PENGARUH PEMBERIAN SARI KECAMBAH KACANG HIJAU TERHADAP KADAR MALONDIALDEHID PADA IKAN LELE DUMBO ( Clarias gariepinus ) YANG TERINFEKSI BAKTERI Aeromonas hydrophila
EFFECT OF MUNG BEAN SPROUTS ESSENCES AGAINST MALONDIALDEHYDE LEVELS IN AFRICAN CATFISH ( Clarias gariepinus ) THAT WAS INFECTED BY BACTERIA Aeromonas hydrophila
Widy Ayunanti, Hari Suprapto dan Boedi Setya Rahardja
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031-5911451

## Abstract
African  catfish  ( Clarias  gariepinus )  is  a  type  of  freshwater  fish  consumption  with  elongated body and smooth skin. Bacterial disease that often strikes African catfish and can cause death as well as a cause of primary infection is A. hydrophila . Bacterial infection may be one cause of the synthesis of lipid peroxidation  which  is  an  indication  of  the  emergence  of  free  radicals.  And  the  end  result  of  lipid peroxidation is malondialdehyde.
Sprouts  are  the  new  little  plants  grow  from  seeds  planted  beans.  Green  bean  seed  germination will  enrich  vitamins  including  vitamin  E,  green  beans  or  α-tocopherol.  Vitamin  E  in  maintaining  the stability of the plasma membrane and protects the cell structure against damage caused by free radicals is by blocking the reaction initiation and propagation of lipid peroxidation reactions interrupt.
Data analyze of this research was used Varian Analyze (ANAVA) and to found the lowest level was used Duncan Test. The average yield of malondialdehyde levels in the negative control treatment is 0.0386 ng / 100 mg mass, positive control (1 ml Aeromonas hydrophila 105 cfu per 5 liter) is 0.0962 ng / 100 mg mass, sprout extract treatment (0 , 1 ml per fish) is 0.05 ng / 100 mg mass, germination and pollen treatment Aeromonas hydrophila is 0.0626 ng / 100 mg mass. From these results indicate that the highest levels found in the positive control treatment while the lowest levels found in the negative control. These results  also  suggest  that  decreased  levels  of  malondialdehyde  using  pollen  germination  is  very significantly different with P < 0,01.
Keywords : Mung  bean  sprouts  essences,  Malondialdehyde,  The  African  catfish,  Bacteria Aeromonas hydrophila
Pendahuluan Budidaya  ikan  lele  merupakan  salah satu budidaya air tawar yang sudah dikembangkan  sejak  dahulu  hingga  sekarang. Namun  salah  satu  permasalahan  pada  budidaya ikan  lele  dumbo  adalah  masalah  penyakit  yang disebabkan  oleh  beberapa pathogen salah satunya  adalah  bakteri.  Bakteri  yang  paling berbahaya  yang  dapat  menyebabkan  kematian pada  ikan  lele  dumbo  ini  adalah Aeromonas hydrophila . Bakteri ini ganas dan menyebabkan kematian  lebih  dari  60%  dalam  waktu  7  hari (Kamiso  dan  Triyanto,  1994).  Bakteri  ini menyerang berbagai jenis ikan air tawar seperti Lele  Dumbo  ( Clarias gariepinus ),  Ikan  mas ( Cyprinus  carpio ),  Gurami  ( Osphronemus gouramy )  dan  Udang  Galah  ( Macrobracium rusenbergii ).  Bakteri Aeromonas  hydrophila dapat  menimbulkan  wabah  penyakit  dengan tingkat kematian tinggi (80-100%) dalam waktu 1-2  minggu  (Sari,  2009).  Pada  tahun  2006,
Komisi  Kesehatan  Ikan  dan  Lingkungan Nasional telah menetapkan jenis penyakit merah yang disebabkan Aeromonas hydrophila sebagai salah  satu  penyakit  ikan  utama  di  Indonesia (Taukhid,  2010).  Adanya  infeksi  bakteri  dapat menjadi salah satu penyebab terjadinya pembentukan peroksidasi lipid yang merupakan indikasi  munculnya  radikal  bebas.  Karena  hasil akhir dari peroksidasi lipid adalah malondialdehid.  Kandungan  malondialdehid yang  tinggi  dalam  tubuh  dapat  menyebabkan radikal bebas (Arkhaesi, 2008).
Kecambah  memiliki  kandungan  serat kasar  dan  protein  serta  vitamin  yang  baik digunakan  atau  dikonsumsikan  pada  ikan  lele dumbo.  Perkecambahan  biji  kacang  hijau  akan memperkaya  kandungan  vitamin  kacang  hijau diantaranya vitamin E atau a-tokoferol.
Vitamin E dalam memelihara stabilitas membran  plasma  dan  melindungi  struktur  sel terhadap  kerusakan  yang  disebabkan  oleh
radikal bebas adalah dengan membloking reaksi inisiasi  dan  menginterupsi  reaksi  propagasi peroksidasi  lipid.  Sehingga  dengan  adanya vitamin  E  dari  kecambah  tersebut  mampu menghambat reaksi radikal bebas pada ikan lele dumbo.  Atas  dasar  pemikiran  tersebut  maka diadakan  penelitian  ini  untuk  memberikan informasi  tentang  manfaat  dari  kecambah  serta pengaruhnya terhadap kadar malondialdehid.
Tujuan Penelitian ini yaitu untuk
mengetahui pengaruh pemberian  sari kecambah kacang hijau terhadap penurunan kadar malondialdehid  dalam  tubuh  ikan  lele  dumbo (C larias gariepinus )  yang terserang Aeromonas hydrophila dan  untuk  mengetahui  konsentrasi terendah malondialdehid pada penelitian.

## Materi dan Metode
Bahan  yang digunakan pada  penelitian ini adalah Ikan lele dumbo ( Clarias gariepinus ) yang  diambil  dari  pasar  ikan  “Patua”  dengan berat  13  -  15  gram  dan  panjang  11  –  13  cm. Bahan  yang  digunakan  selanjutnya  yaitu kecambah  kacang  hijau  yang  didapat dari pasar Mojoarum, Surabaya. Bakteri Aeromonas hydrophila 10 5 cfu/ml  yang  diambil  dari laboratorium  mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran
Hewan Universitas Airlangga, Surabaya. Bahan-bahan  lain  yang  digunakan  diantaranya Plastik,  Botol  Film,  TBA,  Pelet,  HCl,  Buffer Phospate dan TCA.
Metode  yang  digunakan  yaitu  metode eksperimen  dengan  mengukur  daya  antioksidan sari kecambah  kacang hijau  dalam  menurunkan kadar  malondialdehid  pada  ikan  lele  dumbo yang terinfeksi bakteri Aeromonas hydrophila .

## Uji Tantang Ikan Lele Dumbo terhadap Bakteri Aeromonas hydrophila
Uji  tantang  pada  penelitian  ini  adalah dengan  meneteskan  1  ml  bakteri Aeromonas hydrophila dengan  kepadatan  10 5 cfu/ml  pada ikan lele dumbo  dan  menunggu selama 24 jam. Dosis  tersebut  dipilih  karena  berdasarkan penelitian  yang  telah  dilakukan  Kamiso dkk (1994)  bahwa  antara  dosis  rendaman  bakteri Aeromonas  hydrophila 10 4 -  10 7 cfu/ml  yang memiliki rata-rata waktu kematian yang optimal yaitu  pada  dosis  10 5 cfu/ml.  Kemudian memberikan  sari  kecambah  kacang  hijau sebanyak  0,1  ml  pada  ikan  lele  dumbo  secara oral  setiap  hari  dan  mengamati  perubahannya selama 7 hari.
Ada  empat  perlakuan  pada  penelitian ini.  Perlakuan  pertama  (K-)  sebagai  kontrol yaitu tanpa diberi bakteri Aeromonas hydrophila dan  sari  kecambah  kacang  hijau, perlakuan  kedua  (K+)  yaitu  Ikan  lele  dumbo
dengan  penambahan  sari  kecambah  kacang hijau  sebanyak  0,1  ml  melalui  oral  (sonde), perlakuan  ketiga  (SKC)  yaitu  Ikan  lele  dumbo dengan penambahan Aeromonas hydrophila 10 5 cfu/ml  secara  rendaman  sebanyak  ±  1  ml  per  5 liter  air  selama  24  jam,  perlakuan  keempat (BKC) yaitu Ikan lele dumbo dengan penambahan  sari  kecambah  kacang  hijau sebanyak  0,1  ml  melalui  oral  (sonde)  dan bakteri Aeromonas  hydrophila 10 5 cfu/ml secara rendaman ± 1 ml per 5 liter air selama 24 jam.  Variabel  bebas  pada  penelitian  ini  yaitu konsentrasi bakteri dan konsentrasi sari kecambah kacang hijau.
Cara mengukur kadar malondialdehid (MDA) Pengukuran kadar malondialdehid otak ikan  lele  diawali  dengan  menimbang  otak  ikan lele  sebanyak  100  mg  kemudian  sampel  otak tersebut  di  homogenasi  dengan  larutan  Buffer phosphate  sebanyak  2  cc.  Kemudian  ambil  200 µl sampel yang sudah dihomogenasi, tambahkan  dengan  0,5  cc  aquades  lalu tambahkan  200  µl  HCL  0,1  N,  kemudian tambahkan  250  µl  Trichlorid  acetic  acid  40  % serta  tambahkan  250  µl  Thiobarbiturict  acid. Setelah  itu,  panaskan  pada  suhu  100 0 C  selama 20  menit.  Kemudian  di  sentrifus  dengan kecepatan 3000 rpm dan mengambil supernatannya  dengan  ditambahkan  3  cc  H 2 0. Setelah  itu  baru  di  baca  pada  spektrofotometer dengan panjang gelombang λ 532 nm.

## Hasil dan Pembahasan
Sebelum  mengetahui  hasil  penelitian yang  dilakukan  untuk  uji  malondialdehid  maka perlu  dilakukan  pemeliharaan  ikan  lele  dumbo terlebih  dahulu  yang  di  infeksikan  dengan bakteri Aeromonas hydrophila . Untuk memastikan  apakah  bakteri  tersebut  merupakan bakteri Aeromonas  hydrophila maka  perlu dilakukan  uji  biokimia.  Berdasarkan  hasil  uji biokimia,  bakteri A.  hydrophila memiliki karakteristik  biokimia  yaitu  bersifat  motil, positif  H 2 S,  positif  sitrate,  positif  indole  dan menghasilkan  gas.   Setelah  uji biokimia,  maka ikan  lele  dumbo  yang  telah  terinfeksi  tersebut akan  dipelihara    Dari  pengamatan  secara makroskopis  terhadap  ikan  lele  selama  7  hari masa penelitian didapatkan hasil untuk perlakuan  kontrol  negatif  menunjukkan  gejala klinis  yaitu tidak terdapat nodul/ luka di insang dan  sirip  serta  warna  permukaan  tubuh  normal. Kemudian  untuk  perlakuan  kontrol  positif menunjukkan gejala klinis yaitu terdapat banyak nodul  dan  luka  di  insang  dan  sirip  serta  warna permukaan  tubuh  pucat.  Untuk  perlakuan pemberian  sari  kecambah  menunjukkan  gejala
klinis  yaitu tidak terdapat nodul/ luka di insang dan  sirip,  serta  warna  permukaan  tubuh  agak pucat.  Sedangkan  untuk  perlakuan  bakteri A. hydrophila dan  sari  kecambah  menunjukkan gejala  klinis  yaitu  terdapat  sedikit  nodul  dan luka di insang dan  sirip serta  warna permukaan tubuh pucat.
Setelah  masa  pemeliharaan  selama  7 hari, kemudian baru dilakukan uji malondialdehid  secara  laboratorium.  Perlakuan yang  berbeda  menunjukkan  hasil  yang  berbeda pula.  Hasil  kadar  malondialdehid  dapat  dilihat pada tabel 1.

## Tabel 1. Perbedaan rata-rata hasil kadar MDA
Perlakuan Rata-rata ± SD K- (kontrol negatif) 0,037260 c ± 0,0048650 K+ (kontrol positif) 0,162860 a ± 0,0127064 SKC (sari kecambah) 0,061060 c ± 0,0074772 BKC (sari kecambah+ bakteri) 0,088520 b ± 0,0141643
Keterangan  :  Superscript  yang  berbeda  pada kolom yang sama menunjukkan adanya perbedaan yang sangat nyata antar perlakuan (P < 0,01).
Uji  lanjutan  yang  telah  dilakukan menunjukkan bahwa hasil kadar malondialdehid terendah  yaitu  0,0386  pada  perlakuan  kontrol negatif  atau  normal.  Sedangkan  untuk  kadar malondialdehid  tertinggi  yaitu  0,0962  pada perlakuan  kontrol  positif.  Hasil  ini  dapat ditunjukkan melalui gambar 1.
Hasil  malondialdehid  otak  ikan  lele menunjukkan  bahwa  untuk  perlakuan  kontrol negatif memiliki rata-rata kadar malondialdehid terendah,  sedangkan  pada  perlakuan  bakteri memiliki rata-rata kadar malondialdehid tertinggi.  Sedangkan  untuk  dua  perlakuan  yang lain  yaitu  sari  kecambah  (SKC)  dan  sari kecambah dengan
bakteri
Aeromonas hydrophila (BKC)  memiliki  rata-rata  kadar malondialdehid
diatas rata-rata kadar malondialdehid  kontrol  negatif  dan  dibawah rata-rata  kadar  malondialdehid  kontrol  positif. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  sari  kecambah memiliki  pengaruh  untuk  menurunkan  kadar malondialdehid  pada  ikan  lele  yang  terserang Aeromonas hydrophila . Hasil malondialdehid melalui uji lanjutan  Duncan  menunjukkan  bahwa  hasil untuk sari kecambah yaitu berbeda sangat nyata dengan P < 0,01.
Hasil  yang  baik  ialah  menunjukkan bahwa  kadar  malondialdehid  harus  rendah, semakin rendah  kadar  malondialdehidnya  maka akan  mencegah  bahaya  radikal  bebas  tersebut. Karena malondialdehid adalah enzim yang aktif ketika  tubuh  terserang  oleh  penyakit  atau bahaya lain yang menyebabkan radikal bebas.
Pada  perlakuan  pertama  yaitu  kontrol negatif  didapatkan  hasil  yang  terendah  dapat dilihat  pada  grafik  1,  hal  ini  dapat  dikarenakan ikan tidak mengalami tingkat stress yang cukup tinggi  akibat  tanpa  pemberian  bakteri  dan  sari kecambah sehingga hasil
kadar malondialdehidnya  juga  tidak  terlalu  tinggi. Hasil  yang  tertinggi  yaitu  pada  perlakuan kontrol positif dapat dilihat pada grafik 1 diatas, hal ini dikarenakan bakteri Aeromonas hydrophila yang  menginfeksi  ikan  lele  dapat menyebabkan ikan menjadi stres akibat gangguan  fisiologi  serta  gangguan  pertahanan
Gambar 1. Rata-rata hasil MDA setiap perlakuan
tubuh.  Oleh  sebab  itu  malondialdehid  yang dihasilkan pun meningkat.
Pada perlakuan ketiga yaitu pemberian sari kecambah, didapatkan nilai kadar malondialdehid  terendah  kedua  dapat  dilihat pada  gambar  1,  hal  ini  dapat  disebabkan  ketika proses  pemberian  sari  kecambah  pada  ikan dilakukan  dengan  memasukkannya  kedalam mulut  ikan  lele  (sonde)  sehingga  ikan mengalami stres.
Pada  perlakuan keempat
yaitu pemberian  bakteri Aeromonas  hydrophila dan sari  kecambah.  Nilai  kadar  malondialdehidnya terendah  ketiga,  hal  ini  menunjukkan  bahwa dengan pemberian sari kecambah dapat menurunkan  kadar  malondialdehid  pada  ikan lele  yang  terserang Aeromonas  hydrophila tersebut.
Specific  Oksigen  Reaktif  (SOR)  terus menerus dibentuk dalam jumlah besar di dalam sel  melalui  jalur  metabolik  tubuh  yang merupakan  proses  biologis  normal  karena berbagai  rangsangan,  misalnya  radiasi,  tekanan parsial  oksigen  (pO 2 )  tinggi,  paparan  zat-zat kimia  tertentu,  infeksi  maupun  inflamasi. Peningkatan SOR pada infeksi bakteri mempunyai potensi untuk menimbulkan kerusakan  membran  eritrosit.  Eritrosit  sangat rentan  terhadap  senyawa  oksidan,  dan  sebagai akibat  dari  peristiwa  peroksidasi  lipid  pada eritrosit  adalah  terjadinya  lisis  atau  yang  biasa dikenal  dengan  hemolisis.    Terdapat  dua mekanisme  utama  penghancuran  eritrosit  pada hemolisis,  yaitu  penghancuran  berlebihan  oleh sistem  RE  (hemolisis  ekstravaskuler)  atau eritrosit  dihancurkan  langsung  dalam  sirkulasi pada  suatu  proses  (hemolisis  intravaskuler). Mekanisme yang mendominasi tergantung pada patologi  yang  terlibat.  Strategi  yang  digunakan anti-oksidan  dalam  meredam  oksidan  adalah strategi dua tahap, yaitu mencegah terhimpunnya  senyawa-senyawa  oksidan  secara berlebihan dan mencegah reaksi rantai berlanjut. (Arkhaesi, 2008)

## Kesimpulan
Dari  hasil  penelitian  ini  didapatkan kesimpulan  yaitu  hasil  penelitian  menunjukkan bahwa  sari  kecambah  kacang  hijau  mampu menurunkan  kadar  malondialdehid  ikan  lele dumbo  yang  terserang Aeromonas  hydrophila , untuk hasil kadar malondialdehid yang terendah hingga  tertinggi  secara  berurutan  yaitu  terdapat pada  perlakuan  kontrol  negatif  yaitu  0,037260 dan  hasil  tertinggi  pada  perlakuan  pemberian bakteri Aeromonas  hydrophila 10 5 cfu/ml  yaitu 0,162860.

## Daftar Pustaka
Arkhaesi,  N.  2008.  Kadar Malondialdehyde
(MDA)  Serum  Sebagai Indikator Prognosis Keluaran Pada Sepsis Neonatorum. Jurnal Penelitian Program  Pascasarjana  Magister  Ilmu Biomedik  Dan  Program  Pendidikan Dokter  Spesialis-I  Ilmu  Kesehatan Anak Universitas Diponegoro, Semarang. Hal 10-12. Austin,  B.  dan  D.A.  Austin.  1999.  Bacterial
Fish  Pathogens  :  Disease  of  Farmed and  Wild  Fish  (Third  Edition).  Praxis Publishing  Ltd,  Chichester,  UK.  Hal 19, 65, 205-206.
Sari,  N.  2009.  Pencegahan  Dan  Pengobatan Penyakit  MAS  (Motile  Aeromonas Septicemia) Infeksi Bakteri Aeromonas hydrophila Pada Budidaya
Ikan  Air  Tawar.  Program  Studi Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan  Alam,  Institut  Teknologi Sepuluh Nopember, Surabaya.
Taukhid.  2010.  Hydrovac,  Vaksin  Bakteri Lawan  Aeromonas.  Majalah  Trobos, 01 desember 2010