## UJI AKTIVITAS HIPOGLIKEMIK EKSTRAK ETANOL
DAUN TEH ( Camellia sinensis L.)

## PADA TIKUS PUTIH JANTAN GALUR WISTAR
1 Katno, 2 Dian Anistyani, 1 Saryanto
1 Balai Besar Litbang TO-OT Tawangmangu
2 Prodi Farmasi Institut Ilmu Kesehatan Bhakti Wiyata Kediri

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  penelitian  tentang  uji  aktivitas  ektrak  etanol  70%  daun  teh ( Camellia  sinensis L.)  terhadap  penurun  kadar  glukosa  darah  pada  tikus  jantan  galur Wistar yang diinduksi dengan aloksan dengan dosis 100mg/kg BB dan disuntikkan secara intraperitonial.  Tujuan  penelitian  untuk  mengetahui  sejauhmana  pengaruh  pemberian ekstrak  daun  the  terhadap  penurunan  kadar  glukosa  darah  tikus  putih  dibandingkan kontrol.
Penelitian  ini  menggunakan  metode pre  test  and  post  test  with  control  design. Sebagai  hewan  coba  digunakan  tikus  putih  jantan  galur  Wistar  usia  2-3  bulan  dengan berat  160-190  g  per  ekor,  dikelompokkan  menjadi  7  kelompok  masing-masing  5  ekor (yaitu kelompok normal dan kelompok perlakuan).  Sebagai kelompok perlakuan adalah pemberian ekstrak etanol daun teh (yang diekstraksi secara Soxhletasi), dosis 72mg/200g BB,  144mg/200g  BB,    288mg/200g  BB,  576mg/200g  BB,  kontrol  positif  dan  kontrol negatif.    Pemberian  secara  peroral  setiap  hari  selama  9  hari  setelah  disuntik  dengan aloksan.    Pengukuran  kadar  glukosa  darah  dilakukan  pada  hari  ke-0  (sebelum perlakukan),  hari  ke-3,  ke-6  dan  hari  ke-9  setelah  perlakuan.  Sebagai  kontrol  positif digunakan glibenklamid dosis 0,09 mg/200g BB. Analisis data menggunakan An0va satu jalan dilanjutkan uji t dengan taraf kepercayaan 95%.
Hasil  perhitungan  Anava  diperoleh  F  hitung  127,02  sedangkan  F  table  2,77. Sehingga F hit > F tab menunjukkan bahwa paling tidak terdapat dua kelompok data yang mempunyai perbedaan bermakna. Dari hasil uji t diketahui bahwa  t-hitung terbesar pada dosis 576 mg/200g BB. Hasil penelitian menunjukkan pemberian ekstrak etanol daun teh dosis 72;  144;  288 dan 576 mg/200g BB dapat menurunkan kadar glukosa darah tikus putih  berbeda  secara  bermakna  dibandingkan  control  negative  dan  sebanding  dengan control positif.
Kata kunci : Efek hipoglikemik, ekstrak etanol  daun teh, tikus putih jantan galur Wistar

## PENDAHULUAN
Diabetes  Mellitus  (DM)  merupakan  suatu  gangguan  kesehatan  atau  penyakit dimana  tubuh  penderita  tidak  bisa  secara  otomatis  mengendalikan  tingkat  konsentrasi gula (glukosa) dalam darahnya. Penderita diabetes tidak bisa memproduksi insulin dalam jumlah yang cukup, sehingga terjadi kelebihan gula di dalam tubuh. Kelebihan gula yang kronis di dalam darah (hiperglikemia) tersebut akan menjadi racun bagi tubuh. Penyakit DM merupakan penyakit degeneratif yang memerlukan upaya penanganan yang tepat dan serius. Karena dampaknya  akan  membawa  berbagai  komplikasi  penyakit  serius  lainnya, seperti  penyakit  jantung,  stroke,  disfungsi  ereksi,  gagal  ginjal, kerusakan  system  syaraf dan lain-lain (Anonim, 2008).
Menurut data Organisasi Kesehatan Dunia (WHO), Indonesia menempati urutan keenam  di  dunia  sebagai  negara  dengan  jumlah  penderita  Diabetes  Mellitus  terbanyak
setelah  India,  China,  Uni  Sovyet,  Jepang,  dan  Brasil.  Tercatat  pada  tahun  2000,  jumlah penderita diabetes di Indonesia mencapai 5,6 juta dengan peningkatan sebanyak 230.000 pasien  diabet  per  tahun,  sehingga  pada  tahun  2015  diperkirakan  akan  mencapai  20  juta penderita (Pdpersi, 2008).
Ada dua tipe utama diabetes melitus, yaitu tipe I dikenal dengan sebutan IDDM (= Insulin  Dependent  Diabetes  Mellitus )  yang  terjadi  karena  destruksi  autoimun,  faktor genetik  dan  infeksi  virus;  tipe  II  dikenal  dengan  sebutan  NIDDM  (= Non  Insulin Dependent  Diabetes  Mellitus )  yang  terjadi  karena  hipofungsi  sel-sel  beta  pankreas bersama resistensi insulin yang meningkat. (Tjai dan Rahardja, 2003).  Diabetes mellitus tipe  2  merupakan  jenis  diabetes  yang  mencakup  lebih  lebih  dari  90%  seluruh  populasi diabetes  di  Indonesia  (Pdpersi,  2008).  Penatalaksanaan  diabetes  mellitus  tipe  2  dimulai dengan  diet,  latihan  fisik  dan  pengaturan  aktivitas  fisik.  Jika  diet  yang  dilakukan (minimal selama 3 bulan) dan latihan fisik tidak cukup untuk menurunkan kadar glukosa darah, maka diperlukan pemberian antidiabetika oral (Tjai dan Rahardja, 2003).
Pemakaian  obat-obat  sintesis  sebagai  antidiabetes,  kemungkinan  memiliki  efek samping yang tidak dikehendaki karena digunakan dalam waktu relatif lama. Oleh karena itu kini masyarakat banyak mencurahkan perhatiannya pada obat-obat herbal untuk terapi suatu  penyakit,  karena  penggunaan  obat  herbal  dianggap  lebih  aman  dan  dapat meminimalkan  efek  samping  terhadap  tubuh.  Ada  beberapa  tanaman  yang  dipercaya dapat menurunkan kadar gula darah, salah satunya adalah tanaman teh ( Camellia sinensis L.).  Penurunan kadar gula darah bagi penderita dibetes  mellitus diduga disebabkan oleh kandungan  senyawa  aktif  dalam  teh  berupa  katekin,  turunan  katekin,  theaflavin, thearubigin  dan  alkaloid  (Hartoyo,  2003).  Indonesia  merupakan  penghasil  teh  terbesar kelima, tetapi konsumsi teh di Indonesia masih rendah. Hal ini diduga  karena masyarakat belum  banyak  mengetahui  khasiat  teh  terhadap  kesehatan  (Soraya,  2007).  Penelitian  ini dimaksudkan  untuk  membuktikan  pengaruh  ekstrak  etanol  70%  daun  teh  terhadap penurunan  kadar  gula  darah  tikus  putih  jantan  galur  Wistar  yang  diinduksi  dengan aloksan.

## METODOLOGI

## Bahan Penelitian
Pada penelitian ini sebagai bahan utama adalah 1. Daun  teh  ( Camellia  sinensis L.)  diperoleh  dari  kebun  teh  Kemuning,  Ngargoyoso, Karanganyar, Jawa Tengah.
2. Hewan  coba  berupa  tikus  putih  jantan  galur  Wistar,  umur  2-3  bulan  dengan  berat badan  antara  150-180  g,  diperoleh  dari  Laboratorium  Hewan  Coba,  Fak.  Farmasi, Universitas Airlangga, Surabaya.
3. Aloksan  dan  glibenklamid  serta  reagen  kimia  (pa)  dari  Emerck,  alkohol  teknis (Brataco) dan lain-lain.

## Jalannya Penelitian
1. Pembuatan ekstrak daun teh
Daun  teh  ( Camellia  sinensis L.)  dipetik  langsung  dari  pohonnya  secara  manual, disortasi  dan  dicuci  bersih,  ditiriskan  serta  dilayukan  selama  2  hari.  Dikeringkan  dalam oven pada suhu 40 o C hingga kadar air mencapai + 10%. Setelah kering diangkat, disortasi lagi  untuk  memisahkan  kotoran  yang  mungkin  terikut.  Simplisia  dibuat  serbuk menggunakan  blender  dan  diayak  dengan  ayakan  B40  untuk  mendapatkan  serbuk simplisia yang memiliki derajat halus yang seragam.
Serbuk daun teh ditimbang, dibungkus dengan kertas saring dan  dimasukkan  ke dalam alat Soxhlet. Rangkaian alat dilengkapi dengan labu alas bulat dan pendingin balik serta  dipasang  pada  statib  yang  telah  dipersiapkan.  diisi  labu  alas  bulat  dengan  pelarut (alkohol 70%), demikian juga serbuk simplisia (dalam Soxhlet) direndam pelarut selama 24  jam.  Setelah  itu  proses  Soxhletasi  dimulai  dengan  menghidupkan  pemanas  dan dialirkan  air  pada  pendingin  balik.  Proses  ekstraksi  dihentikan  setelah  serbuk  simplisia tersari  sempurna  yang  ditandai  dengan    jernihnya  pelarut  yang  menetes  dari  Soxhlet  ke labu  alas  bulat.  Ekstrak  cair  yang  diperoleh  dikentalkan  dengan  cara  destilasi menggunakan  vakum  rotavapor  sehingga  bebas  pelarut.  Dikeringkan  dengan  tangas  air dan  dihitung  persentase  rendemennya  dengan  membandingkan  berat  ekstrak  dan  bobot serbuk  awal.  Selanjutnya  ekstrak  dilarutkan  untuk  perlakuan  percobaan  dan  dilakukan skrining fitokimia untuk mengetahui kandungan golongan kimia secara kualitatif.

## 2. Membuat model diabetes mellitus pada tikus
Tikus  putih  jantan  galur  Wistar  berumur  2-3  bulan  dan  berat  badan  150-180  gr ditempatkan dalam 7 kelompok @ 5 ekor. Diadaptasikan selama 1 minggu dengan diberi makan  dan  minum  cukup,  diberikan  injeksi  aloksan  yang  dilarutkan  dalam  NaCl  0,9% secara  intraperitonial  dengan  dosis  100mg/kg  BB.  Pada  hari  ke-3  setelah  pemberian aloksan,  diukur  kadar  glukosa  darahnya  secara  kuantitatif  dengan  metode  GOD-Perid. Kemudian tiap kelompok diberi perlakuan secara oral.

## 3. Rancangan penelitian
Metode  yang  digunakan  adalah pre  test  and  post test with control  group  design dengan  7  kelompok  perlakuan.  Kelompok  1  :  normal,  yaitu  tanpa  diberi  perlakuan apapun,  kelompok  II-V  adalah  kelompok  perlakuan  (pemberian  ekstrak  daun  teh  dosis dosis  72mg/200g  BB,  144mg/200g  BB,    288mg/200g  BB,  576mg/200g  BB),  kelompok VI:  sebagai  kontrol  positif,  yaitu  disuntik  aloksan  dan  diberi  glibenklamid  dosis  0,09 mg/200  g  BB  dan  kelompok  VII:  sebagai  kontrol  negatip,  yaitu  disuntik  aloksan  dan diberi aquadest.

## 4. Pengukuran kadar gula darah pada tikus percobaan
Pengukuran kadar gula darah hewan coba dilakukan pada hari ke-3, ke-6 dan ke- 9  setelah  perlakuan.  Pengukuran  secara  kuantitatif  dengan  metode  GOD-Perid. Sebelumnya  disiapkan  tabung  penampung  darah,  kemudian  dibersihan  ekor  tikus  dan dibasahi dengan kapas yang dicelupkan ke air hangat (untuk memperlancar aliran darah), digunting  atau  disayat  ekor  tikus  untuk  mengeluarkan  darahnya.  Ditampung  darah  ke dalam tabung dan pisahkan serumnya dengan cara disentrifuge, amati pada hari itu juga.
5. Analisis data
Data  yang  diperoleh  dianalisis  dengan  Anova  satu  jalan  dan  dilanjutkan  uji  t tingkat kepercayaan 95%.

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
Dari penelitian ini didapatkan hasil sebagai berikut: rendemen ekstrak etanol 70% daun teh adalah 67,58%, dan identifikasi terhadap kandungan golongan  kimia diperoleh hasil  positip  terhadap  golongan  senyawa  alkaloid  (primer,  sekunder,  tersier),  flavonoid, tanin  dan  polifenol.  Adapun  hasil  uji  hipoglikemik  terhadap  tikus  putih  jantan  galur Wistar yang sebelumnya diinduksi diabetogen aloksan sebagaimana disajikan pada tabel dan grafik berikut.
Tabel I. Rata-rata kadar glukosa darah tikus setelah perlakuan
Kelompok Hari Hari Hari Hari rata-rata Perlakuan Ke-0 Ke-3 Ke-6 Ke-9 penurunan (I) Normal 6,75 4,00 5,00 6,20 1,43 (II) Dosis-1 (72mg/200 g BB) 56,25 48,75 46,00 40,24 7,21 (III) Dosis -2 (144mg/200 g BB) 62,50 53,00 43,00 34,00 11,70 (IV) Dosis-3 (288mg/200 g BB) 53,25 37,75 24,00 10,00 19,02 (V) Dosis-4 (576mg/200 g BB) 60,00 53,25 19,00 2,00 28,29 (VI) Kontrol positif = k(+) 5,00 38,75 13,00 8,25 32,13 (VII) Kontrol negatif = k(-) 61,50 68,25 73,50 73,25 (-6,25)
Dari data tersebut jika digambarkan dalam bentuk grafik, dapat disajikan sebagai berikut.
Gambar 1, Grafik kadar glukosa darah vs waktu (hari)
Selanjutnya  data tersebut dianalisis  menggunakan  uji statistik  parametrik  Anava satu jalan, diperoleh harga F hitung = 127,02 sedangkan F tabel = 2,77. Sehingga didapatkan suatu kesimpulan bahwa F hitung > F tabel .  berarti paling tidak terdapat dua kelompok data yang  mempunyai  perbedaan  bermakna  dalam  menurunkan  kadar  glukosa  darah  tikus. Kemudian  analisis  dilanjutkan  dengan  uji  t  dengan  tingkat  kepercayaan  95%  untuk mengetahui  hubungan  antar  masing-masing  dosis  perlakuan  dengan  kontrol  positip  dan negatip. Hasil perhitungan uji t antar kelompok perlakuan tersaji pada tabel berikut.
Tabel 2. Hasil perhitungan uji t antar kelompok perlakuan (taraf kepercayaan 95%)
Antar kelompok perlakuan Hasil uji t II – VII III – VII IV – VII V – VII II – VI III – VI IV – VI V – VI Terdapat perbedaan bermakna Terdapat perbedaan bermakna Terdapat perbedaan bermakna Terdapat perbedaan bermakna
Tidak terdapat perbedaan bermakna
Tidak terdapat perbedaan bermakna Tidak terdapat perbedaan bermakna Tidak terdapat perbedaan bermakna
Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa  ekstrak  etanol  70%  daun  teh  ( Camellia sinensis L.) menunjukkan efek hipoglikemik pada semua dosis yang diujikan. Hasil uji t juga dapat digunakan untuk  melihat pada dosis mana ekstrak etanol daun teh lebih baik
dalam menurunkan kadar glukosa darah pada tikus putih.  Hal ini dapat dilihat dari hasil t-hitung yang paling besar.
Tabel 3. Hasil perhitungan uji t Dosis perlakuan t-hitung thd k(-) t-hitung  thd k(+) 72 mg/200 g BB 144 mg/200 g BB 288 mg/200 g BB 576 mg/200 g BB 15,60 22,27 26,10 31,93 -12,91 -10,64 -3,03 -0,46
Selain  sebagai  minuman  yang  menyegarkan,  teh  telah  lama  dipercaya  secara empirik  memiliki  berbagai  khasiat  bagi  kesehatan  tubuh,  diantaranya  untuk  mengobati dibetes melitus (Soraya, 2007). Efek ini diduga berkaitan dengan kandungan katekin dan turunannya, theaflavin serta thearubigin (Hartoyo, 2003).
Sesuai  pustaka,  senyawa  bioaktif  yang  ada  dalam  teh  merupakan  golongan flavonoid. Adapun flavonoid yang ditemukan pada teh terutama berupa senyawa flavanol dan  flavonol.  Katekin  pada  daun  teh  merupakan  flavonoid  kelas  flavanol,  tetapi  selama proses pembuatan teh katekin dapat dioksidasi secara enzimatis membentuk theflavin dan thearubigin. Selain itu, alkaloid juga diduga ikut berperan dalam efek hipoglikemik yang ditimbulkan oleh ekstrak daun teh (Hartoyo, 2003).
Pada  penelitian  ini  digunakan  aloksan  (2,4,5,6-tetraoxypirimidin)  sebagai diabetagen  yakni  untuk  menginduksi  diabetes  pada  hewan  coba,  karena  selain  memang sudah  lazim  digunakan  zat  ini  cepat  menimbulkan  hiperglikemi  yang  permanen  dalam waktu  2-3  hari.  Mekanisme  aksi  dalam  menimbulkan  perusakan  sel  pankreas  secara selektif  belum  diketahui,  tetapi  dari  penelitian  secara  in  vitro  mekanisme  kerja  aloksan menginduksi  pengeluaran  ion  kalsium  dari  mitokondria  sehingga  mengakibatkan gangguan  homeotasis  yang  merupakan  awal  matinya  sel  (Suharmiati,  2003).  Adapun sebagai kontrol positip digunakan glibenklamid, yaitu obat antidibetik oral dari golongan sulfonilurea  yang  memiliki  efek  farmakologi  jangka  pendek  dan  panjang  seperti  efek sulfonilurea  pada  umumnya.  Selama  pengobatan  jangka  pendek,  glibenklamid meningkatkan sekresi insulin dari sel beta pulau langerhans, sedangkan pada pengobatan jangka panjang efek utamanya adalah meningkatkan efek insulin terhadap jaringan parifer dan penurunan pengeluaran glukosa dari hati (Guyton dan Hall, 1997).
Ekstrak etanol daun teh secara bermakna menurunkan kadar glukosa darah tikus putih  yang  diinduksi  dengan  aloksan,  kemungkinan  karena  dapat  merangsang  pelepasan insulin pada sel yang tidak rusak sempurna. Efek penurunan kadar glukosa darah diduga melalui perbaikan sel-sel beta pulau Langerhans oleh komponen ektrak daun teh, karena kandungan  flavonoid  daun  teh  juga  bersifat  antioksidan  sehingga  dapat  melindungi kerusakan  sel-sel  pankreas  dari  radikal  bebas.  Sedangkan  alkaloid  dan  tanin (epigalokatekin)  ikut  berperan  dalam  menurunkan  kadar  glukosa  darah  kemungkinan melalui penghambatan absorpsi glukosa di usus.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Dari  penelitian  ini  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  70%  daun  teh ( Camellia sinensis L.) mempunyai efek menurunkan kadar glukosa darah pada tikus putih jantan  galur  Wistar  yang  diinduksi  aloksan.  Efek  hipoglikemik  meningkat  dengan peningkatan dosis pada kisaran 72mg-576mg/200 g BB.

## Saran
Perlu penelitian lebih lanjut tentang toksisitas daun teh, penentuan senyawa aktif yang  bertanggungjawab  terhadap  hipoglikemik  serta  penentuan  dosis  optimal  yang bermakna sebagai dasar terapi dan mekanisme aksinya.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim, 2008, Serba-serbi diabetes mellitus, http://www.f-buzz.com/2008/08/04 Anonim,1993, Pedoman    Pengujian  dan  Pengembangan  Fitofarmaka:Penapisan  Farmakologi,
Pengujian Fitokimia dan Pengujian Klinik , Pokja Ilmiah Phytomedica, Jakarta Guyton,  A.C.,  Hall,  J.E., Buku  Ajar  Fisiologi  Kedokteran ,  Edisi  ke-9  (terjemahan  Setiawan), Jakarta, EGC
Hartoyo, Arif, 2003, Teh dan khasiatnya bagi kesehatan , Kanisius, Yogyakarta Pdpersi,  2008, Faktor  lingkungan  dan  gaya  hidup  berperan  besar  memicu  diabetes (online), http://www.pdpersi.co.id . Html. Diakses 5 Nov 2008 Soraya, Noni, 2007, Sehat dan cantik berkat teh hijau , Penebar Swadaya, Jakarta Suharmiati,  2003,  Pengujian  bioaktivitas  antidiabetes  mellitus  tumbuhan  obat, Cermin  Dunia Kedokteran -140 Tjay,T.H.,  dn  Rahardja,  Kirana,  2003, Obat-obat  penting,  khasiat,  penggunaan  dan  efek sampingnya , PT.Elex Media Komputindo, Jakarta.