## Jurnal Ilmu Farmasi dan Farmasi Klinik (JIFFK)
Vol. 15, No. 2, DESEMBER 2018, Hal. 48 - 53 ISSN: 1693-7899

## AKTIVITAS IMUNOMODULATOR FRAKSI ETIL ASETAT DAUN
SOM JAWA ( Talinum paniculatum (Jacq.) Gaertn) TERHADAP RESPON IMUN SPESIFIK
Ika Puspitaningrum 1 * ) , Yuvianti Dwi Franyoto 1) , Siti Munisih 1)
1 Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Yayasan Pharmasi Semarang
JL. Panglima A’im No. 2 Pontianak Email: diankartikasari223@gmail.com

## INTISARI
Fraksi  etil  asetat  daun  Som  Jawa  ( Talinum  paniculatum (Jacq.)  Gaertn)  telah  terbukti meningkatkan kekebalan bawaan dalam tubuh (aktivitas imunomodulator non-spesifik). Penelitian ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  imunomodulator  respon  spesifik  fraksi  etil  asetat  daun Som Jawa ( Talinum paniculatum (Jacq.) Gaertn). Uji respons imun spesifik dengan menggunakan uji  hipersensitivitas  tipe  lambat  dan  uji  titer  antibodi  total.  Analisis  data  diperoleh  dengan menggunakan SPSS versi 16.0. Hasil uji tipe hipersensitif tipe  lambat menunjukkan bahwa fraksi etil asetat daun Som Jawa 50, 100 dan 150 mg/kgbb terbukti meningkatkan respon imun seluler dan aktivitas  yang  sebanding dengan  kontrol positif. Total hasil tes titer  antibodi menunjukkan bahwa fraksi etil asetat daun Som Jawa ketiga dosis terbukti meningkatkan nilai titer antibodi primer dan sekunder.  Berdasarkan  hasil  tes  respon  spesifik  dapat  disimpulkan  bahwa  fraksi  etil  asetat  daun Som Jawa memiliki aktivitas imunomodulator spesifik.
Kata kunci: Talinum  paniculatum (Jacq.)  Gaertn,  imunomodulator,  hipersensitivitas  tipe  lambat, tes titer antibodi total

## ABSTRACT
Ethyl  acetate  fraction  of  Som Java  leaves  (Talinum  paniculatum  (Jacq.)  Gaertn)  has  been shown to boost innate immunity in the body (non-specific immunomodulatory activity). This study aims  to  determine  the  immunomodulatory  activity  of  the  specific  response  of  the  ethyl  acetate fraction of Som Java leaves (Talinum paniculatum (Jacq.) Gaertn). Test specific immune response by using delayed type hypersensitivity test and total antibody titers test. Analysis of data obtained using  SPSS  version  16.0.  Delayed  type  hypersensitivity  test  results  showed  that  the  ethyl  acetate fraction  Som Java  leaves 50, 100 and 150 mg/kgbw proven to increase cellular immune  response and  activities  comparable  to  the  positive  control.  Total  antibody  titer  test  results  showed  that  the fraction  of  ethyl  acetate  Som  Java  leaves  three  doses  shown  to  increase  the  value  of  primary  and secondary  antibody  titers.  Based  on  the  test  results  specific  response  can  be  concluded  that  the ethyl acetate fraction Som Java leaves have specific immunomodulatory activity.
Keywords :   Talinum  paniculatum  (Jacq.)  Gaertn,  immunomodulatory,  delayed  type  hypersensitivity, total antibody titer test
Corresponding author: Ika Puspitaningrum Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi, Yayasan Pharmasi Semarang Jl. Letjend Sarwo Edie Wibowo KM I Plamongansari Semarang, e-mail: Corresponding author Email: ika2vita@gmail.com

## PENDAHULUAN
Senyawa  imunomodulator  dapat  mengubah  aktivitas  sistem  kekebalan  dengan  pengaturan dinamis  sel-sel  kekebalan  tubuh  seperti  sitokin  (Spelman,  dkk.,  2006).  Sistem  kekebalan  tubuh ketika  terpapar  zat  yang  dianggap  asing,  maka  ada  dua  jenis  respon  imun  yang  mungkin  terjadi, respon imun tidak spesifik dan spesifik. Respon imun non-spesifik umumnya merupakan kekebalan bawaan  (imunitas  bawaan)  dalam  arti  bahwa  respon  terhadap  zat  asing  dapat  terjadi  meskipun tubuh belum pernah terpapar  zat tersebut. Sedangkan,  respon imun spesifik  umumnya merupakan respon imun yang didapat (diperoleh) yang timbul terhadap antigen tertentu (Kresno, 2001).
Fraksi  etil  asetat  daun  Som  Jawa  ( Talinum  paniculatum (Jacq.)  Gaertn)  telah  terbukti memiliki aktivitas imunostimulan terhadap respon imun non-spesifik (Puspitaningrum, dkk., 2015). Hal  ini  karena  kandungan  flavonoid,  saponin,  triterpenoid  dan  steroid  (sterol)  di  fraksi  etil  asetat daun  Som  Jawa  dicurigai  memiliki  peran  sebagai  imunomodulator  dengan  merangsang  produksi sitokin IL-2, IFN-γ, meningkatkan respons limfosit T (Barbosa, 2014, Chiang, dkk., 2003, Hussain, dkk., 2013).
Fungsi perlindungan tubuh dalam bentuk respon imun non spesifik akan selalu bekerja sama dengan respon imun spesifik dan tidak dapat dipisahkan. Respon imun spesifik dapat berupa respon imun seluler dan respon imun humoral. Respon imun  spesifik  adalah respon imun  adaptif dimana respon  yang  dihasilkan  muncul  setelah  injeksi  antigen  untuk  kedua  kalinya  (Baratawidjaja  dan Rengganis, 2010).
Oleh karena itu, penelitian ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas imunomodulator fraksi etil  asetat  daun  Som  Jawa  terhadap  respon  imun  spesifik.  Metode  yang  digunakan  adalah hipersensitivitas tipe lambat untuk mengetahui respon imun seluler spesifik, dan titer antibodi total untuk menentukan respon imun humoral spesifik. Antigen yang digunakan dalam  uji respon imun spesifik adalah sel darah merah domba ( Sheep Red Blood Cells /SRBC). SRBC digunakan sebagai antigen  menurut  penelitian  Liwsaree  dkk.  (1982)  SRBC  memiliki  dua  jenis  protein  yang  cukup besar, yaitu 117.000 dan 138.000 dalton, sehingga kuat sebagai antigen.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Jenis penelitian
Jenis penelitian ini adalah penelitian eksperimenta Sampel Penelitian
Daun som jawa ( Talinum paniculatum (Jacq.) Gaertn) yang diambil dari Batu, Malang, Jawa Timur dan dideterminasi oleh UPT Materia Medika Dinas Kesehatan Jawa Timur.
Teknik sampling:
Teknik sampling acak, dimana setiap sampel mempunyai kesempatan yang sama untuk diuji.

## Pengolahan sampel
Serbuk kering daun Som Jawa (2150 g) dimaserasi dengan etanol 96% (1:10) selama 5 hari, kemudian disaring dan ampas kembali dimaserasi dengan etanol 96% selama 3 hari. Setelah 3 hari kemudian  disaring  dan  semua  filtrat  dikumpulkan  dan  diuapkan  dengan rotary  evaporator untuk mendapatkan  ekstrak  kasar  (12,58%  b/b).  Ekstrak  etanol  96%  yang  diperoleh  kemudian difraksinasi  dengan  etil  asetat  pada  suhu  kamar  dan  disaring  untuk  mendapatkan  fraksi  etil  asetat (11,10% b/b).  Fraksi  ini  diuji  untuk  aktivitas  imunomodulator  spesifik,  dengan  melarutkan  dalam natrium karboksi metil selulosa (CMC Na) 0,5%.

## Penapisan fitokimia:
Uji  fitokimia  kualitatif  dilakukan  dengan  metode  Harbone  yang  mengungkapkan  adanya alkaloid,  flavonoid,  tanin,  saponin,  terpenoid,  quinon,  dll.  Penentuan  total  kandungan  flavonoid dalam  fraksi  daun  Som  Jawa  ditentukan  oleh  metode  kolorimetri  AlCl 3 dengan  pengukuran absorbansi spektrofotometri.
Hewan penelitian
Penelitian  dilakukan  pada  mencit  jantan  albino  Swiss  (20-25  g).  Hewan  uji  dipelihara  di bawah  kondisi  laboratorium  standar  (suhu  25  2°C).  Diet  pelet  komersial  dan  air  diberikan  ad libitum.

## Antigen:
Sel-sel  darah  merah  domba  segar  ( Sheep  Red  Blood  Cells /SRBC)  dikumpulkan  secara aseptik dari vena jugularis domba dan disimpan dalam larutan Alsever steril dingin, dicuci tiga kali dengan  larutan  salin  steril  bebas  pirogen  (NaCl,  0,9%  (b/v))  dan  disesuaikan  dengan  konsentrasi dari 5×10 9 sel/ml untuk imunisasi dan tantangan pada jadwal waktu yang diperlukan.
Hipersensitivitas Tipe Lambat ( Delayed Type Hypersensitivitas/DTH ):
a. Tantangan Antigen: Pada hari ke 0, semua hewan uji disensitisasi dengan 0,1 ml/10 g bb SRBC 1% secara intravena.
b. Desain Eksperimental
Hewan  uji  dibagi  menjadi  beberapa  kelompok  yang  terdiri  dari  5  ekor  hewan  uji,  yaitu: Kelompok I – Kontrol Negatif, Suspensi CMC Na 0,5%, per oral (hari pertama sampai dengan hari ke lima).
Kelompok  II  –  Kontrol  Positif,  Sediaan  Fitofarmaka  Meniran  9,1  mg/kg  bb  per  oral  (hari pertama sampai dengan hari ke lima).
Kelompok III,  IV, V  – Fraksi  ethil  asetat daun  Som Jawa 50, 100, and 150 mg/kg bb per oral (hari pertama sampai dengan hari ke lima).
Pada hari  ke  enam, telapak kaki kanan belakang diukur dengan jangka sorong (T0), kemudian hewan  uji  diimunisasi  lagi  dengan  0,05  ml  1%  SRBC  intradermal  pada  telapak  kaki  kanan belakang.  Pada  hari  ke  tujuh  dan  delapan,  ketebalan  telapak  kaki  diukur  kembali.  Perbedaan antara  ketebalan  telapak  kaki  sebelum  dan  sesudah  tantangan  dilaporkan  sebagai  respon hipersensitivitas tipe lambat.
Humoral Antibodi (HA) Titer Respon Terhadap SRBC:
a. Tantangan Antigen: Pada hari ke 0, semua hewan uji disensitisasi dengan 0,1 ml/10 g bb SRBC 1% secara intravena.
b. Desain Eksperimental
Hewan uji dibagi menjadi beberapa kelompok yang terdiri dari 5 ekor hewan uji, yaitu: Kelompok I – Kontrol Negatif, Suspensi CMC Na 0,5%, per oral (hari pertama sampai dengan hari ke dua belas).
Kelompok  II  –  Kontrol  Positif,  Sediaan  Fitofarmaka  Meniran  9,1  mg/kg  bb  per  oral  (hari pertama sampai dengan hari ke dua belas).
Kelompok III,  IV, V  – Fraksi  ethil  asetat daun  Som Jawa 50, 100, and 150 mg/kg bb per oral (hari pertama sampai dengan hari ke dua belas).
Pada hari ke-5 dan hari ke-13 diambil darah mencit melalui vena ekor dan disentrifugasi untuk mendapatkan  serum.  Nilai  hemaglutinasi  pada  hari  ke-5  dinyatakan  sebagai  titer  antibodi primer. Mencit  selanjutnya diimunisasi kembali dengan  SRBC 1 % sebanyak 0,1 mL/10 g BB secara intra vena pada hari ke-12 dan dibiarkan selama 24 jam. Pada hari ke-13, mencit diambil darah  untuk  mendapatkan  serum  dan  kembali  ditentukan  titer  antibodi  dengan  teknik hemaglutinasi,  nilai  hemaglutinasi  ini  dinyatakan  sebagai  titer  antibodi  sekunder.  Pengenceran dua kali lipat serum dilakukan yaitu 50 μl serum ditambahkan ke sumur pertama dari  lempeng sumur  mikro  dengan  kandungan  50  μl  normal  saline.  Untuk  ini  1%  SRBC  (50  μl)  dilarutkan dalam salin normal dicampur. Dari 1 baik 50 μl serum diencerkan ditambahkan ke 2 lempeng sumur mikro yang mengandung 50 μl normal salin dan 50μl 1% SRBC. Pengenceran seperti itu dilakukan  sampai  24  lempeng  sumur  mikro.  Pelat  diinkubasi  pada  37  º  C  selama  1  jam. Pengenceran tertinggi yang telah menunjukkan aglutinasi terlihat dianggap sebagai titer antibodi hemaglutinasi.

## Analisa Statistika:
Nilai-nilai dinyatakan sebagai Rata-rata ± SD. Hasilnya dianalisis menggunakan analisis satu arah varians (ANOVA). Nilai P <0,05 dianggap signifikan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Skrining  fitokimia  awal  mengungkapkan  adanya  flavonoid,  tanin,  saponin,  dan  terpenoid (Tabel  I).  Hasil  uji  kadar  flavonoid  total  diperoleh  fraksi  etil  asetat  daun  Som  Jawa  mengandung flavonoid total sebesar 44,47 mg/g.
Tabel I. Analisis Skrining Fitokimia Fraksi Etil Asetat Daun Som Jawa
Metabolit Sekunder Fraksi Etil Asetat Alkaloid - Flavonoid + Tanin + Saponin + Terpenoid + Kuinon -
Pengujian imunomodulator spesifik dilakukan untuk melihat respon imun yang didapat yang timbul terhadap antigen tertentu. Sistem kekebalan khusus memiliki kemampuan mengenali objek yang dianggap asing baginya. Metode yang digunakan adalah metode hipersensitivitas tipe lambat, dan metode titer antibodi.
Uji  pada  respon  imun  seluler  didasarkan  pada  respon  reaksi  hipersensitivitas  tipe  lambat, yaitu munculnya respon imun  yang  lebih dari 24 jam setelah kontak dengan antigen. Penggunaan sel  darah  merah  domba  (SRBC)  sebagai  agen  kimia  pensensitisasi  karena  kombinasi  dengan protein  kulit  memenuhi  syarat  sebagai  antigen  ketika  digunakan  untuk  bersentuhan  dengan  reaksi hipersensitivitas  tikus  (Kannan,  dkk.,  2007). Dalam  menguji  respon  hipersensitivitas  tipe  lambat, disuntikkan  SRBC  sebagai  antigen  yang  dapat  menyebabkan  edema  karena  respon  inflamasi (akumulasi  makrofag,  leukosit  dan  sel  imun  lainnya)  sehingga  dalam  waktu  0-48  jam  itu  akan menjadi jelas edema tersebut (Kala, dkk., 2015).
Pengujian reaksi hipersensitivitas tipe lambat mengukur perubahan volume kaki diamati dari sebelum  penyuntikan  antigen  dan  jam  ke  24  dan  48  setelah  penyuntikan  antigen  dan  menghitung persentase  perubahan  kaki.  Berdasarkan  teori  reaksi  hipersensitivitas  tipe  lambat  (tipe  IV), peningkatan volume kaki tidak terjadi selama 6-12 jam, dan mencapai intensitas maksimum setelah 24-48  jam  (Bellanti,  1993).  Tertundanya  waktu  respon  yang  diberikan  pada  hipersensitivitas  tipe lambat  mencerminkan  waktu  yang  dibutuhkan  oleh  sitokin  untuk  menginduksi  aktivasi  makrofag (Faradilla  dan  Iwo,  2014).  Efek  fraksi  etil  asetat  daun  Som  Jawa  ( Talinum  paniculatum (Jacq.) Gaertn)  pada  respon  DTH  terhadap  tantangan  antigen  oleh  sel  darah  domba  (SRBC) pada  mencit dapat dilihat pada Tabel II.
Tabel II. Efek Fraksi Etil Asetat Daun Som Jawa Pada Respon Hipersensitivitas Tipe Lambat Terhadap Tantangan Antigen Oleh Sel darah Domba Pada Mencit
Group % Ketebalan Kaki X±SD (T-24) X±SD (T-48) I      (Kontrol Negatif) 22,79±8,23 b 18,87±6,23 b II    (Kontrol Positif) 68,00±7,53 a 74,27±8,96 a III   (Dosis 50 mg/kg bb) 59,95±10,43 a 61,28±9,40 a IV   (Dosis 100 mg/kg bb) 57,59±8,09 a 64,02±1,16 a V    (Dosis 150 mg/kg bb) 60,82±14,13 a 61,95±15,63 a
Keterangan: a (berbeda signifikan dengan kontrol negatif) b (berbeda signifikan dengan kontrol positif)
Persentase  perubahan  ketebalan  kaki  pada  T-24  dan  T-48  fraksi  etil  asetat  daun  Som  Jawa 50, 100 dan 150 mg/kg bb menunjukkan perbedaan yang signifikan dengan kontrol negatif. Hal ini membuktikan  bahwa  fraksi  etil  asetat  daun  Som  Jawa  dapat  meningkatkan  ketebalan  kaki  hewan uji  melalui  respon  seluler  terhadap  sel  T  CD4 + dan  CD8 + yang  menyebabkan  kerusakan  jaringan dan  peradangan.  Dalam  tanggapan  Seluler,  sel  T  CD8 + berproliferasi  menjadi  sel  T killer dan menyerang  secara  langsung  antigen  penyerang  sementara  dalam  respons  humoral,  sel  B bertransformasi  menjadi  sel  plasma  yang  mensintesis  dan  mensekresikan  protein  spesifik  yang disebut  antibodi  atau  imunoglobulin.  Antibodi  mengikat  dan  menonaktifkan  antigen  tertentu.
Sebagian  besar  sel  T  CD4 + menjadi  sel  T helper yang  membantu  baik  respon  CMI  maupun  AMI (Ballow dan Nelson, 1987).
Respon imun spesifik juga dilakukan dengan metode titer antibodi. Titer antibodi bertujuan untuk  melihat  respon  imun  humoral.  Imunitas  humoral  yang  dimediasi  oleh  antibodi.  Antibodi berfungsi sebagai efektor respon humoral dengan mengikat dan menetralkan antigen, atau dengan memfasilitasi  eliminasi  antigen  yang  dapat  dihancurkan  oleh  fagosit  (Dashputre,  dan  Naikwade, 2010).  Uji  hemaglutinasi  antibodi  (HA)  dilakukan  untuk  menentukan  efektivitas  fraksi  etil  asetat daun Som Jawa dari respon imun humoral.
Pengamatan  dilakukan  dengan  melihat  titer  antibodi  hemaglutinasi  pengenceran  tertinggi serum  darah  mencit  yang  memberikan  reaksi  positif  hemaglutinasi.  Reaksi  hemaglutinasi  terjadi bila  antigen  direaksikan  dengan  antibodi  spesifiknya,  sehingga  membentuk  gumpalan  yang akhirnya mengendap dan mudah terlihat cairan jernih di atasnya (Effendi dan Widiastuti, 2014).
Respon  pembentukan  antibodi  dinyatakan  sebagai  titer  antibodi  primer  dan  sekunder.  Titer antibodi  primer  merupakan  gambaran  jumlah  IgM  yang  terbentuk  yang  merupakan  awal  respon imunitas primer. IgM ini juga merupakan imunoglobulin yang pertama diproduksi. Apabila antigen yang  sama  masuk  ke  dalam  tubuh,  maka  akan  meningkatkan  kadar  antibodi  dalam  darah  dan mencapai kadar maksimum yang jauh lebih tinggi dibanding repson awal/primer.
Antibodi sekunder merupakan gambaran dari sel memori B yang akan diaktifkan apabila ada antigen  yang  sama  masuk  ke  dalam  tubuh  kembali.  Respon  sekunder  ini  ditandai  dengan  adanya respon  yang  lebih  cepat  serta  lebih  banyak  dalam  produksi  antibodi,  karena  adanya  ekspansi  sel memori  akibat  paparan  antigen  yang  sama.  Hasil  pengamatan  titer  antibodi  primer  dan  sekunder setelah pemberian fraksi etil asetat Daun Som Jawa dapat dilihat pada Tabel III.
Tabel III. Efek Fraksi Etil Asetat Daun Som Jawa Pada Titer Antibodi Terhadap Tantangan Antigen Oleh Sel darah Domba Pada Mencit
Group Titer Antibodi Primer Titer Antibodi Sekunder I (Negative Control) 1 : 16 1 :  4 II (Positive Control) 1 : 8 1 : 16 III (50 mg/kg b.w) 1 : 8 1 : 48 IV (100 mg/kg b.w) 1 : 12 1 : 256 V (150 mg/kg b.w) 1 : 16 1 : 576
Peningkatan  dosis  fraksi  etil  asetat  daun  Som  Jawa  menunjukkan  peningkatan  dosis  daun Som  Jawa  maka  hemaglutinasi  semakin  besar  nilainya.  Disimpulkan  bahwa  semakin  besar  dosis yang  diberikan  dapat  meningkatkan  jumlah  antibodi  sehingga  ikatan  antara  antigen  dan  antibodi juga  semakin  besar.  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  fraksi  etil  asetat  daun  Som  Jawa memiliki  aktivitas  imunomodulator  dari  sistem  imun  spesifik  baik  respon  seluler  dan  humoral. Kandungan flavonoid di daun Som Jawa secara signifikan meningkatkan aktivitas sel T pembantu, sitokin,  interleukin,  gamma-interferon  dan  makrofag  sehingga  flavonoid  berguna  dalam pengobatan  beberapa  penyakit  yang  disebabkan  oleh  disfungsi  kekebalan  tubuh  (Kawakita,  dkk., 2005; Sharififar, dkk., 2009; Verma, dkk., 1988).
Triterpenoid memiliki aktivitas yang kuat dalam merangsang stimulasi IFN-γ (Chiang, dkk. , 2003).  Saponin  memiliki  aktivitas  sebagai  immunoadjuvant  (bahan  yang  dapat  meningkatkan respon imun terhadap antigen) melalui stimulasi sitokin (IL-2 dan IFN- γ) produksi respon antibodi IgG2a dan IgG2b, menginduksi respon antibodi terhadap antigen melalui stimulasi CTL ( cytotoxic T  lymphocyte )  spesifik  melalui  MHC  kelas  I  (Barbosa,  2014).  Sterol  (  β-sitosterol)  mampu meningkatkan respon limfosit T (Hussain, dkk., 2013).

## KESIMPULAN
Fraksi etil asetat daun Som Jawa ( Talinum paniculatum (Jacq.) Gaertn) dapat meningkatkan respon imun spesifik baik respon seluler dan humoral.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Kementerian  Riset  Teknologi  dan  Pendidikan  Tinggi  tentang  pendanaan  melalui  program hibah kompetitif.

## DAFTAR PUSTAKA
Ballow  M,  and  Nelson  R,  1987,  Immunopharmacology  and  immunotherapy, J  Amer  Med  Assoc . 278: 2008-09.
Baratawidjaja, K.G., and Rengganis,  I, 2010, Basic Immunology , 7 th Edition, Faculty of Medicine Indonesia University, Jakarta, hal: 6-7
Barbosa, A. P, 2014, Saponins as Immunoadjuvant agent: A review, African Journal of Pharmacy and Pharmacology , 8(41): 1050-1057. Bellanti, A.J, 1993, Imunologi III , Gadjah Mada University Press, Yogyakarta, hal: 346-349
Chiang,  L.C.,  Telk  Ng,  L.,  Chiang,  W.,  Chang,  M.Y.,  and  Lin,  C.C,  2003,  Imunomodulatory Activities  of  Flavonoids,  Monoterpenoids,  Triterpenoids,  Iridoid  Glycosides  and  Phenolic Compounds of Plantago Species, Planta Med : 600-604.
Dashputre, N.L., and Naikwade, N.S, 2010, Immunomodulatory Activity of Abutilon indicum linn on Albino Mice , International Journal of Pharmaca Sciences and Research (IJPSR) . 1 (3): 178-184.
Effendi,  N.,  dan  Widiastuti,  H,  2014,  Identifikasi  Aktivitas  Imunoglobulin  M  (Ig  M)  Ekstrak Etanolik  Daun  Ceplukan  ( Physalis  Minima Linn.)  Pada  Mencit, Jurnal  Kesehatan  Vol.  VII No. 2 : 353-360
Faradilla,  M.,  and  Iwo,  M,    2014,  Immunomodulatory  effects  Temu  White  Rhizome  ( Curcuma zedoaria (Christm.)  Roscoe), Journal  of  Pharmaceutical  Sciences  Indonesia .  12  (2):  273- 278.
Hussain,  A.,  Wahab,  S.,  and  Ahmad,  M.P,  2013,  A  Systematic  Review  of  Herbal Immunomodulators In The Indian Traditional Health Care System, International Journal Of Investigation In Pharmaceutical Sciences . 1 (3): 261-266.
Kala,  C.,  Ali,  S.S.,  and  Ali  K.N,  2015,  Immunostimulatory  Potential  of    N-butanolic  Reaction  of Hydroalcoholic  Extract  of Costus  Specious Koen.  Rhizome, Internation  Journal  of Pharmaceutical Sciences and Research . 6 (7) : 2886-2892. Kannan, Singh, Kumar, Jegatheswari, and Subburayalu, 2007,  Studies on Immuno-bioactivities of Nyctanthes  arbortristis  (Oleaceae), African  Journal  of  Microbiology  Research .  1  (6).  088- 091.
Kawakita,  S.,  Giedlin,  H.,  Namoto,  K,  2005,  Immunomodulators  from  higher  plants, Journal  of Natural Medicine . 46: 34-38. Kresno,  S.  B,  2001, Immunomodulatory:  Diagnosis  and  Laboratory  Procedures .  4th  Edition. Faculty of Medicine Indonesia University, Jakarta, hal:25-37
Liewsaree,  P.,  Kalumphahet,  C.,  and  Wilariat,  P,  1982,  Studies  on  Sheep  Red  Blood  Cell Membran:  Indentification  of  Two  High  Moleculer  Weight  Intrinsic  Proteins. J.  Sci.  SOC. Thailand . 8: 225-228
Puspitaningrum,  I.,  Kusmita,  L.,  and  Setyani,  W,  2015,  Non  Spesific  Imunomodulatory  of  Ethyl Acetate Fraction of Leaf Som Jawa, International Joint Symposium on Biomedical Science . Faculty of Medicine Gadjah Mada University.
Sharififar,  F.,  Pournourmohammadi,  S.,  and  Arabnejad,  2009,  Immunomodulatory  activity  of aqueous  extract  of  Achillea  wilhemsii  C.  Koch  in  mice, Indian  Journal  of  Experimental Biology . 47 (8): 668-671.
Spelman K., Burns J., Nichols D., Winters N., Ottersberg S., and Tenborg M, 2006, Modulation of Cytokine  Expression  by  Traditional  Medicines  :  A  Review  of  Herbal  Immunomodulator. Alternative Medicine Review . 11 (2): 128-50.
Verma, A.K., Johnson, J.A., Gould, M.N., Tanner, M.A, 1988, Inhibition of 7,12-dimethylbenz (a) anthracene  and  N-nitrosomethylurea-induced  at  mammary  cancer  by  dietary  flavonol quercetin, Cancer Research . 48 (20): 5754-5758.