## PENGARUH EKSTRAK ETANOLIK ATAU EKSTRAK DEKOK GANODERMA LUCIDUM (ß Glucan) TERHADAP HORMON TESTOSTERON, SEL LEIDIQ
TESTIS RATTUS NORVEGICUS JANTAN.
(The Effect Of Ethanolic Extracts Or Dekok Of Gododerma Lucidium (ß Glucan) Extracts On Testosteron Hormones, Sel Leidiq Testis Rttus Norvegicus)

## Bambang Wasito Tjipto 1)

## ABSTRACT
The process of "aging" causes a decline in physical and mental strength. In general, more and more bodily organs are complained of by elderly people, and suffer from chrnic diseases. Older men  experience  various  changes  including  a  decrease  in  endocrine,  cardiovascular, neurological,  eye,  skin,  reproductive  and  so  on.  The  Late  Onset  Hypogonadism  (LOH)  is  a syndrome that decreases sexual, physical, and psychological abilities associated with a decrease in testosterone levels in the blood. In middle age, the age  of 45-59  years begins to decrease body  function,  including  decreased  reproductive  function  and  the  function  of  sexuality, hormones such as testosterone. which is known as aging process. Testosterone is an anabolic hormone.  Giving  Ganoderma  Lucidum  in  a  preliminary  study  of  normal  one-year-old  male Rattus norvegicus rats, water extract (dekok) and ethanol extract with different doses, 10 mg / kg, 20 mg  / kg bw, and 30 mg kg  / bb proved to increase total testosterone hormone serum significantly at a dose of 30 mg / kg bw, then researchers increase the dose to 50 mg / kg bw. Purpose of the study: Analyzing the effect of dekok extract or Ganoderma lucidum ethanolic extract  on  the  hormone  testosterone,  testicular  Leidiq  cells  that  are  undergoing  the  aging process. Results: Test profile of testosterone, after administration between controls, extract of dekok  and  male  ethanol  extract  of  18  months  old  male  Leydig  Rattus  norvegicus  testis.  In different  tests  on  testosterone,  there  were  significant  differences  between  controls,  dekok extract and ethanol extract. The results of testosterone levels in ethanol extract were higher. Conclusion: Dekok and Ganoderm lucidum ethanol extract can increase testosterone hormone.
Keywords: LOH, Ganoderma Lucidum, Testosterone Hormone.

## ABSTRAK
Proses "penuaan" menyebabkan penurunan kekuatan fisik dan mental. Secara umum, semakin banyak organ tubuh yang dikeluhkan oleh orang tua, dan menderita penyakit kronis. Pria yang lebih  tua  mengalami  berbagai  perubahan  termasuk  penurunan  endokrin,  kardiovaskular, neurologis, mata, kulit, reproduksi dan sebagainya. Late Onset Hypogonadism (LOH) adalah sindrom  yang  menurunkan  kemampuan  seksual,  fisik,  dan  psikologis  yang  terkait  dengan penurunan  kadar  testosteron  dalam  darah.  Di  usia  paruh  baya,  usia  45-59  tahun  mulai mengalami  penurunan  fungsi  tubuh,  termasuk  penurunan  fungsi  reproduksi  dan  fungsi seksualitas,  hormon  seperti  testosteron.  yang  dikenal  sebagai  proses  penuaan.  Testosteron adalah hormon anabolik. Pemberian Ganoderma Lucidum dalam studi pendahuluan pada tikus Rattus  norvegicus  jantan  normal  berumur  satu  tahun,  ekstrak  air  (dekok)  dan  ekstrak  etanol dengan dosis berbeda, 10 mg / kg, 20 mg / kg bb, dan 30 mg kg / bb terbukti meningkatkan total  hormon  testosteron  serum  secara  signifikan  pada  dosis  30  mg  /  kg  bb,  maka  peneliti meningkatkan dosis menjadi 50 mg / kg bb. Tujuan penelitian: Menganalisis pengaruh ekstrak dekok atau ekstrak etanol Ganoderma lucidum terhadap hormon testosteron, sel Leidiq testis yang sedang menjalani proses penuaan. Hasil:  Profil uji testosteron, setelah pemberian antar kontrol,  ekstrak  dekok  dan  ekstrak  etanol  jantan  dari  Leydig  Rattus  norvegicus  testis  jantan berumur  18  bulan.  Dalam  tes  yang  berbeda  pada  testosteron,  ada  perbedaan  yang  signifikan antara kontrol, ekstrak dekok dan ekstrak etanol. Hasil kadar testosteron dalam ekstrak etanol lebih tinggi. Kesimpulan: Ekstrak etanol Dekok dan Ganoderm lucidum dapat meningkatkan hormon testosteron.
Kata Kunci: LOH, Ganoderma Lucidum, Hormon Testosteron.
1) Departemen Biologi, Fakultas Kedokteran Universitas Katholik Widyamandala Surabaya, Jl. Raya Kalisari Selatan No. 1 Tower A Lt. 7 Pakuwon City Surabaya, Email korespondensi: baratawasito@yahoo.co.id

## PENDAHULUAN
Proses  "penuaan"  menyebabkan kemunduran  kemampuan  fisik  dan  mental. Secara  umum,  para  usia  lanjut  banyak mengalami  gangguan  organ  tubuh,  dan menderita  penyakit  kronis.  Pria  usia  lanjut mengalami  bermacam-macam  perubahan termasuk penurunan fungsi endokrin,
kardiovaskuler,  penyakit  saraf,  mata,  kulit, reproduksi dan sebagainya.
Perubahan  pada  pria  usia  lanjut terutama  meliputi  penurunan  produksi hormon  androgen.  Androgen  ditemukan relatif  lebih  banyak  pada  pria  dibanding wanita,  karena  hormon  ini  bertanggung jawab  pada penampilan  fisik seksualitas
pria.  Pada  wanita  jumlah  hormon  androgen lebih sedikit. Bila terjadi penurunan hormon androgen akan mempunyai efek metabolisme secara fisiologis pada beberapa sistem antara lain otak, jantung, dan sendi 24 , hormon  testosteron  sangat  berpengaruh terhadap tanda seks sekunder pada laki-laki terjadiperubahan  suara menjadi besar, bahu dan  dada  lebih  lebar,  juga      rambut  pada bagian  tubuh  tertentu  menjadi  tumbuh, contohnya: rambut kumis, janggut, jambang, ketiak, dan rambut sekitar organ reproduksi.
Late  Onset  Hypogonadism (LOH) adalah  sindrom  menurunnya  kemampuan seksual, fisik,  dan  psikologis  yang dikarenakan  berkurangnya  kadar  hormon testosteron  dalam  darah.  Pada  pria  usia pertengahan usia 45-59 tahun mulai terjadi penurunan fungsi tubuh, termasuk menurunnya fungsi reproduksi dan
hormon–hormon seperti hormon testosteron.  Penurunan  kadar  hormon testosteron  pada  usia  55  tahun  ke  atas menunjukan perbedaan yang bermakna jika dibandingkan dengan kadar hormon testosteron  12  tahun  sebelumnya.  Sesuai dengan  bertambahnya  usia  tersebut  maka
produksi hormon testosteron juga mengalami penurunan, yang dikenal sebagai aging process. Testosteron merupakan  hormon  anabolik.  Dengan meningkatnya  usia  harapan  hidup  maka meningkat pula jumlah lansia di masa yang akan datang, hal ini tentu berakibat semakin meningkatnya problema lansia  tersebut 5,12 ,
Ganoderma  lucidum adalah  obat  terkenal pada  pengobatan  oriental  berabad-abad lamanya. Ganoderma  lucidum di  negara Cina  " Lingzhi "  sedang  di  negara  Jepang disebut  " Reishi ",  di  Indonesia  dikenal dengan sebutan jamur kayu. Jamur ini telah dikenal  sebagai  obat  tradisional,  yang digunakan  di  Cina  dan  Jepang  untuk pengobatan  beberapa  penyakit,  seperti hepatitis, hipertensi, bronkitis kronis, asma bronkial,  kanker  dan  lain-lain 2,10 . Sebuah studi yang menunjukkan bahwa antioksidan,  dalam  plasma  meningkat setelah  konsumsi Ganoderma  Lucidum , selama 10 hari dikaitkan dengan kecenderungan  profil  biomarker  PJK (Penyakit Jantung Koroner). Pada penelitian  toksisitas  jangka  panjang,  tikus dibagi  menjadi  tiga  kelompok  diberi Ganoderma  lucidum kapsul  dengan  dosis 0,47,  0,94  dan  1,87,  g  /  kg.  selama  dua puluh  enam  minggu,  tidak  ditemukan kelainan  yang  disebabkan  oleh kapsul Ganoderma lucidum (β glucan) pada semua hasil,  dan  pada  semua  organ  utama normal. Tidak ada toksisitas kapsul Ganoderma lucidum yang diberikan  kepada  tikus  untuk  jangka panjang 9 .  Ganoderma  lucidum  dilaporkan mengandung  beberapa  komponen  biologis aktif,  seperti  polisakarida, protein,  sterol, triterpen, peptida, asam amino, asam oleat, adenosin,  vitamin  dan  mineral .  Vitamin yang  dikandung  diantaranya B1,  B2,  C, biotin,  dan  niacin .  Sedangkan  kandungan mineralnya  meliputi kalium,  kalsium,
magnesium,  fofor,  tembaga,  germanium dan  beberapa  makroelemen lain  yang seluruhnya mencapai lebih dari 200 elemen aktif 2 . .

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  merupakan  studi eksperimental acak, terdiri dari 3 kelompok masing -masing kelompok terdiri dri 9 ekor rattus norvegicus jantan 18 bulan, kelompok 1.  merupakan  kelompok  kontrol  diberi makan  dan  minum  ad  libitum,  kelompok  2 diberi  makan  dan  minum  serta  diberi  ED (Ekstrak  Dekok)  50  mg/  kg  BB  kedalam  2 ml aqua bides, kelompok 3 diberi makan dan minum serta diberi EE (Ekstrak Etanolik) 50 mg/kg BB kedalam 2 ml aqua bides.

## Bahan penelitian
Bahan  ekstrak  etanolik  dan  dekok diperoleh  dari  PT.  Sahabat  Lingkungan Hidup,  bahan  Ganoderma  lucidum  telah dibudidayakan di kecamatan Pare kabupaten  Kediri,  dan  telah  diidentifikasi LIPI  (Lembaga  Penelitian  Indonesia  )  dan Pusat  Penelitian  Biologi  ( Research  center for Biology ) pada tanggal 23 Januari 2015,
Jamur tersebut benar merupakan Ganoderma lucidum  (Curtis)  P.  Karst  merupakan  suku Ganodermataceae. sertifikat    identifikasi terdapat  pada  lampiran . Bahan  ekstrak
dekok  diambil  dari  jamur  G  Lucidum dihaluskan,  menggunakan  teknologi  bahan ekstraksi air, dan ekstrak etanolik Ganoderma  lucidum Polisakarida  Peptida bahan  berasal  dari  micellium  jamur
Ganoderma lucidum, menggunakan teknologi bahan ekstraksi etanol . specifikasi tentang    komposisi  dan  kandungan  ekstrak, di  peroleh  dari  PT  Sahabat  Lingkungan Hidup,  dan  bahan  untuk  pemeriksaan Hormon  testosteron,  diperoleh  dari  Santa Cruz Biotechnolory, INC, USA. Tikus rattus norvegicus  umur  15  bulan,  berat  badan antara : 250-300 gram, dalam keadaan sehat, ciri-ciri  bermata  jernih  berwarna  merah, pergerakannya  aktif,  dan  gesit.  dibeli  dari Peternakan kucing dan tikus Drh. Rachmad Priyadi, Sidoarjo.

## Penelitian pendahuluan
Apabila dari penelitian pendahuluan pada ekstrak etanolik dan dekok G lucidum pada  rattus  norvegicus  12  bulan,  terjadi peningkatan  hormon  testosteron,  dilakukan di  laboratorium  hewan  Fakultas  Farmasi Universitas
Katholik Widyamandala
Surabaya, menggunakan kit hormon testosteron  metode  elisa,  maka  akan dilakukan penelitian lebih lanjut.
Tabel 2.1 Penelitian pendahuluan dengan dosis 10, 20, 30 mg/kgBB Ekstrak Dekok atau Ekstrak Etanolik
Kelompok (Testosteron) pg/ml Analisa Kontrol 39,525 ± 0,10
Ekstrak Dekok 10 mg/kgBB 20mg/kg BB 30mg/kg BB 47,73 ± 0,324
198,10 ± 0,251
614,80 ± 0,122 ≥ 30 pg/ml Ekstrak Etanolik 10 mg/kgBB 20 mg/kgBB 30 mg/kgBB 64,69 ± 0,123
128,40 ± 0.250
525,90 ± 0.021 ≥ 30 pg/ml

## Tempat dan waktu penelitian
Dilakukan  di  bagian  biokimia Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya Malang  oktober  2014.Untuk  melakukan penelitian  pengaruh  ED  (Ekstrak  Dekok)
dan  EE  (Ekatrak  Etanol) Ganoderma Lucidum
terhadap, jumlah hormon
testosteron, sel Leidiq testis.
Matrix kegiatan penelitin, meliputi definisi  operasional,  metodologi,  waktu pengamatan,  satuan  yang  digunakan  dan analisa dapat dilihat pada tabel 2.2
Tabel 2.2 Matrix penelitian.
Variabel Metode pemeriksaan Waktu pengamatan Satuan Analisa 1. Testosteron sel Leidiq IHC Hari ke 21 numerik/ rata-2 dari 10 Lap pandan varian  uji LSD
Hormon testosteron Leidiq , setelah diberi perlakuan  ekstrak  etanolik  dan  dekok diamati  pada  hari  ke  21.  Alat  yang digunakan:  Imuno  histokimia.  Kit  yang
digunakan untuk
pemeriksaan
Imunohistokimia  menggunakan  antibodi monoclonal ELISA Kit, (5E801): sc-73144, Santa Cruz Biotechnolory, INC.
Setelah  sediaan  slide  testis  dibawah pengecatan  H2O2,  preparat  di  masukan kedalam incubator 37 0 C selama 24 jam.
1.  Dilakukan  deparafinisasi  menggunakan Xilol dan alkohol berseri,   simpan dalam 4 0 C sampai dilakukan imunostaining (kulkas). 2.  Bilas  dengan  dH2O  selama  5  menit  dan lakukan  pencucian  dengan  cairan  PBS  Ph:
7,4 satu kali selama 5 menit, dan tiriskan.
3. Dilakukan Bloking endogenous peroksida mengunakan  3  %  H2O2  selama  20  menit. Cuci  menggunakan  PBS  pH  7,4  tiga  kali, selama  5  menit.  Bloking  unspesifik  protein menggunakan  5%  FBS  yang  mengandung 0,25% Triton X 100. dan cuci menggunakan cairan PBS ph 7,4 sebanyak tiga kali, selama 5 menit.
4.  Inkubasi  menggunakan  monoklonal  anti testosteron, selama 24 jam pada 4 0 C. 5.  Cuci  menggunakan  cairan  PBS  pH  7,4 tiga kali, selama 5 menit, kemudian
dilakukan inkubasi
menggunakan anti mouse biotin conjugated selama 2 jam.
6. Bilas menggunakan dH2O dan keringkan dan  anginkan. Mounting menggunakan  entelen  dan  tutup  dengan coverglass.
7.Amati dibawah mikroskop cahaya pembesaran  1000 X.Dihitung  sel  sel  warna biru.  Hasil pemeriksaan immuno histokimia dihitung  sel  berwarna  biru  di  bawah mikroskop cahaya menggunakan pembesaran  1000  X    sel  sel  warna  biru. Dihitung  sebanyak  10  lapang  pandang, hasilnya di rata rata.

## HASIL PENELITIAN
Penelitian  hormon  testosteron  sel  Leidiq testis  tikus  rattus  norvegicus  setelah
diberi  perlakuan  Ekstrak  etanol  atau dekok Ganoderma Lucidum (ß Glucan)

## Hasil setelah diberi perlakuan
Pada saat perlakuan kelompok tikus kontrol  (kelompok  A).  tikus  tidak  diberi perlakuan  hanya  diberi  makan  dan  minum, kelompok B, tikus diberi  makan ekstrak air PSP  (Poli  sakarida  Peptida)  dari  jamur Ganoderma  lucidum  sebanyak  2  ml  setiap hari  melalui  sonde  mulut  selama  21  hari, pada kelompok C tikus diberi makan ekstrak etanol  PSP  dari  jamur  Ganoderma  lucidum sebanyak  2  ml  setiap  hari  melalui  sonde mulut selama 21 hari,

## Hasil uji hormon testosteron
Hasil perbandingan produksi hormon  testosteron  organ  testis  secara
Imunohistokimia  menggunakan  anti  bodi monoclonal testosteron, ELISA Kit (5E801): sc-73144, Santa Cruz
Biotechnolory,  INC.  (spesifikasi  lihat  pada lampiran) setelah perlakuan ekstrak etanolik dan dekok, selama 21 hari preparat dilihat di bawah mikroskop cahaya dengan pembesaran  1000X  sebanyak  10  lapang pandang  dan  di  rata-rata  ,  maka  dihasilkan numerik sel/lap pandang. Hasil terlihat pada gambar 1 sebagai berikut:
A.Kontrol B. Dekok . C. Etanolik
Gambar  1. Hasil  perbandingan  produksi    hormon  testosteron  secara  Imunohistokimia menggunakan antibodi monoclonal testosteron, ELISA Kit, (5E801): sc-73144, Santa Cruz  Biotechnolory,  INC.  sel Leydig testis, dihitung  di  bawah  mikroskop  dengan pembesaran  1000X,  sebanyak  10  lapang  pandang  di  rata  rata    kelompok  ekstrak etanolik  (C) sel testosteron berwarna biru lebih banyak dibanding dekok (B).
Dari uji testosteron sel Leydig secara Imunohistokimia, menggunakan analisis varian ketiga kelompok hasilnya dapat dilihat pada Tabel 2.3.
Tabel 2.3.Hasil uji beda produksi Testosteron menggunakan analisis Varian
Kelompok n Rerata  Simpangan baku(sel) Nilai p Kontrol 9 3,67  1,803 a <0,0001 Dekok 9 10,89  2,088 b Ekstrak etanolik 9 15,44  5,270 c
Keterangan: Superscript yang berbeda menunjukkan perbedaan bermakna berdasar hasil uji LSD

## DISKUSI
Kemampuan gaya hidup dan perubahan lingkungan untuk mempengaruhi kesehatan  reproduktif  adalah  bidang  yang menarik dan relevan dari penelitian. Sel-sel Leydig  bertanggung  jawab  untuk  produksi testosteron  dalam  testis  mamalia.  Produksi testosteron tergantung pada stimulasi sel-sel ini  oleh  LH  yang  disekresi  dalam  pulse  ke
dalam  sirkulasi  perifer  oleh  kelenjar hipofisis  (pituitary)  bawah  otak  dalam menanggapi GnRH dari hipotalamus. Testosteron  dan  produk  aromatase-nya, estradiol,  kemudian  memberi  masukan kembali ke hipotalamus dan pituitary untuk menekan  produksi,  secara  sementara,  LH dan dengan demikian testosteron.
Menanggapi  berkurangnya  testosterone,

## A
B C
GnRH  dan  LH  diproduksi  lagi.  Siklus masukan  negatif  ini  (negative  feed  back) menghasilkan  sekresi  pulsatile  LH  yang diikuti oleh produksi pulsatile testosteron 4,6 . Selama kehidupan manusia laki-laki, penurunan  serum  testosteron  biasanya dimulai  pada  dekade  kelima 4,6 ,  Pada manusia, penurunan tersebut disertai dengan peningkatan kadar serum FSH dan peningkatan  atau  tidak  berubahnya  tingkat LH 28 .  Pengamatan  ini,  meskipun  mereka tidak mengesampingkan defisit yang berkaitan dengan usia dari sumbu hipotalamus-pituitary selama proses penuaan manusia, menunjukkan defisit testis primer.  Untuk  tujuan  ini,  kami  memilih untuk mempelajari penuaan sel Leydig pada tikus  Rattus  Norvegicus  18  bulan  sebagai model  untuk  manusia.  Dalam  ketegangan ini,  pada  manusia  dan  juga  jenis  tikus lainnya,  kadar  serum  testosteron  menurun seiring dengan usia.
Sejak  ribuan  tahun  Manusia  telah berburu jamur liar. Sudah  lama jamur telah digunakan  sebagai  sumber  makanan 16 , karena  komposisi  kimianya  yang  menarik dari  sumber  gizi.  Pada  awal  peradaban, jamur dikonsumsi terutama untuk palatabilitas  dan  rasa  unik 20,21 .  Penggunaan jamur  sama  sekali  berbeda  dari  tradisional, karena  banyak  penelitian  telah  dilakukan pada komposisi kimia jamur, yang mengungkapkan bahwa jamur dapat digunakan  sebagai  diet  untuk  mengobati penyakit.
Pada  percobaan  pendahuluan  pada tikus  putih  ( Rattus  norvegicus )  jantan  usia satu tahun normal, dan diberi ekstrak etanol Polisakarida  Peptida G  lucidum (β  Glucan) dengan  dosis  berbeda,  10  mg/kgbb,  20 mg/kgbb,  dan  30  mgkg/bb  terbukti  terjadi peningkatan  kadar  hormon  testosteron  total secara  bermakna  pada  dosis  30  mg/kg  bb, namun  kurang  optimal  untuk  itu  dosis  β Glucan G  Lucidum akan  ditingkatkan menjadi 50 mg/kg bb.
Antioksidan  adalah  senyawa  kimia melindungi  sel-sel  dari  kerusakan  yang disebabkan  oleh  molekul  tidak  stabil  yang dikenal sebagai radikal bebas. Radikal bebas merupakan  oksidan  kuat  dan  entitas  kimia yang  mengandung  elektron  yang  tidak berpasangan.  Mereka  mampu  secara  acak merusak  semua  komponen  tubuh,  yaitu. lipid, protein, DNA, gula dan terlibat dalam mutasi dan kanker 18 . Oksigen yang terperangkap oleh enzim seperti superoksida dismutase, katalase, dan glutation peroksidase. Selama produksi radikal bebas menciptakan  stres  oksidatif.  Antioksidan adalah  penting  pertahanan  tubuh  terhadap radikal  bebas  dan  jamur  yang  merupakan sumber  yang  kaya  antioksidan 8,15,17,19 . Properti antioksidan adalah Senyawa berkorelasi  dengan  senyawa  fenolik 25 . Ekstrak  jamur  memiliki  sifat  melindungi DNA 14 , ekstrak Ganoderma lucidum berfungsi sebagai perangkap radikal bebas 11 . Telah  ditemukan  Sifat  antioksidan  dari beberapa  jamur  kuping 15 ,  banyak  spesies jamur telah ditemukan meningkatkan
kekebalan  tubuh  yang  kuat,  hewan  dan kekebalan  manusia  terhadap  kanker 3,7,13,26 .
Triterpenoid  adalah  senyawa  kimia  utama pada G. lucidium.
Camptothecin
bertanggung  jawab  sebagai  antioksidan  di Ganoderma lucidum 27 .

## KESIMPULAN
Penelitian ini dapat diambil suatu kesimpulan  sebagai  berikut:  Ekstrak  etanol atau  dekok Ganoderma  lucidum dapat menstimulasi Lutinizing hormon (LH) untuk merangsang sel Leidiq dalam memproduksi hormon testosteron.

## KEPUSTAKAAN
1. Belanger  A, Candas B, Dupont A, Cusan L,  Diamond  P,  Gomez  L,  Labrie  F.1994. Changes  in  serum  concentrations  of conjugated  and  unconjugated  steroids  in 40- to 80-year-old men. J Clin Endocrinol Metab; 79:1086–1090.
2.  Boh.  B,  Berovic.  M,  Zhang.  J,  Zhi-Bin. L.2007. Ganoderma lucidum and pharmaceutically active compounds.
Biotech. Annu. Rev. 13, 265-301.
3.  Borchers  AT,  Stern  JS,  Hackman RM.1999.  Mushrooms,  tumors,  and immunity. Proc. Soc. Exp.
Biol. Med., 221: 281-293.
4.  Bremner  WJ,  Bagatell  CJ,  Christensen
RB, Matsumoto AM. 1993. Neuroendocrine aspects of the control of
gonadotropin  secretion  in  men.  In: Whitcomb  RW,  Zirkin  BR  (eds.), Understanding  Male  Infertility:  Basic
and Clinical Aspects. New York: Raven Press; 29–41.
5. Dotson a. 2003. Methods of Testosterone Supplementation  for  Man  and  Women Men’s Health Abstract, Desember.
6. Ellis GB, Desjardins C, Fraser HM.1983. Control  of  pulsatile  LH  releas  in  male rats. Neuroendocrinology; 37:177–183.
7.  Feng  W,  Nagai  J,  Ikekawa  T.  2001.  A clinical pilot study of EEM for advanced cancer treatment with EEM for improvement  of  cachexia  and  immune function compared with MPA.
Biotherapy, 15: 691-696.
8. Ferreira ICFR, Baptista P, Vilas-Boas M,
Barros L. 2007. Free-radical scavenging capacity  and  reducing  power  of  wild edible mushrooms from northeast Portugal:  individual  cap  and  stipe activity. Food Chem., 100: 1511-1516.
9.  Gao.  J, and  J. Han.  2008. Long-Term Toxicity Studies on Ganoderma lucidum capsules  for  drug  Lishizhen  Rats. 4 research and materia medica.
10.  Habijani.  J,  Berovi.  M,  Wraber.  B, Hodzar. D, Boh. B. 2001. Immunostimulatory effects Polysaccharies  of Ganoderma lucidum mushroom Submerged Cultivation of Biomass. Food Technol. Biotechnol, 39, 327-331.
11.  Jones  S,  Janardhanan  KK.  2000). Antioxidant  and  antitumor  activity  of Ganoderma  lucidum  ( curt  ex  Fr.).  P.
Karst-Reshi  (Aphyllophoromycetieae) from  south  India.  Int.  J.  Med. Mushrooms, 2: 195-200.
12. Kaufman J.M, Vermeulen A. 2005. The Decline  of  androgen  Levels  in  Elderly men  and  Its  Clinical  and  Therapeutic Implication.  Endocrine  Reviews  26  (6):
833-876.
13.  Kidd  PM  (2000).  The  use  of  mushroom glucans  and  proteoglycans  in  cancer therapy. Alternative Med. Rev., 5: 4-27.
14.  Kim  KC,  Kim  IG.1999. Ganoderma lucidum extract  protects  DNA  from
strand  breakage  caused  by  hydroxyl radical  and  UV  irradiation . Int.  J.  Mol. Med., 4: 273–277.
15.  Mau CN, Huang SJ, Chen CC. 2004.
Antioxidant properties of methanolic extracts from Grifola frondosa ,
Morchella esculenta and Termitomyces albuminosus mycelia. Food Chem.,   87:
111-118.
16.  Mattila  P,  Konko  K,  Eurola  M,  Pihlawa JM, Astola J, Vahteristo   Lietaniemi V,
Kumpulainen J, Valtonen M, Piironen V. 2001.  Contents  of  vitamins,  mineral elements, and some phenolic compounds in cultivated mushrooms. J. Agric . Food Chem., 49: 2343-2348.
17.Puttaraju NG, Venkateshaiah SU,
Dharmesh SM, Urs SM, Somasundaram R.
2006.  Antioxidant  Activity  of  Indigenous Edible Mushrooms. J. Agric. Food Chem.,
54: 9764-9772.
18.Przybytniak  G,  Ambroz  H.1999.  Free
radicals, their identification and determination. In: Marciniec B and Zak S.,
(eds.)  Analytical  methods  in  studies  of pollutants  and  hazardous.  Bydgoszcz: BTN, p. 17.
19.Oyetayo  FL.  2007.  Potential  antioxidant properties  of  Nigerian  edible  mushrooms. Agro foodIndustry , Hi-tech., 18: 44 -45.
20.Rai  RD.  1994.  Nutritional  and  medicinal values  of  mushrooms.  In: Advances  in Horticulture. (Chadha  KL,  Sharma  SR eds.),  Malhotra  publishing  house,  New Delhi, pp. 537-551.
21.Rai  RD.  1997.  Medicinal  mushrooms.  In: Advances  in  Mushroom  Biology  and Production (Rai RD, Dhar BL, Verma RN ed.)  Mushroom  society  of  India.  NRCM,
Solan, H.P., pp. 355-368.
22.  Shi  YL,  James  AE,  Benzie  IFF,  Buswell JA. 2002. Mushroom derivedpreparation in  the  prevention  of  H2O2  –induced oxidative  damage  to  cellular  DNA.
Teratoegensis Car cinogenesis Mutagenesis , 22: 103- 111.
23. Taher A. 2005. Proportion and Acceptance of Andropuse Symtomps Among Elderly Men:  A  Studlthy  in  Jakarta .  Indones  J Intern Med . 37: 82-86.
24.  Tan  R  S,  Meenu  J.  2005.  Aging  Men's Health  A  Case  -Based  A-pproarchl; Delaying  Aging  for  Men:  Longevity Lesson from Women; 11-20.

## 25. Velioglu YS, Mazza G, Gao L, Oomah BD
.1998.  Antioxidant  activity  and  total phenolics  in  selected  fruits,  vegetables, and  grain  products.  J.  Agric.  Food Chem., 46: 4113-4117.
26.  Wasser  SP,  Weis  AL.1999.  Medicinal properties  of  substances  occurring  in higher Basidiomycetes mushrooms: current  perspectives  (Review).  Int.  J.
Med . Mushrooms, 1: 1-62.
27. Zhou Z, Lin J, Yin Y, Zhao J, Sun, X, Tang
K.  2007.  Ganodermataceae:  Natural products and their related pharmacological  functions.  Amer.  J. Chin. Med., 35: 559-574.
28. Zwart AD, Urban RJ, Odell WD, Veldhuis
JD.1996.  Contrasts  in  the  gonadotropin- releasing hormone dose-response relationships  for  luteinizing  hormone, follicle-stimulating   hormone and alpha- subunit  release  in  young  versus  older men: appraisal with high- specificity immunoradiometric
assay and deconvolution
analysis.
Eur J
Endocrinol; 135: 399–406.