## ISOLASI DAN IDENTIFIKASI  FUNGI PADA LIMBAH INDUSTRI  KAYU PUTIH (Melaleuca leucadendra)
Isolation And Identification Fungi In Waste Of  Cajuput Oil (Melaleuca leucadendra) Industry
Umi Isnatin 1 )* , Parwi 2) , Takim Mulyanto 1)
1) Program Studi Agroteknologi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Darussalam Gontor
2) Program Studi Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Merdeka, Ponorogo
DOI: 10.21111/agrotech. v3i2. 1075 Terima 28 November  2017             Revisi 28  December  2017                  Terbit 30 Desember  2017
Abstrak: Penelitian ini bertujuan untuk isolasi dan seleksi  fungi limbah industri  kayu putih. Limbah penyulingan daun kayu putih selama ini belum dimanfaatkan untuk pupuk organik karena  sulit didekomposisi akibat kadar selulosa yang tinggi.  Disisi lain limbah ini memiliki potensi yang besar untuk dikembangkan sebagai bahan baku pupuk organik. Oleh sebab itu perlu dicari fungi yang memiliki kemampuan untuk menguraikan limbah tersebut. Fungi dapat mengekskresi enzim selulase yang berfungsi mendegradasi selulosa.  Sampel limbah diambil secara random  sampling di 3 tempat dilimbah pabrik kayu putih.   Fungi dikembangkan pada  media cair, kemudian diisolasi  dan diidentifikasi pada media padat. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ditemukan tiga isolat fungi yang ada di limbah industri kayu putih dan yang mempunyai potensi untuk agen decomposer hanya dua isolat yaitu aspergilus niger dan trichoderma viride .
Kata Kunci : Isolasi, identifikasi, fungi, limbah, industri kayu putih
Abstract: This study aimed to isolate and select the fungi in waste of Cajuput Oil Industry. Waste of  Cajuput  oil industry has not been used for organic fertilizer because it is difficult to decompose due to high cellulose content. On the other hand, this waste has great potential to be developed as raw material of organic fertilizer. It is therefore, necessary to select for fungi that have the
* Korespondensi email: umiagrounida@yahoo.com
Alamat : Jl. Raya siman km 5, Siman, Ponorogo, Jawa Timur 63471
ability to decompose the waste. Fungi can excrete cellulase enzymes that function to degrade cellulose. Samples taken by random sampling in three places of waste of Cajuput oil industry. Fungi are grown in liquid medium, then isolated and identified in solid media. The results showed that three isolates of fungi was found in waste of  Cajuput oil industry and which have potential for decomposer agent were only two isolates ie Aspergilus niger and Trichoderma viride .
Keywords : Isolation, identification, fungi, waste, Cajuput oil industry

## 1. Pendahuluan
Minyak kayu putih  merupakan  hasil tanaman hutan non kayu yang memiliki nilai ekonomis tinggi, sehingga memiliki potensi untuk dikembangkan.   Luas lahan kayu putih di KBPH Sukun yaitu 2.307 ha lahan produktif dan 1.429 ha lahan tidak produktif.  Kemampuan panen daun basah 7.720 ton/tahun.  Proses produksi minyak kayu putih, selain menghasilkan minyak juga menghasilkan limbah padat berupa sisa ranting dan daun yang telah mengalami proses penyulingan.  Pemanfaataan limbah penyulingan selama ini hanya digunakan untuk bahan bakar pabrik yang kebutuhannya hanya sedikit (20%), sedangkan sisanya masih belum dimanfaatkan sehingga jumlahnya semakin hari semakin bertambah banyak (Lukito, 2012).
Limbah penyulingan daun kayu putih yang belum dimanfaatkan akan mengalami kendala yaitu pertama, memerlukan tempat yang luas untuk menampung limbah. Kedua, bahan limbah mudah sekali terbakar, sehingga dapat mengganggu aktivitas
dilingkungan sekitar. Ketiga, limbah yang  terdekomposisi kurang sempurna akan  menghasilkan CO 2 sehingga  mengakibatkan pencemaran lingkungan. Limbah pertanian memiliki potensi untuk dijadikan bahan baku pembuatan pupuk organik, dengan cara ditemukannya fungi yang mampu mendekomposisi bahan tersebut (Amrullah et a l 2013).
Limbah penyulingan kayu putih memiliki potensi untuk dikembangkan menjadi bahan baku pembuatan pupuk organik tetapi kelemahannya proses dekomposisi berjalan lambat sehingga perlu waktu lama untuk menjadi pupuk organik. Limbah penyulingan kayu putih banyak mengandung lignoselulosa yang sulit didekomposisi. Agar proses dekomposisi berjalan lebih cepat maka langkah awal yang harus dilakukan adalah menemukan fungi yang memiliki kemampuan dalam menguraikan limbah tersebut. Oleh sebab itu perlu dilakukan penelitian untuk menentukan jenis fungi  yang mampu berkembang dengan baik, sehingga didapat isolate fungi yang dapat mempercepat proses dekomposisi limbah padat tersebut. Tujuan penelitian ini adalah  mengisolasi  dan mengidentifikasi fungi yang ada di limbah penyulingan daun  kayu putih.

## 2. Bahan dan Metode

## Lokasi pengambilan sampel
Penelitian  dilakukan  di lahan Industri penyulingan daun kayu putih  KPH Sukun di Desa Sidoharjo Kecamatan Pulung, Kabupaten Ponorogo.  Lokasi penelitian berada pada 111 o 30’  – 111 o 36’  bujur timur dan 7 o 50’ – 7 o 54’ lintang selatan. Ketinggian tempat 200 –  350 m diatas permukaan laut. Sampel   limbah diambil di lahan  pembuangan limbah penyulingan daun  kayu putih. Sampel dianalisa  di laboratorium  Fakultas Pertanian Universitas Merdeka Ponorogo dan Laboratorium MIPA Universitas Brawijaya Malang. Penelitian dilaksanakan pada bulan Maret – Juli 2016
Penelitian ini menggunakan bahan sebagai berikut limbah padat Kayu putih, PDA (medium Potatoes Dextrose Agar ), air bebas ion, CMC ( Carboxil Methil Cellulase ), larutan fisiologis,
Kongo red, alkohol 95%. Alat yang digunakan yaitu mikroskop, autoklaf, pH meter, oven, neraca analitis, thermometer,  hot plate stirrer, labu Erlenmeyer, gelas ukur, cawan petri, tabung reaksi, spatula, pipet, jarum ose, kaca obyektif, pinset, bunsen dan gunting.

## Pengambilan sampel
Sampel  diambil berupa limbah pabrik kayu putih.
Pengambilan sampel dilakukan pada 3 tempat,  dengan metode
Gontor AGROTECH Science Journal                                                123
random sampling . Sampel limbah sebanyak 250 g diambil    dan dimasukan dalam wadah steril dan diletakan dalam Cool box .

## Isolasi Fungi
Kultur dalam media pengayaan diambil 1 ml dan diencerkan dengan aquades  untuk mendapatkan pengenceran 10 -1
sampai 10 -6 .  Cara pengenceran sebagai berikut;  mengambil 1 ml dari media pengayaan kemudian dimasukkan dalam wadah yang telah berisi aquades 9 ml sehingga didapatkan  pengenceran 10 -1 .
Untuk membuat pengenceran 10 -2 maka ambil 1 ml dari pengenceran 10 -1 dan dimasukan dalam wadah yang berisi 9 ml aquades. Hal  yang sama dilakukan sampai mendapatkan pengenceran 10 -3 ,10 -4 ,10 -5 ,10 -6 . Kemudian masing-masing pengenceran ditumbuhkan pada medium PDA padat  yang ditambah ekstrak limbah. Media diinkubasi selama 24 –  48 jam pada suhu 28 – 30 o C. Peubah pengamatan meliputi bentuk, warna, tepian permukaan dan tekstur koloni (Yosmar et al , 2013).

## Pemurnian Fungi
Setiap media  isolasi dimurnikan dengan cara digoreskan pada medium PDA dalam cawan petri, lalu diinkubasi selama 5 hari pada suhu kamar. Setiap akhir inkubasi dilakukan pengamatan dan apabila kultur belum murni dilakukan cara yang sama sampai kultur benar benar murni.  Setelah didapatkan isolat yang murni
maka dilakukan identifikasi berdasarkan makroskopik (Mukaromah et al , 2015).

## Uji kemampuan degradasi selulosa
Isolat jamur diinokulasikan pada medium PDA dan diinkubasi di suhu ruang selama 24 jam. Setelah isolat jamur tumbuh, permukaan medium ditetesi dengan indikator Kongo red kemudian dibilas dengan NaCl. Selanjutnya,  diamati dengan mengukur diameter zona bening yang terbentuk di sekitar koloni (Suryani et al , 2012).

## Identifikasi fungi secara morfologi
Identifikasi berdasarkan panduan Barnett (1998). Identifikasi fungi dilakukan dengan mengamati beberapa karakter morfologi baik secara makroskopis.  Secara makroskopis karakter yang diamati meliputi : warna dan permukaan koloni, tekstur, zonasi, daerah tumbuh, garis-garis radial.

## Identifikasi Fungi berdasarkan sekuensing
Isolat jamur diekstrak menggunkan kit DNA, kemudian diuji kualitas ektrak DNA dengan menggunakan elektroforesis mengunakan 1.5 % agarosa. Sekuen DNA    dilakukan dengan menggunakan
primer ITS5 (5’GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG3’)
dan
ITS4
(5’TCCTCCGCTTATTGATATGC3’) dan reaksi amplifikasi PCR menggunakan suhu 95 °C selama 10 menit, dilanjutkan 95 °C selama 0.25 menit, 55 °C selama 0.5 menit, 72 °C selama 0.25 menit dengan siklus 35 kali, terakhir aplikasi suhu 72 °C selama 7 menit (Schoch et al , 2011).  Uji hasil  PCR  menggunakan elektroforesis  dengan  gel agarosa 1,5%. Hasil sekuensing dianalisis pada GenBank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov)  dengan program MEGA ver.5.03.

## 3. Hasil dan Pembahasan

## Hasil isolasi jamur
Sampel yang diambil di limbah kayu putih terdapat 3 jenis fungi yang  ditumbuhkan dalam media PDA yang diperkaya dengan ekstrak limbah kayu putih. Ketiga isolat jamur tersebut adalah J1, J2 dan J3. Isolat J1, J2 dan J3 mampu  hidup pada media yang mengandung ektrak kayu putih (Gambar 1).
Setelah disekrining dengan menggunakan media yang mengandung selulosa maka yang mampu berkembang adalah isolat J1 dan J2 (Gambar 2).

## Identifikasi jamur
Berdasarkan ciri ciri makroskopik maka isolat J1 teridentifikasi dari spesies Aspergillus sp (Tabel 1). Hasil pengamatan pada penelitian  sejalan dengan penelitian Subowo (2013) yang menyatakan bahwa Aspergillus  sp merupakan jamur
yang mempunyai karakter:  koloni berwarna kuning kecoklatan hingga  coklat kehitaman, sedangkan secara mikroskopik mempunyai hifa  baik bersekat maupun tidak bersekat, konidiofor tidak bercabang yang mempunyai  sterigma primer dan sekunder.
Gambar 1.  Isolat (I = J1. II=J2, III=J3) Gambar 2. Uji selulose J1 J2
Tabel  1. Karakter makroskopik isolat J1 (Aspergilus sp )  dan J2
(Trichoderma sp .)
No  Karakter makroskopik J1 = Aspergilus sp J2 = Trichoderma sp 1 Warna koloni Hijau Hijau 2 Tepi koloni Rata Rata 3 Permukaan koloni Mendatar Mendatar 4 Tekstur permukaan koloni Halus Halus 5 Titik tumbuh Cakram Cakram
Hasil pengamatan pada penelitian  sejalan dengan penelitian Subowo (2013) yang menyatakan bahwa Aspergillus sp merupakan  jamur yang mempunyai ciri-ciri: koloni berwarna putih, kuning, kuning kecoklatan, coklat kehitaman hifa bersekat dan tidak bersekat, konidiofor tidak bercabang,  konidium pada ujung stipe, memiliki sterigma primer dan sekunder.
Isolat J2 berdasarkan ciri makroskopik teridentifikasi dari genus Trichoderma sp . Ciri-ciri makroskopik Trichoderma sp yang diisolasi pada medium PDA ditampilkan  pada Tabel 1.Hasil pengamatan pada penelitian ini didukung oleh penelitian Nadhifah (2016) menyatakan bahwa koloni Trichoderma sp berwarna putih pada bagian tepi berwarna kuning, kemudian berubah berwarna hijau tua. Hifa berwarna bening transparan dengan  diameter 2,5
µm. Konidiofor bercabang, berwarna kehijauan, diameter 5 µm, dan panjangnya10 µm, dinding konidiofor halus. Fialida berwarna kehijauan dengan ukuran 10 x 3,75 µm. Konidia berwarna kehijauan,berbentuk subglobose, dengan ukuran 5 x 2,5 µm dan berdinding halus
Berdasarkan analisis sekunsing maka isolate J1 teridentifikasi sebagai Aspergillus niger dan J2 teridentifikasi sebagai
Trichoderma viride. Jamur Asperegilus  niger pada penelitian ini memiliki ciri yang sama dengan jamur Asperegilus niger yang terdapat pada tanaman kakao yaitu  koloni berbentuk bulat, tekstur lembut, tepi koloni rata, serta berwarna hitam dan coklat kehitaman (Wulandari et al., 2016).  Sedangkan Trichoderma viride memiliki ciri yang sama dengan penelitian Suryani et al ,
(2012) yaitu memiliki tekstur permukaan halus dan berbutir, permukaan koloni mendatar, margin koloni rata, titik tumbuh berbentuk seperti cakram berwarna putih, kuning, hijau muda, dan hijau tua, memiliki lingkaran konsentris.

## 4. Kesimpulan
Limbah industri kayu putih mengandung  fungi yang berperan dalam menguraikan limbah tersebut yaitu Aspergillus  niger dan Trichoderma viride. Jamur yang ditemukan di limbah kayu putih memiliki peran dalam mendegradasi selolusa  dan dapat digunakan sebagai agen dekomposer limbah tersebut.

## 5. Referensi
Amrullah M , Nawir NH, Abdullah A, Tambaru E. 2013. Isolasi jamur mikroskopik pendegradasi lignin dari beberapa substrat alami. Jurnal Alam dan Lingkungan , Vol.4 (7): 19-
25
Barnett, H.L. and B.B. Hunter. 1998. Illustrated genera of
imperfect fungi. 4ed. USA: Prentice-Hall, Inc.
Lukito  M.  2012. Model pendugaan biomassa tanaman kayu putih (KASUS BKPH Sukun KPH Madiun).  Jurnal Agri-tek ,
12( 2) : 36-48.
Mukharomah E, Munawar, Widjajanti H. 2015. Identifikasi dan sinergisme kapang lipolitik dari limbah SBE ( spent bleaching earth ) sebagai agen bioremediasi. Jurnal Ilmu Lingkungan 13(1) : 19-20
Nadhifah YM, Hastuti US dan  Syamsuri I, 2016.Isolasi,
karakterisasi, dan identifikasi mikoflora dari rizosfer tanah pertanian tebu (saccharum officinarum l.) sebagai bahan ajar kingdom fungi untuk siswa kelas x sma. Jurnal Pendidikan:
Teori, Penelitian, dan Pengembangan (1)10 : 2023—2030
Suryani Y, Andayaningsih P,Hernaman  I, 2012. Isolasi dan identifikasi jamur selulolitik pada limbah produksi bioetanol dari singkong yang berpotensi dalam pengolahan limbah menjadi pakan domba. Jurnal ISTEK (7)1 : 1-10
Subowo, YB. 2013. Kemampuan beberapa  jamur tanah dalam
menguraikan pestisida deltametrin dan senyawa lignoselulosa. Berita Biologi 12(2): 231-238
Schoch, C. L., K. A. Selfert., S.Huhndorf., V. Robert., J. L. Spouge.,dan C. A. Levesque. 2011. Nuclear Ribosomal Internal Transcribed Spacer (ITS) Region as a Universal DNA Barcode Marker for Fungi. Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA , 109(16):1-6.
Wulandari DE , Asrul, Lakani I. 2016. Seleksi jamur antagonis aspergillus niger dari beberapa lahan perkebunan kakao untuk mengendalikan Phytophthora palmivora. J.  Agroland
23 (3) : 233 – 242
Yosmar R, Suharti N, dan  Rasyid R. 2013.Isolasi dan Uji Kualitatif Hidrolisat Jamur Penghasil Enzim Selulase dari Tanah Tumpukan Ampas Tebu. Jurnal Farmasi Andalas  1 (1): 5-12.