## PENGARUH PERLAKUAN PEMECAHAN DINDING SEL Botryococcus braunii DAN Nannochloropsis  MENGGUNAKAN MICROWAVE DAN SONIKATOR TERHADAP MINYAK YANG DIHASILKAN
Effect of Cell Wall Disruption Treated by using Microwave and Sonicator of Botryococcus braunii and Nannochloropsis on The Amount of Oil Produced
Sri Amini 1* ,  Diini Fitriani 1 ,  dan Sugiyono 1
1 Balai  Besar  Penelitian  dan  Pengembangan  Pengolahan  Produk  dan  Bioteknologi  Kelautan  dan  Perikanan, Jl. K.S. Tubun  Petamburan  VI,  Jakarta Pusat, Indonesia
*  Korespondensi  Penulis:  aminisri@yahoo.co.id
Diterima: 10 Desember 2013;  Disetujui: 3 Juni 2014

## ABSTRAK
Penelitian  pengaruh  pemecahan  dinding  sel  Botryococcus  braunii  dan  Nannochloropsis menggunakan  microwave  dan  sonikator  terhadap  jumlah  minyak  yang  dihasilkan  telah  dilakukan di Laboratorium BBP4BKP, Slipi, Jakarta. Botryococcus braunii dan Nannochloropsis telah dikultur di  dalam  bak  fiber  ukuran  1000  liter  berisi air  laut,  diaerasi  terus  menerus  dan  diberi  cahaya  sinar matahari.  Conwy  media  ditambahkan  ke  dalam  media  air  laut  sebagai  nutrisi  suplemen  pada kultur.  Biomassa  Botryococcus  braunii  dan  Nannochloropsis  dipanen  pada  umur  4  hari,  lalu dipecah  dinding  selnya  menggunakan  microwave  dengan  frekuensi  2540  MHz  dan  sonikator dengan  frekuensi  20  KHz.  Minyak  algae  diekstraksi  menggunakan  pelarut  heksan  dilanjutkan dengan  evaporasi  menggunakan  rotavapor.  Hasil  menunjukkan  bahwa  jumlah  minyak  dari Botryococcus  braunii  hasil  pemecahan  dinding  sel  menggunakan  sonikator  yaitu  22,24%  dan microwave  yaitu  7,92%.  Jumlah  minyak  Nannochloropsis  dengan  pemecahan  dinding  sel menggunakan  sonikator  adalah  11,92%  dan  microwave  adalah  16,54%.  Ekstraksi  minyak  tanpa pemecahan dinding  sel Botryococcu braunii sebesar 0,84% dan Nannochloropsis sebesar 1,54%. Asam  lemak  jenuh  pada  Botryococcus  braunii  antara  lain  asam  stearat  (18%),  palmitat  (5%), behenat  (1%),  dan  arachidat  (4%)  dengan  jumlah  total  28%.  Sedangkan  pada  Nannochloropsis adalah  asam  stearat  (21%), palmitat (9%),  behenat  (1%),  dan arachidat  (2%)  dengan  jumlah  total 33%.
KATA KUNCI: Botryococcus braunii, Nannochloropsis, microwave, sonikator, minyak

## ABSTRACT
Study on the amount of oil produced of Botryococcus braunii and Nannochloropsis microalgae by treatments of cell wall disruption by microwave and sonicator have been done at Research and Development Center for Marine and Fisheries Product Processing and Biotechnology Laboratory, Slipi, Jakarta.  Botryococcus braunii  and Nannochloropsis  were cultured  in  fiber flasks containing 1000  litre  of  sea  waters,  aerated  and  illuminated  by  sun  shine  fluorescent.  Conwy  medium  was added  to  sea  water  culture  medium  as  supplementary  nutrients.  The  biomass  of  Botryococcus braunii and Nannochloropsis were harvested at 4 days culture, and the cell wall was broken using microwave  at  frequency of  2540  MHz  and  sonicator  at  the  frequency  of  20  KHz. Oils  algae  was extracted using  hexsane and  than the  solvent was  evaporated using  rotavapor. Results  showed that  the  amount  of  oil  extracion  from  Botryococcus  braunii  which  the  cell  wall  disrupted  using sonicator  was  22.24%  and  microwave  was  7.92%.  The  amount  of  Nannochloropsis  disrupted using  sonicator  was  11.92%  and  microwave  was  16.54%.  Oil  extracted  without  disruption  of cell walls from Botryococcus braunii was 0.84% and Nannochloropsis was 1.54%. Saturated fatty acid in Botryococcus  braunii  were  stearic acid  (18%),  palmitic (5%), behenic (1%)  and arachidic (4%) with total amount of 28%, while in Nannochloropsis were stearic acid (21%), palmitic (9%), behenic (1%) and  arachidic  (2%) with  total amount of 33%.
KEYWORDS: Botryococcus braunii, Nannochloropsis , microwave, sonicator, oils

## PENDAHULUAN
Botryococcus braunii dan Nannochloropsis adalah mikroalga hijau dari kelas Chlorophyceae yang hidup di lingkungan air tawar sampai air laut. Kandungan klorofil (zat hijau daun) mencapai 1,5–2,8% yang terdiri atas  klorofil  a,  b,  dan  c,  sehingga  di  permukaan perairan tampak berwarna hijau-coklat kekuningan. Botryococcus braunii dan Nannochloropsis memiliki inti sel dan dinding sel yang keras bersifat non motil, yaitu pergerakannya sangat dipengaruhi oleh arus perairan.  Botryococcus  braunii  kaya  hidrokarbon hingga mencapai 15–76% berat kering. Hidrokarbon rantai panjang dalam bentuk minyak dari spesies ini dikenal  dengan  nama  botryococcene  dan  sangat potensial  sebagai  sumber  energi  atau  biodiesel (Kabinawa,  2008).  Botryococcus  braunii  dan Nannochloropsis  termasuk  algae  mikroskopik, berkembang biak sangat cepat dengan daur hidup relatif pendek (Panggabean, 1998).
Indonesia mempunyai perairan dangkal yang luas dengan  intensitas  sinar  matahari  yang  cukup sepanjang  tahun,  sehi ngga  sangat  besar kemungkinannya  untuk  membudidayakan  alga mikroskopik. Mikroalga mengandung minyak yang komposisinya mirip seperti tanaman darat. Hal yang menarik  untuk  dikembangkan  adalah  kandungan minyak dalam mikroalga pada spesies tertentu cukup tinggi, yaitu rata-rata 40%. Kandungan minyak spesies Botrycoccus  braunii  dapat  melebihi  kandungan minyak  tanaman  darat  penghasil  minyak,  seperti kelapa,  jarak,  dan  sawit.  Menurut  Chisti  (2007), kandungan  minyak  Tetraselmis  sebesar  15–23%, sedangkan Botrycoccus braunii sebesar 44,5–85% (Borowitzka, 1992). Kandungan minyak nabati yang tinggi mengindikasikan kandungan senyawa asam lemak yang tinggi dalam mikroalga. Semakin banyak kandungan asam lemak dalam suatu bahan, maka semakin besar pula biodiesel yang dihasilkan (Zuhdi & Sukardi, 2005).
Jenis mikroalga Botryococcus braunii adalah satu- satunya mikroalga yang menghasilkan hidrokarbon dalam jumlah yang cukup banyak, yaitu sekitar 80% dari  berat  keringnya.  Hidrokarbon  Botryococcus braunii terletak di luar selnya di dalam matriks koloni (Kabinawa,  2001) .  Bot ryoc occus  m am pu menghasilkan hidrokarbon dengan rantai C23–C40, misalnya n-alkadiena dan n-alkena. Kemampuan ini membuat  Botryococcus  braunii  amat  potensial sebagai  sumber  bahan  bakar  cair  terbarukan, menggantikan  bahan  bakar  minyak  fosil,  seperti m inyak  bum i,   gas,   dan  batu  bara.  Dengan menghasilkan  senyawa  hidrokarbon  jenis  alkena, mikroalga  dapat  dijadikan  pilihan  sebagai  sumber energi  masa  depan  yang  dapat  berperan  dalam
pengembangan bioenergi, terutama biohidrogen yang bersumber dari mikroalga perairan air tawar ataupun laut.  Mikroalga  yang  terkenal  sebagai  penghasil hidrokarbon, sumber biodiesel ini, adalah diatom dan Chlorophyta, seperti Botryococcus braunii (Kabinawa, 2001).
Nannochloropsis  juga  merupakan  ganggang m ikroskopis  dari  kelas  Chlorophyceae  yang mempunyai kandungan minyak cukup tinggi. Menurut Borowtzka (1992) kelas Chlorophycae mempunyai kandungan  m i nyak  berki sar  antar a  1–70%. Nannochloropsis  cukup  banyak    dan  melimpah  di daerah  t ropi s  ter m asuk   Indonesi a,  m udah dibudidayakan di seluruh hatchery sebagai pakan larva ikan, kekerangan dan biota laut lainnya. Oleh sebab itu  selain  jenis  Botryococcus  braunii  perlu  pula diketahui  apakah  jenis  Nannochloropsis  ini  cukup potensial untuk dikembangkan sebagai bahan baku biofuel.
Produksi biodiesel dari mikroalgae meliputi 4 tahap penting yaitu kultivasi biomassa, pemisahan biomassa dari  media,  ekstraksi  minyak  dan  transesterifikasi minyak  menjadi  produk  akhir  (Lee  et  al.,  2010). Keempat  tahapan  ini  sangat  penting  diperhatikan untuk diperoleh rendemen minyak dalam jumlah yang banyak. Ketangguhan dinding sel dan membran sel mikroalga  membuat  lipid  tidak  mudah  diekstraksi sehingga dibutuhkan  energi besar yang intensif untuk merusak sel tersebut (Lee et al., 2012).
Dari  berbagai  keuntungan  yang  dimiliki  alga mikroskopik  m empunyai  potensi  besar  untuk dikembangkan sebagai bahan baku biofuel, namun perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut,  khususnya berkaitan dengan teknik pemecahan dinding sel dan proses  ekstraksi  m enggunakan  pelarut  untuk memperoleh jumlah  minyak yang maksimum.

## BAHAN DAN METODE

## Kultivasi dan Pemanenan Mikroalgae
Kultivasi starter mikroalga Botryococcus braunii, dan Nannochloropsis  dilakukan di dalam laboratorium menggunakan air laut dengan kadar garam 25 ppt di dalam  wadah  ukuran  30  liter.  Wadah-wadah ditempatkan  pada  suhu  ruang  terkontrol  (25  °C) menggunakan cahaya lampu neon pada intensitas 2000 lux. Hasil kultivasi starter skala laboratorium kemudian  ditebarkan pada kultur skala massal  di luar  ruangan  dalam  wadah  kapasitas  1000  liter menggunakan air laut   berkadar garam 25 ppt,  aerasi terus menerus dan  cahaya  matahari  untuk proses fotosintesis. Pada kultivasi skala laboratorium ataupun skala massal digunakan pupuk Conwy (Fogg & Thake
1987;  Amini,  2004).  Pertumbuhan  sel  mikroalga diamati kepadatan selnya  menggunakan cara  Oh- Hama & Miyachi (1992).
Pemanenan biomassa Botryococcus braunii dan Nannochloropsis dilakukan  pada umur 4 hari kultivasi dengan cara mengendapkan/flokulasi biomassanya dengan  penambahan  NaOH  sampai  pH  9,0–11,0. Flokulan  yang  mengendap  kemudian  didiamkan selama 24 jam lalu  disaring menggunakan kain satin atau filterbag. Hal tersebut dilakukan karena ukuran Botryococcus braunii, dan Nannochloropsis  berkisar antara  3–5 µm. Biomassa mikroalga dalam bentuk flokulan  dinetralkan  terlebih  dahulu  dengan  asam m enjadi  pH  7,0–8,0.  Pengeringan  biom assa Botryococcus braunii  dan Nannochloropsis   dengan cara penjemuran di atas kain satin. Kadar  air dari biomassa  mikroalgae kering  dihitung  berdasarkan metode  AOAC  (1999).  Hasil  panen  biom assa mikroalgae  tersebut    dipersiapkan    untuk  dipecah dinding  selnya  m enggunakan  sonikator  dan microwave sebelum diekstrak minyaknya.

## Cara Pemecahan Dinding Sel Mikroalgae
Pemecahan dinding sel Botryococcus braunii  dan Nannochloropsis menggunakan sonikator  dilakukan dengan  frekuensi  20  KHz  suhu  mencapai  70  °C. Sedangkan  pemecahan  Botryococcus  braunii  dan Nannochloropsis menggunakan microwave  dilakukan dengan frekuensi 2540 MHz  suhu mencapai  90 °C.
Terpecahnya dinding sel dapat diketahui melalui foto scanning menggunakan alat SEM  di Laboratorium LIPI Cibinong.

## Ekstraksi Minyak Mikroalgae
Ekstraksi  minyak  dilakukan  dengan  modifikasi metode  Algae  Oil  Extraction,  com.  26/12/2006 (Banerjee et al., 2002; Anon., 2006; Dayananda et al., 2007),  menggunakan pelarut heksana. Biomassa mikroalga  dari  jenis  Botryococcus  braunii  dan Nannochloropsis yang telah dipecah dinding selnya diekstr ak  m enggunakan  n-heksana  untuk mengeluarkan minyaknya (Gambar 1).
Gambar 1.   Skema ekstraksi minyak mikroalga. Figure. 1.  Scheme of microalgae oils extractions.

## 50 g biomassa Botryococcus braunii dan Nannochloropsis/
50 g of Botryococcus braunii  and Nannochloropsis biomass
Kontrol/
Control/No disruption
Pemecahan dinding selnya dengan
microwave/Cellwalls disruption using microwave
Maserasi  selama 24 jam  dengan n-hexane – Biomassa : Solven = 1 : 1/ n-hexane maseration for 24 hours – Biomass  : Solven  = 1 : 1
Sentrifuse  kecepatan 4000 rpm, suhu 20 o C selama 10 menit/ Centrifuge at 4000 rpm, temperature of  20 o C for 10 min.
Supernatan  diuapkan di dalam rotary evaporator suhu 70 o C/ Evaporated of supernatant in rotary evaporator at temperature of 70 o C
Minyak Mikroalga/
Oil of Microalge
Pemecahan dinding sel dengan sonikator/Cellwalls disruption using sonicator

## Rancangan Penelitian

## Pada  penelitian  ini  digunakan  mikroalga  jenis
Botryococcus  braunii  dan  Nannochloropsis  yang dipecah dinding selnya menggunakan sonikator dan microwave  dan  yang  tanpa  pemecahan  sebagai kontrol. Percobaan dilakukan dengan 4 kali ulangan.

## Parameter  yang  diamati
Pada penelitian ini diamati  parameter kepadatan sel selama  kultivasi menggunakan haemocytometer pada  m ik rosk op,  t erpec ahnya  dinding  sel menggunakan SEM (Scanning Electron Microscop), jumlah  minyak  hasil  ekstraksi  (AOAC,1999)  dan komposisi  asam  lemak  menggunakan  GCMS (Borowitzka, 1992 dan Puspita, 2009).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Kepadatan sel Botryococcus braunii dan Nannochloropsis
Hasil kultivasi mikroalga di dalam  media 1000 liter air laut yang dipanen pada umur 4 hari pemeliharaan, menghasilkan  kepadatan sel Botryococcus braunii log 7,04 sel/ml dan Nannochloropsis  adalah log 7,15 sel/ml (Gambar 2). Pemberian pupuk Conwy yang sama  pada  media  kultivasi  menghasilkan  jumlah kepadatan sel berbeda. Hal ini sebab setiap spesies mikroalga  mempunyai  laju  pertumbuhan  yang berbeda.  Pemanenan  mikroalgae  pada  hari  ke-4 kultivasi  dilakukan  karena  kepadatan  sel  sudah m encukupi  (l og  7, 0).  Bila  ditangguhkan pemanenannya maka pertumbuhan biomassa dapat
mengalami penurunan sehingga kepadatan menjadi rendah  bahkan  mengakibatkan  kematian.  Hal  ini disebabkan komposisi nutrient yang dibutuhkan oleh sel mikroalga di dalam media tumbuh sudah berkurang yang dapat mengakibatkan fase konstan (stasionary phase) menjadi lebih cepat dan diikuti fase kematian yang ditunjukkan dengan  warna bening dan selnya menjadi hilang seketika (Amini, 2004). Pada penelitian ini  pemanenan  dilakukan  pada  fase  exponensial. Sepanjang masa pertumbuhan exponensial koloni alga Botryococcus braunii  memiliki  warna  hijau  karena mengandung klorofil a dan b, serta memiliki kandungan hidrokarbon  antara  20–33%  dari  berat  tubuhnya (Brown, Knigth, and conwan, 1969; Wolf, 1983 dalam Nurhadiati,  2008)  umumnya  hidrokarbon  yang dihasilkan  memiliki  jumlah  karbon  C27-C31  dan mayoritas berupa olein. Kultivasi  dalam  jumlah besar (volume  media  1000  liter)  yang  dilakukan  di  luar ruangan mempunyai waktu pertumbuhan yang cepat dan maksimum pertumbuhannya hanya 7 hari. Bila dibandingkan kultivasi di dalam ruangan terkontrol dengan cahaya lampu neon pertumbuhannya dapat mencapai  2 sampai  3  minggu, dengan kepadatan optimum  dapat mencapai log 8,0 sel/ml (Amini, 2005).

## Hasil Pemecahan Dinding Sel Botryococcus braunii dan Nannochloropsis
Hasil  pemecahan  dinding  sel  maupun  tanpa pemecahan  dinding  sel  mikroalga  (kontrol)  yang diamati  menggunakan  SEM  dapat  dilihat  pada Gambar 3–8.  Sel mikroalga yang dipecah dinding selnya  menggunakan  microwave  dan  sonikator menunjukkan sel hancur seperti gumpalan putih yang terlihat jelas pada Gambar 4, 5, 7, dan 8. Sedangkan
L o g C e ll/ m l Hari/Days
Gambar 2. Kepadatan sel mikroalgae di dalam volume media air laut (1000 liter). Figure 2. Cell  density of microalgae in sea wáter (1000 litre).
Botryococcus
Nannochloropsis
Gambar 3.  Sel Botryococcus braunii ukuran  2–3  µm (kontrol). Figure 3.  Botryococcus braunii  cells  size of  2–3  µm (control).
Gambar 4. Sel  Botryococcus  braunii  hasil pemecahan menggunakan microwave, frekuensi 2540 MHz.
Figure 4. Botryococcus  braunii  cell  treated  by microwave, frequency of 2540 MHz Gambar 5. Sel  Botryococcus  braunii    hasil pemecahan  menggunakan  sonikator, frekuensi 20 KHz. Figure 5. Botryococcus  braunii  cell  treated  by sonicator,  frequency 20 KHz.
Gambar 6.   Sel Nannochloropsis  (kontrol) ukuran sel 3–5 µm.
Figure 6.  Nannochloropsis cell (control) cell size 3–5 µm.
SEI 20 KV       WD 2.6 um x 5,000 1 µm 10 Juli 2013 SEI 20 KV       WD 2.6 um x 5,000 1 µm 10 Juli 2013
Gambar 7. Sel Nannochloropsis hasil pemecahan menggunakan  microwave  (frekuensi 2540 MHz).
Figure 7. Nannochloropsis treated by microwave (frequency of 2540 MHz). Gambar 8. Sel Nannochloropsis hasil pemecahan menggunakan sonikator (frekuensi 20 KHz). Figure 8. Nannochloropsis  cell  treated  by sonicator (frequency of 20 KHz).
pada perlakuan kontrol yang tidak dipecah dinding selnya  mikroalgae  jenis  Botryococcus  braunii  dan Nannochloropsis  masih berbentuk bulat-bulat seperti terlihat pada Gambar 3 dan 6.
Gambar  SEM  (Scanning  Electron  Microscop) menunjukkan bahwa sel-sel Botryococcus braunii dan Nannochloropsis  yang berukuran 2–3 µm dan 3–5 µm  telah  terpecah  dengan  sempurna  setelah mendapat perlakuan pemecahan dinding sel, sehingga minyak pada bagian vacuola tempat penyimpanan minyak  pada sel-sel mikroalga dapat keluar.

## Persentase Minyak Mikroalga
Biomassa kering mikroalga  jenis  Botryococcus braunii    dan  Nannochloropsis  yang  telah  dipecah dinding selnya menggunakan perlakuan microwave dan sonikator kemudian diekstrak minyaknya. Hasil minyak yang diperoleh dari 2 jenis mikroalga yaitu
Botryococcus  braunii  dan  Nannochloropsis  dapat dilihat pada Tabel 1. Jumlah minyak mikroalga dengan perlakuan  pemecahan  dinding  sel  menggunakan sonikator dan microwave menunjukkan hasil berbeda. Jumlah  minyak dari   hasil  pemecahan dinding  sel mikroalga  Botryococcus  braunii  menggunakan sonikator sebesar 22,24%, sedangkan Nannochloropsis sebesar 11,92%. Hal tersebut karena ukuran  sel  Botryococcus   braunii lebih kecil (2–3 µm) dibandingkan Nannochloropsis (4–5 µm) sehingga dengan pemanasan suhu 70 °C dengan frekwensi  20 KHz dapat menekan sumber minyak yang tersimpan di  dalam  vacuola  yang  terdapat  didalam  selnya. Sebalik nya  pada  pem ec ahan  dinding  sel menggunakan microwave  jumlah minyak yang lebih besar  diperoleh  dari  jenis  Nannochloropsis  yaitu 16,54% dibandingkan dengan  Botryococcus braunii (7,92%). Hal ini dimungkinkan karena sinar radiasi microwave  dengan frekwensi 2540 MHz pada suhu

## Tabel 1. Persentase  minyak mikroalgae dengan perlakuan pemecahan dinding sel  dan kontrol (% bobot kering)
Table 1. Oil  percentage    of  microalgae  by  using  cell  walls  disruption    treatments    and control (% dry  weight)
SEI 20 KV       WD 2.6 um x 5,000
1 µm 10 Juli 2013 SEI 20 KV       WD 2.6 um x 5,000 1 µm 10 Juli 2013
Sonicator M icrowave Botryococcus braunii 0.840 + 0.496 22.24 + 2.682 7.92 + 1.945 Nannochloropsis 1.540 + 0.768 11.92 + 3.063 16.54 + 2.925 Spesies Mikroalgae/ M ikroalgae Species Kontrol/Control Metode Pemecahan/Breaking Method
90  °C  l ebih  m udah  m enem bus  dinding  sel Nannochloropsis yang mempunyai ukuran 3–5 µm dengan permukaan membrane sel yang lebih luas dari Botryococcus braunii. Sedangkan membran dinding sel Botryococcus braunii dengan ukuran lebih kecil (2–3 µm) mempunyai luas permukaan sel yang lebih kecil.  Pada kontrol  tanpa pemecahan dinding sel jumlah minyak yang diperoleh dari 2 jenis mikroalga cukup rendah yaitu Botryococcus braunii = 0,84% dan Nannochloropsis = 1,54%. Menurut Borowtzka (1992) kelas Chlorophycae termasuk jenis Nannochloropsis mempunyai kandungan minyak berkisar antara 1– 70%.  Nam un  dem ikian  kandungan  m inyak Nannochloropsis pada penelitian ini masih rendah.  Hal tersebut  dimungkinkan  karena  proses  maserasi dengan  n-heksana  belum  sempurna  menembus membran vacuola  sebagai tempat sumber minyak di dalam sel (Amini, 1999, 2003, 2005). Hal tersebut didukung pernyataan Darwis (2000) dan Susiloningsih (1999) bahwa proses maserasi ekstraksi yang lama akan menghasilkan rendemen minyak yang semakin
tinggi. Namun demikian  pada penelitian ini maserasi dalam n-heksana yang dilakukan selama 24 jam pada perlakuan kontrol (tanpa pemecahan dinding sel) dari Nannochloropsis  dan  Botryococcus  braunii  masih menghasilkan jumlah minyak yang rendah, sehingga untuk mendapatkan minyak dalam jumlah  yang lebih besar diperlukan  waktu maserasi  lebih dari 24 jam.

## Kandungan Asam Lemak
Analisis  jenis  asam  lemak  pada  penelitian  ini dilakukan hanya pada rendemen minyak yang tinggi yaitu  dari  jenis  Botryococcus  braunii  dengan pemecahan dinding sel  menggunakan sonikator dan dari Nannochloropsis  dengan pemecahan dinding sel menggunakan microwave. Sebagaimana diketahui bahwa  jenis-jenis asam  lemak merupakan penyusun utama minyak nabati atau lemak. Asam lemak dapat dibedakan menjadi asam lemak jenuh (saturated fatty acids = SAFA) yaitu asam lemak yang tidak memiliki ikatan  rangkap  dan  asam  lem ak  tidak  jenuh
Tabel  2. Hasil  analisis asam lemak mikroalga (%)
Table 2. The results of fatty acid contents of microalgae (%)
No Kandungan Asam Lemak/ Fatty Acid Contents Botryococcus Nannochloropsis 1 Miristic C14 10 6 2 Stearic  C18 18 21 3 Palmitic C16 5 9 4 Behenic C22 1 1 5 Arachidic C20 4 2 Total 38 39 6 Oleic C18 8 8 7 Vak senic C14 1 1 8 Palmitoleic C18 1 6 6 9 Linoleic C 18 2 9 6 10 Linolenic C 18 3 1 2 11 Oleic -tetranoic C 18 4 0 0 12 Arachidonic C 20 4 5 2 13 EPA 4 4 14 DHA 9 9 Total 43 38 15 Lain-lain/Others 20 23 Asam lemak jenuh/Saturated fatty acid
Asam lemak tidak jenuh/Unsaturated fatty acid
monouns atur ated  fatt y  ac id  (M UFA)  dan polyunsaturated  fatty  acid  (PUFA)  yang  memiliki ikatan rangkap. Hasil analisis  asam lemak pada jenis Botryococcus  braunii  dan  Nannochloropsis    dapat dilihat  pada  Tabel  2.  Jenis  asam  lemak  jenuh (saturated  fatty  acids)  pada  Botryococcus  braunii terdiri atas asam miristat 10%, asam stearat 18%, palmitat 5%, behenat 1% dan arachidat 4% dengan jumlah total 38%.  Sedangkan  jenis asam lemak jenuh pada Nannochloropsis antara lain asam miristat 6%, asam  stearat  21%,  palmitat  9%,  behenat  1%  dan arachidat 2% dengan jumlah total 39%. Asam lemak tidak jenuh (unsaturated fatty acid) dari Botryococcus braunii  dan  Nannochloropsis  diketahui  terdiri  dari asam oleat, vaksenat, palmitoleat, linoleat, linolenat, arachidonat, EPA dan DHA  yang mempunyai  proporsi berturut turut 43 dan 38%  (Tabel 2). Meskipun proporsi asam lemak jenuh pada Botryococcus braunii  lebih rendah dari asam lemak tidak jenuhnya dan  proporsi asam lemak jenuh Nannochloropsis setara dengan asam lemak tidak jenuhnya, namun jenis mikroalgae ini mempunyai peluang untuk dikembangkan sebagai penghasil bahan baku biofuel. Hal ini didukung oleh penelitian Puspita (2009) yang menyatakan bahwa minyak kelapa sawit yang mengandung asam lemak jenuh  setara  50%  berpeluang  sebagai  bahan pembuatan biodiesel.

## KESIMPULAN
Kepadatan sel mikroalgae Botryococcus braunii dan Nannochloropsis yang dikultivasi selama 4 hari pemeliharaan menunjukkan jumlah masing-masing sebesar log 7,04 sel/ml dan log 7,15 sel/ml.
Jumlah  minyak  dengan  perlakuan  pemecahan dinding  sel  m enggunak an  sonikat or  pada Bot ryococcus  braunii  sebesar   22, 24%;  dan Nannochloropsis sebesar 11,92 %. Sedangkan  pada pemecahan  dinding  sel  menggunakan  microwave jum lah  m inyak   hasi l  ek strak si  dari  jenis Nannochloropsis sebesar 16,54 % dan Botryococcus braunii  sebesar  7,92%.  Pada  kontrol  (tanpa pemecahan dinding sel) jumlah minyak dari 2 jenis mikroalga sangat rendah yaitu Botryococcus braunii 0,84% dan Nannochloropsis 1,54%.
Proporsi  asam  lemak  jenuh  dari  mikroalgae Botryococcus braunii sebesar 38% yang terdiri dari asam miristat 10%, asam stearat 18% , palmitat 5%, behenat  1%  dan  arachidat  4%.  Sedangkan  pada Nannochloropsis  proporsi  asam  lemak  jenuhnya adalah asam miristat 6%, asam stearat  21%, palmitat 9%, behenat 1% dan arachidat 2% dengan jumlah total 39%.

## DAFTAR PUSTAKA
Amini.  (1999).  The  structur  of  I.galbana T-Iso  in  Studies on  the  Culture  of  Isochrysis  galbana  clone  Tahiti. Department  of  Biological  Sciences.  Univ.  College  of Swansea.  U.K.  p.  114–120.
Amini. (2003). Penelitian  Kandungan Asam Lemak  pada Ganggang  Halus  Laut  dari  Jenis  T.  iso, Pavlova luteri, dan Tetraselmis, sp. sebagai Pakan Larva Biota Laut.  Seminar  Nasional  Perikanan  Indonesia  8-9 Oktober. STP, Jakarta. 10 pp.
Amini.  (2004).  Pengaruh  Umur  Ganggang  Halus  Laut
Jenis  Chlorella,  sp.  dan  Dunaliella,  sp.  terhadap Pigmen Klorofil dan Karotenoid sebagai Bahan Baku Makanan  Kesehatan.  Seminar  Nasional  &  Temu Usaha,  Fak ultas  Pertanian  Universitas  Sahid, Jakarta.  p.  229–238.
Amini.  (2005).  Sk rining  Mik roalgae  Penghas il Kandungan  As am  Lemak   Omega-3.  Seminar Nasional  Perikanan  Indonesia.  Makalah  Utama. Sekolah  Tinggi  Perikanan  Jakarta.  p.  260–275.
Anonim.  (2006).  Algae  oil  extraction.  www.oilgae.com/ algae/oil/extract/extract.html.  diakses  tanggal  26 Desember  2006.
AOAC.  (1999).  Official  Methods  of  Analys is .  13rd ed.Association  of  Official  Analytic al  Chemist. Washington   D.C.
Banerjee,  A.,  Sharma,  R.,  Chisty,  Y.,  &  Banerjee,  U.C. (2002). Botryococcus braunii: A renewable source  of hydrocarbons  and  other  chemicals.  Critical  Reviews in  Biotechnology.  (22)3:  245–279.
Borowitzka, M.A.  (1992).  Fats,  Oils,  and  Hydrocarbons. Micro-algal.  Biotec hnology.  Sec tion  The  Algae Cambridge  Univ.  Press.    p.  257–287.
Brown, A.C.,Knights, P.A. & Conwy, E.1969. Hydrocarbon content  and  its  relationship  to  physiological  state  in the green alga Botryococcus braunii. Phytochemistry. 8:  543–547.
Chisti,  Y.  (2007).  Biodiesel  from  microalgae. Biotechnology  Advanc es   25.  Elsevier  Inc .New Zealand  p.  294–306.
Dayananda, C., Sarada, R., Kumar, V., and Ravishankar, G.A.  (2007).  Isolation  and  characterization  of hydrocarbon  producing  green  alga  Botryococcus braunii  from  Indian  freshwater  bodies.  Electronic Journal of Biotechnology.  10(1):  80–91.
Darwis,  D.  (2000).  Teknik  dasar  Laboratorium  dalam Penelitian  Senyawa  Bahan  Alam  Hayati.  Workshop Pengembangan  Sumber  Day a  Manus ia  dalam Bidang  Kimia  Organik  Bahan  Alam  Hayati.  FMIPA Universitas  Andalas  Padang.  30  pp.
Fogg,  G.E.  &  Thake,  B.  (1987).  Algae  Culture  and Phytoplank ton  Ec ology.  Sec ond  Edition.  Th e University  of  W inconsin  Press.  London.  20  pp.
Lee,  J.,  Yoo,  C.,  Jun,  S.,  Ahn,  C.  &  Oh,  H.  (2010). Comparison  of  several  methods  for  effective  lipid extraction  from  microalgae.  Bioresource  Technology, 101:  575–577.
Lee, A.K., Lewis, D.M., &  Ashman, P.J. (2012). Disruption of  microalgal  cells  for  the  extraction  of  lipids  for
biofuels.  Australia  Biomass  and  Bioenergy.  46:  89– 101.
Oh-Hama. T. & Miyachi, S. (1992). Chlorella: Micro-Algal Biotechnology.  In  Borowitzka,  M.A.  and  Borowitzka, L.J.  Cambridge.  Univ.  Press.
Panggabean, L.G.M. (1998). Mikroalga: Alternatif pangan dan  bahan industri  di  masa  mendatang.  Oseana.  13 (1):  19–26.
Puspita,  T.  (2009).  Ekstraksi  Minyak  Nabati  Mikroalga Laut Jenis Botryococcus braunii dan Tetraselmis sp. Menggunakan Pelarut yang Berbeda. Skripsi. FMIPA UIN, Jakarta. 65 pp.
Kabinawa,  I.N.K.  (2008).  Biodiesel  energi  terbarukan.
Warta  Pertamina.  9:  31–35.
Kabinawa,  I.N.K.  (2001).  Mikroalga  sebagai  Sumber Day a  Hay ati  (SDH)  Perairan  dalam  Perspek tif Bioteknologi.  Puslitbang  Bioteknologi  LIPI.  Bogor.  p. 5–13.
Nurhadiati.  (2008).  Fiks as i  CO 2 Menggunak an Mikroalga  Botryococcus  braunii Pada  Bioreaktor  Up Lift.  Skripsi.  Fakultas  Teknik  Kimia  Institut  Teknologi Bandung.
Susiloningsih,  E.K.B.  (1999).  Kinetika  Ekstraksi  Minyak Biji  Kacang  Tanah  Utuh  dengan  Pelarut  Heksana. Universita  Gajah  Mada,  Yogyakarta.  20  pp.
Zuhdy  &  Sukardi.  (2005).  Alga  sebagai  Salah  Satu Alternatif Bahan Baku Biodiesel di Indonesia. Institut Teknologi.  Surabaya.10  pp