FS. Volume 14. No. 1, Juni 2024                                                 p-ISSN:1693-3710 ; e-ISSN: 2541-1187 Terakreditasi: Sinta 4                                           Available online at: http://fishscientiae.ulm.ac.id/index.php/fs
INTRASITOPLASMIC INCLUSION BODIES OF HEPATOSIT, SYNCYTIAL CELLS IN BRAIN AND LIVER AS KEY TO IDENTIFICATION OF TILAPIA LAKE VIRUS (TiLV) BY USING HISTOPATOLOGICAL METHODS IN TILAPIA (Oreochromis niloticus) WITH MOTILE AEROMONAS SEPTICEMIA (MAS) SECONDARY

## INFECTION
1 Balai Perikanan Budidaya Air Tawar Mandiangin Jl. Tahura Sultan Adam Km 14, Mandiangin Barat, Karang Intan, Banjar, Kalimantan Selatan 70661
2 Balai Perikanan Budidaya Laut Batam Pulau Setokok, Kecamatan Bulang, Kota Batam, Kepulauan Riau

## Fish Scientiae

## Jurnal Ilmu-Ilmu Perikanan dan Kelautan
Bambang Setyo Sihananto 1 , Endang Wijayanti 2

## ARTICLE INFO

## ABSTRACT
Article history: Received 2024-06-11 Revised 2023-06-15 Accepted 2024-06-26
Tilapia ( Oreochromis niloticus ) has high adaptability, and is  easy  to  cultivate,  which  encourages  tilapia  cultivation in  Indonesia  to  develop  quite  rapidly,  one  of  which  is tilapia  cultivation  using  floating  cages  and  floating  net cages. In 2020, a disease with clinical symptoms similar to Streptococcus agalactiae bacterial infection was found, namely  erosion  of  the  eye  lens,  whitish  lesions  on  the body surface and thinning of the dorsal and caudal fins in Floating  Net  Cage  farmers  in  Tabalong  Regency,  South Kalimantan  Province.  After  Polymerase  Chain  Reaction (PCR) and histopathology testing showed positive results for viral infection known as Syncytial Hepatitis of Farmed Tilapia  (SHT)/Summer  Mortality  Syndrome  (SMS)/One Month Mortality Syndrome (TOMMS) or better known as Tilapia  Lake  Virus  (TiLV).  Histopathological  testing showed  characteristic  changes  in  the  form  of  syncytial cells and intracytoplasmic body inclusions in hepatocytes, and  syncytial  cells  in  the  brain.  Polymerase  Chain Reaction  (PCR)  testing  showed  positive  results  with  a band  size  of  250  bp.  Identification  of  bacterial  disease showed  positive Aeromonas  hydrophila or  known  as Motile Aeromonas Septicemia (MAS).
Keywords: Histopathology, Intracytoplasmic Inclusions Body, tilapia ( Oreochromis  niloticus ),  Motile Aeromonas  Septicemia ,  Tilapia Lake Virus, Syncytial cell
*)Corresponding Author: e - m ail: bambang.dvm@gmail.com
Some right reserved by: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
Cite this as

## Research Article

## 1. PENDAHULUAN
Potensi perairan umum di
Kalimantan  Selatan  cukup  luas,  yaitu sebesar  1,000,000  ha  dengan  tingkat pemanfaatan  lahan  budidaya  karamba adalah sebesar 87.699 m 2 dengan produksi sebesar  26.915  ton  (Dinas  Penanaman Modal, dan  Pelayanan  Terpadu  Satu  Pintu
Provinsi Kalimantan Selatan, 2021).
Produksi  ikan  nila  di  Kalimantan  Selatan mampu  mendorong  penurunan  inflasi sebesar 13.89 (% qtq) dengan andil sebesar 0.14  (%  qtq)  pada  komponen  makanan, minuman  dan  tembakau  (Bank  Indonesia, 2021). Selain mudah dibudidayakan, harga ikan  nila  di  pasaran  juga  cenderung  lebih stabil  jika  dibandingkan  dengan  ikan  lain.
Namun,  budidaya  ikan  nila  terutama dengan  menggunakan  karamba  apung maupun  karamba  jaring  apung  (KJA) terkendala  oleh  faktor  kualitas  air  yang fluktuatif  dan  juga  masalah  penyakit  juga seringkali  menyebabkan  kerugian  bahkan kegagalan.
Penyakit utama yang sering diidentifikasi pada ikan nila pada  unit-unit karamba  apung  maupun  karamba  jaring apung  (KJA)  adalah  Streptoccocosis  yang disebakan  oleh Streptoccocus  agalactiae .
Dengan  gejala  menciri  adalah  adanya exopthalmia dan erosi pada lensa mata serta
dropsy pada  bagian  abdomen.  Namun, beberapa  negara  seperti  Kolombia,  Mesir
(Fathi et al ., 2017; Kembou Tsofack et al .,
2017;  Nicholson et  al .,  2017),  Thailand
(Dong et  al .,  2017a;  Surachetpong et  al .,
2017), Tionghoa  Taipei,  India dan
Malaysia (Amal et al ., 2018; Behera et al .,
2018; OIE, 2017b,  2017c),  Mesir (Fathi et
al .,  2017),  Malaysia  (Amal et  al .,  2018), dan  Filipina  (OIE,  2017)  mengidentifikasi jenis penyakit virus baru yaitu
Orthomyxovirus like virus yang menyebabkan Syncytial Hepatitis of
Farmed  Tilapia (SHT)  dan  merupakan penyakit  virus  penyebab  gangguan  pada produksi ikan nila secara global (Bacharach et  al .,  2016;  CGIAR,  2017;  Eyngor et  al .,
2014; FAO, 2017; OIE, 2017a) dan Genom parsial yang berasal dari Thailand menunjukkan kemiripan yang relatif tinggi terhadap  galur  yang  berasal  dari  Israel (sekitar 97% identitas nukleotida) (Dong et al ., 2017).
Selain  dikenal  sebagai Syncytial
Hepatitis  of  Farmed  Tilapia (SHT), penyakit  ini  dikenal  juga  sebagai Tilapia Lake  Virus (TiLV)  dan Summer  Mortality
Syndrome (SMS) atau One Month Mortality  Syndrome (TOMMS)  (Del-Pozo et al ., 2017; Eyngor et al ., 2014; Fathi et al .,
2017;  Ferguson et  al .,  2014;  OIE,  2017a;
Tattiyapong et  al .,  2017a).  Penyakit  yang pertama  kali  ditemukan  di  Equador  dan Israel ini (Eyngor et al ., 2014; Ferguson et al .,  2014)  terutama  menyerang  benih  dan
ikan  nila  pada  tahap  pembesaran  dengan mortality rate sampai dengan 90% (Dong et al ., 2017a; Eyngor et al ., 2014; Ferguson et al .,  2014;  Surachetpong et  al .,  2017).
Ferguson et  al .  (2014),  dan  Dong et  al .,
(2017)  melaporkan  bahwa  ikan  nila  pada tahap bibit ( fingerlings ) adalah yang paling terpengaruh.  Fathi et  al .,  (2017)  juga melaporkan bahwa kematian lebih dari 9% terjadi  pada  ikan  nila  berukuran  sedang hingga besar.
Identifikasi  penyakit  ini  selain menggunakan  metode polymerase  chain recation (PCR) (Dong et al ., 2017a) dapat
juga  dilakukan  dengan  menggunakan metode  histopatologi  (Rocha et  al ,  1997;
Eyngor et  al .,  2014;  Jansen et  al .,  2018;
Tattiyapong et  al .,  2017;  Senapin et  al .,
2018;  dan  Dong et  al .,  2017b).  Penelitian
ini dilakukan untuk mengetahui perubahan
histopatologi  yang  menciri  pada  ikan  nila yang  berasal  dari  Provinsi  Kalimantan Selatan  yang  positif  terinfeksi  TiLV melalui  uji  PCR  dengan  infeksi  sekunder Aeromonas hydrophila melalui uji biokimia dan uji API 20E.

## 2. METODOLOGI PENELITIAN
2.1. Ikan nila (Oreochromis niloticus) uji
Tahun  2020,  ditemukan  kasus
kematian pada
ikan nila yang
dibudidayakan pada Karamba  Jaring Apung (KJA) di Desa Bongkang,
Kecamatan  Haruai  Kabupaten  Tabalong Provinsi Kalimantan Selatan dengan gejala yang mirip dengan gejala yang ditimbulkan oleh infeksi Streptococcus agalactiae yaitu erosi  pada  lensa  mata  (katarak),  lemah, berenang di permukaan, dan lesi keputihan pada permukaan tubuh. Etiologi yang tidak teridentifikasi dan tingkat kematian di atas 3% per  hari selama 3-5 hari berturut-turut. Data  kualitas  air  seperti  suhu,  oksigen terlarut,  dan  pH  masing-masing  tercatat 26,80  ±  0,80 ⁰ C,  5,5  ±  0,4  mgL-1,  6,57  ±
0,60. Rerata berat ikan adalah 225 g (200- 250  g)  yang  sebelumnya  tidak  memiliki catatan  infeksi  TiLV  dan  dibawa  ke laboratorium  dalam  kantong  plastik  steril berisi  air  dengan  pasokan  oksigen  yang memadai.  Pemeriksaan  klinis  dan  post- mortem dicatat.dengan baik.

## 2.2. Koleksi Ikan
Sebanyak  5  ekor  ikan  yang menunjukkan  abnormalitas  yaitu  terisolasi dari  kawanannya,  kurus,  lemah,  berenang di  dekat  permukaan  air,  katarak,  dan  lesi keputihan pada permukaan tubuh dikumpulkan. Ikan-ikan tersebut segera di- eutanasia  dengan  anestesi  berlebih  (MS- 222)  dosis  250  mg/L  dengan  perendaman selama  30  menit  (AVMA,  2020)  dan kemudian  dilakukan  pemeriksaan  post- mortem.
47 | Fish Scientiae: Jurnal Ilmu-Ilmu Perikanan dan Kelautan

## 2.3. Isolasi dan Identifikasi Bakteri dari

## Sampel Ikan
Isolasi  dan  identifikasi  bakteri dilakukan  pada  ikan  yang  menunjukkan
gejala klinis berupa perubahan makroskopis pada permukaan tubuh. Otak, limpa,  hati,  dan  ginjal  dibedah  secara aseptik.  Isolasi  dan  identifikasi  bakteri diambil  dari  usapan  mata,  ginjal,  hati,  dan limpa yang digoreskan langsung ke Tryptic
Soy  Agar (TSA)  (Merck®,  AS),  diikuti dengan inkubasi pada suhu 30 ◦C selama 24
Jam.  Bakteri  yang  akan  diidentifikasi disubkultur  untuk  mendapatkan  koloni murni  sebelum  dilakukan  uji  pewarnaan gram,  oksidase,  dan  katalase  (Basri et  al .,
2020).  Identifikasi  lebih  lanjut  dilakukan dengan menggunakan kit API®20E (BioMérieux™,  Perancis)  (Artati  dan Oman, 2020).

## 2.4. Proses Jaringan dan Histopatologi
Organ visceral (limpa, hati, jantung, ginjal,  dan  otak)  serta  organ  mata  dari masing-masing  ikan  dikumpulkan  dan difiksasi  secara  individual  dalam  etanol 95%  untuk  diagnosis  TiLV  dengan  uji PCR.  Organ  hati,  mata  dan  otak  sesuai dengan  pernyataan  Eyngor et  al .,  (2014)
difiksasi  dalam Neutral  Buffer  Formalin
10% (Surgipath®, Jerman) untuk pengujian histopatologi.  Jaringan  yang  diawetkan didehidrasi  dengan  cara  diinkubasi  dalam
Gambar 2.1. Gejala klinis ikan nila yang terinfeksi oleh TiLV 1); 2). warna tubuh yang kusam ( discolouration ), sisik  yang  hilang  ( loss  of  scales )  dan  erosi  pada  sisik  ( skin  erosion )  (tanah  panah  putih),  serta menunjukkan tanda kekurusan (tanda panah kuning); 3). geripis sirip ekor (tanda panah putih); 4). Menunjukkan peradangan pada selaput permukaan mata (katarak) (tanda panah putih).
etanol  dengan  konsentrasi  bertingkat  (70- 100%) dan kemudian dipindahkan kedalam
xylene secara otomatis dengan menggunakan alat Automatic Tissue
Processor Leica®  ASP  200S,  Jerman.
Jaringan  disusupi  dan  direndam  dalam parafin.  Setiap  jaringan  yang  tertanam dalam  parafin  secara  berurutan  dipotong dengan ketebalan 4 μm dan dipasang pada slide  kaca  objek  menggunakan  entellan (Merck®,  AS).  Pewarnaan  slide  dengan menggunakan  pewarnaan  rutin  Mayer hematoksilin dan eosin (H&E). Pewarnaan slide  menggunakan  alat automatic  stainer
ST  5020  (Leica®  Biosystems,  Jerman). Semua  organ  utama  termasuk  hati,  otak, limpa,  dan  mata  diproses  untuk  analisis distribusi  TiLV  dalam  organ.  Otak,  ginjal, hati,  dan  limpa  ikan  yang  terinfeksi diawetkan  dalam  formalin  buffer  netral 10%  (Surgipath®,  Jerman)  untuk  analisis histopatologi (Genten et al ., 2009). Analisis histopatologi  mengacu  pada  Dong et  al .,
2017b; Senapin et al ., (2018); Mona et al .,
(2018) dan Tattiyapong et al ., 2017.

## 2.5. Ekstraksi dan Deteksi RNA Virus
Organ ikan seperti otak, ginjal, hati, dan  limpa  dikumpulkan  dan  diawetkan dalam  etanol  96%  untuk  ekstraksi  dan deteksi  RNA  virus.  Ekstraksi  RNA menggunakan test kit High Pure Viral Kit .
dengan pengambilan sampel organ sebanyak  25  mg,  penambahan  larutan  400
µl  lysis/binding  buffer  dan  dihancurkan menggunakan pastle. Penambahan Dnase 4 µl  kemudian  dihaluskan  menggunakan pastle,  selanjutnya  sampel  diinkubasi selama  15  menit  pada  suhu  15-25ºC kemudian  disentrifuge  dengan  kecepatan 13.000  rpm  selama  5  menit.  Supernatan dipindahkan  kedalam  filter  tube  dan disentrifuge  dengan  kecepatan  13.000 rpm selama  1  menit.  Penambahan  500  µl inhibitor removal buffer kemudian dsentrifuge  dengan  kecepatan  13.000  rpm selama  1  menit.  Proses  selanjutnya, penambahan 450 µl wash buffer pada filter tube kemudian  di  sentrifuge  dengan kecepatan  13.000  rpm  selama  1  menit sebanyak dua kali. Selanjutnya, ditambahkan  100  µl elution  buffer dan disentrifuge  dengan  kecepatan  8000  rpm selama  1  menit.dan  dilanjutkan  kedalam tahap amplifikasi.

## 2.6. Amplifikasi RNA Virus
Amplifikasi TiLV dilakukan secara double step dengan menggunakan RNA kit.
Step  pertama  pada  amplifikasi  TiLV menggunakan  primer  Ext-1  (10  µm)  5’- TAT-GCA-GTA-CTT-TCC-CTG-CC-3’ dan  Primer  Me  1  (10  µm)  5’-GTT- GGGCAC-AAG-GCA-TCC-TA-3’.

## Reaksi  PCR  menggunakan  2x
Promega  Go  Taq  Green  PCR  master  Mix
12.5  μl; Enzyme  Reverse  Transcriptase
AMV  0.5  μl; Nuclease  Free  Water 8  μl;
49 | Fish Scientiae: Jurnal Ilmu-Ilmu Perikanan dan Kelautan
primer forward dan reverse masing-masing
1 μl, dan RNA template hasil ekstraksi 2.5
μl. Master mix dan RNA template digabung
didalam tube 0.2 ml, dilanjutkan dengan uji
PCR menggunakan Thermal Cycler dengan
parameter siklusnya: Reserve transcription
50°C selama 30 menit, Pre denaturasi 94°C
selama 2 menit, denaturasi 94°C selama 30
detik, annealing 60°C  selama  30  detik,
ekstension 72°C  selama  30  detik,  final
ekstension 72°C selama 7 menit.

## 2.7. Elektroforesis
Volume  sampel  sebanyak  5  µl.
Marker  yang  digunakan  untuk  proses elekroforesis, yaitu marker 100 bp dan arus 110  V  selama  30  menit.  Pembacaan  hasil
elektroforesis  dilakukan  dengan  bantuan UV Transluminator yang terhubung
langsung dengan kamera. Pengujian
molekuler TiLV pada ikan nila
( Orechromis niloticus ) berdasarkan
Nurekawati et al ., (2023).

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Gejala  klinis  yang  tampak  sesuai dengan  laporan  pemerintah  Australia (www.agriculture.gov.au) yang menemukan  kematian  pada  ikan  nila dengan  gejala  makroskopis  yang  dapat diamati  secara  kasat  mata  yaitu  ikan  yang terinfeksi  secara  alami  menunjukkan perubahan warna dan penonjolan sisik serta perubahan warna tubuh (gelap atau terang); erosi kulit yang mengakibatkan lesi dermal hemoragic; tonjolan  sisik; Exopthalmus
( popeye )  dan  kekeruhan  lensa  mata
(katarak),  distensi  abdomen  (akibat  cairan atau pembesaran limpa dan organ lain) serta dengan gejala lesu, kehilangan nafsu makan
Gambar 2.2. 1). Inklusi bodi intrasitoplasmik pada hepatosit hati (anak panah hijau), dan infiltrasi sel leukosit (lingkaran biru) (H&E, 10x); dan 2). Infiltrasi sel leukosit yang mengarah pada sel limfosit (anak panah biru), serta inklusi bodi intrasitoplasmik pada hepatosit hati (anak panah hijau) (H&E, 40x).
(anoreksia)  dan  gangguan  pernapasan (bernafas di permukaan air).

## 3.1.Perubahan Histopatologi
1. Hati
Perubahan histopatologi yang
ditemukan  pada  hati  adalah  adanya
Syncytial cell , inklusi body intrasitoplasmik
dengan infiltrasi sel leukosit yang
mengarah  pada  sel  limfosit.  Perubahan  ini sesuai dengan pernyataan dari Rocha et al., (1997)  dimana  hepatosit  ikan  di  beberapa area hati membesar secara tidak normal dan telah kehilangan bentuk polihedralnya yang biasa. Lesi penting lainnya yang diamati di
hati  adalah  nekrosis  fokal  hepatosit  dan infiltrasi  sel  inflamasi  limfositik  yang parah. Seringkali, hepatosit yang membengkak mengandung banyak inti (sel syncytial).  Syncytial  hepatitis  adalah merupakan  perubahan  histopatologi  yang
paling  umum  yang  ditemukan  pada  kasus wabah TiLV (Mona et al ., 2018).
Berdasarkan penelitian yang dilakukan  oleh  Eyngor et  al .,  (2014)  lesi pembengkakan
hepatoseluler juga ditemukan. Pusat melanomacrophage
(MMC)  meningkat  dalam  ukuran  dan
jumlah di hati.
Gambar 2.3. 1);2);3);4). Histopatologi hati menunjukkan Syncytial cell (tanda panah kuning) (H&E, 40x)
51 | Fish Scientiae: Jurnal Ilmu-Ilmu Perikanan dan Kelautan
Pendapat  yang  diungkapkan  oleh Tattiyapong et al ., (2017) yang menemukan perubahan  berupa  adanya  inklusi  bodi intrasitoplasmik,  nekrosis  fokal  pada hepatosit,  infiltrasi  sel-sel  radang  limfosit, hepatosit yang menyerupai giant cells yang mengandung  nukleus multiple (Senapin et al. , 2018).  Sedangkan menurut Dong et al. ,
(2017b)  lesi  yang  menciri  adalah:  adanya syncytial  giant  cell (s)  atau multinucleated
giant  cells .  Sedangkan  lesi  yang  tidak menciri  adalah  (dapat  bersifat  lesi  tunggal maupun  kombinasi  dari  lesi  berikut): adanya intracytoplasmic  inclusion  bodies
(benda inklusi eosinofilik atau
lipoproteindroplets ),  pengurangan  dari  sel penyimpanan  lemak,  disosiasi  hepatosit, pankreas  nekrotik  and  infiltrasi  dari
limfosit, hemoragi, nekrosis seluler,
piknosis dan karioreksis, foamy sitoplasma,
Gambar 2.4. 1). Nekrosis pada limpa (lingkaran hijau) (H&E, 10x); 2). Melanomakrofag center (MMC) (lingkaran hijau) (H&E, 40x).
Gambar 2.5 . 1). Vakuolasi pada otak (tanda kotak merah), dan nekrosi pada otak (lingkaran biru) (H&E, 10x);
2). Syncytial cell pada otak (anak panah hijau) (H&E, 40x).
hepatitis  multifokal  kronis  (Dong et  al .,
2017b).

## 2. Limpa

## Perubahan histopatologi pada limpa
( spleen )  adalah  adanya  peradangan  serta yang  cukup  menonjol  adanya  peningkatan
Melanomakrofag  center (MMC)  (gambar
3),  hal ini  sesuai  dengan  pernyataan  Dong
et al ., (2017b) yang menemukan degenerasi sel  limpa,  adanya  makrofag  bermuatan debris  di  dalam  ellipsoid  limpa,  piknosis dan  karioreksis,  peningkatan  jumlah  pusat
melano-makrofag.  Temuan  Eyngor et  al .,
(2014)  adalah  limpa  hiperplastik,  dengan
limfosit yang berproliferasi.
Pusat melanomacrophage  (MMC)  meningkat
dalam  ukuran  dan  jumlah  di  limpa.  Lesi lainnya termasuk kongesti limpa, hiperplastik, dengan limfosit yang
berproliferasi.
Gambar 2.
6. 1).Tampak PMA ( Pigmented Macrophage Aggregate ) (anak panah biru) dan koloni  bakteri (anak panah hijau) pada mukus dalam vitreous humor (H&E, 10x); 2). Tampak PMA ( Pigmented Macrophage Aggregate )  (anak  panah  biru)  dan  koloni  bakteri  (lingkaran  hijau)  pada  mukus  pada  vitreous humor;  3).  Tampak  koloni  bakteri  berbentuk  batang  pendek  pada  kapsul  lensa  (lingkaran  biru) (H&E, 40x); 4). Tampak sel bakteri berbentuk batang pendek pada kapsul lensa (lingkaran hijau) (H&E, 100x).
3. Otak
Perubahan histopatologi yang ditemukan  pada  otak  adalah  syncytial  cell pada  otak,  nekrosis,  daerah  radang, vakuolasi  kongesti  pembuluh  darah  otak,
infiltrasi  sel  leukosit  serta  fibrosis  pada otak.  Hal  tersebut  sesuai  dengan  hasil penelitian  yang  dilakukan  oleh  Eyngor et al .,  (2014)  yang  menemukan  adanya perubahan  pada  otak  berupa  edema, perdarahan  fokal  pada  leptomeninges,  dan kongesti kapiler baik pada materi putih dan abu-abu serta degenerasi saraf serta adanya fokus  gliosis  dan  sel  limfosit  perivaskular. Tatiyapong et  al .,  (2017)  menemukan adanya kongesti sel limfosit perivaskular di
korteks  otak,  perdarahan  multifokal  & kongesti  darah.  Perubahan  yang  hampir
sama  ditemukan  oleh  Dong et  al .,  207b) yaitu  peradangan  parah  dengan  infiltrasi limfosit  masif,  ensefalitis,  perivaskular cuffing, kongesti darah atau kadang-kadang
perdarahan,  seperti  syncytia  kadang- kadang  terlihat.  Hal  ini  membuktikan bahwa virus itu tersebar luas di seluruh otak (www.agriculture.gov.au).

## 4. Mata
Perubahan histopatologi yang ditemukan  pada  mata  adalah  infiltrasi leukosit  dan  nekrosis  pada  otot  mata, adanya  PMA  ( Pigmented  Macrophage Aggregate )  serta  ditemukan  bakteri  pada lensa  mata.  Perubahan  tersebut  identik dengan  perubahan  yang  dilaporkan  oleh kementerian pertanian Australia
(Agriculture.  n.d.)  yaitu  peradangan  mata termasuk  endoftalmitis  dan  perubahan katarak pada lensa.
Berdasarkan penelitian yang dilakukan  oleh  Pierezan et  al .,  (2020)
diketahui  bahwa  virus  ini  bereplikasi  di organ hati, insang, limpa dan usus berkaitan dengan  penyebaran  dan  perkembangan virus,  dengan  kelimpahan  virus  tertinggi terjadi  pada  hari  ke-7  pasca  uji  tantang, diketahui juga bahwa jalur intestinal adalah merupakan pintu masuk utama bagi infeksi TiLV  yang  kemudian  menyebar  secara sistematis ke seluruh tubuh ikan.
Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Eyngor et  al .,  (2014)  lesi  berat  ditemukan pada  mata  termasuk  perubahan  okular, opasitas lensa dan dalam kasus lanjut lensa pecah.
5. Diagnosa penyakit bakterial
250 bp
1      2         3         4        5
Gambar 7.  Hasil pengujian TiLV dengan menggunakan metode PCR dengan ukuran pita 250 bp.
1:  sampel  +,  2:  sampel  +,  3:  ddH 2 O,  4: Kontrol positif, 5: Marker
Koloni  yang  ditumbuhkan  pada media  berwarna  krem,  elevasi  cembung serta  tepinya  halus.  Hasil  pewarnaan  gram menunjukan gram negatif berbentuk batang pendek.  Hasil  uji  biokomia  yaitu  katalase positif  yang  ditandai  dengan  terbentuknya gelembung udara pada campuran H 2 O 2 3% dengan isolat bakteri, dan bersifat oksidatif dengan  berubahnya  warna  kertas  menjadi biru  yang  menandakan  adanya  enzim oksidase pada isolate bakteri. Isolat bakteri yang  merupakan  biak  murni  berumur  24 jam  pada  media  TSA  sebanyak  2  ose dilarutkan  dalam  5  mL  PBS  dan dihomogenkan  untuk  pengujian  dengan menggunakan  API  20E.  Suspensi  yang dibuat  kemudian  didistribusikan  dengan hati-hati  agar  tidak  terbentuk  gelembung udara  yang  berpengaruh  terhadap  hasil pengujian. Kemudian diinkubasi pada suhu 36 ⁰ C  selama  24  jam.  Proses  identifikasi diketahui  dengan  menggunakan  apiweb™ identification software . Perbandingan warna  pada  Reading  table  dan  acuan  hasil positif  dan  negatif  berdasarkan  warna menunjukkan bahwa postif bakteri
Aeromonas hydrophila .

## 6. Diagnosa TiLV melalui uji PCR
Uji  PCR  untuk  deteksi  TiLV dilakukan dengan menggunakan RNA total yang  diekstraksi  dari  organ  dalam  ikan (hati).  Hasil  pengujian  menunjukkan  hasil positif  dengan  ukuran  pita  adalah  250  bp, hal  tersebut  sesuai  dengan  penelitian  yang
dilakukan  oleh  Dong et  al .,  (2017a);
Koesharyani et al ., (2018), dan Nurekawati et  al .,  (2023)  yang  melakukan  pengujian dengan  RT-PCR  pada  organ  dalam  ikan nila  dewasa  dan  hasil  positif  pada  pita dengan ukuran 250 bp.
Wabah  alami  infeksi  TiLV  terkait dengan  kematian  yang  tinggi  (20-90%) dilaporkan  pada  nila  tahap  fingerling  dan juvenil  (Behera et  al .,  2018;  Dong et  al .,
2017a; Eyngor et al ., 2014; Ferguson et al .
., 2014; Surachetpong et al ., 2017). Namun,
kematian  yang  lebih  rendah  ditemukan  di Mesir  (9.2%),  Cina  Taipei  (6.4%),  dan Malaysia  (0.71  dan  15%).    Kasus  yang terjadi sebelumnya diamati oleh Fathi et al .,
(2017)  menyerang  pada  ikan  nila  ukuran sedang hingga besar lebih dari 100 g. Di sisi lain, viral load yang terdeteksi tetapi rendah bisa  menjadi  indikasi  keberadaan  TiLV pada ikan nila sebagai karier atau pembawa atau  merupakan  infeksi  kronis  yang  dapat menjadi  sumber  reservoir  potensial  untuk transmisi virus. Studi terbaru menunjukkan penularan TiLV melalui kohabitasi, penularan  terjadi  melalui  lendir  ikan  yang terkontaminasi  maupun  melalui  peralatan yang  digunakan  (Eyngor et  al .,  2014;
Liamnimitr et  al .,  2018).  Penurunan  titer virus  pada  >  4  log10  TCID  50  mL -1 diperoleh  dengan  20  ppm  klorin  dan  50 ppm  yodium  dengan  waktu  kontak  hanya 30  menit  dan  diperlukan  waktu  hingga  24 jam  untuk  mencapai  pengurangan  virus
55 | Fish Scientiae: Jurnal Ilmu-Ilmu Perikanan dan Kelautan
pada titer > 4 log10 TCID 50 mL -1 dengan menggunakan  10  ppm  klorin  dan  25  ppm yodium.

## 4. KESIMPULAN DAN SARAN

## 4.1.Kesimpulan
Perubahan  histopatologi  ikan  nila yang  terinfeksi  TilV  pada  hati  adalah adanya infiltrasi sel leukosit yang mengarah  pada  sel  limfosit, Syncytial  cell ,
dan inklusi body intrasitoplasmik .
Perubahan  pada  limpa  ( spleen )  adalah adanya  peradangan  dengan  peningkatan
Melanomakrofag  Center (MMC),  pada otak  adalah syncytial  cell pada  otak,
nekrosis, daerah radang, vakuolasi kongesti pembuluh darah otak, infiltrasi sel leukosit serta  fibrosis  pada  otak  dan  pada  mata adalah infiltrasi leukosit dan nekrosis pada otot  mata,  adanya  PMA  ( Pigmented
Macrophage  Aggregate )  serta  ditemukan bakteri berbentuk batang pendek pada lensa mata.  Uji Polymerase  Chain  Reaction
(PCR)  menunjukkan  ukuran  pita  sebesar
250 bp. Hasil uji bakteri menunjukkan hasil positif Aeromonas  hydrophila . Syncytial cells pada  hati  dan  otak  dan inklusi  body intrasitoplasmik pada hepatosit merupakan perubahan  yang  menciri  penyakit  TiLV pada ikan nila ( Oreochromis niloticus ).

## 4.2. Saran
Perlu  dilakukan  penelitian  lanjutan terutama  terkait  mekanisme  penularan,
serta strategi pencegahan yang paling tepat terutama potensi pengembangan vaksin.

## DAFTAR PUSTAKA
Amal,  M.N.A.,  Koh,  C.B.,  Nurliyana,  M., Suhaiba,  M.,  Nor-Amalina,  Z., Santha, S., Diyana- Nadhirah, K.P., Yusof,  M.T.,  Ina-Salwany,  M.Y., Zamri-Saad,  M.,  (2018).  A  case  of natural co-infection of Tilapia Lake Virus  and  Aeromonas  veronii  in  a Malaysian red hybrid tilapia ( Oreochromis niloticus × O.
mossambicus )  farm  experiencing high  mortality.  Aquaculture  485, 12–16.
Artati, D. & Oman, M. (2020). Identifikasi bakteri Aeromonas hydrophila menggunakan  kit  API  20E  di laboratorium  mikrobiologi  BRPI Sukamandi. Buletin Teknik Litkayasa Akuakultur, 18 (1), 2020,
75-80.
American Veterinary Medical Association.
(2020).  AVMA  guidelines  for  the Euthanasia of animals 2020 Edition.
Bacharach, E., Mishra, N., Briese, T., Zody,
M.C.,  Kembou  Tsofack,  J.E.,
Zamostiano, R., Berkowitz, A., Ng,
J., Nitido, A., Corvelo, A., Toussaint, N.C., Abel Nielsen, S.C.,
Hornig, M., Del Pozo, J., Bloom, T., Ferguson,  H.,  Eldar,  A,  &  Lipkin, W.I.,  (2016).  Characterization  of  a novel orthomyxo-like virus causing mass  die-o ﬀ s  of  tilapia.  MBio  7,
e00431–00416. Badan Pusat Statistisk. https://www.bps.go.id/publication. html . Diakses 12 Desember 2021. Bank Indonesia. https://www.bi.go.id/simodis/publi kasi . Diakses 12 Desember 2021.
Basri,  L.,  Nor,  R.M.,  Salleh,  A.,  Yasin, I.S.M.,  Saad,  MZ.,  Rahaman, NYA.,  Barkham,  T.,  &  Amal,
MNA.  (2020).  Co-Infections  of Tilapia  Lake  Virus,  Aeromonas hydrophila and Streptococcus agalactiae  in  Farmed  Red  Hybrid Tilapia.
Behera, B.K., Pradhan, P.K., Swaminathan,
T.R.,  Sood,  N.,  Paria,  P.,  Das,  A., Verma,  D.K.,  Kumar,  R.,  Yadav, M.K., Dev, A.K., Parida, P.K., Das, B.K., Lal, K.K, & Jena, J.K. (2018). Emergence  of  Tilapia  Lake  Virus associated  with  mortalities  of farmed  Nile  Tilapia  Oreochromis niloticus  ( Linnaeus 1758)  in  India.
Aquaculture 484, 168–174.
CGIAR, (2017). Penang, Malaysia: CGIAR  Research  Program  on  Fish Agri-food Systems. Factsheet:
FISH-2017-03.    Available  at.
https://www.world ﬁshcenter.org/co ntent/tilapia-lake-virus-tilv-what- know-and-do.
Christiansen, D.H., Ostergaard, P.S., Snow, M., Dale, O.B, & Falk, K. (2011). A low-patho- genic variant of
infectious  salmon  anemia  virus (ISAV-HPR0)  is  highly  prevalent and  causes  a  non-clinical  transient infection in farmed Atlantic salmon ( Salmo  salar ,  L.)  in  the  Faroe Islands. J. Gen.  Virol.  92, 909–918.
Cleasby,  N.,  Schwarz,  A.M.,  Phillips,  M.,
Paul, C., Pant, J., Oeta, J., Pickering, T.,  Meloty,  A.,  Laumani,  M.,  & Kori,  M.  (2014).  The  socio- economic  context  for  improving food  security  through  land-based aquaculture  in  Solomon  Islands:  a pen-urban  case  study.  Mar.    Policy 45, 89–97.
Cottet,  L.,  Rivas-Aravena,  A.,  Cortez-San
Martin, M., Sandino, A.M.,
Spencer, E., 2011. Infectious salmon anemia virus—genetics and pathogenesis.  Virus  Res.    155,  10– 19.  Cusack,  R.R.,  Groman,  D.B., MacKinnon,  A.M.,  Kibenge,  F.S., Wadowska, D, & Brown, N. (2001). Pathology associated with  an aquareovirus  in  captive  juvenile Atlantic halibut Hippoglossus
hippoglossus  and  an  experimental treatment  strategy  for  a  concurrent bacterial infection. Dis. Aquat. Org. 44, 7–16.
Del-Pozo,  J.,  Mishra,  N.,  Kabuusu,  R., Cheetham, S., Eldar, A., Bacharach, E.,  Lipkin,  W.I.,  Ferguson,  H.W. (2017). Syncytial hepatitis of tilapia ( Oreochromis  niloticus L.)  is  as- sociated  with  orthomyxovirus-like virions  in  hepatocytes.  Vet.  Pathol. 54, 164–170.
Dinas  Penanaman  Modal  dan  Pelayanan Terpadu Satu Pintu. https://www.dpmptsp.kalselprov.go .id/ . Diakses 12 Desember 2021 Dong,  H.T.,  Siriroo,  S.,  Meemetta,  W., Santimanawong, W., Gangnonngiw,  W.,  Pirarat,  N.,
Khunrae,  K.,  Rattanarojpong,  T., Vanichviriyakit,  R,  &  Senapin,  S., (2017a).  Emergence  of  tilapia  lake virus in Thailand and an alternative semi-nested  RT-PCR  for  detection. Aquaculture 476, 111–118.
Dong,  H.T.,  Siriroo,  S.,  Meemetta,  W.,
Santimanawong, W., Gangnonngiw,  W.,  Pirarat,  N.,
Khunrae,  K.,  Rattanarojpong,  T., Vanichviriyakit,  R.,  Senapin,  S., (2017b).  A  Warning  and  an Improved  PCR  Detection  Method for  Tilapia  Lake  Virus  (TiLV) Disease  in  Thai  Tilapia  Farms. http://www.enaca.org.
Eide, K.E., Miller-Morgan, T., Heidel, J.R., Kent,  M.L.,  Bildfell,  R.J.,  Lapatra, S.,  Watson,  G,  &  Jin,  L.  (2011). Investigation  of  koi  herpesvirus latency in koi.  J. Virol.  85, 4954– 4962. Eyngor,  M.,  Zamostiano,  R.,  Kembou Tsofack, J.E., Berkowitz, A., Bercovier, H., Tinman, S., Lev, M., Hurvitz, A., Galeotti, M.,
Bacharach,  E.  &  Eldar,  A.  (2014). Identi ﬁcation of a novel RNA virus
lethal to tilapia. J. Clin.  Microbiol.
52, 4137–4146.
FAO.  (2017).  Outbreaks  of  tilapia  lake virus (TiLV) threaten the
livelihoods  and  food  security  of millions  of  people  dependent  on tilapia  farming.  In:  Special  Alert (Global) No. 388, (26 May 2017).
Fathi,  M.,  Dickson,  C.,  Dickson,  M., Leschen,  W.,  Baily,  J.,  Fiona,  M., Ulrich,  K.,  Weidmann,  M.  (2017). Identi ﬁcation of Tilapia Lake Virus in  Egypt  in  Nile  tilapia  a ﬀ ected  by ‘summer mortality’ syndrome.
Aquaculture 473, 430–432.
Ferguson,  H.W.,  Millar,  S.D,  &  Kibenge, F.S.  (2003).  Reovirus-like  hepatitis in  farmed  ha-  libut  ( Hippoglossus hippoglossus ). Vet.  Rec.  153, 86– 87.
Ferguson,  H.W.,  Kabuusu,  R.,  Beltran,  S.,
Reyes, E., Lince, J.A., del Pozo, J.,
(2014). Syncytial  hepatitis of farmed tilapia, Oreochromis
niloticus (L.): a case report. J. Fish. Dis. 37, 583–589.
Gomna,  A.  (2011).  The  role  of  tilapia  in food  security  of ﬁshing  villages  in Niger  State,  Nigeria.  Afr.  J.  Food Agric.  Nutr. Dev.  11, 5561–5572.
Dinh-Hung,  N.,  Sangpo,  P.,  Kruangkum,
T., Kayansamruaj, P., Rung-
ruangkijkrai, T., Senapin, S., Rodkhum, C, & Dong, H.T. (2021). Dissecting  the  localization  of Tilapia  tilapinevirus  in  the  brain  of the  experimentally  infected  Nile tilapia, Oreochromis niloticus (L.). J Fish  Dis.  2021;  00:1–12.  https:// doi.org/10.1111/jfd.1336
Jansen,  M.D.,  &  Mohan,  C.V.  (2017). Tilapia lake virus (TiLV): literature review.  Penang,  Malaysia:  CGIAR research  program  on ﬁsh  agri -food systems. In: Working Paper: FISH- 2017-04.
Kembou  Tsofack,  J.E.,  Zamostiano,  R.,
Watted, S., Berkowitz, A.,
Rosenbluth,  E.,  Mishra,  N.,  Briese, T.,  Lipkin,  W.I.,  Kabuusu,  R.M., Ferguson,  H.,  Del  Pozo,  J.,  Eldar, A., Bacharach, E. (2017). Detection of  tilapia  lake  virus  in  clinical samples  by  culturing  and  nested reverse  transcription-PCR.  J.  Clin. Microbiol. 55, 759–767.
Kementerian  Kelautan  dan  Perikanan. https://kkp.go.id/artikel/32431- laporan-tahunan-kkp-2020. Diakses 12 Desember 2021 .
Koesharyani,  I.,  Gardenia,  L.,  Widowati, Z.,  Khumaira,  &  Rustianti,  D.
(2018).  Studi  kasus  infeksi Tilapia Lake  Virus (TiLV)  pada  ikan  nila ( Oreochromis  niloticus ). Jurnal Riset Akuakultur . 13(1). 85-92.
Liamnimitr,  P.,  Thammatorn,  W.,  U- thoomporm,  S.,  Tattiyapong,  P  & Surachetpong,  W.  (2018).  Non- lethal  sampling  for  Tilapia  Lake Virus  detection  by  RT-qPCR  and cell  culture.  Aquaculture  Vol  486, 75-80
Nicholson,  P.,  Fathi,  M.A.,  Fischer,  A., Mohan, C., Schieck, E., Mishra, N., Heinimann,  A.,  Frey,  J.,  Wieland,
B.,  Jores,  J.  (2017).  Detection  of Tilapia Lake Virus in Egyptian ﬁsh
farms experiencing high mortalities in 2015. J. Fish Dis. 40, 1925–1928. Nurekawati, A.D., Putra, I.S. &
Soelistyoadi,  R.N.  (2023).  Deteksi molekuler  (TiLV)  pada  ikan  nila (Oreochromis niloticus) yang dilalu lintaskan  di  Balai  Karantina  Ikan, Pengendalian Mutu, dan Keamanan Hasil  Perikanan  Surabaya  I  Jawa Timur.  MKH.  (2023).  1-12.  DOI: 10.20473/mkh.v34i1.2023.1-12.
OIE.  (2017a).  World  Organisation  for Animal  Health.  Tilapia  Lake  Virus
(TiLV) — A Novel Orthomyxo-like Virus.  OIE  Technical  Disease Cards.
http://www.oie.int/ ﬁleadmin/Home
/eng/Internationa_Standard_Setting /docs/pdf/A_TiLV_disease_card.pd f.  OIE,  2017b.  Tilapia  Lake  Virus Disease, Chinese Taipei. Immediate Noti ﬁcation. Available at.http://www.oie.int/wahis_2/publi c/wahid.php/Reviewreport/Review/
reportid=24033.
OIE.  (2017c).  Tilapia  Lake  Virus  Disease, Malaysia.  Immediate  Noti ﬁcation.
Available
at.https://www.oie.int/wahis_2/pub lic/wahid.php/Reviewreport/Revie w?page_refer= MapFullEventReport&reportid=24
809.
Piamsomboon,  P.,  &  Wongtavatchai,  J.
(2021).  Detection  of  Tilapia  Lake Virus  (TiLV)  in  healthy  fish  from the
pre-existing
disease
environment  using  different  RT-
PCR  methods.  Turkish  Journal  of
Fisheries and Aquatic Sciences, 21, 205-209. http://doi.org/10.4194/1303-2712-
v21_4_05
Rao, M., Kumar, S.H., Kumar, S., Bedekar, M.K., Tripathi, G, & Valappil, R.K. (2021). Microbiological investigation of Tilapia Lake virus– associated  mortalities  in  cage- farmed  Oreochromis  niloticus  in India.  Aquaculture  International https://doi.org/10.1007/s10499- 020-00635-9
Rocha, E., Monteiro, R.A., & Pereira, C.A.
(1997).  Liver  of  the  brown  trout, Salmo trutta (Teleostei, Salmonidae):  a  stereological  study at  light  and  electron  microscopic levels. Anat. Rec.  247, 317–328.
Senapin,  S.,  Phewsaiya,  K.,  Briggs,  M.,
Flegel,  T.W.,  (2007).  Outbreaks  of infectious myo-necrosis virus
(IMNV)  in  Indonesia  con ﬁrmed by genome  sequencing  and  use  of  an alternative RT-PCR detection method. Aquaculture 266, 32–38. Senapin,  S.,  Dong,  H.T.,    Meemetta,  W., Siriphongphaew, A., Charoensapsri, W., Santimanawong, W., Turner, W.A., Rodkhum, C., Withyachumnarnkul, B.,  Vanichviriyakit,  R.  (2016).
Hahella chejuensis is the etiological agent  of  a  novel  red  egg  disease  in tilapia ( Oreochromis spp.) hatcheries in Thailand. Aquaculture 454, 1–7. Surachetpong, W., Janetanakit, T., Nonthabenjawan,  N.,  Tattiyapong, P.,  Sirikanchana,  K.,  Amonsin,  A. (2017).  Outbreaks  of  tilapia  lake virus  infection,  Thailand,  2015– 2016. Emerg. Infect. Dis. http://dx.doi.org/10.3201/eid2306.1 61278. Tattiyapong,  P.,  Dachavichitlead,  W., Surachetpong, W. (2017a).
Experimental  infection  of  Tilapia Lake  Virus  (TiLV)  in  Nile  tilapia
( Oreochromis  niloticus )  and  red tilapia  ( Oreochromis spp.).  Vet.
Microbiol. 207, 170–177.
Tattiyapong, P., Sirikanchana, K., Surachetpong, W. (2017b). Development  and  validation  of  a reverse  transcription  quantitative polymerase  chain  reaction  for tilapia  lake  virus  detection  in clinical samples and experimentally challenged ﬁsh.  J. Fish Dis. http:// dx.doi.org/10.1111/jfd.12708.
Wolf,  K.  (1988).  Fish  Viruses  and  Fish
Viral Diseases. Comstock Publishing Associates, Cornell University Press, NY. Zheng, S., Wang, Q., Bergmann, S.M., Li,
Y.,  Zeng,  W.,  Wang,  Y.,  Liu,  C., Shi,  C.  (2017).  Investigation  of latent infections caused by cyprinid herpesvirus  3  in  koi  ( Cyprinus carpio )  in  southern  China.  J.  Vet. Diagn. Investig. 29, 366–369.
Department  of  Agriculture,  Fisheries,  and
Forestry. “Department of Agriculture, Fisheries, and Forestry,” n.d. https:// www.agriculture.gov.au /site s/default/files/documents/tilapia_la ke_virus_disease.pdf.