Effect Of Long Thawing On The Quality Of Frozen Cow Brahman Cattle
Ririn Novita 1 , Hayatun Nofrida 1 , Sri Lestari 1
1 Dosen Prodi Peternakan Fakultas Pertanian Universitas Musi Rawas Jl. Sultan Mahmud Badaruddin II Kel. Air Kuti I, Lubuklinggau-31628 Email : novitaririn91@yahoo.com

## ABSTRACT
This study purposed is to determine the effect of thawing duration toward the quality of Brahman frozen  semen.  These  include  the  motility  of  Spermatozoa,  Spermatozoa  concentration, Percentage  of  Spermatozoa  Viability,  Percentage  of  Spermatozoa  Abnormalization  and Individual  Moitility,  which  was  conducted  at  the  UPTD  Balai  Artificial  Insemination  (BIB) Sembawa,  Banyuasin  District,  South  Sumatra  Province.  This  research  is  experimental  and carried  out    a  non-factorial  complete  random  design  analysis  (CRD)  consisting  of  6  levels  of treatment and 4 repetitions so that 24 unit experiments are be obtained, through variations in the treatment of 10, 20, 30, 40, 50, and 60 seconds, the length of time thawing. The effect of frozen thawing  semen  for  Brahman  Cattle  has  a  very  significant  effect  on  Individual  Motility  and Percentage  of  Viability  of  Spermatozoa.  Thawing  time  of  30  seconds  on  T3  treatment  gives  a very good influence on the quality of frozen semen of Brahman Cows, while on thawing time of 50 seconds on T5 treatment gives good quality on the percentage of spermatozoa abnormalities. The frozen semen spermatozoa concentration value of Brahman cattle is 53 x 10 6
Keywords : quality of frozen semen, thawing duration, Brahman cattle

## PENDAHULUAN
Ternak sapi potong di Indonesia membutuhkan perhatian  khusus dalam kaitannya dengan upaya  mempertahankan  dan  menunjang  peningkatan  populasi  ternak.    Kementerian  Pertanian Republik  Indonesia  telah  mencanangkan  program  swasembada  daging  sapi  tahun  2014  untuk mendukung program  ketahanan pangan dan program  diversifikasi pangan nasional.  Langkah  – langkah  strategis  yang  ditempuh  dalam  program  swasembada  tersebut  salah  satunya  adalah dengan  mengoptimalisasikan  pelaksanaan  inseminasi  buatan  (IB).    Pelaksanaan  kegiatan inseminasi buatan pada ternak merupakan salah satu upaya penerapan teknologi tepat guna yang merupakan  pilihan  utama  untuk  peningkatan  populasi  dan  mutu  genetik  sapi.    Keberhasilan inseminasi  buatan  pada  ternak  sapi  telah  mencapai  2.116.159  akseptor  dengan  kelahiran 1.333.075 ekor pada tahun 2009.  Inseminasi buatan adalah salah satu teknik yang dikembangkan
untuk meningkatkan populasi ternak, dan  inseminasi buatan juga mencegah penularan penyakit kelamin yang mungkin terjadi dalam perkawinan alami (Said et al , 2004).
Sapi potong merupakan salah satu ternak yang dapat diandalkan sebagai penyedia daging. Hal  ini  tentunya  merupakan  hal  yang  sangat  menguntungkan  bagi  peternak  apabila  bisa memanfaatkan  peluang  ini  dengan  baik.    Selain  itu,  pemenuhan  protein  hewani  bisa meningkatkan  kebutuhan  gizi  masyarakat  untuk  meningkatkan  kecerdasan.    Upaya meningkatkan  konsumsi  protein  hewani  bagi  masyarakat  berarti  juga  harus  meningkatkan produksi  bahan  pangan  asal  ternak.    Pada  akhirnya,  hal  tersebut    berarti  upaya  peningkatan produksi ternak (Rianto, 2009).
Usaha  ternak  sapi  potong  di  Indonesia  membutuhkan  perhatian  khusus  dalam  kaitannya dengan upaya mempertahankan dan menunjang peningkatan populasi ternak.  Guna peningkatan populasi  tersebut  maka  dilakukan  pemanfaatan  teknologi  reproduksi  peternakan  melalui  teknik Inseminasi Buatan (IB) dengan menggunakan semen beku (Kaiin et al , 2005).
Sejak  diperkenalkannya  Inseminasi  Buatan  (IB)  pada  hewan,  para  ilmuwan  mulai mencurahkan perhatian pada peningkatan produksi ternak melalui Ineminasi Buatan.  Teknologi tersebut  pada  awalnya  dimanfaatkan  pada  peternak  sapi  perah,  namun  kini  telah  meluas penggunaannya pada sapi pedaging, kambing, kuda, babi, anjing, dan kucing (Sulabda dan Puja, 2010).
Inseminasi buatan merupakan suatu cara perkawinan  yang lebih efisien dan efektif dalam penggunaan semen pejantan  unggul  untuk  membuahi  sapi  betina  dalam  jumlah  banyak dibandingkan  dengan  perkawinan  alam.  Salah  satu  faktor  yang  mempengaruhi  keberhasilan Inseminasi Buatan adalah kualitas semen pejantan unggul  yakni karakteristik semen yang dapat dinilai melalui pemeriksaan secara makroskopis maupun mikroskopis (Sumeidiana, 2007).
Proses thawing harus dilakukan dengan waktu yang singkat untuk menghindari kerusakan sel  yang  disebabkan  oleh  rekristalisasi.  Mitokondria  yang  rusak  akan  menyebabkan  putusnya rantai oksidasi. Akibatnya, pergerakan spermatozoa terhenti karena tidak ada lagi pasokan energi dari organel  mitokondria  yang berfungsi  merangsang fungsi  mikrotubula (Gazali dan Tambing, 2002).    Pramunico  (2003)  menyatakan  bahwa  suhu thawing yang  rendah  akan  menghasilkan angka  motilitas  yang  lebih  rendah  begitu  juga  sebaliknya  suhu thawing yang  tinggi  maka  akan menghasilkan angka motilitas yang tinggi.
Menurut Rodriguez et al (2005), menyatakan bahwa proses thawing pada semen beku sapi dengan suhu 37 o C selama 60 detik menyebabkan terjadinya beberapa kerusakan pada membran spermatozoa.    Inseminasi  Buatan  komersil  pada  sapi  sebaiknya thawing dilakukan  pada  suhu 37 o C selama 20 detik karena lebih praktis serta semen beku tidak boleh di thawing di bawah suhu 15 o C.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini telah dilaksanakan di UPTD Balai Inseminasi Buatan (BIB) Sembawa, Kabupaten Banyuasin, Provinsi Sumatera Selatan.

## Bahan dan Alat
Adapun bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah Semen sapi Brahman, Eosin, Air, N2 Cair,  NaCl,  Aquades.    Sedangkan  alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  adalah  : stopwatch/Timer,  Gunting,  Gelas,  Watterbad,  Container,  Straw,  Pipet  ukur,  Pinset,  Mikroskop, Tv  monitor,  Objek  glass,  Cover  glass,  Mangkok,  Tisu,  Camber,  Micropipett,  Kamera,  Mistar, Alat tulis dan Kertas Label.

## Metode Penelitian
Metode  penelitian  yang  digunakan  adalah  metode  eksperimental  dengan  menggunakan Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  non-faktorial  menggunakan  6  taraf  dengan  4  kali  ulangan sehingga diperoleh 24 unit percobaan, setiap unit percobaan (tiap unit) di ulang 4 kali.  Adapun taraf perlakuaan yang akan di ujicobakan sebagai berikut :
T1 = 10 Detik T2 = 20 Detik T3 =  30 Detik T4 = 40 Detik T5 = 50 Detik T6 = 60 Detik

## Cara Kerja
Cara kerja yang dilakukan dalam penelitian ini sesuai dengan thawing di UPTD Balai Inseminasi Buatan Sembawa, 2002.

## Parameter Yang Diamati
Adapun  Variabel  yang  diamati  dalam  penelitian  ini  adalah  Motilitas  Masssa  Spermatozoa, Motilitas Individu Spermatozoa, Persentase Viabilitas Spermatozoa, Abnormalitas Spermatozoa, dan Konsentasi spermatozoa

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil analisis Pengaruh Lama Waktu Thawing terhadap Kualitas Semen Beku Sapi Brahman di sajikan pada tabel 1:
Tabel 1.   Hasil analisis ragam Pengaruh Lama Waktu Thawing terhadap Kualitas Semen Beku Sapi Brahman
Keterangan : **  : Berpengaruh Sangat Nyata *    : Berpengaruh Nyata tn : Berpengruh Tidak Nyata
KK : Koefisien Keragaman
Tabel 2.   Pengaruh Lama Waktu Thawing terhadap Kualitas Semen Beku Sapi  Brahman
Keterangan :
+++ : Nilai Sangat Baik
Hasil uji BNJ dan data tabulasi Pengaruh Lama Waktu Thawing terhadap Kualitas Semen Beku Sapi Brahman terhadap semua peubah yang di amati berpengaruh nyata seperti tetara pada tabel 3.
No Peubah yang di amati P KK(%) 1 Motilitas individu 7,20** 21,04 2 Persentase hidup spermatozoa 10,63** 6,22 3 Persentase abnormal spermatozoa 0,48 tn 28,61
No
Peubah yang diamati P 1 Motilitas massa +++ 2 Konsentrasi 53 x 10 6
Tabel 3. Hasil uji BNJ dan data tabulasi Pengaruh Lama Waktu Thawing terhadap Kualitas Semen Beku Sapi Brahman terhadap peubah yang diamati No Peubah yang diamati Lama Waktu Thawing terhadap Kualitas Semen Beku Sapi Brahman BNJ T1 T2 T3 T4 T5 T6 5% 1% 1 Motilitas individu 17,50 aA 23,13 aA 36,88 bcAB 33,75 abAB 30,63 abA 21,25 aA 12,84 16,02 2 Viabilitas spermatozoa 64,38 Aa 74,25 aA 84,50 abAB 80,88 abAB 75,13 abA 68,00 aA 10,42 12,99 3 Persentase abnormalitas spermatozoa 9,75 9,75 9,75 9,13 8,00 10,88 - -
Keterangan : Angka-angka yang di ikuti huruf yang sama pada kolom yang sama berarti berbeda nyata pada taraf uji 5% dan 1%.
Tabel 4.   Tabel Rata-rata Lama Waktu Thawing terhadap Kualitas Semen Beku Sapi Brahman terhadap peubah yang diamati

## PEMBAHASAN
Pada  penelitian  ini semen beku  yang  digunakan  adalah semen beku  dari  sapi  Brahman. Penelitian ini dilakukan karena banyak pendapat mengenai lama waktu thawing yang dilakukan oleh  inseminator  dilapangan  sebelum  melakukan  Inseminasi  Buatan.    Lama  waktu thawing sangat berpengaruh besar terhadap keutuhan spermatozoa dalam semen , sebab selama ini banyak beberapa  pendapat  tentang  lama  waktu thawing pada semen beku  yang  akan  digunakan  dalam pelaksanaan  Inseminasi  Buatan  maka  dari  itu  untuk  mengetahui  kualitas spermatozoa yang paling  optimal  yang  akan  digunakan  dalam  pelaksanaan  Inseminasi  Buatan  adalah  dengan membandingkan penggunaan lama waktu thawing .
Kualitas semen di  Balai  Inseminasi  Buatan  Sembawa  menggunakan  tris  kuning  telur sebagai bahan pengencer, tris kuning telur tersebut dapat memberikan kualitas yang baik dalam spermatozoa,  dapat  melindungi  spermatozoa  selama  proses  pendinginan  dan  pembekuan.
No Peubah yang diamati
Lama Waktu Thawing 1 Motilitas Massa T1 T2 T3 T4 T5 T6 + + + + + ++ + + + 5 Konsentrasi Spermatozoa 53 x 10 6 53 x 10 6 53 x 10 6 53 x 10 6 53 x 10 6 53 x 10 6
Komposisi  kuning  telur  terdiri  dari  air,  protein,  lemak,  karbohidrat,  mineral  dan  vitamin (Sarwono, 1998).
Semen beku  sapi  merupakan semen yang  berasal  dari  pejantan  sapi  terpilih  yang diencerkan  sesuai  prosedur  proses  produksi  sehingga  menjadi semen beku dan disimpan dalam rendaman nitrogen cair pada suhu -196 ͦ C pada kontainer (SNI, 2005).  Pada penelitian ini semen beku  yang  digunakan  adalah semen beku  dari  sapi  Brahman. Semen beku  yang  diproduksi memenuhi syarat  yaitu semen beku sapi dikemas dalam bentuk straw dengan ukuran ministraw volume 0,25 ml dengan jumlah sel spermatozoa minimal 25 juta (SNI, 2008).
Penelitian  terdahulu  pada  sapi  Simmental  yang  terbaik  yaitu  pada  lama  waktu  40  detik pada  motilitas  individu,  viabilitas  spermatozoa  dan  konsentrasi  spermatozoa  64  x  10 6 .    Jenis bangsa sapi mempengaruhi lama waktu thawing , pada sapi Brahman lama waktu thawing terbaik yaitu 30 detik, sedangkan pada sapi Simmental 40 detik.
Faktor-faktor  yang  mempengaruhi  kualitas semen yaitu  suhu,  lingkungan,  umur  ternak, bangsa  ternak,  libido  dan  frekuensi  ejakulasi  (Hafez,  2000).    Berdasarkan  penelitian  yang  di lakukan bahwa lama waktu thawing 30 detik dapat  memberikan hasil  yang lebih baik  terhadap kualitas semen beku  sapi  Brahman,  sedangkan  lama  waktu thawing 10  detik  memberikan kualitas  yang  tidak  baik  terhadap  kualitas semen beku  sapi  Brahman. Sesuai  dengan  pendapat Adikarta dan Listiana (2001), menyatakan bahwa lama thawing 30 detik memberikan hasil lebih baik  terhadap  persentase  spermatozoa  hidup  dari  pada thawing selama  15  detik.    Menurut Rodriguez et.al (2005),  menyatakan  bahwa  proses thawing pada semen beku  sapi  dengan  suhu 37 o C selama 60 detik menyebabkan terjadinya beberapa kerusakan pada membran spermatozoa, lama  waktu thawing yang  terlalu  cepat  dan  lama  dapat  menyebabkan  persentase  spermatozoa rusak atau menyebabkan kematian.
Motilitas Massa Spermatozoa Semen Beku Setelah Thawing
Berdasarkan  hasil  penelitian  pada  motilitas  massa  spermatozoa  di  dapat  nilai  (+++)  atau nilai  sangat  baik  pada  perlakuan  T4  dengan  lama  waktu thawing 40  detik.    Hasil  penelitian menunjukan bahwa dengan suhu 37 0 C dan lama waktu thawing 40 detik ini menunjukan bahwa motilitas  massa  spermatozoa  memiliki  kualitas semen yang  sangat  baik(+++).    Hal  ini  sesuai dengan  pendapat  Ismaya  (2004),  menyatakan  bahwa  pengamatan  motilitas  massa  dengan  suhu 37 0 C  dan  lama  waktu thawing 30  detik  memberikan    kualitas  spermatozoa  dengan  nilai  sangat baik  (+++),  proses thawing dengan  waktu  yang  terlalu  cepat  dapat  menyebabkan  kualitas
spermatozoa  lebih  banyak  tidak  bergerak  maupun  bergerak  mundur,  sedangkan  dengan  lama waktu thawing yang terlalu lama dapat menyebabkan kematian pada spermatozoa, sperma tidak bergerak dan diam di tempat.
Menurut  pendapat  Feradis  (2010),  menyatakan  bahwa  faktor  yang  dapat  menyebabkan pergerakan  spermatozoa  bergerak  mundur  dan  salah  satu  pengaruh  yang  merugikan  adalah cekaman dingin (cold-shock ) dimana efeknya adalah kematian spermatozoa yang terjadi sesudah thawing, sebagai  akibat  tingginya  daya  kontraksi  selubung  lipoprotein  dinding  sel.    Dengan adanya  gliserol  dalam  pengencer  maka  efek  dari  kejutan  dingin  tersebut  dapat  meminimalisir kematian  spermatozoa.    Peranan  tris  kuning  telur  dalam  pengencer  juga  berfungsi  untuk mempertahankan  daya  hidup  spermatozoa  serta  sebagai buffer (penyangga)  dari  perubahan  pH bahan  pengencer  sedangkan  peranan  tris  dalam  pengencer  yaitu  dapat  melindungi  spermatozoa dari  pengaruh  cekaman  dingin  ( cold  shock ),  apabila  spermatozoa  tersebut  memiliki  gerakan berayun atau berhenti bergerak maka dianggap mati.
Menurut  pendapat  Susilawati  (2011),  kriteria  penilaian  massa  spermatozoa  sangat  baik (+++)  terlihat  adanya  gelombang  besar,  banyak,  gelap,  tebal  dan  aktif  bergerak.    Dinilai  baik (++)  terdapat  gelombang-gelombang  kecil  tipis,  jarang,  kurang  jelas  dan  bergerak  lambat. Dinilai  cukup  (+),  bila  tidak  terlihat  gelombang  melainkan  gerakan-gerakan  individual  aktif progresif dan buruk (0), bila tidak ada gerakan sama sekali.
Motilitas Individu Spermatozoa Semen Beku Setelah Thawing
Dalam  motilitas  individu  pada  perlakuan  T3  dengan  lama thawing 30  detik  memberikan nilai tertinggi atau terbaik dalam kualitas semen beku sapi Brahman yaitu dengan nilai 36,88%, Berdasarkan  hasil  analisis  ragam  motilitas  individu  diketahui  bahwa  lama  waktu thawing menunjukkan pengaruh yang sangat nyata (P>0,01) terhadap kualitas semen beku Sapi Brahman. Hal  ini  di  sebabkan  karena  lama  waktu thawing dapat  memberikan  pengaruh  terhadap pemeriksaan  kualitas  motilitas  individu  spermatozoa  yang  nantinya  akan  digunakan  untuk Inseminasi Buatan.
Motilitas  individu  spermatozoa  pada  perlakuan  T3  dengan  lama thawing 30  detik memberikan nilai  tertinggi  atau terbaik  dalam kualitas semen beku Sapi  Brahman  yaitu dengan nilai  36,88%, sedangkan nilai  terendah  yaitu  pada perlakuan T1 dengan lama thawing 10 detik dengan nilai  17,50%.  Sesuai pendapat  Gordon (2002), menyatakan bahwa persentase motilitas
dan  persentase  viabilitas  spermatozoa  tertinggi  adalah  pada post-thawing dengan  suhu 37°C selama 30 detik, karena lama waktu thawing 30 detik belum menyebabkan tekanan osmotik yang dapat  menyebabkan  sel  spermatozoa  menjadi  rusak,  sedangkan  lama  waktu thawing 10  detik menghasilkan  motilitas  individu  terendah  hal  ini  dapat  dikatakan  terlalu  singkat  sehingga menyebabkan  persentase  motilitas  spermatozoa  rendah  karena  spermatozoa  belum  mencair secara  sempurna  dan  lama  waktu thawing yang  terlalu  lama  juga  dapat  menyebabkan spermatozoa banyak yang mengalami kematian.
Menurut  Samsudewa  dan  Suryawijaya  (2008),  menyatakan  bahwa  lama thawing yang terlalu  lama  dan  terlalu  cepat  dapat  menyebabkan  penurunan  motilitas  individu  sampai  pada kualitas  yang  tidak  bisa  dipakai  lagi  untuk  Salah  satu  faktor  keberhasilan  Inseminasi  Buatan. Hal yang paling sering dijadikan pedoman adalah motilitas karena fertilitas juga ditentukan oleh jumlah  spermatozoa  motil  yang  bergerak  progresif,  dan  menurut  BSN  (2005),  penentuan  nilai harapan  40  juta  spermatozoa  motil/milliliter  ditetapkan  berdasarkan  ketentuan  SNI semen beku sapi  yaitu semen yang  diinseminasikan  memiliki  konsentrasi  spermatozoa  100  juta/ml  dengan motilitas individu 40%.
Persentase Viabilitas Spermatozoa Semen Beku Setelah Thawing
Berdasarkan  hasil  analisis  ragam  persentase  viabilitas  diketahui  bahwa  lama  waktu thawing menunjukkan pengaruh  yang sangat nyata (P>0,01) terhadap kualitas semen beku Sapi Brahman.  Hal ini di sebabkan karena lama waktu thawing dapat memberikan pengaruh terhadap pemeriksaan  kualitas  persentase  viabilitas  spermatozoa  yang  nantinya  akan  digunakan  untuk Inseminasi Buatan.  Persentase viabilitas spermatozoa pada perlakuan T3 dengan lama thawing 30 detik memberikan nilai tertinggi atau terbaik dalam kualitas semen beku Sapi Brahman yaitu dengan nilai 84,50%, sedangkan nilai terendah yaitu pada perlakuan T1 dengan lama thawing 10 detik dengan nilai 64,38%. Sesuai dengan pendapat Rodriguez et.al (2005), menyatakan bahwa bahwa  proses thawing pada semen beku  sapi  dengan  suhu  37 0 C  selama  60  detik  menyebabkan terjadinya beberapa kerusakan pada membran spermatozoa dan lama waktu thawing yang terlalu cepat menyebabkan persentase viabilitas spermatozoa rendah karena spermatozoa belum mencair secara sempurna.
Menurut  Sayoko et.al (2007),  lama thawing 30  detik  memberikan  hasil  yang  lebih  baik terhadap  persentase  viabilitas  spermatozoa  dari  pada thawing selama  15  detik,  sperma  yang tercat  atau  berwarna  merah  berarti  sperma  itu  mati  sedangkan  yang  tidak  terwarnai  atau  tidak
tercat  berarti  sperma  itu  hidup,  perubahan  warna  pada  spermatozoa  mati  disebabkan  oleh rusaknya  membran  plasma  pada  spermatozoa  sehingga  zat  warna  pada  eosin  terserap  oleh spermatozoa tersebut.
Pareira et.al (2010),  menyatakan  bahwa  viabilitas  atau  persentase  hidup  spermatozoa semen beku  akan  menurun  akibat  suhu  dingin  selama  penyimpanan  dalam  container, ketersediaan  energi  dalam  pengencer  semakin  berkurang,  dan  menurunnya  pH  karena  terjadi peningkatan asam laktat hasil metabolisme spermatozoa, adanya kerusakan membran plasma dan akrosom, ketersediaan N2 cair, temperatur selama equilibrasi dalam prosesing pembuatan semen beku, serta handling straw.
Persentase Abnormalitas Spermatozoa Semen Beku Setelah Thawing
Abnormalitas  spermatozoa  merupakan  penyimpangan  morfologi  dari  kerangka  normal spermatozoa.    Berdasarkan  hasil  analisis  ragam  persentase  abnormal  diketahui  bahwa  lama waktu thawing menunjukkan pengaruh yang tidak nyata (P<0,01) terhadap kualitas semen beku sapi  Brahman.    Hal  ini  di  sebabkan  karena  lama  waktu thawing tidak  dapat  memberikan pengaruh terhadap pemeriksaan kualitas persentase abnormal sperma.  Persentase abnormal pada perlakuan  T5  dengan  lama thawing 50  detik  memberikan  nilai  terendah  atau  terbaik  dalam kualitas semen beku  sapi  Brahman  yaitu  dengan  nilai  8,00  %,  sedangkan  nilai  tertinggi  atau terburuk yaitu pada perlakuan T6 dengan lama thawing 60 detik dengan nilai 10,88%.
Menurut pendapat (Toelihere, 1981 dalam Ade, Salim et al ., 2012 ), serta (SNI Semen Beku Nasional, 2005) yang merekomendasikan abnormalitas di bawah 20% masih layak dipakai untuk Inseminasi  Buatan.    Hal  ini  mengindikasikan  bahwa  suhu  dan  lama thawing pada  semua perlakuan  belum  banyak  menyebabkan  spermatozoa  menjadi  abnormal.    Penyebabnya  karena pada  suhu  dan  durasi thawing pada  semua  perlakuan  belum  memberikan  tekanan  yang  ekstrim secara  mekanis  sehingga  spermatozoa  menjadi  abnormal  seperti  halnya  ciri  khas  suatu spermatozoa  yang  mengalami  abnormalitas.    Salah  satu  ciri  spermatozoa  yang  mengalami abnormalitas yaitu ekor atau kepalanya yang terputus.  Spermatozoa abnormal meningkat selama proses  pendinginan  dan  pembekuan  disebabkan  oleh  cekaman  dingin  atau cold  shock, ketidakseimbangan  tekanan  osmotik  akibat  dari  proses  metabolisme  yang  terus  berlangsung selama penyimpanan.
Menurut  pendapat  Garner  dan  Hafez  (2008),  menyatakan  bahwa  jika  abnormalitas  lebih dari 25% dari satu ejakulat maka penurunan fertilitas tidak dapat diantisipasi.  Diperkuat kembali
oleh  Alawiyah  (2006),  selama  abnormalitas  spermatozoa  belum  mencapai  20%  dan  tidak  lebih dari itu, maka semen tersebut masih layak untuk diproses selanjutnya.  Dan menurut Susilawati (2013),  menyatakan  bahwa  pengaruh  tingginya  abnormalitas  berasal  dari  prossesing penyimpanan dan kondisi fisiologis dari pengencer tersebut, selain itu juga dari faktor pejantan saat penampungan yang berhubungan dengan fertilitas ternak itu sendiri
Konsentrasi Spermatozoa Semen Beku Setelah Thawing
Berdasarkan  hasil  penelitian  lama  waktu thawing terhadap  kualitas semen beku  sapi Brahman di dapat nilai konsentasi spermatozoa yaitu 53 x 10 6 juta spermatozoa.  Sesuai dengan pendapat  BSN  (2005),  penentuan  nilai  harapan  40  juta  spermatozoa  motil/milliliter  ditetapkan berdasarkan  ketentuan  SNI semen beku  sapi  yaitu semen yang  diinseminasikan  memiliki konsentrasi spermatozoa 100 juta/ml dengan motilitas individu 40%.
Menurut  Arifiantini  (2012),  menyatakan  bahwa  berbagai  metoda  dapat  digunakan  untuk menentukan  konsentrasi  spermatozoa.    Penilaian  konsentrasi  atau  jumlah  spermatozoa  per meliliter semen sangat penting, karena faktor inilah  yang menggambarkan sifat-sifat semen dan dipakai  sebagai  salah  satu  kriteria  penentuan  kualitas semen .    Konsentrasi  digabung  dengan volume dan persentase sperma motil memberikan sperma motil per ejakulat  yaitu kualitas yang menentukan berapa betina yang dapat di inseminasikan dengan ejakulat tersebut.
Frekuensi  ejakulasi  di  Balai  Inseminasi  Buatan  Sembawa  dilakukan  satu  kali  seminggu tentunya  frekuensi  ejakulasi  mempengaruhi  konsentrasi  spermatozoa.    Hal  ini  sesuai  dengan pendapat Ismaya (2014), menyatakan bahwa pejantan yang sering dipakai dengan frekuensi yang tinggi  dapat  menyebabkan  menurunya  libido,  volume  spema,  dan  konsentrasi  sperma. Konsentrasi  spermatozoa  dipengaruhi  oleh  perkembangan  seksual  dan  kedewasaan  sapi  jantan sesuai  kualitas  makanan  yang  diberikan  dan  pengaruh  kesehatan  reproduksi,  peninggian  suhu udara  karena  kelembaban  yang  tinggi  dapat  menyebabkan  kegagalan  pembentukan  dan penurunan  produksi  spermatozoa.    Dan  menurut  Pineda  (2003),  secara  umum  volume  ejakulat, gerak awal, konsentrasi spermatozoa dan proporsi spermatozoa dipengaruhi oleh musim.  Dalam penggunaan  straw  pada  inseminasi  buatan  dengan  jumlah  sel  sperma  yang  optimal  agar  hasil pelaksanaan  inseminasi  buatan  berhasil.    Konsentrasi  spermatozoa  adalah  100  juta/ml  atau  25 juta/dosis straw.
Menurut  Feradis  (2010),  menyatakan  bahwa  perubahan  suhu  lingkungan  yang  tidak menentu  akan  berpengaruh  terhadap  organ  reproduksi  jantan.    Fungsi  termoregulasi  skrotum
dapat  terganggu  yang  berakibat  buruk  pada  proses  spermatogenesis,  musim  juga  berpengaruh terhadap  kualitas  dan  kuantitas semen ,  peningkatan  suhu  testis  akibat  stress  dan  peningkatan suhu  udara  karena  kelembaban  yang  tinggi  dapat  menyebabkan  kegagalan  dalam  pembentukan dan  penurunan  produksi  spermatozoa,  secara  umum  volume  ejakulat,  motilitas  individu  dan konsentrasi  spermatozoa  dipengaruhi  oleh  musim.    Hal  ini  diduga  karena  stress  akibat  dari perubahan cuaca dari musim hujan ke musim kemarau serta meningkatnya suhu lingkungan pada musim  kemarau.    Hal  ini  sesuai  dengan  pernyataan  bahwa  faktor  stres  diketahui  dapat mempengaruhi volume ejakulat dan konsentrasi spermatozoa.

## KESIMPULAN
Pengaruh  lama thawing  semen beku  Sapi  Brahman  berpengaruh  sangat  nyata  terhadap Motilitas  Individu  dan  Persentase  Viabilitas  Spermatozoa.    Lama thawing 30  detik  pada perlakuan  T3  memberikan  pengaruh  yang  sangat  baik  terhadap  kualitas semen beku  Sapi Brahman, sedangkan pada lama thawing 50 detik pada perlakuan T5 memberikan kualitas yang baik pada persentase abnormalitas spermatozoa.  Nilai konsentrasi spermatozoa semen beku sapi Brahman sebesar 53 x 10 6 .

## DAFTAR PUSTAKA
Ade  Salim,  Trinil  Susilawati  dan  Sri  Wahyuningsih.  2012.  Fisiologi  Reproduksi  pada  Ternak. Angkasa. Bandung
Arifiantini. 2012. Teknik koleksi dan evaluasi semen pada hewan. IPB Press. Bogor Alawiyah. 2006. Abnormalitas Spermatozoa Ternak Sapi. UGM-Press. Yogyakarta BSN. 2005. Semen Beku Sapi. Badan Standarisasi Nasional. SNI 01-4869.1-2005. BSN. Jakarta Feradis. 2010. Bioteknologi Reproduksi Pada Ternak. Alfabeta. Bandung.
Gordon. 2002. Controlled Reproduction in Cattle and Buffaloes. CABI Publishing. Wallingford.

## UK
Garner,  D.  L.  and  E.  S.  E.  Hafez.  2008.  Spermatozoa  and  Seminal  Plasma  in  Reproduction  in Farm  Animals  Edited  by  E.  S.  E.  Hafez.  8  th  Ed.  Lippincott  Wiliams  and  Wilkins. Philadelphia
Gazali  dan  Tambing.  2002.  Kriopreservasi  Sel  Spermatozoa.  Fakultas  Pertanian.  Universitas Bandung Raya. Bandung
Ismaya. 2014. Bioteknologi Inseminasi Buatan Pada Sapi Potong. UGM Press.Yogyakarta Kaiin,  Gunawan,  Said  dan  Tappa.  2005.  Peningkatan  Ternak  Sapi  Melalui  Teknik  Inseminasi Buatan. Teknologi Peternakan dan Veteriner. Bogor
Listiani, D. 2005. Pemberian PGF2α pada Sapi  Peranakan  Ongole  yang  Mengalami  Gangguan Korpus Luteum. Tesis. Program Pascasarjana Universitas Diponegoro. Semarang
Pareira,  Becker,  Siquiera,  Severo,  Truzzi,  and  Goncalves.  2010.  Assesment  Of  Bovine Spermatozoa  Viability  Using  Different  Cooling  Protocols  Prior  To  Cryopreservation. Italian Journal Of Animal Science
Partodiharjo. 1992. Fisiologi Reproduksi Hewan. Mutiara Sumber Widya. IPB. Bogor
Pineda MH.  2003.  Male Reproductive System. In Veterinary Endocrinology and Reproduction.
5 th Edition.  Edited by Pineda MH.  And Dooley MP.  Ames Blackwell Publishing.
Pramunico,  A.  2003.Pengaruh  Suhu  dan  Lama  Thawing  Semen  Beku  terhadap  Motilitas  dan Persentase Spermatozoa Hidup pada Sapi Limousin. Skripsi Sarjana Peternakan. Fakultas Peternakan Universitas Diponegoro, Semarang
Rianto. 2009. Panduan Lengkap Sapi Potong. Cetakan ke-2. Penebar Swadaya. Jakarta
Rodriguez, Almeida,Cuadras, A, Anchondo, Romo – Garcia, B. E., Sanchez, J. A., Jimenez, A.
D.,  Alarcon  -  Rojo.  2005.  Heparin  Level  Effect  on  Sperm  Capacitation  of  Fresh  an Frozen  -  Thawed  Bovine  Semen.  Proceedings  Vol.  56  .  Western  Section.  American Society of Animal Science. Mexyco City
Salisbury dan Van Demark. 2012. Fisiologi Reproduksi dan Inseminasi Buatan pada Ternak Sapi (Terjemahan R. D januar). UGM Press. Yogyakarta
Samsudewa  dan  Suryawijaya.  2008.  Pengaruh  Berbagai  Methode  Thawing  terhadap  Kualitas Semen  Beku  Sapi.  Tekhnologi  Peternakan  dan  Veteriner.  Fakultas  Peternakan. Universitas Diponegoro. Semarang
Sayoko,  Hartono,  dan  Silotonga.  2007.  Faktor ‐ faktor  yang  Mempengaruhi  Persentase Spermatozoa  Hidup  Semen  Beku  Sapi  pada  Berbagai  Inseminator  di  Lampung  Tengah. Fakultas Pertanian. Universitas Lampung. Lampung
Sumeidiana.  2007.  Volume  Semen  dan  Konsentrasi  Sperma  Ternak  Sapi  Potong.  Fakultas Pertanian. Universitas Lampung. Lampung
Situmorang.  2002.  The  Effects  of  Inclusion  of  Exogenous  Phospolipid  In  Tris-Diluent Containing  A  Different  Level  of  Egg  Yolk  on  the  Viability  of  Bull  Spermatozoa.  Pusat Penelitian  dan  Pengembangan  Peternakan  dan  Badan  Penelitian  dan  Pengembangan Pertanian,  Bogor  7  (3)  :  131-187.23  <SNI>  Standar  Nasional  Indonesia.  2005.  Standar Nasional Indonesia Semen Beku Sapi. Badan Standar Nasional. Jakarta
Susilawati. 2011. Spermatology. Universitas Brawijaya Press. Malang
Susilawati. 2013. Pedoman Inseminasi Buatan Pada Ternak. Universitas Brawijaya (UB) Press. Malang
SNI. (Standar Nasional Indonesia). 2005. Standar Nasional Indonesia Semen Beku Sapi. Badan Standar Nasional. Jakarta
SNI (Standar Nasional Indonesia). 2008. Semen Beku - Bagian 1 : Sapi (SNI 4869.1:2008) . BSN (Badan Standarisasi Nasional). Jakarta
UPTD  BIB  Sembawa.  2002.  Standar  Operasional  Prosedur  UPTD  BIB  Sembawa.  Dirjen Peternakan Departemen Pertanian. Sumatera Selatan
Warsito  dan  Andoko.  2012.  Karakteristik  Ternak  Sapi  Brahman.  Universitas  Brawijaya  Press. Malang