## DETEKSI SENYAWA METABOLIT SEKUNDER JAMUR ENDOFIT DARI AKAR
TANAMAN KARET ( Hevea brasiliensis )
Widya Lestari dan Aini Qomariah Manurung Program Studi Agroteknologi Sekolah Tinggi Ilmu Pertanian Labuhanbatu Jln. SM. Raja No 126 A Aek Tapa Labuhanbatu Sumatera Utara e-mail : widya.chubby@yahoo.co.id

## ABSTRACT
Endophytic fungi are a group of fungi whose part or whole life is in living plant tissue and usually  does  not  harm  the  host.  Endophytic  fungi  generally  produce  secondary  metabolites that  have  beneficial  biological  activities  such  as  anti-cancer  compounds,  antifungi  or antibacterials. Control of plant diseases caused by Rigidoporus microporus and Ganoderma boninense  can  be  done  by  using  biological  agents,  namely  by  using  endophytic  fungi.  This fungus has metabolite compounds that can inhibit the growth of Rigidoporus microporus and Ganoderma  boninense.  This  study  aims  to  determine  what  content  is  found  in  endophytic mushroom  extracts  isolated  from  rubber  plants  (Hevea  brasiliensis).  Endophytic  fungi  are extracted by maceration using methanol and ethyl acetate solvents. The extract was tested for antifungal  activity  using  diffusion  method.  The  content  of  secondary  metabolites  was  tested by  phytochemical  test.  The  results  of  endophytic  fungal  extraction  with  methanol  and  ethyl acetate solvents resulted in antifungal activity with inhibitory zones in a row namely WL01: 2.19  and  2.15  mm  Fungi  Isolates  on  Ganoderma  boninense  while  3.09  mm  WL02  against Rigidoporus  microporus  Based  on  the  phytochemical  test  results,  endophytic  fungal  extract with methanol and ethyl acetate solvents showed the presence of alkaloid, flavonoid, phenol and saponin.
Keywords: endofit, fungi, hevea, secondary metabolites

## PENDAHULUAN

## 1.1 Latar Belakang
Pencarian sumber senyawa bioaktif  terus  menerus  dilakukan  seiring dengan semakin banyaknya penyakit pada tanaman. Senyawa bioaktif dapat diperoleh dari beberapa sumber, diantaranya dari tumbuhan, hewan, mikroba dan organisme laut (Prihatiningtias, 2005).
Salah satu sumber senyawa bioaktif  yang  dewasa  ini  menjadi  populer adalah  yang  berasal  dari  mikroba.  Salah satu  mikroba  penghasil  senyawa  bioaktif adalah  jamur  endofit  yang  merupakan jamur yang tumbuh dan mengkolonisasi di jaringan  tumbuhan  (inang)  terutama  di bagian  akar,  batang  dan  daun.  Jamur endofit  dapat  menghasilkan  senyawa- senyawa  bioaktif  dan  metabolit  sekunder
yang  sama  dengan  inangnya.  Hal  ini diduga  karena  jamur  endofit  mengalami koevolusi  transfer  genetik  dari  inangnya. Kemampuan  mikroba  endofit  dalam menghasilkan senyawa bioaktif merupakan  hal  yang  sangat  potensial untuk dikembangkan menjadi obat herbal. Hal ini karena mikroba endofit merupakan mikroorganisme yang mudah ditumbuhkan,  memiliki  siklus  hidup  yang pendek  dan  dapat  menghasilkan  jumlah senyawa  bioaktif  dalam  jumlah  besar dengan metode fermentasi.
Menurut  Cook  dan  Baker  (1983), usaha  penanggulangan  penyakit  tanaman secara  biologis  mempunyai  peluang  yang cukup  besar  karena  organismenya  telah tersedia  di  alam  dan  aktivitasnya  dapat
distimulasi dengan memodifikasi lingkungan maupun tanaman inang. Keuntungan dalam menggunakan mikroorganisme antagonis sebagai pengendalian  biologis  antara  lain:  aman terhadap  lingkungan,  tidak  ada  efek residu,  aplikasinya  bersifat  berkelanjutan karena  yang  digunakan  organisme  hidup yang  dapat  memperbanyak  diri  sehingga dapat mengurangi aplikasi  yang berulang- ulang.  Penelitian  jamur  endofit  telah dilakukan  lebih  dari  20  tahun  yang  lalu. Hampir  setiap  bagian  tanaman  ditemukan adanya  jamur  endofit,  baik  pada  daun, akar  maupun  batang.  Dalam  beberapa tahun  terakhir,  pengaplikasian  mikroba endofit  sebagai  pengendali  biologis  telah menjadi  alternatif  untuk  menggantikan peran  pengendali  kimia  seperti  pestisida. Penggunaan agen biologis ini secara alami mampu  mengendalikan  populasi  hama, meningkatkan  produksi  tanaman  dan merupakan  pilihan yang  baik  bagi resistensi  penyakit  dan  juga  ramah lingkungan (Procopio et al ., 2009).

## 1.2 Tujuan Penelitian
Untuk  mencari  sumber  penghasil senyawa  bioaktif  tanpa  mengekstrasi tanaman  yaitu  dengan  cara  mengisolasi dan  mengidentifikasi  jamur  endofit  dari akar  tanaman  karet serta  mengkaji kandungan    metabolit  sekunder  yang diperoleh jamur endofit tersebut.

## METODOLOGI PENELITIAN
2.1 Bahan dan Alat Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  antara  lain  akar  tanaman karet, medium PDA, kloramfenikol, metanol,  etl  asetat,  aquades,  etanol  70  %, NaOCl,  kertas  saring,  kloroform,  pereaksi semprot  DPPH,  H2O2  3%,  Lieberman, dragendrof.
Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  antara  lain:  oven,  autoklaf, laminar air flow , rotary shaker, refrigerator, inkubator, mikroskop, sentrifus,  lemari  asam,  tabung  sentrifuse,
timbangan  digital,  kompor  listrik,  corong, labu Erlenmeyer, gelas kimia, cawan Petri, pembakar  Bunsen,  gelas  ukur,  plastik pembungkus,  aluminium  foil,  swab,  pipet volumetrik,  pinset,  mikropipet,  spatula, gunting, pisau steril, koran, plastik, vortex mixer, chamber,kapas, kertas label, ose, da n penggaris.

## 2.2 Prosedur Penelitian

## Pemurnian Jamur Endofit
Jamur  endofit  yang  telah  tumbuh pada  media  isolasi  PDA,  kemudian  secara bertahap dimurnikan satu persatu. Masing- masing  isolat  murni  jamur  endofit  yang diperoleh, kemudian dipindahkan ke dalam media  dalam  PDA  di  cawan  Petri. Pemurnian ini bertujuan untuk memisahkan koloni endofit dengan morfologi  berbeda  untuk  dijadikan  isolat tersendiri. Pengamatan morfologi dilakukan kembali setelah inkubasi selama 5-7  hari,  dan  apabila  masih  ditemukan pertumbuhan  koloni  yang  berbeda  secara makroskopik  maka  harus  dipisahkan kembali  sampai  diperoleh  isolat  murni. Jamur endofit diinkubasi pada suhu kamar selama 3-5 hari sesuai dengan pertumbuhannya.  Setiap  isolat  murni dibuat  duplo.  Masing-masing  sebagai kultur stok dan kultur untuk penelitian.
Pembuatan  Ekstrak  Jamur    Endofit Ekstraksi  Bahan  Antifungal  dari  Isolat Jamur Endofit
Ekstraksi metabolit sekunder jamur endofit  akar  tanaman  karet  ( Hevea brasiliensis )  yang  memiliki  aktivitas antifungal  dilakukan  berdasarkan  metode yang  pernah  dilakukan  oleh  Nofiani et  al .
(2009)  dan  Suryanto et  al .  (2012)  yang dimodifikasi.  Isolat  jamur  endofit  yang paling  potensial  diperbanyak  di  media PDA dan  diinkubasi selama 5 hari. Media PDA  selanjutnya  dipotong  kecil-kecil  dan direndam  dengan  metanol  dan  etil  asetat dalam  erlenmeyer  selama  72  jam  dan dibungkus dengan kertas aluminium untuk mengindari  kerusakan  karena  cahaya.
Maserat  diambil  dengan  cara  disaring. Perendaman  dilakukan  sebanyak  3  kali.
Semua maserat yang terkumpul
disentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama  15  menit.  Supernatan  dipekatkan dengan menggunakan rotariepavorator dengan  suhu  tidak  lebih  dari  50oC  untuk memperoleh  ekstrak  yang  siap  untuk digunakan.  Metode  yang  sama  dilakukan terhadap pelarut n-heksana dan etil asetat.
Deteksi  Kandungan  Ekstrak  Metanol dan Etil Asetat Isolat Jamur Endofit
Untuk mendeteksi kandungan senyawa  dari  ekstrak  methanol  dan  etil
asetat  isolat  jamur    endofit  dari  akar tanaman  karet,  maka  dilakukan  analisis skrining  fitokimia  meliputi  pemeriksaan kandungan senyawa alkaloida, flavanoida, terpenoid/steroida,  tanin  dan  saponin menurut  prosedur  yang  telah  dilaporkan Harbone  (1996)  (Tabel  1).  Ekstrak metanol  dan    etil  asetat  yang  telah diperoleh dari prosedur sebelumnya dideteksi  dengan  menggunakan  metode fitokimia  untuk  uji  pendahuluan  agar diketahui kandungan senyawa pada ekstrak  bakteri  endofit  yang  dibuat  yaitu alkaloid, terpenoid, fenolik, flavonoid dan saponin. Tabel 1. Metode Skrining Fitokimia menurut Harbone 1996 No Uji Pereaksi Hasil Perubahan warna 1. Fenolik FeCl3 1% Positif Terbentuk larutan warna hijau, biru, hitam 2. Flavanoid Mg-HCl Positif Merah jambu 3. Alkaloid Wagner, Mayer dan Dragendroff. Positif Terbentuk endapan 4. Steroid H2SO4(p) dan pereaksi LB (Lieberman_Burchad). Positif Terbentuk warna hijau kebiruan 5. Saponin Akuades Positif Terbentuk busa 6. Tanin FeCl3 Positif Terbentuk warna hijau kebiruan, dan terbentuk endapan

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Dari  hasil  isolasi  jamur  endofit sampel  akar  tanaman  karet  diperoleh  5 isolat  bakteri:  WL01,  WL02,  WL03, WL04  dan  WL05  yang  memiliki  potensi menghambat pertumbuhan jamur patogen. Kemampuan  menghambat  isolat  bakteri ditunjukkan
dengan terhambatnya
pertumbuhan
jamur Rigidoporus microporus dan Ganoderma  boninense . Isolat  jamur  endofit    WL01  dan  WL02 merupakan  isolat  jamur  yang  paling potensial.  Dari  hasil  uji  daya  hambat Ekstrak  Metanol  jamur  endofit  terhadap Jamur Rigidoporus microporus dan Ganoderma  bininens e  diperoleh  hasil sebagai  berikut:  Pada  konsentrasi  80% ekstrak  methanol  isolat  jamur  WL01 memiliki  zona  hambat  sebesar  2,19  mm terhadap jamur Ganoderma boninense dan sebesar  3,03  mm  terhadap Rigidoporus microporus. Sedangkan  Pada  konsentrasi
60%  ekstrak  metanol  isolat  jamur  WL02 memiliki  zona  hambat  sebesar  13,89  mm terhadap jamur Ganoderma boninense.
Ekstrak  metanol  dari  kedua  isolat jamur  endofit  WL01  dan  WL02  dideteksi kelompok  metabolit  sekundernya  secara umum berdasarakan uji skrining fitokimia sederhana (Tabel 2).
Tabel 2. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Metanol Jamur Endofit WL01
dan WL02 No Uji Hasil Kualitatif Ekstrak WL01 Ekstrak WL02 1 Fenol ++ +++ 2 Flavanoid +++ +++ 3 Alkaloid +++ + 4 Steroid - - 5 Saponin + ++ 6 Tanin - -
Dari  Tabel  2  dapat  dilihat  bahwa isolat  jamur  endofit  terpilih  (WL01  dan
WL02)  mengandung  kelompok  senyawa metabolit  sekunder  alkaloid  yang  ditandai dengan  timbulnya  noda  berwarna  coklat pada  saat  sebelum  maupun  sesudah disemprot dengan pereaksi kimia dragendorff.  Uji  metabolit  sekunder  uji alkaloid    ini  bertujuan  untuk  mengetahui adanya senyawa golongan alkaloid dengan menggunakanpereaksi warna  Dragendorff. Hasil  uji  alkaloid  yang  telah  dilakukan menghasilkan larutan dengan warna oranye  yang  apabila  dibiarkan  beberapa saat akan menghasilkan endapan berwarna oranye  kecoklatan  pada  dasar  tabung.  Hal ini  menunjukkan  hasil  positif  untuk golongan alkaloid. Adanya senyawa golongan  alkaloid  ditunjukkan  dengan adanya  endapan  berwarna  oranye  dengan pereaksi  Dragendorff.  Mekanisme  kerja alkaloid  sebagai  antibakteri  yaitu  dengan cara  mengganggu  komponen  penyusun peptidoglikan  pada  sel  bakteri  sehingga lapisan  dinding  sel  tidak  terbentuk  secara utuh  dan  menyebabkan  kematian  sel tersebut.  Mekanisme  lain  antibakteri alkaloid yaitu komponen alkaloid diketahui  sebagai  interkelator  DNA  dan menghambat  enzim  topoisomerase  sel bakteri (Karou et al ., 2005).
Isolat jamur endofit terpilih (WL01)  juga  mengandung  kelompok senyawa  metabolit  sekunder  flavonoid yang  ditandai  dengan  timbulnya  noda berwarna kuning coklat pada saat sebelum maupun sesudah disemprot dengan pereaksi  kimia  uap  amoniak.  Isolat  jamur endofit  terpilih  (WL01  dan  WL02)  tidak mengandung kelompok senyawa metabolit sekunder  tanin  dan  steroid  dikarenakan noda  yang  dihasilkan  berwarna  kuning sebelum disemprot dengan pereaksi kimia FeCl3  10%  dan  setelah  disemprot  dengan pereaksi  kimia  FeCl3  10%  terlihat  tidak adanya noda yang dihasilkan.

## KESIMPULAN
Skrining fitokimia dengan menggunakan  metode  Harbone  ekstrak methanol  isolat  jamur  endofit  WL01  dan
WL02  mengandung  kelompok  senyawa metabolit sekunder, yaitu Fenolik, Flavanoid, Alkaloid dan Saponin.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis mengucapkan terima kasih yang  sebesar  besarnya  kepada  DPRM RISTEK  DIKTI  yang  telah  memberikan bantuan  dana  Hibah  Penelitian  Dosen Pemula  Pendanaan  Tahun  2018,  sehingga penelitian  dosen  pemula  ini  bisa  berjalan maksimal  dan  semoga  bermanfaat  bagi saya  dan  institusi  STIPER  LABUHAN BATU.

## DAFTAR PUSTAKA
Cook  RJ,  Baker  KF.  1983.  The  Nature  of Practice  of  Biological  Control  of Plant  Pathogens.  The  APS  Press,
St. Paul, Minnesota. 53 p.
Harborne  J.  1996.  Metode  Fitokimia:
Penuntun Cara Modern
Menganalisis  Tumbuhan.  Cetakan kedua.  Penerjemah:  Padmawinata, K.  dan  Soediro,  K.  Bandung:
Penerbit ITB.
Karou  D,  Savadogo  A,  Canini  A,
Yameogo S, Montesano C,
Simpore  J,  Traore  AS.  2005. Antibacterial  Activity  of  Alkaloids From  Sida  acuta. African  Journal of Biotechnology, 4(12), 195-200. Nofiani R,  Nurbetty S dan Sapar A. 2008.
Aktifitas Antimikroba Ekstrak
Metanol  Bakteri  Berasosiasi  Spons dari Pulau Lemukutan, Kalimantan Barat. E-Journal  dan  Teknologi kelautan Tropis. 1: 33-41.
Prihatiningtias,  Widyati.  2005.  Prospek Mikroba  Endofit  Sebagai  Sumber Senyawa  Bioaktif.  Yogyakarta  : Fakultas  Kedokteran  Universitas
Gadjah Mada Procopio REL,  Araujo  W, Maccheroni Jr, Azevedo JL. 2009.
Characterization  of an  Endophytic Bacterial  Community  Associated
With  Eucalyptus  spp. Genet  Mol Res 8 (4): 1408-1422.
Suryanto  D,  Siti  KN,  Erman  M.  2012. Antimicrobial  Activity  of  Some Bacterial Isolates natural Recreational Park of North Sumatera,  Indonesia. Bulletin  of Environment,  Pharmacology  and Life Sciences. 1(11). 1-7.