## Potensi Antibakterial Nilam Aceh

## ( Pogostemon cablin Benth. )
Yaumil Reiza
Program Internship Dokter Indonesia periode 2017/2018, RSU Cut Meutia/Puskesmas Syamtalira Bayu, Kabupaten Aceh Utara/Kota Lhokseumawe, Aceh, Indonesia

## ABSTRAK
Nilam aceh ( Pogostemon cablin Benth.) menghasilkan minyak atsiri yang dinamai minyak nilam. Kon stituen utama minyak nilam yang berperan sebagai antibakterial adalah alkohol nilam dan pogostone. Penelitian telah menunjukkan efektivitas nilam aceh dalam menghambat berbagai spesies  bakteri  Gram-positif  dan  Gram-negatif.  Target  kerjanya  adalah  menghambat penicillin-binding proteins (PBP),  dihidrofolat  sintetase (DHPS), dihidrofolat reduktase (DHFR), DNA girase, dan RNA polimerase yang diperlukan dalam biosintesis berbagai struktur bakteri.
Kata kunci : antibakterial, minyak nilam, nilam aceh ( Pogostemon cablin Benth.), pogostone

## ABSTRACT
Patchouli (Pogostemon cablin Benth.) produces an essential oil called patchouli oil. Main constituents of patchouli oil that acts as antibacterial are patchouli alcohol and pogostone. Studies have demonstrated the effectiveness of patchouli against various species of Gram-positive and Gram-negative bacteria. Its mechanism of action is targeting penicillin-binding proteins (PBP), dihydrofolate synthetase (DHPS), dihydrofolate reductase  (DHFR),  DNA  gyrase,  and  RNA  polymerase  that  are  required  in  biosynthesis  of  various  bacterial  structures . Yaumil Reiza. The Antibacterial Potency of Nilam Aceh (Pogostemon cablin Benth.)
Keywords : antibacterial , patchouli ( Pogostemon cablin Benth.), patchouli oil , pogostone

## PENDAHULUAN
Nilam  ( Pogostemon sp.)  merupakan  tanaman tropis  yang  tumbuh  di  ketinggian  800-1.000 meter  di  atas  permukaan  laut.  Tanaman  ini lebih  menyukai  iklim  hangat  dan  lembab, dapat tumbuh di daerah dengan curah hujan tinggi,  yaitu  150-300  cm  per  tahun.  Nilam membutuhkan  tanah  subur,  liat,  terdrainase baik, kaya humus dan nutrien, tekstur gembur, serta  bersifat  sedikit  asam  dengan  pH  5,5- 7,5. 1 Di Indonesia, dikenal tiga jenis tanaman nilam yang dapat menghasilkan minyak nilam dengan kadar berbeda yaitu: 2 1. Pogostemon cablin Benth. (nilam aceh)
Nilam  aceh  tidak  berbunga,  daunnya berbulu  halus,  memiliki  kadar  minyak atsiri  paling  tinggi,  sebesar  2,5–5,0%. Merupakan  jenis  nilam  yang  paling banyak dibudidayakan.
2. Pogestemon heyneanus Benth.  (nilam hutan)
Nilam  hutan  memiliki  bunga,  daunnya tipis, memiliki kadar minyak atsiri rendah, sebesar 0,5–1,5%.
3. Pogestemon hortensis Benth. (nilam jawa) Nilam  jawa  tidak  berbunga,  berbentuk perdu  dengan  tinggi  mencapai  0,5–1,2 meter, memiliki kadar minyak atsiri rendah, sebesar 0,5–1,5%.
Tulisan  ini  akan  membahas  potensi antibakterial  daun  nilam  aceh  ( Pogostemon cablin Benth.) berdasarkan bukti.
NILAM ACEH ( Pogostemon cablin Benth.)
Nilam menghasilkan minyak atsiri yang secara spesifik  dinamai  minyak  nilam  ( patchouli essential oil ,  PEO).  PEO  bersifat  kental, lengket,  dan  lambat  menguap. 3 Nilam  aceh menghasilkan  minyak  atsiri  dengan  kadar lebih tinggi dibandingkan jenis nilam lainnya. 2 Pada  nilam  aceh,  PEO  terutama  ditemukan pada daun, jumlah yang lebih kecil ditemukan pada  akar,  batang,  dan  ranting.  Umumnya, kandungan PEO pada daun adalah 2,5–5,0%, sedangkan  pada  akar,  batang,  dan  ranting adalah 0,4–0,5%. Daun nilam aceh yang telah dikeringkan  memiliki  kandungan  PEO  2,5–
3,5%. 1,2 Tabel 1 menunjukkan spesifikasi syarat mutu  PEO  berdasarkan  Standar  Nasional Indonesia (SNI).
PEO  memiliki  sejumlah  efek  terapeutik, antara  lain  sebagai  antibakterial,  antifungal, antiseptik, antidepresan, antiinflamasi, astringen,  sedatif,  diuretik,  antiemesis, antialergi,  imunomodulator,  dan  obat pengusir serangga. 4,5
Komponen  utama  PEO  adalah  senyawa seskuiterpen  (40–45%)  yang  sebagian  besar berupa  alkohol  nilam  ( patchouli alcohol, PA) dengan  kadar  35–40%. 3 Selain  itu,  PEO  juga mengandung  senyawa-senyawa  lain  seperti aciphyllene (0,7–4,2%),  (E)- β - caryophyllene (0,75–6,8%), α - guaiene (2,9–23%), α - bulnesene (2,9–23%), α - humulene (0,05–2%), β – patchoulene (0,03–12%), norpatchoulenol (0,11–4,0%), seychellene (2,3–13%), pogostol (0,2–6,2%),  dan pogostone (0,1–27,7%). 6 Dari konstituen-konstituen  tersebut,  PA  (rumus kimia  C 15 H 26 O, Gambar 1)  dan  pogostone

## TINJAUAN PUSTAKA
(rumus kimia C 12 H 16 O 4 , Gambar 2) merupakan senyawa  utama  yang  berperan  sebagai antibakterial. 7
Gambar 1 . Struktur patchouli alcohol (PA). 5
Gambar 2 . Struktur pogostone . 6

## AKTIVITAS ANTIBAKTERIAL NILAM ACEH IN VITRO
Aktivitas  antibakterial  nilam  aceh  dapat ditunjukkan  oleh  diameter  zona  hambat, minimum inhibitory concentration (MIC),  dan minimum bactericidal concentration (MBC).
Diameter  zona  hambat  merupakan  daerah bebas  pertumbuhan  bakteri  yang  dihasilkan oleh  antibotik  yang  berdifusi  ke  medium tempat pertumbuhan bakteri. MIC merupakan konsentrasi  terendah  antibiotik  yang  dapat mencegah pertumbuhan bakteri pada kondisi in vitro dalam  periode  waktu  tertentu.  MBC merupakan  konsentrasi  terendah  antibiotik yang  mampu  menurunkan  jumlah  bakteri sebanyak  99,9%  atau  3log  pada  kondisi in vitro dalam  periode  waktu  tertentu.  Hitung sel bakteri viable dinyatakan dalam satuan log colony-forming unit (CFU). 8
Nilam  aceh  memiliki  aktivitas  antibakteri dengan spektrum sangat luas. Beberapa studi telah  meneliti  efektivitas  ekstrak  nilam  aceh terhadap  berbagai  jenis  bakteri  dengan  hasil bervariasi ( Tabel 2 ).
Penelitian Vu et al. 9 menemukan bahwa ekstrak metanol  dari  daun  dan  ranting  nilam  aceh lebih  efektif  terhadap  bakteri  Gram-positif. Nilai MIC dan MBC ekstrak metanol dari daun dan  ranting  nilam  terhadap Staphylococcus aureus , Bacillus cereus ,  dan Bacillus subtilis adalah 125 μ g/mL dan 250 μ g/mL. Sementara itu, nilai MIC dan MBC Escherichia coli adalah 2.000 μ g/mL  dan  >2.000 μ g/mL,  sedangkan
nilai  MIC  dan  MBC Pseudomonas aeruginosa tidak  dapat  ditentukan  hingga  konsentrasi 2.000 μ g/mL.
Penelitian Rahmawati 10 dan Dechayont et al. 11 menemukan bahwa ekstrak etanol daun nilam aceh juga efektif menghambat pertumbuhan bakteri.  Rahmawati 10 menyatakan  bahwa diameter  zona  hambat  ekstrak  etanol terhadap Staphylococcus aureus adalah sebesar  11,5  ±  0,38  mm.  Dechayont  et  al. 11 menyatakan  bahwa  ekstrak  etanol  lebih  baik dari  ekstrak  air  dalam  menghambat  bakteri Gram-positif seperti methicillin-resistant
Staphylococcus aureus (MRSA), Staphylococcus aureus ,  dan Streptococcus pyogenes dengan diameter zona hambat masing-masing 11,67 ± 1,53 mm; 10,33 ± 2,52 mm; dan 10,33 ± 1,15 mm. Nilai MIC dan MBC berada pada rentang 0,039–5  mg/mL  pada  semua  bakteri  yang diuji.  Penelitian  tersebut  juga  menemukan bahwa diameter zona hambat ekstrak etanol terhadap MRSA lebih baik dari gentamisin (10 ± 0,00 mm).
Hal sebaliknya dikemukakan oleh Pullagummi et  al. 12 ,  bahwa  ekstrak  metanol  tidak  efektif menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Baik ekstrak  air  maupun  ekstrak  etanol  juga  tidak efektif  sebagai  antibakterial.  Namun,  ekstrak heksana  nilam  aceh  mampu  menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus (18–21 mm), lebih besar dibandingkan Escherichia coli (16–20,5  mm), Bacillus subtilis (12–19,3  mm), dan Enterobacter aerogenes (10–15,8 mm).
Yang  et  al. 7 telah  mengidentifikasi  bahwa baik  PEO  dan  konstituennya,  PA  dan pogostone ,  memiliki  aktivitas  antibakterial terhadap Staphylococcus aureus , Escherichia coli , Pseudomonas aeruginosa , Bacillus proteus , Shigella dysenteriae ,  dan Typhoid bacillus .  Sebelumnya,  Pattnaik  et  al. 13 telah
menemukan  bahwa  PEO  efektif  terhadap  20 dari 22 strain bakteri yang diujikan, antara lain Staphylococcus aureus , Bacillus , Escherichia coli , Klebsiella sp., Salmonella , Shigella , Pseudomonas aeruginosa , dan Vibrio cholerae .
Penelitian-penelitian selanjutnya telah menentukan  efektivitas  PEO  terhadap sejumlah  bakteri,  khususnya Staphylococcus aureus .  Widyastuti  dan  Farizal, 14 menemukan bahwa diameter zona hambat PEO terhadap Staphylococcus aureus makin  besar  seiring bertambahnya  konsentrasi  hingga  tercapai konsentrasi  optimal  sebesar  30%  sebelum akhirnya menurun pada konsentrasi 35%. Hal ini menunjukkan bahwa aktivitas antibakterial PEO  dipengaruhi  oleh  konsentrasinya. Selain  itu,  diameter  zona  hambat  PEO  pada konsentrasi  30%  adalah  12,372  ±  0,395  mm dalam  bentuk  gel  dan  14,708  ±  0,859  mm dalam  bentuk  minyak.  Perbedaan  antara keduanya bersifat signifikan (p<0,05), memberi  kesan  bahwa  bentuk  sediaan  PEO juga  memengaruhi  aktivitas  antibakterial nilam aceh.
Kwiatkowski et al. 15 menemukan nilai MIC PEO adalah sebesar 1,7 ± 0,8 μ L/mL. Nilai ini lebih tinggi dibandingkan dengan geranium EO (5,4 ± 2,0 μ L/mL) dan caraway EO (18,8 ± 10,3 μ L/ mL).  Vázquez-Sánchez  et  al. 16 menemukan nilai MIC PEO sebesar 0,5% v/v terhadap sel- sel planktonik ( planktonic cells ) Staphylococcus aureus .  PEO  dalam  konsentrasi  0,10%–8% mampu  menghambat  pertumbuhan  biofilm Staphylococcus aureus yang  berusia  48  jam dengan log reduction (LR) = 1,0–4,2 log CFU/ cm 2 .  Rădulescu  et  al. 17 mengemukakan  LR =  2  pada  biofilm Staphylococcus aureus dibandingkan  kontrol  pada  24  jam  dan  48 jam  inkubasi,  namun  hanya  terdapat  sedikit penurunan jumlah sel setelah 72 jam inkubasi. Sementara  itu,  penelitian  Edwards-Jones
Tabel 1 . Spesifikasi syarat mutu PEO menurut SNI 06-23852006. 2 JENIS UJI PERSYARATAN Warna Kuning muda sampai coklat kemerahan Berat jenis (25°C) 0,945–0,975 Indeks bias (25°C) 1,507–1,515 Kelarutan dalam etanol 90% pada suhu 20±3°C Larutan jernih atau opalesensi ringan dalam perbandingan 1:10 Putaran optik (°) (-48)–(-65) Bilangan asam Maks. 5,0 Bilangan ester Maks. 20,0 Patchouli alcohol (PA) (C 15 H 26 O)
Min. 30%
Alpha copaene (C 15 H 24 ) Maks. 0,5% Kandungan besi (Fe) Maks. 25 mg/kg
Tabel 2 . Studi potensi efektivitas antibakterial nilam aceh ( Pogostemon cablin Benth.) secara in vitro
STUDI KONSTITUEN TANAMAN NILAM ACEH YANG DIUJI BAKTERI YANG DIUJI HASIL Vu et al., 2016  Ekstrak metanol dari daun dan ranting Bakteri Gram-positif:  Staphylococcus aureus  Bacillus cereus  Bacillus subtilis
 Bakteri Gram-negatif:  Escherichia coli  Pseudomonas aeruginosa
Ekstrak metanol memiliki aktivitas antibakterial yang tinggi:
 Nilai MIC dan MBC pada Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Bacillus subtilis adalah 125 μ g/mL dan 250 μ g/mL  Nilai MIC dan MBC pada Escherichia coli adalah 2.000 μ g/ml dan >2.000 μ g/mL  Nilai  MIC  dan  MBC  pada Pseudomonas aeruginosa tidak  dapat  ditentukan hingga konsentrasi 2.000 μ g/mL
Rahmawati, 2016  Ekstrak etanol dari daun  Staphylococcus aureus Diameter zona hambat dari ekstrak etanol = 11,5 ± 0,38 mm Dechayont  et  al., 2017  Ekstrak air dari daun  Ekstrak etanol dari daun  MRSA
 Staphylococcus aureus
 Streptococcus pyogenes  Pseudomonas aeruginosa
Ekstrak etanol memiliki aktivitas antibakterial yang lebih baik daripada ekstrak air:  MRSA: diameter zona hambat = 11,67 ± 1,53 mm, MIC = 5 mg/mL, MBC = 5 mg/mL
 Staphylococcus aureus : diameter zona hambat = 10,33 ± 2,52 mm. MIC = 0,625 mg/mL, MBC = 0,625 mg/mL
 Streptococcus pyogenes : diameter zona hambat = 10,33 ± 1,15 mm. MIC = 0,039 mg/ml, MBC = 0,039 mg/mL
 Pseudomonas aeruginosa : diameter zona hambat = 0 mm. MIC = 0,625 mg/ml,
MBC = 0,625 mg/mL Pullagummi  et  al., 2014  Ekstrak air dari daun
 Ekstrak heksana dari daun
 Ekstrak etanol dari daun
 Ekstrak metanol dari daun  Escherichia coli
 Bacillus subtilis
 Staphylococcus aureus
 Enterobacter aerogenes
Diameter zona hambat ekstrak heksana:  Escherichia coli: 16–20,5 mm
 Bacillus subtilis : 12–19,3 mm
 Staphylococcus aureus : 18–21 mm
 Enterobacter aerogenes : 10–15,8 mm  Ekstrak  air,  etanol,  dan  metanol  ditemukan  tidak  efektif  menghambat pertumbuhan bakteri Yang et al., 2013  PEO  PA  Pogostone  Escherichia coli  Pseudomonas aeruginosa
 Bacillus proteus
 Shigella dysenteriae  Salmonella typhi  Staphylococcus aureus  Baik PEO, PA, dan pogostone memiliki aktivitas antibakterial terhadap semua bakteri yang diuji Pattnaik et al., 1996  PEO  22 strain bakteri yang mencakup:
 Staphylococcus aureus SP-1  Bacillus brevis RB-3, Bacillus circulans RB-6  Citrobacter sp. VR-14
 Escherichia coli VR-12,  EPEC  VR-17,  ETEC  VR-18,
SP-11
 Salmonella typhi VR-20, Salmonella typhimurium VR-19
 Shigella boydii VR-15, Shigella flexneri VR-16  Klebsiella sp. VR-13
 Pseudomonas aeruginosa VR-6, SP-10
 Vibrio cholerae VR-65, VR-75, VR-78, VR-80
 Bakteri patogen pada tanaman
 PEO  efektif  terhadap  20  dari  22  strain  bakteri  yang  diteliti  dengan  diameter daerah hambat 9–28 mm
 PEO tidak efektif terhadap Shigella flexnerii VR-16 dan Escherichia coli VR-18
Widyastuti, 2015  PEO  Staphylococcus aureus  Konsentrasi optimal PEO adalah 30%  Diameter zona hambat gel PEO 30% = 12,372 ± 0,395 mm  Diameter zona hambat PEO 30% = 14,708 ± 0,859 mm Kwiatkowski  et  al., 2017  PEO  Staphylococcus aureus  Nilai MIC PEO = 1,7 ± 0,8 μ L/mL
Vázquez-Sánchez et al., 2014  PEO  Staphylococcus aureus  PEO mampu menghambat sel-sel planktonik ( planktonic cells ) Staphylococcus aureus dengan nilai MIC = 0,5% v/v  PEO  dalam  berbagai  konsentrasi  (0,10%–8%)  mampu  menghambat pertumbuhan biofilm Staphylococcus aureus yang berusia 48 jam dengan nilai LR = 1,0–4,2 log CFU/cm2 Rădulescu  et  al., 2016  PEO  Staphylococcus aureus  PEO  mampu  menghambat  pembentukan  biofilm Staphylococcus aureus setelah  inkubasi  selama  24  jam  dan  48  jam,  di  mana  terdapat  penurunan jumlah  sel  yang viable pada  biofilm  sebanyak  2  log  dibandingkan  kontrol, namun hanya terdapat sedikit penurunan jumlah sel setelah 72 jam inkubasi
Edwards-Jones  et al., 2004  PEO  Staphylococcus aureus (Oxford)
 EMRSA 15
 MRSA
 Kontak  langsung  PEO  mampu  menghambat  pertumbuhan Staphylococcus aureus (Oxford)  (sekitar  25  mm),  EMRSA  15  (sekitar  15  mm),  dan  MRSA  (NT) (sekitar 18-20 mm)
 Kontak uap PEO mampu menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus saja (sekitar 17-18 mm), namun tidak dengan EMRSA 15, dan MRSA (NT) Dzakwan, 2012  PEO  Staphylococcus aureus  Escherichia coli
Diameter zona hambat:
 Staphylococcus aureus : 12,10; 16,60; 18,30 pada konsentrasi 10%, 20%, 30%
 Escherichia coli : 10,50; 12,20; 15,30 pada konsentrasi 10%, 20%, 30% Vieira-Brock  et  al.,
2017  PEO  Pseudomonas aeruginosa
 Staphylococcus aureus
 Streptococcus pneumonia
Diameter zona hambat:
 Pseudomonas aeruginosa = 12,43 ± 0,75 mm
 Staphylococcus aureus = 19,63 ± 1,14 mm
 Streptococcus pneumoniae = 30,48 ± 0,34 mm
et  al. 18 menemukan  bahwa  PEO  mampu menghambat Staphylococcus aureus ,  baik melalui  kontak  langsung  maupun  kontak uap. PEO juga mampu menghambat spesies resisten obat seperti epidemic MRSA (EMRSA) 15  dan  MRSA  (NT)  melalui  kontak  langsung, namun tidak dengan kontak uap.
Penelitian-penelitian lain menemukan bahwa  PEO  lebih  efektif  terhadap  bakteri Gram-positif  daripada  bakteri  Gram-negatif. Dzakwan 19 menemukan  bahwa  diameter zona  hambat  PEO  dengan  konsentrasi  10%, 20%,  dan  30%  pada Staphylococcus aureus lebih besar (12,10 mm; 16,60 mm; 18,30 mm) daripada Escherichia coli (10,50  mm;  12,20
mm;  15,30  mm).  Hal  ini  juga  menunjukkan bahwa aktivitas antibakterial PEO dipengaruhi oleh  konsentrasinya.  Diameter  zona  hambat yang  lebih  besar  pada  bakteri  Gram-positif juga  ditemukan  pada  penelitian  Vieira-Brock et  al. 20 ,  bahwa Staphylococcus aureus dan Streptococcus pneumoniae masing-masing adalah  sebesar  19,63  ±  1,14  mm  dan  30,48
STUDI KONSTITUEN TANAMAN NILAM ACEH YANG DIUJI BAKTERI YANG DIUJI HASIL Bilcu et al., 2014 PEO  Staphylococcus aureus  Klebsiella pneumoniae
Aktivitas antibakterial PEO pada:
 Staphylococcus aureus : LR = 4 log dibandingkan dengan kontrol negatif setelah 24  jam  inkubasi  dan  1-2  log  setelah  48  jam  inkubasi,  namun  tidak  terdapat penurunan  jumlah  sel  yang viable dibandingkan  dengan  kontrol  negatif setelah 72 jam inkubasi
 Klebsiella pneumoniae :  LR  =  2–3  log  dibandingkan  dengan  kontrol  negatif setelah  24  jam  inkubasi,  namun  tidak  terdapat  penurunan  jumlah  sel  yang viable dibandingkan dengan kontrol negatif setelah 48 jam dan 72 jam inkubasi
Lv et al., 2011 PEO  Staphylococcus aureus  Bacillus subtilis  Escherichia coli
Diameter zona hambat:  Staphylococcus aureus = 10,1 ± 0,4 mm
 Bacillus subtilis = 10,4 ± 0,3 mm
 Escherichia coli = 0 mm Karimi, 2014 PEO Strain rujukan:  Staphylococcus aureus ATCC 25923
 Escherichia coli ATCC 25922  Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
 Isolat klinis:  Staphylococcus epidermidis
 Streptococcus oralis
 Streptococcus pneumoniae
 Streptococcus constellatus  Streptococcus pyogenes
 Streptococcus mitis  Bacillus subtilis  Klebsiella pneumoniae
 Salmonella typhi
Diameter zona hambat:  Bakteri Gram-positif = 16,6–27,0 mm
 Bakteri Gram-negatif = 0 mm Wan et al., 2016 PA 107 strain bakteri Gram-positif:  Staphylococcus  Enterococcus
 Streptococcus
 MRSA  Dan lain-lain
20 strain bakteri Gram-negatif:
 Escherichia coli
 Klebsiella pneumoniae  Dan lain-lain Nilai MIC:  Bakteri Gram-positif = 1,5–200 μ g/mL
 Bakteri Gram-negatif = 25–768 μ g/mL
Yu et al., 2014
PA
 Lactobacillus acidophilus
 Bifidobacterium thermophilum
 Staphylococcus aureus
 Streptococcus alpha-hemolyticus
 Streptococcus pneumoniae
 Corynebacerium diphtheriae
 Shigella flexneri  Escherichia coli  Salmonella typhi
 Pseudomonas aeruginosa
 Helicobacter pylori
 PA memiliki aktivitas antibakterial terhadap Helicobacter pylori yang lebih baik (MIC = 78 μ g/ml) dibandingkan dengan amoxicillin (MIC = 120 μ g/mL)
 PA tidak memiliki aktivitas antibakterial terhadap sebagian besar strain bakteri Gram-positif dan Gram-negatif Xu et al., 2017 PA  Helicobacter pylori  Nilai  MIC  terhadap  tiga  strain  standar  (pH  5,3-9)  dan  12  isolat  klinis  masing- masing adalah 25-75 μ g/mL dan 12,5-50 μ g/mL  Nilai MBC terhadap tiga strain standar (pH 5,3-9) dan 11 isolat klinis masing- masing adalah 50 μ g/mL dan 25-75 μ g/mL
Peng et al., 2014 Pogostone 35 strain bakteri Gram-positif:  Staphylococcus  Bacillus  MRSA  Dan lain-lain
48 strain bakteri Gram-negatif:
 Escherichia coli  Enterobacter cloaceae  Pseudomonas aeruginosa  Dan lain-lain
 Nilai MIC terhadap bakteri Gram-positif = 0,098–800 μ g/mL
 Nilai MIC terhadap bakteri Gram-negatif = 0,098–1.600 μ g/mL
±  0,34  mm  dibandingkan Pseudomonas
aeruginosa (12,43  ±  0,75  mm).  Bilcu  et al. 21 mengemukakan  bahwa  PEO  mampu menurunkan  jumlah  sel Staphylococcus aureus yang viable sebanyak  4  log  dan  1–2 log  dibandingkan  dengan  kontrol  negatif setelah 24 dan 48 jam inkubasi, namun tidak terdapat penurunan jumlah sel viable setelah 72  jam  inkubasi.  Sementara  itu,  PEO  mampu menurunkan jumlah sel Klebsiella pneumoniae yang viable sebanyak 2–3 log setelah 24 jam inkubasi,  namun  tidak  terdapat  penurunan jumlah  sel  yang viable setelah  48  jam inkubasi. 21 Hal ini juga menunjukkan aktivitas PEO  yang  lebih  kuat  terhadap  bakteri  Gram- positif.
Studi Lv et al. 22 tidak menemukan adanya zona hambat  PEO  pada Escherichia coli ,  namun terdapat  zona  hambat  pada Staphylococcus aureus dan Bacillus subtilis ,  masing-masing dengan  diameter  10,1  ±  0,4  mm  dan  10,4 ±  0,3  mm.  Demikian  pula  pada  penelitian Karimi 23 yang  menunjukkan  bahwa  PEO mampu  menghambat  bakteri  Gram-positif
seperti Staphylococcus , Streptococcus ,  dan Bacillus (diameter  zona  hambat  =  16,6–27,0 mm),  namun  tidak  mampu  menghambat bakteri  Gram-negatif  ( Klebsiella pneumoniae , Salmonella typhi ). Selain itu, penelitian tersebut menemukan bahwa 65% isolat Staphylococcus aureus dari rumah sakit (39/61) dan komunitas (13/20)  sensitif  terhadap  PEO  dengan  MIC  = 0,03–0,06%  v/v.  Sebanyak  75%  isolat  MRSA (27/36)  dan  45%  isolat methicillin-sensitive Staphylococcus aureus (MSSA)  (12/25)  sensitif terhadap PEO dengan MIC = 0,03–0,06% v/v.
Efek  konstituen  PEO  yang  spesifik  seperti  PA dan pogostone juga telah diteliti. Wan et al. 24 yang  menilai  efektivitas  PA  terhadap  107 strain bakteri Gram-positif dan 20 strain bakteri Gram-negatif  menemukan  bahwa  PA  lebih efektif  menghambat  pertumbuhan  bakteri Gram-positif (MIC = 1,5–200 μ g/mL) daripada bakteri  Gram-negatif  (MIC  =  25–768 μ g/mL).
Hasil  penelitian  tersebut  juga  menunjukkan bahwa PA efektif terhadap strain bakteri yang resisten seperti MRSA dan methicillin-resistant Staphylococcus epidermidis (MRSE), aktivitasnya
lebih  kuat  (1,500  ±  0,000 μ g/mL)  daripada levofloxacin (18,750  ±  6,250 μ g/mL)  dalam menghambat  MRSA  dan  sama  kuat  (1,500  ± 0,000 μ g/ml)  dengan levofloxacin (1,600  ± 2,121 μ g/ml)  dalam  menghambat  MRSE.  Di lain  pihak,  Yu  et  al. 25 menemukan  bahwa  PA tidak memiliki aktivitas antibakterial terhadap sebagian besar strain bakteri Gram-positif dan Gram-negatif,  namun  mampu  menghambat pertumbuhan Helicobacter pylori dengan MIC  =  78 μ g/mL,  lebih  baik  dibandingkan amoxicillin (MIC = 120 μ g/mL). Penelitian Xu et  al. 26 juga  menemukan  bahwa  PA  mampu menghambat Helicobacter pylori , dengan nilai MIC terhadap tiga strain standar dan 12 isolat klinis  masing-masing  adalah  sebesar  25-75 μ g/mL  dan  12,5-50 μ g/mL,  sementara  nilai MBC masing-masing adalah 50 μ g/mL dan 25- 75 μ g/mL.  Peng  et  al. 27 menemukan  bahwa pogostone efektif  terhadap  35  strain  bakteri Gram-positif  dan  48  strain  bakteri  Gram- negatif  secara in vitro ,  dengan  rentang  nilai MIC masing-masing adalah sebesar 0,098–800 μ g/mL dan 0,098–1.600 μ g/mL.
Tabel 3 . Studi potensi efektivitas antibakterial nilam aceh ( Pogostemon cablin Benth.) secara in vivo
STUDI KONSTITUEN TANAMAN NILAM ACEH YANG DIUJI BAKTERI YANG DIUJI SAMPEL HASIL Wan  et  al., 2016 PA  MRSA  n = 70
 Grup kontrol (10)  Grup model MRSA (10)  Grup gastric mucin (10)
 Grup cefotaxime sodium (10)  Grup 50 mg/kg PA (10)  Grup 100 mg/kg PA (10)  Grup 200 mg/kg PA (10)  Kapasitas proteksi pada tikus coba adalah sebesar 80%, 100%, dan 100% pada konsentrasi 50 mg/kg, 100 mg/kg, dan 200 mg/kg Xu et al., 2017 PA  H e l i c o b a c t e r pylori  n = 60  Grup kontrol (10)  Grup model (10)  Grup omeprazole + metronidazole + clarithromycin (10)  Grup 1,25 mg/kg PA (10)  Grup 2,5 mg/kg PA (10)  Grup 5 mg/kg PA (10)
 Tes  RUT  dan  BAMB  menunjukkan  laju  eradikasi Helicobacter pylori pada konsentrasi PA 5 mg/kg masing-masing adalah sebesar 80% dan 40%
Peng  et  al., 2014
Pogostone
 MRSA  n = 80  Grup kontrol (10)  Grup model (10)
 Grup gastric mucin (10)  Grup benzylpenicillin sodium (10)  Grup vancomycin hydrochloride
(10)
 Grup 25 mg/kg pogostone (10)  Grup 50 mg/kg pogostone (10)  Grup 100 mg/kg pogostone (10)
 Kapasitas proteksi pada tikus coba yang terinfeksi MRSA hingga 20%, 50%, dan 60% pada konsentrasi 25 mg/kg, 50 mg/kg, dan 100 mg/kg
 Escherichia coli  n = 70  Grup kontrol (10)
 Grup model (10)  Grup gastric mucin (10)  Grup cefotaxime sodium (10)  Grup 25 mg/kg pogostone (10)  Grup 50 mg/kg pogostone (10)
 Grup 100 mg/kg pogostone (10)
 Kapasitas proteksi pada tikus coba yang terinfeksi Escherichia coli hingga 60%, 90%, dan 90% pada konsentrasi 25 mg/kg, 50 mg/kg, dan 100 mg/kg

## TINJAUAN PUSTAKA

## AKTIVITAS ANTIBAKTERIAL NILAM ACEH IN VIVO
Beberapa  studi  telah  meneliti  aktivitas antibakterial  nilam  aceh in vivo ,  khususnya yang  berkaitan  dengan  PA  dan pogostone , namun  masih  sedikit  bukti  yang  tersedia. Secara  umum,  bukti  penelitian  yang  ada menyatakan  bahwa  baik  PA  dan pogostone memiliki  efek  proteksi  cukup  baik  terhadap infeksi bakteri ( Tabel 3 ).
Wan  et  al. 24 menemukan  bahwa  secara in vivo ,  efek  PA  terhadap  MRSA  ditemukan dapat meningkatkan proteksi pada tikus coba hingga 80%, 100%, dan 100% pada konsentrasi 50  mg/kg,  100  mg/kg,  dan  200  mg/kg, dibandingkan  dengan  kontrol  negatif  yang mati  dalam  waktu  336  jam  setelah  paparan terhadap  MRSA.  Proteksi  yang  diberikan  PA ekuivalen  dengan  proteksi  yang  diberikan oleh cefotaxime sodium 400.000 IU/kg.
Xu  et  al. 26 (2017)  meneliti  efek  PA  terhadap Helicobacter pylori in vivo menemukan bahwa 5  mg/kg  PA  dapat  mengeradikasi H. pylori hingga  80%  dan  40%,  masing-masing  dinilai dari rapid urease test (RUT)  dan boracic acid methylene blue (BAMB). Sebagai perbandingan, laju  eradikasi H. pylori oleh  terapi  tripel omeprazole + metronidazole + clarithromycin adalah 100% pada RUT dan 40% pada BAMB. Sejauh  ini,  belum  terdapat  penelitian in vivo efek  PA  terhadap  bakteri  Gram-negatif  dan Gram-positif sekaligus.
Sementara  itu,  Peng  et  al. 27 menemukan bahwa pemberian pogostone pada konsentrasi  25  mg/kg,  50  mg/kg,  dan  100 mg/kg masing-masing memberikan kapasitas proteksi sebesar 20%, 50%, dan 60% pada tikus coba  yang  terinfeksi  MRSA.  Dosis  yang  sama memberikan  kapasitas  proteksi  sebesar  60%, 90%, dan 90% pada tikus coba yang terinfeksi Escherichia coli . Hasil tersebut memberi kesan bahwa  pogostone  lebih  efektif  terhadap
bakteri Gram-negatif.

## MEKANISME ANTIBAKTERIAL NILAM ACEH
Mekanisme  antibakterial  PEO  tanaman  nilam aceh  terkait  dengan  konstituen-konstituen utamanya seperti PA dan pogostone . Dengan menggunakan  teknologi docking molekuler dan  pengujian in vitro ,  telah  diidentifikasi target  aktivitas  antibakterial  PEO  antara  lain penicillin-binding proteins (PBP), dihidrofolate sintetase (DHPS), dihidrofolate reduktase (DHFR), DNA- girase , dan RNA- polimerase . 7
Kelima enzim tersebut berperan dalam proses biosintesis  berbagai  struktur  bakteri  seperti dinding  sel,  membran  sel,  nukleoplasma, dan asam folat. PBP berfungsi sebagai katalis pada  proses  biosintesis  dinding  sel  bakteri dan  merupakan  target  antibiotik  beta- laktam  seperti benzylpenicillin .  DHPS  dan DHFR memicu metabolisme asam folat yang penting  bagi  sintesis  asam  nukleat  bakteri, dan  masing-masing  merupakan  target dari sulfadiazine dan  trimethoprim.  DNA- girase berperan  penting  dalam  sintesis  DNA bakteri,  sementara  RNA- polimerase berperan penting  dalam  biosintesis  protein  bakteri.
DNA  girase  merupakan  target  dari  antibiotik golongan  quinolone  seperti ciprofloxacin , sementara RNA- polimerase merupakan target  dari rifampicin .  Baik  PA  dan pogostone menargetkan kelima enzim tersebut, dengan skor PA terhadap target PBP sedikit lebih besar (6,97)  dari benzylpenicillin e  (6,22),  sementara skor pogostone terhadap  target  DHPS  sedikit lebih besar (7,93) dari sulfadiazine (7,33). 7
Selain  itu,  PEO  dan  konstituennya  dapat menghambat pertumbuhan biofilm bakteri  karena  matriks  ekstraseluler  biofilm mengabsorpsi  komponen-komponen  aktif pada EO sehingga konsentrasinya meningkat, dan  perbedaan  struktur  membran  sel  dan dinding  sel  akibat  perbedaan  ekspresi  gen yang terdapat pada biofilm. 21

## EFEK SAMPING NILAM ACEH SEBAGAI ANTIBAKTERIAL
Berdasarkan  penelitian in vivo ,  belum dilaporkan adanya efek samping penggunaan nilam  aceh  sebagai  antibakterial.  Pada  tikus coba,  PA  ditemukan  masih  aman  sampai dosis  200  mg/kg. 24 Sementara  itu, pogostone ditemukan  masih  aman  sampai  dosis 100  mg/kg  pada  tikus  coba. 27 Pemberian nanostruktur  PA  dan  Fe 3 O 4 pada  organ  tikus coba  mendapatkan  bahwa  setelah  7–14  hari pasca  pemberian,  nanostruktur  terdeteksi dalam  jumlah  sedikit  atau  tidak  sama  sekali pada  berbagai  organ  tubuh  seperti  otak, hepar,  miokardium,  pankreas,  ginjal,  paru- paru,  dan  limpa.  Namun,  ditemukan  adanya hipertrofi  pulpa  alba  limpa  yang  disebabkan oleh adanya nanopartikel yang menstimulasi pembentukan makrofag. Meskipun penelitian tersebut  tidak  menilai  efek  PA  secara  murni, diduga  PA  memiliki  sitotoksisitas  rendah. 17 Penelitian  dengan  dosis  lebih  besar  (PA >200  mg/kg  dan  pogostone  >100  mg/kg) dibutuhkan untuk melihat efek samping yang mungkin  menentukan  kontraindikasi  nilam aceh sebagai antibakterial.

## SIMPULAN DAN SARAN
Senyawa patchouli essential oil , patchouli alcohol ,  dan pogostone pada  nilam  aceh ( Pogostemon cablin Benth.)  berpotensi antibakterial.  Sebagian  besar  penelitian menemukan  bahwa  nilam  aceh  ditemukan lebih  efektif  terhadap  bakteri  Gram-positif daripada  Gram-negatif.  Namun,  masih dibutuhkan  penelitian  lebih  lanjut  untuk mengetahui  senyawa-senyawa  apa  saja yang  berperan  dalam  menghambat  bakteri Gram-positif  dan  Gram-negatif,  serta  untuk menentukan dosis antibakterial yang optimal.  Selain  itu,  penelitian  selanjutnya hendaknya  juga  menilai  efek  samping  yang mungkin  terjadi  pada  dosis  yang  lebih  besar dan  kontraindikasi  penggunaan  nilam  aceh sebagai antibakterial.

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Ramya  HG,  Palanimuthu  V,  Rachna.  An  introduction  to  patchouli  ( Pogostemon cablin Benth.)  –  A  medicinal  and  aromatic  plant:  Its  importance  to  mankind. Agricultural Engineering International: CIGR Journal. 2013;15(2):243–50.
2.  Rachmayanti R. Asetilasi patchouli alcohol minyak nilam ( patchouli oil ) dengan katalis zeolite beta termodifikasi. Semarang: Universitas Negeri Semarang; 2016.
3.  Anitha M. Agro-processing of patchouli ( Pogostemon cablin Benth.) for efficient essential oil extraction [Thesis]. Bangalore: University of Agricultural Sciences; 2008.
4.  Shah KA, Bhatt DR, Desai MA, Jadeja GC, Parikh JK. Extraction of essential oil from Patchouli leaves using hydrodistillation: Parametric studies and optimization. Indian J Chem Technol. 2017;24:405–10.
5.  Li YC, Xian YF, Ip SP, Su ZR, Su JY, He JJ, Xie QF, Lai XP, Lin ZX. Anti-inflammatory activity of patchouli oil isolated from Pogostemonis herba in animal models. Fitoterapia. 2011;82:1295–301.
6.  van Beek TA, Joulain D. The essential oil of patchouli, Pogostemon cablin : A review. Flavour and Fragrance Journal. 2017;33(1):6–51.
7.  Yang X, Zhang X, Yang S-P, Liu WQ. Evaluation of the antibacterial activity of patchouli oil. Iranian J Pharmaceut Res. 2013;12(3):307–16.
8.  Methods for the determination of susceptibility of bacteria to antimicrobial agents. Terminology. Clin Microbiol Infection. 1998;4(5):291–6.
9.  Vu TT, Kim H, Tran VK, Dang QL, Nguyen HT, Kim H, et al. In vitro antibacterial activity of selected medicinal plants traditionally used in Vietnam against human pathogenic bacteria. Complementary and Alternative Med. 2016;16:32.
10.  Rahmawati I. Skrining Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol 70% dari Beberapa Tanaman di Indonesia terhadap Staphylococcus aureus serta Bioautografinya [Skripsi]. Surakarta: Universitas Muhammadiyah Surakarta; 2016.
11.  Dechayont B, Ruamdee P, Poonnaimuang S, Mokmued K, Chunthorng-Orn J. Antioxidant and Antimicrobial Activities of Pogostemon cablin (Blanco) Benth. J Botany. 2017;2017:8310275
12.  Pullagummi C, Rao NB, Singh CS, Bheemagani AJ, Kumar P, Venkatesh K, Rani AR. Comparitive studies on antibacterial activity of Patchouli [ Pogostemon cablin {Blanco) Benth] and Geranium ( Pelargonium graveolens ) aromatic medicinal plants. African J Biotechnol. 2014;13(23):2379–84. 13.  Pattnaik S, Subramanyam VR, Kole C. Antibacterial and antifungal activity of ten essential oils in vitro. Microbios. 1996;86(349):237–46.
14.  Widyastuti W, Farizal F. Formulasi gel minyak nilam dan uji daya hambatnya terhadap bakteri Staphylococcus aureus . Scientia. 2014;4(2):60–5.
15.  Kwiatkowski P, Mnichowska-Polanowska M, Pruss A, Dzięcioł M, Masiuk H. Activity of essential oils against Staphylococcus aureus strains isolated from skin lesions in the course of staphylococcal skin infections. Herba Polonica. 2017;63(1):43–52.
16.  Vázquez-Sánchez  D,  Cabo  ML,  Rodríguez-Herrera  JJ.  Antimicrobial  activity  of  essential  oils  against Staphylococcus aureus biofilms.  Food  Sci  Technol  Internat. 2015;21(8):559–70.
17.  Rădulescu M, Andronescu E, Holban AM, Vasile BS, Iordache F, Mogoantă L, et al. Antimicrobial nanostructured bioactive coating based on Fe 3 O 4 and patchouli oil for wound dressing. Metals. 2016;6(5):103.
18.  Edwards-Jones V, Buck R, Shawcross SG, Dawson MM, Dunn K. The effect of essential oils on methicillin-resistant Staphylococcus aureus using a dressing model. Burns. 2004;30(8):772–7.
19.  Dzakwan M. Uji aktivitas antibakteri minyak atsiri daun nilam ( Pogostemon cablin , Benth) terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli [Skripsi]. Surakarta: Universitas Setia Budi; 2012.
20.  Vieira-Brock PL, Vaughan BM, Vollmer DL. Comparison of antimicrobial activities of natural essential oils and synthetic fragrances against selected environmental pathogens. Biochimie Open. 2017;5:8–13.
21.  Bilcu M, Grumezescu AM, Oprea AE, Popescu RC, Mogoşanu GD, Hristu R, et al. Efficiency of vanilla, patchouli and ylang ylang essential oils stabilized by iron oxide@C 14 nanostructures  against  bacterial  adherence  and  biofilms  formed  by Staphylococcus aureus and Klebsiella pneumoniae clinical  strains.  Molecules. 2014;19(11):17943–56.
22.  Lu  F,  Liang  H,  Yuan  Q,  Li  C.  In  vitro  antimicrobial  effects  and  mechanism  of  action  of  selected  plant  essential  oil  combinations  against  four  food-related microorganisms. Food Res Internat. 2011;44(9):3057–64.
23.  Karimi  A.  Characterization  and  antimicrobial  activity  of  patchouli  essential  oil  extracted  from Pogostemon cablin [Blanco]  Benth.  [Lamiaceae].  Advances  in Environmental Biology. 2014;8(7):2301–9.
24.  Wan F, Peng F, Xiong L, Chen J, Peng C, Dai M. In vitro and in vivo antibacterial activity of patchouli alcohol from Pogostemon cablin . Chinese Jf Integrative Med. 2016:1–6. [Epub ahead of print]
25.  Yu XD, Xie JH, Wang YH, Li YC, Mo ZZ, Zheng YF, et al. Selective antibacterial activity of patchouli alcohol against Helicobacter pylori based on inhibition of urease.
Phytother Res. 2015 Jan;29(1):67–72.
26.  Xu YF, Lian DW, Chen YQ, Cai YF, Zheng YF, Fan PL, et al. In vitro and in vivo antibacterial activities of patchouli alcohol, a naturally occurring tricyclic sesquiterpene, against Helicobacter pylori infection. Antimicrob Agents Chemother. 2017;61(6):e00122–17.
27.  Peng F, Wan F, Xiong L, Peng C, Dai M, Chen J. In vitro and in vivo antibacterial activity of Pogostone. Chinese Med J. 2014;127(23):4001–5.