e-ISSN 2540-9840 p-ISSN 1412-3770
Accredited by Ministry of Education, Culture,                                       DOI: https://doi.org/10.35799/jis.v24i1.53431 Research and Technology No: 105/E/KPT/2022         Available online at https://ejournal.unsrat.ac.id/v3/index.php/jis

## Pengaruh Konsentrasi Asam Klorida Terhadap Kadar Polifenol dan Aktivitas Antioksidan pada Ekstrak Metanol Sargassum oligocystum
Etik Wahyuningsih 1) , Rachma Nurhayati 2*) , Astrid Kusuma Putri 3)
1) Program Studi Farmasi, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Muhammadiyah Surabaya, Indonesia
2) Program Studi Profesi Apoteker, Fakultas Farmasi, Institut Ilmu Kesehatan Bhakti Wiyata Kediri, Indonesia
3) Program Studi Farmasi, Fakultas Kedokteran, Universitas Hang Tuah Surabaya, Indonesia *Corresponding author: rachma.nurhayati@iik.ac.id

## ABSTRAK
Sargassum  oligocystum merupakan  salah  satu  spesies  alga  coklat  yang  banyak  memiliki aktivitas  biologis.  Tujuan  penelitian  ini  yaitu  untuk  analisis  kandungan  polifenol  dan aktivitas antioksidan dengan pelarut metanol pada variasi konsentrasi asam. Penambahan asam klorida    dalam  pelarut  metanol  pada  berbagai  konsentrasi    0,1  N;  0,2  N,  0,3  N  dalam Sargassum  oligocystum menunjukkan  adanya  peningkatan  kandungan  polifenol  masing- masing  2,82 mg GEA/g; 3,27 mg GEA/g dan 3,88 mg GAE/g. Peningkatan kadar polifenol sebanding dengan peningkatan aktivitas antioksidan masing-masing adalah 0,92 mg; 0,55 mg  dan  0,29  mg.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  hasil  ekstraksi  pelarut  metanol dengan  variasi  asam  klorida  pada Sargassum  oligocy stum    mengandung    polifenol  dan aktivitas antioksidan  yang meningkat dengan meningkatnya konsentrasi asam.
Kata  kunci: Aktivitas  antioksidan;  asam  klorida; Sargassum  oligocystum ;  ekstrak  metanol; polifenol

## The Effect of Cloride Acid Concentration to The Phenolic Compound and The Antioxidant Activity in Methanol Extract of

## Sargassum oligocystum

## ABSTRACT
Sargassum oligocystum is a species of brown algae that has many biological activities. The aim of this research is to analyze the polyphenol compound and antioxidant activity with methanol solvent at varying acid concentrations. Addition of hydrochloric acid in methanol solvent at various concentrations of 0.1 N; 0.2 N, 0.3 N in Sargassum oligocystum showed an increase in polyphenol compound, 2.82 mg GEA/g; 3.27 mg GEA/g and 3.88 mg GAE/g, respectively.  The  increase  in  polyphenol  compound  is  proportional  to  the  increase  in antioxidant activity, 0.92 mg; 0.55 mg and 0.29 mg, respectively. The results showed that methanol  extraction  with  variations  of  hydrochloric  acid  in Sargassum  oligocystum contained  polyphenols  and  antioxidant  activity  which  increased  with  increasing  acid concentration.
Keywords: Antioxidant activity; cloride acid; methanolic extract; phenolic compound;
Sargassum  oligocystum
(Article History: Received 19-02-2024; Accepted 29-04-2024; Published 29-04-2024)

## PENDAHULUAN
Sargassum sp. adalah jenis rumput laut yang merupakan salah satu hasil komoditas Indonesia  yang  memiliki  potensi  besar  untuk  dikembangkan  oleh  industri  kosmetik, nutraseutikal dan industri farmasi (Puspita et al ., 2020). Sargassum sp. banyak ditemukan di  perairan  Indonesia  khususnya  di  wilayah  yang  berbatasan  langsung  dengan  Samudra Pasifik  dan  Samudra  Hindia,  mengandung  banyak  komponen  bioaktif  yang  memiliki aktivitas biologis sebagai antioksidan, antiinflamasi, antikoagulan, antivirus, antitumor dan imunomudulator  yang  dapat  diaplikasikan  sebagai  bahan  baku  obat  (Farvin  &  Jacobsen, 2013; Sanjeewa et al ., 2018; Zhao et al ., 2017). Salah satu spesies rumput laut yang banyak tumbuh  di  perairan  Bali  adalah Sargassum  olygosystum (alga  coklat)  yang  mengandung komponen bioaktif antara lain karotenoid, lipid, klorofil, peptida, flavonoid dan polifenol. Polifenol dalam Sargassum olygosystum menjadi salah satu senyawa yang memiliki peran penting  dalam  menghasilkan  aktivitas  antioksidan  karena  memiliki  gugus  hidroksi  dan mampu mendonorkan hidrogen (Wiryato, 2015). Dibandingkan dengan antioksidan sintesis, Sargassum sp. memiliki nilai radical scavenging activity (RAS) yang lebih baik (Li et al ., 2017).
Eksplorasi  tentang Sargassum  oligocystum di  Indonesia  masih  jarang  diteliti meskipun  diketahui  banyak  mengandung  komponen  bioaktif  sebagai  alternatif  potensial yang  dapat  diaplikasikan  di  bidang  farmasi.  Pada  penelitian  sebelumnya  diketahui bahwa Sargassum  oligosystum mengandung  total  fenol  30,94  mg  dan  memiliki  aktivitas antioksidan  dengan  IC 50 28,5  µg/mL.  Penelitian  tersebut  menggunakan  ekstraksi  metode ultrasonik  dengan  menggunakan  pelarut  metanol  dan  asam  klorida  (HCl)  0,1  N  (DLR Arguelles,  2018;  Arguelles et  al. ,  2017;  Arguelles et  al. ,  2019;  Arguelles,  2022).  HCl merupakan  asam  organik  yang  bersifat  polar  yang  jika  dikombinasi  dalam  air  dapat melarutkan zat yang dapat larut dalam pelarut polar namun dalam konsentrasi tinggi dapat menyebabkan  degrasasi  dari  bahan  aktif  yang  tidak  stabil  terhadap  asam  sehingga menurunkan  kandungan  bahan  aktif.  Ekstraksi  maserasi  merupakan  metode  pilihan  jika senyawa aktif tidak stabil terhadap suhu pemanasan maupun gelombang ultrasonik.
Berdasarkan latar  belakang tersebut,  dilakukan penelitian ekstraksi pada Sargassum olygosystum menggunakan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut  metanol  dengan penambahan  variasi  konsentrasi  HCl  terhadap  kadar  polifenol  dan  aktivitas  antioksidan. Pada  penelitian  ini  dilakukan  tiga  tahap  yaitu  uji  skrining  fitokimia,  uji  polifenol  dan aktivitas antioksidan dari ekstrak Sargassum oligocystum dengan variasi penambahan HCl.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan selama 2 bulan di Unit Layanan Pengujian Fakultas Farmasi, Universitas Airlangga Surabaya

## Alat dan Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah Sargasum oligocystum yang berasal dari  perairan  Bali,  Metanol  pro  analisis  (merck),  HCl  pro  analisis  (Merck),  Aquadest, Flouroglusinol (Sigma Aldrich), DPPH (sigma Aldrich), Na 2 CO 3 (Merck), Reagen Folin & Ciocalteu’s fenol (sigma Aldrich), Kloroform (Merck), Aseton (Merck),  Asam  format
(Merck),  NaOH (Merck),  Etil  asetat  (Merck),  Heksane  p.a  (Merck),  Kiesel  gel  GF  254 (Merck), Ammoniak p.a (Merck).  Rotary evaporator (Heidolph), Spektrofotometer UV-Vis (Agilent), Oven (Nuve), Hot plate (nuve), Sentrifuse (Hettich).

## Prosedur Penelitian

## Determinasi Tanaman
Determinasi tanaman bertujuan untuk mengetahui kebenaran dari tanaman yang akan digunakan sebagai bahan uji. Sargasum oligocystum yang diambil dari pantai perairan Bali dilakukan determinasi pada Lembaga Penelitian Biologi Universitas Airlangga Surabaya.

## Preparasi Ekstrak
Ekstraksi  dilakukan  pada  sampel  basah  sebanyak  10  gram,  kemudian  direndam dengan 50 ml metanol pada berbagai HCl 0,1 N, 0,2 N dan 0,3 N (10:1). Maserasi dilakukan 24  jam kemudian larutan disaring dengan kertas Watman no 42. Filtrat diambil dan diuapkan dengan rotary evaporator pada suhu 60°C (Septiana & Asnani, 2013).

## Skrining Fitokimia

## Identifikasi golongan polifenol
Ekstrak  seberat  0,3  g  ditambah  degan  10  ml  aquades  panas  kemudian  diaduk  dan didiamkan pada temperatur ruang. Setelah itu ditambahkan 3-4 tetes 10 %  NaCl  kemudian diaduk  dan  disaring.  1  ml  filtrat  ditambahkan  0,5  ml  reagen  Folin  &  ciocalteu’s  fenol kemudiaan didiamkan 5  menit  lalu  ditambah  2  ml  Na 2 CO 3 10%  dan  diamkan  10  menit. Adanya polifenol ditunjukkan dengan timbulnya warna biru pada larutan(Harborne, 1984).

## Identifikasi golongan flavonoid
Ekstrak sampel 0,2 g dilarutkan dengan 10 ml etanol 96%. Ekstrak etanol kemudian ditotolkan pada plate KLT dengan menggunakan fase gerak kloroform: aseton : asam format (6:6:1)  dengan  penanda  noda  uap  ammonia.  Adanya flavonoid ditunjukkan adanya noda berwarna kuning intensif dengan penampak noda ammonia (Harborne, 2000).

## Identifikasi golongan terpenoid
Ekstrak  sebanyak  0,3  g  dilarutkan  dalam  n-heksan  diaduk  sampai  larut  kemudian ditotolkan pada fase diam Kiesel gel GF 254 dan diamati dengan KLT dengan fase gerak n- heksana - etil asetat (4 : 1) dengan penampak noda anisaldehid asam sulfat. Timbulnya warna merah ungu atau ungu menunjukkan adanya terpenoid/steroid  (Harborne, 1984).

## Identifikasi golongan alkaloid
Ekstrak  sebanyak  0,3  g  dilarutkan  dalam  etanol  dan  HCl  2N  dan  dipanaskan  2-3 menit, kemudian ditambahkan 0,3 gram NaCl. Hasil kemudian diekstraksi dengan kloroform kemudian ditotolkan pada fase diam Kiesel gel GF 254 dan diamati dengan KLT dengan fase gerak kloroform - etil asetat (1 : 1) dengan penampak noda pereaksi Drogendorf. Timbulnya warna jingga menunjukkan adanya alkaloid  (Harborne, 1984).

## Aktivitas Antioksidan
Uji  aktivitas  penangkapan  radikal  bebas  DPPH  ( 2,2-diphenyl-1  pycrylhydracyl ) dilakukan menggunakan modifikasi  metode Zhang et al . (2015). Blanko yang digunakan adalah etanol dan asam askorbat sebagai kontrol dan diamati dengan menggunakan metode
spektrofotometri pada panjang gelombang 515 nm. Nilai aktivitas penangkalan radikal bebas DPPH dihitung dengan rumus:
Aktivitas penangkalan radikal bebas (%) = Abs kontrol−Abs Sampel Absorban Kontrol 𝑥 100%

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Determinasi Tanaman
Determinasi sampel dilakukan di Lembaga Penelitian Biologi, Universitas Airlangga Surabaya  pada  tahun  2023.  Hasil determinasi  menunjukkan  bahwa  sampel  merupakan Sargassum oligocystum Montagne, 1845, famili sargassaceae , genus Sargassum.

## Skrining Fitokimia
Dari  penelitian  ini  dilakukan  skrining  fitokimia  dan  didapatkan  hasil bahwa Sargassum  oligocystum memiliki  kandungan senyawa  metabolit  sekunder  polifenol, terpenoid dan flavonoid, namun tidak terdeteksi alkaloid. Hasil skrining fitokimia disajikan pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil uji skrining fitokimia pada ekstrak Sargassum oligosystum

## pada berbagai konsentrasi HCl
Kandungan Kimia Hasil (+) literatur Hasil Uji Ekstrak Metanol - HCl 0,1 N Metanol - HCl 0,2 N Metanol - HCl 0,3 N Polifenol Terbentuk warna biru pada larutan sampel Terbentuk warna biru + + + Terpenoid Terbentuk warna merah ungu atau ungu pada noda sampel Noda berwarna ungu + + + Flavonoid Terbentuk warna kuning intensif pada noda sampel Noda berwarna kuning + + + Alkaloid Terbentuk warna jingga intensif pada noda sampel tidak ada noda warna jingga - - -

## Penetapan Kadar Polifenol
Pada  penelitian  ini  dilakukan  ekstraksi Sargassum  oligocystum dengan  pelarut metanol pada berbagai variasi konsentrasi HCl 0,1 N; 0,2 N dan 0,3 N. Dari hasil penelitian diperoleh kadar polifenol yang meningkat dengan meningkatnya konsentrasi HCl yaitu 2,82 mg GAE/g ± [1,3 %], 3,27 mg GAE/g ± [1,7 %] dan 3,88 mg GAE/g ± [2,7 %].  Dibandingkan dengan ekstraksi menggunakan metanol dengan penambahan HCl, ekstraksi dengan pelarut metanol saja menunjukkan hasil yang lebih rendah yaitu 1,61 mg GAE/g ± [0,3 %]. Hal ini disebabkan  HCl  dapat  meningkatkan  kelarutan  sehingga  meningkatkan  kadar  polifenol. Hasil analisis kadar polifenol dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2 . Penetapan  kadar polifenol pada ekstrak Sargassum oligosystum
pada berbagai konsentrasi HCl Konsentrasi HCl (N) Kadar polifenol (mg GAE/g) Rerata± SD 0,1 2,82   ±    [1,3 %] 0,2 3,27   ±   [1,7 %] 0,3 3,88  ±   [2,7 %]
Hasil  kadar  polifenol  pada  ekstrak Sargassum  oligocystum ini  lebih  tinggi  dari kandungan  polifenol  pada Sargassum  honeri yaitu  0,41  %  ±  0,01%  dan Sargassum thunbergii yaitu  0,290 %  ±  0,01% (Zhao et al ., 2017). Tinggi rendahnya kadar polifenol dalam sampel tergantung pada beberapa faktor antara lain jenis rumput laut, umur, iklim serta suhu (Djapiala et al ., 2013).

## Aktivitas Antioksidan
Aktivitas  antioksidan  dengan  variasi  konsentrasi  HCl  dalam  penelitian  ini  diuji menggunakan metode DPPH. Hasil analisis IC 50 aktivitas penangkapan radikal bebas DPPH Sargassum oligocystum dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Nilai IC 50 pada ekstrak Sargassum oligosystum pada berbagai konsentrasi HCl Konsentrasi HCl (N) IC 50 (mg/mL) Rerata± SD 0,1 0,92 ± [0,0 %] 0,2 0,55 ± [ 1,8 %] 0,3 0,29 ± [3,5 %]
Dari  data  hasil  penelitian  diperoleh  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  HCl  maka aktivitas  antioksidan  juga  semakin  besar.  Hal  ini  disebabkan  karena  penambahan  HCl dengan  konsentrasi  yang  semakin  tinggi  dapat  meningkatkan  kadar  polifenol  yang  telah dibuktikan  pada  penetapan  kadar  polifenol  dalam  penelitian  ini.  Seperti  yang  diketahui bahwa  polifenol  sebagai  salah  satu  senyawa  penting  yang  berperan  dalam  aktivitas antioksidan. Hubungan antara  kadar polifenol dan aktivitas antioksidan dapat dilihat pada Gambar 1 yang menunjukkan semakin tinggi kadar polifenol maka aktivitas antioksidan juga meningkat.
Gambar 1. Hubungan Kadar Polifenol dan Aktivitas Antioksidan
0 1 2 3 4 5 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 K ada r P ol if enol (mg G A E/ g)
IC50 (mg/mL)
Apabila  dibandingkan  dengan  penelitian  Arguelles  (2022)  yang  menggunakan  ekstraksi ultrasonik dengan penambahan HCl 0,1 N  maka nilai IC 50 pada penelitian ini lebih tinggi dengan ekstraksi menggunakan maserasi dengan peningkatan konsentrasi HCl.

## KESIMPULAN
Hasil skrining fitokimia dari ekstrak metanol Sargassum oligocystum yang diperoleh dari perairan Bali menunjukkan positif terdeteksi polifenol, flavonoid, dan terpenoid namun tidak  terdeteksi  adanya  alkaloid . Kadar  polifenol  pada  ekstrak  dalam  variasi  konsentrasi asam klorida yang terkandung masing-masing adalah sebesar 2,82 mg GAE/g ± [1,3 %], 3,27 mg  GAE/g  ± [1,7  %]  dan  3,88  mg  GAE/g  ± [2,7  %]  sedangkan  aktivitas  antioksidannya mampu menghambat 50% radikal bebas DPPH pada konsentrasi masing-masing  0,92 mg; 0,55  mg  dan  0,29  mg.  Hasil  penelitian  kadar  polifenol  dan  aktivitas  antioksidan menunjukkan  makin  tinggi  kandungan  polifenol  memiliki  aktivitas  antioksidan  semakin tinggi.

## DAFTAR PUSTAKA
Arguelles, E.D.L.R.  (2018). Proximate analysis, antibacterial activity, total phenolic content and  antioxidant  capacity  of  a  green  microalga  Scenedesmus  quadricauda  (Turpin) Brébisson. Asian Jr. of Mic robiol. Biotech. Env. Sc. 20(1), 150-158.
Arguelles,  E.D.L.R.,  Laurena,  A.,  &  Martinez-Goss,  M.R.  (2017).  Antibacterial  Activity, Total Phenolic Content and Antioxidant Capacity of a Green Microalga Desmodesmus sp.  (U-AU2)  from  Los  Banos  Laguna. Journal  of  Nature  Studies ,  16(2),  1-13. https://www.researchgate.net/publication/321796303.
Arguelles,  E.D.L.R.  (2022).  Chemical  composition  and  In  vitro  study  of  antioxidant  and antibacterial  activities  of  Sargassum  oligocystum  Montagne  (Sargassaceae, Ochrophyta). Asian Journal of Agriculture and Biology , 2022 (4). https://doi.org/10.35495/ajab.2021.05.209 .
Arguelles. E.D.L.R., Monsalud, R.G., & Sapin, A.B. (2019).  Chemical composition and In vitro  antioxidant  and  antibacterial  activities  of Sargassum  vulgare C.  Agardh  from Lobo, Batangas, Philippines. J. ISSAAS , 25(1):112-122.
Djapiala, F.Y., Montolalu, L.A.D.Y., & Mentang, F.  (2013). Kandungan Total Fenol dalam Rumput  Laut Caulerpa  racemosa yang  Berpotensi  Sebagai  Antioksidan. Jurnal Media Teknologi Hasil Perikanan , 1(2), 1-5. DOI: 10.35800/mthp.1.2.2013.1859 . Farvin,  K.H.S.,  &  Jacobsen,  C.  (2013).  Phenolic  compounds and antioxidant  activities  of selected species of seaweeds from Danish coast. Food Chemistry , 138 (2–3), 1670– 1681. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2012.10.078
Harbone J.B. (2000). Advances in Flavonoid Research since 1992. Phytocemistry , 55 , 482– 504.
Harborne, J.B. (1984). Phytochemical Methods . Springer Netherlands. https://doi.org/10.1007/978-94-009-5570-7
Li, Y., Fu, X., Duan, D., Liu, X., Xu, J., & Gao, X. (2017). Extraction and Identification of Phlorotannins from the Brown Alga, Sargassum fusiforme (Harvey) Setchell. Marine Drugs , 15 (2), 49-49(1). https://doi.org/10.3390/md15020049 .
Puspita,  M.,  Setyawidati,  N.A.R.,  Stiger-Pouvreau,  V.,  Vandanjon,  L.,  Widowati,  I., Radjasa,  O.K.,  Bedoux,  G.,  &  Bourgougnon,  N.  (2020).  Indonesian  Sargassum species bioprospecting: potential applications of bioactive compounds and challenge for  sustainable  development. Advances  in  Botanical  Research , 95 ,  113–161. https://doi.org/10.1016/bs.abr.2019.12.002
Sanjeewa,  K.K.A.,  Kang,  N.,  Ahn,  G.,  Jee,  Y.,  Tae-Kim,  Y.,  &  Jin  Jeon,  Y.      (2018). Bioactive  potentials  of  sulfated  polysaccharides  isolated  from  brown  seaweed Sargassum  spp  in  related  to  human  health  applications:  A  review. Food Hydrocolloids, 81(2), 200–208. https://doi.org/10.1016/j.foodhyd.2018.02.040
Septiana, A.T., & Asnani, A. (2013). Antioxidan activity of Sargassum duplicatum seaweed extract. Jurnal Teknologi Pertanian , 14 (2), 79–86.
Wiryato, J. (2015). Beberapa Jenis Makroalga yang Ditemukan di Zona Pasang Surut Pantai Pandawa Badung Bali. Universitas Udayana, Bali.
Zhang, B., Deng, Z., Ramdath, D. D., Tang, Y., Chen, P. X., Liu, R., Liu, Q., & Tsao, R. (2015).  Phenolic  profiles  of  20  Canadian  lentil  cultivars  and  their  contribution  to antioxidant  activity  and  inhibitory  effects  on  α-glucosidase  and  pancreatic  lipase. Food Chemistry , 172 , 862–872. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2014.09.144 Zhao, G., Zhang, R., Liu, L., Deng, Y., Wei, Z., Zhang, Y., Ma, Y., & Zhang, M. (2017). Different thermal drying methods affect the phenolic profiles, their bioaccessibility and  antioxidant  activity  in  Rhodomyrtus  tomentosa  (Ait.)  Hassk  berries. LWT , 79 , 260–266. https://doi.org/10.1016/j.lwt.2017.01.039