## IDENTIFIKASI DAN PENETAPAN KADAR RHODAMIN B DALAM KERUPUK BERWARNA MERAH YANG BEREDAR DI PASAR ANTASARI KOTA BANJARMASIN
Submitted : 20 April 2015 Edited : 10 Mei 2015 Accepted : 20 Mei 2015
Eka Kumalasari
Akademi Farmasi ISFI Banjarmasin E-mail : ekakumalasari260989@gmail.com

## ABSTRACT
Crackers  are  made from  tapioca  flour  batter  mixed  with  flavorings  and  colorings,  still  many outstanding crackers that contain ingredients banned dye Rhodamine B. Rhodamine B is a chemical used for red dye in the textile industry and plastic. Rhodamine B can cause cancer, poisoning, lung irritation, sore eyes, and sore throat. This study aims to identify and determination the levels of Rhodamine B in circulating red crackers Antasari market Banjarmasin.
The  population  is  that  sold  in  the  red  crackers  that  sold  in  Antasari  market  Banjarmasin..  The sampling is technique incidental sampling , that is based on chance, so any population by chance met with researchers  can  be  used  as  a  sample.  Identification  of  Rhodamine  B  was  done  by  Thin  Layer Chromatography (TLC) by using the stationary phase silica GF 254 and mobile phase is elution solvent is n- butanol, ethyl acetate, ammonia (10:4:5). Then detected with a UV lamp 254 nm and 366 nm. While for the determination of levels using Vis spectrophotometry at a wavelength of 544 nm.
The results  showed  that  the  samples  of  6  found  one  sample  containing  Rhodamine  B,  namely samples 5 (cassava crackers matches) and obtained values of 7,25 ± 3,8640 levels mg / kg. Based on these results, Rhodamine B still found in crackers that sold in the market Antasari Banjarmasin.

## K eywords : crackers, Rhodamine B, Thin Layer Chromatography, and  UV-Vis spectrophotometry

## PENDAHULUAN
Kerupuk  adalah  makanan  ringan  yang dibuat  dari  adonan  tepung  tapioka  dicampur bahan perasa. Cara membuatnya sangat gampang, bahan  bakunya  pun  melimpah  ruah.  Kerupuk sangat  garing  dan  cocok  dijadikan  pelengkap sajian masakan indonesia, selain itu kerupuk juga dapat  dinikmati  sebagai  cemilan  ketika nonton televisi 1 . Salah  satu  pasar  yang  banyak  menjual kerupuk berwarna merah  adalah  pasar  Antasari Kota Banjarmasin.
Kerupuk  juga  tidak  lepas  dari  masalah keamanan  makanan  jajanan. Adanya  produsen yang  masih  menggunakan  Rhodamin  B  pada produknya  disebabkan  oleh  pengetahuan  yang tidak  memadai  mengenai  bahaya  penggunaan bahan  kimia  tersebut  pada  kesehatan  dan  juga karena  tingkat  kesadaran  masyarakat  yang  masih rendah. Selain itu, Rhodamin B sering digunakan sebagai  pewarna  karena  harganya  relatif  lebih murah,  warna  yang  dihasilkan  lebih  menarik  dan tingkat  stabilitas  warnanya  lebih  baik  dari  pada
pewarna  alami  dikarenakan  produsen  ingin mendapatkan untung yang lebih banyak.
Menurut  Peraturan  Menteri  Kesehatan Nomor  33  Tahun  2012 2 ,  menyatakan  bahwa Bahan  Tambahan  Pangan  (BTP)  merupakan bahan  yang  ditambahkan  kedalam  pangan  untuk mempengaruhi  sifat  atau  bentuk  pangan.  Banyak produsen  kerupuk  yang  menambahkan  bahan tambahan  pangan  yang  aman,  tidak  jarang  juga ada  bahan  tambahan  yang dilarang  misalnya  zat pewarna  Rhodamin  B. Pemakaian  zat  pewarna berbahaya  untuk  bahan  pangan  telah  ditetapkan dalam Peraturan Menteri Kesehatan No. 33 Tahun 2012 2 tentang  bahan  tambahan  pangan, bahwa Rhodamin  B  merupakan  bahan  tambahan  pangan (BTP)  yang  dilarang  penggunaannya  dalam makanan.
Rhodamin  B  merupakan  zat  warna sintetik  umum  yang  digunakan  sebagai  pewarna tekstil.  Rhodamin  B  merupakan  zat  warna tambahan  yang  dilarang  penggunaannya  dalam
produk-produk  pangan.  Rhodamin  B  bersifat karsinogenik  sehingga  dalam  penggunaan  jangka panjang dapat menyebabkan kanker 3 .
Menurut  penelitian  sebelumnya  tentang identifikasi  Zat  Pewarna  Rhodamin  B  dalam Jajanan  Yang  di  Pasarkan  di  Pasar  Traditional Kota Bandar  Lampung 4 .  Menyebutkan  bahwa hasil identifikasinya bahwa Rhodamin B ditemukan  pada  jajanan  sebanyak  50%  atau  15 dari  30  sampel.  Hal  ini  menunjukkan  masih banyaknya  penggunaan  zat  pewarna  terlarang Rhodamin  B  di  gunakan  pada  jajanan  terutama jajanan  yang  berwarna  merah.  Jajanan  yang mengandung  Rhodamin  B  adalah kerupuk kelanting,  agar-agar kembang  gula/permen  dan mutiara  (sering  jadi  campuran  es),  jajanan
berwarna  merah  muda  sampai  merah  cerah  dan jika diperhatikan terdapat pewarna yang menggumpal  /tidak  merata  pada  makanan tersebut. Penelitian ini menggunakan uji kromatografi  kertas  untuk  menilai  kandungan Rhodamin  B  dalam  sampel,  selanjutnya  sampel- sampel yang telah melalui tahap ekstraksi dengan prosedur  standar  di  ukur  dengan  menggunakan Spektrofotometri Visible untuk menilai kandungan Rhodamin B dalam sampel.
Berdasarkan  latar  belakang  yang  sudah dijelaskan di atas maka dilakukan penelitian untuk mengetahui keberadaan  pewarna  Rhodamin  B pada  kerupuk    yang  berwarna  merah  yang  dijual di pasar Antasari Kota Banjarmasin.

## METODE PENELITIAN
Jenis  penelitian  yang  digunakan  adalah penelitian  deskriptif,  yaitu  dengan  melakukan observasi pada kerupuk yang dicurigai mengandung senyawa Rhodamin B dan menetapkan kadarnya. Penelitian ini dilakukan pada tanggal 12 mei - 12 juni 2014. Penelitian ini dilakukan  di Laboratorium Kimia  AKADEMI FARMASI ISFI Banjarmasin.
Populasi  dalam  penelitian  ini  adalah seluruh kerupuk berwarna merah yang beredar di pasar  Antasari  Kota  Banjarmasin.  Dimana  pasar Antasari ini merupakan pasar sektor 1 yaitu pasar yang  banyak  menjual  kerupuk  yang  berwarna merah, di  pasar ini  terdapat 6  sampel  kerupuk berwarna merah
Identifikasi keberadaan Rhodamin B pada kerupuk  yang berwarna merah  yang  dijual  di
pasar  Antasari  Kota  Banjarmasin  dilakukan dengan  metode  kromatografi  lapis  tipis  (  KLT). Silika GF 254 sebagai fase diam dan sebagai fase gerak  atau  larutan  elusinya yaitu  n- butanol,  etil asetat, ammonia  (10:4:5). Amati  warna  secara visual  dan  dibawah  sinar  UV.  Jika  secara  visual noda  berwarna  merah  jambu  dan  dibawah  sinar UV  254nm  warna  kuning    dan  366nm  merah muda  dan  nilai  Rf  sampel  sama  dengan  nilai  Rf larutan  baku Rhodamin B  maka  hal  ini menunjukkan  adanya  Rhodamin  B,  sehingga penelitian  dapat  dilanjutkan  ke  tahap  penetapan kadar Rhodamin B menggunakan
spektrofotometri  visible.  Setiap  sampel  yang dianalisa dilakukan replikasi sebanyak 3 kali.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  di  awali  dengan  melakukan tahap  pendahuluan  yaitu  pengumpulan  sampel, pembuatan  larutan  baku Rhodamin B  dengan kadar 0,5 mg dalam 100 ml air, pembuatan larutan Amonia  2%,  pembuatan  larutan  etanol  70%, Pembuatan  larutan  amonia  10%,  pembuatan larutan asam asetat 10% dan preparasi sampel.
Preparasi sampel diawali dengan menimbang  kerupuk  sebanyak  10  g  masukkan dalam  erlenmeyer  kemudian  direndam  dalam  20 ml  larutan  amonia  2%  (yang  dilarutkan  dalam etanol  70%)  selama  24  jam,  saring  larutan. Filtratnya  dipindahkan  kedalam  gelas  beker kemudian  diuapkan  diatas  hot  plate,  Residu  dari penguapan  dilarutkan  dalam  10  ml  air  yang mengandung  asam  (larutan  asam  dibuat  dengan mencampurkan  10  ml  air  dan  5  ml  asam  asetat 10%,  Benang  wol  dengan  panjang  15  cm
dimasukkan  kedalam  larutan  asam  dan  didihkan 10  menit,  pewarna  akan  mewarnai  benang  wol, kemudian  benang  diangkat.  Benang  wol  dicuci dengan  air,  Kemudian  benang  wol  dimasukkan kedalam  larutan  basa  yaitu  10  ml  amonia  10% (yang dilarutkan dalam etanol 70%) dan didihkan. Benang  wol  akan  melepaskan  pewarna,  pewarna akan  masuk  kedalam  larutan  basa.  Larutan  basa yang  didapat  selanjutnya  akan  digunakan  sebagai cuplikan  sampel  pada  analisis  kromatografi  lapis tipis ( KLT) 5 .
Tahap  identifikasi  dengan  kromatografi lapis tipis dimulai dengan sampel ditotolkan pada plat KLT dan totolkan larutan baku Rhodamin B. Plat KLT yang mengandung cuplikan dimasukkan kedalam  chamber    yang  lebih  dahulu  telah dijenuhi fase gerak berupa n-butanol : etil asetat : amonia (10:4:5). Biarkan hingga lempeng terelusi
sempurna  kemudian  plat  KLT  diangkat  dan keringkan.  Ketika  pelarut  naik  akibat  dari  aksi kapiler pada adsorben, komponen sampel terbawa dengan kecepatan yang berbeda dan dapat dilihat sebagai  deretan  titik-titik  setelah  pelatnya dikeringkan  dan  diwarnai  atau  dilihat  dibawah cahaya ultraviolet 6 .  Amati  warna  secara  visual dan  dibawah  sinar  UV.  Jika  secara  visual  noda berwarna  merah  jambu  dan  dibawah  sinar  UV
254nm warna kuning  dan 366nm merah muda hal ini menunjukkan adanya Rhodamin B 7 .
Berdasarkan Tabel  1 dibawah  ini  dapat dilihat  bahwa  dari  6  sampel  dengan  replikasi  3 kali  yang  telah  diuji  terdapat satu  sampel  yang positif  mengandung  Rhodamin  B  karena  nilai  Rf sampel sama  dengan Rf  standar  Rhodamin  B.RF (faktor retensi) adalah jarak yang digerakkan oleh senyawa  dari  titik  asal  dibagi  dengan  jarak  yang digerakkan oleh pelarut dari titik asal 8 .
Tabel 1. Hasil  pemeriksaan  Identifikasi  Rhodamin  B  pada  sampel  menggunakan  Kromatografi  Lapis Tipis (KLT) Sampel Deteksi Harga Rf Dilihat di sinar UV 254 nm Dilihat di sinar UV 366 Rhodamin B = 3,5 4,5 = 0,77 Merah Muda Merah Orange A 1 0 - - A 2 0 - - A 3 0 - - Rhodamin B = 3,5 4,5 = 0,77 Merah Muda Merah Orange B 1 0 - - B 2 0 - - B 3 0 - - Rhodamin B = 3,9 4,9 = 0,79 Merah Muda Merah Orange C 1 0 - - C 2 0 - - C 3 0 - - Rhodamin B = 3,9 4,9 = 0,79 Merah Muda Merah Orange D 1 0 - - D 2 0 - - D 3 0 - - Rhodamin B = 3,3 5 = 0.66 Merah Muda Merah Orange E 1 = 3,3 5 = 0.66 Merah Muda Merah Orange E 2 = 3,3 5 = 0.66 Merah Muda Merah Orange E 3 = 3,3 5 = 0.66 Merah Muda Merah Orange Rhodamin B = 3,3 5 = 0.66 Merah Muda Merah Orange F 1 0 - - F 2 0 - - F 3 0 - - Keterangan :A = Sampel 1 1 =  Replikasi 1 B = Sampel 2 2 =  Replikasi 2 C = Sampel 3 3 =  Replikasi 3 D = Sampel 4 + = Positif E= Sampel 5 - = Negatif
F= Sampel 6
Sampel yang dinyatakan positif selanjutnya  dilakukan  penetapan  kadar  dengan metode  spektrofometri  UV-Vis  karena  hasilnya lebih  akurat  dan  lebih  cepat. Penetapan  kadar Rhodamin B  diawali  dengan  pembuatan  Larutan Stok  Rhodamin  B  2000  ppm  dengan  pelarut etanol.    Dari  larutan  ini  ambil  sebanyak    250 µmasukkan  kedalam  labu  ukur  25  ml  dilarutkan hingga batas dengan menggunakan etanol, didapat larutan  Rhodamin  B  dengan  konsentrasi  20  ppm. Larutan  ini  akan  digunakan  untuk  penentuan  OT (Operating Time) dan penentuan panjang gelombang maksimal. Kemudian untuk penentuan kurva  baku  maka dibuatlah  larutan Rhodamin B sebanyak 6 konsentrasi yaitu 10 ppm, 15 ppm, 20 ppm,  25  ppm,  30  ppm, 35  ppm.  Selanjutnya dilakukan  penetapan  kadar  pada  sampel  yang telah diidentifikasi positif mengandung Rhodamin B.
Pada  penentuan Operating  Time baku Rhodamin  B  diperoleh  waktu  pengukuran  yang stabil dimulai dari menit  ke-19 sampai menit ke- 21. Penentuan operating  time tujuannya  ialah untuk  mengetahui  waktu  pengukuran  yang  stabil dan  memiliki  daya  serap  absorbansi  yang maksimal. Operating  time ditentukan  dengan mengukur  hubungan  antara  waktu  pengukuran dengan absorbansi larutan 9 .
Pada Penentuan panjang gelombang maksimum  larutan  Rhodamin  B    dilakukan  pada
konsentrasi  10    ppm  dengan  rentang  panjang gelombang    400- 800  nm  dan  diperoleh    λ maksimum    544  nm.  Hal  ini  dilakukan  karena larutan  Rhodamin  B  merupakan    larutan berwarna.
Selanjutnya Pembuatan kurva baku larutan  Rhodamin  B  dilakukan  dengan  membuat larutan  dengan  berbagai  konsentrasi    pengukuran yaitu:  10,  15,  20,  25,  30,  dan  35  ppm,  kemudian diukur  serapannya  pada  panjang  gelombang  544 nm.  Hasil  perhitungan  persamaan  regresi  kurva larutan  baku diperoleh  persamaan  garis  y= 0,0232x + (-0,0352) dengan koefisien korelasi (r) sebesar  0,9981.    Dari  hasil  tersebut  dapat dikatakan  bahwa  terdapat  korelasi  yang  positif antara  kadar  dan  serapan.  Artinya,  dengan meningkatnya  konsentrasi  maka  absorbansi  juga akan meningkat. Hal ini berarti terdapat  99,18 % data yang memiliki hubungan linier.
Penetapan  kadar  Rhodamin  B  dilakukan dengan  menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis. Dari  6  sampel  yang  dianalisis  ternyata  terdapat satu  sampel  yang  teridentifikasi  adanya zat Rhodamin  B    yaitu  sampel ke 5  dengan  replikasi sebanyak  3  kali. Setelah  dibaca  dengan  alat spektrofotometri UV-Vis didapat nilai absorbansinya  sebesar  0.066,  0.030,  dan  0.051 pada panjang gelombang 544 nm.
Tabel 2. Nilai Absorbansi Sampel
Kode Sampel Replikasi λ maks Absorbansi Sampel 5 1 544 0,066 2 544 0,030 3 544 0,051 Tabel 3. Kadar Rhodamin B pada Sampel Sampel Replikasi Kadar (mg/kg) Kadar rata-rata ± SD (mg/kg) Sampel 5 1 8,72 mg/kg 7,25 ± 3,8640 mg/kg 2 5,62 mg/kg 3 7,42 mg/kg
Hasil  penetapan  kadar  pada  sampel  yang positif  mengandung  Rhodamin  B  setelah  dibaca pada  alat  spektrofotometri UV Vis  dengan replikasi  sebanyak  3  kali  setiap  sampelnya yaitu dengan jumlah  sampel  10  gr  yang  akan dipreparasi kemudian didapat hasil kadar rata-rata sebanyak  7,25  ±  3,8640  mg/kg  kerupuk mengandung Rhodamin B. Berdasarkan perhitungan replikasi sampel menurut Federer dari 6 sampel didapat sebanyak 3 replikasi.
Rhodamin B yang secara sengaja ditambahkan  pada  kerupuk  menambah  kualitas pewarna  agar  lebih  menarik  sehingga  konsumen lebih tertarik untuk membelinya, selain itu banyak penjual  masih  menggunakan  Rhodamin  B  yang praktis  digunakan  dan  harganya  relatif  murah serta  tersedia  dalam  kemasan  kecil di  pasaran sehingga memungkinkan masyarakat umum untuk membelinya. Jadi diharapkan bagi konsumen agar lebih  hati-hati  dalam  mengkonsumsi  kerupuk yang beredar di pasar Antasari Kota Banjarmasin.

## SIMPULAN
Dari hasil
identifikasi dengan menggunakan  metode  Kromatografi  Lapis  Tipis (KLT)  dari  6  sampel  dengan  3  replikasi ditemukan 1 sampel positif mengandung Rhodamin B  yaitu  sampel  ke 5.  Dari  hasil
penetapan kadar sampel ke 5 dengan menggunakan  metode  Spektrofotometri  UV-Vis didapat  kadar  rata-rata Rhodamin B  pada  sampel (kerupuk korek api) sebesar 7,25 ± 3,8640 mg/kg kerupuk.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Team,  JB.  2010, Bisnis  Rumah  Tangga  Cemilan dan  Minuman,hal.  113,Jogya  Bangkit Publisher,Yogyakarta, Indonesia.
2. Kementrian Kesehatan, 2012, Peraturan Menteri Kesehatan Nomor 33 Tahun 2012 tentang Bahan Tambahan Pangan , Jakarta, Kementrian Kesehatan Republik Indonesia.
3. Utami,  W.,  dan  Suhendi,  A  .,  2009,  Analisis  Rhodamin  B  Dalam  Jajanan  Pasar  Dengan  Metode Kromatografi Lapis Tapis,  Penelitian Sains & Toksikologi, Jurnal.Vol. 10, No 2, hal. 148-155 Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah, Surakarta.
4. A, Permatasari, T. Susantiningsih, E. Kurniawati.  2013-2014, Identifikasi Zat Pewarna Rhodamin B dalam Jajanan yang Dipasarkan Di Pasar Traditional Kota Bandar Lampung, Jurnal. hal. 30. Medical Faculty of Lampung University
5. Djalil, A.D., Hartanti, D., Rahayu, W.S., Prihatin, R., Hidayah, N.,2005, Identifikasi Zat Warna Kuning Metanil (Metanil Yellow) dengan Metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT) pada Berbagai Komposisi Larutan Pengembang, Jurnal Farmasi, Vol. 3, No.2, hal. 28-29, Fakultas Farmasi UMP,Purwokerto
6. Suwawinarta, N. 2002, Senarai Istilah Kedokteran Gigi,hal.38, EGC, Jakarta, Indonesia.
7. Putri, W.K. A., 2009, Pemeriksaan Penyalahgunaan Rhodamin B Sebagai Pewarna Pada Sediaan Lipstik yang Beredar di Pusat Pasar Kota Medan. Skripsi. Fakultas Farmsi Universitas Sumatera Utara, Medan.
8. Sastrohamidjojo, H. 2005, Kromatografi, hal. 34, Liberti, Yogyakarta, Indonesia.
9. Ghanjar, I.G. dan Rohman, A. 2007, Kimia Farmasi Analisis, hal. 1 dan hal. 252-256, Pustaka Belajar, Yogyakarta, Indonesia.