E
UJI AKTIVITAS ENZIM AMILOGLUKOSIDASE DARI Aspergillus niger PADA KOMBINASI

## pH DAN SUHU YANG BERVARIASI
Fatmawati Nur* *Jurusan Biologi Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri (UIN) Alauddin Makassar email: fatenurkhalik@yahoo.com
Abstrak : Penelitian  ini  dilakukan  untuk  menguji  aktivitas  enzim amiloglukosidase  yang  dihasilkan  oleh Aspergillus  niger pada kombinasi pH dan suhu yang bervariasi, yaitu pada pH 4.5, 5.0, dan 5.5, suhu  35  °C,  40  °C,  50  °C,  55  °C,  60  °C,  dan  65  °C,  dengan  tujuan mengetahui  kombinasi  pH  dan  suhu  yang  optimum  untuk  aktivitas maksimum  enzim  tersebut. Pengujian  aktivitas  enzim  amiloglukosidase dilakukan  pada  jam  ke  96  waktu  fermentasi  pada  media  cair  yang diinkubasikan pada penangas goyang, suhu kamar,  dan  pH 4.5  dengan metode Sacharifying ,  tiga  kali  ulangan  dan  dianalisis  dengan
Rancangan  Faktorial,  Rancangan  Acak  Kelompok  (RAK),  kemudian dilanjutkan dengan uji Wilayah Berganda Duncan (WBD). Hasil penelitian menunjukkan  bahwa  Aktivitas  enzim  amiloglukosidase  maksimal terjadi pada kombinasi suhu 60 °C dan pH 5.0 sebesar 15.6493 (unit/ml), dan  aktivitas  enzim  amiloglukosidase  minimal  terjadi  pada  kombinasi suhu 65 °C dan pH 5.5 sebesar 7.9823 (unit/ml).
Kata Kunci: Aktivitas enzim, Amiloglikosidase, pH, Suhu

## PENDAHULUAN
nzim adalah senyawa organik berupa protein yang dihasilkan oleh sel-sel hidup dan  berperan  sebagai  katalisator  pada  reaksi  kimia  yang  berlangsung  dalam organisme,  memiliki  sifat dan spesifikasi tertentu (Gaman, 1992). Komponen enzim  dapat  berupa  protein  murni  atau  gabungan  antara  protein  dengan  gugus  kimiawi lainnya. Bagian enzim yang terdiri dan protein bersifat termolabil (tidak tahan panas) diberi  nama  apoenzim.  Sedangkan  bagian  lain  yang  bukan  protein  bersifat  termostabil (tahan  panas)  diberi  nama  gugus  prostetik  (bagian  yang  aktif).  Apoenzim  dengan gugusan prostetik merupakan satu kesatuan yang disebut holoenzim (Kertesz 1976).
28 _ Jurnal Teknosains, Volume 12, Nomor 1, Januari-Juni 2018 , hlm. 27 – 3 8
Seperti  halnya  semua  protein,  enzim  akan  terdenaturasi  oleh  panas, terepresikan  oleh  etanol,  dan  tak  terdialisis  (Pelczar,  1985).  Selain  itu,  enzim memiliki sifat-sifat yang khusus meliputi spesifitas yang tinggi dengan mengkatalisis satu reaksi, aktivitasnya dipengaruhi oleh suhu, pH, memerlukan aktivator, dan dalam jumlah yang kecil dapat mengkatalisis substrat yang besar  (Gaman, 1992).
Tiap  sel  mengandung  enzim  sehingga  dapat  diperoleh  dari  jaringan tumbuhan,  hewan,  dan  mikroorganisme  yang  terseleksi  (Smith,  1993) . Sekalipun semua  enzim  pada  mulanya  dihasilkan  di  dalam  sel,  beberapa  mikroba  dapat mengekskresikan enzimnya melalui dinding sel dan dapat berfungsi di luar sel (Pelczar, 1985).  Enzim  yang  dikeluarkan  oleh  mikroba  ke  lingkungan,  lazim  disebut  enzim ekstraselluler  (Smith,  1993).  Fungsi  utamanya  ialah  melangsungkan  perubahan seperlunya  pada  nutrien  di  sekitarnya  sehingga  memungkinkan  nutrien  tersebut memasuki sel (Pelczar, 1985).
Salah  satu  jenis  enzim  ekstraselluler  yang  penting  adalah  amiloglukosidase yang  digunakan  dalam  bidang  produksi  alkohol,  roti,  juice,  dan  pati.  Mikroba  yang berkemampuan  baik  untuk  menghasilkan  enzim  ini  adalah  jenis Aspergillus  niger, Aspergillus oryzae, dan Endomycopsis bisfora . (Smith, 1993).
Hasil  penelitian  terdahulu  memperlihatkan  produksi  amiloglukosidase  oleh Aspergillus  niger L.51/NRRL  All-164  dengan  molases  sebagai  sumber  karbon, menunjukkan  kondisi  optimal  produksi  pada  suhu  35  °C,  pH  4.5  (Rahman,  1992). Tetapi pada umumnya aktivitas enzim amiloglukosidase optimal bekerja pada kisaran suhu 40-60 °C dan pH berkisar 4.5 – 5.0 (Winarno, 1995).

## TUJUAN PENELITIAN
1. Untuk  mengetahui  aktivitas  maksimal  enzim  amiloglukosidase  dari Aspergillus niger pada kombinasi suhu dan pH yang bervariasi.
2. Untuk mengetahui aktivitas minimal enzim amiloglukosidase dari Aspergillus niger pada kombinasi suhu dan pH yang bervariasi.
Fatmawati Nur, Uji Aktivitas Enzim Amiloglukosidase dari Aspergillus Niger pada… _ 29

## TINJAUAN PUSTAKA

## Enzim Amiloglukosidase
Dikenal ada dua tipe  enzim  yaitu enzim ekstraselluler atau eksoenzim dan enzim intraselluler atau endoenzim. Fungsi  utama  eksoenzim  ialah  melangsungkan  perubahan seperlunya  pada  nutrien  di  sekitarnya  sehingga  memungkinkan  nutrien  tersebut memasuki sel. Enzim intraselluler  mensintesis bahan selluler dan menguraikan nutrien untuk menyediakan energi yang dibutuhkan oleh sel (Pelczar, 1985).
Amiloglukosidase  adalah  salah  satu  jenis  enzim  ekstraselluler,  tergolong  ke dalam  kelompok  enzim  amilase.  Amilase  adalah  enzim  yang  menghidrolisis  pati. Hidrolisis pati pertama-tama menghasilkan polimer berantai pendek yang disebut dekstrin, kemudian  disakarida,  maltosa,  dan  akhirnya  glukosa.  Glukosa  merupakan  jenis  gula sederhana yang derajat kemanisannya lebih rendah dari fruktosa (Rahman, 1992).
Enzim  amiloglukosidase  merupakan  enzim  yang  dapat  menguraikan  ikatan glikosidik  α-1.4,  α-1.6,  α-1.3,  dan  melepaskan  unit  glukosa  mulai  dari  ujung  rantai non  pereduksi  dalam  amilosa,  amilopektin,  dan  glikogen.  Pada  kenyataannya, amiloglukosidase  mengalami  kesulitan  dalam  menghidrolisis  ikatan  glikosidik  α-1.6, namun hal ini dapat diatasi dengan adanya enzim amilase sehingga hasil hidrolisis kedua enzim secara bersama-sama akan lebih sempurna  (Hardjo, 1989).
Bagian gugus prostetik terdiri dari molekul organik yang berat molekulnya lebih rendah  daripada  apoenzim,  dinamakan  koenzim.  Beberapa  enzim  mengandung  vitamin sebagai  pelengkap.  Tetapi  dalam  beberapa  hal,  bagian  gugus  prostetik  suatu  enzim dapat  berupa  logam  untuk  menjadi  teraktivasi.  Ion-ion  itu  dianggap  sebagai  koezim anorganik  (kofaktor),  dan  keduanya  dibutuhkan  untuk  membuat  suatu  enzim  menjadi aktif (Pelczar, 1985).
Enzim dapat diperoleh dari jaringan tumbuhan, hewan, dan mikroorganisme yang  terseleksi . Dari  sumber  tumbuhan  dan  hewan  mungkin  timbul  banyak persoalan,  yakni  untuk  enzim  yang  berasal  dari  tumbuhan,  persoalan  yang timbul adalah  variasi  musim,  konsentrasi  rendah  dan  biaya  proses  yang  tinggi.  Sedangkan yang diperoleh dari hasil samping industri daging mungkin persediaan enzimnya terbatas dan ada persaingan dengan pemanfaatan lain (Smith, 1993).
30 _ Jurnal Teknosains, Volume 12, Nomor 1, Januari-Juni 2018 , hlm. 27 – 3 8
Oleh  karena  itu  peningkatan  sumber  enzim  sedang  dilakukan  yaitu mikroba  penghasil  enzim  yang  sudah  dikenal  atau  penghasil  enzim  baru  lainnya , dengan  cara  membiakkan  mikroba  penghasil  enzim  yang  dikehendaki  pada  media tertentu  kemudian  diekstraksi  dan  akhirnya  dimurnikan.  Ada  beberapa  keuntungan yang diperoleh dengan menggunakan enzim dari mikroba, yaitu: biaya produksi relatif rendah,  dapat  diproduksi d alam  waktu  singkat,  serta  mudah  dikontrol.  Kecepatan produksi  enzim  dari  mikroba  akan  meningkat  dengan  berkembangnya  seleksi mikroba, induksi mutan dan perbaikan kondisi kultur untuk pertumbuhan (Smith, 1993).
Enzim  amiloglukosidase  dapat  diperoleh  dari  beberapa  jenis  mikroba  yang mengeluarkan  enzim  ini  ke  lingkungannya  dan  telah  diusahakan  secara  komersial, antara  lain  diproduksi  dari Aspergillus,  Rhizopus (Winarno,  1995), Endomycopsis,
Mucor,  Penicillium,  Saccharomyces, dan Trichoderma (Hardjo,  1989) . Produksi amiloglukosidase  oleh Aspergillus  niger L.51/NRRL  All-164  dengan  molases sebagai sumber karbon, menunjukkan kondisi optimal produksi pada suhu 35 °C, pH 4.5,  kecepatan  aerasi  1  rpm,  dan  waktu  fermentasi  96  jam,  ke  dalam  medium ditambahkan  induser  sebanyak  2  g/1.  Tetapi  pada  umumnya  amiloglukosidase bekerja secara optimal pada kisaran suhu 40-60 °C dan pH berkisar 4.5-5.0 (Rahman, 1992).
Dalam  pelaksanaannya  enzim  mikroba  didapat  dari  mikroorganisme  tertentu saja  dan  terutama  lebih  banyak  dari  mikroorganisme  yang  bersifat  tidak  patogen, tidak memproduksi bahan toksik dan mempunyai stabilitas biologi yang tinggi.

## Faktor-faktor yang Mempengaruhi Aktivitas Enzim
Keadaan yang mempengaruhi aktivitas enzim diantaranya  ialah konsentrasi enzim, konsentrasi substrat, pH, suhu, pengaruh air, pengaruh hasil akhir, aktivator, dan inhibitor (Pelczar, 1985) .
Terdapat  hubungan  optimum  antara  konsentrasi  enzim  dan  substrat  bagi aktivitas  maksimum.  Demikian  juga,  setiap  enzim  berfungsi  secara  optimal  pada  pH dan  temperatur  tertentu. Penyimpangan  dari  keadaan  optimum  mengakibatkan berkurangnya  aktivitas  enzim  dengan  nyata.  Keragaman  pH  yang  ekstrim  bahkan dapat   merusak   enzim,   seperti   juga   suhu   tinggi.   Pendidihan   akan menyebabkan
Fatmawati Nur, Uji Aktivitas Enzim Amiloglukosidase dari Aspergillus Niger pada… _ 31
denaturasi enzim, sementara suhu rendah pada praktisnya menghentikan aktivitas enzim tetapi tidak menghancurkannya. Banyak enzim dapat diawetkan dengan cara menyimpan pada suhu sekitar 0 °C atau kurang (Pelczar, 1985) .
Konsentrasi  enzim  dan  substrat  yang  dua  kali  kekuatannya,  maka  reaksi berlangsung  dua  kali  lipat  lebih  giat.  Namun  kadang-kadang  hasil  akhir  yang tertimbun bisa menghambat kegiatan enzim (Dwidjosepoetro, 1989) .
Penambahan  zat-zat  kimia  dapat  menambah  kegiatan  seluruh  enzim, misalnya  garam-garam  dari  logam  alkali  tanah  dalam  konsentrasi  encer.  Ion-ion Kobalt, Mangan, Nikel, Magnesium dan Khlor merupakan penggiat bagi enzim tertentu. Di  samping  itu  ada  pula  zat  kimia  yang  menghambat  laju  kerja  enzim  seperti  garam- garam  dari  logam  berat  seperti  Air  raksa.  Zat  penghambat  dapat  bersaing  jika strukturnya mirip dengan struktur molekul substrat, dapat pula berupa zat penghambat tak  bersaing  jika  strukturnya  mirip  dengan  struktur  molekul  enzim,  terutama  bagian prostetiknya (Dwidjosepoetro, 1989) .

## METODE PENELITIAN
Penelitian  dilakukan  dalam  beberapa  tahapan  untuk  pengujian  aktivitas enzim  amiloglukosidase  pada  kombinasi  suhu  dan  pH  yang  bervariasi  setelah diproduksi oleh Aspergillus niger . Urutan tahapan penelitian sebagai berikut :

## Pembuatan Inokulum
Aspergillus niger yang ditumbuhkan pada medium PDA umur 4 x 24 jam, suhu kamar ditambahkan cairan yang terdiri dari 0.1% Tween 80 dan 0.9% NaCl fisiologis, kemudian dikeruk dan dikocok hingga semua spora mikroorganismenya lepas. Suspensi ini  digunakan  sebagai  inokulum  yang  akan  dimasukkan  ke  dalam  medium fermentasi.

## Produksi Enzim Amiloglukosidase
Medium  produksi  terdiri  dari  :  limbah  markisa  (8%),  NaH 2 PO 4 (4.7%), CaCl 2 (0.1%),  KC1  (0.02%),  dan  MgCl 2 .6H 2 O  (0.02%)  diinokulasikan  dengan Aspergillus niger FNCC 6018  dari  inoculum  sebanyak 1 ml dengan kerapatan spora
32 _ Jurnal Teknosains, Volume 12, Nomor 1, Januari-Juni 2018 , hlm. 27 – 3 8
10 7 /ml pada volume media 100 ml, difermentasikan pada suhu kamar, pH 4.5. Sampling dilakukan  pada  jam  ke  96  waktu  fermentasi  yang  diekstraksi  dengan  sentrifuge  3000 rpm  selama  10  menit,  kemudian  ditentukan  aktivitas  enzim  amiloglukosidase  secara sacharifying.

## Penentuan Aktivitas Enzim Amiloglukosidase
Aktivitas  enzim  amiloglukosidase  ditentukan  dengan    urutan    langkah sebagai berikut :
a.  Satu ml larutan 1% pati terlarut diisikan ke dalam 22 tabung reaksi, 21 tabung reaksi diinkubasikan dalam penangas air suhu 100°C, dan 1 tabung untuk standar diinkubasikan ke dalam penangas air suhu 42 °C, masing-masing selama 5 menit.
b.   Ditentukan pH perlakuan, masing-masing 4.5, 5.0, dan 5.5. Ke dalam tabung yang telah  diatur  pHnya  ditambahkan  0.1  ml  enzim  hasil  pengenceran  10  kali (kecuali  tabung  reaksi  untuk  standar,  ditambahkan  0.1  ml  air  suling),  kemudian diinkubasikan pada suhu pengujian, masing pada suhu 35 °C, 40 °C, 45 °C, 50 °C, 55 °C, 60 °C, dan 65 °C. Reaksi dibiarkan selama 10 menit.
c. Setelah  10  menit,  reaksi  dihentikan  dengan  jalan  memindahkan  tabung-tabung tersebut  ke  dalam  penangas  air  100  °C  selama  10  menit.  Hasil  hidrolisis selama  10  menit  tersebut  ditentukan  kadar  glukosanya  dengan  metode  Somogy- Nelson. Urutan langkah penentuan tersebut adalah sebagai berikut:
•  Ke dalam masing-masing tabung reaksi ditambahkan 1.6 ml reagen Nelson A, kemudaian 0.4 ml reagen Nelson B. Campuran dikocok, kemudian mulut tabung ditutup kelereng dan dipanaskan dalam penangas air suhu 100°C selama 10 menit, kemudian didinginkan dalam es selama 5 menit.
•    Ke dalam masing-masing tabung ditambahkan  2  ml reagen Arsenomolibdat dan 4.,9  ml  air  suling.  Tabung  dikocok  dengan  kuat  sambil  menutup  mulut  tabung dengan  ibu  jari  hingga  seluruh  gas  CO 2 keluar.  Hasilnya  disentrifuge  pada
5000 rpm selama   10   menit   (jika   terjadi   endapan),   kemudian   diukur   OD nya   pada spektrofotometer dengan panjang gelombang 520 nm.
Fatmawati Nur, Uji Aktivitas Enzim Amiloglukosidase dari Aspergillus Niger pada… _ 33
d.  Aktivitas enzim ditentukan berdasarkan persamaan berikut:
F s x A x K x f o
AE   = --------------------------   x 10 -3
t
Keterangan:
AE      = Aktivitas enzim dalam unit f s = Faktor pengenceran contoh (sampel) A        = Besarnya serapan cahaya terukur K        = Konsentrasi glukosa pada OD = 1 F o = Faktor pengenceran ekstrak enzim
t         = Waktu penguj ian (10 menit) 10 -3 = Perubahan harga konsentrasi glukosa terukur dari µg/ml ke mg/ml.
Satu  unit  aktivitas  enzim  amiloglukosidase  ditetapkan  sebagai  1  µ.mol  glukosa  yang dihasilkan setiap menit.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengujian  aktivitas  enzim  amiloglukosidase  yang  dihasilkan  oleh Aspergillus niger dengan media fermentasi limbah markisa dilakukan pada kombinasi suhu dan pH yang bervariasi, dilakukan dengan tiga kali ulangan, dan didapatkan hasil uji aktivitasnya  yang dilakukan dengan uji Wilayah Berganda Duncan seperti tampak pada tabel 1.
Perlakuan pH yang diberikan terhadap pengujian aktivitas enzim amiloglukosidase adalah 4.5, 5.0, dan 5.5 , didasarkan pada pH optimum pertumbuhan kapang, yang berarti bahwa  pH  aktivitas  enzim  yang  mempengaruhi  pertumbuhannya  berada  pada  kisaran tersebut, karena pada dasarnya pertumbuhan mikroba itu adalah akibat adanya kerja enzim (Pelczar, 1985). Sedangkan perlakuan suhu adalah 35°C, 40°C, 45°C,  50°C, 55°C, 60°C, dan 65°C, didasarkan pada penelitian terdahulu bahwa suhu optimum untuk aktivitas enzim amiloglukosidase berkisar 40- 60°C (Rahman, 1992).
Dari hasil analisis statistik didapatkan perlakuan-perlakuan yang diberikan berupa kombinasi  pH  (P)  dan  suhu  (T)  yang  bervariasi  itu,  tampak  terdapat  perbedaan  yang nyata antara satu perlakuan dengan perlakuan lainnya.
34 _ Jurnal Teknosains, Volume 12, Nomor 1, Januari-Juni 2018 , hlm. 27 – 3 8
Dengan  adanya  perbedaan  antara  perlakuan,  maka  dilakukanlah  uji  Wilayah Berganda  Duncan  (WBD)  untuk  mengetahui  perlakuan  yang  berpengaruh  terhadap aktivitas enzim amiloglukosidase dari Aspergillus niger seperti tampak pada tabel 1.
Pada tabel 1 terlihat bahwa aktivitas maksimum enzim amiloglukosidase berada pada kombinasi perlakuan P 2 T 6 (pH 5.0 dan suhu 60°C) sebesar 15.,6493 unit/ml. Perlakuan ini memperlihatkan perbedaan yang nyata (taraf 5 %) dengan perlakuan lainnya, kecuali untuk perlakuan P 1 T 6 (pH 4.5 dan suhu 60°C) dengan aktivitas 14.3773 unit/ml, tidak berbeda nyata (taraf 5 %).
Tabel 1.   Hasil  Uji  Wilayah  Berganda  Duncan  pada  Taraf  5  %  terhadap  Perlakuan kombinasi  pH  (P)  dan  suhu  (T)  Aktivitas  Enzim  Amiloglukosidase  dari Aspergillus niger Kombinasi pH dan Suhu Aktivitas Enzim Amiloglukosidase (Unit/ml) P 2 T 6 15.6493    a P 1 T 6 14.3770    ab P 2 T 5
14.0543    b P 3 T 5
13.8417    be
P 1 T 7 13.4530    bed P 1 T 5 13.1963    bed P 3 T 6 13.0680    bcde P 2 T 7
13.0680    bcde
P 2 T 4 12.3823    cde P 1 T 4 12.1953    def P 3 T 4 12.1843    def P 2 T 3 11.6050    ef P 1 T 3
11.5243    ef
P 3 T 3 11.5097    ef P 2 T 2
10.8020     fg
P 3 T 2 10.7800     fg P 2 T 1 10.7727     fg P 3 T 1 10.7067     fg P 1 T 2
9.5150       ghi
P 1 T 1 9.1190       hi P 3 T 7 7.9823       i
Huruf yang sama menyatakan tidak ada beda nyata pada taraf uji 5 % Keterangan: P 1 (pH 4.5), P 2 (pH 5.0), P 3 (pH 5.5), T 1 (suhu 35 o C), T 2 (suhu 40 o C),  T 3 (suhu 45 o C), T 4 (suhu 50 o C), T 5 (suhu 55 o C), T 6 (suhu 60 o C), T 7 (suhu 65 o C).
Fatmawati Nur, Uji Aktivitas Enzim Amiloglukosidase dari Aspergillus Niger pada… _ 35
Kondisi perlakuan P 2 T 6 (pH 5.0 dan suhu 60°C) merupakan kondisi optimum untuk aktivitas  enzim  amiloglukosidase  disebabkan  karena  pada  keadaan  tersebut,  pH  maupun suhu  saling  berinteraksi  memberikan  lingkungan  yang  sesuai  untuk  aktivitas  maksimum enzim tersebut.
Pada  pH  5.0  merupakan  kondisi  yang  tepat  untuk  gugus  pemberi  atau  penerima proton  pada  sisi  katalitik  enzim  berada  pada  tingkat  ionisasi  yang  diinginkan.  Dan  pada kondisi yang sama, suhu 60°C merupakan suhu yang tepat untuk sisi katalitik enzim dapat mengikat  dengan  bagus  molekul  substrat  yang  mengalami  perenggangan  akibat  kenaikan suhu (Winarno, 1995).
Dari  tabel  1  juga  terlihat  bahwa  aktivitas  minimum  enzim  amiloglukosidase  dari Aspergillus  niger adalah  pada  perlakuan  P 3 T 7 (pH  5.5  dan  suhu  65°C)  sebesar  7.9823 unit/ml. Perlakuan ini berbeda nyata (taraf 5 %) dengan perlakuan lainnya, tapi tidak beda nyata (taraf 5 %) dengan perlakuan P 1 T 1 (pH 4.5 dan suhu 35°C) dengan aktivitas sebesar 9.1190 unit/ml dan perlakuan P 1 T 2 (pH 4.5 dan suhu 40°C) dengan aktivitas 9.5150 unit/ml. Perlakuan  P 3 T 7 (pH  5.5  dan  suhu  65°C)  adalah  kondisi  dimana  enzim amiloglukosidase tidak maksimum melaksanakan aktivitasnya. Ini disebabkan karena pada kondisi tersebut enzim telah mengalami denaturasi akibat pH dan suhu tinggi.  Keadaan ini juga berlaku pada perlakuan P 1 T 1 (pH 4.5 dan suhu 35"C) dan perlakuan P 1 T 2 (pH 4.5 dan suhu 40°C)  dimana enzim amiloglukosidase tidak bekerja maksimum pada pH dan suhu rendah.
Gambar 1. Histogram suhu optimum aktivitas enzim amiloglukosidase dari Aspergillus niger pada pH yang bervariasi 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 pH 4.5 pH 5 pH 5.5 A kt iv it as e n zi m (u n it /m l) 35 °C 40 °C 45 °C
50 °C
55 °C
60 °C 65 °C
36 _ Jurnal Teknosains, Volume 12, Nomor 1, Januari-Juni 2018 , hlm. 27 – 3 8
Kenyataan  adanya  aktivitas  maksimum  dan  aktivitas  minimum  akibat  perbedaan perlakuan menunjukkan bahwa kombinasi perlakuan yang diberikan sangat mempengaruhi aktivitas enzim amiloglukosidase.
Jika  ditinjau  secara  khusus,  hasil  pengujian  menunjukkan  bahwa  pH  optimum untuk aktivitas enzim ini adalah 5.0 untuk semua perlakuan suhu kecuali pada suhu 65°C pH optimumnya 4.5 seperti tampak pada gambar 1.
Pada gambar  1  tampak  bahwa  naiknya pH  memacu aktivitas enzim  dan kemudian turun lagi setelah melewati pH tertentu yang merupakan pH optimumnya.
Laju  reaksi  berkurang  pada  kedua  sisi  pH  optimum,  disebabkan  oleh  protein enzim  dapat  mengalami  denaturasi  akibat  pH  ekstrim  tinggi  atau  rendah.  Hal  ini didukung  oleh  Winarno  (1995)  bahwa  aktivitas  enzim  hanya  pada  pH  tertentu  disebabkan oleh karena enzim mengalami denaturasi, protein enzim memerlukan gugus asam amino yang terionisasikan pada rantai samping yang mungkin aktif hanya pada satu keadaan ionisasi, dan mungkin  juga  substrat  memperoleh  atau  kehilangan  proton  dan  reaktif  dalam  satu  bentuk muatan.
Demikian  pula  halnya  dengan  perlakuan  suhu  yang  dikombinasikan  dengan  pH memperlihatkan  hasil  pengujian  aktivitas  optimum  pada  suhu  60°C  untuk  pH  4.5  dan  5.0, sedangkan untuk pH 5.5 suhu optimumnya adalah 55°C seperti tampak pada gambar 2.
Gambar 2. Histogram pH optimum aktivitas enzim amiloglukosidase dari Aspergillus niger pada suhu yang bervariasi
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 35 °C 40 °C 45 °C 50 °C
55 °C 60 °C 65 °C
A kt iv it as e n zi m (U n it /m l) pH 4.5 pH 5 pH 5.5
Fatmawati Nur, Uji Aktivitas Enzim Amiloglukosidase dari Aspergillus Niger pada… _ 37
Pada  gambar  2  tampak  bahwa  kenaikan  suhu  mengakibatkan  kenaikan  laju aktivitas  yang  kemudian  sampai  suhu  tertentu,  aktivitas  kembali  turun.  Suhu  puncak aktivitas  disebut  suhu  optimum  aktivitas  enzim.  Setelah  melewati  batas  tersebut,  enzim mengalami denaturasi oleh panas sebagaimana sifat protein, seperti yang dikemukakan oleh Page (1985), bahwa pengaruh suhu dapat mengaktifkan enzim, tetapi suhu yang terlalu tinggi dapat merusak enzim tersebut.

## KESIMPULAN
Dari  hasil  pengujian  aktivitas  enzim  amiloglukosidase  dari Aspergillus  niger pada kombinasi suhu dan pH yang bervariasi, didapat kesimpulan sebagai berikut:
1. Aktivitas  maksimal  enzim  amiloglukosidase  dari Aspergillus  niger adalah  pada kombinasi suhu 60 °C dan pH 5.0 sebesar 15.6493 (unit/ml).
2. Aktivitas  minimal  enzim  amiloglukosidase  dari Aspergillus  niger adalah  pada kombinasi suhu 65 °C dan pH 5.5 sebesar 7.9823 (unit/ml).

## DAFTAR PUSTAKA
Dwidjosepoetro, D. (1989), "Pengantar Fisiologi Tumbuhan", Gramedia, Jakarta.
Gaman,  P.M.,  Sherrington,  K.B.  (1992), " Ilmu  Pangan.  Pengantar  Ilmu  Nutrisi  dan Mikrobiologi" , Terjemahan  oleh  :  Mardijati  Gardjito,  Gadjah  Mada  University Press, Yogyakarta.
Hardjo,  S.,  Indrasti,  N.S.,  Bantacut,  T.  (1989), "Biokonversi  :  Pemanfaatan  Limbah Industri Pertanian" , PAU Pangan dan Gizi, IPB, Bogor.
Kertesz,  Z.I.  and  R.I.  Me  Collogen  (1976), "Enzim  Acting  on  Pectin  Subtances" dalam "Advances  in  Carbohydrat  and  Biochemistry" , (Tipson,  R.S.  and  H. Derek, ed), Academic Press, London.
Pelczar,  M.J.  dan  Chan  (1985), "Dasar-dasar  Mikrobiologi  1", Terjemahan  oleh  R.S. Hadioetomo, T. Imas,  S.S. Tjitrosoepomo, S.L.  Angka,  Universitas  Indonesia Press, Jakarta.
Rahman, A. (1992), "Teknologi Fermentasi", Arcan, Jakarta.
——— (1992), "Teknologi Fermentasi Industrial", Arcan, Jakarta.
Smith, I.E. (1993), "Prinsip Bioteknologi", Terjemahan oleh V.F. Sumo,  B.Sumantri, dan Subono, Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.
38 _ Jurnal Teknosains, Volume 12, Nomor 1, Januari-Juni 2018 , hlm. 27 – 3 8
Winarno, F.G. (1995), "Enzim Pangan", Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.
Page,  D.S  (1985), "Prinsip-prinsip  Biokimia  " ,  Terjemahan  oleh  R.  Soendoro, Erlangga, Jakarta.