PEMBUATAN BIOETANOL DARI NIRA AREN ( Arenga pinnata Merr )

## MENGGUNAKAN Saccharomyces cerevisiae
BIOETHANOL PRODUCTION FROM PALM JUICE ( Arenga pinnata Merr ) USING Saccharomyces cerevisiae
Meilani M Manurung*, Gusti Handayani, Netti Herlina Departemen Teknik Kimia, Fakultas Teknik, Universitas Sumatera Utara, Jl. Almamater Kampus USU, Medan 20155, Indonesia
*Email : meilani12manurung@gmail.com

## Abstrak
Bioetanol  merupakan  senyawa  alkohol  yang  diperoleh  dari  proses  fermentasi  biomassa  dengan  bantuan mikroorganisme Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh kecepatan agitasi dan volume starter terhadap  kadar  dan yield bioetanol  yang  dihasilkan  dari  nira  aren  ( Arenga  pinnata  Merr ).  Katalis  yang digunakan adalah Saccharomyces cerevisiae . Variabel-variabel yang diamati antara lain kecepatan agitasi dan  volume  starter  pada  proses  fermentasi.  Tahapan  pertama  adalah  pembuatan  starter  yang  kemudian dilanjutkan  dengan  proses  fermentasi  secara  anaerobik.  Hasil  fermentasi  kemudian  didistilasi  pada temperatur  88 o C.    Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  semakin  tinggi  volume  starter  dan  kecepatan agitasi  maka  kadar  dan yield bioetanol  yang  dihasilkan  akan  semakin  tinggi  hingga  mencapai  titik maksimum  yang  diperoleh  pada  agitasi  100  rpm  dan  volume  starter  35%    sebesar  47,618%  (v/v)  dan 48,1411%. Jika melebihi titik tersebut maka perubahan  kecepatan agitasi dan penambahan volume starter akan menurunkan kadar dan yield etanol yang dihasilkan.
Kata kunci : bioetanol, fermentasi, nira aren, saccharomyces cerevisiae.

## Abstract
Bioethanol  was  an  alcohol  substance  which  can  be  obtained  by  biomass  fermentation  process.  The purpose  of  this  study  was  to  determine  the  effect  of  agitation  and  volume  of  starter  on  yield  and concentration  of  bioethanol  produced  from  palm  juice  (Arenga  pinnata  Merr).  Catalyst  used  was Saccharomyces  cerevisiae.  Observed  variables  were  agitation  and  volume  of  starter  in  anaerobic fermentation. The experiment started with preparation of a starter followed by fermentation process. The product obtained  from  distillation process  at temperature  of  88  °C.  The  results  showed  that the  higher agitation speed and volume of starter, yield and concentration of bioethanol will be higher. The highest concentration and yield obtained on the condition at a agitation of 100 rpm and 35% starter amounted to 47.618% (v/v) and 48.1411%. If it exceed that point, the changes of agitation and the addition of starter did not increase the concentration and yield of ethanol produced.
Keywords : bioethanol, fermentation, palm juice, saccharomyces cerevisiae

## Pendahuluan
Bioetanol  atau  etil  alkohol  (C 2 H 5 OH)  sebagai bahan  bakar  yang  ramah  lingkungan  dan  juga terbarukan  menjadi  perhatian  dunia  dewasa  ini. Hal ini dibuktikan dengan semakin meningkatnya produksi bioetanol dari tahun ke tahun yakni 17,3 juta liter pada tahun 2000, meningkat menjadi 46 juta  liter  di  tahun  2007  dan  diestimasi  akan meningkat  secara  drastis  pada  tahun  2020  yakni sebanyak 125 juta liter [2].
Bahan  baku  utama  pembuatan  bioetanol dengan  proses  fermentasi  pada  dasarnya  berasal dari  glukosa,  pati  dan  lignoselulosa  [1,  26]. Bioetanol  dapat  diproduksi  dari  berbagai  jenis biomassa  seperti  jagung,  gandum,  selulosa,  alga dan  ampas  tebu  yang  mana  bahan  baku  ini berwujud  padatan  [3,  24].  Adapun  bahan  baku cair  yang  pernah  digunakan  sebagai  bahan  baku pembuatan  bioetanol  adalah  nira  kelapa,  nira
nipah  ( Nypa  fructicans ),  dan  nira  aren  ( Arenga pinnata  Merr )  [6,  11, 25].  Kelebihan  bahan  baku cairan  (nira)  adalah  karena  nira  merupakan larutan gula yang dapat langsung memulai proses fermentasi sehingga dapat mempersingkat tahapan produksi etanol [23]. Hal ini berbeda jika bahan baku berasal dari pati dan selulosa, dimana pati  harus  melalui  proses  hidrolisis  untuk  masuk ke  tahapan  fermentasi  gula  sedangkan  selulosa harus dikonversi terlebih dahulu untuk mendapatkan  gula  dengan  bantuan  mineral  asam [14].
Pembuatan  bioetanol  berbahan  baku  gula  dan pati  melalui  proses  fermentasi  dengan  bantuan mikroba Saccharomyces cerevisiae adalah metode yang  paling  umum  dan  sering  digunakan  di industri [2]. Saccharomyces cerevisiae digunakan untuk  memecah  glukosa  dalam  proses  fermentasi
untuk  menghasilkan  kadar  etanol  yang  tinggi  [4, 13].

## Teori
Bioetanol  merupakan  etanol  yang  diperoleh dari  bahan  berbasis  biomasa  atau  sumber  yang terbarukan  seperti  dari  berbagai  tanaman  yang mengandung  karbohidrat,  gula  serta  tanaman berselulosa.  Bioetanol  berwujud  cairan  yang merupakan  hasil  dari  proses  fermentasi  gula dimana  terjadi  perombakan  senyawa  organik dengan melibatkan mikroorganisme [5, 21].
Etanol  atau  etil  alkohol  (C 2 H 5 OH)  memiliki karakteristik  mudah  terbakar,  mudah  menguap, larut dalam air membentuk larutan azeotrop, tidak karsinogenik  dan  tidak  memberikan  dampak pencemaran pada lingkungan yang signifikan [9].
Nira  yang  manis  diperoleh  dari  aren  dengan cara penyadapan. Nira disadap dari tongkol bunga jantan  dapat  menghasilkan  8-12  liter  per  hari dengan 2 kali penyadapan. Nira segar mengandung  gula  11-14%,  abu  0,04%,  protein 0,2%  dan  kadar  lemak  0,02%  [20].  Kandungan gula  yang  cukup  tinggi  pada  nira  aren menyebabkan nira mudah rusak selama penyimpanan.  Hal  ini  disebabkan  karena  adanya peristiwa  fermentasi  yang  dapat  menurunkan kualitas nira [16].
Secara  sederhana  proses  fermentasi  adalah proses  konversi  1  mol  glukosa  menjadi  2  mol etanol  dan  2 mol  karbondioksida  dengan  bantuan enzim.  Reaksi  kimianya  adalah  sebagai  berikut [8] :
C 6 H 12 O 6 2C 2 H 5 OH + 2CO 2
Mikroorganisme yang paling banyak digunakan  untuk  memproduksi  bioetanol  adalah ragi, khususnya Saccharomyces cerevisiae. Saccharomyces  cerevisiae sering  dipilih  untuk produksi  etanol  karena  sangat  baik  dalam melakukan  fermentasi  dan  kemampuannya  untuk tumbuh  dengan  cepat  dibawah  kondisi  anaerobik dan toleransi yang tinggi terhadap etanol [22].

## Metodologi Penelitian
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah nira aren ( Arenga pinnata Merr ), NPK, dan S.cerevisiae . Peralatan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  erlenmeyer, beaker  glass, hemositometer,  refraktometer, autoclave ,  labu leher tiga, hot plate , dan agitator.

## Prosedur  Pembuatan Starter
Sebagai  langkah  pertama,  disterilkan  semua peralatan  yang akan  digunakan  dengan autoclave selama  15  menit pada  suhu  121 o C .  Dipanaskan nira segar  pada  suhu  80 o C.  Nira  didinginkan  hingga suhu  ruangan  kemudian  dimasukkan  satu  oase s.cerevisiae dan  diaduk  hingga  merata.  Starter
didiamkan  pada  konisi  ruangan  selama  48  jam. Selanjutnya dilakukan perhitungan jumlah s.cerevisiae dengan hemositometer.

## Prosedur Fermentasi
Semua  peralatan  yang  akan  digunakan disterilkan  dengan  autoclave  selama  15  menit pada  suhu  121 o C.  Dipanaskan    nira  aren  segar pada  suhu  80 o C.  Kadar  gula  nira  di  analisis dengan refraktometer .  Dicampurkan  nira  aren dengan  larutan  starter  sebanyak  15%  (v/v)  dari total  volume  campuran  850  ml.  Ditambahkan NPK  0,4%  (m/m)  ke  dalam  larutan.  Campuran diaduk  di rotary  shaker dengan  kecepatan agitasi 75  rpm  selama  24  jam  pada  suhu  ruangan. Dimasukkan  hasil  fermentasi  ke  dalam  peralatan distilasi,  kondisi  operasi  diatur  pada  suhu  88 o C. Distilat di tampung dengan erlenmeyer dan diukur volumenya.

## Analisis Produk
Analisis  terhadap  bioetanol  yang  dihasilkan meliputi  analisis  karakteristik  dengan Fourier Transform Infra Red (FTIR), perhitungan densitas, kadar bioetanol, specific gravity (sg), API Gravity dan nilai kalor.
Hasil dan Pembahasan Karakterisasi  FTIR  ( Fourier  Transform  Infra Red ) Etanol Karakterisasi FTIR ( Fourier Transform Infra Red )  etanol  dari  nira  aren  dilakukan  untuk mengidentifikasi  gugus  fungsi  dari  senyawa etanol.  Karakteristik  FTIR  etanol  dapat  dilihat pada gambar 1.
Gambar 1. Spektrum FTIR ( Fourier Transform Infra Red ) Etanol Dari Nira Aren
Data  spektrum  etanol  dengan  mencermati puncak  serapan  gelombang  yang  diperlihatkan dapat  dianalisis  bahwa  pada  bilangan  gelombang 3338,64  cm -1 terdapat  serapan  yang  kuat  dan melebar,  hal  ini  menunjukkan  adanya  interaksi antara molekul  elektronegatif  O dengan  positif  H yang  membentuk  ikatan  hidrogen.  Hal  ini  berarti terdapat  gugus  –OH  dalam  sampel.  Bilangan gelombang  pada  2978,46  cm-1  menunjukkan
adanya ikatan alkana (C-H) yang kuat. Serta pada bilangan gelombang 1043,87 cm -1 terdapat ikatan C-OH.  Maka  dari  hasil  analisis  FTIR  ini  dapat disimpulkan bahwa sampel mengandung etanol.

## Pengaruh Volume Starter dan Agitasi terhadap Kadar Bioetanol
Salah  satu  indikator  keberhasilan  dari  proses fermentasi adalah kadar bioetanol yang dihasilkan. Produk  hasil  fermentasi  selanjutnya  didistilasi. Distilat  kemudian  dianalisis  kadar  bioetanolnya dengan  melakukan  perhitungan  densitas  yang selanjutnya diinterpolasi dalam hubungan konversi densitas dan kadar etanol [19].
Dari  hubugan  densitasi  dan  kadar  etanol, dibuat  kurva  kadar  bioetanol  (%  v/v)  vs  volume starter (% v/v). Kurva dapat dilihat pada gambar 2.

## Gambar  2.  Pengaruh  Volume  Starter  dan Agitasi Terhadap Kadar Bioetanol
Kismurtono  meneliti  bahwa  volume  starter yang  semakin  tinggi  akan  menghasilkan  kadar bioetanol  yang  semakin  tinggi  juga  untuk  waktu fermentasi  24  jam  dengan  menggunakan  bahan baku nira aren dan S.cerevisiae sebagai katalisnya [11].  Hal  ini  didukung  juga  oleh  hasil  penelitian Eka dan Halim, yang menyatakan bahwa semakin banyak persen starter yang dicampurkan ke dalam substrat  maka  jumlah S.cerevisiae juga  akan semakin banyak sehingga glukosa yang dikonversi  menjadi  etanol  juga  akan  semakin meningkat  [7].  Namun  dari  hasil  penelitian  ini diperoleh data bahwa penambahan volume starter melebihi  titik  tertentu  tidak  meningkatkan  kadar bioetanol  yang  dihasilkan.  Hal  ini  disebabkan oleh populasi sel yang tinggi. Kondisi pertumbuhan  dan  metabolisme  pada  populasi  sel yang  tinggi  tidak  diharapkan  karena  akan  terjadi gangguan terhadap akses nutrisi yang diakibatkan keterbatasan  ruang  gerak  sel  [15].  Tingginya populasi  sel  juga  akan  meningkatkan  jumlah karbondioksida  sebagai  produk  sampingan  dan etanol  sebagai  produk  utama.  Dalam  proses fermentasi batch baik  produk  utama  dan  produk samping  akan  terakumulasi  sehingga  menjadi inhibisi bagi pertumbuhan mikroba [17].
Jumlah  sel  dalam  media  fermentasi  sangat mempengaruhi  kadar  bioetanol  yang  dihasilkan, selain  itu  variasi  agitasi  yang  dilakukan  juga menunjukkan  pengaruh  yang  cukup  signifikan. Oktaviani  dkk  melakukan  penelitian  mengenai pengaruh  laju  pengadukan  terhadap  biokonversi bioetanol,  dimana  dari  hasil  penelitiannya menyatakan  bahwa  tujuan  dari  pengadukan adalah  untuk  mencegah  sel  mikroorganisme membentuk  gumpalan  yang  selanjutnya  akan mengganggu  perkembangbiakan  sel  akibat  tidak mendapatkan  makanan  yang  cukup  dari  substrat. Selain itu hasil penelitiannya menunjukkan bahwa kecepatan  pengadukan  berbanding  lurus  dengan kadar bioetanol hingga mencapai titik maksimum, dimana setelah melewati titik tersebut penambahan kecepatan pengadukan akan menurunkan  kadar  bioetanol  yang  dihasilkan.
Jeckson  dkk  meneliti  bahwa  hal  itu  disebabkan oleh  pengadukan  yang  terlalu  cepat  dapat mengganggu metabolisme yeast [10, 18].

## Pengaruh Volume Starter dan Agitasi terhadap
Yield Bioetanol Efisiensi penggunaan substrat untuk menghasilkan  etanol  dinyatakan  dalam yield bioetanol.  Semakin  tinggi  nilai yield ,  maka semakin efisien proses fermentasi tersebut [10].
Pengaruh  volume  starter  dan  agitasi  terhadap yield bioetanol dapat dilihat pada gambar 3.
Gambar  3.  Pengaruh  Volume  Starter  dan Agitasi Terhadap Yield Bioetanol
Kismurtono  meneliti  bahwa  volume  starter yang  semakin  tinggi  akan  mereduksi  gula semakin  cepat  menjadi  bioetanol  sehingga yield bioetanol yang dihasilkan akan semakin tinggi hal ini  akan  menghasilkan  kadar  bioetanol  yang semakin  tinggi  juga  [11].  Namun  dari  hasil penelitian  ini  diperoleh  data  bahwa  penambahan volume  starter  melebihi  titik  tertentu  tidak meningkatkan yield yang  dihasilkan  sejalan dengan  hasil  yang  diperoleh  untuk  kadar bioetanol.
Jumlah  sel  dalam  media  fermentasi  sangat mempengaruhi  konversi  gula  menjadi  bioetanol
dalam penelitian ini, selain itu variasi agitasi yang dilakukan  juga  menunjukkan  pengaruh  yang cukup  signifikan.  Oktaviani  dkk  menyatakan bahwa  kecepatan  pengadukan  berbanding  lurus dengan  kadar  dan yield bioetanol  hingga mencapai  titik  maksimum,  dimana  setelah melewati  titik  tersebut  penambahan  kecepatan pengadukan  akan  menurunkan  kadar  dan yield bioetanol  yang  dihasilkan  [18].    Jeckson  dkk meneliti bahwa  hal  itu disebabkan oleh pengadukan yang terlalu cepat dapat mengganggu metabolisme  yeast  [10].  Hal  yang  sama  diteliti juga  oleh  Kurniawan  dkk  bahwa  waktu  kontak mikroorganisme  dengan  substrat  lebih  cepat sehingga  glukosa  yang  terdapat  pada  substrat tidak termanfaatkan dengan baik [12].

## Kesimpulan
Kesimpulan  yang  diperoleh  bahwa  volume starter  dan  agitasi  berpengaruh  dalam  proses fermentasi.  Semakin  tinggi  volume  starter  dan kecepatan agitasi maka kadar dan yield bioetanol yang  dihasilkan  akan  semakin  tinggi  hingga mencapai  titik  maksimum  pada  perlakuan  agitasi 100  rpm  dan  volume  starter  35%  yaitu  masing- masing  sebesar  47,618  (%  v/v)  dan  48,1411  %. Jika  melebihi  titik  tersebut  penambahan  volume starter  dan  kecepatan  agitasi  akan  menurunkan kadar dan yield bioetanol yang dihasilkan.

## Daftar Pustaka
[1]  Alvira, P., Pejo, E. Tomas., Ballesteros, M.,
Negro,  M.J.,  Pretreatment  Technologies  For An  Efficient  Bioethanol  Production  Process Based On Enzymatic Hydrolysis: A Review. Bioresource  Technology 101  (2009) : 4851- 4861
[2]  Aparicio,  Susana  López.,  Hak,  Claudia., Sundvor,  Ingrid.,  and  Sundseth,  Kyrre.. Understanding effects of bioethanol fuel use on  urban  air  quality:  An  integrative approach. Energy    Procedia 58  (2014)  : 215  –  220
[3]  Cardona,  C.A.,  J.A.  Quintero,  and  I.C.  Paz. Production  of  bioethanol  from  sugarcane bagasse: Status and perspectives.
Bioresource Technology 101 (2010) : 4754– 4766
[4]  Cheng,  Ngoh  Gek.,  Hasan,  Masitah., Kumoro,  Andri  Chahyo.,  Ling,  Chew  Fui., Tham,  Margaret.  Production  of    Ethanol  by Fed-Batch  Fermentation. Pertanika  J.SCi  & Technol 17  (2)  (2009)  :  399-408.  ISSN: 0128-7680
[5]    Hasan, M.H., Mahlia, T.M.I., and Nur, Hadi. A  Review  on  Energy  Scenario  and Suistanable Energy in Indonesia. Renewable and  Suistanable Energy  Reviews  16 : 2316-
2328. (2012)
[6]  Effendi, Dedi Soleh. Prospek Pengembangan  Tanaman  Aren  ( Arenga pinnata  Merr )  Mendukung  Kebutuhan Bioetanol  di  Indonesia. Perspektif  Vol.9, No.1 (2010). Hal. 36-46. ISSN : 1412-8004.
[7]  Eka, Agustinus dan Halim, Amran.
“Pembuatan  Bioetanol  dari  Nira  Siwalan
Secara  Fermentasi  Fese  Cair  Menggunakan Ferminpan”. Jurusan Teknik Kimia. Fakultas Teknik. Universitas Diponegoro. [8]  Haggstrom, Caroline., Rova, Ulrika.,
Brandberg.,  Hodge,  David  B.  Integration  of Ethanol Fermentation With Second Generation Biofuels Technologies (2014)
[9]  Jannah,  Asyeni  Miftahul.  Proses  Fermentasi Hidrolisat  Jerami  Padi  untuk  Menghasilkan Bioetanol. Jurnal Teknik Kimia No. 1, Vol. 17. (2010)
[10]  Jeckson,  Edie.,  Ahmad,  Adrianto.,  dan Muria, Sri Rezeki. Pengaruh Laju Pengadukan  dalam  Pembuatan  Bioetanol dari Limbah Serabut Buah Sawit Menggunakan  Saccharomycess  cerevisiae. JOM Fteknik Volume 1 No.2 (2014) [11]  Kismurtono, Muhammad. Fed-batch Alcoholic  Fermentation  of  Palm  Juice
(Arenga  pinnata  Merr)  :  Influence  of  the
Feeding Rate on Yeast, Yield and Productivity. ISSN : 2049-344 (2012)
[12]  Kurniawan,  R.,  Juhanda,  S.,  Syamsudin,  R., dan  Lukman.,  MA.  Pengaruh  Jenis  dan Kecepatan  Pengadukan  pada  Fermentasi Etanol  Secara  Sinambung  dalam  Bioreaktor Tangki  Berpengaduk  Sel  Tertambat. Jurnal STU 10  November 2011,  ISSN :  1693-1750 Itenas.
[13]  Lee,  Wen  Shiang.,  Chen,  I  Chu.,  Chang, Cheng-Hsiung., Yang, Shang Shyng.
Bioethanol  Production  From  Sweet  Potato by  Co-Immobilization  of  Saccharolytic Molds and Saccharomyces cerevisiae. Renewable Energy 39 (2012) : 216-222.
[14]  Lin,  Yan.,  and  Tanaka,.  Shuzo.  Ethanol Fermentation  from  Biomass  Resources: Current State and Prospects. Appl Microbiol Biotechnol 69 (2006) : 627–64
[15]  Mukhtar,  K.,  Asgher,  M.,  Hussain,  K.,  dan Ziaul-Husnain, S. Comparative study on two comercial strains of s.cerevisiae for optimum  ethanol  productionon  industrial scale. Journal of Biomedicine and biotechnology. (2010)
[16]  Mulyawanti, Ira., Nurdi Setyawan, Andi Nur Alam Syah, Risfaheri. Evaluasi Mutu Kimia, Fisika Dan Mikrobiologi Nira Aren (Arenga Pinnata) Selama Penyimpanan. Jurnal Agritech , Vol. 31, No. 4 (2011)
[17]  Nguyen,  Viet  D.,  Aurensenia,  Joseph., Kosuge,  Hitoshi.,  Tan,  Raymon  R.,  dan
Brondial,  Yolanda.  Vacuum  fermentation Integrated  with  separation  process  for ethanol production. Biochemical Engineering Journal 55 (2011) : 206-214 [18] Oktaviani,  Intan.,  Ahmad,  Adrianto.,  dan
Chairul. Pengaruh Laju Pengadukan Terhadap Biokonversi Reject Nanas Menjadi  Bioetanol. JOM  Fteknik Volume  2 No.1 (2015)
[19]  Perry,  Robert  H  dan  Green,  Don.  Perry’s Chemical  Engineering  Hanbook.  Edisi Keenam. (1958)
[20] Pontoh, Julius., Gunawan, Indriani., Fatimah, Feti.  Analisis  Kandungan  Protein  Dalam Nira Aren. Chem Prog , Vol. 4, No.2 (2011)
[21]  Romdhoni, Machrus Afif. Pembuatan Bioetanol  Darisen  Teh  Hijau  sebagai  Bahan Bakar  Alternatif. JTM Vol.  03.  No.  02 (2014) : 11-19
[22] Shahirah, Mohd Nasir Nor., Gimbun, Jolius., Pang,  Sook  Fun.,  Zakria,  Rossyuhaida Mohd.,  Cheng,  Chin  Kui.,  Chua,  Gek  Kee., dan  Asras,  Mohd  Fazli  Farida.  Influence  of
Nutrient  addition  on  the  bioethanol  yield from  oil  palm  trunk  sap  fermented  by s.cerevisiae. Journal  of  Industrial  and
Engineering Chemistry . 2014
[23]  Tangkuman, Herling D., Rorong, Johnly A., Pandara, Dolfie., Tamuntuan, Gerald.
Produksi Bioetanol dari Nira Aren Menggunakan  Energi  Geothermal. Chem
Prog , Vol. 3, No. 1 (2010)
[24]  Wei,  Ping,  Li-Hua  Cheng,  Lin  Zhang,  Xin- Hua Xu, Huan-lin Chen, and  Gao, Cong-jie.
A  review  of  membrane  technology  for bioethanol  production. Renewable  and Sustainable  Energy  Reviews 30  (2014)  :
388–400
[25]  Wijaya,  I  Made  Anom  Sutrisna.,  Arthawan, I  Gusti  Ketut.,  Sari,  Anis  Novita.  Potensi Nira Kelapa Sebagai Bahan Baku Bioetanol. Jurnal  Bumi  Lestari ,  Vol.  12,  No.1  (2012).
Hal. 85-92
[26] Zheng, Dao-Qiong., Wu, Xue-Chang.,  Tao, Xiang-Lin.,  Wang,  Pin-Mei.,  Ping  Li,  Xiao- Qin  Chi,  Yu-Dong  Li,Qing-Feng  Yan,  And Zhao,Yu-Hua.  Screening  and  Construction
Of  Saccharomyces  Cerevisiae  Strains  with Improved  Multi-Tolerance  and  Bioethanol Fermentation Performance. Bioresource Technology 102 (2011) : 3020–3027