DOI : http://dx.doi.org/10.29244/jhi.12.3.163-169 Tersedia online di http://journal.ipb.ac.id/index.php?jhi
Induksi Kalus Embriogenik Pepaya ( Carica papaya L.) Kultivar Caliso dan Callina
Embryogenic Callus Induction of Carica papaya L. cv. Caliso and Callina
Lolliani 1 , Darda Efendi 2,3* , Dewi Sukma 2
Diterima 06 Juni 2021/Disetujui 3 Desember 2021

## ABSTRACT
Somatic embryogenesis papaya is an alternative way to produce true-to-type plants on a mass scale. The current study aimed to obtain a somatic embryogenesis protocol of Caliso and Callina cultivars in vitro with a combination of plant growth regulator 2,4-D (2,4-dichlorophenoxy acetic acid) and sucrose. The research was conducted at the Tissue Culture Laborato- ry of the Center of Tropical Horticulture Studies, IPB University, from November 2018 to February 2020. The explant used were immature zygotic embryos of Caliso and Callina papaya. The experiment was arranged in a factorial in a completely randomized block design. This study was divided into two experiments: a) concentration optimization of 2,4-D and sucrose for callus induction. The first factor was concentration of 2,4-D consisted of 9.05; 22.6 and 45.2 µM. The second factor was concentration of sucrose consisted of 30 and 60 g L -1 . and b) concentration optimization of 2,4-D for the proliferation of em- bryogenic callus on solid and liquid medium. The first factor was concentration of 2,4-D consisted of 4.52; 6.78 and 9.04 µM. The second factor was culture system (solid and liquid). Papaya callus induction in addition with 2,4-D 9.05 µM and sucrose 30 g L -1 produced 92.50% of callus Caliso and 100% for Callina. The best treatment 2,4-D concentration for embryogenic callus proliferation was 6.87 µM in solid medium for Caliso cultivar, while Callina cultivar used 4.52 µM of 2.4-D in solid medium.
Keywords : 2,4-dichlorophenoxy acetic acid, callus persentage, embryogenic callus, sucrose

## ABSTRAK
Embriogenesis somatik pepaya ( Carica papaya L.) merupakan salah satu cara memproduksi tanaman true to type dalam skala massal. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan protokol embriogenesis somatik pepaya kultivar Caliso dan Callina pada media in vitro dengan kombinasi zat pengatur tumbuh 2,4-D ( 2,4-dichlorophenoxy acetic acid ) dan sukrosa. Penelitian dilakukan di Laboratorium Kultur Jaringan, Pusat Kajian Hortikultura Tropika (PKHT) IPB, Bogor, dari November 2018 hingga Februari 2020. Eksplan yang digunakan adalah embrio zigotik muda ( immature zygotic embryo ) pepaya Caliso dan Callina. Ran- cangan percobaan menggunakan Rancangan Acak Kelompok (RAK) faktorial. Penelitian ini dibagi menjadi dua sub percobaan: a) optimalisasi konsentrasi 2,4-D dan sukrosa untuk induksi kalus embriogenik dengan faktor pertama 2,4-D yang terdiri dari 3 taraf (9.05; 22.6 dan 45.2 µM)  dan faktor kedua sukrosa yang terdiri dari 2 taraf ( 30 dan 60 g L -1 ) dan b) optimalisasi konsentrasi 2,4-D untuk proliferasi kalus embriogenik pada media kultur padat dan cair dengan faktor pertama 2,4-D yang teridiri dari 3 taraf (4.52; 6.78 dan 9.04 µM) dan faktor kedua yaitu media MS yang terdiri dari 2 taraf (padat dan cair). Induksi kalus pepaya dengan penambahan 2,4-D 9,05 µM dan sukrosa 30 g L -1 menghasilkan eksplan berkalus 92.5% (Caliso) dan 100% (Callina). Media terbaik untuk proliferasi kalus embriogenik direkomendasikan 2,4-D 6.78 µM dalam media padat pada kultivar Caliso dan dan 2,4-D 4.52 µM untuk kultivar Callina pada media padat.
Kata kunci: 2,4-dichlorophenoxy acetic acid, kalus embriogenik, persentase kalus, sukrosa
1 Program Studi Pemuliaan dan Bioteknologi Tanaman, Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor
2 Departemen Agronomi dan Hortikultura, Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor Jl. Meranti, Kampus IPB Darmaga, Bogor 16680
3 Pusat Kajian Hortikultura Tropika, Institut Pertanian Bogor Kampus IPB Baranangsiang Jl. Raya Pajajaran, Bogor 16144 E-mail: dardaefendi@gmail.com  (*penulis korespondensi)
J. Hort. Indonesia, 12(3): 163-169 Desember 2021

## PENDAHULUAN
Pepaya ( Carica papaya L.) merupakan buah tropika yang sangat digemari di Indonesia. Pepaya menjadi salah satu buah unggulan yang banyak dikembangkan karena memi- liki banyak manfaat sebagai sumber gizi seperti vitamin A, vitamin C, tinggi gula dan mineral serta enzim proteolitik (Bhattacharya et al. 2002).  Permintaan buah pepaya mening- kat sejalan dengan peningkatan kesejahteraan dan kesadaran masyarakat akan pentingnya kandungan nutrisi buah pepaya terhadap kesehatan. Pepaya memiliki 3 variasi tipe seks yaitu betina, jantan dan hermaprodit (Rimberia et al. 2018). Per- banyakan pepaya pada umumnya dilakukan secara generatif melalui biji. Kendala dalam perbanyakan melalui biji adalah sulit memprediksi tipe seks tanaman pepaya sehingga harus menunggu sekitar 5-6 bulan sampai tanaman berbunga. Petani pepaya biasanya menanam setidaknya 2-3 biji per lubang. Setelah tanaman berbunga dilakukan seleksi tanaman, pepaya hermaprodit dipertahankan, sedangkan pepaya jantan dan bet- ina dibuang. Hal tersebut menyebabkan perbanyakan melalui biji tidak efisien dari segi biaya dan proses budidaya. Selain itu perbanyakan ini menyebabkan terjadinya segregasi sehing- ga sifat yang diwariskan ke generasi berikutnya tidak sama dengan induknya (Al-Shara et al. 2018). Tanaman yang di- hasilkan memiliki variasi tinggi baik ukuran dan kualitas buah maupun ketahanan terhadap patogen (Anandan et al ., 2011). Perbanyakan in vitro dapat menjadi solusi alternatif yang tepat dalam mengatasi kendala penyediaan bibit seragam dan true to type . Induksi embriogenesis somatik merupakan salah satu teknik yang dapat digunakan untuk menghasilkan embrio somatik dalam jumlah banyak, seragam, true to type dan be- bas patogen serta dimanfaatkan juga dalam pemuliaan in vi- tro untuk perbaikan genetik tanaman (Dhekney et al., 2016). Perbanyakan melalui embriogenesis somatik masih memili- ki beberapa kendala diantaranya persentase embrio somatik yang dihasilkan masih rendah serta gagalnya embrio somatik beregenerasi menjadi planlet normal (Kabir et al., 2016). Ke- berhasilan embrio somatik pada pepaya dipengaruhi oleh jenis eksplan, komposisi media dan zat pengatur tumbuh (Malabadi et al., 2011). Pusat Kajian Hortikultura Tropika (PKHT) IPB telah mengembangkan varietas unggul tanaman pepaya antara lain pepaya Caliso dan Callina. Pepaya Caliso merupakan kultivar unggul lokal yang berasal dari Kalimantan dengan kategori buah berukuran kecil (panjang 19.5-21.4 cm) dan Callina merupakan varietas unggul nasional dengan kategori buah berukuran sedang (panjang 23-24 cm) (Fajri et al ., 2021). Tu- juan dari penelitian ini yaitu mendapatkan media induksi dan proliferasi kalus embriogenik dalam pengembangan protokol perbanyakan massal pepaya Caliso dan Callina melalui em- briogenesis somatik.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian dilaksanakan pada bulan November 2018 sampai Februari 2020 di Laboratorium Pusat Kajian Hor- tikultura Tropika (PKHT) Institut Pertanian Bogor. Bahan tanam yang digunakan adalah embrio zigotik yang memili- ki ukuran panjang ± 3 mm dan diameter ± 2 mm (Gambar 1C) dari buah pepaya yang berumur ± 90 hari setelah ante- sis dengan ciri-ciri warna kulit buah hijau (Gambar 1A) dan biji berwarna putih (Gambar 1B) pada pepaya kultivar Cal- lina dan Caliso. Sterilisasi dilakukan dengan merendam biji pepaya dalam larutan Bakterisida Agrept 20WP (bahan ak- tif streptomisin sulfat 20%) dan Fungisida Benlate T-20WP (bahan aktif Benomyl 20% dan Tiram 20%) konsentrasi  0.5 mg L -1 selama 60 menit, kemudian direndam dalam larutan alkohol 70% selama 10 menit. Biji kemudian dibilas dengan aquadest steril, lalu direndam dengan larutan 20% dan 10% NaOCl masing-masing 20 menit dan 30 menit, seterusnya dibilas hingga bersih dengan aquadest steril dan ditiriskan di kertas saring. Pemisahan embrio zigotik dari biji dilaku- kan dengan cara menjepit biji menggunakan pinset dan pisau hingga embrio keluar lalu ditanam pada media ½ MS padat.
Induksi Kalus Embriogenik Pepaya Percobaan dilaksanakan secara terpisah pada dua kul- tivar pepaya yaitu Caliso dan Callina. Rancangan percobaan menggunakan Rancangan Acak Kelompok (RAK) faktorial, dengan faktor pertama yaitu konsentrasi 2,4-D yang terdiri dari 3 taraf (9.05, 22.6 dan 45.2 µM) dan faktor kedua yai- tu konsentrasi sukrosa 2 taraf (30 dan 60 g L -1 ). Terdapat 6 kombinasi perlakuan yang setiap perlakuan diulang 10 kali, setiap ulangan terdiri dari 3 botol kultur, sehingga didapat- kan 180 botol unit percobaan pada masing-masing kul- tivar pepaya. Setiap satu botol kultur ditanam 4 eksplan embrio zigotik. Setiap eksplan sebagai satuan amatan. Ek- splan diinkubasi pada ruangan gelap dengan suhu 25 ºC selama 8 minggu. Variabel yang diamati adalah persen- tase eksplan berkalus, waktu muncul kalus dan tipe kalus.
Proliferasi Kalus Embriogenik Pepaya Tahap proliferasi kalus embriogenik menggunakan ba- han tanaman berupa kalus tipe 3 (kalus embriogenik) dari percobaan 1. Rancangan percobaan yang digunakan yaitu Rancangan Acak Kelompok (RAK) faktorial. Faktor pertama adalah konsentrasi 2,4-D yang terdiri dari 3 taraf yaitu: 4.52, 6.78 dan 9.04 µM. Faktor kedua adalah media MS yang terdiri dari 2 taraf yaitu: MS padat dan MS cair. Terdapat 6 kombi- nasi perlakuan dengan 10 kali ulangan, setiap ulangan terdiri dari 3 botol kultur, sehingga didapatkan 180 botol unit perco- baan. Setiap satu botol kultur ditanam sebanyak 0.030 g kalus remah tipe 3 (kalus remah, putih kekuningan dan agak berair). Kultur media padat diinkubasi pada ruangan gelap dan kultur media cair ditempatkan di atas orbital shaker dengan kece-
patan 80 rpm dan dishaker terus menerus dengan suhu 25ºC. Kultur diinkubasi selama 8 minggu dengan periode subkultur dengan interval dua minggu. Peubah yang diamati adalah bob- ot segar kalus embriogenik dan persentase kalus embriogenik yang membentuk embrio somatik.
Data diolah dengan microsoft excel 2010 dan keragaman menggunakan uji F dengan menggunakan (ANOVA) dengan program Statistical Analysis Software (SAS) versi 9.1. Per- lakuan yang berpengaruh nyata berdasarkan ANOVA diuji lanjut dengan Duncan Multiple Range Test (DMRT). Data non parametrik diuji berdasarkan K-Proportion test menggunakan uji Chi Square .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Induksi Kalus Embriogenik Pepaya Kultivar Caliso dan Callina Eksplan pada 3 sampai 6 hari setelah inisiasi belum membentuk kalus, namun terjadi pembengkakan pada eksplan (Gambar 2A), kemudian eksplan tumbuh dan berkembang membentuk kalus hingga pada 6 minggu setelah tanam (Gam- bar 2B, C, dan D).
Pepaya kultivar Caliso tidak menunjukkan respon waktu inisiasi kalus yang berbeda terhadap perlakuan 2,4-D maupun sukrosa. Inisiasi kalus terjadi 13-15 hari setelah tanam (Gam- bar 3A), dengan persentase eksplan berkalus 57.5-92.5%. Ini- siasi kalus pepaya kultivar Callina, terjadi pada 12–16 hari setelah tanam (Gambar 3B), dengan persentase eksplan ber- kalus 50-100%.
Interaksi 2.4-D dan sukrosa tidak berpengaruh nyata terhadap persentase eksplan berkalus pada pepaya kultivar Caliso (Gambar 4A). Pada pepaya Callina pemberian kon- sentrasi 2.4-D dan sukrosa 30 g L -1 secara signifikan meng - hasilkan persentase eksplan berkalus lebih tinggi yaitu antara 87.5-92.5%, sedangkan pemberian 2,4-D dan sukrosa 60 gL -1 menunjukkan persentase eksplan berkalus lebih rendah yaitu antara 57.5-72.5% (Gambar 4B). Sukrosa berperan sebagai sumber energi dan menjaga potensial osmotik serta konserva- si air di dalam sel. Vale et al. (2018) menyatakan media MS yang mengandung sukrosa 30 g L -1 menginduksi kalus em- briogenik, namun sukrosa 60 g L -1 efektif dalam pendewasaan embrio somatik disebabkan karena adanya cekaman tekanan osmotik dalam media kultur. Peningkatan konsentrasi sukro- sa dari 3%-6% meningkatkan jumlah embrio somatik, namun menurunkan laju proliferasi embrio somatik pada pepaya (Roy et al . 2016). Hasil tersebut sejalan dengan penelitian Soloronzo-cascente et al . (2018) yang menggunakan sukro- sa dengan konsentrasi 30 g L -1 dalam media induksi meng- hasilkan persentase eksplan berkalus lebih tinggi pada pepaya hibrida F1 University of Costa Rica.
Pada pepaya kultivar Callina, 2,4-D dan sukrosa berpen- garuh nyata terhadap persentase eksplan membentuk kalus (Gambar 4B). Penggunaan 2,4-D dalam konsentrasi rendah 9.05 µM dengan sukrosa 30 g L -1 menghasilkan persentase eksplan berkalus yang lebih tinggi pada pepaya Callina den-
gan rerata 100% dibandingkan pada perlakuan 2,4-D dalam konsentrasi tinggi 45.2 µM dan sukrosa 60 g L -1 yaitu rerata 50.8%. Demikian juga dalam penelitian Rajesh et al (2020), media MS yang mengandung 2,4-D 3 mg L -1 menghasilkan eksplan berkalus 83.33% pada pepaya kultivar TNAU CO.8. Aplikasi auksin 2,4-D dengan konsentrasi rendah pada induk- si kalus embriogenik pepaya sangat penting, dibandingkan dengan konsentrasi tinggi yang dapat menyebabkan peru- bahan genetik, variasi somaklonal dan embrio somatik yang dihasilkan tumbuh abnormal sehingga tidak mampu berkem- bang menjadi tanaman normal (Anandan et al. 2012). Pemberian 2,4-D yang dikombinasikan dengan sukrosa 30 g L -1 secara signifikan membentuk eksplan berkalus pada kultivar Caliso dan Callina. Chaudhary and Prakash (2019) menyatakan bahwa, penambahan 2,4-D efektif menginduksi eksplan membentuk kalus pada pepaya kultivar P-7-9. Pembe- rian auksin 2,4-D dalam media berperan dalam menginduksi gen yang respon terhadap stres yang berkontribusi mengakti- vasi sinyal transduksi sehingga sel dapat melakukan pemro- graman kembali ekspresi gen yang diperlukan untuk mengin- duksi kalus embriogenik (Feher 2015). Hal tersebut didukung oleh penelitian tanaman Arabidopsis, bahwa setengah dari faktor transkripsi diinduksi dari 2,4-D selama inisiasi embrio- genesis somatik (Gliwicka et al . 2013).  Ekspresi banyak gen yang respon terhadap stres pada kalus pepaya mendukung dalam menginduksi embriogenesis somatik (Jamaluddin et al. 2017). Pepaya kultivar Caliso dan Callina membentuk 4 tipe kalus (Tabel 1) yaitu: tipe 1: kalus kompak dan kuning ke- coklatan, tipe 2: kalus kompak dan putih seperti kapas, tipe 3: kalus remah, putih kekuningan dan agak berair, tipe 4: kalus remah, kuning kecoklatan dan agak berair. Kalus tipe 3 dan tipe 4 merupakan kalus embriogenik. Kalus tipe 3 memiliki struktur remah, agak berair pada kalus, mudah dipisahkan serta sebagian kalus berstruktur globular (Gambar 5C). Sel- sel embriogenik memiliki ciri-ciri sitoplasma berukuran ke- cil serta padat, nukleus berukuran besar, vakuola berukuran kecil, mengandung beberapa lipid dan pati. Sedangkan kalus non-embriogenik selnya berukuran besar, vakuola memanjang dengan sitoplasma sedikit dan beberapa butir pati (Malabadi et al . 2011). Heringer et al . (2013) menyatakan morfologi kalus embriogenik pada pepaya memiliki struktur kalus remah, war- na kuning dan laju pertumbuhan kalus lebih rendah dibanding- kan pada kalus yang non-embriogenik. Estrella-Maldonado et al. (2017), kalus embriogenik ditandai dengan kalus globu- lar, dinding sel tebal, sitoplasma padat, nukleus menonjol dan karakteristik sel-sel meristematik serta pro-embriogenik.
Gambar 1. Buah, benih, dan embrio pepaya. A) pepaya muda umur ± 3 bulan setelah antesis, B) Biji pepaya berwarna putih dan C) Panjang embrio zigotik ± 3 mm, diameter embrio zigotik ± 2 mm.
Gambar 2. Pertumbuhan dan perkembangan kalus. A) eksplan embrio zigotik 3 hari setelah tanam, B) 2 minggu setelah tanam (Bar 2 mm), C) 4 minggu setelah tanam (Bar 2 mm), dan D) 6 minggu setelah tanam (globular) (Bar 2 mm).
Gambar 3.  Waktu kemunculan kalus pada pepaya A) Caliso dan B) Callina karena pengaruh 2,4-D dan sukrosa. Angka yang diikuti oleh huruf yang sama pada grafik batang yang sama tidak berbeda nyata pada uji DMRT (α = 0.05). Bar±S.E.
0 20 40 60 80 100 120 9,05 22,6 45,2 Per sen ta se K al us (%) 2,4-D sukrosa 30 sukrosa 60 A a a a b c c 0 20 40 60 80 100 120 9,05 22,6 45,2 Per sen ta se k al us (%) 2,4-D sukrosa 30 sukrosa 60 B Gambar 4.  Persentase eksplan berkalus pepaya Caliso (A) dan Callina (B) karena pengaruh 2,4-D dan sukrosa. Angka yang diikuti oleh huruf yang sama pada grafik batang yang sama tidak berbeda nyata pada uji DMRT (α = 0.05). Bar±S.E. B A A C B C D 10 12 14 16 18 20 9,05 22,6 45,2 W akt u munc ul ka lu s (H ari ) 2,4-D sukrosa 30 sukrosa 60 A ab ab a a ab b 10 12 14 16 18 20 9,05 22,6 45,2 W akt u munc ul ka lu s 2,4-D sukrosa 30 sukrosa 60 B
Tabel 1. Pengaruh komposisi media terhadap tipe kalus pada eksplan embrio zigotik pepaya kultivar Caliso dan Callina
2,4-D Sukrosa Persentase Tipe Kalus (%) Caliso Callina Tipe 1 Tipe 2 Tipe 3 Tipe 4 Tipe 1 Tipe 2 Tipe 3 Tipe 4 22.6 µM 30 g L -1 20,2 9,17 61,5 9,2 32,7 15,9 45,1 6,2 22.6 µM 60 g L -1 44,4 23,4 16 16 57,5 6,8 28,8 6,8 45.2 µM 30 g L -1 37,1 13,3 37,1 12,4 22 5,9 66,9 5,1 45.2 µM 60 g L -1 56,5 17,4 13 13 73,8 1,6 21,3 3,3 9.05 µM 30 g L -1 35,1 7,2 45 12,6 39,2 15,8 41,7 3,3 9.05 µM 60 g L -1 36,8 12,6 29,9 20,7 67,4 1,1 28,1 3,4 P-value <0.0001** <0.0001**
Keterangan: Hasil analisis dengan uji Chi-Square, *berbeda nyata pada P<0.05, **berbeda sangat nyata pada P<0.01, tn= tidak nyata. Tipe 1: kalus kompak dan kuning kecoklatan, b) Tipe 2: kalus kompak dan putih seperti kapas, c) Tipe 3: kalus remah, putih kekuningan dan agak berair dan d) Tipe 4: kalus remah, kuning kecoklatan dan agak berair.
Gambar 5. Tipe-tipe kalus pepaya. A) Tipe 1: kalus kompak dan kuning kecoklatan (Bar 5 mm), B) Tipe 2: kalus kompak dan putih seperti kapas (Bar 5 mm), C) Tipe 3: kalus remah, putih kekuningan dan agak berair (Bar 5 mm) dan D) Tipe 4: kalus remah, kuning kecoklatan dan agak berair (Bar 5 mm).
Gambar 6. Bobot segar kalus embriogenik pepaya. A) Caliso dan B) Callina pada perlakuan 2,4-D dan media kultur. Angka yang diikuti oleh huruf yang sama pada grafik batang yang sama tidak berbeda nyata pada uji DMRT (α = 0.05). Bar±S.E.
C D A B D C 0 1 2 3 4 5 Bo bo t s eg ar K al us Em br io ge ni k ( g) Perlakuan 2.4-D (µM) dan metode kultur Subkultur 1 Subkultur 2 Subkultur 3 Subkultur 4 Padat Cair a b b b b b 0 1 2 3 4 4,52 6,87 9,04 4,52 6,87 9,04 Bo bo t s eg ar k al us em br io ge ni k ( g) Perlakuan 2.4-D (µM) dan metode kultur Subkultur 1 Subkultur 2 Subkultur 3 Subkultur 4 Cair Padat A B
Hasil analisis Chi-Square pada kultivar Caliso dan Cal- lina menunjukkan 2,4-D dan sukrosa berpengaruh nyata terh- adap persentase tipe kalus. Persentase maksimum kalus tipe 3 pada pepaya kultivar Caliso diperoleh pada 2,4-D 22.6 µM dan sukrosa 30 g L -1 sebesar 61.5%. Pada Callina kalus tipe 3 terbanyak diperoleh pada perlakuan 2,4-D 4.5 µM dan sukro- sa 30 g L -1 dengan 66.9% (Tabel 1). Aplikasi 2,4-D dan sukro- sa 30 g L -1 secara signifikan menghasilkan rata-rata kalus tipe 3 yang merupakan kalus embriogenik dengan beberapa mem- bentuk struktur globular (Gambar 5c).

## Proliferasi Kalus Embriogenik Pepaya Kultivar Caliso Dan Callina
Secara umum semua perlakuan menunjukkan pertumbu- han dan perkembangan biomassa kalus embriogenik mening- kat dari subkultur 1 sampai subkultur 4 pada pepaya kultivar Caliso dan Callina. Interaksi 2,4-D dan media kultur pada pe- paya kultivar Caliso tidak berpengaruh nyata terhadap bobot segar kalus embriogenik pada subkultur 1-3, namun berpen- garuh nyata pada subkultur 4. Pada Subkultur 4 bobot segar kalus tertinggi diperoleh pada kombinasi perlakuan 2,4-D 6.87 µM dan media padat yaitu 4.60 g per kultur (Gambar 6a).
Interaksi 2,4-D dan media kultur pada pepaya Callina tidak pengaruh nyata terhadap bobot segar kalus embriogenik (Gambar 6b). Gambar 6b memperlihatkan bobot segar kalus embriogenik pada media padat dengan rerata maksimal hanya mencapai 1.06 g per kultur. Hasil pengamatan menunjukkan media padat cenderung menghasilkan bobot segar kalus lebih tinggi dibandingkan media cair.
Pengamatan visual pada proliferasi kalus embriogenik pada pepaya kultivar Caliso dan Callina menunjukkan pada semua konsentrasi 2,4-D dalam media padat menghasilkan embrio somatik fase globular yang juga dapat berkembang membentuk embrio somatik fase jantung, torpedo dan kotile- don. Embrio somatik yang terbentuk berbeda-beda jumlah dan kualitasnya pada setiap kombinasi perlakuan pada pepaya kultivar Caliso dan Callina. Pengamatan visual menunjukkan perbedaan respon pertumbuhan dan perkembangan embrio somatik disebabkan karena perbedaan genotipe dan eksplan kalus embriogenik yang tidak seragam. Media padat lebih banyak menghasilkan bobot basah kalus yang membentuk embrio somatik pada fase globular. Pada media cair lebih se- dikit proliferasi kalus, hal tersebut disebabkan kalus embrio- genik lebih banyak mengalami proses pendewasaan menjadi embrio somatik pada subkultur pertama. Peneliti sebelumnya menyatakan media cair lebih tepat diaplikasikan pada taha- pan pendewasaan kalus embriogenik menjadi embrio somatik pada pepaya Maradol Roja (Soloronzo-cascente et al. 2018).

## KESIMPULAN
Dari penelitian ini didapatkan protokol induksi kalus embriogenik dari eksplan embrio muda ( immature zygotic embryo ) yang sama antara pepaya Caliso dan Callina, yaitu dengan menggunakan media dasar MS yang diperkaya den-
gan 2,4-D 9.05 µM dan sukrosa 30 g L -1 . Protokol proliferasi kalus embriogenik berbeda antara papaya Caliso dan Callina, yaitu pada media MS padat yang diperkaya dengan 2,4-D 6.78 µM untuk kultivar Caliso dan 2,4-D 4.52 µM untuk kultivar Callina.

## DAFTAR PUSTAKA
Al-Shara, B., R.M. Taha, K. Rashid. 2018. Biotechnological methods and limitations of micropropagation in papa- ya (Carica papaya L .) production: A review. J. Anim Plant Sci. 28(5): 1208-1226.
Anandan,  R.,  D.  Sudhakar,  P.  Balasubramanian, A.  Gutieır - rez-Mora. 2012. In vitro somatic embryogenesis from suspension cultures of Carica papaya L. Sci. Hortic. 136: 43-49. Doi: 10.1016/j.svienta.2012.01. 003.
Anandan, R., S. Thirugnanakumar, D. Sudhakar, P. 2011.  In vitro organogenesis and plantlet regeneration of ( Cari- ca papaya L.). J. Agric. Sci. Technol. 7(5): 1339-1348.
Bhattacharya, J., S.S. Khuspe, N.N. Renukdas, S.K. Rawal. 2002. Somatic embryogenesis and plant regeneration from immature embryo explant of papaya ( Carica pa- paya L. Washington and Honey Dew). Indian J. Exp. Biol. 40: 624-627.
Chaudhary,  K.,  J.  Prakash  2019.  Effect  of  2,4-D  and  piclo - ram on somatic embryogenesis in Carica papaya var. P-7-9. Plant Tissue Cult Biotechnol. 29(1): 25-32.
Dhekney, S.A., R. Kandel, D.R. Bergey, V. Sitther, K. Soori- nathasundaram, R.E. Litz. 2016. Advances in papa- ya biotechnology. Biocatal. Agric. Biotechnol. Doi: 10.1016/j.bcab.2016.01.004.
Estrella-Maldonado, H., L. Posada-Perez, M.C. Talave- ra, P.F. Barredo, R. Gomez-Kosky, J.M. Santamaria. 2017. The expression of   CpAUX1/LAXs and most of the Long-distance CpPINs genes increases as  the somatic embryogenesis process develops in C. papaya cv. “Red Maradol”. J. Plant Growth Regul.
Fajri, R., D. Efendi, D. Dinarty. 2021. Sterilisasi dan pertum- buhan in vitro tunas aksilar pepaya kultivar Callina dan Caliso. J. Agron. Indonesia. 49(1):75-81.
Feher, A. 2015. Somatic embryogenesis. Stress-induced re- modeling of plant cell fate. Biochim. Biophys. Acta - Gene Regul. Mech. 1849(4), 385–402. Doi: 10.1016/j. bbagrm.2014.07.005.
Gliwicka, M., K. Nowak, S. Balazadeh, B. Mueller-Roeber,
M.D. Gaj. 2017. Extensive modulation of the transcrip- tion factor transcriptome during somatic embryogene- sis in Arabidopsis thaliana . PLoS One.  8(7): e69261. Doi: 10.1371/journal.pone.0069261
Heringer, A.S., E.M. Vale, T. Barroso, C. Santa-Catarina, V. Silveira. 2013. Polyethylene glycol effects on somatic embryogenesis of papaya hybrid UENF/CALIMAN 01 seeds. Theor. Exp. Plant Physiol. 25(2): 116-124.
Jamaluddin, N. D., N.M. Noor, Hoe-Han, Goh. 2017. Ge- nome-wide  transcriptome  profiling  of Carica papa- ya L. embryogenic callus. Physiol. Mol. Biol. Plants. 23(2):357–368. Doi: 10.1007/s 12298-017-0429-8.
Kabir, Md.H., Md.Z. Rahman, A.N.K. Mamun. 2016. Somat- ic embryogenesis and plant regeneration from zygotic embryo in Carica papaya L., cv. Red Lady. Science publishing group. 4(6): 45-50.
Malabadi, R.B., S.V. Kumar, G.S. Mulgund, K. Nataraja. 2011. Induction of somatic embryogenesis in Pa- paya ( C. papaya ). Res. J. Biotechnol. 2(5): 40-55.
Rajesh, C.K., D. Sudhakar, K.K., Kumar, C. Kavitha, G. Karthikeyan, K. Soorianathasundaram. 2020. So- matic embryogenesis in papaya ( Carica papaya L. cv. TNAU Papaya CO.8). Article no. CJAST.55158.
39 (3): 18-26. Doi:10.9734/CJAST/2020/v39i33051.
Rimberia, F.K., F.K. Ombwara, N.N. Mumo, E.M. Ateka. 2018. Genetic improvement of papaya ( Carica pa- paya L.). Advances in Plant Breeding Strategies: Fruits. Doi: 10.1007/978-3-319-91944-7_21.
Roy, P.K., S.K. Roy, L. Hakim, A.N.K. Mamun. 2016. So- matic Embryogenesis and plant regeneration of papaya ( Carica papaya L. cv. Shahi).  J. Nucl Sci Technol . 25:
1-2.
Solorzano-Cascante, P., N. Shanches-Chiang, V.M. Jimenez. 2018. Explant type, culture system, 6-Benziladenine, Meta-Topolin and encapsula- tion  affect  indirect  somatic  embryogenesis  and  re - generation in Carica papaya L. Frontiers Plant Sci. 9: 1769. Doi: 10.3389/fpls.2018.01769.
Vale E., M. Reis., R.S. Passamani, L.Z.C. Santa-Catarina, V. Silveira. 2018. Morphological analyses and variation in carbohydrate content during the maturation of so- matic embryos of Carica papaya . Physiol. Mol. Biol. Plants. 24: 295–305. Doi: 10.1007/s12298-017-0501- 4.