Majalah Farmaseutik Vol. 15 No. 1: 16-21
ISSN-p : 1410-590x
ISSN-e : 2614-0063
Efek  Ekstrak  Kombinasi  Herba Andrographis  paniculata (Burm.f) Ness dan Daun Gynura Procumbens (Merr) Dalam Penangkapan Senyawa Radikal Bebas
Effect  of Andrographis  paniculata (Burm.f)  Ness  Herbs  and Gynura Procumbens (Merr) Leaves Extracts Combination in Free-Radical Scavenging Activity
Kurnia Rahayu Purnomo Sari * , Nofran Putra Pratama, Margaretha Kurniasari Program  Studi  Farmasi  (S-1)  Fakultas  Kesehatan  Universitas  Jenderal  Achmad  Yani Yogyakarta Corresponding author: Kurnia Rahayu Purnomo Sari: Email: kurniarahayupurnamasari@gmail.com ABSTRAK
Pengembangan tanaman obat sebagai alternatif pengobatan perlu dukungan dari segi scientific evidence untuk meningkatkan kepercayaan masyarakat akan khasiat dan untuk menjamin keamanan penggunaannya. Penelitian terbaru tentang Andrographis paniculata (Burm.  f)  Ness  (sambiloto)  dan Gynura  procumbens (Lour.)  Merr  (sambung  nyawa) menunjukkan bahwa kombinasi kedua ekstrak tersebut berpotensi untuk dikembangkan menjadi agen antihiperglikemia salah satunya melalui mekanisme aksi sebagai antioksidan. Penelitian  ini  mengambil  peran  pada  pengujian  aktivitas  antioksidan  kombinasi  ekstrak larut etanol herba sambiloto dan daun sambung nyawa secara in vitro . Metode ekstraksi dilakukan  dengan  maserasi.  Pengujian  aktivitas  penangkapan  radikal  bebas  dilakukan dengan  metode  DPPH.  Hasil  uji  aktivitas  antioksidan  menunjukkan,  bahwa  kombinasi ekstrak larut etanol herba sambiloto dan daun sambung nyawa 50:50 memiliki nilai IC 50 paling baik yaitu 91,418 µg/mL, kombinasi ekstrak larut etanol herba sambiloto dan daun sambung nyawa 75:25 memiliki nilai IC 50 117,059 µg/mL, dan kombinasi kombinasi ekstrak larut etanol herba sambiloto dan daun sambung nyawa 25:75 memiliki IC 50 paling lemah yaitu  142,277  µg/mL.  Ketiga  perbandingan  kombinasi  tersebut  lebih  lemah  aktivitas antioksidannya  jika  dibandingkan  dengan  standar  vitamin  C  yang  memiliki  IC 50 3,546 µg/mL.  Analisis  statistik  menggunakan  ANOVA  satu  jalan  diperoleh  adanya  perbedaan bermakna pada aktivitas antioksidan ketiga kelompok perbandingan.
Kata  kunci: Andrographis  paniculata (Burm.f)  Ness, Gynura  procumbens (Lour.)  Merr, antioksidan, DPPH

## ABSTRACT
Development of medical plants as an alternative treatment needs support in terms of scientific evidence to increase public confidence in its efficacy and to ensure the safety of its use.  Recent  research  on Andrographis  paniculata (Burm.f)  Ness  dan Gynura  procumbens (Lour.)  Merr  show  that  the  combination  of  these  two  extracts  has  a  potential  to  be developed  into  antihyperglycemic  agent,  through  the  mechanism  of  action  as  an antioxidant. The aim of this study was to evaluate the antioxidant effect of these two extracts combination. Extraction was done by maceration method. Testing of free radical capture activity was carried out by the DPPH method. The results of the antioxidant activity test showed  that  the  combination  of  soluble  ethanol  extract  of A.  paniculata herbs  and G. procumbens leaves  50:50  had  the  best  IC 50 value  of  91.418  µg/mL,  the  combination  of
soluble  ethanol  extract  75:25  had  IC 50 value  117,059  µg/mL,  and  the  combination combination of soluble ethanol extract 25:75 had the weakest IC 50 of 142,277 µg/mL. The three comparisons of the combination were weaker in antioxidant activity compared to the standard vitamin C which had IC 50 3,546 µg/mL. Statistical analysis using one-way ANOVA obtained significant differences in antioxidant activity of the three comparison groups.
Keyword : Andrographis  paniculata (Burm.f)  Ness, Gynura  procumbens (Lour.)  Merr, antioxidant, DPPH
PENDAHULUAN Radikal  bebas  merupakan  molekul yang tidak stabil dan sangat reaktif. Jumlah radikal  bebas  yang  berlebihan  di  dalam tubuh  berperan  penting  pada  kerusakan jaringan dan timbulnya penyakit degeneratif pada organisme hidup (Soeksmanto  dkk.,  2007).  Salah  satu penyebab  tingginya  jumlah  radikal  bebas adalah kurangnya antioksidan dalam tubuh. Antioksidan  merupakan  senyawa  yang mampu  memberikan  efek  menangkal  atau menstabilkan  radikal  bebas  (Winarsih, 2007). Sumber antioksidan banyak ditemukan  didalam  tumbuh-tumbuhan, seperti  herba Andrographis paniculata
(Burm.f) Ness (sambiloto) dan daun Gynura procumbens (Lour.)  Merr  (sambung nyawa).  Herba  sambiloto  dan  daun sambung  nyawa  diketahui  mengandung berbagai  macam  senyawa  fenolik  dan flavonoid yang berkhasiat sebagai antioksidan.  Kandungan  flavonoid  total pada  ekstrak  larut  etanol  herba  sambiloto adalah  sebesar  4,64±0,05% b / b sedangkan kandungan  flavonoid  total  pada  ekstrak larut etanol daun sambung nyawa sebesar 5,91±0,09% b / b . Selain itu, hasil penelitian Sari  dkk  (2014)  juga  mengungkapkan bahwa ekstrak larut etanol herba sambiloto mengandung fenolik total
sebesar 5,38±0,05% b / b dan kadar fenolik total pada ekstrak  larut  etanol  daun  sambung  nyawa adalah 7,60±0,13% b / b (Sari dkk., 2014). Kandungan  flavonoid  dengan  gugus fenolik        pada      kedua     ekstrak      dapat
memberikan  aksi  yang  mirip  yaitu perannya sebagai antioksidan sehingga ada kemungkinan  efek  antioksidan  dari  kedua kombinasi  ekstrak  menjadi  lebih  besar. Pemberian  antioksidan  diketahui  dapat menghentikan pembentukan radikal bebas pada  penderita  DM,  mengurangi  stres oksidatif, dan menurunkan ekspresi TNF- α (Widowati,  2010).  Hal  ini  didukung  oleh hasil  penelitian  Coskun  dkk . (2004)  yang menyatakan  bahwa  flavonoid  dapat berperan  dalam  mengatur  penurunan kadar  glukosa  darah  dan  meningkatkan perbaikan  distribusi  sel  beta  Langerhans pankreas dengan kemungkinan mekanisme terkait  kemampuannya  dalam  mengikat superoksida  sehingga  disfungsi  endotel pada  DM  dapat  diperbaiki  melalui fosforilasi oksidatif di dalam mitokondria. Atas dasar hasil penelitian sebelumnya,  maka  penelusuran  spesifik terkait  aktivitas  antioksidan  kombinasi ekstrak  larut  etanol  herba  sambiloto  dan daun  sambung  nyawa  perlu  dilakukan untuk  memperkuat  informasi  khasiat  dari kombinasi  kedua  ekstrak  tersebut  apabila diberikan  dalam  bentuk  kombinasi.
Sehingga melalui penelitian ini, diharapkan akan  diperoleh  bukti  pendukung  sebagai dasar pengembangan khasiat kedua ekstrak tersebut apabila diberikan secara kombinasi.

## METODOLOGI
Alat
Alat  utama  yang  digunakan  dalam penelitian ini antara lain  rotary  evaporator
(IKA®  RV8),  Spektrofotometer  UV-Vis (Genesys® 10S), dan mikropipet (Eppendorf® Research plus). Bahan Bahan  pembuatan  ekstrak  adalah herba  sambiloto ( Andrographis  paniculata (Burm.f)  Ness),  daun  sambung  nyawa
( Gynura  procumbens (Lour.)  Merr)  yang diperoleh dari Moyudan Sleman Yogyakarta, dan etanol 70% (teknis). Bahan untuk  uji  aktivitas  antioksidan  adalah standar  vitamin  C  (Sigma  Chemicals  Co.),
DPPH  (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl)  dari Sigma  Chemicals  Co.  dan  metanol pro analysis dari E. Merck.
Jalannya Penelitian
Proses  preparasi  ekstrak  sambiloto  dan sambung nyawa Sampel  uji  herba  sambiloto  dan sambung nyawa dideterminasi di Departemen  Biologi  Farmasi,  Fakultas Farmasi,  Universitas  Gadjah  Mada.  Herba sambiloto  dan  daun  sambung  nyawa  yang telah  dikeringkan  kemudian  diserbuk.
Serbuk herba Sambiloto (1022,2 gram) dan daun  Sambung  Nyawa  (1164,6  gram) diekstraksi dengan metode maserasi secara terpisah menggunakan pelarut etanol 70% (perbandingan  1:10).  Proses  maserasi dilakukan pada suhu kamar dan dilakukan pengadukan  secara  berkala.  Setelah diremaserasi dua kali, filtrat yang diperoleh dikumpulkan  dan  kemudian  dievaporasi hingga diperoleh ekstrak kental.
Pengujian  aktivitas  penangkapan  radikal bebas DPPH
Pengujian  kemampuan  kombinasi ekstrak  dalam  aktivitas  penangkapan radikal  bebas  DPPH  dilakukan  dalam  tiga macam seri kombinasi ekstrak sambiloto:sambung  nyawa  (75:25;  50:50; 25:75) yang kemudian dari tiap kombinasi tersebut  dibuat  dalam  berbagai  variasi konsentrasi. Kontrol positif yang digunakan adalah  larutan  Vitamin  C  dengan konsentrasi  5  ppm,  10  ppm,  15  ppm,  20
ppm,  25  ppm,  dan  30  ppm.  Dari  masing- masing  larutan  kemudian  direaksikan dengan  DPPH  dan  diinkubasi  selama  30 menit lalu dibaca serapannya menggunakan Spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang maksimal yaitu 516 nm. Aktivitas penangkapan radikal bebas DPPH  oleh  kombinasi  ekstrak  sambiloto dan sambung nyawa dikalkulasi sebagai % inhibisi  dan  kemudian  dinyatakan  dalam IC 50 ,  yaitu  konsentrasi  yang  dibutuhkan sampel  uji  untuk  menangkap  50%  radikal bebas DPPH.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Dalam  penelitian  ini,  dari  proses ekstraksi, diperoleh ekstrak kental sambiloto  dan  sambung  nyawa    sebanyak 100,53  gram  untuk  ekstrak  sambiloto  dan 100,69 gram untuk ekstrak sambung nyawa yang  kemudian  dihitung  rendemennya. Hasil rendemen untuk ekstrak larut etanol herba  sambiloto  adalah  9,83%  sedangkan rendemen  ekstrak  larut  etanol  daun sambung nyawa adalah 8,64%. Karakteristik ekstrak yang digunakan pada penelitian ini sesuai dengan Tabel I. Selanjutnya dilakukan analisis kuantitatif terhadap kemampuan kombinasi  ekstrak  herba  sambiloto  dan daun sambung nyawa secara in vitro dalam meredam  radikal  bebas  DPPH.  Metode  ini merupakan  metode  pengujian  aktivitas antioksidan  suatu  sampel  yang  paling banyak digunakan (Alam et al ., 2012). Pada penelitian  ini,  digunakan  tiga  jenis kombinasi  ekstrak  herba  sambiloto  dan daun sambung nyawa yaitu (ekstrak herba sambiloto:ekstrak  daun  sambung  nyawa)
75:25;  50:50;  25:75.  Vitamin  C  digunakan sebagai  senyawa  pembanding.  Hasil pengujian  terhadap  daya  antioksidan vitamin  C  (Gambar  1).  Sedangkan  hasil pengujian  aktivitas  antioksidan  pada sampel ekstrak kombinasi (Gambar 2).
Dari Tabel II dapat dilihat bahwa daya peredaman  kombinasi  ekstrak  etanol sambiloto  dan  sambung  nyawa  kombinasi 50:50   (IC 50 =     91,418   µg/mL)    memiliki
aktivitas  antioksidan  yang  lebih  kuat dibandingkan   dengan   ekstrak   kombinasi 75:25  (117,060  µg/mL)  dan  ekstrak kombinasi  25:75  (142,277  µg/mL).  Hasil analisis  statistik  terhadap  hasil  IC 50 ketiga kombinasi ekstrak menunjukkan hasil yang berbeda  bermakna  untuk  tiap  kombinasi ekstrak.  Dari  hasil  ini  dapat  dikatakan bahwa  ekstrak  kombinasi  50:50  termasuk dalam golongan antioksidan kuat walaupun masih  nilainya  masih  jauh  dari  nilai senyawa Vitamin C sebagai kontrol positif,
yaitu  3,546  µg/mL.  Ekstrak  kombinasi 75:25 termasuk dalam golongan antioksidan sedang dan ekstrak kombinasi 25:75 termasuk dalam golongan antioksidan  sedang.  Perbandingan  daya antioksidan  antara  kontrol  positif  dan ekstrak  kombinasi  terlihat  sangat  besar karena  kontrol  positif  yang  digunakan, yaitu vitamin C, merupakan senyawa murni dan tunggal. Akan tetapi dengan hasil daya antioksidan ekstrak kombinasi 50:50 yang sudah  masuk  dalam   kategori   Kuat,  maka
Gambar 1. Grafik Hubungan Antara Kombinasi Ekstrak Sambiloto (S) dan Sambung nyawa (SN) dengan Persen Aktivitas Antioksidannya
Tabel I. Identitas Ekstrak dan Hasil Uji Organoleptis Ekstrak Kental Parameter Sambiloto Sambung Nyawa Identitas ekstrak Nama ekstrak Ekstrak larut etanol sambiloto Ekstrak larut etanol sambung nyawa Nama latin tanaman asal Andrographis paniculata (Burm.f) Ness Gynura procumbens (Lour.) Merr. Bagian tanaman yang digunakan Herba Daun Nama Indonesia tanaman Sambiloto Sambung nyawa Senyawa penanda Andrografolid Kuersetin Uji organoleptik ekstrak Warna Hijau kecoklatan Hijau pekat Bau Khas Khas Bentuk/konsistensi Kental, lengket Kental Rasa
Sangat pahit Pahit 0,000 2,000 4,000 6,000 8,000 10,000 12,000 0 10 20 30 40 Akt iv ita s An tio ksi d an (% ) Konsentrasi Ekstrak (µg/mL) Kombinasi S:SN (75:25) Kombinasi S:SN (50:50)
KombinasiS:SN (25:75)
dapat  dikatakan  bahwa  kombinasi  kedua ekstrak  dapat  dikembangkan  lebih  lanjut sebagai senyawa antioksidan alami. Penelitian  lanjutan  perlu  dilakukan untuk menguji daya antioksidan kombinasi kedua  ekstrak  tersebut  apabila  diberikan secara in vivo sehingga dapat diperoleh data yang relevan apabila sampel tersebut telah masuk ke dalam tubuh dan dimetabolisme. Selain  itu,  pengujian  aktivitas  antioksidan dengan  metode  yang  berbeda  juga  perlu dilakukan untuk mengkaji lebih luas terkait mekanisme  kombinasi  kedua  ekstrak sebagai agen antioksidan.

## KESIMPULAN
Kombinasi  ekstrak  etanol  herba sambiloto ( Andrographis paniculata (Burm.
f.) Ness) dan daun sambung nyawa ( Gynura procumbens (Lour.) Merr) dengan perbandingan  50:50  menunjukkan  daya antioksidan tertinggi dibandingkan dengan kombinasi  lain  dengan  nilai  IC 50 91,418 µg/mL.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kami  ucapkan  kepada Fakultas  Kesehatan  Universitas  Jenderal Achmad  Yani  Yogyakarta  yang  telah mendanai penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Alam Md. N., Bristi, N. J., dan Rafiquzzaman, Md.  2012.  Review  on  in  vivo  and  in vitro methods evaluation of antioxidant activity. Saudi Pharmaceutical Journal . 21: 143 – 152. Coskun, O.,  Kanter,  A.,  Korkaz  dan  Oter,  S.
Gambar 2. Grafik Hubungan Antara Konsentrasi Vitamin C dengan Persen Aktivitas Antioksidannya
Tabel II. Nilai IC 50 Vitamin C, Ekstrak Kombinasi S:SN (75:25), Ekstrak Kombinasi S:SN (50:50), dan Ekstrak Kombinasi S:SN (25:75) Sampel IC 50 (µg/mL) Tingkatan aktivitas antioksidan dengan metode DPPH Sangat Kuat (IC 50 <50 µg/mL) Kuat (IC 50 50- 100 µg/mL) Sedang (IC 50 101-150 µg/mL) Lemah (IC 50 >150 µg/mL) Vit C 3,546 √ S:SN 75:25 117,060 √ S:SN 50:50 91,418 √ S:SN 25:75 142,277 √ 0 10 20 30 40 50 60 0 1 2 3 4 Ak ti vi ta s Antiok si da n (%) Konsentrasi Vitamin C (µg/mL) y = 9196.3x - 2176.7 R² = 0.9363
2004. Quercetin, A Flavonoid Antioxidant,  Prevent  and  Protects Streptozotocin  Induced  Oxidative Stress  and  Beta  Cell  Damage  in  Rat Pancreas. Pharmacol.  Res. 51:117-
123.
Sari,  K.R.P.,  Nugroho,  A.E.,  dan  Sudarsono.
2015. Effect of Herbal Combination of Andrographis  paniculata (Burm.f) Ness and Gynura procumbens (Lour.) Merr  ethanolic  extracts  in  alloxan- induced hyperglycemic rats. International Food Research Journal. 22(4):1332-1337. Soeksmanto, A., Hapsari, Y. & Simanjuntak, P. 2007. Kandungan Antioksidan pada Beberapa  Bagian  Tanaman  Mahkota Dewa, Phaleria  macrocarpa (Scheff)
Boerl.  (Thymelaceae). Biodiversitas . 8(2):92-95. Widowati,  W.  2010.  Potensi  Antioksidan sebagai Antidiabetes. Jurnal Kedokteran Maranatha . 7. Winarsi  H.,  2007.  Antioksidan  Alami  dan
Radikal  Bebas.  Penerbit  Kanisius.
Yogyakarta. Indonesia.