Uji Stabilitas Protein Salep Kombinasi Ikan Gabus ( Channa striata )  dan  Ekstrak  Etanol  Daun  Sirih  ( Piper  betle L.)

## Menggunakan Metode Kjeldahl
(Stability Test of Ointment Protein Combination Snakehead Fish ( Channa striata ) and Ethanol Extract Leaves
( Piper betle L.) Using Kjeldahl Method)

## MOHAMAD ANDRIE*, WINTARI TAURINA, MAYA WIDYA ASTUTI WULANDARI
Fakultas Farmasi, Universitas Tanjungpura, Pontianak, Indonesia.
Diterima 3 Desember 2019, Disetujui 30 Agustus 2021
Vol. 19, no. 2 JURNAL ILMU KEFARMASIAN  INDONESIA, Oktober 2021,  hlm. 147-153 ISSN 1693-1831
*Penulis korespondensi: Email: andrie@pharm.untan.ac.id
Abstract: The  endemic  snakehead  ﬁ sh  ( Channa  striata )  supposed  to  speed  up  wound  healing. Antibacterial properties of green betel leaf ( Piper betle L.) are well known. Wound healing necessitates moist circumstances and prolonged medication contact. Such the fact that ointment fat-based preparation that can moisturize skin or wound area due to extended contact with the skin, increasing absorbance and eﬀ ectiveness. Fish protein concentrate  high-protein concentrate obtained by eliminating fat and water from ﬁ sh. One way that can used is freeze drying. Using Kjeldahl method, this study intends investigate protein  stability  of  combination  freeze  dry  ointment  extract  of  snakehead  ﬁ sh  ( Channa  striata )  and ethanol extract green betel leaf ( Piper betle L.). The data was analyzed using the  SPSS version 25 app. On day 28, average protein content of freeze dry ointment and a combination of freeze dry ointment in aqueous phase and ethanol extract of green betel leaf was 6.321 % and 6.630 %, respectively, indicating substantial diﬀ erence in protein content. As result, the freeze dry ointment including aqueous phase and ethanol extract of green betel leaf more stable and has larger protein content than the freeze dry ointment containing snakehead ﬁ sh extract.
Keywords : snakehead ﬁ sh, green betel leaf, freeze dry, ointment, Kjeldahl method.
Abstrak: Ikan  gabus  ( Channa  striata )  secara  endemik  dipercaya  dapat  mempercepat  proses penyembuhan luka. Daun sirih hijau ( Piper betle L.) memiliki aktivitas sebagai antibakteri. Penyembuhan luka membutuhkan kondisi yang lembab dan kontak obat yang lebih lama. Salep merupakan sediaan berbahan dasar lemak serta dapat melembabkan kulit atau area luka karena kontaknya yang lebih lama terhadap  kulit  sehingga  absorbansi  dan  efektivianya  meningkat.  Konsentrat  protein  ikan  merupakan produk yang dihasilkan dengan cara menghilangkan lemak dan air, sehingga menghasilkan konsentrat protein yang tinggi. Freeze drying merupakan salah satu metode yang dapat digunakan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui stabilitas kadar protein dalam sediaan salep kombinasi freeze dry ekstrak ikan gabus ( Channa striata ) dan ekstrak etanol daun sirih hijau ( Piper betle L.) menggunakan metode Kjeldahl. Data dianalisis menggunakan  aplikasi SPSS versi 25. Terdapat perbedaan signiﬁ kan kadar protein salep freeze dry dengan salep kombinasi freeze dry fase air dan ekstrak etanol daun sirih hijau dengan rata-rata kadar protein pada hari ke 28 adalah 6,321% dan 6,630%, sehingga dapat disimpulkan salep kombinasi freeze dry fase air dan ektrak etanol daun sirih hijau lebih stabil dengan kadar protein yang lebih tinggi dibanding salep freeze dry ekstrak ikan gabus.
Kata kunci: ikan gabus, sirih hijau, freeze dry , salep, metode Kjeldahl .
148  ANDRIE ET AL. Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
sel bakteri (10) . Pada kadar tinggi fenol menyebabkan koagulasi  protein  dan  sel  membran  sitoplasma mengalami  lisis (11) .  Hasil  penelitian  sebelumnya  uji aktivitas  antibakteri  terhadap  salep  ekstrak  etanol daun sirih hijau ( Piper betle L.) dengan konsentrasi 5%  menunjukkan  konsentrasi  sebanding  dengan kontrol  positif  (gentamicin),  dengan  indikasi  lama kesembuhan  luka  tidak  berbeda  signifikan  yaitu sebesar 6,00±0,71 hari (12) .
Berdasarkan aktivitas yang dimiliki ikan gabus ( Chana striata ) sebagai agen penyembuh luka maka perlu ditambahkan antibakteri alami yang diharapkan dapat  meningkatkan  efektivitasnya,  salah  satunya adalah antibakteri alami dari tanaman sirih hijau ( Piper betle L.) yang dikembangkan menjadi suatu sediaan farmasi untuk  meningkatkan  penggunaannya dalam  bentuk  sediaan  salep  kombinasi.  Namun, tanaman  sirih  hijau  ( Piper  betle L.)  memiliki kandungan senyawa fenol yang menurut literatur dapat mendenaturasi protein (10) . Sehingga perlu dilakukan uji stabilitas kadar protein ikan gabus ( Chana striata ) yang  dikombinasikan  dengan  tanaman  sirih  hijau dalam  sediaan  salep,  didukung  dengan  kelebihan salep  dibanding  bentuk  sediaan  lain,  dimana  salep merupakan sediaan berbahan dasar lemak serta dapat melembabkan kulit atau area luka karena konaknya yang lebih lama terhadap kulit sehingga absorbansi dan efektivianya meningkat (13) .
Salep  merupakan  sediaan  farmasi  yang  sering digunakan untuk penyembuhan luka. Salep merupakan sediaan  semisolid  berbahan  dasar  lemak  ditujukan untuk  kulit  dan  mukosa.  Salep  digunakan  untuk pengobatan lokal pada kulit, melindungi kulit pada luka agar tidak terinfeksi serta dapat melembabkan kulit (13) .
Ketidakstabilan  suatu  sediaan  farmasi  dapat dideteksi melalui perubahan sifat ﬁ sika, kimia serta penampilan  dari  suatu  sediaan  farmasi.  Besarnya perubahan  kimia  sediaan  farmasi  ditentukan  dari laju  penguraian  obat  melalui  hubungan  antara  ada atau tidaknya penurunan kadar obat (14) . Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui stabilitas kadar protein dalam  sediaan  salep  kombinasi freeze  dry fase  air ekstrak  ikan  gabus  ( Channa  striata )  dan  ekstrak etanol daun sirih hijau ( Piper betle L.). Untuk menguji protein  dalam  sediaan  salep  kombinasi  dilakukan uji  penetapan kadar terhadap protein menggunakan metode Kjeldahl. Metode Kjeldahl digunakan untuk menganalisis  kadar  protein  kasar  dalam  bahan makanan secara tidak langsung, karena yang dianalisis dengan uji ini adalah kadar nitrogennya (15) .

## PENDAHULUAN
IKAN gabus ( Channa striata ) merupakan salah satu jenis ikan buas yang hidup di air tawar maupun air payau yang banyak ditemui di sungai, rawa, danau dan  saluran-saluran  air  hingga  ke  sawah-sawah (1) . Popularitas  ikan  gabus  ( Channa  striata )  sebagai agen terapeutik yaitu berkaitan dengan kepercayaan masyarakat akan khasiatnya dalam mengobati luka, mengurangi rasa sakit, memulihkan energi pada orang tua  dan  pemulihan  diri  dari  persalinan normal  atau operasi (2) .
Kadar  protein  ikan  gabus  mencapai  25,5% dibandingkan  protein  ikan  lainnya,  albumin  ikan gabus cukup tinggi mencapai 6,22% dan daging ikan gabus mengandung mineral seng dengan kadar 1,74 mg/100 gram (2) . Penelitian sebelumnya membuktikan salep kombinasi fase air-minyak ekstrak ikan gabus 10%  memiliki  efektivitas  penyembuhan  luka  akut stadium  II terbuka  dengan  nilai AUC  874,901%  x hari (3) .  Pemanfaatan  hasil  samping  berbasis  protein terus dikembangkan, salah satunya adalah konsentrat protein ikan (KPI). Konsentrat protein ikan merupakan produk yang dihasilkan dengan cara menghilangkan lemak  dan  air,  sehingga  menghasilkan  konsentrat protein yang tinggi (4) .
Freeze drying merupakan salah satu metode yang dapat digunakan. Freeze drying dapat menghasilkan produk dengan mutu relatif lebih tinggi dibandingkan dengan  pengeringan  lain.  Hasil  produk  dari freeze drying memiliki  struktur  yang  kaku  akibat  proses sublimasi, sehingga tidak mengerut pada saat kering, dan  saat  rehidrasi  kondisinya  sama  dengan  bentuk segarnya (5) .  Penelitian  sebelumnya  membuktikan pengeringan  dengan  menggunakan  metode freeze dryer terlihat bahwa pengeringan pada hari pertama dan kedua kandungan protein sampel yang dihasilkan mengalami kenaikan yaitu hari pertama sebesar 4,11% dan hari kedua 4,42% (6) .
Daun  sirih  hijau  digunakan  dalam  pengobatan tradisional  sebagai  obat  kumur,  penyegar  mulut, pengobatan luka, antibakteri, antijamur, antioksidan, dan mengurangi pembentukan plak gigi (7) . Daun sirih merupakan  bahan  alam  yang  memiliki  kandungan aktif  seperti  tanin,  minyak  atsiri,  flavonoid,  dan fenol yang mempunyai kemampuan untuk membantu proses  penyembuhan  luka (8) .  Daun  sirih  hijau  juga mengandung  saponin  yang  memacu  pembentukan kolagen, yaitu protein struktur yang berperan dalam proses reepitelisasi (9) . Daya antibakteri minyak atsiri daun sirih hijau disebabkan kandungan senyawa fenol dan  turunannya  yang  dapat  mendenaturasi  protein
Vol. 19, 2021
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia  149

## BAHAN DAN METODE
BAHAN. Bahan yang digunakan dalam penelitian ini, terbagi menjadi beberapa kelompok, antara lain bahan untuk ekstraksi seperti simplisia daun sirih hijau dan etanol  96%.  Bahan  pembuatan  sediaan  salep  yakni ekstrak  daun  sirih  hijau,  adeps  lanae  (Brataco®), dimethyloldimethyl hydantoin (Clorogreen®), metil paraben,  dan  propil  paraben.  Bahan  dalam  analisis seperti  asam  borat  p.a  (Merck®),  asam  klorida  p.a (Merck®), asam sulfat pekat p.a (Merck®), aquadest, natrium hidroksida p.a (merck®), copper (II) sulfat p.a (Merck®), natrium sulfat p.a (Merck®).
Alat. Alat yang digunakan dalam penelitian ini, terbagi menjadi beberapa kelompok, antara lain alat pembuatan  ekstrak  ikan  gabus  seperti  panci  yang telah dimodiﬁ kasi, spatula, termometer dan kompor. Alat  pembuatan  sediaan  seperti  seperangkat  alat gelas, penangas air (Memmert®), timbangan analitik (Precisa),  sudip,  sendok  tanduk,  wrapping  plastic, mortir, stamper, dan pot salep. Alat yang digunakan dalam  analisis  seperti  seperangkat  alat  Kjeldahl (Buchi).
METODE.  Ekstraksi  Ikan  Gabus. Sebanyak 3  kg  ikan  gabus  di  bersihkan  bagian  kepala  serta isi  perutnya  dan  dikukus  dengan  kisaran  suhu  60 ℃  sampai  70  ℃ di  dalam  panci  selama  30  menit. Kemudian daging ikan gabus di bungkus dengan kain katun dan di masukkan ke dalam alat press hidrolik, dilakukan pengepresan dengan tekanan tinggi untuk mengambil ekstrak fase air ikan gabus. Ekstrak fase air  ikan  gabus  yang  telah  di  dapat  dimasukkan  ke dalam tabung reaksi, kemudian ekstrak fase air ikan gabus disentrifugasi selama 60 menit pada kecepatan 6000  rpm,  lapisan  atas  yang  mengandung  minyak dipisahkan, dan diambil fase air ekstrak ikan gabus. Fase air ekstrak ikan gabus kemudian di freeze dry untuk mendapakan konsentrat protein murni (16) . Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Sirih Hijau. Pengolahan  daun  sirih  hijau  dilakukan  dengan mencuci dengan air yang bersih dan mengalir lalu daun dipisahkan  dari  batangnya,  kemudian  dikeringkan dengan  cara  diangin-anginkan  dan  terlindung  dari sinar  matahari  secara  langsung  untuk  menghindari rusaknya zat kimia yang terkandung dalam simplisia akibat  panas  sinar  matahari (17,18) .  Tujuan  dari pengeringan  adalah  untuk  mengurangi  kadar  air dalam  simplisia  sehingga  dapat  disimpan  dalam waktu yang lebih lama. Selain itu pengeringan juga mencegah terjadinya reaksi enzimatik. Setelah kering daun  sirih  hijau  diserbukkan  dengan  menggunakan blender . Penyerbukan dilakukan untuk memperluas
permukaan simplisia sehingga pelarut dengan mudah menyerap ke dalam simplisia sehingga senyawa aktif yang tertarik lebih maksimal (17,18) .
Maserasi dilakukan dengan merendam simplisia kedalam  pelarut  etanol  96%,  sampai  terendam seluruhnya.  Perendaman  pelarut  dilakukan  hingga bening dengan pengadukan dan penggantian pelarut selama  3x24  jam,  kemudian  disaring  dengan kertas penyaring. Ekstrak hasil maserasi atau ﬁ ltrat yang  dihasilkan,  ditampung  dan  diuapkan,  untuk memisahkan  pelarutnya.  Penguapan  dilakukan dengan menggunakan panci yang telah dimodiﬁ kasi menyerupai rotary evaporator pada suhu 40 °C, sampai pelarut habis menguap, sehingga didapatkan ekstrak kental.  Ekstrak  kental  yang  diperoleh  kemudian ditimbang dan dihitung nilai rendemen (17,18,19) . P embuatan Salep Kombinasi Fase Air Ekstrak Ikan Gabus ( Channa striata ) dan Eksrak Etanol Daun  Sirih  Hijau  ( Piper  betle L.). Formula pembuatan salep yaitu:
R/ Fase Air Ikan Gabus 40% Ekstrak Sirih Hijau 5% Propil Paraben 0,02% Metil Paraben 0,18% DMDM Hidantoin 1% Propilenglikol qs Adeps Lanae
ad 100%
Pembuatan sediaan salep dengan melebur basis disuhu  70˚C,  basis  kemudian  digerus  didalam lumpang  sambil  digerus  bersama  ekstrak  etanol daun sirih hijau hingga homogeny. Freeze dry fase air  ekstrak  ikan  gabus  dilarutkan  kedalam  air  dan ditambahkan  DMDM  Hidantoin.  Dilarutkan  metil dan propil paraben kedalam propilenglikol. Kemudian campurkan semua bahan satu persatu hingga homogen. Sediaan salep yang telah dibuat diberi label tanggal pembuatan dan disimpan dalam lemari khusus dengan suhu yang terjaga (30 ˚C dengan kelembaban 75%) (20) . Dilakukan pengukuran kadar pada hari ke 0, 3, 7, 14, 21, dan 28 menggunakan metode Kjeldahl (21,22,23) . Analisis Hasil. Stabilitas kadar  protein  sediaan salep kemudian diukur pada hari ke 0, 3, 7, 14, 21, 28. Kadar protein kemudian diukur menggunakan metode Kjeldahl. Metode Kjeldahl terdiri dari 3 tahapan yaitu destruksi,  destilasi  dan  titrasi.  Kadar  yang  didapat kemudian  dianalisis  menggunakan  aplikasi  SPSS, kemudian  dibandingkan kadar protein  dari hari per hari  menggunakan One  Way ANOVA.  Kemudian dibandingkan  kadar  protein  pada  hari  ke  28  untuk melihat ada atau tidaknya perbedaan signiﬁ kan kadar salep  freeze  dry  dan  salep  kombinasi  Freeze  dry ekstrak ikan gabus dan ektrak etanol daun sirih.
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
150  ANDRIE ET AL.
Hasil Analisis. Pengujian stabilitas dilakukan untuk melihat kadar pada sediaan salep pada waktu tertentu. Uji stabilitas sediaan salep dilakukan selama 28 hari, dimana kadar protein pada salep diukur pada hari ke 0, 3, 7, 14, 21, 28. Pengujian ini dilakukan untuk melihat stabilitas kadar protein didalam salep. Salep disimpan didalam  lemari  dengan  suhu  dan  kelembaban  yang terjaga (30 ˚C, 75%).
Pengukuran kadar protein dilakukan menggunakan metode Kjeldahl, dimana metode ini sering digunakan untuk mengukur kadar protein dengan melihat Atom N. Dengan mengalikan hasil analisis tersebut dengan angka konversi 6,25 yang merupakan angka konversi untuk  albumin  dimana  6,25  setara  dengan  0,16  g nitrogen per gram protein (15) . Rangkaian alat Kjeldahl diperlihatkan pada Gambar 3.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  Ekstraksi  Ikan  Gabus. Fase  air  ekstrak ikan gabus yang didapat sebanyak 394 mL. Setelah dilakukanproses freeze  dry didapat  fase  air  ekstrak ikan gabus yaitu sebanyak 24,6 g.
Hasil Ekstrak Etanol Daun Sirih Hijau . Daun sirih hijau diekstraksi menggunakan metode maserasi. Dan  rendemen  ekstrak  daun  sirih  yang  didapatkan sebanyak 30,632%.
Pembuatan Salep Kombinasi Fase Air Ekstrak Ikan Gabus ( Channa striata ) dan Eksrak Etanol Daun Sirih Hijau ( Piper betle L.). Salep yang telah jadi  kemudian  dimasukkan  kedalam  lemari  dengan suhu  dan  kelembaban  yang  terjaga,  suhu  yang digunakan didalam adalah 30 ˚C dengan kelembaban 75%.  Hasil  salep  dan  tempat  penyimpanan  salep diperlihatkan pada Gambar 1 dan 2.
(a)                                   (b)
Gambar  1.  (a)  Salep  kombinasi  freeze  dry  ekstrak  ikan gabus  dan  ekstrak  etanol  daun  sirih,  (b)  Salep  freeze  dry ekstrak ikan gabus.
Gambar 2. Lemari penyimpanan salep.
Gambar 3. Rangkaian alat Kjeldahl.
Pada hari ke 28 kadar rata-rata protein dalam salep freeze dry adalah 6,321% dan pada salep kombinasi adalah 6,630% dengan selisih perbedaan kadar sebesar 0,309%. Hasil penurunan kadar protein diperlihatkan pada Tabel 1.
Penurunan kadar protein ini diduga dapat disebabkan oleh lamanya penyimpanan dan suhu yang digunakan, menurut  hasil  penelitian  Eminingtyas  (2006),  nilai kadar protein selama penyimpanan pada suhu ruang mengalami penurunan karena mengalami degradasi akibat aktivitas enzim, degradasi proteindari molekul kompleks menjadi molekul-molekul sederhana seperti asam amino, amoniak dan unsur-unsur nitrogen yang lain,  senyawa  ini  pada  umumnya  mudah  menguap sehingga terjadi pengurangan nilai total nitrogen (N) yang terukur pada pengukuran kadar protein (24) .
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia  151

## Vol. 19, 2021
Kadar protein sampel yang sudah diukur menggunakan metode Kjeldahl kemudian dibandingkan hari per hari menggunakan aplikasi SPSS, kemudian dibandingkan kadar pada hari ke-28 untuk melihat perbedaan kadar pada  masing-masing  sampel.  Penerimaan  hipotesis jika nilai p<0,05, maka Ha diterima yang artinya ada perbedaan secara signiﬁ kan antara kadar protein salep freeze dry dan salep kombinasi, dan Ho ditolak yang artinya tidak ada perbedaan secara signiﬁ kan antara kadar protein salep freeze dry dan salep kombinasi. Hasil  pengukuran  kadar  protein  didalam  salep kemudian  diuji  menggunakan  aplikasi  SPSS versi  25.  Hasil  uji  normalitas  pada  sediaan  salep freeze  dry menunjukkan  bahwa  data  yang  didapat terdistribusi normal (p>0,05). Selanjutnya dilakukan uji Homogenity of Variances, didapatkan bahwa hasil data  kadar  protein  sediaan  salep freeze  dry adalah homogen 0,061 (p>0,05).
Analisis data dilanjutkan dengan uji parametrik yaitu One Way ANOVA karena data telah memenuhi syarat yaitu terdistribusi normal dan homogen. Hasil uji  parametrik  menunjukkan  bahwa  mulai  terjadi penurunan  signiﬁ kan  kadar  salep  Freeze  Dry  pada hari ke 14. Penurunan kadar protein ini diduga dapat disebabkan  oleh  adanya  aktivitas  mikroorganisme. Menurut hasil penelitian Andayani (2011), semakin lama  penyimpanan  maka  kadar  protein  semakin menurun, hal ini disebabkan oleh proses proteolitik dan lepolitik menjadi substansi yang bisa dimanfaatkan oleh  bakteri  misalnya  energi,  pada  mekanisme perubahan tersebut biasanya akan menghasilkan air dan secara otomatis konsentrasi produk protein akan menurun (25) .
Tabel 1. Graﬁ k penurunan kadar protein.
Hasil uji normalitas pada sediaan salep kombinasi menunjukkan bahwa data yang didapat terdistribusi normal  (p>0,05).  Selanjutnya  dilakukan  uji Homogenity  of  Variances ,  didapatkan  bahwa  hasil data  kadar  protein  sediaan  salep  kombinasi  adalah homogen  0,356  (p>0,05). Analisis  data  dilanjutkan dengan uji parametrik yaitu One Way ANOVA karena data telah memenuhi syarat yaitu terdistribusi normal dan homogen.
Hasil uji parametrik menunjukkan bahwa mulai terjadi  penurunan  signiﬁ kan  kadar salep kombinasi pada hari ke 7. Penurunan kadar protein ini diduga dapat  disebabkan  oleh  lamanya  penyimpanan  dan suhu yang digunakan. Selanjutnya dilakukan uji T- test Independent untuk melihat ada atau tidak perbedaan signiﬁ kan pada kadar salep di hari 28. Kadar protein rata-rata salep freeze dry pada hari ke 0 adalah 7,714% sedangkan  kadar  protein  rata-rata  salep  kombinasi adalah  7,607%  dengan  selisih  kadar  protein  salep freeze dry dan salep kombinasi pada hari ke 0 adalah 0,107%.
Perbedaan kadar protein pada hari ke 0 ini diduga dapat  disebabkan  oleh  senyawa  fenol  yang  ada didalam  ekstrak  sirih,  yang  dapat  mempengaruhi kadar protein. Mekanisme antibakteri senyawa fenol dalam  membunuh  mikroorganisme  yaitu  dengan mendenaturasi  protein  sel.  Ikatan  hidrogen  yang terbentuk  antara  fenol  dan  protein  mengakibatkan struktur  protein  menjadi  rusak.  Ikatan  hidrogen tersebut akan  mempengaruhi  permeabilitas  dinding sel dan membran sitoplasma sebab keduanya tersusun atas protein. Permeabilitas dinding sel dan membran sitoplasma  yang  terganggu  dapat  menyebabkan
Keterangan: Salep FD: salep freeze dry ekstrak ikan gabus.
Salep kombinasi: salep kombinasi freeze dry ekstrak ikan gabus dan ekstrak etanol daun sirih. tanda (*) menandakan terjadi penurunan signiﬁ kan.
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
ketidakseimbangan makromolekul dan ion dalam sel sehingga sel menjadi lisis (26) .
Sedangkan  pada  hari  ke  28  kadar  rata-rata protein  dalam  salep freeze  dry adalah  6,321%  dan pada salep kombinasi adalah 6,630% dengan selisih perbedaan kadar sebesar 0,309%. Setelah dilakukan uji T- test Independent terdapat perbedaan signiﬁ kan dengan  nilai  sig-2  tailed  <0,05  ,  perbedaan  kadar pada hari ke 28 dengan kadar salep kombinasi lebih tinggi  daripada  salep freeze  dry .  Jika  dilihat  dari stabilitasnya  salep Freeze  dry mulai  mengalami penurunan sigiﬁ kan di  hari ke 14, sedangkan salep kombinasi  di  hari  ke-7.  Namun,  jika  dilihat  kadar pada  hari  ke  28,  salep  kombinasi  lebih  mampu mempertahankan kadar protein. Hal ini diduga dapat disebabkan  sirih  mengandung  senyawa  tanin  yang dapat  membentuk  ikatan  silang  yang  stabil  dengan protein dan biopolimer lain seperti selulosa dan pektin. Bila terikat pada protein, senyawa tanin merupakan penghambat enzim yang kuat sehingga tidak mudah terdegradasi.
Menurut Manitto (1992), senyawa- senyawa tanin sejak dahulu digunakan untuk mengubah kulit hewan menjadi kedap air sehingga menjadi lebih awet (zat penyamak  kulit)  sehingga  peruraian  ikatan  peptida protein  pada  ikan  oleh  enzim  proteolitik  bakteri akan  dihambat (27) .  Penyebab  lainnya  diduga  karena konsentrasi ekstrak daun sirih yang digunakan dapat meningkatkan  efek  antibakteri  pada  salep  namun konsentrasinya  belum  berpengaruh  besar  terhadap denaturasi protein.
Hasil penelitian yang telah dilakukan oleh Kusuma (2010)  membuktikan  semakin  tinggi  konsentrasi ekstrak  daun  sirih  yang  digunakan  maka  semakin besar daya hambat antibakterinya (28) . Menurut hasil penelitian Pradan (2017) zona hambat minimal bakteri Staphylococcus aureus dan Salmonella typhi terbentuk pada konsentrasi 20% ekstrak etanol daun sirih hijau ( Piper  betle L.) (29) .  Pada  penelitian  Bustanussalam (2015) konsentrasi ekstrak daun sirih yang memiliki efek  antibakteri  yang  paling  efektif  yaitu  pada konsentrasi  25%  dengan  cara  maserasi,  sedangkan cara reﬂ uks yaitu pada konsentrasi 20% (30) .

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan, maka  dapat  disimpulkan  kadar  rata-rata  salep kombinasi freeze  dry fase  air  ekstrak  ikan  gabus ( Channa  striata )  dan  ekstrak  etanol  daun  sirih hijau  ( Piper  betle L.)  pada  hari  ke 0,  3,  7,  14,  21, 28  adalah  masing-masing  sebesar  7,607%, 7,566,  7,475%,  7,277%,  6,980%,  6,630% dan  terdapat  perbedaan  signifika n  antara
s al ep  kon tr ol   d a n  s a l ep  kombi na s i   pa d a hari  ke  28  dengan  melihat  nilai sig-2  tailed <0,05,  dimana  kadar  protein  rata-rata  salep freeze dry pada  hari  ke  28  sebesar  6,321%  sedangkan salep  kombinasi  sebesar  6,630%.  sehingga dapat  disimpulkan  salep  kombinasi freeze  dry fase  air  dan  ektrak  etanol  daun  sirih  hijau  lebih stabil  dengan  kadar  protein  yang  lebih  tinggi dibanding  salep freeze  dry ekstrak  ikan  gabus.

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Ulandari, A.  D.,  Kurniawan  dan A.S.  Putri.  Potensi protein ikan gabus dalam mencegah kwashiorkor pada balita  di  provinsi  Jambi.  Universitas  Jambi.  Jambi. 2011. p. 6.
2.  Fitriyani, E. dan Deviarni, I.M. Pemanfaatan ekstrak albumin ikan gabus ( Channa  striata ) sebagai bahan dasar cream penyembuh luka. Jurusan Ilmu Kelautan dan  Perikanan,  Politeknik  Negeri  Pontianak.  2013. 09(03):166- 174.
3.  Andrie, M.  Sihombing, D. Efektivitas sediaan salep yang mengandung ekstrak ikan gabus ( Channa striata ) pada proses penyembuhan luka akut stadium II terbuka pada tikus jantan galur wistar. Pharm Sci Res ISSN 2407- 2354. 2017. 4(2):88-101.
4.  Riewpassa FJ, Santoso J, Trilaksani W. Karakterisasi sifat fungsional kosentrat protein telur ikan cakalang ( Katsuwonus  Pelamis ).  Jurnal  Ilmu  Dan Teknologi Kelautan Tropis. 2013. 5(2):299-310.
5.  Fitriyani N, Hintono A, Pramono YB. Sifat fungsional whole egg hasil freeze drying dengan umur telur yang berbeda.  Jurnal Aplikasi  Teknologi  Pangan.  2017. 6(3):1-4.
6.  Yulvianti  M,  Ernayati  W,  Tarsono, Alfian  MR. Pemanfaatan ampas kelapa sebagai bahan baku tepung kelapa tinggi serat dengan metode freeze drying . Jurnal Integrasi Proses. 2015. 5(2).
7.  Fannani MZ, Nugroho T. Pengaruh salep ekstrak etanol daun sirih ( Piper Betle ) terhadap penyembuhan luka iris pada tikus putih jantan ( Rattus Norvegicus ). JKKI.
2014. 6(1):19-26.
8.  Mun’im A, Azizahwati, Fimani A. Pengaruh pemberian infusa  daun  sirih  merah  ( Piper  cf.  fragile ,  Benth) secara  topikal  terhadap  penyembuhan  luka  pada tikus  putih  diabet.  Hibah Awal  DRPM  Universitas Indonesia.  No  Kontrak:  2512/H2.R12/PPM.01 SumberPendanaan/2010. Depok: UI; 2010.
9.  Vikash C, Shalini T, Verma NK, Singh DP, Chaudhary SK, Asha R. Piper betle : phy-tochemistry, traditional use & pharmaco-logical activity- a review.  International Journal of Pharmaceutical Research and Development (IJPRD). 2012. 4(4):216-223.
10.  Novita  W.  Uji  aktivitas  antibakteri  fraksi  daun sirih  ( Piper  betle L.)  terhadap  pertumbuhan  bakteri Streptococcus  Mutans secara in  vitro .  JMJ.  2016. 4(2):140- 155.
152  ANDRIE ET AL.
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia  153
Vol. 19, 2021
11.  Nadhila NF. The activity of antibacterial agent of honey against Staphylococcus aureus . J MAJORITY. 2014. 3(7):94- 101.
12.  Vifta RL, Wansyah MAP, Hati AK. Aktivitas antibakteri salep ekstrak etanol daun sirih hijau ( Piper betle L.) terhadap infeksi bakteri Staphylococcus aureus . Jurnal Ilmiah Farmasi. 2017. 5(2):56-61.
13.  Kusumawardhani AD, Kalsum U, Rini IS. Pengaruh sediaan  salep  ekstrak  daun  sirih  ( Piper  betle Linn.) terhadap jumlah ﬁ broblas luka bakar derajat IIA pada tikus putih ( Rattus norvegicus ) galur wistar. Majalah Kesehatan FKUB. 2015. 2(1):16- 28.
14.  Umar S, Selﬁ a M, Azhar R. Studi kestabilan ﬁ sika dan kimia dispersi padat ketoprofen-urea. Jurnal Farmasi Higea. 2014. 6(2):162- 173.
15.  Rosiani H, Rasyid R, Hagramida V. Penetapan kadar protein  secara  kjeldahl  beberapa  makanan  olahan kerang remis ( Corbiculla moltkiana Prime.) dari danau singkarak. Jurnal Farmasi Higea. 2015.7(2).
16.  Saputro PA, Andrie M, Taurina W. Penetapan kadar protein fase air ekstrak ikan gabus ( Channa striata ) sebelum  dan  sesudah freeze  dryer menggunakan metode  kjeldahl.  Skripsi.  Fakultas  Kedokeran Universitas Tanjungpura. Pontianak; 2018.
17.  Orsat V,  Raghavan  GSV.  Dehydration  technologies to retain bioactive components. Dalam: Shi J, editor. Functional  Food  Ingredients  and  Nutraceuticals: Processing Technologies.  Boca  Raton:  CRC  Press; 2006.
18.  Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Parameter standar  umum  ekstrak  tumbuhan  obat.  Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia; 2000.
19.  Maleta HS, Indrawati R, Limantara L, Brotosudarmo THP. Ragam metode ekstraksi karotenoid dari sumber tumbuhan  dalam  dekade  terakhir  (Telaah  Literatur). Jurnal Rekayasa Kimia dan Lingkungan. 2018. 13(1).
20.  Stability testing of active pharmaceutical ingredients and  finished  pharmaceutical  product. Annex  2  to WHO  Technical  Report  Series  No.953.  Updated  6 March 2015.
21.  Gadri A, Priani SE. Stabilitas kadar dan laju disolusi ketoprofen dalam sediaan kapsul gelatin dan HPMC- karagenan.  Jurnal  Sains, Teknologi  Dan  Kesehatan. 2012. 3(1):87- 94.
22.  Pamudji  JS,  Darijanto  ST,  Rosa  S.  Formulasi  dan evaluasi mikroemulsi minyak dalam air betametason 17-  valerat. Acta  Pharmaceutica  Indonesia.  2012. XXXVII(4):146- 152.
23.  Abdassah M, Noviardani T, Levitta J, Suherman SE. Formulasi dan uji stabilitas tetes mata sulfasetamida. IJPST. 2015. 2(1):33-44.
24.  Eminingtyas  R.  Perubahan  mutu  ikan  lele  dumbo ( Clarias  gariepinus )  asap  selama  penyimpanan. Skripsi. Fakultas perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor. Bogor; 2006.
25.  Andayani  R, Yenti  R,  Gustiva  W.  Pengaruh  lama penyimpanan pada suhu kamar dan lemari pendingin terhaap kandungan protein pada dadih kerbau dengan metode kjeldahl. SCIENTA. 2011. 1(1).
26.  Carolina N, Noventi W. Potensi ekstrak daun sirih hijau ( Piper betle L.) sebagai alternatif terapi Acne vulgaris . MAJORITY. 2016. 5(1).
27.  Susilowati,  Harningsih.  Potensi  ekstrak  daun  salam ( Syzygium polyanthum ) sebagai pengawet pada ikan layur  ( Trichiurus Sp.).  Jurnal  Kesehatan  Kusuma Husada. 2017. 2(2):116-112.
28.  Kusuma  RBBE.  Pengaruh  daya  antibakteri  ekstrak daun  sirih  ( Piper  betle L.)  terhadap Streptococcus mutans .  Skripsi.  Fakultas  Kedokteran  Universitas Sebelas Maret. Surakarta; 2010.
29.  Pradana BB. Perbandingan daya hambat konsentrasi ekstrak  etanol  daun  sirih  hijau  ( Piper  betle L.) terhadap  pertumbuhan  bakteri Salmonella  typhi dan Staphylococcus aureus . Skripi. Fakultas Kedokteran Universitas Lampung. Bandar Lampung; 2017.
30.  Bustanussalam, Apriasi  D.  Efektivitas  antibakteri ekstrak  daun  sirih  ( Piper  betle Linn)  Terhadap Staphylococcus  aureus ATCC  25923.  Fitofarmaka. 5(2).