## Bioeksperimen
Volume 3 No.2, (September 2017) ISSN 2460-1365

## PENGARUH ZAT PENGATUR TUMBUH TERHADAP MULTIPLIKASI TUNAS DAN BAHAN PENYANGGA PADA PEMBENTUKAN PLANTLET KANTONG SEMAR ADRIANII ( NEPENTHES

## ADRIANII ) DENGAN KULTUR IN VITRO
Egi Nuryadin 1) , Sugiyono 2) , Elly Proklamasiningsih 3) 1 Jurusan Pendidikan Biologi FKIP, Universitas Siliwangi, Tasikmalaya.
2 Program Studi Ilmu Biologi, Universitas Jenderal Soedirman, PURWOKERTO.
3 Program Studi Ilmu Biologi, Universitas Jenderal Soedirman, PURWOKERTO. Email : egi.nuryadin@unsil.ac.id
Abstract- Nepenthes adrianii (a carnivorous plant) is an  endemic carnivorous plant of  Mount Slamet, which is listed on appendix I and II of the convention on international trade of endangered species ( CITES) ( 2003 ) and considered as  nearly extinct and rare.  Considering the enormous potential of  this plant, conservation efforts are needed to both preserve and propagate it. The biotechnology application such as tissue culture or in-vitro culture is considered to be the best available mean plant conservation. The in vitro culture is used for both  shoot multiplication and plantlet formation . The objectives of this study were to: 1) study the influence of the interaction between BAP and NAA on shoot multiplication; 2) determine the best the concentrations of BAP and NAA to stimulate shoot multiplication; 3) study the influence of supporting materials and NAA concentration on  plantlet formation of carnivorous plant ( Nepenthes adrianii ); and 4) to determine the best supporting material and NAA concentration to stimulate plantlet formation of carnivorous plant ( Nepenthes adrianii ). This research has been carried out experimentally.  This research consisted of 2 stages i.e. shoot multiplication and plantlet formation. The purpose of the multiplication stage was to multiply the shoot, whereas the objective of plantlet formation stage was to produce true plants. During the multiplication stage, a Completely Randomised Design on a two factors factorial pattern was used.   The first factor was BAP concentrations with 4 levels i..e  0 µM, 5 µM, 10 µM, and 15 µM.  The second factor was NAA concentration with 4 levels i.e.  0 µM, 0,5 µM, 1 µM, and 1,5 µM. A Split Plot Design was used on the plantlet formation stage. The main plot were explant supporting materials (P) i.e. agar and filter paper bridge.  The sub plot were NAA concentrations i.e.  0 µM, 5 µM, 10 µM, and 15 µM. The parameters measured in shoot multiplication  were  the  emergence  of  shoot,  leaf,  and  root;  the  number  of  shoots,  leaves  and  roots. The parameters measured in the plantlet formation were the number of shoots, leaves, and roots, the longest leaf and root and plant height. The data obtain were analysed using an analysis of the variance on  95 % level of confidence followed by Honestly Significant Difference test to determine the difference between treatments. The research results showed 10 µM BAP and 0.5 µM NAA was found to be the best treatment for shoot multiplication.  Moreover, during the plantlet formation stage,  the use of a filter paper and media supplemented with  5 µM and 10 µM NAA resulted in the best plantlet formation.
Keywords: Nepenthes adrianii, multiplication of shoots, the formation of plantlet.
Abstrak- Nepenthes  adrianii  (Kantong  Semar)  merupakan  tanaman  endemik  khas  Gunung  Slamet, termasuk dalam Convention on International Trade of Endangered Species (CITES) terdapat apendiks I  (Tahun  2003)  dan  II  yaitu  tanaman  ini  tergolong  hampir  punah  dan  langka.  Mengingat  besarnya potensi yang dimiliki tanaman ini, maka perlu adanya upaya konservasi untuk mengembangkan dan melestarikannya. Penerapan bioteknologi kultur jaringan atau kultur in vitro merupakan solusi yang tepat untuk melestarikan dan mengembangkan tanaman ini. Kultur in-vitro digunakan untuk multiplikasi tunas dan pembentukan plantlet. Penelitian ini bertujuan untuk: 1) mempelajari pengaruh interaksi BAP dan NAA pada multiplikasi tunas: 2)  menentukan konsentrasi interaksi BAP dan NAA yang paling baik untuk memacu multiplikasi tunas; 3) mempelajari pengaruh bahan penyangga eksplan dan NAA pada pembentukan plantlet kantong semar (Nepenthes adrianii); dan 4) menentukan jenis bahan penyangga eksplan dan konsentrasi zat pengatur tumbuh NAA yang paling baik untuk memacu pembentukan plantlet kantong semar  (Nepenthes adrianii). Metode yang digunakan adalah
Bioeksperimen Volume 3 No.2, (September 2017) ISSN 2460-1365
metode eksperimental, penelitian ini terdiri atas 2 tahap yaitu multiplikasi tunas dan pembentukan plantlet. Tujuan penelitian  pada tahap multiplikasi tunas adalah untuk perbanyakan tunas dan tujuan penelitian pada tahap pembentukan plantlet adalah untuk mendapatkan tanaman kecil yang sejati. Tahap  Multiplikasi  Tunas  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  pola faktorial dengan 2 faktor. Faktor I adalah konsentrasi BAP yang terdiri dari 4 taraf yaitu 0 µM, 5 µM, 10 µM, dan 15 µM, Faktor II  konsentrasi NAA yang terdiri dari 4 taraf yaitu yaitu 0 µM, 0,5 µM, 1 µM, dan 1,5 µM. Tahap Pembentukan Plantlet menggunakan Rancangan Petak Terpisah (Split Plot Design) sebagai petak utama adalah bahan penyangga eskplan (P) yaitu:  agar dan jembatan kertas saring, sedangkan sebagai anak petak adalah konsentrasi NAA yang terdiri dari 4 taraf yaitu 0 µM, 5 µM, 10 µM, dan 15 µM. Parameter yang diukur dalam multiplikasi tunas yaitu waktu muncul tunas, waktu muncul daun, waktu muncul akar, jumlah tunas, jumlah daun dan jumlah akar. Parameter yang diukur dalam pembentukan plantlet yaitu jumlah tunas, jumlah daun, jumlah akar, daun terpanjang, akar terpanjang dan tinggi tanaman. Data yang diperoleh dianalisis menggunakan Analisis Ragam (Anova : Analysis of Variance) dengan tingkat kepercayaan 95%. Pengujian F menunjukan hasil sangat nyata kemudian dilanjutkan dengan uji Beda Nyata Jujur (BNJ) untuk mengetahui perbedaan antar perlakuan. Hasil penelitian menunjukan bahwa pada tahap multiplikasi tunas terbaik didapat pada perlakuan interaksi BAP 10 µM dan NAA 0,5 µM. Tahap Pembentukan plantlet terbaik di dapat pada perlakuan interaksi bahan penyangga jembatan kertas saring dengan zat pengatur tumbuh NAA 5 µM dan 10 µM.

## PENDAHULUAN
Nepenthes merupakan tanaman hias yang telah dikenal cukup lama.  Dalam bahasa Indonesia, tanaman ini dikenal dengan sebutan kantong semar karena memiliki kantong seperti perut semar yang buncit. Nepenthes di beberapa daerah mempunyai sebutan yang berbeda-beda misalnya di Riau disebut periuk monyet, di Jawa Barat disebut raja mantri, dan di Bangka disebut ketakung dan ketuyut. (Purwanto, 2007) Nepenthes mempunyai keunikan yaitu penampilan yang eksotis karena dari ujung daun muncul kantong dengan corak serta warna beragam. Berbagai macam variasi kantong mulai dari bentuk, ukuran, motif dan warnanya menyebabkan tanaman ini disebut sebagai kantong semar dan masyarakat internasional menyebutnya sebagai the exotic pitcher plant atau pemanjat yang eksotis karena sifat pertumbuhan dialamnya dengan cara memanjat  (Purwanto,  2007). Nepenthes juga mempunyai potensi sebagai pengendali hayati serangga dan tanaman obat.  (Mansur,  2006;  Purwanto,  2007; 2007; Eilenberg et al , 2010). Nepenthes di Indonesia termasuk tanaman langka dan tanaman yang dilindungi salahsatunya Nepenthes
adrianii yang merupakan tanaman endemik khas Gunung Slamet. Nepenthes adrianii termasuk dalam Convention on International  Trade  of  Endangered  Species (CITES)  terdapat  apendiks  I  (Tahun 2003) dan II yaitu tanaman ini tergolong hampir  punah  dan  langka  (Direktorat Budidaya Tanaman Hias, 2006).  Tanaman yang termuat di dalamnya merupakan jenis-jenis yang telah terancam punah ( endangered ) sehingga perdagangan internasional spesimen yang berasal dari habitat alam harus dikontrol dengan ketat dan hanya diperkenankan untuk kepentingan non komersial tertentu dengan izin khusus.
Mengingat besarnya potensi yang dimiliki tanaman ini, maka perlu adanya upaya konservasi untuk mengembangkan dan melestarikannya. Untuk mengurangi tingkat erosi genetik, tanaman kantong semar perlu pula dibudidayakan secara baik. Teknik budidaya kantong semar secara konvensional masih terbatas. (Direktorat  Budidaya  Tanaman  Hias, 2006). Penerapan bioteknologi dengan kultur in-vitro, yang mempunyai kelebihan yaitu waktu yang cukup singkat, tidak memerlukan lahan yang luas, dan efisien dalam hal tenaga maupun biaya serta

## Bioeksperimen
Volume 3 No.2, (September 2017) ISSN 2460-1365
didapatkannya tanaman setiap saat sesuai dengan apa yang kita inginkan karena faktor lingkungan dapat dikontrol, sangat prospektif  untuk  dicoba  (Purwanto, 2007). Penerapan bioteknologi kultur jaringan atau kultur in vitro merupakan solusi yang tepat untuk melestarikan dan mengembangkan tanaman kantong semar, karena dalam teknik kultur in vitro hanya diperlukan sedikit bagian tanaman sebagai eksplan awal sehingga tidak mengganggu keberadaan tanaman dilapang, dan dalam waktu yang cukup singkat dapat diperoleh bibit tanaman ( plantlet ) yang unggul dalam jumlah yang relatif banyak.
Pembentukan plantlet dalam kultur in vitro dimulai dengan terbentuknya tunas yang diikuti dengan pembentukan akar.  Salah satu faktor yang sangat berpengaruh pada pembentukan plantlet dalam kultur in vitro adalah zat pengatur tumbuh yang digunakan. Zat pengatur tumbuh yang biasa digunakan untuk multiplikasi tunas dan pembentukan plantlet adalah zat pengatur tumbuh dari golongan sitokinin dan auksin. Menurut Zulkarnain (2009) pemberian auksin atau sitokinin merupakan tindakan yang sangat penting dalam mengatur pembelahan, pemanjangan, dan diferensiasi sel, serta pembentukan organ tanaman di dalam kultur in vitro . Penelitian kultur in vitro pada tanaman kantong semar masih jarang dilakukan. Beberapa penelitian terkait dengan kultur in vitro tanaman kantong semar antara lain pernah dilakukan oleh Alitalia, 2008; Iqwal, 2008; Darmayanti et al ., 2010; dan Dinarti et al ., 2010.  Namun demikian upaya menghasilkan plantlet yaitu tanaman kecil dengan akar, batang, dan daun yang sempurna dengan menggunakan beberapa media dan komposisi zat pengatur tumbuh, tidak
memberikan hasil yang maksimal. Oleh karena itu, dalam penelitian ini dikaji mengenai interaksi zat pengatur tumbuh BAP dan NAA pada multiplikasi tunas dan pembentukan plantlet kantong semar ( Nepenthes adrianii ).  Penelitian ini terdiri dari dua tahapan penelitian multiplikasi tunas dan pembentukan plantlet .
MATERI DAN METODE Alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain botol kultur, timbangan analitik, beaker  glass, gelas ukur, botol Duran,  Erlenmeyer, hot plate  magnetic stirrer , pH meter, pipet, alumunium foil, autoklaf, Laminar Air Flow (LAF) Cabinet, bunsen , fridge, rak kultur, pinset, skalpel, cling  film, kertas label, dan hand  sprayer. Bahan-bahan yang digunakan yaitu biji Nepenthes adrianii, media Murashige dan Skoog  (MS-1962),  casein  hydrolizate, sukrosa, agar, sterile destilled water (sdw), akuades, pupuk seedling cair PSA, alkohol 70% dan 96%, HgCl 2 0,2%, zat pengatur tumbuh 6-benzyl aminopurine (BAP)  dan α-naphthalenacetic acid (α-NAA). Penelitian yang dilaksanakan merupakan penelitian eksperimental, terdiri atas 2 tahap yaitu multiplikasi tunas dan pembentukan plantlet dengan rancangan percobaan sebagai berikut :
1.  Tahap multiplikasi tunas Percobaan dilakukan dengan metode eksperimental  dengan Rancangan Acak Lengkap (RAL) pola perlakuan faktorial. Faktor I adalah konsentrasi BAP yang ter- diri dari 4 taraf yaitu B1 0 µM, B2 5 µM, B3 10 µM dan B4 15 µM. Faktor II adalah konsentrasi NAA yang terdiri dari 4 taraf yaitu N1 0 µM, N2 0,5 µM, N3 1 µM dan N4 1,5 µM. Kombinasi perlakuan ada 16 perlakuan seperti pada tabel 1 berikut: Tabel 1 Kombinasi Perlakuan pada Mul- tiplikasi Tunas
B 1 N 1 B 2 N 1 B 3 N 1 B 4 N 1 B 1 N 2 B 2 N 2 B 3 N 2 B 4 N 2 B 1 N 3 B 2 N 3 B 3 N 3 B 4 N 3 B 1 N 4 B 2 N 4 B 3 N 4 B 4 N 4
Masing-masing kombinasi perlakuan diulang 3 kali, sehingga diperoleh 48 unit percobaan.
2.  Pembentukan Plantlet Percobaan dilakukan dengan metode eksperimental  dengan Rancangan Petak Terpisah  (Split  Plot  Design).    Sebagai petak utama adalah bahan penyangga eskplan (P) yaitu:  agar dan kertas saring. Sedangkan sebagai anak petak adalah konsentrasi NAA yang terdiri dari 4 taraf yaitu 0 µM, 5 µM, 10 µM, dan 15 µM. Kombinasi perlakuan ada 8 perlakuan seperti pada tabel 2 berikut:
Tabel 2 Kombinasi Perlakuan pada
Pembentukan Plantlet Perlakuan I Ulangan II III IV P1 (0,8% Agar) N 1 P 1 N 1 P 1 N 1 P 1 N 1 N 2 P 1 N 2 P 1 N 2 P 1 N 2 N 3 P 1 N 3 P 1 N 3 P 1 N 3 N 4 P 1 N 4 P 1 N 4 P 1 N 4
P2 (Jem - batan kertas saring) N 1 P 2 N 1 P 2 N 1 P 2 N 1 N 2 P 2 N 2 P 2 N 2 P 2 N 2 N 3 P 2 N 3 P 2 N 3 P 2 N 3 N 4 P 2 N 4 P 2 N 4 P 2 N 4
Masing-masing kombinasi perlakuan diulang 3 kali, sehingga diperoleh 24 unit percobaan. Variabel yang diamati adalah multiplikasi tunas dan pembentukan plantlet Nepenthes adrianii . a. Parameter yang diukur dalam multiplikasi tunas yaitu waktu muncul tunas, waktu muncul daun, waktu muncul akar, jumlah tunas,  jumlah daun dan jumlah akar.
b. Parameter yang diukur dalam pembentukan plantlet yaitu jumlah tunas, jumlah daun, jumlah akar, daun terpanjang, akar terpanjang dan tinggi tanaman.

## 3.  Prosedur Kerja
Tahap Multiplikasi Tunas terdiri dari Penyiapan biji, sterilisasi alat dan bahan, pembuatan media VW untuk perkecambahan, pembuatan  larutan stok zat pengatur tumbuh, perkecambahan biji didalam laminar  air  flow, pembuatan media ½ MS, pembuatan media perlakuan untuk multiplikasi tunas. Tunas yang berasal dari biji kira-kira panjangnya 0,7cm ditanam didalam botol, dan hasilnya disubkultur pada media terbaik.
Tahap Pembentukan Plantlet terdiri dari pembuatan media perlakuan untuk pembentukan plantlet , tunas hasil sub kultur masing-masing mempunyai dua daun ditanam di dalam media pembentukan plantlet yaitu media ½ MS dengan perlakuan penyangga 0,8% agar dan jembatan kertas saring masing masing 1 tunas/botol.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
1.  Pengaruh  Interaksi  BAP  dan  NAA terhadap Rata-rata Jumlah Tunas, Jumlah Daun dan Jumlah Akar pada Multiplikasi Tunas Selama 7 Ming - gu Gambaran  eksplan  yang  tumbuh pada tahap multiplikasi tersaji pada Gambar  1,  sementara  hasil  analisis ragam dan uji beda nyata pengaruh perlakuan terhadap rata-rata jumlah tunas, jumlah daun dan jumlah akar pada tahap multiplikasi tunas selama 7 minggu.  menunjukkan bahwa interaksi antara BAP dan NAA berpengaruh nyata pada jumlah tunas dan akar yang terbentuk, dan tidak berpengaruh nyata pada parameter jumlah daun yang terbentuk.  Pembentukan daun sangat

## Bioeksperimen
Volume 3 No.2, (September 2017) ISSN 2460-1365
dipengaruhi oleh faktor mandiri BAP dan NAA.  Lebih lanjut, data pada Tabel 3 juga menunjukkan bahwa perlakuan B 3 N 2 (10 µM BAP dan 0,5  µM NAA) merupakan perlakuan paling baik untuk meningkatkan jumlah tunas dan akar Nepenthes adrianii dalam kultur in vitro.
Gambar 1. Gambaran pertumbuhan eksplan pada tahap multiplikasi
Tabel  3.  Interaksi BAP dan NAA terhadap Rata-rata Jumlah Tunas, Jumlah Daun dan Jumlah Akar pada Multiplikasi Tunas Selama 7  Minggu Data Jumlah  Tunas Jumlah Daun Jumlah Akar F hit B 13.17 ** 4.30 * 4.07 * F tab 5% 2.9 2.9 2.9 B1 0.8332 c 1.4166 b 0.9285 b B2 1.3691 b 1.8333 a 1.1073 ab B3 2.0119 a 1.7501 ab 1.1668 a B4 1.4403 b 1.7501 ab 0.9404 ab F hit N 2.85 8.50 ** 7.84 ** F tab 5% 2.9 2.9 2.9 N1 1.7023 1.4286 c 0.7974 b N2 1.4047 1.8333 ab 1.1430 a N3 1.1546 1.9763 a 1.1549 a N4 1.3929 1.5120 bc 1.0477 a F hit BXN 2.20 * 2.06 2.23 * F tab 5% 2.19 2.19 2.19 B1N1 0.7140 bc 0.9523 0.6663 bc B1N2 0.8093 bc 1.714 1.0000 abc B1N3 0.6187 c 1.619 1.1430 abc B1N4 1.1907 abc 1.381 0.9047 abc
Volume 3 No.2, (September 2017) ISSN 2460-1365 Data Jumlah  Tunas Jumlah Daun Jumlah Akar B2N1 2.0477 ab 1.619 1.0000 abc B2N2 0.9047 bc 2 0.9523 abc B2N3 1.2380 abc 1.9047 1.0953 abc B2N4 1.2860 abc 1.8097 1.3813 a B3N1 2.0953 ab 1.7143 0.9523 abc B3N2 2.5713 a 1.9523 1.4290 a B3N3 1.3810 abc 2.2383 1.2383 ab B3N4 2.0000 abc 1.0953 1.0477 abc B4N1 1.9520 abc 1.4287 0.5710 c B4N2 1.3333 abc 1.6667 1.1907 abc B4N3 1.3807 abc 2.143 1.1430 abc B4N4 1.0950 bc 1.762 0.8570 abc Angka yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada BNJ  5%
a. Jumlah Tunas Hasil penelitian menunjukkan bahwa pembentukan tunas Nepenthes adrianii pada media ½ MS dipengaruhi oleh interaksi antara zat pengatur tumbuh BAP dan NAA yang ditambahkan ke dalam media  (Tabel  3).   Data pada Tabel tersebut juga menunjukkan bahwa perlakuan B 3 N 2 (10 µM BAP dan 0,5  µM NAA) menghasilkan jumlah tunas terbanyak 2.57 tunas/eksplan dengan waktu muncul tunas tercepat yaitu 6 hari setelah penanaman. Hasil uji regresi kuadrater BAP pada taraf N 2 didapatkan  persamaan regresi 0.58553333 + 0.26477333 X - 0.01333333X 2 , dan diperoleh konsentrasi optimal 9,93 µM BAP. Pengaruh interaksi antara BAP dan NAA pada pembentukan tunas beberapa jenis Nepenthes pernah dilaporkan  pula  oleh  Alitalia  (2008), Dinarti et al .  (2010),  Harahap  (2010),
Sukamto et al . (2011), Yudhanto (2012) dan  Misdayani  (2014).    Konsentrasi BAP terbaik pada penelitian ini maupun perhitungan konsentrasi optimal dengan regresi sedikit lebih tinggi dari hasil penelitian terdahulu. Pada beberapa penelitian terdahulu
tersebut, diketahui bahwa konsentrasi BAP terbaik berkisar 1-2 ppm (setara dengan 4,44-8,88 µM) sementara pada penelitian ini digunakan 10 µM  BAP dan perhitungan konsentrasi optimal diperoleh angka 9,93 µM.  Namun demikian konsentrasi NAA yang digunakan  pada  penelitian  ini  (0,5 µM ) lebih tinggi dari konsentrasi NAA terbaik yang pernah dilaporkan yaitu sebesar 0,2 ppm (setara dengan 1,01 µM).  Lebih lanjut, jumlah rataan tunas yang diperoleh pada perlakuan 10 µM BAP dan 0,5 µM NAA sebanyak 2.57 tunas/eksplan, lebih tinggi dari yang pernah dilaporkan oleh Alitalia (2008) yaitu sebanyak 1,6 tunas/esplan.
b.  Jumlah Daun Hasil penelitian menunjukkan bahwa jumlah daun Nepenthes adrianii yang terbentuk pada media ½ MS tidak dipengaruhi oleh interaksi BAP dan NAA (Tabel 3), akan tetapi dipengaruhi oleh BAP atau  NAA yang diberikan secara mandiri. Hal ini berbeda dengan yang pernah dilaporkan oleh Yudhanto (2012) dan Misdayani (2014) bahwa pembentukan daun Nepenthes mirabilis dipengaruhi

## Bioeksperimen
Volume 3 No.2, (September 2017) ISSN 2460-1365
oleh interaksi antara BAP dan NAA yang ditambahkan ke dalam media.   Hasil uji beda nyata rataan jumlah daun akibat pemberian BAP menunjukkan bahwa perlakuan B 2 ( 5 µM) merupakan perlakuan terbaik dan menghasilkan rataan 1,83 daun/ tunas.  Hasil ini mirip dengan yang pernah dilaporkan oleh Alitalia
(2008)  dan  Dinarti et al ., 2010, yang melaporkan bahwa jumlah daun terbanyak diperoleh pada perlakuan 1 mg/l BAP atau setara dengan 4,44
µM. Hasil uji regresi pengaruh konsentrasi BAP pada pembentukan daun diperoleh persamaan regresi: Y    =  1.4457458    +  0.08085750    X  - 0.00416750 X 2 dengan R 2 =  12.100%, dengan hasil perhitungan konsentrasi optimum BAP diperoleh angka 9.7009598  (Gambar  2).    Hasil  ini konsisten dengan perhitungan regresi konsenstrasi BAP pada pembentukan jumlah tunas, namun sedikit lebih tinggi dari yang pernah dilaporkan oleh Misdayani (2014) yaitu sebesar 2 ppm (setara dengan 8,88 µM).
Tititk Maximum = (9.7009598, 1.8379435) Gambar 2.  Hasil uji regresi pengaruh BAP pada pembentukan daun Nepenthes adrianii
Hasil uji beda nyata rataan jumlah daun akibat pemberian NAA menunjukkan bahwa perlakuan N 3 (1  µ M) merupakan perlakuan terbaik dan menghasilkan rataan 1,98 daun/tunas.  Hasil ini konsisten dengan yang pernah dilaporkan oleh
Misdayani  (2014)  yaitu  sebesar  0,2 ppm (setara dengan 1,07 µM).  Hasil uji regresi pengaruh konsentrasi NAA pada pembentukan daun diperoleh persamaan  regresi:  Y=1.4113042 +  1.3820250  X - 0.86891667  X 2 , R 2 =27.812%, dengan hasil perhitungan konsentrasi optimum BAP diperoleh angka 0.79525750 (Gambar 3).
Gambar 3.  Hasil uji regresi pengaruh NAA pada pembentukan daun Nepenthes adrianii
c.  Jumlah Akar Hasil penelitian menunjukkan bahwa jumlah akar Nepenthes adrianii yang ditanam pada media ½ MS dipengaruhi oleh interaksi BAP dan  NAA  (Tabel    3).  Seperti  pada parameter jumlah tunas, perlakuan B 3 N 2 (10 µM BAP dan 0,5  µM NAA) menghasilkan jumlah akar terbanyak rerata 1.4290 akar/eksplan dan waktu muncul akar tercepat yaitu 8 hari setelah penanaman.  Hasil uji regresi data jumlah akar diperoleh kisaran konsentrasi optimal BAP sebesar 6,79- 7,03 µM dan NAA sebesar 0,92 µM. Hasil penelitian ini berbeda dengan hasil penelitian Alitalia (2008) bahwa hasil sidik ragam menunjukan kombinasi pemberian BAP dan NAA memberikan pengaruh yang tidak berbeda nyata terhadap rata- rata jumlah akar setiap minggunya. Pengaruh yang nyata terhadap rata- rata jumlah akar diperoleh dari pemberian NAA secara tunggal. Pembentukan akar ditentukan oleh keseimbangan yang tepat antara auksin dan nutrisi. Selain dipengaruhi
Bioeksperimen Volume 3 No.2, (September 2017) ISSN 2460-1365
pemberian auksin eksogen juga dipengaruhi oleh perbedaan genetik yang disebabkan oleh eksplan yang digunakan dan kandungan sitokinin endogennya (Sukawan, 2000).
2.  Pengaruh Bahan Penyangga Eksplan dan NAA terhadap Rata-rata Jumlah Tunas,  Jumlah  Daun,  Jumlah Akar, Rata-rata  Daun  Terpanjang,  Akar Terpanjang,    dan  Tinggi  Tanaman pada Pembentukan Plantlet Selama 7 Minggu Gambaran plantlet yang terbentuk pada  penelitian  ini  tersaji  pada  Gambar 4, sementara hasil analisis ragam dan uji beda nyata pengaruh bahan penyangga eksplan dan NAA terhadap  rata-rata jumlah tunas, jumlah daun, jumlah akar, rata-rata daun terpanjang, akar terpanjang, dan tinggi tanaman pada pembentukan plantlet selama 7 minggu tersaji pada Tabel  4.  Data pada Tabel  4 menunjukkan bahwa interaksi antara BAP dan NAA berpengaruh nyata pada jumlah daun, jumlah akar, rata-rata daun terpanjang, akar terpanjang,  dan tinggi tanaman, tetapi tidak berpengaruh terhadap parameter jumlah tunas yang terbentuk. Data pada Tabel 4 juga menunjukkan
bahwa perlakuan P 2 N 2 (Jembatan  kertas saring dengan penambahan 5 µM NAA) merupakan perlakuan paling baik untuk meningkatkan jumlah daun, jumlah akar, rata-rata daun terpanjang Nepenthes adrianii dalam kultur in vitro, sementara P 2 N 3 (Jembatan  kertas  saring dengan penambahan 10 µM NAA) merupakan perlakuan paling baik untuk meningkatkan akar terpanjang,  dan tinggi tanaman.  Lebih lanjut, data pada tabel tersebut juga menunjukkan bahwa jembatan kertas saring lebih baik jika dibandingkan penyangga 0,8% agar.

## Gambar 4. Plantlet Nepenthes adrianii yang terbentuk
Tabel  4. Bahan Penyangga Eksplan dengan Penambahan Zat Pengatur Tumbuh NAA terhadap Rata-rata Jumlah Tunas, Jumlah Daun, Jumlah Akar, Daun Terpanjang, Akar Terpanjang dan
Tinggi Tanaman pada Pembentukan Plantlet Selama 7 Minggu Data Jumlah Tunas      Jumlah Daun Daun Terpanjang Jumlah Akar Akar Terpanjang Tinggi Tanaman F hit P 2.06 42.98 ** 24.53 ** 8.25 * 22.12 ** 59.90 ** F tab 5% 7.71 7.71 7.71 7.71 7.71 7.71 P1 0.785 2.952 b 0.77 b 1.821 b 0.68 b 1.63 b P2 0.881 3.607 a 1.09 a 2.189 a 1.33 a 2.32 a F hit N 1.38 34.21 ** 7.93 ** 6.34 ** 4.23 * 2.82 F tab 5% 3.49 3.49 3.49 3.49 3.49 3.49 N1 0.786 2.903 b 0.78 b 1.403 b 1.03 ab 1.98 N2 0.976 4.000 a 1.17 a 2.285 a 1.25 a 2.30 N3 0.809 3.167 b 0.97 ab 2.118 a 1.13 ab 2.05 N4 0.762 3.047 b 0.80 b 2.213 a 0.62 b 1.55

## Bioeksperimen
Volume 3 No.2, (September 2017) ISSN 2460-1365 Data Jumlah Tunas      Jumlah Daun Daun Terpanjang Jumlah Akar Akar Terpanjang Tinggi Tanaman F hit PXN 3.15 3.93 * 4.25 * 3.98 * 5.19 * 4.05 * F tab 5% 3.49 3.49 3.49 3.49 3.49 3.49 P1N1 0.762 2.760 de 0.57 c 1.237 c 0.87 bc 1.63 abc P1N2 0.714 3.667 bc 0.93 bc 1.713 abc 1.17 abc 2.47 ab P1N3 0.857 2.620 e 0.73 c 1.903 abc 0.37 bc 1.33 bc P1N4 0.809 2.760 de 0.83 bc 2.430 ab 0.33 c 1.07 c P2N1 0.809 3.047 cde 1.00 abc 1.570 bc 1.20 abc 2.33 abc P2N2 1.238 4.333 a 1.40 a 2.857 a 1.33 ab 2.13 abc P2N3 0.762 3.713 ab 1.20 ab 2.333 abc 1.90 a 2.77 a P2N4 0.714 3.333 bcd 0.77 bc 1.997 abc 0.90 bc 2.03 abc
Angka yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada BNJ  5%
a.  Jumlah Tunas Hasil  penelitian  (Tabel  4) menunjukkan bahwa jumlah tunas Nepenthes  adrianii yang terbentuk pada media ½ MS tidak dipengaruhi oleh perlakuan penyangga eksplan dan NAA.  Hal ini diduga adanya penambahan zat pengatur tumbuh NAA sehingga menghambat pertumbuhan tunas.  Fakta bahwa NAA tidak mempengaruhi pembentukan tunas juga pernah dilaporkan oleh Alitalia  (2008),  Harahap,  2010. Secara umum pembentukan tunas lebih banyak dipengaruhi oleh zat pengatur tumbuh golongan sitokinin sebagaimana dilaporkan pula oleh oleh Alitalia (2008), Harahap, (2010), dan  Yudhanto,  (2012).    Perlakuan penyangga jembatan kertas saring dengan penambahan NAA 5 µM menghasilkan tunas paling banyak dengan rerata 1.238/eksplan (Tabel  4).
b.  Jumlah Daun Hasil penelitian pembentukan plantlet selama  7  Minggu  (Tabel  4) menunjukkan bahwa pembentukan daun pada plantlet yang ditanam pada media ½ MS menunjukkan bahwa interaksi antara penyangga eksplan
dan penambahan zat pengatur tumbuh NAA memberikan hasil nyata. Penggunaan penyangga jembatan kertas saring dengan penambahan NAA  5  µM  (P2N2)  menghasilkan jumlah daun paling banyak dengan rerata 4.333, dan berbeda dengan hampir semua perlakukan. Hal tersebut mengindikasikan bahwa media ½ MS dengan penambahan NAA 5 µM lebih mudah diserap eksplan yang ditanam pada penyangga kertas saring, sehingga mampu memacu pembentukan daun dalam plantlet .
Hasil uji regresi pengaruh konsentrasi NAA pada pembentukan daun dalam jenis penyangga kertas saring  (P2)  diperoleh  persamaan regresi:  Y=  3.1548167  +  0.25473  X    - 0.01666333 X 2 , R 2 =  67.32  %,  dengan hasil perhitungan konsentrasi optimum NAA sebesar  6.126 uM NAA (Gambar  5).    Konsentrasi  ini  lebih tinggi dari yang pernah dilaporkan oleh  Alitalia  (2008),  Sukamto et al .,  (2011)  dan  Misdayani,  (2014). Sukamto et al .,  (2011)  memperoleh konsenstrasi NAA terbaik sebesar 0,5 mg/l atau setara dengan 2,685 µM.    Sementara    itu,  Alitalia  (2008)
Bioeksperimen Volume 3 No.2, (September 2017) ISSN 2460-1365
dan  Misdayani,  (2014)  memperoleh konsenstrasi NAA terbaik sebesar 0,2 mg/l atau setara dengan 1,074 µM. Pertumbuhan daun pada nepenthes tergolong  cukup  lambat  (Alitalia, 2008). Keadaan ini diindikasikan dari sedikitnya jumlah daun yang terbentuk setiap minggunya. Menurut Sayekti (2007),    jumlah  daun  pada  tanaman Nepenthes dapat dijadikan sebagai indikator jumlah buku tanaman, karena dalam tiap buku tersebut terdapat satu helai daun. Sedikitnya jumlah buku mempengaruhi jumlah bagian tanaman yang tersedia untuk disubkultur atau diperbanyak pada tahapan berikutnya.
Gambar 5.  Hasil uji regresi pengaruh NAA pada pembentukan daun plantlet Nepenthes adrianii
c.  Daun Terpanjang Seperti pada parameter jumlah daun, hasil penelitian pembentukan plantlet selama 7 Minggu juga menunjukkan bahwa pemanjangan daun pada plantlet yang ditanam pada media ½ MS dipengaruhi oleh  interaksi antara penyangga eksplan dan penambahan zat pengatur  tumbuh  NAA  (Tabel  4). Penggunaan penyangga jembatan kertas saring dengan penambahan NAA  5  µM  (P2N2)  menghasilkan daun paling panjang dengan rerata 1,40 cm, dan berbeda dengan hampir semua perlakukan. Hal tersebut juga mengindikasikan bahwa media ½ MS dengan penambahan NAA 5 µM lebih mudah diserap eksplan yang ditanam
pada penyangga kertas saring, sehingga memacu pemanjangan daun pada plantlet . Hasil uji regresi pengaruh konsentrasi NAA pada pembentukan daun dalam jenis penyangga kertas saring  (P2)  diperoleh  persamaan regresi:  Y=  1.0183333  +  0.107X    - 0.00833333 X 2 R 2 = 67.67 % dengan hasil perhitungan konsentrasi optimum NAA sebesar  6.420 uM NAA  (Gambar  6).    Konsentrasi ini relatif sama dengan hasil perhitungan konsentrasi optimal untuk pembentukan daun, namun konsentrasi ini  juga lebih tinggi dari yang pernah dilaporkan oleh Alitalia (2008)  yaitu  sebesar  0,2  mg/l  (setara dengan 1,074 µM).
Gambar 6.  Hasil uji regresi pengaruh NAA pada panjang daun plantlet Nepenthes adrianii
d.  Jumlah Akar Hasil analisis data parameter jumlah akar yang terbentuk pada plantlet yang ditanam pada media ½ MS dengan perlakuan penyangga eksplan dan penambahan zat pengatur tumbuh NAA (Tabel 4) juga menunjukkan bahwa pembentukan akar juga dipengaruhi oleh interaksi antara penyangga yang digunakan dan konsentrasi NAA yang ditambahkan pada media.  Hasil penelitian juga menunjukkan bahwa perlakuan  perlakuan jembatan kertas saring  dengan  NAA  5  µM  (P2N2) menghasilkan jumlah akar terbanyak dengan rerata 2,857 buah per eksplan. Hal tersebut menunjukkan bahwa penanaman eksplan yang disangga

## Bioeksperimen
Volume 3 No.2, (September 2017) ISSN 2460-1365
dengan jembatan kertas saring pada media ½ MS dengan penambahan zat pengatur tumbuh NAA 5 µM mampu merangsang pembentukan akar. Alitalia (2008) juga melaporkan bahwa pembentukan akar dipengaruhi oleh konsentrasi NAA yang digunakan. Hasil uji regresi pengaruh konsentrasi NAA pada pembentukan akar dalam jenis penyangga kertas saring  (P2)  diperoleh  persamaan regresi:  Y=  1.67135  +  0.25817X    - 0.01619667X 2 , R 2 =  53.34  %  dengan hasil perhitungan konsentrasi optimum NAA sebesar  7.969 uM NAA  (Gambar  7).    Konsentrasi  ini juga lebih tinggi dari yang pernah dilaporkan  oleh  Alitalia  (2008)  yaitu sebesar 0,2 mg/l atau setara dengan 1,074 µM.
Gambar 7.  Hasil uji regresi pengaruh NAA pada pembentukan akar plantlet Nepenthes adrianii
Hal ini diduga karena dengan penggunaan jembatan kertas saring, eksplan Nepenthes lebih mudah untuk menyerap nutrisi dari media yang mengandung zat pengatur tumbuh NAA 5 µM. Zat pengatur tumbuh NAA secara umum menyebabkan terjadinya perpanjangan sel, pembengkakan jaringan, pembelahan sel, dan pembentukan akar. Namun pada konsentrasi yang tinggi menghambat pembentukan akar (Lestari,  2011).  Ekawati  (2006), menambahkan bahwa konsentrasi NAA yang ditingkatkan ke media
pengakaran akan meningkatkan auksin endogen sehingga terjadi akumulasi auksin. Akumulasi auksin ini akan mempengaruhi pembentukan akar.
e.  Akar Terpanjang Hasil analisis data parameter panjang akar yang terbentuk pada plantlet yang ditanam pada media ½ MS dengan perlakuan penyangga eksplan dan penambahan zat pengatur  tumbuh  NAA  (Tabel  4) juga menunjukkan bahwa panjang akar juga dipengaruhi oleh interaksi antara penyangga yang digunakan dan konsentrasi NAA yang ditambahkan pada media.  Hasil penelitian menunjukkan bahwa perlakuan  perlakuan jembatan kertas saring dengan NAA 10 µM (P2N3)  menghasilkan  panjang  akar terpanjang dengan rerata 1,90 cm. Hal tersebut menunjukkan bahwa penanaman eksplan yang disangga dengan jembatan kertas saring pada media ½ MS dengan penambahan zat pengatur tumbuh NAA 10 µM mampu merangsang pemanjangan akar, dan konsentrasi ini lebih tinggi dari konsentrasi terbaik pada pembentukan akar. Alitalia (2008)  juga  melaporkan  bahwa pembentukan akar dipengaruhi oleh konsentrasi NAA yang digunakan. Hal ini berbeda dengan yang pernah dilaporkan  oleh  Ekawati  (2006)  dan Lestari  (2011)  bahwa  konsentrasi NAA yang tinggi akan menghambat perpanjangan akar.
Hasil uji regresi pengaruh konsentrasi NAA pada pembentukan akar dalam jenis penyangga kertas saring  (P2)  diperoleh  persamaan regresi:  Y=  1.1  +  0.16333333X  - 0.01133333X 2 , R 2 =  46.64  %  dengan hasil perhitungan konsentrasi
Bioeksperimen Volume 3 No.2, (September 2017) ISSN 2460-1365
optimum NAA sebesar  7.206 uM NAA  (Gambar  8).    Konsentrasi  ini lebih tinggi dari yang diperlukan pada pembentukan akar dan juga lebih tinggi dari yang pernah dilaporkan oleh  Alitalia  (2008)  yaitu  sebesar  0,2 mg/l atau setara dengan 1,074 µM. Panjang akar merupakan hasil dari perpanjangan sel-sel dibelakang meristem  ujung  (Anwar,  2007). Pertumbuhan akar dipengaruhi oleh pertumbuhan tunas, tunas yang terbentuk makin banyak maka akar akan semakin pendek atau bahkan tidak memiliki akar sama sekali  (Mufa’adi,  2003).    Penelitian ini sejalan dengan pernyaataan Wattimena (1998) bahwa peningkatan konsentrasi auksin akan menghambat pemanjangan akar.
Gambar 8.  Hasil uji regresi pengaruh NAA pada panjang akar plantlet Nepenthes adrianii
f.  Tinggi Tanaman Hasil analisis data parameter tinggi plantlet menunjukkan hasil yang serupa dengan data panjang akar.  Hasil analisis pada Tabel 4 menunjukkan bahwa  tinggi plantlet yang ditanam pada media ½ MS dengan perlakuan penyangga eksplan dan penambahan zat pengatur tumbuh NAA dipengaruhi oleh interaksi antara penyangga yang digunakan dan konsentrasi NAA yang ditambahkan pada media. Hasil penelitian menunjukkan bahwa perlakuan  perlakuan jembatan kertas saring  dengan  NAA  10  µM  (P2N3)
menghasilkan tinggi plantlet paling tinggi dengan rerata 2,77 cm.  Hal tersebut juga mengindikasikan bahwa bahwa penanaman eksplan yang disangga dengan jembatan kertas saring pada media ½ MS dengan penambahan zat pengatur tumbuh NAA 10 µM mampu merangsang pemanjangan batang.
Auksin dalam konsentrasi rendah akan menstimulasi pembesaran dan perpanjangan sel batang setelah terjadinya pembelahan sel yang distimulir oleh sitokinin. Namun ketika konsentrasi auksin yang digunakan terlalu tinggi, akan menyebabkan terhambatnya pemanjangan sel. Semakin tinggi konsentrasi auksin, konsentrasi etilen yang dihasilkan akan semakin tinggi, hal ini akan menyebabkan terhambatnya aktivitas auksin dalam perpanjangan sel, tetapi akan meningkatkan pelebaran sel (Karjadi, 2007).

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dan pembahasan maka dapat disimpulkan sebagai berikut:
1.  Interaksi antara zat pengatur tumbuh BAP 10 µM dan NAA 0,5 µM pada multiplikasi tunas kantong  semar ( Nepenthes  adrianii) memberikan ha- sil yang nyata terhadap jumlah tunas dan jumlah akar. Hasil tidak nyata pada jumlah daun.
2. Konsentrasi zat pengatur tumbuh BAP dan NAA yang paling baik un- tuk memacu multiplikasi tunas kan- tong semar  ( Nepenthes adrianii) yaitu dengan adanya interaksi antara zat pengatur tumbuh BAP 10 µM dan NAA 0,5 µM.
3.  Bahan penyangga eksplan dengan penambahan zat pengatur tumbuh NAA memberikan hasil yang nyata

## Bioeksperimen
Volume 3 No.2, (September 2017) ISSN 2460-1365
pada pembentukan plantlet tanaman kantong  semar  ( Nepenthes  adrianii ) pada jumlah daun, jumlah akar, daun terpanjang, akar terpanjang dan ting- gi tanaman. Hasil tidak nyata pada jumlah tunas.
4.  Jembatan kertas saring  merupakan jenis bahan penyangga eksplan yang paling baik untuk memacu pem- bentukan plantlet tanaman kantong semar    ( Nepenthes  adrianii) dan kon- sentrasi zat pengatur tumbuh NAA 5 µM dan NAA 10 µM yang paling baik untuk memacu pembentukan plantlet tanaman  kantong  semar    ( Nepenthes adrianii) .

## DAFTAR PUSTAKA
Alitalia, Y. 2008. Pengaruh Pemberian BAP dan NAA Terhadap Pertumbuhan dan Perkembangan Tunas Mikro Kantong Semar ( Nepenthes mirabilis ) secara In  vitro . Skripsi. Fakultas Pertanian Institut Pertanian Bogor.
Anwar, N. 2007. Pengaruh Media Multiplikasi Terhadap Pembentukan Akar pada Tunas In vitro Nenas  ( Ananas comocus (L.) Merr.) cv. Smooth Cayenne di Media Pengakaran. Skripsi . Fakultas Pertanian Institut Pertanian Bogor.
Darmayanti, F., Roostika I, dan Samsurianto. 2010. Induksi Keragaman Somaklonal Tanaman Kantong Semar ( Nepenthes mirabilis ) dengan Mutagen Kimia Kolkisin Secara In vitro. Seminar Nasional IX Pendidikan Biologi FKIP UNS.
Dinarti,  D.,  Sayekti  U    dan  Alitalia  Y.
2010. Kultur Jaringan Kantong
Semar ( Nepenthes mirabilis ). J. Hort.
Indonesia 1(2). Hal 59-65.
Direktorat Budidaya Tanaman Hias. 2006.
Profil  Tanaman  Hias: Zingiberaceae
- Phalaenopsis – Cordyline . Jakarta.
Eilenberg H, Cohen S.P., Rahamin Y, Sionov E, Segal E, Carmeli S, Zilberstein A. 2010. Induced production of antifungal naphtoquinones in the pitchers of the carnivorous plant Nepenthes khasiana. J.  Experimental Botany 61:911-922.
Ekawati, M. 2006. Pengaruh Media Multiplikasi Terhadap Pembentukan Akar dari Tunas In  Vitro Nenas ( Ananas comosus (L.) Merr.) cv. Smooth Cayenne pada Media Pengakaran. Skripsi. Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Harahap, A. S., 2010.  Mikropropogasi Tunas  kantong  semar  ( Nepenthes gracillis Korth.) dengan pemberian NAA dan BAP secara in vitro. http://repository.usu.ac.id/handle/ 123456789/20283
Iqwal, M.T. 2008. Pengujian Plantlet Kantong  Semar  ( Nepenthes  spp .) Pada Berbagai Media Aklimatisasi. Skripsi. Fakultas Pertanian Institut Pertanian Bogor. Tidak dipublikasikan.
Karjadi, A.K. dan Buchory, A. 2007. Pengaruh NAA dan BAP terhadap Pertumbuhan Jaringan Meristem Bawang Putih pada Media B5. Balai Penelitian Tanaman Sayuran. Bandung. J. Hort. 17(3):217-223, 2007 Lestari, E.G, 2011. Peranan Zat Pengatur Tumbuh dalam Perbanyakan Tanaman melalui Kultur Jaringan. Jurnal AgroBiogen 7(1):63-68.
Mansur M. 2006. Nepenthes , Kantong Semar yang Unik. Penebar Swadaya: Jakarta.
Misdayani, 2014.  Pengaruh BAP ( Benzyl  Amino  Purin ) Dan NAA ( α -Napthalene  Acetic  Acid ) terhadap Pertumbuhan Kantong Semar ( Nepenthes  Mirabilis (Lour.)  Druce)
Bioeksperimen Volume 3 No.2, (September 2017) ISSN 2460-1365
Secara In Vitro .  Skripsi Program Studi Agroteknologi Fakultas Pertanian Dan Peternakan  Universitas Islam Negeri Sultan Syarif Kasim Riau.
Mufa’adi,  A.  2003.  Pengaruh  Kombinasi Zat Pengatur Tumbuh BAP dan IAA Terhadap Pertumbuhan dan Perkembangan Tanaman Daun  Dewa  ( Gynura procumbens (Back.))  dalam  Kultur In  Vitro . Skripsi. Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Purwanto, A. W. 2007. Budi Daya Ex- Situ Nepenthes Kantong Semar nan Eksotis. Kanisius: Yogyakarta.
Sukamto, L.A., Mujiono, Djukri, V.
Henuhili, 2011.  Shoot Tip Culture of Nepenthes  albomarginata Lobb ex Lindl. In  Vitro .  Jurnal Biologi Indonesia 7 (2): 251-261.
Sukawan, I. K. 2000. Perbanyakan Tanaman Nenas Varietas Veriegata ( Ananas comosus ”veriegatus”) secara In  Vitro . Skripsi. Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Watimena,  G.A.  1987.  Zat  Pengatur Tumbuh Tanaman. Dept. Agron, Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor.
Yudhanto,  A.  S.,  2012.    Pengaruh Kombinasi NAA Dengan Sitokinin (BAP,  Kinetin  dan  2iP)  Terhadap Daya Ploriferasi Tanaman Kantong Semar (Nepenthes mirabilis) Secara In  Vitro.  http://repository.ipb.ac.id/ handle/123456789/57620.
Zulkarnain, 2009. Kultur Jaringan Tanaman. Bumi Aksara : Jakarta.