PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK DAUN SIRIH ( Piper Betle L.)

## TERHADAP SPERMATOGENESIS TIKUS PUTIH JANTAN GALUR WISTAR ( Rattus norvegicus )
Jofter Julian Longdong 1) , Edwin De Queljoe 1) , Adithya Yudistira 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Problems  in  Indonesia  today,  the  increase  in  the  number  of  very  high  population,  should  be developed methods of contraception in men safe, effective, and easy to apply. Betel leaf (Piper betle L.) contains  phenol,  alkaloids  and  tannins  that  have  been  used  as  traditional  natural  antifertility.  The purpose  of  this  study  to  determine  the  conferral  effect  of  betel  leaf  extract  against  male  wistar  rat spermatogenesis.  This  research  is  experimental  with  complete  randomized  design.  Research  subjects were 24 male wistar strains divided into 4, Group 1 was not treated and as negative control and Group 2- 4  were  treated  with  different  doses  of  200,  400  and  800  mg.  The  treatment  was  performed  for  50  days according to the spermatogenesis cycle. Assessment of spermatogenesis was measured by assessment of the Johnson spermatogenesis score on seminiferous tubules. The results of the investigation showed that there  were  significant  differences  in  the  inter-group  spermatogenesis  process  shown  by  the  Kruskal- Wallis  test.  It  can  be  concluded  that  the  active  substances  present  in  betel  leaf  may  affect  the spermatogenesis  process  of  male  white  rats  wistar  strains  by  inhibiting  spermatozoa  production.  It  is recommended that betel leaf extract may be considered to be use as a natural contraceptive for men.
Keywords :  Spermatogenesis,  antifertility,  betel  leaves  (Piper  betle  L.),  male  wistar  rat  (Rattus norvegicus)

## ABSTRAK
Permasalahan di Indonesia saat ini, terjadinya peningkatan jumlah penduduk yang sangat tinggi, perlu  dikembangkan  metoda  kontrasepsi  pada  pria  yang  aman,  efektif,  dan  mudah  diaplikasikan.  Daun sirih  ( Piper  betle L.)  mengandung  fenol,  alkaloid  dan  tannin  yang  telah  digunakan  sebagai antifertilitas alami  secara  tradisional.  Tujuan  dari  penelitian  ini  untuk  mengetahui  pengaruh  pemberian  ekstrak  daun sirih  terhadap  spermatogenesis  tikus  putih  wistar  jantan.  Penelitian  ini  bersifat  eksperimental  dengan rancangan  acak  lengkap.  Subyek  penelitian  sebanyak  24  ekor  tikus  jantan  galur  wistar  yang  terbagi menjadi  4,  Kelompok  1  tidak  diberi  perlakuan  dan  sebagai  kontrol  negatif  dan  Kelompok  2-4  diberi perlakuan dengan dosis yang berbeda-beda yaitu  200, 400 dan 800 mg. Perlakuan dilakukan selama 50 hari  sesuai  siklus  spermatogenesis.  Penilaian  Spermatogenesis  diukur  berdasarkan  penilaian  skor spermatogenesis  Johnson  pada  tubulus  seminiferus.  Hasil  peneilitian  menunjukan  terdapat  perbedaan yang signifikan pada proses spermatogenesis antar kelompok  yang ditunjukkan oleh uji Kruskal-Wallis. Dapat disimpulkan zat aktif yang ada dalam daun sirih dapat mempengaruhi proses spermatogenesis tikus putih jantan galur wistar dengan cara menghambat pembentukan spermatozoa. Disarankan ekstrak daun sirih dapat dipertimbangkan untuk digunakan sebagai kontrasepsi alami untuk pria.
Kata kunci : Spermatogenesis, antifertilitas, Daun Sirih ( Piper betle L.), Tikus putih jantan galur wistar ( Rattus norvegicus )

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  sebuah  negara berkembang  dengan  jumlah  peningkatan penduduk yang tinggi. Hasil sensus menurut publikasi  BPS  pada  bulan  Agustus  2015 antara  lain  jumlah  penduduk  Indonesia adalah  255.182.144  orang,  terdiri  atas 128.231.889  laki-laki  dan  126.950.255 perempuan dengan laju pertumbuhan penduduk  sebesar  1,2  persen  per  tahun (BPS, 2015). Pertumbuhan jumlah penduduk ini  tentu  saja  akan  berimplikasi  secara signifikan  terhadap  perkembangan  ekonomi dan  kesejahteraan  negara  (Sulistyawati, 2011).  Untuk  menahan  laju  peningkatan jumlah  penduduk,  indonesia  menggunakan program  keluarga  berencana.  Program  ini cukup  efektif  dalam  menurunkan  laju pertumbuhan penduduk. Keluarga berencana adalah  tindakan  yang  membantu  individu untuk  mendapatkan  objek  –  objek  tertentu, menghindari kehamilan yang tidak diinginkan,  mendapatkan  kehamilan  yang diinginkan,  mengatur  interval  kehamilan, menentukan  jumlah  anak  dalam  keluarga, mengontrol  saat  kelahiran  dalam  hubungan dengan umur suami istri (Hanafi, 2003).
Sejak  kontrasepsi  itu  pertama  kali  ada hingga  masa  sekarang  ini,  terutama  yang berperan  untuk  menggunakan  kontrasepsi hanyalah  kaum  wanita  saja.  Beberapa metode  keluarga  berencana  untuk  pria seperti kondom, vasektomi, coitus interuptus,  konsepnya  telah  ada  sejak beberapa  ratus  tahun  yang  lalu,  namun  hal tersebut  sangat  sulit  dilaksanakan  dan  sama sekali  tidak  efektif  dan  tidak  efisien (Costantino A, et al. 2007).
Usaha pengembangan cara pengendalian  kesuburan  pria  lebih  sulit  dari
wanita, karena seorang pria setiap hari dapat memproduksi jutaan spermatozoa, sedangkan seorang wanita hanya melepaskan sebuah sel telur setiap bulan. Pil atau  suntikan  KB  untuk  pria  harus  dapat mengendalikan produksi jutaan spermatozoa,  tanpa  penurunan  libido  dan efek samping yang membahayakan (Simbala, 2007).
Penelitian  tentang  antifertilitas  dari tumbuhan  Sirih  ( Piper  betle  L )  pernah dilakukan,  yaitu  dengan  ekstrak  air  daun Sirih. Menurut Ratnasooria and
Pemakumara  (1997)  ekstrak  air  daun  Sirih ( Piper belte L). dapat menghambat kesuburan  tikus  putih  jantan  galur  secara tidak  permanen.  Hal  ini  mendorong  peneliti untuk  melakukan  penelitian  lebih  lanjut dengan  menggunakan  ekstrak  etanol  daun Sirih.  Adapun  tujuan  penelitian  ini  adalah untuk  melihat  pengaruh  pemberian  ekstrak etanol  Daun  Sirih  ( Piper  betle  L )    terhadap spermatogenesis  tikus  putih  jantan  galur wistar ( Rattus norvegicus ).

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium  Patologi  Anatomi  Fakultas Kedokteran  dan  Laboratorium  Farmakologi Program Studi Farmasi,
Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam, Universitas  Sam  Ratulangi  Manado  yang dimulai  pada    Agustus  2016  –  Februari 2017.  Jenis  penelitian  ini  ialah  eksperimen laboratorium.  Hewan  uji  dikelompokan dalam  4  kelompok  masing-masing  terdiri dari  6  ekor  hewan  uji.  Kelompok  1  tidak diberi perlakuan dan sebagai kontrol negatif. Kelompok  2-4  diberi  perlakuan  dengan dosis yang berbeda-beda yaitu  200, 400 dan
800 mg. Dosis terlebih dahulu dikonversikan dengan menggunakan faktor konversi Laurence.  Kelompok  I  :  Tikus  putih  tidak diberikan perlakuan (Kontrol); Kelompok II
:  Tikus  putih  diberi  dosis  I  (200  mg dikonversikan  dalam    dosis    tikus  menjadi 3,6  mg)  ekstrak  daun  sirih  sebanyak  1  cc setiap hari; Kelompok III :  Tikus  putih diberi dosis II (400 mg dikonversikan dalam dosis    tikus  menjadi  7,2  mg)  ekstrak  daun sirih  sebanyak  1  cc  setiap  hari;  dan Kelompok  IV  :  Tikus  putih  diberi  dosis  III (800  mg  dikonversikan  dalam  dosis  tikus menjadi  14,4  mg)  ekstrak  daun  sirih sebanyak 1 cc setiap hari.
Daun  Sirih  yang  digunakan  diambil di  Perumahan  Minanga,  Minahasa.  Daun sirih  sebanyak  1500  g  berat  basah  dicuci bersih  dengan  air  mengalir,  ditiriskan  dan ditimbang  berat  basahnya.  Daun  yang  telah dibersihkan  dikering  anginkan  didalam ruangan  selama  5  hari.  Sampel  kering kemudian  dihaluskan  mengunakan  blender dan  diayak  mengunakan  ayakan mesh 200 dan didapatkan serbuk simplisia halus. Daun sirih  yang  telah  menjadi  serbuk  simplisia ditimbang  dan  dimasukkan  dalam  beker gelas  kemudian  diekstraksi  menggunakan metode  maserasi  dengan  cara  serbuk simplisia  direndam  dalam  pelarut  etanol 96%,  proses  maserasi  menggunakan  etanol sebanyak  2500  mL  dan  dibiarkan  selama  3 hari  dengan  3  kali  penggantian  pelarut. kemudian  disaring  menggunakan  kertas saring.  Filtrat  yang  peroleh  dievporasi menggunakan rotary evaporator dan diperoleh ekstrak kental sebanyak 61,12 g.
Pemberian
perlakuan untuk penelitian  ini  masing-masing  konsentrasi menggunakan  6  hewan  uji.  Ekstrak  daun
Sirih diberikan sesuai dosis perlakuan secara oral  menggunakan  alat  penyekok  oral (Sonde)  dengan dispo satu  hari  sekali  1  cc untuk  satu  ekor  tikus  selama  50  hari  sesuai siklus spermatogenesis.
Setelah  50  hari,  masing-masing hewan  uji  dikorbankan  untuk  diambil  organ testisnya. Tikus dibius dengan eter, kemudian  di  bedah.  Diambil  testisnya kemudian  dimasukan  kedalam  wadah  yang berisi  larutan  formalin  9.1%  dan  nantinya akan dianalisis di laboratorium.
Sampel  preparat  melintang  tubulus seminiferus  yang  telah  disediakan.  Masing- masing  sediaan  dipilih  penampang  tubulus seminiferus  secara  acak.  Diamati  gambaran histologi  dan  morfologi  dari  sampel  yang diberikan  perlakuan  dengan  sampel  kontrol. Penilaian Spermatogenesis diukur berdasarkan  penilaian  skor  spermatogenesis Johnson  pada  tubulus  seminiferus  preparat testis  tikus  putih  jantan  galur  wistar  ( Rattus novergicus L).
Hasil  percobaan  yang  dianalisis untuk melihat adanya perubahan yang nyata tehadap histologi dan morfologi spermatogenesis dari masing-masing kelompok  tikus  perlakuan.  Analisis  data yang diperoleh diolah dengan menggunakan program  SPSS  uji  non-parametik  ( Kruskal Wallis ).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini dilakukan untuk melihat  pengaruh  pemberian  ekstrak  daun sirih ( Piper betle L)
terhadap spermatogenesis pada tikus putih jantan galur wistar.  Penyiapan  preparat  melintang  testis tikus  dilakukan  di  Labolatorium  Pusat Diagnostik
Patologi dan Anatomi
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Skor Jhonson
Malalayang  Manado.  Preparat  yang  telah tersedia  kemudian  diamati  menggunakan mikroskop.  Pengamatan  dilakukan  dengan mengambil  secara  acak  2  sampel  dari  6 sampel masing-masing perlakuan.
Pemeriksaan dan penilaian dilakukan dengan pengamatan mikroskopis pada pembesaran 200x dan 400x. Pengamatan dan
pemberian skor dilakukan pada lima lapangan  pandang  tiap  preparat.  Skor  dari masing masing lapangan pandang dirata-rata, sehingga  didapatkan  skor  untuk  masing- masing  tikus  putih  jantan  galur  wistar.  Hasil rerata  skor  masing  masing  kelompok kemudian dibandingkan.
Tabel 1 . Hasil skoring preparat testis pada masing-masing kelompok percobaan. PERLAKUAN LP1 LP2 LP3 LP4 LP5 Rata-rata KONTROL A 9 9 9 9 9 9 B 9 9 9 9 9 9 PS2 C 8 9 8 8 8 8.2 F 8 8 8 9 8 8.2 PS4 C 7 9 7 6 9 7.6 D 6 9 8 6 8 7.4 PS8 A 5 5 5 5 5 5 B 5 5 6 7 5 5.6
Gambar  1.  Histogram  Rerata  Skor  Pada
Setiap Kelompok Perlakuan
Tabel 2. Kruskal-Wallis hasil skor Jhonson
Dari  hasil  pengujian  di  atas    pada pengujian skor spermatogenesis menunjukkan  nilai  sig  0,000  (p  >  0.05) artinya terdapat perbedaan diantara perlakuan secara statistik. Terdapat perbedaan  yang  nyata  antara  kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan.

## PEMBAHASAN
Dari  hasil  yang  diperoleh  dapat dilihat  bahwa  skor  dari  setiap  kelompok perlakuan mengalami penurunan dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol. Dapat  dikatakan  bahwa  kelompok  yang diberi  perlakuan  mengalami  perubahan  atau gangguan  dalam  proses  spermatogenesis. Hal  ini  disebabkan  karena  kandungan senyawa  yang  terkandung  pada  daun  sirih dapat  mengganggu  proses  spermatogenesis yaitu  senyawa  alkaloid,  flavanoid  dan Triterpenoid.  Susetyarini  (2009)  dalam penelitiannya  menyampaikan  bahwa  salah satu  kandungan  senyawa  fitokimia  seperti flavonoid  dapat  menghambat  kerja  enzim aromatase  yang  merupakan  enzim  yang
dapat mengkatalis konversi androgen menjadi  estrogen  yang  akan  meningkatkan hormon  testosteron  yang  sangat  dibutuhkan dalam  spermatogenesis.  Dalam  tubulus seminiferus, testosteron berfungsi mengontrol spermatogenesis pada pembelahan meiosis dan juga
spermiogenesi. Tingginya konsentrasi testosteron akan berefek umpan balik negatif ke  hipofisis  yaitu  tidak  melepaskan  FSH atau  LH,  sehingga  akan  menghambat spermatogenesis
(Sutiarso, 1994).
Terhambatnya  FSH  ini  akan  menyebabkan terganggunya  pula  proses  mitosis  dan proliferasi spermatogonia A.
Menurut  Mudayatiningsih, et.  al (2015)  dalam  peneitiannya  menyatakan bahwa penurunan kualitas spermatozoa yang meliputi  gerakan  sperma,  viabilitas,  macam gerakan  akibat  pengaruh  pemberian  ekstrak daun sirih (Piper betle L) pada mencit jantan disebabkan  oleh  kandung  bahan  ekstrak daun  sirih  yang  mengandung  senyawa  zat kimia salah satunya tannin dan diastase yang memiliki sifat septik yang dapat menghambat  dan  mempengaruhi  sekresi GnRH  (Gonadotropin  Releasing  Hormon) yang  dilakukan  oleh  system  limbik  di  otak. Fungsi dari hormone GnRH untuk menstimulasi
pelepasan hormon gonadotropin  hipofisis  terhadap  FSH  dan LH,  sehingga  apabila  terjadi  hambatan  di GnRH,  maka  hipofisis  anterior  sebagai pengahasil  FSH  dan  LH  juga  akan dipengaruhi  dan  secara  tidak  langsung  akan memengaruhi testis terutama sel sertoli tidak mendapatkan rangsangan hormone testosterone yang di hasilkan oleh sel leydig. Kondisi  ini  akan  mempengaruhi  proses spermatogenesis,  sehingga  kualitas  sperma
Test Statistics a,b
skor Chi-Square 29.728 Df 7 Asymp. Sig. .000 a. Kruskal Wallis Test
b. Grouping Variable: perlakuan
juga  akan  terpengaruh.  Hal  ini  juga  sesuai dengan  teori  bahwa  obatan-obatan  dan ramuan  tradisional  dapat  mempengaruhi kecepatan  sekresi  GnRH  oleh  hipotalamus yang  akan  mempengaruhi  mekanisme  feed back negatif.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang didapatkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  Sirih ( Piper betle L)  berpengaruh terhadap proses spermatogenesis  pada  tikus  putih  jantan galur  wistar  ( Rattus  norvegicus ),  dan  pada hasil  pemberian  skor  johnson  penampang melintang testis yang di uji menggunanakan uji Kruskal-Wallis pada  taraf  uji  0,05 menunjukan  bahwa  terdapat  perbedaan antara pemberian skor kelompok kontrol dan kelompok perlakuan.

## SARAN
1.  Disarankan  untuk  melakukan  penelitian lebih lanjut pada daun sirih  mengunakan metode  yang  berbeda  agar  didapatkan informasi lebih mendalam sehingga dapat dijadikan acuan untuk penelitian selanjutnya.
2.  Disarankan  untuk  fraksinasi  senyawa spesifik  yang  terdapat  dalam  daun  sirih yang bersifat sebagai antifertilitas.

## DAFTAR PUSTAKA
Austin,  C.R.,  and  Short,  R.V.  1982.
Reproduction in Mammals : Book I, Germ Cells and Fertilization 2 nd
Edition. Inggris:  University  Press
Cambrigde.
Baker  DEJ,  Lindsey  JR  and  Weisbroth  SH,
1979.  The  Laboratory  Rat  Vol  1.
Biology  and  Disease.  Academic
Press 276 pp.
Clermont,  Y.1962.  Quantitative  analysis  of Spermatogenesis of Rat: A revised  model  for  renewal  of spermatogenia. Am. J. anat.
111:11-127
Costantino  A  ,  Cerpolini  S  ,  Perrone  AM  , Ghi  T  ,  Pelusi  C  ,  Pelusi  G  , Meriggiola  MC.  2007. Current status  and  future  perspectives  in male contraception . Minerva Ginecologica. 59(3):299-310
Daniel,  M.  2015.  Taksonomi:  Perjalanan Evolusi. Jakarta: EGC.
Depkes RI. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak  Tumbuhan  Obat.  Jakarta: Direktorat  Jendral  Pengawasan Obat dan Makanan.
Duke,  J.  A.,  Bogenshutz-Godwin,  M.  J.,
duCellier,  J.,  and  Duke,  P.  K. 2002.  Handbook  of  Medicinal Herbs  Second  Edition.  Florida: CRC Press LLC.
Fawcett,  D.  W.  2002. Buku  Ajar  Histologi Bloom  &  Fawcetr  12 th Edition. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran. Garner,  D.L.,  and  E.S.E.  Hafez.,  1987. Spermatozoa and Seminal Plasma. In: Reproduction in farm Animals.  Ed  Hafez  E.S.E,  1987. Ed 5th. Lea and Febiger, Philadelphia.
Harborne,  J.B.  (1987).  Metode  Fitokimia
Edisi ke dua. Bandung : ITB.
Harkness  J.E.  dan  J.E.  Wagner.  1989. The Biology  and  Medicine  of  Rabbits and  Rodents .  Philadelphia  :  Lea and Febiger.
Hartono.  1988. Histologi  Veteriner  Jilid  II.
Bogor: Fakultas Kedokteran
Hewan IPB.
Heffner,  L.  J.,  Schust,  D.J.  2005. At  a Glance  Sistem  Reproduksi  Edisi
2 . Jakarta: Erlangga.
Ilyas, S. 2007. Azoospermia dan Pemulihan Melalui  Regulasi  Apoptosis  Sel Spermatogenik  Tikus  ( Rattus sp.) Pada  Penyuntikan  Kombinasi  TU &  MPA.  Disertasi.  Program doctor Ilmu Biomedik FKUI.
Krinke, J.G. 2000. The Laboratory Rat First Edition. United  State:  Academic Press.
Mudayatiningsih, S., Dewi, E. S., Suryandari, H., dan Isnaeni. 2015.
Ekstrak Daun Sirih (Piper betle L) Dan  Kualitas  Spermatozoa  Pada Mencit  (Mus  musculus).  Jurnal Informasi  Kesehatan  Indonesia (JIKI). 1 (2) : 127-136.
Pramono,  R.  2015.  Pengaruh  Ekstrak  Daun
Sirih  Hijau  (Piper  Betle  Linn.) Terhadap Gambaran Histopatologi Dan Ketebalan Tubulus Seminiferus (Testis). Thesis. Fakultas Kedokteran
UNISSULA
Ratnasooriya,  W.  D.,  and  Premakumara.  G.
a.  s.  1997. Piper  betle Leaves Reversibly  Inhibits  Fertility  of Male  Rats.  Vidyodaya  Journal  of
Science. Vol 7 : 15-21. Satriyasa, B, K. 2005.Fraksi Heksan Ekstrak Biji Pepaya Muda Dapat Menghambat Proses Spermatogenesis  Mencit  Jantan
Lebih  Besar  Daripada  Fraksi
Metanol  Ekstrak  Biji  Papaya Muda.
Sherwood, L. 2007. Human physiology from cells  to  systems  6th  Edition. California: Thomson Higher Education
Sirait,  M.,  Loohu,  E.,  dan  Sutrisno,  R.B . 1980. Materi  Medika  Indonesia Jilid  IV .  Jakarta:  Dirjen  POM, Departemen Kesehatan RI. Smith,  J.B.  dan  Mangkoewidjojo  S.  1987.
The Laboratory Rat (Rattus norvegicus). In: The Care, Breeding  and  Management  of Experimental Animals for Research  in  The  Topiks.  J.B. Smith  (Edt.)  IDP.  Australia  p.36- 52.Sulistyawati, A. 2011.
Pelayanan  Keluarga  Berencana . Jakarta: Salemba
Susetyarini, R., E. 2009. Efek senyawa aktif daun  beluntas  terhadap  kadar testoteron  Tikus  putih  ( Ratus norwegicus )  jantan.  GAMMA.  5
(1): 21 – 27.
Sutyarso,  dkk.  1994.  Efek  anti  fertilitas ekstrak  buah  pare  (M.  charantia L.)  pada  mencit  jantan.  Majalah Kedokteran  Indonesia.  44  (12).
Hal. 729–735. Syamsu,  H.,  dan  Hutapea,  J.  R.  1997 . Inventaris Tanaman Obat Indonesia .  Jakarta:  Depkes  RI. Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Jakarta. Toelihere,  M.R.  1985. Fisiologi  Reproduksi pada  Ternak .  Bandung:  Penerbit Angsa.
Wischnitzer,  S.  1967. Anatomy  of  The  Cat: Atlas  and  Dissection  Guide  for
Comparative Anatomy 2 nd
Edition. Francisco: W.H. Freeman and Company.