## ORGANOGENESIS TANAMAN KACANG HIJAU ( Vigna radiata L.) PADA BEBERAPA KONSENTRASI ZAT PENGATUR TUMBUH SITOKININ DAN GIBERELIN SECARA IN VITRO
Organogenesis  of  mung  bean  plants  (Vigna  radiata  L.)  on  several  growth regulator concentrations of cytokine and gibberellin in vitro
Sartia Hama* dan Lisa Widianti
Program Studi Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Cokroaminoto Palopo, Palopo, Indonesia
Doi: 10.37195/jac.v1i2.75

## *KORESPONDENSI ABSTRACT
Telepon: +62-852-4204-2376 E-mail: sartiahamma@yahoo.com This study aims to determine the organogenesis of mung  bean plants (Vigna radiata L. ) in several concentrations of cytokine  and gibberellin  growth regulators In Vitro. The method used was a Completely Randomized Design (CRD) with 6 treatments, 4 replications so that there were 24 experimental units. The concentration level used was P0 = no treatment, P1 = 2.5 ppm BAP + 2 ppm GA, P2 = 3.5 ppm BAP + 3 ppm GA, P3 = 4.5 ppm BAP + 4 ppm GA, P4 = 5.5 ppm BAP + 5 ppm GA, P5 = 6.5 ppm BAP + 6 ppm GA. The results showed that the growth regulator BAP and GA that  given to each treatment had no significant effect on all parameters, this was due to the lack of elements of nitrogen to stimulate plant growth. The most effective treatment was found in P4 with a concentration 5.5 ppm BAP + 5 ppm GA which had the average value of germination age of 2 days after planting, then the average value of plantlets height was 10.07 cm, the average number of roots and number of leaves were as much as 2 strands, while the number of plantlet weight was 0.35.

## JEJAK PENGIRIMAN
Diterima: 13 Jul 2019 Revisi Akhir: 27 Agu 2019 Disetujui: 31 Aug 2019

## KEYWORDS
Mung bean plants, Growth regulators, In vitro
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui organogenesis tanaman kacang hijau ( Vigna radiata L.) pada beberapa konsentrasi zat pengatur tumbuh sitokinin dan giberelin secara In Vitro . Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 6 perlakuan 4 ulangan sehingga terdapat 24 unit percobaan. Taraf konsentrasi yang digunakan P0= kontrol (tanpa perlakuan), perlakuan P1=2,5 ppm BAP+2 ppm GA, P2=3,5 ppm BAP+3 ppm GA, P3=4,5 ppm BAP+4 ppm GA, P4=5,5 ppm BAP+5 ppm GA, P5=6,5 ppm BAP+6 ppm GA, pengamatan dilakukan dengan mengamati umur berkecambah (HST), tinggi tanaman (cm), jumlah akar (helai), jumlah  daun (helai), bobot planlet (g). Hasil penelitian menunjukan bahwa pemberian zat pengatur tumbuh BAP dan GA yang diberikan pada masing-masing perlakuan tidak berpengaruh nyata terhadap semua parameter, hal ini disebabkan karena kurangnya unsur nitrogen untuk memacu pertumbuhan tanaman. Perlakuan yang paling efektif terdapat pada P4 dengan konsentrasi 5,5 ppm BAP+5 ppm GA, dengan nilai rata-rata umur perkecambahan 2 hari setelah tanam, kemudian nilai rata-rata tinggi planlet yaitu 10,07 cm, rata-rata jumlah akar dan  jumlah daun yaitu sebanyak 2 helai sedangkan jumlah bobot planlet yaitu 0,35.

## KATA KUNCI
Tanaman  kacang  hijau,  Zat pengatur tumbuh, In vitro

## PENDAHULUAN
Tanaman kacang hijau ( Vigna radiata L.) merupakan salah satu tanaman pangan sumber protein nabati. Kandungan protein kacang hijau sebesar 22% menempati urutan ketiga setelah kedelai dan kacang tanah (Purwono  &  Hartono, 2005). Kacang hijau sangatlah bermanfaat bagi tubuh manusia karena selain mengandung protein, karbohidrat, lemak dan kalsium, juga mengandung beberapa vitamin. Menurut Rukmana (1997) dalam 100 g kacang hijau mengandung protein sebesar 22,00 g, lemak 1,20 g, karbohidrat 62,90 g, air 10,00 g, kalsium 125,00 mg, vitamin A 57,00 mg, vitamin B 0,64 mg dan vitamin C sebesar 6,00 mg. Produksi kacang hijau di Indonesia masih tergolong rendah, yaitu mencapai 0,78 ton/ha, sedangkan rata-rata produksi varietas unggul yang dianjurkan baru mencapai sekitar 1,6 ton/ha, padahal pada kondisi lingkungan yang baik hasil kacang hijau dapat mencapai 2.500- 2.800 kg/ha (Soemarno,  Sutama, &  Soegito 1989; Soeprapto, 1993).
Kacang hijau memiliki permintaan produksi yang sangat tinggi setiap tahunnya, namun hal ini tidak sebanding dengan produksi kacang hijau yang terus mengalami penurunan disebabkan oleh jumlah bibit yang terbatas. Teknik budidaya yang baik dan tepat menjadi salah satu cara untuk meningkatkan produksi tanaman kacang hijau. Salah satu upaya untuk meningkatkan pertumbuhan dan produksi tanaman kacang hijau adalah dengan teknik kultur jaringan. Kultur jaringan merupakan suatu metode untuk mengisolasi bagian dari tanaman untuk memperbanyak jumlah bibit kacang hijau dalam waktu yang singkat. Menurut Gunawan  (1987) kultur jaringan merupakan salah satu cara perbanyakan tanaman secara vegetatif. Kultur jaringan merupakan salah satu cara perbanyakan tanaman dengan cara mengisolasi bagian-bagian atau organ tanaman seperti kalus, daun, mata dan tunas, untuk dikembangkan dalam media buatan yang aseptik  dan penambahan nutrisi dan zat pengatur tumbuh pada wadah tertutup sehingga bagian tanaman dapat memperbanyak atau menggandakan diri dan bergenerasi menjadi tanaman lengkap
yang memiliki akar, batang dan daun. Dalam proses kultur jaringan ini perlu penambahan senyawa organik tetapi bukan nutrisi yaitu zat pengatur tumbuh. Hendaryono dan Wijayani (1994) menyatakan bahwa,  zat pengatur tumbuh (ZPT) merupakan hormon sintetis dari luar tubuh tanaman. Zat pengatur tumbuh memiliki fungsi untuk merangsang perkecambahan, pertumbuhan akar dan tunas. Zat pengatur tumbuh terbagi atas beberapa macam antara lain auksin, sitokinin dan giberelin. Bahan aktif yang mengandung auksin alami antara lain Indol Asam Asetat (IAA), Indol Asam Butirat (IBA) dan untuk auksin sintetik yaitu Naftalen Asam Asetat (NAA), dan 2,4 D Dikhlorofenoksiasetat (2,4 D). Bahan yang mengandung sitokinin alami yaitu air kelapa, jagung muda dan bonggol pisang sedangkan zat pengatur tumbuh sitokinin sintetik antara lain N6-Benziladenin (N6-BA). Demikian rebung dan bawang merah tekandung giberelin alami.
Berdasarkan masalah yang dihadapi dalam pengembangan kacang hijau adalah masih rendahnya produksi yang dicapai petani. Rendahnya hasil disebabkan oleh budidaya yang kurang baik, terbatasnya ketersediaan bibit unggul, adanya serangan penyakit dan virus. Adapun tujuan pada penelitian ini adalah 1) mengetahui pengaruh zat pengatur tumbuh sitokinin dan giberelin terhadap organogenesis tanaman kacang hijau dan 2)  mengetahui berapa konsentrasi zat pengatur tumbuh sitokinin dan giberelin yang efektif terhadap organogenesis tanaman kacang hijau secara in vitro.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah benih bina bermutu tinggi;  gula putih;  air kelapa;  aquades steril; agar-agar putih (Swallow  Globe)  diproduksi oleh PT. Dunia Bintang Walet, Jakarta, Indonesia; zat pengatur tumbuh sitokinin yaitu BAP dan Giberelin yaitu GA diproduksi oleh PT.  Indo Biotech Agro, Jawa Timur, Indonesia; alkohol 70%; alkohol 96%; spirtus; klorox (Bayclean)  diproduksi oleh PT. Tanshania Consumer, Jakarta, Indonesia.

## Desain Penelitian
Penelitian ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL), yang terdiri dari 6 perlakuan yang diulang sebanyak 4 kali sehingga terdapat 24 unit percobaan. Adapun percobaannya, yaitu: P0 = Media MS + 0 ppm BAP + 0 ppm GA (Kontrol) P1 = Media MS + 2,5 ppm BAP + 2 ppm GA
P2 = Media MS + 3,5 ppm BAP + 3 ppm GA
P3 = Media MS + 4,5 ppm BAP + 4 ppm GA P4 = MediaMS  + 5,5 ppm BAP + 5 ppm GA P5 = Media MS + 6,5 ppm BAP + 6 ppm GA Data  pengamatan  kemudian dianalisis menggunakan sidik ragam (Analisis Sidik Ragam), selanjutnya data diuji dengan beda nyata jujur (BNJ) pada taraf 5%.
Sterilisasi Alat Tanam
Pada tahap sterilisasi alat tanam, pertama-tama  dilakukan  pencucian  botol dengan menggunakan sabun cuci  piring  dan dibilas dengan air bersih. Setelah itu botol direndam menggunakan baskom yang berisi klorox  dan  air selama 24 jam, kemudian ditiriskan  pada  keranjang. Lalu botol-botol tersebut disusun dengan rapi ke dalam autoklaf untuk sterilisasi botol, setelah itu autoklaf tersebut ditutup rapat, kemudian skruf autoklaf diputar sekeras mungkin dengan berlawanan arah. Autoklaf kemudian dinyalakan dan ditunggu hingga mengeluarkan uap pada salah satu tutup klep autoklaf,  dan segera dilakukan perhitungan lamanya penguapan sterilisasi botol  (30-45 menit, dengan suhu 121ºC).  Botol yang telah disterilkan kemudian dikeluarkan dan disimpan pada lemari kaca steril dan bebas dari debu.  Kemudian  sterilisasi cawan petridis, pinset, scalpel dibersihkan dengan menggunakan  sabun cuci kemudian dibilas dan ditiriskan, setelah ditiriskan dibungkus dengan kertas,  kemudian dimasukan  dalam autoklaf.  Setelah  semua alat  tanam  steril, kemudian disimpan di dalam lemari kaca yang sudah steril dan bebas dari debu.

## Pembuatan Media
Media tanam merupakan salah satu bahan terpenting dalam proses kultur jaringan. Pada pembuatan media tanam, dimulai dengan penyiapan  bahan-bahan dan alat yang diperlukan,  seperti gelas ukur, gula putih,
agar-agar putih dan pH  meter, setelah itu agar-agar 3,5  g, dan gula 15  g  ditimbang, kemudian dosis masing-masing stok diukur sesuai dengan dosis penelitian.  Kemudian air kelapa sebanyak 50 ml dan aquades sebanyak 500 ml dimasukkan ke dalam gelas ukur untuk pembuatan  media MS.  Kemudian semua bahan  dicampur menjadi satu dan dilakukan pengukuran  pH terlebih dahulu sebelum dipindahkan  panci kecil. Setelah pH diukur, maka siap untuk dimasak hingga  mendidih dan siap untuk dimasukkan ke  dalam botol steril lalu ditutup  menggunakan  aluminium foil.

## Pengambilan Eksplan dan Sterilisasi Eksplan
Eksplan yang digunakan adalah  biji kacang hijau. Pengambilan eksplan dilakukan dengan memilih biji kacang hijau yang memiliki kualitas bagus yang terhindar dari hama dan penyakit.  Proses sterilisasi eksplan dilakukan dengan cara mencuci biji tersebut menggunakan fungisida selama 20 menit, kemudian ditiriskan. Setelah itu, eksplan kemudian direndam  menggunakan  aquades selama 20 menit. Setelah 20 menit, biji kacang hijau  kembali disterilkan pada LAF ( Laminar Air Flow ) dengan cara merendam kembali dengan air steril sebanyak 3 kali,  dengan durasi perendaman masing-masing 5 menit.
Proses pencucian dilakukan dengan  cara memasukkan biji kacang hijau ke dalam gelas dan diberi air steril  kemudian dilakukan perendaman  selama 5 menit, setelah itu air rendaman  dibuang dan diganti dengan air baru,  lalu kemudin diaduk kembali. Setelah bersih, biji kacang hijau tersebut  diletakkan pada cawan petri steril. Cawan petri diisi, ditutup,  dan  kemudian  didiamkan selama beberapa menit sebelum eksplan siap untuk ditanam.

## Inokulasi/Penanaman
Penanaman eksplan  pada tempat steril dilakukan dengan mengambil eksplan, kemudian  diletakkan di atas cawan petri. Eksplan kemudian diambil menggunakan pinset dan dimasukkan ke dalam botol dan ditutup rapat menggunakan aluminium foil.

## Variabel Pengamatan
Pengamatan dilakukan setelah tanaman berkecambah dan pengamatan berikutnya
dilakukan setelah tanaman tumbuh  (sesuai dengan variabel pengamatan). Ada beberapa variabel pengamatan yang diamati dan diukur dalam penelitian ini yaitu, umur berkalus (hari setelah kultur), tinggi planlet (cm), jumlah akar (helai), jumlah daun (helai), bobot planlet (g).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Umur Berkecambah Hasil penelitian menunjukan bahwa konsentrasi zat pengatur tumbuh BAP dan GA memiliki hasil yang sama pada parameter umur berkecambah tanaman kacang hijau. Hasil penelitian menunjukkan bahwa,  pada semua perlakuan menghasilkan umur berkecambah tanaman kacang hijau paling cepat 2 hari setelah tanam. Hal ini disebabkan karena eksplan pada kacang hijau lunak sehingga proses perkecambahan sangat cepat. Kecambah adalah biji-bijian yang mengalami perubahan fisik dan kimiawi yang disebabkan oleh proses metabolisme. Menurut Salisbury dan  Ross  (1995),  metabolisme adalah reaksi kimia yang memungkinkan adanya kehidupan dalam proses pertumbuhan.
Gbr  1.  Diagram  umur  berkecambah  tanaman kacang hijau
Tinggi Tanaman Hasil rata-rata tinggi tanaman kacang hijau dengan pemberian zat pengatur tumbuh BAP dan GA menunjukkan nilai yang berbeda- beda dan konsentrasi yang berbeda-beda pada parameter tinggi tanaman (Gbr. 2). Pengaruh pemberian zat pengatur tumbuh BAP dan GA terhadap tinggi tanaman yang paling baik ditunjukkan oleh perlakuan P4 (5,5 ppm BAP + 5 ppm GA) dengan nilai rata-rata tinggi tanaman 10,07 cm, sedangkan yang terendah terdapat pada perlakuan P1,  dengan nilai rata-rata 7,25 cm. Pemberian giberelin dengan
Gbr 2. Diagram tinggi tanaman kacang hijau konsentrasi tertinggi dapat mempengaruhi tinggi tanamandimana giberelin dapat memacu tanaman mencapai tinggi yang maksimal. Hal ini sesuai dengan pendapat Prawiranata,  Harran, dan Tjondronegoro (1981),  yang menyatakan bahwa,  GA (giberelin) dapat memacu pertumbuhan batang dan meningkatkan pembesaran dan perbanyakan sel pada tanaman, sehingga tanaman dapat mencapai tinggi yang maksimal, sedangkan BAP (sitokinin) dapat memacu pembelahan sel.

## Jumlah Daun
Hasil penelitian menunjukan bahwa konsentrasi zat pengatur tumbuh BAP pada parameter jumlah daun tanaman kacang hijau memperlihatkan hasil yang sama. Hasil rata- rata jumlah daun tanaman kacang hijau tersebut dapat dilihat pada Gbr 3.

## Gbr  3.  Diagram  jumlah  daun  tanaman  kacang hijau
Berdasarkan hasil penelitian pada diagram jumlah daun yang disajikan pada Gbr.  3, proses pembentukan daun yang terbentuk yaitu sebanyak 2 helai. Karena proses pertumbuhan eksplan kacang hijau sangat cepat, sehingga pembentukan daunpun sangat cepat. Selain itu juga eksplan kacang hijau sangatlah lunak,  dan tingginya kadar unsur hara tersedia dapat memacu aktivitas hormon dalam pembentukan daun. Hal ini sesuai dengan pendapat Goldsworthy dan Fisher (1992) yang mangatakan bahwa,
0 1 2 3 P0 P1 P2 P3 P4 P5 U mu r B er ke camb ah Perlakuan 0 5 10 15 P0 P1 P2 P3 P4 P5 Ti ng gi Pl anl et Perlakuan 0 2 4 P0 P1 P2 P3 P4 P5 Ju ml ah D au n Perlakuan
pembentukan daun dipengaruhi oleh banyaknya rangsangan hormon.

## Jumlah Akar
Analisis sidik ragam menunjukkan bahwa untuk setiap perlakuan memperlihatkan hasil atau  nilai  yang sama, akan tetapi terdapat nilai yang berbeda-beda, yang ditunjukkan pada  perlakuan  pemberian konsentrasi zat pengatur tumbuh BAP dan GA pada variable pengamatan  jumlah akar tanaman kacang hijau.
Pengaruh pemberian zat pengatur tumbuh BAP dan GA  terhadap  jumlah akar terbanyak terdapat pada P0 (tanpa perlakuan) dengan nilai rata-rata 2,75 cm, sedangkan terendah  ditunjukkan oleh  perlakuan P1(2,5 ppm BAP + 2 ppm GA), P2 (3,5 ppm BAP + 3 ppm GA), P3 (4,5 ppm BAP + 4 ppm GA) dan P5 (6,5 ppm BAP + 6 ppm GA)  dengan nilai rata-rata 1 cm. Pemberian zat pengatur tumbuh BAP dan GA tidak memberikan respon yang baik sehingga jumlah akar pada tanaman kacang hijau sangat sedikit, sedikitnya jumlah akar kemungkinan disebabkan oleh  kurangnya  air dan mineral yang tersedia dalam media MS. Hal ini sesuai dengan pendapat,  Gardner,  Pearce dan Mitchell (1991) bahwa, akar merupakan organ vegetatif utama yang memasok  atau alat transportasi dalam proses penyerapan air dan  mineral  untuk pertumbuhan dan perkembangan tanaman, serta menjadi faktor yang  sangat  penting dalam menyerap unsur- unsur yang terdapat dalam media kultur.
Gbr 4. Diagram jumlah akar tanaman kacang hijau

## Bobot Planlet
Pemberian zat pengatur tumbuh BAP dan GA  menunjukkan  hasil yang yang berbeda- beda pada setiap perlakuan. Hasil rata-rata diameter bobot planlet dapat dilihat pada Gbr 5. Hasil analisis sidik ragam pada parameter bobot planlet yang paling baik terdapat pada perlakuan P2 (3,5 ppm BAP + 3 ppm GA) dengan rata-rata 0,38 gram, sedangkan hasil
terendah ditunjukkan oleh perlakuan P0 yaitu 0,24 gram, dibandingkan dengan perlakuan lainnya. Pemberian zat pengatur tumbuh BAP dan GA dapat mendukung pertumbuhan
Gbr  5.  Diagram  bobot  planlet  tanaman  kacang hijau
tanaman kacang hijau sehingga meningkatkan pertambahan bobot planlet kacang hijau tersebut. Utama  (2015) menyatakan bahwa, pemberian zat pengatur tumbuh sitokinin pada eksplan tanaman kacang hijau membantu proses pembelahan sel sehingga ukuran, bentuk,  dan volume planlet akan bertambah besar, dan penambahan giberelin pada eksplan tanaman kacang hijau juga akan memberi pengaruh dalam merangsang pembesaran sel.

## KESIMPULAN
Pemberian zat pengatur tumbuh BAP dan  GA dengan berbagai konsentrasi memperlihatkan hasil yang berbeda-beda dan tidak berpengaruh terhadap semua parameter pengamatan  yang terdiri dari  umur berkecambah, tinggi tanaman, jumlah daun, jumlah akar, dan bobot planlet tanaman kacang hijau. Konsentrasi yang paling efektif ditunjukkanoleh perlakuan P4 (5,5 ppm BAP + 5 ppm GA) yaitu dengan nilai rata-rata umur perkecambahan 2 hari setelah tanam, nilai rata-rata tinggi planlet  yaitu  10,07 cm,  rata- rata jumlah akar dan jumlah daun yaitu sebanyak 2 helai, sedangkan jumlah bobot planlet yaitu 0,35 g.

## DAFTAR PUSTAKA
Gardner, F. P., Pearce, R. B., & Mitchell, R. L. (1991). Fisiologi  Tanaman Budidaya .  ( Alih bahasa oleh H. Susilo & Subyanto). Jakarta: UI-Press.
Goldsworthy, P. R.,  &  Fisher N. M. (1992). Fisiologi Tanaman  Budidaya  Tropik. (Alih bahasa oleh Tohari).  Yogyakarta:  Penerbit Gadjah Mada University Press.
0 2 4 P0 P1 P2 P3 P4 P5 Ju ml ah A kar Perlakuan 0 0.2 0.4 0.6 P0 P1 P2 P3 P4 P5 Bo bo t Pl anl et Perlakuan
Gunawan, L. W. (1987). Teknik Kultur Jaringan Tumbuhan .  Bogor: Laboratorium Kultur Jaringan Tanaman, PAU Bioteknologi, IPB
Bogor.
Hendaryono, D. P. S.,  &  Wijayani, A.  (1994). Teknik Kultur Jaringan: Pengenalan dan Petunjuk Perbanyakan Tanaman secara Vegetatif-Modern .  Yogyakarta: Penerbit Kanisius. Purwono, & Hartono, R. (2005). Kacang Hijau . Jakarta: Penebar Swadaya. Prawiranata, Harran, W. S., & Tjondronegoro,
P. (1981). Dasar-dasar Fisiologi Tumbuhan II . Bogor. Fakultas Pertanian IPB. Rukmana. (1997). Ubi Jalar-Budidaya dan Pasca
Panen . Yogyakarta: Penerbit Kanisius.
Salisbury, F. B., & Ross, C. W. (1995). Fisiologi
Tumbuhan (Jilid  3, Diterjemahkan oleh Diah R. Lukman &  Sumaryono). Bandung: Penerbit ITB.
Soemarno,  F., Sutarman, T., & Soegito, J. S. (1989). Grain legume breeding for wetland and for acid soil adaptation: final report of project  legume varietal selection for condition after lowland rice and for acid soil (Phase I). Central Research Institute for Food Crops , 1984-1988.
Soeprapto, H.  S. (1990). Bertanam  Kacang Hijau . Jakarta: Penebar swadaya.
Utama, M.  Z.  H. (2015). Budidaya Padi pada
Lahan Marginal: Kiat Meningkatkan Produksi Padi. Yogyakarta: CV. Andi Offset.