p-ISSN: 2086-8277 e-ISSN: 2807-3282

## UJI POTENSI MIKROB RIZOSFER SEBAGAI PENGENDALI HAYATI PENYEBAB PENYAKIT TANAMAN

## Potential Test of Rizosphere Microbes as Biological Controls that Cause Plant Diseases
Yunik Istikorini 1* dan Thurfah Budiman 1
(Diterima 08 November 2023 /Disetujui 27 November 2023)

## ABSTRACT
Biological control is an alternative to reducing the use of pesticides because it can suppress the growth of plant pathogens and has no negative impact on the environment. This study aimed to test the effectiveness of rhizosphere microbes  as  biological  controllers  that  cause  plant  diseases.  This  study  contains  three  rhizosphere  microbes (Trichoderma  sp.,  Gliocladium  sp.,  Bacillus  sp.)  and  three  pathogenic  test  fungi  (Rhizoctonia  sp.,  Sclerotium  sp., Botryodiplodia sp.) were used. This study was divided into three experiments, namely (1) an in vitro antagonist test, (2)  a  secondary  metabolite  test,  and  (3)  a  growth  test  on  sengon  seeds  (in  vivo).  The  parameters  measured  were percentage  inhibition,  germination  rate,  growth  rate,  disease  incidence,  and  disease  intensity.  The  fungus Trichoderma sp. and Gliocladium sp. can inhibit the growth of pathogenic fungi Sclerotium sp., Rhizoctonia sp., and Botryodiplodia sp. ranging from 61.82% to 80.00%. Secondary metabolites of the fungus Gliocladium sp. are more able  to  inhibit  the  mycelia  growth  of  pathogenic  fungi  Rhizoctonia  sp.,  Sclerotium  sp.,  and  Botryodiplodia  sp. compared  to  the  fungus  Trichoderma  sp.  with  inhibition  values  were  71.13%,  33.83%,  23.58%,  respectively. Gliocladium sp., Trichoderma sp., and Bacillus sp. can suppress disease incidence (14.29%, 12.38%, and 15.24%) and intensity of damping-off attacks caused by Rhizoctonia sp. (8.91%, 8.57%, and 9.43%). This shows that biological agents have the potential to control plant diseases
. Keywords: Bacillus aereus, damping-off, secondary metabolites, Trichoderma

## ABSTRAK
Pengendalian  hayati  merupakan  alternatif  untuk  mengurangi  penggunaan  pestisida  karena  dapat  menekan pertumbuhan patogen tanaman tanpa berdampak negatif terhadap lingkungan. Tujuan penelitian ini adalah menguji efektivitas mikroba rizosfer sebagai pengendali hayati penyebab penyakit tanaman. Pada penelitian ini menggunakan tiga mikroba rizosfer ( Trichoderma sp., Gliocladium sp., Bacillus sp.) dan tiga cendawan patogen uji ( Rhizoctonia sp., Sclerotium sp., Botryodiplodia sp.). Penelitian terdiri dari tiga percobaan: (1) uji antagonis secara in vitro , (2) uji metabolit sekunder, dan (3) uji pertumbuhan pada benih sengon ( in vivo ). Parameter yang diukur meliputi persentase penghambatan,  daya  kecambah,  kecepatan  tumbuh,  kejadian  penyakit,  dan  intensitas  penyakit.  Cendawan Trichoderma  sp. dan Gliocladium sp.  mampu  menghambat  pertumbuhan  cendawan  patogen Sclerotium sp., Rhizoctonia sp.,  dan Botryodiplodia sp.  berkisar  antara  61,82%  hingga  80,00%.  Metabolit  sekunder  cendawan Gliocladium sp. lebih efektif menghambat pertumbuhan miselia cendawan patogen Rhizoctonia sp., Sclerotium sp., dan Botryodiplodia sp.  dibanding  cendawan Trichoderma sp.  dengan  nilai  penghambatan  berturut-turut  asebesar 71,13%, 33,83%, 23,58%. Gliocladium sp ., Trichoderma sp., dan Bacillus sp. mampu menekan kejadian penyakit (14,29%, 12,38%, dan 15,24%) serta intensitas serangan damping-off yang disebabkan Rhizoctonia sp. (8,91%, 8,57%, dan  9,43%).  Hasil  ini  menunjukkan  agensia  hayati Trichoderma sp., Gliocladium sp., Bacillus sp.  berpotensi mengendalikan penyakit tanaman.
Kata kunci:  agensia hayati, damping-off , metabolit sekunder, Trichoderma
1 Departemen Silvikultur, Fakultas Kehutanan dan Lingkungan, IPB University. Jalan Ulin Kampus IPB, Dramaga, Bogor, Jawa Barat, Indonesia, 16680
* Penulis korespondensi: e-mail: yunik.istikorini@gmail.com

## PENDAHULUAN
Penggunaan  pestisida  dalam  pertanian  saat  ini semakin  meningkat,  meskipun  pestisida  merupakan bahan beracun dan berbahaya yang dapat menimbulkan dampak  negatif  jika  tidak  dikelola  dengan  baik. Tingginya  intensitas  penggunaan  pestisida  dalam spektrum  yang  luas  mengakibatkan  berbagai  efek samping  yang  membahayakan.  Oleh  karena  itu, diperlukan  upaya  untuk  mengendalikan  hama  dan penyakit dengan cara yang lebih aman dan efektif. Salah satu  alternatif  yang  diusulkan  untuk  mengurangi penggunaan  pestisida  adalah  pengendalian  hayati. Pengendalian  hayati  merupakan  suatu  strategi  di  mana manusia memanipulasi musuh alami untuk mengendalikan atau menekan populasi hama. Pendekatan ini dianggap lebih aman terhadap kesehatan manusia,  ramah  lingkungan,  mendukung  pengelolaan penyakit tanaman secara berkelanjutan, dan mendukung pertanian organik (Muslim 2019).
Pengendalian hayati melibatkan manipulasi ekosistem  dengan  memanfaatkan  interaksi  antara populasi musuh alami dan hama yang akan dikendalikan (Sopialena 2018). Potensi pengendalian hayati mencakup perlindungan  tanaman  sepanjang  siklus  hidupnya, dengan  beberapa  mikroorganisme  mampu  memberikan manfaat ganda, seperti produksi hormon tumbuh, fiksasi nitrogen,  dan  pelarutan  fosfor  (Sutariati  dan  Wahab 2010).
Mikrob  rizosfer,  termasuk  bakteri  dan  fungi, memiliki  peran  penting  dalam  meningkatkan  kesehatan tanaman  dan  dapat  berpotensi  sebagai  agen  pengendali hayati terhadap patogen tanaman (Hanudin dan Marwoto 2012).  Potensi  besar  mikrob  rizosfer  sebagai  agensia pengendalian  hayati  telah  diakui  (Hasanuddin  2003), karena  penggunaannya  tidak  meninggalkan  residu  dan tidak menyebabkan resistensi tanaman terhadap penyakit (Zuraidah et al. 2020).  Penerapan agensia hayati dalam pupuk  organik  juga  dapat  meningkatkan  efisiensi pemupukan.
Interaksi  kompleks  antara  mikroba  rizosfer  dan tanaman telah terbukti mampu meningkatkan ketahanan tanaman terhadap penyakit. Oleh karena itu, uji potensi mikroba rizosfer sebagai pengendali hayati menjadi suatu aspek yang krusial dalam upaya meminimalkan dampak negatif  penyakit  tanaman  terhadap  produksi  pertanian. Pengendalian  hayati  dengan  mikrob  rizosfer,  seperti Gliocladium sp., Trichoderma sp.,  dan Bacillus sp., memiliki  potensi  tertentu. Gliocladium sp.  dapat mengendalikan  organisme  patogen  penyebab  penyakit tanaman, dan semakin banyak cendawan Gliocladium sp. dalam tanah, semakin besar daya antagonisnya (Herlina 2013). Trichoderma sp.,  sebagai  cendawan  saprofit tanah,  secara  alami  merupakan  parasit  yang  dapat menyerang berbagai jenis cendawan penyebab penyakit tanaman atau memiliki spektrum pengendalian yang luas (Berlian et al. 2013). Bacillus sp. memiliki potensi dalam memacu  pertumbuhan  tanaman  dan  meningkatkan ketahanan terhadap penyakit karena mampu menghasilkan  antibiotik,  asam  sianida,  siderofor,  dan enzim ekstraseluler yang melisis sel patogen (Zuraidah et al. 2020).

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  dalam  rentang  waktu  dari bulan  Januari  hingga  April  2022  di  Laboratorium Patologi,  Departemen  Silvikultur,  Fakultas  Kehutanan dan Lingkungan, IPB University.

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini mencakup autoclave , laminar  air  flow ,  timbangan digital, cawan Petri, erlenmeyer , kompor, tabung reaksi, bunsen, jarum ose, gelas ukur, plastik, cork borer , shaker, miliphore  2  mm,  kassa,  kertas  saring,  corong,  plastik wrapping, label, tissue, kapas, alat tulis, dan kamera.
Bahan-bahan yang digunakan terdiri dari chloramphenicol ,  alkohol  70%,  akuades,  air  steril, spirtus, media PDA ( Potato Dextrose Agar ), dan media PDB  ( Potato  Dextrose  Broth ),  serta  media  tanam  yang terdiri  dari  campuran  tanah  dan  pasir.  Benih  yang digunakan  adalah  benih  sengon,  sementara  isolat mikroba  rizosfer  yang  melibatkan Bacillus sp., Gliocladium sp.,  dan Trichoderma sp.  juga  termasuk dalam bahan penelitian.
Selain itu, terdapat isolat patogen seperti Rhizoctonia sp.  yang  merupakan  penyebab  penyakit damping-off pada  sengon, Sclerotium sp.  yang menyebabkan penyakit busuk batang pada kacang tanah, dan Botriodiplodia sp. yang menjadi penyebab penyakit hawar daun jabon.

## Persiapan media dan peremajaan isolat mikrob
Media  yang  digunakan  dalam  mendukung  proses penelitian  ini  adalah  media  PDA  dengan  antibiotik ( chloramphenicol )  dan  PDB Pada  media  PDA  yang digunakan  untuk  menguji  aktivitas  antagonis Bacillus sp.,  tidak  ada  penambahan  antibiotik  pada  formulasi tersebut.
roses  peremajaan  isolat  mikroba  antagonis  hayati, seperti Trichoderma sp., Gliocladium sp.,  dan Bacillus sp. serta pathogen seperti Rhizoctonia sp., Sclerotium sp., dan Botryodiplodia sp.,  dilakukan  dengan  mengambil inokulum  dari  kultur  murni  menggunakan  jarum  ose. Selanjutnya,  inokulum  tersebut  diinkubasi  selama  satu minggu  pada  suhu  ruang  untuk  memastikan  kondisi optimal bagi perkembangan mikroba tersebut.

## Uji Antagonis Agensia Hayati secara in vitro
Pengujian  antagonis  dalam  kondisi in  vitro dilaksanakan  dengan  memanfaatkan  agensia  hayati, yakni Trichoderma sp.  dan Gliocladium sp.,  terhadap patogen Rhizoctonia sp., Sclerotium sp., dan Botryodiplodia sp.  Pendekatan  yang  diterapkan  adalah metode double  culture ,  dimana  potongan  biakan  murni dari patogen dipasangkan dengan agensia hayati (dengan diameter ± 0,5 cm) di dalam cawan Petri yang telah diisi dengan media PDA.
Pertumbuhan cendawan diamati setiap hari, mulai 1 hari  setelah  inokulasi  (HSI)  hingga  7  hari  setelah inokulasi (Supriati et al. 2010). Persentase
penghambatan  diukur  dengan  menggunakan  rumus (Ruswandari et al. 2020).
𝑷 = r1-r2 r1 𝐱 𝟏𝟎𝟎%
Keterangan: P  = persentase  penghambatan  cendawan  terhadap pathogen r1  =  panjang jari-jari patogen pada perlakuan kontrol r2  =  panjang  jari-jari  patogen  pada  perlakuan  uji antagonis

## Uji Metabolit Sekunder
Cendawan  antagonis  yang  digunakan  dalam  uji metabolit ini yaitu Trichoderma sp. dan Gliocladium sp. Isolat  cendawan  tersebut  dimasukkan  ke  dalam Erlenmeyer berukuran 250 mL yang berisi 100 mL media PDB  dan  satu erlenmeyer lainnya  berisi  hanya  media PDB  sebagai  kontrol  dengan  jumlah  yang  sama. Selanjutnya,  tahap  inkubasi  dilakukan  menggunakan rotary shaker dengan kecepatan 120 rpm selama 14 hari (Amaria et  al. 2015).  Setelah  14  hari,  media  disaring menggunakan kertas saring agar fraksi air dapat terpisah dari  miselium  cendawan  antagonis.  Supernatan  diambil dengan menggunakan filter syringe 0,2 mm ( miliphore ), lalu  dimasukkan  masing-masing  sebanyak  5  mL  ke dalam cawan Petri dan dicampurkan dengan media PDA cair  secukupnya.  Setelah  media  padat,  dilakukan inokulasi patogen pada bagian tengah PDA berdiameter 0,5 cm, dan perkembangannya diamati selama 7 hari.
Parameter yang diamati yaitu diameter patogen dan persentase penghambatnya. Rumus persentase penghambatan patogen yaitu (Shentu et al. 2014):
P ( % ) = ( DK-DP ) DK x100%
Keterangan: P =  persentase penghambatan pertumbuhan patogen DK  =  diameter koloni patogen pada perlakuan kontrol DP  =  diameter koloni patogen pada perlakuan
Uji  Pertumbuhan Benih Sengon di  Rumah Kaca (in vivo)
Media  tanam  yang  digunakan  adalah  campuran tanah dan pasir yang telah diayak dan disterilkan dengan perbandingan  1:1.  Benih  sengon  yang  akan  digunakan dipilih  yang  berkualitas  baik  dan  seragam.  Langkah selanjutnya  melibatkan  pematahan  dormansi  dengan merendam  benih  sengon  dalam  air  panas  dan membiarkannya  hingga  dingin  selama  24  jam (Krisdayani et  al. 2020).  Setelah  periode  tersebut, tiriskan benih  yang telah direndam  dan susun  sebanyak 35 benih ke dalam cawan Petri.
Aplikasi agensia hayati dilakukan sebelum penanaman benih  dengan menaburkan 50 g pada setiap media  tanam.  Aplikasi  patogen,  yaitu Rhizoctonia sp., diberikan  setelah  3  HSI.  Penyiraman  dilakukan  secara seragam, yakni sekitar 10-20 mL setiap harinya. Peubah yang  diamati  meliputi  daya  kecambah,  kecepatan pertumbuhan, kejadian penyakit, dan intensitas penyakit. Pengamatan dilakukan selama periode 16 hari.

## 1. Daya Kecambah (%)
Daya  kecambah  adalah  kemampuan  benih  untuk tumbuh  dan  berkecambah  secara  normal  dan  dihitung menggunakan  rumus  (Oktavia  dan  Miftahorrachman 2012):
Daya Kecambah (%)
= Jumlah benih berkecambah Jumlah benih ditabur X 100%

## 2. Kecepatan Tumbuh (%/etmal)
Kecepatan  tumbuh  benih  merupakan  pertambahan persentase  kecambah  normal  per  hari  yang  tumbuh, dihitung dengan menggunakan rumus (Sajdad 1993):
Kct  = ∑ N t tn 0
Keterangan:
Kct  = kecepatan tumbuh (%/etmal)
N  = pertambahan  %  kecambah  normal  setiap  waktu pengamatan
t = waktu pengamatan
tn  = waktu akhir pengamatan
3. Kejadian Penyakit (%)
Parameter  kejadian  penyakit  ( disease  incidence ) menunjukkan  persentase  kecambah  yang  terserang penyakit dibandingkan total kecambah yang ada dengan rumus sebagai berikut (Istikorini dan Yulia Sari 2020):
KP  = n N × 100%
Keterangan: KP  = kejadian penyakit N = jumlah  kecambah  yang  terserang  patogen Rhizoctonia sp.
N  = jumlah total kecambah yang diamati
4. Intensitas Serangan (%)
Intensitas  keparahan  penyakit  ( disease  severity ) menunjukkan  persentase  tingkat  keparahan  penyakit dengan rumus sebagai berikut (Istikorini dan Yulia Sari 2020):
IKP  = ∑ (ni x vi) N x Z ×100%
Keterangan: IKP = intensitas keparahan penyakit
ni   = jumlah  kecambah  yang  terserang  penyakit  pada skor ke-i
vi   = jumlah total kecambah yang diamati Z   = nilai  skor  tertinggi  yang  digunakan  pada klasifikasi skoring

## Penentuan Skor
Penentuan  skor  yaitu  menentukan  gejala  serangan pada  pertumbuhan  sengon  dari  gejala  paling  ringan hingga  gejala  paling  berat  (tanaman  mati).  Tujuan skoring untuk mengetahui tingkat serangan yang terjadi pada  pertumbuhan  sengon.  Penentuan  skor  dilakukan berdasarkan Tabel 1.

## Analisis Data
Analisis data dilakukan melalui uji sidik ragam yang diperoleh dari pengolahan data menggunakan perangkat lunak  Microsoft  Excel  dan  SAS  9.0 portable .  Jika  (1) nilai  P- value >  α  (0,05),  maka  perlakuan  tidak memberikan  pengaruh  yang  signifikan  terhadap parameter. Sebaliknya, jika (2) nilai P-value < α (0,05), maka  perlakuan  memberikan  pengaruh  yang  signifikan terhadap parameter. Jika analisis menunjukkan pengaruh yang  signifikan,  maka  langkah  selanjutnya  adalah melakukan uji Duncan’s Multiple Range Test (DMRT).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji Antagonis Agensia Hayati secara in vitro
Uji antagonis merupakan mekanisme yang dilakukan oleh suatu mikroorganisme untuk menghambat  pertumbuhan  organisme  lain.  Mekanisme ini  melibatkan  produksi  senyawa  antibiotik,  yang bertujuan  untuk  menghambat  pertumbuhan  organisme lain (Putra dan Purwantisari 2018). Berdasarkan Tabel 2, daya  hambat  agensia  hayati Gliocladium sp.  dan Trichoderma sp.  terhadap  patogen Sclerotium sp., Rhizoctonia sp.,  dan Botryodiplodia sp.  berturut-turut cukup  tinggi,  yaitu  berkisar  antara  61,82%  sampai 80,00%.
Gliocladium sp.  dan Trichoderma sp.  memiliki pertumbuhan  yang  cepat,  sehingga  miselium  cendawan patogen  terdesak  dan  tidak  mendapatkan  ruang  untuk
tumbuh.  Salah  satu  faktor  penting  dalam  menentukan aktivitas  cendawan  antagonis  yaitu  kemampuan berkompetisi.  Adanya  kompetisi  agensia  hayati  dengan patogen  dapat  menghambat  pertumbuhan  karena  tidak memiliki  ruang  untuk  tempat  tumbuhnya  (Octriana 2011).
Mekanisme  antagonis Gliocladium sp.  maupun Trichoderma sp.  terjadi  secara  kompetitif  karena memiliki kecepatan tumbuh yang tinggi, selain itu kedua cendawan  ini  dapat  menghasilkan  produk  ekstraseluler yang  bersifat  racun.  Menurut  Singh et  al. (2002), cendawan yang menghasilkan antibiotik penting adanya dalam menentukan kemampuan mengkolonisasi.  Racun yang  dikeluarkan  dapat  menghasilkan  endolisis  atau autolisis, yaitu sitoplasma yang pecah pada patogen yang mengakibatkan  kematian  dan  tingkat  efektivitas tergantung  dari  kualitas  maupun  kuantitas  microba tersebut.
Cendawan Gliocladium sp.  merupakan  cendawan antagonis yang mampu menghambat patogen tular tanah seperti Sclerotium sp., Rhizoctonia sp.,  maupun Botryodiplodia sp.  (Gambar  1)  Cendawan  ini  tidak mematikan  patogen  secara  langsung,  namun  mampu menekan pertumbuhan ketiga patogen tersebut. Gliocladium sp.  merupakan  cendawan  saprofit  yang mudah ditemukan di berbagai jenis tanah.
Berdasarkan  penelitian  Suada  (2017), Gliocladium sp .  terbukti  efektif  dalam  menekan  patogen  tular  tanah seperti Rhizoctonia sp.  dan Sclerotium sp.,  yang  dapat menyebabkan penyakit damping-off dan berbagai macam patogen  pada  bibit  tanaman  inang.  Keefektifan Gliocladium sp.  dalam  menekan  pertumbuhan  patogen disebabkan  oleh  produksi  senyawa  gliovirin  dan  virdin oleh  cendawan  ini  (Risthayeni et  al. 2018).  Magfiroh (2019)  melaporkan  bahwa  penghambatan Gliocladium sp. terhadap patogen tular tanah melibatkan mekanisme seperti antibiosis, kompetisi, dan mikroparasit. Cendawan  ini  berkompetisi  dalam  merebut  ruang  dan sumber  makanan,  sehingga  dapat  tumbuh  dengan  cepat dan menghambat pertumbuhan cendawan patogen.
Laju  penghambatan  patogen Sclerotium sp.  oleh agensia  hayati Trichoderma sp.  ternyata  lebih  tinggi
Gambar 1  Hasil uji antagonis Gliocladium sp. tehadap patogen (a) Sclerotium sp., (b) Rhizoctonia sp., dan (c) Botryodiplodia sp.

## Tabel 1  Skoring penyakit keparahan sengon
Skor Nilai Serangan Terjadi 0 0 Tidak terjadi serangan penyakit 1 1 ≤ x < 20 Serangan terjadi pada daun atau hipokotil yang menjadi lodoh 2 20 ≤ x < 4 0 Serangan terjadi pada batang dan ditandai dengan perubahan bentuk pada batang menjadi lebih pucat 3 40 ≤ x < 6 0 Serangan terjadi pada pangkal batang (berwarna kecokelatan) 4 60 ≤ x < 8 0 Serangan terjadi pada pucuk dan pangkal batang (pucuk menjadi rontok)
5 x ≥ 80 Seluruh bagian tanaman mengalami gejala serangan sehingga menyebabkan tanaman
menjadi layu dan mati
Sumber: Istikorini dan Yulia Sari (2020)
Tabel 2  Daya  hambat  agensia  hayati  terhadap pertumbuhan  koloni  patogen Sclerotium sp., Rhizoctonia sp., dan Botryodiplodia sp. pada media PDA
Agensia Hayati Daya hambat (%) Sclerotium sp . Rhizoctonia sp. Botryodiplodia sp. Gliocladium sp. 80,00 70,14 61,95 Trichoderma sp. 77,77 75,75 61,82
dibandingkan  dengan  patogen Rhizoctonia sp.  dan Botryodiplodia sp., seperti yang terlihat dalam Tabel 2. Menurut penelitian Habazar dan Yaherwandi (2006), hifa parasit pada Trichoderma sp. tumbuh sejajar dengan hifa patogen,  membentuk  cabang-cabang  samping  mirip pengait,  dan  mampu  menembus  hifa  patogen. Mekanisme Trichoderma sp.  terhadap  pertumbuhan patogen melibatkan kompetisi, parasitisme, dan antibiosis  (Karim et  al. 2020).  Mekanisme  antibiosis terjadi ketika cendawan antagonis menutupi permukaan hifa  cendawan  patogen  dan  membentuk  zona  kuning. Selain  itu,  terdapat  mekanisme  parasitisme  saat  hifa Trichoderma sp.  bertemu  dengan  hifa  patogen. Mekanisme terakhir adalah kompetisi, di mana cendawan antagonis  menekan  pertumbuhan  patogen  sebagai mikoparasitik dan kompetitor yang agresif (Uruilal et al. 2017).

## Uji Metabolit Sekunder
Hasil  analisis  statistika  pada  Tabel  3  menunjukkan bahwa  metabolit  sekunder  dari  cendawan Trichoderma sp.  tidak  berpengaruh  nyata  terhadap  penghambatan patogen Sclerotium sp., Rhizoctonia sp., dan Botryodiplodia sp.,  sedangkan  hasil  metabolit  sekunder pada agensia hayati Gliocladium sp.  berpengaruh nyata dan  dapat  menghambat  pertumbuhan  dari  patogen Sclerotium sp., Rhizoctonia sp., dan Botryodiplodia sp. Cendawan Trichoderma sp.  dan Gliocladium sp. dapat  memproduksi  beragam  metabolisme  sekunder, beberapa  di  antaranya  yaitu  dapat  menghambat mikroorganisme  lain  tanpa  perlu  adanya  kontak  fisik. Substansi penghambat ini dikenal sebagai antibiotik, dan jenis  antibibiotik  yang  dihasilkan  dari  kedua  genus tersebut adalah gliotoxin, virdin  dan gliovirin  (Kubicek dan Harman 1998).
Hasil  uji  lanjut  penghambatan  metabolit  sekunder agensia  hayati Trichoderma sp.  terhadap  patogen Sclerotium sp., Rhizoctonia sp.,  dan Botryodiplodia sp. menunjukkan  bahwa  hasil  yang  diperoleh  tidak berpengaruh  nyata  (Tabel  4).  Hal  ini  menunjukkan konsentrasi metabolit sekunder yang dihasilkan
Trichoderma sp.  tidak  cukup  untuk  menghambat pertumbuhan patogen.
Dalam penelitian Berlian et al. (2013) disampaikan bahwa  cendawan Trichoderma sp.  efektif  dalam menekan  pertumbuhan  patogen Rhizoctonia sp.  dan Sclerotium sp.  Umumnya,  mekanisme Trichoderma sp. menekan  patogen  dengan  cara  mikoparasitik  dan kompetitor  yang  agresif.  Antibiotik  yang  dihasilkan Trichoderma sp.  yaitu  gliotoksin  dan  viridin,  antibiotik ini dihasilkan pada saat hifa Trichoderma sp. melilit dan menghasilkan enzim untuk menembus dinding sel inang. Ketika  hifa Trichoderma sp.  melekat  dan  melilit  hifa cendawan  inang,  hifa  inang  mengalami  vokulasi,  lisis dan akhirnya hancur. Trichoderma sp. dapat melakukan penetrasi  ke  dalam  dinding  sel  inang  dengan  bantuan enzim pendegradasi dinding sel, seperti kitinase, glukase, dan  protease,  serta  menggunakan  isi  hifa  inang  sebagai sumber makanan.
Data  hasil  penelitian  Tabel  5  menunjukkan  bahwa metabolit Gliocladium sp. mampu  menghambat pertumbuhan Rhizoctonia sp., Sclerotium sp.,  dan Botryodiplodia sp.  Daya  hambat  tertinggi  pada  uji metabolit  sekunder Gliocladium sp.  ini  yaitu  pada patogen Rhizoctonia sp.  dengan  persentase  71,13%, dilanjut dengan Sclerotium sp. 33,83% dan Botryodiplodia sp.  23,58%.  Cendawan  saprofitik  ini dapat  berperan  sebagai  agensia  antagonis  yang  efektif untuk mengendalikan patogen tular tanah. Hal ini sejalan dengan (Herlina 2013) Gliocladium sp. dapat menghambat  penyebab  penyakit Rhizoctonia sp.  dan Sclerotium sp.  penyebab damping-off dan  penyebab penyakit akar, begitu juga dengan patogen Botryodiplodia sp.  Menurut  (Amalia et  al. 2008) keunggulan  dari  cendawan Gliocladium sp.  yaitu  dapat menghasilkan  senyawa  metabolit  di  antaranya  seperti gliotoksin,  virdin,  dan  paraquinon  yang  bersifat fungitoksik  terhadap  patogen.  Penghambatan  yang terjadi  pada  diameter  koloni  ketiga  patogen  disebabkan oleh  adanya  enzim  maupun  senyawa  metabolit  pada agensia  antagonis Gliocladium sp.  Senyawa  tersebut mampu  merusak  dinding  sel  patogen  sehingga menyebabkan  pertumbuhan  koloni  patogen  menjadi lambat.

## Uji Pertumbuhan Benih Sengon (in vivo)
Berdasarkan hasil analisis sidik ragam pertumbuhan benih  sengon  terhadap  serangan  patogen  (Tabel  6) menunjukkan  pengaruh  perlakuan Gliocladium sp., Trichoderma sp., Bacillus sp.,  GTB  (Campuran), patogen, dan kontrol tidak nyata. Namun, pada parameter kecepatan  tumbuh  benih,  kejadian  penyakit,  dan
Tabel 3  Hasil analisis sidik ragam uji penghambatan metabolit  sekunder  agensia  hayati  terhadap patogen Parameter Trichoderma Gliocladiu m Persen penghambatan tn *
*  =  berpengaruh  nyata  pada  taraf  uji  5%,  tn  =  tidak bepengaruh nyata pada taraf uji 5%.
Tabel 4  Hasil  uji  lanjut  penghambatan  metabolit sekunder  agensia  hayati Trichoderma sp. terhadap patogen
Patogen Daya Hambat (%) Rhizoctonia sp. 3,83 a Botryodiplodia sp. 1,48 a Sclerotium sp. 0,37 a
Keterangan:  Angka  pada  kolom  yang  sama  yang  diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf uji 5% (uji selang berganda Duncan).
Tabel 5  Hasil  uji  lanjut  penghambatan  metabolit sekunder  agensia  hayati Gliocladium sp.
terhadap patogen
Patogen Daya Hambat (%) Rhizoctonia sp. 71,13 a Sclerotium sp. 33,83 b Botryodiplodia sp. 23,58 c
Angka pada kolom yang sama yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf uji 5% (uji selang berganda Duncan).
intensitas  serangan,  menunjukkan  hasil  berpengaruh nyata  dengan  perlakuan Gliocladium sp., Trichoderma sp., Bacillus sp., GTB (Campuran), patogen, dan kontrol. Prinsip daya kecambah menguji sejumlah benih dan menentukan persentase dari jumlah benih tersebut yang dapat  tumbuh  atau  mampu  berkecambah  secara  normal dalam  jangka  waktu  yang  telah  ditentukan  (Elfiani  dan Jakoni  2015).  Analisis  pengaruh  perlakuan  benih terhadap daya kecambah (Tabel 7) menunjukkan bahwa hasil  yang  diperoleh  tidak  berpengaruh  nyata.  Hal  ini tidak  selalu  berarti  bahwa  perlakuan  benih  dengan agensia tidak memiliki efek. Mungkin ada aspek tertentu yang perlu dieksplorasi lebih lanjut.
Terdapat dua faktor yang mempengaruhi pertumbuhan  kecambah  di  antaranya  yaitu  faktor  luar dan faktor dalam.  Faktor luar meliputi  air, suhu,  udara, dan cahaya. Faktor dalam meliputi tingkat kematangan, ukuran,  dan  dormansi  (Moiwend et  al. 2015). Berdasarkan  hasil  penelitian  Winarni et  al. (2017) perlakuan  benih  yang  direndam  air  selama  24  jam memiliki  persentase  yang  tinggi  karena  benih  yang diberikan perlakuan mendapatkan suplai air yang cukup sehingga  dapat  mempercepat  proses  pertumbuhan. Meningkatnya  daya  kecambah  disebabkan  adanya cadangan  makanan  yang  cukup  untuk  substrat  dalam proses  pertumbuhan.  Bertambahnya  substrat  untuk respirasi  menyebabkan  hasil  energi  dalam  proses pertumbuhan menjadi meningkat (Tatipata et al. 2004). Kecepatan  tumbuh  benih  dapat  dilihat  dari pertumbuhan kecambah normal harian yang tumbuh per etmal  pada  kurun  waktu  pertumbuhan  (Kabelwa  dan
Soekamto 2017). Tabel 7 menunjukkan bahwa kecepatan tumbuh  terendah  dijumpai  pada  perlakuan Gliocladium sp.  dan Bacillus sp.  dengan  nilai  berturut-turut  43,16% dan  45,71%.  Hal  ini  diduga  benih  yang  digunakan memiliki perbedaan genetik sehingga benih yang tumbuh tidak seragam dan cenderung rendah. Sembiring (2022) menyatakan bahwa dosis pupuk yang terlalu tinggi tidak sebanding  lurus dengan  kecepatan tumbuh benih, dapat disimpulkan  bahwa  dosis  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  belum  efektif  dalam  kecepatan  tumbuh benih  sengon  sehingga  nilai  yang  dihasilkan  belum maksimal.
Pengamatan  kejadian  penyakit  menunjukkan  hasil yang berpengaruh nyata pada setiap perlakuan serangan, persentase  tertinggi  berdasarkan  Tabel  8  yaitu  pada perlakuan  tanpa  agensia  hayati  yang  hanya  diberi patogen Rhizoctonia sp. dengan nilai 23,81%.
Persentase  perlakuan  patogen  pada  Tabel  8 menunjukkan  hasil  berpengaruh  nyata  terhadap  tiga agensia  hayati  yaitu Gliocladium sp., Trichoderma sp., dan Bacillus sp. Hal ini dikarenakan ketiga agensia hayati ini dapat menekan kejadian penyakit patogen Rhizoctonia sp. Dapat disimpulkan bahwa ketiga agensia hayati  ini  dapat  digunakan  sebagai  agensia  biokontrol yang dapat melawan cendawan tular tanah. Hal tersebut terbukti bahwa nilai persentase terendah pada parameter kejadian  penyakit  yaitu  perlakuan  GTB  ( Gliocladium sp.+ Trichoderma sp.+ Bacillus sp.)  sebesar  11,43%, kandungan  di  dalamnya  terdapat Gliocladium sp., Trichoderma sp., dan Bacillus sp.
Nilai intensitas serangan pada patogen berpengaruh nyata  terhadap  lima  perlakuan  lainnya.  Perlakuan pathogen  menunjukkan  intensitas  serangan  tertinggi sebesar  17,10%  disebabkan  hanya  diberi  perlakuan patogen Rhizoctonia sp. Pemberian agensia hayati pada pertumbuhan  benih  sengon  membuktikan  bahwa  dapat mengurangi intensitas serangan penyakit Rhizoctonia sp., sehingga  tanaman  dapat  tumbuh  dengan  baik.  Hasil  uji Duncan’s  Multiple  Range  Test (DMRT)  terhadap intensitas penyakit (Tabel 6), persentase nilai kontrol dan seluruh  perlakuan  agensia  hayati  memiliki  pengaruh nyata,  terdapat  perbedaan  besaran  nilai  intensitas
Tabel 6  Hasil  uji  lanjut  uji  agensia  hayati  agensia hayati  dan Rhizoctonia sp.  terhadap kejadian  penyakit  dan  intensitas  serangan secara in vivo No Perlakuan Peubah Kejadian Penyakit (%) Intensitas Serangan (%) 1 Gliocladium sp. + Rhizoctonia sp. 14,29 bc 8,91 b 2 Trichoderma sp. + Rhizoctonia sp. 12,38 bc 8,57 b 3 Bacillus sp. + Rhizoctonia sp. 15,24 bc 9,43 b 4 GTB + Rhizoctonia sp. 11,43 c 7,62 b 5 Rhizoctonia sp. 23,81 a 17,10 a 6 Kontrol 16,19 b 10,24 b
GTB = Gliocladium sp.+ Trichoderma sp.+ Bacillus sp.
Angka  pada  kolom  yang  sama  yang  diikuti  oleh  huruf yang sama tidak berpengaruh nyata pada taraf uji 5% (uji l Duncan).
Tabel 7  Hasil analisis sidik ragam uji agensia hayati terhadap  serangan  patogen Rhizoctonia sp. secara in vivo No Peubah P- value 1 Daya Kecambah 0,3592 tn 2 Kecepatan Tumbuh 0,0001 * 3 Kejadian Penyakit 0,0002 * 4 Intensitas Serangan 0,0002 *
* = berbeda nyata pada taraf uji 5%, tn = tidak berpengaruh nyata pada taraf uji 5%.

## Tabel 8  Hasil  uji  lanjut  uji  agensia  hayati  dan
Rhizoctonia sp. terhadap daya kecambah dan kecepatan tumbuh benih secara in vivo No Perlakuan Peubah Daya Kecambah (%) Kecepatan Tumbuh (%/etmal) 1 Gliocladium sp. + Rhizoctonia sp. 56,71 a 43,16 c 2 Trichoderma sp. + Rhizoctonia sp. 69,52 a 57,65 b 3 Bacillus sp. + Rhizoctonia sp. 66,67 a 45,71 c 4 GTB + Rhizoctonia sp. 74,28 a
58,76 b 5 Rhizoctonia sp. 77,14 a 62,83 ab 6 Kontrol 72,38 a 70,95 a GTB = Gliocladium sp.+ Trichoderma sp.+ Bacillus sp.
Angka pada kolom yang sama yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berpengaruh nyata pada taraf uji 5% (uji selang berganda Duncan).
penyakit di antara perlakuan yang dicoba. Tingginya nilai intensitas  penyakit  dipengaruhi  oleh  masa  inkubasi, kepadatan  konidium,  serta  kemampuan patogen menyerang berkas pembuluh pada tanaman (Cahyaningrum et al. 2017).

## SIMPULAN DAN SARAN

## Simpulan
Uji  antagonis  agensia  hayati Trichoderma sp.  dan Gliocladium sp. terhadap pertumbuhan patogen Sclerotium sp., Rhizoctonia sp.,  dan Botryodiplodia sp. berkisar 61,82% hingga 80,00%. Uji metabolit sekunder Gliocladium sp.  memiliki  pengaruh  agensia  terhadap patogen.  Daya  hambat Gliocladium sp.  pada  patogen Rhizoctonia sp., Sclerotium sp.,  dan Botryodiplodia sp. berturut-turut adalah 71,13%, 33,83%, 23,58%. Gliocladium sp., Trichoderma sp.,  dan Bacillus sp. mampu  menekan  kejadian  penyakit  (14,29%,  12,38%, dan  15,24%)  dan  intensitas  serangan damping-off yang disebabkan Rhizoctonia sp. (8,91%, 8,57%, dan 9,43%). Hal  ini  menunjukkan  agensia  hayati  berpotensi mengendalikan penyakit tanaman.

## Saran
Adapun  saran  yang  dapat  penulis  sampaikan  ialah pemberian konsentrasi pada uji in vivo dan uji metabolit lebih bervariasi agar dapat menentukan hasil terbaik dan lebih optimal.

## DAFTAR PUSTAKA
Amalia  R,  Herliyana  EN,  Anggraeni  I.  2008.  Potensi Trichoderma sp.  dan  Gliocladium  sp.  sebagai Jamur  Antagonis  terhadap  Cylindrocladium  sp. Penyebab Penyakit Lodoh pada Persemaian secara In-Vitro. J. Penelit. Hutan Tanam. 5(1):63–75.
Amaria  W,  Harni  R,  Samsudin.  2015.  Evaluasi  Jamur Antagonis  Dalam  Menghambat  Pertumbuhan Rigidoporus microporus Penyebab Penyakit Jamur Akar Putih pada Tanaman Karet. J. TIDP . 2(1):51– 60.
Berlian  I,  Setyawan  B,  Hadi  H.  2013.  Mekanisme Antagonisme Trichoderma sp. Terhadap Beberapa Patogen Tular Tanah. War. Perkaretan . 32(2):74– 82. doi:10.22302/ppk.wp.v32i2.39.
Cahyaningrum  H,  Prihatiningsih  N,  Soedarmono  S. 2017.  Intensitas  dan  Luas  Serangan  Beberapa Isolat  Fusarium  oxysporum  f.sp.  zingiberi  pada Jahe  Gajah. J.  Perlindungan  Tanam.  Indones. 21(1):16–22. doi:10.22146/jpti.17743.
Elfiani,  Jakoni.  2015.  Pengujuan  Daya  Berkecambah Benih  dan  Evaluasi  Struktur  Kecambah  Benih. J. Din. Pertan. 30(1):45–52.
Habazar  T,  Yaherwandi.  2006. Pengendalian  Hayati Hama dan Penyakit Tumbuhan . Padang: University Andalas Press.
Hanudin,  Marwoto  B.  2012.  Prospek  Penggunaan Mikroba  Antagonis  sebagai  Agens  Pengendali
Hayati  Penyakit  Utama  pada  Tanaman  Hias  dan Sayuran. J. Litbang Pertan. 31(1):8–13. Hasanuddin. 2003. Peningkatan Peranan Mikroorganisme  Alam  Sistem  Pengendalian Penyakit  Tumbuhan  Secara  Terpadu.  Di  dalam:
USU Digital Library . hlm. 1–9.
Herlina  L.  2013.  Uji  Potensi  Gliocladium  so  Terhadap Pertumbuhan  dan  Produksi  Tanaman  Tomat. J. Biol. Biol. Educ. 5(2):88–93.
Istikorini Y, Yulia Sari O. 2020. Survey dan Identifikasi
Penyebab  Penyakit  Damping-Off  pada  Sengon (Paraserianthes falcataria) di Persemaian Permanen IPB. J. Sylva Lestari ISSN . 8(1):32–41. Kabelwa S, Soekamto MH. 2017. Pengaruh Air Kelapa
Terhadap Perkecambahan benih Kedelai (Glycine max (L) Merr. J. Median . 9(2):9–19.
Karim  A,  Rahmiati,  Fauziah  I.  2020.  Isolasi  dan  Uji Antagonis Trichoderma rerhadap Fusarium oxysporum  Secara  In  Vitro. J.  Biosains .  6(1):18– 22. doi:https://doi.org/10.24114/jbio.v6i1.16839 ISSN.
Krisdayani  PM,  Proborini  MW,  Kriswiyanti  E.  2020. Pengaruh Kombinasi Pupuk Hayati Endomikoriza, Trichoderma spp.,  dan  Pupuk  Kompos  terhadap Pertumbuhan Bibit Sengon (Paraserianthes falcataria  (L.)  Nielsen)  (Effect  of  Bio-Fertilizer, Endomicorrhiza, Trichoderma spp.,  and  Compost Combination  on  the  Growth. J.  Sylva  Lestari . 8(3):400–410. doi:10.23960/jsl38400-410.
Kubicek  CP,  Harman  GE.  1998. Trichoderma  & Gliocladium Volume 1 . UK: Taylor & Francis Ltd 1998.
Magfiroh  D.  2019.  Pemanfaatan  Gliocladium  sp  untuk Mengendalikan  Sclerotium  rolfsii  Sacc  Penyebab penyakit  Rebah  semai  pada  Tanaman  Tomat (Lycopersicum esculentum Mill) [skripsi].
Moiwend KY, Aiyen, Madauna IS. 2015. Uji Viabilitas Benih  Ketimun  (  Cucumis  sativus  L  )  Hasil Perlakuan  Penyerbukan  Berbagai  Serangga. J. Agrotekbis . 3(April):178–186.
Muslim  A.  2019. Pengendalian  Hayati  Patogen Tanaman  Dengan  Mikroorganisme  Antagonis . Palembang: Unsri Press.
Octriana  L.  2011.  Potensi  Agen  Hayati  dalam Menghambat  Pertumbuhan  Phytium  sp.  secara  In
Vitro. Bul. Plasma Nutfah . 17(2):138. doi:10.21082/blpn.v17n2.2011.p138-142.
Oktavia  F,  Miftahorrachman  M.  2012.  Pengaruh  lama penyimpanan  terhadap  kecepatan  dan  daya kecambah benih  Pinang (Areca catechu L .). Bul. Palma . 13(2):127–130.
Ruswandari  VR,  Syauqi  A,  Rhayu  T.  2020.  Uji Antagonis  Jamur Trichoderma viridae  dalam Menghambat Pertumbuhan Jamur Patogen Alternaria  porri  Penyebab  Penyakit  Bercak  Ungu pada Tanaman Bawang Merah (Allium ascalonicum L.). J. Ilm. Biosaintropis . 5(2):84–90. Sajdad S. 1993. Dari Benih Kepada Benih . Jakarta: PT. Gramedia.
Sembiring  E.  2022.  Potensi  Agensia  Hayati  sebagai
Biofungisida Penyakit Damping-Off dan Peningkatan  Viabilitas  [skripsi].  Bogor:Institut Pertanian Bogor.
Shentu  X,  Zhan  X,  Ma  Z,  Yu  X,  Zhang  C.  2014. Antifungal  Activity  of  Metabolites  of  The Endophytic Fungus Trichoderma Brevicompactum from  Garlic. Brazilian  J.  Microbiol. 45(1):248– 254. doi:10.1590/S1517-83822014005000036. Supriati LR, Mulyani B, Lambang Y. 2010. Kemampuan Antagonisme  Beberapa  Isolat Trichoderma sp.
Indigenous  terhadap  Sclerotium  rolfsii  secara  in vitro. J. Agroscientic . 17(3):119–122.
Sutariati  GAK,  Wahab  A.  2010.  Isolasi  dan  Uji Kemampuan  Rizobakteri  Indigenous  sebagai Agensia  Pengendali  Hayati  Penyakit  pada Tanaman Cabai. J. Hoertikultura . 20(1):85–95.
Tatipata  A,  Yudono  P,  Purwantoro  A,  Mangoendidjojo W.  2004.  Study  on  Physiology  and  Biochemistry Aspects of Soybean Seed Deterioration in Storage. Ilmu Pertan. 11(2):76–78.
Uruilal  C,  Talahaturuson  A,  Rumahlewang  W,  Patty  J.
2017.  Isolasi Trichoderma spp.  dan  Daya Antagonismenya terhadap Slerotium Rolfsii Sacc. Penyebab  Penyakit  Layu  pada  Tanaman  Cabai (Capsicum  anuum)  secara  In  Vitro. J.  Budid. Pertan.
13(2):64–67. doi:10.30598/jbdp.2017.13.2.64.
Winarni  E,  Fitriani  A,  Purnomo  P,  Panjaitan  SP.  2017.
DAYA KECAMBAH BENIH ROTAN JERNANG (Daemonorops draco Blume) DENGAN BERBAGAI PERLAKUAN PERENDAMAN  DALAM  AIR. J.  Hutan  Trop. 5(2):120. doi:10.20527/jht.v5i2.4365.
Zuraidah,  Nida  Q,  Wahyuni  S.  2020.  Uji  Antagonis Bakteri  Terhadap  Cendawan  Patogen  Penyakit Blas. J. Biot. 8(1):37–47. doi:10.22373/biotik.v8i1.6667.