## UJI BIOAKTIVITAS FORBAZOL E TERHADAP HAMBATAN PERTUMBUHAN PADA STAPHYLOCOCCUS AUREUS
Ni Putu Ristiati Jurusan Pendidikan Biologi, FMIPA Undiksha Singaraja, Singaraja Indonesia
email: puturistiati@gmail.com

## Abstrak
Forbazol  E  dapat  disintesis  dari  1-(p-tosil)  pirol-2-karbonil  klorida  dan  fenasil amonium klorida dengan rendeman cukup tinggi melalui empat tahap reaksi yaitu : pertama,  reaksi  penggabungan;  kedua,  siklodehidrasi;  ketiga,hidrolisis;  dan keempat, klorinasi. Staphylococcus  aureus merupakan  bakteri  gram  positif.  Untuk itu  perlu  diteliti  :  (a)  forbazol  E  dapat  menghambat  pertumbuhan S.  aureus ; (b)konsentrasi  forbazol  E  75  mg/L  akan  menimbulkan  hambatan  pertumbuhan S. aureus lebih  tinggi  dari  konsentrasi  37,5  mg/L.Penelitian  eksperimental  ini menggunakan  rancangan the  randomized-  posttest-only  control  group  design dan melibatkan 9 sampel pada kelompok kontrol, 9 sampel pada kelompok perlakuan I dan  9  sampel  pada  perlakuan  II.  Data  yang  diperoleh  dianalisis  dengan menggunakan  uji  anova  pada  taraf  signifikansi  5%.  Hasil  penelitian  membuktikan forbazol  E  dapat  menghambat  pertumbuhan,  pemberian  forbazol  E  pada  pada kelompok  perlakuan  II  dengan  konsentrasi  75  mg/L  menimbulkan        hambatan pertumbuhan S.        aureus lebih        tinggi  dibandingkan  dengan  kelompok perlakuan  I  dengan  konsentrasi  37,5  mg/L  (p<0,05),  uji  lanjutan  dengan  uji  beda nyata  terkecil  (BNT)  pada  taraf  signifikansi    5%  diperoleh    bahwa    hambatan pertumbuhan S. aureus pada kelompok perlakuan II (75 mg/L) berbeda bermakna dengan  kelompok  perlakuan  I  (37,5  mg/L)(p<0,05).  Bertolak  dari  pembahasan  di atas  dapat  disimpulkan  bahwa  bioaktivitas  forbazol  E  dapat  menghambat pertumbuhan S. aureus.
Kata  kunci :  bioaktivitas,  forbazol  E,  hambatan  pertumbuhan, Staphylococcus aureus .

## Abstract
Phorbazole  E  can  be  synthetized  from  1-(p-tosil)  pyrrole-2-carbonyl  chloride  and phenacyl  ammonium  chloride  with  a  high  yield  content  through  four  reaction phases, i.e.,first, coupling reaction; second, cyclodehydration; third, hydrolysis; and fourth,  chlorination. Staphylococcus  aureus is  a  positive  gram  bacterium.  Thus  a study needs to be conducted on (a) phorbazole E bioactivity can retard the growth of S. aureus (b) whether an application of a 75 mg/L phorbazole E concentration will cause  retard  the  growth  higher  than  that  of  a  37.5  mg/L  phorbazole  E concentration to S. aureus. This experimental study used the randomized postest- only control group design that involved 9 samples of the control group, 9 samples of the treatment I group and 9 samples of the treatment II group. The obtained data were  analyzed  using  the  anova  test  at  the  5%  level  of  significance.  The  result proves  that  phorbazole  E  can  retard  the  growth  of S.  aureus ,  the  application  of
phorbazole  E  at  the  treatment      II      group      with    a    75  mg/L        concentration caused    a    higher    degree    of  retardation  to S.aureus than  that  of  the  treatment  I group with a 37.5 mg/L (p<0.05), a further of the least significance difference test at the 5% level of significance shows that the   retardation   to    the   growth  of S. aureus at    the    treatment    II    group    75  mg/L)  differed  significantly  from  that  of treatment I group (37.5 mg/L). In view of the discussion above it can be concluded that phorbazole E bioactivity can retard the growth of S.aureus .
Keywords :  bioactivity,  phorbazole  E,  growth  retardation,  and Staphylococcus aureus .

## PENDAHULUAN
Forbazol  A,  B,  C  dan  D  yang diisolasi  dari  bunga  karangIndo-Pasifik Phorba  clathrata ,  telah  teridentifikasi strukturnya dan diketahui sebagai turunan oksazol baru yang mengandung unit fenilpiroliloksazol terklorinasi, karena  itu  dinyatakan  sebagai  alkaloid yang  berasal  dari  laut  (Rudi  dkk.,1994). Alkaloid  merupakan  senyawa  yang mempunyai  satu  atau  lebih  atom  dalam sistem cincin heterosiklik, yang
menginduksi  secara  nyata  aktivitas fisiologis  pada  hewan  dan  manusia (Holde,  2000;  Murray  dkk.,  2003). Keempat forbazol ini mengandung kerangka  dasar  yang  sama,  hanya berbeda  satu  sama  lainnya  dalam substitusi atom klor sepanjang kerangka dasar  tersebut.  Keempat  senyawa  yang diekstrak dari Phorbas clathrata dengan pelarut  etil  asetat  kemudian  satu  sama lainnya  dipisahkan  dengan  kromatografi flash vakum  dan kolom sphadex  LH-20. Dari  ekstrak  etil  asetatnya  diperoleh randemen  forbazol  A,  B,  C,  D  masing- masing  2,5%,  0,25%,  0,025%  dan 0,01% (Rudi dkk.,1994). Menurut Radspieler  (2000)  sintesis  forbazol  C dilakukan dengan p- hydroxybenzaldehyde dan 2- methylpyrrol-5-ethylcarboxylate .  Cincin oksazol  dibentuk  melalui  siklodehidrasi.
Penelitian  pendahuluan  (Adamczeski dkk.,1988) menunjukkan bahwa forbazol memiliki  efek  imunomodulatori.  Menurut Baratawidjaja  (2001)  imunomodulator merupakan  obat-obatan  yang  dapat mengembalikan ketidakseimbangan sistem  imun.  Kadar  forbazol  yang sangat  sedikit  dan  menunjukkan  sifat aktivitas  biologis  maka  perlu  usaha untuk  mensintesisnya  di  laboratorium sehingga  tersedia  dalam  jumlah  yang cukup untuk keperluan penelitian tentang uji bioaktifitas.
Forbazol  E  dapat  disintesis  dari 1-(p-tosil)  pirol-2-karbonil  klorida  dan garam  fenasil  amonium  klorida  dengan rendemen  cukup  tinggi  melalui  empat tahap  reaksi  yaitu:  pertama,  reaksi penggabungan ( coupling ); kedua,
siklodehidrasi ( cyclodehydration ); ketiga, hidrolisis  ( hydrolysis );  dan  keempat, klorinasi.  Dari  sintesis  ini  berhasil diperoleh  forbazolE  dengan  rendemen 26,3% (Muderawan, 2003).
Stafilokokus patogen sering dapat  menghemolisis  sel  darah  dan mengkoagulasi plasma diantaranya Staphylococcus aureus yang merupakan bakteri gram positif. Beberapa di antara stafilokokus tergolong  flora  normal  kulit  dan  selaput lendir manusia. Stafilokokus cepat menjadi  resisten  terhadap  banyak  zat
anti  mikroba  dan  menyebabkan  proses pengobatan  yang  sulit  (Jawetz  dkk., 2004).
Cara  kerja  senyawa  bioaktif antimikroba menurut Brock (2003) adalah:  (1)  menghambat  pembentukan dinding sel misalnya antibiotika sikloserin, vancomisin, basitrasin, penisilin,  sephalosporin,  monobaktam, karbapenem; (2)
menghambat metabolisme asam folat misalnya trimetoprim, sulfonamid; (3) menghambat  sintesis  protein  pada subunit 50Smisalnya kloramfenikol, eritromisin/makrolida, klindamisin,
linkomisin,  sedang  yang  menghambat sintesis  protein  subunit  30S  misalnya tetrasiklin,  spektinomisin,  streptomisin,
gentamisin,
tobramisin, kanamisin/aminoglikosida, amikasin, nitrofuran;  (4)  menghambat  kerja  enzim polimerase  RNA  (pada  DNA)  misalnya rifampin;  dan  (5)  menghambat  kerja enzim  DNA girase misalnya novobiosin, asam  nalidiksik,  norflosaksin  (kuinolon). Menurut Walsh  (2000)  ada  tiga  sasaran obat antibakteri, yaitu : (1) menghambat biosintesis  dinding  sel;  (2)  menghambat sintesis protein bakteri; dan (3)
menghambat  replikasi  dan  perbaikan DNA bakteri.
Berdasarkan latar belakang masalah  di  atas,  rumusan  masalah penelitian adalah: (1) Apakah forbazol E menghambat
pertumbuhan
Staphylococcus aureus ? (2) Berapakah konsentrasi  optimum  forbazol  E  dalam menghambatpertumbuhan Staphylococcus  aureus ?  Tujuan  yang ingin  dicapai  pada  penelitian  ini  adalah sebagai berikut: (1)  Untuk membuktikan bahwa forbazol E menghambat pertumbuhan S.aureus (2) Untuk mengetahui konsentrasi optimum
forbazol  E  menghambat  pertumbuhan S.aureus . Manfaat yang diharapkan dari hasil  penelitian  ini  adalah  sebagai berikut:Penelitian ini dapat memperkaya alternatif  penggunaan  sumber  daya alam  hayati  kelautan  sebagai  senyawa bahan  alam  aktif  yang  dapat  digunakan sebagai obat yang efektif untuk menyembuhkan  penyakit.  Forbazol  E yang mampu menghambat pertumbuhan Staphylococcus  aureus, dapat dimanfaatkan untuk menanggulangi penyakit yang disebabkan  oleh  stafilokokus  pada manusia  antara  lain  seperti  :  keracunan makanan, bisul, toxic-schock syndrome .

## METODE
Rancangan  dalam  penelitian  ini merupakan eksperimen sungguhan ( True experimental ). Dikatakan eksperimen sungguhan karena memenuhi  tiga  prinsip  pokok  seperti replikasi,  randomisasi,  dan  adanya kontrol  atau  perlakuan  banding  (Bakta, 1997). Rancangan penelitian
eksperimen  yang  digunakan  adalah  :
The Randomized Posttest- Only Control
Group  Design (Zaenuddin,  1994,  Bawa, 2000).   Populasi  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  bakteri S.aureus ATTC  25922  hasil  isolasi  kultur  murni dari laboratorium mikrobiologi FK UNUD Denpasar.  Sampelmerupakan  bagian dari  atau  cuplikan  dari  suatu  populasi (Sujana,1994). Jadi sampel dalam penelitian  ini  adalah  bakteri S.aureus yang diambil dari kultur cair.  Perlakuan dalam    penelitian  ini    yaitu  forbazol    E dengan  konsentrasi  37,5  mg/L  dan  75 mg/L.  Karena  bakteri  sudah  distandar dengan McFarland 0,5 jumlah bakteri/sampel  bakteri  sudah  sama. Jumlah  ulangan  9  kali  berdasarkan  (T-
1)(R-1)  15  (Rochiman,  1989)  dimana T =  perlakuan  dan  R =  replikasi. Jadi    , unit percobaan akan berjumlah 9 tabung reaksi    yang  berisi  medium Mueller
Hinton cair untuk menumbuhkan
S.aureus. Jumlah seluruh unit percobaan menjadi 27 unit.
ForbazolE adalah senyawa bioaktif  hasil  sintesis  di  laboratorium (Muderawan,  2003).  Konsentrasi      yang digunakan 75 mgr/L dan 37,5 mg/L.Hambatan pertumbuhan S. aureus adalah hambatan pertumbuhan sel yang dapat  diukurdengan  spektrofotometer. Pengukuran  ini  didasarkan  atas  asumsi bahwa  apabila  sinar    diarahkan  kepada suspensi    sel  bakteri  maka  jumlah  sel bakteri  didalam  suspensi      berbanding lurus    dengan    jumlah    cahaya    yang dihamburkan,  atau  berbanding  terbalik dengan  jumlah  cahaya  yang  diteruskan (Benson,  2002,  Phillips,  1991).  Ukuran kekeruhan  dinyatakan  dengan  nilai  O.D (optical density).Suhu 37 0 C untuk pertumbuhan S.aures dalam inkubator.pH    optimum  :  6,4  untuk pertumbuhan S.aures. Medium
pertumbuhan S.aures digunakan  media Mueller  Hinton  broth  (Oxoid). Strain yang  digunakan S.aures AATC  25922 dari FK-UNUD.
Alat  penelitianLaminar  air  flow, incubator,  centrifuge,  spectrofotometer, pH  meter,    autoklav,    cawan  petri, tabung  reaksi,  labu  erlemeyer,    pipet, gelas  ukur,  gelas              kimia,  kawat inokulasi  berkolong,  batang  pengaduk, timbangan,  kompor,  lampu  spiritus, pinset.  Cara  pengukuranpertumbuhan S.aureus digunakan  spectrofotometer (A600).Bahan PenelitianForbazol E yang  digunakan  dalam  penelitian  ini merupakan hasil sintesis di laboratorium (Muderawan, 2003). Medium yang
digunakan  untuk  pertumbuhan  adalah Mueller  HintonBroth yang  dikeluarkan oleh Oxoid, formulanya terdiri dari : beef, dehydrated  infusion      from        3000,0, casein hydrolysate 17,5, starch 1,5, agar 17,0. Suhu inkubator dalam penelitian ini adalah    37 0 C.pH  yang  optimal  (6,4) untuk pertumbuhan S.aures. Isolat
S.aureus yang  diperoleh  dari  Bagian mikrobiologi  FK-UNUD.Alkohol,aquades steril,    spiritus, cotton  swabs ,  kertas saring,  kapas.  Dianalisis  denganUji Kolmogorov-Smirnov  untuk  normalitas data.Uji  Levene  untuk  homogenitas data.Uji  t  untuk  beda  rerata  masing- masing  kelompok.Uji  anava  satu  arah untuk  beda  rerata  antar  kelompok.Uji perbandingan
ganda ( multiple comparison: Post Hock ) antar kelompok untuk  menguji  kelompok  mana  yang berbeda  dengan  kelompok  yang  mana, dengan  menggunakan  uji  LSD  (untuk data  yang  variannya  homogen).Dalam percobaan ini digunakan tingkat kemaknaan  = 0,05

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hambatan  pertumbuhan  yang didata pada penelitian ini adalah hambatan  pertumbuhan  sel S.aureus yang  diukur  dengan  spectrofotometer dengan absorbance padaO.D  600nm.
Diperlukan  penghitungan  jumlah  sel mikroba untuk membuat kurva pertumbuhan.Metode  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  pengukuran secara turbidometri. Pengukuran turbidometri digunakan untuk
mengetahui  jumlah  biomassa  sel  total dalam  suspensi  dengan  mengukur kerapatan  cahaya  atau  densitas  optik kultur  kaldu  dengan  spektrofotometer, dengan  alat  ini  turbiditas  dinyatakan dalam unit absorbance atau daya serap.
Bagi  organisme  uniselular, absorbance adalah  proporsi  jumlah  sel  maupun berat  sel.  Turbiditas  dapat  dibaca  pada alat  ini  sehingga  digunakan  sebagai pengganti  untuk  menghitung  koloni bakteri.  Teknik  turbidometri  secara khusus  digunakan  untuk  menentukan massa sel selama pertumbuhan,
sebagai  evaluasi  terhadap  efek  zat antibakteri terhadap bakteri.
Distribusi  data  pada  nilai  daya serap cahaya berdistribusi normal, maka
dilakukan  analisis  parametrik  dengan menggunakan  uji  anava  satu  arah  pada taraf  signifikansi  5%.Hasil    analisis  data hambatan  pertumbuhan  menunjukkan bahwa  rerata  nilai  kerapatan  cahaya pada  kelompok  kontrol,  perlakuan  I  dan perlakuan II adalah berbeda
bermakna.      Dikatakan      demikian karena    nilai    p < 0,05.  Hasilanalisis data  hambatan  pertumbuhan  dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1.Data pertumbuhan S.aureus pada media Mueller Hinton cair yang diberi perlakuan forbazol E berdasarkan daya serap cahaya
Kelompok                          Nilai daya serap cahaya*            Nilai F        Nilai  p Rerata  Simpang baku
1. Kontrol                             1,357  0,492                                338,862       0,000 2. Forbazol E 37,5 mg/L       0,325  0,002
3. Forbazol E 75 mg/L          0,207  0,109
* O.D = 600nm
Data    di  atas    menunjukkan bahwa  rerata  nilai  daya  serap (O.D  600 nm) pada kelompok kontrol,  perlakuan I (forbazol  E  37,5  mg/L)  dan  perlakuan  II (forbazol  E  75  mg/L)  adalah  berbeda bermakna.    Dikatakan  demikian  karena semua  nilai  p  <  0,05  atau  dengan  kata lain  dapat  dikatakan  bahwa  :  (a)  rerata nilai  daya  serap  cahaya  (O.D  =  600nm) pada  kelompok  kontrol  (1,357)  berbeda bermakna  dengan  rerata  nilai  daya serap cahaya pada kelompok perlakuan I  (0,325);  (b)  rerata  nilai  daya  serap cahaya  (O.D  =  600nm)  pada  kelompok
kontrol (1,357) berbeda bermakna dengan  rerata  nilai  daya  serap  cahaya pada kelompok perlakuan II (0,207) ; (c) rerata  nilai  daya  serap  cahaya  (O.D  = 600nm)  pada  kelompok  perlakuan  I (0,325)  berbeda  bermakna  dengan rerata  nilai  daya  serap  cahaya  pada kelompok perlakuan II (0,207).
Analisis  hasil  pengukuran  nilai daya  serap  cahaya  pada  O.D  =  600nm dengan  spektrofotometer  mulai  dari  0 jam sampai dengan 28 jam, dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel2 Data pertumbuhan S.aureus pada media Mueller Hinton cair yang diberi perlakuan forbazol E antara 0 – 28 jam waktu inkubasi Waktu        Nilai daya *           Nilai                      Nilai Nilai serap cahaya
(jam)          Kontrol              Forbazol E          Forbazol E           F               p 37,5 mg/L              75 mg/L Rerata  SB        Rerata  SB           Rerata  SB
0        0,211  0,017      0,303  0,016       0,214  0,022         69,580   0,000
4        0,979  0,031      0,339  0,008       0,174  0,036    2113,236    0,000
8        1,414  0,059      0,323  0,011       0,212  0,090   1031,652     0,000 12      1,614  0,035      0,327  0,011       0,214  0,116   1104,588     0,000 16      1,656  0,040      0,332  0,008       0,215  0,133     890,347     0,000 20      1,693  0,037      0,326  0,008      0,211  0,142      849,983     0,000 24      1,711  0,049      0,336  0,009       0,213  0,153     722,539     0,000 28      1,579  0,053      0,319  0,043       0,207  0,144     619,587     0,000
* O.D = 600 nm       SB = simpang baku
Data di atas menunjukkan bahwa  pengukuran  nilai  daya  serap cahaya mulai dari 0 jam sampai dengan 28  jam  secara  statistik  menunjukkan perbedaan yang bermakna antara kelompok kontrol dan kelompok perlakuan  I  dan  kelompok  perlakuan  II. Dikatakan  demikian  karena  semua  nilai p  <  0,05  atau  dengan  kata  lain  dapat dikatakan  bahwa  :  (a)  rerata  nilai  daya serap  cahaya  (O.D  =  600nm)  pada  0 jam  sampai  dengan  28  jam  kelompok kontrol  berbeda  bermakna  dengan rerata  nilai  daya  serap  cahaya  pada kelompok  perlakuan  I;  (b)  rerata  nilai daya serap cahaya (O.D = 600nm) pada pada  0  jam  sampai  dengan  28  jam
kelompok  kontrol  berbeda  bermakna dengan  rerata  nilai  daya  serap  cahaya pada  kelompok  perlakuan  II;  (c)  rerata nilai  daya  serap  cahaya  (O.D  =  600nm) pada  0  jam  sampai  dengan  28  jam kelompok perlakuan I berbeda bermakna  dengan  rerata  nilai  daya serap cahaya pada kelompok perlakuan
II.  Data  tersebut    disusun  dalam  kurva pertumbuhan yang menunjukkan perbedaan hambatan pertumbuhan Staphylococcus  aureus pada  kelompok kontrol,  kelompok  perlakuan  I,  dan kelompok perlakuan II. Kurva pertumbuhan Staphylococcus  aureus
dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1 Kurva Pertumbuhan Staphylococcus aureus pada media Mueller Hinton cair yang diberi perlakuan forbazol E.
Kurva pertumbuhan Staphylococcus aureus di atas menunjukkan  bahwa  kelompok  kontrol mengikuti  suatu  pola  pertumbuhan berupa  kurva  pertumbuhan  sigmoid (kurve  normal),  perubahan  kemiringan pada kurve tersebut menunjukkan transisi dari satu fase perkembangan ke fase lainnya. Kurva pertumbuhan bakteri dapat  dipisahkan  menjadi  empat  fase utama  :  fase  lag  (fase  lamban  atau lag phase ), fase pertumbuhan eksponensial (fase  pertumbuhan  cepat  atau log phase ),  fase  stasioner  (fase  statis  atau stationary  phase )  dan  fase  penurunan
populasi  (fase  kematian  atau death phase ). Perlakuan I menunjukkan pertumbuhan  yang    tidak  mengikuti suatu  pola  pertumbuhan  kurva  sigmoid,
begitu pula perlakuan II. Kurva pertumbuhan  di  atas  juga  menunjukkan bahwa  perlakuan    II    (forbazol  E  75 mg/L) menimbulkan hambatan pertumbuhan yang lebih tinggi dibandingkan dengan perlakuan I (forbazol E 37,5 mg/L). Analisis bioaktivitas forbazol E terhadap hambatan  pertumbuhan  dapat  dilihat pada tabel 3
Tabel 3  Hasil uji BNT (Beda Nyata Terkecil) pertumbuhan S.aureus berdasarkan daya serap cahaya
Kelompok                        Beda rerata nilai daya serap cahaya   Nilai p 1.Kontrol – Perlakuan I                          1,031*                                    0,000 2. Kontrol -  Perlakuan II                         1,149 *                                  0,000 3. Perlakuan I – Perlakuan II                   0,118*                                   0,016
*) p < 0,05
0.0 0.3 0.6 0.9 1.2 1.5 1.8 2.1 0 4 8 12 16 20 24 28 32 A B SOR B A N C E PA D A O. D 6 0 0 n m WAKTU (JAM) Kontrol Forbazol E 37,5 mg/L
Hasil analisis di atas menunjukkan  bahwa  forbazol  E  dengan konsentrasi 37,5 mg/L  dan  75  mg/L  dapat  menghambat pertumbuhan Staphylococcus  aureus secara  bermakna  karena  semua  nilai  p <  0,05,  akan  tetapi  dilihat  dari  beda rerata nilai daya serap cahaya menunjukkan  bahwa  forbazol  E  dengan konsentrasi  75  mg/L  mempunyai  daya hambat  pertumbuhan  yang  lebih  tinggi daripada forbazol E dengan konsentrasi 37,5 mg/L.

## Hambatan Pertumbuhan S.aureus
Pertumbuhan  bakteri  dapat  dihambat oleh  beberapa  antimikroba  seperti  yang telah    dilaporkan    oleh    beberapa peneliti,  diantaranya      Liu    dkk.  (2004) menyatakan bahwa pemberian antibiotika penisilin, enoxasin, dan gentamisin pada E.coli pada konsentrasi yang berbeda mempengaruhi  pertumbuhan  bakteri. Kurve pertumbuhan menunjukkan konsentrasi penisilin 100  g/ml menyebabkan E.coli mengalami  fase stasioner  dan  akhirnya  fase  kematian, pada  enoxasin  konsentrasi  0,4  g/ml menyebabkan fase stasioner dan akhirnya  mengalami  fase  kematian, sedang  gentamisin  konsentrasi  0,8  g/ml  menyebabkan  fase  stasioner  dan fase  kematian.  Penisilin,  gentamisin, enoxasin  bersifat  bakterisida  terhadap E.coli .Temuan  Martin  dkk.  (2003)  yang melarutkan  karbondioksida  pada  susu melaporkan      bahwa      karbondioksida secara    signifikan      menghambat pertumbuhanbakteri susu pada fase lag, fase  eksponensial,  dan  fase  stasioner. Croisier  dkk.  (2004)  melaporkan  bahwa gatifloxasin secara signifikan menghambat pertumbuhan
Streptococcus pneumoniae . Kurve pertumbuhan  menunjukkan  gatifloxasin konsentrasi  5  mg/L  menyebabkan  fase kematian pada bakteri tersebut. Forbazol  E  dalam  penelitian  ini menunjukkan rerata hambatan pertumbuhan pada Staphylococcus aureus dengan  nilai  daya  serap  cahaya adalah  1,357  0,492  pada  kelompok kontrol,  0,325  0,002  pada  kelompok perlakuan  I  (forbazol  E  37,5  mg/L)  dan 0,207  0,109 pada kelompok perlakuan II  (  forbazol  E  75  mg/L).  Hasil  analisis ditemukan bahwa hambatan pertumbuhan S. aureus
antara kelompok  kontrol  dan  perlakuan  I  serta perlakuan  II  adalah  berbeda  bermakna
(p < 0,05) (tabel 5.1)..
Setiap  spesies  mempunyai  waktu generasi ( generation time ) untuk melaksanakan pembelahan sel. Staphylococcus aureus mempunyai waktu  generasi  20 –  30  menit,  selisih waktu  4  jam  dalam  setiap  pengamatan memberikan  waktu  yang  cukup  bagi  sel untuk  melakukan  proses  pembelahan diri.
Kurva pertumbuhan Staphylococcus aureus (Gambar  1)  antara  kelompok kontrol  dan  kelompok    perlakuan    I serta    kelompok    perlakuan    II    yang diukur  mulai  dari  0  jam  sampai  dengan 28  jam  menunjukkan  bahwa  hambatan pertumbuhan  pada  kelompok  kontrol, kelompok   perlakuan  I  dan   kelompok perlakuan  II   berbeda   bermakna (p < 0,05)  (tabel  2).  Hambatan  pertumbuhan Staphylococcus aureus
terhadap forbazol  E  paling  tinggi  terdapat  pada kelompok  perlakuan  II  (forbazol  E  75 mg/L). Hambatan pertumbuhan Staphylococcus aureus terhadap
forbazol  E  pada  kelompok  perlakuan  II (75 mg/L)  lebih tinggi  dibanding  dengan
kelompok perlakuan I (37,5) mg/L (tabel 3.3).
Kelompok  kontrol  terlihat  fase  lag dimulai  pada  0  jam  dengan  rerata  nilai daya  serap  cahaya  adalah  0,211. Rerata  nilai  daya  serap  cahaya  pada kelompok  perlakuan  I  (37,5  mg/L) adalah  0,303.  Rerata  nilai  daya  serap cahaya  pada  kelompok  perlakuan  II adalah 0,214 (tabel 3.2). Tidak diperoleh nilai daya serap cahaya 0,00 pada 0 jam Karena diperlukan waktu untuk melakukan inokulasi pada tabung reaksi (kontrol,  perlakuan  I  dan  perlakuan  II) sehingga  sel  sudah  mulai  mengalami proses  pembelahan  diri.    Hal  ini  berarti pada  fase  log  pertambahan  populasi berjalan lambat; sel mengalami perubahan dalam komposisi kimiawi dan bertambah ukurannya; substansi intraselular  bertambah  (Kusnadi  dkk., 2003). Penelitian ini memperlihatkan bahwa  pertumbuhan  fase  log  mulai pada  4  jam  sampai  dengan  12  jam setelah  inkubasi.  Hasil  pengukuran dengan  spektrofotometer  pada  fase  log adalah : (1)
kelompok kontrol menunjukkan  bahwa  rerata  nilai  daya serap  cahaya  0,979  pada  4  jam  fase log,  1,414  pada  8  jam  fase  log,  dan 1,614  pada  12  jam  fase  log  ;  (2) kelompok  perlakuan  I  menunjukkan bahwa  rerata  nilai  daya  serap  cahaya 0,339 pada 4 jam fase log, 0,323 pada 8 jam  fase  log,  dan  0,327  pada  12  jam fase log ; dan (3) kelompok perlakuan II menunjukkan  bahwa  rerata  nilai  daya serap  cahaya  0,174  pada  4  jam  fase log,  0,212  pada  8  jam  fase  log,  dan 0,214  pada  12  jam  fase  log  (tabel  5.2). Hasil ini menunjukkan bahwa forbazol E secara
bermakna menghambat
pertumbuhan
sel
Staphylococcus aureus dengan p < 0,05. Hasil pengukuran dengan spektrofotometer  pada  fase  stasioner adalah: (1) kelompok kontrol menunjukkan  bahwa    rerata  nilai  daya serap cahaya adalah 1,656 pada 16 jam fase  stasioner,  1,693  pada  20  jam  fase stasioner,  dan  1,711  pada    24  jam  fase stasioner;  (2)    kelompok  perlakuan  I menunjukkan  bahwa  rerata  nilai  daya serap  cahaya  0,332  pada  16  jam  fase stasioner,  0,326  pada  20  jam  fase stasioner,  dan  0,336  pada  24  jam  fase stasioner; dan (3) kelompok perlakuan II menunjukkan  bahwa  rerata  nilai  daya serap  cahaya  0,215  pada  16  jam  fase stasioner,  0,211  pada  20  jam  fase stasioner,  dan  0,213  pada  24  jam  fase stasioner (tabel 5.2). Hal ini berarti pada fase  stasioner  terjadi  penumpukan produk  beracun  atau  kehabisan  nutrien; beberapa  sel  mengalami  kematian; jumlah sel hidup menjadi tetap (Kusnadi, dkk., 2003).
Fase  penurunan  populasi  atau  fase kematian  atau death  phase terjadi  pada saat  medium  kehabisan  nutrien  maka populasi bakteri akan menurun jumlahnya. Pada penelitian ini ditemukan bahwa fase penurunan populasi  terjadi  pada  28  jam  setelah inkubasi.  Hasil  analisis  menunjukkan bahwa  kelompok  kontrol  rerata  nilai daya  serap  cahaya  adalah  1,579, kelompok perlakuan I adalah 0,319, dan kelompok perlakuan II adalah 0,207. Hal ini berarti pada fase penurunan populasi,  sel  yang  mengalami  kematian lebih  cepat  daripada  terbentuknya  sel- sel  baru;  laju  kematian  mengalami percepatan secara eksponensial;
bergantung pada spesiesnya, semua sel
mengalami kematian dalam waktu beberapa hari (Brock dkk., 2003). Hasil penelitian ini menunjukkan, pertumbuhan  pada  kelompok  kontrol (tanpa  forbazol  E)  mengalami  fase-fase seperti yang dijelaskan Brock dkk.(2003) yaitu  fase  lag, fase  log,  fase  penurunan populasi  dan  fase  kematian  mengikuti suatu  pola  pertumbuhan  berupa  kurva pertumbuhan  sigmoid.  Pada  kelompok perlakuan  I  (forbazol  E  37,5  mg/L) terlihat fase lag, fase log, fase stasioner, fase  penurunan  populasi  atau  fase kematian  yang  hampir  sama  yaitu mendatar, ini menunjukkan bahwa forbazol  E  mempunyai  kemampuan untuk menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus dengan
merusak  secara  struktural  dinding  sel mikroba tersebut. Kelompok perlakuan II (forbazol  E  75  mg/L)  memperlihatkan fase  lag,  fase  log,  fase  stasioner,  fase penurunan  populasi  atau  fase  kematian yang  hampir  sama  yaitu  mendatar. Kurva  pertumbuhan  yang  mendatar (Gambar  1)  pada  perlakuan  I  maupun perlakuan  II  kemungkinan  disebabkan karena  forbazol  E  memiliki  lima  pusat aktif yaitu : Cl, NH, N, O dan OH , yang dapat membentuk ikatan hidrogen dengan  bagian  peptida  substrat.  Hal  ini memungkinkan  forbazol  E  berinteraksi dengan  bagian  peptida  lewat  ikatan hidrogen  dan  menghalangi  terjadinya reaksi pembentukan ikatan amida, sehingga biosintesis dinding sel terhalang.  Mekanisme  ini,  mungkin menyebabkan  kerusakan  dinding  sel Staphylococcus aureus setelah
pemberian forbazol E baik pada kelompok  perlakuan  I  (37,5  mg/L)  dan kelompok perlakuan II (75 mg/L), namun hal ini perlu penelitian lebih lanjut.
Hambatan
pertumbuhan oleh forbazol E pada perlakuan II lebih tinggi daripada perlakuan I. Hal ini disebabkan karena  konsentrasi  forbazol  E  yang digunakan dalam kelompok perlakuan II dinaikkan dua kali lipat daripada perlakuan  I.  Ini  menunjukkan  bahwa forbazol  E  pada  konsentrasi  75  mg/L mempunyai hambatan pertumbuhan lebih tinggi dibanding dengan konsentrasi 37,5 mg/L pada S. aureus .
Hasil  analisis  juga  menunjukkan bahwa  hambatan  pertumbuhan  pada kelompok perlakuan II berbeda bermakna  dengan  kelompok    perlakuan I (p < 0,05) (tabel 5.3). Dengan demikian dapat dikatakan bahwa kelompok perlakuan II (forbazol E dengan konsentrasi  75  mg/L)  menimbulkan hambatan  pertumbuhan  yang  lebih tingggi  dibandingkan  dengan  kelompok perlakuan I (forbazol E dengan
konsentrasi  37,5  mg/L).  Gambar  5.1 memperlihatkan kurva pertumbuhan Staphylococcus  aureus yang  diukur dengan  spektrofotometer  mulai  dari  0 jam sampai 28 jam. Pertumbuhan merupakan
peningkatan  seluruh  unsur  pokok  kimia sel.  Hal  tersebut  merupakan  suatu proses yang memerlukan replikasi seluruh struktur, organel, dan komponen protoplasma  seluler  dengan  adanya nutrien  dalam  lingkungan  sekelilingnya. Dalam  pertumbuhan  bakteri,  semua substansi essensial harus tersedia untuk sintesis  dan  pemeliharaan  protoplasma, dengan  sumber  energi,  dan  kondisi lingkungan yang sesuai.
Bakteri  sebagai  suatu  kelompok merupakan organisme yang memperlihatkan kemampuan yang sangat  besar  dalam  menggunakan bahan makanan yang tersebar,
menyusun  bahan  anorganik  menjadi senyawa organik yang sangat kompleks.Beberapa spesies juga tumbuh  pada  berbagai  relung  ekologik dengan  temperatur,  keasaman,  dan tekanan oksigen yang ekstrim.Kemampuan bakteri untuk bertahan di bawah keadaan sekitar yang demikian  merupakan  perlindungan  dari adaptabilitas tinggi dan refleks kapasitasnya dalam
keberhasilan merespon suatu stimulus yang dianggap asing atau tidak pernah ditemuinya.

## SIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dan pembahasan maka dapat disimpulkan sebagai berikut: (1) Forbazol E dalam menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus (2) Forbazol  E  pada  konsentrasi  75  mg/L menimbulkan  hambatan  pertumbuhan Staphylococcus  aureus lebih  tinggi dibandingkan  dengan  pada  konsentrasi 37,5 mg/L.
Berdasarkan  simpulan  di  atas dapat  digunakan  sebagai  acuan  dalam menyampaikan  saran  sebagai  berikut. (1)  Diperlukan      penelitian      lebih lanjut    mengenai    mekanisme secara fungsional  terjadinya      hambatan pertumbuhan Staphylococcus  aureus oleh    forbazol    E    (2)  Diperlukan penelitian  lebih  lanjut  untuk  mengetahui konsentrasi  optimum  forbazol  E  dalam menghambat pertumbuhan Staphylococcus  aureus ,  yang  berguna dalam penelitian klinis dengan menggunakan hewan percobaan.

## DAFTAR  PUSTAKA
Bawa,  W.  2000. Rancangan  Penelitian Eksperimental  Di  Bidang  Biologi
dan  Pendidikan  Biolog. Seminar
PSP.Biologi.Singaraja  :  PMIPA STKIP Brock,  T.  D.,  Madigan,  M.  T.,  Martinko, J. 2003. Biology of Microorganisms .New York : Prentice Hall . Ichiba,T.Y.,  Scheuer,W.Y.,  Higa,  P.J., Gravalos,D.G.1991.Hennoxazole s  :  BioactiveBisoxazoles  from MarineSponge. J.Am.Chem.Soc. 113 : 3173- 3178 Jawetz,  E.,  Melnick,  J.,  Adelberg,  E. 2004. Medical Microbiology . Third edition. New York: Published by Appleton & Lange. Kusnadi, Peristiwati, Syulasmi, A., Purwianingsih, W., Rochintaniawati, D. 2003. Mikrobiologi .Jakarta : Techinical Cooperation Project for Development ofScience and Mathematics Teaching for Primary and Secondary Education inIndonesia (IMSTEP). Lavangelde,  P.V.,  Ravensbergen,  E., Grashoff,  P.,  Beckhuizen,  H.,
Groeneveld,  P.H.P.,  Dissel,  J.V.V. 1999.  Antibiotic-Induced  Cell  wall fragments of S.aureus increase Endothelial  chemokine  secretion and adhesiveness for granulocytes. Antimicrobial Agents  and  Chemotherapy. 43
(12) : 2984-2989.
Leid,  J.  G.,  Shirtliff,  M.  E.  ,  Costerton, J.W.,  Stoodley,  P.  2002.  Human Leukocyt Adhere to,Penetrate,and respond to Staphylococcus  aureus Biofilms.
Infection  and Immunity. 70 (11) : 6339-6345.
Lindquist,  N.,  Fenical,  W.,  Van  Duyne, G.D., Clardy,J. 1991. Isolation and Structure Determination of Diazonamides    A  and  B,  Usual Cytotoxic  metabolites  from  Marine Ascidian Diazona sinensis J.Am.Chem.Soc. 113  : 2303-2310. Liu,  Y.Q.,  Zhang,  Y.Z.,  Gao,  P.J.  2004. Novel  Consentration-Killing  Curve MethodFor Estimation of Bactericidal  Potency  of  Antibiotics in an In Vitro Dynamic Model. Antimicrobial Agents and Chemotherapy .48  :  3884-3891. (Diakses 7 September 2006).
Martin,  J.D.,  Werner,  B.G.,  Hotchkiss,
J.H.  2003.Effects  of  Carbon
Dioxide  on  Bacterial  Growth
Parameters  in  Milk  as  Measured by  Conductivity. Journalof  Dairy Science .86 : 1932-1940. (Diakses 8 Agustus 2006).
Matsunaga,  S.,  Fujiki,  H.,  Sakata,D., Fusetani. 1991 . Calyculins E,F,G
and  H,  Additional    Inhibitor  of Protein  1  and  2A.  from  the marine Sponge Discodermia calyx. Tetrahedron .47 : 4393-4400. Mckee, T., Mckee, J. R. 2003. Biochemistry .Boston : McGraw-Hill.
Mims,C.,  Dockrell,  H.M.,  Goering,  R.V., Roitt,  I.,  Wakelin,D.,  Zuckerman, M. 2004.
Medical Microbiology .Third Edition. New York : Mosby. Moat, A.G., Foster, J.W., Spector,M.P.2002. Microbial Physiology. fourth  edition.  New
York : Wiley-Liss.
Muderawan,  I  .W.  2003.Laporan  Riset
Unggulan  Terpadu  VIII  Bidang Ilmu  Kimiadan  Proses. Sintesis
dan Uji Bioaktivitas Forbazol dan Turunannya . Kementrian Riset  dan  Teknologi  RI.Lembaga  Ilmu Pengetahuan Indonesia. Paget, S. D.2003.Synthesis and Antibacterial Activity of pyrroloaryl- substitutedOxazolidinones. Biorg anic  &  Medicinal  Chemistry Letters .13 : 4173-4177. Pelczar, M.J.Jr.,Chan, E.C.S.1993. Microbiology: Consepts and Applications .New York: McGraw- Hill Inc. Radspieler, A, Liebscher, J. 2001.Synthesis of Chlorooxazoles related to NaturalProducts. Synthesis .5 : 745-750. Radspieler,  A.  2000.  Untersuchungen zur  Synthese  von  Diazonamid  A undPhorbazol A Und C (dissertation).Humboldt- Universitat zu Berlin. Ristiati,  N.P.  2005.  Laporan  DIKS
Bidang  Penelitian  Murni. Aktivitas Bakterisida Forbazol  E  Terhadap  Pertumbuhan Staphylococcus aureus . IKIP Negeri  Singaraja.
Rochiman, K. 1989. Dasar Perancangan Percobaan dan Rancangan Acak Lengkap. Surabaya  :  Universitas Airlangga. Rohde, H., Knobloch, J. K.M., Horstkotte, M.A., Mack, D. 2001. Correlation of Staphylococcus aureusicaADBC Genotype and Biofilm Expresssion Phenotype. Journal of Clinical Microbiology .Vol.39. No.12.p.4595-4596.
Sastroasmoro,  S.,  Ismail,  S.  2002. Dasar-dasar  MetodologiKlinis. Edisi  ke
2Jakarta : CV Sagung Seto.
Soediro,  I.  2000. Bahan  Alam  Hayati Bahari, Perkembangan dan Prospeknya dalamBidang Farmasi.  Dalam  Pengetahuan Alam  dan  Pengembangannya , Jakarta : Dirjen Dikti Depdikbud. Shopsin, B., Kreiswirth, B.N. 2001.Molecular  Epidemiology  of Methicilin-Resistant Staphylococcus  aureus. (Diakses 1 Agustus 2001).http://medscape.com./gov mt/CDC/EID/2001/v07. Walsh,  C.  2000.Molecular  Mechanisms that  confer  antibacterial  drug resistence. Nature.406 : 678-685.