## UJI PROTEKSI KOMBINASI ANTIOKSIDAN ASAM ASKORBAT DAN
Na 2 EDTA SEBAGAI PENGKELAT Pb DARAH TERHADAP KADAR HEMOGLOBIN TIKUS ( Mus musculus)

## PROTECTION TEST COMBINATIONS OF ANTIOXIDANTS ASCORBIC ACID AND
Na 2 EDTA AS BRACING Pb BLOOD TOWARD HAEMOGLOBIN LEVELS OF MICE (Mus musculus)
Sarno Setiawan*, Irawan, Alfath Fanidya
Universitas Negeri Semarang Semarang, Jawa Tengah, Indonesia
*email korespondensi: sarno.setiawan19@gmail.com

## Abstrak
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menganalisis  tingkat  proteksi  antioksidan  kombinasi  Na 2 EDTA  dan asam  askorbat  terhadap  kadar  hemoglobin  tikus  putih  yang  dipapar  timbal  asetat.  Jumlah  perlakuan dibagi  menjadi  6  kelompok.  Setiap  kelompok  perlakuan  dipapar  Pb  asetat  175  mg/kg  bb  kecuali kelompok kontrol. Pada kelompok I diberikan Na 2 EDTA 150 mg/kg bb, kelompok II Na 2 EDTA 250 mg/kg bb, kelompok III Na 2 EDTA 150 mg/kg bb dan asam askorbat 300 mg/kg bb, dan kelompok IV Na 2 EDTA 250 mg/kg bb dan asam askorbat 500 mg/kg bb. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa kelompok  kontrol  memiliki  kadar  hemoglobin  tertinggi  yaitu  13,1  g/100  mL,  sedangkan  kelompok kontrol negatif yaitu 6,3 g/100 mL, kelompok I yaitu 7,2 g/100 mL, kelompok II yaitu 7,7 g/100 mL, kelompok III yaitu 9,3 g/100 mL, dan kelompok IV yaitu 8,3 g/100 mL. Data tersebut menunjukkan bahwa ada pengaruh asam askorbat dan Na 2 EDTA dalam menormalkan kadar hemoglobin tikus putih. Kombinasi  antioksidan  paling  efektif  yaitu  300  mg/kg  bb  asam  askorbat  dengan  150  mg/kg  bb Na 2 EDTA.  Hasil  ANOVA  menunjukkan  bahwa  f  hitung  <  f  tabel,  artinya  ada  pengaruh  pemberian Na 2 EDTA dan asam askorbat terhadap kadar hemoglobin tikus putih yang induksi timbal asetat secara oral.  Peningkatan  kadar  hemoglobin  darah  tikus  disebabkan  oleh  pengkhelatan  logam  Pb,  sehingga menurunkan gangguan pada proses sintesis heme.
Kata kunci: asam askorbat, hemoglobin, Na 2 EDTA, Pb darah

## Abstract
This  study  aimed  to  analyze  the  level  of  antioxidant  protection  in  combination  of  Na 2 EDTA  and ascorbic  acid  to  the  hemoglobin  levels  of  white  rats  exposed  to  lead  acetate.  The  number  of treatments was divided into 6 groups. Each treatment group was exposed to Pb acetate 175 mg/kg bw except the control group.  The group I was given Na 2 EDTA 150 mg/kg bw, group II Na 2 EDTA 250 mg/kg  bw,  group  III  Na 2 EDTA  150  mg/kg  bw  and  ascorbic  acid  300  mg/kg  bw,  and  group  IV Na 2 EDTA 250 mg/kg bw and ascorbic acid 500 mg/kg bw. The results showed that the control group had the highest hemoglobin level of 13.1 g/100 mL, while the negative control group was 6.3 g/100 mL, group I was 7.2 g/100 mL, group II was 7.7 g/100 mL, group III was 9.3 g/100 mL, and group IV  was  8.3  g/100  mL.  The  data  show  that  there  is  an  effect  of  ascorbic  acid  and  Na2EDTA  in normalizing hemoglobin levels in white rats. The most effective combination of antioxidants is 300 mg/kg bw ascorbic acid with 150 mg/kg bw Na 2 EDTA. The ANOVA results showed that f count < f table,  that  mean  there  was  an  effect  of  the  administration  of  Na 2 EDTA  and  ascorbic  acid  in  the hemoglobin levels of white rats which induced lead acetate orally. Increased levels of hemoglobin in rat blood are caused by the bracing of Pb  metal, so decreasing interference on the process of  heme synthesis.
Keywords: ascorbic acid, haemoglobin, Na 2 EDTA, Pb blood
8 | Jurnal Zarah , Vol. 7 No. 1 (2019)

## PENDAHULUAN
Senyawa timbal (Pb) terutama Tetra Ethyl Lead  (TEL),  yang  digunakan  sebagai  bahan aditif pada bensin, merupakan senyawa Pb yang paling  toksik  bagi  manusia.  Timbal  dalam bentuk  TEL  mudah  larut  dalam  lemak  dan mudah berdifusi ke dalam jaringan lunak seperti hati  dan  ginjal  serta  ke  dalam  jaringan  keras seperti  tulang.  Senyawa  Pb  yang  masuk  tubuh manusia  lewat  inhalasi,  akan  diabsorpsi  paru- paru  sebesar  10-30%  dan  sekitar  90%  Pb  yang terbawa  aliran  darah  akan  berikatan  dengan eritrosit  (Suyono,  1995).  Sifat  timbal  mudah berikatan dengan gugus sulfhidril (-SH) penyusun  enzim  dan  molekul  protein,  sehingga dapat menimbulkan hambatan terhadap aktivitas enzim (Hernayanti dkk . , 2015).
Logam  Pb  dapat  berasal  dari  aktivitas  di bidang  industri,  transportasi,  pertambangan  dan lain  sebagainya.  Logam  ini  dapat  mencemari lingkungan  tanah,  air  dan  udara,  serta  dapat berdampak  terhadap  kesehatan.  Batas  toleransi Pb  yang  masuk  ke  dalam  tubuh  per  minggu ( provisional  tolerable  weekly  intake /PTWI) adalah  50  μg/kg  berat  badan  untuk  dewasa  dan 25  μg/kg  berat  badan  untuk  anak-  anak. Berdasarkan  standar  WHO  (2011),  apabila kandungan  Pb  lebih  dari  80  μg/100  mL  dapat membahayakan  kesehatan.  Pada  anak-anak, kadar  yang  diperkenankan  oleh Centre  for Disease Control (CDC) adalah 10 μg/100 mL. Logam  Pb  dapat  masuk  ke  tubuh  secara inhalasi.  Efisiensi  pejanan  Pb  secara  inhalasi dapat  meningkat  jika  ukuran  partikel  semakin kecil.  Setelah  masuk  ke  dalam  tubuh,  Pb anorganik  dan  organik  akan  terdistribusi  pada jaringan lunak, susunan saraf pusat, dan jaringan tulang.  Efek  klinik  utama  Pb  anorganik  adalah defisit  susunan  saraf  pusat,  neuropati,  periferal anemia,  nefropati  dan  hipertensi  sedangkan  Pb organik adalah ensefalopati (Kosnet, 2012).
Dalam  tubuh  Pb  bersifat  akumulatif sehingga  proses  pengeksresiannya  berjalan lambat.  Proses  ekskresi  Pb  berjalan  melalui beberapa  cara,  diantaranya  melalui  ginjal  dan saluran  pencernaan.  Ekskresi  Pb  melalui  urine sebanyak  75-80%,  feses  15%  dan  lainnya melalui  empedu,  keringat,  kuku  dan  rambut (Palar,  2008).  Kadar  Pb  dalam  tubuh  yang melebihi  batas  normal  dapat  mengganggu kesehatan  baik  fisik  maupun  mental.  Menurut Doloksaribu  (2008),  kerusakan  ginjal  dapat terjadi  apabila  terpapar  Pb  40  μg/dL,  kerusakan saraf  dan  anemia  apabila  Pb  darah  >  60  μg/dL, dan  apabila  kadar  Pb  darah  >  150  μg/dL  dapat
menyebabkan ensefalopati, sakit kepala, konstisipasi,  sakit  perut,  diare,  dan  anoreksia (Doloksaribu,  2008).  Disisi  lain,  logam  Pb  juga menyebabkan  timbulnya  radikal  bebas  yang berbahaya bagi tubuh serta menurunkan kemampuan  antioksidasi  tubuh  (Ostrovskaya dkk., 2011).
Penelitian
Muliyadi dkk. (2015), menunjukkan  bahwa  adanya  Pb  dalam  darah mempengaruhi  kadar  hemoglobin  yaitu  pada kelompok  terpapar  Pb  11,20  ppm  memiliki kadar  hemoglobin  sebesar  12,97  g/dL  yang nilainya  lebih  rendah  dibandingkan  kelompok yang tidak terpapar yaitu 14,77 g/dL. Peningkatan  kadar  hemoglobin  dapat  dilakukan dengan  pemberian  antioksidan.  Penelitian  Eni dkk.,  (2018)  menunjukkan  bahwa  pemberian kitosan  64  mg/kg  BB  dan  asam  askorbat  300 mg/kg BB dapat meningkatkan kadar hemoglobin tikus yang dipapar timbal asetat 175 mg/kg  BB  yaitu  14,336  g/dL  dibanding kelompok kontrol negatif.
Logam  Pb  mengganggu  proses  sintesis heme  yaitu  mengikat  Fe  yang  dibutuhkan  oleh hemoglobin, sehingga menurunkan kadar hemoglobin.  Pemberian  kitosan berfungsi  untuk mengkhelat  ion  Pb 2+ sedangkan  asam  askorbat berfungsi  untuk  mempercepat  penyerapan  Fe untuk  sistesis  heme  (El-fattah  dkk.,  2013; Elmatris  dkk.,  2015).  Namun  efek  sebagai khelator Pb 2+ belum sepenuhnya maksimal, serta penggunaan  asam  askorbat  sebagai  pengobatan penyakit masih perlu diteliti kembali (Arifuddin dkk., 2016; Marianti dkk., 2017).
Senyawa  EDTA  (Ethylen  Diamine  Tetra Acetate)  merupakan ligan polidentat yang dapat mengikat ion Pb pada enam situs yang berbeda, yaitu ion asetat dan atom nitrogen melalui ikatan kovalen koordinasi (Aziz dkk., 2015). Maka dari itu,  penelitian  ini  dilakukan  untuk  menganalisis apakah kombinasi Na 2 EDTA dan asam askorbat yang  berfungsi  sebagai  pengkelat  Pb  dan antioksidan akan saling bersinergi meningkatkan sifat  antioksidasi  dan  mengurangi  dampak negatif  dari  Pb  dalam  tubuh,  terutama  terhadap kadar Hb.

## METODE PENELITIAN
Alat  yang  digunakan  yaitu  timbangan hewan, haemometer sahli, mikrohematokrit, dan sonde.  Bahan  yang  digunakan  yaitu tikus  putih ( Rattus  noevegicus L.)  strain  wistar  18  ekor, larutan    Pb  asetat  175  mg/kg,  aquades , alkohol 70% , larutan HCl 0,1 N , larutan Na 2 EDTA , dan asam askorbat  dari vitacimin .
Penelitian  ini  diawali  dengan  adaptasi tikus  putih  dengan  lingkungan  laboratorium selama 1 minggu. Pemberian perlakuan (induksi oral  175  mg/kg  Pb  asetat)  setelah  adaptasi dilakukan  pada  kelompok  perlakuan  kecuali kelompok kontrol (KK). Pemberian zat pengkelat pada perlakuan 1 (P1) yaitu Na 2 EDTA 150 mg/kg bb, perlakuan 2 (P2) yaitu Na 2 EDTA 250 mg/kg bb, perlakuan 3 (P3) yaitu Na 2 EDTA 150  mg/kg  dan  asam  askorbat  300  mg/kg,  dan perlakuan 4 (P4) yaitu Na 2 EDTA 250 mg/kg dan asam  askorbat  500  mg/kg.  Setelah  perlakuan selama 14 hari, darah tikus diambil melalui ekor dan  dilakukan  uji  kadar  Hb.  Tabung  pengukur Haemometer  diisi  dengan  HCl  0,1  N  sampai angka  2  (garis  pada  tabung  paling  bawah). Darah  diambil  dengan  cara  menghisapnya melalui  pipet  kapiler  sampai  tepat  pada  garis, kemudian  ditiupkan  darah  ke  dalam  tabung pengukur  yang  telah  diisi  HCl  0,1  N  kemudian dicampur  rata  dan  dibiarkan  selama  3  menit. Selanjutnya  aquades  diteteskan  dan  diaduk perlahan  sampai  muncul  warna  coklat  standar yang  ada  di  sebelah  kiri  dan  kanan  tabung pengukur.  Kadar  Hb  darah  ditunjukkan  oleh tinggi permukaan cairan dalam tabung pengukur yaitu  dalam  g%  (yaitu  g  Hb  dalam  100  ml darah)  dan  dalam  %  (persentase  Hb  yang dihitung dibandingkan dengan Hb normal).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pemberian  paparan  Pb  asetat  sebanyak 175  mg/kg  BB  selama  14  hari  memberikan perbedaan  kadar  hemoglobin  tikus  putih  setiap kelompok  perlakuan.  Kadar  Hemoglobin  tikus putih setelah pemaparan Pb asetat disajikan pada Gambar 1.

## Gambar 1. Kadar Hb tikus putih setelah dipapar Pb asetat
Pb  asetat  menurunkan  kadar  Hb  dalam darah  tikus  putih.  Hal  ini  ditunjukkan  dengan perbandingan  nilai  rata-rata  dari  kelompok kontrol  dan  kelompok  perlakuan.  Paparan  Pb
asetat  secara  terus  menerus  mengakibatkan timbal terakumulasi dalam darah dan terabsorbsi oleh  tubuh,  sehingga  mempengaruhi  oksigen yang terikat oleh hemoglobin.
Hasil analisis keempat kelompok perlakuan dengan menggunakan ANOVA dengan  tingkat  signifikansi  5%  menunjukkan bahwa f hit < f tab sehingga ada pengaruh induksi Pb  asetat  terhadap  penurunan  kadar  Hb  tikus putih  dan  ada  pengaruh  kombinasi  asam askorbat dan Na 2 EDTA dalam menormalkan Hb darah.
Hasil  pengukuran  kadar  hemoglobin tertinggi  pada  kelompok  perlakuan  3  yaitu  9,3 g/100  mL.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa pemberian  Na 2 EDTA  150  mg/kg  bb  dan  asam askorbat 300 mg/kg mampu meningkatkan kadar hemoglobin  terhadap  kelompok  kontrol  negatif (KN).  Perbedaan  muncul  pada  kelompok perlakuan 4 yang diperoleh kadar Hb sebesar 8,3 g/100  mL  dengan  asam  askorbat  500  g/100  ml. Kadar Hb ini menurun sebesar 1 g/100 mL dari kelompok  perlakuan  3.  Hal  ini  disebabkan  oleh kemungkinan  terjadi  pengkhelatan lebih  banyak terhadap  logam  Fe  dibandingkan    Pb  oleh Na 2 EDTA  karena  sifatnya  yang  tidak  selektif dalam mengkhelat logam (Scott, 2004).
Tinggi rendahnya hemoglobin darah salah satunya  dipengaruhi  oleh  asam  askorbat) (Purwani  dan  Hadi,  2002).  Asam  askorbat berperan dalam metabolisme zat besi (mereduksi Fe  dari  bentuk  Fe 3+ menjadi  Fe 2+ yang  lebih mudah diserap oleh sel mukosa usus. Selain itu, asam  askorbat  berperan  dalam  mobilisasi simpanan Fe terutama hemosiderin dalam limpa dan  pemindahannya  dalam  darah.  Jadi,  adanya suplementasi  asam  askorbat  akan  mempercepat dan  membantu  penyerapan  Fe,  sehingga  kadar hemoglobin darah akan meningkat.
Absorpsi  Pb  menimbulkan  efek  subklinik karena  sifat  afinitas  yang  kuat.  Efek  subklinis yang  ditimbulkan  dapat  terjadi  pada  sistem saraf,  hematopoietik  dan  metabolisme  pada sintesis  heme,  nukleotida,  dan  vitamin  D.  Efek utama  Pb  adalah  mempengaruhi  sintesis  heme yang  selanjutnya  akan  menyebabkan  kerusakan pada  darah.  Berdasarkan  penelitian  yang dilakukan oleh Muliyadi dkk ., (2015), menyatakan  bahwa  kandungan  Pb  dalam  cat mempengaruhi  kadar  hemoglobin  darah  pekerja bagian  pengecatan,  setelah  diteliti  diperoleh bahwa  kadar  hemoglobinnya  lebih  rendah dibandingkan dengan pekerja bagian administrasi.  Rata-rata  kadar  hemoglobin  darah kelompok  terpapar  12,97  g/dL,  sedangkan  pada
10 | Jurnal Zarah , Vol. 7 No. 1 (2019)
kelompok  tidak  terpapar  14,77  g/dL  dan sebagian besar kadar hemoglobin darah kelompok terpapar kurang dari syarat hemoglobin darah normal yaitu 13,2-17,3 g/dL.
Mekanisme  Pb  dapat  menurunkan  kadar hemoglobin yaitu Pb dalam darah akan berikatan dengan  eritrosit,  sehingga  dapat  menghambat aktivitas  enzim  oksidase  (Yulaipi,  2013). Adanya  Pb  dalam  darah  dapat  mengikat  ALAD (aminolevulenic  acid  dehidrase ),  suatu  enzim yang diperlukan dalam metabolisme
pembentukan
sel darah merah dan membuangnya  melalui  urine.  Itulah  sebabnya semakin  tinggi  kadar  Pb  maka  semakin  tinggi pula  kadar  ALA  dalam  urine  (ALA-U)  dan semakin  rendah  ALAD  dalam  darah,  sehingga banyaknya Pb darah adalah penyebab berkurangnya  hemoglobin.  Hal  ini  telah  diteliti oleh  Adnan  (2001),  bahwa  kadar  timbal  dalam darah  10  μg/dL  sudah  dapat  menyebabkan gangguan  pada  sintesis  hemoglobin  dengan penghambatan pada  aktivitas  enzim  δ- aminolevulinat  dehidratase  (ALAD).  Hal  ini mengakibatkan peningkatan kadar δ- aminolevulinat  (δ-ALA)  dalam  serum  dan kemih.
Keberadaan  Pb  dalam  tubuh  dapat mengganggu  sistem  hemopoitik  pada  sintese heme melalui tiga mekanisme, yakni mengganggu  penyatuan  Glycine  dan  Succinyl Co-Enzyme  A,  melalui  depresi  terhadap  delta- ALAD,  dan  melalui  gangguan  terhadap  enzim Ferrochelatase  yang  berfungsi  melekatkan  besi (Fe)  terhadap  protoporphyrin  yang  kemudian menjadi  heme  sebagai  bagian  dari  hemoglobin (Malaka,  2012).  Kombinasi  asam  askorbat  dan EDTA  sebagai  antioksidan  bekerja  dengan mengkelat  logam  Pb  dalam  darah.  Pada kelompok  perlakuan  yang  diberi  vitamin  C  dan EDTA  terbukti  dapat  meningkatkan  kadar  Hb walaupun tikus terpapar Pb.
Asam askorbat merupakan agen pereduksi (antioksidan)  karena  mendonorkan  elektronnya, vitamin  ini  mencegah  senyawa-senyawa  lain agar  tidak  teroksidasi.  Kadar  asam  askorbat  di dalam  tubuh  memungkinkan  untuk  membentuk ion  kompleks.  Asam  askorbat  sendiri  akan teroksidasi  dalam  proses  antioksidan,  sehingga menghasilkan  asam  dehidroaskorbat.  Asam dehidroaskorbat dapat tereduksi kembali menjadi asam askorbat dengan bantuan enzim 4- hidroksifenilpiruvat  dioksigenase.  Namun  tidak semuanya dapat kembali menjadi asam askorbat lagi,  karena  di  dalam  tubuh  manusia  hanya terjadi secara parsial.  Asam askorbat yang telah
berubah menjadi ion kompleks berpotensi untuk menerima  elektron  dan  direduksi  oleh  senyawa lain.  Salah  satunya  direduksi  melalui  reaksi transisi  yang  diperantarai  logam  (misalnya ferrum atau cuprum ). Disisi lain apabila Pb juga terdapat  di  dalam  darah,  maka  ion  kompleks asam askorbat juga akan mengkhelat Pb. Hal ini ditunjukkan pada Gambar 2.
(a)
(b)
Gambar 2. (a) Pembentukan ion kompleks asam askorbat, (b) pengkhelatan Pb oleh asam askorbat
Hal ini mengakibatkan asam dehidroaskorbat meningkatkan persaingan antara  Pb  dan  Fe  di  darah  untuk  dikhelat. Kemungkinan asam dehidroaskorbat  lebih banyak  mengkelat  Fe  daripada  Pb,  sehingga asam  dehidroaskorbat  tidak  signifikan  dalam mengekhelat  Pb.  Dampak  yang  ditimbulkan yaitu proses sintesis hemoglobin akan terganggu,  sehingga  terjadi  penurunan  kadar hemoglobin di dalam darah. Hal ini memungkinkan pada perlakuan 4 asam askorbat yang  diberikan  sebagian  berubah  menjadi  ion kompleks,  sehingga  akan  mengekhelat  Fe  dan Pb di dalam darah. Dampaknya kadar hemoglobin lebih rendah dibanding perlakuan 3.
Penelitian Purwani dan Hadi (2002), menunjukan  bahwa  pemberian  vitamin  C  (asam askorbat)  yang  berlebih  pada  ikan  juga  dapat menjadikan  defisiensi  vitamin  B12  karena vitamin  C  dapat  mengubah  sebagian  vitamin B12  menjadi  analognya,  salah  satu  analognya adalah antivitamin B12, padahal vitamin B12 ini
diperlukan dalam meningkatkan kadar hemoglobin.

## KESIMPULAN
Berdasarkan    hasil  penelitian  dan  uji statistik yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa  induksi  timbal  asetat  secara  oral  pada tikus  berpengaruh  terhadap  jumlah  kadar Hemoglobin  (Hb).  Kombinasi  antioksidan  yang paling  optimal  untuk  mengkhelat  Pb  yaitu Na 2 EDTA  150  mg/kg  bb  tikus    dan  asam askorbat  300  mg/kg  BB  dengan  kadar  Hb sebesar 9,3 g/100 mL.

## DAFTAR RUJUKAN
Adnan,  S.  (2001).  Pengaruh  Pajanan  Timbal terhadap  Kesehatan  dan  Kualitas  Semen Pekerja  Laki-laki. Majalah  Kedokteran Indonesia. 51(5): 168-174. Anies.  (2015). Penyakit  Berbasis  Lingkungan.
:Berbagai  Penyakit  Menular  dan  Tidak Menular    yang  Disebabkan  oleh  Faktor Lingkungan . Cetakan 1. Yogyakarta: Ar-
ruzz Media.
Arifuddin, A., Asri., dan Elmatris. (2016). Efek
Pemberian Vitamin C terhadap
Gambaran  Histopatologi  Hati  Tikus Wistar  yang  Terpapar  Timbal  Asetat .
Jurnal Kesehatan Andalas . 5 (1). Aziz,  T.,  Amalia,  R.  P.,  dan  Vishe,  D.  (2015). Removal  Logam  Berat  dari  Tanah Terkontaminasi  dengan  Menggunakan Chelating  Agent  (EDTA). Jurnal  Teknik Kimia. 2(1): 41-49.
Doloksabiru,  B.  (2008).  Pengaruh  Proteksi Vitamin  C  Terhadap  Kadar  Ureum Kreatinin,  dan  Gambaran  Histopatologis
Ginjal  Mencit  yang  Dipapar  Plumbun.
Tesis . Medan: Universitas Sumatra Utara.
El-fattah,  H.  M.  A.,  El-rahman,  M.  K.  A.,  dan
Hassan,  L.  E.  (2013).  Chitosan  as  a hepato-protective  agent  against  single oral  dose  of  dioxin. IOSR  J  Environ  Sci Toxicol Food Technol . 7(3): 11–17.
Elmatris,  S.,  Husnii,  K.,  dan  Eti,  Y.  (2015).
Efek  Pemberian  Vitamin  C  terhadap Aktivitas Katalase Hati Tikus Galur yang Terpapar  Ion  Pb. Jurnal  Kesehatan Masyarakat . 4(1): 279-285.
Eni,  W.  N.,  Aditya,  M.,  dan  Wiwi,  I.  (2018). Bioaplikasi  Kitosan  dan  Vitamin  C terhadap  Kadar  Hemoglobin Rattus norvegicus . Life  Science  Journal  of Biology . 7(2): 65-72.
Flora,  S.  J.  S.,  Mehta  A.,  dan  Satsangi,  K.
(2003).  Aluminum-induced  oxidative stress in  rat  brain: response  to  combined administration of citric acid and HEDTA. Comparative Biochemistry and Physiology  Part  C:  Toxicology  & Pharmacology , 134(3), 319–328.
Hernayanti.,  Agung,  S.,  Dwi,  L.,  dan Saefuddin,  A.  (2015).  Efek  Polimerase GENA  GSTP-1  Terhadap  Aktivitas Glutation  S-Transferase  (GST)  Pada Individu  terpapar  Logam  Berat  Timbal. J. Manusia dan Lingkungan . 22(3): 305-
309. Kosnet, M. J. (2012). Heavy Metals Intoxication and Chelators (Chapter 57) .
Basic  and  Clinical  Pharmacology.  12t edition.  Editor  Katzung,  B,G.  Masters, SB., Trevor, AJ.. Mc GrawHill Companies Inc.
Malaka,  I.  (2012).  Hubungan  Kadar  Timbel dalam  Darah  dengan  Kadar  Hemoglobin dan  Hematokrit  pada  Petugas  Pintu  Tol Jagorawi. Jurnal Kesehatan Masyarakat . 6 (1).
Marianti,  A.,  Anatiasara,  D.,  dan  Ashar,  F.  F. (2017).  Chitosan  as  Chelating  and Protective Agents from Lead Intoxication in Rat. Biosaintifika . 9(1): 126–133.
Muliyadi.,  H.  J.  Mukono.,  dan  Haryanto  N.
(2015).  Paparan  Timbal  Udara  Terhadap Timbal  Darah,  Hemoglobin,  Cystatin  C Serum Pekerja Pengecatan Mobil. Jurnal Kesehatan Masyarakat. 11(1): 87-95. Ostrovskaya,  S.  S.,  Shatornaya  V.  F.,  dan Kolosova, I. (2011). Combined Impact of Plumbum and Cadmium on the Organism. Foreigning  Literature  Review 2(1): 99-101. Palar,  H.  (2008). Pencemaran  &  Toksikologi Logam Berat . Jakarta: Rineka Cipta.
Purwani, R. D., dan Hadi, H. (2002). Pengaruh
Pemberian Pil Besi Folat dan Pil Vitamin C terhadap
Perubahan Kadar Hemoglobin  Anak  Sekolah  Dasar  yang Anemia  di  Desa  Nelayan  Kabupaten
Rembang. Jurnal  Kedokteran  Yarsi ,  10,
8-15.
Scott,  A.  S.  (2004).  EDTA-  a  Molecule  with  a Complex Story. Molecule of the Month . Suyono,  J.  (2015). Deteksi  Dini  Penyakit Akibat Kerja (World Health Organization) .  Editor:  Caroline  Wijaya.
Jakarta: EGC Penerbit Buku Kedokteran.
12 | Jurnal Zarah , Vol. 7 No. 1 (2019)
WHO  (World  Health  Organisation).  (2011). Lead  in  Drinking-water.  Background document  for  development  of  WHO Guidelines for Drinking-water Quality. Yulaipi, A. (2013). Bioakumulasi Logam Berat Timbal  (Pb)  dan  hubungannya  dengan Laju Pertumbuhan Ikan mujair
(Oreochromis mossambicus) . Jurnal Sains  dan  Semi  Pormits .  2(2): 2337- 3520.