## KUALITAS DAN KUANTITAS KALUS PADA KULTUR RUMPUT
BENGGALA ( Panicum maximum ) YANG DIINDUKSI DENGAN KOMBINASI AUKSIN DAN SITOKININ
Marna Eoh 1*
1 Jurusan Peternakan, Fakultas Pertanian, Universitas Pattimura Jl. Ir.M. Putuhena, Kampus Poka, Ambon 97233 * Email Penulis Korespondensi: marnaeoh9@gmail.com

## ABSTRAK
Penelitian  induksi  kalus  dari  eskplan  daun  rumput  Benggala  ( Panicum  maximum )  varietas Trichoglume dengan menggunakan  medium  standart  MS  (Murashige  dan  Skoog)  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  berbagai konsentrasi  2,4-  D  (2,4  dichlorophenoxy  aceticid  acid)  yaitu  2,  4,  6  dan  8  mg/l  dan  proses  organogenesis  kalus menggunakan zat pengatur tumbuh 2iP {N6- (2- isopentenyl)- adenine} dengan konsentrasi 0, 0,2 dan 1 mg/l, dan NAA (l- naphalene acetic acid) dengan konsentrasi 0, 0,03, 0,16 dan 3 mg/l. Peningkatan kualitas dan kuntitas kalus diukur  dengan  menghitung  presentase  pembentukan  kalus,  sedangkan  organogenesis  diamati  dari  morfologis pembentukan kalus membentuk organ. Hasil penelitian menunjukan bahwa perlakuan yang optimal diperoleh pada konsentrasi 4 mg/l 2,4- D, yaitu menghasilkan kalus warna putih sedikit kekuningan,  tekstur kalus remah (friable), dengan  jumlah  kalus  yang  tumbuh  pada  minggu  ke-4  adalah  46,2  persen,  sedangkan  dengan  konsentrasi  8  mg/l menunjukan jumlah kalus terbanyak pada minggu ke- 4 yaitu 59,7 persen dengan morfologi kalus berwarna kuning dan bertekstur lebih kompak. Untuk formasi akar pada minggu ke- 3 menunjukan persentase kalus membentuk akar pada  kombinasi  0  mg  /l  2iP  (auksin)  +  3  mg/l  NAA  dari  (sitokinin)  yaitu  100%  ,  jumlah  akar  terbanyak  pada kombinasi 0 mg/l 2iP + 3 mg/l NAA dari formasi akar yaitu 9,0 dan akar terpanjang pada kombinasi 0 mg/l 2iP + 3 mg/l NAA yaitu 17,0 mm. Warna kalus yang dihasilkan bervariasi putih, putih kekuningan  dan coklat.
Kata kunci: Kalus, rumput Benggala, auksin, sitokinin

## QUALITY AND QUANTITY OF THE CALLUS OF BENGGALA GRASS (Panicum maximum) CULTURE INDUCTED WITH AUXIN AND CYTOKININ COMBINATION

## ABSTRACT
The callus induction study from Bengal grass (Panicum maximum) cultivars of Trichoglume variety using standard MS  medium  (Murashige  and  Skoog)  aimed  to  determine  the  effect  of  various  concentrations  of  2,4-D  (2.4 dichlorophenoxy aceticid acid) namely 2, 4, 6 and 8 mg/l and callus organogenesis process using growth regulator 2iP {N6- (2-isopentenyl)- adenine} with a concentration of 0, 0.2 and 1 mg/l, and NAA (l-naphalene acetic acid) with a concentration of 0, 0.03, 0.16 and 3 mg/l. The increase in callus quality and quantity was measured by calculating the percentage of callus formation, while organogenesis was observed from the morphology of callus formation to form organs. The results showed that the optimal treatment was obtained at a concentration of 4 mg/l 2,4-D, which produced a slightly yellowish white callus, friable callus texture, with the number of callus growing at week 4 was 46.2 percent. , while the concentration of 8 mg/l showed the highest number of callus at week 4, namely 59.7 percent with yellow callus morphology and a more compact texture. For root formation at week 3, the percentage of callus forming roots at the combination of 0 mg/l 2iP (auxin) + 3 mg/l NAA from (cytokinins) was 100%, the highest number of  roots  was  in  the  combination  0  mg/l  2iP  +  3  mg  /l  NAA  from  root  formation  was  9.0  and  the  longest  root  at combination 0 mg/l 2iP + 3 mg/l NAA was 17.0 mm. The color of the resulting callus varies from white, yellowish white and brown.
Key words: Callus, Bengala grass, auxins, cytokinins

## PENDAHULUAN
Pakan diberikan kepada ternak harus memenuhi kualitas dan kuantitas serta kontinyutas guna memenuhi
kebutuhan  hidup  pokok,  pertumbuhan,  produksi  dan reproduksinya.    Berbagai  upaya  untuk  meningkatkan produksi diterapkan diantaranya dengan memilih pakan hijauan  unggul  yang  mempunyai  produktivitas  tinggi,
baik  dipandang  dari  segi  kualitas  maupun  kualitas (Subekti, 2009). Salah  satu hijauan pakan ternak  yang banyak dimanfaatkan adalah rumput Benggala ( Panicum  maximum )  yang  merupakan  salah  satu  jenis tanaman pakan yang mempunyai komposisi nutrisi yang baik (Purbajanti et al., 2010 ; Russell & Webb, 1976). Namun  budidaya  pakan  ternak  seringkali  dihadapkan pada  kendala  yang  cukup  serius,  seperti  keterbatasan lahan, gangguan iklim dan hama penyakit. Bioteknologi dapat dimanfaatkan untuk menghasilkan hijauan pakan ternak  unggul,  mengadakan  perbanyakan  tanaman secara  vegatatif,  pemuliaan  tanaman,  penyediaan  bibit yang  bebas  hama  dan  penyakit  (Fanindi  &  Sutedi, 2014).
Kultur jaringan adalah metode untuk mengisolasi  bagian–bagian  tanaman  seperti  sel, jaringan,  atau  organ  serta  menumbuhkannya  secara aseptis (suci hama) di dalam atau di atas suatu medium budidaya  sehingga  bagian–bagian  tanaman  tersebut dapat  memperbanyak  diri  dan  regenerasi  menjadi tanaman lengkap (Rusdianto & Indrianto, 2015 ; Dodds &  Robert,  1989).  Eksplan  terbaik  untuk  induksi  kalus adalah  jaringan  tanaman  dari  bagian-bagian  semai ( seedling )  yang  dikecudah  menambahkan  secara  in vitro, sel-selnya masih bersifat meristimatik dan sudah mengalami  deferensiasi  (Rasud  &  Bustaman,  2020). Dalam  kondisi  meristematik  inilah,  signal  lingkungan dan hormon akan mengarah ke pembelahan sel-sel baru yang  terspesialisasi  menuju  pembentukan  tunas  atau akar, setelah terinduksi kumpulan sel atau jaringan akan mengalami  determinasi.  Jika  sel-  sel  atau  jaringan tersebut  terus  berkembang  menjadi  organ  (embrio), walaupun  diletakkan  di  lingkungan  yang  baru  yang bebas  dari  signal  penyebab  organogenesis  atau embryogenesis (Yusnita, 2003).
Medium  kultur  jaringan  yang  dipakai  untuk induksi kalus pada kultur daun rumput Benggala adalah medium dasar MS (Murashige- Skoog) (Fitriani et al., 2013).  Selain  nutrisi,  zat  pengatur  tumbuh  sangat diperlukan sebagai komponen medium bagi pertumbuhan,  perkembangan  dan  diferensiasi  kalus rumput  Benggala  (Abidin,  1985).  Untuk  keperluan kultur jaringan telah dibuat zat pengatur tumbuh sitetis. Tanpa  zat  pengatur  tumbuh,  eksplan  akan  terhambat bahkan  mungkin  tidak  tumbuh  (Lestari,  2011).  Zat pengatur tumbuh auksin sintetis yang umum dan efektif untuk induksi kalus adalah 2,4- D, pada kultur jaringan tanaman  monokotil,  teutama  rumput-  rumputan  dan palem,  juga  pada  kultur  in  vitro  umbi  akar  wortel (Rusdianto & Indrianto, 2015 ; Indrianto, 2002). Auksin yang  sering  digunakan  adalah  2,4-  d  (dichloropenoxy acetic  acid)  dan  NAA  (naphthalene  acitic  acid),  IAA (indole -3- acetic acid). Sitokinin yang sering digunakan adalah  kinetin  dan  BAP,  sedangkan  2iP  {  N6-
(2isopentynil)  –  adenine}  Zeatin  jarang  digunakan (Thorpe & Patel, 1984).
Saat ini perkembangan budidaya kultur jaringan lebih menjanjikan harapan dengan dijadikannya sebagai sarana  pemuliaan  untuk  meningkatkan  variabilitas genetik (Estuningsih, 1995), sehingga masalah hijauan pakan  yang  selama  ini  dihadapai  bisa  diatasi  dengan peningkatan  secara  kualitatif  maupun  kuantitatif melalui perbanyakan vegetatif, sehingga didapati pakan hijauan  unggul  yang  seragam  dan  berdaya  guna. Berbagai  konsentrasi    dan  kombinasi  zat  pengatur tumbuh  Naphtalene  acetic  acid  (NAA)  dan  N6-  (2- isopentiny)-  adenine  (2iP)  telah  digunakan  untuk mendapat  tanaman  regenerasi  dari  rumput  Benggala secara in Vitro. Hasil di bidang penelitian bioteknologi bidang  peternakan  melalui  kultur  jaringan  diharapkan dapat  memberikan  manfaat  untuk  perbaikan  pakan ternak  dalam mendapatkan bibit dengan kualitas unggul dan  berdaya  guna  dalam  jumlah  dan  kualitas  yang cukup dengan biaya yang relatif murah. Permasalahannya adalah bagaimana pengaruh penambahan  2,  4-  D  dengan  menggunakan  beberapa konsentrasi yang dipakai ke dalam medium MS dalam kultur  jaringan  dan  terhadap  induksi  kalus  serta beberapa  konsentrasi    dari  kombinasi  zat  pengatur tumbuh NAA dan 2iP terhadap tanaman generasi baru. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  konsentrasi 2,4- D terbaik untuk mendapat kalus pada eksplan daun rumput Benggala.

## BAHAN DAN METODE
Pelaksanaan  penelitian  ini  berlangsung  selama 11  bulan,  dan  dilaksanakan  pada  dua  lokasi  yaitu  (1) penanaman  rumput    Benggala  ( Panicum  maximum ) varietas Trichoglume , di rumah kaca milik Laboratorium Ilmu Tanah Fakultas Pertanian
Universitas Gadjah Mada,  dan (2) untuk  mengadakan penelitian pertumbuhan kalus dilakukan di Laboratorium  Kultur  Jaringan  Fakultas  Biologi, Universitas Gadjah Mada.
Bahan  penelitian  ini  adalah  tanaman  eksplan yang digunakan berupa primordia dan rumput Benggala ( Penicum  maximum )  varietas Trichoglume ,  berumur satu  setengah  bulan,  yang  ditanam  di  rumah  kaca dengan  tujuan  agar  tanaman  tersebut  bebas  dari kontaminasi  dengan  lingkungan  luar,  baik  penyakit maupun  bakteri.  Bahan  kimia  yang  digunakan  untuk membuat  medium  MS  (Murshige  dan  Skoog)  adalah garam makro, garam mikro, vitamin, sukrosa dan agar. Kemudian  ditambahkan  untuk  pengunaan  pH  media yang digunakan KOH 1 N dan HCL 1 N. Bahan strilisasi digunakan adalah HgCl ₂ 40/100cc, Bayclin dan aquades dengan perbandingan 1:1. Zat pengatur tumbuh 2,4- D, NAA  dan  2iP.  Bahan-  bahan  lain  :  kertas  payung  dan aluminium  foil.  Alat  untuk  preparasi  medium  adalah alat- alat gelas, pH stick,  timbangan analitik, hotplate,
magnetic,  stirrer,  mikropipet  dan  autoclave.  Ruang penabur dengan laminar air flow cabinet (LAF) cawan petri, skalpel, pisau dan pinset. Ruang incubator untuk pertumbuhan  kultur kalus dengan suhu 250 C.
Alat-alat  gelas  dan  logam  dicuci  sampai  bersih kemudian  dkeringkan.  Alat-  alat  gelas  seperti  tabung elenmeyer  dan  botol-botol  kultur  bagian  mulutnya ditutup dengan aliminium foil, sedangkan cawan petri, pinset  dan  skapel  dibungkus  dengan  kertas  payung. Kemudian semua alat disterilkan dengan autoclave pada tekanan  1,5  atm,  suhu  121 o C  selama  15  menit. Pembuatan  medium  MS  meliputi  stok  larutan Murashige  (Murashige,  1974)  yaitu  mikronutrien,  zat besi, vitamin, dan zat pengatur tumbuh . Makronutrien tidak  dibuat  stok,  tetapi  langsung  ditimbang.  Bahan pemadat yang digunakan adalah 2 gram agar- agar dan sebagai  sumber  karbon  digunakan  20  gram  sukrosa. Selanjutnya medium ditambahkan zat pengatur tumbuh sesuai  dengan  perlakuan.  Semua  bahan  dicampur  dan diatur derajat keasamannya berkisar antara pH 5,6 – 5,8 kemudian dipanaskan sampai larut. Medium dimasukan ke  botol-botol  kultur,  kemudian  botol  ditutup  dengan aluminium  foil  dan  disterilkan  dengan  autoclave  pada suhu 121 o C selama 15 menit. Tiga hari kemudian sudah dapat melakukan penanaman aksplan
Eksplan  yang  digunakan  adalah  daun  rumput Benggala  ( Panicum  maximum ),  beberapa  pelepah tangkai  daunnya  dihilangkan,  dicuci  dengan  deterjen dan  dibilas  dengan  air  mengalir  sampai  bersih. Sterilisasi  dilanjutkan  di  dalam  laminar,  yang sebelumnya dibersihkan dengan alcohol 70% sehingga laminar dalam keadaan steril, bebas dari bakteri maupun virus  dan  disinari  UV  selama  30  menit.  Eksplan direndam  dalam  HgCl ₂ 40/100cc  dan  aquades  dengan
perbandingan 1:1 selama 10 menit. Setelah itu eksplan dicuci tiga  kali dengan  menggunakan aquades  melalui cara digojok selama 1 menit. Kemudian dibilas kembali kedua  kali,  eksplan  direndam  dalam  Baylclin  dan aquades  dengan  perbandingan  1:1  selama  10  menit, setelah itu eksplan dicuci tiga kali dengan menggunakan aquades  melalui  cara  dikocok  selama  1  menit. Selanjutnya eksplan diletakan dalam cawan petri steril dan  dipotong  sepanjang  ±  5  mm  sebanyak  3  potong dengan menggunakan skapel steril.
Eksplan  yang  telah  disterilisasi  kemudian ditanam  pada  medium  yang  sudah  disiapkan,  yaitu medium  induksi  kalus.Tahap  ini  bertujuan  untuk menginduksi  terbentuknya  kalus  dari  eksplan  dan mempersiapkan  kalus  untuk  tahap  berikutnya  yaitu diferensiasi.  Medium  yang  digunakan  untuk  induksi kalus  berupa  medium  MS  dengan  penambahan  2,4-D sebagai zat pengatur tumbuh pada beberapa konsentrasi, sebagai berikut : MS + tanpa fitohormon (MS 0), MS + 2 mg/l 2,4-D, MS + 4 mg/l 2,4- D, MS + 6 mg/l 2,4- D, MS + 8 mg/l 2,4- D.
Medium  yang  menghasilkan  kalus  yang  paling baik  adalah  medium  yang  paling  cepat  menginduksi kalus  dan  menghasilkan  kalus  dengan  efisiensi  yang paling besar. Medium dengan konsentrasi 2,4- D terbaik akan membentuk akar digunakan untuk memperbanyak kalus  dan  diinduksi  ke  tahap  berikutnya  sampai dihasilkan plantlet.
Kalus  hasil  induksi  kemudian  disubkultur  pada minggu ke  -2 di  medium regenerasi MS padat dengan variasi  zat  pengatur  tumbuh  jenis  auksin  NAA ( naphthalene  acitic  acid )  dan  jenis  sitokinin  2iP  { N6- (2- isopentenyl)-adenine }.
Tabel 1.  Kombinasi Perlakuan Medium Deferensiasi
Dosis 2iP (mg/l) Dosis NAA (mg/l) 0 0,03 0,16 3 0 2iP 0    NAA 0 2iP  0        NAA 0,03 2iP  0        NAA 0,16 2iP 0    NAA 3 0,2 2iP 0,2 NAA 0 2iP  0,2  NAA 0,03 2iP  0,2  NAA 0,16 2iP 0,2 NAA 3 1 2iP 1   NAA 0 2iP  1      NAA 0,03 2iP  1        NAA 0,16 2iP 1 NAA3
Erlenmeyer 2000 ml dan diisi aquades sebanyak 500  ml.  Setiap  komponen  bahan  kimia  makronutrien dan  mikronutrien  sesuai  dengan  tabel  formula Murashige  dan  Skoog  (1962)    100  mg  myo-  inositol (vitamin), serta sukrosa ditimbang kemudian dilarutkan satu per satu dan diaduk dengan menggunakan magnetic stirrer.  Pada  campuran  larutan  tersebut,  ditambahkan aquades sampai volume mancapai  1000 ml.
Larutan dibagi dalam beberapa Erlenmeyer dan ditambahkan agar-agar. Pada masing-masing Erlenmeyer  ditambahkan  zat  pengatur  tumbuh  dengan kombinasi 2iP 0; 0,03; 0,16 dan 3 mg/l + NAA 0; 0,2 dan  1  mg/l.  Perhitungan  untuk  masing-  masing
kombinasi  zat  pengatur  tumbuh  NAA  dan    2iP menggunakan  rumus    M1  x  V1  botol  kultur  ditutup dengan  aluminium  foil,  kira-  kira  40  mg/l  botol, dilakukan di dalam laminar air flow cabinet LAF, dijaga agar larutan dalam keadaan steril. Medium yang sudah steril,  disimpan  di  dalam  ruangan  penyimpan  medium selama 3 minggu.
Kalus  dari  botol  kultur  dipindahkan  ke  dalam cawan petri di dalam laminar LAF, kemudian dipotong menjadi beberapa bagian dengan  menggunakan skapel steril, selanjutnya kalus ditanam di dalam medium yang sudah  diberikan  komponen  nutrient  dan  zat  pengatur tumbuh. Dua belas botol disiapkan untuk 12 kombinasi
medium,  dan  disetiap  =  M2  x  V2..  Dengan menggunakan  mikropipet  larutan  zat  pengatur  tumbuh dimasukan  ke  dalam  Erlenmeyer.  Kertas  indikator digunakan  untuk  menggukur  pH  hingga  keasaman mencapai  pH  5,8-6.  Guna  mengatur  larutan  dalam kondisi asam atau basa dilakukan dengan menambahkan HCL KOH.
Larutan  dipanaskan  sambil  diaduk  sampai mendidih. Dalam kondisi panas dan masih cair, larutan medium  dimasukan  dalam  botol-botol  kemudian dimasukkan  4  buah  kalus,  setelah  itu  ditutup  dengan menggunakan  aluminium  foil dan diletakkan  kembali pada  ruang  inkubasi  untuk  diamati  perkembangannya selama  3  minggu.  Kombinasi  perlakukan  medium deferensiasi seperti tertera pada Tabel 1.
Variabel  yang  diamati  dalam  penelitian    ini adalah  morfologi  dan  jumlah  kalus  pada  medium induksi  kalus,  mulai  hari  pertama  penanaman  aksplan sampai tumbuh kalus. Sedangkan variable pertumbuhan yang  diamati  adalah  kecepatan  terbentuknya  kalus, warna kalus, dan tersktur kalus. Kemudian
organogenesis  dimana  variabel  perkembangan  yang dapat diamati adalah morfologi kalus membentuk akar, jumlah  akar  panjang.  Data  Pengamatan  tentang peningkatan  kualitas  dan  kuantitas  dianalisis  dengan menggunakan  persentase,  rerata  dan  standar  deviasi (Astuti, 1980).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil pengamatan terhadap persentase terbentuknya  kalus  dengan  menggunakan  medium standard MS ditambah 2,4-D pada berbagai konsentrasi disajikan  pada  Tabel  2.  Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa  pada  medium  MS    dengan  menambah  zat pengatur  tumbuh  2,4-D  dengan  konsentrasi  8  mg/l menghasilkan  jumlah  induksi  kalus  terbanyak  minggu ke-1  yaitu  5,5  persen  dengan  warna  kalus  putih  dan kalus tampak remah. Sementara itu minggu ke-4 jumlah kalusnya  tumbuh  59,7  persen  dengan  morfologi  kalus berwarna kuning muda dan kalus tampak lebih kompak.
Tabel  2.  Pengamatan  Terhadap  Presentase  Kalus  Yang  Terbentuk  Pada  Tanaman  Rumput  Benggala  ( Panicum Maximum )
Konsentrasi 2,4-D (mg/l) Persentase jumlah kalus minggu ke 1 Morfologi Kalus Persentase jumlah kalus minggu ke 4 Morfologi kalus 0 Tdk tumbuh Tdk tumbuh warna - 2 2,0 ± 1,4 Warna putih, remah 3,8 ± 0,1 Warna putih,remah 4 2,5± 0,6 Warna putih, remah 46,2 ± 0,6 Warna putih,sedikit kekuningan remah/friabel 6 3,8± 1,3 Waran putih, r minggu remah 51,4 ± 3,0 Warna putih kekuningan kompak 8 5,5 ± 0,4 Warna putih, remah 59,7 ± 4,7 Warna kuning muda,kompak
Pada  penambahan  zat  pengatur  tumbuh  dengan konsentrasi 4 mg/l, pada minggu ke-1 jumlah kalus yang tumbuh  2,5 persen  berwarna    putih  dan  tampak  masih remah,  sedangkan  pada  minggu  ke-4  jumlah  kalus adalah  46,2  persen  dengan  warna  putih  sedikit kekuningan  dan  kalus  tampak  remah  ( friabel ).  Zat pengatur tumbuh 2,4- D pada konsentrasi 4 mg/l yang dipakai  pada  penelitian  ini  paling  optimal  untuk merangsang  pembelahan  sel  dan  sel-sel  penyusun eksplan  sehingga  terbentuk  kalus.  Indrianto  (2002) menyatakan zat pengatur tumbuh aktif pada konsentrasi rendah  dan  diproduksi  di  dalam  tubuh  tanaman    itu sendiri, pada konsentrasi tinggi merupakan herbisida.
Induksi kalus terlihat lebih cepat pada perlakuan 4 mg/l 2,4- D pada minggu ke-1 dan ke- 4 dibandingkan dengan  perlakuan  8  mg/2,4-D  yaitu  2,5  persen  versus 5,5 persen pada minggu  ke-  1, dan 46,2 persen  versus 59,7  persen  pada  minggu  ke-4.  Walaupun  demikian pada  konsentrasi  4  mg/l,  kalus  yang  dihasilkan  hanya sedikit. Hal tersebut mungkin diakibatkan karena terjadi
kontaminasi  oleh  virus  dan  bakteri  selama  penelitian. Hasil ini sesuai dengan pendapat Staba (1980), Dodd & Roberts  (1989)  serta  Krikorian et  al. (1990),  bahwa pemberian 2,4-D pada konsentrasi rendah sangat efektif untuk induksi dan pertumbuhan kalus, sedangkan pada konsentrasi  tinggi  cenderung  bersifat  herbisida  atau menghambat pertumbuhan kalus. Jacobsen (1983) juga mengemukakan bahwa pemberian 2,4-D pada konsentrasi  tinggi  menghambat  IAA,  sedangkan  pada konsentrasi  rendah  2,4-  D  akan  bersifat  seperti  auksin lain yaitu mendorong transport IAA.
Pengamatan  terhadap  morfologi  kalus  tidak menunjukan banyak perbedaan. Perbedaan konsentrasi zat  pengatur  tumbuh  2,4-D  terhadap  warna  kalus menghasilkan warna putih dan kuning, pada minggu ke- 1  kalus  warana  putih,  setelah  minngu  ke-4  kalus berwarna kuning mudah (Gambar 1). Menurut Indah & Ermavitalini  (2013),  dan  Narayanaswamy  (1989), warna  kalus  bervariasi  dan  biasa  berkaitan  dengan jaringan tanaman yang digunakan sebagai eksplan juga
faktor  nutrisi  dan  lingkungan.  Morfologis  kalus  pada konsentrasi 2 dan 4 mg/l kalus yang dihasilkan bersifat remah ( friable ).
Gambar  1.  Induksi  Kalus  Pengamatan  Minggu  Ke-4  Dengan  Menggunakan  Beberapa  Konsentrasi  Zat  Pengatur Tumbuh 2,4-D (A) 2 mg/l, (B) 4 mg/l, (C) 6 mg/l, dan (D) 8 mg/l.
Gambar 2. Pengamatan Terhadap Perkembangan Kalus Selama 4 Minggu

## Organogenesis
Organigenesisi  pada  kalus  akan  terjadi  apabila kalus yang tumbuh pada medium induksi disubkultur ke medium  diferensiasi.  Organogenesis  yaitu  diferensiasi
meristem  unipolar,  menghasilkan  ujung  tunas  ( shoot tip ) yang akan menjadi tunas ( coulogenesis ) atau ujung akar  ( root  tip )  yang  akan  menjadi  akar  ( rhizogenesis ). George & Sherrington (1984) mengemukakan
A B D D C
sebaiknya medium deferensiasi mengandung konsentrasi 2,4- D, NAA, atau IAA yang lebih rendah dari  pada  konsentrasi  zat  pengatur  tumbuh  yang digunakan  untuk  induksi  kalus  atau  dapat  juga menghilangkan auksin dari medium.
Pengamatan  terhadap  perkembangan  Kalus (Gambar  2)  selama  4  minggu  yang  disubkultur  ke
medium  baru  yaitu  medium  MS  dengan  penambahan 2iP  {N6-  (2-  isopentinyl)-  adenine}  dan  NAA (naphalene  acatic  acid)  menujukan  bahwa  kalus  pada hampir  semua  perlakuan  berdiferensiasi  membentuk akar, termasuk pada medium kontrol seperti ditunjukkan pada Tabel 3 dan Tabel 4.
Tabel 3. Pengaruh Kombinasi 2iP dan NAA (mg/l) terhadap Persentase Kalus Membentuk Akar Pada Minggu Ke-2
2iP NAA Rata-rata 0 0,03 0,16 3 0 0,0± 0,0 37,5± 17,7 62,5±17,7 100,0± 0,0 50,0 ± 40,1 0,2 50,0±0,0 50,0±0,0 62,5±17,7 50,0±0,0 53,1±8,8 1 25,0±0,0 50,0±0,0 62,5±17,7 62,5±53,0 50,0±26,7 Rata-rata 25,0±22,4 45,8±10,2 62,5±13,7 70,8±33,2
Keterangan: standar deviasi dihitung dari 2 pengamatan
Tabel 4. Pengaruh Kombinasi 2iP dan NAA (mg/l) terhadap Persentase Kalus Membentuk Akar Pada Minggu Ke -3
2iP NAA Rata-rata 0 0,03 0,16 3 0 0,0±0,0 62,5±17,7 75,0±0,0 100,0±0,0 59,4±39.9 0,2 75.0±0,0 75.0±0,0 75.0±0,0 75.0±35,4 75.0±0,0 1 50,0±0,0 75.0±0,0 75.0±0,0 75.0±35,4 68,8±17,7 Rata-rata 41,7±34,2 70,8±10,2 75,0±0,0 83,3±20,4
Keterangan: standar deviasi dihitung dari 2 pengamatan
Tabel 5. Pengaruh Kombinasi 2iP dan NAA (mg/l) terhadap Jumlah Akar Pada Minggu Ke-2
2iP NAA Rata-rata 0 0,03 0,16 3 0 0,0 ± 0,0 2,0 ± 0,0 4,0 ± 2,8 7,5 ±  0,7 3,4 ± 3,2 0,2 2,5 ± 0,7 2,5 ± 0,7 2,5 ± 0,7 3,5 ±  0,7 2,8 ± 0,5 1 1,5± 0,7 2,5 ± 0,7 3,0 ± 0,0 2,5 ± 0,7 2,4 ± 0,6 Rata-rata 1,33 ± 1,26 2,3 ± 0,3 3,2 ± 0,8 4,5 ± 2,6
Keterangan: standar deviasi dihitung dari 2 pengamatan
Tabel 6. Pengaruh Kombinasi 2iP dan NAA (mg/l) terhadap Jumlah Akar Pada Minggu Ke-3
2iP NAA Rata-rata 0 0,03 0,16 3 0 0,0 ± 0,0 4,0 ± 0,0 5,5 ± 2,1 9,0 ±  1,4 4,6  ± 3,7 0,2 4,0 ± 1,4 3,5 ± 0,7 3,5 ± 0,7 4,5 ±  0,7 3,9 ± 0,5 1 3,0 ± 0,0 3,5 ± 0,7 3,0 ± 0,0 2,5  ± 0,7 3,0 ± 0,4 Rata-rata 2,3 ± 2,1 3,7 ± 0,3 4,0  ± 1,3 5,3 ± 3,3
Keterangan: standar deviasi dihitung dari 2 pengamatan
Pengamatan  pada  minggu  ke-1  menunjukan bahwa  kalus  pada  beberapa  perlakuan  mengalami pertumbuhan  dan  pembentukan  warna.  Warna  kalus bervariasi  dari  putih,  putih  kuningan  sampai  kuning kecoklatan.  Pada  permukaan  kalus,  tumbuh  serabut halus  tetapi  belum  ada  pertumbuhan  akar,  yaitu  pada medium dengan konsentrasi  0 mg/l + 3 mg/l NAA dan 0 mg/l 2iP + 0,16 mg/l NAA pada  minggu ke-2, kalus mengalami  diferensiasi  dengan  tumbuhnya  serabut- serabut halus yang semakin menonjol, memanjang, dan
membentuk kecambah ( seedling ). Namun hal ini tidak terjadi  pada  medium  kontrol  yaitu  medium  MS  tanpa penambahan  zat  pengatur  tumbuh  yaitu  0  mg/l  2iP  + 0mg/l  NAA.  Pada  medium  kontrol  ini  kalus  hanya mengalami perubahan ukuran dan tidak terdiferensiasi.
Persentase terbesar jumlah kalus yang membentuk akar terjadi minggu  ke-2  mg/l 2iP dengan berbagai  konsentrasi    NAA  3  mg/l  NAA  dengan berbagai  konsentrasi  2iP  yaitu  53,1  persen  hasil  rata- rata  0,2  mg/l  2iP  dengan  berbagai  konsentrasi  NAA
dan70,8 persen hasil rata- rata berbagai konsentrasi 2iP dengan    3  mg/l  NAA  sedangkan  pada    minggu  3 berturut-turut yaitu 75,0 persen dan 83,3 persen seperti terlihat pada (Tabel 3 dan Tabel 4).
Kalus yang diinduksi pada setiap kombinasi 2iP {N-(2-  isopentinyl)-  adenine}  dan  NAA  (naphalene acitic acid) didalam medium kultur berjumlah 4 kalus, tetapi  tidak  semuanya  tumbuh  dan  terdiferensiasi membentuk  akar,  hal  tersebut  dapat  terlihat  pada pengamatan  rerata  jumlah  akar  minggu  ke-  2.  Jumlah akar  terbanyak  pada    konsentrasi  0  mg/l  2iP  dengan berbagai  konsentrasi  NAA  dan  3  mg/l  NAA  dengan berbagai konsentrasi 2iP yaitu 3,4 hasil rata-rata 0 mg/l 2iP  dengan  berbagai  konsentrasi  NAA  dan  4,5  hasil
rata- rata berbagai konsentrasi 2iP dengan 3 mg/l NAA sedangkan pada minggu ke- 3 keadaan tersebut berubah menjadi  berturut-  turut  yaitu  4,6 dan  5,3 (Tabel 5  dan Tabel 6 ).
Hasil penelitian menunjukkan bahwa kombinasi konsentrasi  0  mg/l  2iP  dengan  berbagai  konsentrasi NAA d an 3 mg/l NAA dengan berbagai konsentrasi 2iP menghasilkan  panjang  akar  terpanjang  dibandingkan konsentrasi  yang  lain  pada  minggu  ke-2  yaitu,  6,7mm hasil  rata-rata  0  mg/l  2iP  dengan  berbagai  konsentrasi NAA dan 7,8 mm hasil rata- rata berbagai konsentrasi 2iP dengan 3 mg/l NAA sedangkan minggu ke-3 yaitu 8,0  mm  dan  9,3  mm  semua  kalus  telah  terdiferensiasi membentuk akar (Tabel  7 dan Tabel 8).
Tabel 7. Pengaruh Kombinasi 2iP  dn NAA (mg/l) terhadap Jumlah Akar Pada Minggu Ke-2
2iP NAA Rata-rata 0 0,03 0,16 3 0 0,0 ±  0,0 3,0 ± 0,8 8,8 ± 1,9 15,0 ± 9,2 6,7 ± 6,2 0,2 2,3 ±  0,5 3,2 ± 0,8 4,6 ± 1,7 6,3 ± 3,1 4,1 ± 1,7 1 2,5 ± 0,7 2,8 ± 0,5 2,3 ± 0,6 2,0 ± 0,0 2,4 ± 0,3 Rata-rata 1,6 ± 1,4 3,0 ± 0,2 5,2 ± 3,3 7,8 ± 6,6
Keterangan: standar deviasi dihitung dari sampel yang membentuk akar
Tabel 8. Pengaruh Kombinasi 2iP  dn NAA (mg/l) terhadap Jumlah Akar Pada Minggu Ke-3
2iP NAA Rata-rata 0 0,03 0,16 3 0 0,0 ± 0,0 4,0 ± 0,8 11.0 ± 2,6 17 ± 9,5 8,0 ± 7,5 0,2 3,5 ± 1,0 4,4 ± 1,1 6,0  ± 2,1 8,0 ± 3,2 5,5 ± 2.0 1 4,5 ± 0,7 4,5 ± 1,0 3,3  ± 1,2 2,8 ± 0,5 3,8 ± 0,9 Rata-rata 2,7 ± 2,4 4,3 ± 0,3 6,8 ± 3,9 9,3 ± 7,2
Keterangan : standar deviasi dihitung dari sampel yang membentuk akar
Terbentuknya  akar  yang  banyak  menunjukan kandungan  auksin  endogen  yang  tinggi  di  dalam eksplan,  seperti  dikemukakan Staba  (1980), Narayanaswamy  (1989),  dan  Collin  &  Perry  (1998), bahwa  konsentrasi  endogen  yang  tinggi  akan menyebabkan  inisiasi  akar.  Di  dalam  penelitian  ini tingginya  kandungan  auksin  endogen  diduga  sebagai penyebab  terbentuknya  akar  yang  banyak  pada  kalus, akibat  penggunaan  2,4-D  pada  tahap  induksi  kalus. Pembentukan  akar  yang  semakin  banyak  dengan penambahan konsentrasi auksin yang tinggi mempercepat pertumbuhan primordia dalam pembentukan  akar,  dengan  mempercepat  pembelahan sel-sel primordia.
Kalus  yang  disubkultur  tanpa  zat  pengatur tumbuh  pada  tahap  induksi  kalus,  tidak  mengalami diferensiasi  menjadi  akar,  yang  tumbuh  hanyalah rambut  akar  (Gambar  3),  hal  ini  disebabkan  pengaruh penggunaan  2,4-D.  Jacobsen  (1983)  mengemukakan bahwa  2,4-D  mudah  terakumulasi  dalam  jaringan karena  mempunyai  mobilitas  yang  tinggi  dengan  laju oksidasi dan konjugasi yang remah, serta stabilitas yang tinggi. Dengan demikian,  kalus  yang disubkultur pada medium  tanpa  zat  pengatur  tumbuh  tetap  mendapat pengaruh dari auksin sehingga terdiferensiasi membentuk rambut akar.
Gambar 3.   Kalus yang Disubkultur Pada Medium MS Tanpa Zat Pengatur Tumbuh, (A) bulu halus/rambut akar (B) kalus.

## SIMPULAN DAN REKOMENDASI
Zat pengatur tumbuh 2,4-D dengan konsentrasi 4 mg/l, yang ditambahkan ke dalam medium MS pada perlakuan  induksi  kalus,  Memacu  pertumbuhan  kalus pada  kultur  tunas  rumput  Benggala  ( Panicum maximum ).  Kalus  yang  dihasilkan  berwarna  putih kekuningan,  dengan  jumlah  kalus  yang  tumbuh  pada minggu  ke-  4  adalah  46,2  persen  serta  kalus    tampak remah  atau  friable.  Untuk  organogenesis,  persentase kalus yang membentuk akar terbanyak pada kombinasi 0  mg/l  2iP  (auksin)  +  3  mg/l  NAA  (sitokinin)  yaitu 100%  rerata  jumlah  akar  terbanyak  pada  kombinasi  0 mg/l  2iP  +  3mg/l  NAA  yaitu  9,0  mm  dan  akar terpanjangpada  kombinasi  0mg/l  2iP  +  3  mg/l  NAA yaitu 17,0 mm dengan warna kalus bervariasi dari putih, kekuningan sampai coklat. Hal ini menunjukan bahwa konsentrasi  tersebut  pada  minggu  ke-  3  menghasilkan jumlah akar terbanyak dan akar terpanjang dibandingkan dengan konsentrasi lain.
Perlu diadakan penelitian lanjutkan  mengenai induksi  kalus  dan  organogenesis  pada  eksplan  rumput Benggala  (Panicum  Maximum)  menggunakan  zat pengatur tumbuh dengan konsentrasi yang sesuai untuk menentukan komsertrasi optimal sehingga mengahasilkan plantlet yang terbaik.

## DAFTAR PUSTAKA
Abidin,  Z.  1985. Dasar-dasar  Pengetahuan  Tentang Zat  Pengatur  Tumbuh .  Bandung:  Penerbit Angkasa.
Astuti,  M.  1980. Rancangan  Percobaan  dan  Analisa Statistik .  Yogyakarta:  Fakultas  Peternakan Universitas Gadjah Mada.
Collin,  H.  A.,  &  R.  Perry.  1998. Plant  Cell  Culture . New York: Bios. Scientific pub. Limited.
Dodds,  J.  H.,  &  L.W.  Robert.  1989. Experimentals  in Plants  Tissue  Culture.  2 nd edition .  Cambridge, UK: Cambridge University Press.
Estuningsih, S. P. 1995. Budidaya Tembakau Nicotiana labacuml. Temangung yang berciri Srintil secara In-Vitro.  [Tesis].  Yogyakarta:  program  Pasca Sarjana Universitas Gadjah Mada.
Fanindi  A,  &  A.  Sutedi.  2014.  Karakter  Morfologi Rumput  Benggala (Panicum  maximum  cv. Gatton )  yang  Ditanam  Menggunakan  Jenis Benih  Berbeda .  Jurnal  Ilmu  Ternak  dan Veteriner (JITV) . 19(1): 1-8
Fitriani,  H.,  Wahyuni,  S.  Kurniawati,  &  N.  S.  Hartati. 2013.  Inisiasi  Kultur  In  Vitro  Rumput  Gajah ( Pennisetum  purpureum  Schumach )  untuk Multiplikasi Tunas Majemuk. Prosiding Seminar  Nasional  dan  Forum  Komunikasi Industri  Peternakan  dalam  rangka  Mendukung Kemandirian  Daging  dan  Susu  Nasional .  Hlm. 409-418.
George,  F.  E.  and  P.D.  Sherrington.  1984.  Plant Propagation by Tissue. Handbook and Directory of  Commercial  Laboratories.  Eversly,  Bassing stoke, Hants, England: Exegetics Ltd.
Indah,  P.  N.,  &  D.  Ermavitalini.  2013.  Induksi  Kalus Daun  Nyamplung  ( Calophyllum  inophyllum
Linn .) pada Beberapa Kombinasi Konsentrasi 6- Benzylaminopurine (BAP) dan 2,4-
A B
Dichlorophenoxyacetic  Acid  (2,4-D). Jurnal Sains Dan Seni Pomits . 2(1): 23-29.
Indrianto,  A.  2002. Bahan  Ajar  Kultur  Jaringan Tumbuhan .  Yogjakarta:    Fakultas  Biologi Universitas Gadjah Mada.
Jacobsen, H. J. 1983. Biochemical Mechanisms of Plant Hormone Activities . Dalam:  Evans, D.A., W.R. Sharp,  P.V.  Ammirato,  Y.  Yamada  (edits.). Handbook  of  Plant  Cell  Culture.  Vol.  1: Techniques for Propagation and Breeding. New York: Macmillan Co.
Krikorian,  A.  D.,  K.  Kelly,  &  D.  L.  Smith.  1990.
Hormon in
Tissue Culture
and Micropropagasion .  Dalam:  Davies,  P.J  (edit). Plant  Hormone  and  Their  Role  in  Plant  Growt and Development. Netherland: Kluwer Academic Publishers.
Lestari,  E.  G.  2011.  Peranan  Zat  Pengatur  Tumbuh dalam  Perbanyakan  Tanaman  melalui  Kultur Jaringan. Jurnal AgroBiogen . 7(1):63-68.
Murashige, T. 1974. Plant Propagation through Tissue Culture. Annual  Review  of  Plant  Physiologi . 25:135-166.
Narayanaswamy, S. 1989. Regeneration of plants from Tissue  culture .  Dalam  Reinert,J  dan  Y.  B.S. Bajaj (edits). Applied and Findamental Aspectcs of Pland Cell, Tissue and Organ Culture. Berlin: Springer-Verlag.
Purbajanti, E. D., D. Soetrisno, E. Hanudin, & S. P. S. Budhi.  2010.  Respon  Rumput  Benggala
( Panicum  maximum  L .)  terhadap  Gypsum  dan Pupuk  Kandang  Di  Tanah  Salin .  J.  Agron. Indonesia . 38(1): 75-80.
Rasud, Y., & Bustaman. 2020. Induksi Kalus secara In Vitro dari Daun Cengkeh ( Syizigium aromaticum  L.) dalam  Media  dengan  Berbagai Konsentrasi  Auksin. Jurnal  Ilmu  Pertanian Indonesia (JIPI) . 25 (1): 67  72.
Rusdianto,  &  A.  Indrianto.  2015.  Peningkatan Pembentukan  Embrio  Somatik  Pada  Wortel ( Daucus Carota L ) Menggunakan N6- benzylaminopurine  (BAP). Jurnal  Bionature . 16(2): 91-97.
Russell, J. S., & H. R. Webb. 1976. Tropical Grasses . By  P.  J.  Skerman  and  F.  Riveros,  Roma:  Food and  Agriculture  Organizaton  of  the  United Nation.
Staba, C. J. 1980. Plant Tissue Culture as a Source of Biochemical . Florida: Crc Press Inc.
Subekti,  E.  2009.  Ketahanan  Pakan  Ternak  Indonesia. Mediagro. 5(2): 63-71.
Thorpe,  T.  A.,  &  A.  Patel.  1984. Clonal  Propagation Adventious  Bud .  Dalam    I.K.Vasil  (Ed).  Cell Culture  and  Somatic  Cell  Genetic  of  Plant. Laboratory  Practical  and  Their  Application. Volume I. London: Academic Preess Inc.
Yusnita.  2003. Kultur  Jaringan,  Cara  Memperbanyak Tanaman  Secara  Efisien .  Jakarta:  Agromedia Pustaka.
Available online at journal homepage: http://ojs3.unpatti.ac.id/index.php/agrinimal