## Aktivitas Antibakteri Fraksi Ekstrak Etanol Daun Trembesi (Samanea saman (Jacq.) Merr) terhadap Staphylococcus aureus
Ni Ketut Sinarsih 1 *, Wiwik Susanah Rita 2 , Ni Made Puspawati 3
1 Universitas Hindu Negeri I Gusti Bagus Sugriwa, Denpasar, Indonesia
2,3 Universitas Udayana, Denpasar, Indonesia *e-mail: nktsinarsih@gmail.com

## Abstrak
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  menentukan  aktivitas  antibakteri  fraksi-fraksi  dari  partisi ekstrak etanol daun trembesi dalam menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus , yang meliputi ekstraksi  daun  trembesi  dengan  pelarut  etanol,  partisi  menggunakan  pelarut  n-heksan,  etil asetat, dan n-butanol, penentuan daya hambat fraksi hasil partisi, serta penentuan Konsentrasi Hambat  Minimum  (KHM)  dari  fraksi  yang  menunjukkan  aktivitas  penghambatan  terbaik  untuk menghambat pertumbuhan S. Aureus . Hasil penelitian menunjukkan bahwa dari 2000 g sampel diperoleh ekstrak kental sebanyak 160 g. Proses partisi menghasilkan empat fraksi yaitu fraksi n-heksan  yang  berwarna  hijau  tua,  fraksi  etil-asetat  yang  berwarna  hijau  kecoklatan,  fraksi  n- butanol  yang  berwarna  coklat  tua,  dan  fraksi  air  yang  berwarna  coklat  pekat.  Dari  keempat fraksi, hanya fraksi n-butanol yang memberikan efek penghambatan terhadap S. aureus secara in  vitro pada  media Mueller  Hinton ,  yaitu  sebesar  19,3  mm  pada  konsentrasi  15%.  Pada konsentrasi tersebut, aktivitas antibakteri fraksi n-butanol dapat dikategorikan kuat terhadap S. aureus .  Pengujian  KHM  dilakukan  pada  tiga  konsentrasi  yaitu  0,5;  1;  dan  1,5%  dengan diameter hambat aktivitas antibakteri secara berturut -turut sebesar 0 mm; 7,3 mm; dan 9,2 mm.
Kata kunci: Samanea saman , antibakteri, partisi, S. aureus

## 1.  Pendahuluan
Salah  satu  masalah  kesehatan  yang  sangat  umum  diderita  oleh  masyarakat  adalah infeksi.  Infeksi  adalah  penyakit  yang  disebabkan  oleh  adanya  mikroorganisme  yang  bersifat patogen yang menginvasi dan berproliferasi dalam jaringan tubuh (Kusuma, 2010). Salah satu jenis mikroorganisme yang dapat menyebabkan infeksi adalah bakteri spesies Staphylococcus aureus ( S.  aureus ). S.  aureus dapat  menimbulkan  penyakit  infeksi  seperti  bisul,  jerawat, impetigo,  dan  infeksi  berat  seperti  pneumonia,  mastitis,  plebitis,  meningitis,  infeksi  saluran kemih,  osteomielitis,  dan  endokarditis. S.  aureus juga  merupakan  penyebab  utama  infeksi nosokomial, keracunan makanan, dan sindroma syok toksik (Jawetz et al ., 1995). Kumala et  al .  (2007) melaporkan  bahwa  bakteri S.  aureus resisten  terhadap  antibiotik meticillin. Peningkatan  resistensi  bakteri  terhadap  antibiotik  memberikan  peluang  besar  untuk memanfaatkan  senyawa  bioaktif  dari  kekayaan  keanekaragaman  hayati,  salah  satunya trembesi  ( Samanea  saman (Jacq.)  Merr).  Potensi  trembesi  sebagai  antibakteri  sebelumnya telah  dilakukan  oleh Sinarsih,  dkk  (2016), dimana  ekstrak  etanol  daun  trembesi  menunjukkan aktivitas  antibakteri  lebih  baik  dibandingkan  ekstrak  air  terhadap S.  aureus dan E.  coli . Sementara itu beberapa penelitian melaporkan bahwa senyawa flavonoid mempunyai berbagai aktivitas,  salah  satunya  sebagai  antibakteri.  Penelitian  mengenai  aktivitas  flavonoid  telah dilakukan  oleh Parubak  (2013), dimana  flavonoid  dalam  daun  akway  ( Drimys  beccariana ) mempunyai  aktivitas  antibakteri  terhadap E.  coli dan B.  subtilis .  Berdasarkan  fakta-fakta  hasil penelitian tersebut maka perlu dilakukan penelitian pendahuluan mengenai aktivitas antibakteri fraksi  hasil  partisi  ekstrak  etanol  daun  trembesi  terhadap  bakteri S.  aureus serta  menentukan konsentrasi hambat minimum dari fraksi dengan aktivitas terbaik.

## 2. Metode
Penelitian  ini  menggunakan  rancangan  deskriptif  eksploratif  dan  eksperimental. Penelitian deskriptif eksploratif yaitu ekstraksi dan isolasi. Penelitian eksperimental meliputi dua tahapan  yaitu  Tahap  (i)  uji  aktivitas  antibakteri  untuk  penentuan  fraksi  hasil  partisi  terbaik  dan (ii) konsentrasi hambat minimum (KHM).

## Bahan dan Peralatan
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  daun  trembesi  segar  yang telah  dikeringanginkan  dan  dihancurkan  menjadi  serbuk,  etanol,  akuades,  kloroform,  NaOH, H 2 SO 4 ,  pereaksi  Meyer,  asam  asetat  anhidrat,  nutrient  agar, amoxicillin ,  kertas  cakram, mikroorganisme (bakteri S. aureus ). Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah cawan petri untuk pengujian antibakteri, pinset, labu Erlenmeyer , micropipette , gelas ukur, gelas kimia, blender , rotary  evaporator, kain  kasa,  aluminium  foil,  kertas  saring,  kapas,  neraca  analitik, tabung reaksi, pipet tetes, labu volumetri, cawan petri, autoklaf, mistar.

## Ekstraksi daun trembesi
Ekstraksi daun trembesi dilakukan dengan menggunakan pelarut etanol. Daun trembesi yang  telah  dikeringanginkan  sebanyak  2000  g  digiling  hingga  membentuk  serbuk.  Serbuk masing-masing  sebanyak  250  g  dimasukkan  ke  dalam  delapan  toples  untuk  diekstraksi menggunakan  etanol  96%.  Ekstraksi  dilakukan  dengan  merendam  serbuk  sampel  dengan etanol,  diaduk  hingga  homogen  dan  didiamkan  24  jam.  Campuran  disaring  dan  diuapkan dengan rotary  evaporator pada  suhu  40 o C  sampai  seluruh  pelarut  menguap  dan  diperoleh ekstrak kental.

## Partisi
Partisi  bertujuan  untuk  mengelompokkan  metabolit  yang  terkandung  dalam  ekstrak kasar  berdasarkan  perbedaan  polaritasnya.  Sebelum  melakukan  partisi,  ekstrak  etanol  kental dilarutkan dalam 100 mL campuran etanol-air (3:7), kemudian dievaporasi hingga semua etanol menguap dan diperoleh ekstrak dalam air. Selanjutnya dipartisi dengan n-heksana (5 x 50 mL). Ekstrak  n-heksana  dikumpulkan  dan  residu  yang  merupakan  ekstrak  air  dipartisi  kembali menggunakan etilasetat (5 x 50 mL) kemudian ekstrak etilasetat dikumpulkan.  Terakhir ekstrak air  dipartisi  dengan  n-butanol  (5  x  50  mL).  Ekstrak  n-butanol  dikumpulkan.  Sehingga,  pada tahap  akhir  diperoleh  empat  ekstrak,  yaitu  n-heksana,  etilasetat,  n-butanol,  dan  air.  Keempat ekstrak dievaporasi sehingga diperoleh ekstrak kental. Masing-masing ekstrak selanjutnya diuji aktivitasnya sebagai antibakteri terhadap S. aureus .

## Pengujian aktivitas antibakteri
Aktivitas antibakteri diuji dengan metode difusi agar menggunakan kertas cakram pada konsentrasi  15%  dengan  pengulangan  sebanyak  tiga  kali.  Kontrol  negatif  yang  digunakan adalah  pelarut  dari  ekstrak,  sedangkan  kontrol  positif  adalah Amoxicillin .  Media  menggunakan 20  mL  media  Nutrien  Agar  (NA)  Mueller-Hinton  yang  dimasukkan  ke  dalam  cawan  petri  steril kemudian  ditutup  dan  didinginkan  hingga  memadat.  Suspensi  bakteri  kemudian  ditambahkan ke  dalam  nutrient  agar  dengan  cara  dioleskan  pada  permukaan  media  menggunakan  kapas steril  secara  rapat  dan  didiamkan  hingga  agak  mengering  sekitar  5-8  menit  sebelum ditempelkan  cakram.  Kertas  cakram  ditetesi  ekstrak  uji  sebanyak  20  µL  menggunakan mikropipet, dan untuk kontrol negatif diteteskan pelarut 20 µL, kemudian didiamkan ±120 menit. Kertas cakram diletakkan diatas media bakteri dengan pinset dan inkubasi pada suhu 35-37 0 C selama  24  jam.  Diameter  hambat  dari  masing-masing  ekstrak  diukur  setelah  periode  inkubasi menggunakan  mistar.  Senyawa  yang  paling  aktif  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri selanjutnya ditentukan konsentrasi hambat minimumnya.

## Penentuan konsentrasi hambat minimum
Setelah  diketahui  fraksi  yang  paling  aktif  dalam  menghambat  bakteri  maka  ditentukan konsentrasi  hambat  minimum  (KHM).  KHM  ditentukan  untuk  ekstrak  yang  aktif  sebagai antibakteri dengan memvariasikan konsentrasinya, yaitu 0,5%; 1,0%; dan 1,5% (b/v). Prosedur penentuan  KHM  sama  dengan  pengujian  aktivitas  antibakteri  sebelumnya  namun  hanya dilakukan variasi konsentrasi.

## 3.  Hasil dan Pembahasan
Ekstraksi  dilakukan  menggunakan  2000  g  daun  trembesi  dengan  metode  maserasi diperoleh ekstrak kental sebanyak 160 g. Ekstrak etanol dimurnikan lebih lanjut melalui proses partisi, dimana partisi merupakan metode  ekstraksi fase cair-cair dengan  penambahan  pelarut pengekstrak  yang  tidak  saling  melarutkan.  Pada  tahapan  partisi  diperoleh  empat  fraksi  yaitu fraksi  n-heksan  yang  berwarna  hijau  tua,  fraksi  etil-asetat  yang  berwarna  hijau  kecoklatan, fraksi n-butanol yang berwarna coklat tua, dan fraksi air yang berwarna coklat gelap.
Pengujian aktivitas antibakteri terhadap S. aureus dari masing-masing fraksi hasil partisi dilakukan  pada  konsentrasi  15%  menggunakan  media  agar  MH  ( Mueller  Hinton ).  Sensitifitas bakteri  terhadap  sampel  uji  metode  difusi  agar  dengan  kertas  cakram  ditunjukkan  dengan terbentuknya  zona  bening  di  sekitar  kertas  cakram  yang  menandakan  daerah  penghambatan pertumbuhan bakteri (Sinarsih dkk, 2016). Pemilihan amoxicillin sebagai kontrol positif terhadap S. aureus karena amoxicillin merupakan antibiotik turunan penisilin yang mempunyai spektrum kerja luas, dan mekanisme kerjanya menghambat sintesis dinding sel bakteri, khususnya untuk bakteri  Gram  positif (Fatimah  dkk,  2015). Pengukuran  zona  bening  pada  hasil  pengujian aktivitas  antibakteri  dari  fraksi  hasil  partisi  ekstrak  etanol  daun  trembesi  terhadap  bakteri S. aureus memberikan hasil yang seperti terlihat pada Tabel 1.
Tabel  1. Diameter  Zona  Hambat  Pertumbuhan  Bakteri S.  aureus dari Fraksi  N-Heksan,  Etil Asetat, N-Butanol, dan Air Ekstrak Etanol Daun Trembesi pada Konsentrasi 15%
Bakteri Fraksi (15%) Pengukuran Zona Hambat (mm) Kesimpulan I II III S. aureus n-heksan 0 0 0 - etil asetat 0 0 0 - n-butanol 19,5 19,5 18,5 + air 0 0 0 - kontrol positif 31,5 31 31,5 + kontrol negatif 0 0 0 -
Kontrol  negatif  tidak  menunjukkan  adanya  zona  hambat  pertumbuhan  bakteri,  yang berarti  bahwa  pelarut  yang  digunakan  untuk  partisi  ekstrak  dan  pengencerannya  tidak berpengaruh  terhadap  aktivitas  antibakteri.  Fraksi  n-butanol  menunjukkan  aktivitas  antibakteri dengan  adanya  zona  hambat  pertumbuhan  bakteri  rata-rata  sebesar  19  mm  namun  fraksi lainnya  tidak  menunjukkan  adanya  zona  hambat.  Kriteria  daya  hambat  pertumbuhan  bakteri menurut Ardiansyah  (2005) yaitu  apabila  ekstrak  atau  bahan  uji  memberikan  diameter  zona bening  <  5  mm  maka  dikategorikan  lemah,  5  -  10  mm  dikategorikan  sedang,  >10  -  20  mm dikategorikan  kuat,  >20  mm  dikategorikan  sangat  kuat.  Berdasarkan  kategori  tersebut,  maka fraksi  n-butanol  ekstrak  etanol  daun  trembesi  pada  konsentrasi  15%  dapat  dikategorikan memiliki daya hambat kuat terhadap S. aureus.
Suatu  senyawa  antibakteri  dikatakan  aktif  apabila  mampu  memberikan  daya  hambat terhadap  pertumbuhan  suatu  bakteri,  dimana  daya  hambat  suatu  zat  dikatakan  efektif  apabila besarnya  daerah  hambat  (zona  bening)  sebanding  dengan  standar  pengujian  antibakteri (antibiotik). Apabila dibandingkan zona hambat yang dihasilkan antara fraksi n-butanol terhadap kontrol  positif  maka  kontrol  positif  memberikan  aktivitas  antibakteri  yang  lebih  besar.  Oleh karena  itu,  efektivitas  fraksi  n-butanol  dapat  dikatakan  lebih  kecil  dibandingkan  dengan antibiotik sebagai kontrol positif. Bila dibandingkan dengan fraksi lainnya, hanya fraksi n-butanol yang menunjukkan adanya aktivitas antibakteri terhadap S. aureus . Hasil tersebut kemungkinan disebabkan  karena  senyawa  yang  bersifat  sebagai  antibakteri  sebagian  besar  terlarut  dalam fraksi  n-butanol,  salah  satunya  golongan  isoflavon (Suteja  dkk.,  2016). Pada  penelitian  yang dilakukan Suteja,  dkk  (2016), dari  empat  fraksi  ekstrak  etanol  daun  trembesi,  hanya  fraksi  n- butanol  yang  menunjukkan  aktivitas  antibakteri  terhadap E.  coli dengan  diameter  hambat  6,3 mm pada konsentrasi 10%.
Aktivitas antibakteri yang lebih besar pada S. aureus kemungkinan disebabkan karena perbedaan  kompleksitas  dinding  sel  bakteri. S.  aureus sebagai  bakteri  Gram  positif  tersusun oleh  struktur  lapisan  peptidoglikan  yang  lebih  sederhana  dibandingkan E.  coli sebagai  bakteri Gram  negatif (Dewi,  2013). Hal  ini  menyebabkan  senyawa-senyawa  yang  ada  dalam  fraksi  n- butanol  lebih  mudah  masuk  ke  dalam  sel  untuk  merusak  dinding  sel  bakteri  sehingga  fungsi dinding  sel  sebagai  pemberi  bentuk  sel  serta  pelindung  sel  dari  lisis  terganggu  yang mengakibatkan kematian bakteri (Dewi, 2013). Penentuan konsentrasi hambat minimum (KHM) fraksi n-butanol terhadap S. aureus dilakukan dengan uji pada berbagai konsentrasi yaitu 0,5%, 1%, dan 1,5%. Hasil uji antibakteri untuk menentukan KHM disajikan pada Gambar 1.
Gambar 1. Daya Hambat Fraksi N-Butanol Pada Berbagai Konsentrasi Pada S. aureus
Besarnya  diameter  zona  hambat  KHM  dari  fraksi  n-butanol  terhadap S.  aureus ditunjukkan pada Tabel 2.
Tabel 2. Diameter Zona Hambat Pertumbuhan Bakteri Pada Uji KHM S. aureus dari Berbagai
Konsentrasi Fraksi N-Butanol Bakteri Konsentrasi N- butanol Pengukuran Zona Hambat (mm) Kesimpulan I II III S. aureus 0,5 0 0 0 - 1 7 8 7 + 1,5 9 9 9,5 + kontrol negatif 0 0 0 - kontrol positif 33 31 32 +
Hasil  pengujian  menunjukkan  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  fraksi  n-butanol ekstrak etanol daun trembesi maka diameter zona hambat semakin besar. Hasil tersebut sesuai dengan  pernyataan Rhoades  dan  Roller  (2000) serta Pelczar  dan  Chan  (1988), bahwa  pada umumnya  besar  daya  hambat  (diameter  zona  hambat)  cenderung  meningkat  sebanding dengan  meningkatnya  konsentrasi  ekstrak.  Pada  konsentrasi  0,5%,  fraksi  n-butanol  tidak menunjukkan  adanya  efek  penghambatan  yang  ditandai  dengan  tidak  adanya  zona  bening. Oleh  karena  itu  maka  dapat  dikatakan  bahwa  KHM  fraksi  n-butanol  dari  ekstrak  etanol  daun trembesi pada penelitian ini sebesar 1%.

## 4.  Simpulan dan Saran
Berdasarkan hasil penelitian, dapat disimpulkan bahwa fraksi hasil partisi ekstrak etanol daun trembesi pada konsentrasi 15% yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus adalah  fraksi  dari  n-butanol.  Nilai  konsentrasi  hambat  minimum  (KHM)  dari  fraksi  yang  aktif sebagai antibakteri yaitu n-butanol sebesar 1%. Penggunaan daun trembesi sebagai antibakteri akan dapat lebih dikembangkan apabila dilakukan penelitian lebih lanjut untuk uji farmakologis aktivitas antibakteri pada hewan coba secara in-vivo, serta uji toksisitas.

## Daftar Pustaka
Ardiansyah.  2005.  Daun Beluntas sebagai Bahan Antibakteri dan Antioksidan. Tersedia pada [http://www.berita_iptek.com/cetak_beritahp?kat=berita  &id=33].  diakses  pada  tanggal 18 Juli 2015.
Dewi,  A.K.  2013.  Isolasi,  Identifikasi  dan  Uji  Sensitivitas Staphylococcus  aureus terhadap Amoxicillin dari  Sampel  Susu  Kambing  Peranakan  Ettawa  (PE)  Penderita  Mastitis  di Wilayah  Girimulyo,  Kulonprogo,  Yogyakarta. Jurnal  Sain  Veteran. 31(2):  130- 138Jawetz,  E.,  Melnick,  J.L.,  Adelberg,  E.A.  1995.  Mikrobiologi  Kedokteran.  Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta.
Fatimah, I., Kisrini, Wibawa, D.A.A. 2015. Uji Kepekaan Bakteri Klebsiella sp. Hasil Isolasi Ulkus Diabetes  Pasien  Rawat  Inap  Di  RSUD  Dr.  Moewardi  terhadap  Antibiotik  Meropenem, Gentamisin,  Seftriakson,  dan  Siprofloksasin  pada  Bulan  Februari-Maret  Tahun  2014. Jurnal Farmasi Indonesia. 12(1): 33-40
Kumala, S.,  E.   Agustina,  dan  P.  Wahyudi. 2007. Uji  Aktivitas Antimikroba Metabolit  Sekunder Kapang Endofit Tanaman Trengguli. Jurnal Bahan alam Indonesia . 6(2): 46-48. Parubak,  A.  S.  2013.  Senyawa  Flavonoid  Yang  Bersifat  Antibakteri  dari  Akway  ( Drimys beccariana Gibbs), Chem. Prog. 6 (1): 34-37. 141-148 Pelczar, M.J., dan Chan, E.C.S. 2010. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: UI-Press Rhoades,  J.,  Roller,  S.  2000.  Antimicrobial  Actions  of  Degraded  and  Native  Chitosan  against Spoilage  Organisms  in  Laboratory  Media  and  Foods. Applied  And  Environmental Microbiology . 66(1): 80-86
Sinarsih,  N.K.,  Rita,  W.S.,  Puspawati,  N.M.,  2016.  Uji  Efektivitas  Ekstrak  daun  Trembesi ( Samanea  saman (Jacq.))  sebagai  Antibakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus , Cakra Kimia . 4(2): 129-136 Suteja, IKP., Rita, WS., Gunawan. IWG. 2016. Identifikasi dan Uji Aktivitas Senyawa Flavonoid Dari Ekstrak Daun Trembesi. Jurnal Kimia. 10(1).