Efektifitas Ekstrak Tanaman Meniran ( Phyllanthus niruri ) Sebagai Antibakteri Edwardsiella tarda Secara In Vitro
Effectivity Of Meniran ( Phyllanthus niruri ) Extract as Edwardsiella tarda Antibacterial According In Vitro
Sudarno, Fabi Aisah Setiorini dan Hari Suprapto
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031 - 5911451

## Abstract
Medicinal  plants  proven  to  effectively  cope  with  bacterial  diseases  one  of  which  is  the  plant  meniran ( Phyllanthus niruri ). Phyllanthus niruri can act as an antibacterial because it has an antibacterial ingredient content of flavonoids, alkaloids, phenols, and tannins. This shows that plants can be used as an antibacterial Phyllanthus niruri of E.tarda . The purpose of this study was to determine the ability of the antibacterial of Phyllanthus niruri extracts and to find  out  the  best  concentration  of Phyllanthus  niruri extracts  as  antibacterial E.tarda according  in  vitro.  The experiment was conducted in January 2011, housed at the Laboratory of Bacteriology Juanda Fish Quarantine Center and Laboratory of Organic Chemistry and Technology Faculty of Airlangga University Saints. This research method is  done  by  the  Minimum  Inhibitor  Concentration  (MIC)  and  Minimum  Bacterial  Concentration  (MBC)  with  12 treatment. The results showed that the best concentration for the treatment of the concentration of 0.0313 g / ml as indicated with no growth of bacteria and is the lowest concentration of the dilution.
Keywords : Phyllanthus niruri , antibacterial, the best consentration.

## Pendahuluan
Indonesia  merupakan  negara  tropis  yang memiliki  kekayaan  beragam  jenis  tanaman  yang berpotensi  sebagai  obat.  Penggunaan  tanaman sebagai  obat  memiliki  beberapa  keuntungan  yaitu bahan  alami  pengganti  antibiotik,  ramah  terhadap lingkungan, tidak menyebabkan resistensi pada ikan, mudah  diperoleh  dan  harganya  ekonomis.  Tanaman obat terbukti efektif mengatasi penyakit bakteri salah satunya  yaitu  tanaman  meniran  ( Phyllanthus  niruri) . Tanaman meniran dapat berfungsi sebagai antibakteri karena  memiliki  kandungan  bahan  antibakteri  yaitu flavonoid,  alkaloid,  fenol,  dan  tanin  (Sidik  dan Subarnas,  1993).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa tanaman  meniran  dapat  digunakan  sebagai antibakteri E.tarda.
Bakteri E.tarda merupakan  salah  satu penyakit  ikan  yang  disebabkan  oleh  bakteri.  Bakteri E.tarda dikenal sebagai penyakit pada budidaya ikan lele  (Leotta, et  al .,  2009).  Bakteri E.tarda memiliki habitat  pada  perairan  tawar  dan  laut  yang mengandung  bahan–bahan  organik  serta  berlumpur (Afrianto  dan  Liviawaty,  1992).  Bakteri E.tarda merupakan  bakteri  yang  dapat  tumbuh  optimal  pada suhu 25-30°C dan pada suhu kurang dari 10°C serta pada  suhu  lebih  dari  45°C  bakteri  ini  tidak  dapat tumbuh.  Bakteri E.tarda menyebabkan  luka  pada ikan  yang  terinfeksi karena  bakteri ini  memproduksi exotoksin (Rao, et  al .,  2004).  Bakteri E.tarda menyebabkan  beberapa  gejala  klinis  yaitu  pada
infeksi  ringan  yang  ditandai  dengan  luka  kecil kemudian  berkembang  menjadi  luka  yang  bernanah, Pada  infeksi  berat  dapat  meyebabkan  luka  bernanah yang  bertambah  secara  cepat  dengan  berbagai ukuran.  Pada  infeksi  berat  luka  bernanah  tersebut berisi gas dan dapat menyebar ke seluruh tubuh serta jika  luka  tersebut  digores  maka  akan  tercium  bau busuk  yang  diakibatkan  kandungan  H S  pada  luka 2 tersebut (Health Agency, 2001).
Penanggulangan  penyakit  yang  disebabkan oleh E.tarda pada  umumnya  menggunakan obat–obatan.  Penggunaan  obat–obatan  mempunyai dampak  negatif,  salah  satunya  adalah  pencemaran pada  tempat  hidup  ikan.  Salah  satu  alternatif penanggulangan  penyakit  ikan  yang  aman  adalah dengan  menggunakan  tanaman  obat,  oleh  karena  itu penelitian ini penting untuk dilakukan.

## Materi dan Metode
Identifikasi Bakteri Isolat  bakteri E.tarda ATCC  15947  yang didapat di Balai Karantina Ikan Juanda, diidentifikasi dilakukan  dengan  melihat  morfologi  koloni  pada TSA,  uji  gram,  O/F,  uji  oksidase,  uji  katalase,  uji motilitas,  produksi  indol,  LIA,  ornithin,  simmon sitrate,  arginin,  urease,  MR/VP,  TSIA  dan  uji  gula- gula.
Penyiapan Suspensi Bakteri Suspensi  bakteri  yang  akan  digunakan terlebih  dahulu  disetarakan  dengan  larutan  standar Mc  Farland  1.  Cara  penyetaraannya  yaitu pengenceran  dengan  4  tabung  yang  berisi  aquades. Pada tabung pertama berisi 10 ml dan 2-3 ose bakteri kemudian divortex, pada tabung kedua hingga tabung keempat  berisi  9ml  aquades.  Penyetaraan  dilakukan dari tabung pertama yang berisi 10 ml aquades dan 2- 3  ose  bakteri  dimbil  1  ml  untuk  di  masukkan  pada tabung kedua, pada tabung kedua diambil 1 ml untuk dimasukkan  pada  tabung  ketiga,  pada  tabung  ketiga diambil  1  ml  kemudian  dimasukkan  pada  tabung keempat. Sebelum diambil 1 ml untuk diberikan pada tabung  berikutnya  tabung  divortex  dahulu  agar homogen.  Setelah  semua  tabung  selesai  dilakukan pengenceran  kemudian  disetarakan  dengan Mc.Farland  1  dengan  melihat  pengenceran  yang setara dengan Mc.farland 1.
Pembuatan Ekstrak Meniran
Pada  metode  ekstraksi  dilakukan  dengan tiga  tahapan  yaitu  maserasi,  penyaringan  dan penguapan. Pada tahap maserasi bahan-bahan kering pada  ekstrak  direndam  hari  dalam  pot  besar kemudian  ditambah  pelarut  selama  tiga  hari. Kemudian  dilanjutkan  dengan  tahap  penyaringan dengan  kertas  saring.  Pada  tahap  terakhir  hasil penyaringan  diuapkan  dengan  menggunakan  alat rotary  vacuum  evaporator .  Ekstrak  yang  dihasilkan setelah penguapan yaitu 70gr ektrak kental.
Minimum Inhibitor Concentration (MIC) Minimum  Inhibitory  Concentration (MIC) adalah  pengujian  untuk  menentukan  dosis  terendah yang dapat membunuh patogen dengan jumlah paling tinggi.  Obat  yang  paling  baik  adalah  yang  memiliki tingkat  efektifitas  yang  tinggi  artinya  dapat membunuh  patogen  dalam  jumlah  besar  tetapi  tidak membahayakan  ikan.  Penelitian  ini  menggunakan metode  pengenceran  yaitu  dengan  cara  pengenceran secara  bertingkat.  Penelitian  dengan  MIC  dilakukan melalui  beberapa  tahap  yang  diawali  dengan menyiapkan medium 10 tabung. Pada tabung kontrol positif  diisi  dengan  1  ml  aqudes  dan  1ml  suspensi bakteri  dan  pada  kontrol  negatif  berisi  1  gr  ekstrak
meniran dan 1ml aquades.  Pada tabung pertama diisi dengan  1  gr  ekstrak  meniran  kemudian  pada  tabung kedua  diisi  dengan  1  ml  aquades  dan  1  gr  ekstrak meniran, pada tabung ketiga berisi 1 ml aquades dan 1 gr ekstrak meniran yang berasal dari tabung kedua kemudian dihomogenkan,dan seterusnya hingga pada tabung kesepuluh dengan perlakuan yang sama. Pada tabung  kesepuluh  pengenceran  dibuang  1  ml. Suspensi  bakteri  dimasukkan  sebanyak  1  ml  pada masing-masing  tabung  dari  tabung  satu  hingga tabung  kesepuluh  yang  telah disetarakan dengan  Mc
8 Farland  1  dengan  kepadatan  suspensi  bakteri  10 CFU/ml,  kemudian  seluruh  tabung  divortex  dan diinkubasi pada laminar flow selama 24 jam. Setelah 24  jam  dilakukan  pengamatan  terhadap  kekeruhan pada larutan pada tabung dengan secara visual.
5. Minimum Bacterial Concentration (MBC) Setelah  dilakukan  uji  MIC  kemudian dilanjutkan  dengan  melakukan  uji  MBC  untuk mengetahui  pertumbuhan  dari  bakteri  pada  media pengenceran.  Pada  metode  MBC  ini  dilakukan dengan cara mengambil satu ose dari tabung pertama kemudian  diinokulasi  pada  media  TSA  dalam petridish.  Inokulasi  dilakukan  pada  masing-masing tabung.  Setelah  semua  telah  dilakukan  inokulasi kemudian  diinkubasi  pada laminar  flow selama  24 jam.  Setelah  24  jam  diamati  pertumbuhan  bakteri pada  media  inokulan  yaitu  media  TSA.  Apabila terdapat  pertumbuhan  bakteri  berarti  meniran  tidak dapat  membunuh  bakteri  pada  konsentrasi  tersebut sedangkan  apabila  tidak  terdapat  bakteri  berarti ekstrak  meniran  dapat  membunuh  pada  konsentrasi tersebut.

## Hasil dan Pembahasan
Hasil Identifikasi Bakteri Identifikasi  bakteri  dengan  tujuan  untuk mengetahui  apakah  biakan  murni  adalah E.tarda. Identifikasi  yang  dilakukan  yaitu  dengan  melihat morfologi,  pewarnaan  gram  dan  uji  biokimia  seperti Oksidase,  Katalase,  O/F,  Motilitas,  Indole,  H S,
2
MR/Vp,  Citrate,  Urease  LIA,  Arginin,  Ornithin, Gula.  Hasil  pada  identifikasi  pada E.tarda dapat dilihat pada Tabel 1

## Efektifitas Ekstrak Tanaman ......
Hasil Uji Efektifitas Tanaman Meniran Terhadap Bakteri E. Tarda Hasil Uji MIC ( Minimum Inhibitor Concentration ) Uji  MIC  merupakan  suatu  cara  untuk menentukan  konsentrasi  terendah  dari  bahan-bahan yang  digunakan  sebagai  obat  (ekstrak  meniran) sehingga  dapat  membunuh  pertumbuhan  dari E.tarda secara  visual  (Ardiansyah,  2007).  Indikator pada  pengujian  MIC  yaitu  campuran  bakteri E.tarda dan  ekstrak  meniran  dengan  berbagai  konsentrasi seperti  1gr;  1gr/ml;  0,5  gr/ml;  0,25  gr/ml;  0,125 gr/ml;  0,0625  gr/ml,  0,0313  gr/ml;  0,0156  gr/ml; 0,0078  gr/ml;  0,0039  gr/ml.  Perubahan  warna  pada uji MIC yang merupakan percampuran antara bakteri dan ekstrak meniran disajikan pada gambar 1.
Gambar 1. Perubahan Warna Hasil Uji MIC
Keterangan :
A : tabung reaksi yang menunjukkan perubahan warna semakin kekanan semakin jernih,
B : perubahan warna tabung reaksi yang menunjukkan warna jernih
Pada  hasil  uji  MIC  menujukkan  bahwa konsentrasi  1gr/ml  hingga  konsentrasi  0,0625  gr/ml perubahan warna menjadi keruh hal ini menunjukkan bahwa  bakteri  terhambat.  Pada  konsentrasi  0,0313 gr/ml  hingga  konsentrsi  0,0039  gr/ml  perubahan warna  jernih  hal  ini  menunjukkan  bakteri  tidak terhambat.  Perubahan  warna  pada  uji  MIC  tidak dapat  dijadikan  patokkan  terhambat  atau  tidaknya bakteri, oleh karena itu dilanjutkan uji MBC.
H a s i l   U j i   M B C   ( M i n i m u m   B a c t e r i c i d i a l Concentration)
Pengujian MBC merupakan lanjutan pada pengujian  MIC,  pengujian  MBC  membuktikan  akan pengujian  MIC  yang  dilakukkan  secara  visual.  Pada metode  MBC  dilakukan  goresan  pada  media  TSA  ( Trypstic  Soy  Agar  ) dengan  hasil  yang  dapat disajikkan pada Tabel 3.
Tabel 1. Hasil Identifikasi Bakteri E. Tarda Parameter Hasil Parameter Hasil Koloni pada TSA • Warna koloni
• Tepi koloni
• Elevasi koloni
• Struktur dalam koloni
Uji Gula
• Arabinosa
• Manitol
• Sukrose
• Glukosa
• Laktosa
• Inositol
• Maltose Putih
Rata Cembung Transparan - - - + - - + Uji Biokimia • Oksidase
• Katalase
• O/F • H S 2 • MR/Vp • Citrate • Urease
• LIA
• Arginin
• Omithin
• TSIA
Secara Mirkoskopik • Bentuk bakteri
• Pewarnaan gram
- + F + +/- - - - + + K/A, H S, gas 2
Batang
Negatif
Tabel 2. Hasil Uji MIC pada bakteri E. Tarda Konsentrasi Perubahan Warna 1 gr/ml 1 gr/ml 0,5 gr/ml 0,25 gr/ml 0,125  gr/ml 0,0625 gr/ml 0,0313 gr/ml 0,0156 gr/ml 0,0078 gr/ml 0,0039 gr/ml Kontrol (+) Kontrol (-) Keruh (bakteri terhambat) Keruh (bakteri terhambat) Keruh (bakteri terhambat)
Keruh (bakteri terhambat) Keruh (bakteri terhambat) Keruh (bakteri terhambat) Jernih (bakteri tidak terhambat) Jernih (bakteri tidak terhambat) Jernih (bakteri tidak terhambat) Jernih (bakteri tidak terhambat) Jernih (bakteri tidak terhambat) Keruh (bakteri terhambat)
Pada  konsentrasi  1  gr  hingga  konsentrasi 0,0313  gr/ml  bakteri  tidak  tumbuh  seperti  yang terlihat  pada  Gambar  1.  Konsentrasi  0,0156gr/ml sampai  dengan  konsentrasi  0,0039  gr/ml  terlihat pertumbuhan  bakteri  pada  media  TSA  ( Trypatic  Soy Agar ) seperti yang terlihat pada Gambar 2.
Gambar 2. Hasil Uji MBC Dengan Konsentrasi 1 gr - 0,0313 gr/ml
Keterangan :
A : tidak terdapat pertumbuhan bakteri
B : tidak terdapat bakteri kecuali konsentrasi
0,0156 gr/ml
Gambar 3. Hasil Uji MBC Dengan Konsentrasi 0,156 gr/ml - 0,039 gr/ml
Keterangan : A : tidak terdapat bakteri kecuali 0,0156 gr/ml B : tidak terdapat pertumbuhan bakteri kecuali kontrol negatif
Pada  konsentrasi  1  gr  hingga  konsentrasi
0,0313  gr/ml  bakteri  tidak  tumbuh.  Konsentrasi 0,0156gr/ml sampai dengan konsentrasi 0,0039 gr/ml terlihat  pertumbuhan  bakteri  pada  media  TSA ( Trypatic  Soy  Agar ).  Pada  kontrol  positif  (+)  yang berisi 1 ml aquades dan 1 ml bakteri sehingga terlihat bakteri yang tumbuh sedangkan pada kontrol negatif (-) yang berisi 1 gr ekstrak meniran dan 1ml aqudes tidak terdapat aktivitas pertumbuhan   bakteri.
Berdasarkan  hasil  penelitian  dengan memperhatikan  tingkat  pertumbuhan  bakteri,  dapat diketahui  bahwa  konsentrasi  terendah  ekstrak meniran    yaitu  0,0156  gr/ml  dapat  menghambat bakteri E.tarda .  Sedangkan  konsentrasi  meniran yang  dapat  membunuh  bakteri E.tarda yaitu  pada k o n s e n t r a s i   0 , 0 3 1 3   g r / m l .   P a d a   u j i   M I C menunjukkan  bahwa  pada  konsentrasi  1  gr  hingga konsentrsi 0,0625 gr/ml tabung reaksi terlihat keruh, sedangkan  pada  konsentrasi  0,0313  gr/ml  hingga konsentrasi 0,0039 gr/ml tabung reaksi terlihat warna jernih.
Pada  uji  MBC  daya  antibakteri  dapat diketahui  secara  pasti  pada  saat  setelah  dilakukan penanaman  pada  media  TSA.  Pada  hasil  uji  MBC menunjukkan bahwa konsentrasi 0,0156 gr/ml sudah terdapat  pertumbuhan  bakteri  tetapi  jumlahnya sedikit,  hal  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak  meniran dapat  menghambat  pertumbuhan E.tarda .  Pada konsentrasi  1gr  hingga  0,0313  gr/ml  tidak  terdapat pertumbuhan  bakteri  hal  ini  berarti  ekstrak  meniran dapat  membunuh  pertumbuhan E.tarda dan  pada konsentrasi  0,0078  gr/ml  hingga  0,0039gr/ml terdapat  banyak  sekali  pertumbuhan  bakteri  yang artinya  ekstrak  meniran    tidak  dapat  membunuh pertumbuhan bakteri E.tarda .
Tumbuh  atau  tidaknya  bakteri  pada  setiap konsentrasi  dapat  disebabkan  karena  pada  setiap konsentrasi  mengandung  kadar  antibakteri  yang berbeda, semakin encer pada uji MIC jumlah pelarut lebih besar daripada jumlah ekstrak tanaman meniran (Sudewo,  2007).  Tanaman  meniran  dapat  digunakan s e b a g a i   a n t i b a k t e r i   k a r e n a   p a d a   m e n i r a n mengandung  bahan-bahan  antibakteri  seperti f l a v o n o i d   ( E v a n s ,   1 9 8 9 ) ,   f e n o l , t a n n i n (Wijayakusuma  dkk.,  1996)  dan  alkaloid  (Berghe, 1991).
Antibakteri  tannin  dapat  membunuh pertumbuhan bakteri karena tannin mempunyai daya toksisitas.  Daya  toksisitas  pada  tannin  akan menyebabkan  membran  sel  bakteri  mengkerutkan membran sitoplasma yang mengakibatkan perubahan permiabilitas  sel  (Ajizah,  2004).  Membran
Efektifitas Ekstrak Tanaman ......
A B A B
Tabel 3. Hasil Uji MBC pada bakteri E. Tarda Konsentrasi Perubahan Warna 1 1 gr/ml 0,5 gr/ml 0,25 gr/ml 0,125  gr/ml 0,0625 gr/ml 0,0313 gr/ml 0,0156 gr/ml 0,0078 gr/ml 0,0039 gr/ml Kontrol (+) Kontrol (-) gr/ml Bakteri tidak tumbuh Bakteri tidak tumbuh
Bakteri tidak tumbuh Bakteri tidak tumbuh Bakteri tidak tumbuh Bakteri tidak tumbuh Bakteri tidak tumbuh Bakteri tumbuh
Bakteri tumbuh
Bakteri tumbuh Bakteri tumbuh Bakteri tidak tumbuh
sitoplasma  merupakan  tempat  keluar  masuknya makanan  dan  memelihara  integritas  komponen- komponen sel, sehingga apabila membran sel bakteri rusak  akibatnya  bakteri  akan  mati  (Berghe,  1991). Tanin  juga  mempunyai  daya  antibakteri  dengan  cara mempresipitasi protein (Ewing and Edward, 1973).
Selain  sebagai  antibakteri  Flavonoid  juga dapat  berfungsi  sebagai  anti  inflamasi,  antivirus  dan antiparasit,  juga  dapat  sebagai  anti  alergi (Dwidjoseputro,  1994).  Zat  antibakteri  pada flavonoid  bekerja  dengan  cara  menghambat pertumbuhan  pada  bakteri  dengan  merusak  dinding sel  dan  membran  sitoplasma.  Selain  itu  efek flavonoid  juga  dapat  mencegah  pembelahan  bakteri sehingga  bakteri  tidak  dapat  berkembang  biak (Evans,  1989)  dan  membentuk  senyawa  kompleks terhadap  protein  extraseluler  yang  mengganggu integritas membran sel bakteri (Tuti, 1997).
Alkaloid bekerja sebagai antibakteri dengan cara  merusak  komponen  penyusun  peptidoglikan pada  sel  bakteri,  sehingga  lapisan  dinding  sel  tidak terbentuk secara utuh dan menyebabkan kematian sel tersebut  (Heyne,  1987).    Pada  senyawa  fenol  dapat menyebabkan  denaturasi  protein  (Masduki,  1996) pada  yang  akan  menyebabkan  sel  membran mengalami lisis (Robinson, 1995).
Semakin tinggi konsentrasi antibakteri yang digunakan  maka  akan  semakin  cepat  bakteri  mati, tetapi  penggunaan  konsentrasi  yang  tinggi  dalam pengobatan  juga  tidak  dianjurkan  karena  dapat menimbulkan  resistensi  dan  kurang  ekonomis  dalam pemakaiannya  (Michael  and  Chan,  1988).  Hasil penelitian  tentang  efektifitas  ekstrak  meniran terhadap E.tarda dapat  dibuktikan  bahwa  ekstrak meniran  efektif  sebagai  obat  antibakteri  yang  aman karena  bersifat  ramah  lingkungan  dan  tidak menimbulkan pencemaran pada lingkungan ikan.

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  ini,  dapat disimpulkan bahwa ekstrak meniran dapat dibuktikan sebagai  antibakteri E.tarda dengan  konsentrasi terbaik  yaitu  0,0313  gr/ml.  Pada  konsentrasi  0,0313 gr/ml  sebagai  konsentrasi  terbaik  karena  konsentrasi tersebut  merupakan  konsentrasi  terendah  dan  tidak terdapat pertumbuhan bakteri.
Perlu  dilakukan  penelitian  lanjutan  untuk mengetahui  efektifitas  ekstrak  meniran  pada  jenis bakteri  gram  negatif  lain  dan  dilakukan  secara  in vivo.  Pada  penyiapan  ekstrak  perlu  diperhatikan tingkat  kekeringan  bahan  herbal  untuk  mendapatkan ekstrak yang baik.

## Daftar Pustaka
Afrianto,  E  dan  E.  Liviawaty.  1992.  Pengendalian Hama  dan  Penyakit  Ikan.  Penerbit Kanisius. Yogyakarta.
A j i z a h ,   A .   2 0 0 4 .   S e n s i t i v i t a s   S a l m o n e l l a Typhimurium  Terhadap  Ekstrak  Daun Psidium  Guajava  L.  Bioscientiae,  Vol.  1, No. 1 : 31-8.
Berghe,  V.  1991.  Screening  Methods  For  Bacterial Antiviral  Agents  For  Higher  Plants. Harcource  Brace  Jauvanovich  Publ. London.
Dwidjoseputro,  D.  1994.  Dasar-Dasar  Mikrobiologi.
Djambatan. Jakarta.
E v a n s ,   W.   C .   1 9 8 9 .   T r e a s e   a n d   E v a n s
th Pharmacognosy  Basic  Of  Therapeutics.  4 ed.  W.B.    Sanders.  Bailliere  Tindall. London. 420 P.
Ewing, H. W. and P. R. Edward. 1973. Identification Of  Enterobactericeae  By  Biochemichal R e a c t i o n .   B u rg e s s   P u b l i s h i n g   C o . Mineapolis. 61-89 P.
Health  Agency.  2001. Edwardsiella  tarda .  Material Safety  Data  Sheets  (MSDS).  Public  Health Agency of Canada. Jan.
Heyne,  K.  1987.  Tanaman  Berguna  Indonesia,  Jilid
II.  Yayasan  Sauna  Wana  Jaya.  Jakarta. Halaman 1138-114.
Leotta,  G.,  and  V.  Germán.  2009.  Prevalence  of
E.tarda in Antarctic wildlife Polar Biology. Volume 35. 809-812 P.
Masduki,  I.  1996.  Efek  Antibakteri  Ekstrak  Biji
Pinang  (Areca  catechu)  terhadap  S.  aureus dan Bakteri. Cermin Dunia Kedokteran 109 . Halaman  214.
Michael,  J.  P  and  E.  C.  S.  Chan.  1988.  Dasar-Dasar Mikrobiologi.  Universitas  Indanesia  Press. Jakarta. Halaman 808-813.
Rao, P. S., Y. Yamada., Y . P.  Tan., and K. Y. Leung. 2004.  Use  of  proteomics  to  identify  novel virulence determinants that are required for Edwardsiella  tarda  pathogenesis.  Mol Microbiol. 573-86 P.
Robinson,  T.  1995.  Senyawa  Organik  Tanaman Tingkat Tinggi. ITB. Bandung.
Sidik  dan A.  Subarnas.  1993. Phyllanthus  niruri L.; Kimia,  Farmakologi  dan  Penggunaannya Dalam  Obat  Tradisional .  Proseding Seminar  Meniran dan  Kedawung 13-14 Agustus 1993. Surabaya.
Sudewo,  B.  2007.  Basmi  Penyakit  dengan  Sirih Merah, PT Agromedia Pustaka, Jakarta. Tuti, D. S. 1997. Isolasi and Identifikasi Triterpinoid dari  Batang  Meniran.  Skripsi.  FF-UA. Surabaya.
Wijayakusuma,  H.,  S.  Dalimartha., A.  S. Wirian.,  B. Wibowo.  1996.  Tanaman  Berkhasiat  Obat Di  Indonesia.  Edisi  I.  pustaka  Kartini. Jakarta.Halaman 66-67.
Efektifitas Ekstrak Tanaman ......