## Aktivitas Antibakteri dari Bakteri Simbion Lamun Enhalus acoroides. asal
Perairan Tiwoho, Kecamatan Wori, Sulawesi Utara
(Antibacterial Activity of Symbiont Bacteria of Seagrass Enhalus acoroides from Tiwoho Waters, Wori District, North Sulawesi)
Ni Komang P. Purniasih 1 , Elvy L. Ginting 1 , Stenly Wullur 1 , Remy E. P. Mangindaan 1 , Natalie D. C. Rumampuk 1 , Silvester B. Pratasik 2
1 Program Studi Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi, Jl. Kampus Unsrat Bahu, Manado 95115 Sulawesi Utara, Indonesia
2 Staf Pengajar Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi Jl. Kampus Unsrat Bahu, Manado 95115 Sulawesi Utara, Indonesia
*Corresponding author: like.ginting@unsrat.ac.id

## Abstract
Nutrient-poor marine bacteria are often found to form a living mechanism by associating with other marine organisms such as seagrass Enhalus acoroides . Seagrass serves as a habitat for marine biota and is known to produce bioactive compounds. Endophytic and epiphytic microbes that are symbiotic  in  seagrass  have  the  ability  to produce  bioactive  compounds  similar  to the  bioactive compounds  produced  by  their  host.  Therefore,  this  study  aimed  to  obtain  isolates  of  symbiont bacteria  and  to  test  their  antibacterial  activity.    The  symbiotic  bacteria  isolates  were  tested  for their antibacterial activity using gram-negative bacteria such as E. coli and S. typhi , and gram- positive bacteria such as S. aureus and S. mutans . Antibacterial activity test was carried out using the  paper  disc  method.  Observation  of  antibacterial  activity  was  carried  out  for  3x24  hours  by observing  the  growth  of  the  resulting  inhibition  zone.  The  zone  of  inhibition  was  measured  to determine the diameter and strength of the bioactive compounds produced by symbiotic bacteria. A total of six isolates of symbiotic bacteria were obtained from the seagrass Enhalus acoroides with  varied  morphological  characteristics.  The  six  isolates  of  symbiont  bacteria  showed antibacterial  activity  and  could  inhibit  and  kill  pathogenic  bacteria.  Two  of  the  six  isolates  of symbiotic bacteria that produced the largest diameter of the inhibition zone were isolates E (Ep1) 3,5 mm and F (En3) 4 mm in S. mutans test bacteria. Keywords : Antibacterial, Isolation, Enhalus acoroides , Symbionts, Tiwoho
Abstrak
Bakteri  laut  yang  miskin  nutrisi  banyak  dijumpai  membentuk  mekanisme  hidup  dengan  cara berasosiasi dengan organisme laut lainnya seperti lamun Enhalus acoroides . Lamun berfungsi sebagai habitat biota laut dan  diketahui dapat menghasilkan senyawa bioaktif.  Mikroba  endofit dan epifit yang bersimbiosis pada lamun mempunyai kemampuan untuk memproduksi senyawa- senyawa bioaktif yang serupa dengan senyawa bioaktif yang diproduksi inangnya. Oleh karena itu,  penelitian  ini  bertujuan  untuk  mendapatkan  isolat  bakteri  simbion  serta  menguji  aktivitas antibakterinya.  Isolat bakteri simbion diuji aktivitas antibakterinya menggunakan bakteri uji gram negatif seperti E. coli dan S. typhi , dan bakteri uji gram positif seperti S. aureus dan S. mutans. Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan  menggunakan  metode  kertas  cakram.  Pengamatan  aktivitas antibakteri  dilakukan  selama  3x24  jam  dengan  mengamati  pertumbuhan  zona  hambat  yang dihasilkan. Zona hambat diukur untuk mengetahui diameter dan kekuatan senyawa bioaktif yang dihasilkan  oleh  bakteri  simbion.    Sebanyak  enam  isolat  bakteri  simbion  yang  didapatkan  dari lamun Enhalus acoroides dengan karakteristik morfologi yang bevariasi. Keenam isolat bakteri simbion  menunjukkan  adanya  aktivitas  antibakteri  dan  dapat  menghambat  serta  membunuh bakteri  pathogen.  Dua  dari  enam  isolat  bakteri  simbion  menghasilkan  diameter  zona  hambat terbesar adalah isolat E (Ep1) 3,5 mm dan F (En3) 4 mm pada pada bakteri uji S. mutans. Kata kunci: Antibakteri, Isolasi, Enhalus acoroides , Simbion, Tiwoho

## PENDAHULUAN
Bakteri merupakan
kelompok organisme yang tidak mempunyai
membran  sel,  organisme  ini  termasuk dalam  domain  prokariota  yang  berukuran sangat kecil (mikroskopik), tetapi mempunyai peran besar dalam kehidupan
di  bumi  (Poluan dkk., 2019).  Bakteri  laut yang  miskin  nutrisi  banyak  dijumpai membentuk mekanisme hidup dengan cara berasosiasi dengan organisme laut lainnya, seperti  lamun.  Menurut  Asriyana  dan Yuliana (2012). Ekosistem lamun berfungsi sebagai  produsen  primer,  penangkap sedimen ( sediment trap ), penghasil oksigen, tempat tinggal biota laut, melindungi  pantai  dengan  cara  meredam arus dan gelombang dan sebagai pendaur ulang zat hara (Devayani dkk ., 2019; Patty, 2016).
Produktivitas yang tinggi tidak hanya berasal  dari  tumbuhan  lamun  itu  sendiri¸ tetapi juga berasal dari alga dan organisme autotrof  yang  menetap  dan  menempel pada  rhizoma,  batang,  dan  daun  lamun sebagai  epifit  dan  endofit. Mikroba  endofit dan  epifit  yang  bersimbiosis  pada  lamun mempunyai kemampuan untuk memproduksi  senyawa-senyawa  bioaktif yang serupa dengan senyawa bioaktif yang diproduksi inangnya (Nuriah, 2014; Strobel et al., 2003; Bara dkk. , 2013). Purnama dan Brahmana  (2018)  menyatakan  bahwa lamun E.  acoroides  dan  T.  hemprichii memiliki bioaktivitas antibakteri.
Pencarian  antibakteri  pada  bakteri simbion dapat  mengurangi ekploitasi berlebihan  terhadap  lamun.  Selain  itu, bakteri  juga  memiliki  keunggulan  untuk
dimanfaatkan  karena  lebih  mudah  dan cepat  bertumbuh  serta  dapat  dikultur massal  dengan  biaya  yang  lebih  murah. Seiring  meningkatnya  resistensi  antibiotik dalam dunia kesehatan, diperlukan adanya kajian-kajian  penemuan  antibiotik  baru yang dapat diperoleh dari senyawa bioaktif pada  organisme  laut.  Penelitian  ini  bisa dijadikan kajian dalam penemuan antibiotik yang  dapat  digunakan  dalam  bidang farmasi.
Perairan  Tiwoho  merupakan  salah satu daerah yang banyak ditumbuhi lamun Enhalus acoroides . Oleh sebab itu, bakteri simbion  lamun Enhalus  acoroides yang memiliki  kemampuan  aktivitas  antibakteri dapat  dimanfaatkan  sebagai  senyawa antibakteri yang dihasilkannya.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Lokasi pengambilan sampel lamun Enhalus acoroides dilakukan  di  Perairan  Tiwoho, Kec. Wori, Kab. Minahasa Utara, Sulawesi Utara.  Isolasi  bakteri  dan  pengujian aktivitas antibakteri dilakukan pada
Laboratorium Biomolekuler dan Farmasitika  Laut,  Fakultas  Perikanan  dan
Ilmu  Kelautan,  Universitas  Sam  Ratulangi Manado. Penelitian ini dilaksanakan selama 3 bulan dari bulan Mei – Juli 2022.
Gambar 1. Peta Lokasi Pengambilan Sampel

## Pengambilan dan Identifikasi Sampel
Sampel  lamun  diambil  ketika  surut terendah  air  laut,  yang  dapat  dilihat  pada aplikasi Tides .  Sampel  lamun  diambil dengan cara aseptik sebanyak 2 spesimen menggunakan  alat  steril,  seperti  gunting dan  pinset.  Kemudian  sampel  lamun dimasukkan  ke  dalam ziplock yang  sudah diisi  dengan  air  laut  dari  tempat  sampel diambil.  Selanjutnya  sampel  dimasukkan ke  dalam cool  box dan  dibawa  ke Laboratorium Biomolekuler dan Farmasitika  Laut,  Fakultas  Perikanan  dan Ilmu  Kelautan,  Universitas  Sam  Ratulangi Manado  untuk  pengujian  di  laboratorium. Sampel  lamun  diidentifikasi  menggunakan Herandarudewi dkk. (2019), Zurba (2018), dan Syakur (2020).

## Persiapan Isolasi dan Kultur Bakteri

## a. Penyiapan Air Laut
Penyiapan  air  laut  digunakan  untuk membilas  atau  membersihkan  sampel lamun  yang  baru  diambil  dari  tempat pengambilan sampel sebagai bahan larutan untuk pembuatan media kultur dan pengenceran  yang  dilakukan.  Air  laut dibawa ke laboratorium kemudian disaring menggunakan  kertas  saring  hingga  jernih. Hasil  penyaringan  tersebut  kemudian disterilisasi  menggunakan autoclave pada suhu 121°C selama 15 menit.
b. Pembuatan  Media  Nutrien  Agar (NA)
Media  NA  merupakan  media  yang berbentuk  padat  yang  digunakan  sebagai media  kultur.  Pembuatan  media  NA dilakukan  dengan  cara  melarutkan  NB sebanyak 0,8 gr dan bacto agar sebanyak 2  gr  ke  dalam  erlenmeyer  100  ml  larutan aquades  dan  air  laut  murni,  dipanaskan menggunakan hotplate dan magnetic stirrer sampai mendidih. Media disterilisasi menggunakan autoclave pada suhu 121°C selama  15  menit,  lalu  dituang  ke  dalam cawan petri steril sebanyak 6 petri.
c. Pembuatan  Media  Nutrien  Broth
(NB)
Media  NB  merupakan  media  cair Nutrien  Broth yang  digunakan  sebagai media kultur. Media cair NB di buat dengan cara melarutkan 0,8 gr NB ke dalam 100 ml
larutan aquades dan air laut murni, diaduk menggunakan magnetic stirrer hingga larut. Media  cair  NB  dituang  ke  dalam  tabung reaksi  steril  sebanyak  16  tabung,  masing- masing  berisi  sebanyak  6  ml.  Media distrerilisasi menggunakan autoclave pada suhu 121°C selama 15 menit.

## d. Larutan NaCl 0,9%
Media  NaCl  dibuat  dengan  cara melarutkan  NaCl  sebanyak  0,675  gr  ke dalam  75  ml  larutan  aquades,  diaduk menggunakan magnetic  stirrer hingga tercampur  rata.  Larutan  NaCl  dituang  ke dalam  tabung  reaksi  sebanyak  8  tabung, dengan  masing-masing  berisi  sebanyak  9 ml. Larutan tersebut disterilisasi menggunakan autoclave pada suhu 121°C selama 15 menit.

## Isolasi Bakteri
Isolasi yang dilakukan yaitu epifit dan endofit.  Isolasi  bakteri  epifit  dilakukan dengan  cara  mengoleskan  sampel  lamun ke  permukaan  media  NA  kemudian diinkubasi  selama  2x24  jam  pada  suhu 33°C.  Sedangkan  Isolasi  bakteri  endofit diawali  dengan  melakukan  pengenceran sampel  lamun  yang  digerus.  Tujuan pengenceran menggunakan metode spread ini  untuk  menumbuhkan  dan mendapatkan koloni bakteri tunggal. Pengenceran  bertingkat  ini  dilakukan dengan menimbang sampel lamun sebanyak  5  gram  dan  menakar  5  ml aquades  steril  untuk  dilarutkan.  Sampel digerus  menggunakan mortar  dan  pestle , hasil gerusan tersebut dipindahkan sebanyak 1 ml menggunakan mikropipet ke dalam  tabung  reaksi  yang  berisi  larutan NaCl  steril  sebanyak  9  ml.  Pengenceran 10 -1 difortex  sebelum  dipindahkan  ke pengenceran  berikut.  Pengenceran  10 -1 dipindahkan sebanyak 1 ml menggunakan mikropipet kemudian dilanjutkan ke tabung kedua  sampai  tabung  ketiga  sehingga konsentrasi  menjadi10 -3 .  Pengenceran  10 - 1 ,  10 -2 dan  10 -3 dipindahkan  ke  media  NA dengan menggunakan metode penyebaran (s pread  plate ).  Pemindahan  dilakukan dengan  cara  mengambil  0,2  ml  masing- masing pengenceran menggunakan mikropipet,  kemudian  disebarkan  secara merata menggunakan L-glass. Media yang
berisi  bakteri  diinkubasi  selama  2x24  jam pada suhu 33°C.
Karakterisasi Morfologi Bakteri
Isolat yang tumbuh diamati karakterisasi morfologinya dengan memperhatikan  bentuk  koloni,  pinggiran, warna,  dan  elevasi,  yang  ditentukan dengan mengacu pada Leboffe dan Pierce (2012).  Bakteri  yang  memiliki  karakteristik morfologi  berbeda  pada  isolasi  epifit  dan endofit  diinokulasi  pada  media  NA. Inokulasi  menggunakan  metode  gores dengan  cara  isolat  bakteri  tunggal  diambil menggunakan  jarum  ose  steril  kemudian digores  dengan  garis zig-zag pada  media NA.

## Karakterisasi Morfologi Bakteri
Isolat yang tumbuh diamati karakterisasi morfologinya dengan memperhatikan  bentuk  koloni,  pinggiran, warna, dan elevasi, yang ditentukan dengan mengacu  pada  Leboffe dan Pierce  (2012). Bakteri yang memiliki karakteristik morfologi  berbeda  pada  isolasi  epifit  dan endofit  diinokulasi  pada  media  NA. Inokulasi  menggunakan  metode  gores dengan  cara  isolat  bakteri  tunggal  diambil menggunakan  jarum  ose  steril  kemudian digores  dengan  garis zig-zag pada  media NA.
Gambar 2. Teknik Pengenceran Bertingkat, Sumber: Periadnadi, dkk., (2015)
Gambar 3. Karakteristik Morfologi Bakteri Sumber: Leboffe dan Pierce (2012)
Uji Aktivitas Antibakteri
a. Kultur Isolat Bakteri dan Bakteri Uji pada Media NB
Bakteri  uji yang  digunakan  pada  uji aktivitas  antibakteri  adalah E.  coli , S.
aureus, S. tiphy dan S. mutans diambil dari sediaan laboratorium. Isolat bakteri simbion dan bakteri uji diambil menggunakan jarum ose steril kemudian dipindahkan ke dalam media  NB  yang  telah  diberi  label. Selanjutnya  diinkubasi  selama  1x24  jam
pada suhu 33°C. Pengerjaan kultur bakteri dilakukan dalam laminar agar tetap terjaga dari kontaminasi.

## b. Pembuatan  Media  Mueller  Hinton Agar (MHA)
Media  MHA  dibuat  dengan  cara melarutkan 3,4 gr ke dalam 100 ml larutan aquades  dan  air  laut  murni,  dipanaskan menggunakan hotplate dan magnetic stirrer sampai mendidih. Lalu disterilisasi menggunakan autoclave pada suhu 121°C selama 15 menit.

## c. Pembuatan Larutan Antibiotik
Antibiotik  yang  digunakan  adalah antibiotik yang resisten pada setiap bakteri uji seperti Amoxcillin 500 mg, Ampicillin 500 mg,
Ciprofloxacin 500 mg dan Chloramphenicol 250 mg sebagai pembanding zona hambat yang terbentuk. Larutan  antibiotik  dibuat  dengan  cara melarutkan 0,10 gr masing-masing antibiotik ke dalam aquades steril sebanyak 10 ml kemudian difortex hingga homogen.
d. Pengujian Aktivitas Antibakteri Uji aktivitas antibakteri yang
dilakukan dalam penelitian ini
menggunakan  metode  kertas  cakram (Hudzicki, 2009).  Hasil kultur  bakteri uji E. coli , S.  Aureus,  S.  Tiphy dan S.  Mutans dituang  ke  dalam  cawan  petri  yang  berisi
media  MHA  menggunakan  mikropipet sebanyak 90 mikron, lalu swab menggunakan cotton  swab steril.  Kertas cakram dicelupkan ke dalam kultur bakteri simbion menggunakan pinset steril, kemudian  diletakkan  dengan  perlahan  di atas permukaan media MHA yang mengandung bakteri uji. Selanjutnya perlakuan  yang  sama  dilakukan  terhadap seluruh kultur bakteri simbion dan antibitok. Setelah itu, media MHA diinkubasi selama 3x24 jam pada suhu 33°C.
Setelah  24  jam,  zona  hambat  yang tumbuh  di  sekitar  kertas  cakram  diamati serta  diukur  diameternya  menggunakan penggaris  dan  dibandingkan  dengan  zona hambat  kontrol  positif.  Pengukuran  zona hambat  dilakukan  untuk  menentukan kekuatan  senyawa  yang  dihasilkan  oleh bakteri  simbon  terhadap  bakteri  uji.  Luas zona hambat yang terbentuk pada masing- masing  bakteri  simbion  tersebut  diukur dengan  rumus  Andries  dan  Supit  (2014) yang ditampilkan pada Gambar 4.
Penentuan  kekuatan  zona  hambat aktivitas antibakteri yang terbentuk ditentukan  berdasarkan  Davis  dan  Stout (1971).  Diameter  zona  hambat  <  5  mm masuk  dalam  kategori  lemah,  5-10  mm kategori  sedang,  10-20  mm  kategori  kuat dan >20 mm kategori sangat kuat.
Gambar 4. Pengukuran diameter zona hambat Sumber : Andries dan Supit (2014)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Indentifikasi Lamun Enhalus acoroides Berdasarkan hasil identifikasi sampel lamun  yang  diambil  di  Perairan  Tiwoho diperoleh  lamun Enhalus  acoroides. Hasil indentifikasi  menunjukkan  bahwa  sampel
lamun  yang  diambil  dari  Perairan  Tiwoho (Gambar  7A)  memiliki  kemiripan  dengan lamun Enhalus  acoroides (Gambar  7B) dengan ciri-ciri tumbuhan berukuran besar, daun  mencapai  1  meter,  dan  tumbuh rambut pada rhizoma.
Berdasarkan hasil pengamatan didapatkan  lima  isolat  bakteri  simbion endofit lamun Enhalus acoroides dan satu isolat bakteri simbion epifit lamun Enhalus acoroides dengan  karakteristik  morfologi yang  berbeda  dengan  isolat  lainnya. Karakteristik morfologi isolat bakteri simbion Enhalus  acoroides yang  berhasil kultur  pada  media  NA  ditunjukkan  pada Tabel 1.
Berdasarkan Tabel 1, isolat bakteri A (En1), B (En2), C (En4), D (En5), E (Ep1) dan F (En3) memiliki koloni yang dominan batas pinggirannya halus dengan ketinggian  isolat  dominan  datar  serta bentuk keseluruhan koloni dominan adalah bulat  akan  tetapi  memiliki  warna  yang berbeda. Berdasarkan
perbedaan morfologi tersebut mengindikasikan bahwa keenam  isolat  tersebut  merupakan  jenis bakteri yang berbeda.
Maarisit dkk. (2021)  melaporkan bakteri  simbion  pada  lamun T.  hemprichii dari  Perairan  Bahowo  berhasil  diisolasi. Diperoleh  tiga  isolat  bakteri  epifit  dengan karakteristik  morfologi  yang  bervariasi. Susanti dan Elisdiana (2021) juga melaporkan  isolat  bakteri  endofit  pada lamun
Enhalus acoroides dapat berkembang  dengan  baik  pada  media Zobell  2216E.  Sampel  lamun  tersebut diambil  dari  dua  tempat  yaitu  Pantai  Biha dan  Pantai  Ketapang  yang  menghasilkan 53  koloni  bakteri  dengan  beragam  bentuk karakteristik morfologi.
Poluan dkk . (2019) berhasil mengisolasi  bakteri  simbion  spons  dari perairan  Malalyang  berjumlah  lima  isolat. Kelima  isolat  bakteri  yang  bersimbion dengan  spons Cribochalina sp.  memiliki karakteristik  berbeda  yang  umumnya berwarna putih dan kuning dengan bentuk circular.
Gambar 5. Sampel Lamun Enhalus acoroides
Sumber gambar: (B) Herandarudewi dkk. (2019)
Tabel 1. Karakteristik morfologi isolat bakteri simbion lamun Enhalus acoroides
Kode Isolat Bakteri Simbion Karakteristik Morfologi Batas Pinggiran Ketinggian Warna Keseluruhan koloni A (En1) Halus, Utuh Datar Putih susu Bulat B (En2) Berserabut Datar Bening Tidak teratur C (En4) Tidak teratur Datar Bening Tidak teratur D (En5) Halus, Utuh Cembung Krem Bulat E (Ep1) Halus, Utuh Dataran tinggi Krem Bulat F (En3) Halus, Utuh Datar Bening Bulat Ket : En: Endofit, Ep: Epifit

## Uji Aktivitas Antibakteri Dengan Bakteri Uji E. coli
Berdasarkan  hasil  pengamatan  yang telah  dilakukan,  uji  aktivitas  antibakteri pada  bakteri  uji E.  coli menunjukkan  hasil yang berbeda disetiap isolat. Terlihat zona hambat  di  sekitar  kertas  cakram  yang dihasilkan  oleh  isolat  bakteri  simbion Enhalus  acoroides yang  ditunjukkan  pada Gambar 6.
Hasil pengamatan uji aktivitas
antibakteri  keenam  isolat  terlihat  adanya
zona  hambat  di  sekitar  kertas  cakram, namun  terbilang  masih  sangat  kecil  jika dibandingkan  dengan  zona  hambat  yang dihasilkan  antibiotik.  Pembentukan  zona hambat  pada  isolat  bakteri  simbion menunjukkan  bahwa  adanya  aktivitas antibakteri  yang  dapat  menghambat  atau membunuh  patogen.  Hasil  pengamatan dan  pengukuran  diameter  zona  hambat pada  kertas  cakram  ditunjukkan  pada Tabel 2.
Gambar 6. Aktivitas antibakteri pada bakteri uji E. coli
Ket : a : Isolat A (Endofit 1), B (Endofit 2), dan C (Endofit 4) b : Isolat D (Endofit 5), E (Epifit 1), dan F (Endofit 3)
+ : Kontrol positif Ciprofloxacin
Tabel 2. Diameter zona hambat pada bakteri uji E. coli Kode Isolat Waktu Inkubasi Diameter Zona Hambat (mm) 24 48 72 Kontrol positif A (En1) 1,5 1,5 1,5 25 B (En2) 2 2 2 C (En4) 1,5 1,5 1,5 D (En5) 3 3 3 25 E (Ep1) 2 2 2 F (En3) 2 2 2
Berdasarkan  tabel  2,  diameter  zona hambat yang terbentuk pada isolat A (En1) dan  C  (En4)  yaitu  1,5  mm.  Pada  isolat  B (En2),  E  (Ep1),  dan  F  (En3)  memiliki diameter  2  mm.  Kemudian  pada  isolat  D (En5)  memiliki  zona  hambat  lebih  besar dari  isolat  lainnya  yaitu  3  mm.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  isolat  D  (En5) memiliki  kemampuan  yang  lebih  besar
dalam  menghasilkan  senyawa  antibakteri dibandingkan  isolat  A  (En1),  B  (En2),  C (En4),  E (Ep1),  dan  F  (En3). Dapat  dilihat bahwa  zona  hambat  yang  dihasilkan antibiotik  lebih  besar  dari  isolat  bakteri yakni  25  mm.  Tidak  terjadi  pertambahan diameter  zona  hambat  hingga  jam  ke  72. Zona  hambat  dari  isolat  bakteri  simbion lamun Enhalus  acoroides pada  bakteri  uji
E.  coli tergolong  dalam  kategori  lemah berdasarkan Davis dan Stout (1971).
Antibiotik  yang  digunakan  dalam  uji aktivitas antibakteri pada bakteri uji E. coli yaitu Ciprofloxacin .  Penggunaan  antibiotik Ciprofloxacin disesuaikan  dengan  tingkat resistensi  antibiotik  tersebut  terhadap bakteri uji. Sumampouw (2018) melaporkan Ciprofloxacin resisten
terhadap bakteri uji E. coli dan dinyatakan bahwa  Ciprofloxacin  yang  paling  bagus untuk membunuh atau menghambat bakteri E. coli.

## Uji Aktivitas Antibakteri Dengan Bakteri Uji S. aureus
Uji  aktivitas  isolat  bakteri  simbion lamun Enhalus  acoroides dengan  bakteri uji S.  aureus menunjukkan  hal  yang berbeda  dengan  uji  aktivitas  antibakteri
pada  bakteri  uji E.  coli. Hasil  uji  aktivitas antibakteri  dengan  bakteri  uji S.  aureus ditunjukkan pada Gambar 7.
Hasil pengamatan uji aktivitas antibakteri pada bakteri uji S. aureus isolat A  (En1),  B  (En2),  dan  C  (En4)  tidak menunjukkan  adanya  pertumbuhan  zona hambat  di  sekitar  kertas  cakram.  Hal tersebut  menunjukkan  bahwa  isolat  A (En1), B (En2), dan C (En4) tidak memiliki kemampuan  untuk  menghambat  atau membunuh  bakteri  uji S.  aureus. Isolat  D (En5),  E  (Ep1),  dan  F  (En3) menunjukkan adanya pertumbuhan zona hambat dari jam ke 24. Hal tersebut mengindikasikan bahwa isolat  D  (En5),  E  (Ep1),  dan  F  (En3) menghasilkan  senyawa  antibakteri  yang dapat mempengaruhi pertumbuhan bakteri uji.
Gambar 7. Aktivitas antibakteri pada bakteri uji S. aureus
Ket : a: Isolat A (Endofit 1), B (Endofit 2), dan C (Endofit 4)
b: Isolat D (Endofit 5), E (Epifit 1), dan F (Endofit 3)
+ : Kontrol positif Ampicilin Tabel 3. Diameter zona hambat pada bakteri uji S. aureus Kode Isolat Waktu Inkubasi Diameter Zona Hambat (mm) 24 48 72 Kontrol positif A (En1) 0 0 0 12 B (En2) 0 0 0 C (En4) 0 0 0 D (En5) 2,5 2,5 2,5 12 E (Ep1) 3 3 3 F (En3) 1,5 1,5 1,5
Berdasarkan  Tabel  3  tidak  terdapat pembentukan zona hambat pada isolate A (En1),  B  (En2),  dan  C  (En4)  namun  pada isolat  D  (En5),  E  (Ep1),  dan  F  (En3) terdapat  zona  hambat  yang  terbentuk. Diameter  zona  hambat  yang  terbentuk pada isolat D (En5) yaitu 2,5 mm, isolat E (Ep1)  3  mm,  dan  isolat  F  (En3)  1,5  mm. Sedangkan  zona  hambat  yang  dihasilkan antibiotik  yaitu  sebesar  12  mm.  Tidak terjadi pertambahan diameter zona hambat hingga  jam  ke  72.  Hasil  pengamatan  ini menunjukkan  bahwa  zona  hambat  yang dihasilkan  isolat  bakteri  simbion  lamun Enhalus  acoroides pada  bakteri  uji S. aureus tergolong  dalam  kategori  lemah berdasarkan Davis dan Stout (1971).
Antibiotik  yang  digunakan  dalam  uji aktivitas  antibakteri  pada  bakteri  uji S. aureus yaitu Ampicilin. Suheri dkk. (2015) melaporkan  antibiotik Ampicilin memiliki daya  hambat  terhadap  bakteri S.  aureus dan  dikategorikan  tingkat  resistensinya sensitive.

## Uji Aktivitas Antibakteri Dengan Bakteri Uji S. typhi
Uji aktivitas antibakteri keenam isolat bakteri  simbion  lamun Enhalus  acoroides dengan  bakteri  uji S.  typhi tidak  terlihat zona hambat . Hasil menunjukkan hal yang berbeda  dari  seluruh  uji  aktivitas  dengan bakteri uji E. coli, S. aureus dan S. mutans yang ditunjukkan pada Gambar 8.
Hasil  pengamatan  keenam  isolat bakteri yang diuji aktivitasnya pada bakteri uji S.  mutans pada  isolat  A-D  tidak menunjukkan  adanya  pertumbuhan  zona hambat selama 72 jam. Sedangkan isolat E (Ep1) dan F (En3) jam ke 24 menunjukkan adanya  zona  hambat  yang  tumbuh  di sekitar  kertas  cakram.  Selanjutnya  pada jam ke 48 dan 72 zona hambat kedua isolat tersebut  tidak  adanya  pertambahan  atau perubahan  yang  terjadi.  Hal  tersebut mengindikasikan bahwa isolat E (Ep1) dan F (En3) memiliki senyawa antibakteri yang dapat membunuh pathogen.
Hasil pengamatan  pengukuran  diameter  zona hambat ditunjukkan pada Tabel 3.
Gambar 8 . Aktivitas antibakteri pada bakteri uji S. typhi Ket: a: Isolat A (Endofit 1), B (Endofit 2), dan C (Endofit 4) b: Isolat D (Endofit 5), E (Epifit 1), dan F (Endofit 3) + : Kontrol positif Chloramphenicol
Tabel 3. Diameter zona hambat pada bakteri uji S. mutans
Kode Isolat Waktu Inkubasi Diameter Zona Hambat (mm) 24 48 72 Kontrol positif A (En1) 0 0 0 16,5 B (En2) 0 0 0 C (En4) 0 0 0 D (En5) 0 0 0 13 E (Ep1) 3,5 3,5 3,5 F (En3) 4 4 4
Zona  hambat  yang  terbentuk  pada isolat  E  (Ep1)  memiliki  ukuran  diameter sebesar 3,5 mm dan isolat F (En3) sebesar 4  mm,  sedangkan  zona  hambat  yang dihasilkan antibiotik sebesar 13 mm. Dalam hal  ini  zona  hambat  yang  terbentuk  pada isolat  E  (Ep1)  dan  F  (En3)  dapat dikategorikan  sebagai  zona  hambat  yang lemah berdasarkan Davis dan Stout (1971). Namun  dilihat  dari  seluruh  uji  aktivitas antibakteri  pada  keempat  bakteri  uji menunjukkan  bahwa  pada  bakteri  uji S. mutans memiliki  zoba  hambat  yang terbesar dalam penelitian ini.
Antibiotik  yang  digunakan  dalam  uji aktivitas  antibakteri  pada  bakteri  uji S. mutans adalah amoxcilin. Amoxcilin dilaporkan  dapat  menghambat  bakteri S. mutans  dengan  cara menembus  pori-pori dalam membran fosfolipid luar (Yuniar dkk.,
2020).
Skrining aktivitas antibakteri
menunjukkan  enam  isolat  bakteri  simbion lamun Enhalus  acoroides rentan  terhadap bakteri  gram  negatif  seperti E.  coli serta bakteri gram positif seperti S. aureus dan S. mutans. Berbeda  dengan  isolat  bakteri simbion  lamun Enhalus  acoroides tidak rentan  terhadap  bakteri  uji S.  typhi. Menurut  Idiawati dkk. (2017),  aktivitas antibakteri  ditandai  dengan  terbentuknya zona  kabut  dan  zona  bening.  Zona  kabut menunjukkan  aktivitas  antibakteri  yang lemah, sedangkan zona bening menunjukkan  aktivitas  antibakteri  yang kuat.
Diameter zona hambat yang dihasilkan berbeda-beda pada isolat bakteri  simbion  lamun Enhalus  acoroides dan  antibiotik  disetiap  bakteri  uji.  Hal tersebut  disebabkan  karena  isolat  bakteri simbion  merupakan  bakteri  yang  belum dimurnikan.  Sedangkan  antibiotik  yang digunakan  adalah  senyawa  antibakteri yang  sudah  dimurnikan  dan  dipasarkan sebagai obat antibiotik.
Antibiotik  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah antibiotik yang resisten terhadap  bakteri  uji.  Perbedaan  zona hambat  yang  dihasilkan  masing-masing isolat  dapat  disebabkan  oleh  perbedaan senyawa metabolit sekunder yang dihasilkan  untuk  menghambat  bakteri
pathogen  (Hamdani,  2018).  Zona  hambat yang dibentuk oleh senyawa aktif dari isolat bakteri simbiom lamun dapat diklasifikasikan  ke  dalam  kategori  lemah dengan  diameter  <5  mm  berdasarkan Davis dan Stout (1971).
Hal  tersebut  menunjukkan  besar kemungkinan bahwa isolat bakteri simbion lamun Enhalus  acoroides mempunyai aktivitas  anti  mikroba  pada  bakteri  uji bersifat  bakteriosid  (membunuh  bakteri). Bakteri  gram  negatif  memiliki  ketahanan mekanisme  yang  lemah  karena  struktruk dinding sel bakteri gram negatif mengandung  lapisan  polisakarida  dan peptidoglikan yang lebih sedikit dibandingkan  dengan  dinding  sel  bakteri gram positif. Bagian luar dari peptidoglikan tersusun  atas  lipoprotein,  fosfolipid,  dan polimer yang unik yang disebut lipopolisakarida  (Hamidah, dkk .  2019; Firdausia, 2021).
Menurut  Brooks et  al. (2005)  dan Purnamaningsih dkk. (2017), tingkat toksisitas aktivitas antibakteri dibagi menjadi 2 macam yaitu aktivitas bakteriostatik  (menghambat  pertumbuhan sel bakteri) dan aktivitas bakterisidal (dapat membunuh patogen). Antibakteri
bakteriostatik hanya menghambat pertumbuhan bakteri dan tidak mematikan, sedangkan  bakterisidal  dapat  membunuh bakteri. Bakteriostatik dapat bersifat bakteriosidal  jika  dalam  konsentrasi  yang tinggi.
Pada penelitian ini senyawa antibakteri yang dihasilkan isolat A (En1), B (En2), dan C (En4), D (En5), E (Ep1), dan F (En3) pada bakteri uji E. coli , S. aureus, dan S.  mutans tidak  bertambah  atau berkurang seiring berjalannya waktu hingga  jam  ke  72.  Oleh  karena  itu,  isolat bakteri  simbion  lamun Enhalus  acoroides positif  bersifat  bakteriostatik  dan  juga bakteriosidal. Keenam isolat dengan bakteri uji S. typhi tidak menunjukkan sifat bakteriostatik  maupun  bakteriosidal.  Hal tersebut dikarenakan belum adanya pertumbuhan zona hambat di sekitar kertas cakram.  Dari  enam  isolat  bakteri  simbion lamun Enhalus  acoroides tiga  diantaranya memiliki aktivitas terbesar dengan menunjukkan zona hambat dengan
diameter  yang  besar  disekitar  kertas cakram disajikan pada Tabel 4..
Tabel 4. Diameter zona hambat terbesar Kode Isolat Bakteri Uji E. coli S. aureus S. typhi S. mutans D (En5) 3 - - - E (Ep1) - 3 - 3,5 F (En3) - - - 4
Berdasarkan data di atas, enam isolat bakteri  simbion  lamun Enhalus  acoroides menunjukkan  adanya  senyawa  aktivitas antibakteri namun pada bakteri uji S. typhi menunjukkan bahwa senyawa yang dihasilkan  isolat  bakteri  simbion  lamun Enhalus acoroides tidak rentan. Isolat yang menghasilkan senyawa aktivitas antibakteri terbesar dan memiliki diameter lebih besar dibandingkan isolat lainnya dari keseluruhan uji yaitu pada isolat D (En5), E (Ep1), dan F (En3).
Diameter zona hambat terbesar yaitu pada isolat D (En5) pada bakteri uji E. coli dengan diameter 3 mm. Pada isolat E (Ep1) dengan  bakteri  uji S.  aureus memiliki diameter  3  mm  dan  pada  bakteri  uji S. mutans memiliki diameter 3,5 mm. Isolat F (En3)  dengan  bakteri  uji S.  mutans besar diameternya  4  mm.  Diameter  terbesar  di antara tiga isolat tersebut yaitu pada isolat F (En3) dengan bakteri uji S. mutans yaitu 4 mm.
Berdasarkan  data  tersebut  juga diketahui  bahwa  isolat  bakteri  simbion lamun Enhalus  acoroides lebih  resisten terhadap bakteri uji S. mutans dibandingkan dengan bakteri uji E. coli dan S. aureus . Namun hal tersebut tidak terjadi pada bakteri uji S. typhi yang tidak terlihat adannya pembentukan zona hambat disekitar  kertas  cakram.  Senyawa  yang dihasilkan  isolat  bakteri  simbion  lamun tergolong  lemah  sehingga  tidak  dapat membunuh bakteri uji S. typhi.
Menurut  Dwijoseputro  (1990),  suatu antibakteri dapat disebut berspektrum luas apabila  bakteri  yang  memiliki  antibakteri yang  mampu  membunuh  bakteri  gram positif  maupun  bakteri  gram  negatif  dan
disebut  berspektrum  sempit  jika  hanya dapat membunuh bakteri gram positif atau bakteri gram negatif saja. Isolat A (En1), B (En2),  C  (En4),  D  (En5),  E  (Ep1),  dan  F (En3) dinyatakan berspektrum luas karena dapat  membunuh  bakteri  uji E.  coli , S. aureus, dan S. mutans . Sedangkan bakteri uji S.  typhi senyawa  antibakteri  isolat bakteri  tidak  dapat  membunuh  patogen disebut berspektrum sempit.
Setyoningrum  (2015)  melaporkan aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  lamun E. acoroides yang  berasal  dari  Perairan Paciran,  Kabupaten  Lamongan  terhadap bakteri S.  aureus menunjukkan  adanya zona hambat yang tumbuh disekitar kertas cakram. Bakteri yang menunjukkan aktivitas  antibakteri  setelah  24  jam  masa inkubasi.  Senyawa  ini  dihasilkan  setelah melewati  fase  logaritma  menuju  fase stasioner.  Penelitian  serupa  dari  Purnama dan  Brahmana  (2018),  terhadap  bakteri simbion T.  hemperichii dan E.  acoroides dari Perairan Pantai Karang Tirta, Padang, Sumatera  Barat  mempunyai  aktivitas  anti mikroba pada bakteri uji bersifat bakteriosid (membunuh bakteri).
Mahbubah (2011) melaporkan diperoleh  sembilan  isolat  bakteri  yang bersimbiosis  dengan  tumbuhan  lamun Enhalus  sp.  Satu  dari  sembilan  isolat bakteri  mempunyai  aktivitas  antibakteri terhadap Enterobacter sp. dengan diameter zona hambat sebesar 0,34+0,13013 mm.
Pradana dkk. (2018)  melaporkan lamun E.    acoroides , C. rotundata, dan T. hemprichii
dapat menghambat
pertumbuhan  bakteri  karena  mengandung senyawa bioaktif
yang memiliki
kemampuan untuk menghambat
pertumbuhan  bakteri,  seperti  senyawa flavonoid,  alkaloid,  dan  triterpenoid  yang mampu mengganggu membrane sel bakteri.
Andhikawati dkk. (2020) juga melaporkan lamun E. acoroides mengandung  senyawa  bioaktif  berupa alkaloid, steroid, dan tanin. Ekstrak metanol lamun E.  acoroides terbukti  memiliki aktivitas  antioksidan  dengan  kekuatan sedang.  Jika  dibandingkan  penelitian  di atas,  secara  keseluruhan  menunjukkan bahwa  lamun Enhalus  acoroides dapat menghasilkan  senyawa  antibakteri  karena mengandung senyawa bioaktif yang sama dengan inangnya.

## KESIMPULAN
Enam  isolat  bakteri  simbion  lamun Enhalus  acoroides berhasil  diisolasi    dan menunjukkan  aktivitas  antibakteri  dengan adanya zona hambat yang terbentuk. Isolat A  (En1),  B  (En2),  dan  C  (En4)  memiliki aktivitas antibakteri pada bakteri uji E. coli. Isolat D (En5), memiliki aktivitas antibakteri pada bakteri uji E. coli dan S. aureus. Isolat E  (Ep1)  dan  F  (En3)  memiliki  aktivitas antibakteri  pada  bakteri  uji E.  coli,  S. aureus, dan S. mutans.

## DAFTAR PUSTAKA
Andhikawati, A., Akbarsyah, N., dan Putra,
P.  K.  D.  2020.  Identifikasi  Senyawa Bioaktif dan Potensi Aktivitas Antioksidan lamun E. acoroides (Linn. F). Jurnal Akuatek, 1(1), 66-72.
Andries, J. R., Gunawan, P. N., dan Supit, A. 2014. Uji Efek Anti Bakteri Ekstrak Bunga Cengkeh Terhadap Bakteri S. mutans Secara In Vitro. e-GiGi , 2 (2).
Asriyana,  S.  P.,  dan  Yuliana,  S.  P. 2021. Produktivitas  Perairan:  Edisi Revisi. Bumi Aksara.
Bara,  R.,  Amal,  H.,  Wray,  V.,  Lin,  W.,
Proksch,  P.,  dan  Debbab,  A.  2013.
Talaromins  A  dan  B,  New  cyclic Peptides from The Endophytic Fungus Talaromyces worimannii . Tetrahedron Letters, 54: 1686-1689.
Brooks, G. F., J. S. Butel, dan S. A. Morse. 2005. Medical Microbiology. McGraw Hill: New York.
Davis, W. W., dan Stout, T. R. 1971. Disc
Plate  Method  of  Microbiological Antibiotic Assay: I. Factors Influencing Variability and Error. Applied Microbiology, 22(4),
659-665.
Devayani, C. S., Hartati, R., Taufiq-Spj, N., Endrawati, H., dan Suryono, S. 2019. Analisis  Kelimpahan  Mikroalga  Epifit pada Lamun E. acoroides di Perairan Pulau  Karimunjawa,  Jepara. Buletin Oseanografi Marina, 8(2), 67-74.
Dwijoseputro, D. 1990. Dasar-dasar Mikrobiologi, Djambatan, Jakarta.
Firdausia,  R.  Z.  2021.  Perbandingan Dinding  Sel  pada  Bakteri  Gram Negatif,  Gram  Positif,  dan  Sel Tumbuhan.  Universitas  Isam  Negeri Walisongo Semarang.
Hamidah,  M.  N.,  Rianingsih,  L.,  dan
Romadhon, R. 2019. Aktivitas Antibakteri Isolat Bakteri Asam Laktat dari Peda Dengan Jenis Ikan Berbeda Terhadap E. coli dan S. aureus . Jurnal  Ilmu  dan  Teknologi Perikanan, 1 (2), 11-21.
Herandarudewi,  S.  M.  C.,  Kiswara  W., Irawan  A.,  Juraij.,  Anggraeni,  F., Sunuddin,  S.,  Munandar,  E.,  Tania, C.,  Khalifa,  M.  A.  (2019).  Panduan Survey  dan  Monitoring  Duyung  dan Lamun. ITB Press.
Hudzicki,  J.  2009.  Kirby-Beuer  Disk Diffusion Susceptibility Test Protocol. American Society for Microbiology.
Idiawati, N., Sofiana, M. S. J., dan Rousdy,
D.  W.  2017.  Potensi  Antibakteri  dari Bakteri Berasosiasi T. Hemprichii Dari Perairan
Lemukutan. Buletin Oseanografi Marina, 6(2), 130-133. Leboffe,  M.  J.  dan  Pierce,  B.  E.  2012. Microbiology  :  Laboratory  Theory  & Application, Essentials. Morton Publishing company. p. 58.
Maarisit,  I.,  Angkouw,  E.  D.,  Mangindaan, R.  E.,  Rumampuk,  N.  D.,  Manoppo, H., dan Ginting, E. L.  2021. Isolation
and  Antibacterial  Activity  Test  of Seagrass Epiphytic Symbiont Bacteria T.  hemprichii from  Bahowo Waters, North Sulawesi. Jurnal Ilmiah PLATAX, 9(1), 115-122.
Mahbubah, A. S. 2011. Potensi Antibakteri Dari  Bakteri  Simbion  Tumbuhan Lamun Enhalus Sp. Terhadap Bakteri
Mdr Enterobacter sp. (Doctoral Dissertation, Diponegoro University).
Nuriah,  A.  A.  A.  2014.  Aktivitas  Antijamur Bakteri  Endofit  Lamun  Terhadap
Jamur  Patogen.  Skripsi  Program
Studi Ilmu Kelautan, Fakultas
Perikanan dan Ilmu Kelautan. UNDIP
Semerang.
Patty, I.S. 2016. Pemetaan Kondisi Padang Lamun  di  Perairan  Ternate,  Tidore dan Sekitarnya.
Poluan,  G.  G.,  Ginting,  E.  L.,  Wullur,  S.,
Warouw, V., Losung, F., & Salaki, M. (2019). Karakteristik Morfologi Bakteri Simbion Spons Menyerupai Cribochalina sp dari Perairan
Malalayang  Sulawesi  Utara. Jurnal Pesisir  Dan  Laut  Tropis, 7(3),  190- 195.
Pradana, N. E., Wardiwira, F. F., Hakim, L.,
Imamah,  A.  N.,  dan  Istianisa,  W. 2018.  Efektivitas  Ekstrak  Lamun
Cymodocea rotundata , T. hemprichii , dan E. acoroides dari Perairan Jepara Sebagai  Antibakteri  pada  Fillet  Ikan Nila  ( Oreochromis  niloticus )  Selama Penyimpanan Dingin. Saintek Perikanan:  Indonesian  Journal  of Fisheries Science and Technology, 13(2), 143-147. Purnama,  A.  A.,  dan  Brahmana,  M.  E.
2018.  Bioaktivitas  Antibakteri  Lamun
T. hemprichii dan E. acaroides . Jurnal Biologi  Universitas  Andalas.  Vol.  6, No. 1, hal. 45-50.
Purnamaningsih, N., Kalor, H., dan Atun, S.
2017. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Temulawak  ( Curcuma  xanthorrhiza ) terhadap  bakteri Escherichia  coli ATCC  11229  dan S.  aureus ATCC
25923. J Pen Sain, 22(2), 140-142.
Setyoningrum,  D.  (2015). Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Daun  dan  Akar Lamun E.  acoroides Dari  Perairan Paciran, Kabupaten Lamongan Terhadap Bakteri S. aureus (Doctoral dissertation, Universitas Brawijaya).
Strobel,  G.,  Daisy,  B.,  U.  Castillo.,  dan  J.
Harper.  2003.  Bioprospecting  for Microbial  Endophytes  and  Their Natural  Products.  Microbiology  and Molecular  Biology  Reviews.  67(4): 491-502.
Suheri,  F. L., Agus, Z., dan Fitria, I. 2015. Perbandingan  Uji  Resistensi  Bakteri S.  aureus Terhadap  Obat  Antibiotik Ampisilin  dan  Tetrasiklin. Andalas
Dental Journal, 3(1), 25-33.
Sumampouw,  O.  J.  2018.  Uji  Sensitivitas
Antibiotik Terhadap Bakteri Escherichia  coli Penyebab  Diare Balita  di  Kota  Manado. Journal  of Current Pharmaceutical Sciences, 2(1), 104-110. Susanti, O., Yusuf, M. W., dan Elisdiana, Y. 2021. Potensi Bakteri Endofit Lamun Enhalus sp. dengan Aktivitas Antimikrofouling dari Perairan Lampung. Journal of Marine Research, 10(4), 589-594.
Suswati,  I.,  dan  Juniarti,  A.  2011.
Sensitivitas Salmonella typhi Terhadap Kloramfenikol
dan Seftriakson  di  RSUD  Dr.  Soetomo
Surabaya  dan  di  RSUD  Dr.  Saiful Anwar Malang Tahun 2008-2009.
Syakur,  A.  2020.  Jenis-Jenis  Lamun  di
Perairan Ponnori Kecamatan Larompong Selatan Kabupaten Luwu. Jurnal  Biogenerasi, 5(1),  56-
67.
Yuniar,  H.  F.  A.,  Rahmawati,  R.,  dan Rousdy,  D.  W.  2020.  Efektivitas Antimikroba  Buah  Lakum  (Cayratia
Trifolia [L.] Domin) Terhadap
Pertumbuhan  Bakteri Streptococcus sp.(L. 10.3). Jurnal Protobiont, 9 (1).
Zurba,  N.  2018.  Pengenalan  Padang Lamun, Suatu Ekosistem yang
Terlupakan.