## UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA EKSTRAK ETANOL ORGANISME LAUT SPONS Ianthella basta TERHADAP BEBERAPA MIKROBA PATOGEN
Syifa Sari Katili 1) , Defny S. Wewengkang 1) , Henki Rotinsulu 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Sponges are multicellular metazoa animals belonging to the Porifera phylum, which has a different structure from other metazoans. The purpose of this study was to determine whether ethanol extracts from  the  marine  organism  sponge  Ianthella  basta  have  antimicrobial  activity  against  several pathogenic  microbes  Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus,  Pseudomonas  aeruginosa  and Candida albicans. The extraction method used is maceration with 96% ethanol solvent. The method used is the Diffusion Method (Disc Diffusion Kirby and Bauer). The antimicrobial activity test uses a 6  mm  paper  disc  with  50  µL  absorption  per  disc.  The  results  of  crude  ethanol  extract  of  Ianthella basta sponge from all test microbes, namely Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa  and  Candida  albicans,  were  seen  to  provide  the  greatest  inhibitory  activity  against Staphylococcus  aureus  bacteria  with  an  average  of  inhibitory  zone  of  7.00  mm  categorize  as intermediate  The  results  obtained  showed  that  the  crude  extract  of  the  sponge  Ianthella  basta  has antimicrobial  activity  because  it  can  inhibit  the  growth  of  Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli and Candida albicans microbes even though the inhibition zone is categorized as intermediate.
Keywords :  Ianthella  basta,  antimicrobial,  Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli,  Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans.

## ABSTRAK
Spons  adalah  hewan  metazoa  multiseluler  tergolong  ke  dalam  filum  Porifera,  yang  memiliki perbedaan  struktur  dengan  metazoan  lainnya.  Tujuan  penelitian  ini  ialah  untuk  mengetahui  apakah ekstrak  etanol  dari  organisme  laut  spons Ianthella  basta memiliki  aktivitas  antimikroba  terhadap beberapa  mikroba  patogen Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus,  Pseudomonas  aeruginosa dan Candida  albicans. Metode  ekstraksi  yang  digunakan  adalah  maserasi  dengan  pelarut  etanol  96%. Metode yang digunakan yaitu Metode Difusi ( Disc Diffusion Kirby and Bauer ).  Pengujian aktivitas antimikroba ini menggunakan kertas cakram ( paper disc ) berukuran 6 mm dengan daya serap 50 µL tiap  cakram.  Hasil  ekstrak  kasar  etanol  Spons Ianthella  basta dari  semua  mikroba  uji  yaitu Escherichia  coli , Staphylococcus  aureus,  Pseudomonas  aeruginosa dan Candida  albicans, terlihat yang  memberikan  daya  hambat  paling  besar  terdapat  pada  bakteri Staphylococcus  aureus dengan jumlah  rata  –  rata  zona  hambat  yaitu  7,00  mm  dengan  kategori  sedang.  Hasil  penelitian  yang diperoleh  menunjukkan  bahwa  ekstrak  kasar  dari  Spons Ianthella  basta memiliki  aktivitas antimikroba  karena  mampu  menghambat  pertumbuhan  mikroba  uji Staphylococcus  aureus, Escherichia coli dan Candida albicans walaupun dengan zona hambat yang  dikategorikan sedang.
Kata  Kunci : Ianthella  basta ,  antimikroba, Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli,  Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans.

## PENDAHULUAN
Spons adalah hewan metazoa multiseluler  tergolong  ke  dalam  filum Porifera, yang memiliki perbedaan struktur dengan  metazoan  lainnya.  Spons  mencari makan  dengan  menghisap  dan  menyaring air  melalui  seluruh  permukaan  tubuhnya secara  aktif  (Romimohtarto  dan  Juwana 1999). Spons terdiri dari 850 jenis, terbagi menjadi  tiga  kelas  besar,  yaitu  Calcarea, Demospongiae dan Hexactinellida (Thakur dan Müller 2004).
Seperti  spons  pada  umumnya, spons Ianthella basta mempunyai morfologi  dengan  bentuk  tubuh  yang berpori  dan  permukaan  yang  keras  seperti batu.  Selain  itu,  Ianthella  basta  juga  dapat menyerap  oksigen  dari  air  melalui  proses difusi.Secara khusus, individu dari Ianthella  basta ditemukan  dalam  berbagai morfotipe  warna  (kuning,  coklat,  hijau, biru atau ungu) (Webster et al., 2010).
Spons Ianthella basta dapat menghasilkan senyawa khusus yaitu bastadin. Dua  morfotipe  warna  dominan pada Ianthella  basta dicirikan  oleh  profil kimia  dan  mikroba  yang  berbeda  dengan hubungan silsilah yang belum terselesaikan  yang  disimpulkan  pada tingkat molekuler. Morfotipe kuning, yang mengandung  kelas  senyawa  bastadin, didominasi oleh dua strain yang merupakan  anggota  dari  Alpha  dan Gammaproteobacteria.  Morfotipe  ungu yang  mengandung  bastadin  serta  dua araplysillin  juga  didominasi  oleh  Alpha dan  Gammaproteobacteria,  tetapi  galur dominan  pada  spons  ungu  menunjukkan sedikit  variasi  urutan  (1%)  terhadap  galur dominan  pada  spons  kuning.  Selain  itu, morf warna ungu mengandung perwakilan
kecil dari Cyanobacteria, Verrucomicrobia dan Chloroflexi (Marnie et al., 2011).

## METODOLOGI PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  di  laksanakan  pada bulan  April  2019  –  Juni  2019.  Tempat pengambilan sampel dilakukan di perairan Ponteng,  Minahasa  Tenggara  dan  untuk preparasi sampel, pengamatan dilakukan di Laboratorium  Penelitian  Farmasi  Lanjutan (Farmakognosi Fitokimia dan Laboratorium Mikrobiologi Farmasi) Program Studi Farmasi,
Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam, Universitas Sam Ratulangi.

## Bentuk Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian dengan menggunakan metode eksperimental  laboratorium  yang  akan menguji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  kasar dari Spons Ianthella basta.

## Alat dan Bahan
a. Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu scuba  diving ,  sarung tangan, zipper  bag ,  gunting,  kamera, wadah  kaca,  pisau,  Erlenmeyer  (Pyrex), timbangan  analitik,  gelas  ukur  (Pyrex), gelas  kimia  (Pyrex),  cawan  petri,  autoklaf (autoklaf KT-30s), spatula, pinset, pembakar spritus, pipet tetes, mikro tubes , batang  pengaduk, Laminary  air  flow (Clean  Bench) , rak  tabung  reaksi,  tabung reaksi, lemari pendingin, incubator incucell (N – Biotek), cakram ( paper disc) , mikropipet, digital  caliper ,  vial,  oven, jarum ose, vortex dan jas lab.
b. Bahan Bahan yang digunakan yaitu Spons
Ianthella  basta ,  bakteri Escherichia  coli
ATCC  25922,  bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923, bakteri
Pseudomonas  aeruginosa ATCC  25924 dan jamur Candida albicans ATCC 10231, etanol  96%,  aquadest,  Pepton,  Ekstrak Beef, NaCl, Agar, Paper Disc,
Kloramfenikol  Paper  Disc ,  label,  spidol permanen, tissue , aluminium  foil, kertas saring, dan kapas.
Prosedur Penelitian Ekstraksi
Spons Ianthella  basta sebanyak 288  g  diekstrak  dengan  cara  maserasi. Sampel  dibersihkan  dari  bahan  pengotor, dipotong  kecil  –  kecil  dimasukkan  ke dalam  wadah,  kemudian  direndam  dengan pelarut etanol 96%  sampai  sampel terendam  semuanya,  dikocok-  kocok  lalu dibiarkan  selama  1x24  jam.  Sampel  yang sudah direndam kemudian disaring menggunakan  corong  dan  kertas  saring dan  menghasilkan  filtrat  1  dan  debris  1. Debris  1  direndam  kembali  dengan  etanol 96%  sampai  terendam  semuanya,  debris dikocok  –  kocok  dan  dimaserasi  selama 1x24 jam. Diulangi cara yang sama sampai memperoleh  3  filtrat  dan  3  debris. Campurkan  filtrat  1,  2,  dan  3  yang diperoleh  menjadi  satu.  Filtrat  dievaporasi menggunakan  oven dengan  suhu  40 o C hingga  memperoleh  ekstrak  kasar  spons Ianthella  basta dan  timbang  dengan menggunakan  timbangan  analitik.  Ekstrak kasar etanol spons Ianthella basta sebanyak 22,2 g, selanjutnya ekstrak kasar etanol  digunakan  dalam    pengujian  daya hambat antimikroba.

## Sterilisasi dan Pembuatan Media Sterilisasi Alat
Alat-alat  gelas  yang  digunakan dalam  penelitian  aktivitas  antimikroba  ini disterilkan terlebih dahulu dengan
menggunakan  autoklaf  pada  suhu  121  ºC selama  15  menit,  pinset  dibakar  dengan pembakaran  di  atas  api  langsung  dan media  disterilkan  di  autoklaf  pada  suhu 121 ºC selama 15 menit (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Cair BI
Pepton  0,5  g, beef  extract 0,3  g, natrium  klorida  0,3  g  dan  akuades sebanyak  100  ml  diaduk  sampai  homogen kemudian  disterilkan  dalam  autoklaf  pada suhu  121˚C  selama  15  menit  dan  setelah itu didinginkan. Setelah dingin, media cair B1  di  tutup  dengan aluminium  foil (Dwijendra et al , 2014).

## Pembuatan Media Uji
Pepton  0,5  g, beef  extract 0,3  g, natrium  klorida  0,3  g,  agar  1,5  g  dan akuades  sebanyak  100  ml  diaduk  sampai homogen  kemudian  disterilkan  di  autoklaf pada  suhu  121˚C  selama  15  menit (Dwijendra et al ., 2014).

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan uji dibuat dengan cara 1 mg ekstrak  kasar  Spons Ianthella  basta. dilarutkan  dalam  200  μL  metanol  dan dikocok  hingga  homogen  menggunakan vortex. (Ortez, 2005).

## Pembuatan Kontrol  Positif dan Kontrol Negatif
Kontrol  positif  dalam  pengujian aktivitas  antimikroba  ini  menggunakan kloramfenikol paper  disc .  Kontrol  negatif yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu menggunakan  pelarut  metanol,  dengan cara membuat larutan stok metanol dengan mengambil  sebanyak  200  μL  metanol kemudian di totolkan pada paper disc.

## Pengujian Aktivitas Antimikroba
Metode  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  metode  difusi  agar
( disc  diffusion  Kirby  and  Bauer ).  Pada pengujian aktivitas antimikroba ini, cakram  ( paper  disc )  yang  digunakan berukuran 6 mm dengan daya serap 50 μL tiap  cakram.  Sebanyak  300  μL  mikroba yang telah dikultur, dipipet dan diinokulasi pada 30 ml media agar lalu diaduk hingga homogen  dan  kemudian  dituangkan  ke dalam  cawan  petri  dan  tunggu  sampai media  agar  mengeras.  Kemudian,  larutan uji  yang  telah  disiapkan  ditotolkan  pada masing-masing cakram dengan menggunakan  mikropipet.  Setelah  agar mengeras,  kertas  cakram  yang  telah ditotolkan  sampel  Spons Ianthella  basta , kontrol positif dan kontrol negatif diletakkan  ke  dalam  cawan  petri  dengan menggunakan  pinset.  Selanjutnya,  cawan petri  diberi  label  dan  diinkubasi  dalam inkubator  pada  suhu  37 0 C  selama  1  x  24 Jam (Ortez, 2005).

## Pengamatan  dan  Pengukuran  Diameter Zona Hambat
Pengamatan  dilakukan  setelah  24 jam  masa  inkubasi.  Daerah  pada  sekitar cakram  menunjukkan  kepekaan  mikroba terhadap antibiotik atau bahan antimikroba yang  digunakan  sebagai  bahan  uji  yang dinyatakan  dengan  diameter  zona  bening. Diameter zona bening diukur menggunakkan digital  caliper .  Kemudian zona bening yang telah diukur, dikategorikan berdasarkan pedoman Davis dan Stout (1971).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi
Sampel spons Ianthella basta yang dikoleksi  dari  perairan  Ponteng  dipotong kecil-kecil,  kemudian  dimasukkan  ke dalam  wadah.  Dipotong  kecil-kecil  untuk memperluas  ukuran  permukaan  sampel,
semakin  luas  permukaan  sampel  maka lebih  banyak  senyawa  aktif  akan  tertarik dari  sampel  ke  dalam  pelarut  (Kristanti et al .,  2008).  Sampel  spons Ianthella  basta selanjutnya  diekstraksi  dengan  metode maserasi.  Metode  maserasi  digunakan karena  cara  pengerjaannya  yang  mudah dikerjakan dengan menggunakan peralatan yang sederhana, tidak menggunakan pemanasan  dan  dapat  menarik  senyawa  – senyawa aktif dari sampel dengan maksimal.  Perendaman  sampel dalam maserasi  dapat  membuat  dinding  sel  dari sampel  pecah  dan  membuat  senyawa- senyawa  yang  ada  dalam  sampel  yang terdapat  dalam  sitoplasma  akan  tertarik oleh  pelarut.  Dinding  sel  pecah  di karenakan  adanya  perbedaan  konsentrasi di  dalam  dan  di  luar  sel.  Konsentrasi  di luar sel lebih tinggi dibandingkan konsentrasi  di  dalam  sel  yang  rendah sehingga  dinding  sel  pecah  karena  tidak bisa  menahan  tekanan  dari  perbedaan konsentrasi (Harborne, 1996).
Pada  proses  maserasi  dilakukan pengocokan  agar  pelarut  dapat  melarut  ke dalam sampel dan akan  masuk ke rongga- rongga sampel karena dalam keadaan diam selama  maserasi  menyebabkan  turunnya perpindahan bahan aktif. Etanol 96% lebih mudah  masuk  ke  dalam  sel  simplisia sehingga  ekstrak  yang  dihasilkan  lebih kental.  Senyawa  aktif  dalam  sampel  agar tertarik  semua  ke  dalam  pelarut  dilakukan remaserasi  dengan  penggantian  pelarut sebanyak  tiga  kali  dengan  pelarut  etanol. Maserasi  agar  lebih  efisien  dilakukan berulang kali dibandingkan hanya dilakukan  sekali  (Mujipradhana,  2018). Pelarut  yang  digunakan  yaitu  etanol, digunakan  pelarut  etanol  96%  karena didasarkan pada tingkat keamanan, kemudahan  saat  diuapkan,  ekonomis,
mudah bercampur dengan air serta sifatnya yang  mampu  melarutkan  hampir  semua zat,  baik  yang  bersifat  polar,  semipolar, dan nonpolar (Sulastri et al ., 2015).
Hasil ekstrak Spons Ianthella basta selanjutnya  diuapkan  menggunakan  oven dengan  suhu  40 o C,  penguapan  ekstrak  ini dimaksudkan  agar  air  dan  pelarut  yang tersisa  dalam  ekstrak  akan  menguap. Menggunakan  suhu  40 o C  bertujuan  untuk tetap  menjaga  senyawa  bioaktif  dalam filtrat  karena  biasanya  senyawa-senyawa bioaktif  rentan  terhadap  suhu  tinggi (Kowal
et al ., 2018).
Uji Aktivitas Antimikroba Spons

## Ianthella basta
Pengujian  aktivitas  antimikroba
dari  spons Ianthella  basta dilakukan  pada bakteri Escherichia coli dan Pseudomonas aeruginosa mewakili bakteri Gram negatif, bakteri Staphylococcus aureus yang mewakili  bakteri  Gram  positif dan Candida  albicans yang  mewakili  Jamur menggunakan  Metode  difusi  agar  (difusi Kirby-Bauer  yang  telah  dimodifikasi). Masing  –  masing  ekstrak  kasar  diujikan pada  masing  –  masing  bakteri  dan  jamur. Metode difusi digunakan karena
prosedurnya  yang  sederhana,  mudah  dan praktis untuk dikerjakan dan dapat melihat sensitivitas berbagai jenis mikroba terhadap antimikroba (Mpila, 2012).
Penggunaan  mikroba  hal  ini  bertujuan melihat  apakah  ekstrak  spons Ianthella basta memiliki  aktivitas  antimikroba terhadap  mikroba  patogen  pada  tubuh manusia  dan  untuk  mengetahui  spektrum dari  aktivitas  antimikroba  spons Ianthella basta memiliki  spektrum  luas  (membunuh banyak  jenis  mikroba)  atau  spektrum sempit (membunuh salah satu mikroba).
Tabel 2. Hasil rata-rata Aktivitas Antimikroba
Mikroorga nisme Percob aan Ekstr ak Etan ol K+ K- E. coli I 6,50 14, 00 0,0 0 II 6,50 III 6,40 X 6,47 S. aureus I 7,00 18, 05 0,0 0 II 7,00 III 7,00 X 7,00 P. aeruginosa I 0,00 13, 00 0,0 0 II 0,00 III 0,00 X 0,00 C. albicans I 6,40 16, 05 0,0 0 II 6,50 III 6,60 X 6,50
Tabel  1.  Rendemen  ekstrak  kasar  Etanol
Ianthella basta
No. Sampel Randemen (%) Warna Sampel 1.
Ekstral
Etanol 7,70
Coklat
Hasil  yang  diperoleh  dalam  uji
aktivitas
antimikroba dilakukan pengamatan  selama  1x24  jam  masa inkubasi  dengan  3  kali  penggulangan untuk masing – masing mikroba. Aktivitas yang  terbentuk  terlihat  dari  adanya  zona hambat  (zona  bening)  di  sekitaran  cakram dengan ukuran cakram ( paper disc ) 6 mm, membuktikan bahwa ekstrak spons Ianthella basta yang diujikan menunjukkan kepekaan terhadap masing – masing  mikroba  dan  antibiotik  yang digunakan sebagai kontrol positif.
Kontrol  negatif  yang  digunakan yaitu  metanol,  terlihat  dari  hasil  yang  di peroleh metanol tidak menunjukkan adanya  zona  hambat  pada  pengujian  yang dilakukan  pada  masing  –  masing  mikroba uji.  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian  yang dilakukan oleh Wewengkang et al ., (2014) dan  Mujipradhana, (2018) membuktikan bahwa  kontrol  negatif  metanol  yang digunakan  tidak  berpengaruh  pada  uji antimikroba,  sehingga  daya  hambat  yang terbentuk  tidak  dipengaruhi  oleh  pelarut melainkan  karena  aktivitas  senyawa  yang ada dalam Spons Ianthella basta .
Berbalik dengan hasil yang ditunjukkan  dari  kontrol  positif  dari masing  –  masing  mikroba  uji  terlihat kontrol positif menghasilkan aktivitas daya hambat  yang  besar  dibandingkan  dengan kontrol  negatif.  Kontrol  positif  yang digunakan yaitu kloramfenikol.
Menggunakan  kloramfenikol  dikarenakan kloramfenikol merupakan antibiotik berspektrum  luas.  Hasil  yang  diperoleh bahwa pada bakteri Staphylococcus aureus menghasilkan  daya  hambat  yang  besar ditunjukkan  dengan  hasil  yang  diperoleh yaitu  18,05  mm  dibandingkan  dengan bakteri Eschericia  coli,  Pseudomonas aeruginosa dan Candida  albicans. Hal  ini
dikarenakan antibiotik kloramfenikol lebih peka  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus (Gram  positif),  kloramfenikol hanya  membutuhkan  konsentrasi  0,2-5 μg/mL,  sedangkan  pada  kebanyakan bakteri gram positif bakteri dihambat pada konsentrasi 1-10 μg/mL (Katzung, 2004).
Kriteria  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  untuk  menggolongkan  daya hambat  dari  kontrol  uji  dan  bahan  uji Spons Ianthella basta menggunkana kriteria  kekuatan  antibakteri  menurut Davis  dan  Stout  yaitu  dapat  dilihat  pada tabel 3 dibawah ini:

## Tabel  3.  Standar  Kekuatan  Daya
Antimikroba
Diameter Zona
Bening (mm) Kategori >20 Sangat Kuat
10 – 20
Kuat 5 – 10 Sedang
<5 Lemah
Hasil  ekstrak  kasar  etanol  Spons Ianthella  basta  dari  semua  mikroba  uji yaitu  Escherichia  coli, Staphylococcus aureus,  Pseudomonas  aeruginosa dan Candida albicans, terlihat yang memberikan  daya  hambat  yang  paling besar terdapat pada bakteri Staphylococcus aureus dengan  jumlah  rata  –  rata  zona hambat  yaitu  7,00  mm  dengan  kategori sedang.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak dari spons Ianthella basta
memiliki  daya  hambat  yang  lebih  peka pada Staphylococcus  aureus dibandingkan Escherichia
coli,
Pseudomonas aeruginosa dan Candida albicans.
Perbedaan  hasil  aktivitas  dari ekstrak  Spons Ianthella  basta terhadap mikroba uji selain senyawa yang terkandung  dalam  sampel  dan  kepekaan dari  masing  –  masing  Gram  positif  dan Gram negatif juga di pengaruhi oleh faktor lingkungan (habitat) dan lokasi pengambilan  sampel.  Bell  dan  Barnes (2003)  juga  menyatakan  bahwa  substrat tumbuh  spons  dapat  berpengaruh terhadap morfologi  spons,  yang  dengan  demikian juga  akan  mempengaruhi bioaktivitasnya.
Lingkungan  perairan  yang  cenderung subur  (terkontaminasi  limbah organik) juga  sangat  berpengaruh  besar  terhadap produksi  senyawa  bioaktif spons.  Hal  ini disebabkan  lingkungan  yang  subur  dapat menyebabkan  spons dapat  mengurangi jumlah jenis dan kelimpahan simbion yang berasosiasi dengan spons tersebut (Steindler, 2002).

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  yang  diperoleh menunjukkan  bahwa  ekstrak  kasar  dari Spons Ianthella  basta memiliki  aktivitas antimikroba  karena  mampu  menghambat pertumbuhan  mikroba  uji Staphylococcus aureus,  Escherichia  coli dan Candida albicans walaupun dengan  zona  hambat yang  dikategorikan sedang.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  terhadap  Spons Ianthella  basta ke uji aktivitas lainnya agar dapat mengetahui manfaat lain selain aktivitas antimikroba.
DAFTAR PUSTAKA
Bell  JJ,  DKA  Barnes.  2003.  Effects  of disturbance  on  assemblages:  an example  using  Porifera. Biol  Bull 205: 144-159 .
Davis, W. W., T.R. Stout. 1971. Disc plate method  of  microbiological  assay. Journal  of  microbiology . 22 :  659- 665.
Dwijendra,  I.  M.,  D.  S.  Wewengkang.,  F.
Wehantou. 2014. Aktivitas Antibakteri dan Karakterisasi Senyawa Fraksi Spons Lamellodysidea  herbacea yang diperoleh  dari  Teluk  Manado.
Pharmacon . 3(4) : 1-9.
Harborne,  J.  B.  1996. Metode  Fitokimia: Penentuan Cara Modern Menganalisis Tumbahan . Diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata  dan  Iwang  Soediro.
ITB, Bandung.
Katzung.,  Betram  G.  2004. Farmakologi dasar  dan  klinik  edisi  4 .  Alih Bahasa:  staf  dosen  farmakolgi fakultas  kedokteran  unviversitas sriwijaya. EGC, Jakarta : 709-719. Kowal,  A.,  Esther,  A.,  Nickson,  K.,
Kurniati,  K.,  Henky,  M.,  Deiske, H. 2018. Potensi antibakteri karang lunak lobophytum sp. Dari perairan pangalisang pulau bunaken terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus aureus . Jurnal Ilmiah Platax . 6 (2).
Kristanti,  A.  N.,  N.S.  Aminah.,  M. Tanjung.,  B.  Kurniadi.  2008. Buku Ajar Fitokimia . Unair Press, Surabaya.
Marnie  L.  Freckelton.,  Heidi  M.  Luter.,
Nikos Andreakis., Nicole S. Webster.,  Cherie  A.  Motti.  2011.
Qualitative  variation  in  colour morphotypes  of  Ianthella  basta
(Porifera: Verongida). Jurnal Hydrobiologia. Australian Institute of Marine Science. Australia.
Mpila,  D.  A.  2012.  Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun Mayana (Coleus atropurpureus benth)  Terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli dan Pseudomas aeruginosa Secara
Invitro [skripsi].  Program  Studi
Farmasi  FMIPA  Universitas  Sam
Ratulangi, Manado.
Mujipradana,  V.N.,  D.  S.  Wewengkang.,
E. Suryanto. 2018. Aktivitas Antimikroba dari Ekstrak Ascidian
Herdmania  momus pada  Mikroba Patogen Manusia. Pharmacon . 7(3): 338-347.
Ortez, J. H. 2005. Disk Diffusion testing in manual of
antimicrobial
susceptibility  testing.  Marie  B.
Coyle (Coord.  Ed).  American society for Microbiology, America.
Romimohtarto,  K.  dan  Juwana,  S.  1999.
Biologi  Laut.  Ilmu  tentang  Biota
Laut. Pusat Penelitian dan
Pengembangan  Oseanologi-  LIPI.
Jakarta.
Steindler  L,  S  Beer,  M  Ilan.  2002.
Photosymbiosis  in  intertidal  dan subtidal tropical sponges. Sybiosis:
33 : 1-11.
Sulastri,  E.,  Cristadeolia,  O.,Yusriadi.,
2015. Formulasi Mikroemulsi Ekstrak  Bawang  Hutan  dan  Uji Aktivitas  Antioksidan. Jurnal
Pharmascience . 2 (2): 2
Thakur,  N.L.,  Müller  W.E.G.  2004. Biotechnological potential of marine  sponges. Current  Science . 86 (11).
Webster, N. S., M. W. Taylor, F. Behnam,
S.  Lu  ¨cker,  T.  Rattel,  S.  Whalan, M.  Horn  &  M.  Wagner,  2010. Deep sequencing reveals exceptional diversity and modes of transmission  for  bacterial  sponge symbionts. Environmental Microbiology 12: 2070–2082. Wewengkang,  D.,  Deiske.  S.,  Hengki.  R. 2014.  Karakterisasi  dan  bioaktif antibakteri senyawa spons
Haliclona sp.  dari  teluk  manado. Jurnal  LPPM  Bidang  Sains  dan Teknologi . 1 (1).