Jumal Tanah  dan  Lingkungan,  Vol. 5 No.1, April 2003: 29-38
METODE-METODE PENETAPAN BIOMASSA MIKROORGANISME TANAH SECARA LANGSUNG DAN TIDAK LANGSUNG:

## KELEMAHAN DAN KEUNGGULANNYA
Direct and Indirect Methods of Soil Microbial-Biomass Determination: Weakness and Strength

## G.  Djajakirana
Star Pengajar Jurusan Tanah,  Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor, JI.  Meranti,  Kampus IPB  Darmaga,  Bogor  16680

## PENDAHULUAN
Dalam  dua  dasawarsa  terakhir  ini  telah  terjadi peningkatan  minat  para  pakar  ilmu  tanah  dan  lingkungan dalam  menentukan  jumlah  total  mikroorganisme  dalam contoh  tanah.  Minat  tersebut  muncul  karena  para  pakar menyadari  pentingnya  peranan  mikroorganisme  tanah  di dalam  berbagai  proses  biokimia  yang  te'rjadi  di  dalam sistem  tanah,  proses  retensi  dan  pelepasan  hara serta energi dalam  tanah.  Setiap  usaha  untuk  menentukan  aliran  hara dan  energi  dalam  sistem  tanah  harus  mempertimbangkan peranan dari  mikroorganisme tanah,
Menurut  Haris  (1988)  metode  apapun  yang  dipakai untuk  menghitung  jumlah  mikroorganisme,  terdapat  dua aspek  dari  mikroorganisme  yang  tidak  bisa  dicakup  oleh perkiraan jumlahnya.  Salah satu  dari  aspek  tersebut adalah ukuran dari mikroorganisme dan jumlah  jaringan bermetabolisme  yang  mewakilinya. Walaupun  semua organisme  yang  dibicarakan  di  sini  semuanya  termasuk "mikroorganisme",  tetapi  ini  dapat  sangat  menyesatkan karena  pada  kenyataannya  sebuah Amoeba  mempunyai paling  sedikit 1000 kali  lebih  banyak  protoplasma daripada rata-rata  sebuah  bakteri. Membandingkan  antara  fungi dengan  bakteri  sukar dilaksanakan  karena  perbedaan dalam ukuran dan  morfologi.  Aspek yang kedua adalah  penetapan jumlah  mikroorganisme  tidak  menyampaikan  apapun mengenai  aktivitasnya. 8anyak  sekali  mikroorganime tanah  menghasilkan  struktur-struktur dorman  yang spesifik, dan  bahkan  mereka  yang  tidak  mampu  menghasilkan struktur  yang  demikian  seringkali  mampu  dorman  untuk waktu  yang  lama  dengan  cara  mereduksi  aktivitas metabolismenya sampai  tingkat yang minimum yang hanya untuk  mempertahankan  viabilitasnya.  Dua  kenyataan  ini telah  menyadarkan  para  pakar bahwa jika teknik  penetapan jumlah  mikroorganisme  dapat ditingkatkan secara dramatis, metode tersebut hanya  mampu  menunjukkan apa yang ada di  dalam  tanah,  tetapi  sangat sedikit  memberikan  informasi mengenai  apa  yang  terjadi  di  dalam  tanah. Sebagai hasilnya  perhatian  para  pakar  meningkat  pada  pengukuran
total jaringan sel mikroorganisme (biomassa)  dan aktivitasnya.
Jika kita  berbicara mengenai  biomassa mikroorganisme tanah,  maka  apakah  sebenarnya  yang  disebut  biomassa mikroorganisme  tanah  itu? Jenkinson  dan  Ladd  (1981) mendefinisikan  biomassa  mikroorganisme tanah sebagai bagian  hidup  dari  bahan  organik  tanah  di  luar  akar-akar tanaman dan  fauna tanah yang  lebih  besar daripada Amoeba terbesar yang  mempunyai  volume kira-kira 5 x loJ 11m3,
Secara  sederhana  metode-metode  yang  seringkali dipakai untuk menentukan jumlah biomassa mikroorganisme  tanah  dapat  dikelompokkan  menjadi  dua kelompok utama yaitu:
1.  Metode-metode langsung
2.  Metode-metode tidak langsung

## METODE-METODE LANGSUNG
Yang termasuk  dalam  metode-metode  langsung  antara lain:
- Metode-metode yang menggunakan mikroskop. I. Pengamatan  langsung  tanah  tanpa  pewamaan  (keadaan tanah tidak terganggu) menggunakan teknik irisan tipis.
2.  Pewarnaan  tanah  dan  pengamatan  langsung  dengan mikroskop  cahaya  biasa  ataupun  dengan  mikroskop fluoresen.
3.  Metode slide kontak
4.  Metode rasio - usapan
5.  Scanning Electron Microscope (SEM)
6.  Transmission  Electron Microscope (TEM).
Pengukuran dengan metode-metode ini sangat melelahkan, membutuhkan tenaga yang ahli dan berpengalaman,  ban yak  menggunakan  asumsi-asumsi  dan banyak  menghabiskan  waktu. Oleh  karena  itu  metode pengamatan  langsung  memiliki  banyak  kelemahan.  Data yang  diperoleh  dari  hasil  pengukurannya  seringkali  sukar diinterpretasikan. Perbedaan  antara  sel  organisme  yang hidup  dengan  sel  organisme  yang  mati  sulit  untuk  diamati,
Djajakirana. G. 2003.  Metode-metode  penetapan biomassa  mikroorganisme tanah  secara langsung dan  tidak langsung: Kelemllhan
29
dan  keunggulannya.  1.  Tanah  Lingk..  5(/):28-36.
1
1 I j 1 )
I J I I i I
1 I
;

## Metode  penetapan  biomassa mikroorganisme tanah
(G. Djajakirana)
mikroorganisme  yang  memiliki  morfologi  yang  mirip  dapat menyulitkan identifikasi  selanjutnya. Mikroorganisme berfilamen  seperti  fungi  sukar  dihitung,  serta  sukar  untuk mendapatkan contoh  tanah  yang representatif karena contoh tanah  yang  sedikit  sekalipun  dapat  dipergunakan,  dan kadangkala terdapat ketidakpastian bahwa semua mikroorganisme  yang  ada  telah  dihitung  atau  telah  diukur (Frederick.  1965;  Parkinson dan  Paul,  1982).
Di  samping  kelemahan-kelemahan  yang  ada  seperti disebut  di  atas,  tentunya  metode-metode  ini  juga mempunyai  keunggulan-keunggulan.  Beberapa keunggulan dari  metode  mikroskop  antara  lain:  - Semua  sel  dapat dihitung,  morfologi  dapat  dilihat,  dimensi  organisme  dapat diukur  dan  hubungan  spasial  antara sel-sel  mikroorganisme dengan  partikel-partikel  tanah  sebagaimana  mereka  hidup dalam  lingkungan alamnya dapat diamati.
Mikroskop  elektron  memperbaiki  secara  drastis problem  resolusi  yang  mempersulit  pembedaan  antara mikroorganisme  dengan  bahan-bahan inert tanah  yang muncul  pada  mikroskop  cahaya  biasa,  tetapi  di  lain  fihak juga  memunculkan  problem  baru. Resolusi  yang  tinggi pada  TEM  menyebabkan  lapangan  pengamatan  menjadi sangat  sempit,  memerlukan  persiapan  contoh  yang  rumit dan adanya gangguan dari  partikel tanah akibat pemotongan oleh mikrotom. Penggunaan  SEM  nampaknya  menjanjikan dalam  hal  resolusi,  terletak  antara  mikroskop  cahaya dengan TEM, dan  kemampuannya untuk  menampilkan citra secara  tiga  dimensi  untuk  pengamatan  mikrohabitat,  tetapi penggunaannya  untuk  pengamatan  dalam  sistem'  tanah masih san gat jarang (Schmidt dan  Paul,  ] 982).
Teknik  pewarnaan  yang  baru,  terutama  dalam  bidang mikroskop  fluoresensi  dan  juga  kemungkinan  penggunaan anal isis  citra  dengan  bantuan  komputer  memberikan harapan  baru bagi  metode  mikroskop di  masa mendatang.

## METODE-METODE TIDAK LANGSUNG

## Metode Pengkulturan
Metode  pengkulturan (Cultural  Methods; juga dikenal  sebagai  tehnik  penghitungan  hidup  atau Viable Count  Technique). Beberapa  metode  pengkulturan  antara lain adalah:
1.  Metode cawan tuang (Plate Culture Method)
2.  Metode kultur pilihan (Elective Culture Method)
3.  Metode "Most Probable Number" (MPN).
4.  Metode  Pengkayaan Tanah (Soil Enrichment Method)
Dalam  metode  pengkulturan,  partikel  tanah  atau larutan  tanah  encer yang  sesuai ditaruh  di  atas atau di dalam media  padatan  atau  media  cairan  yang  cocok  untuk pertumbuhan dari  organisme  yang diteliti.  Organisme yang diinokulasikan dalam  media,  dalam  proses pertumbuhannya akan  menghasilkan  berbagai  para-meter  yang  bisa  diamati
secara  makrosopis  atau  parameter  lain  yang  dapat  diukur. Parameter-parameter yang bisa diamati antara lain:
•  Media menjadi  keruh
•  Pigmentasi yang jelas
•  Produksi gas
•  Perubahan  media, atau
•  Pembentukan koloni (materi sel).
Sebagai tambahan atau alternatif  pemeriksaan mikroskopis  langsung  ataupun  pemeriksaan  makroskopis dapat dilakukan pada  metode pengkulturan  untuk menentukan  kehidupan dalam tanah.
Metode  kultur  pilihan (Elective  Culture  Method) menggunakan media nutrisi khusus yang telah diadaptasikan untuk pertumbuhan mikroorganisme kelompok  tertentu,  oleh  karena  itu  metode  ini juga disebut "metode kultur selektif'. Metode  ini  agak tidak praktis dan susah  untuk dipakai  karena menyangkut persiapan sejumlah besar  media  untuk  perkembangan  dari  berbagai  kelompok fisiologis  dari  mikroorganisme,  dan  memerlukan banyak wadah  untuk  berbagai  pengenceran.
Metode  MPN  atau  metode  pengenceran  sampai  tak terukur (dilution  to  extinction  method) digunakan  juga untuk  menetapkan  mikroorganisme  tanah  dari  kelompok khusus  seperti:  bakteri  nitrifikasi,  algae  atau  protozoa. Masalah-masalah mengenai dispersi dan separasi  masih ada dalam  metode  ini  dan  ulangan  yang  cukup banyak dibutuhkan  untuk  memperoleh  hasil  yang  nilainya  dapat diandalkan (Harris,  1988).
Metode  Pengkayaan  Tanah  lebih  banyak  menentukan aktivitas  dari  populasi  mikroorganisme  tanah  daripada menetapkan  secara kuantitatif jumlah total  mikroorganisme tanah  itu  sendiri (Waksman,  1952).
Metode-metode penghitungan populasi mikroorganisme tanah berdasarkan metode-metode pengkuIturan  juga  mempunyai  beberapa  titik  kelemahan yaitu:
•  Mempunyai  masalah  yang  berhubungan  dengan dispersi dan separasi antara sel-sel mikroorganisme dengan butiran fraksi-fraksi tanah
•  Mengabaikan  interaksi  di  antara  mikroorganisme bilamana  mereka  tumbuh  pada  medium  yang cocok
•  Antibiotika yang dihasilkan oleh berbagai kelompok  mikroorganisme  tanah  mempunyai  efek besar  terhadap  organisme  lain,  dan  berbagai antagonisme ada di  antara mikroorganisme tanah
•  Banyak  mikroorganisme  tanah  tidak  tumbuh  pada media  yang  digunakan  pada metode pengkulturan, biasanya  yang  mudah  sekali  tumbuh  pada  media nutrisi  buatan  yang  digunakan  dalam  metode pengkulturan adalah  bakteria aerobik-heterotropik, ragi  tertentu, kapang dan aktinomisetes
•  Mikroorganisme  yang  tumbuh  pada  media  nutrisi kaya yang  biasa dipakai  pad a metode pengkulturan
dapat  berbeda  ukurannya  dari  mikroorganisme tanah  induknya,  sehingga  membuat tidak  mungkin menggunakan  turunan  pengukuran  biovolume  dari mikroorganisme  yang  dilihat  dari  kultur  untuk diterapkan  pada  mikroorganisme  tanah  induknya di  dalam tanah.
Oisebabkan  oleh  selektivitasnya  yang  tinggi  dan kurangnya  kapasitas  eakupan  pad a  mikroorganisme  yang dorman,  maka  metode  pengkulturan  biasanya  menilai populasi  mikroorganisme  tanah jauh  lebih  rendah  daripada kenyataan  sesungguhnya  yang  ada  di  dalam  tanah  (Atlas, 1982).  Banyak  sekali  sel-sel  mikroorganisme  tanah  gagal membentuk  koloni-koloni  pada  kondisi  yang  disediakan, sehingga  estimasi  populasi  mikroorganisme  berdasarkan tehnik pengkulturan biasanya sepersepuluh hingga seperseratus  atau  kadang-kadang  seperseribu  lebih  keeil hasilnya  daripada  hasil  yang  didapat  dari  pengamatan langsung  dengan  menggunakan  mikroskop  (Parkinson et aI., 1971; Harris,  1988).
Untuk menyatakan hasil-hasil dari pengamatan langsung dengan  tehnik  mikroskop dan tehnik pengkulturan dalam  bentuk biomassa mikroorganisme tanah (bobot hidup ataupun  bobot  kering)  maka  hasil-hasil. tersebut  perlu dikonversikan.  Konversi  tersebut  dilakukan  dengan  eara mengkombinasikan hasil penghitungan jumlah mikroorganisme  tanah  dengan  ukuran  dari  mikroorganisme yang  bersangkutan  dan  perhitungan  berdasarkan  kerapatan jenis (density) dan  asumsi  komposisi  mikroorganisme tersebut  (van  Veen  dan  Paul,  1979;  Bakken  dan  Olsen, 1983). Stevenson  (1986)  menyarankan  persamaan  di bawah  ini  untuk  menghitung  biomassa  mikroorganisme tanah.
Biomassa = Jumlah sel x Volume sel  x kerapatan jenis sel
Faegri et  al.(1977) menyarankan  untuk  menggunakan kerapatan  jenis  mikroorganisme  tanah  sebesar  1.3  g  em- 3 , tetapi  van  Veen  dan  Paul  (1979) menemukan  bahwa bakteri yang  diisolasi  dari  tanah  dan  dibiakkan  pada  kondisi kelembaban yang setara dengan  kelembaban di  dalam  tanah dapat  memiliki  kerapatan  jenis  yang  lebih  besar. Oleh karena itu Stevenson (1986) menyarankan untuk menggunakan  kerapatan jenis sel-sel  mikroorganisme tanah setara  dengan  1.5  g  em- 3 • Jenkinson  dan  Ladd  (1981) menyarankan  untuk  menggunakan  faktor  koreksi  berat basah  ke  berat  kering  sebesar  25%.  Schmidt  dan  Paul (1982)  merekomendasikan  untuk  menggunakan  faktor konversi  biovolume  ke  biomass  sebesar 0.32.  Jika  faktor- faktor  tersebut  dipergunakan  ternyata  hasilnya  sesuai dengan  hasil  penemuan  van  Veen  dan  Paul  (1979)  untuk fungi.
Metode-metode Fisiologis
Yang  dimaksud  dengan  metode  fisiologis  adalah metode-metode  yang  mengukur  aktivitas  metabolisme organisme  sebagai  parameter  yang  dapat  diamati  atau ditetapkan.  Gas  CO 2 yang  dihasilkan  atau gas O 2 yang dikonsumsi  merupakan  parameter  umum  yang  biasanya dipakai  sebagai  indikator  aktivitas  metabolisme_  Yang termasuk dalam  kelompok metode-metode ini adalah:
1. Metode  Respirasi  Rangsangan-Substrat (Substrate- Induced Respiration: SIR Method)
2.  Metode  Simulasi  Respirasi  (Respiration  Simulation: RS  Method)
Metode  respirasi  rangsangan-substrat  (substrate- induced  respiration: SIR method)
Anderson  dan  Oomseh  (1973;  1975)  menunjukkan bahwa  tanah-tanah  berbeda  dalam  tanggapannya  terhadap respirasi  awal  bila tanah-tanah  terse but mendapat tambahan glukosa dengan  konsentrasi  yang optimal (konsentrasi  yang optimal  ini  didapatkan  pada  uji  pendahuluan  untuk  tiap tanah  yang  digunakan). Mereka  menyimpulkan  bahwa tanggapan  pada  respirasi  awal  (dieatat  sebelum  terdapat pertumbuhan  dari  mikroorganisme  tanah  yang ada akibat penambahan  glukosa)  dapat  dipandang  sebagai  indeks  dari total  biomassa  mikroorganisme  tanah  yang ada  mula-mula. Walaupun  tidak  ada  nilai  biomassa  mutlak  dapat  dihitung pada  pengukuran  seperti  itu,  tetapi  pengukuran  ini  dapat dipergunakan sebagai nilai  perbandingan.
Anderson  dan  Domseh (1978~ mengembangkan metode  yang  eepat  untuk  tujuan  penetapan jumlah  karbon di  dalam  biomassa  mikroorganisme  tanah  yang  aktif. Metode  ini  didasarkan  pada  tanggapan  respirasi  awal  dari populasi  mikroorganisme  terhadap  penambahan  sumber karbon dan sumber energi yang berlebihan dikuantifikasikan  menggunakan  versi  yang  diperluas  dari tehnik  yang  dikembangkan  oleh  Jenkinson. Perhitungan rata-rata  substrat  yang  menghasilkan  flux  CO 2 dilakukan pada  suhu  22°C,  sedangkan  penghitungan  biomassa  C (karbon)  mikroorganisme  di  dalam  tanah  menggunakan rumus:
x = 40.04 Y + 0.37
Oi  mana: X biomassa  mikroorganisme  (mg  C  per  satuan berat kering tanah)
y keeepatan  respirasi  awal  maksimum  (mililiter CO 2 per satuan  berat kering taoab per jam).
Parkinson  dan  Paul  (1982)  menyarankan  beberapa pokok  tehnis  utama  yang  berhubungan  dengan  metode  ini yang  harus  dipertimbangkan  yang  antara  lain  adalah sebagai  berikut:
1. Perhitungan  yang  seksama  hntuk  menetapkan konsentrasi  glukosa  yang  akan  ditambahkan  ke dalam tanah sangatlah penting.

## Metode penetapan bionzassa  nzikroorganisme tanalz (G. Djajakirana)
2. Pengukuran  dari  flux  CO 2 yang  dihasilkan  akibat metabolisme  mikroorganisme  harus  dilakukan sebelum  terjadi perubahan besarnya  jumlah biomassa mikroorganisme tanah.
3. Hubungan  kuantitatifyang diberikan  di  atas  antara kecepatan  flux  CO 2 yang  dihasilkan  dengan biomassa  C  mikroorganisme  hanya  berlaku  jika pengukuran  dilakukan  pada suhu 22°C.  Jika suhu lain  di  luar  22  °C  dipergunakan,  maka  hubungan di atas harus dimodifikasikan.
Anderson dan Domsch  (1978 b ) juga  membuat penelitian  korelasi  antara  metode  mereka d~ngan metode inkubasi fumigasi-chloroform (Chloroform-Fumigation Incubation:  CFt  Method)  yang  dikembangkan  oleh Jenkinson  dan  Powlson  (1976)  dengan  menggunakan  50 contoh  tanah  dari  12  jenis tanah,  dan  mereka  mendapatkan bahwa  kedua  metode  itu  berkorelasi  sangat  nyata  satu dengan  lainnya  (r = 0.96).  Mereka  menyimpulkan  bahwa pad a  suhu  22°C,  kecepatan maksimum respirasi rangsangan-substrat  dari  satu  ml  CO 2 per  jam  dapat disamakan dengan kira-kira 40 mg biomassa C mikroorganisme.
Martens  (l987) jl:lga  menemukan  korelasi  yang  erat  (r = 0.98)  di  antara  biomassa  yang  diukur  dengan  kedua metode  tersebut (SIR  dengan  CFl),  sebaliknya  Sparling (1981)  tidak  menemukan  adanya  korelasi  di  antara  kedua metode  tersebut.  Alasan  untuk  hasil  yang  bertentangan  ini belum  diketahui,  walaupun demikian  ada  kemungkihan  hal tersebut  disebabkan  oleh  beberapa  contoh  tanah  yang dipergunakan  oleh  Sparling  mengandung  bahan  organik tinggi  dan  bereaksi  masam,  yang  telah  diketahui  bahwa tanah-tanah  seperti  itu  untuk  metode CFt  menghasilkan hasil  yang  kurang  dapat  diandalkan. Martens  (l987)
menambahkan bahwa Sparing membiarkan CO 2 terakumulasi  selama  inkubasi,  suatu  tehnik  yang  dapat menyebabkan  hasil  yang  lebih  rendah  untuk  beberapa jenis tanah.
Sebagai  prasyarat  penggunaan  dari  tanggapan  awal maksimum  untuk  pengukuran  biomassa,  dua  kondisi  harus dipenuhi  yaitu:
I.  sebuah  substrat  harus  dipilih  yang  dapat  tersedia bagi  mayoritas mikroorganisme tanah.
2.  sebuah konstanta harus diturunkan yang memungkinkan  konversi  pengukuran  metabolisme relatif ke dalam  biomassa mikroorganisme.
Substrat yang  paling sering dipergunakan  pada metode respirasi rangsangan-substrat (SIR) adalah glukosa, walaupun  tidak  semua  biomassa  mikroorganisme  tanah memberikan  tanggapan  terhadap  penambahan  glukosa  di bawah  kondisi  pengukuran  dengan  metode SIR.  Smith  et at.  (1986)  menemukan  bahwa  lebih  banyak CO 2 dilepaskan dari  glukosa  yang  ditambahkan  kaldu  nutrisi  daripada hanya  glukosa  saja  dan  mereka  menunjukkan  bahwa  CO 2 tambahan  itu  bukan  berasal  dari  glukosa.  Diduga  substrat
yang  ada  dalam  kaldu  dimetabolisme  oleh  sebagian mikroorganisme yang tidak memberikan  tanggapan terhadap  pemberian  glukosa.  Sebuah  asumsi  yang  secara implisit  ada dalam  metode SIR  untuk  pengukuran biomassa C  mikroorganisme tanah  adalah  sebuah fraksi yang konstan dari  mikroorganisme  tanah  memberikan  tanggapan  yang sarna  terhadap  pemberian  glukosa  pada  berbagai  macam tanah,  tetapi  Anderson  dan  Domsch (1978~ menemukan bahwa  pola  dari  tanggapan  populasi  mikroorganisme tanah terhadap  pemberian  glukosa  berbeda-beda  di  antara berbagai  macam tanah.
Pengukuran dengan  metode SIR dapat dilakukan secara otomatis.  Brook dan Paul (1987) membuat sistem sampling yang otomatis penuh dikombinasikan  dengan  Gas Chromatograti  dan  komputer  pengontrol  dapat  mengukur respirasi  tanah  secara  berkesinambungan (continuous, I sampai  36  contoh). Heinemeyer et  at.  (1989)  juga membuat  alat  yang  serupa  untuk  mengukur  respirasi  tanah dan biomassa mikroorganisme tanah secara berkesinambungan  berdasarkan  analisis  gas  dengan  infra merah  dengan  alat  pengontrol  yang dikendalikan komputer yang  memungkinkan  pengukuran  setiap jam  sekali  sampai 24  contoh  tanah jika  interval  pengukuran  disetel  setiap  2.5 men it.  Dengan alat mereka ini,  mereka mengukur biomassa mikroorganisme  empat  macam  tanah  dan  kemudian membandingkan hasilnya  dengan metode  CFI,  dan mendapatkan  bahwa  hasil  kedua  metode  sangat  mirip (r=0.92).
Kaiser et  at.  (1992)  dengan  menggunakan  alat  dari Heinemeyer et  at.  (l989)  mengukur  27  macam  contoh tanah  mendapatkan  hasil  biomassa  mikroorganisme  tanah lebih  besar  daripada  yang  didapat  dengan  metode CFI. Walaupun  demikian  hasil  kedua  metode  tersebut  masih memiliki  index  korelasi  yang  tinggi,  sehingga  mereka menyarankan  menggunakan  nilai  konstanta = 30  daripada 40.04.  Sparling et  al.  (1990)  berdasarkan  pelepasan  14C dari  mikroorganisme tanah yang dilabel in situ dengan  14C_ glukosa,  menggunakan  nilai  konstanta = 50  lUltuk menghitung  biomassa  C  mikroorganisme tanah dengan metode SIR.  Sebuah  ciri  penting  dari  sistem  pengukuran otomatis  adalah  pengaliran  gas  secara  berkesinambungan dari  contoh  yang  dianalisis.  Sebagaimana telah  dijelmkan oleh  Martens  (1987),  estimasi  biomassa C  mikroorganisme tanah  mungkin  tergantung  pada  tipe  aerasi  contoh.  Dia menemukan bahwa pengaliran gas yang tidak berkesinambungan  seperti  pada  metode SIR yang asli (Anderson  dan  Domsch,  1978 b ), menyebabkan  basil  yang lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  sistem  otomatis  dan metode CFt.  Hal  ini  antara lain  disebabkan oleh akumulasi gas  CO 2 pada  fase  cairan  selama  masa  inkubasi,  terutama terjadi pada tanah-tanah netral  dan alkalin.
Pengukuran  dengan  metode  respirasi  rangsangan- substrat (SIR)  harus  dikalibrasikan  terhadap  metode  lain seperti  metode  inkubasi  fumigasi-chloroform (CFl), kandungan  A TP  atau  dengan  pengamatan  langsung dengan mikroskop,  jika  metode  ini  akan  dipakai  untuk  mengukur
Jumal Tanah  dan  Lingkungan,  Vol.  5 No. 1, April 2003: 29-38
biomassa  mikroorganisme  tanah.  Lebih  banyak  pekerjaan diperlukan  pada  uji  kalibrasi,  terutama jika melihat  ketidak sesuaian  hasil-hasil  yang  didapat  di  antara  para  peneliti yang  menggunakan  metode  ini  (Sparling  et  a/., 1986; Martens, 1987).
Metode  simulasi  respirasi (respiration  simulation:  RS

## method)
Van  der  Werf  dan  Verstraete (1987") mengajukan sebuah  metode  baru  untuk  mengestimasi  komponen  yang aktif  dari  biomassa  mikroorganisme  tanah. Metode  ini berdasarkan  pada anal isis  kinetika  respirasi  dari  tanah  yang ditambahkan  dengan  sumber  karbon  yang  segera  dapat terdekomposisikan.  Parameter biokinetika yang  merupakan ciri-ciri  biomassa  mikroorganisme  tanah  diestimasi  dari kurva  respirasi  dengan  menggunakan  simulasi  matematika. Model  matematika  akan  dihitung  berdasarkan  parameter biokinetika sebagai berikut:
• Kecepatan pertumbuhan khas  maksimum
• Afinitas substrat
• Koeffisien hasil  pertumbuhan biomassa
• Koeffisien  pemeliharaan biomassa
Van  der  Werf  dan  Verstraete (l987 b ) menggunakan model  simulasi  ini  pada  berbagai jenis tanah  dan  kemudian membuat  korelasi  antara  konsumsi  O 2 atau  produksi  CO 2 selama  10  jam  dengan  biomassa  mikroorganisme  tanah yang  aktif.  Oengan  cara  ini,  prosedur  untuk  menetapkan biomassa mikroorganisme tanah yang aktif  dapat disederhanakan  dengan  hanya  mengukur  konsumsi  oksigen total  atau  produksi  CO 2 selama  10  jam,  dan  mereka menemukan  hubungan  antara  konsumsi O 2 atau  produksi CO 2 selama  10 jam dengan  biomassa mikroorganisme tanah yang aktif melalui  persamaan:
Xo = 0.788 Y0 2,  10
Oi  mana:
Xo
= biomassa  aktif  mikroorganisme  (mg  berat kering biomassa per kg tanah  basah).
Y0 2• 10 = konsumsi  rata-rata O 2 selama  10  jam inkubasi  (mg O 2 kg· 1 tanah  basah  per lO jam).
Persamaan  ini  didasarkan  pad a data  konsumsi  O 2 yang bervariasi  antara  3.5  - 350  mg  O 2 per  kg  berat tanah  basah per  10  jam.  Persamaan  dalam  bentuk  ini  hanya  berlaku untuk  suhu  inkubasi  pada  20  °C,  dan  hubungan  antara produksi CO 2 dengan  biomassa mikroorganisme tanah  yang aktif dinyatakan  melalui  persamaan:
Xo = 0.283  YC0 2 ,  10
Oi  mana:
YC0 2• 10
biomassa  aktif  mikroorganisme  (mg berat  kering  biomassa  per  kg  tanah basah).
produksi  rata-rata C~ selama  10  jam inkubasi  (mg  CO 2 kg-I  tanah  basah per 10 jam).
Oari  hasil-hasil  penelitian  mereka,  van  der  Werf dan Verstraete (1987 b ) menyimpulkan  babwa  komunitas mikroorganisme  tanah  nampaknya  sangat  bervariasi  dalam hubungannya  dengan:  afinitas  terhadap substrat,  koeffisien pemeliharaan,  dan  terutama  jumlah  dari  komponen biomassa  yang  aktif. Pad a  lahan  pertanian  jumlah komponen  biomassa yang aktif rata-rata dapat mencapai  50 % dari  total  biomassa  mikroorganisme. Pada  ladang gandum,  biomassa  aktif  (bukan  biomassa  total)  sangat nyata dipengaruhi  oleh  pertumbuhan dari tanaman gandum. Oari  tanah-tanah  yang  mereka  amati, ternyata komposisi biomassa  aktif bervariasi  antara 4 hingga 49  % dari  total biomassa mikroorganisme tanah.
Van  der  Werf  dan  Verstraete (1987") menganalisis kurva-kurva  respirasi  dari  berbagai  cootoh  tanah  yang diberi perlakuan fumigasi dan rekolonisasi, dan mendapatkan bahwa komunitas mikroorganisme tanah telah mengalami pergeseran kepada kecepatan pertumbuhan yang lebih  tinggi  dan  afinitas  terhadap  substrat  yang  lebih rendah.  Mereka  menyarankan  hubungan stokiometri  untuk tanah-tanah  yang  telah  difumigasi  dan  direinokulasi  untuk menghubungkan  konsumsi O 2 dengan  biomassa  total mikroorganisme.  Mereka  juga  memverifikasi  konsep  di belakang  tehnik fumigasi-inkubasi untuk  mengukur biomassa  total  mikroorganisme  dalam sebuah cara  yang bebas  dalam  artian  menggunakan  model  matematika secara penuh,  dan  mereka  menemukan  bahwa ada korelasi  yang sangat  baik  antara  biomassa  total  mikroorganisme  yang ditetapkan  dengan  metode  CFI  dengan  yang  dihitung berdasarkan  analisis  matematika  dari  kurva  respirasi. Sebuah  versi  modifikasi  dari  metode  simulasi  telah diajukan  untuk  mengestimasi  baik  biomassa  aktif maupun biomassa  total  mikroorganisme  dengan tes respirasi  secara paralel.
Alef (1991) menelaah  metode-metode  fisiologis  dan dia  menyatakan  bahwa  perubahan  dalam  parameter- parameter  fisiologis  tidak  harus  diikuti  oleh  perubahan dalam biomassa mikroorganisme,  oleh  karena itu penggunaan  parameter  seperti  itu  untuk  mengukur biomassa  mikroorganisme  di  dalam  tanab  hanya  berlaku untuk  kondisi-kondisi  tertentu  saja. Dengan  penetapan biomassa  mikroorganisme  tanah,  mikroorganisme  tanah akan  dipandang  sebagai  sebuah  kesatuan,  walaupun  dalam kenyataannya  berbagai  kelompok  mikroorganisme  yang berbeda baik dalam hal sifat  fisiologis maupun morfologisnya  berhubungan  satu  dengan  lainnya  dan mereka terjerap kuat pada mineralliat, hidup dalam tanah.
Metode-metode  Fumigasi

## Metode  penetapan biomassa mikroorganisme tanah (G. Djajakirana)
Metode-metode ini umumnya mempergunakan chloroform  untuk  memfumigasi  contoh  tanah. Yang termasuk dalam  metode  ini  antara lain adalah:
I. Metode  Inkubasi  Fumigasi-Chloroform (Chloroform Fumigation  Incubation:  CF/ Method)
2. Metode  Ekstraksi  Fumigasi-Chloroform (Chloroform Fumigation Extraction:  CFE Method)
Metode  inkubasi  fumigasi  - chloroform (chloroform fumigation incubation: eF/ method)
Penggunaan  bahan  kimia  sebagai  fumigan  untuk mengontrol  patogen  tanaman  yang  berasal  dari  tanah  telah secara drastis  mengubah  metabolisme tanah.  Fenomena  ini telah  lama  diketahui  sejak  awal  abad  ini.  Banyak  tulisan ilmiah  mengenai  hal  ini  telah  dipublikasikan  (Darbyshire dan  Russell,  1907;  Russell  dan  Hutchinson,  1909; dalam Waksman  dan  Starkey,  1923 3 • b ) dan  secara  tetap  tentu masih  dilaporkan  hingga kini.
Jika  tanah  difumigasi,  kecepatan  respirasi  tanah tersebut  segera  setelah  fumigan  dibuang  akan  lebih  kecil daripada  tanah  yang  tidak  difumigasi. Beberapa  waktu kemudian,  kecepatan  respirasi  tanah  yang  difumigasi tersebut  akan  meningkat  dengan  pesat  mencapai  nilai melebihi  nilai  respirasi  tanah  yang  tidak  difumigasi  dan kemudian  menurun  lagi.  Dengan  demikian  untuk  waktu yang singkat tanah yang difumigasi  mengkonsumsi O 2 lebih banyak  daripada  tanah  yang  tidak  difumigasi  atau.dengan kata  lain  terdapat evolusi  CO 2 yang  melebihi  normal  secara sementara  pada  tanah  yang  sebelumnya  mengalami fumigasi  [banjiran (flush) CO 2 akibat  dekomposisi]. Jenkinson (i 966)  menyimpulkan  bahwa  banjiran  CO 2 akibat  dekomposisi  dalam  jumlah  besar  adalah  hasil  dari dekomposisi  sel-sel  mikroorganisme  yang  terbunuh  oIeh fumigasi.  Dia  menyarankan  bahwa  banjiran  CO 2 akibat dekomposisi  ini  dapat  dipergunakan  sebagai  sebuah perk iraan  untuk  mengukur  biomassa  mikroorganisme  tanah dengan  menggunakan  hubungan persamaan sebagai  berikut:
Oi  mana:
Be Fe Be = Fe/ke biomassa karbon tanah.
COrC  yang  dievolusikan  oleh  tanah  yang difumigasi
dikurangi COrC yang dievolusikan  oleh  tanah  yang  tidak  difumigasi yang  diinkubasi  pada  waktu  dan  kondisi  yang sarna.
ke : fraksi  dari  biomassa  C yang dimineralisasikan m.enjadi  CO 2 selama  inkubasi  setelah  tanah difumigasi.
Dua  kondisi  utama  merupakan  hal  yang  sangat penting untuk  ketepatan  metode  ini.  Pertama,  fraksi k, yang  dapat diturunkan  dari  percobaan  dengan  cara  menentukan persentase  karbon  mikroorganisme  yang  telah  diketahui jumlahnya  yang  dimineralisasikan  di  dalam  tanah  yang telah  difumigasi,  harus  kira-kira  sarna  dengan  nilai  sebuah
konstanta. Kedua,  uap  chloroform  (CHCl l ) yang dipergunakan  untuk  membunuh  mikroorganisme  harus tidak  mengubah  susunan  residu  karbon  yang  berhubungan dengan  sel-sd yang  mati,  seperti  misalnya membuat  residu tersebut menjadi  lebih  mudah termineralisasikan.
Sejumlah  asumsi  pokok  menjadi  dasar dan metode  ini. Asumsi-asumsi  yang  menjadi  dasar  metode  fumigasi- inkubasi  diringkas  oleh  Jenkison  dan  Ladd  (1981)  sebagai berikut:
I.
2.
3.
4.
5.
Karbon  dalam  mikroorganisme  yang  telah  mati lebih  cepat  termineralisasikan  daripada  yang  ada di  dalam  organisme yang hid up.
Semua  mikroorganisme  terbunuh  selama  proses fumigasi.
Kematian  dari  mikroorganisme  pada  tanah  yang tidak difumigasi (kontrol) dapat diabaikan dibandingkan pada tanah yang difumigasi. Satu-satunya efek dari fumigasi hanyalah membunuh biomassa mikro-organisme.
Fraksi  dari biomassa  C  yang  mati  yang termineralisasikan  untuk  waktu  yang  ditetapkan adalah sarna untuk semuajenis tanah.
Tentll,  tidak  semlla  peneliti  setllju  dengan  asumsi- asumsl  Inl. Shields et 01. (1974) menyatakan bahwa fumigasi  dengan  chloroform,  walau  memang  membunuh mikroorganisme,  tetapi  juga  mengubah  senyawa  metabolik tertentu  diluar  sel (extra  cellular) mikroorganisme  dan senyawa  C-organik  pada  sistem  non-kehidupan  sehingga senyawa-senyawa tersebut menjadi lebih mudah terdekomposisi. Powlson dan Jenkinson (1976) menemukan  bahwa  pada  penambahan  glukosa yang  sarna, banjiran  CO 2 yang  ditandai  dengan  14C  akibat dekomposisi karena  fumigasi  pada tanah  masam  hanya separuh daripada yang  terdapat  di  tanah  netral,  sehingga  Icbih  sedikit  bahan organik  yang  telah  ditandai  yang  dapat  dianggap menyumbang  dekomposisi  oleh  fumigasi  pada  tanah masam. Menurut  mereka,  ada  dua  kemungkinan  yang dapat  dijadikan  alasan  mengapa  tanah  masam  memberikan hasil  banjiran  CO 2 yang  lebih  rendah  bila tanih difumigasi, yaitu  pertama,  fumigasi  tidak  melepaskan banyak substrat yang mudah  terdekomposisi  dan  kedua, proses dekomposisi dari substrat yang dilepas oleh fumigasi terhambat di  bawah keadaan  masam.
Hasil  penelitian  Shield et 01. (1974),  menunjukkan bahwa  jumlah  fungi,  bakteri  dan  aktinomisetes  yang mampu  membentuk  koloni  pada  metode  cawan  tuang menurun  90  hingga  100%  akibat  fumigasi  dengan chloroform  (juga  hasil  penelitian  Lynch  dan  Panting,  1980; dan  McGill et 01., 1986). Persamaan  Be = Fe/Icc  menunjukkan,  bahwa  nilai  Icc yang  dipergunakan  di  sini  memiliki  nilai  yang  sangat' penting.  Jenkinson  (1976)  menghitung Icc = 0.50 ± 0.08 pada suhu 25°C, sedangkan Anderson dan Domsch (1978 3 ) menghitung  nilai  rata-rata  tertimbang Icc sebesar 0.41  pada suhu  22°C.  Voroney  dan  Paul  (1984) juga  menemukan
Jurnal  Tanah  dan  Lingkungan,  Vol.  5 No.  I, April 2003: 29-38
nilai in situ kc sebesar 0.4) pada suhu 2) DC.  Nicolardot et al.  (1986) menemukan  nilai kc antara 0.38 hingga 0.43 untuk Aspergillus flavus yang ditumbuhkan in  vitro dengan 14C-glukosa  dan (I~H4)2S04 dan  ditumbuhkan  pad a  tiga jenis tanah.  Jenkinson  dan  Ladd (1981) menyarankan  nilai untuk kc = 0.45 pada 25 DC  cocok  dengan  data  yang  telah dipublikasikan. Telah  banyak  diperdebatkan  bahwa penggunaan  nilai kc yang  berlaku  untuk  semua jenis  tanah dapat  menuntun  kepada  kesalahan,  tetapi  penelitian Anderson dan  Domsch (1978 8 ) menunjukkan  bahwa nilai kc baik  untuk  bakteri  maupun  fungi  tidak  menyebar jauh  satu dengan  yang  lain.  Jika  terdapat  kesamaan  pola  distribusi dari  berbagai  tipe  mikroorganisme  di  dalam  tanah  di  antara berbagai  jenis  tanah  yang  berbeda,  maka  sebuah  nilai kc sangatlah berguna. Parkinson dan Paul (1982) menyarankan,  bila  tanah  sangat  masam  dipelajari,  maka nilai kc lebih  kecil  dari 0.50 haruslah dipergunakan.
Metode eFl mungkin  tidak  memberikan  hasil  yang dapat  diandalkan  bila  dipergunakan  pada  tanah-tanah  yang baru  saja  mendapat  tambahan  bahan  organik  segar.  Bila mempelajari  tanah-tanah calcareous (tanah-tanah  yang mengandung  banyak  CaCO J bebas),  haruslah  diingat bahwa  dekomposisi  dari  bikarbonat  dapat  menyebabkan kesalahan  pengukuran. Kesalahan  ini  dapat  dikurangi dengan  cara menempatkan gelas piala yang diiisi  dengan 25 g  kapur  soda  di  dalam  eksikator  tempat  menginkubasikan contoh  tanah  (baik  yang  difumigasi  maupun  kontrol) (Martens, 1985). Contoh  tanah  untuk  penetapan  biomassa mikroorganisme tanah janganlah dikering-udarakan sebelum  pengukuran  dilakukan,  sebab  mongering-udarakan tanah  dapat  menyebabkan  senyawa  C-organik  non- biomassa  menjadi  mudah  terdekomposisi  dan  akan membunuh  sebagian  dari  biomassa  mikroorganisme  tanah (Shen et  af., 1987). Metode  fumigasi-inkubac;i  juga memberikan  hasil  yang  kurang  dapat  diandalkan  pada tanah-tanah  tergenang  (Inubushi et al.,  1989), atau  pada tanah-tanah dengan pH di  bawah 4.5 (Vance et al.,  1987 8 ).
Melakukan  prainkubasi  dari  contoh  tanah  sebelum pengukuran  biomassa  tanah  akan  meningkatkan  kualitas data yang.  diperoleh, sebab prainkubasi akan menghindarkan  pengaruh-pengaruh  dari  suplai  substrat yang  mungkin  berasal dari  potongan akar segar (Sparling et aI., 1985); menghilangkan pengaruh dari proses pengambilan  contoh  dan  perlakuan  pendahuluan (gangguan pada  contoh  tanah  seperti  pembasahan  dan  pengeringan) (Jenkinson, 1988; Ross  dan  Tate, 1984; Shen et af.,  1987), tetapi  bila  penelitian  tersebut  membutuhkan  data  biomassa mikroorganisme tanah  pada saat pengambilan  contoh,  maka tehnik prainkubasi  ini  tidak dapat diterapkan.
Metoda eFl telah  dipergunakan  secara  luas  sejak diperkenalkan  dan  hasil-hasil  yang  diperoleh  telah  sesuai dengan  hasil-hasil  pengukuran  y'ang  diperoleh  dari pengamatan  langsung  dengan  mikroskop  (Jenkinson et aI., 1976; Vance et af., 1987 8 ). Biomassa  C  hasil  pengukuran dapat  dikonversikan  menjadi  total  biomassa  dengan
mengasumsikan  bahwa  biomassa  mikroorganisme  tanah mengandung kira-kira 45% C berdasarkan bobot kering.
Metode ekstraksi fumigasi-chloroform  (chlol'O/ontl fumigation extraction: CFE method)
Jenkinson (1976) telah  mendiskusikan,  bahwa  di samping  inkubasi,  terdapat  kemungkinan  untuk  proses ekstraksi  setelah  proses  fumigasi.  Powlson  dan  Jenkinson (1976) menemukan  bahwa  terdapat  korelasi yang  erat antara  karbon (C) yang  dapat  diekstraks  dengan  0.5 M K2S04 dengan  banjiran  CO2 setelah  perlakuan  fumigasi- inkubasi. Voroney  (\ 983, dalam Jenkinson, 1988) menunjukkan  bahwa  terdapat  korelasi  yang erat antara biomassa C dengan C yang dianggap terekstrak oleh  larutan K 2 S04 setelah fumigasi.  Vance et al. (I 987 b ) menunjukkan bahwa biomassa C (Be) dapat diperkirakan dari persamaan:
Be=Fe. Ee
Di  mana:
Ee = selisih antara C-organik  terekstrak oleh 0.5 M K2S04  dari  tanah  yang  difumigasi  dengan tanah yang tidak difumigasi.
Fe faktor  proporsionalitas  yang ditetapkan  secara empirik
Mereka  juga  menemukan  bahwa  terdapat  hubungan linier  yang  erat  antara  biomassa  C  mikroorganisme  yang diukur  dengan  metoda eFl dengan  Ee (r = 0.986). Dari hubungan ini mereka  dapat menghitung Fe dan mendapatkan Fe = 2.64 ± 0.06. Sparling dan  West (1988) mengkalibrasikan metode CFE dengan biomassa mikroorganisme  yang  ditetapkan  dengan  metode  SIR  dan juga  dengan  pelepasan  14C  oleh  mikroorganisme  yang diberi  label in  situ dengan  14C-glukosa,  dan  menemukan bahwa  kedua  metode  tersebut  memberikan  nilai  kalibrasi yang  serupa  untuk 26 contoh  tanah  mineral  yang mempunyai  kadar  C  dan  pH  yang  berbeda-beda.  Mereka menyarankan  nilai Fe = 3.03 ± 0.78. Nilai yang samajuga disarankan  oleh  Tate et al.  (\ 988). Nilai  ini  dapat diterapkan  pada  tanah-tanah  dengan  pH  rendah  tetapi kurang  cocok  untuk  contoh  tanah  yang,  mempunyai  kadar bahan  organik > 10% atau  untuk  bahan  serasah (bahan  dari horison 0).  Sparling et al. (1990) menerapkan metode CFE untuk  mengestimasi  biomassa  mikroorganisme  tujuh macam  tanah  yang  mengandung  bahan  organik  sampai 47%, dan  kemudian  membandingkan  hasilnya  dengan biomassa  C  mikroorganisme  yang  diukur  dengan  metode SIR yang telah dimodifikasi, juga dibandingkan dengan sel- sel  mikroorganisme  yang  dilabel in  situ 4engan  14C_ glukosa.  Mer;eka menemukan Fe = 2.70 untuk nietode SIR yang  dimodifikasi  dan Fe = 2.38 untuk  metOde  dengan 14C-glukosa. Dengan  mengambil  kemungkinan  bahwa mereka mendapatkan hasil pengukuran biomassa mikroorganisme lebih rendah dari perkiraan  pad a
! j
f "e , I
I J I
1 j 1 i I I I I I i I
Metode  penetapan  biomassa mikroorganisme tanah  (G.  Djajakirana)
kalibrasinya,  nilai Fe =  2.86 disarankan sebagai  nilai  faktor Fe yang paling mewakili bagi tanah-tanah di New Zealand.
Semua  peneliti  yang  disebut  di  atas  mengukur  hasil ekstraksi  C-nya  dengan  metode  pencernaan  dichromat (dichr~mate digestion  method}. Wu  et  al.  (1990) menggunakan  sistem  pengukuran  otomatis  menggunakan persulfat dan  oksidasi  ultra  violet,  mengukur hasil  ekstraksi C  dengan K 2 S0 4 pada  berbagai  selang  konsentrasi  C  dari tanah  yang  difumigasi  dan  yang  tidak  difumigasi, mendapatkan  rata-rata  20 % lebih  tinggi  organik  C  terukur dibandingkan dengan metode dichromat. Mereka menunjukkan  adanya  hubungan  linier  yang  sangat  erat (r=0.997)  antara  C  yang  diukur  dengan  kedua  metode tersebut,  hal  ini  menunjukkan  bahwa  kesalahan  pada metode  dichromat  adalah  konsisten. Disebabkan  oleh efiesiensi  yang  lebih  tinggi  dari  metode  ultra  violet  - persulfat  maka  mereka  menyarankan  faktor  Fe  =  2.64 pada  metode  CFE  yang  asli  diubah  menjadi  faktor  Fe = 2.22.  Dengan  perubahan  ini  persamaan  menjadi  Be  = 2.22 Ee  mereka  mendapatkan  hubungan  linier  1: 1  yang  sangat erat  antara  biomassa  mikroorganisme  yang  diukur  dengan CFI dengan CFE (Be  CFE = 0.99 ± 0.02  Be CFI;  r = 0.99).
Metode  CFE  menawarkan  beberapa  keuntungan dibandingkan dengan  metode CFI.  Pengukuran biomassa C dan  N  dengan  metode  CFE  dapat  dilakukan:  pada  selang pH  yang sangat  lebar (Vance et al.,  1987"), pada tanah yang mengandung bahan organik yang sedang aktif terdekomposisi (Ocio dan  Brooks,  1990), pada conto,h tanah yang  baru  saja  diambil.  Keadaan  yang  baru  disebut  ini adalah  keadaan  di  mana  metode  CFI  memberikan  hasil yang  kurang dapat diandalkan.  Hasil  pengukuran  biomassa yang  dapat  diandalkan  dengan  metode  CFE  juga  telah dilaporkan  pada  tanah-tanah  tergenang  (lnubushi  et  al., 1989).  Metode  CFE juga  cocok  untuk  dipergunakan  pada penelitian  yang  menggunakan  isotop  untuk  pelabelan. Metode  CFE  mempunyai  keunggulan  bahwa  biornassa yang  diberi  label  isotop  yang  berkembang  sebagai  substrat yang  kemudian  terdekomposisi  dapat  diukur,  hal  ini  sangat tidak  mungkin dengan  rnetode CFI (Wu et al.,  1989).

## KESIMPULAN
Dari  uraian  di  atas  maka  dapat  disirnpulkan,  bahwa banyak  metode  yang  dapat  dipakai  untuk  pengukuran biornassa  mikroorganisme  tanah,  tetapi  masing-masing metode  memiliki  kelemahan  dan  keunggulan  masing- masing.  Pemilihan tiap  metode hendaknya didasarkan pada kebutuhan  dan  tujuan  penelitian,  tersedianya  peralatan  dan penguasaan metode tersebut.
Metode  yang  memiliki  banyak  keunggulan  dan  relatif mudah  dilakukan  dah  tidak  memerlukan  peralatan  yang canggih,  sampai  saat  ini  adalah  rnetode  CFE,  walaupun demikian  metode  ini  juga  tidak  luput  dari  kelemahan. Salah  satu  kelemahan  metode  CFE  adalah  menganggap biomassa  mikroorganisme  tanah  sebagai  suatu  kesatuan,
sehingga  tidak  dapat  memisah-misahkan  kclompok- kelompok  mikroorganisme  yang  ada.  Pada  kenyataannya mikroorganisme  tanah  sangatJah  beragam  baik  fungsi maupun morfologinya.

## DAFTAR PUS TAKA
Alef,  K. 1991. Methodenhandbuch  Bodenmikrobiologie: Aktivitliten,  Biomasse, Differenzierung. Ecomed. 284 pp.
Anderson,  J.P. E., and  K.H.  Domsch.  1973.  Quantificalion  of bacterial  and  fungal  contribution  to  soil  respiration. Arch. Mikrobiol ..  93:113-127.
Anderson,  J.P. E.,  and  K.H.  Domsch.  1975. Measurement  of bacterial  and  fungal  contributions  to  respiration  of sclectrxl agricultural and forest soils. Can. J.  Microbiol.,  21:314-322.
Anderson,  1.P.E.,  and  K.H.  Domsch.  1971r.  Mineralizalion  of bacteria  and  fungi  in  chloroform-fumigated  soils. Soil Bioi. Biochem ..  10:207-213.
Anderson, 1.P.E., and K.H.  Domsch.  1978 b • A physiological method for the quantitative  measurement of microbial biomass in soils. Soil BioI.  Biochem ..  10:215-221.
Atlas,  R.M.  1982. Enumeration  and  estimation  of  miaobial biomass.  In  R.G.  Bums  and  1.H.  Slater (cds.} Experimental
Microbial  Ecology.  Blackwell, Oxford.  p. 85-102.
Bakken,  L.R.,  and  R.A.  Olsen.  1983.  Buoyant  densities and dry- matter contents  of microorganisms : Conversion ofa measured biovolume  into  biomass.  Appl.  Environ.  Microbiol.,  45:1188- 1195.
Brooks,  P.D.,  and E.A.  Paul.  1987.  A new automated ta:Imique fur measuring respiration in soil samples.  Plant and Soil. 101: 183- 187.
Faegri,  A.,  V.L.  Torsvik,  and  1.  GolOOyr.  1977.  Bacteria1  and fungal  acticities  in  soil:  separation  of bacteria and fungi by a rapid  fractional  centrifugation  technique. Soil Bioi.  Biochem., 9:105-112.
Frederick,  L.R.  1965.  Microbial  Populations by Direct Miaoscopy. In C.A.  Black  (ed.). Methods  of  Soil Analysis. Vol.  2. Agronomy Series No.9.  ASA.  Madison. p.  1452-1459.
Harris, P.1.  1988.  Ecology of the  Soil Population. In A. Wild. (ed.). Russell's Soil Condition and Plant Growth.  11111 &;d. Longman Scientific & Technical.  p.  472-499.
Heinemeyer, 0.,  H. Insam,  E.A.  Kaiser,  and  G. WaJenzik. 1989. Soil  microbial  biomass  and  respiration measumneors: An automated  technique  based  on  infra-red  gas  analysis.  Pwnl and Soil.  116:191-195.
Inubushi,  K.,  P.C.  Brookes,  and  D.S.  Jenkinson.  1989. A comparison of  the fumigation-extractiOll,  fumigation- incubation and A TP  methods  for  measuring miaobial biomass in  waterlogged  soils.  5 th International  SympIIosium  on Microbial  Ecology, Kyoto,  Japan.  Abstract 69.
Jenkinson,  D.S.  1966. Studies  on  the  decomposition  of plant material  in  soil  - II.  Partial  sterilisation  of soil and IIIe soil biomass. J Soil Sci ..  17:280-302.
IlIrnal  Tanah  dan  Linglamgan,  Vol.  5 No.1, April 2003: 29-38
Jenkinson,  D.S.  1988.  Determination of Microbial  Biomass Carbon and  Nitrogen  in  Soil. In J.  R.  Wilson  (ed.).  Advances  in Nitrogen Cycling in Agricultural Ecosystems. CAB International,  Wallingford  GB,  p 368-386.
Jenkinson,  D.S. 1976. The  effects  of  biocidal  treatments  on metabolism  in  soil.  IV.  The  decomposition  of  fumigated organisms in  soil. Soil Bioi.  Biochem., 8:203-208.
Jenkinson,  D.S ..  and  D.  S.  Powlson.  1976.  The  effect  of biocidal treatments on metabolism  in  soil- V.  A  method  for  measuring soil biomass. Soil Bioi.  Biochem.,  8:209-213.
Jenkinson,  D.S.,  D.S.  Powlson,  and  R.W.M.  Wedderburn.  1976. The  effects  of biocidal  treatments  on  metabolism  in  soil.- III.
The  relationship  between  soil  biovolume  measured  by optical microscopy,  and  the  flush  of  decomposition  caused  by fumigation. Soil Bioi.  Biochem.,  8:189-202.
Jenkinson.  D.S.,  and  J.N.  Ladd.  1981.  Microbial  Biomass  in  Soil, Measurement and Turnover. In E.A.  Paul and  J.N.  Ladd (eds.). Soil  Biochemistry.  Vol.  5.  Dekker, New York. p.  415-472.
Kaiser,  E.A.,  T.  Mueller,  R.G.  Joergensen. H. Insam,  and  O. Heinemeyer.  1992.  Evaluation of methods  to estimate  the  soil microbial  biomass  and  the  relation-ship  with  soil  texture  and organic matter. Soil BioI.  Biochem.,  24:675-683.
Lynch.  J.M ..  and  L.M.  Panting.  1980.  Cultivation  and  the  soil biomass. Soil BioI.  Biochem., 12:29-33. .
Martens.  R.  1985.  Limitations  in  the  application  of the  fumigation technique  for  biomass estimation  in  amended  soils. Soil  Bioi. Biochem., 17:57-63.
Martens,  R.  1987.  Estimation  of microbial  biomass  in  soil  by  the respiration  method: importance  of  soil  pH  and  flushing methods for measurement of respired CO 2• Soil Bioi.  Biochem.,
19:77-81.
McGill,  W.B ..  K.R.  Cannon, J.A.  Robertson,  and F.D.  Cook.  1986. Dynamics of soil  microbial  biomass and  water-soluble organic C  in  Breton L after 50 years of cropping to two rotations. Can. J Soil Sci.,  66:1-19.
Nicolardot.  B.,  G.  Guiraud,  R.  Chaussod.  and  G.  Catroux.  1986. Mineralisation  dans  les  sols  de  materiaux  microbiens  marque au  carbone  14  et  I'azote  15:  Quantification  de  I'azote  de  la biomasse microbienne. Soil BioI.  Biochem.  18:263-273.
Ocio.  J.A..  and  P.e.  Brookes.  1990.  An  evaluation  of methods  for measuring  the  microbial  biomass  in  soils  following  recent additions  of  wheat  straw  and  the  characterization  of  the biomass that develops. Soil Bioi.  Biochem.,  22:685-694.
Parkinson,  D.T..  T.R.G.  Gray,  and  S.T.  William.  1971. Methods for  Studying  the  Ecology  of Soil  Micoorganisms.  Blackwell, Oxford.
Parkinson,  D .•  and  E.A.  Paul.  1982.  Microbial  Biomass. In A.L. Page,  R.H.  Miller.  and  D.R.  Keeney  (eds.).  Methods  of Soil Analysis.  Part  2:  Chemical  and  Microbiological  Properties.  2nd ed.  Agronomy  Series  No.9.  ASA.  SSSA.  Madison.  p.821- 830.
Powlson,  D.S ..  and  D.S.  Jenkinson.  1976.  The  effect  of biocidal treatment  on  metabolism  in  soil-II.  Gamma  irradiation, autoclaving,  air  drying  and  fumigation. Soil  BioI.  Biochem.,
8:179-188.
Ross,  D.1.,  and  K.R.  Tate.  1984.  Microbial  biomass  in  soil: Effect of some  experimental  variables  on  biochemical  estimations. Soil Bioi. Biochem., 16:161-167.
Schmidt,  E.L..  and  E.A.  Paul.  1982.  Microscopic Methods klr Soil Microorganisms. In A.L.  Page,  R.H.  Miller.  and D.R.  Keeney (eds.). Methods  of  Soil  Analysis. Part  2:  Chemical and Microbiological  Properties.  2 nd ed.  Agronomy Series No.9. ASA, SSSA.  Madison.  p.803-814.
Shen.  S.M..  P.e.  Brookes,  and  D.S.  Jenkinson.  1987. Soil respiration  and  the  measurement of microbial  biomass carbon by  the  fumigation  technique  in  fresh and  air-dried  soil. Soil Bioi.  Biochem., 19: 153-158.
Sparling,  G.P. 1981.  Microcalorimetry and other  methods  to assess  biomass  and  activity  in  soils. Soil  Biol  Biochem., 13:93-98.
Sparling,  G.P ..  A. W.  West,  and K.N.  Whale.  1985.  Interfercuce of plant root in  the estimation of soil  microbial A TP. C, N. and P. Soil Bioi.  Biochem., 17:275-278.
Sparling,  G.P.,  T.W.  Speir.  and  K.N.  Whale.  1986.  Changes  in microbial biomass C, ATP content, soil phospho- monoesterase  and  phospho-diesterase  activity  following  air- drying of soils. Soil Bioi.  Biochem .•  18:363-370.
Sparling.  G.P ..  and A. W.  West.  1988. A direct extraction method to estimate  soil  microbial C: Calibration in  situ  using  miaobial respiration  and  14C  labelled  cells. Soi/Biol.  Biochem.,  20:337- 343.
Sparling,  G.P.,  C. W.  Feltham,  J.  Reynolds,  A W.  West, and  P. Singleton.  1990. Estimation  of  soil  microbial  C  by  a fumigation-extraction  method:  use  on  soils  of high  OIpIic matter content,  and a  reassessment of the kec-factor. Soil Bioi. Biochem., 22:301-307.
Smith, J.L..  B.L.  McNeal,  H.H.  Cheng, and G.S.  Chambell.  1986. Calculation  of microbial  maintenance rates  and  net  nitrogen mineralization  in  soil  at  steady state. Soil Sci.  Soc.  Alfler.  J, 50:332-338.
Shield,  J.A.,  E.A.  Paul,  and  W.E.  Lowe. 1974. Factors influencing  the  stability  of  labelled  microbial  materials  in soils. Soil Bioi.  Biochem., 6:31-37.
Stevenson,  FJ.  1986. Cycles  of  Soil:  Carbon, Nitrogen. Phosphorus,  Sulfur,  Micronutrients. A  WiIey-Interscience Publication. John  Wiley & Sons.  New  York,  Chidtester. Brisbane. Toronto, Singapore.  380 pp.
Tate,  K.R.,  DJ.  Ross,  and e.W.  Feltham.  1988.  A direct extraction method  to  estimate  soil  microbial  C:  Effects  of experimental variables and  some different calibration procedures. Soil Biol. Biochem., 20:329-335.
Van  De  Werf,  H.,  and  W.  Verstraete.  1987".  Estimation  of active soil  microbial  biomass by  mathematical  analysis of respiration curves:  Development and  verification of the model. Soil Bioi. Biochem ..  19:253-260.
Van  De  Werf,  H.,  and  W.  Verstraete.  1987 b . Estimation  of active soil  microbial  biomass  by  mathematical  analysis of respinltion curves:  Calibration  of the  test  procedure. Soil Bioi.  Biodlem., 19:261-265.

## Metode penetapan biomassa mikroorganisme tanah  (G.  Djajakirana)
Van  De  Werf.  H ..  and  W.  Verstraete.  I 98'r. Estimation  of active soil  microbial  biomass  by  mathematical  analysis of respiration curves:  Relation  to  conventional  estimation  of total  biomass. Soil BioI.  Biochem ..  19:267-271.
Van  Veen.  J.A .•  and  E.A.  Paul.  1979.  Conversion  of biovolume measurements of soil organisms, grown under various moisture tensions.  to  biomass  and  their  nutrient  content. Appl.  Environ. Microbiol..37:686-692.
Vance.  E.D.,  P.C.  Brookes.  and  D.S.  Jenkinson.  1987 1 • Microbial biomass measurement in  forest soils:  the use of the chlorofonn fumigation-incubation  method  in  strongly acid soils. Soil Bioi. Biochem ..  19:697-702.
Vance,  E.D..  P.C.  Brookes.  and  D.S.  Jenkinson.  I 987 b • An extraction  method  for  measuring  soil  microbial  biomass  C. Soil Bioi.  Biochem ..  19:703-707.
Voroney.  R.P.,  and  E.A.  Paul.  1984.  Detennination of kc and kN in  situ for  calibration  of  the  chlorofonn  fumigation- incubation method. Soil BioI.  Biochem.,  16:9-14.
Waksman,  S.A.,  and  R.L.  Starkey.  1923 1 . Partial  sterilisation  of soil,  microbial  activities,  and  soil  fertility  I. Soil Sci ..  16:137- 157.
Waksman,  S.A.,  and  R.L.  Starkey.  1923 b • Partial  sterilisation  of soil,  microbial  activities,  and  soil  fertility  II. Soil Sci ..  16:257-
268.
Waksman,  S.A.  1952.  Soil  Microbiology.  John  Wiley & Sons.  Inc. New York. Chapman & Hall,  Limited, London.  356 pp.
Wu,  J.,  P.C.  Brookes,  and  D.S.  Jenkinson.  1989.  Measuring  the dynamics  of  the  turnover  of  biomass  carbon  in  soil.  5'" International  Symphosium  on  Microbial  Ecology,  Kyoto, Japan.  Abstract 148.
Wu, 1., R.G.  Joergensen,  B.  Pommerening, R. Chaussod.  and  P.C. Brookes.  1990.  Measurement of soil  microbial  biomass  C  by fumigation-extraction  an  automated  procedure. Soil  BioI. Biochem ..  22:1167-1169.