## SKRINING FITOKIMIA DAN UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOLIK BUAH BUNI (Antidesma bunius (L.) SPRENG)
Arif Rahman, Abd. Malik, Aktsar Roskiana Ahmad *
Fakultas Farmasi, Universitas Muslim Indonesia
* aktsar.roskiana@umi.ac.id

## ABSTRACT
Free  radicals  play  a  role  in  the  occurrence  of  various  degenerative  diseases  that  require  free-radical scavengers  or  antioxidants.  Buni  fruit  (Antidesma  bunius (L.)  Spreng )  has  the  bioactive  components  are Anthocyanins (flavonoids) that serves to the free radicals. This study aimed to measure the antioxidant activity of the ethanol  extract  contained  70%  fruit  Buni  obtained  by  using  the  method  of  nitric  oxide.  Simplicia  buni  macerated dried fruit with 70% ethanol. Extracts were obtained in the test antioxidant activity against nitric oxide radicals. The antioxidant  activity  against  free  radical  absorbance  measured  by  means  of  UV-Vis  spectrophotometry  at  a wavelength  of  546  nm  and  calcul  ated  IC 50 values.  The  results  shows  that  the  fruit  buni  has  potential  as  a  free radical with IC 50 value of 2.28 µg/mL and a comparison of quercetin with IC 50 value of 5.88 µg/mL.
Keywords: free radical, antioxidants, fruit buni ( Antidesma bunius (L.) Spreng), nitric oxide (NO)

## I.   PENDAHULUAN
Radikal  bebas  didefinisikan  sebagai  suatu atom/molekul/senyawa yang memiliki satu atau lebih elektron yang tidak berpasangan. Karena hal tersebut, radikal bebas cenderung bereaksi dengan molekul sel tubuh  (Sinly,  2008).  Keberadaan  radikal  bebas  di dalam  tubuh  dapat  menimbulkan  berbagai  penyakit seperti serangan jantung, kanker, stroke, gagal ginjal, penuaan  dini  dan  penyakit  kronik  lainnya  (Winarsi, 2007).
Di  dalam  tubuh  manusia  terdapat  senyawa yang  dapat  menangkal  radikal  bebas  yang  disebut Antioksidan. Antioksidan adalah senyawa kimia yang dapat  memberikan  satu  atau  lebih  elektron  kepada radikal  bebas,  sehingga  radikal  bebas  dapat  diredam. Antioksidan  juga  didefinisikan  sebagai  zat  yang mampu  memperlambat  atau  mencegah  proses oksidasi yang dapat menetralisir atau menghancurkan suatu radikal bebas. Pola hidup dan pola makan yang tidak benar serta bertambahnya usia dapat menyebabkan  produksi  antioksidan  oleh  tubuh berkurang,  sehingga  tubuh  memerlukan  antioksidan dari  luar  tubuh  (Kumalaningsih,  2007).  Konsumsi antioksidan  dalam  jumlah  yang  cukup  dapat menurunkan  resiko  terkena  penyakit  degeneratif. Namun,  hal  tersebut  tergantung  dari  kemampuan antioksidan untuk bekerja sebagai inhibitor (penghambat)  reaksi  oksidasi  oleh  radikal  bebas (Norma, 2011).
Antioksidan  dapat  diperoleh  secara  alami dari  tumbuh-tumbuhan,  baik  buah,  daun,  batang  atau bagian  lainnya.  Salah  satu  tumbuhan  yang  memiliki potensi  sebagai  antioksidan  adalah  buah  Buni ( Antidesma  bunius (L)  Spreng)  yang  umumnya masyarakat  lokal  di  daerah  Enrekang,  Sulawesi
Selatan  dikenal  dengan  nama  “sadipe”.  Bagi masyarakat  lokal,  buah  buni  masih  belum  banyak dimanfaatkan dalam pengobatan tradisional. Padahal, secara  empiris  tumbuhan  ini  dipercaya  berkhasiat untuk mengobati penyakit kurang darah, darah kotor, hipertensi,  jantung  berdebar,  batuk,  gangguan pencernaan,  sifilis,  kencing  nanah,  diabetes,  disentri, indigesti,  konstipasi  dan  lain-lain  (Kassem et  al , 2013).  Namua,  data-data  ilmiah  yang  mendukung khasiat dari buah buni tersebut belum terlalu banyak, sehingga pengkajian ini bermanfaat untuk mengetahui pemanfaatan buah buni dimasa yang akan dating.
Mengingat  pentingnya  peran  tunbuhan  bagi kehidupan  manusia,  maka  pengetahuan  mengenai aktifitas  biologis  yang  ditimbulkan  oleh  senyawa antioksidan  yang  berasal  dari  tumbuhan  sangat diperlukan  dalam  usaha  penemuan  sumber  obat  baru sehingga  peneliti  melakukan  pemeriksaan  skrining fitokimia  dan  uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak  buah buni  ( Antidesma  bunius (L.)  Spreng  sebagai  tahap awal  pemanfaatan  buah  buni  khususnya  dalam  ilmu kesehatan (Harborne, 1987)

## II. METODE PENELITIAN
A. Pengambilan dan Pengolahan Sampel
Sampel  segar  buah  buni  ( Antidesma  bunius (L.) spreng) diambil di Kabupaten Enrekang, Provinsi Sulawesi  selatan.  Sampel  kemudian  dibersihkan  dari kotoran  yang  melekat  dengan  menggunakan  air mengalir  lalu  dikeringkan  dengan  cara  diangin- anginkan. Setelah kering, sampel diblender, kemudian dihaluskan (serbukkan).

## B. Ekstraksi Sampel
Simplisia  kering  buah  buni  ( Antidesma bunius (L.) Spreng) sebanyak 1000 gram dimasukkan ke  dalam  wadah  maserasi,  lalu  ditambahkan  pelarut etanol  70%  sebanyak  1000  mL  hingga  simplisia tersebut  terendam,  dibiarkan  selama  3  hari  dalam bejana  tertutup  dan  terlindungi  dari  cahaya  matahari langsung  sambil  diaduk  secara  periodik,  setelah  3  x 24  jam  dilakukan  penyaringan  untuk  diperoleh ekstrak  etanol  70%  cair.  Setelah  itu,  ampasnya dimaserasi kembali dengan cairan penyari yang baru. Hasil  penyarian  yang  diperoleh  kemudian  diuapkan dengan  menggunakan  rotavapor  70 o C  (Dirjen  POM, 2000).

## C. Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  yang  dilakukan  pada ekstrak  buah  buni  ( Antidesma  bunius (L.)  spreng) berdasarkan  pada  metode  Harborne,  tahun  1987 dengan  beberapa  modifikasi.  Skrining  fitokimia meliputi uji alkaloid, uji steroid/triterpenoid, flavonoid, saponin, fenol hidrokuinon, dan tanin.
D. Uji  Aktivitas  Antiradikal  Bebas  dengan  Nitrit Oksida
1. Uji Pendahuluan
Pertama-tama  ekstrak  etanol  buah  buni ditotolkan  pada  lempeng  KLT  kemudian  dielusi dengan  menggunakan  eluen  yang  sesuai.  Lempeng KLT  disemprot  dengan menggunakan larutan Natrium nitroprusida (10 μM) lalu didiamkan selama 30 menit. Diamati perubahan warna  yang terjadi  dari warna ungu menjadi kuning.
2. Pengukuran Daya Antioksidan Blanko Pengujian dilakukan dengan memipet 2,0 ml Natrium  nitroprusida 10 µM, tambahkan 1  ml Griess reagent  dan    dicukupkan  volumenya  dengan Phosphate Buffered Saline (PBS) sampai 10 ml dalam labu tentukur. Larutan ini kemudian dibiarkan selama 30  menit  dan  selanjutnya  diukur  absorbansinya  pada panjang gelombang 546 nm.
3. Pengukuran  Daya  Antioksidan  Ekstrak  Etanol Buah Buni ( Antidesma bunius (L.) Spreng)
Larutan stok 1000 ppm dibuat dengan cara menimbang  ekstrak  etanol  buah  buni  ( Antidesma bunius (L.)  spreng)    sebanyak  10  mg  dengan dilarutkan  dengan  pelarut  PBS  dan  dicukupkan dengan  PBS  dengan  volume  hingga  10  ml  dalam labu tentukur. Selanjutnya dilakukan pengenceran :
1. Dipipet  0,1  ml  (100  µL)  dari  larutan  stok  dan dicukupkan  dengan  Phosphate  Buffered  Saline (PBS) sampai volume akhir 10 ml (10 ppm).
2. Dipipet  0,5  ml  (500  µL)  dari  larutan  stok  dan dicukupkan  dengan  Phosphate  Buffered  Saline (PBS) sampai volume akhir 10 ml (50 ppm).
3. Dipipet 1,0 ml  (1000 µL) dari  larutan  stok  dan dicukupkan  dengan  Phosphate  Buffered  Saline (PBS) sampai volume akhir 10 ml (100 ppm).
Pengukuran dilakukan dengan  memipet 100 µL (0,1 ml) larutan sampel dari berbagai konsentrasi. Kemudian  masing-masing  ditambahkan  2,0  ml Natrium  nitroprusida  10  µM  dan  1  ml  reagen  Griess kemudian  dicukupkan  volumenya  dengan  Phosphate Buffered  Saline  (PBS)  sampai  10  ml  dalam  labu tentukur.  Campuran  kemudian  dihomogenkan  dan dibiarkan  pada  suhu  kamar  (37 o C)  selama  30  menit lalu  serapannya  diukur  pada  panjang  gelobang  546 nm.
4. Pengukuran Daya Antioksidan Sampel
Pembanding Kuersetin
Variasi  konsentrasi  larutan stok dan  larutan sampel  yang  telah  dibuat,  masing-masing  ditotolkan sebanyak  5  µL  dengan  menggunakan  mikropipet pada  lempeng  KLT  ukuran  10  x  10  cm.  Kemudian lempeng  dielusi  dalam  chamber  dengan  campuran pelarut  BAW  (6:3:1).  Noda  yang  terpisah  diamati dibawah  lampu  UV  254  nm,  lalu  diukur  dengan mengggunakan  KLT-Densitometri  pada  panjang gelombang  maksimum  734  nm  dan  dilakukan analisis terhadap hasil scan.
Dibuat  larutan  stok  1000  ppm  dengan  cara menimbang  Kuersetin  setara  10  mg  kemudian dilarutkan  dengan  Phosphate  Buffered  Saline  (PBS) sambil  diaduk  dan  dihomogenkan  lalu  dicukupkan volumenya  hingga  10  ml  dalam  labu  tentukur. Kemudian dilakukan pengenceran :
1. Dipipet  0,1  ml  (100  µL)  dari  larutan  stok  dan dicukupkan  dengan  Phosphate  Buffered  Saline (PBS) sampai volume akhir 10 ml (10 ppm).
2. Dipipet  0,5  ml  (500  µL)  dari  larutan  stok  dan dicukupkan  dengan  Phosphate  Buffered  Saline (PBS) sampai volume akhir 10 ml (50 ppm).
3. Dipipet 1,0 ml  (1000 µL) dari  larutan  stok  dan dicukupkan  dengan  Phosphate  Buffered  Saline (PBS) sampai volume akhir 10 ml (100 ppm).
Pengukuran dilakukan dengan memipet 100 µl  larutan  sampel  dari  berbagai  konsentrasi. Kemudian  masing-masing  ditambahkan  2,0  ml Natrium nitroprusida 10 µM dan 1 ml reagen Griess kemudian dicukupkan  volumenya dengan Phosphate Buffered  Saline  (PBS)  sampai  10  ml  dalam  labu tentukur.  Campuran  kemudian  dihomogenkan  dan dibiarkan  pada  suhu  kamar  (37 o C)  selama  30  menit lalu serapannya diukur pada panjang gelombang 546 nm.  Besarnya  persentase  pengikat  radikal  bebas dihitung dengan  rumus (Apriandi, 2011):
%Pengikatan radikal bebas= (Abs Blanko-Abs Sampel Abs Blanko ×100
Nilai lC 50 dihitung dengan menggunakan persamaan regresi  linear,  konsentrasi  sampel  sebagai  sumbu  x dan % inhibisi sebagai sumbu y. Dari persamaan : y =  a  +  bx  dapat  dihitung  nilai  lC 50. Dengan menggunakan rumus:
IC 50 = 50-a b

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  ini  menggunakan  buah  Buni ( Antidesma  bunius (L.)  Spreng)  untuk  memberikan data secara  ilmiah.  Metode ekstraksi  yang digunakan adalah  metode  maserasi  yang  merupakan  metode ekstraksi  dingin,  dimana  metode  ini  tidak  merusak komponen kimia pada buah buni, karena tidak adanya pemanasan  yang  terjadi  dalam  proses  ekstraksi, disamping  itu  pengerjaan  dan  peralatan  yang digunakan sederhana.
Ekstraksi  yang  dilakukan  menggunakan pelarut  etanol  70%  yang  merupakan  pelarut  polar yang  bersifat  tidak  toksik.  Selain  itu,  pelarut  etanol 70%  memiliki  keistimewaan  tersendiri  yaitu  dapat menyari komponen kimia yang bersifat polar maupun yang  bersifat  non  polar.  Hasil  maserasi  kemudian dipekatkan  dengan  menggunakan  rotavapor  sehingga diperoleh  ekstrak  kental  yang  kemudian  dihitung rendamen  ekstrak.  Rendamen  ekstrak  dihitung dengan  cara  membandingkan  jumlah  ekstrak  yang diperoleh  dengan  simplisia  awal  yang  digunakan. Adapun  Besar  rendamen  hasil  ekstraksi  1000  g  buah buni  dalam  1000  mL etanol 70%  yang  dihitung berdasarkan persen rendamen ekstrak yaitu 9,7%. Hal ini  dapat  dilihat  pada  tabel  1.  Rendamen  ekstrak  ini dapat  digunakan  sebagai  parameter  standar  mutu ekstrak  pada  tiap  bets  produksi  maupun  parameter efisiensi ekstrak (Depkes, 2000).
Tabel  1. Persen  Rendamen  Ekstrak  Buah  Buni ( Antidesma bunius (L.) Spreng) Pelarut Bobot sampel kering Bobot Ekstrak % Rendamen Etanol 70% 1000 gram 93 gram 9,3 %
Hasil  ekstrak  etanolik  dari  buah  buni ( Antidesma bunius (L.) Spreng) kemudian dilakukan skrining  fitokimia  menggunakan  pereaksi  warna yang  meliputi  uji  alkaloid,  tanin,  flavonoid,  saponin dan  Steroid.  Secara  umum  dapat  dikatakan  bahwa sebagian besar metodenya merupakan reaksi pengujian  warna  dengan  suatu  pereaksi  warna (Harborne, 1987).
Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan,  ekstrak  etanolik  buah  buni  mengandung senyawa  kimia  alkaloid,  flavonoid,  fenol  dan  tanin. Dimana,  penelitian  sebelumnya  juga  menyebutkan bahwa  kandungan dari buah  buni  ( Antidesma bunius (L.)  Spreng)  adalah  antosianin  yang  tergolong pigmen  yang disebut flavonoid  yang  pada umumnya larut dalam air karena buahnya yang berwarna merah hingga  ungu  (violet)  (Lembaga  Biologi  Nasional, 1977 dan Gruèzo, 1997).
Tabel  2. Hasil  Penapisan  Fitokimia  Ekstrak  Buah Buni ( Antidesma bunius (L.) Spreng). Senyawa Uji Ekstrak Etanol 70 % Alkaloid + Flavonoid + Steroid - Fenol + Tannin + Keterangan :
(+) Mengandung senyawa fitokimia yang diujikan (-)  Tidak  mengandung  senyawa  fitokimia  yang diujikan
Pengujian  aktivitas  antiradikal  bebas  secara kualitatif  dilakukan  dengan  menggunakan  KLT. Sampel  ditotolkan  pada  lempeng  KLT  kemudian dielusi  menggunakan  cairan  pengelusi  (eluen)  n- butanol  :  asam  asetat  :  air  (BAA),  karena  cairan pengelusi  ini  biasa  digunakan  untuk  flavonoid (Harborne,  1989).  Setelah  lempeng  KLT  dielusi kemudian  disemprot  dengan  Nitrit  Oksida.  Hasil pengujian  memperlihatkan  bercak  berpendar  kuning dalam  sinar  UV  366  nm  pada  nilai  Rf  0,87  pada ekstrak  etanol  70%.  Bercak  yang  memberikan perubahan warna ungu  menjadi kuning  menunjukkan adanya  aktivitas  antiradikal  bebas.  Hasil  KLT  dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel 3. Hasil KLT Ekstrak etanol 70 % buah buni ( Antidesma bunius (L.) Spreng)
Fase gerak : Eluen n-Butanol : Asam asetat : Air (5:1:4) Fase diam : Silika gel Ukuran Lempeng  : 7 x 3 cm
Pengujian  aktivitas  antioksidan  dilakukan secara  kuantitatif  dengan  menggunakan  metode Nitrit  Oksida  (Misrha,  2010).  Metode  Nitrit  Oksida dipilih  karena  sederhana,  cepat,  efektif  dan  hanya memerlukan  sedikit  sampel.  Nitrit  Oksida  (Natrium nitropruside)  yang  berperan  sebagai  radikal  bebas akan bereaksi dengan senyawa antioksidan dalam hal ini  adalah  antosianin  (flavonoid)  yang  dapat menghancurkan  atau  menghambat  radikal  bebas seperti  radikal  superoksida  dan  hydrogen.  NO  akan bereaksi dengan O 2 dan H + /H - membentuk peroksinitrit  serta  radikal  hidrogen  menyebabkan kerusakan  substansi  jaringan  dan  sel  melalui mekanisme  radikal  bebas  (Wallace  JL,  2005). Antosianin (flavonoid) dan berbagai bentuk turunannya  dapat  menghambat  berbagai  reaksi oksidasi  dengan  berbagai  mekanisme  (Astawan  dan Kasih, 2008).
Uji aktivitas antioksidan dengan menggunakan  metode  Nitrit  Oksida  adalah  untuk
melihat  kemampuan  penghambatan  suatu  ekstrak tanaman  terhadap  radikal  Nitrit  Oksida  yang absorbansinya diukur pada spektrofotometer UV-Vis dengan  panjang  gelombang  546  nm  (Mishra,  2010). Hasil penelitian ini menunjukkan ekstrak etanol 70% memiliki  aktivitas  antioksidan  sangat  kuat  terhadap nitrit  oksida  dengan  nilai  IC 50 2,28  µg/mL.  Hal  ini menunjukan  bahwa  konsentrasi  larutan  substrat  atau sampel  menyebabkan  tereduksinya  aktivitas  Nitrit Oksida  sebesar  50%  sehingga  antioksidan  yang terdapat  pada  ekstrak  etanolik  buah  buni  merupakan antioksidan dengan aktivitas yang sangat kuat karena nilai  IC 50 <10  μg/mL.  Sedangkan  kuersetin (antioksidan  alami)  yang  digunakan  sebagai  standar dalam  penelitian  ini  memiliki  aktivitas  antioksidan yang  sangat  kuat  pula  dengan  nilai  IC 50 5,88  µg/mL (IC 50 <10 μg/mL). Namun ekstrak etanolik buah buni lebih efektif dibanding dengan kuersetin.
Tabel 4. Hasil Pengukuran Absorbansi, Persentase Pengikatan Nitrit Oksida dan Nilai IC 50 dari Ekstrak Buah Buni ( Antidesma bunius (L.) Spreng).
Sampel Konsentrasi (ppm) Absorbansi % peredaman Radikal bebas %peredama n Radikal bebas rata- rata IC 50 Blanko Sampel Ekstrak Etanol 70% 0.1 0.708 0.451 36.2 39.266 2.28 µg/ml 0.5 0.708 0.426 39.8 1 0.708 0.412 41.8
Tabel 5. Hasil Pengukuran Absorbansi, Persentase Pengikatan Nitrit Oksida dan Nilai IC 50 dari sampel pembanding
Kuersetin Sampel Bercak UV 254 UV 366 Rf Warna Rf Warna Ekstrak Etanol I II III Titik penotolan 0,87 0,50 0,14 Kuning Kuning Kuning Coklat 0,87 0,50 0,14 Kuning menyala kuning kuning Biru gelap Sampel Konsentrasi (ppm) Absorbansi %peredaman Radikal bebas %peredaman Radikal bebas rata- rata IC 50 Blanko  Sampel Kuersetin 0.1 0.708 0.580 18.02 20.13 5.58 µg/ml 0.5 0.708 0.571 19.35 1 0.708 0.545 23.02
Menurut  Phongpaichit  et  al (2007),  Suatu senyawa  dikatakan  sebagai  antiradikal  bebas  sangat kuat apabila nilai IC 50 < 10 μg/mL, kuat apabila nilai IC 50 antara  10-50  μg/mL,  sedang  apabila  nilai  IC 50 berkisar  antara  50-100  μg/mL,  lemah  apabila  nilai IC 50 berkisar  antara  100-250  μg/mL  dan  tidak  aktif apabila IC 50 diatas 250 μg/mL.
Hal  ini  juga  diperkuat  menurut  Lembaga Biologi  Nasional  (1977)  dan  Gruèzo  (1997),  bahwa buah  buni  mengandung  antosianin  yang  tergolong pigmen  yang  disebut  flavonoid  yang  pada  umumnya larut dalam air karena buahnya yang berwarna merah hingga ungu (violet).  Antosianin (flavonoid) diyakini mempunyai  efek  antioksidan  yang  sangat  baik. Sebuah  penelitian  yang  dilakukan  di  Universitas Michigan  Amerika  Serikat  menunjukkan  bahwa antosianin  (flavonoid)  dapat  menghancurkan  radikal bebas,  lebih  efektif  daripada  vitamin  E  yang  selama ini  telah  dikenal  sebagai  antioksidan  kuat  (Astawan dan Kasih, 2008).

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  dilakukan dapat  disimpulkan  bahwa  komponen  kimia  yang terdapat  pada  ekstrak  etanolik  buah  buni  ( Antidesma bunius (L.)  Spreng)  adalah  flavonoid,  tanin,  fenol, alkaloid  dan  buah  buni  mempunyai  aktivitas aktioksidan  yang  sangat  kuat  terhadap  Nitrit  Oksida dengan nilai IC 50 2,28 µg/mL.

## DAFTAR PUSTAKA
Astawan  M,  Kasih  A.  L.  2008. Khasiat  Warna- Warni  Makanan .  Jakarta:  PT  Gramedia Pustaka Utama. 319hal. Depkes.  (2000). Parameter  Standar  Umum  Ekstrak Tumbuhan  Obat .  Jakarta:  Departemen Kesehatan RI. Hal. 1-11.
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan.
2000. Parameter  Standar  Umum  Ekstrak Tumbuhan  Obat .  Jakarta  :  Departemen Kesehatan RI.
Gruèzo.  1997. Buah-Buahan  yang  Dapat  Dimakan . Editor:  Verheij  E,  W.  M,  Coronel  R.  E. Jakarta:  PT  Gramedia  Pustaka  Utama. 568hal. Harborne,  J.B.  1987. Metode  Fitokimia  :  Penuntun cara modern menganalisa tumbuhan . Terbitan Kedua. Terjemahan Kosasih
Padmawinata  dan  Iwang  Soediro.ITB  : Bandung. Kumalaningsih, S. 2007. Antioksidan  Alami . Trubus Angrisarana. Surabaya. Kassem,  m.  E.s.,  hashim,  a.  N.,  hassanein.  H.  M., 2013. Bioactivity  of antidesma  bunius leaves  (euphorbiaceae)  and  their  major phenolic constituents. Department of
phytochemistry  and  plant  systematics, national  research  centre,  dokki,  cairo, egypt.
Lembaga  Biologi  Nasional.  1977. Buah-Buahan . Bogor: LIPI. 133hal. Norma, P. 2011. Penelusuran Komponen Kimia Aktif Antioksidan Bunga Rosella (Hibiscus sabdariffa L.) . Fakultas Farmasi,
Universitas Muslim Indonesia : Makassar. Noguchi  N  dan  Niki  E  (1999). Chemistry  of  Active Oxygen Species and Antioxidant . Antioxidant  Status,  Diet,  Nutrition,  and
Health.  Edited  by  Papas  A  M.  CRC  Press Boca Roton, London, New York, Washington DC.
Molyneux,  P.  2004. The  Use  of  The  Stable  Free Radical  Diphenylpicrylhydrazyl  (DPPH) for Estimating Antioxidant Activity (Online). ( http://std.kku.ac.th/4831501524/%E0% B8%8A/07-DPPH.pdf . Diakses 15 Desember 2013).
Mishra, A. K. Sahu, N. Mishra, A. Ghosh, A. K. Jha,
S.  Chattopadhyay,  P.  2010. Phytochemical Screening  and  Antioxidant  Activity  of Essential  Oil  of  Eucalyptus  Leaf .  Central
Facility of Instrumentation, IFTM
Pharmacy College, Moradabad Phongpaichit,  S.,  Nikom,  J.,  Rungjindamai,  N., Sakayaroj,  J.,  Hutadilok-Towatana,  N., Rukachaisirikul,  V.,  Kirtikara,  K.  (2007). Biological  Activities  of  Extracts  From Endophytic  Fungi  Isolated  From Garcinia
Plants. Immunology & Medical Microbiology , 51, 517–525.
Wallace  JL.  2005. Nitric  oxide  as  regulatory  of inflammatory  processes .  Am  J  Med  Inst Cruz. 2005; 100: 5-9 Winarsih  H.  2007. Antioksidan  Alami  dan  Radikal Bebas. Yogyakarta: Kanisus.