Program Studi Pendidikan Kimia Universitas Sebelas Maret https://jurnal.uns.ac.id/jkpk

## OPTIMASI PEMBUATAN COATED TUBE TIROGLOBULIN UNTUK KIT IRMA TIROGLOBULIN
Optimization of Thyroglobulin Coated Tube for Thyroglobulin IRMA Kit
Sutari*, Triningsih, Sri Setiyowati, V.Y. Susilo, Agus Ariyanto, Puji Widayati, dan Wening Lestari
Pusat Teknologi Radioisotop dan Radiofarmaka (PTRR)-BATAN Serpong Gedung 11 Kawasan PUSPIPTEK Serpong
Untuk korespondensi: e-mail: tarisb@batan.go.id
Received: July 27, 2018 Accepted: August 24, 2018
Online Published: August 31, 2018
DOI : 10.20961/jkpk.v3i2.22400

## ABSTRAK
Immunoradiometric  assay (IRMA)  adalah  suatu  metode  analisa  yang  berdasar  reaksi imunologi antigen dengan antibodi. Metode ini sangat spesifik dan peka digunakan untuk diagnosis secara in vitro dengan jumlah sangat kecil. Pusat Teknologi Radioisotop dan Radiofarmaka BATAN, mengembangkan  Kit  IRMA  Tiroglobulin  metode coated  tube yang  dapat  menentukan  kadar tiroglobulin  dalam  jumlah  mikrogram. Coated  tube ini  dibuat  dengan  cara  mengimobilisasi  anti tiriglobulin kedalam dasar tabung polistiren. Pengembangan Kit IRMA tiroglobulin melalui beberapa tahap antara lain: optimasi pembuatan komponen, optimasi dan validasi assay. Pada penelitian ini dilakukan  optimasi  pembuatan  komponen coated  tube yang  meliputi  pemilihan  pelarut,  volume pelarut, penggunaan agent penghalang ( blocking agent ), serta volume bloking. Coated tube dibuat dalam jumlah   banyak sampai diperoleh parameter-parameter yang optimum kemudian dilakukan kestabilan pada coated tube . Hasil optimum yang diperoleh dari penelitian ini adalah pelarut buffer fosfat 0,1M pH 7,4 dengan volume 500 µL, dibloking menggunakan 500 µL BSA 3% dalam pelarut buffer fosfat 0,1M pH 7,4, dengan ikatan maksimum 60,58% dan ikatan tidak spesifik (NSB) 1,40%. Dengan kondisi tersebut coated tube stabil hingga 4 minggu.
Kata Kunci: optimasi, coated tube, Tiroglobulin, IRMA

## ABSTRACT
Immunoradiometric assay (IRMA) is a method of analysis based on immunological reactions of  antigens-antibodies  binding.  This  highly  specific  and  sensitive  method  was  used  for  in  vitro diagnosis  in  small  quantity  of  sample.  Center  for  Radioisotope  and  Radiopharmaceutical Technology,  BATAN  has  developed  Thyroglobulin  IRMA  Kit  using  coated  tube  method  that  can determine thyroglobulin levels in microgram quantities. Coated tube was made with immobilisation of anti thyroglobulin into polistyrene tube. Development of IRMA kit performed through several steps including:  optimization  component  of  kit,  optimization  assay  and  kit  validation.  Optimization  of coated tube involved selection and volume of solvent, using blocking and non-blocking agent, and volume  of  blocking  agent.  The  optimum  condition  for  coated  tubes  was  found  to  be  using  0.1M phosphate buffer pH 7. 4 with coating volume of 500 μL, 3% BSA in   500 μL blocking agent 0.1M phosphate  buffer  pH  7.4,  with  maximum  binding  and  non-specific  binding  (NSB)  of  60.58  and 1.40%, respectively. The optimized coated tube was found to be stable up to 4 weeks.
Keywords: immunoradiometric assay, Thyroglobulin, coated tube, optimization

## PENDAHULUAN
Kanker  tiroid  merupakan  sebuah kondisi  di  mana  sel  abnormal  tumbuh  dan berkembang  pada  kelenjar  tiroid.  Jenis kanker ini tidak  banyak terjadi dan jika gejala kanker  tiroid  dapat  diketahui  lebih  awal, termasuk  mudah  dalam  penyembuhannya. Kanker tiroid  cenderung dialami oleh orang- orang yang usianya mencapai  35-39 tahun. Kanker tiroid sebagian besar 80-85% berasal dari  sel  folikuler  sebagai  kanker  tiroid  ber- diferensiasi. Epidemologi kanker tiroid berdasarkan  registrasi  patologi  Indonesia menempati urutan ke sembilan. Pemeriksaan laboratorium  yang  spesifik  untuk  diagnosa kanker  tiroid  umumnya  tidak  ada,  kecuali untuk karsinoma tiroid jenis meduler.  Kadar T 3 ,T 4 dan  TSH  dalam  serum  umumnya normal  untuk  kanker  tiroid.  Pengukuran kadar  tiroglobulin  pada  serum  bermakna pada pemantauan setelah pembedahan total tiroidektomi dari kanker tiroid [1,7].
Tiroglobulin (Tg) adalah protein spesifik  yang  terdapat  pada  kelenjar  tiroid dengan berat molekul 660 k Dalton, dan me- rupakan prekursor  hormon  tiroid. Tiroglobulin sebagai  penanda  penting    kanker  tiroid residual atau rekuren [8]. Tiroglobulin merupakan  penanda  paling  sensitif  untuk mendeteksi  kekambuhan  kanker  tiroid  yang terdiferensiasi.  Namun    adanya  antibodi  anti tiroglobulin  (TgAb)  mengganggu  pengukuran Tg [1,3,4,7]. Kadar Tiroglobulin normal dalam serum ≤ 50 ug/ml [9].
Teknologi nuklir terbukti dapat mengukur peningkatan  kadar  tiroglobulin  dalam  serum menggunakan  Kit  IRMA  (  Immunoradiometric Assay)  Tiroglobulin  metode coated  tube yang dikembangkan  Pusat  Teknologi  Radioisotop
dan  Radiofarmaka  (PTRR)  BATAN.  Kit  IRMA Tiroglobulin sangat sensitif karena mengguna- kan  radioaktif  sebagai  perunut  dan  kespesifi- kan  yang  tinggi  karena  menggunakan  mono- klonal antibodi.
Teknik IRMA yang sangat sensitif dan spesifik dapat menentukan kadar tiroglobulin dalam  serum  dalam  jumlah  mikrogram karena  digunakan  antibodi  yang  berlebih, dengan  demikian  reaksinya  non  kompetitif (subtitusi).  Dalam  praktik,  setelah  proses pemisahan  antara  fraksi  terikat  dan  fraksi bebasnya,  nilai    keradioaktifan  fraksi  terikat dicacah  menggunakan  pencacah  gamma. Makin  banyak    antigen  yang  terikat  dalam standar/sampel, maka makin tinggi  keradio- aktifan  fraksi  terikatnya.  Hubungan  antara konsentrasi  dengan  persen  keradioktifan fraksi  terikat  adalah    berbanding  lurus.  Nilai keradioaktifan yang terikat ditentukan dengan rumus :
Persen ikatan Maksimum,
( Binding per total = B/T)
𝐵/𝑇 (%) = 𝐶𝑎𝑐𝑎ℎ𝑎𝑛 𝑓𝑟𝑎𝑘𝑠𝑖 𝑡𝑒𝑟𝑖𝑘𝑎𝑡−𝐵𝐺 𝐶𝑎𝑐𝑎ℎ𝑎𝑛 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙−𝐵𝐺 𝑥 100%
Persen  Ikatan  Tidak  Spesifik  ( Non  Spesific  Binding ,NSB)
𝑁𝑆𝐵 (%) = 𝐶𝑎𝑐𝑎ℎ𝑎𝑛 𝑓𝑟𝑎𝑘𝑠𝑖 𝑡𝑒𝑟𝑖𝑘𝑎𝑡 𝑁𝑆𝐵−𝐵𝐺 𝐶𝑎𝑐𝑎ℎ𝑎𝑛 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙−𝐵𝐺 𝑥 100%
Kit RIA/IRMA  yang baik menunjukkan kinerja  assay  dengan  nilai  (B/T)  Persen ikatan  Maksimum,  ≥  30%  dimana  nilai tersebut  tidak  boleh  turun  drastis  sampai sebelum waktu kadaluwarsanya, sedangkan nilai NSB (%) adalah serendah mungkin dan tidak boleh lebih dari 5% [2-4].
Kit IRMA tiroglobulin  yang dikembang- kan  PTRR-BATAN  sangat  cocok  untuk penentuan  kadar  tiroglobulin  dalam  serum.
Kit  ini  terdiri  atas  3  komponen  yaitu  antibodi tiroglobulin yang diimobilisasi  kedalam dasar tabung  polistirena  ( coated  tube ),  antibodi tiroglobulin  bertanda 125 I  ( tracer )  dan  antigen yang terdapat dalam sampel/standar. Metode IRMA  merupakan  metode  pengukuran  yang berdasar  pada  reaksi  immunologi  (ikatan antigen-antibodi),  dimana  akan  terjadi  reaksi antara  antigen  (Ag)  yang  terdapat  pada sampel/standar  dengan  antibodi  monoklonal bertanda (Ab*) berlebih [2-5].
Prinsip  pengukuran  kadar  tiroglobulin dengan teknik IRMA tiroglobulin metode coated tube :  antigen  tak  bertanda    yang  ada  dalam standar/sampel dan perunut tiroglobulin (antibodi bertanda Ab*) dalam jumlah berlebih dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  yang sudah  diimobilisasi  dengan  anti  tiroglobulin ( coated  tube ).  Setelah  campuran  diaduk  rata dan diinkubasi pada waktu serta suhu tertentu, maka  dilakukan  pemisahan  antara  antibodi (Ab*)  terikat  dan  antibodi  (Ab*)  bebas. Besarnya  keradioaktifan  Ab*  terikat  dicacah dengan  pencacah  gamma.  Dalam  hal  ini semakin tinggi kadar Ag dalam standar/sampel semakin    banyak  Ab*  yang  terikat  (Ag-Ab*) yang terbentuk.
Untuk  mendapatkan  Kit  IRMA  yang baik  perlu  dilakukan    optimasi  pembuatan komponen kit, optimasi assay, validasi dan uji klinis. Tujuan penelitian ini adalah mendapat- kan  salah  satu  komponen  kit  IRMA tiroglobulin yaitu coated tube dengan kinerja yang  baik  dan  stabil.  Untuk  itu  dilakukan optimasi  pembuatan coated  tube yang meliputi  pemilihan  pelarut,  volume  pelarut, tabung  yang  dibloking  dan  tanpa  dibloking serta volume bloking.

## METODE PENELITIAN

## 1.  Tata Kerja

## Bahan  dan Peralatan
Bahan yang digunakan dalam
penelitian adalah monoklonal anti-tiroglobulin untuk coated  tube E  01326  M  (Biodesign),
Tracer Tg- 125 I  buatan  PTRR,  Standar  Tg PTRR,  dapar  fosfat  0,1  M  pH  7,4,  dapar karbonat  0,  01  M  pH  9,6,  dapar  karbonat bikarbonat  0,05  M  pH  8,6,  dapar  bikarbonat 0,05 M PH 8,6, Bovin Serum Albumin (BSA) Sigma,  Tween  20  (Merck)  Natrium  klorida (Merck ), Tabung polistiren berdasar bintang (NUNC).
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini adalah rak tabung, pengaduk vortex VWR, mikropipet  beserta  tipnya,  pengaduk shaker Heidolf, pencacah gamma DPC.

## 2.  Cara Kerja

## a.  Titer Anti Tiroglobulin
Satu seri larutan anti-tiroglobulin dibuat dalam  dapar  fosfat  0,1  M  pH  7,4  dengan perbandingan : 1:500, 1:1000, 1:2000, 1:4000 dan  seterusnya,    kemudian  larutan  diaduk rata  dan  dimasukkan  ke  dalam  tabung polistiren dasar bintang  masing-masing 500 µL.  Tabung  ditutup  dengan  aluminium  foil dan  diinkubasi  semalam  pada  temperatur kamar.  Cairan  dibuang  dan  tabung  dicuci dengan  1  kali  1  mL  larutan  pencuci  (dapar fosfat  0,01  M  pH  7,4  mengandung  0,05% Tween  20).  Setelah  agak  kering  ke  dalam tabung  dimasukkan  500  µL  dapar  fosfat 0,1 M  pH  pH  7,4  yang  mengandung    BSA  3%. Tabung  ditutup  dengan  aluminium  foil  dan diinkubasi semalam pada temperatur kamar. Larutan dibuang dan tabung dicuci dengan 1
kali 1 mL larutan pencuci. Tabung dikeringkan dan dilakukan uji immunologi untuk mengetahui titer anti-tiroglobulin.
b.  Uji  Imunologi Coated Tube Tiroglobulin Prosedur Baku.
Coated  tube anti-tiroglobulin  disiapkan,
kemudian 100 µL standar tiroglobulin dimasukkan  ke  dalam  tabung coated  tube tersebut.  Sebanyak  200  µL tracer tiroglobulin dengan  cacahan  ±  200000  cpm  (cacahan permenit)  ditambahkan  dan  campuran  di- homogenkan dengan pengaduk vortek. Tabung ditutup  dengan  aluminium  foil  dan  diinkubasi semalam  sambil  diaduk  dengan shaker pada kecepatan  400  putaran  permenit.  Cairan dibuang dan tabung dicuci 1 kali dengan 1 mL larutan pencuci. Tabung dikeringkan kemudian dicacah  menggunakan  pencacah  gamma  dan dihitung besar keradioaktifan fraksi terikat.
c.  Optimasi    Pembuatan Coated  Tube

## Variasi  Pelarut
Larutan anti tiroglobulin dibuat 1:4000 (dari  hasil  titer)  dengan  variasi  jenis  larutan dapar. Adapun dapar yang digunakan adalah dapar  fosfat  0,1  M  pH  7,4,  dapar  karbonat bikarbonat  0,05  M  pH  8,5,  dapar  bicarbonat 0,05 M pH 8,6, dapar karbonat 0,05 M pH 9,6. Larutan  dimasukkan  ke  dalam  tabung polistiren  dasar  bintang  masing-masing sebanyak  500  µL.  Tabung  ditutup  dengan aluminium foil dan diinkubasi semalam pada temperatur  ruang.  Cairan  dibuang  dan tabung  dicuci  dengan  larutan  pencuci    yang sesuai dengan pelarut anti tiroglobulin (dapar fosfat  0,01  M  pH  7,4,  dapar  karbonat bikarbonat  0,01  M  pH  8,5,  dapar  bicarbonat 0,01 M pH 8,6, dapar karbonat 0,01 M pH 9,6 masing-masing  mengandung  0,5%  Tween
20).  Setelah  agak  kering  tabung  dibloking dengan 500 µL larutan bloking sesuai pelarut (dapar  fosfat  0,1  M  pH  7,4,  dapar  karbonat bikarbonat  0,05  M  pH  8,5,  dapar  bicarbonat 0,05 M pH 8,6, dapar karbonat 0,05 M pH 9,6, masing-masing  mengandung  BSA  3%). Tabung  ditutup  dengan  aluminium  foil  dan diinkubasi semalam pada temperatur ruang. Cairan  dibuang  dan  tabung  dicuci  dengan larutan pencuci  yang sesuai dengan pelarut (dapar fosfat 0,01 M pH 7,4, dapar karbonat bikarbonat  0,01  M  pH  8,5,  dapar  bikarbonat 0,05 M pH 8,6, dapar karbonat 0,05 M pH 9,6 masing-masing  mengandung  0,5%  tween 20).  Tabung   dikeringkan  dan dilakukan uji imonologi  dengan  prosedur  immunologi coated tube.
d.  Optimasi  Pembuatan Coated  Tube Variasi Volume Coating
Dibuat  larutan  anti-tiroglobulin  dalam dapar  fosfat  0,1  M  pH  7,4  dengan  per- bandingan  1:4000  (hasil  optimasi  pemilihan pelarut),  setelah  homogen  larutan  dimasuk- kan ke dalam tabung polistiren dasar bintang dengan variasi volume  250 µL, 500 µL, 750 µL  dan  1000  µL.  Tabung  ditutup  dengan aluminium foil dan diinkubasi semalam pada temperatur  ruang.  Cairan  dibuang  dan tabung dicuci dengan larutan pencuci  (dapar fosfat  0,01  M  pH  7,4  mengandung  0,5% Tween  20).  Setelah  agak  kering  tabung dibloking  dengan  500  µL  larutan  bloking (dapar fosfat 0,1 M pH 7,4 yang mengandung BSA 3%). Tabung ditutup dengan aluminium foil dan diinkubasi semalam pada temperatur ruang.  Cairan  dibuang  dan  tabung  dicuci dengan  larutan  pencuci  (seperti  diatas). Tabung  dikeringkan  dan  dilakukan  uji
immunologi  dengan  prosedur  immunologi coated tube.
e.  Optimasi  Pembuatan Coated  Tube

## (Dibloking dan Tanpa Bloking)
Anti-tiroglobulin  dilarutkan  1:4000 dalam    dapar  fosfat  0,1  M  pH  7,4  (hasil optimasi pemilihan pelarut), setelah homogen larutan  didispensing  dalam  tabung  polistiren dasar  bintang  masing-masing  500  µL  (hasil variasi  volume coating ).  Tabung  ditutup dengan aluminium foil dan diinkubasi semalam  pada  temperatur  ruang.  Cairan dibuang  kemudian  tabung  dicuci  dengan larutan  pencuci   sebagian  tabung   dibiarkan kering  dan dilakukan uji immunologi.
Sebagian  tabung  yang  lain  setelah agak kering     kemudian    dibloking    dengan 500 µL larutan bloking (dapar fosfat 0,1 M pH 7,4  mengandung  BSA  3%).  Tabung  ditutup dengan  aluminium  foil  dan  diinkubasi semalam  pada  temperatur  ruang.  Cairan dibuang  dan  tabung  dicuci  dengan  larutan pencuci. Tabung   dikeringkan  dan dilakukan uji  imonologi  dengan  prosedur  immunologi coated tube.
f.  Optimasi    Pembuatan Coated  Tube

## (Variasi Volume Bloking)
Anti-tiroglobulin dilarutkan 1:4000 dalam  dapar    fosfat  0,1  M  pH  7,4  (hasil optimasi pemilihan pelarut), setelah homogen larutan didispensing dalam tabung polistiren dasar bintang masing-masing 500 µL tabung ditutup dengan aluminium foil dan diinkubasi semalam  pada  temperatur  ruang.  Cairan dibuang  tabung  dicuci  dengan  larutan pencuci, setelah agak kering tabung dibloking  dengan  larutan  bloking  variasi
volume : volume  250 L, 500 µL, dan 750 µL. Tabung  ditutup  dengan  aluminium  foil  dan diinkubasi semalam pada temperatur ruang. Cairan  dibuang  dan  tabung  dicuci  dengan larutan  pencuci.  Tabung    dikeringkan    dan dilakukan  uji  imonologi  dengan  prosedur immunologi coated tube.

## g.  Pembuatan Coated Tube
Anti-tiroglobulin dilarutkan 1:4000 dalam dapar    fosfat  0,1  M  pH  7,4  setelah  homogen larutan  didispensing  dalam  tabung  polistiren dasar bintang masing-masing  500 µL. Tabung ditutup  dengan  aluminium  foil  dan  diinkubasi semalam  pada  temperatur  ruang.  Cairan dibuang  dan  tabung  dicuci  dengan  larutan pencuci, setelah agak kering tabung dibloking dengan 500 µL (hasil optimasi volume larutan bloking). Tabung ditutup dengan aluminium foil dan  diinkubasi  semalam  pada  temperatur ruang. Cairan dibuang kemudian tabung dicuci dengan  larutan  pencuci.  Tabung  dikeringkan kemudian  diuji  dengan  prosedur  immunologi coated tu b e.
h.  Uji Kestabilan Coated Tube
Coated tube anti-tiroglobulin disiapkan dengan prosedur yang sudah optimum (dibuat dalam  jumlah  banyak).  Sebanyak  100  µL standar  tiroglobulin  dimasukkan  ke  dalam tabung coated  tube ditambah  200  µL tracer tiroglobulin  dengan  cacahan  ±  200000  cpm (cacahan  permenit)  campuran  dihomogen- kan dengan pengaduk vortek. Tabung ditutup dengan  aluminium  foil  dan  diinkubasi semalam  sambil  diaduk  dengan shaker dengan  kecepatan  400  putaran  permenit. Cairan dibuang  tabung   dicuci   dengan  1 kali 1mL  larutan  pencuci.  Tabung  dikeringkan
kemudian dicacah dengan pencacah gamma dan  dihitung  besarnya  keradioaktifan  fraksi terikat.  Uji  immunologi  terhadap coated  tube dilakukan  secara  berkala  setiap  dua  minggu sekali selama  sepuluh minggu.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Titer  anti-tiroglobulin  perlu  dilakukan dalam  pembuatan coated  tube tiroglobulin, sebelum coated tube tiroglobulin dibuat dalam jumlah  yang  banyak.  Titer  antitiroglobulin dilakukan  untuk  mengetahui  jumlah  antibodi yang  diperlukan  dalam  pembuatan coated tube .
Hasil  titer anti-tiroglobulin dapat dilihat pada gambar 1.
Gambar 1: Kurva Titer Anti-Tiroglobulin
Gambar 1 menunjukkan kurva titer anti- tiroglobulin diperoleh ikatan maksimum  38% dan  NSB  3,75%,  pada  pengenceran  1:1000. Dalam  penelitian  ini  dipilih  pengenceran 1:4000  dengan    ikatan  maksimum  34%  dan NSB 2,83% untuk menghemat jumlah mono- klonal antibodi yang digunakan.
Optimasi  pembuatan coated  tube dilakukan  dengan  beberapa  parameter meliputi : variasi jenis pelarut, variasi volume coating ,  variasi  dengan  dan  tanpa blocking dan variasi volume blocking [6] .
Optimasi  pembuatan coated  tube tiroglobulin  variasi  pelarut  dilakukan  meng- gunakan  dapar: karbonat bikarbonat  0,05 M pH 9,6, fosfat 0,1M pH 7,4,  bikarbonat 0,05 M pH 8,6 dan karbonat 0,05 M pH 9,6. Hasil Optimasi dapat dilihat pada gambar 2.
Gambar  2: Grafik  Optimasi  Pembuatan Coated tube variasi Pelarut
Dari  gambar  2,  paling  optimum diperoleh  pada    ikatan  maksimum  58,36% dan NSB 1,40% menggunakan pelarut dapar fosfat  0,1M  pH  7,4,  kemudian  dapar bikarbonat    0,05 M pH 8,6 diperoleh  ikatan maksimum  50,53%  NSB  1,25%,  sedang dapar  karbonat  bikarbonat  38,66%  NSB 1,65%  dan  dapar  karbonat  38,04%  NSB 1,06%.  Optimasi  pembuatan coated  tube dilanjutkan dengan  dapar fosfat 0,1 M pH 7,4 sebagai pelarut anti-tiroglobulin .
Gambar 3. menunjukkan bahwa
optimasi  volume coating diperoleh  hasil optimum  pada  volume coating 750  µL dengan  ikatan maksimum 23,08%  dan NSB 3,84%, sedang  pada volume 500 µL dengan ikatan  maksimum  21,45  %  NSB    3,76%. Kedua hasil ini tidak menunjukkan perbedaan yang  berarti,  maka  dipilih    volume coating 500  µL  untuk  mengurangi  penggunaan jumlah  antibodi.  Volume coating 250  µL diperoleh  ikatan  maksimum  12,85  %  dan NSB  3,70%. Hasil ini sangat rendah karena
volume coating kurang  dari  volume  assay sehingga mengakibatkan masih ada antigen/ standar yang  tidak berikatan  dengan antibodi.  Pada  volume coating 1000  µL diperoleh ikatan maksimum 22,35% dan NSB 3,94%.  Hal  ini  dimungkinkan  karena  protein yang  terlarut  pada  volume  tersebut  sudah jenuh.  Hasil  optimasi  volume coating pada optimasi pembuatan coated tube tiroglobulin dapat dilihat pada gambar 3.
Gambar 3: Grafik Optimasi Volume Coating
Setelah diperoleh optimasi pelarut dan volume coating dilanjutkan  optimasi  pem- buatan coated  tube tiroglobulin  antara dibloking dan tanpa dibloking. Tujuan bloking adalah untuk menutup pori tabung yang tidak terlapisi antibodi dan untuk melapisi antibodi yang  termobilisasi  ke  dinding  tabung  agar tidak  mudah  lepas.  Dari  percobaan  me- nunjukkan  perbedaan  yang  sangat  berarti yaitu coated tube dengan bloking diperoleh ikatan  maksimum  22,38%  dan  NSB  yang rendah 1,38%, sedang yang tanpa dibloking diperoleh ikatan maksimum 14,43% dan NSB yang  tinggi  7,13%.  Hal  ini  dimungkinkan tracer tiroglobulin terimobilisasi pada dinding tabung  yang  tidak  tertutup  BSA.  Data  per- bedaan coated tube tiroglobulin dibloking dan tanpa bloking dapat dilihat pada gambar 4.
Gambar  4:  Grafik  optimasi coated  tube antara dibloking dan tanpa dibloking.
Gambar  5  menunjukkan  optimasi pembuatan coated  tube variasi  volume larutan  bloking  :  250  µL;  500  µL;  750  µL, berturut-turut  dengan  ikatan  maksimum 40,67  %  NSB  1,89  %,  43,47  %  NSB  1,99% dan  35,92%  dengan  NSB  1,92%.  Kondisi optimum diperoleh pada volume bloking 500 µL  dengan  ikatan  maksimum  43,47%  dan NSB  1,99%.  Hasil  ini  sama  dengan  volume larutan coating .    Hasil  optimasi  pembuatan coated  tube variasi  jumlah  larutan  bloking dapat dilihat pada gambar 5.
Gambar  5:  Grafik  optimasi  pembuatan coated tube tiroglobulin variasi larutan blocking.
Setelah  diperoleh  hasil  yang  optimum pada optimasi pembuatan coated tube , maka untuk  mengetahui  kualitas  dari coated  tube dilakukan uji kestabilan coated tube selama 10 minggu.  Kestabilan coated  tube tiroglobulin dapat dilihat pada gambar 6.
Gambar  6:  Grafik  Kestabilan Coated  tube Selama 10 mingu.
Grafik kestabilan coated tube tiroglobulin (Gambar  6)  terlihat  pada  awal  pembuatan setelah  diuji  imunologi  diperoleh  ikatan maksimum  60,58%  dan  NSB  2,43%. Setelah  4  minggu  terlihat  penurunan  yang sangat  berarti  dengan  ikatan  maksimum 33,59%. Hal ini diduga salah satu komponen sudah  mulai  rusak.  Misalnya tracer sudah mendekati  waktu  paruh,  namun  masih memenuhi syarat Kit IRMA yang baik.

## KESIMPULAN
Dari  penelitian  optimasi  pembuatan coated  tube Tiroglobulin  dapat  disimpulkan bahwa  telah  diperoleh  titer  monoklonal antibodi  1:4000  dan  kondisi  optimum menggunakan  pelarut  dapar  fosfat  0,1M  pH 7,4 dengan volume coating 500 µL, dibloking menggunakan 500 µL  dapar fosfat 0,1M pH
7,4  mengandung  3%  BSA  dengan    ikatan maksimum  60,58%  dan  NSB  1,40%    dan coated tube stabil selama 4 minggu.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terimakasih  kami  sampaukan kepada  ibu  Dra.  Siti  Darwati,  M.Sc.  selaku Kepala  Pusat  dan  bapak  Dr.  Rohadi Awaludin  selaku  Kepala  Bidang  Teknologi
Radiofarmaka  serta  seluruh  staf  dan  teknisi kelompok  radioassay  bidang  Teknologi Radiofarmaka PTRR-BATAN atas terselesai- nya penelitian ini.

## DAFTAR RUJUKAN
[1]  Agus Wibowo dan Muhammad Samsudin “Hubungan kadar tiroglobulin dengan TSH  dan fT4 serum pada anak sekolah  di  tiga  kabupaten  dengan tingkat  endemisitasdefesiansi  iodium yang  berbeda”, Majalah  Penelitian  Gizi dan  Makanan  Balai  Litbang  GAKI, Badan  Litbangkes  Kemennkes  R.I, Vol.36, No. 1, pp:12-19, 2013.
[2]  Wayan  Rediat ning.  “Dasar-dasar  RIA dan  IRMA,  diklat  Operator  Radio- immunoassay (RIA) PRR-Batan Januari 1993”.
[3] Siti  Darwati  “.Teknik  Radioimmuno- assay  (RIA),  Diklat  Produksi  dan Penggunaan  Sediaan  Radiofarmasi’.
Pusat Produksi Radioisotop –Batan, 1994.
[4]  Sutari ,  dkk.,”Optimasi  assay  Kit  RIA Mikroalbumin  Urea  Metode  Coated tube ”. Prosiding  Seminar  Nasional  XI, SDM Teknologi Nuklir,Yogyakarta , 2015.
[5]  Byeong-Cheol Ahn, et.al., “Estimation of True Serum Thyroglobulin Concentration Using  Simultaneous  Measurement  of
Serum Antithyroglobulin Antibody ”. International  Journal  of  Endocrinology, Volume 2013 (2013), Article ID 210639, 7 pages.
[6]  Gina  Mondrida ,  dkk.,  ”Optimasi  Assay Kit  IRMA  TSH ”, Prosiding  Seminar Nasional  XI,  SDM  Teknologi  Nuklir Yogyakarta , 2015.
[7]  R. P. Aprilia dkk., ”Spesifitas dan sensitifitas thyroglobulin  dan  profil  Protein  Serum Tikus  (Ratus  Norvegitus),  Model  Auto- immun Thoriditis ”, Program Studi
Kedokteran  Hewan,  Kedokteran  Hewan,
Universitas Brawijaya Fakultas Matematika dan  Pengetahuan  Alam,  Universitas Brawijaya.
[8]  F.  R.  Amsriz  &  H.      Hardijanto,  Bagian Ilmu  Bedah;  Sub  Bagian  Ilmu  Bedah
Onkologi. Fakultas
Kedokteran
Universitas  Gajah  Mada.  Hubungan Usia Dengan Kejadian  Kanker Tiroid Di
Rumah Sakir Dr. Sadjito.
[9]  Prosedur Reyky hTg [ 125 I] IRMA KIT