## UJI FITOKIMIA DAN UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARI EKSTRAK ETANOL SPONS Lamellodysidea herbacea
Hanna M. Rumagit 1) , Max R.J.  Runtuwene 2) , Sri Sudewi 1) 1) Program Studi Farmasi Fakultas MIPA UNSRAT Manado
2) Jurusan Kimia FMIPA UNSRAT Manado

## ABSTRACT
Lamellodysidea  sponge  herbacea  are  marine  animals  that  contain  active compounds which activeness percentage larger than the compounds produced by land  plants.  This  study  aimed  to  test  the  phytochemical  content  and  antioxidant activity of ethanol extract of the sponge Lamellodysidea herbacea. Extraction was done by maceration method using ethanol solvent. Phytochemical testing include tests  alkaloids,  flavonoids,  steroids,  saponins  and  tannins.  Testing  antioxidant activity  with  DPPH  method  (1,1- diphenyl- 2 -pikrilhidrazil )  measured  at  a wavelength of 520 nm. Phytochemical test results showed secondary metabolites contained  in  the  ethanol  extract  alkaloids  such  sponges,  flavonoids,  steroids, saponins and tannins. The ethanol extract Lamellodysidea herbacea sponge has a relatively strong antioxidant activity based on IC 50 values obtained at 85.10 ppm
Key words : Lamellodysidea herbacea , phytochemistry test, antioxidants, DPPH.

## ABSTRAK
Spons Lamellodysidea  herbacea merupakan  hewan  laut  yang  mengandung senyawa  aktif  yang  persentase  keaktifannya  lebih  besar  dibandingkan  dengan senyawa-senyawa  yang  dihasilkan  oleh  tumbuhan  darat.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  menguji  kandungan  fitokimia dan  aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak  etanol spons Lamellodysidea  herbacea. Ekstraksi  dilakukan  dengan  metode  maserasi dengan  menggunakan  pelarut  etanol.  Pengujian  fitokimia  meliputi  uji  alkaloid, flavonoid,  steroid,  saponin  dan  tanin.  Pengujian  aktivitas  antioksidan  dengan metode DPPH (1,1- difenil- 2 -pikrilhidrazil ) yang diukur pada panjang gelombang 520 nm. Hasil uji fitokimia menunjukan metabolit sekunder yang terdapat dalam ekstrak  etanol  spons  diantaranya  alkaloid,  flavonoid,  steroid,  saponin  dan  tanin. Ekstrak  etanol  spons Lamellodysidea  herbacea memiliki  aktivitas  antioksidan yang tergolong kuat berdasarkan nilai IC 50 yang diperoleh sebesar 85,10 ppm.
Kata kunci : Spons Lamellodysidea herbacea , uji fitokimia, antioksidan,  DPPH.

## PENDAHULUAN
Radikal  bebas  merupakan  salah satu  bentuk  senyawa  reaktif,  yang secara  umum  diketahui  sebagai senyawa  yang  memiliki  elektron yang tidak berpasangan dikulit terluarnya  (Winarsi,  2007).  Adanya radikal bebas didalam tubuh menusia berperan dalam patologi dari berbagai penyakit degenerative yakni kanker, aterosklerosis, rematik, jantung koroner, katarak dan penyakit  degenerasi  saraf  seperti parkinson  (Silalahi,  2006).  Radikal bebas dapat ditangkal dengan pemberian  antioksidan  atau  dengan menkonsumsi antioksidan (Halliwell, 2007).
Antioksidan adalah senyawa kimia  yang  dapat  digunakan  untuk melindungi komponen biologi seperti lipida,  protein,  vitamin  dan  DNA melalui perlambatan kerusakan, ketengikan  atau  perubahan  warna yang disebabkan oleh oksidasi
(Suryanto,  2012).  Sumber-sumber antioksidan dapat berupa antioksidan sintetik  maupun  antioksidan  alami
(Gordon, 1994). Penggunaan senyawa  antioksidan  berkembang
dengan  pesat  baik  untuk  makanan maupun  pengobatan.  Penggunaan
sebagai  obat  makin  berkembang seiring  dengan  makin  bertambahnya pengetahuan  tentang  aktifitas  radikal bebas  terhadap  beberapa  penyakit degeneratif  seperti  penyakit  jantung dan kanker (Boer, 2000).
Spons  adalah  organisme  laut  yang memiliki  potensi  cukup  besar  dalam menghasilkan senyawa aktif.
Didunia  diduga  terdapat  sekitar 10.000
spesies spons dan diperkirakan  sekitar  200  spesies hidup  diekosistem  terumbu  karang Asia  Tenggara  (Dahuri et  al .,  2001).
Spons  dilaporkan  memiliki  aktivitas antikanker, antimikroba dan
antiparasit  ( Amir  dan  Budianto,
1996). Dari penelitian-penelitian tentang  spons  yang  telah  dilakukan sebelumnya mendorong peneliti untuk  melakukan  penelitian  untuk membuktikan bahwa spons Lamellodysidea herbacea sp. memiliki kandungan metabolit
sekunder  yang  dapat  berpotensi sebagai antioksidan. Metabolit sekunder  yang  bersifat  antioksidatif diantaranya adalah alkaloid, flavonoid, tanin, steroid dan saponin.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Alat
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian ini yaitu: Masker, gunting, sarung  tangan,  pisau,  snorkel,  fins, tabung  oksigen,  erlenmeyer,  gelas ukur,  tabung  reaksi,  rak  tabung reaksi, Baker glass , pipit tetes, mikro pipet, batang pengaduk, cawan petri, water  bath, ultrasonic  ultra  8060  D-
H, rotary  evaporator  steroglass strike 300, spektrofotometer
( Shimadzu  1800 ),  timbangan  ( A&D company limited ).

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan dalam penelitian ini antara lain spons Lamellodysidea herbacea , kertas saring, tissue, alumunium foil, kertas label,  etanol,  aquadest,  asam  klorida 1  N,  besi  (III)  klorida,  kloroform, amoniak  10%,  asam  sulfat  2  M, reagen Mayer, asam  klorida  pekat, serbuk  magnesium, 1,1  difenil-2- pikrilhidrazil (DPPH).

## Prosedur Kerja
1. Pengambilan Sampel
Sampel  diperoleh  dari  perairan pantai  Malalayang  kota  Manado, pengambilan  sampel  menggunakan
alat  bantu  (masker,  snorkel,  fins, tabung oksigen). Sampel yang didapat  dibersihkan  dari  pengotor, lalu dipotong kecil-kecil dan langsung  diekstraksi  dengan  metode maserasi menggunakan pelarut etanol.  Sampel  yang  diekstraksi kemudian  dibawah  ke  Laboratorium Fitokimia  Program  Studi  Farmasi  F- MIPA Unsrat untuk dilakukan penelitian lebih lanjut .
2. Ekstraksi Metode

## Maserasi
Sampel  ditimbang  dan  diperoleh direndam  dengan  larutan  etanol dengan  perbandingan  1:3  (b/v). Metode  ekstraksi  dilakukan  dengan cara  merendam  sampel  dalam  cairan penyari  selama  3  kali  24  jam  pada temperatur  kamar  yang  dilindungi dari  cahaya  dengan  menghasilkan filtrat  3  dan  debris  3.  Ke  3  filtrat yang didapat kemudian dicampurkan menjadi  satu  dan  disaring  dengan menggunakan  kertas  saring,  filtrat kemudian dipekatkan dengan menggunakan rotary evaporator, karena  ekstrak  masih  mengandung cairan  pelarut  sehingga  ekstrak  yang telah dievaporasi, dipekatkan dengan bantuan water bath.
3. Uji Fitokimia (Harborne, 1996)
a. Uji Alkaloid
Sebanyak 4 mL ekstrak etanol  spons dimasukan  ke    dalam  tabung  reaksi
kemudian ditambahkan 2 mL kloroform  dan  5  mL  amoniak  10  %, lalu ditambahkan 10 tetes asam sulfat 2  M  untuk  memperjelas  pemisahan terbentuknya  2  fase  yang  berbeda. Bagian  atas  dari  fase  yang  terbentuk diambil, kemudian ditambahkan reagen Mayer .  Keberadaan  alkaloid dalam sampel ditandai dengan terbentuknya endapan merah.
b. Uji Flavonoid
Ekstrak ekstrak etanol spons sebanyak 1 mL diambil ditambahkan serbuk  magnesium  secukupnya  dan 10 tetes asam klorida pekat. Keberadaan flavonoid ditandai dengan  terbentuknya  warna  hitam kemerahan, kuning atau jingga.

## c. Uji Steroid
Sebanyak 1 mL ekstrak  etanol spons diambil  dan  ditambahkan  dengan  2 mL  kloroform.  Setelah  itu  campuran
dikocok.
Kemudian filtrat ditambahkan  asetat  anhidrat  dan
asam  sulfat  pekat  masing-masing sebanyak    2  tetes.  Reaksi  positif ditunjukan  pada  perubahan  warna merah  pada  larutan  pertama  kali kemudian  berubah  menjadi  biru  dan hijau.

## 4. Uji  Aktivitas  Antioksidan dengan Metode DPPH
Penentuan  aktivitas  penangkal radikal  bebas  DPPH  menurut  Burda dan  Olezek  (2001).  Larutan  uji  yang telah  dibuat,  masing-masing  diambil sebanyak  1  mL  dan  direaksikan dengan  1,5  mL  larutan 1,1  difenil-2- pikrilhidrazil (DPPH)  dalam  etanol dan  divortex  selama  2  menit. Berubahnya  warna  larutan  dari  ungu menjadi kuning menunjukkan efisiensi  penangkal  radikal  bebas. Selanjutnya  pada  5  menit  terakhir menjelang 30 menit inkubasi, absorbansi  diukur  pada  panjang gelombang 520 nm dengan menggunakan  spektrofotometer  UV- Vis.
5.  Perhitungan Persen Inhibisi dan Nilai IC 50 Setelah absorbansi didapat, besarnya persentase penangkal
radikal bebas (persen inhibisi) dihitung dengan rumus berikut :
% inhibisi =
Nilai IC 50 merupakan konsentrasi dimana  ekstrak  dapat  menangkap radikal  bebas  sebesar  50%  yang diperoleh dengan
memakai persamaan  regresi  linear  y  =  a  +  bx. Grafik  dibuat  dengan  konsentrasi sampel  uji  (ppm)  sebagai  absis (sumbu  x)  terhadap  persen  inhibisi sebagai ordinat (sumbu y).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Pengambilan dan Determinasi
Sampel  diperoleh  dari  perairan pantai  Malalayang  kota  Manado  dan determinasi  spons Lamellodysidea herbacea dilakukan  di  Fakultas Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan.  Hasil determinasi menunjukan bahwa jenis spons  yang  diteliti  ialah  spons Lamellodysidea  herbacea. Tujuan dilakukannya  determinasi  ialah  agar tidak terjadi kesalahan dalam pengambilan  sampel  yang  akan digunakan  pada uji  fitokimia  dan  uji aktivitas antioksidan.
Uji Fitokimia
Pengujian  fitokimia  dilakukan  untuk mengidentifikasi kandungan
senyawa  aktif  yang  terkandung dalam  tumbuhan.  Pada  penelitian  ini pengujiannya  dilakukan  dengan  cara mengambil sedikit sampel dari ekstrak hasil maserasi, lalu ditambahkan  reagen  sesuai  dengan senyawa  yang  akan  diidentifikasi. Hasil  uji  fitokimia  pada  ekstrak etanol spons Lamellodysidea herbacea menunjukkan bahwa terdapat  senyawa  bioaktif  yaitu alkaloid,  flavonoid,  steroid  saponin dan tanin (lihat tabel 1).
Tabel 1. Uji fitokimia Ekstrak Etanol spons Lamellodysidea herbacea
UJI FITOKIMIA Ekstrak etanol INDIKATOR Alkaloid + Terbentuk endapan merah Flavonoid + Perubahan warna menjadi hitam kemerahan Steroid + Perubahan warna menjadi hijau Saponin + Terbentuk busa yang stabil Tanin + Perubahan warna hitam kehijauan/kuning

## Uji Alkaloid
Pada pengujian alkaloid, yang positif mengandung  alkaloid.  Hasil  positif alkaloid  ditunjukkan  dengan  adanya
endapan  merah  pada  uji  alkaloid
dengan menggunakan pereaksi
Mayer  (HgCl2  +  KI).  Alkaloid mengandung  atom  nitrogen  dan bersifat basa sehingga untuk mengekstraknya dibutuhkan penambahan  asam  sulfat.  Atom nitrogen  yang  mempunyai  pasangan
elektron bebas pada alkaloid mengganti  ion  iod  dalam  pereaksi mayer, hal ini mengakibatkan terbentuknya  endapan  merah  pada penambahan  pereaksi  mayer  karena nitrogen pada alkaloid  akan bereaksi dengan  ion  logam  K + dari  pereaksi Mayer  (Marliana et  al .,  2005;  Sangi dkk., 2008). Alkaloid pada umumnya berbentuk kristal yang disebut dengan garam-garam alkaloid.

## Uji Flavonoid
Pada  hasil  uji  flavonoid,  sampel menunjukan  hasil  yang  positif  yakni mengalami perubahan warna menjadi
hitam kemerahan. Flavonoid merupakan  senyawa  polar  karena mempunyai sejumlah
gugus
hidroksil. Oleh karena itu, umumnya flavonoid  larut  dalam  pelarut  polar seperti  etanol.  Etanol  berfungsi sebagai  pembebas  flavonoid  dari bentuk garamnya. Penambahan asam
klorida pekat berfungsi untuk protonasi flavonoid hingga terbentuk garam flavonoid. Setelah
penambahan bubuk magnesium, hasil  positif  ditunjukkan  dengan perubahan  warna  larutan  menjadi hitam  kemerahan.  Warna  hitam kemerahan yang dihasilkan menandakan adanya flavonoid akibat dari  reduksi  oleh  asam  klorida  pekat dan magnesium (Harborne, 1987).

## Uji Steroid
Pada  pengujian  steroid  menunjukan hasil positif karena dibuktikan dengan  terjadinya  perubahan  warna larutan menjadi hijau ketika ditambahkan  dengan  kloroform  dan asam  sulfat  pekat  yang  menandakan adanya  steroid.  analisis  senyawa didasarkan pada kemampuan senyawa  tersebut  membentuk  warna dengan  H 2 SO 4 pekat  dalam  pelarut asam asetat anhidrat (Ciulei, 1984).

## Uji  Aktifitas  Antioksidan  dengan Metode DPPH
Konsentrasi  ekstrak  etanol  sampel spons Lamellodysidea herbacea yang digunakan  adalah  50  ppm,  100  ppm dan 150 ppm. Masing-masing konsentrasi  dipipet  1  mL  dan
dicampurkan  dengan  1,5  mL  larutan DPPH  93  μM.  Campuran  tersebut
dihomogenkan dan diinkubasi selama  30  menit  pada  tempat  gelap pada  suhu  37 0 C.  Hal  ini  dilakukan untuk mengoptimalkan aktivitas DPPH  agar  terjadi  reaksi  antara DPPH  dengan  sampel  yang  diuji.
(Hatano et al ., 1998).
Dari  hasil  pengukuran  diperoleh absorbansi yang kemudian digunakan  untuk  perhitungan  nilai persen inhibisi atau persen perendaman  senyawa  antioksidan (sampel)  terhadap  DPPH.  Data persen  inhibisi  ekstrak  etanol  spons Lamellodysidea  herbacea di  sajikan pada Gambar 2 berikut ini :
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh pada  Gambar  2  menujukan  bahwa pengukuran  persen  inhibisi  pada ekstrak  etanol  spons  mengalami peningkatan  pada  konsentrasi  50 ppm-150  ppm.  Pada  ekstrak  etanol spons  dengan  konsentrasi  150  ppm memiliki  persen  inhibisi  yang  tinggi
yaitu sebesar 77,08 ppm.
Peningkatan  persen  inhibisi  pada ekstrak  etanol  spons Lamellodysidea herbacea menandakan bahwa konsentrasi ekstrak yang ditambahkan mempengaruhi kemampuan ekstrak dalam
merendam  radikal  bebas.  Hasil  ini didukung  oleh  penelitian  yang  telah dilakukan  oleh  Hanani et  al .,  (2005) yang  menyatakan  bahwa  presentasi penghambat (persen inhibisi) terhadap aktivitas radikal bebas akan ikut meningkat seiring dengan meninggkatnya konsentrasi.
Aktivitas  penangkapan  radikal  bebas DPPH  ekstrak  etanol  spons  dapat dinyatakan  dengan  parameter  IC 50 yaitu  konsentrasi  senyawa  uji  yang menyebabkan  penangkapan  terhadap radikal  bebas  sebesar  50  %.  Nilai IC 50 ditentukan  dari  persamaan regresi  linier  antara  konsentrasi bahan uji dengan persentase penangkal  radikal  bebas  rata-rata dari masing-masing konsentrasi. Harga  IC 50 berbanding  terbalik dengan aktivitas antioksidan. Semakin  besar  harga  IC 50 aktivitas antioksidan  semakin  kecil,  artinya konsentrasi  yang  dibutuhkan  untuk
23.955 62.5 76.04 0 20 40 60 80 50 100 150 Pe rsen In h ib isi Konsentrasi (ppm)
menghasilkan  aktivitas  antioksidan sebesar 50 % semakin besar.
Berdasarkan  hasil  perhitungan  IC 50 menunjukan  bahwa  ekstrak  etanol spons Lamellodysidea herbacea memiliki aktivitas antioksidan dengan  nilai  IC 50 yaitu  85,10  ppm. Semakin  kecil  nilai  IC 50 semakin tinggi  aktivitas  antioksidan.  Secara spesifik,  suatu    senyawa  dikatakan sebagai  antioksidan    yang  sangat kuat  bila  IC 50 <  50  ppm,  kuat  bila nilai  IC 50 bernilai  50-100  ppm, sedang  bila  IC 50 bernilai  100-150 ppm,  dan  lemah  bila  nilai  IC 50 bernilai  151-200  ppm  (Blois,  2005). Menurut klasifikasi ini ekstrak etanol
spons Lamellodysidea herbacea
tergolong memiliki
aktivitas
antioksidan  yang  kuat,  karena  nilai IC 50 -nya  bernilai  diantara  50-100 ppm, yaitu 85,10 ppm.
Berdasarkan  hasil  perhitungan  IC 50 menunjukan  bahwa  ekstrak  etanol spons Lamellodysidea herbacea memiliki  aktivitas  antioksidan  yang tergolong  kuat  pada  biota  laut  ini. Hal  ini  sesuai  yang  dikemukakan oleh  Winarsi  (2007)  pembentukan sel kanker salah satunya dapat dipicu oleh  adanya  senyawa  radikal  bebas di  dalam  tubuh  yang  dapat  merusak
asam  lemak  tak  jenuh  ganda  pada memran  sel  yang  mengakibatkan dinding  sel  menjadi  rapuh.  Senyawa radikal bebas ini berpotensi  merusak DNA  sehingga  mengacaukan  sistem info  genetika  dan  berlanjut  pada pembentukan  sel  kanker.  Radikal bebas dapat ditanggkal atau direndam dengan pemberian
antioksidan atau menkonsumsi antioksidan (Halliwell, 2007). Sesuai dengan  yang  dikemukakan  oleh Trilaksani  (2003)  antioksidan  juga dapat  berperan  dalam  menekan prolifersi  (perbanyakan)  sel  kanker, karena antioksidan berfungsi menutup  jalur  pembentukan  sel ganas (blocking agent).

## KESIMPULAN
1.
S enyawa  metabolit  sekunder  yang terdapat  dalam  ekstrak  etanol spons Lamellodysidea  herbacea berdasarkan  uji  fitokimia  yaitu alkaloid, flavonoid, steroid,
saponin dan tanin,. 2. E kstrak etanol spons Lamellodysidea herbacea memiliki  aktivitas  antioksidan yang tergolong kuat,  karena nilai
IC 50 -nya bernilai diantara 50-100 ppm, yaitu 85,10 ppm.

## DAFTAR PUSTAKA
Depkes  RI.  2000. Parameter  Standar  Umum  Ekstrak  Tumbuhan  Obat .
Cetakan Pertama. Jakarta : Depkes RI. Hal. 10-11.
Halliwell B.2007. Dietary polyphenols: good, dad, or indifferent for  your health. J. Cardiovascular Research 73: 341-347.
Harborne,  J.B.  1996.  Metode  Fitokimia:  Penentuan  Cara  Modern Menganalisa  Tumbuhan.  Terjemahan  Kosasih  Padmawinata  dan  Iwang Soediro. Bandung: ITB.
Robinson,  T.  1995 .  Kandungan  Organik  Tumbuhan  Tinggi .  Edisi  ke-6. Terjemahan Padmawinata, K. ITB, Bandung.
Silalahi, J. 2006. Makanan Fungsional. Kanisius. Jogjakarta
Suryanto  E.  2012. Fitokimia  Antioksidan .  Putra  Media  Nusantara,
Surabaya.
Winarsi,  H.2007. antioksidan  Alami  dan  Radikal  Bebas. Kanisius, Jogyakarta.