Manalagi Apple Vinegar ( Malus sylvestris Mill) as Anti Diabetic to Alloxan Induced Wistar White Male Rat
Valentina Verrell Purnomo 1) , A. Sareh Arjono Tjandra 1) , Risma 1)
1) Fakultas Kedokteran Universitas Hang Tuah Surabaya
Email : valentinaverrell@yahoo.co.id

## ABSTRACT
Apple  vinegar  is  estimated  to  be  able  to  cure  diabetes.  Vinegar  is  able  to control  the  increase  of  glicemic  index.  Apple  has  antioxidant  substance  such  as quercetin and chlorogenic acid. Manalagi apple could be found easily in Indonesia.
This  research  aims  to  reveal  the  effect  of  Manalagi  apple  vinegar  ( Malus sylvestris Mill) towards blood glucose level of alloxan induced Wistar white male rats ( Rattus norvegicus ).
This  research  is  experimental  laboratory  using Experimental methods.  The samples are 30 white rats divided into three groups for 31 days, 1) group which only given  standard  diet;  2)  group  that  induced  by  120mg/dL  alloxan;  3)  group  that induced by 120mg/dL alloxan and Manalagi apple vinegar 0.27ml/100gram weight for 14 days. The measurement of blood serum glucose level is done on day twenty four using homogenous colorimetric enzymatic test method for all groups.
Blood  glucose  average  in  group  with  only  given  standard  diet  as  negative control group (182.33 mg/dL), group which induced by 120mg/dL alloxan as positive control  group  (205.2  mg/dL),  group  which  induced  by  120mg/dL  alloxan  and Manalagi  apple  vinegar  as  treatment  group  (212.25  mg/dL).  The  result  of One-Way Anova significance is 0.229.
The  conclusion  of  this  research  is  that  Manalagi  apple  vinegar  treatment doesn’t  able  to  decrease  the  blood  glucose  level  of  white  Wistar  male  rats significantly.
Keywords : Malus sylvestris Mill, Blood glucose, Alloxan.

## ABSTRAK
Cuka  apel  diperkirakan  dapat  berfungsi  dalam  pengobatan  diabetes.  Cuka mampu  mengontrol  kenaikan  indeks  glikemik.  Apel  memiliki  zat  antioksidan  seperti quercetin  dan  asam  klorogenat.  Apel  manalagi  merupakan  jenis  apel  yang  dapat dijumpai dengan mudah di Indonesia.
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  efek  cuka  apel  manalagi  ( Malus sylvestris Mill)  terhadap  penurunan  kadar  glukosa  darah  tikus  putih  ( Rattus norvegicus ) jantan galur Wistar yang diinduksi alloxan.
Penelitian  eksperimental  ini  menggunakan  metode Experimental .  Sampel yang digunakan adalah tikus putih 30 ekor yang dibagi menjadi 3 kelompok selama 31  hari,  yaitu  1)  kelompok  tikus  yang  hanya  diberi  diet  standar;  2)  kelompok  tikus
yang  diinduksi  alloxan;  3)  kelompok  tikus  yang  diinduksi  alloxan  dengan  dosis 120mg/kgBB tikus serta diberi cuka apel manalagi 0,27ml/100 gram BB tikus selama 14  hari.  Pengukuran  kadar  glukosa  darah  serum  tikus  dilakukan  pada  hari  ke-24 dengan metode tes kolorimetrik enzimatik homogen pada semua kelompok tikus.
Rerata  kadar  glukosa  darah  kelompok  tikus  dengan  diet  standar  atau kelompok kontrol negatif (182,33 mg/dL), kelompok tikus yang diinduksi alloxan atau kelompok  kontrol  positif  (205,2  mg/dL),  kelompok  tikus  yang  diinduksi  alloxan  serta diberi  cuka  apel  manalagi  atau  kelompok  perlakuan  (212,25  mg/dL).  Hasil  uji One- Way Anova menunjukkan nilai signifikansi 0,229.
Kesimpulan  dari  penelitian  ini  adalah  pemberian  cuka  apel  manalagi  ( Malus sylvestris Mill) tidak dapat menurunkan kadar glukosa darah tikus putih jantan secara signifikan.
Kata kunci : Malus sylvestris Mill, Glukosa darah,  Alloxan

## PENDAHULUAN
Apel dihasilkan dari pohon apel, buah apel biasanya berwarna merah kulitnya jika  telah  matang,  bisa  juga  hijau  atau  kuning.  Kulit  buahnya  agak  lembek,  daging buahnya keras dan memiliki beberapa biji di dalamnya.
Cuka  adalah  cairan  yang  masam  rasanya  yang  diproduksi  oleh  bahan  yang mengandung  pati  dan  gula  melalui  proses  fermentasi  alkoholik  dan acetous .  Cuka mampu  menghambat  aksi  enzim  disakaridase  yang  menyebabkan  penyerapan glukosa  hasil  pencernaan  akan  lebih  lambat  dan  kenaikan  indeks  glikemik  dapat terkontrol (Ogawa et al. , 2000).
Cuka  apel  adalah  larutan  asam  yang  dihasilkan  dengan  memfermentasikan apel.  Cuka apel mengandung  vitamin dan mineral (Banna and Kawar, 1982).  Cuka apel mengandung cukup banyak kalium. Kalium diperlukan untuk perbaikan jaringan ikat  dan  penggantian  jaringan  yang  telah  rusak  dalam  tubuh.  Cuka  apel mengandung  asam  asetat  dan  senyawa  antioksidan  alami  yang  dibuktikan  dengan kemampuannya dalam menurunkan kadar glukosa darah tikus yang diberi diet tinggi gula (Zubaidah and Rosdiana, 2016).
Banyak  yang  telah  menggunakan  berbagai  tanaman  sebagai  obat  alternatif dari  diabetes  dikarenakan  timbulnya  kekhawatiran  akan  efek  samping  dari  obat- obatan  diabetes.  Salah  satu  contoh  pengobatan  alternatif  dengan  menggunakan apel  dalam  bentuk  cuka  apel.  Pemilihan  cuka  apel  untuk  membantu  mengatasi diabetes ini dikarenakan apel bukanlah buah yang susah dijumpai dan juga mudah didapat,  terutama  untuk  jenis  apel  manalagi  dan  juga  cuka  selain  akan
kemampuannya,  cuka  juga  dapat  digunakan  dalam  waktu  yang  cukup  lama meskipun sudah melampaui batas kadaluarsanya.
Diabetes  Mellitus  (DM)  merupakan masalah  di  bidang  kesehatan yang  besar karena  mencakup  populasi  yang  besar.  Berdasarkan  estimasi  terakhir  IDF ( International Diabetec Federation) , terdapat 382 juta orang yang hidup dengan diabetes di  dunia  pada  tahun  2013.  Pada  tahun  2035  jumlah  tersebut  diperkirakan  akan meningkat  menjadi  592  juta  orang.  (Kemenkes  RI,  2014).  Diabetes  Mellitus merupakan penyakit gangguan meta bolik menahun akibat pankreas tidak memproduksi cukup  insulin  atau  tubuh  tidak  dapat  menggunakan  insulin  yang  diproduksi  secara efektif (Kemenkes RI, 2014).
Berdasarkan  uraian  di  atas,  peneliti  ingin  meneliti  bagaimana  pengaruh pemberian  cuka  apel  dengan  jenis  apel  manalagi  ( Malus  sylvestris Mill)  terhadap kadar glukosa darah pada tikus jantan ( Rattus norvegicus ) galur Wistar yang menjadi diabetes karena diinduksi aloksan.

## METODE PENELITIAN

## Alat
Kandang  tikus,  timbangan  hewan,  timbangan  analitik,  spuit  3cc  untuk mengambil darah, spuit 3cc dan sonde oral untuk penggunaan cuka apel pada tikus, wadah  plastik,  beaker  glass  50cc  dan  batang  pengaduk,,  spektrofotometer,  sonde intragastrik, scalpel, handschoen, masker, Alloxan monohidrat, ketamine HCl, kapas, kertas label.

## Bahan
1.  Tikus  putih  ( Rattus  norvegicus )  jantan  jalur  wistar  sehat  usia  2,5  –  3  bulan, berat 150 – 200 gram. Jumlah tikus tiap kelompok 10 ekor.
2.  Diet standar (pelet), cuka apel manalagi, aquadest.

## Pembuatan Cuka Apel
Pilih  apel  yang  matang  dan  berkualitas  baik,  cuci  dan  potong  tipis  –  tipis. Rebus  sampai  mendidih,  setelah  mendidih  kecilkan  api  dan  masukan  gula  pasir, diamkan  selama  30-45  menit  hingga  tercium  aroma  apel.  Angkat  dan  saring, masukan  sari  rebusan  apel  ke  botol  kaca.  Tutup  botol  kaca  dengan  rapat.  Biarkan
dingin  dalam  botol  kaca,  lalu  tambahkan  yeast  dan  tutup  kembali.  Tunggu  1-2 minggu  hingga  terbentuk  alkohol,  buka  tutup  botol  dan  gantikan  dengan  kain  kasa. Fermentasikan selama kurang lebih 2 minggu.

## Perhitungan Dosis Cuka Apel
Dosis  perhari  cuka  apel  untuk  manusia  adalah  15-30ml/hari.  Dengan menggunakan metode konversi dari Laurence and Bacharach, dengan estimasi berat manusia adalah 70kg untuk tikus seberat 200gram diperoleh faktor konversi 0,018.
Sehingga dosis untuk 200gram tikus = faktor konversi x dosis manusia
= 0,018 x 30ml
= 0,54ml/200 gram BB tikus
= 0,27ml/100 gram BB tikus

## Desain Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  desain  penelitian post  test  only  control  group . Penelitian ini merupakan penelitian experimental yang dilakukan dalam laboratorium sehingga  segala  perlakuan  terhadap  sampel  dapat  lebih  terkendal.  Sampel  dibagi dalam 3 kelompok, antara lain :
K(-) : Kelompok yang hanya diberi diet standar
K(+)  : Kelompok yang diinduksi alloxan dan diberi diet standar
K(P)   :  Kelompok  yang  diinduksi  alloxan  dan  diberi  cuka  apel 0,27ml  /100gram  BB tikus

## Tahap Perlakuan
Setelah  proses  adaptasi  selesai  dilakukan,  semua  tikus  putih  jantan  galur wistar  dibagi  menjadi  tiga  kelompok  secara  random,  yaitu  kelompok  K(-),  kelompok K(+), kelompok K(P). Selanjutnya dilakukan pengukuran dan pencatatan berat badan tikus  pada  setiap  kelompok.  Kemudian  untuk  tiap  kelompok  tikus  akan  diberi perlakuan berbeda sebagai berikut:
a.  Kelompok  kontrol  negatif,  semua  tikus  pada  kelompok  ini  hanya  akan  diberi diet standar selama 17 hari
b.  Kelompok kontrol positif, semua  tikus pada kelompok ini  yang telah  diinduksi alloxan akan diberi diet standar selama 14 hari tanpa diberikan cuka apel.
c.  Kelompok  perlakuan,  semua  tikus  pada  kelompok  ini  yang  telah  diinduksi alloxan akan diberikan diet standar selama 14 hari disertai dengan pemberian
heksokinase
G6PDH
cuka apel dengan dosis 0,27ml/100gramBB tikus dengan cara disonde oral 1 kali dalam 1 hari selama 14 hari.
d.  Semua kelompok akan diberikan aquades setiap hari selama masa penelitian.
e.  Pada  hari  ke-24,  pengambilan  darah  tikus  dilakukan  untuk  selanjutnya diperiksa kadar glukosa setelah penelitian.

## Cara Pemeriksaan Kadar Gula Darah
Metode  enzimatik  menggunakan  heksokinase.  Heksokinase  mengkatalisis fosforilasi  dari  glukosa  dengan  ATP  untuk  membentuk  glukosa-6-fosfat  dan  ADP. Reaksi  selanjutnya,  enzim  kedua,  glukosa-6-fosfat  dehydrogenase  (G6PDH) digunakan  untuk  mengkatalisis  oksidasi  dari  glukosa-6-fosfat  dengan  NADP + untuk membentuk NADPH.

## D-glukosa + ATP
D-glukosa-6-fosfat + ADP D-glukosa-6-fosfat + NADP + D-6-fosfoglukonat + NADPH + H +
Konsentrasi  NADPH  yang  terbentuk  berbanding  lurus  dengan  konsentrasi glukosa. Hal ini ditentukan dengan mengukur peningkatan absorbansi pada 340nm.

## Analisis Data
Data  diolah  dengan  menggunakan software SPSS  versi  23.0.  Data  kadar  glukosa merupakan  data  numerik  sehingga  pilihan  uji  statistik  yang  digunakan  adalah  uji parametrik. Kemudian data dianalisis secara statistik dengan uji parametrik One Way ANOVA dengan nilai α = 5%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tabel 1. Hasil pemeriksaan sampel darah tikus

## Kadar glukosa (mg/dL)
No Kelompok kontrol (-) Kelompok kontrol (+) Kelompok perlakuan 1 148 175 226 2 203 178 226 3 159 189 281 4 167 212 194 5 116 213 211
Gambar 1. Diagram batang rerata kadar glukosa darah ketiga kelompok
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Hewan  Coba  Fakultas  Kedokteran Hang  Tuah  Surabaya.  Sampel  yang  digunakan  adalah Wistar  jantan  dewasa  berusia  2,5 dengan  kondisi  fisik  yang  sehat,  sejumlah  30  ekor.  Tikus  tersebut  terbagi  dalam  3 kelompok yaitu kelompok kontrol negatif (diberi diet standar), kelompok kontrol positif (diinduksi alloxan), dan kelompok perlakuan (diinduksi alloxan serta diberi cuka apel) yang  masing-masing  berjumlah  10  ekor  tiap  kelompoknya.  Selama  jalannya penelitian, terdapat 3 ekor tikus yang mati, sehingga jumlah sampel menjadi 27 ekor tikus, dengan pembagian kelompok kontrol negatif sebanyak 9 ekor tikus, kelompok kontrol positif 10 ekor tikus, dan kelompok perlakuan 8 ekor tikus.
Bahan  dasar  apel  dalam  cuka  apel  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  telah dideterminasi oleh Laboratorium Botani Jurusan Bi Pemilihan  apel  sebagai  objek  penelitian  ini  karena  apel  tidak  susah  dijumpai  dan
165 170 175 180 185 190 195 200 205 210 215 Kelompok Kontrol (-) Kelompok Kontrol ( 182,33 205,20 Rata-rata Kadar Glukosa (mg/dL) 6 202 205
7 207 198 8 180 255 9 259 232 10  - 195
Diagram batang rerata kadar glukosa darah ketiga kelompok
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Hewan  Coba  Fakultas  Kedokteran Hang  Tuah  Surabaya.  Sampel  yang  digunakan  adalah Rattus  norvegicus Wistar  jantan  dewasa  berusia  2,5  –  3  bulan,  dengan  berat  150 dengan  kondisi  fisik  yang  sehat,  sejumlah  30  ekor.  Tikus  tersebut  terbagi  dalam  3 kelompok yaitu kelompok kontrol negatif (diberi diet standar), kelompok kontrol positif induksi alloxan), dan kelompok perlakuan (diinduksi alloxan serta diberi cuka apel)
masing  berjumlah  10  ekor  tiap  kelompoknya.  Selama  jalannya penelitian, terdapat 3 ekor tikus yang mati, sehingga jumlah sampel menjadi 27 ekor bagian kelompok kontrol negatif sebanyak 9 ekor tikus, kelompok kontrol positif 10 ekor tikus, dan kelompok perlakuan 8 ekor tikus.
Bahan  dasar  apel  dalam  cuka  apel  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  telah dideterminasi oleh Laboratorium Botani Jurusan Biologi Fakultas MIPA ITS Surabaya. Pemilihan  apel  sebagai  objek  penelitian  ini  karena  apel  tidak  susah  dijumpai  dan
Kelompok Kontrol (-) Kelompok Perlakuan 205,20 212,25 rata Kadar Glukosa (mg/dL) Rata-rata Kadar Glukosa (mg/dL) 129 241 190 - -

## Diagram batang rerata kadar glukosa darah ketiga kelompok
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Hewan  Coba  Fakultas  Kedokteran Rattus  norvegicus galur 3  bulan,  dengan  berat  150  –  200  gram  dan dengan  kondisi  fisik  yang  sehat,  sejumlah  30  ekor.  Tikus  tersebut  terbagi  dalam  3 kelompok yaitu kelompok kontrol negatif (diberi diet standar), kelompok kontrol positif induksi alloxan), dan kelompok perlakuan (diinduksi alloxan serta diberi cuka apel)
masing  berjumlah  10  ekor  tiap  kelompoknya.  Selama  jalannya penelitian, terdapat 3 ekor tikus yang mati, sehingga jumlah sampel menjadi 27 ekor
bagian kelompok kontrol negatif sebanyak 9 ekor tikus, kelompok
Bahan  dasar  apel  dalam  cuka  apel  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  telah ologi Fakultas MIPA ITS Surabaya.
Pemilihan  apel  sebagai  objek  penelitian  ini  karena  apel  tidak  susah  dijumpai  dan

## rata Kadar Glukosa
juga  mudah  didapat  dengan  harga  yang  terjangkau,  terutama  untuk  jenis  apel manalagi. Sedangkan untuk pemilihan bentuk olahan cuka berdasarkan kemampuan cuka  untuk  menghambat  enzim  disakaridase  yang  menyebabkan  penyerapan glukosa  hasil  pencernaan  akan  lebih  lambat  dan  kenaikan  indeks  glikemik  dapat terkontrol (Ogawa et al., 2000) . Untuk memperkuat alasan penggunaan cuka apel ini adalah  berdasarkan  penelitian  yang  menyebutkan  bahwa  cuka  apel  memiliki kemampuan  untuk  menurunkan  kadar  glukosa  darah  karena  memiliki  senyawa antioksidan alami (Zubaidah and Rosdiana, 2016).
Awal  penelitian  ini  dilakukan  dengan  adaptasi  terlebih  dahulu  menggunakan diet standar (pelet) selama 7 hari. Kemudian pada hari ke-8 kelompok kontrol positif dan  kelompok  perlakuan  diberi  alloxan  dengan  cara  diinduksikan  dan  diberi  makan diet standar selama 3 hari, untuk kelompok kontrol negatif hanya diberi diet standar. Pada hari ke-10 kelompok perlakuan diberi cuka apel dengan cara disonde oral 1 kali dalam  1  hari  sebanyak  0,27ml/100gramBB  tikus  selama  14  hari,  dan  setiap kelompok tetap diberi diet standar.
Pada hari ke-24 setelah pemberian perlakuan untuk setiap kelompok selesai, maka  dilakukan  pemeriksaan  darah  tikus.  Pada  hari  ke-24  tikus  sudah  tidak  diberi pakan, sehingga tikus dalam keadaan puasa dan siap untuk diambil darahnya. Darah diambil  dari  jantung  ( intracardial )  pada  semua  tikus  sampel.  Masing-masing  tikus diambil  darah  sebanyak  1,5  mL  untuk  pemeriksaan  kadar  glukosa  darah.  Setelah hasil  penelitian  diperoleh,  dilakukan  pengujian  statistika  dengan One-Way  Anova karena kelompok yang dibandingkan lebih dari dua dan berdistribusi normal.
Analisis  data  dimulai  dengan  analisis  deskriptif  untuk  mengetahui perbandingan  rerata  untuk  setiap  kelompok,  dengan  hasil  rerata  kelompok  kontrol negatif  182,33  mg/dL,  kelompok  kontrol  positif  205,20  mg/dL,  dan  kelompok perlakuan 212,25 mg/dL. Perbandingan rerata ini menunjukan bahwa rerata glukosa darah  kelompok  kontrol  negatif  lebih  rendah  daripada  kelompok  kontrol  positif,  dan rerata  glukosa  darah  kelompok  kontrol  positif  lebih  rendah  daripada  kelompok perlakuan.  Untuk  menguji  signifikansi  perbandingan  tersebut,  maka  digunakan  uji parametrik One-Way Anova .
Sebelum  melakukan  uji  parametrik,  terlebih  dahulu  dipastikan  apakah  data yang  diperoleh  sudah  berdistribusi  normal  atau  belum  dengan  menggunakan  uji normalitas Saphiro-Wilk . Dari hasil uji normalitas diperoleh nilai signifikansi kelompok
kontrol negatif 0,926, kelompok kontrol positif 0,580, dan kelompok perlakuan 0,795 sehingga  dari  ketiga  kelompok  menunjukan  bahwa  p>0,05  dan  dapat  disimpulkan data  berdistribusi  normal.  Kemudian  dilakukan  uji  variansi  homogenitas  ( Levene Statistic )  dan  diperoleh  nilai  signifikansi  p  =  0,373  menunjukan  bahwa  p>0,05  yang berarti bahwa variansi data homogen.
Pada  uji One-Way  Anova diperoleh  nilai  signifikansi  p  =  0,229  yang  berarti bahwa p>0,05 atau tidak terdapat perbedaan hasil yang bermakna pada kelompok.
Dari hasil penelitian ini menunjukkan bahwa pemberian cuka apel tidak dapat menurunkan  kadar  glukosa  darah  tikus.  Hal  ini  dapat  disebabkan  karena  berbagai macam  faktor.  Contohnya  waktu  pemberian  yang  kurang  lama  atau  dosis  yang digunakan terlalu sedikit, atau konsentrasi cuka apel kurang tepat. Sedangkan faktor dari segi hewan coba misal karena faktor genetik yang mempengaruhi kadar glukosa darah dan gangguan absorbsi tikus. Dari segi manusia, seperti cara pemberian yang kurang  tepat,  cara  pengambilan  darah  tikus  yang  salah,  dan  adanya  kesalahan dalam melakukan prosedur pengukuran kadar glukosa darah.

## KESIMPULAN
Tidak  ada  pengaruh  pemberian  cuka  apel  manalagi  ( Malus  sylvestris Mill) terhadap  kadar  glukosa  darah  tikus  putih  ( Rattus  norvegicus )  jantan  galur  Wistar yang diinduksi alloxan.

## REFERENSI
Banna, A. A. and Kawar, N. S. (1982) ‘Behavior of parathion in apple juice processed into cider and vinegar’, Journal of Environmental Science and Health, Part B , 17(5), pp. 505–514. doi: 10.1080/03601238209372337.
Kemenkes  RI  (2014)  ‘Situasi  dan  Analisis  Diabetes’, Pusat  Data  dan  Informasi Kementerian Kesehatan RI , p. 2. doi: 24427659. Ogawa, N. et al. (2000) ‘Acetic acid supresses the increase in disaccharidase activity that occurs during culture of  caco-2  cells’, Journal of Nutrition , 130, pp. 507– 513.
Zubaidah,  E.  and  Rosdiana,  I.  (2016)  ‘Efektivitas  Cuka  Salak  dan  Cuka  Apel terhadap  Kadar  Glukosa  Darah  dan  Histopatologi  Pankreas  Tikus  Diabetes’, Jurnal Pangan dan Agroindustri , 4(1), pp. 170–179.