## Karakteristik Ekstrak Bakteri Berasosiasi dengan Eucheuma cottonii Doty yang
Memiliki Aktivitas Antimikroba
Characteristics of Antimicrobial Activity of Eucheuma cottonii Doty-Associated Bacteria Extracts
Risa Nofiani *1 , Kadarisno 1 , Daryati 2 , Ajuk Sapar 1
1 Jurusan Kimia, FMIPA Universitas Tanjungpura
2 Laboratorium Kesehatan Provinsi Kalimantan Barat
Diterima 21 Agustus 2009/ Disetujui 3 November 2009
* Korespondensi: Risa Nofiani, Jl. A. Yani, Pontianak, FMIPA Universitas Tanjungpura, email: rnofiani@yahoo.com

## Abstract
Marine organisms-associated bacteria have a potential source of antimicrobial compounds. The aim of  the  research  was  to  find  out  characteristics  of  antimicrobial  activity  of E.  cottonii Doty-associated bacteria extracts and their genus from Lemukutan Island, Kalimantan Barat. Five of 11 isolates showed antimicrobial activity namely Flavobacterium sp . K08, Alteromonas sp. K09, Bacillus sp. K10, Klebsiella sp. K11, and Pseudomonas sp. K12. Furthermore, their secondary metabolites were extracted with     methanol. The characteristic of the best bacteria extracts minimum inhibitory concentrations (MICs) for Escherichia coli, Bacillus spaericus, Staphylococcus epidermidis, and Candida tropicalis were obtained from bacteria extract of Bacillus sp. K10 (250 µg/disc), Bacillus sp. K10 (750 µg/disc), Pseudomonas sp. K12, (500 µg/ disc), and Alteromonas sp. K09 (1,500 µg/disc)  respectively.
Keywords: antimicrobial activity, Alteromonas sp., E. cottonii Doty, Flavobacterium sp., Pseudomonas sp.

## PENDAHULUAN
Laut  berpotensi  besar  menghasilkan  senyawa  kimia  baru  yang  memiliki  berbagai aktivitas  biologis.  Salah  satu  sumber  penghasil  senyawa  kimia  dari  laut  adalah  bakteri laut.  Umumnya  bakteri  laut  yang  hidup  berasosiasi  dengan  organisme  laut  memiliki probabilitas  lebih besar  dalam menghasilkan  senyawa dengan  berbagai aktivitas  biologis dari  pada  bakteri  laut  yang  hidup  secara  bebas. Asosiasi  bakteri  dengan  organisme  laut dapat  mempengaruhi  proses  metabolisme  bakteri.  Beberapa  hal  yang  menyebabkan  ini terjadi adalah kompetisi hidup yang tinggi antar bakteri dan keterbatasan nutrisi (Mearns- Spragg et al. 1998). Kondisi ini dapat menginduksi bakteri untuk menghasilkan senyawa dengan berbagai aktivitas biologis, misalnya antimikroba. Bakteri yang tidak menghasilkan senyawa antimikroba dapat menghasilkan senyawa antimikroba jika tumbuh pada organisme laut  atau  bersama  dengan  bakteri  lain  (Armstrong et  al . 2001).  Produksi  senyawa antimikroba  merupakan  salah  satu  cara  bakteri  beradaptasi  terhadap  lingkungan  dalam upaya bakteri mempertahankan diri dari bakteri lain dan inangnya.
Umumnya  bakteri  yang  diisolasi  dari  organisme  laut  menghasilkan  senyawa antimikroba. Bakteri Pelagiobacter variabilis dari alga Pocokiella variegata menghasilkan antibiotik phenazine baru,  yaitu  pelagiomisin  yang  dapat  menghambat  aktivitas  bakteri Gram positif dan negatif (Imamura et al . 1997). Bakteri laut D2 telah diisolasi dari Ciona intestinalis diketahui menghasilkan senyawa ekstraseluler berupa protein baru, 190 kDa (James et al . 1996). Senyawa ini dapat membunuh larva invertebrata Balamus amphitrite dan C.  intestinalis dan  memiliki aktivitas  antibakteri.  Bakteri Pseudoalteromonas  ulvae sp. dari alga Ulva lactuca. menghasilkan senyawa kimia yang menghambat pertumbuhan larva B. amphitrite , spora U. lactuca, dan alga merah Polysiphonia (Egan et al . 2001). Bakteri Pseudomonas sp.  yang  diisolasi  dari  alga  merah Ceratodyction  spongiosum menghasilkan  senyawa  2,4-diasetilfloroglusinol  (Isnansetyo et  al. 2001).  Senyawa  ini menunjukkan aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus .
Penelitian  ini  bertujuan  mengetahui  karakteristik  ekstrak  bakteri  dan  mengetahui genus  bakteri  yang  memiliki  aktivitas  antimikroba  dari  alga  laut E.  cotoniii Doty  dari perairan Pulau Lemukutan, Kalimantan Barat. Karakterisasi ekstrak bakteri yang dilakukan meliputi KHM (Konsentrasi Hambat Minimum) dan daya kerja antimikroba.

## METODE

## Waktu dan Tempat
Penelitian dilakukan pada bulan Maret-Oktober 2006, bertempat di perairan Pulau Lemukutan,  Kalimantan  Barat,  Laboratorium  Kimia  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam  Universitas  Tanjungpura,  Laboratorium  Hama  Penyakit  Tanaman Fakultas  Pertanian  Universitas  Tanjungpura,  Laboratorium  Kesehatan  Pontianak  dan Laboratorium  Biologi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam,  Universitas Tanjungpura, Pontianak.

## Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan yaitu: agar (Fisons), air laut, akuades, antibiotik (kanamisin, kloramfenikol, tetrasiklin, dan streptomisin), bromthymol blue , decarboxylase broth base Moeller (Sigma), dimetil- p -fenildiamin hidroklrorida (Merck), DL-lisin, DL-arginin, DL- ornitin, etanol teknis, etanol 95% (Merck), glukosa (Merck), H 2 O 2 (Merck), Gram’s iodine mordant , Hugh and Leifson’s agar (Sigma), Kligler’s iron agar (KIA,  Oxoid), Kovac’s reagent (Merck), kristal violet (Merck), laktosa (Merck), maltosa (Merck), manitol (Merck),
Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia Vol XII Nomor 2 Tahun 2009
MIO (Sigma), metanol teknis, NaCl (Merck), NaOH (Merck), nutrient agar (Oxoid), ZoBell 2216E, parafin, peptone water (Difco), potato dextrose agar (Oxoid), sakarosa (Merck), safranin (Merck), Simmon’s citrate agar (Sigma), dan urea Christensen (Sigma). Mikroba uji yang digunakan adalah Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa (hadiah dari  Laboratorium  Kesehatan  Provinsi  Kalimantan  Barat,  Pontianak). Escherichia  coli DH5α merupakan hadiah dari Departemen Kimia, Institut Teknologi Bandung . Candida tropicalis dan Bacillus sphaericus merupakan strain koleksi Risa Nofiani.
Peralatan  yang  digunakan  adalah  botol  kaca  steril  cawan  petri,  inkubator,  jangka sorong, optical dencity (OD 600 ), vorteks  dan rotary evaporator.
Lingkup Penelitian
Sampling Alga E. cottonii Doty
Sampel E. cottonii Doty diperoleh pada tanggal 9 Maret 2006 dari perairan Pulau Lemukutan, Kalimantan Barat. Kondisi air laut pada saat sampling memiliki suhu 30 o C, salinitas  32‰,  dan  pH  7,2.  Sampling  dilakukan  dengan  memotong  bagian  alga,  lalu dimasukkan  ke  dalam  botol  kaca  steril  yang  berisi  air  laut.  Botol  kaca  disimpan  dalam kotak es dan dibawa ke laboratorium. Saat sampling alga, ditentukan suhu, pH, salinitas, dan  kedalaman  alga  dari  permukaan  laut.  Alga  yang  diperoleh  selanjutnya  dilakukan determinasi.

## Penyiapan Sampel Alga Laut E. cottonii Doty
Sampel E. cottonii Doty dipotong dengan panjang 1-2 cm kemudian dibilas dua kali dengan air laut steril 25 mL.  Potongan alga dimasukkan ke dalam 10 mL air laut steril dan dikocok dengan mengunakan alat vorteks selama 5 menit. Suspensi bakteri yang dihasilkan selanjutnya diencerkan secara berseri menggunakan air laut steril.

## Isolasi Bakteri Berasosiasi dengan Alga Laut E. cottonii Doty
Isolasi bakteri berasosiasi dengan E. cottonii Doty dilakukan dengan metode tuang pada media padat ZoBell 2216E yang dimodifikasi (Z). Media Z terdiri atas: pepton 5 g/L, ekstrak  ragi  1 g/L,  agar  15  g/L  agar,  dan air  laut  hingga  1  L.  Sebanyak 1  mL  suspensi bakteri  dari  hasil  pengenceran  diinokulasi  ke  dalam  cawan  petri  kemudian  dituangkan media padat ZoBell 2216E (suhu  50 o C) dan diinkubasi pada suhu kamar selama 5 hari. Bakteri diisolasi berdasarkan perbedaan diameter, warna, bentuk, elevasi, dan tepian koloni yang tumbuh.
Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia Vol XII Nomor 2 Tahun 2009

## Penapisan Aktivitas Antimikroba
Penapisan aktivitas antimikroba isolat bakteri dilakukan pada berbagai media padat yaitu:  media ZoBell  Z, 1/2  Z,  1/10 Z  (Z -1 ),  dan  1/10  Z yang  diperkaya  dengan  glukosa 0,1%  (Z -1 G).    Penapisan  aktivitas  antimikroba  dilakukan  dengan  menginokulasi  isolat bakteri sehingga terbentuk lingkaran dengan diameter 5-6 mm pada media padat ZoBell 2216E dan diinkubasi pada temperaur 30 o C selama 48 jam. Selanjutnya cawan petri tersebut diinokulasi suspensi  mikroba uji (500  ìL biakan mikroba  uji umur 24  jam disuspensikan dalam 50 mL larutan NaCl 0,9% steril) dengan menggunakan alat semprot dan diinkubasi pada 30 o C selama 48 jam. Bakteri yang menunjukkan aktivitas antimikroba ditandai dengan terbentuknya zona  bening di sekitar  koloni bakteri. Zona  bening diukur dari  tepi koloni bakteri dengan tepi koloni mikroba uji. Alat ukur yang digunakan adalah jangka sorong dengan ketelitian 0,5 mm.

## Ekstraksi Metabolit Sekunder Bakteri yang Memiliki Aktivitas Antimikroba
Sebanyak 200 ìL kultur bakteri yang memiliki aktivitas antimikroba dengan optical dencity (OD 600 ) = 0,6 disebarkan pada media padat sesuai dengan media hasil penapisan dan  diinkubasi  pada  suhu  kamar  selama  5  hari.  Media  padat  selanjutnya  dipotong  (2x2 cm)  dan  direndam  dengan  metanol  selama  48  jam.  Ekstrak  metanol  disaring  dan  filtrat selanjutnya dipisahkan dari sisa media dengan sentrifugasi pada kecepatan 5.000 x g selama 15 menit. Supernatan dipekatkan dengan menggunakan rotary evaporator . Ekstrak yang diperoleh akan digunakan untuk uji aktivitas antimikroba.

## Uji Aktivitas Antimikroba Ekstrak Bakteri
Uji  aktivitas  antimikroba  ekstrak  bakteri  terhadap  bakteri  uji  dilakukan  dengan menggunakan metode difusi kertas cakram (Suganda et al. , 2005). Kertas cakram dijenuhkan dengan ekstrak bakteri pada konsentrasi tertentu dan diletakkan di permukaan media nutrient agar (NA)  yang telah  diinokulasi dengan  suspensi mikroba  uji. Selanjutnya  cawan petri diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam. Zona hambat yang terbentuk kemudian diukur menggunakan jangka sorong dengan ketelitian 0,5 mm.
Uji aktivitas antimikroba ekstrak bakteri terhadap jamur uji dilakukan seperti pada bakteri uji,  tetapi media yang  digunakan adalah  media potato dextrose  agar (PDA)  dan diinkubasi pada suhu 30 o C selama 48 jam
Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia Vol XII Nomor 2 Tahun 2009

## Penentuan Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) Ekstrak Bakteri
Penentuan KHM ekstrak bakteri dilakukan dengan cara menjenuhkan kertas cakram dengan ekstrak bakteri pada berbagai konsentrasi. Selanjutnya kertas cakram diletakkan di  permukaan  media  NA  yang  telah  dioles  mikroba  uji  dan  diinkubasi  pada  suhu  30 o C selama 24 jam. Konsentrasi terendah ekstrak bakteri yang dapat menghambat mikroba uji ditetapkan sebagai KHM ekstrak bakteri. Penentuan KHM ekstrak bakteri untuk jamur uji dilakukan  seperti  pada  penentuan  KHM  ekstrak  bakteri  untuk  bakteri  uji,  tetapi  media yang digunakan adalah media PDA dan diinkubasi pada suhu 30 o C selama 48 jam.

## Uji Bakteriostatik/Fungistatik dan Bakteriosida/Fungisida
Uji bakteriostatik dan bakteriosida dilakukan dengan menggoreskan ose pada bagian zona hambat kemudian ose tersebut digoreskan ke media NA dan diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam. Jika pada media NA tumbuh bakteri uji maka diduga ekstrak metabolit sekunder bakteri tersebut bersifat bakteriostatik. Jika pada media NA tidak tumbuh bakteri uji maka diduga ekstrak metabolit sekunder bakteri tersebut bersifat bakteriosida.
Uji fungistatik dan fungisida dilakukan dengan menggoreskan ose pada bagian zona hambat kemudian ose tersebut digoreskan ke media PDA dan diinkubasi pada suhu 30 o C selama  48  jam.  Jika  pada  media  PDA tumbuh  jamur  uji  maka  diduga  ekstrak  metabolit sekunder bakteri tersebut bersifat fungistatik. Jika pada media PDA tidak tumbuh jamur uji maka diduga ekstrak metabolit sekunder bakteri tersebut bersifat fungisida.

## Identifikasi Bakteri yang Memiliki Aktivitas Antimikroba
Identifikasi  bakteri  yang  memiliki  aktivitas  antimikroba  dilakukan  dengan  sistem Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology (Holt et al ., 1994). Uji yang dilakukan meliputi pewarnaan Gram, uji fermentasi karbohidrat, uji pembentukan indol, uji produksi H 2 S,  uji  penggunaan  sitrat,  uji  urease,  uji  dekarboksilase,  uji  oksidasi-fermentasi,  uji oksidase,  uji  katalase,  dan  uji  KIA.  Uji  untuk  pengaruh  konsentrasi  NaCl  terhadap pertumbuhan bakteri dilakukan pada media padat ZoBell 2216E dengan variasi konsentrasi NaCl (0,0-3,5 M).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil pengenceran sampel E. cottonii 10 -3 menghasilkan  1,82 x 10 5 CFU/mL ( colony forming  unit/ mL).  Berdasarkan  perbedaan  diameter,  warna,  bentuk,  elevasi,  dan  tepian koloni  bakteri  diperoleh  11  isolat  (Tabel  1).  Selanjutnya  11  isolat  dilakukan  penapisan
Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia Vol XII Nomor 2 Tahun 2009
aktivitas antimikroba dengan menggunakan 4 jenis media, yaitu: media Z, 1/2 Z, Z -1 , dan Z -1 G. Hasil penapisan menunjukkan bahwa 5 dari 11 isolat menunjukan aktivitas antimikroba pada media Z -1 G (Tabel 2). Berdasarkan media yang digunakan ternyata 5 isolat memiliki aktivitas  antimikroba  pada  media  ZoBell  2216E  miskin  yang  diperkaya  dengan  glukosa (Z -1 G).  Glukosa  pada  media  Z -1 G  diduga  berperan  sebagai  induser  bakteri  dalam menghasilkan metabolit sekunder yang memiliki aktivitas antimikroba, meskipun glukosa merupakan prekursor metabolit primer.
Tabel 1. Ciri-Ciri Isolat Bakteri Berasosiasi dengan E . cottonii Doty Ciri-ciri  Koloni Kode Diameter  (mm) Warna Bentuk Elevasi Tepian K01 K02 K03 K04 K06 K07 K08 K09 K10 K11 K12 0,5 1,0 1,0 <0,5 1,5 2,0 2,0 1,5 1,0 1,0 1,5 Putih Putih susu Putih Putih susu Putih susu Putih susu Putih susu Putih Putih Putih susu Putih susu Bundar Bundar Bundar Bundar Bundar Bundar Bundar Bundar Bundar Bundar Bundar Cembung Cembung Seperti tetes Cembung Seperti kawah Cembung Timbul Timbul Cembung Timbul Cembung Licin Licin Licin Licin Licin Licin Licin Licin Licin Licin
Licin
Tabel 2. Aktivitas Antimikroba Isolat Bakteri Berasosiasi dengan E . cottonii Doty Aktivitas Antimikroba Kode Bakteri Media Z Media ½ Z Media 1/10 Z Media 1/10ZG EC  BS  SE  PS  CT EC  BS  SE  PS  CT EC  BS  SE  PS  CT EC  BS  SE  PS  CT
K01 K02 K03 K04 K06 K07 K08 K09 K10 K11 K12 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
- - - - - - - - - - -
- - - - - - - - - - -
- - - - - - - - - - -
- - - - - - - - - - -
- - - - - - - - - - -
- - - - - - - - - - -
- - - - - - - - - - -
- - - - - - - - - - -
- - - - - - - - - - -
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - + - + + -
- - - - - - - - + - -
- - - - - - - + - + + - - - - - - - - - - - - - - - - - - + - - -
Keterangan: (+) positif, (-) negatif, SE: S . epidermidis , EC: E . coli , PA: P . aeruginosa , BS: B . sphaericus
Penambahan  prekursor  metabolit  primer  dapat  meningkatkan  metabolit  sekunder (Barry and Wainwright 1997). Induksi prekursor metabolit primer yang digunakan adalah α-ketoglutarat, β-ketoglutarat, glukosa, dan oksaloasetat. Bakteri laut #J292/97 diinokulasi dalam berbagai media yaitu: Marine Broth Difco (MB), MB yang diencerkan 10X (MB 1:9),  MB  1:9  yang  disuplemen  dengan  0,1%  α-ketoglutarat,  MB  1:9  yang  disuplemen dengan 0,1% β-ketoglutarat, MB 1:9 yang disuplemen dengan 0,1% glukosa, MB 1:9 yang disuplemen  dengan  0,1%  oksaloasetat.  Media  pertumbuhan  yang  disuplemen  dengan prekursor  siklus  TCA  ( Tricarboxylic  acid )  yaitu  α-ketoglutarat  dan  oksaloasetat  akan menginduksi  senyawa  yang  memiliki  aktivitas  antimikroba. Pseudomonas  fluorescens HV37a mensintesis antibiotik dalam keberadaan glukosa (Gutterson et al ., 1988).
Konfirmasi  aktivitas  antimikroba  untuk  kelima  isolat  tersebut  dilakukan  dengan membuat  ekstrak  bakteri  dan  menguji  aktivitas  antimikroba.  Hasilnya  adalah  aktivitas antimikroba kelima isolat tersebut sama dengan hasil penapisan aktivitas antimikroba (Tabel 3).  Ekstrak  bakteri  K12  memiliki  daya  antibakteri  paling  kuat  terhadap S.  epidermidis
Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia Vol XII Nomor 2 Tahun 2009
Tabel  3. Aktivitas Antimikroba  Ekstrak  Bakteri  Berasosiasi  dengan Eucheuma  cottonii Doty
Keterangan:- = tidak diuji,  * = konsentrasi ekstrak bakteri 2.000 µg/disk
Ekstrak Bakteri Konsentrasi ekstrak (µg/disk) Diameter Hambat Rata-rata (mm) tiap Mikroba E. coli B. spaericus S. epidermidis C. tropicalis K08 K09 K10 K11 K12 1.700 1.000 1.000 1.000 1.000 - - 10,00 - - - - 8,50 - - 11,75 7,83 - 9,50 10,50 - 11,00* - - -
Tabel  4.  Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM)  Ekstrak  Bakteri  Berasosiasi  dengan E . cottonii Doty
Ekstrak  Bakteri KHM Ekstrak Bakteri (µg/disk) E. coli B. spaericus S. epidermidis C. tropicalis K05 K08 K09 K10 K11 K12 750 - - 250 - - 250 - - 750 - - - 1.250 750 - 1.000 500 1.250 - 1.500 - - -
Keterangan: - = tidak diuji
dibandingkan dengan ekstrak bakteri lain. Setiap 1.000 µg/disk ekstrak bakteri K12 dapat menghambat S. epidermidis dengan diameter hambat sebesar 10,50 mm (Tabel 3).
Nilai KHM ekstrak bakteri K12 terhadap S. epidermidis menunjukkan paling kecil dibandingkan  dengan  nilai  KHM  ekstrak  bakteri  lain  yaitu  500  µg/disk  (Tabel  4).  Nilai KHM  menunjukkan  konsentrasi  ekstrak  terkecil  yang  masih  menghambat  mikroba  uji.
Jika  nilai  KHM  makin  kecil  maka  aktivitas  antimikroba  ekstrak  bakteri  tersebut  makin besar.
Daya kerja antimikroba ekstrak bakteri berasosiasi dengan E. cottonii dapat diketahui melalui  uji  bakteriostatik/fungistatik  dan  bakteriosida/fungisida.    Berdasarkan  hasil  uji bakteriostatik/fungistatik dan bakteriosida/fungisida ekstrak bakteri yang telah dilakukkan, ekstrak  bakteri  K12  bersifat  bakteriosida  terhadap S.  epidermidis .  Ekstrak  bakteri  K05 dan  K09  bersifat  fungistatik  terhadap C.  tropicalis. Ekstrak  bakteri  lain  bersifat bakteriostatik terhadap bakteri uji yang peka terhadap ekstrak bakteri tersebut (Tabel 5).
Hasil uji morfologi dan uji biokimia bakteri ditunjukkan pada Tabel 6. Berdasarkan uji morfologi dan uji biokimia yang telah dilakukan terhadap bakteri yang memiliki aktivitas antimikroba  maka  ditentukan  genus  bakteri  tersebut.  Hasil  identifikasi  yang  dilakukan menurut sistem Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology untuk isolat bakteri K08,
K09, K10, K11, dan K12 diduga adalah Flavobacterium sp . , Alteromonas sp., Bacillus sp., Klebsiella sp., dan Pseudomonas sp. secara berturut-turut.

## KESIMPULAN
Kemampuan  bakteri  dalam  menghasilkan  senyawa  antimikroba  di  laboratorium dipengaruhi oleh media. Lima dari 11 bakteri berasosiasi E . Cottonii Doty menunjukkan aktivitas antimikroba pada media Z -1 G. Ekstrak metanol bakteri Flavobacterium sp . K08,
Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia Vol XII Nomor 2 Tahun 2009
Tabel 5. Spektrum Kerja Antimikroba Ekstrak Bakteri berasosiasi dengan E . cottonii Doty
Ekstrak  Bakteri Daya Kerja Ekstrak Bakteri E. coli B. spaericus S. epidermidis C. tropicalis K08 K09 K10 K11 K12 - - Bakteriostatik - - Bakteriostatik Bakteriostatik - Bakteriostatik Bakteriosida - Fungistatik - - - Keterangan: - = tidak diuji - - Bakteriostatik - -
Batang/Basil Gram Negatif 0,8-1,1x2,5-3,5 Motil + - - - - - - + - O K/K - + + + + 0,1-3,0M + + + + +
Tabel 6. Karakteristik Isolat  Bakteri Berasosiasi dengan E . cottonii Doty yang Memiliki Aktivitas Antimikroba
Karakteristik Kode Bakteri K08 K09 K10 K11 K12 Bentuk Pewarnaan Ukuran (  m) Motilitas Fermentasi : Glukosa Laktosa Manitol Maltosa Sakarosa Indol Dekarboksilase: Lisin Arginin Ornitin OF KIA
Produksi H 2 S
Penggunaan sitrat Urease Oksidase Katalase Toleransi NaCl NA Mac Conkey Agar Blood Agar BHI SS Agar Batang/ Basil Gram Negatif 0,7-1,0x3,0-4,0 Nonmotil + - - + + - - - - - K/K - - + + +
0,1-3,0 M
+ - + + - Batang/Basil Gram Negatif 0,7-1,1x2,1-4,0 Motil - - +/- - - - - - - - K/- - - - + + 0,1-0,5M + - + + - Batang/Basil Gram Negatif 0,9-1,1x4,1-6,0 Motil + + + + + - - - - - A/A - - - - + 0,05-1,5 M + - + + - Batang/Basil Gram Negatif 0,7-1,1x1,5-2,8 Nonmotil +, gas + + + + - + - - F K/A - + + - + 0,1-2,5M + + + + +
Alteromonas sp. K09, Bacillus sp. K10, Klebsiella sp. K11, dan Pseudomonas sp. K12 menunjukkan tingkat aktivitas antimikroba relatif lemah untuk berbagai mikroba uji.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian ini tidak akan terlaksana tanpa bantuan semua pihak, oleh karena itu kami mengucapkan terimakasih kepada Bapak Ir. Fajarianto, M.P. yang telah membantu dalam penelitian  ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Armstrong  E, Yan  L,  Boyd  KG, Wright  PC,  Burgess  JG.  2001. The  Symbiotic  Role  of Marine Microbes on Living Surfaces. Hydrobiologia 461: 37-40.
Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia Vol XII Nomor 2 Tahun 2009
Keterangan: + : tes positif, - : tes negatif, K : basa, A : Asam, F : Fermentatif, O : oksidatif
Barry KJ,   Wainwright NR. 1997. Biosynthetic Induction of a Secondary Metabolites by a Marine Bacterum under Nutritional Stress: Potential Role of the Incomplete Oxidation of an Organic Acid. Bioll Bull 193:274-275.
Cruger  W,  Cruger  A.  1989. Biotecnology:a  text  book  of  industrial  microbiology . Sunderland:Sinaver Associates.
Egan S, Holmstrom C, Kjellberg S. 2001. Psudoalteromonas ulvae sp. nov., a Bacterium with Antifouling Activites Isolated from the Surface of a Marine Alga. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology 51 : 1499-1504.
Gutterson N, Ziegle JS, Warren GW, Layton TJ. 1988. Genetic Determinants for Catabolite Induction  of Antibiotic  Biosynthesis  in Pseudomonas  fluorescens HV37a. Journal Bacteriology 170 : 380-385.
Holt  JH,  Kreig  NR,  Sneath  PHA,  Staley  JT,  Williams  ST.  1994. Bergey’s  Manual  of Determinative Bacteriology ed. 9. Maryland: Williams and Wilkins.
Imamura  N,  Nishijima  M,  Takadera  T, Adachi  K.  1997.  New Anticancer  Antibiotics Pelagiomicins Produced by a New Marine Bacterium Pelagiobacter variabilis . Journal Antibiotic 50(1):8-12.
Isnansetyo  A,  Horikawa  M,  Kamei  Y.  2001. In  Vitro Anti-Methicillin-Resistant Staphylococcus  aureus Activity  of  2,4-diacetylphloroglucinol  Produced  by Pseudomonas sp. AMSN Isolated from a Marine Alga. Antimicrob Chemother 47:724- 725.
James SG, Holmstrom C, Kjelleberg S. 1996. Purification and Characterization of a Novel Antibacterial  Protein  from  the  Marine  Bacterium  D2. Applied  and  Environmental Microbiology 62(8):2783-2788.
Johnson L F, Curl EA, Bond JH, Fribourg HA. 1960. Methods and Studying: soil microflora- plants disease relationships . America: Burgess Publishing Company.
Mearns-Spragg A, Bregu M, Boyd KG and Burgess JG. 1998. Cross-species Induction and Enhancement of Antimicrobial Activity Produced by Epibiotic Bacteria from Marine Algae  and  Invertebrates,  after  Exposure  to  Terrestrial  Bacteria. Letter  Applied Microbiology 27:142-146.
Suganda AG,  Sukandar  EY,  Catarina  E.  2005. Aktivitas Antimikroba  Ekstrak  Etanol Beberapa Tumbuhan suku Malvaceae. Acta Pharmaceutica Indonesia 30(2):54-58.
Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia Vol XII Nomor 2 Tahun 2009