## Arwana Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan
Histopatologi  limpa  pada  ikan  nila  ( Oreochromis  niloticus )  yang  di  papar limbah cair kelapa sawit [Histopathology limpa of the spleen in tilapia ( Oreochromis niloticus ) exposed palm oil liquid waste]
Nazariah Hayatun 1* , Yusrizal Akmal 1 , Irfannur 1 , Muliari 2
1 Program Studi  Akuakultur,  Fakultas  Pertanian  Universitas  Almuslim.  Jln.  Almuslim Matangglumpangdua, Bireuen-Aceh
2 Program Studi Ilmu Kelautan, Fakultas Pertanian, Universitas Malikussaleh. Reuleut, Kec. Muara Batu, Kabupaten Aceh Utara
ABSTRACT ú Palm oil liquid waste is waste from palm oil processing and its potential as an environmental polluter  increases  with  the  increasing  number  of  palm  oil  processing  industries.  This  study  aimed  to examine the impact of sublethal concentration of palm oil effluent on the histology of tilapia spleen. This test was conducted experimentally using a completely randomized design consisting of four treatments and five replications, consisting of: control (0 mg. L- 1 ), A (1.565 mg. L- 1 ), B (2.347 mg. L- 1 ), and C (3.130 mg. L- 1 ).  The  data  obtained  were  analyzed  descriptively.  Preparation  of  spleen  histology  preparations  using histotechnical method with staining. These results indicate that the hispatological picture of the spleen has changed  in  the  form  of  an  increase  in  the  number  of  melanomacrophage  centers  (MMC),  necrosis, vacuolization in treatment C after exposure to connective tissue proliteration was found. It was concluded that exposure to palm oil effluent on tilapia caused changes in the hispathological picture of the spleen which was characterized by an increase in the number of MMC, necrosis, and vacuolization .
Key words ú Palm Oil Liquid Waste, Tilapia Fish, Histopathology limpa
ABSTRAK ú Limbah cair kelapa sawit merupakan limbah hasil pengolahan kelapa sawit dan potensinya sebagai pencemar lingkungan meningkat dengan semakin banyaknya industri pengolahan kelapa sawit. Penelitian ini bertujuan untuk menguji dampak limbah cair kelapa sawit konsentrasi subletal terhadap hispotologi limpa ikan nila. Uji ini dilakukan secara eksperimental dengan menggunakan rancangan acak lengkap yang terdiri dari empat perlakuan dan lima ulangan, terdiri dari: kontrol (0 mg. L -1 ), A (1,565 mg. L -1 ), B (2,347 mg. L -1 ), dan C (3,130 mg. L -1 ). Data yang diperoleh dianalisis secara deskriptif. Pembuatan preparat  histologi  limpa  menggunakan  metode  histoteknik  dengan  pewarnaan.  Hasil  ini  menunjukkan bahwa gambaran hispatologis limpa mengalami perubahan berupa peningkatan jumlah melanomakrofag centres  (MMC),  nekrosis,  vakuolisasi  pada  perlakuan  C  setelah    pemaparan  ditemukan  proliteferasi jaringan  ikat.  Disimpulkan  bahwa  paparan  limbah  cair  kelapa  sawit  pada  ikan  nila  menyebabkan perubahan gambaran hispatologi limpa yang ditandai dengan meningkatnya jumlah MMC, nekrosis, dan vakuolisasi.
Kata kunci ú Limbah Cair Kelapa Sawit, Ikan Nila, Hispatologi Limpa
Received ú 14 Oktober 2022, Accepted ú 29 Oktober 2022, Published ú 30 November 2022. *Koresponden ú Nazariah  Hayatun,  Program  Studi  Akuakultur,  Fakultas  Pertanian  Universitas  Almuslim.  Jln. Almuslim Matangglumpangdua, Bireuen-Aceh. Email: nazariah.hayatun@gmail.com Kutipan ú Hayatun, N., Akmal, Y., Irfannur, I., Muliari, M. (2022). Histopatologi limpa pada ikan nila ( Oreochromis niloticus) yang di papar limbah cair kelapa sawit: Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan, 4(2), 94-99. p-ISSN (Media Cetak) ú 2657-0254 e-ISSN (Media Online) ú 2797-3530
© 2022 Oleh authors. Arwana: Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan . Artikel ini bersifat open access yang  didistribusikan  di  bawah  syarat  dan  ketentuan Creative  Commons  Attribution-ShareAlike  4.0  International License .

## PENDAHULUAN
Ikan  nila  ( Oreochromis  niloticus)  yang  popular dengan sebutan ‘tilapia” merupakan salah satu
jenis  ikan  yang  dibudidayakan  di  dunia.  Ikan nila cocok dipelihara di dataran rendah sampai dataran tinggi 500 m dari permukaan laut. Ikan nila  ( Oreochromis  niloticus)  merupakan  salah
http://www.journal.umuslim.ac.id/index.php/jipsbp
satu  jenis  ikan  yang  bernilai  ekonomis  tinggi. Faktor-faktor  yang  mempengaruhi  pertum- buhan  ikan  terdiri  atas  faktor  internal  dan faktor eksternal. Salah satu faktor internal yang sangat  penting  bagi  pertumbuhan  ikan  adalah genetik  dari  ikan  tersebut,  sedangkan  faktor dari  eksternal  adalah  pakan  dan  lingkungan. Ikan  sangat  sensitif  terhadap  perubahan  di lingkungan  perairan  dan  memainkan  peran penting  dalam  menilai  potensi  risiko  yang terkait  dengan  pencemaran  di  lingkungan hidupnya. Selain itu ikan nila memiliki sebaran yang  luas  serta  pada  dasarnya  mempunyai kemampuan menghindarkan diri dari pengaruh bahan  pencemar  yang  mencemari  lingkungan perairan.  Saat  ini  yang  mencemari  lingkungan adalah limbah cair kelapa sawit.
Limbah cair kelapa sawit merupakan salah satu polutan  yang  berpotensi  menimbulkan  efek negatif  terhadap  lingkungan.  Limbah  industri ini  diketahui  dapat  menyebabkan  terjadinya pencemaran,  khususnya  pada  badan  perairan (Chan et al., 2013). Limbah kelapa sawit adalah suatu  buangan  yang  dihasilkan  dari  proses pengolahan  kelapa  sawit  yang  berbentuk  cair, padat,  dan  gas  yang  berpotensi  menyebabkan pencemaran  lingkungan  sekitar.  Limbah  cair industri  minyak  kelapa  sawit  mengandung bahan  organik  yang  sangat  tinggi  yaitu Biological  Oxigen  Demand  (BOD)  25.500  mg/L, Chemical  Oxigen  Demand  (COD)  48.000  mg/L, Total Suspended Solid (TSS) 31.170 mL/L, N 41 mL/L, minyak dan lemak 3.075 mL/L dan pH 4.0 (Wong et al., 2009).       bahwa limbah cair kelapa sawit  mempengaruhi  hormon  reproduksi  ikan nila jantan. Limbah ini menjadi berbahaya bagi organism  perairan  apabila  dibuang  langsung keperairan  tanpa  proses  pengolahan  terlebih dahulu.
Kadar  Hg  tertinggi  terdapat  di  dalam  limpa dibandingkan organ lainnya, sebagaimana yang pernah  diteliti  oleh  Paundanan  et  al.,  (2015) pada ikan selar tetengkek (Megalaspis cordyla L) yang  terdapat  di  teluk  Palu  Sulawesi  Tengah. Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Solakhiyah (2015)  menunjukkan  bahwa  paparan  merkuri klorida (HgCl2) pada limpa ikan mas (Cyprinus carpio) memberikan pengaruh terhadap jumlah dan  ukuran  MMC.  Limpa  merupakan  organ hematopoiesis,  sebagai  tempat  penyaringan darah,  dan  penghancuran  sel,  serta  sebagai tempat penyimpanan eritrosit. Pada ikan limpa juga  memiliki  fungsi  imunologi  layaknya
limfonodus  pada  mamalia.  Limpa  terdiri  atas pulpa  merah  dan  pulpa  putih.  Pulpa  merah merupakan  sistem  yang  luas  dan  merupakan interkoneksi  korda  limpa  dan  kapiler  sinusoid, sedangkan  pulpa  putih,  terdiri  atas  sel-sel limfoid biasanya mengelilingi arteri (Ostrander, 2000; Mumford et al., 2007; Genten et al., 2009). Gambaran  histopatologis  limpa  ikan  nila  yang terpapar  limbah  cair  kelapa  sawit  sejauh  ini belum  ada  data  yang  kongkrit.  Berdasarkan penjelasan  di  atas,  perlu  dilakukan  penelitian untuk  mengetahui  pengaruh  paparan  limbah cair  kelapa  terhadap  gambaran  histopatologis limpa ikan nila ( Oreochromis niloticus).

## BAHAN DAN METODE

## Lokasi dan Waktu Penelitian
Penelitian  direncanakan  dilaksanakan  pada Bulan  Agustus-November  tahun  2021.  Tahap pemaparan Limbah Cair Kelapa Sawit terhadap ikan  uji  dilaksanakan  di  Laboratorium  Lab Basah  Aquakultur  dan  pengambilan  limpa dilakukan  di  Lab  MIPA  Almuslim,  Universitas Almuslim  sedangkan  preparat  histologi  limpa ikan  di  Laboratorium  Patologi  Fakultas Kedoktoran Hewan, Universitas Syiah Kuala.
Rancangan Penelitian dan Parameter

## Pengukuran
Penelitian  dilakukan  secara  eksperi  mental menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) terdiri dari empat perlakuan dan lima ulangan. Konsentrasi  sub  kronik  LCKS  untuk  tiap perlakuan  didasari  kepada  nilai  LC50-96  jam limbah  cair  kelapa  sawit  terhadap  ikan  Nila yang telah diperoleh pada penelitian sebelumnya yaitu sebesar 15,65 mg. L -1 . Perlakuan K (0% LCKS),
Perlakuan A (10% dari nilai LC50-96 jam: 1,565 mg. L -1 ),
Perlakuan B (15% dari nilai LC50-96 jam: 2,347 mg. L -1 ),
Perlakuan C (20% dari nilai LC50-96 jam: 3,130 mg. L -1 ).
Wadah  pemaparan  ikan  uji  berupa  akuarium berukuran 60 cm x 40 cm x 30 cm dengan volume air  sebanyak  43  liter  yang  dilengkapi  dengan aerasi. Jumlah ikan uji sebanyak sepuluh ekor per wadah uji. Selama masa pemaparan, ikan uji diberi  pakan  komersial  secara  atsatiasi sebanyak  dua  kali  sehari.  Dan  pengambilan limpa  diambil  setiap  perlakuan.  Pembuatan
preparat  histologi  limpa  menggunakan  metode histoteknik dengan pewarnaan
Persiapan  Ikan  Uji  dan  Limbah  Cair  Kelapa Sawit
Sebanyak  300  ekor  ikan  nila  berjenis  kelamin jantan  dan  betina  dengan  kisaran  bobot  total masing masing 9-10 gram dan panjang total 10- 13 cm diperoleh dari Kolam Puspa Gading Umar Cot Gapu Kabupaten Bireuen. Ikan diangkut ke laboratorium  dan  kemudian  dipelihara  dalam wadah  aklimatisasi  selama  1  minggu.  Setelah masa  aklimatisasi  selesai,  ikan  sehat  dipilih untuk digunakan pada percobaan. Selama masa aklimatisasi, ikan diberi pakan buatan sebanyak dua  kali  sehari  secara  adlibitum.  Kotoran  ikan dan  limbah  pakan  disipon  2  hari  sekali  untuk menjaga  kondisi  kualitas  air  media.  Bahan polutan/toksikan yang digunakan pada penelitian  ini  adalah  limbah  cair  kelapa  sawit yang  berasal  dari  Pabrik  Kelapa  Sawit  PT. Syaukath Sejahtera Kecamatan Grugok Kabupaten  Bireuen.  Larutan  stok  limbah  cair kelapa  sawit  dipersiapkan  30  liter  dan berkonsentrasi  tinggi  (100  ml/ 𝐿 -1 )  yang  siap untuk  diencerkan  kedalam  konsentrasi  yang diperlukan. Masa pemaparan limbah cair kelapa sawit berlangsung selama 45 hari.

## Analisis Statistik
Gambaran histopatologis limpa dianalisis secara deskriptif  dengan  membandingkan  limpa kelompok perlakuan dan kelompok kontrol.

## HASIL
Pada  penelitian  ini  gambaran  histopatologis limpa  ikan  nila  pada  perlakuan  control memperlihatkan gambaran histologis limpa ikan yang  normal,  terdapat  pulpa  merah  dan  pulpa putih.  Pulpa  putih  terdiri  atas  sel-sel  limfoid, terdapat arteri sentralis dan bergabung dengan pulpa merah. Pulpa merah terdiri atas jaringan sel retikuler dan sinusoid yang berisi sel darah merah.
Hasil  histopatologis  limpa  ikan  nila  pada perlakuan  kontrol  memperlihatkan  gambaran histologis  limpa  ikan  yang  normal.  Hal  ini terlihat dari struktur jaringan hati yang masih lengkap  dan  belum  mengalami  perubahan (Gambar 1).
Gambar 1. Histopologi limpa ikan nila ( Oreochromis niloticus)  pada  perlakuan  kontrol  (0  mg/L)  limbah cair  kelapa  sawit.  Pulpa  putih  (PP),  Pulpa  merah (PM), Melanomagrophage  centres  (MMC),  Arteri sentralis (AS), vakuolisasi (panah hitam), Degenerasi hidropik (panah hijau). HE 100x (A), 400x (B).
Gambar 2. Histopologi limpa ikan nila ( Oreochromis niloticus) pada perlakuan A (1,565 mg/L) limbah cair kelapa  sawit.  Pulpa  putih  (PP),  Pulpa  merah  (PM), Melanomagrophage  centres  (MMC),  Arteri  sentralis (AS), vakuolisasi (panah hitam), Degenerasi hidropik (panah hijau). HE 100x (A), 400x (B).
Berdasarkan  hasil  pengamatan  gambaran histopatologis limpa ikan nila pada perlakuan A setelah  pemaparan  dengan  limbah  mulai terlihat  perubahan  berupa  MMC,  nekrosis  dan degenerasi hidropik. (Gambar 2).
Gambar  3.  Histopologi  limpa  ikan  nila  pada perlakuan B (2,347 mg/L) limbah cair kelapa sawit.
Pulpa putih (PP), Pulpa merah (PM),
Melanomagrophage  centres  (MMC),  Arteri  sentralis (AS), vakuolisasi (panah hitam), Degenerasi hidropik (panah  hijau),  Hiperplasia  (panah  coklat).  HE  100x (A), 400x (B).
Semakin  bertambah  dengan  meningkatnya konsentrasi limbah cair kelapa sawit pada media pemeliharaan.  Dari  pengamatan  gambar  ini analisis  histologi  pada  preparat  perlakuan  B menunjukkan bahwa Melanomagrophage centres,  vakuolisasi,  degenerasi  hidropik  dan hiperlasia  pada  jaringan  limpa  semakin membesar.  Di  dalam  limpa,  limbah  yang mengandung  zat  racun  sangat  tinggi  yaitu Biological  Oxigen  Demand  (BOD),  Chemical Oxigen  Demand  (COD),  Total  Suspended  Solid (TSS),  minyak  dan  lemak  dapat  mengalami fagositosis  oleh  MMC,  vakuolisasi,  degenerasi hidropik  dan  hiperlasia  karena  yang  diduga akibat toksisitas limbah pada ikan (Gambar 3).
Gambar  4.  Histopologi  limpa  ikan  nila  pada perlakuan C (3,130 mg/L) limbah cair kelapa sawit. Pulpa putih (PP), Pulpa merah (PM), Melanomagrophage  centres  (MMC),  Arteri  sentralis (AS),  nekrosis  (panah  biru),  vakuolisasi  (panah hitam),  Degenerasi  hidropik  (panah  hijau), Hiperplasia (panah coklat). HE 100x (A), 400x (B).
Kerusakan  jaringan  limpa  pada  analisis hispatologi preparat perlakuan C menunjukkan bahwa terjadi adanya jumlah kematian sel limpa (nekrosis) yang semakin meningkat nya limbah cair  kelapa  sawit  yang  dipapar.  Perubahan  ini dapat terjadi kerusakan irreversible karena sel tidak mampu lagi beradaptasi atau memperbaiki diri dan tidak dapat melangsungkan metabolisme, perubahan- perubahan pada jaringan nekrotik
menyebabkan  hilangnya  fungsi  daerah  yang mati (Gambar 4).

## PEMBAHASAN
Limbah cair kelapa sawit memiliki dampak yang dapat menggangu kualitas perairan. Muliari dan Zulfahmi  (2016)  menyebutkan  bahwa  paparan limbah  cair  kelapa  sawit  telah  menimbulkan efek  negatif  terhadap  komunitas  fitoplankton. Selain  dari  pada  itu,  limbah  cair  kelapa  sawit juga  memiliki  tingkat  toksisitas  yang  lebih tinggi  terhadap  ikan  Nila  (Oreochromis niloticus) dibandingkan dengan paparan limbah minyak  mentah  dan  nitrit  (Zulfahmi  et  al., 2017). Pada penelitian ini gambaran histopatologis  limpa  ikan  nila  ( Oreochromis niloticus) terdapat pulpa merah dan pulpa putih. Pulpa putih terdiri atas sel-sel limfoid, terdapat arteri  sentralis  dan  bergabung  dengan  pulpa merah.  Pulpa  merah  terdiri  atas  jaringan  sel retikuler  dan  sinusoid  yang  berisi  sel  darah merah. Pada parenkim limpa dapat ditemukan MMC  (Rebok  et  al.,  2011).  Semakin  tinggi konsentrasi  limbah  cair  kelapa  sawit  yang diberikan maka akan terjadi peningkatan pada jaringan limpa ikan nila.
Dari  hasil  analisis  pengamatan  hispatologi limpa  menunjukkan  adanya  peningkatan  pada perlakuan  B  dan  C  adanya  perubahan  berupa MMC,  vakuolisasi,  hiperlasia  dan  nekrosis. Terjadi  peningkatan  MMC  karena  adanya limbah yang masuk kedalam tubuh ikan melalui insang dan beredar ke seluruh tubuh kemudian masuk  ke  limpa.  Seperti  yang  dinyatakan  oleh Pratiwi dan Manan (2015) darah dan substansi asing yang melewati pembuluh kapiler masuk ke limpa  melalui  arteri.  Substansi  asing  tersebut digumpalkan  atau  difagosit  oleh  MMC  yang berada disekitar selaput arteri. Melanomagrofag centers akan meningkat jumlah dan ukurannya apabila ikan berada pada dalam kondisi stress. Peningkatan  MMC  juga  dapat  terjagi  karena keterlibatan dalam proses detoksifikasi, imunitas  bawaan  dan  adaptif  (Haraez  dan Zapata. 1991; Aguis dan Robert, 2003). Menurut Manrique  et  al.,  (2014)  MMC  berfungsi  untuk menghancurkan  dan  detoksifikasi  endogen ataupun eksogen seperti zat racun dan aktifitas metabolik sel.
Dan pada pengamatan peningkatan degenerasi hidropik  terjadi  disebabkan  membesarnya  sel- sel  pada  jaringan  limpa.  Hal  ini  disebabkan meningkatnya  kadar  limbah  yang  dipapar. Degenerasi hidropik yang terjadi menyebabkan inti  sel  menjadi  tertekan.  Tekanan  yang
diberikan  akan  menyebabkan  berdampak  pada kematian  sel.  Zulfahmi  et  al.  (2015)  juga menyatakan  bahwa  semakin  tinggi  polutan berakibat  pada  semakin  meningkatnya  proses vakuolalisasi.  Pada  pengamatan  hasil  analisis menunjukkan  adanya  perubahan  berupa vakuolisasi.  Vakuolisasi  dapat  terjadi  karena adanya toksin, malnutrisi protein, dan anoksia. Vakuolisasi  terjadi  pada  perlakuan  Kontrol,  A, B, dan perlakuan C. Vakuolisasi terjadi karena adanya  nekrosis  suatu  sel  atau  sekelompok  sel sehingga  menimbulkan  ruang-ruang  kosong (Sukarni et  al.,  2012);  (Mulyono  et  al.,  2013). Perubahan nekrosis dan vakuolisasi juga pernah dilaporkan oleh David dan Kartheek (2015) pada limpa  ikan  mas  ( Cyprinus  carpio)  yang dipaparkan asam sianida.
Efek negatif lain dari limbah cair kelapa sawit juga  berpotensi  menganggu  kinerja  hormon reproduksi  terjadinya  kerusakan  gonad,  kadar lipid serta hati selain itu dapat terjadi gangguan reproduski jantan (Nisak et al., 2020; Zulfahmi et  al.,  2018;  Muliari  et  al.,  2020).  Menurut Muliari et al. (2020) limbah kepala sawit dapat mempengaruhi  perkembangan  larva  ikan  nila. Kandungan  limbah  cair  kelapa  sawit  dapat menganggu  metabolisme  sel  lambung,  usus serta  hati  (Akmal et  al.,  2021).  Muliari  et  al., 2019b menambahkan bahwa limbah cair kelapa sawit  mempengaruhi  hormon  reproduksi  ikan nila.  Zat  toksik  yang  ada  di  perairan  dapat menyebabkan  pembendungan  aliran  darah sehingga terjadi pembengkakan sel atau edema pada  lamela  sekunder  (Maftuch et  al.,  2015). Hiperplasia  merupakan  suatu  respon  fisiologis untuk  melindungi  jaringan  dari  zat  toksik dengan  cara  menstimulasi  pertumbuhan  sel epitel insang dengan sangat cepat (Sudaryatma et al., 2013). Pertumbuhan sel yang sangat cepat dan banyak menyebabkan fusi lamela sekunder. Kejadian hiperplasia selalu disertai dengan fusi lamela.  Fusi  lamela  yang  terjadi  akibat hiperplasia  sel  lamela  secara  terus  menerus mengisi ruang antar lamela sekunder dengan sel baru  sehingga  menyebabkan  perlekatan  antar lamela sekunder (Sipahutar et al., 2013).
Dan  semakin  meningkatnya  konsentrasi  dan lama paparan terhadap ikan nila menyebabkan sel-sel  mengalami  penurunan  fungsi  hingga mengakibatkan  nekrosis.  Limposit  pada  limpa yang  mengalami  nekrosis  terjadi  pada perlakuan  C  karena  tidak  mampu  beradaptasi dengan  paparan  limbah.  Nekrosis  adalah
kematian patologis sebagian jaringan atau organ yang  dihasilkan  dari  kerusakan  irreversible karena  sel  tidak  mampu  lagi  beradaptasi  atau memperbaiki diri dan tidak dapat melangsungkan metabolisme, perubahan- perubahan pada jaringan nekrotik menyebabkan  hilangnya  fungsi  daerah  yang mati (Azmijah et al., 2013).

## KESIMPULAN
Hasil  ini  menunjukkan  bahwa  gambaran hispatologis  limpa  mengalami  perubahan berupa  peningkatan  jumlah  melanomakrofag centres  (MMC),  nekrosis,  hiperlasia  dan vakuolisasi pada perlakuan C setelah pemaparan  ditemukan  proliteferasi  jaringan ikat.

## DAFTAR PUSTAKA
Agius,  C.,  and  R.  J.  Roberts.  "Melano - macrophage centres  and  their  role  in  fish  pathology." Journal of fish diseases 26.9 (2003): 499-509. Akmal, Y., Devi, C. M. S., Muliari, M., Humairani, R., &  Zulfahmi,  I.  (2021).  Morfometrik  sistem pencernaan  ikan  nila  (Oreochromis  niloticus) yang dipapar limbah cair kelapa sawit. Jurnal galung tropika, 10(1), 68-81.
Azmijah, A.,  R.  Darsono, Arimbi  D.,  T.V.  Widiyatno,
H. Plumeriastuti, dan D. Legowo. (2013). Buku Ajar  Patologi  Umum  Veteriner.  Airlangga University Press, Surabaya.
Chan  YJ,  Mei-Fong  C,  Chung-Lim  L.  2013.
Optimization of palm oil mill effluent. David, M. and R.M Kartheek. (2015). Histophatological  alterations  in  spleen  of freshwater  fish  Cyprinus  carpio  exposed  to sublethal  concentration  of  sodium  cyanide.  J. Open veterinary. 5(1):1-5.
Genten,  E.,  E.  Terwinghe,  and  A.  Danguy.  (2009). Atlas  of  Fish  Histology.  CRC  Press,  Florida. Chan  YJ,  Mei-Fong  C,  Chung-Lim  L.  2013. Optimization of palm oil mill effluent.
Haraez,  M.P.  dan  A.G.  Zapata.  (1991). Structural characterization  of  the  melano-macrophage centres (MMC) of goldfish (Carassius auratus). J. European of Morphology. 29(2):89-102. Maftuch,  M,  V.D  Putri,  M.H  Lulloh  dan  F.K.H Wibisono.  2015.  Studi  Ikan  Bandeng  (Chanos chanos)  yang  Dibudidayakan  di  Tambak Tercemar  Limbah  Kadmium  (Cd)  dan  Timbal (Pb)Di  Kalanganyar,  Sidoarjo,  Jawa  Timur Terhadap  Histologi  Hati,  Ginjal  dan  Insang. Journal  Of  Environmental  Engineering  and Sustainable Technology. 2(2): 114-122.
Manrique  W.G.,  G.S.  Claudiano,  T.R.  Perillo,  M.P. Castro, M.A.P. Figueiredo, M.A.A. Belo, J.R.E.
Hayatun et al. (2022)|Arwana ú Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan ú 4(2), 94-99
Moraes,  and  F.R.  Moraes.  (2014). Response  of splenic melanomacrophage centers of
Oreochromis  niloticus  (Linnaeus  1758)  to inflamatory stimuli by BCG and foreign bodies. J. Applied Ichtyology. 30(5):1001-1006.
Muliari, M., & Zulfahmi, I. 2016. Impact of palm oil mill effluent towards phytoplankton community  in  Krueng  Mane  River,  North Aceh. Jurnal  Perikanan  dan  Kelautan, 6(2), 137-146.
Muliari,  M.,  Akmal,  Y.,  Zulfahmi,  I.,  Karja,  N.  W., Nisa, C., Mahyana, M., & Humairani, R. (2020). Effect  of  exposure  to  palm  oil  mill  effluent  on reproductive  impairment  of  male  Nile  Tilapia (Oreochromis niloticus, Linnaeus 1758). In E3S Web  of  Conferences (Vol.  151,  p.  01022).  EDP Sciences.
Muliari, M., at al. “Effects of palm oil mill effluent on reproductive  hormone  of  female  nile  tilapia, oreochromis  niloticus  (Linnaeus  1758).” Adv. Anim. Vet. Sci 7. 11 2019: 1035-1041.
Muliari, M., dan Zulfahmi, I. (2016). Impact of palm oil  mill  effluent  towards  phytoplankton community in Krueng Mane River, North Aceh. Jurnal Perikanan dan Kelautan, 6(2), 137-146. Muliari, M., Zulfahmi, I., Akmal, Y., Karja, N. W. K., Nisa, C., & Sumon, K. A. (2019). Effects of palm oil  mill  effluent  on  reproductive  hormone  of female  nile  tilapia,  oreochromis  niloticus (linnaeus  1758).  Adv.  Anim.  Vet.  Sci,  7(11), 1035-1041.
Muliari, M., Zulfahmi, I., Akmal, Y., Karja, N. W. K., Nisa,  C.,  Sumon,  K.  A.,  &  Rahman,  M.  M. (2020). Toxicity of palm oil mill effluent on the early  life  stages  of  Nile  tilapia  (Oreochromis niloticus, Linnaeus 1758). Environmental Science and Pollution Research, 27(24), 30592- 30599.
Mulyono,  A.,  D.H.  Farida,  N.S.  Handajani.  2013. Histopatologi  hepar  tikus  rumah  (Rattus tanezumi) infektif patogenik Leptospira spp. J. Vektira. 5(1):7-11.
Mumford,  S.,  J.  Heidel,  C.  Smith,  J.  Morrison,  B. MaccConnell,  and  V.  Blazer.  (2007). Fish Histology  and  Histopathology.  USFWS-NCTC, Virginia. Ostrander, G.K. 2000. The Laboratory Fish. Academic Press, California.
Nisak,  K.,  Akmal,  Y.,  Muliari,  M.,  &  Zulfahmi,  I. (2020).  Kandungan  lipid  dan  hormon reproduksi  ikan  nila  (Oreochoromis  niloticus Linnaeus  1758)  yang  dipapar  limbah  cair kelapa sawit. Arwana: Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan, 2(2), 90-96.
Ostrander, G.K. 2000. The Laboratory Fish. Academic Press, California.
Paundanan,  M.,  E.  Riani,  dan  S.  Anwar.  (2015). Kontaminasi  logam  berat  merkuri  (Hg)  dan
timbal  (Pb)  pada  air,  sedimen  dan  ikan  selar tetengkek  (Megalaspis  Cordyla  L)  di  Teluk Palu,  Sulawesi  Tengah.  J.  Pengelolaan Sumberdaya  Alam  dan  Lingkungan.  5(2):161- 168.
Pratiwi,  H.C.  dan  A.  Manan.  (2015).  Teknik  dasar histologi  pada  ikan  gurami  (Osphronemus gouramy). J.  Ilmiah Perikanan dan Kelautan. 7(2):153-158.
Rebok  K.,  M.  Jordanovadan  I.  Tavciovska-V.  (2011). Spleen  histology  in  the  female  ohrid  trout, Salmo  letnica  (kar.)  (teleostei,  salmonidae) during the reproductive cycle. J. Arch. Biol. Sci., Belgrade. 63(4):10231030. Siregar, T.H., N. Sipahutar, H.F., Aritonang, E.Y. dan Siregar. A., 2013. Gambaran  Pengetahuan  Gizi  Ibu  Hamil Trimester  Pertama  Dan  Pola  Makan  Dalam Pemenuhan Gizi Di Wilayah Kerja Puskesmas Parsoburan Kecamatan Habinsaran Kabupaten Toba Samosir Tahun 2013, pp.1–7. Solakhiyah,  T.N.  (2015). Pengaruh  Merkuri  Klorida (HgCl2)  pada  Melano-makrofag  Limpa  Ikan Mas  (Cyprinus  carpio).  Skripsi.    Fakultas Perikanan dan Kelautan, Universitas Airlangga, Surabaya.
Sudaryatma, P.E., N.N. Eriawati., I.F. Panjaitan, dan
L.N. Sunarsih. 2013. Histopatologi Insang Ikan Lele  (Clarias  bathracus)  yang  Terinfeksi Dactylogyrus sp. Jurnal Sains Veteriener. 1(2): 78-83.
Sukarni,  Maftuch,  dan  H.  Nursyam.  2012. Kajianpenggunaan ciprofloxacin terhadaphistologiinsangdanhatiikanbotia (Botiamacracanthus, Bleeker) yang diinfeksibakteriAeromonashydrophila.J.  Exp. Life Sci. 2(1):6-12.
Wong  FPS,  Nandong  J,  Samyudia  Y.  (2009). Optimised treatment of palm oil mill effluent. International Journal  of  Environment  and Waste Management, 3(3/4):265-277. Zulfahmi, I,. Muliari, Akmal, Y,. Batubara AS. (2018). Reproductive performance and gonad histopathology  of  famale  Nile  Tilapia (Orechromis niloticusLinnaeus 1758). Exposed to palm oil mill effluent. The Egyptian Journal of Aquatic Research 44: 327-332. Zulfahmi,  I.,  Affandi,  R.,  dan  Batu,  D.  T.  L.  (2015).
Perubahan struktur histologis insang dan hati ikan  nila  (Oreochromis  niloticus  Linnaeus 1758) yang terpapar merkuri. JESBIO: Jurnal Edukasi dan Sains Biologi, 4(1).
Zulfahmi, I., Muliari, M., Akmal, Y., dan Batubara, A. S. (2018). Reproductive performance and gonad histopathology of female Nile tilapia (Oreochromis niloticus Linnaeus 1758) exposed to palm oil mill effluent. The Egyptian Journal of Aquatic Research, 44(4), 327-332.