Lina W, dkk
14 Aktivitas Repelan Minyak Atsiri
AKTIVITAS REPELAN MINYAK ATSIRI BIJI PALA ( Myristica fragrans Houtt.) PADA NYAMUK Aedes aegypti
REPELLENT ACTIVITY of  NUTMEG ESSENTIAL OIL ( Myristica fragrans Houtt.) on Aedes aegypti
Lina Widiyastuti*, Azis Ikhsanudin, Noorlina
Fakultas Farmasi, Universitas Ahmad Dahlan Yogyakarta * Penulis Korespodensi : lina.widiyastuti@pharm.uad.ac.id

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  penelitian  untuk  menguji  aktivitas  repelan  minyak  atsiri  biji  pala terhadap  nyamuk Aedes  aegipty betina.  Repelan  yang  banyak  beredar  di  pasaran  yaitu repelan  sintetik  yang  dapat  memberikan  dampak  negatif  untuk  kesehatan  karena umumnya  mengandung Diethyltoluamide  atau DEET.  Minyak  atsiri  biji  pala mengandung  eugenol,  metil  eugenol,  elemisin  miristisin,  α-pinena,  dan  β-pinena  yang dapat  digunakan  sebagai  repelan.  Penelitian  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh konsentrasi  minyak  atsiri  biji  pala  terhadap  iritasi  dan  aktivitas  repelan.  Uji  dilakukan pada 6 konsentrasi minyak biji pala  yaitu 4, 6, 8,10, 12% (v/b) dan kelompok kontrol. Pengujian  meliputi  uji  pH,  iritasi,  dan  aktivitas  repelan.  Aktivitas  repelan  dianalisis menggunakan  SPSS  dengan ANOVA dan  dilanjutkan  dengan LSD pada  taraf signifikansi  95%.  Hasil penelitian menunjukkan  pH masing-masing konsentrasi  adalah 6.  Iritan  bersifat  sangat  ringan.  Aktivitas  repelan  dari  6  seri  konsentrasi  tersebut berturut-turut  adalah  43,95;  373,56;  758,03;  1167,41;  1950,98  dan  4,29  detik. Berdasarkan hasil yang diperoleh disimpulkan bahwa minyak atsiri biji pala mempunyai aktivitas  repelan  terbesar  terhadap  nyamuk Aedes  aegypti betina  pada  konsentrasi 12%(v/b) selama 1950,978 detik dan iritan yang sangat ringan.
Kata kunci : Minyak atsiri biji pala ( Myristica fragrans Houtt.), nyamuk Aedes aegypti , repelan

## ABSTRACT
This research was conducted to examine the repellent activity of nutmeg essential oil to Aedes Aegipty mosquitoes. Most repellent in the market is synthetic replication that can give negative results for health because it generally contains DEAT. The essential oil of nutmeg  contains  eugenol,  methyl  eugenol,  elemisin  myristisin,  α-pinena,  and  β-pinene which can be used as repellent. Research was also aimed to know the concentration of essential oil of nutmeg to irritation and repellent activity. The test was performed on 6 nutmeg oil concentrations is 4%, 6%, 8%, 10%, 12% (v/b) and control group. The tests include  pH,  irritation,  and  repellent  activity  test.  The  repellent  activity  was  analyzed using SPSS with ANOVA and continued with LSD at 95% significance level. The results
showed that the pH of each concentration was 6. The irritant was very mild. Repellent activities  of  the  6  series  are  43.952  seconds,  373.556  seconds,  758.032  seconds, 1167.41 seconds, 1950.978 seconds and 4.292 seconds. The results obtained concluded that nutmeg essential oil has the largest repellent activity against Aedes aegypti at 12% concentration (v/b) with 1950,978 seconds and very mild irritant.
Keywords: Nutmeg  essential  oil  (Myristica  fragrans  Houtt.),  Aedes  aegypti  mosquito, repellen.

## PENDAHULUAN
Menurut  Kementerian  Kesehatan  Republik  Indonesia  (2010)  demam  berdarah dengue (DBD) merupakan salah satu  masalah kesehatan masyarakat  Indonesia, karena jumlah  penderita  dan  luas  penyebarannya  semakin  bertambah  seiring  dengan meningkatnya  mobilitas  dan  kepadatan  penduduk.  Vektor  utama  yang  berperan  dalam penyebaran penyakit demam berdarah yaitu nyamuk Aedes aegypti .
Menurut  Kementerian  Kesehatan  Republik  Indonesia  (2015)  pencegahan  penyakit demam  berdarah  dapat  dilakukan  dengan  berbagai  cara,  salah  satunya  yaitu  dengan menggunakan  obat  nyamuk  atau  anti  nyamuk.  Repelan  yaitu  bahan-bahan  yang mempunyai  kemampuan  untuk  menjauhkan  serangga  dari  manusia,  sehingga  gigitan serangga  dapat  dihindari  (Yuniarsih,  2010).  Repelan  yang  banyak  beredar  di  pasaran yaitu repelan sintetik yang dapat memberikan dampak negatif untuk kesehatan. Dampak negatif tersebut disebabkan karena umumnya mengandung Diethyltoluamide atau DEET (Yoon et al ., 2015).
Salah satu efek negatif dari Diethyltoluamide atau DEET yaitu dapat menyebabkan terjadinya  iritasi  pada  kulit  (Robbins  dan  Cherniack,  1986).  Untuk  menghindari  efek samping  negatif  tersebut,  diperlukan  repelan  berbahan  alami  yang  aman  untuk kesehatan  dengan  menggunakan  biji  pala.  Biji  pala  mengandung  minyak  atsiri  yang memiliki  aroma  khas  dan  mudah  menguap.  Minyak  atsiri  biji  pala  diketahui mengandung α-pinena dan β-pinena yang memiliki aktivitas repelan (Agoes, 2007 dan Geetha  dkk,  2014).  Selain  itu  aktivitas  repelan  dari  minyak  atsiri  biji  pala  juga ditunjukkan  pada  kandungan  eugenol,  metil  eugenol,elemisin  dan  miristisin  (Du  dkk, 2014).  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  minyak  atsiri  biji  pala ( Myristica fragrans Houtt.) sebagai repelan alami.
Lina W, dkk
16 Aktivitas Repelan Minyak Atsiri

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah:  sangkar  nyamuk  dengan  ukuran 20 x 20 x 20 cm dengan lubang sirkuler berdiameter 15 cm, seperangkat alat gelas dan alat yang umum ada di laboratorium.
Bahan
Bahan  uji  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah:  biji  pala  ( Myristica fragrans Houtt)  yang  diperoleh  dari  Maluku.  Hewan  uji  yang  digunakan  yaitu Aedes aegypti betina dan kelinci albino. Umur nyamuk yang digunakan yaitu seminggu atau 7 hari. Bahan kimia yang digunakan terdiri dari aquadest, KI, Na 2 SO 4, tween 80, dan span 80.
Jalannya Penelitian
Uji pH
Uji  pH  dilakukan  sebelum  dilakukan  uji  iritasi  dan  uji  repelan  emulsi  minyak atsiri  biji  pala  menggunakan  kertas  pH  dengan  cara  mencelupkan  kertas  pH  pada sediaan.
Uji iritasi
Selanjutnya  dilakukan  uji  iritasi  menggunakan  hewan  uji  kelinci  albino. Sebelum pengujian hewan uji diaklimatisasi di ruang percobaan selama kurang lebih 5 hari. Kemudian 24 jam sebelum pengujian bulu  hewan dicukur pada daerah punggung dengan luas kurang lebih 10 x 15 cm sebagai tempat pemaparan sampel uji. Punggung hewan  yang  telah  dicukur  dibagi  menjadi  6  bagian  dan  sampel  dipaparkan  pada  kulit seluas  2  x  3  cm 2 .  Lalu  ditutup  selama  4  jam  dengan  kasa  dan  diplester  menggunakan plester  yang  bersifat  non  iritan.  Setelah  itu  kasa  dan  plester  dibuka  kemudian  residu sampel  dihilangkan  dengan  air.  Selanjutnya  dilakukan  pengamatan  pada  jam  ke  1,  24, 48,  dan  72  jam  setelah  pembukaan  plester.  Evaluasi  pengamatan  hasil  uji  iritasi dilakukan dengan rumus 1.
Indeks iritasi primer = .........................(1)

## Keterangan :
A  : Jumlah  skor eritema  dan  udema  seluruh  titik  pengamatan  sampel  pada jam  ke  24,  48 dan  72 dibagi jumlah pengamatan
B  : Jumlah  skor eritema  dan  udema  seluruh  titik  pengamatan  kontrol  pada jam  ke  24,  48 dan 72 dibagi jumlah pengamatan
C : Jumlah hewan
Nilai rata-rata dari respon iritasi pada kelinci dikategorikan seperti tersaji pada Tabel I.
Tabel I. Indeks Iritasi Primer (BPOM, 2014) Nilai rata-rata Kategori respon 0,0-0,4 Sangat ringan ( negligible ) 0,5-1,9 Iritan ringan ( slight ) 2,0-4,9 Iritan sedang ( moderate ) 5,0-8,0 Iritan kuat ( severe )

## Uji aktivitas repelan
Uji aktivitas repelan dilakukan untuk  mengetahui konsentrasi minyak atsiri yang paling efektif digunakan sebagai repelan. Dua puluh ekor nyamuk Aedes aegypti betina yang  sudah  dipuasakan  sehari  sebelum  dimasukkan  dalam  sangkar  pengujian.  Sediaan minyak  atsiri  biji  pala  dioleskan  pada  pergelangan  tangan  sebanyak  1,5  g  kemudian pergelangan  tangan  dimasukkan  kedalam  sangkar  dan  diamati  lama  waktu  penolakan hingga  nyamuk  menempel  pada  pergelangan  tangan  probandus.  Proses  pengujian dilakukan menggunakan mekanisme kerja yaitu :
1. Repelan berefek kurang dari 20 menit
Pergelangan tangan dimasukkan dalam sangkar selama 1 menit dengan selang waktu  5  menit.  Pengujian  dihentikan  bila  nyamuk  telah  menempel  untuk  pertama kalinya.
2. Repelan berefek antara 20 menit hingga 4 jam
Pergelangan tangan dimasukkan dalam sangkar selama 1 menit dengan selang waktu  15  menit.  Pengujian  dihentikan  bila  nyamuk  telah  menempel  untuk  pertama kalinya.
3. Repelan berefek lebih dari 4 jam
Pergelangan tangan dimasukkan dalam sangkar selama 1 menit dengan selang waktu  1jam.  Pengujian  dihentikan  bila  nyamuk  telah  menempel  untuk  pertama kalinya (Fradin dan Day, 2002).

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dianalisis  menggunakan  SPSS  ( Statistical  Product  and Services  Solution ).  Untuk  mengetahui  homogenitasnya  digunakan  uji Levene , sedangkan  untuk  mengetahui  normalitasnya  digunakan  uji Kolmogorof  Smirnov .  Data yang diperoleh berupa data parametrik maka dilanjukan dengan uji ANOVA (Analysis of Varian) . Pengujian dilakukan dengan taraf kepercayaan 95%. Selanjutnya dilakukan uji

## Lina W, dkk
18 Aktivitas Repelan Minyak Atsiri
beda  nyata  yaitu  dengan pos  hocLSD ( least  significance  difference )  untuk  mengetahui apakah ada perbedaan pada tiap kelompok.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
1. Uji pH
Uji  pH  dilakukan  untuk  mengetahui  pH  dari  formula  yang  dibuat.  pH  perlu dipastikan  sama  dengan  pH  kulit  agar  tidak  menyebabkan  iritasi.  Hasil  pengujian  pH sediaan disajukan pada Tabel II.
Tabel II. Uji pH sediaan Konsentrasi (% v/b) pH 4 6 6 6 8 6 10 6 12 6 Kontrol 6
Dari Tabel II menunjukkan minyak atsiri biji pala konsentrasi 4, 6, 8, 10, 12% (v/b) dan kontrol  memiliki  pH  masing-masing  adalah  6.  Tabel  II  menunjukkan  penambahan minyak atsiri biji pala tidak menyebabkan perubahan nilai pH. pH kulit berkisar antara 4,5-6,5  (Tranggono  dan  Latifah,  2007).    Hasil  pengujian  pH  yang  diperoleh menunjukkan bahwa minyak atsiri biji pala memiliki pH yang memenuhi batasan pada pH kulit.

## 2. Uji iritasi
Uji  iritasi  dilakukan  untuk  mengetahui  kemampuan  minyak  dalam mengiritasi.Uji  iritasi  yang  terjadi  selanjutnya  dihitung  dengan  menggunakan  rumus indeks iritasi primer. Hasil pengujian dapat dilihat pada Gambar 1.
(a)Sebelum pengamatan  (b) Pengamatan jam ke-72
Gambar 1. Hasil uji iritasi
Hasil  pengamatan  menunjukkan  bahwa  formula  1,  2  dan  3  dengan  minyak  atsiri  biji pala konsentrasi 4, 6 dan 8% (v/b) tidak terlihat adanya eritema dan udema. Formula 4 dan 5 dengan minyak atsiri biji pala konsentrasi 10 dan 12% (v/b) menunjukkan adanya eritema. Adapun hasil perhitungan indeks iritasi primer disajikan pada Tabel III.
Tabel III. Skoring Indeks Iritasi Primer Formula  Indeks Iritasi Primer Kategori F1 -0,037 - F2 -0,037 - F3 -0,037 - F4 0 Sangat ringan F5 0,074 Sangat ringan Keterangan : F1 : Minyak atsiri biji pala konsentrasi 4% (v/b)
F2 : Minyak atsiri biji pala konsentrasi 6% (v/b) F3 : Minyak atsiri biji pala konsentrasi 8% (v/b) F4 : Minyak atsiri biji pala konsentrasi 10% (v/b) F5 : Minyak atsiri biji pala konsentrasi 12% (v/b)
Hasil perhitungan menggunakan rumus indeks iritasi primer menunjukkan hasil negatif pada formula 1, 2, dan 3 dengan minyak atsiri biji pala konsentrasi 4, 6 dan 8% (v/b). Pada formula 4 dengan minyak atsiri biji pala konsentrasi 10% (v/b) indeks iritasi primer  ditunjukkan  pada  nilai  0  dan  pada  formula  5  dengan  minyak  atsiri  biji  pala konsentrasi  12%  (v/b)  indeks  iritasi  primer  ditunjukkan  pada  nilai  0,074.  Menurut BPOM (2014) Tabel III menunjukkan bahwa formula 1, 2, dan 3 dengan minyak atsiri

## Lina W, dkk
20 Aktivitas Repelan Minyak Atsiri
biji pala konsentrasi 4, 6 dan 8% (v/b) tidak dapat dikategorikan ke dalam respon iritasi dikarenakan  hasil  perhitungan  yang  negatif.  Hasil  negatif  tersebut  diperoleh  karena kontrol  yang  digunakan  memiliki  skoring  iritasi  yang  lebih  besar  dibandingkan perlakuan. Pada formula 4 dan 5 dengan minyak atsiri biji pala konsentrasi 10 dan 12% (v/b)  menunjukkan  bahwa  iritasi  yang  dihasilkan  dikategorikan  bersifat  sangat  ringan dengan nilai rata-rata respon iritasi sebesar 0,0-0,4.

## 3. Uji aktivitas repelan
Hasil uji aktivitas repelan disajikan pada tabel IV.
Tabel IV. Hasil Uji Aktivitas Repelan Minyak Biji Pala
Formula Uji Aktivitas Repelan X±SD (detik) F1 43,9±5,7 F2 373,6±-2,4 F3 758,0±2,7 F4 1163,1±3,7 F5 1950,9±9,3 F6 4,3±0,8 Keterangan :
F1 : Minyak atsiri biji pala konsentrasi 4% (v/b) F2 : Minyak atsiri biji pala konsentrasi 6% (v/b) F3 : Minyak atsiri biji pala konsentrasi 8% (v/b) F4 : Minyak atsiri biji pala konsentrasi 10% (v/b) F5 : Minyak atsiri biji pala konsentrasi 12% (v/b) F6 : Kontrol
Dari Tabel IV menunjukkan formula 6 sebagai kontrol memiliki aktivitas repelan paling rendah,  sedangkan  formula  5  dengan  minyak  atsiri  biji  pala  konsentrasi  12%  (v/b) memiliki  aktivitas  repelan  paling  tinggi.  Profil  aktivitas  repelan  dapat  dilihat  pada Gambar 3. Adanya minyak atsiri biji pala memberikan hasil aktivitas repelan yang lebih besar  daripada  tanpa  adanya  minyak  atsiri  biji  pala.  Terlihat  bahwa  aktivitas  repelan yang  diperoleh  semakin  meningkat.  Semakin  banyak  minyak  atsiri  yang  digunakan maka  semakin  tinggi  aktivitas  repelan  yang  diperoleh.  Hasil  analisis  statistika menggunakan  SPSS  versi  16,0  menunjukkan  hasil  yang  terdistribusi  normal menggunakan Kolmogorof  Smirnov dengan  nilai  signifikansi  0,604  (p>0,05)  dan  hasil yang homogen menggunakan Levene dengan nilai signifikansi 0,114 (p>0,05). Analisis ANOVA menunjukkan nilai signifikansi 0,000 (p<0,05) yang artinya terdapat perbedaan antar formula. Analisis menggunakan LSD dari ke-6 formula diperoleh nilai signifikansi
0,000  (p<0,05)  yang  menunjukkan  bahwa  dari  ke-6  formula  berbeda  signifikan sehingga  diketahui  dengan  penambahan  minyak  atsiri  biji  pala  memberikan  pengaruh terhadap aktivitas repelan yang dihasilkan. Hal ini membuktikan bahwa semakin banyak minyak  atsiri  yang  digunakan  maka  aktivitas  repelan  yang  dihasilkan  juga  semakin meningkat. Semakin banyak minyak atsiri biji pala yang digunakan maka semakin kuat juga aroma yang dihasilkan. Aroma minyak atsiri biji pala tersebut akan mempengaruhi bau dan rasa yang berasal dari kulit sehingga dapat mencegah nyamuk untuk mendekati kulit.

## KESIMPULAN
Minyak  atsiri  pada  biji  pala  ( Myristica  fragrans Houtt.)  mempunyai  aktivitas sebagai  repelan  terhadap  nyamuk Aedes  aegypti betina  dengan  konsentrasi  12%. Peningkatan  konsentrasi  minyak  atsiri  biji  pala  tidak  memberikan  pengaruh  terhadap daya iritasi.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terimakasih  penulis  ucapkan  kepada  semua  pihak  yang  telah  memberikan kontribusi selama pelaksanaan penelitian dan sampai publikasi ini. Terimakasih kepada laboran laboratorium Kimia Farmasi Universitas Ahmad Dahlan Yogyakarta yang telah membantu teknis penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
Agoes, G., 2007, Teknologi Bahan Alam , 118, ITB, Bandung
Anonim,  2014,  Pedoman  Uji  Toksisitas  Nonklinik  Secara  In  Vivo,    Peraturan  Kepala
Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia
Du, S.S., Yang, K., Wang, C.F., You, C.X., Geng, Z.F., Guo, S.S., Deng, Z.W., and Liu, Z.L.,  2014,  Chemical  Constituents  and  Activities  of  The  Essential  Oil  from Myristica  fragrans Against  Cigarrete  Beetle  Lasioderma  serricorne, Chemistry & Biodiversity , 11(9): 1449
Fradin,  M.S.,  and  Day,  J.F.,  2002,  Comparative  Efficacy  of  Insect  Repellents  Against Mosquito Bites, The New England Journal of Medicine
Geetha,  R.V.,  and  Roy,  A.,  2014,  Essential  Oil  Repellents-A  Short  Review,
International Journal of Drug Development and Research , 6(2): 21 Kementerian  Kesehatan  Republik  Indonesia,  2010,  Demam  Berdarah  Dengue  di
Indonesia Tahun 1968-2009, Buletin Jendela Epidemiologi , 2 (2087-1546): 5
Kementerian  Kesehatan  Republik  Indonesia,  2015,  Demam  Berdarah  Biasanya  Mulai Meningkat di Januari, Jakarta, diunduh dari
Lina W, dkk
22 Aktivitas Repelan Minyak Atsiri
http://www.depkes.go.id/article/view/15011700003/demam-berdarah-biasanya- mulai-meningkat-di-januari.html , diakses tanggal 19 Desember 2015
Robbins, PJ., and Cherniack, MG., 1986, Review of the biodistribution and Toxicity of the  Insect  Repellent  N,N-diethyl-m-toluamide  (DEET), J.  Toxicol  Environ Health , 18(4): 503-25
Tranggono,  R.I.,  dan  Latifah,  F.,  2007, Buku  Pegangan  Ilmu  Pengetahuan  Kosmetik , 21, PT. Gramedia Pustaka Utama, Jakarta
Yoon, J.K., Kim, K., Cho, Y., Gwon, Y., Cho, H., Heo, Y., Park, Y., Park, K., Lee, Y., Kim,  M.,  Oh,  Y.,  and  Kim  Y.B.,  2015,  Comparison  of  Repellency  Effect  of Mosquito  Repellents  for  DEET,  Citronella,  and  Fennel  Oil, Journal  of Parasitology Research
Yuniarsih,  E.,  2010,  Uji  Efektivitas  Losion  Repelan  Minyak  Mimba  ( Azadirachta indica A.  Juss)  Terhadap  Nyamuk Aedes  aegypti , Skripsi ,  Universitas  Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah, Jakarta