## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARI EKSTRAK ETANOL BUNGA
KANA MERAH ( Canna coccinea
Mill)

## MENGGUNAKAN METODE DPPH
Afrilia Veronika Rumangu 1) , Adithya Yudistira 1) , Henki Rotinsulu 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Cana  plants  are  flower  ornamental  plants  whose  genus  or  margins  are  the  only  ones  in  the  family Cannacea.  This  study  aims  to  determine  the  activity  of  antioxidant  compounds  from  ethanol  extract  of Canna coccinea  Mill flower. by using the DPPH method. Flowers Canna coccinea  Mill  extracted using maceration  with  ethanol  as  a  solvent.  As  a  parameter,  testing  of  antioxidant  activity  was  carried  out using  the  DPPH  (1,1  –  diphenyl-2-pikrilhidrazil)  method  which  was  measured  using  UV-Vis Spectrophotometry  at  a  wavelength  of  517nm.  The  result  showed  that  ethanol  of  Canna  coccinea Mill,flower proven to have antioxidant activity in each concentration test. The highest concentration has an free radical scavenging activity by reaching of 56,00%.
Keywords: Flowers Canna coccinea Mill, Antioxidant, Extraction, DPPH

## ABSTRAK
Tanaman  kana  adalah  tanaman  hias  bunga  yang  genus  atau  marganya  merupakan  satu-satunya  dalam family Cannaceae . Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas senyawa antioksidan dari ekstrak etanol  bunga Canna  coccinea Mill.  dengan  menggunakan  metode  DPPH.  Bunga Canna  coccinea Mill. diekstraksi  menggunakan  metode  maserasi  dengan  etanol  sebagai  pelarut.  Sebagai  parameter, pengujian aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  metode  DPPH  (1,1- difenil -2- pikrilhidrazil )  yang  diukur menggunakan Spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang 517 nm. Hasil penelitian menunjukkan ekstrak  etanol  bunga Canna  coccinea Mill.  terbukti  memiliki  aktivitas  antioksidan  disetiap  konsentrasi pengujian. Konsentrasi tertinggi memiliki aktivitas penangkal radikal bebas dengan mencapai presentase 56,00%.
Kata Kunci : Bunga Canna coccinea Mill, Antioksidan, Ekstraksi, DPPH

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  negara  yang memiliki  ribuan  jenis  tanaman  yang  harus dilestarikan  dan  dimanfaatkan  dengan  baik. Sebagian  besar  tanaman  tersebut  dapat digunakan  sebagai  obat  tradisional.  Obat tradisional  yang  berasal  dari  bahan  –bahan alami,  memiliki  efek  samping,  tingkat bahaya  dan  resiko  yang  jauh  lebih  rendah dibandingkan dengan obat kimia (Sunaryanti, 2012).
Salah  satu  tanaman  yang  dapat digunakan  sebagai  obat  tradisional  adalah tumbuhan  kana  merah.  Tanaman  Kana merah  mempunyai  nama  ilmiah Canna coccinea Mill,  pada  awalnya  merupakan tanaman hias yang tidak diketahui manfaatnya.  Di  Indonesia  tanaman  kana merah  ( Canna  coccinea Mill.)  merupakan salah  satu  tanaman  hias  yang  berpotensial sebagai obat alternatif (Sunaryanti, 2012).
Pada tanaman kana merah atau lebih sering disebut di Indonesia bunga tasbih/ganyang  hutan  ternyata  mempunyai banyak  manfaat  yang  belum  banyak  orang ketahui.  Setelah  diteliti,  diketahui  bahwa tanaman  kana  merah  mengandung  aktivitas antioksidan  yang  sangat  bermanfaat  bagi tubuh, yang memiliki kemampuan menghilangkan oksigen tunggal dan berinteraksi  dengan  senyawa  radikal  bebas (Dutta, et al ., 2004)
Radikal  bebas  merupakan  salah  satu bentuk  senyawa  reaktif,  yang  secara  umum diketahui  sebagai  senyawa  yang  memiliki elektron  yang  tidak  berpasangan  di  kulit terluarnya.  Radikal  bebas  sebagai  molekul atom  dengan  elektron  bebas  dalam  jumlah normal dapat berfungsi dalam membunuh  virus  dan  bakteri,  namun  dalam jumlah  yang  sangat  besar  zat  ini  dapat merusak jaringan normal, menganggu produksi  DNA,  merusak  dinding  sel khususnya
lapisan lipid,
serta mempengaruhi  pembuluh  darah.  Radikal
bebas  dapat  ditangkal  atau  diredam  dengan pemberian antioksidan (Halliwel, 2004).
Antioksidan  berupa  senyawa  kimia yang  dapat  menyumbangkan  satu  atau  lebih elektron  kepada  radikal  bebas,  sehingga reaksi radikal bebas tersebut dapat terhambat. Penggunaan senyawa antioksidan berkembang  dengan  pesat,  baik  untuk makanan maupun
pengobatan.
Penggunaannya sebagai obat semakin meningkat dengan bertambahnya pengetahuan  tentang  aktivitas  radikal  bebas terhadap  beberapa  penyakit  degeneratif seperti  penyakit  jantung,  diabetes,  kanker, inflamasi  jaringan,  kelainan  imunitas  dan penuaan dini (Halliwel, 2004).
Salah  satu  metode  yang  sering dipakai dalam menguji aktivitas antioksidan yaitu metode DPPH ( 1,1-difenil-2- pikrilhidrazil ).  Dari  penelitian-penelitian tentang bunga yang telah dilakukan sebelumnya  mendorong  peneliti  untuk melakukan  penelitian  untuk  membuktikan bahwa bunga Canna coccinea Mill. memiliki  kandungan  karotenoid  sebagai antioksidan.  Berdasarkan  latar  belakang diatas,  maka  peneliti  terdorong  untuk melakukan penelitian dengan judul “Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Etanol Bunga  Kana  Merah  ( Canna  coccinea Mill ) Menggunakan Metode DPPH”.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Pengambilan  sampel  dilakukan  desa Rurukan, di kota Tomohon Sedangkan untuk preparasi  sampel,  pengamatan  dan  analisis data penelitian ini dilakukan di Laboratorium Penelitian  Farmasi  lanjutan  (Farmakognosi Fitokimia dan Laboratorium Analisis Farmasi)  Program  Studi  Farmasi,  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam, Universitas  Sam  Ratulangi  pada  bulan Desember 2018 – Januari  2019.
Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini ialah wadah botol air kemasan 600  mL,  cawan  porselin,  sarung  tangan, telenan,  gelas  ukur,  erlenmeyer,  kaca  arloji, labu  ukur  (100  mL  dan  50  mL),  tabung reaksi, rak tabung reaksi, baker glass , vortex (Benchmark),  corong,  pipet  tetes,  mikro pipet,  timbangan  digital  (AE  ADAM), spatula,  oven  dan  spektrofotometer  UV-Vis (UV-1800).

## Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  kertas  saring,  tissue, alumunium  foil,  kertas  label,    etanol  96%, serbuk  DPPH  ( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil ), Bunga Canna  coccinea Mill . dan  serbuk vitamin  c  p.a  sebagai  kontrol  positif (pembanding).

## Bentuk Penelitian
Penelitian  dilakukan  dengan  metode DPPH dalam bentuk eksperimental laboratorium.

## Prosedur Penelitian Pengambilan Sampel
Sampel  diambil  di  Rurukan,  Kota Tomohon,  Provinsi  Sulawesi  Utara.  Bagian yang  digunakan  dari  tumbuhan  ini  ialah bunga, sebanyak 1500gr.

## Preparasi Sampel
Bunga Canna  coccinea Mill  yang telah dipetik dan dicuci, kemudian dimasukan ke dalam toples untuk perlakuan selanjutnya.
Ekstraksi
Sampel yang telah dimasukan kedalam toples kemudian dimaserasi dengan
pelarut  etanol  sebanyak  4000  mL  selama  3 kali  24  jam  sesekali  sambil  diaduk.  Hasil ekstraksi kemudian disaring untuk mendapatkan  filtrat.  Kemudian  filtrat  yang diperoleh setiap pergantian larutan digabungkan  dan  diuapkan  dengan rotary evaporator hingga  mendapatkan  ekstrak kental dari bunga Canna coccinea Mill.

## Pembuatan Larutan Stok 100 ml
Sebanyak  100  mg  ekstrak  bunga
Canna coccinea Mill.dilarutkandidalam etanol  96%  ad.100  mL  (konsentrasi  1000 ppm).  Dengan  masing-masing  konsentrasi 100 mg/L, 75 mg/L, 50  mg/L, dan 25 mg/L dihitung dengan menggunakan rumus pengenceran, yaitu :
M 1 •V 1 = M 2 •V 2 Pada  keempat  konsentrasi,  masing- masing  hasil  yang  didapatkan  dari  hasil  V 1 dipipet dan ditambahkan etanol 96% hingga mencapai  tanda  batas  (10  mL),  kemudian dipindahkan  ke  dalam  tabung  reaksi  dan ditutup dengan menggunakan aluminium foil untuk digunakan pada perlakuan
selanjutnya.

## Pembuatan Larutan DPPH
Penentuan aktivitas penangkal radikal  bebas  DPPH  menurut  Burda  dan Olezek  (2001).  Sebanyak  4  mg  serbuk DPPH  ditimbang  dan  dilarutkan  dalam etanol  96%  sebanyak  100  mL.  Selanjutnya larutan  stok  DPPH  dilakukan  pengujian kontrol,  di  uji  pada  spektrofotometer  UV- Vis  dengan  panjang  gelombang  antara  400- 800 nm.
Pengujian  Larutan  Kontrol  DPPH  dan Pengujian Sampel
Setelah pengujian sampel dan pengujian kontrol, dilanjutkan pada pengujian  vitamin  C  p.a  sebagai  kontrol pembanding. Kaca arloji ditimbang, vitamin
C  ditimbang  sebanyak  10  mg.  Kemudian, vitamin  C  p.a  dilarutkan  dalam  etanol  96% sebanyak  10  mL,  buat  larutan  stok  dengan konsentrasi  yang  sama  sebelumnya  yaitu konsentrasi  100  mg/L,  75  mg/L,  50  mg/L dan  25  mg/L  dengan  ditambahkan  masing- masing  larutan  dengan  etanol  p.a  mencapai tanda  batas  (10  mL),  dengan  pengulangan sebanyak  3  kali  pada  masing-masing konsentrasi. Pada masing-masing konsentrasi  di  pipet  2  mL  dan  ditambahkan larutan  DPPH  2  mL,  di  vorteks  selama  2 menit  dan  diinkubasi  selama  30  menit  pada suhu 37 0 C.  Sampel vitamin C p.a diuji pada spektrofotometer  UV-Vis  dengan  panjang gelombang 517 nm.
Pengujian  Aktivitas  Antioksidan  Dengan Metode DPPH
Penentuan aktivitas penangkal radikal  bebas  DPPH  menurut  Burda  dan Olezek  (2001).Diambil  sebanyak  2  mL ekstrak bunga Canna coccinea Mill. dengan konsentrasi  100  mg/L,  75  mg/L,  50  mg/L dan  25  mg/L  ditambahkan  masing-masing 1,5  mL  larutan  DPPH  dalam  etanol  dan divorteks  selama  2  menit.  Berubahnya warna ungu menjadi warna kuning menunjukkan  efisiensi  penangkal  radikal bebas.Diukur
absorbansi pada spektrofotometer  UV-Vis  dengan  panjang gelombang  517  nm  setelah  diinkubasi selama 30 menit.Kemudian diamati perbandingannya  dengan  vitamin  C  p.a sebagai  standar.  Setelah  absorbansi  didapat, Aktivitas penangkapan radikal bebas (persen inhibisi) dihitung sebagai persentase berkurangnya warna DPPH dengan menggunakan rumus berikut:

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Dari hasil pengukuran pada penilititian  ini  diperoleh  absorbansi  yang kemudian digunakan untuk perhitungan nilai persen  inhibisi  atau  persen  perendaman senyawa  antioksidan  terhadap  DPPH.  Data persen  inhibisi  ekstrak  etanol  bunga Canna coccinea Mill.  dan  Vitamin  C  p.a  sebagai pembanding  disajikan  pada  Tabel  1  berikut ini :
Tabel  1 .  Hasil  pengujian  Perbandingan antara  Ekstrak  Etanol  Bunga Canna coccinea Mill dan
Vitamin C p.a
Uji  aktivitas  pada  suatu  tanaman sangat  penting  dilakukan  untuk  mengetahui apakah  dari  tanaman  tersebut  terbukti memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  dapat menangkal  radikal  bebas.  Pada  penelitian ini,  tanaman  yang  digunakan  yaitu  tanaman Canna  coccinea Mill.  Diketahui  tanaman pigmen  bunga Canna  coccinea Mill. memiliki  kandungan  senyawa  Flavonoid, tepatnya antosianin., sehingga tidak menutup kemungkinan untuk bagian   bunga dari  tanaman Canna  coccinea Mill.  juga dapat mengandung senyawa aktivitas antioksidan yang dapat mempertahankan diri
Pengulangan Konsentrasi I II III Rata-
Rata 25 mg/ L Ekstr ak 49,10 % 48,80 % 48,50 % 48,80 % Vit.C 66,70 % 67,40 % 74,70 % 96,60 % 50 mg/ L Ekstr ak 50,50 % 49,90 % 49,70 % 50,03 % Vit. C 88,10 % 89,30 % 90,00 % 89,13 % 75 mg/ L Ekstr ak 52,60 % 52,40 % 51,40 % 52,10 % Vit. C 90,20 % 90,10 % 90,20 % 90,16 %
100 mg/ L Ekstr ak 58,50 % 55,70 % 54,10 % 56,00 % Vit. C 90,20 % 89,60 % 90,20 % 90,00 %
dari  lingkungan  maupun  serangan  dari organisme lain.
Pengujian
antioksidan pada penelitian  ini,  menggunakan  metode  DPPH
( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil ). Pemilihan metode  ini  karena  merupakan  metode  yang sangat  sederhana,  mudah,  cepat  dan  peka serta  hanya  memerlukan  sedikit  sampel untuk  evaluasi  aktivitas  antioksidan.  DPPH ( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil ) merupakan radikal  bebas  sintetik  berwarna  ungu  yang banyak  digunakan  dalam  uji  aktivitas antioksidan.  Larutan  radikal  bebas  DPPH memiliki atom nitrogen yang tidak berpasangan.  Reaksi  DPPH  dengan  atom hidrogen  yang  terdapat  dalam  antioksidan dapat  membuat  larutan  DPPH  menjadi berkurang  reaktivitasnya,  yang  ditunjukkan dengan  memudarnya  warna  ungu  menjadi kuning. Perubahan warna ini mengakibatkan perubahan absorbansi pada panjang gelombang maksimum DPPH menggunakan spektrofotometri  UV-Vis  yang  menjadi patokan (Molyneux, 2004). Penetuan panjang  gelombang  serapan  maksimum  (λ maks)  larutan  DPPH  dilakukan  dengan mengukur  absorbansi  larutan  pada  panjang gelombang  antara  400-800  nm.  Hasil  yang didapatkan  pada  penelitian  ini  adalah  517 nm  dan  memiliki  absorbansi  kontrol 0,753nm (Lampiran6 ).
Pengujian aktivitas antioksidan dalam penelitian ini menggunakan perbandingan  1:1  yang artinya 2 ml larutan DPPH  dicampurkan  dengan  2  ml  larutan sampel  (ekstrak  etanol  bunga Canna coccinea Mill.  atau  vitamin  C)  pada  tiap konsentrasi  yang  berbeda-beda.  Sempurnya campuran DPPH dan ekstrak dibantu dengan perlakuan  di vortex selama  2  menit. Berkurangnya  intensitas  warna  larutan DPPH  tersebut  dapat  menunjukkan  bahwa terjadi  reaksi  antara  atom  hidrogen  yang dilepas  oleh  bahan  uji  dengan  molekul radikal  DPPH  sehingga  terbentuk  senyawa 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil yang  berwarna
kuning.  Pada  penelitian  ini,  ekstrak  etanol dari bunga Canna coccinea Mill. yang telah ditambahkan larutan DPPH, Tidak mengalami  adanya  perubahan  warna,  tetapi penelitian ini tetap dilanjutkan.
Konsentrasi  ekstrak  etanol  bunga Canna  coccinea Mill.  yang  digunakan adalah 100 mg/L, 75mg/L, 50 mg/L, dan 25 mg/L. Masing-masing
konsentrasi dicampurkan  dengan  larutan  DPPH  dengan perbandingan yang ada. Campuran dihomogenkan  dan  diinkubasi  selama  30 menit pada tempat gelap dengan suhu 37 0 C. Hal  ini  dilakukan  untuk  menghindari kontaminasi  dan  mengoptimalkan  aktivitas DPPH  agar  terjadi  reaksi  antara  DPPH dengan sampel yang diuji. Setelah diinkubasi, kemudian masing-masing ekstrak  dilakukan  pengukuran  absorbansi dengan menggunakan spektrofotometer pada panjang  gelombang  serapan  maksimum  (λ maks) DPPH 517 nm. Pada tiap konsentrasi dilakukan sebanyak 3 kali pengulangan.
Pembanding yang digunakan sebagai kontrol positif adalah Vitamin C p.a dimana sebagai pembanding karena berfungsi sebagai antioksidan sekunder yaitu menangkap radikal bebas, mencegah terjadinya reaksi berantai, aktivitas antioksidannya sangat tinggi, mudah diperoleh  dan  vitamin  C  lebih  polar  dari vitamin  yang  lain.  Vitamin  C  mempunyai gugus hidroksi bebas yang bertindak sebagai penangkap radikal bebas.
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh pada Tabel 1 menunjukkan bahwa pengukuran  persen  inhibisi  pada  ekstrak etanol bunga Canna coccinea Mill. memiliki aktivitas  antioksidan  dan    mengalami peningkatan  dari  konsentrasi  25  mg/L sampai  dengan  100  mg/L.  Pada  ekstrak etanol  bunga Canna  coccinea Mill.  dengan konsentrasi  100  mg/L    memiliki  persen inhibisi  rata-rata  paling  tinggi  yaitu  sebesar 56,00%.  Penigkatan  persen  inhibisi  pada ekstrak  bunga Canna  coccinea Mill.
menandakan  bahwa  konsentrasi  ekstrak yang ditambahkan
mempengaruhi kemampuan ekstrak dalam merendam radikal  bebas.  Hal  ini  didukung  oleh penelitian yang dilakukan oleh Hanani et al ., (2005)  yang  menyatakan  bahwa  presentasi penghambat  atau  persen  inhibisi  terhadap aktivitas  radikal  bebas  akan  ikut  meningkat seiring  dengan  meningkatnya  konsentrasi. Hasil  pengujian  perbandingan  aktivitas antioksidan  ekstrak  bunga Canna  coccinea Mill.  Dan  Vitamin  C  (Tabel  1)    juga menunjukkan  bahwa  aktivitas  antioksidan ekstrak  etanol  bunga Canna  coccinea Mill. lebih  rendah  dibandingkan  dengan  Vitamin C.
Rendahnya  aktivitas  antioksidan  ini kemungkinan  disebabkan  oleh  berbagai faktor,  diantaranya  karena  metode  ekstraksi yang  digunakan  kemungkinan  tidak  cukup menarik  komponen  kimia  yang  bersifat antioksidan  dalam  bunga Canna  coccinea Mill. selain itu karena vitamin C merupakan senyawa  murni  sedangkan  ekstrak  etanol bunga Canna coccinea Mill. masih merupakan  senyawa  campuran  dan  belum diketahui  kandungan  senyawanya  yang bersifat antioksidan, dimana adanya senyawa  yang  tidak  bersifat  antioksidan kemungkinan  bisa  mempengaruhi  aktivitas antioksidan  ekstrak  etanol  bunga Canna coccinea Mill. itu sendiri.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  dari  hasil  penelitian yang telah dilakukan maka, dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  bunga Canna  coccinea Mill. dari  rurukan,  Kota Tomohon  memiliki  aktivitas  antioksidan disetiap  konsentrasi.  Aktivitas  antioksidan tertinggi terlihat pada konsentrasi 100 mg/L dengan mencapai presentase 56,00%.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  pada  bunga Canna  coccinea Mill. dengan  menggunakan  metode  yang  lain seperti  metode  Cuprac,  Frap  dan  sebaiknya membandingkan  hasilnya  dengan  penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Dutta, D.,Chaudhuri,U.R. & Chakraborty, R. (2004). Retention  of  β-carotene  in frozen  carrots  under  frying  condition of  temperature  and  time  of  storage . Jadavpur University, Kolkata-700032,
India.
Halliwell, B., Whiteman, M. 2004. Measuring reactive species and oxidative  damage  in  vivo  and  in  cell culture:  how  should  you  do  it  and what  do  the  results  mean? Br  J Pharmacol, 142, 231-55.
Molyneux,  P.  2004. The  Use  of  The  Stable Free Radical Diphenylpicrylhydrazyl (DPPH)  For  Estimating  Antioxidant Activity .  J.Sci.  Technol.  26(2)  :  211- 219.  Narins,  D.M.C.  1996. Vitamin Dalam  Krause’s  FOOD,  Nutrition and  Diet  Therapy .  Mahlan,  L.K,  hal 110-114.
Sunaryanti, D.P. 2012. Analisis Keanekaragaman Tanaman Kana
( Canna sp.)  Berdasarkan  Karakter Morfologi. Naskah S1. Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Airlangga, Surabaya.