Aktivitas  Antioksidan  dan  Penghambatan  Xantin  Oksidase  Kulit  Batang Songi ( Dillenia serrata Thunb.)
( Antioxidant  and  Xanthine  Oxidase  Inhibitory  Activity  of  Stem  Bark  of  Songi  (Dillenia serrata Thunb.) )
Carla  Wulandari  Sabandar 1* ,  Juriyati  Jalil 2 ,  Norizan  Ahmat 3 ,  Nor-Ashila  Aladdin 2 ,  Harni Sartika Kamaruddin 1 , Retno Wahyuningrum 1
1* Program Studi Farmasi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Sembilanbelas November Kolaka, Kolaka, Indonesia.
2 Drug and Herbal Research Centre, Faculty of Pharmacy, Universiti Kebangsaan Malaysia, Kuala Lumpur, Malaysia.
3 Faculty of Applied Sciences, Universiti Teknologi MARA, Shah Alam, Selangor, Malaysia. E-mail: carla@usn.ac.id
Article Info: Received: 4 Februari 2020 in revised form: 12 Februari 2020 Accepted: 14 Maret 2020 Available Online: 15 Maret 2020

## ABSTRACT
Songi ( Dillenia serrata ) is a tree endemic to Southeast Sulawesi and its stem bark  has  been  used  in  folk  medicine.  Nonetheless,  only  a  handful  of scientific  knowledge  regarding  chemistry  and  biological  activities  has  been investigated  on  the  plant.  The  present  study  was  aimed  to  investigate  the antioxidant and xanthine oxidase (XO) inhibitory activity of the stem bark of the  plant.  Methanol  extract  and  organic  fractions  (petroleum  ether,  ethyl acetate,  and  methanol)  of  the  dried  powdered  stem  bark  of  songi  were evaluated for phytochemical screening, total phenolic (TPC), total flavonoid contents (TFC), DPPH, FRAP, and XO in vitro assays. Flavonoids, tannins, terpenoids,  steroids,  and  saponins  were  present  in  the  extract.  Meanwhile, the TPC and TFC were estimated to be 59.2 mg GAE/g and 23.4 mg QE/g. The  contents  in  organic  fractions  were  in  solvent-dependent  manner  in  the order  of  methanol>ethyl  acetate>petroleum  ether.  Extract  and  fractions scavenged  the  DPPH  radical  (48.2–59.7%)  at  100  μg/mL  as  compared  to ascorbic acid, trolox, and gallic acid (90.3–93.8%). The FRAP values  were varied from 0.8–3.4 μg/μg of equivalent trolox amount (quercetin and gallic acid  were  25.7  dan  32.4  μg/μg,  respectively).  They  also  inhibited  the xanthine  oxidase  activity  (15.3–50.3%)  at  100  μg/mL  (allopurinol,  98.2%). The study concluded the potential of methanol extract and organic fractions of the stem bark of songi and highlighted the prospect of songi to be used in herbal and drugs development from nature.
Keywords : Dilleniaceae
Dillenia serrata Thunb. Fenolik Flavonoid Antioksidan Xantin oksidase
Corresponding Author: Carla Wulandari Sabandar Program Studi Farmasi Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Sembilanbelas November Kolaka
Kolaka 93517 Indonesia email: carla@usn.ac.id Copyright © 2019 JFG-UNTAD
This open access article is distributed under a Creative Commons Attribution (CC-BY-NC-SA) 4.0 International license.
Sabandar, C. W., Jalil, J., Ahmat, N., Aladdin, N-A, Kamaruddin, H. S., Wahyuningrum, R.  (2020). Aktivitas  Antioksidan dan  Penghambatan  Xantin  Oksidase  Kulit  Batang  Songi  ( Dillenia  serrata Thunb.). Jurnal  Farmasi  Galenika:  Galenika Journal of Pharmacy, 6 (1), 151-159. 10.22487/j24428744.2020.v6.i1.15008
Jurnal Farmasi Galenika ( Galenika Journal of Pharmacy ) 2020; 6 (1): 151 – 159 ISSN : 2442-8744 (electronic); 2442-7284 (printed) Journal Homepage: https://bestjournal.untad.ac.id/index.php/Galenika DOI: 10.22487/j24428744.2020.v6.i1.15008

## ABSTRAK
Songi ( Dillenia serrata ) adalah tanaman pohon endemik dari Sulawesi Tenggara yang digunakan sebagai bahan ramuan  obat  tradisional  oleh  masyarakat  lokal.  Namun  demikian,  pengetahuan  saintifik  tentang  tanaman  ini masih sangat kurang baik itu kandungan kimia maupun aktivitas biologi. Penelitian ini bertujuan untuk mengkaji aktivitas  kulit  batang  songi  sebagai  antioksidan  dan  penghambat  enzim  xantin  oksidase.  Untuk  itu,  skrining fitokimia,  uji  kandungan  fenolik  total  (TPC)  dan  flavonoid  total  (TFC),  uji  DPPH  dan  FRAP,  serta  uji  xantin oksidase telah dilakukan secara in vitro terhadap ekstrak metanol dan fraksi organik (petroleum eter, etil asetat, dan  metanol)  serbuk  kering  kulit  batang  songi.  Hasil  menunjukkan  kandungan  flavonoid,  tannin,  terpenoid, steroid,  dan  saponin  dalam  ekstrak  metanol  dari  kulit  batang.  TPC  dan  TPC  dalam  ekstrak  adalah  59.2  mg GAE/g  dan  23.4  mg  QE/g,  sementara  TPC  dan  TFC  dalam  fraksi  organik  adalah  bergantung  kepada  polaritas pelarut yaitu metanol > etil asetat > petroleum eter. Ekstrak dan fraksi organik mampu menangkap radikal bebas DPPH dengan persentase penghambatan sebesar 48.2–59.7% pada konsentrasi 100 μg/mL dibandingkan dengan vitamin C, trolox, dan asam galat (90.3–93.8%). Nilai FRAP diperoleh bervariasi antara 0.8–3.4 μg/μg ekuivalen jumlah  trolox  dibandingkan  dengan  kuersetin  dan  asam  galat  (25.7  dan  32.4  μg/μg  ekuivalen  jumlah  trolox). Ekstrak  dan  fraksi  organik  (etil  asetat  dan  metanol)  mampu  menghambat  aktivitas  xantin  oksidase  dengan persentase  penghambatan  sebesar  15.3–50.3%  pada  konsentrasi  100  μg/mL  dibandingkan  dengan  allopurinol (98.2%).  Kajian  menyimpulkan  potensi  antioksidan  dan  penghambatan  enzim  xantin  oksidase  oleh  ekstrak metanol  dan  fraksi  organik  dari  kulit  batang  Songi,  sehingga  tanaman  ini  dapat  dimanfaatkan  dalam pengembangan produk herbal dan obatan.
Kata kunci: Dilleniaceae, Dillenia serrata Thunb., Fenolik, Flavonoid, Antioksidan, Xantin oksidase

## PENDAHULUAN
Songi ( Dillenia serrata Thunb.) adalah salah satu tanaman endemik di Sulawesi Tenggara. Tanaman ini juga tumbuh di beberapa daerah di Sulawesi dan dikenal dengan nama yang berbeda seperti Dongi atau  Dengilo  (Manado),  Dengen  (Sulawesi),  dan  Menampa  (Tembuku)  (Lim,  2012;  Jansen et  al ., 1992; Quattrochi, 2012). Di Sulawesi Tenggara, songi dikultivasi sebagai tanaman hias dan buahnya digunakan  oleh  masyarakat  lokal  untuk  mengasamkan  makanan  dan  minuman  jus  (Lim,  2012; Windardi et  al .,  2006).  Air  rebusan  kulit  batang  songi  dimanfaatkan  secara  tradisional  untuk mengobati  muntah  darah  (Windardi et  al .,  2006).  Berdasarkan  penelurusan  literatur,  hasil  kajian saintifik  tanaman  songi  masih  kurang  baik  itu  dari  sisi  kandungan  kimia  maupun  aktivitas  biologis. Penelitian  terdahulu  menunjukkan  aktivitas  anti-inflamasi  ekstrak,  fraksi,  dan  senyawa  golongan triterpenoid  dari  tanaman  ini  yang  diuji  terhadap  penghambatan  biosintesis  prostaglandin  E 2 (PGE 2 ) dalam  darah  manusia  (Jalil et  al .,  2015).  Pada  kajian  ini,  ekstrak  metanol  dan  fraksi  organik (petroleum eter, etil asetat, dan metanol) dari kulit batang songi diuji aktivitasnya sebagai antioksidan dan penghambat xantin oksidase (XO).

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Instrumentasi  yang  digunakan  adalah  pembaca  mikroplat  Multiskan  Go  (Thermo,  Waltham,  USA). Bahan-bahan  meliputi  pelarut  (petroleum  eter,  etil  asetat,  dan  metanol),  reagen  Folin-Ciocalteu, aluminium klorida, natrium karbonat, asam hidroklorida, kalium dihidrogen fosfat, dimetil sulfoksida, difenil-pikrilhidrazil  (DPPH),  besi  (III)  klorida  heksahidrat,  2,4,5-tri(2-piridil-triazin)  (TPTZ)  dan xantin  (kemurnian  99%)  diperoleh  dari  Merck  (Darmstadt,  Jerman)  dan  SigmaAldrich  (St.  Louis USA). Natrium asetat trihidrat dan asam asetat glasial diperoleh dari R&M Chemicals and Friendmann Schimdt  (Parkwood,  Australia).  Enzim  xantin  oksidase  diperoleh  dari  Roche  (Penzberg,  Jerman). Mikroplat  menggunakan f-bottom  96-well  microplate ( UV-Star , μClear )  yang  diperoleh  dari  Greiner Bio One (Frickenhausen, Jerman).

## Metode

## Pengambilan sampel
Sampel kulit batang songi diambil dari hutan sekunder di kampung Onewila, Sulawesi Tenggara dan autentifikasi  dilakukan  oleh  Herbarium  Bogoriense  dengan  nomor  spesimen  BO-1902181.  Sampel ekstrak  metanol  (EM)  dan  fraksi  organik  dari  kulit  batang  songi  diperoleh  dari  preparasi  yang  telah dilaporkan sebelumnya oleh Jalil et al . (2015). Sebanyak 2.5 kg serbuk kulit batang songi dimaserasi dengan 8 L metanol selama 3 x 24 jam. Ekstrak kental diperoleh sebanyak 600 g menggunakan rotary evaporator .  Partisi  berdasarkan  polaritas  terhadap  ekstrak  metanol  dilakukan  dalam  corong  pisah menggunakan metode ekstraksi cair-cair. Sebanyak 10 g ekstrak dilarutkan dalam pelarut metanol dan dipartisi secara berturut-turut menggunakan pelarut petroleum eter dan etil asetat. Partisi menghasilkan fraksi  organik,  yaitu  fraksi  petroleum  eter  (FPe),  fraksi  etil  asetat  (FEa),  dan  fraksi  residu  metanol (FMe).

## Skrining fitokimia
Kandungan  fitokimia  dalam  ekstrak  metanol  secara  kualitatif  diuji  menggunakan  metode  yang  telah dilaporkan oleh Ayoola et al . (2008) dan Nobakh et al . (2010). Skrining dilakukan terhadap alkaloid, tannin, flavonoid, terpenoid, steroid, dan saponin seperti pada Tabel 1.
Tabel 1. Skrining fitokimia ekstrak metanol (EM) kulit batang songi.
Fitokimia Metode Indikasi positif Alkaloid Ekstrak (20 mg) + 2.5 mL HCl 1% (dikocok selama 5 menit, disaring). Filtrat + 5 tetes pereaksi Dragendorff Pembentukan warna oranye kemerahan dalam larutan Tanin Ekstrak (20 mg) + 5 mL H 2 O (dilarutkan, disaring). Filtrat + 5 tetes FeCl 3 0.1% Perubahan warna larutan menjadi hijau kecokelatan/biru kehitaman Flavonoid  Ekstrak (20 mg) + 10 mL MeOH (dilarutkan, disaring). Filtrat + 1 mL HCl pekat + pita Mg (0.5 cm) (dipanaskan dalam waterbath ) Perubahan warna larutan menjadi kemerahan
Terpenoid  Ekstrak (20 mg) + 2 mL CH 3 Cl (dilarutkan) + 3 mL
H 2 SO4 pekat (secara perlahan hingga terbentuk satu lapisan) Perubahan warna cokelat kemerahan antara lapisan Steroid Ekstrak (20 mg) + 1 mL MeOH (dilarutkan, disaring). Filtrat + 1 mL CHCl 3 + 1 mL H 2 SO 4 pekat Perubahan warna larutan menjadi kuning kehijauan fluoresens Saponin Ekstrak (20 mg) + 5 mL H 2 O (dipanaskan hingga mendidih, disaring). Filtrat (digoncang kuat) Pembentukan lapisan buih pada bagian atas larutan

## Estimasi kandungan fenolik total
Kandungan fenolik total ( Total Phenolic Content , TPC) dalam ekstrak metanol dan fraksi organik dari kulit batang songi ditentukan menggunakan metode Folin-Ciocalteu (ISO 14502, 2005). Sebanyak 20 μL larutan sampel (0.1 mg/mL dalam DMSO) dimasukkan kedalam mikroplat 96- well , ditambahkan 100 μL reagen Folin-Ciocalteu (10%, v/v), dan diinkubasi selama 5 menit pada suhu ruang. Campuran kemudian ditambahkan 80 μL larutan Na 2 CO 3 (75%, v/v), dikocok, dan diinkubasi kembali selama 30 menit pada kondisi gelap dan suhu ruang. Absorbansi dibaca pada 735 nm terhadap blanko sampel dan pelarut.  Konsentrasi  kandungan  fenolik  total  dalam  ekstrak  metanol  dan  fraksi  organik  dihitung dengan menginterpolasikan nilai absorbansi dalam persamaan kurva linear standar asam galat (0.01– 0.1 mg/mL): Absorbansi = 4.0418 x asam galat (mg) + 0.0003 ( r 2 = 0.999). Kandungan fenolik total dinyatakan sebagai miligram dari ekuivalen asam galat per gram sampel (mg GAE/g).

## Estimasi kandungan flavonoid total
Kandungan  flavonoid  total  ( Total  Flavonoid  Content ,  TFC)  ditentukan  menggunakan  metode kolometrik  aluminum  (Yang et  al .,  2011).  Sebanyak  100  μL  larutan  sampel  (0.1  mg/mL  dalam DMSO)  dimasukkan  kedalam  mikroplat  96- well ,  ditambahkan  100  μL  larutan  AlCl 3 (2%,  v/v),  dan diinkubasi  selama  15  menit  pada  suhu  ruang.  Absorbansi  kemudian  dibaca  pada  435  nm  terhadap blanko  sampel  dan  pelarut.  Konsentrasi  kandungan  flavonoid  total  dalam  ekstrak  metanol dan fraksi dihitung menggunakan persamaan dari kurva linear standar kuersetin (0.01–0.1 mg/mL): Absorbansi = 6.888 x kuersetin (mg) + 0.0159 ( r 2 = 0.999). Kandungan flavonoid total dinyatakan sebagai miligram dari ekuivalen kuersetin per gram sampel (mg QE/g).

## Uji penangkapan radikal bebas DPPH
Uji  aktivitas  penangkapan  radikal  bebas  dilakukan  menggunakan  metode  DPPH  (2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl) (Clarke et al ., 2013). Sebanyak 100 μL larutan sampel dan kontrol positif yaitu asam askorbat,  trolox,  asam  galat,  dan  kuersetin  (100–1.6  μg/mL)  dimasukkan  kedalam  mikroplat  96- well dan  ditambahkan  100  μL  larutan  DPPH  (10%,  v/v).  Campuran  diinkubansi  selama  15  menit  pada kondisi gelap dan suhu ruang. Absorbansi dibaca pada 540 nm  ( λ maks DPPH dalam DMSO) terhadap blanko  sampel  dan  pelarut  (DMSO).  Kemampuan  sampel  untuk  menangkap  radikal  bebas  DPPH dihitung  menggunakan  persamaan:  %Aktivitas  penangkapan  (%SA)  =  [(A k –  A s )/A k )  x  100,  dimana A k adalah  absorbansi  kontrol  DPPH  dan  A s adalah  absorbansi  sampel  setelah  koreksi  blanko.  Nilai EC 50 dihitung menggunakan GraphPad Prism 5.

## Uji reduksi ion besi (FRAP)
Uji  aktivitas  reduksi  dilakukan  menggunakan  metode  FRAP  ( ferric  reduction  antioxidant  power ) (Yang et al ., 2011). Sebanyak 20 μL larutan sampel (100 μg/mL dalam DMSO) dimasukkan kedalam mikroplat 96- well dan ditambahkan 180 μL reagen FRAP (300 mM larutan penyangga asetat pH 3.6, 20  mM  TPTZ  dalam  40  mM  HCl,  dan  20  mM  besi  (III)  klorida,  rasio  10:1:1,  v/v/v).  Campuran dikocok selama 10 detik dan diinkubasi selama 4 menit pada suhu 37°C. Absorbansi dibaca pada 593 nm terhadap blanko sampel dan pelarut. Asam galat dan kuersetin digunakan sebagai kontrol positif. Nilai  FRAP  dihitung  menggunakan  persamaan  dari  kurva  kalibrasi  linear  trolox  (100–0.8  μg/mL): Absorbansi = 0.078 x trolox (μg) + 0.004 ( r 2 = 0.999). Nilai FRAP dinyatakan sebagai mikrogram per mikrogram jumlah trolox ekuivalen (μg/μg).

## Uji xantin oksidase (XO)
Uji aktivitas penghambatan XO dilakukan menggunakan metode spektrofotometri (Seruji et al., 2012). Sampel  dan  allopurinol  dipreparasi  dalam  DMSO  dan  diencerkan  menggunakan  larutan  penyangga fosfat (PBS, pH 7.5) hingga diperoleh larutan kerja dengan konsentrasi 2.5 mg/mL. Sebanyak 10 μL larutan  sampel  dan  allopurinol  dimasukkan  kedalam  masing-masing well dan  ditambahkan  130  μL PBS (pH 7.5) dan 10 μL larutan enzim XO (0.2 unit/mL). Campuran kemudian diinkubasi selama 15 menit pada suhu 25°C. Setelah inkubasi, campuran ditambahkan 100 μL larutan xantin (0.15 mM, pH 7.5)  dan  diinkubasi  kembali  selama  10  menit  pada  suhu  25°C.  Absorbansi  diukur  pada  295  nm menggunakan pembaca mikroplat. Persentase penghambatan (%I) dihitung menggunakan persamaan: %I  =  1-[(A-B)-(C-D)/(A-B)]  x  100,  dimana  A  adalah  absorbansi  enzim  XO  tanpa  sampel,  B  adalah absorbansi  blanko  tanpa  enzim  XO  dan  sampel,  C  absorbansi  enzim  XO  dan  sampel,  dan  D  adalah absorbansi sampel tanpa enzim XO.

## Analisis statistika
Data  pengujian  diperoleh  secara  triplikat  dan  disajikan  dalam mean ± standard  deviation (SD). Analisis  statistika  dilakukan  menggunakan  GraphPad  Prism  5  Software  (GraphPad  Inc.,  California, USA). Perbedaan diantara grup dibandingkan menggunakan Analysis of Variance (ANOVA) dengan uji Tukey (p<0.05). Korelasi Pearson digunakan untuk mengukur signifikasi antara parameter.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Kandungan fitokimia
Pemanfaatan  bahan  alam  dan  produk  herbal  dalam  pengobatan  telah  menjadi  alternatif  oleh masyarakat  di  negara-negara  berkembang  termasuk  Indonesia.  Sekitar  60%  populasi  dunia menggunakan pengobatan herbal dan 80% populasi dinegara berkembang menjadikan herbal sebagai kebutuhan  kesehatan  primer  (WHO,  2013).  Genus Dillenia adalah  salah  satu  genus  tanaman  dalam keluarga  Dilleniaceae.  Genus  ini  memiliki  sekitar  100  spesies  yang  terdiri  dari  pohon  dan  semak belukar  yang  tersebar  di  Madagascar  hingga  Asia  selatan  dan  Asia  Tenggara.  Di  Indonesia,  dua spesies Dillenia banyak ditemukan, yaitu D. indica Linn. dan D. serrata Thunb. yang masing-masing tersebar di Jawa dan Sulawesi. Kedua spesies ini digunakan secara tradisional oleh masyarakat lokal sebagai bahan herbal dan obat-obatan rakyat. Kandungan fitokimia dari spesies dalam genus Dillenia didominasi oleh flavonoid dan triterpen, termasuk seco -triterpen (Sabandar et al ., 2017). Pada kajian ini,  skrining  fitokimia  secara  kualitatif  menunjukkan  kandungan  flavonoid  dan  terpenoid,  termasuk steroid dalam ekstrak metanol dari kulit batang songi (Tabel 2).
Tabel 2. Kandungan fitokimia kualitatif dalam ekstrak metanol (EM) kulit batang songi.
Fitokimia Hasil Alkaloid - Tanin + Flavonoid + Terpenoid + Steroid + Saponin -
Kajian  fitokimia  dari  kulit  akar  songi  sejauh  ini  telah  melaporkan  kandungan  triterpen  yaitu  asam betulinik,  asam  koetjapik,  dan  asam  3-oxoolean-12-en-30-oat.  Asam  betulinik  dan  asam  koetjapik merupakan  senyawa  kimia  penanda  untuk  spesies  ini  (Jalil et  al .,  2015).  Oleh  karena  itu,  kedua senyawa  ini  mungkin  terkandung  dalam  ekstrak  metanol  dari  kulit  batang  songi.  Hasil skrining  juga menunjukkan bahwa ekstrak metanol dari kulit batang songi tidak mengandung alkaloid dan saponin.

## Kandungan fenolik total dan kandungan flavonoid total
Sejalan  dengan  kandungan  fitokimia,  estimasi  kandungan  fenolik  dan  flavonoid  total  dalam  ekstrak metanol dari kulit batang songi menunjukkan jumlah yang cukup banyak yaitu sebesar 5.92% fenolik dan  2.34%  flavonoid  untuk  setiap  gram  ekstrak  (Tabel  3).  Kandungan  fenolik  dan  flavonoid  paling banyak terdistribusi dalam fraksi metanol yang menunjukkan kandungan senyawa polar dalam fraksi ini.  Sejumlah  fenolik  dan  flavonoid  juga  terdistribusi  dalam  fraksi  etil  asetat  yang  mengindikasikan golongan  fenolik  dan  flavonoid  yang  bersifat  semi  polar  dalam  ekstrak  metanol  dari  kulit  batang songi.  Sementara  itu,  fraksi  petroleum  eter  memiliki kandungan  fenolik  dan  flavonoid  paling  sedikit dibandingkan fraksi lain.
Tabel 3. Kandungan fenolik total dan flavonoid total dalam ekstrak metanol dan fraksi organik kulit batang  songi. Nilai  dengan  simbol  ( † , ‡ , # , § )  yang  berbeda  pada  kolom  yang  sama  adalah berbeda signifikan (p<0.05) diuji menggunakan uji Tukey.
Sampel Kandungan fenolik total (mg GAE/g) Kandungan flavonoid total (mg QE/g) Ekstrak metanol (EM) 59.23 ± 0.25 † 23.39 ± 0.65 † Fraksi petroleum eter (FPe) 1.45 ± 0.01 ‡ 0.00 ± 0.13 ‡ Fraksi etil asetat (FEa) 27.08 ± 0.05 # 7.23 ± 0.06 # Fraksi metanol (FMe) 97.46 ± 0.60 § 11.06 ± 1.08 §

## Aktivitas Antioksidan
Proses  perkembangan  penyakit  seperti  kanker,  diabetes,  penyakit  kardiovaskular,  Alzheimer,  dan penyakit  degeneratif  lainnya  telah  dikaitkan  dengan  oksidatif  stres  yang  terakumulasi  dalam  tubuh manusia. Oksidatif stres terjadi akibat ketidakseimbangan antara prooksidan dan antioksidan endogen dalam  tubuh  yang  mampu  merusak  sel  dan  jaringan  (Biswas,  2016;  Reuter et  al .,  2010).  Berbagai metode telah dikembangkan untuk menguji aktivitas antioksidan oleh ekstrak dan senyawa dari produk herbal dan bahan alam. Salah satu metode yang sering digunakan adalah reaksi pengangkapan radikal bebas DPPH secara in vitro . Metode lain ialah FRAP ( ferric ion reducing antioxidant power ) dengan mekanisme  reduksi  ion  Fe 3+ menjadi  Fe 2+ oleh  senyawa  antioksidan.  Mekanisme  kedua  metode  ini merupakan reaksi transfer elektron antara radikal bebas/ion Fe 3+ dan senyawa antioksidan (Huang et al .,  2005;  Apak et  al .,  2013).  Pengujian  antioksidan  menggunakan  model  DPPH  menunjukkan aktivitas pengangkapan radikal bebas yang moderat oleh ekstrak metanol dan fraksi organik (etil asetat dan  metanol)  kulit  batang  songi  (Tabel  4).  Aktivitas  ini  dibandingkan  dengan  senyawa  antioksidan kuat, yaitu asam askorbat, trolox, asam galat, dan kuersetin. Penentuan nilai EC 50 menunjukkan dosis efektif  oleh  ekstrak  dan  fraksi  organik  untuk  menangkap  50%  radikal  bebas  DPPH  yang  diujikan, yaitu berkisar antara 153.5–277.2 μg/mL. Korelasi Pearson menjelaskan pengaruh kandungan fenolik total dan flavonoid total terhadap aktivitas antioksidan oleh ekstrak metanol dan fraksi organik (Tabel 5).  Analisis  ini  menunjukkan  bahwa  kandungan  fenolik  total  dan  flavonoid  total  tidak  berpengaruh signifikan terhadap aktivitas penangkapan radikal bebas oleh ekstrak metanol dan fraksi organik dari kulit  batang  songi.  Baik  fenolik  maupun  flavonoid  umumnya  telah  dijadikan  sebagai  penentu  utama aktivitas  antioksidan  dalam  tumbuhan  dan  makanan  (Heim et  al .,  2002).  Namun  demikian,  aktivitas antioksidan yang baik tidak selalunya berkaitan dengan kandungan fenolik dan flavonoid yang banyak (Yang et  al .,  2011).  Selain  itu,  pengaruh  senyawa  mayor  dapat  mempengaruhi  aktivitas  antioksidan yang  dihasilkan  oleh  ekstrak,  baik  itu  efek  sinergis  ataupun  efek  antagonis  (Crespo et  al .,  2019). Kajian sebelumnya menjelaskan asam betulinik sebagai senyawa mayor yang dihasilkan oleh tanaman songi  (Jalil et  al .,  2015;  Sabandar et al .,  2017).  Asam  betulinik  menunjukkan  aktivitas  penangkapan radikal  bebas  yang  lemah  (Adesanwo et  al .,  2013).  Oleh  itu,  kandungan  senyawa  mayor  ini  diduga memberikan efek berlawanan terhadap aktivitas penangkapan radikal DPPH oleh ekstrak kulit batang songi.  Selanjutnya,  korelasi  Pearson  menunjukkan  korelasi  kuat  antara  kandungan  fenolik  total  dan aktivitas  reduksi  oleh  ekstrak  dan  fraksi  organik  tersebut  dengan  nilai  korelasi  (r)  sebesar  +0.9967 (p<0.05).  Nilai  ini  menjelaskan  bahwa  aktivitas  reduksi  akan  meningkat  seiring  dengan  peningkatan jumlah  fenolik  dalam  ekstrak  dan  fraksi  organik.  Dengan  demikian,  golongan  senyawa  fenolik  dari kulit  batang  songi  memiliki  potensi  sebagai  antioksidan  alami  yang  dapat  dikembangkan  dalam preparasi herbal dan obat-obatan.
Tabel  4.  Aktivitas  antioksidan  ekstrak  metanol  dan  fraksi  organik  kulit  batang  songi.  Nilai  dengan simbol ( † , ‡ , # , § , ¶ ) yang berbeda pada kolom yang sama adalah berbeda signifikan (p<0.05) diukur menggunakan uji Tukey.
Sampel DPPH
FRAP
( μg/μg jumlah trolox ekuivalen) %SA (pada 100 μg/mL) EC 50 ( μg/mL) Ekstrak metanol 59.5 ± 1.1 † 254.2 † 1.8 ± 0.1 † Fraksi petroleum eter 48.2 ± 0.9 ‡ - 0.0 ± 0.0 ‡ Fraksi etil asetat 54.0 ± 1.1 # 277.2 ‡ 0.8 ± 0.03 †,‡ Fraksi metanol 59.7 ± 1.9 † 153.5 # 3.4 ± 0.1 # Asam askorbat 92.4 ± 0.1 § 1.2 § - Trolox 90.3 ± 0.02 § 2.5 §,¶ - Asam galat 91.2 ± 0.1 § 1.4 § 32.4 ± 0.5 § Kuersetin 66.8 ± 0.8 ¶ 3.8 ¶ 25.8 ± 0.8 ¶
Tabel 5. Korelasi Pearson ( r ) dan kurva regresi linear ( r 2 ) antara kandungan fenolik total dan flavonoid total terhadap DPPH, FRAP, dan XO. a Korelasi signifikan (p<0.05, two-tailed ).
Parameter Pearson ( r ) Kurva linear ( r 2 ) TPC x DPPH +0.9172 0.8413 TPC x FRAP +0.9967 a 0.9935 TPC x XO +0.8526 0.7269 TFC x DPPH +0.8480 0.7191 TFC x FRAP +0.5358 0.2871 TFC x XO +0.2316 0.0536

## 3.4. Aktivitas Penghambatan Xantin Oksidase
Xantin oksidase (XO) merupakan enzim yang berperan penting dalam katabolisme senyawa-senyawa purin dalam tubuh manusia. Produk akhir dari katabolisme purin adalah asam urat yang disekresikan oleh ginjal. Dalam proses ini, spesies oksigen reaktif seperti anion radikal superoksida dan hidrogen peroksida  dihasilkan  (Kostić et  al .,  2015).  Aktivitas  XO  yang  berlebihan  akan  menyebabkan akumulasi  asam  urat  yang  tinggi  dalam  plasma  darah  (hiperurisemia)  dan  memicu  perkembangan penyakit seperti gout dan gangguan ginjal (El Ridi & Tallima, 2017). Oleh karena itu, pencarian agen penghambat  aktivitas  XO  dilakukan  baik  melalui  jalur  sintesis  maupun  yang  bersumber  dari  bahan alam.  Pada  kajian  ini,  ekstrak  metanol  dan  fraksi  organik  dari  kulit  batang  songi  telah  diuji aktivitasnya  sebagai  penghambat  enzim  XO.  Potensi  aktivitas  ditunjukkan  oleh  fraksi  metanol  dari kulit  batang  songi  yang  mampu  menghambat  50.3%  aktivitas  XO  pada  konsentrasi  100  μg/mL (Gambar  1).  Namun  demikian,  uji  Tukey  menunjukkan  perbedaan  yang  signifikan  (p<0.05)  antara aktivitas  fraksi  metanol  dan  allopurinol  sebagai  kontrol  positif  dalam  pengujian.  Allopurinol merupakan  obat  klinis  yang  digunakan  dalam  penatalaksanaan  arthritis  gout  (Nile et  al .,  2019). Korelasi  Pearson  menjelaskan  hubungan  yang  lemah  antara  kandungan  fenolik  total  dan  flavonoid total dengan aktivitas penghambatan XO (Tabel 5). Aktivitas penghambatan XO oleh ekstrak metanol dan  fraksi  organik  juga  dapat  dipengaruhi  oleh  kehadiran  golongan  senyawa  triterpen  seperti  asam betulinik dan asam koetjapik yang merupakan senyawa penanda kimia dari tanaman songi (Jalil et al ., 2015). Kajian sebelumnya telah melaporkan potensi asam betulinik dalam menghambat aktivitas XO dengan  nilai  IC 50 sebesar  12.6  μg/mL  (Nile et  al .,  2019).  Sementara  itu,  aktivitas  asam  koetjapik terhadap penghambatan XO masih perlu diteliti lebih lanjut.
EM FP e FE a FMe Allop ur in ol 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 15.3 0.0 27.0 50.3 98.2 Konse ntrasi 100  g/mL
EM = ekstrak metanol
FPe = fraksi petroleum eter
FEa = fraksi etil asetat
FMe = fraksi residu metanol
Allopurinol = kontrol positif
% P e n g h a m b a ta n X O
Gambar 1. Aktivitas penghambatan xantin oksidase ekstrak metanol dan fraksi organik kulit batang songi.

## KESIMPULAN
Kajian ini menyimpulkan bahwa ekstrak metanol dan fraksi organik (etil asetat dan metanol) dari kulit batang songi memiliki aktivitas pengangkapan radikal bebas DPPH (48.2–59.7%) dan reduksi ion besi (0.8–3.4  μg/μg  ekuivalen  jumlah  trolox)  pada  konsentrasi  100  μg/mL.  Pada  konsentrasi  yang  sama, fraksi metanol dari ekstrak metanol memiliki  aktivitas penghambatan enzim xantin oksidase ( 50.3%) . Dengan  demikian,  kulit  batang  songi  berpotensi  sebagai  sumber  alami  agen  antioksidan  dan penghambat  xantin  oksidase.  Hasil  kajian  ini  mendukung  pemanfaatan  tanaman  songi  dalam pengembangan herbal dan obat-obatan alami.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis  berterimakasih  kepada  Universiti  Kebangsaan  Malaysia  atas  dukungan  fasilitas  penelitian (instrumentasi dan bahan) yang telah diberikan.

## DAFTAR PUSTAKA
Adesanwo,  J.  K.,  Makinde,  O.  O.,  Obafemi,  C.  A.  (2013).  Phytochemical  analysis  and  antioxidant activity  of  methanol  extract  and  betulinic  acid  isolated  from  the  roots  of Tetracera  potatoria . Journal of Pharmacy Research , 6, 903-907.
Apak,  R.,  Gorinstein,  S.,  Böhm,  V.,  Schaich,  K.  M.,  Özyürek,  M.,  Güçlü,  K.  (2013).  Methods  of measurement and evaluation of natural antioxidant capacity/activity (IUPAC technical report). Pure and Applied Chemistry , 85, 957-998.
Ayoola, G. A., Coker, H. A. B., Adesegun, S. A., Adepoju-Bello, A. A., Obaweya, K., Ezennia, E. C., Atangbayila, T. O. (2008). Phytochemical screening and antioxidant activities of some selected medicinal  plants  used  for  malaria  therapy  in  Southwestern  Nigeria. Tropical  Journal  of Pharmaceutical Research , 7, 1019-1024.
Biswas,  S.K.  (2016).  Does  the  interdependence  between  oxidativev  stress  and  inflammation  explain the antioxidant paradox?. Oxidative Medicine and Cellular Longevity , 2016, 5698931.
Crespo,  Y.A.,  Sánchez,  L.R.B.,  Quintana,  Y.G.,  Cabrera,  A.S.T.,  Sol,  A.B.,  Mayancha,  D.M.G. (2019). Evaluation of the synergistic effects of antioxidant activity on mixtures of the essential oil from Apium graveolens L., Thymus vulgaris L. and Coriandrum sativum L. using simplex- lattice design. Heliyon , 5, e01942.
El  Ridi,  R.,  Tallima,  H.  (2017).  Physiological  functions  and  pathogenic  potential  of  uric  acid:  a review. Journal of Advanced Research , 8, 487-493.
Heim,  K.E.,  Tagliaferro,  A.R.,  Bobilya,  D.J.  (2002).  Flavonoid  antioxidants:  chemistry,  metabolism and structure-activity relationships. Journal of Nutritional Biochemistry , 13, 572-584.
Huang, D., Ou, B., Prior, R. L. (2005). The chemistry behind antioxidant capacity assays. Journal of Agricultural and Food Chemistry , 53, 1841-1856.
ISO  14502-1  (2005). Determination  of  substances  characteristic  of  green  and  black  tea.  Part  1: content  of  total  polyphenols  in  tea-colorimetric  method  using  Folin-Ciocalteu  reagent . International Organization for Standardization.
Jalil, J. Sabandar, C. W., Ahmat, N., Jamal, J. A., Jantan, I., Aladdin, N. -A., Muhammad, K., Buang, F., Mohamad, H. F., Sahidin, I. (2015). Inhibitory effect of triterpenoids from Dillenia serrata (Dilleniaceae)  on  prostaglandin  E 2 production  and  quantitative  HPLC  analysis  of  its  koetjapic acid and betulinic acid contents. Molecules , 20, 3206-3220.
Jansen,  P.  C.  M.,  Jukema,  J.,  Oyen,  L.  P.  A.,  van  Lingen,  T.  G.  (1992). Dillenia  serrata Thunb.  In Verheij, E. W. M., Coronol, R. E. (Eds.), Plant resources of South-East Asia No. 2: edible fruit and Nuts (p. 328). Bogor: Prosea Foundation.
Kostić, D. A., Dimitrijević, D. S., Stojanović, G. S.,  Palić, I. R., Đorđević, S.,  Ickovski, D. (2015). Xanthine  oxidase:  isolation,  assays  of  activity,  and  inhibition. Journal  of  Chemistry ,  2015, 294858.
Lim,  T.  K.  (2012). Edible  Medicinal  and  Non-Medicinal  Plants:  Volume  2,  Fruits .  Heidelberg: Springer.
Nile,  S.  H.,  Nile,  A.,  Liu,  J.,  Kim,  D.  H.,  Kai,  G.  (2019).  Exploitation  of  apple  pomace  towards extraction  of  triterpenic  acids,  antioxidant  potential,  cytotoxic  effects,  and  inhibition  of clinically important enzymes. Food and Chemical Toxicology , 131, 110563.
Nobakht, G. M., Kadir, M. A., Stanslas, J. (2010). Analysis of preliminary phytochemical screening of Typhonium flagelliforme . African Journal of Biotechnology , 9, 1655-1657.
Quattrocchi, U. F. L. S. (2012). CRC world dictionary of medicinal and poisonous plants . New York: CRC Press.
Reuter, S., Gupta, S. C., Chaturvedi, M. M., Aggarwal, B. B. (2010). Oxidative stress, inflammation, and cancer: how are they linked?. Free Radical Biology and Medicine , 49, 1603-1616.
Sabandar,  C.  W.,  Jalil,  J.,  Ahmat,  N.,  Aladdin,  N.  -A.  (2017).  Medicinal  uses,  chemistry  and pharmacology of Dillenia species (Dilleniaceae). Phytochemistry, 134, 6-25.
Seruji,  N.  M.  U.,  Khong,  H.  Y.,  Kutoi,  C.  J.  (2012).  Antioxidant,  anti-inflammatory,  and  cytotoxic activities of Garcinia nervosa (Clusiaceae). Journal of Chemistry , 2013.
WHO  (World  Health  Organization),  2013. WHO  traditional  medicine  strategy  2014–2023 . Switzerland: WHO Press.
Windardi, F. I., Rahayu, M., Uji, T., Rustiami, H. (2006). Pemanfaatan tumbuhan sebagai bahan obat oleh masyarakat lokal suku Muna di kecamatan Wakarumba, kabupaten Muna, Sulawesi Utara. Biodiversitas , 7, 339-339.
Yang, H., Dong, Y., Du, H., Shi, H., Peng, Y., Li, X. (2011). Antioxidant compounds from propolis collected in Anhui, China. Molecules , 16, 3444-3455.