Hasil Penelitian                                                  Jurnal. Teknol. dan Industri Pangan,Vol. XVII No. 2 Th. 2006
KARAKTERISASI BIJI DAN PROTEIN KORO KOMAK ( Lablab purpureus (L.) Sweet)

## SEBAGAI SUMBER PROTEIN
[Characterization of Hyacinth Bean ( Lablab purpureus (L.) Sweet) Seed and Its Protein]
Andrew S. R., Wiwiek S. W., dan  A. Subagio
Fakultas Teknologi Pertanian Universitas Jember Jl. Kalimantan I Kampus Tegal Boto, Jember
Diterima   11 Maret   2006 / Disetujui  15  November  2006

## ABSTRACT
This  research  aimed  to  characterize  the  physiochemical  properties  of  hyacinth  beans  as  new  protein  source.  The  result  of research showed that hyacinth beans are oval shaped and orange and yellow coloured. The edible part of hyacinth beans is 83.2 ± 1.1 % of dry seed; in which the carbohydrate is 67.9 ± 1.1 %; protein: 17.1 ± 1.5 % and fat: 1.1 ± 0.4 %. According to their solubility, the protein fractions were found as albumin: 18.22 %; globuli : 55.15 % and glutelin : 26.13 %, whereas prolamin was not detected. Further analyis showed that, the globulin is consisted of globulin 7S (3.50%) and globulin 11S (0.67 %). The hyacinth beans are potential to be used for protein source.
Key words : hyacinth beans, physiochemical properties, protein fractions, seed protein.

## PENDAHULUAN
Protein  merupakan  salah  satu  komponen  gizi terpenting  yang  harus  dipenuhi,  terutama  untuk pertumbuhan  balita  dan  anak-anak.  Pemenuhan kebutuhan protein dapat diperoleh dari dua sumber yaitu protein hewani dan protein nabati. Indonesia kaya akan jenis kacang-kacangan yang merupakan sumber protein nabati.  Golongan  koro-koroan  ( non-oilseed  legumes ) merupakan  salah  satu  sumber  protein  yang  cukup  baik yang  belum  dimanfaatkan  dengan  baik.  Umumnya kacang  koro-koroan  mengandung  protein  antara  18  % sampai  dengan  25  %  dari  biji  (Somaatmadja  dan Maesen, 1993).
Koro  komak  ( L.  purpureus (L.)  Sweet)  di daerah  Asia  Tenggara  sudah  dikenal  sebagai  bahan sayuran  yang  dimakan  dengan  merebus  polong mudanya  atau  digunakan  sebagai  sayur  kari (Somaatmadja dan Maesen, 1993). Karakteristik dari biji koro  komak  ( L.  purpureus (L.)  Sweet)  seperti  panjang, lebar,  tebal,  volume  dan  sifat  fisik  lainnya  perlu diungkapkan  sedemikian  rupa  sebagai  sumber  acuan pemanfaatannya. Komposisi senyawa organik yang ada di  dalam  biji  harus  diketahui  secara  jelas  dan  terperinci terutama komponen penting seperti protein.
Protein  berdasarkan  kelarutannya  dapat dipisahkan    menggunakan  metode  Osborne  menjadi  4 macam  yaitu  albumin,  globulin,  glutelin  dan  prolamin. Protein  berdasarkan  sifat  sedimentasinya  dapat digolongkan  menjadi  empat  fraksi  utama  yaitu  2S,  7S, 11S  dan  15S  (Nielsen,  1985).  Sifat  fungsional  dari protein legume, seperti kelarutan, water holding capacity
(WHC),  sifat  emulsi,  oil  holding  capacity  (OHC),  daya buih  dan  sifat  gelasi  dipengaruhi  oleh  komponen penyusun protein itu sendiri. Suhardi (1989) menyatakan bahwa  perbedaan  struktur  dari  globulin  7S  dan  11S berperan  dalam  variasi  sifat  fungsional  makanan  yang dihasilkan antara lain sifat gelasi, daya ikat flavor, suhu penggumpalan, kelarutan dan kandungan nitrogen serta sulfur.  Dengan  demikian,  maka  protein  koro-koroan berpotensi  untuk  dikembangkan  sebagai  bahan tambahan  makanan  seperti  emulsifier,  flavor  enhancer, texturizer,  stabilizer  atau  sebagai  bahan  pangan  bergizi (Clemente et al., 1999).

## METODOLOGI

## Bahan penelitian
Bahan  dasar  yang  digunakan  untuk  penelitian ini  adalah  koro  komak  ( L.  purpureus (L.)  Sweet)  yang didapatkan  dari  petani  di  kawasan  Cerme,  Kabupaten Bondowoso,  Propinsi  Jawa  Timur.  Bahan  kimia  yang digunakan dalam penelitian berasal dari Jerman dengan merk Merck ini  adalah  NaCl,  ethanol,  NaOH,  Tris-HCl buffer, NaOH, mix lowry, folin, HCl, buffer elektroforesis, stacking gel , resolving gel , coomassie blue staining dan destaining .

## Pengukuran sifat fisik dan sifat kimia
Sifat  fisik  yang  diamati  adalah  berat,  tebal, panjang,  lebar  biji,  luas  permukaan  biji,  volume  biji, bagian  yang  dapat  dimakan,  ketebalan  kulit  dan  warna. Sifat kimia yang dimati dari biji koro komak meliputi kadar
karbohidrat,  kadar  protein,  kadar  lemak,  kadar  air  dan kadar abu.

## Pemisahan protein berdasarkan daya kelarutan
Tepung  koro  bebas  kulit  sebanyak  2,5  gram dilarutkan  dalam  NaCl  5  %  dengan  tujuan  untuk melarutkan  albumin  dan  globulin.  Penambahan  larutan NaCl  akan  menghasilkan  dua  fase  yaitu  fase  larut (cairan)  dan  fase  tidak  larut  (residu)  yang  dipisahkan dengan sentrifugasi pada suhu 4 o C, 8000 rpm selama 20 menit.  Cairan  yang  didapatkan  didialisis  sehingga globulin  terendapkan  dan  terpisahkan  dengan  albumin. Residu  hasil  sentrifugasi  diberi  larutan  ethanol  70  % untuk  melarutkan  prolamin  yang  bersifat  larut  dalam larutan  ethanol  70-80  %.  Cairan  yang  mengandung prolamin  dapat  dipisahkan  dengan  padatannya  dengan cara  sentrifugasi  pada  suhu  4 o C,  8000  rpm  selama  20 menit. Cairan yang mengandung prolamin didialisis untuk mengeluarkan  pelarut  etanol  sehingga  prolamin  yang tidak  larut  dalam  air  akan  terendapkan.  Fraksi  terakhir yaitu  glutelin  didapatkan  dengan  melarutkan  padatan dalam larutan basa encer (NaOH 0,5 N) yang kemudian disentrifugasi untuk memisahkan glutelin dengan protein tidak terlarut.

## Pembentukan globulin 7S dan globulin 11S
Tepung  koro  sebanyak  2,5  gram  dilarutkan dengan 25 ml Tris-HCl buffer 0,30 M yang mengandung 0,01 M 2-merkaptoetanol pH 8,00. Sentrifugasi dilakukan untuk  memisahkan  antara  fraksi  tak  terlarut  dengan fraksi  terlarut  (supernatan)  pada  suhu  20 o C,  8500  rpm selama  20  menit.  Fraksi  terlarut  diatur  pH  6,4 menggunakan HCl 0,1 N dengan tujuan menciptakan pH isoelektrik bagi globulin 11S sehingga dapat diendapkan dan  dipisahkan  dengan  sentrifugasi  pada  suhu  4 o C,
8500 rpm selama 20 menit. Pemisahan globulin 7S juga dilakukan  dengan  menetapkan  pH  larutan  pada  pH isoelektriknya  (4,8)  sehingga  fraksi  globulin  7S  dapat terendapkan  dan  dipisahkan  dengan  sentrifugasi  pada suhu  4 o C,  8500  rpm  selama  20  menit.  Endapan kemudian dilarutkan dengan 25 ml Tris-HCl buffer 0,30 M yang  mengandung  0,01  M  2-merkaptoetanol  pH  8,00. Larutan diatur pH hingga 6,2 dengan menambahkan HCl 0,1  N.  Globulin  7S  cair  didapatkan  dengan  sentrifugasi pada suhu 4 o C, 8500 rpm selama 20 menit.

## Pengukuran berat jenis protein
Analisa polipeptida penyusun protein (albumin, globulin, glutelin dan prolamin) dan fraksi globulin 7S dan 11S  dilakukan  dengan  elektroforesis  SDS-PAGE  pada gel  poliakrilamida  menggunakan  Mini  Protean  II Electrophoresis System (Bio-Rad, Richmond, CA, USA). Marker yang  dipakai  adalah  albumin  ( bovine  serum ), berat  molekul  66  kD;  albumin  ( chicken  egg ),  berat molekul 45 kD; carbonic anhydrase , berat molekul 29 kD dan  α–lactabulmin,  berat  molekul  14,2  kD.  Pembuatan resolving  gel dilakukan  dengan  mencampur  1,67  ml aquades; 1,25 ml Tris-HCl 1,5 M pH 8,8; 0,05 ml SDS 10 %; 2 ml acrylamide.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sifat  fisikokimia  koro  komak  ( L.  purpureus (L.) Sweet) Data  yang  diolah  meliputi  data  sifat  fisik  dan sifat kimia dari biji koro komak ( L. purpureus (L.) Sweet) serta  hasil  fraksinasi  protein  dan  fraksinasi  globulin  7S globulin 11S. Data yang didapat diolah secara deskriptif dengan  cara  penyusunan  data  ke  dalam  daftar, penggambaran  grafik,  analisa  dan  interpretasi  data (Pasaribu,  1981).  Hasil  perhitungan  sifat  fisik  biji  koro komak ( L. purpureus (L.) Sweet) dapat dilihat pada Tabel 1 sebagai berikut.
Tabel 1. Sifat Fisik Biji Koro Komak ( L. purpureus (L.) Sweet) Sifat Fisik Rerata  Standar deviasi Tebal Biji (cm) 0,40  0,03 Lebar Biji (cm) 0,74  0,05 Panjang Biji (cm) 1,05  0,10 Berat Biji (g) 0,23  0,03 Luas Permukaan Biji Koro (cm 2 ) 0,85  0,13 Volume 10 Biji (ml) 1,91  0,40 Bagian yang dapat dimakan (%) 83,21  1,11 Ketebalan Kulit (mm) 0,10  0,01 Warna L = 73,4 c * =10,1 H = 67,3  a * = 3,9  1,4 b * = 9,3  2,3
Berdasarkan sifat fisik  yang ada (tebal, panjang, dan lebar), ukuran koro komak ( L. purpureus (L.) Sweet) termasuk  biji-bijian  yang  mempunyai  ukuran  biji  hampir sama  besar  dengan  kacang  tanah.  Koro  komak    ( L. purpureus (L.)  Sweet)    mempunyai  lapisan  kulit  yang cukup  tipis  (rata-rata  0,1  mm)  dengan  kekerasan  yang tinggi  sehingga  nilai  bagian  yang  dapat  dimakan  cukup besar  (di  atas  80  %).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  koro komak ( L. purpureus (L.) Sweet) dapat dijadikan sumber pangan alternatif yang cukup menjanjikan.
Dilihat  dari  komposisi  kimia  koro  komak, karbohidrat  merupakan  kadar  yang  paling  tinggi  yaitu rata-rata 67,0 % disusul protein, lemak, kadar air, kadar abu dengan nilai berturut-turut 17,1; 9,3; 3,6; dan 1,1 %. Kadar  karbohidrat  yang  cukup  tinggi  membuat  koro komak  ( L.  purpureus (L.)  Sweet)  cukup  menjanjikan untuk digunakan sebagai sumber makanan pokok. Kadar lemak  yang  sangat  sedikit  memungkinkan  orang-orang yang  menghindari  lemak  dapat  mengonsumsinya. Perbandingan  komposisi  kimia  dengan  berbagai  jenis kacang-kacangan  lainnya  (dalam  persen)  dapat  dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Kandungan Kimia Koro Komak dengan Koro Lainnya dan Kedelai Legume Karbohidrat Protein Lemak Kadar Air Kadar Abu Komak 67,9  4,2 17,1  1,5 1,1  0,4 9,3  0,5 3,6  0,1 Kratok a) 64,0  5,2 14,8  1,4 2,2  0,6 9,0  1,0 2,9  0,1 Pedang a) 70,2  4,2 21,7  2,1 4,0  0,3 8,4  0,1 2,9  0,1 Kedelai b) 34,8 34,9 18,1 - 4,9 Sumber :
a) Subagio, (2003).
b) Koswara, (1995).
Dibandingkan dengan jenis koro yang lain, kadar protein, karbohidrat, lemak, kadar air dan kadar abu tidak berbeda  jauh  dengan  komposisi  pada  koro  komak  ( L. purpureus (L.) Sweet). Kadar karbohidrat koro komak ( L. purpureus (L.)  Sweet)  lebih  sedikit  jika  dibandingkan dengan  koro  pedang,  demikian  pula  dengan  kadar proteinnya.  Kadar  lemak  koro  komak  ( L.  purpureus (L.) Sweet)  paling  sedikit  dibandingkan  dua  jenis  koro  yang lain  sedangkan  kadar  air  dan  kadar  abu  paling  besar. Jika  dibandingkan  dengan  kedelai,  kadar  protein,  kadar lemak  dan  kadar  abu  koro  komak  ( L.  purpureus (L.) Sweet) lebih sedikit jumlahnya namun unggul pada kadar karbohidratnya.

## Pemisahan berdasarkan kelarutannya protein
Fraksinasi  protein  dari  koro  komak  ( L. purpureus (L.) Sweet) mendapatkan empat jenis protein berdasarkan  kelarutannya,  dengan  satu  jenis  protein yang  tidak  dapat  terukur/tidak  teridentifikasi.  Hal  ini diakibatkan  kecilnya  kuantitas  dari  protein  yang  hendak diamati  sehingga  tidak  masuk  dalam  range  kurva standar.  Hasil  fraksinasi  protein  koro  komak  secara kuantitatif tersaji dalam Tabel 3.
Tabel 3. Hasil Fraksinasi Protein Koro Komak ( L. purpureus (L.) Sweet) Protein Kadar (%) Albumin 18,22 Globulin 55,15 Glutelin 26,63 Prolamin Tidak Teridentifikasi
Globulin  merupakan  fraksi  yang  paling  dominan dalam  koro  komak.  Hal  ini  sesuai  dengan  pernyataan Zayas  (1997)  yang  mengatakan  bahwa  protein  legume terutama  disusun  oleh  dua  globulin,  yaitu  legumin  dan vicilin. Legumin adalah komponen penyusun utama dari globulin  sedangkan  vicilin  adalah  komponen  terbesar kedua dari globulin biji-bijian (Dieckert et al., 1985). Hal ini berkaitan dengan cara isolasi protein dari koro komak ( L.  purpureus (L.)  Sweet)  yang  berarti  cara  isolasi proteinnya harus berdasarkan pada sifat-sifat fisikokimia dari  globulin  seperti  kelarutan,  titik  isoelektrik  dan  sifat lainnya yang dapat mempengaruhi cara ekstraksi protein.

## Pembentukan globulin 7S dan globulin 11S
Globulin  merupakan  protein  utama  di  dalam biji-bijian.  Fraksi  7S  didapatkan  dengan  pengendapan pada  titik  isoelektrisnya  yaitu  pada  pH  4,8  sedangkan
fraksi  11S  diendapkan  pada  pH  6,4.  Hasil  fraksinasi globulin 7S dan globulin 11S menghasilkan data bahwa kadar  globulin  7S  lebih  banyak  daripada  globulin  11S seperti tersaji pada Tabel 4.
Tabel 4. Hasil Fraksinasi Globulin 7S dan Globulin 11S
Jenis Fraksi Kadar (%) Globulin 7S 3,50 Globulin 11S 0,67
Persentase  globulin  7S  yang  lebih  banyak dibandingkan globulin 11S menghasilkan rasio 7S/11S = 5,23.  Rasio  dari  globulin  7S  dan  11S  akan mempengaruhi  sifat-sifat  fungsional  dari  protein  seperti kelarutan,  water  holding  capacity  (WHC),  daya  emulsi, daya  buih,  sifat  gel  dan  kemampuan  mengikat  minyak atau  lemak.  Kandungan  protein  fraksi  7S  yang  lebih banyak menyebabkan kelarutan protein  koro komak ( L. purpureus (L.) Sweet) lebih tinggi pada kondisi basa. Hal ini  sesuai  dengan  pernyataan  Zayas  (1997)  yaitu perbedaan  sifat  kelarutan  dari  keadaan  yang  sama dihasilkan dari protein 7S dan 11S, tapi protein 7S lebih larut dalam kondisi basa dibandingkan protein 11S. Tingginya fraksi protein 7S akan meningkatkan kemampuan  emulsi  dari  protein  koro  komak  ( L. purpureus (L.) Sweet). Sifat daya emulsi yang lebih baik dari  fraksi  globulin  7S  dapat  berhubungan  dengan tingginya rasio difusi interfase dan dimungkinkan karena ikatan  disulfida  pada  fraksi  globulin  11S  menghambat pelipatan dan menurunkan interaksi pada air dan minyak. Protein  dengan  kapasitas  penyerapan  air  dan  minyak rendah  akan  membentuk  emulsi  dengan  kestabilan rendah.  Tingginya  daya  emulsi  dari  protein  koro  komak ( L.  purpureus (L.)  Sweet)  memungkinkan  proteinnya dapat  digunakan  sebagai  emulsifier  yang  baik.  Hal  ini berguna  sekali  apabila  diaplikasikan  sebagai  bahan emulsifier  dalam  bahan  pangan  yang  membutuhkan pengemulsi, seperti pada pembuatan roti.
Gel yang dibuat dari protein fraksi globulin 7S diprediksi  memiliki  elastisitas  dan  regangan  yang  lebih lemah daripada gel yang dibuat dari globulin 11S karena gel  yang  dibuat  dari  globulin  11S  didukung  dengan adanya ikatan disulfida, sedangkan pada gel 7S peranan penting  dipegang  oleh  ikatan  hidrogen  dan  interaksi hidrofobik (Utsumi and Kinsella, 1985). Rendahnya daya gel  yang  dihasilkan  oleh  protein  koro  komak  ( L. purpureus (L.) Sweet) diduga akan mengakibatkan isolat proteinnya  kurang  baik  jika  digunakan  untuk  membuat
makanan yang membutuhkan pembentukan daya gelasi tinggi.
Fraksi  protein  7S  yang  tinggi  akan menyebabkan meningkatnya daya buih dari protein koro komak  ( L.  purpureus (L.)  Sweet).  Hal  ini  disebabkan jumlah  ikatan  disulfida  yang  lebih  sedikit  dibandingan pada  protein  11S.  Daya  buih  yang  cukup  tinggi  dari protein  koro  komak  ( L.  purpureus (L.)  Sweet)  diprediksi potensial jika digunakan untuk membuat cake.
Globulin  7S  bersifat  lebih  hidrofobik dibandingkan  dengan  globulin  11S.  Hal  ini  dapat  dilihat berdasarkan asam amino penyusunnya. Komposisi grup sulfhidril dan kadar asam amino sulfur globulin 7S yang lebih  sedikit  dibandingkan  globulin  11S  mengakibatkan globulin  11S  bersifat  lebih  hidrofilik.  Berdasarkan pernyataan  di  atas,  kadar  globulin  7S  yang  lebih  besar dari  globulin  11S  diduga  akan  mengakibatkan water holding  capacity (WHC)  dari  protein  koro  komak  ( L. purpureus (L.)  Sweet)  lebih  rendah  daripada  sifat oil holding  capacity (OHC).    Zayas  (1997)  menyatakan bahwa kemampuan menyimpan air dari protein tanaman dapat  digunakan  sebagai  bahan  tambahan  makanan dalam memperbaiki kualitas karakter makanan.

## Pengukuran berat jenis protein
Hasil  analisa  menggunakan  elektroforesis SDS-PAGE  menunjukkan  nilai  berat  molekul  dari albumin,  globulin,  glutelin,  globulin  7S  dan  globulin  11S seperti tersaji pada Tabel 5.
Albumin  mempunyai  tiga  fraksi  di  mana  berat molekulnya berkisar antara 101,7 kD dan 34,5  kD.  Dua fraksi dari albumin merupakan fraksi mayor dengan berat molekul  masing-masing  52,8  kD  dan  34,5  kD.  Albumin hanya  mempunyai  satu  fraksi  minor  dengan  berat molekul 101,7 kD.
Globulin  disusun  dari  empat  fraksi  yang mempunyai  berat  molekul  antara  54,9  kD  hingga  27,4 kD.  Dua  fraksi  mayor  tampak  pada  gel  SDS-PAGE dengan  berat  molekul  54,9  kD  dan  27,4  kD.  Dua  fraksi lainnya  merupakan  fraksi  minor  dengan  berat  molekul 34,5 kD dan 30,8 kD.
Glutelin  memiliki  enam  fraksi  di  mana  berat molekulnya  berkisar  antara  48,9  kD  dan  11,3  kD.  Tiga fraksi  mayor  dari  glutelin  mempunyai  berat  molekul masing-masing 48,9 kD; 32 kD dan 26,4 kD. Tiga fraksi lainnya  merupakan  fraksi  minor  dengan  berat  molekul masing-masing 15,4 kD; 13,7 kD dan 11,3 kD.
Globulin  7S  mempunyai  lima  fraksi  di  mana berat  molekulnya  berkisar  antara  90,5  kD  hingga  29,3 kD.  Dua  fraksi  diantaranya  merupakan  fraksi  mayor dengan berat molekul masing-masing 59,3 kD dan 29,3 kD.  Tiga  fraksi  lainnya  merupakan  fraksi  minor  dengan berat molekul antara lain 90,5 kD; 35,9 kD dan 32 kD. Globulin  11S  mempunyai  lima  fraksi  dengan berat molekul terentang pada kisaran 57 kD hingga 27,4 kD. Fraksi mayor dari globulin 11S ada dua dengan berat molekulnya  57  kD  dan  27,4  kD.  Tiga  fraksi  lainnya adalah fraksi minor dengan berat molekul 38,8 kD; 35,9 kD dan 32 kD.
Fraksi  mayor  merupakan  fraksi  protein  yang mempunyai  ketebalan  dan  intensitas  warna  yang  lebih besar dibandingkan fraksi minor. Hal ini diakibatkan oleh konsentrasi  fraksi  mayor  yang  lebih  tinggi  dibandingkan fraksi-fraksi lainnya (Widowati dan Wijaya, 1997).

## KESIMPULAN
Kadar  senyawa  organik  koro  komak  ( L. purpureus (L.)  Sweet)  adalah  karbohidrat  (67,9  %); protein  (17,1  %)  sehingga  potensial  digunakan  sebagai sumber  makanan  dan  protein  alternatif.  Kadar  lemak cukup rendah (1,1 %) dengan kadar air 9,3 % dan kadar abu 3,6 %. Komponen polipeptida penyusun protein koro komak  adalah  albumin,  18.22  %;  globulin,  55.15  %; glutelin,  26.13  %  sedangkan  prolamin  tidak teridentifikasi.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa komposisi  globulin  adalah  globulin  7S,  3.50  %  dan globulin 11S, 0.67 %.
Tabel 5 . Mobilitas Relatif (Rf) dan Perkiraan Berat Molekul No. Fraksi Albumin Globulin Glutelin Globulin 7S Globulin 11S Rf BM (kD) Rf BM (kD) Rf BM (kD) Rf BM (kD) Rf BM (kD) 1 0,017 101,7 0,288 54,9 0,339 48,9 0,068 90,5 0,271 57,0 2 0,305 52,8 0,492 34,5 0,525 32,0 0,254 59,3 0,441 38,8 3 0,492 34,5 0,542 30,8 0,610 26,4 0,475 35,9 0,475 35,9 4 0,593 27,4 0,847 15,4 0,525 32,0 0,525 32,0 5 0,898 13,7 0,576 29,3 0,593 27,4 6 0,983 11,3

## DAFTAR PUSTAKA
Clemente,  A.  et  al.,  1999 .  Protein  Quality  of  Chickpea ( Cicer  arietinum L.)  Protein  Hydrolysates. Food Chem ., 67: 269-274.
Dieckert,  J.  W.  and  Dieckert,  M.  C.  dalam  Altschul, Aaron  M  and  Harold  L.  Wilcke.  1985. New Protein Foods. Orlando: Academic Press, Inc.
Koswara,  S.  1995. Teknologi  Pengolahan  Kedelai Menjadikan  Makanan  Bermutu.  Jakarta:  Pustaka Sinar Harapan.
Nielsen, N. C. dalam Aaron M. Altschul and Harold L. Wilcke.  1985. New  Protein  Foods.  Orlando: Academic Press, Inc.
Pasaribu,  A.  1981. Pengantar  Statistik.  Jakarta:  Ghalia Indonesia.
Somaatmadja, S dan van der  Maesen, L. J. G. 1993.
Prosea  Sumber  Daya  Nabati  Asia  Tenggara  1 Kacang-kacangan.  Jakarta:  P.T.  Gramedia Pustaka Utama.
Subagio,  A.  2003. Pengembangan  Kekara  Sebagai Sumber  Protein  Untuk  Mencukupi  Kebutuhan Pangan  di  Daerah  Marginal.  Jember:  Fakultas Teknologi Pertanian Universitas Jember.
Suhardi.  1989. Kimia  dan  Teknologi  Protein. Yogyakarta:  PAU.  Pangan  dan  Gizi.  Universitas Gajah Mada.
Utsumi, S. and Kinsella, J. E. 1985 . Structure Function Relationships  in  Food  Protein  Sub  Unit imteractions in Heat induced Gelation of 7S, 11S and  Soy  Isolate  Protein. J.  Agric.  Food  Chem ., 33: 297-302.
Widowati,  S  dan  Wijaya,  S.  K.  S.  1997. Isolasi  dan Karakterisasi  Globulin  7S  dan  11S  dari  Sepuluh Varietas  Kedelai  Indonesia.  Prosiding  Seminar Teknologi Pangan.
Zayas,  J.  F.  1997. Functionality  of  Protein  in  Food. Berlin: Springer.