## PERBEDAAN VARIASI VOLUME SPUTUM TERHADAP DETEKSI Mycobacterium tuberculosis PADA PENDERITA TB MENGGUNAKAN METODE TES CEPAT MOLEKULER
Rafika 1) , Chaerunnisa 1) , Nurdin 1)
1) Poltekkes Kemenkes Makassar
Alamat Korespondensi: rafikauddinramli@gmail.com
Article info

## Abstrak
Penyebab utama  penyakit  TB adalah  Mycobacterium tuberculosis (MTB).  Diagnosis  TB  dari  dahulu  menggunakan  pemeriksaan mikroskopis  BTA,  kultur  dan  molekuler.  Saat  ini telah  digunakan metode diagnosis tuberkulosis menggunakan Tes Molekuler Cepat (TCM).  TCM  bisa  membaca  bakteri  Mycobacterium  tuberculosis walaupun sampel sputum hanya 1 mL dan  dapat digunakan untuk kasus jumah spesimen sputum yang didapat sedikit. Penelitian ini bertujuan  untuk  mendeteksi  Mycobacterium  tuberculosis  dan menganalisis perbandingan variasi volume sputum terhadap hasil TCM penderita TB paru.  Penelitian menggunakan sampel sputum penderita TB paru sebanyak 24 orang dan dilakukan pelaksanaan penelitian  di  RSUD  H.  Andi  Sulthan  Dg.  Radja  Kabupaten Bulukumba.    Teknik  pengambilan  sampel  adalah  purposive sampling.  Volume  sputum  dibuat  kelompok  variasi  0,5  mL,  0,75 mL, 1  mL, 1,5  mL. Setiap volume sputum menggunakan 6 sputum penderita  yang  berbeda.  Volume  sputum  ditambahkan  2  mL reagen  sampel  buffer  TCM.  Penggunaan  pengelohan  sampel dahak  sebanyak  2  mL  dalam  katrid  dan  dilakukan  pemeriksaan TCM.  Hasil  diperoleh  semua  volume  sputum  dapat  mendeteksi adanya  Mycobacterium  tuberculosis.  Berdasarkan  uji  Kruskal- wallis  dapat  disimpulkan  tidak  ada  perbedaan  yang  bermakna antara  variasi  volume  sputum  dengan  hasil  TCM  penderita  TB paru.  Dengan  demikian  bahwa  volume  sputum  yang  sedikit  pun
(0,5 mL) dapat mendeteksi keberadaan Mycobacterium tuberculosis Kata  Kunci: Mycobacterium  tuberculosis, volume  sputum,  TCM,
penderita TB

## Abstract
Tuberculosis  is  an  infectious  disease  caused  by  bacteria  from Mycobacterium tuberculosis (MTB) that attacks the lungs. One of the  methods  of  diagnosis  of  tuberculosis  uses  rapid  molecular tests (TCM). TCM can read Mycobacterium tuberculosis bacteria even though the sputum sample is only 1 ML and can be used for cases  of  the  number  of  sputum  specimens  obtained  is  small.  This study aims to  detect Mycobacterium tuberculosis and analyze the comparison  of  variations  in  sputum  volume  to  TCM  results  of pulmonary  TB  patients.    The  study  used  sputum  samples  of  24 pulmonary  TB  patients  and  conducted  a  study  at  rsud  H.  Andi Sulthan Dg. Radja Bulukumba Regency.  The sampling technique is purposive sampling. The volume of sputum is made a variation group of 0.5 mL, 0.75 mL, 1 mL, 1.5 mL. Each volume of sputum uses  6  different  sputum  sufferers.  The  sputum  volume  is  added  2 mL  of  TCM  buffer  sample  reagent.  The  use  of  sputum  sample management  as  much  as  2  mL  in  the  cartridge  and  TCM Received Revised Accepted Publish : 15-05-2022 : 05-06-2022 : 05-06-2022 : 28-06-2022
examination  was carried out. The results obtained  all volumes of sputum  can  detect  the  presence  of  Mycobacterium  tuberculosis. Based on the Kruskal-wallis test, it can be concluded that there is no significant difference between variations in sputum volume and TCM results of pulmonary TB patients. That  the slightest  volume of  sputum  (0.5  mL)  can  detect  the  presence  of  Mycobacterium tuberculosis.
Keywords: Mycobacterium tuberculosis, sputum volume, TCM, TB sufferers PENDAHULUAN Penyakit menular tuberculosis penyebab utamanya bakteri Mycobacterium tuberculosis yang menyerang  paru-paru,  namun  bakteri  ini berada  pada  ekstra  paru  juga.  Sumber penularan  tuberkulosis    yakni  penderita Basil  Tahan  Asam (BTA) positif  melalui droplet  sputum  yang    dikeluarkan  lewat berbicara, batuk dan bersin yang terhirup oleh orang lain (Panggabean, 2019).
Tuberkulosis  (TB)  menjadi  agen infeksi  yang  mematikan  di  seluruh  dunia setelah  HIV/AIDS.  Menurut  laporan World  Health  Organisation (WHO) tahun  2020  sebanyak  1,4  juta  orang meninggal  karena  tuberculosis  (termasuk 208.000  orang  dengan  HIV).  Delapan negara dengan kasus terbanyak, Indonesia merupakan yang kedua setelah
India,  diikuti  oleh  Cina,  Filipina, Pakistan, Nigeria, Bangladesh, dan Afrika  Selatan.  Di    Indonesia  angka prevalensi  TB  tahun  2017  sebanyak 420.994  kasus  (data    per  17  Mei  2018), ini  yang  juga  menjadi  salah  satu  dari  3 fokus utama target  pemerintah di bidang Kesehatan  (Kementerian  Kesehatan  RI, 2018).  Hasil  survey  pendahuluan  di RSUD  H.  A.  Sulthan  Dg.  Radja  di dapatkan  jumLah  penderita  TB  Paru sebanyak  325  orang  ahun  2019,  dan  230 orang  di  tahun  2020  dari  Januari  sampai Juni 2021.
Diagnosa  TB  pada  tahap  awal sangat  sulit  dilakukan  karena  gambaran klinis  yang  timbul  tidak  spesifik.  Oleh karena itu pemeriksaan gejala klinis yang timbul,  pemeriksaan  fisik  radiologis  dan pemeriksaan laboratoris, dibutuhkan untuk diagnosis TB. Metode pemeriksaan
laboratorium  untuk  mendeteksi  penyakit TB  yang  umumnya  digunakan    yaitu pemeriksaan mikroskopis dengan pewarnaan  Ziehl-Nelssen  sebagai    gold standar  karena  cukup  sederhana,  murah, dan  memungkinkan  cepat    medeteksi penyakit  TB  paru,  namun  hasilnya  akan berbeda-beda    tergantung  dari  ketelitian teknisi (Tamtyas and Rini, 2020).
Diagnosis  lainnya  adalah  dengan ditemukannya  bakteri Mycobacterium tuberculosis (MTB)  pada  kultur  sputum atau  pemeriksaan  biakan.  Metode  kultur memiliki  keterbatasan  waktu  inkubasi yang  lebih  lama  sekeitar  8  minggu  dan diperoleh  hasilnya  yaitu  lebih  dari seminggu  dan  membutuhkan  keahlian dan  pengetahuan  khusus  untuk  dapat melakukannya. Oleh karena itu diperlukan  metode  yang  menunjang pemeriksaan TB lebih cepat dan memiliki  sensitivitas  dan  spesifitas  yang tinggi (Panggabean, 2019).
Saat  ini,  laboratorium  rumah  sakit dan  puskesmas  telah  menggunakan  alat tes  molekuler  cepat  sebagai  metode diagnostik  untuk  dugaan  tuberkulosis resistan  terhadap  obat,  tuberkulosis-HIV, tuberkulosis  anak,  tuberkulosis  diabetes, tuberkulosis  ekstra  paru  dan  kasus terduga  tuberkulosis  dengan    basil  tahan asam  (BTA)  negative  (Kementerian Kesehatan RI, 2016).
TCM  dapat  digunakan  sebagai  tes diagnostik untuk menggantikan pemeriksaan  mikroskopik  konvensional dan  kultur.  Tes  cepat  molekuler  (TCM) adalah  metode  diagnosis  tuberkulosis terbaru menggunakan pemeriksaan molekuler dengan metode semi
kuantitatif  real-time  polymerase  chain reaction  (RT-PCR)  dimana hotspot gen rpoB  dari Mycobacterium  tuberculosis diintegrasikan  secara  otomatis  mengolah ekstraksi  asam  deoksiribonukleat  (DNA) dalam  kotak  sekali  pakai.  Diperlukan waktu  kurang  dari  dua  jam  untuk mendapatkan  hasil,  dan  hanya  pelatihan sederhana yang diperlukan untuk menggunakan alat ini  (Kurniawan et al. ,
2016;  Naim  and  Dewi,  2018).    Studi  di Ethiopia  melaporkan  hal  yang  sama, yaitu  pemeriksaan  TCM  dengan  Xpert MTB/RIF dapat mendeteksi MTB dengan sensitivitas 73,8% dan spesifisitas 95% pada pemeriksaan mikroskopis (Tadesse et al. , 2016).
Penelitian  bertujuan  mengetahui perbedaan  hasil  variasi  volume  sputum terhadap  hasil  pemeriksaan  TCM  untuk mendeteksi Mycobacterium  tuberculosis pada penderita TB paru.

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  berupa  pot dahak,  pipet,  katrid,  alat  TCM.  Adapun bahan yakni sputum pagi, reagen.

## Prosedur Kerja Pengambilan Sampel
Sampel  yang  digunakan  adalah sputum  penderita  TB  paru  sebanyak  24 orang  di  RSUD  H.  Andi  Sulthan  Dg. Radja  Kabupaten  Bulukumba.  Teknik pengambilan  sampel  adalah purposive
sampling dengan  kriteria  inklusi  terdiri volume  sputum  sebanyak  3-5  mL  dengan ciri sputum kuning kehiajauan/mukopurulen, kental atau
mucoid.

## Pemeriksaan Sputum dengan TCM
Volume  sputum  dibuat  kelompok variasi  0,5  mL,  0,75  mL,  1  mL,  1,5  mL. Setiap  volume  sputum  menggunakan  6 sputum penderita yang berbeda. Kemudian masing-masing sputum
dilakukan  pemeriksaan  dengan  metode TCM.  Pengolahan  specimen  sputum dilakukan  pada Biological  Safety  Cabinet (BSC).  Langkah  awal  prosedur  kerja TCM  yakni  dilakukan  pemberian  label
identifikasi  pada  katrid  dan  dituliskan pada  bagian  sisi  katrid.  Kemudian mengambil  sputum  penderita  sebanyak 0,5 mL ditambahkan reagen sampel TCM sebanyak  2  mL.  Begitu  juga  volume sputum  0,75  mL,  1  mL  dan  1,5  mL dengan  menambahkan  reagen  sampel  2 mL.    Setelah  itu  pot  sputum  ditutup kembali dan dihomogenkan dan diinkubasi  pada  suhu  ruang  15  menit. Selanjutnya  buka  penutup  katrid,  lalu buka tempat penampung spesimen. Diambil dengan pipet khusus dan memidahkan  sampel  dahak  yang  telah diolah sebanyak 2 mL (sampai garis batas pada  pipet)  ke  dalam  katrid  secara perlahan-lahan,  tutup  dan  dimasukkan  ke dalam  alat  TCM  dan  diproses  secara otomatis kurang lebih 2 jam.
Interpretasi hasil
Hasil  pemeriksaan  TCM  akan menunjukkan  ada  atau  tidaknya  DNA Mycobacterium tuberculosis (MTB) kompleks dan ada atau tidaknya penyandi resistensi  rifampisin,  serta  perhitungan semi kuantitatif jumlah basil pada sampel berdasarkan  jumlah  Ct  ( Cycle  threshold ) dengan interpretasi hasil terdiri dari MTB not  detected =  tidak  terdeteksi  MTB; MTB detected ( very  low >28,  low  22-28, medium 16-22, high <16). MTB terdeteksi (jika nilai Ct 28-16).

## Pengolahan dan Analisis Data
Pengolahan  dan  analisis  data dilakukan  secara  komputerisasi  dengan menggunakan  SPSS.  Pengujian  secara descriptive dan uji statistik non
parametrik Kruskal-wallis .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  ini  melihat  perbandingan hasil  pemeriksaan  TCM  pada  setiap variasi volume sputum penderita TB paru. Penelitian  telah  dilakukan  di  RSUD  H. Andi  Sulthan  Daeng  Radja  Kabupaten Bulukumba pada bulan April sampai  Mei 2021. Gambaran hasil pemeriksaan deteksi  MTB  pada  TCM  dapat  dilihat pada table berikut ini.
Tabel  1.  Hasil  Deteksi  Mycobacterium
tuberculosis (MTB) pada variasi volume sputum penderita TB paru Volume sampel sputum Hasil pemeriksan Deteksi MTB 0,5 A1 terdeteksi High A2 terdeteksi Low A3 terdeteksi Very low A4 terdeteksi High A5 terdeteksi Medium A6 terdeteksi Very low 0,75 B1 terdeteksi Low B2 B3 B4 B5 B6 terdeteksi terdeteksi terdeteksi terdeteksi terdeteksi Very low Low Medium Medium Medium 1 C1 C2 C3 C4 C5 C6 terdeteksi terdeteksi terdeteksi terdeteksi terdeteksi terdeteksi Medium Very low High Low High Very low 1,5 D1 D2 D3 D4 D5 D6 terdeteksi terdeteksi terdeteksi terdeteksi terdeteksi terdeteksi Medium High High Medium Medium High
Kode  sampel:  A1-A6;  B1-B6;  C1-C6;
D1-D6 Dalam  penelitian  ini  bertujuan melihat adakah perbedaan volume sputum terhadap  deteksi  MTB.  Variasi  volume sputum
sesuai yang digunakan berdasarkan  petunjuk  teknis  pemeriksaan TB  dengan  TCM  bahwa  apabila  volume sputum  minimal  0,1-1  mL,  ditambahkan reagen  sampel  ke  dalam  volume  sputum sampai  mencapai  2  mL  (ratio  2:1). Sedangkan  volume  sputum  1,5    mL ditambahkan reagen sampel sesuai volume  spesimen  dengan  perbandingan (ratio 1:1) untuk dimasukkan dalam katrid
(Kementerian Kesehatan RI, 2017). Walaupun  dalam  penelitian  ini  volume sputum  1,5  mL  ditambahkan  reagen sampel  2  mL  dan  mengambil  2  mL  hasil pencampuran  untuk  digunakan  dalam katrid  TCM.  Penelitian Luetkemeyer (2016) bahwa Xpert MTB /RIF menggunakan  volume  dahak  standar  1 hingga  3  mL,  baik  sebagai  dahak langsung  atau  yang  telah  dekontaminasi,
MTB/RIF  pertama  dengan  BTA smear - negatif mengidentifikasi 59% dan
mengidentifikasi  71%  orang  dengan  TB paru  kultur-positif  dan smear -negatif (Luetkemeyer et  al. ,  2016).  Penelitian (Rarome et  al. ,  2020)  menggunakan volume dahak ditambahkan ke GeneXpert MTB/RIF reagen sampel dalam perbandingan  1:1  (1  mL  dahak  hingga  1 mL reagen sampel). Volume  cairan 2 mL campuran ditambahkan ke katrid GeneXpert  MTB/RIF  diperoleh  hasil positif 33,7% dan negative 66,7%.
Sesuai  hasil  pada  tabel  1  diketahui semua  sampel  sebanyak  24  penderita terdeteksi Mycobacterium  tuberculosis (MTB)  dengan  volume  yang  berbeda. Berdasarkan  uji Kruskal-Wallis diperoleh p=0,23  bahwa  setiap  variasi  volume sputum penderita TB tidak ada perbedaan dalam  mendeteksi  keberadaan  MTB melalui pemeriksaan TCM.
Dalam  pemeriksaan  TCM  nilai  Ct yang  menjadi  penentuan  dalam  melihat hasil.  Berdasarkan  hasil  penelitian  pada volume  0,5  mL  terdapat  hasil  yang very low (Ct > 28 siklus) menunjukkan jumlah DNA  MTB  sangat  sedikit  terdeteksi  di daerah  region  target  gen rpoB dan mendeteksi  81  bp  (base  pair)  core  region dari gen rpoB pada MTB.  Bahwa volume sputum  tidak  memiliki  pengaruh  yang signifikan dalam pemeriksaan TCM.
Penelitian diketahui volume sputum 0,5  mL  mampu  mendeteksi  MTB  secara high .  Hal  ini  bisa  dikarenakan  jumLah BTA  pada  sputum  yang  lebih  banyak, walapun  volume  sputum  yang  digunakan sedikit.  Begitupun  sebaliknya  volume sputum  0,75  mL  terdapat  hasil  deteksi
MTB yang low . Hal ini berarti penurunan volume sputum tidak linear mempengaruhi  penurunan  deteksi  MTB. Oleh  karena  pemeriksaan  TCM  mampu mendeteksi  DNA  MTB  kompleks  secara kualitatif dari spesimen langsung. Sehingga  dapat  dipengaruhi  oleh  jumLah mikroorganisme  dalam  spesimen.  Hasil sangat dipengaruhi pula cara pengumpulan  sampel,  pengolahan  dan penyimpanan specimen (Kementerian Kesehatan RI, 2017). Penelitian Husna dan Dewi, melihat perbedaan deteksi Mycobacterium tuberculosis menggunakan  metode  BTA dekontaminasi  dan  tes  cepat  molekuler. Dari  hasil  penelitian  ini  menggunakan perbandingan  volume  sputum  dan  reagen sampel (2:1). Hasil menunjukkan kesamaan  hasil  BTA  dekontaminasi dengan  TCM.    Hasil  BTA  negatif danTCM diperoleh tidak terdeteksi  MTB.
Sedangkan  BTA  hasil scanty memiliki kesesuaian dengan  hasil   TCM terdeteksi MTB very  low ,  begitu  pula  BTA    positif (1+),  sedangkan  hasil  TCM  terdeteksi MTB low (Husna and Dewi, 2020).
Seperti  penelitian  Nurlia  dan  Novi bahwa  metode  TCM  memiliki  nilai spesifisitas  yang  tinggi  yang  mampu mendeteksi  90,12%  pasien  yang  tidak terinfeksi  MTB  dari  keseluruhan  pasien yang benar-benar tidak terinfeksi, sehingga  metode  ini  efektif  digunakan sebagai  alat  diagnosis  MTB.  Penelitian Boehme,  dkk.  menggunakan  volume sputum  standar  GeneXpert  MTB/RIF ratio  2:1  yakni  penambahan  reagen sampel dua kali lipat volume dahak. Hasil diperoleh  dari  pemeriksaan  MTB/RIF dengan  72,5%  dari  hasil  pemeriksaan mikroskopis  yang  negatif  dan  98,2% dari hasil  pemeriksaan  mikroskopis  positif (Boehme et al. , 2010).
Phoumg  (2019)  melaporkan  hasil penelitian  yang  sama  bahwa  konsentrasi sputum  dengan  buffer  standar    (2:1) dibandingkan  dengan  sputum  dengan buffer  yang  dikurangi  (1:1)    diperoleh
pula  hasil  positif  yang  serupa  (Phuong et al. , 2019).
Bahkan selain sputum yang dikeluarkan dari penderita TB paru, TCM dapat  pula  mendeteksi  MTB  pada spesimen  ekstra  paru.  Seperti  studi  di Afrika  Selatan  pemeriksaan  TCM  dengan Xpert  MTB/RIF  pada  pasien  TB  ekstra paru  dari  spesimen  tinja  menunjukkan sensitivitas  dan  spesifisitas  cukup  tinggi yaitu  masing-masing  31,9%  (95%CI 21,84-44,50)  dan  99,7%  (95%CI  98,2- 100).20  Sementara  hasil  studi  di  China pemeriksaan TB ekstra paru dari spesimen  bilasan  bronchoalveolar  didapat tingkat sensitivitas dan spesifisitas masing-masing  adalah  72,9%  dan  98,7% (Lu et al. , 2018).
Keterbatasan  penelitian  ini  karena tidak berdasarkan hasil mikroskopis BTA.
Sehingga tidak dapat mengetahui perbandingan  hasil  BTA  yang  jumlah bakteri dengan variasi volume sputum.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Penelitian dapat menyimpulkan bahwa  variasi  volume  sputum  penderita TB paru dalam mendeteksi MTB menggunakan metode TCM tidak mengalami  perbedaan  yang  signifikan.
Adapun  saran  yakni  perlu  melakukan deteksi  MTB  pada  spesimen  ekstra  paru pada  anak-anak  menggunakan  TCM. Selain  itu  pula  dapat  dilakukan  penelitian mengenai hubungan variasi volume terhadap  hasil  pemeriksan  mikroskopik BTA negatif dan positif.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan terimakasih penulis  kepada pihak  yang  membantu  dalam  proses pengambilan data dan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Boehme,  C.  C. et  al. (2010)  ‘Rapid molecular detection of tuberculosis and rifampin resistance’, The  New  England journal  of  medicine .  2010/09/01,
363(11),  pp.  1005–1015.  doi: 10.1056/NEJMoa0907847.
Husna,  N.  and  Dewi,  N.  U.  (2020)
‘Perbandingan Hasil Pemeriksaan Mikroskopis  Basil  Tahan  Asam Metode  Dekontaminasi  Dengan Metode  Tes  Cepat  Molekuler’, Jurnal  Riset  Kesehatan  Poltekkes Depkes Bandung , 12(2), pp. 316– 323.
Kementerian  Kesehatan  RI  (2016) Info Data Tuberkulosis Indonesia . Kementerian Kesehatan RI (2017) Petunjuk  Teknis  Pemeriksaan  TB dengan TCM . Kementerian Kesehatan RI (2018) InfoDatin Tuberculosis Kementerian Kesehatan RI . Kurniawan,  E. et  al. (2016)  ‘Nilai diagnostik  metode  “Real  Time”
PCR  geneXpert  pada  TB  Paru BTA  negatif’, Jurnal  Kesehatan Andalas , 5(3). Lu,  Y. et  al. (2018)  ‘Evaluating  the diagnostic  accuracy  of  the  Xpert MTB/RIF assay on bronchoalveolar  lavage  fluid:  a retrospective study’, International
Journal  of  Infectious  Diseases ,
71, pp. 14–19.
Luetkemeyer,  A.  F. et  al. (2016) ‘Evaluation  of  Xpert  MTB/RIF Versus  AFB  Smear  and  Culture to Identify Pulmonary Tuberculosis  in  Patients  With Suspected Tuberculosis From Low  and  Higher  Prevalence Settings’, Clinical infectious diseases :  an  official  publication of  the  Infectious  Diseases  Society of  America .  2016/02/02,  62(9), pp. 1081–1088. doi: 10.1093/cid/ciw035. Naim,  N.  and  Dewi,  N.  U.  (2018) ‘Performa  Tes  Cepat  Molekuler
Dalam  Diagnosa  Tuberkulosis  Di Balai  Besar  Kesehatan  Paru Masyarakat  Makassar’, Jurnal
Media  Analis  Kesehatan ,  9(2), pp. 113–122. Panggabean,  E.  R.  M.  (2019)  ‘Uji Sensitivitas Dan Spesifisitas Genexpert Pada Penderita Suspek Tuberkulosis Di Puskesmas Pancur  Batu  Kabupaten  Deli Serdang’.
Phuong,  N.  T.  B. et  al. (2019)  ‘Effect  of two alternative methods of pooling  sputum  prior  to  testing for  tuberculosis  with  genexpert MTB/RIF’, BMC Infectious Diseases , 19(1), pp. 1–4.
Rarome,  B.  B. et  al. (2020)  ‘GeneXpert
MTB/RIF  and  Mycobacterium tuberculosis  Sputum  Culture  in Establishing  the  Diagnosis  of Pulmonary Tuberculosis and Rifampicin Resistance in Suspected  Childhood  Pulmonary Tuberculosis in Soetomo Hospital’, Indonesian  Journal  of Tropical  and  Infectious  Disease , 8(3), pp. 152–160.
Tadesse,  M. et  al. (2016)  ‘Increased detection of smear-negative pulmonary tuberculosis by GeneXpert Mycobacterium tuberculosis/Rifampicin assay after bleach concentration’.
Tamtyas, F. I. and Rini, C. S. (2020) ‘The
Detection  of  TB  Lungs  with Microscopic and the Rapid Molecular Test Methods’, Medicra  (Journal  of  Medical Laboratory  Science/Technology) ,
3(1), pp. 1–4.