## Indonesian Dental Association

## Journal of Indonesian Dental Association
http://jurnal.pdgi.or.id/index.php/jida ISSN: 2621-6183 (Print); ISSN: 2621-6175 (Online)

## Research Article

## The Activities of Torch Ginger Flower (Etlingera elatior) Ethanol Extract  on Degradation of Porphyromonas gingivalis Biofilm as Periodontal Pathogen
Devi Anisya Putri 1 , A. Haris Budi Widodo 2§ ,  Meylida Ichsyani 2 , Rifda Naufalin 3 , Oedjijono 4
1 Student of Dental Medicine Study Program, Faculty of Medicine, Jenderal Soedirman University, Purwokerto, Indonesia 2 Dental Medicine Study Program, Faculty of Medicine, Jenderal Soedirman University, Purwokerto, Indonesia
3 Food Science and Technology Study Progam, Faculty of Agriculture, Jenderal Soedirman University, Purwokerto, Indonesia 4 Biology Study Program, Faculty of Biology, Jenderal Soedirman University, Purwokerto, Indonesia

## KEYWORDS
biofilm; Etlingera elatior ;
periodontitis;
Porphyromonas gingivalis

## ABSTRACT
Introduction: Porphyromonas gingivalis is bacteria that can form biofilms as the main cause of periodontitis. Mouthwash therapy in long term can cause mucositis and even oral cancer. Antibacterial potential of torch ginger flower ( Etlingera elatior ) can be developed as an alternative adjuvant therapy for periodontitis. Objective: Aims of this research was to determine the effect of torch ginger flower ethanol extract against degradation of P. gingivalis biofilm. Methods: This research used ethanolic extract of torch ginger flower with concentrations 1.56 mg/mL, 3.125 mg/mL, 6.25 mg/mL, 12.5 mg/mL, 25 mg/mL, and 50 mg/mL. Chlorhexidine gluconate 0.2% was used as positive control and DMSO 1% was used as negative control. Measurement of P. gingivalis biofilm degradation used microtiter plate assay with crystal violet 1% staining which reads its optical density at wavelength of 450 nm. Data were analyzed by one way ANOVA and Post hoc LSD. Results: The percentage of P. gingivalis biofilm degradation with torch ginger flower ethanol extract sequentially were 12.47%, 30.56%, 57.12%, 71.36%, and 74.83%. The analysis showed that there was a significant difference (p<0,05) between treatment groups torch ginger flower ethanol extract, as well as between torch ginger flower ethanol extract with DMSO 1% and chlorhexidine gluconate 0.2%. Optimum concentration of ethanol extract of torch ginger flower on P. gingivalis biofilm degradation was 25 mg/mL and showed no significant difference with chlorhexidine gluconate 0.2% (p>0.05). Conclusion: Conclusion of this research is torch ginger flower (Etlingera elatior) ethanol extract has P. gingivalis biofilm degradation activity.
§ Corresponding Author E-mail address: harisbudiw@gmail.com (Widodo AHB)
DOI: 10.32793/jida.v6i1.882
Copyright: ©2023 Putri DA, Widodo AHB, Ichsyani M, Naufalin R, Oedjijono. This is an open access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution License, which permits unrestricted use, distribution, and reproduction in any medium provided the original author and sources are credited.
Received date: September 19, 2022. Accepted date: April 15, 2023. Published date: June 24, 2023.

## KATA KUNCI
biofilm;
Etlingera elatior ;
periodontitis; Porphyromonas gingivalis

## ABSTRAK
Pendahuluan: Porphyromonas gingivalis merupakan bakteri pembentuk biofilm sebagai penyebab utama periodontitis. Terapi obat kumur jangka panjang dapat menyebabkan mukositis bahkan kanker mulut. Potensi antibakteri bunga kecombrang ( Etlingera elatior ) dapat dikembangkan sebagai alternatif terapi adjuvan periodontitis. Tujuan: untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak etanol bunga kecombrang terhadap degradasi biofilm P. gingivalis . Metode: Ekstrak etanol bunga kecombrang konsentrasi 1,56 mg/mL, 3,125 mg/mL, 6,25 mg/mL, 12,5 mg/mL, 25 mg/mL, dan 50 mg/mL digunakan pada penelitian ini. Chlorhexidine gluconate 0,2% digunakan sebagai kontrol positif dan DMSO 1% digunakan sebagai kontrol negatif. Aktivitas degradasi biofilm P. gingivalis diuji dengan metode microtiter plate assay dengan pewarnaan kristal violet 1% yang dibaca densitas optiknya pada panjang gelombang 450 nm. Data dianalisis dengan one way ANOVA dan Post hoc LSD. Hasil: Hasil analisis menunjukkan adanya perbedaan signifikan (p<0,05) antar kelompok perlakuan ekstrak etanol bunga kecombrang, serta antar kelompok perlakuan ekstrak etanol bunga kecombrang dengan DMSO 1% dan chlorhexidine gluconate 0,2%. Konsentrasi optimum ekstrak etanol bunga kecombrang terhadap degradasi biofilm P. gingivalis adalah 25 mg/mL dan menunjukkan tidak adanya perbedaan yang signifikan dengan kontrol positif chlorhexidine gluconate 0,2% (p>0,05). Kesimpulan: Terdapat aktivitas degradasi biofilm P. gingivalis oleh ekstrak etanol bunga kecombrang ( Etlingera elatior ).

## PENDAHULUAN
Periodontitis merupakan penyakit periodontal yang sering terjadi dengan angka kejadian yang cukup tinggi. Prevalensi masalah gigi dan mulut di Indonesia termasuk periodontitis berdasarkan data Riset Kesehatan Dasar tahun 2013 yaitu sebesar 25,9%. 1 Prevalensi ini meningkat 31,7% pada tahun 2018 menjadi 57,6%. Prevalensi masalah kesehatan gigi dan mulut tahun 2018 pada anak berusia 5-9 tahun mencapai 54% dan pada orang dewasa berusia 45-54 mencapai 50,8%. Prevalensi periodontitis di Indonesia mencapai 74,1% dan di daerah Jawa Tengah sendiri mencapai 56,7%. 2
Periodontitis adalah penyakit berupa peradangan pada jaringan periodontal yang ditandai kerusakan tulang alveolar dan ligamen periodontal sehingga mempengaruhi perlekatan gigi, serta terbentuk poket periodontal. Poket tersebut menjadi tempat kolonisasi bakteri. 3 Penyebab utama periodontitis yaitu bakteri pada biofilm atau plak subgingiva. 4 Biofilm tersusun atas kumpulan bakteri yang melekat erat pada suatu permukaan dan akan memicu terbentuknya plak gigi berupa deposit lunak. 5 Porphyromonas gingivalis merupakan bakteri flora normal yang pada kondisi tertentu seperti peningkatan aliran gingival crevicular fluid (GCF) menyebabkan pH menjadi alkalin sehingga menginduksi pertumbuhan bakteri P. gingivalis penyebab periodontitis. P. gingivalis salah satu bakteri yang paling berperan dalam proses pembentukan biofilm. Bakteri Gram negatif anaerob tersebut banyak ditemukan pada plak subgingiva. 1 Bakteri P. gingivalis dapat berpenetrasi ke dalam sulkus gingiva sehingga kedalaman sulkus
bertambah. 6 Bakteri dapat berkontak dengan jaringan periodontal karena adanya lipopolisakarida (LPS) pada dinding sel bakteri. Bakteri P. gingivalis akan menginvasi jaringan gingiva sehingga menginduksi respon imun dan inflamasi sebagai awal perjalanan terjadinya periodontitis. Respon ini meliputi vasodilatasi pembuluh darah, serta sekresi sel-sel imun dan protein plasma ke lokasi infeksi. Sel-sel imun yang berperan dalam respon inflamasi yaitu sel T, sel B, neutrofil, dan makrofag yang dapat meningkatkan produksi sitokin proinflamasi sehingga terjadi periodontitis. 5,7
Perawatan pada periodontitis kronis yaitu scaling root planning untuk mengatasi bakteri secara mekanis, namun tidak mampu menghilangkan semua mikroorganisme patogen. Terapi adjuvan dilakukan dengan pemberian antibiotik, anti-inflamasi, serta obat kumur. Penggunaan antibiotik jangka panjang dapat menyebabkan resistensi antibiotik. Penggunaan obat kumur secara terus-menerus dapat menyebabkan terganggunya sensasi rasa, mukositis seperti sariawan, dan terjadinya diskolorasi gigi. Penggunaan obat kumur jangka panjang juga dapat menyebabkan terjadinya kanker mulut karena mengandung komponen utama alkohol lebih dari 20%. 8,9 Pemanfaaatan bahan alam diharapkan dapat mengurangi penggunaan bahan sintetik dan bahan kimia dalam pencegahan, serta pengobatan penyakit periodontal terutama periodontitis. Penggunaan obat tradisional dari bahan alam cenderung lebih aman karena memiliki toksisitas rendah dan efek samping yang minimal. 10 Salah satu sumber bahan alam yang dapat dikembangkan sebagai alternatif terapi adjuvan untuk penyakit periodontitis yaitu tanaman kecombrang ( Etlingera elatior ).
Tanaman kecombrang banyak ditemukan di Indonesia, terutama di Pulau Jawa. Bunganya sering dimanfaatkan sebagai bahan pangan dan rempah-rempah. Bunga kecombrang dilaporkan memiliki aktivitas antioksidan, antikanker, antijamur, dan antibakteri. 11,12,13 Kandungan senyawa pada bunga kecombrang yang berhasil diidentifikasi antara lain flavonoid, saponin, tanin, alkaloid, fenol, terpenoid, polifenol, steroid, dan minyak atsiri. 14,15 Aktivitas antibakteri ekstrak etanol bunga kecombrang sudah banyak dilaporkan. Konsentrasi hambat minimum ekstrak etanol bunga kecombrang terhadap bakteri Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Listeria monocytogenes, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Propionibacterium acnes, dan Aeromonas hydrophila secara berurutan yaitu 13 mg/mL, 6 mg/mL, 4 mg/mL, 3 mg/mL, 4 mg/mL, 20%, dan 3 mg/mL. 16,17,18 Penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa
konsentrasi bunuh minimum ekstrak etanol buah rimbang ( Solanum torvum Sw.) terhadap bakteri P. gingivalis yaitu 12,5%. 20 Penelitian lain menunjukkan bahwa ekstrak bunga telang ( Clitoria ternatea ) pada konsentrasi 6,25% sudah efektif dalam menghambat pembentukan biofilm P. gingivalis . 21 Kandungan senyawa antibakteri pada kedua ekstrak tersebut juga terkandung pada ekstrak etanol bunga kecombrang.
Penelitian mengenai aktivitas degradasi biofilm P. gingivalis menggunakan bahan alam bunga kecombrang sejauh ini belum pernah dilakukan, maka dari itu peneliti tertarik untuk meneliti aktivitas ekstrak etanol bunga kecombrang E. elatior terhadap degradasi biofilm P. gingivalis penyebab periodontitis. Ekstrak etanol bunga kecombrang dibagi menjadi enam konsentrasi berbeda yaitu 1,56 mg/mL, 3,125 mg/mL, 6,25 mg/mL, 12,5 mg/mL, 25 mg/mL, dan 50 mg/mL. Konsentrasi ekstrak tertinggi pada penelitian ini yaitu 50 mg/mL karena pada uji pendahuluan menunjukkan bahwa ekstrak etanol bunga kecombrang dengan konsentrasi di atas 50 mg/mL efektivitasnya cenderung menurun. Hal ini diduga karena kelarutannya rendah. 22 Uji degradasi biofilm pada penelitian ini menggunakan metode microtiter plate assay dengan pewarnaan kristal violet 1% dan optical density (OD) dibaca pada microplate reader dengan panjang gelombang 450nm.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian ini merupakan eksperimental laboratoris dengan metode in vitro dengan rancangan penelitian posttest-only control group design . Penelitian ini dilakukan pada bulan Januari hingga Maret tahun 2022. Penelitian ini telah mendapatkan persetujuan etik dari KEPK FK Unsoed pada tanggal 16 Juni 2021 dengan nomor referensi 142/KEPK/VI/2021.

## Pembuatan Ekstrak Etanol Bunga Kecombrang
Bubuk simplisia bunga kecombrang sebanyak 500 gram diekstraksi dengan metode maserasi dengan pelarut etanol 70% sebanyak 2.500 mL pada suhu 37oC selama 2x24 jam. 18 Sampel disaring menggunakan kapas sehingga didapatkan filtrat dan ampas. Ekstrak diuapkan dengan rotary evaporator sehingga filtrat dan pelarut terpisah. Pemekatan ekstrak dengan waterbath. Ekstrak etanol bunga kecombrang dibuat menjadi konsentrasi 1,56 mg/mL, 3,125 mg/mL, 6,25 mg/mL, 12,5 mg/mL, 25 mg/mL, dan 50 mg/mL. Ekstrak ditimbang sebanyak 15,62 mg, 31,25 mg, 61,25 mg, 125 mg, 250 mg, dan 500 mg selanjutnya masing-masing ekstrak dilarutkan dalam DMSO 1% 10mL. Ekstrak kental bunga kecombrang dilakukan uji penapisan fitokimia yang meliputi uji flavonoid, saponin, tanin, alkaloid, terpenoid, steroid, fenol, dan antrakuinon.
Pembuatan Suspensi Bakteri dan DMSO 1%
Suspensi bakteri P. gingivalis dibuat dengan mengambil 4-5 ose bakteri P. gingivalis dari biakan MHA, selanjutnya dimasukkan ke dalam 10 mL BHI-B dan diinkubasi di inkubator CO 2 pada suhu 37 o C selama 24 jam. Suspensi bakteri P. gingivalis dilarutkan dalam 3 mL larutan NaCl 0,9% dan disetarakan McFarland 0,5 (jumlah bakteri 1,5x108 CFU/mL). 23 Kontrol negatif DMSO 1% dibuat dengan cara melarutkan 1 mL DMSO 99% dalam 100 mL akuades steril.

## Uji Degradasi Biofilm Porphyromonas gingivalis
Pembentukan biofilm dilakukan dengan metode microtiter plate assay . Medium BHI-B sebanyak 100 µL dan suspensi bakteri P. gingivalis sebanyak 100 µL McFarland 0,5 dimasukkan pada microplate round bottom polystyrene 96 wells . Inkubasi dilakukan pada suhu 37 o C selama 2x24 jam sehingga terbentuk biofilm P. gingivalis. 21,24 Uji degradasi biofilm P. gingivalis dilakukan setelah biofilm P. gingivalis terbentuk. Suspensi bakteri dibuang sebanyak 200 µL dan diberikan perlakuan. Chlorhexidine gluconate 0,2% sebagai kontrol positif, DMSO 1% sebagai kontrol negatif, larutan uji ekstrak etanol bunga kecombrang dengan 6 konsentrasi berbeda sebanyak 100 µL dimasukkan pada setiap sumuran dan ditambahkan BHI-B 100 µL. Kelompok kontrol pertumbuhan ditambahkan 200µL BHI-B. Inkubasi selama 60 menit pada suhu 37 o C. Microplate dicuci 3 kali dengan 200 µL Phospate-Buffered Saline (PBS) dan dikeringkan. Kristal violet 1% sebanyak 100 µL ditambahkan ke dalam setiap sumuran dan diinkubasi pada suhu ruang selama 15 menit. Microplate dicuci kembali dengan PBS sebanyak 3 kali dan dikeringkan. Etanol 96% sebanyak 200µL ditambahkan pada setiap sumuran microplate dan diinkubasi kembali selama 15
menit pada suhu ruang. Pengukuran optical density (OD) biofilm dilakukan menggunakan microplate reader dengan panjang gelombang 450nm. 24 Persentase degradasi biofilm dihitung dengan menggunakan rumus berikut:

## Analisis Data
Data nilai OD digunakan untuk menghitung persentase degradasi biofilm
P. gingivalis dan selanjutnya dianalisis dengan software Statistical
Package for the Social Sciences (SPSS). Uji normalitas data dilakukan dengan uji Saphiro Wilk . dan uji homogenitas dengan Levene test karena jumlah data ≤ 50. Data terdistribusi normal sehingga data dianalisis dengan uji one way ANOVA. Hasil one way ANOVA menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna antar kelompok dan data homogen sehingga analisis dilanjutkan dengan uji Post hoc LSD.

## HASIL
Simplisia bunga kecombrang sebanyak 500 gram diekstraksi dengan metode maserasi dan diperoleh ekstrak kental. Rata-rata rendemen ekstrak sebesar 11,04% dengan konsistensi kental dan berwarna coklat tua. Penapisan fitokimia dilakukan menggunakan ekstrak kental bunga kecombrang hasilnya dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil penapisan fitokimia ekstrak etanol bunga kecombrang
Keterangan: (+) =Terdapat senyawa uji, (-) = Tidak terdapat senyawa uji
Berdasarkan Tabel 1 dapat diketahui bahwa ekstrak etanol bunga kecombrang mengandung senyawa antibakteri flavonoid, saponin, tanin, alkaloid, terpenoid, steroid, dan fenol. Degradasi biofilm P. gingivalis diukur dengan metode microtiter plate assay . Nilai OD yang
diperoleh selanjutnya dihitung persentase degradasi biofilmnya.
Tabel 2 . Degradasi biofilm Porphyromonas gingivalis
Keterangan: α : 0,05, n: Jumlah pengulangan, SD: Standar Deviasi, p: Nilai signifikansi, F tabel : 2,66
Nilai persentase degradasi biofilm P. gingivalis dianalisis secara statistik (Gambar 1). Hasil analisis menunjukkan bahwa data terdistribusi normal dan homogen. Berdasarkan data pada Tabel 2 dapat diketahui bahwa F hitung (2.166,85) lebih besar dari F tabel (2,66) dan nilai p<0,05, artinya terdapat perbedaan aktivitas degradasi biofilm P. gingivalis yang signifikan antar kelompok.
Keterangan: * signifikan, ns: not significant
Gambar 1. Degradasi biofilm Porphyromonas gingivalis antara kelompok perlakuan ekstrak etanol bunga kecombrang dengan chlorhexidine gluconate 0,2%
Hasil analisis dengan tingkat kepercayaan 95% pada Gambar 2 menunjukkan bahwa kelompok chlorhexidine gluconate 0,2% memiliki aktivitas degradasi biofilm P. gingivalis lebih tinggi dibandingkan kelompok perlakuan ekstrak etanol bunga kecombrang pada semua konsentrasi dengan nilai rerata sebesar 84,68±0,35%. Hasil analisis menunjukkan bahwa tidak terdapat perbedaan signifikan antara kelompok perlakuan ekstrak etanol bunga kecombrang konsentrasi 25 mg/mL dengan chlorhexidine gluconate 0,2%. Terdapat perbedaan
No Senyawa Fitokimia Hasil Uji Keterangan 1 Flavonoid + Lapisan amil kuning 2 Saponin + Terbentuk busa 3 Tanin + Endapan putih 4 Alkaloid + Endapan putih 5 Terpenoid/ steroid + Warna  larutan merah keunguan 6 Fenol + Warna larutan hijau kehitaman 7 Antrakuinon - Tidak berubah warna
No Kelompok (mg/mL) n Degradasi Biofilm (%) SD Nilai F hitung Nilai p 1 50 3 74,83 1,62 2.166,85 0,00
2 25 3 83,29 0,58 3 12,5 3 71,36 0,61 4 6,25 3 57,12 1,39 5 3,125 3 30,56 1,93 6 1,56 3 12,47 1,06 7 CHX 0,2% 3 84,68 0,35 8 DMSO 1% 3 1,92 1,27
signifikan antara kelompok perlakuan ekstrak konsentrasi 1,56 mg/mL, 3,125 mg/mL, 6,25 mg/mL, 12,5 mg/mL, dan 50 mg/mL dengan chlorhexidine gluconate 0,2%.
Berdasarkan Gambar 3 dapat dilihat bahwa kelompok kontrol negatif DMSO 1% memiliki aktivitas degradasi biofilm P. gingivalis yang lebih rendah dibandingkan kelompok perlakuan ekstrak etanol bunga kecombrang pada semua konsentrasi yaitu dengan nilai rerata sebesar 1,92±1,27%. Hasil analisis dengan tingkat kepercayaan 95% menunjukkan bahwa terdapat perbedaan signifikan antara kelompok perlakuan ekstrak etanol bunga kecombrang pada semua konsentrasi dengan kelompok kontrol negatif DMSO 1%.
Keterangan: *signifikan Gambar 2. Degradasi biofilm Porphyromonas gingivalis antara kelompok perlakuan ekstrak etanol bunga kecombrang dengan DMSO 1%
Keterangan: *signifikan Gambar 3. Degradasi biofilm Porphyromonas gingivalis antar kelompok perlakuan ekstrak etanol bunga kecombrang
Hasil analisis dengan tingkat kepercayaan 95% pada Gambar 4 menunjukkan bahwa aktivitas degradasi biofilm P. gingivalis pada kelompok perlakuan ekstrak etanol bunga kecombrang menunjukkan hasil yang semakin meningkat dari konsentrasi 1,56 mg/mL hingga 25 mg/mL, kemudian menurun pada konsentrasi 50
mg/mL. Kelompok perlakuan ekstrak konsentrasi 1,56 mg/mL memiliki aktivitas degradasi biofilm P. gingivalis lebih rendah dibandingkan kelompok perlakuan konsentrasi 3,125 mg/mL, 6,25 mg/mL, 12,5 mg/mL, 25 mg/mL, dan 50 mg/mL yaitu dengan nilai rerata 12,47±1,06%. Kelompok perlakuan ekstrak konsentrasi 25 mg/mL memiliki aktivitas degradasi biofilm P. gingivalis yang lebih tinggi dibandingkan kelompok perlakuan konsentrasi lain yaitu dengan nilai rerata sebesar 83,29±0,58%. Hasil analisis menunjukkan bahwa terdapat perbedaan aktivitas degradasi biofilm P. gingivalis yang signifikan antar kelompok perlakuan ekstrak etanol bunga kecombrang.

## PEMBAHASAN
Bunga kecombrang sering dimanfaatkan sebagai bahan pangan dan rempah-rempah. Ekstrak etanol bunga kecombrang dilaporkan memiliki aktivitas antibakteri, antioksidan, antikanker, dan antijamur. 11,12,13,18 Bunga kecombrang dilakukan ekstraksi dengan metode maserasi karena mudah dilakukan dan tidak memerlukan pemanasan. 25 Hasil penapisan fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak etanol bunga kecombrang mengandung senyawa flavonoid, saponin, tanin, alkaloid, steroid, terpenoid, dan fenol. Hal ini sesuai dengan penelitian sebelumnya yang menunjukkan bahwa kandungan senyawa pada bunga kecombrang antara lain flavonoid, saponin, tanin, alkaloid, fenol, terpenoid, triterpenoid, polifenol, steroid, dan minyak atsiri. 15,18
Uji degradasi biofilm P. gingivalis dengan ekstrak etanol bunga kecombrang dilakukan menggunakan metode microtiter plate assay yang merupakan gold standard untuk menguji biofilm. Metode ini memiliki luaran berupa nilai optical density (OD) yang menunjukkan kepadatan biofilm P. gingivalis . Hasil perhitungan persentase degradasi biofilm P. gingivalis pada kelompok ekstrak etanol bunga kecombrang dengan konsentrasi 1,56 mg/mL, 3,125 mg/mL, 6,25 mg/mL, 12,5 mg/mL, 25 mg/mL, dan 50 mg/mL menunjukkan adanya aktivitas degradasi biofilm P. gingivalis yaitu secara berurutan sebesar 12,47%, 30,56%, 57,12%, 71,36%, 83,29% dan 74,83%. Kelompok perlakuan ekstrak konsentrasi 50 mg/mL mengalami penurunan aktivitas degradasi biofilm P. gingivalis dibandingkan kelompok perlakuan ekstrak konsentrasi 25 mg/mL, namun tetap memiliki aktivitas degradasi biofilm lebih baik jika dibandingkan dengan kontrol negatif DMSO 1%. Hal ini karena ekstrak konsentrasi 50 mg/mL memiliki kelarutan rendah sehingga sulit berpenetrasi ke dalam bakteri maupun biofilm. 22 Kelompok perlakuan ekstrak etanol bunga kecombrang 25 mg/mL memiliki aktivitas degradasi biofilm P. gingivalis yang paling baik dibandingkan dengan kelompok perlakuan ekstrak konsentrasi lain.
Hasil penelitian Salsabila (2021) dan Melati (2017) menunjukkan bahwa konsentrasi bunuh minimum pada ekstrak buah asam jawa ( Tamarindus indica L.) dan ekstrak etanol buah rimbang ( Solanum torvum Sw.) terhadap bakteri P. gingivalis secara berurutan yaitu 6,25% dan 12,5%. Ekstrak dengan konsentrasi 6,25% dan 12,5% sudah mampu membunuh bakteri P. gingivalis . Penelitian Widyarman dkk. (2018) menunjukkan bahwa ekstrak bunga telang ( Clitoria ternatea ) konsentrasi 6,25% sudah efektif dalam menghambat pembentukan biofilm P. gingivalis . Ekstrak etanol bunga kecombrang konsentrasi 1,56 mg/mL sudah mampu mendegradasi biofilm P. gingivalis sebesar 12,47%. Aktivitas degradasi biofilm tertinggi terdapat pada ekstrak etanol bunga keco P. gingivalis mbrang dengan konsentrasi 25 mg/mL yaitu sebesar 83,29%. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol bunga kecombrang memiliki aktivitas antibakteri lebih baik dibandingkan ekstrak etanol buah rimbang, ekstrak buah asam jawa, dan ekstrak bunga telang. Aktivitas antibakteri pada ketiga ekstrak tersebut disebabkan oleh senyawa antibakteri flavonoid, saponin, tanin, steroid, dan alkaloid yang juga dimiliki oleh ekstrak etanol bunga kecombrang.
Flavonoid dapat merusak biofilm dengan cara gugus hidroksil berikatan dengan protein biofilm. Senyawa kompleks akan terbentuk sehingga mengakibatkan biofilm terdenaturasi. 12 Flavonoid juga dapat mengganggu ikatan enzim ATPase bakteri. Saponin bekerja dengan cara merusak membran sitoplasma dan mengganggu stabilitas membran sel bakteri. Tanin mampu menggumpalkan protoplasma bakteri dan menekan jumlah beberapa enzim bakteri. 26,27 Terpenoid dapat dapat berikatan dengan protein transmembran bakteri dan menurunkan permeabilitas dinding sel bakteri sehingga pertumbuhannya terhambat bahkan mati. 28 Alkaloid dapat mengganggu komponen penyusun peptidoglikan sehingga gagal terbentuk dengan baik dan mampu mengeliminasi EPS sehingga biofilm rusak. 29
P. gingivalis merupakan bakteri Gram negatif yang dinding selnya tersusun atas lipopolisakarida tebal. 30 Mekanisme kerja steroid berkaitan dengan membran lipid pada dinding sel P. gingivalis dan sensitivitas bakteri terhadap senyawa steroid sehingga mengalami kebocoran liposom. Senyawa ini dapat berinteraksi dengan membran fosfolipid sehingga integritas membran menurun. 20 Senyawa golongan fenol dapat merusak membran sel bakteri dan mendenaturasi protein sehingga biofilm P. gingivalis terdegradasi. 32
Pembentukan biofilm dimulai ketika bakteri dalam bentuk planktonik melekat pada suatu permukaan dan selanjutnya sel saling berkomunikasi ( quorum sensing ).
Bakteri dapat mengkoordinasikan pertumbuhan dan menghasilkan EPS. Senyawa antibakteri pada ekstrak etanol bunga kecombrang dapat mengganggu proses quorum sensing dan mengganggu produksi EPS sehingga biofilm terdegradasi. Tanin dan flavonoid termasuk golongan polifenol. Sifat hidrofobik yang dimiliki oleh bakteri dapat dikurangi oleh senyawa tersebut sehingga perlekatan bakteri rusak dan terjadi degradasi biofilm. 33
Hasil analisis menunjukkan bahwa kelompok perlakuan yang diberikan ekstrak etanol bunga kecombrang konsentrasi 25 mg/mL tidak memiliki perbedaan yang signifikan (p>0,05) dengan kelompok kontrol positif chlorhexidine gluconate 0,2% dalam mendegradasi biofilm P. gingivalis . Hal ini mengindikasikan bahwa kemampuan ekstrak etanol bunga kecombrang konsentrasi 25 mg/mL cukup mampu untuk menyamai kemampuan chlorhexidine gluconate 0,2% dalam mendegradasi biofilm P. gingivalis . Obat kumur chlorhexidine gluconate 0,2% dapat mengikat bakteri serta menghambat metabolisme enzim fosfofenolpiruvat fosfotransferase dan glukosiltransferase sehingga membran sitoplasma lisis dan bakteri mati. 27,34 Chlorhexidine gluconate 0,2% dapat bersifat bakterisid dengan mengganggu kerja enzim ATPase pada bakteri. 35
Ekstrak etanol bunga kecombrang dengan kandungan flavonoid, saponin, dan tanin memiliki mekanisme yang sama dengan chlorhxidine gluconate 0,2%. Flavonoid dapat menghambat metabolisme energi bakteri dengan cara mengganggu permeabilitas membran sel serta mengganggu ikatan enzim fosfolipase dan ATPase. Saponin dapat merusak membran sitoplasma. Tanin dapat berpresipitasi pada beberapa jenis protein dan polisakarida, serta dapat menekan jumlah beberapa enzim seperti enzim glukosiltransferase sehingga membran sitoplasma bakteri rusak. 27
Hasil analisis menunjukkan bahwa aktivitas degradasi biofilm P. gingivalis pada kelompok perlakuan ekstrak etanol bunga kecombrang konsentrasi 1,56 mg/mL, 3,125mg/mL, 6,25 mg/mL, 12,5 mg/mL, 25 mg/mL, dan 50 mg/mL memiliki aktivitas degradasi biofilm P. gingivalis yang lebih baik secara signifikan dibandingkan kontrol negatif DMSO 1% (p<0,05). Hal tersebut menunjukkan bahwa ekstrak etanol bunga kecombrang pada seluruh konsentrasi memiliki aktivitas degradasi biofilm P. gingivalis . Kontrol negatif menggunakan DMSO 1% karena DMSO dengan konsentrasi 1% tidak bersifat antimikroba dan tidak toksik. Hal tersebut dibuktikan dengan tidak adanya perbedaan aktivitas degradasi biofilm P. gingivalis yang signifikan antara kontrol negatif DMSO 1% dengan kontrol pertumbuhan. 31

## KESIMPULAN
Kesimpulan yang dapat diambil berdasarkan penelitian yang telah dilakukan yaitu terdapat pengaruh pemberian ekstrak etanol bunga kecombrang terhadap degradasi biofilm P. gingivalis . Tidak terdapat perbedaan persentase degradasi biofilm P. gingivalis antara kelompok perlakuan ekstrak etanol bunga kecombrang konsentrasi 25 mg/mL dengan kontrol positif chlorhexidine gluconate 0,2%, namun terdapat perbedaan antara kelompok perlakuan konsentrasi lain dengan kontrol positif. Terdapat perbedaan persentase degradasi biofilm P. gingivalis antara kelompok perlakuan ekstrak etanol bunga kecombrang pada semua konsentrasi dengan kontrol negatif DMSO 1%. Terdapat perbedaan persentase degradasi biofilm P. gingivalis antar kelompok perlakuan konsentrasi 1,56 hingga 50 mg/mL. Konsentrasi optimum dari ekstrak etanol bunga kecombrang dalam mendegradasi biofilm P. gingivalis yaitu konsentrasi 25 mg/mL.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Tidak ada konflik kepentingan dalam penelitian ini.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada PT. TF Indonature, Fakultas Pertanian, Universitas Jenderal Soedirman yang telah menyediakan simplisia bunga kecombrang.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Kementerian Kesehatan RI. 2013. Riset Kesehatan Dasar (Riskesdas) Tahun 2013. Lembaga Penerbit Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan. Jakarta; 2013. 110-112 pp.
2. Kementerian Kesehatan RI. Riset Kesehatan Dasar (Riskesdas) Tahun 2018. Lembaga Penerbit Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan. Jakarta; 2018. 179-216 pp.
3. How, K.Y., Song, K.P., Chan, K. Porphyromonas gingivalis: an overview of periodontopathic pathogen below the gum line. Frontiers in Microbiology. 2016; 7 (53): 1–14.
4. Bathla S. Textbook of Periodontitis 1st ed. Jaypee Brothers Medical Publishers (P) Ltd. New Delhi; 2017. 71-100 pp.
5. Kasuma N. Plak Gigi. Andalas University Press. Padang; 2016. 1-33 pp.
6. Amanda EA, Oktiani BW, Panjaitan FU. Efektivitas antibakteri ekstrak flavonoid propolis Trigona sp (Trigona thorasica) terhadap pertumbuhan bakteri
Porphyromonas gingivalis. Dentin Jurnal Kedokteran Gigi. 2019; 3(1): 23–28.
7. Zacarias JMV, Sippert EÂ, Tsuneto PY, Visentainer JEL, Silva CDOE, Sell AM. The influence of interleukin 17A and IL17F polymorphisms on chronic periodontitis disease in Brazilian patients. Mediators of Inflammation. 2015; 1–9.
8. Tartaglia GM, Tadakamadla SK, Connelly ST, Sforza C, Martín C. Adverse events associated with home use of mouthrinses: a systematic review. Therapeutic Advances in Drug Safety. 2019; 10(2): 1–16.
9. Sari M, Latief N, Massi MN. Isolasi dan identifikasi gen pneumcoccal surface adhesin A (psaA) sebagai faktor virulensi Streptococcus pneumoniae. Bioma: Jurnal Biologi Makassar. 2020; 5(1): 27–33.
10. Herawati D. Terapi kombinasi root debridement dan antibiotik terhadap periodontitis agresif. Majalah Kedokteran Gigi. 2011; 18(2): 200–204.
11. Naufalin R, Rukmini HS. Potensi antioksidan hasil ekstraksi tanaman kecombrang (Nicolaia speciosa Horan) selama penyimpanan. Seminar Nasional Membangun Daya Saing Produk Pangan Berbasis Bahan Baku Lokal. 2010; 1(1): 1–13.
12. Farida S, Maruzy A. Kecombrang (Etlingera elatior): sebuah tinjauan penggunaan secara tradisional, fitokimia dan aktivitas farmakologinya. Jurnal Tumbuhan Obat Indonesia. 2016; 9(1): 19–28.
13. Nasution YR, Duniaji AS, Arihantana NMIH. Aktivitas antijamur ekstrak kecombrang (Etlingera elatior) terhadap Aspergillus flavus FNCC 6109. Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan. 2020; 9(2): 127– 135.
14. Pusat Studi Biofarmaka LPPM IPB, Gagas Ulung. Sehat Alami Dengan Herbal: 250 Tanaman Berkhasiat Obat. PT. Gramedia Pustaka Utama. Jakarta; 2014. 495-543 pp.
15. Rusanti A, Sukandar D, Rudiana T, Adawiah. Profil fraksi sitotoksik terhadap sel murine leukemia P-388 dari ekstrak biji honje (Etlingera elatior). Jurnal Kimia VALENSI: Jurnal Penelitian dan Pengembangan Ilmu Kimia. 2017; 3(1): 79–87.
16. Naufalin R, Jenie BSL, Kusnandar F, Sudarwanto M, Rukmini H. Aktivitas antibakteri ekstrak bunga kecombrang terhadap bakteri patogen dan perusak pangan. Jurnal Teknologi dan Industri Pangan. 2005; 16(2): 119–125.
17. Pulungan AF, Octora DD, Sinaga DM. Formulasi sediaan salep antibakteri ekstrak etanol bunga kecombrang (Etlingera elatior) terhadap bakteri Staphylococcus aureus. Jurnal Penelitian Farmasi Herbal. 2018; 1(1): 1–5.
18. Soemarie YB, Apriliana A, Ansyori AK, Purnawati P. Uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol bunga
kecombrang (Etlingera elatior (Jack) R. M. Sm.) terhadap bakteri Propionibacterium acnes. Al Ulum Jurnal Sains dan Teknologi. 2019; 5(1): 13–17. 19. Melati D. Daya antibakteri ekstrak buah asam jawa (Tamarindus indica L.) terhadap pertumbuhan bakteri Porphyromonas gingivalis secara in vitro. Naskah Publikasi Universitas Muhammadiyah Yogyakarta. Yogyakarta. 2017; 1–8.
20. Salsabila AN. Efek antibakteri ekstrak etanol buah rimbang (Solanum torvum Sw.) sebagai alternatif bahan irigasi saluran akar terhadap pertumbuhan Porphyromonas gingivalis (in vitro). Skripsi. Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Sumatera Utara. Medan. 2021; 1–58.
21. Widyarman AS, Sumadi S, Agustin TP. Antibiofilm effect of Clitoria ternatea flower juice on Porphyromonas gingivalis in vitro. Journal of Indonesian Dental Association. 2018; 1(1): 7–12.
22. Purwaningsih D, Wulandari D. Uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun suruhan (Peperomia pellucida L. Kunth) terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853. Biota : Jurnal Ilmiah Ilmu- Ilmu Hayati. 2020; 5(1): 1–7.
23. Dalynn Biologicals. McFarland Standard For In Vitro Use Only. Catalogue No. TM50-TM60 Dalynn Biologicals Inc. 2014; Canada. 1-2.
24. Yosephine AD, Wulanjati MP, Saifullah TN, Astuti P. Mouthwash formulation of basil oil (Ocimum basilicum L.) and in vitro antibacterial and antibiofilm activities against Streptococcus mutans. Majalah Obat Tradisional. 2013; 18(2): 95–102.
25. Nurhasnawati H, Sukarmi S, Handayani F.
Perbandingan metode ekstraksi maserasi dan sokletasi terhadap aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun jambu bol (Syzygium malaccense L.). Jurnal Ilmiah Manuntung. 2017; 3(1): 91–95.
26. Kusumawati E, Supriningrum R, Rozadi R. Uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun kecombrang Etlingera elatior (Jack) R.M.Sm terhadap Salmonella typhi. Jurnal Ilmiah Manuntung. 2015; 1(1): 1–7.
27. Fajariani D, Gunadi A, Wahyukundari, MA. Daya antibakteri infusa kismis (Vitis vinifera L.) konsentrasi 100%, 50%, dan 25% terhadap
Streptococcus mutans. e-Jurnal Pustaka Kesehatan. 2017; 5(2): 339–345.
28. Wulansari ED, Lestari D, Khoirunissa MA. Kandungan terpenoid dalam daun ara (Ficus carica L.) sebagai agen antibakteri terhadap bakteri methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Pharmacon. 2020; 9 (2): 219–225. 29. Batubara I, Rafi M, Yolanda ML. Antioxidant, antibacterial, and degradation Streptococcus mutans biofilms activities of black pepper (Piper nigrum) seed extract. AIP Conference Proceedings. 2020; 2243: 1–5.
30. Lestari ALD, Noverita, Permana A. Daya hambat propolis terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Jurnal Pro-Life. 2020; 7(3): 237– 250.
31. Brito RCD, Silva GND, Farias TC, Ferreira PB, Ferreira SB. Standardization of the safety level of the use of DMSO in viability assay in bacterial cells. MOL2NET: International Conference Series on Multidisciplinary Sciences. 2017; 3 (2017): 1–5.
32. Sapara TU, Waworuntu O, Juliatri. Efektivitas antibakteri ekstrak daun pacar air (Impatiens balsamina L.) terhadap pertumbuhan Porphyromonas gingivalis. Jurnal Ilmiah Farmasi - Universitas Sam Ratulangi. 201; 5(4): 10–17.
33. Jagani S, Chelikani R, Kim DS. Effects of phenol and natural phenolic compounds on biofilm formation by Pseudomonas aeruginosa. Biofouling: The Journal of Bioadhesion and Biofilm Research.
2009; 25(4): 321–324. 34. Rondhianto., Wantiyah., dan Putra, F.M.
Penggunaan chlorhexidine 0,2% dengan povidone iodine 1% sebagai dekontaminasi mulut terhadap kolonisasi Staphylococcus aureus pada pasien pasca operasi anastesi umum. NurseLine Journal. 2016; 1 (1): 176–183.
35. Armiati, I.G.K. Ekstrak etanol kulit daun lidah buaya (Aloevera barbadensis Miller) konsentrasi 100% dapat menurunkan akumulasi plak gigi dan jumlah koloni bakteri Streptococcus mutans. Tesis. Program Studi Ilmu Biomedik Universitas Udayana. Denpasar. 2015.