## Pengaruh Pemberian Salep Kolagen Hidrolisat Ikan Sebagai Penyembuhan Luka Bakar Derajat IIB Berdasarkan Ekspresi
Fibroblast Growth Factor 2
(FGF-2) dan Fibroblas pada Tikus Putih ( Rattus norvegicus )
The Effect of Hydrolyzed Fish Collagen Ointment to Healing Burns Level IIB by Fibroblast Growth Factor 2 (FGF-2) and Fibroblast
in Rats ( Rattus norvegicus )
Lutfiana Pratiwi 1 *, Sasangka Prasetyawan 1 , Dian Vidiastuti 1
1 Progam Studi Kedokteran Hewan, Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Brawijaya *email: lutfianapratiwy@gmail.com

## ABSTRAK
Luka  bakar  derajat  IIB  merupakan  kondisi  hilangnya  jaringan  akibat paparan panas meliputi seluruh epidermis dan sebagian dermis. Obat gold standart yang yang sering digunakan adalah Silver sulfadiazine yang relatif mahal dan bersifat toksik dalam jangka waktu lama sehingga diperlukan alternatif  pengobatan  dari  bahan  alami  seperti  kolagen  hidrolisat bersumber dari ikan. Kolagen hidrolisat ikan bekerja dengan menarik sel imunitas yaitu makrofag yang akan memproduksi growth factor sehingga mampu  mempercepat  kesembuhan  luka.  Penelitian  ini  menggunakan rancangan  RAL  dengan  sampel  24  ekor  tikus  putih  jantan  dengan  berat badan 150-200g umur 8-12 minggu yang dibagi 4 kelompok yaitu kontrol positif, dan kelompok terapi kolagen hidrolisat ikan konsentrasi 5%, 7,5%, 10%  yang  diterapi  dua  kali  sehari  selama  10  hari.  Hasil  dari  penelitian menunjukkan bahwa konsentrasi salep kolagen hidrolisat ikan 10% adalah konsentrasi  terbaik  dari  semua  kelompok  terapi  yaitu  mampu meningkatkan ekspresi FGF-2 (36.65±1.24) % serta mampu meningkatkan jumlah  fibroblas  (40.06±1.24)  sel  dalam  fase  kesembuhan  luka.  Namun kedua hasil yang diperoleh dari konsentrasi salep kolagen hidrolisat 10% masih kurang efektif dibandingkan dengan obat Silver Sulvadiazine dalam meningkatkan  ekspresi  FGF-2  (41.69±0.95)  %  dan  meningkatkan  jumlah fibroblas  (46.50±1.66)  sel.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  salep kolagen  hidrolisat  ikan  dapat  digunakan  namun  masih  kurang  efektif dikarenakan kedua obat terapi memiliki mekanisme kerja yang berbeda.
Kata Kunci: Penyembuhan luka bakar derajat IIB, kolagen hidrolisat ikan, FGF-2, fibroblas

## ABSTRACT
Burns level IIB are a condition of tissue loss due to exposure to heat covering the entire epidermis and part of the dermis. The most commonly used gold standard drug (Silver sulfadiazine) is expensive coast and toxic in the long term that an alternative treatment of natural resources such as hydrolyzed collagen  sourced  from  fish.  Hydrolyzed  fish  collagen  act  by  attracting immune  cells  such  as  macrophages  that  will  produce  growth  factor  to accelerate  wound  healing.  This  experimental  study  by  ANOVA  with  24 samples of 8-12 weeks old male rats (Rattus norvegicus) weight 150-200g divided  into  4  groups  as  positive  control,  and  therapy  group  based  of hydrolyzed  fish  collagen  concentration  fish  5%,  7,5%,  10%  which  were treated twice a day for 10 days. The results of the study showed that the concentration  of  10%  hydrolyzed  fish  collagen  ointment  was  the  best concentration of all therapy groups that was able to increase the expression of FGF-2 (36.65 ± 1.24) % and was able to increase the number of fibroblasts (40.06 ± 1.24) in the wound healing phase. However, both results obtained from  the  10%  hydrolized  fish  collagen  ointment  concentration  were  less effective than Silver Sulvadiazine ointment, showed by the increasing of the FGF-2 expression (41.69 ± 0.95) % and increasing of fibroblasts (46.50 ± 1.66). The results showed that collagen can be used but still less effective because of the difference of mechanism of action between the two drugs. Keywords:  Healing  burns  level  IIB  ,  hydrolyzed  fish  collagen,  FGF-2, fibroblast

## PENDAHULUAN
Luka  bakar  merupakan  suatu bentuk kerusakan atau kehilangan jaringan  yang  disebabkan  adanya kontak  langsung  dengan  sumber panas,  paparan  listrik,  zat  kimia, maupun  radiasi  (Rahayuningsih, 2012). Menurut Sarimin (2009), luka bakar derajat kedua paling banyak ditemukan dengan jumlah 36 kasus atau 46,7% dari seluruh kasus luka bakar yang didapatkan. Luka bakar derajat  IIB  mengalami  kerusakan pada  seluruh  lapisan  epidermis dan 1/2 sampai 7/8 lapisan dermis
dengan  kelenjar  sebasea,  dan kelenjar  keringat,  serta  folikel rambut mudah lepas (Kamolz et al .,
2012).
Obat topikal yang menjadi gold standart pengobatan  luka  bakar derajat  IIB  di  pasaran  yaitu Silver sulfadiazine. Menurut  Fuadi  (2015) Silver sulfadiazine bersifat
antibakteri  serta  mampu  menarik sel  imunitas  untuk  menghasilkan sitokin  dan growth  factor dalam mempercepat  proses  kesembuhan luka.  Namun  beberapa  efek  obat tersebut  telah  dilaporkan  selain harga  yang  relatif  mahal,  tidak
dapat  diberikan  dalam  jangka panjang  karena  dapat  bersifat toksik  pada  luka  (Hosseinimehr et al ., 2010).
Alternatif  pengobatan  luka bakar    bahan  alam  yaitu  kolagen hidrolisat  yang  bersumber  dari ekosistem perairan ( marine colagen) yaitu ikan(Mothumari, 2017). Kolagen  hidrolisat  merupakan hasil  dari  proses  denaturasi kolagen  yang  bersumber  dari tulang, kulit maupun jaringan pada ikan,  sapi,  maupun  babi  (Sibilia et al., 2015). Menurut Yamamoto et al .
(2014)  kolagen  ikan  memiliki biokompatibilitas  yang  baik,  sifat antigenik  yang  rendah,  dan biodegradability . Menurut  Isofrah  dkk.  (2012), pengobatan  luka  bakar  secara topikal  lebih  efektif  karena  obat akan  mudah  diserap  kulit  dan fungsinya  dalam  melembabkan bertahan  lebih  lama.  Berdasarkan uraian  tersebut,  maka  perlu dilakukan  penelitian  mengenai pemanfaatan salep kolagen hidrolisat ikan dalam kesembuhan luka  bakar  dilihat  dari  adanya ekspresi Fibroblast  Growth  Factor 2 (FGF-2)  dan  peningkatan  jumlah fibroblas  pada  hewan  model  tikus putih ( Rattus norvegicus)

## BAHAN DAN METODE Bahan dan alat
Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  antara  lain  kolagen hidrolisat  ikan  (PEPTIPLUS ® XF), Silver  sulfadiazine, tikus  putih ( Rattus  norvegicus ),  pakan  minum tikus, normal  saline (NS)  0,9%, ketamin, xylazine ,  vaselin  album,
buffer  formalin 10%, aquadest proinjection, aquades, alkohol  70%, etanol  70%,  80%,  90%,  95%,  PBS, larutan xylol, antibodi primer FGF- 2,  antibodi  sekunder, Diamano benzidine , pewarna hematoxilin-eosin, asam asetat (CH3COOH) 9%.
Peralatan  yang  digunakan dalam penelitian ini yaitu kandang tikus, underpad , pembatas kandang, waterbath ,  objek  gelas,  pinset anatomis,  cawan  petri,  sentrifus, penangas  air,  timbangan  digital, termometer raksa, plat besi ukuran 2x4  cm 2 ,  pensil,  mikropipet, mikrotube,  oven, gloove ,  masker, pot  salep  60g,  kassa,  tisu,  spatula, plastik  bening,  gelas  ukur,  cawan porselen,  lumpang,  spuit  1cc  dan 3cc, seperangkat alat bedah, papan bedah,  pot  organ, cover  glass , blender, Mikroskop (BX51 ® ). Plat besi ditempelkan menggunakan  pinset  anatomis pada  punggung  tikus  selama  15 detik  tanpa  ada  tekanan,  besi diangkat  dan  dikompres  dengan kasa  yang  telah  dicelupkan  ke dalam larutan NS untuk menghentikan  perluasan  luka  di jaringan sekitar.

## Metode
Pembuatan  Luka  Bakar  Derajat IIB Metode  induksi  luka  bakar yang digunakan merupakan modifikasi dari penelitian Akhoondinasab et  al. (2014)  yaitu plat  besi  ukuran  2x4  cm 2 dengan ketebalan 2 mm dipanaskan dalam air mendidih suhu 100 o C selama 15 menit  dan  ditempelkan  pada bagian punggung tikus.
Pembuatan  Hidrolisat  Kolagen Ikan Kolagen hidrolisat ikan didapatkan  dalam  produk  jadi berbentuk  serbuk  dengan  berat
500g  setiap  kemasan.  Produk tersebut  memiliki  merk  dagang PEPTIPLUS ® XF  yang  telah mendapat sertifikat uji kandungan.
Pembuatan Salep Kolagen Hidrolisat Ikan Proses pembuatan salep diawali dengan menimbang semua bahan  yang  diperlukan  sesuai formula perhitungan salep kolagen hidrolisat  ikan  (Lampiran  5). Vaselin  album  dimasukkan  ke dalam  gelas  ukur  lalu  dileburkan diatas waterbath dengan suhu 50 0 C selama  kurang  lebih  15  menit. Setelah  meleleh,  hasil  leburan dimasukkan dalam cawan porselen dan  digerus  hingga  homogen  dan dingin.  Serbuk  kolagen  hidrolisat ikan  ditambahkan  sedikit  demi sedikit  sambil  digerus  hingga homogen  dan  menjadi  sediaan setengah padat. Sediaan ditimbang seberat 60 g dan dimasukkan dalam dalam pot salep.
Salep  hidrolisat  kolagen  ikan dibuat  dengan  memformulasikan serbuk  hidrolisat  kolagen  ikan (PEPTIPLUS ® XF)  dengan  bahan pembawa vaselin album
konsentrasi  5%,  7,5%,  10%  yang dibuat sebanyak 60 gram. Terapi  Salep  Kolagen  Hidrolisat Ikan
Pemberian salep kolagen hidrolisat  ikan  pada  tikus  dengan luka bakar derajat IIB sebanyak 0,5 g yang diberikan dua sekali sehari (kelompok terapi) selama 10 hari.

## Euthanasi dan Isolasi Kulit
Tikus  putih  jantan  dieutanasi pada  hari  ke-18  dengan  cara dislokasio  cervicalis,  kemudian diletakkan di atas papan bedah dan dalam  posisi  dorsal.  Daerah  kulit yang  akan  diambil  dibersihkan dulu  dari  rambut  yang  mulai tumbuh kembali dengan pencukur dan sampel kulit diangkat menggunakan scalpel blade dengan luas  ±  2x4  cm 2 dan  sedikit mengikutkan  jaringan  normal  di sekitarnya.  Sampel  kulit  dicuci menggunakan
NS kemudian dimasukkan  dalam  larutan buffer
No Nama bahan  5% 7,5 % 10 % 1 Kolagen hidrolisat ikan (g) 3 4,5  6 2 Vaselin album (g) ad d 60 add 60 ad d 60 Gambar 1.  Penempelan plat besi pada punggung tikus tanpa tekanan Tabel 1 Formulasi Salep
formalin 10%  dan  disimpan  dalam suhu ruang.
Prosedur Pembuatan Preparat dan Pewarnaan Immunohistokimia
Persiapan  reparat  yang  akan digunakan dalam pewarnaan IHK. Deparafinisasi  dilakukan  dengan pemberian  xylol  I,  II,  dan  III masing-masing selama 5    menit. Rehidrasi  dengan  memberikan etanol  absolut,  etanol  bertingkat yaitu 95%, 90%, 80%, 70%, aquadest masing-masing  selama  5  menit.
Blocking endogenous peroxidase dilakukan  dengan  memberikan H2O2 dalam  aquades  selama  10 menit. Preparat dicuci dengan PBS sebanyak  3x  masing-masing  5 menit. Pemberian superblok selama 10 menit. Proses pencucian sebanyak  3x  masing-masing  5 menit menggunakan PBS.
Antibodi  primer  FGF-2  1:1000 diinkubasi  pada  suhu  kamar selama semalam. Pencucian menggunakan  PBS  sebanyak  3x masing-masing  5  menit.  Antibodi sekunder rabbit anti rat igG berlabel biotin  diinkubasi  dengan  selama satu  jam  dengan  suhu  ruang. Pencucian kembali dengan PBS pH 7,4  selama  5  menit  3kali.  Inkubasi dengan HRP dilakukan pada suhu kamar selama 10 menit. Pencucian kembali menggunakan PBS sebanyak  3x  masing-masing  5 menit. Penambahan DAB+substrate  dengan microtube
ditutupi alumunium foil pada suhu kamar selama 10 menit dan hindari paparan  cahaya.  Slide  preparat dimasukkan dalam aquades.
Prosedur Pembuatan Preparat dan Pewarnaan Histopatologi Proses fiksasi dilakukan dengan  pemberian formaldehyde
10%.  Dehidrasi  menggunakan etanol  bertingkat  dari  konsentrasi rendah ke konsentrasi tinggi (70%, 80%, 90%, 95%). Clearing dilakukan dengan penambahan xylol I, II, dan III. Proses embedding menggunakan parafin  cair. Blocking dilakukan dengan  menggunakan  cetakan sesuai dengan ukuran   jaringan. Pemotongan jaringan menggunakan mikrotom. Deparafinisasi dengan penambahan xylol dua kali selama 5  menit.  Dehridasi  dengan  etanol absolut sebanyak 3 kali dan etanol bertingkat (95%,    90%, 80%, 70%) masing-masing  5  menit.  Slide direndam  di  dalam  aquades.
Pewarnaan slide
menggunakan eosin selama 5 menit lalu direndam
dalam aquades. Slide dimasukkan kedalam  etanol  betingkat  (70%, 80%,  90%,  95%)  masing-masing selama  10  menit.  Perendaman kedalam  etanol  absolut  selama  5 menit  sebanyak  3  kali.  Slide dimasukkan  dalam  xylol  selama  5 menit  sebanyak  2  kali  dan dikeringkan. Proses mounting menggunakan  ettelan  dan  ditutup cover  glass. Pengamatan  slide dibawah mikroskop cahaya.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Gambaran makroskopik
Berdasarkan  hasil  gambaran makroskopik  kesembuhan  luka yang diambil pada hari ke-10 pasca induksi  luka  bakar  derajat  IIB menunjukkan bahwa kelompok K+ mengalami  penyembuhan  yang paling  baik  dibandingkan  dengan kelompok perlakuan. Perlakuan K+ yang  diterapi Silver  sulfadiazine menunjukkan luas perlukaan yang semakin  mengecil,  mengering  dan keropeng  terlepas,  serta  adanya pertumbuhan  rambut  di  area  luka yang menandakan adanya perbaikan  folikel  rambut  pada lapisan dermis (Gambar 2).
Berdasarkan  hasil  gambaran makroskopik  kesembuhan  luka yang diambil pada hari ke-10 pasca induksi  luka  bakar  derajat  IIB menunjukkan bahwa kelompok K+ mengalami  penyembuhan  yang paling  baik  dibandingkan  dengan kelompok  perlakuan.  Pemberian Silver  sulfadiazine berpengaruh
lebih  baik  yang  dapat  membantu mengurangi  adanya  infeksi  dan menginduksi sel-sel imunitas sehingga  mempercepat  proses penyembuhan  luka.  Berdasarkan hasil  tersebut  diduga  bahwa  pada luka bakar terjadi infeksi sekunder dimana  terapi  salep  kolagen hidolisat  ikan  belum  mampu mengurangi resiko infeksi tersebut, karena  tidak  memiliki  kandungan antibiotik didalamnya.
Kelompok  P2  pasca  induksi luka  bakar  derajat  IIB  diterapi menggunakan salep kolagen hidrolisat  ikan  7,5%  menunjukkan bahwa  luas  perlukaan  pada  kulit sudah  mulai  mengecil  yaitu setengah  dari  luka  pasca  induksi pertama (Gambar 5.1 C). Kelompok
P2 menunjukkan kesembuhan luka yang  lebih  baik  dibandingkan dengan  P1  namun  kurang  baik dibandingkan dengan K+. Kelompok P3 menunjukkan kesembuhan  luka  yang  lebih  baik dibandingkan  dengan  P1  dan  P2 namun masih kurang baik dibandingkan  dengan  K+.  Pada kelompok  P3,  keropeng  pada  area luka sudah terlepas dan permukaan area luka sudah mulai mengecil  atau  berkurang,  hal  ini ditunjukkan dengan adanya kondisi luka yang sudah menutup sempurna dengan adanya pertumbuhan rambut (Gambar 5.1 D). Hal ini sesuai dengan pendapat
Latifa (2017) bahwa konsentrasi 10% adalah  konsentrasi  terbaik  yang mampu  mempercepat  penutupan luka.
Gambar 2 Gambaran  makroskopis perkembangan  kesembuhan  jaringan kulit  tikus  pada  hari  ke-10  pasca induksi  luka  bakar  derajat  IIB  pada semua  kelompok    (    area  yang masih mengalami luka), (      pertumbuhan    rambut area luka)
5.1  Efek Pemberian Salep Kolagen  Hidrolisat  Ikan  pada Tikus  Pasca  Luka  Bakar  Derajat IIB  terhadap  Ekspresi Fibroblast Growth Factor 2 (FGF-2) Fibroblast  Growth  Factor  2 (FGF-2)  diproduksi  oleh  platelet dan  makrofag  untuk  menarik leukosit  pada  fase  inflamasi,  dan diproduksi  oleh  sel  fibroblas  pada fase proliferatif dan berlanjut pada sintesis kolagen Pada hari kesepuluh termasuk dalam puncak proliferasi fibroblas,  dimana  fibroblas  akan mengekspresikan  FGF-2  sehingga FGF-2 jumlahnya meningkat. Berdasarkan  penelitian  Fuadi  dkk.
(2015) Silver  sulfadiazine bersifat sebagai  antibakteri  serta  mampu merangsang sel-sel seperti makrofag  untuk  menghasilkan growth  factor dan  sitokin  seperti TGF- β ,  EGF,  IL1  dan  lainnya sehingga mendukung proses penyembuhan luka. Rata-rata  ekspresi  kelompok P3  (36.65±1.24)%  menunjukkan persentasi yang lebih rendah secara signifikan (P<0.05) terhadap K+(41.69±0.95)% (Tabel 5.1). Perbedaan signifikan kelompok P3 dan  K+  menunjukkan  bahwa penggunaan salep hidrolisat kolagen  10%  masih  kurang  efektif dibandingkan dengan penggunaan obat Silver sulfadiazine.
Pada  penelitian  Paddle et  al. (2008)  efek  toksis  silver  pada  luka bakar  yaitu  menggangu  proses sintesis  pada  fibroblas  dan keratinosit.  Namun  penggunaan hingga mencapai toksik membutuhkan waktu cukup lama yang dibuktikan dengan penelitian  Bidgoli et  al. (2013) pemberian  nanopartikel  silver pada  terapi  21  hari  pasca  luka bakar  tidak  menunjukkan  gejala abnormal  pada  luka  serta  hasil pengujian  beberapa  organ  ginjal, liver , spleen ,  dan  lainnya  tidak
Kelompok Rata-rata Ekspresi FGF- 2±SD (%) K+(Kontrol positif) 41.69±0.95 c P1(Terapi salep hidrolisat kolagen ikan 5%) 24.75±2.86 a P2(Terapi salep hidrolisat kolagen ikan 7,5%) 28.37±1.78 a P3(Terapi salep hidrolisat kolagen ikan 10%)
36.65±1.24 b Gambar 3 Gambaran  mikroskopis ekspresi FGF-2 pada jaringan dermis kulit tikus metode immunohistokimia (400x) (A) Kontrol positif (B) terapi salep kolagen hidrolisat ikan5% (C) terapi salep kolagen hidrolisat  ikan  7,5%  (D)  terapi  kolagen hidrolisat kolagen ikan 10% ( menunjukkan ekspresi FGF-2)
Tabel 2 Ekspresi FGF-2
Keterangan : Perbedaan notasi menunjukkan
adanya perbedaan signifikan (P<0.05) antar kelompok
mengalami  kelainan.  Hal  ini menunjukkan  untuk  mencapai konsentrasi  toksik  yaitu  dengan pemberian  silver  diatas  terapi  21 hari pasca luka bakar.
5.2    Efek Pemberian Salep Hidrolisat  Kolagen  Ikan  pada Tikus  Pasca  Luka  Bakar  Derajat IIB terhadap Jumlah Fibroblas Hasil  perhitungan  fibroblas dilakukan dengan metode histopatologi pengecatan hematoxylin eosin. Fibroblas memiliki  karakteristik  ukuran yang  cukup  besar,  inti  berbentuk elips yang terwarnai ungu, memiliki sitoplasma yang terwarnai merah, serta kedua ujung sel berbentuk lancip (Gambar 5.3) Berdasarkan Tabel 5.2 rata-rata jumlah fibroblas pada K+ (46.50±1.66)  sel  lebih  tinggi  dan berbeda signifikan (P<0.05) dibandingkan  semua  kelompok terapi.  Hal  ini  menunjukkan proliferasi  fibroblas  serta  migrasi fibroblas  ke  area  luka  berjalan dengan baik dalam proses perbaikan jaringan. K+ merupakan kelompok  yang  diberikan  terapi obat Silver  sulfadiazine yang merupakan gold  standart dalam mengobatan  luka  bakar  derajat  II maupun III. Obat tersebut mengandung  agen  antibakteri yaitu  golongan  sulfonamid  yang dapat  menekan  adanya  infeksi bakteri  pada  luka.  Menurut  Fuadi dkk  (2015) Silver  sulfadiazine merupakan obat antibakteri golongan sulfonamid dengan mekanisme  berkompetisi  dengan substrat  PABA  untuk  sintesis enzim dihidropetroat sehingga Kelompok Jumlah Fibroblas Rata- rata±SD(sel) K+ (Kontrol positif) 46.50±1.66 d P1 (Terapi salep hidrolisat kolagen ikan 5%) 22.70±0.86 a P2 (Terapi salep hidrolisat kolagen ikan 7,5%) 32.56±0.28 b P3 (Terapi salep hidrolisat kolagen ikan 10%)
40.06±1.24 c Gambar 5.3 Gambaran    mikroskopis jumlah sel fibroblas   jaringan kulit tikus dengan pengecatan hematoxylin eosin perbesaran (400x) Keterangan :   (A)  Kontrol  positif  (B)  terapi salep hidrolisat kolagen ikan 5% (C) terapi salep kolagen hidrolisat  ikan  7,5%  (D)  terapi kolagen hidrolisat kolagen ikan 10%  (    menunjukkan  sel fibroblas) Tabel.3 Jumlah Fibroblas Tabel.3 Jumlah Fibroblas Keterangan: Perbedaan notasi menunjukkan adanya  perbedaan signifikan   (P<0.05) antar kelompok
mencegah  sintesis  asam  folat bakteri.  Perbedaan  mekanisme kedua  bahan  terapi  tersebut mengakibatkan proses kesembuhan  luka  yang  terjadi antara kelompok kontrol dan terapi berbeda.  Luka  bakar  merupakan tempat yang ideal untuk pertumbuhan  bakteri  karena  luka tersebut cenderung memiliki perlukaan  yang  luas  dan  kondisi yang cenderung basah (Nugraha et al., 2011).  Selain  hal  tersebut keberadaan  bakteri  dapat  dipicu dari  kedalaman  luka  bakar  seta ketidakseimbangan  flora  normal pada  kulit  akibat  paparan  luka bakar. Menurut Khazaeli et al. (2014) tikus putih memiliki luas permukaan kulit 377,2 cm 2 dengan ketebalan  kulit  1-1,6  mm  untuk luka bakar derajat IIB.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian yang  telah  dilakukan  dapat disimpulkan bahwa 1.  Salep kolagen hidrolisat ikan 10%
pada tikus putih ( Rattus norvegicus )  dengan  luka  bakar derajat IIB merupakan konsentrasi terbaik dibandingkan  konsentrasi  5% dan 7,5% yang dapat meningkatkan  ekspresi  FGF-2 (36.65±1.24)%
2.  Terapi  salep  kolagen  hidrolisat ikan konsentrasi 10% pada tikus putih ( Rattus norvegicus ) dengan luka bakar derajat IIB merupakan  konsentrasi  terbaik dibandingkan  konsentrasi  5% dan 7,5% yang dapat
meningkatkan  jumlah  fibroblas sebesar (40.06±1.24) sel
Saran  untuk  penelitian  lanjutan yaitu  meningkatkan  konsentrasi salep di atas 10% serta menambahkan  antibakteri  dalam salep kolagen hidrolisat ikan DAFTAR PUSTAKA ABA. 2014. American Burn Association:    National  Burn Repository Report   of    Data from    2003-2012.   National Burn    Repository. America.
Adinda, D. 2017. Pengaruh Pemberian Gel Ekstrak Teh Hijau ( Camellia sinensis )    Terhadap  Ekspresi IGF-1 dan Gambaran Histopatologi    Epidermis pada    Tikus    ( Rattus norvegicus ) Model Luka Terbuka    [Skripsi].
Fakultas Kedokteran    Hewan.
Universitas Brawijaya Akita, S., A. Kozo, and H. Akiyoshi.
2013.  Basic  Fibroblast  Growth Factor in    Scarless Wound Healing. Advances  in  Wound Healing Care 2(2):44-48
Bliska,  A.T.G.,  L.J.  Mar,  J.B  Jerzy, A.R.Dale,  P.R.  Lawrence,  A. Ahmed, and M.    A.   Kay. 2013.    Wound  Healing  The
Role of Growth Factor. Journal Drugs of today 39(10):787-800
Chai, H.J., H.L. Jing, and N.H. Han.
2010.  Effect  of  Sizes  and Corformations of    Fish Scale    Collagen  Peptides  on Facial    Qualities and Transdermal Penetration
Efficiency. Journal    Biomed  and Biotehnnology    11(55):1-9
Corwin, E. J. 2009. Buku Saku Patofisiologi .  EGC.,  Jakarta.  45- 46. Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia. 2013. Riset Kesehatan    Dasar    (Riskesdas) Laporan Nasional . Jakarta Fuadi, M.I., U. Elfiah, dan Musnawi. 2015. Jumlah fibroblas pada Luka bakar    Derajat II pada Tikus    dengan Pemberian Gel Ekstrak Etanol Kakao dan Silver sulfadiazine . Jurnal Pustaka Kesehatan 3(2):244-248 Granick,  M.S.,  and  R.L.  Gamelli. 2007. Surgical  Wound  Healing and Management .  CRC Press., Francis.   1-15 Hendarto,  K.R.  2017.  Studi  Terapi Kitosan Kerang Darah ( Anadara granosa )    Terhadap Luka Insisi    Hewan Model Nosokomial Dilihat    dari Ekspresi IL-1    dan Jumlah Sel  Radang  [Skripsi].  Fakultas Kedokteran Hewan. Universitas Brawijaya Isrofah,  Sagiran,  M.  Afandi.  2012. Efektifiktas Salep Ekstrak Daun Binahong    ( Anredera  Cordifolia (Tenn)  Stenis )  Terhadap  Proses Penyembuhan Luka    Bakar Derajat  2  Termal  pada  Tikus Putih    ( Rattus norvegicus ). Muhammadiyah Jurnal    of Nursing 2(3):29-34 Joseph, M.M., and L.C. Kloth. 2010. Wound Healing Evidence Based
Management .    4 th Ed. Contemporary  Perspectives  in
Rehabilitation. Davis Company.   Philadelphia Hosseinimehr, S.J., K. Ghasemali, A. Mohammad,  Z.  Peyman,  G. Maryam, and A. Amirhossein.    2010.  Effect  of Aloe Cream Versus Silver
Sulfadiazine for    Healing Burn  Wounds  in  Rats. Acta Dermatovenerol Croat 18(1):2-7
Kamolz, L.P., M.G. Jeschke, and R. E.    Horch.  2012. Handbook  of Burns    Volume 2: Recontruction and Rehabilitation .  Springer.,  New York.    52-53 Kanazawa.  2010. bFGF  Regulates P13-kinase-Rac1-Jnk pathway and promotes    Fibroblast  Migration in  Wound  Heaking .  PloS  One. 2010:    5(8)
http://www.plosone.org/artic le/i nfo%3Adoi%2F10.1371%2Fjour nal. po  ne.001  228. [20 November 2017] Khazaeli, P., M. Karamouzian, S. Rohani,  B.  Shadegirad,  and  N. Ghalekani. 2014.    Effect of
Minoxidil Gel on Burn Wound Healing in Rats. Iranian Journal of    Pharmaceutical Research 13(01):   243-251 Kumar,  B.S.A.,  V.  Prabhakarn,  K. Lakshman, R. Nandeesh, P.Subramanyam,    S. Khan, D. Ranganayakalu and N.V. Khrisna.    2008. Pharmacognostical    studies of Portulaca oleracea L . Rev Bras Farmacogn. 18:4 Latifa,  S.P.  2017.  Pengaruh  Gel Ekstrak Kolagen  Kulit  Ikan Nila    ( Oreochromis
niloticus ) 10%    terhadap Reepitelisasi pada Penyembuhan  Luka  Gingiva [Skripsi].  Fakultas  Kedoktera Gigi.Universitas Gadjah Mada
Lie,  J.,  C.  J.  Kirsner.  2007.
Pahophysiology of acute wound healing. Clinics  in Dermatology    25(1): 9-18
Marg, G. J., L.P. Kamolz, and S.
Shahrokhi. 2013. Burn Care and Treatment. A    Practical Guide.   Springer.  Canada.  14- 20. Mescher, A.L. 2016. Junqueira’r Basic
Histology  Text  and  Atlas. 4 th Edition.    Mc Graw  Hill Education., Indiana. 97-100 Moya, M.L., M.H Cheng, and J.J. Huang.  2010.  “The  effect  of FGF-1    loaded alginate    microbeads on neuvascularization andadipogenesia  in  a  vascular pedicle model   of adipose tissue   engginering”. JournalBiomaterials   31(10): 2816- 2826 Ohara, H., S. Ichikawa, M. Akiyama, and Fujimoto. 2010. Collagen-derivad dipeptide,   proline- hydroxyproline, Stimulated Cell Proliferation And Hyluruna acid   Syntesis Culture    Human Dermal Fibroblast. Journal    Dermatol
37(4):    330-338 Panjaitan, T.F.C. 2016. Optimasi Ekstraksi  Gelatin  Dari  Tulang Ikan    Tuna    ( Thunnus albacares ). Jurnal Wiyata 3(1):11-16 Ravikant, M., P. Soujana, and K. Manjunath. 2011. Heterogenecity of    Fibroblast.
Journal of oral and    maxillofacial 15: 247-250
The National Institute   for Occupational Safety and Health.
2014 . Immedietely    Dangerous to    Life or Health Concentration .    Centers for Disease Control    and Preventing(CDC) https://www.cdc.gov/niosh/i dlh.htm l&hl=en-ID. [10 Juni 2018] Tian, J., Kenneth, K.Y.W. Chi, K.H. Chun-Nam,  L.  Wing-Yiu,  Y.
Chiming, C.    Sen,  C.  and Paul,    K.H.T.  2008.  Topical
Delivery of Silver Nanoparticles    Promote Wound Healing. Chemical
Chem    2:129-136 Xiaoyan, Y.E., Shaokui. Z. Wenguo, Y.U. Wenglong, W.U. Xianggen, and Z.   Liming. 2008. Study on Nutrient  Component  ant  the Extracting condition    or  The Skin Gelatin of    Tilapia.
J South China    Fisheris  Science,
14: 55-60.
Werner, S. T. Kriegh., and H. Smola. 2007. H-Keratinocyte- Fibroblast    Interaction in Wound Healing. Journal  of Investigative    Dermatology 127: 998-1008 World  Health  Organization.  2012. Violence and Injury Prevention (VID) http://www.who.int/violence I njuryprevention/otherinjury/
burns/ en/index.html.
[24 Oktober 2017] Williams,  S.L  and  D.P,  Hopper. 2007. Understanding  Medical Surgical    Nursing .    3 rd Ed. Davis Company.,Philadelphia.  211- 215 Yamamoto,  K.,  K.  Igawa,  K. Sugimoto,   Y.  Yoshizawa,  K. Yanagiguchi, Y.    Ikeda,   S. Yamada,  and  H.  Yahashi. 2014.  Biological  Safety  of  Fish Tilapia Collagen. Biomed Research International 10: 1-9. Zhang,  X.K.  2013. An  Atlas  of Histology .    Springer  Bussines Media., New    York. 57-59 Zhang, Z., J. Wang, Y. Ding, and X.
Dai.    2015. Oral Adsministration of Marine Collagen  Peptides  Prepared
From  Chum  salmon  Skin Enhances    Cutaneus    Wound Healing and    Angiogenesis in Rats. Journal Sci   Food  Agric 91(2):2173-2179. Zhu, H., X. Wei, K. Biann, and F. Murad.  2018.  Effect  of  Nitric Oxide    of Skin Burn Wound Healing. Journal  of Burn Care and Research   29(5):1