## EKSPLORASI DAN KARAKTERISASI BAKTERI RHIZOBIUM ASAL TANAMAN Mucuna bracteata DI TANAH GAMBUT
( Exploration and Characterization of Rhizobium Bacteria from Mucuna bracteata in Peatland )
Isna Rahma Dini 1* , Wawan 1 , Hapsoh 1 , Rahma Devi 1
1 Staf Pengajar, Jurusan Agroteknologi, Fakultas Pertanian Universitas Riau Kampus Bina Widya KM. 12,5 Simpang Baru Pekanbaru 28293
*Penulis Korespondensi: isnarahmadini19@gmail.com

## ABSTRACT
The efficiency of fertilizing N on oil palm plants on peatlands in several companies is done  by  planting  legume  cover  crop,  one  of  which  is Mucuna  bracteata . This  plant can  form  root  nodules  because  it  can  symbiosis  with rhizobium bacteria  which  will make fixation of N 2 in the air so that the bound N elements can be utilized by plants. This bacterium grows naturally on legume cover crop. This study aims to explore and characterize  adaptive rhizobium bacteria  in  peatlands.  The  location  of  sampling  is done at PT. Jatimjaya Perkasa, Kubu District, Rokan Hilir Regency. Sampling of root nodules by stratified random sampling. The results obtained by eight bacterial isolates that  have  relatively  similar  macroscopic  and  microscopic  characteristics  and  belong to rhizobium based on the YEMA + CR and YEMA + BTB tests.
Keywords: Peat soil, Oil palm, Legume cover crop, Rhizobium

## PENDAHULUAN
Lahan gambut di Provinsi Riau sebagian  besar  dimanfaatkan  untuk perkebunan  kelapa  sawit  dimana  luas perkebunan  kelapa  sawit  pada  tahun 2011  lebih  dari  1,5  juta  ha  (Ditjen Perkebunan, 2011). Menurut Ma’ruf et al. (2017),  tanaman  kelapa  sawit membutuhkan  N  sebagai  unsur  hara essensial. Salah satu upaya pemenuhan kebutuhan  unsur  N bagi  kelapa  sawit
yaitu  dengan  penanaman  tanaman legum  cover  crop (LCC).  Jenis  LCC yang  paling  banyak  digunakan  di perkebunan kelapa sawit adalah Mucuna  bracteata .  Berdasarkan  hasil penelitian  Samedani et  al. (2014), peningkatan  hasil  kelapa  sawit  pada perlakuan M.bracteata dibandingkan dengan  tanpa  vegetasi  menunjukkan peningkatan  bobot  rata-rata  tandan buah segar kelapa sawit.
Penanaman M.bracteata pada tahan gambut diduga dapat menyumbang unsur N 2 ke dalam tanah.
Kondisi tersebut dicapai jika M.bracteata dapat  menambat  N 2 dari udara  melalui  bintil  akar  yang  telah bersimbiosis dengan rhizobium membentuk  akar  efektif.  Agus et  al.
(2008)  menyatakan  bahwa pH t anah gambut  di  Indonesia  sebagian  besar berkisar  antara  3-5. Hal  ini  yang
menyebabkan rhizobium diduga kurang  optimal  tumbuh  pada  lahan
gambut. Akan tetapi menurut Indrawati  (2000),  terdapat beberapa strain rhizobium yang  masih  hidup pada  tanah  gambut  pada  pH  sedikit  di bawah  netral  hingga  sedikit  alkali dengan kisaran pH 5,0 sedangkan pada pH  4,4  beberapa rhizobium tidak berkembang (Indrawati, 2000).
Walaupun  demikian,  beberapa hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa tanaman  legum  seperti M.bracteata (Hapsoh et  al. ,  2017),  tanaman  akasia
(Pamungkas  dan  Irfan,  2018)  dan tanaman  kedelai  (Hanafi,  2006)  dapat membentuk  bintil  akar  efektif  pada tanah  gambut.  Namun,  bintil  akar efektifnya  masih  beragam  atau  hanya
sebagian  bintil  yang  membetuk  akar efektif  pada  ketiga  tanaman  tersebut. Hal  ini  menandakan  bahwa  aktivitas rhizobium dalam  memfiksasi  N  masih beragam.  Oleh  sebab  itu,  perlu dilakukan pengembangan potensi tanaman legum di lahan gambut.
Salah satu cara untuk meningkatkan jumlah bintil akar efektif  pada  tanaman  legum  yang ditanam  pada  lahan  gambut  yaitu dengan  mengetahui  interaksi  antara bakteri rhizobium dengan  tanaman legum  dan  lingkungannya.  Langkah awal  untuk  tujuan  tersebut  yaitu dengan melakukan isolasi dan identifikasi  bakteri rhizobium dari berbagai  tanaman  legum  asal  tanah gambut.
Berdasarkan latar belakang tersebut maka perlu dilakukan penelitian  yang  berjudul  “Eksplorasi dan  Karakterisasi  Bakteri Rhizobium Asal  Tanaman M.bracteata di  Tanah Gambut”.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  dilakukan  di  PT. Jatimjaya  Perkasa  Kecamatan  Kubu Kabupaten
Rokan Hilir dan
Laboratorium Tanah Fakultas
Pertanian  Universitas  Riau.  Sampel penelitian  berupa  bintil  akar  diperoleh dari tanaman M.bracteata yang ditanam di  sekitar  tanaman  kelapa  sawit  pada perusahaan tersebut.
Penentuan Lokasi Sampling
Penentuan  lokasi  penelitian dilakukan  dengan  metode purposive sampling yaitu  dengan  memilih  lahan gambut yang ditanami tanaman
M.bracteata. Penentuan lokasi pengambilan  sampel  dengan stratified random sampling yaitu sampel diambil di  lahan  gambut  yang  ditumbuhi M.bracteata umur  satu  tahun,  umur dua  tahun,  serta  umur  tiga  tahun. Pengambilan sampel dilakukan dengan proportional  stratified  sampling yaitu dengan  menghitung  setiap  anggota antar  sub  populasi  dan  diambil sebanyak  10%  dari  total  masing- masing  sub  populasi.  Pengambilan sampel  dengan  metode  diagonal.  Pada setiap  titik  pengambilan  sampel  akar tanaman legum juga dilakukan pengambilan sampel tanah (Pamungkas, 2014).
Seleksi Nodul Tanaman Legum
Seleksi  nodul  dilakukan  untuk mendapatkan  isolat rhizobium yang efektif  dari  bintil  akar  leguminosa yang telah didapatkan. Ciri nodul yang efektif  yaitu  bila  dibelah  secara melintang akan memperlihatkan warna merah  muda  hingga  kecoklatan  di bagian tengahnya ( Pamungkas, 2014).

## Sterilisasi Nodul Tanaman Legum
Bintil akar tumbuhan leguminosa  yang  telah  didapat  dicuci bersih  dengan  cara  mengocok  bintil akar  dalam  aquades  steril  di  dalam tabung  reaksi  selama  satu  menit menggunakan  vortex  sebanyak  tiga kali ulangan. Setelah bersih bintil akar disterilkan menggunakan larutan dettol (10%,  7%,  5%,  3%,  dan  1%)  dengan cara  divortex  masing-masing  selama dua menit, kemudian bintil akar dicuci kembali tiga kali menggunakan aquades  steril  dengan  cara  divortex masing-masing  selama  satu  menit ( Pamungkas, 2014) .

## Isolasi Bakteri Rhizobium
Medium yang digunakan untuk mengisolasi  bakteri rhizobium dari nodul  akar  tanaman  legum  adalah yeast  extract  mannitol  agar (YEMA) dan yeast  extract  mannitol  broth
(YEMB).  Komposisi  media  YEMA yaitu mannitol 10  g; depotasium phosphate (K 2 HPO 4 .3H 2 O)  0,5  g; magnesium  sulphate (MgSO 4 .7H 2 O) 0,2  g; yeast  ekstrak 1  g; sodium cholide (NaCl)  0,1  g;  dan  agar  20  g dalam  1  L  aquades;  sedangkan komposisi media YEMB yaitu mannitol 10  g; depotasium  phosphate (K 2 HPO 4 .3H 2 O)  0,5  g; magnesium sulphate (MgSO 4 .7H 2 O)  0,2  g; yeast ekstrak 1 g, sodium cholide (NaCl) 0,1 g; dan calsium carbonate (CaCO 3 ) 1 g dalam  1  L  aquades.  Media  tersebut selanjutnya  disterilisasi  di  dalam autoclave  selama  15  menit  pada  suhu 121 o C dan tekanan 15 psi.
Kegiatan isolasi pertama kalinya dilakukan dengan
menggunakan  metode  streak  (gores). Nodul  dipecah  dan  diambil  1  ose kemudian digoreskan pada cawan petri yang berisi media YEMA. Inkubasikan pada suhu 35 o C selama 2x24 jam. Pilih satu  koloni  di  antara  yang  dominan dan pindahkan ke agar miring YEMA. Inkubasikan  untuk  pengujian  lebih lanjut (Saputra, 2014).
Identifikasi Bakteri Rhizobium
Identifikasi bakteri diawali dengan mengamati karakteristik morfologi  bakteri  secara  makroskopis (koloni,  bentuk  koloni,  dan  tepian koloni)  dan  mikroskopis  (pewarnaan gram, bentuk sel). Selanjutnya dilakukan identifikasi bakteri
rhizobium pada  dua  media  uji  yaitu YEMA+ congo  red (CR)  dan  YEMA+ brom  thymol  blue (BTB).  Pada pengujian media YEMA+BTB, apabila isolat  yang  tumbuh  berwarna  kuning dan  biru  maka  termasuk  golongan Rhizobium ,  sedangkan  pada  pengujian media  YEMA+CR,  apabila  terbentuk koloni  berwarna  merah  jambu  berarti koloni tersebut adalah koloni rhizobium . Congo red yang ditambahkan sebanyak 0,025 g, sedangkan BTB ditambahkan sebanyak  0,1  ml  dalam  1  L  media YEMA.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Karakteristik makroskopis dan mikroskopis  isolat  bakteri  Rhizobium asal tanaman legum di tanah gambut
Hasil  pengamatan  morfologi koloni  bakteri  secara  makroskopis dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil pengamatan makroskopis koloni bakteri Kode Isolat Ukuran Bentuk Tepian Elevasi Warna Koloni Gram Bentuk Sel IIDM 1 Kecil Sirkular Entire Cembung Putih Negatif Basil IIDM 2 Kecil Sirkular Entire Datar Putih kekuningan Negatif Basil IIDM 3 Kecil Sirkular Entire Cembung Putih kekuningan Negatif Basil IIDM 4 Kecil Sirkular Entire Datar Putih Negatif Basil IIDM 5 Kecil Sirkular Entire Cembung Putih Negatif Basil IIRM 1 Sedang Sirkular Entire Cembung Putih Negatif Basil IIRM 2 Kecil Sirkular Entire Cembung Putih Negatif Basil IIRM 3 Kecil Sirkular Entire Cembung
Putih Negatif Basil Keterangan: IIDM = isolat bakteri asal tanaman M. bracteata umur tanaman 3 tahun; IIRM = Isolat bakteri asal tanaman M. bracteata umur tanaman 2 tahun
Tabel  1  menunjukkan  bahwa hampir  seluruh    isolat rhizobium hasil isolasi  dan  pemurnian  mempunyai kesamaan  morfologi  koloni  yaitu memiliki  permukaan  koloni  yang cembung  dengan  tepi  koloni  rata  dan bertekstur  lengket.  Hal  ini  sesuai dengan  hasil  penelitian  Heliati  (2003) yang menyatakan bahwa bakteri koloni rhizobium berbentuk  cembung,  warna putih  dan  putih  susu  dengan  tekstur lengket  yang  merupakan  ciri  dari bakteri  dalam  skala  laboratorium.
Surtiningsih et al . (2009)
menambahkan  bahwa  karakteristik bakteri rhizobium secara  makroskopis adalah  warna  koloni  putih  susu,  tidak transparan,  bentuk  koloni  sirkuler, konveks,  semitranslusen,  diameter  2-4
mm    setelah    diinkubasi  dalam  waktu 3-5 hari pada media YEMA. Sari et al.
(2018) juga menambahkan, berdasarkan  pengamatan  morfologi koloni  pada  permukaan  agar  miring dan media cawan, hasil isolat rhizobium dari  tanaman  legum  yang diteliti  menunjukkan  hasil  yang  sama, yaitu:  bakteri  mempunyai  bentuk echinulate  ketika  ditumbuhkan  di media miring, dan ketika ditumbuhkan di  media  cawan  ukuran  koloni  besar, berwarna  putih  susu, opaque ,  tidak bisa  ditembus  cahaya,  bentuknya sirkular, elevasinya convex (cembung), permukaanya halus mengkilap, marginnya entire.
Umumnya  kolonir rhizobium menghasilkan  lendir  yang  sangat
banyak.  Hal  ini  mengindikasikan tingginya  produksi  eksopolisakarida
(EPS). Eksopolisakarida berfungi untuk meningkatkan viskositas sekeliling sel, sehingga dapat mengurangi jumlah O 2 dan mengurangi penekanan terhadap aktivitas nitrogenase,  melindungi  sel  bakteri dari  pengaruh  kondisi  tercekam  (pH, kekeringan,  fluktuasi  potensial  air),
mengkelat Al 3+ dan Mn 2+ , menghalangi difusi H 3 O + pada
permukaan sel, sehingga dapat menghalangi  sel  bakteri  dari  ion  yang bersifat  toksik  yang  sering  dijumpai pada  kondisi  tanah  masam  serta memacu  pembentukkan  gel  dengan adanya  Ca 2+ sehingga  berperan  dalam pelekatan  bakteri  pada  rambut  akar (Fuhrman, 1990).
Karakteristik morfologi mikroskopis  bakteri  diamati  melalui pewarnaan  gram.  Pewarnaan  gram merupakan  salah  satu  prosedur  yang paling banyak digunakan untuk menggolongkan berbagai bakteri
(Anuar et al ., 2014). Menurut
Rostinawati  (2008),  pewarnaan  gram digunakan untuk mengetahui morfologi  sel  bakteri  serta  untuk membedakan  bakteri  gram  positif  dan gram  negatif.  Dwidjoseputro  (2005) menyatakan  pada  umumnya  bakteri memiliki  bentuk  sel  batang  ( coccus ), bulat  ( bacil ),  dan  bengkok  ( spiril ). Gambar  1  menunjukkan  bahwa  hasil pewarnaan  gram  dari  delapan  isolat merupakan  bakteri  gram  negatif  dan berbentuk batang (basil). Hal ini sesuai dengan  pernyataan  Manalu  (2011) bahwa  bakteri rhizobium merupakan bakteri  gram  negatif  yang  berbentuk batang (basil).
Karakteristik  Isolat  Hasil  Uji  Media YEMA+Brom Thymol Blue (BTB)
Pengamatan isolat bakteri menggunakan  medium  YEMA+BTB digunakan  untuk  mengelompokkan bakteri rhizobium yang memliki pertumbuhan cepat dan lambat berdasarkan  produksi  asam  atau  alkali pada  media  (Harpreet et  al .,  2012). Hasil pengamatan isolat bakteri menggunakan  medium  YEMA+BTB dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Uji media YEMA+ Brom Thymol Blue (BTB)
Berdasarkan  Gambar  1  terlihat bahwa  delapan  isolat  dalam  media YEMA  yang  ditambah  dengan  BTB kelompok tumbuh cepat ( fast growing ) yang ditandai perubahan warna menjadi  kuning.  Purwaningsih  (2009) menyatakan bahwa bakteri yang ditumbuhkan  dengan  menggunakan media  seleksi  YEMA+BTB,  memiliki dua kecenderungan warna, yaitu warna kuning  dan  warna  biru.  Warna  biru menunjukkan  bahwa  bakteri  yang diisolasi pertumbuhannya lambat ( slow growing ),  sedangkan  apabila  bakteri berubah  warnanya  menjadi  kuning, maka bakteri tersebut merupakan jenis bakteri  yang  pertumbuhannya  cepat ( fast growing ).
Koloni bakteri Rhizobium yang tumbuh  pada  medium  mengandung BTB  akan  merubah  medium  menjadi
kuning  karena  adanya  produksi  asam oleh  mikroorganisme.  Shetta et  al . (2011)  menambahkan  bahwa  produksi asam  diamati  setelah  isolat  diinkubasi 72  jam  pada  suhu  28°C  dengan mengubah  warna  medium  menjadi kuning.  Menurut  Gyorgi et  al .  (2010), jenis  bakteri  yang  tumbuh  lambat digolongkan Bradyrhizobium yang memiliki  koloni  dengan  ukuran  kecil setelah  7-10  hari  inkubasi,  elevasi raised dan mucoid ,  umumnya  koloni berwarna  putih  atau  krem.  Hasil peneltian  ini  juga  didukung  oleh Pangaribuan  (2018)  yang  melakukan penelitian  pada  dua  lokasi  sampel tanah  asal  Jatinangor  dan  Ciparanje mengandung  bakteri  Brady rhizobium sp.  dan Rhizobium sp.,  serta  mikoriza jenis Glomussp. Isolasi bakteri indigenus  pada  inseptisols  ditemukan
jenis  bakteri Bradyrhizobium sp.  yang dicirikan pertumbuhan lambat 5
sampai  7  hari,  dan  memiliki  reaksi basa.
Gambar 2. Uji media YEMA+ Congo Red (CR)
Karakteristik  Isolat  Hasil  Uji  Media YEMA+Congo Red (CR)
Hasil  pertumbuhan  isolat  pada media  selektif  yang  dimodifikasi dengan  penambahan  reagen Congo Red (CR) menunjukkan adanya variasi respon  terhadap  larutan  indikator tersebut.  Pada  media  YEMA+CR, terlihat bahwa isolat tidak mampu atau hanya  sedikit  menyerap  warna  merah dari  CR.  Berdasarkan  hasil  pengujian menunjukkan  bahwa  semua  isolat tidak  mampu  atau  hanya  sedikit menyerap  warna  merah  dari  larutan indikator (Gambar 2).
Menurut  Soekartadiredja  (1992), salah  satu  ciri  khas  bakteri Rhizobium adalah  tidak  menyerap  warna  merah pada  media  yang  mengandung  CR. Warna  yang  ditunjukkan  dari  bakteri Rhizobium sp.  pada  umumnya  putih hingga merah muda apabila ditumbuhkan  pada  media  seleksi, bentuk koloni merata datar pada cawan petri,  warna  koloni  putih atau  warna susu  dengan  tekstur  yang  lengket. Hasil  penelitian  ini  didukung  oleh Purwaningsih (2005) yang menyatakan bahwa  warna  yang  ditunjukkan  dari bakteri Rhizobium sp.  pada  umumnya putih  hingga  merah  muda  apabila
ditumbuhkan  pada  media  seleksi, bentuk koloni merata datar pada cawan petri,  warna  koloni  putih  atau  warna susu  dengan  tekstur  yang  lengket.  Hal ini  didukung  oleh  penelitian  yang dilakukan  oleh  Shetta et  al .  (2011) yang  menyatakan  bahwa  semua  isolat rhizobium yang  ditumbuhkan  pada media  yang  mengandung  CR  tidak menyerap  CR  sehingga  mengubah koloni  bakteri  menjadi  warna  merah muda.
Menurut  Purwaningsih  (2005), apabila  koloni  menyerap  CR  dan merubah  warna  koloni  menjadi  merah maka  bakteri  tersebut  bukan  termasuk golongan rhizobium .  Hal  ini  didukung oleh  hasil  peneltian  Sari et  al. (2018) yang  menemukan  isolat  bakteri  pada media  YEMA+CR  yang  berwarna merah  kemungkinan  bukan  bakteri
rhizobium ,  karena  bakteri  tersebut menyerap  warna  merah  dari  media yang  mengandung  CR,  seperti  telah disebutkan  di  atas  bahwa  ciri-ciri bakteri rhizobium tidak  menyerap warna  merah  pada  media  YEMA+CR. Jadi  bakteri  tersebut  bukan  golongan rhizobium .  Ada  banyak  jenis  bakteri rhizobium dalam  satu  tanaman  saja.
Bakteri rhizobium masuk  ke  dalam akar  legum  melalui  rambut  akar  atau secara  langsung  ke  titik  munculnya akar  lateral.  Rambut  akar  merupakan bagian  tanaman  yang  pertama  kali dapat  memberikan  respons  karena terinfeksi rhizobium di  dalam  bintil akar.  Tidak  hanya  terdapat  satu  strain rhizobium saja,  mungkin  dua  atau lebih  strain  hidup  bersama-sama  di dalam  satu  bintil  akar.  Meskipun demikian,  beberapa  genus  hanya ditemukan pada tanaman inang tertentu (spesifik) saja. Strain rhizobium mampu  menginfeksi  legum dengan melepaskan polisakarida spesifik  yang  menyebabkan  lebih banyak  aktivitas  pektolitik  oleh  akar (Nyakpa dan Yusuf, 1988).

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  isolasi  dan identifikasi  isolat  bakteri  dari  bintil akar tanaman Mucuna bracteata diperoleh  sebanyak  delapan  isolat bakteri rhizobium dengan  karakter morfologi  isolat  yang  hampir  sama. Berdasarkan  pengamatan  uji  media YEMA+BTB, dan uji media YEMA+CR menunjukkan bahwa
semua  isolat  yang  diperoleh  tergolong bakteri rhizobium .

## SARAN
Hasil  pengamatan  morfologi dan  fisiologis  bakteri  belum  dapat memastikan  identifikasi  bakteri  yang diperoleh,  sehingga  untuk  mengetahui spesies bakteri tersebut perlu dilakukan identifikasi lebih lanjut yaitu secara molekuler.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih disampaikan kepada LPPM Universitas Riau melalui  dana  DIPA  Universitas  Riau dengan Nomor
kontrak:
639/UN19.5.1.3/PT.01.03/2019  yang telah mendanai kegiatan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Agus,  F.,  dan  I.G.M.  Subiksa.  2008. Lahan  Gambut:  Potensi  untuk Pertanian dan Aspek Lingkungan.  Balai  Penelitian Tanah. Bogor. Anuar, W., D. Andi dan C. Jose. 2014.
Isolasi  Bakteri  Selulolitik  dari
Perairan  Dumai. Jurnal  Online Mahasiswa . Vol. 1(2). Ditjen  Perkebunan.  2011.  Kebijakan Pengembangan  Kelapa  Sawit Berkelanjutan. Makalah disampaikan pada Seminar
Implementasi RSPO di Indonesia.  Jakarta,  10  Februari 2011. Dwidjoseputro,  D.  2005.  Dasar-Dasar Mikrobiologi. Djambatan. Jakarta. 214 hal. Fuhrman,  B.S.  1990.  Adolescence, adolescent.  London:  Foresman and Company.
Gyorgi,  E.,  G.  Mara,  I.  Mathe,  M.,  E.
Laslo,  K.  Marialigeti,  B.  Albert, F.  Oancea,  and  S.  Lanyi.  2010. Characterization  and  Diversty  of the  Nitrogen  Fixing  Microbiota from a Specific Grassland Habitat  in  the  Ciuc  Mountains. Romanian Biotechnological Letter . Vol. 5(4): 5474-5481.
Hapsoh,  Wawan,    E.  Lupitasari.  2017.
Effects  of  the  Difference  Age  of Mucuna  bracteata Toward  Soil Chemical  Properties in  Peatland. Journal  of  Applied  Science  and Technology . Vol. 1(2): 18-22.
Hanafi,  A.  2006.  Isolasi  dan  Uji Potensi  Rhizobia  dari  Bahan
Asal Tanah Gambut pada Tanaman  Kedelai  ( Glycine  max (L).  Merrill).  Skripsi  (Tidak dipublikasi). Universitas Sumatera Utara. Medan. Heliati,  I.  2003.  Teknik  Isolasi Rhizobium Alam  dari  Tanah. Prosiding. Temu Teknis
Fungsional  Non  Peneliti.  Bogor.
Hal. 62-65.
Harpreet, K.,  P. Sharma, N.  Kaur, and B.S.  Gill.  2012.  PHenotypic  and Biochemical  Characterization  of Bradyrhizobium and Ensifer spp. Isolated from Soybean Rhizosphere. Bioscience Discovery . Vol, 3(1): 40-46.
Indrawati.  2000.  Fiksasi  nitrogen  (N2) oleh  Bakteri Rhizobium pada
Tanaman Leguminoceae .  Vol,
7(2). Ma’ruf,  A.,  C.  Zulia.,  dan  Safruddin.
2017. Legume  Cover  Crop di Perkebunan Kelapa Sawit. Forthisa Karya. Yogyakarta. Manalu, M.H.I. 2011. Aplikasi Bakteri Penambat Nitrogen dengan Media  Tanah  Gambut  Terbakar dan  Tidak  Terbakar  pada  Semai Acacia  crassicarpa Cunn.  Ex- Benth. Skripsi (Tidak dipublikasikan). Institut Pertanian Bogor. Bogor. Nyakpa dan M. Yusuf. 1988.
Kesuburan  Tanah.  Universitas Lampung. Lampung.
Pamungkas,  R.D.S.  2014.  Eksplorasi
dan  Isolasi  Bakteri Rhizobium dari  Bintil  Akar  Tumbuhan Leguminosa  di  Lahan  Gambut Kampus UIN Suska Riau Pekanbaru. Skripsi (Tidak dipublikasikan). Universitas Islam  Negeri  Sultan  Syarif Kasim Riau. Pekanbaru. Pamungkas,  R.D.S.  dan  M.  Irfan. 2018.  Isolasi  Bakteri Rhizobium
dari Tumbuhan Leguminosa
yang Tumbuh di Lahan Bergambut.  Universitas  Islam Negeri  Sultan  Syarif  Kasim
Riau. Jurnal Agroteknologi . Vol, 9(1): 31-40. Pangaribuan,  N.  2018.  Eksplorasi Mikroorganisme Indigenus Inseptisols. Jurnal  Matematika, Sains, dan Teknologi. Vol. 19(2): 80-88.
Purwaningsih,  S.  2005.  Seleksi  Biak
Rhizobium dari  Wonogiri,  Jawa Tengah terhadap  Pertumbuhan
Tanaman  Kedelai  ( Glycine  max L.)  pada  Media  Pasir Steril  di
Rumah Kaca. Jurnal Biodiversitas . Vol. 6: 168-171. Purwaningsih, S. 2009. Populasi Bakteri Rhizobium di Tanah pada beberapa  Tanaman  dari  Pulau Buton, Kabupaten Muna, Propinsi  Sulawesi  Tenggara. J. Tanah Trop . Vol. 14(1): 65-70.
Rostinawati. 2008. Skrining dan
Identifikasi  Bakteri  Penghasil
Enzim  Kitinase  dari  Air  Laut  di Perairan  Pantai  Pondok  Bali. Fakultas  Farmasi  Universitas Padjadjaran. Jatinangor.
Samedani,  B.,  A.S.  Juraimi,  S.A.S.
Abdullah,  M.Y.  Rafii,  A.A. Rahim,  dan  M.P.  Anwar.  2014. Effect  of  Cover  Crop  on  Weed
Community and  Oil Palm Yield. Journal Agriculture Biotechnology . Vol. 16: 23-31
Saputra,  Riko,  A.  2014.  Isolasi  dan Identifikasi  Bakteri Rhizobium dari Akar Tanaman Alfafa
( Medicago  sativa L ). Skripsi (Tidak dipublikasikan). Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim. Malang. Sari,  E.,  A.N.  Flatian,  Z.I.  Sari,  E., Sulaeman.  2018.  Isolasi  dan
Karakterisasi Rhizobium dari Glycine  max L.  dan Mimosa pudica Linn. Jurnal  Penelitian Biologi,  Botani,  Zoologi  dan Mikrobiologi . Vol. 3(2). Shetta,  N.D.,  T.S.  Al-Shaharani,  and M. Abdel-Aal. 2011. Identification and Characterization  of Rhizobium Associated with  Woody  Legume Trees Grown under Saudi Arabia
Condition. AmericanEurasian Journal Agriculture and Environment  Sciences .  Vol.  10 (3): 410-418.
Soekartadiredja, E.M. 1992. Perubahan Infektivitas dan Efektivitas Penambat  Nitrogen  pada  Galur Rhizobium Setelah  Perlakuan Pasasi  in  Vivo.  Tesis  (Tidak dipublikasikan). Universitas Padjadjaran. Bandung. Surtiningsih T., Farida dan T. Nurhayati.  2009.  Biofertilisasi Bakteri Rhizobium pada
Tanaman  Kedelai    ( Glycine max (L)  Merr). Berkala  Penelitian
Hayati . Vol. 15: 31-35.