Cite this Pratiwi, A.A., Mulyadi, D. and Anwar, D.I. (2023) ‘Validation of Analytical Method of Testing Cefotaxime Sodium in Injection Powder  Preparation  by  High-Performance  Liquid  Chromatography’, Berkala  Ilmiah  Kimia  Farmasi ,  10(2),  pp.  26-30.  DOI: 10.20473/bikfar.v10i2.47179.
Copyright: ©2023 by the authors. Submitted for possible open-access publication under the terms and conditions of the Creative Commons Attribution-ShareAlike 4.0 International (CC BY-SA) license

## Validation of Analytical Method of Testing Cefotaxime Sodium in Injection Powder Preparation by High-Performance Liquid Chromatography
Validasi Metode Analisis Pengujian Sefotaksim Natrium dalam Sediaan Serbuk Injeksi dengan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
Aneu Aryani Pratiwi 1) *, Dikdik Mulyadi 1) , Devi Indah Anwar 1)
1 Study Program of Chemistry, Faculty of Science and Technology, Universitas Muhammadiyah Sukabumi, Sukabumi, Indonesia
*Corresponding author E-mail: aneudp4@gmail.com
Article History:
Received: July 2, 2023; Revised: July 9, 2023; Accepted: November 30, 2023; Online: November 30, 2023

## ABSTRACT
Cefotaxime sodium was an antibiotic drug included in the third-generation cephalosporin group. The aim of this research was to validate the method used for the analysis of cefotaxime sodium injection powder using HPLC. Parameters performed in this study included system suitability, selectivity, linearity, accuracy, precision, robustness, Limit of Detection (LOD), and Limit of Quantitation (LOQ). In this study, the mobile phase used was phosphate buffer pH 6,25 with methanol in the ratios of (30:70), (40:60), (50:50), (60:40), and (70:30) v/v. The analysis was carried out using a 150 × 4,6 mm 5μm C18 column and phosphate buffer pH 6,25 with methanol (40:60) v/v as a mobile phase with a flow rate of 1 mL/min, and a detector at a wavelength of 235 nm. The results showed that the system suitability test results met the requirements, with a plate number of 2288, a standard deviation of 0,93%, and a tailing factor of 1,3. The linearity results met the requirements of r ≥ 0,999 with LOD and LOQ values of 3,3894 ×10⁻⁴ mg/mL and 1,0271 ×10⁻³ mg/mL, respectively. The accuracy results obtained a recovery value of 99,30% and an RSD of 0,48%. Precision results of repeatability and intermediate precision had RSDs of 0,38% and 0,85%, respectively. Robustness test  results  obtained  a  recovery  value  of  100,25%  and  an  RSD  of  0,85%.  The  results  showed  that  the recovery values (98-102%) and RSD ≤ 1,5% were in accordance with the validation requirements. It was concluded  that  the  validation  of  the  proposed  method  was  recommended  and  could  be  used  for  routine analysis.
Keywords:  Cefotaxime Sodium, Method Validation, HPLC

## ABSTRAK
Sefotaksim natrium merupakan obat antibiotik yang termasuk dalam golongan sefalosporin generasi ketiga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan validasi metode untuk analisis sefotaksim natrium dalam sediaan serbuk  injeksi  dengan  Kromatografi  Cair  Kinerja  Tinggi  (KCKT).  Parameter  yang  dianalisis  dalam penelitian  ini  meliputi  kesesuaian  sistem,  selektivitas,  linearitas,  akurasi,  presisi, robustness , Limit  of Detection (LOD) dan Limit of Quantitation (LOQ). Fase gerak yang digunakan yaitu dapar fosfat pH 6,25 dan metanol dengan perbandingan (30:70), (40:60), (50:50), (60:40) dan (70:30) v/v. Analisis dilakukan menggunakan kolom C18 150 × 4,6 mm 5μm dengan menggunakan fase gerak terdiri dari dapar fosfat pH 6,25 berbanding metanol (40:60) v/v, panjang gelombang 235 nm dengan kecepatan alir 1 mL/menit. Hasil penelitian  menunjukkan  kesesuaian  sistem  memenuhi  persyaratan  yaitu plate  number 2288,  simpangan baku 0,93% dan tailing factor 1,3.  Hasil  linearitas  memenuhi  persyaratan dengan nilai  r ≥ 0,999 dengan nilai LOD 3,3894 ×10 -4 mg/mL dan nilai LOQ 1,0271 ×10 -3 mg/mL. Hasil akurasi 99,30%, RSD 0,48%, presisi  keberulangan    RSD    0,38%,    presisi    antara    RSD    0,85%.  Hasil  uji robustness diperoleh  nilai perolehan  kembali  100,25%,  RSD  0,85%.  Hasil penelitian  sesuai  dengan  syarat  nilai  perolehan  kembali (98-102%) dan RSD ≤ 1,5%.
Kata kunci: Sefotaksim Natrium, Validasi Metode, HPLC

## PENDAHULUAN
Antibiotik  merupakan  obat  yang  digunakan  untuk mencegah  dan  mengobati  infeksi  yang  disebabkan  oleh mikroba. Salah satu jenis obat antibiotik ialah sefotaksim
( Gambar  1 )  yang  termasuk  golongan  sefalosporin generasi  ketiga  dan  efektif  membunuh  bakteri  Gram negatif (PERMENKES RI, 2011; Radji, 2014). Antibiotik ini  digunakan  untuk  mengobati  infeksi  dan  sering diresepkan pada anak-anak dan orang dewasa.
Gambar 1. Struktur Sefotaksim Natrium (DEPKES RI, 2020)
Setiap metode yang akan digunakan dalam pengujian obat  harus  mampu  memberikan  hasil  yang  terpercaya, karena  itulah  perlu  adanya  proses  verifikasi  ataupun validasi  sebelum  metode  tersebut  digunakan  untuk analisis rutin (Ravisankar et al ., 2015). Adanya perbedaan alat, bahan kimia, keterbatasan alat dan kondisi lain yang bisa menyebabkan metode tersebut tidak dapat digunakan secara keseluruhan, sehingga sering dilakukan modifikasi atau  penyederhanaan  metode  (Nasution,  2006).  Validasi metode  analisis  merupakan  suatu  tindakan  penilaian terhadap  parameter  tertentu,  berdasarkan  percobaan laboratorium,  untuk  membuktikan  bahwa  parameter tersebut  memenuhi  persyaratan  untuk  penggunaannya. Validasi metode analisis bertujuan untuk mengkonfirmasi bahwa  metode  analisis  tersebut  dapat  sesuai  untuk peruntukannya (Gandjar & Rohman, 2007).
Metode  Kromatografi  Cair  Kinerja  Tinggi  (KCKT) merupakan salah satu metode yang dapat digunakan untuk menetapkan  kadar  dalam  obat.  Pemilihan  metode kromatografi  didasarkan  beberapa  hal,  baik  berdasarkan molekul obat yang akan dianalisis, model/kondisi KCKT yang digunakan, serta perangkat yang menyusun kinerja KCKT tersebut (Hadjar & Ibnu, 2011).
Penelitian  Sofyan et  al .,  (2009)  melaporkan  bahwa validasi  metode  senyawa  sefotaksim  secara  KCKT dengan fase gerak larutan dapar fosfat 0,01 M pH 4,6 dan metanol (80:20) kecepatan alir 0,8 mL/menit menghasilkan beberapa parameter validasi yang memenuhi persyaratan dan membutuhkan waktu analisis sekitar 7-10 menit (Sofyan et al ., 2009). Pada penelitian Al-Hakkani  (2020)  tentang  validasi  metode  analisis sefotaksim secara KCKT dengan fase gerak larutan dapar fosfat  pH  6,15  dan  metanol  (130  :  1000  v/v) membutuhkan waktu analisis sekitar 15 menit (Hakkani, 2020). Analisis dikatakan baik jika diperlukan waktu yang singkat dan menghasilkan daya pisah tinggi (Gritter et al ., 1991). Beberapa faktor yang mempengaruhi hasil analisis dalam KCKT di antaranya yaitu fase gerak, jenis, panjang, diameter, dan suhu kolom serta kecepatan alir fase gerak (Amin et al ., 2016).
Pada  penelitian  ini  akan  dilakukan  optimasi  dan validasi  metode  analisis  pada  sefotaksim  sediaan  serbuk injeksi  secara  KCKT  dengan  mengubah  perbandingan fase  gerak,  kolom  dan  pelarut  agar  mendapatkan  waktu retensi yang lebih cepat dan efisien.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Alat
Alat  yang  digunakan  adalah  neraca  analitik (ShimadzuAP225WD),  labu  ukur  20  mL  (pyrex),  gelas kimia 1000 mL, KCKT Shimadzu LC2010, millex syringe filter 0,45 µm, kolom C18 125 × 4 mm 5µm, kolom C18 150  mm  ×  4,6  5µm  dan  kolom  C18  250    ×  4  mm  5µm vakum kaca, degasser elma ultrasonic, syringe 25 mL, pH meter, pipet mohr 5 mL dan pipet volumetrik 2 mL.

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  adalah  standar  sefotaksim natrium  (Mersi), purified  water ,  metanol  (J.T.  Baker), asam fosfat (Merck), disodium hidrogen fosfat (Merck).

## Prosedur Kerja Kondisi Pengerjaan KCKT
Adapun  kondisi  pengerjaan  KCKT  ialah  sebagai berikut:
Kolom : C18 125 × 4 mm 5µm C18 150 × 4,6 mm 5µm C18 250 × 4 mm 5µm Aliran pompa : 1 mL/menit Volume injek : 20µL Pelarut : Air
Panjang gelombang detektor   : 235 nm

## Pembuatan Fase Gerak Dapar Fosfat pH 6,25
Menimbang disodium hidrogen fosfat sebanyak 7,1 gram, kemudian larutkan dengan air 800 mL dalam gelas piala  1000  mL,  diaduk  sampai  homogen.  Larutan  diatur hingga  diperoleh  pH  6,25  ±  0,05  dengan  menambahkan asam  fosfat.  Tambahkan  air  suling  hingga  1000  mL, dihomogenkan  kemudian  disaring  menggunakan  vakum kaca.

## Pembuatan  Larutan  Induk  Standar  Sefotaksim Natrium
Baku  standar  sefotaksim  natrium  ditimbang sebanyak 21 mg, dimasukkan ke dalam labu ukur 100 mL, ditambah pelarut, kemudian disonikasi selama ± 10 menit, ditambah  air  suling  hingga  tanda  batas,  kemudian dihomogenkan.

## Uji Kesesuaian Sistem
Larutan induk standar sefotaksim dipipet sebanyak 2 mL ke dalam labu ukur 20 mL tambahkan pelarut hingga tanda batas, selanjutnya dihomogenkan. Sebanyak 5 kali pengulangan  penyuntikan  menggunakan  fase  gerak kombinasi  dapar  fosfat  pH  6,25  berbanding  metanol dengan  perbandingan  (30:70),  (40:60),  (50:50).  (60:40) dan  (70:30)  v/v.  Syarat plate number yang  tidak  kurang dari  1000 ,  tailing  factor kurang  dari  2  dan  simpangan baku (RSD) kurang dari 1,5%.

## Uji Spesifisitas/Selektivitas
Larutan  sampel  dan  larutan  standar  sefotaksim dipipet masing-masing 2 mL ke dalam labu ukur 20 mL, ditambah  pelarut  hingga  tanda  batas  kemudian dihomogenkan. Suntikkan secara terpisah larutan sampel 100%,  larutan  standar  100%,  fase  gerak  dan  pelarut masing-masing  sebanyak  tiga  kali  replikasi  ke  dalam sistem KCKT.

## Uji Akurasi
Untuk  pengukuran  akurasi  80%,  100%  dan  120% larutan sampel dipipet masing-masing sebanyak 1,8 mL, 2  mL  dan  2,2  mL  kemudian  masing-masing  secara terpisah dimasukkan ke dalam labu ukur 20 mL, ditambah pelarut  hingga  tanda  batas,  kemudian  dihomogenkan. Disuntikkan  secara  terpisah  larutan  sampel  80%,  100% dan 120% masing-masing sebanyak tiga kali replikasi ke dalam sistem KCKT.

## Uji Linearitas
Pengukuran linearitas 80%, 90%, 100%, 110% dan 120%  masing-masingg  larutan  induk  standar  sefotaksim dipipet sebanyak berturut-turut 1,6 mL, 1,8 mL, 2 mL, 2,2 mL dan 2,4 mL, kemudian secara terpisah dimasukkan ke dalam  labu  ukur  20  mL,  ditambah  pelarut  hingga  tanda batas, selanjutnya dihomogenkan. Kemudian disuntikkan secara  terpisah  masing-masing  sebanyak  satu  kali replikasi ke dalam sistem KCKT. Kriteria keberterimaan yaitu koefisien korelasi ≥ 0,990.

## Uji Presisi Presisi Keberulangan
Larutan  sampel  100%  dipipet  sebanyak  2  mL  ke dalam  labu  ukur  20  mL,  ditambah  pelarut  hingga  tanda batas  kemudian  dihomogenkan.  Disuntikkan  larutan sampel  sebanyak  enam  kali  replikasi  ke  dalam  sistem KCKT.

## Presisi Antara
Uji  presisi  keberulangan  dilakukan  dengan  analis yang  berbeda.  Kriteria  keberterimaan  untuk  presisi keberulangan dan presisi antara yaitu %RSD ≤ 1,5%.

## Uji Robustness
Uji  presisi  keberulangan  dilakukan  setelah  sampel disimpan  selama  24  jam  dan  menggunakan  larutan standar yang baru.

## Uji LOD dan LOQ
Uji LOD dan LOQ dihitung berdasarkan kemiringan garis  dan  simpangan  baku intercept kurva  standar, diperoleh  dari  penentuan  standar  deviasi  dari  respon dengan LOD = 3,3 × (SD/S), nilai LOQ = 10 × (SD/S). Nilai SD adalah standar deviasi dari kurva kalibrasi dan S adalah slope dari kurva kalibrasi.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Uji Kesesuaian Sistem
Penelitian  ini  dilakukan  pengembangan  fase  gerak campuran larutan dapar fosfat pH 6,25 ± 0,05 berbanding metanol  dengan  perbandingan  (30:70),  (40:60),  (50:50),
(60:40)  dan  (70:30)  v/v.  Kondisi  analisis  pengujian sefotaksim  natrium  dalam  sediaan  serbuk  injeksi menggunakan tiga kolom C18 125 × 4 mm, 150 × 4,6 mm dan 250 × 4 mm. Kemudian ditentukan kondisi optimum yang  sesuai  dengan  Farmakope  Indonesia  untuk selanjutnya dilakukan validasi  metode analisis. Hasil uji kesesuaian  sistem  untuk  kolom  C18  125  ×  4  mm ditunjukkan pada Tabel 1 .
Tabel 1. Hasil Uji Kesesuaian Sistem Fase Gerak Larutan Dapar Fosfat  pH  6,25  ±  0,05  dengan  Metanol  pada  Berbagai
Perbandingan Perbandingan Waktu Fase Gerak Waktu Retensi (menit) Tailing Factor Plate Number 30:70 1,18 0,79 229,46 40:60 1,20 1,04 677,06 50:50 1,27 1,06 942,02 60:40 1,53 1,16 1344,72 70:30 2,16 0,85 1452,97
Hasil  uji  kesesuaian  sistem  untuk  kolom  C18  150  ×  4,6 mm ditunjukkan pada Tabel 2 .
Tabel 2. Hasil Uji Kesesuaian Sistem Fase Gerak Larutan Dapar Fosfat  pH  6,25  ±  0,05  dengan  Metanol  pada  Berbagai Perbandingan
Perbandingan Waktu Fase Gerak Waktu Retensi (menit) Tailing Factor Plate Number 30:70 1,50 1,29 970,00 40:60 1,63 1,31 2288,84 50:50 1,80 1,31 2640,53 60:40 2,29 1,20 3473,71 70:30 3,80 1,07 5348,76
Hasil uji kesesuaian sistem untuk kolom C18 250 × 4 mm ditunjukkan pada Tabel 3 .
Tabel 3. Hasil Uji Kesesuaian Sistem Fase Gerak Larutan Dapar Fosfat  pH  6,25  ±  0,05  dengan  Metanol  pada  Berbagai Perbandingan
Perbandingan Waktu Fase Gerak Waktu Retensi (menit) Tailing Factor Plate Number 30:70 2,23 1,17 2061,12 40:60 2,49 1,34 3230,97 50:50 3,08 0,92 1967,89 60:40 4,49 0,88 3120,38 70:30 5,21 1,44 5541,69
Uji  kesesuaian  sistem  dilakukan  untuk  melihat sistem  yang  akan  digunakan  analisis  telah  memenuhi persyaratan dan juga untuk mengevaluasi daya elusi dan waktu  retensi  yang  diperoleh  (Gandjar  dan  Rohman, 2007).  Hasil  uji  kesesuaian  sistem  sefotaksim  natrium dengan fase gerak dapar fosfat pH 6,25 ± 0,05 : metanol (40:60)  dengan  menggunakan  kolom  C18  150  mm-4,6 ( Gambar  2 )  menunjukkan  hasil  terbaik  dengan memberikan puncak kromatogram muncul di menit 1,63 dengan tailing  factor 1,31  dan plate  number 2288,84. Nilai plate  number yang  besar  menunjukkan  semakin besar  efisien  kolom.  Nilai plate  number dapat  menurun karena  kolom  yang  sering  digunakan,  sehingga  kinerja kolom  tersebut  menurun.  Semakin  besar  nilai plate number, maka semakin baik pemisahannya karena puncak yang  dihasilkan  akan  semakin  tajam  (Rubiyanto,  2016). Waktu  retensi  merupakan  waktu  yang  diperlukan  analit untuk  keluar  dari  kolom  hingga  sinyalnya  ditangkap maksimal  oleh  detektor  (Sukma  &  Rahmatul,  2019). Pemisahan menggunakan KCKT menganut prinsip yaitu “ like  dissolve  like ”,  yaitu  senyawa  polar  menyukai senyawa  polar  dan  sebaliknya.  Pada  percobaan  ini digunakan fase terbalik, fase gerak bersifat polar dan fase diam  bersifat  non  polar.  Pemisahan  yang  baik  dalam KCKT  dipengaruhi  salah  satunya  oleh  pengaturan komposisi  fase  gerak.  Komposisi  perbandingan  larutan dapar  fosfat  pH  6,25  ±  0,05  :  metanol  (40:60) menunjukkan  bahwa  semakin  banyak  methanol,  maka waktu  retensi  menjadi  singkat. Pada  penelitian  ini dapat dikatakan  bahwa  fase  gerak  yang  digunakan  dapat membawa senyawa sefotaksim natrium dengan baik. Pada fase terbalik zat yang lebih polar akan terelusi lebih dulu dan memiliki waktu retensi yang lebih cepat dibanding zat
non  polar  (Putra,  2004).  Hasil  uji  kesesuaian  sistem  ini telah sesuai dengan Farmakope Indonesia VI tahun 2020 dengan syarat tailing factor ≤ 2, plate number ≥ 1000.
Gambar 2. Hasil Uji Kesesuaian Sistem Dapar Fosfat pH 6,25 : metanol  (40:60)  dengan  menggunakan  Kolom  C18 150 mm-4,6

## Uji Spesifisitas/Selektivitas
Spesifisitas atau selektifitas menunjukkan kemampuan  metode  analisis  menentukan  analit  tertentu dalam sampel secara spesifik dan tidak terpengaruh oleh adanya  pengotor  (Gumustas et  al .,  2013).  Hasil  uji spesifisitas/selektifitas  pada  penelitian  ini  menunjukkan bahwa  pelarut  dan  fase  gerak  tidak  memberikan  puncak pada waktu retensi yang dapat mempengaruhi keluarnya puncak sampel ( Tabel 4 ). Hal ini berarti bahwa metode ini tidak dipengaruhi oleh pelarut dan fase gerak.
Tabel 4 . Hasil Uji Spesifisitas/Selektifitas
Nama Sampel Luas Area Luas Standar % Perolehan Kembali Pelarut 1 0 0 0 Pelarut 1 0 0 0 Pelarut 1 0 0 0 MPS 1 0 0 0 MPS 2 0 0 0 MPS 3 0 0 0 Sampel 1 798596 800207 99,80 Sampel 1 791688 800207 98,95 Sampel 1 807199 800207 100,87 Uji Linearitas Pengujian linearitas adalah pengujian yang dilakukan untuk mengetahui kemampuan metode analisis dalam  memberikan  respon  proporsional  atau  linear terhadap  konsentrasi  analit  dalam  sampel  (Alegre et  al ., 2012).  Hasil  uji  linearitas  ( Gambar  3 )  yang  didapatkan ialah  r  ≥  0,999  sesuai  dengan  syarat  r  ≥  0,990.  Nilai koefisien korelasi yang mendekati satu dianggap menjadi bukti  bahwa  metode  memiliki  nilai  linearitas  yang  baik (Beg et al ., 2012).

## Uji Akurasi
Akurasi merupakan pengujian yang dilakukan untuk mengetahui apakah metode analisis mampu menghasilkan nilai  perolehan  kembali  yang  baik.  Akurasi  merupakan parameter paling penting yang harus dipenuhi oleh suatu metode  analisis  (Araujo,  2009).  Didapatkan  hasil perolehan  kembali  untuk  akurasi  yaitu  99,30%  dengan simpangan baku (RSD) 0,48%. Hasil tersebut telah sesuai dengan persyaratan nilai perolehan kembali untuk akurasi yaitu 98-102% (Harmita, 2004).

## Uji Presisi
Presisi  menunjukkan  kedekatan  hasil  serangkaian pengukuran yang diperoleh dari pengujian berulang pada kondisi tertentu. Presisi dibagi menjadi tiga kategori yaitu keberulangan, ketertiruan dan presisi antara (ICH, 2005). Hasil  uji  presisi  keberulangan  dengan  menggunakan konsentrasi  100%,  nilai  RSD  yang  didapatkan  ialah 0,38%.  Hasil  uji  presisi  antara  dilakukan  dengan  analis yang  berbeda  dan  mendapatkan  nilai  RSD  0,85%.  Hasil presisi  keberulangan  dan  presisi  antara  sudah  sesuai dengan persyaratan Farmakope Indonesia VI tahun 2020 yaitu RSD ≤ 1,5%.
Uji Robustness (Ketahanan) Uji robustness merupakan pengujian yang dilakukan untuk  mengetahui  kekuatan  dari  suatu  metode  analisis untuk  mempertahankan  hasil  analisa  dengan  adanya perubahan  kecil  pada  kondisi  pengujian  (Peris et  al ., 2015). Uji robustness dilakukan dengan membandingkan hasil  pengujian  pada  keadaan  normal  dan  pada  saat adanya perubahan kecil seperti perubahan pH, suhu, laju alir,  komponen  fase  gerak  ataupun  faktor  lainnya (Agrahari  &  Youan,  2012).  Pada  penelitian  ini  uji ketahanan  dilakukan  dengan  menyimpan  larutan  sampel selama  24  jam  dan  menggunakan  larutan  standar  baru. Hasil  yang  didapatkan  tidak  ada  perubahan  signifikan dengan melihat luas area sampel pada jam ke 0 dan jam ke  24.  Nilai  perolehan  kembali  yang  didapatkan  yaitu 100,25% dengan RSD 0,85%.

## Uji LOD dan LOQ
Limit  of  detection (LOD)  merupakan  konsentrasi analit terkecil yang masih bisa dideteksi pada pengukuran (Kruve et  al .,  2015).  Nilai  LOD  dari  pendekatan berdasarkan  standar  deviasi  respon  dan  nilai slope didapatkan dengan menggunakan rumus (ICH, 2005):
LOD = (3,3 × SD)/S
SD    = standar deviasi
S       = slope
Konsentrasi  analit  terkecil  yang  masih  dapat  dideteksi dengan  metode  yang  dievaluasi  adalah  3,3894  ×10 -4 mg/mL.
Limit of quantification (LOQ) merupakan konsentrasi  analit  terendah  yang  dapat  dikuantitasi dengan  akurat  dan  teliti.  Batas  kuantitasi  juga menunjukkan sensitivitas metode yang digunakan (Kruve et al ., 2015). Dari penelitian ini didapat nilai LOQ yaitu 1,0271  ×10 -3 mg/mL.  Nilai  LOQ  dari  pendekatan berdasarkan  standar  deviasi  respon  dan  nilai slope didapatkan dengan menggunakan rumus (ICH, 2005):
LOQ = (10 × SD)/S
SD    = nilai standar deviasi
S       = slope dari kuva kalibrasi.
y = 0,9637x + 3,72 R² = 0,9992 0 50 100 150 70 80 90 100 110 120 Ko n sent ra si A k tu a l (% ) Konsentrasi Teoritis(%) Kurva Kalibrasi Minutes

## KESIMPULAN
Validasi  metode  analisis  pengujian  sefotaksim natrium  secara  KCKT  telah  berhasil  dilakukan.  Hasil validasi  metode  analisis  meliputi  uji  kesesuaian  sistem, akurasi,  presisi,  linearitas, robustness, LOD  dan  LOQ telah  memenuhi  persyaratan  sesuai  dengan  Farmakope Indonesia.  Metode  ini  dapat  dilakukan  untuk  analisa secara rutin dan dianggap valid.

## DAFTAR PUSTAKA
Agrahari,  V.  and  Youan,  B.B.C.  (2012)  'Sensitive  and rapid  HPLC  quantification  of  tenofovir  from hyaluronic  acid-based  nanomedicine', AAPS PharmSciTec , 13(1), pp. 202-210.
Alegre, M.R., Romero, J.E. and Broch, S.C. (2012) 'Is it really necessary to validate an analytical method or  not?  That  is  the  question', Journal  of Chromatography A , 1232, pp. 101-109.
Al-Hakkani,  M.F.  (2020)  'HPLC  analytical  method validation for determination of cefotaxime in the bulk  and  finished  pharmaceutical  dosage  form', Universal Wiser Publisher , 1(1), pp. 33-42.
Amin, S., Amir, M. and Slamet, I. (2016) 'Kromatografi cair kinerja tinggi untuk analisis senyawa diuretik yang disalahgunakan sebagai doping dalam urin', Jurnal Sains Keolahragaan & Kesehatan , I(2).
Araujo,  P.  (2009)  'Key  aspects  of  analytical  method validation  and  linearity  evaluation', Journal  of Chromatography B , 877(23), pp. 2224-2234.
Beg,  S.,  Kohli,  K.,  Swain,  S.  and  Hasnain,  M.S.  (2012)
'Development  and  validation  of  RP-HPLC method for quantitation of amoxicillin trihydrate in  bulk  and  pharmaceutical  formulations  using Box-Behnken  experimental  design', Journal  of Liquid Chromatography & Related Technologies , 35(3), pp. 393-406.
Departemen Kesehatan RI. (2020) Farmakope Indonesia Edisi VI . Jakarta: Kementrian Kesehatan RI.
Gandjar,  I.G.  and  Rohman,  A.  (2007) Kimia  Farmasi Analisis . Yogyakarta: Pustaka Pelajar.
Gritter,  R.J.,  Bobbit,  J.M.  and  Schwarting,  A.M.  (1991)
Chromatography . Penerjemah: Kosasih Padmawinata, Bandung: ITB.
Gumustas, M., Kurbanoglu, S., Uslu, B. and Ozkan, S.A.
(2013)  'UPLC  versus  HPLC  on  drug  analysis: advantageous,  applications  and  their  validation parameters', Chromatographia , 76(21), pp. 1365- 1427.
Hadjar, M.M.I. (2011) Teknik analisis obat dalam cairan biologis dengan GLC dan HPLC.
Harmita  (2004)  'Petunjuk  pelaksanaan  validasi  metode dan cara perhitungannya', Majalah Ilmu Kefarmasian , 1(3), pp. 117-135.

## ICH (International Conference on Harmonization) (2005)
Validation  of  analytical  procedures:  text  and methodology  Q2(R1) .  Geneva:  International Conference on Harmonization.
Kruve, A., Rebane, R., Kipper, K., Oldekop, M.L., Evard, H. et al. (2015) 'Tutorial review on validation of chromatography  mass-spectrofotmetry  method. Part I', Analytica Chimia Acta , 870, pp. 29-44.
Nasution, A.Y. (2006) Validasi metode analisis nifedipin dalam  plasma  in  vitro  secara  kromatografi  cair kinerja tinggi. [Skripsi] Depok: Program Sarjana Ekstensi Farmasi UI.
Peris Vicente, J., Esteve-Romero, J. and Carda Broch, S.
(2015) 'Validation of analytical methods based on chromatographic  techniques:  an  overview', Statistical Validation Parameter , pp. 1757-1808.
PERMENKES  RI  (Peraturan  Menteri  Kesehatan Republik  Indonesia)  (2011) Pedoman  umum penggunaan  antibiotik .  Jakarta:  Kementrian Kesehatan RI.
Putra, E.D. (2004) 'Kromatografi cair kinerja tinggi dalam bidang  farmasi', USU  Digital  Library .  Diakses pada tanggal 18 Juni 2023.
Radji,  M.  (2014)  Mekanisme  aksi  molekuler,  antibiotik dan kemoterapi. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Ravisankar, P., Navya, C.N., Pravallika, D. and Sri, D.N.
(2015)  'A  review  on  step-by-step  analytical method  validation', IOSR  Journal  of  Pharmacy , 5(10), pp. 7-19.
Rubiyanto,  D.  (2016)  Teknik  dasar  kromatografi.
Yogyakarta: CV Budi Utama.
Sofyan,  I.,  Rijal,  S.M.  and  Driyanti,  R.  (2009)  Validasi metode  analisis  senyawa  cefotaxime  dengan standar  internal  cefadroxil  secara  kromatografi cair kinerja tinggi. Sumedang: UNPAD.
Sukma,  F.F.  and  Fajri,  R.  (2019)  'Identifikasi  asam dehidroasetat  dalam  produk  kosmetika  dengan menggunakan  HPLC  (High  Performance  Liquid Cromatography)', Quimica:  Jurnal  Kimia  Sains dan Terapan , 1(2), pp. 15-17.