## ISOLATION AND ANTAGONISM OF BACTERIA TEST OF BIOTA IN THE MANGROVE ECOSYSTEM KAYU ARA RIVER SIAK REGENCY
Rizky Moritania 1* , Irwan Effendi 2 , F. Feliatra 2
1 Student of The Faculty of Fisheries and Marine University of Riau, Pekanbaru
2 Lecturer at The Faculty of Fisheries and Marine Science University of Riau, Pekanbaru * ririrethania22@gmail.com

## ABSTRACT
The  General  area  is  the  mangrove  biodiversity  and  marine  life  that  have  biological  activity that  likely  has  the  same  pharmacological  potential  as  an  antimicrobial  compound.  The purpose  of  this  research  is  to  know  the  bacterial  antagonism  in  isolation  from  mangrove, mangrove  crabs,  snails  and  fish  tembakul  against  pathogenic  bacteria  ( Aeromonas hydrophila, Aeromonas salmonicida, Edwardsiella ictaluri ). This research dimula from May – June 2019. From the results of research that has been done shows that isolates that have the capability of antagonism against pathogenic bacteria test three ( A. salmonicida, A. hydrophila and  E.  ictaluri )  were  isolate  CS7  with category  stronger,  isolate  CS6,  CS5,  CS4, AI4,  AI5, CS9 AI2, with weak category, whereas isolates CS1, B22, B33, B44, AI6 AI7 AI8, was only able to inhibit pathogenic test of 2 with a weak category. The results of the DNA analysis of the  16S  rRNA  sequence  with  the  use  and  analysis  of  BLAST  obtained  that  isolates  the Bacillus cereus species are included.

## Keywords : Mangrove Animals, Antagonism Test, 16S rRNA

## I. PENDAHULUAN
Kabupaten Siak merupakan salah satu kabupaten  yang  terdapat  di  Provinsi  Riau yang memiliki salah satu desa yaitu Sungai Kayu  Ara  dimana  merupakan  daerah penanaman  dan  pengembangan  kawasan hutan  mangrove.Daerah  ini  merupakan daerah yang berbatasan dengan sungai Siak yang  memiliki  peran  sangat  penting  dalam mendukung  aktivitas  masyarakat,  terdapat kawasan industri serta pemukiman penduduk.
Adanya  aktivitas  tersebut  dapat menganggu  keseimbangan  kehidupan  biota yang berada di ekosistem mangrove, bahan organik  produksi  mangrove  sebagian  besar dimanfaatkan  sebagai  detritus.Banyaknya bahan organik dapat mempengaruhi distribusi  serta  aktivitas  organisme  begitu juga mikroorganisme seperti bakteri.
Keberadaan  mikroorganisme  tersebut  ada yang  bermanfaattetapi  ada  pula  yang merugikan  misalnya  dapat  menimbulkan kerusakan akibat kontaminasi yang biasanya disebut bakteri patogen.
Patogen  merupakan  mikroorganisme sejenis  bakteri  yang  bersifat  parasit  dan menjadi  sumber  penyakit  bagi  inang  yang di  tumpanginya . Banyak  penelitian  yang telah  dilakukan  guna  mencegah  tersebar nya  bakteri  patogen  penyebab  penyakit bakterial  pada  komunitas  budidaya.  Salah satunya menggunakan senyawa anti- mikroba  yang  diperoleh  dari  tanaman, hewan maupun senyawa antimikroba buatan.  Oleh  karena  itu  penulis  tertarik untuk  melakukan  penelitian  tentang  isolasi dan  uji  antagonisme  bakteri  dari  biota  di ekosistem  mangrove  Sungai  Kayu  Ara Kabupaten Siak.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  antagonisme  bakteri  yang  di isolasi dari kepiting bakau, siput bakau dan ikan  tembakul  tersebut  terhadap  bakteri patogen  ( A.  hydrophila,  A.  salmonicida, E. ictaluri ).

## 2. METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  telah  dilaksanakan mulai  dari  bulan  Mei  2019.  Pengambilan sampel  dilakukan  di  ekosistem  mangrove Sungai  Kayu  Ara  Kabupaten  Siak.  Isolasi bakteri dilakukan di Laboratorium Karantina  Ikan  Pekanbaru.  Analisis  DNA
dilakukan di Laboratorium Genetika Jurusan  Biologi,  Fakultas  Matematika  dan Ilmu Pengetahuan Alam.
Metode  penelitian  ini  adalah  metode survei,  biota  mangrove  dari  ekosistem mangrove  Kayu  Ara  digunakan  sebagai sampel  untuk  identifikasi  serta  dilakukan uji  antagonisme  pada  3  bakteri  patogen yang berbeda ( A.hydrophila, A.salmonicida dan E. ictaluri ).
Data  yang  diperoleh  dari  hasil disajikan  dalam  bentuk  tabel  dan  gambar. Data  kemudian  dibahas  secara  diskriptif berdasarkan  literatur  untuk  diambil  suatu kesimpulan.

## Pengambilan Sampel dan Isolasi Bakteri
Sampel
kepiting bakau, ikan tembakul  dan  siput  bakau  diambil  secara acak  sebanyak  5  ekor  selanjutnya  sampel dimasukkan  ke  dalam  ice  box.  Bagian organ  yang  akan  diisolasi  dari  kepiting bakau  dan  ikan  tembakul  adalah  saluran pencernaan,  sedangkan  organ  yang  di isolasi  dari  siput  bakau  dimortar  terlebih dahulu  karena  bagian  pada  siput  tidak diketahui.  Setelah  dilakukan  pembedahan organ  di  tusuk  menggunakan  jarum  ose kemudian  digoreskan  pada  media  TSA dengan  goresan  zig-zag  agar  pertumbuhan bakteri  rata  dan  tidak  terjadi  penumpukan pada satu bagian dan di inkubasi selama 24 jam  dengan  suhu  35 ⁰ C  menyesuaikan
dengan suhu maksimum perkembangbiakan bakteri.

## Identifikasi Bakteri
Isolat bakteri yang didapat diidentifikasi secara morfologi dan
biokimia.  Pengamatan  morfologi  meliputi bentuk  koloni,  warna  koloni,  diameter koloni,  tepian  dan  elevasi  koloni.  Uji biokimia  meliputi  pewarnaan  Gram,  uji katalase, uji  citrat, uji sulfida, uji motil, uji indol,uji methyl red dan uji TSIA

## Uji Antagonisme Bakteri
Bakteri  patogen  uji  yang  telah  di murnikan  diambil  sebanyak  25  µL  dan diisolasi  ke  dalam  media  MHA  kemudian di  tumbuhkan  ke  dalam  media  MHA dengan menggunakan metode sebar. Setelah  itu  kertas  cakram  yang  telah direndam  beberapa  menit  ke  dalam  isolat bakteri  uji  diletakkan  ke  dalam  media MHA  tersebut  kemudian  di  inkubasi  pada suhu  28 ⁰ C  selama  24  jam.  Kontrol  negatif digunakan  kertas  cakram  yang  telah direndam  beberapa  menit  dengan  TSB  dan untuk  kontrol  positif  digunakan  antibiotik tetracylin  pada  media  MHA  yang  lain. Besarnya  aktivitas  antibakteri  ditentukan dengan  cara  mengukur  diameter  zona bening di sekitar cakram.

## Uji Molekuler
Proses  isolasi  DNA  ini  terbagi menjadi  5 proses, yaitu  perusakaan jaringan, lysis,  DNA  binding,  wash, dan elution. Selanjutnya tahap amplifikasi DNA dilakukan  dengan  menggunakan  PCR ( polymerase chain reaction )  50  μL dilakukan  dengan  menggunakan  Primer  24 F  - 5’- AGA GTT TGA TCC TGG CT – 3’ dan  1541  R  –  5’  –  AAG  GAG  GTC  ATC CAE  CCG  CA  –  3’  dengan  cara template DNA  diambil  sebanyak  1  μL  dipindahkan ke  dalam  tabung  berukuran  1  mL  dan dimasukkan 49 μL master mix.

## Analisis Sekuen
Data  yang  diperoleh  dari  hasil sequence dianalisis  meggunakan  teknik BLAST yaitu mencocokkan sequence DNA bakteri yang ada di GenBank .

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN Pengamatan Morfologi Koloni
Hasil  pengamatan  morfologi  koloni bakteri dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Pengamatan morfologi koloni bakteri
Kode Isolat Diameter Warna Bentuk Koloni Tepian Elevasi B22 1,3 Putih Tidak Beraturan Berlekuk Datar B44 0,9 Putih Bentuk L Berombak Timbul CS1 0,6 Putih kekuningan Kompleks Berlekuk Datar CS9 1,8 Putih Tidak Beraturan Tidak beraturan Berbukit CS7 1,0 Putih Bundar Licin Timbul CS6 2,1 Putih susu Bentuk L Licin Seperti Kawah CS5 1,2 Putih kekuningan Tidak Beraturan Tidak beraturan Datar
Berdasarkan  pengamatan  morfologi koloni  pada  Tabel  1,  isolat  memiliki diameter berkisar antara 0,6 - 2,1 cm. Isolat yang  memiliki  warna  putih  kekuningan, putih  dan  putih  susu.  Isolat  umumya berbentuk  bundar  dan  tidak  beraturan, isolat lainnya berbentuk kompleks,
kosentris, bulat, konsentris, bentuk L, bulat
dengan  tepian  timbul  dan  menyebar. Umumnya  tepian  koloni  tidak  beraturan serta elevasi datar.

## Uji Biokimia Bakteri
Hasil  pengamatan  hasil  uji  biokimia dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Uji Biokimia isolat bakteri
Kode Uji Gram Bentuk Sel  Katalase  Citrat  Sulfida  Motil  Indol MR B22 - Bulat + + - - - + B44 - Batang - + - + - + CS1 - Bulat - - - + - + CS9 - Batang - + + + - - CS7 + Batang + + - + - - CS6 + Bulat - + - + - + CS5 - Bulat + + - + + +
Gambar 1. Uji Biokimia Isolat Bakteri
Hasil uji biokimia secara umum dapat dilihat  pada  Tabel  2,  hasil  uji  biokimia menunjukkan  bahwa  dalam  uji  Gram terdapat  lima  isolat  Gram  negatif  dan  dua isolat  Gram  positif.  Menurut  Safika et  al. (2017),  Bakteri  Gram  positif  merupakan bakteri  yang  dapat  mempertahankan  zat warna violet pada proses pewarnaan Gram. Perbedaan warna didasarkan pada perbedaan  struktur  dinding  sel  yang menyusun  bakteri.  Hasil  dari  uji  katalase menunjukkan  empat  isolat  katalase  negatif dan  tiga  isolat  katalase  positif.  Menurut Samosir et  al. (2017),  katalase  positif  bila menghasilkan  gelembung  udara  berarti  ada pembentukkan  gas  oksigen  (O 2 )  sebagai hasil  pemecahan  H 2 O 2 oleh  enzim  katalase yang diproduksi oleh bakteri tersebut. Hasil uji  motil  menunjukkan  satu  isolat  motil negatif  dan  enam  isolat  motil  positif. Menurut Sudarsono dalam Yulvizar (2013), uji  positif  ditandai  dengan  pertumbuhan bakteri yang menyebar, menandakan adanya  flagella  yang  berfungsi  untuk melakukan  pergerakan.  Hasil  uji  sulfida menunjukkan 6 bersifat negatif dan 1 isolat bersifat  positif.  Uji  sitrat  menunjukkan
isolat  bersifat  positif  dan  negatif.  Menurut Ulfa et  al. (2016),  uji  sitrat  bertujuan mendeteksi  kemampuan  suatu  organisme untuk  memanfaatkan  sebagai  satu-satunya sumber  karbon  dan  energi.  Hal  ini disebabkan  karena  penggunaan  sitrat  oleh bakteri  menyebabkan  asam  menghilang dari  biakan  sehingga  terjadi  peningkatan pH  dan  mengubah  warna  media  dari  hijau menjadi  biru.  Uji  indol  menunjukkan  satu isolat  positif  dan  enam  isolat  negatif.  Jika Terbentuk  lapisan  cincin  berwarna  merah pada  permukaan  biakan,  artinya  bakteri  ini membentuk  indol  dari  triptophan  sebagai sumber  karbon  (Widyawati,  2012).  Uji methyl red menunjukkan dua isolat bersifat negatif dan lima bersifat positif. Uji methyl red bertujuan  untuk  mendeteksi  kemampu- an  organisme  dalam  memproduksi  dan mempertahankan  produk  akhir  asam  stabil dari fermentasi glukosa. Methyl Red adalah indikator  pH  dengan  hasil  positif  berwarna merah (Rahayu dan Gumilar, 2017).

## Uji Penggunaan Gula
Hasil  pengamatan  hasil  uji  peng- gunaan gula dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Uji Penggunaan Gula terhadap Isolat Bakteri Kode Glukosa Laktosa Sukrosa B22 + + + B44 + - - CS1 + + + CS9 + + + CS7 - - - CS6 - + + CS5 + + +
Hasil uji penggunaan gula menunjukkan  empat  isolat  mampu  mem- fermentasi  ketiga  gula  yaitu  glukosa, laktosa  dan  sukrosa,  satu  isolat  hanya mampu memfermentasi glukosa, satu isolat hanya  mampu  memfermentasi  laktosa  dan sukrosa  dan  satu  isolat  lainnya  tidak mampu memfermentasi ketiga gula
tersebut.  Fardiaz dalam Wahyuni  (2018),
bahwa warna merah pada agar menunjukkan reaksi basa, sedangkan warna kuning menunjukkan reaksi asam.

## Uji Antagonisme Bakteri
Hasil pengamatan hasil uji antagonisme  bakteri  dapat  dilihat  pada Tabel 4.
Tabel 4. Uji Antagonisme Isolat Bakteri Nama Rata-rata Diameter Zona Hambat (mm) Kode Isolat A. hydrophila A. salmonicida E. Ictaluri CS7 18,6 21 19,6 CS6 3,5 2,3 1,3 CS5 2,8 2,2 1 CS9 3,3 5 1,8 CS1 0 4,8 0 B44 4,3 0 1,8 B22 0 0 0
Berdasarkan  nilai  rata-rata  zona bening  yang  terbentuk  dapat  dilihat  bahwa isolat  bakteri  CS7  sampai  dengan  B22 memiliki  kemampuan  yang  berbeda  dalam menghambat  pertumbuhan  dari  bakteri A. salmonicida , A. hydrophila, dan E. ictaluri. Uji  antagonisme  isolat  bakteri  terhadap patogen A.  hydrophila nilai  rata-rata  zona bening  terbesar  adalah  isolat  CS7  sebesar 18,6  mm  dan  yang  terkecil  adalah  isolat B22 dan CS1.
Isolat  CS7  memiliki  respon  hambat terbesar  terhadap  bakteri  patogen A. hydrophila, yaitu dengan diameter rata-rata zona  bening  21  mm  dan  memiliki  respon daya  hambat  terkecil  terhadap  bakteri patogen A.  salmonicida yaitu  dengan diameter  rata-rata  zona  bening  18,6  mm. Sedangkan  isolat  lain  memiliki  respon hambat  yang  lemah  karena  memiliki  nilai diameter <5 mm. Menurut Davis dan Stout dalam Mahmudah dan Sri (2017), menjelaskan  bahwa  klasifikasi  respon hambatan pertumbuhan bakteri yang dilihat berdasarkan  diameter  zona  bening  terdiri atas  empat  kelompok  yaitu  respon  lemah
(diameter  ≤5  mm),  sedang  (diameter  5-10 mm),  kuat  (diameter  10-20  mm),  dan sangat kuat (diameter ≥20 mm).
Berdasarkan  hasil  uji  antagonisme yang dilakukan, isolat bakteri yang diisolasi dari  biota  memiliki  respon  hambat  dengan diameter  yang  berbeda  diukur  dari  adanya zona  bening  disekitar  kertas  cakram. Menurut  Adithya  (2017),  hasil  yang berbeda disebabkan oleh kemampuan setiap bakteri dalam melawan aktivitas antibakteri tergantung  dari  ketebalan  dan  komposisi dinding  selnya  dan  disebabkan  oleh perbedaan  kandungan  metabolit  sekunder yang  dimiliki  oleh  masing  masing  isolat yang  telah  berdifusi  terlebih  dahulu  ke dalam  agar,  sehingga  pertumbuhan  bakteri patogen menjadi terhambat.

## Analisis Sekuens
Berdasarkan  hasil  anilisis BLAST dengan  merujuk  pada Gen  Bank melalui situs  http://www.ncbi.nlm.nih.gov me- nunjukkan bahwa isolat CS7 memiliki nilai homologi  99,29%  terhadap Bacillus  cereus yang tertera pada Tabel 5.
Tabel 5 . Analisis BLAST Isolat Bakteri No Spesies Strain Kode Akses Homologi 1 B. cereus BCT-7112 NR121761 99,29% 2 B. toyonensis FSLW8 NR 152692 99,59% 3 B. marcorestinctum LQQ NR 117414 98,79% 4 B. bingmayongensis FJAT-13831 NR 148248 99,08% 5 B. gaeomokensis BL3-6 NR 116644 98,61% 6 B. manliponensis BL4-6 NR 125530 98,04% 7 B. solisislvae NEAU NR 159143 94,13%
Jika  dilihat  dari  tingkat  homologinya berarti  isolat  CS7  dapat  mewakili  pada tingkat  spesies  yang  sama,  hal  ini  sesuai dengan  pendapat  Hagstrom et  al . dalam Feliatra et  al .  (2011)  menyatakan  bahwa isolat yang mempunyai persamaan homologi  lebih  dari  97%  dapat  mewakili pada tingkat spesies yang sama. Persamaan homologi  antara  93%  -  97%  dapat mewakili identitas pada tingkat genus tetapi berbeda  pada  tingkat  spesies,  jika  dibawah 93%  kemungkinan  spesies  baru  yang urutan  basa  nitrogennya  belum  masuk dalam database Genbank .
Berdasarkan  hasil  dari  identifikasi secara morfologi dan biokimia, menunjukkan  bahwa  isolat  bakteri  CS7 termasuk  ke  dalam  genus Bacillus koloni bakteri  berwarna  putih  susu,  bentuk  koloni bundar  dengan  tepian  licin  dan  elevasi timbul  merupakan  bakteri  Gram  positif, bersifat  motil,  indol  negatif  dan  katalase positif.  Pernyataan  ini  didukung  oleh Bottone  (2010)  bakteri Bacillus  cereus merupakan  bakteri  Gram  positif  bersifat motil  oval,  kadang-kadang  bundar  atau silinder  dan  sangat  resisten  pada  kondisi yang  tidak  menguntungkan.  Bakteri  ini bersifat aerobik sampai anaerobik fakultatif,  katalase  positif  dan  merupakan bakteri  gram  positif  berbentuk  batang katalase  positif,  indol  negatif  dan  mampu memfermentasi  glukosa  serta  laktosa  dan sukrosa.
Bacillus  cereus adalah  bakteri  ber- bentuk  batang  yang  berspora  dan  bersifat gram  positif,  selnya  berukuran  besar dibandingkan dengan bakteri batang lainnya  suhu  pertumbuhan  maksimum  37- 48ºC  dan  minimum  5-20ºC  dan  pH pertumbuhan  5,5-8,5  serta  tumbuh  secara aerob fakultatif, juga memfermentasi karbohidrat. Habitat utama B. cereus adalah lingkungan dan saluran pencernaan. Terutama tanah dan air (Nurwidiani, 2010). Menurut  Pananjung et  al .  (2015)  bakteri dari jenis ini tidak hanya dijumpai di tanah,
air,  makanan  fermentasi  tetapi  juga ditemukan di perairan pantai.
Berdasarkan  uji  antagonisme  isolat CS7  mampu  menghambat  pertumbuhan ketiga  bakteri  patogen  uji  yakni A. hydrophila,  A.  salmonicida dan E.  ictaluri dengan  kategori  kuat,  hal  ini  dapat  dilihat adanya  zona  bening  dengan  diameter  >10 mm  pada  saat  uji  antagonis.  Kemampuan ini  diduga  karena  bakteri  dari  jenis  ini menghasilkan senyawa antibiotik. Senyawa antibiotik  merupakan  kumpulan  zat-zat kimia yang diproduksi oleh mikro- organisme baik fungi maupun bakteri yang memiliki  fungsi  menghambat  pertumbuhan atau  membunuh  organisme  lain. B.cereus memberikan respon positif yaitu, terbentuknya  hambatan  yang  terjadi  pada pertumbuhan  bakteri Aeromonas  sp dan vibrio sp , respon  ini  terlihat  dengan terbentuknya  zona  yang  terputus  oleh adanya  pertumbuhan  bakteri B.cereus (Feliatra, 2011). Kemampuan bakteri
B.cereus dalam  menghambat  atau  meng- interupsi  bakteri  patogen  belum  dipastikan apakah karena dapat mematikan atau meng- hasilkan antibiotik  yang dapat menurunkan populasi bakteri patogen secara keseluruhan.
Menurut Prangdimurti dalam Feliatra (2012),  antagonisme  ada  dua  macam  yaitu antagonisme sejati dan antagonisme vektor. Antagonisme  sejati  terjadi  jika  suatu organisme benar-benar menghambat organisme lainnya, sedangkan antagonisme vektor  terjadi  jika  suatu  jenis  bakteri menghambat  bakteri  lain  secara  aktif karena  makanan  dan  kehidupan  yang terbatas

## 4. KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan  menunjukkan  bahwa  isolat yang  memiliki  kemampuan  antagonisme terhadap tiga bakteri patogen uji ( A.salmonicida,
A.hydrophila dan
E.ictaluri )  adalah  isolat  CS7  dengan
kategori kuat, isolatCS6, CS5, CS9, dengan kategori lemah, sedangkan isolat B44,  B22 hanya  mampu  menghambat  2  dari  patogen uji  dengan  kategori  lemah . Hasil  analisis DNA dengan menggunakan sekuens 16SrRNA didapatkan bahwa isolat tersebut termasuk spesies B. cereus .
Saran
Penelitian selanjutnya disarankan perlu  dilakukan  penelitian  lanjutan  berupa uji  tantang  lapangan  terhadap  ikan  sebagai sampel uji dengan patogen yang berbeda.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Adithiya,  D.S.,  Feliatra.,  dan  A,  Tanjung.  (2017).  Penggunaan  Bakteri  Heterotrofik sebagai  Antibakteri  terhadap  Bakteri  Patogen  yang  diisolasi  dari  Perairan  Laut  Kota Dumai.
2. Bottone, E. J. (2010). Bacillus cereus , a volatile human pathogen, Clinical Microbiologi Reviews, Volume 23 (2), Pages 382–398.
3. Feliatra, F. T.Nogroho, T. Silalahi, dan S. Y. Octavia. (2011). Skrining Bakteri Vibrio Sp Asli Indonesia sebagai Penyebab Penyakit Udang Berbasis Tehnik 16S Ribosomal DNA. Jurnal Ilmu dan Teknologi Kelautan Tropis. Volume 3 (2), Pages 85-99.
4. Feliatra,  Y.  Fitria,  dan  Nursyirwani.  (2012).  Antagonis  Bakteri  Probiotik  yang  diisolasi dari  Usus  dan  Lambung  Ikan  Kerapu  Bebek  ( Cromileptes  Altivelis )  Terhadap  Bakteri Patogen. Jurnal Perikanan dan Kelautan,Volume 17(1), Pages 16-25.
5. Mahmudah,  F.  L.,  dan  A.  Sri.  (2017).  Uji  Aktivitas  Antibakteri  dari  Ekstrak  Ethanol Temukunci  Terhadap  Bakteri Streptococcus  mutan .  Jurnal  Penelitian  Saintek.  Volume 22(1), Pages 22-28
6. Nurwidiani. (2010) .Verifikasi Metode Uji Bacillus cereus pada Sampel Uji Bumbu dan Bahan Makanan.
7. Pananjung,  A. M. S., E. U. Ulfa., K.  Senjarini., S. Arimurti. (2015). Karakterisasi Isolat Bakteri  Fibrinolitik  Wu  021055  Asal  Perairan  Pantai  Papuma,  Jember.  Jurnal Bioteknologi dan Biosains Indonesia. Volume 2(1), Pages 1-8
8. Safika.  (2017).  Total  Colony  Bacteria  Cellulolitic  in  The  Rumen  of  Aceh  Cattle. Jurnal Medika Veterinaria. Volume 11(1), Pages 51-58.
9. Samosir,  M.  F.,  D.  Suryanto,  dan  Desrita.  (2017).  Isolasi  dan  Identifikasi  Bakteri Potensial Probiotik pada Saluran Pencernaan Ikan Mas ( Cyprinus carpio ). Jurnal Biologi Volume 6(2), Pages 61-65.
10. Ulfa, A., E. Suarsini, dan M. H. I. A. Muhdar. (2016). Isolasi dan Uji Sensitifitas Merkuri pada  Limbah  Penambangan  Emas  di  Sekokotong  Barat  Kabupaten  Lombok  Barat Penelitian Pendahuluan. Proceeding Biologi Education Conference .Volume 13(1), Pages 797.
11. Wahyuni.  R,  M.,  A.  Sayuti.,  M.  Abrar.,  Erina  dan  Zainuddin.  (2018).  Isolasi  dan Identifikasi  Bakteri  Enterik  Patogen  pada  Badak  Sumatera  ( Dicherorhinus  sumatrensis ) di  Suaka  Rhino  Sumatera  (SRS)  Taman  Nasional  Way  Kambas  (TNWK)  Lampung. Jurnal Kedokteran Hewan. Volme 2 (4), Pages 474-487.
12. Widyawati, R. (2012). Penuntun Praktek Mikrobiologi, Uji IMViC. http://rodiahmikrobiologi.blogspot.com/2012/ 01/uji-imvic.html. Tgl: 18 juni 2019.
13. Yulvizar,  C.,  (2013).  Isolasi  dan  Identifikasi  Bakteri  Probiotik  pada Rastrelliger  sp. Skripsi . Indonesia: Universitas Syiah Kuala. Volume 6(2), Pages 1-7.