## KETAHANAN BAKTERI ASAM LAKTAT HASIL ISOLASI DARI FESES BROILER TERHADAP KONDISI SALURAN PENCERNAAN  BROILER
(The Resistance of Lactic Acid Bacteria Isolated From the Faeces of Broiler chicken towards the Conditions of the Broiler Digestive Tract)
A. Mujnisa 1) , Laily A. Rotib 1) , Natsir Djide 2) , Asmuddin Natsir 1)
1) Staf Fakultas Peternakan Universitas Hasanuddin
2) Staf Fakultas Farmasi Universitas Hasanuddin Jl.Perintis Kemerdekaan Km 10 Tamalanrea Makassar, Tlp. (0411587217) e-mail: a.mujnisae@yahoo.co.id

## ABSTRACT
This  research  was  conducted  to  determine  the  resistance  degree  of  lactic  acid bacteria  (LAB)  isolated  from  the  faeces  of  broilers  towards  various  intestinal conditions, in order to select a lactic acid bacteria to be used as prospective probiotic. Ten  types  of  LAB  bacteria    (M1,  M2,  M3,  M4,  M5,  M7,  M8,  M23  ,M26,  and  M28) isolated from the faeces of broiler chicken were subjected to pH 2 , pH 3 , and pH 4 ; to 3% bile  salt  and  to  the  temperatures  of  30 o C,  37 o C  and  41 o C.  The  results  of  the  research showed that all LAB isolates experienced the highest colony reductions at pH 2 , which was    around  3.2-5.5  log  units/ml.  The  reduction  of  colony  numbers  at  pH 3 was approximately 1.8-3.1 log unit/ml, and the reduction at pH 4 was around 1.0 – 2.5 log unit/ml.  All  the  LAB  isolates  experienced  a  decrease  of  0.5  log  unit/ml  to  1.6  log unit/ml  in colony numbers after bile salt exposure. The reduction of colony numbers of ten LAB isolates at the temperatures of 30 o C, 37 o C and 41 o C was 0.6 - 1.4 log unit/ml ; 0.1 – 0.5 log unit/ml and 0.7 – 1.4 log unit/ml, respectively. None of the ten  isolates posses all of the expected characteristic, however based on its more superior ability to block  the  pathogenic  micro-organism  as  well  as  its  ability  to  survive  in  simulated gastro intestinal tract conditions, M1 was selected as prospective probiotic.
Key words : Lactic acid bacteria, Faecal broiler, Digestive tract

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  ketahanan  beberapa  isolat  bakteri asam  laktat (BAL) hasil isolasi  dari feses  broiler pada  beberapa  kondisi  saluran  usus, untuk  dijadikan  sebagai  kandidat  probiotik.    Sepuluh  jenis  isolat  BAL  yang  diisolasi dari feses broiler (M1, M2, M3, M4, M5, M7, M8, M23, M26 dan M28) diuji pada pH 2, 3, dan 4; garam empedu 0,3; dan suhu 30, 37 dan 41 0 C. Hasil penelitian menunjukkan bahwa  kesepuluh  isolat  BAL  pada  pH  2  mengalami  penurunan  jumlah  koloni  yang paling tinggi yaitu berkisar antara 3,2- 5,5 unit log/ml, penurunan jumlah koloni pada pH 3 berkisar 1,8 - 3,1 unit log/ml dan pada pH 4 penurunan jumlah koloni berkisar 1,0- 2,5 unit log/ml. Penurunan jumlah koloni kesepuluh isolat  BAL  terhadap garam empedu  berkisar  antara  0,5  unit  log/ml  sampai  dengan  1,6  unit  log/ml  (resisten). Penurunan  jumlah  koloni  kesepuluh  isolat  BAL  pada  suhu  30,  37  dan  41 o C  masing-
masing berkisar antara 0,6 - 1,4 unit log/ml; 0,1 – 0,5 unit log/ml, dan 0,7 – 1,4  unit log/ml.  Karakteristik  probiotik  tidak  semua  berada  pada  satu  jenis  isolat,  sehingga isolat  BAL  M1  sebagai  isolat  terpilih  sebagai  probiotik  berdasarkan  karakteristik penghambatan  terhadap  mikroorganisme  patogen  yang  lebih  baik  dibanding  isolat lainnya,  serta  mampu  bertahan  hidup  pada  simulasi  kondisi  saluran  pencernaan sehingga berpotensi dijadikan sebagai kandidat probiotik.
Kata kunci : Bakteri asam laktat, Feses broiler, Saluran pencernaan

## PENDAHULUAN
Bakteri  asam  laktat  (BAL)  telah  lama  digunakan  sebagai  probiotik,  termasuk didalamnya  jenis Lactobacillus  bulgaricus,  L.  Acidophillus,  L.  Sporogenes,  L.  Casei, L . plantarum ,  dan Streptococcos (Venkat et  al .,  2004).  Faktor-faktor  yang  mempengaruhi ketahanan hidup dan pertumbuhan dalam usus digunakan dalam menentukan strain- strain  BAL  yang  berpotensi  sebagai  probiotik.  Menurut  Chou  dan  Weimer  (1999), stress    bakteri  probiotik  di  mulai  dari  lambung,  dimana  bakteri  ini  harus  mampu bertahan  terhadap  pH  yang  sangat  rendah.  Waktu  yang  dibutuhkan  bakteri  mulai masuk  sampai  keluar  lambung  adalah  90  menit.  Setelah  bakteri  probiotik  berhasil melalui  lambung,  mereka  akan  memasuki  saluran  usus  bagian  atas  yang  merupakan tempat  garam  empedu  disekresikan.  Galur-galur  BAL  dari  spesies  yang  sama  serta diisolasi dari sumber yang sama, memiliki keragaman pada toleransi terhadap garam empedu.
Berdasarkan  hal  tersebut  diatas,  maka  perlu  dilakukan  penelitian  untuk mendapatkan  BAL  sebagai  probiotik  yang  bersumber  dari  broiler  itu  sendiri  yaitu pada feses broiler. Pemilihan feses broiler sebagai sumber BAL dengan  pertimbangan bahwa BAL yang terdapat dalam feses adalah BAL yang mampu bertahan hidup dan menyesuaikan  diri  dengan  kondisi  lingkungan  di  dalam  saluran  pencernaan,  karena salah satu syarat utama probiotik yang baik adalah harus memiliki kemampuan untuk bertahan  hidup  ketika  melalui  saluran  pencernaan.  Berdasarkan  hasil  penelitian Mujnisa  (2012)  maka  dilakukan  penelitian  lanjut  untuk  mengetahui  ketahanan  isolat BAL tersebut terhadap berbagai kondisi saluran pencernaan.

## MATERI DAN METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  selama  3  bulan  di  Laboratorium  Mikrobiologi Jurusan Teknologi Pengelolaan Hasil Perikanan Politeknik Negeri Pangkep. Data pada penelitian ini dianalisis secara deskriptif.
Isolat  BAL  yang  diuji  pada  penelitian  ini  adalah  hasil  penelitian  isolasi  dan karakterisasi oleh Mujnisa (2012) pada feses broiler yang masing-masing diberi simbol isolat M1, M2, M3, M4, M5, M7, M8, M23, M26 dan M28. Isolat BAL tersebut memiliki sifat  Gram positif,  katalase negatif dan tipe homofermentatif.
Seleksi  isolat  BAL  pada  feses  broiler  pada  penelitian  ini  mencakup;  ketahanan terhadap  kondisi  saluran  pencernaan  mencakup  ketahanan  terhadap  pH  asam
(modifikasi  Zavaglia et  al .,  1998)  dilakukan  pada  pH  2,  3,  dan  4,  ketahanan  terhadap garam  empedu  (Zavaglia et  al .,  1998)  0,3%,  serta  ketahanan  terhadap  suhu  yang mencakup  suhu  ruang  30 o C,  suhu  tubuh  broiler  41 o C,  dan  suhu    37 o C  sebagai  suhu kontrol.
Ketahanan isolat BAL terhadap kondisi saluran pencernaan (pH, garam empedu, dan suhu) dihitung berdasarkan  selisih unit log jumlah koloni yang tumbuh setelah 48 jam  inkubasi  di  dalam  media  perlakuan  terhadap  unit  log  jumlah  koloni  sebelum inkubasi.  Semakin  kecil  selisih  unit  log,  maka  semakin  tahan  kultur  BAL  yang  diuji terhadap pH.
Koloni mikroba yang terbentuk dihitung berdasarkan Standard Plate Count (SPC) dengan rumus sebagai berikut :
Keterangan :
N    =  Jumlah koloni, dinyatakan dalam koloni per ml atau per g ∑C  =  Jumlah koloni yang berbeda dalam kisaran hitung (25-250 koloni). n1   =  Jumlah cawan pertama yang koloninya dapat dihitung n2   =  Jumlah cawan kedua yang koloninya dapat dihitung
d    =  Pengenceran pertama yang digunakan
Bahan  untuk  uji  ketahanan  terhadap  kondisi  saluran  pencernaan  digunakan media  MRSB  ( deMan Rogosa and Sharp Broth, Oxoid, England),  MRSA ( deMan Rogosa and Sharp Agar; Oxoid, England), BPW ( Buffer peptone water; Merck, Germany), HCl 4N, dan  garam  oxgall  0,3  %  (Sigma).  Peralatan  utama    yang  autoklaf,  inkubator  CO 2 , timbangan  analitik, refrigerator , vortex ,  pipet  mikro,  bunsen,  pH  meter,  pinset, stomecher, tabung elemeyer 50 ml tutup asa, loop inoculation (ose) dan cabinet laminar.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ketahanan terhadap pH asam
Menurut  Jacobsen et  al .,  (1999),  semua  bakteri  yang  berhasil  bertahan  pada kondisi  pH  rendah  dinyatakan  bersifat  tahan  atau  resisten  terhadap  asam.  Hasil penelitian  pada  Gambar  1  memperlihatkan  kesepuluh  isolat  BAL  yang  diisolasi  dari sumber yang sama yaitu dari feses broiler, memiliki ketahanan berbeda terhadap pH 2, pH  3,  dan  pH  4  selama  24  jam.  Secara  umum,  Isolat  BAL  pada  pH  2  mengalami penurunan  jumlah  koloni  yang  paling  tinggi  yaitu  berkisar  antara  3,2  unit  log/ml sampai dengan 5,5 unit log/ml, diikuti penurunan jumlah koloni pada pH 3 berkisar 1,8    unit  log/ml  sampai  dengan  3,1  unit  log/ml  dan  pada  pH  4  penurunan  jumlah koloni berkisar 1,0 unit log/ml  sampai dengan 2,5 unit log/ml.
∑ C
N  =
{(1xn1) + (0,1xn2)} x (d)
Isolat  M1  memiliki  ketahanan  terhadap  pH  asam  yang  lebih  baik  dibanding dengan  isolat  lainnya  yang  ditunjukkan  dengan  penurunan  jumlah  koloni  (log/ml) yang  lebih  rendah  dibanding  isolat  lainnya,  meskipun  pada  kondisi  pH  3  ketahanan isolat  M1  menduduki  peringkat  ke  3  setelah  isolat  M5  dan  isolat  M23,  namun penurunan log yang terjadi masih dalam batas resisten terhadap kondisi pH asam.
Gambar 1 . Ketahanan Isolat BAL terhadap pH 2, 3, dan 4 selama 24 jam
Meskipun  terjadi  aktivitas  penghambatan  pertumbuhan  terhadap  kesepuluh isolat  BAL  pada  pH  asam  yang  ditandai  penurunan    jumlah  koloni,  namun  semua isolat  masih  mampu  hidup  pada  pH  2,  pH  3,  dan  pH  4  sehingga  masih  terdapat  sel yang  lolos  hidup  pada  saat  melewati  proventrikulus  bila  diberikan  bersama-sama dengan pakan, karena pH saluran pencernaan unggas bagian proventrikulus berkisar 2,83 – 3,01 (Sjofjan, 2003).

## Ketahanan terhadap garam empedu
Hasil  pengujian  ketahanan  isolat  terhadap  konsentrasi  garam  empedu  ( oxgall ) 0,3%  (Gambar  2)  memperlihatkan  adanya  penghambatan  pertumbuhan  kesepuluh isolat  BAL  oleh  garam  empedu.  Penurunan  jumlah  koloni  kesepuluh  isolat  BAL terhadap  garam  empedu  berkisar  antara  0,5  unit  log/ml  sampai  dengan  1,6  unit log/ml. Meskipun terjadi penghambatan garam empedu terhadap pertumbuhan BAL tetapi  dari  hasil  penelitian  terlihat  bahwa  kesepuluh  isolat  BAL  masih  mampu bertahan  dan  tumbuh  dalam  medium  yang  mengandung  garam  empedu  sampai konsentrasi 0,3%, ditandai dengan rata-rata penurunan jumlah koloni yang lebih kecil.
Menurut  Zavaglia et  al., (1998),  konsentrasi  garam  empedu  0,3%  merupakan konsentrasi  yang cukup tinggi untuk menyeleksi galur yang resisten terhadap garam empedu, dan semua mikroba yang berhasil hidup setelah ditumbuhkan dalam MRSA ( deMan  Rogosa  Sharpe Agar )  yang  ditambah  0,3% Oxgall ,  dinyatakan  bersifat  tahan terhadap garam empedu. Hal ini mengindikasikan bahwa isolat BAL dari feses broiler ini  berpotensi untuk dikembangkan sebagai probiotik. Namun, dari kesepuluh isolat tersebut, isolat  M1, M23 dan M26 memiliki ketahanan terhadap garam empedu 0,3%
0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 M1 M2 M3 M4 M5 M7 M8 M23 M26 M28 P e n u ru n a n l o g ( cf u /m l) Isolat pH2 pH 3 pH 4
yang  lebih  baik  dibanding  isolat  lainnya,  hal  ini  ditunjukkan  dengan  penurunan jumlah koloni kurang dari 1 unit log/ml (paling resisten).
Gambar 2 . Ketahanan isolat BAL terhadap garam empedu
Mekanisme  penghambatan  garam  empedu  terhadap  pertumbuhan  bakteri disebabkan  karena  garam  empedu  memiliki  struktuk  amphipatik  sehingga  mampu melarutkan  atau  memecah  semua  substansi  sel  yang  mengandung  lipid.  Dinding  sel bakteri  dan  membran  sel  bakteri  mengandung  lipid  sehingga  masuknya  garam empedu ke dalam dinding sel dan membran sel akan menyebabkan dinding sel  dan membran sel menjadi rusak dan kehilangan fungsinya sebagai pelindung bakteri dan filter.  Apabila  bakteri  mengalami  kerusakan  atau  kehilangan  fungsi  pada  dinding selnya, maka akan mengakibatkan bakteri cenderung tidak mampu bertahan terhadap tekanan osmotik sehingga menyebabkan terjadinya lisis atau pengeluaran isi sel yang berakibat kematian sel (Hill, 1995; Mourad dan Eddine, 2006).

## Ketahanan terhadap suhu
Ketahanan BAL pada suhu  suhu ruang 30 o C, suhu tubuh broiler 41 o C  dan suhu 37 0 C (kontrol)   dapat dilihat pada Gambar 3.
Gambar  3  memperlihatkan  kesepuluh  isolat  BAL  yang  diisolasi  dari  sumber yang  sama    mempunyai  ketahanan  yang  berbeda  terhadap  suhu,  ditandai  dengan penurunan  jumlah  koloni  yang  berbeda.    Penurunan  jumlah  koloni  kesepuluh  isolat BAL  pada  suhu  30 o C,  37 o C  dan  41 o C  masing-masing  berkisar  antara  0,6  -  1,4  unit log/ml; 0,1 – 0,5 unit log/ml, dan 0,7 – 1,4  unit log/ml. Meskipun terjadi penurunan jumlah koloni, namun semua isolat mampu bertahan terhadap suhu perlakuan.
Rata-rata isolat BAL mampu tumbuh paling baik pada suhu 37 o C yang ditandai dengan penurunan log yang terendah, diikuti suhu 30 o C dan 41 o C.  Berdasarkan suhu pertumbuhannya  maka  BAL  yang  diisolasi  dari  feses  broiler  ini  tergolong  bakteri mesofilik.  Menurut  Patterson  (1992)  bahwa  bakteri  mesofilik  tumbuh  optimum  pada suhu  20 o C  –  40 o C  dengan  suhu  minimum  pertumbuhan  10 o C  -  20 o C  dan  suhu maksimum 40 o C - 45 o C.
0.8 1.1 1.2 1.0 1.3 1.0 1.6 0.5 0.9 1.1 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8 M1 M2 M3 M4 M5 M7 M8 M23 M26 M28 P e n u ru n a n l o g ( cf u /m l) Isolat
Gambar 3 . Ketahanan  Isolat  BAL terhadap suhu 30 o C, 37 o C  dan  41 o C  selama 24 jam
Tabel 1 .   Urutan ranking  isolat  BAL feses broiler berdasarkan masing-masing sifat yang diuji.
Ranking Sifat Antimikroba pH asam (∆ log) Garam empedu (∆ log) Suhu (∆ log) 30° C 37° C 41° C S. aure us S. typhi pH 2 pH3 pH4 1 M1 M1 M1 M5 M1 M23 M26 M1 , M7, M28 M26 2 M7, M23 M2 M2 M23 M5 M1 M7 M3, M8, M23 M7, M8 3 M5, M28 M28 M7 M1 M7 M26 M1, M28 M4, M26 M1, M4, 23 4 M2 M4, M8 M5 M4 M4, M8 M4, M7 M26 M2 M3 5 M4, M8, M26 M5, M7, M26 M4 M8 M26 M2, M28 M4 M5 M2 6 M3 M23 M8, M28 M3, M7 M3, 28 M3 M3, M23 M5, M28 7 M3 M23, 26 M26 M2 M5 M5, M8 8 M3 M2 M23
M8
9
M28
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 M1 M2 M3 M4 M5 M7 M8 M23 M26 M28 P e n u ru n a n l o g ( cf u /m l) Isolat 30° C 37° C 41° C
Dari  hasil  uji  BAL  terhadap  ketahanan  pH  asam,  ketahanan  terhadap  suhu,  dan ketahanan  terhadap  garam  empedu  terlihat  bahwa  tidak  semua  karakteristik  probiotik BAL  berada pada satu jenis isolat (Tabel 1), sehingga dalam penentuan pemilihan isolat yang  berpotensi  sebagai  probiotik  diperlukan  beberapa  pertimbangan.  Berpedoman pada    Tabel  1,  maka  isolat  M1  sebagai  isolat  terpilih  sebagai  probiotik  berdasarkan karakteristik  penghambatan  terhadap  mikroorganisme  patogen  dan  karakteristik pertumbuhan pada media MRSB pada berbagai kondisi saluran pencernaan.

## KESIMPULAN
Isolat  bakteri  asam  laktat  M1  (BAL  M1)  merupakan  isolat  terpilih  sebagai kandidat probiotik berdasarkan karakteristik penghambatan terhadap mikroorganisme patogen yang lebih baik dibanding isolat lainnya, serta mampu bertahan hidup pada simulasi kondisi saluran pencernaan
Perlu  dilakukan  penelitian  lanjut  untuk  melihat  species  BAL  M1  dan  aplikasi penggunaan  isolat  BAL  M1  dalam  ransum  broiler  sebagai  imbuhan  pakan  pengganti antibiotika sintetik terhadap penampilan produksi dan kualitas daging broiler.

## DAFTAR PUSTAKA
Chou,  L.  S,  and    B.  Weimer.  1999.  Isolation  and    characterization  of  acid  and  bile  tolerant isolates from strains of Lactobacillus acidophilus . J.  Dairy Sci., 62 : 23-31.
Hill,  M.  J.  1995.  Role  of  Gut  Bacteria  in  Human  Toxicology  and  Pharmacology.  Taylor,  New York.
Jacobsen, C. N., V. R. Nielsen, A. E. Hayford, P. L. Moller, K. F. Michaelsen, A. P. Erregard, B. Sandstrom,  M.  Tvede,  and  M.  Jakobsen.  1999.  Screening  of  probiotic  activities  of  forty seven strains of Lactobacillus spp. by in vitro techniques and evaluation of the colonization ability of five selected strains in human.  J. App. Environ. Microbiol. , 65: 4949-4956.
Mourad,  K,  and    K.  N.  Eddine.  2006.  In  vitro  preselection  criteria  for  probiotic Lactobacillus plantarum strains of fermented Olives origin. J . Probio. Prebio., 1(1): 27-32.
Mujnisa, A. 2012. Potensi Bakteri Asam Laktat Hasil Isolasi dari Feses Broiler sebagai Imbuhan Pakan  terhadap  Produktivitas  Broiler.  Disertasi  Program  Pascasarjana  Universitas Hasanuddin, Makassar.
Patterson, J. A. 1992 . Encyclopedia of Microbiology. Academic Press, London.
Sjofjan, O. 2003. Kajian Probiotik AB ( Aspergillus sp dan Bacillus spp) sebagai Imbuhan Ransum dan  Implikasi  Efeknya  terhadap  Mikroflora  Usus  serta  Penampilan  Produksi  Ayam Petelur. Disertasi Program Pasca Sarjana. Universitas Padjadjaran, Bandung.
Venkat,  H.  K.,  P.  S.  Narottam,  and  K.  K.  Jain.  2004.  Effect  of  feeding  Lactobacillus  based probiotics  on  the  gut  microflora,  growth  and  survival  of  postlarvae  of Macrobrachium rosenbergii (de Man). Aquac.Res., 35: 501-507.
Zavaglia, A. G., G. Kociubinski., P. Perez, and G. De Antoni. 1998. Isolation and characterization of Bifidobacterium strains for probiotic formulation. J. Food Protect., 61(7):865-873.