PENGARUH PEMBERIAN FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOL 70% HERBA PEGAGAN TERHADAP PENYEMBUHAN LUKA BAKAR PADA TIKUS PUTIH JANTAN
EFFECT OF ETHYL ACETATE FRACTION ETHANOL 70%

## EXTRACT OF Centella asiatica L . IN HEALING BURN WOUNDED ON ALBINO MALE RAT
Dwitiyanti, Sediarso, Ade Andar Kusuma
Fakultas Farmasi dan Sains Universitas Muhammadiyah Prof. DR. HAMKA Islamic Center, Jl. Delima II/IV, Perumnas Klender, Jakarta Timur
Email: dwity.farmasi@gmail.com

## ABSTRAK
Luka  bakar  merupakan  respon  kulit  dan  jaringan  subkutan  terhadap  suhu  untuk memperbaiki  jaringan  akibat  luka  bakar  digunakan  pegagan.  Herba  pegagan mempunyai  khasiat  untuk  memperbaiki  jaringan  granulasi  kulit  dan  penyembuh luka.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  pemberian  fraksi  etil asetat herba pegagan terhadap penyembuhan luka bakar. Hewan uji yang dipakai adalah tikus putih jantan yang dibagi menjadi 6 kelompok perlakuan. Kelompok I (kontrol  normal),  kelompok  II  (kontrol  negatif),  kelompok  III  (kontrol  positif) dilukai  dan  diberi  povidon  iodium,  kelompok  IV,  V  dan  VI  dilukai  dan  diberi fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol  herba  pegagan  0,37%,  0,93%  dan  1,49%. Punggung  tikus  diinduksi  dengan  logam  panas  dengan  suhu  105 o C.  Pengamatan dilakukan  2  hari  sekali  selama  14  hari.  Data  yang  didapat  diuji  secara  statistik dengan uji ANOVA dua arah yang dilanjutkan dengan uji Tukey. Hasilnya adalah kelompok  konsentrasi  0,93%  dan  konsentrasi  1,49%  memiliki  khasiat  setara dengan kelompok kontrol positif.
Kata Kunci :Luka bakar, herba pegagan, fraksi etil asetat

## ABSTRACT
Burn wounded is a response of skin and subcutaneous tissue to temperatures for tissue  repair  due  to  burns  Centella  asiatica,  has  efficacy  for  repair  granulation tissue of skin and healing wound. The research aims is to prove the effect of ethyl acetate fraction of centella asiatica for healing burn wounded. The research used Male albino rat, that were divided into 6 group. The group I, II, III in subsquently as normal, negative and positive, group IV, V and VI  was wounded and given a 0.37%,  0.93%,  and  1.49%  concentration  of  ethyl  acetate  fraction  of  ethanol extract  of  Centella  asiatica  herb.  Back  of  mouse  induced  by  hot  metal  with
temperature  105 o C.  Observations  were  made    every  2    days  for  14  days.  The result  was  analyzed  using  two-way  ANOVA  and  Tukey  test.  It  can  be  concluded that 0.93% and 1.49% concentration has equivalent efficacy with positive group.
Keyword : Burn wounded, centella asiatica herb, ethyl acetate fraction

## PENDAHULUAN
Pegagan  adalah  tanaman  yang tumbuh  di  seluruh  Indonesia  serta daerah-daerah  beriklim  tropis  pada umumnya.  Pegagan  dapat  tumbuh mulai  di  dataran  rendah  hingga ketinggian 2500 m dpl. Pegagan juga tumbuh  di  tempat  lembab  dan  subur seperti  padang  rumput,  di  antara batu-batu  dan  di  tepi  jalan.  (BPOM RI,  2010).  Pegagan  mengandung triterpenoid asiatikosida,
madekasosida,  asam  asiatat,  asam madekasat, asam indosentoat,
bayogenin, asam euskapat, flavonoid, kaempferol, kuersetin, saponin, sentelasapogenol  A,  B,  dan  D, poliasetilen, kadiyenol, sentelin, asiatisin,  dan  sentelisin.  Pegagan secara  tradisional  banyak  digunakan untuk  penyakit  kulit.  Disamping  itu pegagan juga digunakan untuk mengobati  sakit  perut,  batuk,  batuk berdarah,  penambah  selera  makan, asma,  dan  penyembuh  luka  (BPOM RI, 2010).
Luka bakar merupakan respons kulit  dan  jaringan  subkutan  terhadap suhu.  Luka  bakar  dengan  ketebalan parsial  merupakan  luka  bakar  yang tidak merusak epitel kulit atau hanya merusak sebagian dari epitel. Biasanya dapat pulih dengan penanganan  konservatif.  Luka  bakar dengan  ketebalan  penuh  merusak sumber-sumber pertumbuhan kembali epitel kulit dan bisa membutuhkan  eksisi  dan  cangkok kulit  jika  luas  (Grace  and  borley, 2007).
Berdasarkan studi pustaka senyawa yang berperan untuk pengobatan  luka  bakar  pada  herba pegagan  adalah asiaticoside yang merupakan senyawa glikosida triterpenoid  dan  berdasarkan  tingkat kepolarannya  senyawa  ini  berada pada  fase  semipolar  menuju  polar (Rismana et  al., 2013),  oleh  karena itu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut dengan  menggunakan  fraksi  etil asetat herba pegagan dalam
penyembuhan luka bakar.

## Pengaruh Pemberian Fraksi
Berdasarkan  hal  tersebut  maka dilakukan  penelitian  uji  aktivitas penyembuhan  luka  bakar  fraksi  etil asetat  ekstrak  etanol  herba  pegagan terhadap tikus putih jantan.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  aktivitas  penyembuhan luka  bakar  fraksi  etil  asetat  ekstrak etanol  herba  pegagan  ( Centella asiatica (L.)  Urb.)  terhadap  luka bakar  pada  punggung  tikus  putih diinduksi logam panas.

## METODE PENELITIAN
Alat  yang  digunakan  antara lain:  kandang  untuk  hewan  uji, perlengkapan  tempat  makan  dan minum tikus, neraca analitik (OHAUS),  mortir,  stamper,  kaca arloji,  jangka  sorong,  kapas  pisau cukur dan keping logam.
Bahan  yang  dibutuhkan  antara lain  pegagan  yang  diperoleh  dari Balai  Penelitian  Tanaman  Rempah dan  Obat  (BALITRO),  etanol  70%, n-heksan,  etil  asetat,  phenobarbital injeksi,  akuades,  hewan  percobaan tikus putih jantan galur SD ( Sprague Dawley )  berumur  2-3  bulan,  berat badan 150-200 gram.
Herba  pegagan  diperoleh  dari Balitro  dan  Determinasi  tanaman dilakukan di Pusat Botani Herbarium Bogoriense LIPI Cibinong, Bogor.
Herba  pegagan  yang  telah
dikumpulkan dibersihkan dari pengotor dengan air bersih. Selanjutnya  dtimbang  sebagai  berat segar  sebesar  4  kg,  kemudian dikeringkan dengan cara
menjemurnya  di  panas  matahari menggunakan  alas  (Darwati,  2012). Sampel  yang  telah  kering  diserbuk dengan blender. Serbuk yang diperoleh  diayak  dengan  pengayak mesh  60  lalu  disimpan  dalam  wadah bersih dan tertutup rapat.
Serbuk  kering  sebanyak  1  kg dimaserasi dengan etanol 70% sebanyak  10  liter,  lalu  direndam selama  3  hari  disertai  dengan pengadukan, setelah 3 hari dilakukan penyaringan, dan ampasnya dimaserasi  kembali  dengan  etanol 70%  dengan  menggunakan  prosedur yang  sama.  Maserasi  dilakukan sebanyak  tiga  kali.  Hasil  maserasi diuapkan menggunakan vacuum rotary  evaporator hingga  diperoleh ekstrak  kental  sebesar  220  gram. (Depkes RI, 2008).
Ekstrak  kental  etanol  70% dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah kemudian  difraksinasi  dengan  n- heksan  (1:1),  kocok  selama  ±15 menit.  Setelah  itu  didiamkan  sampai terbentuk lapisan n-hexan dan lapisan  etanol  70%.  Lapisan  n- heksan dipisahkan dari lapisan etanol 70%.  Kemudian  difraksinasi  lapisan etanol  70%  dengan  etil  asetat  (1:1),
dikocok selama ±15 menit.
Kemudian  ditambahkan  air  hangat secukupnya,  kocok  selama  ±15 menit.  Lalu didiamkan beberapa saat hingga  terbentuk  lapisan  etil  asetat dan  lapisan  etanol  70%.  Lapisan  etil asetat  dipisahkan  dengan  lapisan etanol.  Lapisan  tersebut  disebut sebagai  fraksi  etil  asetat.  Fraksi  etil asetat diuapkan dengan rotary evaporator hingga  diperoleh  fraksi kental.  Kemudian  fraksi  tersebut dikeringkan  dengan  oven  pada  suhu 50 o C.
Pada  penelitian  ini,  digunakan obat  pembanding  povidon  iodium. Konsentrasi  povidon  iodium  yang dipakai  adalah  10%.  Penelitian  ini menggunakan  3  variasi  konsentrasi fraksi etil asetat herba pegagan, yaitu
konsentrasi 0,37%, konsentrasi 0,93%, dan konsentrasi 1,49%.
Hewan  uji  dibagi  menjadi  6 kelompok  dengan  masing-masing kelompok  terdiri  dari  4  hewan  uji. Kelompok  I  tidak  dilukai  (kelompok kontrol  normal),  kelompok  II  hanya dilukai  (kelompok  kontrol  negatif), kelompok  III  dilukai  dan  diberi fraksi povidon iodium (kontrol positif),  kelompok  IV  dilukai  dan diberi fraksi etil asetat herba pegagan konsentrasi  0,37%,  kelompok  V dilukai  dan  diberi  fraksi  etil  asetat herba  pegagan  konsentrasi  0,93%, kelompok  VI  dilukai  dan  diberi fraksi  etil  asetat  herba  pegagan konsentrasi 1,49%.
Pembuatan luka bakar dilakukan dengan cara menempelkan logam yang telah dipanaskan sebelumnya  di  dalam  oven  dengan suhu  105 o C,  setelah  itu  ditempelkan di  punggung  tikus  yang  sebelumnya telah  dicukur  rambutnya  terlebih dahulu selama 10
detik (Widianingtias, 2010).
Pemberian  fraksi  etil  asetat herba  pegagan  dilakukan  sehari setelah  pembuatan  luka  sampai  hari ke-13  pada  waktu  pagi  hari  dengan
Pengaruh Pemberian Fraksi
cara  dioleskan  rata  pada  punggung tikus yang telah dibuat luka.
Pengukuran  dilakukan  dengan cara mengamati luas daerah luka dan persentase penyembuhan luka, dengan cara mengukur diameter luka yang  diukur  pada  arah  vertikal, horizontal dan kedua diagonal.
Pengukuran  luka  dilakukan  sehari setelah pembuatan luka dan dilanjutkan  2  hari  berikutnya  selama 14 hari.
Data  yang  digunakan  untuk analisis statistik adalah data diameter akhir luka bakar pada saat pengukuran hari ke-2 sampai hari ke- 14.  Data    ditentukan  terlebih  dahulu normalitas  dan  homogenitasnya  dari setiap  data  dan  dilanjutkan  dengan uji  ANOVA  dua  arah  dengan  taraf
signifikansi 95% (α  =  0,05). Kemudian dilihat ada tidaknya perbedaan  yang  bermakna,  jika terdapat  perbedaan  yang  bermakna maka dilanjutkan dengan uji tukey.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji identifikasi dilakukan untuk  mengetahui  kandungan  kimia yang  terdapat  dalam  herba  pegagan. Hasil  penapisan  fitokimia  dapat dilihat pada tabel I.
Hasil penyembuhan luka bakar pada  tikus  putih  jantan  dengan pemberian  fraksi  etil  asetat  herba pegagan  dilakukan  dari  hari  kedua hingga  hari  ketiga  belas.  Hasil pengamatan  berupa  diameter  luka bakar  selama  14  hari  pengamatan dapat dilihat pada tabel II.
Tabel I . Penapisan fitokimia herba pegagan No. Metabolit sekunder Hasil Serbuk kering Fraksi etil asetat 1 Alkaloid + + 2 Flavonoid + + 3 Saponin + + 4 Tanin + + 5 Steroid dan Terpenoid + +
Hari Kontrol Positif Kontrol Negatif Konsentrasi 0,37% Konsentrasi 0,93% Konsentrasi 1,49% 2 1,7590 1,9336 1,9336 1,9501 1,8289 4 1.4496 1.7925 1,7626 1,6909 1,6593 6 1.1387 1.6668 1,5311 1,4487 1,3029 8 0,8786 1,5257 1,2377 1,1197 0,9678 10 0,7055 1,4495 0,9608 0,7443 0,5561 12 0.2730 1,2356 0,6443 0,3800 0,2310 14 0,0850 0,8713 0,3550 0,1121 0
Gambar 1. Grafik batang hubungan antara diameter luka bakar terhadap hari
Gambar  2. Grafik  batang  hubungan  antara  persentase  akhir  penyembuhan  luka  bakar  terhadap hari 0 0,5 1 1,5 2 2,5 2 4 6 8 10 12 14 D iam e te r lu ka b akar ( cm ) Hari Kontrol Positif Kontrol Negatif Konsentrasi 0,37% Konsentrasi 0,93% Konsentrasi 1,49% 0 20 40 60 80 100 120 2 4 6 8 10 12 14 Per se n ta se p en y em b u h a n lu k a b a k a r (% ) Hari Kontrol Normal Kontrol Negatif Konsentrasi 0,37%
Konsentrasi 0,93%
Konsentrasi 1,49%
Pengaruh Pemberian Fraksi
Tabel III. Persentase penyembuhan luka bakar tiap kelompok (%) Hari Kontrol Positif Kontrol Negatif Konsentrasi 0,37% Konsentrasi 0,93% Konsentrasi 1,49% 2 22,63 3,8 6,60 20,11 16,33 4 47,54 19,59 23,32 28,56 31,15 6 67,59 30,52 58,17 64,83 57,39 8 80,63 42,35 61,54 68,61 76,57 10 87,35 47,42 76,91 86,11 92,25 12 97.95 61,82 88,09 96,38 98,64 14 99,77 80,89 96,64 99,67 100
Untuk  melihat  seberapa  besar aktivitas  fraksi  etil  asetat  herba pegagan  dalam  penyembuhan  luka bakar, maka data diameter luka bakar tiap  kelompok  perlakuan  tersebut kemudian  diubah  dalam  bentuk persentase  penyembuhan  luka  bakar yang dapat dilihat pada tabel III.
Pada  tabel  rata-rata  diameter luka  bakar  didapatkan  bahwa  pada kelompok  yang  diberi  konsentrasi 0,37%,  0,93%,  dan  konsentrasi 1,49% fraksi etil asetat ekstrak etanol herba  pegagan  dan  kontrol  positif menunjukkan adanya aktivitas penyembuhan  luka  bakar  yang  lebih baik  dibandingkan  kontrol  negatif. Hal  ini  dibuktikan  dengan  besarnya persentase  penyembuhan  luka  pada tiap kelompok perlakuan dan
kelompok kontrol positif dibandingkan dengan persentase
kelompok kontrol negatif.
Simplisia herba pegagan didapat  dari  budidaya  tanaman  obat di  BALITTRO  Bogor.    Hal  ini dilakukan  untuk  menghindari  faktor- faktor  yang  dapat  mempengaruhi hasil percobaan serta untuk mendapatkan simplisia dengan kualitas  yang  baik.  Pemeriksaan kandungan  kimia  fraksi  dilakukan untuk  mengetahui  senyawa  aktif yang  terdapat  pada  simplisia  herba pegagan.  Dari  hasil  pemeriksaan bahwa  herba  pegagan  mengandung alkaloid,  flavanoid,  tanin,  saponin, steroid dan terpenoid.
Herba  pegagan  yang  didapat kemudian dikeringkan di bawah sinar matahari  serta  diberi  alas  (Darwati, 2012).  Pengeringan  bertujuan  untuk mengurangi  kadar  air  yang  terdapat di simplisia, sehingga dapat disimpan dalam waktu yang lebih lama. Selain itu  pengeringan  juga  mencegah simplisia  agar  tidak  berjamur  dan
kandungan kimia zat yang berkhasiat tidak berubah karena proses fermentasi.
Metode ekstraksi yang digunakan  adalah  metode  maserasi. Metode  ini  dipilih  dengan  tujuan agar menghindari rusaknya senyawa- senyawa  yang  terdapat  di  dalam simplisia  akibat  pemanasan.  Pelarut yang  digunakan  untuk  maserasi  ini adalah  etanol  70%.  Pemilihan  etanol 70%  sebagai  pelarut  karena  etanol adalah pelarut yang mudah melarutkan senyawa-senyawa
organik  yang  ada  pada  simplisia,
selain itu etanol juga dapat menghambat pertumbuhan mikroorganisme yang mengakibatkan  rusaknya  kandungan simplisia.  Maserat  yang  didapat kemudian dipekatkan dengan menggunakan vacum rotary
evaporator. Pemekatan bertujuan untuk meningkatkan kandungan ekstrak herba pegagan dengan mengurangi kadar air dan
mengurangi  sisa  pelarut  pada  saat proses maserasi.
Fraksi  herba  pegagan  dibuat dengan  cara  pemisahan  ekstraksi berdasarkan  tingkat  kepolaran  yakni
berturut-turut  menggunakan  pelarut n-heksan,  dan  etil  asetat.  Proses  ini bertujuan untuk meningkatkan kandungan senyawa yang dikehendaki  dengan  menghilangkan atau  memisahkan  senyawa  yang tidak dikehendaki semaksimal mungkin,  sehingga diperoleh ekstrak yang lebih murni.
Pemilihan povidon iodium sebagai  bahan  pembanding  adalah karena  povidon  iodium  merupakan salah satu zat yang umum digunakan sebagai  pengobatan  pada  penderita luka.  Povidon  iodium  juga  bersifat antiseptik, sehingga dapat mempercepat  dalam  penyembuhan pada luka.
Luka  bakar  dibuat  dengan  cara menempelkan  logam  panas  yang dipanaskan  dalam  oven  dengan  suhu 105 0 C ke punggung tikus. Luka akan berbentuk  oval  setelah  24  jam.  Hal ini  terjadi  akibat  adanya  gerakan yang  dilakukan  oleh  hewan  uji, sehingga  mengakibatkan  luka  bakar menjadi  tertarik  di  bagian  atas  dan bawah.  Pada  24  jam  pertama  setelah luka  dibuat  akan  terjadi  proses inflamasi  dan  proses  epitelisasi. Pengukuran  diameter  luka  bakar
Pengaruh Pemberian Fraksi
dilakukan  1  hari  setelah  dilakukan pembuatan  luka  bakar  kemudian dilanjutkan  selama  2  hari  sekali sampai  hari  ke-14.  Hari  ke-2  sampai hari  ke-14  adalah  fase  dimana terjadinya granulasi akibat pembentukan  serat  kolagen  yang akan bertautan pada tepi luka.
Pada hari ke-2 hingga hari ke-13 dilakukan pemberian fraksi etil asetat herba  pegagan  untuk  kelompok perlakuan  dan  baku  pembanding povidon  iodium  pada  kelompok kontrol  positif. Pembuatan fraksi  etil asetat  herba  pegagan  dilakukan setiap 2 hari sekali. Hal ini ditujukan untuk  menjaga  kondisi  sediaan  agar tetap  stabil  sehingga  diharapkan dapat memaksimalkan proses penyembuhan luka bakar.
Data  hasil  diameter  akhir  luka bakar  yang diperoleh terlebih dahulu diuji  normalitas dan homogenitasnya dan  dilanjutkan  dengan  analisa menggunakan  uji  statistik    ANOVA dua  arah,  dan  apabila  ada  perbedaan yang  bermakna  maka  dilanjutkan dengan  uji  Tukey.  Data  hasil diameter  akhir  luka  bakar  kemudian dirubah  pula  kedalam  persentase penyembuhan  luka  untuk  melihat
seberapa aktivitas penyembuhan luka bakar yang dihasilkan oleh fraksi etil asetat herba pegagan.
Pada uji lanjut Tukey menunjukkan bahwa terdapat
perbedaan  bermakna  dari  kelompok kontrol positif, kelompok konsentrasi 0,93%,  dan  kelompok  konsentrasi 1,49%  dengan  kelompok  kontrol negatif, dan tidak terdapat perbedaan bermakna antara kelompok konsentrasi  0,93%  dan  kelompok konsentrasi  1,49%  dengan  kontrol positif.  Hal  ini  didukung  dengan besarnya aktivitas penyembuhan luka bakar pada kelompok kontrol positif, kelompok  konsentrasi  0,93%  dan kelompok konsentrasi 1,49%.
Dari hasil data persentase penyembuhan  luka  bakar  didapatkan bahwa  hari  ke-14  di  tiap  kelompok mengalami  persentase  penyembuhan luka  bakar  yang  tinggi,  dan  pada hasil uji anova dua arah menunjukkan bahwa tidak ada perbedaan  bermakna  antara  hari  ke- 14  dan  hari  ke-12  sehingga  dapat disimpulkan bahwa hari ke-12 adalah hari yang optimum dalam penyembuhan  luka  bakar.  Hal  ini didukung pula dari besarnya
persentase  penyembuhan  luka  bakar dari  semua  kelompok  perlakuan  dan kelompok kontrol positif dan kontrol negatif pada hari ke-12.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian, dapat  disimpulkan  bahwa  fraksi  etil asetat herba pegagan ( Centella asiatica (L.) Urb.) memiliki aktivitas dalam  penyembuhan  luka  bakar. Konsentrasi  terbaik  terdapat  pada konsentrasi  0,93%  dan  1,49%    yang sebanding  dengan  kontrol  positif dalam  penyembuhan  luka  bakar. Pada  persentase  penyembuhan  luka bakar  didapatkan  hari  ke-12  adalah hari  yang  optimum  dalam  proses penyembuhan luka bakar yang ditunjukkan    dengan  besarnya  hasil persentase  penyembuhan  luka  bakar pada semua kelompok perlakuan.

## DAFTAR PUSTAKA
Badan  Pengawas  Obat  dan  Makanan Republik Indonesia, 2010, Serial  Data  Ilmiah  Terkini Tumbuhan Obat, Penerbit Badan  Pengawas  Obat  dan Makanan  Republik  Indonesia. Jakarta. Hlm. 1-4. Darwati  I.,  2012, Budidaya  dan Pasca Panen Pegagan (Centella asiatica), Balai
Penelitian  Tanaman  Rempah dan Obat. Bogor.
Depkes RI, 2008, Farmakope Herbal Edisi I , Departemen Kesehatan.
Jakarta: Hlm. 174.
Grace P A., Borley N R., 2007, At a Glance  Ilmu  Bedah  Edisi  3, Terjemahan:  Vidhia  Umami. Penerbit Erlangga, Jakarta:
Hlm. 87. Rismana  E,  Rosidah  I,  Prasetyawan Y,  Bunga  O,  Erna  Y.,  2013, Efektivitas Khasiat Pengobatan Luka Bakar Sediaan Gel Mengandung  Fraksi  Ekstrak Pegagan  Berdasarkan  Analisis Hidroksiprolin dan Histopatologi Pada Kulit Kelinci. Buletin Penelitian Kesehatan ,  vol. 41 .  Pusat Teknologi Farmasi dan Medika, Badan Pengkajian dan Penerapan  Teknologi,  Jakarta: Hlm. 46 Widianingtyas  D.,  2010,  Pengaruh Perawatan dengan Ekstrak Daun Pegagan ( Centella asiatica )  dalam  Mempercepat Penyembuhan Luka Bakar Derajat  Dua  Dangkal  Pada Tikus Putih ( Rattus novergicus ) Strain Wistar, Skripsi ,  Universitas  Brawijaya,
Malang .