## Uji Sitotoksik Ekstrak Etanol Kulit Batang Awar-awar dengan Metode BSLT
Alya Hermawanfutri, Siti Hazar*
Prodi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Islam Bandung, Indonesia

## A R T I C L E   I N F O
Article history : Received  : 11/11/2023 Revised : 14/12/2023
Published  : 23/12/2023
Creative Commons Attribution- NonCommercial-ShareAlike 4.0 International License.
Volume : 3
No. : 2
Halaman  : 81-88 Terbitan  : Desember 2023

## A B S T R A K
Kanker merupakan salah satu penyakit yang menjadi masalah kesehatan utama di dunia. Daun pulai (Alstonia scholaris (L.) R. Br.) merupakan bagian tanaman yang diduga memiliki potensi sebagai antikanker karena mengandung golongan senyawa metabolit sekunder seperti alkaloid. Golongan senyawa alkaloid diketahui memiliki aktivitas yang dapat menghambat pertumbuhan dan membunuh sel kanker. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas sitotoksik dan nilai LC50 dari ekstrak etanol, fraksi air, fraksi etil asetat, dan fraksi n-heksan daun pulai. Uji sitotoksik dilakukan dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) terhadap larva udang Artemia franciscana Kellogg dan analisis probit untuk mengetahui nilai LC50. Konsentrasi uji yang digunakan adalah 10 ppm, 100 ppm, 250 ppm, 500 ppm, 750 ppm, dan 1000 ppm. Pengujian aktivitas sitotoksik ekstrak etanol, fraksi air, fraksi etil asetat, dan fraksi n-heksan daun pulai menghasilkan nilai LC50 berturut-turut sebesar 207,2526 ppm, 282,1630 ppm, 187,5858 ppm, dan 484,2839 ppm. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol, fraksi air, fraksi etil asetat, dan fraksi n-heksan daun pulai memiliki efek sitotoksik dan berpotensi sebagai antikanker yang ditandai dengan nilai LC50 kurang dari 1000 ppm.
Kata Kunci : Daun pulai; uji sitotoksik, Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)

## A B S T R A C T
Cancer  is  a  disease  that  is  a  major  health  problem  in  the  world.  Pulai  leaves (Alstonia scholaris (L.) R. Br.) are part of a plant that is thought to have anticancer potential because it’s contain secondary metabolites such as alkaloid. Alkaloid compounds are known to have activity that can inhibit growth and kill cancer cells. This study aims to determine the cytotoxic activity and LC50 value of the ethanol extract, water fraction, ethyl acetate fraction, and n-hexane fraction of pulai leaves. The cytotoxic test was carried out using the Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) method on Artemia franciscana Kellogg shrimp larvae and probit analysis to determine the LC50 value. The test concentrations used were 10 ppm, 100 ppm, 250 ppm, 500 ppm, 750 ppm, and 1000 ppm. Testing the cytotoxic activity of the ethanol extract, water fraction, ethyl acetate fraction, and n-hexane fraction of pulai leaves produced LC50 values of 207,2526 ppm, 282,1630 ppm, 187,5858 ppm, and 484,2839 ppm, respectively. This implied that the ethanol extract, water fraction, ethyl acetate fraction, and n-hexane fraction of pulai leaves have a cytotoxic effect and have anticancer potential as indicated by an LC50 value of less than 1000 ppm.
Keywords: Pulai leaves; cytotoxic test; Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).
@ 2023 Jurnal Riset Farmasi Unisba Press. All rights reserved.

## A. Pendahuluan
Kanker  merupakan  salah  satu  penyakit  yang  menjadi  masalah  kesehatan  utama  di  dunia  dan  penyebab kematian  terbesar  kedua  setelah  penyakit  kardiovaskular.  Kanker  disebabkan  oleh  pertumbuhan  dan perkembangan  sel  abnormal  yang  dapat  menyerang  jaringan  sekitar  dan  menyebar  ke  organ  tubuh  lainnya. Selain itu, kanker dapat disebabkan oleh faktor endogen seperti genetik dan hormon, serta faktor eksogen yang dapat  berasal  dari  logam  karsinogen,  makanan,  radiasi  ultraviolet,  rokok,  senyawa  karsinogenik,  dan  virus (16). Berdasarkan data Global Burden of Cancer (Globocan) tahun 2020, terdapat 19.292.789 kasus kanker di dunia dengan jumlah kematian sebanyak 9.958.133 kasus.
Pengobatan  kanker  dapat  dilakukan  dengan  pembedahan,  radioterapi,  dan  kemoterapi.  Akan  tetapi, pengobatan  dengan  pembedahan  tidak  dapat  dilakukan  pada  sel  kanker  yang  telah  menyebar,  sementara pengobatan dengan radioterapi dan kemoterapi dapat memberikan hasil yang baik tetapi menimbulkan efek samping dan toksisitas besar karena sel normal ikut mati sehingga pertumbuhannya terganggu (3). Kemoterapi dilakukan dengan cara memberikan obat yang dapat merusak sel kanker (sitostatik) menggunakan dosis tinggi. Obat sitostatik ini bekerja secara tidak selektif, karena selain bersifat toksik terhadap sel kanker obat ini juga dapat menyerang banyak sel normal hingga menyebabkan kematian sel sehingga sel kanker menjadi resisten terhadap obat. Oleh karena itu, beberapa penelitian mulai ditujukan pada pengujian potensi bahan alam dengan pemanfaatan tanaman obat sebagai agen kemopreventif yang berpotensi menjadi agen pendamping kemoterapi untuk meningkatkan sensitifitas sel kanker dan mengurangi efek samping kemoterapi (15).
Tanaman  yang  termasuk  ke  dalam  suku  Apocynaceae  diketahui  memiliki  aktivitas  antikanker,  salah satunya adalah tanaman tapak dara ( Catharanthus roseus (L.)). Tanaman tapak dara diketahui mengandung senyawa alkaloid yang memiliki aktivitas antikanker seperti katarantin dan vinkristin. Berdasarkan penelitian yang  telah  dilakukan  oleh  Putri et  al .  (10),  hasil  uji  sitotoksik  dengan  metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT)  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  tapak  dara  memiliki  efek  sitotoksik  dengan  nilai  LC 50 = 305,1406 µg/mL.
Tanaman pulai ( Alstonia scholaris (L.) R. Br.) merupakan salah satu tanaman yang termasuk ke dalam suku Apocynaceae yang  memiliki  aktivitas  kemopreventif,  induksi  apoptosis,  antioksidan,  dan imunomodulator  (2).  Pemanfaatan  tanaman  pulai  berhubungan  dengan  kandungan  golongan  senyawa metabolit  sekundernya,  terutama  senyawa  alkaloid  yang  memiliki  aktivitas  apoptosis  dan  bersifat immunomodulatori  (7).  Golongan  senyawa  alkaloid  memiliki  efek  farmakologi  seperti  antikanker, antioksidan,  antiinflamasi,  dan  antimikroba  (14).  Pada  bagian  bunga,  buah,  daun,  kulit  batang,  dan  akar tanaman pulai mengandung senyawa alkaloid yang sebagian besar terkandung pada bagian daun (4).
Melihat adanya potensi senyawa antikanker pada tanaman suku Apocynaceae , maka pada penelitian ini akan dilakukan uji sitotoksik ekstrak etanol dan fraksi daun pulai terhadap larva udang Artemia franciscana Kellogg  dengan  metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT)  yang  merupakan  uji  pendahuluan  untuk mengetahui  dan  menentukan  efek  sitotoksik  dari  suatu  senyawa  yang  terkandung  dalam  tanaman.  Metode BSLT telah terbukti memiliki korelasi positif dengan aktivitas antikanker, sehingga sering digunakan untuk skrining awal senyawa antikanker. Suatu senyawa dikatakan memiliki efek sitotoksik apabila nilai LC 50 kurang dari 1000 µg/mL (1; 10).

## B. Metode Penelitian
Pada penelitian ini dilakukan uji sitotoksik ekstrak etanol dan fraksi daun pulai ( Alstonia scholaris (L.) R. Br.) terhadap larva udang Artemia franciscana Kellogg yang dilakukan di laboratorium riset Program Studi Farmasi  Universitas  Islam  Bandung.  Penelitian  ini  dilakukan  melalui  beberapa  tahap  yaitu  pengumpulan bahan,  determinasi,  pembuatan  simplisia,  ekstraksi,  penetapan  parameter  standar  terhadap  simplisia  dan ekstrak,  penapisan  fitokimia  terhadap  simplisia  dan  ekstrak,  fraksinasi,  penapisan  fitokimia,  dan  pengujian sitotoksik.
Pembuatan  simplisia  dilakukan  melalui  beberapa  tahap  yaitu  sortasi  basah,  pencucian,  perajangan, pengeringan,  pembuatan  serbuk,  dan  sortasi  kering.  Ekstraksi  simplisia  dilakukan  dengan  metode  maserasi menggunakan pelarut etanol 96%. Penetapan parameter standar dilakukan menggunakan dua parameter, yaitu parameter spesifik dan parameter nonspesifik. Parameter spesifik meliputi penetapan kadar sari larut air dan penetapan  kadar  sari  larut  etanol  terhadap  simplisia.  Sedangkan  parameter  nonspesifik  meliputi  penetapan susut  pengeringan,  penetapan  kadar  air,  penetapan  kadar  abu  total,  penetapan  kadar  abu  tidak  larut  asam terhadap simplisia dan penetapan bobot jenis terhadap ekstrak. Fraksinasi dilakukan dengan metode ekstraksi
cair-cair menggunakan pelarut yang memiliki kepolaran yang berbeda yaitu pelarut air, pelarut etil asetat, dan pelarut n-heksan. Penapisan fitokimia dilakukan pada simplisia, ekstrak etanol, dan fraksi daun pulai meliputi pengujian senyawa alkaloid, flavonoid, saponin, polifenol, tanin, antrakuinon, triterpenoid atau steroid, dan monoterpenoid  atau  seskuiterpenoid  Pengujian  aktivitas  sitotoksik  ekstrak  etanol  dan  fraksi  daun  pulai dilakukan dengan metode  BSLT  terhadap  larva  udang  Artemia  franciscana  Kellogg  dengan  dua  perlakuan, yaitu  kelompok  kontrol  negatif  dan  kelompok  uji.  Pada  kelompok  uji  digunakan  beberapa  seri  konsentrasi yaitu 10 ppm, 100 ppm, 250 ppm, 500 ppm, 750 ppm, dan 1000 ppm. Parameter yang digunakan adalah jumlah kematian larva udang serta nilai LC 50 dengan metode analisis probit dan persamaan regresi.

## C. Hasil dan Pembahasan

## Penyiapan Bahan Uji
Bahan  tanaman yang digunakan  pada penelitian  ini  adalah daun  pulai  ( Alstonia  scholaris (L.)  R.  Br.) yang diperoleh dari kebun percobaan Manoko, Desa Cikahuripan, Kecamatan Lembang, Kabupaten Bandung Barat, Provinsi  Jawa  Barat  dan  hewan  uji  yang  digunakan  adalah  larva  udang Artemia  franciscana Kellogg  yang diperoleh  dari  toko  Adraquatic  Bandung.  Berdasarkan  hasil  determinasi  yang  telah  dilakukan,  menyatakan bahwa  bahan  tanaman  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  daun  pulai  dengan  nama  latin  ( Alstonia scholaris (L.) R. Br.) dan hewan uji yang digunakan pada penelitian ini adalah Artemia franciscana Kellogg. Daun pulai segar sebanyak 9 kg disortasi basah, kemudian dicuci dengan air bersih lalu dirajang kecil- kecil  dan  dikeringkan  dengan  cara  diangin-anginkan  di  udara  terbuka  yang  terlindung  dari  sinar  matahari. Daun pulai yang telah kering kemudian dihaluskan menggunakan blender, sehingga diperoleh serbuk simplisia sebanyak 1,41 kg. Serbuk simplisia daun pulai sebanyak 1 kg diekstraksi menggunakan pelarut etanol 96% sebanyak 10 liter dengan metode maserasi. Hasil ekstraksi diperoleh ekstrak kental daun pulai sebanyak 132,75 gram  dengan  rendemen  yang  dihasilkan  sebesar  13,27%.  Maserasi  merupakan  metode  sederhana  dalam ekstraksi yang dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia dengan pelarut yang sesuai dengan beberapa kali  pengadukan  dalam  wadah  tertutup  rapat  pada  suhu  kamar  dan  terhindar  dari  cahaya  agar  mencegah terjadinya  reaksi  yang  dikatalisis  oleh  cahaya.  Selain  pengerjaan  dan  peralatan  yang  digunakan  sederhana, pemilihan  metode  maserasi  ini  berdasarkan  dari  keuntungannya,  di  mana  dalam  proses  ekstraksi  tidak memerlukan panas sehingga dapat mencegah terjadinya kerusakan senyawa-senyawa yang bersifat termolabil Masing-masing ekstrak kental daun pulai sebanyak 10 gram difraksinasi dengan metode ekstraksi cair- cair menggunakan tiga pelarut dengan tingkat kepolaran yang berbeda dan tidak saling bercampur, yaitu n- heksan,  etil  asetat,  dan  air.  Penggunaan  metode  ekstraksi  cair-cair  bertujuan  untuk  memaksimalkan  proses ekstraksi  sehingga  senyawa yang  diinginkan dapat  terpisah.  Senyawa-senyawa  yang bersifat  nonpolar  akan tertarik oleh pelarut nonpolar dan senyawa-senyawa yang bersifat polar akan tertarik oleh pelarut polar (5). Pada penelitian ini diperoleh hasil fraksi air sebanyak 19,91 gram dengan rendemen sebesar 39,83%, fraksi etil asetat sebanyak 17,87 gram dengan rendemen sebesar 35,75%, dan fraksi n-heksan sebanyak 3,36 gram dengan rendemen sebesar 6,72%.

## Penetapan Parameter Standar Bahan Uji
Penetapan parameter standar bahan uji adalah proses yang dilakukan untuk memastikan simplisia daun pulai telah memenuhi persyaratan berdasarkan parameter yang telah ditentukan. Penetapan ini menggunakan dua parameter,  yaitu  parameter  spesifik  dan  parameter  nonspesifik  (9).  Hasil  penetapan  parameter  spesifik  dan nonspesifik adalah sebagai berikut:
Tabel 1. Hasil Penetapan Parameter Spesifik dan Nonspesifik Bahan Uji
Parameter standar Hasil Kadar sari larut air 21,42% Kadar sari larut etanol 14,82% Susut pengeringan 8,24% Kadar air 9,25% Kadar abu total 9,84% Kadar abu tidak larut asam 0,92% Bobot jenis ekstrak 1,01

## Penapisan Fitokimia Simplisia, Ekstrak Etanol, dan Fraksi Daun Pulai (Alstonia scholaris (L.) R. Br.)
Penapisan fitokimia merupakan metode yang sederhana, selektif, dan cepat untuk  mengidentifikasi golongan senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam simplisia, ekstrak etanol, dan fraksi daun pulai (11).
Tabel 2. Hasil Penapisan Fitokimia Simplisia, Ekstrak Etanol, dan Fraksi Daun Pulai ( Alstonia scholaris (L.) R. Br.)
Keterangan: (+) = Terdeteksi (-)  = Tidak terdeteksi

## Uji Sitotoksik Ekstrak dan Fraksi Daun Pulai (Alstonia scholaris (L.) R. Br.)
Uji sitotoksik dilakukan terhadap ekstrak etanol, fraksi air, fraksi etil asetat, dan fraksi n-heksan daun pulai secara in vitro dengan metode Brine Shirmp Lethality Test (BSLT) menggunakan larva udang Artemia franciscana Kellogg sebagai hewan uji. Konsentrasi yang digunakan adalah 10 ppm, 100 ppm, 250 ppm, 500 ppm, 750 ppm, dan 1000 ppm. Pengujian dilakukan selama 24 jam terhadap larva udang yang telah berumur 48 jam. Pengamatan dilakukan terhadap jumlah kematian larva udang.
Tabel 3. Data Kelompok Uji, Konsentrasi Uji, % Mortalitas, dan LC 50 Pada Larva Udang Artemia Franciscana Kellogg Simplisia Ekstrak Fraksi n-heksan Fraksi etil asetat Fraksi air + +
+ + + + + +
+ + -
- - - - + + - + + + + - + + + + + - + +
+ - - +
- - + + - + + + + + + + + + + Monoterpenoid Seskuiterpenoid Steroid Alkaloid Flavonoid Saponin Polifenolat Triterpenoid Antrakuinon Tanin Hasil Golongan senyawa Sampel Konsentrasi (ppm) Log
Konsentrasi Akumulasi Mati % Mortalitas Nilai Probit Nilai LC 50 (ppm) Ekstrak Etanol 0 0 0 0,00 0,0 207,2526
10 1,00 7 7,45
3,5534 100 2,00 20 23,81 4,2872 250 2,40 35 42,68 4,8134 500 2,70 53 62,35 5,3134 750 2,88 72 78,26 5,7796 1000 3,00 93 91,18 6,3469
Fraksi Air
0 0 0 0,00 0,0 282,1630 10 1,00 4 4,12
3,2608 100 2,00 17 20,24 4,1035 250 2,40 33
39,76 4,7389 500 2,70 50
58,14 5,2045 750 2,88 68 74,73 5,6651 1000 3,00 87
88,78 6,2107
Fraksi Etil Asetat 0 0 0 0,00 0,0 187,5858 10 1,00 7 7,61
3,5675 100 2,00 21 25,30 4,3349 250 2,40 37 44,58 4,8617 500 2,70 55
63,22 5,3372 750 2,88 75 78,95 6,8030 1000 3,00 95
90,48 6,3047 Fraksi N-
Heksan
0 0 0 0,00 0,0 484,2839 10 1,00 3 2,50
3,0400 100 2,00 7
7,22 3,5380 250
2,40 17
20,99 4,1901
500 2,70
32
42,11 4,8007 750 2,88 47 61,84 5,3002 1000 3,00 63 81,82 5,9078
Berdasarkan  Tabel  3,  menunjukkan  bahwa  larva  udang  mulai  mengalami  kematian  pada  sampel ekstrak  etanol,  fraksi  air,  fraksi  etil  asetat,  dan  fraksi  n-heksan  dari  konsentrasi  10  ppm  sampai  1000 ppm, sedangkan  pada  konsentrasi  0  ppm  larva  udang  tidak  mengalami  kematian.  Hal  ini  dapat  disebabkan  oleh golongan senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam sampel ekstrak etanol daun pulai. Berdasarkan Tabel  3  dapat  diketahui  bahwa  banyaknya  jumlah  kematian  larva  udang  seiring  dengan  meningkatnya konsentrasi  sampel  uji.  Hasil  angka  kematian  larva  udang  kemudian  dihitung  persen  mortalitasnya  untuk mengetahui  angka  kematian  dalam  persentase.  Persen  mortalitas  paling  tinggi  yaitu  pada  konsentrasi  1000 ppm  dari  masing-masing  sampel  ekstrak  etanol,  fraksi  air,  fraksi  etil  asetat,  dan  fraksi  n-heksan.  Dari  hasil tersebut  dapat  diketahui  bahwa  persen  mortalitas  sebanding  dengan  jumlah  konsentrasi,  semakin  tinggi konsentrasi sampel maka persen mortalitas pun akan semakin tinggi. Setelah diperoleh persen mortalitas dari ekstrak etanol yaitu 91,18%, kemudian dilakukan perhitungan nilai LC 50 berdasarkan persamaan regresi linier yang dihasilkan dari grafik antara log konsentrasi ekstrak etanol dan nilai probit. Grafik tersebut dapat dilihat pada Grafik 1.
Grafik 1. Grafik Antara Log Konsentrasi Dan Nilai Probit Ekstrak Etanol
Dari Grafik 1, diperoleh persamaan regresi y = 1,2985x + 1,992 dengan nilai koefisien korelasi sebesar 0,9043  yang  dihasilkan  dari  regresi  linier  antara  log  konsentrasi  dan  nilai  probit.  Dari  persamaan  regresi tersebut  dapat  dilakukan  perhitungan  nilai  LC 50 dengan  cara  memasukkan  nilai  probit  dari  50%  mortalitas sebagai y sehingga dapat diperoleh nilai log konsentrasi sebagai x, kemudian log konsentrasi diubah menjadi antilog x untuk memperoleh nilai LC 50 . Nilai LC 50 yang diperoleh dari sampel ekstrak etanol pada penelitian ini  adalah  sebesar  207,2526  ppm.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  sampel  ekstrak  etanol  memiliki  efek  toksik terhadap larva udang, karena nilai LC 50 yang diperoleh kurang dari 1000 ppm.
Selanjutnya dilakukan pengamatan terhadap fraksi air, fraksi etil asetat, dan fraksi n-heksan. Hal ini bertujuan untuk mengetahui perbandingan efek toksik antara hasil ekstrak etanol dan hasil fraksi daun pulai. Setelah diperoleh persen mortalitas dari fraksi air yaitu 88,78%, kemudian dilakukan perhitungan  nilai LC 50 berdasarkan persamaan regresi linier yang dihasilkan dari grafik antara log konsentrasi ekstrak etanol dan nilai probit. Grafik tersebut dapat dilihat pada Grafik 2.
Grafik 2. Grafik Antara Log Konsentrasi Dan Nilai Probit Fraksi Air
y = 1.8277x + 0.5211 R² = 0.9518 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 0 1 2 3 4 Ni la i P ro b it Log Konsentrasi Fraksi Air y = 1.2985x + 1.992 R² = 0.9043 0 2 4 6 8 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 Ni la i P ro b it Log Konsentrasi Ekstrak Etanol
Dari Grafik 2, diperoleh persamaan regresi y = 1,8277x + 0,5211 dengan nilai koefisien korelasi sebesar 0,9518 yang dihasilkan dari regresi linier antara log konsentrasi dan mortalitas probit. Dari persamaan regresi tersebut dapat dilakukan perhitungan nilai LC 50 dengan cara memasukkan nilai probit dari 50% mortalitas sebagai y sehingga dapat diperoleh nilai log konsentrasi sebagai x, kemudian log konsentrasi diubah menjadi antilog x untuk memperoleh nilai LC 50 .  Nilai  LC 50 yang  diperoleh  dari  sampel  fraksi  air  pada  penelitian  ini  adalah  sebesar  282,163  ppm.  Hal  ini menunjukkan bahwa sampel fraksi air memiliki efek toksik terhadap larva udang.
Pada  sampel  fraksi  etil  asetat,  setelah  diperoleh  persen  mortalitas  yaitu  90,48%,  kemudian  dilakukan perhitungan nilai LC 50 berdasarkan persamaan regresi linier yang dihasilkan dari grafik antara log konsentrasi fraksi etil asetat dan nilai probit. Grafik tersebut dapat dilihat pada Grafik 3.
Grafik 3. Grafik Antara Log Konsentrasi Dan Nilai Probit Fraksi Etil Asetat Dari Grafik 3, diperoleh persamaan regresi y = 1,9535x + 0,5592 dengan nilai koefisien korelasi sebesar 0,9266 yang dihasilkan dari regresi linier antara log konsentrasi dan mortalitas probit. Dari persamaan regresi tersebut  dapat  dilakukan  perhitungan  nilai  LC 50 dengan  cara  memasukkan  nilai  probit  dari  50%  mortalitas sebagai y sehingga dapat diperoleh nilai log konsentrasi sebagai x, kemudian log konsentrasi diubah menjadi antilog x untuk memperoleh nilai LC 50 . Nilai LC 50 yang diperoleh dari sampel fraksi etil asetat pada penelitian ini adalah sebesar 187,5858 ppm. Hal ini menunjukkan bahwa sampel fraksi etil asetat memiliki efek toksik terhadap larva udang.
Pada  sampel  fraksi  n-heksan,  setelah  diperoleh  persen  mortalitas  yaitu  81,82%,  kemudian  dilakukan perhitungan nilai LC 50 berdasarkan persamaan regresi linier yang dihasilkan dari grafik antara log konsentrasi fraksi n-heksan dan nilai probit. Grafik tersebut dapat dilihat pada Grafik 4.
Grafik 4. Grafik Antara Log Konsentrasi Dan Nilai Probit Fraksi N-heksan
Dari Grafik 4, diperoleh persamaan regresi y = 1,7047x + 0,4227 dengan nilai koefisien korelasi sebesar 0,9394 yang dihasilkan dari regresi linier antara log konsentrasi dan mortalitas probit. Dari persamaan regresi tersebut dapat dilakukan perhitungan nilai LC 50 dengan cara memasukkan nilai probit dari 50% mortalitas sebagai y sehingga dapat diperoleh nilai log konsentrasi sebagai x, kemudian log konsentrasi diubah menjadi antilog x untuk memperoleh nilai
y = 1.9535x + 0.5592 R² = 0.9266 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 Ni la i P ro b it Log Konsentrasi Fraksi Etil Asetat
LC 50 .  Nilai  LC 50 yang  diperoleh  dari  sampel  n-heksan  pada  penelitian  ini  adalah  sebesar  484,2839  ppm.  Hal  ini menunjukkan bahwa sampel fraksi n-heksan memiliki efek toksik terhadap larva udang.
Suatu  sampel  dapat  dikatakan  memiliki  efek  sitotoksik  apabila  dapat  menyebabkan  kematian  50% hewan uji pada konsentrasi kurang dari 1000 ppm, oleh karena itu ekstrak etanol, fraksi air, fraksi, etil asetat, dan  fraksi  n-heksan  daun  pulai  ( Alstonia  scholaris (L.)  R.  Br.)    diketahui  memiliki  efek  sitotoksik,  hal  ini berdasarkan dari nilai LC 50 yang diperoleh dari hasil pengujian. Semakin kecil nilai LC 50 , maka sampel tersebut semakin  toksik  terhadap  larva  udang Artemia  franciscana Kellogg.  Suatu  sampel  dianggap  sangat  toksik apabila memiliki nilai LC 50 kurang dari 30 ppm, toksik apabila memiliki nilai LC 50 kurang dari 1000 ppm, dan tidak toksik apabila memiliki nilia LC 50 lebih dari 1000 ppm. Berdasarkan nilai LC 50 yang telah diperoleh dari hasil pengujian, fraksi etil asetat memiliki nilai LC 50 yang lebih rendah, hal ini menunjukkan bahwa fraksi etil asetat  efek sitotoksik yang lebih tinggi dibandingkan dengan ekstrak etanol, fraksi air, dan fraksi n-heksan. Hal ini dapat disebabkan oleh sifat kepolaran dari fraksi etil asetat yang mampu menarik golongan senyawa polar maupun nonpolar. Golongan senyawa metabolit sekunder seperti alkaloid, flavonoid, tanin, dan terpenoid yang terkandung pada ekstrak etanol, fraksi air, fraksi etil astetat, dan fraksi n-heksan dapat bertindak sebagai stomach poisoning atau racun perut, sehingga apabila senyawa-senyawa tersebut masuk ke dalam tubuh larva udang maka alat pencernaanya akan terganggu, dapat menghambat reseptor perasa pada daerah mulut larva udang,  dan  tidak  bisa  mendapatkan  stimulus  rasa  sehingga  tidak  mampu  mengenali  makanannya.  Hal  ini menyebabkan larva udang mengalami kematian (Rahmi et al., 2022).
Selain  itu,  golongan  senyawa  alkaloidmemiliki  aktivistas  sitotoksik  karena  berperan  sebagai tubulin inhibitor .  Pada  saat  proses  siklus  sel,  alkaloid  akan  berikatan  dengan  tubulin  yaitu  suatu  protein  penyusun mikrotubulus,  sehingga  proses  polimerasi  protein  menjadi  mikrotubulus  dan  pembentukan spindle mitotik akan  terhambat.  Hal  ini mengakibatkan  terjadinya proses  apoptosis  dikarenakan  sel  berhenti  pada  metafase dan  tidak  dapat  melakukan  pembelahan  sel  (Nuraini  et  al.,  2015).  Golongan  senyawa  flavonoid  dapat menginduksi  fragmentasi  DNA,  sehingga  DNA  menjadi  rusak  dan  terjadi  proses  apoptosis  yang mengakibatkan pertumbuhan sel menjadi terhambat. Selain itu flavonoid dapat mempercepat proses apoptosis sel sehingga menyebabkan terjadinya kematian sel. Adanya gugus OH - pada flavonoid yang berikatan dengan protein integral membran sel menyebabkan transport aktif Na + berhenti, sehingga pemasukan ion Na + tidak terkendali  ke  dalam  sel.  Hal  ini  mengakibatkan  sel  menjadi  pecah  dan  terjadi  kematian  sel  (10).  Golongan senyawa tanin dapat menghambat siklus sel kanker dengan menginhibisi aktivitas protein kinase sehingga jalur transduksi  sinyal  dari  membran  ke  inti  sel  menjadi  terhambat  (6).  Golongan  senyawa  terpenoid  memiliki aktivitas  antikanker  dengan  menghambat  metastasis  dan  invasi  sel  kanker,  menginduksi  apoptosis, menghambat poliferasi sel kanker, dan memodulasi sistem kekebalan tubuh (13).

## D. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, diketahui bahwa ekstrak etanol, fraksi air, fraksi etil asetat, dan fraksi n-heksan daun pulai ( Alstonia scholaris (L.) R. Br.) memiliki efek sitotoksik dengan nilai LC 50 yang diperoleh dari masing-masing ekstrak etanol, fraksi air, fraksi etil asetat, dan fraksi n-heksana adalah sebesar 207,2526 ppm, 282,1630 ppm, 187,5858 ppm, dan 484,2839 ppm. Dari hasil tersebut menunjukkan bahwa fraksi etil asetat menghasilkan nilai LC 50 yang lebih rendah yaitu 187,5858 ppm, sehingga fraksi etil asetat memiliki efek sitotoksik yang lebih tinggi dibandingkan ekstrak etanol, fraksi air, dan fraksi n-heksana.

## Daftar Pustaka
Nuraini, Ilyas, A., & Iin, N. (2015). Identifikasi dan karakterisasi senyawa bioaktif antikanker dari ekstrak etanol kulit batang kayu bitti (Vitex cofassus). Al Kimia , 15–27.
Rahmi, A., Afriani, T., & Aini, A. (2022). Cytotoxic test of extract and fractions from Blumea balsamifera leaves using Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Jurnal Ilmiah Farmasi , 18 (1), 26–33. https://doi.org/10.20885/jif.vol18.iss1.art3
Baud, G. S., Sangi, M. S., & Koleangan, H. S. J. (2014). Analis Senyawa Metabolit Sekunder Dan Uji Toksisitas Ekstrak Etanol Batang Tanaman Patah Tulang ( Euphorbia tirucalli L.) Dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Jurnal Ilmiah Sains , 14 (2), 106.
Feng, L., Chen, Y., Yuan, L., Liu, X., Gu, J., Tiongkok, P., & Jiangsu, P. (2013). Kombinasi Alkaloid dan Triterpen dariSarjana Alstonia (Linn.) R.Br. Daun Meningkatkan Aktivitas Imunomodulator pada Mencit C57BL/6 dan Menginduksi Apoptosis pada Garis Sel A549. 13920-13939.
Iriyanti, & Hastuti. (2016). Arthemia salina Leach Hibiscus tiliaceus Metode Brine Shrimp Lethality Test (BST) ( Hibiscus tiliaceus Brine Shrimp Lethality Test (BS). 3 (1), 15-21 Khyade, M. S., Kasote, D. M., & Vaikos, N. P. (2014). Jurnal Etnofarmakologi Alstonia (L.) R. Br. dan Alstonia Macrophylla Dinding. ex G. Don: Dan Farmakologi. Etnofarmakologi , 153 .
Kusumawati, R. M., & Listiana. (2022). Jurnal Ilmiah Kesehatan 2022 Jurnal Ilmiah Kesehatan 2022. Jurnal Ilmiah Kesehatan , 21 (1), 14-19.
Marwati, Salampe, M., Burhan, A., Megawati, Khairuddin, Naneng, A., & Oktaviani, N. (2020). Skrining Antioksidan dan Antikanker Ekstrak Etanol Daun Karamunting ( Rhonomyrtus Tomentosa L.) Sebagai Obat Alternatif. Jurnal Ilmiah Manuntung , 6 (2), 242-244.
Mayor, J., & Wattimena, L. (2022). Pemanfaatan Pohon Pulai (Alstonia Scholaris) Oleh Masyarakat Kampung Puper Distrik Waigeo Timur Kabupaten Raja Ampat. J-MACE Jurnal Penelitian , 2 (1), 680-81.
Nuraini, Ilyas, A., & Iin, N. (2015). Identifikasi dan karakterisasi senyawa bioaktif antikanker dari ekstrak etanol kulit batang kayu bitti (Vitex cofassus). Al Kimia , 15-27.
Purwoko, M. L. Y., Syamsudin, & Simanjutak, P. (2020). Standardisasi Parameter Spesifik dan Nonspesifik Ekstrak Etanol Daun Kelor (Moringa oleifera) Asal Kabupaten Blora. Sainstech Farma Jurnal Ilmu Kefarmasian , 13 (2), 1-15.
Putri, A. P., Nasution, M. P., Muslim, U., & Al, N. (2022). 1,2 1,2. 1 (April), 203-219.
Puspitasari, L., Swastini, D. a., & Arisanti, C. I. (2013). Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol 95% Kulit Buah Manggis ( Garcinia mangostana L.). Garuda Portal , 961, 5.