Jurnal Indonesia Sosial Sains http://jiss.publikasiindonesia.id/
Vol. 2 No. 3 Maret 2021 P-ISSN: 2723 - 6692 dan E-ISSN: 2723 - 6595
A REVIEW: SITOTOKSISITAS SENYAWA BROMELAIN PADA NANAS ( ANANAS COMOSUS L.) TERHADAP SEL KANKER MCF-7

## Diyenda Ainun Nida, Choirun Nisa Suranto, Aulia Agnin Budi Santoso dan Haryoto
Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta, Indonesia Email: diyendaainunnida19@gmail.com
Artikel info
Artikel history:
Diterima 05 Maret 2021 Diterima dalam bentuk revisi 11 Maret 2021 Diterima dalam bentuk revisi 18 Maret 2021
Key words: bromelain; mcf-7; ic50; synthesis matrix.
Abstract: The death rate for breast cancer is one among other cancers.  Drugs  that  are  often  used  for  healing  therapy  have various  side  effects  and  are  quite  expensive.  Recently,  the search for natural and low-toxic compounds has become a top priority  for  researchers.  Bromelain  compounds  are  known  to have  anti-cancer  functions  which  are  abundant  in  pineapple (Ananas  comosus  L.).  This  article  aims  to  examine  the cytotoxicity of bromelain compounds in pineapples and see the IC50  value  which  can  inhibit  the  growth  of  MCF-7  cancer cells.  The  compilation  method  used  is  matrix  synthesis, namely  by  creating  a  table  to  classify  and  classify  different arguments  from  several  articles  in  order  to  get  a  conclusion from  the  overall  article  in  general.  Pineapple  plants  are indicated to have cytotoxic activity against MCF-7 cancer cells. Anti-cancer  activity  can  be  determined  by  the  IC50  value.  For commercial  and  recombinant  bromelain  requires  IC50  at  a concentration  of  5-6  μg /  mL  while  IC50  bromelain  requires  a concentration  above  60  μg  /  mL.  The  process  of  inhibition  of breast cancer cell growth by bromelain through increasing p53 and  Bax,  as  well  as  the  expression  of  Cox-2  and  Bcl-2 expressions.
Abstrak: Tingkat kematian penderita kanker payudara menjadi salah  satu  yang  tertinggi  diantara  kanker  lainnya.  Obat  yang sering digunakan untuk terapi penyembuhan memiliki berbagai efek  samping  dan  tergolong  mahal.  Belakangan  ini,  pencarian senyawa  alami  dan  rendah  toksik  menjadi  prioritas  utama  para peneliti. Senyawa bromelain  diketahui  memiliki fungsi  sebagai anti  kanker  yang  kandungannya  melimpah  pada  tumbuhan nanas  (Ananas  comosus  L.).  Pada  artikel  ini  bertujuan  untuk mengkaji  sitotoksisitas  senyawa  bromelain  pada  nanas  dan mengetahui  nilai  IC50  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan sel kanker MCF-7. Metode penyusunan yang digunakan adalah matrik sintesis, yaitu dengan membuat tabel untuk mengelompokkan  dan  mengklasifikasi  argumen-argumen  yang berbeda  dari beberapa  artikel  agar  mendapat  kesimpulan  dari keseluruhan artikel  secara  umum.  Tumbuhan  nanas  terindikasi
Kata  kunci: bromelain; mcf-7; ic50; matriks sintesis. memiliki  aktivitas  sitotoksik  terhadap  sel  kanker  MCF-7. Aktivitas anti kanker dapat diketahui melalui nilai IC50. Untuk bromelain komersial dan rekombinan membutuhkan IC50 pada konsentrasi 5-6 μg/mL sedangkan IC50 bromelain membutuhkan konsentrasi diatas 60 μg/mL.  Proses penghambatan  pertumbuhan  sel  kanker  payudara oleh bromelain  melalui  peningkatan  p53  dan  Bax,  serta  penurunan ekspresi Cox-2 dan Bcl-2.

## Coresponden author : Diyenda Ainun Nida
Email: diyendaainunnida19@gmail.com artikel dengan akses terbuka dibawah lisensi CC BY SA 2021

## Pendahuluan
Kanker  adalah  pembelahan  sel  yang  tidak  terkendali  yang  dapat  menghancurkan jaringan tubuh (Ruba et al., 2017). Organisasi Kesehatan Dunia mencatat bahwa lebih dari 14 juta jiwa  didiagnosis  kanker  pada  tahun  2012,  dan  sekitar  9  juta  orang  meninggal  karena  kanker pada  tahun  2016  dan  diiperkirakan  22%  diakibatkan  oleh  penggunaan  tembakau  (WHO, 2018). Serta data Globocan menyebutkan di tahun 2018 terdapat 18,1 juta kasus baru dengan angka kematian sebesar 9,6 juta kematian, dimana 1 dari 5 laki-laki dan 1 dari 6 perempuan di dunia mengalami kejadian kanker. Data tersebut juga menyatakan 1 dari 8 laki-laki dan 1 dari 11  perempuan,  meninggal  karena  kanker.  Angka  kejadian  penyakit  kanker  di  Indonesia (136.2/100.000 penduduk) berada pada urutan 8 di Asia Tenggara, sedangkan di Asia urutan ke 23.
Berdasarkan  data  Riskesdas,  prevalensi  tumor/kanker  di  Indonesia  menunjukkan adanya  peningkatan  dari  1.4  per  1000  penduduk  di  tahun  2013  menjadi  1,79  per  1000 penduduk pada tahun 2018. Prevalensi kanker tertinggi adalah di provinsi DI Yogyakarta 4,86 per 1000  penduduk, diikuti  Sumatera  Barat  2,47 79 per 1000 penduduk dan Gorontalo 2,44 per 1000 penduduk. Sedangkan angka kejadian untuk perempuan yang tertinggi adalah kanker payudara yaitu sebesar 42,1 per 100.000 penduduk dengan rata-rata kematian 17 per 100.000 penduduk  yang  diikuti  kanker  leher  rahim  sebesar  23,4  per  100.000  penduduk  dengan  rata- rata kematian 13,9 per 100.000 penduduk (Depkes, 2019).
Meningkatnya resiko penyakit kanker diakibatkan oleh perilaku gaya hidup antara lain seperti merokok, makanan cepat saji, dan perubahan reproduksi (termasuk paritas yang lebih rendah  dan  kemudian  usia  pada  kelahiran  pertama  (Torre  et  al.,  2015),  diet  yang  salah, obesitas  dan  konsumsi  alkohol  juga  berkontribusi  terhadap  meningkatnya  insiden  kanker payudara.  Kanker  payudara  pada  pria  jarang  terjadi,  berkontribusi  pada ∼ 1%  kasus.  Faktor risiko  utama  termasuk  gangguan  klinis  yang  membawa  ketidakseimbangan  horral  (terutama ginekomastia dan sirosis), paparan radiasi, riwayat keluarga yang positif, dan kecenderungan genetik (Senkus et al., 2015).
telah  dilakukan  karena  pengobatan  seperti  radioterapi  dan  kemoterapi  tidak  terlalu menjanjikan  dan  memiliki  berbagai  efek  samping  (Ruba  et  al.,  2017)  .  Salah  satu  tanaman yang dapat dimanfaatkan sebagai obat anti kanker adalah nanas ( Ananas comosus L.) (gambar 1A  dan  1B).  Batang  buah  nanas  serta  bagian  tanaman  nanas  lainnya  selain  daging  buah kelaziman nya tidak dikonsumsi melainkan dibuang dan menjadi limbah, untuk memanfaatkan limbah nanas ini maka kami tertarik akan melakukan kajian terhadap sel kanker payudara.
Berdasarkan  penelitian  terdahulu  menunjukkan  bahwa  nanas  sangat  efektif  dalam pencegahan  dan  pengobatan  kanker,  seperti  pada  pengobatan  kanker  paru-  paru,  leukimia, kanker testis, dan tumor otak (Dua & Srivastav, 2013). Didalam buah nanas terdapat vitamin dan  mineral,  dan  bromelain.  Bromelain  terdiri  dari  enzim  yang  berbeda  seperti  tiol endopeptidase,  fosfatase,  glikosidase,  peroksidase,  selulase,  ribonuklease  bersama  dengan komponen  non-enzimatik  seperti  inhibitor  protease,  glikoprotein,  karbohidrat,  asam  organik, pigmen  berwarna  dan  senyawa  rasa.  Bromelain.  secara  luas  dikenal  karena  aktivitas proteolitiknya.  Konsentrasi  bromelain  akan  meningkat  saat  tanaman  matang  (Bogsan,  C.  S. dan Todorov, 2018).
Bromelain telah terbukti menginduksi jalur apoptosis dan antimetastatik dari jalur sel yang  telah  diberi  perlakuan.  Bromelain  telah  digunakan  untuk  mengobati  demam  dan gangguan pencernaan karena bromelain dapat diserap oleh usus manusia tanpa degradasi dan kehilangan  aktivitas  proteolitiknya.  Aktivitas  farmakologis  lain  dari  bromelain,  seperti pengurangan  trombogenesis,  pengurangan  infeksi  mikroba,  anti  hipertensi,  anti  inflamasi, serta  anti  tumorigenik.  Bromelain  juga  memicu  autophagy,  dan  apoptosis  pada  garis  sel karsinoma mammae (Debnath, dkk, 2018).
Garis  sel  kanker  payudara  yang  digunakan  untuk  eksperimen  yang  biasa  digunakan adalah  MCF-7,  MDA-MB-231,  SK-BR-3,  dan  Hs578T.  Pada  kegiatan  ini  dilakukan  untuk mengetahui  sitotoksisitas  senyawa  bromelain  pada  nanas  terhadap  sel  kanker  pada  kanker MCF-7.  Sel  MCF-7  telah  berfungsi  sebagai  garis  sel  referensi  mendasar  untuk  banyak  studi genom,  sebagian  karena  kemampuan  untuk  menghasilkan  jumlah  RNA  /  DNA  yang  tidak terbatas untuk memungkinkan studi fungsional dan validasi (Lee et al., 2015).
Gambar 1A.
Gambar 1B.

## Metode Penelitian
Salah  satu  teknik  yang  digunakan  dalam  sintesis  pada  penulisan narrative  review adalah dengan menggunakan matriks sintesis ( synthesis matrix ) yang dikelola berdasarkan key studies pada topik tertentu. Matrik sintesis ini sangat bermanfaat sebagai basis penelitian yang akan  dilakukan.  Matrik  sintesis  adalah  sebuah  tabel/diagram  yang  memungkinkan  peneliti untuk  mengelompokkan  dan  mengklasifikasi  argumen-argumen  yang  berbeda  dari  beberapa artikel  dan  mengkombinasikan  berbagai  elemen  yang  berbeda  untuk  mendapatkan
kesan/simpulan  terhadap  keseluruhan  artikel  secara  umum.  Matriks  sintesis  dibuat  dengan cara  (1)  identifikasi  6-12  artikel  yang  sangat  relevan  dengan  fokus  penelitian  dan  (2)  buat kolom-kolom  untuk  mengidentifikasi  beberapa  hal,  seperti  (a)  pertanyaan  penelitian  yang diajukan  penulis,  (b)  metode  yang  digunakan,  (c)  karakteristik  sampel  penelitian,  (d) persamaan  yang  ditemukan  dan  (e)  perbedaan  masing-masing  artikel  yang  tidak  ditemukan pada artikel yang lain (Rahayu et al., 2019).
Salah  satu  teknik  yang  digunakan  dalam  sintesis  pada  penulisan narrative  review adalah dengan menggunakan matriks sintesis ( synthesis matrix ) yang dikelola berdasarkan key studies pada topik tertentu. Matrik sintesis ini sangat bermanfaat sebagai basis penelitian yang akan  dilakukan.  Matrik  sintesis  adalah  sebuah  tabel/diagram  yang  memungkinkan  peneliti untuk  mengelompokkan  dan  mengklasifikasi  argumen-argumen  yang  berbeda  dari  beberapa artikel  dan  mengkombinasikan  berbagai  elemen  yang  berbeda  untuk  mendapatkan kesan/simpulan terhadap keseluruhan artikel secara umum. Matrik sintesis dibuat dengan cara (1) identifikasi 6-12 artikel yang sangat relevan dengan fokus penelitian dan (2) buat kolom- kolom  untuk  mengidentifikasi  beberapa  hal,  seperti  pertanyaan  penelitian  yang  diajukan penulis, (b) metode  yang digunakan, (c) karakteristik sampel penelitian, (d) persamaan  yang ditemukan dan  (e) perbedaan masing-masing artikel  yang tidak ditemukan pada  artikel  yang lain (Rahayu et al., 2019).

## Hasil dan Pembahasan
Sitotoksisitas Buah Nanas ( Ananas Comosus L.) Terhadap Sel Mcf-7 Pada tumbuhan nanas ( Ananas comosus L.) telah teridentifikasi mengandung senyawa bromelain yang berfungsi sebagai anti kanker. Bromelain  adalah enzim protease utama  yang ditemukan pada tanaman nanas ( Ananas comosus L.) yang telah dikenal secara kimiawi sejak 1876  dan  diidentifikasi  untuk  pertama  kalinya  oleh  Marcano  pada  tahun  1891.  Kandungan bromelain  melimpah  pada  batang  dan  buah  tanaman  nanas  dan  dapat  juga  diisolasi  dalam jumlah kecil dari limbah nanas seperti inti, daun, kulit dll dengan tingkatan efek yang berbeda (S, Indumathy, K, K., K, S., & P, 2016).
Kandungan  bromelain  pada  ekstrak  heksan  dari  tujuh  kultivar  daun  nanas  telah dilakukan  dan  didapatkan  hasil  bahwa  ekstrak  heksan  dari  tujuh  kultivar  daun  nanas  dapat menghambat  pertumbuhan  sel  tumor  antara  34,17-97,69  %  (Guedes  et  al.,  2018).  Menurut (Haiyan  et  al.,  2020),  Pada  MCF  7,  tingkat  kelangsungan  hidup  sel  yang  dikultur  bersama dengan  bromelain  dan  diekstraksi  dari  jaringan  kulit,  pulpa,  batang  muda,  batang  dewasa, serta  tangkai  buah  memiliki  persentase  40  -  60%.  Penelitian  selanjutnya  dilakukan  oleh (Raeisi et al., 2019), persentase viabilitas sel MCF-7 pada konsentrasi IC50  berada dibawah 30 %.

## Aktivitas Sitotoksik Bromelain Berdasarkan Nilai Ic50
Aktivitas anti kanker ini telah dibuktikan oleh beberapa peneliti berdasarkan nilai IC50 yang  merupakan  nilai  setengah  konsentrasi  hambat  maksimal  pada  sel  kanker.  Menurut Kulpreet Bhui, dkk, 2010, bromelain memberikan efek  penghambatan pada pertumbuhan sel MCF-7 setelah 96 jam dengan IC50 sebesar 60 μg/mL (Gambar 1A). Lalu menurut (Raeisi et al., 2019), nilai IC50 yang dapat menghambat pertumbuhan sel kanker MCF-7 diperoleh pada
konsentrasi 65 µg/mL (Gambar
(A)
(B)
Gambar 1. Nilai  IC50 bromelain nanas dari (A) (Bhui et al., 2010) dan (B) (Raeisi et al., 2019).
Sedangkan  (Fouz  et  al.,  2013),  didapatkan  hasil  aktivitas  sitotoksik  bromelain komersial dan rekombinan yang ditentukan menggunakan uji sulforhodomine (SRB) dimana bromelian  rekombinan  dan  bromelain  komersial  dapat  memberikan  pengaruh  terhadap penurunan  viabilitas  sel  MCF-7  dengan  nilai  IC50  masing-masing  sebesar  5,13  dan  6,25 μg/mL, seperti pada gambar.
Gambar 2. Nilai IC50 dari bromelain rekombinan dan komersial
Dari  ketiga  penelitian  yang  telah  dilakukan,  terdapat  satu  perbedaan  konsentrasi bromelain yang dapat menghambat 50% sel kanker MCF-7. Penggunaan bromelain komersial dan  rekombinan  membutuhkan  konsentrasi  yang  lebih  kecil  untuk  dapat  menghambat pertumbuhan  sel  kanker  MCF-7  dari  pada  ekstrak  bromelain  nanas.  Weerapreeyakul  dalam (Sirait  et  al.,  2019),  aktivitas  sitotoksik  dari  ekstrak  yang  menyerang  sel-sel  kanker  dapat diklasifikasikan  menjadi  tiga  kategori.  Kategori  pertama  dikatakan  sangat  aktif  apabila memiliki  nilai  IC50  <  10  μg/mL,  kategori  kedua  adalah  aktif  jika  IC50  10-100  μg/mL  dan kategori ketiga yaitu cukup aktif jika IC50 antara 100-500 μg/mL. Dengan demikian, bromelain nanas,  komersial  dan  rekombinan  memiliki  aktivitas  sitotoksik  terhadap  sel  kanker  MCF-7 dengan perbedaan keaktifan.

## Pengaruh Konsentrasi Dibawah Konsentrasi Ic50
Konsentrasi  yang  lebih  rendah  dari  konsentrasi  IC50  dilakukan  uji  menggunakan induksi autophagy, didapatkan hasil bahwa autophagy yang diinduksi oleh bromelain sangat
diperlukan karena dapat meningkatkan apoptosis pada sel kanker MCF-7 (Bhui et al., 2010). (Raeisi  et  al.,  2019),  melakukan  pengujian  yang  berbeda  pada  bromelain  konsentrasi  rendah tanpa  menggunakan  induksi  autophagy  dan  didapatkan  hasil  bahwa  pemberian  bromelain pada  konsentrasi  rendah  dapat  menyebabkan  sel  kanker  mengalami  resistensi  terhadap bromelain.  Pada  data  yang  ditunjukkan,  konsentrasi  20-50  μg/mL  mengalami  peningkatan persentase  kelangsungan  hidup  sel  MCF-7  dibandingkan  sel  yang  tidak  diberi  bromelain. Namun  tidak  dijelaskan  lebih  detail  mengenai  faktor-faktor  yang  mempengaruhi  terjadinya resistensi.

## Mekanisme Penghambatan Sel Kanker Mcf-7 Oleh Bromelain
(Haiyan  et  al.,  2020),  melakukan  penelitian  mengenai  transkripsi  ekspresi  gen. Bertujuan  untuk  mengetahui  mekanisme  yang  terjadi  pada  bromelain  saat  menghambat pertumbuhan  garis  sel  tumor  payudara.  Proses  penghambatan  yang  terjadi  melalui peningkatan ekspresi p53 dan Bax, serta penurunan ekspresi Cox-2 dan Bcl-2. proses tersebut mengindikasikan  terjadinya  apoptosis.  senyawa  yang  digunakan  untuk  terapi  kanker  dapat menyebabkan  kerusakan  DNA  dalam  sel  yang  berakibat  apoptosis  melalui  jalur  p53 (Muhartono  &  Subeki,  2017).  Apoptosis  merupakan  kematian  sel  secara  terprogram  yang pada  dasarnya  mengalami  penurunan  pada  sel  kanker.  Sehingga  banyak  peneliti memprioritaskan pencarian suatu senyawa yang dapat menginduksi apoptosis pada sel kanker. Disisi  lain,  apoptosis  juga  merupakan  proses  aktif  dengan  menginduksi  gen  seperti  Bax  dan penekanan simultan gen seperti Bcl-2 (Nurhayati & Lusiyanti, 2014). Hal tersebut didukung oleh (Muhartono & Subeki,  2017), bahwa aktivasi  apoptosis  Bax akan membentuk  mitochondrial apoptosis-induced  channel  (MAC)  dan  melakukan  mediasi  keluarnya  sitokrom-c,  sedangkan anti-apoptosis  Bcl-2  akan  menghalangi  proses  tersebut.  Dapat  disimpulkan  bahwa  senyawa bromelain dapat menghambat proliferasi dan menginduksi apoptosis sel kanker MCF-7.

## Kesimpulan
Pada  seluruh  bagian  tumbuhan  nanas  terindikasi  mengandung  bromelain  yang memiliki  aktivitas  sitotoksik  terhadap  sel  MCF-7.  Aktivitas  anti  kanker  dapat  diketahui melalui  nilai  IC50.  Untuk  bromelain  komersial  dan  rekombinan  membutuhkan  IC50  pada konsentrasi 5-6 μg/mL, sedangkan IC50 bromelain nanas membutuhkan konsentrasi diatas 60 μg/mL. Proses penghambatan pertumbuhan sel kanker payudara oleh bromelain terjadi dengan peningkatan ekspresi p53 dan Bax, serta penurunan ekspresi Cox-2 dan Bcl-2. Sehingga dapat diketahui bahwa senyawa bromelain juga dapat menginduksi apoptosis sel kanker MCF-7.

## Bibliografi
Bhui,  K.,  Tyagi,  S.,  Prakash,  B.,  &  Shukla,  Y.  (2010).  Pineapple  bromelain  induces autophagy,  facilitating  apoptotic  response  in  mammary  carcinoma  cells. Biofactors , 36 (6), 474–482.
Bogsan, C. S. dan Todorov, S. D. (2018). Tropical Fruit : From Cultivation to Consumption and Health Benefit, Pineapple . Nova Science Publisher.
Dua,  D.,  &  Srivastav,  N.  S.  (2013).  Anti-cancerous  and  antioxidant  potential  of  aqueous extracts  of  Annona  reticulata,  Podophyllum  peltatum,  Psidium  guajava,  Ananas comosus,  Carissa  carandas  on  MCF-7  cancer  cell  line. Int  J  Integr  Sci  Innov  Technol Sec , 2 (4), 15–19.
Fouz, N., Amid, A., & Hashim, Y. Z. H.-Y. (2013). Cytokinetic study of MCF-7 cells treated with  commercial  and  recombinant  bromelain. Asian  Pacific  Journal  of  Cancer Prevention , 14 (11), 6709–6714.
Guedes, J. A. C., de Godoy Alves Filho, E., Rodrigues, T. H. S., Silva, M. F. S., Souza, F. V. D., e Silva,  L. M.  A.,  Alves, R. E., Canuto,  K.  M., de Brito, E. S., & do Ó Pessoa, C. (2018). Metabolic profile and cytotoxicity of non-polar extracts of pineapple leaves and chemometric  analysis  of  different  pineapple  cultivars. Industrial  Crops  and  Products , 124 , 466–474.
Haiyan, S., Funing, M., Keming, L., Wei, S., Guiying, X., Rulin, Z., & Shenghe, C. (2020). Growth  of  breast  cancer  cells  inhibited  by  bromelains  extracted  from  the  different tissues of pineapple. Folia Biologica , 68 (3), 81–88.
Lee, A. V, Oesterreich, S., & Davidson, N. E. (2015). MCF-7 cells—changing the course of breast  cancer  research  and  care  for  45  years. JNCI:  Journal  of  the  National  Cancer Institute , 107 (7).
Muhartono,  M.,  &  Subeki,  S.  (2017).  Aktivitas  Antikanker  Senyawa  Brusein-A  terhadap Ekspresi  Bax pada Tikus  yang Diinduksi  Dimetilbenz (α) antrasen. Jurnal  Kedokteran Universitas Lampung , 1 (3), 469–472.
Nurhayati,  S.,  &  Lusiyanti,  Y.  (2014).  Apoptosis  dan  respon  biologik  sel  sebagai  faktor prognosa radioterapi kanker. Buletin Alara , 7 (3).
Raeisi,  F.,  Raeisi,  E.,  Heidarian,  E.,  Shahbazi-Gahroui,  D.,  &  Lemoigne,  Y.  (2019). Bromelain inhibitory effect on colony formation: an In vitro Study on human AGS, PC3, and MCF7 cancer cells. Journal of Medical Signals and Sensors , 9 (4), 267.
Rahayu, T., Syafril, S., Wekke, I. S., & Erlinda, R. (2019). Teknik Menulis Review Literatur Dalam Sebuah Artikel Ilmiah .
Ruba, P. H., Maheshwari, M., Gupta, A., & Arora, A. (2017). Rachna (2017) Saffron: from flavour to anti-cancer. Int J Applied Res , 3 , 311–314.
S,  Indumathy,  K,  K.,  K,  S.,  &  P,  A.  (2016).  Extraction,  Partial  Purification  and
Characterization  of  Bromelain  Enzyme  From  Pineapple  (Ananas  Comosus). Indo American Journal of Pharmaceutical Research , 7 ((08)), 6–7.
Senkus,  E.,  Kyriakides,  S.,  Ohno,  S.,  Penault-Llorca,  F.,  Poortmans,  P.,  Rutgers,  E., Zackrisson,  S.,  &  Cardoso,  F.  (2015).  Primary  breast  cancer:  ESMO  Clinical  Practice Guidelines for diagnosis, treatment and follow-up. Annals of Oncology , 26 , v8–v30.
Sirait,  P.  S.,  Setyaningsih,  I.,  &  Tarman,  K.  (2019). Aktivitas  Antikanker  Ekstrak  Spirulina Yang Dikultur Pada Media Walne Dan Media Organik . JPHPI.
Torre, L. A., Bray, F., Siegel, R. L., Ferlay, J., Lortet‐Tieulent, J., & Jemal, A. (2015). Global cancer statistics, 2012. CA: A Cancer Journal for Clinicians , 65 (2), 87–108.