## Antigen untuk Metode Serologi Deteksi Antibodi Anti-HIV

## Ika Puspita Dewi
Fakultas Farmasi, Universitas Jember, Jember, Indonesia

## ABSTRAK
HIV dapat ditetapkan diagnosisnya dengan berbagai metode. Berbagai metode uji serologi antara lain EIA yang telah dikembangkan dari generasi satu sampai generasi keempat sampai uji cepat deteksi antibodi anti-HIV. Deteksi antibodi spesifik patogen menggunakan antigen tertentu yang berasal dari patogen tersebut. Antigen bisa berasal dari protein baik hasil isolasi maupun protein rekombinan, dan/ atau menggunakan peptida baik rekombinan maupun sintetik.
Kata kunci: Antigen, EIA, peptida, protein, uji serologi

## ABSTRACT
HIV can be diagnosed with varieties of the methods. Various serological test methods such as EIA have been developed from the first to the fourth generation to rapid test to detect anti-HIV antibody. Pathogen-specific antibodies can be detected by using a specific antigen derived from the pathogen. Antigens may originate from either isolated proteins or recombinant proteins, and or use either recombinant or synthetic peptides. Ika Puspita Dewi. Antigen for Serology Method of Anti-HIV Antibodies Detection.
Keywords: Antigen, EIA, peptide, protein, serology assay

## PENDAHULUAN
Jumlah kumulatif kasus HIV dan AIDS pertama kali  ditemukan  di  Indonesia  tahun  1987 sampai  dengan  Juni  2014  yang  dilaporkan sebanyak  142.961  kasus,  sedangkan  jumlah kumulatif kasus AIDS sebanyak 55.623 orang. 1 Diagnosis  lebih  awal  memudahkan  akses perawatan  dan  pengobatan,  sehingga  dapat meningkatkan luaran pasien. Deteksi dini juga penting untuk pencegahan dan pengurangan tingkat  penularan  di  masyarakat. 2 Informasi dari  uji  laboratorium  juga  bermanfaat  untuk profilaksis,  prognosis,  manajemen  kesehatan, determinasi, pemantauan pasien, dan skrining donor darah dan jaringan, serta kepentingan epidemiologi  untuk  memperkirakan  insidens HIV-1 populasi. 3,4
Indonesia  dengan  prevalensi  HIV  di  bawah 10%  menggunakan  metode  diagnosis strategi  III,  yaitu  menggunakan  tiga  jenis reagen  yang  berbeda  sensitivitas  dan spesifisitasnya.  Masing-masing  reagen  harus memiliki  sensitivitas  minimal  99%  untuk reagen  pertama,  98%  untuk  reagen  kedua, dan  99%  untuk  reagen  ketiga.5  Tes  HIV dapat  menggunakan  tes  cepat  (rapid)  HIV atau  dengan  reagen  ELISA  ( Enzym Linked
Immunosorbent Assay ). 5 Tinjauan  pustaka  ini akan membahas metode serologi dan antigen yang digunakan.

## Metode Serologi Diagnosis HIV
Salah satu pendekatan uji serologi yang paling banyak  dilakukan  sebagai  penanda  infeksi HIV adalah deteksi antibodi anti-HIV. Uji awal diagnosis  HIV  dapat  dengan  uji  imunologi menggunakan  antibodi  imunoglobulin  G (IgG)  terhadap  HIV.  Deteksi  antibodi  dapat dilakukan  beberapa  hari  setelah  infeksi tergantung antigen yang digunakan. 6
Virus  HIV  yang  masuk  ke  dalam  tubuh  akan menginfeksi  sel  targetnya,  yaitu  sel  CD4+ atau  sel  lain  seperti  monosit,  makrofag,  dan sel  dendritik.  Setelah  3-12  minggu  infeksi, respons  imun  akan  bekerja  melawan  virus, diketahui  dengan  adanya  antibodi  dalam darah. Tahap ini disebut sebagai serokonversi. Diagnostik rutin HIV di laboratorium biasanya didasarkan pada produksi antibodi, termasuk tes cepat dan ELISA. 4
Deteksi  antibodi  HIV  dapat  dilakukan  sesuai saat  produksi  antibodi  tersebut.  Antibodi pertama  kali  ditemukan  pada  8  hari  setelah
T 0 , yaitu  saat  pertama  kali  virus  ditemukan  di dalam  darah.  Antibodi  bebas  dalam  plasma pertama  kali  merupakan  antibodi  spesifik protein gp41 HIV yang muncul 13 hari setelah T 0 . Antibodi spesifik protein gp120 muncul 14 hari  setelah  antibodi  pertama,  juga  produksi antibodi  spesifik envelop HIV  non-netralisasi lainnya,  seperti  antibodi  spesifik  CD4- binding site ,  MPER,  dan  CD4- inducible epitopes . Respons  antibodi  mukosal  Imunoglobulin A  (IgA)  pertama  kali  dideteksi  tiga  minggu setelah T 0, juga mengenali gp41 virus HIV. 7
Uji antibodi spesifik HIV pertama kali dilakukan pada  tahun  1985  dengan  metode enzyme immunoassay (EIA)  atau  ELISA. 8 Generasi pertama EIA mendeteksi IgG plasma atau serum dengan  menggunakan  lisat  virus.  Partikel virus yang telah terpecah ini dapat mengikat antibodi  pasien  HIV  dengan  konjugat  anti- antibodi IgG. 9,10 Metode ini dapat memberikan hasil  positif  6-8  minggu  setelah  terjadi infeksi,  kurang  sensitif  ataupun  spesifik. 8,10 Generasi  kedua  menguji  plasma  atau  serum menggunakan  antigen  rekombinan  ataupun sintetik, baik berupa protein maupun peptida. Metode  ini  dapat  mendeteksi  satu  minggu lebih  awal  dibandingkan  generasi  pertama.

## TINJAUAN PUSTAKA
Seperti  generasi  pertama,  generasi  kedua  ini menggunakan  reagen  pewarna  yang  akan berubah  warna  sebagai  tanda  adanya  IgG anti-HIV  pada  sampel.  Metode  ini  memiliki spesifisitas  lebih  baik  dibandingkan  metode pertama. 9,10
Metode  uji  generasi  ketiga  berkembang signifikan.  Antigen  yang  digunakan,  baik protein  rekombinan  maupun  peptida sintetik,  dapat  mendeteksi  baik  IgG  maupun IgM  melalui  perubahan  warna  karena penambahan  enzim  yang  spesifik  terhadap antibodi-antibodi  tersebut.  Oleh  karena  itu, metode  ini  sering  disebut  sebagai sandwich .
Deteksi  dapat  dilakukan  tiga  minggu  setelah terjadi  infeksi.  Metode  ini  juga  lebih  sensitif dibandingkan metode sebelumnya. 8-10
Generasi EIA keempat hadir di Amerika Serikat pada tahun 2010. 8 Generasi keempat ini dapat mendeteksi  p24  serta  antibodi  IgG  dan  IgM HIV-1/2  sekaligus.  Metode  ini  menggunakan dasar  deteksi  antigen  p24  dengan  ELISA. 11,12 Dasar  ELISA  adalah  reaksi  antara  antigen- antibodi  yang  dengan  penambahan  reagen pewarna  akan  menghasilkan  perubahan warna  yang  menandakan  adanya  antibodi anti-HIV  dan  antigen  p24.  Deteksi  antigen p24  menghasilkan  waktu  deteksi  lebih  awal dibandingkan  metode-metode  sebelumnya karena  dapat  dideteksi  sebelum  adanya respons  imun  yang  memproduksi  antibodi. Waktu deteksi sekitar 5-7 hari setelah T 0 , yaitu saat  pertama  kali  virus  ditemukan  di  dalam darah. 8,10,13
ELISA  merupakan  metode  pilihan  untuk diagnosis  HIV. 2 Namun,  metode  ini  memiliki beberapa kelemahan antara lain memerlukan tenaga lebih, waktu lebih lama, peralatan lebih banyak,  dan  personil  berpengalaman;  hal- hal  ini  memicu  peralihan  dari  metode  ELISA ke  uji  cepat.  Lien, et al ,  melaporkan  bahwa kemampuan rapid test dan ELISA kurang lebih sama. 14 Penelitian  lain  menyebutkan  adanya kelemahan rapid assay terutama  sensitivitas dan spesifisitas uji. 2
Rapid test dapat  menggunakan  sampel cairan oral, darah, plasma, atau serum. Uji ini mendeteksi IgG dan IgM HIV. Ikatan antigen- antibodi  akan  memberikan  perubahan warna  sebagai  penanda  positif. 10 Rapid test dapat  mendeteksi  sampel  dalam  30  menit atau  kurang.  Uji  ini  dapat  mendeteksi  HIV-
1  ataupun  HIV-2. 2 Keuntungannya  adalah tidak  menggunakan  peralatan  canggih laboratorium. Rapid test akan  memudahkan akses terhadap tes HIV karena bisa diterapkan di  luar  laboratorium. 15 Sensitivitas  dan spesifisitas  alat  uji  cepat  dapat  mencapai 99,3-100%  dan  99,70-99,9%  dengan  rentang kepercayaan  sebesar  95%  per  produk. 8,10 Namun,  beberapa  penelitian  melaporkan sensitivitas  dan  spesifisitas  yang  rendah. 8 Uji cepat  ini  dapat  dibandingkan  performanya dengan  EIA  generasi  pertama  ataupun kedua, 16 penelitian  lain 17 menyebutkan  enam alat rapid test dapat dibandingkan dengan EIA generasi ketiga. 8
Metode  lain  untuk  deteksi  antibodi antara  lain western blot ,  imunofluoresens, chemiluminesens, dan multiplex flow immunoassay . 13,18 Western
blot sering digunakan,  metode  ini  dapat  memeriksa beberapa protein sekaligus, berbeda dengan metode  ELISA  dan  biasanya  digunakan sebagai  tes  konfirmasi.  Antigen  yang  dapat dikenali Western blot bisa berasal dari protein (p)  HIV  atau  glikoprotein  (gp),  antara  lain p17,  p24,  p31,  gp41,  p51,  p55,  p66,  gp120, gp160. 17,18 Imunofluoresens digunakan hampir sama  dengan Western blot yaitu  sebagai  tes konfirmasi  setelah  EIA. 13 Chemiluminesens menggunakan  energi  kimia  yang  diemisi menjadi  cahaya.  Salah  satu  tes  skrining  HIV yang menggunakan metode ini adalah Liaison XL  Murex  HIV  Ab/Ag  yang  merupakan  EIA generasi  ke-4. 19 Multiplex flow immunoassay untuk  tes  HIV  salah  satunya  adalah  BioPlex 2200  HIV  Ag-Ab  dapat  mendeteksi  dan membedakan  antigen  p24  HIV-1,  antibodi HIV-1  (group  M  dan  O),  dan  antibodi  HIV-2 sekaligus. 20

## Antigen untuk Uji Serologi Antibodi anti-HIV
Salah  satu  cara  diagnosis  infeksi  patogen adalah  deteksi  antibodi  spesifik  patogen menggunakan antigen tertentu yang berasal  dari  patogen  tersebut.  Berbagai metode  seperti  EIA, rapid assay , western blot , imunofluoresens,  chemiluminesens,  ataupun multiplex flowimmunoassay menggunakan antigen yang dapat berasal dari protein, baik hasil  isolasi  maupun  protein  rekombinan, dan/ atau peptida baik rekombinan maupun sintetik. 10,18-20
Antigen Berupa Protein Antigen  berupa  protein  berasal  dari  proses
isolasi  dan  purifikasi  protein  ataupun  hasil rekayasa  genetik. 10,18 Protein  yang  dipilih adalah yang telah diketahui merupakan target sistem imun, khususnya untuk pembentukan antibodi.  Protein  yang  memberikan  respons humoral  biasanya  adalah  yang  berada  di permukaan  atau  yang  mudah  diakses  oleh sistem imun. 3 Protein yang digunakan sebagai antigen  pada  HIV  adalah  protein  struktural ataupun  glikoprotein,  misalnya  p17,  p24, p31,  gp41,  p51,  p55,  p66,  gp120,  gp41,  dan gp160. 3,17,18
Protein  untuk  antigen  dapat  diproduksi dengan  purifikasi  atau  dengan  metode rekombinan. Berbagai metode purifikasi untuk memperoleh  protein  yang  akan  digunakan untuk  antigen,  seperti  kromatografi  afinitas dan kromatografi gel eksklusi. 21 Metode lebih mudah  adalah  metode  DNA  rekombinan. 22 Metode  ini  memungkinkan  produksi  dalam jumlah  besar,  purifikasi  lebih  mudah  dan kontrol kualitas.
Penggunaan protein sebagai antigen diagnostik memiliki kelemahan yaitu rendahnya  spesifisitas  yang  memungkinkan timbulnya  reaksi  silang; .23 untuk  mencegah reaksi silang tersebut diperlukan beberapa tes diagnostik  tambahan  silang. 23 Bagian  protein yang  dikenali  oleh  sistem  imun  atau  epitop biasanya  berupa  beberapa  asam  amino. Pengetahuan  tentang  protein  atau  epitop yang mudah dikenali oleh sistem imun perlu diprioritaskan  baik  untuk  pengembangan antigen untuk diagnostik ataupun produksi  vaksin.    Salah  satu  cara  mengatasi kelemahan spesifisitas protein adalah dengan penggantian protein dengan antigen berupa epitop.  Epitop  berbentuk  linier  merupakan cara  langsung  untuk  menangkap  ikatan antigen-antibodi pada sampel serum. 24

## Antigen Berupa Peptida
Peptida  dapat  didesain  hanya  mengandung situs  ikatan  antibodi  yang  spesifik  terhadap antigen.  Situs  dipilih  yang  memiliki  afinitas kuat,  sehingga  akan  mengurangi  risiko reaksi  silang.  Peptida  berukuran  pendek sehingga  relatif  mudah  disintesis  dengan hasil dan kemurnian tinggi, serta lebih murah dibandingkan produksi protein antigen. 25,26
Peptida sebagai antigen dalam alat diagnostik umumnya  berasal  dari  daerah  lestari  yang menyandi  epitop  virus.  Peptida  sebagai
antigen  untuk  tes  diagnostik  terbukti meningkatkan  sensitivitas  dan  spesifisitas. 25
Peptida  dapat  didesain  sehingga  hanya mengandung bagian yang berikatan dengan antibodi  yang  spesifik  terhadap  patogen tertentu. 25,27 Hal  tersebut  untuk  mengurangi reaksi  silang  karena  kemiripan  epitop.  Selain itu,  ukuran  epitop  tempat  berikatannya antibodi sebenarnya hanya sekitar 8-10 27 atau 10-20 asam amino. 26 Peptida yang berukuran sesuai  epitop  tersebut  afinitasnya  akan  lebih kuat  untuk  berikatan  dengan  antibodi.  Hal ini  lebih  menguntungkan  dibanding  antigen protein yang berukuran lebih besar. 25-27
Antigen  dapat  dirancang  berdasarkan sekuen  protein  ataupun  peptida  gen  yang sudah  terdapat  di  literatur.  Hal  penting dalam  penentuan  antigen  adalah  sifat antigenisitasnya,  yaitu  kemampuan  antigen tersebut  untuk  diikat  oleh  antibodi. 28 Bagian protein yang dikenali sistem imun, yaitu epitop merupakan target penting untuk menentukan antigen untuk diagnosis sehingga penentuan daerah epitop atau yang disebut juga antigenic determinant merupakan hal paling mendasar dalam  merancang  antigen  dalam  diagnosis terutama  yang  bentuknya  peptida.  Epitop yang  penting  dalam  pengenalan  antibodi adalah epitop sel B. Epitop dapat diketahui dari studi literatur penelitian sebelumnya ataupun dapat  diketahui  dari  studi  komputasional. Ada  beberapa  perangkat  lunak  yang  dapat digunakan  untuk  mengetahui  epitop  suatu protein. 29
Peptida yang digunakan sebagai antigen bisa diperoleh  dari  metode  rekombinan  seperti halnya  protein  atau  melalui  pembuatan peptida  sintesis. 26 Metode  rekombinan melibatkan  insersi  sekuens  asam  nukleat tertentu  pada  vektor  pembawa,  umumnya digunakan  plasmid,  kemudian  sekuens tersebut  diekspresikan  atau  dilakukan over expression pada  vektor  tertentu  seperti bakteri. 26 Peptida sintetik merupakan sekuens asam  amino domain tertentu  dari  suatu antigen,  biasanya  sepanjang  10-20  asam amino. 23,26 Peptida  tersebut  dibuat  dari asam  amino  yang  disintesis  dan  digabung, sehingga  membentuk  molekul  tunggal  atau kompleks supramolekul atau hanya dicampur secara  mekanik. 26,28 Pembuatan  peptida sintetik  ini  memiliki  keuntungan  antara lain  aman,  mudah  distardardisasi,  spesifik, reprodusibel,  dan  mudah  dikembangkan
untuk  produksi  dalam  skala  besar  secara in vitro .  Peptida  sintetik  sudah  luas  digunakan dalam  diagnostik,  antara  lain  untuk  kanker, alergi, penyakit autoimun, infeksi virus, bakteri, dan parasit. 28
Peptida  sintetik  yang  digunakan  sebagai antigen  umumnya  dapat  berikatan  dengan sekuens  bagian  tertentu  pada  antibodi atau  protein  yang  bentuknya  linier.  Peptida demikian  disebut  sebagai  peptida  linier. Jumlah epitop linier lebih sedikit dibandingkan
epitop discontinue ,  sehingga  diperlukan perancangan  peptida  yang  bisa  mengenali bagian  tersebut. 28 Epitop  peptida  yang digunakan  sebagai  antigen  biasanya  berasal dari  protein  yang  dikenali  oleh  antibodi seperti protein env HIV-1.

## Aplikasi
Protein  dan  peptida  umumnya  digunakan sebagai antigen dalam alat diganostik antibodi anti-HIV. Alat diagnostik ini sudah banyak yang disetujui Food and Administration (FDA)  dan
Table. Alat diagnostik yang telah disetujui FDA dan antigen yang digunakan. 30 Nama Dagang Format Uji Jenis uji Antigen untuk Deteksi Antibodi Fluorognost HIV-1 IFA Imunofluorosensi Anti-antibodi Protein HIV-1 Cambridge Biotech HIV- 1 Western Blot Kit Western blot Anti- antibodi Protein (p) dan glikoprotein (gp) HIV-1 (p17, p24, p31, gp41, p51, p55, p66, gp120 dan gp160) GS HIV-1 Western Blot Western blot Anti-antibodi Peptida  sintetik  HIV-1  grup  O,  protein  rekombinan gp160  dan  p24  HIV-1,  peptida  rekombinan  daerah imunodominan gp36 HIV-2 Avioq HIV-1 Microelisa System EIA Anti-antibodi Protein lisat virus HIV-1 murni Maxim (Calypte) HIV-1 Urine EIA EIA Anti-antibodi Peptida rekombinan protein envelope HIV-1 INSTI HIV-1/HIV-2 Antibody Test Rapid Immunoassay Anti-antibodi Protein rekombinan HIV-1 dan HIV-2 Reveal Rapid HIV-1 Antibody Test Rapid Immunoassay Anti-antibodi Peptidasintetikbagianlestariproteinstruktural HIV Cambridge Biotech HIV- 1 Urine Western Blot Kit Western blot Anti-antibodi Fraksi spesifik protein HIV Abbott Prism HIV-O Plus Assay Chemiluminescent Immunoassay (ChLIA) Anti-antibodi Protein env HIV-1 grup M, Protein env HIV-1 grup O, Protein env HIV-2, dan peptida sintetik Geenius HIV 1/2 Supplemental Assay HIV Detection Test Anti-antibodi Protein  rekombinan  daerah  konservasi  (lestari)  dan peptida sintetik HIV-1 dan HIV-2 Genetic Systems HIV-1/ HIV-2 Plus O EIA EIA Anti-antibodi Protein  rekombinan  daerah  konservasi  (lestari)  dan peptida sintetik HIV-1 (grup M dan O) dan HIV-2 ADVIA Centaur HIV 1/O/2 Rapid Test Microparticle Chemi-luminometric Immunoassay Anti antibodi Protein  rekombinan  :  protein  env  (gp41/120), core protein (p24) dan protein env HIV-2 (gp36) dan peptida sintetik HIV-1 grup O VITROS HIV-1/HIV-2 Reagent Pack and Calibrator Imunometrik Anti-antibodi Antigen rekombinan : env14, env AL, env10, dan p24 Multispot HIV-1/HIV-2 Rapid Test Rapid Immunoassay Anti-antibodi Protein  rekombinan  HIV-1  (gp41  env),  peptida  HIV-1 (gp41 env), dan peptida HIV-2 (gp36 env) SURE CHECK HIV 1/2 ASSAY Rapid Immunoassay Anti-antibodi Antigen HIV-1 dan HIV-2
HIV 1/2 STAT-PAK ASSAY Rapid Immunoassay Anti-antibodi Antigen HIV-1 dan HIV-2 dan antibody binding protein OraQuick ADVANCE Rapid HIV-1/2 Antibody Test Rapid Immunoassay Anti-antibodi Peptida sintetik yang berasal dari protein env Chembio DPP® HIV 1/2 Assay Rapid Immuno- chromatographic Assay Anti-antibodi Antigen HIV-1 dan HIV-2 Uni-Gold™ Recombigen® HIV-1/2 Rapid EIA Anti-antibodi Protein  rekombinan  mewakili  daerah  imunodominan protein env HIV-1 BioPlex 2200 HIV Ag-Ab Assay Multiplex flow immunoassay Combo assay Peptidasintetik ADVIA Centaur HIV Ag/ Ab Combo (CHIV) Assay Microparticle Chemi-luminometric Immunoassay Combo assay Antigen rekombinan protein env virus (gp41/120 HIV-1 dan gp36 HIV-2), peptida sintetik HIV-1 grup O ARCHITECT HIV Ag/Ab Combo Chemiluminescent Microparticle Immunoassay (CMIA) Combo assay Antigen HIV-1 (grup M dan O) GS HIV Ag/Ab Combo EIA EIA Combo assay Protein rekombinan HIV-1 gp160, peptida sintetik tiruan epitope HIV-1 grup O dan epitope imunodominan env HIV-2 Alere DetermineTM HIV- 1/2 Ag/Ab Combo Immunoassay Combo assay Rekombinan antigen HIV-1 dan HIV-2
beredar di pasaran. Contoh beberapa produk diagnostik  HIV  yang  telah  disetujui  FDA  dan antigen  yang  digunakan  dapat  dilihat  pada tabel . 30

## RINGKASAN
Uji  serologi  yang  paling  banyak  dilakukan
sebagai  penanda  infeksi  HIV  adalah deteksi  antibodi  anti-HIV.  Deteksi  antibodi HIV  dilakukan  dengan  metode enzyme immunoassay (EIA) yang telah dikembangkan dari  generasi  pertama  sampai  keempat, rapid test , western blot ,  imunofluoresens,
chemiluminesens, dan multiplex flow
immunoassay . Antigen yang digunakan dalam deteksi antibodi HIV dapat berasal dari protein baik hasil isolasi maupun protein rekombinan, dan/ atau peptida baik rekombinan maupun sintetik.

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Kementerian Kesehatan Republik Indonesia. Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia nomor 15 tahun 2015 tentang pelayanan laboratorium pemeriksa HIV dan infeksi oportunistik. 2015.
2.  Mehra B, Bhattar S, Bhalla P, Rawat D. Rapid tests versus ELISA for screening of HIV infection: Our experience from a voluntary counselling and testing facility of a tertiary care centre in North India. ISRN AIDS Hindawi. 2014;2014:296840.
3.  Tiwari RP, Jain A, Khan Z, Kumar P, Bhrigu V, Bisen PS. Designing of novel antigenic peptide cocktail for the detection of antibodies to HIV-1/2 by ELISA. J Immunol Methods 2013;387(1–2):157–66.
4.  Shetty S, Prabhu S. Laboratory tests for HIV: Diagnosing, monitoring and managing AIDS-an overview. Int J Oral & Maxillofacial Patho. 2011;2(1):20–8.
5.  Kemenkes RI. Pedoman nasional tes dan konseling HIV dan AIDS. Jakarta; 2013.
6.  Mcmichael AJ, Borrow P, Tomaras GD, Goonetilleke N, Haynes BF. The immune response during acute HIV-1 infection: Clues for vaccine development. Nat Rev Immunol. 2010;10(1):11–23.
7.  Lampejo T, Pillay D. HIV virology, testing and monitoring. Med (United Kingdom). 2013;41(8):420–4.
8.  Cornett JK, Kirn TJ. Laboratory diagnosis of HIV in adults: A review of current methods. Clin Infect Dis. 2013;57(5):712–8.
9.  Branson BM. The future of HIV prevention. J Acquir Immune Defic Syndr. 2010;55(Supplement 2):102–5.
10.  Daskalakis D. HIV diagnostic testing: Evolving technology and testing strategies. Top Antivir Med. 2011;19(1):18–22.
11.  Speers D, Phillips P, Dyer J. Combination assay detecting both human immunodeficiency virus (HIV) p24 antigen and anti-HIV antibodies opens a second diagnostic window. J Clin Microbiol. 2005;43(10):5397.
12.  Saville RD, Constantine NT, Cleghorn FR, Jack N, Bartholomew C, Edwards J, et al. Fourth-generation enzyme-linked immunosorbent assay for the simultaneous detection of human immunodeficiency virus antigen and antibody. J Clin Microbiol. 2001;39(7):2518–24.
13.  Alexander TS. Human immunodeficiency virus diagnostic testing : 30 Years of evolution. Clin Vaccines Immunol. 2016;23(4):249–53.
14.  Lien TX, Tien NTK, Chanpong GF, Cuc CT, Yen VT, Soderquist R, et al. Evaluation of rapid diagnostic tests for the detection of human immunodeficiency virus types 1 and 2, hepatitis B surface antigen, and syphilis in Ho Chi Minh City, Vietnam. Am J Trop Med Hyg. 2000;62(2):301-9.
15.  Almazini P. Rapid test makin cepat mendeteksi antibodi HIV. CDK. 2011;38(2):137–40.
16.  Greenwald JL, Burstein GR, Pincus J, Branson B. A rapid review of rapid HIV antibody tests. Curr Infect Dis Rep. 2006;8:125-31.
17.  Delaney KP, Branson BM, Uniyal A, Phillips S, Candal D, Owen SM, et al. Evaluation of the performance characteristics of 6 rapid HIV antibody tests. CID. 2011;52(15 January):257–63.
18.  Branson BM, Owen SM, Wesolowski LG, Benett B, Werner BG, Wroblewski KE, et al. Laboratory testing for the diagnosis of HIV infection : Updated recommendations - Guidelines and recommendations. Centers for Disease Control and Prevention and Association of Public Health Laboratories; 2014. p. 1-66.
19.  Alonso R, Roa PL, Suárez M, Bouza E. New automated chemiluminescence immunoassay for simultaneous but separate detection of human immunodeficiency virus antigens and antibodies. J Clin Microbiol. 2014;52(5):1467–70.
20.  Bio-Rad Laboratories. BioPlex 2200 system: HIV Ag-Ab, Instructions for use. USER MANUAL. 2015;38.
21.  Movahedi A (R ), Hampson DJ. New ways to identify novel bacterial antigens for vaccine development. Vet Microbiol. 2008;131(1–2):1–13.
22.  Structural  Genomics  Consortium,  Architecture  et  Fonction  des  Macromolécules  Biologiques,  Berkeley  Structural  Genomics  Center,  China  Structural  Genomics Consortium, Integrated Center for Structure and Function Innovation, Israel Structural Proteomics Cente and S-C. Protein production and purification. Nat Methods. 2008;5(2):135-46.
23.  Carmona SJ, Sartor PA, Leguizamón MS, Campetella OE, Agüero F. Diagnostic peptide discovery: Prioritization of pathogen diagnostic markers using multiple features. PLoS One. 2012;7(12):e50748.
24.  Andresen H, Bier FF. Chapter 8 peptide microarrays for serum antibody diagnostics. In: Bilitewski U, editor. Microchip methods in diagnostics. Humana Press; 2009. p. 123–34.
25.  Pau CP, Luo W, McDougal JS. Chimeric multiple antigenic peptides for simultaneous detection of specific antibodies to HIV-1 groups M, N, O, and HIV-2. J Immunol Methods. 2007;318(1–2):59–64.
26.  Hancock DC, Reilly NJO. Synthetic peptides as antigens for antibody production in methods in molecular biology. 3 rd Ed. Burns R, editor. Vol. 295. Humana Press; 2005 .p. 13-25.
27.  Lines JA, Yu Z, Dedkova LM, Chen S. Design and expression of a short peptide as an HIV detection probe. Biochem Biophys Res Commun. 2014;443(1):308–12.
28.  Ponomarenko JV, van Regenmortel MHV. B-Cell epitope prediction BT - Structural bioinformatics. In: Gu J, Bourne PE, editors. Structural bioinformatics second edition. John Wiley and Sons; 2009. p. 849–79.
29.  Potocnakova L, Bhide M, Pulzova LB. An introduction to B-Cell epitope mapping and in silico epitope prediction. J Immunol Res. 2016;2016. 30.  US Food and Drug Administration. Complete list of donor screening assays for infectious agents and HIV diagnostic assays. Infectious Disease Test [Internet].
2016.  Available  from:  https://www.fda.gov/biologicsbloodvaccines/bloodbloodproducts/approvedproducts/licensedproductsblas/blooddonorscreening/ infectiousdisease/ucm080466.htm