1

## OLEANAN DERIVATE COMPOUNDS
FROM Melochia umbellata (Houtt) Stapf var. Degrabrata K BARK

## AND THEIR BIOACTIVITY
Senyawa Turunan Oleanan dari Kulit Batang Melochia umbellata (Houtt) Stapf var. Degrabrata K dan Bioaktivitasnya
1 Chemistry Education Department, Faculty of Teacher and Training, Mulawarman University
2. Chemistry Department, Faculty of Mathematics and Natural Sciences, Hasanuddin University
Received:  June 2014 Published: July 2014

## ABSTRACT

## PENDAHULUAN
Melochia  umbellata (Houtt)  Stapf  var. Degrabrata  K  merupakan  jenis  tumbuhan  yang termasuk  dalam  famili  Malvaceae.  Jenis tumbuhan  ini  dikenal  dengan  nama  paliasa  dan sejak lama digunakan oleh masyarakat di daerah Sulawesi  Selatan  sebagai  obat  tradisional  yang berkhasiat  untuk  mengobati  penyakit  liver, hipertensi, kolesterol dan hepatitis (Heyne, dkk., 1987; Raflizar dkk., 2006). Ekstrak metanol dari daun tumbuhan M. umbellata var. degrabrata K, diketahui  dapat  memperbaiki  fungsi  hati  mencit yang  telah  diinduksi  dengan  karbon  tetraklorida (Tayeb et  al ,  2006).  Menurut  Lallo  dan  Tayab, 2003,  ekstrak  metanol  daun  tumbuhan M. umbellata (Houtt) Stapf var. degrabrata memiliki aktivitas antioksidan dan bersifat toksik terhadap benur  udang Artemia  salina .  Hasil  uji  toksisitas ekstrak metanol pada bagian jaringan kulit akar, kayu  akar,  kulit  batang,  kayu  batang  dan  daun dari M.  umbellata (Houtt)  stapf  var.  degrabrata terhadap benur udang Artemia salina memperlihatkan  nilai  LC 50 masing-masing sebagai  berikut;  66,22;  37,343;  30,27; 1,80  dan 84,26  µg/mL.  Hasil  ini  menunjukkan  ekstrak
kayu  batang  dan  kulit  batang M.  umbellata (Houtt)  Stapf  var.  degrabrata  merupakan  bagian jaringan  yang  paling  aktif  dibandingkan  bagian jaringan lainnya (Erwin dkk., 2009).
Menurut  Heyne  (1987)  Kandungan  kimia dari  daun M.  umbellata (Houtt)  stapf  var. Degrabrata  adalah  minyak  atsiri,  terpenoid, alkaloid  dan  flavonoid.  Dari  daun  tumbuhan tersebut  juga  ditemukan  senyawa  golongan; saponin,  cardenolin,  bufadienol,  antrakinon, scopoletin, keampferol, quercetin, serta senyawa sianogenik  (Raflizar  dkk.,  2006;  Philippine Medicinal  Plants,  2010).  Kemudian  Li,  dkk. (2009),  menambahkan  bahwa  daun  tumbuhan tersebut  mengandung  triterpenoid  sikloartan. Selanjutnya  dari  ekstrak  metanol  kulit  batang tumbuhan M.  umbellata mengandung  senyawa golongan; alkaloid, flavonoid, terpenoid, fenolik dan saponin (Usman, dkk., 2012). Senyawa metabolit sekunder yang ditemukan  pada  bagian  jaringan  kayu  akar M. umbellata (Houtt)  Stapf  var.  Degrabrata  yaitu dari ekstrak n-heksan adalah senyawa stigmasterol (5,22-stigmastadien-3β-ol) berpotensi  sebagai  antibakteri,  dan  senyawa stigmasterol  terglikosidasi  (stigmast-5,22-diena-
Oleanan  derivated  3-acetyl-12-oleanen-28-oat  has  been  isolated  from  the  n-hexane  fraction  of  M.  umbellata (Houtt) Stapf var. degrabrata K. bark. The molecular structure were determined by IR spectroscopy, 1D and 2D NMR (1H, 13C, DEPT, COSY, HMQC and HMBC) data analysis. Bioactivity tested results indicated that the compound was toxic to A. salina with LC50 value was 361.93 mg/mL. At the concentration of 1000 mg/mL 3- acetyl-12-oleanen-28-oat gave the highest inhibition to bacteria B. subtilis and the fungus C. albicans with the inhibited zone diameter was 15.8 mm and 15.2 mm, res.
Kata kunci : Oleanan, M. umbellata, NMR, LC50, inhibition
Usman 1,* , Nunuk Hariani Soekamto 2 , Hanapi Usman 2 , Ahyar Ahmad 2
Usman , dkk / Ind. J. Chem. Res. , 2014, 2, 110 - 115
1
3-O-β-D-glukopiranosida) bersifat sebagai antijamur  (Ridhay,  dkk.,  2012).  Kemudian  dari ekstrak  klorom  kayu  akar  telah  diisolasi  dua senyawa  yaitu  9,10-epoksi  melochinon  yang bersifat  toksik  terhadap A.  salina dan  sel  murin leukemia P-388 dan senyawa golongan flavonoid (6,6’-dimetoksi-4,4’-dihidroksi-3’,2’-furano- isoflavan)  namun  tidak  bersifat  toksik  terhadap A.  salina maupun  sel  murin  leukimia  P-388 (Ridhay, dkk., 2012).
Pada  bagian  jaringan  kayu  batang M. umbellata (Houtt)  Stapf  var.  degrabrata  telah berhasil  diisolasi  dua  senyawa  baru  yaitu senyawa golongan alkaloid (Waltherion C) yang bersifat sangat toksik terhadap A. salina dan sel murin  leukimia  P-388  dan  senyawa  golongan flavonoid  (cleomiscosin)  namun  tidak  bersifat toksik baik terhadap A. salina maupun sel murin leukimia  P-388  (Erwin,  dkk.,  2014).  Serta  β- sitosterol  yang  diisolasi  dari  ekstrak  n-heksan kayu  batang  M.  umbellata  (Houtt)  Stapf  var. Degrabrata K (Erwin dkk., 2010).
Berdasarkan  uraian  tersebut  diatas  bagian jaringan kulit batang M. umbellata (Houtt) Stapf var. Degrabrata K berpotensi untuk dikembangkan  sebagai  sumber  bahan  bioaktif alam karena sifat toksisitasnya terhadap larva A. salina dan  sifat  bioaktif  lainnya  serta pemanfaatan  tumbuhan  tersebut  sebagai  obat tradisional oleh masyarakat. Secara kemotaksonomi tumbuhan dari famili yang sama akan  menghasilkan  senyawa  yang  identik.  Hal ini  berarti  kulit  batang M.  umbellata (Houtt) Stapf  var.  Degrabrata  K  memungkinkan ditemukan  senyawa  metabolit  sekunder  yang memiliki aktivitasbiologis yang bermanfaat.

## METODOLOGI

## Alat dan Bahan
Peralatan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini adalah alat-alat gelas yang lazim digunakan di laboratorium, peralatan kromatografi vakum cair (KVC),  kromatografi  kolom  tekan  (KKT), kromatografi kolom gravitasi (KKG), kromatografi  lapis  tipis  (KLT), chamber , mikropipet,  mikroplate,  alat  uji  antimikrobial, lampu  ultraviolet  (λ,  254  dan  360  nm),  alat evaporator  BUCHI,  alat  pengukur  titik  leleh Fisher  Johns,  FTIR  8501  Shimadzu  dan  NMR JEOL JMN A 5000.
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  sampel  kulit  batang M. umbellata dengan  nomor  spesimen:  BO- 1912171.  Pelarut  organik  berkualitas  p.a  dan teknis;  n-heksan,  kloroforom,  etil  asetat,  aseton dan  metanol,  silika  gel  Merk  (7730,  7733  dan 7734). Larutan serium sulfat 2 %, DMSO, benur udang A. salina , biakan murni bakteri B. subtilis, S.  aureus,  E.  coli, P.  aeruginosa , S.  thypi, dan biakan murni jamur C. albicans, M. furfur dan A. niger . medium  Mueller  Hinton  Agar  (MHA), kertas cakram ( paper disc ).

## Prosedur Kerja Ekstraksi dan Isolasi
Serbuk  halus  kulit  batang  tumbuhan M. umbellata (5,25  Kg)  diekstraksi  dengan  cara maserasi  menggunakan  pelarut  metanol  1  X  24 jam  (sebanyak  3  kali).  Ekstrak  metanol dipekatkan dengan rotary evaporator bertekanan rendah  dan  diperoleh  ekstrak    metanol  (393,58 gr).  Ekstrak  metanol  sebanyak  (300  g),  dipartisi dengan  cara  ekstraksi  cair-cair  menggunakan pelarut  dengan  kepolaran  yang  meningkat;  n- heksan, kloroform dan etil asetat.
Ekstrak heksan (15,0 g) difraksinasi dengan kromatografi  vakum  cair  (KVC)  dan  dielusi dengan  eluen  n-heksan  yang  ditingkatkan kepolarannya dengan etilasetat sehingga dihasilkan  16  fraksi  utama.  Padatan  yang terbentuk pada fraksi D (1,2205 g) dikristalisasi dan  rekristalisasi  menggunakan  pelarut  metanol diperoleh isolat senyawa berupa serbuk berwarna putih sebanyak 70,6 mg.

## Uji Toksisitas
Uji  toksisitas  isolat  senyawa  dilakukan dengan  metode Brine  Shirmp  Lethality  Test (BSLT)  menggunakan  benur  udang A.  salina sesuai  dengan  metode  yang  digunakan  oleh Meyer (1982).

## Uji Antibakteri
Bakteri uji yang digunakan dalam penelitian ini  berasal  dari  biakan  murni..  Bakteri  uji tersebut  terdiri  dari  bakteri  gram  positif  ( B. subtilis dan S. aureus )  dan bakteri gram negatif ( P. aeruginosa, E. coli dan S. thypi ). Uji aktivitas antibakteri dilakukan dengan metode difusi agar menggunakan  kertas  cakram  ( paper  disc ) berdiameter 6 mm.
Usman , dkk / Ind. J. Chem. Res. , 2014, 2, 110 - 115
1

## Uji Antijamur
Biakan jamur uji yang digunakan adalah C. albicans,  M.  furfur  dan  A.  niger Uji  antijamur dilakukan dengan metode difusi agar menggunakan  kertas  cakram  ( paper  disc )  steril berdiameter 6 mm.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tabel 1. Data Spektroskopi NMR isolat senyawa dari ekstrak n-heksan kulit batang M. umbellat (Houtt) Stapf var. Degrabrata K
No H-NMR, δ H ppm (multiplisitas, J dlm Hz) C – NMR δ C ppm δ C (lit) COSY H  H HMQC H  C HMBC H  C 1   1,76 (t, J =  3,25; 7,8; 13,6) 1,23 (1H, m) 38,24 38,0 2 C-1 C2 2   1,80 (1H, m) 23,70 23,5 1, 3 C-2 3   4,50 (t, J = 9,1) 81,10 80,9 2 C-3 C1, C2, C23, C24, C31 4   - 37,87 37,6 5   1,30 (1H, m) 55,46 55,2 6 6   152 (1H, m) 128 (1H, m) 18,35 18,1 5, 7 C-6 C23; C24 7   1,56 (1H, m) 1,31 (1H, m) 32,69 32,4 6 C-7 8   - 39,45 39,2 9   1,43 (1H,  dd, J = 3,2 & 9,75)      47,73 47,5 11 C-9 10   -- 37,17 36,9 11   1,97 (1H, ddd, J = 4,5; 9,1; 13,6) 23,10 22,8 9, 12 C-11 C12, C13 12   5,25 (1H, t, J = 3,9) 122,74 122,5 11 C-12 C9, C14 13   - 143,78 143,6 14   - 41,73 41,5 15   1,38 (1H, m) 1,13 (1H, m) 27,84 27,6 16 C-15 16   1,61 (1H,m) 1,36 (1H, m) 23,57 23,3 15 C-16 C28 17   - 46,72 46,5 18   2,86 (1H, dd, J = 4,55; 13,65) 41,10 40,8 19 C-18 C12, C13, C14 19   1,24  (1H, m) 46,0 45,8 18 C-19 20   - 30,85 30,6 21   1,31 (1H, m) 32,62 33,7 22 C-21 22   2,02 (1H,m) 1,77 (1H, m) 33,96 32,4 21 C-22 C28 23   0,85 (3H, s) 28,22 28,0 C-23 C3, C5 24   0,86 (3H, s) 16,84 16,6 C-24 C6; C3 25   0,93 (3 H, s) 15,57 15,3 C-25 C1; C5; C9; C10 26   074 (3 H, s) 17,35 17,1 C-26 C8, C14 27   1,12 (3 H, s) 26,08 25,8 C-27 C8, C13, C14 28   - 183,96 184,3 29   0,90 (3 H, s) 32,84 33,0 C-29 C19, C20 30   0,94 (3 H, s) 23,51 23,5 C-30 C19, C20 31   - 171,25 171,1 32   2,04 (3 H, s) 22,06 21,3 C-32 C31
1
Isolat  Senyawa  berupa  kristal  putih  (70,6 mg)  dengan  titik  leleh  284-285 0 C  dan    positif triterpenoid  dengan  pereaksi  L-B.  Data spektroskopi  sinar  UV  isolat  senyawa  diukur pada  panjang  gelombang  (λ)  200  –  400  nm dalam  pelarut  kloroform.  Dari  data  ini  serapan maksimum pada panjang gelombang (λ max ) = 276 nm  diperkirakan  adanya  gugus  kromofor  C=O dengan jenis transisi elektron dari orbital   n  π * . Sedangkan serapan pada panjang gelombang (λ max ) = 240 nm diperkirakan berasal dari gugus kromofor  ikatan  rangkap  C=C  terisolasi  dengan jenis transisi  π  π * . Hasil analisis spektrum IR menunjukkan  pada  daerah  bilangan  gelombang 3448  cm -1 merupakan  vibrasi  ulur  dari  gugus hidroksi (OH). Hal ini didukung dengan adanya vibrasi tekuk pada daerah 1099 cm -1 untuk gugus (OH), pita serapan pada daerah 2958, 2918, dan 2848 cm -1 merupakan vibrasi ulur asimetrik C-H alifatik yang didukung oleh adanya serapan pada 1465  dan  1377  cm -1 yang  merupakan  vibrasi tekuk  dari  gugus  CH 2 dan  gugus  CH 3 .  Pita serapan  pada  1737    cm -1 menunjukkan  vibrasi ulur  asimetrik  gugus  ester,  pita  serapan  pada daerah 1261 cm -1 merupakan vibrasi tekuk gugus (C=O)  dari  asetat,  dan  pita  serapan  pada  1633 cm -1 adalah vibrasi ulur untuk gugus (C=C) yang didukung oleh adanya pita serapan pada 802 cm - 1 , khas  untuk  ikatan  rangkap  pada  posisi  C-12 dan C-13 dalam suatu triterpen penta siklik.
Spektrum 13 C-NMR isolat senyawa menunjukkan  adanya  32  sinyal  karbon  yang terdiri atas 8 karbon metil, 10 karbon metilen, 5 karbon  metin  dan  9  karbon  kuaterner. Pada  δ C 81,10 ppm teridentifikasi adanya oksi karbon (C- 3),  Geseran  kimia  pada  δ C 122,74  ppm
menunjukkan karbon tersier rangkap dua (C-12), dan δ C 143,78 ppm teridentifikasi sebagai karbon kuarterner  rangkap  dua  (C-13),  pada  δ C 171,25 ppm  dan  δ C 183,9  ppm  menunjukkan  adanya gugus  karbonil  masing-masing  sebagai  ester pada atom C-31 (CH 3 -CO) dan asam karboksilat pada  atom  C-28  (-COOH).  Hal  ini  didukung dengan  adanya  pita  serapan  IR  pada  bilangan gelombang 1633 cm -1 . Spektrum 1 H-NMR  isolat  senyawa  tersebut menunjukkan adanya gugus ikatan rangkap yang terlihat pada δ H 5,27 ppm (H, t, J = 3,9 Hz) dan metinoksi  (H-C-O-)  yang  muncul  cukup downfield pada δ H 4,50 ppm (H, t, J = 9,1 Hz). Hal  ini  Karena  adanya  gugus  asetil  (CH3-C=O) muncul pada δ H 2,04 ppm (3H, s). Disamping itu ada  7  gugus  metil  singlet  (s)  muncul  pada  δ H 0,74; 0,84; 0,85; 0,90; 0,93; 0,95 dan 1,12 ppm. Sinyal-sinyal  tersebut  diindikasikan  sebagai senyawa dengan kerangka olean yang tersubstitusi gugus asetil pada C-3.
Untuk  memperkuat  posisi  gugus  fungsi dapat  dilihat  dari  nilai  geseran  kimianya  dan adanya korelasi jarak jauh (long range coupling) HMBC. Korelasi jarak jauh antara sinyal proton pada δ H 4,5 ppm (H-3) dengan gugus asetil pada δ C 171,25 ppm, menunjukkan bahwa gugus asetil terletak  pada  C-3.  Disamping  itu  posisi  ikatan rangkap  terletak  pada  C-12  ditunjukkan  dengan adanya  korelasi  antara  δ H 5,25  ppm  (H-12) dengan  karbon  metin  pada  δ C 37,17  ppm  (C-9) dan  karbon  kuarterner  pada  δ C 41,73  ppm  (C- 14).  Posisi  beberapa  gugus  metil  juga  dapat ditentukan  dengan  adanya  korelasi  seperti  pada Gambar 1.
Gambar 1. Senyawa 3-asetil-12-oleanen-28-oat (3-acetyl-12-oleanen-28-oic acid)
Spektrum  COSY  isolat  senyawa  ini memperlihatkan  adanya  korelasi  proton-proton tetangga  yaitu  sinyal  proton  pada  δ H 1,76  ppm (H-1)  dengan  sinyal  proton  pada  δ H 1,80  ppm (H-2).  Sinyal  proton  pada  δ H 1,30  ppm  (H-5) berkorelasi  dengan  sinyal  proton  pada  δ H 1,52 ppm  (H-6).  Hubungan  korelasi  proton-proton tetangga (COSY) isolat senyawa ini secara rinci dapat  dilihat  pada  Tabel  2,  dan  analisis  COSY dapat dilihat pada Gambar 1.
Berdasarkan  data  spektrum  H-NMR,  C- NMR,  COSY,  HMQC  dan  HMBC  seperti  yang disajikan pada Tabel 1, dapat disimpulkan bahwa isolat  senyawa  tersebut  adalah  3-asetil-12- oleanen-28-oat.  Data  spektroskopi  C-NMR senyawa  tersebut  memiliki  kemiripan  dengan data  spektroskopi  C-NMR  senyawa  yang  telah dilaporkan sebelumnya (Ogihara at al., 1997 dan
oleanen-28-oat  sebagaimana  yang  disajikan pada Tabel  3,  memperlihatkan  bahwa  pada konsentrasi  1.000  µg/mL  senyawa  tersebut memiliki  daya  hambat  tertinggi  terhadap pertumbuhan B.  subtilis dan  jamur C.  albicans dengan  diameter  zona  hambat  masing-masing adalah 15,8 mm, dan 15,2 mm. Pada konsentrasi dibawah  1000  ppm  daya  hambat  yang ditunjukkan  senyawa  3-asetil-12-oleanen-28-oat terhadap  pertumbuhan  bakteri  dan  jamur semakin  lemah  bahkan  tidak  memperlihatkan daya hambat atau tidak aktif sama sekali.
Suatu  senyawa  dikatakan  bersifat  sebagai antimikroba  jika  senyawa  tersebut  memberikan rata-rata  diameter  zona  hambat  lebih  besar  dari 14 mm (Wattimena, 1991) Berdasarkan hasil uji aktivitas antimikroba maka senyawa 3-asetil-12- oleanen-28-oat   dari   kulit   batang   tumbuhan
Tabel 2.  Hasil  uji  toksisitas  isolat  senyawa  dengan  metode  BSLT  menggunakan  benur  udang ( A. Salina )
Tabel 3.  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  dan  antijamur  terhadap  isolat  senyawa  dari  ekstrak n-heksan kulit batang M. Umbellata
Sampel [X] µg/m L Zona Hambat (diameter dalam mm) B. subtilis S. aureus E. coli S. thypi P. aeruginosa C. albicans M. furfur A. niger Seny. 1 100 200 400 600 800 1000 t.m 8,5 10,3 12,1 13,2 15,8 t.m t.m t.m t.m 8,3 9,0
t.m t.m t.m 8,8 10,5 12,0 t.m t.m t.m t.m t.m t.m t.m t.m t.m t.m t.m t.m t.m 8,4 10,1 12,6 13,9 15,2 t.m t.m t.m t.m t.m t.m
t.m t.m t.m 7,3 8,0 8,3
Neved,  dkk.,  2006)  sehingga  lebih  memastikan bahwa  isolat  senyawa  tersebut  adalah  3-asetil- 12-oleanen-28-oat.
Hasil  uji  bioaktivitas  senyawa  3-asetil-12- oleanen-28-oat dengan metode BSLT menggunakan  benur  udang A.  salina (Tabel  2) memperlihatkan bahwa senyawa tersebut bersifat kurang toksik dengan nilai LC 50 361,93. Menurut Anderson  (1990)  senyawa  murni  dengan  nilai LC 50 lebih  besar  dari  100  μg/ml  dikategorikan bersifat  toksisitas  rendah.  Berdasarkan  hasil  uji aktivitas     antimikroba     senyawa    3-asetil-12-
M.  umbellata berpotensi  sebagai  antimikroba karenasenyawa  tersebut  mampu  menghambat pertumbuhan bakteri dan jamur dengan diameter zona  hambat  rata-rata  lebih  besar  dari  14  mm, terutama  terhadap  bakteri B.  subtilis dan jamur C.albicans

## KESIMPULAN
1. Senyawa  turunan  oleanan  3-asetil-olean-12- en-28-oat  diisolasi  dari  ekstrak  n-heksan
No. Ekstrak Sampel Berat Ekstrak (gr) LC 50 μg/ml 1. Isolat Senyawa 70,6 mg 361,93
1
kulit batang M. umbellata (Houtt) Stapf var. Degrabrata K.
2. Hasil  uji  toksisitas  dengan  metode  BSLT menggunakan A. salina menunjukkan bahwa senyawa  3-asetil-12-oleanen-28-oat  bersifat kurang  toksik  dengan  nilai  LC 50 369,93 µg/mL.
3. Senyawa
3-asetil-12-oleanen-28-oat memiliki daya hambat terhadap pertumbuhan bakteri B.  subtilis dan  jamur C.  Albicans dengan diameter zona hambat masin-masing 15,8 dan 15,2 mm.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih,  kami  sampaikan kepada:  Kepala  Laboratorium  Kimia  Organik Jurusan Kimia FMIPA Universitas Hasanuddin.

## DAFTAR   PUSTAKA
Almagboul,  A.Z.,  Bashiru,  A.K.,  Karim,  A., Farouk, .A.; Salihu, M., Farouk, A., Khalid, S.A. 1988. Antimicrobial Activity of Certain Sudanese Plants Used in Folklorik Medicine. Fitoterapia. Vol. 59 (5) pp.393-3 96.
Anderson, J.E., Goetz, C.M., and Mc. Laughlin, J.L.  1990.  A  Blind  Comparison  of  Simple Bench-top Bioassay and Human Tumor Cell Cytotoxicities  as  Antitumor  Prescreen. Phytochemical analysis . 6. 107–111.
Babalola,  I.T.,  Adelakun  E.A.,  Wang  Y,  Shode, F.O.  2012.  Anti-TB  Activity  of Sterculia setigera Del.,  Leaves  ( Sterculiaceae ), Journal
of Pharmacognosy and
Phytochemistry .  Vol.  1  No.  3,  Online Available at www.phytojournal.com.
Dias  G.C.D.,  Gressler  V.,  Hoenzel  S.C.S.M.,
Silva  U.F.,  Dalcol  I.I.,  Morel  A.F.  2007. Constituents  of  the  roots  of Melochia chamaedrys . Journal  Phytochemistry ,    68, 668–672.
Erwin,  Noor,  A.,  Soekamto,  N.H.,  Harlim  T. 2010.  Penentuan  Struktur  Molekul  Isolat Kayu  Batang Melochia  umbellata (Houtt).
Stapf var. Degrabrata K (Paliasa) dan Uji Sel Murin  Leukimia  P-388. Disertasi,  tidak diterbitkan,  Program  Studi  Kimia  PPS UNHAS , Makassar.
Igoli,  J.  O.,  Ogaji,  O.  G.,  Tor-  Anyiin,  T.  A., Igoli, N.P. 2005. Medicinal Practices among the Igede people of  Nigeria Part II , African Journal  of  Complementary  and  Alternative Medicine , Vol.2, Ibrahim T. Babalola, Esther A.  Adelakun,  Yuehong  Wang,  Francis  O.
Shode Vol. 1 No. 3 2012
www.phytojournal.com Page | 26.
Kubmarawa D, Ajoku G .A, Enwerem N .M and Okorie  D.  A.    2007.  Preliminary phytochemical  and  antimicrobial  screening of 50 medicinal plants from Nigeria. African Journal of Biotechnology 6 (14):1690-1696. Lalo,  A.  2003.  Perbandingan  Efek  Ekstrak Metanol  Berbagai  Jenis  Daun  Paliasa Terhadap Fyngsi Hati Mencit Jantan, Skripsi , Jurusan Farmasi FMIPA Unhas Makassar. Ogihara, K., Iraha, R., Higa, M., Yogi, S. 1997.
Studies  on  Constituents  from  the  Twigs  of Messerschmidia argentea II. Bull, Coll. Sci.,
Univ, Ryukus, No. 64: 53–59.
Raflizar.,  Adimunca.,  dan  Tuminah,  S. 2006 . Dekok  Daun  Paliasa  ( Kleinhovia  hospital Linn)  Sebagai  Obat  Radang  Hati  Akut. Cermin Dunia Kedokteran . 50, 10-14. Ridhay,  A.,  Noor,  A.,  Soekamto,  N.H.,  dan Harlim, T.  2012. Isolasi dan Uji Antibakteri Senyawa  Steroid  dari  Kayu  Akar M. umbellate (Houtt)    Stapf var. degrabrata K. Jurnal Kesehatan  Bung ,  1(4):  43–46, Desesmber 2011.
Tayeb,  R.,  Alam,  G.,  Wahyudin,  E.  2007. Toksisitas  Ekstrak  Daun  Paliasa  Jenis Kleinhovia hospita , Melochia um bellata var. Degrabrata  dan M.  umbellata var.  Visenia Terhadap  Larva A.  salina Leach. Majalah Obat Tradsional.
Wattimena,  J.R.  1991.  Farmakodinamik  dan Terapi  Antibiotik.  Gajah  Mada  University Press, Yogyakarta. Hal: 36.