## PENINGKATAN STABILITAS OKSIDATIF MINYAK MATA TUNA DENGAN METODE PURIFIKASI DAN PENAMBAHAN NATURAL ASTAXANTHIN (NAst)
Nurmaida*, Bustami Ibrahim, Wini Trilaksani
Departemen Teknologi Hasil Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, IPB University Jalan Agatis, Kampus IPB Dramaga Bogor, Indonesia 16680
Diterima: 23 Juli 2023/Disetujui: 14 November 2023 *Korespondensi: nurmaidanurmaida@apps.ipb.ac.id
Cara sitasi (APA Style 7 th ) : Nurmaida, Ibrahim, B., & Trilaksani, W. (2024). Peningkatan stabilitas oksidatif minyak mata tuna dengan metode purifikasi dan penambahan natural astaxanthin (NAst). Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia, 27(2), 89-103. http://dx.doi.org/10.17844/jphpi.v27i2.48961
Abstrak
Minyak ikan merupakan sumber nutrisi asam lemak tak jenuh ganda, khususnya eicosapentaenoic acid (EPA, C20:5 n-3) dan docosahexaenoic acid (DHA, C22:6 n-3) yang bermanfaat bagi kesehatan manusia. Mata tuna mengandung DHA yang tinggi dan unggul, sehingga dapat diolah menjadi minyak mata tuna. Kekurangan minyak mata tuna adalah mudah mengalami kerusakan oksidatif. Astaxanthin sebagai pigmen karotenoid memiliki aktivitas antioksidan kuat dan menghambat peroksidasi lipid penyebab kerusakan oksidatif. Tujuan penelitian ini menentukan konsentrasi terbaik penambahan astaxanthin pada minyak mata tuna hasil permurnian berdasarkan parameter mutu dan stabilitas oksidasi. Pemurnian minyak mata tuna dilakukan melalui netralisasi dengan NaOH 16°Be, dilanjutkan dengan bleaching menggunakan magnesol 5%. Minyak mata tuna hasil pemurnian dicampur dengan astaxanthin kulit udang pada konsentrasi berbeda, yaitu 0; 0,2: 0,4: dan 0,6%. Parameter yang dianalisis meliputi asam lemak bebas, bilangan peroksida, bilangan p-anisidin, dan total oksidasi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa purifikasi dengan netralisasi NaOH 16°Be dan bleaching magnesol 5% memiliki nilai asam lemak bebas 0,33±0,08%, bilangan peroksida 4,12±0,82 meq/kg, p-Anisidin 2,83±0,22 meq/kg, dan total oksidasi 11,08±1,62 meq/kg. Astaxanthin memiliki nilai IC 50 14,14 ppm. Perlakuan penambahan astaxanthin terbaik adalah konsentrasi 0,6% dengan nilai asam lemak bebas 1,03±0,05%, bilangan peroksida 8,08±0,14 meq/kg, bilangan p-Anisidin 9,12±0,02 meq/kg; dan total oksidasi 25,29±0,31 meq/kg terkecil selama 60 hari penyimpanan. Purifikasi dan penambahan natural astaxanthin mampu memperbaiki kualitas mutu dan stabilitas minyak mata tuna selama penyimpanan.
Kata kunci: antioksidan, hasil samping, hidroperoksida, omega-3, udang

## Improvement of Oxidative Stability of Tuna Eyes Oil by Purification Methods and Natural Astaxanthin (NAst) Addition

## Abstract
Fish oil is a rich source of long-chain polyunsaturated fatty acids (LCPUFA) that are essential for human health. These fatty acids, specifically eicosapentaenoic acid (EPA, C20:5 n-3) and docosahexaenoic acid (DHA, C22:6 n-3), have been shown to provide numerous health benefits.Tuna eye stands out for its exceptional DHA content, which allows it to be refined into tuna eyes oil. The disadvantage of tuna eye oil is its susceptibility to oxidative damage.Astaxanthin, a carotenoid pigment, exhibits robust antioxidant properties and suppresses lipid peroxidation, thereby preventing oxidative damage. The objective of this research is to identify the optimal concentration of astaxanthin and the most suitable refined tuna eye oil based on quality parameters and oxidative stability.The purification of tuna oil was accomplished through a process that involved neutralization with 16°Be NaOH, followed by bleaching with 5% magnesol.The subsequent combination of refined tuna eye oil with shrimp shells was carried out at concentrations of 0%, 0.2%, 0.4%, and 0.6% astaxanthin.The parameters that were examined included free fatty acids, peroxide value, p-anisidine, and total oxidation.The outcomes of the study indicated that the refining process of tuna
Available online: journal.ipb.ac.id/index.php/jphpi
Peningkatan stabilitas oksidatif minyak mata tuna, Nurmaida et al.
oil through neutralization and bleaching resulted in a free fatty acid content of 0.33±0.08%, a peroxide value of 4.12±0.82 meq/kg, a p-Anisidine value of 2.83±0.22 meq/kg, and a total oxidation of 11.08±1.62 meq/ kg. The IC 50 value of astaxanthin was found to be 14.14 ppm. The optimal concentration of astaxanthin for addition was determined to be 0.6%, resulting in a free fatty acid content of 1.03±0.05%, a peroxide value of 8.08±0.14 meq/kg, an anisidine value of 9.12±0.02 meq/kg, and a total oxidation value of 25.29±0.31 meq/kg. Among these values, the total oxidation value showed the smallest change after 60 days of storage, and the utilization of purification techniques and incorporation of astaxanthin may enhance the oxidative stability of tuna oil during storage.
Keywords: antioxidant, by-product, hidroperoxide, omega-3, shrimp
PENDAHULUAN Minyak ikan merupakan sumber gizi omega-3 asam lemak tak jenuh ganda atau long-chain polyunsaturated fatty acids (LCPUFA), khususnya eicosapentaenoic acid (EPA, C20:5 n-3) dan docosahexaenoic acid (DHA, C22:6 n-3) yang sangat penting bagi kesehatan manusia (Félix-Soriano et al ., 2021). Asupan EPA dan DHA yang cukup dapat mengurangi morbiditas penyakit kardiovaskular, meningkatkan kekebalan, mencegah tengkes, meningkatkan perkembangan kognitif,  mencegah stres, kematian prenatal, dan kelahiran prematur selama kehamilan (Hubinont & Savoye, 2017; Meng et al. , 2021). Mata tuna sebagai sumber minyak ikan long-chain omega-3 fatty acids (LCn- 3FA) memiliki DHA yang cukup tinggi yakni 38,33% (Trilaksani et al ., 2020) Nilai ini jauh lebih tinggi dibandingkan dengan kandungan DHA minyak ikan spesies lain, misalnya ikan kakap (6,37%) dan ikan kod (11,9%) (Šimat et al ., 2019). PUFA (DHA dan EPA) sangat rentan terhadap oksidasi selama pemrosesan dan penyimpanan karena memiliki stuktur dengan rantai panjang dengan ikatan rangkap yang banyak (Qiu et al ., 2015). Reaksi oksidasi lipid tidak hanya berdampak buruk pada cita rasa, kandungan gizi, dan umur simpan makanan, tetapi dapat merusak kesehatan (Gao et al ., 2023). Trilaksani et al. (2021) melaporkan bahwa bilangan peroksida minyak ikan mata tuna ( Thunnus sp.) 121,43±0,62 meq/kg (Trilaksani et al
., 2021), sehingga belum memenuhi standar mutu oksidatif yang dipersyaratkan CODEX 329-2017 tentang standar minyak ikan, yaitu maksimum 5,0 meq/kg. Alternatif pencegahan oksidasi lipid dapat dilakukan melalui penggunaan antioksidan alami pada minyak ikan.
Astaxanthin ( 3,3'-dihydroxy-β, β'-carotene- 4,4'-dione ) adalah karotenoid xantofil lipofilik yang memiliki aktivitas antioksidan (gugus hidroksil) dengan kemampuan menangkal radikal bebas superoksida kuat, menghambat peroksidasi lipid, meningkatkan stabilitas oksidatif, serta memperpanjang umur simpan minyak ikan (Rizzardi et al ., 2022). Karotenoid mampu meningkatkan hampir 2 kali lipat stabilitas oksidatif dari minyak hati ikan (Ogrodowska et al .,2020), memiliki kemampuan protective activity, pigmentasi,
dan oxygen radical absorbance capacity (ORAC) yang lebih kuat daripada karotenoid lainnya termasuk sintetik (Rizzardi et al ., 2022; Oslan et al., 2021). Chintong et al . (2019) melaporkan bahwa e kstrak astaxanthin hasil samping udang memiliki aktivitas antioksidan kategori kuat dengan nilai IC 50 7,7±0,6 µg/mL dibandingkan dengan asam askorbat 20,8 ± 1,1 µg/mL  dan butylated hydroxy toluene (BHT) 15,1±0,7 µg/mL. Astaxanthin tidak memiliki efek toksik pada fibroblas dermal sel manusia dan memiliki manfaat terapeutik dalam pengobatan gangguan kesehatan manusia dan hewan. Tujuan penelitian ini menentukan konsentrasi penambahan astaxanthin terbaik pada minyak mata tuna hasil permurnian berdasarkan parameter mutu dan stabilitas oksidasi.

## BAHAN DAN METODE
Ekstraksi dan Pemurnian Minyak Ikan Mata Tuna Mata ikan tuna diperoleh dari PT Nutrindo Freshfood Internasional Bitung,
Sulawesi Utara. Ekstraksi minyak ikan mata tuna menggunakan metode sentrifugasi dingin (Trilaksani et al ., 2020). Pemurnian dilakukan melalui netralisasi dengan NaOH 16 o Be dan dilanjutkan bleaching (pemutihan) dengan adsorben magnesol XL 5% (La Dia et al. , 2022). Minyak murni yang dihasilkan dipindahkan ke botol kaca gelap yang dilapisi foil aluminium untuk dianalisis mutu oksidasinya ( Figure 1) .
Ekstraksi Astaxanthin Kulit Udang Kulit udang diperoleh dari PT Wirontono, Jakarta. Ekstraksi astaxanthin (karotenoid) dilakukan dengan metode enzimatik ( Chakrabarti, 2002) . Astaxanthin yang dihasilkan dipindahkan ke botol kaca yang dilapisi foil aluminium dan disimpan pada freezer untuk dianalisis.
Formulasi dan Stabilisasi Minyak Ikan Selama Penyimpanan Formulasi dilakukan dengan mencampurkan minyak ikan murni dengan astaxanthin udang pada konsentrasi berbeda yaitu 0; 0,2; 0,4; dan 0,6%. Pengujian stabilitas minyak ikan menggunakan metode schaal oven test . Metode tersebut merupakan metode akselarasi menggunakan rentang suhu 23,9±1,2°C hingga 62,8±2,8°C. Satu hari penyimpanan dengan metode schaal oven setara dengan 15 hari penyimpanan pada suhu ruang (Suseno et al. , 2018). Pengujian sehari sekali dengan 3 kali ulangan menggunakan metode schaal oven test dengan suhu 40°selama 4 hari berurut-turut atau setara dengan 60 hari pada suhu ruang ( Figure 1) .
Analisis Kadar Asam Lemak Bebas (AOAC, 2005)
Sampel minyak ikan 2,5 g dilarutkan dengan 25 mL alkohol 95% yang dipanaskan menggunakan penangas air selama 10 menit. Sampel yang terlarut ditambahkan indikator PP 2 tetes dan dititrasi dengan KOH 0,1 N hingga terjadi perubahan warna menjadi merah muda yang tidak hilang dalam 10 detik. Persentase asam lemak bebas dihitung menggunakan rumus berikut:
Analisis Bilangan Peroksida (AOCS Cd 8b-90, 2011)
Sampel minyak ikan 2,5 g dilarutkan ke 30 mL larutan asam asetat dan kloroform dengan perbandingan 3:2 (v/v). Kalium iodida jenuh (KI) 0,5 mL ditambahkan ke larutan, diaduk perlahan, ditambahkan akuades 30 mL, dan larutan indikator pati 1% 0,5 mL pada larutan. Larutan sebelum dititrasi berwarna biru kehitaman. Larutan dititrasi dengan 0,01 N natrium tiosulfat (Na 2 S 2 O 3 ) hingga warna biru menghilang. Perhitungan bilangan peroksida menggunakan persamaan berikut:
Analisis Bilangan p- Anisidin (AOCS Cd 18-90, 2011) Pengujian bilangan anisidin memerlukan dua nilai absorbansi dari dua larutan uji yang berbeda. Larutan uji 1 dibuat dengan melarutkan 0,5 g sampel minyak ikan ke  25 mL isooktan. Larutan uji 2 dibuat dengan menambahkan larutan p-anisidin (2,5 g/L) ke 5 mL larutan uji 1, diaduk perlahan. Larutan referensi dibuat dengan menambahkan 1 mL larutan p-anisidin (2,5 g/L) ke 5 mL larutan isooktan. Sampel harus terhindar dari cahaya selama proses pengujian. Kedua larutan diukur nilai absorbansinya pada panjang gelombang 350 nm, dengan larutan referensi sebagai kompensasi. Perhitungan nilai anisidin ditetapkan menggunakan persamaan berikut:
Bilangan peroksida (meq/kg) = S × M × 1.000
Berat sampel (g)
Keterangan: S = volume natrium tiosulfat (mL) M =konsentrasi natrium tiosulfat (0,01 N) Kadar asam lemak bebas (%) = A × N × M 10 G
Keterangan:
A = jumlah titrasi KOH (mL) N = normalitas KOH (0,1 N) M =berat sampel (g) G = bobot molekul asam lemak dominan
(asam oleat = 282 g/mol)
Peningkatan stabilitas oksidatif minyak mata tuna, Nurmaida et al.
Tuna eye Preparation and milling Cold centrifugation (11,200×g, 4°C, 30 minute) Tuna eye oil Concentration selected Figure 1 Research flow chart Gambar 1 Diagram alir penelitian
Analysis: ● Yield ● Morphometrics ● Proximate
● Heavy metal (Pb, Cd, Hg, As) Analysis: ● Yield ● Free fatty acid ● Peroxide value ● p-anisidine ● Total oxidation ● Fatty acids profile Netralization NaOH (16°Be) Bleaching Magnesol 5%; 20 min Cold centrifugation (11,200×g, 4°C, 10 min) Crude oil Adding NAst (Natural astaxanthin) Control (Concentration 0%) P1 (Concentration 0.2%)
P2 (Concentration 0.4%) P3 (Concentration 0.6%)
Stability test (schaal oven test method) Analysis:
● Yield ● Free fatty acid
● Peroxide value
● p-anisidine
● Total oxidation

## Analisis Bilangan Total Oksidasi (AOCS, 1997)
Bilangan total oksidasi merupakan penentu dari semua parameter oksidasi minyak. Total oksidasi ditentukan dari jumlah dua kali oksidasi primer dan sekunder pada minyak. Persamaan nilai total oksidasi adalah:
Analisis Logam Berat Hg, Cd, Pb, As (SNI 2354-23:2021) Sampel bubur mata tuna 1 g yang telah dihomogenkan pada bejana kemudian spiking . Tahap selanjutnya yaitu penambahan 2 mL HNO 3 suprapure ® ; 0,625 mL H 2 O 2 ultrapure , dan UPW 8 mL pada sampel. Bejana dipanaskan pada oven mikrogelombang selama 30 menit hingga mencapai suhu maksimum 200°. Bejana didinginkan hingga suhu maksimum 50°.  Larutan dipindahkan ke tabung pp (polipropilena) 50 mL dan ditambahkan UPW hingga 50 mL. Larutan dihomogenkan menggunakan pencampur pusar ( vortex mixer ) selama 15 menit,
dipindahkan ke tabung autosampler dan dibaca pada inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP-MS). Rumus perhitungan logam berat Hg, Pb, Cd, dan As sebagai berikut:
Analisis Kandungan Total Karotenoid ( Sachindra et al., 2005)
Kulit udang 25 g diekstraksi menggunakan aseton (1:6 b/v) dan dilakukan tiga kali berturut-turut hingga sampel kehilangan warna atau menjadi tidak berwarna. Ekstrak aseton yang terbentuk diseparasi menggunakan petroleum ether (BP 40-60°C). Larutan petroleum ether dicuci berulang kali dengan larutan NaCl 0,1% untuk menghilangkan sisa aseton, dan dikeringkan menggunakan sodium sulfat. Larutan disaring menggunakan nitrogen dan dievaporasi menggunakan vacuum pada suhu 40°C. Konsentrat karotenoid diukur pada absorbansi 468 nm menggunakan spektrofotometer UV- VIS. Konsentrasi karotenoid ( astaxanthin ) pada ekstrak udang dihitung menggunakan rumus sebagai berikut:
Pengukuran Aktivitas Antioksidan (Chintong et al., 2019) Pembuatan larutan radikal 2,2’-azino- biz ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid (ABTS) dilakukan dengan mereaksikan larutan ABTS 7 mM dan kalium persulfat  (K 2 S 2 O 8 ) 2 mM dengan perbandingan 1:1 yang diinkubasi dalam ruangan gelap selama 16 jam suhu kamar. Larutan ditambahkan etanol hingga didapatkan absorbansi 0,70±0,03 pada panjang gelombang 734 nm. Larutan
ABTS 1,5 mL ditambahkan 1,5 mL sampel; dinkubasi selama 10 menit suhu kamar pada ruang gelap. Aktivitas antioksidan sampel dinyatakan sebagai Trolox Equivalent Antioxidant Capacity (TEAC). Absorbansi diukur pada panjang gelombang 750 nm. Persen penghambatan radikal ABTS dihitung berdasarkan rumus berikut :

## Bilangan  total oksidasi =(2PV+AV)
Keterangan:
PV = bilangan peroksida (meq/kg) AV =bilangan anisidin (meq/kg)
Bilangan  anisidin(meq/kg)  = 25×(1,2 A 1 -A 2 ) m
Keterangan: A 1 =absorbansi larutan uji 1 A 2 =absorbansi larutan uji 2 m =massa sampel yang digunakan pada larutan uji 1
Konsentrasi Hg,Cd,Pb,As (mg/kg) = (D-E)  × V × Fp W Keterangan: D =konsentrasi Hg, Cd, Pb, As (µg/L) larutan contoh yang dihitung E =konsentrasi Hg, Cd, Pb, As (µg/L) blangko pereaksi yang dihitung V =volume akhir larutan sampel (L) Fp =faktor pengenceran W
=berat contoh (g)
Kandungan karotenoid (μg/g ) = A 468 nm ×V ekstrak ×Fp 0,2×W sampel Keterangan: A468 nm =absorbansi pada 468 nm Vekstrak =volume ekstrak Fp =faktor pengenceran 0,2   =A 468 nm nilai absorbansi dari 1 μg/mL astaxanthin standard Wsampel =bobot sampel (g)
Peningkatan stabilitas oksidatif minyak mata tuna, Nurmaida et al.
Astaxanthin kulit udang yang digunakan dilarutkan dengan berbagai konsentrasi untuk mendapatkan nilai IC 50 yang menyatakan besarnya konsentrasi larutan sampel yang dibutuhkan untuk mereduksi radikal bebas ABTS sebesar 50%. Persamaan regresi linear (y = a + bx) yang diperoleh dari nilai inhibisi pada setiap konsentrasi digunakan untuk mencari nilai IC 50 .
Pengukuran Warna CIE-L*a*b* Warna astaxanthin ditentukan menggunakan kolorimeter Minolta CM- 3500d. Hasilnya dinyatakan sebagai nilai L*a*b*. Nilai L* digunakan untuk mengukur kecerahan (0=hitam dan 100=putih); nilai a* mewakili kemerahan (+) dan kehijauan (-); nilai b* mewakili kuning (+) dan biru (-). Warna sebenarnya diwakili oleh hue angle , h = [tan−1 (b*/a*)] dan chroma (intensitas warna) diukur dengan C*= [(b*2 + a*2)1/2].
Uji Stabilitas
Uji stabilitas minyak ikan menggunakan metode Schaal oven test dengan oven  suhu 40°C. Minyak ikan dihitung kadar asam lemak bebas ( Free Fatty Acid/ FFA), nilai peroksida ( peroxide value /PV), bilangan anisidin ( anisidine value /p-AnV), dan total oksidasinya selama 4 hari berturut-turut atau setara dengan 60 hari penyimpanan.
Analisis Data
Data stabilitas dianalisis menggunakan
Rancangan Acak Lengkap Faktorial (RALF) dengan 3 kali ulangan. Faktor perlakuan tersebut adalah perlakuan penambahan astaxanthin konsentrasi (0%; 0,2%; 0,4%; 0,6%) dan lama penyimpanan (0, 1, 2, 3, 4 hari). Data kemudian dianalisis Analysis of Variance
(ANOVA) dengan selang kepercayaan 95% (α=0,05). Model matematik rancangan acak lengkap (RALF) sebagai berikut: Perlakuan yang berpengaruh terhadap respons, selanjutnya diuji lanjut Duncan Multiple Range Test (DMRT). Seluruh data dianalisis menggunakan perangkat lunak IBM
Statistical Product and Service Solution (SPSS) Statistics ® versi 26.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Karakteristik dan Komposisi Kimia Mata Tuna Mata tuna yang digunakan adalah mata ikan segar yang berdiameter antara 6-9 cm ( Figure 2 ). Diameter mata tuna 6,45±2,93 cm dan bobot 146,97±9,21 g (ukuran sedang). Bagian mata yang digunakan untuk ekstraksi minyak ikan adalah otot ekstraokular dengan rerata rendemen yang dihasilkan 34,86% dari berat total bubur mata tuna.
Komposisi kimia terbesar pada mata tuna kadar air dan terendah pada kadar abu. Hasil penelitian dapat dilihat pada Table 1 . Kadar lemak mata tuna penelitian ini lebih tinggi dibandingkan mata tuna penelitian La Dia et al. (2022) dan Trilaksani et al. (2021) dengan nilai berturut-turut 18,15±0,07 dan 18,44±0,39%. Kadar lemak yang tinggi akan berpengaruh pada rendemen dan proporsi minyak ikan yang dihasilkan. Parameter penting yang harus diperhatikan sebagai bahan baku minyak ikan adalah cemaran logam berat. Cemaran logam berat adalah elemen kimiawi metalik dan metaloida, memiliki bobot atom dan bobot jenis yang tinggi, tidak dikehendaki, dapat mengganggu, merugikan, dan membahayakan kesehatan manusia (BPOM, 2022) . Batasan maksimum cemaran logam timbel (Pb), arsen (As), dan kadmium (Cd) bahan pangan
Inhibisi ABTS (%) = × 100%
A -B A
Keterangan:
A =absorbansi kontrol
B =absorbansi sampel Yijk= μ + αi +βj+ αβij+εij Keterangan: Yijk = nilai pengamatan dari perlakuan ke-i, lama penyimpanan ke-j dan ulangan ke-k μ = nilai rataan umum populasi αi = pengaruh perlakuan ke-i βj = pengaruh perlakuan ke-j αβij = pengaruh interaksi perlakuan ke-i dan ke-j ε ij = galat percobaan

## Ketampakan, Proporsi, dan Mutu Minyak Mata Tuna
Minyak ikan mata tuna hasil ekstraksi menggunakan metode cold centrifugation (suhu 4°C, kecepatan 10.000 rpm selama 30 menit) dengan hasil yang membentuk 4 lapisan ( Figure 3A ). Lapisan pertama adalah lapisan lipid-protein berbobot molekul rendah, lapisan kedua lapisan protein cair, lapisan ketiga adalah endapan lipid-protein berbobot molekul besar, dan lapisan ke empat adalah lapisan minyak ikan. Proporsi minyak ikan yang diperoleh adalah 19,33±1,15% dari total berat mata.
maksimum 0,10 mg/kg dan merkuri (Hg) maksimum 0,5 mg/kg ( BPOM, 2020). Hasil analisis kandungan logam berat mata tuna menunjukkan bahwa timbel (Pb), Arsen (As) dan kadmium (Cd) tidak terdeteksi, sedangkan merkuri (Hg) terdeteksi 0,03 mg/kg di bawah batas maksimal standar mutu. Batas deteksi ( Limit of Detection /LOD) merupakan konsentrasi terendah pada sampel uji yang dapat dideteksi secara berulang (tingkat kepercayaan 95%) pada kondisi eksperimen tertentu (SNI, 2021). Batas deteksi Pb, As, dan Hg  adalah 0,0002 mg/kg dan Cd 0,0001 mg/kg. Nilai Hg yang terdeteksi masih di bawah ambang batas yang dipersyaratkan.
Figure 2 Visual of tuna eye; (A) lens, (B) extraocular tissue, (c) vitreous humor, and (D) sclera Gambar 2 Ketampakan mata tuna; (A) lensa, (B) otot ekstraokular, (C) cairan vitreous, dan (D) sklera A B C D Table 1 Chemical composition of tuna  eyes
Parameter (%) Thunnus sp. Thunnus sp. a Thunnus sp. b Moisture 54.23±1.55 62.12±0.12 67.93±1.12 Ash 1.23±0.02 0.98±0.01 1.11±0.04 Lipid 21.38±0.53 18.15±0.07 18.44±0.39 Protein 10.44±0.27 13.48±0.21 11.43±0.24 Carbohydrate 12.72±0.06 5.27±0.32 1.09±0.58
Tabel 1 Komposisi kimia mata tuna ªLa Dia et al. (2022); bTrilaksani et al. (2021)
A2 A                                                                            B A1 A3 A4 Figure 3 Visualization and proportion of fish oil after extraction: (A1) aqueous protein layer;
Gambar 3 Ketampakan dan proporsi minyak ikan setelah ekstraksi: (A1) lapisan protein cair; (A2) sludge and heavy lipid protein layer; (A3) fish oil layer; (A4)  light-lipid protein layer, (B) fish oil
(A2) lapisan endapan lipid protein; (A3) lapisan minyak; (A4)  lapisan lipid protein ringan, (B) minyak ikan
Peningkatan stabilitas oksidatif minyak mata tuna, Nurmaida et al.
Minyak ikan dikategorikan aman untuk produk pangan jika telah memenuhi standar mutu oksidatif yang dipersyaratkan CODEX
329-2017 tentang standar minyak ikan. Mutu oksidatif adalah asam lemak bebas ( free fatty acid/ FFA), bilangan peroksida ( peroxide value /PV), bilangan anisidin ( anisidine value/ p-AnV), dan total oksidasi ( total oxidation / TOTOX).  Hasil analisis menunjukkan bahwa parameter oksidasi pada minyak ( crude ) mata tuna telah memenuhi standar  kecuali pada bilangan peroksida dan total oksidasi ( Table 2 ).  Hal tersebut diduga karena mata tuna telah mengalami kemunduran mutu selama transportasi dan penyimpanan beku akibat fluktuasi suhu penyebab kerusakan jaringan ikan ( Göransson et al ., 2018).
Profil Asam Lemak Minyak Mata Tuna Hasil profil asam lemak minyak mata tuna menunjukkan komposisi asam lemak dominan adalah PUFA 43,63% dari total asam lemak. DHA (C22:6n-3) dan EPA (C20:5n-3) merupakan senyawa asam lemak penyumbang tertinggi dari total PUFA. Total DHA  30,19%  dan  EPA  8% ( Table 3 ) . Asam palmitat (C16:0) menyumbang 63,41% dari total asam lemak jenuh ( saturated fatty acid/
SFA) dan asam oleat (C18:1n-9c) 66,56% dari total MUFA. Zhang et al. (2019) dan Trilaksani et al. (2020) melaporkan bahwa asam lemak DHA dominan ditemukan pada PUFA minyak ikan tuna, demikian juga pada mata tuna dan jaringan otot yang memiliki kandungan triasilgliserol dan fosfolipid lebih tinggi dibandingkan pada mata jenis ikan lainnya (Stoknes et al ., 2004).
Mutu Minyak Ikan Mata Tuna Hasil Pemurnian
Karakteristik mutu minyak ikan mata tuna hasil pemurnian meliputi asam lemak bebas atau free fatty acid (FFA), bilangan peroksida atau peroxide value (PV), bilangan p-anisidin (p-AnV), dan total oksidasi (Totox). Pengujian dilakukan pada minyak mata tuna kasar (tanpa dimurnikan), minyak mata tuna dengan pemurnian bleaching , dan minyak mata tuna pemurnian netralisasi +bleaching
( Figure 4 ).
Asam lemak bebas pada minyak mata tuna terbentuk karena adanya reaksi hidrolisis dari trigliserida selama penyimpanan dan proses ekstraksi. Reaksi hidrolisis selama penyimpanan berpotensi menurunkan kualitas minyak dengan timbulnya aroma.
Hasil analisis ragam menunjukkan pemurnian bleaching menurunkan nilai asam lemak bebas minyak ikan kasar 1,42% menjadi 1,00%  dan  pemurnian netralisasi+ bleaching
menjadi 0,33% ( Figure 4A ). Asam lemak bebas rendah diduga disebabkan oleh tidak adanya perlakuan panas selama proses ekstraksi (Nazir et al ., 2017). Bilangan peroksida merupakan produk oksidasi primer berupa hidroperoksida yang terbentuk oleh mekanisme autokatalitik yang apabila terdekomposisi menyebabkan ketengikan pada minyak ikan (Šimat et al. ,
2019). Tingginya nilai oksidasi pada minyak ikan ini disebabkan oleh kandungan asam lemak tidak jenuh rantai panjang terutama EPA dan DHA yang sangat rentan terhadap oksidasi (Qiu et al ., 2015). Hasil analisis menunjukkan pemurnian bleaching signifikan menurunkan bilangan peroksida  16,58±0,36 meq/kg menjadi 6,85±0,31 meq/kg, dan Table 2 Oxidative quality of crude tuna eyes oil Parameter Thunnus sp. Thunnus sp. a Thunnus sp. b CODEX (2017) Free fatty acid (%) 1.42±0.15 1.25±0.09 1.26±0.06 ≤1.5 Peroxide value (meq/kg) 16.58±0.36 56.61±7.07 94.11±0.16 ≤5.0 p-anisidin value (meq/kg) 3.85±0.12 5.43±0.55 7.31±1.08 ≤20.0 Total oxidation (meq/kg) 37.02±0.79 118.66±13.81 195.53±1.40 ≤26.0 Tabel 2 Kualitas oksidatif minyak mata tuna ªLa Dia et al. (2022); bTrilaksani et al. (2021)
netralisasi +bleaching menjadi 4,12±0,82 meq/ kg dengan persentase penurunan bleaching 58,71% dan netralisasi +bleaching 75,14%
( Figure 4B ) dan telah memenuhi standar yang ditetapkan CXS 329-2017. Bilangan p-Anisidin menunjukkan indikator oksidasi sekunder hasil dekomposisi hidroperoksida sebagai proses oksidasi lebih lanjut.  Hasil analisis ragam  menunjukkan pemurnian bleaching dan pemurnian netralisasi+ bleaching signifikan tidak berbeda ( p <0,05).  Pemurnian bleaching menurunkan nilai p-Anisidin minyak kasar 3,84±0,12 meq/ kg menjadi 2,97±0,09 meq/kg, dan pemurnian netralisasi+ bleaching menjadi 2,83±0,22 meq/
kg dengan persentase penurunan adalah 22,92%  dan 26,56% ( Figure 4C ). Nilai bilangan p-Anisidin yang rendah pada minyak ikan mata tuna menunjukkan bahwa proses pemurnian tidak menyebabkan degradasi lebih lanjut. Perhitungan nilai total oksidasi dilakukan untuk mengetahui pembentukan produk oksidasi primer dan oksidasi sekunder. Hasil analisis ragam menunjukkan pemurnian bleaching menurunkan nilai totoks minyak kasar 37,02±0,79 meq/kg menjadi 16,67 ±0, 64 meq/kg, dan netralisasi+ bleaching menjadi 11,08±1,65 meq/kg. Persentase penurunan pemurnian bleaching adalah 54,98%, dan
Table 3 Fatty acids composition of tuna eyes oil Fatty acids Value (%w/w) Myristic acid, C14:0 3.07 Pentadecanoic acid, C15:0 0.91 Palmitic acid, C16:0 21.4 Heptadecanoic acid, C17:0 1.44 Stearic acid, C18:0 6.51 Arachidic acid, C20:0 0.40 Lignoceric acid, C24:0 0.02 Total Saturated Fatty Acid (SFAs) 33.75 Myristoleic acid, C14:1 0.05 Palmitoleic acid, C16:1 5.42 Heptadecenoic acid, C17:1 0.89 Oleic acid, C18:1n-9c 14.39 Eicosenoic acid, C20:1 0.87 Total Monounsaturated Fatty Acid (MUFAs) 21.62 Linoleic acid, C18:2n-6c 1.28 Alpha-linolenic acid, C18:3n-3 0.73 Cis-11,14- eicosadienoic acid, C20:2 0.26 Arachidonic acid, C20:4n-6 3.17 Eicosapentaenoic acid (EPA), C20:5n-3 8.00 Docosahexaenoic acid (DHA), C22:6n-3 30.19 Total Polyunsaturated Fatty Acid (PUFAs) 43.63 Total Fatty acids identified 99.00 Total Fatty acids unidentified 1.00 n-3 38.92 n-6 4.45 n-9 14.39 Tabel 3 Komposisi asam lemak minyak mata tuna
Peningkatan stabilitas oksidatif minyak mata tuna, Nurmaida et al.
netralisasi+ bleaching menurunkan nilai totoks sebesar 70,08% ( Figure 4D ). Nilai total oksidasi minyak ikan hasil pemurnian tersebut telah memenuhi standar mutu minyak ikan CXS
329-2017.
Keseluruhan parameter oksidasi menunjukkan bahwa minyak ikan yang telah dimurnikan dengan netralisasi+ bleaching memiliki nilai asam lemak bebas terkecil 0,33±0,08%, bilangan peroksida 4,12±0,82 meq/kg, p-Anisidin 2,83±0,22 meq/kg, dan total oksidasi 11,08±1,62 meq/kg. Minyak ikan ini selanjutnya dilakukan perlakuan penambahan NAst ( Natural astaxanthin ) dengan konsentrasi berbeda .
Karakteristik Karotenoid Udang sebagai Natural Astaxanthin (NAst) Struktur kimia unik astaxanthin merupakan senyawa antioksidan yang sangat baik dan menjanjikan untuk diaplikasikan pada pangan kesehatan dan gizi manusia. Struktur utama xanthophyll berperan sebagai
antioksidan dengan menangkap singlet oxygen, reactive oxygen species , dan radikal bebas. Karotenoid menghilangkan radikal dengan bereaksi ataupun dengan memutus rantai reaksi radikal bebasnya guna menghasilkan produk residu tidak berbahaya (Britton, 1995). Total karotenoid udang pada penelitian ini 37,3 μg/g dengan rendemen 3,12±0,08%.
Okada et al. (1994) melaporkan bahwa udang terdiri dari astaxanthin ( free, monoester, dan diester) sebagai pigmen dominan (86-98%), β-carotene (3,6%), dan zeaxanthin (1,5%). Rendemen hasil penelitian lebih rendah dibandingkan Chintong et al. (2019) dengan nilai rendemen ekstrak udang 15,6±0,6 mg asx/g atau sekitar 45% dari total ekstrak. Perbedaan rendemen dan karakteristik ekstrak dapat dipengaruhi oleh kondisi lingkungan, jenis substrat, suhu lingkungan, dan waktu sampling. Aktivitas antioksidan secara kuantitatif dinyatakan dalam nilai IC 50 . Nilai IC 50 yaitu
(A)                                                                                     (B)
(C)                                                                                     (D)
Figure 4 Quality of tuna eye oil after refining: (A) free fatty acids, (B) peroxide value, Gambar 4 Mutu minyak ikan mata tuna hasil pemurnian: (A) asam lemak bebas, (B) bilangan
(C) p-Anisidine, (D) total oxidation; Purification treatments (  crude oil; bleaching;   netralization+bleaching;   codex standard 2017). Mean and standard error (denoted by error bar). Different superscripts show significantly different p <0.05
peroksida, (C) p-Anisidin, (D) total oksidasi; Pemurnian (  minyak kasar; pemutihan;   netralisasi+pemutihan;   standar codex 2017). Rerata dan standard error (ditandai dengan error bar ). Superskrip yang berbeda menunjukkan berbeda p <0,05
konsentrasi ekstrak yang dapat menghambat
50% dari radikal bebas. Pengukuran uji aktivitas antioksidan udang menggunakan 2,2’-azinobis 3-ethylbenzothiazoline-6sulfonic acid (ABTS) dan asam askorbat sebagai pembanding. Aktivitas antioksidan dianggap sangat kuat jika nilai IC 50 ≤50 μg/mL, kuat
(50-100 μg/mL), sedang (101-250 μg/mL), lemah (250- 500 μg/mL), dan tidak aktif >500 μg/mL ( Jun et al., 2003). Nilai IC 50 astaxanthin dari ekstrak kulit udang ( L.vannamei ) 14,14 ppm dan termasuk kategori antioksidan sangat kuat. Hasil ini menunjukkan bahwa aktivitas penghambatan ABTS astaxanthin kulit udang lebih unggul dibandingkan dengan astaxanthin eksoskelaton kepiting
( C. sapidus ) dengan nilai IC 50 17,56 dan asam askorbat 28,46 µg/mL (Abd El-Ghany et al., 2023).
Nilai CIELAB (L*, a* dan b*) adalah parameter yang mengukur lightness, redness dan yellowness dari pigmen astaxanthin . Nilai parameter CIELAB (L*a*b*) astaxanthin udang ( L.vannamei ) adalah 37, 50, 38 dan menunjukkan warna merah bata/ fire brick ( Figure 5 ). Hal ini berbeda dengan Niamnuy et al. (2008) bahwa astaxanthin udang kering memiliki nilai L* 58,70±4,65, a* 9,98±1,3, dan b* 25,83±2,87. Perbedaan tersebut dipengaruhi oleh penggunaan suhu pengeringan penyebab pembentukan pigmen kecokelatan oleh reaksi
Maillard.

## Stabilitas Oksidasi Minyak Mata
Tuna dengan Penambahan Astaxanthin
Stabilitas minyak ikan merupakan faktor penting untuk menentukan masa simpan minyak ikan. Uji stabilitas penyimpanan minyak ikan dengan penambahan astaxanthin
sebagai natural astaxanthin dilakukan
menggunakan metode schaal oven test. Pengujian ini dilakukan pada sampel minyak ikan hasil pemurnian (netralisasi+ bleaching ) yang telah dicampurkan dengan astaxanthin konsentrasi berbeda. Parameter uji oksidatif tersebut adalah asam lemak bebas, bilangan peroksida, p-Anisidin, dan total oksidasi ( Figure 6 ).
Perlakuan minyak ikan dengan penambahan astaxanthin 0,6% memiliki nilai
FFA terkecil setelah disimpan hingga hari ke 4 ( Figure 6A ). Hasil analisis sidik ragam menunjukkan perlakuan dengan astaxanthin yang berbeda memberikan pengaruh nyata terhadap stabilitas minyak ikan (p<0,05). Semua perlakuan menunjukkan kenaikan nilai FFA yg signifikan (p<0,05) hingga hari ke-4 penyimpanan dan masih sesuai standar (CODEX, 2017).
Nilai PV terkecil selama penyimpanan adalah formula penambahan astaxanthin 0,6%. Figure 6B menunjukkan perlakuan astaxanthin 0,6% pada hari ke-1, mengalami penurunan nilai PV secara signifikan dengan nilai 1,17±0,29 meq/kg. Hasil ini berbeda dengan perlakuan kontrol, nilai pv pada hari ke-2 penyimpanan telah melampaui standar mutu (CODEX, 2017). Keseluruhan perlakuan menunjukkan kenaikan PV yg signifikan ( p <0,05) selama penyimpanan hingga hari ke-4. Nilai tersebut menunjukkan bahwa konsentrasi astaxanthin 0,6% yang ditambahkan pada minyak ikan, mampu menjaga kestabilan lebih baik dibandingkan dengan minyak ikan tanpa perlakuan (kontrol). Mcnulty et al . (2008) melaporkan bahwa karotenoid seperti β-karoten memiliki pengaruh pro-oksidan terhadap  lipid peroksidasi dalam membran asam lemak tak jenuh ganda dan astaxanthin menurunkan peroksidasi lipid sebesar 40% dalam struktur
Figure 5 Visualization of  shrimp shells astaxanthin Gambar 5 Ketampakan astaxanthin kulit udang
Peningkatan stabilitas oksidatif minyak mata tuna, Nurmaida et al.
membran tersebut. Astaxanthin mampu meningkatkan efisiensi antioksidan (Liang et
al ., 2009). Kenaikan nilai peroksida pada hari ke-2 dapat disebabkan oleh senyawa oksidasi primer lipid atau dikenal hidroperoksida. Senyawa ini terurai menjadi produk oksidasi sekunder, yaitu aldehida dan keton yang menyebabkan bau tak sedap ( rancidity )  pada minyak (Phung et al., 2020).
Hasil analisis sidik ragam menunjukkan bahwa keseluruhan perlakuan yang berbeda memberikan pengaruh nyata terhadap nilai p-Anisidin stabilitas minyak ikan mata tuna ( p <0,05). Selain nilai FFA dan
PV, perlakuan astaxanthin 0,6% merupakan perlakuan dengan nilai p-Anisidin terkecil dari keseluruhan formula. Figure 6c menunjukkan bahwa nilai p-Anisidin pada perlakuan astaxanthin 0,2%, 0,4%, dan 0,6% memiliki nilai p-Anisidin lebih kecil daripada perlakuan kontrol (tanpa astaxanthin )
selama penyimpanan. Hal ini terlihat pada hari ke-4, kontrol telah melampaui standar mutu oksidatif minyak yang dipersyaratkan (CODEX, 2017). Hasil analisis sidik ragam nilai total oksidasi menunjukkan bahwa perlakuan astaxanthin 0,2 dan 0,6% memberikan pengaruh yang nyata terhadap stabilitas minyak ikan (p<0,05) ( Figure 6D ). Hal ini berbeda dengan perlakuan kontrol dan astaxanthin 0,4% yang menunjukkan nilai yang tidak berbeda nyata pada hari 0 penyimpanan. Nilai total oksidasi yang tinggi juga dipengaruhi oleh  nilai  bilangan peroksida dan bilangan anisidin suatu minyak ikan. Hal ini dikarenakan nilai bilangan total oksidasi yang ekuivalen diperoleh dari penjumlahan dari dua kali bilangan peroksida dan bilangan anisidin.

## KESIMPULAN
Proses  purifikasi  atau pemurnian mampu memperbaiki kualitas mutu minyak mata tuna ( Thunnus sp.) hingga memenuhi standar CODEX 329-2017.  Hasil purifikasi
(A)                                                                                     (B)
(C)                                                                                     (D) Figure 6 Stability of tuna eyes oil based on storage Schaal oven test: (A) free fatty acids, (B)
Gambar 6 Stabilitas minyak mata tuna berdasarkan Schaal oven test: (A) asam lemak bebas,
(C) p-Anisidine value, (D) total oxidation; Astaxanthin concentration (  0%;   2%;
4%;     6%). Different superscripts show differences in p <0.05. The vertical line (bar) is the standard deviation
(B) bilangan peroksida, (C) p-Anisidin, (D) total oksidasi; Konsentrasi astaxanthin ( 0%;   2%;   4%;   6%). Superskrip yang berbeda menunjukkan berbeda p <0,05. Garis vertikal adalah standar deviasi
netralisasi NaOH 16 o Be dan bleaching magnesol 5% yang ditambahkan astaxanthin
0,6% merupakan perlakuan terbaik dalam meningkatkan stabilitas oksidatif minyak ikan mata tuna berdasarkan nilai terkecil FFA, PV, p-Anisidin, dan total oksidasi selama 60 hari penyimpanan.

## DAFTAR PUSTAKA
Abd El-Ghany, M. N., Hamdi, S. A., Elbaz, R. M., Aloufi, A. S., El Sayed, R. R.,
Ghonaim, G. M., & Farahat, M. G. (2023). Development of a microbial-assisted process for enhanced astaxanthin recovery from crab exoskeleton waste. Fermentation ,  9(6), 505. https:// doi.org/10.3390/fermentation9060505 American Oil Chemists Society. (1997). Official Methods and Recommended Practices of AOCS International. Association of Official Analytical Chemist. (2005). Official Methods of Analysis of the Association of Official Analytical of Chemist. American Oil Chemists Society. (2011). p-Anisidine Value. In AOCS Official Method Cd 18-90 (Ed.). Official Methods and Recommended Practices of the American Oil Chemists’ Society
(6 th ed., pp. 2011a).
American Oil Chemists Society. (2011). Peroxide Value Using Chloroform. In AOCS Official Method Cd 8-53 (Ed). Official Methods and Recommended
Practices of the American Oil Chemists’ Society (6 th ed., pp. 2011h). Badan Standardisasi Nasional. (2018). Minyak Ikan Murni (Refined Fish Oil)-Syarat Mutu dan Pengolahan. SNI 8467-2018. Badan Standardisasi Nasional. (2021). Cara uji kimia- Bagian 23: Penentuan logam berat merkuri (Hg), timbal (Pb), cadmium (Cd), arsen (As) dan timah putih (Sn) pada hasil perikanan dengan Inductively Couple Plasma Mass Spectrometer (ICP- MS) secara simultan. SNI 2354-23:2021. Badan Pengawas Obat dan Makanan. (2022). Peraturan BPOM No. 9 tahun 2022 tentang persyaratan cemaran logam berat dalam pangan olahan.
Britton G. (1995). Structure and properties
of carotenoids in relation to function. Faderation of American Societies for Experimental Biology Journal, 9(15),
1551-8. https://doi.org/10.1096/ fasebj.9.15.8529834 Chakrabarti, R. (2002). Carotenoprotein from tropical brown shrimp shell waste by enzymatic process. Food biotechnology ,  16(1), 81-90. https://doi. org/10.1081/FBT-120004202 Chintong, S., Phatvej, W., Rerk-am, U., & Waiprib, Y. (2019). In vitro antioxidant, antityrosinase, and cytotoxic activities of astaxanthin from shrimp waste. Antioxidants ,  8(5), 128. https://doi. org/10.3390/antiox8050128 Codex Alimentarius Commission. (2017). Standard for fish oils CODEX STAN 329- 2017. Félix-Soriano, E., Martínez-Gayo, A., Cobo, M. J., Pérez-Chávez, A., Ibáñez-Santos, J., Palacios Samper, N., Galarza, I. G., Cuervo, M., García-Unciti, Gonzáles- Muniesa, P., M., Lorente-Cebrían, S., & Moreno-Aliaga, M. J. (2021). Effects of DHA-Rich n-3 fatty acid supplementation and/or resistance training on body composition and cardiometabolic biomarkers in overweight and obese post-menopausal women. Nutrients ,  13(7), 2465-2486. https://doi.org/10.3390/nu13072465 Gao, Z., Ji, Z., Wang, L., Deng, Q., Quek, S. Y., Liu, L., & Dong, X. (2023). Improvement of oxidative stability of fish oil-in-water emulsions through partitioning of sesamol at the interface. Foods ,  12(6), 1287-1303. https://doi.org/10.3390/ foods12061287 Göransson, M., Nilsson, F., & Jevinger, Å. (2018). Temperature performance and food shelf-life accuracy in cold food supply chains–Insights from multiple field studies. Food Control ,  86(2018), 332-341. https://doi.org/10.1016/j. foodcont.2017.10.029
Hubinont, C., & Savoye, T. (2017). Maternal and fetal benefits of DHA supplementation during pregnancy. Journal of Pregnancy and Reproduction , 1(1), 1–7. https://doi. org/10.15761/JPR.1000103
Peningkatan stabilitas oksidatif minyak mata tuna, Nurmaida et al.
Jun, M., Fu, H. Y., Hong, J., Wan, X.,
Yang, C. S., & Ho, C. T. (2003). Comparison of antioxidant activities of isoflavones from kudzu root ( Pueraria lobata Ohwi). Journal of food science ,  68(6), 2117-2122. https://doi. org/10.1111/j.1365-2621.2003.tb07029.x La Dia, W. O. N. A, Trilaksani, W., & Ramadhan, W. (2022). Purifikasi minyak mata tuna  ( Thunnus sp.)  kaya DHA dengan variasi adsorben. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia, 25(3), 428- 440. http://dx.doi.org/10.17844/jphpi. v25i3.42794 Liang, J., Tian, Y., Yang, F., Zhang, J., & Skibsted, L. H. (2009). Antioxidant synergism between carotenoids in membranes. Astaxanthin as a radical transfer bridge. Food Chemistry , 115(4),
1437–1442. https://doi.org/10.1016/j. foodchem.2009.01.074 Mcnulty, H., Jacob, R. F., & Mason, R. P. (2008). Biologic activity of carotenoids related to distinct membrane physicochemical interactions. The American journal of cardiology, 101(10A), 20-29. https://doi. org/10.1016/j.amjcard.2008.02.004 Meng, F., Qiu, J., Chen, H., Shi, X., Yin, M., Zhu, M., & Yang, G. (2021). Dietary supplementation with N‐3 polyunsaturated fatty acid‐enriched fish oil promotes wound healing after ultraviolet B‐induced sunburn in mice. Food Science & Nutrition ,  9(7), 3693-3700. https://doi.org/10.1002/ fsn3.2330 Nantitanon, W., Chowwanapoonpohn, S., & Okonogi, S. (2007). Antioxidant and antimicrobial activities of Hyptis suaveolens essential oil. Scientia Pharmaceutica , 75(1), 35-54. https://doi. org/10.3797/scipharm.2007.75.35 Nazir, N., Diana, A., & Sayuti, K. (2017). Physicochemical and Fatty acid profile of fish oil from head of tuna (Thunnus albacares) extracted from various extraction method. International Journal on Advanced Science, Engineering and Information Technology ,  7(2) , 709-715. https://doi.org/74384484/1063 Niamnuy, C., Devahastin, S., Soponronnarit, S., & Raghavan, G. V. (2008). Kinetics of astaxanthin degradation and color changes of dried shrimp during storage. Journal of Food Engineering , 87(4), 591-600. https://doi. org/10.1016/j.jfoodeng.2008.01.013 Ogrodowska, D., Laaksonen, O., & Konopka, I. (2020). Pumpkin oil addition and encapsulation process as methods to improve oxidative stability of fish oil. LWT - Food Science and Technology ,  124(2020), 1-9. https://doi. org/10.1016/j.lwt.2020.109142 Okada, S., Nur-E-Borhan, S. A., & Yamaguchi, K. (1994). Carotenoid composition in the exoskeleton of commercial black tiger prawns. Fisheries science , 60(2), 213-215. https://doi.org/10.2331/fishsci.60.213 Oslan, S. N. H., Tan, J. S., Oslan, S. N., Matanjun, P., Mokhtar, R. A. M., Shapawi, R., &
Huda, N. (2021). Haematococcus pluvialis as a potential source of astaxanthin with diverse applications in industrial sectors: current research and future directions. Molecules ,  26(21), 6470-6481. https:// doi.org/10.3390/molecules26216470 Phung, A. S., Bannenberg, G., Vigor, C., Reversat, G., Oger, C., Roumain, M., ... & Wang, S. C. (2020). Chemical compositional changes in over-oxidized fish oils. Foods , 9(10), 1501-1532. https:// doi.org/10.3390/foods9101501 Qiu, C., Zhao, M., Andrew, E., & Julian, D. (2015). Influence of anionic dietary fibers (xanthan gum and pectin ) on oxidative stability and lipid digestibility of wheat protein-stabilized fish oil- in-water emulsion. Food Research International , 74(2015), 131-139. https:// doi.org/10.1016/j.foodres.2015.04.022 Rizzardi, N., Pezzolesi, L., Samor, C., Senese, F., Zalambani, C., Pitacco, W., Calonghi, N., Bergamini, C., Prata, C., & Fato, R. (2022). Natural astaxanthin is a green antioxidant able to counteract lipid peroxidation and ferroptotic cell death.
International Journal of Molecular Sciences ,  23(23), 15137-15153. https:// doi.org/10.3390/ijms232315137 Sachindra, N. M., Bhaskar, N., &
Mahendrakar, N. S. (2005). Carotenoids
in different body components of Indian shrimps. Journal of the Science of Food and Agriculture , 85(1), 167-172. https:// doi.org/10.1002/jsfa.1977 Šimat, V., Vlahovic, J., Soldo, B., Skroza, D., Ljubenkov, I., & Mekinic, I. G. (2019). Production and refinement of omega-3 rich oils from processing by-products of farmed fish species. Foods , 8(4), 125-139. https://doi.org/10.3390/foods8040125 Stoknes, I. S., Økland, H. M., Falch, E., & Synnes, M. (2004). Fatty acid and lipid class composition in eyes and brain from teleosts and elasmobranchs. Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology ,  138(2), 183-191. https://doi. org/10.1016/j.cbpc.2004.03.009 Suseno, S. H., Hulu, D. P., Bija, S., & Fitriana,
N. (2018). Stability of sardine ( Sardinella sp.) oil soft gel through salt solution and citric acid degumming method. Pakistan Journal of Biotechnology ,  15(1), 11-14. https://pjbt.org/index.php/pjbt/article/ download/99/94 Trilaksani, W., Riyanto, B., & Syifa, A. L. (2020). Extraction and microencapsulation of tuna virgin fish oil with mangrove fruit extract fortified into extrusion cereals [Conference session]. The International Symposium; Coastal ecosystem and biodiversity of Asia-Pacifik, Bogor, Indonesia. IOP Conference Series: Earth and Environmental Science. https://doi. org/10.1088/1755-1315/420/1/012032 Trilaksani, W., Riyanto, B., Nurhayati, T., Santoso, J., & Kurniawan, I. A. H. (2021). Integrasi sentrifugasi suhu rendah dengan optimasi ekstraksi enzimatis minyak mata tuna menggunakan response surface methodology . Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia ,  24(3), 395- 406. https://doi.org/10.17844/ jphpi. v24i3.36652 Zhang, T. T., Xu, J., Wang, Y. M., & Xue, C. H. (2019). Health benefits of dietary marine DHA/EPA-enriched glycerophospholipids. Progress in Lipid Research , 75(08), 100997-101021. https:// doi. org/10.1016/j.plipres.2019.100997