## Jurnal Ilmiah Ilmu Terapan Universitas Jambi
ISSN (Print) 2580-2240 (Online) 2580-2259 Volume 6, Nomor 1, Juni 2022

## Uji Viabilitas Cendawan Peronospora Manshurica Pada Biji Kedelai Impor Penyebab Penyakit Bulai ( Downy Mildew)
Islah Hayati 1 , Ani Ardiana Susanti 2* , Husda Marwan 1 , Mapegau Mapegau 1
1) Jurusan Agroekoteknologi Fakultas Pertanian Universitas Jambi, Indonesia
2) Balai Karantina Pertanian Kelas I Jambi, Indonesia Email korespondensi: ann_dewe@yahoo.co.id

## ABSTRACT
Downy mildew disease in soybeans is caused by the obligate fungus Peronospora manshurica .  The  existence  of  this  fungus  is  still  limited  in  Indonesia.  This  study aimed  to  determine  the  viability  of  the  fungus  oospore P . manshurica on  seeds carried  on  imported  soybeans  from  Malaysia.  Detection  of  oospores  in  soybean seeds  was  carried  out  by  two  methods:  1)  Detection  of  soybean  seeds  without scale  symptoms  was  carried  out  by  washing  or  washing  test  techniques,  and  2) Detection  of  soybean  seeds  with  crust  symptoms  was  carried  out  by  direct examination. Oospora of P . manshurica obtained  was  tested  for  viability  at  the Mycology  Laboratory  of  the  Class  I  Agricultural  Quarantine  Center  Jambi. Morphology observations included Oospora size, Oospora color, Oospora shape, and  hyphae  shape  using  a  multi-media  compound  microscope  (Olympus  BX  51 and Olympus DP 20 camera). Oospores were observed in 10 drops of 10 l each of the precipitate suspension of each test sample. The results showed that the fungus P . manshurica on  imported  soybeans  from  Malaysia  still  had  potential  as  an inoculum causing Downy mildew in soybean plants with a viability level of 3.35  - 9.93%.  Morphology  of Oospora P . manshurica were,  diameter  of  24  -  38µm, smooth  and  spherical  shape  with  an  irregular  surface,  hyaline  to  light  brown  in color. Hyphae were thick and thin-walled with varying densities. Viable oospores were marked with a reddish-orange color.
Keywords : Viability, Peronospora manshurica, imported soybean

## ABSTRAK
Penyakit  downy  mildew  pada  tanaman  kedelai  disebabkan  oleh  cendawan Peronospora  manshurica yang  merupakan  cendawan  obligat.  Keberadaan cendawan  ini  masih  terbatas  di  Indonesia.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk

## Jurnal Ilmiah Ilmu Terapan Universitas Jambi
ISSN (Print) 2580-2240 (Online) 2580-2259 Volume 6, Nomor 1, Juni 2022
mengetahui viabilitas cendawan Peronospora manshurica pada biji kedelai impor menggunakan  oospora Peronospora  manshurica yang  terbawa  pada  kedelai impor  asal  malaysia.  Deteksi  oospora  pada  biji  kedelai  dilakukan  dengan  dua metode:  1)  Deteksi  biji  kedelai  tanpa  gejala  kerak  dilakukan  dengan  tehnik pencucian atau washing test, 2) Deteksi biji kedelai dengan gejala kerak, dilakukan dengan pemeriksaan langsung. Oospora Peronospora manshurica yang diperoleh diuji  viabilitasnya  di  Laboratorium  Mikologi  Balai  Karantina  Pertanian  Kelas  I Jambi. Pengamatan morfologi Oospora meliputi ukuran Oospora , warna Oospora, bentuk Oospora ,  dan  bentuk  hifa  menggunakan  mikroskop  coumpound  multi media (Olympus BX 51 dan kamera Olympus DP 20). Oospora diamati dalam 10 tetes  masing  masing  10  µl  dari  suspensi  endapan  setiap  masing-masing  sampel uji. Hasil penelitian menunjukan bahwa cendawan Peronospora manshurica pada kedelai  impor  asal  malaysia  masih  berpotensi  sebagai  inokulum  penyebab penyakit  bulai  ( Downy  mildew )  pada  tanaman  kedelai    dengan  tingkat  viabilitas 3,35 – 9,93  %.  Morfologi Oospora  Peronospora manshurica berdiameter  24  - 38µm, bentuk halus dan membentuk bola dengan permukaan yang tidak teratur, warna  hialin  sampai  coklat  muda,  dan  hifa  berdinding  tebal  dan  tipis  dengan kepadatan  yang  bervariasi.  Oospora  yang  masih  viabil  ditandai  dengan  warna orange kemerahan.
Kata kunci: Viabilitas, Peronospora manshurica, kedelai impor

## PENDAHULUAN
Peningkatan  konsumsi  kedelai  dewasa  ini  belum  dapat  diimbangi  oleh  produksi kedelai  dalam  negeri.  Sebagai  gambaran  dapat  dikemukakan  bahwa  produksi kedelai saat ini mencapai 1,5 juta ton/tahun dan hanya mampu memenuhi sekitar 80  %  dari  kebutuhan  kedelai.  Untuk  memenuhi  kebutuhan  kedelai  di  Indonesia sejauh ini ditempuh dengan cara impor kedelai. Impor kedelai menduduki posisi kedua setelah gandum (Destasari et. al ., 2015). Menurut Aimon et al., 2014) impor kedelai pada tahun 2020 diprediksi mencapai nilai 3.398.008 ton.
Impor  biji  kedelai  merupakan  salah  satu  cara  patogen  dapat  meyebar  dari tempat  asalnya  menuju  tempat  yang  baru.  Tingginya  Kegiatan  impor  kedelai dapat  menimbulkan  resiko  yang  besar  bagi  penyebaran  penyakit,  khususnya peyakit  yang  terbawa  benih  ( seed  borne ).  Salah  satu  dampak  penyakit  yang terbawa benih adalah munculnya peluang terjadinya penyakit di daerah yang baru (Agarwal dan Sinclair, 1996). Peronospora manshurica merupakan cendawan seed borne,  yaitu  cendawan  yang  dapat  terbawa  benih  baik  dipermukaan  benih,

## Jurnal Ilmiah Ilmu Terapan Universitas Jambi
ISSN (Print) 2580-2240 (Online) 2580-2259 Volume 6, Nomor 1, Juni 2022
didalam  atau  bersama  benih  (Roongruangsree et  al. 1987;  Pap, et  al. ,  2007). Cendawan  ini  bersifat  parasit  obligat  yang  meyebabkan  penyakit  bulai  ( Downy mildew ) pada kedelai. Di negara-negara penghasil kedelai seperti Brazil, Amerika, dan China penyakit ini berstatus penting menyebabkan kerusakan sebesar 8 – 14 %  (Silva et  al. ,  2016).  Sedangkan  di  India  cendawan  ini  menjadi  target  dilarang masuk. Di Indonesia sendiri keberadaan penyakit ini masih terbatas.
Peronospora  manshurica merupakan  cendawan  dengan  tingkat  sporolasi yang  sangat  tinggi  dan  mudah  terbawa  melalui  udara  untuk  jarak  yang  jauh. Apabila  patogen  ini  masuk  dapat  meyebabkan  epidemi,  karena  itu  penyakit  ini termasuk  penyakit  yang  beresiko  tinggi.  Dengan  demikian  dikhawatirkan  biji kedelai  impor  yang  terinfeksi Peronospora  manshurica meskipun  hanya  untuk konsumsi masih berpeluang menjadi sumber inokulum.
Peronospora  manshurica dapat  bertahan  selama  5  tahun  sebagai  oospora pada  biji  kedelai  (Naumova et.  al., 1988).  Berdasarkan  penelitian  (Pathak et.  al ., 1978), oospora yang berumur 1 sampai 2 tahun masih mempunyai viabilitas 30 – 39 %  dan koleksi oospora berumur 8 tahun masih memiliki 20 Oospora yang layak berkecambah. Dengan demkian kemungkinan besar Oospora yang terbawa pada biji kedelai impor masih mempunyai viabilitas yang tinggi sehingga masih mampu menginfeksi tanaman kedelai.

## BAHAN DAN METODE PENELITIAN

## Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  di  laboratorium  Mikologi  Balai  Karantina  Pertanian  (BKP) Kelas I Jambi. Pengujian patogenitas dilakukan di rumah kaca BKP kelas I Jambi. Penelitian dilakukan mulai bulan Mei sampai dengan bulan November 2018.

## Bahan dan Alat
Alat  yang  diperlukan  dalam  penelitian  ini  adalah  mikroskop  stereo  olympus  Szx 20, mikroskop compound multimedia olympus BX 51 dengan kamera olympus DP 20,  shaker  (IKA),  inkubator  (Memmert),  oven  (Memmert),  sentrifuse  (Hecthic), autoclaf  (Tomy),  timbangan  analitik  (Kern),  mikropippet  (Eppendorf),  tabung reaksi,  cawan  petri,  scapel,  jarum  suntik,  gelas  objek,  gelas  penutup,  pinset, nobbe  trier,  pippet,  erlenmeyer,  plastik  sampel  dan  nampan.  Bahan  yang digunakan  adalah  sarung  tangan,  aquades,  alkohol,  karung  goni,  tissu,  kertas saring,  aquades steril, tween, laktovenol, 2, 3, 5-Triphenyltetrazolium klorida, biji kedelai impor, plastik.

## Jurnal Ilmiah Ilmu Terapan Universitas Jambi
ISSN (Print) 2580-2240 (Online) 2580-2259 Volume 6, Nomor 1, Juni 2022

## Sampel pengujian
Sampel  pengujian  diperoleh  dari  biji  kedelai  yang  diimpor  oleh  PT.  Budiman Sukses di Kabupaten Tanjung Jabung Barat. Kedelai impor berasal dari Malaysia yang masuk melalui pelabuhan Kuala Tungkal pada tahun 2018. Pengambilan biji kedelai  impor  dilakukan  secara  acak  di  gudang  PT.  Budiman  sukses  sebanyak  2 kali  kedatangan  kapal.  Metode  pengambilan  sampel  yang  digunakan  adalah pengambilan sampel dari dalam tumpukan atau gudang dalam  kemasan karung (SNI 19-0428 tahun 1998). Setiap satu lot  maksimal 900 karung. Dari 900 karung diambil secara  acak  30 karung sebagai sampel primer. Sampel primer dicampur sampai  homogen,  setelah  homogen  diambil  1  kg  untuk  dijadikan  sampel  uji  di laboratorium.
Deteksi cendawan Peronospora manshurica pada biji kedelai
Deteksi  oospora  pada  biji  kedelai  dilakukan  dengan  dua  metode.  Deteksi  biji kedelai tanpa gejala kerak dilakukan dengan tehnik pencucian atau washing test dan  deteksi  biji  kedelai  dengan  gejala  kerak  dilakukan  dengan  pemeriksaan langsung.  Pengamatan  ini  dilakukan  pada  masing-masing  sampel  setiap  lot  dan diulang 3 kali ulangan.
Pemeriksaan dengan tehnik Washing test dilakukan dengan cara mengambil 50 biji kedelai secara acak kemudian dimasukan dalam 10 ml aquades steril dan shaker selama 5- 10 menit, setelah dishaker larutan dipisahkan dan dimasukan ke dalam  tabung  sentrifuse  untuk  disentrifuse  selama  5  menit  dengan  kecepatan 2500 rpm. Larutan kemudian didiamkan beberapa menit agar dapat mengendap, setelah  mengendap  supernatan  dibuang  dan  endapan  diamati  di  bawah mikroskop coumpound multi media (Olympus BX 51 dan kamera Olympus DP 20). Oospora  diamati  dalam  10  tetes  masing  masing  10  µl  dari  suspensi  endapan setiap masing-masing sampel uji.
Pemeriksaan langsung dilakukan terhadap 3 biji kedelai yang memiliki gejala berkerak.  Bagian  pericarp  biji  kedelai  ditetesi  dengan  aquades  steril  dibiarkan beberapa menit kemudian dikorek dengan menggunakan jarum suntik. Oospora yang  tampak  kemudian  diletakkan  pada  cover  glass  yang  telah  ditetesi  aquades steril kemudian diamati pada mikroskop coumpound multi media (Olympus BX 51 dan kamera Olympus DP 20).
Pengamatan  morfologi  meliputi  ukuran  oospora,  warna  oospora,  bentuk oospora dan juga bentuk hifa. Pengukuran oospora dilakukan secara mikroskopis dengan  mikroskop  multimedia  dan  alat  ukur  mikrometer  okuler    dengan  satuan pengukuran µ (1 µ = 0,001 mm = 1000 µ).

## Jurnal Ilmiah Ilmu Terapan Universitas Jambi
ISSN (Print) 2580-2240 (Online) 2580-2259 Volume 6, Nomor 1, Juni 2022

## Uji viabilitas Oospora
Pengujian  viabilitas  oospora Peronospora  manshurica dilakukan  menggunakan oospora  dari  hasil  pemeriksaan  langsung.  Oospora Peronospora  manshurica dikumpulkan  dari  biji  kedelai  yang  terinfeksi  pada  setiap  lot  masing-masing sebanyak  500  spora/ml.  Pengujian  viabilitas  oospora Peronospora  manshurica pada  biji  kedelai  diulang  6  ulangan.      Perhitungan  kerapatan  oospora  dilakukan secara  manual  menggunakan  haemocytometer  dan  untuk  memudahkan perhitungan digunakan hand counter.
Pengujian  viabilitas  oospora Peronospora  manshurica mengunakan  metode Triphenyltetrazolium  klorida  (TTC).  Sebanyak  500  spora  disuspensi  dalam  1  ml aquades  steril  kemudian  di  inkubasi  selama  48  jam  pada  suhu  30 0 C.  Setelah diinkubasi kemudian ditambah dengan larutan 2, 3, 5-Triphenyltetrazolium klorida 1  %  sebanyak  1  ml  dan  diinkubasi  kembali  selama    48  jam  pada  suhu  30 0 C. Pengamatan  dilakukan  dengan  cara  meneteskan  suspensi  diatas  gelas  objek kemudian  ditutup  dan  dilakukan  pengamatan  di  bawah  mikroskop  multimedia olympus BX 51 dengan kamera olympus DP 20.
Viabilitas  oospora Peronospora  manshurica di  hitung  dengan  cara  melihat oospora  yang  telah  dilakukan  uji  viabilitas.  Oospora  yang  mempunyai  viabilitas ditandai dengan Oospora berwarna merah ke ungguan, atau kuning yang berarti oospora Peronospora  manshurica masih  mampu  berkecambah.  Sedangkan oospora  yang  tidak  dapat  berkecambah  ditandai  dengan  oospora  bening  atau tidak  berwarna.  Perkecambahan  oospora  ini  menunjukan  viabilitas  oospora. Persen  spora  yang  berkecambah  di  hitung  dengan  cara  jumlah  spora  yang berkecambah  di  bagi  dengan  spora  yang  diamati  (Chandel  dan  Pimpalgaonkar, 2014) dengan menggunakan rumus sebagai berikut:
% Spora berkecambah = Jumlah spora berkecambah Total spora yang diamati x 100 %

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Deteksi cendawan Peronospora manshurica pada biji kedelai Sebanyak  5  sampel  uji  yang  terdiri  dari  2  sampel  uji  pada  kedatangan  kapal pertama (Lot 1 dan lot 2) dan 3 sampel uji dari kedatangan kapal ke dua (Lot 1, lot 2 dan lot 3) terdeteksi adanya Peronospora manshurica (Tabel 1).

## Jurnal Ilmiah Ilmu Terapan Universitas Jambi
ISSN (Print) 2580-2240 (Online) 2580-2259 Volume 6, Nomor 1, Juni 2022
Tabel 1. Hasil deteksi oospora Peronospora manshurica pada biji kedelai impor Sampel uji Deteksi langsung Washing test Total oospora Rata-rata/biji Total oospora Rata-rata/biji Kedatangan pertama Lot 1 1185 395 61 6 Lot 2 667 222 54 5 Kedatangan kedua Lot 1 553 184 54 5 Lot 2 731 244 61 6 Lot 3 685 228 57 6
Hasil pengamatan setiap sampel 1 kg biji kedelai terdapat 30- 80 biji kedelai yang berkerak, dengan luasan kerak bervariasi. Biji kedelai yang terinfeksi Peronospora manshurica ditandai  dengan  bagian  permukaan  kulit  biji  kedelai  terdapat  kerak berwarna  putih  keabu-abuan  (Gambar  1).  Kerak    yang  menempel  pada permukaan biji kedelai merupakan kumpulan miselium dan oospora Peronospora manshurica. Oospora Peronospora  manshurica yang  ditetesi  dengan  aquades beberapa saat akan mengelembung terlihat seperti bola-bola kecil berwarna putih kekuningan.  Lapisan  dinding  paling  dalam  oospora  halus  dan  membentuk  bola dengan  permukaan  oospora  tidak  teratur  (Gambar  2).  Oospora  berwarna  hialin sampai  coklat  muda,  tebal,  berdinding  halus  dan  mempunyai  diameter  24 – 38 µm. Miselium pada permukaan biji terdiri dari hifa berdinding tebal dan tipis yang terjalin mejadi retikulum dengan kepadatan yang bervariasi (Gambar 3).
Gambar 1. Peronospora manshurica yang menempel pada kulit biji kedelai Impor (1,5 X)

## Jurnal Ilmiah Ilmu Terapan Universitas Jambi
ISSN (Print) 2580-2240 (Online) 2580-2259 Volume 6, Nomor 1, Juni 2022
Gambar 2. (a). Kumpulan Bentuk Oospora Peronospora manshurica (20 x), (b) Oospora  tunggal (40x)
Gambar 3 . Miselium Peronospora manshurica (40x)

## Viabilitas oospora Peronospora manshurica
Dari semua sampel yang dilakukan uji viabilitas dengan menggunakan TTC masih menunjukan ada oospora yang masih dapat hidup (viabil) dengan kisaran 3,35 – 9,93  %.    Oospora  yang  masih  viabil  ditandai  dengan  warna  orange  kemerahan
a
b

## Jurnal Ilmiah Ilmu Terapan Universitas Jambi ISSN (Print) 2580-2240 (Online) 2580-2259
Volume 6, Nomor 1, Juni 2022
setelah diinkubasi selama 48 jam (Gambar 4). Berikut ini adalah hasil perhitungan persentase viabilitas oospora Peronospora manshurica. ( Tabel 2 ).
Tabel 2. Persentase viabilitas oopora Peronospora manshurica
Sampel Uji % Viabilitas Oospora Kedatangan Pertama Lot 1 9,93 % Lot 2 6,83% Kedatangan kedua Lot 1 3,53% Lot 2 8,79% Lot 3 6,93%
Gambar 4. Oospora yang viabil (a), abnormal (b), dan mati (c)  (40 x)
Viabilitas  paling  tinggi  terjadi  pada  kedatangan  pertama    lot  1  sebanyak  9,93% dan  paling  rendah  yaitu  pada  kedatangan  kedua  lot  1  sebanyak  3,53%.  Hal  ini menunjukkan  terbawanya  inokulum Peronospora  manshurica pada  biji  kedelai impor  yang  dapat  menimbulkan  penyakit  baru  pada  tanaman  kedelai. Peronospora  manshurica merupakan  cendawan  dengan  tingkat  sporolasi  yang sangat  tinggi  dan  mudah  terbawa  melalui  udara  untuk  jarak  yang  jauh.  Apabila patogen ini masuk dapat meyebabkan epedimi, karena itu penyakit ini termasuk penyakit yang beresiko tinggi. Dengan demikian dikhawatirkan biji kedelai impor yang  terinfeksi Peronospora  manshurica meskipun  hanya  untuk  konsumsi  masih berpeluang menjadi sumber inokulum.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dikemukakan  di  atas  dapat  disimpulan bahwa Peronospora  manshurica pada  biji  kedelai  impor  masih  mempunyai
c b a

## Jurnal Ilmiah Ilmu Terapan Universitas Jambi
ISSN (Print) 2580-2240 (Online) 2580-2259 Volume 6, Nomor 1, Juni 2022
vibilitas  3,35 – 9,93  %  sehingga  dapat  menjadi  sumber    inokulum  yang  dapat meyebarkan penyakit downy mildew pada tanaman kedelai.

## DAFTAR PUSTAKA
Aimon,  H.,  Satrianto,  A.  2014.  Prospek  Konsumsi  dan  Impor  Kedelai  Indonesia tahun 2015-2020. Jurnal Kajian Ekonomi. 3 (5).
Agarwal, P.C. 1996. Technique for the detection of seed borne fungi. Seed Res.4 : 24-31
Chand,  G.,  dan  Kumar,  S.,  2016.  Crop  Diseases  and  Their  Manajemen.  Apple Academi Press. India
Destasari,  A.,  M.,  Suharyono  dan  Yulianto,  E.,  2015.  Pengaruh  produki  kedelai dalam  negeri  dan  harga  kedelai  dunia  terhadap  volume  impor  kedelai  di Indonesia  (Studi  terhadap  volume  import  kedelai  tahun  1996-2013).  Jurnal Administrasi Bisnis. Volume 1 no.1
Naumova,  E.S.,  Obtemperanskaya,  M.S.,  1988.  Modes  of  survival  of  the  causal agent of Peronospora disease of soyadean, Peronospora manshurica (Naum) Syd., in the intervegetative period. Mikology Fitopatologiya 22(6) : 500-502 Pap.,  S., M., Milosevic, M., dan Jasnic, S., 2007. Soybean Seed Borne Fungi in the Vojvodina Province. Phytopathol. 45 : 55-65
Pathak, V., K., Mathur, S., B., dan Neergaard, P., 1978. Detection of Peronospora manshurica (Naum) Syd. in Seeds of Soybean. Glycine max . Eppo Bulletin. 8 (1): 21-28
Roongruangsree, U., T., Olon, L.W. dan Lange, L. 1988. The seed borne inoculum of Peronospora manshurica, causal agent of soybean downy mildew. Jurnal Phytopathology. Paul Parey Scientific Publisher.
Silva,  O.C.D.,  Santos,  H.A.A.,  Pria,  M.D.,  dan  Mio,  L.L.M.D.,  2016.  Damage  to Soybean Caused by Downy mildew. Ciencia Rural.46 (3). Maret 2016