Jurnal : Jurnal Kesehatan Prima Volume
: 11, No.1, Februari 2017, Halaman : 43-49
ISSN Print : 1978 – 1334, ISSN Online : 2460 – 8661

## ___________________________________________________________________________
Santy Pristianingrum, Baiq Lely Zainiati, Iwan Daddy Dharmawibawa : Laboratorium Mikrobiologi Instalasi Litbang RSUD Propinsi NTB Laboratorium Mikrobiologi IKIP Mataram

## AKTIVITAS ANTIBAKTERI DAN PROFIL KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS EKSTRAK DAUN Muntingia calabura SEBAGAI KANDIDAT BAHAN HAND SANITISER
Santy Pristianingrum, Baiq Lely Zainiati, Iwan Doddy Dharmawibawa
Abstrak :  Pemanfaatan    zat  aktif  antibakteri  dari  beberapa  jenis  tumbuhan  semakin  berkembang  bukan  hanya sebagai bahan obat saja, pemanfaatannya juga banyak sebagai bahan antibakteri untuk tindakan preventif salah satunya hand  sanitiser .  Penelitian  bersifat  eksperimen  ini  bertujuan  mencari  sumber  alternatif  zat  aktif antibakteri  dari  tanaman Muntingia  calabura untuk  dimanfaatkan  sebagai  bahan hand  sanitiser .  Data  yang didapatkan dianalisa secara deskriptif, berupa kemampuan daya hambat ekstrak etanol absolute dan etanol 95% daun M.calabura terhadap bakteri isolate klinik dengan metode Kirby bauer dan jenis senyawa yang terkandung dalam  daun M.calabura melalui  kromatografi  lapis  tipis  menggunakan  eluen  n-hexan-metanol.  Hasil  ekstrak etanol absolute daun M.calabura menunjukkan rata-rata penghambatan pertumbuhan Pseudomonas aeruginosa 15.67 mm, Staphylococcus aureus 19.33 mm dan Escherichia coli 13 mm, sedangkan hasil ekstrak metanol 95% menunjukkan  hasil  penghambatan  lebih  tinggi Pseudomonas  aeruginosa 19.67  mm, Staphylococcus  aureus 19.33  mm  dan Escherichia  coli 16.67  mm.  Zona  hambat  ini  sedikit  lebih  rendah  dari  chlorhexidine  gluconate dengan rata-rata 20-24 mm terhadap tiga bakteri yang digunakan dalam uji namun masuk dalam kategori sensitif kuat  untuk  bahan  alam  menurut  Mukherjee  (1988).  Dari  profil  KLT  dengan  eluen  n-hexan  :  methanol ditemukan  tiga  senyawa  yang  berada  pada  kisaran  nilai  Rf    0.4;  0.5  dan  0.7.  Dari  hasil  penelitian  ini  dapat disimpulkan  bahwa  zat  bioaktif  yang  terkandung  dalam  ekstrak  etanol  95%  daun M.calabura dapat  di optimalisasi lebih lanjut sebagai kandidat bahan aktif hand sanitiser .
Kata Kunci: Daun Muntingia calabura , Aktivitas Antibakteri, Hand Sanitiser.
ANTIBACTERIAL ACTIVITY AND THIN LAYER CHROMATOGRAPHY PROFILE Muntingia Calabura LEAF EXTRACT AS A MATERIAL CANDIDATE HAND SANITIZER
Abstract : the utilization of  antibacterial active  substances  from  several plants is increasingly  not only as the ingredients  of  medicine,  but  its  utilization  is  also  utilized  for  an  antibacterial  ingredient  for  preventive  action, one  of  them  is  hand  sanitizer  material.  This  research  focused  to  find  the  antibacterial  active  substances alternative  from Muntingia  calabura leaves  extract.  The  data  were  analyzed  descriptively  including  the inhibitory of ethanol absolute extract and ethanol 95% of M. Calabura against isolate clinical bacteria by Kirby Bauer method and the type of coumpund that contains in M.calabura leaf by thin layer chromatography utilizing eluen n-hexan- Methanol. Etanol absolute extract M.calabura leaf showing the average inhibition zone against Pseudomonas aeruginosa 15.67 mm, Staphylococcus aureus 19.33 mm and Escherichia coli 13 mm. While, The etanol extract 95% showing higher inhibition Pseudomonas aeruginosa 19.67 mm, Staphylococcus aureus 19.33 mm and Escherichia coli 16.67 mm. This inhibitory zone was slightly lower than chlorhexidine gluconate with an average of 20-24 mm against the three bacteria  that utilized in the test but belongs to the strongly sensitive category  for  natural  materials  according  to  Mukherjee  (1988).  From  thin  layer  chromatography profile  with eluen  n-hexan:  methanol  found  three  compounds  that  were  in  the  range  of  Rf  value  0.4;  0.5  and  0.7.  The Conclusion for this study is the bioactive material from etanol 95% extract M.calabura leaf can be optimized to the hand sanitizer active compound candidate.
Keywords: Muntingia calabura leaf , Antibacterial Activity, Hand Sanitizer .

## LATAR BELAKANG
Badan  kesehatan  dunia  (WHO)  pada  bulan Oktober  Tahun  2005  mencanangkan  “Clean  Care  is Safer  Care”  merupakan  gerakan  untuk  mengurangi kejadian infeksi nosokomial, yaitu suatu infeksi yang didapatkan  pasien  saat  dirawat  di  fasilitas  kesehatan atau rumah sakit. Menurut WHO infeksi nosokomial menduduki  urutan  tertinggi  penyebab  kematian pasien  yang  menjalani  rawat  inap  di  fasilitas kesehatan  terutama  di  negara-negara  berkembang. Infeksi  tersebut  dapat  ditekan  penularannya  dengan melakukan  hand  higien,  yaitu  mencuci  tangan dengan  sabun  atau  menggunakan  bahan  antiseptic berupa hand sanitiser (WHO Guidelines,2009)
Hand  sanitizer  adalah  bahan  pembersih tangan  yang  dapat  membunuh  bakteri  atau  kuman, berbahan  dasar  alcohol  dengan  konsentrasi  60-95% efektif  membunuh  kuman  dibandingkan  konsentrasi yang  lebih  rendah  atau  bahan  hand  sanitiser  yang berbahan dasar non alcohol (Kampf G.2004 )
Namun  pemakaian  bahan  untuk  hand sanitaizer  berbahan  dasar  triclosan  belakangan  ini menjadi  permasalahan  baru,  The  U.S.  Food  Drug Administration pada penghujung tahun 2016 mengeluarkan  maklumat  mengenai  kewaspadaan penggunaan  hand  sanitizer  yang  mengandung triclosan.  Stoker  dkk  2010  dalam  jurnal  NCBI menyatakan  dalam  penelitiannya  bahwa  triclosan mempengaruhi hormone estrogen yang menyebabkan perubahan  pada  gambaran  histology  uteri  mencit  .( Stoker TE et all, 2010)
Keanekaragaman  hayati  yang  tinggi  di Indonesia mempunyai  peluang besar untuk dijadikan sumber  antibakteri.  Salah  satunya  adalah Muntingia
calabura atau  biasa  disebut  kersen  adalah  tanaman pohon  yang  berasal  dari  daerah  tropis,  tumbuh  di Amerika hingga Asia Tenggara. (Mahmood ND,2014) Biasanya  banyak  ditemukan  tumbuh  liar di  tepi  jalan,  memiliki  ciri  daun  oval  hingga  lancet dengan  tepian  bergerigi.  Pohon  kersen  berbuah sepanjang tahun dengan bentuk bunga kecil berwarna putih,  buah  berwarna  merah  berbentuk  seperti  ceri dan berasa manis (Bayer C,1998)
Di Negara Peru M.calabura banyak dimanfaatkan
sebagai obat tradisional menyembuhkan peradangan, penurun panas, mengobati  asam  urat  selain  sebagai  antiseptic, antioksidan,  antimikrobia,  antidiabetes  dan  anti tumor  (Siddiqua  A,2010). Menurut  Bintang  dan Prabowo    dalam  Firdiyani  (2015)  setiap  tumbuhan memiliki  kumpulan  senyawa-senyawa  yang  dapat dimanfaatkan  untuk  kehidupan  manusia.  Salah satunya  adalah  senyawa  bioaktif,  senyawa  bioaktif adalah senyawa yang terkandung dalam tubuh hewan atau  tumbuhan  yang  memiliki  banyak  manfaat  bagi manusia,  diantaranya  sebagai  sumber  antioksidan, antibakteri, antiinflamasi dan anti kanker.
Flavonoid  adalah  salah  satu  senyawa  yang  dapat digunakan  sebagai  antioksidan,  antibakteri  dan antiinflamasi. Buhian et all (2016) dalam penelitiannya  melalui  fitokemikal  skrening  daun M.calabura  mengandung  senyawa  sterol,  flavonoid, alkaloid, saponin glikosida dan tannin.
Dalam penelitian ini kemampuan kandungan senyawa  antibakteri  daun M.calabura akan  lebih difokuskan  sebagai  bahan  aktif  hand  sanitiser, mengingat  semakin  cepat  berkembangnya  bakteri yang  bermutasi  menjadi  jenis  baru  dirasa  perlu  terus
menerus  dilakukan  eksplorasi  senyawa-senyawa antibakteri dari tumbuhan  yang secara  umum  mudah didapatkan  dan  memiliki  perkembangan  tidak mengenal  musim.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  aktivitas  antibakteri  daun M.calabura melalui  sensitivitas ekstrak etanol absolut dan etanol 95% terhadap beberapa bakteri isolate klinik RSUDP NTB    sebagai  sumber  alternative  bahan  aktif  hand sanitiser serta profil senyawanya melalui kromatografi lapis tipis.

## METODE
Penelitian  ini  adalah  penelitian  eksperimen,  dengan membandingkan  dua  perlakuan  untuk  mengamati aktivitas antibakteri daun M.calabura , yaitu :
- (EA)  ekstrak  etanol  absolute  daun  M.calabura dosis 10 mg/ml
- (E95)    ekstrak  etanol  95%    daun  M.calabura dosis 10 mg/ml
Populasi  dalam  penelitian  ini  adalah  daun  tanaman M.calabura ,  sedangkan  sampel  yang  digunakan adalah daun M.calabura yang dipetik di daerah Batu Layar Lombok Barat pada Bulan Februari.
Variabel  dalam  penelitian,  variable  independent adalah  daun M.calabura dan  variable  dependen adalah aktivitas antibakteri Definisi operasional :
 Daun Muntingia  calabura berwarna  hijau  tua hingga  muda  dengan  tepian  bergerigi  dan berbentuk oval
 Aktivitas  antibakteri  adalah  kemampuan  suatu zat  dalam  menghambat  pertumbuhan  koloni bakteri
 Hand  sanitiser  adalah  bahan  pembersih  tangan yang dapat membunuh bakteri atau kuman Instrumen penelitian :
Alat  :  incubator,  oven,  laminar  cabinet,  blender, neraca  digital,  cawan  petri,  beker  glas,  gelas  ukur, lampu UV.
Bahan  :  daun M.calabura ,  isolate  bakteri  klinik S.aureus,  Pseudomonas  aeruginosa,  Escherichia coli , media Muller Hinton agar, media nutrient agar, plat  silica  gel  60  F254,  n-hexan,  methanol,  etanol absolute,  etanol  95%,  aquades  steril,  kertas  saring Whatman.
Cara kerja :
Pembuatan  ekstrak  maserasi  daun  M.calabura : Daun M.calabura dibersihkan dari pengotor kemudian  dicuci  dengan  air  mengalir  dan  diiris halus,  daun  di  oven  pada  suhu  30 0 C  hingga  kering.
Daun M.calabura kering  diblender  dan    direndam masing-masing  10  gr  dalam  pelarut  etanol  absolute dan 10 gr dalam etanol 95%  dengan perbandingan 1 :  10  (w/v)  selama  3  hari  dengan  sesekali  diaduk. Pada  hari  ke  3  rendaman  disaring  menggunakan kertas  saring,  dan  hasil  filtratnya  di  uapkan  dalam lemari  asam  hingga  didapatkan  maserat  kering. Maserat  diencerkan  dengan  pelarut  DMSO  dan dibuat  dalam  dua  sediaan  dengan  rincian,sebagai berikut:
- (EA)  ekstrak  etanol  absolute  daun M.calabura dosis 10 mg/ml
- (E95)    ekstrak  etanol  95%    daun M.calabura dosis 10 mg/ml
Aktivitas  antimikroba  daun  M.calabura  : aktivitas antimikroba  daun M.calabura di  uji  dengan  teknik difusi Kirby-Bauer (Bauer,Kirby, 1959)
menggunakan  sumuran  pada  media  Muler  Hinton Agar  (MHA)  plate.  Menggunakan  control  negative DMSO  dan  control  positif  chlorhexidine  gluconate (0,5%  w/v  dalam  70%  v/v  etanol).  Bakteri  yang digunakan  dalam  uji  ini  adalah  bakteri  isolate  klinik Staphylococcus  aureus,  Pseudomonas  aeruginosa dan Eschericia coli koleksi Laboratorium Mikrobiologi  Instalasi  Litbangkes  RSUDP  NTB. Dilakukan  dengan  menyemai  bakteri  isolate  klinik pada  media  MHA  yang  kemudian  dilubangi  dengan diameter  6  mm,  ke  dalam  lubang  sumuran dimasukkan  masing-masing  sediaan  EA  dan    E95 dengan  tiga  kali  ulangan.    Selanjutnya  inkubasi selama  24  jam  pada  suhu  37 0 C.  Pengamatan  hasil aktivitas  antimikroba  berupa  sensitivitas  ditandai dengan  munculnya  zona  bening  disekitar  sumuran yang diukur diameternya menggunakan mistar dalam satuan  mm,  hasilnya  dibaca  menggunakan  kriteria Mukherjee(1998),  >  12  mm  sensitive  kuat,  12  mm sensitif  sedang,  4-12  mm  intermediet,  ,<  4  mm
resisten.  Hasil  pengukuran  zona  hambat  kemudian dibandingkan dengan control positif dengan pertimbangan  criteria  Mukherjee  (1988),  apabila mempunyai  nilai  mendekati  zona  hambat  control positif  maka  ekstrak  ethanol  daun M.calabura layak diajukan sebagia kandidat bahan aktif hand sanitiser.
Profil kromatografi lapis tipis M.calabura : pemeriksaan  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  jumlah senyawa yang terkandung didalam daun M.calabura . Dilakukan  dengan  cara  menotol  ekstrak  daun M.calabura pada plat silica gel 60 F254 sebagai fase diam  dan  N-hexan  :  methanol  sebagai  fase  gerak. Hasil rambatan pada plat silica dibaca menggunakan sinar UV 254 nm dan dihitung nilai Rf nya..

## HASIL PENELITIAN
Tabel    dibawah  ini  menunjukkan  hasil  uji aktivitas  antibakteri  yang  terkandung  di  dalam  daun M.calabura serta profil kromatografi lapis tipis.
Tabel 1. Hasil uji sensitivitas ekstrak etanol 95% M.calabura terhadap bakteri isolate klinik dalam 1x24 jam
S.aureus/mm P.aeruginosa/mm E.coli/mm U1 U2 U3 U1 U2 U3
U1 U2 U3 Ekstrak  etanol 95%  daun M.calabura 18 20 20 19 20 20
17 17 16 Rata-rata 19.33 19.67 16.67
Tabel 2. Hasil uji sensitivitas ekstrak etanol absolut M.calabura terhadap bakteri isolate klinik dalam 1x24 jam
S.aureus / mm P.aeruginosa / mm E.coli / mm U1 U2 U3 U1 U2 U3
U1 U2 U3 Ekstrak etanol absolute  daun M.calabura 18 20 20 17 15 15
14 14 15 Rata-rata 19.33 15.67 13
Tabel 3. Hasil uji kromatografi lapis tipis ekstrak etanol 95% daun M.calabura Konsentrasi eluen Bercak yang di hasilkan Nilai Rf Warna pendaran dalam UV 254 n-hexan – methanol 9 : 1 1 0.71 Orange 2 0.5 Orange 3 0.42 Orange

## PEMBAHASAN
Hasil maserasi pada daun M.calabura setiap 10  gr  menggunakan  etanol  95%  selama  tiga  hari menghasilkan pasta hijau pekat rata-rata seberat 0.96 gr  dengan  bau  khas  daun  kering,  sedangkan  ekstrak etanol  absolute  tiap  10  gr  menghasilkan  rata-rata pasta seberat 0.98 gr.   Maserat tersebut diuji  dengan dosis  10  mg/ml  menggunakan  pelarut  DMSO. Kontrol positif dalam penelitian ini adalah Chlorhexidine  gluconate  0,5%  dalam  etanol  70% yang  menunjukkan  penghambatan  sebesar  rata-rata 20-25  mm    dan  kontrol  negatif  menggunakan DMSO.  Hasil uji efektivitas  terhadap bakteri isolate klinik  menunjukkan  bahwa,  hasil  penghambatan senyawa  bioaktif  ekstrak M.calabura ditemukan paling  efektif  terhadap P.aeruginosa sebesar  19.67 mm,  selanjutnya  terhadap S.aureus 19.33mm    dan terkecil  terhadap E.coli yaitu  sebesar  16.67  mm (Tabel  1).  Jika  mengacu  pada  standar  sensitivitas senyawa  bahan  alam  terhadap  bakteri  menurut Mukherjee (1988) semua hasil pengujian menunjukkan  hasil  sensitive  kuat  karena  rata-rata penghambatan  terhadap  bakteri  sebesar  >12  mm. Namun  jika  dibandingkan  dengan  penghambatan Chlorhexidine gluconate yang menjadi control positif rata-rata  memiliki  daya  hambat  sekitar  20-25  mm luas  zona  hambat M.calabura tersebut  masih  sedikit lebih  rendah.    Kampf  G  dan  Kramer  A.  (2004) mengatakan  bahwa  bahan  hand  sanitiser  yang berbahan  dasar  non  alcohol  hanya  efektif  untuk sebagian  kecil  kuman  atau  bakteri  dan  lebih  bersifat menghambat pertumbuhan kuman daripada membunuh. Hal  tersebut  tidak  terjadi  pada penelitian  ini,  daya  hambat  yang  dihasilkan  oleh
senyawa bioaktif daun M.calabura dapat mempertahankan  sensitivitasnya  hingga  lebih  dari  3 hari terhadap tiga bakteri uji.
Arum  YP  (2012)  dalam  penelitiannya mengidentifikasi  keberadaan  senyawa  flavonoid berupa  auron,  flavonol  dan  flavon  dalam  daun M.calabura. Hal  tersebut  membuktikan  bahwa  daun M.calabura mengandung  senyawa  yang  mempunyai sifat  antibakteri.  Dalam  penelitian  tersebut  diketahui bahwa ekstrak  etanol 96% daun M.calabura efektif menghambat  pertumbuhan  bakteri P.aeruginosa sebesar 10 mm, S.aureus sebesar 10 mm dan E.coli 9 mm. Nilai  tersebut  masih  lebih  rendah  dari  hasil penelitian  ini  yang  mencapai  rata-rata  19.67  mm untuk P.aeruginosa ,  19.33  mm  untuk S.aureus dan 16,67  mm  untuk E.coli .    Dari  sisi  penggunaan konsentrasi  pelarut,  dalam  penelitian  ini  konsentrasi yang  digunakan  lebih  rendah  yaitu  etanol  95%    jika dibandingkan  dengan  konsentrasi  dalam  penelitian Arum  YP  (2012)  sebesar  96%.  Konsentrasi  pelarut berkorelasi  dengan  kemampuan  daya  hambat terhadap  pertumbuhan  bakteri  uji,  semakin  pekat pelarut  maka  daya  hambat  terhadap  bakteri  semakin rendah.  Hal  tersebut  dapat  dilihat  pada  tabel  2  yang menunjukkan  bahwa    pada  uji  sensitivitas  ekstrak etanol  absolute M.calabura menghasilkan  daya hambat sedikit lebih rendah dibandingkan menggunakan  ekstrak  etanol  95%,  dan  jika dibandingkan  dengan  penelitian  Arum  YP  (2012) terlihat  bahwa  kemampuan  daya  hambat  tersebut bertingkat,  semakin  besar  konsentrasi  pelarut  saat ekstraksi  semakin  kecil  daya  hambat  pertumbuhan terhadap  bakteri S.aureus,  P.aeruginosa dan E.coli (Tabel 3).
Menurut  Alvarez  dalam  Zakaria  (2010) Bahan  aktif  antimikrobia  terutama  beberapa  jenis golongan flavonoid memiliki komponen  seperti rutin dan  quercetin  yang  mampu  mengikat  protein  pada membrane  bakteri  atau  porin  sehingga  dapat merubah  karakter membrane menjadi  mudah dimasuki oleh zat bioaktif yang bersifat polar melalui sistem difusi.
Pada  pengujian  kromatografi  lapis  tipis ekstrak daun M.calabura dengan menggunakan eluen n-hexan-  methanol  dengan  perbandingan  9  :  1, ditemukan  tiga  bercak  yang  mempunyai  nilai  Rf 0.71  ;  0.5  ;  0.42.  Pada  pengujian  KLT  ini  tidak menggunakan  standar  baku  maupun  pereaksi semprot, deteksi hanya dilakukan dengan menggunakan sinar UV 254 nm dan campuran eluen berdasarkan  uji  coba,  sehingga  perlu  dilakukan pengujian lebih lanjut mengenai profil senyawa yang ditemukan  pada  tiga  bercak  tersebut,  untuk memastikan  jenis  senyawa  dan  apakah  benar  tiga senyawa  tersebut  yang  berperan    dalam  efektivitas antibakteri daun M.calabura .

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Didalam  ekstrak  daun M.calabura yang diuji kromatografi lapis tipis menggunakan silica gel dan  eluen  n-hexan-methanol  ditemukan  tiga  bercak yang berpendar orange dibawah UV 254 nm. Ekstrak etanol 95% daun M.calabura lebih efektif menghambat  pertumbuhan P.aeruginosa,  S.aureus dan E.coli dibandingkan  dengan  ekstrak  etanol absolute  dengan  kisaran  daya  hambat P.  aeruginosa 19.67mm, S.aureus 19.33 mm dan E.coli 16.67 mm.
Sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa  zat  antibakteri yang  terkandung  dalam  ekstrak  etanol  95%  daun M.calabura dapat di uji lanjut sebagai kandidat bahan aktif  hand sanitiser.

## Saran
Perlu  dilakukan  pengulangan  pengujian serupa  menggunakan  bahan  daun M.calabura dari beberapa daerah untuk bisa mendapatkan  jenis-jenis daun M.  calabura yang  memiliki  kemampuan aktivitas  antibakteri  yang  maksimal  untuk  dapat dikembangkan sebagai bahan hand sanitiser.

## DAFTAR PUSTAKA
Anderson,  E.,  &  Mc  Farlane,  J.  (2004).  Community Arum  YP,  Supartono,  Sudarmin.2012.  Isolasi dan  uj  daya  antimikroba  ekstrak  daun  kersen (Muntingia calabura). Jurnal MIPA ;
35(2):165-174 Bauer  AW,Perry  DM,Kirby  WMM.Single  disc antibiotic sensitivity testing staphylococci.AMA Arch Intern Med.1959;104:208-216.
Bayer  C, Chase MW, Fay MF.1998. Muntingiaceae, a new family of dicotyledones with malvalean affinities.Taxon:47(1):37-42
Buhian  WP,  et  all.  2016.  Bioactive  metabolite profiles and antimicrobial activity of ethanolic extract from Muntingia calabura L leaves and stems.    Asian  Pac  J  Trop  Biomed;6(8);682- 685.
Firdiyani  F,  Agustini  T.W.,  Ma’ruf  W.F.2015.
Ekstraksi
senyawa bioaktif sebagai antioksidan  alami Spirulina  platensis segar dengan pelarut yang berbeda. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia,Volume 18 No.1. Kampf G, Kramer A.2004. Epidemiologic background of hand hygiene and evaluation of the most important agents for scrubs and rubs.
Clin Micobiol Rev.Oct;17(4):863-93)
Mukherjee KL.1988.Medical Laboratory Technology.Vol II.Delhi : Tata MC 15 nomor
1
Mahmood ND,Nasir NL,Rofiee MS,Tohid SF, Ching SM,  The  LK,  et.al.2014.  Muntingia  calabura: a  review  of  its  traditional  uses,  chemical properties, and
pharmacological
observation.Pharm Biol;52(12): 1598-623
Siddiqua  A,  Premakuri  KB,  Roukiya  S,  Vithya  &
Savitha.2010. Atioxidant activity and estimation  of  total  phenolic  content  of Muntingia  calabura  by  colorimetry.  Int  J Chem Tech Res;2(1):205-208
Stoker TE et all.2010. Triclosan exposure modulated estrogen-dependent  responsesin  the  female wistar  rat.  Toxicol  Sci  2010  Sep;117(1)  :45- 53.doi:10.1093/toxsci/kfq180.Epub  2010  Jun 18.  Diakses 25 Januari 2017 09.05)
Todd EC, Michaels BS, Holah J.Smith D, Greig JD,
Bartleson  CA.2010.  Outbreaks  where  food workers have been implicated in the spread of foodborne  disease.  Part  10.  Alcohol  based antiseptics  for  hand  disinfection  and  a comparison  of  their  effectiveness  with  soaps.
J Food Prot; Nov 73(11):2128-40.
WHO  Guidelines,2009  Diakses  25  Januari 2017 10.10.
Zakaria et all.2010. In vitro antimicrobial activity of Muntingia  calabura  extract  and  fractions. African  Journal  of  Microbiology  Research;
Vol.4(4),pp.304-308.