## EFFECT OF THE ACTIVATION TIME OF PLATELET RICH PLASMA AND COLLAGEN ON THE LEVELS OF FIBROBLAST GROWTH FACTOR IN GINGIVAL CREVICULAR FLUID
Adisty Restu Poetri*, Kwartarini Murdiastuti**, Sudibyo**

## ABSTRACT
Background: Gingival recession is a condition that occurs when the gingival margin is more apically than the cemento-enamel junction and causes the tooth root to open, so a root closure procedure is required. Platelet rich plasma (PRP) contains growth factors, including Fibroblast growth factor which plays a role in the process of angiogenesis and cell proliferation. The activation time is known to affect platelet count and FGF expression. The purpose of this study was to determine the effect of the activation time of platelet rich plasma and collagen on the expression of fibroblast growth factor in the gingival crevicular fluid Method:  The  research  sample  was  gingival  crevicular  fluid  which  was  taken using paper point #30 for 30 seconds as many as 18 samples. Samples were taken before surgery, day 5 and day 7 after surgery. The samples were divided into 2 groups based on the activation time, 1 hour and 24 hours PRP-collagen. Changes  in  FGF  levels  were  examined  using  ELISA.  Repeated  Meassure ANOVA  test  was  conducted  to  compare  the  differences  in  each  time observation and post hoc was performed to compare the differences between groups for each time observation.
Result:  There  was  no  significant  difference  in  FGF  levels  in  the  gingival crevicular fluid at each time and between groups.
Conclusion: There was no effect of the activation time of platelet rich plasma and collagen on the levels of fibroblast growth factor in gingival crevicular fluid

## PENDAHULUAN
Resesi  gingiva  adalah  kondisi  yang  muncul ketika  margin  gingiva  berada  lebih  ke  apikal  dari
cemento-enamel junction (CEJ) sehingga menyebabkan  akar  gigi  terbuka 1,2 .  Resesi  gingiva menimbulkan  masalah  fungsional  dan  estetis karena  insiden  terjadinya  karies  akar,  kehilangan perlekatan  periodontal  dan  gigi  hipersensitif menjadi  lebih  tinggi.  Bagi  pasien  resesi  gingiva perlu diobati karena menimbulkan masalah estetik. Estetik  telah  menjadi  bagian  tak  terpisahkan  dari terapi gigi dan mulut, sehingga prosedur penutupan
akar  pada  permukaan  akar  gigi  mendapat perhatian 3 . Berbagai
teknik penutupan akar
dikelompokkan  menjadi pedicle  flap dan free  soft tissue  grafts ,  tetapi  dari  teknik  penutupan  akar tersebut belum diperoleh jaringan  ikat yang cukup dan terjadi pembentukan long junctional epithelial 2,4 .  Perlekatan  jaringan  ikat  sesuai histologisnya pada gigi yang mengalami resesi saat ini  menjadi  tujuan  utama  sehingga  hasil  akhir perawatan  penutupan  akar  diharapkan  bukan
* Departemen Periodonsia, Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Islam Sultan Agung ** Departemen Periodonsia, Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Gadjah Mada
Correspondence : adistyrestupoetri@unissula.ac.id
Keywords:
Platelet rich plasma; Collagen; Fibroblast growth factor; Gingival Crevicular Fluid; Gingival recession
hanya  perbaikan  jaringan  tetapi  terjadi  regenerasi
jaringan 5 .
Petrungaro (2001) memaparkan
penggunaan Platelet  Rich  Plasma (PRP)  dapat meningkatkan  terjadinya  regenerasi  jaringan  pada prosedur perawatan akar. Penggunaan PRP untuk membantu  penyembuhan  jaringan  sudah  sering digunakan  dalam  tindakan  bedah,  antara  lain bedah  kepala  dan  leher,  otolaringologi,  bedah kardiovaskular dan bedah maksilofasial serta pada berbagai  tindakan bedah  gigi  dan  mulut 6 . Sediaan PRP  memiliki  banyak  growth  factors  yang diperlukan dalam penyembuhan luka, baik jaringan keras ataupun jaringan lunak 6,7 . Penggunaan PRP dapat meningkatkan regenerasi periodontal karena kemampuan  PRP  untuk  menghambat  migrasi  sel epitel  sehingga  membatasi  terbentuknya  long junctional epithelium 8 .
Albanesse dkk. (2013) mengungkapkan PRP dapat meningkatkan efek positif ketika dikombinasikan  dengan  bahan  cangkok  tulang untuk  perawatan  periodontal  dengan  kerusakan infraboni. Masih belum ditemukan keuntungan yang signifikan  mengenai  penggunaan  PRP  untuk perawatan  resesi  gingiva.  Platelet  rich  plasma memiliki sifat mudah larut dalam air sehingga perlu adanya  membran  sebagai  pembawa.  Adanya permasalahan  tersebut  menyebabkan  munculnya penelitian  secara  in  vitro  mengenai  penggunaan kolagen yang dikombinasikan dengan PRP 9,10 .
Hasil penelitian secara in vitro menunjukkan penambahan  kolagen  pada  PRP  merupakan alternatif  yang  aman  dan  efektif,  selain  berfungsi merangsang pelepasan growth factors dari granula platelet,  kolagen  meningkatkan  konsistensi  PRP menjadi gelasi sehingga lebih mudah diaplikasikan dan  mampu  mengurangi  retraksi  bekuan  PRP. Penemuan  ini  menjadi  penting  dalam  kaitan penggunaan kolagen sebagai scaffold 9,10 .
Kegunaan  penggunaan  kolagen  dalam perawatan resesi gingiva yaitu mengontrol perdarahan, stabilisasi jendalan darah, melindungi area yang luka, menyediakan matriks untuk tempat pertumbuhan  jaringan  dan  terabsorbsi  penuh dalam  kurun  waktu  10 –14  hari  serta  digunakan sebagai  bahan  pembawa  PRP 3 .  Kemampuan potensial PRP dalam suatu terapi bergantung pada kadar growth factors yang dilepaskan oleh platelet dan terdapat korelasi antara jumlah platelet dengan kadar growth factors 11 .
Hasil  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Naik dkk.  menunjukkan  adanya  peningkatan  jumlah platelet  4  kali  lebih  banyak  pada  kolagen  yang direndam  dalam  PRP  selama  1  jam  sebelum operasi dibandingkan dengan jumlah platelet pada baseline.  Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Harrison dkk.  menunjukkan  adanya  peningkatan growth factors pada  PRP yang  diaktivasi kolagen  dengan inkubasi  24  jam. Platelet  Rich  Plasma serelah diaktivasi  dengan  kolagen  selama  24  jam,  terjasi pelepasan growth factors hingga 5 kali lipat 9,10 .
Beberapa  growth  factors  berperan  saat proses  proliferasi,  yaitu Platelet  Derived  Growth Factor (PDGF ),Transforming  Growth  Factor- β (TGF- β), Fibroblast  Growth  Factor (FGF),  dan Vascular  Endothelial  Growth  Factor (VEGF).  Dari growth factors yang berperan pada fase proliferasi, FGF  merupakan  salah  satu growth  factors yang baru berperan saat fase proliferasi dimulai 12 . Pada fase  proliferasi,  FGF  berperan  dalam  memicu proliferasi
fibroblas
dan meningkatkan angiogenesis 12,13 .
Fibroblast  growth  factor dikenal  sebagai sitokin multifungsi yang berpartisipasi dalam proses penyembuhan luka, proliferasi sel dan apoptosis 14 . Hasil  penelitian  mengenai  FGF  menunjukkan banyak  manfaat  pada  pengobatan  regenerasi, penelitian  menunjukkan  FGF  memfasilitasi  reaksi yang  dibutuhkan  untuk  revaskularisasi,  migrasi,
proliferasi  sel  endotel  dan  regenerasi  pembuluh darah kapiler 13 . Penelitian yang dilakukan Tanimoto dkk. (2013) menunjukkan  aktivitas  proliferasi yang lebih  tinggi  pada  fibroblas  yang  diberi  tambahan FGF dan puncak proliferasi juga terjadi lebih awal, dari  hari  ke-5  menjadi  hari  ke-7  dengan  adanya penambahan FGF 14 .
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui pengaruh  waktu  aktivasi platelet  rich  plasma dengan kolagen terhadap kadar FGF cairan sulkus gingiva.

## METODE PENELITIAN
Jenis  penelitian  yang  dilakukan  adalah penelitian  eksperimental  semu,  yaitu  penelitian yang  dilakukan  dengan  memberikan  perlakuan pada  subjek  penelitian  kemudian  dilakukan pengamatan  secara  laboratoris  di  bagian  Biologi Molekuler, Fakultas Kedokteran, Universitas Gadjah  Mada,  Yogyakarta.  Subjek  penelitian adalah  pasien  yang  datang  ke  klinik  periodonsia RSGM  Prof.  Soedomo  FKG  UGM  Yogyakarta, dengan  kriteria  resesi  gingiva  kelas  I  dan  II  Miller dan  bersedia  menyetujui  dan  menandatangani informed  consent.  Pasien  yang  merokok  atau peminum  alkohol,  memiliki  penyakit  sistemik  dan tidak  bersedia  mengikuti  penelitian  hingga  selesai tidak diikut sertakan dalam penelitian.
Penelitian  dilakukan  dengan  pengambilan cairan  sulkus  gingiva  menggunakan paper  point . Sampel dalam penelitian terdiri dari 20 sampel yang dibagi menjadi dua kelompok, yaitu:
a. Kelompok I: Kelompok I, dilakukan bedah flap  dengan  aplikasi  PRP  yang  telah  diaktivasi kolagen selama 1 jam.
b. Kelompok II: Kelompok II, dilakukan bedah flap  dengan  aplikasi  PRP  yang  telah  diaktivasi kolagen selama 24 jam
Sampel diambil pada hari ke-0, hari ke-5 dan hari ke-7. Ethical Clearance , keterangan kelayakan
etik  didapatkan  dengan  mengajukan  usulan penelitian  kepada  komisi  etik  kedokteran  gigi. Selanjutnya  dilakukan  persiapan  penelitian,  yaitu mempersiapkan formulir penelitian, ijin penelitian di RSGM  Prof.  Soedomo  FKG  UGM  dan  Biologi Molekuler FK UGM, serta mempersiapkan informed consent .
Pengambilan  sampel  dari  CSG  untuk  data baseline,  dilakukan  sebelum  tindakan  bedah periodontal. Plak supragingiva dihilangkan dengan cotton  pellet dan  gigi  yang  akan  diambil  CSG dikeringkan  dengan  udara  sebelum  dilakukan pengambilan  sampel. Paper  point (no  30) dimasukkan ke dalam sulkus sebanyak 1 mm atau hingga dirasa ada tahanan selama 30 detik. Paper point kemudian  dimasukkan  ke  dalam  tabung ependorf  yang  berisi  300  µL  saline 15 .  Sampel disimpan  pada  suhu  -80°C  sampai  dilakukan pemeriksaan kadar FGF menggunakan ELISA.
Persiapan  PRP:  Darah  diambil  dari  vena antekubital  ke  dalam  vacutainer  yang  berisi  3,8% antikoagulan  sodium  sitrat  sebanyak  10  ml. Sentrifugasi  dilakukan  sebanyak  dua  kali  untuk memisahkan  dan  memperoleh  platelet.  Putaran pertama,  darah  disentrifugasi  pada  2400  rpm selama  10  menit  untuk  memisahkan  sel  darah merah  dengan  bagian  darah  yang  lain  (sel  darah putih,  platelet,  dan  plasma)  dengan  lapisan  tipis putih diantaranya yang dikenal sebagai buffy coat , yang  mengandung  konsentrasi  platelet  tertinggi. Plasma  dan buffy  coat diambil  dengan  pipet  dan dimasukkan  ke  dalam  tabung  terpisah  lalu disentrifugasi  dengan  3600  rpm  selama  15  menit dan  pada  putaran  kedua  dihasilkan  dua  fragmen yang  terpisah.  Lapisan  darah  adalah  PRP  yang dilapisi  cairan  supernatan platelet  poor  plasma (PPP), PPP diambil dengan pipet lalu dimasukkan ke  tabung  terpisah  dan  PRP  digunakan  dalam penelitian.  Penyimpanan  PRP  pada  suhu  - 20°C 16,17 .
Prosedur  terapi  bedah  flap  dengan  diberi PRP dan kolagen dilakukan pada kelompok aktivasi 1 jam dan aktivasi 24 jam. Anestesi yang digunakan adalah anestesi lokal, infiltrasi pada daerah operasi setelah  daerah  operasi  di  desinfeksi.  Insisi full thickness flap  vertikal  di  mesial  dan  distal  serta sulkular  gigi  yang  resesi.  Flap  dielevasi  dan dilakukan debridement dengan SRP (Scalling Root Planing)  dan  kuretase.  PRP  yang  telah  diaktivasi dengan kolagen diaplikasikan pada daerah resesi. Kemudian  flap  dikembalikan,  dijahit  dengan matress vertikal  dan  interupted  menggunakan benang absorbable .  Pasien  diberi  antibiotik amoxicilin 500 mg selama 7 hari, pasien juga diberi analgetik  dan  antiinflamasi.3  Setelah  perawatan, dilakukan  pengambilan  CSG  (Cairan  Sulkus Gingiva)  untuk  sampel  hari  ke-5  dan  ke-7  setelah tindakan bedah. Sampel disimpan pada suhu -80°C sampai dilakukan pemeriksaan kadar FGF menggunakan ELISA.
Perhitungan  kadar  FGF  dilakukan  dengan Elisa Kit FGF (RnD Quantikine dfb50) dan hasilnya
dibaca  menggunakan  microplate reader.  Prosedur pengerjaan  Elisa  sesuai  dengan  manual  yang disertakan  dalam  Elisa  Kit.  Data  hasil  penelitian dianalisis  dengan  menggunakan  metode  statistika uji  repeated  measure  ANAVA  dengan  tingkat signifikansi p < 0,05. Uji post hoc digunakan untuk analisis data antar kelompok, data tiap pengamatan waktu dan perbedaan antar kelompok terhadap tiap pengamatan waktu. Pengelolaan data menggunakan program statistik SPSS.artikel.

## HASIL PENELITIAN
Angka yang terbaca adalah nilai absorbansi yang mewakili densitas optik warna masing-masing sampel.  Sampel  akan  berubah  warna  menjadi kuning setelah diberi reagen dan diinkubasi selama 30 menit. Perubahan inilah yang dibaca menggunakan microplate  reader .  Data  hasil penelitian selanjutnya diolah dengn  menggunakan uji statistik.
Tabel 1. Rerata dan standar deviasi kadar FGF cairan sulkus gingiva (pg/ml)
Kelompok N Hari ke-0 Hari ke-5 Hari ke-7 PRP-Kolagen 1 jam 9 6,96 ± 1,49 7,07 ± 2,05 7,35 ± 2,35 PRP-Kolagen 24 jam 9 8,23 ± 1,28 7,99 ± 1,51 6,08 ± 2,82
Berdasarkan tabel 1 dapat diketahui rerata kadar FGF pada kelompok dengan lama aktivasi 1 jam terus mengalami kenaikan hingga hari ke-7, sebaliknya pada kelompok dengan lama aktivasi 24 jam kadar FGF terus menurun hingga hari ke-7.
Gambar 1 menunjukkan rerata kadar FGF cairan sulkus gingiva mulai hari ke-0 kelompok aktivasi 1 jam 6,96  pg/ml,  7,07  pg/ml  dan  7,35  pg/ml.  Rerata  kadar  FGF  cairan  sulkus  gingiva  mulai  hari  ke-0  kelompok aktivasi 24 jam adalah 8,23 pg/ml, 7,99 pg/ml dan 6,08 pg/ml
.
Gambar 1. Grafik rerata kadar FGF cairan sulkus gingiva kelompok PRP-kolagen aktivasi 1 jam dan 24 jam (pg/ml)
Uji repeated  measure ANOVA  dilakukan untuk  mengetahui  apakah  ada  perbedaan  kadar FGF  cairan  sulkus  gingiva    antara  kelompok perlakuan yang diberi aplikasi PRP setelah aktivasi
menggunakan  kolagen  selama  1  jam  dan  24  jam pada setiap waktu pengamatan (hari ke-0, hari ke- 5 dan hari ke-7) serta pada kelompok perlakuan
.
Tabel 2. Hasil uji repeated measure ANOVA kadar FGF cairan sulkus gingiva setelah aplikasi PRP- kolagen Kelompok Signifikansi Keterangan Waktu 0,544 p>0,05 Waktu*Perlakuan 0,307 p>0,05
Tabel 2 menunjukkan berdasar variasi waktu pengamatan tidak terdapat perbedaan kadar FGF cairan sulkus  gingiva  yang  bermakna  dengan  nilai  signifikansi  0,544  (p  >  0,05).  Tabel  2  juga  menunjukkan  tidak terdapat  perbedaan  bermakna  kadar  FGF  cairan  sulkus  gingiva  pada  interaksi  waktu  dengan  kelompok perlakuan dengan nilai signifikansi 0,307 (p > 0,05) yang berarti tidak terdapat perbedaan bermakna kadar FGF pada cairan sulkus gingiva baik setelah aplikasi PRP-kolagen yang diaktivasi 1 jam ataupun PRP-kolagen yang diaktivasi 24 jam pada setiap waktu pengamatan (hari ke-0, hari ke-5 dan hari ke-7).:

## DISKUSI
Tabel  1  menunjukkan  hasil  penelitian mengenai  pengaruh  waktu  aktivasi  PRP  dengan kolagen terhadap kadar FGF cairan sulkus gingiva pada  terapi  resesi  gingiva  menunjukkan  ada perbedaan  angka  kadar  FGF  antara  kedua kelompok.  Gambar 1 menunjukkan pada kelompok PRP  yang  diaktivasi  kolagen  selama  1  jam mengalami  peningkatan  kadar  FGF  meskipun secara  statistik  tidak  terdapat  perbedaan  yang signifikan,  sebaliknya  grafik  kadar  FGF  pada kelompok PRP yang diaktivasi kolagen selama 24
jam cenderung menurun dan secara statitistik tidak ada  perbedaan  yang  signifikan  dari  setiap  waktu pengamatan.
Tabel  2  menunjukkan  hasil  statistik  pada penelitian bahwa hipotesis awal ditolak, yaitu PRP dengan kolagen selama 24 jam tidak meningkatkan kadar  FGF  CSG  dibanding  aktivasi  selama  1  jam pada terapi resesi gingiva. Hipotesis ditolak karena hasil analisis data secara statistik pada tiap waktu pengamatan dan antar kelompok menunjukkan nilai signifikansi p > 0,05.
hari ke-0 hari ke-5 hari ke-7 PRP-kolagen 1 jam 6,96 7,07 7,35 PRP kolagen 24 jam 8,23
7,99 6,08 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Kada r FG F -2 C SG (pg /m l)
Tabel 1 menunjukkan angka kadar FGF CSG hari  ke-5  pada  kelompok  dengan  aktivasi  24  jam lebih  tinggi  dibanding  kelompok  dengan  aktivasi  1 jam, hal tersebut menunjukkan jumlah platelet yang menempel  pada  kolagen  dengan  lama  aktivasi  24 jam  lebih  banyak.  Konsentrasi  platelet  yang  tinggi menghasilkan pelepasan GF yang lebih tinggi dan kemampuan  potensial  PRP  dalam  suatu  terapi bergantung  pada  kadar growth  factors yang dilepaskan  oleh  platelet  dan  terdapat  korelasi antara jumlah platelet dengan kadar growth factors . Semakin  tinggi  jumlah  platelet  maka  konsentrasi FGF  yang  dilepaskan  akan  semakin  tinggi  dan sebaliknya  semakin  rendah  jumlah  platelet  maka konsentrasi  FGF  yang  dilepaskan  akan  semakin sedikit 10,11 .
Angka  kadar  FGF  CSG  pada  tabel  2 menunjukkan bahwa hari ke-7 kelompok aktivasi 24 jam  lebih  rendah  dibanding  kelompok  aktivasi  1 jam, adanya perbedaan rerata tersebut menunjukkan bahwa pelepasan FGF pada kelompok dengan lama aktivasi 1 jam terjadi lebih bertahap dan berlangsung dalam waktu yang lebih lama,  sedangkan  pada  kelompok  dengan  lama aktivasi 24 jam terjadi pelepasan yang tinggi di awal dan selanjutnya menurun.
Gambar  1  menunjukkan  adanya  perbedaan pelepasan FGF dalam cairan sulkus gingiva. Tabel 1  menunjukkan  angka  kadar  FGF  pada  kelompok aktivasi  24  jam  turun,  hal  tersebut  dapat disebabkan  fibroblas  yang  berproliferasi  pada  hari ke-7  lebih  sedikit  dibanding  dengan  hari  ke-5 sehingga jumlah kadar FGF yang dilepaskan lebih rendah. Proliferasi yang lebih tinggi pada hari ke-5 dapat  terjadi  karena  adanya  pelepasan  FGF  yang tinggi  pada  awal  aplikasi,  sehingga  terjadi  proses penyembuhan luka yang lebih cepat. Angka kadar FGF  yang  terus  turun  pada  kelompok  aktivasi  24 jam juga dapat disebabkan adanya sebagian besar growth  factors  yang  sudah  dilepaskan  pada  saat
awal  proses  angiogenesis.  Ozdemir  dkk.  (2015) mengungkapkan  pada  awal  proses  angiogenesis, sel-sel  endotel  akan  melepaskan  FGF  yang kemudian menstimulasi terjadinya neovaskularisasi.  Nath  dan  Ravendran  (2014) menyatakan bahwa FGF berperan dalam meningkatkan angiogenesis.
Perbedaan  perubahan  angka  kadar  FGF yang  ditunjukkan  pada  tabel  1  juga  dapat disebabkan karena growth factors yang dilepaskan pada  kelompok  1  jam  lebih  rendah,  sehingga proses proliferasi fibroblas berlangsung lebih lama. Hal tersebut ditunjukkan dengan angka kadar FGF yang masih terus naik hingga hari ke-7. Proliferasi fibroblas  normalnya  akan  mencapai  puncak proliferasi  pada  hari  ke-7.  Angka  kadar  FGF  yang terus naik juga dapat disebabkan masih banyak sel- sel  endotel  yang  melepaskan  FGF  pada  proses angiogenesis 14 .
Perubahan kadar FGF pada kedua kelompok menunjukkan  adanya  proses  penyembuhan  pada daerah yang dilakukan tindakan bedah, yaitu tahap proliferasi  yang  masih  terjadi  dalam  7  hari. Peningkatan faktor pertumbuhan yang menstimulasi  pertumbuhan  dan  pembelahan  sel terjadi saat proses penyembuhan luka 17 . Fibroblast growth  factor merupakan  salah  satu  faktor pertumbuhan yang dilepaskan oleh PRP dan pada tahap  penyembuhan  luka  berperan  saat  fase proliferasi  dan  remodeling 7,18 . Fibroblast  growth factor pada tahap penyembuhan luka berperan saat fase  proliferasi  dan  remodeling,  pada  saat proliferasi  FGF  berfungsi  menstimulasi  proliferasi fibroblas  dan  sintesis  ekstraselular  matriks,  serta meningkatkan kemotaksis, proliferasi dan diferensiasi sel endotel 12,18 .
Perubahan kadar FGF cairan sulkus gingiva pada  kedua  kelompok  tidak  menunjukkan  adanya perbedaan  yang  signifikan,  hal  tersebut  dapat disebabkan karena tingkat kerusakan jaringan yang
ditimbulkan  setelah  tindakan  bedah  tidak  jauh berbeda.  Tingkat  kerusakan  jaringan  yang  tidak berbeda  pada  tiap  kelompok  menyebabkan perubahan  yang  tidak  signifikan  pada  kadar  FGF CSG 17 .  Tidak  terdapat  perbedaan  yang  signifikan juga dapat disebabkan karena growth factors yang dilepaskan  mempunyai  konsentrasi  yang  tidak berbeda  pada  kedua  kelompok,  sehingga  tidak menimbulkan  perubahan  angka  kadar  FGF  yang signifikan.
Penelitian mengenai aktivasi PRP menggunakan  kolagen  masih  belum  banyak dilakukan baik secara in vitro maupun in vivo, oleh karena itu penting dilakukan penelitian  lebih lanjut untuk  mengenai  pelepasan  growth  factors  oleh platelet  setelah  aktivasi.  Gambar  2  menunjukkan grafik  naik  pada  kelompok  1  jam  dan  grafik  turun pada  kelompok  24  jam,  tetapi  belum  diketahui kapan  kadar  FGF  mengalami  titik  puncak,  oleh karena  itu  perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut untuk  mengetahui  pengaruh  lama  aktivasi  PRP dengan  kolagen  terhadap growth  factors yang berperan  pada  fase  proliferasi  sehingga  dapat diketahui lama aktivasi yang optimum untuk terapi regenerasi  jaringan  periodontal  khususnya  terapi resesi gingiva.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  mengenai pengaruh  waktu  aktivasi platelet  rich  plasma dengan kolagen terhadap kadar  FGF cairan sulkus gingiva  dapat  disimpulkan  bahwa  tidak  terdapat pengaruh  waktu  aktivasi  platelet  rich  plasma dengan kolagen terhadap kadar FGF cairan sulkus gingiva.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terima  kasih  kepada  seluruh  pihak  yang telah membantu dalam pelaksanaan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Lafzi, A., Nader, A., Amir, E., Assessment of the Etiologic Factors of Gingival Recession in a  Group  of  Patients  in  Northwest  Iran. Journal  of  Dental  Research,  Dental  Clinics, Dental Prospects , 2009, 3 (3): 90.
2. Avinash, K., Selvan, T., Coronally Advanced Flap  In  The  Treatment  Of  Recession Coverage, Int  J  Dent  Case  Reports ,  2014, 4(1): 1-10.
3. Naik,  AR.,  Ramesh,  AV.,  Dwarkanath,  CD., Use  of  Autologous  Platelet  Rich  Plasma  to Treat Gingival Recession in esthetic Periodontal Surgery, J Indian Soc Periodontol, 2013, 17(3): 345-53.
4. Wolf,  HF.,  Rateitschak,  KH.,  Hassell,  TM.,
Color Atlas of Dental Medicine
Periodontology, 3 rd revised  and  expanded edition, 2005, Thieme, New York.
5. Petrungaro, PS., Using Platelet Rich Plasma to  Accelerate  Soft  Tissue  Maturation  in Esthetic  Periodontal  Surgery, Compendium , 2001, 22(9): 1-8.
6. Albanese,  A.,  Licata,  ME.,  Polizzi,  B., Campisi,  G.,  Platelet-rich  plasma  (PRP)  in dental  and  oral  surgery:  from  the  wound healing to bone regeneration, Albanese et al. Immunity & Ageing , 2013, 10: 23.
7. Park,  Hong-Bun,  Yang,  Jeong-Hee,  Chung, Kwang-Hoe, Characterization of the Cytokine Profile  of  Platelet  Rich  Plasma  (PRP)  and
PRP-inducted Cell Proliferation and Migrations: Upregulation of Matrix
Metalloproteinase-1 amd -9 in HaCaT Cells, The Korean Journal of Hematology , 2011, 46 (4): 265-72.
8. Rodrigues,  SV.,  Acharya,  AB.,  Thakur,  SL., Platelet-Rich  Plasma  A  Review, The  New
York  State  Dental  Journal ,  2012,  2012:  26- 30.
9. Fufa, D., Shealy, B., Jacobson, M., Kevy, S., Murray,  MM.,  Activation  of  Platelet-Rich Plasma  Using  Soluble  Type  I  Collagen, J Oral Maxillofac Surg, 2008, 66(4): 684-90.
10. Harrison, S., Vavken, P., Kevy, S., Jacobson, M.,  Zurakowski,  D.,  Murray,  MM.,  Platelet Activation  by  Collagen  Provides  Sustained Release of Anabolic Cytokines, Am J Sports Med, 2011, 39(4): 729-34.
11. Cho,  HS.,  Song,  IH.,  Park,  SY.,  Sung, MC., Ahn, MW., Song, KE., Individual Variation in Growth  Factor  Concentrations  in  Platelet Rich  Plasma  and  Its  Influence  on  Human Mesenchymal  Stem  Cells, Korean  J  Lab Med , 2011, 31: 212-18.
12. Sood,  S.,  Gupta,  S.,  Mahendra,  A.,  Gene Therapy With Growth Factors for Periodontal Tissue  Engineering –  A  Review, Med  Oral Patol Oral Cir Bucal , 2012, 17(2): e301-310.
13. Nath,  SG.,  Raveendran,  R.,  An  Insight  Into The Possibilites of Fibroblast Growth Factor in  Periodontal  Regeneration, Journal  of Indian  Society  of  Periodontology ,  2014, 18(3): 289-92.
14. Tanimoto,  K.,  Ohkuma,  S.,  Tanne,  Y., Kunimatsu,  R.,  Hirose,  N.,  Mitsuyoshi,  T., Yoshimi,  Y.,  Su,  S.,  Tanne,  K.,  ,  Effects  of bFGF  on  the  Modulation  of  Apoptosis  in Gingival Fibroblasts with Different Host Ages, International  Journal  Dentistry ,  2013,  2013: 1-7.
15. Kaval, B., Renaud, DE., Scott, DA., Buduneli, N.,  The  Role  of  Smoking  and  Gingival Crevicular  Fluid  Markers  on  Coronally
Advanced  Flap  Outcomes, J  Periodontol , 2014, 85(3): 395-405.
16. Ozdemir.,  B.,  Ozmeric,  N.,  Elgun,  S.  dan Baris,  E.,  Smoking  and  gingivitis:  focus  on inducible  nitric  oxide  synthase,  nitric  oxide and  basic  fibroblast  growth  factor, J Periodont Res, 2015 .
17. Vermolen,  FJ.,  Van  Baaren,  E.  dan  Adam, JA.,  A  Simplified  Model  for  Growth  Factor Induced  Healing  of  Wounds, Mathematical and Computer Modelling , 2006, 44: 887-98. 18. Kaigler,  D.,  Cirelli,  JA.,  Giannobile,  WV., Growth factor delivery for oral and periodontal  tissue  engineering. Expert  Opin Drug Deliv , 2006, 3: 647-62.