ISSN: 1410-8917
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 19 (1) (2016): 32 – 37
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa
Isolasi, Identifikasi Senyawa Steroid dari Daun Getih-Getihan ( Rivina humilis L. ) dan Uji Aktivitas sebagai Antibakteri
Wihda Wihdatul Hidayah a , Dewi Kusrini a* , Enny Fachriyah a
a Organic Chemistry Laboratory, Chemistry Department, Faculty of Sciences and Mathematics, Diponegoro University, Jalan Prof. Soedarto, Tembalang, Semarang
* Corresponding author: dewi.kusrini@live.undip.ac.id
A r t i c l e   I n f o A b s t r a c t
Keywords: getih-getihan, n- hexane extract, steroid, antibacterial
Isolation  and  identification  of  steroid  compounds  from  the  leaves  of  getih-getihan (Rivina humilis L.) and its antibacterial activity test have been performed. The isolation was  carried  out  by  maceration  of  2,708  kg  of  dried  powder  from  Getih-getihan  leaves using ethanol solvent, then partitioned with n-hexane solvent which yielded 2.4 gram of n-hexane extract. Phytochemical tests using Liebermann-Burchard reagents showed that n-hexane extracts were positive containing steroids. Separation of n-hexane extracts by column chromatography yielded 5 large fractions (A, B, C, D, E) and a steroid-positive B fraction resulting in isolates of 0.3 mg. The steroid isolates were tested for purity by TLC method with various solvents. From two-dimensional TLC, one stain was obtained and the isolates were suspected to have been pure. The steroid isolates were analyzed using GC-MS, however the structure could not be determined yet. The antibacterial activity test of  n-hexane  extract  on Escherichia  coli and Staphylococcus  aureus bacteria  showed inhibition of bacterial growth at 1000 ppm concentration.

## A b s t r a k
Kata Kunci: getih-getihan, ekstrak n-heksana, steroid, antibakteri Isolasi dan identifikasi senyawa steroid dari daun getih-getihan (Rivina humilis L.) dan uji  aktivitasnya sebagai antibakteri  telah  dilakukan. Isolasi dilakukan dengan  maserasi dari  2,708  kg  serbuk  kering  dari  daun  getih-getihan  menggunakan  pelarut  etanol, kemudian  dipartisi  dengan  pelarut  n-heksana  yang  menghasilkan  ekstrak  n-heksana sebanyak  2,4  gram.  Uji  fitokimia  menggunakan  pereaksi  Liebermann-Burchard menunjukkan bahwa ekstrak n-heksana positif mengandung steroid. Pemisahan ekstrak n-heksana dengan kromatografi kolom menghasilkan 5 fraksi besar (A, B, C, D, E) dan fraksi  B  yang  positif  steroid  menghasilkan  isolat  sebanyak  0,3  mg.  Isolat  steroid  diuji kemurnian  dengan  metode  KLT  dengan  berbagai  pelarut.  Dari  KLT  dua  dimensi, didapatkan  satu  noda  dan  diduga  isolat  telah  murni.  Isolat  steroid  dianalisis menggunakan  spektroskopi  GC-MS,  namum  belum  dapat  ditentukan  strukturnya.  Uji aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  n-heksana  terhadap  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus menunjukkan  penghambatan  pertumbuhan  bakteri  pada konsentrasi 1000 ppm.

## 1. Pendahuluan
Seiring  perkembangan  jaman  dan  adanya  slogan back to nature membuat masyarakat Indonesia cenderung meman-faatkan tumbuhan obat sebagai obat tradisional. Salah  satu  tumbuhan yang  berpotensi  menjadi  obat tradisional adalah getih-getihan ( Rivina humilis L. ) yang
merupakan  tumbuhan  berfamili phytolaccaceae yang biasa dikenal dengan sebutan pigeon berry [1]. Tumbuhan ini  biasanya  tumbuh  liar  dan  belum  banyak dimanfaatkan di Indonesia. Menurut Fathima dan Tilton [2] daun  getih-getihan  yang  berasal  dari  India mengandung  flavonoid,  alkaloid,  quinon,  terpenoid,
steroid,  saponin,  dan  tanin  serta  pada  ekstrak metanolnya  mempunyai  aktivitas  antioksidan  dan aktivitas antibakteri [3]. Buahnya yang berwarna merah dapat digunakan sebagai sumber pigmen betalain  yang memiliki  aktivitas  antiinflamasi,  anti-karsinogenik, anti-malaria, pelindung saraf [1].
Berdasarkan  kemotaksonominya,  tumbuhan  yang satu  famili  ( phytolaccaceae) dengan  getih-getihan  yaitu Singawalang (Petiveria  alliaceae) dan Hilleria  latifolia . Singawalang (Petiveria  alliaceae) memiliki  kandungan metabolit sekunder yaitu saponin glikosida, isoarborinol-triterpen,  isoarborinol-asetat,  steroid, alkaloid,  isoarborinolsinnamat,  flavonoid,  dan  tanin serta  mempunyai  aktivitas  antibakteri,  bioinsektisida, antikanker,  dan  antiinflamasi  [4].  Sedangkan Hilleria latifolia mengandung tanin, glikosida, saponin, alkaloid, flavonoid,  steroid  dan  terpenoid  dan  mempunyai aktivitas antinoseptif dan antiinflamasi.
Steroid  merupakan  salah  satu  golongan  senyawa metabolit  sekunder.  Golongan  senyawa  tersebut diketahui  mempunyai  aktivitas  bioinsektisida  [5], antibakteri [6, 7], antifungi [8], dan antidiabetes. Belum adanya  penelitian  terkait  jenis  senyawa  steroid  yang terdapat pada daun getih-getihan, maka perlu dilakukan isolasi,  identifikasi  senyawa  steroid  dari  daun  getih- getihan (Rivina  humilis  L.) dan  uji  aktivitas  sebagai antibakteri.

## 2. Metode Penelitian

## Alat dan Bahan
Blender,  neraca  analitik,  gelas  ukur,  gelas  beker, pipet  tetes,  erlenmeyer,  botol  vial,  pengaduk, rotary evaporator ,  kertas  saring,  corong  gelas,  corong  pisah, cawan  penguapan, chamber KLT,  pipa  kapiler, kromatografi kolom, cawan petri, inkubator, jarum ose, autoklaf,  lampu  UV  254  nm  dan  365  nm,  spektroskopi GC-MS  TQ  8030.  Daun  getih-getihan,  etanol  96%, aquades,  n-heksana,  kloroform,  etil  asetat,  pereaksi Liebermann-Burchard,  kloroform  p.a.,  n-heksana  p.a., etanol p.a., benzena p.a., metanol p.a., plat silika gel 60 GF 254 ,  silika  gel  60  G,  bakteri Staphylococcus  aureus, Escherichia coli , tetrasiklin, DMSO, nutrient broth , nutrient agar .

## Preparasi Sampel
Sampel  daun  getih-getihan  basah  sebanyak  22  kg dicuci,  dikeringkan  dengan  cara  diangin-anginkan, kemudian  dihaluskan  menggunakan  blender  sehingga diperoleh serbuk simplisia.

## Isolasi Senyawa Steroid
Sebanyak  2,708  kg  serbuk  daun  getih-getihan dimaserasi selama 24 jam menggunakan pelarut etanol 10  L  dengan  pergantian  pelarut  setiap  24  jam  sekali. Ekstrak  yang  diperoleh  kemudian  dipekatkan  dengan rotary  evaporator ,  sehingga  diperoleh  ekstrak  pekat etanol.  Kemudian  ekstrak  pekat  etanol  dihilangkan klorofil  dengan  penambahan  aquades  (1:1)  ke  dalam ekstrak  pekat  etanol  didiamkan  selama  24  jam  dan dilakukan  penyaringan.  Ekstrak  etanol-aquades  hasil
penyaringan dipartisi menggunakan pelarut n-heksana, kemudian  ekstrak  n-heksana  dipekatkan  dengan rotary evaporator hingga diperoleh ekstrak n-heksana sebanyak 2,4 gram. Selanjutnya dilakukan uji steroid menggunakan pereaksi Liebermann-Burchard.

## Penapisan Fitokimia Berdasarkan Harborne [9]

## Uji Saponin
Sebanyak  2  mL  ekstrak  etanol  ditambahkan  2  mL aquades,  kemudian  dikocok  kuat  secara  vertikal  dan ditambahkan  HCl.  Adanya  saponin  ditunjukkan  dengan timbulnya  busa  yang  tetap stabil  dalam  larutan  setelah penambahan HCl.

## Uji Flavonoid
Sebanyak 2 mL ekstrak etanol ditambahkan serbuk Mg,  1  mL  HCl  2M  dan  2  mL  amilalkohol,  dilakukan pengocokkan. Adanya perubahan warna larutan menjadi kuning menunjukkan adanya flavonoid.

## Uji Alkaloid
Sebanyak  2  mL  ekstrak  etanol  ditambahkan ammonia  25%  dan  ditambahkan  kloroform.  Kemudian diekstraksi  dengan  HCl  10%.  Selanjutnya  ditambahkan pereaksi dragendroff. Adanya endapan merah menunjukkan adanya alkaloid.

## Uji Tritepenoid
Sebanyak 2 mL ekstrak etanol ditambahkan 2 mL n- heksana,  dikocok.  Lapisan  n-heksana  ditambahkan pereaksi  Liebermann-Burchard.  Adanya  perubahan warna menjadi merah menunjukkan adanya triterpenoid.

## Uji Steroid
Sebanyak 2 mL ekstrak etanol ditambahkan 2 mL n- heksana,  dikocok.  Lapisan  n-heksana  ditambahkan pereaksi  Liebermann-Burchard.  Adanya  perubahan warna  menjadi  biru  kehijauan  menunjukkan  adanya steroid.

## Uji Tanin
Sebanyak  2  mL  ekstrak  etanol  ditambahkan  2  mL FeCl 3 1%,  kemudian  dilakukan  pengocokkan.  Adanya perubahan  warna  larutan  menjadi  coklat  kehitaman menunjukkan adanya tanin.

## Pemisahan Senyawa Steroid

## Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Ekstrak  n-heksana  dilakukan  kromatografi  lapis tipis untuk mengetahu jumlah komponen senyawa dalam ekstrak  dan  menentukan  eluen  yang  cocok  untuk kromatografi  kolom.  Eluen  yang  digunakan  yaitu  n- heksana,  kloroform,  dan  campuran  eluen  n-heksana: kloroform (2:7), n-heksana: kloroform (3:7), n-heksana: kloroform (2:8).

## Kromatografi Kolom
Ekstrak kental n-heksana dipisahkan menggunakan kromatografi  kolom.  Silika  gel  60G  digunakan  sebagai fasa  diam  dan  eluen  n-heksana,  kloroform,  etil  asetat yang dialirkan secara gradien berdasarkan peningkatan
kepolaran dan ditampung dalam vial tiap 15 mL. Fraksi- fraksi  hasil  kolom  selanjutnya  di  KLT  untuk mengelompokkan  senyawa  menjadi  fraksi-fraksi  besar (A, B, C, D, E). Fraksi (A, B, C, D, E) selanjutnya dilakukan pengujian steroid menggunakan KLT dengan penampak bercak Liebermann-Burchard untuk menunjukkan fraksi positif steroid.

## KLT Preparatif
Fraksi  positif  steroid  dipisahkan  menggunakan metode  KLT  preparatif  dengan  fasa  diam  silika  gel  dan eluen  n-heksana:  kloroform  (8:  2)  dengan  ketebalan silika gel 2 mm dan panjang lapisan 20 cm serta lebar 20 cm, sehingga diperoleh isolat steroid.

## Uji Kemurnian
Isolat  steroid  hasil  KLT  preparatif  dilakukan  uji kemurnian untuk mengetahui kemurnian senyawa pada KLT yang ditunjukkan dengan adanya satu noda tunggal. Eluen  yang  digunakan  yaitu  n-heksana,  benzena, metanol,  n-heksana:  metanol  (1:1),  n-heksana: kloroform  (8:2),  n-heksana:benzena  (1:1)  dan  KLT  dua dimensi dengan eluen n-heksana: kloroform (8:2) dan n- heksana.

## Identifikasi Steroid
Isolat steroid
selanjutnya diidentifikasi menggunakan spektroskopi GC-MS.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Pengujian  aktivitas  antibakteri  dilakukan  dengan metode  difusi  cakram  terhadap  bakteri  gram  positif (Staphylococcus  aureus) dan  bakteri  gram  negatif ( Escherichia  coli) .  Ekstrak  n-heksana  diuji  berbagai konsentrasi (b/v) 62,5 ppm, 125 ppm, 250 ppm, 500 ppm, dan 1000  ppm.  Untuk mengetahui  efektvitas bakteri  uji digunakan pembanding antibiotik yaitu  tetrasiklin [10]. Isolat bakteri uji yang telah dikultur dalam nutrient broth diinokulasikan  pada  permukaan nutrient  agar sebanyak 20µL  menggunakan spreader .  Ekstrak  n-heksana berbagai  variasi  diteteskan  pada  kertas  cakram, selanjutnya  kertas  cakram yang  telah  mengandung ekstrak  diletakkan  pada  permukaan  media  inokulasi menggunakan  pinset.  Kemudian  diinkubasi  selama  24 jam pada suhu 37°C. Selanjutnya dilakukan pengukuran diameter  zona  hambat  yang  terbentuk  diukur  dengan jangka sorong.

## 3. Hasil Dan Pembahasan
Penelitian  yang  berjudul  isolasi,  identifikasi senyawa steroid dari daun getih-getihan ( Rivina humilis L. )  dan  uji  aktivitas  sebagai  antibakteri  dilakukan  di Laboratorium Kimia Organik dan Laboratorium Terpadu Universitas Diponegoro Semarang.

## Preparasi Sampel
Daun  getih-getihan  yang  sudah  bersih  dilakukan pengeringan  untuk  dijadikan  simplisia  dengan  cara diangin-anginkan  bertujuan  untuk  menghilangkan kadar  air  dan  mencegah  terjadinya  perusakan  senyawa yang  terkandung  dalam  sampel.  Kemudian  dijadikan
serbuk  menggunakan  blender  bertujuan  untuk memperluas permukaan sampel, sehingga pelarut lebih mudah  masuk  ke  dalam  jaringan  daun  dalam mengekstrak  senyawa  yang  terdapat  di  dalamnya  dan menghasilkan  simplisia  sebanyak  2,708  kg  (rendemen 12,31%).

## Isolasi Senyawa Steroid
Isolasi  steroid  dilakukan  dengan  metode  maserasi menggunakan  pelarut  etanol  menghasilkan  ekstrak etanol  berwarna  hijau  tua.  Etanol  merupakan  pelarut universal  yang  berfungsi  untuk  mengambil  semua senyawa  organik  yang  terkandung  dalam  sampel  daun getih-getihan  karena  pelarut  etanol  dapat  masuk  ke dalam  jaringan  tumbuhan,  sehingga  banyak  senyawa yang  terekstrak  di  dalamnya.  Filtrat  yang  diperoleh dipekatkan dengan rotary evaporator , sehingga menghasilkan ekstrak pekat etanol sebanyak 40,25 g.
Ekstrak pekat etanol daun getih-getihan dilakukan penapisan  fitokimia  untuk  mengetahui  kandungan kimianya.  Hasil  pengujian  menunjukkan  daun  getih- getihan  mengandung  senyawa  fenolik,  flavonoid, saponin, alkaloid, triterpenoid, steroid, dan tanin dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1: Hasil penapisan fitokimia daun getih-getihan
Golongan Ekstrak etanol Fenolik + Flavonoid +
Saponin +
Alkaloid +
Triterpenoid +
Steroid + Tanin +
Selanjutnya  ekstrak  pekat  etanol  dihilangkan klorofilnya  dengan  penambahan  aquades  (1:1).  Hal  ini bertujuan  untuk  memudahkan  isolasi  senyawa  steroid yang terkandung di dalamnya karena klorofil merupakan senyawa  pengotor.  Filtrat  etanol-aquades  selanjutnya dipartisi  dengan  pelarut  n-heksana  untuk  mengambil senyawa non polar, seperti steroid dan triterpenoid.
Ekstrak pekat n-heksana yang diperoleh dilakukan identifikasi dengan pereaksi Liebermann-Burchard (LB) yang  menghasilkan  warna  biru  kehijauan  yang menunjukkan adanya senyawa steroid.
Untuk mengetahui jumlah komponen senyawa yang terdapat  dalam  fraksi  n-heksana  dilakukan  metode kromatografi lapis tipis (KLT). Fasa diam yang digunakan adalah silika gel 60F 254 dan eluen n-heksana: kloroform (2:8) diperoleh 7 noda pada gambar 1.
Gambar 1. Hasil KLT fraksi n-heksana:kloroform (2:8) dengan pereaksi Liebermann-Burchard dilihat di bawah lampu UV 365 nm

## Pemisahan Senyawa Steroid
Pemisahan  senyawa  dengan  kromatografi  kolom menghasilkan  189  vial.  Selanjutnya  dilakukan  KLT fraksi-fraksi  hasil  kolom  untuk  mengelompokkan  pola noda  yang  sama.  Dari  vial-vial  hasil  kolom  diperoleh  5 fraksi  besar  (A,  B,  C,  D,  E).  Hasil  KLT  penggabungan fraksi-fraksi hasil kolom dapat dilihat pada gambar 2.
Gambar 2. Hasil penggabungan fraksi-fraksi hasil kolom dengan eluen etanol: aseton (2:1) dilihat di bawah lampu UV 365 nm
Nilai  Rf  hasil  penggabungan  fraksi-fraksi  hasil kolom dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel 2: Data penggabungan fraksi-fraksi hasil kromatografi kolom Fraksi Vial Rf A 21-60 0,87 B 61-115 0,83 C 116-135 0,77 D 136-164 0,67 E 165-189 0,81
Dari  masing-masing  fraksi  A,  B,  C,  D,  E  yang diperoleh  selanjutnya  dianalisis  kembali  menggunakan KLT  untuk  mengetahui  adanya  senyawa  steroid.  Fraksi yang  mengandung  steroid  ditunjukkan  dengan  noda berwarna  biru  kehijauan  setelah  disemprot  pereaksi Liebermann-Burchard (LB). Hasil KLT fraksi A, B, C, D, E, dengan LB ditunjukkan pada gambar 3.
Gambar 3. Hasil KLT fraksi A, B, C, D, E pada uji steroid dengan pereaksi Liebermann- Burchard dilihat di bawah lampu UV 365 nm
Dari hasil KLT gambar 3, fraksi B terlihat ada noda yang berwarna biru kehijauan setelah disemprot dengan pereaksi  Liebermann-Burchard  yang  menunjukkan fraksi B positif steroid.
Selanjutnya  fraksi  B  dilakukan  kromatografi preparatif untuk memisahkan isolat steroid menggunakan  eluen  terbaik  campuran  n-heksana: kloroform  (8:2)  menggunakan  fasa  diam  silika  gel dengan ketebalan silika gel 2 mm dan panjang lapisan 20 cm serta lebar 20 cm. Hasil KLT preparatif fraksi B dapat dilihat pada gambar 4.
Gambar 4. Hasil KLT preparatif fraksi B dilihat di bawah lampu UV 365 nm
Hasil KLT preparatif menunjukkan adanya 4 pita (B1, B2, B3, B4). Pita B4 dengan Rf 0,8 berwarna biru terang mengindikasikan  adanya  senyawa  steroid.  Kemudian pita  B4  dikerok  dan  dilarutkan  dalam  n-heksana  pro analis  untuk  mendapatkan  isolat  steroid  setelah dipisahkan  dengan  silika  gel  dan  diuapkan,  diperoleh isolat  steroid  sebanyak  0,3  mg.  Selanjutnya  untuk mengetahui kemurnian isolat yang diperoleh dilakukan uji  kemurnian  dengan  metode  KLT  berbagai  eluen  dan KLT dua dimensi.
Isolat  steroid  dilakukan  uji  kemurnian  dengan metode KLT berbagai eluen dan KLT dua dimensi. Eluen yang digunakan yaitu n-heksana, benzena, metanol, n- heksana: metanol (1:1), n-heksana: kloroform (8:2), n-
heksana: benzena (1:1). KLT dua dimensi dielusi dengan eluen pertama n-heksana: kloroform (8:2) dan kedua n- heksana  untuk  mengetahui  apakah  steroid  dari  hasil kromatografi  preparatif  sudah  murni.  Uji  kemurnian didapatkan  satu  noda  yang  diduga  isolat  telah  murni, ditunjukkan pada gambar 5.
Gambar 5. Hasil KLT pada uji kemurnian pita B4 hasil kromatografi preparatif dengan eluen: (a) n-heksana, (b) benzena, (c) metanol, (d) n-heksana:metanol (1:1), (e) n-heksana:kloroform (8:2), (f) n-heksana:benzena (1:1) pada lampu UV 365 nm
Uji  kemurnian  dilakukan  kembali  dengan  KLT  dua dimensi  menggunakan  eluen  yang  berbeda  pada  elusi pertama  dan  kedua.  Elusi  pertama  dilakukan menggunakan  eluen  n-heksana:  kloroform  (8:2)  dan setelah diputar 90o elusi kedua menggunakan eluen n- heksana.  Hasil  KLT  dua  dimensi  ditunjukkan  pada gambar 6.
Gambar 6. Hasil uji kemurnian KLT dua dimensi dengan eluen (1) n-heksana:kloroform (8:2) dan (2) n-heksana pada lampu UV 365 nm
Hasil uji kemurnian KLT dua dimensi menghasilkan satu  noda  pada  setiap  elusinya.  Hal  ini  menunjukkan bahwa isolat diduga telah murni. Isolat yang dihasilkan berbentuk kristal kecil-kecil berwarna putih sebesar 0,3 mg.
Selanjutnya  isolat  diidentifikasi  menggunakan spektroskopi  GC-MS  untuk  mengetahui  tingkat kemurnian senyawa dan waktu retensi serta mengetahui berat molekul dan pola fragmentasi dari isolat.

## Identifikasi Steroid dengan GC-MS
Isolat steroid diidentifikasi dengan GC-MS TQ8030 Shimadzu.  Alat  GC-MS  menggunakan  kolom  jenis  Rtx-
5MS  dengan  panjang  30  meter  dan  diameter  internal 0,25mm.  Gas  pembawa  yang  digunakan  adalah  helium. Kondisi  alat  GC-MS  yang  digunakan  yaitu  temperatur injektor  200°C,  tekanan  86,2  kPa,  aliran  total  929,3 mL/menit, temperatur kolom terprogram 100oC selama 5  menit  kemudian  dinaikkan  temperaturnya  sebesar 5oC/menit. Hasil analisis GC isolat steroid dapat dilihat pada gambar 7.
Gambar 7. Kromatogram isolat steroid daun getih- getihan
Berdasarkan  hasil  kromatogram  pada  gambar  7 diperoleh 50 puncak senyawa yang menunjukkan bahwa isolat  steroid  belum  murni  dan  tidak  menunjukkan adanya senyawa steroid, sehingga belum mewakili isolat senyawa hasil isolasi. Kemungkinan hal tersebut terjadi karena  kondisi  operasional  alat  yang  belum  optimal sehingga  senyawa  steroid  belum  keluar  dan belum bisa diketahui jenis steroidnya.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji  antibakteri  dari  ekstrak  n-heksana  dilakukan terhadap  bakteri Escherichia  coli mewakili  gram  negatif dan Staphylococcus  aureus mewakili  gram  positif. Pengujian  dilakukan  menggunakan  metode  difusi cakram dengan  berbagai  variasi  konsentrasi  (b/v)  yaitu 62,5 ppm, 125 ppm, 250 ppm, 500 ppm, dan 1000 ppm.
Jumlah  koloni  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus diatur  menggunakan  standar  Mc Farland 0,5. Selanjutnya dilakukan pengujian ekstrak n- heksana terhadap kedua bakteri uji yang telah divariasi konsentrasinya  dan  diinkubasi  selama  24  jam. Selanjutnya dilakukan pengukuran diameter zona bening yang menghambat pertumbuhan bakteri. Hasil pengujian aktivitas antibakteri dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel 3. Hasil pengujian aktivitas antibakteri ekstrak
terhadap bakteri uji Konsentrasi ekstrak uji Diameter hambatan (mm) E.coli S. aureus 62,5 ppm - 1,05 125 ppm - 1,9 250 ppm - 6,15 500 ppm 1,5 6,3 1000 ppm 9,85 6,5 Tetrasiklin 100 ppm (kontrol positif) 26 26 DMSO (kontrol negatif) - -
Hasil  pengujian  antibakteri  pada  tabel  3  dapat diketahui  bahwa  ekstrak  n-heksana  memiliki  aktivitas antibakteri pada bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus .  Aktivitas  antibakteri  ekstrak  n- heksana  terhadap  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus menghambat pertumbuhan bakteri pada konsentrasi 1000 ppm.

## 4. Kesimpulan
Isolat steroid telah diisolasi dari daun getih-getihan berbentuk  kristal  kecil-kecil  berwarna  putih. Struktur isolat steroid dengan spektroskopi GC-MS belum dapat ditentukan. Ekstrak  n-heksana  daun  getih-getihan dapat menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus pada konsentrasi 1000 ppm.

## 5. Daftar Pustaka
[1]  Mohammad  Imtiyaj  Khan,  K.  M.  Denny  Joseph, Muralidhara,  H.  P.  Ramesh,  P.  Giridhar,  G.  A. Ravishankar, Acute, subacute and subchronic safety assessment of betalains rich Rivina humilis L. berry juice  in  rats, Food  and  Chemical  Toxicology ,  49,  12,
(2011)
3154-3157
http://dx.doi.org/10.1016/j.fct.2011.08.022
[2]  Mujeera  Fathima,  F  Tilton,  Phytochemical  analysis and  antioxidant  activity  of  leaf  extracts  of  Rivina humilis L, International Journal of Current Research , 4,
(2012) 326-330
[3]  Antonnacci  Salvat,  L  Antonnacci,  Renee  Hersilia Fortunato,  Enrique  Ysidro  Suárez,  HM  Godoy, Screening  of  some  plants  from Northern  Argentina for  their  antimicrobial  activity, Letters  in  applied microbiology , 32, 5, (2001) 293-297
http://dx.doi.org/10.1046/j.1472-765X.2001.00923.x
[4]  Roman  Kubec,  Seokwon  Kim,  Rabi  A.  Musah,  The lachrymatory  principle  of  Petiveria  alliacea, Phytochemistry , 63, 1, (2003) 37-40
http://dx.doi.org/10.1016/S0031-9422(02)00759-8
[5]  P Sugita, Latifah K Darusman, Tuti Setiawati, Steroid dari Ekstrak Hopea mengawan sebagai Bahan Baku Insektisida  Bologis, J.  Buletin  Kimia  (2000) ,  (2000) 37-41
[6]  S Lalitha, K Rajeshwaran, P Senthil Kumar, K Deepa, K  Gowthami,  In  vivo  screening  of  antibacterial activity  of  Acacia  mellifera  (BENTH)(Leguminosae) on  human  pathogenic  bacteria, Global  Journal  of
Pharmacology , 4, 3, (2010) 148-150
[7]  Fajar  Budi  Laksono,  Enny  Fachriyah,  Dewi  Kusrini, Isolasi  dan  Uji  Antibakteri  Senyawa  Terpenoid Ekstrak  N-Heksana  Rimpang  Lengkuas  Merah (Alpinia purpurata), Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi , 17, 2, (2014) 37-42
[8]  R Saraswathi, Upadhyay Lokesh, R Venkatakrishnan, R Meera, P Devi, Isolation and biological evaluation of  steroid  from  stem  of  Costus  igneus, Journal  of Chemical  and  Pharmaceutical  Research ,  2,  5,  (2010) 444-448
[9]  Jeffrey Barry Harborne, Metode fitokimia, Padmawinata  K,  S.  I,  Institut  Teknologi  Bandung, Bandung, 1987.
[10] K  Anam,  AG  Suganda,  EY  Sukandar,  L  Broto  S Kardono,  Antibacterial  effect  of  component  of
Terminalia  muelleri  Benth.  Against Staphylococcus aureus , International  Journal  of  Pharmacology ,  6,  4,
(2010) 407-412