Versi Online: Pro Food (Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan) http://www.profood.unram.ac.id/index.php/profood

## GULA DARAH  DAN BERAT BADAN  TIKUS PUTIH SPRAQUE DAWLEY  DIABETES MELITUS SETELAH  TERAPI FRAKSI ETIL ASETAT MINUMAN SCJM
[Blood Sugar Body Weight White Spraque Dawley Diabetes Melitus Rats After Treatment The Ethyl Asetat Fraction Scjm Drink]

## N. K. Wiradnyani
Program S1 Ilmu Gizi, Universitas Dhyana Pura Email: wiradnyani@undhirabali.ac.id

## Diterima 27 Juli 2019 / Disetujui 06 November 2019

## ABSTRACT
Sinom drinks mixed with lime and honey are made from rhizome of turmeric and young tamarind leaves which are added with lime juice and honey. The aim of the study was to determine the dose of ethyl acetate fraction of sinom drinks mixed with lime juice and honey (SCJM) which lowers fasting blood sugar and has an effect on body weight  of  spraque  dawley (SD)  white  rats  diabetes  mellitus.  Experimental research  using RAK, testing consisted of two phases. Fiirst phase was  antioxidant capacity test of various solvents of  SCJM yielding 29691.1  µg  AAEAC  /  g  ingredients  namely  the  highest  number  of  ethyl  acetate  fractions  of  n-  hexane, chloroform, and water. Second phase was in vivo  test of ethyl acetate fraction of SCJM  which can reduce the best GDP and weight to SD white rats with diabetes mellitus with various doses, namely: control (-) normal mice, 50, 100, 150, 200 mg/dl BW, control (+) of diabetic rats.  The data was statistically tested using ANOVA with further test BNT. The results of the study of the effect of the antioxidant compound SCJM  ethyl acetate fraction of  various  doses  significantly  affected  (p  <0.01)  in  decreasing  fasting  blood  sugar  (GDP)  white  SD  diabetes mellitus rats, a dose that can reduce the lowest GDP based on statistical tests is 150 mg/kg BW of rats, 168.4 mg/dl from other doses. Rats body weight had no significant (p <0.01) effect after treatment of the SCJM etyl acetate fraction.
Keywords: antioxidant capacity, blood sugar, ethylacetate _ fraction, sinom mix of lime and honey

## ABSTRAK
Minuman sinom  yang dicampur jeruk nipis dan madu terbuat dari rimpang kunyit dan daun asam muda yang ditambahkan air jeruk nipis dan madu. Tujuan penelitian adalah untuk menentukan dosis fraksi etil asetat minuman sinom  campuran  jeruk  nipis  dan  madu  (SCJM)  yang  menurunkan  gula  darah  puasa  (GDP)  dan menimbulkan  efek  terhadap  berat  badan  tikus  putih spraque  dawley  (SD)  diabetes  melitus.  Penelitian eksperimental  menggunakan  RAK  terdiri  dari  dua  tahap.  Tahap  pertama  adalah  uji  kapasitas  antioksidan berbagai pelarut (SCJM) menghasilkan 29691,1 µg AAEAC/g bahan yaitu angka tertinggi fraksi etil asetat dari n- heksana, khloroform dan air. Tahap ke-2 adalah uji in vivo fraksi etil asetat SCJM yang dapat menurunkan GDP terbaik dan berat badan tikus putih SD diabetes melitus dengan perlakuan berbagai dosis yaitu: kontrol (-) tikus normal 50, 100, 150, 200 mg/dl BB, kontrol (+) tikus diabetes. Data diuji statistik menggunakan Anova dengan uji  lanjut  BNT.  Hasil  penelitian  senyawa  antioksidan  SCJM  fraksi  etil  asetat  berbagai  dosis  berpengaruh  nyata (p<0,01)  pada  penurunan  GDP  tikus  putih  SD  diabetes  melitus,  dosis  terbaik  yang  dapat  menurunkan  GDP terendah berdasarkan uji statistik adalah 150 mg/kg BB tikus yiatu 168,4 mg/dl dari perlakuan dosis yang lain. Berat badan tikus tidak berpengaruh nyata (p<0,01) setelah pemberian fraksi etil asetat SCJM.
Kata Kunci : fraksi etilasetat, gula darah, kapasitas antioksidan, sinom campuran jeruk nipis dan madu

## PENDAHULUAN
Kapasitas  antioksidan  minuman sinom (MS)  pada  fraksi  air  yaitu  199,100  μg  AAEAC
( Ascorbic Acid Equivalent Antioksidan
Capacity)  /g  bahan  diketahui  memiliki kapasitas  antioksidan  yang  paling  tinggi diantara fraksi n-heksana (42,800 μg AAEAC/g bahan),  kloroform  (94,200  μg  AAEAC/g bahan),  etil  asetat  (66,600  μg  AAEAC/g
bahan)  (Wiradnyani,  2018)  dan  teruji  dengan metode  GCMS,  diduga  mengandung  senyawa tumeron  (49,84%),  artumeron  (21,32%), curlon (27,25%) dan 9-oktadekanoat
(69,43%)  (Wiradnyani,  2014).  Fraksi  etil asetat, khloroform dan n- heksana mengandung  senyawa  yang  diduga  seperti tumeron,  artumeron  dan  curlon  memiliki prosentase  relative  lebih  kecil  dari  fraksi  air (Wiradnyani,  2014).  Minuman sinom  adalah
Versi Online: Pro Food (Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan) http://www.profood.unram.ac.id/index.php/profood
e-ISSN: 2443-3446
minuman  yang  diolah  dengan  bahan  utama rimpang  kunyit  dan  daun  asam  yang  masih muda,  diambil  dari  pucuk  daun  sampai  helai ke-tujuh.  Menurut  Norton  (2008)  secara alamiah  kunyit  dipercaya  memiliki  kandungan fitokimia  yang  dapat  berfungsi    sebagai analgetika,  antipiretika,  dan  antiinflamasi, begitu  juga  daun  asam  muda  (asam  jawa) kaya  akan  flavonoid,  fenol  dan  saponin sedangkan daun berfungsi sebagai antioksidan,  antiinflamasi,  antipiretika,  dan penenang.  Penambahan  air  jeruk  nipis  dan madu  memberikan  aroma  yang  lebih  segar dan harum, dapat juga mengurangi rasa pahit dari  rasa  kunyit,  menambah  nutrisi  secara alami,  selain  dapat  menghilangkan  jerawat (Mumpuni,  2010).    SCJM  memiliki  aktivitas biologis  sebagai  antikanker  dan  antioksidan (Wiradnyani,  2018).  Kendatipun  minuman sinom sudah banyak dirasakan oleh sebagaian besar  masyarakat  untuk  menyembuhkan berbagai  penyakit  degenerative  khususnya penyakit  diabetes  melitus  dan  dishmoria. dalam  penggunaanya  biasanya  ditambahkan air  jeruk  nipis  dan  madu.  Namun  perlu dilakukan  uji  secara  in  vivo  pada  tikus  putih SD  diabetes  melitus.  Penentuan  kapasitas antioksidan  minuman sinom  campuran  jeruk nipis dan madu SCJM fraksi etil asetat secara kuantitatif pada penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan  dosis  yang  dapat  menurunkan gula darah puasa terendah.

## BAHAN DAN METODE Bahan
Bahan  utama  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  terdiri  atas  bahan  baku  dan bahan kimia. Bahan baku yaitu rimpang kunyit yang  diperoleh  dari  pasar  tradisional  Badung, Denpasar,  Bali,  daun  asam yang  masih  muda dari  pucuk  daun  sampai  helai  daun  ke-tujuh dari  daerah Buduk,  Mengwi, Badung, Bali,  air jeruk  nipis,  dan  madu  hutan  dari  daerah Sumba.    Bahan  kimia  yang  digunakan  terdiri atas pelarut etil asetat, khloroform, n-heksana (PA  merek  Emsure  Acs  215),  kertas  saring (Whatman  no.1),  asam  askorbat,  H 2 SO 4 , DPPH,  methanol,  Nicotinic  acid,  B2  vitamin powder,  acetone  NH 4 OH,  Indikator,  Silika  gel
GF254 (Merck), 1gr Aloksan dosis 50 mg/dl BB tikus,  40  tikus  putih  SD  dari  Balai  Veteriner Farmako
Surabaya,
aquades, air demineralisasi,  formalin,  asam  sitrat,  natrium sitrat, dan pakan tikus standar, buffer.

## Alat
Peralatan  yang  digunakan  adalah timbangan analitik, timbangan biasa, spektrofotometer  Shimadzu  UV-160,    rotary vacum  evaporator,    aluminium  foil,  kain saring,      eksikator,  vortex,  magnetic  stirrer, blood  glucose test meter (Nesco), botol gelap, glucose  stick  (Nesco),    8  buah  kandang  tikus 35  x 35  cm,  jarum  sonde  2  cc  dan  peralatan gelas untuk analisis.

## Lokasi Penelitian
Penelitian
ini dilaksanakan di Laboratorium Pengolahan Pangan dan Laboratorium Analisis Pangan Fakultas Teknologi  Pertanian,  Universitas  Udayana, Laboratorium  Pusat  Studi  Pangan  dan  Gizi Universitas  Udayana,  Laboratorium  Kimia Forensik  Polri  Bali,  Laboratorium  bersama Universitas Dhyana Pura.

## Metode Penelitian Tahap Ke-1
Uji  kapasitas  antioksidan  dilakukan dengan  cara:  penyiapan  sampel  rimpang kunyit  yang  diperoleh  di  pasar  tradisional Badung,  Denpasar,  Bali  dan  daun  asam  yang masih  muda  dari  pucuk  daun  sampai  helai ketujuh  dari  daerah  Jimbaran,  kabupaten Badung, Provinsi Bali. Rimpang kunyit dikupas, ditimbang  sebanyak  50  gram,  dicuci, dihaluskan  menggunakan blender  dengan menambahkan  400  ml  air  selama  3,5  menit, disaring  untuk  mendapatkan  filtrat,  kemudian dipanaskan sampai mendidih selama 1 menit. Filtrat  yang  diperoleh  lalu  dicampur  dengan filtrat  daun  asam  muda  yang  sudah  dicuci, diperoleh  dengan  cara  menimbang    seberat 250 gram daun asam muda, ditambahkan 300 ml  air,  kemudian  dipanaskan  dengan  cara mendidihkan    selama  1  menit.  Setelah  dingin setiap 100 ml ditambahkan 10 gram air jeruk nipis  dan  madu.  Minuman  SCJM  selanjutnya dimasukan  ke  dalam  botol  kaca  dan
Versi Online: Pro Food (Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan) http://www.profood.unram.ac.id/index.php/profood
e-ISSN: 2443-3446
didinginkan  sampai  tidak  ada  uap  panasnya, selanjutnya siap digunakan untuk pengujian. Fraksinasi  minuman  SCJM  dengan menggunakan  etil  asetat,  yang  dilakukan sebagai  berikut:  100  ml  minuman  SCJM dimasukan  ke  dalam  labu  pisah  yang  telah dikeringkan dalam oven selama 15 menit pada suhu  100 o C,  selanjutnya  ditambahkan  etil asetat 100 ml, dikocok 10 kali dan didiamkan selama 30 menit. Fraksi etil asetat dievaporasi dengan  suhu  45 o C  dan  tekanan  280  mbar untuk  menghilangkan  pelarut.  Uji  antioksidan fraksi  minuman  SCJM  dilakukan  berdasarkan penelitian (Winarsi, 2007) dengan rumus:
Konsentrasi (ppm) x Tv x Fp x1000.000
W sampel (mg)
(1)
Keterangan:  Tv  =  total  volume  (liter),  Fp  = faktor    pengeceran,    Konsentrasi  =  hasil      penghitungan kurva  standar,  AAEAC= Ascorbic  Acid  Equivalent Antioksidan Capacity.

## Penelitian Tahap Ke-2
Tahap penelitian eksperimental secara in vivo dengan menggunakan Rancangan Acak Kelompok

## Pengukuran Berat Badan Tikus
Hewan  coba  yang  digunakan    adalah tikus Sprague  Dawley  (SD)  jantan  dewasa berumur  dua  bulan,  dengan  berat  rata-rata 210  gr  -  250  gr  sebanyak  25  ekor,  yang diperoleh  dari  Balai  Veteriner  Farmako Surabaya.  Tikus  tersebut  dimasukkan  dalam kandang individu dengan ukuran panjang 150 cm  x  lebar  15  cm  x  tinggi  15  cm  yang  telah dilengkapi  tempat  makan  dan  minum  dan setiap  kandang  ditempati  satu  ekor  tikus. Tikus  kemudian  dikelompokan    menjadi  5 kelompok  sesuai  rancangan  penelitian.  Setiap kelompok  terdiri  dari  4  ekor  sebagai  ulangan sehingga  total  tikus    adalah  20  ekor.  Semua tikus    ditempatkan  dalam  ruang  yang  bersih, suhu  nyaman  ±  23 o C,  kondisi  gelap  terang secara  alami.  Sebelum  tikus  diberi  perlakuan ada  masa  adaptasi  selama  7  hari  dengan diberi makan pakan standar dan minum secara ad  libitum.    Pemberian  makan  dilakukan  pagi hari  dari  jam  7.00-8.00  WITA,  sebanyak  20 gram,  setiap hari ditimbang berat badannya.
Pembuatan  tikus  diabetes  melitus mengikuti  cara  kerja  (Andayani,  2003).  Tikus dipelihara dalam kandang selama 7 hari untuk menyeragamkan cara hidup dan makanannya, makanan  dan  minuman  diberikan  secara ad libitum.  Kesehatan  tikus  dipantau  setiap  hari, dan  berat    ditimbang  setiap  hari.    Bila  ada sakit akan diobati oleh dokter hewan. Setelah masa  adaptasi  selama  7  hari,  selanjutnya dilakukan  pengukuran  kadar  glukosa  darah. Sebelum dilakukan pengukuran kadar glukosa darah,  tikus  dipuasakan  terlebih  dahulu selama  16  jam.  Induksi  dilakukan  dengan menggunakan  5  %  larutan  streptocotozin (STZ)  dalam  larutan  asam  sitrat  dan  natrium sitrat 0,9% dengan dosis 50 mg/kg BB secara intraperitonial  (Andayani,    2003).    Setelah hewan  diinduksi,  diberi  makanan  yang  cukup ( ad libitum) dan dalam waktu 24 jam pertama dalam air minumnya ditambahkan 5 % larutan D-glukosa  monohidrat  untuk  mencegah terjadinya hipoglikemia yang fatal. Pengukuran kadar  glukosa  darah  dilakukan  3  hari  setelah induksi. Tikus dikatakan DM jika kadar glukosa darah  puasa  >126  mg  /dl  atau  kadar  gula sesaat  >  135  mg/dl,  Glukosa  darah  tikus normal  109  mg/dl.  Pengukuran  berat  badan (BB)  tikus  dilakukan  pada  setiap  pukul  07.00 wita  sebelum  makan  dan  pemberian  sampel fraksi  etil  asetat  SCJM.  Pengukuran  dilakukan sampai

## Penentuan Dosis
Penetapan  dosis  dan  persiapan  fraksi minuman  SCJM  adalah:  dosis  yang  diberikan adalah dosis lazim konsumsi suplemen per hari pada manusia yang dikonversi dari manusia ke tikus. Perhitungan pemberian dosis berdasarkan  pada body  surface  area  (BSA) mengikuti  penelitian  yang  dilakukan  oleh Reagan-Shaw et  al  (2007).  Rumus  konversi dosis disajikan sebagai berikut:
HED (mg/kg) = animal dose (mg/kg) X animal Km/huma Km……(2)
Diasumsikan  suplemen  antioksidan perhari  pada  manusia  rata-rata  sebesar  500 mg/60  kg  BB,  maka  HED (human  equivalent dose)  (mg/kg)  =  8,3.  Apabila  dikonversi  ke tikus maka perhitungan menjadi:
Versi Online: Pro Food (Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan) http://www.profood.unram.ac.id/index.php/profood
e-ISSN: 2443-3446
-0.5 0 0.5 1 1.5 0 5 10 15 Abs or bans i Konsentrasi asam askorbat (mg/L) y=-0,0845X + 0,7738 R 2 =0,7233
8,3 mg/kg = animal dose (mg/kg BB) X 6/37, animal dose = 8,3 X 37/6,  = 51,2 mg/kg BB (3)
Berdasarkan  perhitungan  di  atas,  maka dosis yang diberikan untuk tikus bervariasi dari 50, 100, 150 dan 200 mg /kg BB tikus. Fraksi etil  asetat  minuman  SCJM  sudah  ditimbang beratnya  sesuai  dengan  dosis  yang  akan diberikan pada tikus dilarutkan di dalam 2 ml aquades,  kemudian  dihomogenkan  dengan vortek  agar  tercampur  dengan  merata. Pemberian  fraksi  etil  asetat  SCJM  cara  ini bertujuan  untuk  mempermudah  pemberian pada  tikus  putih  secara  oral  yang  diberikan sesuai  dengan  masing-masing  dosis  fraksi setiap pagi pada jam 07.30 – 08.00 WIB. Penelitin yang dilakukan secara bioassay menggunakan  20  ekor  tikus  putih  SD  dengan perlakuan  dosis  pemberian  fraksi  etil  asetat minuman  SCJM  penelitian  tahap  ke-1  yang terdiri  dari  5  taraf  yaitu:  tikus  kontrol  (-) diberikan  fraksi  etil  asetat  SCJM  0  mg/kg  BB atau  diberi  aquades  2  ml/ekor,  tikus  kontrol positif  (+)  tikus  diabetes  tanpa  pemberian SCJM,  diberikan  secara  oral  (disonde)  fraksi etil  asetat  SCJM:  (K1)  dosis  50  mg/kg,  (K2) dosis 100 mg/kg, (K3) dosis 150 mg/kg, (K4) dosis  200  mg/kg  BB  tikus,  masing-masing ditambahkan  2  ml  aquades,  pemberian  satu kali  sehari  pagi  hari.  Masing-masing  ada  5 kelompok  dan  4  ekor  tikus  sebagai  ulangan. Pengukuran  kadar  gula  darah  diadakan  pada tahap ini, setiap 3 hari sekali dari pengambilan data  ke-0,  3,  6,  9,  12,  15,  18  dan  21. Pemeriksaan  gula  darah  dilakukan  setiap  jam 07.00-08.00 WITA, setelah dipuasakan selama 12 jam tetapi tetap diberi minum. Kadar gula darah  diukur  dengan  alat blood  glucose  test meter Gluco Dr. Selanjutnya di analisis dengan menggunakan Annova 1 %, uji lanjut BNT. Penentuan jumlah ulangan dan sampel: penelitian ini mengunakan 20 unit tikus jantan galur  SD  berumur  dua  bulan  dengan  berat badan  200  sampai  dengan  250  gr,  dari  20 ekor  ini  diambil  masing-masing  empat  ekor untuk  setiap  taraf  perlakuan  sehingga  jumlah ulangan  adalah  empat  kali.  Penggunaan jumlah  sampel  yang  lebih  besar  pada penelitian  ini  untuk  menghindari  terjadinya
kekurangan  sampel  sampai  pada  akhir penelitian  yang  diduga  akibat  kematian sampel.

## Analisis Data
Uji  kapasitas  antioksidan  fraksi  etil asetat  minuman  sinom  campuran  jeruk  nipis dan  madu,  berat  badan  tikus  dan  GDP dianalisis dengan menggunakan analisis varian (ANOVA).  Apabila  terdapat  pengaruh  yang bermakna (taraf 1%) maka analisis dilanjutkan dengan  uji  beda  rerata  antar  perlakuan dengan  uji  perbandingan  berganda  Uji  Beda Nyata terkecil (BNT).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Senyawa  yang  diduga  terkandung dalam  minuman  SCJM  setelah  difraksinasi dengan  menggunakan  berbagai  pelarut  telah diketahui bahwa kapasitas antioksidan tertinggi  adalah  minuman  SCJM  yang menggunakan  pelarut  etil  asetat.  Minuman SCJM  oleh  GCMS  terdeteksi  18  komponen senyawa penyusun (Wiradnyani, 2018).  Hasil GCMS  senyawa  mayor  ini  memiliki  aktivitas biologis  sebagai  antikanker  dan  antidiabetes (Wiradnyani, 2018)
Uji  Kapasitas  Antioksidan  dimulai dengan  penentuan  standar  asam  askorbat atau vitamin C dalam mereduksi radikal bebas DPPH( 1,1-difenil-2-pikrilhidra-zil) 0,1 mM dapat  dilihat  pada  Gambar  1  yaitu  kurva kalibrasi  asam  askorbat  standar  hubungan kapasitas antioksidan (mg/l) fraksinasi dengan pelarut etil asetat ekstrak minuman SCJM.
Gambar 1.  Kurva  Kalibrasi  Asam  Askorbat Standar
Hasil kapasitas antioksidan rata-rata minuman SCJM (Wiradnyani, 2018)
Versi Online: Pro Food (Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan) http://www.profood.unram.ac.id/index.php/profood
e-ISSN: 2443-3446
Tabel 1.  Hasil Pengujian Kapasitas Antioksidan  (µg  AAEAC/g  bahan) Perlakuan Berbagai Pelarut Minuman SCJM Pelarut Kapasitas Antioksidan (µg AAEAC/g bahan) n-Heksan 16551.1 ac ± 4,688 Cloroform 23819.1 bc ± 4,688 Etil Asetat 29691.1 d ± 4,688 Air 18089.7 de ± 4,688
Notasi huruf yang berbeda dalam kolom yang sama menunjukkan  perbedaan  yang  signifikan  pada p<0,05 (BNT).
Kapasitas antioksidan minuman SCJM  hasil  fraksi  dengan  perlakuan  berbagai jenis pelarut dari hasil penelitian dicantumkan pada  Tabel  1. Besarnya  kapasitas  antioksidan fraksi  etil  asetat  memiliki  nilai  tertinggi  yaitu 2969,1  µg  AAEAC/g  bahan,  dibandingkan  n- heksan  (16551,1  µg  AAEAC/g),  kloroform (23819,1  µg  AAEAC/g)  dan  air  (18089,7  µg AAEAC/g).
Hal  ini  disebabkan  oleh  kemampuan senyawa bioaktif yang ada di dalam minuman SCJM  sangat  sesuai  dengan  sifat-sifat  pelarut etil asetat sehingga sifat semi-polar pelarut etil asetat  dimiliki  juga  oleh  senyawa  bioaktif minuman  SCJM  yang  mampu  mengkelat radikal bebas pada DPPH, penelitian ini sesuai dengan analisis senyawa antioksidan fraksi etil asetat daun Libo ( Ficus Variegate Blume) yang di teliti oleh Novitasari (2016).
Rata-Rata  Gula  Darah  Puasa  (GDP)  dan Berat  Badan  Tikus  Putih  SD  Diabetes Berbagai  Dosis  Fraksi  Etil  Asetat Minuman SCJM
Pengujian  GDP  tikus  SD  diabetes dengan  berbagai  dosis  fraksi  etil  asetat Minuman SCJM dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2.  Rata-rata  Gula  Darah  Puasa  (GDP) (mg/dl)  Berbagai  Dosis  Fraksi  Etil Asetat  Minuman  SCJM  (mg/kg)  BB
Tikus Perlakuan Nilai rata-rata GDP Minuman SCJM (mg/Kg BB Tikus) mg/dl kontrol - 92.4 a ±  16.57257 dosis 150 109.8 a±  16.57257
dosis 100 117.2 bc±  16.57257 dosis 50 168.4 cd±  16.57257 dosis 200 232.8 e±  16.57257 kontrol + 337.4 f±  16.57257
Berdasarkan  uji  statistik,  analisis keragaman  menunjukkan  bahwa  senyawa antioksidan pada perlakuan berbagai dosis 50, 100,  150,  200  mg/kg  BB  tikus,  fraksi  etil asetat    minuman  SCJM  pada  tikus    SD diabetes melitus berpengaruh nyata (p< 0,01) terhadap GDP tikus.
Uji  perbandingan  berganda  BNT menunjukkan bahwa pemberian dosis 0 mg/kg yaitu  tikus  kontrol  (-)  menunjukkan  rata-rata GDP  (92,4  mg/dl)  Karena  pemberian  dosis  0 fraksi  air  minuman sinom  yaitu  katagori  tikus sehat  diduga  dalam  tubuh  tikus  secara  alami dari reaksi biologis yang menghasilkan radikal bebas  seperti  ROS  dan  RNS  sehingga  secara alami  pula  tubuh  memiliki  pertahanan terhadap efek radikal bebas yang berasal dari vitamin  C,  oleh  Veliky et  al.  (2001)  Emiati (2007)  Wiradnyani  (2018)  yang  menyatakan bahwa  aktivitas  antiradikal  dengan  metode DPPH  secara in vivo pada manusia didapatkan perlakuan  kontrol  atau  tanpa  konsumsi minuman kakao bebas lemak yang mengandung  komponen  fenolik  ditemukan juga aktivitas antiradikal berkisar 17,5%. Dosis  kontrol  (-)  yang  berbeda  nyata dengan  pemberian  dosis  50  mg/kg  BB  yaitu dengan  rata-rata  GDP  168,4  mg/dl,  maupun dengan pemberian dosis 100 mg/kg BB (117,2 mg/dl),  hal ini  diduga  pada  titik  tertentu  STZ sebagai  diabetogenik,  merupakan  donor  NO yang  mampu  meningkatkan  ROS/ Reactive nitrogen  species  (RSN).    ROS  menyebabkan kerusakan  sel  β,  sebagai  efeknya  produksi insulin  akan  berkurang,  oleh  Badole,  e t  al.
(2007)  dijelaskan  bahwa  akibatnya  adalah diabetes tipe I. Hal ini diduga karena dosis 50 dan  100  mg/kg  BB  antioksidan  fraksi  etil asetat  SCJM  belum  efektif  untuk  menurunkan GDP  tikus  diabetes  (Wiradnyani,  2018).    RNS dari  STZ  sangat  toksik  menyebabkan penurunan  jumlah  ATP,  sintesis  dan  sekresi insulin terhambat yang menyebabkan hiperglikemia  glukosa  plasma  menumpuk dalam  aliran  darah,  karena  kerusakan  sel  β
Versi Online: Pro Food (Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan) http://www.profood.unram.ac.id/index.php/profood
e-ISSN: 2443-3446
pankreas,  sehingga  insulin  tidak  dapat melakukan  sintesis  terhadap  glikogen  (terjadi peningkatan  glukogenesis),  sekresi  insulin terganggu  dalam  kondisi  glukosa  plasma tinggi,  sehingga  kemampuan  insulin  secara normal  menghambat  keluarnya  glukosa  dari hati tidak terjadi lagi (Ganong, 2008).
Gambar  2  menjelaskan  bahwa  GDP tikus  terbaik  adalah  yang  diberikan  dosis  150 mg/kg  karena  memberikan  nilai  terendah (168,4  mg/dl),  berbeda  nyata  dari  perlakuan dosis  yang  lainya,  Glutathione  reduktase memperbaiki  fungsi  mitokondria  sangat dibutuhkan untuk membuat flavin mononukleotida  (FMN)  dan  flavin  adenine dinukleotida  (FAD).  Antioksidan  seperti  ini lebih  baik  (sinergisme)  kemampuannya mengkelat  radikal  bebas  ada  pada  sel  β karena induksi Streptotozin (Setyo, 2012).
Dosis  200  mg/kg  BB  tikus  kurang efektif  diberikan  pada  tikus  diabetes  hal  ini disebabkan  antioksidan  fraksi  etil  asetat  yang berubah  menjadi  prooksidan  sehingga  kerja berbagai  jenis  antioksidan  menjadi  tidak spesifik  dan  kurang  efektif  dalam  mengkelat radikal  bebas  (NO*)  dari  STZ  pada  dosis semakin  tinggi.  Roitt  dan  Delves  (2001), Haliwell  dan  Gutteridge  (1999)  yang menyatakan  bahwa  kemungkinan  pada  saat melakukan  apoptosis,  semua  isi  sel  β  akan keluar dan menghasilkan radikal bebas. Hal ini berakibat  glukagon  menstimulasi  produksi
badan  keton  dengan  cara  meningkatkan oksidasi  asam  lemak  fraksi  minuman sinom asam 9-octadecenoid  acid  dan  menurunkan konsentrasi malonil CoA (Wiradnyani, 2018).
Uji  perbandingan  berganda  BNT menunjukkan bahwa pemberian dosis 0 mg/kg yaitu tikus kontrol (+) menunjukkan rata-rata GDP  (337,4  mg/dl)  yang  berbeda  nyata dengan  pemberian  dosis  50  mg/kg  BB  yaitu dengan rata-rata GDP 168,4 mg/dl, 100 mg/kg BB  (117,2  mg/dl),  maupun  pemberian  dosis 200  mg/kg  BB  (232,8  mg/dl)  hal  ini  diduga sumbangan  injeksi  STZ  sebagai  diabetogenik. Dalam keadaan DM tikus mengalami defisiensi insulin  dan  glukagon  yang  berlebihan menghasilkan  lingkungan  hormonal  yang mempermudah  proses  ketosis  (Hardman, 2002).
Berdasarkan  uji  statistik,  analisis keragaman  menunjukkan  bahwa  senyawa antioksidan pada perlakuan berbagai dosis 50, 100,  150,  200  mg/kg  BB  tikus,  fraksi  etil asetat minuman SCJM pada tikus  SD diabetes melitus  tidak  berpengaruh  nyata  (p<  0,01) terhadap  Berat  Badan  tikus  hal  ini  sesuai dengan  penelitian  Kintoko et  al.  (2016) tentang  efek  binahong  terhadap  luka  tikus, Wansyah et  al.  (2017)  tentang  potensi  fraksi etil asetat daun torbangun dalam meningkatkan    produksi  susu.  Grafik  berat badan  Tikus  SD  berbagai  dosis  fraksi  etil asetat minuman SCJM disajikan pada Gambar 3.
0 50 100 150 200 250 300 350 400 Dosis Fraksi Etil Asetat Minuman SCJM (mg/kg)  BB Tikus 150 Gu la Da ra h P ua sa T ik us ( m g/ dl ) K (+) K (-) 200
Gambar 2. Grafik Gula Darah Tikus  Fraksi Etil Asetat  SCJ M 100 50
Versi Online: Pro Food (Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan) http://www.profood.unram.ac.id/index.php/profood
Gambar 3.  Grafik Berat Badan Tikus SD Berbagai Dosis Fraksi Etil Asetat Minuman SCJM

## KESIMPULAN
1.  Perlakuan  dosis  fraksi  minuman  SCJM berpengaruh nyata (p<0,01) terhadap GDP tikus putih SD diabetes melitus
2.  Kapasitas  antioksidan  tertinggi  SCJM berbagai  pelarut  adalah  fraksi  etil  asetat (29691,1 (µg AAEAC/g bahan)
3. Dosis terbaik yang dapat menurunkan GDP terendah berdasarkan uji lanjut BNT adalah 150  mg/kg  BB  dapat  menurunkan  GDP 168,4 mg/dl.
4.  Fraksi  etil  asetat  minuman  SCJM  tidak berpengaruh  nyata  terhadap  berat  badan tikus putih SD diabetes.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis mengucapkan terimakasih kepada Kemenristek Dikti yang telah mendanai penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Emiati. 2007. Efek Konsumsi Minuman Bubuk Kakao  Bebas  Lemak  terhadap  Sifat Antioksidan  dan  Proliferative  Limfosit Manusia. Disertasi.  Institut  Pertanian Bogor. Bogor.
Ganong,  W.  F.  2008.  Buku  Ajar  Fisiologi Kedokteran.  Editors  Edisi  Bahasa Indonesia.  Ed.22-Jakarta:  EGC  347- 367
Mumpuni,  Y.A.,  Wulandari.  2010.  Cara  Jitu Mengatasi Jerawat. Andi. Jogyakarta.
Norton,  K.J.  2008.  Menstruation  Disorder- Causes  Symptom  and  Treatment  of Dysmenorrhea. http://www-steady health.com/articles, menstruation- disorder-causes-symptom-and- treatments  of  Dysmenorrhea-a773 html.[diakses 3 Maret 2010].
Novitasari,  M.  R,  L.    Febrina,  R.  Agustina,  A. Rahmadani,  R.  Rusli.  2016.  Analisis GCMS Senyawa Aktif Antioksidan Fraksi etil  asetat  Daun  Libo  ( Ficus  variegate Blume),  Jurnal  Sains  dan  kesehatan 1(5):221-225.
Shaw- Reagan, S., M. Nihal, N. Ahmad. 2007. Dose  Translation  from  Animal  to Human Studies Revisited . Departement of  Dermatology,  Paul  P.  Carbone Comprehensive Cancer Center; Molecular and Environmental Toxicology  Center,  University  of
Wisconsin,  Madison,  Wisconsin,  USA. The FASEB  Journal  article  fj.  07-9574 LSF.
Setyo,  P.D.H.  2012.  Pengaruh  Fraksi  Etil Asetat Buah Labu Siam ( Sechium edule (Jacq.)  SW.)  Terhadap  Regenerasi  Sel β  Pankreas  pada  Tikus  Diabetes  yang Diinduksi  Aloksan.  Sekolah  Tinngi Ilmu Farmasi  Yayasan  Pharmasi  Semarang. STIFAR. Semarang.
Wansyah, A. C., Damanah, M. R. M., Kustiadi,
L. 2017. Potensi Fraksi Etil Asetat Daun Torbangun  ( Coleus  amboinicus  L.) dalam  Meningkatkan  Produksi  Susu Bobot  Badan  Induk  dan  Anak  Tikus. J Gizi  Pangan  12(1):  61-68.  DOI: 1025182/J9p.2017.12.1.61-68
170 175 180 185 190 195 200 205 210 50 mg/dl 100 mg/dl 150 mg/dl 200 mg/dl kontrol + kontrol - Ber at b ad an ti ku s Dosis perlakuan berat tikus 5,923 5,923 5,923 5,923 5,923 5,923
Versi Online: Pro Food (Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan) http://www.profood.unram.ac.id/index.php/profood
Winarsi. 2007. Antioksidan Alami dan Radikal
Bebas. Kanisius. Yogyakarta.
Wiradnyani, N.K., Wartini, N. M., Harsojuono,
B.A., 2014. Komposisi Senyawa Antioksidan  Minuman  Sinom  (Curcuma domestica Val - Tamarindus Indica L.), Scientific Journal of Food Technology 1(1):10-23
Wiradnyani,  N.K.  2018.  Kapasitas  Antioksidan Minuman  Sinom.  Proceeding  Sintesa Undhira 1(6):381-389
Wiradnyani,  N.K.,  Dhylla.,  H.D.P.  2018. Senyaw  Penyusun  Hasil  Fraksi  Etil Asetat Minuman Sinom Campuran Jeruk Nipis  dan  Madu  ( Curcuma  domestica val-  tamarindus  indica  l.).  Media  Ilmiah Teknologi Pangan  5(2): 73-79.
Wiradnyani,  N.K.  2018.  Dosage  antioxidant drink  sinom  of  β  cell  langerhans  islet white  micespraque        dawley  diabetes mellitus. Materials  Science  and Engineering  Journal.  IOP  Conf.  Ser: Mater. Sci. Eng.434 012325.