## Deteksi Aeromonas hydrophila pada Ginjal Mencit Mus musculus dengan Teknik Imunohistokimia
Detection of Aeomonas hydrophila in Kidney’s Mice (Mus musculus) with Immunochemistry Technique
Intan Galuh Bintari* 1 , M.Gandul Atik Yuliani 2
1 Program Studi Penyuluhan Peternakan dan Kesejahteraan Hewan, Polbangtan Malang
2 Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Airlangga Surabaya e-mail: *intangaluhb@gmail.com

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  apakah Aeromonas  hydrophila dapat  dideteksi dengan  menggunakan  teknik  imunohistokimia.  Imunohistokimia  adalah  suatu  proses  untuk mendeteksi  antigen  (protein,  karbohidrat,  dll.)  Terhadap  sel  jaringan  dengan  prinsip  reaksi antibodi  yang  berikatan  dengan  antigen  di  dalam  jaringan.  Parameter  penelitian  ini  adalah interaksi  antigen  dan  antibodi  yang  divisualisasikan  dengan  munculnya  warna  coklat  pada ginjal yang diinfeksi Aeromonas hydrophila . Mencit (Mus musculus) umur tiga bulan seberat 30 gram diinfeksi Aeromonas hydrophila dengan dosis 10 6 CFU / ml. Setelah seminggu, ginjal disiapkan  untuk  preparat  histopatologi  dengan  pewarnaan  imunohistokimia.  Antibodi  primer yang  digunakan  adalah  antibodi  kelinci (New  zealand  white) dengan  dua  perlakuan  (P1  dan P2). P1 diinfeksi dengan menggunakan protein spesifik Aeromonas hydrophila 30 kDa dan P2 diinfeksi  dengan  menggunakan  protein  utuh Aeromonas  hydrophila .  Hasilnya  ditunjukkan dengan membandingkan  P1  dan  P2.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  terdapat  perbedaan warna coklat yang lebih banyak melalui P2 dibandingkan dengan P1.
Kata kunci—Aeromonas hydrophila, Mencit (Mus musculus), Antigen, Teknik Imunohistokimia.

## ABSTRACT
This research was aimed to determine whether the Aeromonas hydrophila can be detected by using  immunohistochemistry  technique.  Immunohistochemistry  was  a  process  to  detect antigens (proteins, carbohydrates, etc.) towards the cells of the tissues with antibodies reaction principle  that  binded  to  antigen  in  the  tissues.  The  parameter  of  this  research  was  an interaction  between  antigens  and  antibodies  which  were  visualized  by  the  appearance  of brown color in the kidneys which were infected by Aeromonas hydrophila. The three-month old mice (Mus musculus) with 30 grams of weight were infected by Aeromonas hydrophila with 10 6 CFU/ml of doses. After a week, the kidneys were  prepared for histopathology preparation by using  immunohistochemistry  staining.  The  primary  antibodies  used  were  rabbits’  antibodies (New  zealand  white)  with  two  treatments  (P1  and  P2).  P1  was  infected  by  using  spesific proteins of Aeromonas hydrophila 30 kDa and P2 was infected  by using the whole proteins of
Deteksi Aeromonas hydrophila pada Ginjal Mencit Mus musculus dengan …. ….…….. (Intan Galuh Bintari, dkk)
Aeromonas hydrophila. The results were showed by comparing P1 and P2. The results showed that there was a difference in the brown color which was more through in P2 compared to P1.
Keywords—Aeromonas hydrophila, Mice (Mus Musculus), Antigens, Immunohistochemistry Technique.

## PENDAHULUAN
Sumber daya perikanan yang dimiliki oleh Indonesia sangat beragam dan memiliki  banyak  potensi.  salah  satunya budidaya laut  dan  tambak  atau  payau  yang mengarah  untuk  kemajuan  perekonomian Indonesia  (Juanti  dkk.,  2014).    Kegiatan budidaya  ikan  merupakan  usaha  manusia untuk  mengelola  faktor-  faktor  budidaya, hama,  dan  penyakit  organisme  (Reksono dkk.,  2012).  Menurut  Wiyanto  (2010), indikator keberhasilan dalam usaha budidaya  ikan  salah  satunya  adalah kesehatan  ikan  yang  terkait  dengan pemeliharaan  lingkungan  dan  daya  tahan terhadap  serangan  bakteri  patogen.  Salah satu  bakteri  yang  umum  dijumpai  pada ekosistem perairan dan mempunyai peranan sebagai  mikrobial  flora  bagi  organisme  air pada  kondisi  lingkungan  yang  stabil  yaitu bakteri Aeromonas hydrophila . Bakteri Aeromonas hydrophila merupakan  salah  satu  bakteri  penyebab penyakit  yang  berbahaya  pada  budidaya ikan  air  tawar.  Bakteri  tersebut  banyak menyerang ikan mas yang merupakan salah satu  komoditas  unggulan  air  tawar  dan dapat menginfeksi ikan pada semua ukuran yang  dapat  menyebabkan  kematian  hingga mencapai  80  %,  sehingga  mengakibatkan kerugian  yang  sangat  besar  dalam  usaha budidaya ikan air tawar (Sanoesi, 2008).
Aeromonas  hydrophila melimpah pada lingkungan air tawar terutama dengan kandungan  bahan  organik  yang  tinggi. Infeksi    bakteri  ini  bersifat  opoturnistik, yaitu infeksi yang biasanya tidak menyebabkan penyakit pada hewan dengan sistem kekebalan tubuh yang normal, tetapi
dapat  menyerang  hewan  dengan  sistem kekebalan  tubuh  yang  buruk.  Infeksi Aeromonas  hydrophila dapat  dikenali karena  adanya  luka-luka  eksternal  ( ulcer ), terdapat  bercak  perdarahan  pada  daerah latero-ventral  tubuh  dan  sirip  serta  sisik terkelupas (Wijayaning dan Wahyu, 2008).
Aeromonas  hydrophila memiliki Outer  Membrane  Protein (OMP) yang merupakan protein pada bagian dinding sel bakteri  gram  negatif  yang  berhubungan dengan sifat virulensi dan bersifat imunogenik. Outer  Membrane  Protein (OMP)  terletak  pada  lapisan  paling  luar bakteri yang penting untuk respon kekebalan  bagi host dan  sebagai  target untuk  obat  terapi.  Baru-baru  ini,  banyak perhatian  mengenai  OMP  sebagai  sebuah potensial  yang  sangat  penting  dalam komponen vaksin (Thangviji et al. , 2012). Penelitian tentang Outer Membrane Protein (OMP)  telah  banyak  diteliti  dalam usaha  mendapatkan  antigen  yang  dapat diandalkan  baik  untuk  diagnosis  maupun untuk vaksin. Beberapa penelitian menggunakan  hewan  coba  kelinci  ataupun mencit.  Digunakan  hewan  coba  kelinci untuk memudahkan pengambilan darah dan pemeliharaan.  Beberapa  penelitian  juga menggunakan  organ  ginjal  sebagai  sampel percobaan  hal  ini  dikarenakan  ginjal merupakan organ hematopoetik dan predileksi dari Aeromonas hydrophila pada hewan coba. Di dalam penelitian ini penulis ingin  melakukan  penelitian  mengenai reaktivitas Outer Membrane Protein (OMP) Aeromonas  hydrophila pada  ginjal mencit (Mus  musculus) dengan  teknik Imunohistokimia untuk mengetahui adanya interaksi  antigen  dengan  antibodi  pada
Deteksi Aeromonas hydrophila pada Ginjal Mencit Mus musculus dengan …. ….…….. (Intan Galuh Bintari, dkk)
116 | Jurnal Agriekstensia Vol. 19 No. 2 Desember 2020
ginjal  mencit (Mus  musculus) secara mikroskopis.  Selain  itu,  penelitian  ini bertujuan  untuk  mengetahui  efektivitas teknik  imunohistokimia  dalam  mendeteksi adanya Aeromonas hydrophila pada preparat histopatologi.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  dilakukan  di  kandang hewan  coba  Fakultas  Kedokteran  Hewan Universitas  Airlangga  Surabaya  untuk mengerjakan imunisasi maupun pemeliharan mencit dan kelinci,
Departemen  Patologi  Veteriner  Fakultas Kedokteran  Hewan  Universitas  Airlangga Surabaya untuk mengerjakan teknik imunohistokimia. Penelitian ini
dilaksanakan selama 3 bulan dimulai  bulan Agustus sampai Oktober 2015.
Bahan-  bahan  yang  digunakan dalam penelitian meliputi : protein spesifik 30  kDa Aeromonas  hydrophila , whole protein  Aeromonas  hydrophila , Complete Freund’s  Adjuvant,  Incomplete  Freund’s Adjuvant (SIGMA  F5506) . Bahan  yang digunakan  untuk  imunohistokimia  adalah jaringan  histopatologi  ginjal  mencit,  xylol, alkohol  96%,  90%,  80%,  dan  70%. Aquadest, Phosphat  Buffer  Saline (PBS), formalin  10%.  Hidrogen  peroksida  (H 2 O 2 ) 3%,  antibodi  primer  (anti  30  kDa Aeromonas  hydrophila dan  anti whole protein  Aeromonas  hydrophila ),  antibodi sekunder  berlabel  SA-HRP  ( Strep  Avidin Horseradish  Peroksidase ),  dan  1%  BSA. Alat-alat  yang  digunakan  untuk  penelitian ini  terdiri  dari  :  Spuit (disposable) untuk imunisasi  dengan  ukuran  3  ml.  Sedangkan alat-alat  yang  digunakan  untuk  pewarnaan Imunohistokimia adalah pinset, pipet pasteur, pipet (mikropipet) original eppendorf (made  in  Germany) ,  tabung eppendorf, mikrotom, inkubator dan mikroskop (Nikon H600L) dengan fasilitas
pendukung Optilab dengan  pembesaran 100 dan 400 kali (Andonian et al ., 2001). Hewan  percobaan  yang  digunakan dalam penelitian ini terdiri dari 2 kelompok hewan  percobaan.  Kelompok  pertama digunakan  untuk  produksi  antibodi  primer adalah  kelinci  jantan  berumur  lima  bulan, berat  badan  3  Kg,    jenis New  Zealand White yang  belum  mendapatkan  vaksinasi, diperoleh  dari  salah  satu  tempat  budidaya kelinci di Sidoarjo. Kelinci yang digunakan sebanyak  tiga  ekor  yaitu  satu  ekor  kelinci sebagai  kontrol,  satu  ekor  mendapat imunisasi protein spesifik 30 kDa Aeromonas  hydrophila dan  satu  ekor mendapat imunisasi whole protein Aeromonas  hydrophila .  Dipilih  kelinci karena  hewan  ini  mudah  dipelihara,  daya tahannya  tinggi  dan  mudah  diambil darahnya.  Kelompok  kedua  digunakan untuk imunohistokimia yaitu 3 ekor mencit (Mus  musculus) yang  akan  diinfeksi Aeromonas hydrophila 10 6 CFU/ml kemudian  dipreparasi  ginjalnya  dan  akan dilakukan  pewarnaan  imunohistokimia. Mencit (Mus  musculus) diperoleh  dari Pusat  Veterania  Farma  (PUSVETMA) Surabaya berumur 3 bulan, berat badan 20- 30 gr dan berjenis kelamin jantan.
Imunisasi  pada  kelinci  dilakukan menggunakan  protein  spesifik  30  kDa Aeromonas  hydrophila dan Whole  protein Aeromonas  hydrophila yang  telah  berhasil diisolasi,  sonikasi,  dan  elusi.  Kemudian disuntikkan  secara  intramuskular  pada kelinci  galur New  Zealand  White yang berjenis  kelamin  jantan,  berumur  5  bulan dan  berat  badan  3  kg.  Kelinci  yang diimunisasi  sebanyak  2  ekor  (P1  dan  P2) dan  1  ekor  sebagai  kontrol  (tanpa imunisasi).  Sebelum  dilakukan  imunisasi kelinci  diadaptasikan  pakan,  kandang  dan lingkungan  terlebih  dahulu  selama  7  hari. Kedua kelinci diimunisasi dengan menggunakan  campuran  antigen  dengan Complete Freund’s Adjuvant
Deteksi Aeromonas hydrophila pada Ginjal Mencit Mus musculus dengan …. ….…….. (Intan Galuh Bintari, dkk)
(perbandingan  1:1).  Imunisasi  ke  dua dilakukan  setelah  14  hari  berikutnya dengan campuran antigen dalam Incomplete Freund’s Adjuvant
(perbandingan  1:1).  Imunisasi  ke  tiga dilakukan  setelah  14  hari  berikutnya dengan  cara  dan  bahan  yang  sama  seperti imunisasi  ke  dua  dan  seterusnya  hingga imunisasi  ke  empat.  Setiap  sebelum melakukan booster dilakukan  pengambilan darah  melalui  vena auricularis untuk mendapatkan antibodi primer.
Pengambilan sampel jaringan ginjal mencit  dilakukan  pada  hari  ke  7  setelah infeksi.  Mencit  di  euthanasia  dengan menggunakan kloroform kemudian dilakukan  laparotomi  untuk  mengambil jaringan  ginjal,  dengan  segera  jaringan ginjal  diletakkan  pada  toples/pot  yang berisi larutan formalin 10% untuk kemudian  dibuat  preparat  histopatologi ginjal dan dilakukan
pewarnaan imunohistokimia.
Pewarnaan imunohistokimia dilakukan dengan  cara  :  preparat  histopatologi  ginjal direndam  dalam  xylol  sebanyak  2  kali, alkohol  bertingkat  secara  berurutan  (96%, 90%,  80%,  70%)  untuk  proses  hidrasi.
Dicuci  dalam  PBS  pH  7,4  3  kali  masing- masing  selama  5  menit.  Direndam  dalam 3%  hidrogen  peroksida  (dalam destilate water ) selama 20 menit. Dicuci dalam PBS pH 7,4 selama 3x5 menit. Direndam dalam 1%  BSA  selama  10-30  menit  pada  suhu ruang.  Dicuci  dalam  PBS  pH  7,4  selama 3x5  menit.  Ditambahkan  antibodi  primer selama  1  jam  pada  suhu  ruang.  Lalu diinkubasi selama semalam.
Kemudian dicuci dalam PBS pH 7,4 selama 3x5  menit.  Kemudian  ditambah  antibodi sekunder  berlabel Strep  avidin  horseradish peroxidase (SA-HRP)  selama  1  jam  pada suhu  ruang.  Dicuci  dalam  PBS  pH  7,4 selama 3x5 menit.
Preparat ditambahkan kromogen DAB (3,3- diaminobenzidine tetrahydro chloride )
selama  10-20  menit  pada  suhu  ruang. Dicuci  dalam  aquades  selama  3x5  menit.
Dilakukan counterstain dengan hematoksilin selama  5  menit  pada  suhu ruang.  Dicuci  dalam  aquades  selama  3x5 menit. Dilakukan mounting dengan entellan. Pengamatan dengan menggunakan mikroskop optilab pada  pembesaran  100 dan 400 kali.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil pemeriksaan preparat histopatologi ginjal mencit dengan pewarnaan  imunohistokimia  dan  diperiksa dibawah  mikroskop  dengan  perbesaran 100x  dan  400x  guna  melihat  adanya Aeromonas  hydrophila .  Pada  pemeriksaan tersebut  didapatkan  bahwa  pada  perlakuan pertama  (P1)  dan  perlakuan  kedua  (P2) dapat  diidentifikasi  adanya Aeromonas hydrophila pada  histopatologi  ginjal.  Hal ini terlihat dengan adanya warna kecoklatan  pada  jaringan  histopatologi ginjal  mencit.  Sedangkan  pada  perlakuan kontrol  (P0)  tidak  terlihat  adanya  warna kecoklatan  pada  jaringan  histopatologi ginjal.
Hasil  pada  perlakuan  pertama  (P1) pada  jaringan  histopatologi  terlihat  adanya ikatan antara antigen dengan antibodi yang tervisualisasi  dengan  warna  kecoklatan  di glomerulus ginjal. Sedangkan pada perlakuan  kedua  (P2)  hasil  pemeriksaan histopatologi  menunujukkan  bahwa  warna kecoklatan lebih banyak dan lebih menyebar,  yaitu  terdapat  di  glomerulus, capsula  bowman  maupun  tubulus  ginjal. Hasil ekspresi antigen Aeromonas hydrophila pada  jaringan  histologi  ginjal mencit dapat dilihat pada Gambar dibawah ini.
Deteksi Aeromonas hydrophila pada Ginjal Mencit Mus musculus dengan …. ….…….. (Intan Galuh Bintari, dkk)
Gambar 4.1  Glomerulus dan tubulus ginjal mencit kontrol   pembesaran 400x dengan pewarnaan imunohistokimia.
Keterangan:
Glomerulus dan tubulus ginjal normal
Gambar 4.2 Glomerulus dan tubulus ginjal mencit perlakuan 1 (protein spesifik 30 kDa Aeromonas hydrophila ) pembesaran 100x dengan pewarnaan imunohistokimia. Keterangan: Adanya ikatan antara antigen dengan antibodi yang tervisualisasi dengan warna kecoklatan pada glomerulus ginjal mencit
Gambar 4.3 : Glomerulus  ginjal mencit perlakuan 1 (protein spesifik 30 kDa Aeromonas hydrophila ) pembesaran 400x dengan pewarnaan imunohistokimia. Keterangan:  Adanya ikatan antara antigen dengan antibodi yang tervisualisasi dengan warna kecoklatan pada glomerulus ginjal mencit
Gambar 4.4 : Glomerulus dan tubulus ginjal mencit perlakuan 2 (whole protein) pembesaran 100x dengan pewarnaan imunohistokimia.
Keterangan   :
A:  Adanya  ikatan  antara  antigen  dengan antibodi  yang  tervisualisasi  dengan  warna kecoklatan pada glomerulus ginjal mencit. B:  Adanya  ikatan  antara  antigen  dengan antibodi  yang  tervisualisasi  dengan  warna kecoklatan pada tubulus ginjal mencit.
Gambar 4.5 : Glomerulus dan tubulus ginjal mencit perlakuan 2 (whole protein)
pembesaran 400x dengan pewarnaan imunohistokimia. Keterangan :
A  :  Adanya  ikatan  antara  antigen  dengan antibodi  yang  tervisualisasi  dengan  warna kecoklatan pada tubulus ginjal mencit. B  :  Adanya  ikatan  antara  antigen  dengan antibodi  yang  tervisualisasi  dengan  warna kecoklatan pada glomerulus ginjal mencit. C  :  Adanya  ikatan  antara  antigen  dengan antibodi  yang  tervisualisasi  dengan  warna kecoklatan  pada  capsula  bowman  ginjal mencit.
A
A B B C
Deteksi Aeromonas hydrophila pada Ginjal Mencit Mus musculus dengan …. ….…….. (Intan Galuh Bintari, dkk)
Pada  preparat  histopatologi  ginjal mencit jantan berumur 3 bulan dapat dilihat adanya Aeromonas  hydrophila dengan metode imunohistokimia. Adanya Aeromonas hydrophila pada jaringan histopatologi ginjal mencit dapat tervisualisasi  dengan  warna  kecoklatan. Warna  coklat  merupakan  hasil  interaksi antara  antigen  yang  berikatan  dengan antibodi primer (anti 30 kDa dan anti whole protein Aeromonas hydrophila ) dan
antibodi  sekundernya  berupa Strep  Avidin horseradish  peroxidase (SA-HRP)  serta substrate diamino benzidine (DAB). Kromogen DAB (3,3-
diaminobenzidine  tetrahydrocloride) ini telah  mengandung  peroksida  H 2 O 2 sebagai substansi  penanda  yang  akan  membentuk komplek  dengan  enzim  peroksidase  dalam kompleks SA-HRP ( Strepvidin horseradish peroxidase ).  Komplek  yang  terbentuk  dari kromogen  DAB  akan    membentuk  warna coklat  gelap.  Kromogen  ini  mempunyai ikatan  yang  sangat  kuat  dengan  peroksida sehingga  dengan  proses  dehidrasi  dan clearing tidak  akan  mengalami  perubahan warna.
Identifikasi adanya Aeromonas hydrophila pada  jaringan  ginjal  mencit dengan  menggunakan  antibodi  primer  anti 30 kDa Aeromonas
hydrophila menunjukkan  adanya  ikatan  antara  antigen dengan  antibodi  yang  tervisualisasi  dengan warna  kecoklatan  di  glomerulus  ginjal. Sedangkan identifikasi pada jaringan ginjal mencit  dengan  menggunakan  antibodi primer  anti whole  protein Aeromonas hydrophila menunjukkan  bahwa  warna kecoklatan lebih banyak dan lebih menyebar,  yaitu  terdapat  di  glomerulus, capsula  bowman  maupun  tubulus  ginjal. Hal  ini  terjadi  karena  pada  antibodi  primer anti whole  protein  Aeromonas  hydrophila antigen yang diikat lebih banyak dibandingkan  dengan  antibodi  primer  anti 30  kDa Aeromonas  hydrophila. Antibodi
primer  anti  30  kDa Aeromonas  hydrophila lebih  spesifik  hanya  mengikat  protein dengan  berat  molekul  30  kDa  saja  berbeda dengan  antibodi  primer  anti Whole  protein Aeromonas hydrophila yang dapat mengikat  semua  jenis  protein  yang  berada pada bagian manapun dari bakteri Aeromonas hydrophila.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan,  dapat  disimpulkan  bahwa Aeromonas  hydrophila dapat  terdeteksi pada  jaringan  histopatologi  ginjal  mencit (Mus  musculus) yang  ditunjukkan  dengan adanya  interaksi  antara  antigen  dan antibodi  dengan  menggunakan  teknik imunohistokimia yang tervisualisasi dengan warna kecoklatan.

## SARAN
Penelitian  ini  diharapkan  dapat menjadi referensi dalam penelitian selanjutnya  mengenai  pembuatan  vaksin Aeromonas  hydrophila ,  perlu  dilakukan penelitian  dengan  menggunakan  antibodi Aeromonas  hydrophila untuk  melakukan diagnosa  penyakit  pada  ikan  dan  perlu adanya  penelitian  dengan  menggunakan teknik  yang  sama  guna  melihat  perubahan gambaran  histopatologi  pada  organ  yang lain.

## DAFTAR PUSTAKA
Andonian,  L.,  Mohammadi,  A,A  and Akbarzadeh,J., 2001, Preparation of HY  Antibody  in  Female  Mice  as  a Model  for  Sex  Preselection,  Iranian J. Publ. Health, 30(1-2).
Juanti, F., Aisah dan Edy, 2014, Economic
Landscape  Sub  Sektor  Perikanan Pada Perekonomian Kabupaten Sidoarjo:  Model  Input  Output  Dan
Deteksi Aeromonas hydrophila pada Ginjal Mencit Mus musculus dengan …. ….…….. (Intan Galuh Bintari, dkk)
Analytical  Hierarchy  Process . e-
Journal Ekonomi Bisnis dan Akuntansi, Universitas Jember, Vo1.1, 42 -52. Reksono,  B.,  Herman  dan  Yuniarti,  2012, Pengaruh Padat Penebaran Grailaria sp. Terhadap Pertumbuhan  dan  Kelangsungan
Hidup  Ikan  Bandeng  ( Chanos chanos )  pada  Budidaya  Sistem
Polikultur.  Jurnal  Perikanan  dan
Kelautan, Vol.3, no.3, Hal.41-49. Sanoesi,  E,  2008,  Penggunaan  Ekstrak Daun Pepaya ( Carica papaya Linn ) terhadap Jumlah Sel Makrofag pada
Ikan Mas ( Cyprinus carpio L) yang Terinfeksi Bakteri Aeromonas hydrophila , Jurnal Penelitian Perikanan, Vol 11, No. 2, Desember 2008.
Setijanto,  H,  2002,  Teknik  Mempelajari
Biologi  Sel;  Identifikasi  Beberapa Substansi  atau  Senyawa  Yang Terlibat  Dalam  Metabolisme  Sel, Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga, Surabaya. Sukadi,  M,  2002,  Peningkatan  Teknologi Budidaya Perairan ( The Improvement of fish Culture Technology ), Direktur Jenderal Perikanan  Budidaya.  Departemen Kelautan dan Perikanan, Hal.16. Thangviji, V., Mariavincent, M., and Setty, B,A., Paramasamya and Thavasimuthu.  2012,  Immunization with  the Aeromonas OMP  provides Protection against
Aeromonas hydrophila in  Goldfish  ( Carassius
auratus ). Centhe for Marine Science and Technology, Manonmaniam Sundaran University, India. Wijayaning, R., dan Wahyu, D, 2008, Daya Antibakterial  Pigmen  Pyocyanin dari Isolat ( Pseudomonas aeruginosa )  terhadap  Aeromonas
hydrophila  secara  IN  VITRO,
Fakultas Kedokteran
Hewan,
Universitas Airlangga. Surabaya. Wiyanto,  D,B.,  2010,  Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  rumput  laut kappaphycus alvarezi dan
Eucheuma  denticullatum  terhadap Bakteri  Aeromonas  hydrophila  dan Vibrio  harveyii.  Jurnal  Kelautan, Universitas Trunojoyo, Vol.3, no.1.
Deteksi Aeromonas hydrophila pada Ginjal Mencit Mus musculus dengan …. ….…….. (Intan Galuh Bintari, dkk)