## Biosfera 29 (1) Januari 2012

## Aktivitas dan Karakter Kitinase Isolat Trichoderma sp. W34 A4
Asal Kepulauan Raja Ampat Papua Barat

## Nunuk Widhyastuti dan Muhammad Ilyas
Pusat Penelitian Biologi Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia, Bogor
Diterima Mei 2011 disetujui untuk diterbitkan Januari 2012

## Abstract
The study of chitinase activity was conducted on 13 selected fungal isolates Trichoderma sp. from Raja Ampat, West Papua and Mount Bromo, East Java. The result showed that fungal isolate Trichoderma sp. W34 A4 isolated from Raja Ampat has the highest chitinase activity (14.3 x10-3 U/ml). The highest chitinase was produced by Trichoderma sp. W34 A4 grown on the media containing colloidal chitin (1%), polypepton (0.1%), KH2PO4 (0.1%) and MgSO4.7H2O (0.05%) for 2 days of incubation. Those isolates produced high chitinase with initial pH range 3.0-8.0 and levels of colloidal chitin between 0.2% -2.0%. Chitinase of Trichoderma sp. W34 A4 has optimal activity at pH 5.0 and in temperature 45 °C. Chitinase from those isolate stable at a wide pH range but it is not stable to the high temperatures.
Key words : Chitinase, Trichoderma, optimization, characterization

## Abstrak
Telah  dilakukan  uji  aktivitas  kitinase  pada  13  isolat  kapang Trichoderma sp. terseleksi  asal  Raja Ampat, Papua Barat dan Gunung Bromo, Jawa Timur. Isolat Trichoderma sp. W34 A4 asal Raja Ampat -3 diketahui memiliki  aktivitas  kitinase  tertinggi  (14.3  x10   U/ml).  Kitinase  yang  tinggi  dihasilkan  oleh Trichoderma sp. W34 A4 pada media yang mengandung koloidal kitin (1%), polipepton (0.1%), KH PO 2 4 (0.1%) dan MgSO .7H O (0,05%) selama 2 hari inkubasi. Isolat tersebut menghasilkan kitinase yang
4 2
tinggi  pada  media  dengan  rentang  pH  awal  3.0-8.0  dan  kadar  koloidal  kitin  0.2%-2.0%.  Kitinase o Trichoderma sp. W34 A4 memiliki aktivitas optimal pada pH 5.0 dan suhu 45  C. Kitinase Trichoderma sp. W34 A4 stabil pada rentang pH yang luas tetapi tidak stabil terhadap suhu tinggi.
Kata kunci : Kitinase, Trichoderma , optimasi, karakterisasi

## Pendahuluan
Kitinase  (EC  3.2.1.14)  merupakan glikosil  hidrolase  yang  mengkatalisis degradasi polimer kitin. Kitinase dan produk hidrolisisnya  memiliki  aplikasi  yang  luas  di berbagai  bidang  termasuk  pertanian (biokontrol), farmasi (senyawa bioaktif) dan pangan  (prebiotik)  (Dahiya et  al .,  2006). K i t i n a s e   d i h a s i l k a n   o l e h   b a r b a g a i mikroorganisme,  tanaman  dan  hewan (termasuk  manusia)  dengan  fungsi  yang bervariasi  tergantung  dari  sumbernya. B e b e r a p a   m i k r o b a   y a n g   d i k e t a h u i berpotensi sebagai penghasil kitinase yaitu Enterobacter , Streptomyces , Aspergillus, Penicillium dan Trichoderma (Omumasaba et al ., 2001). Kitinase yang dihasilkan oleh T . harzianum diketahui  dapat  menghambat pertumbuhan  berbagai  kapang  patogen
tanaman  (Felse  &  Panda,  1999;  Ozbay  & Newman, 2004).
Dalam  penelitian  ini  dilakukan  isolasi kapang dari sampel tanah dan serasah asal Raja  Ampat  dan  Gunung  Bromo  dengan target marga Trichoderma .  Isolat  yang diperoleh  selanjutnya  diseleksi  untuk  diuji aktivitas  dan  karakter  kitinasenya. Pengungkapan karakter kitinase diperlukan untuk mengetahui potensinya dalam bidang yang sesuai.

## Materi dan Metode
1. Isolasi dan Identifikasi Kapang
Isolasi  kapang  dari  sampel  tanah  dan serasah  asal  Raja  Ampat  dan  Gunung Bromo  dengan  target  kapang  marga Trichoderma dilakukan  dengan  metode pengenceran  sampel  (Ando et  al .,  2003;
2. Aktivitas Kitinase Kapang Trichoderma
sangat  kecil  pada  hari  pertama  kemudian Aktivitas  kitinase  dari  13  isolat meningkat  mencapai  maksimal  pada  hari Trichoderma pada media cair selama 7 hari kedua dan selanjutnya menurun sampai hari diperlihatkan  dalam  Gambar  1.  Sintesa ke-7.  Aktivitas  kitinase  tertinggi  dihasilkan kitinase  pada  semua  isolat Trichoderma oleh isolat Trichoderma sp. W 34 A-4 pada -3
yang diuji memiliki pola yang serupa, kecuali
hari ke-2, yaitu 14.3x10  U/ml. isolat  W  35  A-2,  yaitu  aktivitas  kitinase
3
Tabel 1. Kapang hasil isolasi dari sampel tanah dan seresah asal Raja Ampat dan Gunung Bromo.
Table 1. Saprophytic fungi isolated from soil sample and leaf litter from Raja Ampat and
Mount Bromo.
Marga Jumlah isolat terseleksi Raja Ampat Gunung Bromo Acremonium - 1 Aspergillus 13 6 Chaetomium - 2 Cladosporium 2 1 Fusarium 2 3 Gliocladium 4 1 Nigrospora 1 - Paecilomyces - 2 Penicillium 5 7 Scopulariopsis - 4 Trichoderma 8 6 Ulocladium - 1 Isolat steril 4 3
Ilyas et  al. ,  2006).  Keragaman  kapang sebagai  produk  hidrolisis  menggunakan diidentifikasi  berdasarkan  pengamatan  ciri metoda  Reissig  (1955).  Satu  unit  aktivitas dan  karakter  morfologi  baik  secara
kitinase  adalah  banyaknya  enzim  yang
makroskopik maupun mikroskopik.
dapat  menghasilkan  1  mol N -asetil glukosamin  dari  substrat  koloidal  kitin o 2. Media permenit pada suhu 50  C, pH 5.0. Media Potato  Dextrose  Agar (PDA)
Sebanyak  0.5  ml  larutan  enzim
digunakan untuk purifikasi, peremajaan, dan
direaksikan  dengan  0.5  ml  substrat  (1%
preparasi  inokulum  isolat Trichoderma
koloidal kitin dalam 50 mM bufer asetat pH
o Komposisi 3 jenis media cair untuk produksi 5.0) dan diinkubasi pada suhu 50  C selama kitinase yaitu (g/L): 30  menit.  Reaksi  dihentikan  dengan a.  Media A : koloidal kitin (5), polipepton (1), pemanasan  dalam  air  mendidih  selama  10 KH PO  (1), MgSO .7H O (0.5) menit,  kemudian  disentrifugasi  (5000  rpm) 2 4 4 2
b.  Media B (Rattanakit et al .,2002): koloidal
selama  5  menit  dan  kadar N -asetil kitin  (5),  baktopepton  (1),  (NH ) SO
glukosamin dalam filtrat dianalisa. 4 2 4
(1,4),  urea  (1,3),  MgSO .7H O  (0.3),
4 2 5. Karakterisasi Kitinase elemen  mikro  (1mL/L).  Komposisi Pengaruh  pH  terhadap  aktivitas
elemen  mikro:  FeSO .7H O  (5),
4 2 kitinase  diuji  dengan  mereaksikan  larutan MnSO .2H O  (1.6),  ZnSO .7H O  (1.4), 4 2 4 2 o
enzim dan substrat pada suhu 50  C selama
CoCl (2). 2
30  menit  pada  berbagai  pH  (3.0-9.0).
c.  Media  C  (Mathivanan et  al .,1998):
Stabilitas  enzim  terhadap  pH  diuji  dengan
koloidal kitin (5), sukrosa (3), NaNO  (2), 3 menginkubasikan  larutan  enzim  dalam KH PO  (1), MgSO .7H O (0.5), KCl (0.5), 2 4 4 2 larutan bufer berbagai pH (3.0-8.0) selama 1 FeSO .7H O (0.01). 4 2 jam. Aktivitas enzim tersisa ditentukan pada kondisi  standar  pengujian  kitinase.  Bufer 3. Seleksi isolat
yang digunakan yaitu bufer asetat (pH 3.0- Trichoderma penghasil  kitinase dan
5.0), bufer fosfat (pH 6.0-7.0) dan bufer Tris- optimasi  produksi  kitinase.  Preparasi
HCl (pH 8.0-9.0).
i n o k u l u m   d i l a k u k a n   d e n g a n   c a r a
Pengaruh  suhu  terhadap  aktivitas
menumbuhkan  kapang  pada  media  PDA
kitinase  diuji  dengan  mereaksikan  larutan miring, diinkubasi pada suhu kamar sampai
enzim  dan  substrat  selama  30  menit  pada
o
o
4  hari.  Ditambahkan  akuades  steril  yang
berbagai suhu (30-70  C dengan selang 5 C) mengandung  0.1%  Tween  80  dan  spora
pada pH optimum. Stabilitas enzim terhadap dipanen dengan ose. Suspensi spora diukur
suhu diuji dengan menginkubasikan larutan
kerapatan  optiknya  (OD)  pada  panjang
o enzim  pada  berbagai  suhu  (30-70  C) gelombang  600  nm  sampai  OD  mencapai
selama  1  jam  dan  2  jam.  Aktivitas  tersisa
0.5.
ditentukan  pada  kondisi  standar  pengujian
Sebanyak  2  %  inokulum  dari  setiap
kitinase.  Nilai  aktivitas  enzim  tersisa
isolat dimasukkan ke dalam media cair dan
dinyatakan  dalam  persen  dibandingkan
diinkubasi pada suhu kamar selama 7 hari di
dengan aktivitasnya tanpa perlakuan.
atas shaker dengan  kecepatan  120 rpm . Sampling dilakukan setiap hari dengan cara
Hasil dan Pembahasan
mengambil  1  ml  cairan  fermentasi, disentrifugasi  (10.000  rpm,  5  menit)  dan
1. Isolasi dan identifikasi isolat Trichoderma
aktivitas  kitinase  pada  filtrat  diuji.  Isolat
Hasil  isolasi  kapang  dengan  target
Trichoderma yang memiliki aktivitas kitinase kapang Trichoderma diperoleh  8  isolat tertinggi ditumbuhkan pada 3 jenis media (A,
Trichoderma terseleksi asal Raja Ampat dan B dan C). Media yang meghasilkan aktivitas 6 isolat Trichoderma terseleksi asal Gunung kitinase tertinggi digunakan dalam pengujian
Bromo.  Selain  itu  juga  terisolasi  beberapa pengaruh  pH  awal  media  cair  (pH  3.0-8.0)
takson kapang lain dan koloni kapang steril dan  konsentrasi  kitin  (0.2%-2%)  terhadap
yang  tidak  teridentifikasi  secara  morfologi produksi kitinase.
(Tabel 1).
4. Pengujian Aktivitas Kitinase Aktivitas  kitinase  diuji  dengan mengukur  kadar N -asetil  glukosamin
.
2
Widhyastuti, Nunuk
Aktivitas dan Karakter Kitinase Isolat Trichoderma sp. W34 A4 dkk., :  1- 7
Biosfera 29 (1) Januari 2012
2. Aktivitas Kitinase Kapang Trichoderma
sangat  kecil  pada  hari  pertama  kemudian Aktivitas  kitinase  dari  13  isolat
meningkat  mencapai  maksimal  pada  hari Trichoderma pada media cair selama 7 hari kedua dan selanjutnya menurun sampai hari diperlihatkan  dalam  Gambar  1.  Sintesa
ke-7.  Aktivitas  kitinase  tertinggi  dihasilkan kitinase  pada  semua  isolat Trichoderma oleh isolat Trichoderma sp. W 34 A-4 pada
-3
yang diuji memiliki pola yang serupa, kecuali hari ke-2, yaitu 14.3x10  U/ml. isolat  W  35  A-2,  yaitu  aktivitas  kitinase
Tabel 1. Kapang hasil isolasi dari sampel tanah dan seresah asal Raja Ampat dan Gunung Bromo.
Table 1. Saprophytic fungi isolated from soil sample and leaf litter from Raja Ampat and Mount Bromo.
Marga Jumlah isolat terseleksi Raja Ampat Gunung Bromo Acremonium - 1 Aspergillus 13 6 Chaetomium - 2 Cladosporium 2 1 Fusarium 2 3 Gliocladium 4 1 Nigrospora 1 - Paecilomyces - 2 Penicillium 5 7 Scopulariopsis - 4 Trichoderma 8 6 Ulocladium - 1 Isolat steril 4 3
Figure 1. Chitinase activity of Trichoderma isolates along 7 days of incubation.
Ilyas et  al. ,  2006).  Keragaman  kapang sebagai  produk  hidrolisis  menggunakan diidentifikasi  berdasarkan  pengamatan  ciri metoda  Reissig  (1955).  Satu  unit  aktivitas dan  karakter  morfologi  baik  secara
kitinase  adalah  banyaknya  enzim  yang makroskopik maupun mikroskopik.
dapat  menghasilkan  1  mol N -asetil glukosamin  dari  substrat  koloidal  kitin
o
2. Media permenit pada suhu 50  C, pH 5.0. Media Potato  Dextrose  Agar (PDA)
Sebanyak  0.5  ml  larutan  enzim
digunakan untuk purifikasi, peremajaan, dan
direaksikan  dengan  0.5  ml  substrat  (1%
preparasi  inokulum  isolat Trichoderma koloidal kitin dalam 50 mM bufer asetat pH
o Komposisi 3 jenis media cair untuk produksi
5.0) dan diinkubasi pada suhu 50  C selama kitinase yaitu (g/L): 30  menit.  Reaksi  dihentikan  dengan a.  Media A : koloidal kitin (5), polipepton (1), pemanasan  dalam  air  mendidih  selama  10 KH PO  (1), MgSO .7H O (0.5)
menit,  kemudian  disentrifugasi  (5000  rpm)
2 4 4 2
b.  Media B (Rattanakit et al .,2002): koloidal selama  5  menit  dan  kadar N -asetil kitin  (5),  baktopepton  (1),  (NH ) SO glukosamin dalam filtrat dianalisa.
4 2 4
(1,4),  urea  (1,3),  MgSO .7H O  (0.3),
4 2
5. Karakterisasi Kitinase
elemen  mikro  (1mL/L).  Komposisi
Pengaruh  pH  terhadap  aktivitas
elemen  mikro:  FeSO .7H O  (5),
4
2
kitinase  diuji  dengan  mereaksikan  larutan MnSO .2H O  (1.6),  ZnSO .7H O  (1.4),
4 2 4 2 o
enzim dan substrat pada suhu 50  C selama CoCl (2). 2
30  menit  pada  berbagai  pH  (3.0-9.0).
c.  Media  C  (Mathivanan et  al .,1998):
Stabilitas  enzim  terhadap  pH  diuji  dengan koloidal kitin (5), sukrosa (3), NaNO  (2), 3
menginkubasikan  larutan  enzim  dalam
KH PO  (1), MgSO .7H O (0.5), KCl (0.5),
2 4 4 2
larutan bufer berbagai pH (3.0-8.0) selama 1 FeSO .7H O (0.01).
4 2
jam. Aktivitas enzim tersisa ditentukan pada kondisi  standar  pengujian  kitinase.  Bufer
3. Seleksi isolat
yang digunakan yaitu bufer asetat (pH 3.0-
Trichoderma penghasil  kitinase dan
5.0), bufer fosfat (pH 6.0-7.0) dan bufer Tris- optimasi  produksi  kitinase.  Preparasi
HCl (pH 8.0-9.0).
i n o k u l u m   d i l a k u k a n   d e n g a n   c a r a
Pengaruh  suhu  terhadap  aktivitas menumbuhkan  kapang  pada  media  PDA
kitinase  diuji  dengan  mereaksikan  larutan miring, diinkubasi pada suhu kamar sampai
enzim  dan  substrat  selama  30  menit  pada
o
o
4  hari.  Ditambahkan  akuades  steril  yang
berbagai suhu (30-70  C dengan selang 5 C)
mengandung  0.1%  Tween  80  dan  spora
pada pH optimum. Stabilitas enzim terhadap dipanen dengan ose. Suspensi spora diukur
suhu diuji dengan menginkubasikan larutan kerapatan  optiknya  (OD)  pada  panjang
o enzim  pada  berbagai  suhu  (30-70  C) gelombang  600  nm  sampai  OD  mencapai
selama  1  jam  dan  2  jam.  Aktivitas  tersisa 0.5.
ditentukan  pada  kondisi  standar  pengujian Sebanyak  2  %  inokulum  dari  setiap
kitinase.  Nilai  aktivitas  enzim  tersisa isolat dimasukkan ke dalam media cair dan
dinyatakan  dalam  persen  dibandingkan diinkubasi pada suhu kamar selama 7 hari di
dengan aktivitasnya tanpa perlakuan.
atas shaker dengan  kecepatan  120 rpm . Sampling dilakukan setiap hari dengan cara
Hasil dan Pembahasan mengambil  1  ml  cairan  fermentasi, disentrifugasi  (10.000  rpm,  5  menit)  dan 1. Isolasi dan identifikasi isolat Trichoderma aktivitas  kitinase  pada  filtrat  diuji.  Isolat
Hasil  isolasi  kapang  dengan  target
Trichoderma yang memiliki aktivitas kitinase kapang Trichoderma diperoleh  8  isolat tertinggi ditumbuhkan pada 3 jenis media (A, Trichoderma terseleksi asal Raja Ampat dan B dan C). Media yang meghasilkan aktivitas 6 isolat Trichoderma terseleksi asal Gunung kitinase tertinggi digunakan dalam pengujian
Bromo.  Selain  itu  juga  terisolasi  beberapa pengaruh  pH  awal  media  cair  (pH  3.0-8.0) takson kapang lain dan koloni kapang steril dan  konsentrasi  kitin  (0.2%-2%)  terhadap yang  tidak  teridentifikasi  secara  morfologi produksi kitinase.
(Tabel 1).
4. Pengujian Aktivitas Kitinase Aktivitas  kitinase  diuji  dengan mengukur  kadar N -asetil  glukosamin
.
2
Gambar 5. Pengaruh konsentrasi kitin terhadap produksi kitinase Trichoderma sp. W34A4. Figure 5. The effect of chitin concentration against chitinase production of Trichoderma sp. W34A4.
0 5 10 15 20
Gambar 6. Pengaruh pH terhadap aktivitas kitinase Trichoderma sp. W34A4. Figure 6. The influence of pH on chitinase activity of Trichoderma sp. W34A4.
0 5 10 15 20 0 2 4 6 8 10 12
14
4. Karakter kitinase Trichoderma sp. W34A4
Aktivitas optimum kitinase kapang pada umumnya  berada  pada  pH  asam  (4.0-5.5) o dan suhu 50  C (Sceigelova & Crout,1999). Kitinase  yang  dihasilkan  oleh Trichoderma sp. W34A4 memiliki aktivitas optimum pada o pH 5.0 (Gambar 6) dan suhu 45  C (Gambar 7),  relatif  stabil  terhadap  perubahan  pH tetapi tidak cukup stabil terhadap perubahan suhu.  Kitinase  tersebut  masih  memper- tahankan lebih dari 80% aktivitasnya setelah
diinkubasi  pada    larutan  bufer  dengan  pH 3 . 0 - 8 . 0   ( G a m b a r   8 ) .   K i t i n a s e mempertahankan 100% aktivitasnya   pada o suhu 40  C selama 1 jam, tetapi kehilangan setengah  aktivitasnya  bila  diinkubasi  pada suhu  tersebut  selama  2  jam  (Gambar  9). Kapang Talaromyces  emersonii diketahui menghasilkan  kitinase  yang  bersifat termostabil dangan aktivitas optimum pada o suhu 65  C.
3. Optimasi produksi kitinase Trichoderma Pada  umumnya  kitinase  kapang sp W34A4. dihasilkan  pada  pH  asam  sedangkan Komposisi  media  berpengaruh kitinase  bakteri  pada  pH  sedikit  asam
terhadap  pertumbuhan  sel  dan  produksi
sampai  netral  (Shanmugaiah et  al .,  2008). enzim.  Sintesa  kitinase  dipengaruhi  oleh
Pada  media  A, Trichoderma sp.  W34A4 sumber  karbon  dan  konsentrasinya  dalam mampu  menghasilkan  kitinase  dengan media  (Shanmugaiah et  al .,  2008).  Kitin aktivitas  tinggi  dalam  2  hari  inkubasi merupakan sumber karbon yang baik untuk
(Gambar  3)  pada  rentang  pH  awal  media sintesa  kitinase,  sedangkan  laktosa, yang luas (Gambar 4). glukosamin,  xilosa  dan  sukrosa  bukan
Konsentrasi  koloidal  kitin  optimum
sumber  karbon  yang  baik  (Souza et  al .,
untuk  produksi  kitinase  bervariasi  pada 2005). Trichoderma sp.  W34A4  tumbuh berbagai mikroba. Konsentrasi koloidal kitin dengan  baik  pada  ketiga  macam  media
yang  terbaik  untuk  produksi  kitinase  pada tetapi aktivitas kitinase terdeteksi tinggi pada Trichoderma sp.  W34A4  adalah  0.8% media A  dan  B,  sedangkan  pada  media  C
(Gambar  5),  sedangkan  pada Fusarium aktivitas kitinase sangat rendah (Gambar 2). chlamidosporum (Mathivanan et  al .,1998) Rendahnya aktivitas kitinase pada media C
dan Colletotrichum gloeosporioides , adalah kemungkinan  karena  terjadinya  represi
0.3% dan 0.5% berturut-turut (Souza et al .,
sintesa kitinase oleh adanya sukrosa dalam
2005). media C.
Gambar 2. Pengaruh jenis media terhadap produksi kitinase Trichoderma sp. W34A4. Figure 2. The influence of media types to the production of chitinase Trichoderma sp. W34A4. 0 1 2 3 4 5 6 0 5
Gambar 3. Pengaruh waktu inkubasi terhadap produksi kitinase Trichoderma sp. W34A4. Figure 3. Effect of incubation periode to the chitinase production of Trichoderma sp. W34A4.
Widhyastuti, Nunuk Aktivitas dan Karakter Kitinase Isolat Trichoderma sp. W34 A4 dkk., :  1- 7 5 4
Gambar 4. Pengaruh pH awal media terhadap produksi kitinase Trichoderma sp. W34A4. Figure 4. The influence of initial pH media on chitinase production of Trichoderma sp. W34A4.
Gambar 5. Pengaruh konsentrasi kitin terhadap produksi kitinase Trichoderma sp. W34A4. Figure 5. The effect of chitin concentration against chitinase production of Trichoderma sp. W34A4.
0 5 10 15 20
Gambar 6. Pengaruh pH terhadap aktivitas kitinase Trichoderma sp. W34A4. Figure 6. The influence of pH on chitinase activity of Trichoderma sp. W34A4.
0 5 10 15 20 0 2 4 6 8 10 12 14 4. Karakter kitinase Trichoderma sp. W34A4 Aktivitas optimum kitinase kapang pada umumnya  berada  pada  pH  asam  (4.0-5.5) o dan suhu 50  C (Sceigelova & Crout,1999). Kitinase  yang  dihasilkan  oleh Trichoderma sp. W34A4 memiliki aktivitas optimum pada o pH 5.0 (Gambar 6) dan suhu 45  C (Gambar 7),  relatif  stabil  terhadap  perubahan  pH tetapi tidak cukup stabil terhadap perubahan suhu.  Kitinase  tersebut  masih  memper- tahankan lebih dari 80% aktivitasnya setelah
diinkubasi  pada    larutan  bufer  dengan  pH 3 . 0 - 8 . 0   ( G a m b a r   8 ) .   K i t i n a s e mempertahankan 100% aktivitasnya   pada o suhu 40  C selama 1 jam, tetapi kehilangan setengah  aktivitasnya  bila  diinkubasi  pada suhu  tersebut  selama  2  jam  (Gambar  9). Kapang Talaromyces  emersonii diketahui menghasilkan  kitinase  yang  bersifat termostabil dangan aktivitas optimum pada o suhu 65  C.
3. Optimasi produksi kitinase Trichoderma Pada  umumnya  kitinase  kapang sp W34A4. dihasilkan  pada  pH  asam  sedangkan Komposisi  media  berpengaruh
kitinase  bakteri  pada  pH  sedikit  asam terhadap  pertumbuhan  sel  dan  produksi
sampai  netral  (Shanmugaiah et  al .,  2008). enzim.  Sintesa  kitinase  dipengaruhi  oleh
Pada  media  A, Trichoderma sp.  W34A4 sumber  karbon  dan  konsentrasinya  dalam
mampu  menghasilkan  kitinase  dengan media  (Shanmugaiah et  al .,  2008).  Kitin aktivitas  tinggi  dalam  2  hari  inkubasi merupakan sumber karbon yang baik untuk
(Gambar  3)  pada  rentang  pH  awal  media sintesa  kitinase,  sedangkan  laktosa,
yang luas (Gambar 4).
glukosamin,  xilosa  dan  sukrosa  bukan
Konsentrasi  koloidal  kitin  optimum sumber  karbon  yang  baik  (Souza et  al ., untuk  produksi  kitinase  bervariasi  pada 2005). Trichoderma sp.  W34A4  tumbuh berbagai mikroba. Konsentrasi koloidal kitin dengan  baik  pada  ketiga  macam  media
yang  terbaik  untuk  produksi  kitinase  pada tetapi aktivitas kitinase terdeteksi tinggi pada
Trichoderma sp.  W34A4  adalah  0.8% media A  dan  B,  sedangkan  pada  media  C (Gambar  5),  sedangkan  pada Fusarium aktivitas kitinase sangat rendah (Gambar 2). chlamidosporum (Mathivanan et  al .,1998) Rendahnya aktivitas kitinase pada media C dan Colletotrichum gloeosporioides , adalah kemungkinan  karena  terjadinya  represi
0.3% dan 0.5% berturut-turut (Souza et al .,
sintesa kitinase oleh adanya sukrosa dalam 2005).
media C.
Gambar 2. Pengaruh jenis media terhadap produksi kitinase Trichoderma sp. W34A4.
Figure 2. The influence of media types to the production of chitinase Trichoderma sp. W34A4. 0 1 2 3 4 5 6 0 5
Gambar 3. Pengaruh waktu inkubasi terhadap produksi kitinase Trichoderma sp. W34A4.
Figure 3. Effect of incubation periode to the chitinase production of Trichoderma sp. W34A4.
4
Gambar 4. Pengaruh pH awal media terhadap produksi kitinase Trichoderma sp. W34A4. Figure 4. The influence of initial pH media on chitinase production of Trichoderma sp. W34A4.
emersonii CBS 814.70. Biotechnology
Letter , 12:673– 8.
Ilyas,  M.,  M.  Rahmansyah,  dan  A.  Kanti.
2006. Seri  panduan:  Teknik  isolasi fungi . Jakarta: LIPI-Press. Mathivanan N, Kabilan V, and Murugesan V.
1998.  Purification,  Characterization, and  Antifungal  Activity  of  Chitinase from Fusarium chlamodosporum ,  A
Mycoparasite  to  Groundnut  Rust, Puccinia arachadis . Canadian Journal of Microbiology , 44(7):646-651. Omumasaba CA, Yoshida N, and Ogawa K. 2 0 0 1 .   P u r i f i c a t i o n   a n d Characterization  of  Chitinase  from Trichoderma viride . Journal of General and Applied Microbiology , 47:53-61.
Ozbay N and Newman SE. 2004. Biological Control  with Trichoderma Spp.  With Emphasis  on T.  harzianum . Pakistan
Journal  of  Biological  Sciences , 7(4):478-484. Rattanakit N, Plikomol A, Yano S, Wakayama
M,  and  Tachiki  T.  2002.  Utilization  of Shrim Shellfish Waste as a Substrate for Solid-State  Cultivation  of  a  Culture Based on Chitinase Formation Which Is Necessary  for  Chitin  Assimilation. Journal  of  Bioscience  and  Bio- engineering , 93(6):550-556. Scigelova M and Crout DHG. 1999. Microbial β- N -acetylhexosamini-dases  and  their biotechnological  applications. Enzyme and Microbial Technology 25:3–14. Shanmugaiah  V,  Mathivanan  N,  Balasu- bramanian  N.,  and  Manoharan  PT. 2 0 0 8 .   O p t i m i z a t i o n   o f   C u l t u r a l Conditions  for  Production  of  Chitinase by Bacillus  laterosporous MML2270 Isolated  from  Rice  Rhizosphere  Soil. African  Journal  of  Biotechnology , 7(15):2562-2568. Widhyastuti, Nunuk Aktivitas dan Karakter Kitinase Isolat Trichoderma sp. W34 A4 dkk., :  1- 7
0 5 10 15 20
Gambar 7. Pengaruh suhu terhadap aktivitas kitinase Trichoderma sp. W34A4. Figure 7. Effect of temperature to the chitinase activity of Trichoderma sp. W34A4. 0 20 40 60 80 100 0 20 40 60 80 100 Gambar 8. Pengaruh pH terhadap stabilitas kitinase Trichoderma sp. W34A4. Figure 8. The influence of pH on chitinase stability of Trichoderma sp. W34A4.
Gambar 9. Pengaruh suhu terhadap stabilitas kitinase Trichoderma sp. W34A4. Larutan enzim diinkubasi selama 1 jam dan 2 jam pada berbagai suhu.
Figure  9.  The  effect  of  temperature  on  chitinase  stability Trichoderma sp.  W34A4.  Enzyme solution was incubared for 1 hour and 2 hours at various temperature.

## Ucapan Terima Kasih
Penulis  mengucapkan  terimakasih kepada  Ibu  Kasirah  atas  bantuan  teknis selama penelitian.

## Daftar Pustaka
Ando, K., C. Nakhashima, J-Y. Park, and M. Otoguro. 2003. Workshop on Isolation Methods  of  Microbes.  Biotechnology Center-NITE  &  Research  and Development  Center  for  Biotechno- logy - LIPI, Cibinong: 24--26 Juni 2003.
Felse  P.A.  and  Panda  T.1999.  Regulation and  Cloning  of  Chitin-ase  Genes. A p p l i e d   o f   M i c r o b i o l o g y   a n d Biotechnology , 51: 141-151.
Dahiya,  N.,  R.  Tewari,  and  G.S.  Hoondal. 2006.  Biotechnological  aspects  of chitinolytic enzymes: A review.
Applied of Microbiology and Bio-technology , 71(6): 773-782.
Hendy L, Gallagher J, Winters A, Hackett TJ, McHale  L,  and  McHale  AP.  1990. Production  of  An  Extra-cellular Chitinolytic  System  by Talaromyces
emersonii CBS 814.70. Biotechnology Letter , 12:673– 8.
Ilyas,  M.,  M.  Rahmansyah,  dan  A.  Kanti. 2006. Seri  panduan:  Teknik  isolasi fungi . Jakarta: LIPI-Press.
Mathivanan N, Kabilan V, and Murugesan V. 1998.  Purification,  Characterization, and  Antifungal  Activity  of  Chitinase from Fusarium chlamodosporum ,  A Mycoparasite  to  Groundnut  Rust, Puccinia arachadis . Canadian Journal of Microbiology , 44(7):646-651. Omumasaba CA, Yoshida N, and Ogawa K. 2 0 0 1 .   P u r i f i c a t i o n   a n d Characterization  of  Chitinase  from Trichoderma viride . Journal of General and Applied Microbiology , 47:53-61.
Ozbay N and Newman SE. 2004. Biological
Control  with Trichoderma Spp.  With Emphasis  on T.  harzianum . Pakistan Journal  of  Biological  Sciences , 7(4):478-484. Rattanakit N, Plikomol A, Yano S, Wakayama
M,  and  Tachiki  T.  2002.  Utilization  of Shrim Shellfish Waste as a Substrate for Solid-State  Cultivation  of  a  Culture Based on Chitinase Formation Which Is Necessary  for  Chitin  Assimilation. Journal  of  Bioscience  and  Bio- engineering , 93(6):550-556.
Scigelova M and Crout DHG. 1999. Microbial β- N -acetylhexosamini-dases  and  their biotechnological  applications. Enzyme and Microbial Technology 25:3–14. Shanmugaiah  V,  Mathivanan  N,  Balasu- bramanian  N.,  and  Manoharan  PT. 2 0 0 8 .   O p t i m i z a t i o n   o f   C u l t u r a l Conditions  for  Production  of  Chitinase by Bacillus  laterosporous MML2270 Isolated  from  Rice  Rhizosphere  Soil.
African  Journal  of  Biotechnology ,
7(15):2562-2568.
0 5 10 15 20
Gambar 7. Pengaruh suhu terhadap aktivitas kitinase Trichoderma sp. W34A4.
Figure 7. Effect of temperature to the chitinase activity of Trichoderma sp. W34A4.
0 20 40 60 80 100 0 20 40 60 80 100 Gambar 8. Pengaruh pH terhadap stabilitas kitinase Trichoderma sp. W34A4.
Figure 8. The influence of pH on chitinase stability of Trichoderma sp. W34A4.
Gambar 9. Pengaruh suhu terhadap stabilitas kitinase Trichoderma sp. W34A4. Larutan enzim diinkubasi selama 1 jam dan 2 jam pada berbagai suhu.
Figure  9.  The  effect  of  temperature  on  chitinase  stability Trichoderma sp.  W34A4.  Enzyme solution was incubared for 1 hour and 2 hours at various temperature.

## Ucapan Terima Kasih
Penulis  mengucapkan  terimakasih kepada  Ibu  Kasirah  atas  bantuan  teknis selama penelitian.

## Daftar Pustaka
Ando, K., C. Nakhashima, J-Y. Park, and M. Otoguro. 2003. Workshop on Isolation Methods  of  Microbes.  Biotechnology Center-NITE  &  Research  and Development  Center  for  Biotechno- logy - LIPI, Cibinong: 24--26 Juni 2003.
Felse  P.A.  and  Panda  T.1999.  Regulation and  Cloning  of  Chitin-ase  Genes. A p p l i e d   o f   M i c r o b i o l o g y   a n d Biotechnology , 51: 141-151.
Dahiya,  N.,  R.  Tewari,  and  G.S.  Hoondal. 2006.  Biotechnological  aspects  of chitinolytic enzymes: A review. Applied of Microbiology and Bio-technology , 71(6): 773-782. Hendy L, Gallagher J, Winters A, Hackett TJ, McHale  L,  and  McHale  AP.  1990. Production  of  An  Extra-cellular
Chitinolytic  System  by Talaromyces