## PENDAHULUAN
Infeksi merupakan penyakit yang menjadi permasalahan di banyak negara termasuk Indonesia. Resistensi bakteri menjadi salah satu faktor penyebab pencarian senyawa aktif  yang  berpotensi  sebagai  antibakteri.  Tanaman sebagai  bahan  alam  dapat  dimanfaatkan  untuk
mengurangi  penggunaan  bahan  sintetik  dalam pengobatan selain dipercaya memiliki efek samping yang minim  (Melviani et  al. 2022).  Secara  tradisional masyarakat  Kalimantan  menggunakan  tumbuhan kalangkala ( Litsea sp) untuk mengobati penyakit seperti diare,  sakit  perut,  dyspepsia,  gastroenteritis,  diabetes, dll.  (Kuspradini,  et  al.,  2018).  Penelitian  sebelumnya

## Aktivitas Antibakteri dan Penetapan Kadar Flavonoid Fraksi Daun Kalangkala (Litsea angulata) Serta Profil Kromatografi Lapis Tipis
Antibacterial Activity and Determination of Flavonoid Levels of Kalangkala Leaf Fraction (Litsea angulata) and Thin Layer Chromatography Profile
Rohama 1*
Melviani 2
Rahmadani 3 Sari Mulia University, Banjarmasin City, South Borneo 70238, Indonesia *email: apt.rohama@gmail.com

## Abstrak
Secara  tradisional masyarakat  Kalimantan  menggunakan kalangkala ( Litsea  angulata) untuk mengobati berbagai penyakit, salah satunya adalah diare. Diketahui kalangkala mengandung flavonoid yang memiliki aktivitas antibakteri. Ekstrak daun kalangkala di uji aktivitas antibakteri terhadap Escherichia coli yang merupakan salah satu bakteri penyebab diare secara difusi dan dilusi. Kemudian kadar flavonoid ditetapkan dengan metode  spektofotometri  UV-Vis  serta  melihat bagaimana  profil  kromatografi  lapis tipis  pada  tingkatan  fraksi  untuk  mengetahui  seberapa  banyak  senyawa  flavonoid. Hasil  menunjukkan  ekstrak  daun  kalangkala  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap E.coli secara difusi diperoleh diameter zona hambat sudah terlihat pada konsentrasi 20 mg/ml. Secara dilusi diperoleh nilai KHM pada konsentrasi 50% dan KBM pada konsentrasi  100%.  Kadar  flavonoid  pada  ekstrak  sebesar  71,367  mg  QE ( Quersetin Equialen ) /g, pada fraksi n-Heksan sebesar 8,367 mg QE ( Quersetin Equialen ) /g, pada fraksi etil asetat sebesar 6,700 mg QE ( Quersetin Equialen ) /g  dan pada fraksi aquadest sebesar 5,700 mg QE ( Quersetin Equialen ) /g. Profil Kromatogafi Lapis Tipis fraksi n-Heksan dengan eluen n- Heksan : Etil Asetat (8:12) tampak 7 noda, fraksi etil asetat dengan eluen Etil Asetat : N-Heksan (3:7) tampak 5 noda dan fraksi aquadest dengan eluen butanol : asam asetat : aquadest (4:1:5) tampak 2 noda.

## Kata Kunci:
Kalangkala Antibakteri Flavonoid Fraksi Keywords : Kalangkala Antibacterial Flavonoid Fraction

## Abstract
Traditionally  the  people  of  Kalimantan  use  kalangkala  (Litsea  angulata)  to  treat  various diseases, one of which is diarrhea. It is known that kalangkala contains flavonoids that have antibacterial  activity.  Kalangkala  leaf  extract  was  tested  for  antibacterial  activity  against Escherichia coli which is one of the bacteria that causes diarrhea by diffusion and dilution. Then flavonoid levels are determined by the Spectophotometry UV-Vis method and see how thin  layer  chromatography  profiles  at  the  fraction  level  to  find  out  how  much  flavonoid compounds  there  are.  The  results  showed  that  kalangkala  leaf  extract  has  antibacterial activity against E.coli by diffusion obtained the diameter of the inhibitory zone already visible at a concentration of 20 mg / ml. Dilutionally obtained the value of KHM at a concentration of 50% and KBM at a concentration of 100%. Flavonoid levels in the extract were 71,367 mg  QE(Quercetin  Equialen)/g,  at  the  n-Hexane  fraction  of  8,367  mg  QE(Quercetin Equialen)/g, at the ethyl acetate fraction of 6,700 mg QE(Quercetin Equialen)/g and at the aquadest  fraction  of  5,700  mg  QE(Quercetin  Equialen)/g.  Profile  of  Thin-Layered Chromatogaphy  of  the  n-Hexane  fraction  with  n-Hexane  :  Ethyl  Acetate  (8:12)  eluene appeared 7 stains, ethyl acetate fraction with ethyl acetate : N-Hexane (3:7) eluene appears 5 stains and aquadest fraction with butanol: acetic acid : aquadest (4:1:5) eluent appears 2 stains.
© 2023 The Authors. Published by Institute for Research and Community Services Universitas Muhammadiyah Palangkaraya. This  is  Open  Access  article  under  the  CC-BY-SA  License  (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/).  DOI: https://doi.org/10.33084/jsm.v9i1.5194.
diketahui  daun  kalangkala  mengandung  senyawa flavonoid yang memiliki kemampuan sebagai antibakteri dan  bentuk  sediaanya  sebagai mouthwash memiliki kemampuan  menghambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus mutans (Rohama, et al., 2021) . Penelitian lain  juga  melaporkan  bahwa  ekstrak  daun  kalangkala memiliki  kemampuan  menghambat  pertumbuhan bakteri Staphylococcus mutans dan Staphylococcus aureus (Kuspradini, et al., 2018) . Penelitian aktivitas antibakteri kalangkala  terhadap  bakteri Escherichia  coli belum pernah  dilakukan. E.coli merupakan  bakteri  gram negative penyebab utama morbiditas dan mortalitas di dunia  melalui  infeksi  gangguan  pencernaan.  Penetapan kadar  flavonoid  perlu  dilakukan  untuk  mengetahui seberapa  besar  kadar  flavonoid  yang  terkandung didalam daun kalangkala yang memiliki aktivitas sebagai antibakteri.

## METODOLOGI

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  yaitu  Rotary  evaporator, spektrofotometer UV-Vis, lampu UV,  BSC, Inkubator, autoklaf, hotplate, kuvet, corong pisah.
Bahan  yang  digunakan  yaitu  Daun  Kalangkala (Litsea angulata), etanol  96%,  n-heksan,  etil  asetat,  aquadest, bakteri E.coli, media Nutrient Agar , Media Mullen  Hilton Agar , Media Nutrient Broth, kuersetin.

## Metode Pelaksanaan
Persiapan Alat dan Bahan Pembuatan  ekstrak  etanol  daun  kalangkala  ( Litsea angulata )  menggunakan  metode  maserasi  sehingga diperoleh  ekstrak  kental  (Rohama,  et  al.,  2021). Kemudian  dilakukan  pengujian  aktivitas  antibakteri terhadap bakteri E.coli dengan metode Difusi (Rohama, et al., 2021) dan dilusi (Jannah, et al., 2021)
Tahapan pembuatan fraksi daun Kalangkala
a. 10 gram ekstrak daun kalangkala dilarutkan dengan 50 ml aquadest masukkan dalam corong pisah.
b. Tambahkan  50  ml  n-Heksan  (1:1)  lalu  gojok homogen dan diamkan hingga terbentuk 2 fase
c. Ambil  fraksi  n-heksan.  Tambahkan  etil  asetat  (1:1) kedalam  corong  pisah,  gojoj  dan  diamkan  sampai terbentuk 2 fase.
d. Ambil fraksi etil asetat dan aquadest.
e. Ketiga  fraksi  yang  diperoleh  di  pekatkan menggunakan rotary evaporator (Mu'awwanah, et al., 2013)
Ekstrak dan fraksi yang diperoleh dilakukan identifikasi senyawa  flavonoid  dengan  pereaksi  warna,  kemudian dilihat Profil Kromatografi Lapis Tipis nya dengan variasi eluen  untuk  melihat  eluen  yang  paling  optimal  dalam memisahkan senyawa. (Rohama, et al., 2021) .
Penetapan Kadar Flavonoid Ekstrak dan Fraksi
a. Pembuatan larutan baku induk kuersetin 100 ppm 10  mg  kuersetin  dilarutkan  dengan  etanol  96%, tambahkan etanol 96% ad 100 ml dalam labu ukur.
b. Penentuan panjang gelombang maksimum kuersetin Ambil 1 ml baku induk, tambahkan 1 ml AlCl 3 10% dan  8  ml  asam  asetat  5%.  Tentukan  panjang gelombang maksimum pada 370-450 nm
c. Penetapan Operating time
Ambil 1 ml baku induk, tambahkan 1 ml AlCl 3 10% dan  8  ml  asam  asetat  5%.  Tentukan  absorbansi dengan  panjang  gelombang  yang  telah  diperoleh. Dengan  interbal  waktu  2  menit  sampai  diperoleh absorbansi yang stabil.
d. Pembuatan kurva standar kuersetin
Ambil baku induk dan buat seri konsentrasi yaitu 2 ppm, 4 ppm, 6 ppm, 8 ppm, 10 ppm dan 12 ppm. Masing-masing di ambil 1 ml, tambahkan 1 ml AlCl 3 10%  dan  8  ml  asam  asetat  5%  diamkan  selama operating time dan ukur absorbansinya.
e. Pembuatan larutan baku induk fraksi daun kalangkala Ambil 1 ml fraksi tambahkan 1 ml AlCl 3 10% dan 8 ml asam asetat 5%, diamkan selama operating time .
Lakukan pengukuran dengan spektrofotometri UV- Vis  dengan  panjang  gelombang  yang  diperoleh (Asmorowati, et al., 2019)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada  proses  maserasi  menggunakan  simplisia  kering sebanyak  898,25  gram.  Kemudian  diekstraksi  dengan pelarut  etanol  96%  setiap  3x24  jam  menghasilkan ekstrak kental sebanyak 55,97 gram. Rendemen ekstrak yang  didapatkan  sebesar  6,23%.  Pemilihan  etanol  96% dikarenakan mampu menyari sebagian besar kandungan kimia tanaman serta etanol juga memiliki beberapa sifat seperti absorpsi yang baik, bersifat netral, tidak beracun dan  kapang  sulit  tumbuh  dalam  etanol  20%  ke  atas (Noval et al. 2019).

## Uji Aktivitas Antibakteri Metode Difusi
Berdasarkan hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun  kalangkala  terhadap Escherichia  coli ,  didapatkan hasil sebagai berikut:
Gambar I. Hasil Uji Daya Hambat
Tabel 1.
Hasil  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Etanol  Daun  Kalangkala  terhadap Escherichia coli. Perlakuan Diameter (mm) Daya Hambat Kontrol (-) 0 Lemah 20 mg/ml 10 Sedang 60 mg/ml 20 Kuat 100 mg/ml 26 Sangat kuat Kontrol (+) 55 Sangat kuat Keterangan (Hapsari, et al., 2015):
Diameter zona hambat >20 mm  : Daya hambat sangat kuat Diameter zona hambat 10-20 mm : Daya hambat kuat Diameter zona hambat 5-10 mm : Daya hambat sedang Diameter zona hambat 0-5 mm  : Daya hambat lemah
Uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun kalangkala dilakukan dalam kondisi steril di dalam BSC (Bio Safety Cabinet). Kertas cakram yang digunakan dalam metode difusi ini adalah kertas cakram dengan diameter 6 mm. Bakteri  yang  digunakan  dalam  pengujian  aktivitas antibakteri  ekstrak  etanol  daun  kalangkala  berupa bakteri  gram  negatif  yaitu Escherichia  coli .  Terdapat  5 perlakuan yang diberikan terhadap bakteri , diantaranya kontrol  negatif  dengan  DMSO,  kontrol  positif  dengan ciprofloxasin  dan  ekstrak  daun  kalangkala  dengan pengenceran 20, 60 dan 100 mg/ml. Sebelum dilakukan pengujian,  ekstrak  kental  diencerkan  terlebih  dahulu dengan  DMSO.  Alasan  penggunaan  DMSO  sebagai pengencer ekstrak dikarenakan DMSO digunakan dalam kontrol  negatif  sehingga  bias  yang  ditimbulkan  saat penelitian  dapat  diminimalisir  dan  dalam  pengenceran ekstrak  perlakuan  lebih  baik  menggunakan  senyawa yang  sama  dengan  kontrol  negatif  (Noval et  al. 2020). Kontrol  negatif  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  DMSO,  karena  DMSO  tidak  memiliki  fungsi antibakteri  dan  umumnya  hanya  digunakan  sebagai pelarut  (Rachmawati,  et  al.,  2016).  Sedangkan  kontrol positif  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah ciprofloxacin  yang  biasa  digunakan  dalam  pengobatan diare karena infeksi bakteri E.coli.
Berdasarkan  hasil  pengamatan  tersebut  kekuatan antibakteri ekstrak etanol daun kalangkala terhadap E. coli mulai  terlihat  pada  konsentrasi  20  mg/ml  dan kekuatan aktivitas antibakterinya akan meningkat seiring dengan  meningkatnya  konsentrasi  ekstrak  yang digunakan.
Kontrol - 20mg/ml 60mg/ml 100mg/ml

## Uji Aktivitas Antibakteri Metode Dilusi Konsentrasi Hambat Minimum (KHM)
Hasil  pengujian  konsentrasi  hambat  minimum  (KHM) diperoleh hasil sebagai berikut:
Tabel II. Hasil  pengujian  konsentrasi  hambat minimum (KHM) ekstrak daun kalangkala ( Litsea  angulata )  terhadap  bakteri Escherichia coli Perlakuan Replikasi I II III Kontrol negatif (DMSO) + Kontrol positif (Ciprofloxacin) - Konsentrasi 6,25% + + + Konsentrasi 12,5% + + + Konsentrasi 25% + + + Konsentrasi 50% - - - Konsentrasi 100% - - - Keterangan:
Tanda negarif (-) : tidak ada pertumbuhan bakteri Tanda positif (+) : adanya pertumbuhan bakteri
Berdasarkan hasil pada tabel diatas dapat dilihat bahwa ekstrak  daun  kalangkala  ( Litsea  angulata) memiliki konsentrasi  hambat  minimum  terhadap  bakteri Escherichia coli diperoleh rata-rata kejernihannya berada pada konsentrasi 50%

## Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM)
Hasil  pengujian  konsentrasi  bunuh  minimum  (KBM) diperoleh sebagai berikut:
Tabel III. Hasil  pengujian  konsentrasi  bunuh minimum (KBM) ekstrak daun kalangkala ( Litsea  angulata )  terhadap  bakteri
Escherichia coli Perlakuan Replikasi I II III Konsentrasi 50% + + + Konsentrasi 100% - - - Keterangan:
Tanda negarif (-) : tidak ada pertumbuhan bakteri Tanda positif (+) : adanya pertumbuhan bakteri
Berdasarkan hasil pada tabel diatas dapat dilihat bahwa ekstrak  daun  kalangkala  ( Litsea  angulata) memiliki konsentrasi  bunuh  minimum  terhadap  bakteri Escherichia coli diperoleh rata-rata kejernihannya berada pada konsentrasi 100%.
Pengujian  antivitas  antibakteri  konsentrasi  hambat minimum  (KHM)  menggunakan  metode  dilusi  cair dengan media Nutrient Broth (NB). Menurut (Maryadi, et al., 2017), pengujian KHM ialah salah satu pengujian yang digunakan  untuk  mengetahui  suatu  sensitivitas  dari mikroba  pada  zat  bioaktif  (Kurniawati  et  al.  2021). Metode  dilusi  merupakan  pengujian  kekuatan antibakteri dalam media cair yang telah diberikan agen antibakteri  dan  di  inkubasi  selama  1x24  jam.  Ekstrak daun kalangkala menggunakan konsentrasi yaitu 100%, 50%, 25%, 12,5% dan 6,25% yang dibuat dalam larutan stok  sebanyak  5  ml.  Menurut  (Sariadi,  et  al.,  2019), dalam  menentukan  suatu  nilai  KHM  yaitu  dipilih  dari konsentrasi  terendah  yang  masih  menunjukkan kejernihan (Noval, et al. 2021.
Pada  tabel  2  dapat  dilihat  kontrol  negatif  terjadi kekeruhan,  artinya  pertumbuhan  bakteri  yang  terjadi karena  DMSO  diketahui  tidak  mempunyai  aktivitas antibakteri. Tabung kontrol positif terlihat jernih artinya tidak terjadi pertumbuhan bakteri, hal ini sesuai dengan fungsi dari ciprofloxacin yang merupakan antibiotic yang sensitive  terhadap  bakteri e.coli. Tabung  yang  berisi ekstrak daun kalangkala menunjukkan kejernihan  pada konsentrasi 50% sehingga dapat disimpulkan nilai KHM terdapat pada konsentrasi 50%.
Tabung ekstrak yang merupakan nilai KHM dilanjutkan dengan pengujian untuk melihat nilai KBM (Konsentrasi Bunuh Minimum), nilai KBM dapat dilihat pada tabel 3, tabung  yang  menunjukkan  kejernihan  terdapat  pada konsentrasi  100%,  artinya  nilai  KBM  terdapat  pada konsentrasi 100%.
Adanya  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  daun kalangkala  terhadap  bakteri Escherichia  coli sesuai dengan fungsi senyawa metabolit yang terkandung pada ekstrak  tersebut,  antara  lain:  flavonoid,  alkaloid,
saponin dan tanin. Flavonoid berperan secara langsung sebagai antibiotik dengan membentuk kompleks dengan protein  sel  bakteri  melalui  ikatan  hidrogen.  Struktur dinding  sel  dan  membran  sitoplasma  bakteri  yang mengandung protein menjadi tidak stabil dan rusak. Hal ini  menyebabkan  sel  bakteri  kehilangan  fungsi biologisnya  sehingga  fungsi  permeabilitas  sel  bakteri terganggu  dan  berakibat  pada  kematian  sel  bakteri. Selain  itu,  perubahan  membran  sel  bakteri  umumnya diikuti oleh masuknya air yang tidak terkontrol ke dalam sel  bakteri  sehingga  terjadi  pembengkakan  dan  lisis (Hapsari, et al., 2015) (Harborne, 1987).
Alkaloid memiliki aktivitas antibakteri dengan tingginya senyawa aromatik kuartener yang berkontribusi untuk membentuk  interkhelat  dengan  DNA  bakteri  dan menghambat  enzim  topoisomerase  sel  bakteri (Rachmawati,  et  al.,  2016)  (Ningsih,  et  al.,  2013) sehingga  menyebabkan  sel  mengalami  mutasi  atau kerusakan  genetik  (Amalia,  et  al.,  2014)  (Putri,  et  al., 2019).  Selain itu menurut Darsana (2012), mekanisme kerja  alkaloid  sebagai  antibakteri  adalah  dengan  cara mengganggu  komponen  penyusun  peptidoglikan  pada sel bakteri sehingga lapisan dinding sel tidak terbentuk sempurna dan sel bakteri itupun akhirnya akan mati. Saponin  sebagai  antibakteri  berdifusi  melewati peptidoglikan dan dinding sel kemudian akan mengikat membran dan menyebabkan sitoplasma keluar dari sel, proses ini dapat mengakibatkan kematian sel (Putri, et al., 2019). Saponin dapat merusak membran sitoplasma dan  mengakibatkan  sifat  permeabilitas  membran  sel berkurang transport zat ke dalam dan keluar sel menjadi tidak  terkontrol.  Zat-zat  yang  berada  di  dalam  sel seperti ion organik enzim, asam amino, dan nutrisi dapat ekluar dari dalam sel. Jika enzim keluar dari dalam sel bersama  zat  lain  seperti  air  dan  nutrisi  maka  proses metabolisme  akan  terhambat  sehingga  terjadi penurunan ATP yang diperlukan sel untuk pertumbuhan dan  perkembangbiakannya,  hal  inilah  yang  akan mengakibatkan kematian sel bakteri (Retnowati, et al., 2011).
Tanin  merupakan  senyawa  kimia  golongan  polifenol yang diduga  dapat mengikat salah satu protein bakteri yaitu  adhesin.  Jika  hal  ini  terjadi,  maka  dapat  merusak reseptor pada permukaan sel bakteri. Tanin dibuktikan dapat membentuk kompleks senyawa yang irreversible dengan  prolin  (protein  lengkap)  karena  ikatan  ini mempunyai  efek  penghambatan  sintesis  protein  dalam pembentukan dinding sel (Hapsari, et al., 2015). Selain itu menurut Ningsih (2013), tanin dapat bereaksi dengan membran  sel  untuk  menginaktivasi  enzim  dan mendestruksi  fungsi  materi  genik  dengan  membentuk kompleks  protein  melalui  ikatan  hidrogen  dan  ikatan hidrofobik.  Tanin  dalam  konsentrasi  rendah  dapat berfungsi menghambat pertumbuhan bakteri, sedangkan pada  konsentrasi  tinggi  dapat  berfungsi  sebagai antibakteri  dengan  cara  mengkoagulasi  protoplasma bakteri  sehingga  terbentuk  ikatan  yang  stabil  dengan protein bakteri.
Pada proses fraksinasi menggunakan pelarut n-Heksan, etil  asetat  dan  air/aquadest.  Adapun  hasil  fraksinasi dapat dilihat pada tabel dibawah ini.
Tabel IV .   Hasil  Fraksinasi  Daun  Kalangkala  ( Litsea angulata )
Berat Ekstrak Pelarut Volume Pelarut Berat Fraksi Rendeme n Fraksi 10 gram N-Heksan 50 ml 1,79 gram 17,9% Etil Asetat 50 ml 3,52 gram 35,2% Aquadest 50 ml 3,09 gram 30,9%
Fraksinasi dari ekstrak kental daun Kalangkala dilakukan dengan  prinsip  perbedaan  tingkat  kepolaran  dan konstanta  dielektrik  antar  perlarut.  Pada  proses fraksinasi  terbentuk  dua  lapisan  yang  berbeda  karena perbedaan kepolaran dari kedua pelarut.
Hasil identifikasi Senyawa Flavonoid dengan menggunakan serbuk Mg dan HCl Pekat. Adapun hasil uji senyawa flavonoid dapat dilihat pada tabel dibawah ini.

## Tabel V.
Hasil  Analisis  Kualitatif  dengan  Pereaksi Warna No Sampel Hasil Keterangan 1 Ekstrak Kuning + 2 Fraksi N-Heksan Kuning + 3 Fraksi Etil Asetat Kuning + 4 Fraksi Aquadest Merah Jingga +
Identifikasi flavonoid dilakukan menggunakan HCl pekat dengan  serbuk  magnesium.  Tujuan  penambahan  HCl pekat dan serbuk Mg pada uji warna senyawa flavonoid adalah  untuk  mereduksi  inti α benzopyron  yang terdapat didalam struktur flavonoid sehingga terbentuk garam flavilium.  HCl  pekat  dan  serbuk  Mg  bereaksi dengan  membentuk  gelembung  gas  H 2 (Illing,  et  al.,
2017).  Hasil  positif  flavonoid  menunjukkan  dengan terbentuknya warna merah, kuning, atau jingga (Dewi, et al., 2021).
Hasil Profil Kromatografi Lapis Tipis Senyawa Flavonoid.

## Fraksi n-Heksan
Hasil Profil Kromatografi Lapis Tipis Senyawa Flavonoid pada Fraksi N-Heksan dapat dilihat pada tabel berikut. Tabel VI. Hasil  Profil  Kromatografi  Lapis  Tipis
Fraksi N-Heksan Eluen Sinar Tampak UV 254 UV 366 n-Heksan : Etil asetat (8:12) 0,08 0,08 0,08 - 0,30 - 0,46 0,46 - 0,66 0,66 - 0,83 0,83 - 0,98 0,98 0,98 1 1 - n-Heksan Diklorometana (8:12) 0,05 0,05 - 0,11 0,11 0,11 0,50 0,50 0,50 0,70 0,70 0,70 1 1 1 Diklorometana : Etil asetat (10:10) 0,16 0,16 0,16 0,40 0,40 0,40 0,60 0,60 0,60 1 1 1

## Fraksi etil asetat
Hasil Profil Kromatografi Lapis Tipis Senyawa Flavonoid pada Fraksi Etil Asetat dapat dilihat pada tabel berikut. Tabel VII. Hasil  Profil  Kromatografi  Lapis  Tipis

## Fraksi Etil Asetat
Eluen Sinar Tampak UV 254 UV 366 Etil Asetat : n- Heksan (3:7) 0,06 0,06 0,58 0,16 0,16 0,74 0,48 0,48 - Etil Asetat : n- Heksan (9:1) 0,94 0,94 0,98 Etil Asetat : n- Heksan : Asam Asetat Glasial (6:3:1) 0,4 0,4 0,9 0,9 0,9 - 0,96 0,96 0,96

## Fraksi aquadest
Hasil Profil Kromatografi Lapis Tipis Senyawa Flavonoid pada Fraksi Aquadest dapat dilihat pada tabel berikut.
Tabel VIII. Hasil  Profil  Kromatografi  Lapis  Tipis

## Fraksi Aquadest
Eluen Sinar Tampak UV 254 UV 366 Butanol : asam asetat : aquadest (4:1:5) 0,66 0,66 - 0,86 0,86 0,86 Metanol : aquadest (7:3) 0,78 0,78 0,78 Etil asetat : metanol : aquadest (4:1:5) - - -
Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT)  merupakan  metode kromatografi  yang  paling  sering  digunakan,  peralatan dan bahan yang dibutuhkan untuk pemisahan dan analisis senyawa  metabolit  sekunder  cukup  sederhana  yaitu sebuah  bejana  tertutup  (chamber)  yang  berisi  pelarut dan lempeng KLT (Wulandari, 2011). Pada proses KLT terdiri  atas  dua  fase  yaitu  fase  gerak  (eluen)  dan  fase diam (lempeng KLT).
Penentuan  eluen  terbaik  dilakukan  menggunakan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dengan variasi eluen  pada  metabolit  sekunder  flavonoid.  Pengujian dilanjutkan dengan visualisasi menggunakan tiga macam sinar  yaitu  pada  sinar  tampak,  sinar  UV  254  nm,  dan sinar UV 366 nm. Eluen terbaik akan dipilih jika memiliki banyak  bercak  atau  noda  yang  terpisah  dan  terjadi
perubahan warna setelah dilakukan penguapan amonia. Hal  ini  terjadi  dikarenakan  perbedaan  kepolaran  dari fase  gerak  (eluen),  apabila  senyawa  flavonoid  semakin mendekati  kepolaran  eluen  maka  akan  terbawa  dan terpisah oleh fase gerak. Sehingga dapat dikatakan noda terbanyak  terdapat  pada  eluen  yang  sifat  nya  mirip. Setelah  dilakukan  penguapan  dengan  amonia terbentuklah bercak noda berwarna kuning kecoklatan yang menandakan positif flavonoid. Hal tersebut terjadi karena  adanya  pembentukan  quinoid  pada β -ring  yang mengandung  ikatan  terkonjugasi  yang  lebih  panjang (Warsi, et al., 2017).
Hasil penetapan kadar flavonoid
a. Hasil panjang gelombang maksimum kuersetin pada rentang 370-450 nm didapatlan sebesar 411 nm.
b. Hasil Operating time didapatkan pada menit ke 18.
c. Hasil  pengukuran  absorbansi  larutan  kurva  baku kuersetin sebagai berikut:
Tabel IX. Hasil  Pengukuran  Absorbansi  Larutan

## Kurva Baku Kuersetin
Konsentrasi (ppm) 2 4 6 8 10 12 Absorbansi 0,002  0,016  0,018  0,028  0,029  0,034 0,002  0,017  0,019  0,028  0,030  0,034 0,002  0,017  0,019  0,028  0,030  0,034 Rata-rata 0,002  0,017  0,019  0,028  0,030  0,034
Gambar 2 . Grafik Kurva Baku Standar Kuersetin
d. Hasil pengukuran absorbansi sampel sebagai berikut:
Tabel X. Penentuan  Absorbansi  Sampel  Daun

## Kalangkala
Sampel Absorbansi Rata-rata Ekstrak 0,220 0,221 0,222 0,221 Fraksi n-Heksan 0,026 0,026 0,026 0,027 Fraksi Etil Asetat 0,020 0,021 0,021 0,021 Fraksi Aquadest 0,018 0,018 0,018 0,018 e. Kadar Flavonoid Total
Tabel XI. Penentuan  Kadar  Flavonoid  Total  Daun

## Kalangkala
Sampel y (absorbansi) b x (mg/L) a Ekstrak 0,221 0,003 71,367 0,0009 Fraksi N-Heksan 0,026 8,367 Fraksi Etil Asetat 0,021 6,700 Fraksi Aquadest 0,018 5,700
Sampel C (mg/L) Volume (L) M (g) KFT Mg QE/g % Ekstrak 71,367 0,025 0,025 71,367 7,137 Fraksi N-Heksan 8,367 0,025 0,025 8,367 0,837 Fraksi Etil Asetat 6,700 0,025 0,025 6,700 0,67 Fraksi Aquadest 5,700 0,025 0,025 5,700 0,57
Analisis  kuantitatif  kadar  flavonoid  daun  Kalangkala ( Litsea  angulata )  dilakukan  dengan  menggunakan Spektrofotometri  UV-Vis.  Spektrofotometri  UV-Vis digunakan untuk analisis senyawa dalam bentuk larutan berwarna ataupun senyawa dalam bentuk larutan yang dapat  direaksikan  hingga  terbentuk  warna.  Kuersetin digunakan sebagai baku pembanding karena merupakan salah  satu  jenis  flavonoid  golongan  flavonol  yang memiliki  gugus  keto  pada  atom  C-4  dan  juga  gugus hidroksil  pada  atom  C-3  dan  C-5  yang  bertetangga (Vonna, et al., 2015). Prinsip penetapan kadar flavonoid menggunakan metode aluminium klorida (AlCl 3 ) adalah terjadinya  pembentukan  senyawa  kompleks  antara
y = 0,003x + 0,0009 R² = 0,9125 0 0,01 0,02 0,03 0,04 0 2 4 6 8 10 12 Abs or b an si Konsentrasi (ppm) Kurva Baku Standar Kuersetin Absorbansi (nm) Linear (Absorbansi (nm))
aluminium  klorida  dengan  gugus  keto  pada  atom  C-4 dan  gugus  hidroksil  pada  atom  C-3  atau  C-5  yang bertetangga dari golongan flavon dan flavonon sehingga menghasilkan warna kuning (Suharyanto, et al., 2020 ). Penetapan  gelombang  maksimum  adalah  panjang gelombang yang dihasilkan suatu senyawa pada serapan maksimum,  bertujuan  untuk  mengetahui  panjang gelombang saat mencapai serapan maksimum, selain itu juga memiliki daya serap yang relatif konstan. Penentuan panjang  gelombang  maksimum  kuersetin  dilakukan dengan  cara  membaca  serapan  larutan  baku  standar kuersetin  100  ppm  pada  rentang  panjang  gelombang 370-450  nm  (Asmorowati,  et  al.,  2019  ).    Hasil  yang diperoleh yaitu 411 nm.
Penentuan operating  time bertujuan  untuk  mengetahui waktu  pengukuran  yang  stabil  yaitu  ketika  sampel bereaksi sempurna dan membentuk senyawa kompleks. Operating  time dilakukan  dengan  menggunakan  larutan baku standar kuersetin 100 ppm dengan interval waktu 2 menit selama 60 menit (Asmorowati, et al., 2019 ). Hasil  penentuan operating  time didapatkan  hasil  pada menit  ke-18  hingga  menit  ke-22.  Pada  rentang  waktu tersebut absorbansi senyawa terukur relatif lebih stabil. Kestabilan  absorbansi  ini  menandakan  reaksi pembentukan  sudah  optimum.  Dari  pengukuran operating time didapatkan absorbansi pada menit ke-18.
Penentuan  kurva  standar  kuersetin  dilakukan  dengan cara  mengukur  absorbansi  dari  larutan  baku  standar kuersetin dengan berbagai konsentrasi yaitu  2 ppm, 4 ppm, 6 ppm, 8 ppm, 10 ppm, 12 ppm yang kemudian di diamkan  selama  18  menit  dan  diukur  dengan  panjang gelombang 411 nm. Penentuan kurva standar kuersetin dilakukan dengan tujuan untuk memperoleh persamaan regresi  linear  yang  akan  digunakan  sebagai  penentuan kadar  dari  sampel.  Hasil  pengukuran  absorbansi menunjukkan  bahwa  konsentrasi  berbanding  lurus dengan nilai absorbansi yang didapat yaitu semakin tinggi konsentrasi  maka  semakin  tinggi  pula  nilai  absorbansi yang didapatkan (Asmorowati, et al., 2019 ). Sedangkan pada persamaan regresi linear kurva standar kuersetin
yang diperoleh adalah y=0,003x + 0,0009  dengan nilai koefisien  korelasi  (r)  sebesar  0,9125.  Nilai  (r)  yang diperoleh  mendekati  angka  1  menunjukkan  bahwa persamaan regresi tersebut adalah linier, sehingga dapat dikatakan  bahwa  absorbansi  dan  konsentrasi  memiliki korelasi yang sangat kuat (Asmorowati, et al., 2019 ). Penentuan kadar flavonoid total dalam daun Kalangkala ( Litsea angulata ) dilakukan menggunakan Spektrofotometri  UV-Vis  dengan  larutan  baku kuersetin.  Agar  mendapatkan  data  yang  lebih  akurat pengujian  dilakukan  sebanyak  tiga  kali  replikasi.  Pada penetapan kadar flavonoid larutan sampel ditambahkan AlCl 3 maka  terjadi  pembentukan  kompleks  antara flavonoid  dengan  AlCl 3 sehingga  menyebabkan pergeseran panjang gelombang kearah sinar visibel yang ditandai  dengan  adanya  warna  kuning  pada  larutan. Pembentukan  senyawa  kompleks  terjadi  ketika  AlCl 3 bereaksi  dengan  gugus  keto  pada  C-4  dan  gugus hidroksil  pada  C-3  atau  C-5  pada  senyawa  flavonoid (Suharyanto & Prima, 2020). Penambahan asam asetat berfungsi  untuk  mempertahankan  panjang  gelombang pada daerah visibel (tampak) (Asmorowati, et al., 2019 )
Berdasarkan  data  pada  penelitian  sampel  diperoleh kadar  flavonoid  total  daun  Kalangkala  ( Litsea  angulata ) pada ekstrak sebesar 71,367 mg QE ( Quersetin Equialen ) /g, pada fraksi  n-Heksan  sebesar  8,367  mg  QE ( Quersetin  Equialen ) /g, pada fraksi etil asetat sebesar 6,700 mg QE ( Quersetin Equialen ) /g dan  pada  fraksi  aquadest  sebesar  5,700  mg  QE ( Quersetin
Equialen ) /g.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang diperoleh, disimpulkan bahwa  aktivitas  antibakteri  ekstrak  daun  kalangkala terhadap bakteri Escherichia coli memiliki nilai KHM pada konsentrasi 50% dan nilai KBM pada konsentrasi 100% sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  daun kalangkala  masuk  dalam  golongan Bactericid. Kadar flavonoid total  daun  Kalangkala  ( Litsea  angulata )    pada ekstrak sebesar 71,367 mg QE ( Quersetin Equialen ) /g, dan pada
fraksi kadar flavonoid terbesar terdapat  pada fraksi n- Heksan yaitu sebesar 8,367 mg QE ( Quersetin Equialen ) /g.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Peneliti mengucapkan terimakasih kepada semua pihak yang baik secara langsung maupun tidak langsung telah terlibat  dalam  penelitian  ini.  Serta  terimakasih  dan apresiasi  sebesar-besarnya  kepada  Kementerian Pendidikan,  Kebudayaan,  Riset  dan  Teknologi  yang mendanai penelitian ini melalui skema hibah “Penelitian Dosen Pemula” di tahun 2022.

## REFERENSI
Amalia  Sri,  Wahdaningsih  Sri  dan  Untari  Eka  Kartika. 2014.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Fraksi  n-
Heksan Kulit Buah Naga Merah (Hylocereus  polyrhizus  Britton  &  Rose) terhadap  Bakteri  Staphylococcus  aureus
ATCC 25923. Trad Med: Vol. II. - hal. ISSN 1410-5918.
Asmorowati H dan Lindawati N. 2019. Penetapan Kadar Flavonoid Total Alpukat (Persea americana Mill.)  dengan  Metode  Spektrofotometri. Jurnal Ilmiah Farmasi : Vol. II. - hal. 51–63.
Dewi  I,  Saptawati  T  dan  Rachma  F.  2021.  Skrining Fitokimia  Ekstrak  Etanol  Kulit  dan  Biji Terong Belanda (Solanum betaceum Cav .). Prosiding  Seminar  Nasional  UNIMUS :  hal. 1210–1218.
Hapsari dan Maria Endah. 2015. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak  Herba  Meniran  (Phyllanthus  ninuri) terhadap Pertumbuhan Bakteri Bacillus cereus dan Escherichia coli . Yogyakarta : Universitas Sanata Dharma
Harborne  J.  1987. Metode  Fitokimia  Penuntun  Cara Modern  Menganalisis  Tumbuhan .  Bandung  : ITB Bandung
Illing I, Safitri W dan Erfiana. 2017. Uji Fitokimia Ekstrak Buah Dengen. Jurnal Dinamika: hal. 66-84.
Jannah  R,  Darsono  P,  V  dan  Rohama.  2018.
SCREENING  OF  PHYTOCHEMICALS
AND  ANTIBACTERIAL  ACTIVITY  OF DADANGKAK  ROOTS  EXTRACTS (Hydrolea spinosa L.) AGAINST
Streptococcus mutans. International Conference on Health and Science : Vol. I.
Kurniawati,  D.  2021.  Formulasi  dan  Uji  Aktivitas Antiseptik  dari  Bahan  Alam  Kulit  Jeruk Nipis,  Daun  Sirih  dan  Tanaman  Bundung terhadap  Staphylococcus  aureus  dan Candida  albican. FARMASIS:  Jurnal  Sains Farmasi , 2 (1), 25-31.
Kuspradini  H.  2018.  Phytochemical,  antioxidant  and antimicrobial  properties  of  litsea  angulata extracts. National Library of Madicine : hal. 1-
11.
Kuspradini  H,  Putri  A,  S  dan  Diana  R.  2018. Potensi Tumbuhan  Genus  Litsea .  Mulawarman University Press
Melviani, M., Rohama, R., & Noval, N. 2022. Penggunaan Tanaman Sebagai Obat pada Masyarakatan Suku  Banjar,  Dayak,  dan  Bugis  di Kalimantan  Selatan. Jurnal  Surya  Medika (JSM) : 8(2), 171-177.
Mu'awwanah  A  dan  Ulfah  M.  2013.  Uji  Aktivitas
Antioksidan  Fraksi  n-Heksan  Ekstrak Etanol Daun Karika (Carica pubescens) dan Identifikasi Senyawa Alkaloid dan Flavonoidnya. Journal of Chemical Information and Modeling : Vol. 9. - hal. 1689-
1699.
Ningsih  Ayu  Putri,  Nurmiati  dan  Agustien.  2013.
Anthoni  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Kental  Tanaman  Pisang  Kepok  Kuning (Musa paradisiaca Linn.) terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Universitas Andalas Padang : Jurnal Biologi
Noval,  N.,  Kurniawati,  D.,  Rahmadani,  R.,  Budi,  S.,  & Nastiti, K. 2021. Activity and Stability Test of  Antiseptic  Preparations  from  The Formulation  Combination  of  Betel  Leaf (Piper  betle  L),  Lime  Peel  (Citrus aurantifolia) and Bundung Plant (Actinoscirpus  grossus). In  International Conference  on  Health  and  Science :  (Vol.  1, No. 1, pp. 703-721).
Noval, N., Melviani, M., Novia, N., & Syahrina, D. 2020. Formulasi  Dan  Evaluasi  Sediaan  Obat Kumur  (Mouthwash)  Dari  Ekstrak  Etanol Tanaman Bundung (Actinoscirpus Grossus) Sebagai  Antiseptik  Mulut. Jurnal  Surya Medika (JSM) : 6 (1), 112-120.
Noval,  N.,  Yuwindry,  I.,  &  Syahrina,  D.  2019. Phytochemical Screening and Antimicrobial
Activity  of  Bundung  Plants  Extract  by Dilution Method. Jurnal Surya Medika (JSM) :
5 (1), 143-154.
Putri  Nadya  Haqque  Santosa.  2019.  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Tangkai  dan  Daun Begonia  multangula  Blume.  terhadap Porphyromonas gingivalis. Jurnal Biologi.
Rachmawati  dan  Umi  Dhinarty.  2016.  Uji  Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol, Etil Asetat dan Petroleum Eter Rambut Jagung Manis (Zea mays  sacarata  Strut)  terhadap  Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Malang : Universitas Islam Negeri
Retnowati Yuliana, Bialangi Nurhayati dan Posangi Nona Wingti.  2011.  Pertumbuhan  Bakteri Staphylococcus  aureus  pada  Media  yang Diekspos  dengan  Infus  Daun  Sambiloto (Andrographis paniculata). Jurnal Saintek: 6 :
Vol. II.
Rohama  dan  Melviani.  2021.  Formulasi  dan  Evaluasi Sediaan  Obat  Kumur  (Mouthwash)  dari Ekstrak  Etanol  Daun  Kalangkala  (Litsea angulata)  sebagai  Antiseptik  Mulut. Jurnal Surya Medika (JSM): Vol. I. - hal. 248-256.
Rohama  dan  Zainuddin  Identifikasi  Senyawa  Metabolit Sekunder  pada  Ekstrak  Daun  Gayam (Inocarpus Fagifer Fosb) dengan Menggunakan  KLT. Jurnal  Surya  Medika (JSM: Vol. II. - hal. 125-129.
Sariadi K, Sembiring M dan Litbangkes B Kajian Pustaka:
Uji Kepekaan Antibiotik pada Corynebacterium diphtheriae. Jurnal Biotek
Medisiana Indonesia : hal. 121-133.
Vonna A dan Nurismi R. 2015. Wound Healing Activity of  Unguentum  Dosage  Form  of  Ethanol Extracts  of  Areca  catechu  L.  Nut  in  Mus musculus  albinus. Jurnal  Natural  Unsyiah : Vol. 2. - hal. 115085.
Warsi dan Sholichah A. 2017. Phytochemical screening and antioxidant activity of ethanolic extract and  ethyl  acetate  fraction  from  basil  leaf (Ocimum  basilicum  L.)  by  DPPH  radical scavenging  method. IOP  Conference  Series:
Materials Science and Engine : 59 : Vol.
Wulandari  L.  2011. Kromatografi  Lapis  Tipis :  In  Taman Kampus Presindo.