## UJI FITOKIMIA DAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL DAUN TIGA ( Allophylus cobbe L.)
Jelly Juliana Najoan 1) , Max John R. Runtuwene 1) , Defny S. Wewengkang 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA Unsrat

## ABSTRACT
This study aims to identify the active componends, determine the secondary metabolites content and to determine antioxidant activity of the three leaves (Allophylus cobbe L.) ethanol extract. Extraction was done by maceration and soxhletasi with ethanol  solvent by 60% and 80%. Phytochemical tests included the identification of alkaloids, phenolics, flavonoids, steroids/triterpenoids and saponin. The determination  of  total  phenolic  and flavonoid content  and the antioxidant  activity  was  tested  by  the method  of  DPPH  (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazil).  The  results  showed  that  the  three  leaves  extract contains  phenolic  compound,  falvonoids,  steroids  and  saponins.  The  highest  phenolic  content  total was  found  in  soxhletasi  80%  49.90  µg/mL,  followed  by  43.65,  37.84,  33.77  (µg/mL)  to  extract soxhletasi,  60%,  maceration  80  and  60%.  Flavonoids  total  was  found  in  maceration  80%  11.58 µg/mL,  followed  by  9.40,    7.77,    6.18  (µg/mL)  to  ectract  soxhletasi  80%  ,  maceration  60%  and soxhletasi 60%. Based on the IC 50 total calculation, the maceration 80% 255.77 µg/mL extract has the highest  antioksidant  activity  and  followed  by    256.76,  297.54,  310.58  (µg/mL)  to  extract  soxhletasi 80%, soxhletasi 60% and maceration 60%.
Key words : total phenolics and flavonoids, antioxidants, Allophylus cobbe L.

## ABSTRAK
Tujuan  Penelitian  ini  adalah  mengidentifikasikan  senyawa  aktif,  menentukan  kandungan  metabolit sekunder serta mengetahui aktivitas antioksidan dari ekstrak  etanol daun tiga ( Allophylus cobbe L.). Ekstraksi  dilakukan  dengan  metode  maserasi  dan  soxhletasi  dengan  pelarut  etanol  60%  dan  80%. Pengujian fitokimia meliputi identifikasi alkaloid, fenolik, flavonoid, steroid/triterpenoid dan saponin, penentuan total kandungan fenolik dan flavonoid serta pengujian aktivitas antioksidan dengan metode DPPH  (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil).  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  tiga mengandung  senyawa  fenolik,  falvonoid,  steroid  dan  saponin.  Berdasarkan  hasil  yang  didapat  daun tiga memiliki kandungan total fenolik  yang paling tinggi sebesar  49.90 µg/mL, diikuti 43.65, 37.84, 33.77  (µg/mL)  untuk  ekstrak  soxhletasi  80%,  60%,  maserasi  80  dan  60%.  Untuk  kandungan  total flavonoid  yang  paling  tinggi  sebesar  11.58  µg/mL,  diikuti  9.40,    7.77,    6.18  (µg/mL)  untuk  ekstrak maserasi  80%,  soxhletasi  80%  ,  maserasi  60%  dan  soxhletasi  60%.  Berdasarkan  hasil  perhitungan IC 50 ekstrak  maserasi  80%  memiliki  aktivitas  antioksidan  tertinggi  255.77  µg/mL,  diikuti  256.76, 297.54, 310.58 (µg/mL) untuk ekstrak soxhletasi 80%, soxhletasi 60% dan maserasi 60%.
Kata kunci : total fenolik dan flavonoid, antioksidan, Allophylus cobbe L .

## PENDAHULUAN
Radikal  bebas  merupakan  salah satu  bentuk  senyawa  reaktif,  yang  secara umum  diketahui  sebagai  senyawa  yang memiliki  elektron  yang  tidak  berpasangan di  kulit  terluarnya.  Radikal  bebas  sebagai molekul  atom  atau    atom  dengan  elektron bebas dalam jumlah normal dapat berfungsi  dalam  membunuh  virus  dan bakteri,  namun  dalam  jumlah  yang  sangat banyak  dan  energi  yang  sangat  besar  zat ini  dapat  merusak  jaringan  normal, mengganggu  produksi  DNA,  merusak dinding  sel  khususnya  lapisan  lipid,  serta mempengaruhi pembuluh darah (Halliwell, 1999).
Antioksidan  merupakan  senyawa kimia  yang  dapat  menyumbangkan  satu atau lebih elektron (electron donor) kepada radikal  bebas,  sehingga  reaksi  radikal bebas tersebut dapat terhambat.
Antioksidan  dapat melindungi tubuh terhadap  kerusakan  yang  disebabkan  oleh senyawa oksigen reaktif, mampu menghambat terjadinya penyakit degeneratif seperti diabetes, kanker, inflamasi  jaringan,  kelainan  imunitas, infark jantung dan penuaan dini (Jacob dan burri 1996).
Pada umumnya tumbuhan memiliki kandungan  senyawa  aktif  dalam  bentuk metabolit sekunder seperti alkaloid, flavonoid,  terpenoid,  steroid  dan  saponin. Senyawa metabolit sekunder tersebut telah banyak  digunakan  sebagai  zat  warna, aroma  makanan  maupun  sebagai  obat- obatan (Lenny, 2006).
Daun  tiga  merupakan  tanaman yang secara empiris diyakini oleh masyarakat  Watuliney  Sulawesi  Utara sebagai  obat  yang  dapat  menyembuhkan gangguan  kesehatan  seperti  panas  dan batuk. Tetapi informasi mengenai senyawa aktif yang terdapat pada tanaman daun tiga belum diketahui, sehingga perlu dilakukan pengujian  terhadap  senyawa  aktif  yang terdapat  pada  tanaman  ini.  Senyawa- senyawa aktif yang terdapat pada tanaman
ini diharapkan memiliki aktivitas antioksidan.

## METODOLOGI PENELITIAN
Alat yang digunakan pada penelitian  ini  yaitu,  blender,  timbangan analitik,  alat  soxhlet,  aluminium  foil, kertas  saring  Whatman,  spektrofotometer UV-Vis, spatula, tabung reaksi, sudip, labu ukur,  pipet  tetes,  corong  pisah,  inkubator, gelas  ukur,  erlenmeyer,  beaker  glass,  hot plate, rak tabung, oven.
Bahan yang digunakan adalah daun tiga  ,  etanol  60  dan  80%,  larutan  H 2 SO 4 pekat,  larutan  natrium  karbonat,  reagen Folin-Ciocalteu,  pereaksi  Mayer  dan Dragendroff,  kloroform,  ammonia,  HCl pekat,  FeCl 3 1%,  serbuk  Mg,  asam  asetat anhidrida, kristal 1,1
-difenil-2- pikrilhidrazil (DPPH).

## Pengambilan dan Determinasi Tanaman
Sampel  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  daun  tiga  yang  di ambil  di  desa  Watuliney  kecamatan Belang,  Minahasa  Tenggara.  Determinasi tanaman  dilakukan  di  Lembaga  Ilmu Pengetahuan  Indonesian  (LIPI),  Cibinong, Bogor.

## Preparasi Bahan Baku
Daun  tiga  yang  telah  dipetik, dicuci,  dipotong  kecil-kecil,  kemudian dikeringkan selama 15 hari. Setelah kering daun  dihaluskan  dengan  blender  sampai berbentuk  serbuk  dengan  berat  total  400 gram.

## Esktraksi Bahan Aktif Maserasi
Ektraksi  daun  tiga  menggunakan pelarut  etanol  60%  dan  80%.  Masing- masing serbuk simplisia sebanyak 100 g di ekstraksi  menggunakan  pelarut  etanol dengan konsentrasi 60% dan 80% sebanyak  400  mL  (1:4).  Proses  maserasi dilakukan  di  dalam  wadah  yang  ditutup aluminium  foil  selama  5  (lima)  hari
dengan  setiap  hari  pengadukan.  Maserat yang didapat disaring dengan kertas saring hingga  diperoleh  filtrat  1.  Residunya diekstrak  kembali  dengan  etanol  60%  dan 80%  sebanyak  200  mL(1:2)  selama  dua hari,  lalu  disaring  (filtrat  2).  Filtrat  1  dan filtrat  2  dikumpulkan  lalu  diuapkan menggunakan rotary  evaporator pada suhu  40 0 C  dan  dilanjutkan  dengan pengeringan menggunakan oven pada suhu 40 0 C  sehingga  menghasilkan  ekstrak kering.

## Soxhletasi
Sampel  sebanyak  100  g  dibungkus dengan  kertas  saring  dan  dimasukkan  ke dalam  ekstraktor  soxhlet.  Etanol  60%  dan 80% dimasukkan ke dalam labu alas bulat. Kemudian alat ekstraksi soxhletasi dirangkai  dengan  kondensor.  Ekstraksi dilakukan sekitar 8 jam hingga cairan tidak berwarna. Ekstraksi yang didapat dievaporasi menggunakan evaporator pada suhu  40 0 C,  kemudian  pelarut  diuapkan menggunakan  oven  pada  suhu  40 0 C sampai diperoleh ekstrak kering.

## Uji Fitokimia
Identifikasi Alkaloid
Ekstrak sebanyak 50 g
ditambahkan  2  mL  kloroform  dan  2  mL ammonia lalu disaring. Filtrat ditambahakan  3-5  tetes  H 2 SO 4 pekat  lalu dikocok  hingga  terbentuk  dua  lapisan. Fraksi asam diambil. Kemudian ditambahkan  reagen  Mayer  Dragendrorff masing-masing 4-5 tetes. Apabila terbentuk  endapan  menunjukan  bahwa sampel  tersebut  mengandungal  alkaloid, dengan pereaksi Mayer memberikan endapan berwarna putih, pereaksi Dregendorff memberikan endapan berwarna merah jingga (Harbone, 1987).

## Identifikasi Fenolik
Ekstrak sebanyak 50 g
ditambahkan  10  tetes  FeCl 3 1%.  Ekstrak positif mengandung fenol apabila menghasilkan  warna  hijau,  merah,  ungu, biru atau hitam pekat.
Identifikasi Flavonoid
Ekstrak sebanyak
50 g
ditambahkan  dengan  100  mL  air  panas, didihkan  selama  5  menit,  kemudian disaring. Filtrat sebanyak 5 mL ditambahkan  0,05  mg  serbuk  Mg  dan  1 mL  HCl  pekat,  kemudian  dikocok  kuat- kuat.  Uji  positif  ditunjukan  dengan terbentuknya  warna  merah,  kuning  atau jingga.

## Identifikasi Saponin
Ekstrak sebanyak 50 g
ditambahkan
10 mL air sambil ditambahkan  2  tetes  HCl  1  N.  Bila  busa yang terbentuk tetap stabil ± 7 menit, maka ekstrak positif mengandung saponin.

## Identifikasi Steroid dan Terpenoid
Ekstrak
sebanyak 50 g ditambahkan  CH 3 COOH  glasial  sebanyak 10 tetes dan H 2 SO 4 pekat sebanyak 2 tetes. Larutan  dikocok  perlahan  dan  biarkan selama beberapa menit. Steroid memberikan  warna  biru  atau  hijau, sedangkan triterpenoid  memberikan warna merah atau ungu.

## Penuntuan Kandungan Total Fenolik
Kandungan  total  fenolik  ekstrak daun tiga ditentukan menggunakan metode Folin  Ciocalteu (Conde et  al ,  1997). Sebanyak  0,1  mL  larutan  ekstrak  dengan konsentrasi  1000  ppm  dimasukkan  dalam tabung  reaksi,  lalu  ditambahkan  0,1  mL reagen Folin  Ciocalteu 50%.  Campuran tersebut  divortex,  lalu  ditambahkan  2  mL larutan  natrium  karbonat  2%.  Selanjutnya, campuran  diinkubasi  dalam  ruangan  gelap selama  30  menit.  Pembacaan  absorbansi pada panjang gelombang 750 nm menggunakan spektrofotometer.
Kandungan  total  fenol  dinyatakan  sebagai mg ekivalen asam galat/kg ekstrak.

## Penentuan Kandungan Total Flavonoid
Kandungan  total  flavonoid  ekstrak lamun ditentukan menurut metode Meda et
al , (2005). Sebanyak 1 mL larutan ekstrak dimasukan  dalam  tabung  reaksi  lalu ditambah  dengan  2  mL  AlCl 3 2%  yang telah  dilarutkan  dalam  etanol,kemudian divortex.  Absorbansi  ekstrak  dibaca  pada spektrofotometer  visibel  dengan  panjang gelombang  415  nm.  Kandungan  total flavonoid  dinyatakan  sebagai  mg  ekivalen kuesertin/kg ekstrak.

## Pengujian Aktivitas Antioksidan Pembuatan Larutan Blanko
Larutan  blanko  dibuat  dengan mencampurkan  1 mL  etanol  dengan  2 mL larutan DPPH 80 mM dalam tabung reaksi, kocok homogen.

## Persiapan Larutan Uji
Ditimbang 20 mg ekstrak kemudian  dilarutkan  dalam  20  ml  etanol hingga homogen (konsentrasi 1000 µg/mL).  Masing-masing  ekstrak  dibuat dalam  berbagai  konsentrasi  yaitu  50 µg/mL,  100  µg/mL,  150  µg/mL,  200 µg/mL, 250 µg/mL dan 300 µg/mL.

## Pengujian Aktivitas Antioksidan
Larutan  uji  yang  sudah  dibuat, masing-masing  di  ambil  sebanyak  1  mL dan  direaksikan  dengan  2  mL  larutan DPPH  80  mM  dalam  tabung  reaksi  dan diberi  penanda  (label).  Campuran  tersebut
diinkubasi  pada  suhu  37 0 C  selama  30 menit,  kemudian  diukur  absorbansinya menggunakan  spektofotometer  UV-Vis pada panjang gelombang 517 nm.
Perhitungan  Persen  Inhibisi  dan  Nilai IC 50
Setelah absorbansi
didapat,
besarnya  presentase  pengikatan  radikal bebas  (persen  inhibisi)  dihitung  dengan rumus berikut :
(%) =1- x 100%

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi
Ekstraksi  serbuk  simplisia  daun tiga dalam penelitian ini menggunakan dua metode  ekstraksi  yaitu  maserasi  dan soxhletasi. Maserasi dan soxhletasi merupakan  dua  metode  ekstraksi  yang lazim  digunakan.  Maserasi  adalah  proses penyarian dengan cara perendaman serbuk dalam  air  atau  pelarut  organik  sampai meresap  dengan  melunakkan  susunan  sel, sehingga  zat-zat  yang  terkandung  di dalamnya  akan  terlarut.  Ekstraksi  dengan cara panas menggunakan soxhlet, sehingga terjadi ekstraksi berkesinambungan dengan jumlah  pelarut  relatif  konstan  dengan adanya  pendinginan  balik  (Ansel,  1989).
Tabel 1. Hasil ekstrak daun tiga dengan metode maserasi dan soxhletasi menggunakan konsentrasi pelarut etanol berbeda. No. Ekstrak Berat simplisia (g) Volume (ml) Ekstrak kental (g) Rendemen (%) Warna 1. Maserasi 60% 100 400 3,98 3,98 Coklat Kehitaman 2. Maserasi 80% 100 400 5,06 5,06 Coklat Kehitaman 3. Soxhletasi 60% 100 400 9,49 9,49 Coklat Kemerahan 4. Soxhletasi 80% 100 400 10,39 10,39 Coklat Kemerahan
Tabel  1.  menunjukkan  bahwa rendeman  yang  tinggi  terdapat  pada ekstrak etanol daun tiga dengan menggunakan  metode  soxhletasi  pada pelarut  etanol  80%,  diikuti  dengan soxhletasi  60%,  maserasi  80%  dan maserasi  60%.  Hal  ini  disebabkan  karena adanya pemanasan yang dapat meningkatkan
kemampuan untuk mengekstraksi senyawa-senyawa yang tidak  larut  dalam  suhu  kamar,  sehingga aktivitas  penarikankannya  lebih  maksimal oleh pelarut yang selalu bersirkulasi dalam proses  kontak  dengan  simplisia  sehingga memberikan peneingkatan rendemen (Harbone, 1987).
Selain disebabkan oleh pemanasan,ukuran sampel juga mempengaruhi  hasil  rendemen.  Semakin halus  bahan  yang  digunakan,  semakin tinggi  juga  rendemen  yang  dihasilkan (Sembiring et al , 2006).

## Uji  Fitokimia  pada    Ekstrak  Etanol Daun Tiga
Pada  penelitian  ini  pengujiannya dilakukan  dengan  cara  mengambil  sedikit sampel  dari  hasil  maserasi  dan  soxhletasi, kemudian  ditambahkan  dengan  reagen sesuai dengan senyawa yang akan diidentifikasi. Hasil uji fitokimia dari daun tiga dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel 2. Hasil uji fitokimia daun tiga dengan metode maserasi dan soxhletasi menggunakan
konsentrasi pelarut etanol berbeda. Golongan Senyawa Ekstrak Maserasi 60% Ekstrak Maserasi 80% Ekstrak Soxhletasi 60% Ekstrak Soxhletasi 80% Standar (warna) Alkaloid - - - - - - - - Endapan putih (Mayer) Endapan merah sampai jingga (Dragendorff) Fenolik + + + + Warna merah, hijau, ungu, atau hitam pekat Flavonoid + + + + Warna merah, kuning atau jingga Steroid + + + + Warna biru atau hijau Triterpenoid - - - - Warna merah atau ungu Saponin + + + + Terbentuk busa Keterangan:  + = terdapat dalam sampel     -  = tidak terdapat dalam sampel Pada identifikasi alkaloid
menunjukan  hasil  negatif  untuk  kedua jenis  ekstrak  yang  ditambahkan  dengan peraksi  Mayer  menghasilkan  endapan hitam , dan reagen Dragendorff menghasilkan endapan putih pada masing- masing sampel.
Pada  identifikasi  pengujian  fenolik dilakukan  dengan  mereaksikan  larutan FeCl 3 1% dengan  sampel  menunjukkan hasil  yang  positif  karena  larutan  berubah warna  menjadi  hitam  pekat.  Hasil  positif juga  berlaku  untuk  masing-masing  jenis ekstrak  yaitu  maserasi  60%,  80%  dan soxhletasi 60%, 80%.
Pada identifikasi
flavonoid dilakukan  dengan  mereaksikan  sampel dengan  serbuk  Mg  dan  HCl  pekat  yang menunjukan  hasil  yang  positif  karena larutan  berubah  menjadi  merah.  Ini menunjukan  bahwa  sampel  mengandung senyawa  flavonoid.  Hasil  positif  ini berlaku  pada  masing-masing  ekstrak  dari maserasi dan soxhletasi.
Pada identifikasi saponin sampel di uji  dengan  di  tambahkan  air  dan  HCl  1  N lalu  di  kocok  kuat.  Hasil  menunjukan positif  karena  larutan  sampel  terbentuk buih  atau  busa.  Busa  yang  terbentuk  tetap stabil selama  ± 7 menit.
Pada  identifikasi  steroid  pengujian golongan  senyawa  ini  dilakukan  dengan pereaksi  Liebermann-Burchard  (anhidrida asetat  –  H 2 SO 4 ).  Steroid  yang  dihidrolisis dengan asam sulfat pekat akan menghasilkan gugus hidroksil dan bereaksi dengan anhidrida asetat. Hasil positif pada uji ini ditandai dengan terbentuknya warna hijau pada larutan yang berasal dari reaksi antara  steroid  dengan  CH 3 COOH  glasial dengan H 2 SO 4 pekat.
Penentuan  Kandungan  Total  Fenolik dan Flafonoid
Tabel 3. Uji Kandungan Total Fenolik dan
Falvonoid Ekatrak etanol daun tiga Fenolik Flavonoid Maserasi 60% 33, 77 7,77 Maserasi 80% 37, 84 11,58 Soxhletasi 60% 43,65 6,18 Soxhletasi 80% 49,90 9,40
Pada  hasil  kandungan  total  fenolik ekstrak  etanol  daun  tiga  menunjukan ekstrak yang paling tinggi ada pada pelarut etanol hasil soxhletasi 80%, diikuti dengan pelarut etanol hasil soxhletasi 60%, pelarut etanol  hasil  maserasi  80%  dan  maserasi 60%.  Hal  ini  menunjukan  kandungan fenolik  terlarut  dalam  pelarut  etanol  hasil soxhletasi 80%. Penggunaan etanol sebagai  pelarut  membuat  senyawa  seperti
fenolik dalam tanaman terekstraksi, karena senyawa  polar  melarutkan  yang  polar. Menurut  penelitian  yang  dilakukan  oleh Larson  (1988)  bahwa  komponen  dari fenolik dari tanaman secara umum bersifat polar. Kandungan total fenol dalam sampel ditentukan dengan metode Folin-Ciocalteu didasarkan  pada  kemampuan  senyawa fenolik  dalam  ekstrak  daun  tiga  bereaksi dengan  asam  fosmolibdat-fosfotungstat dalam reagen Folin-Ciocalteu yang menghasilkan  senyawa  molybdenum  – tunstat  yang  berwarna  biru.  Semakin  biru intensitas  warna  larutan  menunjukkan kandungan total fenol dalam sampel makin besar.
Hasil kandungan total untuk senyawa  flavonoid  menunjukan  ekstrak yang paling tinggi  ada pada pelarut etanol hasil  maserasi  80%  yang  diikuti  oleh soxhletasi  80%,  maserasi  60%  dan soxhletasi  60%.    Hasil  ini  menunjukkan bahwa  ada  hubungan  yang  positif  antara kandungan  total  fenol  dengan  kandungan flavonoid. Menurut Larson (1988), komponen  fenolik  seperti  flavonoid  yang dikenal  sebagai  antioksidan  primer  dari tanaman bersifat polar.

## Uji Aktivitas Antioksidan
Uji  aktivitas  antioksidan  pada ekstrak  etanol daun tiga  dilakukan dengan menggunakan  metode  uji  penangkap radikal  bebas  DPPH.  Prinsip  metode penangkap radikal bebas adalah pengukuran  penangkapan  radikal  bebas sintetik dalam pelarut organik polar seperti etanol  dan  metanol  pada  suhu  kamar  oleh suatu  senyawa  yang  mempunyai  aktivitas antioksidan.
Hasil  reaksi  antara  penangkap radikal  bebas  DPPH  dengan  senyawa antioksidan dapat diketahui melalu perubahan  warna  dari  ungu  pekat  menjadi kuning  akibat  terjadi  resonansi  struktur penangkap radikal bebas DPPH. Pengurangan  intersitas  warna  yang  terjadi berhubungan  dengan  jumlah  elektron penangkap  radikal  bebas  DPPH  yang menangkap  atom  hidrogen  dari  senyawa
antioksidan.  Perubahan warna ini menjadi patokan  pengukuran  pada  spektofotometer UV-Vis. Penangkap radikal bebas memberikan  serapan  kuat  pada  pnjang gelombang  517  nm.  Pada  masing-masing ekstrak  dengan  konsentrasi  150  µg/mL, 200  µg/mL,  250  µg/mL  dan  300  µg/mL mengalami  perubahan  warna  dari  ungu menjadi kuning setelah di inkubasi selama 30  menit.  Namun  pada  masing-masing ekstrak  dengan  konsentrasi  50  µg/mL  dan 100 µg/mL perubahan warna kuning tidak terlalu nampak setelah di inkubasi. Hal ini menandakan bahwa ekstrak dengan
konsentrasi  50  µg/mL  dan  100  µg/mL memiliki kemampuan aktivitas antioksidan yang  kecil.  Setelah  inkubasi,  kemudian dilakukan  pengukuran  absorbansi  dengan menggunakan spektrofotometer pada panjang  gelombang  517  nm. Dari  hasil absorbansi  yang  diperoleh  digunakan untuk perhitungan nilai aktivitas antiradikal atau persen peredaman senyawa  antioksidan  (sampel)  terhadap DPPH.  Data  aktivitas  antiradikal  ekstrak etanol daun tiga dapat di lihat pada gambar berikut:
Gambar 8. Hasil pengukuran aktivitas antiradikal ekstrak etanol daun tiga
Pada  ekstrak  hasil  maserasi  80%
dan  60%  mengalami  peningkatan  pada konsentrasi
50-300
µg/mL. Pada konsentrasi 300 µg/mL memiliki absorbansi yang paling tinggi yaitu 52,2%. Peningkatan  nilai  absorbansi  pada  esktrak maserasi  menandakan  bahwa  konsentrasi ekstrak  yang  ditambahkan  mempengaruhi kemampuan  ekstrak  dalam  merendam radikal  bebas.  Hasil  ini  didukung  oleh penelitian  yang  dilakukan  oleh  Hanani et al (2005),  yang  menyatakan  bahwa presentase penghambatan terhadap aktivitas radikal bebas akan ikut
meningkat  seiring  dengan  meningkatnya konsentrasi.  Pada  ekstrak  hasil  soxhletasi 80% dan 60% menunjukan bahwa aktivitas antioksidan  mengalami  peningkatan  pada konstrasi  50-300  µg/mL  dengan  aktivitas antiradikal sedikit lebih tinggi dibandingkan  dengan  maserasi.  Namun pada    namun  pada  ekstraksi  soxhletasi mengalami penurunan aktivitas antiradikal pada konsentrasi 250-300 µg/mL. Penurunan  aktivitas  antiradikal  ini  di mungkinkan  karena  adanya  senyawa antioksidan  yang  tidak  optimal  dalam menstabilkan radikal bebas
0 10 20 30 40 50 60 50 100 150 200 250 300 Akti vi ta s Anti ra d ika l ( %) Konsentrasi (µg/mL ) Soxhletasi 80% Soxhletasi 60%
Maserasi 80%
Maserasi 60%
Tabel 4. Hasil perbandingan IC 50 ekstrak daun tiga dengan metode maserasi dan soxhletasi menggunakan konsentrasi pelarut etanol berbeda. Ekstrak Etanol Persamaan Grafik Nilai IC 50 Maserasi 80% y = 49,932x - 70,229 R² = 0,9904 255,77 µg/mL Maserasi 60% y = 51,473x - 78,28 R² = 0,9828 310,58 µg/mL Soxhletasi 80% y = 42,679x - 52,836 R² = 0,9505 256,76 µg/mL Soxhletasi 60% y = 47,259x - 66,897 R² = 0,9873 297,54 µg/mL
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh pada  tabel  4.  menunjukkan  bahwa  nilai IC 50 yang dimiliki ekstrak etanol daun tiga pada  maserasi  80%  255,77  µg/mL, maserasi  60%  310,58  µg/mL,  soxhletasi 80%  256,76  µg/mL,  dan  soxhletasi  60% 297,54 µg/mL. Ekstrak  menunjukan kadar fenol yang  tinggi namum  aktivitas antioksidannya  rendah.  Diduga  ektrak  ini mengandung  banyak  klorofil  atau  lignin karena  tidak  semua  senyawa  fenol  yang diekstrak  pelarut alkohol merupakan senyawa  fenol  yang  berfungsi  sebagai antioksidan  belum  diketahui.  Jumlah senyawa fenolik bukan satu-satunya faktor dalam  pertimbangan  aktivitas  antioksidan dan  struktur  molekul  memainkan  peran penting dalam aktivitas antioksidan.
Semua  fenolat  tidak  memiliki  aktivitas antioksidan yang sama (Maulinda, 2007).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  uji fitokimia  dan  aktivitas  antioksidan  dari ekstrak etanol daun tiga dapat disimpulkan bahwa :
1. Senyawa aktif yang terkandung dalam ekstrak  daun  tiga    yaitu  senyawa fenolik, flavonoid, saponin dan steroid pada  kedua  jenis ekstrak  hasil maserasi dan soxhletasi.
2. Kandungan  total  fenolik  ekstrak soxhletasi  etanol  80%  memiliki  total kandungan  fenolik  yang  paling  tinggi yaitu  sebesar  49,90  mg/kg,  diikuti oleh  dengan  soxletasi  60%,  maserasi
80%  dan  maserasi  60%.  Kandungan total flavonoid ekstrak maserasi etanol 80%  memiliki  total  flavonoid  yang paling  tinggi  yaitu  sebesar  11,58 mg/kg,  diikuti  oleh  soxhletasi  80%, maserasi 60% dan soxhletasi 60%.
3. Dari  penelitian  menunjukkan  bahwa ekstrak etanol maserasi 80% menunjukkan  aktivitas  antioksidan yang paling baik dengan nilai aktivitas IC 50 255,77  µg/mL,  diikuti  nilai  IC 50 ekstrak etanol soxhletasi 80%, soxhletasi 60% dan maserasi 60%.

## SARAN
Sebaiknya  dilakukan  penelitian lebih  lanjut  terhadap  daun  tiga  karena masih banyak khasiat yang belum diketahui serta pengujian aktivitas antioksidan    menggunakan  metode  lain dan konsentrasi yang berbeda.

## DAFTAR PUSTAKA
Ansel,  H.  C.  1989. Pengantar  Bentuk Sediaan  Farmasi .  Edisi  IV. Terjemahan Ibrahim, F. Jakarta : Penerbit  Universitas  Indonesia Press.
Conde , E.E.,  M.C.  Cadahia,  G.  Vallejo B.F.D  Simon    Dan    J.R.G. Aldrados.  1997  Low  Molecular Weight  Polyphenol  in  Cork  Oh Querceus  Suber.  J .  Agric  Food Chem. 45 : 20695-20700.
Halliwel,  B.  Dan  V.  Gutteridg.  C.  1999.
Free  Radical  in  Biology  and Medicine. Oxford  University Press, New York.
Hanani  E,  Mun’im  B,  Sekarini  R.  2005. Identifikasi senyawa antioksidan dalam  spons  Callispongia  sp dari Kepulawam
seribu.
Majalah  Ilmu  Kefarmasian 2  : 127-133.
Harborne,  J.  B.  1987,  ” Metode  Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis  Tumbuhan” ,  alih bahasa:  K.  Padmawinata  dan  I. Soediro, Terbitan
kedua,
Institute  Teknologi  Bandung,
Bandung, 71.
Jacob,  R.  dan  Burri.  1996.  Oxidative Damage  and  Defence. Food
Chem , 84 : 23-28.
Lenny, S. 2006. Isolat dan Uji Bioaktivitas Kandungan Kimia Utama Puding  Merah  dengan  Metode Uji Brine Shrimp . USU, Sumatera
Larson, R. K. 1988. On the Double Object Construction. Linguistic  Inquiry
19 : 335-391
Maulinda  R.  2007. Aktivitas  Antioksidan Rumput Laut Caulerpa Lentillifera. [SKRIPSI]. U niversitas Institut Pertanian Bogor. Rohdiana,  D.  2001.  Aktivitas  Daya Tangkap Radikal Polifenol
dalam  Daun  Teh .  Majalah Jurnal Indonesia , 12  : 53-58.
Sembiring,  B.  B,  Mamun.  Ginting,  E.  I.
2006. Pengaruh Kehalusan Bahan  dan  Lama  Ekstraksi Terhadap Mutu Ekstrak Temulawak ( Curcuma
Xanthoriza Roxb.) Bulletin Littro 17 : 53-58.