Aktivitas Antibakteri Fraksi Teraktif Kulit Batang Trengguli ( Cassia fistula L.) Terhadap Propionibacterium acnes Isolat Klinis dan Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 dalam Sediaan Salep
Antibacterial Activity of the Most Active Fraction of Trengguli Bark (Cassia fistula L.) Against Propionibacterium acnes Clinical Isolate and Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 in Ointment Preparation
Tiana Milanda 1 *, Septiyani Mustikawati 1 , Anis Yohana Chaerunisaa 1
1 Fakultas Farmasi Universitas Padjadjaran, Indonesia

## A B S T R A K
Infeksi  bakteri  pada  kulit  umumnya  disebabkan  oleh Propionibacterium  acnes dan Pseudomonas  aeruginosa . Tanaman trengguli ( Cassia fistula L.) diketahui memiliki aktivitas antibakteri yang sangat kuat. Pada penelitian ini dilakukan formulasi sediaan salep antibakteri dari fraksi teraktif kulit batang trengguli. Evaluasi fisik dan uji aktivitas terhadap  kedua  bakteri  uji  dilakukan  terhadap  sediaan  dengan  pengujian  stabilitas  setelah  28  hari  penyimpanan. Pengujian  aktivitas  antibakteri  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  difusi  agar.  Nilai  Konsentrasi  Hambat Tumbuh  Minimum  (KHTM)  dan  Konsentrasi  Bunuh  Minimum  (KBM)  ditentukan  dengan  metode  mikrodilusi. Formula salep dibuat dengan konsentrasi fraksi teraktif 2–4 X KHTM. Karakteristik fisik dari sediaan yang diamati meliputi perubahan organoleptik, pH, dan viskositas selama penyimpanan. Profil Kromatografi Lapis Tipis dari fraksi dibandingkan antara sebelum dan setelah dibuat sediaan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa fraksi etil asetat sebagai fraksi teraktif memiliki KHTM dan KBM sebesar 175 dan 350 ppm untuk Propionibacterium acnes, serta 400 dan 800 ppm untuk Pseudomonas aeruginosa . Dari hasil evaluasi terhadap formula dapat disimpulkan bahwa karakteristik fisik dari sediaan salep basis hidrofob dan hidrofil tidak berubah  selama 28 hari penyimpanan. Dari kedua jenis salep tersebut,  salep  basis  hidrofil  memiliki  aktivitas  lebih  baik  dengan  diameter  zona  hambat  yang  tidak  mengalami perubahan selama 28 hari penyimpanan.

## A B S T R A C T
Generally, skin bacterial infections are caused by Propionibacterium acnes and Pseudomonas aeruginosa. Trengguli (Cassia  fistula  L.)has  already  known  to  have  strong  antibacterial  activity.Formulation  of  antibacterial  ointments containing  active  fractions  of  trengguli  had  been  carried  out.  Evaluation  on  the  physical  characteristics  and antibacterial activity against both bacteria were also performed including stability study after 28 days of storage. Antibacterial activity were conducted using agar diffusion method. Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) values were determined by microdilution method. Most active fraction with concentration of 2-4 X MIC were formulated as ointments. Physical characteristics evaluation included changes in the organoleptic, pH and viscosity during  storage. Thin Layer Chromatography profiles were compared before and after formulation. The result showed that the ethyl acetate fraction as the most active fraction revealed MIC and MBC values of 175 and 350 ppm for Propionibacterium acnes while those against Pseudomonas aeruginosa were 400 and 800 ppm. From the evaluation on formula,  it can be concluded that hydrophobic and hydrophilic ointment base were stable during 28 days of storage. Comparison study on those ointments showed that the hydrophilic base was better than hydrophobic, by showing the unchanged inhibition zone against tested bacteria during the 28 days of storage.

## I N F O    A R T I K E L
Received: 06 Feb 2021; Revised: 10 Mar 2021; Accepted: 15 Apr 2021
* coresponding author: tiana.milanda@unpad.ac.id DOI: https://doi.org/10.22437/jisic.v13i1.13049

## Vol. 13

## No. 1

## JUN 2021
Kata kunci/ Keyword : Kulit batang trengguli, salep antibakteri, Propionibacterium acnes, Pseudomonas aeruginosa, Trengguli’s  Barks,  Antibacterial  Ointment,  Propionibacterium acnes, Pseudomonas aeruginosa  .

## PENDAHULUAN
Kulit  merupakan  bagian  terluar  dari tubuh  manusia  yang  berhubungan  langsung dengan  lingkungan  sekitar  dan  berperan sebagai sistem pertahanan pertama  terhadap paparan  mikroorganisme baik yang bersifat patogen dan non patogen (Cogen et al. , 2008; Findley  &  Grice,  2014).  Permukaan  kulit yang  lembab  menyebabkan  kulit  dapat menjadi media yang baik untuk pertumbuhan bakteri  dan  meningkatkan  resiko  terjadinya infeksi kulit (Grice, 2014).
Satu  dari  banyak  bakteri  yang seringkali  menyebabkan  infeksi  pada  kulit adalah Propionibacterium acnes dan Pseudomonas  aeruginosa (Grice  &  Segre, 2011). Propionibacterium  acnes merupakan bakteri  Gram  positif  yang  bersifat  patogen oportunistik  yang  sering  menyebabkan terjadianya jerawat ( acne vulgaris ) pada kulit (Perry & Lambert, 2006; Contassot & French, 2014).  Jerawat  ( acne  vulgaris )  merupakan peradangan  kulit  yang  umum  terjadi  dan memengaruhi sekitar 80% individu (Williams et  al. ,  2012). Pseudomonas  aeruginosa merupakan  bakteri  Gram  negatif  yang  juga bersifat  patogen  oportunistik  yang  sering menyebabkan  infeksi  pada  kulit  yang  luka, termasuk  luka  bakar  dan  membentuk  nanah berwarna biru hijau (Jawetz et al. , 2007).
Terapi  yang  umumnya  dilakukan terhadap infeksi kulit akibat bakteri tersebut adalah  dengan  pemberian  antibiotik  baik secara  oral  maupun  topikal  dan  biasanya dikombinasikan  dengan  bahan-bahan  kimia seperti asam salisilat, benzoil peroksida, dan derivate-derivat  vitamin  A  seperti  tretinoin dan  isotretinoin  (Movita,  2013).  Namun, penggunaan  jangka  panjang  dari  antibiotik seringkali  memicu  terjadinya  terjadinya resitensi  sehingga  antibiotik  tersebut  tidak lagi sensitif terhadap bakteri penyebab infeksi (Oprica,  2004).  Oleh  sebab  itu,  maka  perlu dilakukan penelitian untuk mencari alternatif zat  antibakteri  dari  bahan  alam  yang  telah dipercaya  lebih  aman  dibandingkan  dengan obat-obatan berbahan kimia.
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan  sebelumnya,  ekstrak  dan  fraksi kulit  batang  trengguli  memiliki  aktivitas terhadap  bakteri Propionibacterium  acnes dan
Pseudomonas
aeruginosa (Duraipandiyan  &  Ignacimuthu,  2007; Ahmed & Baig, 2014; Somantri, 2015). Dari pengujian terhadap beberapa fraksi, diketahui bahwa  fraksi  etil  asetat  dinilai  memiliki aktivitas  antibakteri  terbaik,  dengan  nilai KHTM untuk kedua bakteri tersebut sebesar 100  ppm  (Duraipandiyan  &  Ignacimuthu, 2007; Somantri, 2015).
Untuk  memudahkan  dalam  penggunaan dan mengaplikasikan fraksi aktif kulit batang trengguli  pada  kulit,  maka  perlu  dilakukan formulasi  dalam  bentuk  sediaan  topikal, diantaranya  adalah  sediaan  salep.  Salep merupakan  sediaan  yang  memiliki  waktu kontak  yang  lebih  lama  pada  kulit dibandingkan  sediaan  topikal  lain  sehingga cocok  digunakan  untuk  terapi  infeksi  kulit yang  disebabkan  oleh  bakteri  (Ansel,  2005; Sandhu et  al. ,  2012).  Oleh  karena  itu dilakukan formulasi sediaan salep dengan zat aktif  dari  fraksi  aktif  kulit  batang  trengguli untuk memanfaatkan potensi antibakterinya.

## BAHAN DAN METODE

## a. Bahan
Bahan  Tumbuhan :  Bagian  tumbuhan  yang digunakan  berupa  kulit  batang  tumbuhan trengguli  ( Cassia  fistula L.)  yang  diperoleh dari  Kebun  Tumbuhan  Obat  Manoko, Lembang, Bandung.
Bahan Kimia : Bahan kimia  yang digunakan adalah  etanol  70%  (Merck), n -heksan (Merck),  etil  asetat  (Merck),  amonia  10% (Merck), kloroform (Merck), asam klorida 2 N  (Merck),  pereaksi  Mayer,  pereaksi Dragendorf, serbuk magnesium, amil alkohol, pereaksi besi (III) klorida, larutan gelatin 1%, eter (Merck), pereaksi vanillin sulfat (larutan vanillin  10%  dalam  H2SO4  pekat),  natrium hidroksida  1  N  (Merck),  DMSO  (dimetil sulfoksida)  (Merck),  NaCl  fisiologis  0.9%
steril (Sanbe Farma) dan air suling (Amidis). Bahan-bahan untuk formulasi salep antibakteri  adalah  asam  oleat  (Brataco Chemical),  Cutina®  (Cognis),  Emulgin  B2 (Cognis),  gliserin  (Brataco  Chemical),  metil paraben,  parafin  cair  (Tudapetrol  (H  &  R), PEG  400  (Brataco  Chemical),  PEG  4000 (Brataco  Chemical),  propilen  glikol  (Dow Chemical Pasific), parafin (Brataco Chemical), stearil
alkohol (Brataco Chemical), dan vaselinum album (Tudapetrol KG (H & R).
Bakteri Uji: Bakteri yang digunakan adalah Pseudomonas aeruginosa ATCC 27583 yang diperoleh  dari  Laboratorium  Mikrobiologi,
Jurusan Analis Kesehatan
Politeknik Kesehatan  Bandung  dan Propionibacterium acnes isolat  klinis  dari  Laboratorium Mikrobiologi  Farmasi,  Fakultas  Farmasi, Universitas Padjadjaran.
Media  Pertumbuhan  Bakteri: Medium pertumbuhan bakteri yang digunakan adalah Mueller-Hinton  Agar (Oxoid)  dengan konsentrasi 38 g/L dan Mueller-Hinton Broth (Oxoid) dengan konsentrasi 21 g/L.
b. Alat
Maserator, rotary evaporator (IKA ® RV 10 basic), penangas air (Memmert), desilator toluen (Barstead), corong pisah (Pyrex), plat KLT,  Lampu  UV  254/366  nm  (Camag), neraca  analitik  (Mettler  Toledo,  AL204), oven (Memmert 200 dan Memmert 400-800), spatel,  inkubator  (Sakura,  IF-4),  autoklaf (Hirayama),  ose,  mikropipet  volume  10-100 µL (Boihit Proline), mikropipet volume 100- 1000 µL (Socorex Acura 825), tip mikropipet, perforator, cawan petri (Pyrex), microtiter 96 well  plate,  pemanas  elektrik  (Cimarec ® )  , jangka  sorong  (Tricle  Brand),  pembakar spiritus,  viscometer  Rion ® VT  04F  Manual, pH-indikator  strip  pH  0-14  universal  - Merck ® ,  pH-indikator  strip  pH  4.0  –  7.0  – Merck  Millipore ® ,  serta  alat-alat  gelas  yang umum digunakan di Laboratorium Fitokimia, Mikrobiologi, dan Farmasetika.

## c. Metode
Determinasi  Tumbuhan  dan  Penyiapan Simplisia
Determinasi tumbuhan dilakukan di Laboratorium  Taksonomi,  Jurusan  Biologi, Fakultas  MIPA,  Universitas  Padjadjaran. Simplisia  berupa  kulit  batang  tumbuhan trengguli  ( Cassia  fistula L.)  diperoleh  dari Kebun  Percobaan  Manoko,  Lembang, Bandung.  Simplisia  kulit  batang  trengguli dikumpulkan dan disortir, kemudian digiling menjadi  bagian-bagian  yang  lebih  kecil (serbuk simplisia).

## Ekstraksi Simplisia
Simplisia  diekstraksi  dengan  metode maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  70% selama  3  kali  24  jam.  Ekstrak  cair  yang diperoleh  kemudian  dipekatkan  dengan rotary  evaporator dan  dilanjutkan  dengan penguapan  di  atas  penangas  air  pada  suhu 50ºC  hingga  diperoleh  berat  ekstrak  yang konstan. Seluruh ekstrak akhir yang diperoleh kemudian ditimbang untuk dihitung rendemennya dan dilakukan pula pemeriksaan  organoleptik  ekstrak,  meliputi bentuk,  warna,  bau,  dan  rasa  dari  ekstrak, dilakukan  juga  penapisan  fitokimia  ekstrak serta  pemeriksaan  parameter  ekstrak  kental meliputi kadar air ekstrak, kadar sari larut air dan kadar sari larut etanol.

## Fraksinasi Ekstrak
Sebanyak  20  gram  ekstrak  ditimbang dan  dilarutkan  dalam  30  mL  etanol  70%, kemudian  sebanyak  170  mL  air  suling ditambahkan  sedikit  demi  sedikit  hingga seluruh  ekstrak  terlarut  dan  dimasukkan  ke dalam  corong  pisah.  Setelah  itu,  ke  dalam corong pisah ditambahkan 200 mL n -heksana sebagai  pelarut  non-polar,  kemudian  corong dikocok  konstan  hingga  seluruh  pelarut  dan ekstrak bercampur. Corong pisah didiamkan sampai didapatkan dua fasa cairan yang tidak bercampur.  Fraksi n -heksana  ditampung. Setelah itu ke dalam corong pisah berisi fraksi air  ditambahkan  200  mL  pelarut  semi  polar yaitu  etil  asetat,  kemudian  corong  dikocok konstan  hingga  seluruh  pelarut  dan  ekstrak bercampur.  Fraksi  etil  asetat  ditampung. Masing-masing fraksi yang sudah ditampung dipekatkan  dengan rotary  evaporator kemudian  diuapkan  dengan  menggunakan waterbath hingga  didapat  bobot  fraksi  yang konstan.
Pengujian  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak dan Fraksi
Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  dan Fraksi
Pengujian  aktivitas  antibakteri  ekstrak dan berbagai fraksi dari kulit batang trengguli dilakukan  dengan  metode  difusi  agar. Sebanyak 500 mg masing-masing ekstrak dan fraksi  dilarutkan  dalam  10  mL  DMSO, sehingga  didapat  konsentrasi  50.000  ppm. Sebanyak  20  µL  masing-masing  suspensi bakteri  dan  20  mL  MHA  yang  masih  cair dimasukan  ke  dalam  cawan  petri  steril, kemudian digoyangkan hinga merata. Setelah didiamkan hingga memadat pada suhu kamar, medium  dilubangi  dengan  menggunakan perforator  berdiameter  8  mm.  Sebanyak  50 µL masing-masing ekstrak, fraksi dan 50 µL DMSO  sebagai  kontrol  negatif  dimasukkan ke  dalam  lubang.  Cawan  petri  diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37ºC selama 18- 24 jam, lalu diukur diameter zona hambatnya dan ditentukan fraksi teraktifnya.
Penentuan  Konsentrasi  Hambat  Tumbuh Minimum  (KHTM)  dan  Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) Fraksi Teraktif
Penentuan Konsentrasi Hambat
Tumbuh Minimum (KHTM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) fraksi teraktif kulit batang  trengguli  dilakukan  menggunakan metode mikrodilusi dengan microtiter plates 96  wells. Kolom  kesatu  diisi  200 µ L  MHB sebagai  kontrol  negatif,  sedangkan  kolom  2 diisi  100 µ L  MHB  dan  100 µ L  larutan  stok fraksi  teraktif  sebagai  kontrol  fraksi.  Kolom kedua belas diisi dengan 100 µ L MHB dan 10 µ L  suspensi  bakteri  uji  sebagai  kontrol positif. Kolom ketiga sampai kesebelas diisi dengan  100 µ L  MHB.  Pengenceran  kontrol positif  dilakukan dengan cara memipet 100 µ L larutan dari kolom kedua ke dalam  kolom ketiga, kemudian dipipet 100 µ L larutan dari kolom  ketiga  ke  kolom  keempat,  dan seterusnya  dengan  prosedur  yang  sama hingga  kolom  ke  sebelas,  selanjutnya sebanyak  100 µ L  larutan  dari  kolom kesebelas dibuang. Kolom ketiga  berisi fraksi teraktif  dengan  konsentrasi  tertinggi  dan kolom kesebelas berisi fraksi teraktif dengan konsentrasi  terendah.  Sebanyak  10 µ L
suspensi bakteri uji masing-masing dimasukkan  ke  dalam  kolom  ketiga  sampai kolom  ke  sebelas. Microtiter  plate ditutup menggunakan  plastik  wrap  dan  diinkubasi pada suhu 37˚C selama 18-24 jam.
Kolom  berisi  fraksi  teraktif  dengan konsentrasi terkecil yang tidak menunjukkan pertumbuhan  bakteri  uji    ditentukan  sebagai nilai KHTM. Penentuan nilai KBM dilakukan dengan  memipet  10 µ L  larutan  dari  setiap kolom  yang  bening  ke  dalam  10  mL  MHA dalam  cawan  petri,  lalu  diratakan  dengan menggunakan spreader. Setelah    diinkubasi pada  suhu  37˚C  selama  18-24  jam,  diamati ada tidaknya pertumbuhan bakteri. Konsentrasi terkecil fraksi teraktif yang tidak menunjukkan  pertumbuhan  bakteri  uji ditentukan sebagai nilai KBM.

## Analisis  Profil  Kromatografi  Lapis  Tipis (KLT) Ekstrak dan Fraksi Teraktif
KLT  dilakukan  untuk  mengetahui kandungan  senyawa  kimia  di  dalam  ekstrak dan fraksi teraktif. Analisis KLT menggunakan  fase  diam  berupa  pelat  silika gel GF 254 dan fase gerak berupa kombinasi pelarut  toluen  :  etil  asetat  :  asam  format dengan  perbandingan  5:4:1.  Pelat  gel disiapkan  dengan  ukuran  10  cm  x  3  cm, kemudian  ekstrak  dan  fraksi  teraktif ditotolkan ditempat yang berbeda pada garis awal  (berjarak  1  cm)  menggunakan  pipa kapiler. Pelat silika kemudian dimasukkan ke dalam bejana kromatografi yang sebelumnya telah dijenuhkan dengan cairan pengembang. Proses kromatografi dihentikan ketika cairan pengembang  mencapai  garis  akhir.  Pola kromatogram  diamati  pada  sinar  tampak,  di bawah  lampu  UV  254  dan  366  nm.  Setiap bercak yang teramati dihitung nilai R f nya.

## Formulasi Salep Antibakteri
Berdasarkan  hasil  orientasi  basis, ditetapkan 2 formula basis salep yang paling stabil.  Formulasi  sediaan  salep  antibakteri dilakukan  dengan  menambahkan  fraksi teraktif kulit batang trengguli ( Cassia fistula L.) sebanyak 2 – 4 kali KHTM (Tabel 1 dan Tabel  2).  Sebagai  blanko,  dibuat  juga  basis salep tanpa penambahan fraksi aktif.
Tabel 1. Formula Salep Hidrofob
Komponen Salep Formula (%) F0 F1 F2 F3 Fraksi teraktif - 2x KHTM 3x KHTM 4x KHTM Stearil alkohol 2.2 2.2 2.2 2.2 Paraffin 0.8 0.8 0.8 0.8 Paraffin cair 20 20 20 20 Vaselin album ad 100 100 100 100

## Tabel 2. Formula Salep Hidrofil
Komponen Salep Formula (%) F0 F1 F2 F3 Fraksi teraktif - 2x KHTM 3x KHTM 4x KHTM PEG 4000 40 40 40 40 PEG 400 30 30 30 30 Propilen glikol 15 15 15 15 Metil Paraben  0.2 0.2 0.2 0.2 Air suling ad 100 100 100 100

## Evaluasi Sediaan Salep
Evaluasi  sediaan  salep  meliputi pengamatan organoleptik, pengamatan perubahan  viskositas,  dan  pengamatan perubahan
pH. Hasil pengamatan organoleptis,  viskositas,  dan  pH  selanjutnya dianalisis  dengan  ANOVA  (Analysis  of Varian) Satu Arah untuk melihat apakah ada pengaruh penambahan fraksi teraktif terhadap sediaan salep.

## Analisis  Profil  Kromatografi  Lapis  Tipis (KLT) Sediaan Salep
KLT  sediaan  dilakukan  untuk  melihat kandungan fraksi di dalam sediaan. Analisis KLT  menggunakan  metode  yang  dijelaskan pada point 3.

## Uji Aktivitas Sediaan Salep
Uji  aktivitas  antibakteri  sediaan  salep terhadap Propionibacterium  acnes dan Pseudomonas
aeruginosa
dilakukan menggunakan  metode  difusi  agar  dengan
metode  perforasi.  Sebanyak  20  mL  MHA dimasukkan  ke  dalam  cawan  petri  steril, didiamkan hingga memadat pada suhu kamar, kemudian 20 µL suspense bakteri dimasukkan dan diratakan di atas permukaan agar  dengan  menggunakan speader. Setelah itu,  agar  dilubangi  dengan  perforator  8  mm, lalu  ke  dalam  lubang-lubang  tersebut  diisi dengan  sediaan  salep  dengan  variasi konsentrasi  fraksi  teraktif  kulit  batang trengguli (basis, 2 x KHTM, 3 x KHTM, dan 4  x  KHTM)  masing-masing  untuk  salep hidrofil  dan  hidrofob.  Cawan  petri  ini kemudian  diinkubasi  dalam  inkubator  pada suhu  37°C  selama  18  –  24  jam  lalu  diukur diameter zona hambatnya.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Determinasi Tumbuhan dan

## Penyiapan Simplisia
Hasil  determinasi  tumbuhan  yang dilakukan  di  Laboratorium  Taksonomi Tumbuhan,  Jurusan  Biologi,  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam, Universitas Padjadjaran menunjukkan bahwa tumbuhan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  trengguli  ( Cassia  fistula L.)  dari famili Fabaceae

## Hasil Ekstraksi Simplisia
Hasil pengamatan organoleptik ekstrak menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  kulit batang  trengguli  berupa  cairan  kental, berwarna  coklat  tua,  berbau  khas  trengguli, serta berasa  pahit. Hasil penapisan fitokimia ekstrak  etanol  kulit  batang  trengguli  dapat dilihat pada tabel 3 yang menunjukkan bahwa dalam  ekstrak  etanol  kulit  batang  trengguli terkandung  golongan  metabolit  sekunder polifenol, saponin, flavonoid, monoterpenoid dan  seskuiterpenoid,  serta  kuinon.  Hasil penapisan  fitokimia  ini  sesuai  dengan  hasil penelitian  yang  dilakukan  oleh  Seasotiya et al. (2014)  mengenai  evaluasi  fitokimia tumbuhan trengguli ( Cassia fistula ).
Tabel 3. Hasil penapisan fitokimia  simplisia
kulit buah manggis Golongan Senyawa Kimia Hasil Pengujian Alkaloid - Tanin - Polifenolat + Saponin + Flavonoid + Monoterpenoid dan Seskuiterpenoid +/+ Steroid - Triterpenoid - Kuinon +
Keterangan :  (+) = terdeteksi ( - ) = tidak terdeteksi
Hasil  pemeriksaan  parameter  ekstrak menunjukkan bahwa kadar air ekstrak etanol kulit batang trengguli sebesar 9.955%. Hasil tersebut menunjukkan bahwa ekstrak tersebut telah  memenuhhi  persyaratan  standar  kadar air.  Persyaratan  kadar  air  ekstrak    menurut parameter  standar  yang  dikeluarkan  oleh Dirjen  POM  adalah  tidak  lebih  dari  10% (Depkes, 2000).
Hasil  penentuan  kadar  sari  larut  air diketahui  bahwa  kadar  sari  larut  air  ekstrak etanol  kulit  batang  trengguli  sebesar  76,765 %  b/b.  Hal  ini  menunjukan  bahwa  76,765% senyawa  yang  terkandung  dalam  ekstrak etanol  kulit  batang  trengguli  merupakan senyawa  yang  bersifat  polar  sehingga  larut dalam air.
Hasil penentuan kadar sari larut etanol diketahui bahwa kadar sari larut etanol yang lebih  besar  dari  kadar  sari  larut  air menunjukkan bahwa jumlah senyawa kurang polar  (semi  polar  maupun  non  polar)  yang dapat  terlarut  dalam  etanol,  lebih  besar dibandingkan  dengan  jumlah  senyawa  polar yang dapat terlarut dalam air.

## Hasil Fraksinasi Ekstrak
Fraksinasi  ekstrak  etanol  kulit  batang trengguli  dilakukan  melalui  proses  ekstraksi cair-cair (ECC) menggunakan 3 pelarut yang berbeda  kepolarannya,  yaitu  n-heksana,  etil asetat,  dan  air.    Dari  60.8  g  ekstrak  etanol, diperoleh 3 fraksi sesuai dengan Tabel 4.
Tabel 4. Hasil Fraksinasi Ekstrak Etanol Kulit
Batang Trengguli Fraksi Bobot Fraksi (g) Rendemen (%) n -Heksana 0.44 0.724 Etil Asetat 19.37 31.86 Air 8.48 13.95 Hasil pengamatan organoleptik terhadap  ketiga  fraksi  menunjukkan  bahwa fraksi  air  berbentuk  cairan  kental,  berwarna coklat  tua,  berbau  khas.  Fraksi  etil  asetat berbentuk serbuk berwarna coklat kemerahan,  berbau  khas.  Fraksi n -heksana berbentuk cairan kental, berwarna hijau tua.

## Hasil Uji Aktivitas Ekstrak dan Fraksi
Berdasarkan hasil uji aktivitas diketahui bahwa  ekstrak  dan  fraksi  kulit  batang trengguli memiliki aktivitas terhadap bakteri uji.  Dari  ketiga  fraksi  yang  diuji,  fraksi  etil asetat  memiliki  aktivitas  antibakteri  paling tinggi  yang  ditunjukkan  dengan  diameter zona hambat yang paling besar dibandingkan dengan  fraksi n -heksana  dan  fraksi  air sehingga  fraksi  etil  asetat  dipilih  sebagai fraksi teraktif.
Tabel 5. Hasil pengujian aktivitas ekstrak dan fraksi kulit batang trengguli pada konsentrasi 50.000 ppm terhadap
P. acnes dan P. aeruginosa
Sampel Diameter Zona Hambat (mm)* P. acnes P.aeruginosa Ekstrak 18.6 16.4 Fraksi n -heksana 13.5 - Fraksi etil asetat 21.2 19.6 Fraksi air 17.2 15.5 Keterangan:
(-)  = tidak memberikan zona hambat *Diameter lubang 8 mm

## Hasil Penapisan Fitokimia Fraksi Teraktif
Penapisan  fitokimia  fraksi  dilakukan untuk  mengetahui  golongan  metabolit sekunder  yang  terkandung  dalam  fraksi teraktif,  yaitu  fraksi  etil  asetat.  Berdasarkan penapisan fitokimia fraksi dari ekstrak etanol kulit  batang  trengguli,  diperoleh  hasil  pada Tabel 6.
Tabel 6. Hasil penapisan fitokimia fraksi teraktif
Golongan Senyawa Kimia Hasil pengujian Fraksi Etil Asetat Alkaloid - Tanin - Polifenol + Saponin - Flavonoid + Monoterpenoid dan Seskuiterpenoid -/- Steroid - Triterpenoid - Kuinon + Keterangan: (+) = terdeteksi (-)  = tidak terdeteksi Berdasarkan  tabel  6  diatas  diketahui bahwa fraksi etil asetat kulit batang trengguli mengandung senyawa dari golongan polifenol, flavonoid, dan kuinon.
Hasil  Penentuan  Konsentrasi  Hambat Tumbuh Minimum (KHTM) dan Konsentrasi  Bunuh  Minimum  (KBM) Fraksi Teraktif Penetuan KHTM  fraksi teraktif dilakukan  untuk  mengetahui  konsentrasi terkecil  dari  fraksi  tersebut  yang  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  uji,  yaitu Propionibacterium  acnes dan Pseudomonas aeruginosa . Setelah diinkubasi hasil menunjukkan  bahwa  pada  konsentrasi  175 ppm terlihat adanya penghambatan pertumbuhan  bakteri Propionibacterium acnes dimana  bakteri  tersebut  tidak  tumbuh dalam well berisi larutan fraksi, namun masih dapat  tumbuh  setelah  di  subkultur  ke  media yang  baru,  sehingga  KHTM  fraksi  untuk Propionibacterium  acnes terletak  pada konsentrasi  175  ppm.  KBM  terletak  pada konsentrasi  350  ppm  karena  konsentrasi tersebut merupakan konsentrasi terkecil yang tidak  menunjukkan  adanya  pertumbuhan bakteri, sehingga dinyatakan sebagai KBM.
Hasil  pengamatan  memperlihatkan bahwa  pada  konsentrasi    400  ppm  terlihat adanya  penghambatan  pertumbuhan  bakteri Pseudomonas  aeruginosa dimana  bakteri tersebut  tidak  tumbuh  dalam  well  berisi larutan  fraksi,  namun  masih  dapat  tumbuh
setelah  di  subkultur  ke  media  yang  baru, sehingga  KHTM  fraksi  untuk Pseudomonas aeruginosa terletak  pada  konsentrasi  400 ppm. KBM terletak pada konsentrasi 800 ppm karena  konsentrasi  tersebut  merupakan konsentrasi terkecil yang tidak menunjukkan adanya  pertumbuhan  bakteri,  sehingga dinyatakan sebagai KBM.
Hasil  Analisis  Profil  Kromatografi  Lapis Tipis (KLT) Ekstrak dan Fraksi Teraktif
KLT dilakukan dengan fase diam silica gel GF254 dan fase gerak toluen : etil asetat : asam format (5 : 4 : 1). Profil KLT ekstrak dan fraksi diamati dibawah sinar UV 254nm dan UV  366nm.  Hasil  KLT  dapat  dilihat  pada Tabel 7.
Tabel 7. Hasil pola kromatogram lapis tipis (klt) ekstrak dan fraksi teraktif kulit batang trengguli
Sampel No. Bercak R f Sinar Tampak Sinar UV 254 nm 366 nm Ekstrak 1 0.39 - - Biru 2 0.49 - - Biru 3 0.55 - - Merah 4 0.76 - - Merah Fraksi Etil Asetat 1 0.50 - - Biru 2 0.64 - - Biru 3 0.69 - - Merah 4 0.90 - - Merah
Keterangan: (-) = tidak terdeteksi

## Hasil Formulasi  Sediaan Salep
Berdasarkan  hasil  formulasi  sediaan salep  antibakteri  bahwa  kedua  basis  salep, salep  basis  hidrofob  maupun  salep  basis hidrofil dapat bercampur dengan baik dengan fraksi aktif kulit batang trengguli membentuk sediaan yang homogen

## Hasil Evaluasi Sediaan Salep Pengamatan Perubahan Organoleptik
Berdasarkan  pengamatan  perubahan organoleptis sediaan didapatkan hasil bahwa sediaan salep berbasis hidrofob maupun basis hidrofil  dengan  berbagai  konsentrasi  fraksi teraktif kulit batang trengguli ( Cassia fistula L.)  cukup  stabil,  karena  tidak  mengalami
perubahan konsistensi, warna, dan bau selama 28 hari masa penyimpanan.

## Pengamatan Perubahan pH
Hasil  pengamatan  perubahan  pH sediaan  salep  dengan  berbagai  konsentrasi fraksi  teraktif  kulit  batang trengguli  ( Cassia fistula L.) dapat dilihat pada Gambar 1 dan 2.
Gambar 1. Grafik perubahan pH berbagai sediaan salep antibakteri berbasis hidrofob selama 28 hari penyimpanan
Keterangan:
Fb0 :  Salep hidrofob tanpa bahan aktif Fb1 : Salep  hidrofob  dengan  konsentrasi bahan aktif 2 x KHTM Fb2 : Salep  hidrofob  dengan  konsentrasi bahan aktif 3 x KHTM
Fb3   : Salep  hidrofob  dengan  konsentrasi bahan aktif 4 x KHTM
Dari  kedua  grafik  tersebut  dapat disimpulkan  bahwa  salep  dengan  berbagai konsentrasi  fraksi  teraktif  kulit  batang trengguli  ( Cassia  fistula L.)  cukup  stabil, karena  tidak  mengalami  perubahan  pH selama  masa  penyimpanan,  pH  dari  kedua jenis salep pun sesuai dengan rentang pH kulit yaitu  4.0  –  7.0  (Lambers et  al. ,  2006).  Dari nilai  pH  sediaan  yang  cenderung  stabil tersebut  dapat  disimpulkan  bahwa  tidak  ada perngaruh  dari  penambahan  fraksi  teraktif terhadap pH sediaan salep baik dengan basis hidrofob maupun basis hidrofil.
Gambar 2. Grafik perubahan pH berbagai sediaan salep antibakteri berbasis hidrofil selama 28 hari penyimpanan
Keterangan: Fd0   : Salep hidrofil tanpa bahan aktif Fd1   : Salep  hidrofil  dengan  konsentrasi
bahan aktif 2 x KHTM
Fd2   : Salep  hidrofil  dengan  konsentrasi bahan aktif 3 x KHTM
Fd3   : Salep  hidrofil  dengan  konsentrasi bahan aktif 4 x KHTM

## Pengamatan Perubahan Viskositas
Hasil  pengamatan  viskositas  sediaan salep  dengan  berbagai  konsentrasi  fraksi teraktif kulit batang trengguli ( Cassia fistula L.) dapat dilihat pada Gambar 3 dan Gambar 4.
Gambar 3. Grafik perubahan viskositas berbagai sediaan salep antibakteri berbasis hidrofob selama 28 hari penyimpanan
Keterangan: Fb0 :  Salep hidrofob tanpa bahan aktif Fb1 : Salep  hidrofob  dengan  konsentrasi bahan aktif 2 x KHTM Fb2 : Salep  hidrofob  dengan  konsentrasi bahan aktif 3 x KHTM Fb3   : Salep  hidrofob  dengan  konsentrasi bahan aktif 4 x KHTM
0 2 4 6 1 3 7 14 21 28 pH Waktu Penyimpanan (hari) Fb0 Fb1 Fb2 Fb3 0 2 4 6 1 3 7 14 21 28 pH Waktu penyimpanan (hari) Fd0 Fd1 Fd2 Fd3 0 100 200 300 1 3 7 14 21 28 Vi sk os it as ( dP a' s) Waktu Penyimpanan (hari) Fb0 Fb1 Fb2 Fb3
Pada  awal  penyimpanan,  viskositas sediaan  salep  berbasis  hidrofob  memiliki viskositas  lebih  kecil  dibandingkan  dengan sediaan salep berbasis hidrofil. Sediaan salep basis  hidrofob  tanpa  penambahan  fraksi memiliki  viskositas  awal  250  dPa’s, viskositas ini sedikit menurun pada hari ke-21 menjadi  230  dPa’s.  Sediaan  salep  basis hidrofob dengan penambahan fraksi memiliki viskositas  awal  200  dPa’s  dan  tetap  stabil selama  28  hari  masa  penyimpanan,  hal tersebut  menunjukkan  bahwa  penambahan fraksi  berpengaruh  terhadap  viskositas sediaan salep basis hidrofob.
Perhitungan statistik yang
menggunakan  metode  Anova  Satu  Arah Desain Blok Lengkap Acak (DBLA) dengan taraf kepercayaan 0.05 ( α = 0.05), didapatkan hasil H 0 ditolak, sehingga disimpulkan bahwa penambahan  fraksi  teraktif  kulit  batang trengguli  ( Cassia  fistula L.)  berpengaruh terhadap  viskositas  sediaan  salep  dengan basis hidrofob.
Gambar 4. Grafik perubahan viskositas berbagai sediaan salep antibakteri berbasis hidrofil selama 28 hari penyimpanan
Keterangan:
Fd0   : Salep hidrofil tanpa bahan aktif Fd1   : Salep  hidrofil  dengan  konsentrasi bahan aktif 2 x KHTM Fd2   : Salep  hidrofil  dengan  konsentrasi bahan aktif 3 x KHTM
Fd3 : Salep hidrofil dengan konsentrasi bahan aktif 4 x KHTM Pada  Gambar  4.4  dapat  dilihat  bahwa viskositas sediaan salep dengan basis hidrofil (dengan atau tanpa fraksi teraktif kulit batang trengguli)  memiliki  viskositas  awal  500 dPa’s, dan viskositas ini stabil selama 28 hari masa penyimpanan, hal tersebut
menunjukkan bahwa penambahan fraksi tidak berpengaruh  terhadap  viskositas  sediaan salep basis hidrofil. Dilihat dari pengaruh dari penambahan  fraksi  terhadap  viskositas sediaan salep dengan kedua jenis basis diatas, dapat  ditarik  kesimpulan  bahwa  pengaruh penambahan  fraksi  terhadap  viskositas sediaan  salep  berbeda-beda  tergantung  basis salep  yang  digunakan  dan  komponen- komponen di dalam basis karena kemungkinan  adanya  interaksi  antara  basis dengan  fraksi  teraktif  kulit  batang  trengguli ( Cassia fistula L.).

## Hasil  Analisis  Profil  Kromatografi  Lapis Tipis (KLT) Sediaan Salep
Analisis  profil  KLT  sediaan  salep dilakukan  sebagai  uji  kualitatif  dari  sediaan untuk  menegaskan  bahwa  di  dalam  sediaan salep  terkandung  fraksi  teraktif  kulit  batang trengguli.  Pengembang  yang  digunakan dalam  analisis  profil  KLT  sediaan  salep  ini adalah toluen : etil asetat : asam format (5 : 4
: 1). Hasil analisis profil KLT sediaan salep dapat dilihat pada Gambar 5.
Dari  gambar  tersebut  diketahui  bahwa fraksi aktif dan salep hidrofob Fb 1 , Fb 2 , Fb 3 memiliki jumlah dan warna bercak beserta R f yang  serupa,  hal  ini  berarti  pada  salep  Fb 1 , Fb 2 ,  Fb 3 mengandung  fraksi  aktif  karena memiliki  pola  KLT  yang  serupa  dengan sampel  pembanding  (fraksi  aktif).  Salep hidrofob  Fb 0 tidak  menampakkan  bercak apapun  karena  salep  hidrofob  Fb 0 tidak mengandung fraksi aktif. Pada hari ke-1 dan hari  ke-28  pola  KLT  sediaan  salep  basis hidrofob masih sama, hal ini berarti sediaan salep antibakteri dengan basis hidrofob masih mengandung  fraksi  teraktif  kulit  batang trengguli ( Cassia fistula L.).
Berdasarkan  hasil  KLT,  diketahui bahwa  fraksi  aktif  dan  sediaan  salep  basis hidrofil  Fd 1 ,  Fd 2 ,  Fd 3 memiliki  jumlah  dan warna bercak beserta R f yang serupa, hal ini berarti pada salep Fd 1 , Fd 2 , Fd 3 mengandung fraksi  aktif  karena  memiliki  pola  KLT  yang serupa  dengan  sampel  pembanding  (fraksi aktif).  Pada  pola  KLT  sediaan  salep  basis hidrofil formula 0, formula 1, formula 2, dan formula 3 terdapat bercak baru yang tampak pada  sinar  UV  254  nm,  bercak  tersebut merupakan  bercak  dari  basis  salep  hidrofil
0 100 200 300 400 500 600 1 3 7 14 21 28 Vi sk os it as ( dP a' s) Waktu Penyimpanan (hari) Fd0 Fd1 Fd2 Fd3
yang  terlarut  pada  proses  pemisahan  fraksi dari  sediaan  saat  preparasi  analisis  profil KLT. Pada hari ke-1 dan hari ke-28 pola KLT sediaan  salep  basis  hidrofil  masih  sama,  hal
ini  berarti  sediaan  salep  antibakteri  dengan basis  hidrofil  masih  mengandung  fraksi teraktif kulit batang trengguli ( Cassia fistula L.).
Hari ke-1 (a) (b) (c) (d)
Hari ke-28
(a) (b) (c) (d)
Gambar 5. Hasil analisis profil kromatografi lapis tipis sediaan salep antibakteri (a) Salep anti bakteri dengan basis hidrofob (2 – 4 X KHTM) 366 nm (b) Salep anti bakteri dengan basis hidrofob (2 – 4 X KHTM) 254 nm (c) Salep anti bakteri dengan basis hidrofil (2 – 4 X KHTM) 366 nm (d) Salep anti bakteri dengan basis hidrofil (2 – 4 X KHTM) 254 nm
Hasil  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Sediaan Salep
Hasil  pengujian  aktivitas  antibakteri dari  sediaan  salep  dengan  basis  hidrofob menunjukkan  bahwa  sediaan  salep  dengan basis  tersebut  tidak  memiliki  aktivitas terhadap  bakteri  uji.  Hal  ini  dapat  terjadi karena  basis  salep  yang  bersifat  hidrofob
menyebabkan  fraksi  teraktif  kulit  batang trengguli ( Cassia fistula L.) kesulitan untuk berdifusi  kedalam  media  agar  yang  bersifat hidrofil sehingga sediaan salep dengan basis hidrofob tidak mampu memberikan aktivitas terhadap bakteri uji tersebut.
Berbeda dengan sediaan salep berbasis hidrofob,  sediaan  salep  berbasis  hidrofil
Fb 0 Fb 1 Fb 2 Fb 3 aktif Fraksi aktif Fb 0 Fb 1 Fb 2 Fb 3 Fraksi aktif
aktif Fd 0 Fd 1 Fd 2 Fd 3 Fraksi aktif
Fraksi aktif Fd 0 Fd 1 Fd 2 Fd 3 aktif
Fb 0 Fb 1 Fb 2 Fb 3 Fraksi aktif Fb 0 Fb 1 Fb 2 Fb 3 Fraksi aktif Fd 0 Fd 1 Fd 2 Fd 3 Fraksi aktif Fd 0 Fd 1 Fd 2 Fd 3 aktif Fraksi aktif
mampu  memberikan  aktivitas  antibakteri yang cukup baik terhadap bakteri uji. Hal ini disebabkan  karena  semua  komponen- komponen  yang  terdapat  dalam  salep  yang bersifat hidrofil sehingga didalam media agar yang  mengandung  air  sediaan  salep  basis hidrofil  ini  akan  melarut  secara  perlahan sehingga  memudahkan  fraksi  teraktif  kulit batang  trengguli  ( Cassia  fistula L.)  untuk berdifusi kedalam media agar dan memberikan  aktivitas  terhadap  bakteri  uji. Hasil  pengujian  aktivitas  antibakteri  dari sediaan  salep  dengan  basis  hidrofil  dapat dilihat pada Tabel 6.
Dari data yang ditunjukkan tabel diatas dapat  dilihat  bahwa  selama  28  hari penyimpanan,  sediaan  salep  basis  hidrofil masih memberikan aktivitas terhadap bakteri uji. Semakin tinggi konsentrasi fraksi teraktif kulit  batang  trengguli  ( Cassia  fistula L.)  di dalam  sediaan,  semakin  besar  zona  hambat yang  diberikan  oleh  sediaan  salep  basis hidrofil.  Selain  dilakukan  uji  aktivitas  pada sediaan  salep  juga  dilakukan  uji  aktivitas terhadap  fraksi  teraktif  (etil  asetat)  pada konsentrasi tertinggi pada sediaan yaitu pada konsentrasi 1.600 ppm (4 x KHTM) dimana zona  hambat  yang  dihasilkan  pada  bakteri Propionibacterium  acnes sebesar  14.1  mm sedangkan  pada Pseudomonas  aeruginosa sebesar 17.5 mm. Pada bakteri Propionibacterium acnes sediaan salep basis hidrofil dengan konsentrasi bahan aktif 2 - 4 x  KHTM  memberikan  zona  hambat  yang lebih  besar  dibandingkan  dengan  kontrol fraksi  aktifnya.  Hal  ini  disebabkan  karena pengaruh  dari  basis  salep  hidrofil  yang mengandung
Polietilenglikol (PEG). Menurut  penelitian  yang  dilakukan  oleh Hatmoko et al. (2015) penambahan PEG 400 dapat  meningkatkan  aktivitas  antibakteri salep,  hal  ini  disebabkan  PEG  400  dapat membantu  meningkat  laju  difusi  senyawa aktif dalam sediaan salep dengan menurunkan  viskositasnya  sehingga  dapat meningkatkan  daya  antibakteri  dari  fraksi teraktif kulit batang trengguli ( Cassia fistula L.).
Pada bakteri Pseudomonas aeruginosa, diameter  hambat  yang  dihasilkan  oleh kontrol  fraksi  aktif  1600  ppm  tidak  jauh berbeda dengan yang dihasilkan pada sediaan salep basis hidrofil dengan konsentrasi bahan aktif  1.600  ppm (4  x  KHTM)  yaitu  sebesar ±17.7  mm  sehingga  dapat  dikatakan  bahwa fraksi teraktif kulit batang trengguli ( Cassia fistula L.)  di  dalam  sediaan  salep  basis hidrofil terdifusi dengan baik ke dalam media agar. Tabel 6. Hasil Uji Aktivitas Salep Hidrofil Terhadap  Bakteri Propionibacterium  acnes dan Pseudomonas aeruginosa
Sampel Diameter Zona Hambat (mm)* P. acnes P.aeruginosa Hari ke- 1 Hari ke- 28 Hari ke- 1 Hari ke- 28 Fd 0 - - - - Fd 1 15,2 15,1 15,6 15,6 Fd 2 16 15,8 15,9 15,8 Fd 3 17 16,8 17,7 17,6
Keterangan:
Fd 0 =   Salep hidrofil tanpa bahan aktif Fd 1 =   Salep  hidrofil  dengan  konsentrasi  bahan aktif 2 x KHTM Fd 2 =   Salep  hidrofil  dengan  konsentrasi  bahan aktif 3 x KHTM Fd 3 =   Salep  hidrofil  dengan  konsentrasi  bahan aktif 4 x KHTM

## KESIMPULAN
Dari hasil penelitian didapatkan bahwa ekstrak  dan  fraksi  kulit  batang  trengguli ( Cassia  fistula L.)  memiliki  aktivitas terhadap  bakteri Propionibacterium  acnes dan Pseudomonas aeruginosa dengan fraksi etil  asetat  sebagai  bahan  uji  yang memberikan  aktivitas  antibakteri  terbaik. Konsentrasi  Hambat  Tumbuh  Minimum (KHTM) dari fraksi etil asetat terletak pada konsentrasi 175 ppm untuk bakteri P. acnes dan  400  ppm  untuk  bakteri P.  aeruginosa. Konsentrasi  Bunuh  Minimum  (KBM)  dari fraksi  etil  asetat    terletak  pada  konsentrasi 350 ppm untuk bakteri P.acnes dan 800 ppm untuk  bakteri P.  aeruginosa. Sediaan  salep dengan  basis  hidrofob  dan  hidrofil  yang mengandung  fraksi  etil  asetat  kulit  batang trengguli  (2  –  4  X  KHTM)  stabil  secara
organoleptis,  pH,  dan  viskositas,  namun sediaan  salep  basis  hidrofob  tidak  memiliki aktivitas  terhadap  bakteri  uji  karena  fraksi aktifnya tidak dapat berdifusi ke dalam media agar.  Berbeda  dengan  salep  basis  hidrofob, sediaan salep dengan basis hidrofil memiliki aktivitas terhadap kedua bakteri uji sehingga pada formulasi sediaan salep antibakteri yang
mengandung  fraksi  etil  asetat  kulit  batang trengguli sebaiknya dipilih basis dengan sifat hidrofilisitas  tinggi  seperti  polietilenglikol (PEG) yang membantu meningkat laju difusi fraksi  etil  asetat    sehingga  dapat meningkatkan  daya  antibakteri  dari  fraksi terhadap bakteri uji.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmed, S. A. dan M. M. V. Baig. 2014. In Vitro  Antimicrobial  Activity  of  Leaf and Bark Extract of Cassia Fistula L. International  Journal  of  Biosciences 4(1): 231 - 237.
Ansel,  H.  C.  2005. Pengantar  Bentuk Sediaan Farmasi . Jakarta: UI Press. Cogen, A. L., V. Nizet, dan R. L. Gallo. 2008. Skin Microbiota: A Source of Disease or Defence ? Br J Dermatol 158(3): 442 - 455.
Contassot,  E.  dan  L.  E.  French.  2014.  New
Insights  into  Acne  Pathogenesis:
Propionibacterium Acnes Activates the Inflammasome. Journal of Investigative  Dermatology 134:  310  -
313.
Depkes.  2000. Parameter  Standar  Umum Ekstrak Tumbuhan Obat . D. J. P. O. d.
Makanan. Jakarta : 3 - 38.
Draelos,  Z.  D.,  A.  Potts,  dan  A.  B.  Aliós.
2010. Randomizedvtolerability Analysis  of  Clindamycin  Phosphate 1.2%-Tretinoin 0.025% Gel Used with
Benzoyl  Peroxide  Wash  4%  for  Acne Vulgaris. Cutis 86: 310 - 318.
Duraipandiyan, V. dan S. Ignacimuthu. 2007.
Antibacterial  and  Antifungal  Activity of Cassia Fistula L.: An Ethnomedicinal  Plant. Journal  of
Ethnopharmacology 112: 590 - 594.
Findley, K. dan E. A. Grice. 2014. The Skin Microbiome:  A  Focus  on  Pathogens and  Their  Association  with  Skin Disease. PLOS Pathogens 10(11): 1 - 3. Grice,  E.  A.  2014.  The  Skin  Microbiome: Potential  for  Novel  Diagnostic  and Therapeutic  Approaches  to  Cutaneous Disease. Seminars  in  Cutaneous Medicine and Surgery 33: 1085 - 5629. Grice, E. A. dan J. A. Segre. 2011. The Skin Microbiome. Nat  Rev  Microbiol 9(4): 244 - 253.
Hatmoko,  B.  D.,  Suprapto,  dan  R. Munawaroh.  2015. Optimasi  Formula Salep Antibakteri Ekstrak Etanol Kulit Buah Manggis  (Garcinia Mangostana Linn.)  Basis  Peg  400  Dan  Peg  4000 Dengan  Metode  Desain  Faktorial. [S KRIPSI ]. Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta
Jawetz,  Melnick,  dan  Adelberg.  2007. Medical  Microbiology  24  Edition . United State: McGraw-Hill Companies. Kar, A. 2008. Pharmaceutical Microbiology . New Delhi: New Age International (P) Ltd., Publishers.
Lambers,  H.,  S.  Piessens,  A.  Bloem,  H. Pronk,  dan  P.  Finkel.  2006.  Natural Skin Surface Ph Is on Average Below 5, Which Is Beneficial for Its Resident Flora. International  Journal  Cosmetic
Science 28(5): 359 - 370.
Movita,  T.  2013.  Acne  Vulgaris. CDK-202
40(4): 269 - 272.
Omoya,  F.  O.,  B.  E.  Boboye,  dan  F.  A.
Akinyosoye. 2009. Mosquito- Degradative-Potential  of  Cockroach and Mosquito Borne Bacteria. Journal of Medical Sciences 9: 202 - 207.
Oprica,  C.  2004.  Antibiotic  Resistant Propionibacterium  Acnes on  the  Skin of  Patient  with  Moderate  to  Severe Acne. Journal of Pharmacology 10(3):
155 - 164.
Perry,  A.  L.  dan  P.  A.  Lambert.  2006.
Propionibacterium  Acnes. Journal Compilation  Letters  in  Applied
Microbiology 42: 185 - 188. Poole, K. 2004. Efflux-Mediated Multiresistance  in  Gram-Negative Bacteria. Clinical  microbiology  and infection : the official publication of the European Society of Clinical Microbiology  and  Infectious  Diseases 10(1): 12 - 26. Raj,  M.  S.  dan  P.  Roselin.  2012.  The Antibacterial Activity of Zno Nanopartocles against Propionibacterium Acnes . International  Journal  of  Pharma  and Bio Sciences 3(1): 267 - 276.
Sandhu, P., A. Bilandi , et al. 2012. Additives in Topical Dosage Form. International Journal  of  Pharmaceutical,  Chemical and Biological Sciences 2(1): 78 - 96. Seasotiya, L., P. Siwach, A. Malik, Sheema Bai,  dan  P.  B.  S.  Dalal.  2014. Phytochemical  Evaluation  and  Hptlc Fingerprint  Profile  of Cassia  Fistula . International  Journal  Of  Advances  In Pharmacy,  Biology  And  Chemistry 3(3): 604 - 611.
Shinkafi,  S.  A.  dan  H.  Ndanusa.  2013.
Antibacterial Activity of Citrus Limon on Acne Vulgaris (Pimples). International Journal 2(5): 397 - 409. Soemiati, A., E. Hanani, M. Radji, dan Nelly. 1997. Pemeriksaan Pendahuluan Daya Antibakteri Trengguli Terhadap Kuman Penyakit Kulit. Warta Tumbuhan Indonesia 3(4): 32 - 34. Somantri,  A.  E.  2015. Formulasi  Dan  Uji Aktivitas  Gel  Antibakteri  Dari  Fraksi Aktif  Kulit  Batang  Trengguli  (Cassia Fistula  L.). [SKRIPSI].  Fakultas Farmasi,  Universitas  Padjadjaran, Jatinangor Williams,  H.  C.,  R.  P.  Dellavalle,  dan  S. Garner.  2012.  Acne  Vulgaris. Lancet 379: 361 - 362.