Kandungan Kimia, Fitokimia dan Toksisitas, Pratama et al.

## KANDUNGAN KIMIA, FITOKIMIA DAN TOKSISITAS IKAN BUNTAL PISANG DARI KABUPATEN CIREBON

## Chemical Compound, Phytochemical and Toxicity on Green Rough- backed Puffer from Cirebon District
Ginanjar Pratama*, Nurjanah, Ruddy Suwandi, Agoes Mardiono Jacoeb Departemen Teknologi Hasil Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor, Jalan Agatis, Kampus IPB Dramaga Bogor 16680 telepon 0251-8622915, faks. 0251-8622916
*Korespondensi: ginanjarpratama@yahoo.com
Diterima 15 April 2014/Disetujui 05 Agustus 2014

## Abstrak
Penelitian ini bertujuan untuk mengkaji rendemen, kandungan gizi dan uji in vitro ekstrak ikan buntal ikan buntal pisang dari perairan Kabupaten Cirebon. Metode yang digunakan pada penelitian ini meliputi analisis proksimat, analisis fitokimia dan uji in vitro ekstrak dari ketiga bagian ikan buntal pisang           (daging, jeroan dan kulit). Ikan buntal pisang yang digunakan berukuran (10-13) cm. Rendemen yang didapatkan yaitu daging 37,80%, tulang 45,71%, jeroan 7,25% dan kulit 9,23%. Ikan buntal pisang memiliki potensi terbesar  kandungan  proteinnya,  berkisar  18,54%-25,31%.  Seluruh  ekstrak  memiliki  kandungan  alkaloid dan memiliki sedangkan ekstrak daging pada uji molisch. Hasil uji fitokimia menunjukkan bahwa daging ikan buntal pisang memiliki kandungan tetrodotoksin tetapi jumlahnya belum diketahui. Nilai LC 50 pada ekstrak daging sebesar 104.3498 μg/mL, ekstrak jeroan sebesar 105.4564 μg/mL, dan ekstrak kulit sebesar 104.9637 μg/mL. Hasil tersebut menggambarkan bahwa ekstrak daging, jeroan dan kulit pada ikan buntal pisang tidak toksik, walaupun terdapat indikasi adanya tetrodotoksin pada dagingnya.
Kata kunci: ekstrak, fitokimia, ikan buntal pisang, kandungan gizi

## Abstrak
This  aims  of  study  was  to  assess  yield,  nutrient  content  and  in  vitro  assay  of  extract  on  green rough-backed  puffer  from  Cirebon  district.  The  method  used  in  this  study  was  the  proximate  analysis, phytochemicals, and BSLT test of extracts on three parts of puffer fish (meat, viscera and skin). Puffer fish used measure around 10-13 cm. The yield obtained was meat 37.80%, bone 45.71%, viscera 7.25% and skin 9.23%. Protein content showed greatest potential, protein in the fish meat was 18.54% while the skin was 25.31%. Phytochemical test showed the entire extract has a positive value for alkaloids and have a negative value on the other reagents, except meat extract on molisch test. Phytochemical test results indicated that the meat of green rough-backed puffer contain tetrodotoxin, but the amount was unknown. LC 50 values in meat extract was 104.3498μg/mL, extract the viscera of 105.4564μg/mL, and the skin extract was 104.9637μg/mL. These results showed that the extract of meat, viscera and skin of the puffer fish is not toxic, although there are indications of tetrodotoxin in the flesh.
Keywords: extracts, phytochemical, green rough-backed puffer, nutrient content

## PENDAHULUAN
Puffer  fish (Tetraodontiformes)  dalam bahasa  Indonesia  disebut  ikan  buntal merupakan  ikan  yang  memiliki  adaptasi tingkah  laku  dan  anatomi  yang  tinggi  pada perairan  karang.  Jenis  ikan  ini  umumnya menetap di perairan karang, hanya beberapa jenis yang tidak menetap di perairan karang
antara  lain  trigger  fish  dan  molas  yang dapat  hidup  di  perairan  laut  yang  luas (Grzimek 1974).
Ikan  buntal  merupakan  ikan  yang mempunyai  nilai  gizi  yang  tinggi.  Ikan  ini sangat  digemari  di  Jepang  sebagai  menu masakan  yang  mempunyai  cita  rasa  yang sangat lezat dan bergizi. Harga menu masakan
dari  daging  ikan  buntal  pisang  di  Jepang cukup  mahal  yaitu  10.500  yen  atau  sekitar Rp  840.000,00  (Suryati  dan  Prianto  2008). Salah  satunya  adalah  ikan  buntal  jenis Takifugu  rubripes . T.  rubripes memiliki kandungan  gizi  pada  dagingnya  yaitu,  air 78,9%, protein 16,5%, lemak 0,7%, karbohidrat
2,5% dan abu 1,4% (Saito dan Kunisaki 1998).
Ikan buntal terkenal dengan kandungan racunnya  yaitu  tetrodotoksin  (TTX).  Racun ini  merupakan  neurotoksin  dan  belum ada  penawar  racunnya  (Nieto et  al. 2012). Noguchi  dan  Arakawa  (2008)  menyatakan bahwa kandungan tetrodotoksin yang terdapat ikan  buntal  dipengaruhi  oleh  makanannya sedangkan  menurut  Williams  (2010)  selain dari  makanan  bisa  juga  berasal  dari  kondisi perairannya.
Jenis  ikan  buntal  yang  ditemukan beracun  adalah  ikan  buntal  pisang ( Tetraodon  lunaris ).  Ikan  buntal  pisang merupakan  ikan  buntal  yang  mempunyai kandungan  racun  yang  tinggi  pada  jaringan ototnya  yaitu  lebih  dari  1000  MU/g, sedangkan  pada  kulit  ikan  ini  mempunyai kandungan  racun  antara  100-1000  MU/g. Tingkat  toksisitas  yang  rendah  terdapat pada  bagian  ovari,  testis,  hati  dan  usus ikan  ini  yaitu  kurang  dari  10  MU/g.  Darah ikan  buntal  pisang  tidak  mengandung tetrodotoksin  (Noguchi  dan  Arakawa  2008). Ikan tersebut merupakan ikan yang terkenal di  Jepang  dengan  nama  dokusabafugu ( Tetraodon lunaris , Gastrophysus  lunaris ,
Lagocephalus  lunari s)  (Abe  1960).  Ikan  ini ditemukan  di  Kamboja  (Ngy et  al. 2008), Thailand  (Chulanetra et  al. 2011),  Taiwan (Hwang et  al. 1992),  dan  Florida (Deeds et al. 2008). Ikan buntal pisang secara empiris sangat digemari  oleh  nelayan-nelayan  di  daerah Gebang,  Kabupaten  Cirebon.  Nelayan  di daerah  Cirebon  mengonsumsi  daging  ikan ini karena rasanya yang lezat. Penelitian yang dilakukan oleh Noguchi dan Arakawa (2008) sangat bertolak belakang dengan hal tersebut,
karena kandungan tetrodotoksin pada ikan ini sangat tinggi di dalam jaringan ototnya. Informasi mengenai rendemen, kandungan  gizi  dan  racun  dari  ikan  buntal pisang  di  perairan  Indonesia  belum  banyak dikaji. Penelitian ini bertujuan untuk mengkaji rendemen,  kandungan  gizi  dan  uji  in  vitro ekstrak  ikan  buntal  pisang  dari  perairan Kabupaten Cirebon.

## BAHAN DAN METODE Bahan dan Alat
Bahan  utama  yang  digunakan  pada penelitian ini adalah ikan buntal pisang dari perairan  Gebang,  Kabupaten  Cirebon,  Jawa Barat.  Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu akuades,  H 2 SO4  pekat,  etanol,  asam  asetat, air laut dan bahan untuk pengujian fitokimia. Alat-alat  yang  digunakan  yaitu  sentrifugasi Himac CR21G, gelas piala, pipet mikro, oven Yamato DV 41, dan shaker Wise ShakeSHO- 1D.

## Metode Penelitian Analisis Proksimat (AOAC 2005)
Analisis  proksimat  adalah  analisis  yang dilakukan  untuk  memprediksi  komposisi kimia  suatu  bahan  termasuk  didalamnya analisis kandungan air, lemak, abu, protein dan karbohidrat.

## Ekstrak  Tetrodotoksin  (Zhou  dan  Shun
2003) yang dimodifikasi
Sampel yang digunakan berasal dari tiga bagian ikan buntal pisang yaitu daging, kulit dan  jeroan.  Sebanyak  100  g  dari  masing- masing bagian dicincang halus, lalu ditambah 150 mL air deionisasi dan 0,15 mL asam asetat. Campuran dimaserasi 150 rpm selama 10 jam pada suhu kamar, lalu disaring menggunakan nylon ukuran 100 mesh yang ditahan dengan saringan stainless  steel ukuran  40  mesh. Sebanyak 150 mL air deionisasi ditambahkan ke  dalam  residu,  kemudian  dilakukan pengekstraksian kembali sebanyak empat kali. Filtrat lalu dipanaskan pada suhu 80˚C selama 5 menit, lalu didinginkan.
JPHPI 2014, Volume 17 Nomor 2
Kandungan Kimia, Fitokimia dan Toksisitas, Pratama et al.

## Analisis Fitokimia (Harborne 1987)
Identifikasi senyawa kimia tetrodotoksin secara  kualitatif  dilakukan  menggunakan uji  fitokimia  yang  difragmentasi  maupun yang tidak difragmentasi dilakukan terhadap senyawa-senyawa  yaitu  alkaloid,  steroid/ triterpenoid,  flavonoid,  saponin,  fenol hidrokuinon,  molisch,  benedict,  biuret  dan ninhidrin.
Uji Toksisitas In vitro dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) (Meyer et al. 1982; McLaughlin et al. 1998; dan Carballo et al. 2002)
Menurut  Carballo et  al. (2002),  metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) biasanya digunakan  dalam  uji  pendahuluan  untuk penapisan aktivitas farmakologis pada produk alam.  Uji  ini  digunakan  larva A.  Salina sebagai hewan uji. Mula-mula telur A. Salina ditetaskan di dalam air laut di bawah lampu TL 40 watt selama 48 jam. Sebanyak 10 ekor larva A. Salina dimasukkan ke dalam tabung reaksi,
kemudian dimasukkan larutan ekstrak sampel dengan konsentrasi masing-masing 5 ppm; 10 ppm; 50 ppm; 100 ppm; 500 ppm; dan 1000 ppm dan ditambahkan air laut sampai volume 5  mL.  Air  laut  tanpa  pemberian  ekstrak (0  ppm)  digunakan  sebagai  kontrol.  Semua tabung  reaksi  diinkubasi  pada  suhu  kamar selama 24 jam di bawah penerangan lampu TL 40 watt. Pengamatan dilakukan setelah 24 jam dengan  menghitung  jumlah A.  Salina yang mati  pada  tiap  konsentrasi  penentuan  harga LC 50 (ppm) dilakukan menggunakan analisis probit dan persamaan regresi.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ukuran dan Rendemen Ikan Buntal Pisang Hasil  penelitian  Sulistiono et  al. (2001) diketahui  bahwa  indeks  kematangan  gonad T. lunaris terjadi pada bulan Mei di perairan Ujung  Pangkah,  Jawa  Timur.  Penelitian tersebut  berbanding  lurus  dengan  hasil pengambilan  sampel  yang  didapatkan  pada bulan  Juni  di  Kabupaten  Cirebon  dengan panjang 10 sampai 13 cm dan berat 20 sampai 44 g. Hasil rataan ukuran panjang ikan buntal pisang  yaitu  (11,20±0,93)  cm  dan  bobotnya yaitu  (30,33±7,44)  g.  Nunez-Vazquez et  al. (2012) menyatakan bahwa panjang 10,56±8,96 cm  dan  bobot  (34,04±3,9)  g  adalah  ikan buntal  juvenil.  Penambahan  panjang  ikan buntal  pisang  lebih  cepat  dari  penambahan bobot  tubuhnya  (Suryati  dan  Prianto  2008). Panjang  total  tubuh  ikan  akan  berpengaruh terhadap  rasio  berat  lambung/berat  badan (Yusfiati et  al. 2006)  sehingga  sangat berpengaruh  terhadap  kandungan  gizi  dan kandungan  tetrodotoksin  yang  dikandung oleh ikan buntal (Nunez-Vazquez et al. 2012). Rendemen  tertinggi  ikan  buntal  pisang adalah  tulang  dan  kepala  yaitu  45,17%. Abe  (1960)  menyatakan  bahwa  kepala  ikan buntal lebih besar bila dibandingkan dengan bagian tubuh lainnya. Pemanfaatan kepala dan tulang dari ikan buntal pisang belum banyak dikembangkan sehingga belum menghasilkan nilai  ekonomis  yang  tinggi  pada  bagian  ini. Rendemen terendah adalah jeroan ikan buntal
Gambar 1 Rendemen ikan buntal pisang
pisang  yaitu  7,25%.  Rendemen  daging  ikan buntal  pisang  adalah  37,80%.  Daging  ikan inilah  yang  menjadi  primadona  bagi  para pencinta makanan karena rasanya yang lezat dan nikmat, sehingga mampu memikat para konsumennya. Rendemen kulit ikan ini tidak berbeda  dengan  nilai  rendemen  jeroan  ikan buntal pisang yaitu sebesar 9,23%. Rendemen ikan buntal pisang dapat dilihat Gambar 1.

## Karakteristik Kimia
Ikan buntal pisang memiliki kandungan gizi  pada  dagingnya  yaitu  air  80,02%,  abu 1,15%,    lemak  0,11%,  protein  18,54%  dan karbohidrat  0,18%  (Tabel  1).  Kandungan protein  daging  ikan  buntal  pisang  perairan Kabupaten  Cirebon  lebih  tinggi  bila dibandingkan dengan ikan buntal pisang yang berasal  dari  Parengipettai,  India,  sedangkan lemaknya lebih kecil. Ikan buntal pisang yang berasal  dari  India  memiliki  kandungan  gizi pada dagingnya yaitu air 80,32%, abu 0,96%, lemak 11,25%, protein 9,2% dan karbohidrat 1,96% (Eswar et al. 2014). Protein  pada  daging  ikan  buntal  pisang lebih  tinggi  bila  dibandingkan  dengan T.  rubripes dan L.  lunaris dari  India. Protein  menjadi  salah  satu  primadona  yang menjanjikan  dari  daging  ikan  buntal  ini. Kandungan  asam  amino  daging  ikan  buntal pisang  yang  tertinggi  adalah  asam  glutamat yaitu  1,319  mg/100  g  (Pratama  2010). Kandungan  asam  glutamat  yang  tinggi  ini menyebabkan rasa dari daging ikan ini sangat lezat, sehingga masyarakat di Gebang sangat menyukainya.
Kandungan  yang  tertinggi  pada  jeroan ikan  buntal  pisang  adalah  lemaknya.  Lemak pada  ikan  buntal  pisang  yaitu  5,62%. Kandungan  lemak  yang  tinggi  pada  jeroan
ikan buntal pisang tidak terlepas dari ukuran dan  umur  dari  ikan  buntal  itu  sendiri (Sirisha  dan  Rao  2013).  Lemak  yang  tinggi dari jeroan ikan buntal merupakan salah satu potensi untuk dijadikan minyak ikan, terlepas dari racun yang dikandungnya.
Kulit  ikan  buntal  pisang  merupakan salah  satu  potensi  yang  sangat  tinggi untuk  pembuatan  gelatin  dan  kolagen (Handoko et  al. 2011).  Kulit  ikan  ini  sangat elastis  layaknya  kulit  ikan  belut.  Ikan  ini mempunyai  duri  di  sekitar    punggung  dan perutnya (Grzimek 1974). Kandungan protein pada kulit ikan buntal yaitu 25,31%.

## Analisis Fitokimia
Analisis  fitokimia  yang  berfungsi  untuk mengetahui  senyawa  aktif  dari  ekstrak  yang diperoleh secara kualitatif. Pengujian fitokimia menggunakan  ekstrak  kasar  tetrodotoksin dengan  menggunakan  metode  ekstrak Zhou dan Shun (2003) yang telah dimodifikasi. Tabel 2 menunjukkan hasil uji fitokimia dari bagian-bagian ikan buntal pisang.
Uddin et  al. (2013)  menyatakan bahwa  jenis  racun  tetrodotoksin  pada uji  fitokimia  terdeteksipada  uji  alkaloid. Tetrodotoksin  akan  aktif  apabila  adanya glikosida (karbohidrat), karena racun tersebut dapat  disintesis  bila  terdapat  kuinon  atau karbohidrat  (Bane et  al. 2014).  Penelitian Uddin et al. (2013) menunjukkan bahwa nilai uji fitokimia yang memiliki kandungan racun dari  ikan  buntal  jenis Tetraodon  cutcutia adalah  hatinya,  karena  memiliki  nilai  positif pada  uji  alkaloid  dan  glikosida.  Hasil  uji fitokimia ikan buntal pisang yang didapatkan dari seluruh pengujian ekstrak daging, jeroan dan kulit memiliki nilai positif untuk pereaksi alkaloid,  sedangkan  pereaksi  lain  memiliki Tabel 1 Analisis proksimat bagian-bagian ikan buntal pisang (g/100g) Analisis Kimia Air Abu Lemak Protein Karbohidrat Daging 80,02 ± 0,29 1,15 ± 0,09 0,11 ± 0,01 18,54 ± 0,19 0,18 ± 0,09 Jeroan 78,88 ± 1,76 3,05 ± 0,05 5,62 ± 0,26 8,34 ± 0,20 4,11 ± 1,70 Kulit 65,27 ± 0,52 1,27 ± 0,05 0,27 ± 0,01 25,31 ± 0,29 7,87 ± 0,32
JPHPI 2014, Volume 17 Nomor 2
Kandungan Kimia, Fitokimia dan Toksisitas, Pratama et al.
nilai  negatif  kecuali  ekstrak  daging  pada  uji molisch.  Hasil  uji  fitokimia  menunjukkan bahwa  daging  ikan  buntal  pisang  memiliki kandungan  tetrodotoksin  tetapi  jumlahnya belum diketahui. Pernyataan dari Noguchi  dan  Arakawa  (2008)  yang menyebutkan bahwa racun ikan buntal pisang terdapat pada jaringan ototnya sesuai dengan hasil yang didapatkan dari penelitian ini.
Uji in vitro Pengujian in  vitro (LC 50 )  menggunakan larva  A  salina.  Metode  ini  dilakukan dengan  cara  memasukkan  10  ekor  larva udang ke dalam pelat uji yang berisi ekstrak
tetrodotoksin dan air laut dengan konsentrasi (0; 5; 10; 100; 500; dan 1000) ppm. Hasil uji in vitro dengan larva A. Salina menunjukkan nilai kematian terbanyak pada ekstrak  daging.  Larva A.  Salina tersebut merupakan  indikator  toksisitas  dari  ekstrak ikan  buntal  pisang  dari  beberapa  bagian yang  diujikan.  Nilai  yang  terdapat  pada Gambar  2  menunjukkan  LC 50 yang  terdapat pada  ekstrak  daging  sebesar  104.3498  μg/ mL,  ekstrak  jeroan  sebesar  105.4564  μg/ mL,  dan  ekstrak  kulit  sebesar  104.9637  μg/ mL.  Hasil  tersebut  menggambarkan  bahwa ekstrak  daging,  jeroan  dan  kulit  pada ikan  buntal  pisang  tidak  toksik,  walaupun
Tabel 2 Hasil uji fitokimia dari bagian-bagian ikan buntal pisang Pereaksi Ekstrak daging Ekstrak jeroan Ekstrak kulit Alkaloid - Wagner + - + - Dragendroff +
+ + - Meyer
+
+ + Steroid/Terpenoid - - - Flavonoid - - - Saponin - - - Fenol Hedrokuinon - - - Molisch + - - Benedict - - - Biuret - - - Ninhidrin - - - Keterangan: (+) terdeteksi, (-) tidak terdeteksi
Gambar 2 Hasil uji in vitro ekstrak bagian-bagian ikan buntal pisang.
Keterangan:      ekstrak daging,      ekstrak jeroan,     ekstrak kulit,       Log.(ekstrak daging),         Log.(ekstrak daging), Log.(ekstrak kulit)
terdapat  indikasi  adanya  tetrodotoksin  pada daging.  Hasil  penelitian  Uddin et  al. (2013) menunjukkan bahwa toksisitas LC 50 dari hati ikan  buntal T.  cutcutia adalah  0,75  μg/mL. Hasil  tersebut  mengindikasikan  bahwa  hati ikan buntal T. cutcutia sangat toksik. Menurut Meyer  (1982)  tingkat  (LC 50 )  ketoksisitasan diatas 1000 ppm tidak toksik.

## KESIMPULAN
Rendemen  pada  ikan  buntal  pisang meliputi daging 37,80%, tulang 45,71%, jeroan 7,25%  dan  kulit  9,23%.  Kandungan  protein pada daging dan kulit ikan ini memiliki nilai yang  tinggi  yaitu  18,54%  dan  25,31%.  Uji fitokimia  menunjukkan  bahwa  alkaloid  dan molisch  terdeteksi  pada  dagingnya.  Hasil  ini menunjukkan bahwa kandungan tetrodotoksin terdapat pada daging ikan buntal pisang tetapi belum  diketahui  jumlahnya.  Nilai  LC 50 pada ekstrak daging sebesar 104.3498 μg/mL, ekstrak jeroan  sebesar  105,4564  μg/mL,  dan  ekstrak kulit  sebesar  104,9637  μg/mL.  Nilai  tersebut menggambarkan  bahwa  seluruh  bagian  ikan buntal pisang tidak toksik.

## Ucapan Terima kasih
Peneliti  berterima  kasih  kepada  Dikti, karena  telah  membantu  penelitian  melalui program penelitian BOPTN.

## DAFTAR PUSTAKA
Abe T. 1960. Taxonomic studies on the puffers from  Japan  and  Adjacent  Regions- Corrigenda and Addenda. Part II. Japanese Journal of Ichthyology 8: 3-6.
[AOAC]  Association  of  Official  Analytical
Chemist. 2005. Official Methods of Analysis of  The  Association  of  Official  Analytical of  Chemist.  Arlington,  Virginia  (USA): Published  by  The  Association  of  Official Analytical Chemist. Inc. Bane  V,  Lehane  M.  Dikshit  M,  O’Riordan  A. Furey  A.  2014.  Tetrodotoxin:  chemistry, toxicity, source, distribution and detection. Toxins . 6:693-755.
Carballo JL. Hernandez-Inda ZL, Perez P, Garcia
Gravalos MD. 2002. A comparison between two  brine  shrimp  assay  to  detect  in  vitro cytotoxicity  in  marine  natural  product (methodology  article). Bioorganic  Marine
Chemistry Biotechnology 2(1): 1-5. Chulanetra  M,  Sookrung  N,  Srimanote  P,
Indrawattana  N,  Thanongsakrikul  J,
Sakolvaree  Y,  Nguan  MC,  Kurazono  H, Chaicumpa W. 2011. Toxic Marine puffer fish in Thailand seas and tetrodotoxin they contained. Toxins 3:1249-1262. Deeds JR, LandsbergJH, Etheridge SM, Pitcher GC,  Longan  SW.  2008.  Non-traditional vectors  for  paralytic  shellfish  poisoning. Marine Drugs 6:308-348.
Eswar A, Kathirvel K, Anbarasu R, Ramamoorthy K,  Sankar  G,  Suvitha  S,  Manikandarajan S.  2014.  Proximate  composition  and  fatty acid  analysis  of  puffer  fish,  Lagocephalus inermis (Temminck and Schlegel, 1850) and Lagocephalus lunaris (Bloch and Schneider, 1801)  from  Parangipettai,  Southeast  coast of  India. International  Letters  of  Natural Sciences 12(1):21-29.
Grzimek  B.  1974.  Animal  Life  Encyclopedia.
Vol. 5 Fishes II and Amphibians. New York: Van Nostrand Reinhold Company. Handoko T, Rusli SO, Sandy I. 2011. Pengaruh jenis  dan  konsentrasi  asam,  temperatur dan waktu ekstraksi terhadap karakteristik fish glue dari limbah ikan tenggiri. Reaktor
13(4):237-241. Harborne  JB.  1987.  Metode  fitokimia. Padwaminata  K,  Soediro  I,  penerjemah. Bandung: ITB. Terjemahan dari: Phytochemical Methods. Hwang DF, Kao CY, Yang HC, Jeng SS, Noguchi T. 1992.Toxicity of puffer in Taiwan. Nippon
Suisan Gakkaishi 58(8):1541-1547.
Mc Laughlin JL, Rogers LL, Anderson JE. 1998.
The  use  of  biological  assays  to  evaluate botanicals. Drugs  Information  Journal 32: 513-524.
Meyer  BN,  Ferrigni  NR,  Putnam  JE,  Jacobsen LB,  Nicholas  DE,  Mc  Laughlin  JL.  1982.
Brine shrimp: aconvenient general bioassay for active plant constituents. Planta Medica
Kandungan Kimia, Fitokimia dan Toksisitas, Pratama et al.
45(3):31-34.
Ngy L, Taniyama S, Shibano K, Yu CF, Takatani
T,  Arakawa  O.  2008.  Distribution  of tetrodotoxin  in  puffer  fish  collected  from coastal waters of Sihanouk Ville, Cambodia. Journal  Food  Hygiene  Society  Japan 49(5): 361-365. Nieto  FR,  Cobos  EJ,  Tejada  MA,  Fernandez CS,  Cano  RG,  Cendan  CM.  Tetrodotoxin (TTX)  as  a  therapeutic  agent  for  pain. Marine Drugs 10:281-305. Noguchi  T,  Arakawa  O.  2008.  Tetrodotoxin- distribution  and  accumulation  in  aquatic organisms, and cases of human intoxication.
Marine Drugs . 6:220-242. Nunez-Vazquez  E,  Garcia-Ortega  A,  Campa-
Cordova  AI,  de  la  Parra  IA,  Ibarra- Martinez  L,  Heredia-Tapia  A,  Ochoa  JL.
2012.  Toxicity  of  cultured  bullseye  puffer fish Sphoeroides annulatus. Marine Drugs .
10:329-339.
Pratama  G.  2010.  Pengaruh  penggorengan terhadap  karakteristik  asam  amino  ikan buntal  pisang  (Tetraodon  lunaris)  dari perairan  Kabupaten  Cirebon,  Jawa  Barat. [skripsi]. Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Saito  M,  Kunisaki  N.  1998.  Proximate composition,  fatty  acid  composition,  free amino acid contents, mineral contents, and hardness of muscle from wild and cultured puffer fish Takifugu rubripes. Nippon Suisan
Gakkaishi 64(1):116-120. Sirisha  RI,  Rao  PY.  2013.  Length-weight
relationship and growth of the green rough- backed puffer Lagocephalus lunaris (Bloch and  Schneider  1801),  off  Visakhapatnam, East  coast  of  India. Advances  in  Applied Science Research 4(4):123-128. Sulistiono,  Kurniati  TH,  Riani  E,  Watanabe  S. 2001.  Kematangan  gonad  beberapa  jenis ikan buntal (Tetraodon lunaris, T. fluviatilis, T. reticularis) di perairan Ujung Pangkah, Jawa Timur. Jurnal Iktiologi Indonesia 1(2):
25-30. Suryati NK, Prianto E. 2008. Panjang bobot dan komposisi  makanan  ikan  buntal  pisang Lagocepalus  lunaris  (Tetraodontidae)  di sungai  Musi,  Sumatera  Selatan. Jurnal
Litbang Perikanan Indonesia 14(3):279-283.
Uddin  M,  Pervin  R,  Kabir  Y,  Absar  N.  2013. Preliminary  screening  of  secondary metabolites  and  brine  shrimp  lethality bioassay of warm-water extract of puffer fish organs tissue, Tetraodon cutcutia, available in  Bangladesh. Journal  of  Biomedical  and Pharmaceutical Research 2(5):14-18. Williams  BL.  2010.  Behavioral  and  chemical ecology of marine organisms with respect to tetrodotoxin. Marine Drugs. 8:381-398.
Yusfiati,  Sigit  K,  Affandi  R,  Nurhidayat.  2006. Anatomi  pencernaan  ikan  buntal  pisang ( Tetraodon  lunaris ). Jurnal  Iktiologi
Indonesia 6(1):11-21.
Zhou  M  dan  Shun  FHK,  penemu;  Nanning (CN) dan North Point (HK). 2003 Apr 22.
Method of Extracting Tetrodotoxin. United States Patent US006552191B1.