Morfologi dan Pertumbuhan Planlet Hasil Induksi Poliploidi melalui Perlakuan Kolkisin pada Kuncup Bunga Anggrek Bulan ( Phalaenopsis amabilis (L.) Blume)
Morphology and Growth of Plantlets Resulted from Polyploidy Induction by Colchicine Treatment on Flower Buds of Moth Orchid (Phalaenopsis amabilis (L.) Blume )
Tubagus Kiki Kawakibi Azmi 1 , Dewi Sukma 2 *, Sandra Arifin Aziz 2 , dan Muhamad Syukur 2
1 Program Studi Pemuliaan dan Bioteknologi Tanaman, Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor 2 Departemen Agronomi dan Hortikultura, Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor (Bogor Agricultural University), Jl. Meranti, Kampus IPB Darmaga, Bogor 16680, Indonesia
Diterima 11 Agustus 2015/Disetujui 24 Desember 2015

## ABSTRACT
Induction of polyploid gametes is one of useful plant polyploidization methods. Some of its benefits are to obtain triploid and tetraploid progenies at the same time by cross and self pollination. Previous research showed that some morphological characters which could be the indications of polyploidy plantlets before the analysis of chromosome number. Colchicine treatment on flower bud of diploid Phalaenopsis amabilis was conducted to determine the effect of colchicine on flower bud development, plantlets morphology and growth, and potential of polyploidy induction based on plantlets morphology. Colchicine concentrations in the experiment were 0, 50, 500, 1,000, and 2,000 mg L -1 , with three days duration of treatments with aluminium foil wraps on flower buds. The results showed that high colchicine concentrations (2,000 mg L -1 ) inhibited flowers blooming of treated flower buds. Based on morphological characters, plantlets were classified into normal and putative polyploid plantlets. Putative polyploid plantlets from colchicine with the concentration of 50, 500, and 1,000 mg L -1 were 71.2, 86.4, and 100.0% respectively.
Keywords: colchicine concentration, morphological characters, normal plantlets, putative polyploidy, reproductive organ

## ABSTRAK
Pembentukan  gamet  poliploid  pada  organ  generatif  merupakan  salah  satu  metode  poliploidisasi  yang  memiliki banyak manfaat, antara lain untuk menghasilkan progeni-progeni triploid dan tetraploid dalam waktu bersamaan, melalui penyerbukan  sendiri  dan  silang.  Penelitian  terdahulu  menunjukkan  bahwa  beberapa  karakter  morfologi  dapat  menjadi indikator untuk planlet poliploid sebelum dilakukan analisis jumlah kromosom. Penelitian aplikasi kolkisin pada kuncup bunga  Phalaenopsis  amabilis  bertujuan  untuk  mempelajari  pengaruh  kolkisin  terhadap  perkembangan  kuncup  bunga, morfologi  dan  pertumbuhan  planlet  yang  dihasilkan  dan  potensi  keberhasilan  induksi  poliploidi  berdasarkan  karakter morfologi planlet. Konsentrasi kolkisin dalam percobaan adalah 0, 50, 500, 1,000, dan 2,000 mg L -1 , diaplikasikan melalui penyungkupan tunas bunga dengan kapas berkolkisin dan dibalut alumunium foil dengan durasi perlakuan selama tiga hari. Hasil percobaan menunjukkan bahwa konsentrasi kolkisin yang tinggi (2,000 mg L -1 ) menyebabkan bunga gagal mekar. Berdasarkan karakter morfologi planlet kontrol dan putatif poliploid, persentase planlet diduga poliploid dari perlakuan kolkisin 50, 500 dan 1,000 mg L -1 berturut-turut adalah 71.2, 86.4, dan 100.0%.
Kata kunci: karakter morfologi, konsentrasi kolkisin, organ reproduktif, planlet normal, putatif poliploid

## PENDAHULUAN
Keberadaan  poliploid  memiliki  manfaat  yang  besar terutama  dalam  perbaikan  tanaman,  termasuk  anggrek. Pemulia  anggrek  sering  memanfaatkan  poliploid  untuk memperoleh anggrek yang memiliki karakter bunga dengan variasi baru yang diinginkan, terutama untuk karakter bunga
berukuran besar. Usaha dalam memperoleh anggrek poliploid telah banyak dilakukan, di antaranya oleh Nakasone (1960), Chaicharoen  dan  Saejew  (1981),  Griesbach  (1981),  Chen et al. (2009), Sarathum et al. (2010), Miguel dan Leonhardt (2011),  Kerdsuwan  dan  Te-chato  (2012),  dan  Atichart (2013). Phalaenopsis adalah  salah  satu  jenis  anggrek  yang menjadi komoditas penting dari tanaman hias. Phalaenopsis amabilis dengan  warna  bunga  putih  merupakan  spesies anggrek dari Indonesia yang berpotensi untuk dikembangkan
* Penulis untuk korespondensi. e-mail: dsukma70@yahoo.com
sebagai  spesies  komersial  dengan  karakter  bunga  yang lebih  baik  melalui  poliploidisasi.  Metode  poliploidisasi pada  anggrek  umumnya  dilakukan  melalui  perlakuan menggunakan agen anti-mitosis yang ditargetkan pada sel- sel  somatik  dari  jaringan  meristematik,  seperti protocorm (struktur berbentuk globular dalam proses perkecambahan embrio  anggrek)  (Sarathum et  al .,  2010;  Miguel  dan Leonhardt,  2011;  Kerdsuwan;  Te-chato,  2012;  Rahayu et al .,  2015a) dan planlet (tanaman kecil dalam kultur in vitro yang sudah memiliki akar, batang dan daun) (Vichiato et al ., 2007 dan Rahayu et al ., 2014) ataupun tanaman muda (bibit) (Rahayu et al ., 2015b). Masalah umum yang dihadapi dari induksi poliploid pada jaringan meristem vegetatif adalah perubahan  poliploid  yang  terjadi  hanya  pada  satu  atau beberapa  sel  sehingga  tanaman  yang  dihasilkan  biasanya memiliki  konstitusi  jaringan  dengan  sel-sel  yang  masih beragam jumlah kromosomnya, atau campuran antara sel asal diploid dengan sel poliploid ( mixoploid ). Kondisi tersebut memungkinkan  terjadinya  perubahan  yang  mengarah pada  diploid  ( diplontic  selection ),  yaitu  kompetisi  antara sel-sel  diploid  dan  poliploid  dimana  sel  diploid  kembali mendominasi dan sel-sel poliploid tidak tumbuh maksimal sehingga  tidak  dihasilkan  tanaman  poliploid  (Eigsti  dan Dustin, 1957).
Alternatif  metode  yang  dapat  digunakan  dalam poliploidisasi P.  amabilis adalah  melalui  pembentukan gamet  poliploid.  Penggabungan  gamet  poliploid  jantan dan betina akan menghasilkan individu tanaman poliploid yang solid, tanpa ada peluang terjadinya diplontic selection . Polen poliploid dapat terbentuk secara alami sebagaimana dilaporkan  Teoh  (1984)  dimana  polen  poliploid  pada anggrek  diploid  dapat  terbentuk  secara  alami  dengan persentase  yang  sangat  kecil,  pada Spathoglottis  plicata dan Calanthe rubens , yaitu masing-masing secara berurutan sebesar 0.63 dan 5.01%. Metode aplikasi kolkisin pada spike bunga muda Vanda Miss Joaquin untuk mendapatkan gamet poliploid pernah dilaporkan Nakasone (1960) namun tidak menghasilkan  tanaman  poliploid.  Sementara  itu,  induksi gamet poliploid pada anggrek Phalaenopsis amabilis belum pernah dilaporkan. Gamet poliploid juga berpotensi untuk menghasilkan  progeni  triploid  melalui  fertilisasi  dengan gamet haploid dari tanaman diploid.
Embrio yang terbentuk dari hasil penyerbukan sendiri maupun silang pada bunga hasil perlakuan kolkisin setelah ditumbuhkan  menjadi  planlet  dapat  dikonfirmasi  tingkat ploidinya  dengan  analisis  kromosom.  Rahayu  (2015a) menemukan  adanya  perbedaan  nyata  karakter  planlet diploid dengan poliploid seperti karakter pertumbuhan dan ukuran stomata. Karakter-karakter seperti panjang dan lebar organ  basal protocorm (OBP),  panjang  dan  lebar  daun, panjang dan diameter akar kemungkinan dapat digunakan untuk skrining awal planlet putatif poliploid. Penelitian ini dilakukan untuk mempelajari pengaruh perlakuan kolkisin pada kuncup bunga dari P. amabilis dan potensinya dalam menghasilkan planlet putatif poliploid berdasarkan karakter morfologi.

## BAHAN DAN METODE

## Perlakuan Kolkisin
Penelitian ini dilakukan di tempat penangkar anggrek di kawasan Puncak, Kabupaten Bogor, dan di Laboratorium Kultur  Jaringan  Tanaman  Departemen  Agronomi  dan Hortikultura,  Fakultas  Pertanian  IPB  pada  bulan  Februari 2013  sampai  dengan  Juli  2014.  Bahan  tanaman  yang digunakan adalah P. amabilis yang sedang berbunga pada fase kuncup bunga asal Cianjur Selatan, Jawa Barat. Kuncup bunga dengan diameter sekitar 2 cm yang berwarna hijau muda dibalut dengan kapas dan diberikan perlakuan kolkisin menggunakan kuas kecil. Konsentrasi larutan kolkisin yang digunakan  adalah  0  (kontrol),  50,  500,  1,000,  dan  2,000 mg L -1 . Kuncup bunga yang telah diberi perlakuan kolkisin disungkup menggunakan aluminium foil selama tiga hari. Penelitian  disusun  berdasarkan  Rancangan Acak  Lengkap (RAL)  dengan  perlakuan  kolkisin.  Perlakuan  kolkisin dilakukan  pada  1-2  kuncup  bunga  pertanaman  dengan empat  ulangan,  sehingga  terdapat  20  tanaman  sebagai satuan percobaan.

## Penyerbukan Buatan dan Panen Buah Anggrek
Kuncup  bunga  dari  perlakuan  kolkisin  yang berkembang dan telah mekar sempurna kemudian diserbuk sendiri  atau  silang  secara  buatan  agar  diperoleh  buah anggrek.  Penyerbukan  silang  dilakukan  pada  sebagian bunga dari perlakuan kolkisin 500 dan 1,000 mg L -1 , dengan menggunakan  polen  dari  bunga  lain  yang  tidak  diberikan perlakuan kolkisin. Semua buah anggrek yang dihasilkan, dipanen  sekitar  24  minggu  setelah  penyerbukan  (MSP) dengan  dipisahkan  antara  buah  hasil  penyerbukan  silang dan sendiri.
Penyemaian  Biji,  Subkultur  Planlet  pada  Media Pendewasaan, dan Skrining Planlet Diduga Poliploid
Biji dari setiap buah anggrek disemai secara in vitro pada  media  Knudson  C  sampai  diperoleh  planlet  umur 20  minggu  setelah  semai  (MSS).  Jumlah protocorm yang dihasilkan  dari  setiap  buah  dikelompokkan  menjadi  tiga kategori,  yaitu  banyak  ( protocorm >250),  sedang  (250> protocorm >50),  dan    sedikit    ( protocorm <50). Protocorm yang sudah berkembang menjadi planlet disubkultur pada media  pendewasaan,  yaitu  media  Hyponex  2  mg  L -1 . Sebanyak  125  planlet  dipilih  secara  acak  dari setiap perlakuan kolkisin, kecuali pada 1,000 mg L -1 penyerbukan sendiri hanya diperoleh 50 planlet. Penelitian disusun secara RAL  faktor  tunggal  dengan  lima  ulangan,  setiap  ulangan terdiri  dari  lima  botol  kultur,  sedangkan  pada  perlakuan kolkisin  1,000  mg  L -1 dengan  penyerbukan    sendiri terdiri dari dua botol kultur, sehingga terdapat 135 satuan percobaan.  Setiap  botol  terdiri  dari  lima  planlet  sehingga terdapat 675 planlet sebagai satuan amatan. Skrining planlet
diduga  mutan  poliploid  dilakukan  secara  visual  dengan membandingkan  planlet  dari  perlakuan  kolkisin  dengan kontrol berdasarkan morfologi pada umur 8 minggu setelah subkutur (MSSk).

## Analisis Data
Analisis  sidik  ragam  dilakukan  dengan  program SAS  9.1.3  portable  dan  uji  lanjut  Duncan  untuk  rata- rata  jumlah  daun,  akar,  dan protocorm  like  bodies (plbs). Analisis karakter-karakter tipe planlet diduga poliploid dan tipe  planlet  normal  dari  setiap  perlakuan  kolkisin  seperti: panjang dan lebar organ basal protocorm (OBP) serta daun, dan  panjang  dan  diameter  akar  dilakukan  dengan  kontras ortogonal.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Perkembangan  Kuncup  Bunga  dan  Perkecambahan  Biji secara In Vitro
Perlakuan kolkisin menunda pemekaran kuncup bunga 1-2  minggu  dibanding  kuncup  bunga  kontrol.  Kuncup bunga pada tanaman kontrol mekar pada 4 minggu setelah perlakuan,  sedangkan    kuncup    bunga    hasil    perlakuan kolkisin  mekar pada 4-6 minggu setelah perlakuan kolkisin. Beberapa kuncup  bunga  dari  setiap  perlakuan  kolkisin kering dan rontok. Konsentrasi kolkisin berpengaruh nyata terhadap  persentase  kuncup  bunga  yang  hidup  sampai mekar. Semakin tinggi konsentrasi kolkisin semakin rendah persentase kuncup bunga yang hidup sampai mekar. Pada konsentrasi  kolkisin  2,000  mg  L -1 semua  kuncup  bunga kering dan rontok (Gambar 1).
Representasi  kuncup  bunga  sebelum  perlakuan, buah  yang  dihasilkan  dan  planlet  dari  perlakuan  kolkisin pada  kuncup  bunga  terlihat  pada  Gambar  2.  Perlakuan kolkisin 2,000 mg L -1 sangat toksik terhadap kuncup bunga. Perlakuan  tersebut  tidak  menghasilkan  satupun  bunga mekar dan semua kuncup bunga rontok pada 1-2 minggu setelah perlakuan kolkisin. Hasil di atas sesuai dengan yang dilaporkan  Nakasone  (1960),  dimana  perlakuan  kolkisin pada spike bunga  muda dari Vanda Miss  Joaquin  dengan konsentrasi 1,000 sampai 20,000 mg L -1 juga menyebabkan kuncup bunga gagal mekar kemudian rontok. Demikian juga Wu et al. (2007) menemukan bahwa perlakuan kolkisin pada tunas bunga muda dari Lilium varietas Con. Amore. (non anggrek)  dengan  konsentrasi  2,000  mg  L -1 menyebabkan bunga rontok hingga 81.3%.
Semua bunga mekar dari setiap perlakuan kolkisin dan kontrol dapat berkembang dengan baik dan menghasilkan buah setelah diserbuk secara buatan, baik dengan penyerbukan sendiri  ataupun  silang  dengan  tanaman  diploid.  Bunga hasil perlakuan kolkisin diharapkan mampu menghasilkan gamet poliploid, sehingga penyerbukan sendiri berpeluang menghasilkan  turunan  tetraploid.  Sebaliknya  persilangan dengan  bunga  tanpa  perlakuan  kolkisin  atau  bunga  dari tanaman  diploid  berpeluang  menghasilkan  turunan triploid.  Penyerbukan  silang  dengan  bunga  yang  tidak diberi perlakuan kolkisin dilakukan pada bunga mekar dari
kuncup bunga yang diberi perlakuan kolkisin 500 dan 1,000 mg  L -1 ,  masing-masing  sebanyak  satu  bunga.  Persentase penyerbukan yang menghasilkan buah sampai panen pada kontrol sebesar 100%, pada perlakuan kolkisin 50 mg L -1 sebesar 50%, pada perlakuan kolkisin 500 dan 1,000 mg L -1 sebesar  37.5%  dan  pada  perlakuan  kolkisin  2,000  mg  L -1 tidak dihasilkan buah (Tabel 1). Sebenarnya semua bunga yang hidup sampai mekar berkembang menjadi buah ( fruit set 100%). Semua buah yang dihasilkan juga mampu menghasilkan biji  yang  dapat  berkecambah  menjadi protocorm dalam kultur in  vitro. Secara  umum  biji  mulai  berkembang menjadi protocorm dengan bentuk bulat dan berwarna hijau pada 4-6 MSS. Menurut Lesar et al. (2012), biji beberapa Phalaenopsis hibrida mulai berkecambah secara in vitro pada 2 MSS, diindikasikan dari embrio yang mulai membengkak ( protocorm ) dengan pengamatan menggunakan mikroskop stereo.  Jumlah protocorm per  buah  yang  dihasilkan menunjukkan  adanya  perbedaan  kemampuan  buah  yang terbentuk dari kuncup bunga yang diberi perlakuan kolkisin dengan  konsentrasi  yang  berbeda,  dalam  menghasilkan jumlah biji viabel. Hampir semua buah yang diperoleh dari kuncup bunga yang diberi perlakuan kolkisin menghasilkan kisaran  jumlah protocorm per  buah  pada  kategori  banyak (>250 protocorm ), hanya perlakuan kolkisin 1,000 mg L -1 yang diserbuk sendiri saja yang berada pada kategori sedang (50-250 protocorm ). Hasil ini menunjukkan kemungkinan terhambatnya  pembentukan  gamet  karena  perlakuan kolkisin,  hambatan  dalam  pembuahan,  perkembangan embrio  maupun  perkecambahan  biji.  Nakasone  (1960) menyatakan bahwa perlakuan kolkisin 1,000-10,000 mg L -1 pada biji Dendrobium dan Vanda selama lebih dari empat hari  menyebabkan  gangguan  pada  perkecambahannya. Hasil yang sama juga dilaporkan pada tanaman non anggrek oleh Liu et al. (2007) yaitu pada benih Platanus acerifolia .

## Pertumbuhan dan Perkembangan Planlet
Struktur  kecambah  anggrek  ( protocorm )  akan berkembang  menjadi  planlet.  Pertumbuhan  planlet menunjukkan  perbedaan  yang  nyata  antar  konsentrasi kolkisin  terhadap  kontrol,  dilihat  dari  rata-rata  jumlah daun  dan  akar.  Selain  itu,  perbedaan  yang  nyata  pada rata-rata jumlah daun dan akar juga terlihat antara planlet yang  diperoleh  dari  penyerbukan  sendiri  dan  silang  pada konsentrasi kolkisin yang sama (Tabel 2).
Rata-rata  jumlah  daun  terbanyak  diperoleh  pada planlet dari kontrol, namun jumlah akar terbanyak terdapat pada planlet dari perlakuan kolkisin 1,000 mg L -1 dari buah hasil penyerbukan sendiri. Planlet dari perlakuan kolkisin 1,000 mg L -1 secara visual terlihat lebih pendek dan gemuk, dan  banyak  akar  yang  muncul  dari  bagian  organ  basal protocorm (OBP). Protocorm sekunder  ( protocorm  like bodies (plbs))  terbentuk  dari  bagian  OBP  planlet  pada semua  perlakuan  kolkisin  dan  juga  kontrol.  Buah  hasil penyerbukan sendiri pada perlakuan kolkisin 1,000 mg L -1 menghasilkan persentase protocorm yang membentuk plbs dan jumlah plbs yang nyata lebih tinggi dibanding perlakuan lainnya sampai di akhir pengamatan (Tabel 3).
Kolkisin (mg L -1 ) Jumlah kuncup bunga diberi perlakuan Jumlah buah panen (y) Jumlah buah menghasilkan protocorm (y) Kisaran jumlah protocorm perbuah 0 (Kontrol) 7 7/7 (100.00) 7 (100.0) Banyak ( protocorm >250) 50 6 3/6 (50.00) 3 (50.0) Banyak ( protocorm >250) 500 (x) 8 3/8 (37.50) 3 (37.5) Banyak ( protocorm >250) 1,000 (x) 8 3/8 (37.50) 3 (37.5) Sedang (250> protocorm >50) 2,000 7 0/7 (0.00) 0 (0.0)
Tidak ada
Tabel 1. Hasil perlakuan kolkisin pada kuncup bunga anggrek Phalaenopsis amabilis
Keterangan: Pengamatan pembentukan protocorm dilakukan pada 8 minggu setelah semai (MSS); (x) = terdapat satu buah dihasilkan dari penyerbukan silang dengan kuncup bunga kontrol; (y) = angka dalam kurung menunjukkan data persen (%)
a ab bc bc c 0 20 40 60 80 100 120 0 50 500 1000 2000 Pe rse nt ase k un cu p bu ng a me ka r ( %) Konsentrasi kolkisin (mg L -1 )
Gambar 2. Representasi spike dan kuncup bunga sebelum perlakuan (A), buah anggrek (B) protocorm hasil perkecambahan biji anggrek (C) dan planlet kontrol dan asal perlakuan kolkisin pada kuncup bunga
Gambar 1. Persentase kuncup bunga yang hidup sampai bunga mekar berdasarkan konsentrasi kolkisin. Huruf berbeda menunjukkan per- bedaan secara nyata antar perlakuan kolkisin berdasarkan uji Duncan pada taraf 5%
1 cm Kontrol Kolkisin 50 mg L -1 Kolkisin 500 mg L -1 Kolkisin 1,000 mg L -1 A B D C
Skrining  Planlet  Berdasarkan  Morfologi  dan  Persentase Planlet Diduga Poliploid
Skrining  terhadap  planlet  dari  perlakuan  kolkisin menghasilkan  dua  tipe  planlet,  yaitu  tipe  planlet  normal (N) dan tipe planlet diduga poliploid (DP). Tipe planlet N memiliki karakteristik morfologi yang mirip dengan planlet kontrol, sedangkan tipe planlet DP berbeda dengan planlet kontrol.  Hasil  skrining  terhadap  planlet  dari  perlakuan kolkisin  50,  500,  dan  1,000  mg  L -1 dari  bunga  yang diserbuk  sendiri,  menghasilkan  tipe  planlet  DP  berturut- turut sebanyak 71.2%, 86.4%, dan 100.0%. Persentase tipe planlet  DP  dari  perlakuan  kolkisin  500  dan  1,000  mg  L -1 dari bunga hasil penyerbukan silang masing-masing sebesar adalah  81.6  dan  76.0%.  Rahayu  (2015a)  melaporkan hasil induksi poliploid pada protocorm P. amabilis dan P. amboinensis menghasilkan tanaman poliploid sekitar 15%. Induksi poliploidi dengan kolkisin pada protocorm anggrek yang dilakukan oleh Chaicharoen dan Saejew (1981) dengan kolkisin 500 mg L -1 dan Griesbach (1981) dengan kolkisin 50  mg  L -1 menghasilkan  sekitar  50.0%  mutan  tetraploid. Sementara  Sarathum et al. (2010)  dengan  kolksin  750 mg L -1 dan  Kerdsuwan  dan Te-chato (2012) dengan kolkisin
2,000  mg  L -1 pada protocorm menghasilkan  persentase mutan tetraploid anggrek masing-masing sebesar 43.0 dan 60.0%. Wu et al . (2007) melakukan induksi poliploidi pada Lilium dimana perlakuan kolkisin 1,000 mg L -1 pada bunga lalu  diserbuk  silang  menghasilkan  progeni  mutan  triploid sebesar  18.0%.  Pada Platycodon  grandiflorus dengan kolkisin 500 mg L -1 dihasilkan 50.0% poliploid (Wu et al ., 2011)  dan  pada Physalis  ixocarpa dengan  kolkisin  1,200 mg  L -1 dihasilkan  67.0%  poliploid  (Torres et  al .,  2011). Hasil induksi poliploidi yang sangat rendah dilaporkan oleh Simioni dan do Valle (2009) melalui penggunaan konsentrasi kolkisin 100 mg L -1 pada tanaman Brachiaria , yaitu sebesar 3.9% tetraploid.
Berdasarkan  uji  kontras,  terdapat  perbedaan  yang nyata pada karakter-karakter seperti OBP, daun, dan akar, antara  planlet  kontrol  dan  planlet  yang  diperoleh  dari gabungan semua perlakuan kolkisin, kecuali pada diameter akar (Tabel 4). Perbedaan antar karakter-karakter tersebut juga ditemukan antara tipe planlet DP dengan tipe planlet N  gabungan  semua  perlakuan  kolkisin,  kecuali  untuk lebar  daun  dan  panjang  akar. Analisis  terhadap  gabungan semua perlakuan kolkisin menunjukkan bahwa tipe planlet DP  memiliki  panjang  dan  lebar  OBP  yang  lebih  besar
Perlakuan
(mg L -1 ) 2 MST 4 MST 6 MST 8 MST Daun Akar Daun Akar Daun Akar Daun Akar 0 (Kontrol) 2.7a 1.7b 2.9a 1.9b 3.4a 2.3b 3.8a 2.7a 50 1.1c 1.6b 2.3d 1.8bc 2.8cd 2.1bc 3.3bc 2.4b 500 2.1c 1.3c 2.2d 1.6c 2.6d 1.9c 3.2c 2.4b 1,000 1.4d 2.2a 1.6e 2.3a 1.9e 2.6a 2.2d 2.8a 500 (x) 2.3b 1.3c 2.5c 1.7c 2.9bc 2.0c 3.2c 2.4b 1,000 (x) 2.3b 1.3c 2.7b 1.6c 3.0b 1.9c 3.4b 2.2b
Tabel 2. Rata-rata jumlah daun dan akar dari planlet hasil perlakuan kolkisin pada kuncup bunga dan kontrol
Keterangan: Huruf berbeda pada kolom yang sama menunjukkan perbedaan nyata berdasarkan uji Duncan taraf α = 5%. Jumlah sampel 125, kecuali perlakuan 1,000 mg L -1 terdapat 50 planlet; (x) = Penyerbukan silang dengan kuncup bunga tanpa perlakuan kolkisin
Kolkisin
(mg L -1 ) 2 MST 4 MST 6 MST 8 MST Persentase Rata-rata Persentase Rata-rata Persentase Rata-rata Persentase Rata-rata 0 (Kontrol) 23.20b 0.58b 32.00b 0.91b 33.60b 1.01b 33.60bc 1.07b 50 4.80c 0.06b 12.80cd 0.20b 24.00b 0.58b 41.60b 1.12b 500 1.60c 0.02b 2.40d 0.02b 4.00c 0.05b 6.40d 0.09b 1,000 54.00a 2.08a 60.00a 2.64a 62.00a 3.62a 64.00a 4.60a 500 (x) 8.80bc 0.19b 12.80cd 0.28b 20.00b 0.49b 24.00c 0.64b 1,000 (x) 8.00bc 0.18b 19.20bc 0.49b 29.60b 0.77b 36.00bc 1.06b Tabel 3.  Persentase protocorm yang membentuk plbs dan rata-rata jumlah plbs yang terbentuk dari planlet hasil perlakuan kolkisin pada kuncup bunga
Keterangan: Huruf berbeda pada kolom yang sama menunjukkan perbedaan nyata berdasarkan uji Duncan taraf α = 5%. Jumlah sampel 125, kecuali perlakuan 1,000 mg L -1 terdapat 50 planlet. (x) = Penyerbukan silang dengan kuncup bunga tanpa perlakuan kolkisin
masing-masing  1.6  dan  1.8  kali  dibandingkan  planlet kontrol. Panjang dan lebar OBP tipe planlet DP pada setiap perlakuan kolkisin memiliki nilai yang lebih besar sekitar 1.2 kali dari masing-masing tipe planlet N dalam perlakuan tersebut, kecuali pada perlakuan kolkisin 1,000 mg L -1 yang diserbuk sendiri (tidak terdapat tipe planlet N). Panjang dan lebar  OBP  tipe planlet DP pada perlakuan kolkisin 1,000 mg L -1 yang diserbuk sendiri adalah masing-masing 1.7 dan 2.2 kali dari planlet kontrol.
Perubahan  karakter  terutama  ukuran  tanaman  akibat perlakuan  kolkisin  dibandingkan  kontrol  telah  dilaporkan pada  beberapa  tanaman  seperti  daun  cenderung  lebih lebar dan akar lebih pendek pada varian Sesamum indicum (Mensah et al., 2007), kotiledon dan hipokotil lebih tebal
serta pendek pada Capsicum annuum (Kulkarni dan Borse, 2010), ukuran daun lebih besar pada Fragaria (Chambers et al ., 2013), Mentha mozaffarianii (Ghani et al . 2014), dan jeruk Siam Simadu ( Citrus nobilis Lour) (Yulianti et al., 2014) dan rimpang yang lebih besar pada jahe (Hua et al ., 2011), stomata P. amabilis yang lebih besar (Rahayu, 2015a), serta daun dan akar yang lebih besar pada planlet Rhynchostylis gigantea . Hasil uji kontras (Tabel 4) menunjukkan bahwa tipe  planlet  DP  memiliki  organ  basal protocorm (OBP) yang lebih besar, akar lebih pendek namun diameter akar lebih besar dibandingkan kontrol, mengindikasikan adanya peningkatan diameter sel, yang diduga akibat peningkatan ploidi sel.
Organ basal protocorm (OBP) Daun Akar Panjang (mm) Lebar (mm) Panjang (cm) Lebar (cm) Panjang (cm) Diameter (mm) Kontrol 2.50 1.69 3.10 0.85 4.13 1.59 Semua perlakuan 3.57 2.69 2.18 0.70 3.07 1.67 Uji kontras * * * * * tn Kontrol 2.50 1.69 3.10 0.85 4.13 1.59 N (semua perlakuan) 3.09 2.27 2.30 0.69 3.15 1.41 Uji kontras * * * * * tn Kontrol 2.50 1.69 3.10 0.85 4.13 1.59 DP (semua perlakuan) 3.96 3.04 2.09 0.71 3.02 1.88 Uji kontras * * * * * * N (semua perlakuan) 3.09 2.27 2.30 0.69 3.15 1.41 DP (semua perlakuan) 3.96 3.04 2.09 0.71 3.02 1.88 Uji kontras * * * tn tn * N (50 mg L -1 ) 3.23 2.36 2.36 0.66 3.55 1.53 DP (50 mg L -1 ) 4.13 2.89 1.91 0.69 3.54 1.92 Uji kontras * * * tn tn * N (500 mg L -1 ) 3.05 2.20 1.75 0.67 2.49 1.62 DP (500 mg L -1 ) 3.83 2.99 1.88 0.72 2.47 2.02 Uji kontras * * tn tn tn * Kontrol 2.50 1.69 3.10 0.85 4.13 1.59 DP (1,000 mg L -1 ) 4.41 3.78 2.24 0.83 3.05 1.99 Uji kontras * * * tn * * N (500 mg L -1(x) ) 3.26 2.46 2.19 0.73 3.07 1.32 DP (500 mg L -1(x) ) 3.99 3.00 2.06 0.70 3.10 1.95 Uji kontras * * tn tn tn * N (1,000 mg L -1(x) ) 2.84 2.06 2.89 0.69 3.47 1.16 DP (1,000 mg L -1(x) ) 3.42 2.52 2.39 0.60 2.91 1.52 Uji kontras * * * tn tn *
Tabel 4. Perbandingan beberapa karakter antara tipe planlet normal (N), tipe planlet diduga poliploidi (DP), dan kontrol
Keterangan: tn = Tidak berbeda nyata pada taraf α = 5%; * = Berbeda nyata pada taraf 5 % berdasarkan uji kontras.; (x) = Penyerbukan silang dengan kuncup bunga tanpa perlakuan kolkisin. Pengamatan dilakukan pada lima ulangan dengan lima sampel perulangan

## KESIMPULAN
Perlakuan  konsentrasi   kolkisin   yang  tinggi  (2,000 mg  L -1 )  pada  kuncup  bunga  menyebabkan  kuncup  bunga gagal  mekar.  Berdasarkan  karakter  morfologi,  perlakuan kolkisin  50,  500  dan  1,000  mg  L -1 pada  kuncup  bunga Phalaenopsis amabilis mampu menghasilkan planlet yang diduga sebagai mutan poliploid berturut-turut sebesar 71.2%, 86.4%, dan 100.0%, namun untuk memastikan tingkat ploidi yang akurat diperlukan analisis jumlah kromosom.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  dibiayai  oleh  Hibah  Penelitian Desentralisasi,  Direktorat  Jendral  Pendidikan  Tinggi, Kementrian  Ristek  dan  Pendidikan  Tinggi  Republik Indonesia tahun 2012-2014.

## DAFTAR PUSTAKA
Atichart,  P.  2013.  Polyploid  induction  by  colchicine treatments  and  plant  regeneration  of Dendrobium chrysotoxum .Thai J. Agric. Science 46:59-63.
Chaicharoen,  S.,  K.  Saejew.  1981.  Autopolyploidy  in Dendrobium phalaenopsis . J. Sci. Soc. 7:25-32.
Chambers, A.H.,  H.  Pollard,  K.M.  Fol.  2013.  Limitations of  morphological  ploidy  estimation  methods  in Fragaria . J. Berry Research 3:135-149.
Chen, W.H., C.Y. Tang, Y.L. Kao. 2009. Ploidy doubling by in vitro culture of excised protocorms or protocorm- like bodies in Phalaenopsis species. Plant Cell Tiss. Org. Cult. 98:229-238.
Eigsti,  O.J.,  P.  Dustin.  1957.  Colchicine  in  agriculture, medicine, biology and chemistry. Ames, Lowa: Iowa State Coli. Press.
Ghani, A., S.H. Neamati, M. Azizi, M.J. Saharkhiz, M. Farsi. 2014. Artificial autotetraploidy induction possibility of two Iranian endemic Mint ( Mentha mozaffarianii ) ecotypes. Not. Sci. Biol. 6:185-191.
Griesbach,  R.J.  1981.  Colchicine-induced  polyploidy  in Phalaenopsis orchid.  Plant  Cell  Tiss.  Org.  Cult. 1:103-107.
Hua, W.K., M.J. Hua, H.H. Ping, G.S. Lin. 2011. Generation of autotetraploid plant of ginger ( Zingiber officinale Rosc.) and its quality evaluation. Pharmacogn. Mag. 7:200-206.
Kerdsuwan,  N.,  S.  Te-chato.  2012.  Effects  of  colchicine on  survival  rate,  morphological,  physiological and  cytological  characters  of  chang  daeng  orchid
( Rhynchostylis  gigantea var.  rubrum  Sagarik) in vitro . J. Agric. Tech. 8:1451-1460.
Kulkarni, M., T. Borse. 2010. Induced polyploidy with gigas expression for root traits in Capsicum annuum (L.). Plant Breed. 129:461-464.
Lesar,  H.,  N.  Čeranič,  D.  Kastelec,  Z.  Luthar.  2012. Asymbiotic seed germination of Phalenopsis Blume orchids after hand pollination. Acta Agric. Slovenica 99:1-5.
Liu,  L.,  Z.  Li,  M.  Bao.  2007.  Colchicine-induced chromosome doubling in Platanus acerifolia and its effect on plant morphology. Euphytica 157:145-154.
Mensah, J.K., B.O. Obadoni, P.A. Akomeah, B. Ikhajiagbe,
J. Ajibolu.  2007.  The  effects  of  sodium  azide  and colchicine  treatments  on  morphological  and  yield traits of sesame seed ( Sesamum indicum L. ). African J. Biotech. 6:534-538.
Miguel,  T.P.,  K.W.  Leonhardt.  2011.  In  vitro  polyploid induction  of  orchids  using  oryzalin.  Sci.  Hort. 130:314-319.
Nakasone,  H.Y.  1960.  Artificial  induction  of  polyploidy in  orchids  by  the  use  of  colchicines.  Dissertation. University of Hawaii. Hawaii.
Rahayu,  E.M.D.,  D.  Sukma,  M.  Syukur,  Irawati.  2015a. Induksi poliploidi Phalaenopsis amabilis (L.) Blume dan Phalaenopsis  amboinensis J.  J.  Smith  dengan kolkisin  dalam  kultur  in  vitro.  J. Agron.  Indonesia 43:219-226.
Rahayu, E.M.D., D. Sukma, S.A. Aziz, M. Syukur. 2015b. Induksi  poliploidi  menggunakan  kolkisin  secara in vivo pada bibit anggrek bulan ( Phalaenopsis amabilis (L.) Blume). Bul. Kebun Raya 18:42-48.
Rahayu,  E.M.D.  2014.  Induksi  poliploid Phalaenopsis amabilis (L.) Blume dan Phalaenopsis amboinensis J.J.  Smith  menggunakan  kolkisin  secara in  vitro dan in  vivo .  Tesis.  Sekolah  Pascasarjana.  Institut Pertanian Bogor.
Sarathum, S., M. Hegele, S. Tantiviwat, M. Nanakorn. 2010. Effect  of  concentration  and  duration  of  colchicine treatment  on  polyploidy  induction  in Dendrobium scabrilingue L. Europ. J. Hort. Sci. 75(3):123-127.
Simioni, C., C. B. do Valle. 2009. Chromosome duplication in Brachiaria (A.  Rich.)  Stapfallows  intraspecific crosses.Crop Breed. Applied Biotech. 9:328-334.
Teoh, S.B. 1984. Polyploid spore formation in diploid orchid species. Genetica 63:53-59.
Torres,  V.R.,  F.R.  Godina,  R.F.  Pournavab,  A.B. Mendoza,  G.H.  Guzmán,  M.H.R.  Valdés.  2011. Development of tomatillo (Physalis ixocarpa Brot.) autotetraploids  and their chromosome and phenotypic characterization. Breed. Sci. 61:288-293.
Vichiato, M.R.M., M. Vichiato, M. Pasqual, D.M. Castro, L.F. Dutra. 2007. Indução e identificação de tetraplóides em Dendrobium  nobile Lindl.  ( Orchidaceae ).  Rev.
Ciênc. Agron. Fortaleza 38:385-390.
Wu,  H.,  S.  Zheng,  Y.  He,  G.  Yan,  Y.  Bi,  Y.  Zhu.  2007. Diploid  female  gametes  induced  by  colchicines  in oriental lilies. Sci. Hort. 114:50-53.
Wu, Y., F. Yang, X. Zao, W. Yang. 2011. Identification of tetraploid  mutants  of Platycodon  grandiflorus by colchicine induction. Caryologia 64(3):343-349.
Yulianti, F., A. Purwito, A. Husni, D. Dinarty. 2014. Induksi tetraploid  tunas  pucuk  jeruk  Siam  Simadu  ( Citrus nobilis Lour) menggunakan kolkisin secara in vitro . J. Agron. Indonesia 42:144-150.