Penghambatan Actinomycetes Asal Limbah Kulit  Bawang Merah terhadap Sclerotium Rolfsii Secara In Vitro
Reni Nurjasmi 1 , Suryani 1 , dan Carta 2
1 Program Studi Agroteknologi Fakultas Pertanian Universitas Respati Indonesia Jakarta
2 Pusat Pengembangan Benih dan Proteksi Tanaman Dinas Kelautan Pertanian dan Ketahanan Pangan Provinsi DKI Jakarta Email: reni_nurjasmi@yahoo.co.id

## ABSTRAK
Sclerotium rolfsii adalah jamur patogen yang merugikan bagi tanaman. Upaya pencegahan jamur masih  banyak  menggunakan  pestisida  kimia  yang  diketahui  berdampak  negatif  bagi  lingkungan, sehingga  dibutuhkan  alternatif  pestisida  yang  lebih  ramah  lingkungan  seperti  actinomycetes. Actinomycetes  merupakan  bakteri  yang  dapat  ditemukan  pada  berbagai  habitat.  Lebih  dari  80% diketahui  sebagai  penghasil  senyawa  bioaktif  dengan  berbagai  peran  salah  satunya  adalah  sebagai antijamur  patogen  tanaman.  Tujuan  penelitian  adalah  mengisolasi  actinomycetes  dari  limbah  kulit bawang  merah  dan  mengetahui  potensinya  sebagai  penghambat Sclerotium  rolfsii .  Tahap  penelitian diawali  dengan  pengomposan  limbah  kulit  bawang  merah  selama  3  hari.  Sampel  kompos  tersebut digunakan  sebagai  sumber  actinomycetes.  Actinomycetes  diisolasi  menggunakan  media  spesifik  yaitu Starch  Nitrate  Agar (SNA)  secara pour  plate kemudian  dipurifikasi    menggunakan  media  SNA  dengan metode streak  plate .  Selanjutnya  dilakukan  pengamatan  morfologi  koloni  dan  miselium  isolat actinomycetes  menggunakan  metode slide  culture .  Semua  isolat  yang  memiliki  morfoologi  koloni  dan miselium berbeda ditumbuhkan menggunakan media cair SNA selama 14 hari untuk memperoleh filtrat zat metabolit kemudian dilakukan uji daya hambat filtrat zat metabolit isolat actinomycetes terhadap S. Rolfsii dengan  metode  peracunan  medium.  Berdasarkan  hasil  isolasi  diperoleh  sebanyak  16  isolat actinomycetes  asal  limbah  kulit  bawang  merah.  Semua  isolat  menghasilkan  miselium  sehingga  dapat diduga isolat yang telah diisolasi merupakan kelompok Streptomyces namun berdasarkan pengamatan morfologi koloni dan miselium, semua isolat  merupakan jenis yang berbeda.  Hasil peracunan medium menunjukkan dari 16 isolat  yang diuji hanya 11 isolat  yang mampu menghambat S. rolfsii dan 4 isolat tidak mampu menghambat S. rolfsii . Dari 11 isolat, sebanyak 5 isolat mempunyai daya hambat lebih dari 50% yaitu A1.9 (77,78%); A9. 16 (77,78%); A3.14 (72.22%); A12.15 (66.67%); A2.4 (55.56%).
Kata kunci : Actinomycetes, Daya hambat, Antijamur, Sclerotium rolfsii

## ABSTRACT
Sclerotium rolfsii is a pathogenic fungus that is detrimental to plants. Efforts to prevent fungi still use a lot of chemical pesticides that are known to have a negative impact on the environment, so that an alternative  environmentally  friendly  pesticide  is  needed  such  as  actinomycetes.  Actinomycetes  are bacteria  that  can  be  found  in  various  habitats.  More  than  80%  are  known  to  produce  bioactive compounds with various roles, one of which is plant pathogenic antifungals. The aim of the study was to isolate  actinomycetes  from  red  onion  skin  waste  and  to  determine  their  potential  as  Sclerotium  rolfsii inhibitors.  The  research  phase  begins  with  composting  of  shallot  skin  waste  for  3  days.  The  compost sample is used as a source of actinomycetes. Actinomycetes were isolated using specific media namely Starch Nitrate Agar (SNA) by pour plate then purified using SNA media using the streak plate method. Furthermore, observation of the morphology of colonies and mycelium of actinomycetes isolates using slide culture method All isolates that had morphoology of different colonies and mycelium were grown using SNA liquid media for 14 days to obtain the filtrate of metabolites, then the inhibitory power test of the  metabolite  isolates  of  actinomycetes  on  S.  Rolfsii  was  carried  out  by  medium  poisoning  method. Based on the isolation results obtained as many as 16 isolates of actinomycetes from onion skin waste.
All isolates produce mycelium so that it can be suspected that the isolates that have been isolated are Streptomyces groups but based on observations of the morphology of colonies and mycelium, all isolates are of a different type. The results of the medium poisoning showed that from 16 isolates tested only 11 isolates were able to inhibit S. rolfsii and 4 isolates were unable to inhibit S. rolfsii. Of the 11 isolates, 5 isolates  had  a  inhibitory  power  of  more  than  50%,  namely  A1.9  (77.78%);  A9.  16  (77.78%);  A3.14 (72.22%); A12.15 (66.67%); A2.4 (55.56%).
Keywords: Actinomycetes, inhibitory power, antifungal, sclerotium rolfsii

## PENDAHULUAN
Organisme Pengganggu Tumbuhan (OPT)  merupakan  resiko  yang  harus  dihadapi dan diperhitungkan dalam
setiap membudidayakan tanaman. Resiko ini merupakan  konsekuensi  dari  setiap  perubahan ekosistem  sebagai  akibat  budidaya  tanaman yang dilakukan. Perubahan atau ketidaktentuan iklim sangat berpengaruh terhadap perkembangan  OPT  dan  berpengaruh  langsung terhadap usaha budidaya tanaman.
Pengendalian  hama  dan  penyakit  tanaman bertujuan  untuk  membatasi  kehilangan  hasil akibat  serangan  OPT  menjadi  seminimal mungkin,  sehingga  diperoleh  kualitas  dan kuantitas produksi yang baik.
Dalam  budidaya  tanaman  kacang- kacangan sering ditemukan kendala antara lain adalah  faktor  infeksi  penyakit.  Penyakit  dapat disebabkan mikroba seperti jamur, bakteri, dan virus  yang  mengakibatkan  kerugian  ekonomis karena menurunkan kualitas dan kuantitas hasil panen.  Salah  satu  penyakit  merugikan  adalah busuk batang yang disebabkan jamur Sclerotium rolfsii (Widyati dan Gianto, 2013).
Petani  Indonesia  sering  menggunakan fungisida  sintetis  untuk  mencegah  jamur patogen tanaman, namun pengendalian penyakit menggunakan bahan fungisida sintetis merupakan  solusi  yang  kurang  tepat  karena cepat atau lambat dapat menimbulkan masalah terhadap  ketahanan  patogen  dan  dapat mengganggu  keseimbangan  alam,  hal  ini dikarenakan  bahan  sintetis  yang  terkandung  di dalam  fungisida  merupakan  toksik  bagi  mahluk hidup. Menurut Wasilah et al . (2005), fungisida sintetis  yang  mencemari  lingkungan  telah menyebabkan  kematian  manusia  di  dunia mencapai 40%. Di samping itu, fungisida sintetis dapat  menyebabkan  pencemaran  lingkungan dan menimbulkan resistensi mikroba patogen.
Bertolak dari keadaan pertanian Indonesia yang sangat tergantung pada fungisida sintetis, maka usaha  untuk  memproduksi  pestisida  hayati  di dalam  negeri  sangat  memungkinkan.  Alam Indonesia  yang  kaya  akan  keanekaragaman hayati  merupakan  sumber  daya  alam  potensial
untuk  dimanfaatkan  bagi  kesejahteraan  rakyat (Djunaedy,  2009).  Peningkatan  kepedulian terhadap  sumber  daya  alam  mengarah  pada pemanfaatan agen pengendali hayati, penggunaan  agen  pengendali  hayati  memberi dampak  secara  perlahan,  namun  dapat bertahan  cukup  lama,  relatif  hemat,  dan  tidak membahayakan  lingkungan  (Muanis et  al., 2013).
Menurut  Muanis et  al .  (2013),  dalam upaya
mengendalikan OPT, sistem
Pengendalian Hama Terpadu merupakan upaya pengendalian  yang  diterapkan,  dimana  Konsep Pengendalian Hama Terpadu tersebut didasarkan  pada  pertimbangan  ekologi  dan efisiensi dalam rangka pengelolaan agroekosistem  yang  berwawasan  lingkungan. Untuk  itu  pengembangan  agen  hayati  terus ditingkatkan  dan  dalam  rangka  pengembangan tersebut  telah  dikeluarkan  kebijakan-kebijakan dalam  bentuk  Undang-Undang  dan  Peraturan Pemerintah serta Keputusan Menteri Pertanian.
Sehubungan  dengan  hal  tersebut, pemanfaatan  dan  pengelolaan  agen  hayati perlu  digalakan  dalam  rangka  pengembangan teknologi pengendalian OPT yang ekonomis dan ramah  lingkungan.  Salah  satu  organisme  yang berpotensi sebagai agen hayati adalah actinomycetes.  Bakteri  ini  telah  diketahui menghasilkan senyawa bioaktif dengan berbagai  kemampuan  termasuk  anti  jamur. Menurut Berdy (2005) dan Parungao et al. Actinomycetes memiliki  sebaran  habitat  yang sangat  luas,  salah  satunya  adalah  limbah. Limbah  yang  banyak  dihasilkan  di  Indonesia antara  lain  adalah  kulit  bawang  merah. Menurut  data  Badan  Pusat  Statistik  (BPS), produksi  bawang  merah  pada  tahun  2013 mancapai  1,011  juta  ton.  Jika  dibandingkan tahun 2012, produksi meningkat sebesar 46.550 ton  atau  4,83%.  Besarnya  produksi  bawang merah ini mengakibatkan tingginya limbah kulit bawang  merah,  padahal  limbah  ini  berdampak buruk  bagi  kesehatan  dan  lingkungan.    Limbah kulit  bawang  merah  telah  dikelola  menjadi kompos seperti di Kelurahan Tengah Kecamatan Kramatjati  Jakarta  Timur,  telah  memanfaatkan limbah  kulit  bawang  merah  sebagai  kompos sejak tahun 2003 (Suryani et al ., 2015).
Diketahui  pula  bahwa  selain  sebagai sumber  hara  tanaman,  kompos  kulit  bawang merah  juga  bergunan  sebagai  biopestisida karena  mengandung  senyawa  acetogenin  yang berfungsi  membunuh  hama  serangga  tanaman (Plantus,  2008).  Kemampuan  limbah  kulit bawang  merah  sebagai  biopestisida  menarik perhatian peneliti untuk mengeksplorasi actinomycetes  yang  diduga  berpotensi  sebagai pengendali  jamur  patogen  tanaman.    Tujuan penelitian  ini  adalah  adalah  mengisolasi Actinomycetes  dari  limbah kulit bawang merah dan mengetahui potensinya sebagai penghambat Sclerotium rolfsii .

## METODE Isolasi Actinomycetes
Sebanyak  90  ml  larutan  NaCl  0,85% steril  dimasukkan  ke  dalam  Erlenmeyer kemudian  ditambahkan  10  gram  kompos  kulit bawang  merah.  Erlenmeyer  digoyang  pada shaker selama 30 menit. Selanjutnya diinkubasi selama  1  jam  pada  suhu  70ºC  lalu  larutan disaring  dengan  kertas  saring  steril  dan ditampung  pada  erlenmayer  baru  sebagai pengenceran  10־ 1 .  Larutan  NaCl  0,85%  dituang kedalam 3 buah tabung reaksi masing-masing 9 ml  sebagai  serial  pengenceran  10 -2 ,  10־³  dan 10־ 4 .  Sebanyak  0,1  ml  larutan  dari  masing- masing  serial  pengenceran  dimasukkan  ke dalam  cawan  petri  steril  diikuti  penambahan  5 ml  medium  SNA menggunakan  metoda  tuang (pour  plate), kemudian  cawan  petri  digoyang sampai  larutan  tercampur  rata.  Setelah  media padat,  media  diinkubasi  pada  suhu  ruang selama  7  sampai  14  hari.  Koloni  yang  telah tumbuh  dipurifikasi  secara streak  plate sehingga diperoleh koloni tunggal.
Identifikasi Morfologi Actinomycetes Morfologi miselium Actinomycetes diidentifikasi  menggunakan  metode culture slide , selanjutnya dilakukan pengamatan miselium menggunakan mikroskop pembesaran 100X.
Uji  Daya  Hambat  Actinomycetes  terhadap S. rolfsii
Potensi
actinomycetes sebagai
penghambat S.  rolfsii diukur  menggunakan metode  peracunan  medium  PDA.  Sebanyak  1
ose masing-masing isolat actinomycetes ditumnbuhkan  pada  SNA  cair  sebanyak  10  ml kemudian  digoyang  dengan shaker dengan kecepatan  120  rpm  selama  14  hari.  Filtrat  zat metabolit  tersebut  dituang  ke  dalam  tabung reaksi  lalu  disentrifugasi  dengan  kecepatan 12.000  rpm  selama  10  menit  kemudian  filtrat tersebut  dipindahkan  ke  dalam  tabung  reaksi steril dan diinkubasi selama 30 menit pada suhu 65 0 C.  Filtrat  diinkubasi  selama  60  menit  pada suhu  ruang  kemudian  dipanaskan  kembali selama 30 menit pada suhu 65 0 C. Setelah tahap inkubasi  selesai,  sebanyak  1  ml  filtrat  zat metabolit  dari  masing-masing  isolat  dituang  ke dalam  cawan  petri  kemudian  ditambahkan medium PDA bersuhu 50 o C. Setelah media PDA padat, dilakukan inokulasi S. rolfsii pada bagian tengah cawan petri kemudian diinkubasi selama 7  hari  pada  suhu  28 o C  kemudian  persentase penghambatan  pertumbuhan S.rolfsii dihitung menggunakan rumus menurut Nurul (2012) :
Keterangan :
DK
: diameter koloni S. rolfsii pada kontrol DP
:  diameter  koloni S.  rolfsii pada perlakukan

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil penelitian menunjukkan sebanyak 16  isolat  actinomycetes  telah  berhasil  diisolasi dari  limbah  kulit  bawang  merah.  Semua  isolat memiliki  morfologi  koloni  dan  miselium  yang berbeda setelah dilakukan identifikasi morfologi menggunakan media SNA menggunakan metode slide  culture .  Namun  95%  dari  jumlah tersebut  dapat  dilihat  bahwa  isolat  yang berhasil diisolasi termasuk kelompok Streptomyces  karena  menghasilkan  spora. Menurut  Suryani et  al. (2015)  Streptomyces berbeda  dengan  bakteri  lain  yang  dicirikan dengan pertumbuhan secara perlahan dan akan terlihat  jelas  pada  hari  ke-2  sampai  ke-3 inkubasi.    Koloni  menempel  kuat  pada permukaan  media  dengan  struktur  yang  kasar atau  bertepung  sedangkan  bakteri  lain pertumbuhannya  sangat  cepat,  setelah  24  jam inkubasi  koloni  sudah  terlihat,  dan  struktur koloni berlendir.
Potensi  masing-masing  isolat  sebagai penghambat S.  rolfsii diukur  menggunakan metode  peracunan  medium  PDA  dan  hasilnya menunjukkan dari 16 isolat yang diuji hanya 11 isolat  yang  berpotensi  sebagai  penghambat S. rolfsii .  Daya  hambat  dari  masing-masing perlakuan  disajikan  pada  Tabel  1.  Isolat  yang tidak  mampu  menghambat S.  rolfsii diduga memiliki  zat  antimikroba  pada  jenis  patogen selain S.  rolfsii karena  isolat  tersebut  tidak mengandung  senyawa  bioaktif  anti S.  rolfsii atau  dapat  pula  akibat  kandungan  senayawa antijamur pada isolat yang sangat kecil sehingga tidak  dapat  menghambat  pertumbuhan S. rolfsii .  Penghambatan  jamur  patogen  yang dihasilkan oleh isolat Actinomycetes diasumsikan akibat  adanya senyawa anti jamur metabolit sekunder actinomycetes yang disekresikan pada media.
Daya  hambat  yang  dihasilkan  masing- masing  isolat  bervariasi,  hal  ini  dikarenakan
jenis  dan  jumlah  zat  antijamur  terhadap S. Rolfsii yang  terkandung  pada  isolat  juga berbeda-beda.  Menurut  Anugrahwati  (2011) terdapat faktor yang mempengaruhi persentase daya hambat actinomycetes yaitu  jenis, jumlah dan kualitas senyawa antijamur yang dihasilkan.
Berdasarkan  persentase  daya  hambat, diketahui  isolat  A1.9  dan  A9.16  memiliki  jenis dan  jumlah  zat  antijamur  terhadap S.  Rolfsii yang  paling  tinggi  dibandingkan  perlakuan lainnya.  Isolat  tersebut  diduga  mengandung senyawa antijamur S. rolfsii yang lebih baik dari kualitas  dan  kuantitas,  sehingga  persentase daya  hambat  yang  dihasilkan  juga  lebih  besar. Menurut Susilowati et al. (2007) semakin besar senyawa  antijamur  yang  dilepaskan  ke  media maka  semakin  besar  pula  daya  hambat  yang dihasilkan oleh suatu mikrobia.
Tabel 1 . Daya hambat Actinomycetes terhadap S. rolfsii
Nama isolat actinomycetes Diameter S. Rolfsii (cm) Daya hambat actinomycetes (%) A1.9 2.0 77.78 A9. 16 2.0 77.78 A3.14 2.5 72.22 A12.15 3.0 66.67 A2.4 4.0 55.56 A10.5 4.5 50.00 A5.13 5.0 44.44 A11.24 6.0 33.33 A13.10 6.0 33.33 A6.1 7.0 22.22 A15.7 8.0 11.11 A4.23 9.0 0.00 A7, 17 9.0 0.00 A8,18 9.0 0.00 A14. 8 9.0 0.00 A16. 11 9.0 0.00

## KESIMPULAN
Dari  16  isolat  asal  limbah  kulit  bawang merah, sebanyak 11 isolat mampu menghambat
S. rolfsii dan 5 isolat diantaranya memiliki daya hambat  lebih  dari  50%  yaitu  secara  berurutan dari  yang  paling  tinggi  adalah  A1.9  dan  A9.16 (77,78%);  A3.14  (72,22%);  A12.15  (66,67%); A2.4 (55,56%).

## DAFTAR PUSTAKA
Anugrahwati  DR.  2011.  Aktifitas  Actinomycetes Endofit  sebagai  Bionematisida  terhadap Meloidogyne javanica. Crop Agro 1(2):114- 126.
Berdy, J. 2005. Bioactive Microbial Metabolites.
The Journal of Antibiotics. 58(1):1-26. Djunaedy,  A.  2009.  Biopestisida  sebagai
Pengendali Organisme Penganggu Tanaman (OPT) yang Ramah Lingkungan.Embryo  Vol.  6  No.  1.Juni,
2009.ISSN 0216-0188.
Muanis, N. A., Sutarjo, Lamria Sovia T.S.M. dan Irfan.  2013.    Beberapa  Jenis  Agens  Hayati (Biopestisida).    Balai  Proteksi  Tanaman Dinas Kelautan Dan Pertanian.
Nurul,  W.  2012.  Kajian  Aktinomisetes  Sebagai
Agens Hayati Untuk Pengendalian Sclerotium  rolfsii Dan  Pembiakannya  Pada Media  Limbah  Organik  Padat.  Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor, Bogor. Parungao,  M.,  Villano.  2007.    Screening  of Antibiotic-Producing    Actinomycetes  from Marine, Brackish and Terrestrial Sediments of  Samal  Island.  Journal  of  Research  in Science, Computing, and Engineering, 4(3). 29-38.
Plantus.  2008.  Execitive  Summary  from  the Report:  Analysis  of  Adverse  Reactions  to Monosodium  Clutamate  (MSG).  Journal  of Nutrition 126 (6): 1743-1745. PMID7472671. Susilowati,  D.N.,  R.D.  Hastuti,  dan  E.  Yuniarti. 2007. Isolasi dan Karakterisasi Aktinomisetes Penghasil Antibakteri Enteropatogen Escherichia  coli K1.1,
Pseudomonas  pseudomallei 02  05,  dan Listeria monocytogenes . Jurnal Agrobiogen. 3 (1): 15-23.
Widyati,  N.,  Gianto.  2013.  Kemampuan Aktinomisetes  Menghambat  Pertumbuhan Sclerotium  rolfsii Dan  Pembiakannya  Pada Media  Serbuk  Gergaji.  Fakultas  Pertanian, Institut  Pertanian  Bogor,  Bogor.  Jurnal Fitopatologi Indonesia. ISSN: 2379-2479.
Wasilah F., A. Syulasmi, dan Y. Hamdiyati. 2005.
Pengaruh Ekstrak Rimpang Kunyit ( Curcuma domestica Val.) Terhadap Pertumbuhan  Jamur Fusarium  oxysporum Secara  In  Vitro.  Universitas  Pendidikan Indonesia. Bandung. Tidak Dipublikasikan.