https ://ejour nal.uns rat.ac .id/v3/index.php/pharm ac on

## PHARMACON
ISSN (print): 2302 - 2493 ISSN (online): 2721 - 4923
Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Lissoclinum patella yang Diperoleh dari Pantai Parentek Kabupaten Minahasa
Pricillia Esterlita Mintadoa 1* , Adithya Yudistira 2 , Yuanita Amalia Hariyanto 3
1,2,3 Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi *Corresponding author email: pricilliaesterlitamintadoa@gmail.com

## I N F O R M A S I A R T I K E L A B S T R A C T
Diterima pada 5 April 2024 Disetujui pada 25 Mei 2024 Dipublikasikan pada 30 Juni 2024 Hal. 594 - 601 Tunicates  are  one  of  the  marine  organisms  that  have  the  potential  to  produce  secondary metabolite  compounds  that  have  many  benefits.  One  of  the  functions  of  secondary metabolites  is  as  antioxidants.  Antioxidants  are  compounds  that  can  inhibit  the  oxidation process  caused  by  free  radicals.  This  study  aims  to  determine  the  antioxidant  activity  of ethanol extract produced by Lissoclinum patella using DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) method  obtained  from  Parentek  Beach,  Minahasa  Regency.  This  research  is  a  laboratory experiment  with  maceration  method  using  95%  ethanol  solvent.  Antioxidant  testing  using DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) method with 5 series of sample concentrations (20, 40, 60,  80,  100  ppm)  measured  using  UV-Vis  spectrophotometer  with  absorbance  value measured  at  517  nm  wavelength.  The  results  of  the  study  obtained  the  average  percent inhibition  value  obtained  at  concentrations  of  20,  40,  60,  80,  100  ppm  respectively  were 48.06%,  56.52%,  62.27%,  63.80%,  68.03%.  This  study  concludes  that Lissoclinum  patella tunicata extract has antioxidant activity at concentrations of 20, 40, 60, 80, 100 ppm
Keywords: Lissoclinum patella, antioxidant, DPPH, Parentek Beach, Minahasa
A B S T R A K
DOI: 10.35799/pha.13.2024.55065
Tunikata merupakan salah satu organisme laut yang mempunyai potensi untuk menghasilkan senyawa  metabolit  sekunder  yang  mempunyai  banyak  manfaat.  Salah  satu  fungsi  dari metabolit  sekunder  adalah  sebagai  antioksidan.  Antioksidan  adalah  senyawa  yang  dapat menghambat  proses  oksidasi  yang  diakibatkan  oleh  radikal  bebas.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  yang  dihasilkan  oleh Lissoclinum patella dengan menggunakan metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil) yang diperoleh dari Pantai Parentek, Kabupaten Minahasa. Penelitian ini merupakan eksperimental laboratorium dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  95%.  Pengujian  antioksidan menggunakan  metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil) dengan  5 seri konsentrasi sampel (20,40,60,80,100  ppm)  yang  diukur  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  dengan  nilai absorbansi diukur pada panjang gelombang 517 nm. Hasil penelitian diperoleh rata-rata nilai persen  inhibisi  yang  didapat  pada  konsentrasi  20,40,60,80,100  ppm  secara  berturut-turut adalah  48,06  %,  56,52%,  62,27%,  63,80%,  68,03%.  Penelitian  ini  menyimpulkan  bahwa ekstrak  tunikata Lissoclinum  patella mempunyai  aktivitas  antioksidan  pada  konsentrasi 20,40,60,80,100 ppm.
Kata Kunci: Lissoclinum patella, antioksidan, DPPH, Pantai parentek, Minahasa

## PENDAHULUAN
Keanekaragaman  senyawa  kimia  yang  terkandung  dalam  organisme  laut  banyak  memberi peluang  untuk  memanfaatkan  senyawa-senyawa  aktif  dari  biota  laut  untuk  pengobatan (Wendersteyt et al, 2021). Organisme laut yang diketahui dapat menghasilkan senyawa aktif antara lain bryozoa (Sima dan Vetvicka, 2011), moluska (Kiran et al, 2014), spons (Ngantung et al, 2018), karang lunak (Kawung et al, 2017) dan tunikata (Ali dan Tamilselvi, 2016). Di ekosistem terumbu karang,  Tunikata  adalah  avertebrata  yang  banyak  menghasilkan  senyawa  bioaktif yang  digunakan dalam bidang farmakologi. Hewan ini dapat berasosiasi dengan mikroba fotosintetik dan memiliki potensi molekular yang besar karena kandungan metabolit sekundernya yang merupakan substansi bioaktif (Karim et al, 2018). Hal ini membuat tunikata memiliki potensi sebagai sumber obat-obatan baru  untuk  mengobati  berbagai  penyakit;  produk  yang  dihasilkan  seperti  larvasida  (Rumengan, 2010 ; Mangindaan dan Taroreh, 2013) antitumor atau antikanker (Tatsuta et al, 2017 ; Sumilat et al, 2017 ; Watters, 2018) antibakteri (Opa et al, 2018 ; Sumilat et al, 2019), antioksidan (Sumilat et al,  2019)  dan  antijamur  (Karim  et  al,  2018).  Metabolit  sekunder  berupa  alkaloid,  flavonoid  dan steroid ditemukan pada tunikata Lissoclinum patella (Aulia, 2011).
Uji  aktivitas  antioksidan  suatu  tanaman maupun  biota  laut  sangat  penting  dilakukan  untuk mengetahui  adanya  aktivitas  pengikatan  terhadap  radikal  bebas.  Pada  penelitian  sebelumnya, diketahui  ekstrak  dan  fraksi  Tunikata  Lissoclinum  patella  memiliki  aktivitas  antimikroba. Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  pada  ekstrak  etanol,  fraksi  n-Heksan,  fraksi Kloroform  dan  fraksi  metanol  dari Lissoclinum  patella terhadap  mikroba  uji Escherichia  coli , Staphylococcus  aureus dan Candida  albicans memiliki  kategori  kekuatan  daya  hambat  sedang (Ngantung  et  al,  2015).  Sehingga  memungkinkan Lissoclinum  patella juga  memiliki  aktivitas sebagai  antioksidan  yang  diproduksi  ketika  mempertahankan  diri  dari  lingkungan  maupun  dari serangan organisme lain.
Antioksidan  merupakan    senyawa    yang  dapat  menetralkan  atau  meredam  radikal  bebas, serta  menghambat  terjadinya  oksidasi  pada  sel  tubuh,  sehingga  dapat  mencegah  atau  mengurangi terjadinya  oksidasi  pada  sel  tubuh  dan  terjadinya  kerusakan  sel  (Langi,  2020).  Radikal  bebas merupakan atom atau molekul yang memiliki satu atau lebih elektron yang tidak berpasangan yang dapat  menarik  elektron  dari  senyawa  lain,  yang  memungkinkan  pembentukan  radikal  bebas. Molekul-molekul  seperti  protein,  karbohidrat,  lemak,  dan  deoxyribonucleic  acid  adalah  beberapa contoh  molekul  makro    yang  membentuk  sel  (Kaligis,  2020).  Metode  uji  antioksidan  yang digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  metode  peredaman  radikal  bebas  DPPH (1,1-difenil-2- pikrilhidrazil). Metode  ini  memerlukan  sedikit  sampel,  sederhana,  mudah,  cepat,  dan  peka  untuk mengevaluasi antioksidan dari senyawa bahan alam (Sibarani, 2020).
Berdasarkan  uraian  latar  belakang  diatas  maka  perlu  dilakukan  penelitian  mengenai  uji aktivitas  antioksidan Lissoclinum  patella dari  Pantai  Parentek,  Kabupaten  Minahasa,  Sulawesi Utara dengan metode DPPH.

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  28  Oktober  2023  –  31  Desember  2023  di  Laboratorium Farmasi  lanjut  Program  Studi  Farmasi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  dan Laboratorium Hama dan Penyakit Tumbuhan, Fakultas Pertanian Universitas Sam Ratulangi.

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini, yaitu scuba diving , kamera underwater, masker, label, kertas, talenan, pisau, erlenmeyer , spidol permanen, zipper lock bag, cool box , sarung tangan, botol  600  ml,  spatula,  cawan  petri,  gelas  ukur,  tabung  reaksi,  rak  tabung  reaksi,  corong,  kertas
saring,  tissue,  timbangan  analitik,  pipet  tetes,  lemari  pendingin, spektrofotometer  UV-Vis, aluminium foil , dan rotary evaporator.
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini, yaitu Lissoclinum Patella sebagai sampel yang didapat pada Pantai Parentek Kabupaten Minahasa, Etanol 95%, dan DPPH.

## Jenis Penelitian
Jenis  penelitian  ini  adalah  penelitian  eksperimen  laboratorium.  Metode  eksperimental  ini bertujuan  menguji  aktivitas  antioksidan  dengan  menggunakan  metode  DPPH  ekstrak  etanol Lissoclinum patella dari Pantai Parentek, Kabupaten Minahasa.

## Prosedur Penelitian

## Pengambilan dan Preparasi Sampel
Sampel diambil di pantai Parentek, Kecamatan Lembean Timur, Kabupaten Minahasa pada tanggal  28  Oktober  2023,  sampel  diambil  di  dasar  laut  dengan  peralatan  selam  ( scuba  diving ). Sampel  yang  diperoleh  dimasukkan  ke  dalam zipper  lock  bag kemudian  dimasukkan  dalam cool box , lalu dibawa ke Laboratorium Farmasi lanjut. Sampel Tunikata Lissoclinum patella yang telah diambil  dikeluarkan  dari zipper  lock  bag kemudian  dipotong  kecil-kecil  di  atas  talenan menggunakan  pisau  dan  sampel  dimasukkan  dalam  botol  600  ml  yang  telah  diisi  dengan  200  ml etanol 95%.

## Ekstraksi
Ekstrak Tunikata Lissoclinum patella dibuat menggunakan cara maserasi. Sampel yang telah dipreparasi  dan  direndam  dalam  pelarut  etanol  selama  24  jam,  kemudian  disaring  sehingga menghasilkan  filtrat  1  dan  debris  1.  Debris  1  kemudian  diremaserasi  lagi  dengan  pelarut  etanol semuanya terendam dan dibiarkan lagi selama 24 jam, hal tersebut dilakukan berulang sampai hasil ekstraksi menjadi bening. Filtrat 1,2, dan 3 dicampur menjadi satu kemudian disaring, selanjutnya dilakukan  evaporasi    menggunakan rotary  evaporator pada  suhu  40 ℃ sampai  filtrat  menjadi ekstrak kental yang selanjutnya ditimbang menggunakan timbangan analitik kemudian hitung nilai persen rendemen.

## Pembuatan Larutan Ekstrak
Larutan  ekstrak Lissoclinum  patella dibuat  dengan  konsentrasi  100  ppm,  yakni  dengan melarutkan  10  mg  ekstrak  etanol Lissoclinum  patella kedalam  100  ml  etanol  95%  dalam  tabung reaksi kemudian divortex. Larutan dilakukan pengenceran menjadi 5 seri konsentrasi yakni 20 ppm, 40 ppm, 60 ppm, 80 ppm dan 100 ppm dengan masing-masing konsentrasi dibuat sebanyak 3 kali.

## Pembuatan Larutan DPPH
Larutan  DPPH  dibuat  dengan  cara  ditimbang  4  mg  serbuk  DPPH  kemudian  dilarutkan dengan  100  ml  etanol  95%,  dalam  tabung  reaksi  kemudian  divortex  sampai  didapatkan  larutan konsentrasi 40 ppm. Larutan tersebut kemudian didiamkan selama 30 menit lalu disimpan di wadah yang tertutup rapat dan ditutupi dengan aluminium foil.

## Pembuatan Larutan Kontrol
Larutan  kontrol  dibuat  dengan cara  dicampur  2  ml  etanol  95%  dan  2  ml  larutan DPPH  40 ppm  kemudian  dikocok  hingga  homogen.  Lalu  dilakukan  inkubasi  dalam  ruangan  yang  gelap selama  30  menit  pada  suhu  37°C  dan  setelah  itu  diukur  nilai  absorbansi  menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 517 nm.

## Pengujian Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH
Untuk  pengujian  aktivitas  antioksidan  menggunakan  metode  DPPH  dilakukan  pembuatan larutan uji sampel dengan memasukan 2 mL larutan DPPH ke dalam masing-masing larutan sampel ekstrak Lissoclinum  patella pada  seri  konsentrasi  20,  40,  60,  80,  100  ppm  lalu  divortex  dan dilakukan  inkubasi  dalam  suhu  37°  C  selama  30  menit  sampai  terjadi  perubahan  warna  dari aktivitas DPPH. Dilakukan 3 kali pengulangan pada masing-masing konsentrasi sampel.

## Analisis Data
Pengujian Pengukuran nilai absorbansi sampel Lissoclinum patella dengan spektrofotometer UV-Vis  pada  panjang  gelombang  517  nm.  Diperoleh  data  absorbansi  lalu  data  tersebut  dianalisis dengan perhitungan persen penangkapan radikal bebas (% inhibisi) menggunakan rumus :
%Inhibisi = [1 ( 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑆𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝐾𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 )] ×100%

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil
Gambar 2. Grafik Absorbansi Ekstrak Etanol Lissoclinum patella
Tabel 1. Nilai % Inhibisi Ekstrak Etanol Lissoclinum patella Konsentrasi ppm Pengulangan Rata-rata %Inhibisi I II III 20 48,06% 46,41% 47,35% 48,06 40 56,99% 56,40% 55,93% 56,52 60 71,79% 56,87% 56,16% 62,27 80 70,27% 61,69% 57,10% 63,10 100 67,33% 68,27% 68,03% 68,03

## Pembahasan
Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah Lissoclinum patella yang diperoleh dari pantai  Parentek,  Kabupaten  Minahasa.  Sampel  yang  telah  dikumpulkan  mengalami  tahap pembersihan  untuk  menghilangkan  kontaminan  yang  mungkin  melekat  pada  tiap  sampel. Selanjutnya  untuk  memaksimalkan  proses  ekstraksi,  sampel Lissoclinum  patella dipotong  kecil- kecil.  Menurut  penelitian  Ncube,  et  al  (2008)  hal  ini  dilakukan  untuk  memperluas  ukuran permukaan  sampel  karena  semakin  luas  permukaan  sampel  maka  interaksi  antara  sampel  dan pelarut  semakin  besar  sehingga  proses  ekstraksi  berjalan  optimal  dan  lebih  banyak  senyawa  aktif yang tertarik dari sampel ke dalam pelarut.
Pada  tahap  selanjutnya,  sampel  melalui  proses  ekstraksi  menggunakan  metode  maserasi. Dalam metode maserasi, pelarut yang digunakan dalam penelitian ini adalah etanol 95%. Polaritas etanol  akan  semakin  meningkat  seiring  dengan  penurunan  konsentrasi  etanol  pada  air  (Suhendra, 2019). Etanol dengan konsentrasi 95% memiliki tingkat kepolaran yang lebih tinggi dibandingkan etanol  dengan  konsentrasi  96%.  Perbedaan  tingkat  kepolaran  tersebut  akan  mempengaruhi  hasil ekstraksi yang didapat karena senyawa dalam Lissoclinum patella akan lebih banyak terlarut dalam pelarut yang memiliki tingkat kepolaran yang sama.
Pelarut  kemudian  dipisahkan  dari  ekstrak  yang  telah  diperoleh,  dan  dilakukan  proses evaporasi  menggunakan rotary  evaporator . Rotary  evaporator digunakan  karena  memiliki kemampuan  menguapkan  pelarut  dengan  efisien  pada  suhu  yang  terkontrol.  Pada  tahap  ini,  suhu evaporasi  dipertahankan  pada  40°C.  Suhu  ini  dipilih  karena  dianggap  optimal  untuk  penguapan tanpa merusak senyawa-senyawa aktif yang terkandung dalam sampel (Woran dkk, 2021).
Setelah dihasilkan ekstrak kental, ekstrak Lissoclinum patella ini digunakan untuk pengujian aktivitas antioksidan. Pembuatan larutan ekstrak Lissoclinum patella dibuat dengan konsentrasi 100 ppm kemudian diencerkan menjadi 5 seri konsentrasi, yaitu 20 ppm, 40 ppm, 60 ppm, 80 ppm, dan 100  ppm  dengan  menggunakan  rumus  pengenceran.  Menurut  penelitian  Aderiyanti  (2022)
pengujian  konsentrasi  yang luas  memungkinkan  untuk  membandingkan  nilai  aktivitas  antioksidan ekstrak sampel pada berbagai konsentrasi.
Metode  yang  digunakan  dalam  pengujian  aktivitas  antioksidan  adalah  metode  serapan radikal 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)  dan  dilakukan  3  kali  pengulangan  dengan  larutan yang  berbeda  pada  setiap  konsentrasi  dan  diukur  masing-masing  absorbansi  setiap  konsentrasi pengulangan 1,2, dan 3 setelah itu diambil nilai rata-ratanya. Berdasarkan hasil grafik pada gambar 2  data  absorbansi  semakin  tinggi  konsentrasi  maka  semakin  rendah  konsentrasi  ini  dikarenakan adanya  kemampuan  dari  sampel  mereduksi  radikal  bebas  yang  berupa  DPPH.  Mekanisme  kerja metode  DPPH  yaitu  gugus  kromofor  dan  auksokrom  pada  radikal  bebas  DPPH  memberikan absorbansi maksimum pada panjang gelombang 517 nm sehingga menimbulkan warna ungu. Warna DPPH  akan  berubah  dari  ungu  menjadi  kuning  seiring  dengan  penambahan antioksidan  yaitu  saat elektron tunggal pada DPPH berpasangan dengan hidrogen dari antioksidan. Hasil dekolorisasi oleh antioksidan setara dengan jumlah elektron yang tertangkap (Dehpour, et al., 2009).
Berdasarkan hasil pada Tabel 1 terlihat jika terjadi kenaikan nilai persen inhibisi pada setiap kenaikan konsentrasi sampel. Dari hasil yang didapat hanya konsentrasi 20 ppm yang mempunyai nilai persen inhibisi dibawah 50% sedangkan konsentrasi lainnya yaitu 40 ppm, 60 ppm, 80 ppm, dan 100 ppm mempunyai nilai persen inhibisi diatas 50%. Menurut Molyneux (2013) nilai standar kadar  antioksidan  adalah  50%.sehingga  suatu  bahan  dapat  dikatakan  mempunyai  aktivitas antioksidan yang efektif jika memiliki nilai persen inhibisi lebih dari atau sama dengan 50%.
Dalam  penelitian  ini  ekstrak Lissoclinum  patella dengan  konsentrasi  20  ppm  tidak menunjukan  bahwa Lissoclinum  patella efektif  sebagai  antioksidan.  Hal  ini  disebabkan  karena jumlah  konsentrasi  sampel  pada  konsentrasi  20  ppm  adalah  yang  terkecil  dibanding  konsentrasi lainnya  sehingga  membuat  aktivitas  penghambatan  DPPH  pada  konsentrasi  ini  tidak  sebesar konsentrasi  lainnya.  Selain  itu  juga  diakibatkan  oleh  kadar  senyawa  antioksidan  yang  semakin bertambah  membuat  penghambatan  terhadap  DPPH  akan  semakin  tinggi.  Dengan  demikian  nilai absorbansi yang diperoleh lebih rendah karena semakin sedikit DPPH yang dapat menyerap cahaya, oleh  karena  itu  nilai  absorbansi  akan  berbanding  terbalik  dengan  nilai  persen  inhibisi  karena semakin  kecil  nilai  absorbansi  akan  menghasilkan  nilai  persen  inhibisi  yang  tinggi.  Hasil  pada Tabel  1  juga  menunjukan  bahwa  konsentrasi  sampel  40  ppm  adalah  batas  konsentrasi  minimum yang menunjukan aktivitas antioksidan dari Lissoclinum patella dan naik secara konstan pada setiap kenaikan konsentrasi sampel Lissoclinum patella. Hal ini menunjukan jika Lissoclinum patella baru akan bekerja secara efektif sebagai antioksidan jika memiliki kadar minimum sebesar 40 ppm.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  dilakukan  yaitu  uji  aktivitas  antioksidan, Lissoclinum patella yang diperoleh dari Pantai Parentek Kabupaten Minahasa memiliki aktivitas antioksidan dan efektif sebagai antioksidan pada konsentrasi 40 ppm ,60 ppm, 80 ppm dan 100 ppm.

## SARAN
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui senyawa aktif yang terkandung dalam Lissoclinum patella, Pengujian IC50 untuk mengetahui kekuatan antioksidan dalam sampel, serta pengujian aktivitas yang lain seperti antikanker, antimikroba dan antibakter

## DAFTAR PUSTAKA
Abrar, M., Manuputty, A.E.W. 2008. Inventarisasi dan Sebaran Biota Ascidian di Terumbu Karang Perairan Berau, Kalimantan Timur: Oseanologi dan Lirnnologi di Indonesia. Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia, Jakarta.
Aderiyanti,  R.  2022. Studi  Perbandingan  Metode  Pengukuran  Antioksidan.  [Skripsi]. Fakultas Tarbiyah dan Keguruan Universitas Islam Negeri Raden Intan. Lampung. Ali, H.A.J., Tamiselvi, M. 2016. Ascidians in Coastel Water: A Comprehensif Inventory of Ascidian Fauna from the Indian  Cost.  Springer International Publishing , Switzerland. Aulia,  U.M.  2011. Eksplorasi  dan  Fungsi Senyawa Bioaktif Ascidian Didemnum molle  sebagai Antifouling.  [Skripsi]. Institut Pertanian Bogor. Dephour, A.A., M.A. Ebrahimzadeh., N.S. Fazel & N.S. Mohammad. 2009. Antioxidant Activity of Methanol  Extract  of  Ferula  Assafoetida  and  Its  Essential  Oil  Composition.  Grasas  Aceites. 60(4): 405- 412.
Kaligis,  A.  Y.,  Yudistira,  A.,  &  Rotinsulu,  H.  (2020). Uji  Aktivitas  Antioksidan  Alga  Halimeda opuntia Dengan Metode DPPH [1,1-difenil-2-pikrilhidrazil]. Pharmacon, 9(1), 1–7. Karim, F., Putra, Y.M., Hadi, A. T., Abrar, M. 2018. Antimicrobial and Cytotoxic Properties of the Ascidians  Lissoclinum  patella,  Oxycoryna  fascicularis,  Didemnum  molle  and  Botryllus schlosseri. Original article . Pharmaceutical Sciences and Research (PSR). 5 (2): 65-71. Kawung,  N.J.,  Mangindaan,  R.E.P.,  Rompas,  R.M.,  Chasanah,  E.,    Kapoyos,  M.,  Abdjul,  B., Januar,  H.I.,  Fajarningsih,  D.,    Sumagando,    A.    2017. Cytotoxic  Anticancer  from  New Compound  Unsrat-sinularine  of  Soft  Coral  Sinularia  sp.  from  Bunaken    Island,  Manado, Indonesia. Int. J. Drug. Dev  & Res. 9(3):1-4. Kiran,  N.,  Siddiqui,  G.,  Khan,  A.N.,  Ibrar,  K.,  Tushar,  P.  2014. Extraction    and  Screening  of Bioactive  Compounds  with  Antimicrobial  Properties  from  Selected  Species  of  Mollusk  and Crustacean. J. Clin. Cell. Immunol. 5(1): 1-5. Langi,  P.,  Yudistira,  A.,  &  Mansauda,  K.  L.  (2020). Uji  Aktivitas  Antioksidan  Karang  Lunak (Nepthea sp.) Dengan Menggunakan Metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil) . Pharmacon, 9(3), 425–431.
Molyneux.  2013. The  Use  of  The  Stable  Free  Radical  Diphenylpicrylhydrazyl  (DPPH)  for Estimating Antioxidant Activity. Songklanakarin Journal Science Technolgy . 26(2): 211-219. Ncube,    N.S.,    Afolayan,    A.J.,    Okoh,    A.I.  2008. Assesement    Techniques    of  Antimicrobial Properties  of  Natural  Compounds  of  Plant  Origin:  Current  Methods  and  Future  Trends. Africa Journal of Biotechnology. 7(12): 30-32. Ngantung,  Y.  E.,  Simbala,  H.  E.  I.,  &  Rotinsulu,  H.  (2019). UJI  AKTIVITAS  EKSTRAK  DAN FRAKSI  TUNIKATA  Lissoclinum  patella  TERHADAP  PERTUMBUHAN  MIKROBA Escherichia coli, Staphylococcus aureus, DAN Candida albicans . PHARMACON, 8(4), 825– 835.
Ngantung, A.E.C., Bara, R.A., Sumilat, D.A. 2016. Uji Aktivitas Antibakteri dari Spons Dictyonella funicularis dan Phyllospongia lamellosa yang diambil pada Perairan Bunaken. Jurnal Pesisir dan Laut Tropis. 2(1): 10-16.
Opa, S. L., Bara, R. A., Gerung G. S., Rompas, R. M. Lintang, R. A. J., Sumilat, D. A. 2018. Uji Aktivitas  Antibakteri  Fraksi  NHeksana,  Metanol  Dan  Air  Dari  Ascidian  Lissoclinum  sp. Jurnal Pesisir dan Laut Tropis. 1 (1): 69-80.
Sibarani,  S.  I.,  Yudistira,  A.,  &  Mpila,  D.  A.  (2020). Uji  Aktivitas  Antioksidan  Spons  Stylissa  sp. Dengan  Menggunakan  Metode  DPPH  (1,1-difenil-2  pikrilhidrazil). Pharmacon,  9(3),  419– 424.
Sima,  P.  dan  Vetvicka,  V.  2011. Bioactive substances with anti-neoplastic efficacy from  marine invertebrates:  Bryozoa, Mollusca, Echinodermata and Urochordata. World.  J.  Clin.  Oncol. 2(11):362-366.
Suhendra,  C.  P.,I  Wayan,  R.  W.  Anak  A.  I,S.  W.  2019. Pengaruh  Konsentrasi  Etanol  Terhadap Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Rimpang  llalang  (Imperara  cylindrica  (L)  Beaw)  Pada Ekstraksi Menggunakan Gelombang Ultrasonik. Jurnal Im dan Teknologi Pangan. 827-35. Sumilat,  D.A.,  Wewengkang,  D.S.,  Paruntu,  C.P.,  Rotinsulu,  H.  2017. Inhibitory  Activities  of Ascidian  Herdmania  momus  on  the  Colony  Formation  of  Chinese  Hamster  V79  Cells, collected in Manado North Sulawesi, Indonesia. Jurnal of Asean Studies and Maritime Issues. 3 (5):13-19.
Sumilat, D. A., Rimper J. R. T. S. L., Opa T. E., Kurnia D. 2019. The Potential of Marine Ascidians as  Sources  of  Natural  Antioxidant  and  Antibacterial  agents  from  Manado,  North  Sulawesi. AACL Bioflux 12 (1): 373-377.
Tatsuta T., Hosono M., Rotinsulu H., Wewengkang D.SS., Sumilat D. A., Namikoshi M., Yamazaki H.  2017. Lissoclibadin  1,  a  polysulfur  aromatic  alkaloid  from  the  Indonesian  ascdian Lissoclinum cf. badium, induces capasedependent apoptosis in human colon cancer cells and suppresses tumor growth in nude mice . Journal of Natural Products 80 (2): 499-502. Watters D. J., 2018 Ascidian toxin with potential for drug development. Marine Drugs 16 (5): 162. Wendersteyt, N. V., Wewengkang, D. S., & Abdullah, S. S. (2021). Uji Aktivitas Antimikroba Dari Ekstrak  Dan  Fraksi  Ascidian  Herdmania  momus  Dari  Perairan  Pulau  Bangka  Likupang Terhadap  Pertumbuhan  Mikroba  Staphylococcus  aureus,  Salmonella  typhimurium  Dan Candida albicans. Pharmacon, 10(1), 706–712. Woran,  F.,  Defny,  W.,  Meilani,  J.  2021. Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  dan  Fraksi  Ascidian (Lissoclinum badium) dari Perairan Pulau Mentehage. Pharmacon – Program Studi Farmasi, FMIPA, Universitas Sam Ratulangi, Volume 10 Nomor 2 Mei 2021.