KAJIAN PENDAHULUAN POTENSI ANTI KANKER  DENGAN UJI TOKSISITAS METODE BRINE SHRIMP LETHALITY TEST (BSLT) TERHADAP EKSTRAK ETANOL DAN FRAKSI-FRAKSI DARI KULIT BATANG KEMIRI Aleurites moluccana (L.) Willd.
Ari Sri Windyaswari, Fahrauk Faramayuda, Dessy Ratnasari Program Studi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Jenderal Achmad Yani windyaswari84@gmail.com

## ABSTRAK
Pohon  kemiri Aleurites  moluccana (L.)  Willd.,    adalah  tanaman  asli  Indonesia  multiguna, tumbuh  menyebar  hingga  10-15  meter  pada  area  terbuka  di  dataran  Indonesia  Malaysia  dan kepulauan  Pasifik.  Penelitian  sebelumnya  menunjukkan  tanaman  kemiri  mengandung  tanin, saponin,  flavonoida  dan  polifenol.    Penelitian    ini  bertujuan  untuk  mengetahui  potensi  anti kanker melalui pengujian toksisitas ekstrak etanol kulit batang kemiri Aleurites moluccana (L.) Willd. dengan metode BSLT menggunakan hewan uji larva udang Artemia salina. Pengukuran toksisitas  dinyatakan  dengan  nilai  LC 50. Pembuatan  ekstrak  dilakukan  dengan  teknik  maserasi menggunakan  pelarut  etanol.  Hasil  pengujian  toksisitas  ditunjukkan  dengan  nilai  LC 50 dari ekstrak  etanol,  fraksi  etil  asetat,  fraksi n -heksana,  dan  fraksi  air.    Nilai  toksisitas  yang  paling kuat  hingga  paling  lemah  adalah  fraksi  etil  asetat,  fraksi  n-heksan,  ekstrak  etanol,  fraksi  air secara  berturut-turut  adalah  17,10  ppm;  35,74  ppm;  39,29  ppm;  dan  378,532  ppm.  Intensitas nilai LC 50 hasil pengujian BSLT dari fraksi etil asetat, fraksi n-heksan, ekstrak etanol dan fraksi air  berturut-turut  adalah  sangat  toksik,  sangat  toksik,  sangat  toksik,  dan  toksik.  Hasil Kromatografi Lapis Tipis (KLT) menggunakan penampak bercak spesifik menunjukkan dugaan golongan flavonoid pada ekstrak etanol dan fraksi etil asetat pada kulit batang kemiri.
Kata kunci :  BSLT, kulit batang kemiri, Aleurites moluccana (L.) Willd., flavonoid.

## ABSTRACT
Aleurites  moluccana (L.)  Willd.,  also  known  as  candlenut,  is  a  native  to  Indonesia  great domesticated multipurpose trees, typically grows to 10-15 m in open areas,  It is native to the Indo-Malaysia region and was introduced throughout the Pacific Island.  Previous studies have demonstrated that the leaves and stem bark of Aleurites moluccana (L.) Willd. presents  tannins, saponin,  flavonoid,  and  polyphenols.  The  aim  of  this  research  was  to  determine  the  toxicity value  using  BSLT  method  as  screening  for  new  potential  cytotoxic  drug.  This  research  was started  with  maceration  technique  using  ethanol  solvent.  The  research  was  started  with maceration  method  using  ethanol  solvent.  Determination  of  toxicity  value  of Aleurites molucana (L.)  Willd.  stem  bark  were  examined  using  BSLT  method.  The  toxicity  value  for extract and each fractions was reported as medial lethal concentration (LC 50 ) value, expressed in ppm. The LC 50 value using  BSLT method  of  ethyl acetate  fraction, n-hexane  fraction,  ethanol extract, water fraction were 17,10 ppm; 35,74 ppm; 39,39 ppm; 380,93 ppm respectively. While intensity  of  LC 50 value  for  toxicity  value  of  ethyl  acetate  fraction,  n-hexane  fraction,  ethanol extract, water fraction were very toxic, very toxic, very toxic, and toxic. Chromatogram pattern were  observed  by  Thin  Layer  Chromatography  (TLC)  with  specific  spray  agent,  detected  the flavonoid  in  ethanol  extract and  ethyl acetate fraction from stem bark  of Aleurites moluccana (L.) Willd.
Key words :  BSLT, stem bark of candlenut, Aleurites moluccana (L.) Willd., flavonoid.
PENDAHULUAN Aleurites  moluccana (L.)  Willd  tersebar luas  di  kepulauan  Indonesia  hingga  Asia
Tenggara,  daerah  tropis    benua  Amerika hingga  kepulauan  Virgin.  Tanaman  kemiri merupakan  tanaman  yang  memiliki  banyak kegunaan  pada  hampir  seluruh  bagian tanaman.  Di Indonesia, penggunaan empiris kulit  batang  kemiri  untuk  pengobatan disentri, laksatif, antidiare,  dan sariawan. Di Jepang,  kulit  batang  kemiri  digunakan sebagai anti tumor ( Scott, dkk., 2000)
Penelitian  Gani  dkk  tahun  2001 menunjukkan  bahwa  kulit  batang  kemiri mengandung  metabolit  sekunder  yang bertanggungjawab
dalam
aktivitas antikanker,  yaitu  tanin,  saponin,  flavonoida dan  polifenol.  Penelitian  pendahuluan mengenai  aktivitas  antikanker  dari  kulit batang  kemiri  belum  pernah  di  lakukan, sehingga  perlu  dilakukan  penelitian  awal mengenai  uji  aktivitas  anti  kanker  dari  kulit batang  kemiri  dengan  metode Brine  Shrimp Lethality Test (BSLT).
Bhrine  Shrimp  Letality  Test adalah metode  awal  yang  sering  dipakai  untuk mengamati  toksisitas  senyawa.  Metode BSLT  mudah  dikerjakan,  murah,  cepat,  dan cukup  akurat.  Penggunaan  BSLT  sebagai bioassay pertama  kali  dilaporkan  oleh Tarpley  untuk  menentukan  beberapa  residu insektisida,  menentukan  senyawa  anestetik, serta  menentukan  tingkat  toksisitas  air  laut. Selanjutnya,  Meyer  dkk,  pada  tahun  1982 menggunakan  BSLT  dalam  penapisan senyawa-senyawa  aktif  yang  terdapat  dalam ekstrak  tanaman  yang  ditunjukkan  sebagai toksisitas  terhadap  larva Artemia  Salina Leach.

## METODE
Penelitian  yang  dilakukan  meliputi preparasi  simplisia,    teknik  ekstraksi  dan fraksinasi, uji toksisitas dengan metode Brine Shrimp  Lethality  Test (BSLT),  serta pembuatan profil  dan identifikasi kandungan metabolit sekunder dengan metode Kromatografi Lapis Tipis dari fraksi dan atau ekstrak    yang  memberikan  aktivitas  toksik paling tinggi.
Preparasi Simplisia . Kulit batang kemiri diambil  dari perkebunan Manoko, Lembang, Indonesia, kemudian dilakukan sortasi basah,
pengeringan  dan  sortasi  kering.  Proses pengeringan  simplisia  dilakukan  selama  7 hari pada suhu 40°C.
Teknik  Ekstraksi  dan  Fraksinasi . Sebanyak  500  gram  serbuk  simplisia diekstraksi dengan teknik maserasi
menggunakan  pelarut  etanol  selama  24  jam. Pengulangan  dilakukan  sebanyak  5  kali hingga  didapatkan  filtrat  bening.  Filtrat bening  diuapkan  diatas  rotavapor  hingga didapatkan ekstrak kental etanol (A).
Fraksinasi  dari  ekstrak  etanol  dilakukan dengan  metode  Ekstraksi  Cair-Cair  (ECC) menggunakan    gradien  pelarut  dengan kepolaran  meningkat,  yaitu  pelarut n - heksana,  etil  asetat  dan  air,  sehingga  akan didapat tiga fraksi yaitu fraksi  n-heksan (B), fraksi etil asetat (C) dan fraksi air (D).

## Pengujian Toksisitas Metode BSLT
Penyiapan  larva  uji Artemisia  salina . Pembiakan  telur Artemia  salina dilakukan dalam  wadah  akuarium  berisi  air  laut  yang terdiri  dari  dua  bagian  yang  berhubungan yaitu  bagian  terang  yang  disinari  lampu  dan bagian gelap yang ditutup dengan aluminium foil .  Telur Artemia  salina yang  akan ditetaskan,  terlebih  dahulu  direndam  dalam air  suling  selama  ±1  jam,  kemudian  telur yang  mengapung  dibuang  dan  yang mengendap  dimasukkan  ke  dalam  tempat penetasan  diletakkan  pada  bagian  gelap bejana  untuk  ditetaskan,  setelah  kira-kira  24 jam  nauplii  yang  telah  menetas  akan berenang  menuju  tempat  yang  terang. Nauplii  yang  digunakan  untuk  uji  adalah yang berumur 48 jam setelah menetas.
Pengujian  toksisitas. Ekstrak  dan  fraksi uji  yang  telah  berisi  larva  udang Artemia salina Leach  dengan  berbagai  variasi konsentrasi,  didiamkan  terlebih  dahulu selama  24  jam,  kemudian  dihitung  jumlah larva  udang  yang  mati  dari  tiap  vial.  Uji toksisitas dengan metode BSLT untuk setiap konsentrasi  diulang  sebanyak  3  kali pengulangan.  Apabila  variasi  konsentrasi diatas  memilki  hasil  angka  kematian  belum mencapai 50%, maka dilakukan pengulangan pengujian  dengan  variasi  konsentrasi  yang diperbesar.
Analisa  data  probit. Analisis  Probit dilakukan  menggunakan  perangkat  lunak statistik SPSS.
Profil dan identifikasi metabolit sekunder  dengan  Kromatografi  Lapis Tipis  (KLT). Ekstrak  dan  fraksi  yang memiliki  nilai  LC 50 sangat  kecil  (sangat toksik)  akan  diidentifikasi  kandungan metabolit sekundernya yang diduga bertanggung jawab atas  aktivitas toksik pada larva  udang Artemia  salina ,    menggunakan plat KLT, fasa diam plat silika gel GF 254 dan untuk  fase  gerak  menggunakan  komposisi pelarut n -heksan : etil asetat (2:3).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  Prabowo,  dkk  tahun  2013 menyatakan  bahwa  kulit  batang  kemiri memiliki  potensi  pengembangan  obat  bahan alam,  karena  kandungan  metabolit  sekunder dari  kulit  batang  kemiri  memiliki  banyak aktivitas  farmakologis.  Salah  satu  golongan metabolit  sekunder  yang  dapat  memberikan aktivitas  toksisitas  adalah  flavonoid  yang terdeteksi  pada  ekstrak  etanol  dan  seluruh fraksi kulit batang kemiri.
Flavonoid  bersifat  toksik  pada  saluran cerna  dan  dapat  bertindak  sebagai  racun perut.  Apabila  flavonoid  masuk  kedalam tubuh  larva,  maka  akan  mengganggu  sistem pencernaan larva melalui mekanisme penghambatan  reseptor  perasa  pada  daerah mulut  larva.  Hal  ini  mengakibatkan  larva gagal  mendapatkan  stimulus  rasa  sehingga larva  tidak  mampu  mengenali  makanan  dan kehilangan nutrisi untuk tubuhnya (Nurhayati, 2006).
Pada  pengujian  toksisitas,  semua  sampel akan  diuji  menggunakan  metode  BSLT dengan  hewan  uji  larva  udang Artemisia salina.
Pengujian  toksisitas  metode  BSLT. Pengujian  BSLT  pada  ekstrak  dan  fraksi  uji dari simplisia kulit batang kemiri menggunakan  beberapa  konsentrasi  berbeda. Nilai toksisitas dinyatakan dengan nilai LC 50 ,  suatu  nilai  yang  menyatakan  sejumlah konsentrasi yang diperlukan untuk
membunuh  50%  populasi  larva  udang Artemisia salina.
Penelitian Meyer,dkk tahun 1982 menyatakan  bahwa suatu sampel dinyatakan toksik  apabila  memiliki  nilai  LC 50 dibawah 1000  ppm.    Hasil  pengujian  pada  ekstrak etanol  (A)  dengan  variasi  konsentrasi  8,  20, 40, 80, 120, dan 200 ppm, maka didapat nilai LC 50 sebesar  39,294  ppm.  Pada  fraksi n - heksan dengan variasi konsentrasi 20, 40, 60, 80,  120,  dan  200  ppm,  didapat  nilai  LC 50 35,740  ppm.  Pada  fraksi  etil  asetat    (C) dengan  variasi  konsentrasi  10,  20,  40,  80, 120, dan 200 ppm  didapat nilai LC 50 17,102 ppm.  Sedangkan  pada  fraksi  air  dengan variasi konsentrasi 200, 400, 600, 800, 1000, dan 1200  didapat nilai LC 50 sebesar 380,932 ppm.
Gambar 1. Pengujian  toksisitas  metode  BSLT, dinyatakan  dengan nilai  LC 50 (ppm),  ekstrak etanol  (A),  fraksi  n-heksan  (B),  fraksi  etil asetat (C), fraksi air (D).
Dari hasil diatas dapat disimpulkan bahwa ekstrak  dan  fraksi  dari  kulit  batang  kemiri menunjukkan aktivitas toksik karena memiliki nilai LC 50 <1000 ppm. Akan tetapi, fraksi  etil  asetat  (C)  menunjukkan  aktivitas yang  sangat  toksik,  diikuti  dengan  fraksi  n- heksan  (B)  sangat  toksik,  ekstrak  etanol  (A) sangat toksik dan fraksi air (D) toksik.
Analisis  Probit Data  hasil  pengujian toksisitas  diinterpretasikan  secara  statistik. Analisis  probit  umumnya  digunakan  dalam toksikologi  untuk  menentukan  toksisitas relatif  bahan  kimia  untuk  organisme  hidup. Hal  ini  dilakukan  dengan  menguji  respon berbagai  organisme  di  bawah  konsentrasi dari  masing-masing  bahan  kimia.  Setelah regresi  dilakukan,  selanjutnya  menggunakan luaran dari analisis probit untuk 17,102 35,74 39,294 378,532 C A B D Nilai LC50 (ppm)
membandingkan konsentrasi yang diperlukan untuk  mendapatkan  respon  yang  sama  di berbagai  jenis  sampel,  dimana  titik  akhir digunakan untuk  membandingkan perbedaan toksisitas  bahan  kimia,  dimana  nilai toksisitas  tersebut  dinyatakan  dalam  bentuk LC 50 atau LD 50 .
Estimasi  probit  pada  ekstrak  etanol  (A) kulit  batang  kemiri  menyatakan  aktivitas toksisitas LC 50 pada probit 0.5 adalah 39,294 ppm,  yang  bermakna  dengan  tingkat keyakinan 95%, pada konsentrasi (A) sebesar 39,294  ppm  memiliki  aktivitas  toksik  untuk membunuh  sebanyak  50%  dari  keseluruhan populasi larva udang.
Tabel 1. Hasil  analisis  statistik  probit  pada sampel ekstrak etanol (A) kulit batang kemiri Aleurites moluccana (L.) Willd.
Estimasi  probit  pada  fraksi  n-heksan  (B) kulit  batang  kemiri  menyatakan  aktivitas toksisitas LC 50 pada probit 0.5 adalah 35,740 ppm,  yang  bermakna  dengan  tingkat
keyakinan 95%, pada konsentrasi (A) sebesar 35,740  ppm  memiliki  aktivitas  toksik  untuk membunuh  sebanyak  50%  dari  keseluruhan populasi larva udang.
Tabel 2. Hasil  analisis  statistik  probit  pada sampel  fraksi  n-heksana  (B)  kulit  batang kemiri Aleurites moluccana (L.) Willd.
Estimasi probit pada fraksi  etil asetat (C) kulit  batang  kemiri  menyatakan  aktivitas toksisitas LC 50 pada probit 0.5 adalah 17,102 ppm,  yang  bermakna  dengan  tingkat keyakinan 95%, pada konsentrasi (C) sebesar 17,102  ppm  memiliki  aktivitas  toksik  untuk membunuh  sebanyak  50%  dari  keseluruhan populasi larva udang.
Tabel 3. Hasil  analisis  statistik  probit  pada sampel  fraksi  etil  asetat  (C)  kulit  batang kemiri Aleurites moluccana (L.) Willd.
Estimasi  probit  pada  fraksi  air  (D)  kulit batang kemiri menyatakan aktivitas toksisitas LC 50 pada  probit  0.5  adalah  378,532  ppm, yang  bermakna  dengan  tingkat  keyakinan 95%,  pada  konsentrasi  (D)  sebesar  378,532 ppm  memiliki  aktivitas  toksik  untuk membunuh  sebanyak  50%  dari  keseluruhan populasi larva udang.
Tabel 4. Hasil  analisis  statistik  probit  pada sampel  fraksi  air  (D)  kulit  batang  kemiri Aleurites moluccana (L.) Willd.
Profil  dan  Identifikasi  menggunakan Kromatografi  Lapis  Tipis. Profil  dan identifikasi  senyawa  metabolit  sekunder hanya  dilakukan  terhadap  sampel  uji  yang memberikan  aktivitas  toksik  yang  sangat kuat  dengan  metode  Kromatografi  Lapis Tipis  (KLT).  Profil  kromatografi  yang diperoleh  pada  fraksi  etil  asetat    (C) memberikan  fluoresensi  berwarna  biru (kuat),  dan  fluoresensi  biru  (lemah)  pada ekstrak etanol (A) di bawah sinar UV 365 nm dengan masing-masing nilai Rf 0,23. Hal ini menunjukkan identifikasi awal untuk golongan flavonoid adalah positif. Selanjutnya,  digunakan  tahap  identifikasi lanjutan  untuk  golongan  flavonoid  yaitu penggunaan  uap  NH 3 ,  yang  memberikan fluoresensi  berwarna  biru    terang  (kuat) dibawah  sinar  UV  365  nm  dengan  nilai  Rf pada fraksi  etil asetat (C)  dan  ekstrak  etanol (A)  berturut-turut  sebesar  0,24  dan  0,24.
Penampak  bercak  spesifik    untuk  golongan flavonoid adalah sitroborat, dapat digunakan untuk  identifikasi  lanjutan.  Hasil  yang  di peroleh  setelah  disemprot  dengan  penampak bercak  sitroborat  fraksi  etil  asetat  (C)  dan ekstrak etanol (A) dan  menunjukkan adanya fluoresensi  berwarna  biru  terang  (kuat)  di bawah  sinar  UV  365  nm  dengan  masing-
masing  nilai  Rf  sebesar  0,24.  Tahap  akhir untuk  identifikasi  golongan flavonoid adalah menggunakan  penampak  bercak  spesifik yaitu  AlCl 3, yang  memberikan  hasil fluoresensi biru (kuat) dibawah sinar UV 365 nm    pada  fraksi  etil  asetat  (C)  dan  ekstrak etanol  (A)  dengan  masing-masing  nilai  Rf sebesar 0,24.
Gambar  2. Profil  kromatogram  lapis  tipis  ekstrak  etanol  dan  fraksi  etil  asetat  kulit  batang Aleurites moluccana (L.) Willd., fase diam silika gel GF 254 , fasa gerak n-heksana : etil asetat (3:2), (1) fraksi etil asetat, (2) ekstrak etanol, (a) visual, Rf 0,23, (b) sinar UV 365 nm, Rf 0,24, (c) penampak bercak sitroborat dibawah sinar UV 365 nm, Rf 0,24, (f) penampak bercak AlCl3  dibawah sinar UV 365 nm, Rf 0,24.
Hasil  dari  identifikasi  tersebut  dapat digunakan untuk menyusun profil KLT yang menunjukkan  adanya  golongan  flavonoid yang  terdapat  pada  fraksi  etil  asetat  (C)  dan ekstrak etanol kulit batang kemiri (A)

## KESIMPULAN
Dari hasil penelitian yang telah dilakukan terhadap kulit batang kemiri dapat disimpulkan  bahwa  nilai  LC50  yang  di peroleh  dari  ekstrak,  fraksi  air,  fraksi  etil asetat,  dan  fraksi n -heksan  secara  berturut- turut adalah  39,294 µg/mL,  380,932  µg/mL, 17,102  µg/mL,  dan  35,74  µg/mL.  Dimana yang memberikan aktivitas toksik paling kuat pada  kulit  batang  kemiri  adalah  fraksi  etil asetat  dengan  LC 50 sebesar  17,102  µg/mL. Dan  berdasarkan  hasil  KLT,  senyawa  yang diduga  memiliki  aktivitas  toksik  pada  fraksi
etil  asetat  kulit  batang  kemiri  adalah flavonoid.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan  terima  kasih  ditujukan  kepada Fakultas  Farmasi  Universitas  Jenderal Achmad  Yani  atas  fasilitas  dan  kesempatan yang telah diberikan.

## DAFTAR PUSTAKA
Rahim,  A.,  Alam,  G.,  Agustina,  R.,  Rusydi, M.  2012.  Skrining  Toksisitas  Ekstrak Herba  Bandotan  ( Ageratum  conyzoides L.)  dengan  Metode  Brine  Shrimp Lethality  Test . Majalah  Farmasi  dan Farmakologi, Vol.16, No.2. Hlm 99-106.
Agoes,  G.,  2007, Teknologi  Bahan  Alam , Penerbit ITB, Bandung: 2-3, 21-23.
Azidin,  Y.H.  1990, Pengobatan  Tradisional Daerah  Kalimantan  Selatan  Departemen P&K  Direktorat  Jenderal  Kebudayaan ,
Direktorat  Sejarah  dan  Nilai  Tradisional, Proyek  Inventarisasi  dan  Pembinaan Nilai-nilai Budaya. Jakarta:1-3
Colegate,  S.M.  and  Molyneux,  R.J.,  1993,
Bioactive  Natural  Product,  Detection, Isolation,  and  Structural  Determination , CRC Press., Boca Raton  USA: 442, 444- 448.
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia,
2008, Farmakope Herbal Indonesia , Edisi 1,  Jakarta: 162-175.
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia.
1986. Sediaan Galenik . Jakarta; Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan,  Direktorat  Pengawasan  Obat Tradisional. 26.
Fransworth.,  N.R.,  (1996), Biological  and Phytochemical  Screening  of  Plants ,  J. Pharm.Sci, 55(3) : 243-269.
Gali-Muhtasib,  H.  U.,  Younes,  I.  H., Karchesy,J.J.,  El-Sabban,  Marwan  E., 2001, Plant Tannins Inhibit the Induction of  Abberant  Crypt  Foci  and  Colonic Tumors by 1,2-Dimethylhydrazine in Mice
Harborne,  J.B.,  1996, Metode  Fitokimia: Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis Tumbuhan , Terbitan kedua, Penerbit ITB, Bandung: 6-9,14-15, 19-22, 24,25.
Harini,  M.,  Zuhud,  Sangat  E.A.M., Damayanti,  Ellyn  K.,  2000, Kamus
Penyakit  dan  Tumbuhan  Obat  Indonesia (Etnofitomedika I) , Yayasan Obor Indonesia, Jakarta, 115, 172.
Harmita,  dan  Maksum  Radji.  2008.  Buku
Ajar  Analisis  Hayati  Edisi  3 .  Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. Hlm 76- 77.
Hutapea, J.R. dan Syamsuhidayat S.S., 1994, Inventaris  Tanaman  Obat  Indonesia ,
Edisi  II,  Departemen  Kesehatan  RI, Badan  Penelitian  dan  Pengembangan Kesehatan, Jakarta.
Johnson,  E.L.  dan  Stevenson,  R.,  1991, Dasar  Kromatografi  Cair ,  Penerbit  ITB,
Bandung: 46
Krisnawati  H.,    Kallio  M.,    Kanninen  M., Aleurites moluccana (L.) Willd. Ecology, silviculture  and  productivity,  CIFOR,
Bogor, Indonesia, 3-11, 2011.
Martawijaya,  A.,  Kartasujana,  I.,  Mandang, Y.I.,  Prawira  S.A.  dan  Kadir,  K.,  1989, Atlas  Kayu  Indonesia ,  Jilid  II,  Badan Penelitian  dan  Pengembangan  Hutan, Bogor: 59-64.
McLaughlin,  J.L.,  1990, Workshop  on  Brine
Shrimp  and  Potato  Disc  Bioassay , Universitas Ilmu Hayati Institut Teknologi Bandung: 3-6.
Meyer,  H.N.,  1982, Bhrine  Shrimp  Letality Test:  Med.  Plant  Reseacrh ,  Vol.  45, Hipokrates  Verlag  Gmbrl,  Amsterdam:
31-34.
Nurhayati,  A.P.D.,  2006.  Uji  Toksisitas Ekstrak Eucheuma  Alvarezii terhadap Artemia salina sebagai Studi Pendahuluan Potensi  Antikanker, Jurnal ,  Jurusan Biologi  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam,  Institut  Teknologi Sepuluh November : 41-46
Pasaribu,  Subur  P.,  Eva  M.,  dan  Boby  S.N. 2008.
Prabowo,  W.,  Wirasutisna  K.R.,  Insanu,  M.,
2013, Isolation and characterization of 3- acetyl  aleuritolic  acid  and  scopoletin from  stem  bark  of Aleurites  moluccana (L.)  Willd, Vol  5,  Issue  3,  International Journal  of  Pharmacy  and  Pharmaceutical Sciences, 1-2, ISSN : 0075-1491
Sudjadi,  1986, Metode  Pemisahan ,  UGM Press, Yogyakarta.