Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)*
1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com

## Abstrak
Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3

## Abstract
Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
Volume 5 Nomor 1, Maret 2019 Editorial ................................................................................................................. i Daftar Isi ............................................................................................................... ii
Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya,
Indonesia Salomo Christian, Wahyu Irawati2 .............................................................................. 1-10
Tingkat Ploidi Paku Sayur ( Diplazium Esculentum ) pada Ketinggian yang Berbeda di Gunung
Merbabu, Boyolali, Jawa Tengah, Indonesia Anggun Wulandari, Rina Dian Rahmawati ................................................................. 11-15

## Analisis Pertumbuhan Ikan Nila yang Dibudidaya pada Air Musta’mal
Oktapiandi, Joko Sutrisno, Sunarto ............................................................................. 16-20 Estimasi Emisi Gas Rumah Kaca yang Dihasilkan dari Tempat Pemrosesan Akhir (TPA) di Jawa Tengah Setyo Prabowo, Pranoto, Sri Budiastuti ....................................................................... 21-33
Aktivitas Antibakteri Biji Jeruk Manis ( Citrus sinensis ) Terhadap Bakteri Escherichia coli Mohammad Arfi Setiawan, Mita Dewi Retnoningrum ................................................ 34-38 Analisis Tingkat Kemiripan Orthoptera Menggunakan Indeks Sorensen dan Dendogram di Hutan Bromo Karanganyar Jawa Tengah, Indonesia Dwi Setyo Astuti, Ruslan ............................................................................................ 39-47
Potensi Ekstrak Sirsak ( Annona muricata ) sebagai Larvasida Pengendali Populasi Aedes albopictus
Dyah Ayu Widyastuti, Praptining Rahayu; Lussana Rossita Dewi ............................... 48-54

## POTENSI ANTI BAKTERI MUCUS IKAN-IKAN NATIVE DI PERAIRAN DANAU LIMBOTO, GORONTALO, INDONESIA
Syam S. Kumaji, Zuliyanto Zakaria .............................................................................
55-60

## ANALISIS SENYAWA INHIBITOR ENZIM KATEPSIN KULIT IKAN PATIN TERHADAP PENUNDAAN KEMUNDURAN MUTU CUMI-CUMI
Fitriana Dian Kusuma*, R. Susanti, Septiana Anggraini, Dyken Dwi Arlinda
1 Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Semarang *Email: fitrianadiankusuma@yahoo.co.id Paper submit: 28 Agustus 2019, Paper publish: September 2020
Abstrak- Daya simpan cumi-cumi dipengaruhi oleh aktivitas enzim katepsin yang menyebabkan kemunduran mutu cumi- cumi pada hari ke tiga setelah fase post rigor. Aktivitas inhibitor katepsin alami dari ikan patin berpotensi menghambat kemunduran mutu ikan jenis lain. Penelitian ini dilakukan menggunakan dua variabel yaitu, konsentrasi inhibitor enzim katepsin yang diekstrak dari kulit ikan patin, dengan empat variasi yaitu 1:0; 1:1; 2:3; dan 3:2 dan lama inkubasi cumi- cumi pada fase post rigor selama 3, 7, dan 9 hari dalam ekstrak inhibitor. Hasil uji Two Way Annova menunjukkan bahwa konsentrasi perlakuan berbeda nyata dengan peresentase penghambatan sedangkan lama penyimpanan tidak berbeda nyata (p<0,05). Konsentrasi kemudian diuji lanjut dengan Duncan dan konsentrasi yang paling efektif untuk menghambat aktivitas enzim adalah konsentrasi 3:2 dengan persentase penghambatan 57%.
Kata kunci : Cumi-cumi, Kulit Ikan patin, Enzim Katepsin, Inhibitor sistein protease

## Pendahuluan
Pendinginan merupakan salah satu teknik untuk mengatasi pembusukan ikan yang dilakukan selama penangkapan, pengangkutan, maupun penyimpanan (Siburian et al . 2012). Selain menggunakan teknik pendinginan, beberapa oknum menggunakan pengawet berbahaya untuk menjaga kesegaran ikan yaitu formalin. Pada tahun 2012 hingga 2017 cumi- cumi ( Loligo sp ) merupakan salah satu komoditas ekspor hasil laut yang terus mengalami kenaikan permintaan pasar hingga 19,96% dibandingkan dengan udang, rumput laut, tuna, cakalang, dll (KKP, 2017). Hal ini disebabkan karena cumi-cumi merupakan komoditas laut yang mengandung protein dan gizi yang baik untuk dikonsumsi Cumi-cumi mempunyai daya simpan yang rendah akibat adanya kemunduran mutu setelah fase post rigor . Salah satu faktor yang mempengaruhi daya simpan cumi-cumi adalah aktivitas enzim katepsin. Aktivitas enzim akan meningkat dan mencapai titik tertinggi pada
pembusukan karena enzim akan menguraikan protein dan menghasilkan senyawa-senyawa metabolit yang menyebabkan perubahan bau, tekstur, dan cita rasa (Fentiana, 2009). Hasil penelitian Vaz-pires et al . (2008) menunjukkan bahwa cumi dengan perlakuan penyiangan memiliki kenampakan krem sedikit kecoklatan dan pucat, berbau busuk, tekstur yang tidak elastis dan sedikit empuk. Penilaian cumi-cumi dengan perlakuan tanpa penyiangan, memiliki kenampakan mantel berwarna krem kecoklatan dan pucat, berbau busuk, dan tekstur yang lunak. Faktor penyebab kemunduran mutu cumi- cumi diantaranya adalah organoleptik (7-14 hari), enzimatis (3-6 hari), dan histologis (6 hari) (Alviana, 2017). Faktor yang paling cepat menyebabkan kemunduran mutu cumi-cumi adalah faktor enzimatis. Menurut Nurhayanti et al .  (2015), enzim katepsin merupakan enzim proteolitik yang dapat memecah struktur protein pada tubuh makhluk hidup. Aktivitas enzim katepsin dapat dicegah dengan inhibitor spesifik. Hasil pengujian Fikri (2014), menunjukkan
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018). Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
bahwa ekstrak ikan patin mempunyai aktivitas inhibitor enzim katepsin yang hampir sama dengan phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) konsentrasi 1 mM dan 5 mM, namun masih di bawah aktivitas inhibitor pepstatin 1 μM (94,20%) serta aktivitas penghambatan EDTA sebesar 91,071% (1 mM) dan 92,857% (5 mM). Inhibitor spesifik terhadap enzim katepsin menurut Hanada et al. (2014) adalah L-trans-Epoxy Succinyl-leucylamido (4-guanido) butane atau E-64 yang mempunyai 4 gugus fungsi utama yaitu, guanidyl, epoxide,
1,2-dicarboxyl groups dan ikatan peptida. Menurut Nurhayanti (2015), kulit ikan patin
( Pangasius djambal ) mempunyai kemampuan menghambat aktivitas enzim katepsin hingga 90%. Indonesia sejak tahun 2016 mengalami lonjakan budidaya ikan patin sebesar 437.111 ton dan mempunyai 6 perusahaan filet ikan patin dengan kapasitas produksi 350 ton per bulan. Kondisi ini sangat memungkinkan kulit ikan patin dimanfaatkan sebagai pengawet cumi- cumi yang permintaan pasarnya terus mengalami peningkatan (KKP, 2017).
Berdasarkan uraian di atas, maka perlu dilakukan penelitian aktivitas inhibitor enzim katepsin kulit ikan patin terhadap penundaan kemunduran mutu cumi-cumi. Hasil penelitian ini diharapkan dapat mendukung peningkatan kualitas perikanan nasional, khususnya cumi- cumi.

## Metode Penelitian
Penelitian dilakukan di laboratorium Biokimia, Mikrobiologi, Fisiologi Tumbuhan Jurusan Biologi, dan Laboratorium Riset Fisika Universitas Negeri Semarang. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan desain rancangan acak dengan dua pola faktorial. Faktor pertama adalah konsentrasi inhibitor enzim katepsin yang diekstrak dari kulit ikan patin, dengan empat variasi yaitu 1:0; 1:1; 2:3; dan 3:2. Faktor kedua adalah lama rendaman/inkubasi cumi-cumi pada fase post rigor selama 3, 7, dan 9 hari dalam ekstrak inhibitor. Setelah direndam, aktivitas enzim katepsin pada cumi-cumi diukur dengan metode spektrofotometri.
1.  Ekstraksi inhibitor enzim katepsin dari kulit ikan patin (Dinu et al., 2002)
Kulit ikan patin ( Pangasius sp ) dipisahkan dari daging dan komponen lainnya,  kemudian kulit ikan patin dioven selama 7 hari dan dihaluskan dengan blender. Sebanyak 100 gram kulit ikan patin halus dihomogenisasi dengan 100 mL akuades dingin. Selanjutnya, disentrifugasi (Scilogex DM0412) pada suhu dingin dengan kecepatan 5000 rpm selama 30 menit. Supernatan diambil dan ditambahkan buffer Mcllvaine’s pH 5,5 (asam sitrat  dan Sodium pospat (Merck)) dengan volume yang sama dengan supernatan. Campuran tersebut selanjutnya diinkubasi selama 10 menit pada suhu 80°C, dan disentrifugasi pada kecepatan 7000 rpm selama 15 menit. Supernatannya diambil dan disimpan pada suhu dingin. Ekstrak kulit ikan patin tersebut, selanjutnya diuji kandungan gugus fungsinya menggunakan FT-IR atau IR spectry (PerkinElmer Spectrum Version 10.03.06). Ekstrak inhibitor enzim katepsin kulit ikan patin dibuat menjadi empat variasi konsentrasi yaitu 1:0 (1 bagian ekstrak inhibitor, tanpa buffer Mcllvaine’s), 1:1 (1 bagian ekstrak inhibitor, 1 bagian buffer Mcllvaine’s), 2:3 (2 bagian ekstrak inhibitor, 3 bagian buffer Mcllvaine’s), dan 3:2 (3 bagian ekstrak inhibitor, 2 bagian Mcllvaine’s).

## 2.  Aplikasi Ekstrak Inhibitor Kulit Ikan Patin terhadap Cumi-cumi
Cumi-cumi direndam ke dalam ekstrak inhibitor enzim katepsin dengan konsentrasi yang telah dibuat. Kemudian, Cumi-cumi yang telah direndam ekstrak inhibitor diinkubasi pada suhu 4°C. Setiap hari ketiga, ketujuh, dan ke sembilan aktivitas enzim katepsin pada Cumi-cumi dihitung dengan metode spektrofotometri.

## 3.  Ekstraksi enzim katepsin Cumi-cumi
(Dinu et al., 2002) Setelah cumi-cumi direndam dalam ekstrak inhibitor enzim katepsin dari ikan patin, dengan variasi konsentrasi dan lama rendaman, cumi- cumi diekstraksi dan diuji aktivitas enzim katepsinnya. Sebanyak 10 gram daging cumi- cumi disuspensikan 10 mL akuades dingin 4°C, kemudian dihomogenisasi pada suhu 25 ° C.
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com

## Abstrak
Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3
Abstract Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
Ekstrak tersebut disentrifugasi dengan kecepatan 1000 rpm selama 10 menit, kemudian supernatan yang diperoleh disentrifugasi pada kecepatan 10.000 rpm selama 10 menit. Pelet yang dihasilkan dilarutkan dalam 0,1 M Buffer tris- HCl pH 7,4 (Tris base (Merck) dan HCl (Merck)) dengan perbandingan 1:5 dan disentrifugasi dengan kecepatan 4000 rpm selama 10 menit. Selanjutnya, supernatan yang mengandung enzim katepsin diambil untuk dianalisis.

## 4.  Uji aktivitas enzim katepsin
Aktivitas enzim katepsin diukur dengan metode spektrofotometri, dengan langkah-langkah seperti pada Tabel 1.
Tabel 1. Pengukuran aktivitas enzim katepsin dengan spektrofotometer Pereaksi Sample (mL) Standar (mL) Blanko (mL) Buffer tris 0,1 M pH 7,4 0,1 0,1 0,1 Katepsin 0,1 - - Tirosin (Merck) 0,1 0,1 - Akuades - 0,1 - Hemoglobin 2% (Merck) 0,5 - 0,1 Preinkubasi 37 o C, 30 menit Hemoglobin 2% 0,5 0,5 0,5 Diinkubasi 37°C  10 menit TCA 5% (Merck) 2 2 2 Disaring dengan kertas saring Filtrat 1 1 1 Folin (Merck) 1 1 1 Diamkan pada 37°C, 20 menit Absorbansi diukur dengan spektofotometer (PerkinElmer Lambda 950 UV VIS) panjang gelombang 750 nm

## 5.  Perhitungan aktivitas enzim katepsin
Aktivitas enzim katepsin dihitung dengan rumus  sebagai berikut :
Keterangan : U = JumLah tirosin yang dihasilkan per mL enzim per menit
P   =  Faktor pengenceran T  =  Waktu inkubasi (10 menit)

## 6.  Penghitungan penghambatan inhibitor kulit ikan patin
Persentase daya inhibisi dari inhibitor enzim dari kulit ikan patin dapat dihitung dengan rumus:
Persentasi Penghambatan =

## 7.  Analisis Data
Data daya hambat inhibitor enzim, masing- masing dianalisis secara statistik dengan analisis sidik ragam (ANOVA) dua arah. Jika hasil analisis menunjukkan pengaruh nyata maka dilanjutkan dengan uji lanjut Duncan.

## Hasil dan Pembahasan
Aktivitas enzim katepsin pada hari ke 3, 7, dan 9 menunjukkan bahwa, aktivitas enzim katepsin paling tinggi yaitu hari ke 7 dan mengalami penurunan pada hari ke 8 pada semua konsentrasi. Hasil penelitian Alviana (2017), menunjukkan bahwa cumi-cumi mengalami aktivitas enzim yang paling optimal pada hari ke-3 kemudian mengalami kenaikan sangat tajam pada hari ke-6 dan penurunan pada hari ke-9.
Konsentrasi inhibitor yang paling optimal untuk menghambat aktivitas enzim katepsin adalah 3:2 (Tabel 2). Pada konsentrasi tersebut, aktivitas enzim yang didapatkan paling rendah. Sedangkan aktivitas enzim katepsin paling tinggi didapatkan pada perendaman konsentrasi inhibitor 1:1. Hal tersebut tidak sesuai dengan penelitian Nurhayati (2015) yang menyatakan konsentrasi inhibitor kulit ikan patin  1:1 adalah konsentrasi paling efektif untuk menghambat aktivitas enzim katepsin pada ikan bandeng. Perbedaan hasil penelitian ini disebabkan karena habitat dari cumi- cumi dan ikan bandeng berbeda.
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018). Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
Tabel 2. Rata-rata aktivitas enzim (U/mL) katepsin pada cumi-cumi setelah direndam ekstrak inhibitor kulit
ikan patin Konsentrasi Inhibitor Lama inkubasi Aktivitas Enzim (U/mL) Hari ke-3 Hari ke-7 Hari ke-9 1:0 0,2323 0,2685 0,1799 1:1 0,2493 0,2697 0,2101 2:3 0,2092 0,2536 0,1857 3:2 0,1900 0,2350 0,1708 Kontrol 0,3658 0,6120 0,5551
Habitat cumi-cumi adalah laut yang pada umumnya mempunyai pH air yang berbeda dengan ikan bandeng yang hidup di air tambak. Pada cumi-cumi yang mempunyai habitat di air laut mempunyai pH berkisar 7 - 9 (Poernomo et al ., 1988). Sementara ikan bandeng mempunyai pH sebesar 7- 8 (Faisyal et al., 2016). Perbedaan pH pada ikan bandeng dan cumi-cumi menyebabkan aktivitas enzim pada cumi-cumi dan ikan bandeng berbeda.
Setelah diuji pengaruh inhibitor terhadap aktivitas enzim kemudian  menguji persentase
penghambatan oleh inhibitor kulit ikan patin. Penghambatan oleh inhibitor kulit ikan patin pada cumi-cumi akan memperlambat pembusukan cumi-cumi. Inhibitor enzim katepsin tersebut dibagi menjadi empat konsentrasi sebagai variable terikat dengan konsentrasi 1:0; 1:1, 2:3, 3:2 untuk dihitung absorbansinya secara in vitro pada hari ke 3, 7, dan ke 9. Semakin tinggi  absorbansi sampel maka aktivitasnya semakin tinggi. Berikut merupakan hasil persentase penghambatan inhibitor kulit ikan patin terhadap aktivitas enzim katepsin cumi-cumi.
Tabel 3. Persentase (%) Penghambatan Inhibitor Kulit Ikan Patin terhadap Enzim Katepsin cumi-cumi
Konsentrasi Lama inkubasi Hari ke-3 Hari ke-7 Hari ke-9 1:0 47,6667 47,1667 47,66667 1:1 46,1667 47,0000 46,1667 2:3 56,6667 48,6667 56,6667 3:2 58,6667 54,0000 58,6667
Hasil persentase diatas menunjukkan konsentrasi yang paling tepat dalam menghambat aktivitas enzim katepsin. Tabel 5 diatas menunjukkan bahwa pada konsentrasi 3:2 inhibitor enzim katepsin mengalami penghambatan yang paling tinggi hingga mencapai 54 - 58,67 % selanjutnya konsentrasi 2:3 mencapai 48-56 %, konsentrasi 1:0 mencapai 47,67 %, dan 1:1 antara 46-47 %. Hal ini menunjukkan bahwa konsentrasi inhibitor
yang paling efektif dalam menghambat aktivitas enzim katepsin adalah pada konsentrasi 3:2. Konsentrasi 3:2 dilakukan dengan melarutkan inhibitor volume 3 bagian dan buffer mcllvaine’s 2 bagian. Hasil perhitungan tabel diatas kemuadian  dilakukan pengujian ANNOVA dua arah dan variabel bebas yang siginifikan diuji lanjut duncan. Berikut merupakan hasil dari uji ANNOVA penghambatan aktivitas enzim katepsin dengan ekstrak kulit ikan patin.
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com

## Abstrak
Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3

## Abstract
Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
Tabel 4. Uji Annova Penghambatan Aktivitas Enzim Katepsin dengan Ekstrak Kulit Ikan Patin Source Sum of Squares Df Mean Square F Sig. Corrected Model 1948.305 11 177.119 3.385 .001 Intercept 189609.108 1 189609.108 3623.472 .000 Konsentrasi 1534.066 3 511.355 9.772 .000 Lama 181.854 2 90.927 1.738 .185 Konsentrasi * hari 266.785 6 44.464 .850 .537 Error 3139.681 60 52.328 Total 194303.000 72 Corrected Total 5087.986 71
Pengujian ANOVA menunjukkan bahwa pengaruh hari dan hari* konsentrasi tidak menunjukkan perbedaan nyata terhadap penghambatan dengan taraf signifikasi 0,05 sehingga tidak dilakukan uji lanjut duncan. Sedangkan, pengaruh konsentrasi inhibitor kulit ikan patin
berbeda nyata dengan persentase penghambatan terhadap enzim katepsin sehingga dilanjutkan uji lanjut duncan. Hasil dari uji lanjut duncan dapat dilihat pada Tabel 5.
Hasil pengujian FTIR pada Gambar 2 dapat menginterpretasikan sebagai gugus fungsi yang terdapat dalam suatu senyawa (Tabel 5).

## Tabel 5. Hasil Uji Lanjut Duncan
Konsentrasi N 1 Subset 2 1:1 18 46.666b 1:0 19 47.105b 2:3 17 54.588a 3:2 18 57.111a Sig. .856 .300 4000 400 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 98 -1 10 20 30 40 50 60 70 80 90 cm-1 %T 3467.83cm-1, 1.43%T 1637.97cm-1, 13.90%T 668.23cm-1, 47.82%T 2083.17cm-1, 71.04%T 1079.22cm-1, 87.52%T Gambar 1. Hasil Uji FTIR Ekstrak Kulit Ikan Patin
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018). Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
Tabel 6. Pembacaan Hasil FTIR Peak Name Bilangan Gelombang Wilayah serapan Keterangan Referensi 7 668.23 500-1500 Gugus Sistein Dachriyanus, 2004 6 1079.22 1000-1100 Gugus C=O Kong dan Yu, 2007 5 1637.97 1600-1690 C=O Stretching Jilie dan shaoning, 2007 4 2083.17 2936-2021 CH Gende et al ., 2008 3 3401 2 3435.42 3400 Gugus OH Coates, 2002 1 3467.83
Hasil uji FTIR diatas dapat disimpulkan bahwa senyawa tersebut mempunyai ciri khas dengan adanya gugus Carboyl (C=O), gugus hidroksi (-OH), dan carboxymethyl groups dan ikatan sulfida (sistein). Penghambatan oleh gugus OH terjadi karena alkohol mengandung suatu oksigen dengan dua pasang elektron valensi menyendiri yang bersifat polar, sehingga alkohol dapat membentuk ikatan hidrogen antara molekul-molekulnya, dengan air maupun senyawa lain apa saja, yang mengandung NH atau OH (Fessenden dan Fessenden, 1986). Sistein merupakan asam amino yang mempunyai gugus sulfhidril,gugus ini berinteraksi dengan produk 0-quinon membentuk senyawa Cystein Quinon Addition Compound (CQAC), yang mengakibatkan senyawa melanoidin yang menyebabkan perubahan warna tidak terbentuk. CQAC mempunyai struktur mirip dengan substrat, sehingga CQAC juga dapat berikatan dengan pusat aktif enzim berkompetisi dengan substrat, sehingga sistein dapat bersifat inhibitor kompetitif (Mardiah, 2011).

## Simpulan
Aktivitas enzim katepsin cumi-cumi dapat dihambat oleh inhibitor kulit ikan patin pada konsentrasi 3:2 dengan aktivitas paling kecil pada Konsentrasi inhibitor enzim katepsin hari ke 3 mencapai 0,226 U/mL , hari ke 7 mencapai 0,2209 U/mL, dan hari ke 9 mencapai 0,18 U/mL. Penghambatan yang dihasilkan paling baik pada konsentrasi 3:2 dengan persentase penghambatan mencapai 57%.

## Ucapan Terima kasih
Kami ucapkan terimakasih kepada Kementerian Riset, Teknologi, dan Pendidikan Tinggi Direktorat Jenderal Pembelajaran dan Kemahasiswaan yang telah memberikan dana penelitian yang terdapat pada surat nomor 1020/B3.1/KM/2018 sehingga penelitian ini dapat terlaksana dan berjalan dengan lancar.

## Daftar Pustaka
Alviana D. (2017). Kemunduran Mutu Daging Cumi-Cumi Selama Penyimpanan Suhu Dingin Berdasarkan Aspek Enzimatis Dan Histologis. Skripsi . Departemen Teknologi Hasil Perairan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan. Bogor: Institut Pertanian Bogor
Coates J.,P. (2002). The future challenges facing the development of new antimicrobial drugs. US National Library of Medicine National Institutes of Health, 1(11): 895-910.
Dachriyanus. (2004). Analisis Struktur Senyawa Organik Secara Spektrofotometri, Hal 1-37, Andalas University Press, Padang.
Dinu D, Dumitru IF, Neichifor MT. 2002. Isolation and Charecterization of Two Chatepsin from Muscle Carrasius Aurutus gibelio. Roum Biotechnol , 7(3) : 753-758.
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)*
1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com

## Abstrak
Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3

## Abstract
Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 6 No. 2 (September 2020)
Faisyal Y, Rejeki S, Widowati L.,L. (2016). Pengaruh Padat Tebar Terhadap Pertumbuhan dan Kelulushidupan Ikan Bandeng (Chanos Chanos) di Keramba Jaring Apung di Perairan Terabrasi Desa Kaliwlingi Kabupaten Brebes. Journal of Aquaculture Management and Technology , 5(1): 155-161.
Fentiana N. (2009). Peranan enzim protease jeroan ikan bandeng ( Chanos chanos )   dalam proses kemunduran mutu ikan. Prosiding Seminar Nasional Pengolahan Produk dan Bioteknologi Kelautan : 25-34.
Fessenden, R.J. and J.S. Fessenden. (1986). Kimia Organik Dasar Edisi Ketiga. Jilid 1. Terjemahan oleh A.H. Pudjaatmaka. Erlangga. Jakarta.
Fikri M., Z, Nurhayati T, Salamah E. 2014. Ekstraksi dan Karakterisasi Parsial    Ekstrak Kasar Enzim Katepsin dari Ikan Patin. Jurnal Teknologi dan Industri  Pangan . 25(1) : 119-123.
Gende, B. L., Floris, I., Fritz, R., and Eguaras, M. J. (2008). Antimicrobial Activity of Cinnamon (Cinnamomum zeylanicum) Essential Oil and Its Main Components Against Paenibacillus Larvae From Argentine. Bulletin of Insectology , 61(1): 1-4.
Lopez-Caballero, M., O, Martinez-Alvarez, M.C, Gomez-Guillen, and P. Montero. (2006). Effect of natural compounds alternative to commercial antimelanosics on polyphenol oxidase activity and microbial growth in cultured prawns cultured prawns ( Marsupenaeus tiger ) during chilled storage. Eur. Food Res.Technol. 223:7-15.
Hanada K, Tamai M, Yamagishi M, Ohmura S, Sawaja J & Tanaka I. (2014). Isolation and Characterization of E–64, a New Thiol Protease Inhibitor. Agricultural and Biological Chemistry , 42(3): 523-528.
[KKP] Kementrian Kelautan dan Perikanan. (2017). Statistik Perikanan Tangkap Indonesia menurut Provinsi Tahun 2017. Jakarta (ID): Kementrian Kelautan dan Perikanan.
Kong, J dan Yu, S. (2007). Fourier Transform Infrared Spectroscospic Analysis Of Protein Secondary Structures. Acta biochimica et biophysica sinica 39(8): 549-559.
Mardiah E. (2011). Mekanisme Inhibisi Enzim Polifenol Oksidase Pada Sari Buah Markisa Dengan Sistein Dan Asam Askorba. J.Ris.Kim . 4(2): 32-37.
Nurhayantai T. (2015). Natural Cathepsin Inhibitor to Inhibit Milkfish Deterioration during Chilling Storage. Jurnal Ilmu dan Teknologi Kelautan Tropis , 7(2) : 521-524.
Poernomo A. (1988). Pembuatan Tambak Udang di Indonesia. Departemen Pertanian, Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian, Balai Penelitian Perikanan Budidaya Pantai, Maros.
Siburian ETP, Pramesti D, Nana K. (2012).. Pengaruh suhu dan waktu penyimpanan terhadap pertumbuhan bakteri dan fungi ikan bandeng. Unnes Journal of Life Science, 1(2):101- 105. Vaz-Pires P & Seixas P. (2006). Development of new quality index method (QIM) schemes for cuttlefish (Sepia officinalis) and broadtail shortfin squid (Illex coindetii). Food Control. 17: 942-949.