## PENGARUH PH TERHADAP DEGRADASI PEWARNADIRECT BLUE MENGGUNAKAN JAMUR PELAPUK KAYU (Pleurotus flabellatus)
Niki Rachmanur Husna 1 *, Hasri Hasri 2 , Sudding Sudding 2
1 Mahasiswa Jurusan Kimia FMIPA
2 Jurusan Kimia FMIPA Universitas Negeri Makassar
* email: nikirahma151@gmail.com
Received 11 Oktober 2017
Accepted 28 Nopember 2017

## Abstrak
Pewarna sintetik banyak digunakan dalam industri, terutama industri tekstil karenamemiliki struktur kompleks dan limbahnya sulit terdegradasi. Pemakaian pewarna sintetik meningkat setiap tahunnya, dan berdampak pada peningkatan jumlah bahan pencemar di perairan, menyebabkan terganggunya ekosistem akuatik, sehinggadibutuhkan perhatian yang serius untuk menurunkan konsentrasi limbah cair pewarna dengan memanfaatkanmikroorganisme, oleh karenanya penelitian ini bertujuan untuk menurunkan  kadar  limbah  pewarna  melalui  optimasi  pH  pewarna direct  blue yang  dapat didegradasioleh  enzim  ligninolitik  jamur  pelapuk  kayu.  Variasi  pH direct  blue yang  digunakan adalah3,  4,  5,  6,  7,  8  dan  9.  Rasio  ekstrak  enzim  dan direct  blue yang  digunakan  pada  proses degradasi  adalah  3:1 dengan  konsentrasi  50 ppm,  dikontakkan  selama180  menit  pada  suhu  50 o C. Sisa direct  blue hasil  degradasi  diukur  menggunakan  Spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang 621,80 nm.  Hasil penelitian diperoleh bahwa direct blue terdegradasi secara optimum pada pH 8 dengan efisiensi sebesar 53,45% dengan konsentrasi sisa 23,2714 ppm dan konsentrasi terdegradasi 26,7286 ppm. Kemampuan ini disebabkan adanya enzim ligninolitik yang dihasilkan oleh jamur P. flabellatus yang dapat memutus ikatan azo melalui mekanisme oksidasi.
Katakunci: Pleurotus flabellatus , direct blue, ekstraksi enzim, degradasi

## Abstract
Synthetic dyes  are widely used in industries, especially in textile industry, because it hasa complex structure and it waste is difficult to degraded. The using of synthetic dyestuffs increaseby year to year, and its impacting ison improvement the amount of contaminants in thewater, causing disrupted of aquaticecosystems,so automatically it is needed the serious attention to reducethe concentration of the liquid waste dye be utilizingmicroorganism. Therefore, this research aims to reduce the levels of dye waste based on optimalization of pH thatcan be degraded by enzymes ligninolytic of wood rot fungi ( Pleurotusflabellatus ). The variations pH were3, 4, 5, 6, 7, 8 and 9. The ratio of enzyme extract and dye used was 3:1 with concentration of 50 ppm, contacted for 180 minutest 50 o C. The remaining degradaed of direct blue were measured using a Spectrofotometer UV-Vis at 621,80 nm. The result of reasearch show that direct blue was degraded optimally at pH 8 with an efficiency of 53,45%, residual concentration of 23,2714 ppm and degraded concentration of 26,7286 ppm. The ability is due to the ligninolytic enzyme produced by P. flabellatus fungus that can break the azo bond through the oxidation mechanism.
Keywords: Pleurotus flabellatus, direct blue, enzyme extraction, degradation

## Pendahuluan
Zat  warna  adalah  senyawa  yang mempunyai gugus yang dapat menimbulkan warna
(kromofor)
(Fessenden,  1982).  Pewarna  banyak digunakan dalam berbagai bidang industri,
seperti industri pangan, tekstil dan industri kertas.  Zat  warna  untuk  tekstil  dapat dibedakan  menjadi  dua  jenis  berdasarkan sumbernya,  yaitu  zat  warna  alami  dan sintetik.  Zat  warna  alami  dapat  diperoleh dari  ekstrak  tumbuh-tumbuhan,  namun dengan  variasi  yang  semakin  sedikit  dan cenderung  tidak  stabil,  maka  dibuat berbagai  zat  warna  sintetik  yang  hingga saat  ini  sering  digunakan  pada  industri (Yahdiana,  2011).Beberapa  pewarna  azo yang  sering  digunakan  dalam  industri tekstil  antara  lain direct  blue,  congo  red , dan acid orange (Herlina, 2016).
Pembuangan  air  limbah  tekstil  secara langsung ke lingkungan disamping menimbulkan  persoalan  estetika  juga dapat  mengancam  kelestarian  ekosistem akuatik karena dapat menghambat penetrasi  sinar  matahari  ke  dalam  air sehingga mengganggu aktivitas fotosintesis  dari  mikroalga  (Montano, 2007). Zat warna tekstil umumnya dibuat dari  senyawa  azo  (R–N=N–R)  dan turunannya,  yang  apabila  senyawa  azo terlalu berada di lingkungan akan menjadi sumber penyakit karena sifatnya karsinogen  dan  mutagenik,  maka  perlu dicari alternatif efektif untuk menguraikan limbah tersebut (Widjajanti, 2011).
Pengolahan limbah cair dapat dilakukanmenggunakan  cara  kimia,  fisika dan biologi. Pengolahan air limbah tekstil dengan cara kimia dan fisika cukup efektif untuk  menghilangkan  warna,  akan  tetapi tidak efisien dari segi biaya dan pemakaian bahan kimia serta menimbulkan limbahyang banyak. Untuk itu, penelusuran  metode  pengolahan  limbah cair  tekstil  saat  ini  diarahkan  dengan memanfaatkan  mikroorganisme.  Salah satu  mikroorganisme  yang  potensial dikembangkan  untuk  mengolah  limbah tekstil  adalah  jamur  pendegradasikayu (Sastrawidana, 2012).
Jamur pendegradasi kayu pada kondisi tertentu  menghasilkan  enzim  ligninolitik ekstraseluler tertentu yaitu lignin peroksidase,  mangan  peroksidase,  lakase dan  lain-lain  dalam  berbagai  kombinasi.
Enzim  ligninolitik  yang  dihasilkan  jamur pendegradasi  kayu  ideal  digunakan  untuk biodegradasi organopolutan di lingkungan (Christian, 2005). Berdasarkanhasil kajian Singh  (2013),  diketahui  bahwa  jamur Pleurotus  flabellatus dapat  digunakan dalam  bioremediasi  zat  warna  azo  yang terkontaminasi  dalam  suatu  ekosistem. Kemampuan  jamur  dalam  bioremediasi disebabkan  adanya  enzim  yang  secara efektif dapat menurunkan pewarna toksik. Pleurotus  flabellatus dilaporkan  telah mendekolorisasi  zat  warna direct  blue14 dalam 8 hari.
Faktor-faktoryang mempengaruhi aktivitas  enzim  di  antaranya  adalah konsentrasi  enzim,  konsentrasi  substrat, pH,  suhu,  dan  keberadaan  inhibitor (Murni,  2011).  Ditinjau  dari  kerja  enzim ligninolitik,  enzim  ini  bekerja  secara optimum pada pH 3 – 4 dan terus menurun seiring  peningkatan  nilai  pH  buffer (Dinatha,  2013).  Hasil  penelitian  Asih (2016)  juga  melaporkan  bahwa  aktivitas optimum enzim lakase berada pada pH 3 – 4 dan suhu 35 O C.
Penelitian mengenai degradasi pewarna azo  oleh  jamur  telah  banyak  dilakukan, seperti  yang  dilakukan  oleh  Singh  (2013) yang  melakukan  optimasi  lama  inkubasi degradasi direct  blue oleh  enzim  dari jamur P.  flabellatus pada  pH  yang  tetap, diperoleh  persen  dekolorisasi  sebesar 90,39%  pada  6  jam  inkubasi.  Hal  yang sama juga dilakukan Dinatha (2013) yang menentukan  kondisi  optimum  degradasi limbah tekstil menggunakan jamur Daedaleopsis eff. confragosa meliputi pH, konsentrasi  jamur,  dan  lama  inkubasi. Sejauh  penelusuran  peneliti,  penelitian tentang  pH  optimum  degradasi  pewarna azo  seperti direct  blue oleh  jamur P. flabellatus masih  belum  banyak  dikaji.
Oleh karena itu, perlu dilakukan penelitian mengenai pH optimum dengan memanfaatkan enzim ligninolitiknya sebagai  agen  pendegradasi,  agar  enzim dapat  mendegradasi  pewarna  azo  secara optimal  dan  diharapkan  diperoleh  hasil
degradasi yang aman dibuang ke lingkungan.

## Metode Penelitian
Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah Spektrofotometer UV- Vis Shimadzu UV-1800, pH-meter
Gemmy, sentrifuge Tomy LC-200, autoclave Tomy SX-500, shaker Gerhardt , biological  safety  cabinet , waterbath Memmert,  neraca  analitik, kawat oase, pembakar spiritus, botol kaca, dan  alat-alat  gelas.  Bahan-bahan  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah jamur P. flabellatus , alcohol70%, pewarna direct  blue ,  dekstrosa,  natrium  nitrat (s) , kalium  dihidrogen    fosfat (s) ,  magnesium sulfatheptahidrat (s) ,natrium  asetat (s) ,  asam asetat (l) 0,5 M, aquabides, kapas, wrapping plastic , dan aluminum foil.

## Prosedur Kerja Preparasi sampel
Sebanyak 500 mg zat warna direct blue dilarutkan  ke  dalam  500  mL  aquabides, kemudian  diencerkan  hingga  konsentrasi 500  ppm.  Dari  larutan  ini  dibuat  sampel dengan  konsentrasi  50  ppm  dengan  cara mengencerkannya.  Larutan standar dibuat dengan  variasi  konsentrasi  50,  40,  30,  20 dan  10  ppm.  Salah  satu  larutan  standar akan diukur absorbansinya untuk menentukan
panjang gelombang maksimum  pada  rentang  550-650  nm dengan
menggunakan
alat Spektrofotometer UV-Vis.
Preparasi enzim
a. Pembuatan  Media  Cair  Produksi Enzim
Pembuatan media cair dilakukan dengan  melarutkan  sebanyak  50  gram dekstrosa,  2,06  gram  natrium  nitrat,  1,2 gram  kalium  dihidrogen  fosfatdan  0,5 gram magnesium sulfat heptahidrat dalam air rebusan kentang, kemudian ditambahkan  dengan  aquabides  hingga volume  larutanmenjadi  1  L,  pH  diatur sampai  6.  Larutan  dituang  sebanyak  100
mL  kedalam  erlenmeyer  250  mL,ditutup dengan kapas dan kertas sampul. Larutandisterilkan  dalam  autoklaf  pada suhu  121 0 C  selama  15  menit.  Media  cair didinginkan dan didiamkan selama 24 jam pada suhu kamar (Wuryanti, 2008).
b. Ekstraksi enzim
Ekstraksi  enzim  dari  biakan  jamur dalam media cair dilakukandengan menggunakan  larutan  buffer  asetat  0,2  M pH  4,6  sebanyak  50  mL.  Campuran diletakkan di atas shaker dengan kecepatan 100  rpm  selama  1  jam.  Larutan  dan substrat  didekantasi.  Larutan  dipindahkan ke dalam tabung sentrifus dan didinginkan dalam  lemari  pendingin  untuk  mencegah kerusakan  enzim.  Larutan  selanjutnya disentrifugasi  selama  15  menit  dengan kecepatan  6000  rpm  pada  suhu  4°C (Hanung, 2013). Supernatan yang diperoleh merupakan ekstrak kasar  enzim yang  digunakan  untuk  tahap  selanjutnya yaitu  degradasi  pewarna direct  blue ,  dan dapat  disimpan  pada  suhu  dingin  sampai siap digunakan.
1. Penentuan  pH  optimum  degradasi pewarna direct blue
Penentuan pH optimum pewarna direct blue konsentrasi  50  ppm  yang  akan didegradasi  oleh  enzim  ligninolitik  jamur P. flabellatus dilakukan dengan mencampurkan  enzim  dengan  pewarna yang telah diatur pada variasi  pH 3, 4, 5, 6,  7,  8  dan  9  menggunakan  buffer  asetat, kemudian  didiamkan  selama  180  menit, dan diinkubasi pada suhu 50 o C.
Konsentrasi  akhir  pewarna direct  blue diukur menggunakan alat Spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang maksimum.
2. Penentuan efisiensi degradasi
Penurunan  konsentrasi  pewarna direct blue ditentukandengan cara
membandingkankonsentrasiyang terdegradasi terhadap konsentrasi awal dan dikalikan 100%. Secara matematis persen efisiensi  (%E)  dapat  dihitung  dengan menggunakan rumus (Sukarta, 2013):
%𝐸 = 𝐶 𝑎 −𝐶 𝑠 𝐶 𝑎 × 100% (1)
dengan C a merupakan konsentrasi awal, C s merupakan  konsentrasi  sisa,  dan  %E merupakan  persentase  efisiensi  degradasi pewarna.    Konsentrasi  ditentukan  dengan mengukur absorbansi zat warna yang telah didegradasi  dengan  menggunakan  alat SpektrofotometerUV-Vis  pada  panjang gelombang  maksimum  zat  warna  azo direct blue yang telah diketahui sebelumnya.

## Hasil dan Pembahasan
Jamur P.  flabellatus yang  akan digun a kan sebagai sumber biakan diremajakan  terlebih  dahulu  di  dalam media  PDA  ( Potato  dextrose  agar ). Pembiakan atau peremajaan jamur dilakukan untuk mengoptimalkan pertumbuhan  jamur  setelah  masa  dorman saat  penyimpanan.Pertumbuhan  miselium jamur P. flabellatus pada proses peremajaan  dalam  media  PDA  ( Potato Dextrose  Agar )  menghasilkan  miselium yang menyebar sempurna pada hari ke-14 inkubasi.
Miselium  jamur P.  flabellatus hasil peremajaan  dipindahkan  secara  aseptik pada  media  pertumbuhannya  yaitu  media cair  PDB  ( Potato  dextrose  broth )yang mengandung  nutrisi  dan  mineral  yang berperan  sebagai  penginduksi  enzim ligninolitik.  Media  cair  PDB  diatur  pada pH  6  dengan  menggunakan  buffer  asetat. Hal  ini  dilakukan  untuk  mencegah  enzim terdenaturasi pada pH di bawah atau di atas pH  6  sehingga  enzim  tidak  dapat mengubah substrat.
Enzim yang terdenaturasi  dapat  disebabkan  oleh perubahan  pH  yang  mungkin  terjadi selama proses produksi enzim.
Proses  produksi  enzim  ini  dilakukan dengan  memasukkan  potongan  media PDA  yang  telah  ditumbuhi  miselium, kemudian  dikocok  di  atas shaker untuk mempermudah  difusi  oksigen  ke  dalam medium sehingga kontak antara media dan inokulum  semakin  banyak  dan  homogen (Pangesti, 2012). Setelah dikocok,
diperoleh  campuran  berwarna  kuning kecoklatan (Gambar 1). Hal ini
mengindikasikan bahwa enzim ligninolitik dari jamur telah tersekresi.
Gambar 1. Inokulum jamur P. flabellatus dalam media cair
Ekstraksi  enzim  dari  biakan  jamur dalam  media  cair  dilakukan  dengan menambahkan larutan buffer asetat 0,2 M pH  4,6,  pengocokan  di  atas shaker dan sentrifugasi. Proses ekstraksi enzim dilakukan  untuk  memperoleh  enzim ligninolitik  secara  optimal  yang  terdapat pada jamur. Ekstrak kasar enzim disimpan di  lemari  pendingin  untuk  mencegah kerusakan enzim.
Penentuan  pH  optimum  dilakukan dengan mencampurkan enzim dan pewarna direct  blue konsentrasi  50  ppm, dengan perbandingan  3 : 1 dalam 10 mL, pada  variasi  pH  3-9,  waktu  inkubasi  180 menit  dan  suhu  50 o C.  Konsentrasi  akhir pewarna diukur menggunakan alat Spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang  621,80  nm.  Selengkapnya dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar  2 .  Efisiensi  degradasi  pewarna direct blue pada variasi pH
Optimasi pH ditunjukkan pada Gambar 4. Efisiensi degradasi menurun pada pH 3
0 10 20 30 40 50 60 0 2 4 6 8 10 E fis ie ns i D egr ada si (% ) pH
sampai 6, kemudian meningkat pada pH 7 sampai 8, lalu mengalami penurunan yang sangat  tajam  pada  pH  9.  Sehingga disimpulkan  bahwa  optimal  terdegradasi pada pH 8
Hasil  yang  diperoleh  berbeda  dengan penelitian-penelitian sebelumnya yaitu pH optimum aktivitas enzim lakase berada di daerah asam, dimana dalam penelitian ini diperoleh  pH  optimum  pada  pH  8,  yaitu daerah  basa.  Hasil  penelitian  yang dilakukan  oleh  Asih  (2016),  peningkatan aktivitas  dari  pH  3  hingga  mencapai optimum  pada  pH  4  dan  terus  menurun seiring peningkatan nilai pH buffer. Hasil penenlitian yan sedikit berbeda dilaporkan oleh  Vikineswary  (2006),  bahwa  pH optimum  aktivitas  lakase  yang  dilakukan pada  rentang  pH  4-8  diperoleh  optimum pada pH 5 dan menurun pada pH 6 dan 7, kemudian  mengalami  peningkatan  pada pH  8.  Hal  ini  dapat  disebabkan  karena perbedaan substrat pengujian yang digunakan.  Menurut  Madhavi  (2009) dalam  Asih  (2016)  bahwa  pH  optimum bergantung  pada  substrat  pengujian.Nilai pHoptimum  enzim  lakase  fugi  dengan substrat  peenol  adalah  3-7,  sedangkan untuk substrat ABTS berkisar 3-5.
Asam amino dalam keadaan asam :
+ H 3 N     CH      COOH
R + H 3 N     CH      COO -
R H + +
Kation (A + ) Ion Amfoter (A)
Asam amino dalam keadaan basa : + H 3 N     CH      COO - R Ion Amfoter (A) OH - + H 3 N     CH      COO -

## OH  R
H 2 N     CH      COO -
R H 2 O + Anion (A - ) H 3 N     CH      COO -

## OH  R
Gambar  3. Struktur  asam  amino  dalam keadaan asam dan basa (Poedjiadi, 2012)
Penurunan  pH  yang  terjadi  pada  pH  9 disebabkan karena meningkatnya konsentrasi  [OH - ]  yang  menyebabkan terganggunya aktivator yang dapat
mempengaruhi aktivitas katalitik sisi aktif enzim,  sehingga  enzim  tidak  dapat mengkatalisis penguraian zat warna dalam kondisi ini.
N O CH 3 O CH 3 N S O O Na S O O Na NH 2 O N N S O O S O O Na Na NH 2 O H H S O O Na S O O Na NH 2 O O O CH 3 O CH 3 N N + + 2 Lakase
Gambar 4. Ilustrasi Mekanisme Degradasi  Pewarna Direct  Blue oleh Enzim Lakase(Zille, 2005)
Perubahan  pH  berpengaruh  terhadap perubahan  ionisasi  rantai  samping  asam amino pada sisi aktif, yang berperan dalam menjaga konformasi sisi aktif enzim dalam mengikat  substrat  dan  mengubah  substrat menjadi  produk.  Kondisi  keasaman  (pH) berpengaruh terhadap asam amino penyusun protein enzim. Gugus karboksil pada asam amino cenderung mengikat ion H + pada suasana asam. Hal ini mengakibatkan  gugus  karboksil  bersifat netral, sedangkan gugus amino bermuatan positif. Enzim pada suasana basa membuat gugus  amino  melepaskan  H + sehingga menjadi  muatan  netral,  sedangkan  gugus karboksil bermuatan negatif, dapat dilihat pada Gambar 3.
Perubahan ionisasi asam amino penyusun  protein  enzim  mempengaruhi bentuk  molekul  enzim.  Perubahan  bentuk molekul  dapat  mempengaruhi  aktivitas katalitik enzim (Nelson, 2008 dalam Asih, 2016).  Di  samping  pengaruh  terhadap struktur ion pada enzim, pH rendah dan pH tinggi dapat pula menyebabkan terjadinya proses denaturasi dan ini akan mengakibatkan menurunnya aktivitas enzim (Poedjiadi, 2012).
Proses  degradasi  yang  terjadi  karena adanya  aktivitas  metabolisme  dengan
sistem  enzimatik  yang  menyebabkan pewarna  dimanfaatkan  sebagai  sumber nutrisi  alternatif  enzim  ligninolitik P. flabellatus melalui  aktivitas  katalitiknya sehingga  pewarna  terdegradasi.  Palmieri (2000) dalam Sumarko (2013) menyatakan bahwa  salah  satu  dari  jenis  enzim ligninolitik  yang  dihasilkan  jamur P. flabellatus yaitu  enzim  lakase,  mampu mendegradasi  substrat  fenolik  melalui proses  oksidasi  gugus  fenol  melewati tahap  pembentukan  senyawa  transisi, menghasilkan  senyawa  kuinon,  sebuah derivate  diazen  dan  N 2 .  Berikut  ilustrasi mekanisme degradasi pewarna direct blue 53 oleh enzim lakase.

## Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa jamur P.  flabellatus mampu  mendegradasi pewarna  azo direct  blue secara  optimal pada  pH  8  dengan  efisiensi  penurunan konsentrasi direct blue sebesar 53,4%.

## Saran
1. Perlu dilakukan pemurnian enzim lebih lanjut  agar  diperoleh  kriteria  enzim dengan kemurnian yang tinggi.
2. Perlu  dilakukan  pengujian  aktivitas enzim  yang  akan  digunakana  secara kualitatif dan kuantitatif.

## Daftar Pustaka
Asih,  Sri.  2016.  Produksi,  Purifikasi  dan Karakterisasi  Lakase  dari Pleurotus ostreatus (Ho)  dan Schizophyllum commune (Sc) pada Fermentasi Padat Limbah  Lignoselulosa. Tesis .  Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Christian  V.,  Rshrivastava,  Sukla,  D., Modi,  M.A  dan  Vyas,  B.R.M. 2005.Degradation Of Xenobiotic
Compounds  By  Lignin-Degradibg
White-RotFungi:  Enzymology  And Mechanism Involved. Indian Journal OfExperimental Biology . Vol. 43:301- 312.
Dinatha, Ngurah Mahendra., James Sibarani  dan  I  G.  Mahardika.  2013. Degradasi Limbah Tekstil Menggunakan  Jamur  Lapuk  Putih Daedaleopsis eff. Confragosa . Jurnal Bumi Lestari . Vol. 13 No. 2.
Fessenden,  R.J.  dan  Fessenden  J.S.  1982. Kimia  Organik .  Jakarta:  Penerbit Erlangga.
Hanung  CD.,  Osmond  R.,  Risdianto  H., Suhardi  SH  dan  Setiadi  T.  2013. Optimasi  Produksi  Enzim  Lakase Pada Fermentasi Kultur Padat Menggunakan  Jamur  Pelapuk  Putih
Marasmius sp.  :  Pengaruh  Ukuran Partikel, Kelembapan dan Konsentrasi Cu. Jurnal Selulosa . Vol. 3, No. 2.
Herlina,  Resky.  2016.  Adsorpsi  Zat
Pewarna Azo pada Limbah Pencelupan Benang Sutera Menggunakan Dedak Padi di
Kabupaten  Wajo. Skripsi .  Makassar: Universitas Negeri Makassar.
Montano,  J.G.  2007.  Combination  Of
Advanced  Oxidation  Processes  And
Biological
Treatments For
Commercial  Reactive  Azo  Dyes Removal. Tesis . Bellaterra: Universitat Autonoma De Barcelona.
Murni,  Sri  Wahyu.,  Siti  Diyar  Kholisoh., Tanti  D.L.  dan  Petrissia  E.M.  2011. Produksi,  Karakterisasi  dan  Isolasi Lipase dari Aspergillus niger .
Prosiding  Seminar  Nasional  Teknik Kimia  “Kejuangan” .  ISSN  1693- 4393.
Pangesti,  Nur  Wahyu  Indira.,  Arini Pangastuti dan Estu Retnaningtyas N. 2012.  Pengaruh  Penambahan  Molase pada  Produksi  Enzim  Xilanase  oleh Fungi Aspergillus  niger dengan Substrat  Jerami  Padi. Bioteknologi . Vol. 9 No. 2 : 41-48.
Poedjiadi,  Anna.  2012. Dasar-Dasar
Biokimia . Jakarta: Universitas
Indonesia Press.
Sastrawidana, I D.K., Siti Maryam dan I N. Sukarta.  2012.  Perombakan  Air Limbah  Tekstil  Menggunakan  Jamur Pendegradasi  Kayu  Jenis Polyporus Sp  Teramobil  Pada  Serbuk  Gergaji Kayu. Jurnal  Bumi  Lestari .  Vol.  12, No. 2:382-389.
Singh,  M.  P.,  S.  K.  Vishwakarma  dan  A. K.  Srivastava.  2013.  Bioremediation of Direct  Blue  14 and  Extracellular Ligninolytic  Enzyme  Production  by White  Rot  Fungi: Pleurotus Spp. BioMed Research International .
Volume 2013.
Sukarta, I Nyoman dan I Putu
Sumahandriyani. 2013. Pengaruh konsentrasi Ammonium Sulfat ((NH 4 ) 2 SO 4 Optimasi  Jamur  Jerami Padi  ILS  (Isolat  Lokal  Singaraja) untuk  Biodegradasi  Zat  Warna  Azo Jenis Remazol  Red . Jurnal  Kimia. 7(1).
Sumarko,  Heru  Teguh.,  Sri  Lestari  dan Ratna  Stia  Dewi.  2013.  Deodorisasi Limbah  Cair  Batik  Menggunakan Limbah  Baglog Pleurotus  ostreatus dengan  Kombinasi  Volume  dan Waktu  Inkubasi  Berbeda. Molekul . Vol. 8 No. 2.
Vikineswary, S., Noorlidah Abdullah., M. Renuvathani., M. Sekaran., A. Pandey dan E.B.G. Jones. 2006. Productivity of laccase in Solid Substrate Fermentation  of  Selected  Agro- Residuces by Pycnoporus sanguineus . Bioresource  Technology .  Vol.  97  : 171-177.
Widjajanti,  Endang.,  Regina  Tutik  P  dan M.  Pranjoto  Utomo.  2011.  Pola Adsorpsi  Zeolit  Terhadap  Pewarna
Azo  Metil  Merah  dan  Metil  Jingga. Prosiding Seminar Nasional Penelitian, Pendidikan dan Penerapan .  Yogyakarta:  Universitas Negeri Yogyakarta.
Wuryanti.  2008.  Pengaruh  Penambahan Biotin  Pada  Media  Pertumbuhan Terhadap  Produksi  Sel Aspergillus niger . Bioma . Vol. 10, No. 2.
Yahdiana.  2011.  Studi  Degradasi  Zat warna  Tekstil  Congo  Red  dengan MetodeFotolkatalitik  Menggunakan Suspensi  TiO 2 . Skripsi. Jakarta: Universitas Indonesia.
Zille,  Andrea.,  Barbara  Gornacka.,  Astrid
Rehorek  dan  Artur  Cavaco-Paulo. 2005.  Degradation  of  Azo  Dyes  by Trametes  villosa Laccase  over  Long Periods  of  Oxidative  Conditions. Applied and Enviromental Microbiology . Vol. 71 No. 11.