e- Jurnal Rekayasa dan Teknologi Budidaya Perairan
Volume III No 1 Oktober 2014 ISSN: 2302-3600
PEMANFAATAN EKSTRAK BUAH Rhizophora sp. SEBAGAI ANTI BAKTERI TERHADAP BAKTERI PATOGEN IKAN AIR TAWAR
Herman Apriyanto *† , Esti Harpeni ‡ , Agus Setyawan ‡ , dan Tarsim ‡

## ABSTRAK
Buah Rhizophora sp.  mengandung  berbagai  macam  senyawa  anti  bakteri  dan berpotensi  sebagai  antibiotik  alami.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mempelajari potensi  anti  bakteri  dari  ekstrak  buah Rhizophora sp.  terhadap  beberapa  bakteri patogen pada ikan air tawar . Buah Rhizophora sp. diekstraksi dengan menggunakan tiga  pelarut  yaitu  metanol,  etil  asetat,  dan  heksana.  Ekstrak  diuji  aktivitas  anti bakterinya  terhadap  empat  spesies  bakteri  air  tawar Aeromonas  hydrophila, Edwardsiella  tarda,  Pseudomonas  stutzeri dan Streptococcus  iniae dengan beberapa jenis pengujian yaitu sensitifitas, zona penghambatan, MIC (Konsentrasi Penghambatan  Minimum),  MBC  (Konsentrasi  Bakterisidal  Minimum),  toksisitas dan  ITC ( Inhibition Time Course) . Hasil  pengujian menunjukkan bahwa ekstrak buah Rhizophora sp.  yang  diekstraksi  dengan  etil  asetat,  memiliki  kemampuan paling  besar  untuk  menghambat  pertumbuhan  bakteri S.  iniae dengan  nilai  500 mg/L  dan  MBC  sebesar  600  mg/L.  Pengujian  toksisitas  dengan  BSLT  ( Brine Shrimp Lethality Test ) ekstrak buah Rhizophora sp. dengan etil asetat bersifat toksik dengan nilai LC 50 610,9 mg/L (< 1000 mg/L). Dan pengujian ITC selama 24 jam tidak menghasilkan penghambatan terhadap pertumbuhan S. iniae .
Kata kunci : antibakteri, mangrove, polaritas, patogen, in vitro

## Pendahuluan
Penyakit merupakan salah satu pembatas  keberhasilan  usaha  budidaya perikanan  yang  diakibatkan  oleh  virus, jamur,  parasit,  dan  juga  bakteri (Purwaningsih  dan  Taukhid,  2010). Beberapa penyakit bakterial yang sering
* Mahasiswa Jurusan Budidaya Perairan Universitas lampu n g
† Email : MidzanAprian@gmail.com
‡ Dosen Jurusan Budidaya Perairan Universitas lampung Alamat  :  Jurusan  Budidaya  Perairan,  Fakultas  Pertanian,  Universitas  Lampung  Jl.  Soemantri Brojonegoro Gedong Meneng No. 1 Bandar Lampung 35145
menyerang ikan dan patogennya antara lain Aeromonas sp . penyebab  penyakit aeromoniasis pada ikan air tawar seperti lele  ( Clarias sp.),  ikan  mas  ( Cyprinus carpio ),  dan  gurame  ( Osphronemus gouramy )  (Jayavignesh et  al. ,  2011),
Streptococcus sp.  penyebab  penyakit
streptococcosis pada nila
290                                                                  Pemanfaatan ekstrak buah rhizopora
( Oreochromis  niloticus )  (Purwaningsih dan  Taukhid,  2010),  dan Edwarsiella sp . penyebab  penyakit    edwardsiellosis (Nadirah, 2012).
Selama ini pencegahan dan pengobatan terhadap  serangan  bakteri  dilakukan dengan pemberian antibiotik dan bahan kimia  yang  residunya  bisa  berdampak buruk  terhadap  lingkungan  perairan. Akan tetapi pemberian antibiotik secara terus  menerus  dapat  menyebabkan organisme  patogen  menjadi  resisten,
sehingga penggunaan
antibiotik menjadi  tidak  efektif  (Trianto  dkk.,
2004). Salah  satu  alternatif  yang  dapat digunakan  untuk  mengatasi  serangan penyakit bakterial adalah dengan menggunakan  antibiotik  alami  dari tumbuhan yang dapat dijadikan sebagai antibakteri,  karena  antibiotik  alami memiliki  keunggulan  mudah  didapat, ramah lingkungan dan murah (Wardani dkk., 2012).  Salah satu tumbuhan yang memiliki  potensi  sebagai  antibiotik alami adalah mangrove Rhizophora sp.
karena mengandung senyawa
antibakteri  seperti  alkaloid,  saponin, flavonoid dan juga tanin (Rohaeti dkk.,
2010). Rhizophora sp. telah banyak
dimanfaatkan  oleh  masyarakat  pesisir untuk  pengobatan  alami  seperti  pada bagian  kulit  kayu,  bunga,  dan  daunnya (Purnobasuki,  2004).    Bagian  lain  dari Rhizophora sp. yang dapat dimanfaatkan  adalah  buahnya  yang merupakan tempat penyimpanan cadangan  makanan.  Bagian  ini  juga diduga  mengandung  senyawa-senyawa antibakteri yang berguna bagi pengobatan infeksi oleh bakteri
(Priyono,  2010).  Oleh  karena  itu penelitian  ini  bertujuan  untuk  melihat potensi antibakteri  buah Rhizophora sp. terhadap  bakteri-bakteri  patogen  pada
ikan  air  tawar.  Penelitian  ini  penting dilakukan untuk membuka potensi baru penggunaan bahan-bahan alamiah untuk pengobatan penyakit ikan.

## Bahan dan Metode
Ekstraksi  Buah  Mangrove Rhizophora
sp. Pembuatan  ekstrak  dilakukan  dengan menggunakan metode maserasi (Wardani  dkk.,  2012).  Buah  yang matang  (berwarna  hijau  kecoklatan) dicuci sampai bersih kemudian dikeringkan pada suhu ruangan, selanjutnya buah dihaluskan menggunakan blender sampai didapatkan bubuk halus.
Proses    ekstraksi    dilakukan    dengan merendam  500  gram  bubuk  buah Rhizophora sp.  dengan  3  jenis  pelarut yaitu  hexan,  etil  asetat  dan  metanol masing-masing  sebanyak  2500  ml selama  2x24  jam.  Larutan    disaring dengan  menggunakan  kertas  saring (Whatman) dan dievaporasi menggunakan vacum evaporator sehingga  didapatkan    ekstrak  buah Rhizophora sp. Uji Sensitivitas Uji sensitivitas bertujuan untuk mengetahui  potensi  antibakteri  yang terkandung  di  dalam  ekstrak  buah Rhizophora sp.  murni  yang  dilarutkan menggunakan 3 pelarut berbeda terhadap bakteri Aeromonas hydrophilla, Edwardsiella tarda, Pseudomonas stutzeri, dan Streptococcus  iniae dengan  metode difusi  ( diffusion  test )  menggunakan kertas  cakram.  Sebanyak  20 𝜇𝑙 isolat cair bakteri uji masing – masing dengan kepadatan  10 7 cfu/ml  diteteskan    pada media  TSA  ( Tryptic  Soy  Agar )  lalu diratakan  dengan spreader .  Kertas cakram  dengan  diameter  6 mm  yang telah direndam di dalam masing-masing
ekstrak  buah Rhizophora sp  selama  15 menit,  kemudian    diletakkan    pada permukaan  media  TSA dan diinkubasi selama  18-24  jam.  Pengamatan  Uji sensitivitas  dilakukan  dengan  melihat zona  hambat  ekstrak  buah Rhizophora sp.  yang  terbentuk  terhadap  bakteri A. hydrophilla, E. tarda, P. stutzeri, dan S. iniae. Hasil  dari  uji  sensitivitas  yg menunjukkan diameter terbesar dipakai di dalam uji zona hambat.

## Uji Zona Hambat
Uji  zona  hambat  dilakukan  dengan menggunakan  metode difusi. Sebanyak 20  µl  isolat  cair  bakteri  hasil  uji sensitivitas  dengan  kepadatan  10 7 cfu/ml diteteskan  pada media TSA lalu diratakan  dengan spreader .  Kertas cakram  dengan  diameter  6 mm yang telah  direndam  selama  15  menit  di dalam  ekstrak  buah Rhizophora sp. pada  konsentrasi  100,  200,  300,  400, 500 dan 600 mg/L, kemudian ditempelkan pada TSA.  Kontrol positif dilakukan  dengan  memberikan  kertas cakram yang  direndam antibiotik
oxytetracycline, sedangkan kontrol negatif  berupa  kertas  cakram  netral (hanya  diberi  akuades).    Setelah diinkubasi  selama  24  jam,  diameter zona  hambat  yang  terbentuk  di  sekitar kertas  cakram  diukur  dengan  jangka sorong. Uji MIC (Minimum Inhibitory Concentration) Uji  MIC  bertujuan  untuk  mencari konsentrasi terendah bahan anti bakteri yang  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri.  Langkah  awal  yang  dilakukan yaitu memasukkan 4,5 ml media MHB ( Mueller-Hinton  Broth )  ke  dalam  8 buah  tabung  reaksi.    Ekstrak  buah Rhizophora sp. dengan konsentrasi 100, 200,  300,  400,  500,  600  mg/L,  dan kontrol positif (antibiotik oxytetracyline )  dimasukkan  sebanyak
0,5 ml ke dalam masing-masing tabung reaksi.  Kemudian  suspensi  bakteri uji dengan  kepadatan  10 7 cfu/ml  sebanyak 0,1 ml ditambahkan dan diinkubasi pada suhu  ruang  selama  24  jam.  Hasil pengamatan dibandingkan dengan larutan  pembanding  (larutan  MHB  dan ekstrak)  sehingga  dapat  diketahui adanya  media  yang  jernih  yang menunjukkan nilai MIC.
Uji MBC (Minimum  Bactericidal Concentration) Penentuan  MBC  dapat dilakukan setelah  menginokulasikan  larutan  dari tabung  MIC  terjernih  pada  media.
Diambil  0,1  ml  suspensi  bakteri  dari tabung pada perlakuan
yang menunjukkan  nilai  MIC,  kemudian ditumbuhkan  dalam  medium  TSA. Diinkubasi  pada  suhu  ruang  selama  24 jam.    Setelah  diinkubasi,  dihitung jumlah koloni yang tumbuh pada TSA. Nilai  MBC  ditentukan  dari  konsentrasi terendah  ekstrak  yang  menunjukkan tidak  adanya  pertumbuhan  koloni  pada cawan petri.
Uji Toksisitas (Brine Shrimp Lethality Test)
Uji  toksisitas  yang  digunakan  adalah Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT) yang  merupakan  salah  satu  metode  uji toksisitas yang banyak digunakan dalam penelusuran  senyawa  bioaktif  yang bersifat  toksik  dari  bahan  alam  dengan menggunakan Artemia salina (Juniarti dkk.,  2009).  Sampel  yang  akan  diuji BSLT adalah 0,5 : 1 : 1,5 : 2 : 2,5 : 3 kali dari  hasil  uji  MIC  dengan  masing- masing  3  kali  ulangan.  Penambahan larutan ekstrak dan air laut sampai 2 ml. Larva A.  salina dimasukkan  masing- masing  20  ekor  dengan  menggunakan pipet  ke  dalam  wadah  uji.  Larutan dibiarkan  selama  24  jam,  kemudian dihitung  jumlah  larva  yang  hidup  dan mati  dari  tiap  perlakuan.  Perhitungan
dengan  log  konsentrasi  sebagai  sumbu X terhadap mortalitas sebagai sumbu Y. Nilai  LC 50 merupakan  konsentrasi dimana zat menyebabkan kematian 50% yang diperoleh dengan memakai persamaan  regresi  linier  y  =  a  +  bx. Suatu zat dikatakan aktif atau toksik bila nilai  LC 50 <  1000  ppm  (Juniarti  dkk., 2009).
Uji  Inhibition Time Course (ITC) Uji Inhibition  Time  Course bertujuan mengamati  kecepatan  ekstrak  dapat menghambat bakteri. Uji inhibition time course dengan membuat  media  TSB ( Tryptic Soy Broth ), lalu dimasukkan ke dalam tiap tabung erlenmayer sebanyak 50 ml, kemudian ekstrak dimasukkan ke dalam tiap tabung erlenmayer sehingga dosis  ekstrak  menjadi  1xMIC,  2xMIC, dan  3xMIC,  dengan  kontrol  positif menggunakan oxytetracyline, dan kontrol negatif tanpa pemberian antibiotik.  Kemudian,  sebanyak  50  µl dengan  kepadatan  10 5 sel/ml  inokulasi bakteri  yang  telah  disiapkan  1  hari sebelumnya dimasukan
kedalam erlenmayer. Pengamatan dilakukan
setiap  3  jam  sekali  selama  24  jam menggunakan spektrofotometer.

## Hasil dan Pembahasan

## Uji Sensitivitas
Hasil  uji  sensitivitas  menunjukkan hanya  bakteri S.  iniae yang  sensitif terhadap  ekstrak  buah Rhizophora sp. dengan  tiga  pelarut  yang  berbeda. Sedangkan E.  tarda hanya  sensitif terhadap  ekstrak  buah Rhizophora sp. dengan  pelarut  heksana  (Tabel  1). Suada  (2012)  mengkategorikan  daya hambat suatu bahan dengan berdasarkan diameter zona hambatnya,  yaitu sangat kuat  (>  20  mm),  kuat  (10  -  20  mm), sedang  (5  –  10  mm),  dan  lemah  (<  5 mm). Berdasarkan pada kategori respon hambat tersebut, ekstrak buah Rhizophora dengan  pelarut  etil  asetat memiliki  respon  hambat  yang  sangat kuat  terhadap S.  iniae karena  diameter zona  hambatnya  lebih  dari  20  mm. Sedangkan  ekstrak  dengan  pelarut metana dan heksana tidak menunjukkan adanya zona hambat terhadap bakteri S. iniae .
Tabel 1. Diameter zona hambat (mm) ekstrak buah Rhizophora sp. terhadap 4 jenis bakteri Ekstrak Buah
Rhizophora sp. Jenis Bakteri A. hydrophilla E. tarda P. stutzeri S. iniae Metanol - - - 19,35 mm Etil Asetat - - - 28,50 mm Heksana - 6,25 mm - 11,5 mm Bakteri Streptococcus  iniae ,  yang merupakan  gram-positif  (Locke et  al.,
2007), cenderung lebih sensitif terhadap komponen antibakteri. Hal ini disebabkan oleh struktur dinding selnya yang lebih sederhana sehingga memudahkaan senyawa antibakteri masuk  ke  dalam  sel  dan  menemukan sasaran untuk bekerja. Sedangkan pada
bakteri E. tarda , yang merupakan gram- negatif  (Park et  al., 2012)  struktur selnya lebih kompleks dan berlapis tiga, yaitu lapisan luar yang berupa lipoprotein ,  lapisaan  tengah  berupa lipopolisakarida ,  dan  lapisan  dalam yang  berupa peptidoglikan . Hal  inilah yang  menyebabkan  bakteri S.  iniae
memiliki  daerah  hambatan  yang  lebih besar dibandingkan bakteri E. tarda.

## Uji Zona Hambat
Hasil  uji  zona  hambat  menunjukkan semakin tinggi konsentrasi ekstrak yang digunakan akan menghasilkan diameter zona hambat  yang semakin luas (Tabel 2).  Zona  hambat  yang  terbentuk  pada ke-6  konsentrasi  ekstrak  sangat  lemah (<  5  mm)  (Suada,  2012).  Pada konsentrasi  100  mg/L  tidak  terbentuk zona hambat sama sekali. Zona hambat terbesar  terdapat  pada  konsentrasi  600 mg/L  sekitar  2,93  mm.  Namun  masih sangat  jauh  bila  dibandingkan  dengan diameter  zona  hambat  pada  kontrol
positif  yang  menggunakan  antibiotik OTC, yakni sekitar 28,75 mm.

## Uji MIC
Hasil  uji  MIC (Minimum  Inhibitory Concentration )  ditunjukkan  dengan media  MHB  yang  jernih  dengan konsentrasi  terendah  (Tabel  3).  Pada konsentrasi  200  –  600  mg/L  MHB terlihat keruh sedangkan pada konsentrasi  500  mg/L  dan  600  mg/L MHB  terlihat  jernih.  Hal  menunjukkan nilai MIC terdapat pada konsentrasi 500 mg/L.  MHB  yang  keruh  menunjukkan adanya bakteri yang tumbuh, sedangkan MHB yang bening menunjukkan bakteri yang tidak tumbuh.
Tabel  2.    Diameter  zona  hambat  ekstrak Rhizophora sp.  terhadap  bakteri Streptococcus iniae Konsentrasi ekstrak (mg/L) Diameter Zona Hambat (mm) Kontrol ( + ) (OTC 300 mg/L) 28,75 Kontrol ( - ) 0 100 0 200 1,03 300 1,87 400 2,25 500 2,65 600 2,93

## Uji MBC
Hasil  inokulasi  pada  konsentrasi  600 mg/L  tidak  ada  bakteri  yang  tumbuh,
sementara  pada  konsentrasi  500  mg/L bakteri  masih  tumbuh  (Tabel  4).  Pada media TSA yang di inokulasikan MHB konsentrasi ekstrak 500 mg/L menunjukkan  sedikit  koloni  bakteri yang  tumbuh.  Sedangkan  pada  TSA yang telah diinokulasikan MHB konsentrasi  ekstrak  600  mg/L  tidak terdapat  koloni  bakteri  yang  tumbuh. Hal  ini  dapat  disimpulkan  ekstrak dengan konsentrasi 600 mg/L merupakan  nilai  MBC  karena  mampu membunuh bakteri secara total.
Tabel  3.    Hasil  Uji  MIC  Bakteri S.  iniae dengan  konsentrasi  Ekstrak  200  –  600
mg/L.  Tanda  (+)  menunjukkan  MHB  yang  keruh,  sedangkan  tanda  (-) menunjukkan MHB yang jernih Konsentrasi Ekstrak (mg/L) Pertumbuhan Bakteri Kontrol (+) - Kontrol (-) + 200 + 300 + 400 + 500 - 600 -
294                                                                  Pemanfaatan ekstrak buah rhizopora
Tabel 4.  Hasil Uji MBC Bakteri S. iniae dengan konsentrasi ekstrak 500 dan 600 mg/L.  Tanda  (+)  menunjukkan  masih  adanya  koloni  bakteri  yang tumbuh, sedangkan tanda (-) menunjukkan tidak ada koloni bakteri yang terlihat.
Konsentrasi Ekstrak (mg/L) Pertumbuhan Bakteri Kontrol (+) - Kontrol (-) + 500 + 600 -
Uji  Toksisitas  (Brine  Shrimp  Lethality Test)
Semakin  tinggi  konsentrasi,  semakin tinggi mortalitas artemia. Hasil pengamatan  dan  perhitungan  hasil  uji
toksisitas dari penelitian ini menunjukan  ekstrak  buah Rhizophora sp.  bersifat  toksik  dengan  nilai  LC 50 610,9  mg/L  (<  1000  mg/L)  (Juniarti dkk., 2009) (Tabel 5).
Tabel 5.  Hasil perhitungan uji toksisitas Konsentrasi (mg/L) Angka hidup Angka mati Akumulasi mati Akumulasi hidup Akumulasi mati / total Mortalitas LC 50 0 60 0 0 202 0/202 0 % 610,9 mg/L 250 37 23 23 142 23/165 14 % 500 31 29 52 105 52/157 33 % 750 24 36 88 74 88/162 54 % 1000 19 41 129 50 129/179 72 % 1250 17 43 172 31 172/203 85 % 1500 14 46 218 14 218/232 94 % Tingginya  mortalitas  pada  artemia terjadi karena tingginya aktivitas bioaktif  dari  ekstrak  buah Rhizophora sp.  yang  mengandung  senyawa  seperti alkaloid,  saponin,  dan  fenolik  (Rohaeti dkk.,  2010).  Adanya  senyawa-senyawa tersebut, dengan kadar tertentu,
memiliki  potensi  dalam  membunuh Artemia salina. Semakin tinggi konsentrasi  ekstrak  yang  digunakan maka  akan  semakin  tinggi  mortalitas artemia. Dengan nilai LC 50 610,9 mg/L menunjukkan  ekstrak Rhizophora sp. bersifat toksik (LC 50 < 1000 mg/L) dan
tidak  dapat  digunakan  pada  uji In  vivo (uji tantang pada ikan uji.
Uji Inhibition Time Course
Pada konsentrasi ekstrak Rhizophora sp. 1x MIC (500 mg/L) dan 3x MIC (1500 mg/L)  hampir  menyamai  pertumbuhan pada kontrol negatif. Pertumbuhan pada konsentrasi  ekstrak  2x  MIC  (1000 mg/L)  dibawah  konsentrasi  ekstrak  1x MIC dan 3x MIC. Sedangkan pertumbuhan  bakteri  pada  kontrol positif (antibiotik oxytetracycline ) terjadi  secara  perlahan  namun  masih jauh  dibawah  konsentrasi  ekstrak  1x MIC, 2x MIC, dan 3x MIC (Gambar 1)
Gambar 1. Kepadatan bakteri uji inhibition time course bakteri Streptococcus iniae selama 24 jam
Pertumbuhan  bakteri  terus  meningkat setiap  3  jam  pada  konsentrasi  ekstrak 500  mg/L  (1xMIC),  1000  mg/L  (2x MIC),  dan  1500  mg/L  (3x  MIC). Peningkatan  terpesat  dimulai  pada  jam ke-6  dan  terus  naik  hingga  jam  ke-24. Setelah  24  jam,  grafik  pertumbuhan bakteri  pada  tiga  dosis  ekstrak  masih menunjukkan kenaikan (fase pertumbuhan  eksponensial)  dan  belum menunjukkan adanya penurunan pertumbuhan  (fase  kematian)  ataupun pertumbuhan yang konstan (fase stasioner) bakteri. Hal ini kemungkinan disebabkan karena ekstrak buah Rhizophora ini  memiliki  waktu  mulai hambat  yang  lama  (>  24  jam).  Hal  ini sangat kontras dengan antibiotik oxytetracycline (kontrol  positif)  yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri S. iniae pada 3 jam pengamatan pertama. Disamping itu, kelemahan dari alat  Spektrofotometer  adalah  bakteri- bakteri  yang  telah  mati  ikut  terhitung juga,  sehingga  tidak  dapat  diketahui adanya  penurunan  jumlah  kepadatan, tapi  grafik  akan  menunjukkan  keadaan
yang  konstan  jika  kepadatan  bakteri tidak  bertambah  lagi.  Setelah  24  jam kepadatan  bakteri  pada  dosis  ekstrak 500  mg/L  (1MIC)  dan  1500  mg/L  (3 MIC)  berada  di  sekitar  3,5x10 9 sel/ml, sedangkan  pada  dosis  1000  mg/L  (2
MIC) kepadatan bakteri sekitar
3x10 9 sel/ml.  Pada  kontrol  positif, bakteri S. iniae mengalami peningkatan kepadatan walaupun tidak terlalu tinggi, yaitu  masih  dibawah  5x10 7 sel/ml setelah 24 jam.

## Kesimpulan
Ekstrak  buah Rhizopora sp.  mampu menghambat  bakteri S. iniae meskipun respon  hambatnya  sangat  lemah,  uji toksisitas  menunjukkan  ekstrak  buah Rhizopora sp.  bersifat  toksik  sehingga tidak dapat digunakan pada uji In vivo, tetapi  dapat  dikembangkan  menjadi obat  antikanker.  Uji Inhibition  Time Course selama 24 jam belum menunjukan waktu ekstrak buah Rhizopora sp.  menunjukkan  aktivitas dalam menghambat pertumbuhan bakteri S. iniae

## DAFTAR PUSTAKA
Jayavignesh,  V.,  K.  Sendesh  Kannan,
and Abhijith D. Bath. 2011. Biochemical  Characterization  and Cytotoxicity  of  the Aeromonas hydrophila Isolated  from  Catfish. Archives of Applied Science Research 3: 85-93. Juniarti,  D.,  Osmeli,  dan  Yuhernita. 2009. Kandungan Kimia, Uji Toksisitas  (Brine  Shrimp  Lethality Test) dan Antioksidan (1,1-diphenyl-
2-pikrilhydrazyl)  dari  Ekstrak  Daun Saga ( Abrus precatorius L.). Makara Sains 13: 50-54. Locke,  J.B.,  Kelly  M.  Colvin,  Nissi Varki,  Mike  R.  Vicknair,  Victor Nizet, and John T. Buchanan. 2007.
Streptococcus  iniae B-Hemolysin Streptolysin  S  is  a  Virulence  Factor in Fish Infection. Disease of Aquatic
Organisms 76: 17-26. Nadirah, M., Najiah M., and Teng S.Y. 2012. Characterization of Edwardsiella  tarda Isolated  from Asian  Seabass, Lates  calcarifer . International Food Research Journal
19: 1247-1252.
Park, S. B., T. Aoki and T.S. Jung. 2012.
Pathogenesis  of  and  Strategies  for Preventing Edwardsiella
tarda
Infections in Fish. Veterinary Research 43:67-72. Priyono,  A.  2010.  Panduan  Praktis Teknik  Rehabilitasi  Mangrove  di Kawasan Pesisir Indonesia. Kesemat. Semarang. 64 p. Purnobasuki, H. 2004. Potensi
Mangrove  Sebagai  Tanaman  Obat. Biota 9: 125-126.
Purwaningsih,  U  dan  Taukhid.  2010. Vaksin  Anti Streptococcus spp.
Inaktivasi  Melalui  Heatkilled  untuk
Pencegahan Penyakit Streptococcosis  Pada  Ikan  Nila ( Oreochromis  niloticus ).  Prosiding
Forum Inovasi Teknologi Akuakultur. p.901-904 Rohaeti, E., Batubara, I., Lieke, A., dan Darusman, LK. 2010. Potensi Ekstrak Rhizophora sp.  Sebagai Inhibitor Tirosinase. Prosiding Semnas  Sains  III.  IPB,  Bogor,  13 November 2010. p. 196-201 Suada, I. K. 2012. Keragaman Aktivitas Antifungi Biota  Laut terhadap
Fusarium  oxysporum f.sp.  vanillae Penyebab  Busuk  Batang  Vanili. Jurnal Bumi Lestari 12: 66-70. Trianto  A.  Wibowo,E.  Suryono,  dan Sapta  R.  2004.  Ekstrak  daun mangrove Aegiceras corbiculatum sebagai  antibakteri Vibrio  harveyi dan Vibrio  parahaemolyticus .  Ilmu kelautan 9:186-189 .
Wardani,    R.K.,    Wahju  T.,    dan  Budi
S.R.  2012.  Uji  Efektivitas  Ekstrak
Daun  Sirih  Merah  ( Piper rocatum ) terhadap bakteri Aeromonas hydrophila secara  In  Vitro.  Jurnal Ilmiah dan Kelautan 4: 59-64