IDENTIFIKASI DAN UJI POTENSI KAPANG LIPOLITIK SEBAGAI PEMBELAJARAN IKUIRI

## Ervina Mukharomah
Prodi Pendidikan Biologi Universitas Muhammadiyah Palembang *email: Mukharomah.ervina@gmail.com

## ABSTRACT
This  study  aims  to  invite  students  to  dig  up  information  around  them.  So  that  students  can  reveal  the information obtained by doing experiments with inquiry learning. This research has been done in 2016 in Unsri labolatorium,  the  result  of  this  research  found  that  there  are  8  isolates  of  mold.  Isolate  V1  has  the  same characteristic as V8, isolate V2 has the same characteristics as V3, V6 and V7, whereas the isolate V4 has the same characteristic as V5. Therefore, based on the identification result, it is stated that the isolates of V1 with V8 are  Aspergilus fumigatus, hereinafter called Aspergilus fumigatus (V1).  Isolates of mold V2,  V3,  V6 and V7  are  Cylindrocladium  sp  hereinafter  called  Cylindrocladium  sp  (V2).  Isolates  of  mold  V4  and  V5  are  the same isolate and identified as Fumago sp hereinafter called Fumago sp (V4).
Keywords: Inquiry Learning, Lipolithic Kapang

## Pendahuluan
Pembelajaran  saat  ini  sangat  mengutamakan keaktifan  siswa  untuk  menggali  informasi  dari lingkungan sekitarnya, oleh sebab itu pembelajaran yang  tepat  yang  dipetapkan  adalah  model  ikuiri. Ismawati  (2007)  Pembelajaran  inkuiri  merupakan mengatakan  “bahwa    inkuiri  berasal  dari  kata inquire yang berarti menanyakan, meminta keterangan,  atau  penyelidikan,  dan  inkuiri  berarti penyelidikan. Siswa  diprogramkan agar selalu aktif secara mental maupun fisik”. Materi yang disajikan guru bukan begitu saja di berikan dan diterima oleh siswa,  tetapi  siswa  diusah  akan  sedemikian  rupa seingga  mereka  memperoleh  berbagai  pengalaman dalam  rangka  menemukan  sendiri    konsep–konsep yang direncanakan oleh guru.
Penelitian  ini  menghubungkan  penelitian dalam  mengidentifikasi  kapang  Lipolitik  yang berasal  dari  limbah  pengolahan  minyak  kelapa sawit  dengan  metode  pembelajaran  inkuiri.  Proses pengolahan  kelapa  sawit  menjadi  minyak  kelapa sawit  akan  menghasilkan  limbah  dalam  jumlah yang  cukup  besar.  Untuk  menghasilkan  satu  ton minyak  kelapa  sawit  dihasilkan  dua  setengah  ton limbah  cair  pabrik  kelapa  sawit.  Limbah  cair tersebut  berasal  dari  proses  perebusan,  klarifikasi dan  hidrosiklon.  Salah  satu  proses  yang  paling banyak  menghasilkan  limbah  adalah  proses bleaching/ pemucatan.  Pada  pemucatan crude  palm oil (CPO)menggunakan bleaching  earth akan
menyebabkan  warna  dari  CPO  tersebut  menjadi lebih terang. Hal ini dikarenakan bentonit menyerap sebagian  dari  karoteid  yang  terkandung  dari  CPO dan  juga  minyak  Hasil  dari  proses  penjernihan minyak kelapa sawit menggunakan Bleaching earth ini  menimbulkan  limbah  buangan  yang  menumpuk dan  merusak  lingkungan  apabila  tidak  segera didegradasi (Nasution, 2004).
Mikroorganisme  yang  dapat  menghasilkan lipase  adalah  bakteri,  kapang,  serta  aktinomisetes. Kapang  lebih  dikenal  sebagai  agen  produksi  lipase potensial  dan  merupakan  sumber  lipase  yang terbaik  dan  banyak  dipilih  untuk  digunakan  dalam aplikasi industri (Pramitasari dkk, 2012).
Mikroba yang bekerja dalam proses biodegradasi  di  lahan  tercemar  minyak  terdiri  atas beberapa jenis mikroba yang bekerja saling sinergis. Untuk  itu  perlu  dilakukan  isolasi  dan  identifikasi kapang indigenous yang  dapat  digunakan  untuk mendegradasi  lipid  dalam  limbah  SBE.  Agar pengolahan  limbah  SBE    yang  masih  banyak mengandung lipid berlangsung secara efektif, maka langkah  awal  yang  perlu  dilakukan  adalah  mencari kapang lipolitik. Pada penelitian ini akan dilakukan isolasi,  menguji  kemampuan  kapang  pendegradasi lipid  dan  menguji  sinergis  antar  kapang  yang diambil di area pembuangan limbah. Masalah dalam penelitian  ini  yaitu  apakah  di  dalam  limbah pengolahan  minyak  kelapa  sawit  terdapat  kapang lipolitik.

## METODOLOGI PENELITIAN
Alat-alat  yang digunakan dalam penelitian ini adalah  alumunium  foil,  autoklaf,  buku  catatan, bunsen,  cawan  petri,  erlenmeyer, hot  plate , inkubator,  jarum  ose,  kamera,  kapas, magnetic stirrer ,  neraca  analitik,  kertas  cakram  ( paperdisk ), kertas  label,  ph  meter,  pipet  sirelogis,  pipet  tetes, shaker,  tabung  reaksi,  timbangan  analitik,  gelas ukur dan tisu gulung.
Bahan-bahan  yang  diperlukan  yaitu  aquades steril, limbah SBE dari industri minyak kelapa sawit yang  berasal  dari  areal  PT.  Wilmar  Sumatera Selatan,  medium Potato  Dextrose  Agar (PDA), Potato  Dextrose  Borth (PDB), Mineral  medium (MM), Crude Palm Oil (CPO), Indikator
Bromotymol Blue, lactofenol dan alkohol 70 %.

## Cara Kerja Pengambilan Sampel
Sampel  limbah  SBE  dikoleksi  di  daerah industri  pengolahan  minyak  kelapa  sawit  PT  SAP Wilmar  Group  Sumatera  Selatan.  Pengambilan sampel limbah SBE menggunakan metode Random samplin g. Pengambilan sampel limbah SBE diambil dengan kedalaman kurang dari 30 cm. Sampel yang telah  diambil  dimasukkan  kedalam  kantong  plastik steril  yang  diberi  label  kemudian  disimpan  dalam coolbox sebelum isolasi dikerjakan.

## Pembuatan Media PDA
Sebanyak  39  g  media  PDA,  masing-masing dilarutkan  dalam  1000  ml  aquadest  di  dalam erlenmeyer  dan  diaduk  hingga  merata.  Kemudian dipanaskan  di  alat  pemanas  listrik  ( hot  plate )  yang dilengkapi magnetic  stirer hingga  mendidih. Setelah  mendidih,  media  di  masukkan  ke  dalam tabung  reaksi  masing-masing  sebanyak  10  ml  dan tabung  reaksi  ditutup  dengan  menggunakan  kapas. Semua  media  yang  sudah  dibuat  akan  disterilkan dengan  menggunakan  autoklaf  pada  suhu  121 o C, tekanan 15 lb selama 15 menit. Begitu juga dengan alat yang akan digunakan (Ganjar, 1999).

## Pembuatan Media PDB (Potato Dextrose Both)
Ekstrak  potato  sebanyak  200  g  dilarutkan dalam  aquadest  sebanyak  1000  dimasak  hingga mendidih dengan menggunakan alat pemanas listrik hingga  mendidih.  Selanjutnya  ekstrak  potato dipisahkan  dengan  ampasnya  kemudian  ditambah 20 g glukosa dan dimasukan ke dalam tabung reaksi masing-masing  5  mL  dan  tabung  ditutup  dengan kapas dan aluminium foil. Medium PDB disterilkan menggunakan  autoklaf    sampai  suhu  121 0 C  pada
tekanan 1 atm selama 15 menit hail modifikasi dari (Munawar, 1999).

## Isolasi dan Pemurnian Kapang Lipolitik
Masing-masing  sampel  SBE  sebanyak  5  g dimasukkan  ke  dalam  Erlenmayer  yang  berisi  45 mL medium PDB, selanjutnya diinkubasi pada suhu kamar  selama  24  jam  dan  diagitasi  dengan kecepatan  150  rpm  selama  7  hari  atau  sampai menunjukan pertumbuhan yang  dicirikan campuran CPO  dan  MM  menunjukkan  ciri  berbeda  seperti terdapat  gelembung.  Perubahan  ini  diamati  setiap hari (modifikasi dari Munawar, 1999).

## Isolasi
Masing-masing  sampel  dalam  MM  yang  telah menunjukkan  ciri  tertentu  diencerkan  mulai pengenceran  10 -1 sampai  10 -6 dengan  cara menghomogenkan 1 mL sampel dalam MM dengan 9  mL  garam  fisiologis.  Kemudian  dari  setiap pengenceran  ditumbuhkan  dalam  medium  PDA dengan metode pour plate dan diinkubasi 2x24 jam pada  suhu  37 0 C    sampai  menunjukan  terjadinya pertumbuhan.  Kemudian  diamatai  setiap  koloni kapang  yang  tumbuh  dengan  ciri  berbeda  metode ini merupakan modifikasi dari (Gofar , 2012).

## Pemurnian
Koloni  kapang  dengan  ciri  berbeda  (seperti warna,  bentuk  koloni,  dan  permukaan  koloni) masing-masing  di  murnikan  dengan  cara  di  streak ke medium PDA dalam cawan petri, lalu diinkubasi selama  2  x  24  jam.  Teknik  ini  dilakukan  secara berulang sampai diperoleh koloni yang diindikasikan murni. Jika belum memperoleh koloni yang  murni,  dilakukan  kembali  (ulangi),  hingga mendapat  koloni  yang  murni.  Koloni  murni  adalah koloni yang berasal dari satu sel saja. Koloni murni yang  didapat  diinokulasikan  pada  medium  miring untuk mendapat isolat murni. Metode ini merupakan modifikasi dari (Gofar, 2012).

## Seleksi
Isolat yang telah didapat dari hasil pemurnian diseleksi  berdasarkan  kemampuan  bertahan  hidup dan  tumbuh  pada  media  PDA  yang  ditambah  CPO dan indikator ( Bromotymol Blue ) serta kemampuan untuk  menggunakan  limbah  minyak  tersebut, seleksi  dimulai  dengan  pengujian  dari  masing- masing isolat yang dimurnikan diisolasi pada cawan petri berisi 10-15 mL PDA yang ditambah CPO dan indikator  .  Inokulasi  dilakukan  dengan  meletakkan kapang  pada  pertengahan  media.  Kultur  diinkubasi
pada suhu kamar selama 24 jam. Tumbuhnya koloni isolat  kapang  pada  permukaan  media  yang  telah dicampurkan  CPO  mengindikasi  bahwa  isolat kapang tersebut mampu bertahan hidup dan tumbuh pada lingkungan yang mengandung CPO.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil Isolasi dan Pemurnian Kapang Lipolitik
Hasil  isolasi  yang  diperoleh  dapat  dilihat pada tabel 1 menunjukkan bahwa pada pengenceran terendah  terlihat  paling  banyak  koloni  yang tumbuh. Dari ciri morfologi, bentuk dan permukaan yang  berbeda  pada  masing-masing  koloni  diambil dan  ditentukan  menjadi  koloni  yang  berbeda.  Pada
pengenceran 10 -4 terdapat 207 koloni dan terdapat 2 koloni yang berbeda dengan diberi label V1 dan V2. Pada pengenceran 10 -5 dihitung terdapat 198 koloni yang  tumbuh  dan  setelah  dilakukan  pengamatan terdapat  2  koloni  yang  berbeda  dengan  diberi label V3  dan  V4.  Pada  cawan  yang  berisi  isolat  dengan pengenceran  10 -6 dihitung  terdapat  92  koloni  yang tumbuh dan terdapat 2 koloni yang berbeda dengan memberi  label  V5  dan  V6.  Selanjutnya  pada pengenceran  terakhir  10 -7 terdapat  87  koloni  yang tumbuh dan terdapat 2 koloni yang berbeda dengan diberi  label  V7  dan  V8.  Kemudian  pada  masing- masing  isolat  yang  di  anggap  berbeda  dimurnikan dengan ditanam dengan menggunakan metode gores ( steak plate ) menggunakan media PDA. Tabel.1 Isolasi Isolat Kapang Lipolitik Isolat Jumlah Koloni Koloni yang Berbeda 10 -4 207 2 10 -5
198 2 10 -6
92 2 10 -7 87 2
Hasil isolasi yang diperoleh dapat dilihat pada tabel  1  menunjukkan  bahwa  pada  pengenceran terendah  terlihat  paling  banyak  koloni  yang tumbuh. Dari ciri morfologi, bentuk dan permukaan yang  berbeda  pada  masing-masing  koloni  diambil dan  ditentukan  menjadi  koloni  yang  berbeda.  Pada pengenceran 10 -4 terdapat 207 koloni dan terdapat 2 koloni yang berbeda dengan diberi label V1 dan V2. Pada pengenceran 10 -5 dihitung terdapat 198 koloni yang  tumbuh  dan  setelah  dilakukan  pengamatan terdapat  2  koloni  yang  berbeda  dengan  diberi label V3  dan  V4.  Pada  cawan  yang  berisi  isolat  dengan pengenceran  10 -6 dihitung  terdapat  92  koloni  yang tumbuh dan terdapat 2 koloni yang berbeda dengan memberi  label  V5  dan  V6.  Selanjutnya  pada pengenceran  terakhir  10 -7 terdapat  87  koloni  yang tumbuh dan terdapat 2 koloni yang berbeda dengan
diberi  label  V7  dan  V8.  Kemudian  pada  masing- masing  isolat  yang  di  anggap  berbeda  dimurnikan dengan ditanam dengan menggunakan metode gores ( steak plate ) menggunakan media PDA.
Selanjutnya  dilihat  apabila  isolat  pada masing-masing cawan sudah murni yaitu di dalam 1 cawan  hanya  tumbuh  koloni  yang  sama  dilakukan peremajaan.  Isolat  kapang  yang  sudah  murni diambil  sebanyak  1  ose  diinokulasikan  ke  dalam media  PDA  miring  secara  aseptis  dengan meletakkan  jarum  ose  yang  mengandung  biakan pada  dasar  kemiringan  agar  dan  ditarik  dengan gerakan  zig-zag,  selanjutnya  biakan  kapang diinkubasi  pada  suhu  35 o C  selama  2-7  hari. (Modifikasi  Kurniawan,  2006).  Biakan  yang  sudah tumbuh pada agar miring dapat dilihat pada gambar 1.

## Gambar 1 Isolat Kapang
Selanjutnya  setelah  dilakukan  peremajaan terhadap  isolat  kapang  yang  telah  murni  kemudian dilakukan  uji  seleksi.  Hal  ini  dilakukan  untuk
memperoleh  kapang  lipolitik.  Yaitu  kapang  yang mampu  mengubah  lipid  menjadi  lipase  dan menggunakan CPO sebagai sumber karbon.

## Hasil Seleksi Isolat Kapang Lipolitik
Uji  seleksi  bertujuan  untuk  mendapat  isolat kapang  yang  mampu  memanfaatkan  CPO  sebagai sumber karbon. Kapang yang mampu memanfaatkan  CPO  berati  kapang  tersebut termasuk  jenis  kapang  lipolitik  yang  mampu mendegradasi  daerah  tercemar  minyak  goreng. Isolat kapang lipolitik merupakan hasil isolasi dan seleksi  kapang  lipolitik  yang  telah  dilakukan sebelumnya.  Isolat  kapang  lipolitik  ini  kemudian
diselEksi untuk melihat potensinya dalam mendegradasi  lipid.  8  isolat  kapang  yang  diuji ternyata semua isolat kapang mampu memanfaatkan  CPO  sebagai  sumber  karbon.  Hal ini dapat dilihat pada zona kuning  yang terbentuk pada  sekitaran  koloni  yang  tumbuh  (Gambar  2) hal ini menunjukkan bahwa telah terbentuk lipase akibat aktivitas dari kapang lipolitik tersebut

## Gambar 2 Selesksi Kapang Lipolitik
Dari  8    isolat  yang  sudah  terseleksi selanjutnya dilakukan uji karakterisasi.
Karakterisasi terdapat 2 uji. Yaitu untuk mengetahui bentuk  morfologi  dan  mengetahui  bentuk  spora.
Pada  bentuk  morfologi  semua  isolat  memiliki
morfologi  yang  sama  yaitu  berwarna  hijau, menggunung dan berkapur.

## Identifikasi Kapang lipolitik
Berdasarkan  karakter  dari  kapang  lipolitik yang diperoleh dari proses karakterisasi selanjutnya
diidentifikasi  berdasarkan  buku Illustrated  Genera Of  Imperfect  Fungi  (H.l.  Barnett  &  Barry  B. Hunter2008) dan Soil and  See Fungi Morfologiies of  Cutured  Fungi  and  key  to  Spesies  ( Watanabe Tsuneo, 2002 ).

## PEMBAHASAN
Hasil  isolasi  kapang  dari  limbah Spent Bleaching  Earth (SBE)  diperoleh  8  isolat,  dari  4 pengenceran  sampel  mulai  dari  10 -4 sampai  10 -7 . Rata-rata  dari  masing-masing  pengenceran  sampel diperoleh  2  isolat  kapang  yang  berbeda.  Hal  ini dapat dikatakan bahwa kapang diperoleh mulai dari pengenceran yang rendah (10 -4 ) hingga pengenceran tinggi  (10 -7 ),  hasil  ini  menunjukkan  bahwa pengenceran yang dilakukan dan yang ditumbuhkan untuk  proses  isolasi  sudah  tepat.  Hasil  isolasi kapang ini dapat mewakili keberadaan kapang yang terdapat di dalam limbah SBE.
Isolat kapang yang diperoleh pada pengencearan 10 - 4 terdiri atas dua isolat V1 dan V2, sedangkan isolat yang  diperolah  pada  pengenceran  10 -7 juga diperoleh dua isolat dengan kode V7 dan V8.
Berdasarkan karakteristik yang dimiliki baik morfologi koloni maupun morfologi sel (Tabel 4.6) isolat  kapang  V1  memiliki  karakteristik yang  sama dengan V8, isolat kapang V2 memiliki karakteristik yang sama dengan V3, V6 dan V7, sedangkan isolat kapang  V4  memiliki  karakteristik  yang  sama dengan  V5.  Dengan  demikian  berdasarkan  hasil identifikasi  dinyatakan  bahwa  isolat  kapang  V1 dengan  V8  merupakan  jenis Aspergilus  fumigatus yang  selanjutnya  disebut Aspergilus  fumigatus (V1). Isolat kapang V2, V3, V6 dan V7 merupakan Cylindrocladium sp  yang  selanjutnya  disebut Cylindrocladium sp (V2). Isolat kapang V4 dan V5 merupakan isolat kapang yang sama dan teridentifikasi sebagai Fumago sp  yang selanjutnya disebut Fumago sp (V4).

## KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan bahwa pada penelitian ini Berdasarkan hasil isolasi, seleksi dan identifikasi kapang lipolitik dari limbah Spent  Bleaching  Eart (SBE)  dapat  disimpulkan bahawa  Diperoleh  tiga  isolat  kapang  lipolitik  dari limbah  SBE  dengan  kode  masing-masing  V1,  V2 dan  V4  secara  berurutan  teridentifikasi  sebagai
Aspergilus  fumigatus,  Cylindrocladium  sp  dan Fumago sp.

## DAFTAR PUSTAKA
[1]  Alexander,  M.  1997. Indtroduction  to  Soil Mikrobiology. Secon  Edition.  Jhon  Wiley  & Sons.  New York.
[2]  Azwir.  2006.  Analisa  pencemaran  air  sungai tapung  kiri  Oleh  limbah  industri  kelapa  sawit Pt.  Peputra  masterindo  Di  kabupaten  kampar. Tesis . Universitas Diponogoro Semarang.
[3]  Barnett,H.I  &  Barry  B.  Hunte,  B.B.  2008 . Illustrated  Genera  Of  Imperfect  Fungi. CRC Press. Boca Raton New York.
[4]  Benson, H. 2002. Microbiological Application : Laboratory  Manual  in  General  Microbiology . 8 th Edition. Mc. Graw-Hill. North America.
[5]  Bridson.  E.Y.  1998. The  Oxoid  Manual .  Oxoid Limitid. England.
[6]  Gunawan,  A.W.,  Dharmaputra,  O.S.,  dan Rahayu,  G.  2004. Cendawan  dalam  Praktik Laboratorium. IPB Press. Bogor.
[7]   Gupta, R., Rathi, P., Gupta, N. dan  Bradoo, S. 2003.  Lipase  assay  for  conventional  and molecular screening: an overview. Biotechnol. Appl. Biochem. 37: 63-67.
[8]      Hariyadi,  P.  2010.  Sepuluh  Karakter  Minyak Kelapa
Sawit.
Artikel .http://seafast.ipb.ac.id/article/sepuluh_ karakter_minyak_sawit.pdf. Infosawit.
[9]    Ismawati, H. 2007. Meningkatkan Aktivitas dan Hasil Belajar Sains-Fisika melalui Pembelajaran Inkuiri Terbimbing untuk Sub Pokok Bahasan  Pemantulan Cahaya pada Siswa Kelas VIII SMP Negeri 13 Semarang Tahun Pelajaran 2006/2007. Skripsi, Unnes : Tidak diterbitkan.
[10]    Notodarmojo,  S.  2005. Pencemaran  Tanah dan Air Tanah . Penerbit ITB. Bandung