## AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAUN LAMUN
(Syiringodium isoetifolium) TERHADAP BAKTERI Pseudomonas aeruginosa
Samsudin Dhuha 1) , Widdhi Bodhi 1) , Novel Kojong 1)
1) Program Studi Farmasi Fakultas MIPA UNSRAT Manado

## ABSTRACT
The research about antibacterial activity of seagrass leaf ethanol extract (Syringodium isoetifolium) to against Pseudomonas aeruginosa with using method of agar difuse has done. Study has conducted on extraction  of  seagrass  leaf  by  maseration  with  95%  ethanol  solvent,  preparation  of  positive  control solution  that  uses  ciprofloxacin  500  mg  tablets,  preparation  negative  control  solution  that  uses Carboxy Methyl Cellulose (CMC), preparation test solution 10%, 15%, and 20%, preparation of agar medium  and  well  testing,  sterilization  of  tolls,  bacterial  inoculation  and  preparation  of  bacterial suspention that based on Mc. Farland standard solution, and then Testing antibacterial activity that based  on  diameter  of  its  inhibition.  Based  on  the  testing  the  highest  diameter  of  inhibition  was  the solution test 20% is equal to 18.17 mm and then followed by the solution test 15% and 10% are equal to 17.50 mm and 15.67 mm, whereas the negative and positive control solution respectively ar equal to 8 mm and 28.67 mm.
Key words : Seagrass Leaf (Syringodium isoetifolium), Pseudomonas aeruginosa, antibacterial.

## ABSTRAK
Telah dilakukan penelitian tentang aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun lamun terhadap bakteri uji Pseudomonas  aeruginosa dengan  menggunakan  meode  difusi  agar.  Kajian  yang  dilakukan  meliputi ekstraksi  daun  lamun  secara  maserasi  dengan  pelarut  etanol  95%,  penyiapan  larutan  control  positif yang menggunakan tablet ciprofloxacin 500 mg, penyiapan larutan kontrol negatif yang menggunakan Carboxy Methyl Cellulose (CMC), penyiapan larutan uji 10%, 15% dan 20%, penyiapan media agar dan  sumur  pengujian,  sterilisasi  alat,  inokulasi  bakteri  dan  penyiapan  suspense  bakteri  berdasarkan larutan  standar  Mc.  Farland,  serta  pengujian  aktivitas  antibakteri  yang  berdasarkan  diameter  daya hambatnya.  Berdasarkan  hasil  pengujian  diameter  daya  hambat  yang  paling  tinggi  dari  larutan  uji adalah  larutan  uji  20%  yaitu  sebesar  18.17  nm  kemudian  diikuti  larutan  uji  15%  dan  10%  sebesar 17.50 mm dan 15.67 mm, sedangkan larutan kontrol negatif dan kontrol positif berturut-turut sebesar 8 mm dan 28.67 mm.
Kata kunci : Daun lamun ( Syringodium isoetifolium ), Pseudomonas aeruginosa, antibakteri.

## PENDAHULUAN
Kesehatan adalah keadaan
sejahterah  dari  badan,  jiwa,  dan  sosial yang  memungkinkan  setiap  orang  hidup produktif  secara  sosial  dan  ekonomis, dimana  saat  ini  tingkat  kesehatan mengalami tantangan yang sangat berat.Hal  ini  di  sebabkan  oleh  tingkat biaya kesehatan yang cenderung
meningkat, seperti harga obat-obatan dan biaya  layanan  dokter  dan  rumah  sakit yang  semakin  memperburuk  kualitas hidup dan kesehatan masyarakat (Nurwidodo,  2006).  Salah  satu  upaya untuk mencapai derajat kesehatan masyarakat yang optimal melalui pengobatan tradisional (Zulkifli, 2004). Pengobatan  tradisional  dilakukan secara  turun-temurun,  berdasarkan  resep nenek moyang, kepercayaan ayau kebiasaan  masyarakat  setempat  maupun pengetahuan  tradisional  (Septin,  2009). Obat  atau  ramuan  untuk  kasus-kasus yang  umum  terjadi  bahkan  dapat  dibuat sendiri  dengan  bahan-bahan  yang  mudah diperoleh (Thomas, 1989).
Manado merupakan  salah satu  kota
di Indonesia yang memiliki
keanekaragaman hayati yang menarik dan khas  terutama  sumber  daya  perairan. Lamun  merupakan  tanaman  perairan dangkal dan merupakan sumber makanan penting  bagi  banyak  organisme.  Padang Lamun merupakan ekosistem yang tinggi
produktifitas organiknya, dengan keanekaragaman biota yang cukup tinggi. Lamun memiliki kandungan
nutrisi seperti protein, karbohidrat, lemak, dan serat pangan yang merupakan sumber makanan (Bengen, 2001). Kandungan fitokimia pada lamun dengan jenis Syringodium isoetifolium
menunjukan  adanya  flavonoid,  fenol  dan hidrokuinon  (Ukhty,  2011).  Kemudian berdasarkan hasil penelitian Shu dkk.(2006),  lamun  mengandung  asam fenolik,  tannin  dan  flavonoid  yang memiliki  efek  farmakologis  sebagai antibakteri  dan  insektisida.  Sedangkan Menurut  Dumay  dkk.  (2004),  lamun memiliki  kandungan  fenolik  dan  tanin yang memiliki aktivitas antibakteri.
Antibakteri  adalah  suatu  bahan yang  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri atau membunuh bakteri (Setiabudi, 2007).Antibakteri dapat bersifat Bakteriosida, yaitu zat atau bahan yang  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri.Jugaa  bersifat  bakteriosida,  yaitu bahan  atau  zat  yang  dapat  membunuh bakteri (Djide dan Sartini, 2008).
Peningkatan resistensi bakteri terhadap  antibiotikmendorong  adanya upaya-upaya untuk mendapatkan senyawa antibakteri dengan
memanfaatkan  senyawa  bioaktif  dari kekayaan  keanekaragaman  hayati.  Hal tersebut  mendorong  penulis  melakukan penelitian  uji  anti  bakteri  ekstrak  etanol daun  lamun  ( Syringodium  isoetifolium) Terhadap bakteri Pseudomonas
aeruginosa, menggunakan  metode  difusi agar  (difusi  Kirby  dan  Bauer  yang dimodifikasi) dengan cara sumuran.

## METODE
Bahan-bahan yang digunakan antara lain ekstrak daun lamun ( Syiringodium  isoetifolium) ,  etanol  95%, bakteri  uji Pseudomonas  aeruginosa ATCC  9027), Carboxy  Methyl  Cellulose
(CMC),  aquades  steril,  etanol  96%  p.a, tablet  Ciprofloxacin  500  mg, Nutrient
Agar (NA),  H 2 SO 4 0,36  N,BaCl 2 .2H 2 O
1,175%,  NaCl  0,9%,  kertas  saring  no.1, kertas label dan aluminium foil .
Alat-alat  yang  digunakan  adalah erlenmeyer,  gelas  ukur,  gelas  kimia, tabung  reaksi,  rak  tabung  reaksi,  pipet tetes, penangas air, blender , ayakan mesh 65,  kaca  arloji,  timbangan  analitik,  labu ekstraksi, batang pengaduk, stirer , cawan petri, rotary  evaporator ,  water  bath, jarum ose, pinset, inkubator, laminair air flow ,  termometer,  pencadang,  autoklaf, mikropipet,  mistar  berskala  dan  alat fotografi.

## Determinasi Tanaman
Determinasi  terhadap  lamun  ini dilakukan  di  Laboratorium  Taksonomi
Biologi F-MIPA Unsrat Manado. Determinasi  dilakukan  dengan  tujuan untuk  mengidentifikasi    bahwa  tanaman yang  digunakan  benar-benar  tanaman lamun ( Syringodium isoetifolium ).

## Pengolahan Sampel
Diambil  Daun  Lamun  sebanyak  1 kg.  Dibersihkan  dengan  cara  dicuci dengan air mengalir, kemudian di potong- potong  halus.  Ditimbang  250  g  daun lamun, dimasukkan dalam toples/erlenmeyer  dan  dimaserasi  dengan etanol  95%  sebanyak  750  ml  dan dibiarkan  selama  5  hari,  sambil  sesekali diaduk.  Setelah  5  hari,  larutan  di  filtrasi atau dipisahkan. Kemudian debris penyaringan dilakukan remaserasi selama 2  hari.  Filtrat  pertama  dan  filtrat  kedua disatukan  untuk  memperoleh  filtrat  total dan disaring kembali. . Filtrat, dievaporasi dengan menggunakan
evaporator  untuk  memperoleh  ekstrak setengah  kental  dan  dilanjutkan  dengan waterbath  dengan  suhu  60 0 C  untuk
memperoleh  ekstrak  kental  (Gunawan dan Mulyani, 2004).

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian aktivitas antibakteri ini disterilkan terlebih dahulu. Alat-alat gelas disterilkan  dalam  oven  pada  suhu  170 0 C selama  ±  2  jam,  jarum  ose  dan  pinset dibakar  dengan  pembakaran  diatas  api langsung  dan  media  disterilkan  dalam autoklaf  pada  suhu  121 0 C  selama  15 menit (Lay dan Hastowo, 1992).

## Pembuatan Larutan Kontrol Negatif
Kontrol  negatif  dibuat  dari  CMC 1%  dengan  cara  :  1  gram  serbuk  CMC dilarutkan  dalam  100  ml  aquades  steril.
Dikocok sampai larutan
homogen.Kontrol negatif digunakan sebagai  pembanding  dan  pelarut  untuk pembuatan  larutan  kontrol  positif  dan pembuatan larutan uji.

## Pembuatan Larutan Kontrol Positif
Kontrol  positif  dibuat  dari  sediaan tablet  Ciprofloxacin  500  mg.  Tablet Ciprofloxacin digerus, lalu ditimbang dan disetarakan  dengan  50  mg  ciprofloxacin murni.  Kemudian  serbuk  Ciprofloxacin sebanyak 50 mg dilarutkan dalam 50 mL larutan  CMC  untuk  memperoleh  larutan Ciprofloxacin  50  μg/50  μL.  Selanjutnya diencerkan  dengan  diambil  1  mL  dari larutan  Ciprofloxacin  50  μg/50  μL  dan digenapkan  sampai  10  mL  dengan  CMC 1%  sehingga  didapat  larutan  kontrol positif dengan konsentrasi 5 μg/50 mL.

## Pembuatan Media Agar
Medium  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  medium Nutrient Agar (NA).  Medium  ini  digunakan sebagai media agar miring untuk
inokulasi  bakteri,  media dasar dan media pembenihan.
Inokulasi  bakteri  dari  biakan  murni bakteri Pseudomonas aeruginosa
Bakteri  uji  diambil  dengan  jarum ose  steril,  lalu  ditanamkan  pada  media agar dengan cara menggores. Selanjutnya diinkubasi  dalam  inkubator  pada  suhu
37 0 C selama 24 jam (Siregar, 2009).
Pembuatan Standar Kekeruhan
Larutan  (Larutan Mc. Farland )
Larutan  H 2 SO 4 0,36  N  sebanyak 99,5  ml  dicampurkan  dengan  larutan BaCl 2 .2H 2 O  1,175%  sebanyak  0,5  ml dalam  erlenmeyer.  Kemudian  dikocok sampai terbentuk larutan yang keruh.Kekeruhan  ini  dipakai  sebagai standar  kekruhan  suspensi  bakteri  uji (Victor, 1980).

## Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Bakteri  uji  yang  telah  diinokulasi diambildengan  kawat  ose  steril  lalu disuspensikankedalam tabung yang berisi 2 ml larutan NaCl0,9% hingga di peroleh kekeruhan  yang  samadengan  standar kekeruhan larutan Mc. Farland .

## Pembuatan larutan Uji
Dibuat  larutan  stok  100%  dengan cara  ditimbang  stok  sampel  ekstrak  5g dilarutkan  dengan  5mL  CMC.  Untuk larutan  uji  10%,  15%,  dan  20%  b/v diambil  dengan  pipet  mikro  masing- masing  0,5 mL (0,5 mL/5 mL), 0,75 mL (0,75  mL/5  mL)  dan  1  mL  (1  mL/5  mL) dari  larutan  stok  dan  digenapkan  dengan CMC sampai5 mL volume larutan.

## Pengujian
Sebanyak  50  µL  diambil  dari masing-masing larutan uji dengan konsentrasi  10  %,  15%,  dan  20%  serta larutan  kontrol  positif  dan  negatif kemudian  dimasukkan  ke  dalam  sumur- sumur  yang  telah  dibentuk  pada  media pengujian.  Setelah  itu  diinkubasi  pada suhu  37 o C  selama  24  jam.  Diamati  zona hambat  yang  terbentuk  dan  diukur dengan mistar berskala.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil ekstraksi lamun yang dilakukan  dengan  menggunakan  teknik maserasi dengan etonol 95% menghasilkan  ekstrak  kental  seperti  pada tabel 1. Tabel 1. Hasil ekstraksi lamun Berat Sampel Basah (g) Berat Sampel Kering (g) Berat Ekstrak Kental (g) Kadar Air % Rendemen % Warna Ekstrak Kental 2000 250 11 87,5 4.4 Hijau kehitaman Pemilihan  pelarut  etanol  dalam proses  maserasi  pada  daun  lamun mempengaruhi  banyaknya  rendemen yang  didapat,  dikarenakan  sifat  etanol
yang  dapat  melarutkan  hampir  semua zat sehingga komponen yang terekstrak semakin  banyak  (Arifin  dkk . ,  2006). Kehalusan  bahan  juga  mempengaruhi
rendemen  ekstrak  yang  dihasilkan, semakin  halus  bahan  yang  digunakan semakin tinggi rendemen yang dihasilkan (Sembiring dkk., 2006).
Kadar  air  yang  terdapat  pada  tumbuhan lamun  sebesar  87,5%  dari  berat  sampel awal.  Lamun  merupakan  tumbuhan  air sehingga  termasuk  dalam  golongan tumbuhan  yang  menggandung  kadar  air yang tinggi, rendemen  yang didapat dari ekstraksi maserasi pada tumbuhan lamun
sebesar  4,4%  dengan  warna  ekstrak kental  yaitu  hijau  kehitaman.  Ada beberapa  faktor  yang  mempengaruhi banyak  rendemen  yang  diperoleh  dari teknik  ekstraksi  maserasi  salah  satunya faktor  lama  perendaman  sampel  dalam ekstraksi (Sembiring dkk, 2006).
Hasil  pengujian  ekstrak  etanol daun  lamun  terhadap  penghambatan pertumbuhan bakteri Pseudomonas aeruginosa dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel 2. Hasil pengujian ekstrak etanol daun lamun terhadap penghambatan pertumbuhan bakteri

## Pseudomonas aeruginosa
Pengujian Nilai Diameter luas Daya Hambat (mm) + - E 10% E 15% E 20% Ulangan 1 20.00 0.00 5.50 8.00 17.50 Ulangan 2 21.50 0.00 8.50 11.00 16.50 Ulangan 3 20.50 0.00 9.00 9.50 20.50 Rata-rata 20.67 0.00 7.67 9.50 10.17
Keterangan :   +  (Ciprofloxacin 50 μg/50 μl)
- (CMC 1%) E10 (ekstrak lamun 10%) E15 (ekstrak lamun 15%) E20 (ekstrak lamun 20%)
Berdasarkan  hasil  yang  terlihat  pada tabel 2 bahwa ketigakonsentrasi ekstrak lamun  yang  digunakan  nilai  rata-rata memberikan  berkisar  antara  1-3  mm untuk  diameter  luas  daya  hambatnya. Ekstrak  lamun  20%  memberikan  hasil diameter  daya  hambat  yang  paling besar  yaitu  10,17  mm  kemudian menurun  untuk  ekstrak  15%  dan ekstrak  10%  masing-masing  berurutan sebesar  19,50  mm  dan  17,67  mm.  Hal ini  menjelaskan  bahwa  ekstrak  etanol
daun  lamun  memilikisifat  atau  potensi antibakteri  yang  kuat.  Berdasarkan Davis  dan  Stout  (1971)  menyatakan bahwa  penentuan  kriteria  potensi antibakteri  adalah  sebagai  berikut  : daerah  hambatan  20  mm  atau  lebih termasuk sangat kuat, daerah hambatan 10-20  mm  kategori  kuat,  daerah hambatan  5-10  mm  kategori  sedang, dan  daerah  hambatan  5  mm  atau kurang termasuk kategori lemah.
Dari  data  dapat  dilihat  bahwa semakin  besar  konsentrasi  ekstrak  lamun maka  semakin  besar  nilai  luas  diameter daya  hambat  dari  bakteri Pseudomonas aeruginosa dan  sebaliknya  jika  semakin kecil konsentrasi dari ekstrak lamun maka nilai  diameter  luas  daya  hambat  akan semakin kecil. Alsan dari perbedaaan nilai diameter daya hambatnya karena semakin besar konsentrasi ekstrak maka akan lebih memberikan nilai maksimum untuk
kemampuan antibakterinya sebab
komponen  senyawa  antibakteri  yang terkandung  didalam  ekstrak  semakin banyak.
Menurut  El-Haddy dkk. (2007)
beberapa  senyawa  aktif  yang  terdapat pada lamun bersifat antimikroba
diantaranya  adalah  tanin,  saponin,  dan terpenoid. Beberapa penelitian  telah membuktikan adanya bioaktivitas
antibakterial  alkaloid    dan  s aponin. Efek antibakteri pada lamun disebabkan karena senyawa yang terkandung sebagai antibakteri  pada  lamun  merusak  dinding sel  dan  mempengaruhi  integritasnya. Mekanisme kerja saponin sebagai
antibakteri  dapat  menurunkan  tegangan permukaan sehingga mengakibatkan naiknya  permeabilitas  atau  kebocoran  sel dan  mengakibatkan  senyawa  intraseluler akan  keluar,  sedangkan  mekanisme  kerja tannin  dapat  menghambat  enzim  reverse transcriptase  dan  DNA  topoisomerase sehingga  sel  bakteri  tidak  dapat  terbentuk (Nuria dkk., 2009). Faktor-faktor lingkungan  juga  dapat  mempengaruhi stabilitas  bahan  aktif  yaitu  suhu,  radiasi cahaya, udara (terutama oksigen, karbondioksida dan uap air) dan kelembaban. Faktor-faktor lain yang dapat mempengaruhi  stabilitas,  yaitu  :  pH  7,0, sifat air dan kondisi biotik, dan keberadaan  bahan  kimia  lain  yang
merupakan kontaminan atau dari pencampuran produk yang berbeda secara aktif dapat mempengaruhi stabilitas sediaan bahan aktif (Akhila dkk., 2007).

## KESIMPULAN
Dari  hasil  kajian  ini  disimpulkan bahwa,
1.Peningkatan konsentrasi ekstrak etanol daun lamun berpengaruh terhadap aktivitas  antibakteri  dimana  semakin tinggi  konsentrasi  zona  hambat  yang dihasilkan semakin besar.
2.Peningkatan konsentrasi
mempengaruhi aktivitas antibakteri dimana  aktivitas  yang  paling  besar dihasilkan  oleh  larutan  uji  dengan konsentrasi 20%.

## DAFTAR PUSTAKA
Akhila  JS,  Shyamjith,  Deepa,  dan  Alwar  MC. 2007. Acute toxicity studies and determination of median lethal dose. Science .93: 917-920.
Arifin,  H.,  Anggraini,  N.,  Handayani,  D.  dan Rasyid  R.  2006.  Standarisasi  Ekstrak Etanol  Daun Eugenia  Cumini Merr. J. Sains Tek Far . 11: 88-93.
Ansel,H.C.  1989. Pengatar  Bentuk  Sediaan Farmasi . Edisi 4. UI Press. Jakarta.
Beagen,  Dietriech  G.  2001. Pedoman  dan Ekosistem Mangrove.Pusat KajianSumber Daya Pesisir dan Lautan . IPB, Bogor.
Brook,  G.F.,  J.S.  Butel  dan  S.A.  Morse.  2005. Medical  Microbiology.  Mc  Grow  Hill, New York.
Davis, W. W. dan T. R. Stout. 1971. Disc Plate Methods  of  Microbiological  Antibiotic Assay. Microbiology .22: 659-665.
Djide dan Sartini. 2008. Dasar-Dasar
Mikrobiologi Farmasi . Lephas, Makasar.
Dumay,  O.,  J.  Costa,  J.  M.  Desjoberto, dan  G.  Pergent.  2004.  Variations In  The  Concentration  Of  Phenolic Compounds in The Seagrass Posidonia oceanic Under Concentrations  of  Competition. Phytochemistry .65: 3211-3220.
Dwidjoseputro,  D.  2004. Dasar-Dasar
Mikrobiologi . Djambatan, Jakarta.
El-Hady,  H.H.A,  S.M.  Daboor,  &  A.E. Ghoniemy.  2007.  Nutritive  and antimicrobial  profiles  of  some
seagrass from bardawil lake, Egypt, Egyptian.J. Aq. Research .33: 103-110. Gunawan, D dan Mulyani, S. 2004. Farmakognosi. Swadaya, Jakarta.
Hermawan,A.,  Hana,W.  dan  Wiwiek,  T.  2007.
Pengaruh  Ekstrak  Daun  Sirih( Piper  Betle L) Terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli dengan  Metode Difusi Disk.
Irianto, K. 2013. Mikrobiologi Medis . Alfa beta, Jakarta.
Jawetz , E.,  J.  L.  Melnick  dan  F.  A.  Adelberg . 2005. Mikrobiologi  Kedokteran .  Salemba Medika,
Jakarta
.