online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium
Vol. 18, No1 P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Aliffia Restu Dinika, et al
ORGANOGENESIS KALUS TANAMAN KRISAN ( Chrysanthemum indicum L.) DENGAN PENGGUNAAN KINETIN DAN NAA ( Naphthalene Acetic Acid )
ORGANOGENESIS OF CHRYSANTHEMUM ( Chrysanthemum indicum L.) CALLUS USING KINETIN AND NAA ( Naphthalene Acetic Acid )
Aliffia Restu Dinika 1 , Nurcahyo Widyodaru Saputro 2 , Kuswarini Sulandjari 3 , Hayatul Rahmi 4
Abstrak
Krisan  ( Chrysanthemum  indicum L.)  adalah  salah  satu  jenis  tanaman  hias  yang  banyak diminati  di  Indonesia.  Perbanyakan  tanaman  krisan  bisa  dilakukan  dengan  cara  kultur  jaringan. Tujuan  penelitian  ini adalah  untuk  mendapatkan konsentrasi  kinetin  dan  NAA  ( Naphthalene  Acetic Acid) yang  memberikan  pertumbuhan  organogenesis  pada  kalus  tanaman  krisan  ( Chrysanthemum indicum L . ). Media dasar yang digunakan adalah Murashige dan Skoog. Penelitian ini terdiri dari 16 perlakuan. Hasil penelitian menunjukkan terdapat pertumbuhan tunas yang berjumlah 3 tunas pada 3 perlakuan,  serta  pertumbuhan  akar  pada  1  perlakuan.  Konsentrasi  Kinetin  dan  NAA  ( Naphthalene Acetic Acid) yang berhasil memberikan pertumbuhan tunas adalah konsentrasi Kinetin 0 mg/l + NAA 1  mg/l  (perlakuan  K 1 N 3 ),  konsentrasi  Kinetin  2  mg/l  +  NAA  0,5  mg/l  (perlakuan  K 2 N 2 ),  dan konsentrasi Kinetin 3 mg/l + NAA 0,5 mg/l (perlakuan K 4 N 2 ). Untuk konsentrasi Kinetin dan NAA ( Naphthalene Acetic Acid) yang berhasil memberikan pertumbuhan akar adalah konsentrasi Kinetin 3 mg/l + NAA 0,5 mg/l (perlakuan K 4 N 2 ).
Kata kunci : Organogenesis, Kinetin, NAA, Kalus

## Abstract
Chrysanthemum ( Chrysanthemum indicum L.) is a type of ornamental plant that is in great demand in Indonesia. Chrysanthemum plant propagation can be done by means of tissue culture. The purpose of this study was to obtain the concentration of kinetin and NAA ( Naphthalene Acetic Acid ) which gave the growth of organogenesis in the callus of chrysanthemum plants. The basic media used are Murashige and Skoog. This study consisted of 16 treatments. The results showed that there was shoot  growth,  amounting  to  3  shoots  in  3  treatments,  as  well  as  root  growth  in  1  treatment.  The concentrations  of  Kinetin  and  NAA  ( Naphthalene  Acetic  Acid )  that  succeeded  in  providing  shoot growth were Kinetin concentration 0 mg / l + NAA 1 mg / l (K 1 N 3 treatment), Kinetin concentration 2 mg / l + NAA 0.5 mg /  l (K 2 N 2 treatment) , and Kinetin concentration 3 mg / l + NAA 0.5 mg / l (K 4 N 2 treatment).  For  the  concentration  of  Kinetin  and  NAA  (Naphthalene  Acetic  Acid)  that succeeded in providing root growth was the concentration of Kinetin 3 mg / l + NAA 0.5 mg / l (K 4 N 2 treatment).
Keyword : Organogenesis, kinetin, NAA, Callus

## PENDAHULUAN
Krisan  ( Chrysanthemum  indicum L.) merupakan  salah  satu  jenis  tanaman  hias berupa  bunga  potong  yang  sangat  populer  di Indonesia  (Wediyanto,  2007).  Saat  ini  krisan termasuk  bunga  potong trend  setter di Indonesia  karena  memiliki  keunggulan:  kaya akan  warna,  ukuran  dan  bentuk,  tahan  lama, serta  mempunyai  bau  yang  harum  (Purwanto dan Martini, 2013).
Menurut  Pusdatin  (2015)  dan  Basis Data Statistik Pertanian (2018), perkembangan ketersediaan  krisan  di  Indonesia  selama periode 2007–2012 meningkat, sedikit mengalami  penurunan  pada  tahun  2013 sebesar  2,59%.  Pada  tahun  2014  kembali meningkat  sebesar  10,35%,  selanjutnya  tahun 2015  sampai  dengan  2016  terus  mengalami penurunan.  Pertumbuhan  konsumsi  krisan  per
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium
Vol. 18, No1 P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Aliffia Restu Dinika, et al
tahun  pada  periode  tahun  2007–2016
berfluktuasi dengan rata-rata 26,06% (Tabel 1)
Tabel 1. Perkembangan ketersediaan dan konsumsi krisan di Indonesia Tahun 2007–2016
Tahun ( Year ) Produksi (Production) Vol. ekspor (Exported volume) Kg Vol. impor(Imported volume) Kg Konsumsi (Consumption) Kg Pertumbuhan konsumsi (Consumption growth), % Tangkai (Stalk) Kg 2007 66.979.260 6.697.926 39.059 177 6.659.044 2008 101.777.126  10.177.713 60.501 1.010 10.118.222 51,95 2009 107.847.072  10.784.707 37.791 2.016 10.748.932 6,23 2010 185.232.970  18.523.297 63.063 3.024 18.463.258 71,77 2011 305.867.882  30.586.788 59.547 4.424 30.531.665 65,36 2012 397.651.571  39.765.157 79.102 8.000 39.694.055 30,01 2013 387.208.754  38.720.875 57.049 2.976 38.666.802 -2,59 2014 427.248.059  42.724.806 56.227 240 42.668.819 10,35 2015 442.698.194  44.269.819 59.625 5.250 44.215.444 3,62 2016 433.100.145  43.310.015 60.648 6.975 43.256.342 -2,17 Rata-rata pertumbuhan (Average growth), % tahun (year) 2007-2016 26,06 Sumber: Outlook komoditi krisan (Pusdatin, 2015)
Para  pengusaha  atau  petani  krisan membeli  benih  tanaman  krisan  dari  produsen luar  negeri.  Ini  disebabkan  permintaan konsumen  yang  terus  meningkat  sehingga pengusaha  dan  petani  harus  mengimbanginya (Lilik et  al. ,  2014).  Adapun  kendala  yang sering  dihadapi  dalam  pengembangan  dan budidaya  krisan  adalah  sulitnya  ketersediaan benih yang seragam, bermutu tinggi dan sehat dalam jumlah yang banyak dengan waktu yang relatif singkat (Syaifan, 2010).
Salah satu alternatif untuk mendapatkan  tanaman  krisan  dalam  jumlah banyak  dan  waktu  singkat  adalah  dengan dilakukan perbanyakan secara in-vitro melalui teknik  kultur  jaringan  (Syaifan,  2010). Perbanyakan  tanaman  krisan  yang  dilakukan dengan  cara  kultur  jaringan  diharapkan  dapat menghasilkan  kualitas  bibit  krisan  yang unggul dan seragam, tahan terhadap penyakit, tingkat produksi tinggi serta waktu yang relatif lebih  singkat  jika  dibandingkan  dengan perbanyakan  secara  konvensional  (Lubis, 2016).
Penggandaan  biakan  dalam  kultur in vitro dapat dilakukan melalui jalur organogenesis
(Purnamaningsih,
2003). Organogenesis  adalah  proses  terbentuknya organ  seperti  pucuk  dan  akar  (Gunawan, 1992). Terdapat dua cara terjadinya
organogenesis yaitu secara langsung atau tidak langsung.  Organogenesis  langsung  ditandai dengan  eksplan  yang  ditanam  langsung beregenerasi  membentuk  tunas  dan  daun setelah  eksplan  tersebut  ditanam,  sedangkan organogenesis tidak langsung ditandai dengan pembentukan  organ-organ  tanaman  seperti tunas,  daun,  akar  terjadi  setelah  eksplan beregenerasi  menjadi  kalus  (Suminar et  al. , 2017). Kalus adalah  poliferasi  massa jaringan yang  belum  terdeferensiasi  dan  dapat terbentuk  pada  seluruh  bagian  permukaan yang terkena irisan eksplan (Lina et al. , 2013). Pembentukan  kalus  sangat  penting  dalam proses regenerasi tanaman karena memungkinkannya  dihasilkan  tunas  dari  sel- sel  baru,  bukan  berasal  dari  meristem  yang sudah ada sebelumnya (Marthani et al. , 2016). Menurut  Lestari  dan  Yunita  (2008),  Kalus yang baru terbentuk berpeluang menghasilkan tunas  lebih  tinggi  dibandingkan  kalus  yang telah  disubkultur  berkali-kali,  karena  kalus yang baru terbentuk kandungan poliamin atau senyawa  yang  berperan  dalam  sistem regenerasi masih tinggi.
Auksin dan  sitokinin adalah  zat pengatur  tumbuh  yang  sering  ditambahkan kedalam  media  tanam  kultur  jaringan  karena mempengaruhi
pertumbuhan
dan organogenensis dalam kultur jaringan
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium
Vol. 18, No1 P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Aliffia Restu Dinika, et al
(Wahyudi et al. , 2013). Kinetin merupakan zat pengatur  tumbuh  jenis  sitokinin,  berfungsi sebagai  pengatur  pembelahan  sel  dan morfogenesis.  NAA  merupakan  zat  pengatur tumbuh  jenis  auksin,  berfungsi  sebagai perangsang  atau  mendorong  pengembangan sel (Lindung, 2014).
Kinetin  berpengaruh  nyata  terhadap jumlah  tunas  krisan  kulo,  konsentrasi  terbaik yang  digunakan  yaitu  3  ppm  (Tilaar et  al. , 2015).  Penggunaan  Kinetin  dan  NAA  dengan konsentrasi  3  mg/L  kinetin  +  2  mg/L  NAA memberikan  hasil  terbaik  terhadap  jumlah tunas tanaman krisan (Royani dan Fatmawati, 2016).  Penelitian  ini  akan  membahas mengenai  organogenesis  pada  kalus  tanaman krisan.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mendapatkan  konsentrasi  kinetin  dan  NAA ( Naphthalene  Acetic  Acid) yang  memberikan pertumbuhan  organogenesis  pada  kalus tanaman krisan ( Chrysanthemum indicum L . ).

## BAHAN DAN METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Bioteknologi Tanaman, Program  Studi  Agroteknologi,  Fakultas Pertanian, Universitas
Singaperbangsa
Karawang. Penelitian dilaksanakan mulai pada bulan  Juni  sampai  dengan  bulan  September 2020. Bahan yang digunakan dalam penelitian ini  terdiri  dari  kalus  tanaman  krisan  yang diperoleh dari perbanyakan in vitro sebelumnya,  media Murashige dan Skoog (MS), ZPT Kinetin dan NAA, agar-agar, gula pasir,  alkohol  70%, aquadest .  Alat  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah Laminar Air Flow Cabinet (LAFC ), autoclave , magnetic  stirer ,  kulkas,  timbangan  analitik, pH meter dan alat-alat tanam.
Pada  penelitian  ini  terdapat  16 perlakuan  yang  diulang  sebanyak  5  kali, sehingga terdapat 80 unit penelitian. Data hasil penelitian dianalisis secara deskriptif. Dalam 1 botol  kultur  diletakan  1  irisan  kecil  kalus.
Berikut  merupakan  16  perlakuan konsentrasi kombinasi kinetin dan NAA : 1. K 1 N 1 = Kontrol 2. K 1 N 2 = Tanpa kinetin + NAA 0,5 mg/L 3. K 1 N 3 = Tanpa kinetin + NAA 1 mg/L 4. K 1 N 4 = Tanpa kinetin + NAA 1,5 mg/L 5. K 2 N 1 = Kinetin 2 mg/L + Tanpa NAA 6. K 2 N 2 = Kinetin 2 mg/L + NAA 0,5 mg/L 7. K 2 N 3 = Kinetin 2 mg/L + NAA 1 mg/L
8. K 2 N 4 = Kinetin 2 mg/L + NAA 1,5 mg/L 9. K 3 N 1 = Kinetin 2,5 mg/L + Tanpa NAA 10. K 3 N 2 = Kinetin 2,5 mg/L + NAA 0,5 mg/L 11. K 3 N 3 = Kinetin 2,5 mg/L + NAA 1 mg/L 12. K 3 N 4 = Kinetin 2,5 mg/L + NAA 1,5 mg/L 13. K 4 N 1 = Kinetin 3 mg/L + Tanpa NAA 14. K 4 N 2 = Kinetin 3 mg/L + NAA 0,5 mg/L 15. K 4 N 3 = Kinetin 3 mg/L + NAA 1 mg/L 16. K 4 N 4 = Kinetin 3 mg/L + NAA 1,5 mg/L Langkah  penanaman  pada  penelitian ini  yaitu,  memotong  kalus  tanaman  krisan yang  didapat  dari  perbanyakan  in  vitro sebelumnya,  lalu  kalus  dipotong  menjadi  2-3 bagian, kalus yang sudah dipotong dipindahkan ke botol media yang baru, dalam 1  botol  diisi  1  kalus.  Selanjutnya  botol  yang sudah  berisi  kalus  ditutup  menggunakan alumunium foil  lalu  diikat  dengan  karet kemudian  dilapisi  menggunakan  plastik  wrap. Tahap selanjutnya, botol-botol kultur disimpan di rak kultur.
Pada penelitian ini dilakukan pengamatan selama sepuluh minggu.
Parameter  yang diamati  adalah  waktu  muncul tunas,  persentase  tumbuh  tunas,  respon  lain berupa  munculnya  akar  dan  perubahan  warna kalus.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Waktu Muncul Tunas
Hasil  dari  penelitian  ini  terdapat  3 tunas  pada  3  perlakuan  yang  berbeda  yaitu K 1 N 3 (Tanpa  kinetin  +  NAA  1  mg/L),  K 2 N 2 (Kinetin 2 mg/L + NAA 0,5 mg/L) dan K 4 N 2 (Kinetin  3  mg/L  +  NAA  0,5  mg/L).  Tunas hasil  organogenesis  kalus  krisan  disajikan pada Gambar 1.
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium
Vol. 18, No1 P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Aliffia Restu Dinika, et al
Gambar 1. Tunas pada 3 perlakuan, a.Perlakuan K1N3 (NAA 1 mg/L), b.Perlakuan K2N2 (Kinetin 2 mg/l+NAA 0,5 mg/L), c.Perlakuan K4N2 (Kinetin 3 mg/l+NAA 0,5 mg/L)
Berdasarkan  data  hasil  penelitian diketahui bahwa pemberian berbagai konsentrasi  zat  pengatur  tumbuh  kinetin  dan NAA  ( Naphtalene  Acetic  Acid) memberikan pengaruh  yang  berbeda  pada  waktu  muncul
tunas.  Data  munculnya  tunas  pada  setiap perlakuan tersaji pada Tabel 2. Tabel 2. Waktu muncul tunas pada setiap perlakuan Kinetin (K) NAA (N) 0 mg/l (N 1 ) 0,5 mg/l (N 2 ) 1,0 mg/l (N 3 ) 1,5 mg/l (N 4 ) 0 mg/l (K 1 ) - - 9 MST - 2 mg/l (K 2 ) - 10 MST - - 2,5 mg/l (K 3 ) - - - - 3 mg/l (K 4 ) - 9 MST - - Keterangan: (-) tidak tumbuh tunas
Tabel  2  menjelaskan  bahwa  tunas pertama  kali  muncul  pada 9  MST,  yaitu  pada perlakuan  K 1 N 3 (Tanpa  kinetin  +  NAA  1 mg/L) dan K 4 N 2 (Kinetin 3 mg/L + NAA 0,5 mg/L).  Selanjutnya,  tunas  kembali  muncul pada  10  MST  yaitu  pada  perlakuan  K 2 N 2 (Kinetin  2  mg/L  +  NAA  0,5  mg/L).  Dari ketiga  perlakuan  tersebut  hanya  K 1 N 3 (Tanpa kinetin  +  NAA  1  mg/L)  yang  menggunakan perlakuan  NAA  tanpa  kombinasi  kinetin, walaupun  hanya  menggunakan  NAA  tetapi tetap mampu menginduksi pertumbuhan tunas. Hal  ini  sejalan  dengan  penelitian  Edri et  al (2013), bahwa pemberian NAA secara tunggal pada  multiplikasi  embrio  aren  secara  in  vitro memberikan  pengaruh  pada  parameter  umur muncul  tunas.  Pemberian  auksin  pada  media kultur  dapat  meningkatkan  proses-proses fisiologis  pada  sel-sel  tanaman  yang  dikultur, seperti  turut  membantu  dalam  memacu pembelahan  sel-sel  pada  jaringan  serta berbagai  proses  organogenesis,  diantaranya dalam  pembentukan  dan  pertumbuhan  tunas (Ali et  al. ,  2007).  Pada  perlakuan  K 2 N 2 (Kinetin 2 mg/L + NAA 0,5 mg/L) dan K 4 N 2
(Kinetin  3  mg/L  +  NAA  0,5  mg/L),  zat pengatur  tumbuh  kinetin  lebih  tinggi konsentrasinya  dibandingkan  NAA.  Hal  ini sesuai  dengan  pernyataan  Skoog  dan  Miller (1997), bahwa jika sitokinin tinggi dan auksin rendah maka akan terjadi pembentukan tunas. Pada penelitian ini pertumbuhan tunas terjadi  pada  waktu  yang  relatif  cukup  lama, Hal  ini  diduga  karena  konsentrasi  dan  level sitokinin  endogen  di  dalam  kalus  krisan rendah, sehingga pemberian sitokinin eksogen pada media masih belum mampu meningkatkan  kecepatan  waktu  kemunculan tunas.  Lamanya  partumbuhan  tunas  juga dipengaruhi  oleh  kerja  hormon  sitokinin  dan auksin yang saling berkolerasi. Efektivitas zat pengatur  tumbuh  auksin  maupun  sitokinin eksogen  bergantung  pada  konsentrasi  hormon endogen  dalam  jaringan  tanaman  (Indah  & Ermavitalini, 2013).
Persentase Tumbuhnya Tunas Penentuan persentase tumbuhnya tunas  tanaman  krisan  diperoleh  dengan  cara menghitung  total  ulangan  yang  tumbuh  tunas dibagi  dengan  banyaknya  ulangan  lalu  dikali
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium
Vol. 18, No1 P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Aliffia Restu Dinika, et al
100%.  Data  pengamatan  persentase  tumbuh tunas disajikan pada Tabel 3. Tabel 3. Persentase tumbuhnya tunas pada tiap perlakuan Kinetin NAA 0 mg/l (N 1 )  0,5 mg/l (N 2 )  1 mg/l (N 3 ) 1,5 mg/l (N 4 ) 0 mg/l (K 1 ) 0% 0% 20% 0% 2 mg/l (K 2 ) 0% 20% 0% 0% 2,5 mg/l (K 3 ) 0% 0% 0% 0% 3 mg/l (K 4 ) 0% 20% 0% 0%
Keterangan:  0% : Semua ulangan tidak terbentuk tunas 20% : Terdapat satu ulangan membentuk tunas
Pada  Tabel  3    terdapat  3  perlakuan yang  berhasil  menumbuhkan  tunas,  yaitu perlakuan  K 1 N 3 (Tanpa  kinetin  +  NAA  1 mg/l),  K 2 N 2 (Kinetin  2  mg/L  +  NAA  0,5 mg/L) dan K 4 N 2 (Kinetin 3 mg/L + NAA 0,5 mg/L).  Pada  perlakuan  K 1 N 3 yang  hanya menggunakan  zat  pengatur  tumbuh  NAA konsentrasi  1  mg/L    tanpa  kinetin  mampu menginduksi  pertumbuhan  tunas,    Hal  ini diduga  karena  pemberian  auksin  pada  media kultur  dapat  meningkatkan  proses-proses fisiologis  pada  sel-sel  tanaman  yang  dikultur, seperti  turut  membantu  dalam  memacu pembelahan  sel-sel  pada  jaringan  serta berbagai  proses  organogenesis,  diantaranya pada  pembentukan  dan  pertumbuhan  tunas (Ali et  al. ,  2007).  Zat  pengatur  tumbuh sitokinin  endogen  dalam  kalus  krisan perlakuan  K 1 N 3 (Tanpa  kinetin  +  NAA  1 mg/L)  mampu  menyediakan  dan  mencukupi, sehingga walaupun tidak ditambahkan sitokinin  eksogen  tetap  mampu  menginduksi pertumbuhan tunas.
Pada perlakuan K 2 N 2 (Kinetin 2 mg/L +  NAA  0,5  mg/L)  dan  perlakuan  K 4 N 2
(Kinetin  3  mg/L  +  NAA  0,5  mg/L)  kedua
perlakuan  ini  menggunakan  zat  pengatur tumbuh  sitokinin  yang  konsentrasinya  lebih tinggi  dibandingkan  konsentrasi  zat  pengatur tumbuh auksin. Wattimena (1988), mengemukakan bahwa pemberian auksin yang rendah  dan  sitokinin  yang  lebih  tinggi cenderung  mendorong  pembentukan  tunas adventif dan juga poliferasi tunas aksilar. Hal ini  sesuai  dengan  pernyataan  Prematilake  & Mendis (1999), bahwa auksin turut dibutuhkan untuk  mendorong  pembentukan  tunas,  namun umumnya  dibutuhkan  dalam  jumlah  atau konsentrasi yang rendah.

## Respon Lain
Respon  lain  yang  terjadi  pada  kalus adalah  munculnya  akar  pada  perlakuan  K 4 N 2 (Kinetin  3  mg/L  +  NAA  0,5  mg/L).  Akar mulai  muncul  saat  pengamatan  telah  selesai, tepatnya  saat  17  mst.  Menurut  Nella et  al (2017),  lamanya  waktu  muncul  akar  bisa disebabkan  oleh  beberapa  faktor  yang menghambat proses pertumbuhan dan perkembangan akar eksplan.
Gambar 2. Akar pada perlakuan K 4 N 2 (Kinetin 3 mg/L + NAA 0,5 mg/L)
Gambar 2. Akar pada perlakuan K4N2 (Kinetin 3 mg/l+NAA 0,5 mg/L)
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium
Vol. 18, No1 P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Aliffia Restu Dinika, et al
Munculnya  akar  ditandai  dengan adanya  garis  panjang  berwarna  putih  yang berada  di  bagian  bawah  kalus  yang  terlihat pada  bagian  bawah  botol  (Gambar  4).  Akar terdapat pada perlakuan K 4 N 2 (Kinetin 3 mg/L +  NAA  0,5  mg/L),  perlakuan  K 4 N 2 ini merupakan  perlakuan  yang  konsentrasi  zat pengatur  tumbuh  sitokinin  lebih  tinggi dibandingkan  auksin,  Hal  ini  sejalan  dengan hasil  penelitian  Mahadi, et  al. (2013)  bahwa NAA  dan  kinetin  berpengaruh  nyata  terhadap jumlah  akar  eksplan  buah  Naga  ( Hylocereus costaricensis ).  Rataan  jumlah  akar  eksplan buah  naga  tertinggi  pada  perlakuan  0,4  ppm NAA  dan  4  ppm  kinetin,  dimana  dalam penelitian Mahadi, et al. (2013) ini konsentrasi sitokinin levelnya
10x lebih tinggi
dibandingkan  konsentrasi  auksin.  Menurut Agustina (2002) dalam Nurhanis et al. (2019), munculnya  akar  disebabkan  oleh  masih tingginya auksin yang terdapat dalam eksplan (endogen)  sehingga  walaupun  ditambahkan auksin  secara  eksogen  dengan  konsentrasi rendah akan dapat membentuk akar.
Perubahan Warna Kalus Warna kalus menggambarkan penampilan visual sel-sel kalus sehingga dapat diketahui  tingkat  keaktifan  pembelahan  sel- selnya  (Rasud  dan  Bustaman,  2020).  Kalus yang  didapat  dari  perbanyakan  in  vitro sebelumnya dominan berwarna kuning kecoklatan.  Data  perubahan  warna  kalus disajikan pada Tabel 4.
Tabel 4. Perubahan warna kalus
Perlakuan Warna Kalus Awal Akhir K 1 N 1 (Kontrol) Kuning kecoklatan  Putih kecoklatan K 1 N 2 (Tanpa kinetin + NAA 0,5 mg/L)
Kuning kecoklatan  Putih kecoklatan
K 1 N 3 (Tanpa kinetin + NAA 1 mg/L)
Kuning kecoklatan  Kuning kecoklatan
K 1 N 4 (Tanpa kinetin + NAA 1,5 mg/L)
Kuning kecoklatan  Putih kecoklatan
K 2 N 1 (Kinetin 2 mg/L + Tanpa NAA)
Kuning kecoklatan  Coklat
K 2 N 2 (Kinetin 2 mg/L + NAA 0,5 mg/L Kuning kecoklatan  Coklat
K 2 N 3 (Kinetin 2 mg/L + NAA 1 mg/L) Kuning kecoklatan  Putih kecoklatan K 2 N 4 (Kinetin 2 mg/L + NAA 1,5 mg/L)
Kuning kecoklatan  Putih kecoklatan
K 3 N 1 (Kinetin 2,5 mg/L + Tanpa NAA)
Kuning kecoklatan  Coklat
K 3 N 2 (Kinetin 2,5 mg/L + NAA 0,5 mg/L)  Kuning kecoklatan  Putih kecoklatan K 3 N 3 (Kinetin 2,5 mg/L + NAA 1 mg/L) Kuning kecoklatan  Putih kecoklatan
K 3 N 4 (Kinetin 2,5 mg/L + NAA 1,5 mg/L)  Kuning kecoklatan  Coklat K 4 N 1 (Kinetin 3 mg/L + Tanpa NAA)
Kuning kecoklatan  Coklat
K 4 N 2 (Kinetin 3 mg/L + NAA 0,5 mg/L)
Kuning kecoklatan  Kuning kecoklatan K 4 N 3 (Kinetin 3 mg/L + NAA 1 mg/L)
Kuning kecoklatan  Coklat
K 4 N 4 (Kinetin 3 mg/L + NAA 1,5 mg/L) Kuning kecoklatan  Coklat
Berdasarkan  Tabel  4,  kalus  yang sebelumnya  berwarna  kuning  kecoklatan setelah  dipindahkan  ke  media  MS  dengan penambahan  zat  pengatur  tumbuh  kinetin  dan NAA  ( Naphtalene  Acetic  Acid )  berbagai konsentrasi  menghasilkan  perubahan  warna kalus  yang  bervariasi.  Perbedaan  warna  kalus dapat  disebabkan  beberapa  hal  diantaranya yaitu pigmentasi, intensitas cahaya dan sumber eksplan  dari  bagian  tanaman  yang  berbeda (Hendaryono  &  Wijayani,  1994).  Pada beberapa  perlakuan,  kalus  yang  awalnya
berwarna  kuning  kecoklatan  mengalami perubahan  warna  menjadi  coklat.  Sedangkan kalus  yang  berwarna  putih  merupakan  kalus baru yang baru tumbuh. Kalus yang berwarna putih  merupakan  sel  embrionik  yang  belum mengandung  kloroplas,  tetapi  memiliki kandungan butir pati yang tinggi (Ariati et al. , 2012). Kalus yang berwarna putih merupakan massa sel yang sedang aktif membelah (Rasud dan  Bustaman,  2020).  Kalus  yang  berwarna kekuningan menunjukkan  bahwa  kalus tersebut masih aktif berdiferensiasi
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium
Vol. 18, No1 P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Aliffia Restu Dinika, et al
(Purnamaningsih & Ashrina, 2011).
Sedangkan,  kalus  yang  berwarna  coklat kemungkinan besar pertumbuhan dan perkembangan  kalus  tersebut  telah  memasuki fase stasioner (penuaan)
sehingga menyebabkan  produksi  metabolit  sekunder menurun (Purnamaningsih dan Ashrina, 2011).

## KESIMPULAN
Pemberian  beberapa  kombinasi  ZPT kinetin dan NAA berhasil menumbuhkan tunas pada 3 perlakuan serta akar pada 1 perlakuan. Konsentrasi  ZPT  kinetin  dan  NAA  yang berhasil tumbuh tunas yaitu konsentrasi tanpa kinetin  +  NAA  1  mg/L  (perlakuan  K 1 N 3 ), konsentrasi  kinetin  2  mg/L  +  NAA  0,5  mg/L (perlakuan  K 2 N 2 ),  dan  konsentrasi  kinetin  3 mg/L  +  NAA  0,5  mg/L  (perlakuan  K 4 N 2 ).
Konsentrasi  ZPT  kinetin  dan  NAA  yang berhasil menumbuhkan akar adalah konsentrasi  kinetin  3  mg/L  +  NAA  0,5  mg/L (perlakuan K 4 N 2 ).

## DAFTAR PUSTAKA
Agustina  L.  2002.  Nutrisi  Tanaman.  Rineka Cipta, Jakarta.
Ali, G., F. Hadi, Z. Ali, M. Tariq, and M. A. Khan,  2007.  Callus  Induction  and  in Vitro Complete Plant Regeneration of Different  Cultivars  of  Tobacco ( Nicotiana  tabacum L .) on  Media  of Different  Hormonal  Concentrations. Journal Biotechnology, 6(4): 561-566. Ariati  S,  Niken,  Muslimin,  Waeniati, Suwastika  IN.  2012.  Induksi  Kalus Kakao  ( Theobroma  cacao L.)  pada Media MS dengan Penambahan 2,4-D, BAP  dan  Air  Kelapa.  Jurnal  Natural Science. 1(1): 74  78.
Basis  Data  Statistik  Pertanian  2018.  Diakses: Http://database.pertanian.go.id/eksim2 012asp/neraca.asp. [1 Maret 2021] Edri  W,  Ernita,  Fathurrahman.  2013.  Uji
Konsentrasi Kinetin dan NAA
Terhadap  Multiplikasi  Embrio  Aren ( Arenga pinnata ( W ) Merr ) Secara In Vitro .  Jurnal  Dinamika  Pertanian,
XXVIII.
Gunawan, L.W. 1992.  Teknik Kultur Jaringan
Tumbuhan. Laboratorium Kultur Jaringan Tumbuhan PAU Bioteknologi. Institut Pertanian Bogor.
Bogor.
Hayati, N.Q., Nurmalinda., B. Marwoto. 2018. Inovasi  Teknologi  Tanaman  Krisan yang  Dibutuhkan  Pelaku  Usaha.  J. Hort. 28(1): 147-162 Hendaryono,  D.P.S.  &  A.  Wijayani.  1994. Teknik  Kultur  Jaringan.  Kanisius, Yogyakarta.
Indah, P. N dan Ermavitalini, D. 2013. Induksi Kalus Daun Nyamplung ( Calophyllum inophyllum L.) Pada Beberapa
Kombinasi  Konsentrasi  6-BAP  dan 2,4-D. Jurnal  Sains  dan  Sn  Pomits. 2 (1): 2337–3520.
Lestari,  E.  G  dan  Yunita,  R.  2008.  Induksi Kalus  dan  Regenerasi  Tunas  Padi Varietas Fatmawati. Bul.Agron. 36(2):
106-110. Lilik,  Ninuk  dan  Eko.  2014.  Respon  Dua Kultivar Tanaman Krisan ( Chrysanthemum  morifolium )  Pada Berbagai  Lama  Penambahan  Cahaya Buatan.  Jurnal  Produksi  Tanaman.  2 (1).
Lina,  F.  dan  Wahyono,  R.  2013.  Pengaruh  6- benzylamino  purine (BAP)  dan  6- furfuryl  amino  purine (Kinetin)  pada media  MS  terhadap  Pertumbuhan Eksplan  Ujung  Apikal  Tanaman  Jati secara In Vitro. LenteraBio, 2(1): 167- 178.
Lindung.  2014.  Teknologi  Aplikasi  Zat
Pengatur Tumbuh. Diakses:
http://www.bppjambi.info/newspopup. asp [18 April 2020]
Lubis,  Yanti.  2016.  Regenerasi  In  Vitro Tanaman  Krisan  Melalui  Tunas Aksilar  Sebagai  Respon  Terhadap Media Dasar dan Benzyl Adenin Serta Aklimatisasi  Planlet.  Skripsi.  Fakultas
Pertanian. Universitas Lampung,
Lampung.
Mahadi  I,  Syafi’I  W,  dan  Sari  Y.  2013. Induksi  Kalus  Jeruk  Kasturi  ( Citrus microcarpa )  Menggunakan  Hormon 2,4-D  dan  BAP  dengan  Metode  In Vitro.  Jurnal  Ilmu  Pertanian.  21  (2)  : 84-89.
Marthani, Q., Anggraito, Y., Rahayu, E. 2016. Kalogenesis  Eksplan  Setengah  Biji Koro  Benguk  ( Mucuna  pruriens L.) Secara  In  Vitro  Menggunakan  BAP dan NAA. Jurnal Unnes. 5(1).
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium
Vol. 18, No1 P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Aliffia Restu Dinika, et al
Nella, A, Luthfi, Lollie A. 2017. Pengaruh Zat Pengatur  Tumbuh  terhadap  Induksi Akar  (Rhizogenesis)  pada  Tanaman Bangun-Bangun ( Plectranthus amboinicus  (Lour.)  Spreng )  secara  In
Vitro.  Jurnal  Agroekoteknologi FP USU . 5 (3).
Nurhanis  S,  Reine,  dan  Rosa.  2019.  Korelasi Konsentrasi  IAA  dan  BAP  Terhadap Pertumbuhan  Kultur  Jaringan  Sengon ( Paraserianthes  falcataria ).  Jurnal Hutan Lestari. 7 (2): 857-867.
Prematilake,  D.P.  and  M.H.  Mendis,  1999. Microtubers  of  Potato (Solanum tuberosum): In  Vitro  Conservation and  Tissue  Culture.  Journal  Natn.,  27
(1): 17-28.
Purnamaningsih,
R. 2003. Regenerasi Tanaman Melalui Embriogenesis Somatik  dan  Beberapa  Gen  yang Mengendalikannya. Jurnal Agro Biogen. 5 (2): 51-58. Purnamaningsih,  R  dan  Ashrina,  M.  2011 Pengaruh  BAP  dan  NAA  terhadap Induksi Kalus dan Kandungan Artemisin  dari Artemisia  annua L. Berita Biologi 10(4).
Purwanto  A.W,  Tri  Martini.  2013.  Krisan Bunga  Seribu  Warna.  Kanisius, Yogyakarta.
Pusdatin.  2015, Outlook  komoditi  krisan ,
Kementerian  Pertanian,  Jakarta,  pp. 14–15.
Rasud, Y,. dan Bustaman. 2020. Induksi Kalus secara  In  Vitro  dari  Daun  Cengkeh ( Syizigium  aromaticum L.)  dalam Media  dengan  Berbagai  Konsentrasi
Auksin. Jurnal Ilmu Pertanian Indonesia. 25 (1): 67  72.
Royani  I,  Fatmawati  A.  2016.  Pengaruh Konsentrasi NAA dan Kinetin Terhadap Pertumbuhan Tanaman
Krisan  Secara  In  Vitro . Jurnal  Ilmiah Biologi “Bioscientist”. 4 (2).
Skoog,  F.  dan  Miller.  1997.  Chemical Regulation  of  Growth  and  Organ Formation in Plant Tissue Cultured in Vitro.  Journal  Biotechnology.  11  (2): 118-131.
Suminar,  E.,  Sumadi,  Mubarok,  S.,  Sunarto, T.,  Rini,  N.  2017.  Percepatan Penyediaan  Benih  Sumber  Kedelai Unggul  Secara  In  Vitro.  Jurnal Agrikultura. 28 (3): 126-135. Syaifan,  U.  2010.  Pengaruh Benzyl  Adenine (BA)  Terhadap  Pertumbuhan  Eksplan Dua  Kultivar  Krisan  Secara In  Vitro . Skripsi.  Institut  Pertanian  Bogor, Bogor.
Tilaar W, Rantung dan Tulung. 2015. Induksi Tunas Dari Nodul Krisan Kulo Dalam Media Murashige Dan Skoog Yang Diberi  Sitokinin.  Jurnal  Eugenia.  21 (2).
Wahyudi, E., Ernita , Fathurrahman. 2013. Uji
Konsentrasi kinetin dan NAA Terhadap  Multiplikasi  Embrio  Aren Secara In Vitro .  Jurnal  Dinamika Pertanian. XXVIII (1).
Wattimena, G. A. 1988. Zat Pengatur Tumbuh Tanaman. Departemen Pendidikan dan
Kebudayaan Direktorat Jenderal
Pendidikan  Tinggi  Pusat  Antar Universitas,  Institut  Pertanian  Bogor,
Bogor.
Wediyanto.  2007.  Standart  Operasional Prosedur  Budidaya  Krisan  Potong.
Departemen Pertanian, Jakarta.