## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL DAUN KEDONDONG HUTAN (Spondias pinnata (L.F.) Kurz.) DENGAN BERBAGAI METODE UJI
Submitted : 8 April 2019 Edited : 15 Mei 2019 Accepted : 25 Mei 2019
Suhaimi Azizah, Nursamsiar, Syamsu Nur
Bagian Kimia Farmasi, Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Makassar Km 13,7, Daya, Makassar Email: syamsunur19@gmail.com

## ABSTRACT
The  leaf  of  kedondong  hutan (Spondias  pinnata (L.F.)  Kurz.) Contain  of  flavonoid compound,  which  capable  as  antioxidants  that  function  for  preventing  free  radicals.  The purpose of this study was to determine the antioxidant activity profile of ethanol extract of kedondong hutan leaf with DPPH, ABTS radical and iron reduction methode (FRAP). This study  used  experimental  research  with  stages  of  sample  collection,  plant  determination, simplicia  preparation,  maceration  with  70%  ethanol,  phytochemical  screening  and antioxidant  activity  assay  with  UV-Vis  spectrophotometry. The  results  obtained  from  the ethanol  extract  of  kedondong  hutan  leaves  had  antioxidant  activity  on  DPPH  and  ABTS with  IC 50 of  32.83  ppm  and  45.84  ppm  respectively.  In  FRAP  method  kedondong  hutan leaves  had  antioxidant  activity  which  is  equivalent  to  quarcetin  of  2936.7  µ mol  QR  /g sample.  Ethanol  extract  of  kedondong  hutan  leaves  has  very  strong  antioxidant  power against DPPH, ABTS radical and iron reduction.
Keywords : Spondias pinnata (L.F.) Kurz., Antioxidants, and DPPH, ABTS radical and iron reduction (FRAP)

## PENDAHULUAN
Reactive  Oxygen  Species (ROS) merupakan  suatu  produk  alami  yang terbentuk dari metabolisme aerobik normal dalam  tubuh  yang  secara  potensial  dapat menyebabkan  kerusakan (1) .  Radikal  bebas yang  dihasilkan  dalam  reaksi  biokimia tubuh,  terlibat  sebagai  mediator  pada berbagai  penyakit.  ROS  dalam  jumlah yang berlebihan dapat menyerang molekul biologis yang selanjutnya dapat menyebabkan  kerusakan  sel  atau  jaringan, dan dihubungkan dengan berbagai penyakit  degeneratif (2) .  Pada  penelitian lebih  lanjut  telah  diteliti  bahwa  sekitar  40 penyakit mencakup aterosklerosis, hipertensi,  iskemik,  alzheimer,  parkinson,
kanker  dan  peradangan  disebabkan  oleh radikal bebas (3) .
Antioksidan dapat menangkap radikal  bebas  dan  mendetoksifikasinya (4) . Antioksidan  sintetik,  seperti  ter-butil hidroksitoluen (BHT) dan ter-butil hidroksianisol  (BHA),  tersedia  secara komersial,  dan  saat  ini  digunakan  dalam proses  industri,  karena  diduga  sebagai promotor efek samping karsinogenesis dan efek  negatif  lainnya,  maka  penggunaan antioksidan sintetik dalam makanan, produk  kosmetik,  dan  sediaan  farmasi telah menurun.
Pada  saat  ini,  antioksidan  alami yang  berasal  dari  tanaman  herbal  menjadi pilihan masyarakat (5) . Tanaman yang dapat
dimanfaatkan  sebagai  sumber  antioksidan alami  salah  satunya  adalah  kedondong hutan  (Spondias  pinnata (L.F.)  Kurz.). Berdasarkan  penelitian  Dwija  dkk  (2013) ekstrak metanol daun S. pinnata menunjukkan adanya kandungan
triterpenoid  dan  flavonoid (6) .  Flavonoid merupakan  kandungan  metabolit  sekunder yang  bersifat  sebagai  senyawa  bioaktif (7)
yang mampu bertindak sebagai antioksidan yang berfungsi untuk
menangkal radikal bebas (8) .
Berdasarkan  latar  belakang  di  atas, maka dilakukan penelitian tentang aktivitas  antioksidan  daun S.  pinnata dengan  metode  peredaman  radikal  DPPH, ABTS dan reduksi besi (FRAP).

## METODE PENELITIAN Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu aquadest,  etanol  p.a,  etanol  70%,  HCl, pereaksi  mayer,  pereaksi  wagner,  pereaksi dragendrof,  serbuk  Mg,  FeCl3,  kloroform, asam  asetat  anhidrat,  asam  sitrat,  HCl, H2SO4  pekat,  1,1-difenil-2-pikrilhidrail (DPPH) (Sigma aldrich), (2,2-Azinobis (3- etilbenzotiazolin)-6-asamsulfonat) (ABTS) (Sigma  aldrich),  kalium  persulfat,  (  asam klorida,  besi  (III)  klorida  (Sigma  aldrich), 2,4,6  tri-pyridyl-s-triazine  (TPTZ)  (Tokyo chemical industry), kuarcetin, daun kedondong  hutan  (Spondias  pinnata  (L.F.) Kurz).

## Penyiapan Sampel
Daun kedondong hutan yang diperoleh,  selanjutnya  dilakukan  sortasi basah.  Daun  dikumpulkan  dan  dicuci dengan  air  bersih  mengalir  dan  ditiriskan. Selanjutnya  dirajang  dan  dikeringkan dengan  cara diangin-anginkan  hingga diperoleh  simplisia.  Selanjutnya  simplisia ditimbang sebanyak 230 gram dimasukkan ke  dalam  bejana  maserasi,  ditambahkan dengan  etanol  70%  sebanyak  2  L
didiamkan  selama  3  hari  dan  sesekali diaduk  kemudian  disaring.  Residu  yang diperoleh diremaserasi menggunakan etanol  70%  sebanyak  1,5  L.  Filtrat  yang diperoleh,  dikumpulkan  dan  dipekatkan dengan diangin-anginkan sampai diperoleh ekstrak kental.

## Uji Skrining Fitokimia
Sampel  dilakukan  uji  fitokimia kualitatif  untuk  mengetahui  beberapa senyawa metabolit meliputi  senyawa alkaloid, flavonoid, tanin, terpenoi/steroid, dan  saponin.  Hal  pertama  yang  perlu dilakukan  ialah  pembuatan  larutan  ekstrak etanol  daun  kedondong  hutan  mula-mula ekstrak  kental  ditimbang  sebanyak  0,5 gram, lalu dilarutkan dengan etanol sampai 10  mL  di  dalam  labu,  selanjutnya dilakukan pengujian skrining fitokimia (9) .

## Penentuan AktivitasAntioksidan
Pengujian aktivitas antioksidan dilakukan dengan menggunakan tiga pengujian  yang  berbeda  yaitu:  1,2- diphenyl-2-picrylhydrazyl  (DPPH),  (2,2- Azinobis (3etilbenzotiazolin)-6- asamsulfonat) (ABTS) dan Ferric
Reducing  Antioxidant  Power  (FRAP) dengan sedikit modifikasi.

## Pengujian DPPH,
Secara  ringkas  disiapkan  larutan DPPH 0,4 mM dan dibuat seri konsentrasi sampel  25  µ g/mL,  50µ g/mL, 75  µ g/mL, 100  µ g/mL  dan  125  µ g/mL  dari  larutan stok sampel daun kedondong 1000 µ g/mL, selanjutnya masing-masing seri konsentrasi  larutan  sampel  ditambahkan  1 mL  larutan  DPPH,  selanjutnya  masing- masing  campuran  larutan  sampel  dan larutan  DPPH  dicukupkan  volumenya dengan etanol p.a hingga 5 mL. Didiamkan  selama  30  menit  diukur absorbansi  dengan  Spektrofotometer  UV- Vis dalam panjang gelombang 515 nm.
Nilai IC 50 direpresentasikan
berdasarkan  konsentrasi  sampel  yang dibutuhkan  untuk  mereduksi  50  %  DPPH yang  mana nilainya  diperoleh  dari  grafik regresi linier.

## Pengujian ABTS
Pembuatan  larutan  seri  konsentarsi sampel  40  µ g/mL,  50  µ g/mL,  60  µ g/mL, 70  µ g/mL  dan  80µ g/mL  dari  larutan  stok ekstrak  daun  kedondong  1000µ g/mL  dan ditambah  1  mL  larutan  ABTS  lalu dicukupkan  volumenya  sampai  5  mL dengan  etanol  absolut  dan  diinkubasi selama  15  menit  lalu  serapan  diukur dengan  spektrofotometer  UV-Vis  pada panjang gelombang 750 nm.

## Pengujian Ferric ReducingAntioxidant Power (FRAP)
Disiapkan  larutan  ferric  chlorida  (3 mM  dalam  5  mM  asam  sitrat)  dan  larutan TPTZ (1 mM dalam 0,05 M asam klorida). 0,2  mL  larutan  sampel  ditambahkan dengan  2  mL  larutan  TPTZ,  diinkubasi selama  3  menit  selanjutnya  ditambahkan 0,1  mL  larutan  FeCl 3 dan  dicukupkan volume  air  suling  hingga  5  mL  diukur serapannya  pada  panjang  gelombang  600 nm.
Data  absorbansi  dihitung  terhadap seri  konsentrasi  larutan  standar  kuersetin dan  dicatat  sebagai  equivalent  dengan µ mol/g sampel.

## Analisis Data
Analisis data yang digunakan merupakan  analisis  deskriptif  dimana menggambarkan  atau  menjelaskan  hasil yang  diperoleh  berdasarkan  nilai  pada hasil  kurva  kalibrasi  dengan  persamaan garis  lurus  y  =  bx  +  a,  dimana  profil aktivitas  antioksidan  diperoleh  dengan menginterpolasikan  nilai  absorbasi  sampel sebagai  nilai  (y)  sehingga  profil  aktivitas
antoksidan  sebagai  nilai  (x)  pada  sampel dapat diketahui.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi dan SkriningFitokimia
Serbuk  simplisia  daun  kedondong hutan yang diperoleh, selanjutnya
diekstraksi dengan metode maserasi. Larutan  penyari  yang  digunakan  dalam proses  ekstraksi  adalah  etanol  70%. Penggunaan  cairan  penyari  etanol  70% bertujuan untuk menarik semua komponen di  dalam  serbuk  simplisia,  karena  pelarut etanol  merupakan  pelarut  universal  yang dapat  menarik  senyawa-senyawa  yang larut  dalam  pelarut  non  polar  hingga polar (10) .  Ekstraksi  daun  kedondong  hutan dilakukan  selama  3  hari  dengan  sesekali pengadukan,  diperoleh  hasil  rendemen sebanyak 5,10%.

## Hasil Skrining Fitokimia
Tabel 1. Hasil Skrining Fitokimia No. Golongan Senyawa Kimia Hasil 1. Alkaloid - 2. Flavonoid + 3. Tanin + 4. Terpanoid/Steroid + 5. Saponin +
Ket: (-) menunjukkan hasil negatif
(+) menunjukkan hasil positif
Berdasarkan  tabel  di  atas  diperoleh bahwa  hasil  uji  fitokimia  ekstrak  daun kedondong  hutan  memiliki  kandungan flavonoid,  tanin,  terpenoid/steroid  dan saponin.

## Hasil Uji Aktivitas Antioksidan
Aktivitas  antioksidan  ekstrak etanol daun  kedondong  hutan  dengan  metode peredaman  radikal  DPPH  berdasarkan
hilangnya  warna  ungu  akibat  tereduksinya DPPH  oleh  antioksidan  yang  diukur dengan  spektrofotometer  UV-VIS  pada panjang  gelombang  515  nm.  Hilangnya warna  ungu  adalah  stoikiometri  jumlah elektron yang disumbangkan oleh senyawa antioksidan  daun  kedondong  hutan (11) . Sedangkan  uji  antioksidan  dengan  metode ABTS  berdasarkan  hilangnya  warna  biru akibat tereduksinya ABTS oleh antioksidan.  Intensitas  warna  biru  ini diukur  pada  panjang  gelombang  750  nm. Antioksidan dalam sampel daun kedondong hutan menekan produksi warna ini  ke  tingkat  yang  sebanding  dengan sampel (12) .
Konsentrasi  tiap  sampel  kemudian diukur  pada  spektrofotometer  UV-Vis dengan  kuersetin  murni  sebagai  kontrol positif.  Mekanisme  kuersetin  sebagai antioksidan  sekunder  adalah  dengan  cara memotong  reaksi  oksidasi  berantai  radikal bebas  atau  dengan  cara  menangkapnya (13) . Aktivitas  antiradikal  bebas  ditunjukkan dengan  nilai  IC 50 .  Nilai  IC 50 merupakan nilai konsentrasi antioksidan untuk meredam  50%  aktivitas  radikal  bebas. Pada pengujian aktivitas antioksidan (Tabel 2) dengan metode DPPH
menunjukkan ekstrak etanol daun
kedondong  hutan  mempunyai  kemampuan aktivitas  antioksidan  sangat  kuat  dengan nilai  IC 50 sebesar  32,83  µ g/mLdengan mentransfer  elektron  atau  donor  proton. Namun  jika  dibandingkan  dengan  kontrol positif kuersetin 2,18 µ g/mL menunjukkan bahwa  ekstrak  etanol  daun  kedondong hutan  memberikan  aktivitas  antioksidan yang  masih  rendah.  Hal  ini  dikarenakan kuersetin merupakan senyawa murni golongan  flavonoid  yang  secara  cepat mampu  meredam  radikal  DPPH  jika dibandingkandengan  larutan  sampel  yang masih berupa ekstrak kasar.
Pada pengujian aktivitas antioksidan menggunakan  metode  ABTS  senyawa yang bertanggung jawab memiliki mekanisme  dalam  penangkapan  radikal bebas  melalui  pemutusan  rantai  reaksi radikal  dengan  jalan  memberikan  atau mendonorkan  radikal  hidrogen  secara cepat (14) . Hasil menunjukkan ekstrak etanol  daun  kedondong  hutan  mempunyai kemampuan  aktivitas  antioksidan  sangat kuat dengan nilai IC50 sebesar 45,84µ g/mL  dengan  pengukuran  kontrol positif  kuersetin  dengan  nilai  IC 50 sebesar 4,69µ g/mL.
Tabel 2. Hasil Aktivitas Antioksidan Eksrak Etanol Daun Kedondong Hutan
Ket: *inhibitor konsentrasi larutan ekstrak
**inhibitor konsentrasi larutan kuersetin (kontrol positif)
25 50
75 100 125 40 50 60 70 80
Ekstrak 37,13±1,1 63,3±2,2 75,9±2,0 84,9±0,9 88,5±0,7 32,9±1,1 57,5±1,5 85,0±1,2 92,0±0,14 95,3±0,07
IC 50 *
IC 50 ** Sampel Inibisi (%) pada konsentrasi (µg/mL) metode DPPH Inibisi (%) pada konsentrasi (µg/mL) Metode ABTS
32,83 45,84 2,18 4,69
Aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol daun  kedondong  hutan  juga  diuji  dengan metode  peredam  reduksi  besi  (FRAP).
Pengujian FRAP
merupakan uji kolorimetri  yang  mengukur  kemampuan sampel  untuk  mereduksi  besi  berdasarkan dengan  mekanisme  reaksi  fenton  oleh pengkhelat  ion  logam  dari  Fe 3+ menjadi Fe 2+ yang  ditandai  dengan  peningkatan intensitas  warna  menjadi  biru prussian dari larutan sampel (15) . Pembentukan warna  biru  akan  menaikkan  absorbansi sampel ketika pengukuran dengan spektofotometri  UV-Vis  pada  panjang gelombang 600 nm sehingga akan mengubah  absorbansi  yang  menunjukkan kenaikan  daya  reduksi. Besarnya  daya reduksi suatu sampel menunjukkan
kemampuannya  sebagai  donor  elektron dan  dapat  bereaksi  dengan  radikal  untuk mengubahnya menjadi stabil serta mengakhiri  rantai  radikal (15) . Penentuan kapasitas  antioksidan  dihitung  dengan menggunakan kurva baku kuersetin.
Penentuan aktivitas antioksidan
metode  FRAP  berdasarkan  persamaan regresi  linier  dari  kurva  baku  equivalen kuersetin  (Gambar  1)  dan  ditentukan  IC 50
berdasarkan persamaan regresi linier antara  sampel  banding  kadar  equivalen  Fe dalam  µ Mol.  Persamaan  kurva  baku  yang digunakan  y  =  0,0146x  + 0,3297  dengan nilai  r  =  0,9982.  Selanjutnya  dari  data absorbansi  yang  diperoleh,  dapat  dilihat aktivitas
antioksidannya dengan menggunakan persamaan quersetin equivalent  antioxidant  capacit (QEAC). Dari  hasil  pengujian  diperoleh  aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun kedondong  yang  dinyatakan  ekuivalen dengan  kuersetin  sebesar  2936,7  µ mol/g sampel.  Semakin  besar  nilai  QEAC  maka kemampuan  senyawa  dalam  reduksi  besi juga semakin besar.
Aktivitas ekstrak etanol daun kedondong  hutan  berdasarkan  beberapa pengujian  menunjukkan  adanya  kapasitas antioksidan  pada  metode  pengujian  yang berbeda. Pada pengujian antioksidan dengan  metode  radikal  DPPH  dan  ABTS menunjukkan  aktivitas  yang  sangat  kuat dalam meredam radikal. Hasil yang serupa juga  diperoleh  dari  ekstrak  kedondong hutan  memiliki  kemampuan  yang  sangat kuat  dalam  mereduksi  besi  Fe 3+ menjadi Fe 2+ .
Gambar 1. Kurva baku kuersetin antara absorbansi vs konsentrasi kuersetin (μg/mL)
y = 0,0146x + 0,3297 R² = 0,9982 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 0 10 20 30 40 Ab so rb a n si
Konsentrasi (µMol)

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa,  uji aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  daun kedondong  hutan  (Spondias  pinnata (L.F.) Kurz)  dengan  metode  peredaman  radikal DPPH  dan  metode  ABTS  memberikan aktivitas  antioksidan  yang  sangat  kuat dengan  nilai  IC 50 berturut-turut sebesar 32,83  µg/mL  dan  45,84  µg/mL  sedangkan aktivitas  antioksidan  dalam  mereduksi  besi sebesar 2936,7 µmol/g sampel.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Benzie,  I.F.  and  Strain,  J.J.1996,  The ferric reducing ability of plasma (FRAP) as  a  measure  of  "antioxidant  power"  the FRAP  assay, Jurnal  Anal  Biochem,
Vol.239 (1). Hal 70-6.
2. Amarowicz,  R.,  Pegg,  R.B.,  Rahimi Moghaddam, P., Barl, B. and Weil, J.A., 2004,  Free-radical  Scavenging  Capacity and  Antioxidant  Activity  of  Selected Plant  Species  From  The  Canadian
Prairies, Jurnal  Food  Chem,  Vol.  84.
Hal.551-562.
3. Behera, U. K., Jha, K. P. and Mahapatra,
I.  C.  2004,  Integrated  management  of available  resources  of  the  small  and marginal  farmers  for  generation  of income and employment in eastern India, Crop Research, 27: 83-89
4. Kumaran,  A.,  and  Karunakaran,  R.J.
2005, Antioxidants Activities of Methanol  Extracts  of  Five, Phyllanthus urinaria.Jurnal  Food  and  Chemical
Toxicology, Vol. 46. Hal. 2485-2492.
5. Li, P., Huo, L., W., Lu, R., Deng, C., Liu,
L., Deng, Y., Guo, N., Lu, C. and He, C. 2011, Free Radical Scavenging Capacity,Antioxidant Activity and Phenolic Content of (Pouzolzia zeylanica), College of Pharmacy, J. Serb. Chem, Soc, Vol.76 (5). Hal.709-717.
6. Dwija,  I.B.N.P.,  Juniarta,  I.K.,  Yowani,
S.C.,  dan  Ariantari,  N.P.  2013,  Aktivitas Antituberkulosis  Ekstrak  Metanol  Daun
Kedondong  Hutan  (Spondias  pinnata
(L.F.)  Kurz.), Jurnal  Kimia,  Vol.  7  (1):
25-30. 7. Sarker, S. D., dan Nahar, L. 2009, Kimia untuk Mahasiswa Farmasi Bahan KimiaOrganik, Alam dan Umum. Yogyakarta:  Pustaka  Pelajar.  Hal:  501- 502 8. Dungir,  S.  G.,  Dewa,  G.  K.,  dan  Vanda,
S.  K.  2012,  Aktivitas  Antioksidan  dan Ekstrak Fenolik dari Kulit Buah Manggis, Jurnal MIPA UNSRAT Online. Jurusan  Kimia.  FMIPA.  UNSRAT, Manado.(1) 11-15.
9. Harborne,  J.B.  1987.  Metode  Fitokimia, Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis. Tumbuhan.  Terjemahan  Kosasih  P  dan Iwang SJ., ITB Bandung.
10. Snyder,  C.  R.,  J.  J.  Kirkland,  dan  J.  L. Glajach.  1997, Practical  HPLC  Method Development,  Second  Edition,  New York:  John  Wiley  and  Sons,  Lnc,  Hal. 722-723.
11. Jain  P,  Bhuiyan  MH,  Hossain  KR,
Bachar SC. Antibacterial and antioxidant activities  oflocal  seeded  banana  fruits,
African J of Pharmacy and Pharmacolo, 2011;5(11):1398-140
12. Miller N.J, Rice – Evans C, et.al. 1993, A novel  method  for  measuring  antioxidant capacity  and  its  application  tomonitoring the  antioxidant  status  in  premature neonates, Clin Sci, 84. 407 – 412.
13. Winarsi,  H.,  2007, Antioksidan  Alami dan  Radikal  Bebas,  Penerbit  Kanisius, Yogyakarta.
14. Vaya,  J.,  Aviram,  M.,  2001.  Nutritional antioxidant mechanisms of action, analyses  of  activities  and  medical applications. Curr. Med. Chem.- Immunol.  Endocr.  Metab.  Agents  1,  99 – 117 15. Apak,  R.,  Güçlü,  K.,  Demirata,  B., Özyürek, M., Çelik, S.E., Bektaşoğlu, B.,
Berker, K.I., Özyurt, D., 2007. Comparative  evaluation  of  various  total antioxidant  capacity  assays  applied  to phenolic  compounds  with  the  CUPRAC assay. Molecules 12, 1496 – 1547