Uji Kualitatif dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanolik Buah Maja ( Aegle Marmelos (L.)Correa) dengan Metode DPPH
Muhammad Nur Fauzi * , Joko Santoso
Program DIII Farmasi, Politeknik Harapan Bersama Tegal, Jl. Mataram No.9, Tegal 52147, Indonesia.
* nurfauzi24dec@gmail.com, jokosantoso@unisba.ac.id
Abstract. Indonesia is a country with the third largest tropical forest in the world. The number of medicinal plants in  Indonesia is estimated to be around 1,260 types of plants. Plants produce secondary metabolites that have  potential  as  antioxidants.  One  of  the plants  that contains a  lot  of  secondary  metabolites  is  maja (Aegle  marmelos  (L.)  Corr).  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  content  of  secondary metabolites in maja fruit extracts and to determine the antioxidant activity contained in maja fruit  extracts using  the  DPPH  method.  The  research  was  conducted  by  extracting  maja  fruit  samples  using  maceration method to obtain a thick extract. The extracts obtained were tested for secondary metabolites, TLC test, and antioxidant activity tests using the DPPH method using Uv-vis spectrophotometry. The results of this study indicate  that  maja  fruit  extract  contains  secondary  metabolites  of  flavonoids, tannins, alkaloids,  saponins, and  glycosides.  TLC  results  obtained  Rf  0.512.  The  result  of  antioxidant  activity  of  maja  fruit  extract obtained by IC50 was 269.153 µg / mL. and IC50 vitamin C as a comparison obtained 28,907µg / mL. This shows that the antioxidant activity of maja fruit extract is smaller than the antioxidant activity of vitamin C.
Keywords: Secondary Metabolites, Antioxidants, Maja Fruit (Aegle marmelos (L.) Correa)
Abstrak. Indonesia  adalah  negara  dengan  hutan  tropis  paling  besar  ketiga  di  dunia,  Jumlah  tumbuhan berkhasiat obat di Indonesia diperkirakan sekitar 1.260 jenis tumbuhan. Tumbuhan menghasilkan metabolit sekunder  yang  berpotensi  sebagai  antioksidan.  Salah  satu  tanaman  yang  banyak  mengandung  metabolit sekunder  adalah  tanaman  maja  (Aegle  marmelos  (L.)  Corr).  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  kandungan  metabolit  sekunder  pada  ekstrak  buah  maja  dan  untuk  mengetahui  aktivitas antioksidan  yang  terdapat  pada  ekstrak  buah  maja  dengan  metode  DPPH.  Penelitian  dilakukan  dengan mengekstraksi sampel buah maja dengan metode maserasi untuk memperoleh ekstrak kental. Ekstrak yang diperoleh  dilakukan  uji  metabolit  sekunder,  uji  KLT,  dan  uji  aktivitas  antioksidan  dengan  metode  DPPH menggunakan  spektrofotometri  Uv-vis.  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak  buah  maja mengandung metabolit sekunder flavonoid, tanin, alkaloid, saponin, dan glikosida. Hasil KLT diperoleh Rf 0,512.  Hasil  aktivitas  antioksidan  ektrak  buah  maja  yang  diperoleh  dengan  IC50  adalah  269,153  µg/mL. dan IC50 vitamin c sebagai pembanding diperoleh 28,907µg/mL. hal ini menunjukan bahwa daya aktivitas antioksidan ekstrak buah maja lebih kecil dibanding dengan daya aktivitas antioksidan vitamin C.
Kata Kunci: Metabolit Sekunder, Antioksidan, Buah Maja (Aegle marmelos (L.) Correa)

## A. Pendahuluan
Indonesia  adalah  negara  dengan  hutan  tropis  paling  besar  ketiga  di  dunia  (setelah  Brazil  dan Zaire).  Keanekaragaman  hayati  merupakan  basis  berbagai  pengobatan  dan  penemuan  industri farmasi dimasa mendatang. Jumlah tumbuhan berkhasiat obat di Indonesia diperkirakan sekitar 1.260  jenis  tumbuhan.  Tumbuhan  menghasilkan  metabolit  sekunder  yang  berpotensi  sebagai antioksidan,  zat  perwarna,  penambah  aroma  makanan,  parfum,  insektisida  dan  obat.  Ada 150.000 metabolit sekunder yang sudah diidentifikasi dan ada 4000 metabolit sekunder “baru” setiap tahun (Yuhernita & Juniarti, 2011)
Salah satu tanaman yang banyak mengandung metabolit sekunder adalah tanaman maja ( Aegle  marmelos (L.)  Corr).  Tanaman  maja  atau  disebut  juga  dengan  mojo,  adalah  sejenis tumbuhan  subtropis  yang  mudah  tumbuh  dan  berkembang  di  hampir  seluruh  wilayah  di Indonesia.  Buah  maja  sering  digunakan  sebagai  obat  tradisional.  Buah  yang  matang  dapat  di iris, dikeringkan dan digunakan sebagai obat disentri kronis, diare, dan sembelit. Kulit batangya digunakan untuk meracuni ikan. Akar maja digunakan sebagai obat penenang debaran jantung, gangguan  pencernaan,  dan  tukak  lambung.  Daun  maja  mengandung  saponin  dan  tannin, disamping itu akar dan kulit batangnya mengandung flavonoid, saponin, dan polifenol. Selain itu  getah  maja  juga  dapat  digunakan  sebagai  obat  pharmaceutical  yang  berfungsi  sebagai perekat untuk obat-obatan tablet (Patil et al, 2010).
Pada  penelitian  sebelumnya  Amit  dan  Rashmi  (2011)  menyatakan  bahwa  kandungan buah  maja  diantaranya  alkaloid,  terpenoid,  polifenol,  saponin,  tanin,  dan  plobatanin.  Pada penelitian  lain  juga  disebutkan  pula  kandungan  buah  maja  diantaranya  alkaloid,  flavonoid, fenol dan tanin (Sridhar 2014). Buah maja mengandung komponen tanin 9%, sedangkan pada kulit buah maja mencapai 20% (Naresh et al., 2012)
Melihat manfaat dan kandungan senyawa metabolit sekunder yang dimiliki buah maja ( Aegle marmelos (L.) Corr) yang belum banyak diketahui oleh masyarakat, maka diperkirakan buah  tersebut  memiliki  potensi  dalam  pengobatan  penyakit.  Aktivitas  biologi  buah  maja  juga belum banyak diketahui oleh masyarakat secara luas. Salah satu aktivitas biologi yang diduga terdapat pada buah maja adalah antioksidan. Antioksidan memiliki peranan yang penting bagi tubuh  manusia  dalam  menangkal  serangan  radikal  bebas  atau  kerusakan  yang  terjadi  akibat radikal bebas.
Berdasarkan hal tersebut, perlu dilakukan penelitian lebih dalam mengenai uji kualitatif meliputi  uji  flavonoid,  alkaloid,  tanin,  saponin,  dan  glikosida,  serta  uji  aktivitas  antioksidan dengan metode DPPH
B. Landasan Teori

## Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian antara lain: timbangan elektrik, gelas beker, gelas ukur, batang  pengaduk,  sendok  tanduk,  corong,  kertas  saring,  kain  flanel,  cawan  porselin,  bunsen, kaki  tiga,    pipet  tetes,  pipet  ukur,  mikropipet,  stirer,  tabung  reaksi,  rak  tabung  reaksi,  objeck glass, stop watch , spektrofotometer UV-Vis (Genesys 10s), lempeng KLT, bejana kromatografi dan tutup bejana, pipa kapiler, dan kertas penjenuh.

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  antara  lain:buah  maja,  vitamin  C,  DPPH  (sigma aldrich), etanol 70%, silika gel 60 F254, metanol, butanol, etil asetat, air, asam asetat, aquadest, etanol absolute (Merck, 99.8%) , HCl 2N, H2SO4, reagen bauchardat atau mayer, gelatin, sudan III (Merck, 25gr).

## Pengambilan dan Pengolahan Sampel
Sampel buah maja ( Aegle marmelos (L.) Correa) diperoleh dari daerah Slerok, Tegal, Provinsi Jawa  Tengah.  Buah  maja dipisahkan  dengan  kulitnya  kemudian  daging  buah  maja  diambil  di iris  tipis-tipis,  kemudian  diangin-anginkan  di  tempatyang  teduh  atau  tidak  terkena  sinar matahari  langsung  dan  ditutup  dengan  kain  hitamsampai  kering.  Tujuannya  adalah  simplisia tidak  mudah  rusak  dan  tidak  terjadi  kerusakan  komposisi  kandungan  senyawa  dalam  buah maja. Simplisia yang sudah kering diblender dan diayak dengan ayakan ukuran 40 mesh.

## Ekstraksi Sampel
Simplisia  kering  buah  maja  ( Aegle  marmelos (L.)Correa)  sebanyak  100  gram  dimasukkan  ke dalam wadah maserasi, lalu ditambahkan pelarut etanol 70% sebanyak 750 ml hingga simplisia tersebut  terendam,  dibiarkan  selama  5  hari  dalam  bejana  tertutup  dan  terlindungi  dari  cahaya matahari  langsung  sambil  diaduk  secara  periodik,  setelah  5  x  24  jam  dilakukan  penyaringan untuk  diperoleh  ekstrak  etanol  70%  cair.  Setelah  itu,  ampasnya  dimaserasi  kembali  dengan cairan  penyari  yang  baru.  Hasil  penyarian  yang  diperoleh  kemudian  diuapkan  dengan menggunakan waterbath 70 o C (Dirjen POM, 2000).

## Uji Kualitatif
Uji kualitatif yang dilakukan pada ekstrak buah maja ( Aegle marmelos (L.)Correa) meliputi uji flavonoid, uji alkaloid, uji tanin, uji saponin, dan uji glikosida.
1. Uji Flavonoid
Pengujian  dilakukan  dengan  cara  mengambil  masing-masing  sebanyak  2  mL  sampel buahmaja  yang  telah  diekstraksi  dengan  pelarut  air  dan  etanol,  kemudian  dipanaskan kurang  lebih  5  menit.  Setelah  dipananskan  masing-masing  dutambahkan  dengan  0,1 gram  logam  Mg  dan  5  tetes  HCl  pekat.  Jika  masing-masing  larutan  terbentuk  warna kuning  jingga  sampai  merah,  maka  positif  mengandung  flavonoid  (Mustikasari  & Ariyani, 2010)
2. Uji Alkaloid
Pengujian dilakukan dengan mengambil masing-masing 2 mL sampel buah maja yang telah diekstraksi dengan pelarut air dan etanol ke dalam 2 buah tabung reaksi yang berbeda. Setelah  itu  masing-masing  ekstrak  ditambah  dengan  5  tetes  reagen  Dragendroff.  Jika masing-masing  larutan  terbentuk  endapan  jingga  maka  positif  mengandung  alkaloid. Selanjutnya  utuk  pengujian  Alkaoid  dengan  menggunakan  reagen  mayer  dilakukan dengan  cara  mengambil  masing-masing  sebanyak  2  mL  sampel  buah  maja  yang  telah diekstraksi dengan pelarut air dan etanol ke dalam 2 buah tabung reaksi yang berbeda. Setelah  itu  masing-masing  ekstrak  ditambah  3  tetes  asam  klorida  pekat  dan  5  tetes reagen  Mayer.  Jika  masing-masing  larutan  terbentuk  endapan  putih  maka  sampel positif mengandung alkaloid (Mustikasari & Ariyani, 2010)
3. Uji Tanin
Pengujian dilakukan dengan cara mengambil masing-masing sebanyak 2 mL sampel buah maja yang telah diekstraksi dengan pelarut air dan etanol, kemudian dipanaskan kurang lebih  5  menit.  Setelah  dipanaskan  masing-masing  ditambahkan  beberapa  tetes  FeCl3 1%. Jika masing-masing larutan terbentuk warna coklat kehijauan atau biru kehitaman maka positif mengandung tanin (Marlinda dkk, 2012).
Pengujian  tanin  yang  kedua  l  ml  filtrat  dipindahkan  kedalam  tabung  reaksi  dan ditambahkan  2-3  tetes  gelatin  1  %.  Hasil  positif  menunjukkan  terbentuknya  endapan putih (Kumoro, 2015)
4. Uji Saponin
Pengujian dilakukan dengan cara mengambil 1 g serbuk simplisia dipanaskan dengan 100 mL akuades hingga mendidih selama 5 menit kemudian disaring dan diperoleh ekstrak air. 10 mL ekstrak air digojok secara vertikalselama 10 menit, kemudian ditambahkan beberapa tetes HCl 2 N jika terbentuk busa dengan mantap mengindikasi mengandung saponin (Handayani dkk., 2017).
5. Uji Glikosida
Pengujian dilakukan dengan cara mengambil masing-masing sebanyak 2 mL sampel buah maja yang telah diekstraksi dengan pelarut air dan etanol, kemudian dipanaskan kurang lebih  5  menit.  Kemudian  tambahkan  5  ml  asam  asetat  anhidrat  dan  10  tetes  H 2 SO 4 pekat.  Amati  perubahan  warna  yang  terjadi  jika  terbentuk  warna  biru/hijau menandakan adanya senyawa glikosida (Depkes RI, 1989).

## Uji Kromatografi Lapis Tipis
Bejena  pengembang  (chamber)  dijenuhi  dengan  fase  gerak  yang  sesuai  untuk  golongan senyawa  aktif.  fase  gerak  flavonoid  adalah  butanol  :  asam  asetat  :  air  (1  :  4  :  5).  Totolkan
ekstrak  pada  lempeng  KLT  (silika  gel  60  F254)  untuk  flavonoid,  pastikan  ekstrak  yang ditotolkan  sampai  kering.  Kemudian  lempeng  KLT  dielusi,  dikeringkan  kemudian  dideteksi sinar UV λ 254 nm dan 365 nm. Kemudian dihitung Rf dan HRfnya.
Pembuatan blanko DPPH 0,1 mM
Serbuk DPPH ditimbang sebanyak 3,9 mg dan dilarutkan dalam etanol p.a sampai tepat 100,0 mL (0,1 mM) (Khasanah et al ., 2014).

## Pembuat pembanding vitamin C
Vitamin  C  sebanyak  0,5  mg  ditambahkan  air  sampai  50,0  ml  sehingga  diperoleh  kadar  1%. Dari kadar ini dibuat seri konsentrasi sebesar 10, 15, 20, 25 dan 30 μg/mL.

## Pembuatan kadar sampel vitamin C
Ekstrak  etanol  buah  maja  ditimbang  dengan  seksama  0,1  gram,  kemudian  dilarutkan  dengan metanol  sampai  50  ml,  sehingga  diperoleh  kadar  1%.  Dari  kadar  1%  dibuat  seri  konsentrasi sebesar 100, 150, 200, 250 dan 300 ppm. (Williams, 1995)

## Penentuan panjang gelombang maksimal larutan DPPH 0,1 mM
Penentuan panjang gelombang (λ) dengan cara mengukur 4,0 mL larutan DPPH 0,1 mM pada spektrofotometer  dengan  panjang  gelombang  400-600  nm  untuk  mendapatkan  absorbansi  ± 0,2-0,8 (Khasanah et al ., 2014).
Penentuan operating time larutan DPPH 0,1mM Penentuan operating time dilakukan dengan cara mereaksikan 50 μl baku pembanding vitamin C  ditambah  4,0  mL  larutan  DPPH  0,1  mM,  dihomogenkan  dengan  stirer  selama  1  menit  dan diukur absorbansinya pada menit ke 0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, dan 60 pada λ maksimal yang sudah diperoleh (Khasanah et al ., 2014).

## Uji aktivitas antioksidan dengan metodeDPPH
Sebanyak  4,0  mL  DPPH  0,1  mM  dimasukkan  tabung  reaksi,  tambahkan  50,0  μL  ekstrak etanolik  buah  maja  dengan  berbagai  konsentrasi,  kemudian  distirer  1  menit  sampai  homogen dan diamkan selama 30 menit ditempat gelap, baca absorbansinya pada λ maksimal (515 nm). Untuk uji aktivitas baku pembanding vitamin C perlakuannya sama.

## Analisa Data
Data  nilai  absorbansi  dari  ekstrak  etanolik Aegle  marmelos serta  baku  pembanding,  dihitung dengan rumus: % aktivitas antioksidan = Absorbansi blanko (Absorbansi DPPH) - Absorbansi sampel (Absorbansi ekstrak etanolik Aegle marmelos dan vitamin C dibagi Absorbansi blanko (Absorbansi  DPPH)  dikali  100%.  Data  diolah  menggunakan  analisa  probit  antara  log konsentrasi larutan uji (x) dengan persentase aktivitas antioksidan (y) sehingga diperoleh IC50. Untuk  mengetahui  perbedaan  aktivitas  antioksidan  antara  ekstrak  etanolik Aegle  marmelos digunakan uji.

## C. Hasil Penelitian dan Pembahasan
Penelitian  ini  menggunakan  buah  maja  ( Aegle  marmelos (L.)  Correa)  untuk  memberikan  data secara  ilmiah.  Metode  ekstraksi  yang  digunakan  adalah  metode  maserasi  yang  merupakan metode  ekstraksi  dingin,  dimana  metode  ini  tidak  merusak  komponen  kimia  pada  buah  maja, karena  tidak  adanya  pemanasan  yang  terjadi  dalam  proses  ekstraksi,  namun  membutuhkan waktu yang lama dibandingkan proses ekstrasi yang lainnya.
Ekstraksi  yang  dilakukan  menggunakan  pelarut  etanol  70%  yang  merupakan  pelarut polar  yang  bersifat  tidak  toksik.  Selain  itu,  pelarut  etanol  70%  memiliki  keistimewaan tersendiri yaitu dapat menyari komponen kimia yang bersifat polar maupun yang bersifat non polar. Hasil maserasi kemudian dipekatkan dengan menggunakan waterbath sehingga diperoleh ekstrak kental yang kemudian dihitung rendamen ekstrak. Rendamen ekstrak  dihitung dengan cara  membandingkan  jumlah  ekstrak  yang  diperoleh  dengan  simplisia  awal  yang  digunakan. Adapun  Besar  rendamen  hasil  ekstraksi  100  g  buah  maja  dalam  750  mL  etanol  70%  yang dihitung berdasarkan persen rendamen ekstrak yaitu 36,69%.
Hasil  ekstrak  etanolik  dari  buah  maja  ( Aegle  marmelos (L.)  Correa)  kemudian dilakukan  uji  kualitatif  metabolit  sekunder  menggunakan  pereaksi  warna  yang  meliputi  uji alkaloid,  flavonoid,  glikosida,  saponin,  dan  tanin.  Uji  kualitatif  bertujuan  untuk  identifikasi awal dalam mengetahui golongan senyawa bioaktif yang terhadap dalam simplisia dan ekstrak sebagai  langkah  penting  dalam  penentuan  potensi  aktivitasnya  sebagai  obat  (Simaremare, 2014). Senyawa bioaktif sering juga disebut dengan senyawa metabolit sekunder. Berdasarkan hasil  penelitian  yang  dilakukan,  ekstrak  buah  maja  mengandung  senyawa  metabolit  sekunder alkaloid, flavonoid, glikosida, saponin, dan tanin.
Tabel 1. Hasil Uji Kualitatif Buah Maja ( Aegle marmelos (L.)Correa)
Skrining Fitokimia Hasil Alkaloid + Flavonoid + Glikosida + Saponin + Tanin +
Keterangan : (+) Mengandung senyawa metabolit sekunder yang diujikan (-) Tidak mengandung senyawa metabolit sekunder yang diujikan Pengujian aktivitas anti radikalbebas secara kualitatif dilakukan dengan menggunakan KLT. Sampel ditotolkan pada lempeng KLT kemudian dielusi menggunakan cairan pengelusi (eluen)  n-  butanol  :  asam  asetat  :  air  (4  :  1:  5),  karena  cairan  pengelusi  ini  biasa  digunakan untuk  flavonoid  (Harborne,  1989).  Hasil  pengujian  memperlihatkan  bercak  kuning  menyala dalam sinar UV 366 nm pada nilai Rf 0,512 pada ekstrak etanol 70%. Bercak yang memberikan perubahan warna ungu menjadi kuning menunjukkan adanya aktivitas anti radikal bebas. Hasil KLT dapat dilihat pada table 2.
Tabel 2. Hasil KLT Buah Maja ( Aegle marmelos (L.) Correa) Sampel Rf UV 254 Warna UV 366 Warna Ekstrak Etanolik Buah Maja 0,512 Kunin g Kuning menyala
1. Fase gerak: n-Butanol : Asam Asetat : Air
2. Fase diam : silika gel 60 F254
3. Ukuran : 10 x 3 cm
Penentuan  panjang  gelombang  maksimal  larutan  DPPH  0,1  mM  terhadap  absorbansi diperoleh hasil absorbansi sebesar 1,23A pada panjang gelombang 515 nm, sehingga pengujian sampel dan kontrol positif dilakukan pada panjang gelombang 515 nm.
Hasil penentuan operating time vitamin C dengan DPPH 0,1 mM diperoleh pada menit ke 40. Maka pengujian aktivitas antioksidan dilakukan pada menit ke 40.
Pengujian  aktivitas  antioksidan  dilakukan  secara  kuantitatif  dengan  menggunakan metode yang dilakukan Khasanah et al ., (2014). Diperoleh hasil pada gambar 1.
Gambar 1. Grafik aktivitas antioksidan ekstrak etanolik buah maja
Dapat  diketahui  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  sampel  yang  digunaka  maka aktivitas  antioksidan  juga  semakin  besar,  ditandai  dengan  berkurangnya  intensitas  warna menggambarkan  penurunan  konsentrasi  DPPH  yang  diberi  sampel  maupun  pembanding. Semakin  besar  aktivitas  peredaman  radikal  DPPH  maka  konsentrasi  DPPH  yang  masih  ada semakin kecil, sehingga nilai absorbansi yang dihasilkan semakin turun
Perolehan Inhibition Concentration 50 (IC 50 ) dan Analisis Data pada ekstrak buah maja dan vitamin C sebagai pembanding diperoleh hasil pada tabel 3 dan 4.
Tabel 3. Hasil Aktivitas Antioksidan Vit. C
Sampel Konsen trasi
sampel (μg/ml) Probit
Nilai IC 50 (μg/ml) Vitamin C 10
5,50
Y  = 1,333x – 3,053 R 2 = 0,333 IC50 = 28,907
20 5,50
40 5,52
80 5,52
Tabel 4. Hasil Aktivitas Antioksidan Buah Maja ( Aegle marmelos (L.)Correa)
Sampel
Konsen trasi
sampel (μg/ml) Probit
Nilai IC 50 (μg/ml)
Ekstrak Buah 100 4,92 Y  = 0,237x – 4,424 R 2 = 0,830 150 4,92
y = 0.2377x + 4.424 R² = 0.8304 4.85 4.9 4.95 5 5.05 2 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 2.6 P ro b it Log Konsentrasi
Maja 200 4,95 IC50 = 269,153 250 5 300 5,03
Dari tabel diketahui bahwa IC 50 vitamin C adalah 28,907 dan sampel ekstrak buah maja adalah 269,153 µg/ml. Hal ini menunjukkan bahwa daya aktivitas antioksidan ekstrak etanolik buah  maja  lebih  kecil  disbanding  dengan  daya  aktivitas  antioksidan  vitamin  C  dengan menggunakan  metode  DPPH.  Hal  ini  dikarenakan  kadar  vitamin  C  dan  flavonoid  yang terkandung dalam ekstrak etanolik buah maja lebih sedikit disbanding dengan vitamin C murni yang merupakan senyawa tunggal yang potensial sebagai antioksidan.
Menurut Phongpaichit et al (2007), Suatu senyawa dikatakan sebagai antiradical bebas sangat  kuat  apabila  nilai  IC 50 < 10 μg/mL, kuat apabila nilai IC 50 antara  10-50  μg/mL,  sedang apabila nilai IC 50 berkisar antara 50-100 μg/mL, lemah apabila nilai IC 50 berkisar antara 100-250 μg/mL dan tidak aktif apabila IC 50 diatas 250 μg/mL. Hal ini menunjukan aktivitas antioksidan buah maja tidak aktif.

## D. Kesimpulan
Hasil  uji  kualitatif  menunjukan  bahwa  buah  maja  mengandung  metabolit  sekunder  alkaloid, flavonoid,  glikosida,  saponin,  dan  tanin.  Sedangkan  hasil  ekstrak  etanolik  buah  mempunyai aktivitas  antioksidan  dengan  nilai  IC 50 ekstrak  etanolik  buah  maja sebesar  269,153  µg/ml  dan pada vitamin C sebasar 28,907 μg/ml.

## Daftar Pustaka
[1] Direktorat  Jenderal  Pengawasan  Obat  dan  Makanan.  (2013).  Peraturan  Kepala  Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik  Indonesia tentang Penerapan Pedoman Cara Pembuatan Obat yang Baik. Peraturan Kepala Badan Pengawasan Obat Dan Makanan Republik Indonesia Tentang Penerapan Pedoman Cara Pembuatan Obat Yang Baik .
[2] Handayani,  S.,  Wirasutisna,  K.  R.,  &  Insanu,  M.  (2017).  Penapisan  Fitokimia  dan Karakterisasi Simplisia Daun Jambu Mawar (Syzygium jambos Alston). Jf Fik Uinam .
[3] Harborne,  J.  B.  (1987).  Metode  Fitokimia,  Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis Tumbuhan. ITB.
[4] Kumoro,  A.  C.,  Hasan,  M.,  &  Singh,  H.  (2009).  Effects  of  solvent  properties  on  the Soxhlet  extraction  of  diterpenoid  lactones  from  Andrographis  paniculata  leaves. ScienceAsia . https://doi.org/10.2306/scienceasia1513-1874.2009.35.306
[5] Marlinda,  M.,  Sangi,  M.  S.,  &  Wuntu,  A.  D.  (2012).  Analisis  Senyawa  Metabolit Sekunder  dan  Uji  Toksisitas  Ekstrak  Etanol  Biji  Buah  Alpukat  (Persea  americana Mill.). Jurnal MIPA . https://doi.org/10.35799/jm.1.1.2012.427
[6] Mustikasari,  K.,  &  Aryani,  D.  (2010).  Skrining  fitokimia  ekstrak  metanol  biji kalangkala (Litsea angulata). Jurnal Sains Dan Terapan Kimia .
[7] Naresh,  C.,  Adarsh,  M.,  Mehta,  &  Dodia.  (2012).  Primary  identification  of  certain phytochemical  constituents  of  aegle  marmelos  (l.)  Corr.  Serr  responsible  for antimicrobial  activity  against  selected  vegetable  and  clinical  pathogen. International Journal of Physical and Social Sciences .
[8] Nugraheni.  (2007).  Perbandingan  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Metanol  dan  Ekstrak Etanol Daun Tempuyung (Sunchus arvensis L.) serta Penentuan EC50 dengan Metode DPPH (1,1- difenil-2-pikrilhidrazil).
[9] Pandey,  A.,  &  Mishra,  R. (2011).  Antibacterial  properties  of  Aegle  marmelos  leaves  , fruits and peels against various pathogens. Journal of Pharmaceutical and Biomedical
Sciences .
[10] Patil,  D.  N.,  Kulkarni,  A.  R.,  &  Patil,  B.  S.  (2010).  Fruit  gum  of  Aegle  marmelos  as pharmaceutical aid. International Journal of Pharmacology .
https://doi.org/10.3923/ijp.2010.68.71
[11] Phongpaichit, S., Nikom, J., Rungjindamai, N., Sakayaroj, J., Hutadilok-Towatana, N., Rukachaisirikul,  V.,  &  Kirtikara,  K.  (2007).  Biological  activities  of  extracts  from endophytic  fungi  isolated  from  Garcinia  plants. FEMS  Immunology  and  Medical Microbiology . https://doi.org/10.1111/j.1574-695X.2007.00331.x
[12] Simaremare,  E.  S.  (2014).  Skrining  Fitokimia  Ekstrak  Etanol  Daun  Gatal  (Laportea decumana (Roxb.) Wedd). Pharmacy .
[13] Sridhar,  N.,  Raghavendra,  M.,  Prasad,  M.N.V.,  Kiran,  B.V.V.S.S.,  Kanthal,  L.K. (2014).  Screening  the  fruits  of  Aegle  marmelos  for  antibacterial,  Anthelmintic  and Cardiotonic Properties. International Journal of Pharma Research & Review , 3 , 48–55.
[14] Williams, W. B., Cuvelier, M. E. C., & Berset, C. (1995). Use of a Free Radical Method to Evaluate Antioxidant Activity. Iwt , 28 (1), 25–30.
[15] Yuhernita, J. (2011). Analisis Senyawa Metabolit Sekunder Dari Ekstrak Metanol Daun Surian  Yang  Berpotensi  Sebagai  Antioksidan. MAKARA  of  Science  Series , 15 (1),  48– 52.