## VARIASI UKURAN PARTIKEL PADA EKSTRAKSI BIJI ALPUKAT (PERSEA AMERICANA MILL.) DAN EFEKTIVITASNYA TERHADAP PENURUNAN KADAR TRIGLISERIDA PADA TIKUS HIPERLIPIDEMIA

## THE VARIATION OF PARTICLE SIZES OF AVOCADO
( PERSEA AMERICANA MILL. ) SEED DURING EXTRACTION AND ITS EFFECTIVENESS TOWARDS LOWERING TRIGLYCERIDE LEVELS IN HYPERLIPIDEMIC RATS
Jojor Lamsihar Manalu 1, *, Billy Sukendar 2 , Zita Arieselia 3 ,
Rita Dewi 4 , Yulia Tanti Narwati 5
1 Departemen Fisiologi, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Katolik Indonesia Atma Jaya, Jl. Pluit Raya No. 2, Jakarta, 14440
2 Fakultas  Kedokteran  dan  Ilmu  Kesehatan  Universitas  Katolik  Indonesia  Atma  Jaya,  Jl.  Pluit  Raya  No.  2, Jakarta, 14440
3 Departemen  Farmakologi,  Fakultas  Kedokteran  dan  Ilmu  Kesehatan  Universitas  Katolik  Indonesia  Atma Jaya, Jl. Pluit Raya No. 2, Jakarta, 14440
4 Departemen  Kimia  dan  Biokimia,  Fakultas  Kedokteran  dan  Ilmu  Kesehatan  Universitas  Katolik  Indonesia Atma Jaya, Jl. Pluit Raya No. 2, Jakarta, 14440
5 Departemen  Mikrobiologi,  Fakultas  Kedokteran  dan  Ilmu  Kesehatan  Universitas  Katolik  Indonesia  Atma Jaya, Jl. Pluit Raya No. 2, Jakarta, 14440
* Korespondensi: jojor.lamsihar@atmajaya.ac.id

## ABSTRACT
Introduction: Avocados contain active compounds that decrease blood triglyceride levels. The utilization of avocado seed as a medication to decrease triglyceride has potential that still needs to be discovered before it can be used as an alternative herbal medicine.
Methods: This research was done on Sprague Dawley rats. The rats had propylthiouracil (PTU) for 14 days to reach a hyperlipidemic state and were divided into 2 groups of intervention. The first group received avocado seed extract that had been milled for 15 minutes and others for 30 minutes. Particle size is determined by the average diameter of 10 random avocado seed particles in each group. The extract is given daily for 14 days. Triglyceride levels in the rats’ blood were measured after PTU was given for 14 days and again after 7 and 14 days of avocado seed extract intervention. Unpaired t-test and paired t-test are used to analyze the data. Results: The average particle size of avocado seeds is 27.03 µm and 13.50 µm. Avocado seed extract lowers blood triglyceride levels in hyperlipidemic rats from day 0-7, day 0-14, and day 7-14 in the first group (p<0.05). The findings in the second group are similar (p<0.05), except for days 7-14 (p>0.05). There is no significant difference in the decrease of blood triglyceride levels between the groups. (p>0.05).
Conclusions: Avocado seed extract can lower the  blood triglyceride level in rats. The variation of avocado seed’s particle size on its extraction does not affect the decrease of blood triglyceride.
Key Words: avocado seed extract, blood triglyceride level, Sprague Dawley rats, particle size

## ABSTRAK
Pendahuluan: Biji buah alpukat memiliki zat aktif yang dapat menurunkan kadar trigliserida.  Pemanfaatan biji buah alpukat sebagai obat penurun kadar trigliserida masih memiliki potensial yang perlu dikembangkan untuk menjadi salah obat herbal yang alternatif.
Metode: Penelitian eksperimental  dilakukan  terhadap  tikus  Sprague  Dawley,  tikus  diberikan  sediaan propylthiouracil (PTU) selama 14 hari untuk mencapai kondisi hiperlipidemia yang dibagi ke dalam 2 kelompok intervensi. Kelompok pertama diberikan ekstrak biji alpukat yang diekstraksi dengan metode remaserasi dari biji  alpukat  yang  digerus  selama  15  menit  dan  kelompok  kedua  digerus  selama  30  menit.  Ukuran  partikel didapatkan dari rata-rata diameter 10 partikel biji alpukat secara acak dari setiap variasi waktu penggerusan. Kadar trigliserida dalam darah tikus diukur setelah 14 hari pemberian PTU dan diukur lagi setelah 7 hari, dan 14 hari pemberian ekstrak biji alpukat. Analisis data menggunakan uji paired t-test dan unpaired t-test.

## ARTIKEL PENELITIAN
Hasil: Rata-rata ukuran partikel biji alpukat pada kelompok 1 sebesar 27,03 µm dan kelompok 2 sebesar 13,50 µm Pemberian ekstrak biji alpukat mampu menurunkan kadar trigliserida secara signifikan dari hari 0-7, hari 0-14, dan hari 7-14 pada kelompok 1 (p<0,05). Hal yang sama ditemukan pada kelompok 2 (p<0,05) selain dari  hari  7-14  (p>0,05).  Tidak  ditemukan  perbedaan  yang  signifikan  dalam  penurunan  trigliserida  pada kelompok pertama dan kedua (p>0,05).
Simpulan: Pemberian ekstrak biji alpukat dapat menurunkan kadar trigliserida pada tikus. Perbedaan waktu penggerusan dan ukuran biji alpukat yang diekstraksi tidak memengaruhi efektivitas dalam penurunan kadar trigliserida.
Kata Kunci: ekstrak biji alpukat, kadar trigliserida darah, tikus Sprague Dawley, ukuran partikel

## PENDAHULUAN
Trigliserida merupakan salah satu jenis lemak  yang  berguna  bagi  tubuh  manusia. Trigliserida berfungsi sebagai cadangan ener- gi. 1 Trigliserida dalam jumlah yang berlebihan dapat meningkatkan resiko seseorang terkena penyakit kardiovaskular . 2 Menurut Riset Kese- hatan Dasar yang dilakukan pada tahun 2013, sebanyak 13 persen penduduk Indonesia de- ngan usia ≥15 tahun memiliki kadar trigliserida abnormal  dengan  kategori borderline tinggi dan  11,9  persen  dengan  kategori  tinggi – sangat tinggi. 3
Biji  buah  alpukat  ( Persea  americana Mill. ),  yang  pada  umumnya  dibuang  setelah konsumsi buah alpukat, memiliki khasiat untuk dimanfaatkan  menjadi  obat  tradisional  penu- runan kadar lemak. Biji alpukat memiliki kan- dungan metabolit sekunder seperti flavonoid, saponin,  dan  tannin. 4 Flavonoid  memiliki mekanisme menghambat enzim 3-hidroksi 3- metilglutaril koenzim A reductase (HMG Co-A reductase).  Flavonoid  juga  dapat  meningkat- kan aktivitas enzim LCAT ( Lecithin cholesterol acyltransferase ) yang memiliki hubungan da- lam penurunan kadar kolesterol total, triglise- rida,  LDL-C,  konsentrasi  Apo-B  dan  pening- katan  HDL-C. 4,5 Saponin  dapat  menghambat peroksidasi lemak, meningkatkan konsentrasi enzim antioksidan,  menghambat kerja enzim lipase  yang  berfungsi  dalam  penyerapan
lemak  ke  dalam  tubuh. 6 Tannin  dapat  meng- hambat  penyerapan  kolesterol  dengan  cara bereaksi dengan protein mukosa dan sel epitel usus sehingga dapat menghambat penyerap- an  lemak. 7 Beberapa  penelitian  telah  dilaku- kan  untuk  mengetahui  kemampuan  biji  buah alpukat dalam menurunkan kadar lemak pada darah  tikus.  Penelitian  Pahua-Ramos, et  al . menemukan  bahwa  komponen  fenol  yang terkandung dalam biji alpukat terutama proto- catechuic  acid memiliki  pengaruh  terhadap penurunan kadar lemak. 8 Penelitian serupa di Indonesia  telah  dilakukan  dengan  metode ekstraksi maserasi, mendapatkan bahwa eks- trak  biji  alpukat  dapat  menurunkan  kadar lemak pada tikus. 4 Penelitian lainnya menge- nai hal serupa juga mendapatkan bahwa eks- trak  biji  alpukat  dapat  menurunkan  tekanan darah pada tikus hipertensi. 9
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  pengaruh  dari  variasi  ukuran partikel  ekstraksi  biji  alpukat  terhadap efektivitas  ekstraknya  dalam  menurunkan kadar trigliserida.

## METODE
Topik utama dalam penelitian ini adalah pemberian  ekstrak  biji  alpukat  pada  tikus dengan  kondisi  hiperlipidemia.  Biji  buah  al- pukat harus melalui beberapa proses sebelum menjadi ekstrak biji alpukat. Biji alpukat dica-
cah  tipis  dan  jemur  selama  1  minggu  tanpa terkena  sinar  matahari  langsung.  Biji  alpukat yang  sudah  kering  digerus  menggunakan blender.  Penggerusan  biji  alpukat  dibagi  ke dalam  2  kelompok,  yang  pertama  digerus selama  15  menit  dan  yang  kedua  digerus selama 30 menit dengan tujuan memperkecil ukuran  partikel.  Ukuran  partikel  lebih  kecil diharapkan  dapat  memperluas  permukaan partikel  yang  bersentuhan  dengan  pelarut sehingga  ekstrak  lebih  banyak  terserap . Ukuran biji alpukat akan diukur menggunakan mikroskop  trinokuler  yang  sudah  terhubung dengan  computer  menggunakan  perangkat lunak Cellsens  1.17. Ukuran  biji  alpukat ditentukan  dari  rata-rata  diameter  10  partikel biji  alpukat  yang  dipilih  secara  acak  setiap kelompok.  Setelah  penggerusan,  biji  alpukat akan  diekstraksi  mengunakan  metode  rema- serasi  yang  merupakan  metode  maserasi berulang.  Biji  alpukat  dimasukkan  ke  dalam labu  Erlenmeyer  perkelompok  dan  diberi etanol 96% dengan perbandingan 250 ml/100 g.  Pengulangan  proses  maserasi  dilakukan sebanyak  5  kali.  Hasil  maserasi  melalui proses evaporasi menggunakan rotary evaporator .  Hasil  dari  evaporasi  berupa ekstrak  biji  alpukat  yang  masih  perlu dimasukkan  ke  dalam  toples  berisi  silica  gel selama 1 bulan untuk menarik keluar air yang masih tersisa di dalam ekstrak tersebut.
Penelitian ini adalah penelitian eksperi- mental  yang  dilakukan  pada  tikus  putih ( Rattus  norvegicus) galur Sprague-Dawley, dikarenakan jenis tikus ini tenang dan mudah diatur. 10 Tikus  yang  digunakan    berkelamin jantan, memiliki berat ± 200 gram, dan berusia
≥8 minggu. Jenis kelamin tikus yang diguna- kan  adalah  tikus  jantan,  untuk  menghindari pengaruh  hormon  terhadap  metabolisme lemak dan kolesterol. 11
Tikus awalnya menjalani proses adaptasi selama 7 hari. Saat proses adaptasi dan  sepanjang  penelitian,  tikus  diberi  makan pakan  standar  tikus  dan  juga  diberi  air  putih secara ad libitum . Tikus percobaan ditempat- kan  ke  dalam  kandang  secara  berkelompok dengan  jumlah  2  hingga  3 tikus  perkandang. Kandang  tikus  ditempatkan  di  dalam  ruang dengan  suhu  20-23 0 C  dengan  waktu  terang 12 jam dan waktu gelap 12 jam. 12
Setelah  melalui  proses  adaptasi,  tikus diberi  sediaan  propiltiourasil  (PTU)  dengan dosis 40 mg/KgBB/hari selama 14 hari untuk mencapai  kondisi  hiperlipidemia. 13 Propiltio- urasil  menginduksi  kondisi  hipotiroid  yang menyebabkan  peningkatan  kadar  kolestrol total,  trigliserida,  dan  lipoprotein. 14 Propiltio- urasil  diencerkan  ke  dalam  air  1  ml  sebelum dimasukan ke dalam lambung tikus menggu- nakan sonde. Tikus termasuk ke dalam kriteria hiperlipidemia  jika  berat  badan  20%  lebih berat dari berat badan awal, kadar kolesterol >135 mg/dL, dan trigliserida >92 mg/dL. 15
Tikus yang sudah dalam keadaan hiper- lipidemia  setelah  14  hari  pemberian  PTU  di- bagi ke dalam 2 kelompok intervensi. Kelom- pok  pertama  diberikan  ekstrak  biji  alpukat yang diekstraksi dari biji alpukat yang digerus selama 15 menit dengan ukuran partikel rata- rata  sebesar  27,03  µm.  Kelompok  kedua diberikan ekstrak biji alpukat yang diekstraksi dari biji alpukat yang digerus selama 30 menit dengan  ukuran  partikel  rata-rata  sebesar
13,50  µm.  Ekstrak  biji  alpukat  diberikan dengan  dosis  250  mg/kgBB/hari  selama  14 hari. 4 Pemberian ekstrak biji alpukat dilakukan dengan cara melarutkan ekstrak biji alpukat ke dalam  air  1  ml  dan  dimasukkan  ke  dalam lambung tikus dengan cara disonde.
Pengukuran kadar trigliserida tikus dila- kukan  1  hari  setelah  pemberian  PTU  yang terakhir (hari 0). Kadar trigliserida pada darah tikus  diukur  lagi  1  hari  setelah  hari  ke  7 pemberian  ekstrak  biji  alpukat  (hari  7)  dan  1 hari  setelah  hari  terakhir  pemberian  ekstrak biji  alpukat  (hari  14).  Pengukuran  kadar trigliserida  menggunakan  alat LipidPro TM .
Pengambilan  darah  tikus  dilakukan  dengan menyayat ekor tikus. 16
Hasil dari pengukuran kadar  trigliserida darah  tikus  dicatat  dan  diolah  menggunakan paired  t-test untuk  mengetahui  signifikansi penurunan  kadar  trigliserida  setelah  pembe- rian  ekstrak  biji  alpukat.  Uji unpaired  t-test dilakukan  pada  data  penurunan  kadar  trigli- serida tikus antara kelompok 1 dan kelompok
2 untuk mengetahui signifikansi perbedaan di antara kedua kelompok tersebut.

## HASIL
Tabel 1 menunjukkan perbedaan ukuran partikel  ekstrak  biji  alpukat  setelah  digerus selama 15 menit dan 30 menit. Ukuran partikel dihitung  dari  rata-rata  panjang  tertinggi  10 buah  partikel  ekstrak  biji  alpukat  yang  sudah digerus  yang  diambil  secara  acak.  Hasil pengukuran  menunjukan  bahwa  biji  alpukat yang  digerus  selama  15  menit  memiliki  rata- rata  ukuran  partikel  sebesar  27,03  µm.  Biji alpukat  yang  digerus  selama  30  menit menunjukan ukuran partikel rata-rata sebesar 13,50  µm.  Hal  ini  membuktikan  bahwa  se- makin lama biji alpukat digerus, semakin kecil ukuran  partikelnya.  Gambar  1  menunjukkan rata-rata  kadar  trigliserida  pada  hewan  coba pada  hari  0,  7,  dan  14.  Terjadi  penurunan kadar trigliserida darah tikus dari hari 0 ke hari 7 hingga hari 14 pada kedua kelompok.
Tabel 1 . Ukuran Partikel Penggerusan 15 menit (µm) Penggerusan 30 menit (µm) 50,92 13,24 27,58 13,47 26,11 12,27 19,69 12,30 21,70 15,61 37,56 16,35 25,06 11,91 25,42 13,46 17,44 13,45 18,82 12,89 27,03 13,50
Gambar 1. Grafik Rata-rata Kadar Trigliserida pada Tikus
Uji  normalitas  data  menggunakan metode Shapiro-Wilk. Sebaran data dikatakan normal  bila  p>0,05.  Nilai  p  dari  kelompok  1 pada  hari  0,  hari  7,  dan  hari  14  secara berurutan  yaitu  0,346,  0,141,  0,280  yang artinya  data  berdistribusi  normal.  Demikian pula, nilai p pada kelompok 2 di hari 0, hari 7, dan  hari  14  secara  berurutan  adalah  0,457, 0,273,  0,174  yang  menunjukkan  bahwa  data berdistribusi normal.
Uji paired  t-test dilakukan  untuk menentukan  signifikansi  penurunan  kadar trigliserida  dari  hari  0  pemberian  ekstrak  biji alpukat sampai hari 7, dan dari hari 0 sampai hari  14.  Pada  uji paired  t-test ,  perbedaan dinyatakan  signifikan  bila  nilai p≤0,05.  Hal yang diuji adalah kadar trigliserida dari hari ke 0 dengan hari 7, dan hari ke 0 dengan hari 14. Hasil analisis data menunjukkan bahwa pada kelompok 1  terdapat perbedaan yang signifikan pada kadar trigliserida tikus dari hari 0  hingga  hari  7  (p=0,047)  dan  dari  hari  0 hingga  hari  14  (p=0,027).  Pada  kelompok  2, hasil  analisis  data  menunjukkan  terdapat
perbedaan  yang  signifikan  pada  kadar trigliserida  tikus  dari  hari  0  hingga  hari  7 (p=0,001), hari 0 hingga hari 14 (p=0,000).
Uji unpaired  t-test untuk  menentukan adanya perbedaan signifikan pada efektivitas dalam  penurunan  kadar  trigliserida  antar kelompok  1  dan  kelompok  2.  Pada  uji unpaired t-test , perbedaan dinyatakan signifikan  bila  nilai  p  (sig.  (2-tailed))  <  0,05. Pada  uji  kali  ini  yang  diuji  adalah  perubahan kadar  trigliserida  ( Δ Trigliserida) dari  hari  0 hingga hari 7, hari 0 dan hingga hari 14, antara kelompok 1 dengan kelompok 2. Hasil analisis menunjukkan  tidak  ada  perbedaan  yang signifikan  pada  efektivitas  penurunan  kadar trigliserida antara kelompok 1 dan kelompok 2 pada  hari  0  hingga  hari  7  (p=0,853),  hari  0 hingga  hari  14  (p=0,744),  dan  hari  7  hingga hari 14 (p=0,214).

## DISKUSI
Pada  penelitian  ini,  pemberian  PTU dengan  dosis  40  mg/kgBB  secara  harian selama  14  hari  berhasil  meningkatkan  kadar
0 20 40 60 80 100 120 140 160 0 7 14 Ka d a r tri g lis e ri d a
Lama pengamatan (hari)
Kelompok 1 Kelompok 2
trigliserida  pada  tikus  mencapai  kadar hiperlipidemia di atas 92 mg/dL. Hal ini sejalan dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh Suhendra, et  al . 13 Pemberian  ekstrak  biji alpukat  pada kelompok 1 dengan ekstrak biji alpukat  yang  diperoleh  dari  biji  alpukat  yang digerus  selama  15  menit  dengan  rata-rata ukuran  partikel  sebesar  27.03  µm  dengan dosis 250 mg/kgBB dengan efektif menurunkan kadar trigliserida dalam waktu 7 hari  maupun  dalam  14  hari  walaupun penurunan kadar trigliserida pada hari ke-7 ke hari ke-14 tidak signifikan.
Pada  kelompok  2  dengan  ekstrak  biji alpukat  yang  diperoleh  dari  biji  alpukat  yang digerus  selama  30  menit  berukuran  partikel sebesar 13,50 µm dengan dosis 250 mg/kgBB dengan  efektif  menurunkan  kadar  trigliserida dalam  waktu  7  hari  maupun  dalam  14  hari. Pada  perlakuan  kelompok  2  dengan  ekstrak biji  alpukat  yang  diperoleh  dari  biji  alpukat yang  digerus  selama  30  menit  berukuran partikel  sebesar  13,50 µm  dengan  dosis  250 mg/kgBB  penurunan  kadar  trigliserida  dari hari 7 ke hari ke 14 juga signifikan.
Pemberian  ekstrak  biji  alpukat  selama 14  hari  pada  penelitian  ini  tidak  berhasil menurunkan  kadar  trigliserida  ke  kadar normal  di  bawah  92 mg/dl.  Penurunan  kadar trigliserida  berdasarkan  angka  kuantitatifnya secara garis besar juga terbilang tidak terlalu banyak  walaupun  terbukti  efektif.  Pada penelitian  Sunusmo  yang  menggunakan ekstrak  biji  alpukat  dengan  metode  ekstraksi maserasi,  dengan  dosis  250  mg/dL  berhasil menurunkan  kadar  trigliserida  sebesar  54,3 mg/dL  dalam  waktu  14  hari  dibandingkan
dengan  penelitian  ini  yang  hanya  mampu menurunkan  kadar  trigliserida  dengan  rata- rata 9,71 mg/dL dalam waktu 14 hari. 4 Hal ini diduga karena ekstrak yang digunakan dalam penelitian ini disimpan selama kurang lebih 4 sampai  5  bulan  yang  menyebabkan  kualitas ekstrak menurun.
Perbandingan  efektivitas  penurunan kadar  trigliserida  antara  kelompok  1  dan kelompok 2 dari hari 0 hingga hari ke 7, hari ke 0 hingga hari ke 14 terlihat tidak signifikan hal ini mungkin disebabkan karena perbedaan ukuran  partikel  yang  tidak  terlalu  besar  se- hingga  penyerapan  zat  aktif  tidak  terlalu  ba- nyak sehingga tidak tampak perbedaan penu- runan kadar trigliserida pada kedua kelompok. Penurunan kadar trigliserida berkaitan dengan kadar zat aktif yang terkandung di dalam eks- trak biji alpukat sendiri. Oleh karena itu, pene- liti menyarankan untuk penelitian selanjutnya perlu  membandingkan  kadar  zat  aktif  yang ada dalam plasma darah pada kelompok tikus yang diberikan ekstrak biji alpukat yang dige- rus 15 menit dan 30 menit. Hal ini perlu dilaku- kan  untuk  mengetahui  hubungan  antara ukuran partikel dengan absorbsinya.

## SIMPULAN
Hasil uji analisis paired t-test menunjuk- kan  terjadinya  penurunan  kadar  trigliserida pada  kelompok  1  dan  kelompok  2  secara signifikan dari hari 0 hingga hari ke 7 dan dari hari 0 hingga hari ke 14 pemberian ekstrak biji alpukat. Tidak terdapat perbedaan efektivitas penurunan kadar trigliserida antara kelompok 1 dan kelompok 2 yang membuktikan bahwa perbedaan ukuran partikel pada ekstraksi biji
alpukat  tidak  berpengaruh  pada  efektivitas ekstrak  biji  alpukat  menurunkan  kadar trigliserida pada darah tikus

## DAFTAR PUSTAKA
1. Lauralee  S.  Human  physiology:  from  cells  to systems. 9th edition. Australia: Cengage Learning; 2016.
2. Singh AK, Singh R. Triglyceride and cardiovascular risk: A critical appraisal. Indian J Endocrinol Metab. 2016 Jul-Aug;20(4):418-28.
3. Kementrian Kesehatan RI. Riset Kesehatan Dasar. Jakarta: Balitbang Kemenkes RI; 2013.
4. Sunusmo RA. Uji efektivitas antikolesterol ekstrak biji alpukat pada tikus jantan galur Wistar secara in vivo beserta skrining fitokimia. Universitas Muhammadiyah Surakarta; 2018.
5. Zeka  K,  Ruparelia  K,  Arroo  RRJ,  Budriesi  R, Micucci  M.  Flavonoids  and  their  metabolites: prevention in cardiovascular diseases and diabetes. Diseases. 2017 Sep 5;5(3):19.
6. Marrelli M, Conforti F, Araniti F, Statti GA. Effects of  saponins  on  lipid  metabolism:  A  review  of potential health benefits in the treatment of obesity. Mol Basel Switz. 2016 Oct 20;21(10).
7. Dorland N. Kamus saku kedokteran Dorland. Edisi ke 28. Jakarta: EGC; 2011.
8. Pahua-Ramos  ME,  Ortiz-Moreno  A,  Chamorro-
Cevallos  G,  Hernández-Navarro  MD,  Garduño- Siciliano  L,  Necoechea-Mondragón  H,  et  al.
Hypolipidemic effect of avocado (Persea americana  Mill)  seed  in  a  hypercholesterolemic mouse model. Plant Foods Hum Nutr Dordr Neth.
2012 Mar;67(1):10 –6.
9. Lee  SG,  Yu  MH,  Lee  SP,  Lee  IS.  Antioxidant activities  and  induction  of  apoptosis  by  methanol extracts  from  avocado.  J  Korean  Soc  Food  Sci Nutr. 2008;37:269-75.
10.   Rats,  Sprague-Dawley  -  MeSH  -  NCBI  [Internet]. [cited 2021 Jan 20]. Available from:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/mesh/68017207
11.   Brown  AC,  Wrenn  SP,  Suresh  N,  Meyers  WC,
Abedin  MZ.  Gender  differences  in  cholesterol nucleation  in  native  bile:  Estrogen  is  a  potential contributory factor. J Membr Biol. 2009 Dec;232(1 – 3):35 –45.
12.   Arts  J,  Oosterhuis  N,  Kramer  K,  Ohl  F.  Effects  of transfer  from  breeding  to  research  facility  on  the welfare of rats. Animals. 2014 Dec 3;4(4):712 –28. 13.   Suhendra  AT,  Awaloei  H,  Wuisan  J.  Uji  efek ekstrak  biji  alpukat  (Persea  americana  Mill.) terhadap  kadar  kolesterol  total  pada  tikus  wistar (Rattus norvegicus). J E-Biomedik [Internet]. 2016 Jan 27;4(1).
14.   Al-Noory AS, Amreen AN, Hymoor S.
Antihyperlipidemic  effects  of  ginger  extracts  in alloxan-induced  diabetes  and  propylthiouracil- induced  hypothyroidism  in  (rats).  Pharmacognosy Res. 2013 Jul;5(3):157-61.
15.   Setianingsih N. Pengaruh ekstrak buah pisang dan ekstrak  buah  alpukat  terhadap  kadar  kolesterol mencit betina. JJurnal Biota. 2017;3(2):48-53.
16.   Salamah N, Rozak M, Abror MA. Pengaruh metode penyarian  terhadap  kadar  alkaloid  total  daun jembirit  (Tabernaemontana  sphaerocarpa.  BL) dengan metode spektrofotometri visibel.
Pharmaciana. 2017May1;7(1):113 –22.