## BIOTROPIKA Journal of Tropical Biology
https://biotropika.ub.ac.id/
Vol. 8  |  No. 1  |  2020  |  DOI: 10.21776/ub.biotropika.2020.008.01.03

## ISOLASI, KARAKTERISASI, DAN AKTIVITAS ANTIBAKTERI BAL INDIGENOUS DARI SARANG LEBAH Trigona spp. ASAL KABUPATEN SUMBAWA

## ISOLATION, CHARACTERIZATION, AND ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF LAB INDIGENOUS FROM Trigona spp. BEE HIVES FROM SUMBAWA REGENCY
Baso Manguntungi 1)* , Arlinda Puspita Sari 2) , Riri Rimbun Anggih Chaidir 1) , Izzul Islam 1) , Leggina Rezzy Vanggy 1) , Naning Sufiyanti 1) , Muhammad Fajri Al-Fateeh 1) , Ulfa Febiana Whatin 1) , Intan Dwi Pratiwi 1) , Widya Dwi Kusuma 1)

## ABSTRAK
Trigona  spp.  atau  stingless  bee  merupakan  jenis lebah yang  banyak  ditemukan di  daerah  tropis.  Madu  dan  propolis  yang  dihasilkan  oleh  jenis  lebah  ini mengandung  bakteri  asam  laktat  (BAL)  yang dapat  dijadikan  sebagai kandidat probiotik.  Berdasarkan  hal  tersebut  maka  BAL  tersebut  juga  diduga  dapat ditemukan  pada  sarangnya.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  melakukan isolasi  dan  karakterisasi  BAL  dari  sarang lebah  Trigona  spp.,  serta  melakukan pengujian  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri  uji  Salmonella  thypi  dan Staphylococcus aureus. Bakteri asam laktat diisolasi dari sarang lebah Trigona spp. pada media MRSA. Seleksi BAL dilakukan dengan uji pewarnaan Gram dan uji  katalase.  Delapan  isolat  BAL  telah  berhasil  diisolasi  dari  sarang  lebah Trigona  spp..  Kedelapan  isolat  tersebut  kemudian  dikulturkan  dan  dilakukan ekstraksi metabolit sekunder. Hasil ekstraksi diujikan pada bakteri S. thypi dan S. aureus menggunakan metode difusi sumur. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa  kedelapan  isolat  memiliki  perbedaan  efektivitas  penghambatan  bakteri uji. Isolat SRG 1 lebih efektif menghambat pertumbuhan bakteri S. thypi dengan ukuran  zona  bening  terbesar  1,3±  0,471  mm.  Sedangkan  isolat  SRG  19  efektif menghambat  pertumbuhan  bakteri  S.  aureus  dengan  ukuran  zona  bening terbesar 5,3 ± 0,471 mm.
Kata Kunci: antibakteri, Bakteri asam laktat, sarang lebah, Trigona spp.

## ABSTRACT
Trigona spp. or stingless bee is a type of bee found in the tropical region. Honey and propolis produced by Trigona spp. contain lactic acid bacteria (LAB) which can be  used  as a candidate of  probiotics.  It  is  suspected that  LAB could also be found in Trigona spp. bee hives. The aim of this research was to isolate and  characterize  LAB  from  Trigona  spp.  bee  hives,  and  also  to  examine  the antibacterial  activity  against  Salmonella  thypi  and  Staphylococcus  aureus. Lactic acid bacteria were isolated from Trigona spp. bee hives on MRSA media. LAB  screening  was  carried  out  using  Gram  staining  and  catalase  test.  Eight isolates  of  LAB  were  obtained  from  Trigona  spp.  bee  hives.  The  eight  isolates then  cultured  and  their  secondary  metabolites  were  extracted.  The  secondary metabolites  were  tested  against  S.  thypi  dan  S.  aureus  by  using  agar  well diffusion  method.  The  results  showed  that  the  eight  isolates  had  different inhibition effectiveness. SRG  1 is the most effective isolate to inhibit the growth of S. thyposa with the highest clear zone sizes was 1.3± 0.471. Meanwhile, SRG 19 is the most effective isolate to inhibit the growth of S. aureus with the highest clear zone sizes was 5.3 ± 0.471 mm.
Keywords: antibacteria, bee hives, lactic acid bacteria, Trigona spp.
Diterima: 8 April 2020
Disetujui: 4 Mei 2020

## Afiliasi Penulis:
1) Program  Studi  Bioteknologi,
Universitas  Teknologi  Sumbawa,
Sumbawa, Indonesia 2) Program Studi Pendidikan Biologi, Universitas Sulawesi

## Barat, Majene, Indonesia

## Alamat Korespondensi:
* baso.manguntungi@uts.ac.id
Cara Sitasi: Manguntungi,  B.,  A.P.  Sari, R.R.A.  Chaidir,  I.  Islam,  L.R. Vanggy,  N.  Sufiyanti,  M.  Fajri Al-Fateeh,  U.F.  Whatin,  I.D. Pratiwi,  W.D.  Kusuma.  2020.
Isolasi,
karakterisasi, dan aktivitas antibakteri BAL
indigenous dari  sarang  lebah Trigona spp.  asal  Kabupaten Sumbawa. Biotropika: Journal of Tropical Biology 8 (1): 13-18.

## PENDAHULUAN
Trigona spp . merupakan salah satu jenis lebah  yang  banyak  ditemukan  di  daerah  tropis salah  satunya  di  Kabupaten  Sumbawa,  Nusa Tenggara  Barat,  Indonesia.  Jenis  lebah  ini tidak  bersengat  ( stingless  bee )  dan  dapat menghasilkan  madu  yang  khas  dengan  rasa yang  lebih  asam.  Lebah Trigona  spp. belum banyak  diternakkan  seperti  halnya  lebah Apis spp .,  karena  lebah Trigona  spp .  menghasilkan madu  yang  lebih  sedikit  [1].  Namun,  sarang lebah Trigona spp . banyak ditemukan di dalam hutan  utamanya  pada  pohon-pohon  yang bergetah  dan  berdiameter  besar  [2].  Lebah Trigona spp . membuat sarangnya pada lubang- lubang yang terdapat pada pohon.
Selain  madu, pada sarang lebah Trigona spp .  juga  ditemukan  propolis  yang  berfungsi untuk  memperkokoh  sarang  tersebut  serta digunakan  untuk  sistem  pertahanan Trigona spp .  [3].  Madu  dan  propolis  yang  dihasilkan oleh  lebah Trigona  spp .  dapat  dijadikan sebagai  sumber  probiotik  karena  mengandung bakteri asam laktat (BAL). Bakteri asam laktat dapat  membantu  menjaga  kesehatan  organ pencernaan manusia melalui sintesis eksopoliskarida yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri patogen [4]. Bakteri asam laktat  merupakan  bakteri  Gram  positif  yang mampu  menghasilkan  asam  laktat  melalui fermentasi bahan makanan [5]. Selain itu, BAL mampu memproduksi senyawa-senyawa antimikroba  seperti  asam  organik,  hidrogen peroksida, dan bakteriosin [6].
Beberapa  Penelitian  terkait  kemampuan madu  dan  propolis  dari Trigona  spp .  sebagai sumber probiotik serta sebagai agen antimikroba  telah  banyak  dilakukan.  Nira  dan Amano  [7]  melaporkan  bahwa  madu  yang dikumpulkan dari lebah Trigona pada berbagai wilayah  terbukti  mengandung  BAL  seperti Enterococcus faecalis , E. faecium , Lactococcus  lactis  ssp . Lactis ,  dan L.  Lactis ssp.  Cremoris .  serta  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri patogen. Penelitian Chanchao  [8]  membuktikan  bahwa  BAL  pada madu Trigona  laeviceps mampu  menghambat pertumbuhan S.  aureus , Escherichia  coli , Candida  albicans , Auriobasidium  pullulans , dan Aspergillus niger .  Sementara itu, Hasan et al. [3]  menemukan  bahwa  penambahan propolis  yang  diambil  dari  sarang  lebah Trigona spp . dapat meningkatkan pertumbuhan bakteri  probiotik  seperti Lactobaccilus  casei
subsp. rhamnosus , Lactobacillus  delbrueckii subsp. bulgaricus , dan Streptococcus
thermophilus .  Penelitian  Saleng et  al. [9] menunjukkan  bahwa  isolat  bakteri  yang diambil  dari  propolis Trigona  incisa mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri Klebsiella pneumonia dan Staphylococcus aureus . BAL  yang  terdapat  pada  madu  dan propolis  diduga  dapat  juga  ditemukan  pada sarang  lebah Trigona  spp .  yang  menjadi tempat perkembangbiakannya.  Sebelumya, penelitian  yang  dilakukan  oleh  Tajabadi et  al .
[10]  berhasil  menemukan  BAL Weisella  sp . dari  sarang  lebah Apis  dorsata . Namun penelitian  terkait  BAL  yang  terdapat  pada sarang  lebah Trigona  spp .  belum  pernah dilakukan.  Oleh  karena  itu,  penelitian  ini diakukan  untuk  mengisolasi  dan  karakterisasi BAL  indigenous  yang  terdapat  pada  sarang Trigona  spp. asal  Kabupaten  Sumbawa  dan melakukan  pengujian  antibakteri  pada  bakteri patogen.

## METODE PENELITIAN
Isolasi  Bakteri. Isolat  diperoleh  dari sarang lebah Trigona spp . dari Desa Kelungkung, Kecamatan Batu Lanteh, Kabupaten Sumbawa. Sebanyak 1 gram sarang lebah diambil kemudian ditambahkan ke dalam 9  mL  larutan  garam  fisiologis  (NaCl  0.85  %). Isolat  diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu  37
o C.  Selanjutnya  dibuat  seri  pengenceran  10 -1 s.d 10 -6 lalu diinokulasikan pada media de Man Rogosa  Sharpe  Agar (MRSA)  dan  diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam.
Uji  Morfologi,  Pewarnaan  Gram,  dan Uji  Katalase. Uji  morfologi  koloni  bakteri meliputi  bentuk,  warna,  tepian, elevation , ukuran, appearance dan teksturnya. Pewarnaan Gram  dilakukan  dengan  metode  standar  [11]. Uji  katalase  dilakukan  dengan  menggunakan hidrogen  peroksida  (H 2 O 2 )  3%.  Hasil  yang positif ditandai dengan terbentuknya gelembung-gelembung udara [11].
Uji  Antibakteri. Bakteri  asam  laktat dikulturkan pada media MRSB selama 24 jam. Ekstrak  metabolit  sekunder  diperoleh  dengan pengambilan supernatant dari kultur isolat cair bakteri  asam  laktat  [6].  Bakteri  uji  yang digunakan adalah bakteri Salmonella thypi dan Staphylococcus  aureus .  Bakteri  uji  dibiakkan pada  10  mL  media Nutrient  Broth dan diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu  37 o C.
Kontrol positif yang digunakan adalah antibiotik  ampicilin.  Metode  uji  antibakteri yang digunakan adalah difusi sumur. Sebanyak 3  mL  biakan  bakteri  uji  dituang  ke  dalam cawan  Petri  steril  kemudian  ditambahkan  20 mL  media  NA  dan  didiamkan  hingga memadat.  Setelah  itu  dibuat  sumur  dengan ukuran  diameter  6  mm.  Sebanyak  50  µL ekstrak  metabolit  sekunder  BAL  dimasukkan ke  dalam  sumur  tersebut  kemudian  diinkubasi pada  suhu  37 o C  selama  24  jam  [12].  Zona bening  menunjukkan  bahwa  sampel  memiliki aktivitas  antibakteri.  Pengamatan  zona  bening dilakukan pada jam ke-2, ke-4 dan ke-6 setelah inkubasi. Pengujian dilakukan dengan menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL)  sebanyak  tiga  kali  ulangan.  Data  yang diperoleh  diuji  dengan  analisis  statistik ANOVA menggunakan SPSS 20.0.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji  Morfologi,  Pewarnaan  Gram,  dan Uji Katalase. Hasil isolasi bakteri pada sarang lebah Trigona  spp .  diperoleh  20  isolat. Berdasarkan  uji  morfologi  pada  kedua  puluh isolat tersebut diperoleh hasil yang sama yakni berbentuk  bulat  dengan  tepi  yang  rata, cembung,  berukuran  kecil,  koloni  mengkilap, memiliki  properti  optik  buram,  teksturnya mukoid  dan  tidak  berpigmen.  Seleksi  BAL dilakukan  melalui uji pewarnaan Gram dan uji katalase  seperti  yang  telihat  pada  Tabel  1. Bakteri  asam  laktat  merupakan  bakteri  Gram positif,  bereaksi  negatif  pada  uji  katalase  dan tidak  berspora  [13-14].  Hasil  yang  diperoleh menunjukkan  bahwa  terdapat  delapan  isolat bakteri  yang  dapat  diasumsikan  sebagai kelompok  BAL  yaitu  SRG  1,  SRG  2,  SRG  5, SRG  9,  SRG  13,  SRG14,  SRG  19,  dan  SRG
20.
Tabel 1. Karakterisasi pewarnaan gram dan uji katalase No. Kode Isolat Pewarnaan Gram Uji Katalase 1 SRG 1 + - 2 SRG 2 + - 3 SRG 3 + + 4 SRG 4 + + 5 SRG 5 + - 6 SRG 6 + + 7 SRG 7 + + 8 SRG 8 + + 9 SRG 9 + - 10 SRG 10 + + 11 SRG 11 + + 12 SRG 12 + + 13 SRG 13 + - 14 SRG 14 + - 15 SRG 15 - - 16 SRG 16 - + 17 SRG 17 - + 18 SRG 18 + + 19 SRG 19 + - 20 SRG 20 + -
Uji Aktivitas Antibakteri. Delapan isolat BAL  yang  diperoleh  melalui  hasil  seleksi dengan  uji  pewarnaan  Gram  dan  uji  katalase kemudian  dibiakkan  selama  24  jam  untuk selanjutnya  dilakukan  ekstraksi  metebolit
sekunder.  Metabolit  tersebut  digunakan  untuk pengujian  antibakteri  pada S.  thypi dan S. aureus . Pengamatan dilakukan dengan mengukur diameter zona bening yang terbentuk  pada  tiga  waktu  pengamatan  seperti yang terlihat pada Tabel 2.
Hasil yang diperoleh pada pengamatan uji aktivitas  antibakteri S.  thypi (Tabel  2) menunjukkan  bahwa  aktivitas  penghambatan oleh BAL  mulai terlihat pada pengamatan jam ke-2, namun hanya ditunjukkan oleh satu isolat saja  yaitu  SRG  1  dengan  ukuran  zona  bening sebesar  1  ± 0  mm.  Pada  pengamatan  jam  ke-4 dan  jam  ke-6  terdapat  tiga  isolat  yang menunjukkan  aktivitas  antibakteri  yaitu  isolat SRG  1,  SRG  2,  dan  SRG  19.  Hasil  analisis statistik menunjukkan bahwa SRG 1 menunjukkan hasil yang berbeda nyata dengan SRG  2  dan  SRG  19.  Zona  bening  dari  isolat SRG  1  menunjukkan  hasil  tertinggi  yaitu  1,3± 0,471  mm.  Hal  ini  menunjukan  bahwa efektifitas  penghambatan  bakteri  patogen  oleh BAL  mulai  meningkat  pada  pengamatan  jam ke-4  hingga  jam  ke-6.  Hal  ini  sejalan  dengan penelitian  yang  dilakukan  oleh  Desniar et  al. [15]  yang  mengamati  aktivitas  BAL  pada produk  Bekasam  dan  diperoleh  hasil  bahwa konsentrasi asam laktat dan hidrogen peroksida yang  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri patogen meningkat  seiring  lama  waktu inkubasi.
Tabel  2  juga menunjukkan  bahwa aktivitas  antibakteri  oleh  BAL  yang  diujikan pada  bakteri S.  aureus mulai  terlihat  pada pengamatan jam ke-2. Hasil tersebut diperoleh dari  isolat  SRG  1  dan  SRG  2.  Ukuran  zona bening  pada  isolat  SRG  2  berbeda  nyata dengan  SRG  1  yaitu  sebesar  2  ±  0  mm. Pengamatan  jam  ke-4  menunjukkan  bahwa terdapat  enam  isolat  BAL  yang  memiliki kemampuan  antibakteri  yaitu  isolat  SRG  1,
SRG  2,  SRG  13,  SRG  14,  SRG  19,  dan  SRG 20.  Hasil  tertinggi  ditemukan  pada  isolat  SRG 19  dengan  ukuran  zona  bening  sebesar  3  ±  0 mm. Sementara itu pada pengamatan jam ke-6 hanya  isolat  SRG  9  yang  tidak  menunjukkan aktivitas  antibakteri.  Hasil  analisis  statistik menunjukkan  bahwa  isolat  SRG  19  berbeda nyata  dengan  isolat  SRG  1,  SRG  2,  SRG  3, SRG 13, SRG 14, dan SRG 20. Isolat SRG 19 menunjukkan  ukuran  zona  bening  tertinggi yaitu sebesar 5,3 ± 0,471 mm.  Penelitian  yang dilakukan  oleh  Saleng et  al. [9]  juga menunjukkan  bahwa  BAL  yang  diisolasi  dari propolis Trigona  incisa memiliki  perbedaan efektivitas  penghambatan  pertumbuhan S. aureus .
Hasil  pengujian  isolat  BAL  pada  kedua bakteri  uji  menunjukkan  bahwa  kemampuan penghambatan  dari  semua  isolat  berbeda-beda yang  ditunjukkan  oleh  perbedaan  zona  bening yang  terbentuk.  Bahkan  isolat  SRG  9 ditemukan tidak  membentuk zona bening pada kedua bakteri uji  di semua waktu pengamatan. Sedangkan  isolat  lainya  mulai  menunjukkan aktivitas  penghambatan  pada  pengamatan  jam ke-4.  Isolat  SRG  1  nampaknya  lebih  efektif dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri S. thypi dibandingkan  isolat  lain.  Sedangkan isolat  SRG  19  lebih  efektif  menghambat pertumbuhan  bakteri S.  aureus .  Hal  ini  dapat disebabkan  oleh  perbedaan  senyawa  metabolit sekunder  yang  dihasilkan  oleh  masing-masing isolat.
Tabel 2. Aktivitas antibakteri BAL terhadap S. thypi dan S. aureus Sampel Salmonella thypi Staphylococcus aureus Ukuran Zona Bening (mm) Jam ke- 2 Jam ke-4 Jam ke-6 Jam ke- 2 Jam ke-4 Jam ke-6 Kontrol - 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a SRG 1 1 ± 0 b 1,3 ± 0,471 c 1,3 ± 0,471 c 1 ± 0 b 1 ± 0 b 1 ± 0 b SRG 2 0 ± 0 a 1 ± 0 b 1 ± 0 b 2 ± 0 c 1 ± 0 b 1 ± 0 b SRG 5 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a 2 ± 0 c SRG 9 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a SRG 13 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a 1,7 ± 0,471 bc 1 ± 0 b SRG 14 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a 1,7 ± 0,471 bc 1 ± 0 b SRG 19 0 ± 0 a 1 ± 0 b 1 ± 0 b 0 ± 0 a 3 ± 0 c 5,3 ± 0,471 e SRG 20 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a 2 ± 0 d 4 ± 0 d Kontrol + 14 ± 0 c 14 ± 0 d 14 ± 0 d 11 ± 0 d 12 ± 0 e 13 ± 0 f
Keterangan: Angka yang diikuti dengan huruf yang sama pada kolomyang sama menunjukkan tidak berbeda nyata pada uji one-way ANOVA, α=0, 05.
Penelitian  Desniar et  al. [15]  menunjukkan perbedaan konsentrasi asam laktat dan hidrogen peroksida yang dihasilkan oleh empat isolat  BAL  dari  produk  Bekasam.  Hal  ini menyebabkan
perbedaan efektivitas penghambatan  pertumbuhan  pada  bakteri  uji. Demikian pula pada penelitian Soda et al . [16] yang  menunjukkan  perbedaan  kemampuan BAL dalam memproduksi senyawa eksopolisakarida  (EPS).  55% Enterococcus yang  diamati  mampu  menghasilkan  EPS,  26% Lactococcus mampu menghasilkan EPS, sementara  itu  untuk Lactobacillus sebanyak 42% diantaranya mampu menghasilkan EPS.
Bakteri  asam  laktat  merupakan  bakteri yang  berperan  penting  sebagai  probiotik  yang dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri- bakteri  patogen.  Bakteri  asam  laktat  mampu memproduksi  berbagai  senyawa  yang  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  patogen seperti asam laktat, hidrogen peroksida (H 2 O 2 ), karbon  dioksida, diacetil, dan bakteriosin [17]. Mekanisme penghambatan pertumbuhan bakteri  patogen  oleh  BAL  adalah  melalui penurunan  pH  yang  disebabkan  sekresi senyawa  asam  organik.  Molekul  asam  organik dapat  masuk  melalui  membran  sel  bakteri patogen  sehingga  mengubah  permeabilitas membran sel dan menyebabkan tidak stabilnya protein  pada  sel  dan  sistem  transpor  bahan pada bakteri patogen tersebut menjadi terganggu  [18].  Bakteri  asam  laktat  juga mampu menghasilkan senyawa hidrogen peroksida (H 2 O 2 ). Senyawa ini dapat menyebabkan  denaturasi  sejumlah  enzim  pada bakteri  patogen  serta  memproduksi  radikal bebas  seperti  superoksida  dan  hidroksil  yang dapat merusak DNA [19].
Penelitian  terkait  BAL  pada  sarang  lebah Trigona spp . masih sangat sedikit sebab upaya peternakan  lebah Trigona  spp .  utamanya  di Indonesia juga belum banyak dilakukan. Lebah Trigona  spp .  biasanya  berkembang  secara  liar dengan  membuat  sarang  pada  benda-benda berongga seperti bambu, lubang pohon, bahkan pada  celah-celah  kusen  pintu  maupun  jendela rumah.  Menurut  penelitian  Ichwan et  al. [20] keberadaan lebah Trigona spp . di sekitar Hutan Larangan Adat Rumbio belum banyak dimanfaatkan  masyarakat  karena  kurangnya informasi  terkait  manfaat  dan  teknik  budidaya lebah Trigona spp .

## KESIMPULAN
Delapan isolat bakteri asam laktat ditemukan dari sarang lebah Trigona spp . Dari kedelapan  isolat  tersebut,  isolat  SRG  1 merupakan  yang  paling  efektif  menghambat pertumbuhan Salmonella  thypi pada  jam  ke-2, ke-4,  dan  ke-6.  Sedangkan  isolat  SRG  19 merupakan  yang  paling  efektif  menghambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus pada  pengamatan  jam  ke-4  hingga  jam  ke  -6. Penelitian  ini  dapat  menjadi  dasar  dan rekomendasi untuk identifikasi secara molekuler BAL dari sarang lebah Trigona spp . yang  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri S. thypi dan S. aureus .

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terimakasih kepada Kepala Laboratorium Bioteknologi, Universitas Teknologi  Sumbawa  atas  segala  fasilitas laboratorium yang digunakan selama penelitian ini berlangsung.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Haryanto  B,  Hasan  Z,  Kuswandi,  Artika IM  (2012)  Penggunaan  propolis  untuk meningkatkan  produktivitas  ternak  sapi Peranakan  Ongole  (PO).  Jurnal  Ilmu Ternak dan Veteriner 17 (3): 202.
[2] Azlan  A,  Yoza  D,  Mardhiansyah  M (2016)  Tingkat  keberhasilan  perpindahan koloni Trigona spp . pada sarang buatan di Hutan  Larangan  Adat  Desa  Rumbio Kabupaten Kampar. Jurnal Online Mahasiswa Faperta Universitas Riau 3(2):
1-7.
[3] Hasan  AEZ,  Artika  IM,  Abidin  S  (2014) Produksi asam laktat dan pola pertumbuhan  bakteri  asam  laktat  dengan pemberian  dosis  rendah  propolis Trigona spp .  asal  Pandeglang  Indonesia.  Current Biochemistry 1(3): 126-135.
[4] Ruas-  Madiedo  P,  Reyes-  Gavilan  CG (2005)  Invited  Review:  Methods  for  the Screening,  Isolation,  and  Characterization of Exopolysaccharides Produced by Lactic  Acid  Bacteria.  Journal  Dairu Sciences 88: 843-856.
[5] Pato U (2003) Potensi bakteri asam laktat yang diisolasi dari dadih untuk menurunkan  resiko  penyakit  kanker. Jurnal Natur Indonesia 5(2): 162-166.
[6] Desniar  I,  Setyaningsih  YI,  Purnama (2016) Penapisan dan produksi antibakteri Lactobacillus  plantarum NS  (9)  yang diisolasi  dari  Bekasam  ikan  nila  atin. Jurnal Pengelolaan Hasil Perikanan Indonesia 19(2).
[7] Nira HK, Amano K (2008)  Antimicrobial activity  of  honey  produced  by  Stingless Honey  Bees.  Journal  of  Apicultural Research and Bee World 47(4): 325-327.
[8] Chanchao C (2009) Antimicrobial activity by Trigona  laeviceps (stingless  bee) honey  from  Thailand.  Pakistan  Journal  of Medical Scieces 25(3): 364-369.
[9] Saleng  A,  Syafrizal,  Sari  YP  (2016)  Uji aktivitas antibakteri ekstrak propolis lebah Trigona incisa terhadap bakteri Klebsiella pneumonia dan Staphylococcus  aureus . Bioprospek 11(1): 42-48.
[10] Tajabadi  N,  Mardan  M,  Mustafa  S, Feizabadi  F,  Nateghi  L,  Rasti  B,  Manap MYA  (2012) Weisella sp.  Taj-Apis,  a novel lactic acid bacterium isolatede from honey.  Journal  of  food,  agriculture,  and environment 10(2): 263-267.
[11] Hadioetomo  RS  (1993)  Mikrobiologi dasar  dalam  praktek  teknik  dan  prosedur dasar laboratorium. Gramedia, Jakarta.
[12] Purwijantiningsih  E  (2014)  Viabilitas bakteri asam laktat dan aktivitas antibakteri produk susu fermentasi komersial  terhadap  beberapa  bakteri patogen enterik. Biota 19(1): 15-21.
[13] Romadon,  Subagiyo  S.  Margino  (2012)
Isolasi  dan  karakterisasi  bakteri  asam laktat dari usus udang penghasil bakteriosin sebagai agen antibakteria pada produk-produk  hasil  perikanan.  Jurnal
Saintek Perikanan 8(1).
[14] Montecillo  AD,  Sabino  NG,  Fajardo  A, Cleofas  RJr,  Cervancia,  Aborot  ZA, Ferdigon  KMD,  Lantican  NB  (2014) Screening  of  lactic  acid  bacteria  from
Apis mellifera L. and Trigona spp. against Paenibacillus  larvae  (white)  causing American foulbrood disease
of honeybees. Phillippint Entomologist
28(1): 32-42.
[15] Desniar, Rusmana I, Suwanto A, Mubarik NS  (2012)  Senyawa  antimikroba  yang dihasilkan  oleh  bakteri  asam  laktat  asal Bekasam. Jurnal Akuatika 3(2): 136-145.
[16] Soda  ME,  Ahmed  N,  Omran  N,  Osman, Morsi  A  (2003)  Isolation,  identification and  selection  of  lactic  acid  bacteria cultures  for  cheesemaking.  Emirates
Journal  of  Agricultural  Sciences  15(2): 51-71.
[17] Mobolaji  OA  &  Wuraola  FO  (2011) Assesment of the antimicrobial activity of lactic  acid  bacteria  isolated  from  two fermented  maize  products-ogi  and  kunni- zaki.  Malaysian  Journal  of  Microbiology 7(3): 124-128.
[18] Halim  CN,  Zubaidah  E  (2013)  Studi kemampuan  probiotik  isolat  bakteri  asam laktat  penghasil  eksopolisakarida  tinggi asal  sawi  asin  ( Brassica  juncea ).  Jurnal Pangan dan Agroindustri 1 (1): 129-137.
[19] Ammor  S,  Tauveron  G,  Dufour  E, Chevallier  I  (2006)  Antibacterial  activity of lactic acid bacteria against spoilage and pathogenic  bacteria  isolated  from  the same  meat  small-scale  facility:  Screening and  characterization  of  the  antibacterial compounds. Food Control 17(6): 454-461.
[20] Ichwan  F,  Yoza  D,  Budiani  ES  (2016) Prospek  pengembangan  budidaya  lebah Trigona  spp.  di  sekitar  hutan  larangan adat  rumbio  Kabupaten  Kampar.  Jurnal Online  Mahasiswa  Faperta  Universitas Riau 3(2).