EDUFORTECH 6 (2) 2021

## EDUFORTECH
http://ejournal.upi.edu/index.php/edufortech
PRODUKSI BIOETANOL DARI BAGAS SORGUM MANIS MELALUI SAKARIFIKASI DAN FERMENTASI SIMULTAN (SSF) KONVENSIONAL MENGGUNAKAN Trichoderma reesei dan Saccharomyces cerevisiae
Bioethanol Production from Sweet Sorghum Bagasse by Conventional Simultaneous Saccharification and Fermentation (SSF) using Trichoderma reesei and Saccharomyces cerevisiae
Essa Annisa Syadiah*, Khaswar Syamsu Program Studi Teknologi Hasil Pertanian, Fakultas Pertanian, Perikanan dan Peternakan Universitas Sembilanbelas November Kolaka, Sulawesi Tenggara, Indonesia1 Departemen Teknologi Industri Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian,
Institut Pertanian Bogor, Kampus IPB Dramaga, Bogor, Indonesia2
* syadiahessa@gmail,com

## ABSTRAK
Bagas  sorgum  manis  ( Sorghum  bicolor L.  Moench)  merupakan  hasil  samping  industri  gula  dari  nira sorgum manis yang dapat digunakan sebagai bahan baku pembuatan bioetanol. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk memproduksi bioetanol dari bagas sorgum manis menggunakan Trichoderma reesei dan Saccharomyces  cerevisiae. Teknik  Sakarifikasi  dan  Fermentasi  Simultan  (SSF)  konvensional adalah teknik SSF produksi bioetanol dengan aerasi penuh atau tidak direkayasa. Penggunaan teknik SSF  memiliki  kelebihan  jika  dibandingkan  dengan  teknik  sakarifikasi  dan  fermentasi  terpisah  (SHF), yaitu waktu proses produksi yang dibutuhkan lebih pendek, meningkatkan rendemen, dan laju produksi bioetanol. Produk bioetanol akhir yang dihasilkan sebesar 6.60±0.28 g L -1 . Dengan μx maks gabungan sebesar  0.02/jam,  nilai  Yp/s  sebesar  0.17±0.01  g  bioetanol/g  substrat,  dan  laju  produksi  bioetanol sebesar 0.09±0.00 g L -1 jam-1 .
Kata kunci: limbah biji buah, bioplastik, kemasan pangan

## ABSTRACT
Sweet  sorghum  ( Sorghum  bicolor L.  Moench)  bagasse  is  a  by-product  of  sugar  industry  from  sweet sorghum juice which can be used as raw material for bioethanol production. The aim of this research is to  produce  bioethanol  from  sweet  sorghum  bagasse  using Trichoderma  reesei and Saccharomyces cerevisiae . The Conventional Simultaneous Saccharification and Fermentation (SSF) Technique is the SSF process of bioethanol production with  full aeration.  The use  of SSF techniques has advantages when compared with Separate Hydrolisis and  Fermentation  (SHF) techniques, i.e shorter production process  times,  improved  yield,  and  bioethanol  productivity.  The  final  bioethanol  product  produced  is 6.60±0.28  g  L -1 .  With  a  combined  maximum  specific  growth  rate  (μ)  of  0.02/h,  the  Yp/s  value  of 0.17±0.01 g of bioethanol/g substrate, and ethanol production rate of 0.09±0.00 g L -1 h-1 .
Keywords:  bioethanol,  Saccharomyces  cerevisiae,  simultaneous  saccharification  and  fermentation, sweet sorghum bagasse, Trichoderma reesei

## PENDAHULUAN
Produksi  bioetanol  dapat  menggunakan  beberapa  bahan  baku  seperti  sirup  glukosa,  bahan berpati  (sukun,  jagung,  singkong,  ubi  dll),  serta  bahan  berlignoselulosa.  Setiap  karakteristik  bahan baku  memiliki  kelebihan  dan  kekurangan  masing-masing.  Bahan  sirup  glukosa  dan  berpati  berasal dari bahan baku untuk pemenuhan kebutuhan pangan, sehingga sudah jarang digunakan untuk bahan
baku  alternatif  energi  seperti  bioetanol.  Bahan  baku  tersebut  disebut  dengan  bahan  baku  bioetanol generasi  pertama  (G1).  Bahan  baku  pembuatan  bioetanol  mulai  dialihkan  pada  bahan  baku berlignoselulosa.  Bahan  berlignoselulosa  berasal  dari  tanaman  atau  limbah  hasil  pertanian  dengan kandungan utama lignin, hemiselulosa dan selulosa dan merupakan bahan baku bioetanol generasi kedua (G2). Bahan berlignoselulosa jumlahnya melimpah di alam, namun perlu proses praperlakuan untuk mendegradasi lignin yang merupakan senyawa polifenol. Berdasarkan prinsip zero waste dan jumlah  bahan  baku  yang  melimpah  maka  hasil  samping  industri  pertanian  berupa  bahan berlignoselulosa digunakan untuk produksi bioetanol.
Bagas sorgum manis (BSM) adalah hasil samping industri gula dari nira sorgum manis. BSM merupakan bagian batang yang sudah diperah niranya,  dan memiliki kandungan lignoselulosa yang dapat  dikonversi  menjadi  bioetanol.  Varietas  sorgum  manis  ( Sorghum  Bicolor (L.)  Moench)  adalah kandidat  tanaman  yang  menjanjikan  untuk  pembuatan  energi  terbarukan  karena  mempunyai  hasil biomassa  per  hektar  pertahun  yang  tinggi.  Bahan  baku  lignoselulosa  perlu  praperlakuan  atau delignifikasi  yang  selektif  untuk  menghilangkan  hambatan  struktural  dan  meningkatkan  aksesibilitas selulosa.  Hal  ini  tergantung  pada  agen  kimia  yang  digunakan  (misalnya  asam,  alkali)  serta  kondisi perlakuan yang diterapkan (Wu et al .  2011). Delignifikasi bagas sorgum manis menggunakan alkali hidrotermal dan hidrogen peroksida dinilai cukup efektif untuk meningkatkan aksesibilitas selulosa dan mampu menurunkan lignin hingga 85% (Pramasari et al . 2017).
Produksi bioetanol dapat  menggunakan beberapa teknik, diantaranya teknik sakarifikasi dan fermentasi terpisah atau separate hydrolysis and fermentation (SHF) dan sakarifikasi dan fermentasi simultan atau simultaneous saccharification and fermentation (SSF). Namun teknik SHF mempunyai kelemahan (Dahnum et al . 2015) seperti penggunaan dua bioreaktor berbeda, membutuhkan waktu proses yang lebih lama serta perlu netralisasi dahulu jika menggunakan asam untuk sakarifikasi dan laju  produksi  yang  rendah.  Teknik  SSF  untuk  produksi  bioetanol  mengatasi  kelemahan  teknologi sebelumnya  (SHF)  yaitu  dengan  menerapkan  teknologi  sakarifikasi  dan  fermentasi  simultan  atau Simultaneous Saccharification and Fermentation (SSF). Proses ini langsung menggabungkan proses sakarifikasi dan fermentasi dengan menggunakan campuran enzim dan khamir. Dahnum et al . (2015) melaporkan teknik SSF dapat menutupi kekurangan teknik SHF, seperti mempersingkat waktu proses dan meningkatkan rendemen etanol.
Produksi  bioetanol  membutuhkan  enzim  atau  mikroba  untuk  menghasilkan  produk  yang diinginkan  (Song,  et  al.  2018). Trichoderma  reesei merupakan  mikroba  jenis  kapang  yang  dapat memproduksi enzim selulase. Selulase yang dihasilkan oleh kapang merupakan enzim yang memiliki sistem  paling  efisien  untuk  hidrolisis  sempurna    substrat  selulosa  menjadi  komponen  glukosa monomer, yang merupakan gula fermentasi. Selulase adalah enzim komersial yang penting, banyak digunakan dalam makanan, pakan ternak, tekstil, pulp dan kertas, fermentasi alkohol dan biji-bijian, pengolahan  pati,  farmasi,  malting,  dan  industri  pembuatan  bir  (Mood, et  al. 2013). Saccharomyces cerevisiae merupakan  khamir  yang  paling  penting  pada  fermentasi,  karena  mampu  memproduksi alkohol dengan konsentrasi tinggi dan fermentasi spontan. Khamir Saccharomyces cerevisiae dapat tumbuh dengan baik dan mempunyai toleransi yang tinggi terhadap alkohol konsentrasi yaitu 10-14% (Buckle et  al. 2007).  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  memproduksi  bioetanol  dari  bahan  baku  bagas sorgum  manis  dengan  teknik  SSF  konvensional  menggunakan Trichoderma  reesei dan Saccharomyces cerevisiae .

## METODE

## Alat dan Bahan
Bahan baku yang digunakan  pada penelitian ini adalah  bagas sorgum manis yang  diperoleh dari  dari  PT.  Samirana  Surya  Semesta,  Jakarta.  Isolat Trichoderma  reesei IPBCC.93.260  dan Saccharomyces  cerevisiae IPBCC.Y.  05.544  merupakan  koleksi  Institut  Pertanian  Bogor Culture Collection (IPB  CC).  Media  yang  digunakan  untuk  peremajaan stock  culture adalah  PDA  ( Potato Dextrosa  Agar ).  NaOH,  H2O2  30%,  dan  beberapa  reagen  untuk  analisis  komponen  bahan  seperti: aquades,  H2SO4  pekat,  pereaksi  Fenol  dan  glukosa.  Peralatan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini diantaranya  cawan  petri,  tabung  reaksi,  bioreaktor batch , baffle  flask ,  labu  Erlenmeyer,  autoklaf,
centrifuge , laminar air flow , pH-meter, inkubator, saringan 40 dan 60 mesh dan spektrofotometer UV- Vis, dan kromatografi gas Hitachi OV-17.

## Prosedur Penelitian

## 1.  Kultur Trichoderma reesei
Peremajaan Trichoderma  reesei dilakukan  dengan  menginokulasikan  kultur  stok  pada  agar miring Potato Dextrose Agar (PDA) miring secara zig – zag dengan bantuan kawat Ose dan api Bunsen (secara aseptik) di dalam laminar air flow kemudian diinkubasi selama 7 hari. Kemudian Trichoderma reesei ditumbuhkan  pada  media  nutrisi  cair  untuk  memproduksi  enzim  selulase.  Media  cair  dibuat dengan  mencampurkan  1  L  larutan  buffer  sitrat  dengan  1,0  g  ekstrak  ragi  ( yeast  extract );  1,5  g bacteriological peptone; 1,4 g (NH4)2SO4 ; 2,0 g KH2PO4; 0,005 g FeSO4.7H2O; 5 mL laturan CMC ( Carboxy Methyl Cellulose ) 1%; 1% bagas sorgum manis sebagai inducer . Larutan nutrisi kemudian diaduk menggunakan magnetic stirrer hingga homogen. Satu loop Trichoderma reesei dipindahkan ke media cair dan inkubasi pada rotary shaker berkecepatan 120 rpm dengan suhu 30 o C selama 7 hari (Wahyuningtyas 2013).

## 2.  Kultur Saccharomyces cerevisiae
Isolat Saccharomyces cerevisiae diremajakan pada agar miring PDA dan diinkubasi selama 2 hari. Setelah itu isolat ditumbuhkan lagi pada 50 ml media YMGP ( yeast malt peptone-glucose ) yang terdiri dari ekstrak yeast 5 g/l, malt 5 g/l, glukosa 10 g/l dan pepton 5 g/l di dalam labu erlenmeyer 200 ml. Inkubasi dilakukan pada rotary shaker berkecepatan 125 rpm dengan suhu 30°C selama 24 jam.

## 3.  Proses Sakarifikasi dan Fermentasi Simultan Konvensional
Media untuk SSF Konvensional sebanyak 1.2 L pH 5 disterilisasi pada autoklaf 121 o C selama 20 menit. Campuran tersebut secara aseptik dituang ke dalam bioreaktor batch yang sebelumnya telah disterilisasi pada suhu 121 o C selama 45  menit, selanjutnya diinokulasikan 10% (v/v) kultur T. reesei dan S. cerevisiae di awal proses. Kondisi bioreaktor diatur dalam keadaan aerobik sampai akhir proses, dengan agitasi 150 rpm dan aerasi 1 vvm.

## Metode Analisis
Perhitungan  kadar  etanol  sebagai  produk  (P),  sisa  selulosa  sebagai  substrat  (S),  gula  total, bobot  biomassa  kering  (X),  dan Total  Plate  Count (N),  dilakukan  setiap  12  jam  selama  84  jam. Konsentrasi selulosa diukur menggunakan metode Rowell dan total gula diukur menggunakan metode Fenol. Kurva standar  dibuat berdasarkan  angka absorbansi 490 nm menggunakan spektrofotometer UV/VIS.

## Parameter Pengukuran
Parameter yang diukur dan dihitung sebagai indikator kinerja proses kultivasi adalah:
1.  Bobot  biomassa  kering  (X)  yang  dihasilkan  setiap  12  jam  (pengukuran  dikoreksi  dengan  bobot sisa selulosa karena substrat berbentuk padat)
2.  Kadar gula total yang dihasilkan tiap 12 jam
3.  Kadar etanol [P] yang dihasilkan tiap 12 jam
4.  Sisa substrat selulosa yang terdapat dalam media (S) tiap 12 jam
5. Laju pertumbuhan spesifik maksimum (μ maks)
Ln  X1- Ln  XO  =  μ  (t1-t2)  di  mana,  plot  antara  Ln  X  dan  t  pada  fase  eksponensial  akan menghasilkan garis lurus dengan slope = μ maks
6.  Nilai  penggunaan  substrat  selulosa  terhadap  level  produk  yang  dihasilkan  (Yp/s);  nilai slope dimana nilai So-S (absis) dan P-Po (ordinat) dengan unit g etanol/ g substrat selulosa.
7.  Laju produksi etanol dari plot antara P dengan waktu (g L -1 jam -1 ).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kinerja Proses Sakarifikasi dan Fermentasi Simultan (SSF) Konvensional
Proses sakarifikasi dan fermentasi (SSF) secara simultan pertama kali dilakukan oleh Gomes et  al .  (2018).  menggabungkan  hidrolisis  enzimatik  selulosa  dengan  fermentasi  secara  simultan  gula untuk memproduksi etanol. Dalam proses SSF, tahapannya hampir sama dengan sistem hidrolisis dan fermentasi  terpisah,  kecuali  keduanya  dilakukan  dalam  bioreaktor  yang  sama.  Dengan  demikian, kehadiran  khamir  bersama  dengan  kompleks  enzim  selulolitik  mengurangi  akumulasi  gula  dalam
bioreaktor sehingga meningkatkan hasil dan tingkat sakarifikasi dibandingkan dengan sakarifikasi dan fermentasi terpisah. Keuntungan lain dari teknik SSF adalah bahwa bioreaktor tunggal digunakan untuk seluruh proses dengan demikian mengurangi biaya produksi yang diperlukan. Pemanfaatan selulosa dari biomassa lignoselulosa untuk menghasilkan gula merupakan aspek sangat penting untuk produksi etanol secara ekonomis dan efisien. Hasil konsentrasi gula yang dihasilkan untuk memproduksi etanol tergantung kepada teknik praperlakuan yang digunakan. Biasanya gula difermentasi menggunakan ragi konvensional ( Saccharomyces cerevisiae ) (Correia et al . 2013).
Tahapan pada penelitian ini menggunakan teknik sakarifikasi dan fermentasi secara simultan (SSF)  dan  dilakukan  secara  konvensional  (aerasi  penuh).  Proses  sakarifikasi  merupakan  proses hidrolisis  selulosa  bagas  sorgum  manis  menjadi  gula  sederhana.  Agen  sakarifikasi  yang  digunakan adalah kapang Trichoderma reesei yang mampu menghasilkan enzim selulase. Enzim selulase terdiri dari  tiga  komponen  yaitu  endo1,4- β-D-glukanase, ekso-1,4-β-D-  glukanase dan  1,4-β-D-glukosidase yang  dapat  dihasilkan  oleh  berbagai  macam  mikroba  (Anwar et  al .  2010).  Mikroba  untuk  proses fermentasi  yang  digunakan  adalah  khamir Saccharomyces  cerevisiae .  Khamir  jenis  ini  umum digunakan dalam proses produksi bioetanol. Saccharomyces cerevisiae memiliki beberapa kelebihan dibandingkan dengan mikroba lain yang dapat memproduksi bioetanol. Kelebihan tersebut antara lain lebih  mudah  beradaptasi  dengan  lingkungan,  lebih  tahan  terhadap  kadar  alkohol  tinggi,  dan  lebih mudah didapat (Mood , et al. 2013).
Proses  pada  penelitian  ini  menggunakan  bioreaktor  sistem batch 2  L.  Bioreaktor  dalam keadaan  aerobik  penuh  dari  awal  sampai  akhir  proses.  Kultivasi  dilakukan  selama  72  jam  sesuai penelitian  yang  telah  dilakukan  oleh  Jain  dan  Agrawal  (2018).  Semakin  lama  waktu  sakarifikasi  dan fermentasi yang dilakukan diharapkan akan menyebabkan kontak yang semakin  baik antara kapang Trichoderma  reesei dan  khamir Saccharomyces  cerevisiae .  Hal  ini  akan  meningkatkan  konversi substrat menjadi produk yang diharapkan. Kultivasi dilakukan dengan adanya pemberian aerasi penuh sebesar  0.5-1  vvm.  Gambar  1  menunjukkan  produksi  bioetanol  selama  kultivasi  pada  bioreaktor dengan teknik SSF konvensional. Konsentrasi bioetanol maksimum yang dapat dicapai selama 72 jam sebanyak  6.60  g  L-1.  Masing-masing  aspek  pada  proses  kultivasi  memiliki  nilai  yang  berbanding terbalik antara konsentrasi substrat selulosa bagas sorgum manis, konsentrasi total gula, konsentrasi biomassa sel dan konsentrasi produk etanol yang dihasilkan. Dalam penelitian SSF konvensional, agen sakarifikasi  yang  digunakan  adalah  kapang Trichoderma  reesei .  Penggunaan  kapang Trichoderma reesei bertujuan untuk menghasilkan enzim selulase. Enzim selulase berfungsi menghidrolisis selulosa bagas sorgum manis menjadi gula-gula sederhana yang selanjutnya difermentasi (Zhang, et. al. 2013).
Gambar 1. Hasil kultivasi secara SSF Konvensional (aerasi penuh) . Bioetanol (g L -1 ), selulosa (g L -1 ),           total gula (g L -1 ), T reesei , S cerevisiae .
Produksi bioetanol dipengaruhi oleh jumlah gula yang dihasilkan, pertumbuhan mikroba yang mengkatalisis  proses,  serta  kondisi  lingkungan  bioreaktor  pada  proses  sakarifikasi  dan  fermentasi.
Sakarifikasi  menggunakan  kapang Trichoderma reesei  dan  proses  fermentasi  menggunakan  khamir Saccharomyces  cerevisiae. Proses  sakarifikasi  dan  fermentasi  terjadi  secara  simultan  dalam  satu bioreaktor dengan kondisi aerobik, agitasi dilakukan untuk meningkatkan kontak antara biokatalis dan media. Proses sakarifikasi yaitu hidrolisis selulosa  menjadi gula menggunakan  mikroba Trichoderma reesei .  Selulosa  digunakan  kapang T.  reesei sebagai  sumber  substratnya,  sehingga  konsentrasi selulosa  terus  menurun  hingga  akhir  proses.  Terlihat  kadar  gula  yang  naik  turun  diindikasikan hubungan  antara T.  reesei yang  memproduksi  gula,  dan S.  cerevisiae yang  secara  simultan menggunakan gula sebagai substratnya.
Pada  jam  ke  0-12  terjadi  fase  adaptasi  bagi  mikroba  kapang  dan  khamir.  Pemberian  aerasi akan  membantu  sel  dalam  melakukan  aktivitas  dan  metabolisme.  Pada  waktu  tersebut  kapang Trichoderma  reesei sudah  menghidrolisis  selulosa  bagas  sorgum  manis  menjadi  gula  sederhana. Produksi  bioetanol  pada  kondisi  aerobik  disebut  peristiwa  efek Crabtree .  Efek Crabtree merupakan kondisi penghambatan sintesis enzim respirasi. Jika konsentrasi sel khamir masih rendah, maka enzim respirasi  yang  disintesis  masih  cukup  untuk  memetabolisme  glukosa  melalui  jalur  respirasi.  Namun, jika  konsentrasi  sel  sudah  meningkat  (fase  log)  maka  sintesis  enzim  respirasi  akan  digantikan  oleh enzim  fermentatif.  Hal  ini  menyebabkan  jalur  respirasi  digantikan  dengan  fermentasi  (Jung, et.  al ., 2015).  Pada  kondisi  aerob  khamir  menghasilkan  biomassa  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  produksi etanol.  Hal  ini  mengindikasikan  pada  kondisi  aerob  produk  utama  yang  diinginkan  (etanol)  tidak terbentuk  secara  maksimal,  karena  sel  lebih  banyak  menggunakan  substrat  untuk  pertumbuhan dibandingkan untuk pembentukan produk. Pada jam 12-24 sel Saccharomyces cerevisiae meningkat signifikan  dibandingkan jam sebelumnya. Hal ini diindikasikan selain melakukan respirasi sel khamir juga mulai mengkonversi gula menjadi bioetanol. Terbukti kadar etanol meningkat pada jam ke 12-24 yaitu dari 1.18 g L -1 menjadi 3.02 g L -1 .
Selain menghidrolisis selulosa, kapang juga mengkonsumsi sumber energi lain yaitu gula-gula sederhana.  Kapang  membutuhkan  sumber  energi  tersebut  untuk  melanjutkan  aktivitas pertumbuhannya sehingga aktivitas hidrolisis selulosa tinggi. Hal ini menyebabkan kompetisi konsumsi gula antara kapang dan khamir. Khamir Saccharomyces cerevisiae tidak mampu menghasilkan enzim selulase yang berfungsi menghidrolisis selulosa menjadi gula sederhana. Penggunaan dua jenis kultur yang  terdiri  dari Trichoderma  reesei yang  berperan  untuk  hidrolisis  selulosa  dan Saccharomyces cerevisiae yang berperan dalam mengkonversi gula menjadi bioetanol. Pemberian agitasi sebesar 150 rpm  berdasarkan  penelitian  Lopes et  al .  (2016)  dan  Jain  dan  Agrawal  (2018).  Kecepatan  agitasi memberikan pengaruh terhadap produk yang dihasilkan. Namun, jika kecepatan agitasi di atas 250 rpm tidak memberikan pengaruh nyata terhadap produksi etanol. Hal ini  disebabkan karena keterbatasan metabolisme mikroba dalam menghasilkan produk (Lidiasari et al . 2006). Jumlah produk akhir etanol tergantung  pada  faktor-faktor  atau  parameter  pada  bioreaktor  salah  satunya  adalah  keterbatasan metabolisme khamir. Terhalangnya proses fermentasi, juga dipengaruhi suhu proses dan jenis khamir yang digunakan.

## Kinetika Kultivasi
Pertumbuhan mikroba ditentukan oleh waktu yang diperlukan untuk menggandakan sel. Waktu yang diperlukan untuk menggandakan massa dan jumlah sel berbeda-beda, karena massa sel dapat meningkat  tanpa  penambahan  jumlah  sel.  Namun  apabila  dalam  suatu  lingkungan  tertentu  interval antara  penggandaan  massa  sel  dan  pertumbuhan  jumlah  sel  dengan  waktu  berlangsung  konstan, maka mikroba tumbuh pada laju eksponensial. Parameter kinetika kultivasi pada keadaan lingkungan tertutup  ( batch )  meliputi:  laju  pertumbuhan  spesifik  maksium  gabungan  dua  mikroba  (μ  maks),  laju pertumbuhan  spesifik  maksimum  masing- masing  mikroba  (μN  maks),  rendemen  produk  terhadap substrat (Yp/s), dan laju produksi etanol.
Kecepatan reproduksi sel dalam proses kultivasi disebut dengan laju pertumbuhan spesifik maksimum (μmaks).  Parameter  kinetika  kultivasi  pada  penelitian  ini  mengacu  pada  Jain  dan  Agrawal  (2018) dengan modifikasi. Laju pertumbuhan spesifik gabungan (μx maks) untuk SSF konvensional sebesar 0.02/jam.  Laju  pertumbuhan  spesifik  tergolong  rendah  karena  pada  penelitian  ini  menggunakan  dua kultur  yang  berbeda.  Nilai  Yp/s  adalah  nilai  pembentukan  produk  etanol  terhadap  substrat.  Dengan bioreaktor sistem batch untuk memproduksi bioetanol, nilai Yp/s yang dihasilkan sebesar 0.17±0.01 g bioetanol/g substrat dan laju produksi sebesar 0.09±0.00 g L -1 jam-1 .

## KESIMPULAN
Teknik  sakarifikasi  dan  fermentasi  simultan  (SSF)  konvensional  atau  tanpa  rekayasa  dapat menghasilkan produk akhir etanol sebesar 6.60±0.28 g L -1 . Proses pada SSF konvensional merupakan tipe fermentasi secara aerobik. Fermentasi aerobik atau aerasi penuh menggunakan siklus Crab tree dalam  memproduksi  etanol,  namun  memiliki  kekurangan  yaitu  proses  respirasi  lebih  tinggi dibandingkan  proses  fermentasi.  Proses  SSF  konvensional  dapat  menghasilkan  rendemen  produk terhadap substrat (Yp/s) sebesar 0.17±0.01 g bioetanol/g substrat selulosa dan laju produksi bioetanol sebesar 0.09±0.00 g L -1 jam-1 .

## DAFTAR PUSTAKA
Correia JADC, Jose EMJ, Luciana RBG, Maria VPR. (2013). Alkaline hydrogen peroxide pretreatment of cashew apple bagasse for etanol production : Study of parameters. Bioresource Technology . 139:249-256. https://doi.org/10.1016/j.biortech. 2013.03.153.
Dahnum D, Tasum S O, Triwahyuni E, Nurdin M,  Abimanyu H. (2015). Comparison of SHF and SSF Processes Using Enzyme and Dry Yeast for Optimization of Bioethanol Production from Empty Fruit Bunch. Energy Procedia. 68:107-116. https://doi.org/10.1016/j.egypro.2015.03.238 Gomes DG, Serna-Loaiza S, Cardona CA, Gama M, Domingues L. (2018). Insights into the economic viability of cellulases recycling on bioethanol production from recycled paper sludge. Bioresource Technology 267:347 355. https://doi.org/10.1016/j.biortech.2018.07.056
Jain  L,  Agrawal  D.  (2018).  Performance  evaluation  of  fungal  cellulases  with  dilute  acid  pretreated sugarcane bagasse: a robust bioprospecting strategy for biofuel enzymes. Renewable Energy, 115:978 –988. https://doi.org/10.1016/j.renene.2017.09.021
Jung YR, Park JM, Heo S, Hong W, Lee S, Oh B, Park S, Seo J, Kim C. (2015). Cellulolytic enzymes produced by a newly isolated soil fungus Penicillium sp. TG2 with potential for use in cellulosic ethanol production. Renewable Energy , 76:66 –71. https://doi.org/10.1016/j.renene.2014.10.064 Lopes ML, Paulillo SCDL, Godoy A, Cherubin RA, Lorenzi MS, Giometti FHC, Bernardino CD, Amorim Neto  HB,  Amorim  HV.  (2016).  Ethanol  production  in  Brazil:  a  bridge  between  science  and industry. Brazilian Journal of Microbioloy, 47:64 –76. https://doi.org/10.1016/j.bjm.2016.10.003 Mood  SH,  Golfeshan  AH,  Tabatabaei  M,  Jouzani  GS,  Najafi  GH,  Gholami  M,  Ardjmand  M.  (2013). Lignocellulosic  biomass  to  bioethanol,  a  comprehensive  review  with  a  focus  on  pretreatment.
Renewable Sustainable Energy Rev, 27:77 –93. https://doi.org/10.1016/j.rser.2013.06.033
Pramasari DA, Haditjaroko L, Sunarti TC, Hermiati E, Syamsu K. (2017). The Effectiveness of Physical and  Alkali  Hydrothermal  Pretreatment  in  Improving  Enzyme  Susceptibility  of  Sweet  Sorghum Bagasse. Jurnal Bahan Alam Terbarukan . 117-131 https://doi.org/10.15294/jbat.v6i2.9910 Song C, Qiu Y, Liu Q, Ji N, Zhao Y, Kitamura Y, Hou  X. (2018). Process intensification  of cellulosic ethanol  production  by  waste  heat  integration. Chemical  Engineering  Res  Des 132:115 – 122. https://doi.org/10.1016/j.cherd.2018.01.016
Wu  L,  Arkane  M,  Ike  M,  Wada  M,  Takai  T,  Gau  M.  (2011).  Low  temperature  alkali  pretreatment  for improving enzymatic Digestibility of sweet sorghum bagasse for ethanol production. Bioresource Technology . 102(7): 4793-4799. https://doi.org/10.1016/j.biortech.2011.01.023
Zhang J, Xingxing M, Jianliang Y, Xu Z, Tianwei T. (2011). The effects of four different pretreatments on  enzymatic  hydrolysis  of  sweet  sorghum  bagasse  [Short  Communication]. Bioresource Technology . 102 : 4585-4589. https://doi.org/10.1016/j.biortech.2010.12.093