## A SPONGE (Stylissa sp.) ANTIOXIDANT TEST COLLECTED FROM MANADO BAY

## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN (Stylissa sp.) YANG DIPEROLEH DARI TELUK MANADO
Billy Arthur Porajow 1) , Adithya Yudistira 1) , Erladys Dumondor 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115 *billyporajow@student.unsrat.ac.id

## ABSTRACT
The Stylissa sp. were under the sea, and these sponge contains active compound, wich are more active than the compounds produced by teresterial plants. The purpose of this  study was intended to test the antioxidant activity of the stylissa sp. Sample of the stylissa sp sponge was from the territorial of manado bay. This research an experimental laboratory by testing the ethanol extract of Stylissa sp sponge using  DPPH method (1.1-diphenil-2- pikrhydrazil) to  analyze  antioxidant  activity  using  spectrophotometri  uv-vis  with  variations  in concentrations  2,  4,  6,  8,  and  10mg/  L.  Was  extracted  Stylissa  sp,  sponge  by  maceration using ethanol 95% as a solvent. The   value results of % inhibisi  (2mg/ L); 86.50%  (4mg/ L); 90.5% (6mg/L); 90.53% (8mg/ L) and 90,83% (10mg/L). The highest antioxidant activity at  10mg/L  concentration  with  mean  precentage  90.83%  inhibisi.  The  result  for  this  study indicate that the extract from ethanol Stylissa sp  sponge has highest antioxidant activity.
Keywords: Antioxidant, DPPH, Stylissa sp., bay of Manado

## ABSTRAK
Spons Stylissa sp.  terdapat  di  bawah  laut  dan  spons  ini  mengandung  senyawa  aktif  yang persentase keaktifannya lebih besar dibandingkan dengan senyawa-senyawa yang dihasilkan oleh   tumbuhan   darat.   Penelitian   ini   bertujuan   untuk   menguji   aktivitas antioksidan dari Stylissa sp. Sampel Spons Stylissa sp. diperoleh dari perairan Teluk Manado. Penelitian ini merupakan eksperimental laboratorium dengan pengujian terhadap ekstrak etanol Spons Stylissa sp  dengan  metode  DPPH  ( 1,1-diphenil-2-pikrihidrazil )  untuk  menguji  aktivitas antioksidan yang diukur menggunakan Spektrofotometri UV-Vis dengan variasi konsentrasi 2,  4,  6,  8,  dan  10mg/L.  Ekstrak  Spons Stylissa sp  diperoleh  dengan  cara  maserasi menggunakan pelarut etanol 95%. Hasil nilai % inhibisi rata-rata yang didapat yaitu 87,20% (2mg/L); 86,50% (4mg/L); 90,5% (6mg/L); 90,53% (8mg/L) dan 90,83 (10mg/L). Aktivitas antioksidan tertinggi terdapat pada konsentrasi  10mg/L   dengan nilai
% inhibisi rata-rata 90,83%. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak  etanol  Spons Stylissa sp mempunyai kandungan antioksidan yang tinggi.
Kata kunci : Antioksidan, DPPH, Spons Stylissa sp., Teluk Manado

## PENDAHULUAN
Indonesia  y a n g   d i k e n a l   sebagai negara  yang  mempunyai  keanekaragaman hayati  dengan  jumlah  melimpah  serta memiliki  berbaga i macam  organisme  laut yang  dapat  dimanfaatkan  sebagai  obat alternatif.  Pemanfaatan  organisme  laut  telah terbukti  banyak  digunakan  sebagai  sumber senyawa obat baru (Lalamentik, 2017).
Senyawa  kimia  yang  mempunyai peran  dalam  antioksidan    dapat    ditemukan melimpah  dalam  tumbuhan  dan  organisme laut.  Antioksidan  merupakan  suatu  senyawa yang dapat menyerap atau menetralisir radikal bebas  sehingga  mampu  mencegah  penyakit- penyakit  degeneratif  seperti  kardiovaskuler, karsinogenesis, dan penyakit lainnya.
Senyawa  yang  ditemukan  umumnya  adalah senyawa  fenolik  atau  polifenolik.  Dalam beberapa  tahun  terakhir,  identifikasi  dan pengembangan  senyawa  fenolik  atau  ekstrak dari  berbagai  bahan  alam  telah  menjadi cakupan  utama  dalam  penelitian  yang  terkait dengan  kesehatan  dan  pengobatan  (Murray, 2009).
Spons  merupakan  salah  satu  jenis organisme  laut  yang  memiliki        potensi cukup     besar     dalam menghasilkan  senyawa aktif  (Abdul,  2003).  Berdasarkan  beberapa penelitian  yang  telah  dilakukan,  spons menempati urutan tertinggi  sebagai    sumber senyawa aktif karena metabolit sekunder pada spons memiliki keaktifan sebagai antimikroba, antivirus, dan antikanker yang sangat   berguna sebagai bahan baku obat (Soediro, 1999).
Penelitian    menyatakan    bahwa ekstrak   spons   yang  diperoleh   dari   perairan Selat  Lembeh  memiliki  aktifitas  antioksidan sangat    kuat    yang    diuji    dengan    metode DPPH( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil ).
Berdasarkan data tersebut  peneliti  bermaksud untuk   menguji   aktivitas   antioksidan   dari spons  ( Stylissa sp)  yang  diperoleh  dari perairan Teluk Manado dengan menggunakan metode DPPH ( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil ).

## METODOLOGI  PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian    ini    dilaksanakan    pada bulan  September  2020  –  Oktober  2020  di laboratorium   penelitian   lanjutan   Program studi  Farmasi,  Fakultas Matematika  dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Universitas Sam Ratulangi.

## Jenis Penelitian
Penelitian  ini  berbentuk  eksperimen laboratorium      yang     dilakukan  dengan    cara menguji    aktivitas antioksidan  dengan menggunakan  metode  DPPH  ( 1,1-  difenil-2- pikrilhidrazil )  dari  ekstrak  spons  ( Stylissa sp.) dari perairan Teluk Manado.

## Alat dan Bahan Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini yaitu masker, sarung tangan, gunting, pisau, tabung  oksigen, snorkel ,  fins, ziplok,  telenan, cool  box ,  pisau,  e rlenmeyer (Pyrex),  corong, kamera,  wadah  botol  air  kemasan  600  mL, cawan  porselin,  gelas  ukur,  labu  tentukur, tabung reaksi, baker glass , vortex , mikro pipet, timbangan digital, spatula, oven, spektrofotometer UV-Vis.

## Bahan
Bahan  yang  dipakai  yaitu  ekstrak sampel   spons   ( Stylissa sp.)   etanol     95%, etanol (p.a) , kertas saring, tissue, alumunium foil ,  kertas  label,botol  salep,  serbuk  vitamin C  (p.a)  dan  serbuk  DPPH  ( 1,1-diphenil-2- picrylhydarzyl ).

## Prosedur Penelitian Pengambilan Sampel dan Preparasi
Sampel
Sampel yang akan dipakai didapatkan dari  Teluk  Manado.  Sampel diambil   dengan menggunakan    beberapa  alat      bantu,  yaitu masker,  snorkel,  fins,  dan  tabung  oksigen. Sampel yang telah diambil lansung dibersihkan,  kemudian  dipotong  kecil-kecil, lalu  dimasukkan  ke  dalam  botol  yang  berisi pelarut    etanol    95%.    Botol  sampel dimasukkan kedalam kotak dingin ( cool box ) yang  berisi  es  batu.  Kemudian  dibawa  ke Laboratorium  Farmakognosi  dan  Fitokimia Program  Studi  Farmasi  Universitas  Sam Ratulangi. Dan selanjutnya sampel difoto dan diberi  label  serta  nomor  sampel,  untuk selanjutnya  diekstraksi  menggunakan  metode maserasi.

## Ekstraksi
Sampel     diekstraksi   dengan metode maserasi. Pelarut yang digunakan adalah etanol 95%. Sampel  spons Stylissa sp. sebanyak  440 g  di  maserasi  dengan  pelarut  etanol  95% sebanyak  200  mL  dengan  3  kali  pengulangan selama  24  jam  dengan  sesekali
dikocok.  Hasil  dari  maserasi  kemudian  di saring  untuk  mendapatkan  hasil  filtrat, kemudian hasil filtrat yang di dapatkan dari 3 kali pengulangan di uapkan sehingga menghasilkan ekstrak kental dari sampel, lalu di  taruh  di  cawan  petri  dan  dimasukan  ke dalam  oven  pemanas  pada  suhu  40̊  C  untuk mendapatkan ekstrak kasar dari sampel  spons Stylissa sp.

## Pembuatan Larutan Stok
Sebanyak   100   mg   ekstrak   spons Stylissa sp.  dan  dilarutkan  dalam  etanol  p.a sampai  100  mL.  Kemudian  dilakukan pengenceran dengan masing-masing konsentrasi  2,  4,  6,  8,  10  mg/L.  Dengan menggunakan rumus pengenceran, yaitu :

## V1 . M1 = V2 . M2
Hasil  V1  yang  didapatkan  dari masing-masing  konsentrasi  dimasukkan  ke dalam  gelas  ukur  kemudian  ditambahkan dengan  etanol   p.a  hingga   mencapai  tanda batas    5    mL,    selanjutnya    ditutup menggunakan aluminium foil.

## Pembuatan Larutan Kontrol DPPH
Sebanyak 4 mg DPPH ditimbang dan dilarutkan  dalam  etanol  p.a  sampai  100  mL, dan    buat    larutan    stok    DPPH    sesuai konsentrasi  yang  sama  dengan  konsentrasi pada larutan stok sebelumnya yaitu 2, 4, 6, 8, 10  mg/L  pada  masing-masing  konsentrasi  di tambahkan etanol sampai tanda batas 5 ml.
Selanjutnya   larutan   yang   di   buat untuk  uji  aktivitas  antioksidan  yaitu  ekstrak etanol  spons Stylissa sp . di  pipet  sebanyak  2 mL   di   masukan   kedalam   tabung   reaksi dengan masing-masing konsentrasi 2, 4, 6, 8, 10  mg/L  dan  di  tambahkan  2  mL  larutan DPPH  kedalam  masing-masing  konsentrasi dan di vortex selama 15 detik sebanyak 3 kali pengulangan.

## Pembuatan Larutan Vitamin C
Vitamin  C  p.a    ditimbang  sebanyak 10  mg  dan  dilarutkan  dalam  etanol  p.a sebanyak  10  mL.  Kemudian  buat  larutan dengan  konsentrasi  2,  4,  6,  8,  10  mg/L. Masing-masing konsentrasi ditambahkan dengan etanol p.a sampai tanda batas 5 mL dan dibuat  sebanyak  3  kali  pengulangan.  Setelah pengujian  sampel  dan  pengujian  kontrol dilanjutkan  pengujian  vitamin  C  p.a  pada masing-masing  konsentrasi  sampel  vitamin  C p.a dipipet sebanyak 2 mL dimasukan kedalam tabung reaksi  dan di tambahkan 2 mL larutan DPPH.  Selanjutnya  divortex  selama  15  detik dan diinkubasi selama 30 menit. Sampel diuji pada spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang 517 nm.
Pengujian  Larutan  Kontrol  DPPH  dan Aktivitas  Antioksidan  dengan  Metode DPPH
Sebanyak  2 mL ekstrak etanol spons Stylissa sp . dengan konsentrasi  2, 4, 6, 8, 10 mg/L  dan  ditambahkan  2  mL  DPPH  pada masing-masing    konsentrasi    lalu    divortex selama  15  detik.  Sampel  diinkubansi  selama 30  menit  pada  suhu  37 0 C.  Larutan  kontrol DPPH  diuji  pada  spektrofotometer  UV-Vis dengan  panjang  gelombang  517  nm  sebagai absorbansi    kontrol    dalam    pengujian    ini. Berubahnya  warna  dari  ungu  menjadi  kuning menunjukkan bahwa masing-masing konsentrasi  menunjukkan  efisiensi  penangkal radikal bebas atau antioksidan.
Kemudian     diamati     perbandingan dengan   vitamin   C   (p.a)   sebagai   standar. Aktivitas  penangkapan  radikal  bebas  (persen inhibisi) dihitung sebagai persentase berkurangnya       warna       DPPH       dengan menggunakan rumus :

## HASIL  DAN  PEMBAHASAN
Hasil
Tabel 1. Hasil perbandingan pengujian aktivitas antioksidan ekstrak etanol spons Stylissa sp. dengan vitamin C p.a .
Konsentrasi Pengulangan  I Ekstrak Pengulangan  II Ekstrak Pengulangan  III Ekstrak Rata-rata Vitamin C Vitamin C Vitamin C 88% 86,30% 87,50% 87,20% 2 mg/L 96,80% 92,70% 97,60% 95,7% 84,20% 87,40% 88% 86,50% 4 mg/L 97,50% 98,60% 98,80% 98,3% 89,30% 92,80% 89,4% 90,5% 6 mg/L 98,80% 99,50% 98,90% 99,06% 89,9% 90,80% 90,90% 90,53% 8 mg/L 99,20% 98,20% 98,20% 98,50% 90,20% 90,90% 91,40% 90.83% 10 mg/L 99,60% 99,50% 99,60% 99,56%

## Pembahasan
Pengujian  aktivitas  antioksidan  pada sampel  dilakukan  dengan  metode  DPPH. Prinsip   dari   metode   ini   adalah   mengukur aktivitas  antioksidan  secara  kuantitatif  yaitu dengan  pengukuran  aktivitas  perendaman radikal  DPPH  oleh  ekstrak  etanol  spons Stylissa sp.  menggunakan  spektrofotometer UV-Vis  dengan  panjang  gelombang  517  nm (Rizkayanti et al. , 2017).
Konsentrasi  yang  digunakan  pada pengujian  ekstrak  etanol  spons Stylissa sp. adalah    2,    4,    6,    8,    dan    10    mg/L.    Pada pengujian  ini  vitamin  C  digunakan  sebagai pembanding karena berfungsi sebagai antioksidan    sekunder    yaitu    menangkap radikal bebas dan mencegah terjadinya reaksi berantai.
Hasil  dari  sampel  pada  pengujian  ini menunjukan  bahwa  sampel  ini  mempunyai kadar antioksidan yang lebih besar dibandingkan  dengan  sampel  yang berada  di pulau  Lembeh  dan  yang  berada  di  pulau Bangka,   kadar   antioksidan   yang  diperoleh dari  Teluk  Manado  memiliki  nilai  rata-rata pada konsentrasi 2 mg/L (87,20%), konsentrasi  4  mg/L  (86,50%),  konsentrasi  6 mg/L  (90,5%),  dan  konsentrasi  8  mg/L (89,9%)   dan konsentrasi 10 mg/L (90,83%).
Sedangkan  sampel  yang  berada  di  pulau Bangka nilai yang didapat konsentrasi 50 mg/L (85,63%), konsentrasi 75 mg/L (88,66%), dan konsentrasi  100  mg/L (88,90%), sampel  yang berada  di  pulau  lembeh    memiliki    kadar antioksidan    yaitu  pada  konsentrasi  25  mg/L (65,90%),  konsentrasi    50    mg/L    (66,30%), konsentrasi 75    mg/L    (69,30%),    dan    konsentrasi    100 mg/L (70,26%).
Menurut    Molyneux    (2004)    nilai standart    kadar    antioksidan    adalah    50%. Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh  pada pengujian  DPPH  persen  inhibisi  pada  ekstrak etanol Spons Stylissa sp. dan vitamin C pada Tabel  1.  mengalami  peningkatan  pada konsentrasi   tertinggi   yaitu   10mg/L   yakni sebesar  90,83%.  Peningkatan  persen  inhibisi yang terjadi  pada  ekstrak menandakan bahwa semakin   besar   konsentrasi   ekstrak   maka absorbansi  sampel  akan  menurun  dan  tingkat inhibisi  akan  naik.  Absorbansi  sampel  turun karena elektron pada DPPH menjadi berpasangan  dengan  electron  sampel  yang mengakibatkan  warna  larutan  berubah  dari ungu  pekat  menjadi  kuning  bening,  maka semakin  pula  besar  persen  inhibisi.  (Hanani et  al.,  2005).  Hasil  pengujian  perbandingan aktivitas   antioksidan   ekstrak   etanol   Spons
Stylissa  sp.  dan  vitamin  C  menunjukkan bahwa  kemampuan  penangkal  radikal  bebas pada  vitamin  C  lebih  kuat  dibandingkan dengan  ekstrak  etanol  Spons  Stylissa  sp.  Hal itu  dikarenakan  vitamin  C  mempunyai  gugus hidroksi  bebas  yang  bertindak  sebagai penangkap radikal bebas dan jika mempunyai gugus polihidroksi akan meningkatkan aktivitas    antioksidan    (Triyem,    2010). Vitamin  C  juga  merupakan  senyawa  murni yang jika dibandingkan dengan ekstrak spons Stylissa sp.yang terdiri dari beberapa campuran senyawa lain (Pratiwi et al, 2013).
Peningkatan  persen  inhibisi  ini  pada ekstrak  menandakan  bahwa  semakin  besar konsentrasi   ekstrak   maka   semakin   besar persen  inhibisi.  Hal  ini  didukung  oleh penelitian yang dilakukan oleh (Hanani et al ., 2005)   yang   menyatakan   bahwa   presentase penghambatan  (persen  inhibisi)  terhadap aktivitas  radikal  bebas  akan  ikut  meningkat seiring  dengan  meningkatnya      konsentrasi. Namun  hal  tersebut  tumpang  tindih  dengan hasil  yang  ada  dimana  pada  sampel  spons Stylissa sp . menunjukkan nilai persen inhibisi yang  didapat  pada  konsentrasi  rendah mempunyai  nilai  persen  inhibisi  yang  lebih tinggi  dibandingkan  dengan  konsentrasi  yang lebih  tinggi  didapat  nilai  persen  inhibis  yang rendah.  Ketidakstabilan  absorbansi  yang diperoleh    tersebut    dapat    dimungkinkan karena   rentang   variasi   konsentrasi   yang dipilih  tidak  begitu  signifikan  sehingga  hasil yang  diperoleh  pun  hampir  terlihat  seperti berada    pada    nilai    yang    sama.    Hasil absorbansi  ini  tidak  sesuai  dengan  hukum Lambert-Beer  yang  menyatakan  semakin tinggi  konsentrasi  maka  semakin  tinggi  pula nilai absorbansi suatu sampel
(Kristianingrum, 2010).
Menurut           Gozcelioglu           dan Konuklugil  (2012)  kadar  yang  terdapat  pada Stylissa sp.  memiliki  potensi  bioaktif  Spesies ini  memiliki  senyawa  metabolit  sekunder berupa  terpenoid  dimana  berguna  untuk menghalangi  predator  bersaing  untuk  ruang dengan  organisme spesies lain, untuk komunikasi  dan  untuk  perlindungan  terhadap infeksi.

## KESIMPULAN
Berdasarkan   penelitian   yang   telah dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak etanol  spons Stylissa sp.  dari  perairan  Teluk Manado  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang
kuat  pada  setiap  konsentrasi  dan  aktivitas tertinggi  terdapat  pada  konsentrasi  10mg/L dengan nilai rata-rata inhibisi 90,83%.

## SARAN
Dari     hasil     penelitian    ini    perlu dilakukannya    penelitian    lebih    lanjut mengenai   khasiat   dari   spons Stylissa sp. karena  memiliki  aktifitas  antioksidan  yang kuat dan berpotensi sebagai bahan obat.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdul, M. 2003. Peranan Radikal  Bebas dan Antioksidan    dalam    Kesehatan    dan Penyakit, Depkes RI, Jakarta.
Gozceliogle,   B   dan   Konuklugil,   B.   2012.
Qualitaive      Detection      of      Some Secondary      Metabolites  from  Three Turkish  Marine  Sponges. Fabad  J. Pharm. 37(12) : 73-78.
Hanani,  E,  Sekarini  R.  2005.  Identifikasi Senyawa  Antioksidan  dalam  Spons Callispongia    sp .    dari    Kepulauan Seribu. Jurnal    Ilmu   Kefarmasian . 2
(3) : 127-133.
Kristianingrum,  Susila.  2010.  Spektroskopi
Ultraviolet dan Sinar Tampak (Spektroskopi  UV–Vis).  Universitas Negeri Yogyakarta, Yogyakarta.
Lalamentik,  G.  2017.  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak    Karang    Lunak    Klyxum    sp. yang  Diperoleh  dari  Teluk  Manado [skripsi]. Program Studi Farmasi FMIPA  Universitas  Sam  Ratulangi, Manado.
Molyneux, P. 2004. The use of the stable free radical   diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for  estimating  antioxidant  activity.
Journal  Science  Technology .
26(2) : 211-219.
Murray, R. K., Granner D.K., Rodwell V.W. 2009.  Biokimia  Harper.  Edisi  ke-  27. Terjemahan      Andri  Hartono.  Penerbit Buku Kedokteran, EGC, Jakarta.
Pratiwi,  D.,  Wahdaningsih,  S.,  &  Isnindar. 2013.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Daun
Bawang Mekah ( Eleutherine americana Merr)    dengan    Metode
DPPH   ( 2,2-difenil-1-   pikrilhidrazil ). Traditional  Medicine  Journal . 18(1) : 9-16. Rizkayanti, R. 2017. Uji Aktivitas
Antioksidan  Ekstrak  Air  dan  Ekstrak
Etanol  Daun  Kelor  ( Moringa  oleifera Lam). Jurnal  Akademika  Kimia . 6(2) : 125-131. Soediro,   I.S.   1999.   Produk   Alam   Hayati Bahari  dan  Prospek  Pemanfaatannya  di Bidang Kesehatan dan Kosmetika . Prosidings Seminar Bioteknologi Kelautan  Indonesia  I.  Lembaga  Ilmu Pengetahuan Indonesia, Jakarta.
Triyem. 2010. Aktivitas Antioksidan dari Kulit Batang  Manggis  Hutan  ( Garcinacf. bancana Miq.)  [tesis].  Universitas Indonesia, Depok.