Uji Aktivitas Ekstrak Daun Srikaya ( Annona squamosa ) sebagai Antipiretik pada Tikus Jantan Galur Wistar secara Invivo
Activity Test of Srikaya Leaf Extract (Annona squamosa) as an Antipireticin Invivo Wistar Rats
Willi Wahyu Timur 1 , Rina Wijayanti 1 , Tuti Awalia Kamil 1
1 Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran Universitas Islam Sultan Agung Semarang Jl. Raya Kaligawe Km. 4, Semarang 50112
Sur-el: willi_wahyu@unissula.ac.id

## ABSTRAK
Daun Srikaya memiliki  khasiat empirik  sebagai  penurun panas. Daun Srikaya mengandung flavonoid yang mampu menghambat prostaglandin sehingga mempunyai efek antipiretik. Penelitian dilakukan dengan tujuan untuk mengetahui aktivitas antipiretik ekstrak etanolik 70% daun srikaya (Annona Squamosa L.) pada tikus jantan galur wistar.  Penelitian  ini  menggunakan  metode  eksperimen  dengan  rancangan  penelitian  post  test  only  randomized control  group design. Penelitian  menggunakan 25 ekor tikus jantan galur  wistar, yang dikelompokkan menjadi 5 kelompok secara acak dan tiap kelompok terdiri  dari  5 ekor tikus. Setiap kelompok diinjeksi  dengan vaksin  DPT- Hb-Hib 0,3 ml secara I.M untuk menimbulkan demam. Kemudian kelompok I, II, III secara berturut-turut sebagai kelompok  ekstrak  dosis  720  mg/kgBB,  1080  mg/kgBB  dan  1440  mg/KgBB.  Kelompok  IV  kontrol  positif (parasetamol 6,3 mg/100 g BB) dan kelompok V (CMC-Na 0,5%). Semuanya diberikan secara peroral secara single dose. Pengukuran suhu dilakukan sebelum pemberian  vaksin  DPT-Hb-Hib, 3 jam setelah pemberian vaksin  DPT- Hb-Hib  dan  30  menit  sekali  setelah  perlakuan  sampai  menit  240.  Hasil  menunjukkan  bahwa  terdapat  perbedaan yang  signifikan  antara  kelompok  kontrol  negatif  dengan  kelompok  dosis  I,  II,  III  pada  menit-90  sampai  240. Kesimpulan  yang  dapat  diambil  bahwa  ekstrak  etanolik  70%  daun  srikaya  memiliki  efek  antipiretik  pada  tikus jantan galur wistar secara in vivo.
Kata kunci : antipiretik, ekstrak daun srikaya (Annona Squamosa L), vaksin DPT-Hb-Hib.

## ABSTRACT
Custard apples leaves have empirical properties as heat-reducing properties. Custard apples leaves contain flavonoids  that  can  inhibit  prostaglandins  so  that  they  have  antipyretic  effects.  The  study  was  conducted  to determine the antipyretic activity of ethanolic extract 70% of custard apples (Annona squamosa L.) leaves in male wistar rats. This study uses an experimental method with post test only randomized control group design. The study used  25  male  wistar  rats,  which  were  grouped  into  5  groups  randomly  and  each  group  consisted  of  5  rats.  Each group  was injected  with 0.3 ml DPT-Hb-Hib vaccine in  I.M to  cause fever. Then group I, II, III respectively as a group  extract  dose  of  720  mg  /  kgBW,  1080  mg  /  kgBB  and  1440  mg  /  KgBB.  Group  IV  was  positive  control (paracetamol  6.3  mg  /  100  g  BW)  and  group  V  (CMC-Na  0.5%).  Everything  is  given  orally  on  a  single  dose. Temperature  measurements  were  carried  out  before  administering  the  DPT-Hb-Hib  vaccine,  3  hours  after  the administration of DPT-Hb-Hib vaccine and 30 minutes after treatment  until  240 minutes. The results showed that there  were  significant  differences  between  the  negative  control  group  and  the  dose  group  I,  II,  III  at  90  to  240 minutes.  Conclusions  can  be  drawn  that  the  ethanolic  extract  of  70%  of  srikaya  leaves  has  antipyretic  effects  on male rats in Wistar strain in vivo.
Keywords : antipyretic, leaf extracts custard apples (Annona squamosa L), vaccine DPT-Hb-Hib.

## PENDAHULUAN
Suhu  demam  atau  pireksia  merupakan gejala  dari  suatu  penyakit.  Penyakit  infeksi seperti  demam  berdarah,  tifus,  malaria,
peradangan  hati,  dan  penyakit  infeksi  lain merupakan  contoh  penyakit  yang  sering mempunyai  gejala  demam.  Dampak  negatif demam  antara  lain  dehidrasi,  kekurangan
oksigen,  kerusakan  saraf,  rasa  tidak  nyaman seperti  sakit  kepala,  nafsu  makan  menurun (anoreksia),  lemas,  dan  nyeri  otot.  Untuk mengurangi dampak negatif ini maka demam perlu  diobati  dengan  antipiretik  (Arifianto  & Hariadi,  2007).  Derajat  suhu  yang  dapat dikatakan demam adalah suhu rektal ≥38,0°C atau  suhu  mulut  ≥37,5°C  atau  suhu  aksila ≥37,2°C  (Kaneshiro  N.K.  dan  Zieve  D., 2010).
Obat-obat  yang dapat menurunkan demam disebut  sebagai  obat-obat  antipiretik.  Obat- obat yang digunakan untuk mengatasi demam antara  lain  parasetamol,  asetosal,  fenasetin, dan antipirin (Tjay & Rahardja, 2002). Obat- obat  tersebut  dengan  penggunaan  jangka panjang  dan  berlebihan  dapat  menyebabkan kerusakan  hati  dan  perdarahan  pada  saluran cerna (Ganiswarna, 2007).
Munculnya  banyak  permasalahan  yang terkait  dengan  mengkonsumsi  obat  sintetik memicu  maraknya  penelitian  tanaman  obat tradisional untuk pencegahan dan pengobatan demam. Secara eksperimental aktivitas antipiretik  suatu  bahan  atau  senyawa  dapat diketahui  dengan  melakukan  percobaan  pada hewan  uji,  baik  secara  in  vivo  maupun  in vitro (Wijoyo, 2003).
Penelitian yang dilakukan oleh
(Wandasari,  Ruslan,  &  Kusmardiyani,  2007) menunjukan bahwa daun srikaya mengandung  alkaloid,  glikosida  sianogen, flavonoid,  fenol,  saponin,  dan  terpenoid. Flavonoid  menunjukan  lebih  dari  seratus macam bioaktivitas. Bioaktivitas yang
ditunjukkan  antara  lain  efek  antipiretik, analgetik,  dan  antiinflamasi  (Wijayakusuma, 2001). Flavonoid dapat menghambat siklooksigenase, jenis flavonoid yang menghambat  jalur  COX  adalah  flavon. Kemungkinan besar efek antipiretik
disebabkan karena penghambatan
siklooksigenase  yang  merupakan  langkah pertama  pada  jalur  eikosanoid  seperti prostaglandin dan tromboksan  (Robinson T. , 2001).
Berdasarkan  uraian  diatas  peneliti  ingin membuktikan aktivitas efek antipiretik ekstrak  daun  srikaya  yang  diuji  pada  tikus jantan  galur  wistar.  Dosis  ekstrak  mengacu pada  penelitian  terdahulu  tentang  uji  efek antipiretik  menggunakan  daun  tumbuhan tembelekan  ( Lantana  camara  L )  yang mengandung  flavonoid  dengan  dosis  (720 mg/kgBB;  1080  mg/kgBB;  1440  mg/kgBB) yang diharapkan mempunyai efek antipiretik. Ekstrak  daun  srikaya  bisa  dijadikan  alternatif untuk  terapi  penurunan  demam  selain  obat sintesis seperti parasetamol.

## METODE
Penelitian ini menggunakan metode eksperimen dengan rancangan penelitian post test  only  randomized  control  group  design . Penelitian  menggunakan 25 ekor tikus jantan galur  wistar,  yang  dikelompokkan  menjadi  5 kelompok  secara  acak  dan  tiap  kelompok terdiri  dari  5  ekor  tikus.  Setiap  kelompok diinjeksi  dengan  vaksin  DPT-Hb-Hib  0,3  ml secara  I.M  untuk  menimbulkan  demam.
Kemudian kelompok I, II, III secara berturut- turut  sebagai  kelompok  ekstrak  dosis  720 mg/kgBB, 1080 mg/kgBB dan 1440 mg/KgBB.  Kelompok  IV  kontrol  positif (parasetamol  6,3  mg/100  g  BB)  dan kelompok  V  sebagai  kontrol  negatif  (CMC- Na 0,5%). Semuanya diberikan secara peroral secara single dose . Pengukuran suhu dilakukan  sebelum  pemberian  vaksin  DPT- Hb-Hib,  3  jam  setelah  pemberian  vaksin DPT-Hb-Hib  dan  30  menit  sekali  setelah perlakuan sampai menit 240.
Alat-alat  yang digunakan dalam penelitian ini  yaitu  timbangan  analitik  merk  Mettler Toledo,  erlenmeyer, glassware merk  Pyrex, jarum  suntik,  sonde  tikus,  tabung  reaksi, vakum evaporator merk Heidolph  , hot plate, waterbath ,  kertas  saring  dan  termometer digital.  Bahan  yang  digunakan  yaitu  daun srikaya,  etanol  70%,  aquades,  parasetamol, CMC-Na,  vaksin  DPT-Hb-Hib  dan  tikus jantan sebanyak 35 ekor.
Bahan  yang  digunakan  yaitu  daun  srikaya (diperoleh  dari  Gunung  Pati,  Semarang), etanol 70% (Grade Laboratorium-PT. Brataco),  aquades  (Grade  Laboratorium-PT. Brataco), parasetamol (PT Actavis), CMC-Na (Food  Grade-PT. Brataco),  vaksin  DPT-Hb- Hib (Biofarma) dan tikus jantan sebanyak 35 ekor.
Tahapan  yang  dilakukan  dalam  penelitian ini  adalah  determinasi  tanaman  srikaya, maserasi  daun  srikaya,  uji  skrining  fitokimia, dan  uji  aktivitas  antipiretik  ekstrak  daun srikaya dengan pemeriksaan suhu tubuh tikus
jantan  galur  wistar  yang  telah  diberikan perlakuan  menggunakan  termometer  rektal digital dengan satuan o C.
Data  penurunan  suhu  rektal  tikus  pada menit  ke  30  sampai  menit  ke  240  yang diperoleh diolah dengan menggunakan SPSS. Langkah  pertama  adalah  uji  normalitas menggunakan tes Kolmogorov-Smirnov . Kemudian dilanjutkan uji homogenitas menggunakan Levene  test .    Dari  uji normalitas  dan  homogenitas  didapatkan  data berdistribusi normal dan homogen. Selanjutnya,  dilakukan  analisis  parametrik menggunakan uji anova . Kemudian dilanjutkan  dengan  uji post  hoc untuk membandingkan  perbedaan  mean  antara  2 kelompok dengan nilai α = 0,5.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  determinasi  tanaman  adalah  sebagai berikut:
Divisio : Spermathophyta
Subdivisio  : Angiospermae Kelas : Dicotyledoneae Ordo : Annonales Famili : Annonaceae Genus : Annona Spesies : Annona squamosa L
Pada  penelitian  ini  hasil  pengukuran  suhu tubuh  tikus  jantan  galur  wistar  pada  kondisi awal (T1) menunjukan suhu rata-rata kelompok  perlakuan  dosis  1  34,96 o C, kelompok dosis 2 36,78 o C, kelompok dosis 3 36,28 o C,  kelompok  kontrol  positif  37,04 o C dan kelompok kontrol negatif 35,82 o C. Untuk
mengetahui pengaruh antipiretik ekstrak daun srikaya  ( Annona  squamosa L . )  terhadap penurunan  suhu  tubuh  tikus  jantan  galur wistar  harus  dilakukan  pada  tikus  yang kondisinya  dalam  keadaan  demam.  Oleh karena  itu  diperlukan  demam  buatan  untuk mendemamkan  tikus  yaitu  dengan  metode induksi  vaksin.  Demam  setelah  diberi  vaksin disebabkan  oleh  reaksi  tubuh  terhadap  toksin kuman yang sudah dilemahkan yang masuk ke dalam  tubuh.  Vaksin  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  vaksin  DPT-HB-Hib (Widiyani,  2003).  Setelah  pemberian  vaksin diperoleh  rata-rata  suhu  pada  masing-masing kelompok perlakuan dosis I, dosis II, dosis III, kelompok  kontrol  positif  dan  kelompok kontrol negatif secara berturut-turut 37,48 o C; 37,48 o C;  37,74 o C;  37,94 o C;  dan  37,42 o C. Data tersebut menunjukan terjadinya kenaikan suhu tubuh tikus akibat diinduksi vaksin DPT- Hb-Hib.  Hasil  dari  uji  T-test  antara  suhu sebelum diinduksi vaksin DPT-Hb-Hib dengan suhu setelah diinduksi vaksin
menunjukan perbedaan yang signifikan dengan p <0,05 yang artinya vaksin DPT-Hb- Hib  mampu  menginduksi  terjadinya  demam. Vaksin DPT-Hb-Hib adalah suspensi homogen  yang  mengandung  toksid  tetanus dan  difteri  murni,  bakteri  pertusis  inaktif, antigen  permukaan  hepatitis  B  (HBsAg) murni  yang  tidak  infeksius,  dan  komponen Hib  sebagai  vaksin  bakteri  sub  unit  berupa kapsul  polisakarida Haemophilus  influenzae tipe b tidak infeksius .
Sebagai respon terhadap rangsangan pirogenik,  maka  monosit,  makrofag,  dan  sel- sel  kupffer  mengeluarkan  suatu  zat  kimia yang  dikenal  sebagai  pirogen  endogen  IL- 1(interleukin-1),  TNFα  (Tumor  Necrosis Factor  α),  IL-6  (interleukin-6),  dan  INF (interferon) yang bekerja pada pusat termoregulasi hipotalamus untuk meningkatkan patokan termostat. Hipotalamus mempertahankan  suhu  di  titik  patokan  yang baru  dan  bukan  di  suhu  normal.  Sebagai contoh,  pirogen  endogen  meningkatkan  titik
Tabel 1 Karakteristik Ekstrak Etanolik 70% daun srikaya No Parameter Ekstrak daun srikaya 1 Identitas Nama ekstrak  : Extractum Annona squamosa L . Folium
Nama tanaman    : Annona squamosa L. Bagian tanaman  : Daun Nama Indonesia  : Srikaya 2 Organoleptik Bentuk : Cairan kental Warna : hijau kehitaman Bau : Khas Rasa : Pahit 3 Kadar Air 7,37% 4 Rendemen 5 %
Tabel 2. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Daun Srikaya ( Annona squamosa L.) Parameter uji Reagen Warna Metode Keterangan Flavonoid HCl, Mg, etanol Merah kejinggaan Uji tabung Positif
patokan  menjadi  38,9°C,  hipotalamus  merasa bahwa  suhu  normal  prademam  sebesar  37°C terlalu  dingin,  dan  organ  ini  memicu mekanisme-mekanisme  respon  dingin  untuk meningkatkan  suhu  tubuh  (Ganong,  2003). Vaksin  DPT-Hb-Hib  dapat  menimbulkan demam dengan merangsang tubuh membentuk antibodi  terhadap  penyakit  dipteri,  pertusis,
tetanus, hepatitis B dan Haemophilus influenzae tipe b.
Setelah  tikus  dibuat  menjadi  demam  maka langkah  selanjutnya  setiap  kelompok  diberi perlakuan  berupa  pemberian  dosis  1,  dosis  2, dosis  3,  perlakuan  kontrol  positif  dan perlakuan  kontrol  negatif.  Selanjutnya  suhu tubuh  tikus  tiap  kelompok  diukur  tiap  30
Tabel 3. Rerata pengukuran suhu tubuh tikus Kelompok Suhu o C T1 T2 T30 T60 T90 T120 T150 T180 T210 T240 Dosis A 34,96  37,48  37,32  36,98 36,60  36,54  36,54  36,56  36,52  36,50 Dosis B 36,78  37,48  37,72  37,50 37,06  36,88  36,82  36,78  36,74  36,74 Dosis C 36,28  37,74  37,58  36,88 36,44  36,36  36,26  36,16  36,14  36,14 Parasetamol 37,04  37,94  37,08  36,88 36,62  36,58  36,46  35,96 35,9 35,78 Na. CMC 35,82  37,42  37,86  37,98 38,18  38,14  38,12  38,14  38,10  38,10 Keterangan : Dosis A  = 720 mg/KgBB Dosis B  = 1080 mg/kgBB
Dosis C  = 1440 mg/kgBB T1 = suhu awal sebelum diinduksi vaksin DPT-Hb-Hib
T2 = suhu 3 jam setelah induksi vaksin DPT-Hb-Hib T30 = suhu menit ke 30 setelah pemberian ekstrak daun srikaya T60 = suhu menit ke 60 setelah pemberian ekstrak daun srikaya T90 = suhu menit ke 90 setelah pemberian ekstrak daun srikaya T120 = suhu menit ke 120 setelah pemberian ekstrak daun srikaya T150 = suhu menit ke 150 setelah pemberian ekstrak daun srikaya T180 = suhu menit ke 180 setelah pemberian ekstrak daun srikaya T210 = suhu menit ke 210 setelah pemberian ekstrak daun srikaya
T240 = suhu menit ke 240 setelah pemberian ekstrak daun srikaya
Ket : T =  suhu, PCT = Parasetamol
Gambar  1.  Rata-Rata  Penurunan  Suhu  Dari  Suhu  Tikus  Sesudah  Induksi  Vaksin  Dikurangi Suhu Tikus Setelah Perlakuan -1 -0.5 0 0.5 1 1.5 2 2.5 CMC-Na PCT DOSIS 720 DOSIS 1080
DOSIS 1440
P en u ru n an S u h u Kelompok Perlakuan T30 T60 T90
T120 T150 T180 T210 T240
menit  dari  menit-0  sampai  menit-240. Penurunan  atau  penaikan  suhu  setelah perlakuan yang besarnya juga bervariasi untuk setiap  tikus  dapat  dilihat  pada  Gambar  4.2 variasi  inilah  yang  kemudian  dianalisis  untuk mengetahui  ada  tidaknya  penurunan  yang bermakna  atau  signifikan  sebagai  respon terhadap perlakuan.
Pemberian  ekstrak  daun  srikaya  ( Annona squamosa L) maupun kontrol positif ( Paracetamol ) secara nyata dapat menurunkan suhu tubuh tikus dibandingkan dengan kontrol negatif  (CMC-Na).  Adapun  hasil  analisis menunjukkan  bahwa  pemberian  ekstrak  daun srikaya dosis 3 (1440 mg/KgBB) memberikan pengaruh  yang  signifikan terhadap penurunan suhu tubuh tikus pada waktu 60 menit setelah aplikasi  perlakuan.  Berarti  bahwa  ada perbedaan  yang  nyata  pada  jumlah  rata-rata penurunan  suhu  tubuh  tikus  antara  kelompok perlakuan dosis 3 ekstrak daun srikaya dengan kelompok  kontrol  negatif  dengan  nilai signifikan 0,018.
Penurunan suhu tubuh tikus pada menit ke 90,  120,  150,  180,210,  dan  240  menunjukan perbedaan  yang  signifikan  untuk  semua kelompok perlakuan dosis 1, dosis 2, dosis 3, dan  kontrol  positif  dibandingkan  dengan kontrol  negatif  dengan  nilai  p  <  0,05.  Ini menunjukan  bahwa  kelompok  dosis  ekstrak terbukti memiliki aktivitas antipiretik. Sedangkan  kelompok  dosis  1,  dosis  2  dan dosis  3  dibandingkan  dengan  kelompok kontrol  positif    tidak  menunjukan  perbedaan yang  signifikan  dengan  p  >  0,05.  Ini
menunjukan bahwa kelompok perlakuan dosis 1,  dosis  2,  dan  dosis  3  sebanding  dengan kelompok  kontrol  positif  atau  kelompok parasetamol  dalam  hal  aktivitas  penurunan demam.  Namun,  kelompok  parasetamol menunjukan  penurunan  demam  yang  lebih cepat dibandingkan dengan kelompok dosis 1, 2, dan 3 yakni pada menit ke 30.
Aktivitas  antipiretik  dikarenakan  adanya kandungan  flavonoid  pada  ekstrak  daun srikaya.    Menurut  (Robinson  T.  ,  2001) flavonoid dapat menghambat enzim siklooksigenase  khususnya  siklooksigenase-2 yang  berperan  dalam  biosintesis  prostaglandin sehingga  proses  terjadinya  demam  terhambat. Hal  tersebut  juga  didukung  dengan  hasil penelitian (Kalay S., Bodhi W., & Yamlean P., 2014)  dan penelitian (Suwertayasa, Bodhy, & Edy, 2013)  yang menyatakan bahwa flavonoid memiliki aktivitas antipiretik.
Sifat  antipiretik  flavanoid  berasal  dari mekanismenya  yang  menghambat  pelepasan asam  arakhidonat  dan  sekresi  enzim  lisosim dari  sel  neutrofil  dan  sel  endhotelial  dan  juga menghambat fase proliferasi dan fase eksudasi dari proses inflamasi. Terhambatnya pelepasan asam  arakhidonat  dari  sel  inflamasi  akan menyebabkan  kurang  tersedianya  substrat arakhidonat  bagi  jalur  siklooksigenase  dan lipooksigenase,  yang  pada  akhirnya  akan menekan  jumlah  prostaglandin,  prostasiklin, endoperoksida,  asam  hidroksatetraienoat,  dan leukotrin.  Disisi  lain  penekanan  jumlah tersebut  mempengaruhi  proses  radang,  dan juga  migrasi  leukosit,  yang  akan  berpengaruh
pada  penekanan  peningkatan  jumlah  limfosit (Sabir, 2013).

## KESIMPULAN
Ekstrak  daun  srikaya  mempunyai  aktivitas sebagai  antipiretik  pada  tikus  jantan  galur wistar  dan  aktivitas  antipiretik  ekstrak  daun srikaya    aktivitas  sama  dengan  aktivitas antipiretik obat paracetamol.

## DAFTAR PUSTAKA
Arifianto,  &  Hariadi.  (2007). Demam .
Retrieved April 19, 2015, from www.sehatgroup.web.id.
Ganiswarna,  S.  (2007). Farmakologi  dan Terapi  Edisi  5. Jakarta:  Departemen Farmakologi  dan  Terapetik,  Fakultas Kedokteran UI.
Ganong,  W.  (2003). Buku  Ajar  Fisiologi Kedokteran Edisi 5. Jakarta: EGC.
Kalay  S.,  Bodhi  W.,  &  Yamlean  P.  (2014). Uji  Efek  Antipiretik  Ekstrak  Etanol  Daun Prasman  (Eupatorium  Tripinerve  Vahl.) pada  Tikus  Jantan  Galur  Wistar  (Rattus Norvegicus  L.)  yang  Diinduksi  Vaksin DTP-Hb. Pharmacon .
Kaneshiro N.K.  dan Zieve D. (2010, October 29). Fever.
Robinson,  T.  (2001). Kandungan  Organik Tumbuhan  Tinggi  Edisi  6. Bandung: Institut Teknologi Bandung.
Sabir,  A.  (2013).  Pemanfaatan  Flavonoid  di Bidang Kedokteran Gigi. Dental Journal .
Suwertayasa,  I.,  Bodhy,  W.,  &  Edy,  H.
(2013). Uji  Antipiretik  Ekstrak  Etanol Daun  Tembelekan  (Latana  Camara  L.) pada Tikus Jantan Galur Wistar. Manado:
Universitas Sam Ratulangi.
Tjay,  T.,  &  Rahardja,  K.  (2002).  Obat-obat Penting:  Khasiat,  Penggunaan,  dan  Efek- efek  Sampingnya  Edisi  VI.  Jakarta:  PT. Elex Media Komputindo.
Wandasari,  F.,  Ruslan,  K.,  &  Kusmardiyani, S. (2007). Telaah Fitokimia Daun Srikaya (Anona  Squamosa  L.)  yang  berasal  dari dua  lokasi  tumbuh. Bandung:  Sekolah Farmasi ITB.
Wijayakusuma,  H.  (2001). Penyembuhan dengan Bawang Putih dan Bawang Merah.
Jakarta: Milenia Popular.
Wijoyo,  Y.  (2003). Antaraksi  sari  wortel dengan paracetamol. Jogjakarta:
Universitas Sanata Dharma.