## Potential of Vitamin C and Total Acid as Antioxidants of Rosella Kombucha With Different Fermentation Times

## Potensi Vitamin C Dan Total Asam Sebagai Antioksidan Rosella
Kombucha Dengan Waktu Fermentasi Yang Berbeda
Ovi Prasetya Winandari(*), Nurhaida Widiani, Marlina Kamelia, Erika Puspita Riski
Universitas Islam Negeri Raden Intan Lampung, Jl. Endro Suratmin Sukarame Bandar Lampung, *Corresponding author: oviprasetyawinandari@radenintan.ac.id

## Diterima 02 Februari 2022 dan disetujui 27 Februari 2022

## Abstrak
Plasma  nutfah  yang  melimpah  di  Indonesia  23%  diantaranya  adalah  tanaman  berkhasiat obat.Salah  satu  tanaman  yang  berkhasiat  obat  adalah  rosella  karena  mengandung  berbagai senyawa yang terbukti dapat menjadi antioksidan alami, antikanker, antihipertensi, laksatif, serta antidiuretik alami.Obat herbal seringkali dikonsumsi sebagai minuman fungsional.Rosella dapat diolah menjadi minuman fungsional salah satunya yaitu kombucha.  Lama fermentasi kombucha mampu  mempengaruhi  kandungan  di  dalamnya.    Jenis  penelitian  ini  adalah  deskriftif kuantitatif.Perlakuan yang diberikan berupa lama fermentasi 3, 6, 9, Dan 12 hari.Parameter yang diukur meliputi kandungan vitamin C, total asam laktat, aktivitas antioksidan, total mikroba, dan pH.  Hasil penelitian menunjukkan kandungan vitamin C tertinggi 0.0528 mg/mL di hari ke 3 an 6, total asam laktat tertinggi 1,7250% pada hari ke 12, aktivitas antioksidan terbaik pada hari ke 9 dengan kategori sangat kuat, total bakteri tertinggi 5.96x10 7 CFU/mL di hari ke 12, total khamir tertinggi 11.54x10 6 Log CFU/mL di hari ke 6, pH tertinggi 2,70 pada hari ke 3. Kata Kunci: Kombucha, Rosella, Vitamin C, Antioksidan

## Abstract
Germplasm  which  is  abundant  in  Indonesia,  23%  of  which  are  medicinal  plants.  One  of  the medicinal  plants  is  rosella  because  it  contains  various  compounds  that  are  proven  to  be  natural antioxidants, anticancer, antihypertensive, laxative, and natural antidiuretic. Herbal medicines are often consumed as functional drinks. Rosella can be processed into functional drinks, one of which is kombucha. The length of fermentation of kombucha can affect the content in it. This type of research is  descriptive  quantitative.  The  treatments  given  were  3,  6,  9,  and  12  days  of  fermentation. Parameters  measured  included  vitamin  C  content,  total  lactic  acid,  antioxidant  activity,  total microbes, and pH. The results showed that the highest vitamin C content was 0.0528 mg/mL on days 3 and 6, the highest total lactic acid was 1.7250% on day 12, the best antioxidant activity was on day 9 with a very strong category, the highest total bacteria was 5.96x107 CFU/mL on day 12 12th, the highest total yeast 11.54x106 Log CFU/mL on the 6th day, the highest pH of 2.70 on the 3rd day.
Keywords : Kombucha, Rosella, Vitamin C, Antioxidant
Jurnal Pembelajaran dan Biologi Nukleus is Licensed Under a CC BY SA Creative Commons Attribution-Share a like 4.0 International License . https://doi.org/10.36987/jpbn.v8i1.2471.

## PENDAHULUAN
Indonesia  memiliki  kelimpahan  plasma  nutfah  berupa  tanaman  berkhasiat  obat  yang cukup besar.Data penelitian menunjukkan setidaknya ada sekitar 23% dari 30 ribu spesies
plasma  nutfah  di  Indonesia  yang  terbukti  masuk  golongan  tumbuhan  berkhasiat  obat (Wijaya  &  Dewi,  2020) .  Salah  satu  tanaman  berkhasiat  obat  yaitu  rosella (Wijayanti,
2010) .  Secara  empiris  rosella  terbukti  dapat  bersifat  antioksidan,  antikanker, antihipertensi,  memperbaiki  fungsi  hati,  mencegah  osteoporosis,  laksatif,  dan  diuretik alami.  Hal  ini  dikaitkan  dengan  senyawa  yang  terkandung  di  dalam  rosella  seperti gossypetin,  anthosianin,  glucocide  hibiscin,  delphidin  3  sambubioside,  kalsium,  serta fosfor (Wiyarsi, 2011) .
Tanaman  obat  sering  kali  dikonsumsi  sebagai  herbal  dengan  diolah  menjadi berbagai macam minuman fungsional (Suter, 2013) . Salah satu minuman fungsional yang mulai  dikenal  masyarakat  adalah  kombucha.Kombucha  adalah  minuman  fermentasi yang dikenal khas dari Asia. Namun saat ini mulai populer di dunia Barat karena efek terapeutik, seperti antimikroba, antioksidan, antikarsinogenik, antidiabetes, pengobatan untuk tukak lambung dan kolesterol tinggi.Selain itu juga menunjukkan dampak pada respons  kekebalan  tubuh  dan  detoksifikasi  hati (Coelho  et  al.,  2020) .  Pada  awalnya, kombucha merupakan minuman fermentasi yang terbuat dari seduhan teh yang diberi starter mikroba berupa bakteri dan khamir yang bersimbiosis membentuk lapisan selulosa yang kerap dikenal sebagai SCOBY (Symbiotic Colony of Bacteria and Yeasts ). Khamir dalam  proses  fermentasi  akan  mengubah  gula  menjadi  etanol  yang  kemudian  etanol tersebut akan diubah oleh bakteri menjadi asam asetat dan senyawa asam organik lainnya seperti  glukonat,  laktat, malat,  sitrat, dan  tartarat.    Senyawa  organik  yang terkandung dalam kombucha memiliki aktivitas antibakteri serta mencegah kontaminasi kombucha oleh bakteri patogen (Villarreal ‐ Soto et al., 2018) .
Rosella  bisa  dijadikan  bahan  pengganti  teh  untuk  membuat  kombucha.Hasil penelitian  menunjukkan  rosella  kombucha  dapat  dimanfaatkan  untuk  meningkatkan eritrosit  dan  hemoglobin  serta  menurunkan  leukosit  mencit (Primiani  et  al.,  2018) . Kombucha  rosella  juga  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri Pseudomonas aeruginosa dan Methicillin Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) (Prasetyo, 2020) . Berdasarkan  penelitian  ilmiah  yang  dibuktikan  oleh (Indriyani  et  al.,  2022) ,  lama fermentasi  kombucha  rosella  berpengaruh  nyata  pada  sifat  kimianya  berupa  aktivitas antioksidan,  tanin,  pH,  dan  kadar  alkohol.Saat  fermentasi  berlangsung  akan  terjadi peningkatan  aktivitas  metabolisme Acetobacter  xylinum yang  kaya  akan  asam  laktat. Fermentasi kombucha rosella yang optimal terjadi pada hari ke 8.  Fermentasi kombucha rosella  seiring  peningkatan  waktu  menghasilkankadar  asam  yang  semakin  besar. Penelitian lain juga telah dilakukan ( Febrianti & Dwi Riastuti, 2016) , yang menyatakan bahwa fermentasi teh rosella dapat mempengaruhi pertumbuhan bakteri. Oleh karena itu, penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  potensi  vitamin  C  dan  total  asam  sebagai antioksidan rosella kombucha dengan waktufermentasi yang berbeda.

## METODE
Penelitian  ini  dilakukan  di  laboratorium  THP  Politeknik  Negeri  Lampung  dan  di Laboratorium  Terpadu  UIN  Raden  Intan  Lampung  pada  bulan  Februari  -  Juli 2020.Penelitian  ini  merupakan  penelitian  diskriptif  kualitiatif.  Alat  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  spekrtofotometer  UV-Vis,  vortex,  timbangan  digital,  gelas ukur, serbet, karet gelang, toples kaca transparan, thermometer, pipet volume, pipet tetes,
labu  ukur,  erlenmeyer  500  ml,  blender,  spatula,  corong,  pisau,  sarung  tangan,  tabung reaksi, beaker glass, penangas air, cawan petri, blue tip, ose, bunsen, incubator, masker, korek api, plastik sterilisasi, autoklaf,  alat titrasi, neraca analitik, hot plate, kuvet, kompor gas, panci stainless steel, dan saringan. Sedangkan Bahan yang digunakan adalah starter yang merupakan simbiosis dari beberapa mikroba diantaranya bakteri Acetobacter xylinum dan  juga  beberapa  ragi Sacharomyces  cerevisiae,  Zygosaccharomyces  bailii  dan  Candida  sp , kelopak bunga rosella kering 8 gram, etanol, larutan 1,1-diphenyl-2-pichylhydarzyl (DPPH), aquades, gula pasir, iodium 0,1 N, indikator amilum 1%, dan kertas label.
Tahap awal penelitian ini dengan membuat teh Rosella Kombucha dengan cara memasak 2 gram kelopak bunga rosella dalam 250 ml air dengan gula sebanyak 10%. Setelah  mendidih  teh  rosella  kombucha  dimasukan  kedalam  toples  dan  ditambahkan starter sebanyak 20%.Inkubasi pada suhu ruang dan difermentasi selama 3 hari, 6 hari, 9 hari,  dan  10  hari  tanpa  pengulangan  perlakuan.  Setelah  difermentasi  selanjutnya dilakukan  pengujian  kadar  vitamin  C,  total  asam,  pH,  aktivitas  mikroba,  aktivitas antioksidan,  dan  uji  hedonik.  Adapun  proses  pengujian  dengan  cara  sebagai  berikut: untuk uji kadar vitamin C dan total asam dengan metode titrasi, uji aktivitas antimikroba dengan  metode Total  Plate  Count (TPC),  pengukuran  pH  dengan  pH  meter,  dan pengukuran  aktivitas  antioksidan  dengan  metode  DPPH.  Untuk  mengukur  tingkat kesukaan dilakukan uji hedonik dengan melibatkan 35 panelis.
Kadar vitamin C dihitung dengan menggunakan rumus (Bobby et al., 2017) : Vitamin C mg/100 mL = 𝐴𝑥0,88𝑥100𝑥𝐹𝑃 𝑤 Keterangan: A  : dipakai untuk titrasi (ml) FP : faktor pengenceran W  : berat contoh
Penghitungan total asam dengan menggunakan rumus (Rohman et al., 2019) :
Total Asam (%) = V1 x N X B
V2 x 1000 x 100% Keterangan:
V1: Volume NaoH (ml) V2: Berat sampel yang dititrasi (g) B : Berat molekul asam laktat (90) N: Normalitas NaOH
Perhitungan  jumlah  bakteri  dilakukan  dengan Bacteriological  Analytical  Manual dengan menggunakan rumus:
N = ∑𝐶 [(1xn1) +   (0,1xn2) x (d)]
.
Keterangan:
N : Jumlah koloni per ml produk
∑C : Jumlah total koloni pada semua plate (25-250) n1: Jumlah plate yang dihitung pada pengenceran pertama n2 : Jumlah plate pada pengenceran kedua d   : Pengenceran pertama yang dihitung/ memenuhi ketentuan (30-300)
Aktivitas  antioksidan  sampel  oleh  besarnya  hambatan  serapan  radikal  DPPH dapat  diketahui  melalui  perhitungan  persentasi  inhibisi  serapan  DPPH  dengan menggunakan rumus (Purwanto et al., 2017) :
Aktivitas  antioksidan  ditentukan  dengan  menggunakan  nilai  IC 50 (Inhibition Concentration  50%).  Nilai  IC 50 masing-masing  konsentrasi  sampel  dihitung  dengan menggunakan rumus persamaan regresi linier. Menurut (Scherer & Helena, 2009) , nilai Antioxidant Activity Index (AAI) ditentukan dengan cara membagi konsentrasi DPPH yang digunakan (ppm) dengan nilai IC 50 yang diperoleh (ppm).
Tabel 1. Sifat antioksidan berdasarkan IC 50
Nilai IC 50 (ppm) Aktivitas Antioksidan < 50 Sangat kuat 50 - 100 Kuat 100– 150 Sedang 150 – 200 Lemah

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Uji Vitamin C dan Total Asam  Rosella Kombucha Hasil uji vitamin C dan total asam  rosella kombucha pada perlakuan lama fermentasi yang berbeda, ditunjukkan pada Tabel 2,
Tabel 2 . Hasil Uji Vitamin C dan Total Asam Waktu Fermentasi (Hari) Vitamin C (mg/mL) Total Asam (%) 3 0.0528 0.5901 6 0.0528 1.0668 9 0.0325 1.5435 12 0.0325 1.7250
Berdasarkan Tabel 2 menunjukkan bahwa kandungan Vitamin C tertinggi 0,0528 mg/mL  terdapat  pada  lama fermentasi  3  dan  6  hari.  Sedangkan  Total Asam  semakin meningkat  seiring  dengan  lama  fermentasi  dan  nilai  tertinggi  total  asam    1,7250  % terdapat pada lama fermentasi 12 hari. Data hasil uji aktivitas antioksidan dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3 . Hasil Uji Aktivitas Antioksidan
Waktu Fermentasi (Hari) Absorbansi % inhibisi IC 50 Katerangan 3 0.0284 0.9554 51.323 Kuat 6 0.0183 0.9712 50.693 Kuat 9 0.0115 0.9818 49.034 SangatKuat 12 0.0333 0.9482 51.712 Kuat
% Inhibisi = Abs. Blanko – Abs. Sampel  X 100 Abs. Blanko Keterangan: Abs.Blanko :Absorban DPPH 100 ppm Abs. Sampel : Absorbansi Sampel Uji
Berdasarkan  Tabel  3  hasil  uji  aktivitas  antioksidan  menunjukkan  bahwa  aktivitas antioksidan  paling  baik  terdapat  pada  lama  fermentasi  9  hari  yaitu  dengan  hasil  IC 50 sebesar 49,034 atau <50 yang berarti sangat kuat. Selain itu, data penelitian ini dilengkapi dengan data sekunder sebagai pendukung penelitian ini yaitu berupa data total bakteri, total khamir, dan pH ditunjukkan pada Tabel 4.
Tabel 4 . Data Total Bakteri, Total Khamir, dan PH
Waktu Fermentasi (Hari) Total Bakteri (CFU/mL) Total Khamir (Log CFU/mL) pH 3 1.32x10 7 9.09 x 10 6 2.70 6 1.6 x 10 7 11.54x10 6 2.67 9 5.77x10 7 1.72 x 10 6 2.62 12 5.96x10 7 4.27 x10 6 2.59
Berdasarkan Tabel 4 data total bakteri tertinggi terdapat pada lama fermentasi 12 hari sebesar 5,96x10 7 CFU/mL. Total khamir tertinggi terdapat pada lama fermentasi 6 hari sebesar 11,54x10 6 Log CFU/mL. Sedangkan pH relatif menurun seiring dengan lama fermentasi yaitu 2,59 pada perlakuan lama fermentasi 12 hari. Pada penelitian ini juga telah ditemukan adanya bakteri Acetobacter sp. dan khamir Saccharomyces cerevisiae. Berikut gambar  yang  menunjukkan  koloni  bakteri  dan  khamir  yang  ditemukan  pada  teh kombucha rosella:
(a) (b)
Gambar 1 . (a) Permukaan Koloni Acetobacter sp. pada Media NA; (b) Permukaan Koloni Saccharomyces cerevisiae pada Media PDA

## Pembahasan
Vitamin C merupakan salah satu antioksidan yang sangat bermanfaat bagi tubuh. Kandungan  senyawa  vitamin  C  dapat  kita  temukan  salah  satunya  dalam  produk kombucha rosella karena  vitamin  C merupakan  salah  satu  antioksidan hasil  metabolit dari  proses  fermentasi  kombucha.  Berdasarkan  Tabel  1  pada  awal  fermentasi  jumlah vitamin  C  masih  stabil  sampai  pada  perlakuan  lama  fermentasi  6  hari  yaitu  masih berjumlah  0,0528  mg/mL,  tetapi  semakin  lama  fermentasi  maka  vitamin  C  semakin menurun seperti terlihat pada lama fermentasi 12 hari yaitu berjumlah 0,0325 mg/mL. Hal  terjadi  diduga  karena  adanya  proses  kerusakan  vitamin  C  dan  terhentinya
mikroorganisme dalam menghasilkan vitamin C karena jumlah pasokan makanan atau dalam  hal  ini  jumlah  gula  dalam  kombucha  menurun  sehingga  mikroorganisme  akan menghasilkan senyawa asam yang lain. Hal ini selaras dengan hasil penelitian (Purwanto et  al.,  2017) yang  menjelaskan  bahwa  vitamin  C  dapat  rusak  karena  adanya  aktivitas bakteri yang mampu menghasilkan enzim L-gulonolakton oksidase yang berperan dalam mengubah  senyawa  menjadi  2-Keto-L-gulonolakton  pada  tahap  akhir  pembentukan vitamin  C  sehingga  bukan  lagi  asam  askorbat  (vitamin  C)  yang  dihasilkan  melainkan asam-asam jenis lain. Hal ini ternyata terbukti dari data yang menunjukkan bahwa total asam semakin meningkat.
Total  asam  dalam  penelitian  ini  senantiasa  meningkat  seiring  semakin  lama waktu fermentasi. Dimana hasil penelitian menunjukkan bahwa nilai tertinggi terdapat pada  lama fermentasi  12  hari  yaitu  berjumlah  1,7250%.  Hal  ini  diduga semakin  lama waktu  fermentasi  maka  mikroorganisme  di  dalam  kombucha  rosella  akan  semakin meningkat  aktivitasnya  untuk  merombak  gula  menjadisenyawa-senyawa  yang  bersifat asam. Wistiana  &  Zubaidah  (2014) juga  menjelaskan  dalam  penelitiannya  bahwa mikroorganisme  baik  bakteri  maupun  khamir  akan  merombak  sukrosa  menjadi  asam- asam  organik,  salah  satunya  asam  asetat.  Oleh  karena  itu,  semakin  lama  proses fermentasi maka semakin banyak asam organik yang dihasilkan dan akan mengakibatkan semakin tinggi total asam yang diperoleh. Peningkatan total asam ini juga dipengaruhi adanya  penurunan  pH  pada  tiap  perlakuan  lama  fermentasi,  semakin  lama  proses fermentasi maka semakin asam pH yang dihasilkan bahkan mencapai kurang dari 3, hal ini menunjukkan bahwa produk asam yang dihasilkan oleh mikroorganisme kombucha rosella semakin tinggi, sehingga pH semakin rendah dan total asam semakin tinggi.
Data  peningkatan  total  asam  yang  semakin  meningkat  selaras  dengan  data aktivitas  antioksidan  yang  juga  meningkat  pada  hari  ke-9  yaitu  memiliki  aktivitas antioksidan  dengan  nilai  IC 50 <50  yang  berarti  sangat  kuat.  Nilai  aktivitas  antioksidan tersebut  diduga  berkaitan  dengan  meningkatnya  total  asam,  senyawa-senyawa  asam organik  maupun  senyawa  fenolik  yang  dapat  bertindak  sebagai  antioksidan. Hassmy (2017) mengatakan  bahwa  metabolisme  mikroorganisme  di  dalam  kombucha  rosella akan meningkatkan senyawa fenolik. Sedangkan senyawa fenolik itu sendiri merupakan salah satu senyawa antioksidan selain dari vitamin C.
Kombucha  rosella  tidak  akan  pernah  terlepas  dari  adanya  aktivitas mikroorganisme  di  dalamnya.  Mikroorganisme  berupa  bakteri  dan  khamir  yang bersimbiosis tersebut menghasilkan suatu larutan kaya manfaat yang disebut kombucha. Tidak terlepas dari hal itu maka pada penelitian ini total bakteri dan total khamir juga dipertimbangkan  untuk  diambil  sebagai  data  pendukung  dalam  penelitian  ini.  Pada penelitian  ini  teridentifikasi  2  jenis  mikroorganisme  yaitu  bakteri Acetobacter sp.  dan khamir Saccharomyces cerevisiae. Keduanya berperan aktif dalam keberhasilan pembuatan kombucha  rosella.  Khamir Saccharomyces  cerevisiae berperan  diawal  fermentasi  karena bertugas  untuk merombak gula. Menurut Rohman et al., (2019) proses fermentasi yang melibatkan Saccharomyces cerevisiae dengan mengoksidasi sukrosa menjadi CO 2 dan H 2 O, CO 2 dan  H 2 Oakan  bereaksi  membentuk  asam  askorbat/  Vitamin  C  dan  membentuk alkohol.  Sedangkan  bakteri Acetobacter sp.  berperan  mengubah  alkohol  menjadi  asam asetat  dan  membentuk  nata  atau  selulosa  yang  akan  terlihat  seperti  lapisan  pada permukaan kombucha (Nurhidayah, 2018) .

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian maka disimpulkan bahwa peningkatan aktivitas antioksidan pada lama fermentasi 9 hari yaitu 0.9818%, sebanding dengan penurunan pada vitamin C yang juga terjadi pada lama fermentasi 9 hari yaitu sebesar 0.0325 mg/mL.Peningkatan total asam pada lama fermentasi 12 hari yaitu 1.725% sebanding dengan penurunan pH yang terjadi pada lama fermentasi 12 hari yaitu 2.59. Sedangkan penurunan khamir pada lama fermentasi 9 hari yaitu 1.72x 10 6 LogCFU/mL diikuti dengan meningkatnya jumlah total bakteri yang semakin tinggi pada lama fermentasi 12 hari yaitu 5.96 x 10 7 CFU/mL.

## DAFTAR PUSTAKA
Azizah, N. Suradi K. and Gumilar J. (2018). Pengaruh Konsentrasi Bakteri Asam Laktat Lactobacillus  Plantarum  Dan  Lactobacillus  Casei  Terhadap  Mutu  Mikrobiologi Dan Kimia Mayonnaise Probiotik. Jurnal Ilmu Ternak Universitas Padjajaran . Vol.18, No.2. 79–85.
Bobby, K.M., Sentosa, G., & Mimi., N. (2017). Pengaruh Penambahan Gula Dan Starter Terhadap Karakteristik Minuman Teh Kombucha Daun Gambir. Journal iImu Dan Teknologi Pangan , Vol.5, No.2. 251–157.
Coelho, R. M. D., De Almeida, A. L., Do Amaral, R. Q. G.,  Da Mota, R. N., & De Sousa, P. H. M. (2020). Kombucha. International Journal Of Gastronomy And Food Science , Vol.22 . (100272).
Febrianti, Y., & Dwi Riastuti, R. (2016). Karakteristik Mikrobiologis Kombucha Dari Berbagai Jenis Olahan Teh. Biogenesis: Jurnal Ilmiah Biologi . Vol.4, No.1.
Hassmy,  N.  P.  (2017).  Analisis  aktivitas  antioksidan  pada  teh  hijau  kombucha berdasarkan waktu fermentasi yang optimal. Jurnal Ilmiah Farmasi PHARMACON . Vol.6, No.4. 2303–2493.
Indriyani, I., Ulyarti, U., & Abdi Cahya, B. (2022). Pengaruh Lama Fermentasi Terhadap Karakteristik Minuman Kombucha Ekstrak Bunga Rosella ( Hibiscus sabdariffa L.).
(Doctoral Dissertation, Universitas Jambi) .
Nurhidayah,  N.  (2018).  Pengaruh  Lama  Fermentasi  Terhadap  Mutu  Kombucha  Sari Buah Nanas. Doctoral Dissertation, Universitas Mataram . 1–10.
Prasetyo, S. F. M. D. D. A. (2020). Uji Aktivitas Antibakteri Kombucha Rosella ( Hibiscus sabdariffa )  Terhadap  Bakteri Pseudomonas  aeruginosa dan  Methicillin  Resistant Staphylococcus aerus (MRSA). Jurnasl Stikes RS Anwar Medika .
Primiani, C. N., Mumtahanah, M., & Ardhi, W. (2018). Kombucha Fermentation Test Used For Various Types Of Herbal Teas. In Journal Of Physics: Conference Series , 1025
(1 P. 012073 Iop Publishing.).
Purwanto,  D.,  Bahri,  S.,  &  Ridhay,  A.  (2017).  Uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak  buah purnajiwa  (Kopsia  arborea  Blume.)  dengan  berbagai  pelarut. KOVALEN:  Jurnal Riset Kimia , 3 (1), 24–32.
Rohman, A., Dwiloka, B., & Rizqiati, H. (2019). Pengaruh Lama Fermentasi Terhadap Total Asam , Total Bakteri Asam Laktat , Total Khamir dan Mutu Hedonik Kefir Air Kelapa Hijau ( Cocos nucifera ). Teknologi Pangan , 3 (1), 57-65.
Scherer R., Helena TG. (2009). Antioxidant Activity Index (Aai) By The 2,2-Diphenyl- 1-Picrylhydrazyl Method. Journal Food Chemistry . Vol.112, 654–658.
Suter, I. K. (2013). Pangan Fungsional Dan Prospek Pengembangannya. In Teknologi Pangan. Seminar  Sehari  Dengan  Tema”  Seminar  Sehari  Dengan  Tema”  Pentingnya  Makanan Alamiah (Natural Food) Untuk Kesehatan Jangka Panjang . Pp. 1-17.
Villarreal ‐ Soto, S. A., Beaufort, S., Bouajila, J., Souchard, J. P., & Taillandier, P. (2018). Understanding Kombucha Tea Fermentation: A Review. Journal Of Food Science , 83 (3), 580–588.
Wijaya, N. R., & Dewi, T. F. (2020). Keanekaragaman Spesies Tumbuhan Obat Untuk Perawatan  Sebelum  Dan  Sesudah  Persalinan  Pada  Beberapa  Suku  Di  Maluku Utara. Buletin Plasma Nutfah , 26 (2), 145–156.
Wijayanti,  P.  (2010). Budidaya  Tanaman  Obat  Rosella  Merah  (Hibiscus  sabdariffa  L.)  Dan Pemanfaatan Senyawa Metabolis Sekundernya PT. Temu Kencono, Semarang.
Wistiana,  D.,  &  Zubaidah,  E.  (2014).  Karakteristik  Kimiawi  Dan  Mikrobiologis Kombucha Dari Berbagai Daun Tinggi Fenol Selama Fermentasi, Jurnal Pangan Dan Agroindustri , 3 (4), 23-35.

## Sitasi APA style :
Winandari, O P.,  Widiiani N., Kamelia M., Riski P. (2022). Potential of Vitamin C and Total Acid as Antioxidants of Rosella Kombucha With Different Fermentation TImes, Jurnal  Pembelajaran  dan  Biologi  Nukleus ,  8(1),  141-148. https://doi.org/10.36987/jpbn.v8i1.2471.