## Aktivitas Antioksidan dan Kadar Flavonoid Total Lempuyang Wangi (Zingiber aromaticum Val.)
Antioxidant Activity and Total Flavonoid Content of Zingiber aromaticum Val.
Sunarto 1 *, Nur Amalia Choironi 1 , Faridah Laeli Syarifah 1 .
1 Laboratorium Biologi Farmasi, Jurusan Farmasi Universitas Jenderal Soedirman, Jl Dr. Soeparno Karangwangkal, Purwokerto, Central Java,53123, Indonesia
*E-mail: nartosoetomo@gmail.com

## Abstrak
Peningkatan  prevalensi  penyakit  degenerative  disebabkan  oleh  adanya  radikal  bebas. Lempuyang  wangi  (Z.  aromaticum)  dimanfaatkan  sebagai  obat  tradisional  oleh masyarakat  Indonesia.  Flavonoid  merupakan  salah  satu  senyawa  yang  memiliki aktivitas antioksidan. Tujuan penelitian ini adalah mengetahui  aktivitas  antioksidan  dan kadar  flavonoid  total  pada  Z.  aromaticum  dari  Lembang.  Ekstrak  diperoleh  dengan menggunakan  metode  maserasi  dalam  etanol.  Uji  kadar  flavonoid  total  dilakukan dengan metode spektrofotometri. Uji antioksidan dilakukan menggunakan metode Ferric Reducing  Antioxidant  Power  (FRAP).  Korelasi  flavonoid  total  dengan  aktivitas antioksidan  di  uji  secara  statistik  dengan  Pearson’s  Correlation.  Hasil  penelitian menunjukkan aktivitas antioksidannya lemah dengan kadar flavonoid total 9,924 ± 0,544 mg kuersetin/ g ekstrak.
Kata kunci: Antioksidan, Zingiber aromaticum, Flavonoid total

## Abstract
Increase  prevalence  of  degenerative  disease  caused  by  free  radicals.  Zingiber aromaticum is known to be used as traditional medicine. The purpose of this study was to  known  antioxidant  activity  and  total  flavonoid  content  of Z.  aromaticum  from Lembang . The extract was obtained by maceration method using ethanol solvent. Total flavonoid  content  was  carried  out  using  spectrophotometry.  The  antioxidant  activities was  carried  out  by Ferric  Reducing  Antioxidant  Power  (FRAP) method.  Corellation between  total  flavonoid  content  and  antioxidant  activities  using  statistic  with Pearson’s Correlation  method. The  results  shown  that  antioxidant  activities  of  Z.  aromaticum  is weak with total flavonoid content is 9,924 ± 0,544 mg quercetin/ g extract.
Keywords: Antioxidant, Zingiber aromaticum, Total flavonoid content

## PENDAHULUAN
Reaktif  oksigen  spesies  (ROS)  merupakan  radikal  bebas  turunan  oksigen  yang  berasal dari endogen dan eksogen tubuh. ROS berupa hidroksi radikal ( . OH) merupakan radikal
Artikel Penelitian
reaktif  yang  terbentuk  melalui  reaksi  Fenton  yang  dikalisis  oleh  ion  Fe  (Kim  et  al., 2015;  Liguori  et  al.,  2018).  Ketidakseimbangan  antara  ROS  dan  antioksidan  dapat menyebabkan  stres  oksidatif  yang  berperan  pada  patogenesis  kanker,  penyakit kardiovaskular,  neurodegeneratif  dan  diabetes.  Stres  oksidatif  dapat  dipicu  oleh merokok  (Gutteridge  dan  Halliwell,  2018;  Liguori  et  al.,  2018).  Riset  kesehatan  dasar tahun 2018 melaporkan adanya peningkatan prevalensi merokok dan beberapa penyakit dibandingkan  tahun  2013.  Prevalensi  merokok  pada  populasi  usia  10-18  tahun meningkat dari 7,2 % menjadi 9,1 %. Prevalensi kanker meningkat dari 1,4 % menjadi 1,8  %,  prevalensi  hipertensi  meningkat  dari  25,8  %  menjadi  34,1  %,  dan  prevalensi diabetes meningkat dari 6,9 % menjadi 8,5 % (Kemenkes RI, 2018). Strategi yang dapat dilakukan  untuk  mencegah  kerusakan  oksidatif  akibat  ROS  adalah  menggunakan antioksidan (Liguori et al., 2018).
Zingiber  sebagai  salah  satu  genus  Zingiberaceae  berpotensi  sebagai  agen  antioksidan yang  tumbuh  melimpah  di  Indonesia  (Danciu  et  al.,  2015).  Berdasarkan  studi kemotaksonomi diketahui  lempuyang  gajah (Zingiber zerumbet) dan lempuyang  wangi (Zingiber  aromaticum)  memiliki  kekerabatan  dengan  indeks  similaritas  90  sehingga diperkiran memiliki kandungan senyawa dan aktivitas yang mirip (Marsusi et al., 2001). Namun,  uji  terhadap  Z.  aromaticum  masih  terbatas  penelitian  Handayani  (2007)  yang melaporkan  bahwa  kadar  flavonoid  total  ekstrak  Z.  aromaticum  yang  berasal  dari Wonogiri,  Sleman  dan  Tawangmangu  masing-masing  sebesar  17,03%,  16,71%  dan 15,26%.
Bhavesh  et  al. (2013) melaporkan nilai IC 50 uji  antioksidan ekstrak  etil asetat rimpang Zingiber  zerumbet  yang  berasal  dari  Udupi  India  sebesar  117,65  µg/ml  berdasarkan metode  DPPH  dan  78,72  µg/ml  berdasarkan  metode  penelitian  lainnya  menunjukkan bahwa  ekstrak  rimpang  lempuyang  gajah  aktif  sebagai  agen    antioksidan  dengan  nilai IC 50 sebesar  70-90  µg/ml  (Bhavesh  et  al.,  2013;  Gandhi  dan  Saravanan,  2018)ABTS. Sedangkan, Ganapathy dan Nair (2017) melaporkan nilai IC 50 ekstrak etil asetat rimpang Zingiber  zerumbet  yang  berasal  dari  Indian  Institute  of  Spices  Research  sebesar  275,4 µg/ml  berdasarkan  metode  DPPH.  Kadar  flavonoid  total  ekstrak  etanol  rimpang Zingiber  zerumbet  sebesar  128,6  mg  kuersetin  ekuivalen/g  esktrak,  sedangkan  pada minyak  atsiri  sebesar  29,7  mg  kuersetin  ekuivalen/g  ekstrak  (Tzeng  et  al.,  2015; Ghasemzadeh  et  al.,  2016).  Uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak  rimpang  Z.  aromaticum baru  dilakukan  oleh  Muktapa  (2000)  menggunakan  metode  DPPH  dan  menyarankan untuk  melakukan  uji  lebih  lanjut  menggunakan  metode  lain.  Dengan  demikian  dapat diketahui  bahwa  pelarut,  asal  lokasi  tanaman  dan  metode  merupakan  faktor  yang mempengaruhi hasil uji aktivitas antioksidan dan penetapan kadar flavonoid. Penelitian ini  dilakukan  untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan  Z.  aromaticum  dari  Lembang menggunakan  metode  FRAP  dan  mengetahui  kadar  total  flavonoid  pada  rimpang tersebut.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  untuk  penelitian  adalah  lempuyang  wangi  (Z.  aromaticum), etanol  96  %,  n-heksan,  etil  asetat,  plat  silika  GF 254, alumunium  klorida (AlCl 3 ),  kalium asetat,  kalium  dihidrogen  fosfat  (KH 2 PO 4 ),  natrium  hidroksida  (NaOH),  kalium ferrisianida  (K 3 Fe(CN) 6 ),  asam  trikloroasetat  (TCA),  aquades,  aqua  dm,  besi  klorida (FeCl 3 ), dan asam askorbat.

## Metode

## Pembuatan Simplisia dan Ekstraksi
Z.  aromaticum  diperoleh  dari  Lembang  Bandung  dan  dilakukan  determinasi  di Laboratorium Lingkungan, Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman. Rimpang disortasi  basah  dan  dicuci  dengan  air  mengalir  hingga  bersih.  Rimpang  yang  sudah bersih  diiris  melintang  dengan  ketebalan  antara  3-5  mm.  Irisan  rimpang  tersebut dikeringkan di bawah sinar matahari langsung dengan ditutup kain hitam selama 5 hari. Setelah  kering  dilakukan  sortasi  kering  dan  dibuat  menjadi  serbuk.  Sebanyak  300  g serbuk lempuyang wangi dimaserasi dalam 2,4 L etanol 96 % (1:8). Maserasi dilakukan selama  24  jam,  dan  diremaserasi  sebanyak  2  kali.  Ekstrak  yang  diperoleh  dipekatkan menggunakan  rotary  evaporator  dan  dilanjutkan  menggunakan  waterbath  hingga didapatkan ekstrak kental.

## Uji Aktivitas Antioksidan
Ekstrak Z. aromaticum sebanyak 25 mg kemudian dilarutkan dalam 25 ml etanol 96 %. Selanjutnya dilakukan pengenceran hingga didapatkan konsentrasi 50, 100, 150, 200 dan 250  ppm.  Masing-masing  konsentrasi  ekstrak  dipipet  1  ml,  ditambahkan  dengan  1  ml buffer fosfat 0,2 M pH 6,6 dan 1 ml K 3 Fe(CN) 6 1 %. Setelah itu, diinkubasi selama 20 menit  pada  suhu  50℃.  Selanjutnya,  ditambahkan  1  ml  TCA  10  %  kemudian disetrifugasi  dengan  kecepatan  3000  rpm  selama  10  menit.  Dipipet  1  ml  bagian supernatan,  dimasukkan  dalam  tabung  reaksi,  ditambahkan  1  ml  akua  dm  dan  0,5  ml FeCl 3 0,1 %. Larutan kemudian diinkubasi selama 10 menit. Absorbansi diukur pada λ 684  nm.  Pengukuran  dilakukan  dengan  replikasi  sebanyak  3  kali  (Ganapathy  &  Nair, 2017).
Penetapan Kadar Flavonoid Total
Penetapa kadar flavonoid  total mengikuti metode  yang dilakukan oleh Chang et  al. (2002).
a. Penentuan kurva baku
Kurva baku dibuat dengan mengukur absorbansi larutan kuersetin konsentrasi 60, 70, 80, 90,  dan  100  µg/ml.  Masing-masing  diambil  sebanyak  0,5  ml  dan  ditambahkan  1,5  ml etanol  96  %,  0,1  ml  AlCl 3 10  %,  0,1  ml  kalium  asetat  1,002  M  dan  2,8  ml  aquades. Larutan  kemudian  dihomogenkan  dan  diinkubasi  selama  30  menit.  Diukur  absorbansi pada λ 435,5 nm. Pengukuran dilakukan dengan replikasi sebanyak 3 kali.
b. Uji kadar flavonoid total  Z. aromaticum
Ekstrak Z. aromaticum sebanyak 25 mg dilarutkan dalam 25 ml etanol 96 % (1000 ppm). Larutan  kemudian  dilakukan  pengenceran  hingga  didapatkan  konsentrasi  50,  100, 150, 200 dan 250 ppm. Masing-masing konsentrasi ekstrak dipipet 1 ml, ditambahkan dengan 1 ml buffer fosfat 0,2 M pH 6,6 dan 1 ml K 3 Fe(CN) 6 1 %. Setelah itu, diinkubasi selama 20  menit  pada  suhu  50℃.  Selanjutnya,  ditambahkan  1  ml  TCA  10  %  kemudian disetrifugasi  dengan  kecepatan  3000  rpm  selama  10  menit.  Dipipet  1  ml  bagian supernatant,  dimasukkan  dalam  tabung  reaksi,  ditambahkan  1  ml  aqua  dm  dan  0,5  ml
FeCl 3 0,1 %. Larutan kemudian diinkubasi selama 10 menit. Absorbansi diukur pada λ 684 nm. Pengukuran dilakukan dengan replikasi sebanyak 3 kali Uji Korelasi
Penelitian ini menggunakan uji korelasi dengan beberapa metode Pearson’s Correlation. Metode ini mengukur hubungan antar data kuantitatif kadar flavonoid total dan aktivitas antioksidan.  Hasil  korelasi  dinyatakan  dalam  nilai  r  yang  memiliki  rentang  antara  -1 sampai  +1.  Nilai  -1  menunjukkan  korelasi  negatif,  sedangkan  nilai  +1  menunjukkan korelasi  positif  (Gogtay  dan  Thatte,  2017)  .  Hasil  uji  korelasi  berdasarkan  Pearson’s Correlation  dapat  diklasifikasikan  tingkat  kekuatannya,  kemudian  dilanjutkan  dengan uji signifikansi untuk mengetahui pengaruh antar variabel yang dihubungkan (Sugiyono, 2018).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Rendemen ekstrak  etanol  Z.  aromaticum  (10%b/b) lebih  besar  dibandingkan rendemen berdasarkan  Farmakope  Herbal  Indonesia  (2017)  dan  Widiasari  (2015)  yaitu  5,2%  b/b dan 4,3% b/b. Parameter yang mempengaruhi perbedaan rendemen tersebut adalah jenis pelarut,  rasio  simplisia-pelarut,  lama  maserasi  dan  lokasi  asal  tumbuhan.  Rasio simplisia-pelarut  dan  lama  maserasi  mempengaruhi  senyawa  yang  diperoleh.  Zhang  et al.,  (2018)  menyatakan  bahwa  pemisahan  senyawa  dari  simplisisa  melalui  beberapa tahapan yaitu pelarut akan terpenetrasi ke dalam simplisia, kemudian senyawa akan larut dalam pelarut, dan senyawa akan berdifusi keluar dari simplisia. Semakin tinggi pelarut dan  lama  maserasi  semakin  banyak  rendemen  yang  diperoleh.  Lokasi  asal  tumbuhan dipengaruhi oleh beberapa faktor diantaranya tanah, cuaca, temperatur, dan air. Adanya senyawa  organik  dan  anorganik  juga  dapat  mempengaruhi  metabolisme  tanaman (Depkes  RI,  2000;  Widyastuti  et  al.,  2018).  Rendemen  ekstrak  Z.  aromaticum  yang berasal dari daerah yang berbeda menunjukkan rendemen yang berbeda.
Kadar flavonoid total  dilakukan dengan  metode  kolorimetri alumunium klorida dengan prinsip alumunium klorida akan membentuk kompleks asam stabil dengan C-4 keto, C-3 atau C-5 gugus hidroksi pada flavonol dan flavon serta akan membentuk kompleks asam labil dengan gugus ortodihidroksi pada cincin  A atau B flavonoid (Mabry  et al., 1970; Chang  et  al.,  2002).  Adapun  reaksi  antara  flavonoid  dengan  alumunium  klorida  dapat dilihat pada gambar 1
Gambar 1. Reaksi antara flavonoid dengan AlCl 3 (Mabry et al., 1970) O O OH OH OH HO AlCl 3 O O O O O HO Al Cl Cl Al Cl O O OH OH HO AlCl 3 O O O O HO Al Cl
Penentuan  kadar  flavonoid  total  Z.  aromaticum  dilakukan  dengan  melihat  hasil  kurva baku kuersetin seperti yang terlihat pada gambar 2 dan diperoleh persamaan y = 0,0079x – 0,1125 dengan r 2 sebesar 0,9982 yang menyatakan linearitas. Linearitas sebesar 0,9< r 2 <1  menunjukkan  linearitas  yang  baik  (Gandjar  dan  Rohman,  2007).  Berdasarkan persamaan  tersebut,  diketahui  flavonoid  total  ekstrak  Z.  aromaticum  sebesar  9,924  ± 0,544 mg kuersetin  ekuvalen/ g ekstrak atau setara dengan 0,9924 ± 0,0543%. Namun, hasil  tersebut  berbeda  dengan  Handayani  (2007)  yang  melaporkan  bahwa  kadar flavonoid  total  ekstrak  Z.  aromaticum  yang  berasal  dari  Wonogiri,  Sleman  dan Tawangmangu masing-masing sebesar 17,03%, 16,71% dan 15,26%. Perbedaan  tempat tumbuh  mempengaruhi  metabolisme  tanaman  sehingga  mempengaruhi  kadar  flavonoid total (Depkes RI, 2000; Widyastuti et al., 2018).
Gambar 2. Kurva baku kuersetin
Uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  FRAP  yang didasarkan pada reaksi redoks (Berker et al., 2010) yaitu: Fe(CN) 6 3- + antioksidan
Fe(CN) 6 4- + antioksidan teroksidasi Fe(CN) 6 4- + Fe 3+
Fe[Fe(CN) 6 ] -
Berdasarkan  reaksi  tersebut,  K 3 Fe(CN) 6 berfungsi  sebagai  oksidan  yaitu  senyawa  yang kehilangan  1  elektron  akibat  adanya  donor  elektron  dari  senyawa  antioksidan.  Reaksi redoks tersebut membutuhkan pH netral atau mendekati agar berlangsung dengan baik. Oleh  karena  itu,  dalam  perlakuannya  ditambahkan  dengan  buffer  fosfat  pH  6,6.  Agar reaksi  redoks  dapat  berjalan  dengan  baik  selanjutnya  dilakukan  inkubasi  pada  suhu 50  ℃  selama  20  menit.  Adapun  fungsi  dari  TCA  adalah  untuk  menghentikan  reaksi redoks  yang  terjadi.  Salah  satu  kelemahan  metode  FRAP  adalah  kemungkinan terbentuknya presipitasi Prussian blue yang membentuk  suspensi dan dapat terabsorbsi pada cuvvet. Oleh  karena itu, dilakukan sentrifugasi  untuk  memisahkan besi yang larut dan  tidak  terlarut.  Penambahan  FeCl 3 berfungsi  menstabilkan  produk  reduksi  dari K 3 Fe(CN) 6, dan akan menghasilkan warna Prussian blue (Berker et al., 2010; Ganapathy dan Nair, 2017).
Hasil  uji  aktivitas  antioksidan  Z.  aromaticum  menunjukkan  persamaan  seperti  yang terlihat  pada  gambar  3  yaitu  y  =  0,194x  +  20,14  dengan  r²  =  0,967  dan  memiliki  IC 50 sebesar  154,056  µg/ml  (tabel  1).  Penelitian  sebelumnya  terhadap  Z.  aromaticum menggunakan metode DPPH menunjukkan bahwa konsentrasi 560 µg/ml memiliki daya hambat sebesar 56,62 % (Muktapa, 2000). Berdasarkan IC 50 yang diperoleh dari hasil uji menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  lempuyang  wangi  yang  berasal  dari  Lembang Bandung  memiliki  aktivitas  antioksidan  lemah  (Blois,  1958).  Penelitian  ini menggunakan standar asam askorbat dengan nilai IC 50 sebesar 10,944 µg/ml (tabel 1).
Gambar 3. Kurva hubungan konsentrasi dengn %FRAP Z. aromaticum
Tabel 1. Hasil uji aktivitas antioksidan
No Sampel Konsentrasi (µg/ml) %FRAP IC 50 (µg/ml) Hasil uji 1 Asam Askorbat 5 30,508 10,944 10 54,444 15 57,732 20 76,023 25 81,019 2 Z. aromaticum 50 26,3914 154,056 100 42,2535 150 51,5939 200 59,6457 250 66,1157
Hasil  uji  korelasi  berdasarkan  Pearson’s  Correlation  antara  flavonoid  total  dengan aktivitas  antioksidan  pada  Z.  aromaticum  adalah  0,739  menunjukkan  adanya  korelasi yang kuat dan signifikan. Hasil yang diperoleh menunjukkan korelasi yang sama dengan Nordin  et  al.  (2018)  yang  melaporkan  korelasi  antara  flavonoid  total  dengan  aktivitas antioksidan  metode  DPPH  dari  ekstrak  etanol  rimpang  lempuyang  gajah  yang  berasal dari  Malaysia  berdasarkan  Pearson’s  Correlation  adalah  0,785.  Adanya  korelasi menunjukkan  bahwa  flavonoid  memiliki  aktivitas  antioksidan  berdasarkan  metode FRAP. Adapun mekanisme flavonoid sebagai antioksidan dalam metode FRAP yaitu: 2n[Fe(CN) 6 ] 3- + Ar(OH) n 2n[Fe(CN) 6 ] 4- + Ar(=O) n + 2nH +
K + + Fe 3+ + [Fe(CN) 6 ] 4- KFe[Fe(CN) 6 ]

## SIMPULAN
Z. aromaticum  memiliki  aktivitas  antioksidan lemah  dengan nilai  IC 50 sebesar  154,056 µg/ml dan kandungan flavonoid total sebesar 9,924 ± 0,544 mg kuersetin/ g ekstrak.

## REFERENSI
Berker,  K.  I.,  Güçlü,  K.,  Tor,  İ.,  Demirata,  B.,  &  Apak,  R.,  2010.  Total  antioxidant  capacity  assay  using optimized  ferricyanide  /  prussian  blue  method.  Food  Anal.  Methods,  3  :  154–168. https://doi.org/10.1007/s12161-009-9117-9
Bhavesh,  V.  D.,  Nayak,  Y.,  &  Jayashree,  B.  S.,  2013.  In  vitro  antioxidant  and  antiglycation  activity  of Zingiber  zerumbet  (wild  zin-ger)  rhizome  extract.  International  Journal  of  Research  in Pharmaceutical Sciences, 4 (4) : 482–489. https://doi.org/10.26452/ijrps.v4i4.670
Chang,  C.  C.,  Yang,  M.  H.,  Wen,  H.  M.,  &  Chern,  J.  C.,  2002.  Estimation  of  total  flavonoid  content  in propolis by two complementary colometric methods. Journal of Food and Drug Analysis, 10 (3) : 178–182. https://doi.org/10.38212/2224-6614.2748 Danciu, C., Vlaia, L., Fetea, F., Hancianu, M., Coricovac, D. E., Ciurlea, S.A., & Trandafirescu, C., 2015, Evaluation  of  phenolic  profile,  antioxidant  and  anticancer  potential  of  two  main  representants  of Zingiberaceae  family  against  B164A5  murine  melanoma  cells.  Biological  Research,  48  (1)  :  1-9. https://doi.org/10.1186/0717-6287-48-1
Departemen  Kesehatan  Repubik  Indonesia,  2000.  Parameter  standar  umum  ekstrak  tumbuhan  obat Indonesia. Departemen Kesehatan Indoenesia, Jakarta, 7-8.
Ganapathy, G., & Nair, A.R., 2017. Curcuminoids in Zingiber zerumbet rhizomes: Bioguided fractionation and chromatographic identification of antimicrobial and antioxidant metabolites. Journal of Herbs, Spices and Medicinal Plants, 23 (2) :  169–181. https://doi.org/10.1080/10496475.2017.1283555 Gandhi, K., & Saravanan, S., 2018. Phytochemical estimation and in vitro antioxidant activity of rhizome of Zingiber zerumbet (L.) Sm. International Journal of Life Sciences Research, 6 (2) : 255–262. Gandjar, I. G., &  Rohman, A., 2007. Kimia farmasi analisis, Pustaka Pelajar, Yogyakarta, 31-33. Ghasemzadeh, A., Jaafar, H. Z. E., Ashkani, S., Rahmat, A., Juraimi, A. S., Puteh, A., & Muda, M. M. T.,
2016.  Variation  in  secondary  metabolite  production  as  well  as  antioxidant  and  antibacterial activities  of  Zingiber  zerumbet  (L.)  at  different  stages  of  growth.  BMC  Complementary  and Alternative Medicine, 16 (1) : 1–10. https://doi.org/ 10.1186/s12906-016-1072-6 Gogtay,  N.  J.,  &  Thatte,  U.  M.,  2017.  Principles  of  correlation  analysis.  Journal  of  Association  of Physicians of India, 65 (3) : 78–81.
Gutteridge, J. M. C., & Halliwell, B., 2018. Mini-review: Oxidative stress, redox stress or redox success?.
Biochemical and Biophysical Research Communications, 502 (2) : 183–186.
https://doi.org/ 10.1016/j.bbrc.2018.05.045
Kementerian  Kesehatan  Republik  Indonesia,  2017.  Suplemen I farmakope  herbal  Indonesia.  Kementerian Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, 289.
Kementerian  Kesehatan  Republik  Indonesia,  2018.  Hasil  utama  riskesdas  2018.  Kementerian  Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta, 41-81.
Kim,  G.  H.,  Kim,  J.  E.,  Rhie,  S.  J.,  &  Yoon,  S.,  2015.  The  role  of  oxidative  stress  in  neurodegenerative diseases. Experimental Neurobiology, 24 (4) : 325–340. https://doi.org/ 10.5607/en.2015.24.4.325
Liguori,  I.,  Russo,  G.,  Curcio,  F.,  Bulli,  G.,  Aran,  L.,  Della-Morte,  D.,  &  Abete,  P.,  2018.  Clinical interventions  in  aging  dovepress  oxidative  stress,  aging,  and  diseases.  Clinical  Interventions  in Aging, 13 : 757–772. https://doi.org/ 10.2147/CIA.S158513
Mabry,  T.  J.,  Markham,  K.  R.,  &  Thomas,  M.  B.,  1970.  The  systematic  identification  of  flavonoids. Springer-Verlag, New York, 51-54.
Marsusi, Setyawan, A.D., & Shanti L., 2001. A Chemotaxonomic study in the genus Zingiber. Biodiversitas, Journal of Biological Diversity, 2 (1) :  92–97. https://doi.org/10.13057/biodiv/d020102 Sugiyono, 2018, Metode penelitian kombinasi (Mixed methods), Alfabeta, Bandung, 250. Tzeng, T. F., Hong, T. Y., Tzeng, Y. C., Liou, S. S., & Liu, I. M., 2015. Consumption of polyphenol-rich Zingiber zerumbet rhizome extracts protects against the breakdown of the blood-retinal barrier and retinal inflammation induced by diabetes.
Nutrients, 7(9) : 7821–7841. https://doi.org/10.3390/nu7095369
Widiasari, N., 2015, Uji daya analgetik dan identifikasi kandungan kimia ekstrak etanol rimpang lempuyang wangi (Zingiber aromaticum Val.) secara kromatografi lapis tipis. Skripsi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sebelas Maret, Surakarta.
Widyastuti, S. M., Hadi, E. E. W., & Wahyuono, S., 2018. Dominant understorey plants producing herbal medicine  materials  on  homegarden  agroforestry  system  in  Menoreh  hills,  Kulon  Progo  District, AGRIVITA Journal of Agricultural Science, 40 (2) : 212-221. http://doi.org/10.17503/agrivita.v40i0.657
Zhang, Q. W., Lin, L. G., & Ye, W. C., 2018. Techniques for extraction and isolation of natural products: A comprehensive review, Chinese Medicine, 13 (1) : 1–26 https://doi.org/10.1186/s13020-018-0177-x

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapan  terimakasih  kepada  LPPM  UNSOED  atas  dana  penelitian  BLU UNSOED  yang  diberikan  pada  skema  riset  peningkatan  kompetensi  dengan  No: Kept.159/UN23/14/PN.01.00./2019.

## KONTRIBUSI PENULIS
S berperan dalam membuat konsep dan mengintrepetasikan data. NAC berperan dalam membuat  manuskrip  dan  mengintrepetasikan  data  sampling,  membuat  manuskrip  dan meginterpretasi  data.  FLS  berperan  dalam  mengumpulkan  data  dan  analisa.  Semua penulis berkontribusi dalam merancang penelitian dan menyetujui naskah publikasi.
Akses  Terbuka  Artikel  ini  dilisensikan  di  bawah  Creative  Commons Lisensi  Internasional  Attribution  4.0,  yang  memungkinkan  penggunaan,  berbagi, adaptasi,  distribusi,  dan  reproduksi  dalam  media  atau  format  apa  pun,  selama  Anda memberikan kredit yang sesuai kepada penulis asli dan sumbernya, memberikan tautan ke  lisensi  Creative  Commons,  dan  menerangkan  jika  perubahan  telah  dilakukan. Gambar  atau  materi  pihak  ketiga  lainnya  dalam  artikel  ini  termasuk  dalam  lisensi Creative  Commons  artikel,  kecuali  dinyatakan  sebaliknya  dalam  batas  kredit  untuk materi tersebut. Jika materi tidak termasuk dalam lisensi Creative Commons artikel dan penggunaan yang Anda maksudkan tidak diizinkan oleh peraturan perundang-undangan atau melebihi penggunaan yang diizinkan, Anda harus mendapatkan izin langsung dari pemegang hak cipta. Untuk melihat salinan lisensi ini, kunjungi https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/deed.id .
.
© The Author(s) 2020