## UJI TOKSISITAS AKUT SENYAWA ETIL p-METOKSISINAMAT YANG DIISOLASI DARI RIMPANG KENCUR (Kaempferia galanga L)

## Sara Nurmala
Program Studi Farmasi, FMIPA, Universitas Pakuan, Bogor E-mail: sara.nurmala@gmail.com

## ABSTRAK
Pada  rimpang  tanaman  kecur  ( Kaempferia  galanga  L. )  terdapat  senyawa      etil  p- metoksisinamat  yang  memiliki  aktivitas-aktivitas  farmakologis  diantaranya  sebagai analgesik  dan  antiinflamasi  serta  berpotensi  sebagai  tabir  surya.  Etil  p-metoksisinamat dapat  diisolasi dengan mudah dengan hasil rendemen yang relatif tinggi  sehingga  sangat berpotensi  dijadikan  sumber  bahan  obat  alami.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk menguji toksisitas akut senyawa etil p-metoksisinamat yang disolasi dari rimpang kencur. Serbuk rimpang kencur  diekstrak menggunakan pelarut  n-heksan sebanyak 4 kali.  Etil p- metoksisinamat diidentifikasi dan diisolasi dari ekstrak dengan metode uji jarak lebur dan analisis  KLT.  Dari  hasil  uji  didapatkan  nilai  jarak  lebur  p-metoksisinamat  adalah  48– 48,5ºC  dan  dari  hasil  analisis  KLT  dengan  fase  gerak  metanol :  aseton  (2:1)  didapatkan bahwa etil p-metoksisinamat memiliki nilai  Rf : 0,68. Hasil analisis spektrofotometri UV- VIS senyawa etil p-metoksisinamat  dalam pelarut metanol memberikan spektrum dengan serapan  maksimum  masing-masing  pada  307,0  nm  dan  226,0  nm.  Uji  toksisistas  akut dilakukan  dengan  menghitung  nilai  kisara median  lethal  dose (LD50)  senyawa  etil  p- metoksisinamat  yang diberikan secara oral terhadap kelompok-kelompok tikus uji dengan variasi dosis 50, 100, 500, 1000 dan 2.000 mg/Kg  BB.  Hasil uji menunjukan bahwa nilai median  LD50  dicapai  pada  pemberian  dosis  3.652  mg/Kg  BB.  Dengan  demikian  dapat disimpulkan  bahwa  senyawa  etil  p-metoksisinamat  termasuk  senyawa  obat  baru  dengan kategori toksik sedang.
Kata Kunci: Kencur, etil p-metoksisinamat, toksisitas akut, LD50

## ACUTE TOXICITY OF ETHYL P-METHOXYCINNAMATE COMPOUND ISOLATED FROM KAEMPFERIA GALANGA L

## ABSTRACT
The  main  content   found  in  the     rhizome Kaempferia  galanga L.  is  the  ethyl p - methoxycinnamaten which has been proved to have many pharmacological activities such as an analgesic and anti-inflammatory, and has a potent as a sunscreen agent. The ethyl p - methoxycinnamate  can  be  isolated  easily  and  the  yield  a  relatively  large  number  of compound so that  became the very potential source of a natural medicine. The extraction of Kaempferia  galanga was  using  n-hexane  solvent,  followed  by  identification  and isolation of ethyl p -methoxycinnamate using the melting range test and the TLC analysis methods.  The melting value of ethyl p -methoxycinnamate was  48-48,5ºC and the Rf value obtained  from  TLC  analysis  using  mobile  phase  methanol:acetone  (2:1)  was  0.68.  The results  of  UV-VIS  spectrophotometric  analysis  in  methanol  solvent  shows  that  the maximum absorption value ethyl p -methoxycinnamate compound occur at 307.0 nm and 226.0 nm respectively. The acute toxicity was determined by calculating the median lethal dose (LD50) value of ethyl p -methoxycinnamate on a several groups of mice administered with different dose of ethyl p -methoxycinnamate (50, 100, 500, 1000 and 2,000 mg / Kg). The value obtained median lethal dose (LD50) obtained was 3,652 mg/Kg animal weight.
It can be concluded that ethyl p-methoxycinnamate is the natural compound with moderate toxicity category.
Keywords: Kaempferia galanga L ., acute toxicity, ethyl p-methoxycinnamate, LD50

## PENDAHULUAN
Penelitian-penelitian terhadap kandungan  dari  rimpang  kencur  telah banyak  dilakukan   antara lain penelitian- penelitian  terhadap  senyawa  etil  p- metoksisinamat  yang  merupakan turunan dari  sinamat  (Darwis  dkk.,  1991). Senyawa  ini      yang  diduga  memiliki khasiat  diduga  memiliki  khasiat  sebagai analgesik  dan  antiinflamasi  juga  dapat bersifat sebagai agen tabir surya (Mulyadi T., 2009). dengan memodifikasi perpanjangan rantai karbon. Senyawa etil p-metoksisinamat adalah turunan sinamat yang  berasal  dari  jalur  biosintesis  asam shikimat  dan  memiliki  kerangka  karbon C6 – C3, terdiri dari cincin benzen ( C6 ) yang terikat pada ujung rantai karbon ( C3 )  disebut  dengan  senyawa  fenolik  alam dari  golongan  fenilpropanoid  (DepKes RI.,  1995).  Di  alam  turunan  sinamat terdapat dalam bentuk ester atau glikosidanya. Etil p-metoksisinamat terdapat  di  alam  dalam  bentuk  ester berwujud  padatan  kristal  berwarna  putih kekuningan  dan  mempunyai  bau  khas aromatis yang sangat kuat (Fahmi, 1991).
O
C OC 2 H 5 H 3 CO
( E )-ethyl  3-(4-methoxyphenyl)acrylate
(Etil p-metoksisinamat)
Pada  penelitian  ini  dilakukan  uji toksisitas  akut  yang  bertujuan  untuk menentukan  toksisitas  suatu  zat  atau senyawa tertentu terhadap hewan uji.  Uji toksisistas akut diperlukan untuk mengetahui  derajat  efek  toksik  sesuatu zat   atau   senyawa   yang   terjadi   dalam
waktu  singkat  setelah  pemberian    dalam dosis  tunggal  zat  atau  senyawa  tersebut terhadap  hewan  uji.  Batasan  waktu singkat disini ialah rentang waktu selama 24 jam setelah pemberian senyawa.
Parameter  yang  digunakan  untuk mengetahui toksisitas  akut  suatu  zat  atau senyawa  adalah  nilai median  lethal  dose atau  LD50.  Nilai  LD50      didefinisikan sebagai  dosis  tunggal  suatu  zat  atau senyawa  yang  secara statistik diharapkan akan    membunuh    50%    hewan    uji. Senyawa  etil  p-metoksisinamat      pada penelitian  ini  diisolasi  dari  ekstrak  n- heksan  rimpang  kencur.  Kemurniannya diuji   menggunakan   metode   uji   jarak lebur,    kemudian    diidentiikasi    dan diisolasi mengunakan KLT dan Spekrofotometri Uv-Vis.

## METODE PENELITIAN Pengumpulan Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  rimpang  kencur, yang  diambil  dari  perkebunan  daerah Leuwiliang, Kabupaten Bogor.

## Pembuatan Ekstrak n-heksan Kencur
Sebanyak  masing-masing  0,5  kg serbuk kering Kencur ( Kaempferia galanga L .) murni diperkolasi dengan l L n-heksan        dalam  tabung  perkolator selama  24  jam.  Selama  perendaman dilakukan pengocokan setiap 6 jam sekali selama 15 menit. Setelah 1 hari rendaman disaring,  filtrat  diambil  dan  masukan  ke alat rotary  evaporator sampai menghasikan ekstrak kental yang selanjutnya    didinginkan    sehingga menjadi serbuk kristal etil p- metoksisinamat  dan  digunakan  untuk  uji toksisitas akut.
Nilai  rendemen  ekstrak  dihitung dengan    membandingkan    berat    awal
simplisia  dan  berat  akhir  ekstrak  yang dihasilkan.
Rendemen merupakan
parameter  standar  mutu  ekstrak  serta penentuan  efesiensi  ekstraksi.  Nilai persentase
rendemen etil p- metoksisinamat  dihitung  terhadap  serbuk rimpang kencur  kering dengan larutan n- heksan adalah 1.19 %.
Analisis  Karakteristik  Serbuk  Kristal etil p-metoksisinamat

## Kromatografi Lapis Tipis
Untuk  uji  kromatografi  lapis  tipis, dibuat  eluen/fase  gerak  metanol  dan aseton  dengan  perbandingan  2:1  dan untuk fase diam digunakan Silika gel GF 254.    Sebanyak      10  mL  sampel  1  % disiapkan  dengan  mengencerkan  ekstrak menggunakan  aquadem.  Standar  baku pembanding  etil  p-metoksisinamat  1% juga disiapkan dengan pengencer aquadem. Chamber untuk  meletakkan kromatogram  dijenuhkan  dengan  eluen yang  akan  digunakan.   Larutan  sampel dan  larutan  standar  ditotolkan  pada lempeng,  dibiarkan  kering  kemudian  di elusi pada chamber yang telah disiapkan. Lempeng  KLT yang  telah  dielusi dideteksi  menggunakan  sinar  UV  254. Nilai  Rf  kemudian  dihitung  dari  jarak spor  yang  terbentuk  berbanding  jarak akhir.      Hasil  analisis  KLT  dengan  fase gerak  metanol:aseton  (2:1)  menunjukkan bahwa  senyawa  etil  p-metoksisinamat  m nilai  Rf  0,68.

## Uji Jarak Lebur
Sampel yang diperiksa harus kering dan  digerus  jadi  serbuk,  kemudian dimasukkan  ke  dalam  pipa  kapiler  yang tertutup  sebelah  ujungnya,  berdinding setebal  0,10  -  0,15  mm.  Panjang  kapiler secukupnya  agar  ujung  yang  terbuka berada  di  atas  permuakaan  cairan  dalam alat  tile  dengan  diameter  sebelah  dalam 0,9 - 1,1 mm.
Lekatkan pipa kapiler tersebut pada termometer,  dimana  isinya  diusahakan sedekat  mungkin  pada  tengah-tengah pencadang   raksa.   Letakkan   pencadang
raksa  di  tengah  tabung  yang  vertikal  di tile. Panasi pipa samping   tile dengan api kecil  sampai  kurang  lebih  15 o C  dibawah titik  lebur  diduga,  kemudian  dipanasi pelan-pelan dan teratur dengan kecepatan kurang  lebih  2 o C  per  menit.  Bagian- bagian yang melekat pada dinding kapiler meleleh  terlebih  dahulu,  temperatur dimana  bahan  di  tengah  pipa  kapiler  itu melebur semuanya dicatat sebagai temperatur  titik  leburnya.  Hasil  analisis titik  lebur  senyawa etil p-metoksisinamat adalah 48,5 ºC.

## Spektrofotometri UV-VIS
Pengujian        kadar        etil        p- metoksisinamat  dilakukan  menggunakan alat      spektrofotometer  UV-VIS  dengan pelarut metanol. Hasil analisis spektrofotometri  senyawa  standar  etil  p- metoksisinamat  dalam  pelarut  metanol memberikan  spektrum  dengan  serapan maksimum    masing-masing    pada   307,0 nm dan 226.0 nm (Masida, 2009).

## Pembuatan Sediaan Uji Toksisitas Akut
Uji  toksisitas  akut  mengacu  pada pedoman  dari The  Organization  for Economic Co-operation and Development (OECD)  425  yaitu Up  and Down  Procedure (Lu  F.C.,  1995).
Sebelum  pemberian  senyawa  uji,  mencit dipuasakan satu malam tetapi tetap diberi minum. Senyawa uji  disuspensikan dengan larutan Na-CMC 0,5%. Limit Test Mencit telah dipuasakan ditimbang dan diberikan sediaan senyawa uji peroral pada dosis tunggal 2000 mg/kg BB.  Volume  Administrasi  Obat  (VAO) dihitung  sesuai  dengan  bobot  mencit, yaitu  60  mg/0,2  mL.  Setelah  pemberiaan sediaan uji, pada 6 jam pertama dilakukan pengamatan selama 30 menit, dilanjutkan dengan pengamatan setiap 12 jam selama 48   jam.   Tanda-tanda   toksisitas   yang diamati  meliputi  kondisi  kulit  dan  bulu, mata,    konvulsi,    tremor,    diare,    dan
kematian.  Apabila setelah 48  jam mencit pertama masih hidup dan tidak menunjukkan tanda-tanda toksisitas ataupun kematian, maka pengujian dilanjutkan  pada  4  mencit  lainnya. Apabila terdapat 3 hewan coba yang mati, maka uji dilanjutkan dengan main test.
Uji  Toksisitas  Akut  Oral  etil  p- metoksisinamat
Efek  toksisitas  akut  oral  etil  p- metoksisinamat dievaluasi terhadap kelompok mencit dengan variasi
pemberian dosis  50,  100,  500,  1000 dan 2.000  mg/Kg  BB  secara  oral.  Perilaku dan  kondisi  hewan  coba  diamati  sampai 48  jam  setelah  perlakuan.  Penghitungan LD50  dari  sediaan  uji  dihitung  dengan rumus:
Log  M = Log   D  +  d  (  f  +  1  ) dimana :
M : Harga LD 50 D  : Dosis terkecil yang digunakan d   : Log  R  (Log dari kelipatan dosis)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada  tahap  uji  didapat  jumLah kematian  0,  1,  3,  5,  5  dengan  dosis terkecil  50  mg/20  g  BB.  Berdasarkan rumus, maka didapat nilai LD50 senyawa etil  p-metoksisinamat  adalah  3,6523 (3,1715-4,2060)g/kg  BB.  Nilai  yang didapatkan  menunjukan  bahwa  senyawa etil  p-metoksisinamat  termasuk  senyawa obat baru dengan kategori toksik sedang. Paramenter toksisitas baru terlihat berubah  pada mencit yang diberi perlakuan  dosis  1000  dan  2000  mg/Kg BB  yaitu  mencit  mengalami  tanda  diare dan tremor.

## SIMPULAN
1.  Senyawa  etil  p-metoksisinamat  dapat diisolasi  dari  rimpang  kencur  dengan pelarut   n-heksan   dengan   rendemen 68%     dihitung     terhadap     rimpang kencur.
2.  Senyawa  etil  p-metoksisinamat  dapat identifikasi      menggunakan      KLT,
spektrofotometri  UV-Vis  dan  jarak lebur.
3.  Penetapan nilai LD50 senyawa etil p- metoksisinamat        adalah        3,6523 (3,1715–4,2060)  g/Kg  BB,  senyawa merupakan  senyawa  dengan  kategori toksik sedang.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut tentang efek analgesik/efek antiinflamasi  dari  senyawa  etil  p- metoksisinamat secara in-vivo.

## DAFTAR PUSTAKA
Darwis, S.N, A.B.D Modjo, dan   Hasiyah
S.  1991.  Tumbuhan  obat  familia zingiberaceae.
Bogor: Pusat Penelitian dan Pengembangan Tanaman Industri
DepKes RI. 1995. Farmakope Indonesia.
Edisi     IV.     Direktorat     Jenderal Pengawasan  Obat  dan  Makanan.
Jakarta.
Fahmi  R.  1991.  Isolasi  dan  Karakteristik struktur   konstituen   kimia   utama kencur  ( Kaempferia  galanga Linn) Skripsi.  Padang:  Pusat  Pendidikan Universitas    Negeri    Padang.
Padang.
Lu,  F.C.  1995.  Toksikologi  Dasar  Asas,
Organ Sasaran, dan Penelitian
Resiko.  Ed  2.  Diterjemahkan  oleh  Edi
Nugroho. UI Press. Jakarta.
Masida M.  2009.  Penetapan kadar etil p- metoksisinamat  dari  tiga  varietas rimpang kencur ( Kaempferia galanga L )       secara       KLT- Densitometri. Skripsi. Fakultas
Farmasi Universitas Pancasila.
Jakarta.
Mulyadi  T.  2009.  Senyawa  tabir  surya yang  efektif  dengan  bahan  baku senyawa  aktif  dari  rimpang  kencur ( Kaempferia Galanga L. ).