DOI: https://doi.org/10.24114/jbio.v6i1.16450

## JBIO: JURNAL BIOSAINS
(The Journal of Biosciences)
http://jurnal.unimed.ac.id/2012/index.php/biosains email : jbiosains@unimed.ac.id
EKSPLORASI SENYAWA METABOLIT SEKUNDER DAUN KIRINYUH ( Chromolaena odorata ) DENGAN GC-MS
Endang Sulistyarini Gultom, Mutiara Sakinah, Uswatun Hasanah
Program Studi Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Negeri Medan Email korespondensi : mutiarasakinah695@gmail.com
Diterima:  Januari 2020; Direvisi: Februari 2020; Disetujui: Maret 2020

## ABSTRAK
Kirinyuh ( Chromolaena odorata ) secara tradisional telah digunakan sebagai tumbuhan obat. Obat tradisional masih banyak digunakan oleh masyarakat dan dianggap sangat bermanfaat karena bahan alam mampu  mengobati  berbagai  macam  penyakit  dan  memiliki  efek  samping  yang  relatif  lebih  kecil dibandingkan obat yang terbuat dari bahan sintesis. Kirinyuh mengandung senyawa metabolit sekunder umumnya  flavonoid,  alkaloid,  steroid,  fenol  dan  terpenoid.  Akan  tetapi  pada  beberapa  penelitian  yang dilakukan  tidak  dibedakan  pada  helaian  berapa  daun  diambil,  sehingga  penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  perbedaan  senyawa  metabolit  sekunder  daun  muda  dan  daun  tua  kirinyuh  ( Chromolaena odorata ) dengan metode kromatografi gas. ada perbedaan jumlah senyawa yang diperoleh, pada daun tua memiliki jumlah senyawa yang lebih banyak yaitu  22 senyawa bioaktif daripada senyawa bioaktif yang terdapat pada daun muda yaitu 1 3 senyawa bioaktif. . γ -sitosterol senyawa yang hanya teridentifikasi pada daun tua dan diisooctyl phthalate dan Bis(2-ethylhexyl) phthalate merupakan golongan senyawa saponin yang  hanya  terdapat  pada  daun  muda.Senyawa-senyawa  bioaktif  tersebut  termasuk  dalam  golongan flavonoid, terpenoid, saponin, fenol, alkaloid dan steroid.
Kata kunci : Kirinyuh, senyawa, metabolit sekunder, daun .

## EXPLORATION SECONDARY METABOLITE OF KIRINYUH LEAF (Chromolaena odorata) WITH GC-MS Abstract
Kirinyuh  ( Chromolaena  odorata )  has  traditionally  been  used  as  a  medicinal  plant.  Traditional medicine is still widely used by the community and is considered to be very beneficial because natural ingredients are able to treat various diseases and have relatively smaller side effects compared to drugs made from synthetic materials. Kirinyuh contains secondary metabolites, generally flavonoids, alkaloids, steroids, phenols and terpenoids. However, in several studies conducted not distinguished on the strands of how many leaves are taken, so this study aims to determine the differences in secondary metabolite compounds of young leaves and chirinyuh old leaves (Chromolaena odorata) by the gas chromatography method.  there  are  differences  in  the  number  of  compounds  obtained,  the  older  leaves  have  a  greater number  of  compounds,  22  bioactive  compounds  than  the  bioactive  compounds  found  in  young  leaves, which  are  13  bioactive  compounds.  .  γ -sitosterol  compounds  that  are  only  identified  in  old  leaves  and diisooctyl phthalate and Bis (2-ethylhexyl) phthalate are groups of saponin compounds that are only found in  young  leaves.  These  bioactive  compounds  are  included  in  the  flavonoid,  terpenoid,  saponin,  phenol, alkaloid and steroids.
Keywords: Kirinyuh, compounds, secondary metabolites, leaves
Pendahuluan Indonesia  merupakan  salah  satu negara yang terkenal dengan keanekaragaman
tumbuhan  yang  sangat  tinggi.  Berbagai  jenis tumbuhan berkhasiat yang telah dimanfaatkan oleh  masyarakat  secara  empiris  sebagai  obat
tradisional.  Keanekaragaman  hayati  ini meliputi tumbuhan, hewan maupun mikroba. Beberapa  jenis  telah  dimanfaatkan  oleh masyarakat  untuk  berbagai  keperluan, diantaranya sebagai bahan pangan, pertanian, dan  obat-obatan.  Diantaranya  adalah  bakteri yang  berasosiai  dengan  spons  sebagai antibakteri  (Restuati  dan  Endang,  2019)  dan pemanfaatan tumbuhan sebagai obat tradisional  (Nasution,  2019  dan  Hasnirwan dkk, 2013). Umumnya, masyarakat menggunakan  tumbuhan sebagai obat tradisioanl.  Obat  tradisional  masih  banyak digunakan  oleh  masyarakat  dan  dianggap sangat  bermanfaat  karena  sejak  dulu masyarakat  percaya  bahwa  bahan  alam mampu  mengobati  berbagai  macam  penyakit dan  memiliki  efek  samping  yang  relatif  lebih kecil  dibandingkan  obat  yang  terbuat  dari bahan  sintesis  (Mulyani,  2017).  Salah  satu tanaman  yang  dimanfaatkan  yaitu  daun kirinyuh  ( Chromolaena  odorata ).  Tumbuhan kirinyuh  ( Chromolaena  odorata )  merupakan tumbuhan  liar  yang  mudah  ditemui  disekitar kita,  belum  dimanfaatkan  secara  optimal karena tumbuhan ini dianggap sebagai gulma yang  sulit  diberantas.  Daun  kirinyuh ( Chromolaena odorata )
mengandung beberapa  senyawautama  seperti  tanin,  fenol, flavonoid,  saponin,  alkaloid  dan  steroid  dan minyak  atsirinya  mengandung  α  pinene, cadinene, camphora, limonene, β - caryophyllene  dan  isomer  cadinol  isomer (Yenti  dkk,  2011).  Berdasarkan  hasil penelitian  tersebut,  diketahui  bahwa  daun kirinyuh  ( Chromolaena  odorata )  memiliki banyak  manfaat,  namun  pada  beberapa penelitian  yang  dilakukan  tidak  dibedakan pada  helaian  berapa  daun  diambil,  penulis merasa  perlu  untuk  melakukan  eksplorasi kembali  terhadap  tumbuhan  ini  mengenai senyawa metabolit sekunder yang terkandung di  dalamnya.  Oleh  karena  perlu  dilakukan eksplorasi  senyawa  metabolit  sekunder  pada helaian daun kirinyuh ( Chromolaena odorata ) dengan metode GC-MS.
Bahan dan Metode
Tempat dan Waktu Penelitian Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Kimia dan Laboratorium Biologi
Universitas  Negeri  Medan  dan  Laboratorium
Fitokimia  Universitas  Sumatera  Utara  pada bulan November 2018 – Desember 2019.
Populasi dan Sampel Populasi  dalam  penelitian  ini  adalah tanaman  kirinyuh  ( Chromolaena  odorata ) yang  diperoleh  dari  Simalungun.  Sampel dalam  penelitian  ini  adalah  terdiri  dari  daun muda yang berasal dari daun nomor 1-3 dari pucuk  daun  dan  daun  tua  yang  berasal  dari daun nomor 4-6 dari pucuk daun.

## Alat dan Bahan Alat
Alat  yang  digunakan  terdiri  dari blender,  timbangan,  beaker  glass  (500  mL), erlenmeyer (1000 mL), glass ukur (1000 mL), corong,  kertas  saring,  tangkai  pengaduk  dan pisau,  lempeng  KLT,  seperangkat  alat kromatografi kolom dan seperangkat alat GC- MS.
Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  tanaman  krinyuh ( Chromolaena  odorata )  yaitu  bagian  daun muda dan daun tua, metanol p.a, n -heksan, etil asetat, kloroform, tissue , aquades, silica gel , dan kapas.
Pembuatan  Ekstrak  Metanol  Daun  Muda  dan Daun Tua  Kirinyuh (Chromolaena odorata) Pembuatan  ekstrak  metanol  p.a  daun muda  dan  daun  tua  krinyuh  ( Chromolaena odorata ) yaitu menggunakan metode maserasi dengan  pelarut  metanol  p.a.  Daun  kirinyuh ( Chromolaena  odorata )  muda  sebanyak  6  kg diambil, kemudian dicuci dengan air mengalir sampai  bersih.  Setelah  itu  dikeringkan  di dalam ruangan selama 4 hari (Kusumawardani dkk, 2008). Daun yang telah kering kemudian dihaluskan menggunakan blender dan diayak sehingga dihasilkan simplisia daun muda dan daun tua. Hasil simplisia direndam menggunakan  pelarut  metanol  sebanyak  12 liter  selama  3  x  24  jam.  Hasil  rendaman disaring  menggunakan  kertas  saring  dan dilakukan  pemisahan  antara  zat  pelarut  dan senyawa  aktif  hasil  ekstraksi  dengan mengunakan rotari evoporator sampai kental seperti  pasta.  Dilakukan  hal  yang  sama terhadap  daun  kirinyuh  tua  (Frastika  dkk, 2017).

## Kromatografi Kolom
Pemisahan kromatografi kolom
dilakukan  menggunalan  rangkaian  alat kromatografi  kolom  yang  ditegakkan  dengan statif.  Untuk  pengisian  kolom,  sebagai  bahan bagian  pengisi  bawah  kolom  dimasukkan sedikit kapas kemudian dimasukkan silica gel yang sudah berbentuk buburke dalam kolom. Sampai timbunan bubur silica gel dalam kolom mencapai  tiga  perempat  tinggi  kolom.  Untuk pemisahan  komponen  dengan  menggunakan kromatografi  kolom  ekstrak  dimasukkan kedalam kolom dan kran kromatografi kolom dibuka. Ekstrak akan meresap silica gel dalam kolom sampai batas atas silica gel. Selanjutnya dimasukkan  eluen  dengan  perbandingan n - heksan: etanol (8:1), etil asetat : n -heksan (1:9) dan n -heksan  :  etil  asetat(5:5)secara    terus- menerus  sambil  kran  kolom  dibuka.  Fraksi yang terpisah ditampung dalam tabung reaksi sampai  seluruh  ekstrak  terpisahkan  (Lallo dkk, 2017).

## Kromatografi Lapis Tipis
Lempeng  KLT  yang  akan  digunakan diaktifkan terlebih dahulu dengan oven selama 1  jam.  Setelah  lempeng  aktif,  ekstrak ditotolkan  sepanjang  jarak  lempeng  dengan jarak  1  cm  dari  tepi  bawah  dengan  pipa kapiler,  lempeng  diangin-anginkan  beberapa saat.  Lempeng  kemudian  dimasukkan  ke dalam  chamber  yang  sudah  berisi  eluen kloroform-metanol  9:1,  1:9  dan  5:5    yang sudah  dijenuhkan.  Setelah  dielusi,  lempeng kaca  KLT  preparatif  dikeringkan  dan  dilihat bercaknya  dibawah  sinar  UV  pada  panjang gelombang 366 nm.
Identifikasi dengan GC-MS Sampel disaring menggunakan membran  filter  terlebih  dahulu.  Kemudian sampel diinjeksi sebanyak 20 µL dengan fase diam  silica  C  18  dan  fase  gerak  campuran metanol-air (9:1) secara elusi gradien dengan kecepatan alir 1,0 mL/menit selama 10 menit dengan panjang gelombang 366nm. Kemudian alat  dioperasikan  untuk  melakukan  deteksi, hasil  deteksi  senyawa  yang  telah  murni ditunjukkan  dengan  terbentuknya peak dengan  waktu  retensi  tertentu,  kemudian identitas diberikan untuk senyawa tersebut.

## Hasil Dan Pembahasan
Hasil Pemisahan Kromatografi Kolom Perbandingan  fase  gerak  eluen  pada pemisahan  kromatografi  kolom  adalah    n- heksan:Etil astetat pada perbandingan 9:1, 5:5 dan  1:9.  Berdasarkan  hasil  pemisahan  di dapatkan 4 fraksi dari daun muda dan daun tua kirinyuh ( Chromolaena odorata ).

## Hasil Skrining Fraksi Kromatografi Kolom Daun
Muda  dan  Daun  Tua  Dengan  Metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Senyawa  yang  paling    banyak ditemukan pada daun muda  adalah flavonoid dengan nilai Rf 0,7-0,82. Berdasarkan nilai Rf pada  daun  tua  terdapat  3  senyawa  yaitu flavonoid, steroid dan fenol. Dan berdasarkan tabel  diatas  senyawa  flavonoid  merupakan senyawa yang mendominan. Setiap perbandingan menunjukkan adanya flavonoid yang bersifat polar, semipolar dan nonpolar.
Hasil  Analisis  GC-MS  pada  Fraksi  Hasil Kromatografi  Kolom  Ekstrak  Daun  Muda Kirinyuh (Chromolaena odorata)
Senyawa  bioaktif  pada  daun  muda (F1DM  dan  F2DM)  sebanyak  13  senyawa bioaktif. Dan pada daun tua (F1DT dan F2DT) terdapat  22  senyawa  bioaktif.  Hasil  analisis GC-MS  senyawa  bioaktif  pada  daun  muda sebanyak 13 senyawa bioaktif dan daun tua 22 senyawa  bioaktif.  Jenis  senyawa  pada  daun muda dan daun tua tergolong dalam senyawa flavonoid, alkaloid,saponin, fenol, steroid dan terpenoid.  Perbedaan  senyawa  bioaktif  pada daun  muda  dan  daun  tua  disebebkan  karena daun  tua  memiliki  kemampuan  yang  lebih besar  untuk  mensintesis  senyawa  bioaktif. Pembentukan  senyawa  bioaktif  sangat dipengaruhi  oleh  usia  organ  tanaman (harbone  &  williams  2000).  Peningkatan senyawa  biokatif  juga  dipengaruhi  oleh rendahnya hara dan cahaya. Faktor lingkungan berpengaruh  terhadap  metabolit  sekunder dan  pembentukan  senyawa  bioaktif  pada tanaman, seperti perubahan temperatur siang dan  malam,  curah  hujan,  kekeringan,  serta lama  dan  intensitas  cahaya  matahari  (Siatka, 2011).

## Daftar Pustaka
Amir,  dan  Soendjoto,  A.M.,    2018,  Tumbuhan Yang  Dimanfaatkan  Sebagai  Obat  Oleh
Masyarakat  Dayak  Bakumpai  Yang Tinggal  Di  Tepian  Sungai  Karau,  Desa Muara Plantau, Kabupaten Barito Timur, Kalimantan Tengah Indonesia, Prosiding Seminar  Nasional  Lingkungan  Lahan Basah , Vol 3 (1) : 127-132.
Anurag,  K,  Irchaiya,  R.,  Yadaf,  A.,  Gupta,  N., Kumar,  S.,  Prakash,  A,  and  Gurjar,  H.,
2015.Metabolites  in  plants  and  its classification. World Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences , Vol 4 (1) : 287-305.
Ardianingsih,  R.,  2009,  Penggunaan  High Performance  Liquid  Chromatohraphy (HPLC)  Dalam  Proses  Analisa  Deteksi Ion, Berita Dirgantara , Vol 10 (4) : 101-
104. Dalimunthe,  I.C.,  Rachmawan,  A.,  2017, Prospek Pemanfaatan Metabolit Sekunder  Tumbuhan  Sebagai  Pestisida Nabati  Untuk  Pengendalian  Patogen Pada Tanaman Karet, Warta Perkaretan , Vol 36 (1) : 15-28. Djojopranoto,  R.R.,  2013,  Daya  Peredam Radikal  bebas  Ekstrak  Etanol  Daun
Jambu  Mente  ( Anacardium  occidentale L.)  Terhadap  DPPH  (1,1-Diphenyl-2- Picrylhydrazyl), Jurnal Ilmiah Mahasiswa Universitas Surabaya, Vol2(2) :1- 10. Fernando, A., Rahmawati, A., 2017, Penentuan Profil  Kromatografi  Ekstrak  dan  Fraksi
Tumbuhan  Pegagan  ( Centella  Asiatica
(L.)  Urban)  Secara  Kromatografi  Lapis Tipis  (KLT)  dan  Kromatografi  Cair
Kinerja  Tinggi  (KCKT), Prosiding
Seminar Nasional POKJANAS . ISBN 978-
602-60854-0-6.
Frastika, D., Pitopang, R., Suwastika, N. I., 2017, Uji  Efektiitas  Ekstrak  Daun  Krinyuh ( Chromolaena  odorata ( L. )  R.M.  King H.Rob) Sebagai Herbisida Alami Terhadap  Perkecambahan  Biji  Kacang Hijau  ( Vigna  Radiata ( L. )  R.Wilckzek) dan Biji Karuilei ( Mimosa Invisa Mart . Ex Colla ), Journal of Science and Technology , Vol 6 (3) : 225-238.
Gandjar,  I.  G.,  dan  Rohman,  A.,  2007, Kimia Farmasi  Analisis .  Pustaka  Pelajar, Yogyakarta.
Gritter  R.  J.,  et  al.,  1991,  Pengantar Kromatografi Edisi 2, ITB. Bandung.
Harbone, J. B., and William, C. A., 2000, Review : Advances in Flavonoid Research Since 1992, Phytochemistry , Vol 55, 481-504. Hasnirwan, Ibrahim, S., Yanti, M., 2013, Isolasi dan  karakterisasi  flavonoid  pada  fraksi aktif  antioksidan  dari  daging  buah mahkota  dewa  (Phaleria  macrocarpa (Scheff)  Boerl), Open  Journal  System, Prosiding  Semirata  FMIPA  Universitas Lampung , Vol 1(1): 1 – 6. Kusuma,  A.S.W.,  dan  Ismanto,  H.M.R.,  2016, Pengunaan Instrumen High Preformance  Liquid  Chromatography Sebagai  Metode  Penentuan  Kadar Kapsaisin Pada Bumbu Masak Kemasan
“Bumbu Marinade Ayam Special” Merek Sasa, Jurnal Farmaka , Vol 14(2). Kusumawardani,Kusdarwati,    &Handijatno.
2008.    Daya  Anti  Bakteri  Ekstrak  Jahe Merah (Zingiber officinale Rosc)  dengan Konsentrasi    yang    Berbeda    Terhadap Pertumbuhan   Aeromonas   hydrophila secara      in  vitro.      Program      Studi Budidaya      Perairan      Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga Khadijah,  Ahmad,  M.J.,  S,  Umar.,  dan  Iin  S., 2017,  Penentuan  Total  Fenolik  Dan Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Etanolik Daunsamama (Anthocephalus Macrophylus)  Asal  Ternate,  Maluku Utara, Jurnal Kimia Mulawarman , Vol 15
(1) Nasution, M. Y., Restuati, M., Syahputra, R. A., & Pulungan, A. S. S. (2019). ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF Mandailing  Traditional  Plant  Leaves Ethanol Extract Of Mikania Micrantha . Jurnal Bioscience Research , 16 (01), 793-797.
Restuati,  M.,  &  Gultom,  E.  S.  Potensi  Bakteri
Yang  Berasosiasi  Dengan  Spons  Asal Pulau  Ngge  (Sibolga)  Sebagai  Sumber Antibakteri. JURNAL PENELITIAN SAINTIKA, 12(2), 98-104. Yenti,  R.,  Afrianti,  R.,  &  Afriani,  L.  (2011). Formulasi  krim  ekstrak  etanol  daun kirinyuh  (Euphatorium  odoratum.  l) untuk  penyembuhan  luka.  Majalah Kesehatan  PharmaMedika,  3(1),  227- 230.