e- Jurnal Rekayasa dan Teknologi Budidaya Perairan
Volume IX No 2 Februari 2021 p-ISSN: 2302-3600, e-ISSN: 2597-5315
MOLECULAR IDENTIFICATION AND LOCAL ISOLATE BACTERIAL ACTIVITY TEST AS BIOCONTROL CANDIDATES TO TACKLE Vibrio Spp INFECTIONS AT VANNAMEI SHRIMP CULTIVATION (Litopenaeus vannamei) IN EAST LAMPUNG
Heidy Riana *1 , Supono 1 , Agus Setyawan 2

## ABSTRACT
Pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei) is a widely cultivated type of shrimp with high economic value. One of the obstacles in pacific white shrimp cultivation is an infectious disease, especially Vibrio spp. This study aims to identify bacteria of  biocontrol  candidate  against Vibrio spp.  This  research  was  conducted  by  the Laboratory of Fisheries and Marine, Faculty of Agriculture, University of Lampung and the laboratory of PT. Indolab Utama, West Jakarta, from September 2019 to January  2020.  Bacteria  of  Biocontrol  candidate  were  isolated  from  traditional shrimp  pond  water  in  Purworejo  Village,  Pasir  Sakti  District,  East  Lampung Regency. Water samples were taken from the inlet, plot, and outlet. The bacterial screening was carried out by testing the antagonism of bacterial isolates isolated from  water  samples  with  several Vibrio bacteria,  namely V.  harveyi, V. algynoliticus, and V. parahemolyticus on Sea Water Complete (SWC) medium. The bacterial  isolates  with  the  highest  inhibitory  activity  were  then  identified morphologically, biochemically, and molecularly by 16s rRNA. The results showed that from those 10 isolates was found 1 bacterial isolate from water samples. Only one  pond  plot  isolate  (P1)  was  found  that  had  inhibitory  activity  against V. harveyi and the size was 21 mm. The morphological test results showed the colonies were  round,  flat  edges,  convex  elevation,  cream  colored,  and  included  in  the negative  gram  bacteria  group.  The  results  of  biochemical  tests  showed  that  the bacteria were motile. Meanwhile, the molecular test results with 16s rRNA showed that the P1 bacteria were 99% similar to Aeromonas caviae isolates, which were found potential as biocontrol candidates because they can inhibit the growth of V. harveyi bacteria, which was characterized by the formation of a clear zone around the paper disk.
Keywords: Biocontrol, Identification, Pacific White Shrimp, Vibrio

## Pendahuluan
Udang  vannamei (Litopenaeus vannamei) merupakan salah satu jenis udang yang banyak dibudidayakan di
* E-mail: heidyriana@gmail.com
1 Magister Manajemen Wilayah Pesisir, Sekolah Pascasarjana, Universitas Lampung
2 Jurusan Perikanan dan Kelautan, Fakultas Pertanian, Universitas Lampung Jl. Prof. Soemantri Brodjonegoro No. 1 Gedong Meneng Bandar Lampung 35145
Indonesia  karena  memiliki  nilai ekonomis  yang  cukup  tinggi.  Secara ekonomi udang memberikan kontribusi terhadap nilai ekspor hasil produksi  perikanan  di  Indonesia
sebesar  33,63%.  Salah  satu  cara untuk  meningkatkan  nilai  produksi udang  vannamei  yaitu  dengan  cara meningkatkan padat tebar atau dengan  sistem  budidaya  intensif. Akan  tetapi  sistem  budidaya  intensif pada  udang  vannamei  kemungkinan akan  menimbulkan  suatu  penyakit yang  membuat  kelangsungan  hidup dan pertumbuhan udang menurun.
Timbulnya suatu penyakit udang  di  tambak  disebabkan  oleh berbagai faktor, salah satunya penurunan  kualitas  air  yang  diikuti oleh kesehatan udang yang
memburuk.  Penyakit  yang  sering menyerang  udang  diantaranya  virus, jamur,  parasit  dan  bakteri.  Dari beberapa  penyebab  penyakit  dari genus Vibrio merupakan  salah  satu penyebab  penyakit    yang  banyak menyerang  larva  udang  vannamei adalah penyakit vibriosis yang disebabkan oleh bakteri V. harveyi . Usaha  untuk  menanggulangi penyakit  tersebut  telah  dilakukan dengan  menggunakan  berbagai  jenis antibiotik. Namun penggunaan antibiotik secara terus-menerus dengan  dosis  sub-optimal  telah mengakibatkan V.  harveyi menjadi resisten.
Untuk itu, saat ini telah banyak dikembangkan cara lain yang diharapkan  lebih  aman  dan  efektif salah satunya adalah dengan penggunaan bakteri probiotik sebagai agen biokontrol. Pemanfaatan bakteri biokontrol indigenous sebagai kandidat  probiotik  pada  budidaya udang vannamei memerlukan
beberapa  spesies  bakteri  yang  saling mendukung  satu  dengan  yang  lain.
Sejauh ini, bakteri biokontrol indigenous  dari  tambak  udang  di Lampung masih terbatas pada
Bacillus sp.  D.22  yang  memiliki aktivitas antagonis terhadap beberapa bakteri  pathogen  pada    ikan  dan udang  seperti Staphylococcus aureus , Aeromonas  hydrophila dan Vibrio alginolyticus.
Oleh  karena  itu,  penting  untuk mengeksplorasi  kembali  beberapa kandidat  bakteri  biokontrol  untuk mendukung pengembangan probiotik khusus bakteri indigenous di Lampung. Penelitian ini akan difokuskan  melakukan  penapisan ( skrining) bakteri  biokontrol  yang memiliki  sifat  antagonis  terhadap Vibrio spp.  serta  identifikasi  secara molekuler pada  bakteri  dengan bioaktivitas paling tinggi.

## Metode
Penelitian ini dilaksanakan bulan September 2019 sampai dengan bulan Januari 2020 yang bertempat di Laboratorium Perikanan dan Kelautan Fakultas Pertanian Universitas  Lampung.  Uji  Biokimia dan  Uji  PCR  16s  rDNA  kandidat bakteri  biokontrol  dilakukan  di
Laboratorium  PT.  Indolab  Utama, Jakarta Barat.
Sampel  air  dikoleksi  dari tambak tradisional udang vannamei di Desa  Purworejo,  Kecamatan  Pasir Sakti,  Kabupaten  Lampung  Timur, Provinsi  Lampung.  Sampel  diambil dari  titik inlet , outlet ,  dan  petak tambak  masing-masing  sebanyak 50ml. Metode  yang  dilakukan  antara lain isolasi bakteri kandidat biokontrol, penapisan ( Skrining ) aktivitas antibakteri, identifikasi bakteri  kandidat  biokontrol  terdiri dari identifikasi morfologi,
identifikasi  biokimia  dan  identifikasi
molekuler 16s rDNA. Data dianalisis secara deskriptif.

## Hasil
Isolasi Bakteri Kandidat Biokontrol Isolat kandidat bakteri biokontrol  yang  didapat  dari  hasil penelitian ini sebanyak 10 isolat yang berasal  dari  sampel  air  tambak budidaya  udang  vannamei  di  desa Purworejo,  Kecamatan  Pasir  Sakti, Kabupaten Lampung Timur. Perbedaan letak pengambilan sampel air  menunjukkan  penampilan  koloni yang berbeda  secara visual (Gambar 1).
Gambar  1.  Hasil  isolasi  kandidat  bakteri  biokontrol  dari  perairan  tambak udang
Sedangkan  untuk  jumlah  isolat  yang didapat
dari ketiga tempat pengambilan  sampel  dapat  dilihat pada  Tabel  1  berikut.  Dengan menggunakan pengenceran 10 4 didapat  total  10  koloni  baik  yang berasal dari inlet, petak, dan outlet.
Tabel 1. Jumlah isolat bakteri yang tumbuh pada media SWC (Pengenceran 10 -4)
Pengenceran Sampel Air Tambak Jumlah Koloni Inlet (Koloni) Outlet (Koloni) Petak (Koloni) 10 4 5 3 2 10 Jumlah 5 3 2 10 Penapisan (Skrining) Aktivitas Antibakteri Uji  aktivitas  penghambatan
bakteri dilakukan untuk melihat daya hambat  kandidat  bakteri  biokontrol yang  didapat  dari  isolasi  terhadap pertumbuhan  bakteri  patogen Vibrio spp.  Dari  hasil  seleksi in  vitro terhadap  10  isolat  kandidat  bakteri biokontrol,  dengan  menggunakan metode  kertas  cakram,  didapatkan  1 isolat  kandidat  bakteri  biokontrol
yang  mampu  menghasilkan  zona hambat terhadap pertumbuhan bakteri Vibrio spp.    Isolat  tersebut  memiliki kode P1, yaitu isolat yang didapat dari
Petak  1  (Gambar.  2).  Berdasarkan hasil uji antagonistik yang menggunakan bakteri indikator Vibrio  harveyi didapatkan  1  isolat bakteri  kandidat  biokontrol  dengan kode P1 (Petak 1) yang menghasilkan zona bening sebesar 21 mm.
Gambar 2. Hasil penapisan (skrining) aktivitas antibakteri
Identifikasi Bakteri Kandidat Biokontrol Karakteristik  kandidat  bakteri biokontrol pada penelitian ini diketahui  dengan  melakukan  uji morfologi  (pengamatan  visual)  dan
uji  biokimiawi.  Pengamatan  visual yang  dilakukan  dengan  mengamati bentuk dan warna koloni bakteri serta identifikasi dengan uji biokimia dapat dilihat pada Tabel 2.

## Tabel 2. Hasil uji morfologi bakteri kandidat biokontrol
Jenis Uji Holt et al.   (1994) Hasil Uji Morfologi Koloni : Bentuk Bulat Bulat Tepian Rata Rata Elevasi Warma Cembung Krem Cembung Krem
Dari  hasil  uji  morfologi  dan biokimiawi  terhadap  agen  bakteri kandidat  biokontrol  P1  tersebut memiliki  kemiripan  dari  ciri-ciri
bakteri  dari  Genus Aeromonas ,
seperti yang ditunjukkan oleh Holt et
al . (1994). Tabel 3. Hasil uji biokimia bakteri kandidat biokontrol Jenis Uji Holt et al.   (1994) Hasil Uji Sifat Biokimia : Uji Gram - - Uji katalase + + Uji motilitas Uji O/F Motil Fermentatif Motil Fermentatif Pada  Gambar  3  terlihat  bahwa kandidat biokontrol P1 memiliki sifat gram  negatif  yang  ditandai  dengan adanya  lendir  setelah  pemberian
KOH  3%.    Sedangkan  sifat  katalase dari  kandidat  biokontrol  ini  dapat dilihat  adanya  gelembung  setelah pemberian  peroksida  H 2 O 2 3%. Demikian  pula  untuk  uji  motilitas ditunjukkan dengan adanya pergerakan  yang  menyebar  pada media agar semi solid SWC.
Kandidat biocontrol P1 juga memiliki sifat  fermentif  yang  ditunjukkan dengan perubahan warna pada media yang mengandung glukosa.
Berdasarkan  uji  gram  yang  dilakukan  isolat  bakteri biokontrol  P1  termasuk  dalam  gram  negatif  yang ditandai dengan adanya pembentukan lendir pada kaca objek.
Berdasarkan hasil uji katalase isolat bakteri biokontrol P1  menunjukkan  positif  yang  ditandai  dengan terbentuknya gelembung udara.
Berdasarkan hasil motilitas uji isolat bakteri biokontrol P1 yang telah diisolasi pada media agar SWC semi solid bersifat motil yang menunjukkan adanya  flagella.
Berdasarkan  hasil  uji  O/F  isolat  bakteri  biokontrol  P1 menunjukkan fermentatif terhadap glukosa dikarenakan media  yang  ditutup  paraffin  berubah  warna  dari  hijau menjadi kuning.

## Gambar 3. Hasil uji biokimia bakteri kandidat biokontrol

## Identifikasi Molekuler 16s rRNA
Hasil  yang  didapat  dari  pohon filogenetik berdasarkan perbandingan sekuen gen 16s rRNA, menunjukkan bahwa tipe galur kandidat biokontrol yaitu  isolat  P1  (Petak  1)  lebih  dekat dengan Aeromonas  caviae .  Isolat  P1 dengan Aeromonas caviae menunjukkan nilai keidentikan sebesar  99%.  Isolat  P1  merupakan isolat  bakteri  yang  memiliki  genus sama yaitu Aeromonas tetapi berbeda spesies (Gambar 4).

## Gambar 5. Pohon filogenetika berdasarkan perbandingan sekuens 16S rRNA

## Pembahasan
Hasil isolasi  bakteri  sampel  air tambak dengan masa inkubasi 24 jam menunjukkan  adanya  pertumbuhan koloni  bakteri  pada  media  tumbuh. Hasil  pengamatan  koloni  bakteri meliputi  bentuk,  tepian,  elevasi,  dan warna  ditemukan  10  koloni  kandidat bakteri biokontrol. Dari isolat kandidat  bakteri  tersebut  dilakukan uji penekanan terhadap  pertumbuhan bakteri  patogen Vibrio .  Bakteri
pathogen Vibrio adalah  bakteri  yang umum  didapat  pada  akuakultur, khususnya  budaya  dalam  tambak (Lestari et  al. ,  2018;  Sarida  & Harpeni,  2010;  Hatmanti,  2003). Isolat  terpilih  merupakan  isolat  yang memiliki aktivitas penghambat terbesar, ditandai dengan terbentuknya  zona  bening  di  sekitar koloni  pada  media Sea  Water Complete (SWC) agar yang mengandung  bakteri  uji Vibrio . Adanya zona bening atau disebut juga
dengan  zona  hambat  mengindikasi isolat memiliki kemampuan menghasilkan  senyawa  antibakteri yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri uji. Hasil  uji  antagonistik  dengan
masa  inkubasi  24  jam  didapatkan isolat  bakteri  biokontrol  P1  dengan rata-rata  diameter  zona  bening  21 mm,  terhadap Vibrio  harveyi yang berarti daya hambat bakteri biokontrol  sangat  kuat.  Namun  hasil uji antagonis dengan Vibrio parahemolyticus dan Vibrio algynoliticus tidak menunjukkan zona hambat dikarenakan kemampuan  setiap  bakteri  berbeda- beda  bergantung  ketebalan  dan komposisi dinding selnya. Klasifikasi respon hambatan pertumbuhan bakteri apabila diameter zona hambat lebih besar dari 20 mm maka respon hambatan  pertumbuhannya  sangat kuat,  apabila  diameter  zona  hambat berkisar  antara  10-20  mm  maka respon  hambatan  pertumbuhannya dikategorikan  kuat,  diameter  zona hambat  berkisar  antara  5-10  mm respon  hambatan  pertumbuhannya dikategorikan sedang, sedangkan diameter zona hambat lebih kecil dari 5 mm respon hambatan pertumbuhannya dikatagorikan lemah.  Menurut  Naoman et  al. (2014),  ada  beberapa  faktor  yang dapat  mempengaruhi  besar  kecilnya aktivitas penghambatan zat antibakteri  yaitu:  1)  jenis  dan  umur dari bakteri penghasil bakteriosin dan bakteri  uji;  2)  konsentrasi  zat antimikroba  dan  jumlah  inokulum atau  kepadatan  bakteri  uji;  3) resistensi dari bakteri terhadap substansi  zat  antimikroba  dengan perbedaan dinding sel dari bakteri uji;
4)  kadar  substansi  aktif  atau  gugus fungsi dari senyawa antimikroba.
Isolat  P1  merupakan  bakteri kandidat biokontrol yang berasal dari bagian  tambak  udang  yang  memiliki banyak limbah dari sisa pakan, feses, dan  eksresi  udang.    Uji  karakteristik isolat  P1  ini  diperoleh  morfologi bakteri dalam bentuk, tepian, elevasi, dan  warna  dari  isolat,  yaitu  bentuk bulat,  tepian  rata,  elevasi  cembung dan  berwarna  putih  (Tabel  2).  Ciri- ciri  bakteri  yang  berupa  bentuk  dan warna  yang  berbeda  menunjukkan bahwa  setiap  isolat  bakteri  berasal dari jenis yang berbeda, sehingga ciri- ciri morfologi dapat dijadikan sebagai dasar dalam identifikasi bakteri (Babu et al., 2017).
Namun  untuk  mendapatkan hasil  identifikasi  yang  lebih  tepat harus dilanjutkan dengan uji biokimia yaitu  uji  gram,  uji  katalase,  uji motilitas,  dan  uji  O/F.  Penentuan gram  bakteri  dilakukan  uji  KOH  3% yang  merupakan  pengujian  untuk membedakan kelompok gram bakteri (Purwohadisantoso et  al., 2009). Berdasarkan uji yang dilakukan isolat bakteri biokontrol P1 termasuk dalam gram  negatif.  Bakteri  Gram  negatif ditandai dengan adanya pembentukan lendir  pada  kaca  objek  setelah dicampurkan  dengan  KOH  3%.  Hal ini  dikarenakan  kelompok  bakteri Gram  negatif  memiliki  komponen peptidoglikan  yang  tipis,  sehingga memudahkan sel Gram negatif pecah dan ikatan peptida gram negatif dapat dihidrolisis  dengan  pemberian  asam kuat atau basa kuat untuk menghasilkan komponen asam amino dalam  bentuk  bebas.  Berdasarkan hasil  uji  katalase  isolat  bakteri biokontrol  P1  menunjukkan  positif yang  ditandai  dengan  terbentuknya
gelembung udara pada saat campuran H 2 O 2 3% dengan isolat bakteri. Katalase merupakan enzim yang digunakan mikroorganisme untuk menguraikan hidrogen peroksida  menjadi  H 2 O  dan  O 2 .  Uji motilitas pada isolat bakteri
biokontrol  P1  yang  telah  diisolasi pada  media  agar  SWC  semi  solid bersifat  motil.  Hal  ini  menunjukkan adanya  flagella yang berfungsi untuk melakukan pergerakan. Flagella merupakan  salah  satu  struktur  utama di luar sel bakteri yang menyebabkan terjadinya pergerakan (motilitas) pada sel  bakteri.  Golongan  basil  dapat bergerak dengan adanya flagella yang tersebar  baik  pada  ujung-ujungnya maupun pada sisi.
Selanjutnya, uji O/F pada isolat bakteri  biokontrol  P1  menunjukkan adanya aktivitas fermentatif terhadap glukosa. Beberapa bakteri tidak dapat tumbuh  tanpa  adanya  oksigen,  ada bakteri  yang  tetap  tumbuh  dengan atau tanpa adanya oksigen dan bakteri yang  tidak  dapat  tumbuh  dengan adanya oksigen. Uji O/F ini menunjukkan bahwa kandidat
biokontrol  dari  isolat  P1  mampu tumbuh  pada  kondisi  tanpa  oksigen dan menggunakan sumber energi dari proses fermentasi tersebut.
Berdasarkan hasil uji morfologi dan biokimia bakteri kandidat biokontrol  termasuk  dalam  genus Aeromonas dengan memiliki karakteristik  yang  sama  dengan Aeromonas . Data di www.ncbi.nih.nlm.gov melalui program BLAST menunjukkan
spesies  bakteri  dari  isolat  P1  adalah Aeromonas  caviae dengan  nilai keidentikan sebesar 99%. Aeromonas adalah mikroba yang dapat ditemukan dimana saja, bersifat psikrofil, mikro-
negatif  yang  umum  ditemukan  di perairan  air  tawar,  perairan  estuari, dan  perairan  pesisir  lainnya  (Chacon et  al., 2003).  Taksonomi  dari  genus
Aeromonas bersifat kompleks, ekspansif,  dan  mencakup  sekitar  36 spesies  hingga  saat  ini  (Puah et  al., 2018). Aeromonas merupakan  salah satu patogen potensial yang terdeteksi pada  ikan  dan  hewan  laut  lainnya seperti  ikan  nila  beku  di  Mexico (Escarpulli et  al., 2003),  dan  udang laut di Thailand (Yano et al., 2015). Berdasarkan  penelitian  yang dilakukan, bakteri Aeromonas memiliki  sifat  antagonisme  dengan memiliki  zona  hambat  yang  sangat kuat  terhadap  pertumbuhan  bakteri patogen V. harveyi . Menurut penelitian  Zakiya et  al. (2012),  ada enam puluh tiga solat Aeromonas sp. tahan  terhadap  asam  nalidiksat  yang diperoleh dari udang impor.
Berdasarkan  analisis  filogenetik  dari urutan gyrB menunjukkan bahwa ada 18  bakteri  dari  jenis Aeromonas enteropelogenes , Aeromonas  caviae , dan Aeromonas sobria . Jenis Aeromonas  caviae yang  resisten terhadap  fluorokuinolon  memiliki sitotoksisitas  tertinggi  di  antara semua  strain  yang  diteliti.  Menurut penelitian  Tien-Tien et  al. (2019), isolasi,  karakterisasi  molekuler,  dan kerentanan  antimikroba Aeromonas spp.  diperoleh  dari  ikan  Kerapu Macan  ( Epinephelus  fuscoguttatus ) dan  ikan  Marble  Goby  ( Oxyeleotris marmoratus )  di  Sabah,  Malaysia. Dari hasil penelitian tersebut diketahui keberadaan 15 gen virulensi di Aeromonas dari  dua  spesies  ikan yang  sering  dikonsumsi,  yaitu  7  gen dari ikan kerapu macan laut ( Epinephelus  fuscoguttatus )  dan  8 gen dari ikan goby marmer air tawar
( Oxyeleotris marmoratus ) yang didapat  dari  pembenihan  akuakultur di  Sabah,  Malaysia.  Sebanyak  30
Aeromonas (17 A. caviae , 9 A. rivuli ,
4 A. dhakensis ) diidentifikasi menggunakan gen GCAT penargetan
PCR, polimorfisme panjang fragmen restriksi rpoD dan analisis filogenetik multi-lokus.  Semua  strain  tersebut resisten  terhadap  amoksisilin  dan cephalothin  serta  lima  strain  resisten terhadap berbagai obat. Sembilan gen virulensi  (lip,  ela,  eno,  fla,  aerA, hylA, dam, alt dan ser) terdapat pada A.  dhakensis ,  menunjukkan  potensi virulensi  spesies  ini  sebagai  patogen ikan.
Menurut  penelitian  Hao et  al.
(2014)  efek  pemberian  komposisi pakan Shewanella  haliotis , Bacillus cereus ,  dan Aeromonas  bivalvium , secara tunggal atau kombinasi terhadap  pertumbuhan,  kekebalan bawaan,  dan  ketahanan  penyakit udang ( Litopenaeus vannamei ) menunjukkan  bahwa  tiga  strain tunggal atau kombinasi yang digunakan untuk pakan udang ( Litopenaeus vannamei) dapat meningkatkan pertumbuhan, memiliki kekebalan bawaan terhadap Vibrio harveyi , dan dapat merangsang beberapa  respons  imun. Shewanella haliotis , Bacillus cereus dan Aeromonas bivalvium memiliki peran yang  menjanjikan  untuk  digunakan sebagai  probiotik  pada Litopenaeus vannamei . Ronghua Wu et al. (2019) menganalisis  aktivitas  antimikroba yeast  glycoprotein (YG)  terhadap A. caviae patogen yang diisolasi dari hati ikan Carassius  auratus  gibelio dan mengungkapkan  bahwa A.  caviae memiliki β-hemolisis ,  dan  median dosis  mematikan  untuk Carassius gibelio adalah 1,33 × 106 CFU / ml.
Adenilat kinase dari hati dan aktivitas piruvat  kinase  C.  gibelio dihambat pasca di infeksi A. caviae . Berdasarkan uji antimikroba menunjukkan bahwa A. caviae adalah organisme  yang  resisten  terhadap berbagai  obat  tetapi  dapat  dihambat oleh yeast  glycoprotein (YG)  secara in  vitro. Konsentrasi  penghambatan minimum  dari yeast  glycoprotein (YG)  adalah 83,3 mg / ml dan 166,7 mg / ml. Hasil sekuensing mikrobiota menunjukkan  bahwa  suplemen yeast glycoprotein (YG) dapat menurunkan kelimpahan Aeromonas dan meningkatkan keanekaragaman mikroba. Dengan demikian, A. caviae
dari C.  gibelio adalah  strain  bakteri yang  resisten  terhadap  berbagai  obat dan dapat dihambat secara signifikan oleh yeast  glycoprotein (YG)  secara in vivo dan in vitro.

## Kesimpulan dan Saran
Kesimpulan  yang  dapat  ditarik dari hasil identifikasi molekuler isolar bakteri kandidat biokontrol menunjukkan  spesies Aeromonas caviae dengan  nilai  keidentikan sebesar  99%.  Dan  berdasarkan  uji aktivitas  bakteri  didapatkannya  1 isolat  bakteri  kandidat  biokontrol dengan  kode  P1  yang  berasal  dari petak  tambak  udang  dan  memiliki zona hambat yang sangat kuat.
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk uji patogenisitas terhadap bakteri  terpilih  ( A.  caviae ),  uji mekanisme penghambatannya terhadap Vibrio spp, dan dibutuhkannya eksplorasi dari tambak udang yang lain.

## Daftar Pustaka
Babu, S. V., Triveni, S., Reddy, R. S., and  Sathyanarayana,  J.    2017.
Isolation  and  characterization of phosphat solubilizing microorganism from maize rhizosperic  soils. Bulletin  of Environment,  Pharmacology, and  Life  Science .    6(1):  194–
200. Castro-Escarpulli,  G.,  Figueras,  M.
J., Aguilera-Arreola, G.,
Soler,  L.,  Fernandez-Rendon,
E.,  Aparicio,  G.  O.,  Chacón,
M.  R.  2003.  Characterisation
of Aeromonas spp.  isolated from frozen fish in- tended for human consumption in Mexico. International Journal of Food Microbiology . 84 41– 49.
Chacon  MR,  Figueras  MJ,  Castro- Escarpulli G, Soler L, Guarro J.
2003. Distribution  of  virulence genes  in  clinical  and  virulence genes of Aeromonas spp.
Antonie  Van  Leeuwenhoek  84 (1): 269-27.
Hao Kai, JiaY.L, Fei L, Xiao L.L, Lin L,  Lei  X,  Gao-X.W.  2014. Efek  pemberian  komposisi makanan Shewanella haliotis , Bacillus cereus dan Aeromonas bivalvium , tunggal atau gabungan terhadap pertumbuhan, kekebalan bawaan, dan ketahanan  penyakit  udang ( Litopenaeus vannamei ). Aquaculture 428-429:141- 149. Hatmanti  Ariani,  2003. Penyakit bakterial pada budidaya krustasea serta cara
penanganannya . Jurnal Oseanografi . 3 : 1-10.
Noaman, N. H., Fattah, A., Khaleata, M.,  Zaky,  S.  H.  2014.  Factor affecting  antimicrobial  activity of  Synechococus  Leopoliensis. Journal  Microbial  Research , 159(4): 395-402.
Munti  S,  Esti  H.  2010.  Screening  of potential  probiotic  Vibrio  sp. agains vibriosis in the Litopenaeus  vannamei . Jurnal
Biosfera . 27 (2): 88-94. Puah, S. M., Khor, W. C., Kee, B. P., Tan,  J.  A.,  Puthucheary,  S.  D., & Chua, K.H. 2018. Development  of  a  species- specific  PCR-RFLP  targeting rpoD gene fragment for discrimination  of Aeromonas species. Journal  of  Medical Microbiology . 67 :1271–1278. Purwohadisantoso Kristian, Elok Zubaidah, Ella Saparianti. 2009. Isolasi bakteri asam laktat dari sayur kubis yang memiliki kemampuan penghambat bakteri patogen. Jurnal Teknologi  Pertanian .  Vol.  10 No. 1: 19-27.
Ronghua  Wu,  Junyu  Shen,  Dandan
Tian,  Jiaqian  Yu,  Tao  He, Jianhua  Yi,  and  Yun  Li.  2019.
A potential alternative to traditional antibiotics in aquaculture: yeast glycoprotein exhibits  antimicrobial  effect  in vivo and in vitro on Aeromonas caviae isolated from Carassius
auratus gibelio . Veterinary
Medicine and Science . 20: 1-10.
Shakir  Zakiya,  Saeed  Khan,  Kidon Sung,  Sangeeta  Khare,  Ashraf Khan, Roger Steele, and
Mohamed Nawaz. 2012. Molecular  characterization  of fluroquinolone resistant Aeromonas spp.  isolated  from imported shrimp. Journal Applied  and  Environmental Microbiology p. 8137-8141. Tien-tien  V.L.,  Suat-Moi  Puah., Ching-Kee K.H., Fui-fui Ching., Jin-Ai M.A.T., Savithri D.A.P.,  and  Ping-Chin  Lee. 2019. Isolation, molecular characterization and antimicrobial  susceptibility  of Aeromonas spp.  obtained  from Tiger  Grouper  ( Epinephelus fuscoguttatus ) and Marble Goby ( Oxyeleotris marmoratus )  fish  in  Sabah, Malaysia. Aquaculture Research. 22; 1-11.
Yano,  Y.,  Hamano,  K.,  Tsutsui,  I., Aue-umneoy,  D.,  Ban,  M.,  & Satomi, M.  2015.  Occurrence, molecular characterization, and antimicro- bial susceptibility of Aeromonas spp.  in  marine species  of  shrimps  cultured  at inland low salinity ponds. Food
Microbiology . 47 : 21–27.