Online: https://jurnal.fk.uisu.ac.id/index.php/ibnusina
Ibnu Sina: Jurnal Kedokteran dan Kesehatan-Fakultas Kedokteran Universitas Islam Sumatera Utara
ISSN 1411-9986 (Print) | ISSN 2614-2996 (Online)

## Artikel Penelitian
KADAR INTERFERON GAMMA (IFN- γ) MIKROENKAPSULASI MSC-CD34 + DENGAN
COATING: STUDI PRELIMINARI TERAPI SELULER MDR-TB
INTERFERON GAMMA LEVELS (IFN- γ) OF MICROENCAPSULATED MSC-CD34 + WITH

## COATING: PRELIMINARY STUDY OF MDR-TB CELLULAR THERAPY
Karina Mutiarani Halawa a , Ervina Julien Sitanggang a , Runggu Retno J. Napitupulu a , Christine Verawaty Sibuea a
a Fakultas Kedokteran Universitas HKBP Nommensen, Jl.  Sutomo No.4A, Medan, 20235, Indonesia
Histori Artikel

## A B S T R A K
Diterima: 23 Februari 2024 Revisi: 3 April 2024 Terbit: 1 Juli 2024 Multidrug  Resistant  Tuberculosis (MDR-TB)  merupakan  kondisi  di  mana  pasien tuberkulosis resistan terhadap minimal dua jenis obat anti tuberkulosis. Pasien MDR- TB  sering  mengalami  efek  samping  sehingga  terapi  alternatif  perlu  dipikirkan. Mesenchymal stem cell (MSC) dan sel punca hematopoietik CD34 + dianggap sebagai alternatif  potensial.  MSC  memiliki  sifat  imunomodulator,  sedangkan  CD34 + meningkatkan  angiogenesis.  Interferon  gamma  (IFN-γ)  merupakan  sitokin proinflamasi  yang  berperan  dalam  regulasi  imunitas  tubuh.  Penggunaan coating dengan  lisat  konsentrat  trombosit  dan  mikroenkapsulasi  dapat  meningkatkan efektivitas terapi. Penelitian ini bertujuan mengetahui rerata kadar IFN-γ pada medium kultur mikroenkapsulasi MSC dan CD34 + dengan coating lisat trombosit. Penelitian ini  merupakan penelitian  deskriptif observasional.  Sampel  MSC  dan  CD34 + yang digunakan  masing-masing  berasal  dari  tali  pusat  dan  darah  asal  tali  pusat  bayi  baru lahir. Kadar IFN-γ diukur menggunakan spektrofotometer dengan panjang gelombang 450nm. Hasil penelitian menunjukkan kadar IFN-γ yang disekresikan pada hari ke-2 berjumlah  0,0597  pg/mL,  mengalami  penurunan  pada  hari  ke-7  dan  hari  ke-14, kemudian meningkat pada hari ke-21 sebanyak 2,7337 pg/mL. Kata Kunci A B S T R A C T Multidrug Resistant Tuberculosis, Mesenchymal
Stem Cell, CD34 + , Coating, Mikroenkapsulasi
MDR-TB  refers  to  a  clinical  state  wherein  individuals  afflicted  with  tuberculosis exhibit  resistance  to  a  minimum  of  two  distinct  classes  of  anti-tuberculosis medications. Patients with MDR-TB frequently encounter adverse effects; therefore, alternate  treatment  options  must  be  investigated.  Potential  options  include  CD34+ hematopoietic  stem  cells  and  mesenchymal  stem  cells  (MSCs).  MSCs  exhibit immunomodulatory  characteristics,  whereas  CD34+  promotes  angiogenesis. Interferon  gamma  (IFN-γ)  is  a  cytokine  with  proinflammatory  properties  that  is involved  in  the  modulation of  the  immune  system.  Microencapsulation and  coatings containing  platelet  concentrate  lysate  have  the  potential  to  enhance  the  efficacy  of treatment. The objective of this research endeavor is to ascertain the mean levels of IFN-γ in microencapsulated culture media containing platelet lysate and CD34+ cells. This  research  was  descriptive  and  observational  in  nature.  The  MSC  and  CD34+ samples  utilized  originated  from  the  umbilical  cord  and  neonatal  cord  blood, respectively. The concentrations of IFN-γ were determined with a spectrophotometer set at 450 nanometers. The findings indicated that IFN-γ secretion peaked on day 2 at 0.0597 pg/mL, declined on days 7 and 14, and then rose by 2.7337 pg/mL on day 21.
Korespondensi
Tel.
08122419449
Email: ervinajulien @uhn.ac.id

## PENDAHULUAN
Multidrug Resistant Tuberculosis (MDR- TB)  adalah  keadaan  tubuh  pasien  penderita tuberkulosis resistan terhadap setidaknya 2 jenis Obat Anti Tuberkulosis (OAT) yaitu rifampisin dan  isoniazid.  Kasus  MDR-TB  di  dunia meningkat setiap tahun. World Health Organization  (WHO)  memperkirakan  terdapat 450.000  kasus  MDR-TB  dengan  angka kematian  sebesar  191.000  orang  di  seluruh dunia  pada  tahun  2021.  Jumlah  ini  meningkat sebesar  3,1%  dari  tahun  2020  dengan  jumlah 437.000  kasus.    Angka  penderita  MDR-TB sebanyak  206.030  kasus  pada  tahun  2019  dan sebanyak 186.883 kasus pada tahun 2018. 1
Indonesia  merupakan  salah  satu  dari  10 negara  dengan  kejadian  MDR-TB  tertinggi  di dunia.  Insiden  MDR-TB  di  Indonesia  pada tahun  2017  berjumlah  12.000  kasus,  terjadi peningkatan  di  tahun  2018  dengan  jumlah 24.000  kasus.  Berdasarkan  data  rekam  medis RSUP  Haji  Adam  Malik  Medan  ditemukan jumlah  kasus  MDR-TB  pada  tahun  2019 sebanyak 385 kasus, pada tahun 2021 sebanyak 202  kasus  dan  pada  tahun  2022  mengalami peningkatan sebanyak 492 kasus. 2
Sebagian besar pasien MDR-TB mengalami efek samping selama minum OAT. Efek  samping  yang  paling  sering  dirasakan pasien  selama  terapi  adalah  mual,  muntah, gangguan  tidur,  perubahan  warna  di  kulit, gangguan  jantung,  nyeri  badan,  pusing,  nyeri pada  bekas  injeksi,  keringat  berwarna  coklat dan rasa gelisah. 3 Berbagai efek samping yang dialami  oleh  pasien  tersebut  menyebabkan dibutuhkan  strategi  baru  mengembangkan terapi non-antibiotik alternatif untuk membasmi
patogen  infeksius.  Terapi  alternatif  MDR-TB dengan  toksisitas  yang  lebih  rendah,  durasi pengobatan  yang  tidak  lama  serta  harga  yang ekonomis sangat penting untuk ditemukan. 4
Terapi menggunakan sel punca mesenkimal  dan  sel  punca  hematopoietik CD34 + dipikirkan  sebagai  alternatif  dalam pengobatan MDR-TB. Mesenchymal Stem Cell (MSC ) merupakan sel stroma yang multipoten dan banyak ditemukan di jaringan tubuh, seperti di  sumsum  tulang,  plasenta,  jaringan  lemak, timus, jaringan tali pusat dan sebagainya. MSC mempunyai  kemampuan  untuk  diferensiasi menghasilkan  banyak  sel,  regenerasi  jaringan yang tinggi, dan merangsang neoangiogenesis. MSC  menghasilkan  faktor  anti  mikroba  untuk menyingkirkan Mycobacterium  tuberculosis (M.tb) melalui sekresi sitokin imunomodulator dan  anti  inflamasi  serta  memicu  respons  imun bawaan sehingga dapat memulihkan epitel paru yang  rusak. 4 CD34 + merupakan  salah  satu protein penanda permukaan yang umum dari sel punca hematopoietik. CD34 + memiliki kemampuan dalam meningkatkan angiogenesis dan meningkatkan perbaikan jaringan vaskular. Interaksi CD34 + dengan M.tb akan meningkatkan sekresi sitokin anti inflamasi dan memberikan  efek  terapeutik  pada  organ  paru yang telah terinfeksi. 5
Penelitian yang dilakukan oleh Shigemoto  dkk  pada  tahun  2017  menyatakan bahwa  sifat  imunomodulator  MSC  berperan terhadap  penyakit  diabetes  tipe  1  dengan menghambat  proses  inflamasi  pada  sel Langerhans  dan  meningkatkan  kadar  insulin plasma sehingga dapat menunda onset terjadinya  diabetes. 6 Penelitian  Marvasti  dkk
juga  mengungkapkan  jika  CD34 + berperan dalam  pengobatan  infark  miokard  dengan menstimulasi  angiogenesis  untuk  perbaikan jaringan  sehingga  dapat  meningkatkan  fungsi jantung. 7 Berdasarkan  penelitian-penelitian yang  telah  dilakukan  sebelumnya  terdapat kesamaan  bahwa  MSC  dan  CD34 + terbukti memiliki  efek  terapi  terhadap  berbagai penyakit.
Interferon  merupakan  salah  satu  sitokin proinflamasi  MSC  untuk  menjaga  imunitas tubuh 4 . Interferon dapat memengaruhi pertumbuhan dan diferensiasi CD34 + .
Interferon terbagi atas 3 jenis, yaitu IFN tipe I (- α, -β, -κ, - ε, -ω, -τ), tipe II (-γ) dan tipe III (-λ1- 4,  -£1-3).  IFN-γ  berperan  penting  dalam respons  imun  karena  dapat  mempengaruhi semua  aspek  penting  dimulai  dari  aktivasi  sel fagositik,  antara  lain  mengaktifkan  makrofag dan menariknya ke tempat infeksi,
menghasilkan oksida nitrat (NO) yang berperan penting  dalam  apoptosis  makrofag,  serta penginduksi dalam sel sintesis protein kompleks  histokompatibilitas  kelas  kedua (MHC  kelas  II).  Dengan  demikian,  IFN-γ merupakan  regulator  utama  respons  imun terhadap infeksi yang disebabkan oleh tuberkulosis. 8
Lisat  trombosit  mengandung growth factors ,  sitokin,  dan  sistem  regulator  yang terlibat  dalam sebagian  besar fungsi sel  dalam sistem  endokrin,  parakrin,  autokrin,  dan intrakrin. Growth  factors dan  sitokin  yang terkandung  dalam  lisat  trombosit  antara  lain PDGF, TGF (α–β), VEGF, EGF, FGF, CTGF, IGF-1,  HGF,  KGF,  Ang-1,  PF4,  SDF-1α,  dan TNF. 9 Sebuah  penelitian  menunjukkan  bahwa
MSC  yang  dikultur  dengan  lisat  trombosit memiliki viabilitas yang tinggi. 10
Mikroenkapsulasi  didefinisikan  sebagai  teknik untuk  melindungi  padatan,  cairan,  dan  gas dalam  kapsul  kecil  yang  melepaskan  isinya dengan  laju  yang  terkendali  dalam  jangka waktu  yang  lama.  Teknik  mikroenkapsulasi memiliki  potensi  untuk  meningkatkan  fungsi imunomodulator dari MSC. 11 Berdasarkan latar belakang  tersebut,  peneliti  tertarik  untuk melakukan  penelitian  dengan  tujuan  untuk mengetahui  kadar  IFN-γ  untuk  sediaan mikroenkapsulasi  MSC  dan  CD34 + dengan coating .

## METODE
Penelitian  ini  merupakan  penelitian deskriptif observasional dengan metode pengambilan data primer yang diukur langsung oleh peneliti.

## Isolasi Sel Punca Hematopoietik CD34 +
Sel punca hematopoietik CD34 + diisolasi dari  darah  tali  pusat  bayi  baru  lahir  dengan menggunakan  larutan  Ficoll-Hypaque  seperti pada  penelitian  sebelumnya.  Darah  tali  pusat dan  larutan  Ficoll-Hypaque  disentrifugasi hingga memperoleh buffy coat dan dilanjutkan dengan  pencucian  secara  bertahap  dengan menggunakan  PBS.  Pemisahan  sel  punca hematopoietik CD34 + dilakukan dengan menggunakan  kit  isolasi  EasySep  (Stem  Cell Technologies,  Cat.  17856)  sesuai  dengan protokol  produsen  kit.  Suspensi  disentrifugasi dan  pellet  diresuspensi  dengan  medium  kultur RPMI.  Penghitungan  sel  dilakukan  dengan menggunakan trypan  blue dan  kemurnian  sel
punca  hematopoietik  CD34 + dianalisis  dengan menggunakan flowsitometer.

## Kultur MSC
Kriopreservasi  MSC  asal  tali  pusat  dari penelitian sebelumnya di- thawing dan dikultur dalam  T flask dengan  menggunakan  medium kultur MEM  yang  disuplementasi  dengan  lisat konsentrat trombosit dan heparin. Pemeriksaan flowsitometri  CD  105,  CD90,  dan  CD73 dilakukan  untuk  menganalisis  kemurnian  sel punca mesenkimal berdasarkan kriteria International  Society  Cell  and  Gene  Therapy terhadap CD105, CD90, dan CD73. Sel punca mesenkimal  diinkubasi  dalam  inkubator  5% CO 2 pada suhu  37 0 C,  dipanen  dengan  TrypLE Select  (Gibco,  Cat.  50-591-419)  ketika konfluens 70 – 80 % dan disubkultur dalam T flask dengan densitas 5000 sel/cm 2 . Jumlah sel viabel  dihitung  dengan trypan  blue  exclusion test.
Mikroenkapsulasi  MSC  dan  Sel  Punca Hematopoietik CD34 +
Suspensi 1.600.000 MSC dalam 0,5 mL medium kultur MSC dan suspensi 800.000 sel punca  hematopoietik  dalam  0,25  mL  medium kultur CD34 + , dicampur dalam tabung 1,5 mL.
Total larutan sel adalah 0,75 mL dengan jumlah 12.000.000  sel  punca.  3  mL  larutan  alginat 1,8%  dicampurkan  dengan  0,75  mL  larutan yang  berisi  12.000.000  sel  punca.  Larutan alginat  1,8%  dan  suspensi  sel  diteteskan  ke dalam  CaCl  0,2M  dengan  menggunakan  spuit insulin.  Kemudian  dilakukan coating lisat konsentrat  trombosit:  200  mikro  kapsul disuspensikan  ke  dalam  2  mL  lisat  konsentrat trombosit  dan  heparin  dan  inkubasi  selama  10
menit. Kemudian kapsul dimasukkan ke dalam alginat  yang  sebelumnya  dipakai,  inkubasi selama 10 menit. Cuci dengan PBS sebanyak 3 kali dan dimasukkan ke dalam well yang berisi medium kultur. Mikroenkapsulasi MSC dan sel punca  hematopoietik  CD34 + dikultur  dalam medium kultur MSC selama 21 hari.

## Uji Kadar IFN-γ
Kadar IFN-γ diukur dengan menggunakan medium kultur
mikroenkapsulasi.  Analisis  dilakukan  pada  48 jam, hari ke-7, hari ke-14 dan hari ke-21. Time point tersebut  mempertimbangkan doubling time MSC  dalam  kultur  adalah  45-68  jam  dan konfluens  pada  hari  ke-10 sampai  dengan hari ke-14. 12 Kit  untuk  mengukur  kadar  IFN-γ menggunakan  IFN-γ  ELISA  Kit  (Quantikine, Cat.  DIF50C)  sesuai  dengan  petunjuk  dari produsen.  Sinyal  absorbansi  diukur  dengan spektrofotometer  pada  panjang  gelombang 260nm dan 280nm.
Penelitian ini dilakukan setelah mendapatkan  izin  dari  Komite  Etik  Penelitian Kesehatan  Fakultas  Kedokteran  Universitas Indonesia – RSUPN Dr Cipto Mangunkusumo dengan  No.  KET-732/UN2.F1/ETIK/PPM.00. 02/2022.

## HASIL
Pada  penelitian  ini  ditemukan  bahwa kadar  rata-rata  IFN-γ  pada  medium  kultur mikroenkapsulasi  MSC  dan  CD34 + dengan coating pada hari ke-2 sebanyak 0,0597 pg/mL, menurun  pada  hari  ke-7  dan  ke-14,  lalu meningkat  pada  hari  ke-21  menjadi  sebanyak 2,7337 pg/mL (Gambar 1).
Gambar 1. Hasil kadar IFN-γ mikroenkapsulasi MSC dan CD34+ dengan coating

## DISKUSI
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa kadar  IFN-γ  berfluktuasi  pada  setiap  hari pengamatan. Pada hari ke-2 jumlah IFN-γ yang disekresikan  pada  medium  mikroenkapsulasi dengan coating lisat  trombosit  relatif  sedikit.
Hal ini mungkin terjadi karena dipengaruhi oleh kondisi lingkungan mikro dari sel punca. Hal ini sejalan  dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh Dobroslav, dkk yang menyatakan bahwa MSC tidak  selalu  melepaskan  sitokin  IFN-γ  karena kondisi  lingkungan  mikro  serta  dipengaruhi oleh  reseptor Toll  Like  Receptor (TLR). 13
Lingkungan  mikro  yang  memengaruhi  sekresi IFN-γ  adalah  adanya  kontak  sel-ke-sel  yang melibatkan sel T dan sel NK. 14 TLR merupakan reseptor  yang  dapat  mengatur aktivasi respons imun  dan  respons  inflamasi  khususnya  sitokin proinflamasi guna melawan patogen. 15
Berdasarkan  analisis  data  kadar  IFN-γ mengalami penurunan pada hari ke-7 dan ke-14.
Sekresi IFN-γ dipengaruhi juga oleh sitokin lain yang disekresikan juga oleh MSC-CD34 + . MSC juga mensekresikan parakrin lain seperti IL-10 yang dapat meregulasi sekresi IFN-γ. Penelitian yang dilakukan Chitko-Mckown dkk menunjukkan  bahwa  IL-10  berperan  sebagai sitokin  anti-inflamasi  yang  menekan  sekresi IFN-γ  yang  merupakan  sitokin  proinflamasi. Adanya  IL-10  pada  kultur  sel  T  menurunkan kadar  mRNA  IFN-γ. 16 Pada  penelitian  yang dilakukan oleh Sheridan dkk ditemukan bahwa kadar  IFN-γ  meningkat  ketika  aktivitas  IL-10 ditekan oleh anti-IL-10. 17
Kadar IFN-γ yang mengalami peningkatan  pada  hari  ke-21  diduga  memiliki hubungan  dengan  metode  mikroenkapsulasi pada  kultur  sel.  Mikroenkapsulasi  dapat melindungi  sel  dari  kerusakan  akibat  faktor lingkungan  sehingga  dapat  meningkatkan  usia sel,  mengurangi  potensi  penguapan  dan  reaksi antar senyawa serta meningkatkan
0,0597
0 0 2,7337 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 Hari ke-2 Hari ke-7 Hari ke-14 Hari ke-21 Hari Kultur K ad ar IFN - γ (pg /m L )
bioavaibilitas  sel. 18 Hal  ini  sejalan  dengan penelitian  yang  dilakukan  oleh  Mao  dkk  yang menyatakan  bahwa  MSC  yang  dikapsulasi dapat meningkatkan fungsi imumodulator serta meningkatkan  usia hidup  sel. 11 Penelitian oleh Nurhayati  dkk  juga  menyatakan  bahwa mikroenkapsulasi  bersifat  permeabel  sehingga memungkinkan  terjadinya  pertukaran  nutrisi dan  sekresi  parakrin  yang  menyebabkan peningkatan viabilitas sel. 19
Pemberian coating lisat  trombosit  juga diperkirakan menyebabkan peningkatan sekresi IFN-γ melalui peningkatan viabilitas sel punca. Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Sibuea  dkk menyatakan  bahwa  sel  punca  yang  dikultur dengan  lisat  trombosit  terbukti  memiliki viabilitas  yang  tinggi. 10 Hasil  penelitian  ini menunjukkan bahwa kadar IFN-γ pada hari ke- 21  merupakan  konsentrasi  tertinggi  dengan jumlah rata-rata 2,7337 pg/mL.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan,  maka  didapatkan  hasil  kadar  IFN-γ yang  relatif  sedikit  dan  dijumpai  peningkatan. Kadar IFN-γ tertinggi  dijumpai  pada pengukuran hari ke-21 dengan jumlah rata-rata 2,7337 pg/mL.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  didukung  oleh  hibah  dari Kementerian Riset, Teknologi, dan Pendidikan Tinggi Republik Indonesia, Simlitabmas 2022.

## DAFTAR REFERENSI
1. Aziz KK. Pengobatan Tuberkulosis Paru dan Diabetes Melitus serta Pengaruhnya Terhadap  Risiko  Multi-Drug  Resistant Tuberculosis  (MDR-TB). Anatomica
Medical  Journal  Fakultas  Kedokteran . 2019;2(1):24.
2. Simorangkir  L,  Ginting  F, Rupang  ER,
Sinaga SP. Gambaran Faktor Penyebab Multidrug-Resistent Tuberkulosis
(MDR-TB) di RSUP Haji Adam Malik Medan  Tahun  2022. Elisabeth  Health Jurnal . 22AD;7(1):59-73.
doi:10.52317/ehj
3. Subchan  D,  Kunoli  FHY.  Gambaran Kejadian  Efek  Samping  Obat  (ESO) dengan  Kejadian  Putus  Obat  pada Pasien  TB  Paru  di  RSUD  Luwuk. Poltekita :  Jurnal  Ilmu  Kesehatan . 2022;16(3):345-351. doi:10.33860/jik.v16i3.1533
4. Battah  B.  Mesenchymal  Stem  Cells:
Potential Role Against Bacterial
Infection. J  Biosci  Med  (Irvine) .
2022;10(03):97-113.
doi:10.4236/jbm.2022.103011
5. Delgobo  M,  AGB  Mendes  D,  Kozlova E, et al. An evolutionary recent IFN/IL-
6/CEBP  axis  is  linked  to  monocyte expansion  and  tuberculosis  severity  in humans. Published online 2019. doi:10.7554/eLife.47013.001 6. Shigemoto-Kuroda T, Oh JY, Kim D ki,
et al. MSC-derived Extracellular Vesicles  Attenuate  Immune  Responses in  Two  Autoimmune  Murine  Models: Type 1 Diabetes and Uveoretinitis. Stem Cell  Reports .  2017;8(5):1214-1225. doi:10.1016/j.stemcr.2017.04.008
7. Marvasti TB, Alibhai FJ, Weisel RD, Li
RK.  CD34+  Stem  Cells:  Promising
Roles in Cardiac Repair and
Regeneration. Canadian  Journal  of Cardiology . 2019;35(10):1311-1321.
doi:10.1016/j.cjca.2019.05.037
8. Berns  SA,  Isakova  JA,  Pekhtereva  PI.
Therapeutic  Potential  of  Interferon-
Gamma  in  Tuberculosis. ADMET DMPK . 2022;10(1):63-73. doi:10.5599/admet.1078 9. Everts P, Onishi K, Jayaram P, Lana JF,
Mautner  K.  Platelet-rich  plasma:  New performance understandings and therapeutic considerations in 2020. Int J Mol Sci . 2020;21(20):1-36. doi:10.3390/ijms21207794
10. Sibuea CV, Pawitan JA, Antarianto R, et
al.  3D  Co-Culture  of  Hepatocyte,  a Hepatic  Stellate  Cell  Line,  and  Stem Cells  for  Developing  a  Bioartificial Liver  Prototype. International  Journal of  Technology .  2020;11(5):951-962. doi:10.14716/ijtech.v11i5.4317
11. Mao  AS,  Özkale  B,  Shah  NJ,  et  al.
Programmable  Microencapsulation  for Enhanced  Mesenchymal  Stem  Cell Persistence  and  Immunomodulation. Proc Natl Acad Sci U S A .
2019;116(31):15392-15397.
doi:10.1073/pnas.1819415116
12. Li  Y,  Zhang  C,  Xiong  F,  et  al.
Comparative  study  of  mesenchymal
stem  cells  from  C57BL/10  and  mdx mice. BMC Cell Biol . 2008;9. doi:10.1186/1471-2121-9-24
13. Kyurkchiev  D,  Bochev  I,  Ivanova-
Todorova  E,  et  al.  Secretion  of Immunoregulatory Cytokines
by
Mesenchymal Stem Cells. World J Stem
Cells . 2014;6(5):552-570. doi:10.4252/wjsc.v6.i5.552 14. Song  N,  Scholtemeijer  M,  Shah  K. Mesenchymal Stem Cell Immunomodulation:  Mechanisms  and Therapeutic Potential. Trends Pharmacol  Sci .  2020;41(9):653-664. doi:10.1016/j.tips.2020.06.009
15. Ma’at S. Toll-like Receptor (TLR) dan
Imunitas Natural. Indonesian Journal of
Clinical Pathology and Medical
Laboratory . 2018;15(3):111-116.
16. Chitko-Mckown  CG,  Ruef  BJ,  Rice- Ficht  AC,  Brown1  WC. Interleukin-10
Downregulates Proliferation and Expression  of  Interleukin-2  Receptor P55  Chain  and  Interferon-7,  but  Not Interleukin-2 or Interleukin-4, by Parasite-Specific  Helper  T  Cell  Clones Obtained  from  Cattle  Chronically Infected with Babesia Bovis or Fasciola Hepática . Vol 15. Mary Ann fiebert, Inc; 1995.
17. Sheridan  MP,  Browne  JA,  Doyle  MB,
Fitzsimons T, McGill K, Gormley E. IL- 10  suppression  of  IFN-γ  responses  in tuberculin-stimulated whole blood from Mycobacterium  bovis  infected  cattle.
Vet Immunol Immunopathol . 2017;189:36-42.
doi:10.1016/j.vetimm.2017.06.003
18. Pratama  R,  Abdassah  M,  Chaerunisaa AY.  Review :  Stabilitas  Bahan  Alam dalam Mikroenkapsulasi. Majalah
Farmasetika . 2021;6(3):213-219. doi:10.24198/mfarmasetika.v6i3.33172
19. Nurhayati  RW,  Cahyo  RD,  Pratama  G, et al. Alginate-Chitosan Microencapsulated  Cells for  Improving CD34+  Progenitor  Maintenance  and Expansion. Applied
Sciences .
2021;11(17). doi:10.3390/app11177887