Aktivitas Antibakteri Isolat Bakteri Endofit Asal Daun Ciplukan (Physalis angulata L.) Terhadap Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus

## Antibacterial Activity of Endophyte Bacteria Isolates From Ciplukan
Leafs ( Physalis angulata L.) Against to Escherichia coli and Staphylococcus aureus Bacteria
Heni Setianah 1, *, Ika Afifah Nugraheni 2 , Doddy Sulistiawan Wibowo 3 1,2,3 Universitas ‘Aisyiyah Yogyakarta, Jalan Ring Road Barat No. 63  Nogotirto, Gamping, Sleman , Yogyakarta, 55292, Indonesia
1 henisetianah997@gmail.com*, 2 ikaafifah@unisayogya.ac.id, 3 doddysw21@gmail.com * corresponding author
Tanggal Submisi: . 12 Agustus 2020, Tanggal Penerimaan: 2 Desember 2020

## Abstrak
Tanaman  ciplukan  memiliki  senyawa  yang  berpotensi  sebagai  antibakteri.  Potensi  senyawa antibakteri  kemungkinan  juga  dimiliki  oleh  bakteri  endofit.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengisolasi bakteri endofit dari daun ciplukan sebagai antibakteri terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus .  Metode  penelitian  meliputi  isolasi  bakteri  endofit, karakterisasi morfologi, dan uji aktivitas antibakteri. Sebanyak 8 isolat bakteri endofit berhasil diisolasi  dari  daun  ciplukan  dan  mampu  menghambat  pertumbuhan Staphylococcus  aureus dengan  diameter  zona  hambat  berkisar  antara  0,5-2  mm  dan  2  isolat  terhadap  pertumbuhan Escherichia coli dengan diameter sebesar 2 mm.
Kata  kunci :  Bakteri  endofit;  Daun  ciplukan  ( Physalis  angulata L.);  Aktivitas  antibakteri; Escherichia coli ; Staphylococcus aureus .

## Abstract
Ciplukan plants  has  compounds  that  have  the  potential  as  antibacterial.  The  potential  of antibacterial compounds may also be possessed by the endophytic bacteria. This study aims to isolate  endophyte  bacteria  from ciplukan leafs  that  have  the  potential  as  an  antibacterial  in against  of Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus bacteria.  The  research  method  is isolation  endophyte  bacteria,  morphological  characterization,  and  antibacterial  activity  test. Eight isolates endophyte bacterial were successfully isolated from ciplukan leafs and were able to inhibit the growth of Staphylococcus aureus bacteria with inhibition zone diameters ranging from 0,5-2 mm and 2 isolates against the growth of Escherichia coli with a diameters of 2 mm.
Keywords : Endophyte bacteria; Ciplukan leafs ( Physalia angulata L .); Antibacterial activity; Escherichia coli ; Staphylococcus aureus.

## PENDAHULUAN
Indonesia merupakan negara yang terkenal dengan tanaman herbalnya. Tanaman herbal di  Indonesia  terdapat  2500  jenis  yang  banyak  digunakan  sebagai  obat  dalam  pengobatan tradisional (Kemendag RI, 2014). Salah satu tanaman yang berpotensi sebagai obat herbal yaitu
tanaman  ciplukan  ( Physalis  angulata L . ).  Potensi  yang  dimiliki  tanaman  ciplukan  belum banyak diteliti dan dimanfaatkan oleh masyarakat. Hal tersebut dikarenakan tanaman ciplukan masih dianggap sebagai tanaman liar dan hama bagi tanaman budidaya.
Tanaman ciplukan adalah tanaman herbal tahunan yang memiliki tinggi sekitar 0,1-1 m  dengan  batang  berwarna  ungu  dan  hijau,  berusuk  bersegi  tajam,  berongga  dan  memiliki trikoma (Alkautsari dkk ., 2015).  Tanaman  ciplukan memiliki akar tunggang, bercabang dan berserabut serta berwarna putih hingga kecoklatan dan intensif menyebar di permukaan tanah (Susilowati, 2017). Buah ciplukan dilindungi oleh kelopak hijau dan tulang kelopak berwarna ungu. Buah ciplukan berbentuk bulat dan berwarna kuning (Susilowati, 2017). Daun ciplukan memiliki  ciri-ciri  berwarna  hijau,  tulang  daun  menyirip,  permukaan  daun  berambut,  bentuk helaian daun bulat telur dengan ujung runcing, dengan panjang 5-12 cm dan lebar 4-7 cm, tipis, cepat  layu,  berbau  langu  serta  bertepi  rata  atau  bergelombang-bergerigi  (Alkautsari  dkk ., 2015).
Secara umum, pemanfaatan tanaman ciplukan dikalangan masyarakat biasa digunakan dalam  pengobatan  tradisional.  Daun  ciplukan  memiliki  sifat  analgetik  dan  detoksikan (Alkautsari dkk ., 2015).  Hal  tersebut  disebabkan  adanya  kandungan  senyawa  metabolit sekunder  seperti  saponin,  flavonoid,  alkaloid, tanin,  glikosida  dan  steroid  dalaam  daun ciplukan  (Alkautsari dkk ., 2015).  Secara  umum,  kandungan  senyawa  daun  ciplukan  dapat digunakan berpotensi sebagai antibakteri, antikanker, antitumor, dan antioksidan (Osho et al ., 2010).  Melihat  banyaknya  manfaat  yang  terdapat  pada  daun  ciplukan,  besar  kemungkinan bakteri  endofit  yang  terdapat  pada  daun  ciplukan  memiliki  kemampuan  dalam  mensintesis senyawa yang sama seperti tanaman inangnya. Hal tersebut sesuai dengan penelitian Desriani dkk.,  (2014)  yang  menyatakan  bahwa  isolat  bakteri  endofit  yang  diperoleh  dari  tanaman binahong memiliki  aktivitas antibakteri yang sama dengan tanaman inangnya.
Bakteri endofit adalah bakteri yang hidup di dalam jaringan tanaman dan bersimbiosis mutualisme dengan tanaman inang di mana bakteri endofit hidup di dalam jaringan tanaman dengan membentuk koloni senyawa metabolit sekunder tanpa membahayakan tanaman inang (Fithriya, 2015). Beberapa jenis bakteri endofit terdapat pada tanaman tingkat tinggi dan dapat menghasilkan senyawa metabolit sekunder yang sama dengan tanaman inang. Beberapa jenis bakteri endofit diketahui mampu menghasilkan senyawa metabolit sekunder yang sama dengan tanaman inangnya (Nursanti & Suhartono, 2012). Senyawa metabolit sekunder yang dihasilkan dapat dimanfaatkan dalam bidang kesehatan maupun pertanian seperti antibakteri, antikanker, antifungi, antivirus, dan agen insektisida (Kusumawati dkk., 2014).
Senyawa  bioaktif  yang  dihasilkan  bakteri  endofit  mampu  menghasilkan  berbagai produk potensial, antara lain  bakteri Pseudomonas viridiflava yang berasal dari rumput hias Grass mampu  menghasilkan  Ecomycins  B  dan  C  sebagai  antibakteri . Selain  itu,  bakteri Streptomyces griseus dari tanaman mangrove Kandelia candel mampu menghasilkan asam p- aminoacetophenonic sebagai  antibakteri.  Bakteri Streptomyces NRRL  30562  dari  bunga Kennedia nigriscans menghasilkan  munumbisin  sebagai  antibiotik  dan Streptomyces NRRL 30566  yang  diperoleh  dari  bunga Grevilea  pteridefolia mampu  menghasilkan  kakadumisin sebagai antibiotik (Miller et al ., 1998; Guan et al ., 2005; castilo et al ., 2002 dalam Ryan et al ., 2008). Selain itu, senyawa antibakteri yang dihasilkan dapat diaplikasikan sebagai antibiotik, biofertilizer dan biokontrol (Purwanto dkk . , 2014 dan Sulistiyani & Puspita, 2016).
Isolasi senyawa antibakteri dari bakteri maupun mikroba endofit dianggap lebih efisien dibandingkan  dengan  mengekstrak  biomassa  tanaman  secara  langsung  (Kusumawati  dkk ., 2014). Pemanfaatan senyawa antibakteri dari ekstrak tanaman membutuhkan tanaman dalam jumlah  yang  banyak  serta  ketersediaan  tanaman  di  lingkungan  akan  menurun.  Senyawa antibakteri  dapat  diperoleh  dari  mikrobia  endofit  yang  mampu  menghasilkan  sejumlah senyawa antibakteri yang dibutuhkan, sehingga tidak harus mengekstrak senyawa antibakteri dari tanaman inangnya (Simarmata dkk., 2007 dalam Kusumawati dkk ., 2014).
Penelitian-penelitian  sebelumnya  telah  melakukan  eksplorasi  bakteri  endofit  dari tanaman  herbal  beserta  uji  aktivitasnya  terhadap  berbagai  bakteri  patogen.  Berdasarkan penelitian Kusumawati dkk. (2014), sebanyak tiga isolat bakteri endofit yang diperoleh dari tanaman miana ( Coleus scutellariodes L.) memiliki aktivitas antibakteri terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli (E.coli) dengan diameter zona hambat 1 mm, 2 mm dan 3,3 mm.  Lima belas isolat lainnya menunjukkan penghambatan terhadap S. aureus dengan diameter berkisar antara  1,5-7  mm  (Kusumawati  dkk ., 2014).    Purwanto  dkk . (2014)  menyatakan  bahwa  tiga isolat  bakteri  endofit  dihasilkan  dari  tanaman  sirih  hijau  ( Piper  betle L.) memiliki  aktivitas antibakteri terhadap pertumbuhan bakteri Staphilococcus aureus ( S. aureus) dengan diameter zona hambat 1 mm, 3 mm, dan 5 mm .
Sejauh ini, penelitian mengenai keberadaan bakteri endofit dari daun ciplukan beserta potensinya  belum  banyak  dilakukan.  Penelitian  yang  telah  dilakukan  hanya  sebatas  pada aktivitas antibakteri dari ekstrak daun ciplukan. Eksplorasi bakteri endofit dalam daun ciplukan sangat  diperlukan  untuk  mengetahui  keberagaman  dan  potensi  plasma  nutfah  yang  dimiliki Indonesia. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi bakteri endofit dari daun ciplukan yang berpotensi sebagai antibakteri dalam menghambat pertumbuhan bakteri E. coli dan S. aureus . Bakteri endofit dari daun ciplukan diharapkan mempunyai aktivitas antibakteri terhadap ketiga bakteri patogen tersebut sehingga dapat dikembangkan sebagai penghasil antibakteri baru.

## METODE PENELITIAN Subjek Penelitian
Rancangan  penelitian  yang  digunakan  yaitu  penelitian  eksperimen. Penelitian dilakukan  dengan  mengisolasi  bakteri  endofit  pada  daun  ciplukan  dan    mengetahui  daya hambat  bakteri  endofit  terhadap  bakteri S.  aureus, dan E.  coli. Penelitian  ini  dilakukan  di Laboratorium Mikrobiologi dan Imunologi, Universitas ‘Aisyiyah Yogyakarta.
Pengambilan  sampel  daun  ciplukan  dilakukan  pada  tiga  tanaman  ciplukan  yang tumbuh secara acak di lahan pertanian kacang-kacangan yaitu di Jalan Barak Gedhe, Dusun Margoluwih,  Seyegan,  Sleman,  DIY.  Pengkodean  dilakukan  sesuai  dengan  jumlah  tanaman ciplukan  dan  dibawa  ke  Laboratorium  Mikrobiologi  dan  Imunologi,  Universitas  ‘Aisyiyah Yogyakarta untuk dilakukan pengujian.

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah autoklaf, oven, petridis, tabung reaksi, gelas ukur, gelas beker, erlenmeyer, jarum ose, mikropipet, yellow tip , white tip, plastik wrap, pinset, drigalskispatel, tisu,  kapas,  aluminium  foil,  kertas  saring,  pelubang  kertas,  lampu bunsen, timbangan analitik, hotplate, penggaris, inkubator, dan lemari pendingin.
Bahan yang digunakan pada penelitian ini antara lain, daun ciplukan, Triptic Soy Agar (TSA), Triptic  Soy  Broth (TSB),  kandistatin,  natrium  hipoklorit  5,25%,  etanol  70%, kloramfenikol, aquades steril, bakteri patogen S. aureus, dan E. coli.

## Metode Penelitian Isolasi Bakteri Endofit
Daun  ciplukan  muda  digunakan  sebagai  sumber  bakteri  endofit  karena  mengandung senyawa metabolit sekunder lebih banyak dibandingkan daun tua (Putri dkk., 2018). Sampel daun ciplukan dicuci dengan air mengalir hingga bersih untuk menghilangkan kotoran maupun organisme epifit. Daun ciplukan yang telah dicuci kemudian diambil masing-masing sebanyak dua  buah  dan  dilakukan  proses  sterilisasi  permukaan.  Proses  sterilisasi  permukaan  sampel dilakukan dengan merendam daun ke dalam larutan etanol 70% selama 1 menit. Setelah itu, cairan perendam dibuang dan diganti dengan larutan Natrium hipoklorit 5,25% lalu didiamkan selama  5  menit.  Cairan  perendam  dibuang  kembali  dan  sampel  dibilas  dengan    etanol  70%
selama  1  menit  lalu  cairan  perendam  diganti  dengan    aquades  steril  selama  30  detik  yang dilakukan selama 2 kali (Kumala & Ainun, 2014).
Proses  isolasi  bakteri  endofit  mengikuti  metode  penelitian  Purwanto  dkk.,  (2014) dengan  modifikasi.  Daun  ciplukan  yang  sudah  steril  dipotong  menggunakan  pisau  steril sepanjang 1-2 cm dan ditumbuhkan dalam cawan petri yang berisi media TSA menggunakan pinset steril. Media TSA yang digunakan ditambahkan larutan kandistatin (0,02% b/v) 40 µl sebagai  antifungi.  Proses  penumbuhan  daun  ciplukan  dilakukan  dengan  cara  menekan  daun hingga  mengeluarkan  cairan  yang  berada  di  dalam  sampel.  Daun  ciplukan  yang  sudah ditumbuhkan kemudian diinkubasi pada suhu ruang selama 24-72 jam dan diamati jika terdapat koloni yang tumbuh.

## Pemurnian Bakteri Endofit
Medium yang digunakan untuk pemurnian bakteri endofit yaitu medium TSA. Medium TSA yang digunakan untuk pemurnian ditambahkan larutan Kandistatin sebanyak 0,02% b/v (40 µl). Bakteri endofit yang tumbuh pada medium TSA dimurnikan pada media padat dalam petridis dan media agar miring. Isolat bakteri diinkubasi pada suhu 25 o C-28 o C selama 24-72 jam dan diamati morfologi koloni isolat bakteri endofit. Koloni yang memiliki warna, bentuk, tepian dan elevasi yang sama dianggap sebagai isolat yang sama (Wondal et al., 2019). Setiap koloni  bakteri  dipindahkan  ke  medium  TSA  dengan  metode streak  kuadran dan  diinkubasi selama 24-72 jam. Isolat bakteri endofit disimpan pada media miring untuk digunakan sebagai stock kultur (kultur stok) (Nursulistyarini dkk., 2013).

## Karakterisasi Mofologi
Karakterisasi  morfologi  isolat  bakteri  endofit  yang  telah  diperoleh  dapat  diketahui berdasarkan  beberapa  kriteria  antara  lain,  bentuk  koloni  berupa  titik-titik,  bulat,  tidak beraturan, seperti akar, seperti kumparan dan berbenang. Selain itu, permukaan/elevasi koloni juga  diamati  berupa  bentuk  datar,  naik,  cembung,  dan  umbonatus.  Kriteria  lainnya  yang menjadi acuan untuk mengetahui morfologi bakteri yaitu tepian koloni berupa tepian mulus, lobatus, bergelombang, bergerigi, dan filamentus. Warna koloni juga menjadi kriteria dalam menentukan  morfologi  bakteri  yaitu  dengan  warna  keputih-putihan,  kelabu,  kekuning- kuningan atau hampir bening.

## Uji Aktivitas Antibakteri Terhadap Bakteri E.coli dan S.aureus
Uji  aktivitas  antibakteri  pada  isolat  bakteri  endofit  daun  ciplukan  dilakukan menggunakan  metode  Oktavia  &  Sri,  (2018)  dengan  modifikasi.  Isolat  bakteri  endofit  dan bakteri patogen di regenerasikan dalam medium TSA pada suhu 28 o C selama 48 jam. Koloni bakteri endofit dan bakteri patogen yang berumur 48 jam dilakukan peremajaan pada medium TSB 50 ml dan diinkubasi pada pada suhu 37 o C selama 48 jam. Petridish yang berisi media TSA  padat  dibagi  menjadi  4  bidang  untuk  4  jenis  isolat  bakteri  endofit.  Sebanyak  100  µl suspensi bakteri patogen dimasukan ke dalam cawan petri yang berisi media TSA dan diratakan menggunakan drigalskispatel .  Sebanyak  25  µl  isolat  bakteri  endofit  diinokulasikan  pada masing-masing  kertas  cakram.  Pada  penelitian  ini,  kloramfenikol  25  µl  digunakan  sebagai kontrol positif dan aquades steril 25 µl sebagai kontrol negatif juga diinokulasikan pada kertas cakram.  Isolat  bakteri  endofit  selanjutnya  diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  24  jam.  Zona hambat diamati setelah inkubasi 24 jam.

## Metode Pengumpulan dan Analisis Data
Data diperoleh dengan cara mengumpulkan hasil pengujian yang dimulai dari data hasil isolasi  bakteri  endofit,  pengamatan  morfologi  hingga  data  hasil  uji  aktivitas  antibakteri terhadap bakteri patogen. Data hasil isolasi bakteri endofit digunakan untuk mengetahui isolat
bakteri endofit yang diperoleh dari daun ciplukan. Data pengamatan morfologi bakteri endofit untuk  mengetahui  morfologi  masing-masing  bakteri  endofit.  Data  uji  aktivitas  antibakteri untuk mengetahui zona hambat yang dihasilkan bakteri endofit terhadap bakteri patogen.
Analisis  data  dilakukan  dengan  melihat  hasil  ulangan  pengujian  aktivitas  antibakteri pada  masing  masing  isolat  bakteri  endofit.  Data  hasil  pengujian  aktivitas  antibakteri  yang diperoleh  dianalisis  dengan  mencari  rata-rata  ( mean )  dari  setiap  ulangan  pada  setiap  isolat kemudian dilihat nilai standar deviasi (SD) dari rerata masing-masing isolat.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Isolat Bakteri Endofit Daun Ciplukan
Daun  ciplukan  digunakan  sebagai  sumber  isolat  bakteri  endofit  karena  diketahui mengandung senyawa antibakteri. Daun ciplukan diperoleh dari 3 tanaman ciplukan (Gambar 1)  yang berasal  dari areal  pertanian di  Jalan Barak Gedhe, Dusun Margoluwih, Kecamatan Seyegan,  Kabupaten  Sleman,  DIY.  Penggunaan  tiga  tanaman  ciplukan  bertujuan  untuk memperoleh  keragaman  jenis  bakteri  endofit  yang  berbeda  pada  ketiga  tanaman  ciplukan. Sampel  daun  ciplukan  yang  digunakan  yaitu  daun  yang  berumur  muda.  Hal  tersebut dikarenakan  daun  muda  memiliki  kandungan  senyawa  metabolit  sekunder  yang  tinggi dibandingkan  dengan  daun  tua  (Putri  dkk.,  2018).  Menurut  Irdawati  dkk . (2017),  tanaman dengan  jenis  yang  sama  memiliki  kandungan  bakteri  endofit  yang  berbeda.  Hal  tersebut dipengaruhi  oleh  faktor  biotik  maupun  abiotik  (Amaria  dkk ., 2019).  Bakteri  endofit  yang berasosiasi  pada  tanaman  dipengaruhi  oleh  genotipe  tanaman,  umur  tanaman  dan  bagian tanaman yang digunakan sebagai  sumber bakteri endofit (Munif,  2012 dalam Amaria  dkk ., 2019).  Bakteri  endofit  yang  diperoleh  pada  bagian  tanaman  yang  berbeda  maka  akan menghasilkan  jenis  bakteri  endofit  yang berbeda pula (Amaria  dkk ., 2019).  Bakteri  endofit hidup  di  dalam  pembuluh  vaskuler,  bagian  akar,  batang,  daun  dan  buah.  Hal  tersebut dikarenakan bakteri endofit masuk ke dalam jaringan tanaman melalui akar, bunga, batang, daun,  kotiledon  (Purwanto  dkk.,  2014)  serta  dengan  melakukan  penetrasi  melalui  luka  dan stomata (Compant et al , 2010).
Gambar 1. Sampel daun ciplukan; (DA1) daun ciplukan sampel 1, (DA2) daun ciplukan sampel 2 dan (DA3) daun ciplukan sampel 3.
Tahapan  isolasi  bakteri  endofit  daun  ciplukan  diawali  dengan  proses  sterilisasi permukaan.  Sterilisasi  permukaan  bertujuan  untuk  menghilangkan  kotoran  serta mikroorganisme dari permukaan tanaman (Hermawati, 2016). Proses pra sterilisasi dilakukan dengan  pencucian  sampel  daun  dengan  air  mengalir  untuk  menghilangkan  kotoran  dan oraganisme epifit yang menempel  pada permukaan tanaman (Hafsari & Isma, 2013). Proses sterilisasi  permukaan  menggunakan  alkohol  70%  dan  larutan  matrium  hipoklorit  5,52% sebagai desinfektan untuk dekontaminasi permukaan tanaman. Kombinasi larutan alkohol dan natrium hipoklorit merupakan kombinasi yang sesuai karena memiliki aktivitas yang berbeda. Alkohol  dapat  mendenaturasikan  protein  dengan  cara  dehidrasi  dan  menginaktifkan  enzim serta  mendenaturasi  protein  lebih  cepat  (Rutala et  al., 2008).  Sedangkan  natrium  hipoklorit bekerja  dengan  mengoksidasi  secara irreversible gugus  sulfihifril  pada  enzim  serta mengganggu fungsi metabolik dari sel bakteri (Rutala et al., 2008). Tahap selanjutnya yaitu
dilakukan pembilasan dengan aquades steril untuk membersihkan mikroorganisme yang mati (Hafsari  &  Isma,  2013),  menghilangkan  sisa  alkohol  dan  serta  NaOCl  yang  menempel  di permukaan tanaman (Pratiwi, 2015).
Bakteri endofit daun ciplukan mulai menunjukkan pertumbuhan setelah daun ciplukan diinokulasi pada media TSA selama 48 jam. Pernyataan ini didukung oleh Jalgaonwala et al . (2010) yang menyatakan bahwa waktu inkubasi pertumbuhan bakteri endofit minimal 48 jam untuk  memastikan  bahwa  bakteri  yang  tumbuh  merupakan  bakteri  endofit  daun  ciplukan. Bakteri endofit yang dihasilkan dari daun ciplukan tumbuh di sekitar medium karena adanya penyebaran  cairan  serta  tumbuh  di  sekitar  sampel.  Hal  tersebut  disebabkan  karena  bakteri endofit  memperoleh  nutrien  dari  media  pertumbuhan.  Media  pertumbuhan  yang  digunakan untuk mengisolasi bakteri endofit pada penelitian ini adalah media TSA. Media ini merupakan media  yang  sudah  diperkaya  yang  terdiri  atas casein , soy  meal,  sodium  chlorid dan  agar. Bakteri  endofit  dapat  hidup  pada  media  TSA  dikarenakan  sifat  media  yang  kompleks  dan memiliki  komposisi  yang  mirip  seperti  kondisi  di  dalam  tanaman.  Selain  itu,  penambahan larutan  kandistatin  0,02%  pada  media  TSA  bertujuan  untuk  mengoptimalkan  hasil  isolasi bakteri  endofit  (Kumala  &  Siswanto,  2007  dalam  Purwanto  dkk.,  2014).  Kandistatin merupakan  antifungi yang berfungsi untuk  menghambat pertumbuhan jamur dalam medium TSA (Djajusman dkk ., 2014).
Berdasarkan hasil penelitian, bakteri endofit yang berhasil diisolasi dari daun ciplukan sebanyak  8  bakteri  endofit  yaitu  5  isolat  dari  (DA1)  dan  3  isolat  dari  (DA2)  (Tabel  1). Sedangkan  pada  DA3  tidak  menunjukkan  adanya  petumbuhan  bakteri  endofit.  Menurut Yandila  dkk . (2018),  jumlah  populasi  bakteri  endofit  pada  suatu  jaringan  tanaman  berbeda- beda. Hal tersebut disebabkan karena populasi bakteri endofit dipengaruhi oleh jenis jaringan, waktu  pengambilan  sampel  dan  umur  tanaman  (Yandila  dkk ., 2018).  Keberadaan  bakteri endofit pada tanaman muda lebih banyak dibagian akar sehingga dapat memacu pertumbuhan dan meningkatkan perkembangan tanaman terutama pada fase vegetatif (Puspita dkk ., 2018). Hal tersebut disebabkan karena bagian akar merupakan jalan utama bagi bakteri endofit untuk masuk ke dalam jaringan tanaman. Bakteri endofit akan menyebar ke seluruh bagian tanaman pada  saat  tanaman  sudah  dewasa  yaitu  pada  fase  generatif  (Puspita  dkk ., 2018).  Hal  ini disebabkan oleh adanya  aliran produk fotosintesis yang berasal  dari daun ke seluruh bagian tanaman  melalui  floem,  sehingga  dapat  dimanfaatkan  oleh  bakteri  endofit  sebagai  sumber nutrisi (Lathifah, 2017).
Tabel 1. Populasi dan morfologi koloni isolat bakteri endofit daun ciplukan
Kode Isolat Morfologi Koloni Warna Koloni Bentuk Elevasi Tepian DA1 (1) Kuning Bulat Cembung Mulus DA1 (2) Krem Bulat Cembung Mulus DA1 (3) Orange Bulat Cembung Mulus DA1 (4) Putih Bulat Cembung Mulus DA1 (5) Orange Bulat Cembung Mulus DA2 (1) Orange Bening Bulat Datar Mulus DA2 (2) Krem Bulat Cembung Mulus DA2 (3) Kuning Bulat Cembung Mulus
Keterangan : DA1=daun ciplukan sampel 1, DA2=daun ciplukan sampel 2
Isolat  bakteri  endofit  yang diperoleh dari  daun  ciplukan diamati secara  makroskopik untuk melihat perbedaan dari setiap isolat. Koloni bakteri endofit yang diperoleh dari bagian daun  ciplukan  memiliki  morfologi  koloni  yang  bervariasi  yaitu  memiliki  morfologi  dengan warna  krem,  orange,  orange  bening,  krem  bening,  kuning  dan  putih  (Tabel  1).  Sedangkan bentuk  koloni  bakteri  endofit  yaitu  bulat  dengan  elevasi  cembung  dan  datar.  Tepian  koloni
bakteri endofit menunjukkan  bentuk tepian yang mulus. Karakteristik morfologi yang beragam dari masing-masing koloni berhubungan dengan genus dan spesies dari masing-masing bakteri.
Menurut  Bhore  and  Sathisha  (2010),  keragaman  jenis  bakteri  endofit  pada  suatu tanaman dipengaruhi oleh kondisi  pertumbuhan tanaman. Tanaman dengan jenis  yang sama dapat memiliki jenis bakteri endofit yang berbeda. Hal tersebut dikarenakan beberapa tanaman memiliki  bakteri  endofit  yang  spesifik  dan  khas  menghuni  tanaman  tersebut  (Bhore  and Sathisha,  2010).  Warna  koloni  bakteri  yang  bervariasi  disebabkan  karena  adanya  pigmen pigmen karatenoid, antosianin, melanin, tripitilmethenes dan fenazin yang dihasilkan bakteri endofit. Keberadaan pigmen pada suatu bakteri dapat dilihat pada warna koloni bakteri (Savitri, 2006 dalam Safrida dkk ., 2012).

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji  aktivias  antibakteri  dilakukan  pada  kedelapan  isolat  bakteri  endofit  untuk mengetahui  isolat  bakteri  yang  potensial  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri  patogen. Isolat  bakteri  endofit  diuji  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri  gram  positif  ( S.aureus )  dan gram  negatif  ( E.coli ).  Pemilihan  dua  jenis  bakteri  patogen  dalam  penelitian  ini  berdasarkan alasan bahwa bakteri-bakteri tersebut lazim digunakan sebagai model untuk pengujian senyawa aktif baru dan bersifat patogen bagi manusia. Bakteri E.coli dapat menimbulkan infeksi saluran kencing,  diare  dan  meningitis  (Nugraheni,  2019). Selain  itu,  kedua  bakteri  patogen  juga digunakan untuk membandingkan kemampuan dari dua jenis bakteri yang berbeda yaitu bakteri gram negatif dan gram positif .
Tabel 2. Diameter zona hambat yang terbentuk pada uji aktivitas antibakteri isolat bakteri endofit
terhadap bakteri patogen. Kode Isolat Diameter Zona Hambat (mm) Zona Hambat ( S.aureus ) Zona Hambat ( E.coli ) DA1 (1) 1 mm 2 mm DA1 (2) 1 mm - DA1 (3) 2 mm - DA1 (4) 2 mm 2 mm DA1 (5) 0,5 mm - DA2 (1) 1 mm - DA2 (2) 2 mm - DA2 (3) 0,5 mm - Kontrol Positif 30 mm 20 mm Keterangan : DA1=daun ciplukan sampel 1, DA2=daun ciplukan sampel 2
Berdasarkan hasil pengujian aktivitas antibakteri, sebanyak 8 isolat bakteri endofit daun ciplukan  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri S.aureus dengan  diameter  zona  hambat berkisar  antara  0,5  hingga  2  mm . Sedangkan  bakteri  endofit  yang  mampu  menghambat pertumbuhan bakteri E.coli hanya dua isolat yaitu DA1 (1) dan DA1 (4) dengan diameter zona hambat sebesar 2 mm (Tabel 2) . Diameter zona hambat yang dihasilkan isolat bakteri endofit termasuk  dalam  kategori  lemah  yaitu  berkisar  antara  0,5  mm  hingga  2  mm.  Isolat  bakteri endofit DA1 (1) dan DA1 (4) mampu menghambat pertumbuhan kedua bakteri patogen. Hal tersebut menandakan bahwa senyawa antibakteri yang dihasilkan oleh bakteri endofit DA1 (1) dan DA1 (4) memiliki spektrum yang luas. Bakteri endofit dikatakan memiliki spektrum yang luas apabila dapat menghambat pertumbuhan bakteri gram negatif dan gram positif (Pratiwi, 2015).
Terbentuknya  zona  hambat  di  sekitar  koloni  isolat  bakteri  endofit  mengindikasikan adanya  senyawa  antibakteri  yang  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri  patogen.
Keragaman  zona  hambat  yang  dihasilkan  bakteri  endofit  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor antara  lain  kecepatan  difusi  senyawa  antibakteri  ke  dalam  media  serta  interaksinya  dengan bakteri  patogen,  kecepatan  pertumbuhan  bakteri  endofit,  dan  sensitifitas  bakteri  patogen terhadap senyawa antibakteri (Setyati dkk ., 2016). Selain itu, beberapa faktor lain yang juga dapat mempengaruhi terbentuknya zona hambat yaitu perbedaan struktur sel bakteri patogen, dan  perbedaan  jenis  dan  jumlah  senyawa  antibakteri  yang  dihasilkan  bakteri  endofit (Kusumawati  dkk ., 2014).  Penelitian  serupa  juga  dilakukan  oleh  Kusumawati  dkk . (2014), dimana sebanyak 13 bakteri endofit yang diperoleh dari tanaman miana mampu menghambat pertumbuhan bakteri E.coli dengan diameter zona hambat berkisar antara 1-3 mm dan sebanyak 15 isolat bakteri endofit mampu menghambat pertumbuhan bakteri S.aureus dengan diameter zona hambat antara 1,5-7 mm (Kusumawati dkk ., 2014).
Gambar 2. Zona hambat isolat bakteri endofit terhadap S.aureus dan E.coli. (SA) : S.aureus dan (EC) : E.coli . Isolat  dengan  kode  DA1  (1-8)  menunjukkan  zona  hambat  terhadap S.aureus dan  isolat  DA1(1)  dan  DA2(2) terhadap E.coli serta kontrol positif kloramfenikol (K+) terhadap E.coli dan S.aureus
Isolat  bakteri  endofit  yang  memiliki  populasi  tertinggi  dalam  menghambat pertumbuhan bakteri patogen yaitu sebanyak 8 isolat bakteri endofit terhadap bakteri S. aureus. Sedangkan 2 isolat hanya mampu menghambat bakteri E.coli (Gambar 2). Adanya perbedaan jumlah bakteri yang mampu menghambat bakteri patogen dikarenakan adanya perbedaan zona hambat yang dihasilkan pada bakteri Gram positif maupun Gram negatif. Terbentuknya zona hambat yang berbeda pada masing-masing bakteri endofit terhadap bakteri patogen disebabkan jumlah bakteri patogen yang berlebihan. Jumlah bakteri patogen yang berlebihan menyebabkan senyawa  metabolit  sekunder  yang  dihasilkan  bakteri  endofit  tidak  signifikan  terhadap pertumbuhan bakteri patogen (Fithriyah, 2015). Selain itu, perbedaan struktur dinding sel pada kedua  bakteri  patogen  juga  menyebabkan  adanya  perbedaan  sensivitas  bakteri  patogen terhadap senyawa antibakteri (Sari, 2018).
Bakteri  Gram  positif  cenderung  lebih  sensitif  terhadap  senyawa  antibakteri.  Hal tersebut dikarenakan struktur dinding sel bakteri Gram positif lebih sederhana dibandingkan struktur dinding sel bakteri Gram negatif. Perbedaan struktur dinding sel pada kedua bakteri patogen  tersebut  dapat  memudahkan  senyawa  antibakteri  untuk  masuk  ke  dalam  sel  bakteri gram positif secara maksimal (Fithriyah, 2015). Struktur dinding sel bakteri Gram positif terdiri dari 2-3 lapis membran sitoplasma yang terusun dari asam teikoat dan asam teikourenik berupa polimer yang larut dalam air sehingga lebih mudah untuk ditembus senyawa antibakteri dari luar (Vitasari, 2012). Sedangkan struktur dinding sel bakteri Gram negatif memiliki susunan dinding sel yang lebih kompleks karena mengandung lebih sedikit peptidoglikan, tetapi di luar lapisan  tersebut  terdapat  tiga  polimer  yaitu  lipoprotein,  selaput  luar  dan  lipopolisakarida (Jawetz et al .,2005 dalam Sari, 2018).
Bakteri endofit yang mampu menghasilkan aktivitas antibakteri pada bakteri patogen dikarenakan  adanya  senyawa  metabolit  sekunder  yang  pada  daun  ciplukan  yang  berpotensi sebagai antibakteri. Aktivitas antibakteri dalam menembus struktur dinding sel bakteri yaitu dengan menghambat sintesis peptidoglikan yang mengaktivasi enzim lisis serta menghasilkan lisis  pada  lingkungan  yang  isotonik  (Sari,  2018).  Menurut  Masfufah  dkk.  (2019),  bakteri endofit  B.E2  daun  tanaman  sukun  ( Artocarpus  altilis )  mampu  menghasilkan  senyawa metabolit sekunder golongan flavonoid, alkaloid dan saponin. Ketiga senyawa tersebut mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri Gram  negatif  maupun  positif  dikarenakan  memiliki kemampuan sebagai antibakteri (Masfufah dkk., 2019).
Salah  satu  mekanisme  senyawa  antibakteri  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri patogen yaitu dengan cara mendenaturasi protein sel bakteri (Rijayanti, 2014). Bakteri patogen akan membentuk ikatan hidrogen dengan senyawa antibakteri. Ikatan hidrogen yang terbentuk antara  fenol  dan  protein  akan  mengakibatkan  struktur  protein  bakteri  menjadi  rusak.  Ikatan hidrogen  tersebut  kemudian  akan  mempengaruhi  permeabilitas  dinding  sel  bakteri  dan membran  sitoplasma  karena  tersusun  dari  protein.  Permeabilitas  dinding  sel  dan  membran sitoplasma  yang  terganggu  akan  menyebabkan  ketidakseimbangan  makromolekul  dan  ion dalam  sel  bakteri  (Rijayanti,  2014).  Hal  tersebut  menyebabkan  struktur  lapisan  dinding  sel bakteri tidak terbentuk secara utuh dan sel tidak dapat menahan tekanan osmotik yang tinggi sehingga akan mengalami lisis bakteri (Isniyetty, 2010).
Koramfenikol  merupakan  salah  satu  antibiotik  yang  digunakan  sebagai  pembanding untuk  melihat  potensi  bakteri  endofit  antibiotik  yang  memiliki  potensi  sebagai  antibakteri. Menurut  Wibowo  &  Yuliani  (2015),  kloramfenikol  merupakan  antibiotik  yang  memiliki spektrum luas dan tingkat sensivitas yang tinggi terhadap bakteri Gram positif maupun Gram negatif.  Diameter  zona  hambat  yang  dihasilkan  antibiotik  kloramfenikol  termasuk  dalam kategori sangat kuat terhadap bakteri  Gram positif yaitu S. aureus dengan diameter diameter zona hambat 30 mm dan kategori penghambatan kuat dengan diameter 20 mm terhadap bakteri Gram  negatif  yaitu  bakteri E.  coli .  Berdasarkan  perbedaan  diameter  zona  hambat  yang dihasilkan  dapat  dikatakan  bahwa  antibiotik  kloramfenikol  memiliki  aktivitas  antibakteri spektrum luas dengan kekuatan daya hambat yang tinggi dalam menghambat dan membunuh bakteri, baik kelompok Gram positif maupun Gram negatif. Menurut Levinson (2004 dalam Alviana,  2016),  antibiotik  kloramfenikol  mampu  mengikat  subunit  ribosom  50S  sel  bakteri target  dan  menghalangi  aktivitas  enzim peptidyltransferase sehingga  terjadi  hambatan pembentukan  ikatan  peptida  dan  biosintesis  protein. Antibiotik  kloramfenikol  jug  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  gram  positif  secara  maksimal  karena  memiliki  struktur dinding sel yang sederhana dibandingkan dengan bakteri gram negatif (Vitasari, 2012).

## SIMPULAN
Bakteri  endofit  berhasil diisolasi  dari daun  ciplukan dan diperoleh sebanyak 8 isolat bakteri endofit. Berdasarkan uji aktivitas antibakteri, diperoleh 8 isolat isolat bakteri endofit yang  memiliki  potensi  sebagai  antibakteri  terhadap  bakteri S.aureus dan  2  isolat  terhadap bakteri E.coli .  Isolat DA1 (3), DA1 (4) dan DA2 (2) memiliki daya hambat tertinggi terhadap bakteri S.aureus. Sedangkan isolat yang memiliki daya hambat tertinggi terhadap bakteri E.coli yaitu DA1 (1) dan DA1 (4). Isolat bakteri endofit DA1 (1) dan DA1 (4) mampu menghambat pertumbuhan kedua bakteri patogen dengan diameter zona hambat berkisar antara 1-2 mm.

## SARAN
Penelitian  lebih  lanjut  perlu  dilakukan  untuk  mengidentifikasi  spesies  isolat  bakteri endofit yang potensial dalam menghambat pertumbuhan bakteri patogen. Peneliti selanjutnya perlu  melakukan  pengujian  lanjut  untuk  mengisolasi  dan  mengidentifikasi  senyawa  yang dihasilkan oleh isolat bakteri endofit.

## REFERENCE
Alkautsari,  L.,  Widiana,  R.,  &  Indriati,  G.  (2015).  Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  daun ciplukan (Physalis Minima Linn.) terhadap pertumbuhan bakteri Salmonella Sp. E-Jurnal , Padang.
Alviana,  N.  (2016).  Uji  efektivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  daun  krisan  ( Chrysanthemum morifolium Syn. Dendrathema  grandiflora )  terhadap S.  aureus dan E.  coli.  Skripsi. Fakultas Teknobiologi. Universitas Atma Jaya Yogyakarta. Yogyakarta.
Amaria, W., Kasim, N. N & Munif, A. (2019). Kelimpahan populasi bakteri filosfer, rizosfer, dan  endofit  tanaman  kemiri  sunan  ( Reutealis  Trisperma (Blanco)  Airy  Shaw),  serta potensinya sebagai agens biokontrol. Journal TABARO , 3 (1), 305-317. Bergey’s.  (2005).  Manual  of  systematic  bacteriology. Department  of  Microbiology  and Molecular Genetics : Michigan State University.
Bhore, S. J and Sathisha, G. (2010). Screening of endophytic colonizing bacteria for cytokinin- like compounds: crude cell-free broth of endophytic colonizing bacteria is unsuitable in cucumber cotyledon bioassay. World Journal of Agricultural Sciences. Sci, 6 (4), 345-352 . Compant,  S.,  Clément,  C.,  &  Sessitsch,  A.  (2010).  Plant  growth-promoting  bacteria  in  the rhizo-  and  endosphere  of  plants:  Their  role,  colonization,  mechanisms  involved  and prospects  for  utilization. Soil  Biology  and  Biochemistry , 42 (5),  669–678. https://doi.org/10.1016/j.soilbio.2009.11.024
Desriani.,  Safira,  U.  M.,  Bintang,  M.,  Rivai,  A.,  &  Lisdiyanti,  P.  (2014).  Isolasi  dan Karakterisasi  Bakteri  Endofit  dari  Tanaman  Binahong  dan  Katepeng  China. Jurnal Kesehatan Andalas , 3 (2), 89–93. https://doi.org/10.25077/jka.v3i2.33
Djajusman, S. K., Tedjosasongko, U., & Irmawati, I. (2014). Daya hambat xylitol dan nistation terhadap pertumbuhan Candida albicans (in vitro) (Inhibition effect of xylitol and nistatin combination on Candida albicans growth (in vitro)). Dental Journal (Majalah Kedokteran Gigi) , 47 (3), 164-167. https://doi.org/10.20473/j.djmkg.v47.i3.p Fithriyah, N. L. (2015). Isolasi dan identifikasi bakteri endofit dari rumput kebar ( Biophytum sp.) sebagai penghasil senyawa antibakteri terhadap bakteri E.coli dan S.aureus . Skripsi . Fakultas Sains dan Teknologi. Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim. Malang. Hafsari,  A.  R  &  Isma,  A.  (2013).  Isolasi  dan  identifikasi  kapang  endofit  dari  tanaman  obat surian ( Toona sinensis) . Artikel edisi agustus, 7 (2), 175-191.
Hermawati, L. (2016). Uji aktivitas antibakteri isolat kapang endofit dari daun tanaman paku daun kepala tupai ( Drynaria quercifolia (L.) J. Smith) terhadap E.a coli, Salmonella typhi, S.  aures dan Bacillus  subtilis . Skripsi. Fakultas  Kedokteran  dan  Ilmu  Kesehatan. Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. Jakarta.
Irdawati.,  Linda,  A.,  &  Fitri,  A.  (2017).  Isolation  and  Activity  Test  of  Antimicrobial Endophytic Bacteria from Leaf Salam ( Syzygium polyanthum Wight). Bio Science , 1 (2), 62-69.
Isniyetty.  (2010).  Isolasi  dan  uji  antibakteri  flavonoid  dari  daun  ciplukan  ( Physalis Minima Linn ). EKSAKTA , 2 (1), 95-102.
Jalgaonwala,  R.  E,  Mohite,  B.  V,  and  Mahajan, R.  T.  (2010).  Evaluation  of  endophytes  for their  antimicrobial  activity  from  indigenous  medicinal  plants  belonging  to  north maharashtra region india . Int. J. on Pharm and Biomed Res , 1 (5), 136- 141.
Kementerian  Perdagangan  (Kemendag)  RI.  (2014).  Warta  ekspor  obat  herbal  tradisional. Kementerian Perdagangan Republik Indonesia . Jakarta.
Kumala, S & Ainun, A. P. (2014). Efek Antimikroba dari Kapang Endofi t Ranting Tanaman Biduri. Jurnal Farmasi Indonesia, 7 (2), 111-120.
Kusumawati, D. E., Pasaribu, F. H., & Bintang, M. (2014). Aktivitas antibakteri isolat bakteri endofit dari tanaman miana ( Coleus Scutellariodes [L.] Benth.) terhadap S. aureus dan E.
coli . Current Biochemistry , 1 (1), 45 – 50.
Lathifah,  A.  (2017).  Isolasi,  karakterisasi  dan  uji  antimikroba  bakteri  endofit  Lokio  ( Allium chinense G. Don). Tesis. Sekolah Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor. Bogor. Masfufah., Puji, A., & Afghani, J. (2019). Aktivitas antibakteri dari isolat bakteri endofit B.E2 daun tanaman sukun ( Artocarpus altilis ) terhadap S. typhimurium dan S. aureus. Jurnal Kimia Khatulistiwa , 8 (1), 79-85.
Nugraheni,  I.  A.  (2019).  Deteksi  Escherichia  coli  dan  Salmonella  pada  jamu  kunir  asem  di Daerah Gamping, Sleman, Yogyakarta. Jurnal Health Of Studies , 3 (2), 40–50.
Nursanty, R & Suhartono. (2012). Isolasi karakterisasi dan uji antimikroba bakteri endofit asal tumbuhan  johar  ( Cassia  Siamea Lamk.). Jurnal  Ilmiah  Pendidikan  Biologi,  Biologi Edukasi, 4 (1), 7-10.
Nursulistyarini., Fenni & Ainy, E. Q. (2013). Isolasi dan identifikasi bakteri endofit penghasil antibakteri  dari  daun  tanaman  binahong  ( Anredera  Cordifolia (Ten)  Steenis). Seminar Nasional  Xi  Pendidikan  Biologi .  Fakultas  Kedokteran  Ilmu  Pendidikan.  Universitas Negeri Surakarta. Surakarta.
Oktavia,  N.,  &  Sri,  P.  (2018).  Isolasi  dan  uji  antagonisme  bakteri  endofit  tapak  dara ( Catharanthus Roseus, L.) terhadap bakteri E. coli dan S. aureus. Berkala Bioteknologi, 1 (1), 6-12.
Osho, A., Adetunji, T., Fayemi S. O., and Moronkola, D. O. (2010). Antimicrobial activity of essential oils of Physalis angulata. L. Journal Tradit Complement Altern Med , 7 (4), 303- 306.
Pratiwi,  B.  E.  (2015).  Isolasi  dan  skrining  fitokimia  bakteri  endofit  dari  daun  rambutan ( Nephelium lappaceum L.)  yang  berpotensi  sebagai  antibakteri. Skripsi. Fakultas Kedokteran Dan Ilmu Kesehatan. Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah. Jakarta. Purwanto, U. M. S., Fachriyan, H. P., & Maria, B. (2014). Isolasi bakteri endofit dari tanaman sirih hijau ( Piper Betle L.) dan potensinya sebagai penghasil senyawa antibakteri. Current Biochemistry , 1 (1), 51 – 57.
Puspita, F., Sukemi, I. S., & Jenny, M. (2018). Uji Beberapa Konsentrasi Bakteri Bacillus sp. Endofit  untuk  Meningkatkan  Pertumbuhan  Bibit  Kakao  ( Theobroma  cacao L.). Jurnal Agronomi Indonesia , 46 (3), 322-327.
Putri, M. F., Fifendy, M., & Putri, D. H. (2018). Diversitas bakteri endofit pada daun muda dan tua tumbuhan andaleh ( Morus macroura miq .). Eksakta , 19 (1), 125–130.
Rijayanti, R. P. (2014). Uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun mangga bacang (mangifera foetida  l.) terhadap staphylococcus  aureus secara in  vitro.  Naskah  Publikasi. Fakultas Kedokteran. Universitas Tanjungpura. Tanjungpura.
Rutala, W. A., David, J. W., and Healthcare Infection Control Practices Advisory Committe . (2008). Guideline for disinfection and sterilization in helatcare facilities. Department of Health and Human Services , USA.
Ryan, R. P., Kieran, G., Ashley, F., David, J. R and David, N. D. (2008). Bacterial endophytes: recent developments and applications. FEMS Microbiol Lett, 27 (8), 1-9.
Safrida,  Y.  D.,  Cut,  Y  &  Cut,  N.  D.  (2012).  Isolasi  dan  karakterisasi  bakteri  berpotensi probiotik pada ikan kembung ( Rastrelliger sp.). Depik , 1 (3), 200-203.
Sari, N. I. P. (2018). Isolasi, karakterisasi dan aktivitas antimikroba bakteri endofit pada lamun Thalassia hemprichii terhadap pertumbuhan bakteri Bacillus cereus, P. aeruginosa dan jamur Candida  albicans.  Artikel  Penelitian. Fakultas  Keguruan  dan  Ilmu  Pendidikan. Universitas Mataram.
Setyati, W. A., Ahmad, S. H., Subagyo., Ali, R., Nirwani, S., & Rini, P. (2016). Skrining dan seleksi  bakteri  simbion  spons  penghasil  enzim  ekstraseluler  sebagai  agen  bioremediasi bahan  organik  dan  biokontrol  vibriosis  pada  budidaya  udang. Jurnal  Kelautan  Tropis, 19( 1), 11-20 .
Sulistiyani,  T. R., & Puspita, L. (2016). Keragaman bakteri  endofit pada tanaman Curcuma heyneana dan potensinya dalam menambat nitrogen. Widyariset , 2 (2), 106 – 117.
Susilowati,  R.  (2017).  Analisis  karakter  morfologi,  anatomi,  dan  struktur  sekretori  tanaman ciplukan  ( Physalis  angulata L . ). Skripsi. Fakultas  Matematika  Dan  Ilmu  Pengetahuan Alam. Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Vitasari, O. N. (2012). Uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun ciplukan terhadap S. aureus dan P. aureginosa . Skripsi. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas Sebelas Maret. Surabaya.
Wibowo, T. C & Yuliani, R. (2015). Aktivitas antibakteri ekstrak etanol buah pare ( Momordica charantia L.)  terhadap  bakteri E.coli dan S.aureus Multiresisten  antibiotik  beserta  uji bioautografinya. Naskah  Publikasi. Fakultas  Farmasi.  Universitas  Muhammadiyah Surakarta. Surakarta.
Wondal,  B.,  Elvy,  L.  G.,  Veibe,  W.,  Stenly,  W., Sandra,  O.  T  and  Ferdinand,  F.  T.  (2019). Isolasi  bakteri  laut  dari  Perairan  Malalayang  Sulawesi  Utara. Jurnal  Pesisir  dan  Laut Tropi, 7 (3), 183-189.
Yandila, S., Dwi, H. P., & Mades, F. (2018). Kolonisasi bakteri endofit pada akar tumbuhan andaleh ( Morus macroura Miq .). Bio-site , 4 (2), 61 – 67.