## STUDI AKTIVITAS HEPATOPROTEKTIF FRAKSI
ETIL ASETAT KENIKIR ( Cosmos caudatus ) PADA

## TIKUS YANG DIINDUKSI PARASETAMOL KAJIAN STRESS OSIDATIF (LIPID PEROSIDASE)
Agil Novianto 1) , Hartono 2)
1,2 Akademi Farmasi Nasional Surakarta agiel.novianto@gmail.com

## ABSTRAK
Hati  memainkan  peran  penting  dalam  metabolisme  dan  ekskresi.  Parasetamol  dosis  tinggi  dapat membuat gagal hati akut (ALF) dan nekrosis di hepar dari penanda enzim serta meningkatkan parameter oksidatif  stres  untuk  peroksidasi  lipid.  Tujuan  penelitian  untuk  mengetahui  efektivitas  etyl  asetat fraksi kenikir pada tikus yang diinduksi oleh parasetamol. Desain penelitian aktivitas hepatoprotektif menggunakan hewan uji yang terbagi enam kelompok. Kelompok I (normal) diberi asupan aquades, kelompok II (kontrol negatif) diberi CMC 1 %, kelompok III (kontrol positif) diberi kurkuminoid 100mg/ kg BB dalam CMC 1 %, kelompok IV-VI (kelompok perlakuan) diberi fraksi etil asetat kenikir dengan dosis 281,25 mg/kg BB, 562,5 mg/kg BB, dan 1.125 mg/kg BB. Perlakuan sediaan uji selama 7 hari, pada hari ke-7, 30 menit setelah pemberian sampel uji dilanjutkan dengan induksi parasetamol dosis 2,5 g/kg BB secara peroral. Setelah 48 jam induksi, selanjutnya dilakukan pembedahan hewan uji untuk pengambilan  sampel  liver.  Sampel  jaringan  liver  digunakan  untuk  analisis  parameter  stres  oksidatif yaitu  lipid  peroxidation  (LPO).  Fraksi  etil  asetat  kenikir  dosis  1125  mg/kg  BB  mampu  menghambat WHUMDGLQ\D OLSLG SHURNVLGDVL VHFDUD VLJQL¿NDQ \DLWX PHPEHULNDQ HIHN RSWLPDO KHSDWRSURWHNWLI GDQ indikasi  penurunan  peroksidasi  lipid  (p  <0,05).  Mekanisme  hepatoprotektor  fraksi  etil  asetat  kenikir didasarkan atas kemampuan sebagai antioksidan (in vitro dan in vivo) sehingga terjadinya kerusakan liver (nekrosis) dapat diminimalisir.
Kata kunci: etylaccetate kenikir fraksi, hepatoprotektif, peroksidasi lipid, parasetamol

## ABSTRACT
The liver plays an important role in the metabolism and excretion. High doses of paracetamol could create acute liver failure (ALF) to show necrosis at high liverby of marker enzymes and increases oxidative stress parameters for example lipid peroxidation. The aim of research to determine the effectiveness etyl acetate fraction of marigolds in rats induced by paractamol. The study design hepatoprotective activity using test animals were divided into six groups. Group I (normal) fed a diet of distilled water, group II (negative control) were given CMC 1%, group III (positive control) were given kurkuminoid 100mg / kg in CMC 1%, group IV-VI (the treatment group) were given a fraction of ethyl acetate kenikir with a dose of 281.25 mg / kg, 562.5 mg / kg, and 1,125 mg / kg. Test preparation treatment for 7 days, on the 7th day, 30 minutes after administration of the test sample followed by induction of paracetamol dose of 2.5 g / kg is orally. After 48 hours of induction, then performed surgery for sampling test animal liver. Liver  tissue  samples  used  for  the  analysis  of  oxidative  stress  parameters,  namely  lipid  peroxidation (LPO). Ethyl acetate fraction kenikir dose 1125 mg / kg is capable of preventing the occurrence of lipid SHUR[LGDWLRQVLJQL¿FDQWO\RSWLPDOHIIHFWKHSDWRSURWHFWLYHLQGLFDWHGE\DGHFUHDVHOLSLGSHUR[LGDWLRQS

## Jurnal KesMaDaSka - Januari 2016
<0.05). Hepatoprotective mechanism kenikir ethyl acetate fraction is based on the ability of antioxidants (in vitro and in vivo) so that the occurrence of liver damage (necrosis) can be minimized.
Keywords: etylaccetate fractions of kenikir, hepatoprotective, lipid peroxidation, paracetamol

## 1.  PENDAHULUAN
Hati  merupakan  organ  vital  yang  memiliki

## SHUDQ SHQWLQJ GDODP SURVHV GHWRVL¿NDVL
Penggunaan obat dalam jangka panjang dapat  memicu  kerusakan  hati  (Singh,  2012). Hepatotoksin  merupakan  bahan  kimia  dengan efek  toksik  terhadap  sel  hati.  Pada  dosis  yang berlebihan (dosis  toksik) atau pemaparan dalam jangka  waktu  yang  lama  dapat  menyebabkan kerusakan  hati  akut,  sub  akut  maupun  kronis. Contoh  senyawa  hepatotoksin  antara  lain karbon  tetraklorida  (CCl4),  kloroform,  etionin parasetamol, galaktosamin dan lipopolisakarida.
Parasetamol  merupakan  obat  dengan  efek analgetik  dan  antipiretik  yang  aman  digunakan dalam pemakaian pada dosis di bawah 4,0 g/hari (Clark et  al .,  2012).  Penggunaan  parasetamol dalam jumlah yang berlebih (15 gram/hari) mampu menyebakan  kerusakan  pada  hati  (Gestanovia 2007; Clark et al ., 2012). Parasetamol mengalami proses  metabolisme  oleh  enzim  sitokrom  P450 menjadi  metabolit  reaktif  yang  dikenal  dengan N-acetyl-p-benzoquinonemine (NAPQI). NAPQI mampu  berinteraksi  secara  kovalen  dengan makromolekul  hati  pada  bagian  sistein  dan mengakibatkan  terjadinya  oksidasi  lipid  dan menyebabkan kerusakan pada liver (Setty, 2007). Terjadinya  kerusakan  hati  akibat  pemberian parasetamol  mampu  memicu  naiknya  kadar serum glutamate pyruvate transaminase (SGPT), serum glutamate  oxaloacetat  transaminase (SGOT),  serum alkaline  phosphatase (ALP), billirubin,  total  protein  (Hinson et  al .,  2010). Kerusakan  hati  akibat  parasetamol  ini  juga ditandai  dengan  naiknya  parameter  stress oksidatif  yang  ditunjukkan  dengan  tingginya kadar  lipid  peroksidase  (LPO)  (Singh,  2011; Datta et al ., 2013).
Kenikir  ( Cosmos  caudatus K.)  telah  lama digunakan dalam konsep pengobatan tradisional. Secara  tradisional  daun  kenikir  digunakan sebagai  obat  penambah  nafsu  makan,  lemah lambung, penguat tulang, dan pengusir serangga.
Abas et al ., (2003) menyebutkan bahwa ekstrak

## PHWDQROLN GDXQ NHQLNLU PHQJDQGXQJ ÀDYRQRLG
dan  glikosida  kuersetin.  Ekstrak  etanol  kenikir dosis  2.250  mg/kgBB,  memiliki  efektivitas menurunkan  kadar  SGPT  pada  tikus  yang diinduksi parasetamol (Setyawati, 2011).
Ekstrak  etanol  dan  fraksi  etil  asetat PHQJDQGXQJ VHQ\DZD ÀDYRQRLG SDOLQJ VHGLNLW dua komponen. Uji aktivitas antioksidan dengan metode penangkapan radikal DPPH (2,2’-difenil- 1-pikril-hidrazil)  menunjukkan  ekstrak  etanol memiliki  IC 50 19,43±0,317  ìg/mL  (Nurhaeni, 2012) dan fraksi etil asetat memiliki IC50 14,229 ìg/mL (Kurniasih, 2008).
Tujuan penelitian untuk mengetahui aktivitas  hepatoprotektor  dari  fraksi  etil  asetat herba kenikir berdasarkan kajian stress oksidatif lipid peroxidation (LPO).

## 2. METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Daun kenikir, tablet parasetamol 500 mg (Kimia Farma),  kurkuminoid,  CMC  Na  (Brataco), aquadest,  etanol  70  %  hexane,  ethyl  acetat (Brataco).  Hewan  uji  tikus  jantan  galur  wistar berat  150-200g.  Spuit  oral  (Terumo),  setrifuge Sigma,  water  bath, trichloroacetic  acid (TCA), TBA  ( Thiobarbituric  acid), SDS,  asam  asetat, Tris HCl pH 7,4.

## Cara Kerja
a.  Preparasi sampel
Daun kenikir dimaserasi etanol 70 % untuk mendapatkan  ekstrak  etanol.  Ekstrak  etanol selanjutnya  difraksinasi  bertingkat  dengan hexane, etil asetat dan air untuk mendapatkan fraksi etil asetat kenikir.
b.  Uji kualitiatif fraksi etil asetat kenikir
$QDOLVLV .URPDWRJUD¿ /DSLV 7LSLV ./7 menggunakan fase gerak campuran butanol, asam  asetat  dan  air  (ratio  4:  1:  5)  dan  fase diam  lempeng  silika  gel  GF 254 .  Standar yang  digunakan  adalah  quercetin.  Deteksi
menggunakan  sinar  UV  pada  panjang gelombang 366 nm.
c.  Uji aktivitas hepatoprotektor
Uji  hepatoprotektor  dilakukan  mengikuti rancangan  Hurkadale et  al .,  2012  dan Paramaguru et  al .,  2011.  Hewan  uji  dibagi enam  kelompok.  Kelompok  I  (normal) diberi asupan aquades, Kelompok II (kontrol negatif)  diberi  CMC  1  %,  Kelompok  III (kontrol positif) diberi kurkuminoid 100mg/ kg  BB  dalam  CMC  1  %,  Kelompok  IV-VI (kelompok  perlakukan)  diberi  fraksi  etil asetat  kenikir  dengan  dosis  281,25  mg/kg BB, 562,5 mg/kg BB, dan 1.125 mg/kg BB.
Perlakukan  sediaan  uji  selama  7  hari,  pada hari ke-7, 30 menit setelah pemberian sampel uji  dilanjutkan  dengan  induksi  parasetamol dosis 2,5 g/kg BB secara peroral (Hurkadale et  al .,  2012;  Paramaguru et  al .,  2011). Setelah  48  jam  induksi,  selanjutnya  hewan uji dikorbankan dan dilakukan pembedahan untuk mengambil liver. Sampel jaringan liver digunakan  untuk  analisis  parameter  stres oksidatif yaitu lipid peroxidation (LPO) .
d.  Analisa  stress  oksidatif lipid  peroxidation (LPO)
Pengukuran  kadar  LPO  mengikuti  metode yang  dikembangkan  oleh  Ohkawa  et al.(1979).  Organ  liver  selanjutnya  di- keringkan dan ditimbang, sebesar 10 % dari jaringan  ini  selanjutnya  dihomogenkan  dan dilakukan  preparasi  dengan  larutan  0,15 M  Tris  HCl  (pH  7,4).  Kadar  lipid  peroksi- dase  dalam  campuran  ditentukan  berdasar- kan  jumlah  terbentuknya malonilaldehyde (MDA).  Sejumlah  0,2  ml  liver  yang  telah dihomogenkan ditambah dengan 0,2 ml So- dium  dodecyl  sulfate  (SDS)  8,1  %,  1,5  ml asam  asetat  20  %,  dan  1,5  ml  TBA  0,8  %. Campuran  dibuat  sejumlah  4  ml  ditambah aquadest,  dan  dihangatkan  pada  suhu  95 0 C selama  60  menit.  Setelah  diinkubasi,  didi- amkan  dalam  suhu  kamar.  Dengan  volume yang  sama  ditambahkan TCA  10  %.  Selan- jutnya  disentrifugasi  selama  10  menit  pada 3000  rpm.  Lapisan  atas  yang  terbentuk  di- ambil  dan  diukur  nilai  OD  pada  panjang gelombang 532 nm terhadap blanko yang ti-
dak diberikan sampel. Jumlah lipid peroksi- dase  (LPO)  dinyatakan  dengan  sejumlah mol thiobarbituric  acid  reactive  substance (TBARS)/mg protein dengan menggunakan NRH¿VLHQHNVWLQJVL[0 -1 cm -1 (Bose et al., 2007).

## 4.  HASIL DAN PEMBAHASAN
Analisis  KLT  dilakukan  untuk  mengetahui keberadaan  senyawa  maupun marker (senyawa identitas)  dari  sampel  yang  digunakan.  KLT XQWXN LGHQWL¿NDVL ÀDYRQRLG PHQJJXQDNDQ IDVH diam selulosa yang memiliki sifat lebih baik un- WXNLGHQWL¿NDVLPHWDEROLWÀDYRQRLGGLEDQGLQJNDQ dengan jenis silika gel. Selain itu digunakan fase gerak kombinasi butanol asam asetat air (sistem BAW)  dengan  perbandingan  4  :  1  :  5  sebagai pembanding  digunakan  rutin  dan  quercetin  de- ngan pemeriksaaan pada UV 366 nm dan penam- pak  bercak  uap  NH3.  Hasil  KLT  terhadap  sam- pel ekstrak maupun fraksi, diketahui keberadaan fraksi etil asetat memiliki spot yang memiliki ni- lai HRf yang mirip dengan nilai quercetin dengan ZDUQD\DQJPLULSNHWLNDGLLGHQWL¿NDVLGDODP89 366 nm dan uap NH 3 .
Analisa stress oksidatif dalam penelitian un- tuk  mencari  mekanisme  hepatoprotektif  dilihat dari  kajian  stress  oksidatif  dengan  pengamatan terhadap  parameter  lipid  peroksidase.  Lipid peroksidase  merupakan  suatu  proses  terjadinya oksidasi  lipid  oleh  radikal  bebas  yang  menye- babkan  terjadinya  kerusakan  membrane  yang mengandung  lipid.  Terjadinya  lipid  perosidasi memicu  terjadinya peroksil  radical yang  diikuti dengan  terbentuknya  lipid  peroksida.  Lipid- peroksida  yang  terbentuk  dapat  terfragmentasi menjadi malondialdehyde (MDA)  dan 4-hy- droxyalkena (4-HDA). Terbentuknya malondial- dehyde (MDA) merupakan indikator utama yang dapat  digunakan  untuk  analisis  terjadinya  lipid peroksidasi.  Hasil  uji  terhadap  parameter  stress oksidatif  meliputi  kadar  lipid  peroksida  teru- kur  berdasarkan  terbentuknya  malondialdehide yang bereaksi dengan thiobarbituric acid sebagai bentuk Thiobarbituric  Acid  Reactive  Substance (TBARS).  Hasil  analisa  lipid  perosidasi  seb- agaimana tercantum dalam Tabel 1.

## Jurnal KesMaDaSka - Januari 2016
Dari  gambar  1  menunjukkan  bahwa pemberian  parasetamol  2,5  g/kg  BB  mampu menyebabkan  kerusakan  liver  yang  ditandai dengan  naiknya  kadar  lipid  peroksidase  secara

## VLJQL¿NDQ S GLEDQGLQJNDQ NHORPSRN
tanpa  induksi.  Kurkuminoid  sebagai  kontrol positif  dalam  penelitian  ini  mampu  mencegah kerusakan  liver  yang  ditandai  dengan  kadar lipid perosidase yang lebih rendah dibandingkan

## NRQWUROQHJDWLYHS
Pemberian  fraksi  etil  asetat  kenikir  selama 7  hari  mampu  mencegah  kerusakan  liver akibat  pemberian  parasetamol.  Hal  ini  ditandai dengan  penurunan  kadar  lipid  peroksidase dibandingkan  dengan  kelompok  induksi.  Fraksi etil  asetat  kenikir  dengan  dosis  1125  mg/kg  BB memberikan  aktivitas  hepatoprotektif  optimal yang  ditunjukkan  dengan  kemampuanya  dalam menghambat  terjadinya  lipid  peroksidasi  secara

## VLJQL¿NDQS
Kemampuan  fraksi  etil  asetat  sebagai hepatoprotektif  melalui  efek  terhadap  lipid perosidase;  didukung  penelitian  Novianto  & Hartono  (2013)  bahwa  fraksi  etil  asetat  mampu menurunkan  kadar  SGPT  dan  SGOT  pada  tikus yang diinduksi parasetamol dosis toksik,
Aktivitas  hepatoprotektor  kenikir  dipicu PHWDEROLW VHNXQGHU ÀDYRQRLG +DVLO DQDOLVLV
KLT  menunjukkan  senyawa  yang  terdapat dalam fraksi etil asetat kenikir adalah quercetin. Flavonoid berperan penting terhadap aktivitasnya sebagai hepatoprotektor. Quercetin memiliki efek hepatoprotektor  pada  hewan  uji  yang  diinduksi hepatotoksin  seperti  parasetamol  (Jashita et  al ., 2011; Ali et al . 2013).
Hasil  uji  aktiviitas  antioksidan  fraksi etil  asetat  kenikir  secara in  vitro dengan menggunakan  DPPH  diperoleh  IC 50 14,229  ìg/ mL  (Kurniasih,  2008).  Dari  hasil  uji  dengan parameter  stress  oksidatif  dapat  diketahui bahwa aktivitas hepatoprotektor fraksi etil asetat kenikir  melalui  mekanisme  antioksidan.  Hal  ini didukung  dengan  beberapa  penelitian  lain  yang mengkorelasikan  efek  hepatoprotektor  dengan aktivitas antioksidan (Singh et al ., 2011; Tanwar, 2011; Sasidharan, 2010).
Antioksidan  menjadi  salah  satu  target  me- kanisme  hepatoprotektif  didasarkan  pada  peng- gunaan  parasetamol  dalam  dosis  berlebih  me- micu  terbentuknya  metabolit  reaktif  NAPQI. Tingginya  NAPQI  memicu  terjadinya  deplesi gluthathione (GSH)  dan  berdampak  terhadap nekrosis liver yang memicu naiknya jumlah ROS (Hinson et al ., 2010). Keberadaan kenikir mence- gah dampak buruk dari ROS terhadap proses ok- sidasi (lipid peroksidasi) serta meminimalisir ter- jadinya kerusakan liver (nekrosis).

## 5.  KESIMPULAN
Fraksi  etil  asetat  kenikir  mampu  memberi- kan  efek  hepatoprotektor  pada  tikus  yang  di- induksi  parasetamol.  Fraksi  etil  asetat  kenikir dosis  1125  mg/kg  BB  mampu  menghambat  ter- MDGLQ\DOLSLGSHURNVLGDVLVHFDUDVLJQL¿NDQ0H - kanisme hepatoprotektor fraksi etil asetat kenikir didasarkan atas kemampuan sebagai antioksidan ( in vitro dan in vivo ) yang mampu menghambat ROS  sehingga  terjadinya  kerusakan  liver  (nek- rosis) dapat diminimalisir

## 6.  REFERENSI
Abas,  2003,  Antioxidative  Radical  Scavenging Properties  of  the  Constituent  Isolated  from Cosmos  caudatus K.), Natural  Product Science 9 (4); 245-248.
Ali, M., Qadir, M., Saleem, M., Janbaz, K.H., Gul,
H., and Hussain, L., 2013, Hepatoprotective
potential  of  Convolvulus  arvensis  against parasetamol-induced hepatotoxicity,
Bangladesh J Pharmacol ; 8: 300-304
Bose,  P.,  Gupta,  M.,  Mazumder,  U.K.,  Kumar,
R.S., Sivakumar, T., and Kumar., R.Suresh. 2007,  Hepatoprotective  and  Antioxidant
Effect  of  Eupatorium  ayapana  against Carbon  tetracloride  Induced  Hepatotoxicity in  Rats, Iranian  Journal  of  Pharmacology and Therapeutics , 6 :27-33.
Clark, R., Fisher, J.E., Sketris, I.S., and Johnston, G.M.  2012,  Population  prevalence  of  high dose parasetamol in dispensed parasetamol/ opioid prescription combinations: an observational  study, BMC  Pharmacology and Toxicology , I :1-8.
Datta, S., Dhar, S, Nayak, S.S., and Dinda, S. C. . 2013,  Hepatoprotective  activity  of Cyperus articulatus Linn. against parasetamol induced  hepatotoxicity  in  rats, Journal  of Chemical  and  Pharmaceutical  Research ,
5 (1):314-319.
Gestanovia,  2007, Hepatotoksis  Parasetamol , Undip, Semarang.
Hinson, J.A., Roberts, D.W., and James, L.P. 2010, Mechanisms  of  Acetaminophen-Induced Liver Necrosis, Handb Exp Pharmacol . 196 : 369–405.
Hurkadale,  P.J.,  Shelar,  P.A.,  Palled,  S.G., Mandavkar,  Y.D.,  and  Khedkar, A.S.  2012, Hepatoprotective activity of Amorphophallus paeoniifolius tubers  against  parasetamol- induced  liver  damage  in  rats, Asian 3DFL¿F -RXUQDO RI 7URSLFDO %LRPHGLFLQH 1:S238-S242
Jashita,  M.,  Chakraborty,  M.,  and  Kamath,
J.V.  2013,  Effect  Of  Quercetin  On Hepatoprotective  Activity  Of  Silymarin
Against Thioacetamide Intoxicated Rats, Int. Res. J. Pharm, 4 (7).
Kurniasih,  2008,  Daya  Antioksidan  Fraksi  Etil Asetat  Ekstrak  Herba  Kenikir  ( Cosmos caudatus +%.GDQ3UR¿O./7 Skripsi , Jurusan  Farmasi  Fakultas  Matematika  Dan
Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas  Islam Indonesia Novianto & Hartono., 2013, Aktivitas
Hepatoprotektor  Fraksi  Etil  Asetat  Kenikir Pada  Tikus  yang  Diinduksi  Parasetamol, Penelitian Dosen Pemula .
Nurhaeni, F., 2012, Skrining Aktivitas dan Isolasi Senyawa  Penangkap  Radikal  2,2-Difenil-1- Pikril  Hidrazil  dari  Daun  Kenikir  (Cosmos caudatus,  H.B.K),  Tesis,  Farmasi  UGM, Yogyakarta.
Ohkawa,  H.,  Onishi,  N.,  Yagi,  K.,  1979. Assay for  lipid  peroxidation  in  animal  tissue by  thiobarbituric  acid  reaction. Analyze Biochemia . 95 :351–358.
Paramaguru,  R.,  Singh,  S.K.,  Rajasekar,  N., and  Raj,  A.V.  2011,Hepatoprotective  And Antioxidant  Effects  of Amorphophallus campanulatus Against Acetaminophen
Induced Hepatotoxicity in Rats, International Journal Pharmacy Science, 3 (2):202-205.
Sabate, M., Ibanez, L., Perez, E., Vidal, X., Buti, M., and Xiol, X., et al . 2011, Parasetamol in therapeutic  dosages  and  acute  liver  injury: causality  assessment  in  a  prospective  case series, BMC Gastroenterology , I :1-7.
Sasidharan,  S.,  Aravindran,  S.,  Latha,  L.Y., Vijenthi,  R.,  Saravanan,  D.,  4  and Amutha, S.  2010, In  Vitro Antioxidant  Activity  and Hepatoprotective Effects of Lentinula edodes against Parasetamol-Induced Hepatotoxicity, Molecules , 15 :4478-4489.
Setty,  S.  R.,  Quereshi, A.A.,  Swamy, A.H.M.V., Patil, T., Prakash, T., Prabhu, K., and Gouda, A.V.. 2007, Hepatoprotective activity RI &DORWURSLV SURFHUD ÀRZHUV DJDLQVW parasetamol-induced  hepatic  injury  in  rats, Fitoterapia, 78 :451–454.
Singh, I., Vetriselvan, S., Shankar, J., Gayathiri, S.,  Hemah,  C.,  Shereenjeet,  G.,  and Yaashini, A.2012, Hepatoprotective Activity of  Aqueous  Extract  of Curcuma  longa in Etanol  Induced  Hepatotoxicity  in  Albino Wistar  Rats, International  Journal  of Phytopharmacology. 3 (3):226-233 .