## KELIMPAHAN DAN JENIS BAKTERI Vibrio PADA AIR DAN SEDIMEN TAMBAK UDANG VANAME SISTEM MONOKULTUR DAN POLIKULTUR DENGAN
Gracilaria sp. DI KABUPATEN BREBES
Restiana Wisnu Ariyati, Lestari Lakhsmi Widowati # , Amelia Rahmawati,  Sarjito, dan Sri Rejeki
Departemen Akuakultur, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro, Jalan Prof. Jacub Rais Kampus Universitas Diponegoro, Tembalang, Semarang, Jawa Tengah
(Naskah diterima: 24 Januari 2023; Revisi final: 08 Maret 2024; Disetujui publikasi: 08 Maret 2024)

## ABSTRAK
Infeksi bakteri Vibrio merupakan salah satu masalah yang banyak dihadapi pada budidaya udang vaname. Serangan vibriosis disebabkan oleh tingginya limbah organik di perairan. Rumput laut jenis Gracilaria sp. memiliki senyawa aktif dan kemampuan memperbaiki kualitas air sehingga dapat mereduksi kelimpahan bakteri Vibrio. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui kelimpahan dan jenis bakteri Vibrio pada budidaya udang vaname secara monokultur dan polikultur dengan Gracilaria sp. Sampel air dan sedimen diambil dari lima tambak monokultur dan lima tambak polikultur di Kabupaten Brebes, Jawa Tengah.  Bakteri Vibrio dihitung kelimpahannya dengan metode  total plate count dan diidentifikasi secara morfologi, mikroskopis, dan uji biokimia. Kelimpahan bakteri Vibrio air di tambak polikultur lebih rendah (3,46 × 10 4 CFU mL -1 ) dibanding tambak monokultur (2,18 × 10 5 CFU mL -1 ). Bakteri V. alginolyticus terdapat pada substrat dan air di tambak monokultur, namun pada tambak polikultur hanya terdapat di air. Hal ini diduga karena Gracilaria sp. memiliki kandungan senyawa bioaktif (alkaloid, flavonoid, steroid, dan fenolik) yang berperan sebagai antibakteri alami. Lebih lanjut, kandungan nitrat dan fosfat di tambak polikultur (0,3-0,5 ppm dan 1,3-1,4 ppm) lebih rendah dibanding tambak monokultur (2,2-2,4 ppm dan  2,5- 2,1 ppm). Kondisi ini menyebabkan Bakteri Vibrio fluvialis dan Vibrio vulnificus terdapat pada tambak monokultur yang memiliki nitrat dan fosfat yang lebih tinggi dari tambak polikultur. Hal ini menunjukkan bahwa Gracilaria  sp. memiliki kemampuan dalam mereduksi nutrien melalui thallusnya, sehingga menciptakan lingkungan perairan yang lebih baik untuk mereduksi kelimpahan bakteri Vibrio.
KATA KUNCI: Gracilaria sp.; monokultur; polikultur; udang vaname; Vibrio
ABSTRACT: The Abundance and Types of Vibrio in Water and Sediment of Monoculture and Polyculture Ponds of Pacific White Leg Shrimp with Gracilaria sp . in Brebes
Vibrio bacterial infection is one of the problems often faced in Pacific white leg shrimp cultivation. Vibriosis attacks are caused by high levels of organic waste in waters. Gracilaria sp. has active compounds and the ability to improve water quality so that it can reduce the abundance of Vibrio bacteria. The aim of this study was to determine the abundance and types of Vibrio bacteria in cultivation of Pacific white leg shrimp in monoculture and polyculture with Gracilaria sp. Water and sediment samples were taken from five monoculture ponds and five polyculture ponds in Brebes, Central Java. The abundance of Vibrio bacteria was
#Korespondensi: Departemen Akuakultur, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro, Tembalang, Semarang, Jawa Tengah Email: widowatiriri@gmail.com
Kelimpahan Dan Jenis Bakteri Vibrio Pada Air dan...... (Restiana Wisnu Ariyati)
calculated using the total plate count method and identified morphologically, microscopically, and biochemically. The abundance of Vibrio bacteria in water of polyculture ponds was lower (3.46 × 10 4 CFU mL -1 ) than in monoculture ponds (2.18 × 10 5 CFU mL -1 ). Vibrio alginolyticus is found in the substrate and water of monoculture ponds, but in polyculture ponds it was only found in water. This was thought to be because Gracilaria sp. contains bioactive compounds (alkaloids, flavonoids, steroids, and phenolics) which act as natural antibacterials. Furthermore, the nitrate and phosphate content in polyculture ponds (0.3-0.5 ppm and 1.3-1.4 ppm) was lower than in monoculture ponds (2.2-2.4 ppm and 2.5-2.1 ppm). This condition caused Vibrio fluvialis and Vibrio vulnificus found in monoculture ponds which had higher nitrate and phosphate than polyculture ponds. This showed that Gracilaria sp. has the ability to reduce nutrients through its thallus, thus creating a better aquatic environment to reduce the abundance of Vibrio bacteria.
KEYWORDS: Gracilaria sp .; monoculture; Pacific white leg shrimp; polyculture; Vibrio

## PENDAHULUAN
Udang vaname (Litopenaeus vannamei) merupakan spesies penaeid yang paling umum dibudidayakan secara global, mencakup 83% dari seluruh budidaya udang penaeid (Food and Agriculture Organization, 2020). Sebagian besar produksinya dipusatkan di beberapa negara di Amerika Latin dan Asia Tenggara, termasuk Ekuador, Thailand, Vietnam, India, dan Tiongkok. Total produksi udang di Indonesia sebesar 409.590 ton pada tahun 2008, menurun menjadi 338.060 ton pada tahun 2009 dan meningkat menjadi 893.258 ton pada tahun 2022 (Kementerian Kelautan dan Perikanan, 2024). Penurunan produksi udang tersebut dapat disebabkan oleh adanya kegagalan panen akibat serangan penyakit pada udang. Penyakit yang sering menyerang kegiatan budidaya udang berasal dari bakteri Vibrionaceae (Sarjito et al.,  2015). Kepadatan bakteri  Vibrio  dalam tambak yang melampaui batas maksimum dapat mengakibatkan penyakit hingga kematian pada udang budidaya. Air dan sedimen merupakan komponen dalam tambak yang menjadi media pertumbuhan bakteri. Bakteri  Vibrio  penting diteliti kelimpahannya untuk mencegah kematian massal udang.
Kegiatan budidaya udang terdapat dua sistem budidaya, yaitu monokultur dan polikultur dan keduanya tergolong dalam budidaya secara tradisional (Cahya et al., 2021).  Kabupaten Brebes merupakan wilayah
yang banyak menerapkan teknologi budidaya sistem monokultur dan polikultur.
Budidaya monokultur merupakan sistem budidaya    dengan satu kultivan dalam satu wadah (Huniyah et al., 2015), sedangkan budidaya polikultur adalah sistem budidaya yang menggabungkan beberapa kultivan dalam satu wadah dengan tingkat trofik yang berbeda (Cahya et al., 2021). Budidaya polikultur dengan komoditas utama berupa udang vaname umumnya diintegrasikan dengan rumput laut jenis Gracilaria sp. sebagai komoditas penunjang. Selama pertumbuhannya, Gracilaria sp. menggunakan thallusnya untuk menyerap kandungan zat organik seperti amoniak, nitrat, dan nitrit sebagai nutrisinya, sehingga Gracilaria sp. dapat berperan sebagai biofilter. Gracilaria sp. memiliki kemampuan untuk menyerap nitrogen dalam air sebanyak 0,4 g nitrogen m -2 hari -1 (Komarawidjaja, 2005). Bakteri Vibrio pada tambak udang sering muncul karena rendahnya kualitas air tambak, terutama dengan tingginya konsentrasi amoniak dan total amoniak nitrogen (TAN). Keberadaan Gracilaria sp. dalam budidaya polikultur dapat menekan keberadaan bakteri Vibrio. Gracilaria sp. memiliki aktivitas antibakteri yang dapat melindungi udang penaeid (Rudi & Ramadhani, 2022).
Budidaya polikultur antara udang vaname dan  Gracilaria  sp. akan berdampak positif, karena  Gracilaria  sp. mempunyai kemampuan mereduksi bahan organik berupa nitrogen
total (N-total) dari 1,2 mg L -1 menjadi 0,4 mg L -1 dalam waktu kurang dari 10 jam (Komarawidjaja, 2005), sehingga kualitas air budidaya udang terjaga.  Kualitas air yang baik akan menurunkan kelimpahan bakteri Vibrio di perairan.  Lebih lanjut, Gracilaria  sp. menjadi faktor penyebab kelimpahan bakteri Vibrio sp. menjadi lebih rendah. Penelitian Rahardjo et al. (2020) melaporkan bahwa keberadaan rumput laut dalam perairan tambak memberikan pengaruh terhadap keberadaan Vibrio sp. Uji tantang pada penelitian tersebut menunjukkan populasi bakteri di air yang terdapat rumput laut di dalamnya, lebih rendah dan terus menurun selama pemeliharaan dibandingkan dengan tanpa rumput laut (kontrol) yang terus naik selama pemeliharaan. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui kelimpahan dan jenis bakteri Vibrio di air serta sedimen pada sistem budidaya monokultur dan polikultur.
Diharapkan penelitian ini dapat memberikan manfaat berupa informasi berupa sistem budidaya yang dapat mengurangi serangan penyakit vibriosis pada budidaya udang.

## BAHAN DAN METODE

## Lokasi Pengambilan Sampel
Sampel sedimen dan air diambil diambil dari lima tambak monokultur udang vaname (tambak 1, 2, 3, 4, dan 5) serta lima tambak polikultur udang vaname dan rumput laut jenis Gracilaria sp. (tambak 6, 7, 8, 9, dan 10) yang terletak di Kabupaten Brebes, Jawa Tengah dengan peta lokasi yang tersaji pada Gambar 1. Titik koordinat dari tambak-tambak yang menjadi lokasi pengambilan sampel dicatat menggunakan alat global positioning system (GPS) yang diuraikan pada Tabel 1.
Gambar 1. Peta lokasi pengambilan sampel air dan sedimen dari tambak monokultur dan polikultur pada Kabupaten Brebes, Jawa Tengah untuk evaluasi kelimpahan dan jenis bakteri Vibrio Figure 1. Map of water and sediment sampling locations of monoculture and polyculture ponds in Brebes,
Central Java for the evaluation of the abundance and types of Vibrio
Penentuan lokasi sampel dilakukan berdasarkan beberapa kriteria meliputi keaktifan penggunaan tambak, luas lahan, pada tebar udang, dan umur pemeliharaan udang. Tambak yang digunakan sebagai lokasi pengambilan sampel merupakan tambak yang masih aktif melakukan budidaya udang secara monokultur dan polikultur dengan rumput laut. Luas setiap tambak kurang lebih 1 ha dengan padat penebaran udang vaname 10 ekor m -2 yang dibudidayakan minimal selama 60 hari.

## Pengambilan Sampel
Pengambilan sampel dilakukan pada bulan April dan Mei 2023. Pengambilan sampel dilakukan pada lima tambak monokultur dan lima tambak polikultur. Air dan sedimen diambil pada dua titik setiap tambak yaitu inlet dan  outlet, sehingga total sampel adalah 20
buah sampel air dan 20 buah sampel sedimen. Botol untuk tempat sampel dicuci dan disterilisasi menggunakan autoclave dengan suhu 121°C tekanan 1 atm selama 20 menit. Sampel air (volume 250 mL) diambil pada bagian kolom air (20 cm dari permukaan air) dan dimasukkan ke dalam botol sampel steril. Sampel sedimen diambil dengan memasukkan pipa paralon 4 inci ke dalam sedimen sedalam 10 cm dan kemudian dimasukkan ke dalam botol sampel steril. Sampel yang telah diambil dimasukkan ke dalam cool box sebelum diamati di laboratorium.

## Penghitungan Kelimpahan Bakteri Vibrio
Media yang digunakan adalah media yang selektif terhadap Vibrio  sp. yaitu media t hiosulfate citrate bile salt sucrose (TCBS). Selanjutnya dilakukan penanaman bakteri
Tabel 1. Titik koordinat lokasi pengambilan sampel air dan sedimen dari tambak monokultur dan polikultur di Kabupaten Brebes, Jawa Tengah untuk evaluasi kelimpahan dan jenis bakteri Vibrio
Table 1. Coordinates of water and sediment sampling locations of monoculture and polyculture ponds in Brebes, Central Java for the evaluation of abundance and types of Vibrio
Lokasi Locations Tambak monokultur Monoculture ponds Bujur Longitudes Lintang Latitudes Tambak 1 Pond 1 109.0838056 -6.828361112 Tambak 2 Pond 2 109.0931111 -6.836499999 Tambak 3 Pond 3 109.0971944 -6.840333332 Tambak 4 Pond 4 109.0821737 -6.851494777 Tambak 5 Pond 5 109.0796069 -6.84886705
Lokasi Locations
Tambak polikultur Polyculture ponds
Bujur Longitudes
Lintang Latitudes Tambak 6 Pond 6 109.0824299 -6.845308597 Tambak 7 Pond 7 109.0902694 -6.836150356 Tambak 8 Pond 8 109.0939485 -6.844810421 Tambak 9 Pond 9 109.0934255 -6.844711433 Tambak 10 Pond 10 109.0791667 -6.857166666
dengan metode spread plate untuk sampel air dan metode pour plate untuk sampel sedimen pada media TCBS dan diinkubasi dalam inkubator selama 2 x 24 jam. Koloni bakteri yang memenuhi syarat untuk dihitung yaitu 30-300 koloni pada satu sampel dalam satu cawan petri (Sukmawati, 2018). Penghitungan koloni dengan metode total plate count (TPC) dilakukan pada bakteri yang telah tumbuh dengan rumus:
Kelimpahan Bakteri         =
(CFU mL -1 )
Jumlah Koloni x 1
Faktor Pengenceran
Kelimpahan ini dihitung pada seluruh sampel air (10 sampel) dan sedimen (10 sampel) dari tambak monokultur dan polikultur
Isolasi dan Identifikasi Bakteri Vibrio
Pemurnian bakteri dilakukan untuk mendapatkan isolat tunggal. Pemurnian dilakukan dengan mengambil koloni bakteri hasil isolasi dengan metode spread plate untuk sampel air dan pour plate untuk sampel sedimen, kemudian dilakukan streak plate pada media TCBS yang baru, dan diinkubasi selama 24-48 jam. Pemurnian bakteri dilakukan dengan beberapa kali pengulangan (3-5 kali) hingga didapatkan bakteri yang seragam dari warna, bentuk, tepi, dan elevasinya.
Identifikasi bakteri dilakukan melalui beberapa pengamatan meliputi pengamatan morfologi, pengamatan mikroskopis, dan uji biokimia. Pengamatan morfologi dilakukan dengan cara mengamati koloni yang tumbuh pada media. Pengamatan yang dilakukan meliputi pengamatan terhadap warna, bentuk, tepi, dan elevasi koloni bakteri (Holderman et al., 2017). Pengamatan mikroskopis dilakukan dengan metode pewarnaan untuk mengetahui sifat bakteri gram positif atau negatif dari bakteri (Wulandari & Purwaningsih, 2019). Uji biokimia yang dilakukan melalui beberapa jenis uji meliputi uji triple sugar iron agar (TSIA), uji lysin iron agar (LIA), uji sulfur indole motility (SIM), uji oksidatif/fermentatif (O/F), uji pepton, uji motile indole ornithine (MIO), uji methyl red-voges
prokauer (MRVP) serta uji gula-gula yang terdiri atas uji glukosa, sukrosa, laktosa, dan laktosa. Hasil identifikasi bakteri dicocokkan dengan karakter bakteri yang mengacu pada buku Fish Patogen Disease in Farmed and Wild Fish (Austin & Austin, 2007) dan Cowan and Steel’s (1993).

## Pengukuran Kualitas Air
Pengukuran kualitas air dilakukan setiap 2 minggu sekali selama pelaksanaan penelitian (2 bulan). Parameter kualitas air yang diamati secara langsung di lapangan meliputi pH, suhu, salinitas, dan oksigen terlatut. Pengukuran pH dilakukan dengan menggunakan digital pH meter PH – 009(I)A, sedangkan pengukuran suhu menggunakan digital thermometer. Salinitas diukur dengan menggunakan hand refractometer ATC 0-100% dan oksigen terlarut diukur menggunakan DO meter Hanna HI 9146.
Parameter kualitas air yang diukur di laboratorium terdiri atas amoniak, nitrat, dan fosfat. Pengukuran amoniak, nitrat, dan fosfat dilakukan dengan menggunakan spektrofotometer secara fenat, brusin sulfat serta asama askorbat. Pengukuran amoniak, nitrat, dan fosfat dilakukan dengan mengambil sampel dan melakukan analisis di laboratorium.

## Analisis Data
Data berupa kelimpahan bakteri Vibrio dan jenis bakteri Vibrio dari sampel air serta sedimen tambak monokultur dan polikultur ditabulasi dengan Microsoft Excel 2021. Data kualitas air juga ditabulasi menggunakan Microsoft Excel 2021. Data yang telah ditabulasi kemudian dianalisis secara deskriptif.

## HASIL DAN BAHASAN
Kelimpahan Bakteri Vibrio
Bakteri Vibrio sp. pada air tambak monokultur  (2,18 × 10 5 CFU mL -1 ) lebih tinggi dibandingkan dengan air pada tambak polikultur (3,46 × 10 4 CFU mL -1 ) (Tabel 2). Hal ini diduga karena pada tambak polikultur terdapat
rumput laut Gracilaria  sp. yang memiliki kandungan senyawa antibakteri.  Rumput laut diketahui memiliki senyawa bioaktif seperti alkaloid, flavonoid, steroid, dan senyawa fenolik yang berperan sebagai antibakteri alami (Siregar et al., 2012).  Flavonoid memiliki sifat antibakteri. Flavonoid merupakan senyawa yang disintesis oleh tumbuhan yang berfungsi sebagai antibakteri terhadap patogen Vibrio harveyi (Munaeni et al. 2017).
Kelimpahan bakteri Vibrio sedimen tambak monokultur (1,59 x 10 6 CFU mL -1 ) lebih rendah daripada tambak polikultur (9,10 × 10 6 CFU mL - 1 ) (Tabel 2). Sedimen memiliki jumlah bakteri lebih banyak dibandingkan air (Suwoyo et al., 2015). Hal ini dikarenakan sedimen memiliki karakteristik yang menetap dibandingkan air. Bakteri  Vibrio  sp.  dapat menginfeksi udang apabila telah melebihi batas maksimum kelimpahannya di tambak. Batas maksimum kelimpahan bakteri Vibrio  pada pemeliharaan
udang yaitu 10 4 CFU mL -1 . Pada jumlah tersebut, udang akan rentan terserang penyakit vibriosis (Kharisma & Manan, 2012).

## Jenis Bakteri Vibrio pada Tambak Monokultur dan Polikultur
Berdasarkan isolasi bakteri Vibrio sp. yang berasal dari air dan sedimen tambak monokultur dan polikultur diperoleh 35 isolat. Isolat tersebut kemudian dikelompokkan berdasarkan karakteristik morfologi seperti warna, bentuk, elevasi, dan tepian koloni, sehingga diperoleh lima isolat bakteri yang akan diidenfikasi jenis bakterinya melalui uji biokimia (Tabel 3).
Pada tambak polikultur dengan isolat yang berasal dari sedimen dan air memiliki karakteristik morfologi bakteri meliputi warna hijau, bentuk koloni irregular, elevasi raised, dan tepian undulate. Karakteristik bakteri pada
Tabel 2. Kelimpahan bakteri Vibrio (CFU mL -1 ) pada tambak monokultur dan polikultur di Kabupaten Brebes, Jawa Tengah Table 2. The abundance of Vibrio (CFU mL -1 ) in monoculture and polyculture pond in Brebes, Central Java
Monokultur Monoculture Polikultur Polyculture Air Water 2,18 x 10 5 3,46 x 10 4 Sedimen Sediment 1,59 x 10 6 9,10 x 10 6
No Kode sampel
Sample codes Asal isolat
Isolate origins Warna koloni Colony colours Bentuk   koloni Colony shapes Elevasi Elevations Tepian Edges 1 M-T1-S2 Sedimen monokultur Monoculture sediment Hijau Green Circular Convex Entire 2 M-T1-S4 Sedimen monokultur Monoculture sediment Kuning Yellow Irregular Convex Entire 3 M-T2-A1 Air monokultur Monoculture water Kuning Yellow Circular Convex Entire 4 P-T7-S2 Sedimen polikultur Polyculture sediment Hijau Green Irregular Raised Undulate 5 P-T8-A1 Air polikultur Polyculture water Hijau Green Irregular Raised Undulate
Tabel 3. Karakteristik morfologi isolat bakteri Vibrio yang berasal dari air dan sedimen tambak monokultur dan polikultur di Kabupaten Brebes, Jawa Tengah
Table 3. Morphological characteristics of Vibrio bacterial isolates originating from water and sediment of monoculture and polyculture ponds in Brebes, Central Java
tambak monokultur lebih bervariasi dibanding tambak polikultur. Tampak dari warna koloni yang memiliki warna kuning dan hijau, bentuk koloni circular dan irregular. Namun pada elevasi dan tepiannya memiliki karakteristik yang sama yaitu convex dan entire.
Hasil uji biokimia pada sampel sedimen
tambak monokultur (M-T1-S2) didapatkan hasil uji presumtif, uji biokimia, dan uji TSIA bakteri seperti yang tersaji pada Tabel 4. Hasil uji tersebut dibandingkan dengan Cowan dan Steel (1993) memiliki kemiripan 93% dengan Vibrio fulnivicus, 83% dengan Vibrio anguillarum, dan 85% Vibrio hollisae.
Tabel 4. Hasil uji biokimia isolat M-T1-S2 Table 4. The result of biochemical tests of M-T1-S2 isolate
Cowan dan Steel (1993) Cowan and Steel (1993) Uji Tests M-T1-S2 Vibrio vulnificus Vibrio anguillarum Vibrio hollisae Uji presumtif Presumptive tests Bentuk   koloni Colony shapes Circular ND ND ND Warna Colours Hijau Green ND ND Kuning Yellow Elevasi Elevations Convex ND ND ND Tepian Edges Entire ND ND ND Gram Gram negatif Gram negative Gram negatif Gram negative Gram negatif Gram negative Gram negatif Gram negative Katalase Catalase + + + + Oksidase Oxidase + + + + Tumbuh pada suhu 37˚C Grow in a temperature of 37˚C + + + + Uji biokimia Biochemical tests MIO + + - - Urea - - - - Sitrat Citrate - ND ND ND Uji lanjutan Subsequent tests TSIA A/A, H2S -, G- G- G- G- O/F F F F F LIA - + - - Indol Indole + +
+ +
MR + + ND ND VP - - + - SIM Motil Motile Motil Motile Motil Motile Motil Motile Sensitifitas Gula Sugar sensitivities Laktosa Lactose + + ND ND Sukrosa Sucrose + D + - Maltosa Maltose + ND ND ND Glukosa Glucose + + + ND Nilai kesesuaian Conformity values 93% 83% 85%
Keterangan: + = 85-100% strain positif, d = 16-84% strain positif, - = 85-100% strain negatif, dan ND = not determine. Note: + = 85-100% positive strain, d = 16-84% positive strain, - = 85-100% negative strain, and ND = not determine.
Hasil uji biokimia pada sampel sedimen tambak monokultur dengan isolat kode M-T1-S4 dilakukan uji presumtif, uji biokimia, dan beberapa uji lanjutan seperti yang tersaji pada Tabel 5. Hasil uji dibandingkan dengan Austin
dan Austin  (2007) memiliki kemiripan sebesar 84% dengan Vibrio alginolyticus, 70% dengan Vibrio cholerae, dan 75% dengan Vibrio ordalli.
Hasil uji biokimia pada sampel air tambak monokultur dengan isolat kode M-T2-A1
Tabel 5. Hasil uji biokimia isolat M-T1-S4 Table 5. The result of biochemical tests of M-T1-S4 isolate
Austin dan Austin (2007) Austin and Austin (2007) M-T1-S4 Vibrio alginolyticus Vibrio cholerae Vibrio ordalii Uji presumtif Presumptive tests Bentuk   koloni Colony shapes Irregular ND ND Warna Colours Kuning Yellow Kuning Yellow ND Elevasi Elevations Convex ND ND Convex Tepian Edges Entire ND ND ND Gram Gram negatif Gram negative Gram negatif Gram negative Gram negatif Gram negative Gram negatif Gram negative Katalase Catalase + + + + Oksidase Oxidase + + + + Tumbuh pada suhu 37˚C Grow in a temperature of 37˚C + + + + Uji biokimia Biochemical tests MIO + + - - Urea - + - - Sitrat Citrate + ND + ND Uji lanjutan Subsequent tests TSIA G- A/A, G-, H2S -, H2S, G- - H2S -
O/F
F F F F LIA - + + - Indol Indole + + + - MR - + + - VP - + + - SIM Motil Motile Motil Motile Motil Motile Motil Motile Sensitifitas gula Sugar sensitivities Laktosa Lactose - - - + Sukrosa Sucrose + + + + Maltosa Maltose + + + + Glukosa Glucose + + + + Nilai kesesuaian Conformity values 84% 70% 75%
Keterangan: + = 85-100% strain positif, d = 16-84% strain positif, - = 85-100% strain negatif, dan ND = not determine. Note: + = 85-100% positive strain, d = 16-84% positive strain, - = 85-100% negative strain, and ND = not determine.
dilakukan  uji presumtif, uji biokimia, dan uji lanjutan dengan hasil pada Tabel 6. Hasil uji dibandingkan dengan Cowan dan Steel (1993) menunjukkan kemiripan 92% dengan Vibrio fluvialis, 75% dengan Vibrio furnissi, dan 64% dengan Vibrio damsela.
Hasil uji biokimia pada sampel sedimen tambak polikultur dengan isolat kode P-T7-S2 didapatkan hasil uji presumtif, uji biokimia, dan uji lanjut sesuai dengan data yang tersaji pada Tabel 7. Hasil uji dibandingkan dengan Cowan dan Steel (1993) menunjukkan kemiripan
Tabel 6. Hasil uji biokimia isolat M-T2-A1
Table 6. The result of biochemical tests of M-T2-A1 isolate
Cowan dan Steel (1993) Cowan and Steel (1993) Uji Tests M-T2-A1 Vibrio fluvialis Vibrio furnissii Vibrio damsela Uji presumtif Presumptive tests Bentuk      koloni Colony shapes Circular ND ND ND Warna koloni Colony colours Kuning Yellow ND ND ND Elevasi Elevations Convex ND ND ND Tepian Edges Raised ND ND ND Gram Gram negatif Gram negative Gram negatif Gram negative Gram negatif Gram negative Gram negatif Gram negative Katalase Catalase + + + + Oksidase Oxidase + + + + Tumbuh pada suhu  37˚C Grow in a temperature of 37˚C + + + + Uji biokimia Biochemical tests MIO + - - - Urea - - - - Sitrat Citrate + ND ND ND Uji lanjutan Subsequent tests TSIA A/A, H2S -, G- G- G+ G- O/F F F F F LIA - - - D Indol Indole + D - - MR - ND ND ND VP - - - + SIM Motil Motile Motil Motile Motil Motile Motil Motile Sensitifitas gula Sugar sensitivities Laktosa Lactose + ND ND + Sukrosa Sucrose + + + - Maltosa Maltose + ND ND ND Glukosa Glucose - ND ND ND Nilai kesesuaian Conformity values 92% 75% 64%
Keterangan: + = 85-100% strain positif, d = 16-84% strain positif, - = 85-100% strain negatif, dan ND = not determine. Note: + = 85-100% positive strain, d = 16-84% positive strain, - = 85-100% negative strain, and ND = not determine.
92% dengan Vibrio harveyi, 82% dengan V. alginolytcus, dan 69% dengan Vibrio pelagius.
Hasil uji biokimia pada sampel air tambak polikultur dengan isolat kode P-T8-A1 didapatkan hasil uji presumtif, uji biokimia, dan
uji lanjutan seperti pada data yang tersaji pada Tabel 8. Hasil uji dibandingkan dengan Austin dan Austin (2007) menunjukkan kemiripan 93% dengan V. fulnivicus, 69% dengan Vibrio splendidusi, dan 84% dengan V. harveyi.

## Tabel 7. Hasil uji biokimia isolat P-T7-S2
Table 7. The result of biochemical tests of P-T7-S2 isolate
Austin dan Austin (2007) Austin and Austin (2007) Uji Tests P-T7-S2 Vibrio harveyi Vibrio alginolyticus Vibrio pelagius Uji presumtif Presumptive tests Bentuk koloni Colony shapes Irregular ND ND ND Warna koloni Colony colours Hijau Green ND Kuning Yellow ND Elevasi Elevations Raised ND ND ND Tepian Edges Undulate ND ND ND Gram Gram negatif Gram negative Gram negatif Gram negative Gram negatif Gram negative Gram negatif Gram negative Katalase Catalase + + + + Oksidase Oxidase + + + + Tumbuh pada suhu 37˚C Grow in a temperature of 37˚C + + + + Uji biokimia Biochemical tests MIO + + + - Urea - ND + + Sitrat Citrate + ND ND ND Uji lanjutan Subsequent tests TSIA A/A, G-, H2S -, ND H2S, G- H2S- O/F F F F F LIA + + + - Indol Indole + + + + MR + ND + + VP - - + D SIM Motil Motile Motil Motile Motil Motile Motil Motile Sensitifitas gula Sugar sensitivities Laktosa Lactose + - - - Sukrosa Sucrose + + + + Maltosa Maltose + ND + + Glukosa Glucose + + + ND Nilai kesesuaian Conformity values 92% 82% 69%
Keterangan: + = 85-100% strain positif, d : 16-84% strain positif, : 85-100% strain negatif, dan ND: not determine. Note: + = 85-100% positive strain, d : 16-84% positive strain, : 85-100% negative strain, and ND: not determine.
Austin dan Austin (2007)
Austin and Austin (2007) Uji Tests P-T8-A1 Vibrio alginolyticus Vibrio splendidus Vibrio harveyi Uji presumtif Presumptive tests Bentuk   koloni Colony shapes Irregular ND ND ND Warna koloni Colony colours Hijau Green ND ND ND Elevasi Elevations Raised ND ND ND Tepian Edges Undulate ND ND ND Gram Gram negatif Gram negative Gram negatif Gram negative Gram negatif Gram negative Gram negatif Gram negative Katalase Catalase + + + + Oksidase Oxidase + + + + Tumbuh pada suhu 37˚C Grow in a temperature of 37˚C + + + + Uji biokimia Biochemical tests MIO + + - + Urea - - + ND Sitrat Citrate - ND + ND Uji lanjutan Subsequent tests TSIA A/A, H2S -, G- ND H2S-, G- ND O/F F F F F LIA + + + +
Indol Indole + + + + MR + ND + ND VP + + - - SIM Motil Motile Motil Motile Motil Motile Motil
Motile Sensitifitas gula Sugar sensitivities Laktosa Lactose + + ND - Sukrosa Sucrose + - - + Maltosa Maltose + + + ND Glukosa Glucose + + + + Nilai kesesuaian Conformity values 93% 69% 84%

## Tabel 8. Hasil uji biokimia isolat P-T8-A1
Table 8. The result of biochemical tests of P-T8-A1 isolate
Keterangan: + = 85-100% strain positif, d = 16-84% strain positif, - = 85-100% strain negatif, dan ND = not determine. Note: + = 85-100% positive strain, d = 16-84% positive strain, - = 85-100% negative strain, and ND = not determine.
Pada penelitian ini telah diidentifikasi beberapa species Vibrio yang terdapat pada tambak monokultur maupun polikultur, yaitu V. vulnificus, V.  alginolyticus, V. fluvialis,  dan V. harveyi. Kelima jenis bakteri ini mengakibatkan penyakit berupa sirip ekor geripis, penyakit di karapas, pecah pembuluh darah, pengeroposan
karapas, dan penyakit gangguan pencernaan. Pengeroposan karapas, penyakit gangguan pencernaan, dan pecahnya pembuluh darah menyebabkan kematian massal di tambak budidaya udang. Penyakit pengeroposan karapas erat dengan keberadaan V. anguillarum. Penyakit ini diidentifikasi dengan adanya
bintik hitam dan lesi pada exoskeleton. Penyakit dengan gejala berupa pecahnya pembuluh darah, gangguan pencernaan, dan pengeroposan karapas umumnya memiliki derajat kematian 80%, disebabkan oleh V. alginoliticus (Jayasreeet et al., 2000).
Vibrio fluvialis dan V. vulnificus ditemukan di air pada tambak monokultur, namun tidak ada pada tambak polikultur. Bakteri ini tumbuh di ekosistem perairan yang dipengaruhi oleh banyaknya ketersediaan nitrat dan berkembang optimal pada salinitas 20 ppt (Arisandi  et al., 2017). Tambak monokultur memiliki kandungan nitrat yang lebih tinggi (2,2 ppm) daripada tambak polikultur (0,3 ppm) dan dengan salinitas yang lebih tinggi (15 ppt) dibanding tambak polikultur (14 ppt).
Keragaman bakteri Vibrio  sp. dilihat dari identifikasi morfologinya. Isolat bakteri banyak ditemukan di tambak monokultur dengan total 18 isolat yang terdiri atas tujuh isolat dari air dan 11 isolat dari sedimen, dibandingkan tambak polikultur dengan total isolat 17 isolat yang terdiri dari enam isolat dalam air dan 11 isolat dari sedimen. Keragaman dan kelimpahan bakteri Vibrio sp. dalam air maupun sedimen tambak dipengaruhi oleh beban limbah organik (Mangampa, 2015). Bakteri Vibrio umum hidup di air dan sedimen tambak (Gusman, 2019), sehingga keberadaan bakteri Vibrio tidak begantung pada jenis tambak, namun kelimpahan dan keragamannya dapat
mengindikasikan adanya pencemaran. Penelitian Rudi dan Ramadhani (2022) melaporkan bahwa G. verrucosa mampu menghambat pertumbuhan V. harveyi di perairan. Rumput laut jenis Gracilaria memiliki thallus yang mampu menyerap nutrien dalam perairan. Nitrogen disimpan di selnya dalam thallus untuk kemudian digunakan sebagai sumber pertumbuhannya. Oleh karena itu  Gracilaria  berperan sebagai biofilter, bioakumulator, dan bioindikator. Penelitian Komarawidjaja (2005) menunjukkan bahwa tingkat konsentrasi nitrogen dalam thallus Gracilaria sp. meningkat dari 1,3% menjadi 3,1% pada air pembuangan tambak, sehingga rumput laut jenis ini dapat disebut “nitrogen starved Gracilaria”.  Nitrogen starved Gracilaria berarti  berapapun tersedia N dalam air akan terus diserap dan disimpan di dalam sel, sehingga konsentrasinya menjadi berlipat.

## Kualitas Air
Nilai suhu, pH, salinitas, dan amoniak pada tambak monokultur dan polikultur memiliki rata-rata yang hampir sama (Tabel 9). Nilai suhu (30 o C) berada dalam kisaran aman dalam budidaya udang vaname (SNI nomor 7310, 2009). Nilai salinitas masih berada di rentang optimal dengan salinitas 15-17 ppt pada tambak monokultur dan tambak polikultur 14-17 ppt (Haliman & Adijaya, 2006). Nilai
Tabel 9. Kualitas air di tambak monokultur dan polikultur di Kabupaten Brebes, Jawa Tengah Table 9. Water quality in monoculture and polyculture ponds in Brebes, Central Java
Parameter Parameters Monokultur Monoculture Polikultur Polyculture Nilai optimal Optimum ranges Suhu ( o C) Temperature ( o C) 29-30 28-30 29-32 (SNI, 2009) Salinitas (ppt) Salinity (ppt) 15-17 14-17 5-30 ppt (Haliman & Adijaya, 2006) pH 7,5-8,2 7,8- 8,2 7,5-8,5 (Kharisma & Manan, 2012) Oksigen terlarut (ppm) Dissolved oxygen (ppm) 3,5-5,4 4,2-6,3 >4,0 ppm (SNI, 2014) Nitrat (ppm) Nitrate (ppm) 2,2-2,4 0,3-0,5 0,01-1,0 ppm (SNI, 2004) Fosfat (ppm) Phosphate (ppm) 2,5-2,1 1,3-1,4 0-1,0 (SNI, 2005) Amoniak (mg L -1 ) Ammonia (mg L -1 ) 0,42-0,45 0,41-0,43 <0.01 ppm (Kharisma & Manan, 2012)
pH berada pada kisaran 7,5-8,2 yang  masih berada pada kisaran optimal untuk budidaya udang (Kharisma & Manan, 2012). Nilai oksigen  terlarut  pada tambak monokultur dan polikultur tergolong optimal untuk budidaya udang vaname yaitu lebih dari 4 mg L -1 (Badan Standarisasi Nasional, 2014). Hal ini menunjukkan bahwa adanya rumpt laut jenis Gracilaria  tidak memberikan pengaruh pada beberapa parameter tersebut.
Tambak monokultur memiliki konsentrasi nitrat 2,2-2,4 ppm dan  fosfat 2,5-2,1 ppm yang lebih tinggi daripada tambak polikultur dengan nilai secara berturut turut yaitu 0,3-0,5 dan 1,3- 1,4 ppm. Udang dan ikan pada perairan payau dapat tumbuh dengan baik pada kadar nitrat 0,080-0,524 ppm (Mangampa & Burhanuddin, 2014). Nilai nitrat pada tambak monokultur melebihi standar untuk kualitas media budidaya perairan yaitu kurang dari 2 ppm (Luo et al., 2017). Nilai fosfat pada tambak polikultur dan monokultur berada pada kadar yang berlebih untuk budidaya udang yaitu 0,100 ppm. Terlebih lagi, nilai fosfat lebih dari 0,100 ppm dapat menyebabkan blooming fitoplankton (Bui et al., 2012). Kondisi perairan dengan nutrien yang berlebih ini menyebabkan kelimpahan bakteri V. alginolyticus dan V. fluvialis di tambak polikultur yang kemudian dapat menyebabkan penyakit pecahnya pembuluh darah, gangguan pencernaan, dan abnormalitas pada karapas dengan tingkat kematian 80%.

## KESIMPULAN

## Tambak polikultur memiliki kelimpahan
Vibrio yang lebih rendah dibanding tambak monokultur. Hasil identifikasi bakteri menunjukkan bahwa jenis bakteri yang ditemukan pada tambak monokultur meliputi V.  vulnivicus,  V. alginolyticus,  dan  V. fluvialis, sedangkan pada tambak polikultur yaitu V. alginoliticus dan V. harveyi.
Bakteri V. alginolyticus terdapat pada substrat dan air di tambak monokultur, namun pada tambak polikultur hanya terdapat di air. Hal ini diduga karena peran Gracilaria sp.   yang mempunyai senyawa bioaktif (alkaloid, flavonoid, steroid, dan
fenolik) yang berperan sebagai antibakteri alami.
Bakteri V. fluvialis dan V. vulnificus terdapat pada tambak monokultur yang memiliki kondisi nitrat dan fosfat yang lebih tinggi dari tambak polikultur.  Hal ini menunjukkan bahwa menunjukkan  Gracilaria sp. memiliki kemampuan mereduksi nutrien melalui thallusnya. Kondisi ini menciptakan lingkungan yang tidak sesuai untuk media hidup bakteri Vibrio.

## UCAPAN TERIMA  KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada tim penelitian, bapak dan ibu dosen, dan teknisi pada Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro yang terlibat dalam penelitian ini. Terima kasih juga kami ucapkan kepada  reviewer  dan Dewan Redaksi Jurnal Riset Akuakultur. Penelitian ini dibiayai melalui Hibah Penelitian Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro. Sumber dana selain APBN Universitas Diponegoro No. 92/UN7.5.10.2/PP/2021.

## DAFTAR ACUAN
Arisandi, A., Wardani M. K., Badami, K., & Araninda, G. D. (2017). Dampak perbedaan salinitas terhadap viabilitas bakteri Vibrio fluvialis. Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan,
9(2), 91-97. https://doi.org/10.20473/jipk. v9i2.7636
Austin, B., & Austin D. A. (2017). Bacterial fish pathogens. Springer Cham. https://doi. org/10.1007/978-3-319-32674-0
Bui, T. D., Luong-Van, J., & Austin, C. M.
(2012). Impact of shrimp farm  effluent on  water  quality  in  coastal  areas  of the  world heritage-listed  Ha  Long Bay. American Journal of Environmental Sciences, 8(2), 104-116. https://doi.org/10.3844/ ajessp.2012.104.11
Cahya, M. A., Yustiati, A., & Andriani, Y. (2021). Sistem budidaya polikultur dan integrated multi trophic aquaculture (IMTA) di Indonesia. Jurnal Torani Journal of Fisheries
and Marine Science, 4(2), 72-85.
Cowan, S. T., & Steel, K. J. (1993). Cowan and Steel’s manual for the identification of medical bacteria. 3 rd edition. Cambridge University Press. https://doi.org/10.1017/ CBO9780511527104
Food and Agriculture Organization. (2020). FAO yearbook. Fishery and Aquaculture Statistics 2018. Food and Agriculture Organization. https://doi.org/10.4060/cb1213t
Gusman, E. (2019). Identifikasi bakteri Vibrio yang diisolasi dari sedimen mangrove di sekitar tambak udang vaname. Samakia: Jurnal Ilmu Perikanan,  10(2), 121-127. https://doi.org/10.35316/jsapi.v14i2
Holderman, M. V., de Queljoe, E., & Rondonuwu, S. B. (2017). Identifikasi bakteri pada pegangan eskalator di salah satu pusat perbelanjaan di Kota Manado. Jurnal Ilmiah Sains,  17(1), 13–18. https:// doi.org/10.35799/jis.17.1.2017.14901
Huniyah, A., Alamsjah, M. A., & Pursetyo, K. T. (2015). Analisis finansial pembesaran ikan bandeng (Chanos chanos) pada tambak tradisional dengan sistem monokultur dan polikultur di Kecamatan Mulyorejo, Surabaya, Jawa Timur. Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan,  7(2), 169-176. https://doi.org/10.20473/jipk.v7i2.11202
Jayasree, L., Janakiram, P., & Madhavi, R. (2000). Characteristics, pathogenicity and antibiotic sensitivity of bacterial isolates from white spot diseased shrimps. Asian Fisheries Science, 13, 327–334. https://doi. org/0.33997/j.afs.2000.13.4.004
Kementerian Kelautan dan Perikanan. (2024). Kementrian Kelautan dan Perikanan satu data. Produksi perikanan.  https://statistik. kkp.go.id/home.php?m=prod_ikan_ prov&i=2#panel-footer-kpda.
Kharisma, A., & Manan, A. (2012). Kelimpahan bakteri  Vibrio  sp. pada pembesaran udang vannamei (Litopenaeus vannamei) sebagai deteksi dini serangan penyakit vibriosis. Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan, 4(2), 129-
134.  https://doi.org/10.20473/jipk.v4i2.11563 Komarawidjaja, W. (2005). Rumput laut Gracilaria sp. sebagai fitoremedian bahan organik perairan tambak budidaya . Jurnal Teknologi Lingkungan, 6(2), 410-415. https:// doi.org/10.29122/jtl.v6i2.346
Luo, G., Zhang, N., Cai, S., Tan, H., & Liu, Z. (2017). Nitrogen dynamics, bacterial community composition and biofloc quality in biofloc-based systems cultured  Oreochromis niloticus with poly- β -hydroxybutyric and polycaprolactone as external carbohydrates. Aquaculture, 479, 732-741. http://dx.doi.org/10.1016/j. aquaculture.2017.07.017
Mangampa M., & Burhanuddin. (2014). Uji lapang teknologi polikultur udang windu (Penaeus monodon Fabr.), ikan bandeng (Chanos chanos Forskal) dan rumput laut (Gracilaria verucosa) di tambak Desa Borimasunggu Kabupaten Maros. Indonesia Journal of Fisheries Science and Technology (IJFST), 10(1), 30-36.
Mangampa, M. (2015). Dinamika populasi bakteri dalam air dan sedimen tambak pada pemantapan budidaya udang vaname ekstensif plus melalui pergiliran pakan.  Berkala Perikanan Terubuk,  43(2), 25-35. http://dx.doi.org/10.31258/ terubuk.43.2.25%20-%2035
Munaeni, W., Pariakan, A., Yuhana, M., Setiawati, M., & Abidin L. O. B. (2017). In vitro phytochemical and inhibitory potential tests of Buton Forest onion extract (Eleutherine palmifolia) on Vibrio harveyi.  Microbiology Indonesia,  11(3), 75- 80. https://doi.org/10.5454/mi.11.3.1
Rahardjo, S., Soepardjo, A. H., Djokosetiyanto, D, Alamsyah, A. T. (2018). Seaweed utilization for phytoremediation of Litopenaeus vannamei shrimp farming waste in recirculation systems (environmentally friendly design of sustainable shrimp culture). In B. Mclellan (Ed.), Sustainable Future for Human Security (pp. 145-158). Springer. https://
doi.org/10.1007/978-981-10-5430-3_12
Rudi, M., & Ramadhani, D. E. (2022). Uji daya hambat ekstrak rumput laut Gracilaria verrucosa terhadap bakteri Vibrio harveyi. Jurnal Kemaritiman: Indonesian Journal of Maritime,  3(1), 15-20. https://doi. org/10.17509/ijom.v3i1.47526
Sarjito, Apriliani, M., Afriani, D., & Haditomo, A. H. C. (2015). Agensia penyebab vibriosis pada udang vaname (Litopenaus vannamei) yang dibudidayakan secara intensif di Kendal.  Jurnal Kelautan Tropis (Tropical Marine Journal), 18(3), 189-196. https://doi. org/10.14710/jkt.v18i3.533
Siregar, A. F., Sabdono, A., & Pringgenies, D. (2012). Potensi antibakteri ekstrak rumput laut terhadap bakteri penyakit kulit Pseudomonas aeruginosa,  Staphylococcus epodermis, dan Micrococcus luteus. Journal of Marine Research, 1(2), 152-160. https://doi. org/10.14710/jmr.v1i2.2032
Sukmawati, Ratna, & Fahrizal, A. (2018). Analisis cemaran mikroba pada daging ayam broiler di Kota Makassar. Scripta Biologica, 5(1), 51-53. https://doi.org/ 10.20884/1.sb.2018.5.1.799
Suwoyo, H. S., Nirmala, K., Djokosetiyanto, D., & Mulyaningrum, S. R. H. (2015). Faktor dominan yang berpengaruh pada tingkat konsumsi oksigen sedimen di tambak intensif udang vaname (Litopenaeus vannamei).  Jurnal Ilmu dan Teknologi Kelautan Tropis, 7(2), 639-654. https://doi. org/10.29244/jitkt.v7i2.11031
Wulandari, D., & Purwaningsih, D. (2019). Identifikasi dan karakterisasi bakteri amilotik pada umbi Colocasia esculenta L. secara morfologi, biokimia, dan molekuler. Jurnal Bioteknologi dan Biosains Indonesia, 6(2). 247-258. https://doi.org/10.29122/ jbbi.v6i2.3084