Accredited by Ministry of Research, Technology                          DOI: https://doi.org/10.35799/jis.21.1.2021.33881 and Higher Education No: 28/E/KPT/2019                Available online at https://ejournal.unsrat.ac.id/index.php/jis
Aktivitas Antibakteri  Ekstrak Rumput Laut Eucheuma spinosum Segar dari Perairan Pulau Nain Sulawesi Utara
Lena Jeane Damongilala 1) , Fitje Losung 1) , Verly Dotulong 1)
1) Program Studi Teknologi Hasil Perikanan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Sam Ratulangi Manado, Indonesia Jl.Kampus Unsrat Bahu Manado 95115 Tlp. 828027 Email : lenajeane@unsrat.ac.id

## ABSTRAK
Penelitian terhadap ekstrak metanol, fraksi etil asetat, dan fraksi butanol dari rumput laut Eucheuma spinosum menggunakan  metode Disc  Diffusion  Test dilakukan  untuk  mengetahui  peranannya sebagai  antibakteri Escherichia  coli ATCC  25922,  dan Staphylococcus  aureus ATCC  6538. Sebagai kontrol digunakan ekstrak (negatif) pelarut metanol, dan Amoxicilin. Konsentrasi sampel uji ditetapkan 10.000 ppm. Hasil pengujian menunjukkan adanya  aktivitas antibakteri yang ditandai dengan terbentuknya zona hambat terhadap bakteri Escherichia coli ATCC 25922.  Besarnya zona hambat secara berurutan untuk ekstrak metanol, fraksi  butanol, dan fraksi etil asetat, ialah : 6,98 mm,  7,85  mm,  dan  7,88  mm.    Nilai  zona  hambat  tersebut,  relatif  sama  untuk  setiap  sampel  uji. Sampel uji juga menunjukkan aktivitas antibakteri yang ditandai dengan terbentuknya zona hambat terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus ATCC  6538.    Besarnya  zona  hambat  secara  berurutan untuk ekstrak metanol, fraksi  butanol, fraksi etil asetat, dan kontrol negatif pelarut metanol, ialah: 7,42 mm, 14.40 mm, 7,90 mm, dan 6,75 mm.  Zona hambat fraksi butanol lebih tinggi dibanding yang lain, ini menunjukkan bahwa aktivitas antibakteri Staphylococcus aureus pada fraksi butanol lebih tinggi dibanding fraksi lainnya.
Kata kunci :  Antibakteri; Eucheuma spinosum;  Escherichia coli; Staphylococcus aureus
Antibacteria Activities of Extract Sea Algae Eucheuma spinosum Fresh from Nain Island Waters North Sulawesi

## ABSTRACT
A  research  on  antibacterial  activity  of  methanol  extract,  ethyl  acetate,  and  butanol  fraction  from Eucheuma  spinosum seaweed  using  the disc  diffusion  method to  know  the  role  as    antibacterial activity was tested against Escherichia coli ATCC 25922 and Staphylococcus aureus ATCC 6538. Methanol  was  used  as  negative  control  while  amoxicillin  was  used  as  positive  control.  The concentration of the test sample was set at 10,000 ppm. The antibacterial activity was indicated by the formation of an inhibition zone against the tested microorganisms. The inhibition zones against E.coli for methanol extract, butanol fraction, and ethyl acetate fraction were 6.98 mm, 7.85 mm, and  7.88  mm,  respectively.    The  value  of  the  zone  of  inhibition  is  relatively  the  same  for  each sample.    In  addition,  the  inhibition  zones  of methanol  extract,  butanol  and  ethyl  acetate  fraction against Staphylococcus aureus were 7.42 mm, 14.40 mm, 7.90 mm, and 6.75 mm, respectively. The inhibition zone of the butanol fraction is higher than the others, this indicated that the antibacterial activity for butanol fraction is higher than other fractions.
Keywords : Antibacterial activity; Eucheuma spinosum; Escherichia coli; Staphylococcus aureus
(Article History:  Received 22-04-2021; Accepted 28-04-2021; Published 29-04-2021)

## PENDAHULUAN
Perairan  Sulawesi  Utara  memiliki keanekaragaman  hayati  yang  kaya  bahan bioaktif.  Kekayaan  alam    ini  belum dieksplorasi  secara  maksimal.  Salah  satu
kekayaan lautnya ialah rumput laut. Senyawa bioaktif  rumput  laut  memiliki  aktivitas farmakologi pada sistem metabolisme makhluk hidup.
Rumput  laut  (alga)  merah  di  antaranya Eucheuma spinosum , salah satu sumber bahan alam  dalam  jumlah  besar  dan  mudah dibudidaya.  Bahan  aktif  dari  alga Eucheuma cotonii dilaporkan sebagai anti bakteri (Safitri et al. , 2018) .  Berbagai  bahan  aktif  dari  alga diketahui  sebagai  anti  bakteri  (Haniffa et  al., 2012),  antivirus,  anti  jamur,  sitotoksik,  dan anti  alga  (Shanmughapriya et  al. ,  2008; Vallinayagam et al., 2009). Izzati (2007) juga menyatakan  bahwa  beberapa  rumput  laut berpotensi sebagai antibakteri.
Eucheuma spinosum merupakan spesies rumput laut merah yang sudah dibudidaya dan digunakan  sebagai  bahan  pangan  sumber karagenan dan antioksidan. Senyawa antioksidan  merupakan  metabolit  sekunder yang  sangat  penting  bagi  tubuh  karena berfungsi sebagai radikal bebas. Radikal bebas sangat dihindari  karena merupakan penyebab berbagai  penyakit.  Selain  itu,  senyawa metabolit  sekunder  memililiki  perbedaan aktivitas tergantung pada jenisnya. Sejauh ini riset  mengenai  rumput  laut  lebih  difokuskan pada  produk  karagenan  dan  pigmen  yang dihasilkannya  untuk  skala  industri  ataupun ekspor.
Senyawa metabolit primer atau sekunder  dari  rumput  laut  diduga  memili kandungan  senyawa  bioaktif  potensial  bagi industri kesehatan. Selain itu, juga ditemukan bahwa  alga  memiliki  aktivitas  antiviral, antibakteri  dan  antifungal  yang  mampu menghambat  pertumbuhan  mikroorganisme patogen (Vitor et al ., 2002).
Eucheuma  spinosum termasuk  spesies rumput  laut  merah  yang  mengandung  serat pangan,  vitamin  A,  B,  C,  karoten,  senyawa antioksidan  maupun  antibakteri.  Kandungan nutrisi  dan  senyawa  bioaktif  yang  kaya  pada rumput  laut E.  spinosum tersebut,  sangat menarik dilakukan telaah lebih lanjut tentang potensi  senyawa  antibakteri  terhadap  ekstrak dan fraksinya.
Berdasarkan  uraian  di  atas,  perlu dilakukan  penelitian lanjtan guna mengetahui aktivitas  dan  kandungan  senyawa  bioaktif ekstrak  rumput laut E.  spinosum sebagai antibakteri  terhadap Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus .  Hasil  penelitian diharapkan  dapat  memberikan  informasi tentang  upaya  pemanfaatan  bahan  alam rumput laut E. spinosum sebagai antibakteri.

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan Alat
Bahan  uji yang digunakan ialah rumput laut Eucheuma spinosum segar sebanyak 5 kg, diambil  dari  perairan  Pulau  Nain  Sulawesi Utara.  Pelarut yang digunakan ialah : metanol, etil  asetat,  dan  butanol.  Bakteri  uji  yang digunakan  ialah Escherichia  coli ATCC 25922  dan Staphylococcus  aureus ATCC 6538 . Alat-alat  yang  digunakan  ialah: autoklaf,  cawan  petri, rotary  evaporator , inkubator,  mikro  pipet,  pipet  tetes,  dan  tip pipet.

## Metode

## Pembuatan Ekstrak
Rumput laut selama 4 hari dikeringkan di  bawah  sinar  matahari.  Sampel  yang  sudah kering  dipotong-potong  dan  dihaluskan menggunakan blender sampai menjadi serbuk. Ditimbang 50 g serbuk, dimasukkan ke dalam tabung  Erlenmeyer  500  ml.  Selanjutnya selama  3  hari,  dilakukan  perendaman  dalam larutan  metanol  96%.  Berikutnya  dilakukan fraksinasi  menggunakan  pelarut  butanol  dan etil  asetat.  Konsentrasi  ekstrak  dan  kontrol diatur  sebesar  10.000  ppm.  Larutan  disaring memakai kertas saring. Ekstrak yang dihasilkan  selanjutnya  dipekatkan  dengan rotary evaporator pada suhu 40 o C (Iskandar et al. ,  2009).  Kontrol  yang  digunakan  selain kontrol negatif untuk metanol, juga menggunakan  Amoxicilin  sebagai  kontrol positif.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri    dilakukan dengan  metode Disk  Diffusion Testing menggunakan  mikroorganisme Escherichia coli ATCC 25922 dan Staphylococcus aureus ATCC 6538.  Metode difusi dilakukan dengan proses pengenceran, yakni senyawa antibakteri  diencerkan  hingga  diperoleh konsentrasi yang diinginkan, kemudian suspensi kedua bakteri uji tersebut ditambahkan  ke  dalam  media  cair  dan diinkubasi.  Pertumbuhan  bakteri  diamati dengan  adanya  kekeruhan  dalam  suspensi sampel.  Konsentrasi  suspensi  uji  senyawa antibakteri  yang  terlihat  jernih  yang  berarti bahwa  bakteri  uji  tidak  tumbuh,  ditetapkan sebagai Konsentrasi Hambat Minimal (KHM) atau Minimal Inhibitory Concentration (MIC). Selanjutnya,  suspensi  KHM  tersebut  dikultur
ulang  pada  media  cair  tanpa  bakteri  uji  atau senyawa  antibakteri  untuk  memastikan  ada tidaknya  aktivitas  penghambatan.  Suspensi KHM  diinkubasi  selama  18-24  jam.  Media cair yang tetap terlihat jernih dapat dipastikan sebagai  KHM.  Perhitungan  aktivitas  anti bakteri  juga  dilakukan  dengan  menggunakan media padat, dengan mengukur diameter zona bening  yang  terbentuk  yang  menunjukkan penghambatan,  dikurangi  diameter  disk setelah 24 jam masa inkubasi. Diameter zona hambat diukur mengunakan jangka sorong.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil pengamatan zona hambat sampel terhadap  bakteri Escherichia  coli ATCC 25922 dapat dilihat pada Tabel 1. Berdasarkan  Tabel  1,  terlihat  bahwa  hasil pengujian  aktivitas  antibakteria E.  coli terhadap  masing-masing  sampel  uji  yaitu ekstrak kasar, fraksi etil asetat, fraksi butanol, dan  kontrol  Amoxicilin  dari  rumput  laut E.spinosum memperlihatkan  adanya  aktivitas antibakteri, yang ditunjukkan dengan terbentuknya  zona  penghambatan  terhadap pertumbuhan bakteri uji.
Tabel 1. Kadar hambat minimal (KHM) ekstrak Eucheuma. spinosum terhadap bakteri E. coli
Pengamatan  zona  hambat  sampel, terhadap bakteri S. aureus ATCC 6538 dapat dilihat  pada  Tabel  2.    Dari  Tabel  2    terlihat bahwa  hasil  pengujian  terhadap  bakteri S. aureus untuk masing-masing sampel uji yaitu ekstrak kasar, fraksi butanol, fraksi etil asetat,
kontrol  negatif    pelarut  metanol,  dan Amoxicilin  dari  rumput  laut E.  spinosum menunjukkan  aktivitas  antibakteri  yang ditandai  dengan  terbentuknya  zona  hambat terhadap bakteri uji S. aureus .
Tabel 2 .  Kadar hambat minimal (KHM) ekstrak Eucheuma. spinosum terhadap bakteri S. aureus
No.  Sampel dan konsentrasi        Diameter KHM (mm)   Rata-rata       Keterangan (ppm)                                  1           2                       (mm)
1      Ekstrak (10.000)                           6,90     7,95                     7,42      Aktif sampel dan pelarut 2.     Fraksi butanol (10.000)               11,20    17,60                  14,40     Aktif sampel dan pelarut 3.     Fraksi etil asetat (10.000)             7,90     7,90                     7,90      Aktif sampel dan pelarut 4.     Kontrol pelarut metanol
(negatif)                                        6,75     6,75                     6,75      Aktif sampel dan pelarut
5.     Kontrol Amoxicilin (10.000)     32,80    32,80                  32,80 Susceptible
Dari  Tabel  1,  terlihat  bahwa  luas/ besarnya  zona  hambat  pada  konsentrasi 10.000  ppm  masing-masing  sampel  ekstrak rumput laut Eucheuma spinosum untuk bakteri E.  coli dengan  pelarut  metanol  (6,98  mm), fraksi  butanol  (7,85  mm),  fraksi  etil  asetat (7,88  mm),  dan  kontrol  Amoxicilin  (21,70 mm). Pengujian tersebut menunjukkan terbentuknya  zona  hambat  yang  relatif  sama pada media dengan bakteri uji.
Pada  Tabel  2,  terlihat  bahwa  luas/ besarnya  zona  hambat  pada  konsentrasi 10.000  ppm  masing-masing  sampel  ekstrak rumput laut Eucheuma spinosum untuk bakteri S. aureus dengan pelarut metanol (7,42 mm), fraksi  butanol  (14,40  mm),  fraksi  etil  asetat (7,90  mm),  kontrol  pelarut  metanol    (6,75 mm),  dan  kontrol  Amoxicilin  (32,80  mm). Pengujian tersebut menunjukkan terbentuknya zona  hambat  pada  media  dengan  bakteri  uji. Zona  hambat  untuk  fraksi  butanol  memiliki
No.  Sampel dan konsentrasi            Diameter KHM (mm)      Rata-rata       Keterangan (ppm)                                    1         2                       (mm)
1.      Ekstrak (10.000)                           7,75     6,20                     6,98 Aktif 2.      Fraksi butanol (10.000)                9,45     6,25                     7,85 Aktif 3.      Fraksi etil asetat (10.000)            7,80      7,95                     7,88 Aktif 4.      Kontrol pelarut metanol (negatif)                                         -            -                           -                     - 5.      Kontrol Amoxicilin (10.000)     21,70    21,70                   21,70 Susceptible
nilai yang lebih besar (14,40 mm), dibanding fraksi lainnya. Pelarut metanol yang digunakan sebagai kontrol negatif
memberikan  zona  yang  relatif  sama  dengan ekstrak  metanol  dan  fraksi  etil  asetat. Beberapa  penelitian  menyatakan  bahwa senyawa  antibakteri  mudah  larut  pada senyawa  metanol  dan  etanol,  karena  kedua senyawa  ini  sebagai  senyawa  aromatik  dan organik  (Wiyanto,  2010).  Antibakteri  dapat diklasifikasikan menurut mekanisme kerjanya,  yaitu  antibakteri  yang  bekerja sebagai penghambat pertumbuhan dinding sel, antibakteri  pengubah  permeabilitas  membran sel  atau  penghambat    transpor  aktif  dalam membran sel, antibakteri penghambat sintesis protein,  dan  antibakteri  penghambat  sintesis asam  nukleat  sel.  Aktivitas  antibakteri  terdiri dari  2  jenis,  yaitu  bersifat  bakteriostatik (menghambat  pertumbuhan  namun  tidak membunuh patogen) dan  bersifat bakterisidal (membunuh  patogen  dalam  kisaran  luas) (Jawetz et  al. ,  2001).    Senyawa  antibakteri dalam  ekstrak  metanol  rumput  laut E. denticullatum didominasi  oleh  senyawa turunan asam karboksilat yaitu asam heksadekanoat (41.33%), asam 9-
oktadekanoat  (7.18%)  dan  senyawa  turunan keton  steroid  yaitu  cholest-5-ene-3-bromo (5.35%).
Bakteri S.  aureus merupakan  bakteri patogen karena mampu berkembang biak dan tersebar luas dalam jaringan dengan produksi zat  ekstra  selular  yang  banyak.    Infeksi S. aureus ini  dapat  menimbulkan  penyakit  di jaringan  atau  organ  tubuh.  Gejala  khas  yang ditimbulkan, adalah peradangan, nekrosis, dan pembentukan  abses.  Infeksi  dapat  berupa furunkel yang ringan pada kulit sampai berupa pigmen  pada  manusia.  Kecuali  impetigo, umumnya  ini  menimbulkan  penyakit  yang bersifat  sporadik  bukan  epidemik  (Jawetz et al. , 2001). Menurut  Taskin et  al. (2007),  ekstrak kasar  alga  uji  menunjukkan  penghambatan terhadap S.  aureus dan  aktivitas  tertinggi ditunjukkan  oleh U.  rigida .  Penelitian  lain menemukan  bahwa  aktivitas  penghambatan tertinggi  ditunjukkan  oleh C.  officinalis terhadap E.  aerogenes (34.00  ±  1.00  mm), selanjutnya D.  dichotoma menunjukkan penghambatan paling rendah  terhadap E. coli dan E. faecalis (10.66 ± 1.52 mm). Selain itu, aktivitas spektrum yang paling luas ditunjukkan oleh ekstrak C. barbata ,
sedangkan  aktivitas  yang  paling  rendah terhadap mikroorganisme ditunjukkan oleh D. dichotoma dan H. filicina . Hanapi et al. (2013) menyatakan bahwa ekstrak  metanol E.  spinosum menunjukkan peningkatan aktivitas penghambatan terhadap pertumbuhan  bakteri E.  coli, seiring  dengan peningkatan  konsentrasi  ekstrak.  Selain  itu, hasil penelitian uji aktivitas antibakteri ekstrak alga coklat
Sargassum
polycystum , menunjukkan adanya kemampuan menghambat  pertumbuhan  bakteri S.  aureus dan E. coli (Enida, 2011).

## KESIMPULAN
Ditemukan adanya aktivitas antibakteri pada rumput laut E. spinosum, ditandai dengan terbentuknya zona hambat terhadap bakteri E. coli ATCC  25922.  Besarnya  zona  hambat secara berurutan untuk ekstrak metanol, fraksi butanol, dan fraksi etil asetat, ialah : 6,98 mm, 7,85  mm,  dan  7,88  mm.    Nilai  zona  hambat tersebut, relatif sama untuk setiap sampel uji. Selain  itu,  aktivitas  antibakteri  terhadap bakteri S. aureus ATCC 6538 juga ditunjukkan oleh E. spinosum . Besarnya zona hambat  secara  berurutan  untuk  ekstrak metanol, fraksi  butanol, fraksi etil asetat, dan kontrol  negatif  pelarut  metanol,  ialah  :  7,42 mm, 14.40 mm, 7,90 mm, dan 6,75 mm.  Zona hambat  fraksi  butanol  lebih  tinggi  dibanding yang  lain,  ini  menunjukkan  bahwa  aktivitas antibakteri S. aureus pada fraksi butanol lebih tinggi dibanding fraksi lainnya.

## DAFTAR PUSTAKA
Enida, F.N.R. 2011.  Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi n-heksana, Etilasetat, dan Etanol Rumput Laut Coklat Sargassum polycystum Terhadap Bakteri Eschericia  coli  dan  Staphylococcus aureus. Tugas Akhir (Tidak Diterbitkan), USU – Medan. Hanapi,  A.,  Fasya,  A.G.,  Mardiyah,  U.  & Miftahurrahman.    2013.    Uji  Aktivitas
Antioksidan  dan  Antibakteri  Ekstrak Metanol Alga Merah Eucheuma spinosum  dari  Perairan  Wongsorejo Banyuwangi.
Haniffa , M.A., Kavitha, K. 2012. Antibacterial  Activity  of  Medicinal Herbs  Against  the  Fish  Pathogen Aeromonas  hydrophila. Journal  of
Agricultural  Technology , 8(1) :205- 211). Iskandar,    Rusmiati,  D.  &  Dewi,  R.R.  2009. Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Etanol Rumput Laut ( Eucheuma cotonii )  Terhadap  Bakteri Escherichia coli dan Bacillus  cereus .  Jurusan Farmasi  Fakultas  MIPA  Universitas Padjadjaran Jatinangor Sumedang.
Izzati, M. 2007. Skreening Potensi Antibakteri pada  Beberapa  Spesies  Rumput  Laut terhadap  Bakteri  Patogen  pada  Udang Windu. Laboratorium Fungsi Tumbuhan, 9(2) : 62-67.
Jawetz . ,  J.L.  Melnick,  E.A.,  Adelberg,  G.F., Brooks,  J.S.,  Butel,  L.N.  &  Ornston. 2001. Mikrobiologi  Kedokteran ,  edisi 20.  University  of  California,  San Francisco.
Safitri, A., Srihardyastutie, A., Rosdiana, A. & Sutrisno.  2018.  Antibacterial  Activity and  Phytochemical  Analysis  of  Edible Seaweed Eucheuma  spinosum Against Staphyloccocus aureus . J.  Pure  App.
Chem Res, 7(3) : 308-315.
Shanmughapriya,  S.,  Manilal,  A.,  Sujith,  S.,
Selvin, J., Kiran, G.S. & Natarajaseenivasan, K. 2008. Anmicrobal  Activity  of  Seaweeds Extracts Against Multiresistant Pathogens. Annuals  of  Microbiology ,
58(3) : 535-541.
Taskin,  E.,  Ozturk,  M.  &  Kurt,  O.    2007. Antimicrobial  Activities  of  Some Marine  Algae  from  the  Aegean  Sea (Turkey).    Departement  of  Biology,
Faculty of Arts & Sciences, Celal.
Vitor J.M., Carvalho, A.F.F.U., Freitas, S.M.
&  Melo,  V.M.M.  2002.  Antibacterial Activity  of  Extracts                    of  Six Macroalgae  From  The  Northeastern Brazilian  Coast..  Departamento  de
Microbiologia,  Instituto  de  Ciencias Biologicas,  Universidade  Federal  de Minas Gerais, Belo Horizonte;Departamento  de  Biologia, Universidade Federal do Ceara, Fortaleza, CE, Brasil. Brazilian Journal of Microbiology, 33 : 311-313.
Wiyanto,  D.B.  2009.    Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Rumput  Laut Kappaphycus  alvarezi  dan  Eucheuma denticullatum Terhadap Bakteri Aeromonas  hydrophila  dan  Vibrio harveyii. Jurnal Kelautan , 3(1) : 1-17.