## JNPH
Volume 10 No. 1 (April 2022) © The Author(s) 2022
EFEK EKSTRAK ETANOL DAUN MENGKUDU (MORINDA CITRIFOLIA) TERHADAP SPLENOMEGALI PADA MENCIT BALB/C YANG DIINFEKSI PLASMODIUM BERGHEI
EFFECTS OF NONI LEAF ETHANOL EXTRACT (MORINDA CITRIFOLIA) AGAINST SPLENOMEGALY IN BALB/C MICE INFECTED WITH PLASMODIUM BERGHEI
JON FARIZAL, RAHMAD ABDILLAH, LENI MARLINA JURUSAN ANALIS KESEHATAN, POLTEKKES KEMENKES BENGKULU, BENGKULU, INDONESIA FAKULTAS FARMASI, UNIVERSITAS ANDALAS, PADANG, INDONESIA Email: jonfarizal77@gmail.com, Adil.grassia72@gmail.com

## ABSTRAK
Pendahuluan:  Demam  malaria   merupakan   penyakit  yang  masih   menjadi  masalah  di   negara berkembang.  Plasmodium berghei  adalah Parasit intraseluler fakultatif, maka sistem imunitas yang berperan yaitu sistem seluler. Morinda citrifolia merupakan tanaman obat tradisional yang mengandung banyak senyawa aktif yang dapat menurunkan indek splenomegali. Membuktikan efek ekstrak etanol morinda citrifolia terhadap splenomegali pada mencit Balb/c yang diinfeksi Plasmodium berghei. Metode: Jenis penelitian ini adalah eksperimental dengan rangcangan the post test only control group design pada hewan coba mencit balb/c yang terdiri dari 24 ekor mencit jantan, dibagi menjadi 4 kelompok. (K) merupakan kelompok kontrol di beri Aquadest, dan   kelompok   perlakuan   (P1,P2,P3)   yang   diberi   ekstrak   morinda   citrifolia   dengan   dosis bertingkat   (0,64   mg/kgBb/hari,   1,28   mg/kgBb/hari,   2,56   mg/kgBb/hari).   Proses   perlakuan diberikan selama 14 hari dan pada hari ke-6 diinfeksi dengan Plasmodium berghei sebanyak 0,1 ml x 10 6 secara intraperitoneal. Hari ke-14 dilakukan pembedahan isolasi limpa dilanjutkan pemeriksaan indek limpa. Data diperoleh dari penghitungan indek limpa. Uji beda untuk indek splenomegali menggunakan  One Way ANOVA  yang diteruskan dengan  Post Hoct Test.  Hasil dan   Pembahasan:  Ekstrak   etanol  Morinda   citrifolia  dapat   menurunkan   indek   limpa,   antara kontrol dengan perlakuan P1,P2 dan P3 mempunyai perbedaan yang signifikan, akan tetapi antar   perlakuan   tidak   ada   perbedaan   yang   signifikan.   Kesimpulan:   Ekstrak   etanol  Morinda citrifolia  berbagai   dosis   dapat   menurunkan   indek   splenomegali   pada   mencit   Babl/c   yang diinfeksi Plasmodium berghei.
Kata Kunci:  Splenomegali, Morinda citrifolia, Plasmodium berghei

## ABSTRACT
Intoduction:   Malaria   fever   is   a   disease   that   is   still   a   problem   in   developing   countries. Plasmodium berghei is a facultative intracellular parasite, so the immune system that plays a role is the cellular system. Morinda citrifolia is a traditional medicinal plant that contains many active   compounds   that   can   reduce   the   splenomegaly  index.   Proving   the   effect   of  Morinda citrifolia on splenomegaly in Balb/c mice infected with   Plasmodium berghei.  Method:  This type of research is experimental with the post test only control group design on experimental animals balb/c mice consisting of 24 male mice, divided into 4 groups. (K) is the control group given Aquadest, and the treatment group (P1,P2,P3) given morinda citrifolia in graded doses (0.64 mg/kgBb/day, 1.28 mg/kgBb/day, 2.56 mg/kgBb/day). The treatment process was given for 14 days and on the 6th day was infected with Plasmodium berghei as much as 0.1 ml x 10 6 intraperitoneally. On the 14th day, surgical isolation of the spleen was performed followed by examination   of   the   spleen   index.   Data   obtained   from   the   calculation   of   the   spleen   index. Different test for splenomegaly index using One Way ANOVA followed by Post Hoct Test. Result and Discussion: Morinda citrifolia can reduce spleen index, between the controls with P1, P2 and P3 treatments had a significant difference, but between treatments there was no significant   difference.   Conclusion:   Morinda   citrifolia   in   various   doses   can   reduce   the splenomegaly index in Babl/c mice infected with Plasmodium berghei.

## Keywords:  Splenomegaly, Morinda citrifolia, Plasmodium berghei

## PENDAHULUAN
Data World   Health   Organization pada tahun 2015 terjadi 214 juta kasus malaria dan 438.000 kematian. Sebanyak 88% kasus dan 90%   kematian   terjadi   di  Afrika,   mengambil kehidupan   seorang   anak   di   bawah   usia   5 tahun setiap 2 menit.
Indonesia   memiliki   resiko   tinggi penyakit   malaria   dari   tahun   2005-2015 sebanyak 82% kasus yang berasal dari Papua, Papua   Barat,   Maluku   dan   Maluku   Utara. Kasus   malaria   di   Provinsi   Bengkulu   pada tahun   2015   berdasarkan   pada   pemeriksaan laboratorium sebanyak 33.814 tanpa sediaan darah   dan   28.333   pemeriksaan   dengan sediaan   darah,   didapatkan   2.631   dinyatakan positif malaria, sebanyak 1.874.944 penduduk di   Provinsi   Bengkulu   beresiko   terhadap penyakit   malaria   dengan   jenis   kelamin perempuan   dan   laki-laki. Anopheles ditemukan   diseluruh   dunia   kecuali   di antartika, dan dari 430 spesies hanya  30-40 spesies   yang   mengirimkan   malaria   di   alam. Infeksi   malaria   pada   manusia   dan   hewan disebabkan   oleh   parasit   Plasmodium   yang ditularkan   oleh   nyamuk   Anopheles
(mentransmisikan malaria juga pada manusia) dan menginfeksi hati setelah disuntikkan ke dalam   aliran   darah   dengan   gigitan   nyamuk betina yang terinfeksi. Plasmodium memiliki kemampuan   untuk   menyebabkan   malaria pada   hewan,   termasuk   tikus   (tikus).   Infeksi Plasmodium berghei juga mempengaruhi otak dan   bisa   menyebabkan   komplikasi   serebral pada tikus laboratorium. Banyak pendekatan telah   dikembangkan   untuk   mengendalikan ancaman   nyamuk.   salah   satu   seperti pendekatan   untuk   mencegah   nyamuk ditanggung   penyakit   adalah   dengan membunuh   nyamuk   pada   tahap   larva. Larvasida   adalah   cara   sukses   mengurangi populasi   nyamuk   di   tempat-tempat   mereka berkembang   biak   sebelum   mereka   muncul menjadi dewasa. Pencegahan perkembangbiakan   nyamuk   melalui penggunaan larvasida adalah cara yang paling efektif untuk melawan dengan importunation nyamuk ini.
Morinda citrifolia (Noni) adalah satu di antara   banyak   obat   herbal   yang   digunakan secara luas selama 2000 tahun terakhir. Daun mengkudu merupakan tanaman yang banyak terdapat di Indonesia yang memiliki khasiat
mampu   menyembuhkan   penyakit,   dengan senyawa   kimia   yang   terdapat   pada   daun mengkudu   yaitu   Pyro-phorbide   a, Pheophorbide a, Purpin 7, dan  Pheophorbide phypolesper 8 . Mekanisme Morinda citrifolia sebagai   imunomodulator   dikarenakan kandungan  yang  terdapat  didalamnya  antara lain adalah alkaloid, flavonoid, tanin,dan lain- lain.   Akan   tetapi,   yang   berperan   dalam peningkatan   sistem   imun   adalah   Pyro- phorbide   a   dan   Pheophorbide   Phypolesper. Mekanisme   Pyro-phorbide   a   dan Pheophorbide
Phypolesper sebagai imunomodulator   pada Morinda   citrifolia kurang   lebih   sama   seperti   mekanisme   pada tanaman yang mengandung senyawa ini, yaitu dengan   meningkatkan   aktivitas   IL-2   dan proliferasi   limfosit.   Sel   CD4 + akan mempengaruhi proliferasi limfosit .
Dosis   daun   mengkudu   yang   digunakan pada penelitian ini di bagi menjadi tiga dosis bertingkat   yaitu   0,64   mg/kgBB/hari   peroral, 1,28   mg/kgBB/hari   peroral   dan   2,56 mg/kgBB/hari   peroral   mencit.   Pemilihan dosis   bertingkat   ini   didasarkan   pada   dosis penggunaan   daun   mengkudu   di   Masyarakat yang   digunakan   untuk   pengobatan   malaria. Dosis   yang   digunakan   di   Masyarakat   untuk mengoabati   malaria   adalah   10-100   gram, kemudian dihitung dan dikonversikan kepada mencit sehingga diperoleh dosis diatas.

## METODE PENELITIAN
Penelitian   ini   merupakan   penelitian eksperimental   laboratorium   dengan   desain The   Post   Test-Only   Control   Group yang menggunakan   hewan   coba   mencit   Balb/c sebagai   objek   penelitian.   Perlakuan   adalah pemberian   ekstrak   etanol Morinda   citrifolia dengan keluaran adalah Aktivitas fagositosis sel makrofag pada cairan peritoneum mencit Balb/c diinfeksi plasmodium berghei .
Populasi   dan   Sampel   penelitian   ini meliputi   mencit   jantan   strain   Balb/c   yang diperoleh dari Laboratorium Farmasi Unand Padang.   Populasi   adalah   mencit   Balb/c berusia   8-10   minggu   beratnya   20-30   mg. Sampel   penelitian   diperoleh   dari   populasi
dengan   cara   pengambilan   sampel   secara simple random sampling, kriteria inklusi dan eksklusi   untuk   menghindari   bias   dalam pelakuan   diambil   sebagai   berikut.   Kriteria Inklusi: Faktor keturunan mencit diambil dari populasi   mencit   yang   secara   genetik   adalah homogen   Strain   Balb/c,   tidak   ada   kelainan anatomis, sehat dan aktif selama adaptasi, dan penempatan   kandang   ditempatkan   pada tempat yang sama di Laboratorium Imunologi Fakultas   Farmasi   Universitas   Andalas Padang.
Bahan   dan   Reagen   Daun Morinda citrifolia yang diperoleh dari Rejang Lebong, Bengkulu. Morinda citrifolia yang digunakan adalah  daun yang masih  segar, Plasmodium berghei diambil   dari   Laboratorium Mitokondria   dan   Penyakit   Infeksi   Institut Riset   Eijkman   Jakarta, Peritoneal   Exudate Cell (PEC)   mencit   jantan   strain   Balb/c berumur   8-10   minggu,   sehat,   aktivitas   dan tingkah   laku   normal,   diperoleh   dari Laboratorium   Imunologi   Fakultas   Farmasi Universitas   Andalas,   dan   Larutan Roswell Park   Memorial   Institute (RPMI)   komplit, Bovine   Serum   (FBS)   10   %,   alkohol   70   %, asam   asetat   3   %,   Latex   beads,   methanol absolute,   Giemsa   20%, Phosphate   Buffered Saline (PBS). Alat-alat yang digunakan dalam penelitian   ini   adalah:   mikroskop, spuit disposable 1 ml, 10 ml, timbangan elektrik, objek   glass,   tabung   reaksi,   kandang   hewan coba, yellow dan blue tip , incubator CO 2 5%, alat-alat bedah steril, laminar air flow, Elisa reader , pipet Pasteur, pipet Eppendorf , bilik hitung Neuebaeur improve , sentrifugasi sigma 310   AK   yang   dilengkapi   pengatur   suhu, microplate 24 well dasar   rata, thermanox plastic coverslip diameter 13 mm, falcon blue max 15 ml poplpropylene conical tube . Pengambilan   Sampel   daun   mengkudu ( Morinda   citrifolia )   yang   telah   dibersihkan dengan cara pencucian dengan air mengalir, kemudian   dikeringkan   dan   diserbuk   hingga siap   untuk   di   ekstraksi   dengan   metode maserasi. Pengolahan sampel diambil serbuk daun   mengkudu   sebanyak   400   gram, kemudian di maserasi dengan pelarut etanol 96% selama 2 x24 jam. Simplisia yang yang
telah   dimaserasi   dengan   larutan   etanol disaring   hingga   di   peroleh   filtrat.   Filtrat pelarut   tersebut   diuapkan   dengan menggunakan alat rotary evaporator sehingga dihasilkan ekstrak kering daun mengkudu. Kelompok perlakuan hewan uji hewan coba dikelompokan   menjadi   4   kelompok   dan masing-masing kelompok terdiri dari 6 ekor mencit   jantan.   Kelompok   I   sebagai   kontrol mencit hanya di beri aquades. Kelompok II di berikan ekstrak daun mengkudu dengan dosis 0,64   mg/kgbb.   Kelompok   III   diberikan dengan dosis 1,28 mg/kgbb dan Kelompok IV diberikan dengan dosis 2,56 mg/kgbb. Pada hari ke-1 sampai ke 13 mencit diberi zat uji dan   kontrol   secara   peroral   dan   hari   ke-6 mencit diinfeksi Plasmodium berghei .
Uji Fagositosis Makrofag pada hari ke- 14 diambil cairan eksudat peritoneal Mencit dibunuh   dengan   cara   dislokasi   servikal. Mencit   diletakkan   dalam   posisi   telentang, kulit bagian perut dibuka dan dibersihkan dari selubung   peritoneum   dengan   alkohol   70% dan   disuntikkan   ±   10   ml   RPMI   dingin   ke rongga   peritoneum.   Kemudian   didiamkan selama   ±   3   menit   sambil   digoyang-goyang secara   perlahan   (agar   makrofag   yang menempel   di   rongga   peritoneum   dan   di sekitar   usus   dapat   terlepas   dan   tersuspensi dalam   medium   RPMI).   Cairan   peritoneal dikeluarkan   dari   rongga   peritoneum   dengan dilakukan penekanan organ dalam dengan 2 jari,   kemudian   cairan   diaspirasi   dengan tabung   injeksi.   Aspirat   dipusingkan   pada 1.200 rpm, 40 0 C selama 10 menit. Supernatan yang   terbentuk   dibuang   dan   kemudian ditambahkan   3   ml   medium   RPMI   komplit (mengandung FBS 10%). Jumlah sel dihitung dengan
hemositometer ,
kemudian
diresuspensikan   dengan   medium   komplit sehingga   didapat   suspensi   sel   dengan kepadatan   2,5   x   10 6 /ml.   Suspensi   sel   yang telah   dihitung   ditumbuhkan   dalam plate 24 sumuran   yang   telah   diberi coverslips bulat, setiap sumuran berisi 200 μl (5x10 5 sel). Sel diinkubasikan dalam inkubator CO 2 5%, 37 0 C selama   30   menit,   kemudian   ditambahkan medium komplit 1 ml/sumuran dan inkubasi
dilanjutkan selama 2 jam. Sel dicuci dengan RPMI   2x   kemudian   ditambahkan   medium komplit   1   ml/sumuran   dan   inkubasi dilanjutkan   sampai   24   jam.   Pemeriksaan Fagositosis   Makrofag   dengan Latex   Beads, Suspensi makrofag yang telah dikultur pada microplate 24 wells yang   telah   diberi coverslips ,   setiap   sumuran   200   μl   (5x10 5 ), diinkubasi   dalam   CO 2 5%   37 0 C   selama   30 menit.   Tambahkan   medium   komplit   1   ml setiap sumuran, inkubasikan selama 24 jam. Makrofag   yang   telah   dikultur   sehari sebelumnya   dicuci   dengan   RPMI   2   kali. Latex   beads diresuspensikan   sehingga didapatkan konsentrasi 10 kali lipat . Cuci 3 kali   dengan   PBS   untuk   menghilangkan partikel yang tidak difagosit. Keringkan pada suhu   ruangan,   fiksasi   dengan   methanol absolut.   Setelah   kering, coverslips dipulas dengan Giemsa 20% selama 30 menit. Cuci dengan aquadest, angkat dari sumuran kultur dan   keringkan   pada   suhu   kamar.   Setelah kering   di- mounting pada   kaca   objek. Kemampuan fagosit dihitung dari persentase sel   yang   memfagosit   partikel latex yang kemudian dihitung pada 200 sel dikali jumlah rata-rata   partikel   pada   sel   yang   positif   dan dinyatakan   dalam   indeks   fagositosis.   Data hasil   penelitian   diolah   secara   statistik menggunakan   Analisisn   varian   (ANOVA) dilanjutkan dengan uji Tukey HSD.

## HASIL PENELITIAN
Tabel   1.  Hasil   Analisis   rerata   Indek Splenomegali   masing-masing   Kelompok perlakuan
Group n Mean ± SD p K 6 366,67 ± 49,666 P1 6 240,00 ± 51,769 0.0001 P2 6 200,00 ± 42,895 P3 6 140,83 ± 13,197
Tabel   1   diketahui   rerata   fagositosis makrofag   pada   keempat   kelompok menunjukkan   kadar   fagositosis   makrofag yang  meningkat  seiring  dengan  peningkatan dosis.
Tabel   2.   Uji Post   Hoc   Test Perbedaan Indeks Indek Splenomegali masing-masing Kelompok perlakuan
Group K P1 P2 P3 K 0,000* 0,000* 0,000* P1 0,000* 0,381 0,003* P2 0,000* 0,381 0,105 P3 0,000* 0,003* 0,105
Tabel   2   diketahui   indeks   splenomegali tampak antara kelompok kontrol (K) dengan masing-masing kelompok perlakuan P1,P2,P3 terdapat   perbedaan   yang   signifikan   dengan nilai   P<0,05,   sedangkan   antara   masing- masing   kelompok   perlakuan   tidak   terdapat perbedaan yang signifikan.

## PEMBAHASAN
Mencit yang digunakan dalam penelitian diperoleh   dari   Laboratorium   Imunologi Fakultas   Farmasi   Universitas   Andalas Padang.   Banyaknya   mencit   yang   digunakan adalah 24 ekor, di mana tiap kelompok dibagi menjadi   6   ekor.   Mencit   kemudian diadaptasikan   selama   tujuh   hari   di Laboratorium   Imunologi   Fakultas   Farmasi Universitas  Andalas   Padang.   Mencit   selama diadaptasi  diberi  pakan  standar  dan minum. Mencit   yang   telah   diadaptasi   selama   tujuh hari kemudian diberi perlakuan yang terlebih dahulu ditimbang berat badannya.
Pemberian   ekstrak   etanol Morinda Citrifolia dengan dosis P1: 0,64 mg/hari, P2: 1,28   mg/hari,   P3:   2,56   mg/hari   diberikan selama 13 hari sebanyak dosis ekstrak dibagi dosis   lazim   kali   berat   badan   sama   dengan ml/hari, begitupula dengan kelompok kontrol diberi aquadest ml/hari, di mana pada hari ke 6   mencit   diinfeksikan Plasmodium   Berghei . Pengamatan fisik terhadap mencit dilakukan pada hari pertama sampai hari ke 6 sebelum diinfeksikan Plasmodium Berghei yang akan dibandingkan   dengan   kondisi   mencit   pasca diinfeksikan Plasmodium Berghei .
Mencit   pada   kelompok   kontrol   pada penelitian hari ke 5 mati sebelum diinfeksikan Plasmodium   Berghei ,   ada   beberapa
kemungkinan   mencit   tersebut   mati   dalam penelitian.   Pertama   bisa   disebabkan   oleh stress  yang  dapat  menurunkan  sistem imun, dimana stress ini mempengaruhi sistem imun tubuh  melalui   stimulasi  sekresi  kortisol  dan adrenalin   serta   berpengaruh   terhadap pelepasan   noradrenalin   dan   postganglion simpatik   terminal   saraf   di   pembuluh   darah dan   organ   limfoid.   Efek   sistemik   dari glukokortikoid   dan   katekolamin   ini mempengaruhi   sitokin   sehingga   terjadi penurunan produksi sitokin yang dibutuhkan dalam   menanggapi   infeksi   bakterial   melalui respon imun seluler.
Mencit pada  kelompok  P3 mati  selama masa penelitian pada hari ke 6 pascainfeksi. Jumlah   kematian   3   ekor.   Kematian   mencit pada perlakuan P3 ini seharusnya dilakukan penelitian terhadap organ-organnya, misalnya hepar   dan   ginjal   untuk   menentukan mekanisme kematian yang tepat. Akan tetapi, dugaan   penyebab   kematian   saat   ini   diduga kandungan   resin   yang   terkandung   dalam ekstrak etanol Morinda Citrifolia . Kandungan resin   ini,   apabila   dikonsumsi   terus   menerus dalam   dosis   yang   tinggi   maka   akan   terjadi terakumulasi   zat   toksin   resin   dalam   tubuh yang akan menyebabkan efek samping pada sistem   saraf   yang   bisa   menyebabkan kematian.
1. Indeks Splenomegali
Hasil   penelitian   ini   adalah   antara kelompok   kontrol   dengan   perlakuan   P1, perlakuan   P2   dan   perlakuan   P3   didapatkan perbedaan   yang   signifikan.   Selain   itu   pada kelompok   K,   P1,   P2   dan   P3   menunjukkan peningkatan   aktivitas   fagositosis   makrofag sesuai   dengan   peningkatan   dosis   yaitu   K< P1< P2 < P3.
Infeksi Plasmodium   Berghei ini mengaktifkan sistem imun selluler. Makrofag sebagai fagosit profesional, melakukan fungsi sebagai   efektor,   setelah   sel   diaktivasi   oleh mikroba,   sitokin   dan   stimulus   lainnya. Pemberian ekstrak etanol Morinda Citrifolia mampu mengaktivasi makrofag.
Peran   makrofag   yang   teraktivasi   dalam
respon imun seluler ada 3 (1) memfagosit dan membunuh mikroba intrasel melalui produksi molekul   mikrobisidal   (2)   menstimulasi inflamasi   akut   lokal   (3)   membersihkan jaringan mati akibat proses infeksi bakteri dan reparasi jaringan.
Pheophorbide   Phypolesper   dalam   suatu tanaman   dapat   memodulasi   berbagai   sistem imun, Pheophorbide Phypolesper juga bersifat lipofilik   yang   dapat   merusak   membran mikroba. Pheophorbide Phypolesper ini bisa meningkatkan   aktivitas   IL-2   dan   proliferasi limfosit.   Sel   CD4 + ,   akan   mempengaruhi proliferasi   limfosit   kemudian   menyebabkan sel Th1 teraktivasi. Sel Th1 yang teraktivasi akan   mempengaruhi   SMAF,   yaitu   molekul- molekul   termasuk   IFNγ   yang   dapat mengaktifkan   makrofag,   sehingga   makrofag mengalami   peningkatan   metabolik,   motilitas dan   aktivitas   fagositosis   secara   cepat   dan lebih efisien dalam membunuh, bakteri atau mikroorganisme patogen.

## KESIMPULAN
Rerata indek splenomegali pada keempat kelompok   menunjukkan   penurunan   seiring dengan peningkatan dosis. Pemberian ekstrak etanol Morinda Citrifolia berbagai dosis yang paling   kuat   efeknya   2,56   mg/kg BB/hari/mencit   dapat   menurunkan   indek splenomegali   pada   mencit   Balb/c   yang diinfeksi Plasmodium   Berghei dibandingkan dengan   yang   tidak   diberi   ekstrak   etanol Morinda Citrifolia.

## SARAN
Disarankan   pada   penelitian   selanjutnya bisa mendapatkan hasil yang lebih baik.

## DAFTAR PUSTAKA
Cancer   Chemoprevention   Research   Center. Mengkudu   (Morinda   citrifolia   L.). 2016;1–4.
Darlina   .,   Kisnanto   T,   Fauzan  A.   Respons Hematopoitik   Mencit   Yang   Diinfeksi Dengan   Plasmodium   berghei   Stadium
Eritrositik Iradiasi Gamma. J Sains dan Teknol Nukl Indones. 2013;13(2):85–94. De Oliveira Paula S, De Sousa JA, De Brito ES,   Gallão   MI.   The   morphological characterization   of   the   dry   seeds   and reserve mobilization during germination in   Morinda   citrifolia   L.1.   Rev   Cienc Agron. 2016;47(3):556–63.
Gordon   P,   Okai   B,   Hoare   JI,   Erwig   LP, Wilson   HM.   SOCS3   is   a   modulator   of human   macrophage   phagocytosis.   J Leukoc   Biol.   2016;100(4):771–80.
Available from:
http://www.jleukbio.org/cgi/doi/10.1189/ jlb.3A1215-554RR
Harmita, Radji M. Buku Ajar Analisis Hayati. 3rd ed. Manurung J, editor. Jakarta: Buku Kedokteran EGC; 2010. 63-68 p.
Innocent O, Oke O, Anthony O. Plasmodium berghei   Malarial   Infection   Reduces Blood   And   Brain   Glucose   Levels   In Experimental Mice . 2013;1(1):1–7.
Jambou R, El-Assaad F, Combes V, Grau GE.
In vitro culture of Plasmodium berghei- ANKA   maintains   infectivity   of   mouse erythrocytes   inducing   cerebral   malaria. Malar J. 2011;10:2–6.
Janse   CJ,   Waters  AP.   Plasmodium   berghei: The   application   of   cultivation   and purification   techniques   to   molecular studies   of   malaria   parasites.   Parasitol Today.   1995;11(4):138–Available   from: http://www.sciencedirect.com
Jubrail   J,   Kurian   N,   Niedergang   F.
Macrophage   phagocytosis   cracking   the defect   code   in   COPD.   Biomed   J.
2017;40(6):305–Available from: https://doi.org/10.1016/j.bj.2017.09.004
Kemenkes   RI.   profil   Kesehatan   Indonesia.
Vol.   70,   Kesehatan.   2016.   1780-1790 p.Available
Kaur K, Chang HH, Topchyan P, Cook JM, Barkhordarian   A,   Eibl   G,   et   al. Deficiencies   in   natural   killer   cell numbers, expansion, and function at the pre-neoplastic stage of pancreatic cancer by   KRAS   mutation   in   the   pancreas   of obese   mice.   Front   Immunol.   2018;9 (Jun):1–12.
Puti I, Sabirin R, Maskoen AM, Hernowo BS.
Peran   Ekstrak   Etanol   Topikal   Daun Mengkudu ( Morinda citrifolia L .) pada Penyembuhan   Luka   Ditinjau   dari Imunoekspresi CD34 dan Kolagen pada Tikus   Galur   Wistar   Role   of   Noni (Morinda   citrifolia   L  .)   Leaf   Ethanolic Extract   Topical  Application   on   Wound Heal.   2011;45(4):226–33.   from:
http://www.depkes.go.id
Prevention   C   for   DC   and.   Anopheles
Mosquitoes. 2015;24(7):1–14.
R.   F.  The   incidence   of   environment   related
illnesses in North Bengkulu, Indonesia. J Environ Health [Internet]. 1994;57(1):16–8.   Available   from: http://ovidsp.ovid.com
Ramamoorthy L, Tizard IANR. Induction of
Apoptosis   in   a   Macrophage   Cell   Line RAW 264.7 By Acemannan , ( 1 , 4 ) -Acetylated Mannan. 1998;421:415–21.
Rethinam   P,   Pratap   UP.   Pharmacological properties   and   clinical   applications   of Morinda citrifolia L . 2015;10:1–18.
Soe UTM, Mya D, Chaw N, Naw D, Myint H.   Larvicidal   efficacy   of   Morinda citrifolia   L.   leaf   extract   against   three important mosquitoes. 2015;(5).
Sundrarajan   M,   Bama   K,   Bhavani   M,
Jegatheeswaran S, Ambika S, Sangili A, et   al.   Obtaining   titanium   dioxide nanoparticles   with   spherical   shape   and antimicrobial   properties   using   M. citrifolia leaves extract by hydrothermal method. J Photochem Photobiol B Biol.
2017;171(May):117–24.
Weekly   LS.   Patents ;   Patent   Application Titled   "   Method   and   Composition   for Administering   Bioactive   Compounds Derived   from   Morinda   Citrifolia   ". 2013;1–3.
World   Health   Organization.   World   Malaria
Report 2015. Avenue Appia; 2015.
Yildiz K, Ince AT, Gangarapu V, Bugdaci MS, Baysal B, Kayar Y, et al. Evaluation of concentrations   of   pro/anti-inflammatory cytokines   after   complication-free   ECRP in   cholangiocarcinoma.Turkish   J Gastroenterol. 2015; 25 1):133-7.
ZipcodeZoo. Morinda citrifolia. ZipcodeZoo. 2016.
Zhang   L   TI.   Activation   of   a   mouse macrophage cell line by acemannan : the major   carbohydrate   fraction   from  Aloe vera gel. Immunopharmacol. 1996;35 (2) : 119–28.