Evaluasi penambahan glutamin pada pakan terhadap struktur dan fungsi usus, serta pertumbuhan benih ikan lele, Clarias gariepinus (Burchell 1822)
[Evaluation of glutamine supplementation in the diet on the structure and function of the intestine and the growth performance of African catfish, Clarias gariepinus (Burchell 1822) juvenile]
Ismail Rahmat, Dedi Jusadi*, Mia Setiawati, Ichsan Ahmad Fauzi
1) Departemen Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogo r
Surel:ismailrahmatmunthe@gmail.com dedidj@apps.ipb.ac.id; siflounder@gmail.com miasetia@apps.ipb.ac.id ichsan.a.fauzi@gmail.com
*Kontributor utama
Diterima: 13 Januari 2021; Disetujui: 29 Mei 2021

## Abstrak
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengevaluasi  penambahan  Glutamin  bebas  (Gln)  pada  pakan  yang menghasilkan  struktur dan fungsi usus, serta kinerja pertumbuhan benih ikan lele Clarias gariepinus yang terbaik.  Pakan komersil disuplementasi Gln sebanyak 0% (kontrol), 0,7%, 1,4%  dan  2,1%. Ikan lele ukuran 2 ± 0,02  cm ditebar ke dalam 12 akuarium 50x40x35 cm 3 yang diisi air setinggi 30 cm dengan kepadatan 2000 ekor m -2 . Ikan dipelihara selama 30 hari, dan diberi pakan sesuai perlakuan tiga kali sehari sekenyangnya.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  laju  pertumbuhan  dan  biomassa  ikan  di  akhir penelitian memiliki respon kuadratik, dengan pertumbuhan maksimal tercapai pada perlakuan Gln 0,7%. Pola  respon  pertumbuhan  ikan  sejalan  dengan  distribusi  panjang  ikan.  Ikan  pada  perlakuan  0,7%  Gln memiliki  jumlah  ikan  berukuran  5-6  cm  lebih  sedikit  12%  dibandingkan  dengan  perlakuan  lainnya, sedangkan  ikan  dengan  ukuran  7-8  cm  lebih  banyak  dibandingkan  dengan  perlakuan  lainnya. Lebih tingginya pertumbuhan di perlakuan 0,7% Gln berkorelasi dengan vili yang lebih panjang, retensi protein yang lebih tinggi, yang pada akhirnya efisiensi pakan juga tinggi. Peningkatan asupan Gln di pakan juga menyebabkan  peningkatan  aktivitas  enzim  protease  usus,  dan  akumulasi  Gln  di  hati,  namun  tidak meningkatkan aktivitas enzim Superoksidase Dimutase (SOD) hati. Dari penelitian ini dapat disimpulkan bahwa penambahan Gln 0,7% pada pakan dapat memperbaiki struktur dan fungsi usus, serta meningkatkan target ukuran produksi benih ikan lele.
Kata penting: enzim, glutamin, lele, pertumbuhan, usus

## Abstract
A triplicate experiment was conducted to evaluate the effect of the diet supplemented with free glutamine (Gln) on intestinal structure and function, as well as the growth performance of African catfish Clarias gariepinus juvenile. The commercial feed was supplemented with Gln of either 0% (control), 0.7%, 1.4% or 2.1%. Fish measuring 2 ± 0.02 cm were stocked in 12 aquariums 50x40x35 cm filled with water at a volume of 50 L with a density of 2,000 fish m -2 . Fish were cultured for 30 days and fed on the diets three times a day at satiation. Results showed that the growth rate and biomass of the fish at the end of the experiment  had  a quadratic response,  with  the  maximum  growth  achieved  at  0.7% Gln  treatment. The response pattern of fish growth was in line with the distribution of fish length. Fish in 0.7% Gln treatment had number fish measuring 5-6 cm more than 12% less than other treatments, while fish measuring 7-8 cm were more than other treatments. Higher growth in the 0.7% Gln treatment correlated with longer villi, higher protein retention, and ultimately higher feed efficiency. Increased  intake of Gln  in the diet also caused an increase in intestinal protease enzyme activity, and accumulation of Gln in the liver, but did not increase the enzymes activity of the liver Superoxidase Dismutase (SOD). It can be concluded that feeding
on a diet supplemented with 0.7% Gln can improve the structure and function of the intestine, as well as increase the target size of catfish juvenile production.
Keywords: catfish, enzyme, glutamine, growth, intestine

## Pendahuluan
Pendederan ikan lele Clarias gariepinus merupakan salah satu segmen usaha yang me- nunjang keberhasilan produksi ikan lele un- tuk  usaha  pembesaran.  Permasalahan  yang sering  dijumpai  dalam  proses  pendederan adalah beragamnya ukuran benih yang diha- silkan. Pada akhir fase pemeliharaan, biasa- nya benih lele yang dipanen memiliki lebih dari 3 kriteria ukuran panjang.  Beragamnya ukuran benih lele diduga akibat dari kurang optimalnya  penyerapan  nutrien  serta  persa- ingan  konsumsi  pakan  akibat  padat  tebar yang tinggi. Kualitas dan jumlah pakan yang dikonsumsi  ikan  akan  berpengaruh  pada morfologi usus (Onura et  al. 2018). Hal ini akhirnya  akan  berpengaruh  pada  efisiensi pencernaan  dan  penyerapan  nutrien  (Kho- jasteh 2012). Perlu upaya peningkatan struk- tur dan fungsi usus melalui pemberian bahan tambahan agar penyerapan nutrien lebih efisi- en.  Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan oleh  Shen et  al. (2013)  terdapat  hubungan antara  pemberian  glutamine  dengan  variasi ukuran antar bobot ikan.
Glutamin (Gln)  merupakan asam amino yang  dapat  disintesa  dalam  tubuh,  namun pada kondisi tertentu, misalnya fase partum- buhan yang tinggi di stadia larva dan benih, kebutuhan Gln oleh tubuh meningkat, sehing- ga Gln harus diperoleh dari pakan (Onura et
al. 2018).  Pemberian  Gln  dilakukan  agar
dapat  memacu  pertumbuhan  usus  dan panjang vili (Yan dan Qiu-Zhou 2006) pada ikan mirror carp Cyprinus carpio (Hong et al. 2014), red drum Sciaenops ocellatus (Cheng
et  al . 2011), channel catfish Ictalurus  punc- tatus (Pohlenz et  al. 2012), serta ikan patin
Pangasius  hypophthalmus (Dewi  2019).
Perubahan  morfologi  yang  terjadi  ditandai dengan peningkatan jumlah dan tinggi lipatan usus serta peningkatan mikrovili dan entero- sit ikan (Hong et al 2014; Cheng et al . 2011; Pohlenz et  al. 2012).  Perbaikan  morfologi usus  tersebut  berkaitan  dengan  peran  gluta- min sebagai bahan bakar utama sel epitel usus (Li et  al. 2019;  Luquetti et  al 2016),  serta sebagai  prekursor  biosintesis  nukleotida purin dan gula amino yang berperan penting untuk pertumbuhan dan diferensiasi sel (Liu
et al. 2015; Li et al. 2017; Li et al. 2018; Curi et  al 2005;  Carey et  al. 2015;  Zhao et  al 2017). Perbaikan morfologi dan fungsi usus ikan tersebut, menyebabkan efisiensi peman- faatan  pakan  meningkat,  sehingga  pertum- buhan meningkat (Cheng et  al . 2011; Wang et  al. 2011;  Pereira et  al. 2017  Zhang et
al. 2017; Yu et al 2016).
Gln memiliki peran serbaguna bagi meta- bolisme  ikan  seperti  pertumbuhan,  perta- hanan,  antioksidan,  perkembangan  usus, detoksifikasi  ammonia  serta  imunitas  (Li et al .  2009).  Pada  ikan,  pakan  yang  ditambah Gln dapat meningkatkan sistem imun bawaan
(Cheng et al. 2012). Gln dapat meningkatkan aktivitas superoksida dismutase (SOD) pada saluran  usus  serta  meningkatkan  retensi protein  ikan  gilthead  sea  bream Sparus
aurata (Coutinho et  al. 2016;  Solares et  al. 2015). Ikan yang diberi pakan yang ditambah Gln juga memiliki perlindungan stress oksi- datif yang lebih baik (Han et al. 2014; Ding et al. 2017; Hu et al. 2015 ). Konsumsi glutamin juga  dapat  meningkatkan  aktifitas  antiok- sidan  tubuh  sehingga  mencegah  terjadinya stress oksidatif (Murniasih et al. 2019). SOD merupakan enzim antioksidan dalam sel yang berperan sebagai pertahanan terhadap senya- wa radikal bebas seperti ROS ( reactive oxy-
gen species ) yang dihasilkan selama metabo- lisme. Peningkatan aktivitas SOD akan me- macu  sintesis  GSH  sehingga  meningkatkan kapasitas eliminasi radikal bebas serta melin- dungi sel dari kerusakan (Shi et al . 2016).
Pada berbagai penelitian, Gln juga memi- liki  fungsi  sebagai growth  enhancer pada berbagai  jenis  ikan.  Pada  ikan  Jian  carp, mirror  carp,  red  drum,  channel  catfish  dan patin, hasil optimal diperoleh setelah masing- masing mengkonsumsi pakan yang ditambah Gln sebesar 1,2 %, 0,82 %, 2%, 2%, dan 1 % (Yan dan Qiu-Zhou 2006; Hong et al. 2014;
Cheng et al . 2011; Pohlenz et al. 2012; Dewi
2019). Dosis optimal penambahan Gln juga berbeda  pada  ikan  lainnya,  seperti  pada hybrid  striped  bass Morone  chrysops×
Morone  saxatilis ,  ikan  botia Chromobotia macracanthus ,  Japanese  flounder Paralich- thys  olivaceus dan  half-smooth  tongue  sole ( Cynoglossus  semilaevis Günther).  Kinerja
pertumbuhan ikan yang lebih baik didapatkan jika  masing-masing  ikan  tersebut  diberi pakan dengan dosis Gln sebesar 1%, 1%, 1,5 % dan 0,63% (Cheng et al. 2012; Murniasih et al. 2019; Han et  al. 2014; Liu et  al. 2015). Berdasarkan data kebutuhan Gln dari setiap spesies  ikan,  perlu  dicari  dosis  optimal penambahan  Gln  untuk  ikan  lele.  Penam- bahan  Gln  dengan  dosis  yang  tepat  pada pakan diharapkan dapat memperbaiki struk- tur dan fungsi usus ikan lele, sehingga penye- rapan nutrien meningkat. Perbaikan struktur dan fungsi saluran pencernaan juga diharap- kan  dapat  menyeragamkan  konsumsi  pakan serta  mengurangi  keragaman  ukuran  benih ikan  lele.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengevaluasi  pengaruh  penambahan  Gln pada pakan terhadap struktur dan fungsi usus, serta kinerja produksi benih ikan lele.

## Bahan dan metode

## Rancangan penelitian
Rancangan  penelitian  yang  digunakan adalah  rancangan  acak  lengkap  (RAL) dengan  analisis  data  menggunakan  metode sidik  ragam  (ANOVA)  pada  tingkat  keper- cayaan  95%  serta  dilanjutkan  dengan  uji lanjut Duncan. Percobaan terdiri atas 4 per- lakuan dengan 3 ulangan. Sebagai perlakuan adalah pemberian pakan yang ditambah Gln pada  dosis  yang  berbeda  untuk  benih  ikan lele. Perlakuan yang dicobakan yaitu penam- bahan  Gln  pada  pakan  dengan  dosis  0,0%,
0,7%, 1,4% dan 2,1% (Tabel 1).

## Pakan uji
Pakan uji yang digunakan adalah pakan buatan  komersial  (PF  500)  dengan  penam- bahan  Gln sesuai  dengan  dosis  yang  sudah dijelaskan di atas. Hasil analisis asam amino pakan komersil disajikan di Tabel 2.  Pakan mengandung  asam  amino  esensial  yang dibutuhkan  ikan.  Asam  amino  Glutamate (7,44%)  memiliki  nilai  terbesar.  Di  dalam tabel  tersebut  asam  glutamat  merupakan representasi dari glutamat dan Gln. Gln yang
digunakan  adalah  merek  dagang Glutapure dari Ultimate  Nutrition dengan  kemurnian 100%. Penambahan Gln pada pakan dilaku- kan  dengan  menggunakan  metode  salut/
coating (Febriani et al. 2013). Pakan di semua perlakuan  dibuat  isoprotein  dan  energi, dengan  cara  menambahkan  glisin  di  setiap perlakuan sebesar 3%, 2,3%, 1,6 % dan 0,9% untuk  masing-masing  perlakuan  Gln  0,0%, 0,7%, 1,4% dan 2,1% (Tabel 3). Penambahan glisin  sebagai  penyeimbang  protein  pakan

## Tabel 1
Perlakuan pada penelitian penambahan glutamin pada pakan benih ikan lele Perlakuan Keterangan Gln 0,0 Pakan ditambah glutamin bebas 0,0% Gln 0,7 Pakan ditambah glutamin bebas 0,7% Gln 1,4 Pakan ditambah glutamin bebas 1,4% Gln 2,1 Pakan ditambah glutamin bebas 2,1% Tabel 2 Kandungan asam amino pakan (% berat kering) Asam amino Kadar Aspartic acid 3,72 Threonine 1,64 Serine 1,84 Glutamate 7,44 Proline 2,12 Glysine 2,42 Alanine 2,46 Cystine 0,55 Valine 2,13 Methionine 0,60 Ileusine 1,71 Leusine 3,57 Tyrosine 1,07 Phenylalanine 2,27 Histidine 1,40 Lysine 2,88 Arginine 2,85 Amino acid total 40,66
mengacu pada Liu et al . (2015). Hasil analisis proksimat pakan disajikan pada Tabel 3.

## Pemeliharaan ikan
Ikan  yang  digunakan  adalah  benih  ikan lele  berumur  2  minggu  dengan  ukuran 2,22±0,14  cm,  berat  0,09±0,02  g.  Ikan  lele berasal dari pembudidaya ikan di Dramaga, Bogor. Ikan dipelihara pada wadah akuarium berukuran  50x50x40  cm 3 sebanyak  12  unit.
Akuarium diisi air dengan ketinggian 30 cm sehingga  volume  air  75  L.  Ikan  ditebar sebanyak  200  ekor  dalam  setiap  akuarium. Ikan  disortir  agar  ukuran  yang  digunakan relatif sama. Ikan ditimbang bobotnya meng- gunakan timbangan digital ketelitian 0,01 g. Pemeliharaan ikan dan pemberian pakan uji dilakukan selama 30 hari. Ikan diberi pakan uji dengan frekuensi pemberian pakan 3 kali
sehari  yakni  pada  pukul  08.00,  13.00  dan 18.00 WIB. Proses ganti air dilakukan selama tiga hari sekali sebesar 20%.
Pemberian  pakan  dilakukan  dengan metode at  satiation (sampai  ikan  kenyang). Jumlah konsumsi pakan selama pemeliharan dihitung  dan  dicatat.  Pada  penelitian  ini, sistem yang digunakan sudah optimal untuk pemeliharaan larva lele. Pemantauan kualitas air dilakukan dengan pengukuran suhu, kon- sentrasi  oksigen  terlarut  (DO)  dan  pH  air. Pengukuran suhu dilakukan setiap hari pada pagi  dan  siang,  sedangkan  pengukuran oksigen terlarut dan pH dilakukan pada awal, tengah  dan  akhir  pemeliharaan.  Rata-rata kualitas  air  selama  pemeliharaan  meliputi oksigen terlarut sebesar 5,09 mg L -1 , suhu 26- 28 0 C serta pH 7,46. Kondisi DO, suhu, dan pH  masih  berada  dalam  rentang  optimum
Tabel 3 Komposisi pakan penelitian (%) dan hasil analisis proksimat pakan (%) Komposisi Dosis penambahan Gln (%) 0,0 0,7 1,4 2,1 Pakan komersil (%) 100 100 100 100 Gln (%) 0 0,7 1,4 2,1 Glysin (%) 3 2,3 1,6 0,9 Analisis Proksimat Kadar air 6,14 5,17 5,43 5,46 Protein 40,05 41,83 41,4 40,63 Lemak 5,12 6,97 6,49 6,5 Serat kasar 2,86 2,02 2,78 2,22 Kadar abu 8,35 8,62 8,15 8,44 BETN 37,47 35,38 35,75 36,76 Energi bruto (kkal kg -1 )    4302,98 4390,03 4394,3 4349,05 C/P 10,74 10,5 10,62 10,7
Keterangan: BETN = bahan ekstrak tanpa nitrogen, 1 g protein = 5,6 kkal energi bruto, 1 g karbohidrat/BETN = 4,1 kkal energi bruto, 1 g lemak = 9,4 kkal energi bruto (Watanabe 1988), C/P: perbandingan nisbah energi pakan dengan jumlah protein pakan.
berdasarkan penelitian Akinwole & Faturoti (2007), Britz & Hecth (1987), dan Ndubuisi
et al. (2015).

## Pengambilan dan preparasi sampel
Pada  awal  pemeliharaan  sebanyak  50 ekor ikan diambil secara acak dan dilakukan pengukuran  biomassa  dan  panjang  awal. Sebanyak  50  ekor  ikan  disimpan  dalam
freezer -20 ℃ untuk analisis proksimat tubuh awal.  Analisis  proksimat  sesuai  dengan AOAC (1999). Pada akhir pemeliharaan, ikan dipuasakan  selama  24  jam,  kemudian  dila- kukan  proses  sortasi,  penghitungan  jumlah ikan  dan  pengukuran  bobot  biomassa  ikan. Pengukuran distribusi ukuran ikan dilakukan dengan  cara  memisahkan  ikan  berdasarkan ukuran panjang. Proses pemisahan ikan dila- kukan menggunakan ember sortir tipe 5-6, 6- 7, 7-8, 8-9 dan >9. Sebanyak 40 ekor ikan per akuarium  diambil  dan  disimpan  dalam
freezer -20 ℃ untuk analisis proksimat tubuh.
Pada  akhir  pemeliharaan,  20  ekor  ikan dari  setiap  akuarium  dibedah  untuk  peng- ukuran panjang usus, lalu sebanyak 5 sampel usus  tersebut  dimasukkan  ke  dalam  larutan Bouin  untuk  pembuatan  preparat  histologi.
Proses  preparasi  histologi  yang  dilakukan berdasarkan  metode  yang  dilakukan  oleh Dewi  (2019).  Preparat  histologi  digunakan untuk pengukuran diameter usus, tinggi vili dan  luas  permukaan  vili.  Preparat  histologi diamati  dengan  menggunakan  mikroskop Olympus,  kemudian  diameter  usus,  tinggi vili,  dan  lebar  basal  vili  diukur  dengan bantuan software image J. Sebanyak 10 ekor
ikan  dari  setiap  akuarium  diambil  untuk analisis glutamin hati. Sampel ikan dibedah dan diambil hatinya kemudian disimpan pada suhu -80 ℃. Sampel hati dianalisis konsentrasi glutaminnya menggunakan Glutamine Deter- mination Kit Abcam dan diukur pada panjang gelombang  450  nm  menggunakan Elisa
Reader .
Analisis aktivitas enzim protease meng- gunakan  metode  Walter  (1984).  Analisis aktivitas  enzim  protease  menggunakan sampel  sebanyak  5  ekor  ikan  dari  setiap akuarium. Berat sampel usus yang digunakan berkisar antara 0,2–0,5 g. Analisis SOD dan malondialdehida  (MDA)  dilakukan  dengan mengambil  organ  hati  dari  10  ekor  ikan  uji pada  akhir  pemeliharaan.  Organ  hati  yang diambil dimasukkan ke dalam larutan nitro- gen  cair,  lalu  disimpan  di  dalam freezer -80 ℃. Analisis SOD dilakukan dengan SOD
colorimetric  test  kit ,  Abcam,  UK.  Enzim SOD (EC 1.15.1.1) digunakan sebagai larutan standar pada  analisis ini.  Analisis MDA di- lakukan  dengan  menggunakan  MDA lipid peroxidation  colorimetric  tes  kit, Abcam,
UK.

## Parameter uji
Jumlah  keseluruhan  pakan  yang dikonsumsi  pada  setiap  unit  percobaan selama  30  hari  dicatat  sebagai  data  jumlah konsumsi  pakan.  Nilai  retensi  protein  dan efisiensi  pakan  dihitung  menggunakan formula  dari  Watanabe  (1988).  Pengukuran laju  pertumbuhan  spesifik  ikan  uji  dihitung menggunakan  persamaan  dari  Huisman
(1987). Tingkat kelangsungan hidup dihitung dengan  membagi  ikan  yang  hidup  di  akhir penelitian dibagi jumlah ikan awal. Konsen- trasi  glutamin  di  hati  pada  setiap  perlakuan ditentukan  menggunakan Glutamine  Deter-
mination Kit Abcam dengan pembacaan Elisa
Reader . Pengukuran SOD dilakukan dengan SOD colorimetric  test  kit ,  Abcam,  UK.
Enzim SOD (EC 1.15.1.1) digunakan sebagai larutan standar pada analisis ini.
Pengamatan  morfologi  usus  meliputi nisbah panjang usus dibanding panjang tubuh (RPU), tinggi vili (TV), basal vili (BV), luas permukaan vili (LV) dan diameter usus (DU). RPU  dihitung  berdasarkan  rumus  Nasir (2002) sebagai berikut.
RPU= Lu Lt Keterangan: RPU  = Rasio panjang usus dengan panjang tubuh ikan Lu = Panjang usus ikan pada akhir pemeliharaan (cm) Lt = Panjang total ikan pada akhir pemeliharaan (cm)
Pengukuran luas permukaan vili dihitung menggunakan metode Iji et al .(2001) dengan rumus sebagai berikut.
LV= c+b 2 ×a Keterangan: LV = Luas permukaan vili (mm 2 ) a = Tinggi vili (μm) b = Lebar apikal vili (μm) c = Lebar basal vili (μm)
Pengujian aktivitas enzim protease pada saluran  pencernaan  dilakukan  di  akhir
penelitian. Analisis aktivitas enzim protease menggunakan  metode  Walter  (1984). Aktivitas  enzim  protease  dapat  dihitung dengan menggunakan rumus sebagai berikut.
UA= ABsp-ABbl ABst-ABbl ×FP× 1 T
Keterangan:
UA  = Jumlah enzim yang dapat menghasilkan 1 μmol tirosin per menit (IU mL -1 ).
Absp = Absorbansi sampel Abbl = Absorbansi blanko Abst = Absorbansi standar FP  = Faktor koreksi T  = Waktu inkubasi
Untuk  mengetahui  aktivitas  enzim  pro- tease spesifik dilakukan dengan terlebih da- hulu menentukan konsentrasi protein sampel (usus)  dengan  menggunakan  metode  Brad- ford  (1976),  selanjutnya  aktivitas  spesifik dapat dihitung. Aktivitas spesifik merupakan jumlah  enzim  yang  dapat  menghasilkan 1 μmol  tirosin  per  menit  berdasarkan  kon- sentrasi protein.

## Analisis data
Data  jumlah  biomassa  akhir  ikan  (Bt), laju  pertumbuhan  harian  (LPH),  jumlah konsumsi pakan (JKP), retensi protein (RP), tingkat kelangsungan hidup (TKH), efisiensi pakan (EP), tinggi vili (TV), basal vili (BV), luas  permukaan  vili  (LV),  nisbah  panjang usus dengan panjang tubuh (RPU), diameter usus  (DU),  aktivitas  enzim  protease  serta SOD  dan  MDA  dianalisis  menggunakan metode sidik ragam (ANOVA) pada tingkat
kepercayaan  95%  serta  dilanjutkan  dengan uji  lanjut  Duncan.  Penghitungan  dosis  pe- nambahan glutamin yang optimal dilakukan dengan menggunakan regresi, sedangkan pe- nentuan  kurva  ( curve  fitting )  dilakukan
dengan  polinomial  ortogonal.  Analisis  data dilakukan  menggunakan  program  perangkat lunak Microsoft  Excel dan SPSS  23 .  Data konsentrasi  glutamine  hati  dianalisis  secara deskriptif dengan grafik.
Tabel  4 Kinerja  pertumbuhan  ikan  lele  yang  diberi  pakan  dengan  penambahan  Gln  dosis berbeda Parameter Dosis penambahan Gln (%) 0,0 0,7 1,4 2,1 Bt (g) 292,36±57,69 ab 347,00±84,53 b 303,77±72,96 ab 195,32±11,13 a LPH (%) 10,81±0,55 ab 11,24±0,9 b
10,73±0,5 ab 9,88±0,65 a JKP (g) 195,30±24,52 a 223,84±46,91 a 199,69±37,50 a 161,15±10,99 a RP (%) 49,50 ab 52,86 b 50,39 ab 40,44 a TKH (%) 83 ± 6,38 a 87,16±6,01 a
87,83±11,02 a 72,66 ±9,24 a EP (%) 140,53±14,26 b 146,92±11,51 b 142,80±11,57 b 111,72±11,75 a
Keterangan: Bt= biomassa ikan akhir, LPH = laju pertumbuhan harian, JKP= jumlah konsumsi pakan, RP = retensi protein, TKH = tingkat kelangsungan hidup, EP=efisiensi pakan. Huruf tika atas berbeda di belakang nilai simpangan baku menunjukkan pengaruh yang berbeda nyata (P<0,05).
Gambar 1 Kurva respons biomassa ikan di akhir penelitian terhadap penambahan Gln pada dosis berbeda di pakan.
y = -83.211x 2 + 126.98x + 294 R² = 0.5343 100 150 200 250 300 350 400 450 -1.78E-15 0.7 1.4 2.1 Bi oma ssa (g )
Penambahan Gln (%)

## Hasil
Kinerja  pertumbuhan  benih  ikan  lele yang  diberi  pakan  dengan  penambahan  Gln pada dosis berbeda selama 30 hari disajikan pada  Tabel  4.  Penambahan  Gln  pada  dosis yang  berbeda  berpengaruh  pada  kinerja pertumbuhan lele yang meliputi pertumbuhan biomassa,  laju  pertumbuhan  harian  ikan, retensi  protein,  serta  efisiensi  pakan.  Nilai efisiensi  pakan  pada  keempat  perlakuan memiliki  pola  yang  sama  yakni  meningkat pada  perlakuan  Gln  0,7%  kemudian  turun kembali  pada  perlakuan  Gln  1,4%.  Kurva respon  hubungan  perlakuan  Gln  yang  ber- beda  terhadap  biomassa  ikan  dapat  dilihat pada  Gambar  1.  Kurva  respon  ini  dibuat mengingat  adanya  korelasi  antara  biomassa dengan  keragaman  ukuran  ikan  seperti  di Gambar  2.  Berdasarkan  kurva  respon  dapat diketahui  bahwa  titik  optimal  Gln  yang
memberikan biomassa maksimal terjadi pada dosis  Gln  0,76%.  Nilai  efisiensi  pakan  per- lakuan  Gln  0,0%,  0,7%  dan  1,4%  tidak berbeda  nyata,  namun  pada  Gln  2,1%  nilai efisiensi  pakan  menurun  secara  signifikan. Meskipun  terdapat  perbedaan  pertumbuhan ikan antar perlakuan, jumlah konsumsi pakan serta  kelangsungan  hidup  ikan  di  seluruh perlakuan tidak berpengaruh nyata.
Panjang  ikan  di  akhir  penelitian terdistribusi menjadi 4 kelompok (Gambar 2). Distribusi  ukuran  panjang  ikan  di  semua perlakuan  didominasi  kelompok  ukuran  5-6 cm. Pada kelompok 5-6 cm, nilai terkecil ada pada  perlakuan  Gln  0,7%,  sedangkan  ter- tinggi  pada  perlakuan  Gln  2,1%.  Distribusi ukuran terbanyak berikut ada pada kelompok panjang  7-8  cm.  Pada  kelompok  7-8  cm, distribusi  tertinggi  ada  di  perlakuan  Gln 0,7%, yakni 32,59 ±14,18%. Distribusi yang
Gambar 2 Distribusi ukuran panjang ikan pada akhir penelitian.
Gln 0% Gln 0.7% Gln 1.4% Gln 2.1% 0 10 20 30 40 50 60 70 80 5-6 6-7 7-8 8-9 >9 49.61 32.59 Distribusi (% )
Panjang ikan (cm)
terendah di kelompok 5-6, serta tertinggi di kelompok 7-8 diduga menjadi sebab kinerja pertumbuhan Gln 0,7% paling tinggi diban- ding perlakuan lainnya.
Hasil pengukuran morfometri usus benih ikan lele meliputi tinggi vili (TV), basal vili (BV),  luas  permukaan  vili  (LV),  nisbah panjang  usus  dengan  panjang  tubuh  (RPU) serta  diameter  usus  (DU)  disajikan  pada
Tabel 5. Pada parameter TV, berbeda nyata hanya ditemukan antara perlakuan Gln 0,0% dan  Gln  0,7%.  Tidak  ada  perbedaan  nyata antara perlakuan Gln 0,7%, 1,4% dan 2,1%, maupun  antara  perlakuan  Gln  0,0%,  1,4% dan 2,1% . Tinggi vili ikan di perlakuan Gln
0,7%  secara  signifikan  lebih  tinggi  diban- dingkan dengan perlakuan Gln 0,0%.
Tabel 5 Morfometri usus ikan lele yang diberi pakan dengan penambahan Gln dosis berbeda Parameter Dosis penambahan Gln (%) 0,0 0,7 1,4 2,1 TV(μm) 217,92±9,12 a 274,31±14,28 b 259,65±9,09 ab 256,06±47,96 ab BV (μm) 79,70±4,44 a 75,54±6,72 a
74,29±4,55 a 69,18±5,70 a LV (μm2) 12813±1368 a 14684±683 a
13971±626 a 12750±3143 a RPU 0,79±0,09 a 0,71±0,05 a 0,78±0,23 a 0,65±0,09 a DU (mm) 911,7±29,1 a 952,8±21,1 a
917,5±34,8 a 950,3±122,5 a
Keterangan: TV= tinggi vili, BV= basal vili, LV= luas permukaan vili, RPU=nisbah panjang usus dengan panjang tubuh, DU= diameter usus. Nilai yang tertera merupakan nilai rata-rata dan simpangan baku. Huruf tika atas berbeda di belakang nilai simpangan baku menunjukkan pengaruh yang berbeda nyata (P<0,05).
Keterangan: huruf berbeda di atas garis simpangan baku menunjukkan pengaruh berbeda nyata (p<0,05)
Gambar  3 Aktivitas enzim protease usus ikan lele yang diberi pakan dengan penambahan Gln dosis berbeda.
Aktifitas  enzim  protease  usus  ikan meningkat  dengan  adanya  konsumsi  pakan yang  ditambah  Gln  (Gambar  3).  Aktivitas enzim protease penambahan Gln 1,4% tidak berbeda nyata dengan 0,7% dan 2,1%, tetapi lebih tinggi dan berbeda nyata dibandingkan tanpa  penambahan  Gln,  antara  penambahan
0,0% dan 0,7% tidak berbeda nyata
Hasil  pengamatan  aktifitas  SOD  dan MDA hati ikan lele disajikan pada Tabel 6. Konsumsi  pakan  yang  ditambah  Gln  pada penelitian ini tidak memberikan peningkatan aktivitas  antioksidasi  pada  benih  ikan  lele, dicirikan  dengan  tidak  ditemukan  adanya perbedaan nyata pada nilai SOD dan MDA di semua perlakuan.
Pemberian  pakan  dengan  penambahan Gln selama 30 hari cenderung meningkatkan kandungan  glutamin  pada  hati  ikan  lele (Gambar 4). Konsentrasi Gln pada hati ikan menunjukkan  Gln diserap  dengan baik oleh ikan.

## Pembahasan
Glutamin  merupakan  asam  amino  yang berfungsi sebagai sumber energi utama dalam pembelahan  sel  epitel  usus  (Luquetti et  al .
2016, Li et  al . 2019, Li et  al . 2020). Asam amino  ini  juga  berperan  sebagai  prekursor biosintesis nukleotida purin dan gula amino yang  penting  untuk  pertumbuhan  dan diferensiasi  sel  (Curi et  al .  2005;  Liu  et  al.
Tabel  6 Aktivitas  SOD  dan  kadar  MDA  pada  hati  ikan  lele  yang  diberi  pakan  dengan penambahan Gln dosis berbeda
Parameter Penambahan Gln (%) 0 0,7 1,4 2,1 SOD (unit g protein -1 ) 8,27 ± 0,54 a 8,43 ±  0,96 a 8,75 ± 0,73 a 7,77 ± 0,35 a MDA (ppm) 0,96 ± 0,19 a 0,75 ± 0,19 a 0,97 ± 0,15 a 0,98± 0,26 a
Keterangan: huruf tika atas pada tabel menunjukkan pengaruh tidak berbeda nyata (p<0,05).
Gambar 4 Konsentrasi glutamin hati ikan lele yang diberi pakan dengan penambahan Gln dosis berbeda.
153 ± 27
155 ± 9 166± 15 173 ± 59 0 50 100 150 200 250 0 0.7 1.4 2.1 Gluta mi n ha ti (n mol/m l) Penambahan Gln (%)
2015; Zhao et al. 2017). Pada penelitian ini, Gln  yang  ditambahkan  pada  pakan  dapat diserap  dengan  baik  oleh  ikan  lele,  hal  ini dapat terlihat dari nilai kadar glutamin yang lebih  tinggi  pada  perlakuan  dengan  suple- mentasi glutamin (Gambar 5). Nilai  Gln yang lebih tinggi dalam tubuh ikan dapat mening- katkan ketersediaan biologis glutamin untuk berbagai proses metabolisme, seperti prolife- rasi  dan  diferensiasi  sel,  sehingga  dapat digunakan  untuk  meningkatkan  penyerapan nutrien melalui perkembangan vili usus.
Umumnya,  tinggi  dan  luas  permukaan lipatan usus atau vili pada hewan air meru- pakan sebagai tanda kemampuan penyerapan nutrien (Olli et al. 1994; Farhangi et al. 2001). Pada parameter morfometrik usus dalam pe- nelitian ini, hanya tinggi vili pada perlakuan
0.7% Gln yang menunjukkan perbedaan nya- ta dibandingkan dengan kontrol. Nilai tinggi vili  usus  yang  lebih  baik  dibandingkan dengan  kontrol  pada  penelitian  ini  sejalan dengan  penelitian  lain  oleh    Qiyou  et  al. (2011) pada ikan hybrid sturgeon ( Acipenser
schrenckii ♀  × Huso dauricus ♂) dan pa- da  penelitian  Pohlenz et  al .  (2012)  dengan menggunakan ikan channel catfish ( Ictalurus
punctatus ). Meskipun hasil panjang vili usus pada penelitian ini sejalan dengan kedua pe- nelitian  lain  yang  disebutkan  sebelumnya, terdapat perbedaan hasil pada parameter per- tumbuhan.
Pada  penelitian  yang  dilakukan  oleh Qiyou et  al .  (2011)  suplementasi  pakan dengan  glutamin  dapat  meningkatkan performa pertumbuhan. Hasil pada penelitian
ini  serta  penelitian  yang  dilakukan  oleh Pohlenz et al. (2012) menunjukkan walaupun ada  perbedaan  yang  nyata  pada  parameter panjang vili usus antara perlakuan, tidak ada perbedaan  performa  pertumbuhan  antara perlakuan  kontrol  dan  perlakuan  dengan suplementasi  glutamin.  Spesies  ikan  yang berbeda  diduga  memiliki  respon  yang berbeda  dalam  merespon  suplementasi glutamin terhadap pakan. Selain itu terdapat kemungkinan bahwa perbedaan hasil pertum- buhan antara penelitian ini dengan penelitian yang  dilakukan  oleh  Qiyou et  al .  (2011) dikarenakan perbedaan umur ikan yang digu- nakan,  dimana  pada  penelitian  ini  menggu- nakan ikan yang baru berubah dari larva men- jadi benih. Pada parameter performa pertum- buhan  lainnya,  penambahan  Gln  pada  dosis berbeda berpengaruh pada nilai biomassa, la- ju pertumbuhan harian ikan, retensi protein, namun hanya antara perlakuan 0,7% Gln dan perlakuan dengan 1,4% Gln. Tidak terdapat perbedaan  nyata  antara  perlakuan  kontrol dengan  semua  perlakuan  dengan  suplemen- tasi Gln.
Berdasarkan analisis regresi terlihat bah- wa kinerja pertumbuhan mengalami pening- katan dengan pola kuadratik pada kurva res- pon  hubungan  perlakuan.  Diketahui  bahwa nilai  biomassa  maksimal  terjadi  pada  dosis suplementasi  Gln  0,76%  walaupun  nilai  R 2 pada  kurva  respons  biomas  menunjukkan bahwa  datanya  hanya  sesuai  ( fit )  dengan model sampai dengan 53,4%.
Pada  beberapa  parameter  performa  per- tumbuhan (BT, LPH, RP, dan EP) beda nyata
juga  ditemukan  antara  perlakuan  Gln  0,7% dan 2,1% dimana perlakuan Gln 2,1% secara statistic lebih rendah nilai-nilainya pada para- meter yang disebutkan diatas. Penelitian ter- hadap pengaruh buruk suplementasi glutamin pada  ikan  sebagai  hewan  model  memang belum banyak dilakukan, namun pada hewan mamalia, Cynober et al. (2010) menyatakan bahwa  glutamin  merupakan  indikator  kua- litas/ketersediaan protein dimana apabila glu- tamin atau arginin mempunyai peran menjaga kesetimbangan  nitrogen  sehingga  apabila jumlahnya berlebih maka tubuh akan secara berupaya  untuk  mengelimintasi  kelebihan nitrogen  tersebut.  Ada  kemungkinan  bahwa proses pengelimintasi nitrogen yang berlebih mempengaruhi  performa  pertumbuhan  ikan lele  yang  terlihat  pada  studi  ini.  Namun diperlukan  penelitian  yang  lebih  mendalam untuk  bisa  mengetahui  apakah  hal  ini  juga berlaku pada ikan.
Tidak  ada  perbedaan  nyata  pada  para- meter TKH dan JKP pada semua perlakuan. Beberapa  penelitian  menunjukkan  bahwa pemberian glutamin dapat meningkatkan JKP namun hasil ini tidak terlihat pada penelitian ini.  Beberapa  asam  amino  diketahui  dapat meningkatkan  respon  makan  namun  berda- sarkan  penelitian  Hara  (2006)  efek  tersebut umumnya  spesifik  pada  spesies  tertentu. Sementara itu, parameter TKH tidak berbeda nyata  karena  larva  ikan  lele  berada  pada kondisi  optimum.  Pada  penelitian  lain,  glu- tamin  memang  dapat  meningkatkan  imun pada ikan (Li et al . (2020) namun umumnya penelitian  terkait  dengan  imun  dilakukan
dengan  menggunakan  uji  tantang  baik  ter- hadap stress maupun menggunakan patogen. Pada  penelitian  ini uji  tantang  tidak  dilaku- kan.
Pada  kegiatan  pembenihan  ikan  lele, proses sortasi perlu dilakukan untuk menge- lompokkan ikan berdasarkan ukuran panjang (Sutrisno  2012).  Hal  ini  dilakukan  pembu- didaya  agar  ikan  yang  dipelihara  tumbuh lebih baik dan seragam untuk mencapai target produksi benih ikan lele. Proses sortasi yang dilakukan  umumnya  menggunakan  alat berupa ember sortasi yang memiliki sejumlah lubang  kecil  (Badruzzaman et  al .  2020).
Ukuran  lubang  pada  ember  sortasi  disesu- aikan  dengan  ukuran  lingkar  kepala  benih ikan lele. Hal ini mencerminkan ukuran pan- jang  ikan  yang  akan  disortir.  Panjang  ikan menjadi  acuan  penting  dalam  proses  pema- saran benih ikan lele. Terdapat beberapa tipe ember sortasi ikan lele yang biasa digunakan diantaranya  tipe  5-6,  6-7,  7-8,  8-9cm.  Ikan yang telah melalui ember sortir tipe tertentu berarti memiliki panjang sesuai dengan tipe ember sortirnya.
Proses  sortasi  juga  akan  memberikan gambaran  sejauh  apa  perkembangan  benih ikan  lele  mendekati  target  produksi.  Ikan yang menjadi target produksi dalam kegiatan pembenihan  ataupun  pendederan  umumnya ialah  ikan  dengan  ukuran  7-8,  8-9  serta 9-10 cm.  Ukuran  ikan  tersebut  sudah  layak untuk  dipasarkan  pada  konsumen  yang umumnya  pembudidaya  pembesaran  ikan lele.  Ikan  dengan  ukuran  di  bawah  7-8cm belum banyak diminati pasar karena ukuran
yang kecil memerlukan waktu pemeliharaan yang lebih lama serta resiko kematian yang lebih tinggi. Pada penelitian ini proses sortasi menggunakan  ember  dengan  tipe  5-6,  6-7, 7-8,  8-9  dan  >9.  Ikan  dilewatkan  melalui ember  sortasi  selanjutnya  dikelompokkan serta diukur panjang, bobot serta jumlahnya. Oleh  karena  itu  terdapat  sebaran  ukuran panjang ikan yang terbagi menjadi kelompok 5-6,  6-7,  7-8,  8-9  dan  >9  cm  yang  dapat digunakan  untuk  melihat  kinerja  pertum- buhan ikan lele.
Distribusi  ukuran  panjang  ikan  pada semua  perlakuan  dalam  penelitian  ini  dido- minasi dua kelompok besar yaitu kelompok ukuran  5-6  cm  dan  kelompok  7-8cm. Penambahan Gln 0,7% menyebabkan 32,59% ikan  lele  berada  pada  kelompok  7-8cm dibandingkan  dengan  perlakuan  yang  lain. Perlakuan  0,7%  Gln  memiliki  frekuensi ukuran 7-8 cm yang lebih besar. Ukuran 7- 8cm merupakan ukuran benih ikan lele yang siap  jual  dikarenakan  ukuran  7-8cm  umum digunakan  serta  siap  untuk  ditebar  pada kegiatan pembesaran. Pada penelitian ini juga terlihat bahwa jumlah ikan dari kelompok 5- 6 cm relatif lebih kecil pada perlakuan 0,7% Gln jika dibandingkan dengan perlakuan lain. Hal ini memberikan indikasi bahwa penam- bahan  Gln  0,7%  mendukung  untuk  mem- peroleh keuntungan yang optimal pada usaha pembenihan  karena  jumlah  benih  yang  siap jual  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan perlakuan lain.
Kinerja  pertumbuhan  terlihat  menurun pada  penambahan  Gln  dengan  dosis  yang
lebih  tinggi.  Penambahan  Gln  2,1%  meng- hasilkan nilai efisiensi pakan yang rendah dan berbeda  secara  signifikan.  Hal  ini  diduga bahwa penambahan Gln sudah melebihi titik optimal  pada  ikan  lele.  Kinerja  usus  dan pertumbuhan  terlihat  mengalami  penurunan pada perlakuan Gln 1,4% dan 2,1% dengan nilai yang lebih rendah dibandingkan dengan perlakuan  0,7%  (Tabel  4).  Pemberian  Gln diatas 0,7% diduga sudah melebihi kebutuhan ikan  lele  sehingga  Gln  akan  dimetabolisme menjadi glutamat dan amonia (Garlick 2001). Yan  dan  Zhou  (2006)  menyatakan  bahwa penambahan Gln pada ikan jian carp optimal sampai  dosis  1,2%.  Liu et  al .  (2015) menunjukkan  bahwa  pakan  dengan  penam- bahan Gln menghasilkan pertumbuhan opti- mal pada dosis 0,63% pada  ikan half-smooth tongue  sole.  Menurut  Dewi  (2019)  penam- bahan Gln sampai 2% menjadi titik optimal bagi pertumbuhan ikan patin.
Penambahan  Gln  0,7%  -  2,1%  mampu meningkatkan aktivitas enzim protease, khu- susnya  perlakuan  1,4%  dan  2,1%  pening- katan aktivitas protease terjadi secara signi- fikan.  Peningkatan  aktivitas  protease  ini mengingat  Gln  sebagai  asam  amino  meru- pakan derivat dari protein dan enzim protease yang  berperan  dalam  pencernaan  protein. Peningkatan aktivitas enzim protease sebagai akibat  dari  penambahan  Gln  juga  berkaitan dengan pengembangan hepatopankreas ikan. Hepatopankreas  berperan  dalam  menghasil- kan  enzim  pencernaan  ikan  (Cahu et  al .
1995).  Penelitian  Yan  dan  Zhou  (2006) menunjukkan kaitan penambahan Gln dengan
peningkatan  protease  ikan  ditandai  dengan peningkatan hepatosomatic index dan konten protein hepatopankreas ikan yang lebih tinggi pada  ikan  yang  diberi  Gln.  Pengembangan hepatopankreas  memperkuat  memperkuat fungsi pancreatic exocrine ikan, ditunjukkan dengan peningkatan rasio Tri-Is (menggam- barkan tingkat tripsin) pada ikan yang diberi pakan  dengan  penambahan  Gln  (Liu et  al . 2015).  Sejalan  dengan  penelitian  Murniasih et  al  (2019)  penambahan  glutamin  bebas sebesar  1%  pada  pakan  mampu  meningkat- kan  aktivitas  protease.  Kondisi  ini  sesuai dengan  penelitian  Hong et  al .  (2014)  yang menunjukkan bahwa penambahan Gln dipep- tida hingga 1,5% berkorelasi dengan pening- katan  aktivitas  enzim  protease  pada  benih ikan mirror carp. Hal serupa juga ditemukan pada ikan young hybrid sturgeon oleh Qiyou
et al . (2011).
Penambahan  Gln  pada  penelitian  ini belum  mampu  meningkatkan  aktivitas  anti- oksidan  SOD  secara  signifikan.  Aktivitas MDA pada hati ikan lele juga tidak terdapat penurunan  secara  nyata.  Berbeda  denga temuan  Qiyou et  al .  (2011)  dan  Liu et  al .
(2015)  Gln  mampu  meningkatkan  aktivitas
SOD  serta  menurunkan  aktivitas  MDA.
Temuan pada penelitian ini diduga peran Gln pada  ikan  lele  sebagai  antioksidan  terbatas dibandingkan ikan lain.  Meskipun demikian tingkat  aktivitas  SOD  benih  ikan  lele  pada penelitian  ini  cukup  tinggi  dibandingkan dengan  aktivitas  MDA.  SOD  merupakan enzim  antioksidan  kuat  yang  berperan sebagai pertahanan terhadap senyawa radikal
bebas  ROS  (reactive  oxygen  species)  hasil dari metabolisme (Hong et al . 2014; Shi et al . 2016).  ROS  dapat  mempengaruhi  makro- molekul  seperti  protein,  karbohidrat  dan lemak  sehingga  menyebabkan  kerusakan oksidatif  (stres  oksidatif)  (Finkel  dan Holbrook 2000, Kehrer & Klotz 2015).
Peningkatan ROS menyebabkan terjadi- nya  peroksidasi  lipid  serta  dapat  meme- ngaruhi  sel  normal.  Peroksidasi  lipid  akan menghasilkan  produk  radikal  yang  dapat bereaksi dengan protein dan DNA sehingga berakibat  kerusakan.  Produk  akhir  peroksi- dasi  lipid  tersebut  adalah  MDA  yang  dapat memperparah  stres  oksidatif  (Chen  et  al. 2009). Oleh karena itu pertahanan enzimatik diperlukan agar produksi ROS dapat dikon- trol  sehingga  tidak  terjadi  stres  oksidatif. Menurut  Hong et  al. (2014)  peningkatan aktivitas  antioksidan  mampu  menghambat peroksidasi  lipid  dan  mendorong  perbaikan membran sel. Tingkat aktivitas SOD ikan lele yang tinggi pada penelitian ini menunjukkan bahwa ikan lele tidak mengalami stres oksi- datif.  Aktivitas  antioksidan  yang  baik  juga mendukung sintasan ikan tetap tinggi (Dewi 2019).

## Simpulan
Penambahan Gln 0,7% pada pakan dapat meningkatkan struktur dan fungsi usus serta kinerja produksi ikan, yang dicirikan dengan peningkatan  jumlah  ikan  lele  berukuran 7-8 cm.

## Persantunan
Penelitian  ini  didanai  seutuhnya  oleh Kemenristek  Dikti/BRIN  dengan  nomor: 2819/IT3.L1/PN/2020  dengan  amandemen nomor: 4243/IT3.L1/PN/2020 tahun anggar- an 2020.

## Daftar pustaka
AOAC. 1999. Official Methods of Analysis of AOAC International, 16th ed. AOAC
International. Gaithersburg, Maryland.
Akinwole  AO,  &  Faturoti  EO.  2007. Biological  performance  of  African Catfish  (Clarias  gariepinus)  cultured  in recirculating  system  in  Ibadan.
Aquacultural Engineering. 36(1):  18-23. DOI: 10.1016/j.aquaeng.2006.05.001
Badruzzaman,  Tito  E,  Meri  R,  Faishal  F.
2020. Analisis proses pengujian kinerja mesin fish grading untuk sortir ikan lele kapasitas  5  kg.  Industrial  Research Workshop  and  National  Seminar, Politeknik Negeri Bandung. 978.979.3541.60 Bradford  MM.  1976.  A  rapid  and  sensitive method  for  the  quantitation  of microgram  quantities  of  protein utilization  the  principle  of  protein-dye binding. Analytical Biochemistry, 72(1-
2):  248-254.  DOI:  10.1016/0003- 2697(76)90527-3 Britz  PJ,  Hecht  T.  1987.  Temperature preferences  and  optimum  temperature for growth of African sharptooth catfish (Clarias  gariepinus)  larvae  and postlarvae.  Aquaculture.  63(1-4):  205- 214. DOI: 10.1016/0044- 8486(87)90072-X Cahu  CL,  Infante  JLZ.  1995. Maturation  of the  pancreatic  and  intestinal  digestive functions  in  sea  bass  (Dicentrarchus labrax): effect of weaning with different protein  sources.  Fish  Physiology  and Biochemistry.  14(6):  431–437. DOI: 10.1007/BF00004343
Carey BW, Finley LW, Cross JR, Allis CD, Thompson  CB.  2015.  Intracellular alphaketoglutarate maintains the pluripotency  of  embryonic  stem  cells. Nature. 518(7539): 413-416. DOI: 10.1038/nature13981 Chen  J,  Zhou  XQ,  Feng  L,  Jiang  J.  2009. Effects  of  glutamine  on  hydrogen peroxide-induced  oxidative  damage  in intestinal  epithelial  cells  of  Jian  carp (Cyprinus  carpio).  Aquaculture.  288(3- 4):  285-289.  DOI:  10.1016/j.aquacul ture.2008.10.053
Cheng  ZY,  Buentello  A,  Gatlin  DM.  2011.
Effects of dietary arginine and glutamine on  growth  performance,  immune responses and intestinal structure of red drum, (Sciaenops ocellatus). Aquaculture.  319(1-2):  247 – 252.  DOI: 10.1016/j.aquaculture.2011.06.025
Cheng  Z,  Gatlin  DM,  Buentello  A.  2012. Dietary  supplementation  of  arginine and/or  glutamine  influences  growth performance,  immune  responses  and intestinal morphology of hybrid striped bass (Morone chrysops×Morone saxatilis). Aquaculture. 362 – 363: 39 – 43.
DOI: 10.1016/j.aquaculture.2012.07.015
Coutinho F, Castro C, Rufino-Palomares E, Ordóñez-Grande  B,  Gallardo  MA, Oliva-Teles  A,  Peres  H.  2016.  Dietary glutamine  supplementation  effects  on amino  acid  metabolism,  intestinal nutrient  absorption  capacity  and antioxidant  response  of  gilthead  sea bream  (Sparus  aurata)  juveniles. Comparative Biochemistry and Physiology. 191: 9 – 17. DOI: 10.1016/j.cbpa.2015.09.012 Curi  R,  Lagranha  CJ,  Doi  SQ,  Sellitti  DF, Procopio J, Pithon-Curi TC, Corless M,
Newsholme  P.  2005.  Molecular mechanisms  of  glutamine  action. Journal of Cellular Physiology. 204(2): 392-401. DOI: 10.1002/jcp.20339
Cynober L, Moinard C,  De Bandt JP.2010. The  2009  ESPEN  Sir  David Cuthbertson.  Citrulline:  a  new  major
signaling molecule or just another player in the pharmaconutrition game?. Clinical  Nutrition, 29(5):  545- 551. DOI: 10.1016/j.clnu.2010.07.006 Dewi  U.  2019.  Penambahan  glutamin  pada pakan  untuk  meningkatkan  kinerja pertumbuhan,  struktur  dan  fungsi  usus benih ikan patin (Pangasius hypophthalmus)    [tesis].  Bogor  (ID): Institut Pertanian Bogor. Ding  Z,  Li  W,  Huang  J,  Yi  B,  Xu  Y. 2017. Dietary  alanyl-glutamine  and vitamin E supplements could considerably promote the expression of GPx  and  PPARα  genes,  antioxidation,
feed  utilization,  growth,  and  improve composition  of  juvenile  cobia. Aquaculture.  470(1):  95–102.  DOI: 10.1016/j.aquaculture.2016.12.015 Farhangi  M,  Carter  CG.  2001.  Growth, physiological and immunological responses of rainbow trout (Oncorhynchus  mykiss)  to  different dietary inclusion levels of dehulled lupin (Lupinus  angustifolius).  Aquaculture Research,  32(1):  329–340.  DOI: 10.1046/j.1355-557x.2001.00044.x Febriani  D,  Sukenda,  Nuryati  S.  2013. Kappa-karagenan sebagai imunostimulan  untuk  pengendalian penyakit infectious myonecrosis (IMN) pada  udang  vaname  Litopenaeus vannamei. Jurnal Akuakultur Indonesia.12(1): 70–78. Finkel  T,  Holbrook  NJ.  2000.  Oxidants, oxidative  stress  and  the  biology ofageing.  Nature,  408(6809):  239-247. DOI: 10.1038/35041687 Garlick PJ. 2001. Assessment of the safety of glutamine  and  other  amino  acids.  The Journal  of  Nutrition.  131(9):  2556S– 2561S. DOI: 10.1093/jn/131.9.2556s Han Y, Koshio S, Jiang, Z, Ren T, Ishikawa M, Yokoyama S, Gao J. 2014. Interactive  effects  of  dietary taurine  and  glutamine  on  growth performance,  blood  parameters  and oxidative  status  of  Japanese  flounder (Paralichthys  olivaceus).  Aquaculture. 434: 348–354. DOI: 10.1016/j.aquaculture.2014.08.036 Hara  TJ.  2006.  Feeding  behaviour  in  some teleosts  is  triggered  by  single  amino acids primarily through olfaction. Journal of Fish Biology, 68(3): 810-825. DOI: 10.1111/j.0022-1112.2006.00967.x Hong X, Qing Z, Chang-an W, Zhi-gang Z, Ling  L,  Lian-sheng  W,  Jin-nan  L,  Qi- you  X.  2014. Effect  of  dietary  alanyl- glutamine  supplementation  on  growth performance,  development  of  intestinal tract, antioxidant status and plasma non- specific immunity of young mirror carp (Cyprinus  carpio  L.).  Journal  of Northeast  Agricultural  University.
21(4):  37–46.  DOI:  10.1016/S1006- 8104(15)30018-0 Hu K, Zhang JX, Feng L, Jiang WD, Wu P, Liu Y, Jiang J, Zhou XQ. 2015. Effect of dietary glutamine on growth performance,  non-specific  immunity, expression of cytokine genes, phosphorylation of target of rapamycin (TOR),  and  anti-oxidative  system  in spleen  and  head  kidney  of  Jian  carp (Cyprinus  carpio  var.  Jian).  Fish Physiology  and  Biochemistry.  41(3):
635–649.  DOI:  10.1007/s10695-015- 0034-0
Huisman  EA.  1987.  Principles  of  fish production.  Wagenigen  (ND)  : Department  of  Fish  Culture  and Fisheries,  Wageningen  Agriculture University. 170 p.
Iji  PA,  Saki A,  Tivey  DR.  2001.  Body  and
Intestinal  Growth  of  Broiler  Chicks Oncommercial Starter Diet. 1. Intestinal Weight and Mucosal Development. Brit Poultry  Sci.  42(4):  505-513.  DOI:
10.1080/00071660120073151. Kehrer JP, Klotz LO. 2015. Free radicals and related reactive species as mediators of injury  and  disease:  implications  for health.  Critical  review  in  Toxicology. 45(9):765-798. DOI: 10.3109/10408444.2015.1074159
Khojasteh  SMB.  2012.  The  morphology  of the  post-gastric  alimentary  canal  in teleost fishes: abrief review. International  Journal  of  Aquatic Science. 3(2): 71-88. Li  C,  Zhang  M,  Li  M,  Zhang  Q,  Qian  Y, Wang R. 2018. Effect of dietary alanyl- glutamine  dipeptide  against  chronic ammonia stress induced hyperammonemia in the juvenile yellow catfish (Pelteobagrus fulvidraco). Comparative Biochemistry and Physiology,  Part  C.  213:  55–61.  DOI: 10.1016/j.cbpc.2018.08.001 Li HT, Jiang WD, Liu Y, Jiang J, Zhang YA,
Wu  P,  Zeng  YY,  Zhou  XQ,  Feng  L. 2017. Dietary  glutamine  improves  the function  of  erythrocytes  through  its metabolites  in  juvenile  carp  (Cyprinus carpio var. Jian). Aquaculture. 474: 86– 94.  DOI:  10.1016/j.aquaculture.2017. 03.041 Li P, Mai K, Trushenski J, Wu G. 2009. New developments  in  fish  amino  acid nutrition: towards functionaland environmentally  oriented  aquafeeds. Springer. 37(1): 43-53. DOI: 10.1007/s00726-008-0171-1 Li S, Guo Q, Li S, Zheng H, Chi S, Xu Z, Wang  Q.  2019. Glutamine  protects against  LPS-induced  inflammation  via adjusted NODs signaling and enhanced immunoglobulins  secretion  in  rainbow trout  leukocytes.  Developmental  and Comparative  Immunology. 98:  148– 156. DOI: 10.1016/j.dci.2019.05.006
Li X, Zheng S, & Wu G. 2020. Nutrition and metabolism of glutamate and glutamine in fish. Amino acids. 52: 671-691. DOI: 10.1007/s00726-020-02851-2 Liu J, Mai K, Xu W, Zhang Y, Zhou H, Ai Q.
2015.  Effects  of  dietary  glutamine  on survival, growth performance, activities of  digestive  enzyme,  antioxidant  status and  hypoxia  stress  resistance  of  half- smooth  tongue  sole  (Cynoglossus semilaevis  Günther)  post  larvae.
Aquaculture.  446:  48–56.  DOI: 10.1016/j.aquaculture.2015.04.012
Luquetti  BC,  Alarcon  MFF,  Lunedo  R, Campos  DMB,  Furlan  RL,  Macari  M. 2016. Effects of glutamine on performance  and  intestinal  mucosa morphometry  of  broiler  chickens vaccinated against coccidiosis. Scientia Agricola.  73(4):  322–327.  DOI: 10.1590/0103-9016-2015-0114
Murniasih S, Jusadi D, Setiawati M, Nuryati S.  2019.  Suplementasi  glutamin  bebas dalam  pakan  meningkatkan  respons fisiologis  dan  sintasan  ikan  botia Chromobotia  macracanthus  Bleeker,
1852.  Jurnal  Iktiologi  Indonesia  19(3): 437-448. DOI: 10.32491/jii.v19i3.466
Nasir M. 2002. Pengaruh kadar selulosa yang berbeda  dalam  pakan  terhadap  panjang usus  dan  aktivitas  enzim  pencernaan benih  ikan  gurami  (Osphronemus gouramy Lac.) Tesis. Sekolah Pascasarjana.  Institut  Pertanian  Bogor. Bogor. Ndubuisi  UC,  Chimezie  AJ,  Chinedu  UC, Chikwem IC,  Alexander U. 2015. Effect of  pH  on  the  growth  performance  and survival  rate  of  Clarias  gariepinus  fry. International  Journal  of  Research  in Biosciences. 4(3): 14-20.
Olli  JJ,  Krogdahl  Å,  van  den  Ingh  TS,  & Brattås LE. 1994. Nutritive value of four soybean  products  in  diets  for  Atlantic salmon  (Salmo  salar,  L.).  Acta Agriculturae Scandinavica, 44: 50-60.
Onura  CN,  Broeck  WVde,  Nevejan  N, Muendo P, Stappen GV. 2018. Growth performance and intestinal morphology of  African  catfish  (Clarias  gariepinus Burchell 1822) larvae fed on live and dry feeds.  Aquaculture.  17:  70-79.  DOI:
10.1016/j.aquaculture.2018.01.046
Pereira  RT,  Rosa  PV,  Gatlin  DM.  2017. Glutamine and arginine in diets for nile tilapia  :  Effects  on  growth,  innate immune  responses,  plasma  amino  acid profiles  and  whole-body  composition. Aquaculture.  473:  135–144.  DOI: 10.1016/j.aquaculture.2017.01.033
Pohlenz C, Buentello A, Bakke AM, Gatlin DM.  2012.  Free  dietary  glutamine
improves  intestinal  morphology  and increases enterocyte migration rates, but has limited effects on plasma amino acid profile  and  growth  performance  of channel  catfish  Ictalurus  punctatus.
Aquaculture.  370-371:  32-39.  DOI:
10.1016/j.aquaculture.2012.10.002 Qiyou  X,  Qing  Z,  Hong  X,  Chang'an  W, Dajiang  S.  2011.  Dietary  glutamine supplementation  improves  growth performance and intestinal digestion/absorption  ability  in  young hybrid  sturgeon  (Acipenser  schrenckii female ×  Huso dauricus male). Journal of Applied Ichthyology. 27(2): 721–726. DOI:  10.1111/j.1439-0426.2011.01710. x
Shen B, Han Y, Lu H, Niu X, Li Z, Zhao C, Wang  G.  2013.  Effects  of  Ala-Gln  on growth  and  feed  intake  of  Cyprinus carpio  var.  Jian  reared  at  different stocking  densities.  Journal  of  South China Agricultural University. 34: 241– 247. DOI: 10.1016/j.fsi.2016.02.034
Shi L, Feng L, Jiang WD, Liu Y, Jiang J, Wu P, Zhou XQ. 2016. Immunity decreases, antioxidant  system  damages  and  tight junction changes in the intestine of grass carp  (Ctenopharyngodon  idella)  during folic acid deficiency: Regulation of nf ‐ κb, nrf2 and mlck mRNA levels. Journal Fish  andShellfish  Immunology.  51:
405–419.  DOI:  10.1016/j.fsi.2016.02. 029
Solares  AC,  Viegas  I,  Salgado  MC,  Siles AM,  Sáez  A,  Metón  I,  Baanante  IV, Fernández F. 2015. Diets supplemented with  glutamate  or  glutamine  improve protein  retention  and  modulate  gene expression  of  key  enzymes  of  hepatic metabolism  in  gilthead  seabream (Sparus  aurata)  juveniles.  Aquaculture.
444  :  79–87.  DOI:  10.1016/j.aquacul ture.2015.03.025
Sutrisno AY. 2012. Analisis kelayakan usaha pembenihan  dan  pembesaran  ikan  lele sangkuriang  (Studi  kasus:  Perusahaan Parakbada, Kelurahan Katulampa, Kota Bogor,  Provinsi  Jawa  Barat)  [Skripsi]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Walter.  1984.  Proteinases:  methods  with hemoglobin,  casein  and  azocoll  as substrates.  In:  Bergmeyer.  Methods  of Enzymatic Analysis. Weinheim.
Wang C.A, Xu QY, Xu H, Zhu Q, Yang JL, Sun  DJ.  2011.  Dietary  L-alanyl-L- glutamine  supplementation  improves growth  performance  and  physiological function  of  hybrid  sturgeon  Acipenser schrenckii♀  ×  A.  baerii♂.  Journal Applied    Ichthyology.  27:  727–732. DOI:  10.1111/j.1439-0426.2011.01673. x
Watanabe  T.  1988.  Fish  Nutrition  and Mariculture.  Department  of  Aquatic Bioscience.  Tokyo  University  of Fisheries. JICA.
Yan L, Qiu-Zhou X. 2006. Dietary glutamine supplementation  improve  structure  and function of intestine of juvenile jian carp (Cyprinus  carpio).  Aquaculture.  256(1- 4):  389-394.  DOI:  10.1016/j.aquacul ture.2006.02.011
Yu H, Gao Q, Dong S, Lan Y, Ye Z, Wen B. 2016. Regulation  of  dietary  glutamine on  the  growth,  intestinal  function, immunity  and  antioxidant  capacity  of sea  cucumber  Apostichopus  japonicus (Selenka). Fish and Shellfish Immunology,  50:  56–65.  DOI: 10.1016/j.fsi.2016.01.024 Zhang K, Mai K, Xu W, Liufu Z, Zhang Y, Peng M, Jinghua C, Ai Q. 2017. Effects of  dietary  arginine  and  glutamine  on growth performance, nonspecific immunity,  and  disease  resistance  in relation  to  arginine  catabolism  in juvenile turbot (Scophthalmus maximus L.). Aquaculture. 468(1): 246–254. DOI: 10.1016/j.aquaculture.2016.10.021
Zhao  Z,  Song  F,  Xu  Q.  2017.  Effects  of glutamine  and  its  precursors  on  the growth performance and relevant protein synthesis  pathway  of  mirror  carp Cyprinus carpio. Fisheries Science. 83: 1019–1026. DOI: 10.1007/s12562-017- 1124-y