TRANSFORMASI PLASMID YANG MENGANDUNG GEN mer B PADA
BAKTERI Escherichia coli TOP-10
Sarah H. C. Rotinsulu 1) , Fatimawali 1) ,  Trina E. Tallei 2)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115
2) Jurusan Biologi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
DNA  transformation  is  the  process  of  inserting  recombinant  DNA  into  host  cells  via  vector plasmid. The host cell that is often used is TOP-10 Escherichia coli. The transformation method is widely used to transfer plasmids containing genetic material. This study aimed to evaluate the results of plasmid transformation  containing  the  merB  gene  in  the  Escherichia  coli  TOP-10  bacteria.  This  study  initiated with  identification  of  the  microbiology  of  host  cells  to  be  used,  namely  Escherichia  coli  TOP-10. Escherichia coli TOP-10 host cells were made into competent cells by transforming plasmids containing merB  gene  into  Escherichia  coli  TOP-10  host  cells  using  the  heat  shock  method.  The  transformation results were evaluated by observing at the growth of Escherichia coli TOP-10 colonies on agar LB media containing ampicillin antibiotics. Plasmids on Escherichia coli TOP-10 were isolated and analyzed by 1% agarose  gel  electrophoresis.  The results  showed that the transformation  of  plasmids  containing  merB  in Escherichia coli TOP-10 bacteria was successfully carried out as indicated by the growth of Escherichia coli  TOP-10  bacteria  on  LB  media  agar  containing  ampicillin  and  the  visualization  on  agarose  gel resulted  that  the  plasmid  which  carried  the  merB  gene  could  be  transformed  in  to  the  E.  coli  TOP-10 bacteria cell.
Keywords : Transformation, Plasmids, merB genes, heat shocks, E. coli TOP-10

## ABSTRAK
Transformasi  DNA  merupakan  proses  memasukkan  DNA  kedalam  sel  bakteri.  Metode transformasi dipakai secara luas untuk  mantransfer plasmid yang mengandung bahan genetika. Penelitian ini  bertujuan  untuk  mengevaluasi  hasil  transformasi  plasmid  yang  mengandung  gen  merB  pada  bakteri Escherichia  coli TOP-10.  Penelitian  ini  didahului  dengan  identifikasi  secara  mikrobiologi  bakteri Escherichia coli TOP-10. Bakteri Escherichia coli TOP-10 dibuat menjadi sel kompeten yang digunakan sebagai inang. Selanjutnya dilakukan transformasi plasmid yang mengandung gen merB kedalam sel inang E.  coli TOP-10  menggunakan  metode heatshock. Hasil  transformasi  dievaluasi  dengan  melihat  adanya koloni E. coli TOP-10 pada media LB agar yang mengandung antibiotik ampisilin. Plasmid pada E. coli TOP-10  diisolasi  dan  dianalisis  dengan  elektroforesis  gel    agarose  1%.  Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa transformasi plasmid yang mengandung  gen merB pada bakteri Escherichia coli TOP-10 berhasil dilakukan,  ditunjukkan  dengan  adanya  pertumbuhan  bakteri E.  coli TOP-10  pada  media  LB  agar  yang mengangandung  ampisilin  dan  hasil  visualisasi  pada agarose  gel  terlihat  bahwa  plasmid  yang  membawa gen mer B dapat ditransformasikan ke dalam sel bakteri E. coli TOP-10.
Kata kunci : Transformasi, Plasmid, gen mer B, heatshock, E. coli TOP-10

## PENDAHULUAN
Seiring  dengan  perkembangan  zaman dan  tuntutan  pemenuhan  kebutuhan  hidup, manusia  terkadang  melupakan  pentingnya kelestarian  fungsi  lingkungan.  Kegiatan masyarakat  dalam  pemenuhan  kebutuhan hidup  ini  banyak  yang  mengabaikan  arti penting lingkungan dalam menunjang kehidupan mereka. Kegiatan masyarakat yang sangat  merugikan  lingkungan  yang  sedang marak  berkembang  adalah  pertambangan emas (Kepel et al., 2012).
Pertambangan  emas  ini  dilakukan  secara ilegal  karena  tidak  memiliki  ijin  dari  pejabat yang  berwenang.  Kegiatan  penambangan emas  tanpa  ijin  (PETI)  ini  sangat  merugikan baik  bagi  masyarakat  maupun  pemerintah setempat  dan  dampak  lingkungan  yang diakibatkannya sangat mengkhawatirkan kelangsungan  hidup  generasi  yang  akan datang.  Dampak  lingkungan  akibat  aktivitas PETI  ini  antara  lain  yaitu  kegiatan  PETI dilakukan dengan membongkar lahan puluhan hektar  sehingga  mengubah  keseimbangan ekosistem yang berpengaruh secara signifikan terhadap  terjadinya  kerusakan  jenis,  spesies serta habitat flora dan fauna (Nofiani, 2004).
Lingkungan  yang  terkontaminasi  dengan merkuri  dapat  membahayakan  kehidupan manusia,  karena  adanya  merkuri  yang terintegrasi  dengan  rantai  makanan.  Merkuri dapat terakumulasi di dalam mikroorganisme. Habitat yang mengandung kontaminasi merkuri  dalam  konsentrasi  tinggi  dalam jangka  waktu  yang  lama  akan  berdampak pada  populasi  dan  aktivitas  bakteri,  sehingga diasumsikan  bahwa  bakteri  dapat  hidup  pada lingkungan  yang  terkontaminasi  dengan mekanisme pertahanan spesifik yang dimilikinya (Morel et al ., 1998)
Strain  bakteri  yang  resisten  merkuri memiliki  satu  set  gen  yang  disebut mer operon,  yang  biasanya  terdapat  pada  plasmid
(Nascimento, 2003). Mekanisme bioremediasi  merkuri  oleh  gen-gen  ini  salah satunya melibatkan gen mer B yang mengkode pembentukan protein enzim MerB (organomerkuri  liase)  yang  mengkatalisa pemutusan dengan ikatan C-Hg pada merkuri organik  (Benison et  al .,  2004)  sehingga menghasilkan  karbon  yang  tereduksi  dan  ion merkuri  (Miller,  1999).  Penggunaan  gen  ini dalam  detoksifikasi  perlu  dianalisis  lebih lanjut agar detoksifikasi  dapat dilakukan oleh protein.  Untuk  mendapatkan  protein  MerB yang  murni  maka  perlu  dilakukan  proses rekayasa genetika melalui prosedur pengklonan  gen mer B  ke  dalam  plasmid. Plasmid hasil rekayasa kemudian diintroduksi ke  dalam  sel bakteri  melalui  proses transformasi.
Transformasi  merupakan  metode  transfer genetik  yang  paling  banyak  terjadi  pada bakteri  dan  dapat  terjadi  secara  alami  atau buatan  yang  dilakukan  dengan  sengaja. Metode  transformasi  yang  sering  digunakan yaitu heatshock (kejutan  panas) yang  pada umumnya dilakukan pada suhu 42 0 C selama 2 menit (Brown, 2006), sehingga plasmid dapat masuk  ke  dalam  sel.  Waktu  dan  suhu heatshock dapat mempengaruhi hasil transformasi.  Transformasi  plasmid  dapat dilakukan pada sel  inang Bakteri Escherichia coli. Bakteri  hasil  transformasi  mampu bereplikasi  sangat  cepat  dan  dapat  tumbuh pada  medium  sederhana  ataupun  medium khusus,  sehingga  mudah  dikulturkan  (Casali dan  Preston,  2003).  Strain E.  coli yang digunakan  sebagai  inang  dalam  proses transformasi  dapat  beragam,  salah  satunya yaitu Escherichia coli TOP-10, yang memiliki efisiensi  transformasi  yang  cukup  tinggi  (Liu et  al .,  2014).  Berdasarkan  latar  belakang  di atas,  maka  perlu  dilakukan  penelitian  tentang transformasi  plasmid  yang  mengandung  gen mer B pada bakteri Escherichia coli TOP-10.

## METODE Alat
Alat  yang  akan  digunakan  yaitu    tabung mikrosentrifus,  collection  tube,  PDH  kolom, mikrosentrifugasi, alat elektroforesis, autoklaf, Laminar Air Flow (LAF), mikropipet,  pipet  tip,  cawan  Petri,  lampu Bunsen, jarum Ose, tabung reaksi, gelas ukur, Erlenmeyer,  gelas  beker, shaker inkubator, inkubator, spektrofotometri, timbangan, sudip.

## Bahan
Bahan  yang  akan  digunakan  yaitu  bakteri E. coli Top-10, plasmid yang telah disisipkan gen mer B,  media  Luria  Berthani  Broth  cair dan padat, ampicillin, air ddH 2 O, PD1 Buffer, PD2  Buffer,  PD3  Buffer,  W1  Buffer,  Wash Buffer,  TAE  1x,  bubuk  Agarose,  NaCl, Tripton, Yeast, Akuades, antibiotik ampisilin, Kristal violet, safranin, reagen kovak’s, lugol, minyak  emersi,  media  Nutrient  Broth  agar, media Triple  Sugar  Ion  Agar (TSIA),  media Simmons’s  Citrate  Agar, media  Lysin  Iron Agar.

## Prosedur Kerja Sterilisasi Alat
Alat-alat gelas dan media disterilkan dalam autoklaf  pada  suhu  121 0 C  selama  15-20 menit.  Jarum  Ose  disterilkan  dengan  cara dipijarkan  dengan  pembakaran  langsung  di atas api bunsen.

## Pembuatan  Media  Luria  Berthani  (LB) Cair
Media  Luria  Bertani  cair  dibuat  dengan menimbang sodium chloride (NaCl) sebanyak 1,25  gram,  Tripton  2,5  gram,  dan  Yeast Extract  1,25  gram,  kemudian  dimasukkan  ke dalam  Erlenmeyer  dan  dilarutkan    dengan aquades  sebanyak  250  mL.    Suspensi  media hihomogenkan  dengan  cara  diaduk  dan
dituangkan  ke  dalam  dua  Erlenmeyer  dengan ukuran  masing-masing  125  mL.  Media  yang sudah  homogen  ini  disterilkan  pada  autoklaf pada  suhu  121 0 C  selama  15-20  menit, tambahkan  ampisillin  pada  satu  Erlenmeyer sebanyak  12,5  μL.    Medium  kemudian dituangkan  sebanyak  20  mL  ke  dalam masing-masing tabung falcon dan diberi label.

## Pembuatan  Media  Luria  Berthani  (LB) Padat
Media  Luria  Bertani  dibuat  dengan menimbang sodium chloride (NaCl) sebanyak 1,25  gram,  agar  3,75  gram,  tripton  2,5  gram, dan yeast  extract 1,25  gram,  kemudian dimasukkan  ke  dalam  Erlenmeyer  dan dilarutkan  dengan aquades sebanyak 250 mL. Suspensi  dihomogenkan  dengan  cara  diaduk. Media  yang  sudah  homogen  ini  disterilkan pada autoklaf pada suhu 121 0 C selama 15-20 menit,  dan  dituangkan  ke  dalam  dua Erlenmeyer  masing-masing  sebanyak  125 mL, di mana ke dalam salah satu Erlenmeyer ditambahkan  ampisilin  sebanyak  12,5  μL. Media  kemudian  dituangkan  pada  masing- masing  cawan  Petri  sebanyak  20  mL, didinginkan pada suhu ruangan dan diberikan label.

## Pembuatan Sel Kompeten
Sebanyak 20 uL bakteri E. coli Top-10 dari stok  gliserol  diinokulasikan  ke  dalam  2  mL medium  LBB.  Kultur  diinkubasi  pada shaker dengan  suhu 37oC  semalam.  Selanjutnya kultur  diambil  sebanyak  5%  (v/v)  dan diinokulasikan  ke  dalam  50  mL  LBB.  Kultur diinkubasi  selama  3  jam  (180  menit)  pada suhu 37oC pada shaker dengan kecepatan 150 rpm.  Kultur  yang  telah  diinkubasi  kemudian disentrifugasi.  Supernatan  dibuang  dan  hasil sentrifugasi  berupa  pelet  ditambahkan  2  mL TSS.  Langkah  selanjutnya  yaitu  membagi pelet  sebanyak  200  μL  ke  dalam  tabung
falcon 15 mL (Langden, 2017).
Transformasi  Plasmid  yang  mengandung gen mer B  ke  dalam  Sel  Kompeten E.  coli TOP-10
Sebanyak  5  μL  larutan  plasmid  yang mengandung mer B  yang  telah  dilarutkan dalam  akuades  steril  dipipet  kedalam  larutan pelet  200  μL  sel E.  coli .  Larutan  lalu diinkubasi  pada  suhu  0 o C  (es)  selama  30 menit,  dan  dilanjutkan  dengan    diinkubasi pada thermo block pada suhu 42 o C selama 90 detik.  Setelah  itu  larutan  diinkubasi  pada  es selama 30 menit, lalu ditambahkan media LB cair  sebanyak  800  μL,  dan  diinkubasi  pada
inkubator  shaker  selama  60  menit  dengan kecepatan 150 rpm. Selanjutnya kepadatan sel bakteri diukur pada OD600 untuk mendapatkan  nilai  0,4.  Suspensi  bakteri disentrifuge pada 3.670 rpm selama 10 menit, supernatant  dibuang  sebanyak  800  μL sehingga  tersisa  200  μL,  diaduk  sehingga pelet  sel  tercampur  dengan  supernatant.  Dari masing-masing  tabung  dipipet  sebanyak  50 μL  dan  ditebar  di  atas  media  LB  padat  yang mengandung ampisillin, diratakan dan diinkubasikan pada suhu 37 o C selama 18 – 20 jam.  Koloni  yang  tumbuh,  diambil  dengan jarum Öse dan digores pada media padat yang mengandung kamanisin, diinkubasi pada suhu 37 o C selama 17 jam. Terhadap koloni bakteri yang  tumbuh,  dilakukan  lisis  cepat  dengan mengambil  1  Öse  sel E.  coli ,  ditambahkan EDTA  10  mM  pH8,  ditambah  50  μL  larutan segar  yang  terdiri  atas  (2μL  NaOH  5N  +  50
μL  SDS  100%  +  400  μL  sukrosa  50%  + akubides  548  μL),  divortex  30  detik, diinkubasi 5 menit dalam es dan disentrifugasi  13.000  rpm  selama  3  menit. Supernatan  yang  diperoleh  dielektroforesis pada  gel  agarose  1%  selama  45  menit.  Gel hasil  elektroforesis,  direndam  dalam  larutan buffer yang  mengandung ethidium  bromide selama  5  menit,  selanjutnya  direndam  dalam akuades  selama  20  menit  dan  divisualisasi dengan illuminator UV. (Fatimawali, 2016).

## Isolasi Plasmid
Isolasi  DNA  plasmid  ( mini  preparation ) dilakukan  dengan  menggunakan  PrestoTM
Mini Plasmid Kit (Geneaid).

## Elektroforesis Gel  Agarosa dan Visualisasi UV
DNA  plasmid  hasil  amplifikasi  dengan PCR  dianalisis  menggunakan  elektroforesis gel  Agarose  1%.  Sebanyak  0,4  g  agarose dilarutkan  dalam  40  mL  TAE  1x  untuk mendapatkan  gel  agarose  1%.  Campuran dipanaskan  di  dalam  oven  selama  2  menit untuk  melarutkan  agarose.  Larutan  agarose didiamkan  sebentar  sampai  suhu  kira-kira mencapai  suhu  ruangan,  lalu  ditambahkan  3 μL  larutan  etidium  bromida  (EtBr)  lalu dituangkan  kedalam  cetakan  di  dalam  kotak elektroforesis  yang  sudah  berisi  buffer  TAE 1x.  Sampel  DNA  dan  DNA  marka/penanda dimasukkan  ke  dalam  sumur  elektroforesis. Elektroforesis  dilakukan  pada  voltase  80  V selama 60 menit. DNA divisualisasi di bawah
Tabel 1. Hasil nilai absorban sel kompeten Nilai Absorban (OD 600 )
Sampel 1 40 o C Sampel 2 42 o C
Sampel 3 44 o C 0.38 0.37 0.41

## sinar UV.

## Hasil dan Pembahasan Pembuatan Sel Kompeten
Pada  penelitian  ini  sel  kompeten  yang digunakan  yaitu  bakteri E.  coli TOP-10  yang akan  berfungsi  sebagai  organisme  yang  akan memperbanyak  plasmid.  Menurut  Radji (2011)  larutan  CaCl 2 merupakan  larutan garam  yang  paling  baik  untuk  membuat  sel kompeten dalam proses transformasi. Penambahan  CaCl 2 menyebabkan  perubahan permeabilitas  dinding  sel  bakteri  sehingga mampu  dilewati  plasmid.    Bakteri  yang  telah mendapat  perlakuan  ini  disebut  dengan  sel kompeten.
Pertumbuhan bakteri dapat diamati dengan cara  mengukur optical  density (OD)  atau kekeruhan  media  pertumbuhan  yang  telah ditambahkan  dengan  bakteri  pada  panjang gelombang tertentu.
Indikasi adanya
pertumbuhan  yaitu  kekeruhan  yang  semakin meningkat  akibat  semakin  meningkatnya
jumlah  sel  bakteri.  Pertumbuhan  bakteri mengacu  pada  pertambahan  sel-sel  bakteri bukan pada perkembangan individu organisme  bakteri.  Setiap  jam  pertumbuhan bakteri tersebut diamati dengan cara mengukur  OD  pada  panjang  gelombang  600 nm.
Nilai  OD 600 yang  paling  baik  untuk transformasi  plasmid  ke  dalam E.coli adalah 0,3-0,4  (Sezonov et  al .,  2007).    Nilai  OD 600 0,3-0,4 dapat dicapai dalam waktu inkubasi 3 jam  (Sekse et  al .,  2012).  Hasil  pengamatan dapat dilihat pada Tabel 1 Sel kompeten yang digunakan  dalam  transformasi  juga  berperan penting dalam mempengaruhi efisiensi transformasi.
Transformasi  Plasmid  yang  mengandung gen mer B  ke  dalam  Sel  Kompeten E.  coli TOP-10
Plasmid pengkode mer B dicampur dengan  sel  kompeten  kemudian  diinkubasi dalam  es.  Tujuannya  agar  plasmid  menempel
Sel inang + plasmid tumbuh pada media LB + Ampisilin
(1) 40 o C (2) 42 o C (3) 44 o C
Sel inang kosong tidak tumbuh pada media LB + Ampisilin
pada membran sel bakteri. Selanjutnya, sel E. coli TOP-10  yang kompeten diberi  perlakuan heat shock untuk membuka pori pada dinding sel  bakteri.  Pada  tahap  ini    diharapkan  pori- pori  membran  bakteri  terbuka  dan  plasmid masuk  ke  dalam  sel  bakteri.  Proses  ini dilakukan  dengan  memindahkan  secara  cepat sel  yang  tadinya  dinkubasi  dalam  es  selamat 30  menit  ke  dalam  suhu  hangat,  masing- masing  pada  40 o C,  42 o C,  44 o C  selama  30 detik, jika terlalu lama akan terjadi kerusakan membran  sel  sehingga  bakteri  akan  mati. Proses  ini  harus  dilakukan  secara  cepat  dan tepat  waktu  sehingga  sel  benar-benar  dalam kondisi terkejut (Brown, 2006).
Uji  resistensi  antibiotik  merupakan  salah satu  cara  yang  digunakan  untuk  mengetahui berhasil tidaknya sebuah plasmid diinsersikan ke  dalam  sel  inang  (Casali,  2003).    Ketika plasmid  yang  mengandung  gen mer B  berada di  dalam E.  coli TOP-10,  maka  bakteri tersebut  akan  mengalami  transformasi  yaitu perubahan  resistensi  terhadap  antibiotik ampisilin.  Hal  ini  dikarenakan  pada  plasmid terdapat  gen  yang resisten terhadap antibiotik ampisilin.  Bakteri E.  coli TOP-10  yang awalnya  tidak  mampu  bertahan  hidup  (tidak
resisten)  pada  media  yang  mengandung antibiotik  ampisilin,  setelah  memperoleh plasmid  yang  mengandung  gen  resisten ampisilin  menjadi  mampu  bertahan  hidup (resisten)  pada  media  yang  mengandung antibiotik ampisilin.
Sel  inang  yang  ditanam  pada  media  padat yang  mengandung  ampisilin  tidak  tumbuh dapat dilihat pada Gambar 1. Hasil transformasi menunjukkan pertumbuhan koloni E. coli TOP-10 pada media padat yang mengandung ampisilin.

## Isolasi Plasmid
Pada  penelitian  ini  dilakukan  isolasi plasmid  menggunakan  Genomic  DNA  Mini Kit  (Geneaid).  Pada  prinsipnya  isolasi plasmid  ini  dilakukan  untuk  memisahkan DNA dari protein dan RNA dan memisahkan DNA plasmid dari DNA kromosom.
Elektroforesis Gel  Agarosa dan  Visualisasi UV
Hasil  isolasi  DNA  plasmid  dielektro- foresis pada gel agarose sehingga menghasilkan  pita-pita  DNA  yang  berbeda ukurannya.  Hasil  visualisasi  plasmid  yang mengandung sisipan gen merB disajikan pada Gambar 2.
Saat  elektroforesis  terlihat  pemisahan molekul  DNA  berdasarkan  ukurannya  seperti pita-pita. Berdasarkan hasil penelitian
pemisahan
DNA plasmid dengan elektroforesis terlihat masih adanya kontaminan.  Hal  itu  disebabkan  karena  hasil isolasi  plasmid  yang  dilakukan  belum  murni. Kemungkinan  kontaminan  disebabkan  oleh adanya  DNA  kromosomal  yang  mengalami fragmentasi.  Pita  yang  terletak  pada  bagian akhir merupakan fragmen DNA yang memiliki elektromobilitas lebih cepat. Hal ini menandakan  ukuran  fragmen  DNA  plasmid tersebut lebih kecil. Pita yang berada di dekat sumur  gel,  bergerak  lebih  lambat  yang menandakan  bahwa  ukuran  fragmen  lebih besar (DNA  kromosomal)  (Albert,  2002). Berdasarkan  hasil  visualisasi  pada  agarose gel,  maka  dapat  disimpulkan  bahwa  plasmid yang membawa gen mer B dapat
ditransformasikan ke dalam sel bakteri E. coli TOP-10.

## KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa transformasi  plasmid  yang  mengandung  gen merB  ke  dalam E.  coli TOP-10 berhasil dilakukan  yang  diindikasikan  dengan  adanya E.  coli TOP-10 yang  mampu  tumbuh  pada medium  LB  yang  mengandung  antibiotik ampisilin  serta  adanya  pita  plasmid  pada  gel agarosa yang dapat divisualisasi dengan UV.

## DAFTAR PUSTAKA
Alberts,  B.,  Johnson,  and  A.,  Lewis,  J.,
2002,Molecular  Biology  of  the  Cell,  4 th ed., Gartand Science, New York.
Benison,  G.  C.,  Lello  P.,  Shokes,  I.  E., Cosper,  N.  J.,  Scott,  R.  A.,  Legault,  P., Omichinski,  J.  G.  2004.  A  stable  mercury containing complex of the organomercurial lyase MerB: catalysis, product release, and direct  transfer  to  MerA. Biochemistry.
43(26): 8333-45.
Brown,  T.A.  2006. Gene  Cloning  and  DNA Analysis:  An  Introduction .  Fifth  edition.
Wiley Blackwell.
Casali,  N.  dan  Preston,  A.  2003. E.  coli plasmid vectors: methods and applications . Humana Press, New Jersey.
Kepel, B. J., Fatimawali, Yusuf, I., Natsir, R., dan  Badaruddin,  F.  2012.  Isolasi  dan Karakterisasi  Gen mer B  pada  Bakteri Pseudomonas sp.,  Sebagai  Gen  Resistensi Merkuri  Organik. J.  Kedokteran  Yarsi, 20(2) : 69-80.
Liu, X., Liu, L., Wang, Y., Wang, X, Ma, Y., dan  Li,  Y.  2014.  The  study  on  the  factors affecting  transformation  efficiency  of Escherichia coli competent  cells. Pakistan journal of pharmaceutical sciences (3)27 : 679-684.
Miller, S. M. 1999. Bacterial detoxification of
Hg(II) and organomercurials. Essay Biochemistry. 34: 17-30.
Morel , F. M., Krapiel, A. M. L., and Amyot,
M.  1998.  The  chemical  cycle  and bioaccumulation  of  mercury.  Ann.  Rev. Ecol. Syst. 29: 543-66
Nascimento A. M. A., and Souza, C. E., 2003. Operon  Mer:  Bacterial  resistance  to Mercury  and  Potential  for  Bioremediation Of  Contaminated  Enviroments, Genet, 2: 92-101.
Nofiani,  R.,  dan  Gusrizal.  2004.  Bakteri Resisten  Merkuri  Spektrum  Sempit  dari daerah  Bekas  Penambangan  Emas  Tanpa Izin  (PETI)  Mandor,  Kalimantan  Barat. Jurnal Natur Indonesia., 6(2): 67-74.
Sekse, C., Bohlin, J., Skjerve, E., Vegarud, G.
E.  2012.  Growth  comparison  of  several Escherichia  coli exposed  to  various concentration  of  lactoferrin  using  linear spline  regression.  Microbial  informatics
Superhelical form plasmid
Linearized form plasmid
Relaxed circular form plasmid
and experimentation 2(5) : 1-12.
Sezonov,  G.,  Joseleau-Pelit,  D  dan  D’Ari,  R.
2007. Escherichia  coli Physiology  in Luria-Bertani Broth. Journal of
Bacteriology. (189)23 : 8746-8749.