## SINTESIS SENYAWA KALKON TURUNAN 4’-METOKSIASETOFENON DAN UJI TOKSISITAS DENGAN METODE BRINE SHRIMP LETHALITY TEST (BSLT)
Raja Mutya Gasella 1 , Yum Eryanti 2 dan Adel Zamri 3
1. Mahasiswa Program S1 Kimia FMIPA Universitas Riau
2,3. Dosen Jurusan Kimia FMIPAUniversitas Riau e-mail:adel.zamri@lecturer.unri.ac.id

## ABSTRAK
Senyawa  kalkonturunan  4’-metoksiasetofenon  ( E )-1-(4’-metoksifenil)-3-(2-hidroksifenil)prop-2-en-1-on  (RMG 1 ) telah  disintesis  dari  senyawa  4’-metoksiasetofenon  dan  2-hidroksibenzaldehid  dibawah  iradiasi  gelombang mikromenggunakan  kalium  hidroksida  sebagai  katalis.  Struktur  senyawa  kalkon  dikonfirmasi  berdasarkan interpretasi  data  spektroskopi  UV,  IR, 1 H-NMR,  dan  MS.  Aktivitas  toksisitas  senyawa  kalkon  ditentukan  dengan metoda Brine  Shrimp  Lethality  Test terhadap  larva Artemiasalina Leach  dan  menunjukkan  aktivitas  dengan  nilai LC 50 = 1,58 x 10 29 µg/mLdanmenunjukkanbahwa senyawa kalkon RMG 2 tidak memiliki aktivitastoksisitas dengan nilai LC 50 diatas 200 µg/mL.

## (RMG 1 )
Kata Kunci : Brine Shrimp Lethality Test , kalkon, sintesis.

## 1. PENDAHULUAN
Senyawakalkonmerupakansenyawametabolit sekunderdenganduacincinaromatikdihubungkanol ehsistemkarbonil α,β -takjenuh  (Patil et  al .,2009).
Senyawa  kalkon  juga  dikenal  sebagai  senyawa intermediet  untuk  sintesis  bermacam-macam senyawa heterosiklik seperti flavon, flavanol, dan flavanon (Tiwari et al , 2010).
Kalkon  tersebar  diberbagai  family  tanaman, namun  jumlahnya  terbatas  disbanding  dengan senyawa  flavonoid  lain  karena  senyawa  ini termasuk  dalam  kategori  minor  flavonoid  dan persentasenya  dalam  tumbuhan  juga  kecil  serta variasi  strukturnya  relative  sedikit.  Senyawa kalkon  baik  yang  diperoleh  melalui  sintesis maupun  dari  bahan  alam  dianggap  sebagai molekul  yang  sangat  berharga  dalam  bidang farmasi,  untuk  mengetahui  potensi  aktivitas senyawa  kalkon,  dibutuhkan  senyawa  kalkon dalam jumlah yang cukup dengan variasi struktur yang  beragam.  Oleh  karena  itu,  sintesis menggunakan  reaksi  aldol  di  laboratorium merupakan solusi terbaik untuk mendapatkan dan mengetahui potensi aktivitas senyawa kalkon.
Handayani  (2013)  melakukan  penelitian terhadap  senyawa  kalkon  yang  mengandung gugus  metoksi.  Senyawa  tersebut  dilaporkan memiliki  aktivitas  toksisitas  yang  baik  sehingga berpotensi sebagai antikanker.
Oleh karena itu, pada penelitian ini disintesis senyawa  kalkon  menggunakan  bahan  baku senyawa  aldehid  aromatik  yaitu  senyawa  2- hidroksibenzaldehid  dengan  senyawa  keton  4’- metoksiasetofenon menggunakan iradiasi gelombang  mikro,  kemudian  diuji  potensi antikankernya  melalui  toksisitas  dengan  metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).

## 2. METODOLOGI PENELITIAN Bahan danPeralatan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  4’-metoksiasetofenon  (Aldrich),  2- hidroksibenzaldehid  (Aldrich),  etanol  absolut, KOH  6N  (Merck),  HCl  3N  (Merck),  indikator universal  (Merck), n -heksana,  metanol,  etil asetat,  kloroform,  diklorometana,  akuades,  air laut dan dimetil sulfoksida.
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah microwave (Samsung  ME  109  F  500 MHz),  alat  pengukur  titik  leleh Fisher  John, lampu  Ultra  Violet  (254  nm  dan  366  nm),  plat KLT  GF 254 ,  HPLC  (Shimadzu  LC  20  AD), spektrofotometer  FTIR  (Shimadzu,  IR  Prestige- 21), spektroskopi NMR (Agilent 500 MHz DD2), spektroskopi  massa  (water  LCT  Premier  XE Mode Positif), spektrofotometer UV-Vis (Genesys 10 S UV-Vis v4.002 2L9N175013) dan peralatan  gelas  yang  biasa  digunakan  di laboratorium.

## RancanganPenelitian
Sintesis  senyawa  kalkon  dilakukan  dalam satu  tahap  reaksi  melalui  kondensasi Claisen- Schimdt antara  senyawa  4’-metoksi  asetofenon dengan  2-hidroksibenzaldehid  dengan  bantuan iradiasi  gelombang  mikro  menggunakan  katalis KOH  dan  pelarut  etanol  absolut  seperti  terlihat pada Gambar 1.

## ProsedurKerjaSintesis
Senyawa  4’-metoksiasetofenon(5  mmol) dimasukkan  ke  dalam  Erlenmeyer  250  mL, ditambahkan  etanol  absolut  (5  mL),  kemudian ditambahkan  KOH  6N  (5  mL).  Setelah itu,ditambahkan  senyawa  2-hidroksibenzaldehid (5  mmol).  Campuran  ini  diiradiasi  dengan gelombang  mikro  selama  12  menit  dengan  diuji KLT setiap 1 menit. Campuran didiamkan selama ±  24  jam.  Setelah  itu,  15  mL  akuades  dingin ditambahkan  ke  dalam  campuran  dantetes  demi tetes HCl 3NsampaipH campurannetral.
Kemudian  dibiarkan  dalam  lemari  pendingin  ± satu hari agar terbentuk endapan yang maksimal. Endapan yang terbentuk disaring dengan menggunakan  corong Buchner ,  dicuci  dengan akuades dan n -heksan dingin, kemudian divakum hingga kering. Produk yang diperoleh direkristalisasi  dengan  pelarut  etanol  lalu  diuji kemurniannya  dengan  uji  KLT,  titik  leleh,  dan analisis HPLC.
Uji  Toksisitas  dengan  Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Sampel  sebanyak  20  mg  dilarutkan  dalam  2 mL  metanol  (larutan  induk,  konsentrasi  10000 µg/mL),  kemudian  dari  larutan  induk  dibuat konsentrasi  yang  berbeda  1000  µg/mL,  100 µg/mL  dan  10  µg/mL  dengan  cara  pengenceran bertingkat.  Kemudian  disiapkan  vial  5  mL yangsudah  dikalibrasi  untuk  masing-masing konsentrasi.  Sampel  dipipet  ke  dalam  masing- masing vial sebanyak 0,5 mL, lalu pelarut
diuapkan  hingga  mengering.  Selanjutnya, kedalam masing-masing vial ditambahkan 50 µL DMSO dan sedikit air laut. Setelah itu, sebanyak 10  ekor  larva  udang  dimasukkan  kedalam  vial tersebut  dan  ditambah  air  laut  hingga  batas kalibrasi 5 mL.
Tingkat  toksisitas  diukur  dengan  cara menghitung jumlah larva udang yang mati dalam selang  waktu  24  jam.  Pengujian  dilakukan sebanyak tiga kali pengulangan dengan perlakuan yang  sama  untuk  masing-masing  konsentrasi. Data yang diperoleh dianalisis untuk menentukan nilai  LC 50 dengan  metode  kurva  menggunakan tabel analisis probit.
Kontrol  negatif  dalam  uji  BSLT  disiapkan, sebanyak  50  µL  DMSO  dipipet  dengan  pipet mikro dimasukkan kedalam vial dan ditambahkan air  laut  sedikit.  Kemudian  dimasukkan  10  ekor larva Artemia salina Leach dan ditambah air laut hingga batas kalibrasi 5 mL.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN Sintesis Senyawa Kalkon
Senyawa kalkon( E )-3-(2-hidroksifenil)-1-(4’- metoksifenil)-prop-2-en-1-on (RMG 1 ) telah berhasil disintesis. Senyawa murni yang diperoleh berupa kristal berwarna orange dengan berat  0,8326  gram  dan  rendemen  65,56%. Kemurnian  senyawa  yang  diperoleh  ditunjukan
Gambar 1 . Sintesis senyawa kalkon
dengan  hasil  KLT  satu  noda  pada  perbandingan eluenn-heksana: etil asetat (8: 2) denganHarga R f =  0,50.  Selain  itu,  didukung  oleh  hasil kromatogram  HPLC  yang  satu  puncakpadaλ  240 nm,  t R :  14,5  menit  dan λ  365  nm,  t R :  14,5  menit dantitikleleh139-140°C.Lebih jelasnya dapat dilihat pada Tabel 1.
Senyawa  RMG 1 yang  telah  murni  kemudian dianalisis  strukturnya  menggunakanspektroskopi UV,  FTIR, 1 H-NMR  dan  HRMS.  Serapan maksimum  pada  spektrum  UV  untuk  senyawa RMG 1 terlihat pada λ 207,  309 dan 348 nm. Hal ini menunjukkan terjadinya eksitasi elektron dari n–  *  untuk  karbonil  dan  –  *  untuk  kedua gugus aromatik pada senyawa kalkon. Selain itu, hal  ini  juga  menunjukkan  bahwa  pada  senyawa RMG 1 ada  ikatan  rangkap  terkonjugasi.  Semakin banyak ikatan rangkap terkonjugasi terdapat pada senyawa  kalkon  maka  energi  ikatannya  menjadi semakin  lemah  sehingga  panjang  gelombang yang  dihasilkan  semakin  besar.  Spektrum  FTIR senyawa  RMG 1 memperlihatkan  adanya  vibrasi pada bilangan gelombang 3210 cm -1 menunjukkan  adanya  gugus  O-H,  vibrasi  pada bilangan  gelombang  3063  cm -1 menunjukkan adanya  gugus  C-H  aromatik,  vibrasi  pada bilangan  gelombang  1582  cm -1 menunjukkan adanya gugus C=C alifatik, vibrasi pada bilangan
gelombang  1640  cm -1 menunjukkan  adanya gugus  C=O,  vibrasi  pada  bilangan  gelombang 1171  cm -1 menunjukkan  adanya  gugus  C-O metoksi.Lebih  jelasnya  dapat  dilihat  pada Tabel 2 .
Spektrum
1 H-NMR senyawa RMG 1 menunjukkan bahwa jumlah proton dari senyawa tersebut  sesuai  dengan  yang  diharapkan,  dapat dilihat  pada  Tabel  4.4.  Pergeseran  kimia  pada  δ 6,99  ppm  (dd, Ja= 8,15  Hz; Jb =  1,1  Hz) menunjukkan proton H pada posisi C-3 dan C-5. Pergeseran  kimia  pada  δ  7,26  (dt, Ja =8,55  Hz; Jb =  7,6  Hz)  menunjukkan  proton  H  pada  posisi C-4.  Pergeseran  kimia  pada  δ  7,79  (dd, Ja =7,8 Hz; Jb =  1,7  Hz)  menunjukkan  proton  H  pada posisi C-6.Pergeseran kimia pada δ 7,88 ppm (d, 1H , J =15,7  Hz)  dan  δ  8,14  ppm  (d,  1H, J =16,05 Hz) berturut-turut memperlihatkan proton H pada C α dan  C β .  Pergeseran  kimia  pada  δ8,12  (td,  td, J = 9 Hz) menunjukkan posisi H pada C-2’ dan C- 6’. Pergeseran kimia pada δ7,06 (dt, Ja =8,85 Hz) menunjukkan  posisi  proton  H  pada  C-3’  dan  C- 5’. Proton H pada gugus metoksi (s, 3H) terdapat pada pergeseran kimia δ 3,90 dan proton H pada gugus  hidroksi  (s,  1H)  terdapat  pada  pergeseran kimia  δ  9,14  ppm.Lebih  jelasnya  dapat  dilihat pada Tabel 2.
Tabel 1. Sifat fisik senyawa kalkon Struktur Rumus Molekul Rendemen (%) Titik Leleh (°C) Warna Kristal
C 16 H 14 O 3 65,56 139-140 Orange
Tabel 2. Data spectrum FTIR, HRMS dan 1 H-NMR senyawa kalkon
Data Spektrum 1 H-NMR
(500 MHz, Dimetilsulfoksida, δ ( ppm)) Data Spektrum IR (KBr, cm -1 ) Data Spektrum MS ( m/z ) 6,99  (dd, Ja= 8,15  Hz; Jb =  1,1  Hz);  7,26  (dt, Ja =8,55  Hz; Jb =  7,6  Hz);  6,91  (dt, Ja =  8,7  Hz; Jb = 1,15 Hz); 7,79 (dd, Ja =7,8 Hz; Jb = 1,7 Hz); 7,88  (d, J =15,7  Hz);  8,14  (d, J =16,05  Hz);  8,12 (td, td, J = 9 Hz); 7,06 (dt, Ja =8,85 Hz); 7,06 (dt, Ja =8,85  Hz);  8,12  (td, J =  9  Hz);  9,14  ppm  (s,
1H); 3,90 ppm (s, 3H) 3210  (O-H);  3063  (C-H  aromatik); 1582  (C=C  alifatik);  1640  (C=O); 1171 (C-O metoksi) 255,1021 Spektrum HRMS senyawa RMG 1
menunjukkan  adanya  puncak  ion  molekul  yang
dihitung sebagai C 16 H 15 O 3 (M+H) + pada 255,1020 m/z dan yang ditemukan pada spektrum
massa  255,1021 m/z ,  lihat  Tabel  2.  Selisih  massa molekul tersebut 0,0001. Berdasarkan puncak ion molekul  yang  dihitung  dan  yang  ditemukan dalam  spektrum  MS  tersebut,  didapatkan  selisih massa  antara  keduanya  sangat  kecil.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  senyawa  kalkon  yang  telah disintesis  telah  murni  dan  mempunyai  struktur sesuai dengan yang diharapkan.

## Uji Toksisitas
Senyawa RMG 1 diuji pada konsentrasi 1000, 100dan  10  µg/mL.  Perbedaan  konsentrasi  ini dimaksudkan  untuk  mengetahui  tingkat  aktivitas toksisitas  masing-masing  senyawa  terhadap kematian larva Artemia salina Leach.
Data  hasil  uji  toksisitas  dari  tiga  senyawa kalkon  terhadap  larva Artemia  salina Leach dianalisis  untuk  menentukan  nilai  LC 50 dengan metode  analisis  probit.  Pada  metode  BSLT, senyawa  murni  dianggap  menunjukkan  aktivitas toksisitas  bila  mempunyai  nilai  LC 50 kecil  dari 200 µg/mL (Anderson and Mclaugnlin, 1991).
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, dapat  diketahui  bahwa  senyawa  RMG 1 tidak memiliki aktivitas toksisitas, hal ini dapat dilihat dari  nilai  LC 50 seyawa  RMG 1 yang  lebih  dari 200µg/mL (1,58x10 29 µg/mL).

## 4. KESIMPULAN
Senyawa  kalkon  ( E )-3-(2-hidroksifenil)-1- (4’-metoksifenil)-prop-2-en-1-on  telah  berhasil disintesis  dan  menghasilkan  rendemen  65,56%. Berdasarkan  hasil  analisis  struktur  mengunakan spektoskopi  UV,  FTIR, 1 H-NMR  dan  HRMS, senyawa  kalkon  yang  diperoleh  dari  hasil penelitian  sesuai  dengan  senyawa  target  yang diharapkan.  Senyawa  RMG 1 memiliki  nilai  LC 50 =  1,58x10 29 µg/mL.  Berdasarkan  nilai  LC 50 tersebut  dapat  diketahui  bahwa  senyawa  RMG 1 tidak berpotensi sebagai antikanker.

## 5. DAFTAR PUSTAKA
Ahmed, R.M., Sastry, G.V., Bano, N.,
Ravichandra,  S.,  and  Raghavendra,  M.
2011. Synthesis and Cytotoxic,
Antioxidant  Activities  of  New  Chalcone Derivatives. Rasayan  Journal  Chem .
4 (2): 289-294.
Bano,  S.,  Javed,  K.,  Ahmad,  S.,  Rathish,  I.  G.,
Singh,  S.,  Chaitanya,  M.,  Arunasree,  K. M.,  &  Alam,  M.  S.  2013.  Synthesis  of some  novel  chalkon,  flavanones  and flavones  and  evaluation  of  their  anti- Inflammantory activity. Europan Journal of Medical Chemistry. 65 : 51-59
Budimawarti,  C.  &  Handayani,  S.  2010.
Efektivitas  katalis  asam  basa  pada sintesis  2-hidroksicalkon,  senyawa  yang berpotensi  sebagai  zat  warna. Jurdik kimia UNY .
Fox,  R.  2004. Statistic  Acute  Toxicity  Bioassay Laboratory Exercise . Laboratory Ecologi Pages. 306.
Handayani, S., Teruna, H.Y. and Zamri, A. 2013.
Sintesis Analog Kalkon (E) -3-(2- klorofenil)-1-(4’-metoksifenil)-prop-2- en-1-on  dan  Uji  Toksisitas  dengan Metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT). J. Ind. Chem. Acta. 4 (1): 17-20.
Indiastuti,  D.N.,  Purwaningsih,  S.,  Setiawati,  Y., dan Cholies, N. 2008. Skrining Pendahuluan Toksisitas Beberapa Tumbuhan Benalu terhadap Larva Udang Artemia  salina Leach. Jurnal  Ilmu
Kefarmasian Indonesia . 6 (2): 81-85.
Jayapal,  M.R.,  Prasad,  K.S.,  dan  Sreedhar,  N.Y.
2010.  Synthesis  and  Characterization  of 2,6-Dihydroxy  Substituted  Chalcones Using  PEG-400  as  a  Recyclable  Solven. Journal  of  Pharmaceutical  Science  and Research . 2 (8): 450-458.
Kim,  Y.H.,  Kim,  J.,  Park,  H.,  and  Kim,  H.P.
2007.  Anti-inflammatory  Activity  of  the
Synthetic Chalcone Derivatives: Inhibition  of  Inducible  Nitric  Oxide Synthase-Catalyzed Nitric Oxide Production  from  Lipopolysaccharide- Treated  RAW  264.7  Cells. Biological and  Pharmaceutical  Bulletin . 30 (8):
1450-1455.
Oktavani,  J.,  Teruna,  H.Y  dan  Jasril.  2014.
Sintesis  Kalkon  Piridin  dan  Turunannya dariAsetilpiridin dan Indol-3- Karbaldehid serta UjiAktivitasnya sebagai  Antioksidan. Jurnal  Online
Mahasiswa FMIPA . 1 (2):100-104.
Patil, C.B., Maharjan, S.K., and Katti, S.A. 2009. Chalcone: A Versatile Molecule. Journal of Pharmaceutical Science and Research .
1 (3): 11-12.
Tiwari,  B.,  Pratapwwar,  A.  S.,  Tapas,  A.  R.,
Butle,  S.  R.,  &  Vatkar,  B.  S.  2010. Synthesis  and  Antimicrobial  activity  of some  chalcone  derivates. International Journal  of  ChemTech  Research . 1 (2): 499-503.