## Pemurnian diasilgliserol dari produk gliserolisis minyak sawit mentah dengan kromatografi kolom
Purification of diacylglycerol from  glycerolysis products of crude palm oil using column chromatography
TRI-PANJI *), SUHARYANTO & Urip PERWITASARI
Balai Penelitian Bioteknologi Perkebunan Indonesia, Jl. Taman Kencana No.1, Bogor 16151, Indonesia
Diterima tgl 17 Desember 2010/Disetujui  9 Maret 2011

## Abstract
Vegetable  oil  enriched  with  diacylglycerol  (DAG)  is known  as  healthy  oil.  This  oil  is  much  more  expensive  than cooking  oil.    Production  of  DAG  could  be  performed  by glycerolysis  process  of  CPO  using  specific  lipase  of  1,3- glyceride from Rhizopus oryzae mold.  Product derived from glycerolysis  process  of  CPO  is  a  mixture  of  DAG,  mono- acylglycerol  (MAG),  free  fatty  acid  (FFA)  and  residual  of unglycerolysed  triacylglyserol  (TAG).  Therefore  the  DAG product has to be isolated from other components in order to get high purity of DAG. The objective of the research was to purify and  to find out optimal concentration of DAG derived from  a  mixture    product  of  CPO  glycerolysis  at  laboratory scale  experiment  (total  reactant  for  glycerolysis  was 93.8  mL)  and  semipilot  scale  experiment    (10  times  of laboratory  scale)  using  column  chromatography  with  silica gel  as  stationary  phase.  The  research  showed  that    the highest DAG content could be collected at fraction of 26 th i.e 65%, while at semipilot scale experiment the highest content of  DAG  (97%)  was  achieved  at  64  to  66th  fraction. Reglycerolysis  of  residual  CPO  only  yielded  8.24% glycerolysis product which was much lower than that of the first glycerolysis reaching 46.67%. The highest DAG derived from the second reglycerolysis product  was achieved at 24 th fraction reaching 35.71 % .
[ Keywords:    Vegetable  oil,  lipase  enzyme  1,3-glyceride,
CPO,   diacylglycerol,]

## Abstrak
Minyak  nabati  kaya  kandungan  diasilgliserol  (DAG) dikenal  sebagai  minyak  sehat  ( healthy  oil ).  Minyak  ini  jauh lebih  mahal dari  minyak makan biasa. Produksi DAG dapat dilakukan  dengan  proses  gliserolisis  CPO  menggunakan enzim  lipase  spesifik  1,3-gliserida  dari  kapang Rhizopus oryzae .  Produk  gliserolisis  CPO  triasilgliserol  adalah campuran  DAG,  monoasilgliserol  (MAG)  dan  asam  lemak bebas  (ALB)  serta  residu  triasilgliserol  (TAG)  yang  tidak tergliserolisis.    Oleh  karena  itu  DAG  yang  terbentuk  harus dipisahkan dari komponen lainnya agar diperoleh fraksi DAG dengan  kemurnian  tinggi.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk memurnikan  dan  menetapkan  konsentrasi  DAG    yang  dapat diperoleh  dari  gliserolisis  CPO  skala  lab  (total  reaktan 93,8  mL)  dan  skala  semipilot  (10  kali  skala  laboratorium) dengan  kromatografi  kolom  menggunakan  fase  padat  silika gel.  Residu  TAG  dari  gliserolisis  pertama  digunakan  untuk gliserolisis  kedua  atau  gliserolisis  ulang.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  fraksi  DAG  dengan  konsentrasi
tertinggi  diperoleh  pada  fraksi  ke-26  yaitu  sebesar  65%, sedangkan  pada  percobaan  dengan  skala  semipilot  (10  kali skala  laboratorium)  diketahui  bahwa  konsentrasi  DAG tertinggi  (97%)  diperoleh  pada  fraksi  ke-64  sampai  dengan ke-66.  Gliserolisis  kedua  dari  residu  CPO  hanya  mampu menghidrolisis  TAG  menjadi  campuran  DAG,  MAG  dan ALB  sekitar  8,24%,  lebih  kecil  dari  reaksi  gliserolisis pertama  yaitu  sebesar  46,67%.  DAG  tertinggi  yang  berhasil dikumpulkan  dari  produk  gliserolisis  kedua  adalah  pada fraksi ke-24 yaitu sebesar 35,71% .
[Kata  kunci:  Minyak    nabati,    enzim  lipase  1,3-gliserida, CPO  diasilgliserol]

## Pendahuluan
Salah  satu  produk  olahan  CPO  yang  mempunyai nilai  ekonomi  tinggi  adalah  diasilgliserol  (DAG). Diasilgliserol  dikenal  sebagai  minyak  sehat  ( healthy oil )  karena  dapat  mengurangi  trigliserida  (TG)  dalam serum darah, mencegah akumulasi lemak dalam tubuh, dan  memperbaiki  rasio  kolesterol  serum  darah (Yasunaga et al ., 2001).  Reyes et al . (2008) melapor- kan  bahwa  konsumsi  minyak  yang  diperkaya  dengan DAG  selama  lima  minggu  tidak  meningkatkan kandungan  plasma  TG  sehingga  dapat  mengurangi risiko  serangan  jantung.  Harga  minyak  sehat  dapat mencapai  5-7  kali  dari  harga  minyak  goreng  biasa. Campuran  DAG  dan  monoasilgliserol  (MAG)  juga merupakan  surfaktan  non-ionik  untuk  bahan  peng- emulsi  dan  penstabil  pada  produk-produk  pangan  dan kosmetika (Hasanuddin et al ., 2003).
Diasilgliserol  dapat  diproduksi  dengan  cara gliserolisis    CPO  menggunakan  enzim  lipase  spesifik 1,3-gliserida.  Kandungan  DAG  dalam  CPO  dapat ditingkatkan  dari  sekitar  4-5%  menjadi  29%  setelah proses  gliserolisis  (Tri-Panji et  al .,  2008).  Hidrolisis CPO  menghasilkan  beberapa  produk  seperti  DAG, MAG,  asam  lemak  bebas  (ALB),  dan  karoten  yang dapat dipisahkan dan dimurnikan dari minyak. Produk tersebut digunakan untuk memperkaya minyak goreng menjadi  minyak  sehat,  sebagai  contoh  minyak  kedelai yang diperkaya DAG  (Yong et al ., 2009).  Pemurnian merupakan proses hilir yang sangat menentukan dalam pengembangan  industri  pengolahan.  Dalam  proses gliserolisis  CPO,  proses  pemurnian  dilakukan  untuk
Pemurnian diasilgliserol dari produk gliserolisis crude palm oil …………( Tri Panji et al.)
pemisahan  fraksi-fraksi  minyak.  Pemisahan  fraksi- fraksi  minyak  dapat  dilakukan  dengan  ekstraksi (Irimescu et  al .,  2002),  kromatografi  kolom (Mappiratu, 1999), kristalisasi (Chen & Ju, 2001), dan pendinginan  ( winterisasi )  bertahap  (Watanabe et  al. , 2006) serta destilasi molekular ( molecular destillation ) (Compton et al ., 2008). Pada penelitian ini pemisahan DAG  dilakukan  menggunakan  cara  kromatografi kolom dengan fase padat atau fase stasioner dari silika gel.  Alumina  dan  silika  gel  merupakan  dua  adsorben yang sering dipakai dalam kromatografi kolom karena memiliki  permukaan  partikel  yang  luas.  Silika  gel mempunyai  luas  permukaan  sekitar  500  m 2 /g  dan sesuai    untuk  pemisahan  senyawa-senyawa  organik yang  peka  oleh  aktivitas  katalitik  (Adnan,  1997). Penelitian  bertujuan  menetapkan  konsentrasi  DAG optimum yang dapat diperoleh dari produk gliserolisis CPO  skala  laboratorium  dan  skala  semipilot  dengan pemisahan menggunakan kromatografi kolom.

## Bahan dan Metode

## Bahan
Contoh  minyak  untuk  produksi  DAG  adalah  CPO segar berasal dari pabrik kelapa sawit (PKS) Kertajaya, PTPN  VIII,  Banten. Rhizopus  oryzae TP2  untuk produksi  lipase  adalah  isolat  koleksi  Balai  Penelitian Bioteknologi  Perkebunan  Indonesia  (BPBPI)  yang dipelihara  pada  PDA  miring  dan  diremajakan  setiap tiga minggu.

## Penyiapan lipase
Biakan kapang Rhizopus oryzae TP2 dalam potato dextrose  agar (PDA)  miring  umur  3-4  hari  ditambah- kan  akuades  3  mL  kemudian  spora  dikerik  dan divorteks  hingga diperoleh  suspensi  spora.  Suspensi spora  diinokulasikan dalam 200 mL medium cair PDB yang mengandung CPO 2 % dan diinkubasi pada suhu ruang  (27-30 o C)  selama  lima  hari  sambil  dikocok dengan kecepatan 75 rpm. Setelah lima hari, miselium dan  spora  dipisahkan  dengan  penyaringan  mengguna- kan  kertas  saring  kasar  dan  filtrat  diambil  sebagai ekstrak  kasar  lipase.  Filtrat  dikeringbekukan  ( freeze dried )  untuk  mempertahankan  kestabilan  lipase. Sebanyak  7  g  serbuk  ekstrak  enzim  kasar  diperoleh dari  500  mL  filtrat  yang  dikeringbekukan.  Serbuk lipase disimpan dalam freezer untuk produksi DAG.

## Produksi DAG
Produksi  DAG  dilakukan  dalam  medium  glisero- lisis pada suhu 37 o C, dengan substrat CPO 3 g, gliserol 0,8  g,  pelarut  heksana  40  mL,  bufer  Tris-HCl  pH  7.0 50  mL  dan  ekstrak  kasar  lipase  10  μL  serta  waktu inkubasi selama 18 jam. Ekstrak kasar lipase disiapkan dengan  melarutkan  serbuk  enzim  hasil  pengeringan beku (0,05 g) ke dalam 1 mL bufer Tris-HCl pH 7 (Tri-
Panji et al ., 2009).  Reaktan disaring dengan kain halus dan  filtrat  dipanaskan  dalam  oven  suhu  60 o C  untuk menguapkan  pelarut  heksan.    Filtrat  hasil  gliserolisis mengandung  campuran  komponen  DAG,  MAG,  ALB dan  residu  TAG.  Produksi  DAG  skala  semipilot dilakukan  dengan  kondisi  reaksi  yang  sama  dengan total reaktan 10 kali skala laboratorium yang dilakukan pada bejana kapasitas 2 L. Residu komponen TAG dari pemisahan  DAG  pertama  digunakan  kembali  untuk proses gliserolisis kedua.

## Pemisahan DAG
Pemisahan  DAG  dilakukan  dengan  kolom kromatografi  menggunakan  cara  Watanabe et  al . (2006) dengan silika gel sebagai fasa diam dan larutan heksana : etilasetat (80:20) sebagai fasa gerak.  Kolom berdimensi    (panjang  30  cm  x  diameter  2,5  cm)  diisi dengan glass wool setinggi  1 cm dan silika gel.  Silika gel  (7  g)  terlebih  dahulu  dibuat  bubur  dengan  cara melarutkannya  dalam  larutan  heksana:  etilasetat (80:20)  kemudian  bubur  silika  dimasukkan  ke  dalam kolom  secara  perlahan  dan  dibiarkan  pada  suhu  ruang hingga  memadat.  Sampel  hasil  gliserolisis  (20  mL) dimasukkan  ke  dalam  kolom  lalu  dielusikan  dengan campuran  heksana:etil  asetat  (80:20).  Setiap  fraksi dikumpulkan  sebanyak  1  mL.  Fraksinasi  dihentikan bila  hasil  fraksinasi  sudah  terlihat  jernih.    Komposisi hasil  gliserolisis  tiap-tiap  fraksi  dianalisis  mengguna- kan metode KLT.

## Pemurnian DAG skala semipilot
Diasilgliserol  produksi  skala  semipilot  diisolasi dengan kromatografi kolom dengan eluen  heksana:etil asetat (80:20). Jumlah silika gel sebagai fasa diam pada kromatografi  kolom  yang  digunakan  juga  diperbesar menjadi  10  kali  lipat  dari  percobaan  skala  labora- torium.  TAG  hasil  fraksinasi  dikumpulkan  kemudian pelarutnya diuapkan pada suhu 60 o C selama 15 menit. Setelah  sampel  bebas  dari  pelarut,  TAG  yang  tersisa ditimbang  bobotnya  kemudian  digliserolisis  ulang  dan difraksinasi kembali. Setelah proses gliserolisis, lapisan heksana  dipisahkan  dari  lapisan  air,  kemudian  lapisan heksana  dipanaskan  dalam  oven  pada  suhu  60 o C sampai  seluruh  pelarut  menguap  sehingga  jumlah fraksi yang terkumpul lebih pekat.

## Analisis komponen
Fraksi  komponen  TAG,  DAG,  MAG,  dan  ALB dari  reaksi  gliserolisis  dianalisis  dengan  metode  KLT (AOAC,  1995).  Lempeng  yang  digunakan  adalah lempeng  silika  gel  G  60.  Sebanyak  10  µL  contoh ditotolkan  sedikit  demi  sedikit  ke  dalam  lempeng tersebut  dan  dielusikan  dengan  campuran  petroleum benzene:dietileter:asam  asetat  glasial  (90:10:1). Lempeng  KLT  yang  sudah  dielusikan  dibiarkan
Menara Perkebunan 2011, 79(1), 30-35
mengering  terlebih  dahulu,  kemudian  visualisasi  noda dilakukan  dengan  menggunakan  uap  iodine.  Kristal iodine  dituangkan  ke  dalam  cawan  Petri  hingga  rata. Lempeng  KLT  yang  sudah  kering  diletakkan  di  atas cawan  Petri  selama  dua  menit  hingga  terlihat  noda cokelat.  Noda  yang  terlihat  langsung    diberi      tanda menggunakan    pensil.  Noda  yang  terlihat  dari  setiap komponen  minyak  (DAG,  MAG,  ALB  dan  TAG) dijiplak menggunakan kertas HVS 80 g lalu ditimbang bobotnya.  Fraksi  komponen  dihitung  dengan persamaan:

## Hasil dan Pembahasan

## Isolasi DAG skala laboratorium
Setiap  fraksi  minyak  terpisah  dengan  baik menggunakan  kromatografi  kolom  seperti  yang ditunjukkan  pada  spot  KLT  (Gambar  1).  TAG  baru muncul  pada  fraksi  ke-11,  sedangkan  fraksi  yang muncul  sebelumnya  adalah  pelarut  yang  sifatnya  non-
polar. Pada fraksi ke-26, TAG tidak muncul lagi karena sudah  terelusikan  secara  sempurna  sehingga  yang berada di dalam kolom merupakan senyawa yang  lebih polar  dibandingkan  TAG.  DAG  yang  sifatnya  lebih polar  dibandingkan  TAG  tertahan  pada  fasa  diam  dan baru  muncul  pada  fraksi  ke-22.  Hasil  perhitungan persentase  DAG  tertinggi  terletak  pada  fraksi  ke-26 yaitu sebesar 65% (Gambar 2). Pada fraksi yang sama persentase  MAG  dalam  jumlah  minimal  yaitu  sebesar 34%.  Teknik  kolom  kromatografi  adalah  berdasarkan pada  kelarutan  suatu  bahan.  TAG  yang  bersifat  non- polar  terelusi  lebih  dahulu  karena  kesamaan  sifat dengan  pelarut  yang  digunakan.  Pelarut  yang  di- dominasi  oleh  heksana  menyebabkan  TAG  cenderung terikat  pada  pelarut  yang  bersifat  nonpolar  dibanding- kan pada fasa diam yaitu silika yang bersifat polar.

## Isolasi DAG skala semipilot
Hasil  pemisahan  pada  percobaan  dengan  skala semipilot menunjukkan bahwa TAG baru muncul pada fraksi  ke-15,  sedangkan  DAG  muncul  pada  fraksi  ke- 47  (Gambar  3).      Hasil  ini  berbeda  dengan  yang diperoleh  pada  percobaan  skala  laboratorium
Gambar 1. Fraksinasi minyak sawit hasil gliserolisis dengan kromatografi kolom pada skala laboratorium.
Figure 1.  Fractionation of oil palm resulted from glycerolysis using column chromatography at laboratory scale experiment.
Gambar 2. Hasil pemisahan fraksi DAG dari produk gliserolisis lainnya dengan kromatografi kolom pada percobaan skala laboratorium.
Figure 2.  Result of DAG isolation from other glycerolysis product using column chromatography at laboratory scale experiment. Fraksi ke-/ Fraction Pe rs en / P er ce nt ag e Fraksi komponen x (%) =
= Berat komponen x (g) Berat komponen total X 100% 10  11 13 12 14  15  16  17  18  19  20  21  22  23  24  25  26  27  28  29 TAG DAG MAG ALB/ FFA
Pemurnian diasilgliserol dari produk gliserolisis crude palm oil …………( Tri Panji et al.)
yaitu  TAG  muncul  pada  fraksi  ke-11  dan  DAG  pada fraksi  ke-22.  Lambatnya  pemisahan  fraksi  TAG tersebut  kemungkinan  disebabkan  oleh  masih  banyak- nya  eluen  yang  tersisa  dalam  kolom  pada  saat fraksinasi  dimulai  yang  pada  gilirannya  DAG  ikut lambat  terelusi.    Menurut    Craven    &  Lencki  (2010) terjadinya ko-elusi sering menyebabkan hasil fraksinasi kurang  murni.  Walaupun  pemisahan  relatif  lambat, fraksi  DAG  yang  terpisahkan  cukup  murni.  Fraksi ke-47 sampai dengan fraksi ke-62 menghasilkan DAG dengan  kemurnian  sekitar  10-60%,  sedangkan  fraksi ke-63  sampai  dengan  ke-66  DAG  relatif  terpisah sempurna  yaitu  sekitar  97%  (Gambar  4).  Hasil  ini setara  dengan  yang  diperoleh  Compton et  al .  (2008) pada pemisahan DAG dari minyak kedelai dan minyak bunga matahari yang dilakukan dengan proses destilasi molekular.
Jumlah  TAG  menurun  mulai  fraksi  ke-47, kemudian  hilang  pada  fraksi  ke-63  namun  muncul kembali setelah fraksi ke-69. Munculnya kembali TAG di akhir fraksinasi kemungkinan disebabkan oleh masih aktifnya enzim lipase yang dapat menyebabkan   reaksi esterifikasi.  Reaksi  tersebut  terjadi  karena  setelah proses  gliserolisis  tidak  dilakukan  inaktivasi  untuk menghentikan  aktivitas  enzim  lipase.  Enzim  lipase yang masih aktif dalam medium yang bersifat hidrofob akan bekerja dalam lapisan heksana yang mengandung DAG,  MAG,  dan  ALB  sehingga  memungkinkan terjadinya reaksi esterifikasi (Price & Stevens, 1996).
DAG  yang  dihasilkan  pada  gliserolisis  skala semipilot  ini  dapat  dimurnikan  pada  fraksi  ke-64 sampai  fraksi  ke-66  (Gambar  4).  Fraksi  ke-14  sampai fraksi  ke-46  yang  berisi  TAG  dikumpulkan  dan pelarutnya diuapkan serta ditimbang. Bobot TAG yang diperoleh  sebesar  14,49  g.  Sampel  ini  kemudian dimasukkan  kembali  ke  dalam  medium  gliserolisis kedua. Sampel hasil gliserolisis kedua adalah sebanyak 200  mL  kemudian  dipekatkan  menjadi  40  mL.    Hasil analisis  menggunakan  KLT  menunjukkan  bahwa gliserolisis  kedua  hanya  mampu  menghidrolisis  CPO menjadi  campuran  DAG,  MAG  dan  ALB  sekitar 8,24%.  Nilai  ini  lebih  kecil  jika  dibandingkan  dengan reaksi  gliserolisis  pertama  yang  dapat  menghidrolisis CPO menjadi campuran DAG, MAG dan ALB sebesar 46,67%  (Tabel  1).  DAG  tertinggi  yang  berhasil dikumpulkan dari reaksi gliserolisis kedua adalah pada fraksi  ke-24  yaitu  sebesar  35,71%  (Gambar  5). Rendahnya  hasil  gliserolisis  kedua  mungkin  disebab- kan  masih  adanya  eluen  yang  tertinggal  pada  fraksi yang  mengandung  TAG  sehingga  kerja  enzim  ter- ganggu. Kemungkinan tertinggalnya eluen dapat terjadi karena  sampel  hasil  fraksinasi  hanya  dipanaskan  pada suhu  60 o C  sehingga  masih  ada  kemungkinan  ter- tinggalnya etil asetat dalam sampel. Reaksi gliserolisis mungkin  masih  dapat  diulang    lagi  jika  residu  pelarut setelah  fraksinasi    dalam  kromatografi  kolom  dapat dihilangkan secara sempurna.
Gambar 3.  Spot DAG dan fraksi minyak lainnya hasil pemisahan dengan kromatografi kolom  dari hasil gliserolisis skala semipilot. Spot KLT dari baris paling atas sampai baris terbawah berturut-turut adalah TAG, DAG, MAG, dan FFA.
Figure 3.   DAG and other fraction spots resulted from fractionation using column chromatography at semi pilot scale glyserolysis.  Spots of  TLC at  the upper  row spots  to the  lower  row  spots are TAG, DAG, MAG  and FFA,  respectively.
13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 TAG DAG MAG ALB/ FF A TAG MAG DAG ALB/ FFA
Gambar 4.  Persentase DAG dan fraksi minyak lainnya hasil pemisahan dengan kromatografi kolom pada percobaan skala semipilot
Figure 4.    Percentage of DAG and other oil  fraction resulted from separation by column  chromatography at semipilot scale   experiment
Gambar 5.  Persentase DAG hasil gliserolisis ulang terhadap sisa TAG yang kemudian difraksinasi dengan kromatografi kolom.
Figure 5.   Percentage of DAG resulted from reglycerolysis  at the residual TAG which then fractionated by column chromatography.
Tabel 1.  Rekapitulasi hasil gliserolisis  CPO pada siklus pertama dan kedua.
Table 1. Recapitulation of glycerolysis yield of CPO at the  first and second cyclus.
Gliserolisis ke Glycerolysis stage Jumlah substrat Amount of substrate (g) Sisa substrat Residual substrate (g) Sebelum fraksinasi Before fractionation Setelah fraksinasi After  fractionation TAG (%) Hasil  gliserolisis Glycerolysis yield 1 ) (%) TAG (%) Hasil  gliserolisis Glycerolysis yield 1 ) (%) 1 30,00 14,49 53,33 46,67 48,30 28,62 2 14,49 11,92 91,76 8,24 82,25 6,83
1) Hasil gliserolisis adalah total DAG, MAG dan ALB (Glycerolysis yield is the sum of  DAG, MAG and FFA)
pe rs en ( % ) fraksi ke- TAG DAG Fraksi ke-/ Fraction Pe rs en ta se / P er ce nt age ( % ) Fraksi ke-/ Fraction Pe rs en ta se / Pe rc en ta ge ( % )
Pemurnian diasilgliserol dari produk gliserolisis crude palm oil …………( Tri Panji et al.)

## Kesimpulan
Isolasi DAG dari campuran TAG, DAG, MAG dan ALB  hasil  gliserolisis  CPO  secara  enzimatis  dapat dilakukan  dengan  kromatografi  kolom  menggunakan silika gel sebagai fase stasioner. Pemisahan DAG skala laboratorium menggunakan kromatografi kolom meng- hasilkan DAG sebesar 65 % yang diperoleh pada fraksi ke-26.    Pada  percobaan  skala  semipilot,  DAG  relatif murni  (97  %)  dapat  diperoleh    pada  fraksi  ke-64 sampai  dengan  ke-66.  Gliserolisis  kedua  dari  residu CPO  menghasilkan  campuran  DAG,  MAG  dan  ALB sekitar  8,24  %,  lebih  kecil  dibandingkan  dengan  hasil reaksi gliserolisis pertama yaitu sebesar 46,67 %. DAG tertinggi yang berhasil dikumpulkan dari reaksi glisero- lisis  kedua  adalah  pada  fraksi  ke-24  yaitu  sebesar 35,71 %. Penghilangan residu pelarut minyak dari hasil gliserolisis  pertama  perlu  dipelajari  agar  gliserolisis ulang lebih optimal.

## Ucapan Terima Kasih
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  atas  bantuan pendanaan  dari  DIPA  2009  No.  4025.0/018/09.2/ XII/2009  melalui  Balai  Besar  Penelitian  dan Pengembangan Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik Pertanian,  Kementerian  Pertanian  sehingga  penelitian ini dapat terlaksana dengan baik.

## Daftar Pustaka
Adnan,  M  (1997). Teknik  Kromatografi  untuk  Analisis Bahan  Makanan .  Yogyakarta:  Andi  Offset  AOAC (1995). Official  Methods  of  Analysis  of  the  Association of  Official  Analytical  Chemistry .  Washington  DC, AOAC Press.
Chen  TC  &  YH  Ju    (2001).  Polyunsaturated  fatty  acids concentration from borage oil and linseed oil fatty acids. JAOCS 78,1030-1036.
Compton  DL,  JA  Laszlo,  F  J  Eller  &  SL  Taylor  (2008). Purification  of  1,2-diacylglycerols  from  vegetable  oils: Comparison  of  molecular  distillation  and  liquid  CO 2 extraction. J Industrial Crops  Products 28, 113–121.
Craven  RJ    &  RW  Lencki  (2010).    Preparation  of  diacid 1,3-diacylglycerols. J Am Oil Chem Soc 87, 1281–1291.
Iremescu  R,  Y  Iwasaki  &  CT  Hou  (2002).  Study  of ethanolysis  to  2-MAG  by  immobilized Candida antartica lipase and synthesis of symmetrically structure TAG. J  Am Oil Chem Soc 79, 879-883.
Hasanuddin  A,  Mappiratu  &  GS  Hutomo  (2003).    Pola perubahan  mono  dan  diasilgliserol  dalam  reaksi etanolisis  minyak  sawit  mentah. J  Tekn  Indust  Pangan 14 (3), 241-247.
Mappiratu  (1999).  Penggunaan  biokatalis  dedak  padi  dalam biosintesis  antimikroba  monoasilgliserol  dari  minyak kelapa [ Disertasi ]. Bogor, Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.
Price  NC  &  L  Stevens    (1996). Fundamentals  of Enzymology . New York, Oxford University Press.
Reyes  G,  K  Yasunaga,  E  Rothenstein,  W  Karmally,
R  Ramakrishnan,  S  Holleran  &    HN  Ginsberg  (2008). Effects  of  a  1,3-diacylglycerol  oil-enriched  diet  on postprandial  lipemia  in  people  with  insulin  resistance. J Lipid Res 49, 670-678.
Saberia  AH,    L    Oi-Ming    &  JT  Vázquezc    (2011). Crystallization kinetics of palm oil in blends with palm- based diacylglycerol. J Food Res Intnl 44 (1), 425-435.
Tri-Panji,  Suharyanto  &  N  Arini    (2008).    Lipase  spesifik 1,3-gliserida  dari  fungi  lokal  untuk  biokonversi  CPO menjadi  diasilgliserol. Menara  Perkebunan 76  (1),  11- 22.
Tri-Panji, A Budiani, Suharyanto & Irma Kresnawaty (2009). Rekayasa genetika mikroba dan produksi lipase spesifik 1,3-  digliserida  untuk  menghasilkan  produk  bernilai tinggi >10 kali lipat. Laporan Akhir Kegiatan Penelitian. Bogor, Balai Penelitian Bioteknologi Perkebunan.
Watanabe Y, T Nagao, S Kanatani, T Kobayashi, T Terai &
Y  Shimada  (2006).  Purification  of  mono-acylglycerol with  conjugate  linoleic  acid  synthesized  through  a lipase-catalyzed  reaction  by  solvent  winterization. J Oleo Sci 55 (10), 537-543.
Yasunaga K, Y Katsuragi & T Yasukawa (2001). Nutritional characteristics of diacylglycerol. In: Proc. Internat Palm Oil Congress. Food Technology & Nutrition Conf, 20-22 August 2001. p, 149-155.
Yong  W,  M    Zhao ,  OU  Shiyi,    L    Xie &  S  Tang (2009). Preparation  of  a  diacylglycerol-enriched  soybean  oil  by phospholipase A1 catalyzed hydrolysis. J Mol Catalysis B  Enzymatic 56 (2-3), 165-172.