## PENGARUH MEDIA DASAR DAN BENZILADENIN (BA) TERHADAP PEMBESARAN SEEDLING ANGGREK Dendrobium IN VITRO
Adryade Reshi Gusta 1 , Dwi Hapsoro 2 , Nyimas Sa’diyah 2 , Yusnita 2 1 Fakultas Pertanian Universitas Lampung
2 Fakultas Pertanian Universitas Lampung Email: adryadereshi@gmail.com

## ABSTRACT
THE EFFECT OF MEDIA AND BENZILADENINE ON THE GROWTH OF Dendrobium ORCHIDS SEEDLING IN VITRO. Orchid such as Dendrobium is more commonly propagated in vitro by using tis- sue culture techniques.  In tissue culture, the type and composition of media and plant growth regulator was very crucial. The research was aimed to study the effect of media and plant growth regulator on growth of Dendrobium seedlings in vitro and was conducted in Plant Tissue Culture Laboratory, Faculty of Agriculture, University of Lampung, from April 2010 until October 2010.  The experiment was carried out in a completely randomized design with three replicates.  Treatments were arranged as 2 x 3 factorial design with media (½ MS and modified ½ MS with high P and low N) as the first factor and three concentrations of benzyl-adenine (0, 5, and 10 mg/l) as the second factor.  Each experimental unit consisted of 3 culture bottles each of which containing 2 five-month-old seedlings.  The result showed that both media was not significantly affected the growth of Dendrobium seedlings. Whereas, the addition of benzyl-adenine (BA) at 5 mg/l and 10 mg/l in both of media was able to increase shoot number from 2.8 to 5.2-5.4 and increase leave number from 9.2 to 18.0- 18.2.  Overall, the application of benzyl-adenine decreased shoot height (from 3.7 to 3.0-2.7 cm), root number (from 2.7 to 1.3-0.8), and root length (from 1.6 to 1.0-0.8 cm).
Keyword :  Dendrobium in vitro, seedlings growth.

## PENDAHULUAN
Kultur jaringan merupakan teknik menum- buh-kembangkan bagian tanaman, baik berupa sel, jaringan, atau organ dalam kondisi aseptik secara in vitro (Yusnita, 2003).  Serangkaian kegiatan yang di- perlukan untuk produksi bibit anggrek adalah penge- cambahan biji anggrek in vitro , pertumbuhan dan pembesaran seedling , hingga aklimatisasi plantlet / bibit botolan.  Tahapan sejak perkecambahan hingga akhir bibit botolan perlu pembesaran seedling in vi- tro , karena media yang optimal untuk pengecamba- han biji berbeda dengan media yang optimal untuk pertumbuhan dan pembesaran seedling .  Oleh karena itu, perlu dikaji formulasi media yang optimal untuk pengecambahan biji dan petumbuhan dan pembesa- ran seedling (Yusnita, 2003). Media kultur merupakan salah satu faktor penentu keberhasilan perbanyakan tanaman secara kultur jaringan (Yusnita, 2003).  Formulasi media yang sering digunakan untuk mengulturkan berbagai jenis tanaman adalah media Murashige dan Skoog (MS) (1962) dengan hara makro dan mikronya di- kurangi menjadi setengahnya (½ MS) (Damayanti, 2006; Ramadiana, et al ., 2008).  Formulasi media ½ MS lebih sering digunakan untuk mengecambahkan biji anggrek dengan hasil yang lebih baik dibanding- kan dengan formulasi Knudson C (Knudson, 1946) dan formulasi Vacin dan Went (VW) (1949).  For- mulasi media Knudson C dan VW mengandung hara makro yang lengkap, tetapi hara mikro yang tersedia
hanya Mn dan Fe.  Unsur mikro yang lain, yaitu B, Zn, Cu, Mo, dan Co tidak terdapat pada kedua formu- lasi media tersebut.  Sedangkan formulasi media MS atau ½ MS mengandung hara makro dan hara mikro yang lengkap (Yusnita, 2010).
Media padat berkomposisi modifikasi ½ MS dengan atau tanpa zat pengatur pertumbuhan digu- nakan sebagai media pembesaran tunas anggrek in vitro (Aktar et al ., 2008; Puchooa, 2004; Shiau et al ., 2005; Sheelavanthmath et al ., 2005).  Media ini men- gandung nutrisi hara yang lengkap untuk menunjang pertumbuhan tunas selama pengulturan.  Beberapa peneliti lain juga melaporkan bahwa media ½ MS menunjukkan hasil yang bagus di dalam pengulturan anggrek Dendrobium (Aktar et al. , 2008; George, 2010). Penggunaan media dengan peningkatan konsentrasi P (fosfor) dan rendah N (nitrogen) pada media ½ MS dalam pembesaran tunas in vitro telah digunakan Sim et al . (2006) dan Hee et al . (2007). Penurunan konsentrasi N mengurangi masa juvenil yang lama.  Peningkatan konsentrasi P (fosfor) dan rendah N (nitrogen) pada media ½ MS diharapkan dapat mempengaruhi pertumbuhan seedling anggrek Dendrobium menjadi lebih kuat karena mengandung lebih banyak lignin dan tidak ternitrifikasi.
Benziladenin merupakan sitokinin yang ber- fungsi untuk merangsang pembelahan sel (Schmull- ing, 2004).  Pengaruh pemberian BA terhadap perban- yakan tunas in vitro berbagai tanaman telah banyak dilaporkan.  BA dapat meningkatkan jumlah tunas
BA
pada tanaman anggrek dan anthurium (Yusnita, 2010). Sim et al . (2006) melaporkan bahwa penambahan BA ke dalam media pembesaran seedling menyebabkan seedling dapat berbunga lebih cepat.  Penambahan BA yang diberikan, diharapkan mampu merangsang perbanyakan tunas dan menjadi lebih cepat berbunga (mempercepat periode juvenil tanaman anggrek). Penelitian ini bertujuan untuk mempelajari pen- garuh media dasar, pengaruh pemberian benziladenin (BA), dan menentukan konsentrasi benziladenin (BA) terbaik untuk pertumbuhan dan pembentukan tunas seedling Dendrobium in vitro .

## BAHAN DAN METODE
Penelitian yang dilaksanakan sejak bulan April 2010 hingga bulan Oktober 2010. Percobaan ini menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) den- gan 3 ulangan.  Perlakuan disusun secara faktorial 2 x 3.  Faktor pertama adalah media dasar, yaitu media ½ MS dan media ½ MS P tinggi N rendah.  Faktor kedua adalah benziladenin (BA) konsentrasi 0, 5, dan 10 mg/l.  Setiap unit percobaan terdiri dari 4 botol kultur yang masing-masing berisi 2 eksplan seedling anggrek Dendrobium in vitro koleksi Laboratorium Kultur Jaringan yang berumur 5 bulan sejak penge- cambahan biji.  Seedling tersebut berukuran rata-rata ± 1,7 cm dengan 2-3 helai daun.
Pengamatan dilakukan dengan mengukur tinggi tanaman, jumlah tunas, jumlah daun, jum- lah akar, dan panjang akar per bulan selama 6 bulan pengulturan.  Perbedaan nilai variabel yang diukur dianalisis ragam dan jika nyata diuji dengan uji BNT taraf 5%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil penelitian menunjukkan bahwa kedua media dasar, yaitu media ½ MS dan ½ MS P tinggi N rendah tidak berpengaruh nyata terhadap seluruh variabel pengamatan (Tabel 1).  Sedangkan benzilad- enin (BA) berpengaruh nyata terhadap seluruh varia- bel pengamatan.  BA dapat meningkatkan pertumbu- han tunas (multiplikasi tunas) dan daun.  Sedangkan pada variabel tinggi tanaman, jumlah akar, dan pan- jang akar (Gambar 1) cenderung menurun. Tidak ada interaksi antara media dan BA
Perlakuan Tinggi tanaman (cm) Jumlah tunas Jumlah daun Jumlah akar Panjang akar (cm) Media Dasar ½ MS 2,4 a 1,2 a 1,7 a 1,2 a 1,1 a ½ MS Pt Nr 2,5 a 1,2 a 1,7 a 1,1 a 1,0 a BNT 5% 0,2 0,1 0,1 0,2 0,2 BA 0 mg/l 3,7 a 2,8 b 9,2 b 2,7 a 1,6 a 5 mg/l 3,0 b 5,4 a 18,4 a 1,3 b 1,0 b 10 mg/l 2,7 b 5,2 a 18,0 a 0,8 b 0,8 c BNT 5% 0,3 1,6 4,3 0,3 0,4
Gambar 1. Pengaruh BA tinggi tanaman, jumlah tunas, jumlah daun, jumlah akar, dan panjang akar seedling Dendrobium in vitro .  Dua nilai tengah yang diikuti oleh huruf yang sama tidak  berbeda nyata pada uji BNT 5%.
Peningkatan konsentrasi BA hingga 10 mg/l menyebabkan multiplikasi tunas dan daun menjadi lebih banyak.  Data yang dipaparkan di atas mengin- formasikan bahwa BA merupakan sitokinin yang efektif untuk pembentukan tunas pada kultur in vitro tanaman  anggrek,  tetapi  efektifitas  BA  tersebut  di - pengaruhi oleh konsentrasinya.  Kishor et al . (2005) melaporkan bahwa penggunaan kinetin (sitokinin) 0,5 mg/l dalam media ½ MS menghasilkan respon yang tidak berbeda dengan media ½ MS kontrol terhadap pertumbuhan seedling , sehingga perlu peningkatan konsentrasi sitokinin lebih dari 0,5 mg/l.    Pemberian zat pengatur pertumbuhan dengan konsentrasi yang tepat merupakan salah satu faktor yang mempenga- ruhi keberhasilan pertumbuhan dan perkembangan tanaman (George, 2010).
Semakin tinggi konsentrasi BA hingga 10 mg/l mengakibatkan pertumbuhan tanaman cend- erung semakin pendek/kerdil (Gambar 2).  Diduga eksplan seedling sudah mempunyai sitokinin yang relatif tinggi, maka pembelahan dan pembesaran sel semakin meningkat sehingga fotosintat banyak ditu- jukan untuk multiplikasi tunas daripada untuk per- tumbuhan atau pemanjangan tunas.  Dalam pening- katan dosis tertentu memang penggunaan BA efektif menumbuhkan tinggi tanaman.
Perlakuan BA hingga 10 mg/l menghasilkan jumlah akar yang lebih sedikit daripada kontrol.  Kon- sentrasi BA yang semakin tinggi cenderung meng-
Tabel 1 .  Hasil analisis ragam pengaruh media dasar dan benziladenin (BA)
A B C D E E
hambat pertumbuhan akar, sehingga mengakibatkan jumlah akar menjadi lebih sedikit dan akar menjadi pendek.  Penambahan BA menyebabkan jumlah si- tokinin lebih banyak daripada jumlah auksin yang berada di dalam sel tubuh seedling in vitro , sehingga proses multiplikasi tunas lebih banyak daripada pem- bentukan akar (Stern et al ., 2003).
Gambar 2. Pengaruh konsentrasi BA pada media ½ MS dan media ½ MS P Tinggi N rendah terhadap pembesaran seedling Dendrobium in vitro pada umur 2 bulan. A = ½ MS + BA 0 mg/l, B = ½ MS + BA 5 mg/l, C = ½ MS + BA 10 mg/l, D = ½ MS P tinggi N rendah + BA 0 mg/l, E = ½ MS P tinggi N rendah + BA 5 mg/l, F = ½ MS P tinggi N rendah + BA 10 mg/l.

## KESIMPULAN
Berdasarkan data hasil pengamatan yang telah dikemukakan, dapat disimpulkan sebagai berikut : (1) Media ½ MS dan ½ MS P tinggi dan N rendah ber- pengaruh sama pada seedling anggrek Dendrobium in vitro , (2) Pemberian benziladenin (BA) 5 dan 10 mg/l dapat meningkatkan jumlah tunas dan daun seedling Dendrobium in vitro , tetapi menurunkan jumlah akar dan panjang akar, serta tanaman cenderung kerdil, (3) Konsentrasi BA terbaik untuk meningkatkan jumlah tunas dan daun seedling Dendrobium in vitro adalah 5 mg/l.

## DAFTAR PUSTAKA
Aktar, S., K.M. Nasiruddin, and K. Hossain.  2008. Effects of Different Media and Organic Addi- tives Interaction on In Vitro Regeneration of Dendrobium Orchid.  Agric. Rural Dev.  6(1:2): 69-74.
Damayanti, F.  2006.  Pembentukan beberapa Hibrida
Anggrek serta Pengaruh Beberapa Media Perke- cambahan dan Media Perbanyakan cepat secara In Vitro pada Beberapa Anggrek Hibrida.  Lapo- ran Akhir Program Hibah Kompetisi.  Universi- tas Padjajaran.  Bandung.
George, E.F.  2010.  Plant Propagation by Tissue Cul- ture In Practice.  Second Edition.  Part I and Part II.  England: Exegentics Limited.
Hee, K.H., C.S. Loh, and H.Y. Yeoh.  2007.  Early in vitro flowering and seed production in culture in Dendrobium Chao Praya Smile (Orcidaceae). Plant Cell Reports. p.1-10.
Kishor, R., P.S.S.V. Khan, and G.J. Sharma.  2005. Hibridization and In Vitro Culture of an Orchid Hybrid Ascocenda ‘Kangla’.  Scientia Horticul- turae.
Knudson, L.  1946.  A new nutrien solution for the germination of orchid seed.  American Orchid Society Bulletin.  15:214-217.
Murashige, T and F. Skoog.  1962.  A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tis- sue culture.  Physiol. Plant.  15:473-497.
Puchooa, D. 2004.  Comparison of Different Culture Media for the In Vitro Culture of Dendrobium (Orchidae) .  Agriculture & Biology. http://www. ijab.org .  Diakses pada tanggal 9 April 2010.
Ramadiana, S., A. P. Sari, Yusnita, dan D. Hapsoro. 2008.  Hibridisasi, pengaruh Dua Jenis media Dasar dan Pepton terhadap Perkecambahan Biji dan pertumbuhan Protokorm Anggrek Dendro- bium Hibrida secara In Vitro.  Prosiding Semi- nar Nasional Sains dan Teknologi II Universitas Lampung.  Bandar Lampung.  17-18 November.
Schmulling, T.  2004.  Cytokinin.  In Encyclopedia of Biological Chemistry (Eds. Lennarz, W., Lane, M.D.).  Academic Press/Elsevier Science. Sheelavanthmanth, S.S., B.P. Hema , E.J. Hahn, and K.Y. Paek.  2005.  High Frequency of Proto- corm like bodies (PLBs) Induction and Plant Re- generation from Protocorm and leaf Section of Aerides crispum.  Scientia Horticulturae. 106(3): 395-401.
Shiau, J., Y.S.M. Nalawade, C. Hsia, V. Mulabagal, and H. Tsay.  2005.  In Vitro propagation of The Chinese Medicinal Plant, Dendrobium candidum Wall.  Ex Lindl from Axenic Nodal Segment.  In Vitro Cellular and Developmental Bology-Plant. Sim, G.E., C.S. Loh, and C. J. Goh.  2006.  High Fre- quency Early In Vitro Flowering of Dendrobium Madame Thong-In (Orchidaceae) .  Plant Cell Rep.  26(4): 383-393.

## Gusta et al.: Pengaruh media dasar dan BA terhadap seedling Dendrobium
Stern, K.R., S. Janksy, and J.E Bidlack.  2003.  Intro- ductory Plant Biology.  The McGraw-Hill Com- panies, Inc.  New York.  America.
Vacin, E. and F. Went.  1949.  Some pH changes in nutrient solution.  Botanical Gazette.  110:605- 613.
Yusnita.  2003.  Kultur Jaringan Cara Memperbanyak Tanaman  Secara  Efisien.   AgroMedia  Pustaka. Jakarta.  105 hlm.
Yusnita.  2010.  Perbanyakan In Vitro Tanaman Ang- grek.  Universitas Lampung Press.  Bandar Lam- pung.  128 hlm.
o