## PROSES RECOVERY DAN PENGKONSENTRASIAN PROTEIN AIR PEREBUSAN PINDANG TONGKOL (Euthynnus affinis) MELALUI ULTRAFILTRASI

## RECOVERY PROCESS AND CONCENTRATION OF DRINKING WATER PROTEIN “PINDANG TONGKOL” (Euthynnus affinis) THROUGH ULTRAFILTRATION
Uju *) , Bambang Riyanto, Bustami Ibrahim, Wahyu Ramadhan, Irfan Setia Tanjung
Departemen Teknologi Hasil Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor Kampus IPB Darmaga, Jalan Agatis, Bogor 16680, Jawa Barat, Indonesia
Email: ujusadi@gmail.com
Makalah: Diterima 18 September 2017; Diperbaiki 11 Desember 2017; Disetujui 29 Desember 2017

## ABSTRACT
“Pindang” is a  fisheries product which is produced by combination of boiling and salting. Boiling in a salt  solution  causes  dissolving  protein  into  the  boiling  water.  Membrane  process  has  been  applied  for  the concentrating  of  protein.  In  this  study,  the  characterization  and  recovery  of  protein  from  the  boiled  water  of “pindang” were carried out using 0.05 µm ultrafiltration membrane. The parameters of study included the effect of the concentration factor on the protein concentration, flux of permeate, and protein rejection coefficient. The concentrating of “pindang” boiling water using 0.05 μm ultrafiltration membrane increased 46.75% of protein. During  ultrafiltration  concentrating  process,  flux  decreased  from  6.58  L/m 2 h  at  the  beginning  of  the concentration  to 2.71  L/m 2 h  at  fortieth  minute.  Rejection coefficient  increased  from  41.2%  at  the  beginning of the  concentrating  to  55.07%  at  fortieth  minute.  The  decreasing  values  of  the  parameters  COD,  TSS,  turbidity, protein,  and  fat  were  higher  than  the  decreasing  of  TDS,  salinity,  and  pH.  The  dominant  molecular  weight  of protein in protein concentrate of “pindang” boiling water was 33.45 kDa .
Keywords: protein concentrate, “pindang”, ultrafiltration

## ABSTRAK
Pindang  merupakan  hasil  olahan  ikan  dengan  cara  kombinasi  perebusan  dan  penggaraman.  Perebusan dalam  larutan  garam  menyebabkan  terlarutnya  protein  kedalam  air  perebusan.  Dalam  penelitian  ini  dikaji karakterisasi  dan recovery protein  dari  air  rebusan  pindang  menggunakan  ultrafiltrasi  0,05  µm.  Kajian  proses meliputi pengaruh faktor konsentrasi terhadap konsentrasi protein dan fluks, dan koefisien rejeksi protein selama pengkonsentrasian.  Proses recovery dan  pengkonsentrasian  air  perebusan  pindang  denganultrafiltrasi  0,05  µm dapat meningkatkan konsentrasi protein 46,75%. Selama pengkonsentrasian menyebabkan nilai fluks mengalami penurunan dari 6,58 L/m 2 jam pada awal pengkonsentrasian menjadi 2,71 L/m 2 jam pada menit ke-40. Koefisien rejeksi  selama  pengkonsentrasian  mengalami  peningkatan  dari  41,2%  pada  awal  pengkonsentrasian  menjadi 55,07%  pada  menit  ke-40.  Nilai  penurunan  parameter  COD,  TSS,  kekeruhan,  protein,  dan  lemak  lebih  tinggi dibandingkan penurunan TDS, salinitas, dan pH. Berat molekul protein yang dominan pada konsentrat protein air perebusan pindang adalah 33,45 kDa.
Kata kunci: konsentrat protein, pindang, ultrafiltrasi

## PENDAHULUAN
Pindang  menempati  urutan  kedua  volume produksi  olahan  hasil  perikanan  Indonesia  setelah ikan  kering/asin  dengan  total  produksi  mencapai 229.566  ton  pada  tahun  2015  (KKP,  2016). Tingginya  volume  produksi  pindang  diikuti  pula oleh besarnya volume air perebusan yang dihasilkan dari  pemindangan.  Sebanyak  500  L  air  perebusan pindang diperkirakan dapat dihasilkan pada produksi satu  ton  pindang.  Perebusan  dalam  larutan  garam memungkinkan  terlarutnya  protein  kedalam  air perebusan  sehingga  mengurangi  kandungan  protein dalam  bahan.  Niamnuy et  al. (2008)  melaporkan bahwa larutan garam dapat mengakibatkan terlarutnya  protein  ke  dalam  air  perebusan. Konsentrasi  protein  yang  larut  ke  dalam  air
perebusan  berbanding  lurus  dengan  konsentrasi garam  dan  waktu  perebusan.  Besarnya  penurunan jumlah protein yang terlarut akibat perebusan dalam larutan garam dapat mencapai 66% dari total protein pada udang.
Air perebusan pindang selama ini merupakan  hasil  samping  pemindangan  yang  belum banyak dimanfaatkan. Sebagian besar unit pengolahan  pindang  membuang  air  perebusan  tanpa ada  proses  pengolahan  ulang,  sehingga  berpotensi mencemari  lingkungan.  Pemanfaatan  air  perebusan pindang  yang  telah  dilakukan  diantaranya  adalah sebagai  bahan  baku  pembuatan  petis  ikan.  Menurut Fitriyani et  al. (2013)  petis  ikan  diperoleh  dari  air perebusan  pindang  ditambah  beberapa  bahan  lain kemudian  dikentalkan  dengan  cara  dipanaskan sehingga  kadar  airnya  berkurang  dan  viskositasnya
Jurnal Teknologi Industri Pertanian 27 (3):281-290 (2017) ISSN: 0216-3160    EISSN: 2252-3901
menjadi  tinggi.  Pengkonsentratan  air  rebusan pindang  dengan  pemanasan  selain  memerlukan energi  tinggi  karena  menguapkan  sejumlah  air  juga dapat  menyebabkan  kerusakan  pada  komponen gizinya  karena  panas  yang  tinggi  dan  waktu  yang lama.
Metode  pemisahan  dan  pengkonsentrasian yang umum dan telah banyak diterapkan diantaranya menggunakan  adsorpsi  (Shukoor et  al., 2007), presipitasi  (Kurinomaru et  al., 2014),  evaporasi (Schuck et al., 2015), dan membran reverse osmosis (Uju et  al., 2009).  Diantara  metode  tersebut, ultrafiltrasi  memiliki  keunggulan  pada  isolasi  dan pemisahan protein karena tidak  memerlukan banyak garam dan buffer , dapat berjalan terus-menerus, dan menghilangkan  komponen  pengotor  (Kumar  dan Lawler,  2014).  Proses  membran  menjaga  kualitas senyawa  terkonsentrasi  dibandingkan  dengan  proses panas  atau  proses  kimia  karena  dilakukan  pada temperatur  relative  rendah  (Dumay et  al., 2008). Schuck et  al. (2015)  melaporkan  bahwa  untuk memisahkan  1  kg  air  pada  susu  menggunakan evaporasi  memerlukan  energi  418  kJ.  Masse et  al. (2011)  melaporkan  bahwa  untuk  memisahkan  air pada  proses pretreatment desalinasi  air  laut menggunakan  membran  ultrafiltrasi  membutuhkan energi  sebesar  0,5  kJ  untuk  setiap  1kg  air  yang dipisahkan. Pengkonsentrasian menggunakan membran tidak mengakibatkan perubahan fase bahan seperti  yang  terjadi  pada  evaporasi  sehingga membutuhkan energi yang lebih sedikit. Berdasarkan penjelasan di atas penggunaan membran  dalam  pemisahan  dan  pengkonsentrasian protein  dapat  menghemat  penggunaan  energi  dan bahan kimia.
Teknologi membran telah banyak diaplikasikan  untuk  pemisahan  protein  dalam  suatu larutan. Menurut Guo et al . (2009) aplikasi membran ultrafiltrasi  untuk  mengolah  air  limbah  dapat diterima  secara  luas  karena  secara  konsisten menghasilkan  kualitas  air  buangan  lebih  baik  dan mengembalikan  komponen  yang  masih  berharga untuk  daur  ulang  maupun  dijual.  Benhabiles et  al. (2013)  melaporkan  bahwa  membran  ultrafiltrasi dengan  ukuran  pori  0,05μm  dapat  memisahkan protein  hasil  proses  deproteinisasi  pembuatan  kitin yang  mencapai  97%.  Gringer et  al. (2015) melaporkan  bahwa  membran  ultrafiltrasi  dengan rata-rata  ukuran  pori  0,04  µm  berhasil  mereduksi kandungan protein pada marinade hingga 76%.
Pengolahan air perebusan pindang menggunakan  membran  ultrafiltrasi  diharapkan dapat memisahkan protein dengan sedikit kerusakan. Proses  tersebut  akan  menghasilkan  air  garam  yang dapat  digunakan  kembali  untuk  perebusan  pindang, karena  membran  ultrafiltrasi  masih  meloloskan garam  (Cheryan,  1998).  Penelitian recovery protein air  perebusan  pindang  menggunakan  membran ultrafiltrasi  menjadi  penting  untuk  dilakukan. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan pengaruh
penggunaan  membran  ultrafiltrasi  untuk recovery protein dari air perebusan pindang, menguji kualitas protein dan air hasil pengolahan.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan dan Alat
Sampel yang digunakan merupakan air  sisa proses  perebusan  pindang  ikan  tongkol  ( Euthynnus affinis) dari  UKM  Cindy  Group,  Parung-Bogor. Bahan-bahan yang digunakan dalam analisis  protein antara  lain comassie  briliant  blue  G-250 (SIGMA), asam  fosfat  85%,  etanol  95%,  dan Bovine  Serum Albumin (SIGMA).  Bahan-bahan  yang  digunakan untuk analisis kualitas air antara lain H 2 SO 4 .Ag 2 SO 4 , digestion  solution , buffer fosfat,  MgSO 4 ,  CaCl 2 , FeCl 3 ,  MnSO 4 1,25  N,  NaOH  +  KI,  H 2 SO 4 pekat, Na 2 S 2 O 3 ,  dan  indikator  kanji.  Bahan  untuk  analisis lemak diantaranya klorometanol dan MgCl 2 . Bahan- bahan  untuk  analisis  berat  molekul  protein  antara lain marker Spectra Multicolor Broad Range Protein Ladder dari Thermo  Scientific,  buffer sampel, pewarna silver  staining ,  larutan  fiksasi,  etanol  20%, Na 2 CO 3 ,  Na 2 S 2 O 3 ,  AgNO 3, larutan developing  gel , stop solution , dan air bebas ion.
Alat-alat  utama  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah membran  hollow  fibre ultrafiltrasi  berbahan  polipropilen  dengan  rata-rata ukuran pori 0,05μm (setara dengan molecular weight cutoff  (MWCO)  50  kDa)  dan  luas  permukaan membran  1,8  m 2 (GDP  Filter,  Bandung)  dengan pompa  penggerak Deng  Yuan  KJ-2600 .  Alat-alat yang digunakan untuk analisis uji kualitas air adalah COD  reaktor,  pH  meter Thermo  Scientific  ORION  3 STAR ,  multimeter HACH  Sension5 ,  turbidimeter HACH 2100Q , dan spectrophotometerHACH DR/2000 . Analisis konsentrasi protein total menggunakan  alat UV-Vis  RS  Spectrophotometer UV-2500 dari  Labomed.  Analisis  berat  molekul protein  menggunakan  alat TOMY  MRX-152  High Speed  Refrigerated  Micro  Centrifuge dan Hoefer Scientific InstrumentsPS 500XT DCPower Supply .

## Metode Penelitian
Tahapan penelitian dibagi kedalam 3tahapan,  yaitu  (1) sampling dan  karakterisasi  air rebusan  pindang,  (2)  pengkonsentratan  air  rebusan pindang, dan (3) karakterisasi konsentrat air rebusan pindang.  Diagram  alir  prosedur  penelitian  dapat dilihat pada Gambar 1.

## Sampling dan Karakterisasi Air Perebusan Pindang
Sampling dilakukan  ketika  proses  produksi pindang  telah  selesai  yaitu  air  rebusan  dalam keadaan  masih  panas  dan  segar.  Setelah  suhunya dingin,  sampel  selanjutnya  dibawa  dalam  kemasan berpendingin  (cool  box)  dengan  penambahan  es curai  untuk  sampel  dikarakterisasi  di  laboratorium. Parameter  uji  karakterisasi  meliputi  kadar  protein, kadar  lemak,  dan  berat  molekul  protein,  kekeruhan,
pH, total  dissolved  solids (TDS), chemical  oxygen demand (COD), total  suspended  solids (TSS),  dan salinitas.

## Pengkonsentratan Protein Air Perebusan Pindang
Sebanyak 5L air rebusan pindang dimasukkan kedalam tangki umpan. Proses pengkonsentrasian atau pemekatan dengan ultrafiltrasi  dilakukan  dengan  cara  mengalirkan  air rebusan  pindang  melalui  membran  ultrafiltrasi  oleh pompa  pada  tekanan  transmembran  0,5  bar  pada suhu  ruang  (  30°C).  Fraksi permeat yaitu  fraksi
yang  lolos  membran  dipisahkan  dan  ditampung dalam  wadah  khusus,  sedangkan retentat (fraksi yang  tidak  lolos  membran)  dialirkan  kembali  ke tangki umpan. Proses ini mengakibatkan peningkatan  konsentrasi  terlarut  (konsentrat)  pada tangki  umpan  yang  semakin  pekat  seiring  dengan waktu pemekatan berlangsung. Skema pengkonsentrasian  air  rebusan  pindang  disajikan pada Gambar 2. Parameter kinerja proses ultrafiltrasi adalah  faktor  konsentrasi  (Krijgsman,  1992),  fluks (Cheryan,  1998),  dan  koefisien  rejeksi  (Benhabiles et al., 2013).
Gambar 1. Prosedur penelitian
Gambar  2.  Diagram  skematik  pengkonsentratan  air  rebusan  pindang  dengan  membran  ultrafiltrasi  (1  =tangki permeat ;  2  =  pompa;  3  = pressuregauge ;  4  =  membran  ultrafiltrasi;  5  = valve ;  6  =  wadah penampungan permeat )
Setiap 10 menit sekali, fraksi permeat hasil proses ultrafiltrasi diambil untuk dianalisis kekeruhan,  pH, total  dissolved  solids (TDS), chemical  oxygen  demand (COD), total  suspended solids (TSS),  salinitas,  konsentrasi  protein,  dan lemak.  Pada  fraksi retentat diambil  contohnya dengan  jeda  waktu  yang  sama  untuk  diuji konsentrasi  protein,  lemak,  dan  berat  molekul proteinnya.

## Pencucian Membran
Pencucian membran dilakukan setiap proses ultrafiltrasi  selesai  menggunakan  air  bersih  dengan aliran  terbalik  ( backwash ).  Air  bersih  dialirkan berlawanan  melalui  lubang permeat agar  partikel yang menumpuk pada permukaan membran terlepas. Kemudian membran dicuci dengan cara meresirkulasikan larutan pembersih yang mengandung  sabun  pencuci  dengan  konsentrasi  5% selama  ±  30  menit.  Pembilasan  menggunakan  air bersih  dilakukan  kembali  setelah  pencucian.  Fluks membran  diuji  kembali  menggunakan  air  destilasi hingga mencapai fluks semula. Jika belum mencapai fluks  semula  maka  dilakukan  proses  pembersihan kembali.

## Prosedur Analisis
Prosedur  analisis  meliputi  analisis  kualitas permeat,  retentat ,  dan  kinerja  membran.  Analisis kualitas permeat meliputi chemical  oxygen  demand (COD), total suspended solids (TSS), total dissolved solids (TDS),  derajat  keasaman  (pH),  salinitas, kekeruhan,  lemak,  protein,  dan  berat  molekul protein.  Analisis retentat terdiri  dari  analisis  lemak, protein,  dan  berat  molekul  protein.  Analisis  kinerja membran meliputi pengukuran fluks, faktor konsentrasi, dan koefisien rejeksi.
Analisis Chemical Oxygen Demand (APHA, 2012) Analisis chemical oxygen demand dilakukan  menggunakan  metode  dikromat  refluks- tertutup.  Sampel  sebanyak  1  mL  diencerkan sebanyak  100  kali  dengan  menambahkan  akuades hingga  volume  100  mL.  Sampel  kemudian  diaduk menggunakan  vortex  agar  homogen.  Sampel sebanyak  2,5  mL  yang  telah  diencerkan  ditambah dengan  1,5  mL  larutan  pencerna  dan  3,5  mL Ag 2 SO 4 . H 2 SO 4 .  Sampel  selanjutnya  diaduk  dengan vortex selama 1 menit dan dilakukan proses distilasi dengan  kondensasi  uap  (refluks)  pada  suhu  150°C selama  2  jam.  Sampel  yang  telah  dingin  dihitung absorbansinya  pada  panjang  gelombang  600  nm. Konversi nilai absorbansi menjadi nilai COD didapat melalui persamaan regresi kurva standar.

## Analisis Total Suspended Solids (APHA 2012)
Pengukuran  nilai total  suspended  solids (TSS) dilakukan  dengan  menyaring  cairan  air perebusan pindang menggunakan kertas saring yang telah  diketahui  bobot  keringnya.  Kertas  saring dipasang  pada  pompa  vakum  untuk  memudahkan
proses  penyaringan.  Kertas  saring  yang  telah  berisi padatan dari air perebusan pindang dioven pada suhu 105°C  selama  1  jam.  Pendinginan  dilakukan menggunakan desikator minimal 30 menit, kemudian  dihitung  bobotnya.  Sampel  sebanyak  20 mL disaring menggunakan pompa vakum, dilanjutkan  pembilasan  dengan  akuades  10  mL sebanyak  3  kali.  Kertas  saring  dikeringkan menggunakan  oven  pada  suhu  105°C  selama  1  jam dan  didinginkan  dengan  desikator  selama  30  menit. Penghitungan  nilai  TSS  dilakukan  dengan  membagi selisih  berat  kertas  saring  awal  dan  akhir  (mg) dengan jumlah sampel awal (L).

## Analisis Total Dissolved Solids (TDS)
Pengukuran total  dissolved  solids (TDS) dilakukan  menggunakan  alat  multimeter.  Elektroda multimeter  dibilas  terlebih  dahulu  dengan  akuades dan  dikeringkan  menggunakan tissue .  Pengukuran dilakukan dengan caraelektroda multimeter dicelupkan  ke  dalam  larutan  sampel.  Angka  yang tertera  pada  layar  digital  dicatat  dan  elektroda multimeter dibilas setelah digunakan.

## Pengukuran Salinitas
Pengukuran
salinitas dilakukan menggunakan  salinometer.  Elektroda  multimeter dibilas  terlebih  dahulu  menggunakan  akuades  dan dikeringkan menggunakan tissue . Pengukuran dilakukan dengan cara elektroda multimeter dicelupkan  ke  dalam  larutan  sampel.  Angka  yang tertera  pada  layar  digital  dicatat  dan  elektroda multimeter dibilas setelah digunakan.

## Pengukuran Kekeruhan
Kekeruhan diukur menggunakan alat turbidimeter  ( HACH,  2100Q ).  Sampel    dimasukkan kedalam  kuvet  sampai  penuh.  Sampel  dikocok  agar homogen  dan  bagian  luar  kuvet  dilap  menggunakan tissue sebelum  dimasukkan  kedalam  alat.  Angka yang  tertera  pada  layar  digital  dicatat  dan  kuvet dibersihkan.

## Pengukuran Fluks (Cheryan, 1998)
Fluks  didefinisikan  sebagai  jumlah  volume cairan yang berhasil melewati membran untuk setiap satuan luasan membran dan satuan waktu. Pengukuran  fluks  dilakukan  setiap  5  menit  dengan menghitung waktu yang dibutuhkan untuk mencapai volume  100  mL.  Nilai  fluks  dihitung  dengan menggunakan persamaan:
Fluks = Jumlah volume permeat Luas membran x waktu x 3600

## Pengukuran Faktor Konsentrasi (Krijgsman, 1992)
Faktor  konsentrasi  didefinisikan  sebagai perbandingan  antara  konsentrasi  awal  umpan  (V F ) dengan  konsentrasi  retentat  (V R ).  Nilai  faktor konsentrasi dihitung dengan persamaan:
Faktor konsentrasi = Konsentrasi umpan Konsentrasi retentat = V F /V R
Analisis  Koefisien  Rejeksi  (R 0 )  (Benhabiles  et  al.,
2013) Koefisien rejeksi
(R 0 ) merupakan kemampuan suatu membran dalam menahan partikel terlarut  tertentu. Sampling permeat  untuk  diuji dilakukan  setiap  10  menit.    Parameter  koefisien rejeksi  menggunakan  konsentrasi  pada  umpan  (C u ) dan  konsentrasi  permeat  (C p )  kemudian  dihitung dengan persamaan:
R 0 = (1- Cp Cu ) x 100 Analisis Protein (Bradford, 1976) Pereaksi Bradford
dibuat dengan melarutkan  20  mg comassie  briliant  blueG-250 ke dalam  10  mL  etanol  95%  lalu  ditambahkan  20  mL asam  fosfat  85%.  Jika  sudah  terlarut  sempurna ditambah  akuades  hingga  1  L  dan  disaring menggunakan kertas saring Whatman No. 1. Larutan standar bovine serum albumin (BSA) disiapkan pada konsentrasi  0,  200,  400,  600,  800,  dan  1000  mg/L. Konsentrasi  protein  diukur  dengan  cara  0,1  mL larutan  standar  dan  sampel  dimasukkan  ke  dalam tabung  reaksi.    Sebanyak  5  mL  pereaksi  Bradford ditambahkan  kedalam  tabung  reaksi  dan  diinkubasi selama  5-60  menit.  Nilai  absorbansi  diukur menggunakan
spectro UV-Vis RS Spectrophotometer UV-2500
pada panjang gelombang 595 nm.
Analisis Lemak (Watanabe, 1988)
Pelarut  lemak  (klorometanol)  disiapkan dengan  mencampurkan  kloroform  dan  metanol dengan  perbandingan  2:1.  Sampel  sebanyak  50  mL dikeringkan  dalam  oven  pada  suhu  50°C  sampai volumenya menjadi 10 mL lalu diekstrak dengan 50 mL  pelarut  klorometanol.  Hasil  diekstrak  disaring dengan kertas saring dan didiamkan di corong pisah yang telah berisi 10 mL MgCl 2 . Larutan dikocok dan didiamkan selama 24 jam agar terbentuk dua lapisan. Lapisan  bawah  dipisahkan  dengan  memutar  kran pada  bagian  bawah  corong.  Sampel  kemudian dikeringkan  menggunakan  oven  pada  suhu  105°C selam  satu  jam.  Kadar  lemak  dihitung  dengan  cara menghitung bobot akhir cawan dikurangi bobot awal cawan.
Penentuan  Berat  Molekul  Protein  dengan  Sodium Dodecyl  Sulphate-Poly  Acrylamide  Gel  Electro- phoresis (SDS-PAGE) (Laemmli, 1970) Marker  yang  digunakan  adalah Spectra Multicolor  Broad  Range  Protein  Ladder dari Thermo  Scientific .  Tahapan  kerja  yang  dilakukan dalam  analisis  berat  molekul  protein  meliputi penyiapan  gel  pemisah  dan  penahan,  penyiapan sampel dan loading , kondisi operasi, pewarnaan gel, dan  pelunturan  warna.  Tahap  pertama  yaitu
pembuatan  gel  12%  pemisah  dan  4%  gel  penahan. Tahap  selanjutnya  yaitu  preparasi  sampel  dengan cara  membersihkan  sampel  dari  bahan-bahan pengotor  dengan  sentrifuse  pada  kecepatan  9000 rpm  selama 15  menit pada suhu 4°C. Sebanyak 100 μL  sampel  yang  sudah  bersih  dicampur  dengan  25 μL buffer. Sampel kemudian disimpan dalam lemari es  semalam.  Tahapan  selanjutnya  yaitu running SDS-PAGE  selama  3  jam  pada  arus  10-25  μA, voltage  konstan  60  Volt.  Gel  kemudian  diwarnai dengan  pewarna silver  staining .  Tahap  pewarnaan diawali  dengan  perendaman  dalam  larutan  fiksasi selama  12  jam  pada  suhu  ruang  sambil  diagitasi secara  perlahan.  Gel  dicuci  menggunakan  etanol 20%  selama  20  menit  sebanyak  3  kali  dan dilanjutkan  dibilas  menggunakan  akuades  bebas  ion selama  20  detik.  Gel  diinkubasi  dilemari  es  dalam 0,1%  AgNO 3 selama  20  menit  dan  dilanjutkan pembilasan  dengan  air  bebas  ion.  Gel  direndam kedalam  larutan developing  gel hingga  pewarnaan cukup,  setelah  pewarnaan  cukup  ditambahkan larutan stop solution kedalam wadah selama 5 menit. Gel  dibilas  menggunakan  air  bebas  ion  selama  5 menit  sebanyak  3  kali.  Perhitungan  berat  molekul dilakukan  dengan  memasukkan  nilai  Rf  masing- masing pita ke dalam kurva standard.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Karakteristik Air Perebusan Pindang
Hasil karakterisasi menunjukkan air perebusan  pindang  memiliki  kadar  organik  lebih tinggi  dibandingkan  air  cucian  surimi.  Hasil karakterisasi  air  perebusan  pindang  dapat  dilihat pada Tabel 1.
Konsentrasi  protein  dalam  air  perebusan pindang  yang  terukur  yaitu  631  ±  7,07  mg/L.  Nilai ini lebih tinggi dibandingkan air cucian surimi yaitu 410  ±  10  mg/L  (Uju et  al., 2009).  Teknik  proses pengolahan  dan  karakteristik  bahan  baku  yang berbeda  menyebabkan  konsentrasi  protein  terlarut yang  beda  pada  kedua  hasil  tersebut.  Teknik perebusan  dalam  larutan  garam  mengakibatkan protein  lebih  banyak  terlarut  dalam  air  perebusan dibandingkan  dengan  hanya  proses  pencucian  dan pemerasan  yang  terdapat  pada  proses  produksi surimi.
Niamnuy et  al. (2008)  melaporkan  bahwa konsentrasi  larutan  garam  yang  semakin  tinggi mengakibatkan  kelarutan  protein  ke  dalam  air perebusan semakin tinggi. Perebusan yang lama dan konsentrasi  larutan  garam  yang  semakin  tinggi mengakibatkaan  lebih  banyak  protein  terutama miofibril  yang  terlarut  dalam  air  garam.  Kijowski dan  Mast  (1988)  menyatakan  bahwa  meningkatnya kadar garam pada daging  mengakibatkan penurunan stabilitas termal dari protein otot yang mengakibatkan tingginya transformasi dari miofibril dan sarkoplasma menjadi protein alkali terlarut.

## Tabel 1. Karakteristik air perebusan pindang
Parameter Air Perebusan Pindang Air Cucian Surimi a Protein (mg/L) 631 ± 7,07 410 ± 10 Lemak (mg/L) 480 ± 5,65 - COD (g/L) 26,73 ± 0,47 4,23 ± 0,11 TDS (g/L) 111 ± 0,0 1,63 ± 0,02 TSS (mg/L) 1.565 ± 7,07 55 ± 3,25 Kekeruhan (NTU) 982 ± 2,82 20 ± 0,0 Salinitas (ppm) 143 ± 0,0 - pH 5,78 ± 0,0 6,7 ± 0,0 Sumber : a Uju et al. (2009)
Chemical  oxygen  demand (COD)  adalah banyaknya oksigen yang dibutuhkan untuk mengoksidasi  seluruh  bahan  organik  (yang  terurai dan sukar terurai) secara kimia dengan menggunakan oksidator kuat. COD sering digunakan untuk menghitung pengotor dalam air limbah dan air alami  (APHA,  2012).  Nilai  COD  air  perebusan pindang  lebih  tinggi  yaitu  26,73  ±  0,47  g/L dibandingkan  air  cucian  surimi  yaitu  4,23  ±  0,11 g/L.  Nilai  COD  yang  lebih  tinggi  dapat  disebabkan oleh kandungan protein dalam air perebusan pindang yang lebih tinggi.
Kekeruhan  dalam  air  disebabkan  oleh materi  tersuspensi  dan  koloid  yang  dibedakan menjadi komponen organik dan anorganik. Kekeruhan  adalah  sebuah  ekspresi  dari  properti optik  yang  menyebabkan  cahaya  akan  tersebar  dan diserap sebagian diteruskan (APHA, 2012). Kekeruhan  air  perebusan  pindang  lebih  tinggi  yaitu 982  ± 2,82  NTU  dibandingkan  air  cucian  surimi  20 ±  0,0  NTU.  Proses  perebusan  menyebabkan  lebih banyak  zat  pengotor  antara  lain  darah,  protein, lemak,  dan  serpihan  daging  halus  ikan  terkandung dalam  air  perebusan  sehingga meningkatkan kekeruhan.
Keasaman air adalah kemampuan kuantitatif  untuk  bereaksi  dengan  dasar  yang  kuat untuk  pH  yang  ditunjuk.  Keasaman  memberi kontribusi untuk kekorosifan dan mempengaruhi laju reaksi  kimia,  spesiasi  kimia,  dan  proses  biologi (APHA, 2012).  Air perebusan pindang  memiliki pH 5,78 ± 0,0. Nilai tersebut lebih rendah dibandingkan air cucian surimi yaitu 6,7 ± 0,0. Proses pengolahan yang dialami bahan menyebabkan nilai pH berbeda- beda.
Salinitas  menggambarkan  padatan  total  di dalam  air,  setelah  semua  karbonat  dikonversi menjadi  oksida,  semua  bromida  dan  iodida digantikan  oleh  klorida,  dan  semua  bahan  organik telah  dioksidasi  (Effendi,  2003).  Penentuan  kadar garam  dilakukan  dengan  instrumen  pengukur konduktivitas.  Hal  ini  dikarenakan  konduktivitas memiliki  keakuratan  yang  tinggi  terhadap  salinitas (APHA, 2012). Salinitas air perebusan pindang lebih tinggi dibandingkan air cucian surimi  yaitu 143 atau 14,3%  karena  pada  perebusan  pindang  ditambahkan garam.  Nilai  ini  berbeda  dengan  yang  diperoleh Kuca  dan  Szaniawska  (2009)  pada  air  limbah
industri  pengolahan  ikan  yaitu  12,3%.  Jenis pengolahan yang berbeda menyebabkan kadar garam yang terkandung dalam air perebusan berbeda-beda.
Padatan merujuk ke dalam benda tersuspensi  atau  terlarut  dalam  air  atau  air  limbah. Padatan dapat mempengaruhi kualitas efluen air dan merugikan.  Total  padatan  adalah  bahan  residu  yang tertinggal  setelah  sampel  diuapkan  dan  dilanjutkan pengeringan  dalam  oven  pada  suhu  tertentu.  Total padatan  termasuk  TSS  yang  tidak  lolos  membran dengan  pori  2  μm,  dan  TDS  bagian  yang  lolos membran  (APHA,  2012).  TSS  dan  TDS  air perebusan  pindang  memiliki  nilai  yang  lebih  tinggi dibandingkan air cucian surimi.  Nilai TSS dan TDS air  perebusan  pindang  berturut-turut  1.565  ±  7,07 mg/L  dan  111  ±  0,0  g/L.  Tingginya  nilai  TSS disebabkan oleh proses pengolahan yang menggunakan  suhu  tinggi  sehingga  banyak  bagian serpihan  tubuh  ikan  yang  masuk  kedalam  air perebusan.  Padatan  tersuspensi  (TSS)  berkorelasi positif  dengan  kekeruhan.  Semakin  tinggi  nilai kekeruhan,  nilai  padatan  tersuspensi  juga  semakin tinggi.  Tingginya  nilai  TDS  disebabkan  oleh tingginya  kandungan  garam  dalam  air  perebusan pindang.  TDS  biasanya  terdiri  dari  bahan-bahan anorganik  berupa  ion-ion  diantaranya  natrium, klorida,  magnesium,  kalsium,  dan  sulfat  (Effendi 2003).
Pengkonsentrasian
Protein Air Perebusan Pindang
Proses pengkonsentrasian protein air rebusan pindang menggunakan membran ultrafiltrasi 0,05  µm  disajikan  pada  Gambar  3.  Selama  proses ultrafilrasi,  konsentrasi  protein  meningkat  dari  631 mg/L  pada  faktor  konsentrasi  1  menjadi  926  mg/L pada faktor konsentrasi 6,25 atau terjadi peningkatan 47%  hanya  dalam  waktu  40  menit.  Peningkatan konsentrasi  protein  terjadi  karena  telah  terjadi pemisahan terhadap kandungan air pada umpan yang menjadi permeat ,  sedangkan  sebagian  besar  protein tertahan  sebagai retentat yang  dialirkan  kembali menuju  tangki  umpan,  sehingga  konsentrasi  protein pada umpan semakin tinggi.
Pada  tekanan  trans  membran  0,5  bar,  fluks permeat pada awal pengkonsentrasian 6,58 L/m 2 jam menjadi 2,71 L/m 2 jam pada menit ke-40. Penurunan fluks tajam terjadi pada saat awal pengkonsentrasian
sampai  faktor  konsentrasi  1,42  atau  pada  menit  ke- 10 dan setelah itu penurunan fluks menjadi kecil.
Gambar  3.  Pengaruh  faktor  konsentrasi  terhadap konsentrasi    protein  dan  fluks permeat ( ■= Konsetrasi protein, dan ●= Fluks)
Proses penurunan fluks tersebut lebih cepat sepeerti  yang  dilaporkan  Chollangi  dan  Hossain (2007)  pada  proses  pemisahan  protein  dan  laktosa dari  limbah  industry  susu.    Penurunan  awal  yang cepat dapat disebabkan oleh akumulasi molekul pada permukaan  membran.  Penurunan  fluks  tersebut menunjukkan  bahwa  terjadi  lapisan fouling pada permukaan  membran  yang  semakin  lama  semakin menebal. Hal
tersebut
menyebabkan meningkatkatnya  resistensi  terhadap  transfer  massa yang  juga  ditandai  menurunnya  fluks  permeat (Chabeaud et  al., 2009).  Jika  dibandingkan  hasil penelitian  sebelumnya  penurunan  fluks  ini  masih lebih  rendah  dengan  yang  dilaporkan  oleh  Sotoft et al. (2015)  pada recovery protein  marinade menggunakan  membran  ultrafiltrasi  50  kDa  yang memperoleh penurunan fluks 68,42%.
Koefisien rejeksi protein mengalami peningkatan  selama  pengkonsentrasian  (Gambar  4). Hal  tersebut  disebabkan  oleh  kadar  protein  yang semakin  meningkat  seiring  dengan  fungsi  waktu proses pengkonsentrasian seperti yang disajikan dan dibahas pada Gambar 3. Peningkatan nilai koefisien rejeksi disebabkan sebagian besar protein menumpuk  pada  permukaan  membran  dan  akan meningkatkan koefisien rejeksi seperti yang dilaporkan  (Goosen et  al., 2011).  Menurut  Cheryan (1998)  makromolekul  seperti  protein  akan  terejeksi
dan  menumpuk  serta  akan  menutupi  permukaan membran  mikrofiltrasi  ultrafiltrasi  serta  membentuk lapisan  gel  atau cake dan  proses  ini  membuktikan atau  terjadinya fouling pada  permukaan  pada membran.
Kisaran  nilai  rejeksi  protein  41,2-55,7% masih  lebih  rendah  dengan  yang  dilaporkan Benhabiles et  al. (2013)  yang  memperoleh  nilai rejeksi  protein  hingga  97%  pada recovery protein limbah  deproteinisasi  kitin  menggunakan  membran ultrafiltrasi 0,05 µm. Perbedaan hasil ini dipengaruhi oleh  jenis  membran  dan  sampel  yang  digunakan. Besar molekul protein dalam setiap sampel berbeda- beda  tergantung  jenis  sampel  yang  digunakan. Protein  dalam  air  perebusan  pindang  diduga  telah mengalami  perubahan  berat  molekul  sehingga beratmolekul  proteinnya  menjadi  kecil  akibat pemanasan  selama  ±  6  jam.  Elagamy  (2000) melaporkan  bahwa  suhu  dan  waktu  pemanasan mempengaruhi  profil  protein.  Perebusan  pada  suhu tinggi  menyebabkan  berat  molekul  protein  menjadi kecil. Firlianty et al. (2014) juga melaporkan bahwa pemanasan dapat menyebabkan pemecahan protein
Gambar  4.  Koefisien  rejeksi  protein  selama pengkonsentrasian

## Karakteristik Permeat
Penyaringan  air  perebusan  pindang  dengan membran  ultrafiltrasi  menghasilkan  penurunan  nilai COD,  TSS,  kekeruhan,  protein,  dan  lemak  dalam fraksi permeatnya (Tabel  2).  Tingkat  penurunan (reduksi) yang sangat tinggi diperoleh pada molekul yang  memiliki ukuran besar yaitu direpresentatifkan pada  parameter  kekeruhan  TSS  dan  lemak  dengan nilai lebih dari 90%.
Tabel 2. Karakteristik permeat hasil ultrafiltrasi
Parameter Waktu Pengkosentratan (menit) Reduksi a (%) 0 10 20 30 40 Kekeruhan (NTU) 54,5 ± 0,1 5,17 ± 0,1 5,17 ± 0,0 5,08 ± 0,0 3,17 ± 0,0 99,67 TSS  (mg/L) 120 ± 7 92,5 ± 4 90 ± 0,0 82,5 ± 4 82,5 ± 3,5 94,72 Lemak (mg/L) 43 ± 0,1 - - - 34 ± 0,2 92,91 COD (g/L) 21,1± 0,5 19,4 ± 0,0 19,1 ± 0,5 16,9 ± 0,2 16,2±1,2 39,27 TDS (g/L) 108 ± 0,0 107± 0,0 106,5 ± 0,0 106,5 ± 0,0 106,5 ± 0,0 4,05 Salinitas(ppm) 139 ± 0,0 138 ± 0,0 138 ± 0,0 137 ± 0,0 137 ± 0,0 4,19
a Pada menit ke-40 dibandingkan dengan sampel awal.
Kekeruhan permeat hasil ultrafiltrasi mengalami penurunan 99,67%, yaitu dari 982 ± 2,82 NTU  pada  sampel  awal  menjadi  3,17  ±  0,04  NTU pada  menit  ke-40.  Penurunan  tingkat  kekeruhan  ini secara  kasat  mata  dapat  diamati  dengan  mudah (Gambar 5). Kekeruhan dalam air perebusan pindang diduga disebabkan oleh bahan-bahan tersuspensi dan koloid  yang  sulit  mengendap.  Penurunan  kekeruhan yang  tinggi  dengan  diterapkannya  ultrafiltrasi disebabkan  oleh  banyaknya  tersuspensi  dan  koloid tersebut  serta  pengotor  lainnya  seperti  serpihan daging pada sampel awal tidak dapat melewati pori- pori  membrane  sehingga  dihasilkan  warna  permeat yang lebih jernih. Menurut Cheryan (1998) membran ultrafiltrasi  tepat  untuk  pemisahan  molekul  yang cukup  besar  misal  polimer  alam,  pati,  protein, material  koloid  pada  larutan.  Sebagian  besar partikel-partikel  penyebab  kekeruhan  tidak  dapat melewati membran ultrafiltrasi.
Kandungan  padatan  tersuspensi  (TSS) mengalami  penurunan  hingga  94,72%  dari  1.565  ± 7,07 mg/L menjadi 82,5 ± 3,53 mg/L pada menit ke- 40.  Hasil  ini  mendekati  nilai  yang    dilaporkan  oleh Gringer et  al. (2015)  yang  memperoleh  nilai penurunan TSS 95% pada recovery biomolekul dari marinade  menggunakan  membran  keramik.  Hal  ini menunjukkan bahwa ultrafiltrasi memberikan pengaruh  yang  besar  terhadap  partikel-partikel tersuspensi  pada  air  perebusan  pindang  yaitu serpihan daging, darah, sisik, dan lain-lain.
Salinitas  dan  padatan  terlarut  (TDS) permeat  ultrafiltrasi  masing-masing  mengalami penurunan  4,19%  dan  4,05%  menjadi  137  ±  0  dan 106,5  ±  0,0  g/L.  Gringer et  al. (2015)  melaporkan bahwa  kadar  garam  pada  proses  ultrafiltrasi  tidak mengalami  perubahan  yang  signifikan  yaitu  0,7%. Menurut  Cheryan  (1998)  membran  ultrafiltrasi masih  dapat  meloloskan  molekul  kecil  antara  lain garam,  berbeda  dengan  membran reverse  osmosis yang  dapat  menahan  molekul  garam.  Kandungan garam  yang  tinggi  ini  merupakan  suatu  kelebihan dalam  proses  pengolahan  air  perebusan  pindang,
karena air hasil pengolahan dapat digunakan kembali untuk  perebusan  tanpa  dilakukan  penambahan garam.

## Analisis Berat Molekul Protein
Elektroforesis  merupakan  teknik  untuk memisahkan  molekul  berdasarkan  muatan  dan  berat molekul  (Bintang,  2010).  Jenis  elektroforesis  yang digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  SDS-PAGE yang menggunakan gel yang  tersusun  dari poliakrilamida.  Metode  ini  biasa  digunakan  untuk mengestimasi  bobot  molekul  protein,  selain  itu biasanya  digunakan  untuk  memantau  pemurnian protein (Wilson dan Walker, 2010). Hasil elektroforegram  SDS-PAGE  sampel  air  perebusan pindang dapat dilihat pada Gambar 6.
Hasil  uji  SDS-PAGE  menunjukkan  bahwa estimasi  berat  molekul  protein  yang  dominan  pada sampel  air  perebusan  pindang  adalah  33,45  kDa, selain  itu  juga  terdapat  protein  lain  dengan  berat molekul  13,79  kDa,  17,31  kDa,  55,14  kDa,  70,79 kDa,  139,92  kDa, dan  183,76  kDa.  Pita-pita  protein ini  diduga  merupakan  hasil  fragmentasi  dari  protein besar  daging  ikan  menjadi  protein  yang  berukuran lebih  kecil.  Sotoft et  al. (2015)  menjelaskan  bahwa proses  proteolitik  dapat  memecah  protein  molekul besar  daging  ikan  diantaranya  aktin  (42  kDa)  dan miosin  (200  kDa)  menjadi  protein  berukuran  lebih kecil.  Pemanasan  merupakan  salah  satu  contoh proses proteolitik. Terdapat perbedaan profil protein pada  sampel  awal  air  perebusan  pindang, retentat , dan permeat .  Estimasi  berat  melekul  protein  pada permeat  tinggal  menyisakan  protein  dengan  berat molekul  13,79  kDa,  17,31  kDa,  33,45  kDa,  55,14 kDa,  dan  70,79  kDa.  Profil  protein  pada permeat tidak  ditemukan  pita  protein  dengan  berat  molekul 139,92  kDa  dan  183,76  kDa.  Berkurangnya  jumlah pita  protein  pada  permeat  menunjukkan  protein dengan  berat  molekul  139,92  kDa  dan  183,76  kDa tidak  lolos  melewati  membran  ultrafiltrasi  yang digunakan.
Gambar 5.  Perbandingan umpan dan permeat setiap waktu. (U= umpan yaitu sebelum difiltrasi, dan angka 0-40 menunjukkan waktu sampling pada permeat )
Gambar 6. Hasil elektroforegram SDS-PAGE air perebusan pindang (M = Marker , P= Permeat menit ke-40, U= Umpan, dan R = Retentat )
Hal  tersebut  terjadi  karena  membran  yang digunakan  dengan  rata-rata  MWCO  40  kDa.  Profil protein  pada retentat hampir  sama  seperti  sampel awal  air  perebusan  pindang,  meskipun  terdapat perbedaan ketebalan pita proteinnya. Protein dengan berat  prolekul  183,76  kDa  lebih  banyak  pada retentat ditandai  dengan  pita  protein  yang  lebih tebal.  Perbedaan  lainnya  yaitu  muncul  pita  protein dengan  berat  molekul  171,66  kDa  yang  tidak terdapat pada sampel awal.
Protein  dengan  berat  molekul  besar,  yakni 183,76  kDa  dan  33,45  kDa  jumlahnya  meningkat pada retentat dibandingkan pada umpan. Pita protein dengan berat molekul 13,79 kDa pada retentat yang jauh  lebih  tipis  dibandingkan  umpan.  Hal  ini  dapat disebabkan oleh sebagian besar protein dengan berat molekul  rendah  sudah  lolos  melewati  membran ultrafiltrasi  sehingga  jumlahnya  menurun  pada retentat .  Menurut  Cheryan  (1998)  dalam  proses ultrafiltrasi  perbedaan  tekanan  yang  melintasi membran  ultrafiltrasi  akan  memaksa  pelarut  dan molekul  yang  lebih  kecil  melewati  pori-pori membran, sementara  molekul yang lebih besar akan ditahan dan dialirkan sebagai retentat.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Membran  ultrafiltrasi  dengan  rata-rata ukuran pori 0,05 µm dapat digunakan pada recovery protein  air  perebusan  pindang  dengan  nilai  rejeksi hingga  55%.  Pengkonsentrasian  mengakibatkan konsentrasi  protein  meningkat  46,75%.  Berat molekul  protein  yang  dominan  adalah  33,45  kDa. Permeat yang  dihasilkan  memungkinkan  untuk digunakan kembali pada proses perebusan pindang.

## Saran
Untuk mengurangi kandungan besar fouling sebaiknya  digunakan  proses  prefiltrasi.  Penggunaan membran ultrafiltrasi dengan ukuran pori lebih kecil
diharapkan meningkatkan nilai rejeksi protein. Perlu penelitian  lanjutan  untuk  memanfaatkan  konsentrat protein yang telah dihasilkan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Sebagian penelitian ini didanai oleh Kemenristek  DIKTI  melalui  skema  Program Kreativitas Mahasiswa (PKM) tahun 2015.

## DAFTAR PUSTAKA
[AOAC] Association of Official Analytical Chemists .  1995. Official  Methods  of  Analysis of  The  Association  of  Official  Analytical  of Chemists . Arlington (US): The Association of Official Analytical Chemists , Inc.
[APHA] American Public Health Association. 2012. Standar  Methods  for  Examination  of  Water and  Waste  Water. Washington  DC  (US): American Public Health Association.
Benhabiles  MS,  Abdi  N,  Droviche  N,  Lounici  H,
Pauss  A,  Gosen  MFA,  Mameri  N.  2013. Protein  recovery  by  ultrafiltration  during isolation  of  chitin  from  shrimp  shells
Parapenaeus longirostris . Food Hydrocolloids . 32: 28-34. Bintang  M.  2010. Biokimia  –  Teknik  Penelitian . Jakarta (ID): Erlangga.
Bradford  MM.  1976.  A  rapid  and  sensitive  method for  the  quantitation  of  microgram  quantities of  protein  utilizing  the  principle  of  protein dye  binding. Analysis  Biochemistry .  72:  248- 254.
Chabeaud  L,  Vandonjon  V,  Bourceau  P,  Jaouen  P, Guerart F. 2009. Fractionation by ultrafiltration  of  saithe  protein  hydrolysate ( Pollachius  virens ):  effect  of  material  and molecular  weight  cut-off  on  the  membrane performances. Journal  of  Food  Engineering . 91: 408-414.
33,45 kDa
13,79 kDa
Cheryan M. 1998. Ultrafiltration and Microfiltration  Handbook .  Lancaster  (US): Technomic Publishing Co. Inc.
Chollangi  A  dan  Hossain  M.  2007.  Separation  of proteins  and  lactose  from  dairy  wastewater. Chemical  Engineering  Processes .  46:  398- 404.
Dumay J, Radier S, Barnathan G, Berge J, Jaouen P.
2008. Recovery of valuable soluble compounds  from  washing  waters  generated during smal fatty pelagic surimi processing by membrane processes. Environmental Technology . 29: 451-461. Effendi  H.  2003. Telaah  Kualitas  Air  bagi Pengelolaan  Sumber  Daya  dan  Lingkungan Perairan . Yogyakarta (ID): Kanisius. Elagamy EI. 2000. Effect of heat treatment on camel milk  proteins  with  respect  to  antimicrobial factors: a comparison  with cows’ and buffalo milk proteins. Food Chemistry . 68: 227-232. Firlianty, Suprayitno E, Hardoko, Nursyam H. 2014. Protein  profile  and  amino  acid  profile  of vacuum  drying  and  freeze-drying  of  family channidae  collected  from  central  kalimantan, indonesia. International Journal of Biosciences . 5(8): 75-83.
Fitriyani  RH,  Susilo  B,  dan  Komar  N.  2013.  Studi pengaruh penambahan air dan suhu pemanasan  terhadap  viskositas  petis  ikan. Jurnal  Keteknikan  Pertanian  Tropis  dan Biosistem . 1(2): 29-34.
Guo  X,  Zhang  Z,  Fang  L,  Su  L.  2009.  Study  on ultrafiltration for surface water by polyvinylchloride  hollow  fiber  membrane. Desalination . 238(1-3): 183-191.
GoosenMFA,  SablaniS,  Dal-SinM,  Wilf  M.  2011. Effect  ofcyclicchanges  intemperature  and pressure on permeation properties of composite polyamideseawater reverse osmosis membranes. Separation Science and Technology . 46:14-26.
Gringer  N,  Hosseini  SV,  Svendsen  T,  Undeland  I, Christensen  ML,  Baron  CP.  2015.  Recovery of  biomolecules  from  marinated  herring ( Clupea  harengus )  brine  using  ultrafiltration through  ceramic  membranes. LWT-Food Science and Technology . 43:1-7.
Kijowski  JM  dan  Mast  MGE.  1988.  Effect  of sodium  chloride  and  phosphates  on  the thermal  properties  of  chicken  meat  protein. Journal of Food Science . 53:367–370.
[KKP]  Kementrian  Kelautan  dan  Perikanan.  2016. Direktorat  Jenderal  Penguatan  Daya  Saing Produk  2015. Jakarta  (ID):  Kementrian Kelautan dan Perikanan.
Krijgsman J. 1992. Product  Recovery in Bioprocess Technology .  Oxford  (GB):  Butterworth- Heinemann.
Kuca  M  dan  Szaniawska  D.  2009.  Application  of microfiltration  and  ceramic  membranes  for treatment  of  salted  aqueous  effluents  from fish processing. Desalination . 241: 227-235. Kumar  M  dan  Lawler  J.  2014.  Preparation  and characterization of negatively charged organic-inorganic hybrid ultrafiltration membranes for protein separation. Separation and Purification Technology. 130: 112-123.
Kurinomaru  T,  Maruyama  T,  Izaki  S,  Handa  K, Kimoto  T,  Shiraki  K.  2014.  Protein-poly (amino  acid)  complex  presipitation  for  high- concentration  protein  formulation. Journal  of Pharmaceutical Sciences. 103(8): 2248-2254.
Laemmli  UK.  1970.  Cleavage  of  structural  proteins during  the  assembly  of  the  head  of bacteriophage T4. Nature . 227: 680-685. Masse A, Thi HN, Legentilhomme, Jaouen P. 2011. Dead-end  and  tangential  ultrafiltration  of natural  salted  water:  influence  operating parameters  on  specific  energy  consumption. Journal of Membrane Science . 380: 192-198. Niamnuy  C,  Devahastin  S,  dan  Soponronnarit  S. 2008.  Changes  in  protein  compositions  and their  effects  on  physical  changes  of  shrimp during  boiling  in  salt  solution. Food Chemistry . 108: 165-175.
Schuck  P,  Jeantet  R,  Tanguy  G,  Mejean  S,  Gac  A, Lefebvre  T,  Labussiere  E,  Martineaur  C. 2015.  Energy  consumption  in  the  processing of dairy and feed powders by evaporation and drying. Drying Technology . 33: 176-184. Shukoor  MI,  Natalio  F,  Tahir  MN,  Ksenofontov  V, Therese  HA,  Theato  P,  Schroder  HC,  Muller WEG,  Tremel  W.  2007.    Superparamagnetic Fe 2 O 3 nanoparticles with tailored functionality for protein separation. Chemistry Community . 4677-4679.
Sotoft  LF,  Lizarazu  JM,  Parjilolaei  BR,  Karring  H,
Christensen KV. 2015. Membrane
fractionation of herring marinade for separation  and  recovery  of  fats,  proteins, amino  acids,  salt,  acetic  acid,  and  water. Journal of Food Engineering . 158: 39-47.
Uju,  Tati  N,  Bustami  I,  Wini  T,  Maglory  S.  2009.
Karakterisasi  dan recovery protein  dari  air cucian minced  fish dengan  membran reverse osmosis . Jurnal  Pengolahan Hasil  Perikanan Indonesia . 12(2): 115-127. Watanabe T. 1988. Fish Nutrition and Marinculture. JICA  Text  Book.  The  General  Aquaculture
Course
Departement of Aquaculture Biosciences. Tokyo (JP): Tokyo University of Fisheries.
Wilson  K  dan  Walker  J.  2010. Principlesand Techniques  of  Biochemistry  and  Molecular Biology .  Ed  ke-7.  Hlm  403-465.  London (UK): Cambridge University.