## PHARMACON-PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI, Volume 12 Nomor 2, Mei 2023

## THE EFFECTIVENESS OF GREEN BETEL LEAF (Piper betle L.) DECOCTION AS
ANTIBACTERIA Escherichia coli AND Staphylococcus aureus

## EFEKTIVITAS REBUSAN DAUN SIRIH HIJAU (Piper betle L.) SEBAGAI ANTIBAKTERI
Escherichia coli DAN Staphylococcus aureus
Enong Liha 1)* , Afifah Nur Shobah 1) , Nia Marlina Kurnia 2)
1) Program Studi Farmasi STIKes Salsabila Serang, Banten
2) Program Studi Biologi Universitas Bina Bangsa Serang, Banten *enong.liha6@gmail.com

## ABSTRACT
Piper betle as a folk remedy has been used to inhibit the growth of bacteria, by making various ways one of which is decoction. The purpose of this study was to determine the effectiveness of green betel leaf decoction as  an antibacterial of  Escherichia  coli and Staphylococcus  aureus. The  samples  used  were  green  betel  leaf decoction  with  a  concentration  of  17%,  34%,  51%,  68%,  Amoxicillin,  and  Aquadest. Antibacterial  testing using the Kirby & Bauer diffusion method with four repetitions. The results showed that the average inhibition zone of each stew concentration in E.coli bacteria was classified as weak (≤5 mm), namely 17% by 2,12 mm; 34%  by  1,00  mm;  51%  by  1,37  mm;  and  68%  by  3,50  mm. The  average  inhibition  zone  of  each  boiled concentration in S.aureus bacteria is classified as weak (≤5 mm) to moderate (5-10 mm) which is 17% by 7,87 mm; 34% by 4,00 mm; 51% by 4,97 mm; and 68% by 4,87 mm. The conclusion is that a decoction of green betel leaves is less effective in inhibiting the growth of E.coli and S.aureus bacteria.
Keywords: Piper betle , Decoction , Escherichia coli , Staphylococcus aureus

## ABSTRAK
Piper betle sebagai obat tradisional telah digunakan untuk menghambat pertumbuhan bakteri, dengan dibuat berbagai  cara  salah  satunya  rebusan.  Tujuan  dari  penelitian  ini  yaitu  untuk  mengetahui  efektivitas  rebusan daun sirih hijau sebagai antibakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus . Sampel yang digunakan yaitu rebusan daun sirih hijau konsentrasi 17%, 34%, 51%, 68%, Amoksisilin, dan Aquadest. Pengujian antibakteri menggunakan  metode  difusi Kirby  &  Bauer dengan  pengulangan  sebanyak  empat  kali. Hasil  penelitian menunjukkan  rata-rata  zona  hambat  tiap  konsentrasi  rebusan  pada  bakteri E.coli tergolong lemah (≤5 mm) yaitu 17% sebesar 2,12 mm; 34% sebesar 1,00 mm; 51% sebesar 1,37 mm; dan 68% sebesar 3,50 mm. Rata- rata zona hambat tiap konsentrasi rebusan pada bakteri S.aureus tergolong lemah (≤5 mm) sampai sedang (5- 10 mm) yaitu 17% sebesar 7,87 mm; 34% sebesar 4,00 mm; 51% sebesar 4,97 mm; dan 68% sebesar 4,87 mm. Kesimpulannya bahwa rebusan daun sirih hijau kurang efektif dalam menghambat pertumbuhan bakteri E.coli dan S.aureus .
Kata kunci : Piper betle , Rebusan, Escherichia coli , Staphylococcus aureus

## PHARMACON-PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI, Volume 12 Nomor 2, Mei 2023

## PENDAHULUAN
Piper  betle merupakan  tanaman  yang  sering digunakan  untuk  pengobatan  tradisional  oleh masyarakat, salah satu bagian tanaman yang biasa digunakan yaitu daunnya. Kebanyakan masyarakat merebus  daun  segar  sirih  hijau  untuk  diminum airnya  (Isnawati  dan  Retnaningsih,  2018). Tumbuhan  sirih  mempunyai  kegunaan  yang melimpah  sebagai  obat  tradisional,  terutama daunnya.  Beberapa  kegunaan  daun  sirih  untuk mengobati  penyakit  area  kewanitaan  (keputihan), diare,  menghentikan  pendarahan  dari  hidung, menghilangkan  bau  pada  mulut,  dan  mengobati batuk. Adapun kandungan yang terdapat pada daun sirih  hijau  yaitu  minyak  atsiri,  flavonoid,  tanin, alkaloida,  steroid,  glikosida,  pati,  seskuiterpen, diastase,  dan  kavikol  (Isnawati  dan  Retnaningsih, 2018).
Daun sirih hijau sebagai obat tradisional telah digunakan  untuk  menghambat  pertumbuhan bakteri  (antibakteri),  dengan  dibuat  berbagai  cara salah satunya yaitu perebusan. Rebusan daun sirih hijau  bermanfaat  untuk  mengatasi  bau  mulut dengan  cara  berkumur,  karena  mengandung senyawa  antibakteri.  Keuntungan  dari  khasiat rebusan dan ekstrak daun sirih hijau yaitu sebagai antibakteri  alami,  karena  dalam  tumbuhan  sirih hijau terdapat senyawa alami yang aman dibanding obat dengan kandungan bahan sintetik (Bustanussalam  dkk.,  2015).  Proses  rebusan dilakukan  dengan  cara  merebus  beberapa  lembar daun sirih yang sering dilakukan oleh masyarakat pada umumnya. Perebusan dilakukan selama 45-60 menit  dengan  suhu  ±100 o C  tanpa  menambah pelarut tertentu (Etnis dan Maay, 2021).
Penelitian  yang  dilakukan oleh Suliantari  dkk (2008)  dikutip  oleh  Isnawati  dan  Retnaningsih (2018)  bahwa  ekstrak  dari  daun  sirih  hijau memiliki  kekuatan  dalam  menahan  pertumbuhan dari patogen Escherichia coli dan Staphylococcus aureus . Pengujian efektivitas antibakteri Escherichia  coli dilakukan  dengan  metode  difusi agar.  Metode  difusi  agar  yang  dimaksud  yaitu metode disc diffusion (tes Kirby & Bauer), teknik pengerjaannya  tidak  terlalu  sulit  selain  itu  bisa menghemat  waktu  karena  alat  dan  bahan  yang diperlukan  tidak  terlalu  banyak.  Kemudian  untuk prinsip dari metode disc diffusion ini yaitu dengan mengukur  daerah  hambatan  yang  menahan pertumbuhan  bakteri  disebabkan  oleh  difusi  zat yang bersifat sebagai antibakteri pada media padat. Berdasarkan persoalan dipaparkan di atas, peneliti berminat  untuk  melakukan  penelitian  untuk mengetahui  efektivitas  dari  rebusan  daun  sirih
hijau  sebagai  antibakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus .

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Peneliatian
Penelitian  dilakukan  pada  bulan  Januari sampai dengan bulan April 2022, di Laboratorium Kesehatan Daerah Provinsi Banten.

## Alat dan Bahan Alat
Beaker  glass (Pyrex),  erlenmeyer  (Pyrex), tabung  reaksi  (Pyrex),  pipet  ukur  (Pyrex),  pipet tetes,  rak  tabung  reaksi,  penjepit, rubber  bulb , sikat,  bunsen,  korek,  gunting,  pisau,  jarum  ose, kapas lidi steril ( cotton swab ), spatula, cawan petri, cawan porselin, neraca analitik, Autoklaf (Hirayama), Biological  Safety  Cabinet (BSC) (Biobase  Class  III),  Oven  (Oxone),  Blender (Waring),  Inkubator  (Memmert),  Lemari  asam (Phenolic  Resin),  kulkas  (Sanken), hot  plate (Heidolph  MR),  panci, stopwatch ,  termometer, pinset, batang pengaduk, nampan, penggaris.

## Bahan
Daun  sirih  hijau  ( Piper  betle L . ),  aquadest steril  (H 2 O),  biakan  bakteri Escherichia  coli , bakteri Staphylococcus  aureus ,  kertas  cakram ( paper  disk )  6  mm,  kapas,  kain  kasa  steril, kain blacu, sarung tangan, masker, tisu, aluminium foil, wrapping ,  kertas  label,  alkohol  70%,  NaCl  0,9%, Amoksisilin,  medium  MHA  ( Mueller-Hinton Agar ),  Besi  (III)  Klorida  (FeCl 3 ),  Asam  Sulfat (H 2 SO 4 ),  Asam  Klorida  (HCl),  Pereaksi  Mayer, Pereaksi  Dragendorff,  Pereaksi  Wagner.  spiritus, dan disinfektan.

## Preparasi sampel
Lokasi pengambilan daun sirih  hijau yaitu di Jalan  Rokoy  Kampung  Salam  Sukamanah Pandeglang-Banten.  Sampel  berupa  daun  sirih hijau  dilakukan  determinasi  terlebih  dahulu  di laboratorium  Biologi  Universitas  Ahmad  Dahlan Yogyakarta.  Setelah  itu  sampel  dibuat  simplisia melalui proses sortasi basah, pencucian, perajangan,  pengeringan,  sortasi  kering,  dan penyimpanan.

## Pembuatan Media Padat
Medium MHA ( Mueller-Hinton Agar ) sebanyak 38g/L  dimasukkan ke dalam erlenmeyer kemudian  ditambah  pelarut  aquades  sebanyak 1000 ml. Tutup lubang erlenmeyer dengan kapas, lalu  sterilkan  pada  autoklaf  dengan  temperatur

## PHARMACON-PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI, Volume 12 Nomor 2, Mei 2023
121 o C  selama  15  menit.  Media  yang  sudah  di sterilkan  dimasukkan  ke  dalam  cawan  petri sebanyak  20  ml  sebagai  agar plate dan  tabung reaksi  sebanyak  10  ml  sebagai  agar  miring (Simanjuntak, 2015).

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  berupa  gelas  dibersihkan  terlebih dahulu kemudian dibungkus menggunakan alumunium  foil  dan disusun  rapi. Dimasukkan  ke dalam autoklaf selama 15 menit pada suhu 121 o C. alat berupa pinset dan ose, disterilkan dengan cara pembakaran di atas api langsung (Yusmaniar dkk., 2017).

## Pembuatan Rebusan
Siapkan panci yang sudah terisi air sebanyak 1000 ml dipanaskan sampai mendidih suhu >90 o C. Timbang simplisia sebanyak 17 g, 34 g, 51 g, dan 68 g. Masing-masing masukkan simplisia ke dalam beaker  glass dan  tambahkan  aquadest  sebanyak 100 ml aduk sampai homogen. Tutup beaker glass dengan  aluminium  foil  lalu  masukkan  ke  dalam panci  yang  sudah  berisi  air  mendidih  selama  30 menit. Setelah itu saring menggunakan kain blacu, hingga didapatkan ekstrak dengan volume 100 ml (Nur Khoiriyah dan Murwaningsih, 2017).

## Skrining Fitokimia
Pengujian  flavonoid,  masukkan  1  ml  ekstrak ke dalam tabung reaksi, tambahkan HCl pekat dan panaskan  selama  15  menit  di  atas  penangas  air. Positif  flavonoid  ditandai  dengan  terbentuknya warna  yaitu  merah  atau  kuning  (Muthmainnah, 2019).
Pengujian alkaloid, masukkan 2 ml ekstrak ke dalam  tabung  reaksi,  ditetesi  5  ml  HCl  2N  dan dipanaskan.  Setelah  itu  dinginkan  terlebih  dahulu dan  bagi  masing-masing  1  ml  dalam  tiga  tabung reaksi.  Tabung  reaksi  pertama  ditambah  pereaksi Mayer,  tanda  positif  alkaloid  yaitu  terbentuknya endapan  berwarna  putih  atau  kuning.  Tabung reaksi  kedua  ditambah  pereaksi  Wagner,  tanda positif  alkaloid  yaitu  terbentuknya  endapan berwarna  coklat.  Kemudian  tabung  reaksi  ketiga ditambah  pereaksi  Dragendorff,  tanda  positif alkaloid  yaitu  terbentuknya  endapan  berwarna jingga (Muthmainnah, 2019).
Pengujian terpenoid dan steroid,  masukkan 2 ml  ekstrak  ke  dalam  tabung  reaksi  tambahkan10 tetes H 2 SO 4 reaksi positif terpenoid adanya warna hijau dan biru. Reaksi positif steroid adanya warna kuning (Rukmini dkk., 2020).
Pengujian saponin, Masukkan 1 ml ekstrak ke dalam  tabung  reaksi  dan  tambahkan  10  ml  air panas,  dinginkan  lalu  kocok  kuat-kuat  selama  10 detik.  Positif  saponin  ditandai  oleh  terbentuknya buih setinggi 1-10 cm tidak kurang dari 10 menit. Kemudian  ditambah  1  tetes  HCl  2  N,  buih  tidak menghilang (Muthmainnah, 2019).
Pengujian  tanin,  masukkan  1  ml  ekstrak  ke dalam tabung reaksi dan tambahkan 10 ml air panas didihkan  selama  5  menit.  Lalu  ditambahkan  3-4 tetes  FeCl 3. Positif  tanin  adanya  warna  hijau  biru (hijau-hitam) atau warna biru hitam (Muthmainnah, 2019).

## Pembuatan Larutan Kontrol Positif
Digerus  tablet  amoksisilin,  lalu  ditimbang sebanyak 100 mg masukkan ke dalam beaker glass dan  larutkan  dengan  50    ml  aquadest,  sehingga didapatkan  konsentrasi  sebesar  2000  PPM (Rudiansyah  dkk.,  2021).  Pemilihan  tablet amoksisilin  yang  digunakan  sebagai  sampel kontrol positif, karena amoksisilin merupakan lini pertama  yang  digunakan  untuk  menghambat pertumbuhan  bakteri  gram  positif  dan  negatif (Permenkes RI, 2017).

## Peremajaan Bakteri
Media agar miring pada tabung reaksi masing- masing  diberi  biakan  murni  bakteri E.coli dan S.aureus diambil  satu  ose  bulat  dan  diinokulasi dengan cara digores pada medium agar. Setelah itu inkubasi  masing-masing  kultur  bakteri  dengan suhu 37 o C selama 24 jam (Hasyim dkk., 2018).

## Pembuatan Suspensi Bakteri
Hasil  peremajaan E.coli dan S.aureus pada medium  MHA  miring  masing-masing  dilakukan pengenceran  menggunakan  NaCl  0,9%  sebanyak 10  ml.  Lalu  diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu 37 o C (Hasyim dkk., 2018).

## Pengujian Antibakteri
Diambil suspensi bakteri E.coli dan S.aureus dengan  cara  mencelupkan  kapas  lidi  steril, diamkan selama kurang lebih lima  detik. Masing- masing  diinokulasikan  pada  permukaan  medium agar  dalam  cawan  petri  secara  merata.  Kertas cakram 6 mm yang telah ditetesi rebusan masing- masing  konsentrasi  17%  b/v,  34%  b/v,  51%  b/v, dan 68% b/v, Aquadest steril (kontrol negatif), dan Amoksisilin (kontrol positif), dengan pengulangan perlakuan  sebanyak  empat  kali.  Dimasukkan  ke dalam cawan petri menggunakan pinset. Kemudian masukkan  masing-masing  cawan  petri  yang

## PHARMACON-PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI, Volume 12 Nomor 2, Mei 2023
sebelumnya telah diberi tanda menggunakan kertas label  ke  dalam  inkubator.  Diinkubasi  selama  24 jam pada suhu 37 o C. Setelah diinkubasi selama 24 jam,  diamati  zona  hambat  di  sekitar  cakram  dan diukur menggunakan penggaris dalam  satuan mm (Hasyim dkk., 2018).

## Analisis Data
Data yang didapatkan dianalisis menggunakan SPSS  versi  25.  Pertama  data  dilakukan  uji normalitas dan homogenitas menggunakan Shapiro-Wilk untuk mendapatkan nilai signifikansi (P>0,05).  Jika  data  terdistribusi  normal  analisis dilanjut dengan uji varian yaitu uji one way anova , tujuannya  mengetahui  ada  atau  tidak  pengaruh perbedaan  dari  rebusan  daun  sirih  hijau  terhadap diameter daya hambat bakteri uji antar konsentrasi. Setelah  itu  dilanjut  dengan  uji duncan ,  untuk mengetahui  ada  atau  tidaknya  beda  nyata  pada batas  signifikansi  0,05  (Hasyim  dkk.,  2018). Alternatif lain jika data tidak terdistribusi normal, analisis  dapat  dilakukan  dengan  uji Kruskall Wallis . Pedoman uji Kruskall Wallis yaitu jika nilai sig  <  0.05  maka  ada  perbedaan  rata-rata  dan  jika nilai sig > 0.05 maka tidak ada perbedaan rata-rata. Setelah itu data dilanjut dengan uji Mann-Whitney untuk  mengetahui  perbedaan  bermakna  dari  tiap kelompok sampel uji. Pedoman uji Mann-Whitney yaitu  jika  nilai  sig  <  0.05  maka  ada  perbedaan bermakna dan jika nilai sig > 0.05 maka tidak ada perbedaan bermakna (Zeniusa dkk., 2019).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengujian  rebusan  daun  sirih  hijau  ( Piper betle L.)  dilakukan  dengan  metode disc  diffusion menggunakan kertas cakram, yang ditetesi sampel berupa  rebusan  daun  sirih  hijau  konsentrasi  17%, 34%,  51%,  dan  68%.  Kertas  cakram  diletakkan pada  media  agar  yang  telah  diolesi  suspensi bakteri.  Langkah  awal  sebelum  melakukan pengujian antibakteri adalah membuat media MHA ( Mueller-Hinton  Agar ),  pembuatan  media  terdiri dari  media  agar  miring  dan  media  agar plate . Setelah  itu  dilakukan  peremajaan  bakteri,  bakteri yang digunakan dalam penelitian ini yaitu bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus .
Kemudian  dibuat  suspensi  bakteri  dengan menggunakan larutan natrium klorida (NaCl 0,9%) dan diinkubasi selama 24 jam dengan suhu 37 o C. Persiapan  sampel  yaitu  ekstrak  rebusan  daun sirih  hijau  dengan  beberapa  variasi  konsentrasi. Selain variasi konsentrasi rebusan, dalam pengujian  ini  digunakan  sampel  berupa  kontrol positif  dan  negatif,  kontrol  positif  yaitu  larutan amoksisilin  dan  kontrol  negatif  yaitu  aquadest. Pengujian  rebusan  daun  sirih  hijau  dilakukan sebanyak empat kali replikasi, masing-masing pada bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus .  Adapun  proses  yang  dilalui  sebelum merebus daun sirih yaitu daun sirih hijau dilakukan determinasi terlebih dahulu di Universitas Ahmad Dahlan  Yogyakarta,  daun  sirih  hijau  dibuat simplisia  dan  dihaluskan,  serta  dilakukan  uji skrining  fitokimia  untuk  mengetahui  senyawa metabolit  sekunder  yang  terkandung  dalam  daun sirih hijau ( Piper betle L.).
Senyawa  metabolit  sekunder  hasil  skrining fitokimia pada Tabel 1. berupa flavonoid, steroid, tanin,  dan  alkaloid.  Senyawa  flavonoid,  saponin, dan steroid sebagai antibakteri bekerja dengan cara masuk ke dalam sel bakteri dan merusak membran plasma bakteri. Senyawa tanin dan alkaloid sebagai antibakteri mempunyai mekanisme dalam merusak struktur  dinding  sel  bakteri  (Kurniawan  dkk., 2019).  Senyawa  terpenoid  sebagai  antibakteri memiliki mekanisme kerja dengan cara menghambat  membran  plasma  (Santoso  dkk., 2019).  Senyawa  flavonoid,  saponin,  dan  alkaloid mempunyai  sifat  tidak  tahan  panas,  sehingga adanya  dampak  penurunan  kadar  flavonoid  yang mempengaruhi  aktivitas  antibakteri  (Sonia  dkk., 2021).  Senyawa  metabolit  sekunder  dapat diketahui  dengan  cara  melakukan  uji  skrining fitokimia.  Skrining  fitokimia  dilakukan  dengan cara menguji simplisia atau ekstrak tumbuhan yang diberi pereaksi berbeda-beda. Penelitian sebelumnya  yang  dilakukan  oleh  Rukmini  dkk (2019) bahwa daun sirih hijau positif mengandung senyawa metabolit sekunder yaitu steroid, alkaloid, dan flavonoid. Rukmini dkk (2019) menggunakan salah  satu  metode  ekstraksi  dalam  pengujian skrining fitokimia yaitu metode maserasi.
Tabel 1. Hasil skrining fitokimia daun sirih hijau ( Piper betle L.) Senyawa Pereaksi Hasil Keterangan Alkaloid HCl 2N + dipanaskan + Wagner + Endapan coklat Flavonoid HCl pekat + dipanaskan + Merah bata Saponin Aquadest + dipanaskan + dikocok kuat - Berbusa sementara Steroid H 2 SO 4 + Kuning
Tanin Aquadest panas + FeCl 3 + Hijau kehitaman Terpenoid H 2 SO 4 - -
Keterangan: daun sirih hijau ( Piper betle L.) positif mengandung senyawa metabolit sekunder yaitu alkaloid, flavonoid, steroid dan tanin.
Data  yang  dihasilkan  dari  pengujian  rebusan daun  sirih  hijau  ( Piper  betle L.)  terhadap  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus dilakukan analisis. Pertama data dianalisis dengan uji Kruskall-Wallis untuk mengetahui ada tidaknya perbedaan bermakna dari tiap sampel uji. Pedoman uji Kruskall-Wallis yaitu jika nilai p < 0,05 artinya terdapat  perbedaan  bermakna.  Setelah  itu  data dianalisis  dengan  uji Mann-Whitney untuk mengetahui  kelompok  mana  yang  bermakna. Pedoman untuk uji Mann-Whitney yaitu jika nilai p <  0,05  artinya  terdapat  perbedaan  bermakna  dari tiap kelompok uji (Zeniusa dkk., 2019).
Berdasarkan  data  hasil  penelitian  pada  Tabel 2.  bahwa  rebusan  daun  sirih  hijau  dapat menghasilkan  zona  hambat  terhadap  bakteri Escherichia coli . Rata-rata diameter tiap konsentrasi  yaitu  17%  sebesar  2,12  mm,  34% sebesar 1,00 mm, 51% sebesar 1,37 mm, dan 68% sebesar  3,50  mm.  Lalu  dilakukan  analisis  dengan uji Kruskal-Wallis didapatkan signifikansi kurang dari  0,05  yaitu  0,025  artinya  terdapat  perbedaan rata-rata antara sampel rebusan. Kategori antibakteri  yang  terbentuk dari  pengujian  rebusan daun Piper betle terhadap bakteri E.coli tergolong lemah  (≤5  mm)  untuk  menghambat  atau membunuh  pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli dengan rata-rata  zona hambat sebesar 2,12  – 3,50 mm.
Tabel 2. Pengujian rebusan daun Piper betle sebagai antibakteri E.coli Sampel Mean ± SD (mm) Uji analisis Kruskal-Wallis Mean Rank Asymp. Sig Rebusan 17% 2,12 ± 2,52 8,88 0,017 Rebusan 34% 1,00 ± 2,00 7,13 Rebusan 51% 1,37 ± 2,75 7,88 Rebusan 68% 3,50 ± 4,35 10,13 Amoksisilin (K+) 16.25 ± 3,47 18,50 Aquadest (K-) - 7,50
Keterangan: kategori zona hambat bakteri yaitu sangat kuat >20 mm, kuat 10-20mm, sedang 5-10 mm, lemah ≤5 mm (Kurniawan dkk., 2019)
Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Castoeri  dkk (2022) menguji air rebusan daun sirih ( Piper betle L.)  terhadap  bakteri Escherichia  coli diperoleh hasil bahwa dosis pemakaian air rebusan daun sirih di  masyarakat  konsentrasi  5%  tidak  menghambat pertumbuhan sel  bakteri Escherichia coli . Penelitian  lain  yang  dilakukan  oleh  Tjahjani  dan Lestari  (2022)  menguji  ekstrak  daun  sirih  hijau dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut etanol  96%.  Hasil  penelitian  tersebut  diperoleh bahwa  ekstrak  daun  sirih  hijau  menggunakan pelarut  etanol  96%  dapat  menghambat  atau membunuh pertumbuhan bakteri Proteus mirabilis
pada konsentrasi 20%, 40%, 60%, dan 80%. Rata- rata  zona  hambat  yang  dihasilkan  dari  penelitian tersebut tergolong sedang (5-10 mm) sampai kuat (10-20 mm) yaitu sebesar 6,00 – 11,00 mm.
Sampel kontrol negatif berupa aquadest tidak menunjukkan adanya zona hambat yang terbentuk. Hal tersebut di karenakan aquadest tidak memiliki sifat  sebagai  antibakteri  (Kurniawan  dkk.,  2019). Kontrol  positif  berupa  amoksisilin,  menunjukkan adanya zona hambat yang terbentuk. Kategori zona hambat  yang  terbentuk  yaitu  kuat  (10-20  mm) dengan  rata-rata  sebesar  16,25  mm  artinya amoksisilin sebagai kontrol positif dapat

## PHARMACON-PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI, Volume 12 Nomor 2, Mei 2023
menghambat atau membunuh pertumbuhan bakteri Escherichia coli (Kurniawan dkk., 2019).
Berdasarkan  data  hasil  penelitian  pada  Tabel 3. bahwa  rebusan  daun  sirih  hijau  dapat menghasilkan  zona  hambat  terhadap  bakteri Stahphylococcus  aureus .  Rata-rata  diameter  tiap konsentrasi  yaitu  17%  sebesar  7,87  mm,  34% sebesar 4,00 mm, 51% sebesar 4,97 mm, dan 68%
sebesar  4,87  mm.  Lalu  dilakukan  analisis  dengan uji Kruskal-Wallis didapatkan signifikansi kurang dari  0,05  yaitu  0,031  artinya  terdapat  perbedaan rata-rata antara sampel rebusan. Kategori antibakteri  yang  terbentuk dari  pengujian  rebusan daun Piper  betle terhadap  bakteri S.aureus tergolong  lemah  (≤5  mm)  sampai  dengan  sedang (5-10  mm)  dapat  menghambat  atau  membunuh pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus dengan rata-rata sebesar 4,00 – 7,87 mm.
Tabel 3. Pengujian rebusan daun Piper betle sebagai antibakteri S.aureus Sampel Mean ± SD (mm) Uji analisis Kruskal-Wallis Mean Rank Asymp. Sig Rebusan 17% 7,87 ± 3,59 11,50 0,007 Rebusan 34% 4,00 ± 3,85 6,63 Rebusan 51% 4,97 ± 1,69 7,88 Rebusan 68% 4,87 ± 4,47 8,00 Amoksisilin (K+) 20,50 ± 8,97 18,50 Aquadest (K-) - 3,50 Keterangan: kategori zona hambat bakteri yaitu sangat kuat >20 mm, kuat 10-20mm, sedang 5-10 mm, lemah ≤5 mm (Kurniawan dkk., 2019)
Penelitian  yang  dilakukan oleh  Willianti  dkk (2020)  menguji  Rebusan  daun  sirih  hijau  ( Piper betle L.)  terhadap  bakteri Streptococcus  mutans diperoleh  hasil  bahwa  rebusan  daun  sirih  hijau dapat  menghambat  atau  membunuh  pertumbuhan bakteri streptococcus  mutans dengan  merebus  10 lembar  daun  sirih  dan  aquadest  200  ml. Rata-rata zona  hambat  yang  dihasilkan  dari  penelitian tersebut  tergolong  kuat  (10-20  mm)  yaitu  sebesar 15,81  mm.  Penelitian  lain  yang  dilakukan  oleh Pangesti  dkk  (2017)  menguji  ekstrak  daun  sirih hijau  dengan  metode  maserasi  menggunakan pelarut  etanol  96%.  Hasil  penelitian  tersebut diperoleh  bahwa  ekstrak  daun  sirih  hijau menggunakan pelarut etanol 96% dapat menghambat atau membunuh pertumbuhan bakteri Streptococcus mutans pada konsentrasi 20%. Rata- rata  zona  hambat  yang  dihasilkan  dari  penelitian tersebut  tergolong  lemah  (≤5  mm)  yaitu  sebesar 4,15 mm.
Sampel  kontrol  positif  berupa  amoksisilin menunjukkan rata-rata sebesar 20,50 mm kategori kuat  (10-20  mm)  dalam  membunuh  dan menghambat bakteri Staphylococcus aureus . Zona hambat  yang  dihasilkan  oleh  kontrol  positif amoksisilin  terhadap  bakteri Staphylococcus
aureus lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  bakteri Escherichia coli . Hal tersebut dikarenakan adanya perbedaan struktur sel bakteri dan mekanisme kerja antibiotik. Bakteri staphylococcus aureus merupakan  jenis  bakteri  gram  positif  yang mengandung banyak lapisan peptidoglikan memiliki struktur yang tebal dan kaku, serta asam teikoat.  Sebaliknya  bakteri Escherichia  coli merupakan jenis bakteri gram negatif mengandung satu  atau  beberapa  lapisan  peptidoglikan  dan membran  luar.  Peptidoglikan  terikat  lipoprotein pada  membran  luar.  Terdapat  daerah  periplasma yaitu  daerah  yang  terdapat  di  antara  membran plasma dan membran luar. Periplasma berisi enzim degradasi  konsentrasi  tinggi  serta  protein-protein transpor.  Dinding  sel  tidak  mengandung  asam teikoat,  hanya  mengandung  sejumlah  kecil peptidoglikan  sehingga  dinding  sel  bakteri  gram negatif  relatif  lebih  tahan  terhadap  kerusakan mekanis.  Antibiotik  amoksisilin  merupakan  jenis antibiotik  berspektrum  luas  golongan  penisilin. Mekanisme  kerja  antibiotik  amoksisilin  yaitu menghambat  sintesis  dan  merusak  dinding  sel bakteri, dengan cara merusak lapisan peptidoglikan yang menyusun dinding sel bakteri (Pratiwi, 2008).

## PHARMACON-PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI, Volume 12 Nomor 2, Mei 2023
Data  pada  Tabel  4  memperlihatkan  hasil analisis Mann-Whitney dari  rebusan  daun  sirih hijau  sebagai  antibakteri Escherichia  coli .  Bahwa sampel kontrol positif berupa amoksisilin memiliki perbedaan  yang  bermakna  dengan  rebusan  daun sirih  hijau  pada  konsentrasi  17%,  34%, 51%,  dan 68%  dengan  nilai  signifikansi  <  0,05.  Selain  itu kontrol  negatif  berupa  aquadest  terlihat  memiliki perbedaan  yang  bermakna  dengan  sampel amoksisilin.  Data  pada  Tabel  5  memperlihatkan
hasil  analisis Mann-Whitney dari  rebusan  daun sirih  hijau  sebagai  antibakteri Staphylococcus aureus .  Bahwa  sampel  kontrol  positif  berupa amoksisilin  memiliki  perbedaan  yang  bermakna dengan  rebusan  daun  sirih  hijau  pada  konsentrasi 17%, 34%, 51%, dan 68% dengan nilai signifikansi < 0,05. Selain itu kontrol negatif berupa aquadest terlihat memiliki perbedaan yang bermakna dengan sampel  rebusan  daun  sirih hijau konsentrasi  17%, 34%, 51%, 68%, dan amoksisilin.
Tabel 4. Data hasil uji Mann-Whitney bakteri E.coli Sampel Rebusan 17% Rebusan 34% Rebusan 51% Rebusan 68% K+ K- Rebusan 17% - Rebusan 34% 0,508 - Rebusan 51% 0,741 0,850 - Rebusan 68% 0,642 0,321 0,508 - K+ 0,020* 0,018* 0,018* 0,020* - K- 0,131 0,317 0,317 0,131 0,014* -
Tabel 5. Data hasil uji Mann-Whitney bakteri S.aureus Sampel Rebusan 17% Rebusan 34% Rebusan 51% Rebusan 68% K+ K- Rebusan 17% - Rebusan 34% 0,081 - Rebusan 51% 0,245 0,773 - Rebusan 68% 0,561 0,885 0,885 - K+ 0,020* 0,021* 0,021* 0,021* - K- 0,013* 0,047* 0,014* 0,047* 0,014* - Keterangan: (*)perbedaan bermakna nilai p < 0,05. K+ = Amoksisilin K- = Aquadest
Berdasarkan rata-rata hasil uji Kruskal-Wallis pada Gambar 1 dan Gambar 2, bahwa rebusan daun sirih  hijau  dapat  menghambat  atau  membunuh pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli pada konsentrasi  68%  dan  bakteri Staphylococcus aureus pada konsentrasi 17%. Zona hambat bakteri umumnya terjadi ketika semakin besar konsentrasi maka semakin tinggi zona hambat. Pada penelitian ini  berbeda,  karena  beberapa  faktor  yang mempengaruhinya.  Faktor  yang  mempengaruhi besar  kecilnya  zona  hambat  antibakteri  yaitu konsentrasi  ekstrak,  kemapuan  difusi  ekstrak, adanya bahan organik pada sampel, suhu, dan pH lingkungan.  Semakin  besar  konsentrasi  maka
semakin besar pula  zona hambat dan kemampuan difusi  ekstrak  yang  terbentuk  (Dewangga  dan Qurrohman,  2019).  Bahan  organik  asing  dapat menurunkan  keefektifan  zat  antibakteri  dengan cara  menginaktifkan  zat-zat  pada  sampel  dan melindungi  bakteri.  Suhu  berpengaruh  ketika terjadi  kenaikan  dari  suhu  sedang  menjadi  tinggi dapat  menaikkan  keefektifan  suatu  sampel antibakteri.  Kemudian  pH  lingkungan,  bakteri yang diberi perlakuan sampel dengan pH asam (<7) dapat  dibunuh  pada  suhu  yang  lebih  singkat dibanding  dengan  bakteri  dalam  pH  lingkungan basa (>7) (Fifendy, 2017).

## PHARMACON-PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI, Volume 12 Nomor 2, Mei 2023
Gambar 1. Diagram rata-rata uji Kruskal-Wallis bakteri E.coli Gambar 2. Diagram rata-rata uji Kruskal-Wallis bakteri S.aureus
Faktor  lain  yang  mempengaruhi  besar kecilnya zona hambat yaitu kualitas dan  kuantitas sampel  tumbuhan,  pembuatan  ekstrak,  metode pengujian  antibakteri,  dan  tipe  bakteri.  Kualitas dan kuantitas daun sirih hijau yang ditanam dapat dipengaruhi oleh beberapa faktor di antaranya pada saat pemberian pupuk, cara penyiraman, dan sinar matahari.  Hal  tersebut  dapat  berpengaruh  pada tanaman  sirih,  terjadinya  pengurangan  zat antibakteri sehingga mengakibatkan  rebusan daun sirih tidak menghasilkan zona hambat antibakteri. Pembuatan ekstrak pula dapat berpengaruh seperti pada  saat  penyaringan  ekstrak  tidak  tersaring
dengan  baik  dan  penambahan  pelarut  yang berlebihan.  Metode  pengujian  antibakteri  yang dilakukan pada saat penelitian dapat mempengaruhi,  seperti  pada  saat  menetesi  kertas cakram  dengan  sampel  kurang  terendam  atau terlalu  cepat.  Penyebaran  bakteri  dengan cotton swab kurang merata sehingga mengakibatkan tidak terbentuknya  zona  hambat  di  sekeliling  kertas cakram.  Tipe  bakteri  mengakibatkan  adanya perbedaan  enzim  dan  zat  yang  diperoleh  bakteri, enzim tersebut kemungkinan menjadi perusak atau penghancur  zat  antibakteri  pada  sampel  sehingga tidak terbentuk zona hambat (Suryati dkk., 2018).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  dan  pembahasan  dari penelitian, diperoleh kesimpulan sebagai berikut: 1. Rebusan daun sirih hijau ( Piper betle L.) kurang efektif sebagai antibakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus .
2. Terdapat perbedaan rata-rata zona hambat dari tiap konsentrasi rebusan daun sirih hijau dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus .  Dengan  nilai zona hambat terbesar 3,5 mm pada konsentrasi 68%  pengujian  terhadap  bakteri Escherichia coli ,  sedangkan  7,87  mm  pada  konsentrasi 17% pengujian terhadap bakteri Staphylococcus aureus .

## SARAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan, diharapkan peneliti selanjutnya untuk:
1. Melakukan  uji  antibakteri  menggunakan metode yang berbeda, seperti metode sumuran, metode E-test , metode dilusi cair, dan metode dilusi padat.
2. Menguji  bagian  tumbuhan  sirih  hijau  selain daunnya.
3. Menguji  dengan  metode  penyari  lain,  seperti digesti, perkolasi, sokhletasi, dan maserasi.
4. Menggunakan  antibiotik  yang  lebih  spesifik untuk  kontrol  positif,  pada  pengujian  bakteri gram positif dan gram negatif.

## DAFTAR PUSTAKA
Afifah  Rukmini, Danang  Hadi  Utomo,  Ainun Nikmati  Laily.  2020.  Skrining  Fitokimia Familia  Piperaceae . Jurnal  Biologi  Dan Pembelajarannya (JB&P) , 7(1): 28–32.
B,  Muthmainnah.  2019.  Skrining  Fitokimia Senyawa Metabolit Sekunder Dari Ekstrak Etanol Buah Delima ( Punica granatum L.) Dengan  Metode  Uji  Warna. Media Farmasi, 13(2): 36–41.
Castoeri,  Y.  N.,  Suryadjaja,  E.  dan  Wahjudi,  M.
2022.  Air  Daun  Sirih  ( Piper  betle L  .)
Tidak  Berpotensi  Memicu  Resistensi  Sel Escherichia  coli pada  Dosis  Pemakaian Secara Traditional. Media Pharmaceutica
Indonesia , 4(1): 56-64. 8,88
7,13 7,88 10,13 0 2 4 6 8 10 12 17% 34% 51% 68% R a ta -r a ta Zo n a Ha m ba t (m m ) Konsentrasi 11,5 6,63 7,88 8 0 2 4 6 8 10 12 14 17% 34% 51% 68% R a ta -ra ta Zo n a Ha m ba t (m m ) Konsentrasi

## PHARMACON-PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI, Volume 12 Nomor 2, Mei 2023
Dewangga, V.S., Qurrohman, M.T., 2019. Potensi Antibakteri Ekstrak Etanol Herba Meniran
Hijau  ( Phyllanthus  niruri Linn.)  Dalam
Menghambat Pertumbuhan Staphylococcus aureus . Jurnal Kesehatan Kusuma Husada , 10(2): 144–150.
Fifendy, M. 2017. Mikrobiologi Edisi Pertama. PT Balebat Dedikasi Prima .
Harborne,  J.  B.  1992.  Phytochemical  methods,  a guide  to  modern  techniques  of  plant analysis.  London,  New  York: Chapman and Hall .
Hasyim,  M.  F.,  Patandung,  G.  and  Irfiana.  2018.
Uji  Aktivitas  Antibakteri  Infusa  Daun Sawo  Manila  ( Manilkara  zapota L.) Terhadap Escherichia coli. Jurnal Farmasi Sandi Karsa , 4(7): 16-19 Kurniawan, D., Sulistyowati, E., Hakim, R., 2019.
Efek  Antibakteri  Kombinasi  Ekstrak Metanolik  atau  Dekokta  Daun  Sirsak ( Annona muricata L.) dengan Amoksisilin pada  Bakteri Staphylococcus  aureus atau Escherichia  coli secara  in  vitro. Journal Bio  Komplementer  Medicine, 6(3):  262– 271.
Marsono,  O.S.,  Eko,  T.,  Surjowardojo,  P.,  2017.
The effect of decoction leaves from green leaf  ( Piper  betle L.)  to  inhibition  activity of Streptococcus  agalactiae cause  of mastitis  in  dairy  cow. Jurnal  Ilmu  dan Teknologi Hasil Ternak , 12(1): 47–60.
Nur  Khoiriyah,  Y.  dan  Murwaningsih,  S.  2017. Kajian  Ragam  dan  Periode  Penyimpanan Kombinasi  Air  Rebusan  Daun  Sirih  dan Kayu  Siwak  Terhadap  Pertumbuhan
Streptococcus mutans . Biogenesis: Jurnal Ilmiah Biologi , 5(2): 70–77.
Pangesti, R. D., Cahyono, E. dan Kusumo, E. 2017.
Perbandingan  Daya  Antibakteri  Ekstrak dan  Minyak Piper  betle L.  terhadap Bakteri Streptococcus mutans , Indonesian Journal  of  Chemical  Science ,  6(3):  291–
299. Permenkes RI. 2017. Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia Nomor 2406/MENKES/PER/XII/2011 Tentang
Pedoman  Umum  Penggunaan  Antibiotik. Permenkes RI , hal: 34–44.
Pratiwi, S. T. 2008. Mikrobiologi Farmasi. Jakarta:
Penerbit Erlangga .
Santoso, I. Rina B, Y. Fadli, Z. 2019. Uji Aktivitas Antibakteri  Dari  Dekokta  Dan  Ekstrak
Kloroform  Alga Cladophora  sp .  Pada
Bakteri  Gram  Positif  Dan  Negatif. Angewandte Chemie International Edition , 6(11): 62–69.
Sari, S.L., Hakim, R., Sulistyowati, E., 2019. Efek Antibakteri  Kombinasi  Daun  Teh  Hijau (C amellia  sinensis )  dengan  Amoksisilin pada Staphylococcus aureus atau Escherichia  coli secara  in  vitro. Jurnal Kedokteran, 8(1): 1-10.
Simanjuntak,  A.  M.  2015.  Penentuan  Aktivitas Antibakteri Infusa Daun Karas ( Aquilaria malaccensis Lamk.)  terhadap  Bakteri Bacillus  cereus secara  In  Vitro’, Jurnal Mahasiswa Farmasi Fakultas Kedokteran , 3(1): 4–9.
Sonia  Agustin  Ervina  A.,  Reza  Hakim,  Erna Sulistyowati.  2021.  Efek  Antibakteri Kombinasi Ekstrak Metanol atau Dekokta Daun Annona  muricata L.  dengan Kloramfenikol pada Staphylococcus aureus dan Escherichia coli secara in vitro.
Angewandte Chemie International Edition, 6(11): 951–952. Suryati, N., Bahar, E. and Ilmiawati, I. (2018) ‘Uji
Suryati,  N.  dan  Bahar,  E.  2018.  Uji Efektivitas Antibakteri Pertumbuhan Escherichia coli . Jurnal Kesehatan
Andalas , 6(3): 518-522.
Tjahjani,  N.  P.  dan  Lestari,  D.  W.  2022.  Potensi Ekstrak  Etanol  70%  Daun  Binahong ( Anredera  cordifolia (Ten.) Steenis.)  Dan Ekstrak  Etanol  96%  Daun  Sirih  Hijau ( Piper betle L.) Terhadap Bakteri Proteus mirabilis . Jurnal Pranata Biomedika, 1(1):
64–77.
Willianti,  E.,  Theodora,  T.  dan  Parmasari,  W.  D. 2020. Analisa Aktivitas Antibakteri Rebusan  Daun  Sirih  Dengan  Rebusan Daun  Kemangi  Terhadap  Pertumbuhan Bakteri Streptococcus mutans. Hang Tuah Medical Journal , 18(1): 36-48.
Yusmaniar,  Wardiyah  and  Nida,  K.  (2017) Mikrobiologi  dan  Parasitologi , Badan PPSDM Yusmaniar,  Wardiyah  dan  Nida, K.  2017.  Mikrobiologi  dan  Parasitologi. Badan  PPSDM  Kementerian  Kesehatan Republik Indonesia .
Zeniusa,  P.  dkk . 2019.  Uji  Daya  Hambat  Ekstrak Etanol  Teh  Hijau  terhadap Escherichia coli Secara In Vitro. Majority , 8(2): 136– 143.