p-ISSN 2354-6565 /e-ISSN 2502-3438
KOMBINASI EKSTRAK BUAH MENGKUDU ( Morinda citrifolia L.) DAN DAUN SIRSAK ( Annona muricata L.) DALAM MENGHAMBAT BAKTERI Escherichia coli DAN Staphylococcus aureus
Sri Sudewi dan Widya Astuty Lolo
Program Studi Farmasi, FMIPA Universitas Sam Ratulangi Manado, 95115 Corresponding author e-mail: ssudewi@gmail.com

## ABSTRAK
Penelitian  ini  tentang  pemanfaatan  bahan  herbal  yang  sudah  diketahui  khasiat  dan  nilai  terapinya dengan  cara  melakukan  kombinasi  dua  macam  bagian  tanaman  herbal    dimana    secara  empiris masing-masing  bagian  tanaman  tersebut  sudah  banyak  dimanfaatkan  oleh  masyarakat  luas  dalam pengobatan  penyakit.  Penelitian  ini  dilakukan  dengan  tujuan  untuk  mengetahui  daya  hambat kombinasi  ekstrak  buah  mengkudu  dan  daun  sirsak  pada  konsentrasi  efektif    dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri  E.coli  dan  S.aureus.  Ekstraksi  dilakukan  dengan  cara  maserasi  menggunakan pelarut etanol 96 %.  Pengujian daya hambat dilakukan dengan metode difusi agar  (difusi Kirby dan Bauer)  dengan  cara  sumuran  dan  menggunakan  ciprofloxacin  sebagai  kontrol  positif  serta  aquadest sebagai kontrol negatif. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kombinasi ekstrak buah mengkudu dan daun sirsak pada konsentrasi 1000 µg menghasilkan zona hambat bakteri E.Coli dan S.Aureus sebesar 22,  625  dan  25,5  mm  dengan  kontrol  positif  sebesar  43,625  dan  46,  375  mm.  Berdasarkan  hasil penelitian,  dapat  dsimpulkan  bahwa  kombinasi  ekstrak  buah  mengkudu  dan  daun  sirsak  dapat menghambat pertumbuhan bakteri E.coli dan S.aureus.
Kata kunci : daya hambat, ekstrak, bakteri

## ABSTRACT
The research about utilization the known  herbal of its efficacy and therapy value by combinated two part of herbal plant while it has been used by society in disease medication empirically. This research was carried out for know inhibitory at combination of mengkudu fruits and sirsak leaves extract by effective concentration in inhibited growth E.coli and S. Aureus. Extraction was done by maceration with  ethanol  96%.  The  test  of  inhibitory  was  carried  out  by  agar  difussion  (Kirby  and  Bauer difussion) by pitting method and ciprofloxacin as positive control and aquadest as negative control. The  result  showed  that  combination  of  mengkudu  fruits  and  sirsak  leaves  extract  at  1000 µg produced inhibitory zone of E. Coli and S. Aureus as 43,625 and 46, 375 mm. Based on the result,its concluded that combination of mengkudu fruits and sirsak leaves extract at 100% concentration could inhibited the E. coli and S. aureus growth.
Keywords : Inhibitory, extract, bactery

## PENDAHULUAN
Senyawa  aktif  yang  berasal  dari  alam  masih mempunyai  peran  utama  sebagai  obat  dan  dapat digunakan  sebagai  senyawa  penuntun  dalam perkembangannya  sebagai  senyawa  sintetik. Selain  itu  senyawa  aktif  yang  mempunyai aktivitas  sebagai  antibakteri  saat  ini  banyak dikembangkan sebagai antibiotik.
Penyakit yang ditimbulkan oleh bakteri dapat dicegah dengan obat antibiotik namun penggunaan  antibiotik  yang  tidak  tepat  dapat menimbulkan  resistensi.  Pencegahan  resistensi dapat  dilakukan  dengan  memanfaatkan  kembali bahan-bahan  alami  terutama  obat-obatan  herbal.
Obat  herbal  harganya  terjangkau, mudah diperoleh,  dan    efek  samping  yang  relatif  kecil. Penggunaan  obat  herbal  memiliki  nilai  terapi seperti pada buah mengkudu dan daun sirsak.
Tanaman  mengkudu  merupakan  tanaman yang  hampir  seluruh  bagian  tubuhnya  memiliki khasiat sebagai obat baik pada daun, akar, batang dan buah. Buah mengkudu mengandung beberapa  zat-zat  yang  bersifat  antibakteri  yaitu Acubin,  L.  asperuloside,  alizarin  dan  beberapa zat  antrakuinon.  Selain  itu,  alkaloid  dan falovonoid juga ditemukan dalam buah mengkudu.  Menurut  Antara  dkk  (2001)  buah mengkudu  dengan  tingkat  kematangan  yang
berbeda  mempunyai  kandungan  bahan  aktif  dan khasiat  yang  berbeda  pula.  Ekstrak  buah mengkudu  matang  memiliki senyawa antibakteri yang bekerja terhadap Pseudomonas aeruginosa, M. pyrogenes, Salmonella typhosa, S. Montevideo,  S. schottmuelleri , Shigella  paradys , Eschericia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis,  Clostridium  perfingens, dan Vibrio parahaemolyticus .
Tanaman  sirsak  merupakan  tanaman  yang berkhasiat  sebagai  antiparasit,  antispasmodik, antikanker, sedatif, hipotensi, insektisida, penyakit  kulit.  Bagian  tanaman  sirsak  seperti kulit  batang  dan  akar  juga  dapat  dimanfaatkan sebagai obat diare, cacing, disentri. Bagian bunga dan  polong  buah  digunakan  untuk  mengobati selesema (Odewole dan Ojewole, 2006). Sementara  bagian  daunnya  dapat  difungsikan sebagai  obat  kejang,  luka  borok,  bisul,  kutu rambut (Mardiana dan Ratnasari, 2011).
Penggalian tentang pemanfaatan bahan herbal yang  sudah  diketahui  khasiat  dan nilai terapinya dengan  cara  melakukan  kombinasi  dua  macam bagian  tanaman  herbal    dimana    masing-masing bagian tanaman tersebut sudah banyak dimanfaatkan  oleh  masyarakat  luas  dalam pengobatan  penyakit  secara  empiris  sehingga dapat  dirumuskan  suatu  permasalahan  penelitian ini yaitu apakah kombinasi ekstrak buah matang mengkudu  dan  ekstrak  daun  sirsak  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri E.Coli dan S. Aureus .

## METODE PENELITIAN
Rancangan Penelitian.
Penelitian ini bersifat eksperimental melalui analisis laboratorium dengan tahapan yaitu (1); pengambilan  dan  penanganan  sampel  buah matang  mengkudu  dan  daun  sirsak.  (2); pengeringan dan pembuatan serbuk. (3); ekstraksi  secara  maserasi.  (4)  pengujian  ekstrak buah  mengkudu  dan  daun  sirsak  (1:1)  dengan konsentrasi  100%  pada  bakteri E.coli dan S.aureus dengan metode difusi agar (sumuran).
Alat penelitian. Peralatan yang dipergunakan dalam  penelitian  ini  adalah  :  peralatan  gelas, inkubator,  autoklaf, rotary  evaporator ,  cawan petri,  cawan  porselin,  refrigerator,  jarum  ose, mikropipet,  oven dan timbangan elektrik.
Bahan  penelitian. Bahan  yang  digunakan yaitu:  buah  mengkudu  matang,  daun  sirsak, etanol,  aquades,  media Nutrient  Agar (NA), biakan bakteri Staphylococcus aureus , Escherichia coli , kertas saring.
Pengambilan  dan  Penanganan  Sampel. Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  adalah buah  matang  mengkudu  dan  daun  sirsak  yang diambil  di  daerah  Kota  Manado.  Pengambilan sampel dilakukan pada pagi hari yang selanjutnya disortasi, dicuci dengan air mengalir. 1) Pengeringan Sampel dan Pembuatan Serbuk
Sampel buah mengkudu dan daun sirsak yang sudah dibersihkan dari bahan-bahan pengotor dengan menggunakan air mengalir selanjutnya  dikeringkan  dalam  oven  pada suhu  50 o C.    Simplisia  sampel yang  telah kering kemudian dihaluskan sehingga menjadi serbuk.
2) Ekstraksi Secara Maserasi
Hasil pembuatan serbuk kemudian diekstraksi dengan maserasi dengan etanol 96%. Maserasi  dilakukan  3  kali  ditandai  dengan hilangnya warna maserat dan dengan pengadukan.  Langkah  selanjutnya  disaring sehingga diperoleh filtrat. Ampasnya dikering anginkan hingga kering sehingga bau pelarutnya hilang. Filtrat atau ekstrak cair dari setiap  ekstrak  diuapkan  sehingga  diperoleh ekstrak buah mengkudu dan daun sirsak.
3) Pengujian Aktivitas Antibakteri pada Ekstrak a. Pembuatan Media Pengujian
Lapisan  dasar  dibuat  dengan  menuangkan masing-masing 10 ml NA dari media dasar ke  dalam  6  cawan  petri,  lalu  dibiarkan sampai  memadat.  Setelah  memadat,  pada permukaan lapisan dasar diletakkan masing-masing  3  pencadang  pada  setiap cawan  petri.  Selanjutnya  suspensi  bakteri dicampurkan ke dalam media pembenihan NA.    Kemudian  dituangkan  25  ml campuran  tersebut  ke  dalam  tiap  cawan petri  sebagai  lapisan  kedua.    Setelah  itu pencadang  diangkat  secara  aseptik  dari cawan  petri,  sehingga  terbentuk  sumur yang akan digunakan dalam uji antibakteri.
b. Regenerasi Bakteri
Bakteri
Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus diperoleh  dari Laboratorium Mikrobiologi Program Studi
Farmasi, FMIPA, Universitas Sam Ratulangi.  Sebelum  dipakai  dalam  uji antibakteri,  bakteri  yang  akan  dipakai tersebut harus diregenerasi terlebih dahulu. Langkah  pertama  yang  dilakukan  adalah membuat  biakan  agar  miring,    kemudian menggoreskan  biakan  dari  stok  bakteri  ke media Nutrient  agar  (NA) miring  yang masih  baru,  selanjutnya  diinkubasi  pada suhu  37 o C  selama  18  –  24  jam.  Dari
biakan  tersebut,  masing-masing    diambil satu ose bakteri stok, kemudian diinokulasi ke  dalam  tabung  yang  berisi  2  mL  media cair  steril,    selanjutnya  diinkubasi  selama 24  jam  pada  suhu  37ºC  (dikultur).  Hasil kultur  tersebut  disamakan  kekeruhannya dengan  standar  0,5  Mc  Farland  (10 8
CFU/unit  dengan  cara  menambahkan larutan  NaCl  0,9%.  Kemudian  diencerkan lagi hingga 10 6 CFU/mL.
c. Penyiapan ekstrak
Sebanyak  2  gram    ekstrak  uji  (ekstrak etanol  buah  mengkudu  sebanyak  1  gram dan  ekstrak  daun  sirsak  sebanyak  1  gram) dilarutkan  dalam  2  mL  akuades  sehingga diperoleh kosentrasi sebesar 100 %.
d. Pengujian antibakteri
Larutan  uji  ekstrak  buah  mengkudu  dan dau  sirsak  dengan  konsentrasi  100  %  ; aquadest  sebagai  kontrol  negatif,  dan larutan  ciprofloxacin  50  µg/50  µl  sebagai kontrol  positif,  masing-masing  diteteskan pada sumur yang berbeda sebanyak 50 µl. Kemudian  diinkubasi  pada  suhu  37 o C selama 1 x 24 jam.
e. Pengamatan dan pengukuran
Pengamatan  dilakukan  setelah  1  x  24  jam masa  inkubasi.  Zona  bening  merupakan petunjuk kepekaan bakteri terhadap antibiotik  atau  bahan  antibakteri  lainnya yang  digunakan  sebagai  bahan  uji  yang dinyatakan  sebagai  diemeter  zona  hambat (Vandepitte et  al ,  2005).  Diameter  zona hambat  diukur  dalam  satuan  milimeter (mm)  menggunakan  mistar  berskala. Kemudian  diameter  zona  hambat  tersebut dikategorikan kekuatan daya antibakterinya  berdasarkan  penggolongan
Davis and Stout (1971).
4) Interpretasi Data
Zona  jernih  disekitar  sumuran  (diameter  7 mm)  mengindikasikan  adanya  penghambatan dari senyawa uji.
Gambar 1. Pengukuran zona hambat

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  skrining  Fitokimia. Hasil  skrining fitokimia  pada  ekstrak  buah  mengkudu  secara kualitatif ditunjukkan pada tabel berikut.
Tabel 1. Hasil  Skrining  Fitokimia  Ekstrak  Buah Mengkudu Komponen kimia Hasil Flavonoid + Alkaloid + Terpenoid - Tanin + Saponin + Steroid +
Hasil  skrining  fitokimia  pada  ekstrak  etanol buah  mengkudu  memberikan  nilai  positif  pada golongan  fitokimia  flavonoid,  alkaloid,  tanin, saponin  dan  steroid.  Sedangkan  golongan terpenoid tidak terdapat pada kandungan ekstrak buah  mengkudu.  Hasil  skrining  fitokimia  pada ekstrak  daun    sirsak  ditunjukkan  pada  tabel berikut.
Tabel 2. Hasil  Skrining  Fitokimia  Ekstrak  Daun
Sirsak Komponen kimia Hasil Flavonoid + Alkaloid - Terpenoid - Tanin + Saponin + Steroid +
Skrining  fitokimia  ekstrak  etanol  daun  sirsak menunjukkan kandungan flavonoid, tanin, saponin  dan  steroid.  Sedangkan  golongan alkaloid dan terpenoid memberikan hasil negatif.
Daya hambat ekstrak buah mengkudu dan daun  sirsak  terhadap  bakteri E.  coli. Hasil pengujian  aktivitas  antibakteri  ditunjukkan  pada tabel 3.
Tabel 3. Daya Hambat Ekstrak Terhdap Bakteri E.coli Nama Konsentrasi (µg/mL) Diameter Zona Hambat (mm) Rerata (mm) Ekstrak Buah Mengkudu 250 11 10,75 10,5 500 16 15,75 15,5 1000 24 20 16 Kontrol (+) (Ciprofloxacin) 50 33 32,25 31,5 Kontrol (-) (Aquades) 50 0 0 0 Ekstrak Daun Sirsak 250 10 10,75 11,5 500 16 15,75 15,5 1000 16 16,5 17 Kontrol (+) (Ciprofloxacin) 50 29 29,5 30 Kontrol (-) (Aquades) 50 0 0 0
Hasil  menunjukkan  bahwa  diameter  rerata zona  hambat  pada  ekstrak  buah  mengkudu  pada konsentrasi  250,  500  dan  1000  µg  secara berturutan  sebesar  10,75;  15,75;  dan  20  mm, sedangkan  ekstrak  daun  sirsak  pada  konsentrasi 250,  500  dan  1000  µg  secara  berturutan  sebesar 10,75;  15,75;  dan  16,5  mm.  Kontrol  positif memberikan diameter rerata zona hambat sebesar 32,25 mm. Diameter zona hambat kontrol negatif sebesar  0  mm.  konsentrasi  paling  afektif  yang diberikan  oleh  ekstrak  buah  mengkudu    dan daunsirsak  terhadap  bakteri    E.  Coli  dihasilkan dari konsentrasi 1000 µg. Kekuatan daya hambat yang diberikan oleh ekstrak buah mengkudu dan daun sirsak menggunakan kriteria yang diusulkan oleh  Davis  dan  Stout  (1971).    Ekstrak  buah mengkudu  dan  daun  sirsak  memiliki  daya hambat  dengan  kategori    kuat    karena  memiliki diameter zona hambat dengan rerata 10 - 20 mm.
Tabel 4. Kekuatan  daya  hambat  antibakteri  (Davis dan Stout, 1971) Kriteria kekuatan daya antibakteri Diameter zona hambat (mm) Lemah Kurang dari 5 Sedang 5-10 Kuat 10-20 Sangat Kuat Lebih dari 20
Rukmana  (2002)  menyatakan  kandungan buah  mengkudu yang  berpotensi  sebagai senyawa antibakteri diantaranya alizarin, acubin, L.  Asperuloside,  dan  flavonoid.  Sedangkan senyawa  aktif  pada  daun  sirsak  yang  berpotensi sebagai senyawa antibakteri yaitu flavonoid.
Daya hambat ekstrak buah mengkudu dan daun sirsak terhadap bakteri S. aureus. Hasil pengujian aktivitas antibakteri S. Aureus dari ekstrak ditunjukkan pada tabel berikut
.
Tabel 5. Daya Hambat Ekstrak Terhadap Bakteri S. aureus Nama Konsentrasi (µg/mL) Diameter Zona Hambat (mm) Rerata (mm) Ekstrak Buah Mengkudu 250 13 13,25 13,5 500 17,5 16,375 15,25 1000 20 19,25 18,5 Kontrol (+) (Ciprofloxacin) 50 33,5 33,75 32 Kontrol (-) (Aquadest) 50 0 0 0 Ekstrak Daun Sirsak 250 11,5 12 12,5 500 15,25 14,625 14 1000 16,75 15,87 15 Kontrol (+) (Ciprofloxacin) 50 38 35 32 Kontrol (-) (Aquades) 50 0 0 0
Zona  penghambatan  sampel  ekstrak  buah mengkudu  dan  daun  sirsak  terhadap  bakteri S. Aureus pun  memberikan  diameter  zona  hambat sebesar  13,25;  16,375;  dan  19,25  mm  secara berturutan  pada  konsentrasi  250,  500  dan  1000 µg.  Zona  hambat  ciprofloxacin  sebesar  35  mm sebagai kontrol positif. Konsentrasi paling efektif dihasilkan  dari  konsentrasi  yang  memberikan daya  hambat  paling  besar  terhadap  bakteri S. Aureus yang dihasilkan dari konsentrasi 1000 µg dengan  zona  hambat  sebesar  19,25  mm. Kekuatan  ekstrak  buah  mengkudu  dan  daun sirsak  terhadap  bakteri S.  Aureus memiliki kategori  yang  kuat  berdasarkan  penggolongan Davis dan Stout (1971).
Hasil perolehan kedua ekstrak buah mengkudu  dan  daun  sirsak  yang  memberikan
zona hambat paling besar selanjutnya dikombinasikan kedua konsentrasi kedua ekstrak tersebut.  Kombinasi  yang  memberikan  zona hambat  paling  besar  dengan  konsentrasi  yang paling  efektif  dalam  menghambat  aktivitas bakteri E.  Coli dan S.  Aureus diberikan  dari konsentrai  1000  µg  untuk  ekstrak  buah mengkudu  dan  konsentrasi  1000  µg  untuk ekstrak daun sirsak.
Daya  hambat  kombinasi  ekstrak  buah mengkudu  dan  daun  sirsak  terhadap  bakteri E.  coli dan S.  aureus. Hasil  pengujian kombinasi  ekstrak  buah  mengkudu  dan  daun sirsak  terhadap  bakteri E.  Coli dan S.  Aureus ditunjukkan pada tabel berikut.
Tabel 6. Daya Hambat Kombinasi Ekstrak Buah Mengkudu Dan Daun Sirsak Terhadap Bakteri E. coli dan S.
aureus Bakteri Nama Diameter Zona Hambat (mm) Rerata (mm) E.Coli Kombinasi Ekstrak 22,75 22,625 22,25 Kontrol (+) (Ciprofloxacin) 42,75 43,625 44,5 Kontrol (-) (Aquades) 0 0 0 S. Aureus Kombinasi Ekstrak 24,75 25,5 25,5 Kontrol (+) (Ciprofloxacin) 46 46,375 46,75 Kontrol (-) (Aquades) 0 0 0
Hasil  menunjukkan  bahwa  diameter  rerata zona  hambat  pada  kombinasi  ekstrak  buah mengkudu  dan  daun  sirsak  terhadap  bakteri  E. Coli  dan  S.  Aureus  yang  terbentuk  secara berturutan  sebesar  22,625  mm  dan  25,5 sedangkan  kontrol  positif  memberikan  diameter rerata  zona  hambat  sebesar  43,635  dan  46,375 mm.  Diameter  zona  hambat  kontrol  negatif sebesar  0  mm.  Kekuatan  daya  hambat  yang diberikan oleh kombinasi ekstrak buah mengkudu dan daun sirsak menggunakan kriteria yang  diusulkan  oleh  Davis  dan  Stout  (1971). Kombinasi  ekstrak  buah  mengkudu  dan  daun sirsak memiliki daya hambat sangat kuat  karena memiliki  diameter  zona  hambat  dengan  rerata lebih dari 20 mm.
Kemampuan  daya  hambat  yang  sangat  kuat ini  diduga  karena  adanya  kekuatan  sinergis  dari kombinasi  ekstrak  buah  mengkudu  dan  daun sirsak. Seperti yang ditulis oleh Rukmana (2002) kandungan  buah  mengkudu  yang  berpotensi sebagai senyawa antibakteri diantaranya alizarin, acubin, L. Asperuloside, dan flavonoid. Sedangkan  senyawa  aktif pada  daun  sirsak  yang berpotensi  sebagai  senyawa  antibakteri  yaitu flavonoid. Menurut Spinella (2002) efek sinergis bahan  aktif  merupakan  kondisi  ketika  efek  yang dihasilkan  oleh  senyawa  aktif  secara  bersama lebih  besar  daripada  jumlah  dari  efek  tunggal dari masing-masing senyawa aktif.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  daerah zona  hambat  bakteri  gram  positif  (S.aureus) memiliki  zona  hambat  yang  lebih  kecil  daripada zona  hambat  bakteri  gram  negatif  (E.Coli)  baik pada  ekstrak  buah  mengkudu  dan  daun  sirsak. Hal  ini  diduga  adanya  perbedaan  struktur- struktur dinding sel menentukan penetrasi, ikatan dan  aktivitas  senyawa  antibakteri  (Jawetz  dkk., 2005).  Dalam  hal  ini,  senyawa  aktif  dalam ekstrak buah mengkudu dan daun sirsak ini lebih aktif  dalam  menghambat  bakteri  Gram  negatif. Menurut  Davidson et  al (2005),  senyawa antibakteri  yang  berupa  asam-asam  organik memiliki daya hambat yang lebih besar terhadap bakteri  Gram  negatif.  Dalam  penelitian  yang dilakukan  oleh  West et  al (2012)  aktivitas antiabakteri berhubungan dengan adanya kandungan  asam  iridoat  pada  buah  mengkudu, khususnya  asam  deasetilasperulosida  dan  asam asperulosida.
Secara  umum  pembentukan  daerah  zona hambat  pada  bakteri  gram  positif  lebih  besar daripada pembentukan zona hambat pada bakteri gram  negatif.  Hasil  ditunjukkan  pada  daerah zona  hambat  yang  diberikan  oleh  kombinasi
ekstrak  buah  mengkudu  dan  daun  sirsak  dengan memberikan zona bening sebesar  22, 25 dan 25, 5 mm pada bakteri E. Coli dan S. Aureus . Hal ini terjadi  karena  adanya  perbedaan  senstivitas bakteri  terhadap  antibakteri  dipengaruhi  oleh struktur dinding sel bakteri. Bakteri gram positif cenderung  lebih  sensitif  terhadap  antibakteri, karena  struktur  dinding  sel  bakteri  gram  positif lebih  sederhana  dibandingkan  struktur  dinding sel  bakteri  gram  negatif  sehingga  memudahkan senyawa  antibakteri  untuk  masuk  ke  dalam  sel bakteri gram positif.
Bakteri  gram  positif  memiliki  struktur dinding  sel  dengan  lebih  banyak  peptidoglikan, sedikit  lipid  dan  dinding  sel  mengandung polisakarida  (asam  teikoat).  Asam  teikoat merupakan  polimer  yang  larut  dalam  air,  yang berfungsi  sebagai  transport  ion  positif  untuk keluar  atau  masuk.  Sifat  larut  air  inilah  yang menunjukkan  bahwa  dinding  sel  bakteri  gram positif  bersifat  lebih  polar.  Sedangkan  senyawa flavonoid  dalam  buah  mengkudu  merupakan bagian yang bersifat polar sehingga lebih mudah menembus  lapisan  peptidoglikan  yang  bersifat polar  daripada  lapisan  lipid  yang  nonpolar. Sehingga  menyebabkan  aktivitas  penghambatan pada  bakteri  gram  positif  lebih  besar  daripada bakteri  gram  negatif.  Bakteri  gram  negatif  lebih banyak mengandung lipid, sedikit peptigoglikan, membran  luar  berupa  bilayer  (berfungsi  sebagai pertahanan  selektif  senyawa-senyawa  yang keluar  atau  masuk  sel  dan  menyebabkan  efek toksik).  Membran  luar  terdiri  dari  fosfolipid (lapisan  dalam),  dan  lipopolisakarida  (lapisan luar)  tersusun  atas  lipid  A,  yang  bersifat nonpolar.  Hal  ini  yang  menyebabkan  senyawa antibakteri pada buah mengkudu lebih sulit untuk masuk ke dalam sel sehingga aktivitas antibakterinya  lebih  lemah  dibandingkan  pada bakteri gram positif.

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  dapat  ditarik  kesimpulan bahwa  ekstrak  buah  mengkudu  dan  daun  sirsak dapat  menghambat  aktivitas  bakteri  E.  Coli  dan S.  Aureus  pada  konsentrasi  250,  500,  dan  1000 µg  dengan  konsentrasi  yang  memberikan  zona hambat  bakteri  E.  Coli  paling  besar  di konsentrasi  1000  µg  yang  menghasilkan  zona bening  sebesar  20    dan  16,5  mm  untuk  ekstrak buah mengkudu dan daun sirsak, sedangkan zona hambat  bakteri  S.  Aureus  paling  besar  juga  di konsentrasi  1000  µg  yang  menghasilkan  zona bening  sebesar  19,  25  dan  15,87  mm  masing- masing ekstrak buah mengkudu dan daun sirsak.
Hasil  kombinasi  ekstrak  buah  mengkudu  dan daun sirsak pada konsentrasi 1000 µg menghasilkan  zona  hambat  bakteri  E.Coli  dan S.Aureus  sebesar  22,  625  dan  25,5  mm  dengan kontrol positif sebesar 43,625 dan 46, 375 mm.

## DAFTAR PUSTAKA
Antara,  N.T,  Pohan,  H.G.  dan  Subagja.  2001. Pengaruh  tingkat  kematangan  dan  proses terhadap  karakteristik  sari  buah  mengkudu. Warta  IHP/ J.  of  Agro-  Based  Industry 18(1−2): 25−31.
Buchanan,  R.E  dan  N.E.  Gibbons.1974. Bergey Manual  of  Determinative  Bacteriology  8th edition .  Baltimore  USA:  The  Williams  & Wilkins Company Davis  dan  Stout.  1971.  Disc  Plate  Method  Of Microbiological  Antibiotic  Essay. Journal  Of Microbiology . 22 : 4 – 9. Dwidjoseputro, D. 1982. Dasar-dasar Mikrobiologi .Djambatan. Jakarta.
Figueroa,  L.  V.,  Guillermo  C.R.,  Cedillo  F.D., Lopez  M.C.R.,  Rosa  M.,    Magaña  E.,  Linda V.,  and  Fuentes  G.,  2008,  Evaluation  and
Characterization  of  Antimicrobial  Properties of Pregnenolone-derivatives on Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae and Escherichia
coli,
Microbiologia , 50: 13-18 Harborne,  J.  B.  1987. Metode  Fitokimia
Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan ,  Edisi  kedua.  diterjemahkan  oleh
Kosasih  Padmawinata  dan  Iwang  Soedira.
ITB Press. Bandung.
Jawetz,  E,  Menick  dan  Adelberg.  2001.
Mikrobiologi Kedokteran
Edisi XXII .
Diterjemahkan oleh  Bagian  Mikrobiologi
Fakultas Kedokteran  Universitas  Airlangga. Salemba Medika. Jakarta. Karsinah. 1994. Mikrobiologi Kedokteran Edisi Revisi . Jakarta: Binaputra Aksara
Mardiana,  L.  dan  Ratnasari,  J.  2011. Ramuan dan Khasiat Sirsak . Penerbit Penebar
Swadaya.  Jakarta. Radji,  M.,  2011, Buku  Ajar  Mikrobiologi Panduan Mahasiswa Farmasi dan Kedokteran . Buku Kedokteran EGC. Jakarta.
Supardi, dan Sukamto. 1999. Mikrobiologi Dalam Pengolahan Dan Keamanan Produk Pangan. Penerbit Alumni. Bandung.
Odewole,  S.O,  and  Ojewole,  J.AO.  2006.
Protective  Effects  Annona  muricata  Linn. (Annonaceae)  Leaf  Aqueous  Extract  on Serum  Lipid  Profiles  and  Oxidative  Stress  in Hepatocytes of Streptozotocin-Treated
Diabetic  Rats. African  Journal  of  Biomedical Research. Vol.9, No.4; 173-180.
Sunarjono,  H.  2005. Sirsak  dan  Srikaya:  Budi Daya  Untuk  Menghasilkan  Buah  Prima . Penebar Swadaya. Jakarta. Sitepu dan Josua. 2012. Perbandingan Efektifitas Daya  Hambat  terhadap  Staphylococcus Aureus  dari  Berbagai  Jenis  Ekstrak  Buah Mengkudu  (Morinda  Citrofolia  Liin)  (  In vitro). Skripsi.  Universitas  Sumatera  Utara.
Medan.
Spinella M. 2002. The importance of pharmacological  synergy  in  psychoactive herbal medicines. Alternative Medicine Review. 7(2). 130-137.
Vandepitte,  et  al.  2005. Prosedur  Laboratorium Dasar  untuk  Bakteriologis  Klinis. Edisi  2.
Buku Kedokteran EGC, Jakarta.
Warsa, U. C. 1994. Kokus Positif Gram, dalam Buku Ajar Mikrobiologi Kedokteran Edisi Revisi. Binarupa Aksara. Jakarta.
West  J  Brett,  Stephen  K.  Palmer,  Shixin  Deng,
Afa  K.  Palu.  2012.  Antimicrobial  activity  of an iridoid rich extract from Morinda citrifolia fruit  Curr. Res.  J.  Biol.  Sci .,  4  (1).
52–54