Daya Hambat Kombinasi Ekstrak Pegagan ( Centella asiatica,
L. ) dan Peppermint terhadap Pertumbuhan
Streptococcus mutans
(Inhibition Activity of Combination of Centella asiatica, L. and Peppermint (Mentha piperita, L.) Extract against
Streptococcus mutans)
Lutfi Lailia Sofidiana, Erna Sulistyani, Pujiana Endah Lestari Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Jember Jl. Kalimantan No. 37, Kampus Tegal Boto, Jember, Jawa Timur 68121 e-mail: ayayyana@gmail.com

## Abstract
Pegagan  leaves  and  peppermint  leaves  contain  antibacterial  and  refreshed  breath  so  that  the leaves  of  both  these  plants  have  the  potential  to  be  used  as  a  mouthwash  to  prevent  many conditions of the oral cavity including caries. One way to reduce the incidence of caries is to use mouthwash  that  can  inhibit  the  growth  of  caries-causing  bacteria,  namely  Streptococcus mutans.  The  use  of  chemical  mouthwash  many  side  effects.  Therefore,  it  is  necessary  to innovate natural-based mouthwashes that can inhibit the growth of S. mutans with minimal side effects. This study  aimed to proved the antibacterial power of the combination  of pegagan leaf extract  (Centella  asiatica)  and  peppermint  leaf  (Mentha  piperita)  in  inhibiting  the  growth  of  S. mutans.  This study used the disc diffusion methode  of 4 treatment groups (5%, 10%, 20% and 40%  extract),  positive  control  group  (chlorhexidine),  and  negative  control  group  (sterile akuades).  Data  were  analyzed  using  Kruskal-Wallis  Test  and  Mann-Whitney  test.  The combination  extract  of  pegagan  (Centella  asiatica)  and  peppermint  (Mentha  piperita)  has  an antibacterial effect and can inhibit the growth of S. mutans.
Keywords: Antibacterial, Streptococcus mutans, Centella asiatica, peppermint extract .

## Abstrak
Daun  pegagan  dan  daun  peppermint  memiliki  kandungan  antibakteri  dan  dapat  menyegarkan nafas  sehingga  keduanya  mempunyai  potensi  untuk  dijadikan  obat  kumur  yang  dapat mencegah berbagai kondisi rongga  mulut termasuk karies. Salah satu cara untuk menurunkan angka  kejadian  karies  adalah  dengan  menggunakan  obat  kumur  yang  dapat  menghambat pertumbuhan  bakteri  penyebab  karies  yaitu Streptococcus  mutans .  Penggunaan  obat  kumur kimiawi  banyak  menimbulkan  efek  samping.  Oleh  karena  itu,  diperlukan  adanya  inovasi  obat kumur  berbahan  dasar  alam  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan S.  mutans dengan  efek samping yang minimal. Penelitian ini bertujuan untuk  membuktikan daya antibakteri kombinasi ekstrak  daun  pegagan  dan  daun  peppermint  dalam  menghambat  pertumbuhan S.  mutans . Penelitian  ini  menggunakan  metode  difusi  cakram  yang  terdiri  dari  6  kelompok  penelitian  (4 kelompok  perlakuan  dan  2  kelompok  kontrol).  Kelompok  perlakuan  terdiri  dari  ekstrak konsentrasi  5%,  10%,  20%,  dan  40%.  Sedangkan  untuk  kelompok  kontrol  terdiri  dari  kontrol positif  ( chlorhexidine )  dan  kontrol  negatif  (akuades  steril).  Analisis  data  menggunakan  uji Kruskal-Wallis dan  uji Mann-Whitney .  Ekstrak  kombinasi  pegagan  ( Centella  asiatica )  dan peppermint ( Mentha piperita ) memiliki efek antibakteri dan dapat menghambat pertumbuhan S. mutans .
Kata kunci: Antibakteri, Streptococcus mutans, ekstrak pegagan, peppermint.

## Pendahuluan
Streptococcus mutans merupakan bakteri anaerob fakultatif Gram-positif berbentuk  bulat  khas  membentuk  rantai. S. mutans merupakan anggota flora normal yang paling  banyak  ditemukan. S.  mutans memiliki peran  penting  dalam  menjaga  kesehatan membran mukosa. S. mutans banyak ditemukan  pada  rongga  mulut  manusia,  dan memegang  peranan  krusial  pada  proses terjadinya  karies  gigi.  Karies  gigi  dapat mempengaruhi kesehatan umum individu [1].
Karies  gigi  merupakan  salah  satu masalah  utama  dalam  bidang  kedokteran  gigi yang hingga saat ini masih banyak terjadi pada masyarakat  Indonesia.  Pada  hasil  Riskesdas 2018  angka  kejadian  karies  telah  mencapai angka 57.6% dan angka ini meningkat sebesar 4,4%  dibanding  hasil  Riskesdas  2013.  Salah satu  cara  untuk  menurunkan  angka  kejadian karies  adalah  dengan  menggunakan  obat kumur  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri penyebab karies yaitu S. mutans [2]. Karies  dapat  dicegah  dengan  berbagai cara, salah satunya menggunakan obat kumur klorheksidin.  Namun  penggunaan  klorheksidin dalam  jangka  waktu  yang  lama  dapat menimbulkan  beberapa  efek  samping  seperti menimbulkan  staining  pada  gigi,  mengganggu fungsi  indera  pengecapan,  dan  mengganggu seimbangan  flora  normal  dalam  rongga  mulut [3]. Oleh karena itu, diperlukan adanya inovasi obat  kumur  berbahan  dasar  alam  yang  dapat menghambat  pertumbuhan S.  mutans dengan efek samping yang minimal.
Pegagan  ( Centella  asiatica )  merupakan tumbuhan liar yang dapat ditemui di tepi jalan, di  daerah  persawahan,  di  sela-sela  rumput,  di tanah  yang  sedikit  lembab  atau  sedikit ternaungi,  dan  dapat  ditemukan  hampir  di seluruh  wilayah  Indonesia,  baik  di  dataran rendah  maupun  dataran  tinggi.  Pegagan diketahui  memiliki  fungsi  pembersih  darah sehingga dapat melancarkan peredaran darah, peluruh kencing, dan menghentikan pendarahan.  Selain  itu,  pegagan  dapat meningkatkan kapasitas saraf memori, sebagai  agen  antibakteri,  tonik,  antiplasma, hingga  antiinflamasi  dan  antialergi  [4]  [5]. Kandungan bahan aktif yang ditemukan dalam ekstrak pegagan antara lain alkaloid, karbohidrat, glikosida, steroid, protein, flavonoid, tanin, antrakuinon, terpenoid, saponin,  asam  amino,  dan  bahan  aktif  lainnya [6]. Peppermint  ( Mentha  piperita )  adalah tumbuhan  yang  banyak  dibudidayakan  di sebagian  besar  dunia,  termasuk  di  Indonesia. Secara tradisional, peppermint telah
digunakan dalam beberapa industri di Indonesia.  Salah  satunya  ialah  dalam  industri kesehatan,  peppermint  banyak  digunakan sebagai  herbal  oleh  masyarakat  Indonesia. Peppermint  tumbuh  di  sebagian  besar  negara dengan  iklim  yang  berbeda  [7].  Daun peppermint  dipercaya  dapat memulihkan stamina  tubuh,  meredakan  sakit  kepala, mencegah demam, mempunyai sifat antioksidan,  antikanker,  dan  dapat  menjaga kesehatan  mata.  Selain  itu,  daun  peppermint juga memiliki kandungan yang bersifat antibakteri dan antialergenik [8].
Daun  pegagan  dan  daun  peppermint memiliki  kandungan  antibakteri  dan  dapat menyegarkan nafas sehingga daun dari kedua tumbuhan  ini  mempunyai  potensi  untuk dijadikan  obat  kumur.  Berdasarkan  penelitian oleh Mariappan Senthilkumar, diketahui bahwa daun  pegagan  dan  daun  peppermint  memiliki kandungan yang bersifat antibakteri. Kandungan  tersebut  antara  lain  flavonoid, tanin,  saponin,  terpenoid  dan  steroid.  Daun pegagan  memiliki  efek  antibakteri  dan  efektif pada  konsentrasi  50%,  75%,  dan  100%. Kandungan  bahan  dalam  peppermint  juga mempunyai  sifat  antibakteri  [6].  Selain  itu, daun  peppermint  mengandung  mentol  yang dapat  menyegarkan  nafas  dan  menyamarkan bau  tidak  sedap  pada  mulut  [9].  Kombinasi kedua  bahan  tersebut  mempunyai  potensi untuk  dapat  digunakan  sebagai  obat  kumur yang  menyegarkan  nafas  dan  mencegah karies  dengan  mengurangi  pertumbuhan S. mutans .  Kombinasi  dari  keduanya  diharapkan dapat  memperkuat  daya  antibakteri  dan memenuhi standar rasa dari obat kumur.
Untuk  menghambat  pertumbuhan S. mutans ,  penulis  akan  melakukan  penelitian dengan  judul  “Daya  Hambat  Kombinasi Ekstrak  Daun  Pegagan  ( Centella  asiatica,  L. ) dan  Daun  Peppermint  ( Mentha  piperita,  L. ) terhadap Pertumbuhan Streptococcus mutans ” secara  in  vitro  dengan  menggunakan  metode difusi  cakram  pada  konsenterasi  5%,  10%, 20%, dan 40%.

## Metode Penelitian
Jenis penelitian yang dilakukan merupakan experimental laboratories secara in vitro  dengan  menggunakan  rancangan the post  test  only  control  group  design. Penelitian ini  dilaksanakan  bulan  Januari  2021 –Februari 2021  di  Laboratorium Bioscience RSGM Fakultas  Kedokteran  Gigi  Universitas  Jember dan Laboratorium Mikrobiologi Research Center Fakultas  Kedokteran  Gigi  Universitas Airlangga.  Identifikasi S.  mutans dilakukan  di Laboratorium  Mikrobiologi  Research  Center
Fakultas
Kedokteran
Gigi Universitas
Airlangga,  dan  identifikasi  pegagan  dan peppermint  dilakukan  di  UPT  Pengembangan Pertanian  Terpadu,  Politeknik  Negeri  Jember, Kabupaten Jember, Jawa Timur.
Sampel  berjumlah  24  yang  terdiri  dari  6 kelompok  penelitian,  yaitu  ekstrak  kombinasi pegagan dan peppermint dengan konsenterasi 5%,  10%,  20%,  40%,  kontrol  positif  (suspensi
S.  mutans dan  klorheksidin),  dan  kontrol negatif  (suspensi S.  mutans dan  akuades steril). Metode yang digunakan dalam penelitian adalah metode difusi cakram.
Pertama-tama
adalah tahapan persiapan.  Pada  tahap  ini,  dilakukan  uji identifikasi bakteri dan uji identifikasi tanaman, sterilisasi  alat,  pembuatan  ekstrak  kombinasi daun  pegagan  dan  peppermint.  Proses pembuatan ekstrak dilakukan secara maserasi menggunakan  pelarut  etanol  96%.  Kemudian dilanjutkan  dengan  mempersiapkan  media MHA, MHB, dan suspensi S. mutans.
a. Pembuatan  Ekstrak  Kombinasi  Pegagan dan Peppermint
Pada  proses  pembuatan  ekstrak,  bagian yang  digunakan  adalah  seluruh  bagian daun tumbuhan. Daun pegagan sebanyak 3 kg dan daun peppermint sebanayk 3 kg dicuci  bersih  menggunakan  air  mengalir, ditiriskan, kemudian diangin-anginkan selama  3  hari  untuk  menghilangkan  sisa air.  Daun  pegagan  dan  peppermint selanjutnya  dipanaskan  dan  dikeringkan di  dalam  oven  dalam  suhu  50º  C  selama 36 jam. Setelah kering, dilakukan penggilingan  menggunakan  blender  dan diayak  hingga  terbentuk  serbuk  halus.
Serbuk  sebanyak  333,3  gram  (serbuk pegagan  sebanyak  166,66  gram  dan serbuk  peppermint  sebanyak  166,66 gram)  direndam  pada  1  liter  etanol  96% dengan perbandingan 1 : 3 selama 72 jam dalam wadah  tertutup  dan  diaduk manual hingga  homogen  setiap  24  jam.  Hasil rendaman  disaring dengan  menggunakan kertas saring.
Selanjutnya etanol diuapkan  dengan  menggunakan rotary evaporator pada suhu 40º C selama 3 jam dengan kecepatan 180 rpm untuk maserat dengan volume 500 ml.
Penguapan  dihentikan  bila  pelarut  tidak menetes lagi atau ekstrak telah mengental. Ekstrak kemudian dipanaskan di dalam oven dengan suhu 50º C selama 2  jam.  Hasil  akhir  didapatkan  sediaan ekstrak daun pegagan dan daun peppermint  konsentrasi  100%.  Ekstrak disimpan  di  dalam  kulkas  bersuhu  2º  C. Selanjutnya dilakukan pengenceran
ekstrak daun pegagan dan daun peppermint  konsentrasi 100%  untuk mendapatkan ekstrak dengan konsentrasi 40%,  20%,  10%,  dan  5%.  Proses pengenceran menggunakan akuades steril. Pengenceran ekstrak daun pegagan  dan  daun  peppermint  dilakukan di dalam laminar flow dan hasil pengenceran  tersebut  dimasukkan  pada tabung eppendorf .  Rumus  pengenceran yang digunakan adalah:
V 1 x M 1 = V 2 x M 2 Keterangan : V 1 : Volume ekstrak konsentrasi 100% V 2 : Volume  ekstrak yang akan dibuat M 1 : Konsentrasi awal (ekstrak 100%) M 2 : Konsentrasi ekstrak yang akan dibuat.
b. Pembuatan  Media Mueller  Hinton  Agar /
MHA Pembuatan MHA dilakukan dengan mencampur  38  g  bubuk  MHA  dan  1L akuades steril dan dihomogenkan dengan alat hotplate  stirrer dan  dimasukkan dalam water  bath sampai  homogen. Media  MHA  disterilkan  dan  dilakukan  uji sterilisasi dengan inkubasi pada suhu 37º C  selama  24  jam  untuk  memastikan media  MHA  tidak  terkontaminasi.  Media MHA  akan  digunakan  sebagai  media biakan S. mutans . c. Pembuatan Stok S. mutans Pembuatan  stok S.  mutans dilakukan untuk  memperbanyak  bakteri  yang  akan digunakan  dalam  penelitian.  Pembuatan stok S. mutans dilakukan dengan mengambil 1 ose biakan murni S. mutans yang didapatkan dari laboratorium Mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran  Gigi
Universitas Airlangga, kemudian diinokulasikan  pada  media  MHA  dalam petridish . Selanjutnya media MHA dimasukkan  ke  dalam  inkubator  pada suhu 37º C selama 24 jam.
d. Mempersiapkan Media Cair Mueller Hinton Broth / MHB Mueller  Hinton  Broth merupakan  media penyubur  dalam  bentuk  cair  untuk pertumbuhan  bakteri  yang  digunakan dalam pembuatan suspensi. MHB sebanyak  21  g  ditimbang  menggunakan neraca  dan  mengukur  akuades  steril sebanyak  1  liter  dengan  gelas  ukur. Akuades  steril  dan  MHB  dimasukkan dalam  botol  kaca,  dipanaskan  dalam water bath hingga mendidih dan homogen. Media MHB disterilkan menggunakan autoclave dengan  suhu 121º C selama 15-20 menit dan dilakukan uji  sterilisasi  dengan  inkubasi  pada  suhu
37º  C  selama  24  jam  untuk  memastikan media  MHB  tidak  terkontaminasi.  Media MHB digunakan untuk membuat suspensi bakteri S. mutans.
e. Mempersiapkan  Suspensi  Bakteri S. mutans Pembuatan  suspensi  dilakukan  di  dalam strerile  bench  laminar  flow .  Suspensi dibuat dengan menambah 1 ose suspensi bakteri S. mutans ke dalam tabung reaksi yang berisi 2 ml MHB. Selanjutnya tabung reaksi  ditutup  menggunakan  kapas  dan diinkubasi  pada  suhu  37º  C  selama  24 jam [10]. Pertumbuhan S. mutans ditandai dengan  adanya  kekeruhan  pada  media. Setelah  24  jam  suspensi S.  mutans dikocok  dengan thermolyne. Setelah  itu dilakukan pengukuran absorbansinya dengan standar 0,5 Mc Farland. Pembuatan  suspensi  sesuai  standar protokol National  Commitee  for  Clinical Laboratory Standards .
f. Pengenceran Suspensi S. mutans Hasil  pembuatan  suspensi  bakteri S. mutans yang dilakukan dengan menggunakan  standar Mc  Farland 0,5 kemudian  diencerkan  menjadi  10 -1 dan
10 -2 dan
menunjukkan jumlah pertumbuhan  koloni  yang  masih  padat. Konsentrasi bakteri yang digunakan adalah pengenceran 10 -3 . Suspensi bakteri  diencerkan  dengan  pengenceran seri untuk mendapatkan pengenceran 10 - 3 . Pengenceran dilakukan dengan menyiapkan  tabung eppendorf sebanyak
3  buah  dengan  tiap  tabungnya  telah  diisi akuades  steril  0,9  ml  maka  didapatkan pengenceran  10 -1 .  Kemudian  tabung dihomogenkan
dengan
vortex.
Selanjutnya pada tabung 2 diambil 0,1 ml dari tabung 1 maka didapatkan
pengenceran  10 -2 .  Kemudian  tabung dihomogenkan dengan
vortex . Selanjutnya pada tabung 3 diambil 0,1 ml dari tabung 2 maka didapatkan pengenceran  10 -3 .  Kemudian  tabung dihomogenkan dengan vortex.
Selanjutnya  adalah  tahapan  perlakuan. Tahapan perlakuan dilakukan dengan mempersiapkan  6  tabung eppendorf yang diletakkan  di  dalam laminar  flow .  Tabung tersebut  masing-masing  diberi  nomor  urut  1-6 menggunakan  kertas  label.  Tabung  1  diberi bahan  uji  ekstrak  daun  pegagan  dan  daun peppermint  konsentrasi  40%  sebanyak  1  ml. Tabung  2  diberi  bahan  uji  ekstrak  daun pegagan  dan  daun  peppermint  konsentrasi 20% sebanyak 1 ml. Tabung 3 diberi bahan uji ekstrak  daun  pegagan  dan  daun  peppermint
konsentrasi  10%  sebanyak  1  ml.  Tabung  4 diberi  bahan  uji  ekstrak  daun  pegagan  dan daun  peppermint  konsentrasi  5%  sebanyak  1 ml.  Tabung  5  diberi chlorhexidine 0,2% sebanyak  1  ml  sebagai  kontrol  positif  dan tabung  6  diberi  akuades  steril  sebanyak  1  ml sebagai  kontrol  negatif.  Selanjutnya  suspensi bakteri S.  mutans sebanyak  100  µl,  dilakukan pengenceran
10 -3 . Seluruh tabung dihomogenkan dengan vortex. Aktivitas antibakteri  ekstrak  etanol  daun  pegagan  dan peppermint  dievaluasi  dengan  menggunakan metode agar well diffusion assay (Perez et al., 1990).  Dalam  metode  ini  100  µl  kultur S. mutans diinokulasi  pada  media  MHA  dengan ketebalan  4  mm  dalam petridish .  Selanjutnya kertas  cakram  ditetesi  bahan  uji  sesuai kelompok perlakuan dalam tabung 1-6 menggunakan mikropipet kemudian diletakkan pada  permukaan  media  secara  aseptik. Seluruh petridish diinkubasi  dengan  suhu  37º C selama 24 jam.
Selanjutnya adalah tahapan pengamatan.  Pengamatan  dilakukan  dengan cara  mengukur  diameter  zona  hambat.  Zona hambat  merupakan  aktivitas  antibakteri  yang terhambat.  Keberadaan  zona  hambat  ditandai dengan  terbentuknya  area  bening  disekitar kertas cakram pada media agar. Zona hambat diukur  diameternya  menggunakan  jangka sorong  sebanyak  tiga  kali  pengulangan  dan hasil akhir adalah rata-rata dari hasil pengukuiran dengan tiga kali pengulangan. Data  yang  diperoleh  dilakukan  uji normalitas  menggunakan  uji Shapiro-Wilk dan uji  homogenitas  menggunakan Levene  Test . Selanjutnya dilakukan uji statistik non parametrik, yaitu Kruskall-Wallis yang kemudian  dilanjutkan  dengan  uji Mann- Whitney untuk  mengetahui  apakah  ada perbedaan antar kelompok penelitian.

## Hasil
Hasil  penelitian  mengenai  daya  hambat antibakteri ekstrak kombinasi pegagan ( Centella  asiatica )  dan  peppermint  ( Mentha piperita ) terhadap S. mutans yang dilaksanakan  pada  Januari  2021  -  Februari 2021 di Laboratorium Bioscience Rumah Sakit Gigi  dan  Mulut  Fakultas  Kedokteran  Gigi Universitas Jember dan Laboratorium Mikrobiologi Research Center Fakultas
Kedokteran  Gigi  Universitas  Airlangga  dapat dilihat pada Gambar 1 sebagai berikut:
Gambar 1. Hasil Penelitian
Hasil penghitungan nilai rata-rata jumlah koloni S. mutans ditunjukkan pada Tabel 1.
Tabel  1. Nilai  rata-rata  diameter  zona  hambat S.  mutans dan  standar  deviasi
pada seluruh kelompok .
Kontrol Negatif 5% 10% 20% 40% Kontrol Positif Rerata ± SD 00,00 ± 0  00,00 ± 0 11,59 ± .53600 13,83 ± .31754 15,68 ± .23274 20,54 ± .24958
Tabel  1  menunjukkan  diameter  zona hambat  ekstrak  kombinasi  pegagan  ( Centella asiatica )  dan  peppermint  ( Mentha  piperita ) terhadap  pertumbuhan S.  mutans ,  pada masing-masing  kelompok  perlakuan  dengan  4 kali pengulangan. Berdasarkan hasil penelitian,  kelompok  kontrol  positif  memiliki zona  hambat  paling  besar,  diikuti  oleh kelompok  ekstrak  40%,  20%,  dan  10%. Semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak  yang digunakan,  semakin  besar  pula  zona  hambat yang terbentuk. Pada kontrol positif didapatkan rata-rata diameter zona hambat sebesar 20,54 mm, pada ekstrak konsentrasi 40% didapatkan rata-rata diameter zona hambat sebesar 15,68 mm, pada ekstrak konsentrasi 20% didapatkan rata-rata diameter zona hambat sebesar 13,83 mm, pada ekstrak konsentrasi 10% didapatkan rata-rata diameter zona hambat sebesar 11,59 mm.  Sedangkan  untuk  kelompok  kontrol negatif  dan  ekstrak  konsentrasi  5%  tidak terbentuk zona hambat.
Data  hasil  penelitian  yang  diperoleh pada  masing-masing  kelompok  penelitian selanjutnya dianalisis secara statistik. Berdasarkan hasil uji normalitas menggunakan uji  Shapiro  Wilk,  nilai  yang  diperoleh  untuk kelompok  kontrol  positif  (p=0.697),  ekstrak konsentrasi 40% (p=0.998), ekstrak konsentrasi  20%  (p=0.813),  dan  ekstrak konsentrasi  10%,  (p=0.977),  sehingga  dapat disimpulkan  data  berdistribusi  normal  karena nilai p>0.05. Berdasarkan hasil uji homogentitas  menggunakan  uji  Levene,  nilai yang  diperoleh  adalah  p  =  0.013  (p<0.05) sehingga dapat disimpulkan data tidak homogen.  Untuk  menguji  perbedaan  dalam
kelompok  penelitian  dapat  digunakan  uji  non- parametrik Kruskal Wallis .
Hasil  dari  uji  non-parametrik Kruskal Wallis diperoleh  nilai  p  =  0,000  (p<0.05)  yang memiliki  arti  bahwa  rata-rata  diameter  zona hambat  di  antara  seluruh  kelompok  penelitian memiliki  perbedaan  signifikan.  Selanjutnya untuk mengetahui perbedaan rata-rata diameter  zona  hambat  dilakukan  uji Mann Whitney .
Hasil  uji Mann  Whitney pada  kelompok kontrol  positif,  konsentrasi  40%,  konsentrasi 20%,  konsentrasi  10%,  konsentrasi  5%,  dan kontrol  negatif  menunjukkan  bahwa  terdapat perbedaan  signifikan  antar  kelompok  lebih dominan daripada yang tidak memiliki perbedaan  signifikan.  Perbandingan  antara kelompok  kontrol  negatif  dan  konsentrasi  5% tidak menunjukkan adanya perbedaan signifikan.  Hal  ini  dikarenakan  pada  kedua kelompok  tersebut  tidak  menghasilkan  zona hambat terhadap pertumbuhan S. mutans.

## Pembahasan
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa ekstrak  kombinasi  pegagan  ( Centella  asiatica ) dan  peppermint  ( Mentha  piperita )  mempunyai kemampuan  untuk  menghambat  pertumbuhan S.  mutans .  Kemampuan  ini  ditunjukkan dengan  adanya  perbedaan  signifikan  pada  uji Kruskal  Wallis pada  rata-rata  zona  hambat yang  dibentuk.  Konsentrasi  yang  memiliki kemampuan  menghambat  pertumbuhan S. mutans adalah  konsentrasi  40%,  20%,  dan 10%  dengan  rata-rata  diameter  zona  hambat yang  berbeda.  Dari  hasil  analisis  data  dan mempertimbangkan  histogram  pada  gambar, dapat  ditarik  kesimpulan  bahwa  daya  anti bakteri  yang  paling  besar  didapatkan  pada konsentrasi  40%,  diikuti  dengan  konsentrasi 20% dan 10%.
Semakin bertambah konsentrasi ekstrak pegagan  dan  peppermint  yang  digunakan, semakin  bertambah  pula  diameter  zona hambat  yang  dihasilkan.  Hal  ini  dikarenakan adanya  kenaikan  kandungan  bahan  aktif seiring  dengan  adanya  kenaikan  konsentrasi. Pada  ekstrak  konsentrasi  40%  terdapat  lebih banyak  bahan  aktif  dibandingkan  ekstrak konsentrasi 20% dan 10%, sehingga kemampuannya
dalam
menghambat pertumbuhan S.  mutans lebih  besar  dan menghasilkan  diameter  zona  hambat  yang lebih besar pula.
Pada kelompok perlakuan kontrol negatif dan konsentrasi 5% tidak menghasilkan zona hambat terhadap pertumbuhan S.  mutans. Hal  ini  dapat disebabkan  karena  kandungan  antibakteri
yang  terkandung  dalam  kelompok  kontrol negatif  dan  kelompok  ekstrak  konsentrasi  5% terlalu  rendah  sehingga  tidak  cukup  untuk menghambat  pertumbuhan S.  mutans .  Daya antibakteri  akan  menurun  seiring  dengan penurunan  dari  konsentrasi  yang  dapat diketahui  dari  diameter  zona  bening  yang terbentuk di sekitar kertas cakram.
Penelitian
ini menggunakan chlorhexidine 0,2%  sebagai  kelompok  kontrol positif.  Dari  hasil  analisis  data  diketahui diameter  zona  hambat  yang  dihasilkan  oleh chlorhexidine 0,2%  lebih  besar  dari  semua kelompok  ekstrak  kombinasi  pegagan  dan peppermint.  Pada  penelitian  ini,  ekstrak kombinasi  pegagan  dan  peppermint  belum mampu  menyamai  daya  antibakteri  yang dihasilkan oleh chlorhexidine 0,2% terhadap S. mutans. Hal ini disebabkan karena chlorhexidine memiliki  molekul  bermuatan positif  (kation)  dan  sebagian  besar  molekul bakteri  bermuatan  negatif  (anion).  Hal  ini menyebabkan  perlekatan  kuat  antara  molekul chlorhexidine dengan molekul bakteri. Chlorhexidine akan  menyebabkan  perubahan permeabilitas  membran  sel  bakteri  sehingga menyebabkan  keluarnya  sitoplasma  sel  dan komponen  sel  dengan  berat  molekul  rendah dari  dalam  sel  menembus  membran  sel sehingga  menyebabkan  kematian  sel  bakteri. Selain  itu  juga  bisa  dikarenakan  adanya interaksi  dari  kandungan-kandungan  yang berada  dalam  ekstrak  yang  belum  diketahui apakah  bekerja  secara  sinergis  ataupun antagonis. Selain itu telah diketahui konsentrasi  efektif  dari chlorhexidine untuk bisa  menghambat  pertumbuhan  dari  bakteri rongga  mulut.  Sedangkan  untuk  ekstrak kombinasi  pegagan  dan  peppermint  belum diketahui  konsentrasi  paling  efektif  untuk menghambat pertumbuhan S. mutans . Terdapat  faktor  yang  dapat  mempengaruhi hasil  penelitian  diantaranya  adalah  faktor yangdapat  mempengaruhi  kadar  bahan  aktif yang terkandung pada tumbuhan seperti faktor genetik  (sifat  bawaan  dari  induk  tumbuhan seperti  rasa, bau, komposisi kimiawi,  nilai gizi, dan  termasuk  kemampuan  produksinya),  dan faktor  lingkungan  (faktor  luar  dari  tumbuhan seperti  sinar  matahari,  temperature,  musim, tempat/daerah  pertumbuhan).  Faktor-faktor tersebut dapat mempengaruhi daya antibakteri dari kedua bahan tersebut. [11-14].
Pegagan dan peppermint memiliki komponen aktif utama yang bersifat antibakteri diantaranya  yaitu flavonoid,  tannin,  terpenoid, steroid, dan saponin . Mekanisme kerja flavonoid sebagai  antibakteri  dapat  melalui  3 cara  yaitu  dengan  menghambat  sintesis  asam nukleat, menghambat fungsi membran sel dan
menghambat  metabolisme  energi.  Kemapuan tannin sebagai  agen  anti  bakteri  yaitu  dengan kemampuannya melewati membran sel. Hal ini karena tanin dapat berpresipitasi pada protein. Tannin juga  dapat  menekan  jumlah  enzim glukosiltransferase. Saponin dapat meningkatkan  permeabilitas  membran  sel bakteri sehingga dapat mengubah struktur dan fungsi  membran,  menyebabkan  denaturasi protein  membran  sehingga  membran  sel  akan rusak  dan  lisis  [12].  Mekanisme  terpenoid sebagai  agen  anti  bakteri  adalah  bereaksi dengan  protein  transmembran  pada  membran luar dinding sel bakteri dan membentuk ikatan polimer  yang  kuat  sehingga  mengakibatkan rusaknya  protein  transmembran.  Rusaknya protein tersebut dapat mengurangi permeabilitas  dinding  sel  bakteri  yang  akan mengakibatkan  sel  bakteri  kekurangan  nutrisi, sehingga  pertumbuhan  bakteri  terhambat  atau mati.  Mekanisme  steroid  sebagai  antibakteri berhubungan  dengan  membran  lipid  dan sensitivitas  terhadap  komponen  steroid  yang menyebabkan kebocoran pada lisosom. Steroid  dapat  berinteraksi  dengan  membran fosfolipid sel yang bersifat permeabel terhadap senyawa-senyawa lipofilik sehingga menyebabkan  integritas  membran  menurun serta  morfologi  membran  sel  berubah  yang menyebabkan  sel  rapuh  dan  lisis.  Peran  dari komponen-komponen  aktif  tersebut  dapat menekan  pertumbuhan S.  mutans sehingga dapat  mengurangi  resiko  terjadinya  karies  [6] [11] [15].
Penelitian ini membuktikan bahwa terdapat aktivitas antibakteri ekstrak kombinasi pegagan  ( Centella  asiatica )  dan  peppermint ( Mentha  piperita )  terhadap  pertumbuhan S. mutans. Hal  ini  diperkuat  oleh  penelitian sebelumnya  yang  dilakukan  Azzahra,  dkk (2018)  tentang  Uji  Aktivitas  Ekstrak  Daun Pegagan  ( Centella  asiatica  (L).  Urb )  terhadap pertumbuhan Streptococcus mutans dan diperoleh  hasil  bahwa  aktivitas  antibakteri pegagan  efektif  pada  konsentrasi  10%,  20%, 40%,  60%,  dan  80%  dengan  diameter  zona hambat yang berbeda-beda. Hasil peneitian ini juga  diperkuat  pada  penelitian  Latifah,  dkk (2019) tentang Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Pegagan ( Centella asiatica ) terhadap Pertumbuhan
Streptococcus mutans Penyebab  Utama  Kavitas  secara  In  Vitro  dan diperoleh  hasil  bahwa  aktivitas  antibakteri efektif  pada  konsentrasi  5%,  10%,  dan  15% dengan  diameter  yang  berbeda.  Juga  pada penelitian  Jeyakumar  (2011)  tentang  Efisiensi Peppermint ( Menthe piperita )  terhadap Bakteri Patogen  dan  diperoleh  hasil  bahwa  aktifitas antibakteri peppermint efektif pada konsentrasi 5%,  10%,  15%,  20%,  25%,  dan  30%  dengan
diameter  zona  hambat  yang  berbeda-beda. Hal  ini  disebabkan  adanya  faktor  yang mempengaruhi  jalannya  dan  hasil  penelitian seperti faktor genetik tumbuhan, faktor lingkungan  tumbuhan,  dan  metode  selama penelitian  dilakukan.  Faktor-faktor  tersebut dapat  mempengaruhi  daya  antibakteri  dari ekstrak bahan yang digunakan [12] [16]-17].

## Simpulan dan Saran
Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan  dapat  ditarik  kesimpulan  bahwa ekstrak  kombinasi  pegagan  ( Centella  asiatica ) dan peppermint ( Mentha piperita ) memiliki efek antibakteri dan dapat menghambat pertumbuhan S. mutans . Saran  yang  dapat  diberikan  yang mungkin bermanfaat bagi penelitian mendatang  yaitu  Perlu  dilakukan  penelitian lebih  lanjut  mengenai  efek  antibakteri  ekstrak kombinasi  pegagan  ( Centella  asiatica )  dan peppermint ( Mentha piperita ) dalam konsentrasi yang berbeda dan dengan mikroorganisme berbeda.

## Daftar Pustaka
[1]  Ranganathan,  V.,  C.  H.  Akhila.  2019.
Streptococcus  mutans: Has  it  Become Prime  Perpetrator  for  Oral  Manifestation.
Journal of Microbiology & Experimentation . 7(4) : 207-213.
[2]  Departemen Kesehatan RI. 2018. Laporan  hasil  riset  kesehatan  dasar
(RISKESDAS)  nasional .  Jakarta:  Badan
Penelitian dan Pengembangan Kesehatan.
[3]  Nuniek NF, Nurachmah E, dan Gayatri D. Efektifitas  Tindakan  Oral  hygiene  Antara Povidone  Iodine  1%  dan  Air  Rebusan Daun  Sirih  di  Pekalongan. Jurnal  Ilmiah Kese- hatan . 2012. 4(1): 1-11.
[4]  Lasmadiwati,  E.,  Herminati,  H.  Indriani. 2004. Pegagan Meningkatkan Daya Ingat, Membuat Awet Muda, Menurunkan Gejala Stress  dan  Meningkatkan  Stamina.  Seri Agrisehat. Jakarta:  Penerbit  Penebar Swadaya.
[5]  Badan  POM  RI.  2010. Acuan  Sediaan Herbal. Vol.  5 Edisi I . Direktorat Obat Asli Indonesia.  Jakarta:  Badan  Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia.
[6]  Senthilkumar,  M.  2018.  Investigation  on Quantification  of  Bioactive  Compounds and  In  Vitro  Antibacterial  Property  of Important  Medical  Plant  of Centella asiatica (L.) Urban.International Journal of
Research
in Pharmacy
and
Pharmaceutical Sciences .3 (1): 127-132.
[7]  Badan POM RI. 2008. Informatorium Obat Nasional Indonesia . Jakarta: Badan Pengawas  Obat  dan  Makanan  Republik Indonesia.
[8]  Meamarbashi,  A.,  A.  Rajabi.  2013.  The Effect of Peppermint on Exercise Performance. Journal  of  the  International Society of Sports Nutrition 10:15.
[9]  Singh,  R.,  M.A.M  Shushni,  A.  Belkheir. 2015. Antibacterial and antioxidant activities  of  Mentha  piperita  L. Arabian Journal of Chemistry . 8 : 322-328.
[10]  Rahim,  Z.  H.,  H.  B.  S.  G.  Khan.  2006. Comparative  Studies  on  the  Effect  of Crude  Aquos  (CA)  and  Solvent  (CM) Extact  of  Clove  on  the  Cariogenic Properties  of Streptococcus  mutans . J Oral sci . 48: 117-123.
[11] Azzahra.  2018.  Uji  Aktivitas  Ekstrak  Daun Pegagan  ( Centella  asiatica  (L).  Urb ) terhadap Pertumbuhan Streptococcus mutans . Jurnal B-Dent . 5(1) 9-19.
[12] Majidah,  D.,  Fatmawati,  A.,  Gunadi,  A. 2014.  Daya  Antibakteri  Ekstrak  Daun Seledri  ( Apium  graveolens L.)  terhadap Pertumbuhan Streptococcus mutans sebagai  Alternatif  Obat  Kumur.  Artikel Ilmiah.  Jember:  Fakultas  Kedokteran  Gigi Universitas Jember.
[13] Rachmawati,  F.,  Nuria,  CM.  2011.  Uji Aktivitas  Antibakteri  Fraksi  Kloroform Ekstrak Etanol Pegagan ( Centella asitica ) serta Serta Identifikasi Senyawa Aktifnya. Jurnal. Semarang:  Fakultas  Farmasi Universitas Hasyim.
[14] Sofiani,  E.,  Mareta,  AD.  2014.  Perbedaan Daya  Antibakteri  Antara  Klorheksidin Diglukonat  2%  dan  Ekstrak  Daun  Jambu Biji  ( Psidium  guajava  linn )  Berbagai Konsentrasi. IDJ . Vol 3, No 1. Yogyakarta: Program  Studi  Pendidikan  Dokter  Gigi Muhammadiyah.
[15]  Prabowo.  2002. Centella  Anti  Radang. Jakarta: PT Intisari Mediatama.
[16] Latifah,  S.,  Aini,  N.,  Muhammad,  F., Rakhmawati,  A.  2019.  Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Pegagan  ( Centella asiatica ) terhadap Pertumbuhan Streptococcus  mutans Penyebab  Utama
Kavitas Secara In Vitro. Prosiding Seminar  Nasional  Jurusan  Pendidikan Biologi  Universitas  Negeri  Yogyakarta. ISBN 978-602-97298-6-3: B125-B130.
[17]  Jeyakumar,  E.,  R.  Lawrence,  and  T.  Pal. 2011.  Comparative  Evaluation  in  the Efficacy  of  Peppermint  ( Mentha  piperita )
Oil  with  Standards  Antibiotics  Against Selected  Bacterial  Pathogens. Asian Pacific  Journal  of  Tropical  Biomedicine . 1(2) : S253-S257.