## BIOSPECIES
ISSN : 19790902 E-ISSN : 2503-0426 DOI  : https://doi.org/10.22437/biospecies.v17i2.35582
UJI  BRINE  SHRIMP  LETHALITY  TEST  (BSLT)  EKSTRAK  ETANOL  96%  DAUN ANDE-ANDE LUMUT ( Selaginella doederleineii )
Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) of 96% Ethanol Extract of Ande-ande Lumut (Selaginella doederleineii) Leaves
Yunita Difa Prasticha 1 , Surahmaida 1*
1 Akademi Farmasi Surabaya
* Email : fahida1619@gmail.com
Selaginella doederleineii is a fern plant that is efficacious for treating coughs, pneumonia and broken bones.  Leaves are the primary medicinal parts. However, there has been no research regarding the toxicity of Selaginella doederleineii leaves. This study aims to evaluate potential toxicity  of  96%  ethanol  extract  of  Selaginella  doederleineii  leaves  against  shrimp  larvae ( Artemia  salina Leach)  using  the  Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT)  method.  The  toxicity value is shown by the LC50 value. This research method includes the extraction stage, larvae hatching stage, stock solutions and concentration dilutions of the extract preparation, toxicity test and LC50 value calculation. The toxicity test using 10 Artemia salina shrimp larvae were exposed to each test concentration (0 ppm, 1 ppm, 2 ppm, 3 ppm, 4 ppm, 5 ppm) in triplicate. Larval mortality was assessed after 24 hours to calculate mortality percentage and LC50. The results showed that the  LC50 value for the 96% ethanol extract of Selaginella doederleineii was  12.0221  ppm,  indicating  very  toxic.  It  can  be  concluded  that Selaginella  doederleineii leaves  exhibits  significat  toxicity  to  brine  shrimp  and  potential  to  be  developed  as  a  raw material for anti-cancer drugs.
Keywords : Artemia  salina,  brine  shrimp  lethality  test,  mortality,  Selaginella doederleineii, toxicity.
Ande-ande lumut ( Selaginella doederleineii ) merupakan tanaman paku yang berkhasiat untuk mengobati  batuk,  radang  paru  dan  patah  tulang.  Bagian  tanaman  ande-ande  lumut  yang berkhasiat  adalah  daunnya.  Namun  belum  ada  penelitian  mengenai  toksisitas  daun  ande- ande  lumut.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  potensi  ketoksikan  ekstrak  etanol  96% daun ande-ande lumut terhadap larva udang ( Artemia salina Leach) menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Nilai toksisitas ditunjukkan   dengan nilai LC 50 . Metode penelitian ini meliputi tahap ekstraksi, tahap penetasan larva, tahap pembuatan larutan induk dan  pengenceran  konsentrasi,  uji  toksisitas  dan  perhitungan  nilai  LC 50 .  Uji  toksisitas menggunakan 10 larva udang Artemia salina dimasukkan ke dalam tiga replikasi untuk setiap konsentrasi uji, yaitu 0 ppm (sebagai kontrol), 1 ppm, 2 ppm, 3 ppm, 4 ppm, 5 ppm. Setelah 24 jam, dihitung jumlah larva udang yang mati untuk perhitungan persentase kematian dan nilai  LC 50 .  Hasil  penelitian  menunjukkan  ekstrak  etanol  96%  daun  ande-ande  lumut ( Selaginella doederleineii ) menghasilkan nilai LC 50 sebesar 12,0221 ppm dan bersifat sangat toksik. Dapat disimpulkan bahwa ande-ande lumut berpotensi dikembangkan sebagai bahan baku obat anti kanker.
Kata  kunci : Artemia  salina,  brine  shrimp  lethality  test,  kematian,  Selaginella doederleineii, toksisitas.
Abstract Abstrak

## PENDAHULUAN
Tanaman  obat  mendapat  perhatian  besar dalam mengatasi permasalahan kesehatan. Saat ini  minat  penelitian  minat  terhadap  penelitian tanaman  berkhasiat  obat  semakin  meningkat. Tanaman  obat  merupakan  sumber  daya  hayati terkaya  untuk  obat  tradisional,  suplemen makanan, nutraseutikal, farmasi dan bahan kimia untuk obat sintetis. Obat herbal semakin diminati masyarakat sebagai alternatif pengobatan karena masayarakat percaya bahwa obat herbal minim  efek  samping  dibandingkan  dengan  obat kimiawi.  Hal  ini  yang  menyebabkan  pasar  dan permintaan  terhadap  obat  herbal  menjadi meningkat (Kabubii et al., 2015).
Untuk memastikan keamanan dan efektivitas  tanaman  obat,  diperlukan  pengujian farmakologi  dan  toksikologi  seperti  uji  toksisitas akut,  dosis  letal  dan  IC 50 (Konan  et  al.,  2022). Salah  satu  tanaman  obat  yang  akan  diteliti toksisitasnya  pada  penelitian  ini  adalah  ande- ande lumut ( Selaginella doederleineii ).
Ande-ande  lumut  adalah  anggota  famili Selaginellaceae  dan  umumnya  dikenal  dengan tanaman  paku  cakar  ayam,  rumput  solo  atau cemara kipas gunung (Sutomo & Fardila, 2013). Di Cina, tanaman ini dikenal dengan sebutan “da ye cai” dan “shi shang bai”. Ande-ande lumut berkhasiat untuk mengobati penyakit kardiovaskular, sakit tenggorokan, kanker nasofaring, kanker paru-paru dan tumor trofoblastik (Muema et al., 2022).
Sampai  saat  ini,  publikasi  mengenai toksisitas ande-ande lumut ( Selaginella doederleineii )  belum  ditemukan.  Penelitian  ini bertujuan  untuk  mengetahui  potensi  toksisitas ande-ande lumut terhadap larva udang A. salina dengan  metode  BSLT  dan  diharapkan  dapat dijadikan bahan referensi tentang potensi ande- ande lumut sebagai antikanker.

## METODE
Penelitian ini menggunakan metode penelitian  eksperimental  untuk  mengetahui  dan menganalisa  toksisitas  daun  ande-ande  lumut yang diekstrak menggunakan pelarut etanol 96% terhadap larva udang ( A. salina ) dengan metode BSLT. Uji toksisitas ini dilakukan di Laboratorium Farmakognosi Akademi Farmasi Surabaya.

## Sampel
Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah serbuk halus daun ande-ande lumut yang diperoleh  di  UPT  Laboratorium  Materia  Medica
Batu,  Jl.  Johor  No.  58  Malang.  Hewan  uji  yang digunakan adalah larva udang Artemia salina .

## Pembuatan Ekstrak Etanol 96% Daun Ande- ande Lumut
Proses  ekstraksi  menggunakan  metode maserasi.  Sebanyak  100  g  serbuk  halus  daun ande-ande  lumut  dimasukkan  ke  dalam  toples kaca,  lalu  ditambahkan  1000  mL  pelarut  etanol 96%. Diaduk rata dan direndam selama 72 jam. Selama proses maserasi, dilakukan pengadukan secara  berkala  agar  ekstrak  tercampur  rata dengan pelarut dan mempercepat  reaksi antara pelarut  dan  senyawa  yang  terkandung  di dalamnya.  Setelah  3  hari,  disaring  dengan  kain blacu  dan  filtratnya  diuapkan  menggunakan rotary  evaporator  pada  suhu  40  °C  hingga didapatkan ekstrak kental.

## Proses Penetasan Hewan Uji A. Salina
Disiapkan  toples  plastik  sebagai  wadah penetasan  larva  udang  ( A.  salina ).  Sebanyak 0,25 mg telur larva udang dimasukkan ke dalam toples  yang  yang  telah  berisi  500  ml  air  laut. Larva yang digunakan untuk uji toksisitas adalah larva yang berumur 48 Jam.

## Uji Bebas Etanol
Untuk memastikan ekstrak daun ande-ande lumut ini bebas dari pelarut, meskipun sudah di- evaporasi, maka perlu dilakukan uji bebas etanol. Sebanyak 0,1 g ekstrak dilarutkan dengan 1 mL asam asetat glasial (CH 3 COOH) dan 1 mL asam sulfat  pekat  (H 2 SO 4 ),  kemudian  dipanaskan. Ekstrak  dinyatakan  bebas  etanol  apabila  tidak tercium bau ester wangi (Alydrus et al., 2023).

## Pembuatan Larutan Induk
Untuk  pembuatan  larutan  induk  1000  ppm dengan cara menimbang 100 mg ekstrak etanol 96% daun ande-ande lumut dan ditambahkan 30 tetes DMSO 1% agar terlarut sempurna. Setelah larut, lalu dimasukkan ke dalam labu ukur dan di- ad -kan air laut 100 ml.

## Pembuatan Konsentrasi Uji
Dari  larutan  induk  tersebut  kemudian dilakukan pengenceran untuk konsentrasi 1 ppm, 2 ppm, 3 ppm, 4 ppm dan 5 ppm. Kontrol negatif (0 ppm) yaitu air laut tanpa penambahan larutan uji.

## Uji Toksisitas
Uji  toksisitas  ini  dilakukan  berdasarkan metode  (Ntungwe  et  al.,  2020)  dengan modifikasi.  Ada  2  kelompok  perlakuan  pada  uji
toksisitas yaitu kelompok uji (konsentrasi 1 ppm, 2 ppm, 3 ppm, 4 ppm dan 5 ppm) dan kelompok kontrol  (sebagai  pembanding).  Tiap  konsentrasi disiapkan  3  tabung  reaksi.  Total  ada  18  tabung reaksi dan 180 larva A. salina untuk uji BSLT. Sebanyak  1  mL  larutan  uji  dimasukkan  ke dalam  tabung  reaksi  dan  ditambahkan  air  laut hingga 10 mL, lalu dimasukkan 10 larva Artemia salina. Untuk  kontrol,  hanya  ada  10  mL  air  laut dan 10 larva A. salina tanpa penambahan larutan uji. Pemaparan dilakukan selama 24 jam, diamati dan dihitung jumlah larva A. salina yang mati.

## Analisis Toksisitas
Efek toksik dilakukan dengan cara menghitung  persentase  (%)  kematian  larva A. salina dalam 24 jam pada setiap konsentrasi zat yang  diuji.  Kriteria  standar  larva  yang  mati ditandai dengan tidak adanya pergerakan.
Persentase kematian
dihitung menggunakan rumus sebagai berikut: % Kematian = U − K S x 100%

## Dimana:
U = jumlah larva uji yang mati K = jumlah larva kontrol yang mati S = jumlah larva uji
Setelah  mengetahui  nilai  %  kematian, kemudian  dicari  nilai  probit  melalui  tabel  probit dan diregresikan secara linier untuk mendapatkan  nilai  LC50.  Nilai  LC50  yang diperoleh kemudian diklasifikasikan ketoksikannya berdasarkan Hamidi et al., (2014) dan Karchesy et al., (2016) yang disajikan pada Tabel 1 sebagai berikut:
Tabel 1. Ketosikan senyawa berdasarkan nilai LC 50 Nilai LC 50 (mg/mL) Kategori > 1000 Non toksik 500 - 1000 Rendah 100 – 500 Sedang > 100 Sangat toksik

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui toksisitas  dari  ande-ande  lumut  berdasarkan kemampuannya membunuh larva udang ( Artemia  salina Leach)  dengan  metode Brine Shrimp  Lethality  Test (BSLT).  Hasil  maserasi daun ande-ande lumut yang diekstraksi dengan pelarut  etanol  96%  didapatkan  ekstrak  sebesar 6,19 g. Sebelum uji toksisitas, dilakukan uji bebas
etanol.  Uji  bebas  etanol  ini  bertujuan  untuk memastikan  bahwa  ekstrak  bebas  dari  etanol sebelum  digunakan  untuk  uji  toksisitas  yang digunakan benar-benar tidak menghasilkan data yang bias (Alydrus et al., 2023). Hasil uji bebas etanol  menunjukkan  bahwa  ekstrak  tersebut telah bebas dari pelarut etanol.
Selanjutnya,  dilakukan  pembuatan  larutan induk  dan  pengenceran  konsentrasi.  Agar ekstrak  terlarut  sempurna,  digunakan  DMSO sebagai  pelarut  utama  dalam  uji  BSLT.  Adanya perbedaan  kepolaran  mengakibatkan  ekstrak tidak larut sempurna apabila hanya menggunakan  air  laut.  DMSO  bekerja  sebagai surfaktan  (senyawa  yang memiliki  sifat  hidrofilik dan  hidrofobik),  yang  menurunkan  tegangan permukaan sehingga dapat membantu pelarutan ekstrak (Amarulloh & Lukmayani, 2022).
Dalam uji toksisitas, DMSO yang digunakan adalah DMSO 1% karena aman (tidak menghasilkan  efek  toksik  pada Artemia  salina ) dan  meningkatkan  kelarutan  ekstrak.  Pada kontrol  hanya  menggunakan  air  laut  untuk memastikan  bahwa  kematian  larva  udang disebabkan  dari  senyawa  kimia  dari  ekstrak tanaman dan bukan dari air laut (Marzuki et al., 2019; Wulansari et al., 2022).
BSLT  digunakan  sebagai  uji  pendahuluan atau  skrining  awal  untuk  mendeteksi  aktivitas biologis dari senyawa yang berasal dari tanaman ataupun sintetis.  Hasil uji toksisitas dari metode ini  berkorelasi  dengan  aktivitas  sitotoksik terhadap antikanker dan anti-tumor. Keuntungan dari  metode  BSLT  yaitu  sederhana  (mudah dilakukan),  efisien,  cepat,  hemat  biaya,  tidak membutuhkan  peralatan  yang  khusus,  dan hanya membutuhkan sedikit sampel uji (2-20 mg) (Sarah et al., 2017).
Artemia salina digunakan sebagai hewan uji pada  metode  BSLT  karena  memiliki  kepekaan yang  tinggi  terhadap  senyawa  kimia  baik  dari logam berat maupun tanaman obat (Konan et al., 2022).  Selain  itu,  penggunaan A.  salina dalam jumlah yang banyak (replikasi 3 kali) memungkinkan  analisis  statistik  yang  kuat terhadap sampel uji (Sarah et al., 2017).
Larva A.  salina yang  digunakan  untuk  uji BSLT  harus  berumur  48  jam  karena  pada  fase tersebut larva aktif bergerak dan memiliki tingkat pembelahan  mitosis  yang  tinggi.  Tingginya aktivitas  mitosis  ini  menjadikan  larva A.  salina mirip  dengan  sel  kanker  sehingga  cocok  untuk mengevaluasi  efek  senyawa  kimia  terhadap pertumbuhan  sel  kanker  (Andini  et  al.,  2021). Selain  itu,  larva A.  salina yang  berumur  48  jam telah  memiliki  organ-organ  yang  lengkap  dan
tingkat  kepekaan  yang  tinggi  terhadap  zat-zat kimia  sehingga  memungkinkan  deteksi  efek sitotoksik dengan akurat (Ntungwe et al., 2020). Hasil uji toksisitas yang dilakukan selama 24 jam, didapatkan efek toksik ekstrak etanol 96% daun
ande-ande lumut berdasarkan persentase kematian  larva  udang A.  salina. Adapun  hasil persentase  kematian  larva  udang  ( A.  salina ) disajikan pada Tabel 2 berikut:
Tabel 2. Hasil uji toksisitas ekstrak etanol 96% daun ande-ande lumut
Replikasi Jumlah larva udang yang mati 0 ppm 1 ppm 2 ppm 3 ppm 4 ppm 5 ppm 1 1 1 3 4 2 4 2 1 1 2 2 3 3 3 0 2 2 2 4 2 Total 2 4 7 8 9 9 Rata-rata 0,6 1,33 2,33 2,66 3 3 % kematian 0,66 6,66 16,66 20 23,33 23,33 Pada Tabel 2 menunjukkan nilai persentase kematian yang sama (tidak mengalami peningkatan kematian) pada konsentrasi 4 ppm dan 5 ppm. Hal ini disebabkan pada konsentrasi tersebut merupakan batas maksimal konsentrasi yang dapat membunuh larva A. salina . Semakin tinggi konsentrasi maka kematian larva meningkat. Kandungan senyawa kimia meningkat  seiring  dengan  tingginya  konsentrasi dan kemungkinan hal itulah yang menyebabkan respon kematian A. salina yang sama.
Pada kontrol, terdapat dua larva udang yang mati kemungkinan pada saat proses pemindahan larva dari wadah penetasan ke dalam tabung uji,
larva  mengalami  stress  sehingga  pada  saat  uji toksisitas mengalami kematian di tabung kontrol. Dari data tersebut kemudian dilakukan perhitungan  nilai  LC 50 menggunakan  metode analisis  probit  dengan Microsoft  Excel. Lethal Concentration  50 (LC 50 )  adalah  konsentrasi  zat yang menyebabkan kematian 50% organisme uji dalam  24  jam.  Nilai  LC 50 merupakan  indikator toksisitas suatu zat, dimana semakin rendah nilai LC 50 maka semakin toksik zat tersebut (Ntungwe et  al.,  2020).  Adapun  hubungan  antara  log konsentrasi dan nilai probit yang menyatakan % kematian larva udang disajikan pada Gambar 1.
Gambar 1. Grafik nilai probit terhadap log konsentrasi dari ekstrak daun ande-ande lumut
Nilai  LC 50 pada  ekstrak  etanol  96%  daun ande-ande  lumut  sebesar  12,0221  ppm  dan bersifat sangat toksik. Hasil penelitian menunjukkan  bahwa  daun  ande-ande  lumut ( Selaginella  doederleineii )  berpotensi  untuk dikembangkan  sebagai  obat  anti  kanker. Menurut Sarah et al., (2017) dan Ntungwe et al., (2020), nilai LC 50 yang dihasilkan pada uji BSLT ini  berkorelasi  dengan  aktivitas  sitotoksik
terhadap  antikanker  dan  anti  tumor.  Semakin rendah  nilai  LC 50 maka  semakin  toksik  zat tersebut  terhadap A.  salina (yang  dianalogikan sebagai sel kanker/sel tumor).
Mekanisme  kematian  larva  udang  selama pengujian toksisitas berkaitan dengan kandungan  senyawa  metabolit  sekunder  pada ande-ande  lumut.  Senyawa  metabolit  sekunder bekerja sebagai racun perut ( stomach
y = 1,1795x + 3,5376
R² = 0,9225 0 1 2 3 4 5 6 0,000 0,100 0,200
0,300 0,400 0,500 0,600 0,700 0,800
P ro b it log konsentrasi Probit Kematian Larva Udang dari setiap konsentrasi Probit Linear (Probit)
poisoning ), dengan cara menghambat kemampuan larva udang untuk makan  (Marzuki et  al.,  2019).  Ande-ande  lumut  ( Selaginella doederleineii )  mengandung  senyawa  alkaloid dan flavonoid  (Brad et  al.,  2017).  Dua  senyawa kimia  utama  dalam  ekstrak  ande-ande  lumut tersebut  memiliki  mekanisme  berbeda  dalam membunuh larva Artemia salina .
Senyawa  flavonoid  menghambat  aktivitas enzim  pencernaan  dan  penyerapan  makanan pada larva, sehingga larva tidak dapat mencerna dan  menyerap  nutrisi  dengan  baik.  Hal  ini menyebabkan larva kelaparan dan mati. Flavonoid  juga  bertindak  sebagai  racun  perut pada  larva,  sehingga  menyebabkan  kerusakan pada  sistem  pencernaan  dan  kematiannya. Alkaloid  bersifat  racun  bagi  larva  ketika  ditelan. Racun ini dapat mengganggu sistem saraf larva, sehingga  larva  kehilangan  kemampuan  untuk mengenali dan merasakan makanannya. Akibatnya  larva  tidak  dapat  makan  dan  mati kelaparan (Cahaya et al., 2023)

## KESIMPULAN
Dapat  disimpulkan  bahwa  daun  ande-ande lumut ( Selaginella doederleineii ) yang diekstraksi dengan  pelarut  etanol  96%  memiliki  aktivitas sitotoksik  terhadap  larva  udang Artemia  salina dan  dapat  dikembangkan  sebagai  obat  anti kanker.  Nilai  LC 50 yang  diperoleh  pada  daun ande-ande  lumut  sebesar  12,0221  ppm  dan bersifat sangat toksik.

## DAFTAR PUSTAKA
Alydrus,  L.  N.,  Gama,  S.  I.,  &  Rijai,  L.  (2023).
Skrining  Fitokimia  dan  Uji  Aktivitas
Antibakteri Ekstrak Daun Bidara ( Ziziphus mauritiana ) terhadap Bakteri Propionibacterium  acnes . Proceeding  of Mulawarman Pharmaceuticals Conferences , 17, 38 –43. https://doi.org/10.25026/mpc.v17i1.688 Amarulloh,  W.  K.,  &  Lukmayani,  Y.  (2022). Aktivitas Sitotoksik Tajuk Gandasoli Hutan ( Hedychium  roxburghii Blume). Jurnal Riset Farmasi, 1(2), 133 –140.
https://doi.org/10.29313/jrf.v1i2.568 Andini, A., Prayekti, E., Triasmoro, F., Nur Endah Kamaliyah, D. (2021).
Pengaruh Penggunaan  Jenis  Pelarut  Dalam  Uji Sitotoksistas Metode Brine Shrimp
Lethality  Test (BSLT)  Pada  Wound
Dressing Kolagen-Kitosan. Al-Kimiya , 8(1), 15-20.
Brad, K., Zhang, Y., Yang, X., & Wang, T. (2017). Identification  of  chemical  constituents  of Selaginella doederleinii Hieron. Advances in Engineering Research (AER), 143, 455- 459.
Cahya, D. N. R., Abdulkadir, W. S., & Hasan, H. (2023). Uji Toksisitas Ekstrak Etanol Kulit Terong  Ungu  ( Solanum  melongena L.) Menggunakan  Metode Brine  Shrimp Lethality  Test (BSLT). Journal  Syifa Sciences and Clinical Research , 4(1), 202- 210.
https://doi.org/10.37311/jsscr.v4i1.13630 Hamidi,  М.  R.,  Jovanova,  B.,  &  Panovska,  K.
(2014).  Toxicоlogical  evaluation  of  the plant  products  using  Brine  Shrimp ( Artemia  salina L.)  model. Macedonian pharmaceutical bulletin, 60(1), 9-18. Kabubii,  Z.  N.,  Mbaria,  J.  M.,  &  Mbaabu,  P.  M. (2015).  Phytochemical  Composition  and Brine  Shrimp  Cytotoxicity  Effect  of Rosmarinus officinalis . American Scientific Research Journal for Engineering, Technology  and  Sciences  (ASRJETS), 11(1), 127-135.
Karchesy, Y. M., Kelsey, R. G., Constantine, G., &  Karchesy,  J.  J.  (2016).  Biological screening  of  selected  Pacific-Northwest forest  plants  using  the  brine  shrimp ( Artemia salina ) toxicity bioassay. SpringerPlus , 5(510), 1-9. https://doi.org/10.1186/s40064-016-2145-
1
Konan, A. M. L., Golly, K. J., Kra, A. K. M., Adima, A.  A.,  &  Lohoues,  E.  E.  C.  (2022). Phytochemical  Screening  and  Toxicity Assessment  of Imperata  cylindrica (L.)  P. Beauv. (Poaceae) Raw Extracts with Brine Shrimp  ( Artemia  salina )  Lethality  Assay. Journal  of  Biosciences  and  Medicines , 10(08), 153 –171. https://doi.org/10.4236/jbm.2022.108014
Marzuki,  A.,  Rahman,  L.,  &  Mamada,  S.  S.
(2019). Toxicity test of stem bark extract of banyuru  ( Pterospermum  celebicum miq.) using BSLT ( brine shrimp lethality test ) and cream  irritation  test. Journal  of  Physics:
Conference Series , 1341. https://doi.org/10.1088/1742- 6596/1341/7/072018
Muema,  F.  W.,  Liu,  Y.,  Zhang,  Y.,  Chen,  G.,  & Guo, M. (2022). Flavonoids from Selaginella  doederleinii Hieron  and  Their Antioxidant and Antiproliferative Activities. Antioxidants , 11(1189),
1-16. https://doi.org/10.3390/antiox11061189
Ntungwe  N,  E.,  Domínguez-Martín,  E.  M.,
Roberto,  A.,  Tavares,  J.,  Isca,  V.  M.  S., Pereira,  P.,  Cebola,  M.-J.,  &  Rijo,  P. (2020).  Artemia  species:  An  Important Tool to Screen General Toxicity Samples. Current Pharmaceutical Design , 26, 2892 – 2908. https://doi.org/10.2174/138161282666620
0406083035
Sarah,  Q.  S.,  Anny,  F.  C.,  &  Misbahuddin,  M.
(2017).  Brine  shrimp  lethality  assay. Bangladesh Journal of Pharmacology , 12, 186 –189. https://doi.org/10.3329/bjp.v12i2.32796 Sutomo,  S.,  &  Fardila,  D.  (2013).  Autekologi Tumbuhan  Obat Selaginella  doederleinii Hieron Di Sebagian Kawasan Hutan Bukit Pohen  Cagar  Alam  Batukahu,  Bedugul Bali. Jurnal Penelitian Hutan Dan Konservasi Alam , 10(2), 153 –161.
https://doi.org/10.20886/jphka.2013.10.2. 153-161 Wulansari, D., Wulandari, D. D., & Krisdayanti, A. (2022).  Comparative  Study  of  In-Vitro Toxicity  of  Raw  Honey  and  Fermented Honey  Using  the  BSLT  ( Brine  Shrimp Lethality Test ) Method. Medical Technology  and  Public  Health  Journal , 6(2), 148 –156.
https://doi.org/10.33086/mtphj.v6i2.3477