## Original Research Paper

## POLA EKSPRESI PROTEIN P53 PADA ASTROSITOMA BERDASARKAN GRADING HISTOPATOLOGI
Nurul Fardillah 1 , Muhammad Husni Cangara 1,2 , Cahyono Kaelan 1,2 , Mahmud Ghaznawie 1 , Mardiati 2 , Alfian Zainuddin 3 , Upik Andriani Miskad 1,2*
1 Departemen Patologi Anatomi, Fakultas Kedokteran Universitas Hasanuddin
2 Departemen Patologi Anatomi, Rumah Sakit Universitas Hasanuddin
3 Departemen Kesehatan Masyarakat, Fakultas Kedokteran Universitas Hasanuddin
Email Corresponding: upik.miskad@gmail.com
Page : 148-156

## ABSTRAK
Astrositoma merupakan salah satu tumor primer susunan saraf pusat yang paling sering  ditemukan  dibandingkan  lainnya.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  pola  ekspresi  protein  P53  pada  astrositoma  berdasarkan  derajat histopatologi.  Penelitian  ini  merupakan  penelitian  observasi  analitik  dengan pendekatan  cross  sectional  yang  dilakukan  di  Fakultas  Kedokteran  Universitas Hasanuddin Makassar mulai bulan Agustus 2021 sampai Desember 2021. Kami mengumpulkan  dan  mengelompokkan  seluruh  sampel  yang  memenuhi  syarat berdasarkan pemeriksaan histopatologi diffuse astrositoma, anaplastic astrositoma,  dan  glioblastoma  kemudian  dilakukan  pemeriksaan  pewarnaan imunohistokimia  untuk  menilai  protein  P53.  Hasil  penelitian  ini  adalah  protein p53  negatif  lebih  banyak  ditemukan  dibandingkan  p53  positif  pada  diffuse astrositoma, anaplastic astrositoma, dan glioblastoma.

## ABSTRACT
Astrocytoma  is  one  of  the  most  common  primary  tumors  of  the  central  nervous system.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  pattern  of  P53  protein expression  in  astrocytoma  based  on  histopathological  degree.  This  study  is  an analytical  observation  study  with  a  cross  sectional  approach  conducted  at  the Hasanuddin  University  Makassar  from  August  2021  to  December  2021.  We collected  and  grouped  all  eligible  samples  based  on  histopathological examination  of  diffuse  astrocytoma,  anaplastic  astrocytoma,  and  glioblastoma then  Immunohistochemical  staining  was  performed  to  assess  the  P53  protein. The result of this study was that p53 negative protein was more commonly found than  positive  p53  in  diffuse  astrocytoma,  anaplastic  astrocytoma,  and glioblastoma.

## Kata Kunci :
Astrositoma, protein p53, glioblastoma

## Keywords:
Astrocutoma, protein p53, glioblastoma

## Published by:
Tadulako University, Managed by Faculty of Medicine. Email: healthytadulako@gmail.com Phone (WA): +6285242303103 Address: Jalan Soekarno Hatta Km. 9. City of Palu, Central Sulawesi, Indonesia

## PENDAHULUAN
Tumor otak neuronal merupakan kelompok yang jarang dari tumor sistem saraf pusat  yang  muncul  dari  sel-sel  dengan diferensiasi  neuronal.  Tumor  ini  mungkin murni  berasal  dari  neuron  atau  memiliki komponen  neuronal  dan  glial campuran, yang terdiri dari subset tumor glioneuronal. 1
Dari seluruh tumor primer susunan saraf pusat  (SSP),  astrositoma  anaplastik  dan
glioblastoma meliputi sekitar 38% dari jumlah keseluruhan,  dan  meningioma  serta  tumor mesenkim  lainnya  27%.  Sisanya  terdiri  dari tumor  otak  primer  yang  bervariasi,  meliputi tumor  hipofisis,  schwannoma,  limfoma  SSP, oligodendroglioma,  ependimoma,  astrositoma derajat rendah, dan meduloblastoma. 2,3
Pada astrositoma tingkat rendah, memiliki  prognosis  yang  lebih  baik,  dengan kelangsungan  hidup  mendekati  7  sampai  8
tahun  setelah  operasi.  Pada  astrositoma anaplastik,  terapi  berfokus  pada  perbaikan gejala.  Radioterapi  dari  tumor  yang  direseksi sebagian  meningkatkan  angka  kelangsungan hidup  pascaoperasi.  Tingkat  kelangsungan hidup setelah radiasi pasca operasi hampir dua kali lipat dari hanya intervensi bedah (5 vs 2,2 tahun). 4
Terdapat  beberapa  penelitian  terbaru yang  menunjukkan  mungkin  adanya  peran protein  p53  pada  pasien  dengan  astrositoma. Namun  penelitian  ini  masih  kontroversial. Penelitian  Tsai,  dkk.  menunjukkan  bahwa hasil  pasien  astrositoma  tidak  berbeda  secara signifikan pada pasien dengan tingkat ekspresi p53 yang rendah atau tinggi. 5
TP53  merupakan  salah  satu  onkogen yang paling sering bermutasi di sebagian besar kanker  manusia,  sekitar  5%  hingga  50%  di hampir  setiap  jenis  kanker.  Mutasi  ini  dapat menyebabkan  hilangnya  ekspresi  p53  atau ekspresi  versi  mutan  dari  protein  p53  yang memiliki  potensi  onkogenik.  Selain  itu, perubahan  pola  tersebut  menghasilkan  efek gain-of-function atau loss-of-function. Hal  ini menunjukkan  bahwa  gen  ini  berperan  penting dalam  mencegah  pembentukan  kanker  dan mungkin  mempengaruhi  outcome  pasien melalui pengobatan dengan target p53. 6,7
Tujuan  penelitian  kami  adalah  untuk mengetahui  pola  ekspresi  p53  pada  pasien astrocytoma,  sehingga  diharapkan  hasil  kami dapat  mengkonfirmasi  hasil  penelitian  yang masih  kontroversial  mengenai  peran  protein p53 pada pasien astrositoma, baik pengaruhnya  dalam  pembentukan  kanker, pengaruhnya  pada  derajat  tumor  ataupun outcome pasien.

## BAHAN DAN CARA Desain Penelitian
Penelitian  kami  merupakan  penelitian analitik  observasional  dengan  pendekatan cross  sectional.  Penelitian  ini  dilakukan  di Fakultas  Kedokteran  Universitas  Hasanuddin
Makassar,  mulai  bulan  Agustus  2021  sampai Desember 2021.

## Subjek Penelitian
Populasi  penelitian  ini  adalah    seluruh pasien  yang  terdiagnosa  sebagai  astrositoma difusa, astrositoma anaplastik dan glioblastoma.  Sampel  penelitian  ini  adalah seluruh  pasien  yang  terdiagnosa  sebagai astrositoma  difusa, astrositoma  anaplastik  dan glioblastoma  yang  terdaftar  di  RS  Wahidin Sudirohusodo.  Kriteria  inklusinya  adalah Pasien  yang  terdiagnosa  sebagai  astrositoma difusa, astrositoma anaplastik dan glioblastoma  yang  diambil  jaringan  reseksi asal  tumor  otak  primer  dan  dikirimkan  ke laboratorium patologi anatomi fakultas kedokteran Universitas Hasannudin, RS Wahidin  Sudirohusodo  dan  Sentra  Diagnostik Patologia  Makassar.  Kriteria  eksklusinya adalah  pasien  dengan  blok  paraffin  jaringan biopsy  tumor  otak  primer  yang  rusak  saat diproses ulang dengan pewarnaan immunohistokimia.
Alokasi Subjek
Pertama,  kami  mengumpulkan  dan mengelompokkan seluruh sampel yang memenuhi  syarat  berdasarkan  pemeriksaan histopatologi  sebagai  astrositoma  difusa, astrositoma  anaplastik  dan  glioblastoma. Kemudian  mengumpulkan  seluruh  sampel yang  memenuhi  syarat  untuk  diambil  blok parafin  sesuai  urutan  berdasarkan  nomor registrasi  kemudian  mengelompokkan  setiap kelompok  tersebut  berdasarkan  skor  ekspresi P53. Setelah itu dilakukan pewarnaan imunohistokimia.

## Prosedur Pewarnaan Imunohistokimia
Pertama,  jaringan  dalam  blok  parafin dipotong  berukuran  4-5  µm,  dibuat  dua potongan  dan  direkatkan  pada  dua  kaca objek poly-L-lysine yang kemudian dilakukan deparafinisasi  dengan  xylene  dan  rehidrasi menggunakan  alkohol  yang  konsentrasinya ditingkatkan secara bertahap.
Ketiga,  dilakukan  penanganan  dengan retrieval  antigen  (ab973)  sesuai  prosedur Tissue-Tek  Staining  Dishes.  Ditambahkan protein block (ab80438) dan diinkubasi selama 10 menit pada suhu ruangan.
Keempat,  teteskan  antibodi  primer Rabbit  anti-P53  Monoclonal  Antibody pada slide dan inkubasi selama semalam.
Kelima,  cuci  3  kali  dalam  buffer, tambahkan  HRP  conjugate  (ab80437)  Rabbit Specific  HRP  dan  inkubasi  selama  15  menit, lalu dicuci 4 kali dalam larutan buffer.
Keenam, campurkan 30µL DAB chromogen  (ab80438)  dan  1,5  ml  DAB substrate  (ab80438)  dan  diaduk.  Campuran tersebut  lalu  ditambahkan  pada  jaringan/slide, dan diinkubasi selama 1-10 menit.
Terakhir,  lakukan  pembilasan  dalam larutan buffer sebanyak 4 kali dan
ditambahkan counterstain
hematoxylin, direhidrasi  seperlunya  dan  ditutup  dengan entelan.
Definisi
1. Astrositoma  adalah  tumor  otak  primer yang ganas asal sel astrosit, dinilai dengan pemeriksaan  histopatologi,  menggunakan pewarnaan H&E , dilihat dengan mikroskop  cahaya  oleh  peneliti  dan  dua orang  ahli  patologi.  Kriteria  objektif gambaran histopatologi astrositoma 8 :
- Diffuse  Astrositoma  dengan  gambaran inti  yang  atipik,  selularitas  meningkat dan  memiliki  aktivitas  mitosis  yang rendah.
- Anaplastik Astrositoma dengan gambaran  inti  yang  atipik,  lebih seluler, memiliki aktivitas mitosis yang tinggi dan infiltratif. - Glioblastoma dengan gambaran hiperseluler  dengan  aktivitas  mitosis yang  sangat  tinggi  disertai  proliferasi vaskuler dan nekrosis.
2. Ekspresi  P53  adalah  akumulasi  protein P53  pada  inti  sel  tumor  yang  dideteksi dengan metode imunohistokimia. Imunoekspresi P53 dihitung menggunakan  analisa  semikuantitatif 9 , yaitu:
- <10% inti sel yang terwarnai  : negatif
- ≥  %          y       w       : positif

## Analisis Data
Kami  menggunakan  software  statistics SPSS  versi  26.0  untuk  analisis  data.  Analisis univariat disajikan berupa jumlah dan persentase.  Analisis  bivariat  yaitu  pola ekspresi  p53  pada  pasien  astrositoma  dinilai menggunakan chi square.

## HASIL
Jumlah  seluruh  sampel  yang  didapat adalah  sebanyak  69  sampel,  yang  terdiri  dari astrositoma  difusa,  astrositoma  anaplastic  dan glioblastoma.  Karakteristik  subjek  disajikan pada tabel 1.
Dari  total  69  sampel,  ditemukan  jenis kelamin  laki-laki  42  orang  (60,9%)  lebih banyak  dibandingkan  dengan  jenis  kelamin perempuan  sebanyak  27  orang  (39,1%). Menurut  kategori  usia,  untuk  usia  0-19  tahun didapatkan 10 orang (14,5%), usia 20-39 tahun didapatkan  24  orang  (34,8%),  kategori usia 40-59 tahun didapatkan 25 orang (36,2%), dan  kategori  usia  >59  tahun  didapatkan  10 orang (14,5%).
Tabel 1. Karakteristik Subjek Karakteristik Jumlah Presentase Jenis Kelamin Laki-laki 42 60,9% Perempuan 27 39,1% Usia 0-19 tahun 10 14,5% 20-39 tahun 24 34,8% 40-59 tahun 25 36,2% >59 tahun 10 14,5% Diagnosa Diffuse Astrositoma (DA) 20 29% Anaplastik Astrositoma (AA) 16 23,2% Glioblastoma (GB) 33 47,8% P53 ≥  % (      f) 25 36,2% <10% (negatif) 44 63,8% Dari hasil evaluasi histopatologi
didapatkan 20 sampel  (29%) yang didiagnosis sebagai astrositoma difusa, 16 sampel (23,2%) astrositoma anaplastik dan 33 sampel (47,8%) glioblastoma. Berdasarkan pewarnaan
imunohistokimia  P53  diperoleh  25  sampel (36,2%)  yang  mengekspresikan  P53  ≥  % (positif),  dan  44  sampel  (63,8%)  yang mengekspresikan <10% (negatif).
Tabel  2  menunjukkan  hasil  uji  analisis antara  diagnosa  histopatologik  Astrositoma dengan  status  ekspresi  p53.  Hasil  analisis menunjukkan  nilai  p=0,056  (p>0,05)  yang berarti tidak terdapat hubungan yang signifikan antara diagnosa histopatologi Astrositoma  dengan  status  ekspresi  p53.  Pada kelompok  astrositoma  difusa  sebanyak  20 sampel  (100%),  ditemukan  3  sampel  (15,0%) menunjukkan  ekspresi  p53  positif,  dan  17 sampel  (85,0%)  menunjukkan  ekspresi  p53 negatif. Pada kelompok Astrositoma anaplastik  sebanyak  16  sampel  (100%), ditemukan  8  sampel  (50,0%)  menunjukkan
ekspresi  p53  positif,  dan  8  sampel  (50,0%) menunjukkan ekspresi p53 negatif. Sedangkan pada  kelompok  Glioblastoma  sebanyak  33 sampel (100%), ditemukan 14 sampel (42,4%) yang  menunjukkan  ekspresi  p53  positif,  dan terdapat 19 sampel (57,6%) yang menunjukkan ekspresi p53 negatif.

## PEMBAHASAN
Astrositoma  merupakan  tumor  otak primer yang berasal dari sel-sel astrosit dengan angka kejadian yang sangat tinggi dan bersifat agresif,  dengan  prognosis  yang  buruk.  Terapi
Diagnosa Status P53
Jumlah (%) P Value Positif (%) Negatif  (%) Astrositoma difusa 3 (15.0) 17 (85.0) 20 (100.0) 0,056 Astrositoma anaplastik 8 (50.0) 8 (50.0) 16 (100.0) Glioblastoma 14 (42.4) 19 (57.6) 33 (100.0) Total 25 (36.2) 44 (63.8) 69 (100.0)
Tabel 2. Perbandingan Ekspresi P53 Berdasarkan Diagnosa Histopatologi Astrositoma
Astrositoma saat ini belum banyak dikembangkan. Selain pembedahan, dilakukan pula  radioterapi  dan  kemoterapi.  Sayangnya selain  sel  tumor  yang  sering  tersisa  dan tingginya  tingkat  resistensi  pasien  terhadap radioterapi  dan  kemoterapi  sehingga  angka kekambuhan pasien Astrositoma cukup tinggi 10
Pada  penelitian  ini  didapatkan  bahwa insiden  paling  banyak  adalah  pada  laki-laki dibandingkan dengan perempuan dengan ratio 1,5:1.  Hasil  ini  sejalan  dengan  beberapa penelitian  yang  dilakukan  sebelumnya  yang menemukan  bahwa  pada  jenis  kelamin  laki- laki  lebih  banyak  dibandingkan  dengan perempuan,  baik  untuk  diagnosa  Astrositoma maupun Glioblastoma. 11
Beberapa  publikasi  telah  membahas perbedaan  jenis  kelamin  dalam  kejadian astrositoma  maupun  glioblastoma.  Volume intrakranial  (ICV),  sebagai  pengganti  ukuran otak, berkorelasi dengan risiko pengembangan astrositoma dan glioblastoma, dengan peningkatan  ICV  yang  mengarah  ke  risiko yang lebih tinggi. Hal tersebut diyakini terkait dengan  jumlah  yang  lebih  besar  dari pembelahan  sel induk  neuroglial  di  otak yang lebih besar, dan bisa menjadi salah satu faktor yang  menyebabkan  proporsi  astrositoma  dan glioblastoma  yang  lebih  besar  pada  pria. Selain itu, hilangnya fungsi p53 meningkatkan risiko  transformasi  ganas,  khususnya  pada astrosit laki-laki, menjadi mekanisme tambahan untuk perbedaan insiden. Disparitas jenis  kelamin  terkait  p53  juga  diamati  pada kanker  lain,  yang  terkait  dengan  lokasi regulator  negatif  p53  pada  kromosom  X. Sebuah  studi  lebih  lanjut  menemukan  bahwa risiko  genetik  untuk  memperoleh  glioma dikaitkan dengan EGFR pada pria, dan TERT pada  wanita,  menunjukkan  perbedaan  jenis kelamin  yang  relevan  secara  biologis  dalam gliomagenesis. 12 Selain  itu,  hormon  wanita memiliki efek pencegahan pada
gliomagenesis. 13 Namun hasil ini tidak sejalan
dengan  Hasil  penelitian    Eljiji,  dkk.  dengan populasi penelitian yang sedikit, yang menunjukkan  dominasi  wanita  pada  60% pasien dan pria pada 40%. 14
Berdasarkan  usia,  kami  menemukan prevalensi  tertinggi  kejadian  Astrositoma berada pada usia 20-59 tahun. Hasil ini sejalan dengan penelitian Omer, dkk. yang memperlihatkan
bahwa perjalanan gliomagenesis  terjadi  pada  usia  yang  lebih muda yaitu dekade 2 hingga dekade 5 dengan usia  rata-rata  39  tahun. 11 Begitu  juga  pada penelitian Abdulghani, dkk. yang menunjukkan  pada  Astrositoma  Anaplastik dan  Glioblastoma,  frekuensinya  meningkat seiring  dengan  bertambahnya  usia  dan menurun  di  atas  usia  59  tahun.  Hal  ini  dapat terjadi oleh karena kelangsungan hidup pasien Astrositoma yang rendah. Berdasarkan tabel 1, tumor  astrositik  ditemukan  pada  usia  dekade pertama kehidupan. Tampaknya pasien dengan usia  muda  biasanya  menderita  astrositoma derajat rendah, sementara glioblastoma (grade IV)  biasanya  banyak  ditemukan  pada  usia lanjut.  Sementara  astrositoma  anaplastik ditemukan pada usia pertengahan. Glioblastoma adalah astrositoma ganas dengan angka  ketahanan  hidupnya  kurang  dari  satu tahun,  untuk  itu  angka  kejadian  glioblastoma pada diatas 59 tahun jarang ditemukan. 15
Ketidakseimbangan  antara  onkogen  dan tumor  supresor  gen  berperan  penting  dalam karsinogenesis.  Salah  satu  tumor  suppressor gen  yang  berperan  dalam  proses  tersebut adalah  p53.  Saat  ini  banyak  studi  yang berkembang tentang peran perubahan gen p53 dalam inisiasi, kekambuhan, dan perkembangan  tumor  astrositik  grade  II,  III, dan  IV.  Mutasi  inaktivasi  gen  TP53  terjadi sekitar  50%  dari  semua  tumor  manusia  dan terkait  dengan  perkembangan  tumor  yang cepat  dan  resistesi  terhadap  terapi  antikanker. Data  yang  muncul  dengan  kuat  mendukung peran  onkogenik  untuk  p53  mutant  dan bersama-sama  dengan  stabilisasi  p53  mutant
pada  tumor,  data  menunjukkan  bahwa  target p53  mutant  mungkin  merupakan  strategi pengobatan antikanker yang menjanjikan. 16
Penelitian kami menilai ekspresi protein p53  pada  inti  sel  tumor,  dengan  interprestasi f (<  %)           f (≥  %)  H kami menunjukkan hasil analisa statistik yang tidak  ditemukan  korelasi  antara  ekspresi  p53 dan  derajat  Astrositoma  (Tabel  2).  Hasil ekspresi  p53  pada  glioma  sangat  bervariasi diantara berbagai penelitian yang dilakukan di berbagai  tempat  di  seluruh  dunia.  Nilai
ekspresi  p53  ini  bervariasi  bisa  dikaitkan dengan  penggunaan  antibodi  yang  digunakan, ukuran  sampel  yang  kecil,  prosedur  fiksasi jaringan,  protokol,  variasi  dalam  teknik inkubasi  dan  fiksasi  antigen,  subjektivitas dalam  penilaian,  dan  perbedaan  nilai  batas. Distribusi  sampel  juga  bisa  mengakibatkan adanya  hasil  yang  tidak  signifikan  karena mutasi p53 terjadi pada permulaan patogenesis glioblastoma,  sedangkan  kasus-kasus  yang dievaluasi  merupakan  tumor  pada  tingkat akhir. 17
Skor IHC Diagnosa Histopatologi Diffuse Astrositoma Anaplastik Astrositoma Glioblastoma
Skor P53 <10%
(Negatif)
Skor
P53 ≥10%
(Positif)
Gambar 1. Ekspresi Protein P53 Berdasarkan Diagnosa Histopatologik Astrositoma. Ekspresi Pada Inti Sel Tumor (Lensa Objektif 40x)
Walaupun  hasil  analisa  statistik  pada penelitian  kami  tidak  signifikan,  namun terdapat  kecenderungan  bahwa  dari  seluruh sampel  yang  positif  mengekspresikan  protein p53,  lebih  banyak  ditemukan  pada  kasus glioblastoma  (grade  IV),  kemudian  disusul oleh  astrositoma  anaplastik  (grade  III),  dan terakhir    astrositoma  difusa  (grade  II)  (Tabel 2).  Hal  ini  sejalan  dengan  penelitian  Muslim, dkk.  yang  menunjukkan  terdapat  hubungan yang  signifikan  antara  protein  p53  dengan derajat  astrositoma.  Ekspresi  protein  p53 positif    paling  banyak  ditemukan  juga  pada kasus  glioblastoma  (grade  IV). 18 Namun  hasil kami tidak sejalan dengan penelitian Tsai, dkk. yang menunjukkan bahwa tidak ada hubungan yang  signifikan  antara  tingkat  ekspresi  p53 dengan  hasil  pasien  astrositoma  berdasarkan derajat.  Efek  status  p53  saja  pada  astrositoma masih kontroversial. 5
Pada  fase  G1,  protein  p53  mutan  tidak mengontrol proliferasi atau siklus sel, menyebabkan  kerusakan  DNA  yang  semula reversibel  menjadi  ireversibel  dan  mutasi  ini menjadi  permanen  dalam  pembelahan  sel. Akibatnya,  sel  akan  mengalami  transformasi ganas.  Protein  p53  yang  menyimpang  dari produk gen TP53 mutan dapat menempel pada produk  gen  TP53  normal  dan  menghambat fungsinya sebagai penghambat proliferasi. Sel tumor dengan gen p53 mutan resisten terhadap apoptosis,  sedangkan  tumor  yang  tidak memiliki  gen  p53  normal  berkembang  lebih lambat.  Kemampuan  p53  untuk  mengatur apoptosis  dalam  menghadapi  kerusakan  DNA berimplikasi  pada  terapi  kanker.  Radiasi  dan kemoterapi  adalah  dua  perawatan  kanker paling  umum  yang  menyebabkan  kerusakan DNA  dan  apoptosis.  Sel  tumor  dengan  gen p53  normal  merespon  lebih  baik  terhadap terapi daripada sel dengan p53 mutan. 19
Pada  penelitian  ini,  jumlah  sampel astrositoma  yang  tidak  mengekspresikan protein p53 (negatif) lebih banyak dibandingkan dengan
yang positif
mengekspresikan  protein  p53.  Hal  ini  bisa disebabkan  karena  astrositoma  yang  tidak mengekspresikan p53 merupakan perkembangan  astrositoma  maligna  yang melalui jalur de novo . Glioblastoma (astrositoma high-grade )  terdiri  dari  2  jenis yaitu  glioblastoma  primer  ( de  novo )  dan glioblastoma  sekunder.  Glioblastoma  primer muncul pertama kali pada penderita yang pada saat  didiagnosa  tidak  menunjukkan  bukti  baik secara  klinis,  radiologi,  maupun  histopatologi adanya astrositoma derajat rendah. Glioblastoma  primer  memiliki  insiden  tinggi yaitu  sekitar  90%  dari  seluruh  kejadian glioblastoma.  Sementara  untuk  glioblastoma sekunder  berkembang  secara  perlahan-lahan melalui  perkembangan  yang  diawali  dari astrositoma  difusa  (grade  II)  atau  astrositoma anaplastik  (grade  III).  Berbeda  dengan glioblastoma  primer,  untuk  glioblastoma sekunder  dibutuhkan  bukti  klinis,  radiologi, atau  histopatologi  dari  evolusi  lesi  prekursor hingga terjadi astrositoma derajat tinggi. 20
Banyak  faktor  molekuler,  termasuk EGFR,  PTEN,  CDKN2A,  MDM2,  dan  p53, memiliki peran dalam tumorgenesis glioblastoma primer dan sekunder. Glioblastoma primer ditandai dengan overekspresi EGFR, mutasi PTEN, penghapusan CDKN2A,
hilangnya heterozigozitas  10q,  dan  amplifikasi  MDM2, sedangkan  glioblastoma  sekunder  ditandai dengan mutasi TP53 dan perubahan genetik. 21
Oleh  karena  itu,  ada  kemungkinan bahwa  dalam  penelitian  ini  tingginya  insiden astrositoma  derajat  tinggi  dengan  ekspresi protein p53 negatif, yang berkembang melalui jalur de novo (glioblastoma primer), akumulasi  protein  p53  yang  dideteksi  dengan pewarnaan  imunohistokimia  juga  rendah karena  mutasi  TP53  tingkat  di  glioblastoma primer  rendah.  Karena  itu,  ada  lebih  banyak sampel  astrositoma  dalam  penelitian  kami yang  tidak  mengekspresikan  protein  p53 daripada sampel p53-positif. Dalam penelitian
ini,  sampel  glioblastoma  yang  p53  negatif lebih  banyak  dibandingkan  astrositoma  difus atau  anaplastik.  Ada  kemungkinan  bahwa tingkat  tinggi  akumulasi  p53  tipe  liar  pada astrositoma  tingkat  tinggi  sebagai  akibat  dari disregulasi  proliferatif  atau  kerusakan  DNA adalah penyebab tingginya tingkat imunopositif p53 pada tumor ini. Penyelidikan lebih  mendalam  terhadap  beberapa  aspek, antara  lain  sebagai  faktor  reseptor,  hormon, usia,  dan  jenis  kelamin,  yang  mempengaruhi ekspresi  mutasi  p53  yang  menyebabkan terbentuknya keganasan astrositoma diperlukan  karena  banyak  penelitian  tentang mutasi  p53  pada  astrositoma  dengan  hasil yang berbeda. 9,22

## KESIMPULAN DAN SARAN
Kami  tidak  menemukan  perbedaan bermakna  antara  ekspresi  protein  P53  pada astrositoma  difusa,  astrositoma  anaplastic  dan glioblastoma.  Namun  terdapat  kecenderungan ekspresi  protein  P53  lebih  banyak  pada Glioblastoma (Astrositoma grade IV) dibandingkan dengan astrositoma grade lainnya.
Diperlukan  penelitian  lebih  lanjut  yang melibatkan multicenter agar dapat memperoleh  jumlah  sampel  astrositoma  yang lebih  banyak  sehingga  peran  molekul  protein p53  pada  astrositoma  dapat  dievaluasi  secara lebih  akurat.  Selain  itu  perlu  dilakukan pertimbangan  untuk  memasukkan  data  klinis, radiologi,  dan  pemeriksaan  histopatologi sebelumnya  untuk  membedakan  Glioblastoma primer  dan  sekunder,  sehingga  lebih  lanjut dapat menentukan tingkat sensitifitas, spesifitas,  nilai  prediktif  positif,  dan  nilai prediktif negatif dari pemeriksaan imunohistokimia p53.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terimakasih  kepada  Departemen  Patologi Anatomi  Universitas  Hasanuddin  yang  telah membantu dalam penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Mezzaccappa  FM,  Thorrell  W.  Neuronal
Brain Tumors. StatPearls Publ . Published online 2022.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NB
K576406/
2. KPKN. Pedoman  Nasional  Pelayanan Kedokteran-Tumor Otak .; 2017.
3. Leece  R,  Xu  J,  Ostrom  QT,  Chen  Y, Kruchko  C,  Barnholtz-Sloan  JS.  Global incidence  of  malignant  brain  and  other central  nervous  system tumors  by histology,  2003-2007. Neuro  Oncol . 2017;19(11):1553-1564.
doi:10.1093/neuonc/nox091
4. Kapoor  M,  Gupta  V.  Astrocytoma.
StatPearls . Published online 2022. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NB K559042/
5. Tsai HP, Lin CJ, Wu CH, et al. Prognostic Impact  of  Low-Level  p53  Expression  on Brain  Astrocytomas  Immunopositive  for Epidermal  Growth  Factor  Receptor. Curr Issues  Mol  Biol .  2022;44(9):4142-4151. doi:10.3390/cimb44090284
6. Li  J,  Wang  J,  Su  D,  et  al.  p53 Immunohistochemistry Patterns Are Surrogate Biomarkers for TP53 Mutations in Gastrointestinal Neuroendocrine Neoplasms. Gastroenterol  Res  Pract . 2021;2021. doi:10.1155/2021/2510195
7. Dolma  L,  Muller  PAJ.  GOF  Mutant  p53 in  Cancers:  A  Therapeutic  Challenge. Cancers (Basel) . 2022;14(20). doi:10.3390/cancers14205091
8. Louis DN, Perry A, Reifenberger G, et al. The  2016  World  Health  Organization Classification  of  Tumors  of  the  Central Nervous  System:  a  summary. Acta Neuropathol . 2016;131(6):803-820.
doi:10.1007/s00401-016-1545-1
9. Lee  KS,  Choe  G,  Nam  KH,  et  al. Immunohistochemical  classification  of primary  and  secondary  glioblastomas.
Korean  J  Pathol .  2013;47(6):541-548. doi:10.4132/KoreanJPathol.2013.47.6.541
10. Gargini  R,  Segura-Collar  B,  Sánchez-
Gómez  P.  Cellular  plasticity  and  tumor microenvironment in gliomas: The struggle  to  hit  a  moving  target. Cancers
(Basel) . 2020;12(6):1-24.
doi:10.3390/cancers12061622
11. Omer N, Jalal J, Ismael A. IDH1 (R132H) Immunoexpression  in  Glioma.  Published online 2018.
12. Tavelin B, Malmström A. Sex Differences in  Glioblastoma—Findings  from  the
Swedish  National  Quality  Registry  for Primary  Brain  Tumors  between  1999– 2018. J Clin Med . 2022;11(3).
doi:10.3390/jcm11030486
13. H   z A  R c  F  D     ‐   ‐ c        H
D       H   A    cy    :  A         ‐
sensitive tumor? Int J Mol Sci .
2020;21(23):1-23.
doi:10.3390/ijms21239114
14. Eljili  F,  Gassoum  AS,  Deaf  S  Al,  Abdel M,  Arbab  R,  Zaidan  A.  P53  Gene Mutation  in  Low  Grade  Astrocytoma Among Sudanese Patients. 2(1):157-164.
15. Abdulghani MM, Abbas MN, Mohammed WR.  Immunohistochemical  expression  of epidermal  growth  factor  receptor  in astrocytic  tumors  in  iraqi  patients. Open Access Maced J Med Sci . 2019;7(21):3514-3520. doi:10.3889/oamjms.2019.751 16. Issaeva  N.  P53  signaling  in  cancers. Cancers (Basel) . 2019;11(3):14-16.
doi:10.3390/cancers11030332 17. Nweke M, Ogun G, Adeleye A, Okolo C, Adesina A. Immunohistochemical characterisation and histopathology astrocytic  neoplasm  at  a  tertiary  Nigerian hospital. Published online 2020. doi:https://doi.org/10.1111/ijcp.14094 18. Muslim  LM,  Mohammed  M,  Hasan  SM, Dosh ZN. Immunohistochemical Study of P53 and Ki-67 in Astrocytoma. 2021;25(1):6507-6525.
19. Roger  L,  Tomas  F,  Gire  V.  Mechanisms and  regulation  of  cellular  senescence. Int
J Mol Sci . 2021;22(23):1-42. doi:10.3390/ijms222313173 20. Hanif  F,  Muzaffar  K,  Perveen  K,  Malhi SM, Simjee SU. Glioblastoma multiforme: A review of its epidemiology and pathogenesis through clinical presentation  and  treatment. Asian  Pacific J Cancer Prev . 2017;18(1):3-9.
doi:10.22034/APJCP.2017.18.1.3
21. Khani  P,  Nasri  F,  Chamani  K,  Saeidi  F, Nahand  S.  Genetic  and  epigenetic contribution to astrocytic gliomas pathogenesis. J Neurochem . 2019;148(2).
22. Al-Nuaimy  W. P53 expression in glioma: an  immunohistochemical  study. J  Arab Board Heal Spec . 2013;14(3).