## MASERASI SEBAGAI ALTERNATIF EKSTRAKSI PADA PENETAPAN KADAR KURKUMINOID SIMPLISIA
TEMULAWAK ( Curcuma xanthorriza Roxb)
Mujahid R, Awal PKD, Nita S Balai Besar Litbang Tanaman Obat dan Obat Tradisional Tawangmangu

## ABSTRAK
Temulawak ( Curcuma xanthoriza Roxb) merupakan salah satu bahan yang cukup banyak digunakan pada klinik saintifikasi djamoe Hortus Medicus. Oleh sebab itu kontrol kualitas  dari  temu  lawak  sangat  penting  dilakukan  untuk  menjamin  kesinambungan kualitas.  Dalam  analisa  dibutuhkan  metode  yang  sederhana,  cepat,  efisien  dan  tidak mahal.  Farmakope  Herbal  Indonesia  2008  menyebutkan  bahwa  ekstraksi  temulawak untuk penetapan kadar kurkuminoid adalah dengan refluks, ini dipandang kurang praktis dan  efisien  karena  membutuhkan  peralatan  khusus,  waktu  yang  relatif  lama,  energi  dan bahan  kimia  yang  cukup  banyak.  Oleh  sebab  itu  telah  dilakukan  modifikasi  tahapan ekstraksi  penetapan  kadar  kurkuminoid  dalam  simplisia  temulawak  dan  dibandingkan terhadap  metode  refluks  yaitu  dengan  metode  maserasi  24  jam  dan  sonikasi  15  menit. Sistem  penetapan  kadar  secara  KLT  Densitometri  dengan  fase  diam  silika  gel  60  F 254 , fase gerak n-heksan: etil asetat (1:1) dan deteksi pada panjang gelombang 425 nm.
Kadar kurkuminoid temulawak yang tertetapkan dengan metode ekstraksi refluks, sonikasi dan maserasi berturut-turut adalah : 1,17+0,05%; 1,13+0,16% dan 1,36+0,11%. Uji anova single factor menunjukkan adanya perbedaan tidak nyata dengan nilai F hit 3,455 dan F tab 5,143 dari validasi metode diperoleh LOD 11,95ng/spot, dan LOQ 0,40%, 0,61% dan  0,27%  untuk  ekstraksi  secara  refluks,  sonikasi  dan  maserasi. Metode  yang  dapat diterapkan  sebagai  alternatif  ekstraksi  yang  sederhana  dalam  penetapan  kadar kurkuminoid pada simplisia temulawak adalah maserasi.
K ata kunci : Maserasi, penetapan kadar, kurkuminoid, temulawak

## PENDAHULUAN
Temulawak merupakan salah satu obat asli Indonesia yang penggunaannya paling luas  baik  di  negara-negara  Asia  bahkan  di  seluruh  dunia.  Temulawak  tumbuh  dengan subur  di  berbagai  negara  khususnya  yang  memiliki  iklim  tropis.  Sekitar  70%  dari  jamu yang  beredar  di  Indonesia  memakai  bahan  utama  temulawak.  (Kertia,  2007).  Secara tradisional  rimpang  temulawak  dimanfaatkan  untuk  tujuan  perbaikan  pencernaan,  pada anak-anak  yang  kurang  mempunyai  nafsu  makan,  peluruh  batu  empedu,  pelancar  ASI, pelancar pencernaan, penurun panas, peluruh batu ginjal, penurun kolesterol (Sudarsono dkk ., 1985).  Adapun  cara  pemakaian  umum  di  masyarakat  adalah  dengan  menyeduh rimpang temulawak.
Metabolit  yang  terdapat  dalam  rimpang  temulawak  ( Curcuma  xanthorrhiza Roxb,  suku  Zingiberaceae)  yang  menopang  manfaat  di  bidang  kesehatan  antara  lain kurkumin,  desmetoksi  kurkumin  (suatu  zat  warna  kuning,  turunan  diaril  heptanoid)  dan minyak  atsiri  (terutama  komponen  seskuiterpen  antara  lain:  xanthorrhizol,  ar-turmeron, alpha-Phelan-dren).  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  kurkumin,  desmetoksi kurkumin  dan  xanthorrhizol  berefek  pada  stimulasi  cairan  empedu.  Hasil  penelitian terhadap  kurkuminoid  rimpang  temulawak  menunjukkan  adanya  efek  kolekinetik (Schneider, 1985).
Mengingat aktifitas yang dimiliki oleh kurkuminoid dan xanthorrizol maka kedua senyawa  ini  digunakan  sebagai  senyawa  identitas  yang  digunakan  sebagai  parameter mutu  dari  temulawak.  Bahkan  dalam  Farmakope  Herbal  Indonesia  (2008)  dengan  tegas menyebutkan  bahwa  parameter  kandungan  kimia  untuk  simplisia  temulawak  adalah kandungan kurkuminoid.
Refluks  merupakan  prosedur  baku  ekstraksi  yang  disarankan  Farmakope  Herbal Indonesia  untuk  penetapan  kadar  kurkuminoid  dalam  simplisia  temulawak.  Ekstraksi secara refluks membutuhkan peralatan khusus, waktu yang relatif lama, energi dan bahan kimia yang cukup banyak, sehingga diperlukan alternatif ekstraksi yang lebih sederhana, cepat, efisien dan tidak mahal, namun tetap memenuhi kaidah-kaidah analisis. Ekstraksi secara sonikasi sangat tepat diterapkan pada analisa dalam jumlah massif dengan waktu yang  terbatas.  Sedangkan  maserasi  merupakan  cara  yang  sangat  sederhana  dan  tidak membutuhkan peralatan khusus sehingga dapat diterapkan di semua laboratorium .

## METODOLOGI

## Bahan Penelitian
Bahan  yang  dibutuhkan  adalah simplisia temulawak,  baku  kurkuminoid  Aldrich (94% HPLC), alkohol, n-heksan, etil asetat, plat TLC Silika gel F 245 .

## Alat Penelitian
Alat  yang  digunakan  adalah  neraca  analitik,  sonikator,  refluks  set,  sentrifuse, Camag Linomat 5, Camag TLC Scanner 3, bejana kromatografi dan alat alat gelas.
Jalannya Penelitian Preparasi sampel
a. Refluks (Anonim, 2008)
Ditimbang  seksama  500,0  mg  serbuk  simplisia  temulawak,  dimasukkan  dalam labu  alas  bulat  250  ml;  20  ml  etanol  ditambahkan;  direfluks  selama  30  menit;  diangkat dan disaring, filtrat disisihkan; ampas direfluks kembali dengan 15  ml etanol selama 30 menit;  diangkat  dan  disaring,  filtrat  disisihkan;  ampas  kembali  direfluks  dengan  15  ml etanol  selama  30  menit;  diangkat  dan  disaring.  Filtrat  dikumpulkan  dan  digenapkan menjadi 50,0 ml menggunakan labu takar (sampel siap ditotolkan).
b. Sonikasi
Ditimbang  seksama  100,0  mg  serbuk  simplisia  temulawak,  sampel  dimasukkan dalam  botol  bertutup  25  ml;  10,0  ml  etanol  ditambahkan  secara  seksama;  disonikasi selama  15  menit;  didiamkan  selama  30  menit,  1  ml  bagian  bening  diambil  dan dimasukkan  dalam  tabung  sentrifuse;  sampel  disentrifuse  selama  5  menit  pada  10.000 rpm (sampel siap ditotolkan).
c. Maserasi
Ditimbang  seksama  100,0  mg  serbuk  simplisia  temulawak,  sampel  dimasukan dalam  botol  bertutup  25  ml;  10,0  ml  etanol  ditambahkan  secara  seksama;  sampel disimpan pada tempat gelap selama 24 jam; 1 ml bagian bening diambil dan dimasukan dalam tabung sentrifuse; sampel disentrifus selama 5 menit pada 10.000 rpm (sampel siap ditotolkan).

## Standard Addition Methode (SAM)
Untuk menetapkan perolehan kembali dan LOQ masing masing metode ekstraksi dilakukan  dengan  SAM.  Simplisia  uji  ditambahkan  sejumlah  baku  kurkuminoid  yang
setara  dengan  0,25  dan  0,50%;  selanjutnya  dilakukan  ekstraksi  dengan  ketiga  macam metode tersebut.

## Preparasi baku
Ditimbang  seksama  1,8171  mg  baku  kurkuminoid  aldrich  (94%  HPLC). Ditambahkan  dengan  seksama  10,0  ml  etanol,  sehingga  diperoleh  kadar  kurkuminoid setara 0,1708 μg/μl.

## Sistem KLT
Fase  diam  yang  digunakan  adalah  Silica  gel  F 254 Merck,  sampel  ditotolkan menggunakan  Camag  Linomat  5  dengan  jarak  dari  dasar  10mm,  jarak  antar  totolan 10mm, lebar totolan 2mm. Baku kurkuminoid ditotolkan sejumlah 0,1; 0,2; 0,4; 0,6 dan 0,8  μl  atau  setara  dengan  17,08;  34,15;  68,30;  102,45  dan  135,5  ng/spot,  sedangkan sampel masing-masing ditotolkan 0,5 μl. Fase gerak berupa campuran n-heksan etil asetat (1:1), jarak pengembangan 8 cm. Dideteksi dengan Camag TLC Scanner 3 menggunakan program Wincats versi 1.4.4 pada panjang gelombang 425 nm.

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
Pada  sistem  KLT  Densitometri  yang  dilakukan,  diperoleh  kromatogram  baku kurkuminoid dan sampel temulawak sebagai berikut:
Gambar 1. Kromatogram baku kurkuminoid dan sampel temulawak.
Tampak adanya puncak/spot pada Rf 0,35-0,40 baik pada baku maupun sampel. Data  pemindaian  panjang  gelombang  juga  menunjukan  adanya  kesesuaian  panjang gelombang  maksimum  dan  spektra  antara  baku  dan  sampel  dengan  tingkat  kesesuaian
96,83%.  (Gambar  2)  dengan  data  ini  berarti  dalam  sampel  temulawak  secara  kualitatif mengandung kurkuminoid.
Gambar 2.   Spektrum baku kurkuminoid dan sampel temulawak pada spot/puncak dengan Rf 0,35-0,40
Data  kurva  baku  yang  nantinya  digunakan  dalam  perhitungan  penerapan  kadar ditampilkan dalam tabel 1. Dari data tersebut diperoleh persamaan sebagai berikut:
Y = (82,27 + 3,92) X + (1.121,35 + 327,73)
Nilai  korelasi  R 2 =  0,971  telah  memenuhi  parameter  analitik  yang  disarankan Shoum, 2010 yaitu 0,514 (untuk n=15). Perhitungan lebih lanjut (Miller and Miller, 1988) diperoleh  nilai  batas  deteksi  minimum  (LOD)  sebesar  11,95  ng/spot,  dalam  arti  bahwa jumlah kurkuminoid paling kecil (minimum) yang masih dapat dideteksi keberadaaNnya dalam sistem totolan KLT tersebut adalah 11,95 ng/totolan.
Tabel I. Data kurva baku kurkuminoid
Jumlah Kurkuminoid (ng/spot) Luas Area (AU) 17,08 2.013,30 1.855,41 1.895,73 34,15 4.408,42 3.894,25 4.102,16 68,30 7.747,08 7.093,14 7.272,15 102,45 10.430,98 9.368,81 9.622,67 135,50 12.701,02 11.139,89 11.527,75
Dari  data  kurva  baku  tersebut  juga  dapat  diperoleh  nilai  koefisien  variasi  (CV) yang  merupakan salah satu parameter presisi (ketelitian). Koefisien variasi metode KLT Densitometri untuk penetapan kadar kurkuminoid adalah 4,76%. Secara umum koefisien variasi  disarankan  kurang  dari  2%  (Hamirta,  2004),  sedangkan  US  FDA  (2001) menyatakan  koefisien  variasi  harus  kurang  dari  15%.  Dengan  demikian  metode  KLT Densitometri cukup layak digunakan dalam penetapan kadar kurkuminoid.
Hasil  penetapan  kadar  kurkuminoid  dalam  simplisia temulawak  disajikan  dalam Tabel  II.    Uji  anova  satu  jalan  didapatkan  nilai  F hitung 3,455  (F tabel =5,143),  hal  ini
menunjukkan  bahwa  perlakuan  ekstraksi  memberikan  hasil  yang berbeda  tidak bermakna terhadap penetapan kadar kurkuminoid simplisia temulawak .
Tabel II.  Hasil penetapan kadar kurkuminoid simplisia temulawak yang diekstraksi dengan metode refluks (Anonim, 2008), sonikasi dan maserasi
No Kadar Kurkuminoid Simplisia (%) Refluks Sonikasi Maserasi 1 1,23 0,95 1,44 2 1,15 1,17 1,24 3 1,12 1,27 1,40 Rata-rata + SD 1,17 + 0,05 1,13 + 0,16 1,36 + 0,11
Ketepatan  ( accuracy )  dari  suatu  metode  analisis  dapat  dinilai  dari  perolehan kembali  ( recovery )  dengan Standard  Addition  Methode (SAM).  Tabel  III  menyajikan perolehan  kembali  penetapan  kadar  kurkuminoid  simplisia  temulawak  masing-masing adalah  109,34;  117,58  dan  108,37%,  untuk  metode  ekstraksi  refluks  (Anonim,2008), sonikasi  dan  maserasi.  Dari  uji  anova  satu  jalan  nilai  perolehan  kembali  antara  ketiga macam  metode  tersebut berbeda  bermakna ,  yang  ditunjukan  dengan  nilai  F hitung 4,562 dan  F tabel 3,683.  Uji  lebih  lanjut  menunjukan  perolehan  kembali  ekstraksi  cara  refluks berbeda tidak bermakna dengan cara maserasi.
Tabel  III.  Perolehan  kembali  penetapan  kadar  kurkuminoid  simplisia  temulawak  yang diekstraksi dengan metode refluks (Anonim, 2008), sonikasi dan maserasi
Perlakuan Sampel + baku Jumlah Kurkuminoid (mg) Perolehan Kembali (%) Riil Hasil PK (%) Rata rata Refluks 0,00 6,10 0,00 5,78 0,00 5,58 0,25 7,12 8,05 113,06 109,34 0,25 7,04 7,44 105,68 0,25 7,08 7,60 107,34 0,50 8,36 8,95 107,06 0,50 8,40 9,66 115,00 0,50 8,37 9,03 107,89 Sonikasi 0,00 0,93 0,00 1,16 0,00 1,25 0,25 1,36 1,74 127,94 117,58 0,25 1,41 1,55 109,93 0,25 1,36 1,42 104,41 0,50 1,66 1,97 118,67 0,50 1,67 2,03 121,56 0,50 1,61 1,98 122,98 Maserasi 0,00 1,44 0,00 1,23 0,00 1,38 0,25 1,58 1,71 108,23 108,37 0,25 1,59 1,69 106,29 0,25 1,65 1,73 104,85 0,50 1,85 2,10 113,51 0,50 1,86 1,99 106,99 0,50 1,83 2,02 110,38
Dengan  rumus  yang  diungkapkan  Miller and Miller  (1988)  didapatkan    kadar kurkuminoid  terkecil  (LOQ)  dalam  simplisia  temulawak  yang  dapat  ditetapkan  secara KLT Densitometri adalah 0,40%; 0,61 dan 0,27% untuk metode ekstrasi refluks (Anonim, 2008), sonikasi dan maserasi.

## KESIMPULAN
1. Penetapan  kadar  kurkuminid  dalam  simplisia  temulawak  ( Curcuma  xanthorriza Roxb.) dengan metode KLT Densitometri mendapatkan nilai LOD 11, 95 ng/spot.
2. Kadar kurkuminoid dalam simplisia temulawak ( Curcuma xanthorriza Roxb.) yang tertetapkan  dengan  ekstraksi  secara  refluks,  sonikasi  dan  maserasi  adalah  berbeda tidak  bermakna  dengan  hasil  1,17+0,05%;  1,13+0,16%  dan  1,35+0,11%  dengan LOQ 0,40 %; 0,61 dan 0,27%.
3. Maserasi  dapat  digunakan  sebagai  alternatife  ekstraksi  yang  sederhana,  dan  murah dalam  penetapan  kadar  kurkuminid  dalam  simplisia  temulawak  ( Curcuma xanthorriza Roxb.)

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim,  2008, Farmakope  Herbal  Indonesia ,  Departemen  Kesehatan  RI,  hal  150-154,  162-166 dan 175
Hamirta, 2004,  Petunjuk  Pelaksanaan  Validasi  Metode  dan  Cara  Perhitungannya, Majalah  Ilmu Kefarmasian , 1 ( 3), hal 117 – 135
Kertia  N.,  Sudarsono,  2007,  Kontroversi  Penggunaan  Temulawak  Sebagai  Obat  Asli  Indonesia Untuk Menangani Masalah Kesehatan Khususnya Osteoartritis, dalam Seminar Nasional Tanaman  Obat  dan  Obat  Tradisional  : Obat  Tradisional  Yang  Aman,  Berkhasiat  Dan Bermutu Mendukung Pelayanan Kesehatan Masyarakat.
Miller,  JC.  and  Miller,  JN.,  1988, Statistics  for  Analytical  Chemistry ,  2 nd Edition  John  Wiley  & Sons, New York hal 109-120 Shoum, B, 2010, Statistics and data analysis, LC-GC Europe Online Supplement, hal 13-18 Sudarsono,  Ngatidjan,  Subagus  Wahyuono,  Didiek  Gunawan,  Sudrajat,  1985, Tumbuhan  Obat  I , Pusat Studi Obat Tradisional UGM. Schneider G.,  1985, Pharmazeutische Biologie , BI-Wissenschaftsverlag, Mannheim Setton, L.A., Elliot,  DM,  and  Mow,  V.C.  1999.  Altered  mechanics  of  cartilage  with  osteoarthritis: human  oasteoarthritis  and  an  experimental  model  of  joint  degeneration. Osteoarthritis and Cartilage ; 7: 2-14.
US  Department  of  Health  and  Human  Services  Food  and  drug  Administration  (US  FDA):
Guidande for Industry: Bioanalytical Method Validation, 2001.
http.//www.fda.gov/cder/guidance/425fnl.pdf. Accessed May 2, 2006.