## Aktivitas Antibakteri Isolat Bakteri Asam Laktat Intestinal Udang Penaeid Tipe Liar Terhadap Bakteri Vibrio
Subagiyo 1 *, Sebastian Margino 2 , Triyanto 2 , Feri Setiawan 2 , Wilis Ari Setyati 1 dan Rini Pramesti 1
1 Departemen Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl. Prof. Soedarto, SH. Kampus UNDIP Tembalang, Semarang 50275
2 Fakultas Pertanian, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, Indonesia Bulaksumur, Yogyakarta 55281 Email: subagiyo.kelautan13@gmail.com

## Abstract
Lactic  acid  bacteria  are  groups  of  bacteria  that  have  been  commonly  used  as probiotics with functional targets controlling pathogens. In this study, BAL were isolated from penaeid shrimp intestinum was captured in natural waters and were tested of antibacterial activity  against  3  types  of  pathogenic  vibrio  bacteria  in  shrimp.  The  shrimp  samples  were taken from the North Coast of Java (Situbondo and Semarang) and the South coast of Java (Cilacap).  BAL  isolation  was  done  by  pour  plate  method  using  MRS  medium  enriched  with CaCO3. The antibacterial activity test was performed by using paper diffusion method using V. harveyi, V. anguilarum and V. parahaemolyticus as bacteria indicator. The isolation result obtained  224 isolates of BAL intestinal of penaeid shrimp. The  active BAL isolates against V. Harveyi,  V.  anguilarum  and  V.  parahaemolyticus  were  59,  83  and  66  isolates,  respectively. Isolates are active against 3 types, 2 types and 1 type of Vibrio were  51, 25 and 11 isolates respectively.
Keyword : lactic acid bacteria, antibacteria, vibrio, penaeid shrimp

## Abstrak
Bakteri  asam  laktat  merupakan  kelompok  bakteri  yang  telah  banyak  digunakan sebagai  probiotik  dengan  target  fungsional  mengendalikan  pathogen.  Pada  penelitian  ini telah dilakukan isolasi BAL dari intestinum udang penaeid yang ditangkap di perairan alam dan pengujian aktivitas antibakteri terhadap 3 jenis bakteri vibrio pathogenik pada udang. Sampel  udang  diambil  dari  Pantai  Utara  Jawa  (Situbondo  dan  Semarang)  dan  pantai Selatan  Jawa  (Cilacap).  Isolasi  BAL  dilakukan  dengan  metode  taburan  menggunakan medium  MRS  yang  diperkaya  dengan  CaCO 3 .  Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan  dengan paper  diffusion  method menggunakan  bakteri  uji V.  harveyi,  V.  anguilarum dan V. parahaemolyticus. Hasil  isolasi  diperoleh  224  isolat  BAL  intestinal  udang  penaeid.  Isolat  BAL yang aktif terhadap V. Harveyi, V. anguilarum dan V. parahaemolyticus berturut-turut 59, 83 dan 66 isolat. Isolat yang aktif terhadap 3 jenis, 2 jenis dan 1 jenis Vibrio uji  berurut-turut 51, 25 dan 11 isolat.
Kata Kunci : bakteri asam laktat, antibakteri, vibrio, udang penaeid

## PENDAHULUAN
Vibrio merupakan salah satu agensia penyebab  penyakit  pada  udang.  Jenis- jenis penyakit vibriosis ini meliputi black shell disease,  tail  rot,  septic  hepatopancreatic necrosis, brown gill disease, swollen hindgut
syndrome dan luminous  bacterial  disease (Heenatigala  &  Fernando,  2016).  Jenis penyakit yang disebabkan oleh Vibrio yang saat  ini  merupakan  penyakit  baru  dan ganas  adalah  early  mortality  syndrome (EMS)  atau acute  hepatopancreatic necrosis  disease (AHPND).  Penyakit  ini
ditengarai disebabkan oleh satu atau lebih strain  spesifik V.  parahaemolyticus (De Schryver et  al., 2014).  Salah  satu pendekatan  penyakit  yang  disebabkan oleh  vibriosis  adalah  melalui  aplikasi probiotik  yang  memiliki  kemampuan menghambat pertumbuhan Vibrio.
Penelitian probiotik di bidang perikanan  jauh  tertinggal  dibandingkan penelitian  di  bidang  peternakan,  industri makanan fungsional dan kesehatan manusia.  Peluang  yang  luas  terbuka  untuk melakukan  kajian  di  bidang  probiotik perikanan  pada  umumnya  dan  budidaya udang pada khususnya. Teknologi probiotik sekarang  telah  diterima  oleh  para  praktisi tambak  (Zhou  &  Wang,  2003),    sehingga perhatian  besar  ditujukan  untuk  terus melakukan  penelitian  di  bidang  probiotik. Penggunaan probiotik di budidaya perikanan  memiliki  berbagai  target  yaitu meningkatkan  pertumbuhan,  pencernaan nutrien,  kualitas  air, stress  tolerance , reproduksi  dan  pengendalian  patogen (Cruz et al., 2012).
Bakteri  asam    laktat  dipilih  untuk dikembangkan  sebagai  probiotik  untuk menyehatkan  udang  didasarkan  pada  (1) bakteri asam
laktat
merupakan mikroorganisme  yang  secara  genetik adalah  aman  (memiliki  status  GRAS= genetically  recoqnized  as  safe )  (Ljungh  & Wadström,  2006),  (2)  merupakan  bakteri yang  umum  hidup  di  dalam  intestinum manusia  dan  hewan,  termasuk  udang ( Maeda et al., 2014), (3) mampu hidup dan melekat di dalam sistem mukosa intestinum (Balcazar et  al., 2006  dan  Ljungh  & Wadström,  2006),  (4)  mampu  berkompetisi dengan patogen untuk reseptor pelekatan di epitelium intestinum (Balcazar et al., 2006 dan  Vesterlund et  al., 2006),  (5)  mampu berkompetisi  terhadap  nutrien  esensial (Balcazar et  al., 2006),  (6)  menghasilkan asam  organik,  hidrogen  peroksida  dan bakteriosin yang bersifat antagonis terhadap  patogen  (Balcazar et  al., 2006; Rattanachaikunsopon  &  Phumkhachorn, 2010),
(7)
menghasilkan produk bermanfaat  lain  seperti  enzim  ekstraseluler (Bogale et  al., 2015  dan  Donlora et  al.,
2007),  antioksidan  (Ljungh  &  Wadström, 2006),  (8)  meningkatkan  sistem  imun
(Balcazar et  al., 2006  dan Maeda et  al., 2014),
(9) bersifat noninvasif, nonkarsinogenik
dan nonpatogenik (Farzanfar,  2006),  (10)  memiliki  sejarah panjang digunakan sebagai starter produk makanan  dan  minuman  serta  probiotik untuk  manusia  dan  ternak.    Kinerja  BAL sebagai  probiotik  bersifat  multifaktoral yang  meliputi  pengendalian  komunitas mikroflora saluran pencernaan, pengendalian  populasi  patogen,  proteksi infeksi,  dan  konstribusi  proses  pencernaan, oleh  karena  itu  eksplorasi  bakteri  asam laktat  sebagai  probiotik  memiliki  nilai strategis tersendiri.
Menurut Kosin &   Rakshit (2006) salah satu  kriteria  seleksi  probiotik  adalah kemampuan  menghambat  pertumbuhan pathogen  (memiliki  aktivitas  antimikrobia). Maka  probiotik  untuk  mengendalikan penyakit  Vibriosis  harus  memiliki  aktivitas antibakteri terhadap vibrio. Pada penelitian  ini  dilaporkan  hasil  isolasi  bakteri asam  laktat  (BAL)  yang  memiliki  aktivitas antibakteri  terhadap  Vibrio.  Ioslat-siolat  ini selanjutnya  dapat  diseleksi  lebih  lanjut untuk  dikembangkan  sebagai  konsorsium probiotik  utnuk  mengendalikan  penyakit vibriosis.

## MATERI DAN METODE
Pada penelitian ini BAL diisolasi pada intestinum  udang  penaeid  tipe  liar  yang ditangkap  di  periaran  Situbondo  (Jawa Timur),  Semarang  dan  Cilacap  (Jawa Tengah).  Vibrio  yang  digunakan  sebagai bakteri uji adalah V. harveyi, V. anguilarum dan V.  parahaemolyticus. Vibrio  ini diperoleh  dari  Laboratorium  Manajemen Kesehatan  Hewan  Akuatik,  Balai  Besar Pengembangan  Budidaya  Air  Payau (BBPBAP)  Jepara,  Jawa  Tengah.    Vibrio ditumbuhkan  pada  medium  nutrient  agar. Bakteri  ini  selanjutnya  disimpan  sebagai stok    dalam  larutan  gliserol  (30%)  dan  susu skim (10%) dengan perbandingan 1:1 pada suhu -80 o C.
Media  yang  digunakan  untuk  isolasi adalah  medium  MRS  dengan  komposisi media MRS adalah tripton (10,0 g/l), ekstrak khamir  (5,0  g/l),  glukosa  (20,0  g/l),  K 2 HPO 4 (2,0  g/l),  sodium  asetat  (5,0  g/l),  MgSO 4 -
7H 2 O  (0,2  g/l),  MnSO 4 -H 2 O  (0,05  g/l), amonium  sulfat  (2,0  g/l),  tween  80  (1  ml/l). Media  untuk  uji  aktivitas  antivibrio  adalah medium  Nutrient  Agar  (NA)  dengan komposisi  pepton  (10  g/l)  gram  dan  beef ekstract (3 g/l)

## Isolasi BAL
Udang  yang  telah  dipuasakan selama  2  hari  dianestasi  dengan  suhu rendah. Permukaan tubuh udang disterilisasi  menggunakan  hipoklorit  (0,2 mg/l).
Intestinum
diperoleh melalui pembedahan secara aseptik menggunakan  peralatan  seksio  steril.
Intestinum kemudian dipotong dan dimasukkan  ke  dalam  cawan  petri  steril. Sampel  intestinum  dicuci  secara  aseptik dalam  air  laut  steril,  selanjutnya  ditiriskan dan  ditimbang  sebanyak  1  g.  Intestinum dimasukkan  ke  dalam    lumpang  porselin dan dihomogenasikan menggunakan penumpuk  lumpang.  Homogenat  diambil dan  disuspensikan  ke  dalam  9  ml  air  laut steril.  Satu  ml  suspensi  homogenat intestinum  diinokulasikan  ke  dalam  9  ml medium  MRS  cair.  Kultur  ini  selanjutnya  di inkubasi pada suhu kamar selama 48 jam.
Isolasi BAL dilakukan dengan metode taburan.  Satu  ml  kultur  bakteri  intestinal diinokulasikan  ke  dalam  9  ml  air  laut  (70%) steril untuk mendapatkan faktor pengenceran  10 -1 .  Seri  pengenceran  10 -2 dibuat  dengan  menginokulasikan  1  ml suspensi bakteri pada pengenceran 10 -1 ke 9  ml  air  laut  steril,  demikian  seterusnya sampai  diperoleh  seri    pengenceran  10 -6 . Suspensi  bakteri  pada  masing-masing pengenceran  secara  aseptik  diambil sebanyak 100 µl dan dipipetkan  ke dalam cawan  petri  steril,  kemudian  media  MRS agar  yang  mengandung  CaCO 3 1  %    dan Na  azide  0,01%  dalam  kondisi  telah dicairkan  (suhu  sekitar  50 o C)  dituang  ke dalam cawan petri dan diratakan. Inkubasi dilakukan  secara  aerob  pada  suhu  kamar selama  72  jam.  Koloni  bakteri  asam  laktat ditunjukkan oleh terbentuknya zona bening.  Selanjutnya  koloni-koloni  bakteri yang  tumbuh    diambil  menggunakan  ose kemudian digoreskan ke medium MRS agar miring  dan    diinkubasi  pada  suhu    kamar selama  48  jam.  Koloni  BAL  yang  memiliki
ukuran yang sangat kecil diambil menggunakan jarum preparat dan diinokulasikan ke dalam medium MRS cair.
Isolat
BAL dimurnikan dengan metode  goresan.  Isolat  BAL  dalam  kultur miring maupun kultur cair diambil menggunakan  ose  kemudian  di  goreskan ke  atas  medium  MRS  agar  secara  aseptik. Inkubasi  pada  suhu  kamar  selama  48  jam. Satu  koloni  yang  yang  terpisah  diambil menggunakan  ose  dan  di  goreskan  ke medium MRS agar miring.  Isolat BAL dibuat stok  dalam  10%  skim  milk  dan  30%  gliserol dengan  perbandingan  1:1  dan  di  simpan pada suhu beku -80 °C.
Kemampuan  menghasilkan  senyawa antibakteri  terhadap  Vibrio  dilakukan dengan uji antagonis langsung (Bourouni et al., 2007)    menggunakan  metode paper disc diffusion agar .  Isolat BAL ditumbuhkan dalam  medium  MRS  cair,  inkubasi  pada suhu  kamar  selama  24  jam.  Lima  puluh mikroliter kultur isolat BAL dipipetkan ke atas kertas  cakram  steril  (diameter  8  mm)  yang diletakkan  di  dalam  cawan  petri  steril kemudian menggunakan pipet steril dipindahkan ke atas medium Nutrient Agar yang  telah  diinokulasi  dengan  bakteri  uji (bakteri  Vibrio).  Bakteri  Vibrio  yang digunakan  untuk  uji  ini  adalah Vibrio harveyi,
V.
parahaemolyticus, V. alginolyticus dan V.  anguilarum. Inkubasi pada  suhu  kamar  selama  24  jam.  Kertas cakram  yang  membentuk  zona  bening disekelilingnya menunjukkan adanya aktivitas  penghambatan  pertumbuhan Vibrio.  Diameter  zona  bening  yang terbentuk  diukur  dan  digunakan  untuk menentukan
besarnya
aktivitas penghambatan. Aktivitas antibakteri dihitung  dengan  rumus  seperti  yang digunakan  oleh  Sunaryanto  dan  Tarwadi (2015).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
BAL  diisolasi  dari  intestinum  udang penaeid  yaitu  udang  windu  dan  2  jenis udang  putih    yang  ditangkap  di  perairan pantai  Situbondo,  Semarang  dan  Cilacap. Sampel  udang  hidup  dipilih  yang  sehat (dicirikan  dari  kenampakan  karapas  dan kelengkapan  alat  geraknya).  Udang
dimatikan  dengan  teknik  anestesi  dingin. Sampel  intestinum  diambil  secara  aseptis menggunakan  alat  seksio  dan  pinset  steril. Isolasi  BAL  dilakukan  dengan  teknik pourplate menggunakan  medium  MRS agar  yang  diperkaya  dengan  CaCO 3 . Koloni yang menghasilkan asam ditunjukkan  oleh  terbentuknya  zona  jernih di sekitar koloni (Gambar 1.). Zona jernih ini merupakan  hasil  reaksi  asam  yang diproduksi  oleh  koloni  bakteri  dengan CaCO 3 yang  ada  pada  medium  isolasi. Hasil  isolasi  diperoleh  total  224  isolat  BAL yang  terdiri  dari  67  isolat  udang  windu ( Penaeus  monodon )  dan  157  isolat  dari  2 jenis  udang  putih  (62  isolat  dari  intestinum Metapenaeu  ensis dan    95  isolat  dari intestinum Penaeus  merguiensis ).  Hasil seleksi  berdasarkan  aktivitas  antibakteri terhadap  vibrio  ditunjukkan  pada  Tabel  1. Hasil  ini  sesuai  dengan  pernyataan Nikoskelainen et  al., (2001)  bahwa  BAL merupakan  mikroorganisme  normal  di dalam  saluran  pencernaan  hewan  yang sehat  baik  mamalia  maupun  hewan budidaya akuatik. Peneliti sebelumnya juga berhasil  mengisolasi  BAL  dari  saluran pencernaan  udang  windu  hasil  budidaya (Shakila et  al., 2006),  udang  Vaname  hasil budidaya  (Vieira et  al., 2013),  ikan  dan udang  (Noordiana et  al., 2013), kuruma shrimp ( Marsupenaeus  japonicus )  (Maeda et al., 2014), Fenneropenaeus chinensis dan ikan Acanthogobius  hasta (Sha et  al.,
2016). Hasil-hasil penelitian ini menunjukkan bahwa  BAL  merupakan  mikroorganisme saluran  pencernaan  udang.  Berdasarkan hal  ini  maka  BAL  potensial  dikembangkan sebagai probiotik untuk udang.
Berdasarkan jenis Vibrio yang dihambat  didapatkan  jumlah  isolat  BAL yang  mampu  menghambat V.  harveyi, V. anguilarum, dan V.  parahaemolyticus berturut-turut  59,  83  dan  66  (Tabel  2.). Sedangkan berdasarkan jumlah jenis Vibrio yang  dihambat  didapatkan  jumlah  isolat BAL yang mampu menghambat 3, 2, dan 1 jenis  Vibrio  uji  berturut-turut  adalah  51,  25 dan 11 (Tabel 2).
Aktivitas  antibakteri  merupakan salah  satu  karakter  utama  probiotik untuk  mampu  memproteksi  inang  dari infeskai  pathogen  didalam  saluran cernanya.  Salah  satu  kemampuan penghambatan pathogen adalah melalui produksi metabolit seperti asam organik (asam laktat dan asam asetat) (Suskovic et  al .,  2010). Kemampuan antibakteri  asam  organik  terhadap Vibrio  juga  dibuktikan  oleh    Ricke, (2003)    dan    Mine  &  Boopathy,  (2011). Penelitian da Silva et al., (2013) secara in  vitro  membuktikan  bahwa  sodium asetat,  sodium  butirat,  sodium  sitrat,
Gambar 1. Hasil  isolasi  BAL  dari  intestinum  udang  penaeid.  Koloni  yang  membentuk  zona jernih  adalah  koloni  yang  menghasilkan  asam.  Zona  jernih  berasal  dari  reaksi antara  asam  yang  dihasilkan  oleh  koloni  bakteri  dengan  CaCO 3 yang  ada  di medium isolasi
Tabel  1. Hasil  seleksi  isolat  BAL  intestinal  udang  penaeid  yang  memiliki  aktivitas  anti  vibrio (mm diameter zona hambat). Diameter paper disk 8 mm dan volume kultur yang diteteskan ke paper disk 50  l.
No Kode isolat V. harveyi V. anguilarum V. parahaemolyticus Diameter zona hambat (mm) Aktivitas anti bakteri (ml/mm 3 ) Diameter zona hambat (mm) Aktivitas anti bakteri (ml/mm 3 ) Diameter zona hambat (mm) Aktivitas anti bakteri (ml/mm 3 ) 1 M4.1 0 0 16 5756,7 8 732,7 2 M4.2 12 2826,0 20 9524,7 16 5756,7 3 M6.1 12 2826,0 20 9524,7 12 2826,0 4 M6.2 9 1177,5 19 8504,2 11 2224,2 5 M6.3 12 2826,0 20 9524,7 0 0 6 M6.4 12 2826,0 20 9524,7 0 0 7 MP.3 12 2826,0 20 9524,7 10 1674,7 8 MP.4 13 3480,2 18 7536,0 12 2826,0 9 P2.10 0 0 17 6620,2 0 0 10 P2.11.1 0 0 20 9524,7 11 2224,2 11 P2.11.2 0 0 12 2826,0 10 1674,7 12 P2.11.3 15 4945,5 12 2826,0 10 1674,7 13 P6.14 6 0,0 15 4945,5 10 1674,7 14 P6.15 14 4186,7 20 9524,7 0 0 15 P6.3 0 0 15 4945,5 10 1674,7 16 P6.4 0 0 15 4945,5 10 1674,7 17 W6.13 0 0 16 5756,7 8 732,7 18 M3.2 0 0 24 14130,0 10 1674,7 19 M7.1 10 1674,7 18 7536,0 12 2826,0 20 M7.2 10 1674,7 15 4945,5 12 2826,0 21 M7.3 10 1674,7 17 6620,2 12 2826,0 22 P.6.10 0 0 19 8504,2 0 0 23 P.6.12 12 2826,0 15 4945,5 0 0 24 P6.11 0 0 11 2224,2 0 0 25 P6.13 11 2224,2 10 1674,7 7 340,2 26 P6.14 13 3480,2 12 2826,0 10 1674,7 27 P6.15 14 4186,7 10 1674,7 7 340,2 28 P6.5 10 1674,7 17 6620,2 11 2224,2 29 P6.6 0 0 14 4186,7 0 0 30 P6.7.1 11 2224,2 17 6620,2 11 2224,2 31 P6.7.2 0 0 19 8504,2 0 0 32 P6.8 11 2224,2 17 6620,2 12 2826,0 33 P6.9 14 4186,7 20 9524,7 0 0 34 Pa.1.1 12 2826,0 8 732,7 0 0 35 Pa.1.2 0 0 11 2224,2 0 0 36 Pa.1.3 0 0 14 4186,7 0 0 37 PB.1.4 0 0 15 4945,5 0 0 38 PB.9.3 12 2826,0 12 2826,0 7 340,2 39 PB1.1 0 0 13 3480,2 0 0 40 PB1.2 0 0 15 4945,5 0 0 41 PB9.1 0 0 10 1674,7 0 0 42 PB9.2 0 0 0 0 0 0 43 SS1 9 1177,5 8 732,7 13 3480,2 44 SS1.1 8 732,7 9 1177,5 11 2224,2 45 SS2 9 1177,5 9 1177,5 12 2826,0 46 SS2.1 8 732,7 8 732,7 9 1177,5 47 SS3 9 1177,5 8 732,7 13 3480,2 48 SS3.1 10 1674,7 8 732,7 13 3480,2 49 SS4 8 732,7 11 2224,2 12 2826,0 50 SS4.1 12 2826,0 11 2224,2 13 3480,2 51 SS5 9 1177,5 10 1674,7 9 1177,5
No Kode isolat V. harveyi V. anguilarum V. parahaemolyticus Diameter zona hambat (mm) Aktivitas anti bakteri (ml/mm 3 ) Diameter zona hambat (mm) Aktivitas anti bakteri (ml/mm 3 ) Diameter zona hambat (mm) Aktivitas anti bakteri (ml/mm 3 ) 52 SS5.1 8 732,7 8 732,7 9 1177,5 53 SS6 17 6620,2 11 2224,2 17 6620,2 54 SS6.1 11 2224,2 8 732,7 11 2224,2 55 SS6.2 9 1177,5 8 732,7 11 2224,2 56 SS6.3 10 1674,7 8 732,7 11 2224,2 57 w6.19 0 0 15 4945,5 8 732,7 58 W6.20 0 0 14 4186,7 8 732,7 59 B2.4.2 9 1177,5 9 1177,5 12 2826,0 60 B2.4.3 9 1177,5 11 2224,2 12 2826,0 61 B2.4.4 9 1177,5 9 1177,5 12 2826,0 62 BB.1 8 732,7 8 732,7 10 1674,7 63 BB1 12 2826,0 8 732,7 0 0 64 BBC.1 10 1674,7 10 1674,7 8 732,7 65 BBC.1.1 10 1674,7 10 1674,7 9 1177,5 66 BBC.8 11 2224,2 12 2826,0 9 1177,5 67 BBC.9 0 0 8 732,7 8 732,7 68 BBF.12 0 0 8 732,7 12 2826,0 69 BBF.3 9 1177,5 10 1674,7 8 732,7 70 BFC.7 9 1177,5 8,5 948,5 11 2224,2 71 BKC.5 0 0 9 1177,5 12 2826,0 72 BKC.6 11 2224,2 8 732,7 17 6620,2 73 BKFC.1 12 2826,0 10 1674,7 12 2826,0 74 BKFC.1 8 732,7 9 1177,5 0 0 75 BKFC.2 10 1674,7 12 2826,0 8 732,7 76 BKFC.2.1 9 1177,5 8 732,7 8 732,7 77 PS12 9 1177,5 10 1674,7 14 4186,7 78 PS14 13 3480,2 9 1177,5 14 4186,7 79 PS20.2 10 1674,7 9 1177,5 12 2826,0 80 PS4.2 13 3480,2 13 3480,2 17 6620,2 81 PS6.2 12 2826,0 11 2224,2 15 4945,5 82 PS9 12 2826,0 12 2826,0 18 7536,0 83 WC.8 11 2224,2 9 1177,5 17 6620,2 84 WFC.2 9 1177,5 9 1177,5 12 2826,0 Tabel 2. Jumlah isolat BAL yang aktif terhadap Vibrio
Jenis Vibrio uji yang dihambat Jumlah jenis Vibrio yang dihambat V. harveyi V. anguilarum V. parahaemolyticus 3 2 1 59 83 66 51 25 11
sodium  format,  sodium  laktat  dan  sodium propionat secara in vitro mampu menghambat
Vibrio
harveyi ,
V . alginolyticus ,  dan V . anguillarum. Hasil penelitian  yang  lain  terkait  dengan pemanfaatan  asam  sebagai  agensia antibakteri  terhadap  Vibrio    membuktikan bahwa  aplikasi  asam  organik  ini      secara nyata  mampu  meningkatkan  resistensi udang vaname  (Romano et al., 2015) dan Penaeus  monodon (Ng et  al., 2015)
terhadap infeksi Vibrio harveyi. Kemampuan  BAL  terpilih  menghasilkan asam  organik  ini  membawa  kepada kemampuan  fungsional  sebagai  probiotik untuk mengendalikan komunitas mikroorganisme  di  dalam  intestinum.  Di dalam intestinum tumbuh beragam mikroorganisme yang  dapat  bersifat merugikan udang. Bakteri pathogen seperti Vibrio potensial menyebabkan infeksi yang mematikan bagi udang.
Beberapa
penelitian  menunjukkan  keganasan  Vibrio terhadap  udang  Vannamei    (Soto- Rodriguez et  al., 2010  ;Heenatigala  & Fernando,  2016  ;  Hong et  al., 2016).  Vibrio juga diketahui sebagai agensia penyebab penyakit early  mortality  syndrome  ( EMS) atau  “a cute  hepatopancreatic  necrosis disease ” (AHPND) (De Schryver et al., 2014). Toksisitas  asam  organik  disebabkan oleh  gangguan  homeostasis  pH  seluler: asam yang terprotonasi berdifusi ke dalam sel  di  mana  ia  mengalami  de-protonasi dan  mengubah  baik  ΔpH  dan  ΔΨ. (Zhitnitsky,  et al., 2017).  Proses  ini membutuhkan energi ATP, sehingga menyebabkan  deplesi  energi  seluler. Penurunan  pH  sitoplasma  juga  akan menyebabkan  denaturasi  protein  dan DNA,  dan meninmbulkan gangguan pada proses  fisiologi  sel.  Selain  itu  asam  laktat juga dapat  berinterferensi  dengan struktur membran  sitoplasma    dan  protein membran  sehingga  mengganggu  kinerja membran sitoplasma (Ricke, 2003). Alakomi et al., (2000) dalam penelitiannya melaporkan  bahwa  asam  laktat  baik dalam  bentuk  terdisosiasi  atau  tidak terdisosiasi dapat menyebabkan disintegrasi outer membrane dan LPS. Berdasarkan hasil penelitian  ini didapatkan isolat-isolat BAL yang potensial untuk dikembangkan sebagai probiotik. Hal ini  karena  isolat  BAL  yang  diperoleh menunjukkan
kemampuan
untuk menghambat pertumbuhan
Vibrio
pathogen.  Isolat  potensial  ini  selanjutnya perlu  diseleksi  lebih  lanjut  menggunakan kriteria  seleksi  probiotik  baik  secara  in  vitro maupun in vivo.

## DAFTAR PUSTAKA
Alakomi,  H.  L.,  Skytta,  E.,  Saarela,  M., Mattila-Sandholm,  T.,  Latva-Kala,  K. Aguirre-Guzmán,  G.,  M.,  Lara-Flores,  J. G.,  Sánchez-Martínez,  A.  I.  and Campa-Córdova,  2012,      The  Use  of Probiotics  in  Aquatic  Organisms:  A review,
African
Journal of Microbiology Research, 6 : 4845-4857. Balcazar,  J.  L.,    de  Blas,  I.,  Ruiz-Zarzuela,  I., Cunningham, D., Vendrell, D., Mu´zquiz,  J.  L.,  2006,  The  Role  of Probiotics  in  Aquaculture ,  Veterinary Microbiology, 114 : 173–186.
Balca ́ zar,  J.,  Decamp,  O.,  Vendrell,  D.,  De Blas,  I.  and  Ruiz-Zarzuela,  I.,  2006, Health  and  Nutritional  Properties  of Probiotics in Fish and Shellfish, Microbial Ecology in  Health and Disease, 18  :  65- 70.
Bogale,  A.  T.  and    Prapulla,  S.G.,  2015, Studies  on  Amylase  from  Probiotic Lactic  Acid  Bacteria, International Journal  of  Modern  Chemistry  and Applied Science, 2(4) : 211-214.
Bourouni,  O.  C.,  Bour,  M.  E.,    Mraouna,  R., Abdennaceur, H., Boudabous, A., 2007, Preliminary Selection Study of Potential Probiotic  Bacteria  from  Aquacultural Area in Tunisia, Annals of Microbiology, 57 : 185-190.
Cruz,  P.M.,  Ibanez,  A.  L.,  MonroyHermosillo, O.  A., and Saad, H. C.  R., 2012,  Use of Probiotics in Aquaculture,
ISRN
Microbiology ,  Article  ID  916845,  13 pages,
http://dx.doi.org/10.5402/2012/916845 da  Silva,  B.C.,    Vieira,  F.N.,  Mouriño,  J.L.P., Ferreira, G.S.,  Seiffert, W.Q.,  2013,  Salts of  Organic  Acids  Selection  by  Multiple Characteristics  for  Marine  Shrimp Nutrition, Aquaculture, 384–387  :  104– 110.
De Schryver P, Defoirdt T, Sorgeloos P (2014)
Early  Mortality  Syndrome  Outbreaks:  A Microbial Management Issue in Shrimp Farming?
PLoS Pathogen 10(4):
e1003919. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.10 03919
Drancourt,  M.  and  Raoult,  D.,  2005, Sequence-Based  Identification  of  New Bacteria:  a  Proposition  for  Creation  of an  Orphan  Bacterium  Repository, Journal of Clinical Microbiology., 43 (9) : 4311–4315.
Farzanfar,  A.,  2006,  The  use  of  Probiotic  in Shrimp Aquaculture, FEMS Immunology
& Medical Microbiology 48:149-158. Heenatigala, P. P. M. &  Fernando, M.  U. L., 2016,  Occurrence  of  Bacteria  Species Responsible for Vibriosis in Shrimp Pond Culture  Systems  in  Sri  Lanka  and Assessment  of  the  Suitable  Control Measures, Sri Lanka Journal of Aquatic Science, 21 (1) : 1–17.
Hong,  X. P., Xu, D., Zhuo, Y., Liu H. Q., Lu, L. Q.,
2016, Identification and pathogenicity of Vibrio
parahaemolyticus isolates and immune responses  of Penaeus  (Litopenaeus) vannamei (Boone), Journal  of    Fish Disease , 39(9):1085-1097..
Kosin,  B.  and  Rakshit,  S.  K.,  2006,  Microbial and  Processing  Criteria  for  Production of  Probiotics:  A  Review  , Food Technology and  Biotechnology, 44 (3)
: 371–379.
Ljungh,   A, and   Wadström, T., 2006, Lactic Acid  Bacteria  as  Probiotics, Current Issues in Intestinal  Microbiology, 7(2)  : 73-89.
Maeda,  M.  1.,  Shibata,  A.,  Biswas,  G.,
Korenaga,  H.,  Kono,  T.,  Itami,  T.,  Sakai, M.,  2014,  Isolation  of  Lactic  Acid Bacteria from Kuruma Shrimp ( Marsupenaeus  japonicus )  Intestine and Assessment of Immunomodulatory Role  of  a  Selected  Strain  as  Probiotic, Marine  Biotechnology  (NY), 16(2)  :  181- 92.
Mine,  S.,  &  Boopathy,  R.,  2011,  Effect  of organic  acids  on  shrimp  pathogen, Vibrio  harveyi, Current    Microbiology , 63(1):1-7.
Ng, W., Koh, C., Teoh, C., Romano, N., 2015,
Farm-Raised  Tiger  Shrimp, Penaeus Monodon , Fed Commercial Feeds With Added Organic Acids Showed
Enhanced  Nutrient  Utilization,  Immune Response  And  Resistance  To Vibrio Harveyi Challenge, Aquaculture, 449 : 69-77.
Nikoskelainen,  S.,  Salminen,  S.,  Bylund,  G.,
Ouwehand, A.C., 2001a., Characterization  of  the  Properties  of Human and Dairy Derived Probiotics for Prevention of Infectious Diseases in Fish. Applied
and
Environmental Microbiology, 67 : 2430-2435.
Noordiana,  N.,  Fatimah,  A.  B.  and  Mun,  A.
S., 2013,
Antibacterial Agents Produced  by  Lactic  Acid  Bacteria
Isolated  from  Threadfin  Salmon  and
Grass  Shrimp, International  Food
Research Journal , 20(1) : 117-124. Rattanachaikunsopon, P., and Phumkhachorn,  P.,  2010,  Lactic  Acid Bacteria : their Antimicrobial Compounds  and  their  Uses  in  Food Production,
Annals of Biological Research, 1 : 218-228. Ricke,  S.  C.,  2003,  Perspectives  on  the  Use of Organic Acids and Short Chain Fatty
Acids  as  Antimicrobials, Poultry Science, 82 : 632–639. Romano,  N.,    Koh,  C.,    Ng,  W.  K.,  2015, Dietary  Microencapsulated  Organic Acids Blend Enhances Growth, Phosphorus Utilization, Immune Response,  Hepatopancreatic  Integrity and  Resistance  Against Vibrio  harveyi in White Shrimp, Litopenaeus vannamei, Aquaculture, 435 : 228–236. Sha,  Y.,  Wang,  L.,  Liu,  M.,  Jiang,  K.,  Xin,  F., Wang,  B.,  2016,  Effects  of  Lactic  Acid Bacteria  and  the  Corresponding Supernatant  on  the  Survival,  Growth Performance,  Immune  Response  and Disease  Resistance  of Litopenaeus vannamei,  Aquaculture , 452 : 28-36. Shakila, R. J.,  Saravanakumar, R., Vyla, S. A. P.,  Jeyasekaran,  G.,  Jasmine,  G.  I., 2006,  Antagonistic  Activity  of  the  Gut Microflora  Isolated  from  Farmed  Tiger Shrimp  ( Penaeus  monodon ), Asian Fisheries Science, 19 : 247-255.
Soto-Rodriguez,  S.  A.,    Gomez-Gil,  B.,
Lozano, R.,  2010, ‘Bright-red’ syndrome in  Pacific  white  shrimp Litopenaeus vannamei is  caused  by Vibrio  harveyi,
Diseases Of Aquatic Organisms , 92: 11– 19.
Sunaryanto,  R.  dan  Tarwadi,  2015,  Isolasi dan  Karakterisasi  Bakteriosin  yang Dihasilkan oleh oleh lactobacillus lactis dari  Sedimen  Laut ,  JPB  Kelautan  dan Perikanan, 10 (1 ) : 11–18.
Suskovic, J., Kos, B., Beganovic, J., Pavunc, A.  L.,  Habjanic,  K.,  Matosic,  S.,  2010,
Antimicrobial Activity–the Most
Important  Property  of    Probiotic  and Starter  Lactic, Food  Technology  and Biotechnology, 48 : 296–307.
Vesterlund,  S.,  Karp,  M.,  Salminen,  S.  and
Ouwehand, A. C., 2006,
Staphylococcus  aureus Adheres  To Human  Intestinal  Mucus  but  can  be Displaced  by  Certain  Lactic  Acid Bacteria. Microbiology, 152  :  1819– 1826.
Vieira,  F.  P.,    Jatobá  A.,  Mouriño,  J.  L.  P., Vieira, E. A., Soares, M.,  da Silva, B. C., Seiffert,  W.  Q.,    Martins,  M.  L.    and Vinatea, L. A., 2013, In vitro selection of Bacteria  with  Potential  for  Use  as Probiotics  in  Marine  Shrimp  Culture, Pesquisa  Agropecuária  Brasileira, 48(8)
: 998-1004.
Zhitnitsky, D., Rose, J., & Lewinson, O. (2017). The highly synergistic, broad spectrum, antibacterial  activity  of  organic  acids and transition metals. Scientific Reports ,
7 ,  44554.  http://doi.org/10.1038/srep
44554
Zhou,  X.,  Wang,  Y.,  2003.  Probiotic  in aquaculture-Benefits  to  the  Health, Technological Applications and Safety, dalam  Health  and  Environment  in
Aquaculture,  E.  Carvalho  (ed.),  InTech Europe, Croatia. p.215-226.