## Potensi Ampas Kasar Kecap sebagai Bahan Dasar Pembuatan Etanol
Wulan Sari Eko Putri 1 dan Tri Ardyati 1*
1 Laboratorium Mikrobiologi, Jurusan Biologi, Fakultas MIPA, Universtitas Brawijaya
*E-mail: tri_ardyati@yahoo.com

## ABSTRAK
Ampas kasar kecap sebagai limbah agro-industri mengandung gula reduksi yang berpotensi sebagai bahan dasar pembuatan etanol. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui potensi ampas kasar kecap sebagai bahan dasar pembuatan etanol. Produksi etanol oleh isolat I 2 YP 5 K 1 , C. krusei dan S. cerevisiae dilakukan pada media filtrat ampas kasar kecap 20 Brix diinkubasi pada suhu 30 o C, agitasi 120 rpm selama 3 hari. Parameter yang diamati adalah kadar etanol, pH, gula reduksi dan jumlah sel. Kadar etanol diukur dengan Kromatografi Gas. Produksi etanol paling tinggi didapatkan dari perlakuan S. cerevisiae sebesar 4,07 % diikuti oleh isolat I 2 YP 5 K 1 sebesar 1,52 % dan C. krusei sebesar 0,84 % pada hari ke-3.
Kata kunci : ampas kasar kecap, etanol, khamir

## ABSTRACT
Reduction sugar contain in crude soy sauce waste made it as a potential habitat for ethanol production. Aim of this research is to observed potentiality of crude soy sauce for ethanol production. I 2 YP 5 K 1 , C. krusei and S. cerevisiae in 20 Brix crude soy sauce filtrate agitated in 30 o C, 120 rpm for 3 days. Measurement of ethanol contentration, pH, concentration of sugar reduction and cell mass done each day for three days. Ethanol contentration assay done by Gas Chromatography. Maximum ethanol production observed in S. cerevisiae with ethanol concentration was 4,97 % while I 2 YP 5 K 1 and C. krusei was 1.52 % and 0.84 % respectively. Potential ethanol production of crude soy sauce waste was 4.07 %.
Key words : ethanol, soy sauce waste, yeast

## PENDAHULUAN
Produksi minyak bumi di Indonesia mengalami kesenjangan negatif dengan konsumsi minyak bumi dimana angka konsumsi melebihi angka produksi sebesar 24.000 bph (barel per hari) [1]. Oleh karena itu diperlukan suatu upaya untuk mendapatkan sumber energi alternatif. Salah satu sumber energi alternatif yang mempunyai beberapa kelebihanyaituetanol,hal tersebut dikarenakan etanol merupakan sumber energi yang dapat diperbarui dan ramah lingkungan karena emisi karbondioksidanya rendah [2]. Selain itu, etanol dapat digunakan sebagai bahan campuran bensin (gasolin) yang kemudian dinamakan gasohol, dan juga dapat digunakan secara langsung sebagai bahan bakar [3]. Bahan dasar pembuatan etanol dapat berupa lignoselulosa, bahan yang mengandung pati dan bahan-bahan yang berupa disakarida maupun monosakarida [2].
Ampas kecap sebagai salah satu limbah agro-industri terbagi atas dua jenis yaitu, ampas kecap dalam bentuk pasta yang selama ini dimanfaatkan sebagai salah satu komponen pakan ternak karena nutrisi yang terkandung di dalamnya cukup besar [4], dan ampas kasar kecap yang selama ini kurang diminati dan digunakan sebagai pakan ikan lele. Kurangnya peminat ampas kasar kecap memberikan peluang untuk dikembangkan sebagai bahan baku pembuatan bioetanol [5]. Prospek pengembangan ampas kasar kecap sebagai bahan baku pembuatan bioetanol juga didukung oleh banyaknya industri pembuatan kecap di Indonesia, yaitu sejumlah 79 perusahaan [6] dengan total limbah 85 ton/tahun/pabrik [7]. Dengan demikian tujuan yang ingin dicapai pada penelitian ini yaitu mengetahui potensi ampas kasar kecap sebagai bahan dasar pembuatan etanol.

## METODE PENELITIAN
Fermentasi: isolat yang digunakan pada saat fermentasi adalah isolat I 2 YP 5 K 1 , Candida krusei dan S. cerevisiae. Setiap isolat umur 48 jam pada media Yeast Malt cair (0,3 % ekstrak khamir, 0,3 % ekstrak malt, 0,5 % pepton, dan 3 % glukosa) steril diinokulasi sebanyak 10 % ke media filtrat ampas kasar kecap 20 Brix 30 mL dan diinkubasi dengan penggojogan pada suhu 30 o C, kecepatan 120 rpm, selama 48 jam. Kemudian, sebanyak 10 % dari hasil inkubasi tersebut diinokulasi ke filtrat ampas kasar kecap 20 o Brix 100 mL, diinkubasi dengan penggojogan pada suhu 30 o C, kecepatan 120 rpm sampai jam ke-6, inokulum tersebut selanjutnya diinoukulasi ke media untuk proses fermentasi yaitu filtrat ampas kasar kecap 20 Brix 1000 mL. Fermentasi dilakukan pada suhu 30 o C, kecepatan 120 rpm, selama 3 hari. Setiap hari dilakukan pengukuran pH, suhu, dan kadar gula reduksi. Untuk pengukuran kadar etanol dilakukan dengan destilasi sebanyak 200 mL terlebih dahulu, kemudian distilat dianalisis dengan kromatografi gas.
meningkatkanflokulasi,mampu memanfaatkan gula dalam bentuk disakarida dan trisakarida, serta tidak membentuk gelembung busa [8].
Gambar 1. Perbandingan kadar etanol hasil fermentasi dengan isolat dan hari berbeda, I 2 YP 5 K 1 ( ), C. krusei ( ) dan S. cerevisiae ( ) *label huruf yang berbeda menandakan perbedaan hasil perlakuan yang signifikan (p<0,05)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar Etanol Hasil Fermentasi dari Isolat I 2 YP 5 K 1 , C. krusei dan S. cerevisiae: Perlakuan fermentasi filtrat ampas kasar kecap oleh S. cerevisiae pada hari ke-3 menunjukkan hasil yang paling maksimal (Gambar 1), sedangkan pada perlakuan oleh isolat I 2 YP 5 K 1 dan C. krusei pada hari ke-3 tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan. Rata- rata kadar etanol yang dihasilkan isolat S. cerevisiae, I 2 YP 5 K 1 dan C. krusei pada hari ke- 3 secara berturut-turut sebesar 4,07 %, 1,52 % dan 0,84 %. Dengan demikian dapat disimpulkan bahwa isolat yang dapat menghasilkan etanol dari filtrat ampas kasar kecap paling tinggi adalah isolat kontrol S. cerevisiae.
Pemanfaatan S. cerevisiae dalam skala industri sebagai organisme yang berperan dalam produksi etanol telah banyak dilakukan, beberapa kelebihan S. cerevisiae yaitu memiliki kemampuan fermentasi gula dengan lebih cepat, toleran terhadap alkohol serta dapat memproduksi etanol dengan konsentrasi tinggi, menghasilkan rasa dan aroma yang khas padaindustriminumanberalkohol,

## Pengaruh Waktu Inkubasi dan Jenis Isolat
Terhadap pH dan Produksi Etanol: Semakin lama waktu inkubasi, pH media semakin rendah yaitu dari 5,6 menjadi + 4,7, namun kadar etanol semakin tinggi. Peningkatan yang signifikan (p<0,05) terhadap kadar etanol terjadi pada perlakuan S. cerevisiae pada hari ke-3 dengan pH 4,72 (Gambar 2). Produksi etanol yang paling maksimal menggunakan S. cerevisiae dengan pH 4,5; 5,0; 5,5; 6,0; 7,0 dan 8 menghasilkan kadar etanol optimum pada pH kisaran 5,5 [9].

## Gambar 2. Pengaruh waktu inkubasi dan isolat
I 2 YP 5 K 1 ( ●), C. krusei ( ■), serta S. cerevisiae ( ▲) terhadap pH dan kadar etanol; Ket: kadar etanol - - -, pH
Konsentrasi ion hidrogen dalam media berperan penting dalam proses fermentasi, dimana pH tinggi dapat menghambat kontaminasibakteri,mempengaruhi pertumbuhan khamir, laju fermentasi dan terbentuknya produk sampingan (by-product)
[10]. Kecenderungan media fermentasi semakin asam disebabkan NH 3 (amonia) yang digunakan sel khamir sebagai sumber nitrogen diubah menjadi NH 4+ . Molekul NH 4+ akan menggabungkan diri ke dalam sel sebagai R- NH 3 . Dalam proses ini H + ditinggalkan dalam media. Sehingga semakin lama waktu fermentasi, semakin rendah pH media (semakin asam) [11].

## Pengaruh Waktu Inkubasi dan Jenis Isolat Terhadap Jumlah Sel dan Produksi Etanol:
Semakin tinggi jumlah sel maka kadar etanol yang dihasilkan semakin meningkat (Gambar 3). Kadar etanol yang paling tinggi dihasilkan saat perlakuan dengan S. cerevisiae pada hari ke-3 dengan jumlah sel sebesar 8,04 log cfu/mL. Namun, peningkatan jumlah sel pada tiap perlakuan tidak berbeda secara signifikan. Hal ini disebabkan oleh penghambatan etanol, selain itu dalam kondisi fermentasi, sel khamir tidak melakukan pembelahan sel dalam skala besar, karena energi yang didapatkan digunakan untuk memproduksi etanol, tidak untuk pertumbuhan.
untuk tumbuh dalam kondisi anaerob tidak tergantung dari kapasitas fermentasi saja. Kebanyakan khamir membutuhkan oksigen dalam jumlah yang terbatas untuk fermentasi glukosa, misalnya Hansenula nonfermentans.
Walaupun fermentasi terjadi dalam kondisi anaerobik,pertumbuhankhamirtetap tergantung pada keberadaan oksigen. Bahkan penambahan ergosterol dan unsaturated fatty acid yang merupakan media esensial dalam pertumbuhan khamir pada kondisi anaerob tidak mengurangi kebutuhan khamir terhadap oksigen [14].

## Pengaruh Waktu Inkubasi dan Jenis Isolat
Terhadap Kadar Gula (Brix) dan Produksi Etanol: Terjadi penurunan kadar gula diikuti dengan peningkatan konsentrasi etanol (Gambar 4), dimana konsumsi gula reduksi terbanyak adalah pada perlakuan S. cerevisiae pada hari ke-3 dengan kadar gula terendah sebesar 13,07 Brix dan kadar etanol sebesar 4,07 %. Kadar gula reduksi pada fermentasi dengan isolat S. cerevisiae menunjukkan penurunan secara signifikan pada hari ke-1 dan ke-2 sedangkan pada hari selanjutnya tidak terjadi penurunan kadar gula yang signifikan.
Namun, hal ini tidak berlaku untuk kadar etanol yaitu kadar etanol dengan perlakuan S. cerevisiae meningkat secara signifikan setiap hari. Produk sampingan pada awal fermentasi dihasilkan lebih lambat dibandingkan dengan laju konsumsi gula reduksi, namun laju konsumsi mengalami perlambatan pada hari selanjutnya [15].
Gambar 3. Pengaruh waktu inkubasi dan isolat
I 2 YP 5 K 1 ( ●), C. krusei ( ■), serta S. cerevisiae ( ▲) terhadap jumlah sel dan kadar etanol; ket: kadar etanol - - -, jumlah sel
Dalam kondisi fermentasi, terjadi kenaikan jumlah sel sebanyak 70 % pada jam ke-2,37 % pada jam ke-3,5 dan 29 % pada jam ke-6. Perlambatan kenaikan jumlah sel ini dipengaruhi oleh ketersediaan oksigen yang semakin sedikit selama proses fermentasi [12]. Hasil metabolisme pada jalur pentosa fosfat oleh khamir yang tergolong Crabtree positif (misalnya S. cerevisiae) didominasi oleh pembentukan NADPH, bukan pembentukan biomassa (sel) [13].
Pada prinsipnya, fermentasi dapat menyediakan energi yang cukup untuk pertumbuhan. Namun, kemampuan khamir
Gambar 4. Pengaruh waktu inkubasi dan isolat I 2 YP 5 K 1 ( ●), C. krusei ( ■), serta S. cerevisiae ( ▲) terhadap kadar gula dan kadar etanol; ket: kadar etanol - - -, kadar gula
Gula reduksi digunakan untuk aktivitas pertumbuhan dan pembentukan metabolit sekunder oleh mikroba. Penurunan kadar gula reduksi di akhir fermentasi mengindikasikan
terbentuknya metabolit (etanol). Hal ini ditunjukkan oleh perbedaan pH selama fermentasi [16].

## KESIMPULAN
Potensi ampas kasar kecap dalam menghasilkan etanol yaitu sebesar 4,07 % oleh isolat S. cerevisiae kemudian diikuti oleh isolat I 2 YP 5 K 1 dan C. krusei secara berturut-turut sebesar 1,52 dan 0,84 %.

## Pustaka
[1]. Djunedi. 2004. Dampak Surutnya Cadangan Minyak Indonesia. http:// www.fiskal.depkeu.go.id.Tanggal akses 20 Desember 2011
[2]. Siqueira, P. F., Susan G. K., Júlio C. C.,
Wilerson S., José A. R., Jean-Luc T., Reeta R. S., Ashok P., dan Carlos R. S. 2008. Production of Bio-ethanol fromSoybeanMolassesby Saccharomycescerevisiae at Laboratory, Pilot and Industrial Scales. Bioresource Technology 99: 8156 – 8163
[3]. Jeon, Bo Young dkk. 2007. Development of a Serial Bioreactor System for Direct Ethanol Production from
Starch Using Aspergillus niger and Saccharomycescerevisiae. BiotechnologyandBioprocess Engineering 12: 566-573
[4]. Supriyanto, T. dan Wahyudi. 2010. Proses Produksi Etanol oleh Saccharomyces cerivisiae dengan Operasi Kontinyu pada Kondisi Vakum. Skripsi. Jurusan Teknik Kimia, Fakultas Teknik, Universitas Diponegoro. Semarang [5]. Halimatussa’diah. 2007. Pencampuran
Tepung Hasil Isolasi Protein dari Limbah Padat Industri Kecap dengan Tepung Kaldu Ayam sebagai Penyedap Rasa Makanan. Skripsi. DepartemenKimia,Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan, Universitas Sumatera Utara. Medan [6]. Nugroho, A., Enny T. S., Herman T., dan Surahmanto. 1998. Evaluasi Limbah PadatKecapSebagaiPakan RuminansiaBerdasarkanUji Degradasi Substansi Serat Terlarut dalamAsam.LaporanHasil
Penelitian.PusatPenelitian Pengembangan Teknologi, Lembaga Penelitian, Universitas Diponegoro, Semarang [7]. Kementrian Perdagangan Republik Indonesia.2010.Direktori Perusahaan (Klasifikasi Lapangan Usaha di Indonesia : Kecap). http://www.kemendag.go.id/direktori _koleksi_pusdatin_perdagangan. Diakses tanggal 2 November 2011
[8]. Bisson, L. F. 2004. The biotechnology of wine yeast. Food Biotechnol 18:63 –
96.
[9]. Linden, T., Peetre, J., Hahn-Hagerdal, B. 1992. Isolation and characterization of acetic acid-tolerant galactose- fermenting strains of Saccharomyces cerevisiae from a spent sulphite liquor fermentation plant. Appl. Environ. Microb. 58:1661-1669.
[10]. Wayman M., dan Parekh S. R. 1990. BiotechnologyofBiomass Conversion: Fuel and Chemicals from Renewable Resources. Open University Press. Milton Keynes:
UK.
[11]. Judoamidjojo, R. M., Darwis A. A., dan Sa’id E. G. 1992. Teknologi
Fermentasi. Bogor: Departemen PendidikandanKebudayaan, DirektoratJenderalPendidikan Tinggi, Pusat Antar Universitas BioteknologiInstitutPertanian Bogor.
[12]. Visser W, Batenburg-van der V. W, dan Scheffers W. A. 1990. Oxygen requirements of yeasts.
Applied
EnvironmentalMicrobiology 56:3785 – 3792.
[13]. Miller, R. K. 2004. Monitoring spindle assembly and disassembly in yeast by indirect immunofluorescence. In “Cell cycle checkpoint control protocols.” H. B. Lieberman. Editor. Humana Press, USA, Totowa, NJ. Methods in Molecular Biology series. Vol 241. pp.341-352.
[14]. Blank, L. M. dan Sauer, U. 2004. TCA Cycle Activity in Saccharomyces cerevisiae is a Function of The EnvironmentallyDetermined Specific Growth and Glucose Uptake Rates. Microbiology 150:1085 – 1093.
[15]. Fales, F. W. 1951. The Assimilation and Degradation of Carbohydrates by
YeastCells.Departementof Physiology, Stanford University of Medicine, California.
[16]. Nur, H. S. 2009. Suksesi Mikroba dan AspekBiokimiawiFermentasi
Mandai dengan Kadar Garam Rendah. makara sains 13(1):13-16.