Efektivitas Ekstrak Biji Alpukat (Persea Americana Mill) Dalam Menjaga Viabilitas Sel Fibroblas Gigi Avulsi Pada Tikus Wistar Jantan
Effectiveness of Avocado Seed Extract (Persea Americana Mill) in Maintaining Fibroblast Cell Viability of Avulsed Teeth in Male Wistar Rats
1 Puspa Dila Rohmaniar * , 2 Dzanuar Rahmawan, 3 Basma Rosandi Prakosa Fakultas Kedokteran Gigi, Institut Ilmu Kesehatan Bhakti Wiyata Kediri
Info Artikel Abstrak Sejarah Artikel : Submitted:2023-08-27 Accepted : 2023-12-07 Publish Online : 2023- 12-23 Latar  Belakang :  Avulsi  merupakan  trauma  kompleks  yang  ditandai  dengan lepasnya  gigi  dari  socketnya.  Kondisi  avulsi  memerlukan  segera  tindakan replantasi  untuk  mengembalikan  gigi  pada  socketnya.  Keberhasilan  tindakan tersebut  dipengaruhi  oleh  viabilitas  dari  sel  fibroblas.  Biji  alpukat (Persea Americana  Mill) merupakan  salah  satu  tanaman  yang  mudah  didapatkan  dan mengandung  senyawa  flavonoid  dan  saponin  yang  memiliki  aktivitas antiinflamasi, antioksidan, serta antibakteri. Ekstrak biji alpukat diketahui berperan dalam  penyembuhan  luka  untuk  meningkatkan  jumlah  sel  fibroblas. Tujuan: untuk  mengetahui  efektivitas  ekstrak  Biji  Alpukat  dalam  menjaga  viabilitas  sel fibroblas  gigi  avulsi  pada  tikus  wistar  jantan. Metode: Sampel  yang  digunakan adalah 24 gigi tikus wistar diekstraksi dan dibagi menjadi 2 kelompok, 1 kelompok kontrol  dan  1  kelompok  perlakuan,  dimana  masing-masing  kelompok  dibagi menjadi  2  subkelompok  berdasarkan  lama  perendaman  yaitu  30  dan  60  menit. Selanjutnya sel fibroblas pada ligamen periodontal ditripsinasi kemudian dihitung dengan  hemositometer  pada  mikroskop  cahaya.  Data  kemudian  dilakukan pengujian menggunakan software SPSS 24. Hasil: Terdapat perbedaan signifikan jumlah viabilitas sel fibroblast pada perendaman dengan menggunakan ekstrak biji alpukat dan HBSS. Simpulan: Perendaman dengan menggunakan HBSS 30 menit menghasilkan viabilitas sel fibroblast yang paling baik.
Kata Kunci: Avulsi, Viabilitas,
Fibroblast, Alpukat Keywords:
Avulsion, Viability,
Fibroblast, Avocado Abstract
Background: Avulsion  is a complex trauma characterized by the loss of a tooth from  its  socket.  Its  requires  immediate  replantation  to  return  the  tooth  to  its socket.  The  success  of  replantation  influenced  by  the  viability  of  the  fibroblast cells.  Avocado  seed  (Persea  Americana  Mill)  is  a  plant  that  is  easily  available and contains flavonoids and saponins which have anti-inflammatory, antioxidant and  antibacterial  activities.  Its  known  to  play  a  role  in  wound  healing  by increasing  the  number  of  fibroblast  cells.  Objective:  to  determine  the effectiveness of avocado seed extract in maintaining the viability of avulsed tooth fibroblast cells in male Wistar rats. Methods: The sample used was 24 Wistar rat teeth  extracted,  there  are  1  control  group  and  1  treatment  group,  where  each group  was  divided  into  2  subgroups  based  on  soaking  time,  namely  30  and  60 minutes. Furthermore, fibroblast cells in the periodontal ligament are trypsinated and  then  counted  with  a  hemocytometer  on  a  light  microscope.  The  data  were then tested using SPSS 24 software. Results: There was a significant difference in the  amount  of  fibroblast  cell  viability  in  immersion  using  avocado  seed  extract and  HBSS.  Conclusion:  Soaking  using  HBSS  for  30  minutes  produced  the  best fibroblast cell viability.

## PENDAHULUAN
Trauma dentoalveolar merupakan cedera yang dapat mengakibatkan terjadinya luksasi, avulsi,  fraktur  gigi,  trauma  tulang  alveolar  serta  jaringan  disekitar  lokasi  trauma  (Arbi,  etl  al., 2016). Avulsi adalah cedera traumatis kompleks yang ditandai dengan terlepasnya seluruh gigi dari soketnya dan dapat menyebabkan kerusakan parah pada jaringan pendukungnya (Khinda, et al.,  2017).  Salah  satu  tindakan  untuk  mengembalikan  gigi  yang  avulsi  adalah  dengan  tindakan replantasi. Replantasi adalah penanaman kembali gigi avulsi ke dalam soket gigi yang bertujuan untuk  mengembalikan  tampilan  estetik  dan  mempertahankan  gigi  secara  fungsional  pada tempatnya  untuk  pertumbuhan  normal  alveolar  ridge  (Demir,  et  al.,  2020).  Keberhasilan replantasi gigi tergantung pada pemeliharaan viabilitas sel ligamen periodontal (fibroblas) yang melekat  pada  gigi  yang  avulsi.  Replantasi  gigi  dianjurkan  untuk  dilakukan  secepat  mungkin untuk  menjaga  viabilitas  sel  fibroblas.  Viabilitas  sel  fibroblas  akan  berkurang  jika  gigi  tidak dilakukan replantasi sebelum 60 menit (Abraham, et al., 2021). Tindakan replantasi gigi avulsi memerlukan  media  penyimpanan  untuk  meningkatkan  dan  mempertahankan  viabilitas  sel ligamen  periodontal  (Khinda,  et  al.,  2017).  The  American  Association  of  Endodontic merekomendasikan Hanks Balances Salt  Solution  (HBSS) sebagai pilihan media penyimpanan terbaik  untuk  gigi  avulsi,  karena  bersifat  biokompatibel  terhadap  sel  ligamen  periodontal, memiliki  semua  elektrolit  dan  glukosa  yang  dibutuhkan  untuk  mempertahankan  metabolisme normal  sel  ligamen  periodontal  dan  memiliki  pH  seimbang  8,9.  HBSS  tidak  tersedia  secara umum  di  Indonesia,  sehingga  diperlukan  media  penyimpanan  alternatif  yang  dapat  menjaga viabilitas sel fibroblast (Fajriyany et al., 2016). Syarat media penyimpanan harus memiliki sifat tertentu yang membuatnya dapat diterima untuk mempertahankan gigi avulsi, antara lain mudah didapat, memiliki sifat  antimikroba, serta mampu menjaga  sel ligamen periodontal (Khinda, et al., 2017). Pada beberapa penelitian dilaporkan bahwa terdapat beberapa media  alternatif yang mudah didapatkan dipasaran salah satunya yaitu buah alpukat (Khinda, et al., 2017). Selama ini alpukat  hanya  dimanfaatkan  buahnya  saja  untuk  dikonsumsi,  sedangkan  biji  alpukat  tidak banyak  dimanfaatkan.  Biji  alpukat (Persea  Americana  Mill) memiliki  kandungan  senyawa alkaloid,  flavonoid,  tanin,  saponin,  terpenoid  atau  steroid  dan  fenolik  yang  memilikin  sifat antimikroba  (ambarwati  &Rustianai,  2022).  Pada  tindakan  replantasi  gigi  akan  melibatkan proses penyembuhan, dimana sel yang telibat adalah sel fibroblast. Sel fibroblast yang melekat pada  akar  gigi  memiliki  peranan  dalam  pembentukan  ligament  periodontal.  Flavonoid  dan saponin  memiliki  peranan  dalam  peningkatan  jumlah  fibroblast.  Perendaman  gigi  tikus  wistar jantan  dilakukan  dengan  durasi  waktu  30  dan  60  karena  waktu-waktu  tersebut  merupakan golden periode gigi avulsi(Moradian, et al., 2013; Fouad et al., 2020).

## METODE PENELITIAN
Jenis  Penelitian  ini  adalah true  eksperimental  laboratoris dengan  rancangan  penelitian post  test  only  control  group  design .  Berdasarkan  rumus  perhitungan  besar  sampel  Federer, sampel yang digunakan adalah 24 gigi tikus wistar diekstraksi dan dibagi menjadi 2 kelompok, 1  kelompok  kontrol  dan  1  kelompok  perlakuan,  dimana  masing-masing  kelompok  dibagi menjadi 2 subkelompok berdasarkan lama perendaman yaitu 30 dan 60 menit.
Pada penelitian ini menggunakan tikus wistar jantan yang berumur 2-3 bulan sebanyak 246 ekor dengan berat 150-250 gram. Sebelum diberikan perlakuan, tikus wistar diadaptasikan selama 7-14 hari di dalam kandang.
Pembuatan  ekstrak  biji  alpukat  diawali  dengan  membersihkan  biji  alpukat  yang  telah
dipisahkan dari buahnya, kemudian ditiriskan dan dibentuk simplisia serbuk. Serbuk biji alpukat ditimbang  sebanyak  250  g,  dimasukkan  dalam  bejana  maserasi  menggunakan  etanol  70%. Selanjutnya disaring untuk memisahkan ekstrak cair dan ampas, ampas selanjutnya diremaserasi dengan pelarut yang sama sebanyak 2 kali.
Pencabutan  gigi  tikus  diawali  dengan  tindakan  sterilisasi  alat.  Tikus  dianestesi  dengan secara  peritoneal  menggunakan  ketamin  40-80  mg/kgBB . Pencabutan  dilakukan  pada  gigi insisivus  kiri  rahang  bawah  menggunakan  scalpel  dan needle  holder dengan  arah  pencabutan labial-lingual  kemudian  ditarik  ke  arah  labial  secara atraumatic  extraction. Kemudian  soket gigi diirigasi menggunakan saline solution (Luthfi et al, 2020) . Gigi tikus dibagi menjadi 4 kelompok yaitu kelompok perendaman ekstrak biji alpukat dan kelompok kontrol dengan perendaman  HBSS, masing-masing kelompok terdiri dari 6 gigi yang  direndam  selama  30  dan  60  menit.  Gigi  diambil  dari  larutan  penyimpanan  dengan pemegangan pada korona gigi, lalu dilakukan trypsinasi untuk merontokkan sel selama 30 menit di cawan petri mini dengan 4ml larutan  versen  trypsin  (VT) sembari dikocok perlahan dengan rotomix.  Larutan  VT  dipindahkan  ke  dalam falcon  tube dan  ditambahkan  400µl fetal  bovine serum (FBS)  pada  masing-masing  tube.  Seluruh  tube  disentrifus  selama  4  menit  dengan kecepatan 1.500 rpm (Fajriyany et al., 2016).
Penghitungan sel mati dan sel hidup fibroblas dilakukan dibawah mikroskop cahaya dan dilakukan penghitungan dengan hemositometer dengan cara:
1. Pastikan hemositometer sudah bersih menggunakan etanol 70%.
2.  Campurkan  perlahan  endapan  sel  dan  trypan  blue  0,4%  dengan  perbandingan  1:1  (endapan sel  10µl  dengan  trypan  blue  0,4%  10µl)  kemudian  di  campurkan  dalam  eppendorf  tube (Hadisaputri & Abdulah, 2020).
3.  Pipet  10µl  campuran  suspensi  sel  dan  trypan  blue  kemudian  dimasukkan  ke  dalam hemositometer (Hadisaputri & Abdulah, 2020).
4. Hemositometer terdiri dari sembilan kotak besar di dalam kotak besar terdiri dari kotak-kotak kecil.  Penghitungan  sel  dengan  hemositometer  menggunakan  kotak  yang  berada  disudut  dari sembilan  kotak  tersebut  dimana  masing-masing  kotak  terdiri  dari  16  kotak  kecil  dengan permukaan yang sama di dalamnya (Hadisaputri & Abdulah, 2020).
5.  Hemositometer  diletakkan  dibawah  mikroskop  cahaya  menggunakan  pembesaran  10X20 (Kaur, et al., 2018). Lakukan penghitungan sel dimulai dari sudut kiri atas ke kanan, kemudian ke  bawah  dari  kanan  ke  kiri,  setelah  itu  ke  bawah  dimulai  lagi  dari  kiri  ke  kanan.  Semua  sel yang  menyentuh  garis  batas  sebelah  atas  dan  kiri  dianggap  masuk  ke  dalam  ruangan  dan dihitung,  sedangkan  sel  yang  menyentuh  garis  batas  sebelah  kanan  dan  bawah  dianggap  tidak masuk dan tidak dihitung (Hadisaputri & Abdulah, 2020).
6. Sel yang hidup akan memiliki sitoplasma yang jernih, sedangkan sel yang mati akan memiliki sitoplasma biru(Kaur, et al., 2018).
7.Presentase jumlah viabilitas dihitung dengan rumus:
% Viabilitas sel = (Jumlah sel hidup /umlah total seluruh sel) x 100%
Penghitungan sel mati dan sel hidup fibroblas dilakukan dibawah mikroskop cahaya dan dilakukan penghitungan dengan hemositometer, diperoleh gambaran sebagai berikut:
a.                                                                     b.
Gambar Hasil sel fibroblas pada perendaman 30 menit: a. HBSS; b. Ekstrak biji alpukat
a.
b.
Gambar Hasil sel fibroblas pada perendaman 60 menit: a. HBSS; b. Ekstrak biji alpukat
Sel fibroblast hidup merupakan gambaran sel fibroblast dengan bentuk bulat, sedangkan bentuk sel lain yang tidak berbentuk bulat dihitung sebagai total sel.
Hasil dari penghitungan jumlah sel fibroblas diperoleh hasil sebagai berikut:

## Tabel 1 Persentase viabilitas sel fibroblas pada perendaman 30 dan 60 menit
Sel fibroblas hidup Total% Viabilitas sel Std dev Perendaman 30 menit Ekstrak Biji Alpukat 107 265 40.37% 4.37 HBSS 665 736 90.35% 3.55 Perendaman 60 menit Ekstrak Biji Alpukat 60 178 33.7% 13.49 HBSS 619 713 86.81% 4.31
Hasil  data  yang  tertera  pada  tabel  1  menunjukkan  jumlah  sel  fibroblas  yang  hidup      setelah      dihitung menggunakan   hemositometer,   kemudian   dilakukan perhitungan % viabilitas sel menggunakan rumus jumlah  sel  hidup  /  jumlah  jumlah  total  seluruh  sel  x  100%.  Sel  fibroblas  hidup  pada  kelompok perendaman  menggunakan  HBSS  dengan    lama    perendaman    30    menit    menunjukkan    hasil    paling besar  yaitu  665 dengan prosentase viabilitas sel yaitu 90.35% dan kelompok dengan perendaman ekstrak biji alpukat dengan  lama  perendaman  60  menit  menunjukkan  hasil  paling  kecil  yaitu  60 dengan % viabilitas sel yaitu 33.7%
Pada    penelitian   ini,  dilakukan  analisis  data  untuk  mengetahui  perbedaan signifikansi  pada masing- masing   kelompok.  Analisis  data  yang  digunakan  adalah  uji   non-parametrik menggunakan
uji  Kruskal  Walls  dan  dilanjutkan  dengan  uji  lanjutan  Post  Hoc  LSD.  Uji  normalitas  menggunakan Saphiro  Wilk  karena  jumlah  sampel  kurang  dari  50  (n≤50)  dan  untuk  uji  homogenitasmenggunakan Levene’s test.
Tabel 2. Uji normalitas Saphiro Wilk Bahan Rendaman Shapiro-Wilk (Sig) Ekstrak Biji Alpukat 30 menit 0.053 HBSS 30 menit 0.45 Ekstrak Biji Alpukat 60 menit 0.53 HBSS 60 menit 0.78
Tabel 2 menunjukkan hasil uji normalitas data menggunakan uji Saphiro Wilk.  Hasil  menunjukkan  nilai signifikansi  seluruh kelompok memilili nilai signifikansi lebih dari 0.05, sehingga data tersebut berdistribusi normal (p>0.05).

## Tabel 3 Levene test
Sig Based on Mean 0.007 Based on Median 0.029 Based on Median and with adjusted df 0.079 Based on Trimmed mean 0.005
Tabel   3  menunjukkan   hasil   uji   homogenitas   data   menggunakan   uji Levene’s.  Hasil menunjukkan  nilai  signifikansi  pada  masing- masing  kelompok berdasarkan rata rata yaitu 0.007, sehingga data tersebut tidak homogen (p<0.05).
Berdasarkan  hasil  uji  normalitas  dan  uji  homogenitas,  diketahui  bahwa  data  tidak    homogen. Syarat  analisis  data  menggunakan  uji  One  Way  ANOVA  tidak terpenuhi, sehingga akan dilakukan analisis  data  menggunakan  uji  non  parametrik  menggunakan  uji  Kruskal  Wallis  kemudian  dilanjutkan dengan uji Mann Whitney.

## Tabel 4 Uji beda Kruskal Wallis
Persentase Kruskal-Wallis H 32.495 Asymp Sig. .000
Hasil menunjukkan nilai signifikansi  adalah  0.000.  Nilai  ini  lebih  kecil  dari  0.05 (p<0.05),  sehingga dapat  dilihat  bahwa  terdapat  perbedaan signifikan antar kelompok HBSS dan perendaman biji alpukat. Berdasrkan hasil uji Kruskal Wallis, selanjutnya dilakukan uji lanjutan Mann Whitney untuk mengetahui perbedaan pada setiap kelompok.

## Tabel 5 uji Mann Whitney
Ekstrak biji alpukat 30' Ekstrak biji alpukat 60' HBSS 30' HBSS 60' Ekstrak biji alpukat  30’ - 0.2 0.004* 0.004*
Ekstrak biji alpukat  60’ 0.2 - 0.004* 0.004* HBSS 30' 0.004* 0.004* - 0,109 HBSS 60' 0.004* 0.004* 0.109 -
Tabel  5  merupakan   hasil  uji   lanjutan   menggunakan  uji   Mann   Whitney untuk  perbedaan kemampuan    dari    masing-masing    kelompok      dalam    menjaga  viabilitas  sel  fibroblas  gigi  avulsi  pada tikus  wistar  jantan  antara  kelompok  kontrol  dengan  kelompok  perlakuan  baik  dalam  perendaman  30 menit maupun perendaman 60  menit.  Hasil  nilai  signifikansi  p<0.05  menunjukkan  adanya  perbedaan yang  bermakna  antar    kelompok.    Hasil    tersebut  menunjukkan  bahwa    ekstrak    biji  alpukat  memiliki perbedaan  yang  signifikan  dengan  kelompok  perendaman  HBSS  pada  perendaman  30  menit  dan  60 menit.

## PEMBAHASAN
Berdasarkan hasil  menunjukkan  bahwa   kelompok perendaman dengan menggunakan HBSS ataupun ekstrak biji alpukat selama 30 menit menunjukkan hasil persentase yang tinggi, hal  ini  dikarenakan  sel  ligamen  periodontal    memiliki    kemampuan    untuk    berikatan    dan berproliferasi    kembali  dengan  permukaan  akar  selama  30  menit.    Setelah  30  menit  kapasitas fungsional ligamen periodontal akan mengalami penurunan (Kenny et al ., 2000).
Berdasarkan  hasil  uji  senyawa  aktif  yang  ada  di  dalam  kandungan  ekstrak  biji  alpukat pada  penelitian  ini,  biji  alpukat  memiliki  kandungan  senyawa  aktif  tanin  yang  paling    tinggi yaitu    sebesar    6,18%,    flavonoid    sebesar    4,05%    dan    saponin  sebesar  5,11%.  Ketiga kandungan  ekstrak  biji  alpukat  tersebut  kemungkinan  berperan  untuk  menjaga      vitalitas      sel fibroblas   karena   memiliki   aktivitas   antibakteri   dan antioksidan. Aktivitas antibakteri pada senyawa-senyawa  tersebut  dapat  berperan  sebagai    pelindung    sel    dari    bakteri    dan    virus sehingga  proses  proliferasi  tidak terganggu (Sofiyah, 2014). Sedangkan, aktivitas antioksidan pada  dapat      melindungi      proliferasi      fibroblas      dari      kerusakan      akibat      stres      oksidatif Nurdiana  et  al  (2016).  Sesuai  dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Nurdiana  et  al  (2016), senyawa saponin dapat berperan dalam proliferasi sel fibroblas dengan cara   saponin   memiliki aktivitas      antibakteri.      Selain      itu,      saponin      juga      akan  mengaktifkan      fungsi      dari transforming      growth      factor      β  (TGF-β),      vascular  endothelial  growth  factor  (VEGF)  dan fibroblas  growth  factor-1  (FGF-1).  TGF-β  dan    FGF-1    akan    menstimulasi    migrasi    dan proliferasi    fibroblas.      Kandungan  senyawa    yang    juga    diduga    dapat    berperan    dalam proliferasi    sel    fibroblas  yaitu  kandungan  tanin.  Menurut  penelitian  yang  dilakukan  oleh Nurdiana et al (2016), senyawa tanin dapat berperan dalam proloferasi sel fibroblas dengan cara tanin merupakan antioksidan yang juga memiliki kemampuan untuk menginduksi TGF-β untuk proliferasi fibroblas. Tanin juga menginduksi limfokin untuk  meningkatkan  migrasi  makrofag. Makrofag  merangsang  sekresi  growth factor sehingga meningkatkan proliferasi fibroblas.
Selain  saponin  dan  tanin,  terdapat  senyawa  lain  yang  berperan   dalam proliferasi sel  fibroblas   yaitu   flavonoid.  Sesuai  penelitian   yang   dilakukan  oleh Kurnia et  al  (2015), flavonoid  dapat  berperan  sebagai  antioksidan  dan  antibakteri.  Mekanisme    flavonoid    dalam proliferasi    sel    fibroblas    yaitu    dapat    meningkatkan  aktivitas  IL-2  dan  proliferasi  limfosit. Proliferasi  limfosit  akan  mempengaruhi  sel  CD4+,  yang  kemudian  menyebabkan  sel  Th1 teraktivasi. Sel Th1 yang teraktivasi akan mempengaruhi SMAF (Spesific Makrofag Activating Factor),  yaitu  molekul-  molekul  multipel  yang  dapat  mengaktifkan  makrofag.  Makrofag  yang
aktif dapat memproduksi  hormone  pertumbuhan  (growth  factor)  yang  dapat  meningkatkan proliferasi fibroblas.
Namun  pada  penelitian  ini  menunjukan  bahwa  jumlah  viabilitas  sel  fibroblast  dengan perendaman  ekstrak  biji  alpukat  tidak  sebaik  perendaman  dengan  HBSS.  Pada  perendaman ekstrak  biji  alpukat  baik  pada  penyimpanan  30menit  ataupun  60  menit  memiliki  perbedaan signifikan  dengan  perendaman  dengan  HBSS.  Jumlah  viabilitas  sel  fibroblast  dengan perendaman  biji  alpukat  lebih  sedikit  daripada  perendaman  HBSS.  Beberapa  penelitian  media penyimpanan  gigi  avulsi  telah  banyak  dilakukan.  Media  penyimpanan  yang  paling  ideal  dan telah diuji adalah Hank’s Balanced Salt Solution (HBSS). The     American     Association of     Endodontics juga merekomendasikan HBSS sebagai media penyimpanan pilihan untuk gigi  avulsi  karena    kemampuannya    untuk    mempertahankan    viabilitas    sel.    Media    tersebut memiliki   elektrolit   dan   glukosa   yang   dibutuhkan   untuk   mempertahankan metabolisme normal  sel  dalam  jangka  waktu  panjang.  HBSS  memiliki  pH  seimbang 7 ,2  dan  memiliki osmolalitas  320  mOsm/l  (Khinda et  al .,  2017).  Berdasarkan  hasil  penelitian      yang      telah dilakukan   oleh   Hwang et   al .   (2011),   HBSS   dapat mempertahankan sel fibroblas vital pada 24 jam pertama sebesar 93,3%. Meskipun demikian, HBSS tidak tersedia di banyak tempat kejadian  traumatis  yang  biasanya  terjadi    seperti    di  sekolah,  rumah,    perkemahan    dan  arena olahraga    dimana    orang  aktif    secara    fisik.    Sebagai    media    penyimpanan    HBSS    tidak banyak  dikenal dikalangan masyarakat dan cukup mahal (Khinda et al ., 2017).

## SIMPULAN
Terdapat  perbedaan  signifikan  antara  jumlah  viabilitas  sel  fibroblast  pada  gigi  avulsi yang  direndam  ekstrak  biji  alpukat  dan  HBSS.  Gigi  yang  direndam  dengan  HBSS  memiliki viabilitas  jumlah  sel  fibroblast  yang  lebih  banyak  daripada  gigi  avulsi  yang  direndam  dengan ekstrak biji alpukat.

## SARAN
Disarankan  untuk  melakukan  penelitian  dengan  menggunakan  prosentase  ekstrak  biji alpukat yang berbeda.

## REFERENSI
Abraham, Y., Christy, R., Gomez-Kunicki, A., Cheng, T., Eskarous, S., Samaan, V., Khan, A.,
& Sholapurkar, A. 2021. Management of dental avulsion injuries: A survey of dental support staff in cairns, australia. Dentistry Journal , 9 (1), 1–13. https://doi.org/10.3390/dj9010004
Alim, N., Hasan, T., Rusman, & Jasmiadi. 2022. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Biji Alpukat (Persea americana Mill .) Asal Enrekang. Prosiding Seminar Nasional SAINS Dan Terapan (SINTA) , VI (April), 166–175.
Ambarwati, R., & Rustiani, E. 2022. Formulasi dan Evaluasi Nanopartikel Ekstrak Biji Alpukat (Persea Americana Mill) Dengan Polimer Plga. Majalah Farmasetika , 7 (4), 305.
https://doi.org/10.24198/mfarmasetika.v7i4.38549
Arbi, T.A., Novita, C.F. & Mulya. 2016. Tingkat Pengetahuan Dokter Gigi Muda Terhadap Penanganan Trauma Dentoalveolar Di Rumah Sakit Gigi Mulut Universitas Syiah Kuala. Cakradonya Dent Journal, Vol. 8, No. 2:98-104
Aslantürk, Ö. S. 2018. In Vitro Cytotoxicity and Cell Viability Assays: Principles, Advantages, and Disadvantages. Genotoxicity - A Predictable Risk to Our Actual World , 1–18. https://doi.org/10.5772/intechopen.71923
Demir, P., Guler, C., Kizilci, E., & Keskin, G. 2020. Survival of Avulsed Permanent Incisors in Children Following Delayed Replantation. Niger J Clin Pract Vol. 23, Issue 5:631-637
Luthfi, M., Juliastuti, W.S., Rizky, Y.A., Wijayanti, E.H., Rachmawati, A.E. & Asyhari, N.P.O.
2020. Expression of Fibroblas Cells After Extraction of Wistar Rat Teeth After Topical Application of Okra Fruit ( Abelmoschus esculentus ) Gel. Infectious Disease Reports,
Volume 12, Number s1: 8476.
Fajriyany, F. R., Harijadi, A., Kamadjaja, D. B., Program, M., Gigi, S. K., Departemen, S., Mulut, B., Fakultas, M., & Gigi, K. 2016. Perbandingan efektivitas air kelapa kemasan dan susu UHT sebagai media penyimpanan gigi avulsi (Comparison of effectiveness of bottled coconut water and UHT milk as storage media for avulsed tooth). J. Oral and Maxillofacial Surgery , 5 (2), 20–26.
Fouad, A. F., Abbott, P. V., Tsilingaridis, G., Cohenca, N., Lauridsen, E., Bourguignon, C.,
O’Connell, A., Flores, M. T., Day, P. F., Hicks, L., Andreasen, J. O., Cehreli, Z. C., Harlamb, S., Kahler, B., Oginni, A., Semper, M., & Levin, L. 2020. International
Association of Dental Traumatology guidelines for the management of traumatic dental injuries: 2. Avulsion of permanent teeth. Dental Traumatology , 36 (4), 331–342. https://doi.org/10.1111/edt.12573
Kaur, B., Faktorová D, & Lukeš J. 2018. Cell Counting using a Haemocytometer (Naeubauer cell chamber) with Fixer. Genotoxicity - A Predictable Risk to Our Actual World , 1–17.
Kenny, J. D., Barret, E. J., Johnston, D. H., Sigal, M. J., & Tetenbaum, H. C. 2000. Clinical Management of Avulsed Permanent Incisors Using emdogain: Initial Report of an Investigation. Clinical Practice. 66(1):21.
Khinda, V. I., Brar, G. S., Kallar, S., & Khurana, H. 2017. Clinical and Practical Implications of Storage Media used for Tooth Avulsion. International Journal of Clinical Pediatric Dentistry , 10 (2), 158–165. https://doi.org/10.5005/jp-journals-10005-1427
Kurnia, P. A., Ardhiyanto, H., & Suhartini. 2015. Potensi ekstrak teh hijau (Camellia sinensis) terhadap peningkatan jumlah sel fibroblas soket pasca pencabutan gigi pada tikus wistar. E- Jurnal Pustaka Kesehatan , 3 (1), 122–127.
Moradian, H., Badakhsh, S., Rahimi, M., & Hekmatfar, S. 2013. Replantation of an avulsed maxillary incisor after 12 hours: Three-year follow-up. Iranian Endodontic Journal , 8 (1), 33–36.
Mutiarahmi, C. N., Hartady, T., & Lesmana, R. (2021). Use of Mice As Experimental Animals in Laboratories That Refer To the Principles of Animal Welfare: a Literature Review. Indonesia Medicus Veterinus , 10 (1), 134–145. https://doi.org/10.19087/imv.2020.10.1.134
Ulya, I., & Putra, I. P. R. A. (2016). Pengaruh Pemberian Gel Ekstrak Daun Melati (Jasminum Sambac L. Ait) Terhadap Jumlah Fibroblas Kulit Dalam Penyembuhan Luka Bakar Derajat Ii A Pada Tikus Putih (Rattus Norvegicus) Galur Wistar. Jurnal Ilmu Keperawatan (Journal of Nursing Science) , 4 (1), 1–11. https://doi.org/10.21776/ub.jik.2016.004.01.1