## KANDUNGAN KOMPONEN BIOAKTIF DAN AKTIVITAS ANTIMIKROB
EKSTRAK BINTANG LAUT ( Culcita
schmideliana )
Bioactive Compound and Antimicrobial Activities of Sea Star

## Culcita schmideliana Extract
Kustiariyah Tarman 1,2 *, Hana Nurullita Prestisia 1 , Iriani Setyaningsih 1 , Meydia 2 , Yogiara 3 , Jae-Kwan Hwang 3
1 Departemen Teknologi Hasil Perairan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Institut Pertanian Bogor 2 Pusat Kajian Sumberdaya Pesisir dan Lautan, Lembaga Penelitian dan Pengabdian kepada Masyarakat Institut Pertanian Bogor
3 Departement of Biotechnology, Yonsei University, Republic of Korea, Seodaemun-gu Seoul 120749 Diterima 18 Oktober 2012/Disetujui 24 Desember 2012

## Abstract
Sea  star Culcita  schmideliana is  a  species  from  an  Asteroidean  class  which  is  potential  as  antimicrobial source. The aims of this study were to investigate the active compounds of the extracts and their antimicrobial activity.  Phytochemical  test,  antimicrobial  assay,  fractionation  with  thin  layer  chromatography,  and bioautography  were  performed  in  this  study.  The  result  of  the  qualitative  phytochemical  test  showed  that methanol  extract  contained  alkaloid,  steroid,  flavonoid,  saponin,  and  ninhidrin,  whereas  n-hexane  and  ethyl acetate extracts contained steroids and saponins. The highest antimicrobial activity was showed by ethyl acetate extract at 2 mg/well with diameter of inhibition zone was 16 mm. Fractination with TLC revealed 7 spots under UV light at λ 254 and one spot at λ 366 nm. Bioautography of ethyl acetat extract using B. subtilis revealed inhibition zone at Rf = 0.02 (7 mm) and Rf = 0.62 (3 mm).
Key words: antimicrobial, bioautography, phytochemical, thin layer chromatography

## Abstrak
Bintang  laut Culcita  schmideliana merupakan  salah  satu  spesies  dari  kelas  Asteroidea  yang  memiliki potensi  sebagai  antimikrob.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  menentukan  komponen  bioaktif  dan  aktivitas antimikrob  dari  bintang  laut C.  schemidelian a.  Penelitian  ini  dilakukan  melalui  beberapa  uji,  yaitu  uji komponen fitokimia, uji aktivitas antimikrob, dan fraksinasi dengan kromatografi lapis tipis, serta bioautografi. Hasil  uji  fitokimia  secara  kualitatif  menunjukkan  bahwa  ekstrak  metanol  mengandung  alkaloid,  steroid, flavonoid, saponin, dan ninhidrin, sedangkan ekstrak n-heksan dan etil asetat mengandung steroid dan saponin. Aktivitas  antimikrob  terbesar  ditunjukkan  oleh  ekstrak  etil  asetat  dengan  konsentrasi  2  mg  yaitu  sebesar  16 mm.  Fraksinasi  KLT  diidentifikasi  memiliki  7  bercak  pada  lampu  sinar  UV  λ  254  nm  dan  UV  λ  366  nm menghasilkan  1  bercak.  Pengamatan  bioautografi  terhadap  bakteri B.  subtilis menghasilkan  zona  hambat sebesar 7 mm pada Rf = 0,02 dan pada Rf = 0,62 menghasilkan zona hambat sebesar 3 mm.
Kata kunci: antimikrob, bioautografi, fitokimia, kromatografi lapis tipis

## PENDAHULUAN
Mikrob  patogen  merupakan  salah satu  penyebab  penyakit  pada  manusia  dan makhluk hidup lainnya. Banyak usaha yang
*Korespondensi:  Jln.  Lingkar  Akademik,  Kampus  IPB Dramaga.  Telp.  +622518622915  Fax.  +622518622916 e-mail:E-mail: kustya@gmail.com
telah  dilakukan  untuk  melawan  mikrob patogen  tersebut  yaitu  dengan  menemukan senyawa  kimia  yang  dapat  menghambat pertumbuhan dan membunuh bakteri. Senyawa-senyawa  tersebut  dikenal  dengan nama  antibiotik  (Pelczar  dan  Chan  2008). Penggunaan antibiotik sintetik maupun semi-
sintetik umumnya memiliki efek samping yang tidak  diharapkan  terutama  apabila  antibiotik tersebut digunakan secara terus-menerus.
Produk  bahan  alam  yaitu  metabolit sekunder,  baik  senyawa  murni  maupun  dalam bentuk  ekstrak,  memiliki  peluang  untuk dikembangkan dalam dunia pengobatan.
Senyawa  bahan  alam  tersebut  memiliki  efek terapis yang signifikan terhadap bakteri, jamur, maupun  virus  yang  bersifat  patogen  terhadap hewan  dan  manusia.  Efek  terapis  yang ditimbulkan  lebih  aman  tanpa  efek  samping (Parthasarathy et al . 2009).
Biota  laut  potensial  sebagai  sumber antimikrob,  diantaranya  adalah  bintang  laut Certonardoa semigularis (Wang et al . 2003), Anasterias  minuta (Chludil et  al .  2000; Maier et al . 2007), spons Axinella sp. (Heras dan Hortelano  2009),  timun  laut  (Samuel et al . 2011), dan bulu babi Tripneustes gratilla (Abubakar et al . 2012). Bintang laut Culcita schmideliana merupakan  salah  satu  spesies dari kelas  Asteroidea  dan  merupakan kelompok  Echinodermata.  Bintang  laut  ini banyak  ditemukan  di  Perairan  Pantai Lampung.  Populasi  bintang  laut  yang melimpah  ini  yang  mendasari  penelitian  ini untuk mengetahui potensi komponen bioaktif dan aktivitas antimikrob ekstrak bintang laut.
Beberapa penelitian tentang senyawa bioaktif  dari  bintang  laut  masih  terbatas  pada penemuan  senyawa  yang  belum  diketahui aktivitasnya.  Tang et  al .  (2005)  dan  Guo et  a l.
(2009)  menyatakan  bahwa  streroidal  glikosid merupakan  metabolisme  utama  dari  bintang  laut dan  umumnya  mengandung  racun.  Bintang  laut memiliki  komponen  aktif  yang  dibagi  menjadi tiga  kelompok  utama  berdasarkan  strukturnya yaitu  asterosaponin,  siklis  steroidal  glikosid  dan glikosid  dari  steroid polyhidroxylated .  Guo et  al .
(2009) menyatakan bahwa asterosaponin memiliki  potensi  aktivitas  biologis  yang  berguna sebagai  antikanker,  antibakterial,  antiviral  dan antifungi.  Hasil  penelitian  ini  diharapkan  dapat memperkaya  informasi  mengenai  kandungan senyawa bioaktif dan aktivitas antibakteri bintang laut
yang  dapat  bermanfaat  bagi  bidang  pangan, farmasi dan industri. Penelitian ini bertujuan untuk  menentukan  komponen  bioaktif  dan aktivitas antimikrob dari bintang laut Culcita schemideliana .

## MATERIAL DAN METODE

## Bahan dan Alat
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu  bintang  laut Culcita  schmidelian a.  Bahan yang dibutuhkan untuk analisis kimia dan biologi yaitu  n-heksana,  etil  asetat,  metanol,  pereaksi Wagner,  pereaksi  Meyer,  pereaksi  Dragendorff, kloroform,  anhidra  asetat,  asam  sulfat  pekat, serbuk  magnesium,  amil  alkohol,  air  panas, larutan  HCl  2  N,  etanol  70%,  larutan  FeCl 3 5%, dan larutan ninhidrin 0,1%, media Nutrient Agar, Nutrient Broth, Muller Hilton Agar II, mikroorganisme Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, Candida
maltosa,  Bacillus  subtilis, dan Pseudomonas aeruginosa , silika G 60 F 254 dan eluen (fase gerak) etil asetat: kloroform: asam format (3:7:0,05).
Alat  yang  digunakan  yaitu freeze  dryer , Erlenmeyer  500  mL, alumunium  foil ,  kapas, orbital shaker , corong terpisah, kertas saring Whatman  42, rotary  evaporator ,  sudip, vortex,  tabung  reaksi,  pipet  tetes,  tabung reaksi,  lup,  cawan  petri,  pipet,  botol  vial, shaker waterbath , spektrofotometer UV-VIS, inkubator, gelas, dan pipet volumetrik.

## Metode Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  melalui  beberapa tahap,  yaitu  pengambilan,  preparasi  dan ekstraksi  bahan  baku;  uji  komponen  fitokimia, uji  aktivitas  antimikrob,  dan  fraksinasi  dengan kromatografi lapis tipis serta bioautografi.
Bahan  baku  bintang  laut C.  schmideliana diambil  dari  Perairan  Lampung  Selatan. Bintang  laut  kemudian  dikeringkan  dengan suhu rendah menggunakan freeze dryer . Tujuan proses  pengeringan  adalah  mengurangi  kadar air dalam bahan. Bintang laut yang telah kering dihaluskan  dengan hammer  mills ,  sehingga didapat tekstur yang halus.
Metode  ekstraksi  bahan  baku  mengacu pada  Iswani  (2001),  tahap  ekstraksi  dilakukan dengan  dua  cara,  yaitu  ekstraksi  tunggal menggunakan  pelarut  metanol  dan  ekstraksi bertingkat menggunakan tiga jenis pelarut yaitu pelarut  n-heksana,  etil  asetat,  dan  metanol, pelarut  ini  ditujukan  untuk  memisahkan senyawa-senyawa  yang  mempunyai  kepolaran yang berbeda, yaitu memisahkan senyawa non- polar, semi-polar dan polar. Metode fitokimia  mengacu  pada  Harborne  (1987),  uji fitokimia dilakukan untuk menentukan komponen  bioaktif  yang  terdapat  pada  ekstrak kasar  bintang  laut  masing-masing  pelarut.  Uji fitokimia  yang  dilakukan  terdiri  atas  uji alkaloid, steroid/triterpenoid, flavonoid, saponin, fenol hidrokuinon, dan ninhidrin.
Pengujian  aktivitas  antimikrob  dilakukan dengan  metode  sumur  agar  ( agar  well diffusion )  yang  mengacu  pada  penelitian Moorty et  al .  (2007).  Sampel  yang  digunakan untuk pengujian  aktivitas  antimikrob  adalah ekstrak  bintang  laut  dengan  proses  ekstraksi bertingkat  (n-heksana, etil  asetat,  dan  metanol) dan dengan proses ekstraksi tunggal (metanol). Mikroorganisme  yang  digunakan  antara  lain S. aureus,  E.  coli,  L.  monocytogenes,C.  maltosa, B. subtilis, dan P. aeruginosa . Fraksinasi  dengan  kromatografi  lapis  tipis dan  uji  bioautografi  mengacu  pada  penelitian Zheng et  al .  (2005).  Ekstrak  yang  digunakan pada  uji  kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  dan bioautografi  adalah  ekstrak  yang  memiliki aktivitas  antibakteri  paling  kuat,  yaitu  ekstrak etil asetat. Elusi dilakukan menggunakan eluen campuran,  yaitu  etil  asetat:  kloroform:  asam format  (3:  7:  0,05).  Noda  yang  dihasilkan  dari proses  elusi  masing-masing  eluen  diamati  di bawah lampu UV pada λ 254 nm dan 366 nm.
Uji bioautografi dilakukan untuk mengetahui fraksi  aktif  antimikrob  menggunakan  KLT. Kromatogram diletakkan dalam cawan petri  yang telah  berisi  biakan  bakteri B.  subtilis kemudian diinkubasi  selama 24 jam lalu dilihat bercak atau daerah  yang  berwarna  bening  merupakan  daerah senyawa aktif berada.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Karakteristik Bintang Laut
Bintang laut C. schmideliana biasa dikenal dengan  nama  bintang  bantal.  Bintang  laut  ini terdapat dalam jumlah yang berlimpah dibandingkan dengan kelompok asteroid lainnya.  Ciri  fisik  dari  bintang  laut C. schmideliana yaitu  memiliki  5  buah  tangan, tubuh  yang  tebal,  dan  berdiameter  15  cm. Permukaan  bintang  laut  ini  berwarna  hijau muda  dan  memiliki  latar  berwarna  hijau  tua. Habitat bintang laut ini yaitu di daerah terumbu karang,  pasir,  dan  padang  lamun.  Bobot bintang laut segar 1260,8 gram.
Bintang  laut  setelah  dikeringkan  memiliki karakteristik  dengan  ukuran  yang  lebih  kecil, berwarna  putih  kecokelatan,  dan  tidak  berbau. Bintang laut serbuk memiliki bobot yang lebih ringan  dibandingkan  bintang  laut  yang  masih segar,  yaitu  sebesar  344,5  gram.  Hal  ini dikarenakan  kadar  air  yang  terkandung  dalam bintang  laut  mengalami  penyusutan  akibat proses pengeringan. Kadar air yang terkandung dalam  bintang  laut  yaitu  sebesar  72,68%. Sampel  serbuk  bintang  laut  yang  dapat dimanfaatkan dapat dinyatakan dengan rendemen.  Nilai  rendemen  bintang  laut  yaitu sebesar 27,32%. Sampel serbuk bintang laut ini siap digunakan untuk proses ekstraksi.

## Ekstrak Komponen Aktif Bintang Laut

## Culcita schmideliana
Ekstrak  etil  asetat  memiliki  persentase rendemen  terkecil  yaitu  0,24%,  sedangkan ekstrak  metanol  tunggal  merupakan  ekstrak yang  memiliki  rendemen  terbesar  yaitu  6,50%, ekstrak  metanol  tunggal  0,60%  dan  metanol bertingkat 4,35%. Hasil ini menunjukkan kadar ekstrak  metanol  (polar)  bintang  laut  terdapat dalam  jumlah  yang  paling  banyak.  Hasil penelitian  ini  didukung  oleh  hasil  penelitian Salamah et  al .  (2008)  yang  menunjukkan ekstrak  polar  dari  kijing  Taiwan  ( Anadonta woodiana Lea.)  terdapat  dalam  jumlah  yang paling  banyak  yaitu  dengan  rendemen  sebesar 0,12% dibandingkan dengan ekstrak semipolar
dengan rendemen 0,10 % dan nonpolar dengan rendemen  sebesar  0,04%.  Nurhayati et  al . (2009)  menyatakan  bahwa  pelarut  metanol diketahui dapat menarik semua komponen baik yang bersifat polar, semipolar maupun nonpolar.  Metanol  sebagai  pelarut  yang digunakan  paling  akhir  pada  proses  ekstraksi diduga  menarik  semua  komponen  aktif  yang tertinggal  pada  ekstraksi  sebelumnya  sehingga rendemen ekstrak metanol cukup besar.
Hasil  uji  fitokimia  pada  masing-masing ekstrak  kasar  bintang  laut  disajikan  pada Tabel 1. Ekstrak kasar metanol mengandung komponen  bioaktif  yang  lebih  banyak dibandingkan  ekstrak  n-heksana  dan  ekstrak etil  asetat. Komponen  bioaktif  yang  terdapat pada  ekstrak  metanol  antara  lain  alkaloid, steroid,  flavonoid,  saponin,  dan  ninhidrin. Ekstrak  n-heksana  dan  etil  asetat  memiliki komponen  bioaktif  yaitu,  steroid  dan saponin.  Uji  fitokimia  menunjukkan  bahwa ekstrak  bintang  laut  mengandung  5  dari  6 komponen  yang  diuji  dengan  metode fitokimia,  yaitu  alkaloid,  steroid,  flavonoid, saponin, dan ninhidrin.

## Aktivitas Antimikrob
Ekstrak  n-heksana,  etil  asetat,  metanol bertingkat,  dan  metanol  tunggal  dari  bintang laut  diuji  aktivitas  antimikrobnya  terhadap enam jenis mikroorganisme antara lain E. coli,
S.  aureus,  L.  monocytogenes,  C.  maltosa,  B. subtilis, dan P.  aeruginosa .  Jumlah  ekstrak yang  digunakan  untuk  pengujian  aktivitas antimikrob  dalam  setiap  sumurnya  yaitu sebesar 0,5 mg, 1 mg, dan 2 mg. Diameter zona hambat ekstrak n-heksana bintang laut terhadap mikroorganisme  uji  disajikan  pada  Tabel  2. Ekstrak  kasar  bintang  laut  dengan  pelarut  n- heksana  tidak  mempunyai  aktivitas  antimikrob yang  ditunjukkan  dengan  tidak  adanya  zona hambat  terhadap  bakteri E.coli,  S. aureus,  B. subtilis, L. monocytogenes, P. aeruginosa pada jumlah  ekstrak  n-heksana  sebesar  0,5  mg  dan C. maltosa . Aktivitas  antimikrob  ekstrak kasar bintang  laut  dengan  pelarut  n-heksana  terlihat pada  bakteri P.  aeruginosa yaitu  pada  jumlah ekstrak 1 mg mempunyai zona hambat sebesar 6,5  mm  dan  pada  jumlah  ekstrak  2  mg mempunyai  zona  hambat  sebesar  7  mm.
Heksanaa merupakan pelarut yang paling
Tabel 1 Hasil uji fitokimia ekstrak kasar bintang laut C. schmideliana
Uji Fitokimia Jenis Pelarut Standar (warna) n-Heksan Etil asetat Metanol Metanol bertingkat tunggal Alkaloid: a. Dragendorff - - + + Endapan merah atau jingga b. Meyer - - - - Endapan putih kekuningan c.  Wagner - - - - Endapan coklat Steroid/ Perubahan dari + + + + merah menjadi biru triterpenoid atau hijau Lapisan amil alkohol Flavonoid - - + + berwarna merah/ kuning/hijau Saponin - - + - Terbentuk busa Fenol - - - - Warna hijau atau hidrokuinon hijau biru Ninhidrin - - + + Warna biru
Tabel 2 Diameter zona hambat (mm) aktivitas antimikrob ekstrak kasar bintang laut C. schmideliana Mikroorganisme uji Ekstrak (mg) E. coli  P. aeruginosa  S. aureus  B. subtilis L. C. maltosa monocytogenes n-Heksana 0,5 0 0 0 0 0 0 1 0 6,5 0 0 0 0 2 0 7 0 0 0 0 Kloramfenikol 45 30 39 34,5 36,5 38,5 Etil asetat 0,5 0 7 0 7 7 7 1 0 8 0 8,5 8 8,5 2 0 13,5 7 15,5 10 9,5 Kloramfenikol 48 27,5 28,5 35 35 37 Metanol 0,5 0 0 0 7 0 0 bertingkat 1 0 7 0 7,5 7 0 2 0 8 0 8 8,5 0 Kloramfenikol 27,5 29,5 34,5 29,5 31 33,5 Metanol 0,5 0 0 0 7 0 0 tunggal 1 0 7 7 7,5 8 0 2 0 8,5 7,5 8,5 9,5 0 Kloramfenikol 42,5 33 33,5 28 33,5 38,5
tidak  polar  diantara  pelarut  etil  asetat  dan metanol.  Hasil  uji  aktivitas  antimikrob  (Tabel
2)  menunjukkan  bahwa  ekstrak  heksana memiliki diameter
penghambatan pertumbuhan bakteri yang kecil.
Pengujian  aktivitas  antimikrob  ekstrak  n- heksana  bintang  laut C.  schmidelian a  memiliki aktivitas yang berbeda dengan ekstrak n-heksana bintang  laut Protoreaster  linck i.  Ekstrak  n- heksana bintang laut P. lincki dapat menghambat
S.  aureus (2,01  mm), B.  subtilis (1,11  mm), Pseudomonas sp. (1,18 mm), E. coli (1,02 mm), dan C.  albicans (1,01  mm).  Kontrol  negatif menggunakan pelarut n-heksana tidak
menunjukkan  adanya  zona  hambat  di  sekitar sumur  (Kumaran et  al .  2011).  Perbedaan  zona hambat  dapat  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor, yaitu pH lingkungan, komposisi media, stabilitas senyawa antimikrob, besarnya inokulum, lamanya  inkubasi,  dan  aktivitas  metabolik mikroorganisme (Jawetz et al . 1996).
Ekstrak  etil  asetat  mempunyai  aktivitas antimikrob terhadap bakteri B. subtilis,
P. aeruginosa, dan L. monocytogenes . Ekstrak etil  asetat juga  mempunyai  aktivitas  antifungi terhadap  khamir C.  maltosa .  Zona  hambat ekstrak  0,5  mg  sebesar  7  mm,  pada  jumlah ekstrak  1  mg  mempunyai  zona  hambat berkisar antara 8 mm sampai 9 mm, dan pada jumlah ekstrak 2 mg mempunyai zona hambat yang  cukup  besar  dibandingkan  dengan jumlah ekstrak lainnya, yaitu berkisar antara 9 mm sampai 16 mm.
Aktivitas  antimikrob  ekstrak  etil  asetat bintang  laut C.  schmideliana memiliki  hasil yang  berbeda  dengan  ekstrak  etil  asetat  bintang laut P.  lincki .  Ekstrak  etil  asetat  bintang  laut P. lincki dapat  menghambat  mikrob  mikrob S. aureus (5,01  mm), B.  subtilis (1,06  mm), Pseudomonas sp.  (1,05  mm), E.  coli (1,1  mm), dan C.  albicans (2,01  mm).  Kontrol  negatif menggunakan pelarut etil asetat tidak menunjukkan  adanya  zona  hambat  di  sekitar sumur (Kumaran et al . 2011).
Ekstrak  metanol  yang  diekstraksi  secara bertingkat menunjukkan bahwa tidak adanya
zona hambat pada bakteri E.coli, P. aeruginosa pada jumlah ekstrak 0,5  mg, S.  aureus, dan C. maltosa pada  jumlah  ekstrak  sebesar 0,5  mg.
Ekstrak  metanol  bintang  laut  yang  diekstraksi secara bertingkat mempunyai aktivitas
antibakteri  terhadap  bakteri B. subtilis yaitu pada  jumlah  ekstrak  0,5  mg mempunyai  zona hambat  7  mm,  dan pada bakteri P.  aeruginosa dan L.  monocytogenes pada  jumlah  ekstrak  1 mg  mempunyai  zona  hambat  berkisar  antara  7 mm  sampai  8  mm,  serta  pada  bakteri B. subtilis, P. aeruginosa, dan C. maltosa dengan jumlah  ekstrak  2  mg  mempunyai  zona  hambat yaitu berkisar antara 8 mm sampai 9 mm.
Ekstrak  metanol  bintang  laut  yang diekstraksi  secara  tunggal  tidak  mempunyai aktivitas  antibakteri  yang  ditunjukkan  dengan tidak  adanya  zona  hambat  terhadap  bakteri E. coli, S. aureus pada jumlah ekstrak sebesar 0,5 mg,  dan P.  aeruginosa pada  jumlah  ekstrak sebesar  0,5  mg,  selain  itu  ekstrak  metanol tunggal  bintang  laut  tidak  memiliki  aktivitas antifungi  terhadap C.  maltosa .  Aktivitas antibakteri  ekstrak  kasar  bintang  laut  dengan pelarut metanol terlihat pada bakteri B. subtilis pada  jumlah  ekstrak  0,5  mg  mempunyai  zona hambat  sebesar  7  mm  dan L.  monocytogenes , pada jumlah ekstrak 1 mg yaitu berkisar antara 7  mm  sampai  8  mm,  serta  zona  hambat  pada jumlah  ekstrak  2  mg  yaitu  berkisar  antara  8 mm sampai 10 mm.
Aktivitas  antimikrob  ekstrak  metanol bintang  laut C.  schmideliana memiliki  hasil yang  hampir  sama  dengan  ekstrak  metanol bintang laut P. lincki . Ekstrak metanol bintang laut P.  lincki dapat  menghambat  mikrob S. aureus (2,01  mm), B.  subtilis (4,23  mm), Pseudomonas sp.  (3,15  mm), E.  coli (2,06 mm), dan C.  albicans (1,05  mm).  Kontrol negatif tidak menunjukkan adanya zona hambat di sekitar sumur (Kumaran et al . 2011). Ekstrak metanol  bintang  laut C.  schmideliana dan bintang  laut P.  lincki memiliki  aktivitas antimikrob  yang  lebih  tinggi  dibandingkan dengan  ekstrak  n-heksana  bintang  laut C. shmideliana dan P. lincki .

## Fraksi Ekstrak Terpilih dan Bioautografi
Profil  pemisahan  senyawa  dengan  eluen etil asetat: kloroform : asam format (3: 7: 0,05) disajikan  pada  Gambar  1.  Hasil  pengujian terhadap  fraksi  diduga  bahwa  masing-masing fraksi  telah  menunjukkan  adanya  1  bercak dengan  Rf  yang  berbeda.  Pemisahan  senyawa dengan  eluen  etil  asetat:  kloroform:  asam format (3:7:0,05) menggunakan sinar UV λ 254  nm  diidentifikasi  memiliki  7  bercak dengan  nilai Rf 0,06;  0,2;  0,28;  0,4;  0,56;  0,66 dan 0,9 serta pengujian menggunakan sinar UV λ 366  nm  menghasilkan  1  bercak  dengan  nilai Rf sebesar  0,84  dari  hasil  ekstrak  kasar  etil  asetat. Pengujian  terhadap  fraksi  mengunakan  KLT menghasilkan  8  bercak  senyawa,  namun  hasil tersebut belum dapat diketahui golongan senyawa yang  telah  terpisah  pada  kromatogram.  Hasil KLT  dari  ekstrak  etil  asetat  bintang  laut disemprot dengan pereaksi Dragendorff.
Profil  penyemprotan  ekstrak  etil  asetat  dengan pereaksi  Dragendorff  disajikan  pada  Gambar  2. Fraksi  pada  kromatogram  dengan Rf yang  berbeda- beda  sehingga  memudahkan dalam  pengamatan.
Pemisahan  senyawa  tersebut  memiliki  7  bercak dengan nilai Rf 0,06; 0,12; 0,24; 0,34; 0,48; 0,58 dan
0,7. Hasil penyemprotan ini menunjukkan keberadaan  senyawa  alkaloid  yang  ditandai  dengan munculnya  bercak  berwarna  merah  kecokelatan pada Rf 0,06;  0,12;  0,24;  dan  0,34  serta  bercak berwarna  putih  pada Rf 0,48,0,58;  dan  0,7 selanjutnya  nilai  alkaloid ini  akan  dibandingkan dengan bioautogram untuk menentukan bercak yang aktif.
Kusumaningtyas et  al .  (2008)  menyatakan bahwa  angka  Rf  berkisar  antara  0,001-1,0.  Hasil KLT  tersebut  dijadikan  acuan  nilai Rf yang memberikan  hasil  positif  pada  bioautogram karena pada uji bioautografi bercak senyawa yang sudah  terpisah  tidak  disemprot  dengan  pereaksi warna  tetapi  langsung  diuji  dengan  mikrob  uji. Acuan  bercak  juga  dapat  dilakukan  dengan melihat  bentuk  pita  hasil  bioautografi  yang  telah memberikan  hasil  positif  disesuaikan  dengan hasil KLT yang telah menampilkan warna.
Bioautografi  dilakukan  pada  ekstrak bintang laut yang memiliki aktivitas antibakteri
Gambar 6 Profil pemisahan senyawa dengan eluen
Gambar 7 Profil penyemprotan dengan pereaksi etil  asetat:  kloroform:  asam  format
Dragendorff. (3: 7: 0,05).
tertinggi,  yaitu  ekstrak  etil  asetat  yang  telah dilakukan  pemisahan  menggunakan  KLT. Bakteri  yang  digunakan  dalam  bioautografi yaitu, Bacillus  subtilis .  Bakteri  ini  memiliki sensitivitas  tertinggi  pada  uji  aktivitas antibakteri  yang  dilakukan  menggunakan ekstrak  etil  asetat,  hal  ini  terlihat  pada  zona hambat yang dihasilkan di sekitar bakteri uji. Profil bioautografi dsajikan pada Gambar 3.
Sudirman  (2005)  menyatakan  bahwa bercak-bercak  yang  timbul  pada  kromatogram dengan Rf yangberbedadapatterdiriatassenyawa antimikrob  dan  senyawa  lainnya.  Bioautografi yang dilakukan terhadap kromatogram tersebut bertujuan  untuk  menentukan  bercak  yang merupakan  senyawa  antimikrob.  Pengamatan terhadap  bioautografi  terhadap  bakteri B. subtilis menghasilkan  zona  hambat  sebesar  7 mm  pada Rf =  0,02  dan  pada Rf =  0,62 menghasilkan zona hambat sebesar 3 mm.
Metode  bioautografi  dapat  mengetahui fraksi  aktif  yang  terdapat  pada  ekstrak  etil asetat.  Hasil Rf 1  pada  bioautografi  yaitu  0,02 tidak sesuai dengan hasil Rf 1 pada penyemprotan  ekstrak  etil  asetat  dengan pereaksi  Dragendorff  yaitu  0,06.  Hasil Rf 2 pada  bioautografi  yaitu  0,62  terletak  pada Rf 6 dan Rf 7  pada  penyemprotan  ekstrak  etil  asetat dengan  pereaksi  Dragendorff  yaitu  0,58  dan 0,7. Hasil bioautografi dan penyemprotan KLT dengan  pereaksi  Dragendorff  menunjukkan bahwa  fraksi  aktif  yang  terdapat  pada  bintang laut C.  schmideliana ini  kemungkinan  bukan golongan alkaloid.

## KESIMPULAN
Komponen  bioaktif  yang  terdapat  pada ekstrak  bintang  laut C.  schmideliana dengan pelarut  metanol  antara  lain  alkaloid,  steroid, flavonoid, saponin, dan ninhidrin. Ekstrak
Gambar 8 Profil bioautografi.
n-heksana  dan  etil  asetat C.  schmideliana memiliki  komponen  bioaktif  yaitu  steroid  dan saponin.  Diameter  zona  hambat  terbesar  berasal dari  ekstrak  etil  asetat  dengan  konsentrasi  2 mg/sumur  yaitu  sebesar  16  mm.  Pemisahan senyawa pada pengujian KLT menggunakan sinar UV  λ  254  nm  diidentifikasi  memiliki  7  bercak serta pengujian menggunakan sinar UV λ 366 nm menghasilkan 1 bercak. Pengamatan bioautografi terhadap  bakteri B. subtilis menghasilkan  zona hambat sebesar 7 mm pada Rf = 0,02 dan pada Rf = 0,62 menghasilkan zona hambat sebesar 3 mm.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  didanai  oleh  College  of
Science and Biotechnology,
Yonsei University, Republic of Korea.

## DAFTAR PUSTAKA
Abubakar  L,  Mwangi  C,  Uku  J,  Ndirangu  S.  2012.
Antimicrobial activity of various extracts of the sea  urchin Tripneustes  gratilla (Echinoidea).
Journal  of  Pharmacology and  Therapeutics 1(1): 19-23.
Chludil  H,  Maier  MS,  Seldes  AM.  2000.
Bioactive  steroidal  glycosides  from  starfish Anasterias minuta. Molecules 5: 352-353. Guo C, Tang X, Yang Y. 2009. Studies on the expectorant,  antitussive  and  antiasthmatic properties of asterosaponin extracted from Liquida  quinaria.  African  Journal  of Biotechnology 8(23): 6694-6696. Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia. Edisi kedua.  Padmawinata  K,  Soediro  I, penerjemah. Bandung: ITB. Terjemahan dari: Phytochemical Methods .
Heras  DBL,  Hortelano  S.  2009.  Molecular basic  of  the  anti-inflammatory  effect  of terpenoids. Infl  ammation  and  Allerg- Drug Targets 8: 28-39.
Iswani  S.  2007.  Proses  preparasi  ekstrak  kasar ( Crude  extract )  etanol  dari  makroalga untuk  uji  farmakologi. Buletin  Teknologi Penelitian Akuakultur 6(1): 57-60.
Jawetz  E,  Melnick  J,  Adelberg  E.  1996.
Mikrobiologi  Kedokteran . Ed ke-20.
Nugroho  E,  Maulany  RF,  penerjemah. Jakarta: EGC. Terjemahan dari: Medical Microbiology .
Kumaran NS, Bragadeeswaran S, Thangaraj. 2011.  Antimicrobial  activities  in  star fishes Protoreaster  lincki  (Blainville, 1830) and Pentaceraster regulus (Muller
&  Troschel, 1842)  against  isolated human,  fish  pathogenic  and  biofilm microorganisms. Journal  of  Applied Sciences Research 7 (6): 818-825.
Kusumaningtyas E. Astuti E, Darmono.2008. Sensitivitas  metode  bioautografi  kontak dan  agar  overlay  dalam  penentuan senyawa antikapang. Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia 6(2): 75-79.
Maier MS, Centurion R, Muniain C, Haddad
R,  Eberlin  MN.  2007.  Identification  of sulfated steroidal glycoside from starfish Heliaster  helianthus by  electrospray ionization mass spectrometry. Arkivoc 7: 301-309.
Moorthy K,  Srinivasan  K,  Subramanian,
Palaniswamy  M,  Mohanasundari  C.  2007. Phytochemical  screening  and  antibacterial evaluation  of  stem  bark  of Mallotus philippinensis var.  Tomentosus. African Journal of Biotechnology 6(13): 1521-1523.
Nurhayati  T,  Aryanti  D,  Nurjanah.  2009. Kajian  awal  potensi  ekstrak  spons sebagai  antioksidan. Jurnal  Kelautan Nasional 2: 43-51.
Parthasarathy  S,  Azizi  JB,  Ramanathan  S,
Ismail  S,  Mansor  SM,  Sasidharan  S, Said MIM. 2009. Evaluation of antioxidant and antibacterial activities of aqueous,  methanolic  and  alkaloid  from
Mitragyna speciosa (Rubiaceae  family) leaves. Molecules 14: 3964-3974.
Pelczar  S,  Chan  ECS.  2008.  Dasar-Dasar
Mikrobiologi 2. Hadioetomo et al., penerjemah.  Jakarta:  UI-Press.  Terjemahan dari: Elements of Microbiology .
Salamah  E,  Ayuningrat  E,  Purwaningsih  S. 2008.  Penapisan  awal  komponen  bioaktif dari  kijing  Taiwan  ( Anodonta  woodiana Lea.) sebagai senyawa antioksidan.
Buletin Teknologi Hasil Perikanan 11(2):
119-132.
Samuel  P,  Prince  L,  Prabakaran  P.  2011.
Ocean:the inviolated source of pharmaceutical leads and drug metabolites. World  Jurnal  of  Science and Technology 1(10): 74-91. Sudirman LI.  2005.  Deteksi  senyawa antimikrob  yang  diisolasi  dari  beberapa Lentinus tropis dengan metode
bioautografi. Hayati 12(2): 67-72.
Tang HF, Yi HY, Li L, Sun Peng, Zhou DZ, Liu
BS. 2005. Three new asterosaponins from
the starfish Culcita novaeguinae and their bioactivity. Planta Medica 71: 458-463.
Wang  W,  Li  F,  Hong  J,  Lee  CO,  Cho  HY,  Im  KS,
Jung  JH.  2003.  Four  new  saponins  from  the starfish Certonardoa  semiregularis.  Chemical and Pharmaceutical Bulletin 51(4): 435-439.
Zheng  L,  Chen  H,  Han  X,  Lin  W,  Yan  X. 2005.  Antimicrobial  screening  and active  compound  isolation  from  marine bacterium  NJ6-3-1  associated  with  the sponge Hymeniacidon  perleve. World
Journal of Microorganism and Biotechnology 21: 201-206.