# Korespondensi:  Balai  Besar  Riset  Budidaya  Laut  dan Penyuluhan  Perikanan.  Banjar  Gondol  Kec.  Gerokgak  Kab. Buleleng,  Bali  81155,  Indonesia.
Tel.:  +  62  362  92278 E-mail:  wa2n.rimgdl@gmail.com
Tersedia  online  di:  http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/ma

## APLIKASI PROTEIN  SEL  TUNGGAL  DAN  “SPENT  GRAINS”  DALAM  FORMULASI  PAKAN UNTUK  PEMELIHARAAN  KERAPU  HIBRID
(Epinephelus fuscoguttatus x Epinephelus polypekadion)
Wawan  Andriyanto # ,  Nyoman  Adiasmara  Giri,  dan  Muhammad  Marzuqi
Balai Besar Riset Budidaya Laut dan Penyuluhan Perikanan
(Naskah diterima: 1 Februari 2017; Revisi final: 12 Maret 2018; Disetujui publikasi: 12 Maret 2018)

## ABSTRAK
Sumber protein alternatif berupa protein sel tunggal (PST) dari sisa produksi bumbu penyedap dan “spent grains” dari sisa produksi minuman bir memiliki kandungan protein yang tinggi. Penelitian ini bertujuan untuk  mendapatkan dosis  terbaik  dari  penggunaan dua  sumber  bahan  tersebut terhadap  pertumbuhan dan sintasan ikan kerapu hibrid (kerapu cantik). Empat pakan uji diformulasikan dengan menambahkan kombinasi tepung spent grains dan PST untuk menggantikan protein dari tepung ikan sebesar (A) 0%, (B) 30%, (C) 40%, dan (D) 50%. Uji pakan dilakukan di keramba jaring apung menggunakan 12 jaring berukuran 2 m x  2  m  x  2  m.  Bobot  awal  ikan  kerapu  cantik  yang  digunakan  adalah  63  ±  0,6  g  dan  ditebar  dengan kepadatan  253  ekor/jaring.  Pakan  uji  diberikan  dua  kali  sehari  secara  satiasi.  Data  yang  diamati  adalah pertumbuhan  (bobot  dan  panjang),  sintasan,  dan  konversi  pakan.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa perlakuan pakan A (0%) menghasilkan berat akhir sebesar 299,6 ± 27,0 g lebih baik dan berbeda nyata (P<0,05)  dari  perlakuan  C    (40%)  dan  D  (50%),  namun  tidak  berbeda  nyata  (P>0,05)  dengan  perlakuan pakan B (30%), yaitu 287,4 ± 5,3 g. Hasil ini menunjukkan bahwa substitusi protein tepung ikan dengan campuran protein dari PST dan spent grains pada pakan pembesaran kerapu hibrid dapat dilakukan sampai level 30%.
KATA KUNCI: protein sel tunggal; spent grains; pertumbuhan; kerapu hibrid
ABSTRACT: Application of single cell protein and spent grains on feed formulation for grow out of “hibryd grouper”. By: Wawan Andriyanto, Nyoman Adiasmara Giri, and Muhammad Marzuqi
Single cell protein left-over from seasoning factory and spent grains from brewery waste are potential as high protein sources for animal feed. This study was aimed to obtain an optimal supplementation dose of the two ingredients in relation to the growth and survival rate of hybrid grouper (Cantik grouper). Four test feeds were formulated by mixing different combinations of single cell protein and spent grains to replace fishmeal protein content in the feed at 0%, 30%, 40%, and 50%. The feeding trials were conducted at a floating net cage consisted of 12 netpens sized 2 m x 2 m x 2 m. The initial mean weight of hybrid grouper was 63 ± 0.6 g. The fish were stocked at a density of 253 fish/netpen. Feed treatments were given at satiation two times a day. Parameters of growth (final body weight and length), survival rate, and feed conversion were observed. The results showed that fish in treatment A (0%) gained the final body weight of 299.6 ± 27.01 g which was significantly different (P<0.05) with that of treatment C and D, but not significantly different with fish in treatment B (30%), with the mean weight gain of 287.4 ± 5,3 g. Fish in treatment B (30%) showed better growth response and survival rate than that of treatment C (40%) and D (50%). The result also indicated that fish fed with treatment B feed (30%) had not different a mean final body weight with the control feed. This study suggested that a combination of single cell protein and spent grains to substitute fish meal in grow-out feed for hybrid grouper could be applied up to 30%.
KEYWORDS: single cell protein; spent grains; growth; hybrid grouper

## PENDAHULUAN
Keberhasilan teknologi pembenihan  ikan kerapu hasil  persilangan  antara  kerapu  macan  (Epinephelus fuscoguttatus)  dengan  kerapu  batik  (Epinephelus polyphekadion)  menghasilkan  turunan  ikan  kerapu cantik. Pembesaran kerapu hibrid ini ikut mendukung perkembangan budidaya di keramba jaring apung (KJA) karena permintaan pasar yang tinggi pada komoditas ini. Pakan dengan kandungan nutrisi yang lengkap dan seimbang merupakan faktor penting dalam menunjang keberhasilan  usaha  budidaya  ikan.  Satu  di  antara kebutuhan nutrien utama untuk ikan adalah protein. Pada  umumnya,  formulasi  pakan  ikan  kerapu mempunyai kandungan protein yang relatif tinggi.
Ikan kerapu bebek (C. altivelis) membutuhkan pakan dengan kandungan protein 54,2% untuk pertumbuhan yang baik (Giri et al., 1999). Kebutuhan protein ikan kerapu macan (E. fuscoguttatus) mencapai 48,0% (Giri et  al.,  2004),  ikan  kerapu  batik  (E.  polyphekadion) sebesar 48% (Marzuqi et al., 2004), ikan kerapu lumpur (E. coioides) sebesar 48,0% (Suwirya et al., 2005) dan ikan kerapu sunu (P. leopardus) sebesar 48% (Marzuqi et  al.,  2007)  untuk  dapat  tumbuh  dengan  baik. Kebutuhan protein tersebut umumnya diperoleh untuk ikan  ukuran  benih.  Pada  penelitian  lain  dilaporkan bahwa ikan kerapu bebek (Cromileptes altivelis) pada stadia  pembesaran  membutuhkan  pakan  dengan kandungan  protein  45%-55%.  (Laining  et  al.,  2003; Usman et al., 2005).
Tepung  ikan  masih  merupakan  sumber  protein utama untuk ikan laut, khususnya ikan karnivor. Harga tepung  ikan  di  pasaran  relatif  mahal  yang mengakibatkan  harga  pakan  ikan,  termasuk  ikan kerapu juga relatif mahal, sehingga perlu diupayakan pemanfaatan bahan pakan alternatif sebagai substitusi sumber protein tepung ikan. Informasi pemanfaatan bahan pakan alternatif pada komoditas ikan kerapu sejauh ini belum banyak tersedia. Beberapa percobaan untuk  mensubstitusi  tepung  ikan  dengan  bahan alternatif  telah  dilakukan  pada  ikan  laut  seperti penggunaan tepung protein sel tunggal (PST) pada ikan kerapu pasir (Marzuqi et al., 2010). Bahan baku hasil samping  dari  olahan  bumbu  masak  selain  memiliki kadar protein  tinggi, juga mengandung  lemak, vita- min, dan mineral yang dibutuhkan oleh ikan (Setiawati, 2010).  Tepung  limbah hasil  fermentasi  dari  kedelai, tepung jagung, dan tepung bungkil kelapa sawit juga mempunyai  kandungan  zat  gizi  yang  cukup  tinggi dengan harga relatif murah (Pamungkas, 2011).
Protein  sel  tunggal  (PST)  berasal  dari  proses fermentasi  dari  bahan  tetes  tebu  dan  dextrose  oleh bakteri Brevibacterium flavum dengan media tumbuh bactosoytone  mulai  skala  kecil  (media  cair  starter)
sampai dengan skala besar pada media cair. Tepung protein sel tunggal merupakan produk hasil samping dari suatu proses fermentasi dalam produksi protein sel tunggal. Hasil samping tersebut setelah dikeringkan kemudian digiling menjadi tepung dan dikenal sebagai protein  sel  tunggal.  Selain  kaya  akan  asam  amino esensial  (AAE)  dan  non  AAE,  tepung  protein  sel tunggal memiliki kandungan mineral tinggi, di mana mineral sangat diperlukan dalam proses metabolisme sehingga  berpengaruh  terhadap  pertumbuhan  ikan (Zonneveld et al., 1991).
Spent grains merupakan limbah padat (Brewerysolid waste) dari pengolahan minuman bir. Karakteristik dari Brewerysolid waste yaitu memiliki pH 6,5 ± 0,4; COD 1.250 mg/L; NH3-N 16 mg/L; TN 24 mg/L; SS 500 mg/L (Wen  et  al.,  2010).  Jenis  ampas  bir  terbagi  menjadi spent grains, trub, spent yeast, dan kieselguhr sludge, di mana yang digunakan dalam penelitian ini adalah yang berbentuk  spent  grains.  Jenis  spent  grains  banyak digunakan dalam aplikasi pakan saat ini, dan jenis ini merupakan salah satu buangan limbah bir yang telah dimanfaatkan sejak lama dalam pakan campuran pada hewan  ternak  karena  mudah  ditepungkan, ketersediaan paling melimpah, dan harga yang murah. Spent  grains  juga  memiliki  kandungan  selulosa, hemiselulosa, lignin, gula, dan asam amino yang baik untuk pakan ternak (Bisaria et al., 1997). Aplikasi spent grains  pada  dosis  10%-15%  dalam  formulasi  pakan menghasilkan  produksi  kerapu  cantik  yang  baik (Andriyanto & Giri, 2016).
Ketersediaan  spent  grains  dan  PST  ini  cukup berlimpah dan kontinu karena terkait langsung dengan usaha utamanya yaitu produksi bir dan bumbu masak yang terus berlangsung. Kombinasi spent grains  dan PST ini diharapkan dapat merupakan sumber protein alternatif pengganti protein tepung ikan dalam pakan untuk  ikan  kerapu  cantik.  Penelitian  ini  bertujuan untuk menentukan kombinasi optimum spent grains dan PST sebagai substitusi tepung ikan dalam formulasi pakan pembesaran kerapu cantik (E. fuscoguttatus x E. polyphekadion).

## BAHAN DAN METODE
Penelitian dilakukan di Instalasi Percobaan Karamba Jaring  Apung  (KJA),  Balai  Besar  Riset  Budidaya  Laut dan  Penyuluhan  Perikanan  di  Teluk  Pegametan, Buleleng, Bali. Pada percobaan ini digunakan 12 buah kantong jaring berukuran 2 m x  2 m x 2 m dengan yang ditempatkan pada KJA. Ikan kerapu hibrid (cantik) yang digunakan  dalam percobaan ini  diperoleh dari hatcheri kerapu di daerah Gerokgak, Buleleng. Benih ikan kerapu cantik dengan ukuran panjang 15,0 ± 0,1 cm dan bobot 63,0 ± 0,2 g ditebar dengan kepadatan
253 ekor/kantong jaring. Ikan diberi pakan percobaan dua kali sehari pada pagi pukul 09.00 dan sore hari pukul  16.00  dan  diberikan  secara  ad  satiation (sekenyangnya). Penggantian jaring dilakukan setiap dua minggu sekali.
Bahan pakan dan pakan uji disimpan dalam cold stor- age yang bersuhu dingin (-20°C) sebelum dikeringkan dalam oven pada suhu 70°C. Spent grains yang sudah kering, dilakukan penepungan dengan mesin penepung (disk mill) dengan mesh ayakan 0,5 mm. Tepung PST diayak untuk mendapatkan partikel yang halus.
Komposisi proksimat tepung spent grain dan PST disajikan pada Tabel 1.
Pakan percobaan dibuat empat formula pakan uji sebagai  perlakuan  dengan  jumlah  campuran  spent grains dan PST yang berbeda sehingga mensubstitusi protein dari tepung ikan sebanyak 0% (perlakuan A), 30%  (perlakuan  B),  40%  (perlakuan  C),  dan  50% (perlakuan D). Komposisi pakan percobaan disajikan pada Tabel 2. Pakan dibuat dalam bentuk pelet dengan diameter 10 mm, dikeringkan dalam oven pada suhu 70°C sampai kering.
Percobaan dilakukan secara eksperimental dengan menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) dengan empat  perlakuan  beda  pakan  dan  setiap  perlakuan terdiri dari tiga ulangan.
Sampling  pertumbuhan  ikan  kerapu  cantik dilakukan  setiap  dua  minggu  dengan  mengukur panjang dan bobot ikan selama enam bulan percobaan.
Adapun  parameter  atau  variabel  yang  diamati meliputi:
Pertumbuhan bobot mutlak (g) (Zonneveld et al., 1991)
di mana: W = pertumbuhan bobot mutlak Wt = bobot rata–rata ikan pada akhir penelitian Wo = bobot rata–rata ikan pada awal penelitian
Laju pertumbuhan bobot spesifik (% bobot/hari) (Zonneveld et al., 1991)
di mana: SGR= laju pertumbuhan spesifik Wt = bobot rata–rata ikan pada akhir penelitian Wo = bobot rata–rata ikan pada awal penelitian t = waktu pemeliharaan

## Sintasan (%) (Effendi, 1997)
di mana: SR= sintasan Nt = jumlah ikan pada akhir pemeliharaan No = jumlah ikan pada awal pemeliharaan
Kecernaan pakan (KP) (Takeuchi, 1988)
Komposisi proksimat pakan uji dianalisis dengan menggunakan metode AOAC (1990). Selain itu, juga dilakukan analisis histologi untuk mengetahui profil organ pencernaan ikan setelah diberi pakan percobaan. Data  hasil  percobaan  ditabulasi  dan  dianalisis
Tabel 1. Komposisi proksimat tepung spent grains dan PST (% bahan) Table 1. Proximate composition of spent grains and single cell protein (% sample)
* ) BETN= bahan ekstrak tanpa nitrogen (nitrogen free extract)
Tepung spent grains Spent grains meal Tepung PST Single cell protein meal Kadar air (Moisture ) 9.0 8.0 Protein (Protein ) 25.07 60.4 Lemak (Lipid ) 9.9 0.4 Kadar abu (Ash ) 14.05 4.0 Serat kasar (Crude fiber ) 2.2 2.85 BETN/NFE * ) 39.78 24.35
Bahan uji (Material test ) Parameter Parameters Wo Wt W   100% x t Wo Ln Wt Ln SGR   100% x No Nt SR  (g) ikan biomassa n Pertambaha (g) diberikan pakan Jumlah KP pakan nutrien % x Cr2O3 % feces nutrien % x Cr2O3 % 100 100 KP(%)
    

    
menggunakan  analisis  statistik  dengan  program excel.

## HASIL DAN BAHASAN
Perbedaan  level  subsitusi  protein  tepung  ikan dengan  protein  campuran  spent  grains  dan  PST berpengaruh nyata terhadap pertumbuhan, sintasan, dan  konversi  pakan  ikan  kerapu  cantik  (P<0,05). Proporsi protein dari campuran spent grains dan PST yang tinggi (40% dan 50%) dalam pakan memberikan respons pertumbuhan dan konversi pakan yang kurang baik (Tabel 3).
Rata-rata  bobot  akhir  ikan  yang  diberi  pakan perlakuan A dan B tidak berbeda nyata (P>0,05). Bobot akhir ikan yang diberi pakan perlakuan C dan D adalah lebih rendah dan berbeda nyata dengan perlakuan A dan B. Hasil ini menunjukkan bahwa 30% protein tepung ikan dalam pakan ikan kerapu hibrid dapat disubstitusi dengan protein dari  campuran spent grains dan  PST. Pada dosis substitusi sebesar 50% (pakan D) dengan level protein pakan pada pelet yang hampir sama pada semua  perlakuan  yaitu  47%  (Tabel  2).  Komposisi proksimat pakan uji cenderung menghasilkan bobot akhir yang lebih kecil dan secara statistik berbeda nyata dengan perlakuan A dan B. Substitusi protein tepung ikan  dengan  protein  dari  kombinasi  PST  dan  spent grains hingga 50% diduga tidak efektif menyediakan energi untuk metabolisme mendukung pertumbuhan ikan.  Hal  ini  dapat  terjadi  karena  kualitas  protein, khususnya keseimbangan profil asam amino esensial dari PST dan spent grains yang lebih rendah dari pro- tein tepung ikan. Harver (1972), menyatakan bahwa pertumbuhan  terjadi  apabila  ada  kelebihan  energi setelah  energi  yang  digunakan  untuk  pemeliharaan tubuh,  metabolisme  basal,  dan  aktivitas  terpenuhi. Kondisi ini berbeda dengan pakan kontrol (perlakuan A), di mana profil asam amino esensialnya yang baik sehingga  dapat  secara  maksimal  digunakan  untuk menyusun protein tubuh atau pertumbuhan ikan selain untuk  memenuhi  kebutuhan  energi  untuk metabolismenya.  Kebutuhan  energi  untuk metabolisme  juga  dapat  diperoleh  dari  lemak  dan karbohidrat  pakan.  Performa  pertumbuhan  harian dalam penelitian ini juga cenderung memiliki pola yang sama di mana semakin tinggi dosis substitusi tepung ikan dengan  campuran tepung  PST dan  spent  grains menghasilkan pola pertumbuhan panjang dan berat yang semakin menurun.
Nilai rasio konversi pakan perlakuan A (0%) adalah berbeda nyata dengan perlakuan B (30%); C (40%); dan D (50%). Nilai tertinggi terdapat pada perlakuan D (50%) dan terkecil pada perlakuan kontrol. Rasio konversi pakan  menunjukkan  tingkat  efektivitas  pakan percobaan  dalam  mendukung  pertumbuhan  ikan.
Semakin tinggi tingkat substitusi protein tepung ikan dengan protein PST dan spent grains memperlihatkan hasil  yang  tidak  efektif  di  mana  perlakuan  D menghasilkan nilai FCR yang tinggi yaitu 1,65. Sintasan ikan  pada  masing-masing  perlakuan  berbeda  nyata secara statistik. Sintasan tertinggi dengan angka 58,6% diperoleh  pada  ikan  yang  diberi  perlakuan  A  dan sintasan terkecil pada perlakuan D yaitu 47,4%.
Nilai kecernaan pakan memperlihatkan angka yang berbeda di  mana pada perlakuan  B (30%)  lebih baik dari kontrol dan secara statistik berbeda nyata. Pada perlakuan  B  menghasilkan  nilai  kecernaan  protein pakan  sebesar  86,74%  dan  berbeda  nyata  dengan perlakuan C dan D. Hasil ini menunjukkan bahwa pakan B dapat dicerna lebih baik daripada pakan C ataupun D. Meningkatnya jumlah protein dari campuran PST dan spent grains lebih dari 30% dalam pakak ternyata berakibat  menurunnya  nilai  kecernaan  pakan.  Hal tersebut juga diperkuat dengan hasil histologi pada organ pencernaan sepetrti disajikan pada Gambar 1. Secara histologi terlihat bahwa organ usus/intestine ikan yang diberi pakan A dan B panjang lamela usus dan  ujung vili  tampak tersusun  dengan baik.  Selain itu,  juga  sel-sel  goblet  yang  berfungsi  dalam pencernaan makanan tampak memenuhi lamela usus. Hal  ini  berbeda  dengan  histologi  usus  perlakuan  C dan D di mana lamela usus/lamina propia tampak tidak teratur  dan  panjang  tidak  beraturan.  Penurunan panjang  pada  vili  (lipatan  perut)  ada  hubungannya dengan penggunaan protein tepung ikan yang diganti dari  protein  nabati  dan  berpengaruh  terhadap pertumbuhan (Borgesen et al., 2006).
Histologi  bagian  usus  ikan  dapat  memberikan informasi tentang efisiensi dan efektivitas penyerapan makanan oleh ikan (Hu et  al., 2007; Raskovic et  al., 2011; Rodrigues et al., 2009). Penurunan daya cerna diduga dapat disebabkan karena meningkatnya dosis substitusi tepung protein sel tunggal dan spent grains. Hal  yang  sama  juga  dilaporkan  pada  penelitian sebelumnya  pada  kerapu  pasir  (Robisalmi,  2008). Pengamatan kecernaan pakan pada ikan kerapu bebek yang diberikan  protein sel tunggal  (PST) dilaporkan bahwa  daya  cerna  proteinnya  berkisar  92,78% (Subiyakto, 2007). Marzuqi et al. (2008) melaporkan ikan  kerapu  macan  (Epinephelus  fuscoguttatus)  dapat memanfaatkan  21%  ampas  kecap  dalam  pakannya karena pada level yang lebih tinggi akan menurunkan kecernaan pakannya yang selanjutnya berpengaruh pada pertumbuhan  ikan.  Kemampuan  ikan  dalam memanfaatkan suatu bahan pakan dipengaruhi oleh kualitas  bahan,  jenis  ikan,  dan  umur  ikan.  Kualitas bahan  pakan  berupa  hasil  samping  industri  sangat berkaitan  dengan  jenis  mikroorganisme  yang digunakan dalam fermentasinya.
Tabel 2. Komposisi pakan percobaan untuk pemeliharaan ikan kerapu hibrid Table 2. Composition of experimental feed for rearing of hybrid grouper
* ) BETN= bahan ekstrak tanpa nitrogen (nitrogen free extract)
Tabel 3. Keragaan pertumbuhan sintasan dan konversi pakan ikan kerapu cantik yang diberi pakan percobaan
Table 3. Growth performance,  survival rate and food conversion ratio of hybrid grouper fed experi- mental diets
Keterangan: Notasi dengan huruf yang sama dalam satu baris menunjukkan hasil yang tidak berbeda nyata
Remark: Notation  with  the  same  letter  in  the  raw  showing  the  results  was  not  significantly  different
A B C D Bobot akhir Final  body weight  (g) 299.6 ± 27.01 a 287.4 ± 5.34 a 277.4 ± 11.47 b 267.7 ± 4.90 b Laju pertumbuhan panjang Length growth rate  (%) 5.9 ± 0.6 a 5.6 ± 0.6 a 5.6 ± 0.6 a 5.3 ± 0.6 a Laju pertumbuhan bobot harian Weigth growth rate  (%) 0.97 ± 0.09 a 0.95 ± 0.08 a 0.94 ± 0.07 a 0.92 ± 0.08 a Sintasan Survival rate  (%) 58.6 ± 2.38 a 54.2 ± 1.39 b 52.7 ± 1.27 b 47.4 ± 1.05 c Konversi pakan Feed convertion ratio 1.30 ± 0.1 a 1.45 ± 0.0 b 1.48 ± 0.0 c 1.65 ± 0.1 d Kecernaan protein pakan Protein digestibility  (%) 86.0 ± 0.4 a 86.7 ± 0.2 b 84.4 ± 0.4 c 81.7 ± 0.8 d Perlakuan (Treatments ) Parameter Parameters
A B C D Tepung ikan (Fish meal ) 54.1 37.6 32.4 27.1 Tepung bubuk kedelai (Soybean ) 10.0 10.0 10.0 10.0 Tepung rebon (Mysid ) 3.0 3.0 3.0 3.0 Tepung hati cumi (Squid liver ) 10.0 10.0 10.0 10.0 Tepung spent grains - 19.0 25.4 31.7 Tepung PST (Single cell protein meal ) - 8.7 11.6 14.5 Tepung tapioka (Tapioca flour ) 16.3 5.8 2.0 - Minyak ikan (Fish oil ) 3.0 2.3 2.1 0.1 Vitamin mix 1.5 1.5 1.5 1.5 Mineral mix 1.6 1.6 1.6 1.6 CMC 0.5 0.5 0.5 0.5 Total (%) 100.0 100.0 100.0 100.0 Kadar air (Moisture ) 8.7 8.6 8.6 8.6 Kadar protein (Protein) 47.1 47.0 47.0 47.1 Kadar lemak (Lipid ) 9.2 9.6 9.1 9.1 Kadar abu (Ash ) 16.9 16.8 16.5 16.8 Serat kasar (Crude fiber ) 4.1 4.0 4.1 4.8 BETN/NFE* ) 14.0 14.0 14.7 13.6 Komposisi proksimat pakan uji (% pakan)
Proximate composition of experimental feed Bahan pakan
Feed ingredients
Pakan uji (Experimental feed )
Deskripsi  potongan  melintang  histologi  irisan melintang  otak  ikan,  di  mana  dari  hasil  ini  terlihat bahwa perlakuan C dan D nampak terdapat sel-sel yang lebih besar dibandingkan dengan perlakuan A dan B. Pertumbuhan  sel  yang  lebih  besar  dari  sel  normal mengindikasikan  kemungkinan  adanya  penyakit seperti  VNN  dan  iridovirus  (Putri  et  al.,  2013).  Ikan pada perlakuan A dan B tidak memperlihatkan adanya pertumbuhan sel yang besar dimungkinkan ikan sampel yang dianalisis tidak terinfeksi virus.

## KESIMPULAN
Jumlah substitusi protein tepung ikan dengan pro- tein dari PST dan spent grains berpengaruh terhadap pertumbuhan ikan kerapu hibrid. Susbtitusi protein tepung ikan dengan campuran protein dari PST dan spent  grains  pada  pakan  pembesaran  kerapu  hibrid dapat dilakukan sampai sejumlah 30%.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Kegiatan ini didanai dari DIPA BBPPBL tahun 2015. Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada  Bpk. Mujimin  dalam  pembuatan  preparat  histologi,  Bpk. Sumardi  dalam  pembuatan  pelet  percobaan,  Bpk. Mujiono dan Bpk. Nengah Sulatra dalam pemeliharaan ikan kerapu hybrid di KJA dan teknisi lain yang telah membantu kegiatan ini yang tidak dapat disebutkan satu per satu.

## DAFTAR  ACUAN
Association  of  Official  Analytical  Chemists  [AOAC].
(1990). Official methods of analysis. 12th edition. Association of Official Analytical Chemists, Wash- ington D.C., 1141 pp.
Andriyanto,  W.,  &  Giri,  N.A.  (2016).  Substitusi  pro- tein  sel  tunggal  dari  “spent  grains”  dalam pembesaran  kerapu  hybrid.  Prosiding  Seminar
Keterangan (Remark):
g: sel goblet, ml: muscular layer, L: lamina propia, mv: micro vili (g: goblet cell, ml: muscular layer, L:  lamina propia,  mv:  micro  vili)
Gambar 1. Histologi  organ usus  ikan  yang diberi  pakan  percobaan  pada akhir  penelitian;  A (0%),  B (30%), C (40%), dan D (50%).
Figure  1. Histology  of  intestine  given  feed  treatment  at  the  end  of  the  study;  A  (0%),  B  (30%),  C  (40%), and  D  (50%).
Keterangan (Remark): Lingkaran menunjukkan pertumbuhan sel abnormal (The abnormal cell development was shown by  inserted  circle)
Gambar 2. Histologi organ otak ikan pada akhir penelitian; A (0%), B (30%), C (40%), dan D (50%). Figure 2. Histology of brain at the end of the study; A (0%), B (30%), C (40%), and D (50%).
Nasional Tahunan XIII Hasil Penelitian Perikanan dan Kelautan. Universitas Gadjah Mada, hlm. 341-347. Borgesen,  T.L., Racz,  V.J.,  Wilkie,  D.C., White,  LJ.,  &
Drew,  M.D.  (2006).  Effect of  replacing  fish  meal and oil with simple or complex mixtures of veg- etable  ingredients  in  diets  fed  to  nile  tilapia, Oreochromis niloticus. Aquaculture Nutr., 12, 141-149. Bisaria,  R.,  Madan,  M.,  &  Vasudevan,  P.  (1997). Utilisation of Agro-residues as animal feed through Bioconversion. Bioresour. Technol., 59, 5-8.
Effendie,  M.I.  (1997).  Biologi  perikanan.  Bogor: Yayasan Pustaka Nusantara, 163 hlm.
Giri,  N.A.,  Suwir ya,  K.,  &  Marzuqi,  M.  (1999). Kebutuhan protein,  lemak, dan vitamin  C untuk yuwana ikan  kerapu bebek  (Cromileptes  altivelis). Jurnal Penelitian Perikanan Indonesia, 5(3), 38-46. Giri, N.A., Suwirya, K., Marzuqi, M., Rimmer, M.A., & Kevin, C.W. (2004). Effect of dietary protein lev- els on  growth and feed  efficiency of  juvenile ti- ger grouper (E. fuscoguttatus). Indonesian Fisheries Research Journal, 10(1), 78-80.
Harver, J.E. (1972). The vitamins. p. 30-103. In: Halver,
E.J  (Ed.),  Fish  Nutrition.  Washington  D.C.:  Acad Press.  Horcourt  Brace  Javanovich  Publisher,  798 pp.
Hu, C.H., Xu, Y., Xia, M.S., Xiong, L., & Xu, Z.R. (2007). Performance,  microbial  ecology  and  intestine morphology of nile tilapia (Oreochromis niloticus). Aquaculture, 270, 200-206.
Laining, A.,  Rachmansyah, Taufik, A., &  Williams, K. (2003). Apparent digestibility of selected feed in- gredients  for  humpback  grouper,  Cromileptes altivelis. Aquaculture, 218, 529-538.
Marzuqi, M., Giri, N.A., & Suwirya, K. (2004). Substi- tution of fish meal by soybean meal in formula- tion  diet  for  humpback  grouper  (Cromileptes altivelis). Indonesian Fisheries Research Journal, X(1), 39-42.
Marzuqi,  M.,  Giri,  N.A.,  &  Suwir ya,  K.  (2007). Kebutuhan protein optimal dan kecernaan nutrien pakan untuk benih ikan kerapu sunu (Plectropomus leopardus).  J.  Aquacultura  Indonesiana,  8(2),  113- 119.
Marzuqi, M., Giri, I N.A., Agustina, E., & Suwirya, K.
(2008).  Pengaruh  tepung  ampas  kecap  sebagai substitusi  tepung  ikan  dalam  pakan  terhadap pertumbuhan  dan  nilai  kecernaan  juvenil  ikan kerapu  macan  (Epinephelus  Fuscoguttatus).  J. Perikanan Universitas Gadjah Mada, IX(2), 254-260.
Marzuqi, M., Giri, N.A., Suwirya, K., & Astuti, N.W.W.
(2010). Pemanfaatan protein sel tunggal sebagai bahan pakan untuk ikan kerapu pasir (Epinephelus corallicola). Forum Inovasi Teknologi Akuakultur Buku 2, hlm. 651-657.
Pamungkas, W. (2011). Teknologi fermentasi, alternatif solusi dalam upaya pemanfaatan bahan pakan lokal. Media Akuakultur, 6(1), 546-551.
Putri,  R.R.,  Yanuhar,  U.,  &  Suryanto,  A.M.H.  (2013). Perubahan struktur jaringan mata dan otak pada larva ikan kerapu tikus (Cromileptes altivelis) yang terinfeksi  viral  nervous  necrosis  (VNN)  dengan pemeriksaan  scanning  electron  microscope  (SEM). MSPi Student Journal, 1(1), 1-10.
Raskovic,  B.S.,  Stankovic,  M.B.,  Markovic,  Z.Z.,  & Poleksic, V.D. (2011). Histological methods in the assessment of different feed effects on liver and intestine of fish. J. Agric. Sci., 56, 87-100.
Robisalmi, A. (2008). Pemanfaatan protein sel tunggal dalam ransum pakan buatan terhadap retensi pro- tein dan  energi juvenil  kerapu pasir  (Epinephelus corralicola). Skripsi. Fakultas Perikanan. Universi- tas Brawijaya Malang.
Rodrigues,  A.P.O.,  Pauletti,  P.,  Kindlein,  L.,  Cyrino, J.E.P., Delgado, E.F., &  Machado-Neto, R. (2009). Intestinal morphology and histology of the striped catfish Pseudoplatystoma fasciatum (Linnaeus, 1766) fed dry diets. Aquac. Nutr., 15, 559-563.
Takeuchi, T. (1988). Laboratory work. Chemical evalu- ation  of  dietary  nutrient.  In  Watanabe,  T.  (Ed.), Fish nutrion and mariculture. Department of Aquatic Bioscience.  Tokyo  University  of  Fisheries.  JICA, p. 179-226.
Setiawati,  M.K.  (2010).  Pemanfaatan  by  products sebagai bahan baku pakan ikan laut: Suatu Ulasan. Dalam  Semiloka  Nutrisi  dan  Teknologi  Pakan  Ikan/ Udang. Institut Pertanian Bogor. Bogor, 8 hlm.
Subiyakto,  A.  (2007).  Respons  pertumbuhan  yuwana kerapu  bebek  (Cromileptes  altivelis)  yang  diberi pakan  buatan  berinokulasi  bacillus  dan  single  cell protein.  Tesis.  Fakultas  Perikanan,  Universitas Brawijaya, Malang.
Suwirya,  K.,  Giri,  N.A.,  &  Marzuqi,  M.  (2005). Kebutuhan kadar protein terhadap pertumbuhan benih ikan kerapu lumpur (Epinephelus coioides). J. Penelitian Perikanan Indonesia, 11(1), 63-68.
Usman, Rachmansyah, Laining, A., Ahmad, T., & Will- iams,  K.C. (2005).  Optimum  dietary protein  and lipid  specifications  for  grow-out  of  humpback grouper Cromileptes altivelis (Valenciennes). Aquac- ulture Research, 36(13), 1285-1292.
Wen, Q., Wu, Y., Zhao, L., Sun, Q., & Kong, F. (2010). Electricity  generation  and  brewery  waste  wáter treatment from sequential anode-cathode micro- bial fuel cell. J. Zhejiang Univ. Sci. B, 11(2), 87-93.
Zonneveld,  N.,  Huisman,  E.A.,  &  Boon,  J.H.  (1991). Prinsip-prinsip budidaya ikan. Terjemahan. Jakarta, PT Gramedia Pustaka Utama, 318 hlm.