KAJIAN STRUKTUR ANATOMI DAN MORFOLOGI DAUN PLANLET PISANG KEPOK KUNING HASIL PEMBERIAN EKSTRAK UMBI KEMBANG SUNGSANG SECARA IN VITRO
Yoga Aji Saputra 1* , Eti Ernawiati 2 , Rochmah Agustrina 3 , Sri Wahyuningsih 4 1,2,3,4 Universitas  Lampung , Jl.  Prof.  Dr.  Ir.  Sumantri  Brojonegoro,  Kota  Bandar  Lampung, Lampung 35141, Indonesia
*Corresponding author, e-mail: saputrayogaaji1@gmail.com

## A B S T R A C T
Plantain is a fruit commodity that has a high level of market demand, but the yield is low. To  overcome  this  problem,  tissue  culture  techniques  are  used  to  increase  plantlet production  in  a  short  time.  Plantain  have  parthenocarpy  character,  high  sterility,  and different levels of ploidy. Tissue culture with the addition of flame lily tuber biomutagen containing colchicine was used as a strategy to overcome the above constraints because it was  thought  to  increase  the  production  of  polyploid  banana  plantlets.  Changes  in  the anatomical and morphological structures are indicators of polyploidy. The purpose of this study  was  to  obtain  information  on  changes  in  the  anatomical  and  morphological structures of plantain leaves as a result of giving in vitro plantlet propagation media as an indicator  of  the  formation  of  polyploidy.  Plantlets  were  grown  on  tissue  culture  media supplemented with three treatments: 10% flame lily tuber extract, 0.1% pure colchicine, and  without  addition  (control).  The  parameters  observed  were  epidermal  cell  size, stomata size, stomata index, number and leaf area. Epidermal cell size, stomata size and stomatal index were analyzed using range values and mean values. The number of leaves, and the average wide of leaf, is then shown in the form of a bar chart. The results showed that  administration  of  flame  lily  tuber  extract  was  able  to  increase  epidermal  cell  size, stomata size, wide of a leaf, and able to reduce the stomata index and number of leaves.
Keywords : Flame lily tubers extract , Pantain, Polyploid, Tissue culture

## PENDAHULUAN
Pisang banyak disukai oleh masyarakat Indonesia dari berbagai kalangan, baik dari kalangan bawah hingga kalangan atas dan salah satu komoditas buah unggulan Indonesia (Wibowo et al., 2010). Luas panen dan produksi pisang selalu menempati posisi pertama. Pisang merupakan buah yang mengandung gizi tinggi, mudah didapat dan  harganya  terjangkau,  sebagai  sumber  vitamin,  mineral  dan  juga  karbohidrat. kandungan nutrisi pada pisang antara lain mineral, karbohidrat, serat dan vitamin A, B,  C  (Ambarita,  2015)  dapat  membantu  memperlancar  sistem  metabolisme  tubuh, meningkatkan  daya  tanah  tubuh  dari  radial  bebas.  Serta  menjaga  kondisi  tetap kenyang dalam waktu lama (Wijaya, 2013).
Salah satu jenis pisang yang sangat digemari masyarakat adalah pisang  kepok ( Musa  paradisiaca L.).  Pisang  kepok  merupakan  salah  satu  jenis  pisang  lokal Indonesia  hasil  persilangan Musa  acuminata dan Musa  balbisiana (Simmonds  & Shepherd,  1995).  Pisang  kepok  ini  memiliki  2  jenis  yaitu  pisang  putih  dan  pisang kepok kuning.  Permintaan pasar terhadap pisang kepok kuning relatif tinggi, karena jenis pisang ini banyak digunakan sebagai bahan olahan makanan tradisional maupun
industri  rumahan  seperti  selai,  keripik,  tepung  pisang,  dan  sale  pisang.  Permintaan terhadap pisang kepok kuning yang tinggi tidak diimbangi dengan tingkat produksi yang  memadai.  Rendahnya  produksi  pisang  kepok  kuning  diduga  karena  budidaya pisang yang tidak tepat. Dengan demikian diperlukan sebuah terobosan bioteknologi untuk  memperoleh  kultivar  pisang  kepok  unggul,  salah  satunya  dengan  teknik pemuliaan mutasi.
Mutasi  dapat  dilakukan  dengan  cara  menambahkan  senyawa  tertentu  yang dapat  menyebabkan  terjadinya  mutasi  atau  disebut  mutagen.  Kolkisin  diketahui dapat dijadikan sebagai salah satu mutagen. Namun kolkisin sintesis harganya relatif mahal.  Solusi  untuk  memperoleh  kolkisin  alami  yaitu  dengan  memanfaatkan kembang sungsang, karena kandungan senyawa kolkisinnya sangat tinggi dan mudah didapat.  Kembang  sungsang  diketahui  mengandung  senyawa  kolkisin  pada  seluruh organnya.    Selain  itu,  seluruh  bagian  dari  tanaman  ini  mengandung  senyawa  aktif, misalnya pada umbi diketahui mengandung alkaloid yang sangat toksit, yaitu kolkisin sekitar  0,1-0,8  %,  pada  batang  0,33-0,41%  (Jana  &  Shekhawat,  2011).  Menurut Suminah et al. (2005), kolkisin mampu mencegah terbentuknya benang spindel pada sel yang aktif membelah karena mampu berikatan dengan tubulin, protein penyusun utama  mikrotubul.  Oleh  karena  itu  kembang  sungsang  berpotensi  menjadi biomutagen.
Senyawa  kolkisin  ini  juga  sering  digunakan  untuk  menginduksi  mutasi (poliploid).  Senyawa  ini  mampu  menghentikan  pembelahan  sel  (antimitosis),  yaitu dengan cara menghambat pembentukan benang gelendong sehingga sel tidak dapat ditarik  ke  kutub  berlawanan  dan  kromosom  menyebar  dalam  sel,  pembentukan membran sel baru terhambat dan akhirnya membentuk sel dengan jumlah kromosom meningkat  atau  bersifat  poliploid.  Berdasarkan  hal  tersebut,  maka  perlu  diketahui struktur  anatomi  dan  morfologi  daun  planlet  pisang  kepok  kuning  hasil  pemberian ekstrak umbi kembang sungsang secara in vitro.

## METODE Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  dari  Mei-Juni  2020,  penelitian  ini  dilakukan  di Laboratorium  Botani,  Jurusan  Biologi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam, Universitas Lampung.

## Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu pinset, botol larutan , beaker glass , gelas objek, gelas penutup, silet, mikroskop, gunting, neraca analitik, alat tulis dan  kamera.  Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu  daun  planlet  pisang  kepok  kuning yang diperoleh dari penelitian tahap 1 (induksi planlet pisang kepok kuning), alkohol, pewarna  safranin  1%  (dilarutkan  dalam  aquades),  tissue,  gliserin  10%,  pemutih pakaian, dan aquades.

## Rancangan
Observasi  terhadap  daun  planlet  pisang  kepok  kuning  hasil  perlakuan  media kontrol (A1), media diberi tambahan ekstrak umbi kembang sungsang 10 % (A2) dan media  diberi  kolkisin  0,1  %  (A3).  Pengamatan  pada  masing-masing  perlakuan dilakukan pada 10 planlet pisang kepok kuning sebagai satuan pengulangan. Prosedur Kerja

## 1. Preparasi anatomi daun
Daun dikerik hingga tipis, kemudian direndam dalam larutan pemutih pakaian selama 5 menit. Sisa klorofil dibersihkan dengan aquades. Kemudian sampel diwarnai
dengan  safranin  1%  dan  ditaruh  diatas  gelas  obyek  dalam  medium  gliserin  10  %, kemudian  ditutup  dengan  gelas  penutup  (Dorly,  1989).  Preparat  irisan  membujur daun  ini  dibuat  menggunakan  permukaan  bawah  daun.  Sediaan  yang  telah  siap diamati  dibawah  mikroskop  pada  perbesaran  1000  X  (dibantu  minyak  emersi). Kemudian diambil gambarnya menggunakan kamera.
2. Pengamatan stomata, sel epidermis, dan indeks stomata daun
Pengukuran  stomata  dan  sel  epidermis  dilakukan  pada  15  kali  untuk  setiap ulangan.  Sedangkan  untuk  indeks  stomata  (IS)  dihitung  pada  10  bidang  pandang untuk tiap ulangan. Menurut Royer (2001), indeks stomata dapat di tentukan dengan menggunakan rumus :
𝐼𝑛𝑑𝑒𝑘𝑠 𝑆𝑡𝑜𝑚𝑎𝑡𝑎 = Jumlah Stomata Jumlah Stomata+Jumlah Sel Epidermis 𝑥 100%

## 3. Pengamatan jumlah daun planlet
Jumlah  daun  pisang  dihitung  dari  hasil  setiap  perlakuan  dan  ulangan  secara manual.
4. Pengamatan luas daun planlet
Perhitungan  luas  daun  menggunakan  metode  gravimetri  kertas.  Kertas duplikat ukuran 10 x 10 cm ditimbang. Kemudian daun planlet pisang digambar pada kertas  menggunakan  pensil,  lalu  replika  daun  pada  kertas  dipotong  menggunakan gunting.  Selanjutnya  hasil  potongan  replika  daun  tersebut  ditimbang  menggunakan timbangan  analitik.  Menurut  Irwan  (2017),  perhitungan  luas  daun  planlet  dapat menggunakan rumus sebagai berikut:
𝐿𝑢𝑎𝑠 𝐷𝑎𝑢𝑛 = Berat Replika Daun Planet Berat Kertas 10 cm x 10 cm 𝑥 100%
Analisis Data
Parameter  yang  diamati  dalam  penelitian  ini  adalah  ukuran  sel  epidermis, ukuran stomata, indeks stomata, jumlah daun, dan luas daun. Analisis data ukuran sel epidermis, ukuran stomata, dan indeks stomata dianalisis menggunakan nilai kisaran dan  nilai  rata-rata.  Jumlah  daun  dan  luas  daun  dirata-rata  kemudian  ditampilkan dalam bentuk diagram batang.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil pengamatan anatomi daun planlet pisang kepok kuning hasil perlakuan penamban  ekstrak  umbi  kembang  sungsang  (A2),  penambahan  kolkisin  (A3)  dan kontrol (A1) dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1 . Ukuran sel epidermis, stomata, dan indeks stomata (perbesaran 1000 x)
Sel  epidermis  daun  planlet  pisang  kepok  kuning  dari  media  yang  diberi perlakuan penambahan ekstrak umbi kembang sungsang 10% (A2) dan kolkisin 0,1% (A3) lebih panjang dibandingkan planlet dari media kontrol (A1). Namun untuk lebar, ketiga  perlakuan  menunjukkan  nilai  rata-rata  lebar  yang  hampir  sama  (Tabel  1).
Parameter A1 A2 A3 Kisaran  Rata-Rata Kisaran  Rata-rata Kisaran  Rata-rata Sel Epidermis (µm) P  25-78 35,99 ± 2,73  25-62 40,78 ± 1,52  26-69 41,11 ± 1,57 L  10-28 15,49 ± 0,91  10-28 15,98 ± 1,17  10-26 16,12 ± 0,86 Stomata (µm) P  24-35 28,23 ± 0,74  19-35 28,81 ± 1,52  25-35 29,68 ± 0,98 L  12-26 17,08 ± 0,7 11-27 18,08 ± 1,62  15-25 19,95 ± 0,43 Indeks Stomata (%) 0-10,2 3,13 ± 0,62 0-9,8 3,02 ± 1,08 0-9,09 2,99 ± 1,14
Keterangan P: Panjang  L: Lebar
Peningkatan ukuran panjang sel epidermis daun planlet pisang kepok kuning diduga karena  telah  terbentuk  planlet  pisang  kepok  kuning  poliploid.  Dugaan  ini  sesuai dengan  hasil  penelitan  Ernawiati  et  al.  (2014)  yang  melaporkan  terjadinya peningkatan  ukuran  sel  epidermis  cabai  merah  akibat  perendaman  benih  cabai dengan pemberian ekstrak biji kembang sungsang 0,025%.
Ukuran  panjang  dan  lebar  stomata  pada  daun  planlet  dari  perlakuan penambahan  ekstrak  umbi  kembang  sungsang  10%  (A2)  sedikit  lebih  besar  jika dibandingkan  perlakuan  kontrol  (A1).  Panjang  dan  lebar  stomata  daun  planlet  dari perlakuan  penambahan  kolkisin  0,1%  (A3)  menunjukkan  ukuran  yang  paling  besar (Tabel  1).  Penambahan  ekstrak  umbi  kembang  sungsang  10%  (A2)  pada  media mampu menaikkan ukuran stomata jika dibandingkan dengan perlakuan pada media kontrol (A1), sehingga diduga telah terjadi poliploidi. Namun  hasilnya  lebih  rendah dibandingkan  dengan  perlakuan  penambahan  kolkisin  0,1%  pada  media  (A3). Konsentrasi  ekstrak  mampu  menaikkan  ukuran  stomata  namun  diduga  belum optimal  untuk  memunculkan  sel  poliploid.  Penambahan  ukuran  stomata  tertinggi pada penelitian ini dijumpai pada perlakuan penambahan kolkisin 0,1% pada media (A3). Hasil ini dapat diduga telah terbentuk sel poliploid pada pisang kepok kuning. Hasil  ini  sesuai  dengan  hasil  penelitian  Rohmah  et  al.  (2017)  yang  menunjukkan adanya peningkatan ukuran sel stomata daun zaitun akibat pemberian kolkisin 0,75 %.  Menurut  Ernawati  et  al.  (2010),  kandungan  kolkisin  yang  cukup  besar  ini  dapat dimanfaatkan sebagai biomutagen yang sangat prosepktif dalam menghambat proses mitosis dan terbentuknya sel poliploid.
Indeks  stomata  pada  perlakuan  A2  nilainya  lebih  rendah  dibandingkan  A1. Namun pemberian kolkisin 0,1% (A3) menunjukkan nilai yang paling rendah (Tabel 1).  Indeks  stomata  berbanding  terbalik  dengan  ukuran  stomata.  Semakin  tinggi ukuran  stomata  maka  nilai  indeks  stomata  akan  semakin  rendah  (Pharmawati  & Wistiani,  2015).  Hal  ini  mengindikasikan  penambahan  ekstrak  umbi  kembang sungsang pada media tanam mampu menurunkan indeks stomata (IS).
Penurunan  indeks  stomata  tersebut  diduga  telah  terbentuk  planlet  pisang kepok  kuning  poliploid.  Hal  ini  sejalan  dengan  penelitian  Pharmawati  dan  Wistiani (2015)  yang  menyebutkan  bahwa  terjadi  penurunan  indeks  stomata  daun  tanaman bawang  putih  kultivar  kesuna  bali  pada  berbagai  konsentrasi.  Nilai  indeks  stomata berkaitan dengan ukuran stomata. Ukuran stomata yang makin besar akan memiliki indeks stomata yang makin kecil. Sebaliknya, jika ukuran stomata makin kecil maka nilai indeks stomata makin besar.
Rata-rata jumlah daun planlet  pisang kepok  kuning pada media  kontrol (A1) dan  media  ditambah  kolkisin  0,1%  (A3)  menunjukkan  nilai  yang  sama  yaitu  1,5. Media  yang  ditambah  ekstrak  umbi  kembang  sungsang  10%  (A2)  memiliki  jumlah daun yang paling rendah yaitu 1. Hal ini dikarenakan efek kolkisin yang menghambat pembelahan  sel  berbanding  lurus  dengan  jumlah  daun.  Menurut  Crowder  (1997), kolkisin  dapat  menginduksi  sel  meristem  yang  menyebabkan  terhambatnya pembentukan  benang-benang  spindel  yang  menyebabkan  kromatid  tidak  dapat terpisah  pada  tahap  anafase.  Hal  ini  mengakibatkan  terjadinya  penggandaan kromosom tanpa pembentukan sel baru. Oleh karena tidak terbentuk sel baru maka jumlah daun planlet tidak akan meningkat.
Luas  daun  planlet  hasil  perlakuan  media  yang  ditambah  ekstrak  umbi kembang sungsang 10% (A2) yaitu 2,27 cm menunjukkan kenaikan yang signifikan dibandingkan  dengan  media  kontrol  (A1)  yaitu  1,99  cm.  Kenaikan  ini  juga  dialami oleh daun planlet dari perlakuan penambahan kolkisin 0,1% (A3) yang menghasilkan
planlet dengan  luas daun tertinggi yaitu 2,38 cm. Penambahan ukuran stomata dan ukuran epidermis hasil percobaan ini memiliki korelasi positif terhadap penambahan luas  daun  planlet.  Hal  tersebut  mengindikasikan  bahwa  penambahan  ekstrak  umbi kembang  sungsang  pada  pisang  kepok  kuning  diduga  menghasilkan  planlet  yang poliploid.
Hasil  ini  sejalan  dengan  penelitian  Rahayu  et  al.  (2013)  yang  menyebutkan bahwa pemberian kolkisin dengan konsentrasi dan lama perendaman yang berbeda memberikan pengaruh nyata pada luas daun tanaman sedap malam. Diperkuat oleh penelitian  Rahman  et  al.  (2017)  yang  melaporkan  bahwa  pemberian  kolkisin  pada tanaman  oyong  ( Luffa  acutangula L.)  memberikan  pengaruh  nyata  terhadap  luas daun pada berbagai konsentrasi.

## SIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan  didapatkan  kesimpulan penambahan  ekstrak  umbi  kembang  sungsang  10%  pada  media  kultur  jaringan pisang kepok kuning mampu meningkatkan ukuran sel epidermis, stomata dan luas daun.  Serta  mampu  menurunkan  indeks  stomata  dan  jumlah  daun  planlet  pisang kepok  kuning.  Hasil  tersebut  menjadi  indikator  kuat  terbentuknya  planlet  pisang kepok kuning yang poliploid.

## REFERENSI
Ambarita M D Y., Bayu E S., Setiado H. (2015). Identifikasi Karakter Morfologis Pisang ( Musa sp.)  di  Kabupaten  Deli  Serdang. Jurnal  Agroekoteknologi 4  (1)  :1911- 1924.
Crowder,  L.V.  (1997). Genetika  Tumbuhan .  Diterjemahkan  oleh  Kusdiarti.  UGM. Yogyakarta.
Dorly.  (1989). Membandingkan  Anatomi  Daun  Varietas  Orba  dan  Muria .  Laporan Masalah Khusus. IPB. Bogor.
Ernawiati,  E.,  Destiliani,  A.,  dan  Yulianty.  (2014).  Profil  Anatomi  Daun  Cabai  Merah Keriting  ( Capsicum  annum L.)  Akibat  Pemberian  Ekstrak  Air  Biji  Kembang Sungsang . Jurnal Ilmiah . 2 (1): 16-19.
Ernawiati,  E.,  Wahyuningsih,  S.,  dan  Yulianty.  (2010).  Efek  Biomutagen  Terhadap Mitosis  Sel  Akar  Kecambah  Cabai  Merah(Capsicum  Annum  L.):  Prosiding Seminar Nasional, Lampung: Universitas Lampung.
Jana, S., & Shekhawat, G.S. (2011). Critical review on medicinally potent plant species: Gloriosa superba L. Fitoterapia . 82 (3): 293-301.
Pharmawati,  M.,  dan  Wistiani,  N.L.A.J.  (2015).  Induksi  Mutasi  Kromosom  dengan Kolkisin  Pada  Bawang  Putih  ( Allium  sativum L.)  Kultivar  ‘Kesuna  Bali’. Universitas Udayana. Jurnal Bioslogos. 5 (1): 18-25 Rahayu,  Y.S.,  Istiyono,  K.,  Prasetyo  dan  Andrys,  U.R.  (2013). Pengaruh  Penggunaan Kolkisin  Terhadap  Pertumbuhan  Vegetatif  Tanaman  Sedap  Malam  (Polianthes tuberose L. ) Di Dataran Medium . Universitas Malang. Malang. Rahman, A.F., Nandariyah dan Parjanto. (2017). Keanekaragaman Pertumbuhan dan Hasil  Tanaman  Oyong  ( Luffa  acutangula L.)  pada  Berbagai  Konsentrasi Kolkhisin. Agrotech Res J . 1 (1): 1-6.
Rohmah, A., Rahayu, T., dan Hayari, A. (2017). Pengaruh Kolkisin terhadap Karakter Stomata  Daun  Zaitun  ( Olea  europaea L.). Jurnal  Ilmiah  BIOSAINTROPIS .  2  (2): 10-17.
Royer, D.L. (2001). Stomatal Density and Stomatal Index as Indicators of Paleomosperic CO2 Consentration. Review of Paleobotany and Palynology 114 (2001): 1-28. Simmonds, N.W., and Shepherd, K. (1955). The taxonomy and origins of the cultivated bananas. Linnean Society. Botanical J. 55 (359): 302-312. Wibowo  A.,  Joko  T.,  Subandiyah  S.  (2010).  Increase  Resistance  Of  Kepok  Kuning Bananaagainst  Blood  Disease  Through  Somaclonal  Variation  And  Endophytic Symbiosis. Jurnal Perlindungan Tanaman Indonesia , 16 (1): 15–21.
Wijaya,  C.H.  Noryawati  M.  (2013).  Bahan  Tambahan  Pangan  Pewarna.  Bogor:  IPB Press.