Rekayasa , 2024; 17(2): 198-205 ISSN: 0216-9495 (Print) ISSN: 2502-5325 (Online)
Aktivitas Antibakteri Ekstrak Bunga Telang ( Clitoria ternatea L ) terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli
Asri Widyasanti 1 *, Febrianti 1
1 Program Studi Teknik Pertanian Fakultas Teknologi Industri Pertanian Universitas Padjadjaran Jl Hegarmanah Jatinangor Sumedang 45363 Jawa Barat *E-mail Korespondensi  : asri.widyasanti@unpad.ac.id DOI: https://doi.org/10.21107/rekayasa.v17i2.22348
Submitted September 14 th 2023, Accepted February 27 th 2024, Published August 15 th 2024 Abstrak
Bunga telang ( Clitoria ternatea L. ) atau biasa disebut butterfly pea merupakan tanaman merambat yang tergolong ke dalam keluarga fabaceae . Tanaman ini dikenal memberikan banyak manfaat salah satunya sebagai antibakteri alami. Senyawa metabolit sekunder pada bunga telang diduga bertanggung jawab atas aktivitas antimikroba yang dimilikinya. Tujuan dari penelitian ini yaitu untuk mengetahui aktivitas antibakteri pada ekstrak bunga telang dalam menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus dan E. coli serta mengetahui interaksi antara konsentrasi ekstrak dengan pertumbuhannya. Metode yang digunakan adalah eksperimen dengan Rancangan Acak Lengkap (RAL). Perlakuan yang diberikan yaitu variasi konsentrasi sebesar 20%, 40%, 60%, 80%, dan 100%, kontrol positif meropenem dan kontrol negatif aquades. Ekstrak bunga telang juga dilakukan penapisan fitokimia guna mengidentifikasi kehadiran senyawa flavonoid, tanin, alkaloid, fenol dan saponin yang menunjukkan hasil positif terhadap lima senyawa tersebut. Hasil pengujian antibakteri membuktikan bahwa ekstrak bunga telang dapat menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus dan E. coli serta perlakuan konsentrasinya berpengaruh sangat nyata terhadap nilai DDH (Diameter Daya Hambat). Aktivitas antibakteri ekstrak bunga telang paling efektif pada konsentrasi 100% dengan nilai rerata DDH terhadap bakteri S. aureus adalah 8,44 ± 0,27 mm sementara terhadap bakteri E. coli yaitu 10,00 ± 0,73 mm. Perlakuan konsentrasi ekstrak bunga telang yang diujikan memiliki pengaruh yang sangat nyata terhadap nilai DDH kedua bakteri.
Kata Kunci: antibakteri , ekstrak bunga telang , Clitoria ternatea L ., Staphylococcus aureus, Escherichia coli
Abstrac t
Clitoria ternatea L. or commonly called butterfly pea is a vine that belongs to the fabaceae family. This plant is known to provide many benefits, one of which is as a natural antibacterial. Secondary metabolite compounds in C. ternatea are thought to be responsible for its antimicrobial activity. The purpose of this study was to determine the antibacterial activity of C. ternatea  extract  in  inhibiting  the  growth  of  S. aureus  and  E.  coli  bacteria and  to determine  the  interaction  between  the concentration of the extract and its growth. The method used was an experiment with a completely randomized design (CRD). The treatments given were variations in the concentration of C. ternatea extract by 20%, 40%, 60%, 80%, and 100%, positive control of meropenem and negative control of aquades. The C. ternatea extracts were also screened for phytochemicals for flavonoids, saponins, tannins, alkaloids, and phenols which showed positive results for these five compounds. The results of antibacterial  testing  proved  that  C.  ternatea  extract  could  inhibit  the  growth  of  S.  aureus  and  E.  coli  bacteria  and  the concentration treatment had a very significant effect on the zone of inhibition. The antibacterial activity of C. ternatea extract was most effective at a concentration of 100% with the mean value of DDH against S. aureus bacteria was 8.44 ± 0.27 mm while against E. coli bacteria was 10.00 ± 0.73 mm. The concentration treatment of the tested C. ternatea extract had a very significant effect on the zone of inhibition of the two bacteria.
Key words : antibacterial, extracts butterfly pea, Clitoria ternatea L ., Staphylococcus aureus , Escherichia coli

## PENDAHULUAN
Bunga  telang  ( Clitoria  ternatea L.)  atau  dikenal  juga  dengan  sebutan butterfly  pea merupakan tanaman  merambat  yang  tergolong  ke  dalam  keluarga Fabaceae .  Seluruh  bagian  tanaman  ini  dapat dimanfaatkan,  oleh  karena  itu  tanaman  ini  seringkali  disebut  tanaman  istimewa  terutama  dalam pengobatan  tradisional  (Mukherjee et  al .,  2008).  Menurut  tradisi  India,  tanaman  telang  telah  dikenal memiliki  banyak  manfaat  diantaranya  ialah  untuk  mengobati  insomnia,  epilepsi,  disentri,  penyakit  kulit seperti eksim, sebagai obat antiperiodik, obat cacing, pencahar dan masih banyak lagi (Manjula et al ., 2013). Sementara di Indonesia khususnya oleh masyarakat Betawi, bunga telang digunakan untuk membuat jernih mata bayi (Marpaung, 2020), selanjutnya bagian bunga tanaman telang yang berwarna biru ini lebih sering dimanfaatkan  sebagai  pewarna  makanan.  Apabila  dilihat  dari  tinjauan  fitokimianya,  bunga  telang

## REKAYASA
Journal of Science and Technology https://journal.trunojoyo.ac.id/rekayasa
mengandung sejumlah bahan  aktif yang memiliki potensi farmakologis yang luas salah satunya adalah sebagai antibakteri (Budiasih, 2017).
Pengobatan paling umum yang dilakukan untuk  menangani infeksi bakteri adalah menggunakan obat-obatan  sintetis  termasuk  antibakteri.  Sayangnya,  penggunaan  antibakteri  sintesis  diketahui  telah memberikan dampak negatif pada kesehatan manusia dan menyebabkan bakteri memiliki resistensi yang lebih tinggi. Efek samping yang disebabkan dari pemberian antibiotik seperti penisilin adalah reaksi alergi berupa syok anafilaktik yang khas, nefritis, gangguan pernapasan, berbagai ruam kulit, eosinofilia, demam dan sebagainya (Brooks et al., 2008).  Salah satu cara untuk menurunkan resistensi terhadap antibakteri sintesis  adalah  dengan  memanfaatkan  antibakteri  alami. Senyawa  metabolit  sekunder  yang  ditemukan pada  tanaman  sebagian  besar  bertanggung  jawab  atas  aktivitas  antimikroba.  Penelitian  Hutajulu et  a l (2008)  juga  membuktikan  bahwa  senyawa  fenol  konsentrasi  5%  dari  ekstrak  bunga  telang  mempunyai khasiat sebagai antibakteri terhadap S. aureus dengan nilai DDH rata-rata 0,87 mm. Selain itu Riyanto et al (2019)  menemukan  alkaloid,  saponin  dan  tannin  pada  bunga  telang  tipe single  petal yang  dapat menghambat  pertumbuhan Pseudomonas  aerugenosa dengan  nilai  DDH  rata-rata  20,50  mm  pada konsentrasi ekstrak 100%.
Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli dipilih  sebagai  bakteri  uji  serta  dipilih  untuk  mewakili bakteri  Gram  positif  dan  Gram  negatif.  Adapun  alasan  dalam  pemilihan  kedua  bakteri  tersebut  karena keduanya merupakan bakteri patogen yang dapat merugikan manusia. S. aureus merupakan bakteri Gram positif  yang  menjadi  patogen  utama  pada  manusia.  Hampir  semua  orang  pernah  mengalami  infeksi S. aureus dengan derajat keparahan yang beragam, mulai dari keracunan makanan hingga infeksi berat yang membahayakan (Champoux et al, 2004). E. coli adalah bakteri Gram negatif yang merupakan bagian flora normal  pada  usus  manusia  namun  sering  juga  menyebabkan  infeksi  saluran  kemih (urinary  tract infection/ UTI ) ,  infeksi  enterik,  infeksi  intra-abdominal,  meningitis  akut  dan  pneumonia (Noviana,  2004), selain itu untuk beberapa strain E. coli juga menjadi salah satu penyebab terjadinya diare (Brooks et al , 2008).  Berdasarkan  latar  belakang  dan  identifikasi  masalah,  tujuan  dari  penelitian  ini  yaitu  untuk mengetahui aktivitas antibakteri pada ekstrak bunga telang dalam menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus dan E. coli serta mengetahui interaksi antara konsentrasi ekstrak dengan pertumbuhannya. Penggunaan bagian bunga dari tanaman telang kali ini menjadi pokok perhatian pada penelitian. Sejauh ini, belum ada penelitian mengenai uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol bunga telang tipe double blue terhadap bakteri patogenik S. aureus dan E. coli . Uji aktivitas antibakteri ekstrak bunga telang dengan variasi konsentrasi akan dilakukan terhadap bakteri S. aureus dan E. coli. Hasil penelitian yang diperoleh nantinya diharapkan dapat menunjang pembuatan antibakteri alami yang dapat meminimalisir dampak buruk penggunaan antibakteri sintetis. Selain itu penelitian ini juga dapat mengembangkan potensi yang dimiliki komoditas pertanian bunga telang di bidang kesehatan.

## METODE PENELITIAN

## Bahan
Bahan utama yang akan digunakan adalah bunga telang ( Clitoria ternatea L.) varietas double blue dari lahan Ciparanje Unpad, Jatinangor, Sumedang, Jawa Barat.  Bahan lainnya yang digunakan antara lain yaitu etanol  96%  (teknis),  pewarna  kristal  violet,  larutan  lugol,  alkohol  95%,  safranin,  aquades,  meropenem, Mueller  Hinton  Agar (MHA),  BaCl 2 1%,  H 2 SO 4 1%,  reagen  Dragendorff,  FeCl 3 ,  HCl,  NaOH,  TTC  ( 2,3,5- Triphenyltetrazolium chloride ), bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923 dan bakteri Escherichia coli ATCC 25922 yang diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi, Fakultas Farmasi, Universitas Padjadjaran.

## Analisis Data
Metode  analisis  yang digunakan  adalah  metode  eksperimental  laboratorium  menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL). Uji aktivitas antibakterinya dilakukan dengan metode difusi cakram untuk menentukan Diameter Daya Hambat (DDH),  pengujian ini dengan tiga kali ulangan dan dilakukan secara duplo.    Hasil  yang  diperoleh  pada  pengujian  DDH  dilanjutkan  dengan  uji  lanjutan  Duncan  untuk mengetahui faktor yang memiliki perbedaan sangat nyata.

## Persiapan Ekstrak
Tahapan yang dilakukan untuk persiapan bunga telang adalah pemanenan, proses pelayuan selama 15-16 jam pada suhu ruang dan pengeringan menggunakan food dehydrator dengan suhu 60°C selama 6 jam, dari simplisia yang sudah kering diambil samplenya untuk diukur kadar airnya menggunakan metode oven. Kemudian dilakukan pengecilan ukuran menggunakan grinder dan pengayakan dengan mesh 60. Bubuk  bunga telang selanjutnya diekstrak  dengan metode maserasi selama 3 hari  (Kamilla et al ., 2009) menggunakan  pelarut  etanol  96%  (1:10).  Ekstrak  maserasi  kemudian  disaring  melalui  kertas  saring Whatman  No.  1  dengan  bantuan vacuum  filtration .  Ekstrak  kasar  yang  diperoleh  kemudian  diuapkan sampai  tidak  ada  tetesan  pelarut  menggunakan rotary  evaporator (Heildolph  p/n  562-01300-00).  Dari keseluruhan  proses  dihitung  rendemen  total  proses  ekstraksi  yaitu  perbandingan  massa  ekstrak  yang dihasilkan dengan massa bahan baku yang digunakan. Selain itu dilakukan perhitungan untuk Kadar Sisa Pelarut (KSP) pada ekstrak yaitu persentase berat pelarut yang diuapkan dari satuan berat bahan yang diuji.

## Penapisan Fitokimia Ekstrak
Penapisan  fitokimia  pada  ekstrak  dilakukan  untuk  mengidentifikasi  kehadiran  senyawa  metabolit sekunder  yang  terkandung  di  dalamnya.  Identifikasi  senyawa  alkaloid  dilakukan  menggunakan  uji Dragendorff,  flavonoid  diuji  dengan  reagen  alkali  (Fadhly et  al., 2015),  fenol  dengan  uji  FeCl 3 ,  saponin menggunakan uji buih dan tanin menggunakan uji endapan (Chakraborty et al., 2017).

## Identifikasi dan Uji Aktivitas Bakteri
Identifikasi bakteri dilakukan dengan pewarnaan Gram dan pengamatan bentuk melalui mikroskop untuk  memastikan  bahwa  bakteri  yang  diujikan  tepat.  Aktivitas  antibakteri  ekstrak  bunga  telang  diuji dengan metode difusi cakram (CLSI, 2018b). Suspensi bakteri S. aureus dan E. coli yang telah setara dengan kekeruhan  standar  0,5  Mc  Farland  dengan  kepadatan  bakteri  1-2  x  108  CFU/ml  diambil  dengan menyelupkan cotton swab ke dalamnya kemudian diinokulasi ke permukaan kering pelat MHA pada cawan petri  9  cm.  Ekstrak  bunga  telang  20  µl  konsentrasi  20%,  40%,  60%,  80%  dan  100%  (konsentrasi menunjukkan persentase ekstrak dalam pelarut aquades), 20 µl kontrol positif meropenem (30 µg/ml) dan 20 µl kontrol negatif aquades diaplikasikan pada kertas cakram diameter 6 mm kemudian ditempatkan pada lapisan atas pelat MHA dengan bantuan forsep dengan menekan sedikit cakram untuk memastikan cakram menyentuh permukaan agar. Dalam satu pelat MHA terdapat sampel uji duplo. Langkah selanjutnya adalah menginkubasi pelat dalam keadaan terbalik pada suhu 37°C selama 16-18 jam. Waktu inkubasi ini mengikuti waktu inkubasi yang disarankan oleh CLSI (2018a) untuk S. aureus ATCC 25923 dan E. coli ATCC 25922.  Diameter  daya  hambat  yang  terbentuk  diukur  menggunakan  jangka  sorong.  Semua  percobaan dilakukan dalam rangkap tiga. Hasilnya dilaporkan sebagai rata-rata dari tiga percobaan.

## HASIL PEMBAHASAN

## Ekstraksi Bunga Telang
Parameter  yang  diamati  dalam  proses  pembuatan  ekstrak  bunga  meliputi  kadar  air  simplisia, karakteristrik ekstrak, rendemen total proses, kadar sisa pelarut (KSP) dan bobot jenis, hasilnya dilihat pada Tabel 1. Kadar air yang dimiliki bunga telang kering adalah 4,54 ± 1,02%. Nilai tersebut telah sesuai dengan yang dipersyaratkan oleh Kemenkes (1995) tentang bubuk simplisia dimana kadar air untuk simplisia adalah maksimal  10%.  (Prasetyo  &  Inoriah,  2013)  menyebutkan  bahwa  reaksi  enzimatis  pada  tanaman  akan terhenti ketika kadar air simplisia kurang dari 10%. Reaksi enzimatis perlu dihentikan karena enzim pada tanaman dapat mengubah kandungan kimia yang telah terbentuk menjadi kandungan lain (Winangsih et al. , 2013).
Ekstrak yang dihasilkan memiliki konsistensi kental, bau khas yang tidak menyengat dan berwarna biru pekat. Rendemen total proses ekstraksi bunga telang adalah 49%. Nilai Kadar Sisa Pelarut (KSP) adalah sebesar 20%, nilai tersebut menggambarkan jumlah pelarut yang tersisa dalam ekstrak (Widyasanti et al., 2018).  Persyaratan  mutu  untuk  ekstrak  bunga  telang  belum  diatur  dalam  monografi  farmakope  herbal Indonesia,  namun  berdasarkan  pengaturan  Badan  Pengawasan  Makanan  dan  Obat  (BPOM,  2005), kandungan  etil  alkohol  pada  obat  dalam  bentuk  sediaan  cairan  nilainya  tidak  boleh  melebihi  1%.
Berdasarkan  hal  tersebut,  ekstrak  bunga  telang  yang  diperoleh  masih  lebih  besar  daripada  yang dipersyaratkan. Untuk penelitian selanjutnya hal yang dapat dilakukan untuk meminimalisir nilai KSP pada ekstrak yaitu menggunakan metode spray drying untuk menggantikan proses penguapan sehingga ekstrak yang diperoleh dalam bentuk bubuk. Bobot jenis yang dimiliki ekstrak menunjukkan banyaknya komponen yang terkandung dan nilainya berbanding lurus, semakin tinggi nilai bobot jenis maka semakin banyak juga komponen yang terkandung dalam zat tersebut (Widyasanti et al., 2018).
Tabel 1. Hasil Ekstraksi Bunga Telang Parameter Nilai Kadar air simplisia 4,54 ± 1,02% Rendemen total proses 49% Kadar Sisa Pelarut (KSP) 20% Bobot Jenis 1,145

## Penapisan Fitokimia
Penapisan  fitokimia  ekstrak  bunga  telang  secara  kualitatif  dilakukan  untuk  menguji  kehadiran  5 senyawa  metabolit  sekunder  yang  hasilnya  ditunjukkan  pada  Tabel  2.  Studi  penapisan  fitokimia mengungkapkan bahwa bunga telang tipe double blue mengandung kelima senyawa yang diujikan. Hasil ini  sama  dengan  penapisan  fitokimia  pada  ekstrak  bunga  telang  tipe single  petal yang  dilakukan  oleh (Riyanto et al., 2019) dimana kelima senyawa teridentifikasi terkandung di dalam ekstrak. Hasil analisis juga menunjukkan  bahwa  pelarut  etanol  memiliki  kemampuan  menarik  senyawa  metabolit  sekunder  pada bunga telang lebih baik dari metanol. Hal ini ditunjukkan oleh teridentifikasinya senyawa saponin, tanin dan  alkaloid  sementara  pada  penelitian  (Kamilla et  al .,  2009)  menggunakan  metanol,  ketiga  senyawa tersebut tidak teridentifikasi pada ekstrak.
Tabel 2. Hasil Penapisan Fitokimia Ekstrak Bunga Telang No. Nama Senyawa Nama Uji Hasil Kesimpulan 1. Flavonoid Uji reagen alkali Timbul warna kuning Positif (+) 2. Saponin Uji buih Terdapat  buih  yang  menetap >5 menit Positif (+) 3. Tanin Uji endapan Terdapat endapan merah Positif (+) 4. Alkaloid Uji reagen Dragendorff Terdapat endapan merah bata Positif (+) 5. Fenol Uji FeCl 3 Terbentuknya warna hitam Positif(+)
Flavonoid merupakan senyawa golongan dari fenol, sistem kerjanya sebagai antibakteri yaitu dengan membentuk  senyawa  kompleks  dengan  protein  ekstraseluler  dan  terlarut  yang  dapat  menyebabkan kerusakan  pada  membran  sel  bakteri.  Alkaloid  bekerja  sebagai  antibakteri  dengan  cara  mengganggu komponen penyusun peptidoglikan pada sel bakteri sehingga lapisan dinding sel rusak yang menyebabkan kematian pada sel (Khumairoh et al ., 2020). Mekanisme kerja saponin yaitu dengan membentuk senyawa kompleks dengan membran sel melalui ikatan hidrogen yang mengakibatkan rusaknya struktur protein sehingga permeabilitas membran sel menjadi tidak seimbang dan menyebabkan lisis pada sel. Sementara tannin akan merusak membran dan fungsi materi genetik sel bakteri (Riyanto et al ., 2019).

## Identifikasi Bakteri
Hasil identifikasi terhadap kedua bakteri dapat dilihat pada Gambar 1. Bakteri S. aureus teridentifikasi sebagai  bakteri  Gram  positif  yang  dibuktikan  dengan  visualisasi  bakteri  berwarna  ungu  bakteri E.  coli menunjukkan  bakteri  termasuk  ke  dalam  Gram  negatif  karena  pewarnaan  menghasilkan  warna  merah. Pengamatan bentuk terhadap S. aureus menunjukkan ciri-ciri yang sesuai dengan yang dideskripsikan oleh Brooks et  al (2008)  yaitu  memiliki  bentuk  bulat  (kokus)  seragam  dan  bertumpuk  membentuk  agregat seperti anggur. Sementara E. coli terlihat memiliki sel berbentuk batang pendek dalam sel 200unggal atau berpasangan, sifat ini sesuai dengan yang dinyatakan oleh Berg (2004) yaitu selnya berbentuk batang yang panjangnya sekitar 2,5 µm. Hasil identifikasi menunjukkan kedua bakteri yang akan diujikan pada penelitian kali ini sudah tepat.
(a) (b) Gambar 1. Hasil identifikasi bakteri (a) S. aureus dan (b) E. coli dengan perbesaran 100x Pengamatan  bentuk  terhadap S.  aureus menunjukkan  ciri-ciri  yang  sesuai  dengan  yang dideskripsikan  oleh    Brooks et  al (2008)  yaitu  memiliki  bentuk  bulat  (kokus)  seragam  dan  bertumpuk membentuk agregat seperti anggur. Sementara E. coli terlihat memiliki sel berbentuk batang pendek dalam sel  tunggal  atau  berpasangan,  sifat  ini  sesuai  dengan  yang  dinyatakan  oleh  Berg  (2004)  yaitu  selnya berbentuk batang yang panjangnya sekitar 2,5 µm. Hasil identifikasi menunjukkan kedua bakteri yang akan diujikan pada penelitian kali ini sudah tepat.
Aktivitas Antibakteri Ekstrak Bunga Telang terhadap Bakteri S. aureus dan E. coli
Hasil  pengamatan  DDH  (Diameter  Daya  Hambat)  menunjukkan  ekstrak  bunga  telang  memiliki aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri S.  aureus dan E.  coli .  Berdasarkan  spektrum  atau  kisaran  kerjanya ekstrak  bunga telang termasuk  antibakteri sprektrum luas ( broad spectrum ) karena dapat menghambat pertumbuhan bakteri Gram positif juga bakteri Gram negatif  (Hidayati et al ., 2017). Hal ini menegaskan bahwa  ekstrak  bunga  telang  memiliki  potensi  yang  dapat  dikembangkan  sebagai  zat  antibakteri. Pengamatan terhadap kontrol menunjukkan aktivitas antibakteri meropenem yang kuat, sementara pada aquades terbukti tidak memberikan penghambatan sama sekali. Adapun hasil dari pengukuran nilai DDH dari berbagai konsentrasi ekstrak dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Nilai diameter daya hambat ekstrak bunga telang terhadap S. aureus dan E. coli Bakteri Konsentrasi Ekstrak Diameter Daya Hambat ± SD (mm) Staphylococcus aureus Kontrol (+) 47,20 ± 0,62 Kontrol (-) 0,00 ± 0,00 20% 0,00 ± 0,00 a 40% 6,30 ± 0,17 b 60% 6,49 ± 0,04 c 80% 7,55 ± 0,59 d 100% 8,44 ± 0,27 e Escherichia coli Kontrol (+) 51,09 ± 0,03 Kontrol (-) 0,00 ± 0,00 20% 6,91 ± 1,00 ab 40% 7,18 ± 0,05 b 60% 6,56 ± 0,68 a 80% 8,02 ± 0,33 c 100% 10,00 ± 0,73 d
Ket: DDH kontrol diperoleh dari dua kali ulangan secara duplo, DDH sampel diproleh dari tiga ulangan secara duplo. Angka yang diikuti huruf yang sama menunjukkan hasil yang tidak berbeda nyata.
202 | Widyasanti & Febrianti, Aktivitas Antibakteri Ekstrak Bunga Telang
Hasil uji lanjut Duncan untuk bakteri S. aureus menunjukkan seluruh perlakuan konsentrasi memiliki nilai yang berbeda signifikan satu sama lain, untuk itu penentuan konsentrasi paling efektif dilihat dari nilai DDH yang paling tinggi yaitu konsentrasi 100%.  Hasil uji lanjut Duncan untuk bakteri E. coli menunjukkan konsentrasi  20%  memiliki  nilai  yang  tidak  berbeda  signifikan  dengan  konsentrasi  40%  dan  60%,  maka konsentrasi yang terbaik untuk memberikan pengaruh yang sama adalah konsentrasi yang paling rendah yaitu 20%. Sementara konsentrasi 40%, 60%, 80%, dan 100% memiliki nilai yang berbeda signifikan satu sama lain. Ketika dibandingkan seluruh perlakuan, konsentrasi yang paling optimal untuk  menghambat pertumbuhan bakteri E. coli adalah konsentrasi ekstrak 100% karena memiliki nilai DDH paling tinggi dan berbeda signifikan dengan perlakuan yang lain.
Hasil yang disajikan pada Tabel 3 menunjukkan aktivitas antibakteri ekstrak bunga telang memiliki nilai yang lebih tinggi terhadap E. coli dibandingkan S. aureus . Hasil yang serupa juga terjadi pada penelitian Kamilla et al . (2009) dimana ekstrak bunga telang tipe single petal lebih mengambat pertumbuhan E. coli. Hal ini dapat terjadi karena adanya perbedaan komponen struktur penyusun dinding sel dan juga adanya perbedaan  respon  antara  bakteri  Gram  positif  dan  bakteri  Gram  negatif  dalam  melawan  senyawa antibakteri. S.  aureus yang  merupakan  bakteri  Gram  positif  umumnya  lebih  sensitif  terhadap  senyawa antibakteri yang bersifat nonpolar. Sebaliknya E. coli sebagai bakteri Gram negatif pada umumnya akan lebih sensitif terhadap senyawa antibakteri yang bersifat polar  (Davidson et al., 2005). Ekstraksi bunga telang dilakukan menggunakan pelarut etanol yang bersifat polar sehingga senyawa yang dapat ditarik adalah yang bersifat polar, untuk itu dapat disimpulkan bahwa senyawa antibakteri pada ekstrak bunga telang bersifat polar dan lebih berpengaruh dalam menghambat pertumbuhan bakteri E. coli dibandingkan S. aureus .
Komponen  dasar  penyusun  dinding  sel  bakteri  dapat  menyebabkan  perbedaan  respon  antara bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif terhadap senyawa antibakteri, hal ini didukung oleh  Brooks et al (2008) yang menyatakan bahwa struktur dinding sel bakteri menentukan penetrasi, ikatan dan aktivitas suatu senyawa antibakteri. Komponen dasar penyusun dinding sel bakteri Gram positif mengandung 90% peptidoglikan yang salah satu penyusunnya adalah asam amino alanin yang bersifat hidrofobik (nonpolar). Komponen tersebut membentuk struktur yang tebal dan kaku, serta lapisan tipis asam teikoat dan asam teikuronat yang bermuatan negatif. Sementara itu lapisan dinding sel pada bakteri Gram negatif hanya mengandung 5-10% peptidoglikan, selebihnya terdiri dari protein, lipopolisakarida dan lipoprotein yang terdapat pada membran luar (Davidson et al. , 2005; Madigan et al., 2003). Lapisan peptidoglikan dengan jumlah yang sedikit serta tidak  mengandung asam teikoat ini diduga menyebabkan dinding sel bakteri Gram  negatif  lebih  rentan  terhadap  guncangan  fisik  seperti  saat  diberikan  antibiotik  maupun  bahan antibakteri lainnya (Mpila et al., 2012). Selain komponen dasar penyusun diding selnya, S. aureus memiliki mikrokapsul yang melindungi dinding sel dan memiliki enzim FAME ( Fatty Acid Modifying Enzyme ) yang dapat  memodifikasi  lipid  antibakteri  dan  memperpanjang  kelangsungan  hidup  bakteri  (Todar,  2004). Kondisi  ini  membuat S.  aureus memiliki  kemampuan  resistensi  terhadap  antibakteri  yang  lebih  baik dibandingkan dengan E. coli .
Zona hambat pada setiap konsentrasi ekstrak bunga telang memiliki nilai yang berbeda-beda. Grafik hubungan  konsentrasi  dengan  nilai  DDH  kedua  bakteri  dapat  dilihat  pada  Gambar  2.  Nilai  DDH  pada bakteri S. aureus menunjukkan nilai yang berbanding lurus dengan peningkatan konsentrasi, peningkatan nilai DDH seiring meningkatnya konsentrasi dikarenakan kehadiran komponen zat aktif yang lebih banyak pada  konsentrasi  yang  lebih  tinggi.  Sementara  pada  bakteri E.  coli terjadi  fluktuasi  nilai  DDH  dimana konsentrasi 60% menghasilkan nilai DDH yang lebih kecil dibandingkan dengan konsentrasi 40% dan 20%.
Perbedaan zona hambat yang terbentuk oleh senyawa antibakteri terhadap bakteri uji kemungkinan terjadi karena adanya perbedaan kemampuan atau respon bakteri dalam melawan senyawa antibakteri sehingga  peningkatan  konsentrasi  ekstrak  tidak  selalu  sebanding  dengan  peningkatan  DDH.  Menurut Harborne (2003), aktivitas daya hambat optimal pada zat antibakteri akan terjadi ketika diberikan perlakuan yang  optimal  dan  tidak  bergantung  kepada  nilai  dari  konsentrasi  ekstrak  tersebut.  Hal  tersebut  juga didukung  oleh  pendapat  Katzung  (2010),  yang  menyatakan  bahwa  konsentrasi  ekstrak  dapat mempengaruhi  efektivitas  obat  terhadap  bakteri,  namun  peningkatan  konsentrasi  tidak  selalu  diikuti dengan  peningkatan  efek.  Perlakuan  optimal  dapat  berupa  lamanya  waktu  setiap  konsentrasi  untuk berdifusi, sementara pada penelitian ini waktu untuk berdifusi adalah waktu inkubasi yang disama ratakan
yaitu 16-18 jam. Selain itu, penyebab hasil yang tidak sebanding dengan kenaikan konsentrasi yaitu karena proses difusi pada membran luar sel bakteri.
Gambar 2. Hubungan konsentrasi ekstrak terhadap bakteri S. aureus dan E. coli Bakteri E. coli memiliki membran luar yang terdiri dari lipopolisakarida (LPS) pada seluruh bagian dan fosfolipid  pada  lapisan  bawah.  Lapisan  LPS  ini  sangat  mudah  ditembus  oleh  antibiotik  yang  bersifat hidrofilik,  sedangkan  lapisan  fosfolipid  sangat  sulit  menyerap  lapisan  yang  bersifat  hidrofilik  (Nikaido, 2009). Ekstrak bunga telang dan aquades merupakan senyawa hidrofilik dimana ekstrak memiliki kelarutan yang lebih rendah dibandingkan aquades sehingga konsentrasi yang memiliki kandungan aquades yang lebih tinggi tentunya akan lebih mudah berpenetrasi pada lapisan LPS namun akan lebih sulit masuk ketika melewati  lapisan  fosfolipid.    Pemberian  konsentrasi  yang  lebih  rendah  mungkin  akan  menghasilkan diameter daya hambat yang lebih besar karena dapat berpenetrasi lebih baik pada LPS. Namun, dapat juga lebih kecil karena lebih sulit untuk diserap oleh lapisan fosfolipid. Oleh karena itu, pemberian konsentrasi yang semakin tinggi pada bakteri E. coli tidak  selalu memberikan diameter daya hambat  yang semakin tinggi karena perbedaan tingkat difusi pada setiap lapisan membran luar bakteri tersebut.

## Hasil Uji Lanjut Duncan
Hasil pengukuran DDH yang diperoleh kemudian dianalisis menggunakan sidik ragam (Anova) dan uji  Duncan  seperti  pada  Tabel  4  untuk  bakteri S.  aureus dan  bakteri E.  coli .  Analisis  dilakukan  untuk membuktikan hipotesis penelitian, apakah hipotesis diterima (H 1 ) atau ditolak (H 0 ). Perlakuan konsentrasi ekstrak  bunga  telang  memiliki  pengaruh  yang  sangat  nyata  terhadap  diameter  daya  hambat  bakteri S. aureus dan E. coli . Setiap konsentrasi ekstrak dapat dikatakan memberikan pengaruh yang berbeda-beda dalam menghambat pertumbuhan kedua bakteri. Hal tersebut dibuktikan oleh nilai F hitung yang lebih besar dari nilai F tabel 5% dan F tabel 1% . Hal ini juga menunjukkan bahwa hipotesis dapat diterima/terbukti (H1). Tabel 4. Hasil Uji Lanjut Duncan Nilai DDH Ekstrak Etanol Bunga Telang
Konsentrasi (%) Hasil Uji Duncan nilai DDH± SD (mm) S.aureus E. coli 20 0,00 ± 0,00 a 6,91 ± 1,00 b c 40 6,30 ± 0,17 b 7,18 ± 0,05 b c  d 60 6,49 ± 0,04 b 6,56 ± 0,68 b 80 7,55 ± 0,59 c d 8,02 ± 0,33 d e 100 8,44 ± 0,27 c 10,00 ± 0,73 f
Ket: Angka yang diikuti huruf yang sama menunjukkan hasil yang tidak berbeda nyata
Hasil uji lanjut Duncan menunjukkan hanya konsentrasi ekstrak bunga telang dengan konsentrasi 20% terhadap S. aureus dan konsentrasi 100% terhadap E. coli yang memiliki hasil yang berbeda nyata satu
0 2 4 6 8 10 0 20 40 60 80 100 120 D ia me te r D ay a Ha mb at (mm) Konsentrasi (%) S. aureus
E. coli
sama lain dan dengan konsentrasi lainnya ditandai dengan notasi yang paling berbeda. Konsentrasi 100% terhadap S. aureus tidak memiliki nilai yang berbeda signifikan dengan konsentrasi 80% terhadap E. coli , namun perlakuan keduanya berbeda signifikan dengan yang lain. Sementara perlakuan konsentrasi 60% terhadap E. coli memiliki hasil yang tidak berbeda signifikan dengan konsentrasi 40% dan 60% terhadap S. aureus . Nilai DDH yang dihasilkan pada perlakuan tersebut berada pada rentang 6.3 – 6.56 mm. Ketiga perlakuan  tersebut  juga  tidak  berbeda  signifikan  dengan  perlakuan  dengan  konsentrasi  20%  dan  40% teradap E. coli.
Berdasarkan uji lanjutan Duncan dapat dilihat bahwa pengaruh konsentrasi 40% dan 60% terhadap S. aureus tidak berbeda signifikan sehingga diantara dua konsentrasi tersebut yang paling efisien adalah konsentrasi 40%, namun apabila dilihat dari seluruh perlakuan konsentrasi 100% adalah konsentrasi terbaik untuk  menghambat S.  aureus .  Sementara  itu  pengaruh  perlakuan  konsentrasi  terhadap E.  coli pada konsentrasi 20-60% tidak berbeda signifikan, maka konsentrasi yang terbaik untuk memberikan pengaruh yang sama adalah konsentrasi yang paling rendah yaitu 20%. Hal yang sama juga berlaku pada E. coli yaitu ketika dibandingkan seluruh perlakuan, konsentrasi yang paling baik untuk  menghambat pertumbuhan adalah konsentrasi ekstrak 100%.

## KESIMPULAN
Ekstrak bunga telang dapat menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus dan E. coli paling efektif pada konsentrasi 100% dengan nilai rerata DDH (Diameter Daya Hambat) terhadap bakteri S. aureus adalah 8,44 ± 0,27 mm sementara terhadap bakteri E. coli yaitu 10,00 ± 0,73 mm. Perlakuan konsentrasi ekstrak bunga telang yang diujikan memiliki pengaruh yang sangat nyata terhadap nilai DDH kedua bakteri. Perlu penelitian  lanjutan  mengenai  isolasi,  karakterisasi  komponen  aktif  fitokimia  bunga  telang  serta toksisitasnya dengan menentukan LC 50 dan pada persiapan ekstrak bunga telang agar memiiliki nilai KSP yang lebih rendah.

## DAFTAR PUSTAKA
BPOM, R. (2005). Peraturan Kepala Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia Nmor HK 00.05.41.1384 Tentang Kriteria dan Tata Laksana Pendaftaran Obat Tradisional, Obat Herbal Terstandar dan Fitofarmaka. Jakarta.
Brooks,  G.,  Butel, J & Morse, S. (2008). Jawetz, Melnick, & Adelberg: Mikrobiologi kedokteran (23rd ed.). Jakarta: Sunter Agung Podomoro: EGC.
Budiasih,  K.  (2017).  Kajian  Potensi  Farmakologis  Bunga  Telang  ( Clitoria  ternatea L.). Prosiding  Seminar Nasional Kimia UNY 2017 , (4), 201 – 206.
Chakraborty, S., Sahoo, S., Bhagat, A., & Dixit, S. (2017). Studies on Antimicrobial Activity, Phytochemical Screening Tests, Biochemical Evaluation of Clitorea Ternatea Linn. Plant Extracts. International Journal of Research 5 (10), 197 – 208. https://doi.org/10.29121/granthaalayah.v5.i10.2017.2296
Champoux, J. J., Drew, W. L., Neidhardt, F. C., & Plorde, J. J. (2004). Medical Microbiology An Introduction to Infectious Diseases (4th ed; K. J. Ryan & C. G. Ray, Eds.). https://doi.org/10.1036/0838585299 CLSI. (2018a). M100 Performance Standards for Antimicrobial .
CLSI. (2018b). Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests (13th ed.). 950 West Valley Road, Suite 2500, Wayne, Pennsylvania 19087 USA: Clinical and Laboratory Standards Institute.
Davidson, P. M., Sofos, J. N., & Branen, A. L. (2005). Antimicrobials in Food. In Antimicrobials in Food, Third Edition (Third Edit). Boca Raton: CRC Press.
Depkes RI. (1995). Farmakope Indonesia edisi IV. In Departemen Kesehatan Republik Indonesia .
Fadhly, E., Kusrini, D., & Fachriyah, E. (2015). Isolasi, Identifikasi Senyawa Alkaloid dari Daun Rivina humilis L. serta Uji Sitotoksik Menggunakan Metode BSLT (Brine Shrimp Lethality Test). Jurnal Kimia Sains Dan Aplikasi , 18 (2), 67 – 72. https://doi.org/10.14710/jksa.18.2.67-72
Ginovyan, M., Petrosyan, M., & Trchounian, A. (2017). Antimicrobial activity of some plant materials used in Armenian  traditional  medicine. BMC  Complementary  and  Alternative  Medicine , 17 (50),  1 – 10. https://doi.org/10.1186/s12906-017-1573-y
Harborne, J. B. (2003). Metode Fitokimia : Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan (Edisi II). Bandung: Institut Teknologi Bandung.
Hidayati, W., Yuniarti, F., Shofaya, L., & Utomo, S. P. (2017). Screening and Identification Endophytic Bacteria from  Indonesian  Bay  Leaves  (Eugenia  polyantha  Wight)  With  Antibacteria  Activity. Proceeding Kolokium UHAMKA , 1 (2), 167 – 176. Retrieved from https://proceedings.uhamka.ac.id/index.php/psd/article/view/43 Hutajulu, T. F., Sari, R., & Djumarman. (2008). Senyawa Fenol Kembang Telang.Pdf. Journal of Agro-Based
Industry , Vol. 25, pp. 35 – 44.
Kamilla, L., Mnsor, S. M., Ramanathan, S., & Sasidharan, S. (2009). Antimicrobial activity of Clitoria ternatea (L.) extracts. Pharmacologyonline , 1 (January), 731 – 738.
Katzung, B. G. (2010). Farmakologi Dasar dan Klinik . Jakarta: Salemba Medika.
Madigan, M. ., Martinko, J. ., & Parker, J. (2003). Brock Biology of Microorganism (10th Editi). Illinois: Southern Illinois University Carbondale.
Manjula, P., Mohan, C. H., Sreekanth, D., Keerthi, B., & Devi, B. P. (2013). Phytochemical Analysis of Clitoria ternatea Linn  a Valuable Medical Plant . 92 , 173 – 178.
Marpaung,  A.  M.  (2020).  Tinjauan  manfaat  bunga  telang  ( Clitoria  ternatea l.)  bagi  kesehatan  manusia. Journal of Functional Food and Nutraceutical , 1 (2), 63 – 85. https://doi.org/10.33555/jffn.v1i2.30
Mpila,  D.  A.,  Fatimawali,  &  Wiyono,  W.  I.  (2012).  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun  Mayana (Coleus Atropurpureus [L] Benth) terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli dan Pseudomonas aeruginosa secara In-Vitro. Pharmacon , 1 (1), 13 – 21. https://doi.org/https://doi.org/10.35799/pha.1.2012.440
Mukherjee, P. K., Kumar, V., Kumar, N. S., & Heinrich, M. (2008). The Ayurvedic medicine Clitoria ternatea - From  traditional  use  to  scientific  assessment. Journal  of  Ethnopharmacology , 120 (3),  291 – 301. https://doi.org/10.1016/j.jep.2008.09.009
Nikaido,  H.  (2009).  Outer  Membrane,  Gram-Negative  Bacteria. Encyclopedia  of  Microbiology ,  439 – 452. https://doi.org/10.1016/B978-012373944-5.00050-X
Noviana, H. (2004). Pola Kepekaan Antibiotika Escherichia coli yang Diisolasi dari Berbagai Spesimen Klinis. Jurnal Kedokteran Trisakti , 23 (4), 122 – 126.
Prasetyo,  &  Inoriah,  E.  (2013).  Pengelolaan  Budidaya  Tanaman  Obat-Obatan  (Bahan  Simplisia). Perpustakaan  Nasional  Ri:  Katalog  Dalam  Terbitan ,  pp.  1 – 85.  Badan  Penerbitan  Fakultas  Pertanian UNIB.
Riyanto, E.  F., Nurjanah, A. N., & Ismi, S. N. (2019).  Daya Hambat Ekstrak  Etanol Bunga Telang ( Clitoria ternatea ). Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada: Jurnal Ilmu Ilmu Keperawatan, Analisis Kesehatan Dan Farmasi , 19 (2), 218 – 225.
Todar, K. (2004). Todar’s Online Textbook of Bacteriology . Madison: University of Wisconsin-Madison.
Widyasanti, A., Halimah, T., & Rohdiana, D. (2018). Ekstraksi Teh Putih Berbantu Ultrasonik pada Berbagai Amplitudo. Jurnal Aplikasi Teknologi Pangan , 7 (3). https://doi.org/10.17728/jatp.2295
Winangsih, Prihastanti, E., & Parman, S. (2013). Pengaruh Metode Pengeringan Terhadap Kualitas Simplisia Lempuyang Wangi (Zingiber aromaticum L.). Buletin Anatomi Dan Fisiologi , XXI (1), 19 – 25.