## Aktivitas Antioksidan dan Sitotoksisitas Ekstrak Bakteri Tanah Asal Pulau
Muna, Sulawesi Tenggara
Antioxidant and Cytotoxic Properties of Extract from Soil Bacteria Isolated from Muna Island, Southeast Sulawesi
Jepri Agung Priyanto 1*) , Egiyanti Nur Widhia Hening 1 , Vera Permatasari 2 , Muhammad Eka Prastya 2 , La Ode Abdul Fajar Hasidu 3 , Gian Primahana 2
1 Divisi Mikrobiologi, Departemen Biologi, FMIPA, IPB University
2 Pusat Riset Bahan Baku Obat dan Obat Tradisional, Badan Riset dan Inovasi Nasional (BRIN),
3 Jurusan Ilmu Kelautan, Universitas Sembilanbelas November Kolaka *E-mail: jepriyanto@apps.ipb.ac.id

## ABSTRACT
Soil bacteria could be the promising source of secondary metabolites with diverse pharmacological activities.  Bacteria  coded  as  P1  and  M7  were  isolated  from  soil  obtained  from  Muna  Island, Southeast Sulawesi. This research aimed to evaluate the antioxidant activity, cytotoxic property, and identify the chemical profile  of the extract derived  from soil bacteria P1 and M7. Based on 2,2'- azino-bis  (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic  acid  (ABTS)  and  2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) assay, extract derived from P1 isolate was moderately active against ABTS free radical with IC 50 of  126.22±10.82  µg/mL,  and  less  active  on  DPPH  (IC 50 :  721.95±16.59  µg/mL),  while  M7 extract was less active towards DPPH and ABTS. Interestingly, these extracts in the concentration of 100 µg/mL were cytotoxic to breast cancer cell (MCF-7), as tested by 3-(4,5-dimethylthiazol-2- yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium  bromide  (MTT)  assay.  MCF-7  viability  was  decreased  up  to 69.83±1.46 % and 61.49±0.76 % after treated with P1 and M7 extract, respectively. The extracts were  also  induced  membrane  disruption  and  apoptosis  of  MCF-7  cells.  The  extracts  contained phenol (9.52±0.22 and 10.41±0.09 mg EAG/g extract, for P1 and M7, respectively) and flavonoids (9.16±0.16  and  9.29±0.24  mg  EQ/g  extract,  for  P1  and  M7,  respectively).  According  to  Gas Chromatography  Mass  Spectrometry  (GC-MS)  analysis,  Pyrrolo[1,2-a]  pyrazine-1,4-dione, hexahydro-3-(2-methylpropyl) that previously well known as antioxidant and cytotoxic compounds, were found in the M7 and P1 extract. This compound may play a vital role in the radical scavenging and cytotoxic properties of P1 and M7 extracts. The results of this study indicate that P1 and M7 extracts could be the potential source of antioxidant and cytotoxic compounds and need to be further developed for pharmaceutical use.
Keywords: Antioxidant, cytotoxicity, muna island, soil bacteria, phenol, flavonoids.

## PENDAHULUAN
Keberadaan  radikal  bebas  yang  berlebih  di dalam sel dapat mengganggu struktur dan fungsi normal  sel  (Liguori et  al., 2018).  Cekaman oksidatif  ini  berkontribusi  dalam  menginduksi penuaan  dan  berbagai  penyakit  degeneratif, antara lain kanker, jantung koroner, alzheimer, parkinson,  dan  gagal  ginjal  kronis  (Leyane et al., 2022). Oleh karena itu, pencarian  senyawa bahan alam yang memiliki aktivitas farmakologis terutama sebagai antioksidan dan antikanker  dari  sumber-sumber  biologis  terus dilakukan.  Senyawa  antioksidan  memiliki kemampuan  untuk  meredam,  menstabilisasi, atau memperlambat produksi radikal bebas dari aktivitas  seluler  (Żymańczyk-Duda et  al., 2018).  Dengan  adanya  karakter  tersebut, senyawa antioksidan dapat mengurangi cekaman  oksidatif  sel  dan  jaringan  manusia
yang  penting  dalam  mencegah  atau  mengatasi penyakit  timbulnya  penyakit  degeneratif, termasuk  kanker.  Mikroorganisme  merupakan salah  satu  sumber  potensil  penghasil  senyawa antioksidan dan antikanker (Gupta, 2014).
Tanah  merupakah salah satu  habitat  favorit berbagai mikroorganisme. Diantara jenis mikroorganisme tanah lainnya, bakteri merupakan  kelompok  mikroorganisme  tanah yang paling melimpah dan beragam (Ding et al ., 2019).  Satu  gram  tanah  mengandung  bakteri sekitar  10 5 hingga  10 10 CFU/g  (Kacergius  & Sivojiene, 2023; Mushtaq et al ., 2023). Bakteri yang  hidup  pada  lingkungan  ini  seringkali terpapar  oleh  berbagai  cekaman,  termasuk radiasi  UV,  fluktuasi  temperatur,  ketersediaan air,  dan  kompetisi  intraspesies maupun interspesies untuk memperebutkan sumber daya (Peyrat et  al., 2019).  Sebagai  bentuk  adaptasi dari  kondisi  lingkungan  ini,  bakteri  berevolusi
dengan mengembangkan kemampuan metabolisme  yang  unik  untuk  memproduksi berbagai  jenis  senyawa  bioaktif  dengan bioaktivitas  spesifik  untuk membantunya bertahan  hidup  pada  lingkungan  tersebut. Senyawa  bioaktif  asal  bakteri  tanah  telah banyak  dilaporkan  memiliki  berbagai  fungsi farmakologis,
diantaranya antimikrob (Andayani et  al., 2015),  antikanker  (Osama et al., 2022),  antivirus  (Gaied,  2017),  dan antioksidan  (Celladurai  &  Vadamalai et  al., 2022). Pulau Muna merupakan pulau yang terletak di Kabupaten Buton Tengah, Sulawesi Tenggara.  Pulau  ini  memiliki  bentang  alam yang khas berupa perbukitan batu gamping atau bukit karst. Umumnya kondisi lahan pada pulau ini  tergolong  sebagai  lahan  gersang  dengan tanah  berkapur  (Hindersah  &  Rahmi,  2020). Kondisi tanah tersebut merupakan tempat yang potensial  untuk  mendapatkan  bakteri  tanah dengan  kemampuan  produksi  metabolit  yang khas. Namun, hingga saat ini eksplorasi bakteri tanah  dari  kawasan  tesebut,  baik  dari  segi keragaman  maupun  bioprospeksinya  belum pernah  dilakukan.  Eksplorasi  mikroorganisme tanah  dari  kawasan  kepulauan  yang  jarang diteliti dan memiliki karakteristik wilayah yang khas merupakan peluang besar untuk menemukan  mikroorganisme-mikroorganisme jenis baru dengan karakter genetik dan fisiologis yang unggul.
Pada  penelitian  sebelumnya,  dua  isolat bakteri  dengan  kode  P1  dan  M7  telah  berhasil diisolasi  dari  tanah  Pulau  Muna  (Koleksi  dari
Jepri Agung Priyanto, Laboratorium Mikrobiologi,  Dept.  Biologi,  FMIPA,  IPB, 2022). Namun, dua isolat tersebut belum dikaji bioaktivitasnya.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengevaluasi
potensi antioksidan, sitotoksisitas, dan profil kimia dari ekstrak isolat bakteri  P1  dan  M7  yang  diisolasi  dari  tanah Pulau Muna, Sulawesi Tenggara.

## METODE

## Sumber isolat bakteri
Dua  isolat  bakteri  dengan  kode  M1  dan  P7  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  telah  diisolasi  dari tanah  Pulau  Muna,  Kabupaten  Buton  Tengah, Sulawesi  Tenggara  (Koleksi  Jepri  Agung  Priyanto Laboratorium  Mikrobiologi,  Departemen  Biologi, FMIPA, IPB , 2022).
Kultur bakteri dan ekstraksi senyawa bioaktif Dua isolat bakteri tanah (P1 dan M7) masing-masing diinokulasikan  pada  media nutrient  broth (NB)  dan diinkubasi  pada  suhu  ruang  ±28℃  selama  24  jam.
Sebanyak  1%  (v/v)  kultur  tersebut  selanjutnya diinokulasikan ke dalam 1 L media NB baru, diikuti dengan  inkubasi  selama  3  hari  pada  suhu  ±28℃ dengan  agitasi  120  rpm.  Kemudian,  kultur ditambahkan dengan etil asetat 1:1 (v/v). Campuran selanjutnya  dikocok  dengan  kuat  selama  60  menit. Fase  pelarut  etil  asetat  kemudian  dipisahkan  dan diuapkan pada suhu 50℃ untuk mendapatkan ekstrak kasar  bakteri.  Ekstrak  kering  yang  diperoleh kemudian  ditimbang  dan  disimpan  pada  suhu  4°C (Priyanto et al., 2023 a ) .

## Uji  aktivitas  antioksidan  terhadap  DPPH  dan ABTS
Aktivitas  antioksidan  ekstrak  bakteri  ditentukan menggunakan  2  jenis  radikal  yaitu  2,2-difenil-1- pikrilhidrazil (DPPH) dan 2, 2'-azino-bis-3- etilbenzotiazolin-6-asam sulfonat (ABTS) (Prastya et al., 2020) .  Larutan  sampel  yang  telah  dilarutkan dengan metanol diencerkan pada microplate 96 well hingga  mencapai  konsentrasi  39,75-  5000  µg/mL dengan  volume  akhir  masing-masing  sampel  pada sumuran  sebanyak  100  µL.  Sampel  tersebut kemudian ditambah dengan 100 µL DPPH (2,5 µM) dan diinkubasi dalam kondisi gelap selama 30 menit pada suhu ruang (±28ºC).
Selanjutnya, sampel tersebut diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer ELISA pada panjang gelombang 515 nm. Disisi lain, pada uji ABTS, radikal dibuat dengan mencampurkan kalium  persulfat  (K 2 S 2 O 8 )  dengan  2,45  mM  dan larutan  ABTS  dengan  konsentrasi  7  mM  pada perbandingan 1:1 (v/v) dan diinkubasi dalam kondisi gelap  selama  12-16  jam  pada  suhu  ±28  ºC.  Radikal ABTS  yang  digunakan  harus  memiliki  nilai absorbansi 0,6 - 0,7 (panjang gelombang 734 nm).
Selanjutnya, 150 µL radikal ABTS dicampurkan dengan 50 µL larutan sampel (39,75 - 5000 µg/mL), lalu  diinkubasi  dalam  gelap  selama  30  menit  pada suhu  ±28  ºC,  dan  dilanjutkan  dengan  pengukuran pada  panjang  gelombang  734  nm.  Persentase  nilai penghambatan dari kedua radikal tersebut ditentukan dengan  rumus:  [(Absorbansi  kontrol  -  Absorbansi sampel)/Absorbansi  kontrol]  ×  100.  Nilai  inhibisi kemudian ditentukan melalui persamaan linier regresi untuk mendapatkan nilai penghambatan 50% (IC 50 ). Senyawa  asam  askorbat  digunakan  sebagai  kontrol positif.

## Uji sitotoksisitas
Dua  ekstrak  bakteri  tanah  P1  dan  M7  dianalisis sitotokisitasnya  terhadap  sel  kanker  payudara manusia  (MCF-7,  ATCC;  Rockville,  MD,  USA), koleksi  dari  laboratorium  Biokimia,  Pusat  Riset Bahan  Baku  Obat  dan  Obat  Tradisional,  BRIN, Serpong.  Sel  uji  tersebut  secara  rutin  diremajakan pada  Dulbecco's  modified  eagle  medium  (DMEM) tinggi  glukosa  dengan  kandungan  antibiotik  1% (penisilin-streptomisin) dan fetal bovine serum (FBS) 10% dalam  inkubator  CO 2 5% pada  suhu  37°C.  Uji sitotoksisitas dilakukan dengan mengkultur sel pada microplate steril 96 well dengan konsentrasi sel awal
1×10 4 sel/sumur  diikuti  dengan  inkubasi  selama  24 jam pada kondisi seperti pemeliharaan sel diatas.
Kemudian, media DMEM diganti dengan media yang  baru  dan  ditambahkan  ekstrak  bakteri  dengan konsentrasi  akhir  100  µg/mL,  kemudian  diinkubasi selama 48 jam. Selanjutnya, sel dicuci menggunakan buffer fosfat pH 7,4 dan ditambah dengan larutan 10 µL  3-[4,5-dimetiltiazol-2-yl]-2,5  difenil  tetrazolium bromida (MTT) (0,5 mg/mL), dan diinkubasi selama 3  jam  pada  suhu  37°C.  Setelah  itu,  kultur  sel ditambah dengan 200 µL DMSO 99%. Viabilitas sel diukur pada panjang gelombang 570 nm. Persentase penghambatan  ditentukan  menggunakan  rumus:  [1- (Absorbansi Sampel  – Absorbansi Kontrol DMSO)] ×  100%.  Doksorubisin  (100  µg/mL)  dan  DMSO (0,05%)  secara  berturut-turut  digunakan  sebagai kontrol positif dan negatif (Priyanto et al., 2023 b ) .

## Analisis kandungan total fenol
Kandungan  total  fenol  pada  ekstrak  bakteri ditentukan  menggunakan  teknik  kolorimetri  Folin- Ciocalteu (Prastya et  al., 2019) .  Reaksi  uji  dibuat dengan  mencampurkan  0,5  mL  sampel  (1000 µg/mL), 3,5 mL akuades, dan 0,25 mL reagen Folin- Ciocalteu,  dilanjutkan  dengan  homogenisasi  dan diinkubasi  selama  8  menit  pada  suhu  ±28  ºC. Campuran  kemudian  ditambahkan  dengan  0,75  mL natrium bikarbonat 20% dan diinkubasi kembali pada suhu  ruang  selama  2  jam.  Segera  setelah  itu, absorbansi  diukur  menggunakan  spektrofotometer (Thermo  Scientific  Varioskan  Flash  ELISA, ThermoFischer)  pada  panjang  gelombang  765  nm. Nilai kadar total fenol dinyatakan sebagai ekuivalen asam galat (EAG) mg/g ekstrak.

## Penentuan kadar total flavonoid
Kadar total flavonoid dianalisis menggunakan teknik kolorimetri aluminium klorida ( Prastya et al., 2019) . Reaksi  penentuan  kadar  total  flavonoid  disiapkan dengan  mencampurkan  2,45  mL  akuades,  0,5  mL sampel  (1000  µg/mL),  dan  0,15  mL  NaNO 2 5%, kemudian  diinkubasi  pada  suhu  ±28  ºC  selama  2 menit.  Selanjutnya  campuran  tersebut  ditambah dengan  0,15  mL  aluminium  klorida  10%  dan diinkubasi  pada  suhu  ±28  ºC  selama  8  menit. Selanjutnya,  larutan  tersebut  ditambahkan  dengan  2 mL  NaOH  1  M,  dan  diukur  absorbansinya  pada panjang  gelombang  510  nm.  Nilai  kadar  total flavonoid  dinyatakan  sebagai  ekuivalen  kuersetin (EQ) mg/g ekstrak.

## Analisis GC-MS
Analisis GC-MS dilakukan menggunakan instrumen Agilent 19091S-433:93.92873 GC-MS. 1 μL sampel ekstrak  bakteri  yang  dilarutkan  dalam  pelarut  n- heksana,  disuntikkan  ke  dalam  kolom  HP-5MS  5% Phenyl Methyl Silox 0 °C-325 °C (325 °C): 30 m x 250 μm x 0,25 μm. Gas helium digunakan sebagai gas pembawa dengan laju aliran 1 mL/menit. Suhu awal yang digunakan sebesar 40 ℃ secara bertahap selama 30  menit  hingga  mencapai  suhu  300  ℃.  Tekanan
diatur sebesar 7,0699 psi dengan kecepatan rata-rata aliran  tekanan  sebesar  36,262  cm/detik  dan  waktu penahanan  1,3789  cm/detik.  Perangkat  lunak  MSD Chem-Station  Data  Analysis  digunakan  untuk menganalisis hasil spektrum GC-MS.

## Analisis statistik
Setiap uji dilakukan dengan tiga ulangan. Data yang ditampilkan merupakan hasil rata-rata yang dilengkapi dengan deviasi standar (±SD). 99% selang kepercayaan diperoleh dari hasil analisis one-way of variance (ANOVA).  Uji  lanjut  Duncan  digunakan untuk menganalisis signifikansi perbedaan data. Data dengan P-value <0,05 dianggap berbeda nyata.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Aktivitas antioksidan ekstrak bakteri tanah
Ekstrak  isolat  M7  dan  P1  memiliki  aktivitas antioksidan  yang  berbeda  yang  diindikasikan oleh  nilai  IC 50 yang  bervariasi  baik  terhadap radikal  DPPH  maupun  ABTS  (Tabel  1).
Berdasarkan nilai IC 50 -nya, aktivitas
anitoksidan ekstrak bahan alam dapat digolongkan  menjadi beberapa kategori, antara lain  sangat  kuat  (<50  µg/mL),  kuat  (50-100 µg/mL),  moderat  (101-150  µg/mL),  lemah (>150 µg/mL) (Irawan et al., 2022). Berdasarkan pengelompokan tersebut, ekstrak  P1  memiliki  aktivitas  antioksidan moderat  terhadap  radikal  ABTS  karena memiliki  IC 50 sebesar  126,22±10,82  µg/mL, namun  aktivitasnya  lemah  terhadap  radikal DPPH  (IC 50 721,95±16,59  µg/mL).  Ekstrak yang  aktif  terhadap  radikal  ABTS  umumnya memiliki  kemampuan  untuk  mendonorkan radikal  proton  untuk  menstabilkan  radikal bebas,  sedangkan  ekstrak  yang  aktif  terhadap DPPH adalah ekstrak yang mampu mendonorkan ion hidrogen (H 3 O + ) (Mus et al., 2017).
Disisi  lain,  ekstrak  M7  memiliki  aktivitas antioksidan lemah, baik terhadap radikal DPPH maupun  DPPH.  Secara  umum,  asam  askorbat masih memiliki aktivitas antioksidan yang lebih tinggi  dibandingkan  dengan  ekstrak  bakteri. Beberapa penelitian sebelumnya juga melaporkan  bahwa  ekstrak  dari Bacillus sp. memiliki  aktivitas  antioksidan  dengan  IC 50 terhadap DPPH sebesar 15.025 μg/mL (Gopi et al., 2014),  dan Bacillus  tequilensis strain  BT4 dengan  dengan  IC 50 terhadap  DPPH  sebesar 196.236  μg/mL  (Arivo et  al., 2023).  Aktivitas antioksidan  keduanya  masih  lebih  rendah dibandingkan  dengan  asam  askorbat  sebagai sampel standar antioksidan.
Tabel  1.  Aktivitas  antioksidan  ekstrak  bakteri P1 dan M7 Sampel IC 50 Aktivitas antioksidan (µg/mL) * DPPH ABTS M7 617,25±17,55 b 933,56±12,99 d P1 721,95±16,59 c 126,22±10,82 c Asam askorbat 6,82±7,50 a 1,58±0,67 a
* Keterangan:  huruf  yang  berbeda  diatas  nilai  IC 50 mengindikasikan bahwa data berbeda nyata
Sitotoksisitas ekstrak bakteri tanah terhadap sel kanker payudara (MCF-7) Ekstrak  P1  dan  M7  pada  konsentrasi  100 µg/mL,  mampu  menghambat  viabilitas  sel MCF-7  lebih  dari  60%  (Tabel  2).  Ekstrak  P1 lebih aktif karena memiliki persentase penghambatan  viabilitas  sel  yang  lebih  besar (69,83±1,46  %)  dibandingkan  dengan  ekstrak M7  (61,49±0,76).  Disisi  lain,  pada  konsentrasi yang  sama,  kontrol  positif  doksorubisin  juga mampu  menghambat  viabilitas  sel  hingga 92,71%.
Tabel  2.    Sitotoksisitas  ekstrak  bakteri  P1  dan
M7 terhadap sel MCF-7 Sampel * Rata-rata penghambatan viabilitas sel MCF-7 ±SD (%) M7 61,49±0,76 b P1 69,83±1,46 c Doksorubisin 92,71±0,99 d DMSO 0 a
* Keterangan:  ekstrak  bakteri  dan  doksorubisin  diuji pada  konsentrasi  100  µg/mL,  sedangkan  DMSO diuji  pada  konsentrasi  0,05%  (v/v).  Huruf  yang berbeda  diatas  data  mengindikasikan  bahwa  data tersebut berbeda nyata .
Viabilitas sel MCF-7 menurun setelah diberi perlakuan  ekstrak  P1  dan  M7  selama  48  jam. Ekstrak  tersebut  juga  menginduksi  terjadinya perubahan morfologi sel MCF-7 seperti adanya kerusakan  membran  dan  apoptosis  sel  MCF-7, sehingga  densitas  MCF-7  yang  diuji  dengan ekstrak bakteri lebih rendah dibandingkan pada perlakuan tanpa ekstrak (Gambar 1). Penurunan densitas  dan  apoptosis  sel  MCF-7  juga
ditemukan  pada  kultur  sel  yang  diuji  dengan doksorubisin.  Hal  ini  mengindikasikan  bahwa ekstrak  P1  dan  M7  dapat  menjadi  sinyal eksternal bagi MCF-7 untuk  menginisiasi jalur apoptosis  sel  MCF-7.  Beberapa  penelitian sebelumnya  juga  telah  melaporkan  bahwa metabolit  dari  bakteri  lainnya  juga  mampu menginduksi  apoptosis  sel  MCF-7.  Metabolit dari Bacillus  scoagulan mampu  menurunkan viabilitas sel MCF-7 dan menginduksi apoptosis melalui  peningkatan  ekspresi  gen  bax,  caspase 3, dan caspase 9, serta penurunan ekspresi gen anti-apoptosis  yaitu  gen  BCL2  (Dolati et  al., 2021). Selain itu, bakteri lainnya yaitu Bacillus thuringiensis juga mampu menghasilkan metabolit berupa protein parasporin A13-2 yang bersifat sitotoksik terhadap sel MCF-7 (Borin et al ., 2021).

## Total  fenol  dan  flavonoid  dari  ekstrak bakteri P1 dan M7
Ekstrak  P1  dan  M7  memiliki  kandungan  total fenol  yang  berbeda  (Tabel  3).  Ekstrak  M7 memiliki  total  fenol  yang  lebih  tinggi (10,41±0,09  mg  EAG/g  ekstrak)  dibandingkan dengan  ekstrak  P1  (9,52±0,22  mg  EAG/g ekstrak). Disisi lain, kandungan total flavonoid kedua ekstrak ini relatif sama. Ekstrak M7 dan P1  berturut-turut  memiliki  total  flavonoid 9,29±0,24  dan  9,16±0,16  mg  EQ/g  ekstrak. Adanya  fenol  dan  flavonoid  dalam  kedua ekstrak ini diduga berkontribusi dalam aktivitas antioksidan  dan  sitotoksisitasnya  terhadap  sel MCF-7. Fenol dan flavonoid pada ekstrak bahan alam umumnya terlibat dalam deaktivasi radikal bebas  (Aryal et  al., 2019),  dan  sitotoksik terhadap sel kanker payudara MCF-7 (Berdowska et al. , 2013).
Tabel 3. Total fenol dan flavonoid dari ekstrak bakteri P1 dan M7 Sampel Total fenol (mg EAG/g ekstrak) * Total flavonoid (mg EQ/g ekstrak) * M7 10,41±0,09 b 9,29±0,24 a P1 9,52±0,22 a 9,16±0,16 a
* Keterangan:  huruf  yang  berbeda  diatas  data  pada kolom  yang  sama  mengindikasikan  bahwa  data tersebut berbeda nyata.
Gambar  1.  Densitas  dan  morfologi  sel  MCF-7,  pada  (A)  media  DMEM;  perlakuan  (B)  DMSO 0,05%, (C) Doksorubisin, (D) ekstrak M7, (E) ekstrak P1, yang diamati menggunakan mikroskop cahaya terbalik (inverted) dengan perbesaran 100x. Garis putih menunjukkan skala  ukuran  30  µm.  Tanda  panah  hitam  menunujukkan  sel  MCF-7  yang  mengalami apoptosis
Tabel 4. Daftar senyawa volatil dominan pada ekstrak isolat M7 dan bioaktivitasnya No. Senyawa Waktu retensi Kelimpahan (%) Kemiripan (%) Golongan Bioaktivitas Pustaka 1 Isophorone 13,825 5,81 46 keton Antibakteri Kiran et al., 2013 2 Cetene (1- hexadecene) 19,850 2,29 96 hidrokarbon - 3 Phenol, 4-(1,1- dimethylpropyl) 21,450 2,17 49 fenol 4 1-Octadecene 22,017 3,89 99 alkene - 5 Cyclo(L-prolyl- L-valine) 22,710 2,00 97 peptida - - 6 Pyrrolo[1,2-a] pyrazine-1,4- dione, hexahydro-3-(2- methylpropyl)- 23,832 4,87 95 peptida Anti-MRSA, antioksidan, antifungi, sitotoksik moderat terhadap sel normal RAW 264 Kiran et al., 2018; Sanjenba m & Kannabira n, 2016; Ser et al. , 2015 7 3-Eicosene 24,034 4,78 96 Asam lemak - - 8 1-Tetracosene 25,912 1,93 94 Asam lemak - - 9 Tributyl acetyl citrate 26,365 0,63 62 Asam tetrakarboksil at - - 10 Cyclotetracosane 27,676 1,27 99 Asam lemak Antimikrob, antikanker, antioksidan Mongalo et al. , 2019 11 Bis (2- ethylhexyl) phthalate 29,088 67,45 93 Asam ptalat Antibakteri dan larvasida; Antimutagen ik Cruz- Ramírez et al. , 2021; Javed et al., 2022 12 1-Hexacosene 29.579 0,92 96 Asam lemak - -
Tabel 5. Daftar senyawa volatil dominan pada ekstrak isolat P1 dan bioaktivitasnya
No. Nama senyawa Waktu retensi (menit) Kelimpahan (%) Kemiripan (%) Golongan Bioaktivitas Pustaka 1 Isophorone 13,926 3,78 35 keton Antibakteri Kiran et al., 2013 2 Cetene 19,837 1,96 93 hidrokarbon - - 3 Hexestrol 21,312 0.44 59 stilbene antiandrogen Schiller et al., 1990 4 2,2-Dimethyl-N- phenethylpropio namide 21,526 2,57 50 - - - 5 Phenol, 4- (1,1,3,3- tetramethylbuty 21,765 1,11 46 fenol - - 6 Cyclo(L-prolyl- L-valine) 22,711 2,49 98 alpha amino acids 7 2-Decene, 3- methyl-, (Z) 23.063 0,49 43 - - - 8 7,9-Di-tert- butyl-1-oxaspiro (4,5) d eca-6,9- diene-2,8-dione 23,366 0,28 92 - Inhibitor alfa amilase Ahmad et al., 2023 9 Pyrrolo[1,2-a] pyrazine-1,4- dione, hexahydro-3-(2- methylpropyl) 23.820 4,75 94 - peptida Anti- MRSA, antioksidan, Antifungal, moderat terhadap sel normal RAW 264 Kiran et al., 2018; Sanjenba m & Kannabir an, 2016; Ser et al., 2015 10 3-Eicosene 24,009 5,41 74 Asam lemak - - 11 1-Octadecene 25,886 1,62 96 alkena - - 12 Tributyl acetyl citrate 26,340 0,78 62 Asam tetrakarbok silat, - - 13 1-Tetracosene 27,651 1,27 99 Asam lemak - - 14 Bis(2- ethylhexyl) phthalate 29.037 66,29 98 Asam ptalat Antibakteri dan larvasida; Antimutagen ik Cruz- Ramírez et al., 2021; Javed et al., 2022 15 1-Hexacosene 29,529 1,02 97 Asam lemak - -

## Profil senyawa volatil ekstrak P1 dan M7
Adanya  aktivitas  antioksidan  dan  sitotoksik ekstrak bakteri P1 dan M7 kemungkinan besar didukung  oleh  keberadaan  senyawa  aktif  yang terkandung  di  dalamnya.  Analisis  GC-MS menunjukkan  bahwa  kedua  ekstrak  tersebut mengandung  berbagai  senyawa  bioaktif  volatil dengan  kelimpahan  dan  waktu  retensi  yang
berbeda-beda.  Senyawa  kelompok  peptida, keton, stilbene, asam lemak, fenol, asam ptalat, asam  tetra  karboksilat,  alkena,  stilbene,  dan hidrokarbon terdeteksi pada ekstrak bakteri M7 (Tabel 4) dan M7 (Tabel 5). Beberapa senyawa antioksidan dan antikanker, seperti pyrrolo[1,2- a] pyrazine-1,4-dione, hexahydro-3-(2- methylpropyl), dan cyclotetracosane ,
teridentifikasi  pada  ekstrak  M7,  sedangkan senyawa cyclotetracosane tidak terdeteksi pada ekstrak  P1.  Kedua  senyawa  tersebut  juga diproduksi  oleh  bakteri Bacillus  tequilensis MSI45, Streptomyces  mangrovisoli sp.  Nov., dan Streptomyces sp.  VITPK9  dan  telah dilaporkan  memiliki  aktivitas  antioksidan  dan sifat sitotoksik terhadap sel RAW 264 (Kiran et al., 2018; Sanjenbam & Kannabiran, 2016; Ser et  al., 2015).  Selain  kedua  senyawa  tersebut. ekstrak P1 dan M7 juga  mengandung senyawa aktif  lainnya  yang  telah  diketahui  memiliki aktivitas  antibakteri,  antifungi,  antimutagenik, antiandrogen,  larvasida,  dan  inhibitor  alfa amilase.  Namun, masih banyak senyawa kimia dalam  ekstrak  kedua  bakteri  ini  yang  belum diketahui  aktivitas  farmakologinya,  sehingga perlu penelitian lebih lanjut.

## KESIMPULAN
Ekstrak  isolat  P1  dan  M7  memiliki  aktivitas antioksidan yang berbeda. Ekstrak P1 lebih aktif terhadap  radikal  ABTS  dengan  aktivitas antioksidan  moderat  dibandingkan  dengan radikal  DPPH.  Meskipun  demikian,  kedua ekstrak  sangat  aktif  terhadap  sel  kanker payudara  MCF-7.  Ekstrak  P1  dan  M7  pada konsentrasi  100  µg/mL  mampu  menghambat viabilitas  sel  MCF-7  hingga  lebih  dari  60%. Senyawa  fenol  dan  flavonoid  yang  terkandung pada  kedua  ekstrak  tersebut  diduga  memiliki peranan  penting  dalam  mendukung  aktivitas antioksidan dan sitotoksiknya. Senyawa lainnya,  yaitu pyrrolo[1,2-a]  pyrazine-1,4- dione, hexahydro-3-(2-methylpropyl) terdeteksi pada  kedua  ekstrak  bakteri  tersebut.  Penelitian lebih  lanjut  diperlukan  untuk  mengidentifikasi jenis  bakteri  tanah  ini  dan  elusidasi  senyawa aktif yang dihasilkannya.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Sebagian penelitian ini didukung oleh Direktorat  Riset  dan  Inovasi,  IPB,  melalui Program  Penelitian  Riset  Kolaborasi  Nasional 2023-2024 yang diberikan kepada Jepri Agung Priyanto,  dan  Sebagian  lagi  didukung  oleh Lembaga  Pengelola  Dana  Pendidikan  (LPDP) dan Badan Riset dan Inovasi Nasional (BRIN), Indonesia  melalui  program  Riset  dan  Inovasi Indonesia  maju  (RIIM)  gelombang  2  tahun 2022-2024;  Nomor  Hibah:  82/II.7/HK/2022 yang  diberikan  kepada  Gian  Primahana).  Oleh karena itu, penulis menyampaikan terima kasih atas dukungan yang telah diberikan.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmad  S,  Alrouji  M,  Alhajlah  S,  Alomeir  O, Pandey RP, Ashraf MS, Safeeque A & Khan S.  2023.  Secondary  Metabolite  Profiling,
Antioxidant, Antidiabetic and Neuroprotective Activity of Cestrum octurnum (Night  Scented-Jasmine):  Use  of In  Vitro and In  Silico Approach  in Determining the Potential Bioactive Compound. Plants . 12 : 1-22. Andayani  DGS,  Sukandar  U,  Sukandar  EY  & Adnyana IK. 2015. Antibacterial, Antifungal and Anticancer Activity of Five Strains  of  Soil  Microorganisms  Isolated from  Tangkuban  Perahu  Mountain  by Fermentation. HAYATI Journal of
Biosciences. 22 (4): 186-190. Arivo D, Mubarik NR, Rusmana I, Batubara I. 2023.  Antioxidant  Activity  of  Various Solvent  Extracts  from  Endophytic  Bacteria Isolated from Girang ( Leea indica ) Leaves. Biodiversitas. 24 (1): 415-422.
Aryal  S,  Baniya  MK,  Danekhu  K,  Kunwar  P, Gurung R & Koirala N. 2019. Total Phenolic Content, Flavonoid Content and Antioxidant Potential of Wild Vegetables from Western Nepal . Plants . 8 (96): 1-12.
Berdowska I, Zielin´ski B, Fecka I, Kulbacka J, Saczko  J  &  Gamian  A.  2013.  Cytotoxic Impact  of  Phenolics  from  Lamiaceae Species  on  Human  Breast  Cancer  Cells. Food Chemistry . 141 : 1313-1321.
Borin  DB,  Castrejón-Arroyo  K,  Cruz-Nolasco A, Peña-Rico M, Sagrillo MR, Santos RCV, Baco  LS,  Pérez-Picaso  L,  Camacho  L  &
Navarro-Mtz  AK.  2021.  Parasporin  A13-2 of Bacillus  thuringiensis Isolates  from  the Papaloapan  Region  (Mexico)  Induce  a Cytotoxic Effect by Late Apoptosis against Breast Cancer Cells. Toxins. 9: 13 (7): 476. Celladurai R & Vadamalai S. 2022. Antagonistic,  Antibiofilm  Antioxidant  and Anticancer Activity of Secondary
Metabolites  of  Isolated  Bacteria  from Mangrove  Soil. International  Journal  of Biosciences. 21 (6): 378-386.
Cruz-Ramírez  SG,  López-Saiz  CM,  Rosas- Burgos EC, Cinco-Moroyoqui FJ, Velázquez  C,    Hernández  J  &  Burgos- Hernández  A. 2021. Antimutagenic Bis (2- ethylhexyl) Phthalate Isolated from Octopus ( Paraoctopus  vulgaris ). Food  Science  and Technology . 41 (2): 314-320.
Ding T, Yang LJ, Zhang WD & Shen YH. 2019. The  Secondary  Metabolites  of  Rare Actinomycetes:  Chemistry  and  Bioactivity. RSC Advances. 9 : 21964-21988.
Dolati  M,  Tafvizi  F,  Salehipour  M,  Movahed TK  &  Jafari  P.  2021.  Inhibitory  Effects  of Probiotic Bacillus coagulans against MCF7 Breast  Cancer  Cells. Iranian  Journal  of Microbiology. 13 (6): 839-847.
El Gaied HAA, Hashem AEGM, Fahmy AM & El-Rakaiby MT. 2017.  Antiviral Activity of Secondary Metabolites Produced by Streptomyces Species Isolated from Egyptian  Soil. International  Journal  of Advance Research . 5 : 1165-1174. Gopi  M,  Dhayanithi  NB,  Devi  KN,  Kumar TTA.  2014.  Marine  Natural  Product, Pyrrolo[1,2-a]pyrazine-1,4-dione, hexahydro-  (C7H10N2O2)  of  Sntioxidant
Properties from Bacillus
Species at
Lakshadweep  Archipelago. Journal  of Coastal Life Medicine. 2 (8): 636-641.
Gupta  C,  Prakash  D,  Gupta  S.  2014.  Natural Useful Therapeutic Products from Microbes. Microbiology & Experimentation . 1 (1): 30- 37. Hindersah  R  &  Rahmi  NM.  2020.    Profil Komoditas  Kacang  Mete  dan  Jagung  di Pulau  Muna  Provinsi  Sulawesi  Tenggara. Agrologia . 9 (2): 62-70.
Imrawati, Mus S, Gani SA & Bubua KI. 2017. Uji Aktivitas Antioksidan Fraksi Etil Asetat Daun  Kersen  ( Muntingia  calabura L.) Menggunakan  Metode  ABTS. Journal  of Pharmaceutical  and  Medicinal  Sciences.
2 (2): 59-62.
Irawan  C,  Putri  ID,  Sukiman  M,  Utami  A, Ismail, Putri RK, Lisandi A & Pratama AN. 2022.  Antioxidant  Activity  of  DPPH, CUPRAC,  and  FRAP  Methods,  as  Well  as Activity  of  Alpha-Glucosidase  Inhibiting
Enzymes  from Tinospora  crispa (L.)  Stem Ultrasonic Extract. Pharmacognosy Journal . 14 (5): 511-520.
Javed  MR,  Salman  M,  Tariq  A,  Tawab  A, Zahoor MK, Naheed S, Shahid M, Ijaz A & Ali  H.  2022.  The  Antibacterial  and
Larvicidal  Potential  of  Bis-(2-Ethylhexyl) Phthalate from Lactiplantibacillus plantarum. Molecules . 27 (21): 1-15.
Kacergius  A,  Sivojiene  D.  2023.  Microbial Diversity  and  Abundance  in  Loamy  Sandy Soil  under  Renaturalization  of  Former Arable  Land. Peer  Journal  of  Life  & Environment. 11 : 1-17.
Kiran  GS,  Priyadharsini  S,  Sajayan  A, Ravindran  A  &  Selvin  J.  2018.  An Antibiotic  Agent  Pyrrolo[1,2-a]pyrazine- 1,4-dione,hexahydro Isolated from A
Marine Bacteria Bacillus tequilensis MSI45 Effectively  Controls  Multi-Drug  Resistant Staphylococcus  aureus. RSC  Advances. 8 :
17837-17846.
Kiran I, Özşena Ö , Çelik T, İlhanb S, Gürsu BY & Demirci F. 2013. Microbial Transformations of Isophorone by
Alternaria alternata and Neurospora crassa .
Natural Product Communications. 8 (1): 59-
61.
Leyane  TS,  Jere  SW  &  Houreld  NN.  2022.
Oxidative  Stress  in  Ageing  and  Chronic Degenerative Pathologies: Molecular
Mechanisms  Involved  in  Counteracting
Oxidative Stress and Chronic Inflammation. International Journal of Molecular Science . 23 :1-28.
Liguori I, Russo G, Curcio F, Bulli G, Aran L, Della-Morte  D,  Gargiulo  G,  Testa  G, Cacciatore F, Bonaduce D & Abete P. 2018. Oxidative  Stress,  Aging,  and  Diseases. Clinical  Interventions  in  Aging. 13 :  757- 772.
Mongalo  N,  Soyingbe  OS  &  Makhafola  TJ. 2019.
Antimicrobial, Cytotoxicity, Anticancer  and  Antioxidant  Activities  of Jatropha zeyheri Sond. roots
(Euphorbiaceae). Asian  Pacific  Journal  of Tropical Biomedicine. 9 (7): 307-314. Mushtaq  H,  Ganai  BA  &  Jehangir  A.  2023.
Exploring  Soil  Bacterial  Diversity  in Different  Micro-Vegetational  Habitats  of Dachigam  National  Park  in  North-Western Himalaya. Scientific Report . 13 : 1-18.
Osama  N,  Bakeer  W,  Raslan  M,  Soliman  HA, Abdelmohsen  UR  &  Sebak  M.  2022  Anti- Cancer and Antimicrobial Potential of Five Soil Streptomycetes :  A  Metabolomics- Based Study. Royal Society Open Science . 9 : 1-17.
Peyrat  LA,  Tsafantakis  N,  Georgousaki  K, Ouazzani  J,  Genilloud  O,  Trougakos  IP  & Fokialakis N. 2019. Terrestrial Microorganisms: Cell Factories of Bioactive Molecules with Skin Protecting Applications. Molecules . 24 (1836): 1-35. Prastya ME, Astuti RI, Batubara I, Takagi H & Wahyudi AT. 2020. Natural Extract and Its Fractions  Isolated  from  The  Marine Bacterium Pseudoalteromonas  flavipulchra STILL-33  Have  Antioxidant  and  Anti-
Aging  Activities  in Schizosaccharomyces pombe. FEMS Yeast Research. 20 :1-14. Prastya  ME,  Astuti  RI,  Batubara  I,  Wahyudi AT. 2019. Antioxidant, Antiglycation and in Vivo  Antiaging  Effects  of  Metabolite Extracts  from  Marine  Sponge-associated Bacteria. Indian Journal of Pharmaceutical Science. 81 (2): 344-353.
Priyanto JA, Prastya ME, Astuti RI & Kristiana R. 2023. The Antibacterial and Antibiofilm Activities  of  the  Endophytic  Bacteria Associated  with Archidendron  pauciflorum against Multidrug-Resistant Strains. Applied Biochemistry  and  Biotechnology . 195 (11): 6653.
Priyanto  JA,  Prastya  ME,  Primahana  G  & Randy A, Utami DT. 2023. Paederia foetida Linn  Leaves-Derived  Extract  Showed Antioxidant and Cytotoxic Properties
Against  Breast  Carcinoma  Cell. Hayati Journal of Biosciences . 30 (2): 271-280.
Rani  K.  2017.  Role  of  Antioxidants  in Prevention  of  Diseases. Journal  of  Applied Biotechnology  and  Bioengineering. 4 (1): 495-496.
Sanjenbam  P  &  Kannabiran  K.  2016.
Bioactivity  of  Pyrrolo[1,2-a]pyrazine-1,4- dione,hexahydro-3-(phenylmethyl)- Extracted  from Streptomyces sp.  VITPK9
Isolated  from  the  Salt  Spring  Habitat  of Manipur, India. Asian Journal of
Pharmaceutics . 10 (4): 265-270.
Schiller CD, Schneider MR & Von Angerer E.
1990. 3-(Cyclohexenonyl)-4-(4- hydroxyphenyl)-hexanes: Antiandrogenes Derived  from  the  Estrogen  Hexestrol.
Archive der Pharmazie. (Weinheim). 323 (7): 417-420.
Ser HL, Palanisamy UD, Yin WF, Malek SNA,
Chan  KG,  Goh  BH,  &  Lee  LH.  2015. Presence of Antioxidative Agent, Pyrrolo[1,2-a]pyrazine-1,4-dione, hexahydro- in Newly Isolated Streptomyces mangrovisoli sp. nov. Frontiers in Microbiology. 6 :1-11.
Żymańczyk-Duda  E,  Szmigie-Merena  B,
Brzezińska-Rodak  M  &  Klimek-Ochab  M. 2018.  Natural  antioxidants–properties  and possible  applications. Journal  of  Applied Biotechnology  and  Bioengineering . 5 (4): 251-258.
16                                                              Aktivitas Antioksidan dan …                      (Priyanto, dkk)