## PENGUKURAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL DAUN KELOR (Moringa oleifera Lam.) MENGGUNAKAN METODE FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)
St. Maryam* ) , Muzakkir Baits* ) , Ainun Nadia* )
* ) Fakultas Farmasi Universitas Muslim Indonesia, Makassar Email: st.maryam_apt@yahoo.com

## ABSTRACK
Measurement of antioxidant activity of ethanol extract of Marunggai leaves (Moringa oleifera Lam) was conducted. The  aim  research  to  obtain  antioxidant  activity  using  FRAP  (Ferric  Reducing  Antioxidant  Power).  Marunggai leaves  (Moringa  oleifera  Lam.)  ware  extracted  using  maceration  method  by  ethanol  96  %.  Free  radical  activity absorbance was measured with a spectrophotometer at a wavelength of 720 nm and the total value of antioxidant activity  was  calculated  based  on  the  data  absorbance.  The  calculations  showed  that  Marunggai  leaves  (Moringa oleifera Lam.) have the antioxidant activity with the value 7,923 mg AAE/g extract.
Keywords: Antioxidant, ethanol extract of Moringa oleifera Lam., FRAP.

## I. PENDAHULUAN

## A. Latar Belakang
Radikal  bebas  merupakan  salah  satu  bentuk senyawa  reaktif,  yang  secara  umum  diketahui sebagai  senyawa  yang  memiliki  elektron  yang  tidak berpasangan  di  kulit  terluarnya  (Winarsi,  2007). Radikal  bebas  berperan  penting  pada  terjadinya arterosklerosis,penyakit jantung  koroner,  stroke, kanker,  gagal  ginjal,  dan proses  penuaan  manusia (Kumalaningsih,  2006;  Youngson, 2005).  Meskipun manusia  juga  dapat  memproduksi  senyawa-senyawa yang  dapat  berperan  aktif  dalam  menanggulangi radikal  bebas,  seperti  enzim  SOD  (superoksida dismutase),  glutathione,  dan  katalase,  namun jumlahnya seringkali tidak mencukupi, oleh sebab itu dibutuhkan asupan makanan yang banyakmengandung antioksidan seperti vitamin C, E, betakaroten,  maupun  antioksidan  fitokimia  dari golongan  fenolik,  sehingga  dapat  melindungi  dari serangan radikal bebas. Sumber antioksidan alami ini dapat  diperoleh  dari  buah-buahan  dan  sayur-sayuran (Kumalaningsih, 2006).
Salah satu tanaman yang banyak mengandung antioksidan ditemukan dalam tumbuhan kelor  (Moringa  oleifera Lam.),  salah  satunya  pada bagian  daun.  Penelitian  sebelumnya  terhadap ekstraksi  daun  kelor  (Moringa oleifera Lam.) menunjukkan  adanya  aktivitas  antioksidan  yang tinggi dalam proses in vivo dan in vitro (Chumark, et al.,  2008),  selain  itu  dalam  daun  kelor  (Moringa oleifera Lam.)  kaya  akan phytochemicals,  karoten, vitamin,  mineral,  asam  amino,  senyawa  flavonoid dan phenolic (Anwar, et al., 2007).
Beragam metode pengukuran telah dikembangkan  untuk  mengukur    karakteristik  total antioksidan,  tetapi  tidak  ada  yang  benar-benar  ideal.
Metode  pengukuran  aktivitas  antioksidan  tersebut akan  mendeteksi  karakteristik  yang  berbeda  dari antioksidan  dalam  sampel,  hal  ini  menjelaskan mengapa  metode pengukuran  aktivitas  yang berbeda akan  mengacu  pada  pengamatan  mekanisme  kerja antioksidan yang berbeda pula (Hasannbaglou, et al., 2012).  Beberapa  metode  yang  dilakukan  yaitu DPPH, CUPRAC, FRAP.
Benzie  &  Strain  (1996)  mengemukakan bahwa metode FRAP adalah metode yang digunakan untuk menguji antioksidan dalam tumbuh-tumbuhan. Kelebihan metode FRAP ini yaitu metodenya murah, reagennya  mudah  disiapkan  dan  cukup  sederhana dan  cepat.  Metode  ini  dapat  menentukan  kandungan antioksidan  total  dari  suatu  bahan  berdasarkan kemampuan  senyawa  antioksidan  untuk  mereduksi ion Fe 3+ menjadi Fe 2+ sehingga kekuatan antioksidan suatu  senyawa  dianalogikan  dengan  kemampuan mereduksi  dari  senyawa  tersebut  (Halvorsen, et  al., 2002).
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan sebelumnya  pada  penelitian  ini  akan  dilakukan pengujian  aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak  etanol daun  kelor  (Moringa  oleifera Lam.)  dengan menggunakan  metode FRAP    (Ferric  Reducing Antioxidant  Power). Prinsip  dari  uji  FRAP  adalah reaksi  transfer  elektron  dari  antioksidan  ke  senyawa Fe 3+ - TPTZ.  Senyawa  Fe 3+ - TPTZ  sendiri  mewakili senyawa  oksidator  yang  mungkin  terdapat  dalam tubuh dan dapat merusak sel-sel.

## II. MATERIAL DAN METODE PENELITIAN
A. Material
Material  yang  digunakan  yaitu batang pengaduk,  blender, corong,labu  erlenmeyer,  gelas arloji,  gelas  kimia  (Pyrex®),  labu  ukur  (Pyrex®),
mikropipet, oven (Memmert ®), penjepit tabung, pH meter, pipet  tetes,  pipet  ukur  ,  pipet  volum,  pisau, sentrifuge, spektrofotometer  UV-Visible,  tabung reaksi, tabung  sentrifuge, timbangan  analitik, sedangkan  bahan  yang  digunakan  adalah aquades, asam askorbat, asam oksalat 1%, asam trikloroasetat  10%,  FeCl3  0,1%,  dapar  fosfat  (0,2 M  pH  6,6),  ekstrak  daun  kelor  (Moringa  oleifera Lam.),  etanol  96%,  kalium  ferrisianida  1%,  kertas saring.

## B. Metode

## 1. Jenis Penelitian
Penelitian ini dilakukan secara ekperimental dengan menggunakan metode FRAP untuk membuktikan  adanya  aktivitas  antioksidan daun kelor (Moringa oleifera Lam.)  di  Laboratorium Kimia Farmasi.

## 2. Populasi dan Sampel
Material  yang  digunakan  adalah  daun  kelor yang diperoleh  dari  Kota  Makassar,  Provinsi Sulawesi Selatan.

## 3. Cara Kerja a. Pengambilan dan Pengolahan Sampel
Pengambilan  sampel daun  Kelor  (Moringa oleifera Lam.) dibersihkan  dari  kotoran  yang  melekat pada daun  menggunakan air  mengalir lalu dikeringkan dengan cara diangin-anginkan. Setelah kering diblender,  lalu  siap  untuk  diekstraksi  dengan  metode maserasi.

## b. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Kelor
Simplisia  daun  Kelor  dalam  bentuk  serbuk sebanyak  300  g dimasukan  kedalam  wadah toples. Ditambahkan  etanol 96%  hingga  simplisia  tersebut terendam, dibiarkan selama 3 hari dalam bejana tertutup dan  terlindung  dari  cahaya  sambil  berulang-ulang diaduk. Setelah 3 hari simplisia disaring dan ampasnya direndam lagi dengan cairan penyari yang baru, hal ini dilakukan sebanyak 3 kali. Hasil penyarian yang didapat kemudian dikumpulkan dan diuapkan hingga diperoleh ekstrak etanol yang kental.

## c. Penyiapan Pada Sampel Ekstrak Etanolik
Ekstrak  etanol  ditimbang  dengan  3  replikasi yaitu  masing-masing  5  mg.  Masing-masing  ekstrak dilarutkan  dengan  etanol  96%  sebanyak  5  mL. kemudian dihomogenkan.
d. Penyiapan Larutan Kurva Baku
Larutan  stok  1000  ppm  dibuat  dengan melarutkan  25  mg  asam  askorbat  yang  dilarutkan dengan  asam  oksalat  1%  hingga  batas  labu  ukur  25 mL.  Selanjutnya  dari  larutan  stok  1000  ppm  diambil
masing-masing  0,6;  0,7;  0,8;  0,9;  dan  1,0  mL  dan ditempatkan dalam labu ukur 10 mL yang berbeda dan diencerkan dengan asam oksalat 1% hingga 10 mL dan dihomogenkan.  Konsentrasi  larutan  standar  1000  ppm asam askorbat yakni 60, 70, 80, 90, 100 ppm.
e. Penyiapan Pada Larutan
1. Larutan Dapar Fosfat 0,2 M pH 6,6
Larutan disiapkan dengan menimbang 2 gram NaOH  dan  dilarutkan  dengan  aquades  bebas  CO 2 hingga  tepat  250  mL  dalam  labu  takar.  Kemudian sebanyak  6,8  gram  KH 2 PO 4 yang  dilarutkan  dengan aquades  bebas  CO 2 250  mL  dalam  labu  takar. Kemudian dipipet sebanyak 16,4 mL NaOH dimasukkan dalam labu takar dan dicampurkan 50 mL KH 2 PO 4 ,  selanjutnya  diukur  sampai  pH  6,6  dan dicukupkan dengan aquades bebas CO 2 hingga 200 mL.

## 2. Larutan oksalat 1%
Larutan  disiapkan  dengan  melarutkan  1  gram asam  oksalat  dalam  air  bebas  CO 2 dan  diencerkan dalam labu takar 100 mL.

## 3. Larutan Kalium Ferrisianida 1%
Larutan  disiapkan  dengan  melarutkan  1  gram kalium  ferrisianida  dalam  aquades  dan  diencerkan dalam labu takar 100 mL.

## 4. Larutan FeCl 3 0,1%
Larutan  disiapkan  dengan  melarutkan  0,1 gram FeCl 3 dalam  aquades  dan  diencerkan  dalam  labu takar 100 mL.

## 5. Larutan asam trikloroasetat (TCA) 10%
Larutan disiapkan dengan melarutkan 10 gram TCA  dalam  aquades  dan  diencerkan  dalam  labu  takar 100 mL

## 6. Aktivitas Antioksidan dengan Metode FRAP
Sebanyak  5  mg ekstrak  dilarutkan  dalam  5 mL  etanol  96%,  lalu  dipipet  1  mL,  ditambahkan  1 mL  dapar  fosfat  0,2  M  (pH  6.6)  dan  1  mL K 3 Fe(CN) 6 1%  setelah  itu,diinkubasi  selama  20 menit  dengan  suhu  50°C.  Setelah  diinkubasi ditambahkan  1  mL  TCA  lalu  disentrifuge  dengan kecepatan  3000  rpm  selama  10  menit.  Setelah disentifuge  dipipet  1  mL  lapisan  bagian  atas kedalam  tabung  reaksi,  dan  ditambahkan  1  mL aquades dan 0,5 mL FeCl 3 0,1%. Larutan didiamkan selama 10 menit dan diukur absorbansinya pada 720 nm.  Sebagai  blangko  digunakan campuran  larutan oksalat. Kurva kalibrasi dibuat menggunakan larutan asam  askorbat  dengan  berbagai  konsentrasi.  Nilai FRAP  dinyatakan  dalam  mg  equivalen  asam askorbat/ gr ekstrak.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN A. Hasil
Tabel  1. Hasil  pengukuran  absorbansi  larutan pembanding  asam  askorbat    ekstrak  daun  kelor (Moringa oleifera Lam.)
Tabel  2. Hasil  pengukuran  absorbansi  dan  nilai aktivitas  antioksidan  ekstrak  daun  kelor  (Moringa oleifera Lam.)

## B. Pembahasan
Kelor  (Moringa  oleifera Lam.)  merupakan salah  satu  tanaman  yang  banyak  mengandung antioksidan,  salah  satunya  pada  bagian  daun. Penelitian  sebelumnya terhadap ekstraksi daun kelor (Moringa oleifera Lam.) menunjukkan  adanya aktivitas  antioksidan  yang  tinggi  dalam  proses in vivo dan in vitro (Chumark, et al., 2008).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan kapasitas antioksidan yang ada dalam sampel ekstrak daun  kelor.  Beberapa  metode  telah  dikembangkan untuk  mengukur  aktivitas  antioksidan  suatu  sampel. Pada  penelitian  ini  aktivitas  antioksidan  diukur melalui  uji  FRAP.  Uji  FRAP  ini  dipilih  karena prosedurnya  yang  sederhana, metodenya  murah, cepat  dan  reagen  yang  digunakan  cukup  sederhana serta  tidak  menggunakan  alat  khusus  untuk menghitung total antioksidan.
Pengujian  FRAP  telah  digunakan  untuk menentukan  aktivitas  antioksidan  karena  sederhana dan cepat. Disamping itu, reaksinya direproduksi dan linear  yang  berkaitan  pada  konsentrasi  molar  dari antioksidan.  Namun,  beberapa  kerugian  ditemukan dalam  metode  ini  yang  tidak  bereaksi  cepat  dengan beberapa antioksidan seperti gluthathion.
Antioksidan  adalah  senyawa  yang  menyumbangkan elektron  tunggal  atau  atom  hidrogen  untuk  reduksii (Rabeta & Faranisa, 2013).
Larutan  standar  yang  digunakan  adalah asam  askorbat.  Asam  askorbat  digunakan  sebagai pembanding  karena  berfungsi  sebagai  antioksidan sekunder  yaitu  menangkap  radikal  bebas  dan mencegah  terjadinya  reaksi  berantai.  Vitamin  C termasuk  golongan  antioksidan  sekunder  yang mampu menangkal berbagai radikal bebas ekstraseluler.  Hal  itu  dikarenakan  vitamin  C mempunyai  gugus  hidroksi  bebas  yang  bertindak sebagai penangkap radikal bebas dan jika mempunyai  gugus  polihidroksi  akan  meningkatkan aktivitas antioksidan (Kim, 2005).
Pengukuran aktivitas antioksidan
menggunakan  uji  FRAP  ini  dengan  larutan  asam askorbat sebagai standar. Penambahan TCA bertujuan  agar  kompleks  kalium  ferrosianida mengendap. Penambahan FeCl 3 juga bertujuan untuk membentuk  kompleks  berwarna  hijau  sampai  biru (biru  berlin).  Daya  reduksi  merupakan  indikator potensi  suatu  senyawa  antioksidan.  Daya  reduksi dalam  hal  ini  diukur  dari  kemampuan  suatu antioksidan  untuk  mengubah  Fe 3+ menjadi  Fe 2+ (Kim,  2005).  Senyawa  yang  mempunyai  daya reduksi  kemungkinan  dapat  berperan  sebagai antioksidan  karena  dapat  menstabilkan  radikal dengan  mendonorkan  elektron  atau  atom  hidrogen sehingga  senyawa  radikal  berubah  menjadi  lebih stabil. Reaksi yang terjadi :
K 3 Fe(CN) 6 K 4 Fe(CN) 6 Fe 3+ + e - Fe 2+
Hasil  regresi  dari  konsentrasi  (x)  dengan nilai  absorbansi  (y)  larutan  pembanding  asam askorbat  diperoleh  persamaan  yaitu  y  =  0,010x – 0,373 dengan nilai R 2 = 0,998 dan untuk menghitung nilai aktivitas antioksidan dimasukkan nilai absorbansi sampel kedalam persamaan tersebut. Nilai FRAP  dinyatakan  dalam  mg  equivalen  asam askorbat/  gr  ekstrak (AAE).  Kandungan  vitamin  C pada  masing-masing  replikasi  dinyatakan  sebagai ekuivalen  asam  askorbat  atau Ascorbic  Acid Equivalent (AAE).  AAE  merupakan  acuan  umum untuk  mengukur  sejumlah  vitamin  C  yang  terdapat dalam suatu bahan. Hasil pengukuran absorbansi dan nilai  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  daun  kelor (Moringa  oleifera Lam.)  tercantum  pada  table  hasil penelitian  sehingga  didapatkan  nilai  rata-rata  dari sampel  ekstrak  etanol  daun  kelor  (Moringa  oleifera Lam.)  sebesar  7,923  mgAAE/g  ekstrak,  artinya dalam  setiap  gram  ekstrak  setara  dengan  7,923  mg asam askorbat.

## IV. KESIMPULAN
Dari  hasil  pengujian  aktivitas  antioksidan ekstrak  etanol  daun  kelor  (Moringa  oleifera Lam.)
Konsentrasi (ppm) Abs 60 0.261 70 0.383 80 0.491 90 0.591 100 0.693 Ekstrak etanol daun kelor Absorbansi (720 nm) Aktivitas Antioksidan (mgAAE/g ekstrak) Replikasi 1 0, 336 7,09 Replikasi 2 0, 443 8,16 Replikasi 3 0, 479 8,52
menggunakan metode FRAP dengan larutan pembanding  asam  askorbat  diperoleh  aktivitas antioksidan  ekstrak  etanol  daun  kelor  (Moringa oleifera Lam.) sebesar 7,923 mgAAE/g ekstrak.

## DAFTAR PUSTAKA
Anwar, F., Latif, S., Ashraf, M., Gilani, A.H., 2007, Moringa  oleifera  Lam.:  a  food  plant  with multiple  medicinal  uses. Phytother  Res, 21:17-25
Benzie,  I.F.F.,  and  Strain,  J.J,  1996,  The  Ferric Reducing Ability of Plasma as a Measure of “Antioxidant  Power”  :  The  FRAP  assay, Analitycal Biochemitical 239: 70-76
Chumark,  P.,  Khunawat,  P.,  Sanvarinda,  Y., Phornchirasilp, S., Morales, N.P., Phivtong- ngam, L., Ratanachamnong, P., Srisawat, S., Pongrapeeporn,  K.,  2008,  The  In  Vitro  and
Ex
Vivo
Antioxidant
Properties, Hypolipidaemic  And  Antiatheroschlerotic Activities of  Water  Extract  of Moringa oleifera Lam Leaves,
Journal Ethnopharmacol, 116 : 439-446
Halvorsen, B.L., Holte,Kari.,  Myhrstad, Mari C. W., Barikmo, I.,Hvattum Erlend, Remberg Siv Fagertun, Wold Anne-Brit, Haffner Karin, Baugerød Halvard , Andersen Lene Frost , Moskaug Jan, Jacobs David  R , Blomhoff Rune ,2002,  A  Systematic  Screening  of Total Antioxidant in Dietary Plants, Journal of Nutrition.
Hassanbaglou,  B.,  Hamid,  A.  A.,  Roheeyati,  A.  M., Saleh, N. M., Abdulamir, A. S., Khatib, A., Sabu,  M.  C,  2012, Antioxidant  Activity  of Different  Extracts  From  Leaves  of  Pereskia bleo  (Cactaceae), Journal  of  Medicinal Plants Research Volume 6 (15): 2932-2937
Kim,O.S.,  2005,  Radical  Scavenging  Capacity  and Antioxidant  Activity  of  The  Vitamin Fraction  In  rice  bran. J  Food  Sci. (3):  208- 213
Kumalaningsih, S., 2006, Antioksidan Alami, Trubus Agrisarana, Surabaya.
Rabeta, M.S., dan Faraniza N., 2013, Total Phenolic Content  and  Ferric  Reducing  Antioxidant Power of The Leaves and Fruits of Garcinia atrovirdis and Cynometra cauliflora. International Food Research Journal 20(4): 1691-1696
Winarsi  H.,  2007, Antioksidan  Alami  dan  Radikal Bebas. Yogyakarta: Kanisus
Youngson,  R.,  2005, Antioksidan:  Manfaat  Vitamin
C  dan  E  Bagi  Kesehatan,  alih  bahasa  Susi Purwoko, Arcan Jakarta.