## LACTOBACILLUS BULGARICUS SEBAGAI PROBIOTIK GUNA PENINGKATAN KUALITAS AMPAS TAHU UNTUK PAKAN CACING TANAH

## Purkan Purkan, Nur Nisdiyatul Laila, Sri Sumarsih
Prodi S-1 Kimia, Departemen Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Airlangga, Surabaya email: purkan@fst.unair.ac.id
Received 20 Pebuari 2017 Accepted 20 April 2017

## Abstrak
Penelitian  ini  bertujuan untuk  menentukan aktivitas protease dari  probiotik Lactobacillus bulgaricus dan pengaruh probiotik Lactobacillus bulgaricus dalam fermentasi pakan ampas tahu  untuk  meningkatkan  produktivitas  cacing  tanah.  Metode  yang  digunakan  untuk penentuan aktivitas protease dalam hidrolisis substrat kasein adalah metode Bradford. Dari hasil penelitian, probiotik Lactobacillus bulgaricus menghasilkan protease selama 18 jam pertumbuhan,  dengan  aktivitas  protease  sebesar  131,04  U/mL.  Probiotik Lactobacillus bulgaricus OD 0,6 dapat menghidrolisis protein ampas tahu sebesar 1,48 µg/mL dalam 12 jam  fermentasi.  Produktivitas  cacing  tanah  mengalami  peningkatan  berat  cacing  tanah karena adanya pengaruh probiotik Lactobacillus bulgaricus pada pakan ampas tahu  yang ditunjukkan dengan persen kenaikan berat cacing tanah sebesar 32,13%.
Kata kunci: Probiotik, Lactobacillus bulgaricus, Enzim protease, Cacing tanah

## Abstract
The  aims  of  this  study  were  to  determine  the  protease  activity  of  the Lactobacillus bulgaricus probiotic and to know the effect of tofu dregs feed fermentation in increment of the earthworms productivity. The Bradford method was used for determination of protease activity  in  the  hydrolysis  of  casein  substrate.  From  the  research,  the Lactobacillus bulgaricus probiotic released protease during 18 hours of growth and the protease activity was 131,04 U/mL. Lactobacillus bulgaricus probiotic in 0.6 OD could hydrolyze protein of tofu  dregs  as  well  as  1.48  µg/mL  during  12  hours  of  fermentation.  The  earthworms productivity could increase the weight of earthworms due to the influence of Lactobacillus bulgaricus probiotic  in  tofu  dregs  feed,  it  was  indicated  by  the  increment of  earthworms weight up to 32.13%.

## Keywords: Probiotics, Lactobacillus bulgaricus, protease enzyme, Earthworms

## Pendahuluan
Probiotik  merupakan  mikroorganisme hidup  yang  memberikan  manfaat  bagi kesehatan dalam jumlah tertentu (FAO/WHO,  2001).  Probiotik  umumnya berasal  dari  golongan  asam  laktat  seperti Lactobacillus  bulgaricus. Lactobacillus
bulgaricus memiliki peran penting di jalur intestinal karena dapat menjaga keseimbangan  mikroflora  sehingga  tubuh tidak  mudah  terserang  penyakit  (Rahayu, 2002). Selain itu, Lactobacillus bulgaricus juga dimanfaatkan untuk  berbagai produk fermentasi  makanan.  Probiotik  mampu
menguraikan  rantai  panjang  karbohidrat dan  protein  karena  adanya  enzim  tertentu dalam selnya yang dapat mengolah protein yang kompleks menjadi asam-asam amino yang  lebih  sederhana  (Effendi,  2002). Enzim tersebut adalah protease.
Probiotik  tidak  hanya  dimanfaatkan  di bidang kesehatan dan makanan tetapi juga dibidang  peternakan  (Kompiang,  2009). Ternak  yang  paling  mudah  dilakukan treatmen  adalah  ternak  cacing  tanah. Cacing  tanah  dijadikan  profit  usaha  yang menjanjikan  di  kalangan  masyarakat karena  penanganan  dan  produksi  yang mudah. Untuk
meningkatkan
produksivitas  cacing  tanah,  asupan  pakan cacing  tanah  juga  diperhatikan.  Pakan cacing tanah berupa sampah rumah tangga seperti ampas tahu. Ampas tahu merupakan  protein  kompleks  yang  lebih sulit  dicerna  oleh  usus  cacing  tanah  dan tidak  dapat  bertahan  lama.  Hal  ini menyebabkan banyaknya ampas tahu yang terbuang  tanpa  ada  peningkatan  produksi cacing  tanah  sehingga  menimbulkan banyak  kerugian  finansial  bagi  peternak. Oleh karena itu perlu dilakukan penelitian mengenai Lactoacillus bulgaricus sebagai probiotik guna peningkatan kualitas ampas tahu untuk pakan cacing tanah.

## Metode Penelitian

## Alat dan Bahan
Perlatan    yang  digunakan  terdiri  atas gelas  beker,  hot  plate,  labu  erlenmeyer, autoclave,  tabung  reaksi,  rak  tabung reaksi,  kawat  ose,  bunsen, laminar  air flow, lemari es, incubator,
spektrofotometer
UV-VIS,
shaker incubator, cawan petri, pipet volume, pipet tetes,  dan  pengaduk . Sementara  bahan utamanya  adalah  isolat Lactobacillus bulgaricus yang digunakan untuk prebiotik,  diperoleh  dari  Laboratorium Mikrobiologi Departemen
Biologi,
Fakultas Sains dan Teknologi. Universitas Airlangga..  Spesimen  yang  akan  diteliti berupa  hewan  hidup  cacing  tanah, diperoleh  dari  peternak  cacing  tanah    di daearh Kamal, Madura.

## Prosedur Pembuatan media MRS broth.
Media  cair  MRS  terdiri  dari  1%  (b/v) pepton,  0,5%  (b/v)  yeast  extract  dan  2% (b/v)  glukosa.  Media  disterilkan  dengan autoklaf  pada  tekanan  1  atm,  temperatur 121 o C selama 15 menit.

## Pembuatan kurva pertumbuhan bakteri.
Bakteri  diperbanyak  dengan  cara ditumbuhkan  pada  media  MRS  broth. Sebanyak
2% (v/v)
inokulum
Lactobacillus bulgaricus dimasukkan kedalam 25 mL media MRS broth. Media yang berisi inokulum diinkubasi pada suhu ruang  menggunakan  alat shaker dengan kecepatan  130  rpm  selama  48  jam.  Pada interval 4 jam dilakukan pengukuran nilai optical density (OD) menggunakan spektrofotometer UV-VIS pada λ 600 nm.

## Panen protease ekstraseluler Lactobacilus bulgaricus.
Protease  ekstraseluler  didapatkan  dari pemisahan  antara  sel  bakteri  dengan substrat  (media  biakan  yang  dicampur induser).  Induser  yang  digunakan  yaitu BSA  dan  ampas  tahu.  Sebanyak  25  mL MRS  broth  ditambahkan  2%  (v/v) inokulum Lactobacillus bulgaricus dan 1g ampas tahu. Sedangkan media biakan yang lain,  25  mL  MRS  broth  ditambahkan  2% (v/v)  inokulum Lactobacillus  bulgaricus dan  1  mL  BSA  1µg/mL . Masing-masing media  dishaker  pada  suhu  kamar  selama 18 jam. Pada 0 jam dan 18 jam, dilakukan sentrifuge  dengan  kecepatan  9000  rpm selama  10  menit  untuk  memperoleh protease ekstraseluler Lactobacillus bulgaricus. Supernatan  yang  diperoleh pada  jam  ke-18  dilakukan  uji  aktivitas protease  (Enggel et  al. 2004)  dan penentuan kadar protein (Bradford, 1976).
Uji aktivitas protease.
Sebanyak 250 µL supernatan ditambahkan  250  µL  buffer  fosfat  pH  7. Selanjutnya  larutan  diinkubasi  selama  5 menit pada suhu 37 o C. Setelah diinkubasi, larutan ditambahkan 250 µL substrat (2%
kasein dalam buffer fosfat pH 7). Larutan diinkubasi  kembali selama 10  menit pada suhu 37 o C. Kemudian larutan ditambahkan 500 µL asam trikloroasetat  (TCA) 0,4  M. Larutan yang sudah mengendap, disentrifuge  untuk  memisahkan  endapan dan supernatan. Supernatan yang diperoleh diukur  nilai  absorbansinya  menggunakan metode  Bradford,  yang  selanjutnya  dapat dihitung  kadar  proteinnya  (Enggel et  al ., 2004).
Unit/mL enzim = (kadar enzim)(Vtot) (𝑉)(𝑡) x Fp (1)
Keterangan:
Vtot = Volume total dalam analisis (ml) V      = Volume enzim yang digunakan (ml) t      = Waktu analisis (menit) Fp   = Faktor pengenceran selama analisis

## Penentuan kadar protein.
Sebanyak  100  µL  sampel  di  tambah dengan 5 mL Bradford dan 3 mL akuades. Larutan  dihomogenkan hingga larut sempurna.  Selanjutnya  larutan  diinkubasi pada suhu 37 o C selama 5 menit. Kemudian larutan diukur nilai absorbansinya menggunakan  spektrofotometer  UV-VIS pada λ 595 nm. Kadar protein dalam suatu sampel  ditentukan  dengan  memasukkan nilai  absorbansi  yang  terbaca  pada spektrofotometer kedalam persamaan regresi  liner  hasil  ekstrapolasi  kurva standar BSA (Bradford, 1976).
Uji kinerja probiotik Lactobacillus bulgaricus pada pakan ampas tahu.
Uji kinerja probiotik dilakukan dengan cara  memfermentasi  pakan  ampas  tahu dengan  variasi  optimasi  konsentrasi  dan waktu  fermentasi  probiotik.  Optimasi konsentrasi  probiotik  dilakukan  dengan cara menyiapkan 5 gelas beker yang berisi masing-masing  20g  ampas  tahu  yang dilarutkan dalam 20 mL akuades. Masing- masing  wadah  ditambahkan  25  mL suspensi  probiotik  OD  0,2;  0,4;  0,6;  0,8 dan  1.  Fermentasi  dilakukan  dengan menshaker  masing-masing  wadah  pada suhu kamar selama 20 jam. Setiap interval
4  jam  diamati  sifat  fisik  dari  ampas  tahu yang meliputi perubahan tekstur, bau, dan warna.  Selain  itu,  pada  interval  tersebut juga dilakukan sentrifugasi untuk memisahkan supernatan yang akan digunakan untuk penentuan kadar protein.
Uji kinerja probiotik Lactobacillus bulgaricus pada cacing tanah. Kondisi  optimum  yang  diperoleh  dari konsentrasi probiotik dan waktu
fermentasi  probiotik,  digunakan  untuk melakukan uji kinerja probiotik
Lactobacillus  bulgaricus pada  cacing tanah.  Cacing  tanah  ditentukan  beratnya terlebih dahulu. Selanjutnya, cacing tanah diberikan umpan berupa pakan ampas tahu yang dicampur dengan probiotik Lactobacillus bulgaricus.
Pertumbuhannya  diamati  selama  16  hari. Setelah16  hari,  cacing  tanah  ditimbang kembali  untuk  mengetahui  berat  cacing tanah setelah diberikan umpan probiotik.

## Hasil dan Pembahasan
Kurva Pertumbuhan Lactobacillus bulgaricus. Pola pertumbuhan Lactobacillus bulgaricus ditampilkan  pada  Gambar  1.
Pertumbuhan mikroorganisme didefinisikan  bertambahnya  jumlah  sel dari  satu  sel  menjadi  jutaan  sel  setelah terjadi  pembelahan.  Berdasarkan  Gambar 1 dapat dijelaskan bahwa pola pertumbuhan bakteri Lactobacillus bulgaricus mengalami  4  fase  yaitu  fase lag,  fase  log  (fase  eksponensial),  fase stasioner  dan  fase  kematian.  Fase  lag merupakan  fase  adaptasi  bakteri  untuk mulai  tumbuh  pada  media  yang  baru, sehingga  pada  fase  ini  belum  terjadi peningkatan sel. Fase lag terjadi pada jam ke-0  sampai  jam  ke-8.  Sedangkan  pada fase log, pertumbuhan bakteri sangat cepat karena  nutrisi  yang  tersedia  masih mencukupi.  Selama  fase  ini  bakteri tumbuh  pada  kecepatan  maksimum.  Fase log terjadi pada  jam ke 12 sampai  jam ke 18. Setelah mengalami peningkatan jumlah  sel  yang  tinggi,  maka  kebutuhan
makanan  bakteri  akan  berkurang.  Oleh karena itu, sebagian bakteri akan mengalami  kematian  karena  kekurangan nutrisi  sehingga  bakteri  berada  pada  titik kejenuhan  yang  disebut  fase  statisoner. Jumlah  bakteri  yang  hidup dan  mati akan sama sehingga jumlahnya terlihat konstan. Fase ini terjadi pada jam ke-20 hingga jam ke-48. Pada  Gambar.1  tidak  terdapat  fase kematian Lactobacillus bulgaricus karena kurangnya  waktu  inkubasi.  Namun,  jika waktu  inkubasi  diperpanjang  melebihi  48
jam  dapat  dimungkinkan  terjadi  fase kematian.  Karena  setelah  48  jam,  bakteri yang mengalami fase kematian ditunjukkan dengan penurunan jumlah sel. Hal ini dikarenakan nutrisi yang ada pada media sangat rendah sehingga mengakibatkan  tidak  ada  pertumbuhan bakteri  lagi  (Waluyo,  2004).  Waktu pertumbuhan optimal dalam pertumbuhan Lactobacillus  bulgaricus yaitu  selama  16 jam.
Gambar 1. Kurva pertumbuhan Lactobacillus bulgaricus
Tabel 1. kadar protein yang terhidrolisis oleh Lactobacillus bulgaricus
No Perlakuan media Protein awal jam ke-0 ( µ𝐠/ 𝐦𝐋) Protein sisa jam ke-18 (µ𝐠/ 𝐦𝐋 ) Protein yang terhidrolisis (µ𝐠/𝐦𝐋 ) 1. +BSA1 µg/mL 6,16 4,4 1,76 2. +ampas tahu 1 gram 8,58 5,4 3,18 Uji  Aktivitas  Protease  Dari  Probiotik Lactobacillus bulgaricus. Lactobacillus bulgaricus
dapat mengeluarkan  protease  dari  dalam  sel keluar  lingkungan  tumbuhnya  dengan bantuan  induser,  sehingga  dapat  diuji aktivitas  proteasenya.  Nilai  absorbansi yang terbaca pada jam ke-0 dan jam ke-18, dimasukkan kedalam regresi kurva standar BSA  sebesar y =  0,025 x +  0,125.  Kurva standar BSA digunakan untuk menghitung kadar  protein  yang  terhidrolisis.  Data ditampilkan pada Tabel 1.
Berdasarkan Gambar 2 dapat dijelaskan bahwa  media  biakan  dengan  tambahan BSA yang awalnya memiliki kadar protein 6,16  µg/mL,  oleh  probiotik Lactobacillus bulgaricus dapat  dihidrolisis  sebesar  1,76 µg/mL.  Sedangkan  pada  media  biakan yang mengandung pakan ampas tahu yang awalnya  memiliki  kadar  protein  8,58 µg/mL  oleh  probiotik  dihidrolisis  sebesar 3,18 µg/mL. Hal ini sesuai dengan prinsip kerja probiotik  yang  menunjukkan  bahwa Lactobacillus bulgaricus memiliki kemampuan menghidrolisis protein kompleks  yang  terdapat  pada  masing-
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 Opt ic al De n si ty ( OD ) λ 600 n m Waktu tumbuh (jam)
masing media biakan menjadi protein yang lebih sederhana.
Untuk mengecek ada tidaknya protease yang dihasilkan oleh probiotik, supernatan pada waktu inkubasi 18 jam dilakukan uji aktivitas protease (Enggel et al ., 2004). Uji aktivitas  protease  menggunakan  metode hidrolisis  substrat  (kasein)  oleh  protease menggunakan  metode  Bradford.  Substrat yang ditambahkan, diukur nilai
absorbansinya terlebih dahulu menggunakan  metode Bradford sehingga diperoleh  kadar  protein  sebesar 39,4 µg/ mL .  Aktivitas  protease  oleh  probiotik
Lactobacillus
bulgaricus , dapat ditampilkan pada Tabel 2.
Unit  aktivitas  protease  didefinisikan banyaknya enzim yang dapat menghidrolisis 1 µg/mL protein per menit pada  kondisi  percobaan.  Berdasarkan Gambar  3  dapat  dijelaskan  bahwa  media biakan  yang  mengandung  BSA  memiliki aktivitas  protease  sebesar  133,28  U/mL.
Sedangkan  pada  media  biakan  yang mengandung  pakan  ampas  tahu  memiliki aktivitas  protease  sebesar  131,04  U/mL. Protease  adalah  enzim  penghidrolisis protein  menjadi  senyawa-senyawa  yang lebih sederhana seperti peptide atau asam amino (Bergman, 1942). Adanya protease tesebut  dapat  ditunjukkan  dari  besarnya nilai aktivitas protease yang terdapat pada masing-masing  media  biakan.  Aktivitas protease  pada  media  yang  mengandung BSA    hanya  selisih  2,24  U/mL  dari aktivitas protease pada media pakan ampas tahu.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  pakan ampas  tahu  yang  dianggap  limbah,  jika dicampurkan probiotik Lactobacillus bulgaricus memiliki  aktivitas  protease yang tidak jauh berbeda dengan tambahan BSA.  Sehingga Lactobacillus  bulgaricus dapat  digunakan  sebagai  probiotik  dalam tambahan  pakan  ampas  tahu  karena mampu menghasilkan protease.
Gambar 2. Kadar protein terhidrolisis oleh probiotik
Optimasi konsentrasi dan waktu fermentasi optimum
probiotik Lactobacillus  bulgaricus  pada  pakan ampas tahu.
Data  masing-masing  hasil  optimasi dapat ditampilkan pada Gambar 4. Grafik variasi  konsentrasi  menunjukkan  adanya penurunan  kadar  protein  terhadap  waktu fermentasi  dari  jam  ke-0  sampai  jam  ke- 20.  Hasil  regresi  dari  masing-masing variasi konsentrasi juga menunjukkan nilai
negatif yang berarti telah terjadi degradasi protein  kompleks  yang  terdapat  pada pakan  ampas  tahu  menjadi  asam-asam amino  yang  lebih  sederhana  dengan adanya  protease.  Konsentrasi  optimum probiotik Lactobacillus bulgaricus ditentukan  berdasarkan  hasil  regresi  yang memiliki  nilai  slope  paling  besar  yang menunjukkan adanya laju penurunan kadar protein. Dari kelima variasi OD probiotik Lactobacilus bulgaricus , probiotik OD 0,6
0 1 1 2 2 3 3 4 + BSA 1 µg/mL + ampas tahu 1 gram 1,76 K ada r pr o te in ( µ g/m L ) 3,18
yang  memiliki  kriteria  yang  sesuai  yakni memiliki  regresi  sebesar  y  =  -0.413x  + 6.568.  Sehingga  probiotik  OD  0,6 dianggap  sebagai  konsentrasi  probiotik optimum.  Sedangkan  waktu  fermentasi optimum  pada  pakan  ampas  tahu,  juga ditentukan  berdasarkan  Gambar  4  yakni terjadi  penurunan  kadar  protein  sisa berturut-turut  dari  waktu  ke  waktu. Fermentasi  pakan  ampas  tahu  yang optimum berada pada jam ke-16. Pada jam tersebut terjadi penurunan yang signifikan Selama  fermentasi,  pakan  ampas  tahu yang dicampur dengan probiotik
Lactobacillus  bulgaricus juga  dianalisis sifat fisiknya yang meliputi tektur, bau dan
warna. Tekstur pakan ampas tahu sebelum fermentasi  yaitu  kasar  dan  sedikit  padat. Sedangkan  selama  fermentasi  pakan ampas tahu menjadi lunak dan berair. Dari segi  bau,  pakan  ampas  tahu  awalnya berbau tidak sedap ditunjukkan dengan pH 7,setelah  difermentasi  pH  nya  turun menjadi  5  dan  tidak  menghasilkan  bau yang  menyengat  karena  danya  senyawa metabolit  sekunder  yang  dihasilkan  oleh probiotik. Sedangkan warna pakan ampas tahu  sebelum  fermentasi  berwarna  putih pucat,  namun  selama  proses  fermentasi pakan ampas tahu menjadi putih kekuningan. Tabel 2. Uji aktivitas protease
No Perlakuan media Protein substrat (kasein) µ𝐠/𝐦𝐋 Protein sisa (µ𝐠/ 𝐦𝐋 ) Protein yang terhidrolisis (protein substrat- protein sisa) (µ𝐠/𝐦𝐋 ) Aktivitas protease (U/mL) 1. +BSA 1 µg/mL 39,4 1,320 38,08 133,28 2. +ampas tahu 1 gram 39,4 1,960 37,44 131,04
Gambar 3. Aktivitas protease Lactobacillus bulgaricus
Uji Kinerja Probiotik Pada Cacing Tanah. Uji  ini  dilakukan  berdasarkan  kondisi optimasi konsentrasi dan waktu fermentasi pada  pakan  ampas  tahu,  yaitu  probiotik
Lactobacillus  bulgaricus OD  0,6  dan waktu  fermentasi  12  jam.  Pertumbuhan cacing  tanah,  diamati  selama  16  hari. Setelah  16  hari,cacing  tanah  ditimbang
0 15 30 45 60 75 90 105 120 135 +BSA 1 µg/mL +ampas tahu 1 gram A kt iv it as pr o te as e (U/m L ) 131,04 133,28
kembali  beratnya  untuk  mengetahui  efek probiotik Lactobacillus  bulgaricus dalam
peningkatan  produktivitas  cacing  tanah.
Persen  kenaikan  berat  cacing  tanah  dapat ditunjukkan pada Gambar 6.
Gambar  4. Grafik  pengaruh  jumlah Lactobacillus  bulgaricus (diwakili  dengan  OD) terhadap degradasi protein ampas pada berbagai waktu fermentasi. A (OD 0,2); B (OD 0,4); C (OD 0,6); D (OD 0,8); E (OD 1)
Gambar 5. Kondisi pakan ampas tahu sebelum fermentasi (kiri) dan kondisi pakan ampas tahu setelah fermentasi (kanan).
Pertambahan  berat  cacing  tanah  dapat terlihat  dari  selisih  antara  berat  cacing tanah  pada  hari  ke-0  sebelum  pemberian pakan  hingga  16  hari  setelah  pemberian pakan. Pada Gambar 6  dan 7 menunjukkan bahwa  kenaikan  berat  cacing  tanah  pada pakan  ampas  tahu  yang  mengandung
probiotik lebih tinggi daripada berat cacing tanah  yang hanya diberikan umpan pakan ampas tahu.
Selama  proses  fermentasi,  kondisi pakan  ampas  tahu  juga  diamati  yang meliputi bau. Bau pakan ampas tahu yang dicampur  dengan  probiotik Lactobacillus
y = -0.36x + 6.2667
R² = 0.8615 0 1 2 3 4 5 6 7 0 4 8 12 16 20 K ad ar pr o tei n si sa (µg/ m L) Waktu fermentasi (jam) y = -0.284x + 6.752 R² = 0.9815 0 1 2 3 4 5 6 7 0 4 8 12 16 20 K ad ar p ro te in s is a (µ g/mL) Waktu fermentasi (jam) y = -0.413x + 6.568 R² = 0.9895 0 1 2 3 4 5 6 7 0 4 8 12 16 20 Ka d ar p ro te in s is a (µ g/mL) Waktu fermentasi (jam) y = -0.312x + 6.472 R² = 0.9596 0 1 2 3 4 5 6 7 0 4 8 12 16 20 Ka d ar p ro te in s is a (µ g/mL) Waktu fermentasi (jam) y = -0.293x + 6.528 R² = 0.9944 0 1 2 3 4 5 6 7 0 4 8 12 16 20 Ka d ar p ro te in s is a (µ g/mL) Waktu fermentasi (jam) A D C E B
bulgaricus yang  umumnya  berbau  tidak sedap,  namun  selama  fermentasi  pakan ampas  tahu  tidak  berbau  sehingga  ramah lingkungan. Hal ini dikarenakan Lactobacillus bulgaricus mampu menghasilkan senyawa metabolit sekunder sehingga  kemungkinan  adanya  bakteri pathogen  lain  menjadi  sedikit.  Selain  itu, pakan ampas tahu yang dicampur probiotik Lactobacillus bulgaricus lebih cepat habis dimakan  cacing  tanah  dibandingkan
dengan hanya diberikan pakan ampas tahu. Enzim  protease  yang  dihasilkan  oleh probiotik  mampu  memecah  molekul kompleks  pakan  ampas  tahu  menjadi molekul  yang  sederhana  sehingga  mudah dicerna  oleh  usus  cacing  tanah.  Dengan demikian, pakan ampas tahu selain sebagai limbah  juga  sebagai  sumber  protein  dan dapat  dimanfaatkan  sebagai  pakan  cacing tanah  yang  berkualitas  dengan  tambahan probiotik Lactobacillus bulgaricu
Tabel 3 Kenaikan berat cacing tanah Perlakuan Berat cacing tanah pada hari ke- Selisih berat (gram) % kenaikan berat 0 16 Media pakan yang ditambah dengan- ampas tahu 250 g 285 g 35 14% ampas tahu+probiotik 250 g 375 g; 380 g; 350 g 118,33 32,13%
Gambar 6. Grafik kenaikan berat cacing tanah setelah diberikan pakan ampas tahu yang dicampur dengan probiotik Lactobacillus bulgaricus 0 50 100 150 200 250 300 350 400 K en a ik an b er a t (gr a m ) Kontrol berat cacing  awal Cacing tanah dengan pakan ampas tahu Cacing tanah dengan pakan ampas tahu+probiotik Hari ke-
0 16 0 16
Gambar 7. Grafik persen kenaikan berat cacing tanah

## Kesimpulan
Lactobacillus bulgaricus
dapat
menghasilkan  protease  pada  media  yang mengandung BSA dengan aktivitas protease sebesar 133,28 U/mL. Sedangkan pada  media  yang  mengandung  pakan ampas  tahu  diperoleh  aktivitas  protease sebesar  131,04  U/mL. Lactobacillus
bulgaricus OD 0,6 dapat mencerna ampas tahu  secara  optimal  untuk  pakan  cacing tanah selama 12 jam. Probiotik
Lactobacillus
bulgaricus yang
dicampurkan  kedalam  pakan  ampas  tahu, mempengaruhi  berat cacing tanah  dengan prosentase kenaikan berat sebesar 32,13%.

## Daftar Pustaka
Bradford,  M.,  M.,  1976 .  A  rapid  and sensitive  method  for  quantitation  of protein  utilization. The  principle  of protein-dye  binding.  Anal.  Biochem. 72, 248-254
Bergman,  M.,  1942. A  classification  of proteolytic enzymes . Adv. Enzimol
Effendi,  I.  2002. Probiotics  for  Marine Organism Disease Protection. Pekanbaru:  Fakultas  Perikanan  dan
Ilmu Kelautan Universitas Riau.
Enggel, J., Meriandini, A. and Natalia, L.,
2004. Karakterisasi Protease Ekstraseluler  Clostridiun  bifermentans R14-1-b. Jurnal Mikrobiologi Indonesia, 9, 9 - 12. FAO/WHO.  2001. Joint  FAO/WHO
Expert  Consultation  on  Evaluation  of Health  and  Nutritional  Properties  of Probiotics  in    Food  Including  Powder Milk  with  Live  Lactic  Acid  Bacteria.
Amerian Córdoba Park Hotel, Córdoba, Argentina Kompiang, I., P., 2009. Pemanfaatan
Mikroorganisme sebagai Probiotik untuk Meningkatkan Produksi Ternak Unggas di Indonesia. Pengembangan Inovasi Pertanian : Bogor. Hal 188 Waluyo,  2004, Mikrobiologi  Umum .
Universitas Muhammadiyah Press, Malang 0% 5% 10% 15% 20% 25% 30% 35% pakan ampas tahu pakan ampas tahu+probiotik % K en aik an b er at 32,13% 14%