Published by Fakultas Peternakan UNPAD DOI: 10.24198/jit.v19i1.23009 Unpad Press Available online at http://jurnal.unpad.ac.id/jurnalilmuternak Available online at http://jurnal.unpad.ac.id/jurnalilmuternak
Pengaruh  medium  dan  lama  inkubasi  dalam  proses sexing sperma terhadap kualitas semen kambing Boer
Anwar 1a , Nurcholidah Solihati 2 dan Siti Darodjah Rasad 2
1 Program studi Pascasarjana Fakultas Peternakan Universitas Padjadjaran
2 Departemen Produksi Ternak Fakultas Peternakan Universitas Padjadjaran
a) email: anwar_tuwieumpeuk@yahoo.co.id

## Abstrak
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh medium dan waktu inkubasi pada sexing  semen  terhadap  kualitas  spermatozoa  kambing  Boer.  Proses sexing menggunakan metode  perbedaan  densitas  dengan  menggunakan  medium  bovine  serum  albumin  (BSA)  dan spermgrad  (SG).  Penelitian  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  dengan  enam perlakuan  yaitu,  BSA  40  menit  (P1),  BSA  50  menit  (P2),  BSA  60  menit  (P3),  SG  40  Menit (P4),  SG  50  (P5)  dan  SG  60  menit  (P6).  Variabel  yang  diamati  adalah  kualitas  spermatozoa (motilitas  dan  abnormalitas).  Data  dianalisis  menggunakan  analisis  ragam  diikuti  uji  lanjut berganda  Duncan.  Materi  yang  digunakan  adalah  semen  kambing  Boer.  Hasil  penelitian menunjukkan motilitas tertinggi terdapat pada fraksi atas (sperma X) dan fraksi bawah (sperma Y)  terdapat  pada  perlakuan  P1  (72,0  ±2,7%  dan  72,0±2,7%)  dan  motilitas  terendah  pada perlakuan P6 (57,0±5,7% dan 58,0±5,7%). Selain itu, persentase abnormalitas sperma tertinggi pada fraksi atas pada perlakuan P1 dan fraksi bawah pada P6 (8,5±0,9% dan 5,4±1,2%). Hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa tidak terdapat perbedaan yang nyata motilitas antara kedua medium, dan waktu inkubasi 50 menit optimum untuk mempertahankan kualitas semen. Kata kunci: sexing sperma, lama waktu inkubasi, kualitas semen, kambing boer

## Effect  of  medium  and  incubation  time  on  sexing  spermatozoa  Boer  on the quality of cement Boer goat

## Abstract
The  aim  of  this  research  to  know  the  effect  of  medium  and  incubation  time  on  sexing semen on the quality of Boer goat spermatozoa. The sexing process used the density difference method by using bovine serum albumin (BSA) and spermgrad (SG) medium. This research used a Completely Randomized Design (CRD) with six treatments namely, BSA 40 minutes (P1), BSA 50  minutes  (P2),  BSA  60  minutes  (P3),  SG  40  Minutes  (P4),  SG  50  (P5)  and  SG  60  minutes (P6). The variable observations are spermatozoa quality (motility and abnormality). Data were analyzed using analysis of variance followed by Duncan's multiple follow-up tests. The material used  is  Boer  goat  semen.  The  results  showed  the  highest  motility  was  in  the  upper  fraction (sperm X) and the lower fraction (sperm Y) was in the P1 treatment (72.0 ± 2.7% and 72.0 ± 2.7%) and the lowest motility in the P6 treatment (57.0 ± 5.7% and 58.0 ± 5.7%). Besides, the percentage of sperm abnormality was highest in the upper fraction at P1 treatment and lower fraction at P6 (8.5 ± 0.9% and 5.4 ± 1.2%). The results of the study concluded that there was no significant difference in motility between the two mediums and the optimum incubation time of 50 minutes to maintain cement quality.
Keywords: sperm sexing, incubation time, semen quality, Boer goat

## Pendahuluan
Perkembangan teknologi
reproduksi  pemisahan  spermatozoa  dengan kromosom  X  atau  Y,  yang  lebih  dikenal dengan  istilah sexing dapat  dilakukan
secara in-vitro dengan  menggunakan berbagai  metode,  salah  satunya  adalah menggunakan  jenis  medium  pemisah dengan gradien yang  berbeda.  Upaya pemisahan  spermatozoa  dilakukan  untuk mengubah  perolehan  spermatozoa  yang
berkromosom  X  atau  Y  agar  dapat meningkatkan  persentase  kelahiran  anak dengan  jenis  kelamin  jantan  atau  betina. Secara  alami,  peluang  kelahiran  anak  hasil kawin  alam  atau  inseminasi  buatan  adalah 50% betina dan 50% jantan.  Hewan betina mempunyai  1  pasang  kromosom  X  dan  X, sedangkan  hewan  jantan  mempunyai kromosom X dan Y. Sel telur mengandung kromosom  X,  sedangkan  spermatozoa mengandung kromosom X atau Y.
Teknologi  pemisahan  spermatozoa untuk  mengubah  rasio  spermatozoa  X  dan Y  dengan  menggunakan  medium  pemisah berbeda dan lama masa inkubasi dipengaruhi oleh beberapa faktor,
diantaranya  jenis  medium,  konsentrasi medium,  waktu  atau  lama  spermatozoa menembus larutan medium, dan konsentrasi spermatozoa  yang  akan  dipisahkan  dalam cairan pengencer. Medium
sexing spermatozoa sedimentasi dengan perbedaan konsentrasi  larutan  yang  umum  digunakan adalah  Bovine  Serum  Albumin  (BSA), media ini mudah diperoleh, namun kendala dari  penggunaan  medium  ini  adalah harganya relatif mahal dan motilitas sperma pasca sexing yang  masih  rendah.  Medium spermgrand  (SG)  adalah  medium sexing sperma  yang  sudah  umum  digunakan sebagai  medium sexing pada  manusia, namun belum ada literatur yang melaporkan tentang  keberhasilan  sexing  menggunakan medium  ini  pada  hewan  ternak  khususnya pada  kambing.  Prinsip  pada  metode  kolom BSA  dan  SG,  yaitu  pemisahan  sperma berkromosom  X  dan  sperma  berkromosom Y  berdasarkan  pada  perbedaan  kecepatan bergerak (motilitas) menembus kolom.
Keberhasilan  proses sexing dengan metode  ini  dipengaruhi  oleh  beberapa faktor,  salah  satunya  yaitu  lama  waktu inkubasi  sperma.  Waktu  inkubasi  yang terlalu  singkat  akan  menghasilkan  proporsi sperma  X  dan  sperma  Y  yang  sedikit, sedangkan  waktu  inkubasi  terlalu  lama dapat mengakibatkan bercampurnya kembali spermatozoa X dan Y pada lapisan medium yang berbeda konsentrasi selain itu dapat  terjadi  peningkatan  kerusakan  pada sel sperma sehingga menurunkan kualitasnya. Beberapa peneliti telah melaporkan tentang pengaruh lama
inkubasi.  Waktu  inkubasi  45  menit  adalah waktu  optimum  menghasilkan  proporsi spermatozoa  kromosom  X-Y  paling  tinggi dibandingkan  lama  inkubasi  60  dan  75 menit  dan  kualitas  semen  terbaik  pasca sexing ,  yaitu  proporsi  spermatozoa  X sebesar  75,40%±3,20%  dengan  angka motilitas 75,89%±2,13%  hasil ini diperoleh dari  penelitian  yang  membandingkan  lama waktu ingkubasi (45, 60 dan 75 menit) pada proses sexing
spermatozoa kambing
Peranakan  Etawah  menggunakan  media sexing BSA  (Solihati et  al., 2017).  Angka persentase  motilitas  56,6%  spermatozoa  X, 57,3%  spermatozoa  Y  sapi  yang  di sexing menggunakan  medium  BSA  dengan  lama inkubasi  45  menit  (Kaiin et  al., 2017). Persentase motilitas spermatozoa sapi hasil separasi  kolom  albumin  dengan  waktu inkubasi 60 menit diperoleh hasil yaitu 75% spermatozoa  Y  pada  fraksi  bawah,  namun proporsi spermatozoa Y sangat rendah pada fraksi  bawah  yaitu  58,82  %  (Afiati,  2004). Tujuan  penelitian  ini  untuk  mengetahui pengaruh medium dan lama waktu inkubasi pada proses sexing sperma terhadap kualitas semen kambing Boer pasca sexing .

## Materi dan Metode
Penelitian ini dilakukan di kandang percobaan dan laboratorium Molekuler dan Reproduksi  Loka  Penelitian  Kambing Potong,  Sei  Putih,  Sumatera  Utara.  Mulai dari bulan Januari sampai Mei 2019. Materi penelitian  menggunakan  semen  yang berasal  dari  kambing  Boer  jantan  berumur 2-4  tahun  dengan  bobot  badan  50-75  kg sebanyak  3  ekor.  Penampungan  semen dilakuan  dengan  menggunakan  vagina buatan, dilakukan pada pagi hari. Pemeriksaan semen segar meliputi pemeriksaan makroskopis dan mikroskopis. Semen  yang  memenuhi  standar  (kualitas baik)  diencerkan  1:5  dengan  larutan brackett oliphant (BO), kemudian dilakukan proses sexing sperma.  Media  yang digunakan pada proses sexing sperma yaitu BSA dengan konsentrasi (5 dan 10 %) dan media  SG  dengan  konsentrasi  (45  dan 90%).  Semen  yang  telah  diencerkan kemudian  diletakkan  di  atas  permukaan kolom  BSA  dan  SG  serta  diinkubasi  pada suhu  37ºC.  Lama  inkubasi  terdiri  dari  tiga
waktu  inkubasi  yaitu  medium  BSA  40 menit  (P1),  BSA  50  menit  (P2),  60  menit (P3),  SG  40  menit  (P4),  SG  50  menit  (P5) dan  SG  60  menit  (P6),  masing-masing perlakuan  diulang  sebanyak  lima  kali. Setelah proses inkubasi, lapisan paling atas diambil  sebanyak  1  ml  kemudian  dibuang. Lapisan  tengah  merupakan  lapisan  yang diprediksi sebagai spermatozoa X
sedangkan lapisan paling bawah merupakan spermatozoa  Y.    Pengambilan  lapisan  atas sebanyak  2  ml,  lapisan  bagian  bawah sebanyak  2  ml,  kemudian  masing-masing dimasukkan ke dalam tabung yang berisi 3 ml  BO.    Kemudian  disentrifus  selama  10 menit  dengan  kecepatan  1800  rpm. Selanjutnya supernatan dibuang sebanyak 3 ml  dan  disisakan  2  ml,  kemudian  di evaluasi  kualitasnya  secara  mikroskopis meliputi  motitas  dan  abnormalitas.  Data dianalisis  menggunakan  ANOVA  dan  Uji lanjut Duncan 5%.

## Hasil dan Pembahasan Kualitas Semen Segar Kambing Boer
Karakteristik spermatozoa kambing Boer  sebelum  prosedur sexing dievaluasi untuk  mengetahui  kualitas  semen  segar. Hasil penelitian semen segar kambing Boer dapat dilihat pada Tabel 1.
Berdasarkan hasil pengamatan volume  semen  kambing  Boer  yang  didapat dari  lima  kali  ulangan  memiliki  rataan sebesar  0,82  ml/ejakulat,  rataan  volume semen  kambing  boer  0,83  ml/ejakulat (Pamungkas et  al., 2008),  namun  lebih rendah  dari  hasil  penelitian  Lestari  dkk
(2014)  yang  menunjukkan  angka  rataan  1 ml/ejakulasi.  Data  tersebut  menunjukkan volume  semen  kambing  Boer  masih  dalam kisaran  normal.  Volume  semen  kambing Boer  yaitu  0,69-1,03  ml/ejakulat  (Hastono et  al., 2002).  Variasi  volume  semen  pada saat penampungan dipengaruhi oleh perbedaan  individu  ternak,  bangsa  ternak, genetik,  umur,  nutrisi,  frekuensi  ejakulasi, interval  koleksi  semen  dan  metode  koleksi semen  (Toelihere  1993;  Tambing et  al., 2003).
Warna, konsistensi dan konsentrasi berkaitan  satu  dengan  lainnya.  Bila  warna semakin pudar, maka konsentrasi spermatozoa  semakin  menurun  dan  semen semakin  encer.  Hasil  evaluasi  karakteristik semen menunjukkan bahwa semen kambing Boer  berwarna  krem.    Warna  semen kambing  krem  hingga  kekuningan  (Evans dan  Maxwell,  1987;  Susilawati,  2013). Warna  krem  pada  semen  disebabkan  oleh adanya  riboflavin  dari  sekresi  kelenjar vesikularis  serta  semen  yang  memiliki jumlah spermatozoa banyak mengakibatkan semen  lebih  kental  dan  warna  yang  lebih pekat (Pamungkas et al., 2008). Konsistensi  merupakan  derajat kekentalan  dan  dapat  diperiksa  dengan teknik  memiringkan  tabung  yang  berisi semen. Semen yang baik dapat ditunjukkan dengan  derajat  kekentalannya  hampir  sama atau  lebih  kental  dari  susu,  sedangkan semen  yang  jelek,  baik  warna  maupun kekentalannya sama dengan air buah kelapa (Partodihardjo, 1980). Pengamatan menunjukkan bahwa konsistensi semen Tabel 1. Karakteristik spermatozoa kambing Boer sebelum Sexing Parameter Rataan Volume (ml) 0,82±0,3 Warna Krem Kosistensi Kental pH 6,7±0,0 Gerakan Massa 3+ Motilitas (%) 78,0±2,5 Viabilitas (%) 78,3±3,5 Abnormalitas (%) 7,8±2,2 Mebran Plasma Utuh (MPU) (%) 80,6±2,8
kambing  Boer  dalam  penelitian  kental. Semakin  kental  semen  dapat  diartikan bahwa semakin tinggi konsentrasi
spermanya (Kartasudjana, 2001).
Derajad  keasaman  semen  kambing Boer  mendekati  asam  yaitu  berkisar  6,5- 7,0.  Derajad  keasaman  sangat  menentukan status  kehidupan  spermatozoa  didalam semen.  Tinggi  dan  rendahnya  derajad keasaman  semen  dari  normal  dapat menyebabkan spermatozoa lebih cepat mati (Suyadi et  al., 2004).  Rataan  derajad keasaman  semen  segar  hasil  penelitian adalah  6,7,  lebih  tinggi  dibandingkan  hasil penelitian  Dasrul  dkk  (2013)  yaitu menunjukkan rataan derasajat kesaman 6,53 ± 0,15.
Hasil penelitian menunjukkan
bahwa  rataan  gerakan  masaa  (+++) menandakan  sangat  baik  (Mahmilia et  al., 2006).  Menurut  Yusuf et  al., (2006) gerakan  massa  dilakukan  dengan  cara meneteskan satu tetes semen menggunakan pipet  diatas  gelas  objek,  lalu  diperiksa dibawah  mikroskop  dengan  pembesaran 100x.  Nilai  gerakan  massa  terdiri  dari sangat  baik  (+++),  baik  (++),  cukup  (+), dan  buruk  (-).  Motilitas  individu  rataan 78,0±2,5%,  lebih  rendah  dibandingkan dengan  hasil  penelitian  Agustian et  al., (2014)  yang  menunnjukan  hasil  80±0,0%. Hasil  ini  sebanding  dengan  kisaran  rataan motilitas spermatozoa kambing Boer dalam penelitian Mahmilia et al., (2006) yakni 65- 98%  Tambing et al., (2001) menambahkan bahwa  semen  dengan  motilitas  50-80% tergolong normal dan fertil.
Rataan viabilitas hidup semen segar yang  diperoleh  selama  penelitian  adalah 78,3±3,5%.  Hasil  tersebut  lebih  rendah dibandingkan  hasil  penelitian  Agustian et al., (2014),  yaitu  89,26±2,63%,  dan  lebih tinggi  dibandingkan  persentase  hidup sepermatozoa  kambing  Boer  76,71% adanya  perbedaan  nilai  yang  diperoleh disebabkan  karena  adanya  variasi  individu ternak  yang  digunakan,  perbedaan  bangsa, dan umur (Kostaman et al., 2004),
Rataan abnormalitas semen
kambing Boer yang segar adalah 7,8±2,2% lebih  tinggi  dari  hasil  penelitian  Dasrul et al., (2013)  yaitu  angka  abnormalitasnya hanya  6,38  ±  1,96.  Namun  persentase
abnormalitas semen ini menunjukkan masih dalam  kisaran  normal.  Menurut  Hafez (2008), setiap ejakulasi semen mengandung sejumlah spermatozoa yang abnormal tidak lebih dari 8-10%, tetapi apabila
abnormalitas  lebih  dari  25%  dari  total semen  maka  akan  berpengaruh  terhadap fertilitas.
Hasil  penilaian  semen  segar  pada Tabel 1 dapat diperoleh kesimpulan bahwa kualitas  semen  segar  kambing  Boer  yang digunakan  pada  penelitian  ini  mempunyai kategori  baik  dan  memenuhi  syarat digunakan  sebagai  sampel  semen  untuk proses sexing .  Persyaratan  yang  harus dipenuhi  agar  semen  kambing  Boer  layak untuk diolah yaitu motilitas minimal 70 %, persentase  hidup  spermatozoa  minimal  75 %,  abnormalitas  tidak  lebih  dari  20%  dan semen  memiliki  gerakan  massa  ++/+++ (Suyadi et al., 2004)
Kualitas  Spermatozoa  Kambing  Boer
Setelah Perlakuan Sexing dengan Medium  dan  Lama  Ikubasi  yang
Berbeda
Secara  umum  rataan  kualitas spermatozoa  kambing  Boer  menurun setelah melewati tahapan proses sexing baik dengan  medium  maupun  lama  waktu inkubasi  yang  berbeda.  Pada  penelitian  ini indikator  kualitas  semen  yang  diamati meliputu; motilitas dan abnormalitas semen kambing  Boer  stelah sexing menggunakan medium BSA dan SG
Motilitas  Spermatozoa  Kambing  Boer setelah Sexing
Rataan  motilitas  spermatozoa  Y setelah sexing dengan  medium  BSA  dan SperGrad  dengan  masa  inkubasi  40,50  dan 60 menit dapat dilihat pada tabel 2. Rataan persentase  motilitas  spermatozoa  kambing Boer mengalami penurunan setelah melewati  proses sexing baik  menggunakan medium  BSA  maupun  SG  dengan  lama inkubasi  40,  50  dan  60  menit.  Motilitas spermatozoa pada setiap perlakuan memiliki  rataan  yang  berbeda-beda  dengan selisih  sekitar  1-15%.  Persentase  motilitas spermatozoa  pada  perlakuan  P1  dan  P4 nyata  lebih  tinggi  (P<0,05)  dibandingkan dengan  perlakuan  P3,  P5  dan  P6  pada
lapisan  X  (atas/  betina),  akan  tetapi perlakuan  P2  tidak  berbeda  nyata  (P>0,05) dengan  perlakuan  P1,  P4,  dan  P5,  namun berbeda nyata pada P3 dan P6 di lapisan Y (jantan/  bawah).  Persentase  motilitas spermatozoa  pada  perlakuan  medium  BSA dan  SG  pada  masa  inkubasi  40  menit  (P1 dan  P3)  lebih  baik  dibandingkan  dengan perlakuan  dengan  medium  yang  sama dengan  masa  inkubasi  yang  lebih  lama  (50 dan  60  menit/  P2,  P3,  P5  dan  P6),  hal  ini diduga  sperma  pada  perlakuan  P2,  P3  P5 dan  P6  mengalami  penurunan  motilitas. Peneurunan  motilitas  spermatozoa  pada pada  perlakuan  masa  inkubasi  yang  lebih lama disebabkan oleh metabolisme spermatozoa  selama  proses  inkubasi, sehingga  spermatozoa  kehilangan  energi yang  berpengaruh  terhadap  penurunan motilitas  (Sunarti et  al.,, 2016).  Motilitas terendah diperoleh pada perlakuan P3 yaitu 57,0±2,7%  dan  yang  tertinggi  pada perlakuan  P1  dengan  rataan  persentase motilitas 72,0±2,7%.
Motilitas  spermatozoa  hasil sexing secara  keseluruhan  menunjukkan  angka lebih  rendah  dari  motilitas  semen  segar. Penurunan  motilitas  ini  dikarenakan pengaruh  medium  dan  suhu  selama  proses sexing, selain  itu  juga  pengaruh  mekanis saat  sentrifugsi  selama  proses  berlangsung terjadi  penurunan  motilitas  spermatozoa (Susilawati et  al., 1997).  Energi  yang dibutuhkan  sperma  selama  proses sexing berasal  dari  proses  metabolisme  sel  baik secara  aerob  maupun  anaerob.  Tingginya
kebutuhan energi tentu dapat meningkatkan intensitas  metabolisme  sel,  yang  akhirnya menyebabkan peningkatan konsumsi oksigen  pada  sperma.  Menurut  hasil penelitian  Else  dan  Kraffe  (2015) menyatakan  bahwa  peningkatan  jumlah konsumsi oksigen pada sel dapat meningkatkan  intensitas  peroksidasi  lipid pada  sel  serta  pembentukan  radikal hidrogen peroksida (H 2 O 2 ) dan malondialdehid pada sel. Peroksidasi  lipid  berkepanjangan dapat  merusak  membran  plasma  bahkan menyebabkan  hilangnya  fungsi  enzim  dan transporter  membran.  Kerusakan  membran pada  sel  sperma  tidak  hanya  terjadi  pada bagian  ekor  saja,  melainkan  kerusakan membran  dapat  terjadi  pada  bagian mitokondria.  Membran  pada  mitokondria mengandung  kompleks  protein  rantai respirasi,  adenosin  trifosfat  (ATP)  sintase dan  transporter  membran.  Kandungan  lain yang  terdapat  pada  membran  mitokondria yaitu kanal ion v oltage dependent selective anion  channel (VDAC)  yang  berfungsi mengatur  keluar  masuk  ion-ion  dan  ATP dari mitokondria. Kerusakan pada membran mitokondria  dapat  menghambat  kerja protein transpor (porin), ion dan enzim lain karena  terganggunya  sifat  permeabel selektif pada membran yang mengakibatkan sebagian  molekul  bebas  keluar  masuk kedalam sel. Perubahan struktur dan fungsi pada  mitokondria  tentu  dapat  menggangu inisiasi  motilitas  sperma  (Asmarinah, 2010).
Tabel 2. Motilitas Spermatozoa Y dan X setelah sexing dengan medium dan masa inkubasi yang berbeda Perlakuan P1 P2 P3 P4 P5 P6 Lapisan X 72,0 ±2,7 a 64,0±4,1 b 57,0±4,4 c 70,4±3,6 a 63,0±2,7 b 57,0±5,7 c Lapisan Y 72,0±2,7 a 67,0±2,7 ab 57,0±2,7 c 71,0±4,1 a 63,0±2,7 b 58,0±5,7 c
Keterangan :
P1 = Perlakuan medium BSA dengan lama inkubasi 40 menit P2 = Perlakuan medium BSA dengan lama inkubasi 50 menit P3 = Perlakuan medium BSA dengan lama inkubasi 60 menit P4 = Perlakuan medium SpermGrad dengan lama inkubasi 40 menit P5 = Perlakuan medium SpermGrad dengan lama inkubasi 50 menit P6 = Perlakuan medium SpermGrad dengan lama inkubasi 60 menit

## Persentase  Abnormalitas  Spermatozoa Setelah Sexing
Abnormalitas  spermatozoa  dapat diindentifikasi  sebagai  karakteristik  yang digunakan  untuk  memprediksi  kemampuan fertilisasi  dari  spermatozoa,  sehingga abnormalitas  spermatozoa  selama  proses sexing merupakan  penilaian  penting. Persentase abnormalitas
spermatozoa setelah sexing pada  penelitian  ini  dapat dilihat pada Tabel 3.
Rataan  persentase  abnormalitas spermatozoa kambing Boer pada lapisan X sama  dengan  persentase  abnormalitas semen  segar  dan  tidak  terdapat  perbedaan yang  nyata  pada  setiap  perlakuan,  namun pada  lapisan  Y  persentase  abnormalitas menurun  setelah  pemisahan  menggunakan medium  BSA  dan  SG  dengan  lama  waktu inkubasi  40,  50,  dan  60  menit.  Penurunan persentase pada lapisan Y diakibatkan oleh kemampuan  gerak  spermatozoa  abnormal yang  tidak  dapat  menembus  lapisan  bawah karena  pengaruh  viskositas  yang  lebih ketal, sehingga spermatozoa abnormal lebih sedikit  ditemukan  pada  lapisan  bawah. Penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  adanya perbedaan  yang  nyata  (P ˃ 0,05)  terhadap abnormalitas  spermatozoa  setelah sexing . Persentase abnormalitas yang menggunakan medium BSA dengan lama inkubasi 40, 50, dan  60  menit  berbeda  nyata  (P>0,05) dengan  perlakuan  yang  menggunakan  SG dengan  lama  inkubasi  60  menit,  tapi  tidak berbeda  nyata  dengan  medium  SG  dengan lama inkubasi 40 dan 50 menit.
Abnormalitas spermatozoa penelitian  ini  terendah  terdapat  pada perlakuan  medium  BSA  dengan  lama inkubasi  60  menit  (rataan  2,9±1,0%),  yang tertinggi  berada  pada  perlakuan  dengan medium  SG  yang  diinkubasi  selama  60 menit  dengan  hasil  rataan  5,4±1,2%.  Nilai tersebut hampir sama dengan rataan sebesar 3,46 ± 1,03% pada lapisan Y (Rasad et al.,
2016). Setelah perlakuan sexing menggunakan medium BSA dan SG terjadi penurunan angka abnormalitas spermatozoa. Menurunnya persentase abnormalitas  spermatozoa  setelah  proses sexing dengan  medium  BSA  dan  SG  pada lapisan  Y sangat  wajar  terjadi  karena spermatozoa  yang  abnormal  tidak  mampu berenang  ke  bagian  lapisan  dengan konsentrasi yang lebih tinggi. Spermatozoa tersebut  sudah  terpisah  dari  spermatozoa immotil  dengan  abnormal  (teraglutinasi). Sementara  itu,  terdapatnya  spermatozoa abnormal  pada  semen  pasca sexing ,  ini disinyalir  bukan  spermatozoa  abnormal pada  semen  segar,  tetapi  melainkan abnormalitas  yang  terbentuk  kemudian akibat  dari  adanya  benturan-benturan  pada dinding  tabung  pada  saat  proses  separasi sehingga  merusak  morfologi  spermatozoa. Oxidative  stress menjadi  salah  satu implikasi  yang  paling  penting,  karena abnormalitas  spermatozoa  terjadi  melalui induksi  peroksidasi  lemak.  Telah  diketahui pula  bahwa reaction  oxydative  species (ROS)  mungkin  yang  bertanggung  jawab untuk  peroksidasi  lemak  pada  membrane
Tabel 3. Abnormalitas Spermatozoa Y dan X setelah Sexing dengan medium dan masa inkubasi yang berbeda Perlakuan P1 P2 P3 P4 P5 P6 Lapisan X 8,5±0,9 a 8,3±3,1 a 6,3±1,3 a 7,4±2,1 a 8,0±1,2 a 6,0±1,0 a Lapisan Y 3,2±1,0 b 3,6±1,8 b 2,9±1,0 b 3,8±0,6 ab 4,1±1,3 ab 5,4±1,2 a Keterangan :
P1 = Perlakuan medium BSA dengan lama inkubasi 40 menit P2 = Perlakuan medium BSA dengan lama inkubasi 50 menit P3 = Perlakuan medium BSA dengan lama inkubasi 60 menit P4 = Perlakuan medium SpermGrad dengan lama inkubasi 40 menit P5 = Perlakuan medium SpermGrad dengan lama inkubasi 50 menit P6 = Perlakuan medium SpermGrad dengan lama inkubasi 60 menit
plasma,  karena  terjadi  perubahan  dalam permeabilitas,  ketidakaktifan  enzim,  dan bahkan  kematian  sel.  Spermatozoa  di bawah  kondisi  aerobik  sangat  sensitif terhadap  bahaya  oksidatif  karena  tingginya kandungan  asam  lemak  tak  jenuh  dan rendahnya  secara  relatif  level  enzim antioksidan (Guamares et al., 2014).
Namun demikian
persentase abnormalitas  spermatozoa  pada  penelitian masih berada dalam kisaran normal. Semen yang  berkualitas  baik  memiliki  5-15% spermatozoa  abnormal  (Campbell et  al., 2003). Dilihat dari semua perlakuan P1, P2, P3,  P4,  P5  dan  P6  meununjukkan persentase  abnormalitas  yang  tergolong baik  di  bawah  20%,  namun  terbaik diperoleh  pada  perlakuan  P6  lapisan  atas dan P3 lapisan bawah.

## Kesimpulan
Hasil  penelitian  dapat  disimpulkan bahwa  kualitas  spermatozoa  kambing  Boer tidak  terdapat  perbedaan  yang  nyata  antara medium  BSA  dan  SG.  Lama  waktu inkubasi  berpengaruh  terhadap  penurunan angka  motilitas  pada  lapisan  atas  dan bawah  (X  dan  Y)  menggunakan  ke  dua medium  tersebut.  Lama  waktu  inkubasi berpengaruh  nyata  terhadap  penurunan motilitas  menggunakan  ke  dua  medium tersebut,  dan  hanya  berpengaruh  nyata terhadap  peningkatan  angka  abnormalitas lapisan  atas  menggunakan  ke  dua  medium. Waktu  inkubasi  50  menit  adalah  waktu yang  optimum  untuk  mempertahankan kualitas semen.

## Ucapan Terima Kasih
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada  Bapak  Kepala  Loka  Penelitian Kambing  Potong,  Bapak  Kikin,  Rian Rosartio,  Alfian  Destomo,  Ibu  Fera Mahmilia,  Annisa  Yusrina,  Arie  Febre Tresiana,  Alwiyah  dan  rekan-rekan  di Laboratorium  Molekuler  dan  Reproduksi Loka Penelitian Kambing Potong Sei putih yang telah membantu pelaksanaan penelitian ini.

## Daftar Pustaka
Afiati., F. (2004). Proporsi dan karakteristik spermatozoa  x  dan  y  hasil  separasi kolom  albumin. Media  Peternakan.
27 (1) :16-20.
Agustian,  M.F.,  Ihsan,  M.N.,  and  Isnaini,
N.  (2014).  Pengaruh  lama  simpan semen dengan pengencer tris
aminomethan  kuning  telur  pada  suhu ruang  terhadap  kualitas  spermatozoa kambing  boer. J.  Ternak  Tropika. 1 5 ( 2): 1-6,
Asmarinah.  (2010).  Peran  molekul  kanal ion  pada  fungsi  spermatozoa. Maj Kedokteran Indonesia , 60 (8).
Campbell,  J.R.,  Campbell,  K.L.,  and Kenealy,  M.D.  (2003).  Artificial insemination. In:  Anim.  Sci. 46  Ed.
Mc Graw-Hill. New York. Dasrul, Yaman, M., A., and Zulfan. (2013). Pemisahan spermatozoa berkromosom x dan y kambing boer dan aplikasinya melalui  inseminasi  buatan  untuk mendapatkan  jenis  kelamin  anak sesuai harapan. Jurnal Agripet 13 (1). Else,  P.  L.,  and  Kraffe,  E.  (2015). Docosahexaenoic  and  arachidonic acid  peroxidation:  it's  a  within molecule  cascade. Biochimica  et Biophysica Acta 1848: 417–421 Evans  and  Maxwell.  (1987).  Membran structure and function. Oxford
University.  Oxford : IRL  Press. 11  – 28.
Guamares, A. C. G., Leivas, F. G., Santos,
F. W., Schwenger, E.B., Giotto, A. B.,
Machado, C., I.U., Goncalves,
C.G.M.,  Folichini,  N.  P.,  and  Brum, D. S. (2014). Reduction of centrifugation  force  in  discontinuous percoll  gradientt  increasesin  in  vitro fertilization  rates  without  reducing bovine  sperm  recovery. Journal Animal Science 146: 103-110. Hafez, E.S.E. (2008). Reproduction in farm animal 7th edition . Blackwell
Publishing.  Kiawah  Island,  South
Carolina, USA: 4- 14. Hastono,  Sutama,  I.K.,  Situmorang,  P., Budiarsana,  I.  G.  M.,  Kostaman,  T., Adiati, U., Hidayat, C., and Mulyawan,  M.  (2002).  Pengaruh intensitas  ejakulasi  terhadap  kualitas
semen  kambing  peranakan  Etawah dan  Boer. Kumpulan  hasil-hasil penelitian  APBN  Tahun  Anggaran 2001. Balai  Penelitian  Ternak  Ciawi, Bogor. hlm. 181 – 190. Kaiin,  E.  M.,  Gunawan,  M.,  Octaviana,  S., and Nuswantara, S. (2017). Verifikasi molekuler  metode  sexing  sperma  sapi dengan  kolom  BSA  (Bovine  Serum Albumin). pros  sem  nas  masy  biodiv indon.  Volume  3  Nomor  2 .  Halaman: 241-245. publication/318319013 Verifikasi  molekuler  metode  sexing sperma  sapi  dengan  kolom  BSA (Bovine Serum Albumin) Kartasudjana, R. (2001). Teknik Inseminasi Buatan  pada  Ternak .  Departemen Pendidikan Nasional. Jakarta.
Kostaman,    T.,    Martawidjaja,  M., Herdiawan,  I.,  and  Sutama,  I.K. (2004).  Hubungan  antara  lingkar skrotum  dengan  bobot  badan,  volume semen,  motilitas       progresif       dan konsentrasi  spermatozoa      pada kambing      jantan      muda. Prosiding
Seminar          Nasional          Teknologi Peternakan    dan    Veteriner. Pusat Penelitian dan Pengembangan Peternakan. Bogor.
Lestari, T.P.S., Ihsan, M.N., and Isnaini, N.
(2014).  Pengaruh  waktu  simpan semen  segar  dengan  pengencer andromed  pada  suhu  ruang  terhadap kualitas  semen  kambing  boer. J. Ternak  Tropika  Vol.  15,  No.1 :  43-50. https://ternaktropika.ub.ac.id/index.ph p/tropika/ article/download/196/194
Mahmilia,  F.,  Doloksaribu,  M.,  and Pamungkas, F.A. (2006). Karakteristik semen  kambing  Boer. Seminar Nasional  Peternakan  dan  Veteriner . 533- 536.
Pamungkas, F.A, Mahmilia, F., and Elieser, S.  (2008).  Perbandingan  karakteristik semen  kambing  Boer  dengan  kacang. Seminar Nasional Teknologi Peternakan  dan  Veteriner. Loka Penelitian Kambing Potong. Galang
Parera,  F.Z.,  Prihatiny,  D.F.,  Souhoka,  and Rizal,  M.  (2009).  Pemanfaatan  sari wortel  sebagai  pengencer  alternatif spermatozoa  epididimis  sapi  Bali. J. Indon.Trop.Anim. Agric . 34(1): 50-56.
Partodihardjo,  S.  (1980). Ilmu  Reproduksi Hewan. Penerbit Mutiara, Jakarta.
Rasad,  S.D.,  Setiawan,  R.,  Solihati,  S.,
Widyastuti,  R.,  and  Nugraha,  I.
(2016). Derajat pemulihan dan persentase  spermatozoa  x  dan  y kambing  peranakan  etawah  setelah separasi  dengan  gradient  percoll. Jurnal Veteriner. Vol. 20 No. 1 : 14 – 19 Solihati,  N.,  Rasad,  S.D.,  Yusrina,  A.,  and Dimyati,  D.I.  (2017).  Identifikasi morfometrik  sperma  domba  lokal sebagai  dasar  aplikasi  sexing  sperma. Jurnal ilmu ternak, volume 17, No. 2, 112 – 116. http://jurnal.unpad.ac.id/jurnalilmuter nak/article/view/15138/8454
Sunarti,  Saili,  T.,  and  Nafiu,  L.  O.  2016. Karakteristik  spermatozoa  sapi  bali setelah  sexing  menggunakan  metode kolom  albumin  dengan  lama  waktu sexing  yang  berbeda. Jitro .  3  (1)  pp 65-76 Susilawati,  T.  (2013). Pedoman  inseminasi buatan  pada  ternak .  Universitas Brawijaya. UB Press.
Susilawati,  T.,  Sumitro,  S.B.,  and  Sutanto, H.  (1997).  Upaya  pembekuan  semen sapi  hasil  sexing  serta  penerapannya dalam  inseminasi  buatan  pada  sapi untuk  mendapatkan  pedet  dengan jenis kelamin sesuai harapan. Laporan Akhir  Penelitian  Riset  Unggulan Terpadu . Universitas Brawijaya.
Malang: 17-21.
Suyadi,  Susilawati,  T.,  and  Isnaini,  N. (2004).  Uji  Coba  Produksi  Semen Beku Kambing Boer. Laporan Penelitian. Fakultas  Peternakan.  UB.
Malang.
Tambing, S. N., Toelihere, M. R., Yusuf, T. L., and Sutama, I. K. (2001). Kualitas semen  beku  kambing  peranakan etawah setelah ekuilibrasi. Jurnal Ilmu Hayati 8: pp 70-75.
Tambing, S. N., Toelihere, M. R., Yusuf, T. L.,  Purwantara  and  Sutama,  I.  K. (2003). Kualitas semen beku kambing saanen pada berbagai jenis pengencer. Hayati 10:146-150.
Toelihere. (1993). Inseminasi Buatan Pada Ternak . Bandung: Angkasa. Yusuf,  T.  L.,    Arifiantini,  R.  I.,  and Mulyadi, Y. (2006). Efektifitas waktu pemaparan  gliserol  terhadap  motilitas spermatozoa  pada  pembekuan  semen domba  lokal  menggunakan  pengencer tris  kuning  telur. Animal  Production . 8, (3) pp  168 - 173.