BioEksakta: Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed Volume 5, Nomor 3 (2023): 160-167 E-ISSN: 2714-8564

## Pertumbuhan dan Kandungan Polifenol Selada Merah (Lactuca Sativa L. var. crispa L.) pada Media Tanam dengan Pemberian Asam Humat
Khoerunnisa, Elly Proklamasiningsih * , Iman Budisantoso
Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman, Jl. dr. Suparno 63 Purwokerto 53122 *Correspondent email : elly.proklamasiningsih@unsoed.ac.id
Rekam Jejak Artikel:
Diterima  : 15/08/2022 Disetujui  : 02/09/2023

## Abstract
Flavonoids  are  secondary  metabolites  that  have  15  carbon  atoms  and  are  composed  of  two substituted benzene rings or C6 groups linked by a three-carbon aliphatic chain. One of the plants that contain a lot of this compound is red lettuce ( Latuca sativa var. crispa L.). The flavonoids found in red lettuce have the potential as antioxidants, anticancer, antitumor, anti-inflammatory, and antiviral properties. These various benefits make increasing the levels of flavonoids in red lettuce necessary. Increasing levels of secondary metabolites in plants can be done by increasing plant biomass. Plant biomass can be increased by adding humic acid to the growing media. The aims of this research were to determine the effect of humic acid on the growth and flavonoid content of red lettuce, and to determine the concentration of humic acid that could increase the growth and flavonoid content of red lettuce. This research was carried out using an experimental method  with  a  completely  randomized  design  (CRD).  The  treatment  used  was  humic  acid concentration which consisted of 4 levels, namely 0 g.kg -1 , 4 g.kg -1 , 8 g.kg -1 , and 12 g.kg -1 soil with five replications. Parameters observed were wet weight, dry weight, plant height, and leaf flavonoid  content.  The  research  was  carried  out  at  the  greenhouse  and  Plant  Physiology Laboratory,  Faculty  of  Biology,  Jenderal  Soedirman  University  from  November  2021  to February  2022.  The  data  obtained  were  analyzed using  the  ANOVA  test  with  an  of 0,05  and 0,01, with Duncan's further test at a error rate of 0,05. The results showed that the administration of humic acid could increase the wet weight, dry weight, plant height, and flavonoid content in red lettuce. The concentration of humic acid 7,22 g.kg -1 is an effective concentration to increase the growth and flavonoid content of red lettuce.
Key Words : flavonoids, humic acid, red lettuce

## Abstrak
Flavonoid merupakan senyawa metabolit sekunder yang memiliki 15 atom karbon dan tersusun atas dua cincin benzena tersubstitusi yang dihubungkan oleh rantai alifatik tiga karbon. Salah satu tanaman yang banyak mengandung senyawa ini yaitu selada merah ( Latuca sativa var. crispa L). Flavonoid yang terdapat pada selada merah berpotensi sebagai antioksidan, antikanker, antitumor, antiinflamasi,  dan  antivirus.  Berbagai  manfaat  tersebut  menyebabkan  upaya  peningkatan  kadar flavonoid pada selada merah perlu dilakukan. Peningkatan kadar metabolit sekunder pada tanaman dapat dilakukan dengan meningkatkan biomassa tanaman. Biomassa tanaman dapat ditingkatkan dengan  penambahan  asam  humat  pada  media  tanam.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui pengaruh asam humat terhadap pertumbuhan dan kandungan flavonoid selada merah, serta menentukan konsentrasi asam humat yang dapat meningkatkan pertumbuhan dan kandungan flavonoid  selada  merah.  Penelitian  ini  dilaksanakan  dengan  metode  eksperimental  dengan Rancangan Acak Lengkap (RAL). Perlakuan yang digunakan adalah konsentrasi asam humat yang terdiri atas 4 taraf yaitu 0 g.kg -1 , 4 g.kg -1 , 8 g.kg -1 , dan 12 g.kg -1 tanah dengan lima kali ulangan. Parameter  yang  diamati  adalah  bobot  basah, bobot kering,  tinggi tanaman,  dan  kadar  flavonoid daun.  Penelitian  dilaksanakan  di greenhouse dan  Laboratorium  Fisiologi  Tumbuhan,  Fakultas Biologi  Universitas  Jenderal  Soedirman  dari  November  2021  sampai  Februari 2022.  Data  yang diperoleh dianalisis menggunakan uji ANOVA dengan tingkat kesalahan 0,05 dan 0,01, dengan uji lanjut Duncan pada tingkat kesalahan 0,05. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian asam humat dapat meningkatkan bobot basah, bobot kering, tinggi tanaman, serta kandungan flavonoid pada tanaman selada merah. Konsentrasi asam humat 7,22 g.kg -1 merupakan konsentrasi efektif untuk meningkatkan pertumbuhan dan kandungan flavonoid selada merah.
Kata kunci: asam humat, flavonoid, selada merah

## PENDAHULUAN
Flavonoid  merupakan  senyawa  metabolit sekunder yang memiliki 15 atom karbon dan tersusun atas  dua  cincin  benzena  tersubstitusi  yang dihubungkan  oleh  rantai  alifatik  tiga  karbon. Senyawa  ini  bersifat  polar  dan  mudah  larut  dalam berbagai  macam  pelarut  seperti  etanol,  metanol,
aseton,  butanol,  dimetilformamida  dan  lain-lain. Biosintesis  flavonoid  terjadi  melalui  dua  jalur  yaitu jalur  sikimat  dan  jalur  asetat-malonat  (Markham, 1988). Berdasarkan sifat-sifat strukturalnya, flavonoid  terbagi  atas  beberapa  subkelas  yaitu flavanol,  flavanon,  flavon,  isoflavon,  antosianidin, dan flavonol. Flavonoid dapat ditemukan secara luas
pada semua tumbuhan hijau dan berkontribusi dalam memproduksi pigmen berwarna merah, biru, kuning, dan  ungu  dari  daun,  buah,  dan  bunga  (Arifin  & Ibrahim, 2018).
Salah  satu  tanaman  yang  banyak  mengandung flavonoid  yaitu  selada  merah ( Latuca  sativa var. crispa  L.)  (Sawatdee et  al .,  2021).  Selada  merah merupakan  tanaman  yang  memiliki  daun  berwarna merah dengan tepi daun bergerigi. Tanaman ini dapat tumbuh  optimal  pada  dataran  rendah  atau  dataran tinggi  dengan  suhu  berkisar  antara  25ºC  -  30ºC (Purwaningsih,  2020;  Ria et  al. ,  2021).  Menurut Purwaningsih  (2020),  dalam  100  g  selada  merah terkandung karbohidrat 2,90 g, lemak 0,20 g, protein 1,20  g,  fosfor  25  mg,  Fe  0,50  mg,  kalsium  22  mg, serta  berbagai  vitamin  seperti  vitamin  A  162  mg, vitamin B 0,04 mg, dan vitamin C 8 mg. Arabbi et al. (2004) menyatakan bahwa selain nutrisi yang tinggi, kandungan  flavonoid  pada  selada  merah  diketahui lebih  tinggi  dibandingkan  sayuran  lain  seperti bawang, selada hijau, dan cabai
Senyawa flavonoid pada selada merah berpotensi sebagai antioksidan yang kuat (Rohmah et al. ,  2019).  Antioksidan  merupakan  senyawa  yang berperan  dalam  penghambatan  reaksi  oksidasi dengan  cara  mengikat  radikal  bebas  melalui pendonoran  atom  hidrogen  dari  gugus  hidroksil flavonoid (Adianti et al. , 2019; Winahyu et al. , 2019). Senyawa  ini  dapat  mencegah  terjadinya  stress oksidatif  dan  mengurangi  risiko  penyakit  kronis seperti  jantung  koroner  (Febriyanto  &  Septiyani, 2019).  Flavonoid    memiliki  aktivitas  antikanker dengan  cara  menginduksi  terjadinya  apoptosis  atau kematian terprogram pada sel (Rohmah et al. , 2019). Selain sebagai antikanker, flavonoid juga bermanfaat sebagai senyawa antiinflamasi (Zekkori et al., 2018), antitumor dan antivirus (Aziz et al. , 2020). Berbagai manfaat  tersebut  menyebabkan  upaya  peningkatan kadar flavonoid pada selada merah perlu dilakukan.
Peningkatan  kadar  metabolit  sekunder  pada tanaman  dapat  diupayakan  dengan  melakukan peningkatan  biomassa  tanaman.  Biomassa  tanaman dapat  meningkat  seiring  dengan  meningkatnya pertumbuhan  tanaman  (Proklamasiningsih et  al. , 2019). Berdasarkan penelitian Idha & Herlina (2018), penambahan  pupuk  NPK  konsentrasi  3  g  dapat meningkatkan pertumbuhan selada merah. Ria et al. (2021)  juga  menyatakan  bahwa  penambahan  pupuk cair  nasi  basi  konsentrasi  50  mL  menghasilkan pertumbuhan tanaman selada merah yang lebih baik dibanding  kontrol.  Berbagai  penelitian  tersebut menunjukkan  bahwa  penambahan  hara  perlu dilakukan untuk meningkatkan pertumbuhan tanaman.
Asam humat adalah makromolekul polielektrolit yang memiliki gugus fungsional seperti –COOH, –OH alkoholat, maupun –OH fenolat, yang dapat  meningkatkan  kemampuan  pertukaran  ion (Proklamasiningsih et al. , 2019).  Asam humat ialah substansi  koloid polidispersi yang  bersifat  ampifilik
dan memiliki pH asam (Rahmandhias & Rachmawati, 2020). Penambahan asam humat dapat memperbaiki kualitas media tanam dan meningkatkan  ketersedian  nutrisi  untuk  tanaman sehingga  meningkatkan  pertumbuhan  tanaman (Akladious & Mohamed, 2018; Al-Taey et al. , 2019). Penggunaan asam humat juga mampu meningkatkan biosintesis  senyawa  metabolit  sekunder  pada tanaman seperti polifenol, antosianin, dan flavonoid (Proklamasiningsih et al. , 2019; Riyandi et al., 2020). Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengetahui pengaruh asam  humat  terhadap  pertumbuhan  dan  kandungan flavonoid selada merah, serta menentukan konsentrasi  asam  humat  yang  dapat  meningkatkan pertumbuhan

## MATERI DAN METODE
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini antara lain selada merah ( Lactuca sativa var. crispa L.)  yang  diperoleh  dari  toko  pertanian  di  kota Purwokerto,  tanah,  asam  humat,  etanol  96%, akuades,  standar  quersetin,  aluminium  klorida (AlCl 3 ),  dan  kalium  asetat  (CH 3 COOK),  sedangkan alat yang digunakan yaitu spektrofotometer UV-vis.
Metode yang digunakan yaitu metode eksperimental dengan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  dengan  4 taraf konsentrasi asam humat yaitu 0 g.kg -1 , 4 g.kg -1 ,8 g.kg -1 , dan 12 g.kg -1 tanah dengan masing-masing 5 kali  ulangan  (Adianti et  al. ,  2019).  Parameter  yang diamati  adalah  bobot  basah,  bobot  kering,  tinggi tanaman,  dan  kadar  flavonoid  daun.  Penelitian dilakukan di greenhouse dan Laboratorium Fisiologi Tumbuhan  Fakultas  Biologi,  Universitas  Jenderal Soedirman selama 4 bulan dari bulan November 2021 sampai dengan Februari 2022.
Persiapan media dan penanaman bibit mengacu pada Adianti et al. (2019), bibit yang telah memiliki empat  helai  daun  ditanam  pada  media  tanah  yang dicampur dengan asam humat. Pengamatan parameter  pertumbuhan  mengacu  pada  Novriani (2014),  pengukuran  bobot  basah  dilakukan  dengan menimbang seluruh bagian tanaman secara langsung setelah  pemanenan  (35  HST).  Pengukuran  bobot kering dilakukan dengan menimbang seluruh bagian tanaman  yang  sebelumnya  dioven  terlebih  dahulu pada  suhu  70ºC  hingga  mencapai  bobot  konstan. Pengamatan  parameter  tinggi  tanaman  dilakukan dengan  meletakkan  tanaman  yang  sudah  dipanen pada kertas milimeter block .
Pengukuran  kandungan  flavonoid  dimulai dengan  ekstraksi.  Proses  ekstrasi  mengacu  pada Febriyanto & Septiyani (2019) yaitu dengan metode maserasi  pelarut  etanol  96%.  Sampel  berupa  daun pada  masing-masing  perlakuan  direndam  dengan pelarut  etanol  96%  hingga  terendam  seluruhnya selama 3x24 jam. Filtrat yang didapatkan kemudian disaring dengan kertas saring dan dipekatkan dengan rotary  evaporator hingga  diperoleh  ekstrak  daun selada  merah.  Penetapan  kadar  flavonoid  total dilakukan  dengan  menggunakan  quersetin  sebagai
standar  yang  mengacu  pada  Stankovic  (2011). Sebanyak 10 mg quersetin ditimbang dan dilarutkan dalam  pelarut  etanol  96%  sampai  100 mL  sehingga diperoleh larutan quersetin 100 ppm. Larutan standar quersetin  dengan  konsentrasi  2,  4,  6,  8  dan  10 ppm dibuat dengan cara melarutkan 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 dan 1  mL  larutan  stok  dan  ditambahkan  etanol  96% sampai  volume  10  mL.  Dari  masing  masing konsentrasi larutan standar quersetin ditambahkan 1 mL  AlCl 3 dan  1  mL  kalium  asetat  2%.  Setelah  itu diinkubasi selama 1 jam pada suhu kamar dan diukur absorbansinya  pada  panjang  gelombang  435  nm. Langkah selanjutnya adalah membuat kurva kalibrasi atau  kurva  hubungan  antar  konsentrasi  quersetin dengan absorbansi.
Penetapan kandungan flavonoid total mengacu pada  Stankovic  (2011),  dimulai  dengan  melarutkan 15 mg ekstrak sampel dalam 10 mL etanol 96%. Dari larutan tersebut dipipet 1 mL kemudian ditambahkan 1  mL  larutan  AlCl 3 dan  1  mL  kalium  asetat  2%. Selanjutnya,  larutan  diinkubasi  pada  suhu  kamar selama  1  jam  dan  diukur  absorbansinya  pada spektrofotometer 435 nm.  Kemudian, kadar flavonoid  ditetapkan  berdasarkan  persamaan  regresi larutan standar yang telah dibuat.
Data  yang  diperoleh  dianalisis  menggunakan analisis sidik ragam (ANOVA) pada taraf uji 0,05 dan 0.01 yang dilanjutkan dengan uji lanjut Duncan pada taraf uji 0,05.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tabel  1.  menunjukkan  bahwa  hasil  analisis ragam  pemberian  asam  humat  terhadap  tanaman selada  merah  berpengaruh  sangat  nyata  terhadap bobot  basah,  tinggi  tanaman,  dan  kandungan flavonoid,  serta  berpengaruh  nyata  terhadap  bobot kering. Peningkatan bobot basah, bobot kering, tinggi tanaman, dan kandungan flavonoid tersebut disebabkan karena asam humat mampu meningkatkan  ketersediaan  hara  bagi  tanaman sehingga  laju  fotosintesis  tanaman  meningkat. Peningkatan laju fotosintesis menyebabkan fotosintat yang dihasilkan semakin banyak sehingga pertumbuhan tanaman semakin optimal yang ditandai dengan peningkatan  bobot  kering,  bobot  basah,  dan tinggi  tanaman.  Hasil  tersebut  sejalan  dengan penelitian  Riyandi et  al., (2020),  pemberian  asam humat dengan konsentrasi tepat dapat meningkatkan bobot  basah  dan  bobot  kering  tanaman  binahong dengan cara meningkatkan penyerapan hara.
Tabel  1. Analisis  Ragam  Pengaruh  Pemberian  Asam Humat  terhadap  Pertumbuhan  dan  Kandungan  Flavonoid Selada Merah No. Parameter F Hitung Sig. 1. Bobot basah 5,630 0,008** 2. Bobot Kering 4,096 0,025* 3. Tinggi Tanaman 5,751 0,007** 4. Kandungan Flavonoid 13,785 0,001** Keterangan: * berpengaruh nyata pada taraf uji 0,05
** berpengaruh sangat nyata pada taraf uji 0,01
Bobot  basah  dan  bobot  kering  menunjukkan kemampuan  tanaman  dalam  menimbun  hasil asimilasi  meliputi  karbohidrat,  lemak,  protein,  dan nutrisi  (Apzani et  al., 2017).  Penimbunan  asimilat tanaman  sangat  dipengaruhi  oleh  penyerapan  hara dan laju fotosintesis tanaman. Abdellatif et al. (2017); Neoriky et al. (2017) menyatakan bahwa asam humat berperan dalam menstimulasi pertumbuhan akar serta meningkatkan penyerapan hara sehingga berpengaruh  besar  terhadap  hasil  fotosintesis  dan transfer fotosintat tumbuhan. Nikbakht et al . (2008) lebih  lanjut  melaporkan  bahwa  pemberian  asam humat  sampai  dengan  konsentrasi  100  mg/L  dapat meningkatkan penyerapan makronutrien (Ca, Mg, N, P,  dan  K),  serta  mikronutrien  (Cu,  Fe,  dan  Zn)  ke dalam organ fotosintesis.
Penyerapan  unsur  hara  yang  optimal  akan berpengaruh  pada  ketersediaan  hara.  Pertumbuhan tanaman  akan  terpacu  secara  optimal  apabila  hara makro  dan  mikro  tersedia  secara  cukup  dan  sesuai (Mas’ud,  2009).  Makronutrien  merupakan  unsur yang unsur yang banyak dibutuhkan oleh tumbuhan. Nitrogen (N) diperlukan untuk merangsang pertumbuhan  vegetatif  tanaman  serta  merupakan komponen  penyusun  protein  dan  pembentuk  daun. Unsur fosfor (P) berperan sebagai penyusun protein. Magnesium  (Mg)  memiliki  peran  penting  dalam pembentukkan  klorofil  dan  komponen  organik tumbuhan  (Jones,  2012).  Sedangkan  Kalium  (K) dibutuhkan untuk pembentukan sel dan meningkatkan  laju  fotosintesis  (Tadayyon et  al., 2017).  Ketersediaan  unsur  Mg,  N,  P,  dan  K  yang cukup  karena  pemberian  asam  humat  dapat meningkatkan  produksi  protein  dan  klorofil  serta pembentukan daun yang berimbas pada peningkatan laju fotosintesis tanaman (Riyandi et al., 2020). Laju fotosintesis  yang  meningkat  akan  menyebabkan fotosintat mengalami peningkatan sehingga menghasilkan bobot basah, bobot kering, serta tinggi tanaman yang semakin besar (Asifah et al., 2019).
Tabel 2. Hasil  Uji  Lanjut  DMRT  Pengaruh  Pemberian  Asam  Humat  terhadap Pertumbuhan dan Kandungan Flavonoid No. Perlakuan Bobot basah (g) Bobot kering (g) Tinggi tanaman (cm) Kandungan Flavonoid (x10 2 mg/g) 1.
AH 0 (0 g.kg -1 ) 20,17a±6,69a 1,44a±0,38a 24,52a±3,40a 1,59a±3,03a 2. AH 1 (4 g.kg -1 ) 27,46b±1,05b 1,90bc±0,80bc 28,38bc±1,77bc 3,01b±5,51b 3. AH 2 (8 g.kg -1 ) 28,48b±2,89b 1,95c±0,12c 31,62c±1,86c 3,97c±1,05c 4. AH 3 (12 g.kg -1 ) 25,19ab±1,66ab 1,55ab±0,32ab 27,2ab±3,46ab 2,26ab±1,57ab
Keterangan : angka yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf uji  0,05 pada kolom yang sama
Berdasarkan hasil uji lanjut DMRT, pemberian asam humat pada media tanam dengan konsentrasi 8 g.kg -1 efektif  meningkatkan  bobot  basah,  bobot kering,  tinggi  tanaman,  dan  kandungan  flavonoid selada merah (Tabel 2.). Hasil tersebut sesuai dengan penelitian  Proklamasiningsih et  al. (2019)  yang menyatakan bahwa pemberian asam humat konsentrasi 8 g.kg -1 dapat meningkatkan pertumbuhan  dan  kandungan  metabolit  sekunder ditandai  dengan  meningkatnya  bobot  basah,  bobot kering, dan kandungan polifenol tanaman katuk. Hal ini  disebabkan  karena  kemampuan  asam  humat dalam meningkatkan ketersediaan hara dan menginduksi aktivitas hormon tanaman. Ketersediaan hara dan aktivitas hormon yang optimal menyebabkan  pembelahan  sel  semakin  cepat sehingga  berimbas  pada  peningkatan  parameter pertumbuhan  tanaman  seperti  bobot  basah,  bobot kering, dan tinggi tanaman.
Sarno et  al .  (2014)  dalam  penelitiannya melaporkan  bahwa  pemberian  asam  humat  dengan konsentrasi  200 mg/L menghasilkan  tinggi  tanaman tomat  ( Lycopersicum  esculentum )  yang  lebih  besar dibanding tanaman kontrol. Hasil tersebut diperkuat oleh  penelitian  Wahyuningsih et  al. ,  (2017)  yang menunjukkan  bahwa  pemberian  asam  humat konsentrasi  1200  ppm  meningkatkan  bobot  kering dan tinggi tanaman kedelai ( Glycine max ). Penelitian Radite  &  Simanjuntak  (2020)  juga  menunjukkan bahwa bobot segar tajuk,  jumlah daun, dan luas daun tanaman  pakcoy  ( Brassica  rapa L.)  meningkat setelah  diberi  asam  humat  dengan  konsentrasi  800 mL/ha.  Hal  tersebut  dikarenakan  kemampuan  asam humat  dalam  meningkatkankan  pertukaran  ion  dan kapasitas  tukar  kation  (KTK)  tanah  sehingga  dapat meningkatkan  kemampuan  tanah  dalam  pengikatan unsur hara. Pengikatan unsur hara oleh asam humat dapat  menyebabkan  hara  yang  tersedia  semakin tinggi  sehingga  pertumbuhan  akan  semakin  optimal (Radite & Simanjuntak, 2020). Menurut Rahmandhias  &  Rachmawati  (2020);  Sarno et  al. (2014),  peningkatan  ketersediaan  oleh  asam  humat dapat meningkatkan ketersediaan unsur N dan P yang berperan  dalam  pembelahan  dan  pemanjangan  sel. Mora et  al. (2014)  menyatakan  bahwa  selain meningkatkan  ketersediaan  hara,  asam  humat  juga mampu  menginduksi  aktivitas  fitohormon  seperti indole  acetic  acid (IAA)  di  perakaran  tanaman. Elmongy et  al. (2018)  lebih  lanjut  menjelaskan bahwa  pemberian  asam  humat  yang  optimal meningkatkan  biosintesis  auksin  lokal  sehingga mempengaruhi  aktivitas  meristem  apikal  dan  H + - ATPase di akar. Asam humat berperan dalam aktivasi membran  plasma  H + -ATPase  dan  menyebabkan pengasaman  apoplas  oleh  proton  H + .  Hal  tersebut akan merangsang pemanjangan dinding sel.
Hasil  uji  korelasi  menyebutkan  bahwa  antar parameter  pertumbuhan  memiliki  keterkaitan  yang kuat.  Menurut  Arifin  (2017),  apabila  uji  korelasi menunjukkan  nilai  diatas  0,60  dan  kurang  dari  1,
maka antar parameter tersebut reliabel atau memiliki korelasi tinggi. Nilai koefisien korelasi antara bobot basah dan bobot kering tanaman selada merah adalah 0,925633, sehingga dapat dikatakan bahwa semakin tinggi  bobot  basah,  bobot  kering  tanaman  selada merah akan semakin meningkat. Azmi & Handriatni (2019)  mengemukakan  bahwa  bobot  kering  dan bobot basah tanaman memiliki hubungan yang erat. Bobot kering merupakan bahan organik dalam bentuk biomassa hasil berat basah tanaman yang dihilangkan kandungan airnya. Apabila tanaman memiliki bobot basah yang tinggi, maka bobot keringnya juga tinggi. Peningkatan  tinggi  tanaman  akan  diikuti  dengan peningkatan  bobot  basah  dan  bobot  kering,  hal tersebut  ditunjukkan  dengan  nilai  korelasi  yang mencapai  0,953825  dan  0,886569.  Hal  tersebut sejalan  dengan  penelitian  Widiastuti  &  Latifah (2016),  tinggi  tanaman  berkaitan  erat  dengan  bobot basah  dan  bobot  kering  tanaman.  Apabila  tinggi tanaman semakin besar, maka bobot basah dan bobot bobot kering akan semakin besar.
Pada perlakuan asam humat konsentrasi 8 g.kg - 1 menunjukkan peningkatan pertumbuhan (Tabel 2.), sehingga  produk  metabolit  primer  juga  meningkat. Metabolit primer hasil fotosintesis tersebut merupakan  senyawa  awal  dalam  pembentukkan metabolit  sekunder  seperti  flavonoid.  Hal  tersebut diperkuat dengan nilai koefisien korelasi antara bobot basah,  bobot  kering,  dan  tinggi  tanaman  dengan kandungan  flavonoid  yang  mencapai  0,953255, 0,945407,  dan  0,986538.  Berdasarkan  uji  korelasi tersebut,  dapat  dikatakan  bahwa  semakin  tinggi pertumbuhan tanaman, kandungan flavonoid tanaman  selada  merah  akan  semakin  meningkat. Penelitian Proklamasiningsih et al. (2019) menunjukkan  hasil  yang  serupa,  pemberian  asam humat  dengan  konsentrasi  8  g.kg -1 mampu meningkatkan  kadar  polifenol  pada  tanaman  katuk mencapai  63,73  mg/g.  Asam  humat  memiliki kemampuan  dalam  dalam  menyediakan  komponen organik  dan  anorganik  penting  bagi  tanaman. Gholami et  al. ,  (2018)  juga  melaporkan  bahwa tanaman Chicory ( Cichorium intybus L.) yang diberi asam  humat  menghasilkan  kadar  flavonoid  yang lebih tinggi dibanding tanaman kontrol. Peningkatan tersebut disebabkan karena kemampuan asam humat dalam mengoptimalkan biosintesis flavonoid.
Ketersediaan komponen organik dan anorganik bagi tanaman akan menyebabkan produksi metabolit primer  mengalami  peningkatan.  Anggraito et  al.
(2018) menyatakan bahwa metabolit primer merupakan  prekursor  dari  pembentukan  metabolit sekunder yang disintesis melalui jalur asam sikimat, jalur asam mevalonat dan metil eritritol fosfat (MEP), serta  jalur  malonat.  Flavonoid  yang  termasuk  ke dalam  senyawa  fenolik  merupakan  metabolit sekunder  yang  disintesis  melalui  jalur  asam  sikimat melalui kondensasi antara asam fosfoenol piruvat dan eritrosa 4-fosfat membentuk fenilalanin, serta melalui
Gambar 1. Kurva  Persamaan  Regresi  Pemberian  Asam  Humat  terhadap Pertumbuhan dan Kandungan Flavonoid Selada Merah
Keterangan : (a) Berat basah; (b) Berat Kering; (c) Tinggi Tanaman, (d) Kandungan Flavonoid).
jalur  asam  malonat  dengan  asetil-CoA  sebagai starting  material. Menurut  Elmongy et  al., (2018) asam  humat  mampu  meningkatkan  kandungan  IAA dan  GA endogenous pada  tanaman.  Peningkatan hormon  tersebut  akan  meningkatkan  pertumbuhan dan  kandungan  metabolit  primer  pada  tanaman sehingga  menyediakan starting  material dalam biosintesis flavonoid. Apabila starting material yang tersedia  semakin  banyak,  maka  flavonoid  yang dihasilkan juga semakin banyak.
Peningkatan kandungan flavonoid juga dapat disebabkan  karena  peningkatan  aktivitas  enzim phenylalanine  ammonia  lyase (PAL)  oleh  asam humat.  Flavonoid  merupakan  senyawa  metabolit sekunder  yang  melewati  jalur  fenilpropanoid sehingga produksinya sangat bergantung pada enzim PAL (Taufika et al., 2016). Penelitian Olivares et al. (2015)  menunjukkan  bahwa  aplikasi  asam  humat secara foliar dapat  meningkatkan  aktivitas  enzim PAL.  Hernandez et  al., (2015)  juga  melaporkan bahwa  asam  humat  dapat  menginduksi  enzim  PAL yang berperan dalam biosintesis metabolit sekunder. Asam  humat  berperan  sebagai  elisitor  dan  induser untuk aktivitas enzim PAL pada jalur fenilpropanoid.
Gambar  1.  menunjukkan  bahwa  berdasarkan hasil  uji  regresi,  pemberian  asam  humat  optimal pada parameter bobot basah dan bobot kering yaitu
sebesar  7,12  g.kg -1 dan  6,37  g.kg -1 media  dengan nilai  maksimal  masing-masing  mencapai  17,22  g dan  1,98  g,  sedangkan  perlakuan  asam  humat optimal  pada  parameter  tinggi  tanaman  yaitu  7,13 g.kg -1 media dengan nilai maksimal tinggi tanaman mencapai 30,82 cm. Konsentrasi optimal pemberian asam  humat  pada  kandungan  flavonoid  tanaman yaitu  6,75  g.kg -1 media  dengan  nilai  maksimal kandungan  flavonoid  mencapai  371,39  mg/g. Berdasarkan  hasil  tersebut  dapat  dikatakan  bahwa pemberian asam humat dengan konsentrasi melebihi nilai optimal dapat menurunkan bobot basah, bobot kering,    tinggi  tanaman,  dan  kandungan  flavonoid. Asam  humat  dengan  konsentrasi  12  g.kg -1 menghasilkan  pertumbuhan  tanaman  yang  lebih rendah  dibandingkan  dengan  konsentrasi  4  g.kg -1 dan  8  g.kg -1 (Tabel  2.).  Hasil  penelitian Wahyuningsih et al. (2017) menunjukkan hasil yang sejalan, pemberian asam humat dengan konsentrasi pekat  yaitu  melebihi  1200  ppm  menurunkan pertumbuhan  tanaman.  Hal  tersebut  disebabkan karena pemberian asam humat yang melebihi batas optimal.  Menurut  Proklamasiningsih et  al. (2019), semakin  tinggi  konsentrasi  asam  humat  yang diberikan  menyebabkan  ketersediaan  unsur  hara akan semakin tinggi sehingga penyerapan hara oleh tanaman  melebihi  kebutuhan.  Pamuji et  al .  (2018)
y = -0.1653x 2 + 2.3857x + 20.268 R² = 0.9953 titik maks = (7.22, 17.22) 0 5 10 15 20 25 30 35 0 5 10 15 Ber at Ba sa h (g) Konsentrasi Asam Humat (g/kg) y = -0.0134x 2 + 0.1708x + 1.438 R² = 0.9996 titik maks = (6.37, 1.98) 0 0,5 1 1,5 2 2,5 0 5 10 15 Ber at ker ing (g) Konsentrasi Asam Humat (g/kg) y = -0.0981x 2 + 1.3995x + 25.828 R² = 0.89 titik maks = (7.13, 30.82) 0 5 10 15 20 25 30 35 0 5 10 15 Ting gi ta na ma n (cm ) Konsentrasi asam humat (g/kg) y = -4.8906x 2 + 66.113x + 147.95 R² = 0.9221 titik maks = (6.75, 371.39) 0 100 200 300 400 500 0 5 10 15 Fl avo no id (m g/g) Konsentrasi Asam Humat (g/kg) a b c d
menyatakan bahwa kelebihan hara karena konsentrasi  pupuk  yang  terlalu  tinggi  akan menyebabkan  kondisi  toksik  dan  terganggunya fisiologi tanaman sehingga menyebabkan pertumbuhan mengalami penurunan.

## SIMPULAN
Pemberian  asam  humat  dapat  meningkatkan bobot  basah,  bobot  kering,  tinggi  tanaman,  serta kandungan  flavonoid  pada  tanaman  selada  merah. Konsentrasi  asam  humat  7,22  g.kg -1 merupakan konsentrasi efektif untuk meningkatkan pertumbuhan dan kandungan flavonoid selada merah. Berdasarkan hasil penelitian dan hasil uji regresi, pemberian asam humat  dengan  konsentrasi  7,22  g.kg -1 dapat meningkatkan pertumbuhan dan kandungan flavonoid  tanaman  selada  merah.  Hal  ini  dapat menjadi  rekomendasi  dalam  membudidayakan tanaman selada merah agar mendapatkan hasil yang optimal.

## DAFTAR REFERENSI
Abdellatif,  I.  M.  Y.,  Abdel-Ati,  Y.  Y.,  Abdel-
Mageed, Y. T. & Hassan, M. A. M. M., 2017. Effect  of  Humic  Acid  on  Growth  and Productivity  of  Tomato  Plants  under  Heat Stress. Journal  of  Horticultural  Research , 25(2), pp.59–66.
Adianti,  R.,  Proklamasiningsih,  E.  &  Sasongko, N.D.,  2019.  Pertumbuhan  dan  Kandungan Flavonoid  Bayam  Merah  (Alternanthera amoena  Voss)  pada  Media  Tanam  dengan Pemberian Asam Humat dan Urea. BioEksakta :  Jurnal  Ilmiah  Biologi  Unsoed , 1(2), pp. 91-95
Akladious,  S.  A.  &  Mohamed,  H.  I.,  2018. Ameliorative  Effects  of  Calcium  Nitrate  and Humic  Acid  on  The  Growth,  Yield Component  and  Biochemical  Attribute  Of Pepper  ( Capsicum  annuum )  Plants  Grown Under Salt Stress. Scientia Horticulturae , 236, pp.244–250.
Al-Taey, D. K. A., Al-Shareefi, M. J. H., Mijwel, A. K.,  Al-Tawaha,  A.  R.  &  Al-Tawaha,  A.  R., 2019. The Beneficial Effects of Bio-Fertilizers Combinations  and  Humic  Acid  on  Growth, Yield  Parameters  and  Nitrogen  Content  of Broccoli  Grown  Under  Drip  Irrigation System. Bulgarian  Journal  of  Agricultural Science , 25(5), pp.959–966.
Anggraito,  Y.  U.,  Susanti,  R.,  Iswari,  R.  S., Yuniastuti, A., Lisdiana, W. H. N., Habibah, N.  A.  &  Bintari,  S.  H.,  2018. Metabolit Sekunder Dari Tanaman . Semarang: Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam Universitas Negeri Semarang.
Apzani, W., Wardhana, H. A. W. & Arifin, Z., 2017. Efektivitas  Pupuk  Organik  Cair  Eceng Gondok  ( Eichhornia  crassipes )  Fermentasi Trichoderma spp.  terhadap  Pertumbuhan
Selada ( Lactuca sativa L.). Jurnal
Sangkareang, 3(2355), pp. 1-9.
Arabbi, P. R., Genovese, M. I. & Lajolo, F. M., 2004. Flavonoids  in  Vegetable  Foods  Commonly Consumed  in  Brazil  and  Estimated  Ingestion by  the  Brazilian  Population. Journal  of Agricultural  and  Food  Chemistry ,  52(5), pp.1124–1131.
Arifin, B. & Ibrahim, S., 2018. Struktur, Bioaktivitas dan  Antioksidan  Flavonoid. Jurnal  Zarah , 6(1), pp.21–29.
Arifin,  Z.,  2017.  Kriteria  Instrumen  dalam  Suatu Penelitian. Jurnal THEOREMS (The Original Research of Mathematics) , 2(1), pp.28–36.
Asifah,  R.,  Izzati,  M.  &  Prihastanti,  E.,  2019.  The Combination  of Azolla  pinnata R.  Br.  and Rice Husk Ash on the Growth and Production of Rice Plants ( Oryza sativa L. var Inpari 33) in  the  Saline  Soil. Buletin  Anatomi  dan Fisiologi , 4(1), pp.73–81.
Aziz,  I.  R.,  Armita,  D.,  Hajrah,  H.  &  Makmur,  K., 2020. Gen Regulasi Tanaman Lokal Indonesia: Imunomodulator Covid-19.
Teknosains:  Media  Informasi  Sains  Dan Teknologi , 14(2), pp.238–246.
Azmi, R. & Handriatni, A., 2019. Pengaruh Macam Zat  Pengatur  Tumbuh  Alami  terhadap Pertumbuhan  Setek  Beberapa  Klon  Kopi Robusta (C offea canephora ). Biofarm : Jurnal Ilmiah Pertanian , 14(2), pp. 71-81.
Ekawati, R., 2018. Pertumbuhan, Produksi Umbi dan Kandungan Flavonoid Bawang Dayak dengan Pemberian  Pupuk  Daun. Agrosintesa  Jurnal Ilmu Budidaya Pertanian , 1(1), pp.1-9.
Elmongy, M.S., Zhou, H., Cao, Y., Liu, B. & Xia, Y., 2018.  The  Effect  of  Humic  Acid  on Endogenous Hormone Levels and Antioxidant Enzyme Activity During In Vitro Rooting of Evergreen  Azalea. Scientia  Horticulturae , 227, pp.234–243.
Febriyanto,  Y.  &  Septiyani, K.,  2019.  Uji  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Daun  Selada Merah ( Lactuca sativa var. acephala) dengan Menggunakan  1,1-Difenyl-2-Picrylhydrazyl (DPPH). Jurnal  Farmasi  &  Sains  Indonesia , 2(2), pp.36–41.
Gholami, H., Saharkhiz, M. J., Raouf Fard, F., Ghani, A.  &  Nadaf,  F.,  2018.  Humic  Acid  and Vermicompost Increased Bioactive
Components,  Antioxidant  Activity  and  Herb Yield  Of  Chicory  ( Cichorium  intybus L.).
Biocatalysis and Agricultural Biotechnology , 14, pp.286–292.
Hernandez, O. L., Calderín, A., Huelva, R., Martínez-
Balmori,  D.,  Guridi,  F.,  Aguiar,  N.  O., Olivares, F. L. & Canellas, L.P., 2015. Humic Substances  from  Vermicompost  Enhance Urban  Lettuce  Production. Agronomy  for Sustainable Development , 35(1), pp.225–232.
Idha,  M.  E.  &  Herlina,  N.,  2018.  Pengaruh  Macam Media  Tanam  dan  Dosis  Pupuk  NPK Terhadap  Pertumbuhan  dan  Hasil  Tanaman Selada  Merah  ( Lactuca  sativa var.  Crispa). Jurnal Produksi Tanaman , 6(4), pp.398–406.
Mas’ud, H., 2009. Sistem Hidroponik dengan Nutrisi dan  Media  Tanam  Berbeda  Terhadap Pertumbuhan  dan  Hasil  Selada. Media Litbang Sulteng , 2(2), pp.131–136.
Markham,  K.  R.  1988. Cara  Mengidentifikasi Flavonoid. Bandung : Penerbit ITB.
Mora, V., Bacaicoa, E., Baigorri, R., Zamarreño, A. M. & García-Mina, J. M., 2014. NO and IAA Key  Regulators  in  the  Shoot  Growth Promoting Action of Humic Acid in Cucumis sativus L. Journal  of  Plant  Growth Regulation , 33(2), pp.430–439.
Neoriky, R., Lukiwati, D. R. & Kusmiyati, F., 2017. Pengaruh  Pemberian  Pupuk  Anorganik  dan Organik  Diperkaya  N,  P  Organik  terhadap Serapan  Hara  Tanaman  Selada  ( Lactuca sativa .  L). Journal  of  Agro  Complex ,  1(2), p.72-77.
Nikbakht, A., Kafi, M., Babalar, M., Xia, Y. P., Luo, A. & Etemadi, N. A., 2008. Effect of Humic Acid  on  Plant  Growth,  Nutrient  Uptake,  and Postharvest Life of Gerbera. Journal of Plant Nutrition , 31(12), pp.2155–2167.
Novriani,  2014.  Teknik  Budidaya  Selada. Skripsi , 9(2), pp.57–61.
Olivares,  F.  L.,  Aguiar,  N.  O.,  Rosa,  R.  C.  C.  & Canellas, L. P., 2015.
Substrate
Biofortification  in  Combination  with  Foliar Sprays  of  Plant  Growth  Promoting  Bacteria and  Humic  Substances  Boosts  Production  of Organic  Tomatoes. Scientia  Horticulturae , 183(1), pp.100–108.
Pamuji,  A.,  Pratomo,  B.  &  Manurung,  S.,  2018. Pengaruh  Kompos  Limbah  Baglog  Jamur Tiram  dan  Urin  Sapi  yang  Difermentasi terhadap  Pertumbuhan  Bibit  Kelapa  Sawit ( Elaeis  guineensis Jacq.)  di  Pre  Nursery. Agroprimatech , 1(2), pp.44–56.
Proklamasiningsih,  E.,  Budisantoso,  I.  &  Maula,  I., 2019. Pertumbuhan dan Kandungan Polifenol Tanaman  Katuk  ( Sauropus  androgynus (L.)
Merr) pada Media Tanam dengan Pemberian Asam  Humat. Al-Kauniyah:  Jurnal  Biologi , 12(1), pp.96–102.
Purwaningsih,  E.,  2020.  Pengaruh  Kombinasi  Jenis dan Jumlah Sumbu terhadap Pertumbuhan dan Hasil Tanaman Selada Merah ( Lactuca sativa L.  var.  Red  Rapid)  Pada  Hidroponik  Sistem Wick. Jurnal Pertanian Indonesia, 1(1), pp. 1-
6.
Radite,  S.  &  Simanjuntak,  B.,  2020.  Penggunaan Asam  Humat  sebagai  Pelapis  Urea  Terhadap Pertumbuhan  dan  Hasil  Tanaman  Pakcoy ( Brassica  rapa L.). AGRILAND  Jurnal  Ilmu Pertanian , 8(1), pp. 72-78.
Rahmandhias,  D.  T.  &  Rachmawati,  D.,  2020.  The Effect  of  Humic  Acid  on  Productivity  and Nitrogen  Uptake  in  Kangkung  ( Ipomoea reptans Poir.). Jurnal  Ilmu  Pertanian Indonesia , 25(2), pp.318–324.
Ria,  P.,  Noer,  S.  &  Marhento,  G., 2021.  Efektivitas Pemberian Nasi Basi Sebagai Pupuk Organik pada Tanaman Selada Merah ( Lactuca sativa var. crispa). EduBiologia: Biological Science and Education Journal , 1(1), pp.55-61.
Riyandi,  F.,  Proklamasiningsih,  E.  &  Rochmatino,
R.,  2020.  Pengaruh  Pemberian  Asam  Humat pada  Media  Tanam  terhadap  Pertumbuhan dan  Kandungan  Polifenol  Daun  Binahong ( Anredera  cordifolia ). BioEksakta :  Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed , 2(2), pp.243-247.
Rohmah,  J.,  Rini,  C.  S.  &  Wulandari,  F.  E.,  2019. Aktivitas  Sitotoksik  Ekstrak  Selada  Merah ( Lactuca  sativa Var.  Crispa)  pada  Berbagai Pelarut  Ekstraksi. Jurnal  Kimia  Riset ,  4(1), pp.18-32.
Sarno, Saputra, A., Rugayah & Pulung, M. A., 2014. Pengaruh  Pemberian  Asam  Humat  (Berasal dari  Batubara  Muda) dan  Pupuk  N  Terhadap Pertumbuhan  dan  Produksi  Tanaman  Tomat ( Lycopersicum  esculentum Mill). Jurnal Agrotek Tropika , 2(3), p0.192-198.
Sawatdee,  S.,  Prommuak,  C.,  Jarunglumlert,  T., Pavasant, P. & Flood, A. E., 2021. Combined Effects  of  Cations  in  Fertilizer  Solution  on Antioxidant Content in Red Lettuce ( Lactuca sativa L.). Journal of the Science of Food and Agriculture , 101(11), pp.4632–4642.
Stankovic,  M.S.,  2011.  Total  Phenolic  Content,
Flavonoid  Concentration  and  Antioxidant Activity  of  Marrubium  peregrinum  L. extracts. Kragujevac Journal Science , 33 (2011), pp.63-72.
Tadayyon,  A.,  Beheshti,  S.  &  Pessarakli,  M.,  2017. Effects of Sprayed Humic Acid, Iron, and Zinc on
Quantitative
and
Qualitative
Characteristics  of  Niger  Plant  ( Guizotia abyssinica L.). Journal  of  Plant  Nutrition , 40(11), pp.1644–1650.
Taufika,  R.,  Aziz,  S.  A.  &  Melati,  M.,  2016.
Produksi Flavonoid Daun Kemuning (Murraya  paniculata  L.  Jack)  pada  Dosis Pupuk  Organik  dan  Interval  Panen  yang Berbeda. Buletin Penelitian Tanaman
Rempah dan Obat , 27(1), pp.27-36.
Wahyuningsih, W., Proklamasiningsih, E. & Dwiati,
M.,  2017.  Serapan  Fosfor  dan  Pertumbuhan
Kedelai  ( Glycine  max )  pada  Tanah  Ultisol dengan  Pemberian  Asam  Humat. Biosfera , 33(2), pp.66-70.
Widiastuti,  E.  &  Latifah,  E.,  2016.  Growth  and Biomassa  Soybean  ( Glycine  max (L)) Varieties  Performance  in  Paddy  Field  of Liquid Organic Fertilizer Application. Jurnal Ilmu Pertanian Indonesia , 21(2), pp.90–97.
Winahyu, D., Retnaningsih, A. & Aprilia, M. 2019. Penetapan Kadar Flavonoid pada Kulit Batang Kayu  Raru  ( Cotylelobium  melanoxylon P.) dengan  Metode  Spektrofotometri  Uv-Vis. Jurnal Analis Farmasi , 4(1), pp. 29 - 36.
Zekkori, B., Khallouki, F., Bentayeb, A., Fiorito, S., Preziuso,  F.,  Taddeo,  V.  A.,  Epifano,  F.  & Genovese,  S.,  2018.  A  New  Phytochemical and  Anti-Oxidant  and  Anti-Inflammatory Activities of Different Lactuca sativa L. var.
Crispa Extracts. Natural Product Communications , 13(9), pp.1139–1142.