Journal Syifa Sciences and Clinical Research (JSSCR)
Volume 4 Nomor 1, 2022
Journal Homepage: http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/jsscr , E-ISSN: 2656-9612 P-ISSN:2656-8187 DOI : https://doi.org/10.37311/jsscr.v4i1.13484

## Fraksi Ekstrak Etanol Buah Pare ( Momordica charantia
L.) Sebagai Antiinflamasi Terhadap Kadar Tumor Necrosis Factor Alpha ( TNF-α )
Parawansah 1,2 , Nuralifah 2 , Yulfa 2
1 Departemen Farmakologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Halu Oleo, Kendari, Indonesia Kampus Hijau Bumi Tridharma Anduonohu. Jl. H.E.A. Mokodompit, Kendari 93232,
2 Departemen Farmakologi, Fakultas Farmasi, Universitas Halu Oleo, Kendari, Indonesia Kampus Hijau Bumi Tridharma Anduonohu. Jl. H.E.A. Mokodompit, Kendari 93232,
* Penulis Korespondensi. Email: parawansah@uho.ac.id

## ABSTRAK
Inflamasi merupakan respon imun baik spesifik maupun non spesifik. Buah pare mengandung golongan senyawa flavonoid, dan terpenoid yang berpotensi sebagai antiinflamasi. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antiinflamasi fraksi n-heksan, fraksi etil asetat dan fraksi air pada ekstrak etanol buah pare ( Momordica charantia L.) terhadap kadar Tumor Necrosis Factor Alpha ( TNF- α ) pada  tikus wistar. Penelitian ini menggunakan post test only group design . Menggunakan  6 kelompok perlakuan kontrol  normal, kontrol positif (natrium diklofenak), kontrol  negatif  (NaCMC  0,5%)  dan  kelompok  uji  (  fraksi  n-heksan  buah  pare  dosis  150 mg/kgBB, fraksi etil asetat buah pare dosis 150 mg/kgBB dan fraksi air buah pare dosis 150 mg/kgBB). Uji in vivo dilakukan induksi inflamasi, pemberian sediaan dan pengukuran kadar TNF-α  dengan  metode  ELISA.  Data  dianalisis  menggunakan One  Way ANOVA.  Hasil penelitian menunjukkan rerata kadar TNF- α kontrol normal (0,494 ng/L) kontrol positif (0,507 ng/L), kontrol negatif (0,721 ng/L), kelompok uji fraksi n-heksan (0, 487 ng/L), kelompok uji fraksi  etil  asetat  (0,513  ng/L)  dan  kelompok  uji  fraksi  air  (0,563  ng/L).  Kesimpulan  yang diperoleh semua  kelompok  uji  memiliki  aktivitas antiinflamasi.  Dan  kelompok  uji  fraksi  n- heksan memiliki aktivitas antiinflamasi yang paling baik dari pada kelompok uji yang lain. Kata Kunci:
Antinflamasi; Mommordica charantia L.,; Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-α)
Diterima:
30-01-2022 Disetujui: 9-02-2022 Online: 25-02-2022

## ABSTRACT
Inflammation is an immune response specific and non-specific. Momordica contains a class of flavonoid compounds and terpenoids that have the potential as anti-inflammatory. This study aims to determine the anti-inflammatory activity of the n-hexane fraction, ethyl acetate fraction and water fraction in the ethanolic extract of Momordica charantia L. on levels of Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-  ) in wistar rats. This study uses a post test only group design. Using 6 normal control treatment groups, positive control (diclofenac sodium), negative control (NaCMC 0.5%) and the test group (n-hexane fraction of bitter melon at a dose of 150 mg/kgBW, ethyl acetate fraction in bitter melon at a dose of 150 mg/kgBW and  the  water  fraction  of  bitter  melon  at  a  dose  of  150  mg/kgBW).  In  vivo  tests  were  performed  on inflammation induction, administration of preparations and measurement of TNF-α levels  using the ELISA method. Data were analyzed using One Way ANOVA. The results showed the average TNF-  level in normal control (0.494 ng/L) positive control (0.507 ng/L), negative control (0.721 ng/L), n- hexane fraction test group (0.487 ng/L), group the ethyl acetate fraction test (0.513 ng/L) and the water
fraction  test  group  (0.563  ng/L).  The  conclusion  obtained  by  all  test  groups  has  anti-inflammatory activity. The n-hexane fraction test group had the best anti-inflammatory activity than the other test groups. The conclusion obtained by all test groups has anti-inflammatory activity. The n-hexane fraction test group had the best anti-inflammatory activity than the other test groups. The conclusion obtained by all test groups has anti-inflammatory activity. The n-hexane fraction test group had the best anti- inflammatory activity than the other test groups.
Copyright © 2022 Jsscr. All rights reserved.
Keywords:
Anti-Inflammatory; Mommordica charantia L.; Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-α)
Received: 2022-01-30 Accepted: 2022-02-9 Online: 2022-02-25

## 1. Pendahuluan
Inflamasi  merupakan  suatu  respon  imun  baik  spesifik  maupun  non  spesifik dimana tubuh berperan dalam melawan agen penyebab kerusakan sel pada daerah lokal yang mengalami cedera, seperti karena terinfeksi, iritasi, trauma fisik, luka bakar dan lain  sebagainya [1] .  Inflamasi  baik  respon  lokal  maupun  sistemik  ditandai  oleh pembengkakan  (edema),  kemerahan,  panas,  nyeri,  dan  perubahan  fungsi [2] .  Selama respons  inflamasi,  mediator,  seperti  sitokin  pro-inflamasi,  termasuk  interleukin  IL-1, tumor  nekrosis  faktor  (TNF),  interferon  (IFN)-c,  IL-6,  IL-12,  IL-18  dan  granulosit- makrofag faktor perangsang koloni, dilepaskan [3] .
Tumor  necrosis  factor  alpha (TNF-α)  merupakan  sitokin  utama  pada  respon inflamasi akut terhadap bakteri gram negatif dan mikroba lainnya. Sumber utama TNF- α ialah fagosit mononuklear dan sel T yang diaktifkan antigen, sel NK, dan sel mast. Lipopolisakarida merupakan rangsangan poten terhadap makrofag untuk menyekresi TNF. IFN-γ yang diproduksi sel T dan sel NK juga merangsang makrofag antara lain meningkatkan  sintesis  TNF [4] .  Tumor  nekrosis  faktor  terdiri  dari  dua  bentuk  yang berbeda yaitu TNF yang terikat membran (mTNF) dan TNF terlarut (sTNF atau TNF). sTNF mengikat dua secara struktural reseptor transmembran yaitu TNFR1 dan TNFR2, kedua reseptor mengatur ekspresi gen melalui jalur pensinyalan berbeda. TNFR1 dapat diaktifkan  oleh  mTNF  dan  TNF,  sedangkan  TNFR2  secara  khusus  mengikat  mTNF untuk memulai aktivasi dari reseptor [5] .
Obat antiinflamasi  yang umumnya digunakan terbagi  menjadi dua kelompok besar  yaitu  antiinflamasi  golongan  steroid  dan  antiinflamasi  golongan  nonsteroid. Namun, kedua golongan obat tersebut memiliki efek samping yang cukup serius pada penggunannya seperti pendarahan pada gastrointestinal dan tukak peptik [6] . Tanaman  yang  dipercaya  memiliki  efek  antiinflamasi  adalah  buah  pare  ( Momordica charantia L.).  Buah  pare (Momordica  charantia L. ) merupakan  tanaman  yang  umum  di Asia yang dilaporkan mempunyai aktivitas antiinflamasi. Hasil uji fitokimia didapatkan bahwa buah pare mengandung senyawa metabolit sekunder seperti alkaloid, flavonoid, tannin, saponin, steroid dan triterpenoid [7] .   Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas  antiinflamasi  fraksi  n-heksan,  fraksi  etil  asetat,  dan  fraksi  air  pada  ekstrak etanol buah  pare  ( Momordica  charantia L.)  terhadap penurunan kadar TNF-α pada tikus wistar yang mengalami inflamasi.

## 2.  Metode

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  adalah Rotary  Vacuum  Evaporator ( Buchi ® ),  seperangkat alat KIT ELISA TNF-α rat ( Bioassay Technology Laboratory ® ), Oven ( Inaco ® ), erlenmeyer
( Pyrex ® ),  timbangan  analitik  ( Precisa ® ),  Spektrofotometer  20-D  ( Thermo  SPectronic ® ), gelas  ukur  ( Pyrex ® ),  gelas  kimia  ( Pyrex ® ),  inkubator  ( Memmert ® ),  mesin  sentrifugasi ( Boeco ® ), hotplate , magnetic stirrer , mikropipet, tabung EDTA 5 cc.
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian adalah etanol 96%, pakan standar, carrageenan ,  Na  CMC  0,5%  ( Food  Grade ® )    dan  natrium  diklofenak  50  mg,  buah  pare, aquades,  larutan  N-heksan,  larutan  etil  asetat,  tikus  jantan  galur  wistar  apas  ( Rattus norvegicus ),

## Prosedur Fraksinasi
Buah pare yang telah dipanen seberat 15 kg dicuci dengan akuades hingga bersih dari  pengotor  seperti  debu  dan  tanah  selanjutnya  dikeringkan.  Simplisia  buah  pare sebanyak 628 gram dimaserasi dengan pelarut etanol 96% selama 3x24 jam pada suhu kamar dengan beberapa kali pengadukan. Kemudian dilakukan penyaringan maserat pertama  dengan  kertas  saring.  Maserasi  dilakukan  berulang-ulang  hingga  diperoleh filtrat yang bening. Filtrat dikumpulkan dan dipekatkan dengan rotary vacum evaporator . Dimasukkan ± 500 mL fraksi cair kedalam labu alas bulat kemudian dipasang labu alas bulat tersebut pada kondensor. Selanjutnya dinyalakan alat evaporator pada suhu 50°C kemudian ditunggu hingga diperoleh ekstrak kental [6] .
Fraksinasi dilakukan menggunakan perbandingan pelarut 1:1. Sebanyak 10 gram ekstrak buah pare (Momordica charantia L.) dilarutkan dalam 1000 ml aquades. Larutan ekstrak tersebut diambil sebanyak 50 ml dan dimasukkan dalam corong pisah kemudian tambahkan  50  ml  n-heksan.  Campuran  tersebut  dikocok  selama  ±  15  menit  secara perlahan-lahan  dan  sesekali  dibuang  gas  dari  corong  pisah.  Diamkan  beberapa  saat hingga terjadi proses pemisahan yang menghasilkan fraksi n-heksan dan fraksi residu ekstrak. Lapisan n-heksan (bagian atas) dipisahkan dengan membuka kran corong pisah sampai lapisan air habis. Diambil lapisan n-heksan kemudian dipisahkan sebagai fraksi n-heksan. Dilakukan pengulangan sebanyak 2 kali [8] .
Fraksi residu ekstrak diambil sebanyak 50 ml dan dimasukkan dalam corong pisah kemudian tambahkan 50 ml  etil asetat. Dilakukan perlakuan yang sama seperti pada fraksi n-heksan.. Dilakukan pengulangan sebanyak 2 kali. Selanjutnya masing-masing fraksi yang telah diperoleh, diuapkan dengan rotary vacum evaporator pada suhu 50 ºC hingga  kental  tapi  masih  bisa  dituang.  Kemudian  fraksi  tersebut  dikeringkan  dalam oven pada suhu 40ºC hingga diperoleh bobot tetap.
Sampel  penelitian  ini  menggunakan  tikus  putih  jantan  galur  wistar  ( Rattus norvegicus ) yang berusia 10-12 minggu dengan bobot badan 100-200 gram. Penelitian ini membagi  tikus  menjadi  6  kelompok  terdiri  dari  kelompok  kontrol  normal,  kontrol positif (natrium diklofenak), kelompok kontrol negatif (Na-CMC 0,5%), dan 3 kelompok perlakuan (fraksi  n-heksan, fraksi  etil asetat,  dan  fraksi  air  pada  ekstrak  etanol  buah pare) dengan dosis 150 mg/kgBB.
Dilakukan  aklimatisasi  tikus  selama  7  hari.  Untuk  induksi  inflamasi,  umumnya dilakukan  pembuatan  larutan  1% carrageenan dalam  akuades  lalu  dilakukan  injeksi intraplantar  dengan  dosis  0,1  ml [9] .  Setelah  1  jam  pemberian  induksi,  kemudian dilakukan  treatment  pada  setiap  kelompok  perlakuan.  1  jam  berikutnya  dilakukan pembedahan  pada  seluruh  kelompok  perlakuan  yang  sebelumnya  telah  dieuthanasi secara kimia menggunakan eter untuk kemudian dilakukan pengambilan darah tikus melalui jantung. Darah yang diperoleh kemudian disimpan dalam tabung vakum berisi antikoagulan EDTA 0,1% dan disentrifugasi pada kecepatan 3000 rpm selama 25 menit untuk memisahkan antara plasma darah dan residu [10] , [11] .
Sampel  plasma  darah  yang  diperoleh  kemudian  akan  dilakukan  pemeriksaan menggunakan metode Sandwich ELISA. Antibodi spesifik TNF-α telah dipreparasi pada plat  96  well.  Standar  dan  sampel  uji  ditambahkan  kedalam  well,  selanjutnya ditambahkan antibodi pendeteksi spesifik TNF-α dan kemudian dibilas dengan buffer untuk menghilangkan antibodi atau konjugat yang tidak terikat. Ditambahkan substrat A dan substrat B untuk memvisualisasikan reaksi enzimatik yang kemudian dikatalisis oleh steptavidin proxidase untuk menghasilkan produk berwarna biru. Selanjutnya plat diinkubasi  kemudian  ditambahkan  larutan  stop  penghenti  asam  sehingga  berubah menjadi warna kuning. Kemudian dilakukan pengukuran densitas optik menggunakan microplate reader pada panjang gelombang 450 nm.

## 3.  Hasil dan Pembahasan
Proses  ekstraksi  dilakukan  dengan  metode  maserasi.  Simplisia  buah  pare dimaserasi menggunakan etanol 96% selama 3x24 jam. Hasil maserasi berupa maserat dipekatkan dengan menggunakan rotary vacuum evaporator. Proses evaporasi  Ekstrak buah pare yang diperoleh sebanyak 34,28 gram. Ekstrak buah pare yang telah diperoleh kemudian  dilakukan  fraksinasi.  Seluruh  fraksi  air,  etil  asetat,  dan  n-heksana  yang diperoleh selanjutnya diuapkan  pelarutnya, selanjutnya dilakukan skrining fitokimia untuk mengetahui senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam fraksi ekstrak etanol buah pare. Kemudian dilakukan pengujian aktivitas antiinflamasi fraksi ekstrak etanol buah pare terhadap kadar Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-α) pada tikus wistar.
Keterangan : K1 =Kontrol Normal; K2 =Kontrol Positif ; K3 =Kontrol Negatif; K4 =Kelompok uji fraksi etil asetat dosis 150 mg/kg BB; K5 =Kelompok uji fraksi n-heksan dosis 150 mg/kg BB; K6 =Kelompok  uji  fraksi  air dosis 150 mg/kg BB.
Gambar 1 . Rerata kadar TNF-α pada masing-masing kelompok
Pemeriksaan  Kadar  TNF-α  diuji  dengan  menggunakan Kit ELISA Rat TNF-α. Berdasarkan uji ELISA didapatkan hasil rerata pengukuran kadar TNF-α pada masing- masing  kelompok  perlakuan.  Pengujian  aktivitas  antiinflamasi  pada  penelitian  ini dilakukan dengan menggunakan 6 kelompok perlakuan yaitu kelompok kontrol normal tidak  diberikan  perlakuan  apapun  karena  kontrol  normal  digunakan  untuk  melihat bahwa  hewan  coba  yang  digunakan  normal,  kontrol  positif  (natrium  diklofenak) digunakan untuk membandingkan apakah kelompok uji  memiliki  efektivitas sebagai
0,494 0,507 0,721 0,487 0,513 0,563 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 K1 K2 K3 K4 K5 K6 Kadar TNF- α ( ng/L)
antiinflamasi yang sama dengan kelompok kontrol positif atau tidak, kelompok control negatif  (Na-CMC  0,5%)  digunakan  sebagai  pembanding  untuk  mengetahui  apakah kelompok uji berpotensi sebagai  antiinflamasi  atau tidak, dan 3 kelompok perlakuan (fraksi n-heksan, fraksi etil asetat, dan fraksi air pada ekstrak etanol buah pare) dengan dosis 150 mg/kgBB.
Pengambilan darah tikus dilakukan 1 jam setelah pemberian suspensi uji dan 2 jam setelah diinduksi karagenan mengakibatkan terbentuknya radang yang terdiri dari dua fase, yaitu 1 sampai 2 jam setelah injeksi karagenan, menyebabkan trauma akibat radang  yang  ditimbulkan  oleh  karagenan [12] .  Pada  fase  pertama  terjadi  pelepasan serotonin  dan  histamin  ke  tempat  radang  serta  terjadi  peningkatan  sintesis prostaglandin  pada  jaringan  yang  rusak.  Pada  fase  kedua  terjadi  pelepasan prostaglandin  dan  dimediasi  oleh  bradikinin  dan  leukotrien [13] , [14] .  Atas  dasar tersebut, pada penelitian ini evaluasi kadar TNF-α dilakukan pada fase kedua (awal jam ke-2)  dimana  fase  kedua  merupakan  waktu  yang  baik  untuk  mengevaluasi  manfaat klinis penggunaan agen anti-inflamasi [15] .
Produksi TNF-α sebagai sitokin dipengaruhi oleh aktivasi sinyal NF-κB (Nuclear Factor  of  κB).  Protein  adaptor  TRADD  (TNFR1  Associated  Death  Domain  protein) terikat pada TRAF2 (TNFR Associated Factor 2) dan RIP (Receptor Interacting Protein) akan  terlepas  akibat  adanya  rangsangan  pada  reseptor.  Selanjutnya  TRAF2  akan mengikat  IKK  (IκB  kinase)  dan  diaktifkan  oleh  RIP  sehingga  memfosforilasi  IκB (Inhibitor  of  κB)  yaitu  sebuah  protein  penghambat  yang  berikatan  dengan  NFκB (Nuclear Factor of κB) yang berfungsi menghambat translokasi. Setelah fosforilasi, IκB akan  terdegradasi  dan  melepaskan  faktor  transkripsi  NFκB  yang  mentranslokasi  ke nukleus untuk memediasi transkripsi protein yang terlibat dalam aktivasi, proliferasi, dan kelangsungan hidup sel [16] .
Perbedaan hasil inflamasi pada setiap kelompok perlakuan dapat dilihat melalui kurva rerata kadar TNF-α diatas. Berdasarkan hasil rerata kadar TNF-α pada kelompok uji fraksi ekstrak etanol buah pare dapat diketahui bahwa kadar TNF-α pada kelompok kontrol negatif lebih tinggi  dibandingkan kelompok lain. Hal  ini  dikarenakan proses eliminasi agen penyebab inflamasi pada kelompok kontrol negatif berlangsung secara alamiah  tanpa  bantuan  agen  anti-inflamasi.  Kadar  TNF-α  pada  kelompok  kontrol normal  memiliki  nilai  yang  rendah.  Hal  ini  dikarenakan  kelompok  normal  tidak diberikan induksi karagenan, sehingga tidak terjadi peradangan dan peningkatan kadar TNF-α  pada  kelompok  tersebut.  Pada  kelompok  positif  (natrium  diklofenak)  kadar TNF-α memiliki nilai yang lebih rendah dibandingkan kelompok uji fraksi etil asetat dan fraksi air.
Kadar  TNF-α  pada  kelompok  uji  fraksi  n-heksan  memiliki  nilai  yang  lebih rendah dibandingkan dengan kelompok uji fraksi etil asetat dan fraksi air. Dan memiliki kadar TNF-α yang lebih rendah dari kelompok positif. Hal ini karena senyawa metabolit sekunder seperti flavonoid dan terpenoid yang terkandung dalam fraksi N-heksan yang yang bertanggung jawab sebagai antiinflamasi dengan cara menekan aktivitas sitokin pro inflamasi [17] . Terpenoid dapat mengurangi inflamsi pada kaki tikus yang diinduksi karagenan dengan cara menghambat ekspresi enzim COX-2 dan iNOS. Mekanisme lain terpenoid sebagai anti inflamasi yaitu menekan produksi PGE 2 yang diinduksi LPS dan mengurangi  produksi  leukotrien  B4  (LTB4)  dan  tromboxan  B2  (TXB2) [18] .  Sitokin inflamasi  diproduksi  dan  diatur  ditingkat  transkripsi  dapat  meningkatkan  atau menghambat  proses  inflamasi.  Telah  diamati  bahwa  beberapa  flavonoid  mampu
mengurangi ekspresi yang berbeda sitokin/kemokin proinflamasi, termasuk TNF-α, IL- 1b, IL-6, IL-8 dan dalam berbagai jenis sel seperti makrofag, sel T yang diinduksi LPS monosit [19] , [20] .
Senyawa flavonoid yang terkandung dalam buah pare yaitu golongan luteolin, quersetin, dan kamferol. Senyawa luteolin, kuersetin, dan kaemferol berperan penting dalam  antiinflamasi  melalui  mekanisme  yang  berbeda.  Kuersetin  diketahui  dapat menghambat  COX-2  dan  5-LOX  yang  terlibat  dalam  produksi  eikosanoid  dari  asam arakidonat. Kandungan kuersetin dalam buah pare juga dapat menghambat produksi nitric oxide dan ekspresi protein iNOS. Luteolin dalam buah pare dapat menghambat aktivasi NF-kβ, sedangkan kaemferol dapat menghambat produksi TNF-α [21] , [22] . Kadar TNF-α pada kelompok fraksi etil asetat lebih rendah jika dibandingkan dengan kelompok  uji  fraksi  air.  Hal  ini  dikarenakan  senyawa  metabolit  sekunder  yang terkandung  dalam  fraksi  etil  asetat  yaitu  diantaranya  flavonoid  dan  terpenoid  yang memiliki aktivitas sebagai antiinflamasi. Namun, Kadar TNF-α pada kelompok fraksi etil asetat tidak lebih rendah jika dibandingkan dengan kelompok uji fraksi n-heksan. Hal ini dikarenakan senyawa terpenoid memiliki sifat non-polar sehingga senyawa ini lebih banyak tertarik kedalam fraksi n-heksan yang bersifat non-polar dari pada fraksi etil asetat yang bersifat semi polar.
Kadar TNF-α pada kelompok fraksi air memiliki  nilai  yang lebih rendah dari kelompok kontrol negatif namun tidak lebih rendah dari kelompok uji fraksi n-heksan dan  fraksi  etil  asetat.  Hal  ini  karena  dalam  fraksi  air  hanya  terkandung  senyawa flavonoid  yang  bekerja  dengan  cara  mengurangi  ekspresi  yang  berbeda sitokin/kemokin proinflamasi, termasuk TNF-α, IL-1b, IL-6, IL-8 dan dalam berbagai jenis sel seperti makrofag, sel T yang diinduksi LPS monosit [23] .
Data  kadar  TNF-α  pada  masing-masing  kelompok  kemudian  diujikan  secara statistik  menggunakan  SPSS (Statistical  Package  For  Social  Science) One  Way  ANOVA dengan taraf kepercayaan 95% dan tingkat signifikansi (tingkat kesalahan 5% (α = 0,05). Kemudian  dilakukan  analisis  dengan  uji  Beda  Nyata  Jujur  ( Post  Hoc  Tukey )  untuk mengetahui  kelompok perlakuan yang memiliki pengaruh sama atau berbeda antara satu  dengan  yang  lainnya.  Berdasarkan  uji Post  Hoc  Tukey dari  ketiga  kelompok  uji (fraksi  n-heksan,  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  air),  fraksi  n-heksan  memiliki  aktivitas antiinflamasi yang paling baik. Hal ini dilihat dari kadar TNF-α yang lebih rendah dari kelompok uji fraksi etil asetat dan fraksi air. Dan memiliki efektivitas yang lebih baik dari kelompok positif, dilihat dari penurunan kadar TNF-α pada fraksi n-heksan lebih rendah dari pada kadar TNF-α pada kelompok kontrol positif.

## 4.  Kesimpulan
Kesimpulan  yang  diperoleh  semua  kelompok  uji  memiliki  aktivitas antiinflamasi. Kelompok uji fraksi n-heksan memiliki aktivitas antiinflamasi terhadap TNF-α yang lebih baik dari pada kelompok uji yang lain.

## Ucapan Terima Kasih
Terimakasih  kami  ucapkan  kepada  semua  pihak  yang  telah  terlibat  baik  dalam persiapan, pelaksaan, maupun pengolahan hasil penelitian ini, serta pendamping pada Laboratorium Riset Fakultas Kedokteran Universitas Halu Oleo.

## Referensi
[1]. LathaY,Vasavithirumalanadhuni,  Vani  M,  Palempalli  UM.  In  Vivo  Anti- Inflammatory  Activity  Of  Ethyl  Acetate  Extract  Derived  From  Marine Streptomyces  Carpaticus.  International  Journal  of  Pharmaceutical  Sciences  and Research. 2017;8(12):5221-5226.
[2]. Fristiohady  A,  Wahyuni  W,  Wa  Oil  K,  La  Omj  P,  Saripuddin  S,  Idin  S.  Anti- Inflammatory Activity of Marine Sponge Aaptos sp. to the Plasma Interleukin-1β Level  in  Wistar  Male  Rats.  Pharmacology  and  Clinical  Pharmacy  Research. 2019;4(20).
[3]. Lintang K, Sitorus P,  Dalimunthe A. Anti-Inflammatory Activity of Ethanol And Fraction  of  Buni  Leaves  (Antidesma  Bunius  L.)  on  White  Rat  In  Carrageenan Induced  Paw  Inflammation.  Asian  Journal  of  Pharmaceutical  Research  and Development. 2019;7(5): 01-05.
[4]. Supit  IA,  Damajanty  HCP,  Silvy  RM.  Profil  Tumor  Necrosis  Factor  (TNF-α) Berdasarkan Indeks Massa Tubuh (IMT)  Pada Mahasiswa Fakultas Kedokteran Unsrat Angkatan 2014. Jurnal e-Biomedik (eBm). 2015;3(2): 640-643.
[5]. Yan  L.  Dejin  Z.  Ren  HX.  Critical  Role  Of  Tumor  Necrosis  Factor  Signaling  In Meshencymal  Stem  Cell-Based  Therapy  For  Autoimmune  And  Inflammatory Diseases. Frontiers In Immunology. 2018; 9(1658).
[6]. Cruz MP, Andrade CMF, Silva KO, de Souza EP, Yatsuda R, Marques LM, et al. Antinoceptive  and  Anti-inflammatory  Activities  of  the  Ethanolic  Extract, Fractions  and  Flavones  Isolated  from  Mimosa  tenuiflora  (Willd.)  Poir (Leguminosae). Journal Plos One. 2016;11(3).
[7]. Parawansah,  Wahyuni,  Zakiyatul  M. Uji  Efek  Antipiretik  dan  Antiinflamasi Ekstrak  Etanol  Buah  Pare  ( Momordica  charantia L.)  terhadap  Mencit  Jantan. Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo. 2016;4(1): 309-315.
[8]. Zahra A, Kusmardi, Hadi S. Uji Sitotoksisitas Fraksi Etil Asetat   Ekstrak Etanol 70% Buah Pare ( Momordica charantia L.) Terhadap Sel HeLa (disertasi). Jakarta. Universitas Muhammadiyah Prof Dr. Hamka. 2018.
[9]. Santi    TD.  Uji  Toksisitas  Akut  Dan  Efek  Antiinflamasi  Ekstrak  Metanol  Dan Ekstrak n-Heksan Daun Pepaya. Pharm Sci Res . 2015;2(2).
[10]. Sujono, Yumna AM., Meilanda PS. Kadar Protein Total dan Ureum Dengan dan Tanpa  Penambahan  cyclodextrin  pada  Serum  Lipemik.  Jurnal  Teknologi Laboratorium. 2016;5(1).
[11]. Parawansah,  Sudayasa  IP,  Nuralifah. Kholidha  ANS,  Eso  A,  Rahayu  WOSF, Sandra F. Momordica charantia L. Fruit Fractions inhibit Malondialdehyde Level and Regenerate Hepatic Damage of Hyperglycemic Rats . Indones Biomed J. 2020; 12(1).
[12]. Kim KH, Hyeon WI, Mrigendra BK, Sejong K, Byoung HM, et al. Low-Intensity Ultrasound  Attenuates  Paw  Edema  Formation  And  Decreases  Vascular Permeability Induced By Carrageenan Injection In Rats, Journal of Inflammation. 2020; 17(7): 2.
[13]. Bhuvad  SB,  Nishteswar  K,  Rabinarayan  A.  Mukesh  BN.  Comparative anti-inflammatory  and  analgesic  activities    of  leaf  powder  and  decoction  of Chirabilva (Holoptelea  integrifolia (Roxb.)  Planch).  Pharmacologycal  Study. 2014;35(3).
[14]. Luliana  S,  Ressi  S,  Ellya  A.  Uji  Aktivitas  Antiinflamasi  Ekstrak  Air  Herba Ciplukan ( Physalis angulata L.) terhadap Tikus Putih ( Rattus norvegicus L.) Jantan Galur  Wistar  yang  Diinduksi  Karagenan,  Traditional  Medicine  Journal.  2017; 22(3): 204.
[15]. Adnyasari  IAPS,  Ni  Made  P,  I  Made  S.  Potensi  Antiimplamasi  Secara  In  Vivo Ekstrak  Etanol  Batang  Antawali  ( Tinospora  sinensis )  Pada  Tikus  Wistar  Yang Diinduksi Karagenan, Cakra Kimia (Indonesian E-Journal of Applied Chemistry). 2017; 5(2): 115.
[16]. Urschel  K,  Iwona  C.  TNF-α  in  the  cardiovascular  system:  from  physiology  to therapy.  International  Journal  of  Interferon,  Cytokine  and  Mediator  Research. 2015;7:9-25.
[17]. Amri  O,  Abderrahmane  Z,  Abdellah  B,  Saida  T.  Abdelhakim  H.      Anti- inflammatory Activity of Methanolic Extract from Pistacia atlantica Desf. Leaves. Journal Pharmacogn. 2018; 10(1):71-76 [18]. Ahmad  B,  Shah  M,  Choi  S.  Oceans  As  A  Source  Of  Immunotherapy.  Marine Drugs. 2019;17(282):1-37.
[19]. Soleha T. M Agung YP. Blueberry ( Vaccinium Corymbosum ) dalam Menghambat Proses Inflamasi. Majority. 2016;5(1).
[20]. Domini  FBA,  I  Dewa  ARD,  Erawati  W.  Analisis  Jumlah  Sel  Monosit  yang Mengekspresikan  TNF-Α  setelah  dipapar Porphyromonas  Gingivalis dan  Tulang Ikan  Kuniran (Upeneus  Sulphureus) dengan  Teknik  Imunositokimia,  Jurnal
Kesehatan Gigi. 2019; 6(2): 87-88.
[21]. Muhtadi, Lita WA. Aktivitas Antiinflamasi  Dari Kombinasi Ikan Gabus (Channa striata) Dan  Ekstrak  Etanol  Buah Pare (Momordica  charantia  L.) Terhadap  Tikus Wistar  Jantan  Yang  Diinduksi  Karaginan.  The  5th  Urecol  Proceeding.  2017 February 18, Yogyakarta, Indonesia: Universitas Ahmad Dahlan. 2017.
[22]. Ramadhani N, Sri AS. Aktivitas Antiinflamasi Berbagai Tanaman Diduga Berasal dari Flavonoid. FARMAKA. 2016; 14(2): 114.
[23]. Amir  N,  Dhea  A,  Novia  E,  Ardi.  Potensi  Cangkang  Sotong (Sepia Sp.)  Sebagai Antiinflamasi Pada Penderita Penyakit Asma. Jurnal IPTEKS PSP. 2019; 6(12): 212.