PEMERIKSAAN WSSV ( WHITE SPOT SYNDROME VIRUS ) DENGAN UJI PCR ( POLYMERASE CHAIN REACTION ) PADA UDANG VANNAMEI ( Litopenaeus vannamei ) DI UPT LABORATORIUM KESEHATAN IKAN DAN LINGKUNGAN,

## PASURUAN JAWA TIMUR
WSSV (WHITE SPOT SYNDROME VIRUS) EXAMINATION USING THE PCR (POLYMERASE CHAIN REACTION) TEST ON VANNAMEI SHRIMP (Litopenaeus vannamei) AT UPT FISH AND ENVIRONMENTAL HEALTH LABORATORY, PASURUAN, EAST JAVA
Amalia Khofifah 1 , Indah Wahyuni Abida 1 , Asmaul Khusnah 2
1 Program Studi Manajemen Sumberdaya Perairan, Jurusan Kelautan dan Perikanan Fakultas Pertanian, Universitas Trunojoyo Madura
2 Analis Kesehatan Ikan dan Lingkungan (Biologi Molekuler) UPT Laboratorium Kesehatan Ikan dan Lingkungan, Pasuruan, Jawa Timur
*Corresponding author email: indahwahyuniabida@trunojoyo.ac.id
Submitted: 16 August 2022 / Revised: 31 May 2023 / Accepted: 31 May 2023
http://doi.org/10.21107/juvenil.v4i2.16462

## ABSTRAK
Udang  vannamei  mempunyai  banyak keunggulan  daripada  udang  jenis  lainnya,  akan tetapi  resisten terhadap  serangan  penyakit  yang  disebabkan  oleh  virus.  Virus  WSSV  merupakan  virus  yang menyerang  sistem  organ  dari  crustacea  yang  menyebabkan  bercak  putih  di  permukaan  eksternal udang  sehingga  menimbulkan  kerugian  berupa  kematian  tinggi  mencapai  100%  dari  udang pemeliharaan  waktu  3-10  hari  sejak  gejala  klinis  muncul.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui hasil pemeriksaan WSSV dengan uji PCR pada udang vannamei. Penelitian ini dilaksanakan di UPT (Unit  Pelaksana  Teknis)  Laboratorium Kesehatan Ikan  dan  Lingkungan,  Pasuruan  Jawa  Timur  pada 17 Januari sampai 17 Februari 2022. Metode pemeriksaan WSSV (White Spot Syndrome Virus) pada udang  vannamei  dilakukan  dengan  uji  PCR  (Polymerase  Chain  Reaction).  Prosedur  diawali persiapan sampel yang didapatkan dari customer yang ingin mengujikan udangnya, ekstraksi sampel, persiapan  reagen,  amplifikasi  pada  mesin  PCR,  persiapan  elektroforesis,  proses  elektrophoresis, analisis  hasil  pada  UV  Transilluminator,  dokumentasi  hasil  dan  pembacaan  hasil.  Pemeriksaan sampel  59  dan  61  menunjukkan  hasil  WSSV  negatif dengan  adanya  1  garis  perpendaran  pita  DNA (band)  ukuran  848  bp,  sampel  tersebut  tidak  terinfeksi  virus  WSSV.  Pembacaan  hasil  uji  PCR  (+) WSSV  berat  (severe)  terlihat  3  garis  perpendaran  pita  DNA  (band)  ukuran  910  bp,  550  bp,  296  bp, yang  terjadi  pada  sampel  57  dan  sampel  duplo  57.  Sampel  72  menunjukkan  hasil  (+)  WSSV  ringan (light) yang terlihat 1 garis perpendaran pita DNA (band) dengan ukuran 296 bp.
Kata  Kunci:  Udang  vannamei,  WSSV  (White  Spot  Syndrome  Virus),  PCR  (Polymerase  Chain Reaction)

## ABSTRACT
Vannamei shrimp have many advantages over other types of shrimp, but they are resistant to disease attacks caused by viruses. The WSSV virus is a virus that attacks the organ systems of crustaceans which  causes  white  spots  on  the  external  surface  of  the  shrimp,  causing  losses  in  the  form  of  high mortality reaching 100% of reared shrimp within 3-10 days since clinical symptoms appear. This study aims  to  determine  the  results  of  WSSV  examination  with  the  PCR  test  on  vannamei  shrimp.  This research was conducted at the UPT (Technical Implementation Unit) Fish and Environmental Health Laboratory,  Pasuruan,  East  Java  from  17  January  to  17  February  2022.  WSSV  (White  Spot Syndrome  Virus)  examination  method  on  vannamei  shrimp  was  carried  out  by  PCR  (Polymerase Chain  Reaction)  test.  The  procedure  begins  with  sample  preparation  obtained  from  the
customer  who  wants  to  test the  shrimp,  sample  extraction,  reagent  preparation,  amplification  on  the PCR machine, electrophoresis preparation, electrophoresis process, analysis of the results on the UV Transilluminator,  results  documentation  and  results  reading.  Examination  of  samples  59  and  61 showed  negative  WSSV  results  in  the  presence  of  1  luminescent  DNA  band  (band)  measuring  848 bp, these samples were not infected with the WSSV virus. The reading of the results of the PCR (+) WSSV heavy (severe) test showed 3 lines of fluorescence of DNA bands (bands) of size 910 bp, 550 bp,  296  bp,  which  occurred  in  sample  57  and  sample  57  duplo.  Sample  72  showed  mild  (+)  WSSV results (light) which shows 1 glowing line of DNA band (band) with a size of 296 bp.
Keywords:  Vannamei  Shrimp,  WSSV  (White  Spot  Syndrome  Virus),  PCR  (Polymerase  Chain Reaction)
PENDAHULUAN Udang vannamei merupakan produk primadona di sektor perikanan karena memiliki nilai  ekonomis  dan  prospek  ekspor  yang menjanjikan  (Putri et  al .,  2020).  Permintaan pasar  yang  tinggi  baik  dalam  maupun  luar negeri  menjadikan  Indonesia  sebagai  negara pengirim  udang.  Badan  Pusat  Statistik  (BPS) mencatat  pertumbuhan  Produk  Domestik Bruto  (PDB)  Nasional  sektor  perikanan  tahun 2017 sebesar 6,75 % atau naik sebesar 31 % dari  tahun  2016.  Angka  PDB  tersebut  tercatat paling  progresif  dan  berada  di  atas  rata-rata pertumbuhan  PDB  Nasional  yang  hanya  5,03 %  (Direktorat  Jenderal  Perikanan  Budidaya, 2018).  Kontribusi  udang  vannamei  mencapai 45,6%  dari  keseluruhan  nilai  perdagangan ekspor  komoditas  perikanan  dan  paling digemari  di  pasar  internasional  (Fauzi et  al ., 2023).  Fuady et  al. (2013)  melaporkan keunggulan udang vannamei yaitu pertumbuhan  cepat  dan  ukuran  panen  yang seragam  serta  dapat  dibudidayakan  padat tebar tinggi
Udang vannamei menurut Rahmi et al . (2016) mempunyai  peranan  sebagai  pakan  bagi hewan akuatik yang lebih besar, seperti ikan di dalam  sebuah  rantai  makanan.  Pertumbuhan yang  lambat  dan  turunnya  daya  tahan  udang disebabkan  oleh  faktor  biologi,  kimia,  dan fisika.  Faktor  biologi  menurut  Mahyudin et  al . (2015)  misalnya  kelimpahan  virus  dan  bakteri yang  dapat  mempengaruhi  pertumbuhan udang vannamei. Faktor kimia yang mempengaruhi pertumbuhan udang di antaranya  oksigen  terlarut  (DO),  derajat keasaman  (pH)  dan  amonium  (NH 4+ ).  Adapun faktor  fisika  mempengaruhi  pertumbuhan udang  diantaranya  suhu  dan  salinitas.  Udang vannamei  mempunyai  banyak  keunggulan daripada  udang  jenis  lainnya,  akan  tetapi resisten  terhadap  serangan  penyakit  yang disebabkan oleh virus (Yasin, 2021).
Pratama et al. (2017) menyatakan keberadaan  penyakit  disebabkan  kurang optimalnya  pengelolaan  pakan,  pengelolaan
induk,  dan  minimnya  implementasi  sistem pengelolaan  air  yang  menjadikan  sistem reproduksi  udang  vannamei  tidak  terukur. Yasin  (2021)  melaporkan  penurunan  volume ekspor terjadi akibat penurunan produksi yang sangat  drastis  karena  adanya  serangan penyakit  WSSV (White  Spot  Syndrom  Virus) pada  udang  vannamei.  Permasalahan  ini sangat  mempengaruhi  jumlah  kelimpahan udang  vannamei  di  perairan  dan  merupakan patogen paling serius menyerang udang serta menghancurkan  industri  udang  di  berbagai negara  (Rahma et  al., 2014).  Virus  WSSV merupakan  virus  yang  menyerang  sistem organ crustacea yang  menyebabkan  spot putih  atau  bercak  putih  di  permukaan eksternal udang sehingga menimbulkan kerugian  berupa  kematian  tinggi  mencapai 100%  dari  udang  pemeliharaan  waktu  3-10 hari  sejak  gejala  klinis  muncul  (Supriatna et al ., 2014).
Amrillah et  al .  (2015)  menyatakan  secara kronologis  peneliti  di  Indonesia  menunjukkan hampir  semua  penyakit  WSSV  meledak  pada musim  penghujan,  musim  pancaroba  dan musim  dingin.  Udang  vannamei  setiap  fase hidupnya  rentan  diserang  virus  apabila  tidak diimbangi  dengan  manajemen  kualitas  air yang  baik.  Penyakit  udang  terinfeksi  virus dapat diantisipasi tindakan pencegahan meliputi  benih  yang  unggul,  manajemen budidaya  yang  baik,  selain  itu  pemantauan keberadaan  patogen  di  lingkungan  tambak selama  budidaya  yang  dapat  dilakukan dengan  peringatan  dini,  serta  pemanfaatan teknik  PCR  ( Polymerase  Chain  Reaction ) yang  bekerja  secara  sensitif  dan  spesifik. Virus  yang  menginfeksi  udang  vannamei dalam  jumlah  sedikit  dan  belum  menimbulkan gejala  penyakit  pada  udang  dapat  dideteksi dengan menggunakan uji PCR.
Latritiani et  al .  (2017)  menyatakan  bahwa  uji PCR  mempunyai  fungsi  untuk  memastikan keamanan udang vannamei sebelum dikonsumsi  dan  meminimalisir  adanya  virus pada udang dalam kegiatan ekspor dan impor.
Deteksi  virus  WSSV  pada  udang  vannamei dengan  metode  PCR  yang  hasilnya  negatif umumnya  masih  perlu  di  kontrol  tambak udang  vannamei  seperti  manajemen  kualitas air,  pemberian  pakan  dan  lain  sebagainya dengan  tujuan  menghindari  infeksi  virus WSSV  (Rante et  al .,  2012).  Penelitian  ini bertujuan untuk mengetahui hasil pemeriksaan WSSV dengan uji PCR pada udang vannamei di  UPT  (Unit  Pelaksana  Teknis)  Laboratorium Kesehatan  Ikan  dan  Lingkungan,  Pasuruan Jawa Timur.

## MATERI DAN METODE
Penelitian  ini  telah  dilaksanakan  pada  17 Januari  hingga  17  Februari  2022.  Sampel udang vannamei berasal dari tambak customer yang  ingin  dideteksi  virus  WSSV dengan  uji  PCR.  Penelitian  dilakukan  di  UPT Laboratorium
Kesehatan
Ikan dan Lingkungan, Pasuruan Jawa Timur.

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah mini  centrifunge , vortex ( maxi  mini ), DNA atau RNA extraction kit ( spin column and collection  tube ), DNA atau RNA  extraction  kit ( grinder ), vortex ( thermoscientific ), thermalcycler , enclosures , minispin ,  1  unit elektrophoresis  horizontal ,  sisir  ( comb ), uv transilluminator , kamera digital, analitic balance , hot  plate , waterbath , autoclave , uv , frezeer 100 l, tube (1.5 ml, 0.5 ml, 0.2 ml), rack tube ,  tip  mikropipet,  mikropipet, disecting  set (gunting  dan  pinset), glass  ware (erlenmeyer, gelas ukur dan corong kaca), magnetic stirrer , timer , aluminium foil , dan spatula laboratorium. Adapun  bahan  yang  digunakan  diantaranya, DNA  atau  RNA  extraction  kit ( solution 1, solution 2, solution 3), first  PCR  premix (termasuk  didalamnya buffer , dNTPS , primer WSSV )  berjumlah  7.5  μl, IQZyme  DNA polymerase 2  U  /  µL, template  DNA (hasil proses  ekstraksi sampel), nested PCR  premix (termasuk  didalamnya buffer , dNTPS , primer WSSV )  berjumlah  0.5  μl,  P  (+) standart berjumlah 2 μl, larutan TAE 10X ( tris acetate ), aquadest  steril , agarose 0,8  mg, syber  gel stain , template DNA  (hasil  proses  amplifikasi sebanyak  5  µl),  6X loading  dye ,  DNA marker (848  bp,  630  bp,  33  bp)  dan  DNA  100  bp ladder ,  alkohol  70%,  dan  sampel  udang vannamei.

## Metode  analisis
Analisis biologi molekuler yang dilakukan yaitu pemeriksaan  WSSV  ( White  Spot  Syndrome Virus )  pada  udang  vannamei  ( Litopenaeus
vannamei ) dari tambak customer . Pemeriksaan WSSV pada
sampel menggunakan  metode  uji  PCR  ( Polymerase Chain  Reaction )  Konvensional  menurut  UPT
Laboratorium Kesehatan Ikan
dan Lingkungan,  Pasuruan  Jawa  Timur.  Prosedur analisis  uji  PCR  Konvensional  terdiri  atas beberapa tahap diantaranya adalah:

## Sterilisasi Ruangan
Sterilisasi  ruang  dilakukan  1  bulan  2  kali dengan membersihkan ruangan terlebih dahulu  kemudian  menutup  ruangan  dan menyalakan lampu UV selama 30 menit.

## Sterilisasi Alat di Autoclave
Tahap  pertama  menghubungkan  kabel  listrik ke  stop  kontak  pada  tegangan  220 volt ,  dan memastikan bahwa semua tombol pada posisi off.  Tahap  kedua  memasukkan aquadest dalam  ruang  sterilisasi  sampai  menutup sistem  pemanas.  Tahap  ketiga  memasukkan keranjang  berisi  bahan  atau  alat  yang  akan disterilkan  kedalam autoclave ,  lalu  menutup autoclave sampai terkunci rapat serta mengecek  bagian exhaust dalam  posisi  tutup, untuk  mencegah  uap  air  keluar.  Tahap keempat  menghubungkan  kabel  listrik  ke  stop kontak  dan  memilih  tombol power  on pada samping  kiri autoclave untuk  menjalankan arus listrik yang menghubungkan ke autoclave .  Tahap  kelima  memilih  tombol power  on pada  tutup autoclave untuk menghidupkan dan memilih mode liq di tombol mode pada autoclave bahan  yang  akan disterilisasikan.  Tahap  keenam  menekan tombol set atau ent pada autoclave untuk mengatur  suhu  121 ℃ dengan  tekanan  1  atm, lalu  menekan  tombol next pada autoclave untuk  mengatur  waktu  yang  dibutuhkan sterilisasi  yakni  15  menit.  Pengoperasian autoclave harus memastikan semuanya sudah diatur  dan  sudah  tertutup  rapat,  selanjutnya memilih  tombol start untuk  menjalankan proses  sterilisasi.  Proses  sterilisasi  selesai ditandai  dengan  bunyi  alarm  pada autoclave tersebut.  Tahap  terakhir  yaitu  buka exhaust serta  tunggu  5  hingga  10  menit  agar  uap airnya keluar, lalu tutup autoclave bisa dibuka.

## Persiapan Sampel
Tahap  awal  apabila  sampel  sudah  siap, peralatan  ( disecting  set,  tube 1.5  mL, aluminium  foil )  dan  bahan  (sampel  udang vannamei)  untuk  preparasi  sampel  serta  alat dan  bahan  untuk  ekstraksi  sampel  harus dalam satu meja ekstraksi. Tahap kedua untuk menghindari kontaminasi, hendaknya
menggunakan disecting  set yang  berbeda disetiap  sampelnya  saat  mengambil  organ target  uji.  Tahap  terakhir  yakni  memberi  kode sampel pada tube , tujuannya agar mengetahui sampel  nomor  berapa  yang  diekstraksi. Aluminium  foil digunakan  sebagai  alas  ketika mengambil organ target uji.

## Tahapan Ekstraksi Sampel
Tahap  pertama  memasukkan  sampel  seperti uropod , pleopod , periopod atau  insang sebanyak  2-5 pieces (20  mg)  atau  30  < post larva 12  sebanyak  25-50  ekor  ke  dalam tube 1,5  mL  dengan disecting  set .  Tahap  ke  dua mengambil 500 µL Solution 1 dan menaruh ke dalam tube menggunakan  tip  mikropipet beserta mikropipet nya. Tahap ketiga menghancurkan  sampel  dengan  menggerus memakai grinder sampai homogen, penghancuran  sampel  pada  proses  ekstraksi bertujuan didapatkannya DNA atau RNA pada target  uji.  Tahap  keempat  menambahkan  500 µL Solution 2,  kemudian  vortex  10  detik  dan centrifunge 1  menit  di mini  centrifunge ,  serta memindahkan supernatant 500  µL  ke  tabung fiter ( tube fiter ) baru. Tahap kelima, memvortex  10  detik  dan centrifunge 1  menit lalu, membuang larutan yang ada di collection tube ,  setelah  itu  menambahkan  500  µL Solution 2  menggunakan  tip  mikropipet beserta  mikropipet  nya.  Tahap  keenam, memasukkan  kembali tube  filter ( collection tube )  ke  dalam tube ,  memvortex  10  detik  dan mensentrifuge  selama  3  menit.  Tahap  ketujuh memindahkan tube  filter ( collection  tube )  ke dalam tube baru  dan  menambahkan Solution 3  sebanyak  200  µL,  berikutnya memvortex  10 detik  dan  sentrifugasi  mini  1  menit.  DNA  siap digunakan  pada  tahap  uji  PCR  selanjutnya yakni  amplifikasi  mesin  PCR,  apabila  tidak langsung  digunakan  DNA  dapat  disimpan terlebih  dahulu  pada  suhu  20 ℃ di  dalam freezer 100  L.  Ekstraksi  sampel  nomor  057, 059,  061  organ  target  uji  yang  diambil  ialah insang  ( gill ),  sedangkan  sampel  nomor  072 organ target uji yang diambil ekor ( uropod ).

## Persiapan  Reagen  Dan  Amplifikasi  Pada Mesin PCR
Tahap  pertama  menyiapkan  reagen  di  dalam enclosures dan  memastikan  penggunaan reagen  atau  bahan  yang  diambil  dari freezer 100  L sudah  mencair  tidak  membeku,  apabila membeku  divortex  10  detik.  Tahap  kedua memperhatikan  komposisi  larutan  PCR  untuk 1  reaksi  step  1  atau First  PCR (10  µL  per reaksinya)  dengan  mencampurkan  bahan- bahan First PCR Premix 7.5 µL, IQZyme DNA Polymerase 2  U  /  µL  berjumlah  0.5  µL  dan
template DNA  (hasil  proses  ekstraksi  sampel) berjumlah  2  µL,  percampuran  bahan-bahan tersebut  menggunakan  tip  dan  mikropipet serta menaruhnya ke tube 0.5 mL yang sudah diberi  kode  tulisan  nomor  sampel  dan first PCR (step  1).  Tahap  ketiga  memperhatikan komposisi  larutan  PCR  untuk  1  reaksi  pada step  2  atau Nested  PCR (15  µL  per reaksinya),  proses  ini  dilakukan  di enclosures dengan  mencampurkan  bahan-bahan Nested PCR Premix 14 µL , IQZyme DNA Polymerase 2 U / µL berjumlah 1 µL, kedalam tube 0.5 mL baru  yang  sudah  di  beri  kode  tulisan  nomor sampel dan nested PCR (step 2), kemudian ke dua tube tersebut di taruh di rack tube . Jumlah banyaknya  bahan  yang  dipersiapkan  adalah jumlah sampel yang ditambah 1 reaksi. Tahap keempat  setelah  semua  bahan  dicampur (kecuali template DNA ),  di  bagikan  kedalam tube 0,2 mL dengan volume masing-masing 8 µL  untuk  step  1  atau first  PCR lalu  di vortex dan minispin, sedangkan  bahan  atau  larutan nested  PCR atau  step  2  disimpan  pada  suhu 4 ℃ di freezer 100  L.  Tahap  kelima menambahkan template  DNA ,  termasuk  P  (+) standart 2  µL.  Vortex  sebentar tube 0.2  mL kemudian  di minispin sebelum  dimasukkan mesin  PCR  ( thermalcycler )  dan  memastikan program  yang  dijalankan  WSSV First  PCR (step  1),  alat thermalcycler umumnya  untuk menggandakan  DNA  target  uji.  Pengaturan suhu step 1 ( First PCR ) pada thermalcycler , di antaranya  ialah  94 ℃ 30  detik,  62 ℃ 30  detik,
72 ℃ 30  detik,  diulang  sebanyak  5  siklus, kemudian 94 ℃ 15 detik, 62 ℃ 15 detik, 72 ℃ 20 detik,  diulang  sebanyak  15  siklus  dan  yang terakhir  72 ℃ 30  detik,  20 ℃ 30  detik,  sampai siklus  berakhir.  Tahap keenam, setelah  reaksi step  1  ( First  PCR )  selesai  selama  27  menit sampai siklus berakhir, memencet thermalcycler ( done )  dan  mengeluarkan tube dari  mesin  PCR  untuk  ditambahkan  reagen nested  PCR 15  µL  per  reaksinya  yang  sudah disiapkan  sebelumnya.  Tahap  ke  enam  ini dilakukan  diruang nested ( enclosures )  untuk pencampuran dimana (membuka dan menutup  tabung  dengan  cepat  dan  tepat) yang bertujuan untuk menghindari kontaminasi serta  mengganti  tip  mikropipet  untuk  tiap-tiap tube .  Tahap  ketujuh  sebelum  memasukkan tube nested  PCR dalam thermalcycler ,  di vortex dan minispin terlebih dahulu, kemudian memastikan  bahwa  sebelum product  PCR dijalankan  WSSV Nested  PCR (Step  2).
Pengaturan  suhu  step  2  ( Nested  PCR )  pada thermalcycler diantaranya  ialah  94 ℃ 20  detik,
62 ℃ 20 detik, 72 ℃ 30 detik, diulang sebanyak 25  siklus  dan  72 ℃ 30  detik,  20 ℃ 30  detik, sampai  siklus  berakhir.  Tahap  berikutnya setelah  proses  berakhir  selama  57  menit  step

## Khofifah et al., Pemeriksaan WSSV (White Spot Syndrome Virus)
2  ( nested  PCR ),  mengeluarkan tube lalu mematikan  mesin  dan product  PCR siap dijalankan pada proses elektrophoresis.
Persiapan  Elektrophoresis  Dalam  Pembuatan Larutan TAE 1X
Tahap  pertama  melarutkan  larutan  stok  TAE 10X (tris  acetate) 50  ml  ke  dalam glass  ware (erlenmeyer) yang  sudah  di  isi  450  ml aquadest  sterill .  Tahap  berikutnya  aduk menggunakan magnetic stirier sampai tercampur  rata  diatas hot  plate dengan pengaturan  stir  8  dan  waktu  3  menit  serta menutup glass  ware dengan aluminium  foil . Tahap selanjutnya, setelah 3 menit angkat dari hot plate lalu ambil magnetic stirier dan larutan TAE 1X siap digunakan.
Persiapan  Elektrophoresis  Dalam  Pembuatan 2% Gel Agarose
Tahap  pertama  menimbang  0,8  mg  bubuk agarose diatas aluminium  foil didalam analitic balance menggunakan  spatula  laboratorium, lalu memasukkan kedalam glass ware (erlenmeyer).  Tahap  kedua,  memasukkan larutan TAE 1X sebanyak 45 ml kedalam glass ware ,  kemudian  dipanaskan  diatas hot  plate untuk  menghomogenkan  larutan  gel agarose , dengan  ukuran head 7  serta  menunggu sampai  gel agarose sedikit  mendidih  atau larutan  gel agarose menjadi  bening.  Tahap ketiga  memasukkan syber  gel  stain 10  µl menggunakan tip mikropipet beserta mikropipet  kedalam  larutan  gel agarose pada saat  sedikit  mendidih  lalu  tutup  kembali dengan  aluminium  foil.  Tahap  keempat, glass ware dapat diambil dari hot plate dengan kain serbet  ketika  sudah  mendidih  dan  mematikan hot plate kemudian meletakkan diatas waterbath suhu  60 ℃ selama  3  menit.  Proses berikutnya  mematikan waterbath ,  mencetak agarose diatas  cetakan  gel  yang  sudah dipasang  sisir  ( comb )  dimana  sisir  yang  tipis berada  dibawah  dan  sisir  yang  tebal  berada diatas.  setelah  mencetak  gel agarose dapat menunggu diluar ruangan selama 20-60 menit, sebab  uap  gel agarose bersifat  karsinogenik. Gel agarose siap  digunakan  untuk  proses elektrophoresis apabila  teksturnya  sudah memadat.

## Proses Elektrophoresis
Pengoperasian elektrophoresis horizontal , diawali  dengan  persiapan  alat  dan  bahan kemudian  sebelumnya  meletakkan  gel  yang sudah  di  cetak  lalu  mengisi  tangki  dengan larutan  TAE  1X  yang  sudah  diencerkan sebanyak  500  ml,  sampai  gel agarose
terendam.  Tahap  ke  dua  menyiapkan tube ( product PCR)  yang  sudah  diamplifikasi  lalu menambahkan  (6X Loading  dye )  sebanyak  5 µl  pada  masing-masing tube sampel  WSSV dengan  memakai  tip  mikropipet  beserta mikropipetnya dan selalu menganti tip mikropipet  pada  tiap-tiap  pengambilan  (6X Loading  dye) untuk  menghindari  adanya kontaminasi. Tahap berikutnya mencampurkan  hingga homogen .  Tahap ketiga  memasukkan product PCR  yang sudah tercampur (6X Loading dye ) dengan menggunakan tip mikropipet beserta mikropipetnya kedalam sumuran gel sebanyak 5  µl.  Tahap  keempat  memasukkan  DNA marker yang  biasanya  disebut  sebagai penanda  DNA  yang  sudah  diketahui  berat molekulnya  (848  bp,  630  bp,  333  bp) sebanyak 5 µl, atau dapat menggunakan DNA 100  bp ladder .  Proses  tersebut  dalam peletakkan DNA  marker dapat  diawal  atau diakhir  deretan  sumuran  gel  dan  pada  tahap ini gel agarose berfungsi sebagai media dalam proses elektrophoresis .  Tahap  terakhir  yaitu semua sampel dimasukkan ke dalam sumuran yang mana dengan urutan DNA marker , K (+),
K  (-),  sampel  WSSV,  sampel  WSSV  duplo, lalu  memasang  tutup elektrophoresis dan menghidupkan  listrik  dengan voltase yang diatur 120 V selama 30 menit.

## Analisis  Hasil  Pada  UV  Transilluminator  Dan Dokumentasi
Tahap di awali dengan proses elektrophoresis horizontal telah selesai  dan  gel agarose diangkat dari alat elektrophoresis menggunakan  spatula  laboratorium  kemudian dipindahkan  untuk  melakukan  proses UV Transsiluminator dengan  memencet  tombol on . Tahap berikutnya didokumentasikan dengan  menggunakan  kamera  digital.  Alat elektrophoresis  horizontal serta  alat UV Transsiluminator dimatikan  lalu  dibersihkan dan  tahap  terakhir  ialah  membuang  gel agarose kedalam plastik klip.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penyebaran  WSSV  dimulai  tahun  1992 dengan  daerah  persebaran  Jepang,  Thailand, Bangladesh,  India,  Korea,  Malaysia,  Philipina hingga  ke  Indonesia,  dan  gejala  penyakit berawal  dari  interaksi  antara  inang,  agen penyakit  serta  lingkungan  (Supriatna et  al ., 2014).  Respon  imun  untuk  antibakteri  dan antijamur  pada crustacea memiliki  kesamaan dengan  kelompok  insekta,  sedangkan  respon imun  untuk  antivirus  masih  perlu  kajian  lebih lanjut.  Iqbal et  al .  (2016)  melaporkan
pemeriksaan penyakit yang viral dapat dilakukan dengan metode konvensional, yakni melalui pemeriksaan patologi mikroskopik dan isolasi  virus.  Pendekatan  biologi  molekuler umumnya  diarahkan  pada  deteksi  materi genetik  akibat  penyakit,  yang  disebut  dengan metode  PCR  (reaksi polymerase berantai) untuk  melipatgandakan  sedikit  materi  genetik (DNA)  menjadi  banyak  materi  genetik,  hal  ini
dapat  dilakukan  deteksi  keberadaan  patogen virus WSSV melalui PCR yang bekerja secara spesifik dan sensitif (Fuady et al ., 2013). Hasil pemeriksaan  WSSV  dengan  uji  PCR  pada udang vannamei di UPT Laboratorium Kesehatan  Ikan  dan  Lingkungan,  Pasuruan Jawa  Timur,  dapat  dilihat  pada tabel  1 sebagai berikut:
Tabel 1 . Pemeriksaan WSSV dengan uji PCR pada udang vannamei di UPT Laboratorium Kesehatan Ikan dan Lingkungan, Pasuruan Jawa Timur
No. Kode Sampel Organ Target Uji Keadaaan Udang Vannamei Hasil Uji PCR (WSSV) 1. 57 Insang ( gill ) Ukuran tubuh besar, udang  terlihat  tidak  segar dan  terdapat  bercak  putih dibagian eksternal udang. Positif 2. 59 Insang ( gill ) Ukuran tubuh sedang, udang  terlihat  segar,  tidak terdapat tanda-tanda infeksi virus WSSV. Negatif 3. 61 Insang ( gill ) Ukuran tubuh sedang, udang  terlihat  segar,  tidak terdapat tanda-tanda infeksi virus WSSV. Negatif 4. 72 Ekor ( Uropod ) Ukuran tubuh sedang, udang terlihat sedikit segar dan  terdapat  bercak  putih dibagian eksternal udang. Positif Tabel 1 dapat dilihat perbedaan hasil  uji PCR WSSV  pada  tiap  sampel  nya.  Sampel  yang digunakan  apabila  ditemukan  adanya  garis DNA  marker sejajar  dengan  kontrol  positif dapat  diartikan  bahwa  udang  vannamei  yang diuji tidak terinfeksi virus WSSV. Kontrol positif dalam uji PCR berfungsi sebagai indikator ada atau  tidaknya  virus  pada  sampel,  apabila kontrol positif tidak muncul biasanya dikarenakan  adanya  kontaminasi  pada  saat
pengerjaan  proses  analisa  maupun  kontrol positif  tersebut  sudah  lama  tidak  digunakan. Adapun  marker  berfungsi  sebagai  acuan  atau penanda  nilai  bp  ( basepare ),  yang  mana setiap  garis  putih  marker  bernilai  100, terkadang  pada  hasil  uji  biasanya  terdapat DNA  marker yang  tidak  begitu  jelas  warna garisnya.  Hal  tersebut  dikarenakan  pada  saat pembuatan  marker  penambahan  bahannya kurang.
Gambar 1. Hasil uji PCR WSSV Sampel Nomor 57 (Data Primer, 2022)
Harahap (2018) melaporkan bahwa hasil yang menunjukkan  kontrol  positif  muncul  dapat diartikan bahwa sampel tersebut tidak terdeteksi  adanya  virus,  namun  apabila
sampel ditemukan garis sejajar dengan kontrol positif  serta DNA  marker ,  maka  kemungkinan besar  sampel  mengalami  infeksi  virus  WSSV sejak  proses  ekstraksi,  amplifikasi  maupun

## Khofifah et al., Pemeriksaan WSSV (White Spot Syndrome Virus)
elektrophoresis .  Pernyataan  tersebut  sesuai pembacaan  hasil  uji  PCR  (+)  WSSV  berat ( severe ),  yang  terlihat  3  garis  perpendaran pita  DNA  ( band )  ukuran  910  bp,  550  bp,  296 bp,  yang  terjadi  pada  sampel  57  dan  sampel duplo  57  atau  dapat  dilihat  pada gambar  1 . Adapun  sampel  duplo  pengujian  PCR  WSSV dilakukan  dengan  tujuan  untuk  meyakinkan hasil  saat  pengujian  berlangsung,  yang  mana sampel pertama dan sampel duplo di uji dalam waktu  yang  sama.  Reaksi  yang  terjadi  pada tahap amplifikasi ini umumnya untuk meningkatkan  jumlah  salinan  urutan  DNA. Kegiatan  yang  dilakukan  sesuai  dengan pernyataan  Kurniawati et  al .  (2019)  bahwa proses  amplifikasi  dapat  menggandakan  atau mereplikasi  suatu  DNA  yang  awalnya  sedikit menjadi banyak atau berlipat ganda.
WSSV  dapat  teridentifikasi  secara  cepat  dan tepat  pada  berbagai  stadia  udang  baik  dari alam  ataupun  udang  dari  lokasi  budidaya dengan  menggunakan  metode  PCR.  Virus
WSSV  adalah  virus  yang  disebabkan  virus SEMBV dan termasuk golongan virus berbahan genetik DNA berbentuk batang. Fajri (2017)  melaporkan  bahwa  virus  merupakan partikel  elemen  genetik  yang  mengandung salah  satu  asam  nukleat  yaitu  DNA  (Asam Deoksiribo  Nukleat )  dan  RNA  (Asam Ribo Nukleat )  yang  berada  dalam  dua  kondisi berbeda,  yakni  secara  intraseluler  dalam tubuh  inang  dan  ekstraseluler  diluar  tubuh inang.  Kasus  penyakit  bercak  putih  yang terjadi  pada  udang  vannamei  umumnya  akan menyerang  beberapa  organ  vital  diantaranya sel-sel  insang,  hepatopankreas  dan  usus, yang  mana  kerusakan  ini  ditandai  dengan hipertropi inti dan inklusi sel tubuh. Iqbal et al .
(2016)  menyatakan  mengenai  bercak  putih pada  karapas  dengan  diameter  0,5-0,3  nm akan  terjadi  pada  fase  akut,  sedangkan  pada induk  udang  akan  berwarna  merah,  karena virus  WSSV  termasuk  virus  ganas  dan mempunyai  tiga  selaput  ( envelope )  yang melindungi inti ( nucleocapsid ).
Gambar 2. Hasil uji PCR WSSV Sampel Nomor 59 dan 61 (Data Primer, 2022)
Pembacaan hasil (-) WSSV negatif menunjukkan  1  garis  perpendaran  pita  DNA ( band )  dengan  ukuran  848  bp,  seperti  pada sampel  59  dan  61  atau  dapat  dilihat  pada gambar  2 .  Hasil  negatif  didapatkan  dari  tidak adanya  infeksi  WSSV.  Rante et  al .  (2012) menyatakan  bahwa  deteksi  virus  WSSV  pada udang vannamei dengan metode PCR Konvensional  yang  hasilnya  negatif  masih perlu  di  kontrol  tambak  udang  vannamei seperti manajemen kualitas airnya, pemberian pakan  dan  lain  sebagainya  dengan  tujuan menghindari  infeksi  virus  WSSV. Boyd  (1990) melaporkan oksigen terlarut merupakan parameter utama kualitas air yang
berpengaruh  terhadap  pertumbuhan  dan kelangsungan  hidup  udang,  yang  mana meliputi  gangguan  fungsi  biologis  dengan terserangnya  virus,  lambatnya  pertumbuhan, nafsu  makan  rendah,  konversi  pakan  tinggi, bahkan dapat mengakibatkan kematian. Musim  kemarau  menjadikan  salinitas  air tambak  bersifat hypersaline (berkadar  garam tinggi,  lebih  dari  40  ppt),  hal  ini  menjadikan udang  vannamei tidak  tumbuh,  akan  tetapi udang  vannamei memiliki  toleransi  salinitas luas  ( euryhalin )  sehingga  dapat  dipelihara diperairan  bersalinitas  1-40  ppt  (Anita et  al ., 2017).
Gambar 3. Hasil uji PCR WSSV Sampel Nomor 72 (Data Primer, 2022)
Sampel  72  menunjukkan  hasil  (+)  WSSV ringan ( light ) yang terlihat 1 garis perpendaran pita  DNA  ( band )  dengan  ukuran  296  bp. Dokumentasi  hasil  sampel  57,  59,  61  dan  72 menunjukkan persamaan akan fungsi penggunaan DNA marker dalam pemerikasaan  Uji  PCR  WSSV.  Perbedaan terletak  pada  penggunaan DNA marker yang berbeda,  sampel  72  menggunakan  marker umum  (marker  100  bp ladder ),  sedangkan sampel  57,  59  dan  61  menggunakan DNA marker yang sudah diketahui berat molekulnya (848 bp, 630 bp, 333 bp), penggunaan marker umum  dikarenakan  bahan  dari  IQ2000  WSSV (DNA marker )  di  UPT  LKIL,  Pasuruan  Jawa Timur  habis.  Virus  WSSV  pada  udang menginfeksi pada tingkat ringan dan beberapa tingkatan.  Infeksi  hasil  positif  WSSV  tingkat berat  ( severe )  terjadi  seperti  pada  sampel  57, hasil  positif  WSSV  tingkat  sedang  ( medium ) terjadi  apabila  terlihat  garis  perpendaran  pita DNA  ( band )  dengan  ukuran  550  bp  dan  296 bp, kemudian hasil positif WSSV tingkat ringan (light)  terjadi  seperti  pada  sampel  72  serta hasil  negatif  terjadi  seperti  pada  sampel  59 dan 61. Hasil akurat pemeriksaan virus WSSV dengan  uji  PCR  diperoleh  dari  tidak  adanya kontaminasi  selama  berlangsungnya  uji  (UPT LKIL PASURUAN, 2021).
Penularan  virus  WSSV  secara  umum  melalui hewan  perantara  ( carrier )  yakni  burung  camar serta  adanya  sifat  kanibal  udang  vannamei, bermula  pada  udang  yang  sehat  memakan udang yang terinfeksi WSSV, sehingga udang yang  sehat  dapat  tertular  virus  tersebut. Infeksi  WSSV  sangat  patogenik  pada  kondisi udang  yang  diberikan  tekanan,  hal  ini  karena mekanisme  pertahanan  tubuh  udang  tidak dapat  mencegah  atau  menahan  perbanyakan WSSV  dibawah  kondisi  stress.  Kandungan oksigen  terlarut  dalam  air  dapat  mendukung kehidupan udang minimum 3 mg/L,
sedangkan  untuk  pertumbuhan  yang  normal bagi  udang  yaitu  4-7  mg/L.  Kadar  oksigen terlarut 3 mg/L walaupun tidak memperlihatkan  gejala  abnormal  akan  tetapi sebenarnya  berpengaruh  pada  pertumbuhan udang  (Rahma et  al .,  2014).  Pendeteksian virus  WSSV  dengan  uji  PCR  mendapati  hasil uji  positif  WSSV  berat  ( severe )  dan  positif WSSV ringan ( light ) terjadi karena kemungkinan  besar  terinfeksi  melalui  air media yang terkontaminasi WSSV.
Perkembangbiakan  virus  mempunyai  arti penting  agar  mengetahui  bagaimana  virus masuk  dan  keluar  dari  sel  inang,  bagaimana virus bisa mematikan atau mentransformasikan  sel.  Reproduksi  dalam virus  terdapat  beberapa  tahap  diantaranya adsorpsi (fase  penempelan),  virus  pada  sel inang,  injeksi  (fase  memasukkan  asam  inti), sintesis  (fase  pembentukan),  perakitan  dan lisis  (fase  pemecahan  sel  inang).  Sari  (2018) melaporkan  bahwa  tahapan-tahapan  daur hidup virus dapat dibedakan menjadi daur litik dan daur lisogenik.
Infeksi  WSSV  mengakibatkan  perubahan bentuk  tubuh,  ukuran  benih  yang  tidak seragam, pertumbuhan lambat, adanya mortalitas serta tanda bintik putih pada bagian eksternal  udang  vannamei.  Perubahan  iklim yang terjadi maka tidak menutup kemungkinan terjadinya  mutasi  virus  yang  mengakibatkan perubahan  sifat  virus  tersebut  menjadi  lebih membahayakan.  Pengendalian  virus  WSSV dapat  dilakukan  dengan  cara  melakukan penebaran  benih  yang  diketahui  bebas  virus melalui  deteksi  dengan  uji  PCR  pada  benih ataupun naupli (f1), menghindari pemeliharaan udang pada musim bediding/musim pancaroba (suhu air terlalu rendah), menghindari pemberian pakan secara berlebihan yang dapat menimbulkan
kerusakan  lingkungan,  menghindari  penyebab stress  dengan  melakukan  pergantian  air secara  rutin  dan  lain  sebagaiannya.  Adapun benih  yang  akan  dikeluarkan  dari  unit pembenihan dan dibesarkan ditambak sebaiknya dilakukan uji laboratorium (uji PCR). Koesharyani et  al .  (2015)  melaporkan  hal tersebut  dilakukan  guna  memastikan  benih bebas penyakit dan virus, sehingga kegagalan panen  dapat  diminimalkan.  Upaya  monitoring untuk  mencegah  WSSV  pada  tambak  udang vannamei  sangat  disarankan  untuk  dilakukan metode pengawasan kesehatan tambak (Hidayani et al ., 2015).

## KESIMPULAN DAN SARAN
Pemeriksaan  WSSV  ( White  Spot  Syndrome Virus )  dengan  uji  PCR  ( Polymerase  Chain Reaction ) pada udang vannamei ( Litopenaeus vannamei )  di  UPT  Laboratorium  Kesehatan Ikan  dan  Lingkungan,  Pasuruan  Jawa  Timur, yang  mana  prosedur  diawali  persiapan sampel,  ekstraksi  sampel,  persiapan  reagen, amplifikasi  pada  mesin  PCR,  persiapan elektroforesis,  proses elektrophoresis ,  analisis hasil  pada UV  Transilluminator ,  dokumentasi hasil dan pembacaan hasil. Hasil pemeriksaan sampel  59  dan  61  menunjukkan  hasil  WSSV negatif  (tidak  terdeteksi  WSSV).  Pembacaan sampel 57 didapatkan hasil uji PCR (+) WSSV berat  ( severe )  dan  sampel  72  menunjukkan hasil (+)  WSSV ringan ( light ). Upaya monitoring  untuk  mencegah  WSSV  pada tambak  udang vannamei sangat  disarankan untuk dilakukan metode pengawasan kesehatan tambak.

## DAFTAR PUSTAKA
Amrillah,  A.  M.,  Widyarti,  S.,  &  Kilawati,  Y.
(2015). Dampak stres salinitas terhadap prevalensi  White  Spot  Syndrome  Virus (WSSV)  dan  survival  rate  udang vannamei ( Litopenaeus vannamei ) pada kondisi  terkontrol. Research  Journal  of Life Science , 2 (2), 110-123.
Anita,  A.  W.,  Agus,  M  dan  Mardiana,  T.  Y. (2017).  Pengaruh  Perbedaan  Salinitas terhadap
Pertumbuhan dan Kelangsungan  Hidup  Larva  Udang
Vannamei  ( Litopenaeus  vannamei )  PL- 13. PENA Akuatika, 16 (1), 12 –19.
Boyd.  (1990). Water  Quality  In  Pond  For Aquaculture .
Auburn University Alabama. Direktorat  Jenderal  Perikanan  Budidaya,  D. J. P.  (2018). Capaian  Kinerja  Subsektor
Perikanan Budidaya dan Outlook Tahun 2018. KKP.
Jakarta.
https://kkp.go.id/djpb/artikel/3042- capian-kinerja-subsektor-perikanan- budidayadan-outlook-tahun-2018 [5
November 2018] Fajri,  N.A.  (2017).  Deteksi WSSV  ( White  Spot Syndrome  Virus )  Pada  Lobster  Air
Tawar ( Procambarus clarkia ) Menggunakan  Metode Real  Time -PCR. Genec Swara, 11 (2), 33-38.
Fauzi,  M.,  Kristiani,  M.  G.  E.,  Hapsari,  F.,  & Putra,  A.  (2023).  Hasil  Produksi  Dan Analisis  Usaha  Pembesaran  Udang. Fisheries of Wallacea Journal, 4 (1), 10 –
18
Fuady,  M.  F.,  &  Nitisupardjo,  M.  (2013).
Pengaruh pengelolaan kualitas air terhadap tingkat kelulushidupan dan laju pertumbuhan udang vaname
( Litopenaeus  vannamei )  di  PT.  Indokor Bangun  Desa,Yogyakarta. Management of Aquatic Resources Journal
(MAQUARES) , 2 (4), 155-162.
Harahap, M. R. (2018). Elektroforesis: Analisis elektronika terhadap biokimia genetika. CIRCUIT: Jurnal Ilmiah
Pendidikan Teknik Elektro , 2 (1), 21- 26.
Hidayani, A. A., Malina, A. C., Tampangallo, B. R.,  &  Fathurrahman,  A.  F.  (2015). Deteksi  distribusi  white  spot  syndrome virus  pada  berbagai  organ  udang vaname  ( Litopenaeus  vannamei ). Torani Journal of Fisheries and Marine Science , 25 (1), 1-6. IQ2000TM. IQ2000TM  WSSV  Instruction Manual .  (2014).  Taiwan:  Gene  Reach Biotecnologhy Corporation.
Iqbal,  M.,  Buwono,  I.  D.,  &  Kurniawati,  N.
(2016).  Analisis  perbandingan  metode isolasi  DNA  untuk  deteksi  white  spot syndrome  virus  (WSSV)  pada  udang vaname ( Litopenaeus vannamei ). Jurnal Perikanan Kelautan , 7 (1), 54 – 65.
Koesharyani,  I.,  Gardenia,  L.,  &  Mufidah,  T.
(2015). Sebaran Infeksi Taura Syndrome,  Infectious  Myonecrosis,  dan Penaeus vannamei Nervous Virus (TSV, IMNV, dan PVNV) pada Budidaya Udang Litopenaeus  vannamei di  Jawa Barat,  Jawa  Timur,  dan  Bali. Jurnal Riset Akuakultur , 10 (3), 415-422.
Kurniawati,  M.  D.,  Sumaryam,  S.,  &  Hayati,  I.
N.  (2019).  Aplikasi  polymerase  chain
reaction  (PCR)  konvensional  dan  real time-pcr  untuk  deteksi  virus  vnn  (viral nervous  necrosis)  pada  ikan  kerapu macan ( Epinephelus fuscoguttatus ) T echno-Fish , 3 (1), 19-30.
Latritiani,  R.,  Desrina  dan  Sarjito.  (2017).
Keberadaan White  Spot  Syndrome
Virus (WSSV)  pada  Udang  Vannamei ( Litopenaeus vannamei ) di Pertambakan Kota Pekalongan. Journal
of Aquaculture Management and Technology , 6 (3), 276 –283.
Mahyudin.,  Soemarno  dan  Tri,  B,  P.  2015.
Analisis  Kualitas  Air  dan  Strategi Pengendalian  Pencemaraan  Air  Sungai
Metro  di  Kota  Kepanjen,  Kabupaten Malang . J-PAL, 6 (2), 105-114.
Nuhman. (2009). Pengaruh Prosentase Pemberian Pakan Terhadap Kelangsungan Hidup dan Laju Pertumbuhan Udang Vaname ( Litopenaeus  vannamei ). Jurnal  Ilmiah Perikanan dan Kelautan, 1 (2), 193-197. Pratama,  A.,  Wardiyanto  dan  S.  (2017).  Studi Performa  Udang  Vaname  ( Litopenaeus vannamei )  Yang  Dipelihara  Dengan Sistem  Semi  Intensif  Pada  Kondisi  Air
Tambak  Dengan  Kelimpahan  Plankton
Yang  Berbeda  Pada  Saat  Penebaran.
Jurnal Rekayasa Dan Teknologi
Budidaya Perikanan, 6 (1), 643 –652. Putri,  D.  S.,  Affandi,  M.  I.,  &  Sayekti,  W.  D. 2020. Analisis Kinerja Usaha Dan Risiko
Petambak Udang Vaname Pada Sistem Tradisional  Dan  Sistem  Semi  Intensifdi Kecamatan Labuhan Maringgai Kabupaten Lampung Timur. Jurnal Ilmu- Ilmu Agribisnis , 8 (4),
625. https://doi.org/10.23960/jiia.v8i4.4707 Rahma, H. N., Prayitno, S. B., & Haditomo, A. H. C. (2014). Infeksi white spot syndrom virus  (WSSV)  pada  udang  windu ( Penaeus monodon fabr.) yang dipelihara  pada  salinitas  media  yang berbeda. Journal
of Aquaculture Management  and  Technology , 3 (3),  26- 34. Rahmi,  R.,  Annawaty,  A.,  &  Fahri,  F.  (2016). Keanekaragaman  Jenis  Udang  Air
Tawar  Di  Sungai  Tinombo  Kecamatan
Tinombo  Kabupaten  Parigi  Moutong Provinsi
Sulawesi Tengah. Natural Science:  Journal  of  Science  and Technology , 5 (2), 199-208. Rante,  B.T.,  Muliani  and  Koko,  K.  (2012). Several  Stressing  Methods  To  Induce The  Development  Of  WSSV  ( White Spot  Syndrome  Virus )  On  Tiger  Shrimp Shrimp  Fries  ( Penaeus  monodon ).
Aquaculture  Research  Journal,  7 (3),
465 – 475. Sari, N. (2018). Upaya Meningkatkan Kreativitas  Dan  Hasil  Belajar  Siswa Dengan Penggunaan Media Alat
Peraga  Pada  Materi  Virus  Di  Mas Muta’allimin  Kecamatan  Blang  Bintang Aceh  Besar .  Skripsi.  Fakultas  Tarbiyah Dan Keguruan, Universitas Islam Negeri Ar-Raniry Banda Aceh. Aceh.
Supriatna,  I.,  Yustiati,  A  dan  Iskandar,  I.
(2014). Sekuen Asam Amino Anti White Spot  Syndrome  Virus (WSSV)  Pada Udang  Windu ( Penaeus  Monodon ), Bionatura, 16(1), 40 –46.
Yasin,  M,  I.  2021.  Studi  Penyakit  dan Penanggulangan  Bahan  Kimia  Pada Tambak  Udang  Vaname  ( Litopenaeus vannamei ) Di Kabupaten Mamuju Tengah Menggunakan Liquid Chromatography Tandem-Mass Spectrometry Dan  Diagnosa  Molekuler.
Jurnal Ilmiah Maju, 4 (2), 6-13.