## ANALISIS KADAR SIANIDA PADA REBUNG BERDASARKAN VOLUME UKURAN DARI KECAMATAN BAJENG KABUPATEN GOWA
Analysis of Sianida Contents on Bamboo Shoot Based on The Size Volume From Bajeng Sub-District, District of Gowa
Dewi Arisanti * , Nur Qadri Rasyid, Muh.Nasir
Study Program of Health Analyst, Academy of Health Analyst Muhammadiyah Makassar-Indonesia
*Corresponding author, e-mail: dewiharimuswarah@gmail.com
Received: April 2018 Published: July 2018

## ABSTRACT
Bamboo shoots are young shoots from bamboo shoots. Bamboo shoots contain cyanide content if consumed can cause  shortness  of  breath,  decreased  blood  pressure,  rapid  pulse,  headache,  nausea,  diarrhea,  mental  disorders and seizures.  Continuous consumption  with low doses causes  mumps and dwarfism and neurological diseases. This  study  aims  to  determine  how  much  cyanide  levels  in  bamboo  shoots  and  this  type  of  research  is  a descriptive  laboratory  experiment.  The  sample  that  used  in  this  study  is  3  samples  based  on  the  size  of  the volume. The sampling technique is by means of purposive sampling that is looking at the criteria based on large, medium  and  small  size  types.  Analysis  of  cyanide  levels  was  obtained  by  UV-Vis  Spectrophotometer  with  a wavelength of 582 nm. The results showed that large size bamboo shoots were height = 27 cm; diameter = 16 cm has a cyanide content of 21.84 mg/Kg, medium size were height = 18 cm; diameter = 7 cm has a cyanide content of 18.40 mg/Kg and a small size of height = 8 cm; diameter = 4 cm has cyanide content of 4.65 mg/Kg. Thus it can be concluded that the greater the size of bamboo shoots, the greater the level of cyanide.
Keywords : Analysis, bamboo shoot, cianida, spektrofotometer UV-Vis

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  negara  yang  kaya akan sumber daya alam dengan kesuburan tanah yang luar biasa. Semua kekayaan alam yang ada di  Indonesia  memiliki  banyak  kegunaan  dan manfaat  oleh  setiap  manusia.  Misalnya  rebung bambu yang telah membudaya sebagai salah satu bahan  masakan  tradisional  yang  cukup  popular di masyarakat (Kencana dkk., 2009).
Rebung  mengandung nilai gizi yang cukup baik  dimana  setiap  100  gr  rebung  mengandung, 27  kkal  energi,  2.6  gr  protein,  0.3  gr lemak,  5.2 gr karbohidrat, 13 mg kalsium, 59 mg fosfor, 0.5 mg  besi,  20  SI  vitamin  A,  0.15  mg  vitamin  B1 dan  4  mg  vitamin  C,  dan  merupakan  makanan yang  kaya  serat  dan  sumber  kalium  yang  baik sehingga  dapat  menurunkan  kolesterol  darah serta  resiko  penyakit  kardiovaskuler.  Namun, dari  beberapa  manfaat  dari  rebung  terdapat kandungan  asam  sianida  yang    tidak  diketahui masyarakat  umum.  Kandungan  sianida  yang terdapat  pada  rebung  berpengaruh  pada  volume ukuran  dan  lamanya  usia  rebung  tersebut.
Semakin  tua  rebung  maka  akan  terasa  pahit  dan kadar sianidanya semakin tinggi. Rebung bambu mengandung asam sianida sekitar 245 mg/100 g dan  bervariasi  tergantung  pada  jenis  bambunya (Kencana dkk., 2012).
Asam  sianida  merupakan  senyawa  yang berbahaya  baik  bagi  manusia  maupun  hewan. Fsanz  (2005)  menyatakan  dosis  letal  asam sianida  pada  manusia  dilaporkan  0.5-3.5  mg/Kg berat badan. Gejala keracunan akut asam sianida pada manusia meliputi: nafas tersengal, penurunan  tekanan  darah,  denyut  nadi  cepat, sakit  kepala,  sakit  perut,  mual,  diare,  pusing, kekacauan  mental  dan  kejang.  mengkonsumsi terus  menerus  dalam  dosis  yang  rendah menyebabkan berbagai penyakit seperti penyakit gondok,  kekerdilan  serta  penyakit  neurologis (Bradbury dan Holloway, 1988).
Cara  pengolahan  rebung  yang  baik  agar dapat  mengurangi  sianida  yaitu  dicuci  pada  air yang mengalir, dilakukan pengupasan menggunakan pisau stainless, perendaman dengan air garam, pemotongan secara halus, dan perebusan kurang lebih 30 menit serta jika belum
ingin  dimasak,  alangkah  baiknya  disimpan  pada lemari es agar kualitas rebung terjaga.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui kandungan  kadar  sianida  yang  terdapat  pada rebung pada kondisi mentah berdasarkan volume ukuran  (kecil,  sedang  dan  besar).  Penelitian  ini dapat  memberikan  informasi  kepada  masyarakat tentang  bagaimana  cara  mengolah  bahan makanan  yang  baik  agar  kesehatan  masyarakat dapat terjaga.

## METODOLOGI

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  adalah  sampel rebung,  larutan  KCN,  larutan  AgNO 3 0,1  M, NaCl,  rhodamin,  larutan  indikator  K 2 CrO 4 5%, larutan NaOH 2%, larutan ammonium amidosulfat  10%,  larutan  EDTA,  Asam  fosfat H 2 PO 4 Asam asetat pekat (1+8), larutan indikator fenolftalein  0,5%,  larutan  kalium  di-hidrogen fosfat  20%,  larutan  baku  fosfat  pH  7,2,  larutan kloramin-T, larutan HCl (1+10), larutan 4-piridin asam  karboksilat-pirazolon/  asam  barbiturat handscoon , masker, dan akuades.

## Alat
Alat  yang  digunakan  adalah  pisau,  ember, blender, labu ukur 50 ml,  100 ml, 250  ml, 1000 ml,  timbangan  analitik,  gelas  ukur  100  ml,  alat destilasi, alat spektrofotometer UV-Vis

## Prosedur Kerja Pengambilan Sampel
Sampel  penelitian  diambil  secara  langsung dari  lahan  warga  di  Kecamatan  Bajeng Kabupaten  Gowa.  Sampel  diambil  dengan kriteria berdasarkan kriteria ukurannya (Yuningsih, 2008)
1. Sampel  A  =  Sampel  rebung  yang  diambil dengan volume ukuran kecil (dengan diameter  kurang  lebih  5  cm  dengan  tinggi  5- 15 cm).
2. Sampel  B  =  Sampel  rebung  yang  diambil dengan    volume  ukuran  sedang  (dengan diameter 5-10 cm dengan tinggi 15-20 cm).
3. Sampel  C  =  Sampel  rebung  yang  diambil dengan  volume  ukur  besar  (dengan  diameter 10-20 cm dengan tinggi lebih dari 20 cm)
Setelah  pengambilan  sampel  selesai,  dilakukan perlakuan pada sampel rebung  yaitu dibersihkan
dan  dihaluskan  kemudian  dilakukan  pengukuran kadar asam sianida.

## b. Pengolahan Sampel
Sampel  kemudian  disimpan  pada  suhu ruang  25 0 C  -  30 o C,  lalu  sampel  dikupas, kemudian  dibersihkan,  dipotong  dan  dihaluskan menggunakan  blender  dengan  penambahan akuades  untuk  memudahkan  penghalusan  dan melarutkan  sianida  yang  terkandung  dalam sampel. Setelah halus, sampel kemudian dikeluarkan  dari  blender  kemudian  dimasukkan kedalam  gelas  kimia  dan  ditutup  dengan aluminium foil untuk mencegah autohidrolisisnya  sampel  kemudian  dilakukan pengukuran kadar asam sianida.
c. Persiapan Pengujian Asam Sianida (HCN)

## 1. Pembakuan larutan induk.
Pipet  50  ml  larutan  induk  sianida, tambahkan  0,25  ml  indikator  rhodamin.  Titrasi dengan  larutan  AgNO 3 0,1  M  sampai  titik  akhir (warna  kuning  menjadi  merah),  hitung  kadar sianida  dalam  larutan  induk  dengan  persamaan berikut:
C= a x f x 5,204 x 1/5
Keterangan : C   = Kadar ion sianida CN - dan larutan induk (mg/ml). a   = Volume larutan AgNO 3 0,1 M yang dibutuhkan untuk titrasi (ml).
f   = Faktor larutan AgNO 3 0,1 M. 5,204 = Ion sianida setara dengan 1 ml AgNO 3 0,1 M

## 2. Pembuatan kurva kalibrasi
Dioptimasikan  alat  spektrofotometer  untuk pengujian  kadar  asam  sianida  sesuai  petunjuk penggunaan alat pipet 0,1; 0,5; 1; 2; 4; 5; 7; dan 9  ml  larutan  baku  sianida  CN - 1  mg/l  masing- masing kedalam labu ukur 50 ml. Tambahkan air suling sehingga volume menjadi kurang lebih 10 ml.  Ditambahkan  1  tetes  indikator  fenolftalein dan  netralkan  dengan  asam  asetat  sampai  warna merah  menghilang.  tambahkan  kurang  lebih  10 ml larutan buffer fosfat pH 7,2. Ditambahkan 0,5 ml  larutan  kloramin-T  dan  dibiarkan  pada  suhu ruang  25 o C  –  30 o C  selama  5  menit. Ditambahkan  10  ml  larutan  4-piridin  asam karboksilat-pirazolon lalu tepatkan dengan akuades,  ditutup,  dikocok  dan  dibiarkan  pada
suhu  ruang  kurang  lebih  30  menit.  Setelah ditepatkan,  kadar  sianida  CN - dalam  larutan adalah  0,01;  0,02;  0,04;  0,08;  0,10;  0,14;  dan 0,18 mg/l. buat kurva kalibrasi dengan membaca dan mencatat absorbansi masuknya pada panjang gelombang optimal disekitar 582 nm.

## 3. Destilasi sampel
Ditimbang  50  gr  sampel  yang  telah dihaluskan  dan  masukkankedalam  labu  didih, tambahkan akuades hingga volume  kurang lebih 200  ml,  tambahkan  3  tetes  larutan  indikator fenolftalein  0,5%,  lalu  ditambahkan  ammonium amidosulfat  10%  sebanyak  1  ml  sampai  larutan bersifat  asam  dan  larutan  berwarna  merah. Ditambahkan  lagi  dengan  asam  phophat  10  ml ditambahkan  larutan  EDTA  10  ml,  pasang  alat destilasi  dan  alat  penampung  destilat  pada Erlenmeyer yang berisi 20 ml larutan NaOH 2%. Bilas injection  funnel dengan  akuades.  Alat destilasi  dipanaskandan  kecepatan  destilasi sekitar  2-3  ml/menit.  Destilat  ditampung  sampai kurang  lebih  100  ml  dan  dibilas  pendingin dengan akuades.

## 4. Pengujian asam sianida (HCN)
Dinetralkan  hasil  destilat  dengan  HCl  1:1 sampai  bersifat  asam.  Kemudian  sampel  dipipet 1mlmasukkan  kedalam  labu  ukur  100  ml  yang telah  dicukupkan  dengan  akuades  sampai  tanda tera. Lalu sampel yang telah dicukupkan dengan akuades dipipet sebanyak 20 ml dan dimasukkan kedalam  gelas  ukur  lalu  ditambahkan  dengan 4ml  larutan  NaH 2 PO 4 lalu  ditambahkan  lagi dengan  kloramin  T  sebanyak  2  ml  dan  terakhir ditambahkan  lagi  dengan  asam  Barbipurat sebanyak  5  ml,  lalu  dikocok  sampai  berubah warna  menjadi  ungu  keping  pingan  jika  positif sianida,  dimasukkan  kedalam  kuvet  pada spektrofotometer,  ukur  dan  catat  absorbannya dengan panjang gelombang 582 nm. Selanjutnya dilakukan pengukuran yang sama pada blanko.

## 5. Perhitungan Kadar Sianida
Dimasukkan  hasil  pembacaan  absorbansi larutan  blanko  ke  dalam  kurva  kalibrasi. Masukkan  hasil  pembacaan  absorbansi  larutan
sampel  kedalam  kurva  kalibrasi.  Kadar  sianida yang sesungguhnya adalah:
CN (mg/Kg) = x fp
Keterangan : a = konsentrasi sampel dari alat spektrofotometer b = sampel uji yang di destilasi (100 ml) dijadikan ke liter c = berat sampel yang ditimbang dari gr dijadikan Kg. d = faktor pengenceran

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  pemeriksaan  kadar  sianida  diperoleh dalam  bentuk  mg/Kg  kemudian  hasilnya  sesuai dengan    penelitian  tentang  kadar  sianida  yang tidak berbahaya <50mg/Kg rebung dan berbahaya  >100  mg/Kg  rebung  (Julistiana, 2009).  Kandungan  kadar  sianida  pada  rebung berdasarkan  volume  ukuran  dapat  dilihat  pada Tabel 1.
Tabel 1 Hasil pemeriksaan analisis kadar sianida pada rebung berdasarkan volume ukuran yang berada di Kecamatan Bajeng Kabupaten Gowa.
No.  Sampel Ukuran Satuan Kadar sianida 1. Rebung Besar d: 10-20 cm t : ≥ 20 cm mg/Kg 21,84 2. Rebung sedang d: 5-10 cm t:15-20 cm mg/Kg 18,40 3. Rebung kecil d: ≤ 5 cm t :5-15 cm mg/Kg 4,65
Rebung  berdasarkan  varietas  ukuran  ini diambil  didaerah  Kecamatan  Bajeng  Kabupaten Gowa.  Sebelum  dilakukan  pemeriksaan  rebung tersebut dikupas kulitnya dan dibersihkan namun tidak  dibilas  dengan  menggunakan  air  karena sianida  yang  terkandung  didalam  rebung  sangat mudah larut didalam air. Rebung di potong dadu- dadu  agar  sianida  yang  terkandung  didalam rebung  tidak  mudah  menguap,  lalu  di  blender agar mempermudah pemeriksaan.
Lalu  dilakukan  proses  destilasi  guna  untuk pemisahan  bahan  kimia  berdasarkan  perbedaan kecepatan atau kemudahan menguap (volatilitas) bahan  atau  teknik  pemisahan  kimia  berdasarkan perbedaan  titik  didih.  Dalam  penyulingan, campuran  zat  dididihkan  sehingga  menguap  dan uap  ini  kemudian  didinginkan  kembali  kedalam bentuk cairan.
Pada  proses  destilasi  ini  penambahan ammonium amidosulfat berfungsi untuk mengikat  kation-kation  yang  ada  pada  sampel dan sifatnya sangat larut didalam air. Penambahan larutan EDTA 10% berfungsi untuk pemisahan  logam-logam  yang  lantanida  melalui kromatorgrafi  penukaran  ion.  Penambahan larutan    NaOH  2%  yaitu  sebagai  larutan  baku yang  bersifat  basa  yang  berfungsi  untuk membentuk  larutan  alkalis  yang  kuat,  sangat mudah  larut  didalam  air,  sifatnya  lembab,  cair dan  secara  spontan  menyerap  karbondioksida dari  udara  bebas  dan  penambahan  indikator phenolftalein atau disebut indikator PP
digunakan dalam titrasi asam-basa dan mempermudah  reaksi  dalam  proses  perubahan warna.
Sebelum  pengujian  sianida  hasil  destilasi sampel  rebung  harus  bersifat  asam  dengan penambahan  larutan  HCl  yang  berfungsi  untuk mengatur  keasaman yang telah ditetapkan dalam pengukuran spekrofotometer. Penambahan dapar posphat  berfungsi  untuk  mengatur  pH.  pH asam<7  dan  pH  basa  >7,  larutan  agar  tetap konstan  di  area  mendekati  pH  7.  Penambahan larutan kloramin T berfungsi untuk menghasilkan  sianogen  klorida  (CNCl)  pH kloramin  T  akan  bereaksi  pada  pH  ≤  8  dan penambahan  asam  barbiturat  untuk  memberikan intensitas  warna  ungu  yang  berbanding  lurus dengan kadar sianida pada sampel.
Pembacaan  sianida  menggunakan  alat spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang  582  nm.  Karena  panjang  gelombang maksimumpada pengujian sianida yaitu 582 nm. Oleh  karena  itu  panjang  gelombang  ini  yang digunakan dan panjang gelombang pada parameter  pemeriksaan  berbeda-beda  tergantung dari  jenis  pemeriksaannya.  Pada  penelitian  ini pada  saat  pembacaan  kadar  sianida  pada  alat ditemukan nilai yang melebihi dari standar maka sampel  rebung  tersebut  dilakukan  pengenceran agar  nilai  absorban  yang  didapatkan  sesuai dengan standar kalibrasi pada alat.
Berdasarkan volume ukuran  diperoleh hasil dalam  bentuk  kadar  sianida  pada  rebung  yakni
sampel  rebung  dengan  ukuran  besar  dengan tinggi  27  cm  dengan  diameter  16  cm  dengan kadar  21,84  mg/Kg,  sampel  rebung  dengan ukuran  sedang  dengan  tinggi  18  cm  dengan diameter  7  cm  dengan  kadar  18,40  mg/Kg  dan rebung  dengan  ukuran  kecil  dengan  tinggi  8cm dengan diameter 4 cm dengan kadar 4,65 mg/Kg. Perbedaan  kadar  pada  rebung  dapat  dilihat  pada diagram  batang  dibawah  ini  yang  menunjukkan bahwa  kadar  sianida  lebih  tinggi  pada  rebung besar  dibandingkan  rebung  sedang  dan  rebung kecil.
Gambar 1 . Grafik kenaikan sianida berdasarkan volume ukuran
Faktor yang mempengaruhi terdapat perbedaan  kadar  sianida  berdasarkan  volume ukuran karena adanya getah yang berwarna putih secara  alami  disetiap  tunas  rebung  tersebut. Dimana  getah  putih  itu  mengandung  zat glukosida  sianogenik.  Semakin  besar  rebung maka  getah  yang  dihasilkan  juga  semakin banyak.  Rasa  rebung  juga  semakin  pahit  yang menandakan kandungan sianidanya juga semakin banyak.  Begitupula  sebaliknya    jika  semakin kecil  rebung  getah  putih  yang  dihasilkan  juga sedikit  sehingga  kadar  sianida  dalam  rebung tersebut juga sedikit.
Hubungan  dari  zat  glikosida  sianogenik dengan  sianida  yaitu  dimana  kita  ketahui bahwa glikosida sianogenik adalah senyawa hidrokarbon  yang  terikat  dengan  gugus  CN  dan gula.  Beberapa  tanaman  tingkat  tinggi  dapat melakukan  sianogenesis  yakni  membentuk glikosida  sianogen  sebagai  hasil  sampingan reaksi  biokimia  dalam  tanaman.  Glikosida
sianogenik  ini  terdapat  pada  tanaman  singkong, almond, bambu, shorgum.
Tahap  pelepasan  asam  sianida,  glikosida sianogenik  dapat  terhidrolisis  secara  enzimatis menghasilkan asam sianida (HCN). Hidrolisis ini dilakukan oleh enzim beta glikosida. Menghasilkan  gula  dan  sianohidrin.  Degradasi sianohidrin  menjadi  HCN  dan  senyawa  keton aldehid.  Asam  sianida  dilepaskan  oleh  glikosida sianogenik merupakan senyawa toksik berspektrum  luas  pada  setiap  organisme  hal  ini disebabkan  karena  kemampuannya  mengikat Fe 2+ , Mn 2+ dan CU 2+ (Smith dan Mudder 1991).
Racun  alami  pada  rebung  yaitu  glikosida sianogenik  dimana  gejala  keracunannya  mirip dengan  gejala  keracunan  pada  singkong.  Jika kadar  sianida  masuk  kedalam  tubuh  dengan jumlah  kecil  maka  akan  berikatan  dengan vitamin B12 sehingga dapat di ekresikan melalui urine. Namun jika kadar sianida masuk kedalam tubuh  dalam  jumlah  yang  banyak  maka  akan berikatan  dengan  tiosianat  yang  menyerang bagian enzim oksidase sehingga dapat menghentikan metabolisme secara aerobik.
Cara  untuk  mengurangi  kadar  sianida  pada rebung  yaitu  dengan  cara  dibersihkan  dengan menggunakan  air  yang  mengalir,  dilakukan perendaman  pada  air  garam,  dimasak  dengan menggunakan  air  yang  mendidih  dan  jika dimasak  usahakan  tutup  wajan  dibuka  agar sianida menguap.
Berdasarkan data pengamatan uji kuantitatif pada sampel rebung berdasarkan volume ukuran kadar  yang  didapatkan  tidak  melebihi  ambang batas karena kadar yang diperoleh kurang dari 50 mg/Kg rebung (Juliastina, 2009).
Pada  hasil  penelitian  ini  kadar  sianida tertinggi  masih  layak  untuk  dikonsumsi  karena hasil yang diperoleh yaitu kurang dari 50 mg/Kg HCN. Hal ini menunjukkan bahwa rebung dapat dikonsumsi  namun,  jangan  keseringan  dan alangkah baiknya pilih rebung yang masih muda dan ukurannya yang lebih kecil.
Menurut FAO, untuk rebung yang dikonsumsi  kandungan  asam  sianida  maksimal yang  diperbolehkan  dikonsumsi  yaitu  kurang
dari 50mg/Kg oleh karena itu, dalam penggunaan rebung  sebagai  bahan  pangan  perlu  dilakukan perlakuan-perlakuan  khusus  untuk  menurunkan kandungan kadar sianida. Prinsip pengujian pada pemeriksaan  sianida  pada  rebung  yaitu  larutan yang  mengandung  ion  sianida  (CN)  dalam destilat  dinetralkan  dengan  asam  phosphat.  Ion sianida  (CN)  bereaksi  dengan  kloramin  T menghasilkan  CNCl  ini  kemudian  bereaksi dengan  asam  barbiturat  menghasilkan  senyawa yang  berwarna  ungu,  warna  ungu  ini  kemudian diukur  absorbansinya  pada  panjang  gelombang 582 nm.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  analisis  kadar sianida  pada  3  sampel  rebung  yang  dianalisis kadar  masing-masing  sampel  yaitu  sampel rebung dengan ukuran besar dengan tinggi 27 cm dengan  diameter  16  cm  dengan  kadar  21,84 mg/Kg,  sampel  rebung  dengan  ukuran  sedang dengan  tinggi  18  cm  dengan  diameter  7  cm dengan  kadar  18,40  mg/Kg  dan  Rebung  dengan ukuran kecil dengan tinggi 8cm dengan diameter 4 cm dengan kadar 4,65 mg/Kg. perbedaan kadar sianida  yang  menunjukkan  kadar  sinida  lebih tinggi  pada  rebung  ukuran  besar  dibandingkan ukuran  sedang  dan  kecil.  Namun,  kadar  sianida pada sampel ketiga tidak melebihi ambang batas yang  diizinkan    yaitu  sebesar  50  mg/Kg  HCN rebung.

## DAFTAR PUSTAKA
Bradbury,  J.H.dan  W.D  Holloway,  1988, Chemistry of Tropical Root Crops: significance for nutrition and Agriculture in the pacific. Australian centre of International Agricultural Research,
Canberra.
Fsanz,  2005,  Rebung  kaya  serat  penangkal stroke, diakses tanggal 27 Agustus 2010.
Julistiana,  Ra  Etika,  2009,  Pengembangan  dan validasi  metode  pengujian  kadar  sianida dalam  limbah  cair  secara  spektroskopi  UV- Vis., Skripsi ,  Departemen  Kimia  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam Institut Pertanian Bogor.
Kencana  P.K.,  Diah,  2009,  Fisiologi  dan Teknologi  Pascapanen  Rebung  Bambu
Tabah (Gigantohloa  nigrociliata  kuiz), Disertasi program  pascasarjana  Fakultas Pertanian Universitas Branisya Malang. Kencana, P.K.D,B.S Widia W.N.S Antara, 2012,
praktek baik Budidaya Daya Bambu Rebung Bambu Tabah (Gigantochloa nigrociliataBuze-Kuiz), Team UNUD- UNSAD-TPC Prpject.
Smith,  A  and  Mudder,  T.,  1991, The  Chemistry and  Treatment  Of  Cyanidation  Waste,
Mining Journal Books Ltd., London.
Yuningsih,  2008 ,  Kandungan  dan  Stabilitas Sianida  Dalam  Tanaman  Picung  (Pangium edule Reinw) Serta Pemanfaatannya .  Balai Besar Penelitian Veteriner, hal. 102-109.