Vol. 9, No.1, Januari 2020, hal  8-12 e-ISSN : 2715-9957

## UJI CEMARAN MIKROBA AIR MINUM ISI ULANG DARI DEPOT AIR MINUM DI WILAYAH KABUPATEN PONOROGO
Endang Ernawaningtyas 1 , Yaya Sulthon Aziz 2 , Qoirul Adi Styawan 3 1,2) Akafarma Sunan Giri Ponorogo, Jl. Batoro Katong 32 Ponorogo e-mail: endang.akafarma@gmail.com 1) 2) aptgolong@gmail.com
3) qoiruladi14@gmail.com

## Abstrak
Latar belakang: Air minum isi ulang banyak digunakan oleh masyarakat Kecamatan Ponorogo untuk konsumsi  rumah  tangga  dan  juga  untuk  berjualan.  Air  minum  isi  ulang  ini  belum  tentu  aman  untuk dikonsumsi dan terdapat bakteri, salah satunya bakteri Eschericia coli . Bakteri ini bisa menyebabkan berbagai penyakit seperti diare dan mual. Tujuan: Untuk mengetahui jumlah Angka Lempeng Total (ALT)  dan Most  Probable  Number (MPN) Eschericia  coli pada  air  minum  isi  ulang  di  Kecamatan Ponorogo Kabupaten Ponorogo memenuhi syarat SNI 01-3553-2006. Metode: Air minum isi ulang di Kecamatan Ponorogo akan di  Uji Angka Lempeng Total dan Uji Most Probable Number Eschericia coli dengan teknik sampling purposive . Hasil: hasil uji Angka Lempeng Total (ALT) pada sampel A, B, C, D, dan E > 300 koloni/ml dan uji Most Probable Number (MPN) Eschericia coli sampel A 120 MPN/ml,  sampel  B  39  MPN/ml,  sampel  C  43  MPN/ml,  sampel  D  150  MPN/ml,  dan  sampel  E  28 MPN/ml. Simpulan  dan  saran: hasil  Uji  Angka  Lempeng  Total  dan  Uji Most  Probable  Number (MPN) Eschericia  coli pada  air  minum  isi  ulang  di  wilayah  Kecamatan  Ponorogo  Kabupaten Ponorogo tidak memenuhi persyaratan SNI 01-3553-2006.
Kata kunci: Air Minum Isi Ulang, ALT, MPN.

## Abstrack
Background: Refilled  drinking  water  is  widely  used  by  the  people  of the  Ponorogo  District for household  consumption  and  also  for  selling.  Refill  drinking  water  is  not  necessarily  safe  for consumption and contains bacteria, one of which is the Escherichia coli bacteria. These bacteria can cause  various  diseases  such  as  diarrhea  and  nausea. Method: Refill  drinking  water  in  Ponorogo District  will  be  tested  for  total  plate  count  and  Escherichia  coli  Most  Probable  Number  test  using purposive  sampling  technique. Objective: To  find  out  the  total  plate  count  (ALT)  and  the  most probable number (MPN) for Eschericia coli in refill drinking  water in Ponorogo District,  Ponorogo Regency,  which  meet  the  SNI  01-3553-2006  requirements. Results: Total  Plate  Number  (ALT)  test results  in  samples  A,  B,  C,  D,  and  E>  300  colonies  /  ml  and  the  Most  Probable  Number  (MPN) test of Eschericia  coli  sample  A  120  MPN  /  ml,  sample  B  39  MPN  /  ml , sample  C  43  MPN  /  ml, sample D 150 MPN / ml, and sample E 28 MPN / ml. Conclusions and suggestions: the results of the Total  Plate Number  Test and  the  Most  Probable  Number  (MPN)  Test  for  Eschericia  coli in refill drinking  water  in  the  Ponorogo  District,  Ponorogo  Regency,  do  not  meet  the  SNI  01-3553-2006 requirements.
Keywords: Refill Drinking Water, ALT, MPN.

## PENDAHULUAN
Air merupakan materi yang sangat penting dalam kehidupan, baik untuk tanaman, hewan, dan manusia.  Tumbuhan,  hewan,  dan  manusia  sebagian  besar  tersusun  oleh  air.  Sel  tumbuhan mengandung  lebih dari 75% air dan sel hewan mengandung lebih dari 67% air (Sisca, 2016). Kadar air  di  dalam  tubuh  manusia  mencapai  68%  dan  untuk  tetap  hidup  kadar  air  dalam  tubuh  harus
dipertahankan.  Kebutuhan  air  minum  dalam  manusia  berfariasi  mulai  dari  2,1  liter  hingga  2,8  liter perhari.  Tergantung  berat  badan  dan  aktivitasnya  (Rahayu  dan  Gumilar,  2017).  Seiring berkembangnya  teknologi  masyarakat  cenderung  memilih  cara  yang  praktis  dengan  biaya  relatif murah untuk memenuhi kebutuhan air minum terutama di kota Ponorogo. Salah satu untuk memenuhi kebutuhan  air minum tersebut dengan cara membeli air minum isi  ulang. Depot air minum isi  ulang adalah  usaha  industri  yang  melakukan  proses  pengolahan  air  baku  menjadi  air  minum  dan  menjual langsung  kepada  konsumen.  Masalah  utama  yang  harus  dihadapi  dalam  pengolahan  air  adalah semakin  tingginya  tingkat  pencemaran  air,  baik  pencemaran  dari  air  limbah  rumah  tangga  maupun limbah dari industri sehingga harus dilakukan upaya-upaya baru terus untuk mendapatkan sumber air minum,  khususnya  untuk  pemenuhan  untuk  air  minum  yang  memenuhi  persyaratan  yang  telah ditetapkan. Salah satu penyakit yang disebabkan oleh air minum yang kualitas uji mikrobanya buruk yaitu diare (Radji et al , 2008).
Menurut  Peraturan  Mentri  Kesehatan  Nomor  492/MENKES/PER/IV/2010,  persyaratan kualiltas  air  minum  wajib  memenuhi  persyaratan  fisika,  kimiawi,  mikrobiologis,  dan  radioaktif. Dalam  SNI  No.01-3553-2006,  air  minum  dalam  kemasan  selain  tidak  boleh  mengandung  bakteri patogen  yaitu Salmonella dan Pseudomonas  aeruginosa, juga  tidak  boleh  mengandung  cemaran mikroba lebih besar dari < 2 koloni/100ml. Sejauh ini pengusaha depot air minum isi ulang masih ada yang belum memenuhi kualitas mikrobiologis, kimia, maupun secara fisika. Kualitas air yang belum memenuhi  kemungkinan  syarat  disebabkan  kurangnya  pengusaha  dalam  memelihara  alat  produksi secara  rutin  (Pradana,  2013).  Berdasarkakan  uraian  di  atas,  perlu  dilakukan  penelitian  untuk mengetahui  bahwa  air  minum  isi  ulang  di  kota  Ponorogo  layak  dikonsumsi  atau  tidak  dan  untuk mengetahui jumlah cemaran mikroba dalam sampel air isi ulang dengan menggunakan metode Angka Lempeng Total (ALT) dan Most Probable Number (MPN) Eschericia coli .

## METODOLOGI PENELITIAN
A. Angka Lempeng Total (ALT) atau Total Plate Count (TPC)
Diambil  10  ml  sampel  dimasukkan  Erlenmeyer  dan    tambahkan  90  ml  pepton  cair  0,1% (pengenceran  10 -1 ).  Pipet  1  ml  sampel  dari  pengenceran  10 1 ,  kemudian  masukkan  tabung  reaksi dan tambahkan 9 ml pepton cair 0,1% (pengenceran 10 2 ). Masing-masing pengenceran dipipet 1 ml  kemudian  dimasukkan  cawan  petri  dan  di  tambah  15  ml  media Nutrien  Agar .  Goyangkan cawan  petri  agar  rata  dan  diamkan  sampai  media  memadat.  Setelah  memadat,  balik  cawan  petri dan  bungkus  masing-masing  cawan  petri  dengan  kertas  koran.  Inkubasi  pada  inkubator  dengan suhu  35-37 o C  selama  24-48  jam.  Jumlah  koloni  bakteri  yang  tumbuh  diamati  dan  dihitung. Masing-masing pengenceran dilakukan duplo.
Vol. 9, No.1, Januari 2020, hal  8-12 e-ISSN : 2715-9957
B. Angka Paling Mungkin (APM) / Most Probable Number (MPN)
1) Uji penduga
Disiapkan  10  ml  media  Lactose  Broth  dalam  9  tabung  reaksi  yang  di  dalamnya  terdapat tabung  durham  terbalik.  Dimasukkan  sampel  ke  dalam  9  tabung  dan  pengisian  ini  dibagi menjadi  3  kelompok.  Kelompok  I,  3  tabung  berisi  10  ml  LB  ditambah  10  ml  sampel. Kelompok II, 3 tabung berisi 5 ml LB ditambah 1 ml sampel. Kelompok III, 3 tabung berisi 5 ml LB ditambah 0,1 ml sampel. Kemudian diinkubasi dengan  suhu 35-37 o C selama 48 jam. Amati  perubahan  warna  biakan  yang  menjadi  keruh  dan  adanya  gas  yang  berbentuk  dalam tabung durham.
2) Uji penguat
Dari  uji  positif  dari  ujia  penduga  diambil  1  ose  bulat  untuk  diinokulasi  ke  dalam  8  ml Brilliant Green Lactose Bile Broth (BGLBB) pada tabung reraksi yang di dalamnya terdapat tabung  durham  terbalik.  Diinkubasi  pada  suhu  44 o C  selama  24-48  jam.  Diamati  apakah terbentuk gas  atau  tidak dan  cocokkan dengan tabel MPN Eschericia coli . Dari biakan yang menghasilkan gas, diinokulasi pada media Endo Agar (EA) dengan metode gores. Diinkubasi pada  suhu  35-37 o C  selama  24  jam.  Bila  pada Endo  Agar terdapat  tumbuh  koloni  khas Eschericia coli (kilap logam warna merah). Diinokulasikan pada media agar miring, media ini diinokulasi pada suhu 37 o C selama 24 jam.
3) Pengecatan gram
Membuat  preparat  smear  1  jarum  ose  dari  uji  penguat  yang  positif Eschericia  coli secara aseptis,  kemudian  dikering  udarakan  dan  difiksasi  dengan  nyala  api  spirtus.  Tambahkan  2-3 tetes gram A sampai menutup noda preparat dan diamkan 3 menit. Kemudian cuci dengan air mengalir, kemudian tetesi dengan gram B, yaitu larutan mordan dan biarkan selama 30 detik. Setelah  itu,  cuci  dengan  air  mengalir  kemudian  tetesi  gram  C  dan  biarkan  selama  30  detik, cuci preparat dengan air mengalir. Tetesi preparat cat penutup yaitu gram D selama 2-3 menit kemudian cuci dengan air mengalir dan kering udarakan. Amati dibawah mikroskop.
4) Uji pelengkap
Dari pertumbuhan koloni pada media NA, dilakukan uji biokimia yang meliputi:
a. Uji Indol pada media SIM
Diambil  bakteri  dari  NA  dan  diinokulasi  secara  tusukan  dengan  jarum  ose.  Inkubasi selama  24  jam  pada  suhu  37 o C.  Tambahkan  beberapa  reagen  erlich  A  dan  B.  Uji  indol positif jika permukaan media berwarna merah setelah penambahan erlich.
b. Uji pembentukan asam pada media Methyl Red-Voges Proskauer (MR-VP)
Vol. 9, No.1, Januari 2020, hal  8-12 e-ISSN : 2715-9957
Diambil bakteri dari NA dan diinokulasikan secara aduk pada media MR-VP. Diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 o C. Uji pembentukan asam positif bila larutan media menjadi merah.
c. Uji pembentukan aceton pada media Methyl Red-Voges Proskauer (MR-VP)
Diambil  bakteri  dari  media  NA  dan  diinokulasikan  secara  aduk  dengan  jarum  ose  pada media MR-VP. Diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 o C. Ditambahkan 2-3 tetes larutan KOH  40%  disertai  pengocokan  yang  kuat.  Ditambahkan  2-3  tetes  reagen  barit.  Uji pembentukan positif jika larutan berwarna merah.
d. Uji citrate sebagai sumber karbon tunggal pada media citrate
Diambil koloni bakteri dari media NA, diinokulasikan secara goresan pada media citrate dengan  jarum  ose.  Diinkubasi  selama  24  jam  dengan  suhu  37 o C.  Uji citrate positif  bila lereng media berwarna biru.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Analisa Data Angka Lempeng Total (ALT)
Tabel 1. Hasil Uji Angka Lempeng Total (ALT) Sampel Persyaratan Hasil Pengujian Ket A Maks.1,0 x 10 2 >300 TMS B >300 TMS C >300 TMS D >300 TMS E >300 TMS
Analisa Data Most Probable Number (MPN)
Tabel 2. Hasil Uji Angka Lempeng Total (ALT) Sampel Hasil pengamatan MPN/ml @ 10 ml @ 1 ml @ 0,1 ml A 3 1 2 120 B 3 0 1 39 C 3 1 0 43 D 3 2 1 150 E 2 2 1 28
Dari  hasil  penelitian  ini  didapat  hasil  Angka  Lempeng  Total  sampel  A  >300  koloni/ml, artinya  adalah  setiap  gram  atau  milimeter  sampel  A  terdapat  >300  koloni  bakteri.  Sampel  B  >300 koloni/ml, artinya adalah setiap gram atau milimeter sampel B terdapat >300 koloni bakteri. Sampel C >300  koloni/ml,  artinya  adalah  setiap  gram  atau  milimeter  sampel  C  terdapat  >300  koloni  bakteri. Sampel D >300 koloni/ml, artinya adalah setiap gram atau milimeter sampel D terdapat  >300 koloni bakteri. Dan Sampel E >300 koloni/ml, artinya adalah  setiap gram atau milimeter  sampel  E terdapat
Vol. 9, No.1, Januari 2020, hal  8-12 e-ISSN : 2715-9957
>300 koloni bakteri. Hal itu dibuktikan dengan adanya pengujian cawan dimana sampel dimasukkan ke  dalam  cawan  petri  yang  sudah  diberi  media Natrium  Agar (NA)  sebagai  tempat  pertumbuhan bakteri. Menurut Batas Cemaran Mikroba  Air Minum Dalam Kemasan (AMDK)  SNI 01-3553-2006 semua sampel air minum isi ulang tidak memenuhi persyaratan, karena jumlah koloni lebih dari 1,0 x 10 2 koloni/ml.  Untuk  hasil  pengamatan Most  Probable  Number (MPN) Escherichia  coli didapatkan hasil  sampel  A  120  MPN/ml,  artinya  terdapat  120  koloni  bakteri  pada  setiap  gram  atau  setiap milliliter  sampel  A.  Sampel  B  39  MPN/ml,  artinya  terdapat  39  koloni  bakteri  pada  setiap  gram  atau setiap milliliter sampel B. Sampel C 43 MPN/ml, artinya terdapat 43 koloni bakteri pada setiap gram atau setiap milliliter sampel C. Sampel D 150 MPN/ml, artinya terdapat 150 koloni bakteri pada setiap gram  atau  setiap  milliliter  sampel  D.  Sampel  E  28  MPN/ml,  artinya  terdapat  28  koloni  bakteri  pada setiap gram atau setiap milliliter sampel E. Hal tersebut dibuktikan dengan hasil pada uji penduga dan uji  penguat  yang  menghasilkan  gelembung  gas  pada  setiap  tabung.  Lalu  tabung  yang  positif  dari setiap  sampel  dicocokkan  dengan  tabel  MPN.  Menurut  persyaratan  SNI  01-3553-2006,  nilai Most Probable  Number air  minum  isi  ulang  tidak  memenuhi  syarat  karena  jumlah  koloni  lebih  besar  dari persyaratan, yaitu >2 koloni/ml.
Sampel  yang tidak memenuhi persyaratan  Angka  Lempeng  Total (ALT) dan Most Probable Number (MPN) kemungkinan terjadi karena pengolahan air minum di depot yang tidak sesuai dengan protap,  penyimpanan  yang  belum  standar,  wadah  bahan  baku  yang  tidak  terbuat  dari  tara,  pengisian air yang tidak steril, pencucian wadah yang kurang bersih, dsb.
Lingkungan  yang  jelek  dan  tempat  yang  kotor  dapat  meningkatkan  jumlah  bakteri  yang sangat tinggi dan menimbulkan penyakit. Penularan penyakit terjadi melalui  air  yang terkontaminasi bakteri patogen dan di salurkan kepada manusia melalui mulut. Penyakit umum yang di alami adalah diare,  sakit  perut,  tifus,  paratifus,  disentri,  dsb  yang  disebabkan  oleh  adanya  pencemaran  bakteri Eschericia coli, Salmonella, Shigella dan Vibrio pada air.

## KESIMPULAN
Uji  Angka  Lempeng  Total  (ALT)  pada  air  minum  isi  ulang  di  wilayah  Kecamatan  Ponorogo Kabupaten Ponorogo tidak memenuhi persyaratan SNI 01-3553-2006 dan Uji Most Probable Number (MPN) Eschericia coli tidak memenuhi persyaratan SNI 01-3553-2006.

## Daftar pustaka
KEMENDIKBUD RI, Buku Mikrobiologi Kurikulum 2013.
Pradana et al .(2013). Uji Kualitas Air Minum Isi Ulang di Kecamatan Sukodono, Sidoarjo Ditinjau Dari Perilaku dan Pemeliharaan Alat. Jurnal Teknik ITS 2.2.
Radji M. 2010. Buku Ajar Mikrobiologi Panduan Mahasiswa Farmasi dan Kedokteran . Jakarta. EGC.
Vol. 9, No.1, Januari 2020, hal  8-12 e-ISSN : 2715-9957
Rahayu S.A dan Gumilar M.H .(2017). Uji cemaran air minum masyarakat sekitar Margahayu Raya Bandung dengan identifikasi bakteri Escherichia coli. Indonesian Journal of Pharmaceutical Science and Technology 4.2.
Sisca,  V  .(2016). Penentuan  Kualitas  Air  Minum  Isi  Ulang  Terhadap  Kandungan  Nitrat,  Besi,
Mangan, Kekeruhan, pH, Bakteri E. Coli dan Coliform. Chempublish Journal 1.2.