online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium Vol. 18, No1, P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Marai Rahmawati, et al
PERBANYAKAN TANAMAN NILAM ACEH ( Pogostemon cablin Benth.) DENGAN

## KOMBINASI IAA DAN KINETIN SECARA IN VITRO
In Vitro Propagation of Aceh Patchouli (Pogostemon cablin Benth.) by Combining IAA and Kinetin
Marai Rahmawati 1*) , Cut Nurul Safira 1 , Mardhiah Hayati 1 ,
1 Jurusan Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Syiah Kuala Jl. Tgk. Hasan Krueng Kale No.3, Kopelma Darussalam, Kec. Syiah Kuala, Kota Banda Aceh, 23111 * ) Corresponding author: marai_rahmawati@unsyiah.ac.id
Abstrak. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  pemberian  beberapa  konsentrasi IAA  dan  Kinetin  terhadap  pertumbuhan  tanaman  nilam  Aceh  secara in  vitro .  Penelitian  ini dilaksanakan  di  Laboratorium  Kultur  Jaringan  Tanaman,  Fakultas  Pertanian,  Universitas  Syiah Kuala,  pada  bulan  Juni  sampai  dengan  November  2020.  Penelitian  ini  dilakukan  dengan menggunakan faktor konsentrasi IAA yang terdiri dari empat taraf, yaitu 0 mg L -1 ; 0,25 mg L -1 ; 0,5 mg L -1 ; dan 0,75 mg L -1 serta faktor konsentrasi Kinetin yang terdiri dari empat taraf, yaitu 0 mg L -1 ; 1 mg L -1 ; 2 mg L -1 ; dan 3 mg L -1 . Hasil penelitian menunjukkan persentase eksplan hidup tertinggi 60% dan persentase kontaminasi terendah 20% adalah pada perlakuan 0 mg L -1 IAA + 1 mg L -1 kinetin. Persentase hidup tertinggi 60% dan persentase browning terendah 0% adalah pada perlakuan 0 mg L -1 IAA + 2 mg L -1 kinetin. Eksplan tanaman nilam tertinggi dan jumlah tunas terbanyak pada umur 10 MSI, serta jumlah daun terbanyak pada umur 5 MSI dan 10 MSI adalah pada perlakuan 0,75 mg L -1 IAA + 0 mg L -1 Kinetin.
Kata kunci ; Nilam, IAA, Kinetin, in vitro
Abstract. This  study  aims  to  determine  the  effect  of  giving  several  concentrations  of  IAA  and Kinetin on the growth of Aceh patchouli in vitro. This research was conducted at the Laboratory of Plant Tissue Culture, Faculty of Agriculture, Universitas Syiah Kuala, from June to November 2020. This research was conducted using  four different concentrations of IAA: 0 mg L -1 ; 0.25 mg L -1 ; 0.5 mg L -1 ; and 0.75 mg L -1 , and four different concentrations of Kinetin: 0 mg L -1 ; 1 mg L -1 ; 2 mg L -1 ; and 3 mg L -1 . The results showed the highest percentage of live explants was 60% and the  lowest  contamination  percentage  was  20%  in  the  combination  of  0  mg  L -1 IAA  +  1  mg  L -1 Kinetin. The highest percentage of life was 60% and the lowest percentage of browning was 0% in the combination of 0 mg L -1 IAA + 2 mg L -1 Kinetin. The highest height of patchouli explants and the highest number of shoots were found at 10 weeks after inoculation. The application of 0.75 mg L -1 IAA  +  0  mg  L -1 Kinetin  possessed  the  highest  number  of  leaves  at  5  and  10  weeks  after inoculation.
Keywords; Patchouli, IAA, Kinetin, in vitro

## PENDAHULUAN
Nilam  ( Pogostemon  cablin Benth.) merupakan  salah  satu  komoditi  penghasil minyak  atsiri  yang  dibutuhkan  pada  berbagai sektor industri. Menurut Amalia & Hadipoentyanti
(2018), hampir 90% pemenuhan  kebutuhan  minyak  nilam  dunia berasal  dari  Indonesia.  Indrawanto  &  Syakir (2008)  menyatakan  minyak  nilam  memiliki prospek  sebagai  komoditas  ekspor  unggulan karena  secara  kontinyu  dibutuhkan  sebagai
salah satu bahan baku utama dalam pembuatan produk seperti kosmetik, parfum, hingga obat- obatan. Menurut Sahwalita & Herdiana (2015), minyak atsiri yang berasal dari tanaman nilam memiliki  daya  fiksasi  yang  tinggi  terhadap campuran  bahan  pewangi  lain,  serta  dapat mengikat  dan  mencegah  penguapan  aroma sehingga dapat bertahan lebih lama.
Berdasarkan  hal tersebut,  nilam  telah  menjadi tanaman  yang  sangat  potensial  untuk dikembangkan,  baik  dari  segi  peningkatan kualitas mutu maupun upaya perbanyakannya.
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium Vol. 18, No1, P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Marai Rahmawati, et al
Berdasarkan  data  Direktorat  Jenderal Perkebunan (2019), sekitar 33 persen dari rata- rata  produksi  nilam  yang  dihasilkan  di Indonesia  berasal  dari  Aceh.  Aceh  memiliki empat kabupaten yang menjadi sentra produksi tanaman  dan  minyak  atsiri  nilam  terbesar  di Indonesia, yaitu kabupaten Aceh Selatan, Aceh Barat,  Gayo  Lues,  dan  Aceh  Jaya.  Menurut Balai  Penelitian  Tanaman  Rempah  dan  Obat (2016),  nilam  Aceh  mengandung  sekitar  2,5- 5% kadar minyak atsiri sehingga lebih diminati oleh  pasar.  Jenis  nilam  lainnya  seperti  nilam jawa  ( Pogostemon  heyneanus )  dan  nilam sabun  ( Pogostemon  hortensis )  memiliki kandungan  minyak  atsiri  yang  lebih  rendah yaitu  berkisar  antara  0,5-1,5%.  Hal  tersebut menyebabkan  tanaman  nilam  Aceh  menjadi yang  paling  diminati  untuk  dikembangkan serta  hasil  penyulingan  minyak  atsiri  nilam Aceh  terbukti  telah  menembus  pasar internasional.
Karakteristik  tanaman  nilam  Aceh yang  tidak  memiliki  biji  sebagai  organ perkembangbiakan  generatif  menyebabkan perbanyakan  tanaman  nilam  Aceh  biasa dilakukan  secara  vegetatif  menggunakan bagian  tunas  akar.  Menurut  Hatta et  al .,
(2008),  nilam  Aceh  yang  merupakan  tanaman potensial  untuk  dikembangan  ini  tidak memiliki  bunga,  sehingga  keragaman  genetik tanaman  juga  sangat  rendah.  Kultur  jaringan sebagai  dasar  dari  aplikasi  bioteknologi  juga dapat  ditindak  lanjut  sebagai  upaya  untuk meningkatkan  keragaman  genetik  tanaman nilam Aceh.
Perbanyakan  tanaman  nilam  secara  kultur jaringan merupakan upaya untuk menghasilkan bibit  dalam  kuantitas  yang  banyak  dan berkualitas.  Menurut  Anitasari et  al .,  (2018), kultur jaringan adalah cara menumbuhkan dan memperbanyak  sel,  jaringan,  dan  organ tanaman dalam kondisi aseptis secara in vitro , guna menghasilkan bibit tanaman baru dengan sifat  yang  identik  seperti  tanaman  induknya, bebas  dari  penyakit,  dan  dengan  waktu  yang relatif  lebih  singkat.  Pengembangan  teknik kultur  jaringan  pada  tanaman  nilam  Aceh ditujukan antara lain untuk menyediakan benih klonal  dalam  jumlah  besar  yang  diperlukan untuk  memenuhi  kebutuhan  bibit  tanaman nilam yang terus meningkat.
Penggunaan  Zat  Pengatur  Tumbuh  (ZPT) pada  kultur  jaringan  tanaman  mempengaruhi arah  pertumbuhan  jaringan  tanaman.  Menurut Suminar et al ., (2015), keberhasilan perbanyakan  tanaman  secara in  vitro merujuk pada syarat media tumbuh tanamanyang harus mengandung  semua  zat  yang  diperlukan  oleh eksplan dalam mendukung proses pertumbuhan  dan  perkembangannya.  Menurut Fried & Hademenos (2006), auksin memainkan  peranan  penting  dalam  beragam perilaku  dan  pola  pertumbuhan  tanaman, terutama  pada  perkembangan  sistem  akar  dan tunas.  Lebih  lanjut  Firmansyah et  al. (2007) menyatakan bahwa auksin merangsang pemanjangan  sel  pada  konsentrasi  tertentu. Jika  konsentrasi  auksin  terlalu  tinggi,  maka pemanjangan  akar  dan  batang  menjadi terhambat.  Hartmann et al., (2001), IAA yang merupakan  salah  satu  jenis  auksin  memiliki sifat  mudah  diserap  oleh  tanaman  karena memiliki  struktur  kimia  yang  tidak  berbeda dengan  auksin  alami  pada  tanaman.  Sitokinin berperan  dalam  merangsang  pembelahan  sel pada  tanaman.        Sitokinin  juga  dibutuhkan untuk  pembentukan  organel-organel  semacam kloroplas. Dalam prosesnya, sitokinin berinteraksi  dengan  auksin  untuk  menentukan diferensiasi  jaringan  meristematik  (Fried  & Hademenos, 2006).
Meskipun masing-masing ZPT memiliki  peranan  dalam  mempengaruhi pertumbuhan  tanaman,  namun  tak  jarang kedua jenis ZPT dibutuhkan secara bersamaan pada perbandingan atau ratio tertentu. Adanya salah  satu  ZPT  tertentu  dapat  meningkatkan maupun  menurunkan  aktivitas  ZPT  lainnya (Lestari,  2011). Berdasarkan penelitian Wardani  (2016),  terdapat  interaksi  atau pengaruh  pada  hasil  kultur  jaringan  tanaman dengan  menggunakan  kombinasi  ZPT  jenis auksin  dan  sitokinin.  Penggunaan  ZPT sitokinin  dan  auksin  dalam  satu  media  tanam kultur jaringan  dapat  memacu poliferasi  tunas yang  disebabkan  karena  adanya  pengaruh sinergisme antara kedua zat tersebut. Penelitian mengenai kombinasi auksin dan sitokinin pada tanaman nilam yaitu berupa kombinasi IAA dan BAP telah dilakukan oleh Hatta et  al., (2008)  dan  mendapatkan  hasil bahwa  kehadiran  IAA  menyebabkan  BAP memberikan  pengaruh  negatif  terhadap
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium Vol. 18, No1, P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Marai Rahmawati, et al
pembentukan daun tanaman
nilam.
Trimulyono et al ., (2002) dalam penelitiannya mendapatkan  hasil  yaitu  pemberian  auksin jenis 2,4-D dan sitokinin jenis Kinetin dengan konsentrasi  0,5  mg  L -1 mampu  menginduksi terbentuknya  kalus  pada  tanaman  nilam. Menurutnya,  pada  konsentrasi  tersebut  kedua ZPT mampu merangsang sel melakukan proses dediferensiasi membentuk kalus.
Darunde & Pandey (2019),
melaporkan  respon  pembentukan  akar  terbaik pada kultur jaringan tanaman nilam yaitu pada pemberian konsentrasi 0,5 mg L -1 IAA + 1 mg L -1 IBA.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa konsentrasi dan jenis auksin yang sesuai dapat membantu meningkatkan pertumbuhan tanaman  nilam  khususnya  pada  pembentukan akar tanaman. Sharma & Sarma (2016) dalam penelitiannya  membuktikan  bahwa  interaksi auksin  dan  sitokinin  yaitu  berupa  pemberian IBA  0,1  mg  L -1 dan  Kinetin  2,5  mg  L -1 memberikan  tingkat  multiplikasi  maksimum dalam proporsi generasi tunas, daun, akar, dan kalus tanaman nilam.
Berdasarkan  latar  belakang  tersebut, penelitian  ini  dilakukan  dengan  menggunakan kombinasi beberapa konsentrasi ZPT IAA dan Kinetin  untuk  melihat  pengaruhnya  pada perbanyakan  tanaman  nilam  Aceh  secara in vitro .

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilaksanakan
di Laboratorium  Kultur  Jaringan  Tanaman, Jurusan  Agroteknologi,  Fakultas  Pertanian, Universitas  Syiah  Kuala,  Darussalam,  Banda Aceh.  Pelaksanaan  penelitian  dimulai  pada Juni sampai dengan November 2020.
Alat-alat yang digunakan dalam pelaksanaan  penelitian  ini  antara  lain  yaitu autoclave,  hot  plate dan magnetic  stirrer , spatula, Laminar  Air  Flow  Cabinet (LAFC), sedangkan bahan-bahan yang digunakan dalam pelaksanaan  penelitian  ini  antara  lain  yaitu tunas pucuk tanaman nilam Aceh, larutan stok A, B, C, D, E, F, Vitamin, Mio-inotisol, agar- agar, akuades steril, Indole Acetic Acid (IAA), Kinetin,  alkohol  70%,  betadine,  bayclin, spiritus, detergen cair.
Penelitian  ini  terdiri  atas  dua  faktor  yaitu konsentrasi IAA  yang terdiri atas empat taraf, yaitu  0;  0,25;  0,5;  dan  0,75  mg  L -1 dan
konsentrasi  Kinetin  yang  terdiri  atas  empat taraf,  yaitu  0;  1;  2;  3  mg  L -1 .  Terdapat  16 kombinasi  perlakuan  dengan  5  kali  ulangan, sehingga diperoleh 80 satuan percobaan.

## Pelaksanaan Penelitian
Sumber  eksplan  berasal  dari  batang tanaman nilam Aceh varietas Tapak Tuan yang diperoleh  dari  Aceh  Jaya.  Batang  tanaman nilam  distek  dan  ditanam  dalam  polybag dengan media tanah dan pupuk kandang. Stek tanaman  nilam  diberi  naungan  paranet,  dan disiram  setiap  pagi  dan  sore  hari.  Pucuk  stek tanaman  nilam  kemudian  digunakan  sebagai eksplan setelah berumur 3 bulan.
Persiapan  alat  dan  media  kultur in  vitro meliputi sterilisasi aquades, pembuatan larutan stok,  pembuatan  media  tanam Murashige  and Skoog (MS), sterilisasi alat, pembuatan larutan sterilisasi,  sterilisasi  ruang  tanam.  Sterilisasi eksplan  dilakukan  pada  bagian  tunas  pucuk tanaman  nilam.  Eksplan  dicuci  dengan  air mengalir,  kemudian  disikat  secara  perlahan satu  persatu  menggunakan  kuas  cat.  Eksplan kemudian  dimasukkan  dalam  larutan  detergen cair 5 ml L -1 air sambil diaduk selama 5 menit. Selanjutnya  eksplan  dibilas  sebanyak  3  kali dan dimasukkan kedalam LAFC.
Sterilisasi  selanjutnya  dilakukan  didalam LAFC  dan  dekat  dengan bunsen spiritus  yang telah  dinyalakan.  Eksplan  direndam  dalam alkohol  70%  sambil  diaduk  selama  30  detik, kemudian dibilas sebanyak 3 kali menggunakan aquadest steril.  Selanjutnya eksplan  direndam  dalam  larutan  clorox  30% sambil  diaduk  selama  5  menit,  dan  dibilas menggunakan aquadest steril sebanyak 3 kali. Terakhir,  eksplan  dibilas  dengan aquadest steril yang telah diberikan 5 tetes betadine. Selanjutnya  eksplan  dipotong  hingga berukuran  kurang  lebih  1  cm  dan  ditanam dalam  setiap  botol  kultur  berisi  satu  eksplan tanaman nilam. Pemeliharaan eksplan dilakukan sampai tanaman berumur 10 MSI.

## Parameter Pengamatan
Pengamatan  eksplan  tanaman  nilam  Aceh dilakukan  setiap  minggu,  yang  dimulai  sejak umur  1  sampai  10  MSI.  Parameter  yang diamati  meliputi  persentase  eksplan  hidup, persentase  kontaminasi,  persentase browning , tinggi tanaman, jumlah tunas dan jumlah daun. Hasil  pengamatan  pada  penelitian  ini  tidak dapat diolah  menggunakan  rancangan  statistik
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium Vol. 18, No1, P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Marai Rahmawati, et al
dikarenakan  data  tidak  menyebar  normal akibat rendahnya persentase hidup.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Persentase  Hidup  Eksplan,  Kontaminasi dan Browning
Eksplan  tanaman  nilam  yang  tumbuh berdasarkan kombinasi perlakuan ZPT memiliki  persentase  hidup  yang  beragam. Berdasarkan  data  pada  Tabel  1,  eksplan tanaman  nilam  hasil  inisiasi  yang  berhasil hidup dan tumbuh hanya mencapai persentase tertinggi 60%. Perlakuan 0 mg L -1 IAA + 1 mg L -1 Kinetin  dan  0  mg  L -1 IAA  +  2  mg  L -1 Kinetin  merupakan  kombinasi  perlakuan  yang konsisten  mencapai  persentase  hidup  60% hingga waktu pengamatan terakhir, yaitu pada umur 10 MSI. Eksplan tanaman nilam dengan kombinasi perlakuan 0 mg L -1 IAA + 3 mg L -1 Kinetin  sampai  umur  4  MSI  juga  memiliki persentase  hidup  60%,  namun  menurun menjadi 40% pada minggu selanjutnya hingga umur  10  MSI,  hal  ini  disebabkan  karena terjadinya kontaminasi pada sebagian eksplan.
Kombinasi  perlakuan  0  mg  L -1 IAA  +  0 mg L -1 Kinetin dan 0,5 mg L -1 IAA + 1 mg L -1 Kinetin  memiliki  persentase  hidup  0%  yang berarti  tidak  ada  eksplan  nilam  yang  berhasil tumbuh  pada  kedua  perlakuan  tersebut. Banyaknya  jumlah  eksplan  tanaman  nilam yang  tidak  tumbuh  diduga  disebabkan  oleh kondisi sumber tanaman yang digunakan serta proses  pelaksanaan  yang  kurang  hati-hati. Kondisi  sumber  bahan  tanam  yang  digunakan antara satu tanaman dengan tanaman yang lain dapat sangat berbeda.
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan,  persentase  hidup  eksplan  tanaman nilam  tidak  dapat  selalu  dipertahankan. Kegagalan  hidup  eksplan  tidak  harus  terjadi pada  masa  awal  penanaman.  Eksplan  dapat mengalami  kontaminasi  dan browning bahkan pada  umur  5,  6,  dan  7  MSI.  Perbedaan  yang sangat  jelas  pada  persentase  hidup  eksplan tanaman  nilam  antar  kombinasi  perlakuan penelitian  ini  tidak  menunjukkan  pengaruh atau keterkaitan dengan ZPT yang digunakan.
Tabel 1.  Persentase  Eksplan  Hidup,  Persentase  Kontaminasi,  dan  Persentase  Browning  Eksplan tanaman Nilam pada Minggu ke-1, 5 dan 10
Konsentrasi IAA + Kinetin Persentase  Eksplan Persentase  Kontaminasi Persentase Bowning 1 5 10 1 5 10 1 5 10 0,0 + 0 0 0 0 60 60 60 40 40 40 0,0 + 1 60 60 60 20 20 20 20 20 20 0,0 + 2 60 60 60 40 40 40 0 0 0 0,0 + 3 60 40 40 20 40 40 20 20 20 0,25 + 0 40 40 20 40 40 60 20 20 20 0,25 + 1 40 40 40 20 20 20 40 40 40 0,25 + 2 40 40 40 20 20 20 40 40 40 0,25 + 3 20 20 20 60 60 60 20 20 20 0,50 + 0 20 20 20 40 40 40 40 40 40 0,50 + 1 0 0 0 80 80 80 20 20 20 0,50 + 2 20 20 0 60 60 80 20 20 20 0,50 + 3 20 20 20 20 20 20 60 60 60 0,75 + 0 40 40 40 40 40 40 20 20 20 0,75 + 1 20 20 20 80 80 80 0 0 0 0,75 + 2 20 20 0 80 80 80 0 0 20 0,75 + 3 20 20 20 60 60 60 20 20 20 Terjadinya kontaminasi dapat
menyebabkan  kegagalan  pada  teknik  kultur jaringan  tanaman.  Menurut  Fitriani et  al .
(2019),  kontaminasi  yang  disebabkan  oleh
mikroorganisme  yang  hidup  didalam  sel tanaman  atau  ruang  antar  sel  sangat  sulit diatasi dengan sterilisasi permukaan. Kontaminan  yang  menginfeksi  permukaan
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium Vol. 18, No1, P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Marai Rahmawati, et al
eksplan akan memberikan respon dalam kurun waktu  48  jam,  namun  kontaminan  yang bersifat  internal  akan  terlihat  lebih  lambat yaitu sebulan atau lebih setelah inisiasi. Tabel  1  menunjukkan  bahwa  nilai kontaminasi yang terjadi pada eksplan tanaman nilam  sangat  tinggi  hingga  mencapai persentase  tertinggi  80%,  yaitu  yang  terjadi pada eksplan tanaman nilam dengan kombinasi perlakuan 0,5 mg L -1 IAA + 1 mg L -1 Kinetin, 0,75 mg L -1 IAA + 1 mg L -1 Kinetin, serta 0,75 mg  L -1 IAA  +  2  mg  L -1 Kinetin.  Beberapa kombinasi  perlakuan  mengalami  penambahan persentase  kontaminasi  setelah  melewati  satu bulan masa inisiasi. Kombinasi perlakuan 0 mg L -1 IAA  +  3  mg  L -1 Kinetin  mengalami penambahan  kontaminasi  pada  5  MSI, sementara itu kombinasi perlakuan 0,25 mg L -1 IAA + 0 mg L -1 Kinetin dan 0,5 mg L -1 IAA +
2  mg  L -1 Kinetin  mengalami  penambahan kontaminasi pada 10 MSI.
Mikroorganisme  dapat  masuk  pada  saat proses  penanaman  maupun  pemeliharaan. Udara  sebagai  pembawa  bahan  partikulat, debu,  dan  tetesan  air  dapat  sebagai  tempat tumbuh  bakteri.  Menurut  Wojtania  dan Pulawska (2005), kontaminasi yang disebabkan  oleh  bakteri  dapat  menyebabkan kondisi eksplan berair serta berlendir. Patogen jamur  yang  menginfeksi  eksplan  kultur jaringan  tanaman  nilam  ditandai  dengan  ciri berwarna  putih  dan  membentuk  benang- benang halus serta menyebar hingga menutupi permukaan eksplan dan media tanam (Gambar 1).
Gambar 1. Perbedaan eksplan tanaman nilam yang terkontaminasi oleh bakteri (a) dan jamur (b) Eksplan  tanaman  nilam  yang  tidak berhasil  hidup  selain  karena  disebabkan  oleh kontaminasi,  juga  disebabkan  oleh browning eksplan. Browning merupakan keadaan dimana ekplan  tanaman  mengalami  perubahan  warna menjadi  coklat  setelah  proses  inisiasi, perubahan ini dapat menghambat pertumbuhan jaringan dan menyebabkan kematian tanaman. Menurut  Megasari et  al., (2020),  terjadinya browning disebabkab  oleh  adanya  fenol  yang dihasilkan  eksplan  tanaman  akibat  dari  proses pemotongan batang eksplan, hal ini menyebabkan  jaringan  tanaman  teroksidasi. Santoso & Nursandi (2004) menyatakan faktor teknis  pada  proses  penanaman  seperti penggunaan  scapel  dan  pinset  yang  masih panas  serta  lamanya  proses  pengeringan
eksplan  yang  telah  disterilisasi  juga  dapat menjadi penyebab terjadinya browning . Persentase browning tertinggi  yaitu  60% hanya  terjadi  pada  eksplan  tanaman  nilam dengan kombinasi perlakuan 0,5 mg L -1 IAA + 3  mg  L -1 Kinetin.  Pada  Tabel  1  dapat  dilihat bahwa  terdapat  banyak  kombinasi  perlakuan yang  memiliki  persentase  browning  0%,  yang berarti  tidak  ada  ekplan  pada  kombinasi perlakuan tersebut yang mengalami browning. Pada sebagian besar eksplan, browning terjadi pada  umur  1  MSI  tanpa  adanya  penambahan pada  minggu  selanjutnya, kecuali  yang  terjadi pada kombinasi perlakuan 0,75 mg L -1 IAA + 2 mg L -1 Kinetin yang mengalami penambahan eksplan browning pada  umur  6  MSI,  hal  ini menunjukkan  bahwa browning tidak  selalu
a b
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium Vol. 18, No1, P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Marai Rahmawati, et al
terjadi  pada  masa  awal  inisiasi,  namun  dapat terjadi selama masa inisiasi.

## Pertumbuhan Ekplan Tanaman Nilam
Eksplan  nilam  yang  berhasil  tumbuh dengan  baik  yaitu  pada  enam  kombinasi
konsentrasi IAA dan Kinetin. Eksplan tersebut mengalami  penambahan  tinggi  tanaman, pembentukan  tunas  dan  daun  sebagaimana ditampilkan pada Tabel 2.
Tabel 2.  Tinggi Tanaman, Jumlah Tunas dan Jumlah Daun Eksplan Tanaman Nilam pada Minggu ke-1, 5 dan 10
Perlakuan Konsentrasi IAA + Kinetin (ml L -1 ) Tinggi Tanaman (cm) Jumlah Tunas (tunas) Jumlah Daun (helai) 1 5 10 1 5 10 1 5 10 0,00 + 1 1,1 2,5 4,5 1 2 13 2 13 34 0,00 + 2 1,8 3,2 4,8 3 6 6 2 18 32 0,00 + 3 2,2 3,8 4,6 1 3 6 2 28 43 0,25 + 1 2,5 4,2 5,8 2 4 4 2 29 42 0,25 + 2 1,4 2,7 4,5 1 3 3 2 11 25 0,75 + 0 1,8 3 6,7 0 4 23 2 38 66
Eksplan  tanaman  nilam  yang  tumbuh dengan baik 50% berasal dari kombinasi tanpa IAA.  Menurut  Lestari  (2011),  kombinasi penggunaan  auksin  dan  sitokinin  pada  media akan  memacu  proliferasi  tunas  karena  adanya pengaruh  sinergisme  antara  kedua  ZPT tersebut, meskipun demikian faktor
multiplikasi  pada  tanaman  nilam  yang  tinggi dapat diperoleh tanpa menggunakan sitokinin.
Tinggi tanaman pada 1 dan 5 MSI yang tertinggi ditunjukkan pada kombinasi 0,25 mg L -1 IAA + 1 mg L -1 Kinetin (Gambar 2), namun pada 10 MSI kombinasi 0,75 mg L -1 IAA + 0 mg  L -1 Kinetin  menghasilkan  tanaman tertinggi yaitu 6,7 cm.
Gambar 2. Eksplan tanaman nilam pada media kombinasi 0,25 mg L -1 IAA + 1 mg L -1 Kinetin pada umur 1, 5, dan 10 MSI
1 MSI 5 MSI 10 MSI
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium Vol. 18, No1, P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Marai Rahmawati, et al
Sedangkan pada jumlah tunas terbanyak pada  1  dan  5  MSI  terdapat  pada  eksplan dengan  kombinasi  0  mg  L -1 IAA  +  2  mg  L -1
Kinetin,  namun  pada  10  MSI  jumlah  tunas pada  eksplan  tersebut  tidak  bertambah
(Gambar  3).  Kombinasi  0,75  mg  L -1 IAA  +  0 mg  L -1 Kinetin  justru  menghasilkan  jumlah tunas  yang  terbanyak  pada  10  MSI  yaitu  23 tunas (Gambar 4).
Gambar 3.  Eksplan tanaman nilam pada media kombinasi 0 mg L -1 IAA + 2 mg L -1 Kinetin pada umur 1, 5, dan 10 MSI
Gambar 4. Eksplan tanaman nilam pada media kombinasi 0,75 mg L -1 IAA + 0 mg L -1 Kinetin pada umur 1, 5, dan 10 MSI
Menurut  para  ahli,  tunas  merupakan bagian tumbuhan yang tumbuh dari kecambah atau  kuncup  yang  berada  diatas  permukaan media.  Tunas  dapat  terdiri  dari  batang  dan ditambah  dengan  daun  muda.  Menurut penelitian Swamy et al., (2010), Kinetin tidak berpengaruh  signifikan  terhadap  regenerasi banyak  tunas,  namun  berperan  dalam peningkatan  panjang  dan  kekuatan  tunas. Wiraatmaja  (2017)  menyatakan  meristem tunas  apikal  merupakan  tempat  utama  sintesis
auksin.  Pada  penelitian  ini,  kombinasi perlakuan  yang  menggunakan  ZPT  Kinetin menunjukkan  pertumbuhan  tunas  yang  cukup baik, namun oleh karena rendahnya persentase hidup,  tidak  dapat  diperoleh  hasil  yang  nyata antara  pengaruh  kombinasi  IAA  dan  Kinetin terhadap  pertumbuhan  jumlah  tunas  eksplan tanaman nilam.
Setiap  eksplan  memiliki  jumlah  daun yang  sama  pada  1  MSI  yaitu  2  helai  daun, namun  selanjutnya  pada  kombinasi  0,75  mg
1 MSI 5 MSI 10 MSI 1 MSI 5 MSI 10 MSI
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium Vol. 18, No1, P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Marai Rahmawati, et al
IAA  +  0  mg  Kinetin  jumlah  daun  meningkat menjadi 38 helai pada 5 MSI dan 66 helai pada 10  MSI  (Gambar  7).  Daun  sebagai  organ vegetatif  tanaman  yang  berbentuk  pipih memegang  peranan  penting  dalam  proses metabolisme  pertumbuhan  dan  perkembangan tanaman,  diantaranya  yaitu  fotosisntesis  dan respirasi.  Jumlah  daun  terbanyak  pada perlakuan  tanpa  Kinetin  ini  sesuai  pernyataan Bushra et  al., (2009)  menyatakan  bahwa eksplan  yang  berasal  dari  tunas  pucuk  telah memiliki  kandungan  sitokinin  endogen  yang cukup  tinggi  sehingga  pada  dasarnya  mampu beregenerasi  dengan  baik  untuk  menghasilkan jumlah  daun  tanaman  yang  lebih  banyak. Meskipun  demikian,  menurut  Chakravarthi et al .  (2010),  pemberian  ZPT  sitokinin  pada eksplan  mata  tunas  dan  tunas  pucuk  mampu menghasilkan jumlah daun yang lebih banyak.

## KESIMPULAN
Persentase hidup eksplan tanaman nilam tertinggi adalah 60% pada perlakuan 0 mg L -1 IAA + 1 mg L -1 Kinetin dan 0 mg L -1 IAA + 2 mg  L -1 .  Persentase  eksplan  hidup  tertinggi 60%,    persentase  kontaminasi  terendah  20% dan persentase browning 20% ditemukan pada perlakuan  0  mg  L -1 IAA  +  1  mg  L -1 Kinetin. Persentase  eksplan  hidup  tertinggi  60%, persentase  kontaminasi  40%  dan  persentase browning terendah  0%  ditemukan  pada perlakuan  0  mg  L -1 IAA  +  2  mg  L -1 . Konsentrasi  0,75  mg  L -1 IAA  +  0  mg  L -1 Kinetin memberikan pengaruh terbaik terhadap tinggi eksplan, jumlah tunas serta jumlah daun pada 10 MSI.

## DAFTAR PUSTAKA
Amalia & E. Hadipoentyanti. 2018. Perbanyakan  nilam  ( Pogostemon  cablin Benth)  menggunakan  media  dasar alternatif  secara in  vitro .  Perspektif.  17 (2): 139-149.
Anitasari, S.D., D.N.R. Sari, I.A. Astarini dan M.R.  Defiani.  2018.  Dasar  Teknik Kultur  Jaringan  Tanaman.  Depublish. Yogyakarta.
Balai  Penelitian  Tanaman  Rempah  dan  Obat.
2016.  Kualitas  Minyak  Nilam.  Balai
Penelitian  Tanaman  Rempah  dan  Obat. Bogor.
Bushra,  Z.,  N.  A.  Abbasi,  T.  Ahmad  &  I.  A. Hafiz.  2009.  Effect  of  explant sources  and  different  concentrations of plant growth regulators on in vitro shoot  proliferation  and  rooting.  J. Bot. 41 (5): 23-46.
Chakravarthi  D.  V.  N.,  V.  Indukuri,  U.  A. Goparaju & V. Yechuri. 2010. Effect of  genotype,  explant  and  hormonal concentration on in vitro response of eggplant. Not Sci Biol. 2 (3): 77-85.
Darunde, D. & S. Pandey. 2019. Standardization  and  optimization  of initiation,  shooting  and  rooting  medium for patchouli micro propagation. International  Journal  of  Trend  in Scientific  Research  and  Development (IJTSRD). 3 (3): 895-902.
Direktorat Jenderal Perkebunan. 2019. Statistik Perkebunan  Nilam.  Direktorat  Jenderal Perkebunan. Jakarta.
Firmansyah,  R.,  A.  Mawardi  &  M.U.  Riandi. 2007. Mudah dan Aktif Belajar Biologi. Setia Purna Inves. Bandung.
Fitriani,  Y.,  G.  Wijana  &  I.A.P  Darmawati. 2019. Teknik sterilisasi dan efektivitas 2,4-D terhadap
pembentukan  kalus  eksplan  daun nilam  ( Pogostemon  cablin Benth) in vitro . 8 (1): 41-52.
Fried,  G.H  &  G.J.  Hademenos.  2006. Schaum’s Outlines Biologi Edisi Kedua. Erlangga. Jakarta.
Hartmann,  H.T.,  D.E.  Kester,  J.R.  Davies  & Geneve.  2001.  Plant  Propagation Principles  and  Practices.  Pearson.  New York.
Hatta,  M.,  M.  Hayati  &  U.  Irayani.  2008. Pengaruh  IAA  dan  BAP  terhadap pertumbuhan tanaman
nilam ( Pogestemon  cablin Benth) in  vitro.
Jurnal Floratek. 3 (1): 56-60.
Indrawanto,  C  &  M.  Syakir.  2008.  Analisa Usaha  Tani  Nilam.  Balai  Penelitian Tanaman Rempah dan Obat. Bogor.
online version : https://ojs.unimal.ac.id/index.php/agrium Vol. 18, No1, P-ISSN 1829-9288.  E-ISSN 2655-1837
Author(s): Marai Rahmawati, et al
Lestari,  E.G.  2011.  Peranan  zat  pengatur tumbuh  dalam  perbanyakan  tanaman melalui  kultur  jaringan.    Jurnal AgroBiogen. 7 (1): 63-68.
Megasari, E., N. Hermita & S. Susiyanti. 2020. Respon perkecambahan benih sintetik  nilam  ( Pogostemon  cablin Benth.) terhadap pemberian
konsentrasi  alginate  dan  NAA sintetik  tanaman.  Jurnal  Agrista.  24 (1): 12-18.
Sahwalita  &  N.  Herdiana.  2015.  Budidaya Nilam  dan  Produksi  Minyak  Atsiri. Biodiversity  and  Climate  Change.
Palembang.
Santoso,  U.  &  F.  Nursandi.  2004.  Kultur Jaringan  Tanaman.  UMM  Press. Malang.
Sharma,  P  &  J.  Sarma.  2016. Pogostemon cablin (Blanco) Benth. ( Lamiaceace ): its enthnobotany  and  in  vitro  regeneration. PHCOG Journal. 7 (3): 152-156.
Suminar,  E.,  I.R.D.  Anjarsari,  A.  Nuraini  & Hapizhah.  2015.  Pertumbuhan  dan perkembangan tunas nilam var. Lhokseumawe dari jenis eksplan dengan sitokinin  yang  berbeda  secara in  vitro . Jurnal Kultivasi. 14 (2): 10-15.
Swamy,  M.K.,  S.  Balasubramanya  &  M.
Anuradha. 2010. In vitro
multiplication  of Pogostemon  cablin Benth.  through  direct  regeneration. African  Journal  of  Biotechnology.  9 (14): 2069-2075. Trimulyono,  G.,  Solichatun  &  S.D.  Marliana. 2002. Pertumbuhan kalus dan kandungan minyak atsiri
nilam ( Pogostemon  cablin (Blanco)  Bth.) dengan perlakuan asam a-naftalen asetat (NAA) dan kinetin. Biofarmasi. 2 (1): 9- 14.
Wardani,  I.  B.  2016.  Pengaruh  Kombinasi BAP-6  (6- Benzyl  Amino  Purine )  dan NAA  ( Naphtalen  Acetic  Acid )  terhadap
Induksi Tunas Aksilar Cendana ( Santalum album L.). Skripsi
Universitas  Negeri  Maulana  Malik Ibrahim. Malang.
Wiraatmaja, I.W. 2017. Zat Pengatur Tumbuh Auksin  dan  Cara  Penggunaannya dalam  Bidang  Pertanian.  Udayana University Press. Denpasar