## SKRINING THALASEMIA-BETA MINOR PADA MAHASISWA FAKULTAS KEDOKTERAN
Submitted : 27 Maret 2019 Edited : 15 Mei 2019 Accepted : 25 Mei 2019
Fransiska Anggreni Sihotang 1 , Loly Rotua Dharmanita Siagian 2 , Novia Fransiska Ngo 3 , Lily Pertiwi Kalalo 4
1 Laboratorium Fisiologi, Fakultas Kedokteran Universitas Mulawarman 2 Laboratorium Patologi Klinik, Fakultas Kedokteran, Universitas Mulawarman
3 Laboratorium Ilmu Kebidanan dan Kandungan, Fakultas Kedokteran, Universitas Mulawarman
4 Laboratorium Patologi Klinik, RSUD Abdul Wahab Sjahranie Email : f.sihotang@fk.unmul.ac.id

## ABSTRACT
Thalassemia  is  a  group  of  congenital  hemoglobinopathy  characterized  by  deficiency  or absence of one (or more) of the globin chains that constitute hemoglobin. Thalassemia major is inherited through autosomal recessive pattern by marriage between carriers of the thalassemia gene known as thalassemia minor. Beta-thalassemia is the most common type of thalassemia. It is  estimated  that  10%  of  Indonesia's  population  carries  the  beta-thalassemia  gene.  However, there has been no routine screening for thalassemia gene carriers. Several recognized methods of  thalassemia  screening  are  available.  One  of  them  is  screening  of  prospective  brides  using several  hematology  parameters  such  as  Mentzer  index  and  red  blood  cells  fragility;  both  are relatively straightforward and inexpensive compared to hemoglobin analysis or genetic testing. This study aimed to determine the frequency of beta-thalassemia minor suspects among students in  the  Medical  Faculty  of  Mulawarman  University.  This  study  was  a  descriptive  quantitative study with cross sectional approach that involved 160 participants. Participant's blood sample was  collected  for  complete  blood  count  and one  tube osmotic  fragility  test  (OTOFT).  Mentzer index  is  calculated  by  dividing  MCV  values  with  erythrocyte  count.  Participants  were determined  as  beta-thalassemia  minor  suspects  if  they  met  following  criterias:  (1)  MCV  <  80 fL; (2) Mentzer index < 13; and (3) positive OTOFT result. This study demonstrated that 1.25% (n=2)  of  160  participants  were  beta-thalassemia  minor  suspect.  Further  examination  of hemoglobin electrophoresis or genetic testing is needed to further confirm this finding.
Keywords : beta-thalassemia minor; screening; university student

## PENDAHULUAN
Thalasemia merupakan kelompok penyakit  anemia  kongenital  dimana  terjadi defisiensi  maupun  absensi  satu  atau  lebih sub-unit  globin  pada  rantai  hemoglobin 1 . Keadaan ini menyebabkan produksi berlebihan  dari  rantai  sub-unit  globin  lain yang mengakibatkan kerusakan membran sel eritrosit  disertai  morbiditas  dan  mortalitas yang  signifikan (1) .  Thalasemia  merupakan penyakit genetik monogenik yang terbanyak
pada  manusia  dengan  pola  pewarisan autosomal  resesif (2) .  Berdasarkan  rantai globin yang mengalami gangguan,
thalasemia digolongkan menjadi thalasemia- α,  -β,  -γ,  -δ,  -δβ,  atau  - ∊ γδβ 2 .  Diantara  sub grup  tersebut,  thalasemia-beta  merupakan sub grup terbanyak (2) .
Data  dari  Bank  Dunia  menyatakan bahwa  7%  dari  populasi  dunia  merupakan pembawa  (karier)  gen  thalasemia 3 .  Setiap tahun  sekitar  50.000  hingga  100.000  anak
meninggal  akibat  thalasemia-beta (3) .  Dari
jumlah  tersebut,  80%  berasal  dari  negara berkembang termasuk Indonesia (3) .
Indonesia  termasuk  salah  satu  negara  dalam sabuk  thalasemia  dunia  atau  negara  dengan frekuensi  gen  pembawa  sifat  thalasemia yang tinggi (3) . Hal ini terbukti dari penelitian epidemiologi di Indonesia yang
mendapatkan  frekuensi  gen  thalasemia-beta berkisar 3-10% (3) .
Data yang didapat dari  seluruh  rumah sakit  pendidikan  ternyata  hanya  terdaftar sekitar  7670  pasien  thalasemia  mayor  di seluruh  Indonesia (3) .  Angka  ini  diperkirakan jauh  lebih  rendah  dari  jumlah  yang sebenarnya. Hal ini dapat disebabkan karena jenis  mutasi  gen  yang  ada  di  Indonesia sangat  bervariasi  mulai  dari  sangat  berat sampai  ringan  sehingga  tidak  membutuhkan transfusi (asimptomatis) atau karena kurangnya  pengetahuan  tenaga  kesehatan maupun  fasilitas  laboratorium  diagnostik sehingga  penyandang  thalasemia  tidak terdeteksi (3) .
Munculnya  penyandang  thalasemia mayor  disebabkan  oleh  perkawinan  sesama pembawa  gen  thalasemia  atau  penderita thalasemia  minor.  Dengan  demikian,  angka kejadian  thalasemia  dapat  ditekan  dengan melakukan  skrining  dan  edukasi  terhadap individu pembawa gen thalasemia (4) .
Skrining  menjadi  sangat  penting  untuk mendeteksi  penyandang  thalasemia  minor, yaitu  pembawa  gen  thalasemia,  karena  pada umumnya tidak menimbulkan gejala sehingga  sulit  untuk  dideteksi (5) .  Skrining awal thalasemia bertujuan untuk
menetapkan  tersangka  thalasemia  sebelum diagnosis  pasti  melalui  pemeriksaan  genetik dan  elektroforesis  hemoglobin  dilakukan. Skrining atau uji tapis hendaknya merupakan pemeriksaan yang sederhana dan mudah  dilakukan.  Pemeriksaan  hematologi sederhana  berupa  kadar  hemoglobin  (Hb), jumlah  sel  darah  merah, mean  corpuscular volume (MCV), tes fragilitas osmotik tabung
tunggal  atau one  tube  osmotic  fragility  test (OTOFT),  dan  Indeks  Mentzer  telah diketahui  dan  teruji  dapat  menentukan tersangka thalasemia (5,6) .
Skrining  thalasemia  ditujukan  untuk menjaring  karier  thalasemia  pada  suatu populasi  dan  idealnya  dilakukan  sebelum memiliki  keturunan.  Skrining  karier  massal dan  konseling  genetika  telah  berhasil menurunkan  insiden  thalasemia  di  negara- negara  Mediterania  seperti  Italia,  Yunani, dan  negara-negara  lain  yang  memiliki fekuensi gen thalasemia tinggi (3) . Mahasiswa berada  pada  usia  subur  dimana  persiapan pernikahan  sudah  dapat  mulai  dilaksanakan sehingga  skrining  karier  thalasemia  tepat untuk  dilakukan.  Di  Kalimantan  Timur sendiri  belum  pernah  dilakukan  skrining terhadap  thalasemia  sehingga  data  karier thalasemia  belum  ada.  Oleh  karena  itu,  tim peneliti  merasa  perlu  dilakukan  skrining yang  bertujuan  untuk  mengidentifikasi tersangka  thalasemia-beta  minor  dengan menggunakan metode yang cukup sederhana dan  terjangkau  pada  populasi  mahasiswa yang  ada  di  kota  Samarinda  khususnya  di Fakultas Kedokteran Universitas
Mulawarman.

## METODE PENELITIAN Kriteria Partisipan
Penelitian  ini  menggunakan  desain deskriptif  kuantitatif.  Teknik  pengambilan sampel yang digunakan merupakan convenience sampling . Partisipan terdiri dari 160  mahasiswa  S1  di  Fakultas  Kedokteran yang  mencakup  program  studi  Pendidikan Dokter,  Kedokteran  Gigi,  dan  Keperawatan. Semua  partisipan  telah  terlebih  dahulu mendapatkan sosialisasi mengenai penelitian ini.  Kriteria  inklusi  adalah  mahasiswa  yang belum  diketahui  menyandang  thalasemia dan menyatakan kesediaan mengikuti penelitian  dengan  mengembalikan  lembar informed  consent yang  telah  ditandatangani oleh  diri  sendiri  atau  oleh  orang  tua/wali
(untuk  partisipan  yang  belum  berusia  18
tahun). Kriteria eksklusi yaitu telah diketahui  menyandang  thalasemia,  telah mengikuti skrining thalasemia dengan menunjukkan  bukti  skrining,  dan  sampel darah  yang  lisis  atau  tidak  dapat  digunakan. Penelitian  ini  telah  mendapatkan  surat persetujuan kelayakan etik  dari Komite Etik Fakultas Kedokteran Universitas Mulawarman (No. 75/KEPK-FK/IX/2018).

## Pemeriksaan Darah Lengkap
Sampel darah sebanyak 3 mL diambil dari masing-masing partisipan menggunakan spuit  steril  [Terumo]  dan  diletakkan  dalam tabung  EDTA  steril  [Vaculab]  oleh  analis terlatih  dari  RSUD  Abdul  Wahab  Sjahranie Samarinda.  Prosedur  pengambilan  sampel darah  dilakukan  sesuai  standar  yang  telah ditetapkan. Masing-masing tabung diberikan label  berisi  kode  untuk  masing-masing partisipan.
Sampel  darah  yang  telah  terkumpul dibawa ke  Laboratorium Patologi Klinik RS AWS  untuk  dilakukan  pemeriksaan  darah lengkap  meliputi  pemeriksaan  kadar  Hb, jumlah eritrosit, dan MCV dengan menggunakan  mesin hematology  analyzer [Mindray BC-6800].
Pemeriksaan One  Tube  Osmotic  Fragility Test (OTOFT)
Sisa  sampel  darah  kemudian  dibawa ke  Laboratorium  Patologi  Klinik  Fakultas Kedokteran  Universitas  Mulawarman  untuk dilakukan one  tube  osmotic  fragility  test (OTOFT).  Sebanyak  20  μL  darah  EDTA diambil  dari  dalam  tabung  menggunakan pipet  mikro  dan  dimasukkan  ke  dalam tabung  kaca  berisi  5  mL  larutan  NaCl 0,36%, diinkubasi selama 5 menit pada suhu ruangan,  kemudian  diamati  kekeruhannya. Apabila  larutan  tampak  keruh  (tidak  bisa membaca  dengan  jelas  kertas  koran  di belakang  tabung)  maka  hasil  OTOFT
dikatakan  positif.  Gambar  1  menunjukkan hasil OTOFT positif dan negatif.
Gambar 1. Pemeriksaan  OTOFT.  Tabung A  adalah  kontrol  negatif  sedangkan  tabung B  adalah  kontrol  positif.  Tabung  C  adalah sampel dengan hasil OTOFT positif sedangkan  tabung  D  adalah  sampel  dengan hasil OTOFT negatif.

## Analisis Hasil
Identifikasi  tersangka  thalasemia-beta minor diawali dengan melihat status eritrosit partisipan  dari  data  hasil  pemeriksaan laboratorium  berupa  kadar  Hb,  jumlah eritrosit,  dan  MCV.  Setelah  itu  dilakukan perhitungan indeks Mentzer. Indeks Mentzer (IM)  adalah  parameter  hematologi  yang diperoleh dari pembagian nilai MCV dengan jumlah eritrosit. Selanjutnya dapat ditentukan subyek sebagai tersangka
thalasemia-beta  minor  apabila  memenuhi kriteria yaitu MCV < 80 fL, Indeks Mentzer <13  dan  OTOFT  positif (7,8) .  Data  hasil pemeriksaan dianalisis dengan
menggunakan  program  Microsoft  Excel 2016.  Hasil  pemeriksaan  darah  dan  skrining thalasemia-beta  minor  diberikan  kepada masing-masing  partisipan.  Partisipan  yang teridentifikasi  sebagai  tersangka  thalasemia- beta minor mendapatkan konseling.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Karakteristik Sampel Penelitian Penelitian ini melibatkan 160 partisipan  yang  merupakan  mahasiswa Fakultas Kedokteran Universitas Mulawarman  angkatan  2017  dan  2018 dimana  101  merupakan  mahasiswa  program studi  pendidikan  dokter,  13  mahasiswa program  studi  kedokteran  gigi,  dan  46 mahasiswa program studi keperawatan. Dari 160  mahasiswa,  31.25%  (n=50)  berjenis kelamin  laki-laki  dan  68.75%  (n=110) berjenis  kelamin  perempuan.  Rentang  usia partisipan  adalah  16-20  tahun  dengan  usia terbanyak 18 tahun. Tabel 1 menyajikan data karakteristik partisipan.
Tabel 1. Karakteristik  partisipan  berdasarkan program studi, usia, dan jenis kelamin.
Laki- laki Perempuan Jumlah Program studi Pendidikan dokter 37 64 101 Kedokteran gigi 3 10 13 Keperawatan 36 10 46 Usia 16 tahun 0 1 1 17 tahun 4 26 30 18 tahun 27 49 76 19 tahun 16 30 46 20 tahun 3 4 7

## Status Eritrosit
Dari  160  partisipan,  rata-rata  kadar hemoglobin  adalah  13,2  (±  1,6)  gram/dL. Nilai  median  MCV  adalah  86,7  fL,  nilai median jumlah  eritrosit  adalah 4,78×10 6 /μL, dan nilai median indeks Mentzer adalah 17,8 dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Status eritrosit partisipan.
Parameter Mean  SD Median n Hemoglobin 13,2 (± 1,6) MCV (fL) 86,7 Jumlah eritrosit (×10 6 /μL) 4,78
Indeks Mentzer 17,8 OTOFT (n)  Positif  Negatif 11 149 Parameter Skrining Thalasemia-Beta

## Minor
Dari  160  partisipan  yang  mengikuti skrining,  terdapat  23 partisipan  dengan  nilai MCV  <  80  fL,  4  partisipan  dengan  indeks Mentzer (IM) < 13 dan 11 partisipan dengan hasil  uji  fragilitas  osmotik  tabung  tunggal positif dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Parameter skrining thalasemia-beta minor.
Parameter n % MCV < 80 fL 23 14,4 Indeks Mentzer < 13 4 2,5 OTOFT positif 11 6,9
Gambar 2. Irisan parameter hematologi yang menjadi kriteria tersangka karier
thalasemia.
Tabel 4. Parameter  hematologi  partisipan yang teridentifikasi sebagai tersangka thalasemia-beta minor. Parameter Partisipan 1 Partisipan 2 Kadar Hb (gr/dL) 10,7 9,3 MCV (fL) 61,0 66,3
Indeks Mentzer 10,3 12,9 OTOFT Positif Positif
Dari  hasil  penelitian  teridentifikasi  2 partisipan  yang  memenuhi  ketiga  kriteria skrining  untuk  karier  thalasemia-beta  pada Gambar  2  sehingga  frekuensi  karier  gen thalasemia-beta  pada  populasi  penelitian adalah  1,25%.  Kedua  partisipan  tersebut berjenis  kelamin  perempuan.  Tabel  4 menunjukkan parameter
hematologi
partisipan yang teridentifikasi sebagai tersangka thalasemia-beta minor. Pembahasan Hasil penelitian menunjukkan bahwa  insidensi  tersangka  pembawa  gen thalasemia-beta  pada  mahasiswa  Fakultas Kedokteran Universitas Mulawarman Kalimantan Timur adalah sebanyak 1,25%. Nilai  ini  lebih  rendah  dibandingkan dengan penelitian serupa yang
dilaksanakan  di  Jawa  Barat  pada  populasi pelajar  SMA  yang  menemukan  insiden pembawa  gen  thalasemia-beta  sebanyak 9,3% 4 .  Hal  ini  dapat  disebabkan  karena Samarinda  termasuk  kota  dengan  jumlah penduduk  pendatang  yang  cukup  tinggi sehingga tingkat pernikahan dengan hubungan  kekerabatan  yang  dekat  cukup rendah.
Kedua partisipan dengan hasil skrining  positif  memiliki  nilai  hemoglobin yang  rendah  untuk  perempuan  yaitu  10,7 gram/dL  dan  9,3  gram/dL  dapat  dilihat pada  Tabel  4.  Meskipun  demikian,  pada wawancara tidak ditemukan adanya keluhan  pada  kedua  partisipan.  Hal  ini sesuai  dengan  teori  dimana  karier  gen thalasemia sering tidak merasakan keluhan (asimtomatik) sehingga sulit untuk
terdeteksi (9) .
Metode  skrining  yang  digunakan dalam penelitian ini cukup mudah dilakukan  dan  mudah  diakses.  Ketiga
parameter  yang  digunakan  yaitu  MCV, indeks  Mentzer,  dan  uji  fragilitas  osmotik tabung  tunggal  atau one  tube  osmotic fragility test (OTOFT) merupakan parameter  yang  telah  terbukti  memiliki sensitivitas  dan  spesifisitas  yang  baik.
Penggunaan  lebih  dari  satu  parameter membantu membedakan tersangka thalasemia-beta  minor  dari  penyebab anemia  mikrositik  lain  yaitu  anemia defisiensi besi.
Nilai  MCV  <  80  fL  menandakan bahwa eritrosit mikrositik yang merupakan karakteristik  untuk  thalasemia.  Penelitian oleh Hapsari dan Rujito (2015) menemukan  bahwa  nilai  MCV  <  80  fL memiliki  nilai  sensitivitas  81,3%  dan spesifisitas 95,8% untuk mendeteksi
pembawa  gen  talasemia-beta (10) .  Indeks Mentzer  juga  merupakan  parameter  yang paling  baik  untuk  membedakan  karier thalasemia  dengan  anemia  defisiensi  besi pada  anemia  mikrositik  dengan  nilai sensitivitas 98,7% dan spesifisitas
82,3% (11) .  Uji  fragilitas  osmotik  satu tabung  merupakan  pemeriksaan  yang mudah  dilakukan  dan  dapat  digunakan sebagai  penunjang  pemeriksaan  indeks hematologi  seperti  MCV  dan  indeks Mentzer dengan nilai sensitivitas 95% dan spesifisitas  86%  untuk  deteksi  thalassemia minor (12) .
Meskipun  demikian,  penelitian  ini memiliki  kelemahan-kelemahan.  Tindakan skrining  idealnya  ditindaklanjuti  dengan pemeriksaan  yang  dapat  dengan  pasti mendeteksi  pembawa  gen  thalasemia-beta seperti  elektroforesis  Hb  dan  analisis  gen. Pemeriksaan definitif belum dapat dilaksanakan  pada  penelitian  ini.  Selain itu,  pemilihan  sampel  yang  dilakukan bukan  secara  acak  ( random )  tetapi  dengan convenience sampling yang dapat mempengaruhi hasil yang didapatkan.

## SIMPULAN
Prevalensi  terduga  pembawa  gen thalasemia-beta  pada  populasi  mahasiswa Fakultas Kedokteran Universitas Mulawarman  adalah  1,25%.  Pemeriksaan lanjutan  berupa  elektroforesis  hemoglobin atau analisis gen dibutuhkan untuk mengkonfirmasi temuan dari uji skrining ini.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Singh,  S.,  Singh,  R.,  Kaul,  K.  K.  &
Kour, M. Study of Serological Parameters  in  Thalassemic  Patients  of
GMC  Jammu. IOSR  J.  Dent.  Med.  Sci. 15, 35–52 (2016).
2. Sanctis,  V.  De et  al. β  -Thalassemia Distribution  in  the  Old  World :  an
Ancient Disease Seen from a Historical Standpoint. Mediterr  J  Hematol  Infect Dis 2017 9, 1–14 (2017).
3. Menteri Kesehatan Republik  Indonesia.
Keputusan Menteri Kesehatan Republik Indonesia Nomor HK.01.07/Menkes/1/2018 tentang Pedoman Nasional Pelayanan Kedokteran  Tata  Laksana  Thalasemia . 1–90 (2018).
4. Alyumnah, P., Ghozali, M. & Dalimoenthe, N. Z. Skrining Thalassemia  Beta  Minor  pada  Siswa SMA  di  Jatinangor  Suspected  Beta Thalassemia Minor Screening in Jatinangor  High  School  Students. J. Sist. Kesehat. 1, 133–138 (2015).
5. Qazi,  R.  A.,  Shams,  R.,  Hassan,  H.  & Asif, N. Screening for Beta
Thalassemia  Trait. J.  Rawalpindi  Med.
Coll. 18, 158–160 (2014).
6. Maharani, E. A., Soedarmono, Y. S. M. &  Nainggolan,  I.  M.  Frequency  of thalassemia  carrier  and  Hb  variant  and the quality of stored donor blood. Med J
Indones 23, 209–212 (2014). 7. Kementerian Kesehatan Republik Indonesia.  Pencegahan  Thalassemia (Hasil  Kajian  HTA  Tahun  2009). (2010).
8. Yousafzai, Y. M., Khan, S. & Raziq, F. Beta-thalassaemia  trait:  haematological parameters. J. Ayub Med. Coll.
Abbottabad 22, 84–86 (2010).
9. Old, J. Hemoglobinopathies and Thalassemias.  in Emery  and  Rimoin’s Essential Medical Genetics (eds. Rimoin,  D.,  Pyeritz,  R.  &  Korf,  I.) (Elsevier, 2013). 10.  Hapsari,  A.  T.  &  Rujito,  L.  Uji Diagnostik Indeks Darah dan Identifikasi Molekuler Karier Talasemia  β  pada  Pendonor  Darah  di Banyumas  Blood  Donor  Subjects  in Banyumas. J.  Kedokt.  Brawijaya 28, 233–237
11.  Vehapoglu,  A. et  al. Hematological Indices  for  Differential  Diagnosis  of Beta  Thalassemia  Trait  and  Iron Deficiency  Anemia. Anemia (2014).
doi:10.1155/2014/576738
12.  Chow,  J.,  Phelan,  L.  &  Bain,  B.  J. Evaluation  of  single-tube  osmotic fragility  as  a  screening  test  for thalassemia. Am.  J.  Hematol. 79,  198– 201 (2005).