Aktivitas Antibakteri Minyak Nilam …………
AKTIVITAS ANTIBAKTERI MINYAK NILAM ( Pogostemon cablin Benth ) PADA BEBERAPA TINGKAT KADAR PATCHOULI ALCOHOL

## ANTIBACTERIAL ACTIVITIES OF PATCHOULI OIL IN SOME PATCHOULI ALCOHOL CONTENT
Sarifah Nurjanah, Dwi Merita Rosi, Rizqi Putri Fathoni, Sudaryanto Zain, Asri Widyasanti, Indira Lanti Kaya Putri
Fakultas Teknologi Industri Pertanian, Universitas Padjadjaran Email :sarifah@unpad.ac.id
Makalah: Diterima 17 April 2019; Diperbaiki 19 Oktober 2019; Disetujui 5 Desember 2019

## ABSTRACT
Patchouli oil (Pogostemon cablin Benth) contains patchouli alcohol (PA) as the main component, which has antibacterial activity. Some previous studies suspect that the antibacterial activity is caused by the content of PA.  This  study  aims  to  find  out  the  antibacterial  activity  of  several  patchouli  oil  fractions  resulting  from  the fractionation process. The method used is decriptif method. The treatment given was fractionated fraction of oil with  several  levels  of  PA  (fraction  2  with  PA  content  of  25.62%,  fraction  7  with  PA  content  of  34.65%  and fraction  8  with  PA  content  of  54.49%)  and  the  bacterias,included  :Propionibacterium  acnes,  Staphyloccocus aureus,  Staphylococcus  epidermidis,  Micrococcus  luteus,  Pseudomonas  aeruginosa,  Enterobacter  aerogenes, Klebsiella pneumonia, and Proteus mirabilis. The antibacterial activity was conducted by measuring the zones of inhibition.  The  results  showed  that  increasing  levels  of  patchouli  PA  oil  affected  the  inhibitory  diameter  in several types of bacteria. The higher the PA level can increase the zones of inhibition of some types of bacteria. Fraction 8 is the most effective fraction in inhibiting the growth of P. acnes, S. aureus, S. epidermidis, M. luteus as  gram-positive  bacteria  with  zones  of  inhibition  of  23.02  mm  and  13.00  mm,  24.10  mm,  respectively.  31.22 mm. Whereas in P. aeruginosa, E. aerogenes, K. pneumonia, and P. mirabilis as gram negative bacteria zones of inhibition is not formed.
Keywords : antibacterial activity, fractionation, patchouli oil, patchouli alcoh ol

## ABSTRAK
Minyak  nilam  ( Pogostemon  cablin Benth)  mengandung patchouli  alcohol (PA)  sebagai  komponen utama,  yang  mempunyai  aktivitas  antibakteri.  Beberapa  penelitian  sebelumnya  menduga  bahwa  aktivitas antibakteri  tersebut  disebabkan  oleh  kandungan  PA  pada  minyak  nilam.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk melakukan  pengujian  aktivitas  antibakteri  beberapa  fraksi  minyak  nilam  hasil  proses  fraksinasi.  Metode  yang digunakan  adalah  metode  deskriptif,  dengan  perlakuan  yang  diberikan  adalah  fraksi  minyak  hasil  fraksinasi dengan beberapa tingkatan kadar PA (fraksi 2 dengan kadar PA 25,62%, fraksi 7 dengan kadar PA 34,65% dan fraksi  8  dengan  kadar  PA  54,49%)  dan  jenis  bakteri Propionibacterium  acnes , Staphyloccocus  aureus, Staphylococcus epidermidis, Micrococcus luteus, Pseudomonas aeruginosa , Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumonia ,  dan Proteus  mirabilis .  Parameter  yang  diujikan  adalah  uji  aktivitas  antibakteri  dengan  mengukur diameter daya  hambat menggunakan metode sumuran. Hasil penelitian menunjukkan bahwa peningkatan kadar PA  minyak  nilam  berpengaruh  terhadap  diameter  daya  hambat  pada  beberapa  jenis  bakteri.    Semakin  tinggi kadar  PA  dapat  meningkatkan  diameter  daya  hambat  beberapa  jenis  bakteri.  Fraksi  8  merupakan  fraksi  yang paling  efektif  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri P.  acnes , S.  aureus,S.  epidermidis,  M.  luteus yang merupakan  bakteri  gram  positif  dengan  diameter  daya  hambat  berturut-turut  23,02  mm,  13,00  mm,  24,10  mm, dan  31,22  mm,  sedangkan  pada  bakteri P.  aeruginosa , E.  aerogenes,  K.  pneumonia ,  dan P.  mirabilis sebagai bakteri gram negatif tidak terbentuk diameter daya hambat.
Kata kunci : antibakteri, fraksinasi, minyak nilam, patchouli alcohol

## PENDAHULUAN
Minyak  nilam  adalah  salah  satu  jenis minyak  atsiri  yang  terdapat  di  Indonesia.  Minyak nilam diperoleh  dari hasil penyulingan daun,  batang dan  cabang  tanaman  nilam  ( Pogostemon  cablin Benth).  Minyak  nilam  sangat  digemari  di  dunia karena  daya  fiksasinya  yang  cukup  tinggi  terhadap pewangi  lain,  sehingga  dapat  mengikat  bau  wangi dan mencegah penguapan zat pewangi sehingga bau
wangi  tidak  cepat  hilang  (Agustian  dan  Sulaswatty, 2015).  Komponen  utama  yang  dikandung  minyak nilam  adalah patchouli  alcohol (PA,  C 15 H 26 O) (Swamy et al ., 2015). Menurut  Chomchalow  (2002),  minyak nilam  dapat  digunakan  sebagai  bahan  aromaterapi, industri farmasi, sabun, sampo, dan desinfektan. Hal tersebut  dikarenakan  minyak  nilam,  memiliki kemampuan sebagai antibakteri, antidepresan,
Jurnal Teknologi Industri Pertanian 29 (3):240-246 (2019)
Nomor DOI: 10.24961/j.tek.ind.pert.2019.29.3.240 ISSN: 0216-3160    EISSN: 2252-390 Terakreditasi Peringkat 2
Dirjen Penguatan Riset dan Pengembangan No 30/E/KPT/2018 Tersedia online http://journal.ipb.ac.id/index.php/jurnaltin
Sarifah Nurjanah, Dwi Merita Rosi, Rizqi Putri Fathoni, Sudaryanto Zain, Asri Widyasanti, Indira Lanti Kaya Putri
antijamur,  antiinfeksi,  anti-inflamasi,  antiseptik, antivirus dan karminatif (Pullagummi et al. , 2013). Secara  umum,  kandungan  minyak  nilam merupakan  senyawa  hidrokarbon  seperti  terpen, seskuiterpen, senyawa hidrokarbon teroksigenasi dan senyawa  lain  (Deguerry et  al .,  2006).  Menurut  El- Shazly  dan  Hussein  (2004),  senyawa  seskuiterpen, terutama  seskuiterpen  alkohol  dari  minyak  nilam sangat  menentukan  aktivitas  antibakteri  untuk merusak  membran  sel  bakteri.  Komponen patchouli alcohol pada  minyak  nilam  diduga  merupakan komponen yang bertanggungjawab terhadap aktivitas antibakteri minyak nilam (Yung et al ., 2013; Kongkathip et al., 2009). Peningkatan kadar kadar patchouli alcohol minyak  nilam  dapat  dilakukan  dengan  suatu  proses lanjutan  salah  satunya  yaitu  destilasi  fraksinasi  (Su et  al .,  2014).  Destilasifraksinasi  merupakan  proses pemisahan  komponen  kimia  pada  minyak  atsiri berdasarkan  perbedaan  titik  didih  dan  berat molekulnya.
Berbagai  macam  jenis  bakteri pathogen yang terdapat pada manusia yang dapat menyebabkan  penyakit  seperti Propionibacterium acnes , Staphyloccocus  aureus,  Staphylococcus epidermidis,  Micrococcus  luteus,  Pseudomonas aeruginosa , Enterobacter  aerogenes,  Klebsiella pneumonia ,  dan Proteus  mirabilis .  Oleh  karena  itu, penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh minyak  nilam  hasil  destilasi  fraksinasi  terhadap aktivitas  antibakteri  pada  bakteri  gram  positif  ( P. acnes,  S.  aureus,  S.  epidermidis dan M.  luteus )  dan bakteri  gram  negatif  ( P.  aeruginosa , E.  aerogenes, K.  pneumonia ,  dan P. ).  Bakteri  tersebut  merupakan bakteri  yang  mudah  hidup  di  daerah  tropis  dan bersifat patogen.

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan Alat
Bahan  baku  yang  digunakan  adalah minyak nilam yang berasal dari Aceh Selatan. Bahan kimia  yang  digunakan  yaitu  aquades,  alkohol  90% dan  96%,  fenolftalein  (pp),  KOH  0,1  N  dan  0,5  N, HCl 0,5 N, BaCl 2 1%, H 2 SO 4 1%, dan NaCl 0,85%. Bakteri  uji  yang  digunakan  adalah  bakteri  gram positif  ( P.  acnes,S.  aureus,  S.  epidermidis dan M. luteus )  dan  bakteri  gram  negatif  ( P.  aeruginosa , E. aerogenes,  K.  pneumonia ,  dan P.  mirabilis )  yang diperoleh dari Fakultas Farmasi Universitas
Padjadjaran, Fakultas Kedokteran Universitas
Padjadjaran, Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan  Alam  dan  Fakultas  Farmasi,  Institut Teknologi  Bandung.  Media  penumbuhan  yang digunakan nutrient  agar (NA)  serta mueller  hinton agar (MHA)  yang  diperoleh  dari  Laboratorium Mikrobiologi  Pangan  Fakultas  Teknologi  Industri Pertanian, Universitas Padjadjaran.
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu  destilasi  fraksinasi,  piknometer,  refraktometer
ABBE,  polarimeter,  erlenmeyer,  alkohol  meter, buret, spectrophotometer  chromameter CM-5, gas chromatography mass spectrometry (GC-MS) Shimadzu  QP  2010,  autoklaf,  oven,  inkubator, cawan petri, tabung reaksi, ose, bunsen, spektrofotometer,  mikropipet,  fintip,  timbangan analitik, vortex ,  gelas  ukur, beaker  glass dan  alat bantu lainnya.

## Metode
Penelitian  ini  dilakukan  dengan  metode deskriptif dengan dua faktor,dan diulang sebanyak 3 kali.  Adapun  faktor  tersebut  adalah  fraksi  minyak nilam  (3  fraksi)  dan  jenis  bakteri  ( P.  acnes , S. aureus , S.  epidermidis , M.  luteus , P.  aeruginosa , E. aerogenes , K. pneumonia , P. mirabilis ).
Persiapan Bahan Persiapan bahan dilakukan dengan melakukan  destilasi  fraksinasi  minyak  nilam  pada suhu 120 o C-150 o C dengan tekanan vakum sebesar (- )  60  cmHg  -(-)74  cmHg  selama  ±  4,5jam.  Hasil destilasifraksinasi diperoleh 8 fraksi. Hasil pengujian kadar Patchouli  alcohol (PA)  dengan  menggunakan GCMS  menunjukkan  bahwa  fraksi  2  merupakan fraksi  dengan  kadar  PA  terendah  (25,62%),  fraksi  8 merupakan  fraksi  dengan  kadar  PA  tertinggi (54,49%)  dan  fraksi  7  merupakan  fraksi  dengan kadar  PA  diantara  keduanya  (34,96%),  sehingga pada  penelitian  ini  digunakan  ketiga  fraksi  tersebut yang  mewakili  kadar  PA  pada  8  fraksi  yang dihasilkan.
Analisis  Mutu  Minyak  Nilam  dan  Hasil  Destilasi Fraksinasi
Minyak nilam sebelum difraksinasi dianalisi    mutunya  sesuai  dengan  Standar  Nasional Indonesia  minyak  nilam  (SNI  Minyak  Nilam  06- 2385-2006)  meliputi  bobot  jenis,  indeks  bias, putaran  optik,  kelarutan  dalam  alkohol  90%, bilangan  asam,  bilangan  ester,  dan  warna.  Analisis juga  dilakukan  pada  minyak  hasil  fraksinasi  untuk melihat  berubahan  karakteristik  karena  proses fraksinasi.    Analisis  komponen  senyawa  yang terdapat  dalam  minyak  nilam  dilakukan  dengan menggunakan  GC-MS  dengan  kolom  kapiler silica ZB-5MS  (30m  ×  0,25mm  ×  0,25μm).  Detektor dioperasikan  dalam  mode  FI  ( flame  ionizatio n) dengan  rentang  pemindaian  dari  m/z  35  hingga  500 pada  0,7  kV.  Komponen  diidentifikasi  dengan menggunakan NIST 3.0 dan WILEY 275.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji aktivitas antibakteri dilakukan menggunakan  metode  difusi  sumuran.  Regenerasi bakteri menggunakan media NA dan diinkubasi pada suhu  37 o C  selama  24  jam,  sedangkan  pengujian aktivitas antibakteri menggunakan media MHA pada cawan  petri.    Lubang  sumuran  dibuat  dengan diameter 6 mm dan fraksi minyak nilam dimasukkan sebanyak  60  μL  (0,0594  g).  Selanjutnya  diinkubasi
Aktivitas Antibakteri Minyak Nilam …………
pada  suhu  37 o C  selama  24  jam    (Nurainy et  al., 2008).    Standarisasi  larutan  mikroba  dilakukan dengan  membandingkan  suspensi  mikroba  dengan larutan Mc.Farland 1 (3×108 CFU/mL). Pengukuran diameter  daya  hambat  bakteri  diukur  dengan mengukur diameter zona bening kemudian dikurangi diameter  lubang  sumuran  (6  mm).  Kontrol  positif yang digunakan sebagai pembanding yaitu antibiotik Gentamisin  (konsentrasi  50%)  dan  antibiotik Ciprofloxacin (konsentrasi 50%), sedangkan kontrol negatif yang digunakan adalah aquadest .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Karakteristik Minyak Nilam Hasil Fraksinasi

## Kadar Patchouli Alcohol
Berdasarkan  pada  hasil  pengujian  dengan GCMS  yang  diidentifikasi  komponennya  dengan menggunakan  perbandingan  dengan  spektra  NIST 3.0  dan  WILEY  27,  kadar patchouli  alcohol mengalami  kenaikan  seiring  bertambahnya  jumlah fraksi  seperti  terlihat  pada  Tabel  1.  Kadar patchouli alcohol tertinggi  berada  pada  fraksi  8  sebesar 54,49%.  Tingginya  kadar patchouli  alcohol pada
fraksi  8  dikarenakan  sebagian  komponen  dengan titik  didih  yang  lebih  rendah  dari patchouli  alcohol sudah terpisahkan pada fraksi sebelumnya. Komponen  dengan  titik  didih  rendah  dari patchouli alcohol (287 o C)  diantaranya  adalah δ-elemene (254,5 o C), β-patchoulene (260 o C), β-elemene (252,1 o C), seychellene (259,5 o C), α-guaiene (281 o C),  dan trans-caryophyllene (245,3 o C).  Hal  ini dikarenakan semakin lama proses fraksinasi berlangsung  membuat  suhu  dan  tekanan  vakum meningkat  sehingga  fraksi  dengan  titik  didih  tinggi semakin banyak yang terpisahkan.  Struktur molekul patchouli alcohol disajikan pada Gambar 1.
Gambar 1. Patchouli alcohol
Tabel 1.  Komponen minyak nilam dan hasil fraksinasi
Komponen Rumus kimia Bobot molekul (g) Minyak Nilam (%) Fraksi 2 (%) Fraksi 7 (%) Fraksi 8 (%) Propanoic acid C 14 H 18 O 2 218
- - - 0,03 Aromadendrene, dehydro- C 15 H 22 202 - 1,13 0,85 0,68 delta-Elemene C 15 H 24 204 0,20 0,28 0,10 - beta-Patchoulene C 15 H 24 204 2,81 - 2,46 0,83 beta-Elemene C 15 H 24 204 1,36 1,90 1,52 0,45 Seychellene C 15 H 24 204 8,17 12,84 8,20 3,86 Caryophyllene C 15 H 24 204 3,31 3,94 3,56 1,60 alpha-Guaiene C 15 H 24 204 15,97 18,63 16,12 4,79 alpha-Selinene C 15 H 24 204 0,24 0,34 0,19 0,12 alpha-Humulene C 15 H 24 204 1,08 1,48 1.11 0,53 alpha-Patchoulene C 15 H 24 204 5,74 7,09 5,80 3,12 Azulene C 15 H 24 204 2,98 0,59 3,53 4,86 Patchoulene C 15 H 24 204 1,38 1,71 1,33 0,62 trans-Caryophyllene C 15 H 24 204 0,73 0,89 0,69 - Germacrene C 15 H 24 204 0,17 - - - gamma-Gurjunene C 15 H 24 204 1,03 4,43 1,01 2,39 delta-Guaiene C 15 H 24 204 14,36 15,06 15,95 10,91 Butyric acid C 14 H 20 O 2 220 0,43 - - 0,25 alpha-Panasinsen C 15 H 24 204 0,53 0,51 0,48 0,51 alpha-Cubebene C 15 H 24 204 0,13 - 0,13 - Isolongifolene C 15 H 22 202 - 0,19 0,26 0,59 Caryophyllene oxide C 15 H 24 O 220 1,22 0,80 0,85 2,04 Naphthalenamine C 15 H 24 O 220 0,54 - - 1,04 Longifolenaldehyde C 15 H 24 O 220 - 0,06 0,24 0,76 Globulol C 15 H 26 O 222 0,89 0,98 - 2,24 Palustrol C 15 H 26 O 222 0,31 - - - Caryophyllenyl alcohol C 15 H 26 O 222 0,18 0,80 - - Epoxysalvia C 15 H 24 O 220 - - - 0,36 Veridiflorol C 15 H 26 O 222 - - - 1,36 Patchouli alcohol C 15 H 26 O 222 35,28 25,62 34,96 54,49 Naphthalenone C 15 H 22 O 218 0,26 0,17 0,08 0,93 Acetic acid C 23 H 34 O 4 374 0,10 0,06 0,07 0,17 Others 0,60 0,50 0,51 0,47 Jumlah 100 100 100
100
Sarifah Nurjanah, Dwi Merita Rosi, Rizqi Putri Fathoni, Sudaryanto Zain, Asri Widyasanti, Indira Lanti Kaya Putri

## Karakteristik Minyak Nilam dan Fraksi
Hasil  penelitian  karakteristik  minyak  nilam dan  bahan  setiap  fraksi  yang  meliputi  bobot  jenis, indeks  bias,  putaran  optik,  kelarutan  dalam  alkohol, bialangan  asam,  dan  bilangan  ester  disajikan  pada Tabel 2.

## Bobot Jenis
Bobot  jenis  setiap  fraksi  yang  diperoleh dalam  penelitian  ini  berkisar  0,945-0,991  seperti terlihat  pada  Tabel  2.  Berdasarkan  pada  hasil perhitungan  bobot  jenis,  menunjukkan  bahwa semakin  bertambahnya  fraksi  minyak  nilam,  maka nilai bobot jenisnya semakin tinggi.
Nilai  bobot  jenis  tertinggi  berada  pada fraksi  8  sebesar  0,991.  Menurut  Armando  (2009), bobot  jenis  sering  dihubungkan  dengan  berat komponen  yang  terkandung  di  dalamnya.  Semakin tinggi  fraksi  berat  yang  terkandung  dalam  minyak, maka  semakin  tinggi  pula  bobot  jenisnya.  Pada fraksi 8 mengandung lebih banyak fraksi berat salah satunya  yaitu patchouli alcohol yang memiliki berat molekul  222,36 g/mol, sedangkan  pada fraksi  2  dan 7  lebih  banyak  mengandung  senyawa  seskuiterpen C 15 H 24 yang  memiliki  berat  molekul  204.35  g/mol ( α-guaiene ), sehingga semakin tinggi kadar patchouli  alcohol ,  maka  nilai  bobot  jenisnya  akan semakin besar.

## Indeks Bias
Nilai indeks bias  fraksi minyak  nilam  hasil fraksinasi  yang  diperoleh  dalam  penelitian  ini  yaitu berkisar  1,505-1,511.  Berdasarkan  pada  hasil perhitungan  menunjukkan  bahwa  nilai  indeks  bias semakin  tinggi  seiring  dengan  bertambahnya  fraksi minyak  nilam  seperti  yang  disajikan  pada  Tabel  3. Peningkatan  nilai  indeks  bias  mengindikasikan
peningkatan  komponen-komponen  senyawa  kimia dari  minyak  nilam  yang  memiliki  susunan  rantai karbon panjang atau ikatan rangkap yang banyak.
Nilai  indeks  bias  tertinggi  berada  pada fraksi  8  yaitu  sebesar  1,511.  Tingginya  nilai  indeks bias  pada  fraksi  ini  dikarenakan  tingginya  kadar patchouli  alcohol yang  terkandung.  Menurut Armando (2009), semakin tinggi komponen berantai panjang  seperti  seskuiterpen  ( δ-guaiene , α-guaiene , dan seychellene )  atau  komponen  bergugus  oksigen ( patchouli  alcohol,  (-)-globulol,  caryophyllene oxide )  pada  minyak  nilam    membuat  nilai  indeks bias  menjadi  besar.  Hal  ini  dikarenakan  kerapatan medium  bahan    akan  bertambah  sehingga  cahaya yang  datang  akan  sukar  untuk  dibiaskan.  Oleh karena  itu  semakin  tinggi  kadar patchouli  alcohol , maka nilai indeks bias akan semakin besar.

## Putaran Optik
Berdasarkan  pada  hasil  uji  putaran  optik, bahan hasil fraksinasi berada pada kisaran (-)44,30 o – (-)81,03 o .    Tabel  3  menunjukkan  bahwa  semakin bertambahnya  fraksi  minyak  nilam,  maka  nilai putaran  optik  semakin  besar  memutar  kekiri (negatif).
Pada  minyak  nilam  fraksi  8  menunjukkan nilai  putaran  optik  tertinggi  yaitu  sebesar  -81,03 o . Tingginya  nilai  putaran  optik  pada  fraksi  ini dikarenakan  tingginya  kadar patchouli  alcohol yang terkandung.  Menurut  Harimurti et  al .  (2012), kecenderungan  minyak  nilam  memutar  kearah  kiri disebabkan karena komponen alkohol yang memiliki daya  optik  aktif  ke  kiri  (-)  yang  lebih  besar.  Nilai putaran  optik  yang  semakin  tinggi  menunjukkan kandungan  karbon  asimetris  yang  semakin  banyak. Karbon  asimetris  yang  terkandung  dalam  fraksi bahan yaitu patchouli alcohol .
Tabel 2.  Data karakteristik minyak nilam dan  fraksihasil fraksinasi
Parameter Minyak nilam Fraksi 2 Fraksi 7 Fraksi 8 Bobot jenis 0,957 0,945 0,958 0,991 Indeks bias 1,509 1,505 1,507 1,511 Putaran optik ( o ) -53,55 -44,30 -54,90 -81,03 Kelarutan dalam alkohol 1:1 1:7 1:6 1:1 Bilangan asam (mg KOH/g bahan) 5,941 1,70 1,70 2,80 Bilangan ester (mg KOH/g bahan) 7,468 7,30 6,60 7,70 Tabel 3.  Karakteristik setiap fraksi hasil fraksinasi Parameter Fraksi 2 Fraksi 7 Fraksi 8 Bobot jenis 0,945 0,958 0,991 Indeks bias 1,505 1,507 1,511 Putaran optik ( o ) -44,30 -54,90 -81,03 Kelarutan dalam alkohol 1:7 1:6 1:1 Bilangan asam (mg KOH/g bahan) 1,70 1,70 2,80 Bilangan ester (mg KOH/g bahan) 7,30 6,60 7,70
Commented [W71]: Gunakan format yang seragam untuk penyitiran rujukan.
Aktivitas Antibakteri Minyak Nilam …………

## Kelarutan dalam Alkohol
Menurut  Badan  Standardisasi  Nasional mengenai  SNI  minyak  nilam  (06-2385-2006), minyak  nilam  larut  jernih  dalam  alkohol  90%  pada perbandingan  1:10.  Berdasarkan  pada  hasil  uji kelarutan  dalam  alkohol  90%  (Tabel  3),  minyak nilam  pada  setiap  fraksi  mempunyai  nilai  kelarutan yang berbeda.
Nilai  kelarutan  dalam  alkohol  terendah berada  pada  fraksi  8  yaitu  1:1.  Hal  ini  menyatakan bahwa pada minyak nilam fraksi 8 lebih mudah larut dalam  alkohol.  Minyak  yang  kaya  akan  komponen oxygenated lebih  mudah  larut  dalam  alkohol  dari pada  yang  kaya  akan  terpen.  Menurut  Deguerry et al. (2006),  salah  satu  golongan oxygenated pada minyak nilam adalah patchouli alcohol . Oleh karena itu, semakin tinggi kadar patchouli alcohol membuat minyak  semakin  mudah  larut  dalam  alkohol. Rendahnya nilai kelarutan dalam alkohol pada fraksi 8 ini menunjukkan bahwa minyak nilam mudah larut dalam alkohol.

## Bilangan Asam
Hasil  analisis  bilangan  asam  pada  minyak hasil  fraksinasi  yang  diperoleh  berada  pada  kisaran 1,7-2,8  mg  KOH/g  minyak  nilam,  seperti  terlihat pada  Tabel  3.  Menurut  Badan  Standardisasi Indonesia  mengenai  SNI  minyak  nilam  (06-2385- 2006) untuk bilangan asam yaitu maksimal 8.
Minyak  nilam  pada  fraksi  8  merupakan minyak  dengan  nilai  bilangan  asam  tertinggi  yaitu sebesar  2,8  mg  KOH/g  minyak  nilam.  Tingginya nilai  bilangan  asam  pada  fraksi  ini  dikarenakan kandungan  asam  pada  fraksi  8  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  fraksi  lain.  Berdasarkan  hasil uji  GC-MS  pada  fraksi  8,  terdapat  komponen propanoic  acid , butyric  acid dan acetic  acid , sehingga  diduga  komponen  tersebut  membuat  nilai bilangan  asam  pada  fraksi  8  meningkat.  Penyebab lain  dari  besarnya  nilai  bilangan  asam  pada  fraksi  8 diduga  dikarenakan  adanya  senyawa  golongan aldehid  salah  satunya  seperti longifolenaldehida yang  lebih  banyak  dibandingkan  fraksi  2  dan  fraksi 7.  Hasil  GC-MS  menunjukkan  bahwa  luas  area senyawa longifolenaldehida pada  fraksi  8  yaitu sebesar 0,76%, sedangkan pada fraksi 2 yaitu 0,06% dan pada fraksi 7 sebesar 0,24%.

## Bilangan Ester
Menurut  Badan  Standardisasi  Nasional mengenai  SNI  minyak  nilam  (06-2385-2006)  untuk bilangan ester maksimal 20 mg KOH/g bahan. Nilai bilangan  ester  yang  dihasilkan  dalam  penelitian  ini berkisar  6,6-7,7  mg  KOH/g  bahan,  seperti  terlihat pada Tabel 3.
Nilai  bilangan  ester  tertinggi  berada  pada fraksi  8  yaitu  sebesar  7,7  mg  KOH/g  bahan. Tingginya bilangan ester pada fraksi ini yaitu diduga karena pada proses pemisahan minyak fraksi 8, suhu yang  tinggi  dan  pemanasan  yang  berlangsung  lama
menyebabkan meningkatnya bilangan ester.  Arpi et al .  (2011)  menyatakan  bahwa  semakin  lama  waktu penyulingan  maka  semakin  banyak  komponen minyak  nilam  dengan  titik  didih  tinggi  yang mengalami polimerisasi.
Warna Berdasarkan hasil uji derajat warna menunjukkan  nilai  HUE  ketiga  fraksi  berada  pada kisaran  81,26 o -87,89 o .  Angka  tersebut  berada  pada rentang  54 o -90 o yang  menunjukkan  warna  kromatis minyak  nilam  hasil  fraksinasi  adalah Yellow  Red , seperti terlihat pada Tabel 4.
Tabel 4. Warna setiap fraksi hasil destilasi fraksinasi
Perlakuan L*±SD o Hue±SD Kisaran Warna Kromatis Fraksi 2 92,40 ± 0,02 81,86 ±0,96 Kuning kemerahan Fraksi 7 92,70 ± 0,11 81,26 ±0,88 Kuning kemerahan Fraksi 8 81,43 ± 0,04 87,89 ±0,96 Kuning kemerahan Minyak nilam mengandung senyawa patchouli  alcohol , patchoulene , azulene ,  dan sesquiterpenes . Komponen tersebut memiliki karakteristik  warna  kekuningan  atau  kehijauan hingga  coklat  gelap  (Panda,  2010).  Senyawa aromatik  yang  terkandung  pada  minyak  nilam  hasil fraksinasi  yaitu patchouli  alcohol , patchoulene dan azulene .  Sehingga  diduga  kandungan  senyawa tersebut  memberikan  pengaruh  terhadap  warna terutama patchouli alcohol yang merupakan komponen tertinggi pada ketiga fraksi.

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Uji antibakteri ketiga fraksi bertujuan untuk mengetahui  aktivitas  antibakteri  minyak  nilam  hasil destilasi fraksinasi dalam menghambat pertumbuhan bakteri  yang  diujikan. Bakteri  yang digunakan  yaitu gram positif ( P. acnes,S.  aureus, S. epidermidis dan M.  luteus )  dan  bakteri  gram  negatif  ( P.  aeruginosa , E.  aerogenes,  K.  pneumonia ,  dan P.  mirabilis ). Bakteri  tersebut  merupakan  bakteri  yang  yang mudah hidup di daerah tropis dan bersifat patogen.
Minyak  nilam  yang  digunakan  dalam  uji antibakteri  ini  yaitu  minyak  nilam  hasil  destilasi fraksinasi  pada  fraksi  2  dengan  kadar patchouli alcohol 25,62%,  fraksi  7  dengan  kadar patchouli alcohol 34,86% dan fraksi 8 dengan kadar patchouli alcohol 54,49%. Ketiga fraksi minyak nilam dapat menghambat  bakteri  gram  positif P.  acnes,  S. aureus, S. epidermidis, dan M. luteus. Hal ini sesuai beberapa  penelitian  sebelumnya  bahwa  minyak nilam dapat menghambat bakteri P. acnes (Sulistyaningsih et  al .,  2015), S.  aureus dan S. epidermidis (Yang et al ., 2013; Piotr et al ., 2018).
Sarifah Nurjanah, Dwi Merita Rosi, Rizqi Putri Fathoni, Sudaryanto Zain, Asri Widyasanti, Indira Lanti Kaya Putri

## Tabel 5. Aktivitas antibakteri fraksi minyak  nilam hasil destilasi fraksinasi
Kultur Diameter Daya Hambat (mm) Kontrol Fraksi 2 Fraksi 7 Fraksi 8 Propionibacterium acnes 6,48 ± 0,81 8,42 ± 0,61 23,02 ± 0,84 19,58± 0,38 Staphylococcus aureus 8,00 ± 0,93 15,00±0,66 13,63±0,11 19,33 ± 0,94 Staphylococcus epidermidis 15,66 ± 0,70 23,68 ± 0,30 24,10  ± 0,28 40,20 ± 1,22 Micrococcus luteus 10,74 ± 0,36 19,43 ± 0,86 31,22 ± 0,78 37,97 ±1,65 Pseudomonas aeruginosa 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 19,34 ± 1,23 Enterobacter aerogenes 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 19,98 ±0,67 Klebsiella pneumonia 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 36,92 ± 0,99 Proteus mirabilis 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 36,20 ± 1,59
Diameter  daya  hambat  tertinggi  pada bakteri P. acnes, S. epidermidis, dan M. luteus yaitu pada  fraksi  8.  Tingginya  kadar patchouli  alcohol (54,49%) pada fraksi ini diduga mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri  dengan  baik.  Hal ini sesuai dengan hasil penelitian Yung et al .  (2013) dan  Kongkathip et  al. (2009)  yang  menyatakan bahwa  semakin  tinggi  kadar patchouli  alcohol pada miyak nilam semakin tinggi aktivitas antibakterinya. Pada  bakteri S.  aureus tidak  menunjukkan  semakin tinggi  kadar patchouli  alcohol ,  daya  hambat terhadap  bakteri  semakin  tinggi.  Diameter  daya hambat tertinggi pada bakteri S. aureus berada pada fraksi  7  dengan  kadar patchouli  alcohol (34,86%). Perbedaan kecepatan difusi senyawa antibakteri pada media agar diduga mampu mempengaruhi pertumbuhan  bakteri.  Pada  minyak  nilam  fraksi  8 memiliki  nilai  kekentalan  yang  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  fraksi  2  dan  fraksi  7. Konsentrasi  yang  tinggi  akan  menghasilkan  larutan yang  kental.  Larutan  yang  terlalu  kental  akan  sulit berdifusi  dibandingkan  dengan  larutan  yang  lebih encer. Akibatnya diameter penghambatan mengalami  penurunan.  Nilai  kekentalan  yang  tinggi pada  fraksi  8  diduga  membuat  kecepatan  difusi minyak  nilam  menjadi  lebih  rendah  sehingga mengakibatkan penurunan daya hambatnya.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa minyak  nilam  hasil  fraksinasi  tidak  mampu menghambat pertumbuhan bakteri gram negatif. Hal ini  dikarenakan  bakteri  gram  negatif  mempunyai ketahanan  yang  lebih  baik  terhadap  senyawa antibakteri  dibandingkan  dengan  bakteri  gram positif. Menurut Pratiwi (2008), pada dinding bakteri gram  positif  banyak  mengandung  peptidoglikan. Rendahnya  kandungan  peptidoglikan  pada  dinding sel  bakteri  gram  negatif  relatif  lebih  tahan  terhadap kerusakan mekanis.
Menurut  Pelczar  dan  Chan  (2006),  respon yang  berbeda  dari  dua  golongan  bakteri  terhadap senyawa  ini  disebabkan  karena  adanya  perbedaan kepekaan pada bakteri gram positif dan bakteri gram negatif terhadap senyawa antibakteri yang terkandung.  Bakteri  gram  positif  cenderung  lebih sensitif  terhadap  komponen  antibakteri.  Hal  ini disebabkan  oleh  struktur  dinding  sel  bakteri  gram positif  lebih  sederhana  sehingga  memudahkan senyawa  antibakteri  untuk  masuk  ke  dalam  sel  dan
menemukan  sasaran  untuk  bekerja,  sedangkan struktur  dinding  sel  bakteri  gram  negatif  lebih kompleks dan berlapis tiga, yaitu lapisan luar berupa lipoprotein, lapisan tengah yang berupa petidoglikan dan lapisan lipopolisakarida.
Menurut  Nazzaro et  al. (2013),  dinding  sel dari  bakteri  gram  positif  memungkinkan  molekul hidrofobik seperti minyak atsiri berpenetrasi pada sel dan  merusak  dinding  sel  dan  juga  sitoplasma. Bakteri  gram  positif  mempunyai  dinding  sel  yang mengandung  90%  peptidoglikan  serta  lapisan  tipis asam  teikoat.  Peptidoglikan  berperan  mengatur difusi molekul ke dalam sel sedangkan asam teikoat merupakan  bagian  penyusun  peptidoglikan.  Dinding sel  bakteri  gram  positif  lebih  banyak  mengandung asam amino alanin yang berfungsi menjaga stabilitas protein  dalam  bakteri  yang  bersifat  hidrofobik, sehingga  lebih mampu mengikat senyawa  non-polar seperti  minyak  atsiri  dibandingkan  dengan  pada bakteri gramnegatif.
Membran luar bakteri gram negatif memiliki  sifat  hidrofilik  yaitu  mudah  berikatan dengan  air  dan  gugus  polar  lainnya,  namun  tidak dengan  minyak  atsiri  yang  merupakan  senyawa  non polar.  Membran  luar  juga  berperan  sebagai  barrier masuknya  senyawa-senyawa  yang  tidak  dibutuhkan sel, diantaranya bakteriosin, enzim, dan senyawa lain yang  bersifat  hidrofobik  (Davidson et  al., 2005). Selain itu, pada bakteri gram negatif terdapat saluran yang terbuat dari  protein  yaitu porin  yang  berfungsi sebagai  tempat  masuknya  komponen  hidrofilik seperti gula (oligosakarida, monosakarida) dan asam amino yang penting untuk kebutuhan nutrisi bakteri, hal  itu  juga  yang  menyebabkan  senyawa  dengan molekul  besar  tidak  dapat  memasuki  dinding  sel bakteri  gram  negatif,  sehingga  bakteri  gram  negatif lebih  resiten  untuk  dihambat  dengan  minyak  nilam yang bermolekul besar.
Aktivitas kerja minyak atsiri dalam menghambat  pertumbuhan  atau  mematikan  bakteri dengan  cara  mengganggu  proses  terbentuknya membran atau dinding sel, membran atau dinding sel tidak  terbentuk  atau  terbentuk  secara  tidak sempurna.  Minyak  atsiri  dari  komponen  terpenoid yang  terkandung  dalam  suatu  tanaman  dapat merusak membran sel bakteri dengan  cara berikatan dengan  protein  enzim  dan  merusakan  membran  sel sehingga  dapat  menghambat  pertumbuhan  sel
Aktivitas Antibakteri Minyak Nilam …………
bakteri. Pratiwi (2008) menyatakan bahwa membran plasma  juga  tempat  aksi  bagi  beberapa  agen antimikroba,  sehingga  diduga  kemampuan  aktivitas antibakteri  minyak  nilam  terhadap  bakteri  gram positif  yaitu  dengan  cara  merusak  membran  atau dinding  sel  bakteri.  Pada  bakteri  gram  negatif, struktur  dinding  sel  yang  lebih  kompleks  diduga membuat  senyawa  aktif  pada  minyak  nilam  tidak mampu merusak membran atau dinding sel bakteri.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Minyak  nilam  hasil  destilasi  fraksinasi mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri  gram positif  ( P.  acnes , S.  aureus,  S.  epidermidis, dan M. luteus ) tetapi tidak mampu menghambat pertumbuhan bakteri gram negatif ( P. aeruginosa , E. aerogenes, K. pneumonia , dan P. mirabilis ), dimana pada  fraksi  8  dengan  kadar  PA  54,49%  merupakan fraksi  yang  paling  efektif  dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri P.  acnes , S.  aureus,S. epidermidis, M. luteus yang merupakan bakteri gram positif  dengan  diameter  daya  hambat  berturut-turut 23,02 mm, dan 13,00  mm , 24,10 mm, 31,22 mm.

## DAFTAR PUSTAKA
Agustian  E  dan  Sulaswatty  A.    2015.  Produksi minyak nilam untuk “fixative aromatherapy” :  studi  kasus  desain  kondensor  distilasi uap. Biopropal Industri 6 (1): 19-27. Arpi N, Erika C, Ermaya D. 2011. Survey and study on yield and quality of patchouli oil in Aceh Barat  Daya  District,  Indonesia  based  on original  area  of  raw  materials,  methods  and length  of  distilation. Proceedings  of  The Annual  International  Conference  Syiah Kuala  University ,  Aceh  29-30  November 2011. Armando  R.  2009. Memproduksi  15  Minyak  Asiri Berkualitas . Jakarta: Penebar Swadaya. Chomchalow N. 2002.Production of Aromatic Plants in  Asia  -  An  Overview. AU  Journal  of Technology. 1 (3): 1-12.
Davidson  PM,  Sofos  JN,  dan  Brannen  AL.  2005. Antimicrobial  in  Food .  3 rd edition.  London (GB) : Taylor and Francis Group. Deguerry  F,  Pastore  L,  Wu  S,  Clark  A,  Chappel  J,
Scalk  M.    2006.    The  diverse  sesquiterpene profile  of  patchouli, Pogostemon  cablin ,  is correlated with limited number of sesquiterpene  synthases. Biochemistry  and Biophysics 454 : 123-136.
El-Shazly  AM  dan  Hussein  KT.  2004.  Chemical analysis  and  bilogical  activities  of  the essentian oil of Teucrium leucocladum Boiss (Lamiaceae). Biochemical Systemic and Ecology 32 (7): 665-764. Harimurti N, Soerawidjaja TH, Djajeng S, Risfaheri. 2012.  Ekstraksi  minyak  nilam  ( Pogostemon
Cablin Benth)  dengan  teknik  hidrodifusi pada tekanan 1-3 Bar . Journal Pascapanen 9 (1): 1-10.
Kongkathip  N,  Tanasombat  M,  Udomkunsori  P. 2009.  Development  of  patchouli  extraction with  quality  controland  isolation  of  active compounds with antibacterial activity. Kasetsart Journal. (43) : 519 - 525.
Nazarro  F,  Florinda  F,  Laura  D  M,  Raffaele  C, Vincenzo  DF.  2013.  Effect  of  essential  oils on  pathogenic  bacteria. Pharmaceutical s  6: 1451-1474.
Nurainy  F,  Samsul  R,  dan  Yudiantoro.  2008. Pengaruh konsentrasi kitosan terhadap aktivitas  antibakteri  dengan  metode  difusi agar (Sumur). Jurnal Teknologi Industri dan Hasil Pertanian. 3 (2) : 117-125. Panda  H.  2010. Perfumes  and  Flavours  Technology Handbook .  Delhi:  Asia  Pasific  Bussines Press Inc.
Piotr  S,  Magdalena  Z,  Joanna  P,  Barbara  K, Slawomir  M.    2018.    Essential  oils  as potential  anti- Staphylococcal agents. Acta Veterinaria-Beograd 68 (1) : 95-107. Pelczar  MJ,  dan  Chan  ESC.  2006. Dasar-dasar Mikrobiologi I . Penerjemah : Ratna SH, Teja I,  S.Sutarmi  T,  dan  Sri  LA.  Jakarta.:  UI- Press. Pratiwi  SUT.  2008. Mikrobiologi  Farmasi. Jakarta: PT. Gelora Aksara Pratama Erlangga. Pullagummi  C,Venkatesh  K,  Chandra  SS,  Arun  JB, Prem  KB,  Amareshwari  P,  Roja  RA.  2013. Phytochemical,Pharmacological  importance of  Patchouli  ( Pogostemon  cablin (Blanco) Benth) an aromatic medicinal plant. International Journal Pharm. Sci. Rev. Res., 21(2), 7-15.
Su ZQ, Wu XL, Bao MJ, Li CW, Kong SZ, Su ZR, Lai,  XP,  Li  YC,  Chen  JN.    2014.    Isolation of (-)-patchouli alcohol from patchouli oil by fraction distillation andcrystallization. Tropical  Journal  Pharmaceutical  Research 13 (3) : 359-363. Sulistiyaningsih R,  Surahman E,  dan  Lenggogeni P. 2015.    Anti-acne  ( Acne  vulgaris )  emulgen formulation  of  aromatic  oil  from  Patchouli leaves  ( Pogostemon  cablin Benth)  and  in vitro  antibacterial  activity  test  against Propionibacterium  acnes . International Journal of Medicine and Pharmacy 3(2) 57- 64. Swamy MK, Mohanty SK, Sinniah UR, Maniyan A. 2015.    Evaluation  of  patchouli  ( Pogostemon cablin Benth) cultivars for growth, yield and quality parameters.  TEOP 18 (4) : 826-832. ang  X,  Zhang  X,  Yang  SP,  Liu  WQ.    2013.
Evaluation  of  antibacterial  of  patchouli  oil.
Iranian Journal of Pharmaceutical Research. 12 (3) : 307- 316