## PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL

## UMBI BAWANG DAYAK ( Eleutherine palmifolia (L.) Merr. ) SECARA ORAL PADA MENCIT BALB/c TERHADAP PENCEGAHAN PENURUNAN DIAMETER GERMINAL CENTER
PADA KELENJAR GETAH BENING SERTA KADAR IgG SERUM

## Austin Bertilova Carmelita
Program Studi S2 Imunologi, Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga Surabaya JL. Airlangga No. 4-6 Surabaya (60286) Telp. 031-5041566, Fax. (031) 5029856 Email: austin.bertilova@yahoo.com

## ABSTRAK
Salah  satu  tanaman  yang  memiliki  kandungan  imunostimulator  yaitu  bawang  dayak ( Eleutherine  palmifolia  (L.)  Merr. ).  Ekstrak  etanol  umbi  bawang  dayak  (EEUBD)  memiliki kandungan  fitokimia  yang  bersifat  sebagai  antioksidan  antara  lain  triterpenoid,  flavonoid,  fenolik, alkaloid  dan  tanin.  Flavonol  berpotensi  sebagai  imunostimulan  meningkatkan  produksi  IL-2  yang terlibat  dalam  aktivasi  dan  proliferasi  sel  T.  Flavonoid  dapat  menginduksi  Th1  untuk  menghasilkan IFN-  γ,  IFN-  γ  berperan  untuk  menginduksi  sel  limfosit  B  memproduksi  imunoglobulin.  Untuk mengetahui  potensi  pengaruh  pemberian  ekstrak  etanol  umbi  bawang  dayak  dalam  pencegahan penurunan diameter germinal center pada kelenjar getah bening serta pencegahan penurunan kadar Ig G  serum  pada  mencit  yang  diinduksi  metilprednisolon  oral  dilakukan  penelitian  dengan  desain eksperimental.  Pada  penelitian  ini  mencit  dikelompokkan  menjadi  lima  kelompok  yaitu  kelompok  I (K1)  merupakan  perlakuan  kontrol  hanya  diberi  CMC  Na + 0,5  %.  Kelompok  II  (K2)  merupakan model  imunosupresi  yaitu  kelompok  perlakuan  yang  diinduksi  metilprednisolon  0,08  mg/30  grBB mencit/  hari  terlarut  dalam  0,2  ml  aquades.  Kelompok  III  (K3)  dengan  perlakuan  metilprednisolon ditambah EEUBD dengan dosis 50 mg/kgBB. Kelompok IV (K4) dengan perlakuan metilprednisolon ditambah  EEUBD  dengan  dosis  100  mg/kgBB  dan  kelompok  V  (K5)  dengan  perlakuan metilprednisolon  ditambah  EEUBD  dengan  dosis  200  mg/kgBB,  diberikan  sekali  sehari  selama  14 hari  bersamaan  pemberian  induksi  metilprednisolon  pada  sore  hari  secara  per-oral  (sonde intragastrik).  Kemudian  diamati  peningkatan  diameter germinal  center dan  kadar  Ig  G  serum.  Data hasil  penelitian  antar  kelompok  dianalisis  dengan  menggunakan  uji  korelasi  bivariat  koefisien pearson.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  EEUBD  terbukti  sebagai  imunostimulator  terhadap peningkatan  diameter germinal  center pada  dosis  100  mg/kgBB  dan  peningkatan  kadar  Ig  G  serum pada dosis 200 mg/kgBB.
Kata-kata kunci : bawang dayak ( Eleutherine palmifolia (L.) Merr. ), germinal center , imunoglobulin G (Ig G)

## ABSTRACT
One of the plants that contain immunostimulatory is Dayak’s onion (Eleutherine palmifolia (L.)  Merr.).  The ethanol  extract of  Dayak’s  onion contains  phytochemicals  that  act  as  antioxidants include  triterpenoids,  flavonoids,  phenolics,  alkaloids  and  tannins.  Flavonols  potential  as  an immunostimulant increase the production of IL-2 is involved in the activation and proliferation of T cells  can  induce  Th1  flavonoids  to  produce  IFN- γ ,  IFN- γ role  is  to  induce  B  lymphocyte  cells producing immunoglobulins. To determine the potential effect of ethanol extract of Dayak’s onion to prevent  deterioration  diameter  germinal  center  of  the  lymph  nodes  as  well  as  the  prevention  of decreased levels of serum Ig G in mice induced oral methylprednisolone research with experimental design. In this study, mice were divided into five groups: group I (K1) is a control treatment was only given CMC Na + 0.5%. Group II (K2) is a model of immunosuppression is induced methylprednisolone treatment group 0.08 mg / 30 grBW mice / day dissolved by 0.2 ml of distilled water. Group III (K3) by treatment with methylprednisolone combined with ethanol extract of Dayak’s onion a dose of 50 mg  /  kgBW.  Group  IV  (K4)  by  treatment  with  methylprednisolone  combined  with ethanol  extract  of Dayak’s onion a dose  and group V (K5) by treatment with methylprednisolone combined with ethanol extract  of    Dayak’s  onion with  a  dose  of    200  mg  /  kgBW,  administered  once  daily  for  14  days concurrent  administration  of  methylprednisolone  orally  (sonde  intragastric)  are  induction  in  the afternoon.  Then  the  observed  increase  in  the  diameter  of  germinal  center  and  G  serum  Ig  levels. Research  data  between groups  were  analyzed  using Pearson's  correlation  coefficient  bivariate.  The results showed that ethanol extract of  Dayak’s onion proved an immunostimulatory to the increased diameter of the germinal center at the dose of 100 mg / kgBW and elevated levels of serum Ig G at the dose of  200 mg / kgBW.
Key words: Dayak’s onion (Eleutherine palmifolia (L.) Merr.), germinal  center, immunoglobulin G (Ig G)

## PENDAHULUAN
Kemampuan  tubuh  untuk  melindungi diri,  agar  terhindar  dari  suatu  penyakit  sangat tergantung  pada  sistem  kekebalan  tubuh  atau sistem  imun,  baik  yang  bersifat innate immunity  ( ketahanan  tubuh  alami/bawaan) maupun adaptive  immunity  ( ketahanan  tubuh yang  didapat).  Jejas  adalah  semua  tekanan baik  pada  tingkat  molekuler  atau  seluler (Sudiana, 2014).
Masyarakat  Kalimantan  Tengah  telah memanfaatkan  tanaman  sebagai  obat  secara turun  temurun.  Bawang  dayak  ( Eleutherine palmifolia  (L.)  Merr. )  adalah  salah  satu tanaman  yang  dipercaya  memiliki  khasiat menyembuhkan berbagai jenis penyakit. Sampai  saat  ini  tanaman  bawang  dayak
digunakan  untuk  terapi  penyakit  kanker  usus, kanker  payudara,  diabetes  melitus,  hipertensi, menurunkan  kolesterol,  obat  bisul,  stroke, sakit  perut  sesudah  melahirkan.  (Galingging, 2009).  Tanaman  bawang  dayak  bisa  dianggap sebagai  obat  dewa  bagi  penduduk  Kalimantan Tengah.
Kortikosteroid  merupakan  obat  yang sangat  banyak  dan  luas  dipakai  dalam  dunia kedokteran.  Glukokortikoid  digunakan  luas pada  banyak  kelainan-kelainan  non  endokrin dengan  variasi  penggunaan  yang  besar  baik dalam pemilihan obat maupun dosisnya antara lain  penyakit-penyakit  rheumatik/Collagen (SLE,  Polyarteritis  nodusa),    penyakit  ginjal (sindroma nefrotik, glomerulonephritis membranous), penyakit-penyakit allergi,
asthma  bronchiale ,  infeksi,  penyakit-penyakit mata, penyakit-penyakit kulit, penyakit- penyakit  gastrointestinal,  penyakit  kelainan hematologi  dan  onkologi,  edema  otak,  shock, transplantasi  organ  dan  stroke  dan  trauma spinal cord (Azis, 2006).
Begitu luasnya penggunaan kortikosteroid  ini  bahkan  banyak  yang digunakan  tidak  sesuai  dengan  indikasi maupun  dosis  dan  lama  pemberian,  seperti pada  penggunaan  kortikosteroid  sebagai  obat untuk  menambah  nafsu  makan  dalam  waktu yang  lama  dan  berulang  sehingga  bisa memberikan efek yang tidak diinginkan (Azis, 2006). Salah satu  efek samping steroid adalah dengan  melemahkan  sistem  kekebalan  tubuh. Jika  sistem  kekebalan  tubuh  dilemahkan, kerentanan  tubuh  terhadap  infeksi  virus maupun  bakteri  menjadi  meningkat.  Pada pasien  yang  mengkonsumsi  steroid  sering terjadi  infeksi  jamur  pada  mulut  ( thrush )  atau vagina  (RSCM  Kirana,  2014;  Sumarwoto  T, 2004). Berdasarkan hal tersebut perlu dipikirkan  terapi  alternatif  dari  bahan  alam yang  memiliki  efek  memodulasi  sistem  imun, sehingga pasien yang mendapat terapi kortikosteroid  tidak  mengalami  penurunan sistem imun.
Kemampuan bawang
dayak menyembuhkan berbagai penyakit yang dipercaya  masyarakat  Kalimantan  Tengah memberi  harapan  bahwa  tanaman  obat  ini dapat  digunakan  sebagai  bahan  yang  bersifat modulasi  sistem  imun.  Namun,  bagaimana pengaruh dari tanaman bawang dayak terhadap modulasi  sistem  imun  masih  belum  dapat dijelaskan.
Imunomodulator  adalah  bahan  (obat) yang
dapat mengembalikan ketidakseimbangan  sistem  imun  (Chairul  dan Praptiwi,  2008).  Senyawa  yang  mempunyai bioaktifitas sebagai imunostimulan agen adalah golongan senyawa polisakarida, terpenoids,  alkaloid  dan  poli-fenol  (Wagner, 1985). Flavonol berpotensi sebagai imunostimulan  karena  mampu  meningkatkan produksi IL-2 yang terlibat dalam aktivasi dan proliferasi sel T (Dewi et al , 2013). Flavonoid dapat  menginduksi  Th1  untuk  menghasilkan IFN-ᵞ,  IFN-ᵞ  berperan  untuk  menginduksi  sel limfosit B memproduksi imunoglobulin (Annisa, 2014).
Sebuah  penelitian  yang  dilakukan Febrinda  dkk  (2013)  menunjukkan  ekstrak etanol umbi bawang dayak memiliki kandungan  fitokimia  yang  bersifat  sebagai antioksidan antara lain triterpenoid, flavonoid, fenolik, alkaloid dan tanin. Senyawa flavonoid yang  terdapat  pada  tanaman  terbukti  dapat menstimulasi sistem imun dengan meningkatkan  aktivitas  makrofag  dan  limfosit T  (Zalisar,  2013).  Peneliti  yang  lain  juga membuktikan  bahwa  ekstrak  etanol  bawang dayak memiliki kemampuan sebagai imunomodulator  dengan  meningkatkan  Ig  M pada mencit (Annisa, 2014).
Flavonoid dapat menginduksi Th1 untuk menghasilkan  IFN-γ  ,  IFN-γ    berperan  untuk menginduksi  sel  limfosit  B  yang  berada  di organ  limfoid  sekunder  berproliferasi  menjadi sel  plasma.  Sel  plasma  adalah  fase  akhir  dari sel limfosit B yang memproduksi immunoglobulin, salah satunya
immunoglobulin  G  (IgG).  Proses  proliferasi sel  B  menjadi  sel  plasma  dapat  ditunjukkan dengan adanya peningkatan diameter germinal center pada kelenjar getah bening.
Berdasarkan hal tersebut peneliti berupaya untuk melakukan penelitian pengaruh  pemberian  ekstrak  etanol  umbi bawang  dayak  ( Eleutherine  palmifolia  (L.) Merr. )  secara  oral  pada  mencit  BALB/c terhadap  pencegahan  penurunan  jumlah  sel plasma  dan  diameter germinal  center pada kelenjar  getah  bening  serta  kadar  IgG  pada serum.

## METODE PENELITIAN

## Instrumen Penelitian
1.  Alat  pemeliharaan  mencit  :  Kandang mencit  dari  kotak  plastik,  ram  kawat,  alas kandang, tempat makanan dan botol air.
2.  Alat untuk pembedahan mencit : kotak kaca dan penutup kaca pembiusan, scalpel (pisau bedah),  surgical  scissor  (gunting  bedah) dan pinset.
3.  Alat  untuk  melarutkan  dan  pemberian ekstrak  etanol  umbi  bawang  dayak  : timbangan  mikro  Toledo,  tabung  falcon, alumunium  foil,  vortex  mixer,  sonde lambung, spuit 1 ml terumo dan rak tabung reaksi.
4.  Mikroskop.
5.  ELISA Kit reader

## Bahan Penelitian
1.  Hewan  coba  dengan  kriteria  jenis  mencit ( Mus musculus ) : BALB/c berjenis kelamin
:  jantan,  umur  12  minggu  dengan  berat badan  25  –  30  gram,  kesehatan  mencit dapat diamati dengan gerakan cukup lincah, tidak lesu, kulit bersih dan tanpa luka, mata terang dan tidak sayu.
2.  Jenis  makanan  pellet  CP  511  dan  jenis minuman aquadestila.
3.  Perawatan  mencit  pemberian  makanan pellet,  pemberian  minum  secara  ad  libitum 5  ml/ekor/4  hari,penggantian  sekam  untuk alas  tidur  2  hari  sekali,  untuk  sanitasi kandang  dibersihkan  setiap  hari  dengan suhu  sesuai  dengan  suhu  ruang,  ventilasi dan  sinar  matahari  yang  cukup  dan  tidak lembab.
4.  Pembuatan ekstrak etanol bawang dayak. Umbi  bawang  dayak  dikupas  kulit  luarnya dicuci bersih dan diiris tipis-tipis, kemudian diangin-anginkan hingga
kering.
Selanjutnya  irisan  umbi  bawang  dayak tersebut  dibuat  serbuk.  Ditimbang  500 gram  serbuk  umbi  bawang  dayak  kering, ditambahkan  2  ml  etanol  kemudian disimpan  selama  24  jam  (  serbuk  bawang dayak  dilarutkan  dalam  2  ml  etanol  96  % dengan  metode  maserasi  yaitu  bahan direndam  etanol  1  x  24  jam  hingga etanolnya  menguap,  lalu  disaring  untuk diambil  fibrat  nya).  Besoknya  ditampung kemudian  dirotavator.  Ada  sisa  sari ditambahkan 1,5 liter etanol, didiamkan 24 jam.  Ampas  bawang  dayak  dimaserasi kembali  selama  1  x  24  jam  kemudian diambil  filtratnya.  Besoknya  diambil  lagi, dirotavator  kembali,  sisanya  diberi  etanol 1,5  liter,  hal  ini  dilakukan  selama  3  hari berturut-turut.  Pembagian  filtrat  dilakukan 3 kali kemudian semua filtrat dikumpulkan menjadi  satu,  lalu  diuapkan  dengan  alat rotary  evaporator  buchi R-200  melalui penurunan  tekanan  pada  suhu  40  –  45 derajat  celcius,  sehingga  diperoleh  ekstrak kental  bawang  dayak.  Selanjutnya  dibuat sediaan ekstrak  etanol  umbi  bawang  dayak konsentrasi  50  mg/kgBB  dengan  cara diambil  0,1  ml  EEUBD  larutkan  bersama 0,1 ml larutan CMC Na + 0,5 %. Dibuat juga sediaan ekstrak  etanol  umbi  bawang  dayak konsentrasi  100  mg/kgBB  dengan  cara diambil  0,2  ml  EEUBD  larutkan  bersama
0,1  ml  larutan  CMC  Na + 0,5  %.  Terakhir dibuat sediaan ekstrak etanol umbi bawang dayak  konsentrasi  200  mg/kgBB  dengan cara  diambil  0,3  ml  EEUBD  larutkan bersama 0,1 ml larutan CMC Na + 0,5 %.
5.  Pembuatan larutan Metilprednisolon berdasarkan dosis oral 25 mg/kgBB. Pembuatan larutan induksi metilprednisolon berupa 0,08 mg metilprednisolon  /30  grBB  mencit/  hari dilarutkan  bersama  0,2  ml  larutan  CMC
Na + 0,5 %.
6.  Ketamin ( Ketamine HCl / 2-(0- chlorophenil) – 2 (methylamino) cyclohexanone  hydrochloride )  dengan dosis 0,025 mg/10 grBB mencit berdasarkan dosis 10 mg/kgBB.
7.  Larutan CMC Na + 0,5%
8.  Formalin 10 %, etanol 70%, 80%, 99%, xylol, Paraffin cair, kaset, cover slip, base mould, beker glass , gelas ukur, termometer, cutter , pinset panjang, tissue processor auto technicon”, hot plate, cold plate , paraffin  dispenser untuk membuat preparat.
9. Rotary microtome, disposable blad, kuas cat air kecil nomor 1, Tissue flotation bath, kaca obyek, diamond pencil, staining rack, hot plate, aquadestilata.
10.Bahan-bahan kimia untuk pewarnaan Haematoksilin Eosin (HE).
11. Mouse Ig-G ELISA Kit
Ekstrak  yang  diteliti  berupa  ekstrak etanol  dari  umbi  Bawang  Dayak.  Jumlah mencit  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah 30 ekor dan dibagi secara acak menjadi 5  kelompok,  masing-masing  kelompok  terdiri dari 6 ekor. Kelompok pertama kontrol negatif diberi  CMC  Na,  kelompok  kedua  diberi Metilprednisolon,  kelompok  ketiga,  keempat dan kelima diberi ekstrak etanol umbi bawang dayak berturut-turut dengan dosis 50, 100 dan 200  mg/kgBB  bersama  Metilprednisolon dengan  dosis  0,08  mg/30  grBB  mencit/hari. Pemberian  perlakuan  dilakukan  1  kali  sehari pada  sore  hari.  Sebelum  diberikan  perlakuan, semua mencit dalam setiap kelompok pelakuan  diaklimatisasi  selama  1  minggu. Proses  perlakuan  berlangsung  selama  14  hari dan  pada  pagi  hari  ke  15  dilakukan  terminasi untuk pengambilan darah dari ekor mencit dan sampel  KGB  mencit.  Pengamatan  diameter
germinal  center  dan  kadar  Ig  G  serum dilakukan.  Analisis  statistik  dengan  uji korelasi bivariat koefisien pearson.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada penelitian ini menggunakan sampel  mencit  strain  BALB/C  sebagai  model imunosupresi dengan pemberian obat kortikosteroid  (metilprednisolon).  Penggunaan metilprednisolon  pada  penelitian  ini  dengan alasan  pertimbangan  obat  tersebut  banyak digunakan  dan  merupakan  kortikosteroid  oral yang  paling  sering  digunakan  dalam  terapi berbagai penyakit dan juga digunakan sebagai supresi  penyakit  jangka  panjang  (PIO  Nas, 2015, Dexa Medica, 2016).
Kelompok  I  (K1)  merupakan  kelompok normal  (kontrol  positif)  tanpa  perlakuan ekstrak  etanol  umbi  bawang  dayak  (EEUBD) dan  tanpa  diinduksi  metilprednisolon  hanya diberi  CMC  Na + 0,5  %.  Kelompok  II  (K2) merupakan  kelompok  model  imunosupresi (kontrol  negatif)  yaitu  kelompok  perlakuan yang diinduksi kortikosteroid jenis metilprednisolon 0,08 mg/30grBB mencit/ hari terlarut  dlm  0,2  ml  aquades  tanpa  perlakuan EEUBD.  Sedangkan  kelompok  III-V  (K3,  K4 dan  K5)  dengan  perlakuan  EEUBD  dengan dosis  0,25  ml/30  g  berat  badan  mencit konsentrasi  50  mg/kgBB,  100  mg/kgBB  dan 200  mg/kgBB,  diberikan  sekali  sehari  selama 14 hari bersamaan pemberian induksi metilprednisolon pada sore hari secara per-oral (sonde intragastrik)
Pengaruh Pemberian  Ekstrak  Etanol  Umbi Bawang Dayak (EEUBD) Terhadap Pencegahan  Penurunan  Diameter Germinal Center
Diameter  germinal  center  pada  KGB mencit  BALB/C  yang  diwarnai  menggunakan Hematoksilin-Eosin (HE).
Gambar 1. Diameter germinal center .
Tabel  1. Diameter germinal  center KGB mencit  Balb/C  antar  kelompok  perlakuan (satuan µm) Kelompok Rerat a SD Min imu m Ma ksi mu m CMC Na + 189,4 58,3 120, 4 280, 2 MP 188,3 33,7 155, 1 249, 3 MP  +  EEUBD  50 mg/KgBB 209,0 45,0 147, 7 259, 2 MP  +  EEUBD  100 mg/KgBB 214,6 25,6 181, 4 239, 2 MP  +  EEUBD  200 mg/KgBB 207,1 29,2 183, 0 262, 7 Keterangan  : MP : Metilprednisolon
EEUBD
: Ekstrak Etanol Umbi
Bawang Dayak
Gambar 2. Rerata diameter germinal center pada setiap kelompok perlakuan
Tabel  2. Uji  Korelasi  Bivariat  Koefisien Pearson rerata diameter germinal center
CM
C Na MP
MP + EE UB D 50 mg/ Kg BB MP + EE UB D 100 mg/ Kg BB MP + EE UB D 200 mg/ Kg BB CM C Na Pearson Correlati on 1 .29 0 .69 2 - .81 4(*) - .70 5 Sig. (2- tailed) . .57 7 .12 8 .04 9 .11 7 N 6 6 6 6 6 MP Pearson Correlati on .29 0 1 .72 7 .10 0 - .49 1 Sig. (2- tailed) .57 7 . .10 2 .85 0 .32 3 N 6 6 6 6 6 MP + EEU BD 50m Pearson Correlati on .69 2 .72 7 1 - .58 0 - .80 0 g/Kg BB Sig. (2- tailed) .12 8 .10 2 . .22 7 .05 6 N 6 6 6 6 6 MP + EEU BD 100 mg/ KgB B Pearson Correlati on - .81 4(*) .10 0 - .58 0 1 .65 6 Sig. (2- tailed) .04 9 .85 0 .22 7 . .15 7 N 6 6 6 6 6 MP + EEU BD 200 mg/ KgB B Pearson Correlati on - .70 5 - .49 1 - .80 0 .65 6 1 Sig. (2- tailed) .11 7 .32 3 .05 6 .15 7 . N 6 6 6 6 6
*  Correlation is significant at the 0.05 level (2-tailed).
Berdasarkan  Tabel  1  menunjukkan rerata  diameter germinal  center paling  rendah pada kelompok K2 yang merupakan kelompok model  imunosupresi.  Selanjutnya  diikuti dengan  rerata  diameter  germinal  center  pada kelompok  K1  yang  merupakan  kelompok kontrol (normal). Pada kelompok K3-K5 rerata diameter  germinal  center  lebih  besar  dari  K2 maupun K1.
Berdasarkan  tabel  2.  maka  terlihat  uji korelasi  bivariat  koefisien  pearson  antara kelompok  perlakuan  CMC  Na + (K1)  terhadap K2,  K3,  K4  dan  K5.  Jika  dibandingkan diameter germinal  center antara  K1  dengan K2,  K3  dan  K5  didapatkan  bahwa  perbedaan rerata  diameter germinal  center berbeda  tidak bermakna  (p>0,05)  dengan  nilai  p  masing- masing  0,577,  0,128  dan  0,117.  Sedangkan pada  perbandingan    rerata  diameter germinal
0 100 200 300 SD Rerata
center antara  K1  dengan  K4  (kelompok perlakuan  yang  diberikan    metilprednisolon dikombinasikan
dengan
EEUBD
100mg/KgBB)  didapatkan  hasil  p<0,05  yaitu p=0,049.
Uji korelasi bivariat koefisien pearson antara  kelompok  perlakuan  Metilprednisolon (K2)  terhadap  K1,  K3,  K4  dan  K5.  Rerata diameter germinal  center pada  K2  jika dibandingkan  dengan  masing-masing  rerata diameter germinal  center K1, K3,  K4  dan  K5 didapatkan  semua  hasil  yang  berbeda  secara tidak  bermakna  karena  semua  nilai  p>0,05 yakni p=0,577, p=0,102, p=0,850 dan p=0,323.
Uji korelasi bivariat koefisien pearson antara  kelompok  perlakuan  Metilprednisolon ditambah  dengan  EEUBD  dosis  50mg/KgBB (K3)  terhadap  K1,  K2,  K4  dan  K5.  Rerata diameter germinal  center pada  K3  jika dibandingkan  dengan  masing-masing  rerata diameter germinal  center K1, K2,  K4  dan  K5 didapatkan  semua  hasil  yang  berbeda  secara tidak  bermakna  karena  semua  nilai  p>0,05 yakni p=0,128, p=0,102, p=0,227 dan p=0,056.
Uji korelasi bivariat koefisien pearson antara  kelompok  perlakuan  Metilprednisolon ditambah dengan EEUBD dosis 100mg/KgBB (K4)  terhadap  K1,  K2,  K3  dan  K5.  Rerata diameter germinal  center pada  K4  jika dibandingkan  dengan  masing-masing  rerata diameter germinal  center K1  didapatkan  nilai p<0,05  yakni  p=0,049  yang  berarti  terdapat perbedaan  yang  berbeda  secara  bermakna antara  diameter germinal  center pada  K4  jika dibandingkan  dengan  masing-masing  rerata diameter germinal  center K1.  Namun,  jika diameter germinal  center pada  K4  jika dibandingkan  dengan  masing-masing  rerata diameter germinal  center K2,  K4  dan  K5 didapatkan  semua  hasil  yang  berbeda  secara tidak  bermakna  karena  semua  nilai  p>0,05 yakni p=0,850, p=0,227, dan p=0,157.
Uji korelasi bivariat koefisien pearson antara  kelompok  perlakuan  Metilprednisolon ditambah dengan EEUBD dosis 200mg/KgBB (K5)  terhadap  K1,  K2,  K3  dan  K4.  Rerata diameter germinal  center pada  K5  jika dibandingkan  dengan  masing-masing  rerata diameter germinal  center K1, K2,  K3  dan  K4 didapatkan  semua  hasil  yang  berbeda  secara tidak  bermakna  karena  semua  nilai  p>0,05
yakni p=0,117, p=0,323, p=0,056 dan p=0,157.
Sehingga  didapatkan  perbandingan rerata  diameter germinal  center yang  berbeda bermakna  pada  kelompok  K1  (CMC  Na + ) dengan  K4  berarti  pada  dosis  EEUBD 100mg/KgBB mampu merangsang pembentukan diameter germinal center mencapai  nilai  maksimal  yang  berarti  terjadi proliferasi  dan  diferensiasi  limfosit  B  secara maksimal  pada  dosis  tersebut.  Hal  ini menunjukkan  pada  dosis  tersebut  EEUBD tidak  hanya  mampu  mencegah  terjadinya imunosupresi akibat pemberian metilprednisolon oral namun sekaligus mampu menjadi  imunostimulator.  Namun  jika  dosis ditingkatkan  menjadi  EEUBD  200mg/KgBB, ukuran diameter germinal center tidak meningkat  jika  dibandingkan  dengan  dosis EEUBD  100mg/KgBB.  Hal  ini  berarti peningkatan  kuantitas  maksimal  pada  ukuran diameter germinal  center terjadi  pada  dosis EEUBD 100mg/KgBB.
Peningkatan proliferasi dan
diferensiasi  limfosit  B  yang  ditandai  dengan peningkatan  diameter germinal  center dapat terjadi  karena  adanya  kandunganPeningkatan aktivasi  limfosit  B  yang  ditandai  dengan peningkatan  kadar  Ig  G  serum  dapat  terjadi karena  adanya  senyawa  yang  terdapat  pada ekstrak  etanol  bawang  dayak  (falavonoid, fenolik, triperpenoid, tannin, alkaloid)
mempunyai
bioaktifitas sebagai imunostimulan agent (Febrinda, 2013; Wagner,  1985).  Flavonol  berpotensi  sebagai imunostimulan  karena  mampu  meningkatkan produksi  IL-2  (interleukin-12)  yang  terlibat dalam  aktivasi  dan  proliferasi  sel  T  (Dewi et al ,  2013).  IL-12  akan  menginduksi  T  helper (Th-0).  Th-0  yang  diinduksi  oleh  IL-12  akan mengalami proliferasi dan diferensiasi menjadi Th-1 dan Th-2. Selain mensekresi IL-12, APC juga mensekresi beberapa sitokin seperti IL-1. IL-1  kemudian  menginduksi  Th-1  untuk mensekresi  IL-2  dan  IFN-γ.  Kedua  sitokin  ini kemudian menginduksi dan mengaktivasi Th-2 untuk  mensekresi  beberapa  sitokin  seperti  IL- 4,  IL-5  dan  IL-6  dan  IL-10  yang  akan mengaktivasi  sel  limfosit  B  berprolifersi  dan diferensiasi  menjadi  sel  plasma  yang  dapat dilihat  dengan  peningkatan  diameter germinal center .
Jurnal Biosains Pascasarjana Vol. 18 (2016) pp © (2016) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
Kelenjar getah bening termasuk sistem limfoid  perifer.  Pada  sistem  limfoid  perifer diferensiasi  limfoid  tergantung  pada  antigen ( antigen  dependent ) (Abbas et  al ,  2014,
Sudiana,  2011).  Pada  sistem  limfoid  perifer, baik  limfosit  T  maupun  limfosit  B    akan mengalami    proliferasi  dan  diferensiasi  bila terinduksi  oleh  suatu  imunogen  (Sudiana, 2011). Imunogen adalah sebuah substansi yang bila  dimasukkan  ke  dalam  tubuh  mampu merangsang  respon  imun,  baik  respon  selular maupun  respon  humoral  atau  keduanya (Kresno, 2010). Presentasi fragmen antigen/imunogen non-self diikuti oleh sekresi IL-12 dan IL-18 yang  kemudian menstimulasi sel  T  menghasilkan  interferon-γ  (INF-γ). Kehadiran INF-γ akan mengakibatkan
proliferasi  sel  B  yang  ada  di germinal  center (Campbell dalam Sulistiyana, 2015).
Proliferasi  sel  B  dapat  ditunjukkan  dengan peningkatan diameter germinal center (Bellanti dalam Sulistiyana, 2015).
Pengaruh Pemberian  Ekstrak  Etanol  Umbi Bawang Dayak (EEUBD) Terhadap Pencegahan Penurunan Kadar IgG Serum Tabel  3. Kadar  Ig  G  serum  mencit  Balb/c antar
kelompok perlakukan diukur menggunakan  metode  ELISA  dengan  panjang gelombang 450 nm dan 630 nm (satuan ng/ml) Kelompok Rera ta SD Mi ni mu m Ma ksi mu m CMC Na + 39,4 38, 8 1,9 95, 6 MP 50,3 51, 0 8,2 130 ,8 MP  +  EEUBD 50 mg/KgBB 30,6 48, 7 7,2 130 ,0 MP  +  EEUBD 100 mg/KgBB 51,1 56, 5 8,2 132 ,4 MP  +  EEUBD 200 mg/KgBB 70,3 65, 8 7,7 138 ,5 Keterangan  : MP : Metilprednisolon EEUBD
:  Ekstrak  Etanol  Umbi
Bawang Dayak
Gambar  3. Diagram      batang        rerata    dan standar  deviasi  (SD)  Imunoglobulin G (Ig G) pada serum darah mencit Balb/C
Tabel  4. Uji  Korelasi  Bivariat  Koefisien Pearson rerata diameter germinal center
CM C Na MP
MP + EE UB D 50 mg/ Kg BB MP + EE UB D 100 mg/ Kg BB MP + EE UB
D 200 mg/
Kg BB CMC Na Pearson Correlati on 1 - .32 1 - .36 6 .22 3 .92 8(* *) Sig. (2- tailed) . .53 6 .47 5 .67 1 .00 8 N 6 6 6 6 6 MP Pearson Correlati on - .32 1 1 .34 0 - .64 1 - .04 4 Sig. (2- tailed) .53 6 . .51 0 .17 0 .93 3 N 6 6 6 6 6 MP + EEU BD 50mg /KgB B Pearson Correlati on - .36 6 .34 0 1 - .30 4 - .37 7 Sig. (2- tailed) .47 5 .51 0 . .55 8 .46 2 N 6 6 6 6 6 MP + EEU BD 100m Pearson Correlati on .22 3 - .64 1 - .30 4 1 .03
0 50 100 150 SD Rerata
g/Kg BB Sig. (2- tailed) .67 1 .17 0 .55 8 . .95 2 N 6 6 6 6 6 MP + EEU BD 200m g/Kg BB Pearson Correlati on .92 8(* *) - .04 4 - .37 7 .03 2 1 Sig. (2- tailed) .00 8 .93 3 .46 2 .95 2 . N 6 6 6 6 6
**  Correlation is significant at the 0.05 level (2-tailed).
Berdasarkan  tabel  3. menunjukkan rerata  kadar  Ig  G  serum  paling  tinggi  pada kelompok  K5  yang  merupakan  kelompok perlakuan  dengan  pemberian  metilprednisolon oral dikombinasikan dengan EEUBD 200mg/KgBB.
Berdasarkan  tabel  4.  terlihat  uji korelasi  bivariat  koefisien  pearson  antara kelompok  perlakuan  CMC  Na + (K1)  terhadap K2,  K3,  K4  dan  K5.  Jika  dibandingkan  kadar Ig G serum antara K1 dengan K2, K3 dan K4 didapatkan bahwa perbedaan rerata kadar Ig G serum  berbeda  tidak  bermakna  (p>0,05) dengan  nilai  p  masing-masing  0,536,  0,475 dan  0,671.  Sedangkan  pada  perbandingan rerata kadar Ig G serum antara K1 dengan K5 (kelompok perlakuan yang diberikan metilprednisolon dikombinasikan dengan EEUBD  200mg/KgBB)  didapatkan  hasil p<0,05 yaitu p=0,008.
Sedangkan uji korelasi bivariat koefisien  pearson  antara  kelompok  perlakuan Metilprednisolon  (K2)  terhadap  K1,  K3,  K4 dan K5. Rerata kadar Ig G serum pada K2 jika dibandingkan  dengan  masing-masing  rerata kadar  Ig  G  serum  K1,  K3,  K4  dan  K5 didapatkan  semua  hasil  yang  berbeda  secara tidak  bermakna  karena  semua  nilai  p>0,05 yakni p=0,536, p=0,510, p=0,170 dan p=0,933.
Uji korelasi bivariat koefisien pearson antara  kelompok  perlakuan  Metilprednisolon ditambah  dengan  EEUBD  dosis  50mg/KgBB (K3)  terhadap  K1,  K2,  K4  dan  K5.  Rerata kadar  Ig  G  serum  pada  K3  jika  dibandingkan
dengan  masing-masing  rerata  kadar  Ig  G serum  K1,  K2,  K4  dan  K5  didapatkan  semua hasil  yang  berbeda  secara  tidak  bermakna karena  semua  nilai  p>0,05  yakni  p=0,475, p=0,510, p=0,558 dan p=0,462.
Uji korelasi bivariat koefisien pearson antara  kelompok  perlakuan  Metilprednisolon ditambah dengan EEUBD dosis 100mg/KgBB (K3)  terhadap  K1,  K2,  K4  dan  K5.  Rerata kadar  Ig  G  serum  pada  K3  jika  dibandingkan dengan  masing-masing  rerata  kadar  Ig  G serum  K1,  K2,  K4  dan  K5  didapatkan  semua hasil  yang  berbeda  secara  tidak  bermakna karena  semua  nilai  p>0,05  yakni  p=0,671, p=0,170, p=0,558 dan p=0,952.
Uji korelasi bivariat koefisien pearson antara  kelompok  perlakuan  Metilprednisolon ditambah dengan EEUBD dosis 200mg/KgBB (K5)  terhadap  K1,  K2,  K3  dan  K4.  Rerata kadar  Ig  G  serum  pada  K4  jika  dibandingkan dengan  masing-masing  rerata  kadar  Ig  G serum  K1  didapatkan  nilai  p<0,05  yakni p=0,008  yang  berarti  terdapat  perbedaan  yang berbeda  secara  bermakna  antara  kadar  Ig  G serum  pada  K5  jika  dibandingkan  dengan rerata kadar Ig G serum K1. Namun, jika kadar Ig G serum pada K5 jika dibandingkan dengan masing-masing  rerata  diameter germinal center K2, K3 dan K4 didapatkan semua hasil yang  berbeda  secara  tidak  bermakna  karena semua  nilai  p>0,05  yakni  p=0,933,  p=0,462, dan p=0,952.
Sehingga didapatkan perbandingan rerata  kadar  Ig  G  serum  yang  berbeda bermakna  antara  K1  (CMC  Na + )  dengan  K5 (kelompok perlakuan yang diberikan metilprednisolon dikombinasikan dengan
EEUBD  200mg/KgBB)  didapatkan  hasil p<0,05 yaitu p=0,008. Hal tersebut membuktikan
pada dosis EEUBD 200mg/KgBB mampu merangsang pembentukan  Ig  G  serum  mencapai  nilai maksimal berarti pada dosis EEUBD 200mg/KgBB  mampu  merangsang  aktivasi limfosit B membentuk imunoglobulin G (Ig G) secara  maksimal  pada  dosis  tersebut.  Hal  ini menunjukkan  pada  dosis  tersebut  EEUBD tidak  hanya  mampu  mencegah  terjadinya imunosupresi akibat pemberian metilprednisolon oral namun sekaligus mampu menjadi  imunomodulator  yang  meningkatkan produksi  Ig  G  serum  mencit.  Hal  ini
menunjukkan  pada  dosis  tersebut  terjadi peningkatan kualitas limfosit B.
Peningkatan  aktivasi  limfosit  B  yang ditandai dengan peningkatan kadar Ig G serum dapat  terjadi  karena  adanya  senyawa  yang terdapat  pada  ekstrak  etanol  bawang  dayak (falavonoid,  fenolik,  triperpenoid,  tannin, alkaloid)  mempunyai  bioaktifitas  sebagai imunostimulan agent (Febrinda, 2013; Wagner,  1985).  Flavonol  berpotensi  sebagai imunostimulan  karena  mampu  meningkatkan produksi  IL-2  (interleukin-12)  yang  terlibat dalam  aktivasi  dan  proliferasi  sel  T  (Dewi et al ,  2013).  IL-12  akan  menginduksi  T  helper (Th-0).  Th-0  yang  diinduksi  oleh  IL-12  akan mengalami proliferasi dan diferensiasi menjadi Th-1 dan Th-2. Selain mensekresi IL-12, APC juga mensekresi beberapa sitokin seperti IL-1. IL-1  kemudian  menginduksi  Th-1  untuk mensekresi  IL-2  dan  IFN-γ.  Kedua  sitokin  ini kemudian menginduksi dan mengaktivasi Th-2 untuk  mensekresi  beberapa  sitokin  seperti  IL- 4,  IL-5  dan  IL-6  dan  IL-10  yang  akan mengaktivasi  sel  limfosit  B  berdiferensiasi menjadi  sel  plasma  (Sudiana,  2011).  Pada respon  awal  ( primer  respons )  antibodi  yang terbentuk  adalah  kelas  Ig  M.  Ig  M  bisa berubah  menjadi  kelas  imunoglobulin  yang lain  termasuk  Ig  G  ( switching ).  Perubahan  Ig M  menjadi  Ig  G  sangat  tergantung  terhadap IFN-γ  sebagai  sitokin  yang  dominan  yang dapat  memicu  gen  pengkode  rantai  µ  (miu) pada  limfosit  B  untuk  mengalami  switching sehingga yang dikode adalah rantai γ (gamma) dan  kemudian  membentuk  antibodi  spesifik yaitu Ig G (Sudiana, 2011).
Pada  penelitian  ini  peningkatan  kadar Ig  G  serum  dapat  terjadi  oleh  karena kandungan  yang  terdapat  pada  EEUBD mampu bersifat sebagai
imunogen/imunostimulan sehingga terjadi respon  imun  yang  bisa  diamati  dengan meningkatnya  kadar  Ig  G  serum  pada perlakuan dosis EEUBD 200mg/KgBB dikombinasikan dengan metilprednisolon (K5) jika  dibandingkan  dengan  kadar  Ig  G  serum kelompok  kontrol  yang  hanya  diberikan perlakuan CMC Na + (K1).

## DAFTAR PUSTAKA
Abbas  AK,  Andrew  H,  and  Pillai  S.  2014. Cells and Tissues of The Immune. In Cellular and Molecular Immunology. 7 th Edition , Philadelphia; WB Elsevier Company, 15-34
Abbas  AK,  Andrew  H,  and  Pillai  S.  2014. Antibodies and Antigens. In Cellular and  Molecular  Immunology.  7 th Edition ,  Philadelphia;  WB  Elsevier Company, 89-105
Abbas  AK,  Andrew  H,  and  Pillai  S.  2014. Immunity  to  Microbes. In  Cellular and  Molecular  Immunology.  7 th Edition ,  Philadelphia;  WB  Elsevier Company, 345-63
Annisa  R.  2014. Uji  Efek  Imunomodulator
Ekstrak Etanol Umbi Bawang Dayak
(Eleutherine americana (Aubl) Merr) pada Mencit (Mus musculus).
Makasar  :  Fakultas  Kedokteran Universitas  Hasanuddin.  Retrieved  : August  06,  2014,  Available  at  : http://repository.unhas.ac.id:4001/dig ilib . Diakses tanggal 14 April 2015.
Azis,  A.  L.  2006.  Penggunaan  kortikosteroid di  klinik  (  The  use  of  corticosteroid in  clinics  ).  Divisi  Gawat  Darurat Lab/SMF  Ilmu  Kesehatan  Anak  FK
Unair/RSUD  dr  Soetomo  Surabaya .
Available at :
http://old.pediatrik.com/buletin/2006
0220-uk51j3-buletin.pdf .  Diakses tanggal 24 Agustus 2015
Baratawidjaja  KG  dan  Rengganis  I.  2010. Sistem  Imun. Dalam  Imunologi Dasar .  Edisi  ke-9,  Jakarta;  Fakultas Kedokteran  Universitas  Indonesia, 27-56
Baratawidjaja  KG  dan  Rengganis  I.  2010.
Antigen dan Antibodi. Dalam Imunologi Dasar . Edisi ke-9, Jakarta; Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, 147-76
Chairul  dan  Praptiwi,  2008.  Uji  Efektivitas Imunomodulator Tiga Jenis Zingiberaceae Secara In-Vitro Melalui  Pengukuran  Aktivitas  Sel
Makrofag Dan Kapasitas Fagositosis.
Jakarta: Puslit Biologi LIPI, 1-7
Dewi  L.K,  Widyarti  S,  Rifai  M,  2013. Pengaruh  Pemberian  Ekstrak  Etanol Daun  Sirsak  (Annona  muricata
Linn.)  terhadap  Peningkatan  Jumlah Sel  T  CD4+  dan  CD8+  pada  Timus Mencit  (Mus  musculus).  Jurnal Biologi. Malang: Universitas Brawijaya, 1-5 Dexa  Medica.  Methylprednisolone . Available at : http://www.dexa- medica.com/our- product/searchs/Methylprednisolone
%20 .  Diakses  tanggal  29  Agustus 2015
Febrinda  AE,  Astawan  M,  Wresdiyati  T,
Yuliana ND. 2013. Kapasitas Antioksidan  dan  Inhibitor  Alpha Glukosidase  Ekstrak  Umbi  Bawang Dayak. Jurnal Teknologi dan Industri Pangan . 24 (2): 161-7
Febrinda  AE et  al .  2014.  Hyperglycemic control  and  diabetes  complication preventive  activities  of  Bawang Dayak  ( Eleutherine  palmifolia L. Merr.)  bulbs  extracts  in  alloxan- diabetic  rats. International  Food Research  Journal 21(4):  1405-1411.
Available  at  / Journal  homepage:
http://www.ifrj.upm.edu.my . Diakses tanggal 25 Maret 2015
Firdaus  T,  2014.  Efektivitas  Ekstrak  Bawang
Dayak (Eleutherine Palmifolia) Dalam  Menghambat  Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus. Skripsi.    Universitas  Islam  Negeri Syarif Hidayatullah. Indonesia. Galingging,  R.Y.  2009.  Bawang  Dayak ( Eleutherine palmifolia ) Sebagai Tanaman  Obat  Multifungsi. Warta
Penelitian dan Pengembangan 15(3):
2-4.
Kresno, S.B. 2010. Imunologi : Diagnosis dan Prosedur Laboratorium. Edisi Kelima. Jakarta : Fakultas Kedokteran Indonesia, 64-65
Mata  Kuliah  Biologi,  2012.  Respon  Imun.
Mata  kuliah  biologi.  Available  at  : blogspot.com/2012/06/respon- imun.html Diakses  pada  tanggal  24 Agustus 2015.
Nur  AM.  2011. Kapasitas  Antioksidan Bawang Dayak (Eleutherine
palmifolia)  dalam  Bentuk  Segar, Simplisia  dan  Keripik,  pada  Pelarut Nonpolar,  Semipolar  dan  Polar . Skripsi.  Bogor  :  Fakultas  Teknologi Pertanian Institut Pertanian Bogor, 1- 76
BPOM.  2015.  Glukokortikoid.  Available  at  : http://pionas.pom.go.id/book/ioni- bab-6-sistem-endokrin-63- kortikosteroid/632-glukokortikoid .
Diakses  pada  tanggal  24  agustus 2015
Puspadewi  R,  Adirestuti  P  dan  Menawati  R. 2013.  Khasiat  Umbi  Bawang  Dayak ( Eleutherine  palmifolia (L.)  Merr) sebagai  Herbal  Antimikroba  Kulit. Kartika  Jurnal  Ilmiah  Farmasi . 1(1):31-37
RSCM Kirana. 2014. Pemberian
Kortikosteroid Dosis Tinggi dan/atau Obat  Imunusupresif  untuk  Jangka Panjang.  Available  at  : http://mata- fkui-rscm.org/panduan- pasien/edukasi-pasien/penggunaan- kortikosteroid/ . Diakses pada tanggal
24 agustus 2015
46
Sudiana  IK,  2005.  Teknologi  Ilmu  Jaringan dan Imunohistokimia. Jakarta: Sagung Seto, 1-46 Sudiana IK, 2011. Limfosit dalam Patobiologi Molekuler  Kanker.  Jakarta:  Salemba Medika, 77-83 Sulistyana MI. 2015. Pemanfaatan Polisakarida  Krestin  dari  Coriolus versicolor  sebagai  Imunomodulator pada  Mus  musculus  yang  Terpapar Mycobacterium
tuberculosis
berdasarkan  Indikator  Konsentrasi
IL-4  dan  Histologi  Limpa.  Skripsi. Surabaya  :  Fakultas  Sains  dan Teknologi  Universitas  Airlangga,  1-
74
Sunarjo.  2014.  Bahan  Kuliah  Eksperimental
Design. Dalam Mata Kuliah Metodologi  Penelitian. Universitas
Airlangga, 1-32 Sumarwoto  T,  2004.  Efek  Pemberian  Ekstrak Kedelai Dalam Menghambat Penurunan  Kepadatan  Tulang  Pada Terapi Kortikosteroid Jangka Panjang  Tikus  Putih  Jantan  ( Rattus norvegicus ). Tesis. Universitas
Airlangga. Indonesia, 1-83
Wagner  H,  1985.  Immunostimulants  from medicinal  plants.  In  Advances  in Chinese medicinal materials research (Eds.)  H.M.  Chang;  H.W.  Yeung;
W.W.  Tso  and  A.  Koo.  World
Scientific Publ. Co. Singapura : 159- 170.
Yanti  F.  2014. Efek  Penghambatan  Siklus  Sel
dan  Pemacuan  Apoptosis Kombinasi Ekstrak Umbi Lapis Bawang Sabrang (Eleutherine bulbosa (Mill.) Urb.)  dan  Doksorubisin  pada  Sel Kanker  Payudara .  Tesis.  Medan  :
Program  Studi  Magister  Farmasi Universitas Sumatera Utara, 1-29
Yusni  MA.  2008. Perbedaan  Pengaruh Pemberian  Fraksi  Etanolik  Bawang Dayak  (Eleutherine  palmifolia  L. Merr) dengan 5-Fluorouracil terhadap Penghambatan Pertumbuhan  Galur  Sel  Karsinoma Kolon  HT29  dan  Ekspresi  p53
Mutan. Tesis.  Fakultas  Kedokteran Universitas Sebelas Maret/RSUD dr. Moewardi Surakarta, 1-79
Zalisar  L.  2013  Flavonoid  of    Phyllanthus Niruri  as  Immunomodulator:  A Prospect to  Animal  Disease  Control. ARPN  Journal  of  Science  and Technology . 3(5): 529-30