## Efek Kardioprotektif Ekstrak Daun Kenikir (Cosmos Caudatus Kunth.) pada Tikus Putih (Rattus norvegicus) Model Diabetes Mellitus
Tri Agusti Sholikah 1* , Sri Wulandari 2 , Taufik Ridwan Hadi Kusuma 3 , Muthmainah 1
1. Bagian Histologi, Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret, Surakarta 2. Bagian Fisiologi, Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret, Surakarta 3. Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret, Surakarta
Korespondensi : triagusti_sholikah@staff.uns.ac.id

## ABSTRAK
Latar  Belakang  : Diabetes  mellitus  (DM)  merupakan  salah  satu  penyakit  degeneratif yang dapat menyebabkan komplikasi serius pada berbagai organ tubuh termasuk jantung. Oleh  karena  itu,  DM  harus  diterapi  dengan  adekuat  untuk  mencegah  progesifitas  dan komplikasi.  Salah  satu  yang  kemungkinan  dapat  dikembangkan  sebagai  terapi  adalah tanaman  herbal  daun  kenikir  ( Cosmos  Caudatus Kunth.)  yang  banyak  mengandung flavonoid.  Flavonoid  berperan  sebagai  antioksidan  yang  dapat  mengurangi  kerusakan berbagai  organ  termasuk  jantung.  Penelitian  ini  menguji  khasiat  ekstrak  daun  kenikir terhadap  derajat  kerusakan  otot  jantung  tikus  model  DM  yang  belum  pernah  dilaporkan sebelumnya.
Tujuan  Penelitian  : Penelitian  ini  bertujuan  mengetahui  efek  kardioprotektif  ekstrak daun kenikir pada tikus putih model DM.
Metode  : Total  24  ekor  tikus  putih  ( Rattus  norvegicus )  dibagi  menjadi  4  kelompok secara  acak, yaitu kelompok kontrol  normal  (KKN)  tanpa perlakuan;  kelompok  kontrol negatif  (KK(-))  hanya  diinduksi  Streptozotocin  (STZ  60  mg/kgBB)  dan  Nicotinamid (NA 120 mg/kgBB) secara intraperitoneal dosis tunggal pada hari ke-8; serta  kelompok perlakuan      1  dan  2  (KP1  dan  KP2),  diinduksi  STZ-NA  dan  masing-masing  diberi ekstrak daun kenikir dosis 200 mg/kgBB dan 400 mg/kgBB.  Setelah 28 hari pemberian ekstrak daun kenikir, gambaran  histopatologi jantung tikus diperiksa dan dinilai dengan skor  derajat  kerusakan.    Skor  tersebut  dianalisis  secara  statistik  dengan  uji Kruskal Wallis yang dilanjutkan dengan uji Post Hoc Mann Whitney . Hasil : Terdapat perbedaan derajat kerusakan histopatologi jantung tikus yang signifikan pada  semua  kelompok  perlakuan.  KP2  mempunyai  derajat  kerusakan  yang  lebih  ringan daripada KK(-) dan KP1.
Kesimpulan  : Ekstrak  daun  kenikir  memiliki  efek  kardioprotektif  karena  dapat mengurangi derajat kerusakan otot jantung tikus putih model diabetes mellitus.
Kata  Kunci:  efek  kardioprotektif;  cosmos  caudatus  kunth.;  flavonoid;  tikus  model DM.

## ABSTRACT
Background:  Diabetes  Mellitus  (DM)  is  one  of  the  degenetaive  disease  which  cause complication  in  the  body’s  tissues  including  heart.  Therefore,  DM  must  be  adequately treated  to  prevent  the  disease  progession  and  its  complication.  One  of  the  herbs  which potentially to develop as diabetic therapy is Kenikir leaf (Cosmos caudatus Kunth. ). It is known  to  have  high  flavanoids  content.  Flavonoids  are  antioxidants  that  play  a  role  in reducing  tissue  damage  include  heart.  This  study  aims  to  investigate    the    efficacy    of kenikir  leaf  extract  on degree  of  heart  muscle  damage  in diabetic  rat  that had  been  not reported.
Sholikah et al., Efek Kardioprotektif Ekstrak Daun Kenikir  ( Cosmos Caudatus Kunth.) pada Tikus Putih ( Rattus norvegicus) Model Diabetes Mellitus
.
Objective: This study aimed to determine the cardioprotective effect of kenikir leaf extract using the DM rat model.
Methods: The total sample of 24 rats (Rattus norvegicus) were divided into 4 groups, the normal  control  group  (KKn),  was  not  induced  by  streptozotosin-nicotinamide  (STZ-NA) intraperitoneal; negative control group (KK(-)), induced by STZ-NA (STZ 60 mg/kg BW and NA 120 mg/kg BW);The treatment group 1 and 2 (KP1 and KP2), were induced by STZ-NA at the same dose as previously mentioned and were given kenikir leaf extract at dose 200 mg/kg BW and 400 mg/BW respectively. The hearth histopathology of rat’s were examined on the 28 th day after the administration of kenikir leaf extract. The results were statistically analyzed using Kruskal Wallis test followed by Post Hoc Mann Whitney test Results  :There  were  a  significant  difference  in  the  hearth histopathopogy  of  rat’s  in  all group.  There  were  minimally  heart  tissues  damage  of  KP2  group  compare  to  the  KK(-) and KP1 groups.
Conclusion:  The  kenikir  leaf  extract  has  cardioprotective  effect  since  it  was  proven  to reduce the heart tissue damaged in diabetic rat model.
Keywords: cardioprotective effect; cosmos caudatus kunth.;  flavonoid; diabetic rat model.

## PENDAHULUAN
Diabetes  Mellitus  (DM)  merupakan masalah  kesehatan  yang  serius  karena prevalensinya  yang  terus  meningkat.  Saat  ini sekitar  500  juta  penduduk  dunia  menderita diabetes  dan  diperkirakan  prevalensinya  akan terus  meningkat  hingga  mencapai  700  juta jiwa  penduduk  dunia  pada  tahun  2040 1 .  Pada tahun 2013, tercatat 6,9% penduduk Indonesia yang  berusia  di  atas  15  tahun  menderita  DM dan pada tahun 2018 prevalensinya meningkat menjadi 8,5% 2 .
Diabetes  Mellitus  ditandai  dengan meningkatnya  kadar  glukosa  di  dalam  darah atau  hiperglikemia.  Kondisi  ini  dikarenakan adanya  defisiensi  produksi  insulin  oleh  sel  β pankreas  dan  atau  gangguan  sensitivitas insulin  di  jaringan  perifer  sehingga  glukosa tidak dapat digunakan oleh sel 3 . Hiperglikemia dapat
mengakibatkan gangguan  proses  oksidatif  pada  tubuh  atau disebut dengan stress oksidatif 4 .
Stress  oksidatif  merupakan  kondisi ketidakseimbangan antara jumlah oksidan dan antioksidan  dalam  tubuh.  Hal  tersebut dikarenakan  produksi  radikal  bebas  seperti Reactive Oxygen Species (ROS) yang
berlebihan 5 . Kondisi stress oksidatif pada DM dapat  mengakibatkan  komplikasi  yang  serius di  berbagai  organ  tubuh 4 .  Organ  yang  paling sering  terkena  komplikasi  akibat  DM  adalah mata, saraf, ginjal dan jantung 6 .
Komplikasi  DM  pada  jantung  atau yang  sering  dikenal  dengan  kardiomiopati diabetik berpotensi menimbulkan gagal
jantung sehingga dapat meningkatkan kematian 7 .  Kardiomiopati  terjadi  karena adanya  stress  oksidatif  akibat  peningkatan radikal bebas pada otot jantung 8 .
Untuk mencegah timbulnya komplikasi  pada  pasien  DM,  maka  kadar glukosa darah harus dikontrol. Penatalaksanaan DM bertujuan untuk mempertahankan  kadar  glukosa  darah  agar tetap  normal  yang  dapat  dilakukan  melalui kombinasi  perubahan  gaya  hidup  dan  terapi farmakologis.  Perubahan  gaya  hidup  meliputi pengaturan  diet  dan  olahraga,  sedangkan terapi farmakologis meliputi obat antidiabetik oral dan injeksi 9 .
Obat  anti  diabetik  (OAD)  yang tersedia  saat  ini  cukup  beragam  namun masing-masing mempunyai efek samping dan perlu  disesuaikan  untuk  individu  dengan kondisi  tertentu  misalnya  usia  tua,  hamil,
Sholikah et al., Efek Kardioprotektif Ekstrak Daun Kenikir  ( Cosmos Caudatus Kunth.) pada Tikus Putih ( Rattus norvegicus) Model Diabetes Mellitus
.
obesitas  dan  lain-lain 9 .  Oleh  karena  itu, penelitian  untuk  menemukan  OAD  dengan efek  samping  minimal  masih terus dilakukan. Salah satunya penelitian pada tanaman herbal. Obat  herbal  memiliki  beberapa  keunggulan dibandingkan  dengan  obat  komersial  antara lain mudah didapatkan, efek samping minimal, murah dan eco-friendly 10 . Daun  kenikir  ( Cosmos  Caudatus Kunth.)  merupakan  salah  satu  jenis  sayuran dan  tanaman  herbal  yang  sering  digunakan oleh masyarakat Indonesia. Daun ini mengandung  flavonoid  yang  cukup  tinggi 11 . Penelitian  sebelumnya  menunjukkan  bahwa tanaman  herbal  yang  mengandung  flavonoid mampu  menurunkan  kadar  glukosa  darah pada  tikus model  DM 12 .  Selain  itu  flavonoid berperan  sebagai  antioksidan  yang  dapat mengurangi stress oksidatif akibat
hiperglikemia  pada  DM  sehingga  dapat mencegah kerusakan berbagai organ termasuk jantung 13 . Banyak penelitian mengenai ekstrak daun  kenikir  yang  telah  dilakukan  namun sejauh pengetahuan peneliti, penelitian tentang  khasiat  ekstrak  daun  kenikir  terhadap jantung  tikus  model  DM  khususnya  terhadap derajat  kerusakan  otot  jantung  belum  pernah dilakukan.
Berdasarkan  uraian  diatas,  peneliti bertujuan  mengetahui  efek  kardioprotektif ekstrak  daun  kenikir  ( Cosmos  Caudatus Kunth.) terhadap  jantung  tikus  model  DM. Model    DM  dibuat  dengan  cara  menginduksi tikus  dengan  Streptozotosin  dan  nikotinamid (STZ-NA).

## METODE
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental  laboratorik  dengan  desain Posttest  Only  Control  Group  Design . Ethical Clearance penelitian didapat dari Komite Etik Fakultas  Kedokteran  Universitas  Sebelas
Maret Surakarta dengan nomor 304/UN27.6/KEPK/2018. Subyek  penelitian  adalah  tikus  putih
( Rattus  norvegicus) galur  wistar  dengan kriteria  inklusi  berkelamin  jantan,  usia  2-3 bulan  dan  berat  200-250  gram.  Kriteria eksklusi,  tikus  putih  yang  cacat  fisik,  tampak sakit,  kadar  glukosa  darah  puasa  pada  3  hari sesudah induksi streptozotosin dan nikotinamid  ≤126  mg/dL,  serta  tikus  yang mati selama penelitian.
Penelitian  ini  menggunakan  ekstrak daun  kenikir  yang  didapat  dari  CV.Merapi Farma  Yogyakarta  dalam  bentuk  simplisia. Simplisia diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan  pelarut  ethanol  80%  berulang kali  dan  sesekali  dikocok.  Proses  ekstraksi berlangsung  sekitar  2  minggu.  Setiap  2  hari sekali  pelarut  diganti  dan  disaring  untuk mendapatkan liquid  extract .  Selanjutnya liquid  extract dievaporasi  menggunakan vacuum  rotary  evaporator untuk  medapatkan ekstrak yang kental.
Jumlah  total  sampel  penelitian  yaitu 24 ekor tikus yang dibagi secara acak menjadi 4  kelompok, masing-masing  kelompok terdiri dari  6  ekor  tikus.  Empat  kelompok  tersebut adalah  kelompok  kontrol  normal  (KKN), kelompok  kontrol  negatif  (KK(-)),  kelompok perlakuan 1 dan 2 (KP1 dan KP2).
Sebelum  perlakuan,  hewan  coba diadaptasikan  terlebih  dahulu  selama  7  hari. Selama  percobaan,  KKN  hanya  diberi  pakan standar dan air ad libitum; KK(-) diberi pakan standar  dan  diinduksi  menjadi  tikus  model diabetes  dengan  STZ-NA  pada  hari  ke-8 percobaan.  Induksi  dilakukan  secara  injeksi intraperitoneal dengan dosis STZ 60 mg/kgBB dan NA 120
mg/kgBB.
Nikotinamid  diberikan  15  menit  sebelum injeksi STZ. Kelompok KP1 dan KP 2, diberi pakan  standar,  diinduksi  STZ-NA  pada  hari ke  8  dan  diberi  ekstrak  daun  kenikir  dengan dosis  berturut-turut  200  mg/kg  BB  dan  400 mg/kg  BB.  Ekstrak  daun  keningkir  pada kedua  kelompok  diberikan  dengan  sonde lambung  selama  28  hari  (hari  ke-12  sampai
Sholikah et al., Efek Kardioprotektif Ekstrak Daun Kenikir  ( Cosmos Caudatus Kunth.) pada Tikus Putih ( Rattus norvegicus) Model Diabetes Mellitus
.
hari ke-39).  Sebelum induksi STZ-NA (pada hari  ke-8  percobaan),  tikus  pada  semua kelompok  diambil  darahnya  dari  vena  retro orbital  untuk  dilakukan  pemeriksaan  glukosa darah puasa.
Tiga  hari  setelah  induksi  STZ-NA, yaitu hari ke-11, glukosa darah puasa kembali diperiksa  untuk  mengetahui  apakah  induksi tikus  model  DM  telah  berhasil.  Tikus tergolong  DM  dan  disertakan  pada  penelitian jika  kadar glukosa puasanya ≥ 126 mg/dL.
Setelah  28  hari  pemberian  ekstrak daun  kenikir  (hari  ke-40  percobaan),  hewan coba pada semua kelompok diperiksa glukosa darah puasanya dan dilakukan terminasi.
Selanjutnya organ  jantung tikus diambil  untuk  dibuat  preparat  jaringan  yang dicat  dengan  pewarnaan  hematoksilin  eosin (HE).  Setiap  tikus  dibuat  4  irisan/preparat jaringan dan setiap preparat diukur persentase kerusakannya pada 2 lapang pandang sehingga  total  terdapat  48  pengamatan  pada setiap kelompok.
Persentase kerusakan diklasifikan menjadi 4 derajat yaitu derajat 0 menunjukkan tidak  ada  kerusakan,  derajat  1  apabila ditemukan  kerusakan  0-30%,  derajat  2 menunjukkan  kerusakan  sebesar  30-60%  dan derajat  4    menunjukkan  kerusakan  >60%. Kerusakan ditandai dengan adanya inflamasi/infiltrasi  sel  radang  pada  lapisan
miokardium  dan  eosinofilia  pada  sitoplasma sel  otot  jantung 14 .  Pemeriksaan  histopatologi jantung tersebut diamati dengan menggunakan mikroskop cahaya perbesaran 400x.
Perbandingan perbedaan derajat kerusakan  setiap  kelompok  dianalisis  dengan uji Kruskal Wallis yang dilanjutkan dengan uji Post  Hoc  Mann  Whitney .  Derajat  kemaknaan yang digunakan adalah α=0,05 dan dinyatakan bermakna apabila nilai p<0,05.

## HASIL
A. Kadar glukosa darah puasa tikus
Pengukuran  kadar  glukosa  darah puasa tikus putih sebanyak 3 kali. Pengukuran pertama  dilakukan  pada  hari  ke-8,  tepat sebelum induksi streptozotosin dan nikotinamid dengan tujuan untuk memastikan bahwa  tikus  yang  akan  diinduksi  tidak menderita  DM.  Pada  hari  ke-11  dilakukan pengukuran  kedua  kadar  glukosa  darah puasa tikus putih untuk mengkonfirmasi keberhasilan  induksi  DM  pada  tikus  putih. Pengukuran  ketiga  dilakukan  pada  hari  ke-40 untuk memastikan keadaan DM dipertahankan hingga  akhir  penelitian.  Rerata  kadar  glukosa darah  puasa  setiap  kelompok  ditampilkan pada tabel 1.
Tabel 1.  Rerata Kadar Glukosa Darah Puasa Tikus Putih (Rattus norvegicus) pada
Masing-Masing Kelompok Kel Kelompok Rerata  Kadar  Glukosa  Darah  Puasa  ±  Standar  Deviasi (mg/dL) Hari ke-8 Hari Ke-11 Hari Ke-40 KKN 71,45 ± 5,26 72,83 ± 5,11 73,76 ± 5,09 KK(-) 69,68 ± 4,73 257,36 ± 4,37 259,21 ± 4,57 KP1 69,34 ± 3,47 258,29 ± 2,83 125,27 ± 3,97 KP2 70,42 ± 4,06 256,92 ± 2,35 101,76 ± 4,21
Hasil pengukuran kadar glukosa darah pada tabel 1 menunjukkan bahwa rerata kadar glukosa  darah  puasa  sebelum  induksi  STZ- NA  pada  hari  ke-8  dari  tiap  kelompok
perlakuan tidak jauh berbeda dan dalam batas normal (<126 mg/dL).
Pemeriksaan  kadar  glukosa  darah puasa pada hari ke-11 menunjukkan kenaikan kadar  glukosa  darah  (>126  mg/dl)  pada
Sholikah et al., Efek Kardioprotektif Ekstrak Daun Kenikir  ( Cosmos Caudatus Kunth.) pada Tikus Putih ( Rattus norvegicus) Model Diabetes Mellitus
.
kelompok  yang  diinduksi  STZ-NA,  yaitu kelompok  KK(-),  KP1,  dan  KP2  sehingga dapat  disimpulkan  injeksi  STZ-NA  berhasil sebagai  induksi  tikus  model  diabetes  melitus tipe II pada semua hewan uji di penelitian ini.
Pemeriksaan  kadar  glukosa  darah puasa  yang  ketiga  (hari  ke-40)  menunjukkan rerata  kadar  glukosa  darah  puasa  pada  KKN tidak  menunjukkan  kenaikan  dibandingkan pengukuran  pada  hari  ke-8  dan  ke-11.  Pada KK(-)  yang  tidak  diberikan  ekstrak  daun kenikir  ( Cosmos  caudatus Kunth.),  tidak terdapat penurunan rerata kadar glukosa darah puasa. Kelompok yang diberikan ekstrak daun kenikir ( Cosmos caudatus Kunth.), yaitu KP1 dan KP2 menunjukkan penurunan rerata kadar glukosa darah puasa.
B. Histopatologi Otot Jantung Gambaran  histopatologi  otot  jantung yang  dicat  dengan  hematoksilin  dan  eosin pada KKN, KK(-), KP1 dan KP2 dapat dilihat pada  gambar  1.  Pada  KKN,  sebagian  besar sampel  tidak  menunjukkan  kerusakan  pada gambaran histopatologi jantungnya sedangkan pada  KK(-)  sebagian  besar  menunjukkan kerusakan  derajat  2  dan  3.  Sebagian  besar
sampel KP1 dan KP2 menunjukkan kerusakan derajat 1.
Gambar  1.  Histopatologi  Otot  Jantung.  A. Kelompok  kontrol  normal  (KKN).  B.  Kelompok kontrol negatif (KK(-)). C. Kelompok perlakuan 1 (KP1).  D.  Kelompok  Perlakuan  2  (KP2).  MN  = myocardium  normal,  SE  =  Sitoplasma  eosinofilia, panah  hitam  =  inflamasi,  panah  kuning  = vakuolisasi. Pengecatan H&E. Pembesaran 400x.
Jumlah dan persentase derajat kerusakan  histopatologi  jantung  tikus  putih pada 48 pengamatan dari tiap kelompok dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel 2. Jumlah dan persentase derajat kerusakan otot jantung tikus putih
Kelompok Jumlah dan Persentase Derajat kerusakan Total Derajat 0 Derajat 1 Derajat 2 Derajat 3 KKN 38 (79,2%) 10 (20,8%) 0 (0%) 0 (0%) 48 (100%) KK(-) 1 (2%) 9 (18,8%) 20 (41,6%) 18 (37,5%) 48 (100%) KP1 8 (16,7%) 30 (62,5%) 10 (20,8) 0 (0%) 48 (100%) KP2 24 (50%) 24 (50%) 0 (0%) 0 (0%) 48 (100%)
Pada  tabel  2  terlihat  luas  kerusakan histopatologi  jantung  derajat  0  paling  banyak terdapat  pada  KKN  yaitu  sebesar  79,2%, sedangkan derajat 3 paling banyak pada KK(-) yaitu sebesar 37,5%. Pada KP1 sebagian besar kerusakan terjadi pada derajat 1, yaitu sebesar 62,5%  dan  pada  KP2  terjadi  kerusakan dengan  derajat  1  sebanyak  50%  sampel
sedangkan sisanya tidak mengalami kerusakan (derajat 0).
C. Analisis statistik
Analisis  derajat  kerusakan  preparat histopatologi  jantung  tikus  pada  keempat kelompok  perlakuan  yaitu  kelompok  kontrol negatif  (KK(-)),  kelompok  kontrol  normal (KKN),  kelompok  perlakuan  1  (KP1)  dan kelompok  perlakuan  2  (KP2)  dengan  uji
Sholikah et al., Efek Kardioprotektif Ekstrak Daun Kenikir  ( Cosmos Caudatus Kunth.) pada Tikus Putih ( Rattus norvegicus) Model Diabetes Mellitus
.
Kruskal-Wallis  menunjukkan  perbedaan  yang signifikan (p = 0,000; p<0,05).
Uji Post Hoc Mann Whitney
menunjukkan  terdapat  perbedaan  derajad kerusakan  histopatologi  jantung  tikus  yang signifikan diantara kelompok perlakuan (KK(- ) dengan KKN (p=0,000), KK(-) dengan KP1 (p=0,000),  KK  (-)  dengan  KP2  (p=0,003)  , KKN  dengan  KP1  (p=0,000),  KKN  dengan KP2  (p=0,000)  dan  KP1  dengan  KP2 (p=0,000).

## PEMBAHASAN
Pada penelitian ini tidak ada hewan coba yang  mati  pada  semua  kelompok  perlakuan. Semua  hewan  coba  pada  KP1  dan  KP2  yang tetap hidup sampai akhir penelitian menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  kenikir yang  dikonsumsi  hewan  coba  masih  dalam dosis yang tidak berefek letal.
Pengukuran  kadar  glukosa  darah  puasa tikus putih pada hari ke-8 menunjukkan kadar glukosa darah puasa masing-masing kelompok masih dalam batas normal sebagaimana  tertera  pada  tabel  1.  Hal  ini menunjukkan  tidak  ada  tikus  yang  menderita DM sebelum dilakukan induksi.
Pengukuran  kadar  glukosa  darah  puasa tikus  pada  hari  ke-11  bertujuan  untuk mengkonfirmasi  keberhasilan  induksi  tikus model diabetes melitus pada KK(-), KP1, dan KP2.  Pada  pengukuran  hari  ke-11  diperoleh rata-rata  kadar  glukosa  darah  puasa  pada ketiga  kelompok  tersebut  >126  mg/dL  (tabel 1).  Hal  ini  menunjukkan  induksi  DM  pada tikus berhasil.
Strepzotocin dan nikotinamid yang digunakan  dalam  penelitian  ini  berhasil menginduksi  kondisi  DM  tipe  II  pada  tikus putih  ( Rattus  norvegicus ).  Streptozotosin (STZ) menyebabkan kerusakan sel β pankreas melalui  ikatan  dengan  transporter  glukosa GLUT-2 pada membran plasma yang kemudian  akan  menyebabkan  mekanisme
stress  oksidatif 15 .  Strepzotocin  merusak  sel  β dengan  cara  mengaktifkan  enzim  PARP-1 yang  akan  mengurangi  stok  NAD+  di  dalam sel  β  yang  diperlukan  dalam  proses pembentukan ATP. Berkurangnya stok NAD+ di  dalam  sel  β  akan  mengganggu  proses pembentukan  ATP  oleh  sel  β  tersebut, kemudian  menyebabkan  kematian  sel  β  pada pankreas. Nikotinamid (NA) berefek sebaliknya  yaitu  melindungi  sel  β  pankreas terhadap  efek  toksik  STZ 16 sehingga  sel  β pankreas  tikus  model  DM  masih  dapat mensekresi  insulin  walaupun  dalam  jumlah yang tidak adekuat 17 . Nikotinamid melindungi sebagian  sel  β  dari  kerusakan  akibat streptozotosin  dengan  cara  menghambat enzim  PARP-1 16 .  Rusaknya  sebagian  sel  β pankreas  ini  mengakibatkan  kondisi  DM  tipe II pada tikus putih.
Kadar  glukosa  darah  puasa  kelompok KK(-) pada hari ke-40 tidak jauh berbeda bila dibandingkan  dengan  kadar  glukosa  darah puasa  pada  hari  ke-11  (tabel  1).  Hal  tersebut menunjukkan  bahwa  pembuatan  tikus  model diabetes melitus dengan induksi streptozotosin -  nikotinamid  berhasil  dipertahankan  hingga akhir  penelitian.  Sedangkan  pada  kelompok KP1  dan  KP2  terdapat  penurunan  kadar glukosa  darah  puasa  pada  hari  ke-40  yaitu 125,27  mg/dL  pada  KP1  dan  101,76  mg/dL pada  KP2  (tabel  1)  yang  berarti  bahwa pemberian ekstrak daun kenikir pada penelitian  ini  dapat  menurunkan  kadar glukosa darah puasa tikus putih model DM.
Gambaran  histopatologi  otot  jantung tikus  putih  ( Rattus  norvegicus )  model  DM tipe II yang diamati pada penelitian ini adalah derajat  kerusakan  otot  jantung  dalam  satu lapang  pandang  yang  dinilai  dengan  skoring. Pada  hasil  pengamatan  didapatkan  persentase otot jantung yang tidak mengalami kerusakan pada  KKN  sebesar  79,2%  dan  yang mengalami kerusakan derajat 1 adalah 20,8%. Hal ini menunjukkan bahwa KKN mengalami kerusakan  yang  paling minimal  dibandingkan
Sholikah et al., Efek Kardioprotektif Ekstrak Daun Kenikir  ( Cosmos Caudatus Kunth.) pada Tikus Putih ( Rattus norvegicus) Model Diabetes Mellitus
.
dengan kelompok perlakuan lainnya. Gambaran  histopatologi  jantung  pada  KKN ini  dapat  terjadi  karena  variabel  luar  yang tidak  dapat  dikendalikan.  Gambaran  awal histologis  jantung  pada  penelitian  ini  tidak diperiksa sehingga terdapat kemungkinan otot jantung  sudah  mengalami  kerusakan  sebelum pemberian perlakuan.
Histopatologi KK(-) menunjukkan sebagian besar (41.6%)  mengalami kerusakan derajat  2,  dan  sisanya  mengalami  kerusakan derajat  3  sebanyak  37,5%  dan  kerusakan derajat  1  sebanyak  18,8%.  Kerusakan  dengan derajat  0  pada  KK(-)  terjadi  pada  1  sampel (2%). Hal ini menunjukkan sampel pada KK(- )  mengalami  kerusakan  yang  paling  berat diantara kelompok perlakuan lainnya.
Kelompok  Perlakuan  1  (KP1)  dan Kelompok  Perlakuan  2  (KP2)  yang  diberi ekstrak  daun  kenikir  ( Cosmos  caudatus Kunth.) setelah induksi streptozotosin- nikotinamid  menunjukkan  derajat  kerusakan yang lebih ringan dibandingkan KK(-). Hal ini menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  kenikir ( Cosmos  caudatus Kunth.)  dapat  berperan mengurangi  derajat  kerusakan  otot  jantung pada tikus putih ( Rattus norvegicus ).
Berdasarkan uji Post Hoc Mann Whitney , KK(-)  dan  KKN  memiliki  perbedaan  yang signifikan  (p=0,000).  Gambaran  histopatologi yang  terjadi  pada  KK(-)  menunjukkan kerusakan yang jauh lebih berat dibandingkan dengan  KKN.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa pembuatan  sampel  model  diabetes  melitus menggunakan  induksi  STZ-NA  berdampak kerusakan  pada  histopatologi  jantung  tikus putih.  Hal  ini  sesuai  penelitian  Badole  et  al (2014)  dan  Guido  et  al  (2017)  yang menunjukkan  bahwa  induksi  STZ-NA  dapat menyebabkan  kerusakan  struktur  histologis lapisan  miokardium  jantung 14,18 .  Kerusakan yang  terjadi  berupa  inflamasi  lapisan  otot jantung,  eosinofilia  pada  sitoplasma  sel  otot jantung,  vakuolisasi  dan  rusaknya  struktur otot  jantung.  Hal  ini  disebabkan  karena
streptozotosin (STZ) yang masuk ke dalam sel β pankreas akan menyebabkan stress oksidatif dan  inflamasi  sistemik  yang  dapat  memicu peningkatan ROS 19,20 . Reactive Oxygen Species (ROS)  memiliki  peran  penting  dalam patofisiologi  kerusakan  struktur  histologis jantung. Reactive  Oxygen  Species (ROS) dapat  menimbulkan  ekspresi  gen  yang abnormal  dan  perubahan  transduksi  sinyal sehingga  terjadi  peningkatan  kerusakan  otot jantung 20,21 .
Hasil  analisis  derajat  kerusakan  otot jantung  antara  KK(-)  dengan  KP1  dan  KK(-) dengan  KP2  yang  menunjukkan  perbedaan yang  bermakna. Hal  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak daun kenikir dapat mencegah kerusakan otot jantung pada tikus model DM . Efek  daun  kenikir  ( Cosmos  caudatus Kunth.) tersebut dikarenakan daun kenikir mengandung zat flavonoid yaitu quercetin dan kaempferol 11 . Flavonoid  dapat  menghambat pembentukan  radikal  bebas  dengan  cara menghambat  aktivitas  enzim  atau  berikatan dengan zat yang berperan dalam pembentukan radikal bebas 22 .
Derajat  kerusakan  histopatologi  otot jantung  antara  KKN  dengan  KP1  dan  KKN dengan  KP2  menunjukkan  hasil  perbedaan yang  signifikan  pada  uji post  hoc .  Hal  ini menunjukkan  histopatologi  otot  jantung  pada KP1 dan KP2 belum sesuai dengan gambaran normal (KKN). Kondisi tersebut
kemungkinan  disebabkan  dosis  ekstrak  daun kenikir  yang  diberikan  pada  KP1  dan  KP2 belum  optimal  untuk  mencegah  kerusakan otot jantung.
Gambaran  histopatologi  otot  jantung antara  KP1  dan  KP2  berbeda  secara bermakna.  Hal  ini  menunjukkan  peningkatan dosis  daun  kenikir  pada  penelitian  ini  dapat berpotensi  mencegah  kerusakan  otot  jantung tikus putih.
Sholikah et al., Efek Kardioprotektif Ekstrak Daun Kenikir  ( Cosmos Caudatus Kunth.) pada Tikus Putih ( Rattus norvegicus) Model Diabetes Mellitus
.

## KESIMPULAN
Pemberian ekstrak daun kenikir dapat menurunkan  kadar  glukosa  darah  puasa  dan mempunyai  efek  kardioprotektif  pada  tikus putih model diabetes mellitus.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapakan  terima  kasih kepada Laboran Pusat Studi Pangan dan Gizi, PAU  Universitas  Gadjah  Mada  dan  Staf Laboratorium Histologi yang telah membantu persiapan dan penyediaan laboratorium.

## DAFTAR PUSTAKA
1.   International Diabetes Federation. Idf diabetes atlas Ninth edition. 2019.
2.   Riskesdas.  Laoran  Nasional  Riskesdas 2018.pdf.  Jakarta:  Badan  Peneltian  dan Pengembangan Kesehatan; 2018.
3.   Association  AD.  Diagnosis  and  Classi  fi cation  of  Diabetes  Mellitus.  Diabetes  Care. 2014;37(Supplement 1):81–90.
4.   Giacco F, Brownlee M. Oxidative stress and diabetic  complication.  2010;107(9):1058– 70.
5.   Francisqueti  FV,  Chiaverni  LCT,  Dos Santos KC, Minatel IO, Ronchi CB, Ferron AJT,  et  al.  The  role  of  oxidative  stress  on the pathophysiology of metabolic
syndrome. Rev Assoc Med Bras. 2017;63(1):85–91.
6.   Chawla A, Chawla R, Jaggi S. Microvasular and macrovascular complications in diabetes  mellitus :  Distinct  or  continuum ? Indian J Endocrinol Metab. 2016;20(4):547–51.
7.   Kobayashi  S,  Liang  Q.  Biochimica  et Biophysica Acta Autophagy and mitophagy in  diabetic  cardiomyopathy ☆ .  BBA  -  Mol Basis  Dis  [Internet].  2015;1852(2):252–61.
Tersedia pada: http://dx.doi.org/10.1016/j.bbadis.2014.05.0
20 8.   Li C, Zhang Q, Li M, Zhang J, Yu P, Yu D.
Attenuation  of  myocardial  apoptosis  by alpha-lipoic  acid  through  suppression  of mitochondrial  oxidative  stress  to  reduce diabetic  cardiomyopathy.  Chin  Med  J (Engl). 2009;122(21):2580–6.
9.   Marín-peñalver JJ, Martín-timón I, Sevillano-collantes C, del Cañizo-gómez FJ. Update  on  the  treatment  of  type  2  diabetes mellitus. World J Diabetes. 2016;7(17):354–95.
10.  Verma  S,  Gupta  M,  Popli  H,  Aggarwal  G. Diabetes  Mellitus  Treatment  Using  Herbal Drugs.  Int  J  Phytomedicine.  2018;10(1):1– 10.
11.  Andarwulan  N,  Batari  R,  Agustini  D, Bolling B, Wijaya H. Flavonoid content and antioxidant  activity  of  vegetables  from Indonesia. Food Chem [Internet]. 2010;121(4):1231–5. Tersedia pada: http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2010.0 1.033 12.  Sholikah  TA,  Wulandari  S,  Ariesta  I, Hakim MAR, Hafizhan M. Jurnal Kedokteran dan Kesehatan Indonesia. JKKI.
2020;11(2):172–9.
13.  Pietta  P.  Flavonoids  as  Antioxidants.  J NatProd. 2000;63:1035–42.
14.  Badole  SL,  Jangam  GB,  Chaudhari  SM, Ghule  AE,  Zanwar  AA.  L-Glutamine Supplementation  Prevents  the  Development of  Experimental  Diabetic  Cardiomyopathy in  Streptozotocin-Nicotinamide  Induced Diabetic Rats. 2014;9(3):1–7.
15.  Lenzen  S.  The mechanisms  of  alloxan-  and streptozotocin-induced diabetes. Diabetologia. 2008;51:216–26. 16.  Szkudelski T. Streptozotocin – nicotinamide-induced  diabetes  in  the  rat  . Characteristics  of  the  experimental  model. Exp Biol Med. 2012;237:481–90.
17.  Masiello  P.  Animal  models  of  type  2 diabetes  with  reduced  pancreatic  B  -cell mass. Int J Biochem Cell Biol. 2006;38:873–93.
18.  Guido MC, Marques AF, Tavares ER, Melo
MDT De, Salemi VMC, Maranhão RC. The
Effects  of  Diabetes  Induction  on  the  Rat Heart :  Differences  in  Oxidative  Stress  , Inflammatory  Cells  ,  and  Fibrosis  between Subendocardial  and  Interstitial  Myocardial Areas. Oxid Med Cell Longev. 2017;1–11.
19.  Cai  L,  Kang  YJ.  Oxidative  Stress  and Diabetic  Cardiomyopathy  A  Brief  Review. Cardiovasc Toxicol. 2001;1(3):181–93.
20.  Maritim  AC,  Sanders  RA,  Iii  JBW. Diabetes , Oxidative Stress , and Antioxidants :  A  Review.  J  Biochem  Mol Toxicol. 2003;17(1):24–38.
21.  Yao P, Li K, Jin Y, Song F, Zhou S, Sun X, et  al.  Food  Chemistry  Oxidative  damage after  chronic  ethanol  intake  in  rat  tissues : Prophylaxis of  Ginkgo biloba  extract.  Food Chem. 2006;99:305–14.
Sholikah et al., Efek Kardioprotektif Ekstrak Daun Kenikir  ( Cosmos Caudatus Kunth.) pada Tikus Putih ( Rattus norvegicus) Model Diabetes Mellitus
.
22.  Kumar  S,  Pandey  AK.  Chemistry  and Biological  Activities  of  Flavonoids :  An
Overview. Sci World J. 2013;1–16.