## Analisis pewarna Rhodamin B pada kerupuk merah di payakumbuh

## Linda Hevira*, Desmi Alwinda, Najmi Hilaliyati
Universitas Mohammad Natsir, Bukittinggi, Indonesia Jl. Tan Malaka Bukit Cangang, Bukittinggi. 26136 e-mail: * lindahevira@gmail.com
Diterima: 25 Oktober 2019/ Disetujui: 6 Mei 2020/ Dipublikasi online: 31 Mei 2020 DOI: https://doi.org/10.22437/chp.v5i1.7912

## ABSTRAK
Rhodamin  B  merupakan  zat  warna  sintetik  yang  digunakan  sebagai  pewarna tekstil,  cat  dan  kertas  namun  banyak  disalahgunakan  pada  makanan  salah satunya  kerupuk  merah.  Rhodamin  B  dapat  menyebabkan  iritasi  saluran pernafasan, kulit, mata, saluran pencernaan, keracunan dan gangguan hati, serta dalam  jangka  panjang  bisa  menyebabkan  kanker  dan  tumor.  Kadar  zat  warna Rhodamin  B  secara  kualitatif  dan  kuantitatif  pada  kerupuk  merah  ditentukan menggunakan  KLT  dan  Spektrofotometri  UV-Vis.    Dari  tujuh  sampel  produsen menunjukkan  bahwa  tidak  ditemukannya  Rhodamin  B  atau  negatif  di  dalam kerupuk merah. Itu artinya kerupuk merah yang diproduksi oleh home industri di Payakumbuh aman untuk dikonsumsi.
Kata kunci: Kerupuk merah, Kromatografi Lapis Tipis, Rhodamin B, spektrofotometri UV-Vis; zat warna sintetik.

## ABSTRACT
Rhodamine B is a synthetic dye that is used as a coloring agent for textiles, paints, and paper but is widely misused in foods, one of which is red crackers. Rhodamine B could irritate the respiratory tract, skin, eyes, digestive tract, poisoning, and liver disorders,  and  in  the  long  run,  can  cause  cancer  and  tumors.  The  content  of Rhodamin  B  dyes  was  calculated  in  red  crackers  with  TLC  and  UV-Vis Spectrophotometry  in  a  qualitative  and  quantitative  method.  Seven  samples  from producers showed that Rhodamin B or negative was not found in red crackers. That means that the red crackers produced by the Payakumbuh home industry are safe for consumption.
Keywords:  Red  crackers,  Rhodamine  B,  Thin  Layer  Chromatography,  UV-Vis spectrophotometry, synthetic dyes

## PENDAHULUAN
Zat pewarna  adalah salah satu zat tambahan dalam makanan yang dapat memberikan warna agar terlihat lebih menarik (Febrina et al., 2013). Salah satu makanan  yang  sangat  disukai  dan  juga  menarik  perhatian  banyak  konsumen adalah  kerupuk  merah  (Abdurrahmansyah  et  al.,  2017).  Kerupuk  dibuat  dari tepung  tapioka  dicampur  dengan  air,  kemudian  diberi  bumbu  dan  pengenyal sehingga  menjadi adonan. Selain bahan-bahan ini, adonan  kerupuk  dapat  juga
ditambahkan pewarna agar terlihat lebih menarik (Kumalasari, 2015).
Secara umum, pewarna dibagi menjadi dua jenis, yaitu pewarna alami dan pewarna sintetis. Pewarna alami berasal dari tanaman, hewan, dan mineral yang aman jika dikonsumsi. Sebaliknya, pewarna sintetis adalah pewarna yang berasal dari bahan kimia yang sering digunakan sebagai pewarna tekstil, cat, printing dan lainnya.  Pewarna  sintetik  tersebut  berdampak  buruk  bagi  kesehatan  manusia, seperti  iritasi  mata,  iritasi  kulit,  kerusakan  hati,  mutagenik  dan  karsinogenik (Hevira et al., 2020).
Beberapa jenis tanaman dapat digunakan sebagai pewarna makanan, seperti warna kuning didapat dari parutan kunyit, warna merah bersala dari buah bit, buah  naga  dan  stroberi,  warna  hijau  dari  daun  pandan  dan  daun  suji,  warna coklat  dari  buah  cokelat,  dll.  Namun,  untuk  skala  produksi  yang  besar penggunaan pewarna membutuhkan harga yang tinggi dan proses yang panjang, sehingga  produsen  makanan  mencari  alternatif  lain  untuk  memakai  pewarna buatan yang murah dan mudah diperoleh, seperti pewarna tekstil.
Menurut Permenkes RI No. 033 tahun 2012, aditif makanan adalah bahan tambahan  yang  ditambahkan  pada  makanan  sehingga  makanan  terlihat  lebih menarik. Rhodamin B merupakan pewarna dalam bentuk bubuk kristal, berwarna merah keunguan, tidak berbau, jika dalam bentuk larutan berwarna merah terang neon  (fluorescent)  (Sari,  2014).  Bahaya  Rhodamin  B  bagi  kesehatan  dapat mengiritasi  saluran  pernapasan,  kulit,  pencernaan,  dan  bersifat  karsinogenik (Surati, 2015). Rhodamin B juga dapat menyebabkan kerusakan hati jika terlalu banyak  dikonsumsi  (Anjasmara  et  al.,  2017).  Beberapa  bahaya  zat  warna  azo lainnya dapat dilihat pada Tabel 1.

## Tabel 1. Beberapa zat warna azo dan bahayanya bagi kesehatan
Zat warna Digunakan pada Penyakit yang terjadi 4-Aminoazobenzene (Aniline Yellow) Tinta  printer,  insektisida,  lak, pernis, lilin, resin stirena Tumor  hati,  tumor  kulit, kanker hati o-Aminoazotoluene (C.I. Solvent Yellow 3) Pewarna paraffin tumor  di  kandung  kemih, kantung  empedu,  paru- paru, dan hati Methyl Yellow (Butter Yellow) Pada pewarna bahan makanan dan minuman Pemicu kanker Sudan  Azo  (Sudan  I, Sudan II, Sudan III, Sudan IV) untuk  mewarnai  lilin,  pelarut, kadang ditemukan untuk mewarnai bubuk  kari,  bubuk  cabai,  saus cabai  formulasi  asap  berwarna oranye Karsinogen Para Red Pewarna  pakaian,  kadang  dalam pewarna makanan Beracun dan karsinogen Sumber: (Chung, 2016 dan Hevira, 2019)
Meskipun  Rhodamin  B  telah  dilarang  pemerintah,  namun  masih  banyak produsen makanan yang menambahkan pewarna tersebut ke dalam kerupuk. Hal ini  kurang  disadari  oleh  publik  yang  mengkonsumsi  kerupuk  menggunakan pewarna  sintetis  (Syakri,  2017).  Karakteristik  makanan  yang  mengandung Rhodamin  B  adalah  warnanya  mencolok,  mengkilap  terang,  tidak  merata  atau masih ada yang menggumpal (Dawile et al., 2013).
Warna  makanan  dapat  meningkatkan  daya  beli  konsumen  tentang  suatu produk. Namun, penggunaan pewarna harus mematuhi peraturan yang berlaku karena  dapat  merusak  kesehatan  konsumen  (Sumarlin,  2018).  Serangkaian penelitian telah dilakukan untuk membuktikan penggunaan Rhodamin B sebagai zat pewarna makanan.
Penelitian  pada  tahun  2009  tentang  camilan  pasar  yang  beredar  di  enam pasar Kabupaten Laweyan. Hasil penelitian pada 41  jajanan pasar yang dijual di 6 buah  pasar di Kabupaten Laweyan Kota Surakarta  sebanyak 15 sampel yang mengandung  Rhodamin  B,  yaitu:  42,86%  di  pasar  Kadipolo,  25%  di  pasar Kembang,  50%  di  pasar  Purwosari,  33,33  %  di  pasar  Jungke,  75%  di  pasar Penumping, 22,22% di pasar Kleco (Suhendi et al., 2009).
Identifikasi  dan  penetapan  kadar  Rhodamin  B  dalam  kerupuk  merah  di pasar Antasari Kota Banjarmasin, menetapkan ada satu sampel yang positif dari 6 sampel yang diuji  (Kumalasari, 2015). Sedangkan penelitian tentang kerupuk merah yang mengandung Rhodamin B di pasar Bringharjo, Jogjakarta terdapat 2 sampel yang positif dari 15 sampel (Rahayu dan Mahmuda, 2016).
Kecendrungan  masyarakat  untuk  mengkonsumsi  kerupuk  sebagai pelengkap makan nasi, soto, nasi goreng dan cemilan di Sumatera Barat menjadi latar  belakang  dari  penelitian  ini.  Maraknya  penggunaan  Rhodamin  B  dalam makanan,  perlu  ditentukan  apakah  kerupuk  merah  di  Piladang  mengandung Rhodamin  B  atau  tidak.  Jika  ada,  berapakah  kadarnya  di  dalam  kerupuk tersebut.  Hal  ini  penting  diketahui  oleh  masyarakat  karena  sebagaian  besar produsen kerupuk merah di Sumatera Barat berada di Piladang.
Ada beberapa metode penelitian untuk analisis Rhodamin B. Ekstraksi fase padat  dapat digunakan untuk penentuan  Rhodamin B dalam minuman ringan, makanan  dan  kosmetik  (Soylak  et  al,  2011).  Hal  ini  dapat  dilakukan  untuk memisahkan  Rhodamin  B  dari  campuran,  kemudian  menganalisis  konsentrasi Rhodamin B menggunakan Spectrophotometri UV-Vis.

## METODOLOGI PENELITIAN
Metode  yang  digunakan  adalah  metode  kualitatif  dan  kuantitatif  dengan Kromatografi  Lapis  Tipis  dan  Spektrofotometri  UV-Vis.  Sampel  kerupuk dikumpulkan dari produsen kerupuk merah di Piladang Nagari Koto Tangah Batu Hampar Akabiluru Kabupaten Payakumbuh, Sumatera Barat, Indonesia.
Penelitian dilakukan di Laboratorium LLDIKTI Wilayah X, Padang. Instrumen yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  Spektrophotometri  UV-Vis  (PG Instrument T80), hot plate (ANKE), chamber (Pyrex), neraca analitik (Preeisa XB 220A), Erlenmeyer (Pyrex), gelas beker (Pyrex), gelas ukur (Pyrex), corong pisah, pipet tetes, pipet volumetri, batang pengaduk (Pyrex) (Mamoto dan Citraningtyas, 2013).Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  amonia  2%,  amonia 10%,  etanol  70%,  n-butanol,  etil  asetat,  asam  asetat,  benang  wol,  aquades, Rhodamin B (Merck), kerupuk merah (Mamoto dan Citraningtyas, 2013).

## Persiapan Sampel
Sampel kerupuk merah seberat 10 gram dimasukkan ke dalam Erlenmeyer kemudian  direndam  selama  24  jam  dalam  20  ml  larutan  amonia  2%  yang dilarutkan  dalam  etanol  70%.  Filtrat  disaring  menggunakan  kertas  saring Whatman No. 1. Larutan dipindahkan  ke dalam gelas  beker  dan dipanaskan di atas hot plate. Residu dari penguapan dilarutkan dalam 10 ml larutan asam yang dibuat dengan mencampurkan 5 ml air dan 5 ml asam asetat 10%. Benang wol dengan panjang 15 cm dimasukkan ke dalam larutan asam dan dididihkan hingga 10 menit, dan pewarna akan mewarnai benang wol, kemudian benang diangkat. Benang wol dicuci dengan air. Kemudian benang dimasukkan ke dalam larutan basa 10 ml amonia 10% yang dilarutkan dalam 70% etanol dan direbus. Benang wol melepaskan warna dan warnanya akan memasuki larutan basa. Larutan basa yang diperoleh kemudian digunakan sebagai sampel dalam analisis kromatografi lapis tipis (Dawile et al., 2013).

## Identifikasi dengan KLT
Chamber  dijenuhkan  dengan  eluen  N-butanol:  etil  asetat:  10%  amonia dengan perbandingan 10: 4: 5. Sampel dan  pembanding  ditotolkan  pada  garis penotolan plat yang berjarak 2 cm dari tepi plat KLT menggunakan pipet kapiler yang telah dibilas dengan aquades. Penotolan dilakukan dengan tegak lurus. Plat KLT dimasukkan ke dalam chamber yang telah jenuh dengan eluen, ditutup  dan dibiarkan  beberapa  saat  sampai  eluen  naik  sampai  batas  atas  plat.  Plat  KLT diangkat, dikeringkan  Diamati warna secara visual dan dibawah sinar UV, jika
secara visual noda berwarna merah jambu dan dibawah sinar UV 254 nm dan 365 nm berfluoresensi kuning atau orange, hal ini menunjukkan adanya Rhodamin B dan menghitung nilai Rf (Dawile et al., 2013).

## Pembuatan Larutan Standar Rhodamin B
Rhodamin  B  ditimbang  sebanyak  0,1  gram    dilarutkan  dengan  aquadest sampai tanda batas dalam labu ukur 100 ml untuk membuat larutan 1000 ppm. Dari larutan 1000 ppm diencerkan menjadi 100 ppm dengan memipet 10 ml ke dalam  labu  ukur  100  ml  ditambahkan  aquadest  sampai  tanda  batas.  Dan diencerkan lagi menjadi 20 ppm dengan memipet 10 ml ke dalam labu ukur 50 ml ditambahkan aquadest sampai tanda batas. Lalu dari larutan 20 ppm dibuat konsentrasi  1,5  ppm,  2  ppm,  2,5  ppm,  3  ppm,  3,5  ppm  dan  4  ppm,  dengan memipet masing-masing 0,75 ml, 1 ml, 1,25 ml, 1,5 ml, 1,75 ml dan 2 ml ke dalam labu  ukur  10  ml  lalu  ditambah  aquadest  sampai  tanda  batas  (Vifta,  2019), (Devitria dan Sepryani, 2015).

## Analisis sampel dengan Spektrofotometer UV-Vis
Masing-masing  sampel  yang  sudah  dipreparasi  kemudian  diukur  satu persatu dengan alat Spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang 553 nm. Pembacaan  dilakukan  selama  kurang  lebih  1  menit  sehingga  didapatkan  nilai adsorbansi dan konsentrasi dari masing-masing sampel.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Gambar  1  menunjukkan  bahwa  tes  kualitatif  Rhodamin  B  pada  sampel kerupuk merah K1-K7 menggunakan KLT. Pada pengamatan dalam sinar UV 254 nm tidak  timbul warna  fluorescent  pink dan pada sinar UV 365 nm juga tidak berwarna  kuning  atau  kuning  oranye.  Sedangkan  dalam  literatur  disebutkan bahwa  Rhodamin  B  akan  memberikan  Fluoresensi  kuning  jika  disinari  dengan Sinar UV dengan panjang gelombang 365 nm.
K1 K1
K2 K2
K3 K3 K4 K4
K5
K5 K6 K6 K7 K7
Gambar 1. Warna noda sampel setelah disinari Sinar UV pada panjang gelombang 254 nm dan 365 nm
Pada  Tabel  2  dapat  dilihat  bahwa  hasil  pemeriksaan  Rhodamin  B  pada sampel K1-K7 menunjukkan tidak adanya Rhodamin B dalam kerupuk merah.
Tabel  2. Hasil  pemeriksaan  kualitatif  Rhodamin  B  pada sampel  dengan  metode Kromatografi Lapis Tipis Perlakuan Sinar UV Nilai Rf Keterangan 254 nm 365 nm Pembanding (Rhodamin B) Merah jambu Kuning atau Orange Rf = 0,75 Positif Sampel (K1) Tidak berwarna merah jambu Tidak  berwarna kuning atau Orange Rf = 0,525 Negatif Sampel (K2) Tidak berwarna merah jambu Tidak  berwarna kuning atau Orange Rf = 0,525 Negatif Sampel (K3) Tidak berwarna merah jambu Tidak  berwarna kuning atau Orange Rf = 0,56 Negatif Sampel (K4) Tidak berwarna merah jambu Tidak  berwarna kuning atau Orange Rf = 0,537 Negatif Sampel (K5) Tidak berwarna merah jambu Tidak  berwarna Orange Rf = 0,5 Negatif Sampel (K6) Tidak berwarna merah jambu Tidak  berwarna kuning atau Orange Rf = 0,58 Negatif Sampel (K7) Tidak berwarna merah jambu Tidak  berwarna kuning atau Orange Rf = 0,575 Negatif
Selanjutnya,  sampel  kerupuk  juga  diuji  secara  kuantitatif  untuk memastikan  apakah  kerupuk  merah  tidak  mengandung  Rhodamin  B.  Analisis dilakukan  menggunakan  Spektrofotometer  UV-Vis,  di  mana  metode  ini  lebih khusus  dalam  menghitung  kadar  zat  tertentu  yang  terkandung  dalam  Sampel (Maryam,  2014).  Hasil  analisis  menggunakan  Spektrofotometer  UV-Vis disajikanpada Gambar 2.
Gambar 2. Panjang gelombang maksimum sampel menggunakan spektrofotometri UV-vis
Pada  Gambar  2,  setelah  mengukur  sampel  K1-K7,  didapatkan  bahwa sampel K1, K2 dan K6 tidak memiliki panjang gelombang maksimum. Sementara itu, panjang gelombang maksimum pada 503 nm di K3, 508 nm di K4, 506 nm di K5, dan 508 nm di K7 menunjukkan bahwa spektrum spektrofotometri  sampel memang  dalam  kisaran  menyerap  warna  merah.  Namun,  pengukuran  sampel menggunakan UV-Vis Spectrophotometry tidak menunjukkan adanya Rhodamin B  karena  panjang  gelombang  maksimum  pada  sampel  sangat  berbeda  dengan panjang  gelombang  Rhodamin  B  pada  553  nm.  Hal  ini  juga  dapat  dibuktikan bahwa  warna merah pada zat warna Rhodamin B berbeda dengan warna merah yang terdapat pada sampel untuk membuat kerupuk merah, seperti yang dapat dilihat  pada  Gambar  3.    Berdasarkan  data  spektrofotometri  UV-Vis  juga membuktikan  bahwa  tidak  adanya  Rhodamin  B  dalam  sampel  kerupuk  merah karena  panjang gelombang maksimum sampel tidak sama  dengan  Rhodamin B sebagai pembanding

## Gambar 3. Perbandingan pewarna Rhodamin B dan pewarna kerupuk merah di
Payakumbuh.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan,  dapat  disimpulkan bahwa kerupuk merah di Payakumbuh pada pengujian Kromatografi Lapis Tipis dan hasil uji Spektrofotometri UV-Vis adalah negatif. Artinya tidak ditemukannya Rhodamin B di dalam kerupuk merah, sehingga kerupuk merah di Payakumbuh dinyatakan  aman  untuk  dikonsumsi  karena  tidak  mengandung  Rhodamin  B. Namun  demikian  perlu  juga  diwaspadai  akan  adanya  turunan  warna  lain  dari campuran zat warna tekstil yang dilarang digunakan sebagai zat warna makanan.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdurrahmansyah, Fitratul Aini, D. C. 2017. Analisis Zat Pewarna Rhodamin B Pada Saus Cabai Yang Beredar Di Kampus Universitas Islam Negeri Raden Fatah Palembang. Jurnal Biota, 3 (1), 38.
Anjasmara  Pravangesta  Anggit,  Muhammad  Fadhol  Romdhoni,  Mustika Ratnaningsih  Purbowati.  2018.  Pengaruh  Pemberian  Rhodamin  B  Peroral Subakut Terhadap Perubahan Ketinggian Mukosa Gaster Tikus Putih Galur Wistar Rattus Norvegicus Strain Wistar. Saintika Medika, 13, (2), 58-62.
Chung,  K.  T.  2016  Azo  dyes  and  human  health:      A      review,  Journal            of Environmental   Science   and   Health -Part  C  Environmental  Carcinogenesis and  Ecotoxicology  Reviews,  344,  233–261.
Devitria, R. dan Sepryani, H. 2017. Analisis Rhodamin B pada makanan jajanan anak di sekitar SDN 2 dan SDN 3 Kota Pekanbaru. Jurnal  Analis Kesehatan, 5 (1), 32–40.
Dawile  Sherly,  Fatimawali,  Frenly  Wehantouw.  2013.  Analisis  Zat  Pewarna Rhodamin  B  Pada  Kerupuk  Yang  Beredar  Di  Kota  Manado.  Jurnal  Ilmiah Farmasi. 2 (3).
Febrina, G. A. A., Wiratmini, N. I., dan Sudatri, N. W. 2013. Pengaruh pemberian rhodamin b terhadap siklus estrus mencit (Mus musculus L) betina. Jurnal Biologi, 17 (1), 21–23.
Hevira, L., Rahmi, A., Zein, R., Zilfa, Z., dan Rahmayeni, R. 2020. The fast and of
low-cost-adsorbent to the removal of cationic and anionic dye using chicken eggshell with its membrane. Mediterranean Journal of Chemistry, 10(3), 294.
Hevira  Linda,  Rahmiana  Zein,  Putri  Ramadhani.  2019.  Metoda  Adsorpsi  Pada Penyerapan Ion Logam Dan Zat Warna Dalam Limbah Cair. Jurnal Sains Dan Terapan Kimia, 131:39–58.
Indonesia, Departemen Kesehatan Republik. 2012. Peraturan Menteri Kesehatan Republik  Indonesia  Nomor  033  Tahun  2012  tentang  Bahan  Tambahan Makanan.
Kumalasari,  E.  2015.  Identifikasi  dan  Penetapan  Kadar  Rhodamin  B  dalam Kerupuk Berwarna Merah yang Beredar di Pasar Antasari Kota Banjarmasin. Jurnal Ilmiah Manuntung, 1(1), 85–89.
Mamoto L V and Citraningtyas F G, 2013. Analisis Rhodamin B Pada Lipstik Yang Beredar Di Pasar Kota Manado. Jurnal Ilmiah Farmasi, 2 (2) 61-66.
Maryam.  St., Muflihunna,  A.,  Sajadah,  U.  2014.  Analisis  Pewarna  Rhodamin  B Dalam Saus Tomat Yang Beredar Di Kota Makassar Secara Spektrofotometri Uv-Vis. Jurnal As-Syifaa. 6 (2), 107-111.
Peraturan  Menteri  Kesehatan  Republik  Indonesia  Nomor  033  Tahun  2012,  & Dengan, B. T. P.
Rahayu, M., dan Mahmuda, Y. I. 2016. Identifikasi Zat Pewarna Rhodamin B Dan Methanyl Yellow Pada Kerupuk Yang Dijual Di Pasar Beringharjo Yogyakarta Tahun 2016. Teknolab Journal, 5 (2), 3–6.
Sherly Dawile, Fatimawali, F. W.  2013. Analisis Zat Pewarna  Rhodamin B Pada Kerupuk Yang. Jurnal Ilmiah Farmasi, 2(3), 86–90.
Surati. 2015. Bahaya zat aditif rhodamin B pada makanan. Jurnal Biology Science & Education, 4(1), 22–28.
Soylak M, Unsal YE, Yilmaz E, Tuzen M. 2011. Determination of Rhodamin B in soft drink, waste water and lipstick samples after solid phase extraction. Food Chem Toxicol. 49 (8),1796-1799.
Suhendi, A., Surakarta, U. M., Utami, W.,  dan Surakarta, U. M. 2009. Fakultas Farmasi, 10, 148–155.
Sumarlin,  L.O.  2018.  Identifikasi  Pewarna  Sintetis  Pada  Produk  Pangan  Yang Beredar Di Jakarta Dan Ciputat. Jurnal Kimia. hal 274–83.
Syakri, Syamsuri. 2017. Analisis Kandungan Rhodamin B Sebagai Pewarna Pada Sediaan Lipstik Impor Yang Beredar Di Kota Makassar. Jurnal Jf Fik Uinam 51: 40–45.
Vifta, U. arisanti A. K. H. R. L. 2019. Identifikasi dan penetapan kadar rhodamin b dalam sediaan kosmetik perona pipi di pasar bandarjo kecamatan ungaran kabupaten semarang. Artikel, 2–12.