## JUMLAH  SEL  LEYDIG  DAN  SEL  SERTOLI  TIKUS  GALUR SPRAGUE-DAWLEY  TERPAPAR  SOPI  PASCA  DITERAPI  EKSTRAK ETANOL SIRIH CINA (Peperomia pellucida L.)

## NUMBER  OF  LEYDIG  CELLS  AND  SERTOLI  CELLS  OF  SPRAGUE-DAWLEY STRAIN  RATS  EXPOSED  TO  SOPI  AFTER  THERAPY  WITH  PEPPER  ELDER (Peperomia pellucida L.) ETHANOL EXTRACT
Adrien  Jems  Akiles  Unitly 1*) ,  Amos  Killay 1) ,  Mechiavel  Moniharapon 2) ,  La  Eddy 2) , Veince  B  Silahooy 2) ,  Laury  Marcia  Ch  Huwae 3) ,  Debby  Dijola  Moniharapon 2) ,  Bella Frida Lakesubun 2)
1 Program Studi Sains Biomedis, Fakultas MIPA Universitas Pattimura, Ambon – Indonesia
2 Program Studi Sains Biologi, Fakultas MIPA Universitas Pattimura, Ambon – Indonesia
3 Program Studi Sains Bioteknologi, Fakultas MIPA Universitas Pattimura, Ambon - Indonesia
* Corresponding Author e-mail : adebiologi@yahoo.co.id

## ABSTRACT
Keywords: Antioksidan,
Sirih cina, Sel Leydig, Sel Sertoli, Sopi
Konsumsi  sopi  yang  berlebihan  diduga  mengakibatkan  turunnya  fungsi  reproduksi  seperti turunnya  jumlah  sel  leydig  dan  sel  sertoli,  yang  dapat  menyebabkan  infertilitas.  Tujuan penelitian  ini  untuk  mengetahui  jumlah  sel  Leydig  dan  sel  Sertoli  tikus  terpapar  sopi  pasca diterapi  ekstrak  etanol  sirih  cina  ( Peperomia  pellucida. L).  Rancangan  acak  lengkap  (RAL) digunakan  dalam  penelitian  ini,  dengan  membagi  15  ekor  tikus  ke  dalam  5  kelompok perlakuan  yang  diulang  sebanyak  3  kali,  yaitu  kelompok  5.4  adalah  3  ekor  tikus  yang  diberi sopi 5.4 ml/ekor/hari selama 14 hari (kontrol negatif), kelompok Vit. C 6.3 adalah 3 ekor tikus yang diberi sopi 5.4 ml/ekor/hari kemudian diberi Vitamin C 6.3 mg/ekor/hari selama 14 hari (kontrol  positif),  kelompok  0.71,  1.43  dan  2.86  adalah  3  ekor  tikus  yang  diberi  sopi 5.4ml/ekor/hari selama 14 hari kemudian masing-masing kelompok diberi ekstrak etanol sirih cina 0.71g/ekor/hari selama 14 hari, 1.43g/ekor/hari selama 14 hari dan 2.86g/ekor/hari selama 14  hari.  Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Zoologi  dan  Mikroteknik  Jurusan  Biologi Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas  Pattimura  Ambon  mencakup persiapan  hewan  model,  pemberian  minuman  sopi,  ekstraksi  sirih  cina,  pembuatan  preparat histologis  dan  pengamatan.  Hasil  yang  diperoleh  dianalisis  dengan  Analysis  of  Variance (ANOVA)  dan  dilanjutkan  dengan  uji  duncan  pada  taraf  nyata  =  0.05  menggunakan perangkat  lunak  SAS  dan  dilanjutkan  dengan  uji  beda  nyata  terkecil  untuk  mengetahui perbedaan  perlakuan  yang  diberikan.  Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa pemberian  sopi  5.4 ml dapat menyebabkan penurunan jumlah sel Leydig dan sel Sertoli dan setelah diberi ekstrak etanol  sirih  cina,  jumlah  sel  Leydig  dan  sel  Sertoli  mengalami  peningkatan,  dimana  dosis ekstrak etanol sirih cina yang baik untuk sel Leydig adalah 2.86g dan untuk sel Sertoli adalah dosis 1.43g.
Article History: Dikirim: 01 Mei 2024 Diterima: 30 Mei 2024 Disetujui: 01 Juni 2024 © 2024 Jurusan Biologi FMIPA Universitas Pattimura
Copyright © 2024 Biofaal Journal Homepage: https://ojs3.unpatti.ac.id/index.php/biofaal/index E-mail: biofaaljournal@gmail.com
This  article  is  an  open  access  article  distributed a  Creative  Commons  Attribution-NonCommercial-ShareAlike  4.0 International License
How to cite:
Unitly AJA, Killay A, Moniharapon M, Eddy L, Silahooy VB, Huwae LMC, Moniharapon DD, Lakesubun BF. 2024. Jumlah Sel Leydig Dan  Sel  Sertoli  Tikus  Galur  Sprague-Dawley  Terpapar  Sopi  Pasca  Diterapi  Ekstrak  Etanol  Sirih  Cina  ( Peperomia  pellucida L.).  Biofaal Journal. 5(1): 010-018.

## BIOFAAL Journal Juni 2024   Volume 5 Nomor 1   Halaman 010-018
E-ISSN: 2723-4959
https://doi.org/10.30598/biofaal.v5i1pp010-018

## A. PENDAHULUAN
Tumbuhan  sirih  cina  ( Peperomia  pellucida L.)  tumbuh  di  seluruh  Indonesia  yang bermanfaat  sebagai  tumbuhan  obat  bagi  kesehatan  sering  dianggap  sebagai  tanaman  biasa atau  gulma  bagi  tanaman  lain  (Sitorus et  al .,  2013).  Tanaman  obat  mengandung  senyawa yang  bermanfaat  bagi  kesehatan  tubuh  karena  mengandung  antioksidan  seperti  flavonoid, alkanoid  saponin,  tanin,  dan  triterpenoid  (Sitorus et  al .,  2013).  Antioksidan  memberikan elektronnya  kepada  molekul  radikal  bebas  untuk  mencegah  reaksi  oksidasi.  Ini memungkinkan terjadinya penghentian reaksi berantai yang disebabkan oleh hadirnya radikal bebas  (Kumalaningsih,  2006 dalam Sitorus et  al .,  2013).  Flavonoid  adalah  salah  satu metabolit  sekunder  yang  memiliki  kemampuan  sebagai  antioksidan  karena  sifatnya  sebagai akseptor yang baik terhadap radikal bebas,. Radikal bebas dapat berasal dari elemen di dalam (internal) atau dari luar (eksternal) tubuh manusia (Dewi et al ., 2014).
Mengonsumsi  minuman  beralkohol  adalah  faktor  luar  penyebab  radikal  bebas,  dan jika  dikonsumsi  secara  berlebihan,  akan  meningkatkan  ROS  ( Reactive  Oxygen  Species ) dalam  tubuh.  Ini  mengakibatkan  kurangnya  keseimbangan  antioksidan  endogen  untuk melawan  radikal  bebas  dan  dapat  menyebabkan  peningkatan  stress  oksidatif  dalam mitokondria.  Akumulasi  penggunaan  alkohol  juga  dianggap  sebagai  mekanisme  sensitisasi penyebab peningkatan stress oksidatif sehingga terjadi kerusakan protein, asam nukleat, dan lipid,  yang  dapat  menyebabkan  berbagai  penyakit.  Sopi  adalah  salah  satu  minuman beralkohol  wilayah  timur  yang  penggunaannya  berkaitan  dengan  adat  istiadat  masyarakat timur (Pattiruhu dan Therik, 2020).
Sopi  berasal  dari  kata  "Zoopje"  dari  bahasa  Belanda  yang  berarti  alkohol  cair.  Sopi merupakan hasil fermentasi nira aren yang telah mengalami destilasi/penyulingan. Minuman sopi  mengandung  alkohol  jenis  etanol.  Sopi  yang  dibuat  dari  nira  aren  melalui  proses penyulingan menggunakan bambu dan dimasak menggunakan tungku yang terbuat dari kayu (Wattimena,  2013).  Penyalahgunaan  sopi,  biasanya  dilakukan  di  luar  acara  adat  dan menyebabkan  berbagai  masalah  kesehatan,  peningkatan  tekanan  darah  (hipertensi), kerusakan  jantung,  kerusakan  hati,  stroke,  gangguan  pencernaan,  kesulitan  tidur,  kerusakan otak  dengan  perubahan  kepribadian  dan  suasana  hati,  gangguan  ingatan  dan  gangguan konsentrasi,  impotensi  dan  kurangnya  kesuburan.  Selain  itu,  masalah  kesehatan  yang ditimbulkan  oleh  konsumsi  sopi  secara  berlebihan  dalam  jangka  panjang  adalah  kurangnya kesuburan yang ditandai dengan turunnya konsentrasi dan motilitas spermatozoa (Wattimena et al ., 2023).
Minuman beralkohol dapat  menganggu fungsi organ reproduksi  jantan berupa testis, dimana  dapat  mempengaruhi  sel  leydig  dan  sel  sertoli  yang  mempunyai  fungsi  dalam menghasilkan hormon testosteron serta pematangan sperma.  Alkohol yang masuk ke tubuh menyebabkan  ROS,  mengganggu  sekresi  hormon Gonadotrophine  Releasing  Hormone (GnRH) akibatnya  hormon Luteinizing  Hormone (LH)  tidak  maksimal  dalam  menstimulus sel leydig untuk menghasilkan hormon testosteron dan Follicle Stimulating Hormone (FSH) yang mempengaruhi sel  sertoli  dalam  pematangan  sperma  (Melmambessy et  al .,  2015). Konsumsi  sopi  yang  berlebihan  diduga  mengakibatkan  turunnya  fungsi  reproduksi  seperti turunnya jumlah sel leydig dan sel sertoli, yang dapat menyebabkan infertilitas. Oleh karena itu,  perlu  dilakukan  penelitian  untuk  melihat  jumlah  sel  Leydig  dan  sel  Sertoli  tikus  galur
Sprague-Dawley terpapar sopi pasca diterapi ekstrak etanol sirih cina ( Peperomia pellucida. L).

## B. METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Zoologi  dan  Mikroteknik  Jurusan  Biologi Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas  Pattimura  Ambon. Penelitian  ini  menggunakan  rancangan  acak  lengkap  (RAL),  yang  mencakup  lima perlakuan  dan  tiga  kali  ulangan.  Dalam  penelitian  ini,  tikus  diberi  dosis  sirup  sirih  cina yang berbeda, yaitu:
Sopi 5.4   :   3  ekor  tikus  yang  diberi  sopi  5.4  ml/ekor/hari  selama  14  hari  (kelompok kontrol negatif).
Vit. C 6.3 :   3 ekor tikus yang diberi sopi 5.4 ml/ekor/hari kemudian diberi Vitamin C 6.3
mg/ekor/hari selama 14 hari (kelompok kontrol positif).
0.71 :   3 ekor tikus yang diberi sopi 5.4ml/ekor/hari selama 14 hari kemudian diberi ekstrak etanol sirih cina 0.71g/ekor/hari selama 14 hari.
1.43 :   3 ekor tikus yang diberi sopi 5.4ml/ekor/hari selama 14 hari kemudian diberi ekstrak etanol sirih cina 1.43g/ekor/hari selama 14 hari.
2.86 :   3 ekor tikus yang diberi sopi 5.4ml/ekor/hari selama 14 hari kemudian diberi ekstrak etanol sirih cina 2.86g/ekor/hari selama 14 hari.

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini termasuk timbangan digital, tabung reaksi, cawan  petri,  gelas,  gelas  ukur,  kaca  preparat,  kandang  plastik,  kawat  besi,  blender,  alat pencekok,  pipet,  gunting  bedah,  kertas  saring,  kertas  label,  alat  pencekok,  oven,  dan mikroskop.  Dalam  penelitian  ini,  digunakan  bahan-bahan  berikut:  tumbuhan  sirih  cina ( Peperomia  pellucida L.),  tikus  Rattus  norvegicus,  vitamin  C,  aquades,  etanol  70%,  pakan standar (AD II), alkohol 70%, alkohol 80%, alkohol 90%, alkohol 96 %, xylol, hematoxylin, eosin, dan larutan NBF ( neutral buffer formalin ) 10%.

## Persiapan Hewan Model
Penelitian  ini,  menggunakan  15  ekor  tikus  jantan Rattus  norvegicus galur  Sprague- Dawley dengan  berat  badan  kurang  lebih  200  gram  per  ekor.  Tikus  ditimbang,  kemudian diaklimatisasi selama tujuh hari dalam kandang plastik yang ditutupi dengan kawat besi dan beralaskan  sekam.  Sebelum  diberikan  perlakuan,  tikus  ditimbang  beratnya,  diawasi kesehatannya, dan diberikan pakan dan air minum secara teratur.

## Pemberian Minuman Sopi
Pemberian  minuman  sopi  5,4ml/200g  BB  (Sanaky,  2016),  dilakukan  dengan  cara pencekokkan menggunakan sonde (alat cekok). Pencekokkan sopi pada tikus dilakukan pagi dan sore hari dengan membagi menjadi 2,7ml setiap kali pencekokkan selama 14 hari.

## Ekstraksi Sirih Cina
Sirih  Cina  sebanyak  1  kg  diambil,  dikering  anginkan,  dan  kemudian  dihaluskan menggunakan  blender.  Setelah  menjadi  serbuk,  dilakukan  ekstraksi  dengan  menggunakan teknik maserasi dengan bantuan etanol. Proses pembuatan digambarkan sebagai berikut:
1. Timbang serbuk sirih cina 250 gr kemudian dimasukkan ke dalam erlenmeyer.
2. Ekstrak tumbuhan sirih cina dicampur dengan etanol selama dua puluh empat jam, dan kemudian disaring menggunakan kertas saring wartman 0.2 untuk menghasilkan ekstrak cair sirih cina. Residu yang diekstrak diulang tiga kali.
3. Ekstrak cair sirih cina dipekatkan dengan alat rotary evaporator untuk menghasilkan ekstrak etanol sirih cina yang pekat.
4. 10 gr ekstrak etanol sirih cina dihasilkan sebagai produk akhir dari proses pemekatan.
5. Setelah pemberian sopi, dosis ekstrak sirih cina diberikan selama empat belas hari.

## Pembuatan Preparat Histologis
Proses  pembuatan  preparat  histologi  meliputi  fiksasi,  dehidrasi,  penjernihan ( clearing ),  infiltrasi  paraffin  ( embedding ),  pengeblokkan  ( blocking ),  pemotongan ( sectioning ),  pewarnaan  ( staining ),  dan  perekatan  pada  gelas  objek  ( mounting ).  Menurut Marfu'ah et  al .,  (2014),  tahapan  pembuatan  preparat  histologis  dengan  pewarnaan Hematoksilin-Eosin (HE) adalah sebagai berikut:
1. Tikus  dinekropsi  dengan  cara  dislokasi  cervical,  kemudian  dibedah  untuk  mengambil organ testis.
2. Selanjutnya,  organ  testis  dicuci  dengan  natrium  klorida  dan  difiksasi  dengan  larutan buffer formalin neutral 10%.
3. Kemudian  dilakukan  dehidrasi,  organ  testis  dimasukkan  ke  dalam  alkohol  bertingkat (70%, 80%, 90%, dan 96%).
4. Penjernihan ( clearing ) dan pembersihan ( dealkoholisasi ) yaitu perendaman sampel organ testis ke dalam larutan xylol I, xylol II, dan xylol III sampai jernih.
5. Selanjutnya  Infiltrasi  ke  dalam  parafin  dilakukan  dengan alat  vacuum  infiltration processor pada suhu 60˚C.
6. Setelah itu ,  Embedding yaitu  proses  penanaman  jaringan  dari  parafin  murni  yang ditanamkan ke dalam parafin cair dilakukan sebanyak 2 kali.
7. Pengeblokkan ( Blocking ) dengan paraffin kemudian disimpan dalam refrigator
8. Pemotongan ( Sectioning )  dilakukan  dengan  mikrotom  menggunakan  3µ  dan  5µ  tebal irisan.  Hasil  sayatan  kemudian  diletakkan  di  atas  gelas  objek  dan  ditempatkan  pada pemanas yang bersuhu 60 0 C.
9. Deparafinasi ,  dilakukan  untuk  menghilangkan  parafin,  dimana  sediaan  histologis dimasukkan ke dalam xylol I dan II selama sepuluh menit.
10. Pewarnaan ( Staining )  dilakukan  menggunakan  pewarna  HE  (Hematoxylin  Eosin). Dilakukan  perendaman  gelas  objek  ke  dalam  xylol  sebanyak  3  kali  dan  eosin  2  kali masing-masing  selama  5  menit,  aquades  1  menit,  Hematoxylin  15  menit,  aquades  1 menit, alkohol + acid 4-5 celupan, aquades 15 menit, Eosin 1% selama 2 menit, alkohol 96% 3 kali masing-masing 3 menit, etanol 2 kali masing-masing 5 menit, dan xylol 2 kali masing-masing  5  menit.  Kemudian  sediaan  histologis  ditetesi  cairan  etelan  berupa
canada  balsam ,  lalu  ditutupi  dengan  penutup  cover,  sehingga  dapat  diamati  dibawah mikroskop.
11. Penutupan ( Mounting )  dan  pemberian  label  ( labeling )  adalah  proses  menutup  preparat dengan  menggunakan  kaca  penutup  dan  memberi  label  yang  menunjukkan  identitas preparat, kemudian disimpan dalam kotak sediaan.

## Analisis Data
Peningkatan  jumlah  sel  leydig  dan  sel  sertoli  adalah  bagian  dari  analisis  data kuantitatif. Hasil kuantitatifnya dianalisis menggunakan ANOVA ( Analysis of variance ) dan uji Duncan (taraf nyata α = 0.05) menggunakan software SAS .

## C. HASIL DAN PEMBAHASAN
Analisis statistik menunjukkan bahwa ekstrak etanol sirih cina mampu meningkatkan jumlah sel Leydig tikus terpapar sopi (Tabel 1).
Tabel  1.  Rataan  sel  Leydig  tikus  jantan  terpapar  sopi  pasca  diterapi  ektrak  etanol  sirih cina.
Parameter Kelompok Perlakuan Sopi 5.4 ml Vitamin C 6.3 mg Ekstrak Etanol Sirih Cina 0.71g 1.43g 2.86g Sel Leydig 40.67 ± 21.8 b 57.67 ± 9.0 ab 62.33 ± 17.2 ab 67.00 ± 17.2 ab 80.33 ± 13.3 a
Keterangan: Huruf superscrip yang berbeda dalam baris yang sama menunjukan perbedaan nyata (P<0.05)
Hasil  uji  duncan  pada  taraf  signifikan  0.05  menunjukkan  perlakuan  ekstrak  etanol sirih  cina  dosis  2.8g  pada  tikus  tidak  berbeda  nyata  dengan  dosis  ektrak  etanol  sirih  cina 0.71g,  dosis  ektrak  etanol  sirih  cina1.43g  dan  perlakuan  pemberian  vitamin  C  (P>0.05), namun  berbeda  nyata  dengan  perlakuan  pemberian  sopi  5.4ml  (P<0.05).  Ini  dapat  terjadi memperlihatkan bahwa dosis ektrak etanol sirih cina dosis 2.8g mampu meningkatkan jumlah sel Leydig sejalan dengan peningkatan dosis dan lebih baik dibandingkan pemberian Vitamin C.
Pasca  pemberian  sopi,  jumlah  sel  Leydig  tikus  mengalami  penurunan.  Ini  terjadi  di duga akibat gangguan pada organ reproduksi testis karena adanya asetaldehid metabolit yaitu senyawa alkohol pada minuman sopi dapat menstimulan enzim sitokrom P450s menyebabkan produksi Reactive  Oxygen  Species (ROS)  yang  berlebihan  sehingga  dapat  mengganggu pembentukan  dan  pengeluaran  GnRH  hipotalamus  mengakibatkan  gagalnya  hipofisis  dalam mensintesis dan mensekresi FSH dan LH. terganggunya pembentukan LH, berakibat pada sel Leydig yang juga mengalami gangguan ditandai dengan rusaknya sel Leydig dan mengalami necrosis  (kematian  sel)  sehingga  terjadi  penurunan  jumlah  sel  Leydig  dalam  tubulus seminiferous  testis.  Penurunan  sel  Leydig  mengakibatkan  turunnya  hormon  testosteron, karena  sel  Leydig  bertugas  memproduksi  hormon  testosteron.  Menurut  Wattimena et  al ., (2023),  alkohol  dapat  mengganggu  sistem  reproduksi  tikus  jantan  yang  dimulai  dari hipotalamus,  hipofisis  anterior  dan  testis.  Sel  Leydig  pada  tubulus  seminiferous  testis  yang terpapar  sopi  mengalami  necrosis  (kematian  sel)  sehingga  kehilangan  fungsi  dalam memproduksi  hormon  testosteron  (Unitly,  2019),  padahal  testosteron  sangat  diperlukan dalam  fertilitas  reproduksi.  Hal  ini  terjadi  dikarenakan  sopi  yang  mengandung  alkohol
(asetaldehid)  berperan  membentuk  ROS,  yang  merupakan  Stres  oksidatif  menyebabkan ketidakseimbangan  antara  ROS  yang  tinggi  dibandingkan  antioksidan  endogen  yang  lebih rendah (Wuisan, et al ., 2016).
Kandungan  antioksidan  sirih  cina  seperti  vitamin  C  dan  flavonoid  (Unitly et  al ., 2022),  merupakan  antioksidan  alami  yang  mampu  menekan  stres  oksidatif  secara  langsung melalui  beberapa  jalur,  seperti  mengatur  pembentukan  radikal  bebas,  menghentikan  reaksi berantai dengan menghilangkan radikal bebas atau menghambat reaksi oksidasi, dan dengan mengganggu  kaskade  reaksi  berantai  radikal  bebas.  Hal  ini  menyebabkan  pengurangan necrosis (kematian sel) sel Leydig. Sel Leydig yang masih hidup terlindungi dan mengalami pembelahan  sel  menyebabkan  peningkatan  jumlah  sel  Leydig  (Unitly,  2019).  Antioksidan sirih cina juga diduga dapat menghambat radikal bebas atau ROS dari minuman Sopi. Hal ini senada  dengan  Novia et  al .,  (2018) dalam Wattimena et  al .,  (2023),  yang  menyatakan senyawa  antioksidan  flavonoid  mampu  menghambatan  aktivitas  ROS.  Penghambatan  ROS menyebabkan  proses  sekresi Gonadotropin-releasing  Hormone (GnRH)  kembali  membaik. Pengeluaran GnRH dari hipotalamus menyebabkan mulainya pelepasan LH dari hipofisis dan hasilnya  merangsang  sel  Leydig  dalam  memproduksi  hormon  testosteron  (Isdadiyanto  dan Tana, 2020). Kerja LH yang membaik dapat meningkatkan jumlah sel Leydig.
Selain  flaovonoid  dan  vitamin  C,  kandungan  fitokimia  sirih  cina  yang  lain  adalah tannin,  saponin,  alkaloid,  dan  triterpenoid  (Karomah,  2019).  Fitokimia  ini  merupakan senyawa  yang  berfungsi  sebagai  anti  radikal  bebas,  memperbaiki  sel  dan  melindungi  DNA dari radikal bebas sehingga sel Leydig berada dalam kondisi baik. Kandungan saponin yang terdapat  dalam  sirih  cina  meningkatkan  produksi  LH  dan  FSH  yang  bekerja  sama  untuk menjaga  kualitas  dan  fungsi  testis  selama  masa  reproduksi  (Andini,  2014),  sehingga  sel Leydig  di  dalam  testis  dapat  diproduksi  dengan  baik  menyebabkan  peningkatan  jumlah  sel Leydig.
Analisis statistik jumlah sel sertoli menunjukkan bahwa pemberian ektrak etanol sirih cina mampu meningkatkan jumlah sel sertoli tikus terpapar sopi (Tabel 2).
Tabel 2. Rataan sel sertoli tikus jantan terpapar sopi pasca diterapi ektrak etanol sirih cina
Parameter Kelompok Perlakuan Sopi 5.4 ml Vitamin C 6.3 mg Ekstrak Etanol Sirih Cina 0.71g 1.43g 2.86g Sel Sertoli 21.67 ± 4.6 c 26.00 ± 6.1 c 27.33 ± 5.5 bc 34.67 ± 2.5 ab 39.67 ± 1.1 a
Keterangan: Huruf superscrip yang berbeda dalam baris yang sama menunjukan perbedaan nyata (P<0.05)
Hasil  uji  duncan  pada  taraf  signifikan  0.05  memperlihatkan  tidak  berbeda  nyatanya dosis sirih cina dosis 2.86g dengan dosis 1.43g (P>0.05), namun berbeda nyata dengan dosis sirih  cina  0.71g,  perlakuan  pemberian  vitamin  C  dan  perlakuan  pemberian  sopi  5.4ml (P<0.05).  Selain  itu,  terkonfirmasi  secara  statistik  bahwa  tidak  adanya  perbedaan  antara perlakuan pemberian vitamin C dan yang diberi sopi 5.4ml (P>0.05). Sementara dosis ekstrak etanol  sirih  cina  1.43g  dan  2.86g  dapat  meningkatkan  jumlah  sel  sertoli  bersamaan  dengan peningkatan  dosis  ekstrak  etanol  sirih  cina  dibandingkan  perlakuan  pemberian  sopi  5.4ml (P<0.05).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  dosis  ekstrak  etanol  sirih  cina  1.43g  mampu meningkatkan sel sertoli dibandingkan vitamin C.
Terpaparnya sopi pada tubuh mengakibatkan penurunan jumlah sel Sertoli. Ini terjadi karena  peningkatan  produksi  radikal  bebas  atau  ROS  yang  menyebabkan  reaksi  peroksidasi lipid yang tinggi pada tingkat jaringan sel gonad (testis), menyebabkan kerusakan membran sel epitel germinal tubulus seminiferus dan degenerasi sel testis. Radikal bebas eksogen dari sopi  diduga  dapat  meningkatkan  produksi  senyawa  oksigen  reaktif  dalam  tubuh  yang merupakan mediator yang berperanan dalam terjadinya kerusakan oksidatif pada sel termasuk sel  Sertoli.  Menurut  Mathur et  al .,  (2011),  keberadaan  ROS  menginduksi  permeabilitas membran  luar  mitokondria  dan  memicu  peroksidase  cardiolipindi  membrane  dalam mitokondria  sehingga  mengakibatkan  aktivasi  apoptosis  caspase  cascade  yang  berakhir dengan  apoptosis  (kematian  sel)  sel  Sertoli.  Proses  intervensi  radikal  dapat  menghambat sintesis  dan  sekresi  Gonadotropin-releasing  Hormone  (GnRH),  sehingga  terhambat  juga sekresi  FSH  dan  LH  yang  berperan  dalam  proliferasi  sel  Sertoli  (Johnston et  al .,  2004; Walker dan Cheng, 2005).
Sirih  cina  mengandung  antioksidan  flavonoid  sangat  membantu  dalam  proses recovery akibat radikal bebas.  Mekanisme kerja antioksidan eksogen ini yaitu menekan dan menghentikan reaksi radikal bebas atau ROS dari minuman sopi. Proses menekan melibatkan penghentian  pembentukan  radikal  bebas  melalui  penghambatan  enzim,  pengkelatan  ion logam ( metal ion chelating ), yang bertanggung jawab dalam pembentukan radikal bebas dan meredam radikal bebas. Sementara radikal scavengers dapat mencegah peroksidasi lipid pada tahap  awal, peroxy-radical  scavengers dapat  mencegah  reaksi  propagasi  (Widowati,  2005 dalam Berlina et  al .,  2019).  Sementara  proses  penghentian,  yang  melibatkan  penghentian rangkaian reaksi peroksidasi lipid asam lemak tidak jenuh pada fosfolipid membran sel testis, membantu mencegah akumulasi radikal bebas pada jaringan yang memproduksi spermatozoa dan  melindungi  fungsi  spermatozoa,  termasuk  sel  sertoli,  yang  mengakibatkan  peningkatan jumlah sel sertoli.
Saponin  pada  sirih  cina  berperan  juga  sebagai  antioksidan  alami  yang  dapat meningkatkan FSH yang dilepaskan oleh hipofisis. Antioksidan memiliki kemampuan untuk menetralisir  atau  menghancurkan  radikal  bebas  dengan  cara  berinteraksi  langsung  dengan radikal  bebas  atau  oksidan,  mencegah  pembentukan  jenis  oksigen  reaktif  baru,  mengubah oksigen reaktif menjadi kurang toksik, dan memperbaiki kerusakan yang terjadi pada sel dan jaringan  (Sizer  dan  Whitney,  2000 dalam Unitly,  2013).  Hal  ini  menyebabkan  peningkatan sekresi  FSH  dari  kelenjar  hipofisis  anterior.  Pengaturan  gonad  berfungsi  dan  merangsang produksi  steroid  seks  terjadi  melalui  ikatan  antara  FSH  dengan  FSH- Receptor untuk proliferasi  dan  perkembangan  sel  Sertoli  pada  tubulus  seminferus  testis,  menyebabkan peningkatan jumlah sel Sertoli.
Selain Flavonoid dan saponin,  sirih  cina juga mengandung triterpenoid. Triterpenoid ini memiliki kemampuan untuk memperbaiki aktivitas membran pituitari, yang menghasilkan peningkatan  sensitifitas  pituitari  terhadap  GnRH  yang  diproduksi  oleh  hipotalamus. Peningkatan sensitifitas ini berbanding  lurus dengan peningkatan jumlah  FSH dan LH yang dikeluarkan  oleh  pituitary  dan  selanjutnya  meningkatkan  proliferasi  sel  Sertoli  (Fadhilah et al ., 2022).

## D. KESIMPULAN
Pemberian  sopi  5.4  ml  dapat  menyebabkan  penurunan  jumlah  sel  Leydig  dan  sel Sertoli  dan  setelah  diberi  ekstrak  etanol  sirih  cina,  jumlah  sel  Leydig  dan  sel  Sertoli mengalami  peningkatan,  dimana  dosis  ekstrak  etanol  sirih  cina  yang  baik  untuk  sel  Leydig adalah 2.86 gr dan untuk sel Sertoli adalah dosis 1.43 gr.

## E. DAFTAR PUSTAKA
Andini  D.  A.  2014.  Potential  of  Katuk  Leaf  ( Sauropus  androgynus L.  Merr)  as  aphrodisiac. Jurnal  Majority . 3(7): 17- 21.
Berlina  C.  R.,  Eliyani  H.,  Samik  A.,  Widjiati,  Mulyati  S.,  Anwar  Ch.  2019.  Pengaruh  Pemberian  Ekstrak Rumput  Kebar  ( Biophytum  petersianum Klotzsch)  Terhadap  Jumlah  Sel  Sertoli  Mencit  ( Mus musculus )  Yang  Dipapar  2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-P-Dioxin. Journal  of  Basic  Medicine Veterinary . 8(1): 45-52
Dewi  Ni.  W.  O.  A.  C.,  Puspawati  Ni.  M.,  Swantara  I.  M.  D.,  Asih  I.  A.  R.  A.,  Rita  W.  S.  2014.  Aktivitas Antioksidan  Senyawa  Flavonoid  Ekstrak  Etanol  Biji  Terong  Belanda  ( Solanum betaceum ,  syn) Dalam  Menghambat  Reaksi  Peroksidasi  Lemak  Pada  Plasma  Darah  Tikus  Wistar. Cakra  Kimia ( Indonesian E-Journal of Applied Chemistry ) . 2(1): 7-16.
Fadhilah A. F., Arjadi F., Gumilas D. S. A. 2022. Perbedaan Jumlah Sel Sertoli Pasca Pemberian Ekstrak Etanol Akar Purwoceng ( Pimpinella alpina ). Gunung Djati Conference Series; Prosiding Seminar Nasional Kimia . Vol 15: 75-81 Idadiyanto  S.,  Tana  S.  2020.  Jumlah  Sel  Leydig  dan  Mikroanatomi  Testis  Tikus  Putih  ( Rattus  norvegicus ) Setelah  Pemberian  Teh  Kombucha  Konsentrasi  50%  Waktu  Fermentasi  6,  9  dan  12  Hari. Buletin Anatomi dan Fisiologi . 5(1): 67-74
Johnston H., Baker P. J., Abel M., Charlton H. M., Jackson G., Fleming L., Kumar T. R., O'shaughnessy P. J. 2004.  Regulation  of  Sertoli  Cell  Number  and  Activity  by  Follicle-Stimulating  Hormone  and Androgen During Postnatal Development in the Mouse. Endocrinology . 145(1): 318-329 Karomah,  S. 2019.  Uji  Ekstrak  Tumbuhan  Sirih  Cina  ( Peperomia  pellucida L.)  Sebagai  Antibakteri  Terhadap Bakteri Staphylococcus  aureus dan Staphylococcus  epidermidis [Tesis].  Universitas  Medan  Area. Medan Area University Repository.
Mathur P.  P., Huang L., Kashou A., Vaithinathan S., Agarwal A. 2011. Enviromental Toxicants  and Testicular Apoptosis. The Open Reproductive Science Journal . Vol. 3: 114-124
Melmambessy  E.  E.,  Tendean  L.,  Rumbajan  J.  M.  2015.  Pengaruh  Pemberian  Cap  Tikus  Terhadap  Kualitas Spermatozoa Wistar Jantan ( Rattus norvegicus ), Jurnal E-Biomedik ( eBm ). 3(1): 322-327. Pattiruhu  G.  M.,  Therik  W.  M.  A.  2020.  Sopi  Maluku  Diantara  Cultural  Capital  Dan  Market  Sphere. Jurnal Ilmiah Ilmu Sosial . 6(2): 104-118
Sanaky M. 2016. Pengaruh Pemberian Minuman Sopi Beralkohol Pada Jumlah Sel Sertoli Tubulus Seminiferus Tikus  Putih  ( Rattus  norvegicus )  Jantan.  [Tesis]  Program  Studi  Ilmu  Kedokteran  Dasar  Jenjang Magister Fakultas Kedokteran. Universitas Airlangga.
Sitorus E., Momuat L. I., Katja D. G. 2013. Aktivitas antioksidan tumbuhan suruhan ( Peperomia pellucida [L]. Kunth). Junal Ilmiah Sains . 13(2): 80-85 Unitly  A.  J.  A.  2013.  Potensi  Ekstrak  Rumput  Kebar  ( Biophytum  petersianum Klotzsch)  Pada  Fungsi Reproduksi  Tikus  Jantan  Yang  Terpapar  Asap  Rokok.  [Disertasi].  Bogor:  Sekolah  Pascasarjana Institut Pertanian Bogor.
Unitly A. J. A. 2019. The Study Of Administration Extract Kebar Grass On Number Leydig Cells And Sertoli Cells  In  Rat  ( Rattus  norvegicus )  That  Exposed  With  Cigarette  Smoke. Rumphius  Pattimura Biological Journal . 1 (1): 8-11 Unitly  A.  J.  A.,  Killay  A.,  Huwae  D.Y.  2022.  Potensi  Ekstrak  Etanol  Sirih  Cina  ( Peperomia  pellucida L.) Terhadap  Peningkatan  Air  Susu  Tikus  ( Rattus  norvegicus )  Terpapar  Asap  Rokok. Jurnal  Biologi Edukasi Edisi 29. 14(2): 73-78 Walker W. H., Cheng J. 2005. FSH and Testosterone Signaling in Sertoli Cells. Reproductive . 130(1): 15-28 Wattimena L. E. 2013. Penggunaan Minuman Sopi Dan Persepsi Masyarakat Tentang Sopi Terhadap Kesehatan Di Desa Layeni Kecamatan Teon Nila Serua, Kabupaten Maluku Tengah. https://repository.uksw.edu/handle/123456789/3843.[3 Maret 2024]
Wattimena M., Kakisina P., Unitly A. J. A. 2023. Efek Terapi Ekstrak Etanol Sirih Cina ( Peperomia pellucida L.) terhadap Peningkatan Konsentrasi dan Motilitas Spermatozoa Tikus ( Rattus norvegicus ) Terpapar Sopi. Jurnal Biologi Edukasi Edisi 30. 15(1): 10-17 Wuisan M., Tendean L., Rumbajan J. M. 2016. Pengaruh ekstrak kulit buah manggis ( Garcinia mangostana L.) terhadap kualitas  spermatozoa  tikus  wistar  ( Rattus norvegicus )  yang  dipapari  asap  rokok. Jurnal E - Biomedik . 4(1).

## BIOFAAL JOURNAL
E-ISSN 2723-4959 Volume 5 Number 1 | Juni 2024

## EDITOR IN CHIEF
Laury Marcia Ch. Huwae, S.Si., M.Si

## Associate Editor
Dr. Windi Mose, S.Pd D. E. Sahertian, S.Si., M.Si E. Samson, S.Si., M.Si Veince B. Silahooy, S.Si., M.Si

## Expert Editor Board
Prof. Dr. Pieter Kakisina, S.Pd., M.Si (Universitas Pattimura, Ambon)
Dr. dr. Ermita I. Ibrahim Ilyas, M.S., AIFO (Universitas Indonesia, Jakarta) Sri Sumartiningsih, S.Si., M.Kes., Ph.D., AIFO (Universitas Negeri Semarang, Semarang) Dr. Ir. Alfred O. M. Dima, M.Si (Universitas Nusa Cendana, Kupang) Dr. Safrida, S.Pd., M.Si (Universitas Syiah Kuala, Aceh) Dr. dr. Yetty Machrina, M.Kes, AIFO-K (Universitas Sumatera Utara, Medan) Dr. Saidah Rauf, S.Kep., M.Sc (Politeknik Kesehatan Kemenkes Maluku, Masohi) Dr. Jusak Syaranamual, M.Pd., AIFO (Universitas Pattimura, Ambon) Dr. Theopilus W. Watuguly, M.Kes., AIFO (Universitas Pattimura, Ambon)
Dr. Maria Nindatu, M.Kes (Universitas Pattimura, Ambon) Dr. Martha Kaihena, M.Kes (Universitas Pattimura, Ambon)
Dr. La Eddy, S.Pd., M.Si (Universitas Pattimura, Ambon)
Dr. Drs. Amos Killay, M.Kes (Universitas Pattimura, Ambon)
Dr. Ch. D. Umi Baszary, S.Si., M.Si (Universitas Pattimura, Ambon) Dr. Meilissa C. Mainassy, S.Si., M.Si (Universitas Pattimura, Ambon)

## Asistant Editorial
Dr. Adrien Jems Akiles Unitly, S.Si., M.Si E. T. Apituley, S.Si., M.Si

## Publisher
Jurusan Biologi FMIPA Universitas Pattimura, bekerja sama dengan Ikatan Ahli Ilmu Faal Indonesia (IAIFI)

## Editorial Address
Jurusan Biologi - Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Pattimura
Jl. Ir. M. Putuhena, Kampus Poka, Ambon, 97234, Maluku, Indonesia E- mail : biofaaljournal@gmail.com