## ANALISIS KADAR RESIDU ANTIBIOTIK DALAM DAGING AYAM POTONG YANG BEREDAR DI KOTA MATARAM

## QUANTITATIVE ANALYSIS OF ANTIBIOTIC RESIDUE IN CHICKEN FROM MATARAM
Sahri Yanti 1 , Surya Hadi 2 , Lely Kurniawati 2
1 Program Studi Teknologi Hasil Pertanian Fakultas Teknologi Pertanian, UTS, NTB
2 Program Studi Kimia Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Mataram, NTB. sahri.farwana@gmail.com/sahriyanti@uts-sumbawa.ac.id

## ABSTRAK
Analisis  kuantitatif  residu  antibiotik  dalam  daging  ayam  potong  yang  beredar  di  Kota Mataram  telah  dilakukan  dari  bulan  September  hingga  Oktober  2011.  Pengambilan  sampel dilakukan secara acak di tiga lokasi Pasar, Supermarket HERO, KFC dan Kentuku. Analisis kimia yang dilakukan melibatkan proses ekstraksi, sentrifugasi dan pengukuran dengan HPLC. Pada proses  ekstraksi,  pelarut  yang  digunakan  yaitu  Mcilvaine  EDTA  yang  mampu  memisahkan antibiotik  dalam  daging.  Analisis  kualitatif  dengan  HPLC  mengindikasikan  keberadaan  residu antibiotik Oksitetrasiklin dalam sampel daging ayam potong dari Kota Mataram. Kadar residu antibiotik  Oksitetrasilin  yang  telah  ditemukan  lebih  kecil  dari  batas  maksimum  1  ppm  yang ditetapkan  FAO.  Kadar  residu  antibiotik  Oksitetrasiklin  dalam  sampel  masing-masing  lokasi yaitu Seganteng 0,353 ppm, Bertais 0,259 ppm, Sesela 0,190 ppm, Sweta 0,172 ppm, Hero 0,157 ppm, KFC 0,113 ppm dan Kentuku 0,092 ppm.
Kata kunci: Residu Antibiotik, Mcilvaine EDTA, Oksitetrasiklin, HPLC.

## 1. PENDAHULUAN
Daging  ayam  potong  bukanlah  istilah yang  asing  dan  populernya  daging  tersebut disebabkan  oleh  daya  beli  masyarakat  yang rendah sehingga menjadikannya sebagai alternatif  pengganti  daging  lainnya,  seperti daging  sapi  dan  daging  kambing.  Kebutuhan masyarakat  terhadap  daging  ayam  potong terlihat  dari  besarnya  populasi  ternak  ayam potong  di  Kota  Mataram  (Dinas  Peternakan NTB, 2011). Populasi ternak ayam yang tinggi perlu  diwaspadai  karena  pemeliharaannya diiringi  oleh  penggunaan  antibiotik  yang intensif.  Menurut  Levy  (1992),  antibiotik ternak  pedaging  yaitu  Tetrasiklin,  Penicillin, Neomicin,  Streptomicin  dan  derifat  Sulfur, namun  yang  sering  digunakan  oleh  industri peternakan  ayam  yakni  yang  memiliki spektrum  luas,  seperti  Tetrasiklin  (Lawrie, 1985) .
Anief  (1990)  menyebutkan  bahwa antibiotik  merupakan  obat  yang  mampu menghambat  atau  membunuh  bakteri,  namun antibakteri merupakan obat pembunuh bakteri. Toksisitas  antibiotik  bersifat  selektif,  artinya jika  difungsikan  untuk  ayam,  maka  antibiotik tersebut  aman  bagi  ayam,  namun  bersifat
racun  bagi  mikroorganisme  patogen  dalam tubuh  ayam  (Komara,  2010).  Antibiotik  dapat menghambat sintesis materi yang penting dari sel  bakteri  dalam  tubuh  manusia  (Anief, 1990).  Selama  absorbsi,  distribusi  dan ekskresi, antibiotik juga mengalami biotransfomasi.  Murtidjo  (2003)  menyebutkan bahwa  biotranformasi  dapat  merubah  struktur kimia  obat  menjadi  lebih  mudah  larut  dalam air.  Tempat  terpenting  biotransformasi  adalah hati,  namun  terjadi  juga  di  paru-paru, lambung,  usus,  kulit  dan  ginjal.  Hati  merupa- kan  mesin  metabolik  dan  dapat  menginak- tifkan obat yang melintasi saluran gastrointes- tinal menuju seluruh tubuh (Stringer, 2009). Hasil  penelitian  pada  tahun  1998 menemukan  residu  beberapa  jenis  antibiotik dalam  daging  ayam  broiler  di  wilayah  Kota Mataram  (Sriasih,  1998).  Menurut  Levy (1992)  pemakaian  antibiotik  dalam  jumlah besar  akan  menimbulkan  masalah  bagi manusia diantaranya terjadi seleksi dari bakteri yang  resisten  terhadap  antibiotik,  akhirnya menyebabkan  kerusakan  pada  jaringan  tubuh. Salah  satu  dampak  residu  antibiotik  adalah alergi  terhadap  daging  ayam.  Hal  ini merupakan  reaksi  hipersensitivitas  terhadap
komponen  yang  tidak  diketahui  dalam  tubuh pasien (Mansur, 2001).
Berdasarkan  data  kunjungan  tim puskesmas  di  Kota  Mataram  tahun  2008, alergi menempati urutan ke-6 sebanyak 25.154 pasien  (Depkes  RI,  2008).  Mursyidi  (2004) menambahkan  bahwa  kompleksitas  penyakit yang menyerang menuntut penggunaan antibiotik  secara  tepat.  Pelarangan  tersebut telah lama diterapkan di Eropa pada antibiotik untuk  hewan  ternak  yang  mengakibatkan resistensi  kuman  dalam  tubuh  manusia (Yamin,  2008).  Mengingat  bahaya  residu antibiotik  dalam  daging  ayam  potong  yang dikonsumsi  oleh  masyarakat,  maka  telah dilakukan  analisis  kadar  residu  antibiotik dalam  daging  ayam  potong  yang  beredar  di Kota Mataram.
Adapun rumusan masalah yang telah dikaji yakni: (a) jenis antibiotik apa saja yang umum  digunakan  oleh  peternak  ayam  potong di  Kota  Mataram?  (b)  berapa kadar  residu antibiotik  yang  terdapat  dalam  daging  ayam potong  yang  beredar  di  Kota  Mataram berdasarkan hasil analisa HPLC? (c) bagaimanakah perbandingan batas mak-simum penggunaan  antibiotik  dengan  kadar  residu antibiotik  dalam  sampel  daging  ayam  potong dari Kota Mataram?.
Penelitian  diharapkan  dapat  menge- tahui  jenis  antibiotik  yang  umum  digunakan dan  kadar  residunya  dalam  sampel  daging ayam  potong  yang  beredar  di  Kota  Mataram. Hal  tersebut  merupakan  upaya  pengendalian dampak  negatif  residu  antibiotik  terhadap kesehatan  masyarakat  di  Kota  Mataram. Manfaat  lainnya  yaitu  sebagai  informasi  bagi pemerintah  Kota  Mataram  terhadap  ancaman kesehatan  masyarakat  dan  diharapkan  adanya penyuluhan kepada para peternak ayam potong mengenai  cara  pemberian  antibiotik  yang benar,  serta  memberi  pengawasan  yang  ketat terhadap penggunaan antibiotik hewan.

## 2. METODE PENELITIAN
2.1 Alat
Adapun  alat  -  alat  yang  digunakan yaitu: Kolom  C 18 RSIL,  HPLC,  Detektor  UV, Reader  Shimadzu,  timbangan  analitik,  pH meter, blender, penggojok, sentrifugasi, kertas saring  0,4  µm  (wilex),  kertas  saring  membran 0,2  µm,  tabung  reaksi,  gelas  kimia  1000  mL, labu  takar  25  mL,  gelas  ukur  25  mL, pengaduk,  pipet  mikro  1000  µL,  pipet  tetes,
aluminium  foil,  pisau,  talenan  dan  baskom kecil.

## 2.2 Bahan
Bahan  yang  dibutuhkan  yakni:  daging ayam  potong  segar,  es  batu,  metanol (CH 3 OH), aquades, Na 2 -EDTA, sodium posfat (Na 2 HPO 4 .2H 2 O), asam sitrat (C 6 H 8 O 7 ), Coryvit, Corydon dan amonium sulfat (NH 4 ) 2 SO 4 .

## 2.3 Pembuatan Reagen
a Pembuatan pelarut Na 2 EDTA (buffer posfat pH 4) 0,1 M
Tambahkan  30,245  gr  Na-  EDTA kemudian  larutkan  dalam  812,5  mL buffer posfat.
b Pelarut elusi (20% aquades dan 80% metanol)
Eluen A: Sediakan metanol sebanyak 200 mL.  Eluen  B:  Saring  aquades  sebanyak 250 mL dengan kertas saring 0,2 µm.

## 2.4 Larutan Standar Antibiotik
Timbang  masing  –  masing  1  gr  Coryvit dan  2  gr  Corydon,  kemudian  larutkan dengan  metanol  dan  ditepatkan  25  mL. Konsentrasi  awal  masing  –  masing larutan standar yaitu 4000 ppm. Pengenceran selanjutnya dilakukan hingga  konsentrasi  mencapai  3000  ppm,
2000 ppm, 1000 ppm.

## 2.5 Preparasi sampel
Bagian  lemak  sampel  dipisahkan  dan diblender dengan kecepatan tinggi selama 15 -  30  detik.  Sebanyak  5  gr  simplisia ditambahkan  dengan  2  mL  amonium  sulfat jenuh  dan  18  mL  larutan  Mcilvaine  EDTA. Simplisia  digojok  dengan  sheker  155  rpm selama  30  menit  dan  diputar  3000  rpm selama 10 menit. Supernatan dipisahkan dari residunya,  dan  diekstraksi  kembali  dengan menambahkan  10  mL  Mcilvaine  EDTA, selanjutnya  diputar  dengan  kecepatan  3000 rpm  selama  10  menit  kemudian  disaring dengan wilex.

## 2.6 Injeksi Sampel
Kolom  HPLC  diaktifkan  dengan  metanol dan  air  pada suhu  kamar. Dimasukkan  10  mL standar ke dalam kolom yang telah diaktifkan. Didiamkan  selama  5  menit,  kemudian  dielusi dengan  fase  gerak  metanol  dan  air  dengan perbandingan  1:1,  dan  laju  alir  diatur  0,6
mL/detik.  Fase  diam  pada  HPLC  yaitu  silika C18  Bondapak,  sedangkan  reader  yang digunakan  yaitu  Simatzu.  Sampel  dan  larutan standar  diinjeksikan  dengan  syiring  berskala 100  μL,  dan  sebanyak  10  μL  standar  dan supernatan diinjeksikan dalam HPLC.

## 3 HASIL DAN PEMBAHASAN
Larutan standar dibuat dengan
mengencerkan  antibiotik  Oksitetrasiklin  dan Ampicillin  yang  masing  -  masing  bermerek
“CORYDON”  dan  “CORYVIT”.  Keduanya merupakan antibiotik yang dijual secara bebas di Kota Mataram.  Masing - masing antibiotik diencerkan  dengan  metanol.  Metanol  dapat melarutkan  berbagai  senyawa  organik  yang sukar  larut  dalam  air  (Rivai,  2006).  Semakin kecil  konsentrasi  antibiotik  dalam  metanol, semakin  pudar.  Konsentrasi  awal  larutan standar yaitu 4000 ppm. Berikut variasi warna antibiotik :

## Gambar 1. Coryvit (a) Corydon (b)

## 3.1 Pengenceran Coryvit dengan Metanol
Coryvit  mengandung  Oksitetrasiklin HCl  100  mg/gr  dan  Neomycin  sulfat  110 mg/gr.  Sebelum  diencerkan,  produk  Coryvit merupakan  serbuk  halus  berwarna  kuning muda.  Auterhoff  dan  Kovar  (2002)  juga menyebutkan  hal  yang  sama,  yakni  golongan Tetrasiklin merupakan antibiotik yang berwujud  serbuk  kuning  dan  tidak  berbau, sedangkan  Neomycin  berwarna  putih,  tidak berbau,  pahit,  tahan  terhadap  cahaya  dan udara.
Pengenceran  Coryvit  dengan  metanol me-nyebabkan perubahan warna kuning
menjadi  merah    serta  muncul  endapan  putih. Terbentuknya  endapan  dikarenakan  tidak semua  antibiotik  dalam  Coryvit  mudah  larut dengan  metanol.  Antibiotik  yang  mudah  larut dalam metanol yaitu Oksitetrasiklin,
sedangkan  Neomycin  bersifat sebaliknya.
Endapan  Neomycin  yang  terbentuk  akan menghilang  jika  Coryvit  dilarutkan  kembali dengan dalam aquades. Schunack et all (1990) menyebutkan  20  mg/mL  Oksitetrasiklin  larut dalam  pelarut  metanol  dan  1,7  mg/mL  larut dalam air. Rendahnya kelarutan Oksitetrasiklin dalam air disebabkan oleh sifat gugus benzena yang sukar larut dalam air.
O OH C H 3 O - O O - C H 3 OH + +

## Gambar 2.
Reaksi Benzena dengan Metanol dalam Suasana Asam (Rivai, 2006):
Menurut  Svehla (1985)  dan  Tjahajati  (2008),  Neomycin  sulfat  terdiri  dari anion  sulfat  yang  bersifat higroskopik  dan  rantai  amina  yang  terhubung  dengan  senyawa  glikosidik.  Amina  larut  dalam  air karena dapat membentuk ikatan hidrogen dengan molekul air.
H O H
O NH 2 O H O H OH N .....................
Gambar 3. Ikatan Hidrogen (Fessenden, 1982).

## 3.2 Pengenceran Corydon dengan Metanol
Corydon terbuat dari antibiotik Ampicillin trihidrat 50 mg/gr dan Colistin sulfat 12,195 mg/gr. Pengenceran  dengan  metanol  menghasilkan  larutan  kuning.  Menurut  Svehla  (1985),  Departemen Kesehatan RI (1995) dan Fessenden (1982) Colistin sulfat memiliki anion sulfat bersifat higroskopik, sukar  larut  dalam  metanol,  berbentuk  serbuk  putih  kekuningan,  tersusun  dari  polipeptida  sederhana
(a) (b)
dengan BM kurang dari 1000 gr/mol dan dihubungkan oleh ikatan hidrogen yang mudah dirusak oleh alkohol.
OH O H O H N H 2 NH NH 2 N H C H 3 OH C H 3 O - OH O H O H N H 3 + NH NH 2 N H metanol amino peptida senyawa kuning + +

## Gambar 4. Reaksi Alkohol dengan Amino Peptida
Pengenceran  Corydon  menghasilkan  endapan  yang  berasal  dari  sisa  antibiotik  Colistin  dan Ampicillin.  Ampicillin  berwujud  bubuk  halus,  putih,  higroskopik  dan  sukar  larut  dalam  metanol. Kelarutannya dalam air memiliki perbandingan 1:150 (Auterhoff dan Kovar, 2002).
asam peniciloat penicillin H + OH - H 2 O H 2 O S O NH O H CH 3 CH 3 N H O O OH O S O O H CH 3 CH 3 NH O S O O H CH 3 CH 3 N O N H 2 CH 3 O Amidase +
Gambar 5. Reaksi Ampicillin dengan Air (Sudjadi, 2007)

## 3.3 Ekstraksi Daging Ayam Potong
Ekstraksi dilakukan dengan Mcilvaine EDTA  pH  4.  Sebelum  diekstraksi,  daging terlihat  berwarna  merah  menunjukkan  miog- lobin, yaitu protein pigmen yang mirip dengan hemoglobin darah. Mioglobin banyak terdapat pada bagian tubuh yang aktif bergerak, seperti paha  (Murtidjo,  2003).  Jika  bereaksi  dengan oksigen,  mioglobin  akan  berwarna  merah cerah,  namun  jika  tidak  bereaksi  dengan oksigen  akan  cenderung  berwarna  ungu. Selain protein, daging ayam juga mengandung lemak dan air sekitar 75% - 80%.
Ekstrak  yang  dihasilkan  berwarna putih  pucat  dan  membentuk  gumpalan  akibat perubahan  struktur  serta  komposisi  protein
(denaturasi)  dalam  daging  ayam.  Denaturasi dapat  dipicu  oleh  penggunaan  buffer  pH  4 (asam),  panas  dan  alkohol.  Hal  tersebut  juga ditegaskan  oleh  Winarno  (2004)  yakni  bila susunan  rantai  polipeptida  suatu  molekul protein berubah dapat dikatakan bahwa protein tersebut  terdenaturasi.  Faktor  yang  mengaki- batkan  denaturasi  protein  antara  lain  faktor kimia dan fisika. Menurut Panil (2007), faktor kimia  yang  dimaksud  berupa  penambahan larutan  asam,  basa,  garam  dan  logam  berat. Sedangkan  salah  satu  faktor  fisika  yaitu penggojokan
Protein  dapat  menghambat  aliran sampel  dalam  kolom,  sebab  dapat  bereaksi dengan  metanol  (eluen).  Oleh  karena  itu,
sampel harus terbebas dari protein. Penghilangannya dilakukan dengan cara penambahan  garam  ammonium  sulfat  jenuh
kemudian  disentrifugasi.  Protein  dengan  berat molekul  yang  besar  akan  mengendap  dengan cepat.

## 3.4. Analisis Kuantitatif dengan HPLC – Detektor UV
Uji linearitas dilakukan dengan membuat  kurva  kalibrasi  dari  konsentrasi larutan  standar  dan  luas  puncak.  Persamaan regresi  yang  diperoleh  untuk  antibiotik Oksitetrasiklin yaitu y = 7,898x, dan antibiotik Ampicillin yaitu y = 8,992x. Masing – masing antibiotik  memiliki  nilai  koefisien  korelasi sebesar  0,959  dan  0,929.  Oksitetrasiklin
terdeteksi pada rentang waktu retensi (t R ) 2.74 –  3.09  menit.  Waktu  retensi  (t R )  Ampicillin yaitu  2.41  -  2.45  menit.  Kecepatan  injeksi dapat  mempengaruhi  waktu  retensi.  Jika injeksinya  lambat,  maka  waktu  retensi  juga lama.  Keberadaan  antibiotik  dalam  sampel diketahui dengan penambahan larutan standar.

## Gambar 6. Kromatogram HPLC Oksitetrasiklin (a) Ampicillin (b)
Analisis  sampel  menggunakan  HPLC  menghasilkan  kromatogram  dengan  luas  area  yang berbeda  –  beda.  Sem  akin  besar  luas  area,  semakin  besar  pula  konsentrasi  antibiotik. Konsentrasi masing – masing antibiotik dihitung berdasarkan rumus berikut:
g m t V std C std A s A s C   
C s adalah  konsentrasi  sampel,  C std adalah  konsentrasi  standar,  A s adalah  luas  puncak  sampel,  A std adalah  puncak  standar,  V t adalah  Volume  akhir  sampel  (L),  dan  m g adalah  berat  sampel.(mg). Konsentrasi standar (C std ) yang digunakan yaitu 2000 ppm, luas puncak standar (A std ) yaitu 15796 dan volume total (V t ) sebanyak 0,03 L. Nilai V t , C std , dan A std adalah sama, variabel yang berubah yaitu A s dan m g .
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 SGT BTS SSL STA HR AGK KTK 0.353 0.259 0.190 0.172 0.157 0.113 0.092 K o n sent ra si ( p p m )
(a) (b) Ket : SGT: Seganteng
STA: Sweta  KTK : Kentuku BTS : Bertais HR : Hero SSL : Sesela AGK : Ayam Goreng KFC

## Gambar 7. Diagram Residu Oksitetrasiklin Dalam Sampel Kota Mataram
Berdasarkan diagram di atas, rerata residu Oksitetrasiklin  yang  terdapat  dalam  daging ayam potong yakni 0,191 ppm dan Ampicillin tidak  terdeteksi.  Batas  maksimum  yang ditetapkan FAO untuk Oksitetrasiklin adalah 1 ppm  dan  jika  dibandingkan  dengan  rerata tersebut,  maka  semua  sampel  daging  ayam potong  dari  Kota  Mataram  memiliki  kadar residu  di  bawah  batas  maksimum. Rendahnya angka rerata kadar residu antibiotik Oksitetrasiklin  dalam  sampel  daging  ayam potong  dari  kota  Mataram,  menginformasikan bahwa secara umum daging ayam potong yang beredar  di  Kota  Mataram  cukup  aman  dari antibiotik Oksitetrasiklin.

## 4 KESIMPULAN
Antibiotik  yang  umum  digunakan  oleh peternak  ayam  potong  di  Kota  Mataram  yaitu antibiotik  dari  golongan  Tetrasiklin  berjenis Oksitetrasiklin dan golongan Penicillin berjenis
Ampicillin.
Kadar
residu Oksitetrasiklin dalam masing - masing sampel yaitu Seganteng, Bertais, Sesela, Sweta, Hero, KFC  dan  Kentuku  dengan  kadar  berturut  - turut  yakni:  0,353  ppm,  0,259  ppm,  0,190 ppm,  0,172  ppm,  0,157  ppm,  0,113  ppm  dan 0,092 ppm. Jumlah rerata residu Oksitetrasiklin  yang  ditemukan  dalam  daging ayam  potong  dari  Kota  Mataram  yaitu  0,191 ppm,  sedangkan  residu  Ampicillin  tidak terdeteksi.  Semua  sampel  memiliki  kadar residu antibiotik Oksitetrasiklin di bawah batas maksimum penggunaan antibiotik Oksitetrasiklin  yakni  1  ppm  yang  ditetapkan FAO.

## DAFTAR PUSTAKA
Anief,  Moh.  1990. Penggolongan  Obat Berdasarkan  Khasiat  dan  Penggunaan .
Yogyakarta.  Gadjah  Mada  University Press.
Auterhoff  dan Kovar,  2002. Identifikasi  Obat . Bandung: ITB Departemen  Kesehatan  RI.  1995. Farmakope Indonesia  Edisi  IV .  Jakarta:  Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan.
Departemen  Kesehatan  RI.  2008.  “Profil Kesehatan  Kota  Mataram  2008” . http://www.depkes  .go.id .  Diakses  pada hari Jumat, 3/2012.
Dinas  Peternakan  Provinsi  NTB.  2011.
“Grafik  Populasi  ternak  Provinsi  NTB
(2008-2010)”. http://www.disnakkeswanntb@ yahoo .co.id. Diakses pada hari Senin, 11/04/2011.
Erlan. 2009. Makalah Kimia Antibiotik Dalam Ternak. Garut: Universitas Garut Press. Fessenden  dan  Fessenden.  1982.  Kimia Organik. Jakarta: Erlangga.
Komara,  Toni.  2010.“Review  Antibiotik Untuk  Ayam” .  http://masenchipz.com . Diakses pada hari Kamis, 31/03/2011. Lawrie,  R.A.  1985. Ilmu  Daging  Edisi  ke  5. Diterjemahkan  Oleh  Parakkasi.  A. Jakarta: Universitas Indonesia Press. Levy,  Stuart  B.,M.D.,  1992. The  Antibiotik Paradox .  Plenum  Press,  Newyork  and Lodon.
Mansur.  2008.  “Toksikologi  dan  Distribusi Agen  Toksik”. http://library.usu.ac.id. Diakses pada hari Minggu, 17/4/2011. Mursyidi,  Achmad.  2004. Peran  Analisis kimia Bagi Kehidupan manusia .
Surakarta:  Muhammadiyah  University Press.
Murtidjo,  Bambang  Agus.  2003. Pemotongan dan Penanganan Daging Ayam .
Yogyakarta: Kanisius.
Panil,  Zulbadar.  2007. Memahami  Teori  dan Praktek  Biokimia  Dasar  Medis .  Jakarta
: EGC.
Rivai,  Harizul.  1995. Asas  Pemeriksaan Kimia . Jakarta: UI Press.
Schunack  W,  Mayer  K,  Haake  M.  1990. Senyawa  Obat,  Buku  Pelajaran  Kimia Farmasi. Penerjemah;  Padmawinata,
Yogyakarta: UGM Press.
Sriasih,  Made.,  Maskur.,  Hasil  Tamzil.  1998. Laporan  Penelitian  Analisis  Residu Beberapa Jenis Antibiotika Pada Daging  Ayam  Broiler .  Dibiayai  Dana SPP/DPP  Universitas  Mataram  Tahun 1997/1998, Surat Kontrak No. 1443/J18.H8/PL01.01/97  Tanggal  20 Oktober  1997.  Mataram:  Universitas Mataram Press.
Stringer,  Janet  L.  2009. Konsep  Dasar Farmakologi . Jakarta: EGC Sudarmadji,  Slamet.  1996. Teknik  Analisis Biokimiawi . Yogyakarta: Liberty Sudjadi  dkk.  2007. Analisis  Kuantitatif  Obat . Yogyakarta:  Gadjah  Mada  University Press.
Svehla.  1985. Analisis  Anorganik  Kualitatif Makro  dan  Semimakro .  Jakarta:  PT Kalman Media Pusaka. Tjahajati, Ida. 2007. Ilmu Penyakit Ternak III.
Yogyakarta:  Gadjah  Mada  University Press.
Winarno.  2004. Kimia  Pangan  Dan  Gizi. Jakarta: PT Gramedia Pustaka Utama. Yamin, Abdul Alim. 2008. “Penggunaan Antibiotik dalam Ransum Ayam Broiler”. http:// alimyameen. blogspot. com . Diakses pada hari Kamis, 31/03/2011.