Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 27-33 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
Isolation and Identification of Endophytic Bacteria in Blimbing Wuluh ( Averrhoa blimbii ) Leaves that have potential as Lactic Acid Bacteria
Isolasi dan Identifikasi Bakteri Endofit Pada Daun Blimbing Wuluh ( Averrhoa blimbii )  Yang Berpotensi Sebagai Bakteri Asam Laktat (BAL)
Kustiasih Lestari 1 , Mellysa Rahmita 2 , Fitria 3 1,2,3 Poltekkes Kemenkes Riau, Pekanbaru, Indonesia Email: kustiasih.lestari@pkr.ac.id

## Abstract
Lactic acid bacteria (LAB) are widely recognized for their numerous benefits. Apart from their medicinal properties, they can also serve as  additional  ingredient in food. Their high acidity is believed to be a plant's defense mechanism associated with endophytic microbes, which greatly benefit plant growth. Lactic acid bacteria (LAB)  can  offer  advantages  to  humans  and  are  widely  distributed  in  nature. However,  the  collection  of  indigenous  lactic  acid  remains  limited,  necessitating exploration of lactic acid from Indonesia's natural environment. This study aims to isolate and identify endophyt bacteria in the leaves of Averrhoa bilimbi (Blimbing wuluh) that potentially serve as sources of LAB. The research employed purposive sampling for sample collection and laboratory experiments. Results revealed that Blimbing wuluh leaves contain endophytic bacteria which have the potential to be lactic  acid  bacteria,  with  positive  carbohydrate  tests  result  to  ferment  lactose, sucrose, and glucose. The results of the Lactic Acid Bacteria test were positive on MRSB media and MRSA media. The results of the endophytic bacteria isolation characterization  test  succeeded  in  identifying  3  isolates  from  Blimbing  wuluh (Averrhoa blimbii) which had the potential to be Lactic Acid Bacteria (LAB).

## Keywords:
Isolation; Identification; Leaves; Endophytes; Lactic Acid Bacteria (LAB)

## Abstrak
Tanaman Blimbing wuluh (Averrhoa blimbii) adalah tanaman yang telah lama dikenal  banyak  manfaatnya.  Selain  mempunyai  khasiat  obat  juga  dapat jadikan  sebagai  salah  satu  bahan  tambahan  pada  makanan.  Kadar  asam yang  tinggi  diduga  sebagai  bentuk  pertahanan  tanaman  yang  berasosisai dengan  mikroba  endofit  yang  memberikan  manfaat  besar  terhadap pertumbuhan  tanaman.  Bakteri  asam  laktat  (BAL)  dapat  memberikan keuntungan untuk manusia dan banyak tersebar dialam. Koleksi asam laktat indigenous  masih  terbatas,  diperlukan  eksplorasi  asam  laktat  dari  alam Indonesia.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengisolasi  dan  mengidentifikasi bakteri bakteri endofit pada daun Blimbing wuluh yang berpotensi sebagai sumber  BAL.  Penelitian  ini  dilakukan  dengan  pengambilan  sampel  secara purposive sampling dan eksperimen laboratorium. Hasil penelitian diperoleh pada daun Blimbing wuluh mengandung bakteri endofit yang memiliki potensi sebagai  Bakteri  Asam  Laktat  dengan  hasil  uji  karbohidrat  positif memfermantasi laktosa, sukrosa, glukosa. Hasil uji Bakteri Asam Laktat  positif pada media MRSB  dan media MRSA dan dari hasil uji karakterisasi isolasi bekteri  endofit  berhasil  mengidentifikasi  3  isolat  dari    Blimbing  wuluh (Averrhoa blimbii) yang berpotensi sebagai Bakteri Asam Laktat (BAL).
Kata Kunci:
Isolasi; Identifikasi; Daun; Endofit; Bakteri Asam Laktat (BAL)

## Article Info
Article history Received date: 2024-05-15 Revised date: 2024-07-08 Accepted date: 2024-07-16
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 27-33 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)

## PENDAHULUAN
Tanaman  Blimbing  wuluh  ( Averrhoa  blimbii ) merupakan tanaman yang telah lama dikenal banyak  manfaatnya.  Belimbing  wuluh  ( A. blimbii  L )  banyak  dijumpai  tersebar  diseluruh nusantara,  mudah  dijumpai  dimana  saja  dan juga  mudah  untuk  dibudidayakan.  Selain mempunyai  khasiat  obat  juga  dapat  jadikan sebagai  salah  satu  bahan  tambahan  pada makanan  guna  meningkatkan  cita  rasa  serta penambah selera makan [1].
Ekstrak daun belimbing wuluh ( A. blimbii L ) telah diteliti  terkait  karakteristik  fisika  dan  kimia. Ekstrak daun belimbing wuluh diketahui dapat menghasilkan  senyawa  antibakteri  untuk menghambat  mikroba  penyebab  kerusakan pangan,  dan  juga  terbukti  efektif  untuk menghambat  pertumbuhan  bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus [2],  serta menghambat pertumbuhan Streptococcus mutans penyebab karies gigi [3].
Kandungan  senyawa  yang  terdapat  dalam tanaman sangat berhubungan dengan keberadaan mikroba endofit. Mikroba endofit merupakan  mikroba  yang  terdapat  pada jaringan  tanaman  yang  bersimbiosis  dengan tanaman  inangnya  dan  memberikan  manfaat besar  terhadap  pertumbuhan  tanaman inangnya.  Hal  ini  karena  perannya  dalam membantu tanaman inang dalam penyerapan nutrisi,  menghasilkan  senyawa  yang  berguna untuk  pertumbuhan,  serta  berperan  sebagai mikroba pertahanan inang dalam menghadapi cekaman lingkungan yang ekstrim [4].  Bakteri endofit  juga  sebagai  sumber  produk  alami untuk  mengahasilkan  antibiotik,  antiviral, antimalaria,  antikanker  dan  immunosupresan [5].  Ekplorasi  bakteri  endofit  masih  sangat dibutuhkan  sebagai  sumber  senyawa  bioaktif yang  potensial  untuk  dimanfaatkan  sebagai sumber  pengembangan  produk  dibidang kesehatan,  pertanian,  makanan,  maupun kosmetik [6].
Kadar asam yang tinggi pada Blimbing wuluh ( A. blimbii ) diduga sebagai bentuk pertahanan tanaman  Blimbing  wuluh  (A.  blimbii)  dalam
menghadapi  cekaman  lingkungan  ataupun serangan hama yang dihasilkan oleh mikroba endofit yang berpotensi sebagai bakteri asam laktat.  Bakteri  asam  laktat  (BAL)  merupakan group  bakteri  yang  dapat  memberikan keuntungan  untuk  manusia,  hewan,  dan tanaman.  BAL  telah  lama  digunakan  untuk fermentasi  makanan  seperti  produk  susu, daging,  dan  roti.  Kelompok  bakteri  ini  telah diketahui  memiliki  variasi  kebutuhan  nutrisi yang  mungkin  berbeda-beda  antar  spesies atau bahkan antar strain [7].
Koleksi asam laktat asli indonesia (indigenous) masih  terbatas.  Eksplorasi  asam  laktat  dari lingkungan  alam  Indonesia  dilakukan  untuk meningkatkan  koleksi  bakteri  asam  laktat  asli indonesia. Identifikasi BAL indigenous dari buah Belimbing  wuluh  ditemukan  yaitu Enterococcus faecalis,  Lactococcus  lactis  subsp  lactis,  dan Lactobacillus  plantarum [8] . Berdasarkan  latar belakang tersebut maka penulis mencoba untuk mengisolasi  dan  mengidentifikasi  bakteri endofit yang berpotensi sebagai bakteri asam laktat  yang  terdapat  pada  daun  Blimbing wuluh ( A.blimbii ).

## METODE
Metode  penelitian  ini  adalah  survey  dengan pengambilan sampel secara purposive sampling  dan  dilakukan  eksperiment  di laboratorium. Sampel penelitian ini yaitu daun blimbing wuluh dengan kriteria daun blimbing wuluh  yang  lebar,  segar  tanpa  adanya kerusakan dan pengambilan daun dari tangkai pohon  menggunakan  gunting  atau  pisau. Waktu  pelaksanaan  dilakukan  pada  bulan Februari-Agustus  2022  di  Laboratorium Mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran  Universitas Riau.
Prosedur  kerja  yaitu  pertama    sterilisasi  alat. Alat yang akan digunakan dilakukan sterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121 ᵒ C tekanan 15 lbs selama lebih kurang 15 menit. Tahap kedua pengambilan  sampel,  sampel  yang  sudah diambil  berdasarkan  kriteria  di  cuci  bersih dengan air mengalir dan dicuci dengan alkohol
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 27-33 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
70%  lalu  daun  dibagi  menjadi  dua  bagian tepat  pada  tengah  tulang  daun  kemudian dipotong  dengan  ukuran  2x2  cm  dan dimemarkan menggunakan lumping steril. Tahap  ketiga  yaitu  isolasi  bakteri  endofit, dilakukan  inokulasi  dengan  menggunakan pinset kedalam cawan petri yang telah berisi medium Nutrient Agar (NA). Setiap cawan petri ditanam  5  potong  sampel,  selanjutnya diinkubasi pada suhu 35 ᵒ C selama 48 jam [9]. Setelah  bakteri  tumbuh  dilakukan  pemurnian dan  diberi  kode.  Tahap  ke  empat  Uji
Fermentasi
Karbohidrat isolat bakteri diinokulasikan  ke  medium  kaldu  glukosa. laktosa,  dan  sukrosa  atau    medium  TSIA. Kemudian inkubasi pada suhu ruang selama 48 jam. Tahap kelima Isolasi bakteri BAL, dengan melakukan  penanaman  BAL  pada  Media  de Man Rogosa Sharpe (MRS) Agar.  Sebanyak 10 mL sampel ditambahkan dengan 90 mL NaCL fisiologis sehingga diperoleh pengenceran 10 -1 dan  selanjutnya  dibuat  pengenceran  berseri sampai  10 -3 .  Dari  pengenceran  10 -3 tersebut, ditanam  10 µ L  pada  media  MRS  agar  yang telah  ditambahkan  indikator  pH  bromcresol purple,  kemudian  diiinkubasi  pada  kondisi anaerab suhu 37 o C selama 48 jam. Koloni BAL yang tumbuh terlihat berwarna kuning sebagai karakteristik dihasilkannya asam. menghasilkan zona  bening  lalu  digunakan  untuk  identifikasi lebih lanjut dan juga ditumbuhkan dalam MRSB. Tahap  keenam  karakterisasi  Bakteri  Endofit Isolat  BAL  yang  diperoleh  diberi  kode selanjutnya  dilakukan  karakterisasi  dengan mengamati bentuk dan warna koloni, kemudian dilakukan    pewarnaan  gram  dan  spora kemudian  amati [10].

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Isolasi  bakteri  merupakan  tahapan  untuk mendapatkan koloni tunggal dari sampel yang kita  gunakan.  Proses  isolasi  bakteri  endofit pada  daun  belimbing  wuluh  dari  5  sampel daun  didapatkan  pertumbuhan  bakteri  pada setiap  sampel.  Hasilnya  dapat  dilihat  pada gambar 1.
Gambar 1. Hasil Pertumbuhan Koloni Pada Media NA Setiap koloni pertumbuhan bakteri pada media NA  selanjutnya  dilakukan  penanaman  ulang untuk  mendapatkan  isolat  yang  murni mengandung  bakteri  endofit.  Hasil  dapat disajikan pada gambar 2.
Gambar 2. Hasil Permurnian Pertumbuhan Koloni
Koloni  tunggal  hasil  pemurnian  kemudian dilakukan  uji  fermentasi  karbohidrat  dengan menggunakan sumber karbon yaitu glukosa, D- laktosa,  dan  D-sukrosa.  Hasil  uji  karbohidrat disajikan  pada  tabel  1.    BAL  berdasarkan fisiologis dan metabolismenya dibagi menjadi 2  group,  yakni  homofermentatif  ( Lactococcus lactis,  L.  delbrueckii ,  dan L.  casei )  dan heterofermentatif ( L. amylovorus, L. reuteri, dan L.  manihotivorans )      [7],  [10].  BAL  merupakan kelompok bakteri yang beragam
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 27-33 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
Kustiasih Lestari and kustiasih.lestari@pkr.ac.id
secara  filogenetik  termasuk  dalam  ordo Lactobacillales. Ini beragam ordo mencakup 6 famili, lebih dari 30 genera, dan lebih dari 300 spesies  [11].  Karbohidrat  merupakan  sumber energi  utama  BAL  yang  akan  dimetabolisme menjadi  berbagai  senyawa  terutama  asam laktat.  Homofermentatif  akan  memetabolisme satu molekul heksosa menjadi dua molekul asam laktat  sedangakan  heterofermentatif  hanya mengasilkan  satu  molekul      asam  laktat  [7]. Homofermentatif  tidak  ada  gas  pada fermentasi glukosa [12].
Tabel. 1 Hasil Uji Karbohidrat No Kode Sampel Hasil Keterangan 1 BED 1 +/+ Laktosa dan Sukrosa 2 BED 2 -/+ Glukosa 3 BED 3 -/+ Glukosa 4 BED 4 -/+ Glukosa 5 BED 5 -/+ Glukosa
Isolat bakteri selanjutnya dilakukan uji Bakteri Asam laktat (BAL)  menggunakan media selektif MRS  agar  dan  MRS  broth.  Media  ini  bersifat selektif  terhadapat  pertumbuhan  BAL.  Pada media MRS ditambahkan ammonium sitrat dan sodium  asetet  sehingga  pH  media  5.4,  hal  ini dapat  menghambat  bertumbuhan  bakteri  lain [13].  Adanya  pertumbuhan  pada  media  ini menunjukkan  adanya  BAL  pada  sampel  daun belimbing  wuluh.  Genus  utama  BAL  ialah Lactobacillus,  Leuconostoc,  Pediococcus  dan Streptococcus [14].    Hasil  pertumbuhan  dapat dilihat pada tabel 2. Pada MRSB terlihat ada kekeruhan pada kelima isolat sampel. Pertumbuhan  bakteri  positif  bila  perbenihan media  terjadinya  kekeruhan  dan  negatif  jika tidak terjadi kekeruhan. Pada buah belimbing wuluh  yang  telah  ditiliti  ditemukan  tujuh  isolat BAL  [8].  Hasil  penelitian  lain  juga  ditemukan oleh  Kurnia,  dkk  2020  yang  mengidentifikasi BAL  pada  makanan  khas  daerah  [15].  BAL
memiliki aktifitas berlawanan dengan mikrooganisme  lain,  saat  fermentasi  BAL menghasilkan  asam  organik  yang  dapat menurunkan  pH  lingkungan  menjadi  3-4,5 sehingga  dapat  membunuh  bakteri  lain. Disamping itu BAL menghasilkan senyawa yang mampu menghambat mikroorganisme patogen seperti  hidrogen  peroksida  (H 2 O 2 ),  diasetil, CO 2 ,  asetaldehid,  asam-asam  amino,  dan bakteriosin [10].
Tabel 2. Hasil Uji Bakteri Asam Laktat (BAL) pada Daun
Belimbing Wuluh No. Kode Sampel MRSA MRSB 1. BED 1 Positif terjadi pertumbuhan berwaran kuning Positif terjadi kekeruhan 2. BED 2 Positif terjadi pertumbuhan berwaran kuning Positif terjadi kekeruhan 3. BED 3 - Positif terjadi kekeruhan 4. BED 4 - Positif terjadi kekeruhan 5. BED 5 Positif terjadi pertumbuhan berwarna kuning Positif terjadi kekeruhan Masing-masing  isolat  dilakukan  pemeriksaan secara  makroskopik  dan  mikroskopik  untuk mengidentifikasi bakteri. Pemeriksaan makroskopik  dilakukan  dengan  menilai karakteristik  pertumbuhan  koloni  pada  media tumbuh.  Pemerikssan  mikroskopik  dilakukan dengan  pengamatan  dibawah  mikroskop dengan pewarnaan Gram, hasil dapat dilihat pada tabel 3. Secara makroskopis ditemukan ciri koloni berwarna putih dan cembung. Pada penelitian  lain  juga  ditempukan  karakteristik makroskopik BAL pada media agar berwarna putih susu, halus, dan cembung [16].
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 27-33 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
Tabel 3. Hasil Pengamatan Makroskopik dan mikroskopik Bakteri Asam Laktat (BAL) pada Daun Belimbing Wuluh
No. Kode Sampel Makroskopik Mikroskopik Bentuk Tepi Warna Bentuk Sifat Jenis 1. BED 1 Bulat Rata Putih Batang Gram + Lactobacillus sp 2. BED 2 Bulat Rata Putih Batang Gram + Bacillus sp 3. BED 3 Bulat Tidak Rata Putih Batang Gram - Bacillus sp 4. BED 4 Bulat Tidak Rata Putih Batang Gram - Lactobacillus sp 5. BED 5 Bulat Rata Putih Batang Gram + Lactobacillus sp
Secara  mikroskopis  BAL  memiliki  morfologi berbentuk coccus atau batang, bersifat Gram positif,  tidak  berspora,  katalase  negatif,  dan termasuk    bakteri  yang  sensitif  dalam pertumbuhannya  [17].    BAL  dari  genus Lactobacillus bersifat  Gram  positif,  berbentuk batang sedangkan genus Enterococcus bersifat Gram positif dan berbentuk coccus  [10]. Pada pewarnaan  Gram,  dinding  sel  bakteri  Gram positif  akan  berwarna  ungu  karena  bakteri Gram  Positif  memiliki  kandungan  lipid  yang rendah  pada  permukaan  dinding  sel.  Pada pemberian  zat  warna  violet  dinding  sel langsung mengikat zat warna dan tidak dapat dilunturkan oleh alkohol dan diisi oleh pewarna lain  [18].  Pada  hasil  pengamatan  secara karakterisitik  mIkroskopik  terdapat  3  isolat yang  memiliki  karakteristik  yang  sama  yakni berbentuk  batang  dan  bersifat  Gram  positif.
BAL bersifat Gram positif berwarna ungu juga ditemukan pada penelitian Kurnia dkk (2020) dan  Muzaifa  (2014).  Penelitian  isolasi  BAL pada produk perikanan ditemukan BAL dengan morfologi coccus dan Gram posititf [12]. Untuk identifikasi selanjutnya dilakukan pewaranaan spora  untuk  melihat  apakah  isolat  bakteri endofit  yang  didapat  memiliki  karakterisitik memiliki  spora  [19],  hasil  dapat  dilihat  pada tabel 4. Penelitian BAL  yang diwarnai dengan pewarnaan  endopsora  berupa  Malachite green  akan terlihat tidak memiliki sprora  [20]. Malachite  green  larut  dalam  air  dan  memiliki afinitas  rendah  terhadap  komponen  seluler sehingga sel vegetatif akan luntur oleh air dan dapat  diwarnai  dengan  safranin  sehingga terlihat dibawah mikroskop [21].  Karena BAL tidak  memiliki  spora  sehingga  tidak  terlihat bagian sel yang terlihat berwarna hijau.
Tabel 4. Pewaranaan Spora pada isolat Bakteri Asam Laktat (BAL) pada Daun Belimbing Wuluh
No. Kode Sampel Pewarnaan Spora Bentuk Hasil 1. BED 1 Basil Tidak berspora 2. BED 2 Basil Tidak berspora 3. BED 3 Basil Berspora 4. BED 4 Basil Berspora 5. BED 5 Basil Tidak berspora
Hasil pewarnaan spora menunjukkan 2 sampel memiliki  spora,  dan  3  sampel  tidak  memiliki spora. Sesuai dengan karakterisitik BAL bahwa pada  hasil  penelitian  ini  ditemukan  3  isolat yang terduga kuat sebagai BAL. Ekstrak daun belimbung  wuluh  juga  memiliki  daya
antibakteri  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri  bakteri P.  acnes secara  in-vitro  [19]. Kemampuan  daya  antibakteri  yang  dimiliki oleh  daun  belimbing  wuluh  sebagai  potensi adanya bakteri endofit dan dari penelitian ini terdapat  3  isolat  yang  berpotensi  sebagai
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 27-33 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
Kustiasih Lestari and kustiasih.lestari@pkr.ac.id
bakteri  yang  dapat  menghasil  asam  laktat. Isolasi BAL telah banyak dilakukan dari habitat produk olahan susu, flora normal pencernaan, prosuk sayuran, dan flora normal saluran urin [10].    BAL  sangat  bermanfaat  dalam  terapi penyakit penceranaan dan dapat meningkatkan  imunitas.  BAL  juga  berperan dapat  pengobatan  alami  dan  mencegah patogen  serta  dalam  kemananan  makan dengan mencegah kontaminasi [22].

## SIMPULAN
Bakteri  endofit  sebagai  sumber  produk  alami untuk  mengahasilkan  antibiotik,  antiviral, antimalaria,  antikanker  dan  immunosupresan . Bakteri endofit pada daun blimbing wuluh (A. blimbii)  diduga  kuat  memiliki  potensi  Bakteri Asam  Laktat  (BAL).  Hasil  penelitian  dengan tahapan  isolasi  bakteri  endofit  dilanjutkan dengan  uji  karbohidrat,  pertumbuhan  MRSA dan MRSB, perwarnaan Gram, dan pewaranaan  spora  ditemukan  3  isolat  yang terduga  kuat  sebagai  BAL  isolat  yang berpotensi  sebagai  bakteri  yang  dapat menghasil  asam  laktat.  Isolat  ini  dapat dimanfaat untuk sumber dalam pengembangan kesehatan, pertanian, dan teknologi makanan ,serta  sebagai  koleksi  BAL  asli  indonesia (indigenous).

## DAFTAR PUSTAKA
[1]    E.  Purwaningsih,  “Multiguna  belimbing wuluh.” Geneca Exact, Jakarta, 2007.
[2]  P. A. C. D. Pendit, E. Zubaidah, and F. H. Sriherfyna, “Karakteristik Fisik-Kimia dan Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Daun Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L.),” J. Pangan dan Agroindustri , vol. 4, no. 1, pp. 400–409,  2016,  [Online].  Available: https://jpa.ub.ac.id/index.php/jpa/arti cle/view/342
[3]  M.  N.  Fadel,  E.  Setyowati,  Y. Trinovitawati,  and  W.  Sabaan,  “Uji Aktivitas Antibakteri Obat Kumur Ekstrak Daun Belimbing Wuluh (Averrhoa Bilimbi L.)  Terhadap  Bakteri  Streptococcus
mutans Penyebab Karies Gigi,” CERATA J. Ilmu Farm. , vol. 12, no. 1, pp. 10–19, 2021, doi: 10.61902/cerata.v12i1.189.
[4]  D. N. Nair and S. Padmavathy, “Impact of endophytic microorganisms on plants, environment and humans,” Sci. World J. , vol. 2014, 2014, doi: 10.1155/2014/250693.
[5]  M.  Radji,  “Peranan  Bioteknologi  Dan Mikroba  Endofit  Dalam  Pengembangan Obat  Herbal,” Maj.  Ilmu  Kefarmasian , vol.  2,  no.  3,  pp.  113–126,  2005,  doi: 10.7454/psr.v2i3.3388.
[6]  G. Strobel and B. Daisy, “Bioprospecting for  Microbial  Endophytes  and  Their Natural  Products,” Microbiol.  Mol.  Biol. Rev. , vol. 67, no. 4, pp. 491–502, 2003, doi: 10.2307/1592233.
[7]  H. S. a and I. S. a, “Current limitations and challenges  with  lactic  acid  bacteria:  a review,” Food  Nutr.  Sci. ,  vol.  2013,  no. November,  pp.  73–87,  2013,  [Online]. Available: http://file.scirp.org/Html/10- 2700895_40133.htm
[8]  M.  Muzaifa,  “IDENTIFIKASI  BAKTERI ASAM  LAKTAT  INDIGENOUS  DARI BELIMBING  WULUH  (Averrhoa  bilimbi
L.),” J.  Sagu ,  vol.  13,  no.  1,  pp.  8–13, 2014, [Online]. Available: http://ejournal.unri.ac.id/index.php/JS G/article/view/2130 [9]  H.  Hamtini,  W.  Nurhati,  M.  Rahmita,  C. Trisna,  J.  Rahmawati,  and  S.  Shufiyani,
“Isolasi  dan  Identifikasi  Bakteri  Endofit pada  Batang  dan  Daun  Tanaman Songgolangit (Tridax procumbens (Lour.)),” J. Med. Lab. Res. , vol. 1, no. 1, pp. 19–22, 2022, doi: 10.36743/jomlr.v1i1.430. [10]  S. Syukur, Bioteknologi Dasar Dan Bakteri Asam  Laktat  Antimikrobial .  Padang: Lembaga  Pengembangan  Teknologi Informasi  dan  Komunikasi  (LPTIK) Universitas Andalas, 2016.
[11]  M.  Kanauchi, Lactic  Acid  Bacteria: Methods  and  Protocols  by  Makoto
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.13, No.1, Mei 2024, pp. 27-33 ISSN 2715-1115 (Online), ISSN 2302 – 8610 (Print)
Kanauchi  -  PDF  Drive .  1887.  [Online]. Available: https://www.pdfdrive.com/lactic-acid- bacteria-methods-and-protocols- e187227566.html [12]  Romadhon, Subagiyo, and M. Sebastian, “Isolasi  Dan  Karakterisasi  Bakteri  Asam Laktat  Dari  Usus  Udang  Penghasil Bakteriosin  Sebagai  Agen  Antibakteria Pada Produk-Produk Hasil Perikanan,” J. Saintek Perikan. , vol. 8, no. 1, pp. 59–64, 2012.
[13]  J.  C.  De  Man,  “MRS  agar  (  deMan  , Rogosa  ,  Sharpe  )  |  Principle  | Preparation | Interpretation,” pp. 1–3.
[14]  K.  Khalid,  “An  overview  of  lactic  acid bacteria,” Int. J. Biosci. , vol. 1, no. 3, pp. 1–13, 2011.
[15]  M.  Kurnia,  H.  Amir,  and  D.  Handayani, “Isolasi  Dan  Identifikasi  Bakteri  Asam Laktat  Dari  Makanan  Tradisional  Suku Rejang  Di  Provinsi  Bengkulu:  ‘Lemea,’” Alotrop , vol. 4, no. 1, pp. 25–32, 2020, doi: 10.33369/atp.v4i1.13705.
[16]  A. Ibrahim, F. Delvia, and A. Fridayanti, “Isolasi  Dan  Identifikasi  Bakteri  Asam Laktat  (Bal)  Dari  Buah  Mangga
(Mangifera indica L.),” vol. 1, no. 2, pp. 114–120, 2015, doi: 10.25026/mpc.v1i1.16. [17]  M. P. Mokoena, “Lactic acid bacteria and their bacteriocins:
Classification, biosynthesis  and  applications  against uropathogens: A mini-review,” Molecules , vol. 22, no. 8, 2017, doi:
10.3390/molecules22081255.
[18]  G. F. Brooks, K. C. Carroll, J. Butel, S. A. Morse,  and  T.  Mietzner, Medical Microbiology .
2013. doi:
10.1017/CBO9781107415324.004.
[19]  I.  Surono,  S, Probiotik,  mikrobiome  dan pangan fungsional , 1st ed., vol. 1, no. 1. Yogyakarta:  Deepublish,  2016.  doi:
10.25134/quagga.v10i01.803.
[20]  G. Fallo et al. , “Isolasi dan karakterisasi Bakteri Asam Laktat pada air rendaman
kacang  tunggak  (Vigna  unguiculata  (L.) Walp)  berpotensi  sebagai  penghasil antibiotik,” J. Pendidik. Biol. Undiksha , vol.
8, no. 3, pp. 161–170, 2021.
[21]  R.  Siddique  and  A.  Gul, Plant-Microbe Interactions . 2021. doi: 10.1201/9781003106784-1.
[22]  R.  D.  Ayivi et  al. ,  “Lactic  Acid  Bacteria: Food  Safety  and  Human  Health Applications,” Dairy ,  vol.  1,  no.  3,  pp. 202–232, 2020, doi: 10.3390/dairy1030015.