## KERAGAMAN  GENETIK SAPI BALI DI KABUPATEN BARRU BERDASARKAN KARAKTERISTIK FENOTIPE DAN DNA PENCIRI MIKROSATELIT
(Genetic Diversity of Bali Cattle in Barru Regency Based on Phenotype Characteristics and Microsatelite DNA Identifier)
Musdalifa Mansur 1 , Andi Tenri Bau Astuti Mahmud 1 , Muhammad Ihsan Andi Dagong 2 , Lellah Rahim 2 , Rr Sri Rachma Aprilita Bugiwati 2 dan Sudirman Baco 3
1 Jurusan Produksi Ternak, Fak. Peternakan, Universitas Hasanuddin 2 Laboratorium Genetik dan Pemuliaan Ternak, Fak. Peternakan, Universitas Hasanuddin 3 Laboratorium Produksi Ternak Potong, Fak. Peternakan, Universitas Hasanuddin Jalan Perintis Kemerdekaan KM.10 Tamalanrea, Makassar, 90245 email: ihsandagong@gmail.com

## ABSTRACT
Sapi Bali is one of Indonesia germplasm, which has great potential to be developed as a national meat  suppliers.  Barru  regency,  South  Sulawesi  province  is  one  of  the  purification  center  of  Bali cattle in Indonesia. This study aimed to determine the genetic characteristics of Bali cattle in Barru regency  based  on  identification  of  phenotype  qualitative  (horn  shape  and  color  of  feathers)  and quantitative traits (body size), as well as the identifier of microsatellite DNA diversity, in particular HEL9 and INRA035loci. Bali cattle phenotype characterization was done by identifying the typical qualitative properties owned by Bali cattle, as well as a quantitative trait such as body weight, body length, chest circumference and height. Blood samples were collected from about 80 heads of Bali cattle (35 males and 45 females). Extraction of genomic DNA using a DNA extraction kit (GeneJet Genomic DNA Extraction). PCR technique was then used to amplify DNA in microsatellite HEL9 and INRA035loci. Genetic diversity was calculated based on the frequency of alleles and genotypes, observed heterozygosity (Ho), expectated heterozygosity (He) and the Hardy-Weinberg equilibrium. The results showed that the predominant form of horns in males were silak bajeg while the females were silak manggulgangsa, while the percentage of normal color pattern (typical of Bali cattle) was 92.5% and the color pattern deviates ie. 7.5%. In HEL9 locus, alleles found were A and B with only AB genotype(100%). While at the INRA035 locus,were found three alleles ie. A (0.4813), B (0.50) and C (0.0187), with the most common genotype were AB (0.96). Based on shape horn and feather color, the phenotype characteristic  of Bali cattle in the Barru regency were quite diverse, but the genetic diversity of DNA microsatellite observed quite low with only found two alleles (A and B) at HEL9 and 3 alleles (A, B and C ) at the INRA035 locus.
Key Words : Allele frequency, HEL9, INRA035, Microsatellite, Bali cattle

## ABSTRAK
Sapi Bali merupakan salah satu plasma nutfah Indonesia yang memiliki potensi besar untuk dikembangkan  sebagai  pemasok  daging  secara  nasional.  Kabupaten  Barru,  Sulawesi  Selatan merupakan salah satu daerah yang memprogramkan pemurnian sapi Bali di Indonesia. Penelitian ini  bertujuan  untuk  mengetahui  karakteristik  genetik  sapi  Bali  di  Kabupaten  Barru  berdasarkan identifikasi  karakteristik  fenotipe  sifat  kualitatif  (bentuk  tanduk  dan  warna  bulu)  dan  sifat kuantitatif (dimensi tubuh), serta keragaman DNA penciri mikrosatelit lokus HEL9 dan INRA035. Identifiksi fenotipe sapi Bali dilakukan dengan mengidentifikasi sifat kualitatif khas yang dimiliki sapi Bali, serta sifat kuantitatif seperti bobot badan, panjang badan, lingkar dada, dan tinggi badan. Sampel  darah  dikoleksi  dari  sekitar  80  ekor  sapi  Bali  (35  jantan  dan  45  betina).Ekstraksi  DNA genomdengan menggunakan Kit DNA ekstraksi (GeneJet Genomic DNA Extraction).Teknik PCR kemudian  digunakan  untuk  mengamplifikasi  DNA  penciri  mikrosatelit  pada  lokus  HEL9  dan INRA035.Keragaman  genetik  dihitung  berdasarkan  frekuensi  alel  dan  genotipe,  heterozigositas pengamatan  (Ho),  heterozigositas  harapan  (He)  dan  kesetimbangan  Hardy  Weinberg.  Hasil penelitian menunjukkan bentuk tanduk yang dominan pada jantan adalah s ilak bajeg sedangkan pada betina adalah silak manggulgangsa, sedangkan persentase pola warna normal (khas sapi Bali)
JITP Vol. 4 No. 3, Januari  2016
yaitu 92.5 % dan pola warna menyimpang yaitu 7.5% . Pada  lokus  HEL9  alel  yang  ditemukan adalah alel A dan B dengan hanya genotipe AB yang ditemukan (100%). Sedangkan pada lokus INRA035 ditemukan tiga alel yakni A (0.4813), B (0.50) dan C (0.0187), dengan genotipe yang paling  umum  adalah  AB  (0.96).Berdasarkan karakteristik  fenotip  (bentuk  tanduk  dan warna  bulu)  sapi  Bali  di  kabupaten  Barru cukup  beragam,  namun  keragaman  genetik DNA mikrosatelit yang diamati cukup rendah dengan hanya ditemukan 2 alel (A dan B) pada lokus HEL9 dan 3 alel (A, B dan C) pada lokus INRA035.
Kata  Kunci :    Frekuensi  Alel,  HEL9,  INRA035, Mikrosatelit, Sapi Bali

## PENDAHULUAN
Sapi Bali (Bos sondaicus) merupakan salah satu sapi potong asli Indonesia hasil domestikasi dari  Banteng  ( Bos-bibos  banteng) dan  memiliki potensi yang besar untuk mensuplai kebutuhan protein masyarakat Indonesia. Penyebaran sapi Bali  saat  ini  hampir  meliputi  seluruh  wilayah Indonesia, kecuali Propinsi DKI Jakarta. Empat propinsi yang memiliki jumlah sapi Bali terbesar di Indonesia adalah Propinsi Sulawesi Selatan, NTB, Bali dan NTT.
Sapi  Bali  merupakan  aset  nasional  yang perlu  dilestarikan.Pemerintah  telah  sejak  lama memberikan  perhatian  yang  cukup  besar bagi  pelestarian  plasma  nutfah  ini  dengan menetapkan program nasional pemuliaan untuk sapi  Bali.Program  nasional  tersebut  meliputi program  pemurnian  dan  peningkatan  mutu genetik  sapi  Bali.  Program  pemurnian  sapi Bali  dilaksanakan  dengan  penetapan  wilayah peternakan murni sapi Bali di Sulawesi Selatan khususnya Kabupaten Barru dan Bone.
Program  pelestarian  sapi  Bali  perlu didukung dengan metode identifikasi karakteristik  genetik  khas  sapi  Bali  yang cepat,  mudah,  dan  akurat,  agar  pelestarian sapi  Bali  pada  suatu  wilayah  tertentu  dapat berhasil  dilakukan  tanpa  ada  keraguan terhadap  kemurniannya.    Identifikasi  penciri genetik sebagai alat penanda pembeda bangsa merupakan langkah penting sebagai ciri khusus yang bersifat khas pada bangsa ternak tertentu.
Pengujian  lokus  DNA  mikrosatelit  HEL9 dan INRA035 dilakukan Handiwirawan (2003) dalam sampel yang lebih besar pada sapi Bali di Propinsi Bali. Hasil identifikasi genotipe sapi Bali dan genotipe Banteng sebagai pembanding
menunjukkan bahwa alel A dan alel B merupakan alel yang monomorfik pada lokus mikrosatelit INRA035  pada  sapi  Bali  sehingga  dapat digunakan sebagai penciri genetik sapi Bali. Alel A pada lokus mikrosatelit HEL9 merupakan alel dengan frekuensi yang sangat tinggi pada sapi Bali (92,9%) yang dapat dipergunakan sebagai penciri  genetik  pendukung  pada  sapi  Bali karena semua Banteng yang di uji juga memiliki alel tersebut.
Pada  berbagai  lingkungan  pemeliharaan di  Indonesia,  sapi  Bali  memperlihatkan kemampuannya untuk berkembang biak dengan baik  yang  disebabkan  beberapa  keunggulan yang  dimiliki  sapi  Bali.  Keunggulan  sapi  Bali dibandingkan  sapi  lain  yaitu  memiliki  daya adaptasi  sangat  tinggi  terhadap  lingkungan yang  kurang  baik  (Masudana,  1990),  seperti dapat  memanfaatkan  pakan  dengan  kualitas rendah  (Sastradipradja,  1990),  mempunyai fertilitas  dan conception  rate yang  sangat  baik (Oka  dan  Darmadja,  1996),  persentase  karkas yang tinggi yaitu 52-57,7% (Payne dan Rollinson, 1973), memiliki daging berkualitas baik dengan kadar lemak rendah (kurang lebih 4%) (Payne dan Hodges, 1997) dan tahan terhadap parasit internal  dan  eksternal  (National  Research Council,  1983).  Dengan  berbagai  keunggulan yang dimiliki tersebut dan mengingat Indonesia merupakan  pusat  sapi  Bali  di  dunia  maka sapi  Bali  merupakan  aset  nasional  yang  perlu dilestarikan.

## MATERI DAN METODE

## Identifikasi fenotipe
Identifiksi  fenotipe  sapi  Bali  dilakukan dengan  mengidentifikasi  sifat  kualitatif  khas yang  dimiliki  sapi  Bali.  Adapun  sifat  –  sifat kualitatif  yang  di  identifikasi  antara  lain  pola warna bulu, bentuk dan ukuran tanduk, serta ciri–ciri fisik khusus pada sapi Bali seperti bulu hitam yang membentuk garis (garis belut) pada bagian punggung dan warna putih pada bagian belakang paha (pantat), bagian bawah (perut), keempat  kaki  bawah  ( white  stocking )  sampai di atas kuku, bagian dalam telinga, dan pada pinggiran bibir atas, sifat kuantitatif seperti bo - bot badan badan, panjang badan, lingkar dada, dan tinggi badan.

## Koleksi  sampel darah dan ekstraksi DNA
Sebanyak    80  sampeldarah  yang  berasal dari  45 ekor betina dan 35 ekor jantan diperoleh
dari  5  kecamatan  pengembangan  sapi  Bali  di Kabupaten  Barru  (Kec.  Tanete  Riaja  (n=24), Tanete Rilau (n=12), Barru(n=18), Balusu (n=13) dan Soppeng Riaja (n=13)). Pengambilan darah melalui vena  jugularis ditampung  pada  tabung vacutainer yang telah berisi antikoagulan EDTA untuk  mencegah  penggumpalan  darah.  DNA diisolasi dan dimurnikan dengan menggunakan Kit  DNA  ekstraksi  ( Genejet  Genomic  DNA Extraction Thermo Scientific ).

## PCR
Amplifikasi HEL9  menggunakan primer (F=5’-CCCATTCAGTCTTCAGAGGT-3’)  dan (R=5’-CACATCCATGTTCTCACCAC-3’)  se- dangkan  INRA035  menggunakan  primer  (F =5’-ATCCTTTGCAGCCTCCACATTG-3’) dan(R=5’-TTGTGCTTTATGACACTATC- CG-3’).  Komposisi  reaksi  PCR  dikondisikan pada volume reaksi 25 µl yang terdiri atas 100 ng  DNA,  0.25  mM  masing-masing  primer, 150 µM dNTP, 2.5 mM Mg 2+ , 0.5 µl Taq DNA polymerase dan 1x buffer. Kondisi mesin PCR dimulai  dengan  denaturasi  awal  pada  suhu 94 o C x 2 menit, diikuti dengan 35 siklus beri- kutnya  masing-masing  denaturasi  94 o C  x  45 detik, dengan suhu annealing yaitu : 55 o C x 60 detik (HEL9), 54 o C x 60 detik (INRA035)  yang dilanjutkan dengan ekstensi : 72 o C x 60 detik, yang  kemudian  diakhiri  dengan  satu  siklus ekstensi akhir pada suhu 72 o C selama 5 menit dengan menggunakan mesin PCR ( Senso Quest, Germany ).    Produk  PCR  kemudian  dielektro- foresis pada gel polyacrylamide dan pewarnaan dengan  perak  mengikuti  metode  Tegelstrom (1992). Penentuan alel dilakukan  dengan cara menginterpretasi  pita  (band)  yang  terbentuk paling jauh migrasinya ke kutub anoda sebagai alel “ a ”, berikutnya alel “ b ” dan seterusnya.

## Analisis data
Hasil  pengamatan  pola  bulu  tubuh  sapi Bali  dan  pola  warna  yang  menyimpang  dihi - tung  frekuensinya  dari  sampel  yang  diambil, demikian pula untuk bentuk tanduk sehingga dapat diperoleh frekuensi fenotipe kedua sifat tersebut.Keragaman  alel  mikrosatelit  ditentu - kan dari perbedaan migrasi alel pada gel dari masing-masing  individu  sampel,  karena  alel mikrosatelit adalah kodominan maka genotipe ditentukan  berdasarkan  variasi  pita  alel  yang ada.  Kemudian  dihitung  frekuensi  masing- masing  alel  setiap  lokus.  Diferensiasi  genetik diestimasi dengan menggunakan frekuensi alel yang diikuti dengan test Chi – square.
Keterangan :
X 2 = Nilai uji Chi – square O = Jumlah pengamatan genotipe ke –i E = Jumlah harapan genotipe ke - i
Nilai Heterozigositas Pengamatan (H o ) dan Hara- pan (H e ) Nilai  heterozigositas  teramati  (H o )  dan harapan (H e ) dapat digunakan untuk menduga nilai koefisien inbreeding pada suatu kelompok ternak. Perhitungan nilai H o dan H e dilakukan menurut Hartl (1988) dengan formula sebagai berikut :
Keterangan :
H o = Heterozigositas pengamatan N 1ij = Jumlah individu heterozigot pada lokus ke-1 N    = Jumlah individu yang diamati
Nilai  Heterozigositas  Harapan  (H e ) dihitung dengan formula :
Keterangan : H e = Heterozigositas harapan P 1i = Frekuensi alel ke - 1 pada lokus ke - l N  = Jumlah alel pada lokus – l

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Karakteristik fenotip Sapi Bali
Sifat  kualitatif  merupakan  sifat  yang tampak dari luar dan tidak dapat dihitung. Yang termasuk  dalam  sifat  kualitatif,  seperti  bentuk tanduk, warna bulu, dan warna kaos kaki. Hasil pengamatan karakteristik sapi Bali berdasarkan bentuk tanduk dapat dilihat pada Tabel 1. Berdasarkan  Tabel  1.  memperlihatkan bahwa terdapat 6 macam bentuk tanduk yaitu
Silak  Manggulgangsa,  Congklok,  Anoa,  Cono, Bajeg, dan Pendang . Bentuk tanduk yang paling dominan  pada  sapi  jantan  adalah Silak  Bajeg (54,28%)  sedangkan  pada  sapi  betina  yaitu Manggulgangsa (75,56%).  Pada  penelitian  yang dilakukan Handiwirawan (2003), bentuk tanduk yang dominan pada jantan adalah Silak Congklok (74,5%) dan pada betina adalah Manggulgangsa (31,9%).  Sapi  Bali  jantan  umumnya  memiliki bentuk  tanduk Silak  congklok yaitu  jalannya pertumbuhan  tanduk  mula-mula  dari  dasar sedikit  keluar  lalu  membengkok  keatas, kemudian pada ujungnya membengkok sedikit keluar.  Pada  sapi  betina  bentuk  tanduk  yang ideal  disebut manggulgangsa yaitu  jalannya pertumbuhan  tanduk  satu  garis  dengan  dahi arah  kebelakang  sedikit  melengkung  kebawah dan pada ujungnya sedikit mengarah kebawah dan kedalam, tanduk ini berwarna hitam (Payne dan  Rollinson,  1973; National  Research  Council, 1983; Hardjosubroto, 1994).
Variasi bentuk tanduk sapi Bali betina lebih sedikit  daripada  sapi  Bali  jantan.  Bradley  dan Cunningham  (1999)  mengemukakan  bahwa perbedaan bentuk fenotipe ternak domestikasi saat ini dengan leluhurnya adalah akibat proses domestikasi.  Banteng  jantan  memiliki  bentuk
tanduk  yang  sedikit  berbeda  dibandingkan sapi Bali jantan, National Research Council (1983) mengemukakan bahwa bentuk tanduk Banteng jantan adalah mengarah keluar dan kemudian keatas dengan ujung tanduk mengarah kedalam. Hasil analisis karakteristik sapi Bali berdasarkan warna bulu dan warna kaos kaki dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel  2.  memperlihatkan  bahwa  warna bulu yang normal pada sapi jantan didominasi sekitar 97,14% sedangkan pada sapi Bali betina 88,89%.  Sedangkan  warna  kaos  kaki  yang normal pada sapi Bali jantan 91,43% begitu pula dengan sapi Bali betina warna kaos kaki yang normal  sekitar  66,67%.  Sapi  Bali  mempunyai ciri-ciri  khusus  antara  lain:  warna  bulu  merah bata, tetapi yang jantan dewasa berubah menjadi hitam.  Ada  tanda-tanda  khusus  yang  harus dipenuhi sebagai sapi bali murni, yaitu warna putih  pada  bagian  belakang  paha,  pinggiran bibir  atas  dan  pada  paha  kaki  bawah  mulai tarsus dan carpus sampai batas pinggir atas kuku, bulu pada ujung ekor hitam, bulu pada bagian dalam telinga putih, terdapat garis belut (garis hitam) yang jelas pada bagian atas punggung, (Hardjosubroto, 1994).

## Tabel 1 . Karakteristik bentuk tanduk sapi Bali
Karakteristik Jantan Betina Ekor (%) Ekor (%) Manggulgangsa 0 0,0 34 75,56 Congklok 11 31,43 0 0,0 Anoa 1 2,86 8 17,78 Cono 0 0,0 3 6,66 Bajeg 19 54,28 0 0,0 Pendang 4 11,43 0 0,0 Total 35 100,0 45 100,0
Tabel 2 . Karakteristik warna bulu dan kaos kaki Parameter Jenis Kelamin Warna Persentase Normal Menyimpang Normal Menyimpang Warna bulu Jantan 34 1 97,14 2,86 Betina 40 5 88,89 11,11 Total 74 6 92,5 7,50 Kaos kaki Jantan 32 3 91,43 8,57 Betina 30 15 66,67 33,33 Total 62 18 77,50 22,55

## Musdalifa Mansur, dkk

## Sifat kuantitatif
Sifat  kuantitatif  sapi  Bali  yang  berada  di Kabupaten Barru dapat dilihat pada Tabel 3. Berdasarkan  pengamatan  yang  dilakukan terhadap sifat kuantitatif sapi Bali di Kabupaten Barru,  performa  sapi  Bali  betina  lebih  besar daripada  jantan.  Hal  ini  disebabkan  karena umur  rata-rata  pada  sapi  jantan  adalah  2,65 tahun dan rata-rata umur sapi betina adalah 4,62 tahun. Umur juga mempengaruhi berat badan hal ini sesuai dengan pendapat Pane (1986) yang menyatakan  bahwa  pertumbuhan  merupakan pertambahan  bobot  badan  atau  ukuran  tubuh yang sesuai dengan umur. Umur ternak jantan yang lebih muda disebabkan oleh ternak jantan yang tua umumnya dijual oleh peternak untuk digemukkan  oleh  pengusaha  penggemukan atau untuk dipotong sebagai hewan konsumsi atau qurban.
Amplifikasi  dan  genotip  Mikrosatelit  Lokus HEL9 dan INRA035 pada sapi Bali
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  menunjukkan  bahwa  lokus  HEL9
dan INRA035 berhasil di amplifikasi pada suhu annealing 55 dan 54 o C. Hasil amplifikasi dapat divisualisasikan pada gel polyacrylamide 8% dan dapat dilihat pada Gambar 1. Panjang produk hasil  amplifikasi  mikrosatelit  HEL9  berkisar antara 144-169 pb.
Pada penelitian ini, alel mikrosatelit HEL9 yang  berhasil  teramplifikasi  (ditunjukkan dengan adanya band dengan ukuran yang sesuai). Sekuen  alel  HEL9  berukuran  panjang  antara 143-165  pb  (Bioshop et  al. ,  1994).  Berdasarkan panjang  fragmen  hasil  PCR  dapat  ditentukan genotip  masing-masing  ternak.  DNA  dengan panjang fragmen ±144 pb diidentifikasi sebagai alel A sedangkan panjang fragmen ±161 pb di identifikasi  sebagai  alel  B.  Dengan  demikian ternak  dengan  panjang  kedua  fragmen  ±144 pb  di  identifikasi  sebagai  genotipe  AA,  ternak dengan panjang fragmen ±144 pb dan ±161 pb di identifikasi sebagai genotipe AB dan ternak dengan  panjang  kedua  fragmen  ±161  pb  di identifikasi sebagai genotipe BB. Hal ini sesuai dengan  penelitian  Handiwirawan et  al .  (2003) bahwa  alel  yang  teramplifikasi  melalui  proses PCR  pada lokus HEL9 pada sapi Bali memiliki
Tabel 3 . Sifat kuantitatif sapi Bali
Data kuantitatif Konsentrasi gliserol (%) Jantan (n=35) Betina (n=45) Umur 2,65±0,45 4,62±1,98 Bobot Badan 158,63 ± 34,27 185,72 ± 46,37 Lingkar Dada 136,69 ± 14,57 146,84 ± 13,18 Panjang Badan 98,46 ± 7,00 104,13 ± 10,48 Tinggi Badan 104,84 ± 5,69 106,96 ± 6,07
Gambar 1.   Visualisasi hasil amplifikasi Mikrosatelit Lokus HEL9 pada mesin PCR dalam gel polyacrylamide 8%. M: marker 100 pb, 1-12: sampel sapi Bali
ukuran panjang yaitu: alel A berukuran ±144 pb, alel B berukuran ±161 pb.
Sedangkan  lokus  INRA035  berhasil  di amplifikasi  pada  suhu annealing 54 o C.  Hasil amplifikasi  yang  divisualisasikan  pada  gel polyacrylamide 30% dapat dilihat pada Gambar 2. Gambar  2  memperlihatkan  alel  yang teramplikasi  melalui  proses  PCR  pada  lokus INRA035 pada sapi Bali. Sekuen alel mikrosatelit INRA035  panjangnya  berukuran  120  pb (Vaitman et al., 1994). Pada penilitian ini terdapat 3  jenis  alel  yang  ditemukan  yaitu  alel  A  yang berukuran + 113 pb, alel B yang berukuran + 117 pb dan alel C yang berukuran + 121 pb. Dengan demikian sapi Bali yang panjang kedua fragmen +113 pb dan  + 117 pb bergenotipe AB dan sapi Bali  dengan  panjang  kedua  fragmen  +  117  pb dan  +  121  pb  bergenotipe  BC.  Hasil  penilitian Handiwirawan  (2003)  menemukan  bahwa  alel yang teramplifikasi pada lokus INRA035 yaitu alel A yang berukuran + 113 pb dan alel B yang berukuran  + 117  pb  yang  teramplifikasi  pada sapi Bali dan Banteng serta diperoleh 2 jenis alel lain, yaitu alel C yang berukuran + 121 pb dan alel D yang berukuran + 138 pb.
Frekuensi  Genotip,  Alel  dan  Keseimbangan Hardy- Weinberg
Hasil analisa frekuensi genotip mikrosatelit lokus  HEL9  pada  sapi  Bali  dapat  dilihat  pada Tabel 5. Polimorfisme dapat ditunjukkan dengan adanya dua alel atau lebih dalam satu populasi. Gen  dikatakan  polimorfik  apabila  salah  satu alelnya mempunyai frekuensi kurang dari 99% (Nei dan Kumar, 2000).
Berdasarkan data pada Tabel 4 dapat dilihat bahwa frekuensi genotip homozigot AA dan BB adalah  0  dan  frekuensi  heterozigot  AB  adalah 100. Hal ini terjadi karena hanya satu genotipe yang terdistribusi dan nilai ini muncul karena jumlah sampel yang diteliti sangat sedikit dan tingkat keragaman genetik sangat rendah.
Walaupun  sapi  Bali  merupakan  hasil domestikasi  dari  Banteng,  namun  hasil pengamatan menunjukkan bahwa alel genotip Banteng dan sapi Bali tidak identik. Pada populasi sapi  Bali  di  Kabupaten  Barru  ditemukan  alel lain.  Pada  lokus  HEL9  ditemukan  alel  B  yang berukuran ±161 pb yang tidak ditemukan pada banteng (Handiwirawan et al ., 2003). Adanya alel ini diduga karena alel-alel tersebut merupakan alel  mutasi  sebagai  akibat  proses replication
Gambar 2. Alel yang teridentifikasi melalui gelpolyacrylamide 30 % padalokusINRA035. (M) Marker 100pb.(1-15) sampel sapi Bali
Tabel 4. Frekuensi genotip mikrosatelit lokus HEL9
Lokus mikrosatelit Frekuensi Genotipe  (n) AA AB BB AC BC CC HEL9 0 100 (80) 0 0 0 0 INRA035 0 0.9625 (77) 0 0 0.0375 (3) 0
shappage yang  menghasilkan  rangkaian  yang lebih  panjang  (Levinson  dan  Gutman,  1987, Li  dan  Graur,  1991).  Kemungkinan  yang  lain adalah  adanya  aliran  gen  (alel)  dari  luar  atau bangsa sapi lain yang masuk kedalam populasi sapi Bali di Kabupaten Barru.
Sedangkan  pada  lokus  mikrosatelit INRA035, hasil identifikasi menunjukkan bahwa sapi  Bali  mempunyai  2  jenis  genotipe  yaitu genotipe  AB  sebanyak  77  ekor  dan  genotipe BC  sebanyak  3  ekor,  sedangkan  genotipe  AA, BB  dan  CC  tidak  ditemukan  pada  penelitian ini.  Frekuensi  genotipe  AB  yaitu  0,9625  yang lebih  tinggi  dari  frekuensi  BC  yaitu  0,0375. Hasil  penelitian  Winaya  (2000)  mendapatkan hasil  bahwa  alel  pada  lokus  INRA035  adalah monomorfik pada sapi Bali dimana seluruh sapi Bali bergenotipe AB, lokus tersebut merupakan kandidat  yang  diuji  pada  lokus  dengan  alel yang  spesifik  pada  sapi  Bali  yaitu  alel  A  dan B. Munculnya alel baru (alel C)  kemungkinan karena  adanya aliran gen dari luar atau bangsa sapi  lain  yang  masuk  ke  dalam  populasi  sapi Bali yang ada di Kabupaten Barru.
Frekuensi  alel  adalah  perbandingan keseluruhan  fragmen  gen  yang  terdiri  dari suatu varian gen tertentu (alel). Keseimbangan Hardy-Weinberg  berhubungan  eret  dengan frekuensi genotip dan frekuensi alel. Frekuensi alel dapat dihitung berdasarkan Nei dan Kumar (2000) dan HWE dengan Uji Chi- Square.
Pada Tabel 5 ditunjukkan bahwa frekuensi alel A pada lokus HEL9 adalah 50%, frekuensi ini  lebih  kecil  jika  dibandingkan  dengan  yang dilaporkan Handiwirawan (2003) frekuensi alel A  (92,9%).  Hal  ini  berarti  telah  ada  aliran  gen dari sapi lain yang terdapat pada sapi Bali yang ada di kabupaten Barru.
Pada  penelitian  ini  juga  menunjukkan bahwa  frekuensi  alel  pada  lokus  HEL9  dan INRA035 pada populasi sapi Bali di Kabupaten Barru tidak berada dalam keseimbangan Hardy- Weinberg . Hal-  hal  yang  dapat  mempengaruhi keseimbangan Hardy-Weinberg menurut Hardjosubroto (1998) adalah mutasi, gene flow , migrasi,  seleksi,  dan  tidak  terjadi  perkawinan secara acak.

## Nilai Heterozigositas
Keragaman  genetik  suatu  populasi dapat  diukur  dengan  nilai  heterozigositas. Nilai heterozigositas pengamatan (H o ) dan  heterozigositas  harapan  (H e )  dihitung berdasarkan rumus Nei dan Kumar (2000) dapat dilihat pada Tabel 6.
Nilai heterozigositas pengamatan (H o ) dan heterozigositas  harapan  (H e )  digunakan  untuk menduga  keragaman  genetik.Heterozigositas harapan  merupakan  penduga  keragaman genetik pada populasi ternak lebih tepat karena perhitungannya  dilihat  berdasarkan  frekuensi alel.Nilai  H o adalah  1  dan  He  (0.50  dan  0.52). Nilai  ini  lebih  tinggi  didapatkan  dari  pada penelitian  yang  dilakukan  oleh  Abdullah, dkk  (2008)  yang  hanya  menemukan  0,1  dan Handiwirawan  (2003)  menemukan  0,135.  Hal ini  disebabkan  karena  ketidakseimbangan genotipe  pada  populasi  tersebut.  Menurut Tambasco et  al (2003)  perbedaan  antara  nilai heterozigositas  pengamatan  (H o )  dan  nilai heterozigositas  harapan  (H e )  dapat  dijadikan sebagai  indikator  adanya  ketidakseimbangan genotipe pada populasi sapi yang diamati yang diindikasikan bahwa sudah ada kegiatan seleksi yang dilakukan  dan tidak adanya perkawinan acak.

## Tabel 5. Frekuensi Alel dan Keseimbangan Hardy- Weinberg
Lokus Mikrosatelit Total Sampel (n) Frekuensi Alel (%) X2 (HWE) A B C HEL9 80 50 50 0 Td INRA035 80 0,48 0,50 0,02 79**
td : tidak memenuhi syarat untuk dihitung
Tabel 6. Nilai Heterozigositas Pengamatan (Ho) dan Heterozigositas  Harapan (He)
Lokus Mikrosatelit Total Sampel (n) Nilai heterozigositas A B HEL9 80 1 0,5031 INRA035 80 1 0,5213

## KESIMPULAN
Bentuk  tanduk  yang  paling  umum  pada sapi  Bali  di  Kabupaten  Barru  pada  jantan adalah Silak  Bajeg (54,28%)  dan  pada  betina adalah Silak  Manggulgangsa (75,56%).  Warna bulu menyimpang 2,28% pada jantan dan betina 11,11%. Warna kaos kaki yang menyimpang pada jantan 8,57% dan betina sekitar 33,33%. Warna menyimpang  pada  kaos  kaki  seperti:  terdapat warna hitam dan warna coklat pada kaos kaki sapi  tersebut.  Proporsi  alel  mikrosatelit  lokus HEL9 adalah 50% untuk masing-masing alel A dan B.Persentase genotipe AB pada sapi Bali di Kabupaten Barru adalah 100% . Sedangkan pada lokus INRA035 frekuensi genotipe AB sebanyak 96,25% dan BC sebanyak 3.75%.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdullah,  M.  A.  N.,  R.R.  Noor,  H.  Martojo,  dan D.D. Solihin. 2008. Karakterisasi genetik sapi Aceh dengan menggunakan dna mikrosatelit. J.Indon.Trop.Anim.Agric. 33.
Bishop, M.D., S.M. Kappes, J.W. Keele, R.T. Stone, I.F. Sunden, G.A. Hawkin, S.S. Toldo, R. Fries, M.D. Grosz, J. Voo, and C.W. Beattie. 1994. A genetic linkage map for cattle. Genetics. 136: 619-639.
Bradley, D.G. and E.P. Cunningham. 1999. Genetics Aspects  of  Domestication.  In:  Fries,  R.  And Ruvinsky,  A.,  editor.The  genetics  of  Cattle. New York : CABI Publishing. Hlm 15 – 31.
Handiwirawan,  E.  2003.Penggunaan  Mikrosatelit HEL9 dan INRA035 sebagai Penciri Khas Sapi Bali.  Tesis.  Program  Pasca  Sarjana,  Institut Pertanian Bogor.
Handiwirawan,  E.,  R.  R.  Noor,  Muladno,  and  L. Schuler. 2003. The use of HEL9 and INRA035 mikrosatelites  as  specific  markers  for  Bali cattle. Arch. Tierz., Dummerstorf 46: 503-512.
Handiwirawan, E. dan Subandriyo.  2004. Potensi dan  keragaman  sumberdaya  genetik  sapi bali.Lokakarya Nasional Sapi Potong . Pusat Penelitian  dan  Pengembangan  Peternakan.
Hlm. 50-60.
Hardjosubroto,  W.  1994.  Aplikasi  Pemuliabiakan Ternak  di  Lapangan.  Jakarta:  PT  Gramedia Widiasarana Indonesia.
Hardjosubroto,  W.  1998.  Pengantar  Genetika Hewan.  Fakultas  Peternakan  Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Levinson,  G.  and  G.  A.  Gutman.  1987.  Slipped- strand  mispairing:  a  major  mechanism  for DNA sequence evolution. Mol. Biol. Evol. 4: 203-221
Li,  W.  H.  and  D.  Graur.  1991.  Fundamentals of  Molecular  Evolution  Sunderland, Massachusetts: Sinauer Associates, Inc.
National  Research  Council.  1983.  Little-Known Asian  Animals  with  a  Promising  Economic Future. Washington, D.C.: National Academic Press.
Nei, M. and S. Kumar. 2000. Molecular Evolution and  Phylogenetics.  New  York:  Oxford University Press.
Oka, I. G. L. and D. Darmadja. 1996. History and development  of  Bali  Cattle.  Proceedings seminar  on  Bali  cattle,  a  special  spesies  for the dry tropics, held by Indonesia Australia Eastern  University  Project  (IAEUP),  21 September 1996. Udayana University Lodge, Bukit Jimbaran, Bali.
Pane,  I.  1986.  Pemuliabiakan  Ternak  Sapi.  PT.

## Gramedia, Jakarta.
Payne,  W.J.A.  and  D.H.L.  Rollinson.  1973.  Bali cattle. World Anim. Rev. 7: 13-21.
Payne,  W.J.A.  and  J.  Hodges.  1997 . Tropical Cattle: Origin, Breeds and Breeding Policies. Blackwell Science.
Tambasco,  D.  D.,  C.  C.  P.  Paz,  M.  Tambasco- Studart, A. P. Pereira, M. M. Alencar, A. R. Freitas, L. L. Countinho, I. U. Packer, and L. C.  A.  Regitano.  2003.  Candidate  genes  for growth traits in beef cattle Bos Taurus x Bos Indicus. J. Anim. Bred. Genet. 120: 51-60.
Tegelstrom,  H.  1992.  Mitochondrial  DNA  in natural  population:  An  improved  routine for  screening  of  genetic  variation  baed  on sensitive  silver  staining.  Electrophoresis.  7: 226-229