Penetapan Kandungan Total Fenolik-Flavonoid pada Fraksi Etil Asetat Kulit Batang Kasturi (Mangifera casturi Kosterman)
Hafiz Ramadhan*, Dea Permata Rezky, Eka Fitri Susiani Program Studi S1 Farmasi, STIKES Borneo Lestari, Banjarbaru, Indonesia
*Corresponding author: hafizramadhan14@gmail.com
Submitted: 26 Mei 2020 Accepted: 3 Desember 2020 Published: 27 April 2021

## Abstract
Background:  Kasturi  (Mangifera  casturi  Kosterman)  is  one  of  the  typical  plants  of  Kalimantan  which  has potentially bioactive because it has a high phenol and flavonoid content. This plant is used in medicine by people for generations and is  rarely found, so need to  know the chemicals that are efficacious in  the bark. Objective: This  study  aims  to  determine  the  total  levels  of  phenolic  and  flavonoids  of  ethyl  acetate  fraction  from  the methanol  extract  of  Kasturi  bark.  Methods:  Qualitative  analysis  was  done  through  phenolic  phytochemical screening  with  FeCl 3 reagent,  whereas  flavonoids  using  Mg-HCl,  NaOH  10%,  and  H 2 SO 4 .  Thin-layer chromatography  (TLC)  was  also  carried  out  with  methanol  eluent  and  10%  FeCl 3 spotting  appearance  for phenolic  compounds,  5% AlCl 3 and  citroborate  for  flavonoid  compounds.  Determination  of  total phenolic  and flavonoid  levels  using  colorimetric  methods  with  the  Folin-Ciocelteu  complex  reagents  in  phenolic  and  AlCl 3 complex  reactants  on  flavonoids  whose  absorbance  was  measured  using  UV-Vis  spectrophotometer.  Results: The  results  showed  that  the  value  of  rendement  of  methanol  extract  of  Kasturi  bark  is  10.38%  and  its  ethyl acetate fraction is 4.2%. Phytochemical  screening  and  TLC was identified phenolic and flavonoid content.  The ethyl acetate fraction from the methanol extract of Kasturi bark contains a total phenolic level of 3.92 mg GAE/g fraction and a total flavonoid level of 5.14 mg QE/g fraction. Conclusion: The study can be concluded that the ethyl acetate fraction from the methanol extract of Kasturi bark contains flavonoid and phenolic compounds that can be used as alternatives natural medicine sources.

## Keywords: kasturi bark, ethyl acetate fraction, phenolic, flavonoid

## Abstrak
Pendahuluan :  Kasturi  ( Mangifera  casturi Kosterman)  adalah  salah  satu  dari  tumbuhan  khas  Kalimantan  yang memiliki  berpotensi  bioaktif  karena  memiliki  kandungan  fenol  dan  flavonoid  yang  tinggi.  Tanaman  ini digunakan dalam pengobatan oleh masyarakat secara turun temurun dan langka untuk ditemukan, sehingga perlu diketahui zat kimia berkhasiat pada bagian kulit batangnya. Tujuan : Penelitian ini bertujuan untuk menentukan kadar  total  fenolik  dan  flavonoid  fraksi  etil  asetat  dari  ekstrak  metanol  kulit  batang  kasturi  ( M.  casturi Kosterman). Metode :  Analisis  kualitatif  melalui  skrining  fitokimia  fenolik  dengan  reagen  FeCl 3 ,  sedangkan untuk flavonoid menggunakan Mg-HCl, NaOH 10%, dan H 2 SO 4 . Kromatografi lapis tipis (KLT) juga dilakukan dengan eluen metanol  dan penampak bercak FeCl 3 10% untuk  senyawa fenolik, AlCl 3 5% dan sitroborat  untuk senyawa  flavonoid.  Penentuan  kadar  total  fenolik  dan  flavonoid  menggunakan  metode  kolorimetri  dengan pereaksi  kompleks Folin-Ciocelteu pada  fenolik  dan  pereaksi  kompleks  AlCl 3 pada  flavonoid  yang absorbansinya  diukur  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis. Hasil :  Hasil  penelitian  diperoleh  rendemen ekstrak  metanol  kulit  batang  Kasturi  sebesar  10,38%  dan  rendemen  fraksi  etil  asetatnya  sebesar  4,2%.  Hasil skrining  fitokimia  dan  KLT  teridentifikasi  kandungan  fenolik  dan  flavonoid.  Fraksi  etil  asetat  dari  ekstrak metanol  kulit  batang  Kasturi  mengandung  kadar  total  fenol  sebesar  3,92  mg  GAE/g  fraksi  dan  kadar  total flavonoid sebesar 5,14 mg QE/g fraksi. Kesimpulan : Kesimpulan dari penelitian ini adalah fraksi etil asetat dari
ekstrak  metanol  kulit  batang  Kasturi  mengandung  senyawa  fenolik  dan  flavonoid  yang  berpotensi  untuk dimanfaatkan sebagai alternatif sumber obat bahan alam.
Kata kunci : kulit batang kasturi, fraksi etil asetat, fenolik, flavonoid

## PENDAHULUAN
Spesies-spesies  dari  genus Mangifera dikenal sebagai  buah-buahan  yang  banyak  dikonsumsi  oleh masyarakat,  diantaranya  adalah  mangga (Mangifera indica) , pakel (Mangifera foetida L .) , kweni (Mangifera  odorata) dan  kasturi (Mangifera  casturi Kosterman ) (Santoni  dkk.,  2015).  Genus Mangifera mengandung  potensial  bioaktif  dan  merupakan  salah satu  penghasil  antioksidan  tinggi  karena  memiliki kandungan  golongan  senyawa  fenolik  dan  flavonoid tinggi  yang  berperan  dalam  menghasilkan  aktivitas tersebut  (Mirfat  dkk.,  2013).  Kandungan  fenolik  yang terdapat  pada  genus Mangifera antara  lain  yaitu  asam galat, α-tokoferol, 3 - metil  galat,  propil  galat,  dan  juga mangiferin  (Kim  dkk.,  2010;  Sulaiman  &  Ooi,  2012). Genus  tersebut  juga  mengandung  beberapa  jenis flavonoid  antara  lain  yaitu  kaempferol  3-O-glukosida, kuersetin  3-β-D  glukosida,  katekin,  epikatekin, daidzein  dan  genistein  (Khoo  &  Ismail,  2008;  Kim dkk., 2010; Ribeiro dkk., 2008).
Salah  satu  tumbuhan  dari  genus  tersebut  yang merupakan  tanaman  khas  berasal  dari  Kalimantan adalah Kasturi  (Aksara dkk., 2013). Tanaman ini telah banyak  digunakan  dalam  pengobatan  karena  secara tradisional  telah  digunakan  oleh  masyarakat  secara turun  temurun.  Tanaman  ini  juga  sudah  langka  untuk ditemukan,  maka  akan  sulit  untuk  diteliti  sehingga perlu  diketahui  zat  kimia  berkhasiat  yang  terkandung didalamnya, agar terjaga kelestariannya dan bermanfaat  dalam  dunia  kesehatan  (Kostermans  & Bompard,  2014).  Aktivitas  antioksidan  dari  Kasturi sudah  terbukti  sangat  kuat  pada  bagian  buah (Suhartono  dkk.,  2012;  Sutomo  dkk.,  2017b),  daun (Bakti  dkk.,  2017),  dan  kulit  batang  (Prayitno  dkk., 2016).  Keberadaan  Kasturi  yang  terancam  punah  dan belum  dibudidayakan  karena  umur  berbuahnya  yang sangat  panjang  dan  pohonnya  yang  sangat  besar  dan tinggi  sehingga  potensi  bagian  kulit  batangnya  perlu dieksplorasi  dan  dimanfaatkan  secara  maksimal (Marliani  dkk.,  2016).  Selain  berperan  sebagai antioksidan,  bagian  kulit  batang  Kasturi  memiliki potensi  dikembangkan  menjadi  bahan  obat  karena berpotensi  sebagai  antibakteri  (Rosyidah  dkk.,  2012; Santi dkk., 2016; Syarifuddin dkk., 2014) dan aktivitas sitotoksik (Ariyani dkk., 2010).
Aktivitas  yang  dihasilkan  kulit  batang  Kasturi berhubungan  dengan  kandungan  senyawa  fenolik  dan flavonoidnya. Kadar senyawa yang tersari dari tamanan sangat berperan dalam menghasilkan aktivitas biologis, sehingga  pemilihan  pelarut  yang  tepat  sangat berpengaruh  dalam  ektraksi  kulit  batang  Kasturi. Penggunaan pelarut metilen klorida pada maserasi kulit batang  Kasturi  telah  dilakukan  oleh  Prayitno  dkk. (2016)  untuk  aktivitas  antioksidan,  tetapi  hasil  yang didapatkan  tidak  menunjukkan  adanya  aktivitas antioksidan.  Penggunaan  pelarut  etanol  pada  ekstraksi kulit batang Kasturi juga didapatkan kadar fenolik yang lebih rendah dibandingkan bagian daun dan kulit buah (Marliani dkk., 2016). Sedangkan ekstraksi menggunakan  metanol  untuk  kulit  batang  Kasturi berpotensi besar dalam menghasilkan aktivitas biologis seperti  antidiabetes  (Mustikasari  &  Ariyani,  2008) aktivitas  sitotoksik  (Rosyidah  &  Mustikasari,  2008) dan antibakteri  (Rosyidah dkk., 2012). Pengujian pada ekstrak metanol kulit batang Kasturi juga menunjukkan hasil  skrining  metabolit  sekunder  yang  lebih  banyak meliputi tanin, fenol, flavonoid, alkaloid, terpenoid dan saponin  (Sutomo  dkk.,  2017a).  Selain  itu  penggunaan pelarut  metanol  lebih  efektif  dalam  mengekstraksi kandungan  mangiferin  yang  merupakan  komponen kimia utama pada genus Mangifera (Shinde & Chavan, 2014).
Berdasarkan penelusuran literatur yang menunjukkan  hasil  skrining  metabolit  sekunder  pada ekstrak  metanol  kulit  batang  kasturi  mengandung senyawa golongan fenolik dan flavonoid, melatarbelakangi  dilakukannya  penelitian  penentuan kadar  total  fenolik  dan  flavonoid  dari  fraksi  etil asetat yang berasal dari ekstrak metanol kulit batang Kasturi. Penelitian  ini  diharapkan  bahwa  fraksi  etil  asetat  dari ekstrak  metanol  kulit  batang  Kasturi  memiliki kandungan dan kadar flavonoid dan fenolik yang tinggi seperti  pada  bagian  daun  dan  kulit  buahnya,  sehingga dapat  berguna  sebagai  alternatif  sumber  obat  bahan alam, khususnya aktivitas antioksidan.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  untuk  penelitian  adalah metanol teknis ( Shagufta Laboratory ), etil asetat teknis
( Shagufta  Laboratory ),  metanol p.a. ( Merck ),  FeCl 3 ( Merck ),  AlCl 3 ( Merck ),  asam  asetat  ( Merck ),  Na 2 CO 3 ( Merck ),  reagen Folin-Ciocalteu ( Merck ) , silica  gel GF 254 ( Merck ),  aquadest,  kuersetin  ( Sigma-aldrich ), asam  galat  ( Sigma-aldrich ).  dan  simplisia  kulit  batang Kasturi  yang  diperoleh  dari  Kota  Banjarbaru, Kalimantan Selatan.
Alat
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  bejana  maserasi, blender  (Sharp ® ),  cawan penguap , labu  ukur (Pyrex ® ),  rotary  evaporator (IKARF10 ® ) ,  kuvet,  spektrofotometer  UV-Vis  ( PG Instruments T60 ® ), tabung reaksi (IWAKI ® ) , timbangan analitik (Scount Pro ® ) , dan waterbath (Memmert ® ) .

## Metode

## Ekstraksi simplisia kulit batang kasturi
Simplisia  kulit  batang  Kasturi  diekstraksi  dengan metode maserasi menggunakan pelarut metanol (1 : 5). Ekstraksi  dilakukan selama 1  x  24 jam dan remaserasi sebanyak  2  kali  (2  x  24  jam).  Hasil  ekstraksi  disaring dan  filtrat  diuapkan  pelarutnya  menggunakan rotary evaporator dan  dipekatkan  dengan waterbath pada suhu 50 o C (Sutomo dkk., 2017a) .

## Fraksinasi ekstrak methanol kulit batang kasturi
Ekstrak  kental  dilarutkan  dalam  100  mL metanol  :  air  (1  :  2)  dalam  corong  pisah,  kemudian difraksinasi  dengan  n-heksan  100  mL  dengan  3  kali pengulangan, didiamkan sampai terbentuk dua lapisan. Residu  fraksi  air  dipisahkan dan  ditambahkan 100 mL etil asetat dengan pengocokan dan 3 kali pengulangan. Fraksi  etil  asetat  dipekatkan  dengan waterbath pada suhu 60 o C (Tanaya dkk., 2015).
Skrinning  fitokimia  flavonoid  dan  fenolik  pada fraksi etil asetat Uji fenol
Sampel konsentrasi 1% dalam metanol ditambahkan  1  mL  FeCl 3 5%,  hasil  uji  positif mengandung  senyawa  fenol  apabila  terbentuk  warna biru kehitaman (Marliani dkk., 2016).

## Uji flavonoid
Sampel  konsentrasi  1%  dalam  metanol  diujikan dengan  3  pereaksi  warna.  Pada  uji  pertama  sampel ditambahkan  beberapa  tetes  NaOH  10%.  Jika  warna kuning-coklat  muncul  dan  kemudian  memudar  ketika ditambahkan HCl encer menunjukkan positif flavonoid (Khairiah  dkk.,  2018).  Pada  pengujian  kedua  jika sampel membentuk endapan merah setelah penambahan reagen HCl pekat dengan logam Mg, serta jika pada pengujian ketiga setelah sampel ditambahkan HCl  dan  H 2 SO 4 pekat  membentuk  warna coklat, maka
juga  menunjukkan  positif  kandungan  flavonoid (Tanaya dkk., 2015).
Identifikasi  senyawa  flavonoid  dan  fenolik  dengan kromatografi lapis tipis (KLT)

## Identifikasi senyawa fenol
Fraksi  etil  asetat  dari  ekstrak metanol  kulit  batang kasturi konsentrasi 100 ppm dalam metanol, ditotolkan pada  plat  KLT  silica  gel  GF 254 menggunakan  eluen metanol  tunggal  hingga  terelusi  sempurna,  kemudian diamati  bercak  pada  UV  254  nm  dan  366  nm.  Setelah itu dilakukan penyemprotan dengan reagen FeCl 3 10%. Hasil  positif  mengandung  fenol  jika  noda  berwarna hitam (Marliani dkk., 2016).

## Identifikasi senyawa flavonoid
Hasil  KLT  seperti  perlakuan  pada  identifikasi fenol diamati bercaknya pada UV 254 nm dan 366 nm. Setelah  itu  bercak  disemprot  dengan  AlCl 3 5%  dan pereaksi  sitroborat.  Jika  bercak  menjadi  berwarna kuning  pada  penampak  bercak  AlCl 3 5%  maupun pereaksi  sitroborat  menunjukkan  positif  kandungan flavonoid (Ahmad dkk., 2015; Marliani dkk., 2016). Penentuan  kadar  total  flavonoid  dari  fraksi  etil asetat
Percobaan  merujuk  pada  penelitian  (Chang  dkk., 2002)  yang  diawali  dengan  penetapan  λ  maks  dari larutan  kuarsetin  100  ppm  sebanyak  1  mL  ditambah 1 mL AlCl 3 dan 8 mL asam asetat 5% kemudian diukur absorbansi dengan  spektrofotometer UV-Vis, sehingga didapat λ maks 415 nm. Penentuan operating time juga diberi perlakuan serupa pada interval 1 menit, sehingga didapat  absorbansi  stabil  pada  0  -  6  menit.  Penetapan kadar  total  flavonoid  menggunakan  standar  kuersetin sebagai kurva baku dengan seri konsentrasi 40, 60, 80, 100,  dan  120  ppm.  Seri  kurva  baku  dan  fraksi  diberi perlakuan  yang  sama  seperti  penentuan  λ  maks  yang sebelumnya didiamkan selama operating time sebelum pembacaan  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis. Penetapan  kadar  total  flavonoid  dalam  fraksi  didapat dengan  memasukkan  absorbansi  pada  regresi  linier kurva  baku  (Anwar  dkk.,  2017;  Bakti  dkk.,  2017). Kadar  total  flavonoid  dinyatakan  sebagai  total ekuivalen  kuersetin  per  1  g  fraksi  (mg QE /g).  Kadar total  flavonoid  dapat  dihitung  menggunakan  rumus sebagai berikut (Rosita dkk., 2017):
C x V x Fp Kadar total flavonoid =
M
Keterangan: C: Konsentrasi Kuersetin
V: Volume Fraksi M: Berat Fraksi

## Fp: Faktor Pengenceran

## Penentuan kadar total fenolik dari fraksi etil asetat
Pada  tahap  ini  langkah  pertama  dilakukan penetapan  λ  maks  dari  konsentrasi  100  ppm  sebanyak 0,5  mL  ditambah  2  mL  reagen Folin-Ciocalteu dan didiamkan selama 3 menit, kemudian tambahkan 4 mL larutan  Na 2 CO 3 1  M,  divorteks  dan  diinkubasi  pada ruangan gelap selama 20 menit. Pengukuran absorbansi menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  didapatkan  λ maks  738  nm.  Penetapan  kadar  total  fenolik menggunakan  standar  asam  galat  sebagai  kurva  baku dengan  seri  konsentrasi  25,  50, 75, 100,  dan 125 ppm. Seri  kurva  standar  asam  galat  dan  fraksi  diberi perlakuan  yang  sama  seperti  penentuan  λ  maks  dan diukur  absorbansinya  pada  738  nm.  Penetapan  kadar total  fenolik  dari  fraksi  didapat  dengan  memasukkan absorbansi  pada  regresi  linier  kurva  baku  (Das  dkk., 2014;  Wahdaningsih  dkk.,  2017).  Kadar  total  fenolik ditunjukkan dengan miligram ekuivalen asam galat per gram  fraksi  (mg GAE /g).  Kadar  total  fenolik  dapat dihitung menggunakan rumus sebagai berikut (Rollando & Monica, 2018):
C x V x Fp Kadar total fenoik = M Keterangan: C: Konsentrasi Asam Galat V: Volume Fraksi
M: Berat Fraksi
Fp: Faktor Pengenceran

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kulit batang Kasturi (Mangifera casturi Kosterman ) diekstraksi  dengan  metode  maserasi menggunakan  pelarut  metanol.  Semua  flavonoid  baik dalam  bentuk  glikosida  maupun  flavonoid  dalam bentuk  bebas  dapat  larut  dalam  pelarut  methanol karena  sifatnya  yang  cendrung  polar  (Tanaya  dkk.,
2015).  Metode  maserasi  digunakan  untuk  ekstraksi karena prosedur dan peralatannya sederhana, prosesnya mudah,  tetapi  sudah  dapat  mensari  zat  aktif  simplisia dengan  maksimal  (Sa`adah  &  Nurhasnawati,  2015). Selain  itu,  metode  maserasi  tidak  menggunakan  suhu tinggi  yang  mungkin  dapat  merusak senyawa-senyawa kimia dalam simplisia, yang berperan dalam menghasilkan aktivitas biologis (Al Ridho, 2014). Hasil ekstraksi  kulit  batang  Kasturi  dengan  pelarut  metanol didapatkan  rendemen  sebesar  10,38%.  Hasil  tersebut tidak  jauh  berbeda  dengan  rendemen  dari  ekstrak metanol  kulit  batang  Kasturi  yang  diacu  pada penelitian Sutomo dkk. (2017a) yaitu 12,78%.
Proses  fraksinasi  ekstrak  metanol  kulit  batang Kasturi  menggunakan  3  pelarut  organik  yang  berbeda tingkat kepolarannya, dengan tujuan untuk memisahkan komponen yang terkandung dalam ekstrak berdasarkan  tingkat  kepolarannya  menjadi  fraksi  yang bersifat polar, semi polar dan non polar, terutama untuk ekstrak  tanaman  yang  mengandung  lebih  dari  satu macam  golongan  fenolik  dan  flavonoid  (Tanaya  dkk., 2015).  Pada  tahap  penambahan  n-heksana  terhadap campuran ekstrak metanol-air bertujuan untuk menarik komponen  yang  bersifat  non  polar.  Setelah  dipisahkan dengan  fraksi  n-heksana,  kemudian  fraksi  metanol-air ditambahkan  pelarut  etil  asetat  untuk  menarik komponen  yang  bersifat  semipolar  (Rahayu  dkk., 2015).  Pemilihan  fraksi  etil  asetat  sebagai  sampel  uji didasarkan  pada  kemampuan  pelarut  etil  asetat  dalam menarik  komponen  fenolik  utama  dalam  genus Mangifera yang  merupakan  golongan  xanton  yaitu mangiferin (Shinde & Chavan, 2014).
Rendemen  fraksi  etil  asetat  kulit  batang  Kasturi yang  didapat  sebesar  4,2%.  Hasil  tersebut  dipengaruhi oleh tingkat kepolaran pelarut organik yang digunakan pada  proses  fraksinasi,  sehingga  mempengaruhi  jenis dan  banyaknya  senyawa  yang  terekstrak  (Ritna  dkk., 2016). Penelitian tersebut selaras dengan hasil skrining fitokimia  fraksi  etil  asetat  dari  ekstrak  metanol  kulit batang Kasturi yang menunjukkan positif mengandung fenolik  dan  flavonoid  setelah  uji  warna  seperti  pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil uji warna pada skrining fitokimia fraksi etil asetat dari kulit batang kasturi Metabolit Sekunder Pereaksi Pengamatan Hasil Flavonoid HCl pekat + Mg Terbentuk merah jingga dan buih (+) HCl + H 2 SO 4 pekat Terbentuk warna coklat (+) NaOH 10% + HCl encer Terbentuk warna coklat kehijauan (+) Fenolik FeCl 3 5% Terbentuk warna hijau hitam (+)
(+) = Positif mengandung metabolit sekunder
Uji  kualitatif  menggunakan  kromatografi  lapis tipis  (KLT)  juga  dilakukan  untuk  lebih  menegaskan hasil yang didapat dari uji warna. Pada fase diam silika gel  GF 254 dan  fase  gerak  methanol  terdeteksi  bercak berwarna kuning pada penampak bercak sitroborat dan AlCl 3 dengan Rf masing-masing  sebesar 0,83 dan 0,86 (Gambar  1).  Warna  yang  terbentuk  mengindikasikan bahwa  pada  fraksi  etil  asetat  kulit  batang  Kasturi mengandung  senyawa  flavonoid.  Pada  bercak  yang sama terbentuk warna hitam setelah diberi penyemprot
FeCl 3 dengan Rf sebesar  0,81  yang  mengindikasikan bahwa  bercak  flavonoid  yang  terdeteksi  merupakan golongan  senyawa  fenol  (Marliani  dkk.,  2016).  Pada paparan  sinar  UV  254  nm,  ternyata  lempeng-lempeng KLT  tersebut  tampak  berwarna  gelap  dengan  latar berflouresensi,  sedangkan  pada  sinar  366  nm  bercak tampak  berflouresensi  dan  latar lempeng tampak gelap (Ih  dkk.,  2017).  Hasil  tersebut  menguatkan  bahwa sampel  mengandung  flavonoid  dan  fenolik  seperti penampakan bercak KLT pada Gambar 1.
(a) (b) (c) (a) (b) (c) (a) (b) (c) (1) (2) (3)
Gambar 1. Hasil uji kualitatif menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT) pada pengamatan secara (a) visual, (b) di bawah UV 254 nm, dan (c) di bawah UV 366 nm untuk flavonoid dengan (1) penampak bercak sitroborat dan (2)
penampak bercak AlCl 3 , serta untuk fenol dengan (3) penampak bercak FeCl 3
Berdasarkan  skrining  fitokimia  dan  uji  kualitatif yang menunjukkan positif flavonoid dan fenolik,  maka dilakukan  penetapan  kadar  total  flavonoid  dalam sampel  fraksi.  Prinsip  penetapan  kadar  flavonoid didasarkan pada pembentukan  kompleks  AlCl 3 dengan gugus  orto  dihidroksi  dan  gugus  hidroksi  keton  pada senyawa  flavonoid  (Harborne,  2006).  Contohnya  pada reaksi  antara  kuersetin  dengan  reagen  AlCl 3 seperti pada  Gambar  2,  sehingga  penetapan  kadar  flavonoid menggunakan  standar  kuersetin  sebagai  kurva  baku yang  diukur  pada  panjang  gelombang  maksimal kuersetin  yang  didapatkan  pada  penelitian  ini  yaitu 415  nm  dengan  nilai  absorbansi  0,643.  Panjang
gelombang  (λ)  tersebut  dapat  digunakan  pada penelitian ini karena masih merupakan kisaran panjang gelombang  flavonoid  golongan  flavonol  seperti kuersetin yaitu   415 - 425 nm. Pengukuran absorbansi juga harus dilaksanakan pada waktu optimum senyawa bereaksi  dengan  reagen,  agar  absorbansi  yang  terukur maksimal  (Pękal  &  Pyrzynska,  2014).  Pada  penelitian ini operating time atau  waktu pengukuran dimana saat pembentukan kompleks antara flavonoid dengan AlCl 3 telah sempurna didapatkan absorbansi yang stabil pada 0 - 6 menit. Grafik panjang gelombang maksimum dan operating time ditunjukkan oleh Gambar 3.
Gambar 2 . Reaksi kuersetin dengan reagen AlCl 3 (a) (b)
Gambar 3 . Grafik (a) panjang gelombang maksimum dan (b) operating time kuersetin
Persamaan kurva baku kuersetin dari seri kadar 40, 60, 80, 100, dan 120 ppm seperti grafik pada Gambar 4 digunakan  sebagai  pembanding  ekuivalen  senyawa flavonoid  yang  terdapat  dalam  fraksi  etil  asetat  kulit batang  Kasturi,  untuk  penentuan  kadar  flavonoid totalnya.  Hasil  perhitungan  kadar  yang  ditunjukkan Tabel  2  didapatkan  rata-rata  dari  3  replikasi  yaitu 51,4966  mg  QE/g  atau  5,1496%.  Kadar  yang
terkandung  terlihat  jelas  lebih  rendah  dibandingkan kadar total flavonoid dalam ekstrak etanol kulit batang Kasturi  pada  penelitian  Marliani  dkk.  (2016)  yaitu 7,92%,  karena  kadar  yang  terukur  bukan  merupakan kadar  total  flavonoid  dari  ekstrak  tetapi  dalam  skala fraksi,  sehingga  kadar  tersebut  sudah  sesuai  dengan hasil yang diharapkan dari suatu fraksi.
Gambar 4 . Grafik persamaan kurva baku kuersetin
Tabel 2. Hasil perhitungan kadar total flavonoid dalam fraksi etil asetat dari ekstrak metanol kulit batang kasturi
Sampel fraksi Absorbansi sampel QE (b%/b) Rerata QE (b%/b) ± SD Replikasi 1 0,375 4,6163 5,1496 ± 0,46197 Replikasi 2 0,377 5,4072 Replikasi 3 0,378 5,4254 QE = quercetin equivalent
Pada  penetapan  kadar  total  fenolik  dalam  fraksi etil  asetat  dari  ekstrak  metanol  kulit  batang  kasturi menggunakan  metode  kolorimetri Folin-Ciocalteu , yang  memiliki  prinsip  reduksi  dan  oksidasi.  Reaksi pada  Gambar  5  menunjukkan  bahwa  senyawa  fenol bereaksi  dengan  senyawa  fosfomolibdatfosfotungstat
(Folin-Ciocalteu) yang  akan  membentuk  warna kuning,  dan  ketika  ditambahkan  Na 2 CO 3 akan membentuk  warna  biru  (Ismail  dkk.,  2012).  Standar asam galat merupakan senyawa golongan asam fenolik yang  dapat  mengalami  reaksi  tersebut,  sehingga digunakan sebagai kurva baku.
Gambar 5 . Reaksi fenol dengan reagen Folin-Ciocalteu
Pengukuran  kurva  baku  seri  kadar  asam  galat  25, 50,  75,  100,  dan  125  ppm  pada  panjang  gelombang 738  nm,  karena  konsentrasi  100  ppm  yang  diukur memiliki  nilai  absorbasi  tertinggi  0,729  pada  panjang gelombang tersebut (Gambar 6). Pengukuran absorbansi menggunakan operating time masa inkubasi 20  menit  yang  mengacu  pada  penelitian  Das  dkk. (2014),  karena  pada  penelitian  ini  tidak  didapatkan waktu  optimum  reaksi  yang  menunjukkan  absorbansi stabil.  Kadar  total  fenol  dalam  fraksi  fraksi  etil  asetat dari  ekstrak  metanol  kulit  batang  Kasturi  ditentukan dengan  memasukkan  absorbansi  fraksi  ke  dalam persamaan  kurva  baku  asam  galat  (Gambar  7). Berdasarkan  hasil  perhitungan  kadar  dari  3  replikasi absorbansi  pada Tabel  3  diperoleh rata-rata total kadar fenolik  dalam  fraksi  fraksi  etil  asetat  dari  ekstrak
metanol kulit batang Kasturi yaitu 39,21233 mg GAE/g fraski  etil  asetat  atau  3,921233%.  Hasil  tersebut  juga menunjukkan  bahwa  kadar  total  fenol  dalam  fraksi fraksi  etil  asetat  dari  ekstrak  metanol  lebih  rendah dibandingkan dalam ekstrak etanol kulit batang Kasturi pada  penelitian  Marliani  dkk.  (2016)  yaitu  16%.  Hal tersebut  disebabkan  sifat  dari  golongan  senyawa fenolik  yang  bersifat  polar  karena  dapat  membentuk ikatan  hidrogen  dengan  air,  sehingga  senyawa  fenolik cendrung  kurang  terlarut  dalam  fraksi  semi  polar seperti  etil  asetat  (Pratiwi  dkk.,  2016).  Seperti  halnya kadar flavonoid, pada penelitian ini kadar yang terukur bukan merupakan kadar total fenolik dari ekstrak tetapi total  kadar dalam skala fraksi, sehingga kadar tersebut juga  sudah  sesuai  dengan  hasil  yang  diharapkan  dari suatu fraksi.
Gambar 7 . Grafik persamaan kurva baku asam galat
Tabel 3. Hasil perhitungan kadar fenol total dalam fraksi etil asetat dari ekstrak metanol kulit batang kasturi
Sampel Absorbansi sampel GAE (b%/b) Rerata GAE (b%/b) ± SD Replikasi 1 0,416 3,4027 3,921233 ± 0,449923 Replikasi 2 0,443 4,1527 Replikasi 3 0,445 4,2083 GAE = gallic acid equivalent
Hasil  penetapan  kadar  fenolik  dan  flavonoid  pada fraksi  etil  asetat  dari  kulit  batang  Kasturi  ini memberikan  informasi  penting  bahwa  berdasarkan kadar  flavonoid  yang  terkandung  mendekati  jumlah kadar  flavonoid  dalam  ekstrak  etanol  kulit  batang Kasturi. Penggunaan metanol sebagai  pelarut  ekstraksi memberikan  efektivitas  yang  tinggi  dalam  mengikat flavonoid, disebabkan metanol  memiliki polaritas yang tinggi  dalam  mengikat  senyawa  flavonoid  terutama golongan  fenolik  (Adham  dkk.,  2019).  Hal  ini menunjukkan  bahwa  komponen  flavonoid  yang terkandung  dalam  fraksi  etil  asetat  dari  kulit  batang Kasturi  dapat  dikatakan  cukup  tinggi  dan  berpotensi untuk  dikembangkan  dan  dieksplorasi  lebih  lanjut terkait  aktivitas  biologis  yang  dihasilkan,  karena aktivitas  tidak  hanya  dihasilkan  dari  kadar  yang terkandung  tetapi  struktur  kimia  dari  senyawa  yang terkandung juga berperan dalam  menghasilkan aktivitas  biologis.  Penelitian  ini  dapat  menjadi  dasar informatif bahwa golongan fenolik dan flavonoid pada tumbuhan  Kasturi  dapat  berperan  dalam menghasilkan aktivitas biologis yang menjanjikan.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan bahwa  fraksi  etil  asetat  dari  ekstrak  metanol  kulit batang  Kasturi  mengandung  senyawa  fenolik  dan flavonoid  melalui  skrining  fitokimia  dan  kromatografi lapis  tipis.  Penetapan  kadar  total  flavonoid  yang diperoleh  sebesar  5,1496  mg  QE/g  fraksi  etil  asetat
kulit  batang  Kasturi  dan  kadar  total  fenolik  sebesar 3,921233  mg  GAE/g  fraksi  etil  asetat  kulit  batang Kasturi  sehingga  berpotensi  untuk  dimanfaatkan sebagai  alternatif  sumber  obat  bahan  alam.  Pada penelitian  ini  tidak  dilakukan  pengujian  terhadap ekstrak dan fraksi yang lain, sehingga direkomendasikan  untuk  dilakukan  pada  penelitian berikutnya.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih dan penghargaan  kepada  Laboratorium  Bahan  Alam  dan Program  Studi  S1  Farmasi  STIKES  Borneo  Lestari Banjarbaru  yang  telah  memberikan  sumbangsih  dan menyediakan sarana serta prasarana terhadap penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
Adham, D., Taufiqurrahman, I. & Helmi, Z. N. (2019).
Flavonoid Level Analysis of Binjai Leaf Extract ( Mangifera  Caesia )  in  Ethanol,  Methanol,  and N-Hexane Solvents. Dentino Jurnal  Kedokteran Gigi; 4; 46–49.
Ahmad, A. R., Juwita, J. & Ratulangi, S. A. D. (2015).
Penetapan  Kadar  Fenolik  dan  Flavonoid  Total Ekstrak  Metanol  Buah  dan  Daun  Patikala ( Etlingera elatior (Jack) R.M.SM).
Pharmaceutical  Sciences  and  Research;  2; 1–
10.
Aksara,  R.,  Musa,  W.  J.  A.  &  Alio,  L.  (2013).
Identifikasi  Senyawa  Alkaloid  dari  Ekstrak Metanol  Kulit  Batang  Mangga  ( Mangifera indica L). Jurnal Entropi; 8; 514–519.
Al  Ridho,  E.  (2014).  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Buah
Lakum ( Cayratia trifolia ) dengan Metode DPPH ( 2,2-diphenyl-1-picrylhidrazyl ). Jurnal Mahasiswa Farmasi Fakultas Kedokteran
UNTAN; 1; 1-14.
Anwar,  K.,  Fadlillaturrahmah  &  Sari,  D.  P.  (2017).
Analisis  Kandungan  Flavonoid  Total  Ekstrak Etanol  Daun  Binjai  ( Mangifera  caesia Jack.) dan  Pengaruhnya  Terhadap  Kadar  Glukosa Darah  Tikus  yang  Diinduksi  Fruktosa-Lemak Tinggi. Jurnal Ilmiah Ibnu Sina; 2; 20–30.
Ariyani,  D.,  Rosyidah,  K.,  Ersam,  T.  &  Santoso,  M.
(2010).  Isolasi  Senyawa  Fenolat  Berkhasiat Sitotoksik  dari Kulit Batang Kasturi ( Mangifera casturi ). Jurnal  Sains  dan  Terapan  Kimia;  4;
101–107.
Bakti,  A.  A.,  Triyasmono,  L.  &  Rizki,  M.  I.  (2017).
Penentuan  Kadar  Flavonoid  Total  dan  Uji Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Daun  Kasturi ( Mangifera  casturi Kosterm.)  dengan  Metode DPPH. Jurnal Pharmascience; 4; 102–108. Chang, C. C., Yang, M. H., Wen, H. M. & Chern, J. C.
(2002).  Estimation  of  Total  Flavonoid  Content in  Propolis  by  Two  Complementary  Colometric Methods. Journal  of  Food  and  Drug  Analysis;
10; 78-82.
Das,  N.,  Islam,  M.  E.,  Jahan,  N.,  Islam,  M.  S.,  Khan, A.,  Islam,  M.  R.  &  Parvin,  M.  S.  (2014). Antioxidant  Activities  of  Ethanol  Extracts  and Fractions of Crescentia cujete Leaves and Stem Bark  and  the  Involvement  of  Phenolic Compounds. BMC Complementary and
Alternative Medicine; 14; 1–9.
Harborne,  J.  B.  (2006).  Metode  Fitokimia:  Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan  (Cetakan ke-4). Bandung: Penerbit ITB.
Ih, H., Fajriaty, I., Rahmawani, S. P. & Abdurrachman.
(2017). Skrining Fitokimia dan Analisis
Kromatografi  Lapis  Tipis  dari  Ekstrak  Etanol Herba  Pacar  Air  ( Impatiens  balsamina Linn.).
Seminar  Nasional  Pendidikan  MIPA  dan Teknologi  IKIP  PGRI  Pontianak,  Pontianak; 403–414.
Ismail,  J.,  Runtuwene,  M.  R.  &  Fatimah,  F.  (2012).
Penentuan  Total  Fenolik  dan  Uji  Aktivitas Antioksidan  pada  Biji  dan  Kulit  Buah  Pinang
Yaki  ( Areca  vestiaria Giseke). Jurnal  Ilmiah Sains; 12; 84.
Khairiah,  K.,  Taufiqurrahman,  I.  &  Putri,  D.  K.  T.
(2018).  Antioxidant  Activity  Test  of  Ethyl Acetate  Fraction  of  Binjai  ( Mangifera  caesia ) Leaf  Ethanol  Extract. Dental  Journal  (Majalah Kedokteran Gigi); 51; 164–168.
Khoo,  H.  E.  &  Ismail,  A.  (2008).  Determination  of Daidzein  and  Genistein  Contents  in  Mangifera Fruit. Malaysian  Journal  of  Nutrition;  14; 189– 198.
Kim,  H.,  Moon,  J.  Y.,  Kim,  H.,  Lee,  D.  S.,  Cho,  M., Choi,  H.  K.,  Kim,  Y.  S.,  Mosaddik,  A.  &  Cho, S.  K.  (2010).  Antioxidant  and  Antiproliferative Activities of Mango ( Mangifera indica L.) Flesh and Peel. Food Chemistry; 121; 429–436.
Kostermans,  A.  J.  &  Bompard,  J.  M.  (2014).  The Mangoes: Their Botany, Nomenclature, Horticulture and Utilization.  London:  Academic Press.
Marliani, L., Naimah, A. & Roni, A. (2016). Penetepan Kadar  Fenolat  dan  Flavonoid  Total  Ekstrak Etanol  Daun,  Kulit  Batang,  dan  Kulit  Buah Kasturi  ( Mangifera  casturi ). Seminar  Nasional Tumbuhan  Obat  Indonesia  Ke-50,  Samarinda; 275–281.
Mirfat,  A.  H.  S.,  Razali,  M.  &  Salma,  I.  (2013). Antioxidant  Properties  of  Wild  Mangifera Species  in  Malaysia. Acta  Horticulturae ;  651– 659.
Mustikasari,  K.  &  Ariyani,  D.  (2008).  Studi  Potensi Binjai ( Mangifera caesia ) dan Kasturi ( Mangifera casturi ) sebagai Antidiabetes Melalui  Skrining  Fitokimia  pada  Akar  dan Batang. Jurnal  Sains  dan  Terapan  Kimia;  2;
64–73.
Pękal,  A.  &  Pyrzynska,  K.  (2014).  Evaluation  of
Aluminium Complexation Reaction for
Flavonoid  Content  Assay. Food  Analytical Methods; 7; 1776–1782.
Pratiwi,  L.,  Fudholi,  A.,  Martien,  R.  &  Pramono,  S. (2016). Ekstrak etanol, Ekstrak etil asetat, Fraksi etil  asetat,  dan  Fraksi  n-heksan  Kulit  Manggis ( Garcinia  mangostana L.)  sebagai  Sumber  Zat Bioaktif  Penangkal  Radikal  Bebas. Journal  of Pharmaceutical  Science  and  Clinical  Research; 1; 71–82.
Prayitno, B., Rosyidah, K. & Astuti, M. D. (2016). Uji Antioksidan  Senyawa  Terpenoid  dari  Fraksi  M- 17  Ekstrak  Metilena  Klorida  Kulit  Batang
Tumbuhan  Kasturi  ( Mangifera  casturi ). Jurnal Pharmascience; 3; 32–36.
Rahayu,  S.,  Kurniasih,  N.  &  Amalia,  V.  (2015).
Ekstraksi  dan  Identifikasi  Senyawa  Flavonoid dari  Limbah  Kulit  Bawang  Merah  sebagai Antioksidan Alami. al-Kimiya; 2; 1–8.
Ribeiro,  S.  M.  R.,  Barbosa,  L.  C.  A.,  Queiroz,  J.  H.,
Knödler,  M.  &  Schieber,  A.  (2008).  Phenolic Compounds  and  Antioxidant  Capacity  of Brazilian Mango ( Mangifera indica L.)
Varieties. Food Chemistry; 110; 620–626.
Ritna,  A.,  Anam,  S.  &  Khumaidi,  A.  (2016).
Identifikasi Senyawa Flavonoid pada Fraksi Etil Asetat  Benalu  Batu  ( Begonia Sp.)  Asal Kabupaten  Morowali  Utara. Jurnal  Farmasi Galenika  (Galenika  Journal  of  Pharmacy);  2; 83–89.
Rollando  &  Monica, E.  (2018).  Penetapan  Kandungan
Fenolik  Total  dan  Uji  Aktivitas  Antioksidan Fraksi Air Ekstrak Metanol Kulit Batang Faloak
( Sterculia  quadrifida R.  Br). Scientia:  Jurnal Farmasi dan Kesehatan; 8; 29 –36.
Rosita,  J.  M.,  Taufiqurrahman,  I.  &  Edyson.  (2017).
Perbedaan  Total  Flavonoid  Antara  Metode Maserasi  Dengan  Sokletasi  Pada  Ekstrak  Daun Binjai  ( Mangifera  caesia ). Dentino  Jurnal Kedokteran Gigi; 1; 100–105.
Rosyidah, K. & Mustikasari, K. (2008). Uji Hayati Bslt Terhadap  Batang  Kasturi  ( Mangifera  casturi ). Jurnal Sains dan Terapan Kimia; 2; 74–79. Rosyidah,  K.,  Nurmuhaimina,  S.  A.,  Komari,  N.  &
Astuti,  M.  D.  (2012).  Aktivitas  Antibakteri Fraksi  Saponin  dari  Kulit  Batang  Tumbuhan Kasturi ( Mangifera casturi ). ALCHEMY; 1; 65– 69.
Sa`adah, H. & Nurhasnawati, H. (2015). Perbandingan Pelarut Etanol dan Air Pada Pembuatan Ekstrak Umbi  Bawang  Tiwai  ( Eleutherine  americana Merr)  Menggunakan  Metode  Maserasi. Jurnal Ilmiah Menuntung; 9; 149–153.
Santi, N., Prahatamaputra, A. & Ajizah, A. (2016). Uji
Antibakteri Infusa Kulit Batang Kasturi ( Mangifera  casturi Kosterm)  terhadap  Bakteri Escherichia  coli secara  In  Vitro. Jurnal Wahana-Bio; 16; 36–42.
Santoni,  A.,  Sabariah  &  Efdi,  M.  (2015).  Isolasi  dan Elusidasi  Struktur  Senyawa  Triterpenoid  dari
Kulit  Batang  Ambacang  ( Mangifera  foetida L.) serta  Uji Brine  Shrimp  Letality  Test (BSLT). Jurnal Riset Kimia; 9; 1.
Shinde,  S.  S.  &  Chavan,  A.  R.  (2014).  Isolation  of Mangiferin from Different Varieties of Mangifera  Indica Dried  Leaves. International Journal  of  Scientific  &  Engineering  Research;
5; 928–934.
Suhartono,  E.,  Viani,  E.,  Rahmadhan,  M.  A.,  Gultom,
I.  S.,  Rakhman,  M.  F.  &  Indrawardhana,  D. (2012).  Total  Flavonoid  and  Antioxidant Activity  of  Some  Selected  Medicinal  Plants  in South  Kalimantan  of  Indonesian. APCBEE Procedia; 4; 235–239.
Sulaiman, S. F. & Ooi, K. L. (2012). Polyphenolic and Vitamin  C  Contents  and  Antioxidant  Activities of  Aqueous  Extracts  from  Mature-Green  and Ripe  Fruit  Fleshes  of Mangifera  sp . Journal  of Agricultural  and  Food  Chemistry;  60; 11832– 11838.
Sutomo,  Agustina,  N.,  Arnida  &  Fadilaturrahmah.
(2017a). Studi Farmakognostik dan Uji
Parameter  Nonspesifik  Ekstrak  Metanol  Kulit Batang  Kasturi  ( Mangifera  casturi Kosterm.).
Jurnal Pharmascience; 4; 94–101.
Sutomo,  Azhari,  H.,  Arnida,  F.  &  Yunus,  R.  (2017b).
Isolasi  dan  Identifikasi  Senyawa  Antioksidan Dari Buah Kasturi ( Mangifera casturi
Kosterm.). Jurnal Pharmascience; 4; 246–254. Syarifuddin,  N.  I.,  Badruz,  S.  &  Ni’mah,  M.  (2014). Perbandingan Daya Hambat Antibakteri Ekstrak Kulit  Batang  Kasturi  ( Mangifera  casturi Kosterm)  dengan  Ekstrak  Daun  Sirih  ( Piper betle L.)  terhadap  Pertumbuhan Streptococcus mutans 2302-Unr  Secara  In  Vitro. Jurnal Pharmascience; 1; 48–52.
Tanaya,  V.,  Retnowati,  R.  &  Suratmo.  (2015).  Fraksi
Semi Polar dari Daun Manga Kasturi ( Mangifera  casturi Kosterm.). Kimia  Student Journal ; 1; 778–784.
Wahdaningsih,  S.,  Wahyuono,  S.,  Riyanto,  S.  & Murwanti,  R.  (2017).  Penetapan  Kadar  Fenolik Total  dan  Flavonoid  Total Ekstrak  Metanol  dan Fraksi  Etil  Asetat  Kulit  Buah  Naga  Merah ( Hylocereus  Polyrhizus (F.A.C.  Weber)  Britton Dan Rose). PHARMACON; 6; 295–301.