## EKSTRAK DAUN KELOR (Moringa oleifera Lam.) SEBAGAI PELURUH KALSIUM BATU GINJAL SECARA IN VITRO
Yance Anas 1) , Ali Imron 2) , Sekar Indah Ningtyas 2)
1) Departemen Farmakologi dan Farmasi Klinik, Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim
2 ) Program S1 Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim

## INTISARI
Senyawa flavonoid dalam daun kelor diduga mampu meningkatkan kelarutan kalsium batu ginjal.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  membuktikan  kemampuan  ekstrak  metanol  (EMDK)  dan ekstrak  etanol  daun  kelor  (EEDK)  dalam meningkatkan  kelarutan  kalsium    batu  ginjal  secara in vitro . Daun kelor diekstrak dengan cara maserasi menggunakan cairan penyari metanol dan etanol 70%.  Kandungan  senyawa  aktif  golongan  flavonoid  diidentifikasi  secara  kualitatif  dengan  KLT. Serbuk  batu  ginjal  direndam  dalam  seri  konsentrasi  EMDK  dan  EEDK  (2%,  4%,  6%,  8%,  dan 10%) dan diinkubasi selama 6 jam pada suhu 37 0 C. Kadar kalsium terlarut dianalisis dengan SSA pada  panjang  gelombang  422,7  nm.  Hasil  penelitian  membuktikan  bahwa  EMDK  (2-10)%  dan EEDK  (4-10)%  mampu  meningkatkan  kelarutan  kalsium  batu  ginjal  secara in  vitro ( p ≤0,05). Kelarutan  kalsium  batu  ginjal  dalam  EMDK  dan  EEDK  mengikuti  pola  tergantung  konsentrasi. Kadar kalsium batu ginjal terlarut dalam EMDK dan EEDK berturut-turut berkisar antara (86,27- 185,87) ppm dan  (95,31-177,29) ppm.  Hasil analisis dengan  KLT membuktikan  bahwa  senyawa aktif golongan flavonoid berhasil terdentifikasi dalam EMDK dan EEDK.
Kata Kunci : Batu ginjal kalsium, daun kelor ( Moringa oleifera Lam.), flavonoid, maserasi

## ABSTRACT
Flavonoids  in  kelor  leaves  (Moringa  oleifera  Lam.)  suspected  had  an  important  role  on dissolving  calcium  kidney  stones.  The  purpose  of  this  research  is  to  reveal  the  effect  of  kelor leave's methanol extract (KLME) and ethanol extract (KLEE) on the in vitro solubility of calcium kidney  stones.  The kelor  leave's  simplisia extracted with  maceration  method.  Methanol and ethanol  70%  were  used  as  solvent.  An  active  flavonoid  compound  in  KLME  and  KLEE has identified  with  TLC  method.  Kidney  stone's  powder  soaked  in  KLME  and  KLEE  series concentration  (2%,  4%,  6%,  8%  and  10%)  and  incubated for  six  hours  at  37 °C.  The  dissolved calcium levels from kidney stones in KLME and KLEE were analyzed with AAS at a wavelength of 422.7  nm.  The result  showed  that  the  KLME  (2-10)  % and  KLEE  (4-10%)  can  enhance  the dissolved calcium levels from kidney stones in vitro (p<0.05). The dissolved kidney stone's calcium in  KLME and KLEE  deppend  on  it’s concentration.  The  levels  of  dissolved calcium  from kidney stones  in  KLME  dan  KLEE  series  concentration  were  (86.27-185.87)  ppm  and  (95.31–177.29) ppm repectively. The result of TLC analysis showed that the flavonoid found in KLME dan KLEE. Keywords:   Calcium kidney  stones,  flavonoid,  maceration, moringa leaves  (Moringa  oleifera Lam.)

## PENDAHULUAN
Batu  ginjal  adalah  benda  padat  yang dibentuk  oleh  presipitasi  berbagai  zat terlarut  pada  ginjal  dan  saluran  kemih (Grace  dan  Borley,  2006).  Insiden    batu ginjal  lebih  banyak  menyerang  individu antara kelompok usia 30-60 tahun dan lebih banyak  didominasi  oleh  laki-laki.  Insiden batu  ginjal  dan  prevalensinya  hampir mengalami kenaikan di setiap tahunnya pada
beberapa  negara  (Romero et  al .,  2010). Insiden batu ginjal di indonesia dialami oleh sekitar  530  orang  penderita  per  tahun (Effendi dan Markum, 2010).
Kualitas  hidup  penderita  batu  ginjal umumnya sangat rendah. Hal ini dikarenakan  beberapa  gejala  yang  sering muncul  akibat  dari  penyakit  batu  ginjal, seperti  mual  dan  muntah  serta  rasa  nyeri pada  daerah  pinggul  pada  saat  buang  air
kecil  (Purnomo,  2007).  Tatalaksana  terapi pengobatan  batu  ginjal  yang  paling  banyak digunakan yaitu dengan terapi Extracorporeal Shockwave Lithotripsy (ESWL).  ESWL  adalah  suatu  prosedur terapi  dengan  jalan  menghancurkan  batu ginjal  dalam  ureter  menjadi  fragmen– fragmen kecil dengan menggunakan gelombang  kejut.  Penyembuhan  penyakit batu  ginjal  menjadi  lebih  lama    karena pasien tidak patuh terhadap pengobatan yang disebabkan oleh mahalnya biaya  yang harus dikeluarkan.  Selain  biaya  yang  mahal,
ESWL dikontraindikasikan terhadap penderita yang mengalami infeksi di saluran kemih  dan  gangguan  pendarahan.  ESWL juga  memiliki  efek  samping  yang  sering muncul  setelah  terapi,  seperti  hematuria, pendarahan,  dan  hipertensi  (Nakada  and Pearle, 2013).
Melihat  beberapa  kekurangan  dan permasalahan  yang  ada,  masyarakat  mulai beralih  pada  pengobatan  alternatif,  yaitu dengan pengobatan tradisional menggunakan  tanaman  herbal.  Biaya  yang dikeluarkan  pada  pengobatan  alternatif relatif  lebih  ekonomis.  Pengobatan  yang lebih ekonomis diharapkan dapat meningkatkan  kepatuhan  pasien  terhadap pengobatan  sehingga  angka  kesembuhan pasien juga semakin tinggi.
Kelor  ( Moringa  oleifera L.)  adalah sejenis  tumbuhan  dari  suku Moringacea . Tumbuhan  ini  diduga  mengadung  senyawa flavonoid,  alkaloid,  fenol,  dan  saponin (Arora et al ., 2013). Berdasarkan pengalaman  empiris,  masyarakat  telah menggunakan  kelor  sebagai  pengobatan herbal  peluruh  batu  ginjal  (Arisandi  dan Andriani, 2000). Penelitian terdahulu menyimpulkan  bahwa  ekstrak  air  dan alkohol kulit akar kelor mampu mengurangi pembentukan  batu  ginjal  secara in  vivo . Pemberian ekstrak air dan alkohol kulit akar kelor  pada  tikus  yang  diinduksi  dengan etilen glikol mampu mengurangi
pembentukan  batu  ginjal  pada tikus (Karadi et  al ,  2006).  Pemanfaatan  kulit  akar  dalam pengobatan  batu  ginjal  menjadi  kurang efektif  dan  efisien  karena  ketersediaanya terbatas.  Berbeda  dengan  daun  yang ketersediannya cukup banyak dan penggunaannya  sebagai  bahan  baku  tidak mengganggu  ekosistem  lingkungan.  Oleh karena itu, penelitian ini mencoba
mengembangkan daun kelor sebagai peluruh batu  ginjal.  Senyawa  aktif  golongan flavonoid  yang  terdapat  dalam  daun  kelor yang  diduga  berperan  penting  dalam  efek peluruhan  batu  ginjal,  seperti  yang  terdapat dalam kulit akar. Dalam penelitian ini, daun kelor  dibuat  dalam  bentuk  ekstrak  dengan menggunakan  metanol  dan  etanol  70% sebagai  cairan  penyari  sehingga  senyawa flavonoid akan tersari kedalamnya.
Penelitian  ini  merupakan  pengujian  ekstrak metanol  daun  kelor  (EMDK)  dan  ekstrak etanol  daun  kelor  (EEDK)  sebagai  peluruh batu  ginjal  secara in  vitro .  Penelitian  ini diharapkan  dapat  memberikan  bukti  ilmiah mengenai  ekstrak  daun  kelor  sebagai peluruh kalsium batu ginjal.

## METODE PENELITIAN Bahan Penelitian
Bahan  tanaman  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  daun  kelor  yang dipanen dari Desa Gemiring Kidul, Kecamatan    Nalumsari,  Kabupaten  Jepara, Jawa  Tengah,  pada  tanggal  25  Mei  2014. Bahan-bahan  yang  digunakan  untuk  proses ekstraksi  dan  uji  kelarutan  kalsium  batu ginjal  adalah  metanol  dan  etanol  70%  (PT. Brataco  Chemika  Tbk.),  aqua  demineral, tween 80,  batu  ginjal  (diperoleh  dari  tiga orang  pasien  setelah  menjalani  operasi pengangkatan  batu  ginjal  di  Rumah  Sakit Kardinah,  RSI  Harapan  Anda  Tegal  dan RSU  Sultan  Agung  Semarang,  Jawa Tengah),  standar  kalsium  (E.merck),  asam sulfat  (p.a)  (E.merck)  dan  asam  nitrat  (p.a) (E.merck).  Bahan  kimia  dan  pereaksi  yang digunakan  untuk  uji  flavonoid  dengan metode  KLT  adalah  silika  gel  60  F 254 (E.merck),  butanol  p.a  (E.merck),  asam asetat p.a (E.merck), air, alumunium klorida p.a(E.merck) dan rutin (Sigma-Aldrich).

## Alat Penelitian
Alat-alat  yang  untuk  maserasi  daun kelor  adalah  timbangan  kilogram  (Five goats),  botol  gelap,  timbangan  elektrik (Ohaus),  blender  (Maspion), vaccum  rotary evaporator (Heidolph),  oven  (Sense)  dan corong buchner . Alat yang digunakan untuk uji  kelarutan  batu  ginjal  adalah  mortir, ayakan 40 Mesh, alat-alat gelas,
spektrofotometer  serapan  atom  (Perkin
Elmer), spektrofotometer infra merah (Perkin  Elmer)  dan shecking  water  bath .
Alat untuk analisis kandungan senyawa aktif golongan  flavonoid  adalah  bejana  KLT (Camag),  kertas  penjenuh,  pipa  kapiler, lampu UV 254 dan UV 366 (Camag).

## Pembuatan  Ekstrak  metanol  (EMDK) dan ekstrak etanol daun kelor (EEDK)
Daun  kelor  sebanyak  1,27  kg  dicuci dengan  air  mengalir  dan  selanjutnya dilakukan  sortasi  basah  untuk    memisahkan daun  kelor  yang  masih  segar.  Daun  kelor kemudian  ditiriskan  dan  disimpan  dalam wadah  tertutup.  Daun  kelor  dikeringkan  di dalam  oven  pada  suhu  50 0 C  sampai  kering dan  kemudian  diukur  kadar  airnya  dengan alat moisture  balance .  Simplisia  daun  kelor kering  diblender  dan  diayak  menggunakan ayakan no  40  Mesh.  Serbuk  yang  diperoleh selanjutnya  digunakan  untuk  pembuatan EMDK dan EEDK.
Proses  maserasi  simplisia  daun  kelor dilakukan  dengan  merendam  300  gram serbuk  daun  kelor  dengan  2.250  mL methanol untuk EMDK dan 2.250 mL etanol 70%  untuk  EEDK  dalam  bejana  maserasi. Bejana  maserasi  ditutup  dan  dibiarkan selama tiga hari serta diletakkan pada tempat yang terlindung dari sinar matahari langsung. Selama proses perendaman, rendaman  diaduk  beberapa  kali  dengan tujuan untuk meningkatkan efektifitas proses difusi  senyawa  terlarut  ke  dalam  cairan penyari.  Campuran  simplisia  dan  cairan penyari  disaring  dan  diperas    hingga diperoleh  hasil  maserat  pertama.  Ampas yang  sudah  diperas  direndam  kembali dengan  metanol  dan  etanol  (masing-masing sebanyak  750  mL)  selama  tiga  hari  hingga diperoleh  maserat  kedua.  Maserat  kedua kemudian  digabungkan  dengan  maserat pertama.  Maserat  yang  diperoleh  didiamkan selama  semalam  dan  diendapkan.  Maserat dipekatkan  dengan  menggunakan rotarry evaporator pada  suhu  50 0 C  sehingga diperoleh ekstrak kental daun kelor (EMDK dan EEDK).

## Pembuatan serbuk batu ginjal
Batu  ginjal  sebanyak  3,7  gram ditimbang secara seksama kemudian digerus menggunakan  mortir  menjadi  partikel  yang kecil.  Serbuk  batu  ginjal  yang  digunakan pada  penelitian  ini  adalah  1.800  mg  untuk 36  sampel.  Berat  serbuk  batu  ginjal  yang
digunakan  untuk  masing-masing  sampel adalah seberat 50 mg.

## Analisis  kualitatif    batu  ginjal  dengan spektrofotometer infra merah
Batu  ginjal  sebanyak  50,0  gram serbuk  digerus  menggunakan  mortir  sampai halus kemudian dianalisis langsung menggunakan spektrofotometer infra merah. Spektrogram  yang  diperoleh  dibandingkan dengan  spektrogram  dari  standar “Analyse des
Calculus par Spectrophotometrie Infaraouge  Advantage  et  Limites  de  in Methode” (Daudon and Reveeilaud, 1987).

## Pembuatan  kurva  baku  seri  konsentrasi larutan standar kalsium
Sebanyak  1,0  mL  larutan  standar kalsium  konsentrasi  1.000  ppmdimasukkan ke  dalam  labu  ukur  100  mL  dan ditambahkan  dengan  aquademineral  sampai batas. Larutan standar kalsium dibuat dalam seri  konsentrasi  (1,0;  2,0;  3,0;  4,0  dan  5,0) ppm. Setiap konsentrasi diukur absorbansinya dengan spektrofotometri
serapan  atom  pada  panjang  gelombang 422,7  nm  untuk  menghasilkan  persamaan regresi  (Y=Bx+A)  yang  menggambarkan hubungan antara konsentrasi kalsium terlarut ( ppm ) dengan absorbansi.
Analisis  kuantitatif  kadar  kalsium  batu ginjal  terlarut  dalam  EMDK  dan  EEDK menggunakan  spektrofotometer  serapan atom (SSA).
EMDK  dan  EEDK  dibuat  dalam bentuk seri konsentrasi (2, 4, 6, 8 dan 10)%. Masing-masing  sampel  EMDK  dan  EEDK sebanyak  (1;  2;  3;  4;  5)  gram  dilarutkan terlebih dahulu dengan tween 80. Selanjutnya, sebanyak 50 mL aquademineral ditambahkan  sedikit  demi  sedikit  pada masing-masing  sampel.  Serbuk  batu  ginjal sebanyak 50,0 mg ditimbang secara seksama dan dimasukan ke dalam vial yang berisi seri konsentrasi  EMDK  dan  EEDK.  Rendaman serbuk batu ginjal diinkubasi dalam sheking water  bath selama  6  jam  pada  suhu  37ºC dengan  penggojokan  setiap 15  menit  sekali. Rendaman  batu  ginjal  kemudian  disaring menggunakan  kertas  saring.  Hal  yang  sama dilakukan  pada  blangko  (aquademineral  + tween 80).  Rendaman  serbuk  batu  ginjal dalam  EMDK  dan  EEDK  didestruksi menggunakan H 2 SO 4 pekat : HNO 3 (v/v 2:1).
Kadar  kalsium  batu  ginjal  terlarut  pada  seri konsentrasi  EMDK,  EEDK  dan  blanko (replikasi sebanyak tiga kali) diukur dengan menggunakan SSA pada panjang gelombang 422,7 nm (Gandjar dan Rohman, 2008).
Identifikasi senyawa aktif golongan flavonoid dengan KLT
Fase  diam  yang  digunakan  adalah silika  gel  60  F 254 dengan  fase  gerak campuran butanol : asam asetat : air (3-1-1) (11).  Rutin  digunakan  sebagai  senyawa pembanding.  Sampel  EMDK  dan  EEDK diencerkan menggunakan pelarut aquademineral  dengan  konsentrasi  akhir 2mg/mL.  Sebanyak  10  mg  sampel  EMDK dan EEDK dimasukkan ke dalam labu takar
5,0  mL,  kemudian  ditambahkan  dan dicukupkan  volumenya  dengan  pelarut sampai  batas.  Penotolan  sampel  dilakukan sebanyak tiga kali pada plat KLT menggunakan  pipa  kapiler.  Setiap  kali penotolan  dikeringkan  terlebih  dahulu. Bejana  terlebih  dahulu  dijenuhkan  sebelum plat  KLT  dimasukkan  ke  dalam  bejana kromatografi.  Sampel  dan  rutin  dielusi dengan  fase  gerak  sampai  batas  elusi  (8,5 cm). Bercak diamati di bawah sinar UV λ 254 , UV λ 366 dan dideteksi dengan menggunakan pereaksi  semprot  AlCl 3 yang  selanjutnya dilihat  secara  visibel.  Sampel  EMDK  dan EEDK  dinyatakan  mengandung  senyawa akif  golongan  flavonoid  apabila  timbul bercak warna kuning pada plat KLT setelah direaksikan  dengan  AlCl 3 .  Nilai  Rf  sampel EMDK  dan  EEDK  dibandingkan  dengan standar rutin.
Analisis Data Persamaan kurva baku untuk perhitungan  kadar  kalsium  terlarut  dibuat
dengan  cara  menghubungkan  konsentrasi larutan  standar  kalsium  (sumbu  X)  dengan absorbansi  (sumbu  Y).  Persamaan  ini  (Y= BX  +  A)  digunakan  untuk  mengkonversi serapan yang terbaca pada alat SSA menjadi kadar  kalsium  terlarut  (ppm).  Data  kadar kalsium terlarut (ppm) dari perendaman batu ginjal  dalam  seri  konsentrasi  EMDK  dan EEDK  dibandingkan  dengan  blanko.  Uji statistik yang digunakan untuk membedakan kadar kalsium terlarut dalam seri konsentrasi EMDK  dan EEDK adalah  Anova  satu  jalan yang dilanjutkan dengan uji Tukey pada taraf kepercayaan 95 %. Nilai signifikansi < 0,05 ( p <0,05)  menunjukkan  adanya  perbedaan yang signifikan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Analisis Kualitatif  Batu Ginjal dengan Spektrofotometer Infra Merah
Analisis  batu  ginjal  yang  digunakan  dalam penelitian ini dilakukan dengan spektrofotometer  infra  merah.  Hal  ini bertujuan untuk memastikan jenis batu ginjal yang  digunakan  adalah  jenis  batu  ginjal kalsium oksalat. Hasil analisis yang
diperoleh berupa spektogram dengan puncak-puncak dan lembah yang menunjukkan gugus-gugus fungsional penyusun  batu  ginjal.  Hasil  identifikasi kandungan  batu  ginjal  tersebut  tersaji  pada gambar  1.  Spektrogram  yang  dihasilkan kemudian dibandingkan dengan spektrogram standar  batu  ginjal  yang  terdapat  dalam Analyse des Calculs par Spectrophotometrie Infraronge  advantages  et  Limites  de  la Methode
Gambar 1.   A. Spektrogram batu ginjal. B. Standar spektrogram infra merah batu ginjal yang terdapat dalam “Analyse des Calculs par Spectrophotometrie Infraronge advantages et Limites de la Methode”
A B
Spektrogram  batu  ginjal  yang  didapatkan terdiri  dari  51 peak. Dua peak diantaranya mengindikasikan adanya kandungan kalsium oksalat, yaitu peak dengan bilangan gelombang  1.618,30  cm -1 dan peak pada bilangan gelombang 1.316,40 cm -1 . Interpretasi bilangan gelombang yang
menunjukkan kalsium pada batu ginjal dapat dilihat  pada  Tabel  I.  Setelah  dibandingkan dengan  spektrogram  standar  batu  ginjal, penelitian  ini    menyimpulkan  bahwa  batu ginjal  yang  digunakan  untuk  uji  kelarutan kalsium  batu  ginjal  dalam  EMDK  dan EEDK adalah batu ginjal kalsium oksalat.
Tabel I. Interpretasi Spektrum Batu Ginjal yang terdapat dalam “Analyse des Calculs par
Spectrophotometrie Infraronge advantages et Limites de la Methode” Ikatan yang Bervibrasi Gugus Fungsional Tipe Vibrasi Posisi Bilangan Gelombang Molekul yang Bersesuaian C=O Amida (peptida) – COO Ulur (Asim) 1618.30 cm -1 Whewelite (Kalsium Oksalat monohidrat) Cystine C=O Amida (peptida) – COO Ulur (sim) 1316.40 cm -1 Weddelit (Kalsium Oksalat dihidrat) Pembuatan Kurva Baku Larutan Standar Kalsium Larutan standar kalsium dibuat dengan  konsentrasi  (0,02;  0,04;  0,06;  0,08; 0,10) ppm dan  diukur  serapannya  dengan SSA  pada  panjang  gelombang  422,7  nm. Pembuatan  kurva  baku  bertujuan  untuk menentukan  persamaan  regresi  linear  yang akan  digunakan  untuk  menghitung  kadar kalsium  terlarut  dalam  larutan  uji.  Larutan uji  yang  digunakan  adalah  seri  konsentrasi
EMDK dan EEDK (2, 4, 6, 8 dan 10)% dan blanko.  Kurva  baku  dibuat  dengan  cara menghubungkan  konsentrasi  larutan  standar kalsium  (sumbu  X)  dengan  absorbansi (sumbu  Y).  Persamaan  regresi  linier    yang dihasilkan  adalah  y  =  3,0185x  +  0,191 dengan  koefisien  korelasi  (r)  =  0,994 (gambar 2).
Gambar 2. Kurva hubungan seri konsentrasi larutan standar kalsium (ppm) dengan absorbansi
Koefisien  korelasi  (r)  dari  persamaan  kurva baku  standar  kalsium  dinyatakan  linier  dan memenuhi  syarat  karena  lebih  besar  dari  r tabel  (P  :  0,95;  df=4)  yaitu  0,7293.  Oleh karena  itu,  persamaan  regresi  linier  yang diperoleh valid digunakan untuk
mentransformasi  data  absorbansi  yang terbaca  pada  alat  SSA  ke  dalam  bentuk kadar kalsium terlarut ( ppm ).
Analisis  Kuantitatif  Kadar  Kalsium  dari Batu Ginjal yang Terlarut dalam Ekstrak Metanol dengan Spektrofotometer Serapan Atom Batu ginjal yang terlarut dalam seri konsentrasi  EMDK  dan  EEDK  diukur dengan spektrofotometer serapan atom pada panjang  gelombang  422,7  nm.  Rata-rata kadar kalsium terlarut batu ginjal dalam seri
konsentrasi  EMDK  dan  EEDK  lebih  besar daripada  kalsium  batu  ginjal  terlarut  dalam blanko  ( p <0,05).  Data  kadar  kalsium  batu
ginjal  terlarut  dalam  EMDK,  EEDK  dan blanko dapat dilihat pada tabel II. Tabel II. Hasil Pengukuran Kadar Kalsium Batu ginjal Terlarut Ekstrak Konsentrasi Kadar kalsium terlarut (mg/dL) X±SD I II III Blangko 60,35 59,35 61,52 60,41 ± 1,780 EMDK 2% 89,56 85,67 83,29 86,17* ± 1,780 4% 103,45 106,11 101,40 103,65* ± 1,780 6% 123,24 126,29 123,77 124,43* ± 1,780 8% 143,30 138,24 140,12 140,55* ± 1,780 10% 184,90 187,72 185,00 185,87* ± 1,780 EEDK 2% 65,25 69,77 70,44 68,49 ± 1,629 4% 80,71 93,10 112,12 95,31* ± 9,134 6% 124,23 125,47 129,45 126,38* ± 1,575 8% 139,19 144,35 153,07 145,54* ± 4,050 10% 170,03 177,84 183,99 177,29* ± 4,039
*=Hasil uji Tukey menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan dengan blanko ( p <0,05)
Hasil  penelitian  membuktikan  bahwa EMDK (2-10)% dan EEDK (4-10)% mampu meningkatkan  kelarutan  kalsium  batu  ginjal secara in  vitro ( p <0,05).  EMDK  10% mempunyai  kemampuan  melarutkan  batu ginjal  paling  tinggi  (185,87±1,78052) ppm dibandingkan dengan konsentrasi di bawahnya  (2,  4,  6,  dan  8)%  dan  kadar kalsium terlarut dalam semua seri konsentrasi EEDK (2-10)%. Hasil uji Tukey menyimpulkan  bahwa  terdapat  perbedaan yang  signifikan  pada  kadar  kalsium  batu ginjal terlarut dalam masing-masing
konsentrasi EMDK dan EEDK. Dengan kata lain, kelarutan kalsium batu ginjal mengikuti pola  tergantung  konsentrasi.  Hal  ini  diduga terkait  dengan  konsentrasi  zat  aktif  yang terdapat  di  dalam  EMDK  dan  EEDK. Semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak  yang digunakan  maka  konsentrasi  zat  aktif  yang mempunyai  peranan  dalam  melarutkan kalsium batu ginjal juga semakin tinggi. Identifikasi  Senyawa  Aktif  Golongan Flavonoid  dalam  EMDK  dan  EEDK dengan menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Salah  satu  kandungan  senyawa  aktif bahan  alam  yang  memiliki  kemampuan melarutan  kalsium  batu  ginjal  adalah
flavonoid  (Pramono  dkk.,  1993).  Flavonoid adalah  salah  satu  senyawa  aktif  yang terdapat  dalam  daun  kelor  (Kasolo,  2010). Oleh  karena  itu,  penelitian  ini  juga membuktikan  adanya  kandungan  senyawa aktif  golongan  flavonoid  yang  tersari  ke dalam EMDK dan EEDK. Proses
identifikasi dilakukan secara kualitatif menggunakan  KLT.  Senyawa  flavonoid standar yang digunakan sebagai pembanding adalah  rutin.  Visualisasi  bercak  senyawa aktif  dalam  EMDK  dan  EEDK  pada  plat KLT  setelah  disinari  dan  diamati  di  bawah sinar  UV 254 ,  UV 366 dan  visibel  dapat  dilihat pada gambar 3. Hasil pengamatan pada plat KLT  secara  visible  menunjukkan  bercak sampel EMDK, EEDK dan rutin menghasilkan warna kuning setelah direaksikan  dengan  pereaksi  semprot  AlCl 3 (Gambar 3A). Oleh karena itu, penelitian ini menyimpulkan  bahwa  EMDK  dan  EEDK mengandung  senyawa  aktif    golongan flavonoid. Flavonoid apabila bereaksi dengan  AlCl 3 akan  membentuk  senyawa kompleks  berwarna  kuning  (Markham, 1988).
Keterangan : (A) Pengamatan secara visibel
(B) Pengamatan di bawah sinar UV 254 nm (C) Pengamatan di bawah sinar UV 366 nm
Fase diam : Silika Gel 60 F 254 Fase Gerak : Butanol : Asam Asetat : Air (3:1:1) Pereaksi : AlCl 3 Jarak pengembangan : 8,5 cm P : Pembanding (rutin) 1 : EMDK 2 : EEDK
Gambar 3.   Kromatogram  identifikasi  senyawa  flavonoid  dalam  EMDK,  EEDK  dan pembanding rutin
Deteksi  bercak  di  bawah  sinar  UV 254 nm  menunjukan  bahwa  bercak yang terbentuk dapat merendam fluorosensi silika gel  yang  berwarna  hijau  sehingga    bercak terlihat  berwarna  hitam  (Gambar  3.B). Sementara  itu,  pendeteksian  di  bawah  sinar UV 366 nm, bercak yang dihasilkan menunjukan  warna  biru  dan  silika  gel terlihat  berwarna  hitam  (Gambar  3.C).  Hal ini  dikarenakan  silika  gel  tidak  dapat berfluorosensi pada sinar UV 366 .
Nilai retardation  factor (Rf)  dari bercak  sampel  EMDK  dan  EEDK  yang terdapat  pada  KLT  berturut-turut  adalah seebsar  0,82  dan  0,85,  Sementara  itu,    nilai Rf  bercak  baku  pembanding  (rutin)  adalah 0,59.  Nilai  Rf  bercak  sampel  lebih  tinggi apabila  dibandingkan  dengan  nilai  Rf pembanding.  Hal  ini  menunjukan  bahwa senyawa  aktif  golongan  flavonoid  yang terkandung  di  dalam  EMDK  dan  EEDK cenderung  bersifat  lebih  bersifat  semi  polar bila dibandingkan dengan rutin.
Penelitian  ini  menyimpulkan  bahwa EMDK  dan  EEDK  mengandung  senyawa aktif  golongan  flavonoid  yang  diduga berperan  kuat  terhadap  efek  melarutkan
kalsium  batu  ginjal  secara in  vitro .  Senada dengan  hasil  penelitian  ini,    peneliti sebelumnya  juga  menyimpulkan  bahwa senyawa  flavonoid  yang  terdapat  dalam ekstrak air dan fraksi etil-asetat daun benalu mindi  ( Dendrophthoen  falcata L.f  Ettingsh) (Sasmito  dkk.,  2001);  ekstrak  etanol,  fraksi air,  dan  fraksi  etil-asetat  bunga  rosela ( Hibiscus  sabdariffa L.)  (Ulfa  dkk.,  2012) juga  diduga  kuat  mampu  meningkatkan kelarutan kalsium batu ginjal secara in vitro . Suharjo  dan  Cahyono  dalam  bukunya  telah mengungkap  mekanisme  aksi  senyawa flavonoid  dalam  melarutkan  kalsium  batu ginjal.  Gugus -OH yang terdapat pada rantai samping  struktur  induk  flavonoid  memiliki kemampuan  membentuk  ikatan  dengan kalsium  batu  ginjal  sehingga  menghasilkan senyawa  kompleks  Ca–flavonoid.  Senyawa kompleks  ini  lebih  mudah  larut  dalam  air sehingga  akan  mudah  dikeluarkan  melalui urin (Suharjo, 2009). Oleh karena itu, sangat dimungkinkan  bahwa  peningkatan  kelarutan kalsium  batu  ginjal  dalam  EMDK  dan EEDK disebabkan adanya kandungan senyawa aktif golongan flavonoid ini.
Hasil  penelitian  ini  telah  berhasil membuktikan  kemampuan  EMDK  dan EEDK dalam meningkatkan kelarutan kalsium  batu  ginjal  secara in  vitro .  Akan tetapi,  penelitian  ini  belum  mengungkap kemampuan  EMDK  dan  EEDK  dalam melarutkan  kalsium  batu  ginjal  secara in vivo. Penelitian  selanjutnya  diarahkan  pada pengujian  dua  ekstrak  daun  kelor  ini  dalam melarutkan  kalsium  batu  ginjal  secara in vivo menggunakan hewan percobaan. Selain itu,  agar  dapat  digunakan  sebagai  sediaan herbal, penelitian selanjutnya juga diarahkan pada  uji  toksisitas  ekstrak  daun  kelor sehingga  dapat  diketahui  keamanannya apabila  digunakan  sebagai  herbal  peluruh batu  ginjal.  Dengan  demikian,  hasil  dari serangkaian  penelitian  tersebut  diharapkan dapat  dijadikan  sebagai  bukti  ilmiah  dan dijadikan  sebagai  acuan  untuk  pembuatan obat  herbal  daun  kelor,  khususnya  untuk pengobatan batu ginjal.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Hasil  penelitian  membuktikan  bahwa EMDK (2-10)% dan EEDK (4-10)% mampu meningkatkan  kelarutan  kalsium  batu  ginjal secara in  vitro ( p <0,05).  Kelarutan  kalsium batu  ginjal  dalam  EMDK  dan  EEDK mengikuti  pola  tergantung  konsentrasi. Kadar  kalsium  batu  ginjal  terlarut  dalam EMDK  dan  EEDK  berturut-turut  berkisar antara  (86,27-185,87) ppm dan  (95,31- 177,29)  ppm.  Hasil  analisis  dengan  KLT membuktikan bahwa senyawa aktif golongan  flavonoid  berhasil  terdentifikasi dalam EMDK dan EEDK.
Saran
Berbagai  penelitian  selanjutnya  perlu dilakukan untuk melengkapi hasil penelitian ini,  diantaranya  adalah  pengujian  dua ekstrak  daun  kelor  ini  dalam  melarutkan kalsium batu ginjal secara in vivo menggunakan  hewan  percobaan.  Selain  itu, agar  dapat  digunakan  sebagai  sediaan herbal, penelitian selanjutnya juga diarahkan pada  uji  toksisitas  ekstrak  daun  kelor sehingga  dapat  diketahui  keamanannya apabila  digunakan  sebagai  herbal  peluruh batu  ginjal.  Dengan  demikian,  hasil  dari serangkaian  penelitian  tersebut  diharapkan dapat  dijadikan  sebagai  bukti  ilmiah  dan dijadikan  sebagai  acuan  untuk  pembuatan
obat  herbal  daun  kelor,  khususnya  untuk pengobatan batu ginjal.

## Ucapan Terimakasih
Ucapan  terima  kasih  kami  sampaikan kepada  Bapak  Didik  Setyo  Widodo,  S.Si., M.Si.,  yang  telah  memberikan  pelatihan pengukuran kadar kalsium terlarut menggunakan alat SSA.

## DAFTAR PUSTAKA
Arisandi,  Y.,    dan  Andriani  Y.,  2000, Tanaman  obat  dan  pengobaan alternaif, Cetakan  pertama,  Setia kawan, Jakarta;, p 47-54
Arora,  S.D.,  Onsare,  G.J.,  and  Kaur  H., 2013,  Bioprospecting  of  moringa (Moringaceae)  :  microbiological prespective, Journal of Pharmacognosy and Phytocemistry ; 1(6): 193 Daudon, M.M.F., and Reveeilaud R.J., 1987, Analyse des calculus par spectrophotometrie infrarouge advantages  et  limited  de  la methode, Ann  Bio  Clin ;  36:  475- 486 Effendi, I., dan Markum H.M.S., 2010, Buku ajar ilmu penyakit dalam, Jilid II, Edisi IV, FKUI, Jakarta;, p 35-40 Gandjar, I.G., dan Rohman A., 2008, Kimia farmasi  analisis,  Pustaka  Pelajar,
Yogyakarta;, p 46, 353-354
Grace,  P.A.,  dan  Borley,  N.R.,  2006, At  a Glance  Ilmu  Bedah, Erlangga, Jakarta;, p 41 Karadi,  R.V.,  Gadge  N.B.,  Alawadi,  K.R. and  Savadi  R.V.,  2006,  Efect  of
Moringa  oleifera lam.  root-wood on ethylene glycol induced urolithiasis in rats, J Ethopharmacol ;  105  (1-2):  306- 311
Kasolo,  J.N.,  Bimenya  G.S.,  Ojok,  L., Ochieng,  J.  and  Jasper  W.O., 2010, Phytochemicals and uses of Moringa oleifera leaves in uganda rural  communities, J  Med  Plant Res ; 4(9): 753-757 Markham  K.R.,  1988, Cara  identifikasi flavonoid,  diterjemahkan  oleh Kosasih  Padmawinata ,  Penerbit ITB, Bandung, p 1-54
Nakada,  S.Y.,  and  Pearle,  M.S.,  2013, Surgical management of
urolithiasis, Spriger ,  New  York;, p 80-83 Pramono,  S.,  Sumarmo,  Wahyono  S.,  1993, Flavonoid daun tempuyung
(Sonchus  arvensis)  senyawa  aktif pembentuk  komplek  dengan  batu ginjal berkalsium ,
Warta Tumbuhan  Obat  Indonesia;  2(3): 5-7 Purnomo,  B.B.,  2007,  Dasar-dasar  urologi, Agung Seto, Jakarta;, p 64-65. Romero,  V.,  Akpinar,  H.,  and  Assimos, D.G.,  2010,  Kidney  Stone:  A global  picture  of  pravalence, incident and  associated risk factors, Rev Urol ; 12(2-3): 86-96 Sasmito,  D.,  Kamal  Z.,  Kristanto  J.,  2001, Kemampuan ekstrak air dan fraksi etil-asetat  daun  benalu  mindi ( Dendrophthoe
falcata
L.F
Ettingsh)  melarutkan  batu  ginjal kalsium in vitro yang diuji dengan metode  aktivasi  neutron  cepat, Majalah  Farmasi  Indonesia ;  12: 120-127 Suharjo,  J.B.,  dan  Cahyono,  B.,  2009, Batu ginja l,  Kanisius,  Yogyakarta,  p 30-31 Ulfa, R.I., Dwi E.W., dan Wildan A., 2012, Pengaruh pemberian ekstrak etanol,  fraksi  air,  dan  fraksi  etil- asetat  bunga  rosela  ( Hibidus sabdariffa L.)  terhadap  kelarutan batu  ginjal  kalsium  secara in vitro , Majalah Farmasi
Indonesia ; 4 : 432 Wagner,  H.,  and  Bladt  S.,  2001,  Plan  drug analysis, a thin layer chromatography  atlas,  Second Edition, Spinger ,  188-189,  294- 296