(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 115-122

## Efektivitas Ekstrak Daun Cempedak Artocarpus integer Sebagai Antibakteri
Frengky Mawea 1* , Wilmar Maarisit 1 , Olvie Datu 1 , Nerni Potalangi 2
1 Program Studi Farmasi, Fakultas MIPA, Universitas Kristen Indonesia Tomohon
2 Program Studi Biologi, Fakultas MIPA, Universitas Kristen Indonesia Tomohon
* Penulis Korespondensi: maweafrengky13@gmail.com Diterima: 4 Maret 2018, Disetujui: 20 Maret 2018

## ABSTRAK
Masalah yang sering dihadapi dalam bidang pengobatan saat ini adalah resistensi bakteri terhadap antibiotik pada negara berkembang maupun negara maju. Oleh karena itu banyak dilakukan riset dalam pembuatan dan pengembangan antibiotik baru untuk menghadapi resistensi bakteri, baik dari bahan sintesis maupun dari sumber alami. A. Integer adalah salah satu tanaman yang digunakan sebagai  obat  dan  banyak  ditemukan  di  daerah  tropis.  Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimen  laboratorium  dengan  menggunakan  spektrofotometer  Uv-Vis  untuk  pengamatan  nilai MIC dan MBC. Penentuan nilai MIC pada tujuh perlakuan dengan konsentrasi ekstrak etanol daun A.  integer  dibuat  pengenceran  berseri  yakni  50,  100,  150,  200,  250,  300,  350  mg/ml.  Analisis spektrofotometer bahwa nilai MIC ekstrak etanol daun A. integer pada bakteri E. coli terdapat pada konsentrasi 150 mg/ml dengan rata-rata absorbansi sebelum inkubasi 0,628 dan sesudah inkubasi 0,502.  Nilai  MIC  pada  bakteri  S.  aureus  terdapat  pada  konsentrasi  250  mg/ml  dengan  rata-rata absorbansi sebelum inkubasi 0,765 dan sesudah inkubasi 0,529. Nilai MBC yang dianalisis lanjut pada  spektrofotometer,  bahwa  ekstrak  etanol  daun  A.  integer  belum  mampu  membunuh  bakteri karena setelah diinkubasi menunjukan peningkatan nilai absorbansi. Ekstrak etanol daun A. Integer bersifat bakteriostatik. Nilai MIC pada konsentrasi 150 mg/ml terhadap bakteri E. coli, dan pada bakteri S. aureus terdapat pada konsentrasi 250 mg/ml.
Kata Kunci : Artocarpus integer, Antibakteri, MIC dan MBC

## ABSTRACT
One  of  the  most  often  problems  in  medicine  faced  in  both  developed  and  developing  countries recently  is  bacterial  resistance  toward  antibiotic.  Therefore,  there  have  been  so  many  research conducted  to  make  and  develop  new  antibiotic  to  face  the  bacterial  resistance  from  synthetic  or natural  resources.  One  of  them  is  A.  integer  found  mostly  in  tropical  areas.  This  research  is categorized as a laboratory experiment using Uv-Vis spectrophotometer to find out MIC and MBC value. To determine MIC on seven treatments of ethanol extract of the leaves A. integer must be done by dilution of 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350 mg/ml. The results showed that spectrophotometer’s analysis of MIC ethanol extract of the leaves A. integer on E.coli was at concentration of 150 mg/ml with an average absorbance before incubation of 0.628 and after incubation of 0.502. MIC values in S. aureus bacteria were found at a concentration of 250 mg/ml with an average absorbance before incubation  of  0.765  and  after  incubation  of  0.529.  MBC  values  were  further  analyzed  on  a spectrophotometer. The ethanol extract of A. integer leaves could not be able to kill bacteria because after incubation absorbance value increased. Ethanol extract of A. Integer leaves is bacteriostatic. MIC values at a concentration of 150 mg/ml against E. coli bacteria, and in S. aureus bacteria  were found at a concentration of 250 mg/ml.
Keywords : Artocarpus integer, Antibacterial, MIC and MBC
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 115-122

## PENDAHULUAN
Penyakit  infeksi  menjadi  masalah  yang serius khususnya di Negara-negara berkembang. Terapi  farmakologi  untuk  mengatasi  penyakit infeksi tersebut yaitu menggunakan antimikroba yang  terdiri  dari  antibakteri  atau  antibiotik, antijamur, antivirus, antiprotozoa. Agen antimikroba yang paling sering digunakan pada terapi infeksi  yang disebabkan oleh bakteri  dan penggunaannya sering salah merupakan antibiotik. Terjadinya infeksi bakteri disebabkan oleh  kedua  bakteri  yakni Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus (PERMENKES  RI 2011).
Munculnya
resistensi terhadap antibiotik  dalam  bakteri  patogen  merupakan suatu  perkembangan  serius  yang  mengancam berakhirnya  era  antibiotik.  Presentase  infeksi bakteri  lebih  dari  70%  berhubungan  dengan infeksi  nosokomial  di  Amerika  Serikat  yang resisten terhadap satu atau lebih obat antimikroba  yang  sebelumnya  digunakan  untuk terapi (Brunton, 2008).
Resistensi  bakteri  terhadap  antibiotik pada  negara  berkembang  maupun  negara  maju merupakan  suatu  masalah  yang  sering  dihadapi dalam  bidang  pengobatan  saat  ini.  Oleh  karena itu banyak dilakukan riset dalam pembuatan dan pengembangan antibakteri/antibiotik baru untuk menghadapi  resistensi  bakteri,  baik  dari  bahan sintesis maupun dari sumber alami (Pervez et al ., 2004).
Pembuktian ilmiah melalui uji pra klinik dan uji klinik merupakan suatu pemanfaatan dan pengembangan obat tradisional yang diwariskan turun temurun berdasarkan empiris. Bahan alam yang  diproduksi  di  Indonesia  adalah  obat tradisional. Berdasarkan proses pembuatan, jenis klaim  penggunaan  dan  tingkat  pembuktian khasiat obat dikelompokkan menjadi jamu yang didasarkan  pada  pendekatan  empiris  atau  turun temurun. Obat herbal terstandar didasarkan pada pendekatan  secara  ilmiah  yang  produk  jadinya telah dilakukan standarisasi terhadap bahan baku yang  digunakan.  Dan  yang  telah  dilakukan standarisasi terhadap bahan baku dalam produk jadi  yang  digunakan  serta  klaim  khasiatnya dibuktikan dengan uji klinik disebut fitofarmaka (Priyanto, 2010)
Tanaman  yang  digunakan  sebagai  obat adalah  cempedak  Artocarpus  integer  yang banyak  ditemukan  di  daerah  tropis.  Dalam pengobatan  tradisional,  kulit  batang  cempedak digunakan sebagai obat antimalaria, disentri dan
penyakit kulit (Iwasaki dan Ogata, 1995) Sebelumnya pernah dilakukan penelitian  bahwa  ekstrak  fraksi  etil  asetat  daun cempedak memiliki aktivitas antibakteri tehadap Salmonella  thyposa , Staphylococcus  aureus , Staphylococcus epidermidis , Streptococcus mutans dengan konsentrasi   1000   ppm   adalah zona   hambat terbesar (Sahib, 2017)
Berdasarkan latar belakang yang dijelaskan,  maka  penulis  melakukan  penelitian untuk     menentukan nilai MIC ( G ),  dan  MBC ( Minimum Bactericidal Concentration ), ekstrak etanol  daun A.  integer terhadap  bakteri E.  coli , dan S. aureus .

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilakukan di laboratorium Fakultas  MIPA  UKIT,  laboratorium  fitokimia dan mikrobiologi Fakultas MIPA UNSRAT.
Aquades,  etanol  70%,  NaCl  0,9%, larutan  Mc.  Farland,  medium  Nutrien  Agar (NA),  medium Nutrient  Broth (NB),  sampel daun A. integer , strain bakteri Escherichia coli , dan Staphylococcus  aureus adalah  bahan  yang digunakan dalam penelitian ini.
Autoklaf,  spektrofotometer  UV-Vis, batang  pengaduk, alumunium    foil ,  kain  kasa steril,      kapas,  kertas  label,  korek  api,  kertas perkamen,  api  bunsen,  erlenmeyer, laminar  air flow (LAF),    desikator, hot  plate ,  gelas  kimia, tabung  reaksi,  rak  tabung,  lemari  pendingin, water  bath ,  gelas    ukur,  gunting,  inkubator, jarum  ose,  plastik wrap ,  pinset,  pipet  volume, mikropipet, rotary  evaporator , sentrifuge (GS 150),  seperangkat  alat  maserasi  dan  timbangan analitik.
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimen  laboratorium.  Pada  penelitian  ini digunakan  spektrofotometer  UV-Vis  untuk pengamatan  nilai  MIC  dan  MBC.  Penentuan nilai MIC    pada tujuh perlakuan, yaitu dengan konsentrasi ekstrak etanol daun cempedak yang dibuat  pengenceran  berseri  yakni  50,  100,  150, 200, 250, 300, 350 mg/ml. Perlakuan dilakukan sebanyak  tiga  kali  pengulangan  (Replikasi). Tanaman  diperoleh  dari  Halmehara  Barat,  Ibu tengah.  Daun  A.  integer  merupakan  bagian tanaman yang digunakan pada penelitian ini.
Ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi. Sampel daun cempedak diambil segar dan  ditimbang  500  gr,  kemudian  dikumpulkan, disortasi,  lalu  dicuci  dengan  air  mengalir. Sampel  segar  dibuat  pengecilan  ukuran  dan dimasukan ke wadah maserasi dengan
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 115-122
tambahkan pelarut etanol  hingga 2 L atau lebih hingga  semua  sampel  terendam.  Pada  proses meserasi,  setiap  24  jam  dilakukan  penyaringan menggunakan  kertas  saring  dan  didapatkan filtrat.  Waktu  penyaringan  setiap  24  jam dilakukan 3 hari. Filtrat hasil penyaringan yang diperoleh  diuapkan  menggunakan  alat rotary evaporator pada  suhu  40ºC.  Ekstrak  daun cempedak  ditimbang  sebanyak  2000  mg  dan larutkan dalam 20 ml aquades, kemudian dibuat seri konsentrasi 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350 mg/ml.
Bakteri  uji  diperoleh  dari  laboratorium mikrobiologi farmasi Fakultas MIPA UNSRAT. Satu koloni bakteri E. coli diambil dengan jarum ose  yang  steril,  kemudian  jarum  digores  pada media  NA  miring,  setelah  penggoresan,  media tersebut  diinkubasi  dalam  inkubator  pada  suhu 37ºC  selama  24  jam.  Setelah  selesai  inkubasi, dari  media  kultur  bakteri E.  coli yang  telah tumbuh diambil denganjarum ose yang disterilkanlalu  di  suspensikan  dalam  tabung reaksi  yang  berisi  10  ml  NaCl  0,9%,  sampai didapatkan  kekeruhan  suspensi  bakteri  sama dengan larutan standar 0,5 Mc. Farland, dari sini konsentrasi  suspensi  bakteri  yang  didapatkan adalah 10 8 cfu/ml. Setelah itu tabung steril   yang berisi  9,9  ml  NaCl  0,9%  dimasukan  0,1  ml suspensi  bakteri  yang  dipipet  dari    suspensi bakteri 10 8 cfu/ml lalu dikocok hingga homogen. Dari sini  diperoleh  suspensi  bakteri  10 6 cfu/ml. Untuk  penyiapan  suspensi  bakteri S.  aureus dilakukan  seperti E.  coli (Oonmetta-aree et  al ., 2005)
Metode  dilusi  cair  digunakan  pada penelitian  ini  untuk  penentuan  nilai  MIC  dan MBC  menggunakan  media  cair  NB  dan absorbansi  diukur  sebelum dan  sesudah inkubasi  pada  spektrofotometer  UV-Vis  guna melihat  pertumbuhan  bakteri yang  diuji (Lennette et al ., 1991)
Sebanyak  16  ml  media  NB  yang  sudah disterilkandimasukkan ke masing-masing erlenmeyer yang sudah diberi label konsentrasi, kemudian  ditambahkan  2  ml  ekstrak  dengan masing-masing          ekstrak  yang  telah  dibuat konsentrasi  50,  100,  150,  200,  250,  300,  350 mg/ml, setelah itu tambahkan lagi 2 ml suspensi bakteri E.  coli pada  10 6 cfu/ml  yang  sudah disesuaikan dengan standar 0,5 Mc.  Farland dan dihomogenkan  (Dikocok  perlahan).  Setelah  itu dipindahkan  ke  masing-masing  tabung  reaksi yang  telah  diberi  label  konsentrasi  dengan  tiap tabung  volume  5  ml.  Untuk  perlakuan  pada
bakteri S. aureus dilakukan sama dengan bakteri E. coli .
Sebanyak  21  tabung  reaksi  yang  berisi media NB, suspensi bakteri dan ekstrak, masing- masing sebelum inkubasi diukur nilai absorbansi pada  panjang  gelombang  600  nm  dengan spektrofotometer UV-Vis, setelah itu 21 tabung uji  tersebut  diinkubasi  dalam  inkubator  selama 24 jam, dan suhu yang digunakan adalah 37°C. Setelah  selesai  24  jam  diinkubasi,  dengan menggunakan      spektrofotometer  UV-Vis  pada panjang  gelombang  600  nm,  diukur  lagi  nilai absorbansi  pada  masing-masing  21  tabung  uji. Penentuan MIC dengan cara membuat perbandingan  absorbansi          setelah  perlakuan inkubasi dikurangi absorbansi sebelum perlakuan  inkubasi.  Bila  terdapat  konsentrasi terendah yang menghambat pertumbuhan bakteri ditunjukan dengan tidak adanya kekeruhan  atau  absorbansi=  ≤  0,  maka didapatkan nilai MIC. Kemudian pada penentuan  nilai  MBC,  semua  tabung  yang digunakan pada penentuan nilai MIC yang tidak ada  pertumbuhan  bakteri  (Bakteriostatik), diambil  sebanyak  200  μl  menggunakan mikropipet  dari  suspensi,  lalu  ditambahkan  ke dalam tabung reaksi yang berisi 5 ml media NB steril,  kemudian  diinkubasi  dalam  inkubator dengan  suhu  37°C  selama  18-24    jam, selanjutnya diukur absorbansi dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang  600  nm.  Setelah  itu  jika  hasil pengukuran menunjukkan konsentrasi   terendah ekstrak mempunyai absorbansi=0 maka didapatkan nilai MBCnya (Lennette et al ., 1991) Pada  penelitian  ini,  hasil  analisis spektrofotometer  nilai  MIC  sebelum  inkubasi dan  sesudah    inkubasi  pada  kedua  bakteri  di analisis  statistik  dengan  uji  Kruskal  Wallis  non parametrik.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Proses  ekstraksi  digunakan  metode maserasi,  karena  metode  ini  sangat  sederhana dan umum    digunakan, yakni dengan merendam material/simplisia  di  dalam  pelarut  pada  suhu kamar (tanpa pemanasan) untuk  mencegah atau meminimalisir kerusakan metabolit pada simplisia.
Berbagai  senyawa  yang  terkandung dalam  daun A.  integer dengan  struktur  kimia yang  berbeda  dapat  mempengaruhi  kelarutan dan stabilitas senyawa-senyawa tersebut terhadap  berbagai  faktor  seperti  pemanasan,
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 115-122
udara,  cahaya,  serta  logam  berat.  Dengan menggunakan  wadah  yang  terbuat  dari  kaca dilakukan  proses  maserasi  untuk  mencegah terjadinya  reaksi  kimia  antara  senyawa  yang terkandung  dalam  daun A.  integer ,  dan  juga pelarut  yang  digunakan,  karena  stabilitas  kaca yang baik dan atau tidak mudah bereaksi secara kimia,  berbeda  dengan  plastik  ataupun  logam. Selama  proses  maserasi,  wadah  selalu  dalam keadaan  tertutup  rapat  untuk  menghindari terjadinya  proses  oksidasi  oleh  udara  dari  luar. Maserasi  juga  dilakukan  di  dalam  ruangan tertutup  untuk  menghindari        pengaruh  cahaya sinar  matahari  terhadap  stabilitas  senyawa- senyawa  yang  akan  diekstraksi  (DEPKES  RI, 2000;  Srijanto et  al .,  2004;  Tensiska et  al ., 2007).
Dalam  melakukan  ekstraksi,  pelarut yang  digunakan  yakni  etanol  70%.  Dengan memiliki extracting power (daya ekstraksi) yang luas  sehingga  pelarut  etanol  70%  dapat mengekstraksi hampir semua senyawa metabolit sekunder  pada  daun A.  integer dalam  tiga  kali maserasi  (Saifudin,  2014).  Etanol  digunakan sebagai  pelarut  dalam  pembuatan  ekstrak  daun A. integer dapat melarutkan kandungan senyawa-senyawa  alkaloid,  polifenol,  tanin, terpenoid (Cowan, 1999)
Penguapan menggunakan rotary evaporator ,  umumnya  dilakukan  pada  suhu rendah sekitar 40-50ºC dan dibantu dengan alat vakum  udara  sehingga  titik  didih  pelarut  lebih rendah. Penguapan   berlansung cepat sehingga kemungkinan  terjadinya  penguraian  senyawa yang termolabil dapat dihindari (Hanani, 2014). Hasil  dari  evaporasi  didapatkan  ekstrak  dengan bobot 51 gr.
MIC ( Minimum Inhibitory
Concentration )  merupakan  kadar  antimikroba terendah  yang  masih  dapat  menghambat pertumbuhan  mikroorganisme  tertentu.  Untuk menghasilkan  antimikroba  yang  efektif,  kadar antimikroba di dalam cairan tubuh secara klinis harus lebih tinggi dari nilai MIC. Apabila kadar tertentu  tersebut  tidak  tercapai,  antimikroba tersebut tidak dapat mengatasi infeksi. Sebagai  contohnya  suatu  mikroorganisme dengan  MIC  20  μg/ml  rentan  terhadap  kadar tersebut  secara  in  vitro.  Namun,  apabila  kadar antimikroba  yang  dicapai  dalam  darah  hanya  5 μg/ml,  pertumbuhan  mikroorganisme  tidak dapat dihambat oleh antimikroba tersebut. MBC ( Minimum  Bactericidal  Concentration )  adalah kadar terendah antimikroba yang dapat
membunuh  99,9%  mikroorganisme  setelah inkubasi 18 jam (Radji, 2014)
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan sebelumnya, bahwa dengan menggunakan metode difusi, aktivitas antibakteri  ekstrak  etil  asetat  daun A.  integer paling  besar  terhadap  bakteri S.  aureus adalah konsentrasi 1000 ppm dengan rata-rata diameter zona  hambat  7,5  mm.  Yang  tidak  menunjukan adanya zona hambat terdapat pada bekteri E. coli (Sahib,  2017)  Nilai  MIC  pada  bakteri    uji berbanding  terbalik  dengan  zona  hambat antimikroba  cakram  metode  difusi,  semakin kecil  nilai MIC pada bakteri uji, maka semakin luas zona hambat pada bakteri uji (Sahib, 2017). Pada penelitian lanjutan ini  ekstrak etanol daun A.  integer dipilih  untuk  pengujian  MIC  dan MBC dengan menggunakan metode dilusi cair.
Suspensi  bakteri  yang  digunakan  untuk pengujian  adalah  10 6 cfu/ml  yang  diencerkan dari  10 8 cfu/ml  sesuai  larutan  standar  0,5 Mc. Farland .  Jumlah  bakteri  10 5 –10 8 cfu/ml  telah memenuhi syarat digunakan untuk uji kepekaan (Carter dan Cole, 1990)
Pada  penentuan  nilai  MIC  dapat digunakan  metode  turbidimetri  secara  visual tetapi  metode      tersebut  tidak  dapat  digunakan pada  penelitian  ini  karena  larutan  ekstrak  yang berwarna kecoklatan, dan juga hal ini cenderung bersifat  subjektif  dari  penglihatan  manusia, sehingga  akan  mempersulit  pada  pengamatan, karena  itu  untuk  hasil  yang  akurat  harus dilakukan analisis menggunakan spektrofotometer  UV-Vis.  Panjang  gelombang yang  dipakai  untuk  mengukur  absorbansi  dari jumlah  mikroba  yaitu  600  nm,  menurut  APHA (1998)  umumnya  pada  600  nm  banyak  sel-sel menyerap pada panjang gelombang ini.
Berdasarkan  hasil  analisis  yang  terlihat pada  Tabel  1  bahwa  larutan  ekstrak  yang menunjukan efek bakteriostatik terhadap bakteri E.  coli adalah  konsentrasi  300  mg/ml  dan  150 mg/ml. Berdasarkan analisis data spektrofometer bahwa nilai MIC pada bakteri E. coli terdapat pada konsentrasi 150 mg/ml. Hasil analisis yang terlihat pada Tabel 2 bahwa larutan ekstrak  yang  menunjukan  efek  bakteriostatik terhadap  bakteri S.  aureus adalah  konsentrasi 350,  300  dan  250  mg/ml.  Berdasarkan  analisis data  tersebut,  nilai  MIC  pada  bakteri S.  aureus terdapat pada konsentrasi 250 mg/ml.
Menurut  Benson  (2002)  bahwa  ada hubungan  sebanding  antara  jumlah  sel  bakteri dengan nilai absorbansi. Dengan demikian maka
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 115-122
semakin jernih larutan uji maka nilai absorbansi juga  semakin  rendah  dan  sebaliknya  semakin keruh  larutan  uji  maka  nilai  absorbansi  juga semakin tinggi.
Efek  Antibakteri  dari  ekstrak  daun A. integer pada  bakteri  bekerja  tidak  stabil  yang menunjukan  kenaikan  nilai  absorbansi  pada konsentrasi  yang  lebih  tinggi,  yang  seharusnya semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak  yang diberikan,  maka  semakin  besar  aktivitas penghambatannya (Penurunan nilai absorbansi), tetapi pada penelitian ini tidak demikian.
Kenaikan  nilai  absorbansi  yang  terlihat pada  konsentrasi  tidak  sepenuhnya  karena pertumbuhan bakteri, tetapi dapat juga dipengaruhi  oleh  kepekatan  dari  konsentrasi ekstrak  yang  lebih  tinggi,  sehingga  dapat mempengaruhi  absorpsi  cahaya  oleh  sel-sel bakteri  yang  mati  di  dalam  larutan  (Watson, 2012;  Eckschlager,  1994;  Astuningsig,  2014). Kekurangan  dari  alat  spektrofotometer  UV-Vis yaitu  cahaya  yang  diabsorpsi  tidak  dapat membedakan  antara  sel-sel  bakteri  yang  mati dan yang hidup. Kenaikan nilai absorbansi dapat juga  disebabkan  oleh  konsentrasi  ekstrak  daun cempedak  yang  masih  memiliki  senyawa  yang kompleks  di  dalamnya  sehingga  menyebabkan adanya  senyawa-senyawa  yang  mempengaruhi absorbsi  cahaya.  Kelemahan  spektrofotometer UV-Vis dapat diminimalisasi dengan menggunakan  alat high  performance  liquid chromatography (HPLC).  Kromatografi  adalah teknik  analisis  yang  berbasis  pada  pemisahan molekul-molekul berdasarkan perbedaan struktur  dan  atau  komposisinya  (Astuningsih, 2014)
Hasil uji analisis spektrofotometer pada kedua  bakteri  didapatkan  nilai  MIC  yang berbeda,  Hal  ini  disebabkan  karena  perbedaan komponen  penyusun  dinding  sel  pada  bakteri gram  positif  dengan  bakteri  gram  negatif. Dinding  sel  merupakan  bagian  yang  terpenting dari  sel  bakteri  karena  berfungsi  menyediakan komponen  struktural  yang  kaku  dan  kuat sehingga  memberi  bentuk  sel.  Dinding  sel
bakteri gram positif strukturnya lebih sederhana, berbeda dengan struktur dinding sel pada bakteri gram negatif yang lebih kompleks. Kompleksitas dinding sel bakteri tersebut dapat menghambat senyawa antimikroba yang diujikan.  Pada  kuman  gram  positif,  dinding  sel terutama  terdiri  dari  peptidoglikan  yang  relatif lebih  tebal  daripada  bakteri  gram  negatif  dan dikelilingi  oleh  lapisan  asam  teikoat  dan lipoteikoat.  Peptidoglikan  merupakan  molekul polimer  yang  terdiri  dari  rantai  polisakarida paralel yang dihubungkan oleh ikatan polipeptida.  Pada  bakteri  gram  negatif,  dinding selnya  mempunyai  lapisan  peptidoglikan  yang relatif  tipis,  dan  dikelilingi  lapisan  lipoprotein, lipopolisakarida, fosfolipid, dan protein. Membran  terluar  menyatukan komponen- komponen  spesifik  bakteri  gram  negatif  dan bersifat hidrofobik (Astuningsig, 2014).
Berdasarkan penelitian sebelumnya metabolit  sekunder  pada  daun A.  integer yang berperan  sebagai  antibakteri  yaitu  senyawa flavonoid  dan  senyawa  fenol  (Sahib,  2017). Kandungan senyawa-senyawa flavonoid dengan kerangka  yang  beragam  salah  satunya  turunan prenilflavon  telah  berhasil  di  isolasi  senyawa tunggal dari kulit akar Artocarpus rigida Blume, Artonin  E  (Gambar 1 )  kelas  senyawa  3- prenilflavon,  dengan  konsentrasi  250  µg/ disc memiliki  aktivitas  sebagai  antibakteri  terhadap E. coli dan Bacillus subtilis menghasilkan zona bening pada diameter 1,2 cm ( E. coli ) dan 0,9 cm ( B. subtilis ), kanamisin sulfat dengan konsentrasi  240  µg/ disc menghasilkan  zona bening  dengan  diameter  zona  hambat  2,2  cm. Senyawa ini dapat digunakan sebagai antibakteri (Suhartati et  al ,  2008).  Dua  isoprenilflavon Artocarpin  dan  Artocarpesin  (Gambar 1 )  yang diisolasi  dari Artocarpus  heterophyllus dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  kariogenik primer  pada  konsentrasi  3,13-12,15  µg/ml  dan juga  menunjukan  efek  penghambatan  terhadap pertumbuhan Streptococci .  Kedua  senyawa  ini potensial  untuk  pencegahan  karies  gigi  (Jagtap dan Bapat, 2010)
Artonin E (1)
Artocarpin (2)
Artocarpesin (3)
Gambar 1 . Metabolit sekunder dari Artocarpus integer
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 115-122
Tabel 1 . Data analisis nilai MIC pada bakteri E. coli Minimum Inhibitory Concentration Absorbansi Sebelum Inkubasi Absorbansi Sesudah Inkubasi Replikasi Replikasi K I II III Rata- rata I II III Rata- rata 50 mg/ml 0,375 0,373 0,373 0,373 0,857 0,764 0,814 0,811 100 mg/ml 0,532 0,531 0,534 0,532 0,760 0,868 0,798 0,808 150 mg/ml 0,632 0,626 0,627 0,628 0,598 0,478 0,430 0,502 200 mg/ml 0,665 0,663 0,665 0,664 0,881 0,896 0,878 0,885 250 mg/ml 0,674 0,675 0,675 0,674 1,167 1,187 1,107 1,153 300 mg/ml 0,629 0,629 0,631 0,629 0,602 0,616 0,617 0,611 350 mg/ml 0,793 0,785 0,793 0,790 1,255 1,171 1,277 1,234 Tabel 2 . Data analisis nilai MIC pada bakteri S. aureus Minimum Inhibitory Concentration Absorbansi Sebelum Inkubasi Absorbansi Sesudah Inkubasi Replikasi Replikasi K I II III Rata- rata I II III Rata- rata 50 mg/ml 0,361 0,364 0,364 0,363 0,750 0,750 0,903 0,801 100 mg/ml 0,575 0,574 0,573 0,574 0,836 0,885 0,945 0,888 150 mg/ml 0,682 0,690 0,690 0,687 0,583 0,811 0,945 0,779 200 mg/ml 0,706 0,706 0,704 0,705 0,934 0,837 0,811 0,860 250 mg/ml 0,720 0,787 0,790 0,765 0,551 0,486 0,551 0,529 300 mg/ml 0,993 0,915 0,913 0,920 0,575 0,424 0,557 0,518 350 mg/ml 1,050 1,053 1,048 0,050 0,925 0,708 0,835 0,822
Keterangan :
K = Konsentrasi Ekstrak
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 115-122
Berdasarkan  hasil  analisis  lanjut  yang terlihat  pada  tabel 3 dan 4 ,  pengujian  MBC konsentrasi  ekstrak  daun A.  integer belum menunjukan  nilai  MBC,  hal  ini  ditunjukan setelah  inkubasi  adanya  pertumbuhan  bakteri atau kenaikan absorbansi pada tabung uji lanjut tersebut,  sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa ekstrak  daun A.  integer belum  memiliki  sifat bakterisidal,  tetapi  hanya  bersifat  bakteriostatik pada bakteri uji. Inkubasi terlihat nilai signifikan (0,003)  dan  sesudah  inkubasi  nilai  signifikan (0,035)  kurang  dari  nilai  alpha  (α=0,05),  oleh karena  itu  H0  ditolak.  Dengan  demikian,  dapat disimpulkan bahwa terdapat perbedaan dari tiap perlakuan  konsentrasi  ekstrak  terhadap  nilai MIC  sebelum  inkubasi  dan  sesudah  inkubasi pada bakteri S. aureus .
Tabel 3 .  Data  analisis  lanjut  nilai  mbc  pada bakteri E. Coli
Minimum Bactericidal Concentration Absorbansi Sesudah Inkubasi Replikasi K I II III Rata- rata 150 mg/ml 0.330 0.386 0.479 0.398 300 mg/ml 0.102 0.111 0.101 0.104
Tabel 4 . Data Analisis Lanjut Nilai MBC Pada
Bakteri S. aureus Minimum Bactericidal Concentration Absorbansi Sesudah Inkubasi Replikasi K I II III Rata- rata 250 mg/ml 0.118 0.173 0.116 0.135 300 mg/ml 0.118 0.117 0.114 0.116 350 mg/ml 0.117 0.114 0.154 0.128
Tabel  5 .  Hasil  analisis  kruskal  wallis  (MIC E. coli )
MIC Sebelum Inkubas MIC Sesudah Inkubasi Chi-square 19,338 19,152 Df 6 6 Asymp.Sig. 0,004 0,004
Tabel  5 .  Hasil  analisis  kruskal  wallis  (MIC S. aureus )
MIC Sebelum Inkubas MIC Sesudah Inkubasi Chi-square 19,675 13,546 Df 6 6 Asymp.Sig. 0,003 0,035
Hasil  analisis  Kruskal  Wallis  non parametrik pada tabel 5 bahwa pada bagian MIC sebelum  dan  sesudah  inkubasi,  terlihat  nilai signifikan  (0,004)  kurang  dari  nilai  alpha (α=0,05),  oleh  karena  itu  H0  ditolak.  Dengan demikian,  dapat  disimpulkan  bahwa  terdapat perbedaan  dari  tiap  perlakuan  konsentrasi ekstrak terhadap nilai MIC sebelum dan sesudah inkubasi pada bakteri E. coli .
Analisis  Kruskal  Wallis  non  parametrik pada  tabel  6  bahwa  pada  bagian  MIC  sebelum inkubasi  terlihat  nilai  signifikan  (0,003)  dan sesudah inkubasi nilai signifikan (0,035) kurang dari  nilai  alpha  (α=0,05),  oleh  karena  itu  H0 ditolak.  Dengan  demikian,  dapat  disimpulkan bahwa  terdapat  perbedaan  dari  tiap  perlakuan konsentrasi ekstrak terhadap nilai MIC sebelum inkubasi  dan  sesudah  inkubasi  pada  bakteri S. aureus .

## KESIMPULAN
Dari hasil penelitian ini dapat disimpulkan bahwa,  secara in  vitro ekstrak  etanol  daun cempedak  ( A.  Integer )  bersifat  bakteriostatik dengan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC)  pada  konsentrasi  150  mg/ml  terhadap bakteri E.  coli ,  dan  pada  bakteri S.  aureus terdapat pada konsentrasi 250 mg/ml.

## DAFTAR PUSTAKA
Astutiningsih,  C.  Setyani,  W.  Hindratna,  H. 2014. Uji Daya Antibakteri Dan Identifikasi  Isolat  Senyawa  Katekin  Dari Daun  Teh  (Camellia  sinensis  L.  var Assamica).  Jurnal  Farmasi  Sains  Dan Komunitas. p50-57.
American  Public  Health  Association  (APHA). 1989. Standard methods for the examination    of  water  and  wastewater.
American  Water  Works  Association (AWWA)  and  Water  Pollution  Control Federation (WPCF). 17th ed. Washington. Benson, H.J. 2002. Microbiological Applications  Laboratory  Manual  In
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 115-122
General  Microbiology  Eight  Edition. Pasadena City College. Pasadena. Brooks,  G.F., Carroll,  K.C.,  Butel,  J.S.,  Morse, S.A., Mietzer. T.A., Jawets, Melnick, and Adelberg’s 2010. Medical Microbiology. Twenty-fifth  Edition.  The  McGraw-Hill Medical. United States of America.
Brunton,  L.L.,  Parker,  K.L.,  Blumenthal  D.K., Buxton,  L.L.O.  2008.  Goodman  & Gilman’s  Manual  of  Pharmacology  and Therapeutics, United States of America.
Carter,  G.R.  and  Cole,  J.R.  1990.  Diagnostic Procedures  in  Veterinary  Bacteriology and  Micology.  5th  edition.  Academic
Press. Inc. San Diego California.
Cowan, M.M. 1999.  Plant Product as Antimicrobial Agents. Journal Microbiology Reviews. 12(4): p564-582. Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia. 2000.  Parameter  Umum  Standar  Ekstrak Tumbuhan Obat Cetakan Pertama.
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan
Makanan, Jakarta.
Eckschlager,  K.  1994.  Kesalahan  Pengukuran dan Hasil dalam  Analisis Kimia. Jakarta:
Ghalia Indonesia.
Hanani.  E.  2014.  Analisis  Fitokimia.  Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta.
Iwasaki,  T.    and  Ogata,  Y.  1995.  Medicinal Herbs Index in Indonesia, 2nd edition. PT. Eisai Indonesia.
Jagtap, U.B, and Bapat, V.A. 2010. Artocarpus: A  review  of  its  traditional  uses, phytochemistry and pharmacology. Journal  of  Ethnopharmacology.  129: p142–166.
Lennette,  T.H.,  Barilows,  A.,     Hausler,  W.J.J., Shadoni,  H.  J.  1991.  Manual  Clinical Microbiology   (5th edition). Washington, DC: American Sociaty for Microbiology.
Oonmetta-aree,  J.S.,  2005.  Tomoko,  G., Piyaman,  Griangsak.  E.  Antimicrobial properties and action of galangal (Alpinia galanga Linn.) on Staphylococcus aureus, 39, p1214-1220. Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia Nomor 2406/MENKES/PER/XII/2011  Tentang Pedoman Umum Penggunaan Antibiotik. Pervez,  M.K.U.,  Hakim,  M.A.,  Chowdhury,
D.K.,  Rahman,  M.S.  2004.  Study  on Antibiotic  Resistence  by  Pathogenic Bacteria Isolated from Clinical Specimen, Pak. J. Biol. Sci. 7(11).
Priyanto.  2010.  Farmakologi  Dasar  Untuk Mahasiswa  Farmasi  &  Keperawatan, Edisi 2, Penerbit LESKONFI, Jakarta.
Saifudin,A.  2014.  Senyawa  Alam  Metabolit
Sekunder  Teori,  Konsep,  dan  Teknik Pemurnian. Deepublish. Edisi 1.
Yogyakarta.
Sahib,  N.A.  2017.  Uji  Aktivitas  Antimikroba Hasil Fraksinasi Ekstrak Daun Cempedak (Artocarpus          champedenL)  Terhadap Mikroba Patogen, Uin Alauddin
Makassar.
Suhartati,  T.,  Yandri,  S.  Hadi.  2008.  The bioactivity test of artonin E from the bark of  Artocarpus  rigida  Blume.  European Journal  of  Scientific  Research  23:  p330– 337.
Srijanto,  B.,  Rosidah,  I.,  Ris,  E.,  Syabirin,  G. Aan,  Mahreni.  2004.  Pengaruh  Waktu, Suhu  dan  Perbandingan  Bahan  Baku- Pelarut  pada  Ekstraksi  Kurkumin  dari Temulawak  (Curcuma        xanthorizza Roxb.)  dengan  Pelarut  Aseton.  Prosiding Seminar  Nasional  Rekayasa  Kimia  dan Proses, p1-5.
Soleha.  T.U.  2015.  Uji  Kepekaan  Terhadap Antibiotik. Jurnal Kedokteran Universitas Lampung. 5(9), p119-123.
Radji,  M.  2014.  Mekanisme  Aksi  Molekuler Antibiotik  dan  Kemoterapi.  Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta
Tensiska,  Marsetio.,  S.,  Yudiastuti.  2007.
Pengaruh Jenis Pelarut terhadap Aktivitas Antioksidan Ekstrak Kasar Isoflavon dari Ampas  Tahu.  Laporan  Penelitian.    FTIP Universitas Padjadjaran, Bandung
Watson  D.G.  2012.  Pharmaceutical  Analysis 3nd  edition.  A  Textbook  for  Pharmacy Students  and      Pharmaceutical  Chemists. London: Elsevier.