## UNPAD

## TLC Video Densitometry Method for Determination Thiamphenicol in Dry Syrup
Winasih Rachmawati1*, Ellen R. Pratiwi1, Anne Yuliantini1
1Fakultas Farmasi, Universitas Bhakti Kencana Bandung, Jl. Soekarno Hatta No. 754 Bandung, Indonesia
Submitted 20 October 2023; Revised 21 December 2023; Accepted 18 December 2023; Published  30 December 2023 *Corresponding author: winasih.rachmawati@bku.ac.id

## Abstract
An  analytical  method  for  the  determination  of  thiamphenicol  in  dry  syrup  has  been  developed  by the  TLC  video  densitometry  method.  Identification  and  quantification  of  thiamphenicol  in  simple pharmaceutical  preparations  were  performed  on  a  silica  gel  GF254  plate  using  mobile  phase  ethyl acetate:chloroform:methanol (7.5:2:0.5, v/v/v). The detection was carried out under a UV lamp at 254 nm and then captured by a digital camera with ISO 100 sensitivity, 50 mm focal point, f/6 aperture, and 1/15 sec shutter speed. The captured images were analyzed using ImageJ software to determine the AUC values of each spot. The selectivity result was 1.52. Method validation results obtained regression equation y = 1.7481x + 16498 (r = 0.9995; Vx0 = 0.80%). The limit of detection and the limit of quantitation were 21.78 and 72.60 ppm respectively. The precision (%RSD) intra-day and inter-day precisions were 1.07 and 1.34% respectively. The method has mean recoveries in the range of 96.62 - 100.91%. The levels of thiamphenicol in three dry syrup samples were 99.26, 101.25, and 101.81%, respectively. The TLC video densitometry method can be used as a routine analysis of thiamphenicol in dry syrup.
Keywords: dry syrup, thiamphenicol, TLC video densitometry.

## Metode KLT Video Densitometri untuk Penetapan Kadar Tiamfenikol dalam Sirup Kering

## Abstrak
Metode analitik untuk penentuan tiamfenikol dalam sirup kering telah dikembangkan menggunakan metode  KLT  video  densitometri.  Identifikasi  dan  kuantifikasi  tiamfenikol  dalam  sediaan  tablet dilakukan pada lempeng silika gel GF254 menggunakan fase gerak etil asetat: kloroform: metanol (7,5: 2: 0,5, v/v/v). Deteksi dilakukan di bawah lampu UV 254 nm dan kemudian diambil menggunakan kamera digital dengan sensitivitas ISO 100, titik fokus 50 mm, aperture f/6, dan shutter speed 1/15 detik. Gambar yang diambil dianalisis menggunakan perangkat lunak ImageJ untuk menentukan nilai AUC dari setiap bercak. Hasil selektivitasnya adalah 1,52. Persamaan regresi tiamfenikol diperoleh persamaan  y  =  1,7481x  +  16498  (r  =  0,9995;  Vx0  =  0,80%).  Batas  deteksi    dan  batas  kuantitasi masing-masing sebesar 21,78 dan 72,60 bpj. Presisi (%RSD) dalam satu hari dan antar hari masing- masing adalah 1,07 dan 1,34%. Metode ini menghasilkan rata-rata perolehan kembali direntang 96,62 hingga  100,91%.  Kandungan  tiamfenikol  dalam  tiga  sampel  sirup  kering  masing-masing  sebesar 99,26, 101,25, dan 101,81%. Metode KLT video densitometri dapat digunakan sebagai analisis rutin tiamfenikol dalam sirup kering.
Kata Kunci: sirup kering, tiamfenikol, KLT video densitometri.

## 1.  Pendahuluan
Tiamfenikol  merupakan  antibiotik spektrum  luas  turunan  kloramfenikol  yang mempunyai  indikasi  untuk  infeksi1.  Saat ini  produk  yang  beredar  dan  mengandung tiamfenikol hanya berupa kapsul dan suspensi kering. Tiamfenikol  dibuat  sediaan  suspensi kering  karena  zatnya  sukar  larut  dalam  air2 dan bentuk sediaan nyaman untuk diberikan untuk  pediatri3.    Rasa  antibiotik  yang  pahit dapat tertutupi jika dibuat sediaan sirup4. Metode standar dalam penentuan kadar tiamfenikol dalam sedian jadi tidak terdapat di  dalam  Farmakope  Indonesia,  namun beberapa penelitian  telah melaporkan analisis kadar  tiamfenikol  dalam  sediaan  dapat dilakukan  menggunakan  Kromatografi  Cair Kinerja Tinggi (KCKT) dan spektrofotometri ultraviolet 5–7 .  Selain  itu,  metode  KLT- KCKT  telah  dilakukan  untuk  identifikasi tiamfenikol dalam makanan ternak8. Kontrol kualitas  suatu  zat  aktif  dalam  sediaan  dapat menggunakan  Kromatografi  Lapis  Tipis (KLT).  Kombinasi  KLT  dan  densitometri merupakan metode pemisahan analitik secara simultan yang bercaknya dapat dipindai secara optik  elektronik  sehingga  dapat  digunakan untuk  penetapan  kadar.  Dibandingkan dengan  KCKT,  fase  gerak  yang  digunakan di  KLT    dapat  lebih  luas  dan  bervariasi. Sampel  suspensi  dapat  ditetapkan  kadarnya secara  langsung  tanpa  proses  preparasi sampel yang rumit9.  Selain itu metode KLT Video  densitometri  ini  memiliki  kelebihan diantara  lain  instrumennya  sederhana, biaya  operasional  relatif  murah,  volume pelarut  yang  digunakan  sedikit,  selektif  dan sensitif, serta kromatogramnya dapat diamati secara  visual 10–12 .  Kromatogram  direkam menggunakan  kamera  video  warna  yang sensitif,  dan  sinyal  video  dikirim  ke  papan digitalisasi  khusus  ( frame grabber )  yang membantu  pemrosesan  gambar  secara  cepat melalui  sistem  komputer  pribadi  (seperti ImageJ ).  Perangkat  lunak  khusus  yang dikembangkan  untuk  evaluasi  kuantitatif kromatogram mendukung pengeditan dokumen  gambar  di  layar,  termasuk pemilihan posisi pemindaian, ekstraksi data, dan integrasi 13 .  Penerapan metode KLT video
densitometri untuk analisis tiamfenikol belum terdapat  publikasi  yang  pernah  dilakukan. Berdasarkan  uraian  di  atas,  maka  peneliti tertarik  untuk  mengembangkan  metode Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT)  video densitometri sebagai metode alternatif dalam analisis kadar tiamfenikol  dalam sediaan sirup kering.  Validasi  metode  merupakan  tahapan yang  penting  dalam  melakukan  analisis kadar. Parameter validasi yang harus dipenuhi meliputi  selektivitas,  linearitas,  sensitivitas (batas  kuantitasi  dan  batas  deteksi),  presisi, dan akurasi 14,15 .
2.  Metode
2.1.  Alat Lempeng  KLT  silika  gel  60  F 254 aluminium  20  x  20  cm  (Merck),  bejana pengembang  10  x  10  cm,  aplikator  Camag linomat  4, injector Camag,  kamera  digital Sony Alpha tipe A5100, dan perangkat lunak ImageJ versi 1.53h20.
2.2.  Bahan
Tiamfenikol  baku  (PT  Sanbe  Farma), tiamfenikol  sirup  yang  mengandung  125 mg/5  mL  tiamfenikol  (3  merk  di  apotek), metanol p.a (Merck), kloroform p.a (Merck), etil asetat p.a (Merck), dan aquades.
2.3.  Prosedur
2.3.1. Penyiapan Larutan Standar dan Larutan Baku Kerja Larutan  standar  dibuat  dengan menimbang  seksama  sejumlah  kurang  lebih 100  mg  tiamfenikol  dilarutkan  dengan  50,0 mL metanol. Larutan baku kerja dibuat dari pengenceran larutan standar hingga diperoleh konsentrasi direntang 600-1200 bpj.
2.3.2. Optimasi Kondisi Analisis
Pelat  KLT  silika  gel  GF 254 diaktivasi dengan  cara  dipanaskan  pada  suhu  105°C selama  30  menit.  Larutan  kerja  1000 bpj  ditotolkan  penotolan  menggunakan aplikator  Camag  sebanyak  5  μL  pada  pelat KLT.  Fase  gerak  disiapkan  dengan  cara mengkombinasikan  beberapa  pelarut  seperti metanol,  etil  asetat  dan  kloroform  hingga menghasilkan  pemisahan  bercak  yang  baik.
Lempeng KLT kemudian dimasukkan dalam chamber yang  telah  jenuh.  Setelah  eluen mencapai batas elusi, lempeng diangkat dan dikeringkan  kemudian  diamati  di  bawah lampu  UV.  Hasil  kombinasi  pelarut  terbaik diperoleh  dari  bercak  yang  menghasilkan nilai  Rf  di  rentang  0,2-0,8.  Bercak  difoto menggunakan  kamera  Sony  Alpha  A5100 dengan  sensitivitas  ISO  100,  titik  fokus  50 mm, aperture f/6,  dan shutter speed 1/15 detik.  File  foto  dibaca  dengan  perangkat lunak ImageJ menghasilkan AUC untuk data perhitungan berikutnya.
2.3.3. Selektivitas dan Spesifisitas Preparasi  standar:  Larutan  baku  kerja tiamfenikol  1000  bpj  disiapkan  kemudian ditotolkan sebanyak 5 μL pada lempeng KLT Silika Gel F 254 . Preparasi sampel: Sirup  yang  telah direkonstitusi  ditimbang  setara  125  mg tiamfenikol    (menggunakan  kesetaraan  BJ) kemudian  dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur 25,0  mL  dan  dilarutkan  dengan  metanol. Larutan  tersebut  diencerkan  lima  kali menggunakan  metanol.  Larutan  sampel disaring  dan  dipindahkan  kedalam  vial kemudian  ditotolkan  sebanyak  5  μL  pada lempeng KLT Silika Gel F 254 . Preparasi fase gerak: Sebanyak 10  mL  campuran    pelarut    etil  asetat  : kloroform : metanol (7,5: 2 : 0,5) digunakan sebagai    fase  gerak  dimasukkan  ke  dalam bejana  ( chamber )  hingga  jenuh.  Pelat  yang telah  ditotolkan  larutan  baku  dan  sampel dimasukkan  ke  dalam  chamber  yang  telah jenuh.  Setelah  eluen  mencapai  batas  elusi, lempeng diangkat dan dikeringkan. Lempeng noda yang dihasilkan diamati di bawah lampu UV  254  nm,  kemudian  direkam  dan file hasilnya  dibaca  dengan  perangkat ImageJ . Nilai resolusi puncak tiamfenikol mempunyai nilai pemisahan lebih dari 1,5.
2.4.  Validasi Metode Analisis
2.4.1. Linearitas Larutan  baku  kerja  tiamfenikol  dibuat sebanyak tujuh konsentrasi yang berbeda yaitu 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, dan 1200 bpj. Larutan  seri  tersebut  ditotolkan  sebanyak  5
μL pada pelat menggunakan aplikator Camag. Setelah itu dilakukan pengembangan dengan fase  gerak  terpilih.  Setelah  pengembangan, pelat yang akan dianalisis dikeringkan untuk menghilangkan  uap  dari  fase  gerak  dan divisualisasikan di bawah sinar UV 254 nm untuk  mendeteksi  bercak  senyawa  analit tiamfenikol.  Kemudian,  gambar  pelat  KLT di  bawah  sinar  UV  diambil    menggunakan kamera digital Sony Alpha tipe A5100 yang sudah diletakkan di atas pelat. Gambar yang dihasilkan  berupa  bercak  yang  terlihat  jelas kemudian dianalisis dengan perangkat lunak ImageJ  untuk  menghasilkan  nilai AUC  dari masing-masing bercak. Selanjutnya dilakukan perhitungan regresi linear dimasukkan dalam persamaan  garis  y=bx+a.  Dari  persamaan berikut dapat diperoleh nilai koefisien korelasi (r) dan Vx0.
2.4.2. Sensitivitas Proses  analisis  sama  dengan  linieritas yang    dilanjutkan  dengan  perhitungan  nilai parameter batas deteksi dan batas kuantitasi dari data hasil pemindaian. Menghitung nilai parameter batas deteksi dan batas kuantitasi menggunakan persamaan Batas deteksi (BD) = (3 × Sy/x)/b. Batas kuantitasi (BK) = (10 × Sy/x)/b.
2.4.3. Akurasi Uji akurasi dilakukan dengan membuat sampel simulasi dengan formulasi yang terdiri dari tiamfenikol, sukrosa, xanthan gum, asam sitrat  dan  aerosil4.  Sampel  simulasi  dibuat konsentrasi tiamfenikol yang berbeda  yaitu 80,  100,  dan  120%  dari  kekuatan  sediaan yang tertera di etiket.
Larutan sirup simulasi ditimbang setara dengan  5  mL  (kesetaraan  BJ),  kemudian dilarutkan  menggunakan  metanol  p.a  dalam labu  ukur  25,0  mL.  Kemudian  dilakukan pengenceran  sebanyak  lima  kali.  Larutan disaring kemudian ditotolkan sebanyak 5 µL di pelat KLT. Proses penotolan, pengembangan, penampakan  dan  perekaman  bercak  serta analisis kromatografi sama dengan linearitas. Kemudian  dilakukan  analisis  kromatogram sehingga diperoleh nilai respon luas puncak (AUC).
2.4.4. Presisi
Presisi dilakukan dengan menggunakan sampel  simulasi  konsentrasi  100%  diulang sebanyak 6 kali, kemudian larutan ditotolkan pada  pelat  KLT  masing-masing  sebanyak 5µL.  Kemudian  dikembangkan  dalam chamber , diangkat lalu dikeringkan. Prosedur ini  dilakukan  sebanyak  tiga  kali  pada  hari yang  berbeda  untuk  menentukan  presisi antara  atau intermediate precission .  Setelah pelat  kering,  visualisasi  dan  pengambilan gambar  dilakukan.  Selanjutnya,  nilai  respon luas puncak (AUC) dihitung melalui analisis kromatogram.
2.4.5. Penetapan Kadar Sampel Sampel sirup kering tiamfenikol dipilih tiga merk berbeda yang didapatkan dari salah satu  apotek  daerah  Bandung.  Pembuatan larutan  uji  dilakukan    dengan  menimbang setara  5,0  mL  sirup  kemudian  dilarutkan menggunakan  metanol  p.a  dalam  labu  ukur 25,0  mL.    Larutan  tersebut  diencerkan  5 kali  kemudian  ditotolkan  pada  pelat  KLT. Penotolan sampel pada pelat KLT dilakukan sebanyak tiga kali pengulangan. Setelah itu, AUC  bercak  dan  rataan AUC  dihitung,  dan kromatogram baseline yang dipilih berwarna hijau  karena  memberikan  bentuk  puncak terbaik. Selanjutnya, dianalisis menggunakan perangkat  lunak ImageJ hingga  diperoleh
nilai luas area kemudian kemudian dihitung konsentrasinya dari persamaan regresi linier yang  telah  diperoleh.  Nilai  kadar  yang diperoleh harus memenuhi syarat yaitu 97% - 103% 2 .

## 3.  Hasil
3.1.  Selektivitas dan spesifisitas Pada pengujian ini dilakukan percobaan dengan  delapan  variasi  fase  gerak.  Hasil optimasi  dapat  dilihat  pada  Tabel  1.  Sistem KLT  yang  terbaik  yaitu  menggunakan  fase diam silika gel GF254 dan fase gerak No. 8 yaitu etil  asetat  :  kloroform  :  metanol  (7,5:2:0,5, v/v)  dengan  nilai  selektivitas  (α)  sebesar 1,52.  Hasil  selektivitas  ditunjukkan  pada Gambar 1. Bercak yang dihasilkan kemudian divisualisasikan  menggunakan software ImageJ sehingga  diperoleh  kromatogram seperti pada Gambar 2.
3.2.  Linearitas Berdasarkan  hasil  yang  didapat  nilai koefisien  korelasi  (r)  tiamfenikol  adalah 0,9992 (n=7). Persamaan yang didapat sebesar y = 1,7481x + 16498 dengan hasil nilai Vx0 yang didapatkan sebesar 0,80%.
3.3.  Sensitivitas Dari  hasil  perhitungan,  diperoleh  nilai batas deteksi dan batas kuantitasi tiamfenikol dengan  metode  KLT  video  densitometri berturut-turut adalah 21,78 bpj dan  72,60 bpj.
Gambar 1. Hasil  Uji  Selektivitas,  Baku  (A); Sampel  (B);  Sampel  +  Baku Tiamfenikol (C)
Fase Gerak (v/v) Rf Bentuk Bercak Metanol : Etil Asetat (3:97) 0,92 Pipih Metanol : Etil Asetat (97:3) 1 Sedikit Bulat Etil Asetat 100% 0,76 Pipih, Lonjong Kloroform 100% 0,07 Bulat Etil Asetat : Kloroform (1:1) 0,13 Bulat Etil Asetat : Kloroform (8:2) 0,27 Bulat Etil Asetat : Kloroform : Metanol (7:2:1) 0,72 Pipih, Lonjong Etil Asetat : Kloroform : Metanol (7,5 : 2 : 0,5) 0,63 Pipih, Lonjong Tabel 1. Optimasi Fase Gerak menggunakan pelat KLT silika gel GF 254
3.4.  Akurasi Dari  hasil  uji  akurasi  menunjukkan persen  perolehan  kembali  direntang  96,62- 100,91% yang dapat dilihat pada Tabel 2.
3.5.  Presisi Uji  presisi  dilakukan  menggunakan metode  sampel  simulasi  dengan  konsentrasi 100%.  Data  presisi  interday  diperoleh  dari tiga hari percobaan (n=6). Hasil presisi yang diperoleh  memenuhi  persyaratan  yaitu  nilai RSD  kurang  dari  2% 16 dapat  dilihat  pada Tabel 3.
3.6.  Penetapan Kadar Pada  penelitian  ini  dilakukan  analisis tiamfenikol di dalam tiga merek sirup kering yang  beredar  di  pasaran.  Hasil  rata-ratanya dapat dilihat pada Tabel 4 berikut ini:
4.  Pembahasan Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, menunjukkan bahwa hasil optimasi fase  gerak  dari  delapan  variasi  campuran yang telah dilakukan dipilih sistem No 8 yaitu campuran  etil  asetat  :  kloroform  :  metanol (7,5: 2 : 0,5) digunakan sebagai  fase gerak, hasil pengujian yang dilakukan memberikan nilai Rf sebesar 0,63. Nilai Rf yang diperoleh
menunjukkan bahwa hasil berada pada rentang nilai persyaratan yaitu 0,2-0,8. Pelarut 7 dan 8  mempunyai  campuran  yang  sama  dengan komposisi  yang  berbeda.  Penambahan volume etil asetat dapat menurunkan polaritas dari fase gerak sehingga menurunkan nilai Rf tiamfenikol.  Komponen  dari  senyawa  akan melewati  fase  diam  dengan  tingkatan  yang berbeda  sehingga  memiliki  faktor  retensi yang  berbeda  juga 17 .  Sistem  kromatografi yang  lain  menunjukkan  nilai  Rf  sangat rendah untuk fase gerak nomor 2, 4, 5 dan 6, sedangkan Rf yang sangat tinggi ditunjukkan pada sistem kromatografi nomor 1, 3 dan 7. Nilai Rf yang terlalu rendah atau tinggi akan mengganggu  terhadap  visualisasi  bercak yang berasal dari pelarut 18 . Selektivitas dapat dilihat  dari  pemisahan  analit  yang  diperiksa dan  analit  yang  terdapat  di  dalam  sampel dapat  berpisah.  nilai  selektivitas  (α)  sebesar 1,52, dimana persyaratan untuk nilai adalah α > 1,5 2 . Nilai selektivitas menunjukkan adanya pemisahan yang baik antara satu analit dengan yang lainnya. Semakin besar nilai selektivitas dapat  menyatakan  pemisahan  yang  besar perbedaannya.  Linearitas  yaitu  kemampuan metode  analitik  untuk  merespon  berbanding lurus dengan konsentrasi analit dalam sampel. Berdasarkan hasil yang didapat nilai koefisien
Gambar 2. Kromatogram hasil ImageJ (a) tiamfenikol baku (b) sampel
Konsentrasi Massa teoritis (mg) Massa hasil percobaan (mg) Perolehan kembali (%) Rata-rata
80% 100 100 100 96,05 96,76 97,05 96,05 96,76 97,05 96,62 % 100% 125 125 125 124,01 123,09 123,10 99,21 98,47 98,48 98,72 % 120% 150 150 150 151,62 150,09 152,38 101,07 100,06 101,59 100,91 %
Tabel 2. Hasil Akurasi
baku  tiamfenikol  adalah  0,9992.  Persamaan yang  didapat  sebesar  y  =  1,7481x  +  16498. Koefisien  korelasi  dapat  diartikan  sebagai kedekatan  antara  titik  dan  garis.  Korelasi menjadi  lebih  kuat  semakin  dekat  titik  ke garis.  Nilai  r  sebesar  0,9995  tersebut  akan semakin linear karena mendekati satu 19 . Jika persyaratan Vx0 kurang dari 2%, maka hasil nilai  Vx0  yang  didapatkan  sebesar  0,80% dapat  dinyatakan  nilai  tersebut  memenuhi syarat yang dapat diartikan bahwa ada korelasi linear  antara  jumlah  tiamfenikol  dengan luas  area  yang  diperoleh.  Maka,  persamaan linearitas  pada  kurva  baku  tiamfenikol dapat  digunakan  untuk  menentukan  jumlah tiamfenikol  yang  terkandung  dalam  sampel sirup kering.
Batas  deteksi    (BD)  merupakan konsentrasi  terendah  yang  masih  dapat terdeteksi  di  dalam  sampel 16 .  Dari  hasil penelitian  diperoleh  konsentrasi  21,78  bpj. Sedangkan  batas  kuantitasi  (BK)  adalah konsentrasi  terkecil  dari  sampel  yang  dapat ditentukan  secara  kuantitatif 16 .  Hasil  BK diperoleh konsentrasi sebesar 72,60 bpj. BD dan BK diperoleh dari hasil perhitungan secara statistik melalui regresi linier kurva kalibrasi. Akurasi  adalah  kedekatan  kesepakatan antara nilai yang diterima baik sebagai nilai konvensional  yang  sebenarnya  atau  sebagai nilai  referensi  yang  diterima  dan  nilai yang  ditemukan 20 .  Rentang  keberterimaan ditunjukkan  dengan  batas  persen recovery untuk setiap konsentrasi analit pada matriks. Berdasarkan  Tabel  3  menunjukkan  tingkat perolehan  kembali  tiamfenikol  pada konsentrasi sampel simulasi, masing-masing sebesar  96,62;  98,7;  dan  100,9%.  Dapat diartikan  hasil  perolehan  kembali  yang diperoleh  berada  pada  rentang  95-105% 20 . Presisi  merupakan  kedekatan  nilai  antara setiap  pengukuran  dalam  kondisi  analisis yang sama. Parameter deviasi standar relatif (RSD)  dapat  digunakan  untuk  mengukur
presisi.  Berdasarkan  Tabel  6  hasil  presisi yang  diperoleh  memenuhi  persyaratan  yaitu nilai RSD kurang dari 2% 15 . Jika  semua  parameter  validasi  metode terpenuhi, dapat disimpulkan bahwa metode yang  digunakan  dalam  penelitian  ini memenuhi  persyaratan  validasi  dan  dapat digunakan  untuk  menetapkan  kadar  sampel. Sampel yang digunakan adalah sampel sirup kering  tiamfenikol  dengan  tiga  merek  yang berbeda.  Setelah  didapatkan  bercak  berupa gambar  selanjutnya  dianalisis  menggunakan perangkat lunak ImageJ hingga mendapatkan AUC tiamfenikol, kemudian dimasukkan ke persamaan garis linear. Berdasarkan Tabel 5 diketahui  hasil  penetapan  kadar  tiamfenikol dalam  sirup  kering  untuk  ketiga  sampel diperoleh  hasil  berturut-turut  sebesar  99,26, 101,25,  dan  101,81%,  hal  ini  menunjukkan bahwa kadar tiamfenikol diperoleh memenuhi persyaratan  yang  tertera  pada  Farmakope Edisi  VI  dimana  tiamfenikol  mengandung tidak kurang dari 98,0% dan tidak lebih dari 100,5% 2 .
5.  Kesimpulan Dari hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa  metode  KLT  video  densitometri yang telah divalidasi dapat digunakan untuk analisis rutin tiamfenikol dalam sediaan sirup kering.

## Referensi
1.  Balbi  HJ.  Chloramphenicol:  A  review. Pediatr Rev. 2004;25(8):284–8.
2.  Kemenkes RI. Farmakope Indonesia. 6th ed.  Jakarta:  Kementerian  Kesehatan  RI; 2020.
3.  Swarnalatha  KM,  Harshika  A,  Iswariya VT,  Madhavi  N.  Dry  Syrup:  A Comprehensive  Review.  Int  J  Life  Sci Pharma Res. 2022;13(1):39–46.
4.  Akre  HS,  Mundhada  DR,  Bhaskaran  S, Asghar  S,  Gandhi  GS.  Dry  suspension
Hari ke- Kadar (%) ± SD RSD interday (%) 1 99,22 ± 1,06 1,07 2 100,73 ± 1,11 1,10 3 101,21 ± 1,88 1,86 Tabel 3. Data Presisi Sampel Merk Kadar (mg/5mL) Kadar (%) A 124,08 ± 2,14 99,26 ± 1,71 B 126,57 ± 2,38 101,25 ± 1,91 C 127,26 ± 1,34 101,81 ± 1,07
Tabel 4. Kadar Tiamfenikol dalam Sirup Kering
formulation  of  taste  masked  antibiotic drug for pediatric use. J Appl Pharm Sci.
2012;2(7):166–71. 5.  Tarinc  D,  Golcu  A.  Development  and Validation of Spectrophotometric Methods for Determination of Thiamphenicol in Capsule Forms. KSU J Eng Sci. 2011;14(1):35–8.
6.  Martins  YA,  De  Oliveira  CLCG. Development  and  Validation  of  an UV  Spectrophotometric  Method  for Determination
of Thiamphenicol in  Dosage  Form.  J  Appl  Spectrosc.
2019;86(4):629–35.
7.  Pramita ED. Validasi Metode Penetapan Kadar  Tiamfenikol  Dalam  Sediaan Suspensi  Kering  (Dry  Syrup)  Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi. 2020;
8.  Wang JM, Yang JJ, Qian MR, Zhou DN, Ke XB, Sun GZ, et al. A TLC-HPLC Method for  Determination  of  Thiamphenicol  in Pig, Chicken, and Fish Feedstuffs. Food Anal Methods. 2018;11(11):3103–12.
9.  Yuangsoi  B,  Jintasataporn  O,  Areechon N,  Tabthipwon  P.  Validated  TLC- densitometric  analysis  for  determination of  carotenoids  in  fancy  carp  (Cyprinus carpio)  serum  and  the  application  for pharmacokinetic  parameter  assessment. Songklanakarin J Sci Technol.
2008;30(6):693–700.
10. Kimel  K,  Zienkiewicz  M,  Sparzak- Stefanowska  B,  Krauze-Baranowska  M. TLC-densitometric  analysis  of  allantoin in  Symphytum  officinale  L.  roots.  Acta Pharm. 2019;70(1):101–10.
11. OlDham  PB.  Development  of  a video  densitometer  for  thin-layer chromatography.  Instrum  Sci  Technol. 1990;19(1):49–77.
12. Misra  H,  Dwivedi  BK,  Mehta  D, Mehta  BK,  Jain  DC.  Development  and validation  of  high  performance  thin- layer  chromatographic  method  for determination  of  α-mangostin  in  fruit pericarp  of  mangosteen  plant  (Garcinia mangostana L.) using ultraviolet - Visible detection. Rec Nat Prod. 2009;
13. Petrovic  M,  Kastelan-Macan  M, Lazaric  K,  Babic  S. Validation  of Thin-
Layer  Chromatography  Quantitation Determination  with  CCD  Camera  and Slit-Scanning Densitometer. J AOAC Int. 1999;82(1):25–30.
14. Mukherjee A,  Bera A. A  detailed  study of  validation  parameters  and  system suitability  test  in  HPLC.  Res  J  Pharm Biol Chem Sci. 2012;3(4):426–47.
15. ICH.  Guidance  for  Industry  Q2B Validation  of  Analytical  Procedures: Methodology.  In:  the  Drug  Information Branch  (HFD-210)  [Internet].  1996. p.  301–827.  Available  from:  http:// www.fda.gov/cder/guidance/index. htm%5Cnhttp://www.fda.gov/cber/ guidelines.htm
16. Sonawane  L  V.,  Poul  BN,  Usnale, Sharad V. Waghmare  P V,  Surwase  LH. Bioanalytical  Method Validation  and  Its Pharmaceutical  Application-  A  Review. Pharm Anal Acta. 2014;05(03).
17. Kumar  S,  Jyotirmayee  K,  Sarangi  M. Thin  layer  chromatography:  A  tool  of biotechnology  for  isolation  of  bioactive compounds  from  medicinal  plants.  Int  J Pharm Sci Rev Res. 2013;18(1):126–32.
18. Muttaqin FZ, Yuliantini A, Fitriawati A, Asnawi  A.  Penetapan  Kadar  Senyawa Metampiron dan Diazepam dalam Sediaan Kombinasi  Obat  Menggunakan  Metode KLT  Video  Densitometri.  Pharmacy. 2016;13(2):127–36.
19. Chan  CC,  Lam  H,  Lee  YC,  Pharma N. ANALYTICAL METHOD VALIDATION  AND  INSTRUMENT PERFORMANCE VERIFICATION. 2004.
20. Harmita.  Petunjuk  Pelaksanaan  Validasi Metode  dan  Cara  Perhitungannya.  Maj Ilmu Kefarmasian. 2004;1(3):117–35.