## UJI EFEK TONIKUM EKSTRAK ETANOL BUAH MENGKUDU (Morinda citrifolia L.) TERHADAP MENCIT JANTAN GALUR SWISS
Risha Fillah Fithria 1), Kiki Damayanti 1) , Nurul Mustaufiah 2)
1) Departemen Farmakologi dan Farmasi Klinik, Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim
2 ) Program S1 Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim

## INTISARI
Buah mengkudu dipercaya dapat meningkatkan stamina. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk membuktikan adanya efek tonikum ekstrak etanol buah mengkudu (EEBM) terhadap mencit jantan  galur  Swiss  dan  mengidentifikasi  adanya  senyawa  golongan  flavonoid  yang  terkandung dalam ekstrak tersebut.
Ekstraksi buah mengkudu dilakukan dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol 70%.  Uji  kandungan  senyawa  golongan  flavonoid  dilakukan  dengan  pereaksi  FeCl 3 dan kromatografi  lapis  tipis  (KLT).  Penelitian  ini  adalah  penelitian  eksperimental  dengan pretest- posttest  matched  control  group  design .  Percobaan  uji  efek  tonikum  dilakukan  menggunakan metode natatory exhaustion . Mencit sebanyak duapuluh lima ekor dibagi menjadi lima kelompok. Mencit kelompok I, II, dan III diberi EEBM (160, 400, dan 800) mg/kgBB. Mencit kelompok IV diberi  kafein  100  mg/kgBB  (kontrol  positif)  dan  mencit  kelompok  V  diberi    CMC-Na  0,5%  25 mL/kgBB (kontrol negatif). Sediaan uji diberikan per oral selama 14 hari. Analisis data dilakukan dengan  cara  membandingkan  waktu  bertahan  berenang  mencit  sebelum  dan  sesudah  perlakuan menggunakan  uji Wilcoxon dan  uji  t-berpasangan.  Analisis  data  adanya  perbedaan  efek  antar kelompok  perlakuan  menggunakan  uji  Kruskal-Wallis  dilanjutkan  dengan  uji  Mann-Whitney dengan taraf  kepercayaan 90%.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa EEBM dosis 400 mg/kgBB             (p<0,1) dan 800 mg/kgBB  (p<0,1)  terbukti  mempunyai  efek  tonikum.  Senyawa  golongan  flavonoid  berhasil ditemukan dalam EEBM.
Kata  kunci : ekstrak  etanol  buah  mengkudu  (Morinda  citrifolia  L.),  tonikum,  natatory exhaustion, flavonoid

## ABSTRACT
Noni fruit  is believed  can increase  stamina.  The  purpose  of  this  study  was  to  prove the tonic  effect  of  noni  fruit  ethanol  extracts  (NFEE)  to  the  male  Swiss  mice  and  identify  flavonoid compound contained in the extract.
Noni fruit extracted by the maceration method in ethanol 70%. Identification of flavonoid compound conducted with FeCl 3 reagents and thin layer chromatography (TLC). This research is experimentally  with  pretest-posttest  matched  control  group  design.  The  tonic  effect  assay conducted  with  natatory  exhaustion  method.  Twenty-five  mice  divided  into  five  groups.  Mice  in group I, II, and III treated with NFEE (160, 400, and 800) mg/kg BW. Mice in group IV treated with caffeine 100 mg/kg BW (positive control) and group V treated with CMC-Na 0.5% 25 ml/kg BW (negative control). The test preparation given for 14 days orally. Data of survival time swam mice  before and  after  treatment  analyzed  statistically  with  Wilcoxon  test  and  paired  t-test.  Data was  analyzed  for  different  effect  intergroup treatment  with  Kruskal-Wallis  and  then  with  Mann- Whitney at 90% confidence level.
The  result  showed  that  NFEE  (400  and  800)  mg/kg  BW  have  a  tonic  effect  (p<0,1). Flavonoid compounds have been found in NFEE.
Keywords:    ethanol  extract  of  noni  fruit  (Morindacitrifolia  L.),  tonic,  natatory  exhaustion, flavonoid

## PENDAHULUAN
Tonikum  adalah  suatu  obat  yang dapat  menambah  tenaga  atau  energi  pada tubuh.  Efek  tonikum  digolongkan  ke  dalam golongan psikostimulansia. Senyawa psikostimulansia tersebut dapat menghilangkan  rasa  kelelahan.  Salah  satu senyawa  psikostimulansia  adalah  kafein. Beberapa  efek  samping  kafein  yang  cukup berbahaya diantaranya menyebabkan
jantung  berdebar  dan  tremor  (Mutschler, 1991).  Penghentian  mengkonsumsi  kafein juga  dapat  menimbulkan  rasa  gelisah, gugup,  mudah  tersinggung,  tidak  mampu bekerja efektif, mual, nyeri kepala, gemetar, sembelit dan kadang-kadang depresi
(Joewana,  2003).  Salah  satu  usaha  yang digunakan  untuk menghindari  efek  samping kafein  adalah  dengan  melakukan  penelitian senyawa  baru  yang  berkhasiat  sebagai tonikum. Kebutuhan akan suplemen penambah  stamina  atau  tonikum  bisa didapatkan  dari  mengkonsumsi  tanaman herbal.  Pemanfaatan  tanaman  herbal  untuk menambah  tenaga  mempunyai  kelebihan tersendiri  dibandingkan  senyawa  sintetik. Tanaman herbal relatif lebih aman dibandingkan  senyawa  sintetik  (Sari,  2006). Tanaman  herbal  yang  sudah  dikembangkan menjadi  bahan  penambah  stamina  atau tonikum  adalah  pasak  bumi  dan  gingseng. Tanaman  mengkudu  juga  dapat  digunakan sebagai  tonikum.  Bagian  utama  tanaman mengkudu  yang  secara  empiris  bermanfaat sebagai  tonikum  adalah  bagian  buah  (Tony, 2006  dan  Achmad, et  al .,  2008).  Buah mengkudu  mengandung  steroid,  glikosida, fenol,  tanin,  terpenoid,  alkaloid,  resin, flavanoid, antrakinon, saponin, gula, protein, lemak  dan  senyawa  asam  (Nagalingam, et al ., 2012). Beberapa penelitian lain  telah membuktikan  adanya  aktivitas  tonikum  dari ekstrak yang mengandung senyawa flavonoid  yaitu  penelitian  Li et  al .  (2009). Penelitian  tersebut  menyatakan  bahwa ekstrak  etanol  daun  mulberry  ( Morus  alba L.)  mengandung  senyawa  flavonoid  dan meningkatkan  waktu  bertahan  berenang pada  mencit.  Penelitian  Jin  dan  Wei  (2011) juga  menyimpulkan  senyawa  flavonoid dalam  ekstrak  etanol  gandum  tartary ( Fogopyrum esculentum ) mempunyai aktivitas  tonikum  pada  mencit.  Buah
mengkudu  diketahui  mengandung  senyawa golongan  flavonoid,  sehingga  kemungkinan buah  mengkudu  juga  mempunyai  efek sebagai tonikum. Penelitian yang membuktikan  buah  mengkudu,  baik  dalam bentuk  segar  ataupun  dalam  bentuk  ekstrak yang  digunakan  sebagai  tonikum  belum pernah dilakukan. Berdasarkan uraian tersebut,  maka  dilakukan  penelitian  uji  efek tonikum  ekstrak  etanol  buah  mengkudu terhadap mencit jantan galur Swiss.

## METODE PENELITIAN Desain dan Variabel Penelitian
Penelitian  ini  adalah  penelitian eksperimental dengan desain pretest- posttest  matched  control  group .  Variabel bebas  penelitian  ini  yaitu  peringkat  dosis ekstrak  etanol  buah  mengkudu,  variable tergantung  yaitu  waktu  bertahan  berenang mencit  sesudah  perlakuan  dalam  satuan detik.  Variabel  yang  dikendalikan  meliputi berat  badan,  galur,  umur,  dan  jenis  kelamin mencit, suhu air dalam akuarium, kedalaman, serta ukuran akuarium.

## Bahan Penelitian
Bahan  tanaman  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  buah  mengkudu yang masih berwarna putih agak hijau, yang diambil  dari  jalan  Delta  Mas,  Kecamatan Semarang  Selatan.  Bahan  lainnya  yang digunakan  adalah  etanol  70%  teknis (Brataco), FeCl 3 (Smart-Lab), butanol (Merck KGaA), asam asetat (Merck KGaA), aquadest, kuersetin (Sigma Aldrich), amoniak  (Merck  KGaA),  kafein  (Merck KGaA), dan CMC-Na (Brataco).

## Alat Penelitian
Alat  yang    digunakan    dalam penelitian  ini  antara  lain  timbangan  listrik (Henherr  Scale),  oven  (Memmert),  blender (Philips),  ayakan  no  40  mesh,  bejana maserasi, moisture  balance (Ohaus), rotary evaporator (Heidolph),  pipet  tetes,  pipa kapiler,  selulosa  (Merck  KGaA),  penggaris, bejana KLT, lampu UV 366 nm, timbangan hewan uji, spuit oral, termometer, stopwatch , aquarium ukuran 50 cm × 30 cm
× 20 cm, dan alat-alat gelas. Pembuatan Ekstrak Etanol Buah Mengkudu Serbuk  simplisia  buah  mengkudu diekstraksi dengan metode maserasi.
Sebanyak  500  gram  serbuk  simplisia  buah mengkudu  dimasukkan  ke  dalam  toples,
ditambah  cairan  penyari  etanol  70% sebanyak  3.750  mL,  toples  ditutup,  dan didiamkan  selama  lima  hari  terlindung  dari cahaya  sambil  sesekali  diaduk.  Setelah lima hari  campuran  serbuk  simplisia  dan  etanol 70% diserkai. Hasil serkaian disebut sebagai maserat  I.  Ampas  ditambah  etanol  70% sebanyak 1.250 mL kemudian toples ditutup dan  diamkan  selama  dua  hari,  terlindung dari  cahaya,  sambil  sesekali  diaduk.  Setelah dua  hari,  campuran  ampas  dan  etanol  70% diserkai  kembali.  Hasil  serkaian  ini  disebut sebagai  maserat  II.  Maserat  I  dan  II dicampur,  lalu  diuapkan  menggunakan rotary evaporator dengan suhu 55 º C sampai diperoleh ekstrak kental.

## Uji Pendahuluan Senyawa Flavonoid
Uji  kandungan  senyawa  flavonoid dalam  ekstrak  etanol  buah  mengkudu dilakukan  dengan  cara  melarutkan  ekstrak etanol  buah  mengkudu  sebanyak  0,1  gram dalam  10  mL  etanol.  Larutan  dibagi  ke dalam  dua  tabung  reaksi.  Tabung  pertama digunakan  sebagai  tabung  kontrol  dan tabung ke dua ditambahkan FeCl3 sebanyak empat  tetes.  Warna  yang  terbentuk  setelah penambahan  FeCl3    pada    tabung  ke  dua dibandingkan dengan tabung kontrol (Harborne, 1987).

## Identifikasi  Senyawa  Flavonoid  dengan Kromatografi Lapis Tipis
Fase  gerak  untuk  memisahkan flavonoid  adalah  campuran  butanol,  asam asetat  dan  aquadest  dengan  perbandingan 7:1:2.  Campuran  fase  gerak  dimasukkan  ke dalam  bejana  dan  dilakukan  pengocokan, kemudian  dilakukan  penjenuhan  bejana. Penjenuhan  dilakukan  dengan  memasukkan kertas  saring  dalam  bejana.  Keadaan  jenuh tercapai apabila kertas saring sudah terbasahi  fase  gerak  (Gandjar  dan  Rohman, 2007). Ekstrak etanol buah mengkudu dan kuersetin dilarutkan dalam etanol secukupnya.  Fase  diam  diberi  tanda  untuk tempat penotolan dan batas elusi. Jarak elusi yang  ditetapkan  adalah  8  cm.  Fase  diam untuk memisahkan flavonoid adalah
lempeng  selulosa.  Larutan  ekstrak  etanol buah  mengkudu  dan  kuersetin  ditotolkan pada  lempeng  selulosa.  Selanjutnya,  fase diam  dimasukkan  dalam  bejana  hingga  fase gerak  mencapai  batas  elusi.  Bila  fase  gerak sudah  mencapai  batas  elusi,  fase  diam
diambil,  kemudian  dikeringkan  dengan  cara diangin-anginkan. Lempeng selulosa diamati di  bawah  sinar  UV  366  nm.  Selanjutnya, lempeng  solulosa  diuapi  dengan  uap amoniak. Lempeng selulosa diamati kembali secara  visibel  dan  di  bawah  sinar  UV  366 nm.  Pengamatan  pada  lempeng  selulosa meliputi warna, jumlah bercak yang terpisah, dan jarak antara bercak dan tempat penotolan. Uji  Efek  Tonikum  Ekstrak  Etanol  Buah Mengkudu Uji efek tonikum dilakukan menggunakan  uji  renang  kemudian  dilihat waktu  pada  ketahanan  berenang  mencit. Metode  uji  renang  yang  digunakan  adalah natatory exhaustion (Turner, 1965). Sebanyak  dua  puluh  lima  ekor  mencit diadaptasi lingkungan di laboratorium selama  dua  minggu.  Mencit  dibagi  menjadi lima kelompok perlakuan. Setelah diadaptasi mencit  dilatih  berenang  dalam  aquarium dengan  suhu  air  dipertahankan  pada  30  ± 1ºC.  Latihan  berenang  dilakukan  tiga  kali seminggu  selama  satu  minggu.  Pengujian ketahanan berenang mencit sebelum perlakuan  dilakukan  sehari  setelah  latihan berenang terakhir. Waktu bertahan berenang (detik) dihitung semenjak mencit dimasukkan  dalam  aquarium  hingga  mencit menunjukkan kelelahan. Tenggelamnya
kepala  mencit  selama  4-5  detik  merupakan penanda kelelahan (Turner, 1965).
Mencit kelompok I, II dan III diberi ekstrak  etanol  buah  mengkudu  dosis  (160, 400 dan 800) mg/kg BB. Dasar penggunaan dosis  tersebut  adalah  penelitian  yang dilakukan  oleh  Cao et  al .  (2009).  Mencit kelompok IV diberi kafein dosis 100 mg/kg BB  sebagai  sediaan  uji  kelompok  kontrol positif.  Dasar  penggunaan  dosis  kafein adalah  penelitian  yang  dilakukan  oleh Wahyuni  dan  Kusumawati  (2008).  Mencit kelompok  V  diberi  larutan  CMC-Na  0,5% 25  mL/kgBB  sebagai  sediaan  uji  kelompok kontrol negatif. Seluruh perlakuan diberikan secara per oral selama 14 hari. Sehari setelah perlakuan  terakhir  dilakukan  pengujian waktu  bertahan  berenang  mencit.  Waktu bertahan berenang mencit dicatat (Hu et al ., 2010). Data waktu bertahan berenang mencit sebelum dan sesudah perlakuan dianalisis.
Analisis Hasil a. Uji Pendahuluan Senyawa Flavonoid Pengamatan uji pendahuluan dilakukan  dengan  mengamati    perubahan yang  terjadi  setelah  ekstrak  etanol  buah mengkudu  ditambah  FeCl3.  Ekstrak  etanol buah mengkudu dinyatakan positif mengandung flavonoid jika dengan penambahan FeCl3 menyebabkan peningkatan  intensitas  warna  (Harborne, 1987). Peningkatan intensitas warna diketahui  dengan  cara  membandingkan warna larutan ekstrak etanol buah mengkudu yang  ditambah  etanol  70%  dengan  larutan ekstrak  etanol  buah  mengkudu  yang ditambah etanol 70% dan FeCl3.
b. Identifikasi Senyawa Flavonoid dengan Kromatografi Lapis Tipis Hasil identifikasi senyawa flavonoid pada ekstrak etanol buah mengkudu  dibandingkan  dengan  kuersetin.
Apabila bercak ekstrak etanol buah mengkudu  yang  terpisah  diuapi  dengan amoniak  dan dilihat  secara  visibel  berwarna kuning  menyala  atau  coklat  maka  ekstrak etanol  buah  mengkudu  dinyatakan  posistif mengandung  senyawa  flavonoid  (Harborne, 1987). Bercak ekstrak etanol buah mengkudu  dinyatakan  positif  mengandung flavonoid apabila dilihat di bawah sinar UV 366 nm bercak berfluoresensi warna kuning, hijau,  dan  biru  muda  (Wagner  dan  Bladt, 1995).  Nilai  Rf  bercak  dan  kuersetin dihitung  dengan  cara  membagi  jarak  antara tempat penotolan sampai bercak dibagi jarak elusi.

## c. Uji  Efek  Tonikum  Ekstrak  Etanol Buah Mengkudu
Data    uji      efek    tonikum      adalah waktu   (detik) bertahan   berenang   mencit sebelum  dan  sesudah  pemberian  sediaan  uji selama  14  hari.  Data  tersebut  diuji normalitas  distribusinya  dengan  metode Shapiro-Wilk. Hasil uji normalitas distribusi menghasilkan nilai signifikansi lebih dari 0,1 (p>0,1).  Selanjutnya,  analisis  data  yang digunakan  untuk  melihat  perbedaan  waktu bertahan  berenang  mencit  sebelum  dan sesudah  perlakuan  adalah  dengan  uji  t- berpasangan (statistik parametrik) pada taraf kepercayaan  90%.  Sebaliknya,  jika  hasil  uji normalitas  menghasilkan  nilai  signifikansi kurang  dari  0,1  (p<0,1),  maka  analisis  data
yang  digunakan  adalah  uji  Wilcoxon (statistik non parametrik) pada taraf kepercayaan  90%.  Data  waktu  bertahan berenang  mencit  sebelum  dan  sesudah pemberian    CMC-Na  0,5%,  kafein  dan ekstrak etanol buah mengkudu (160 dan 400 mg/kgBB)  dianalisis  menggunakan  uji  t- berpasangan, sedangkan data waktu bertahan berenang  mencit  sebelum  dan  sesudah pemberian  ekstrak  etanol  buah  mengkudu dosis 800 mg/kgBB dianalisis menggunakan uji  Wilcoxon.  Adanya  perbedaan  yang bermakna  waktu  bertahan  berenang  mencit sebelum  dan  sesudah  perlakuan  ditentukan dengan  nilai  signifikansi  kurang  dari  0,1 (p<0,1).  Ekstrak  etanol  buah  mengkudu dinyatakan mempunyai efek tonikum apabila ada  perbedaan  yang  bermakna  waktu bertahan  berenang  mencit  sebelum  dan sesudah pemberiaan sediaan uji.
Data      peningkatan      waktu bertahan      berenang    mencit    sebelum    dan sesudah perlakuan dianalisis untuk mengetahui  adanya  perbedaan  efek  tonikum antar  tiap  kelompok  perlakuan  kafein  100 mg/kgBB dan ekstrak etanol buah mengkudu  dosis  (400  dan  800)  mg/kgBB.
Hasil uji normalitas distribusi data menunjukkan bahwa data terdistribusi normal  (p>0,1)  dan  memiliki  varian  yang tidak  homogen  (p<0,1).  Selanjutnya  data peningkatan waktu bertahan berenang mencit  dianalisa  menggunakan  statistik  non parametrik  yaitu  menggunakan  uji  Kruskal- Wallis  dan  dilanjutkan  dengan  uji  Mann- Whitney  pada  taraf  kepercayaan  90%.
Indikator adanya perbedaan efek peningkatan waktu berenang antar kelompok perlakuan  ditentukan  oleh  nilai  signifikansi kurang dari 0,1 (p<0,1). HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN Identifikasi Kandungan Senyawa Flavonoid a. Uji Pendahuluan Senyawa Flavonoid
Uji ini dilakukan sebagai screening test yaitu pengujian awal sebelum dilakukan uji  KLT.  Buah  mengkudu  mengandung senyawa  golongan  alkaloid  dan  flavonoid (Nagalingam et  al .,  2012).  Uji  pendahuluan dilakukan terhadap golongan senyawa alkaloid  dan  flavonoid.  Uji  pendahuluan terhadap senyawa golongan alkaloid hasilnya  negatif.  Hasil  negatif  tersebut
kemungkinan  karena  perbedaan  tempat tumbuh  tanaman  mengkudu  seperti  cuaca, ketinggian, dan keadaan tanah yang berbeda, sehingga  menyebabkan  kandungan  senyawa aktif dalam buah mengkudu yang sama akan menghasilkan  senyawa  aktif  yang  berbeda. Perbedaan  tersebut  kemungkinan  besar menyebabkan ekstrak etanol buah mengkudu mengandung  alkaloid  dalam  jumlah  yang sedikit, sehingga tidak terdeteksi melalui uji pendahuluan. Uji pendahuluan pada
senyawa golongan flavonoid hasilnya positif,  hal  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak etanol buah mengkudu mengandung senyawa  flavonoid.  Hasil  uji  pendahuluan senyawa  flavonoid  dapat  dilihat  pada gambar 1. Keterangan : a. Ekstrak etanol buah mengkudu + etanol
b. Ekstrak etanol buah mengkudu + etanol + FeCl 3
Gambar 1. Uji pendahuluan senyawa flavonoid ekstrak etanol buah mengkudu
Hasil uji pendahuluan membuktikan ekstrak etanol buah mengkudu mengandung  senyawa  flavonoid  dengan terbentuknya  warna  yang  lebih  intens  dari warna larutan ekstrak semula. Ekstrak etanol buah  mengkudu  mengalami  perubahan warna  dari  kuning  menjadi  kuning  pekat akibat  penambahan  FeCl 3 (gambar  1).
Perubahan  warna  yang  terjadi  disebabkan adanya  gugus  hidroksi  pada  flavonoid (fenol) yang bisa berikatan dengan Fe 3+ dari pereaksi  FeCl 3. Flavonoid  adalah  termasuk senyawa  fenol  (Sastrohamidjojo,  1996). Reaksi  antara  gugus  fenol  dengan  FeCl 3 terdapat  dalam  persamaan  reaksi  pada gambar 2 (Arum, 2012).
Gambar 2. Persamaan reaksi antara gugus fenol dengan FeCl 3
b. Identifikasi Senyawa Flavonoid dengan Kromatografi Lapis Tipis
Setelah uji kandungan kimia
dilakukan  kemudian  dilanjutkan  dengan kromatografi  lapis  tipis  (KLT).  Analisis KLT  hanya  dilakukan  terhadap  golongan
flavonoid. Fase gerak yang digunakan untuk identifikasi  harus  tepat  agar  pemisahannya berjalan  dengan  baik.  Setelah  mencoba beberapa  fase  gerak  dengan  berbagai perbandingan, diperoleh hasil bahwa kombinasi  butanol-asam  asetat-air  (7:1:2)
a b +  3Cl - +  6H + 3- 6 Fe 3+ OH O - + FeCl 3
memberikan  hasil  pemisahan  yang  cukup memadai.  Pembanding  yang  digunakan adalah  senyawa  kuersetin  yang  merupakan glikosida  flavonoid.  Hasil    pengamatan dilakukan  di  bawah  sinar  UV  366  nm    dan secara    visibel.    Hasil    kromatografi  lapis tipis  senyawa  flavonoid  dapat  dilihat  pada gambar 2.
A B C
Keterangan : A. Pengamatan secara visibel sesudah diuapi amoniak B. Pengamatan dibawah sinar UV 366 nm sebelum diuapi amoniak C. Pengamatan dibawah sinar UV 366 nm setelah diuapi amoniak Fase diam : Selulosa Fase gerak : Butanol : asam asetat : air (7:1:2) Penampak bercak : Uap amoniak K : Kuersetin E : Ekstrak etanol buah mengkudu

## Gambar 2. Hasil Identifikasi Senyawa Flavonoid
Hasil  uji  kromatografi  lapis  tipis senyawa  flavonoid  dalam  ekstrak  etanol buah mengkudu setelah dielusi menghasilkan empat bercak, sehingga kemungkinan ekstrak etanol buah mengkudu mengandung empat jenis flavonoid. Kuersetin termasuk dalam flavonoid
golongan  flavonol.  Umumnya  flavonol secara  visibel  akan  berwarna  kuning menyala  atau  coklat  kekuningan  ketika diuapi  dengan  pereaksi  amoniak  (Harborne, 1987).  Secara  visibel  bercak  ekstrak  etanol buah  mengkudu  dan  kuersetin  sebelum diuapi  amoniak  berwarna  putih  kekuningan dan  sesudah  diuapi  amoniak  berwarna kuning cerah   (gambar 9.A). Warna bercak kuning  cerah  yang  terbentuk  setelah  diuapi
amoniak  terjadi  karena  adanya  interaksi antara  uap  amoniak  dengan  gugus  hidroksil pada flavonoid (Harborne, 1987).
Menurut  Wagner  dan  Bladt  (1995) flavonoid akan berfluoresensi dengan menampakkan warna kuning, hijau dan biru muda  bila  dilihat  di  bawah  sinar  UV  366 nm. Pengamatan di bawah sinar UV 366 nm didapatkan  bercak  ekstrak  etanol  buah mengkudu  terlihat  berfluoresensi  biru  muda sebelum dan sesudah diuapi amoniak seperti terlihat  pada  gambar  2.B  dan  2.C.  Bercak kuersetin  terlihat  berfluoresensi  hijau  di bawah  sinar  UV  366  nm  sebelum  dan sesudah  diuapi  amoniak  (gambar  2.B  dan 2.C).  Berdasarkan  hasil  pengamatan  warna bercak  ekstrak  etanol  buah  mengkudu
Rf = 0,39 Rf = 0,65 Rf = 0,87 Rf = 0,96 Rf = 0,81 E K K E K E
sebelum dan sesudah diuapi amoniak secara visibel dan di bawah sinar UV 366 nm dapat dinyatakan  bahwa  ekstrak  etanol  buah mengkudu  mengandung  senyawa  flavonoid. Senyawa  flavonoid  yang  terkandung  dalam ekstrak  etanol  buah  mengkudu  diduga merupakan golongan isoflavon karena warna bercaknya biru muda di bawah sinar UV 366 sesudah diuapi amoniak (Markham, 1988).
Polaritas      flavonoid      dalam ekstrak      etanol      buah      mengkudu      dapat diketahui  dengan  cara  membandingkan  Rf ekstrak  etanol  buah  mengkudu  dan  Rf kuersetin.  Rf  kuersetin  sebesar  0,81.
Kromatogram ekstrak etanol buah mengkudu  menghasilkan  empat  bercak dengan  Rf  berturut-turut  sebesar  0,39;  0,65; 0,87;  0,96.  Nilai  Rf  dari  empat  bercak tersebut berbeda dengan kuersetin, sehingga kemungkinan flavonoid dalam ekstrak etanol buah  mengkudu  bukan  kuersetin.  Dua bercak  flavonoid  pada  ekstrak  etanol  buah mengkudu  dengan  Rf  0,39  dan  0,65  lebih polar  dari  pada  kuersetin.  Dua  bercak flavonoid  lainnya  pada  ekstrak  etanol  buah mengkudu  dengan  Rf  0,87  dan  0,96  lebih non polar dibandingkan kuersetin.

## Uji  Efek  Tonikum  Ekstrak  Etanol  Buah Mengkudu
Metode  uji  efek  tonikum  dengan natatory  exhaustion memiliki  beberapa keunggulan jika dibandingkan dengan metode lainnya yaitu dapat mengetahui efek stimulan  sebagai  peningkat  aktivitas,  efek stimulan  dapat  dilihat  secara  spontan  dari peningkatan  kapasitas  kerja,  waktu  yang digunakan untuk pengamatan relatif singkat, dan  rangkaian  alat  yang  digunakan  cukup sederhana  (Sambodo,  2009).  Data  waktu bertahan berenang mencit dihitung semenjak mencit  dimasukkan  dalam  aquarium  hingga mencit menunjukkan kelelahan. Tenggelamnya  kepala  mencit  selama  4-5 detik merupakan penanda kelelahan. Meningkatnya  waktu  bertahan  hewan  uji sesudah  diberi  sediaan  uji  menggambarkan penambahan  daya  tahan  atau  sebagai munculnya  efek  tonik.  Perbandingan  rata- rata  waktu  bertahan  berenang  mencit  pada masing-masing kelompok perlakuan sebelum  dan  sesudah  pemberian  sediaan  uji selama 14 hari dapat dilihat pada gambar 3.
161 129 119 165 179 175 * 258 ** 309 * 667 191 0 100 200 300 400 500 600 700 800 EEBM 160 mg/kgBB EEBM 400
mg/kgBB EEBM 800 mg/kgBB
Kafein 100 mg/kgBB CMC-Na 0,5% ra ta -r at a w ak tu b e rt ah an b e re n an g m e n ci t (d e ti k) Kelompok Perlakuan Sebelum pemberian sediaan uji Sesudah pemberian sediaan uji
Keterangan :
EEBM   : Ekstrak etanol buah mengkudu *Hasil uji t-berpasangan menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna waktu bertahan berenang mencit sebelum dan sesudah pemberian sediaan uji ( p <0,1) **Hasil  uji  Wilcoxon  menunjukkan  adanya  perbedaan  yang  bermakna  waktu  bertahan berenang mencit sebelum dan sesudah pemberian sediaan uji ( p <0,1)
Gambar 3.    Perbandingan rata-rata waktu bertahan berenang mencit sebelum dan sesudah pemberian sediaan uji
Hasil penelitian menunjukkan bahwa  pada  kelompok  kontrol  negatif
(CMC-Na  0,5%)  mengalami  peningkatan waktu  bertahan  berenang  mencit  sesudah perlakuan. Pengujian secara statistik dengan uji t-berpasangan menunjukkan bahwa tidak ada perbedaan yang bermakna (p>0,1) waktu bertahan  berenang  mencit  pada  kelompok kontrol  negatif  sebelum  dan  sesudah perlakuan.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa CMC-Na 0,5% sebagai zat pembawa ekstrak etanol  buah  mengkudu  tidak  mempunyai efek tonikum.
Kafein  digunakan  sebagai  kontrol positif  karena  kafein  merupakan  senyawa yang memberikan efek psikotonik kuat yang dapat menghilangkan gejala kelelahan (Mutschler, 1991). Penelitian yang dilakukan  oleh  Davis, et  al ,  (2003) menyatakan  bahwa  kafein  dapat  menunda kelelahan, sehingga kafein sering digunakan sebagai  tonikum.  Hasil  penelitian  pada kelompok  kontrol  positif  (kafein  100 mg/kgBB)  menunjukkan  bahwa  sesudah pemberian  kafein  terjadi  peningkatan  waktu bertahan  berenang  mencit  yang  sangat tinggi.  Pengujian  secara  statistik  dengan  uji t-berpasangan  menunjukkan  ada  perbedaan yang  bermakna  (p<0,1)  antara  waktu bertahan  berenang  mencit  sebelum  dan sesudah  pemberian  kafein,  yang  artinya kafein mempunyai efek tonikum.
Kelompok perlakuan ekstrak etanol buah  mengkudu  dosis  (160,  400,  dan  800) mg/kgBB  mengalami  peningkatan  waktu
bertahan berenang mencit setelah pemberian ekstrak etanol buah mengkudu. Setelah diuji menggunakan  uji  t-berpasangan,  waktu bertahan berenang mencit kelompok perlakuan  ekstrak  etanol  buah  mengkudu dosis 160 mg/kgBB tidak berbeda bermakna dengan  sebelum  perlakuan  (p>0,1).  Hal tersebut dapat terjadi karena kadar flavonoid dalam  ekstrak  etanol  buah  mengkudu  160 mg/kgBB  masih  sedikit,  sehingga  belum mampu  memberikan  aktivitas  tonikum. Hasil  uji  statistik  dengan  uji  t-berpasangan dan  uji  Wilcoxon  menunjukkan  bahwa waktu  bertahan  berenang  mencit  kelompok perlakuan  ekstrak  etanol  buah  mengkudu dosis  400  dan  800  mg/kgBB  berbeda bermakna dengan sebelum perlakuan (p<0,1).  Ekstrak  etanol  buah  mengkudu dosis  400  dan  800  mg/kgBB  mempunyai efek tonikum pada mencit. Seiring bertambahnya dosis, diduga kadar
kandungan  flavonoid  dalam  ekstrak  etanol buah  mengkudu  juga  semakin  banyak sehingga  aktivitas  tonikum yang dihasilkan semakin besar.
Data  peningkatan  waktu  bertahan berenang    mencit    sebelum    dan    sesudah perlakuan  kafein  dosis  100  mg/kgBB (kontrol  positif),  ekstrak  etanol  daun  buah mengkudu  dosis  (400  dan  800)  mg/kgBB dibandingkan  untuk  mengetahui  adanya perbedaan  efek  tonikum  antar  kelompok perlakuan. Hasil rata-rata peningkatan waktu bertahan berenang mencit dapat dilihat pada gambar 4.
Gambar  4.    Rata-rata  peningkatan  waktu  bertahan  berenang  mencit  sebelum  dan  sesudah pemberian sediaan uji
Hasil uji Kruskal-Wallis menunjukkan  bahwa  terdapat  perbedaan peningkatan waktu bertahan berenang mencit  yang  mendapat  perlakuan  kafein dosis 100 mg/kgBB dan ekstrak etanol buah mengkudu  dosis  (400  dan  800)  mg/kgBB (p<0,1) . Hasil uji Mann-Whitney menunjukkan  bahwa  kafein    dosis  100 mg/kgBB  mempunyai  efek  tonikum  yang lebih  besar  dari  pada  ekstrak  etanol  buah mengkudu  dosis  (400  dan  800)  mg/kgBB. Hal ini disebabkan angka peningkatan waktu bertahan  berenang  mencit  perlakuan  kafein 100  mg/kgBB  lebih  tinggi  dan  berbeda secara signifikan dari pada perlakuan ekstrak etanol  buah  mengkudu  dosis  (400  dan  800) mg/kgBB (gambar 4 dan p<0,1).
Peningkatan waktu bertahan berenang mencit  yang  diberi perlakuan antara  ekstrak etanol  buah  mengkudu  dosis  400  dan  800 mg/kgBB  tidak  berbeda  secara  signifikan (p>0,1).  Hasil  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak  etanol  buah  mengkudu  dosis  (400 dan 800) mg/kgBB mempunyai kemampuan yang  sama  dalam  meningkatkan  waktu bertahan  berenang  mencit.  Peningkatan dosis  ekstrak  etanol  buah  mengkudu  dari 400  sampai  800  mg/kgBB  diduga  tidak dapat  meningkatkan  kandungan  bahan  aktif yang  signifikan,  sehingga  tidak  mampu meningkatkan aktifitas tonikum pada mencit jantan galur Swiss .
Flavonoid  yang  terkandung  dalam ekstrak  etanol  buah  mengkudu  diduga berperan memberikan efek tonikum.
Senyawa flavonoid tersebut mempunyai efek tonikum  dengan  mekanisme  mengantagonis reseptor  adenosin  A 1 (Alexander,  2006). Kafein  juga  mempunyai  mekanisme  yang sama  dengan  senyawa  flavonoid  sebagai tonikum  yaitu  mengantagonis  reseptor adenosin A 1 (Davis et al , 2003).
Penelitian yang mendukung adanya aktivitas tonikum dari ekstrak yang mengandung senyawa flavonoid yaitu penelitian  Li et  al .  (2009).  Penelitian tersebut  menyatakan  bahwa  ekstrak  etanol daun mulberry ( Morus alba L.) mengandung senyawa flavonoid dan meningkatkan waktu bertahan  berenang  pada  mencit.  Penelitian aktivitas  tonikum  ekstrak  etanol  daun mulberry  juga  melakukan  penetapan  kadar asam  laktat, Blood  Urea  Nitrogen (BUN),
dan  glikogen  dalam  darah  mencit  yang merupakan  penanda  kelelahan.  Ekstrak etanol daun mulberry diketahui menurunkan asam laktat, menurunkan BUN dan meningkatkan  glikogen  hepatik.  Penelitian lanjutan  efek  tonikum  ekstrak  etanol  buah mengkudu  yang  perlu  dilakukan  adalah pengukuran  kadar  asam  laktat,  BUN  dan glikogen dalam darah hewan uji. Pengukuran  parameter  tersebut  diperlukan untuk membuktikan aktivitas tonikum terhadap  proses  biokimia  di  dalam  tubuh.
Hal ini dilakukan untuk mengetahui kemampuan  ekstrak  etanol  buah  mengkudu dalam  mempengaruhi  beberapa  parameter penanda kelelahan. Pemanfaatan tanaman herbal sebagai  tonikum  diharapkan  tidak  hanya berhenti  pada  bentuk  ekstrak  saja  tetapi dikembangkan  lebih  lanjut  menjadi  ekstrak terpurifikasi. Pembuatan ekstrak terpurifikasi dimaksudkan untuk menyederhanakan komponen dalam ekstrak. Penyederhanaan  tersebut  dapat  dilakukan dengan  cara  fraksinasi.  Penelitian  lanjutan yang  dapat  dilakukan  adalah  uji  efek tonikum  berbagai  fraksi  dari  ekstrak  etanol buah mengkudu.

## KESIMPULAN
Ekstrak  etanol  buah  mengkudu dosis  400  dan  800  mg/kgBB  terbukti mempunyai  efek  tonikum.  Senyawa  aktif yang  terkandung  dalam  ekstrak  etanol  buah mengkudu adalah senyawa golongan flavonoid.

## DAFTAR PUSTAKA
Achmad,  S.A.,  Hakim,  E.H.,  Makmur,  L., Syah,  Y.M.,  Juliawaty,  L.D.,  dan Mujahidin,  D.,  2008, Ilmu  Kimia dan Tumbuh-Tumbuhan Obat Indonesia ,  Jilid  I,  Penerbit  ITB, Bandung, 16 Arum,  Y.P.,  2012,  Isolasi  dan  Uji  Daya
Antimikroba  Ekstrak  Daun  Kersen ( Muntingia calabura ), Jurnal
MIPA , 35 (2) , 165-174 Cao,  S.,  Shang,  H.,  Wu,  W.,  Du,  J.,  and Putheti,  R.,  2009,  Evaluation  of Anti-Athletic  Fatigue  Activity  of
Schizandra chinensis Aqueous
Extracts in Mice, African Journal of
Pharmacy  and  Pharmacology , 3 (11) , 593-597
Davis,  J.M.,  Zhao,  Z.,  Stock,  H.S.,  Mehl, K.A.,  Buggy,  J.,  and  Hand,  G.A., 2003,  Central  Nervous  System Effects  of  Caffeine  and  Adenosine on  Fatigue, American  Journal Physiology  Regulatory  Integrative and  Comparative  Physiology , 284 (2) , 399-404 Gandjar, I.G., dan Rohman, A., 2007, Kimia Farmasi  Analisis ,  Pustaka  Pelajar, Yogyakarta, 323, 353, 354, 359
Harborne,  J.B.,  1987, Metode  Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis  Tumbuhan ,  Penerbit ITB, Bandung, 49, 50, 70, 74 Hu,  Q.L.,  Zhang,  L.J.,  Li,  Y.N.,  Ding,  Y.J., and Li, F.L., 2010, Purification and Anti-Fatigue Activity of Flavonoids from  Corn  Silk, International
Journal of Physical Sciences , 5 (4) ,
321-326 Jin,  H.M.,  and  Wei,  P.,  2011,  Anti-Fatigue Properties  of Tartary  buckhwheat Extracts  in  Mice, International Journal  of  Molecular  Sciences , 12 (8) , 4770-4780 oewana,  S.M.D.,  2003, Gangguan  Mental dan  Perilaku  Akibat  Penggunaan Zat  Psikoaktif : Penyalahgunaan
NAPZA/Narkoba ,  Edisi  II,  Penerbit Buku  Kedokteran  EGC,  Jakarta, 187, 189
Li,  W.,  Li,  T.,  and  Tang,  K.,  2009, Flavonoids  from  Mulberry  Leaves by Microwave-Assisted Extract and Anti-Fatigue Activity, African Journal of Agricultural Research , 4 (9) , 898-902 Markham, K.R., 1988, Cara Mengidentifikasi Flavonoid , diterjemahan oleh Kosasih Padmawinata, Penerbit ITB,
Bandung, 1-103
Mutschler,  E.,  1991, Dinamika  Obat,
diterjemahkan  oleh  Mathilda  B. Widianto  dan  Anna  Setiadi  Ranti, Edisi  5,  Penerbit  ITB,  Bandung,
157-162
Nagalingam,  S.,  Sasikumar,  C.S.,  and
Cherian,  K.M.,  2012,  Extraction and Preliminary Phytochemical
Screening  of  Active  Compounds  in Morinda  citrifolia Fruit, Asian Journal  of  Pharmaceutical  and Clinical Research , 5 (2) , 179-181 Sambodo,  N.W.,  2009,  Uji  Efek  Tonik Madu Rambutan pada Mencit Putih
Jantan  dengan  Metode  Natatory Exhaustion, Skripsi , Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta Sari,  L.O.R.K.,  2006, Pemanfaatan  Obat Tradisional  dengan  Pertimbangan Manfaat
dan Keamanannya , Penerbit Aneka Ilmu, Semarang, 6 Tony,  H.,  2006, Mengkudu  Khasiat  dan Peluang Usahanya , Penerbit Aneka Ilmu, Semarang, 4-7
Turner,  R.A.,  1965, Screening  Methods  In Pharmacology ,  Academic  Press, New York and London, 76-77
Wagner, H., and Bladt, S., 1995, Plant Drug Analysis Thin Layer Chromatography Atlas ,  2 nd Edition, Springer, Berlin, 196, 197
(Markham, 1988).
Wahyuni,  A.S.,  dan  Kusumawati,  F.,  2008,
Efek  Tonik  Ekstrak  Air  Biji  Cola ( Cola  nitida Schott  &  Endl)  pada
Mencit  Jantan ,  Skripsi ,  Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta