## PENGEMBANGAN MODEL HEWAN PERCOBAAN TIKUS DIABETES MELLITUS TIPE 2  KARENA RESISTENSI INSULIN YANG DIINDUKSI DENGAN HUMAN INSULIN JANGKA PANJANG
Yance Anas 1) , Ria Rositasati 1) , Meita Rafika Fitriani 1) , Suharjono 2 )
1) Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang
2) Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro Semarang

## INTISARI
Hiperinsulinemia  sering  mengawali  terjadinya  resistensi  insulin  pada  pasien  DM  tipe  2. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  membuktikan  perlakuan  human  insulin  jangka  panjang  dalam menginduksi  terjadinya  hiperglikemik  dan  resistensi  insulin  pada  tikus  jantan  galur  Wistar. Sebelum  percobaan,  dilakukan  pengukuran  kadar  glukosa  darah  2  jam  setelah  pembebanan glukosa  2  g/KgBB.  Human  insulin  (0,45  –  1,80)  IU/KgBB/hari  diberikan  pada  tikus  secara subkutan setiap hari selama 14 hari. Selanjutnya, human insulin 1,8 IU/KgBB/hari juga diberikan dalam jangka waktu 7, 14 dan21 hari. Pada akhir percobaan, kembali dilakukan pengukuran kadar glukosa  darah  2  jam  setelah  pembebanan  glukosa.  Pengaruh  perlakuan  human  insulin  jangka panjang terhadap kadar glukosa darah post prandial ditentukan dengan membandingkan data kadar glukosa darah sebelum dan setelah perlakuan secara statistik.  Resistensi insulin ditetapkan dengan membandingkan  efek  hipoglikemik glibenklamid  10  mg/KgBB dengan kelompok kontrol.   Hasil penelitian menyimpulkan bahwa perlakuan human insulin dosis 1,80 IU/KgBB/hari selama 14 hari mampu  meningkatkan  kadar  glukosa  darah  tikus  jantan  galur  Wistar  sampai  pada  126,369 mg/dL(p<0,05)  dengan  pola  tidak  tergantung  lama  waktu  pemberian.Rata-rata  %  efek hipoglikemik glibenklamid 10 mg/KgBB pada tikus yang mendapatkan perlakuan dengan human insulin 1,80 IU/KgBB/hari adalah sebesar 18, 31%, lebih kecil bila dibandingkan kontrol (62,20%) (p<0,05).
Kata Kunci : Human insulin , resistensi insulin, model hewan percobaan DM tipe 2

## ABSTRACT
Hyperinsulinemia may precede insulin resistance in patients with Type 2 diabetes.  In this study, we tried to reveal an  influence of  long-term treatment of  human  insulin to hyperglycemic and insulin resistance in male Wistar rats.  Before the experiment, blood-glucose  levels measured two hours after 2 g/Kg glucose imposition.  Rats receive human insulin (0.45-1.80) IU/KgBW/day subcutaneously  every  day  for  14  days.    Furthermore,  human  insulin  1.8  IU/KgBW/day  also provide a period of7,14and 21days. At theend of the experiment,we mademeasurements ofblood- glucoselevelstwo  hoursafterthe  imposition  glucose.There  are,  the  influence  oflong-termtreatment of  human  insulin  determined  bycomparing  the  blood-glucoselevelsbeforeandafter  insulin treatment.  Insulin  resistance  isdeterminedby  comparing  thehypoglycemiceffect  of  glibenclamide 10  mg/Kg  BW  to  the  control  group.  The  results  concluded  that  the  humaninsulin1.80 IU/KgBW/day treatment for 14dayscan improveblood-glucoselevel'sWistarmale ratsup to126.369mg/dL(p<0.05)withpatternsdoes  notdepend  onthe  length  of  timeof  administration.The averageof % hypoglycemiceffect of glibenclamide10mg/kgBW in ratswhoreceived treatment with human  insulin  1.80IU/kg  BW/dayswereat  18,31%,smaller  thancontrols  (62.20%)  (p<0.05). Decrease  in  hypoglycemic  effects  of  glibenclamide  10  mg/kg  BW  caused  by  mice  has  insulin resistance might be due to a result of long-term insulin administration.
Keywords : Human insulin, insulin resistance, Type 2 diabetes animal models

## PENDAHULUAN
Diabetes  mellitus  (DM)  merupakan penyakit  yang  menjadi  penyebab  kematian nomor  empat  di  dunia  (Akinchi etal .,  2008).
Kongres Federasi Diabetes Internasional (IDF) di  Paris  menyebutkan  bahwa  pada  tahun  2003 terdapat  sekitar  194  juta  orang  di  dunia  yang telah mengidap DM. Angka kejadian DM pada
orang  dewasa  pada  tahun  2010  adalah sebanyak  285  juta  orang.  Angka  kejadian  ini diperkirakan  akan  terus  melonjak.  Pada  tahun 2030,  diperkirakan  angka  kejadian  DM  pada orang  dewasa  (usia  20  -79  tahun)  mencapai 439  juta.  Persentase  peningkatan  ini  mencapai 69%  pada  masyarakat  di  negara  berkembang dan 20 % di negara maju (Shaw etal ., 2010). Di Indonesia, penyakit ini telah diderita oleh lebih dari  2,5  juta  orang,  dan  angka  kejadiannya diperkirakan akan terus bertambah.
Sebagian  besar  jenis  DMyang  diderita oleh orang di seluruh dunia adalah DM tipe 2. Penyebab  utama  dari  DM  tipe  2  adalah gangguan  metabolik  yang  ditandai  dengan terjadinya  resistensi  reseptor  insulin  dan berkurangnya  kemampuan  sel  β–pankreas dalam  mensekresikan  insulin.  Patofisiologi DM tipe 2 ditandai dengan terjadinya resistensi insulin  pada  jaringan  tubuh  dan  atau  adanya gangguan  /  abnormalitas  sekresi  insulin  dari sel  β  pulau  langerhans  pangkreas  (Thevenod,
2008). Berbagai laporan penelitian menyimpulkan bahwa resistensi insulin mengawali perkembangan keadaan hiperglikemik pada orang-orang yang mengalami  DM  tipe  2  (Abdul-Ghani  dan
DeFronzo, 2010; Choi dan Kim, 2010).
Tingginya  kadar  glukosa  darah  pada penderita  DM  tipe  2  lebih  sering  disebabkan karena  terjadinya  resistensi  insulin  pada jarigan  perifer,  sehingga  kebanyakan  glukosa gagal  dibawa  masuk  ke  dalam  sel  (Thevenod, 2008).    Metodelogi  penelitian  aktivitas antidiabetes yang berhubungan dengan resistensi insuin relatif masih sedikit.  Pesatnya perkembangan ilmu pengetahuan dan teknologi di bidang biologi molekuler telah memungkinkan dikebangkannya berbagai metodelogi uji aktivitas antidiabetes berdasarkan  patofisiologi  resistensi  insulin, diantaranya  menggunakan  hewan  percobaan khusus  yang  telah  manipulasi  secara  genetik. Metode tersebut diantaranya adalah
menggunakan  metode spontaneous  diabetic rats dengan  menggunakan  tikus biobreding (BB),  WBN/KOB rats , Goto-Kakizaki  rats yang  merupakan  tikus  non-obesitas  yang mengalami  resistensi  insulin  (Srinivasan  dan Ramarao,  2007).    Akan  tetapi,  metode  ini belum  dapat  diterapkan  di  seluruh  dunia, terutama  di  Indonesia  yang  dikarenakan ketersediaan  hewan  uji  ini  masih  jarang  dan memiliki metode yang sulit untuk dikembangkan.
Metode  uji  aktivitas  antidiabetes  tipe  2 berdasarkan  resistensi  insulin  yang  lebih sederhana adalah dengan  menggunakan  model tikus Wistar  Fatty  Rats (WFR).    Tikus  WFR dikembangkan  dengan  cara  pemberian  asupan glukosa/sukrosa dan pakan tinggi kalori dalam waktu jangka panjang.  Asupan glukosa jangka panjang  akan  meningkatkan  respon  tubuh dalam  mensekresikan  insulin  sehingga  terjadi kondisi  hiperinsulinemia  dalam  jangka  waktu yang  relatif  lama.  Pada  keadaan  ini,  kadar glukosa darah cenderung berada dalam rentang normal,  sementara  itu  jumlah  reseptor  insulin dan sensitifitas jaringan terhadap insulin relatif berkurang,  sehingga  akan  terjadi  resistensi insulin yang semakin memburuk dan tingginya kadar glukosa darah yang memicu DM (Abdul- Ghani  dan  DeFronzo,  2010).Berdasarkan patofisiologi  dan  metode  Tikus  WFR,  muncul suatu pertanyaan mengenai hubungan penggunaan  insulin  jangka  panjang  dengan terjadinya resistensi insulin yang mengakibatkan  terjadinya  DM  secara in  vivo . Penelitian ini merupakan penelitian pendahuluan  untuk  pengembangan  metode baru  dalam  membuat  model  hewan  percobaan diabetes  mellitus  tipe  2  yang  mengalami resistensi  insulin  karena  pemberian  insulin eksogen  jangka  panjang.  Secara  khusus, penelitian ini mencoba membuktikan kemampuan  insulin  yang  diberikan  dalam jangka  panjang  untuk  menginduksi  terjadinya peningkatan kadar glukosa darah dan resistensi insulin  pada  tikus  jantan  galur  Wistar.  Jika memenuhi berbagai persyaratan sebagai model,  metode tikus diabetes  yang  mengalami resistensi  insulin  karena  pemberian  insulin jangka  panjang  ini  diprediksi  akan  lebih banyak  digunakan  dalam  penelitian  pengujian calon  obat  baru  untuk  antidiabetes  tipe  2. Prediksi  ini  menjadi  logis  disebabkan  karena kemampuan  model  ini  yang  lebih cepat dalam menginduksi  terjadinya  resistensi  insulin  dari metode hewan percobaan diabetes mellitus tipe 2 lainnya.

## METODE PENELITIAN

## Rancangan dan variabel Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental dengan menggunakan rancangan randomized matched two grouppretest-posttest design (rancangan eksperimental ulang). Kelompok  perlakuan  terdiri  dari  kelompok tikus  yang  diberikan  perlakuan human  insulin
dengan  variasi  dosis  dan  lama  perlakuan  serta kelompok kontrol. Untuk mengukur terjadinya peningkatan kadar glukosa darah, pengambilan sampel  dan  pemeriksaan  kadar  glukosa  darah pada  masing-masing  tikus  dilakukan  sebelum dan  setelah  perlakuan human  insulin dengan variasi  dosis  dan  lama  perlakuan.Terjadinya resistensi  insulin  diukur  berdasarkan  lebih rendahnya  %  efek  hipoglikemik  glibenklamid 10 mg/KgBB pada kelompok perlakuan human insulin dibandingkan dengan kelompok kontrol pada  akhir  percobaan.Penelitian  dilaksanakan di  laboratorium  Farmakologi  dan  Toksikologi Universitas  Wahid  Hasyim  Semarang  pada bulan Agustus – November 2011.

## Bahan dan Alat Penelitian
Hewan uji  yang digunakan adalah tikus jantan galur wistar (diperoleh dari Laboratorium  Farmakologi  dan  Toksikologi Fakultas  Farmasi  Universitas  Wahid  Hasyim
Semarang) usia 2-3  bulan, dengan berat badan 200  –  250  g.    Tikus  dipelihara  dalam  kondisi laboratorium  dengan  pemberian  pakan  standar BR2  dan  minum  akuades ad.libitum dengan pengaturan cahaya terang-gelap (12:12) jam.
Human  insulin yang  digunakan  adalah insulin kerja panjang (Lantus®/ Insulin glargine )  yang  dibeli  dari  Apotek  Kimia Farma  di  kota  Semarang.    Bahan  kimia  lain yang  digunakan  adalah    glukosa  anhidrat ( Pharmaceutical  grade PT. Brataco Chemical, Semarang),  reagen  GOD-PAP  dari Diagnostic Systems  International (Diasys),  yang  terdiri dari  :    (1)  Monoreagen  (dapar  fosfat  (pH  7,5) 250 mmol/L; fenol 5 mmol/L; 4- aminoantipirin  0,5  mmol/L;  glukose  oksidase
>10  mmol/L; peroksidase >1  mmol/L) dan (2) larutan  glukosa  standar  100  mg/dL  atau  5,55 mmol/L  (Diasys).  Berbagai  peralatan  yang digunakan dalam penelitian ini adalah seperangkat  alat  gelas,  timbangan  tikus (Acyss), spuit injeksi oral, tabung eppendroph , scalpel, vial, pipet volume (Pyrex), pipet mikro berbagai ukuran  dan  spektrofotometer UV-Vis (Genesys).

## Jalannya Penelitian
Penelitian  ini  dibagi  menjadi  2  tahap. Penelitian  tahap  pertama  dilakukan  untuk mengamati pengaruh perlakuan human insulin dosis (0.45; 0,90 dan 1,80) IU/KgBB/hari selama 14 hariterhadap
peningkatan kadar glukosa darah 2 jam setelah pemberian glukosa 2 g/KgBB pada tikus jantan
galur  wistar.  Dua  puluh  empat  ekor  tikus jantan  dipilih  secara  acak,  kemudian  dibagi dalam tiga kelompok dosis human insulin (tiap kelompok  terdiri  dari  6  ekor  tikus)  dan  satu kelompok  kontrol  (6  ekor  tikus).    Sebelum perlakuan human insulin , dilakukan pengukuran kadar glukosa darah 2 jam setelah pemberian asupan glukosa dosis 2 g/KgBB per oral  pada  masing-masing  tikus  kelompok perlakuan  dan  kelompok  kontrol.  Selanjutnya tiga  peringkat  dosis human  insulin (0,45;  0,90 dan 1,8 IU/KgBB/hari) diinjeksikan pada tikus secara  subkutan  selama  14  hari,  sedangkan kelompok kontrol diinjeksikan dengan akuabides 0,25 mL/200 g/hari secara  subkutan selama  14  hari  dengan  tetap  diberikan makanan  dan  minuman.  Selanjutnya,  tikus dibiarkan  selama  3  hari.    Pada  hari  ke-18 dilakukan  pengukuran  kadar  glukosa  darah  2 jam  setelah pemberian asupan glukosa dosis 2 g/KgBB.
Penelitian  tahap  kedua  dilakukan  untuk mengamati  pengaruh  lama  perlakuan human insulin terhadap  peningkatan  kadar  glukosa darah  2  jam  setelah  pembebanan  glukosa  2 g/KgBB pada tikus jantan galur Wistar.  Selain itu, pada akhir penelitian ini dilakukan uji efek hipoglikemik  glibenklamid  10  mg/KgBB untuk  melihat  terjadinya  resistensi  insulin. Sebanyak 36 ekor tikus dipilih secara acak dan dibagi kedalam tiga kelompok  lama perlakuan (tiap  kelompok  terdiri  dari  6  ekor  tikus)  dan tiga  kelompok  kontrol  (tikus  diperlakukan dengan  pemberian  akuabides  dosis  0,25 mL/200  g  secara  subkutan).  Dosis human insulin
yang digunakan adalah 1,80
IU/KgBB/hari.    Sebelum  penelitian  dimulai, dilakukan  pengukuran  kadar  glukosa  darah  2 jam  setelah pemberian asupan glukosa dosis 2 g/KgBB  per  oral  pada  masing-masing  tikus setiap  kelompok  lama  perlakuan  dan  kontrol. Human  insulin diinjeksikan  pada  masing- masing tikus secara subkutan selama 7, 14 dan 21  hari  pada  tiga  kelompok  lama  perlakuan dengan tetap diberikan makanan dan minuman. Setelah  perlakuan  insulin  selesai  dilakukan, tikus  dibiarkan  selama  3  hari  dan  kemudian dilakukan  pengukuran  kadar  glukosa  darah  2 jam  setelah pemberian asupan glukosa dosis 2 g/KgBB  per  oral.  Hari  ke-4  setelah  perlakuan insulin  jangka  panjang  dilakukan  penetapan keadaan resistensi insulin.  Parameter resistensi insulin adalah  efek  hipoglikemik glibenklamid 10  mg/KgBB  kelompok  perlakuan  human
insulin  lebih kecil dari pada kelompok  kontrol (p<0,05).

## Data penelitian
Data primer dalam penelitian  ini adalah kadar  glukosadarah  (mg/dL)  2  jam  setelah pemberian  asupan  glukosa  dosis  2  g/KgBB tikus  yang  diukur  sebelum  dan  setelah perlakuan human  insulin jangka  panjang,  baik pada  kelompok  perlakuan  maupun  kelompok kontrol.    Selain  itu,  kadar  glukosa  darah  pada penetapan  efek  hipoglikemik  glibenklamid dosis 10 mg/KgBB juga merupakan data utama dalam  penelitian  ini.  Kadar  glukosa  darah ditetapkan secara enzimatik dengan
menggunakan  metode  GOD-PAP.  Prinsip penetapan  kadar  glukosa  dengan  metode  ini adalah terjadinya reaksi antara glukosa dengan reagen GOD-PAP yang menghasilkan senyawa komplek  berwarna  kuinonimin  yang  dapat diukur dengan alat spektrofotometer visibel.
Sampel darah sebanyak 1,0  mL diambil dari  vena  lateralis  ekor  tikus  dan  ditampung dalam  tabung eppendroph yang  telah  ditetesi dengan  satu  tetes  larutan  antikoagulan  EDTA. Selanjutnya, sampel darah disentrifugasi dengan  kecepatan  3.000  rpm  selama  3  menit. Serum  diambil  sebanyak  20,0  µL  dari  sampel dan  dicampur  dengan  10  mL  TCA.Campuran tersebut kemudian direaksikan secara enzimatis  dengan  2,0  mL  reagen  GOD-PAP dan  divortex  selama  ±  10  detik.  Langkah selanjutnya  adalah  dilakukan  inkubasi  pada suhu  37  °C  selama  105  menit  dan  serapan dibaca pada λ maksimal 505 nm.

## Analisa Data
Data yang dikumpulkan untuk
pengukuran  kadar  glukosa  darah  berupa  data serapan  yang  terbaca  pada  spektrofotometri visibel.  Kemudian  nilai  serapan  ini  diubah menjadi  kadar  glukosa  darah  (mg/dL)  dengan menggunakan rumus: (Bhoja, 2009)
Keterangan :
C =   kadar glukosa darah (mg/dL) As =   serapan larutan sampel darah Ast =   serapan larutan glukosa standar
Data kadar glukosa darah yang ditampilkan  merupakan  rata-rata  ±  SEM. Perhitungan % efek hipoglikemk glibenklamid 10
mgkGBB dilakukan dengan
membandingkan  data  kadar  glukosa  darah  2
jam  setelah  pembebanan  glukosa  2  g/KgBB hari  ke-3  setelah  perlakuan  insulin  dengan kadar  glukosa  darah  pada  hari  ke-4  (setelah pemberian glibenklamid).
( )
Keterangan :
P = kadar  glukosa  darah  2  jam  setelah pembebanan  glukosa  2  g/KgBB peroral  pada  hari  ke-3  setelah perlakuan human insulin
Q = kadar  glukosa  darah  2  jam  setelah pembebanan  glukosa  2  g/KgBB peroral pada uji hipoglikemik glibenklamid 10  mg/KgBB (hari ke- 4 setelah perlakuan human insulin )
Analisa  statistik  yang  digunakan  untuk membandingkan  kadar  glukosa  darah  sebelum dan setelah perlakuan human insulin adalah uji t  berpasangan  dan  uji  Wilcoxon,  dengan  taraf kepercayaan 95%. Perbedaan efek hipoglikemik  glibenklamid  10  mg/KgBB antara  kelompok  lama  perlakuan human insulin dengan  kelompok  kontrol  dianalisa dengan  uji  Kruskal-Wallis  yang  dilanjutkan dengan uji Mann-Whitney pada taraf kepercayaan  95%.  Adanya  perbedaan  yang signifikan  ditandai  dengan  nilai  signifikansi (p< 0,05).

## HASIL PENELITIAN
Pengaruh Perlakuan Human Insulin selama 14  Hari  terhadap  Kadar  Glukosa  Darah  2 Jam  setelah  Pembebanan  Glukosa  2  g/Kg BB
Perbandingan  rata-rata  kadar  glukosa darah  sebelum  dan  setelah  perlakuan  dengan human  insulin (0,45  –  1,80)  IU/KgBB/hari selama  14  hari  tersaji  pada  gambar  1. Penurunan  rata-rata  kadar  glukosa  darah kelompok  perlakuan  insulin  0,45  IU/KgBB tidak  bermakna  secara  statistik  (p>0,05), sedangkan  pada  perlakuan human insulin 0,90 IU/KgBB/hariselama  14  hari  menunjukkan penurunan  rata-rata  kadar  glukosa  darah  yang signifikan (p<0,05)  dibandingkan dengan rata- rata  kadar  glukosa  darah  sebelum  perlakuan.
Perlakuan human  insulin 1,80  IU/KgBB/hari selama 14 hari secara signifikan meningkatkan rata-rata  kadar  glukosa  darah  2  jam  setelah pembebanan  glukosa  2  g/KgBB.    Rata-rata kadar  glukosa  darah  setelah  perlakuan  insulin human  insulin 1,80  IU/KgBB/hari  adalah
sebesar  (126,369  ±  9,250)  mg/dL  dan mengalami peningkatan sampai lebih dari 50,0 mg/dL.
Gambar 1. Perbandingkan kadar glukosa darah (mg/kgBB) 2 jam pembebanan glukosa 2 g/KgBB peroral pada kelompok kontrol dan kelompok perlakuan insulin dosis (0,45; 0,90 dan 1,80) IU/KgBB/hari selama 14 hari.  Kadar glukosa merupakan nilai rata-rata ± SEM (n=6).  *  Hasil  uji  t  berpasangan  menunjukan  adanya  perbedaan  yang  bermkana dengan kadar glukosa darah sebelum perlakuan (p<0,05).
Pengaruh  Lama  Perlakuan Human  Insulin 1,80  IU/KgBB    terhadap  Kadar  Glukosa Darah  2  jam  setelah  Pembebanan  Glukosa
2 g/KgBB Perlakuan human insulin 1,8
IU/KgBB/hari  pada  berbagai  rentang  waktu pemberian  mampu  menginduksi  terjadinya peningkatan  rata-rata  kadar  glukosa  darah  2 jam  setelah  pembebanan  glukosa  2  g/KgBB
(p<0,05)  dengan  pola  tidak  tergantung  waktu
(gambar 2).  Peningkatan kadar glukosa darah tertinggi adalah pada perlakuan human insulin selama  14  hari.    Hal  ini  tidak  terlihat  pada kelompok  kontrol,  dimana  rata-rata  kadar glukosa  darah  setelah  pembebanan  glukosa pada  akhir  perlakuan  tidak mengalami peningkatan  yang  signifikan  (p>0,05).  Hasil penelitian ini  menyimpulkan bahwa perlakuan human insulin mampu mengacaukan metabolisme glukosa tikus jantan galur Wistar.
69.369
80.966 85.608 75.580 98.517 67.225 45.311 126.369 0 20 40 60 80 100 120 140 160 Kontrol Human insulin 0,45 IU/KgBB Human insulin 0,90 IU/KgBB Human insulin 1,80 IU/KgBB K ad ar Gl u kosa D ar ah ( m g/ d L) Rata-rata kadar Glukosa Darah (mg/dL) sebelum perlakuan insulin
Rata-rata kadar glukosa darah (mg/dL) setelah perlakuan insulin selama 14 hari * *
Gambar 2. Perbandingkan  rata-rata  kadar  glukosa  darah  (mg/kgBB)  2  jam  setelah  pembebanan glukosa  2  g/KgBB  peroral  pada  kelompok  kontrol  dan  kelompok  perlakuan  insulin 1,80 IU/KgBB/hari selama 7, 14 dan 21 hari.  Kadar glukosa merupakan nilai rata-rata ±  SEM  (n=6).  *  Hasil  uji  Wilcoxon  menunjukan  adanya  perbedaan  yang  bermakna dengan rata-rata kadar glukosa darah sebelum perlakuan (p<0,05).
Pengaruh  Lama  Perlakuan Human  Insulin
1,80 IU/KgBB terhadap Efek Hipoglikemik
Glibenklamid 10 mg/KgBB.
Rata-rata % efek hipoglikemik glibenklamid 10 mg/KgBB kelompok
perlakuan human  insulin 1,80  IU/KgBB/hari selama  7  dan  21  hari  lebih  tinggi  dari kelompok  kontrol  (gambar  3).    Meskipun demikian,  perbedaan  tersebut  tidak  bermakna secara statistik (p>0,05).  Sebaliknya, rata-rata %  efek  hipoglikemik  glibenklamid  kelompok perlakuan human  insulin 1,80  IU/KgBB/hari selama  14  hari  justru  lebih  rendah  dari  pada kelompok kontrol (p<0,05). Efek hipoglikemik  glibenklamid  10  mg/KgBB sangat rendah, yaitu sebesar 18,31%.

## Diskusi dan Pembahasan
Salah  satu  metodelogi  uji  khasiat farmakologi obat secara in vivo adalah dengan menggunakan  hewan  percobaan,  termasuk untuk  uji  aktivitas  antidiabetes.    Berbagai metode penelitian dengan menggunakan hewan percobaan telah banyak dikembangkan, baik  untuk  DM  tipe  1  dan  DM  tipe  2, diantaranya pangkreaktomi pada anjing, induksi berbagai senyawa diabetogenik
(aloksan  dan  streptozotosin)  yang  memicu terjadinya  kerusakan  sel  β-pankreas,  sehingga akan  mengurangi  kemampuan  pangkreas
dalam  mensekresikan  insulin.  Pengguaan hormon pertumbuhan seperti senyawa kortikosteroid,  antibodi  insulin  dan  bahkan menggunakan  virus  yang  dapat  menginduksi terjadinya  pangkreatitis  pada  berbagai  hewan percobaan  (Vogel, et.al .,  2002;  Ruzin, et.al ., 2005). Semua metode tersebut lebih difokuskan  pada  patofisiologi  DM  yang berhubungan dengan gangguan sekresi insulin. Penelitian ini mencoba untuk mengembangkan metode baru untuk menghasilkan  tikus  diabetes  yang  mengalami resistensi  insulin,  sehingga  dapat  digunakan dalam  penelitian  aktivitas  antidiabetes  tipe  2. Resistensi  reseptor  insulin  pada  jaringan perifer  penderita  DM  tipe  2  didahului  oleh keadaan  hiperinsulinemia  dan  gangguan  pada reseptor insulin di jaringan perifer (Mahler dan Adler, 1999).Hiperinsulinemia jangka panjang diinduksi  dengan  pemberian human  insulin eksogen,  sehingga  diharapkan  juga  dapat menginduksi terjadinya resistensi insulin.Hasil penelitian  ini  menunjukkan  pemberian human insulin dosis  1,80  IU/KgBB/hari  selama  14 hari  mampu  meningkatkan  kadar  glukosa darah  tikus  jantan  galur  Wistar  sampai  pada 126,369 mg/dL (masuk dalam range diabetes) dengan  pola  tidak  tergantung  lama  waktu pemberian.
78.644
72.238 69.369 75.580 61.931 69.917 81.894 99.257 98.517 126.369 64.438 102.414 0 20 40 60 80 100 120 140 160 kontrol 7 hari Insulin 1,8 IU/KgBB 7 hari kontrol 14 hari
Insulin 1,8
IU/KgBB 14 hari kontrol 21 hari Insulin 1,8 IU/KgBB 21 hari K ad ar G lu ko sa D ar ah ( m g/ d L) Rata-rata kadar
Glukosa Darah (mg/dL) sebelum perlakuan insulin Rata-rata kadar glukosa darah (mg/dL) setelah perlakuan insulin * * *
Gambar 3. Perbandingkan  %  efek  hipoglikemik  glibenklamid  10  mg/KgBB  pada  kelompok kontrol  dan  kelopok  perlakuan  insulin  1,80  IU/KgBB/hari  selama  7,  14  dan  21  hari.
* hasil uji Mann-Whithney menunjukan perbedaan yang bermakna dengan kelompok kontrol (p<0,05).
Perlakuan human insulin 1,80 IU/KgBB/haripada  tikus  jantan  galur  Wistar mengakibatkan  rata-rata  %  efek  hipoglikemik glibenklamid  10  mg/KgBB  yang  lebih  kecil (sebesar 18,31%) dibandingkan kontrol (62,20%) (p<0,05).Rendahnya rata-rata % efek hipoglikemk  glibenklamid  tersebut  bukan dikarenakan berkurangnya insulin dalam tubuh tikus jantan galur Wistar, melainkan disebabkan karena terjadinya resistensi insulin pada  jaringan  perifer,  sehingga  kadar  glukosa tinggi di dalam darah (hiperglikemik).  Hal ini disebabkan karena
mekanisme kerja glibenklamid  sebagai  antidiabetes  adalah menstimulasi sel β-pankreas untuk melepaskan insulin  yang  tersimpan  ( stored  insulin ), sehingga  dapat  meningkatkan  sekresi  insulin sebagai  akibat rangsangan glukosa  (Waspadji, 2007).  Dalam  keadaan  ini,  kadar  insulin diprediksi  cukup  tinggi  di  dalam  darah, sedangkan  reseptor  insulin  banyak  yang mengalami gangguan atau mengalami resistensi  terhadap  aksi  insulin.    Sebelumnya, hasil  pengujian  secara  invitro  menyimpulkan bahwa  pemberian  insulin  dapat  menginduksi terjadinya down-regulation reseptor  insulin pada  sel  lemak  pasien  DM  tipe  2  dengan obesitas,  sel  fibroblast  3T3  mencit,  hepatosit tikus  dan  hepatosit  ayam  (Knutson et  al ., 1982).
Kelemahan  dari  penelitian  ini  adalah peningkatan kadar glukosa darah 2 jam setelah pembebanan glukosa 2 g/KgBB tidak
bergantung  lama  pemberian.    Persentase penurunan  efek  hipoglikemik  10  mg/KgBB dalam  jangka waktu pemberian human insulin yang  lebih  lama  (21  hari)  justru  lebih  kecil dari pada pemberian  human  insulin selama 14 hari.    Hal  ini  mungkin  disebabkan  karena penggunaan  tikus  jantan  galur  Wistar  dengan usia  yang  relatif  muda  (usia  2  bulan). Keadaan  ini  mungkin  akan  berbeda  jika penelitian  menggunakan  tikus  dengan  usia yang  tua  (6  bulan)  dan  mengalami  obesitas, sehingga  perlu  penelitian  lanjutan  untuk mengoptimalkan hasil penelitian ini.
Resistensi  reseptor  insulin  adalah  suatu kondisi  dimana  terjadi  penurunan  sensitivitas jaringan terhadap kerja insulin sehingga terjadi peningkatan  sekresi  insulin  sebagai  bentuk kompensasi sel β-pankreas. Difungsi metabolik  ini  menimbulkan  berbagai  kelainan dengan konsekuensi klinik  yang serius  berupa penyakit  kardiovaskuler  dan  diabetes  melitus tipe  2,    serta  penyakit  lainnya  (Mahler  dan Adler, 1999).Resistensi reseptor insulin merupakan  faktor  risiko  utama  pemicu  DM tipe 2. Resistensi  insulin  berhubungan  dengan obesitas  dan  sindrom  metabolik.  Disregulasi metabolisme  asam  lemak  berperan  penting dalam  patogenesis  resistensi  insulin.  Berbagai penelitian  membuktikan  bahwa  peningkatan berat  badan  akan  diikuti  dengan  peningkatan angka kejadian resistensi reseptor insulin pada otot  rangka.  Sebaliknya,  penurunan  berat badan  pada  pasien  dengan  obesitas  akan
39.79 62.20 35.98 65.66 18.31 47.68 0 10 20 30 40 50 60 70 Perlakuan selama 7 hari Perlakuan selama 14 hari Perlakuan selama 21 hari % Ef e k Hi p o gl ik e m ik G li b e n kl am id 1 0 m g/K gB B kontrol Insulin 1,80 IU/KgBB *
mengembalikan  keadaan  resistensi  reseptor insulin  pada  otot  rangka  (Abdul-Ghani  dan DeFronzo, 2010).

## KESIMPULAN
1. Perlakuan human  insulin dosis  1,80
IU/KgBB selama 14 hari mampu
meningkatkan  kadar  glukosa  darah  tikus jantan  galur  Wistar  sampai  pada  126,369 mg/dL  (masuk  dalam range diabetes) dengan  pola  tidak  tergantung  lama  waktu pemberian.
2. Perlakuan human  insulin 1,80  IU/KgBB pada  tikus  jantan  galur  Wistar  mampu menginduksi  terjadinya  resistensi  insulin dan  mengakibatkan  rata-rata  %  efek hipoglikemik  glibenklamid  10  mg/KgBB yang  lebih  kecil  (sebesar  18,  31%) dibandingkan kontrol (62,20%).

## DAFTAR PUSTAKA
Abdul-Ghani,  M.  and  DeFronzo,  R.,  2010. Pathogenesis  of  insulin  resistance  in skeletal  muscle. J  Biomed  and Biotech . 2010: 1-19. Akinchi, F., Yildrim, A., Gozu, H., Sargin, H., Orbay.  E.  and  Sargin,  M.,  2008. Assessment  of  health-related  quality of  life  (HRQoL)  of  patient  with  type 2  diabetes  in  turkey, Diabetes  Res Clin Pract . 79: 117-23. Bhoja,  Y.L.,  2009.  Efek  hipoglikemik  ekstrak etanolik  daun  lenglengan  ( Leucas lavandulaefolia JE.  Smith)  terhadap tikus  jantan  galur  Wistar  yang  diberi glukosa  berlebih. Skripsi .  Fakultas Farmasi.  Universitas  Wahid  Hasyim Semarang.
Choi,  K.  and  Kim,  Y.,  2010.  Molecular mechanism  of  insulin  resistance  in obesity and type 2 diabetes. Korean J
Intern Med . 25(2): 119-129. Knutson,  V.P.,  Ronnett,  G.V.  and  Lane,
M,D.,1982. Control of insulin receptor  level  in  3T3  cells:  effect  of insulin-induced  down-regulation  and dexamethasone-induced up- regulation on rate  of receptor inactivation. Proceedings  of  the National  Academy  of  Sciences  of  the United  States  of  America. 79(9): 2822-2826. Mahler,  R.  and  Adler,  M.,  1999.  Type  2 diabetes mellitus: update on diagnosis,pathophysiology, and treatment. J  Clin  Endocrinol  Metab . 84(4): 1165-71. Ruzzin, J., Wagman, A.S. and Jensen, J., 2005. Glucocorticoid-induced insulin resistance in skeletal muscles: defects in insulin signalling and the effects of a selective glycogen synthase kinase-
3  inhibitor. Diabetologia .  48(10): 2119-2130.
Shaw,  J.E.,  Sicree,  R.A.  and  Zimmet,  P.Z.,
2010. Diabetes atlas : Global
estimates  of  the  prevalence  of diabetes  for  2010  and  2030, diabetes research and clinical practice , 87: 4-
14.
Srinivasan, K. and Ramarao, P., 2007. Animal models  in  type  2  diabetes  research  : An overview. Indian J Med Res . 125 :
451-472.
Thevenod,  F.,  2008.  Pathophysiology  of diabetes  mellitus  type  2:  roles  of obesity,  insulin resistance and β –cell dysfunction. Diabetes 19(1) : 1-18. Vogel,  H.G.,  2002. Drug  Discovery  and Evaluation: Pharmacological Assays . Second  Edition.  New  York:  Springer
Berlin-Heidelberg. Waspadji,  S.,  2007. Diabetes  Mellitus: Mekanisme Dasar dan Pengelolaannya Yang Rasional , Dalam Soegondo S. Soewondo P. dan Subekti,  I.  2007,  Penatalaksanaan
Diabetes  Mellitus  Terpadu,  Cetakan ke-6,