Jurnal Silvikultur Tropika Vol. 06 No. 1, April 2015, Hal 27-32 ISSN: 2086-8227
POTENSI Trichoderma harzianum DAN Gliocladium sp.
SEBAGAI AGENS HAYATI TERHADAP Botryodiplodia sp.
PENYEBAB PENYAKIT MATI PUCUK PADA JABON ( Anthocephalus cadamba (ROXB.) MIQ)
Potency of Biological Agent Trichoderma harzianum and Gliocladium sp. on Pathogenic Fungi Botryodiplodia sp. causes Dieback Disease of Jabon (Anthocephalus cadamba (Roxb.) Miq. )
Eti Artiningsih Octaviani, Achmad dan Elis Nina Herliyana
Departemen Silvikultur, Fakultas Kehutanan IPB

## ABSTRACT
Botryodiplodia sp. is causes dieback disease of jabon ( Anthocephalus cadamba (Roxb.) Miq). Dieback disease causes a decrease in the quality and economic value of jabon seedlings in the nursery. Research on control of the disease is still rare. Control of the disease is divided into three ways, namely chemical, physical, and biological. One biological control can be biological agents. Biological agents are used in this study is Trichoderma harzianum and Gliocladium sp. on  in vitro test.  The test results showed that T. harzianum antagonism with the direct method  able to inhibit the growth of Botryodiplodia sp. with the average 52.53% and 35.99% respectively on PDA and Czapex Agar, while Gliocladium sp. able to inhibit the growth of Botryodiplodia sp. Average 46.46% and 28.51% respectively on the PDA and Czapex Agar for 7 days of observation. Results of antagonist test with indirect methods showed that the filtrate of T. harzianum and Gliocladium sp. has the ability to inhibit the growth of Botryodiplodia sp. at 13.42% and 10.25% PDB media significantly different from controls. T. harzianum and Gliocladium sp. have ability to inhibit the growth of Botryodiplodia sp. greatly.
Key words : Botryodiplodia sp., Gliocladium sp., in vitro test, Trichoderma harzianum

## PENDAHULUAN
Hutan  rakyat  merupakan  salah  satu  solusi  dalam menyelesaikan masalah penyediaan kayu untuk berbagai  keperluan.  Selain  itu,  hutan  rakyat  yang dikelola  masyarakat  mampu  membuka  peluang  usaha baru  yang  potensial  dan  berperan  dalam  pengembalian fungsi  hutan.  Dewasa  ini,  salah  satu  jenis  kayu  yang dibudidayakan  pada  hutan  rakyat  adalah  jabon  putih ( Anthocephalus  cadamba ).  Jabon  menjadi  salah  satu jenis pohon yang banyak diminati untuk dibudidayakan dan  dikembangkan.  Jabon  termasuk fast  growing species (FGS)  yang  memiliki  nilai  manfaat  secara ekologi  dan  ekonomi.  Jabon  memiliki  kemudahan dalam pemeliharaan karena dapat mengalami pemangkasan  alami  serta  pemasarannya  relatif  mudah. Menurut  Herusansono  dan  Wahono  (2011),  harga  kayu jabon  siap  panen  bisa  mencapai  Rp  1.2-1.4  juta/m 3 . Potensi  ekonomi  tersebut  ini  diperkuat  dengan penelitian  Krisnawati et  al. (2011)  yaitu  tegakan  jabon umur  5  tahun  yang  ada  di  daerah  Kalimantan  Selatan dan  Jawa,  memiliki  riap  diameter  rata-rata  1.2-11.6 cm/tahun  dengan  riap  tinggi  rata-rata  0.8-7.9  m/tahun. Data  tersebut  juga  menggambarkan  potensi  jabon sebagai  jenis  yang  dapat  diperuntukkan  dalam  kegiatan penghijauan  maupun  reklamasi  lahan  bekas  tambang. Hal ini terkait langsung dengan ketersediaan bibit jabon.
Kebutuhan  pasar  akan  kayu  telah  mendorong  usaha budidaya jabon ini untuk terus ditingkatkan produktivitasnya.  Salah  satu  faktor  keberhasilan
budidaya  jabon  adalah  penyediaan  bibit  berkualitas yang  dilakukan  dalam  lingkup  persemaian.  Tingkat kerentanan  bibit  jabon  terhadap  hama  dan  penyakit dapat  mempengaruhi  kualitas  dan  kuantitas  bibit  yang dihasilkan.  Beberapa  penyakit  penting  di  persemaian bibit  tanaman  jabon  yang  telah  dilaporkan  adalah penyakit  mati  pucuk  yang  disebabkan Rhizoctonia solani (Rahman et  al. 1997)  dan  penyakit  bercak  daun yang disebabkan Colletotrichum sp. (Anggraeni 2009). Penyakit  mati  pucuk  dapat  terjadi  pada  bibit  jabon yang  masih succulent sehingga  dapat  menyebabkan kematian pada bibit tersebut. Hal ini dapat menyebabkan penurunan kualitas bibit hingga kematian pada  bibit  tersebut.  Selain  itu, Botryodiplodia sp. dikenal  sebagai  patogen  dengan  lebih  dari  500  inang (Abdollahzadeh et  al. 2010;  Ismail et  al. 2012). Cendawan  ini  dilaporkan  telah  menyebabkan  penyakit mati  pucuk  pada  tanaman  mangga  (Khanzada et  al. 2004), shisham (Muehlbach et al. 2010), pir ( Pyrus sp. ) (Shah et  al. 2010),  karet  (Rahman et  al. 1997),  dan kakao  (Mbenoun et  al. 2008).  Serangan  yang  terjadi  di persemaian  rentan  dengan  penyebaran  yang  meluas sehingga  dapat  menimbulkan  kerugian  ekonomi  yang besar  bagi  pelaku  usaha  persemaian.  Gejala  penyakit awal  adalah  membusuknya  bagian  daun  pada  satu  atau beberapa  spot  membusuk.  Spot  tersebut  selanjutnya akan  berkembang  secara  berangsur-angsur,  hingga akhirnya  bergabung  dengan  beberapa  spot  yang  lain membentuk  area  nekrosis  yang  lebih  besar.  Setelah  itu, daun  akan  mati  secara  simultan.  Oleh  karena  itu,  perlu
dilakukan  langkah  pengendalian  penyakit  mati  pucuk untuk menekan potensi kematian sekaligus meminimalkan kerugian yang diakibatkan oleh serangan tersebut.  Salah  satu  cara  pengendalian  penyakit  yang efektif dan ramah lingkungan yaitu pengendalian secara hayati.  Pengendalian  hayati  dapat  dilakukan  dengan aplikasi  agens  hayati  yang  bersifat  antagonis  terhadap patogen Botryodiplodia sp.. Trichoderma  harzianum dan Gliocladium sp.  merupakan  cendawan  yang  telah dikenal sebagai agens hayati.
Studi  tentang  identifikasi  agen  penyebab  penyakit dan  pengujian  patogenisitas  serta  virulensinya  telah dilakukan  oleh  Aisah  (2014)  sehingga  diperlukan  studi lanjut  tentang  pengendalian  penyakit  mati  pucuk khususnya  secara  hayati.  Oleh  sebab  itu,  penelitian  ini bertujuan  untuk  menentukan  agens  hayati  yang  paling efektif di antara Trichoderma harzianum dan Gliocladium sp.  dalam  menghambat  pertumbuhan patogen  secara in  vitro sebagai  salah  satu  acuan  dalam penentuan  langkah  pengendalian  hayati  penyakit  mati pucuk.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan dan Alat
Bahan-bahan  yang  digunakan  pada  percobaan berupa isolat cendawan agens hayati yaitu T. harzianum dan Gliocladium sp..  Keduanya  hasil  isolasi  dari  tanah yang  merupakan  koleksi  SEAMEO  Biotrop.  Isolat cendawan  patogen Botryodiplodia sp.  hasil  isolasi  dari bibit jabon yang terindikasi penyakit mati pucuk. Bahan penelitian  lainnya  berupa  air  steril,  media Potato Dextrose  Agar (PDA), Potato  Dextrose Broth (PDB), Czapex  Agar ,  kertas  saring Whattman no.1,  kertas saring standar dan syiringe filter 0.2 µm. Alat yang digunakan dalam penelitian ini diantaranya laminar  air  flow , autoclave ,  oven,  cawan petri,  tabung  reaksi,  penggaris,  jarum  oose, cork  borer , sudip, botol semprot, labu erlenmeyer, dan inkubator.

## Metode Kerja
Peremajaan Cendawan Patogen dan Agens Hayati
Isolat Botryodiplodia sp., Trichoderma  harzianum , dan Gliocladium sp.  ditumbuhkan  pada  media  PDA dalam  cawan  petri.  Koloni  patogen  yang  tumbuh dimurnikan  pada  media  PDA.  Selanjutnya,  patogen diinkubasi  pada  suhu  25ºC  untuk  digunakan  pada  uji antagonisme in vitro .
Antagonisme In vitro Metode Langsung
Uji  antagonisme in  vitro dengan  metode  langsung dilakukan  dengan  uji  ganda  ( dual  culture )  (Benhamou & Chet 1993 dalam Purwantisari & Hastuti 2009)  pada media PDA dan Czapex Agar. Penggunaan kedua media dikarenakan adanya  hipotesis bahwa ekspresi antibiosis pada antagonisme in vitro dipengaruhi oleh media yang digunakan.  Achmad et  al. (2010)  mempelajari antagonisme  pada  media  padat  yang  melibatkan T. harzianum ,  zona  penghambatan  terbentuk  baik  pada PDA  maupun  MEA,  akan  tetapi  zona  penghambatan pada  antagonisme  yang  melibatkan T. pseudokoningii
hanya terbentuk pada MEA. Agens hayati T.  harzianum dan Gliocladium sp. diinokulasikan pada media dengan jarak 3 cm dari koloni cendawan patogen Botryodiplodia sp. . Tiap  perlakuan  dilakukan  sebanyak 3  ulangan.  Pengamatan  dilakukan  dengan  mengukur jari-jari koloni cendawan patogen yang menjauhi koloni agens hayati (R1) dan jari-jari koloni cendawan patogen yang  mendekati  agens  hayati  (R2),  serta  menghitung penghambatan agens hayati (H). Pengamatan dimulai 12 jam  setelah  kedua  isolat  uji  ditumbuhkan  pada  media PDA sampai hari ketujuh setelah perlakuan.
Keterangan : P  :  Koloni patogen A  :  Koloni agens hayati
R1  :  Jari-jari  koloni  patogen  yang menjauhi  koloni  agens  hayati
(mm) R2  :  Jari-jari  koloni  patogen  yang mendekati koloni agens hayati (mm)
Interaksi  cendawan  agens  hayati  dengan  cendawan patogen dalam pengendalian hayati terjadi dalam bentuk antibiosis,  kompetisi,  dan  mikoparasitisme  (Baker  & Cook 1974). Zona penghambatan yang terbentuk antara koloni  patogen  dan  koloni  agens  hayati  pada  pengujian antagonisme in  vitro merupakan  indikasi  bekerjanya mekanisme  antibiosis  (Fravel  1988).  Zona  pengham- batan  tersebut  secara  visual  berupa  zona  bening. Besarnya  daya  hambat  agens  hayati  terhadap  patogen dihitung dengan menggunakan rumus persentase:
H = (R1-R2) x 100% R1
Keterangan :
H  :  Persentase penghambatan agens hayati (%)
R1 :  Jari-jari  koloni  patogen  yang  menjauhi  koloni agens hayati (mm)
R2 :  Jari-jari  koloni  patogen  yang  mendekati  koloni agens hayati (mm)
Catatan : bila koloni pertumbuhan patogen sudah tertutup oleh koloni agens hayati, maka dianggap persentase penghambatan agens hayati (H) = 100%.

## Antagonisme Metode Tak Langsung
Uji  Antagonisme  metode  tak  langsung  dilakukan untuk  mengamati  pengaruh  filtrat  biakan  agens  hayati terhadap  pertumbuhan  patogen  berdasarkan  metode Achmad (1997). Media yang digunakan dalam tahap ini adalah PDB. Tiga potong koloni agens hayati berumur 7 hari  (Ø  7mm)  dimasukkan  ke  dalam  100  mL  media PDB  dalam  labu  erlenmeyer  250  mL  kemudian diinkubasi selama 7 hari pada suhu kamar. Setelah masa inkubasi, suspensi media PDB dipisahkan dari biomassa isolat dengan menggunakan kertas saring Whattman no. 1.  Suspensi  media  selanjutnya  disentrifuse  dengan kecepatan  10.000  rpm  selama  10  menit  untuk mendapatkan  supernatan  filtrat  tersebut.  Hasil  proses tersebut  disaring  kembali  dengan syringe  filter berukuran  pori  membran  sebesar  0.2  μm.  Filtrat  agens hayati diambil sebanyak 3 mL dan ditambahkan 20 mL media  PDB  di  dalam  labu  erlenmeyer  50  mL.  Tiga
potong  koloni  patogen  ditanam  di  dalamnya.  Kontrol dibuat  dengan  mengganti  media  perlakuan  dengan media PDB dengan volume yang sama. Labu perlakuan maupun  kontrol  diinkubasi  selama  7  hari  pada  suhu kamar.  Miselia  patogen  disaring  lalu  ditentukan bobotnya  setelah  dikeringkan  dalam  oven  60°C  selama 24  jam.  Persentase  penghambatan  ditunjukkan  oleh selisih  bobot  miselia  perlakuan  terhadap  bobot  miselia kontrol dibagi bobot miselia kontrol.

## Analisis Statistik
Rancangan  percobaan  yang  digunakan  pada  tahap uji  antagonis  secara in  vitro metode  langsung  adalah Rancangan  Acak  Lengkap  “dalam  waktu”  (RAL in time )  sedangkan  metode  tak  langsung  menggunakan RAL.  Analisis  yang  dilakukan  menggunakan  Uji  F (ANOVA),  apabila  hasil  menunjukkan  perlakuan berbeda  nyata  maka  dilakukan  Uji  Perbandingan Berganda  Duncan  ( Duncan's  Multiple  Range  Test ). Analisis  dilakukan  pada  selang  kepercayaan  95%  (α  = 0,05) menggunakan Microsoft Excel dan software SAS versi 9.1.3.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Antagonis in vitro metode langsung
Hasil  uji  antagonis  dengan  metode  langsung menunjukkan  bahwa T.  harzianum menghambat pertumbuhan Botryodiplodia sp.  pada  5  HSI  hingga 99.2%  dan 70.4% berturut-turut  pada  PDA  dan Czapex Agar ,  sedangkan Gliocladium sp.  mampu  menghambat Botryodiplodia sp.  sebesar  86.4%  dan  63%  berturut- turut  pada  PDA  dan Czapex  Agar (Tabel  1).  Hasil tersebut  menunjukkan  daya  hambat  agens  hayati terhadap Botryodiplodia sp.  lebih  tinggi  dibandingkan daya hambat terhadap Cylindrocladium sp. yaitu sebesar 24.2%  dan  19.3%  berturut-turut  oleh Trichoderma sp. dan Gliocladium sp.  pada  media  PDA    (Amalia et  al. 2008).  Pertumbuhan Botryodiplodia sp.  dan  cendawan agens  hayatinya  pada  media  PDA  memiliki  dinamika yang  teratur  daripada  media Czapex  Agar .  Hal  ini diduga terjadi berkaitan dengan perbedaan nutrisi antara PDA dan Czapex Agar . Media PDA mengandung nutrisi yang kaya sehingga daya hambat dapat mencapai 100%. Hal ini sesuai dengan Achmad (1997) yang menyatakan bahwa  media  PDA  merupakan  media  terbaik  untuk menumbuhkan cendawan.
Tabel 1  Daya  hambat T.  harzianum dan Gliocladium sp.  terhadap  pertumbuhan Botryodiplodia sp. pada media PDA dan Czapex Agar pada uji in vitro setelah 5 hari perlakuan Agens hayati Media Rata-rata Penghambatan (%) T. harzianum PDA 99.2 a Czapex Agar 70.4 b Gliocladium sp. PDA 86.4 b Czapex Agar 63.0 b
Menurut  Widyastuti  dan  Sumardi . (1999),  bahwa kemampuan isolat
Trichoderma spp. dalam menghambat S.  rolfsii berbeda-beda.  Hal  ini  sangat dimungkinkan  terjadi  pada  kemampuan T.  harzianum dan Gliocladium sp.  dalam  menghambat  berbagai patogen memberikan hasil yang berbeda-beda. Pertumbuhan Botryodiplodia sp.  dan  cendawan  agens hayatinya  pada  media  PDA  memiliki  dinamika  yang teratur daripada media Czapex Agar . Alam et al. (2001) melaporkan  bahwa  kecepatan  pertumbuhan  radial miselium B.  theobromae menurun  seiring  dengan bertambahnya kadar glukosa pada media kultur.
Menurut  Baker  dan  Cook  (1974),  terdapat  tiga  pola antagonis  yaitu  kompetisi,  antibiosis,  dan  mikoparasit. Mekanisme  penghambatan  oleh T.  harzianum dan Gliocladium sp.  terhadap Botryodiplodia sp.  adalah kompetisi  dan  mikoparasit.  Hasil  uji  antagonis  antara agens  hayati  dan Botryodiplodia sp.  diduga  terdapat mekanisme kompetisi dan mikoparasit (Gambar 1).
Gambar 1   Mekanisme mikoparasit secara mikroskopik antara T.  harzianum (T)  dan Gliocladium sp.(G)  terhadap Botryodiplodia sp.(B)  di mana  pada  1  dan  2  terjadi  penetrasi  hifa patogen oleh agens hayati
Mekanisme kompetisi terjadi pada awal pertumbuhannya  dikarenakan T.  harzianum dan Gliocladium sp.  terhadap Botryodiplodia sp.  memiliki pertumbuhan  yang  sama  cepatnya.  Agens  hayati  dan patogen    memiliki  kecepatan  tumbuh  yang  sama  yaitu dalam  waktu  48-72  jam  mampu  memenuhi  cawan berdiameter  9  cm  pada  penelitian  pendahuluan.  Hal  ini sangat  memungkinkan  terjadinya  kompetisi.  Kompetisi juga  terjadi  pada  pola  penghambatan T.  harzianum dan Gliocladium sp.  terhadap Cylindrocladium sp.  (Amalia et  al. 2008).  Kompetisi  merupakan  mekanisme  yang terjadi  bila  terdapat  persaingan  mendapatkan  faktor tumbuh  baik  berupa  ruang  dan  nutrisi  antara  patogen dan agens hayati.
Mekanisme  mikoparasit  terjadi  apabila  cendawan mampu memproduksi enzim ektraselular untuk merusak dinding  sel  cendawan  lain  yang  kemudian  digunakan sebagai  sumber  makanan.  Agens  hayati T.  harzianum mempunyai  kemampuan  untuk  menghasilkan  enzim hidrolitik  β-1,3-glukanase,  kitinase,  dan  selulase. Enzim-enzim  inilah  yang  secara  aktif  merusak  sel-sel cendawan  lain  yang  sebagian  besar  tersusun  dari  1,3 glukan (linamirin) dan  kitin sehingga dengan  mudah T. harzianum dapat  melakukan  penetrasi  ke  dalam  hifa cendawan  inangnya  (Elad et  al. 1983).  Degradasi  kitin T.  harzianum dilakukan  secara  bertahap.  Hal  tersebut menunjukkan  dihasilkannya  kitinase  secara  terus- menerus  (Achmad  1997).  Hal  ini  terjadi  pula  pada antagonisme  antara Trichoderma  reesei terhadap
Fusarium sp.  (Harjono et  al. 2001), T.  reeseei dan T. harzianum terhadap R.  solani (Widyastuti  2007), Trichoderma spp.  terhadap S.  rolfsii pada  tusam (Widyastuti et al. 2003) dan Fusarium sp. pada cendana (Widyastuti  &  Hariani  2006 dalam Widyastuti  2007), Gliocladium sp.  terhadap Ganoderma  boninense (Hadiwiyono  1996)  dan Cylindrocladium sp.  penyebab penyakit  lodoh  pada  bibit Acacia  mangium Wild. (Anggraeni et  al. 2009)  dan Gliocladium  fimbriatum terhadap Marasmius  palmivorus Sharples  penyebab busuk  buah  tandan  kelapa  sawit  (Sitompul  2013)  serta T.  harzianum dan Gliocladium  virens terhadap Botryodiplodia theobromae dan Phytophthora citrophthora penyebab  busuk  pangkal  batang  jeruk (Retnosari  2011).  Selain  itu,  Gupta et  al. (1998) menyatakan bahwa sebagian besar mekanisme antagonis  terhadap B. theobromae oleh Trichoderma spp., Gliocladium sp.  dan Laetisaria sp.  adalah mikoparasit.
Mekanisme mikoparasit terlihat dari hasil pengamatan secara  mikroskopik. Hifa dari  kedua agens hayati  yaitu Gliocladium sp.  dan T.  harzianum mampu melakukan penetrasi ke dalam dinding sel Botryodiplodia sp. (Gambar 1). Mekanisme mikoparasit terjadi  pula  pada Botryodiplodia  theobromae penyebab penyakit  pada mulberry di  India.  Proses  mikoparasit diawali dari apresoria T. harzianum menempel pada hifa patogen  kemudian  terjadi  penetrasi  sehingga  hifa B. theobromae mengalami  kerusakan.  Mikoparasit  yang dilakukan  oleh Gliocladium virens menyebabkan  hifa B.theobromae kehilangan  turgor  dan  isi  sel  keluar (Gupta et al. 1999). Selain itu, Gliocladium sp. TNC73 yang  diisolasi  sebagai  agen  biokontrol  alami  dari  tanah supresif  terhadap  fitopatogen Phytophtora  capsici dan terisolasi berdasarkan kemampuannya untuk menghasilkan  kitinase.  Produksi  kitinase  diberikan Gliocladium sp.  TNC73  mampu  menjadi  mikoparasit patogen Fusarium sp. (Nugroho 2006). Bentuk lain dari mekanisme  mikoparasit  ditunjukkan  oleh  hifa T. harzianum (Elad et al. 1983) dan T. reeseei (Widyastuti 2007)  yang  mampu  membelit  dan  melubangi  hifa cendawan  inangnya.  Selain  itu,  kontak  pertama  dengan antagonis  mampu  menginduksi  enzim  endokitinase yang dihasilkan Trichoderma spp. (Carsolio 1994 dalam Widyastuti 2007).

## Antagonisme dengan metode tak langsung
Hasil  uji  antagonis  dengan  metode  tak  langsung menunjukkan bahwa filtrat T. harzianum dan Gliocladium sp.  memiliki  kemampuan  menghambat pertumbuhan Botryodiplodia sp.  sebesar    13.42%  dan 10.25%  pada  media  PDB.  Kemampuan  penghambatan ditentukan  dengan  pengukuran  bobot  kering  miselia Botryodiplodia sp.  antara  kontrol  dibandingkan  dengan bobot  kering  miselia  yang  diberikan  perlakuan penambahan  filtrat  agens  hayati.  Penghambatan  kedua agens  hayati  berbeda  nyata  terhadap  kontrol  sedangkan penghambatan  oleh  filtrat T.  harzianum lebih  tinggi dibandingkan Gliocladium sp.  walaupun  tidak  berbeda nyata.
Menurut Achmad (1997), daya hambat oleh filtrat T. harzianum pada  media  cair  ME  terhadap R.  solani dan F.  oxysporum berturut-turut  sebesar  86.87%  dan
60.87%.  Hal  ini  berbeda  dengan  hasil  penelitian  yang menunjukkan daya hambat filtrat T. harzianum terhadap Botryodiplodia sp. relatif kecil. Dengan demikian, dapat diduga  bahwa  nilai  penghambatan  oleh T.  harzianum akan  lebih  tinggi  bila  dilakukan  di  dalam  media  ME dibandingkan  bila  dilakukan  di  dalam  media  PDB. Kemungkinan  lain  yang  terjadi  yaitu  masa  inkubasi mempengaruhi  besarnya  metabolit  yang  dikeluarkan. Aktifitas  β-1,3-glukanase  yang  bersifat  antipatogen dipengaruhi  oleh  waktu  tetapi  tidak  berhubungan dengan  pertumbuhan  cendawan  itu  sendiri  (Widyastuti &  Budiarti  2005 dalam Widyastuti  2007).  Pengaruh metabolit  sekunder  akan  ternetralisir  bila  ditumbuhkan pada media PDA (Achmad 1997). Proses netralisir juga dimungkinkan  terjadi  pada  media  PDB,  yang  memiliki bahan dasar yang sama yaitu Potato Dextrose.
Tabel 2  Penghambatan  filtrat  biakan  cendawan  agens hayati terhadap pertumbuhan miselia cendawan patogen Perlakuan Rataan Bobot Miselia Kering (g) Penghambatan (%) Filtrat T. harzianum 0.177 13.42 a Filtrat Gliocladium sp. 0.184 10.25 a
Gambar 2  Miselia Botryodiplodia sp.  (Bo)  setelah  7 hari  inkubasi  Kontrol  (K),  penambahan filtrat Gliocladium sp.  (G),  penambahan filtrat T. harzianum (T)
Beberapa  mekanisme  biokontrol  telah  diidentifikasi pada  pengendalian  hayati,  yaitu  mikoparasitisme  yang melibatkan  enzim  pendegradasi  dinding  sel,  kompetisi nutrisi,  produksi  metabolit  sekunder  yang  bertindak sebagai  antibakteri  atau  antijamur,  dan  produksi metabolit  yang  dapat  menginduksi  ketahanan  tanaman (Shoresh et  al. 2010 dalam Widyastuti  2007). Pemodelan  dan  studi  penelitian  telah  menunjukkan bahwa  pengendalian  hayati  yang  efektif  harus  mampu melakukan lebih dari satu mekanisme biokontrol (Xu et al. 2011). Mekanisme mikoparasitisme pada Trichoderma spp.  belum  diketahui  secara  lengkap namun ekspresi enzim ekstraseluler pengurai dinding sel terbukti  memiliki  peranan  kunci  dalam  proses penghambatan  patogen.  Enzim  ekstraseluler  yang dikeluarkan  dapat  berupa  enzim-enzim  kitinase.  Hal tersebut  diperkuat  dengan  pernyataan  Achmad et  al. (1999)  bahwa T.  harzianum dan T.  pseudokoningii mampu  menekan  pertumbuhan R.  solani dan F. oxysporum melalui mekanisme mikoparasitisme dengan memproduksi  enzim  kitinase.  Menurut  Lewis  dan Papavizas  (1984), Trichoderma sp.  menghasilkan sejumlah besar enzim ekstraseluler β-1,3-glukonase dan kitinase  selama  tumbuh  aktif  yang  dapat  melarutkan dinding  sel  patogen. Trichoderma spp.  memiliki  enzim
endokitinase  yang  merupakan  tipe  enzim  kitinase  yang mempunyai  aktivitas  lisis  dan  antifungi  yang  tertinggi (Lorito et al. 1996 dalam Widyastuti 2007). Elad et al. (1982)  menyatakan  bahwa T.  harzianum dan T. hamatum mampu  menghasilkan  enzim  kitinase  dan  β- 1,3-glukanase yang sinergis dalam lisis dinding sel dari S.  rolfsii dan R.  solani sehingga  dapat  menghambat pertumbuhan kedua patogen tersebut.
Gliocladium sp.  merupakan  cendawan  saprofitik yang  dapat  berperan  sebagai  antagonis  efektif  untuk mengendalikan patogen tanaman, terutama patogen tular tanah.  Senyawa  metabolit  sekunder  yang  dihasilkan Gliocladium sp.  antara  lain  gliotoksin,  viridian,  dan paraquinon  yang  bersifat  fungitoksik.  Beberapa  hasil penelitian  menunjukkan  bahwa Trichoderma sp.  dan Gliocladium sp.  mampu  menghambat  pertumbuhan patogen  antara  lain Cylindrocladium sp.  (Amalia et  al. 2008)  dan Phytium sp.  (Octriana  2011).  Beberapa spesies Gliocladium juga  memproduksi  siklik  peptida dengan  sifat  antibakteri,  seperti  diketopiperazine (Koolen et  al. 2011).  Senyawa  lain  bersifat  antibiotik yang  dihasilkan  beberapa  spesies Gliocladium lainnya adalah  p-terphenyl  (Guo et  al. 2007)  dan  poliketida (Kohno et  al. 2000).  Antibiotik  yang  menghambat Erwinia  carotovora diproduksi  oleh  Gliocladium  sp. TNC73 lebih cenderung menjadi bentuk diketopiperazine  atau  bentuk  peptida  siklik  lainnya, terphenyl  atau  poliketida,  daripada  peptaibol  linier. Selain  itu, Gliocladium sp.  memproduksi  kitinase  dan menghasilkan  metabolit  sekunder  yang  memiliki  sifat antibakteri  terhadap  bakteri Bacillus  subtilis dan Staphylococcus aeureus . Eksplorasi kemampuan Gliocladium sp.  TNC73  untuk  pengendalian  penyakit tanaman yang disebabkan oleh bakteri dilakukan dengan mengekstrak etil asetat dari media fermentasi Gliocladium sp.  TNC73.  Ekstrak  tersebut  dianalisis kemampuannya untuk menghambat bakteri gram negatif E. carotovora yang menyebabkan penyakit busuk lunak pada tanaman pangan (Saputra et al. 2013).

## SIMPULAN
Agens  hayati T.  harzianum dan Gliocladium sp. pada  uji in  vitro mampu  menghambat  pertumbuhan patogen Botryodiplodia sp.  sebagai  penyebab  mati pucuk  pada  jabon  yaitu  sebesar  99.2%  dan  86.4% berturut-turut  pada  media  PDA.  Mekanisme  pengham- batan  yang  dilakukan  oleh  kedua  agens  hayati  diduga merupakan kompetisi dan mikoparasit.

## SARAN
Penelitian  ini  membuka  peluang  dalam  pengem- bangan  pengendalian  penyakit  mati  pucuk  oleh Botryodiplodia sp.  pada  jabon  secara  hayati.  Oleh karena  itu,  sebaiknya  diperkaya  dengan  penelitian selanjutnya berupa aplikasi T. harzianum dan Gliocladium sp.  pada  bibit  jabon  di  persemaian.
Aplikasi  tersebut  dapat  berupa  tindakan  pencegahan maupun pengendalian penyakit.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Beasiswa fresh-graduate Dikti  dan  Himpunan  Alumni  Fakultas Kehutanan  IPB  (HAE  IPB)  yang  telah  memberikan bantuan  dana  untuk  pelaksanaan  studi  penulis.  Selain itu, kepada  seluruh staf  Silvikultur  IPB  dan Laboratorium Patologi Hutan terutama kepada Ai Rosah Aisah    S.Hut,  MSi  yang  telah  membantu  kelancaran penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Achmad.  1997.  Mekanisme  serangan  patogen  dan ketahanan  inang  serta  pengendalian  hayati  penyakit lodoh  pada Pinus  merkusii [disertasi].  Bogor  (ID): Institut Pertanian Bogor.
Achmad,  Hadi,  S  Harran,  E  Gumbira  Sa’id,  B
Satiawiharja, MK Kardin. 2010. Aktivitas antagonisme in  vitro  Trichoderma  harzianum dan Trichoderma pseudokoningii terhadap patogen lodoh Pinus merkusii . J Penelitian Hut Tan . 7(5):233-240. Aisah  AR.  2014.  Identifikasi  dan  patogenisitas cendawan  penyebab  primer  penyakit  mati  pucuk pada  bibit  Jabon  ( Anthocephalus  cadamba (Roxb). Miq) [tesis]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor. Alam  MS,  Begum  MF,  Sarkar  MA,  Islam  MR.  2001.
Effect  of  temperature,  light  and  media  on  growth, sporulation,  formation  of  pigments  and  pycnidia  of Botryodiplodia theobromae Pat. Pakistan Journal of Biological Sciences . 4(10):1224-1227.
Amalia  R,  Herliyana  EN,  Anggraeni  I.  2008.  Potensi Trichoderma sp. dan Gliocladium sp. sebagai jamur antagonis  terhadap Cylindrocladium sp.  penyebab penyakit  lodoh  pada  persemaian  secara  in-vitro. J Penelitian Hut Tan . 5(1):63-74.
Anggraeni I, Wibowo A. 2009. Pengendalian Cylindrocladium sp.  penyebab  penyakit  lodoh  pada bibit Acacia  mangium wild.  dengan  fungi  antagonis Trichoderma sp.  dan Gliocladium sp.. J  Penelitian Hut Tan . 6 (4) : 241 – 249. Baker  KP,  Cook  RJ.  1974. Biological  Control  of  Plant Pathogens .  San  Fransisco  (US):  WH  Freeman  & Company.
Elad  Y,  Chet  I,  Boyle  P,  Henis  Y.  1983.  Parasitism  of Trichoderma spp.  on Rhizoctonia  Solani and Sclerotium rolfsii. Scanning electron microscopy and fluorescense microscopy. Phytopathol . 73:85-88. Fravel DR. 1988. Role of antibiosis in the biocontrol of diseases. Ann Rev Phytopathol . 26:75-81.
Guo  H,  Hu  H,  Liu  S,  Liu  X,  Zhou  Y,  Che  Y.  (2007).
Bioactive p-terphenyl derivatives from a Cordyceps - colonizing  isolate  of Gliocladium  sp .. J  Natural Products . 70:1519-1521.
Gupta  VP,  SK  Tewari,  Govindaiah,  AK  Bajpai.  1999. Ultrastructure  of  Mycoparasitism  of Trichoderma,
Gliocladium and Laetisaria species
on
Botryodiplodia  theobromae . Phytopathol (147):19- 24.
Hadiwiyono.  1996.  Pengendalian  hayati Ganoderma boninense Pat.  (Penyebab  busuk  pangkal  batang kelapa  sawit)  oleh Trichoderma , Gliocladium ,  dan Pseudomonas kelompok  fluoresen  [tesis].  Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Harjono,  SM  Widyastuti,  S  Margino.  2001.  Pemurnian dan  Karakteristik  Enzim  Endokitinase  dari  Agen Pengendali  Hayati Trichoderma  reeseei . J  Perlind Tan  Indonesia . 7(2):114-120.
Herusansono  W,  Wahono  T.  2011  Februari  10.  Kayu jabon jadi tanaman penghijauan [internet]. [diunduh:
2013 April 11]. Kompas . com . Tersedia pada:http://regional.kompas.com/read/2011/02/10/20 27540/Kayu.Jabon.Jadi.Tanaman.Penghijauan.
Kohno J, Nishio M, Kishi N, Okuda T,  Komatsubara S.
(2000).  Biosynthesis  of  the  fungal  polyketide antibiotics TMC-151s: origin of the carbon skeleton. J Antibiotics . 53:1301-1304.
Koolen HH, Soares ER, Silva FM, Souza AQ, Medeiros LS, Filho ER, Almeida RA, Ribeiro IA, Pessoa CO, Morais  MO,  Costa  PM,  Souza  AD.    (2011).  An antimicrobial  diketopiperazine  alkaloid  and  co- metabolits from an endophytic strain of Gliocladium isolated  from  Strychnos  of  cf.  toxifera. Natural Products Research . 26:2013-2019.
Krisnawati  H,  Kallio  M,  Kanninen  M.  2011. Anthocephalus  cadamba (Miq.) Ekologi,  Silvikultur, dan Produktivitas [internet]. [diunduh: 2011 Oktober 11].  Bogor  (ID):  Center  of  International  Forestry Research.
Tersedia pada: http://www.cifor.org/publications/pdf_files/Books/ Bkrisnawati1108.pdf.
Lewis  JA,  GC  Papavizas.  1984.  A  new  approach  to stimulate  population  proliperation  of Trichoderma sp.  and  other  potensial  biocontrol  fungi  introduced into natural soil. Phytopathol . 54:74-80.
Nugroho  T,  Jasril  Abdullah,  C  Saryono,  Tanzil  M,  dan Muzeliati (2006). Perbandingan dua metode ekstraksi antibiotik dari media fermentasi Gliocladium sp.  T.N.C73. J  Natur  Indonesia ,  9:16-
21.
Octriana  L.  2011.  Potensi  agen  hayati  dalam menghambat  pertumbuhan Phytium sp.  secara in vitro . Bul Plasma Nutfah . 17:2.
Purwantisari  S,  Hastuti  RB.  2009.  Uji  antagonisme jamur  patogen Phytophthora  infestans penyebab penyakit  busuk  daun  dan  umbi  tanaman  kentang dengan menggunakan Trichoderma spp. isolat lokal. Bioma . 11(1):24-32.
Rahman MA, Baksha MW, Ahmed FU. 1997. Diseases and  pests  of  tree  species  in  forest  nurseries  and plantations  in  Bangladesh  [internet].  Dhaka  (BD):
Bangladesh Agricultural Research Council. [diunduh: 2013 Januari 21]. Tersedia
pada:http://mapbangla.com/mapadmin/publications/ 163_040_Diseases%20%20and%20pests%20of%20t ree%20species%20in%20forest%20nurseries%20an d%20plantations%20%20in%20Bangladesh.pdf.
Retnosari E. 2011. Identifikasi penyebab busuk pangkal batang  jeruk  (Citrus  spp)  serta  uji  antagonisme in vitro dengan Trichoderma harzianum dan Gliocladium  virens  [skripsi].  Bogor  (ID):  Institut Pertanian Bogor.
Saputra H, Puspita F, Nugroho TT. 2013. Production of an  antibacterial  compound  against  the  plant pathogen Erwinia  carotovora subs. carotovora by the  biocontrol  strain Gliocladium  sp. T.N.C73. J
Agricult Technol . 9(5):1157-1165. Sitompul SK. 2013. Evaluasi Keefektifan Penghambatan Beberapa Agens Biokontrol terhadap Pertumbuhan Marasmius palmivorus Sharples [skripsi]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Widyastuti  SM,  Sumardi.  1999.  Trichoderma spp.  as decomposing  and  biological  control  agents  isolated from  dipterocarp  forest  in  Jambi .  Proc.  Of  the  Int. Sem.  On  Ecological  Approach  for  Productivity  and Sustainability  ogf  Dipterocarp  Forest.  Yogyakarta (ID). pp:58-60.
Widyastuti  SM,  Harjono,  Sumardi,  Yuniarti  D.  2003. Biological  control  of  Sclerotium  rolfsii  damping-off with  three  isolates  of  Trichoderma  spp.  OnLine J Biol Sc .3(1):95-102. Widyastuti  SM.  2007. Peran Trichoderma spp.  dalam Revitalisasi  Kehutanan  di  Indonesia .  Yogyakarta (ID): UGM Pr.
Xu  XM,  Jeffries  P,  Pautasso  M,  Jeger  MJ.  (2011).
Combined  use  of  biocontrol  agents  to  manage  plant diseases  in  theory  and  practice. Phytopathol 101:1024-1031.