Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Ketapang ( Terminalia catappa L.) dan Daun Jambu Biji ( Psidium guajava L.) terhadap Pertumbuhan Bakteri Aeromonas hydrophila
Yuni Sine a* Gergonius Fallo b
a Fakultas Sains dan Teknologi, Program Studi Biologi Universitas Timor, Kefamenanu, TTU- NTT, 85613, Indonesia email:yuni_sine@yahoo.com
b Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi Universitas Timor, Kefamenanu, TTU-NTT, 85613, Indonesia email:gergofallo@yahoo.com
Article Info Abstrak Article history: Tumbuhan  obat  semakin  banyak  digunakan  karena  relatif  lebih  aman  dibandingkan  dengan  obat-obatan  sintetik.  Tumbuhan  yang digunakan dalam penelitian ini adalah ketapang ( Terminalia catappa L.)  dan jambu biji ( Psidium guajava L.). Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas antibakteri dari ekstrak daun ketapang ( Terminalia catappa L.) dan daun jambu biji ( Psidium guajava L.)  terhadap  pertumbuhan  bakteri Aeromonas  hydrophila .  Bakteri A.hydrophila merupakan  penyebab  penyakit  motil  aeromonas septicemia    (MAS)  pada  ikan  air  tawar.  Pengukuran  aktivitas  antibakteri  dilakukan  selama  48  jam  dan  setiap  24  jam  dilakukan pengukuran.  Dari  pengujian  aktivitas  antibakteri  diketahui  konsentrasi  100%  merupakan  konsentrasi  terbaik  dalam  menghambat pertumbuhan bakteri A.hydrophila. Daun ketapang pada setiap konsentrasi yaitu 25%, 50%, 75%, dan 100% memiliki zona hambat yang lebih luas dari pada daun jambu biji. ©2016 dipublikasikan oleh Bio-Edu .
Keywords: daun ketapang, daun jambu biji, A.hydrophila, aktivitas antibakteri.

## 1. Pendahuluan
Tumbuhan  obat  merupakan  salah  satu  alternatif  dalam  proses penyembuhan  penyakit  ikan,  karena  relatif  lebih  aman  dibandingkan  dengan obata-obatan  sintetik,  Beberapa  keuntungan  menggunakan  tumbuhan  obat tradisional  antara  lain  relatif  lebih  aman,  mudah  diperoleh,  murah,  tidak menimbulkan  resistensi,  dan  relatif  tidak  berbahaya  terhadap  lingkungan sekitarnya.  Sejumlah  tumbuhan    mengandung  senyawa  yang  bersifat antimikroba,  ada  yang  bersifat  bakterisidal  (pembunuh  bakteri),  dan bakteriostatik (penghambat pertumbuhan bakteri).
Ketapang ( Terminalia catappa L.), merupakan tumbuhan yang berkhasiat sebagai  obat  alami  (Heyne,  1987),  dan  memiliki  senyawa  metabolit  sekunder yang  berpotensi  sebagai  antibakteri  (Rahayu,  dkk.,  2009).  Pada  penelitian Nuryati, dkk., (2005)  daun ketapang  menunjukkan aktivitas antifungi terhadap Aphanomyces sp.    Daun  ketapang  juga  mampu  menghambat  pertumbuhan jamur  (Harianto,  2010).  Tumbuhan  obat  lain  yang  sering  digunakan  adalah jambu  biji  ( Psidium  guajava L.).  Jambu  biji  sangat  sering  digunakan  untuk pengobatan  tradisional.  Daun  jambu  biji  mengandung  berbagai  senyawa kimia   aktif  diantaranya  flavonoid,  tri  terpenoid,  minyak  atsiri,  tanin,  beta sitosterol  dan  senyawa-senyawa  lainnya  (Duke,  2004 dalam Ojewole,  2006). Daun  jambu  biji  menurut  Purwiyatno  (2001) dalam Ajizah  (2004)  terbukti mampu menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus ,  karena  daun  jambu  biji  memiliki  metabolit  sekunder  yang  mampu menghambat pertumbuhan bakteri, selain itu daun jambu biji banyak digunakan untuk pengobatan tradisional seperti untuk menyembuhkan diare, disentri, obat maag,  masuk  angin,  sembelit,  sariawan,  penyakit  kulit  dan  obat  luka  baru. Jambu biji juga mengandung kandungan vitamin yang tinggi (Ajizah, 2004).
Bakteri Aeromonas  hydrophila secara  normal  ditemukan  dalam  air  tawar. Bakteri ini menyerang berbagai jenis ikan air tawar seperti lele dumbo, ( Clarias gariepinus ), ikan mas ( Cyprinus carpio ), gurami ( Osphronemus gouramy ) dan udang  galah  ( Macrobracium  rusenbergi )  dan  dapat  menimbulkan  wabah penyakit  dengan  tingkat  kematian  tinggi  (80-100%)  dalam  waktu  1-2  minggu (Anonim,  2010 2 ).  Usaha  pengendalian  penyakit  dengan  menggunakan  bahan kimia dan antibiotik telah lama dipakai oleh pembudi daya ikan. Namun dengan cara  ini  telah  banyak  menimbulkan  masalah  diantaranya  berupa  pencemaran lingkungan,  timbulnya  organisme  yang  resisten terhadap bahan-bahan  tersebut serta  timbulnya  residu  pada  produk  perikanan.  Penyakit  yang  disebabkan bakteri A.hydrophila dapat  diobati  dengan  menggunakan  obat  kimiawi  atau antibiotik  tertentu  seperti novobiocin , oxolinicacid , streptomycin dan chloramphenicol .  Penelitian  ini  ingin  menegetahui  potensi  dari  ekstrak  daun ketapang  ( Terminalia  catappa L.)  dan  daun  jambu  biji  ( Psidium  guajava L.) dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri Aeromonas  hydrophila dan  melihat perbandingan  aktivitas  antibakteri  antara  ekstrak  daun  ketapang  ( Terminalia catappa L.)  dan  daun  jambu  biji  ( Psidium  guajava L.)  dalam  menghambat pertumbuhan bakteri Aeromonas hydrophila .
2. Metode
2.1 Waktu dan Tempat
Penelitian  dilaksanakan  bulan  April  sampai  Agustus  2012  Penelitian  ini dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi Stasiun Karantina Ikan Kelas I El Tari Kupang 2.2 Rancangan Percobaan Penelitian  ini  termasuk  penelitian  eksperimental  dengan  menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) pola faktorial yang terdiri atas 2 perlakuan, 3 kali ulangan dan 1 kontrol negatif dan 1 kontrol positif.
A=  Jenis Ekstrak, a1 =  Ketapang, a2 =  Jambu Biji B  =  Konsentrasi, b0 =  0 %, b1 =  25 %, b2 =  50 %, b3 =  75 %, b4 =  100 %
2.3 Pelaksanaan Penelitian
a. Pembuatan Ekstrak Daun Ketapang dan Daun Jambu Biji
Ekstrak  daun  ketapang  dan  daun  jambu  biji  dibuat  dengan  menggunakan metode  maserasi.  Maserasi  adalah  proses  pengekstrasian  simplisia  dengan menggunakan  pelarut  dengan  beberapa  kali  pengocokan  pada  temperatur ruangan  (kamar).  Sampel  biasanya  direndam  selama  3-5  hari,  sambil  diaduk sesekali  untuk  mempercepat  proses  pelarutan  komponen  kimia  yang  terdapat dalam sampel (Pereira. et ., al ., 2000).
b. Tahap  Persiapan Bakteri Uji Aeromonas hydrophila
Tahap pengenceran bakteri uji Aeromonas hydrophila : Menyiapkan biakan murni  bakteri Aeromonas  hydrophila, biakan  bakteri Aeromonas  hydrophila , diinokulasi  pada  media  GSP  5  ml,  kemudian  diinkubasi  selama  24  jam. Membuat  seri  pengenceran  10 -1 -10 -4 caranya,  sebagai  berikut:  Biakan Aeromonas hydrophila diencerkan  sebanyak delapan  kali.  Untuk  mendapatkan pengenceran  10 -1 di  lakukan  dengan  cara  mengambil Aeromonas  hydrophila dalam  media  GSP  sebanyak  1  ose,  dimasukkan  dalam  NaCl  9  mL  kemudian dikocok  sampai  homogen.  Kemudian  untuk  mendapatkan  pengenceran  10 -2 , mengambil  1  mL  larutan  pengenceran  10 -1 lalu  dimasukkan  ke  dalama  NaCl kuades 9 mL kemudian dikocok sampai homogen. Untuk pengenceran 10 -3 -10 -4 akan  dilakukan  seperti  10 -1 dan  10 -2 ,  yang  di  ambil  adalah  serial  pengenceran keempat.
c. Uji  Daya  Hambat  Ekstrak  Daun  Ketapang  ( Terminalia  catappa L)  dan Daun  Jambu  Biji  ( Psidium  guajava L.)  terhadap  Bakteri Aeromonas hydrophila menggunakan  Antibiotic  Disk  dengan  Metode  Kirby-Bauer yang telah dimodifikasi.
Prosedur  Kerja  : Antibiotic  disk steril  direndam  dalam  masing-masing ekstrak (daun ketapang dan daun jambu biji) dengan konsentrasi 0%, 25%, 50%, 75%  dan  100%,    Selama  30  menit.  Inokulasi  bakteri Aeromonas  hydrophila pada  media  GSP  dan  TSA,  dengan  cara  mengambil  0,1  ml  biakan  bakteri A. hydrophila yang  telah  diencerkan  dan  dimasukkan  ke  dalam  petridish  dengan teknik spread  plate diatas  permukaan  media  GSP  dan  TSA  dengan menggunakan drigalsky .  Menempelkan antibiotic  disk yang  telah  direndam dalam masing-masing ekstrak pada media GSP dan TSA. Kemudian diinkubasi selama 24-48 jam pada suhu 37 0 C. Mengamati ada tidaknya zona bening yang terbentuk  disekitar Antibiotic  disk .  Kemudian  mengukur  diameter  di  zona bening    yang  terbentuk  akibat  aktivitas  penghambatan  oleh  masing-masing ekstrak (daun ketapang dan daun jambu biji).
d. Analisis Data
Teknik  analisa  data  yang  digunakan  untuk  mengetahui  besarnya  zona hambat  dilakukan  secara  deskriptif.  Sedangkan  untuk  menghitung  pengaruh perbedaan  konsentrasi  dianalisis  menggunakan  menggunakan  analisis  sidik ragam  (ANOVA),  jika  terdapat  perbedaan  dilanjutkan  dengan  uji  DMRT ( duncan’s multiple range test ) dengan menggunakan program MINITAB.
3. Hasil dan Pembahasan
3.1 Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Ketapang ( Terminalia catappa L.) dan Daun  Jambu  Biji  ( Psidium  guajava L.)  terhadap  Bakteri Aeromonas hydrophila
Zona  hambatan  yang  terbentuk  merupakan  ukuran  kekuatan  suatu  zat antimikroba terhadap bakteri uji.  Hambatan di  sekitar cakram tergantung pada daya serap bahan aktif yang dipergunakan. Apabila zat antimikroba itu bersifat menghambat atau membunuh, maka pertumbuhan bakteri tersebut akan terhenti didaerah  sekitar  cakram  disk,  hal  ini  terlihat  lingkaran  bening  yang  tidak ditumbuhi  oleh  bakteri  setelah  diinkubasi  selama  24-48  jam,  lingkaran  bening ini menunjukkan aktivitas bakterisidal.
Menurut  Jawet et.,  al. ,  (1976) dalam Haryadi  (2012),  jika  suatu  zat antibakteri hanya  bersifat bakteriostatik atau hanya mampu menghambat maka ketika diinkubasi lebih lama maka bakteri mempunyai kesempatan untuk terus
bertumbuh  secara  perlahan  atau  antibakteri  bakteriostatik  bekerja  dengan  cara menghambat  perbanyakan  populasi  bakteri  dan  tidak  mematikan,  namun  jika zat  yang  terkandung  didalamnya  bersifat  bakterisidal  atau  membunuh  bakteri maka  pertumbuhan  bakteri  akan  terhenti.  Beberapa  antibakteri  yang  bersifat bakteriostatik  dapat  berubah  menjadi  bakterisidal  jika  digunakan  dengan konsentrasi  tinggi  dan  diinkubasi  lebih  lama.  pada  umunnya  tumbuhan  obat memiliki kedua sifat ini (Darwis, 1992 dalam Haryadi, 2012)
3.2 Aktivitas antibakteri pada waktu inkubasi 24 jam
Setelah  diinkubasi  selama  24  jam  dan  diamati  terdapat  zona hambat    yaitu  zona  dimana  bakteri  tidak  tumbuh  pada  sekitar  disk  akibat pengaruh  dari  antibiotik  atau  sebagai  akibat  dari  aktivitas  antibakteri  kedua ekstrak, namum tidak menutup kemungkinan bahwa bakteri akan tetap tumbuh secara perlahan.  Hasil pengukuran aktivitas antibakteri  dari kedua ekstrak dan kontrol positif   yang diinkubasi selama 24 jam dapat  dilihat pada tabel 1 .
Tabel 1 . Aktivitas antibakteri ekstrak daun ketapang dan daun  jambu biji pada
waktu inkubasi 24 jam Ekstrak Ulangan Zona hambat waktu inkubasi 24 jam (mm) Novobiosin Konsentrasi 0% 25% 50% 75% 100% Ketapang 1 15,25 0,00 11,25 15,00 18,38 20,50 2 16,00 0,00 12,00 15,38 16,25 19,38 3 15,87 0,00 11,25 14,38 15,88 18,50 Rerata 15,71 0,00 11,5a 14,92a 16,83a 19,46a jambu biji 1 16,12 0,00 11,63 13,13 15,50 16,75 2 15,25 0,00 10,38 13,00 14,50 16,00 3 16,62 0,00 10,38 12,5 13,25 18,63 Rerata 16,00 0,00 10,79a 12,88a 14,42a 17,13a
Hasil  pengukuran  aktivitas  antibakteri  masing-masing  ekstrak pada tabel 1 menunjukkan bahwa pada konsentrasi 25%  kedua ekstrak mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri A.hydrophila .  Kontrol  negatif  (0%)  tidak terbentuk  zona  bening  hal  ini  disebabkan  karena  pada  kontrol  negatif  tidak terdapat  zat  antibakteri  dari  kedua  ekstrak.  Sedangkan  pada  kontrol  positif antibiotik novobiosin bersifat bakterisidal, hal ini yang membedakan cara kerja dari  antibiotik  kimia  dan  antibiotik  alami  (kedua  tumbuhan  yang  digunakan). Aktivitas  penghambatan  pada  waktu  24  jam  pertama  semakin  meningkat sejalan  dengan  meningkatnya  konsentrasi  hingga  konsentrasi  100%.  Kontrol positif  yang  dibandingkan  dengan  ekstrak  daun  ketapang  menghasilkan  zona bening    seluas  15,71  mm  dan  dibandingkan  dengan  ekstrak  daun  jambu  biji menghasilkan diameter seluas 16 mm. Kontrol positif  bersifat  bakterisidal atau membunuh  bakteri  sehingga  disebut  dengan    zona  radikal  yaitu  zona  dimana disekitar disk tidak ditemukan pertumbuhan bakteri.
Konsentrasi 100% pada ekstrak daun ketapang menunjukkan zona hambat  paling  optimal  dibandingkan  dengan  konsentrasi  100%    ekstrak  daun jambu  biji.  Hal  yang  sama  terjadi  pada  konsentrasi  75%,  50%,  dan  25%  pada kedua  ekstrak,  dimana  daun  ketapang  memiliki  zona  hambat  lebih  besar dibandingkan dengan daun jambu biji, hal ini yang membedakan efektifitas dari kedua ekstrak.  Hal ini seperti yang dinyatakan oleh Kim et ., al ., (1995) dalam Harianto  (2010)  mekanisme  antimikroba  minyak  atsiri  dan  fenolik  lainnya dalam  daun  ketapang  adalah  mengganggu  lapisan  fosfolipid  dari  membran  sel yang  menyebabkan  peningkatan  permeabilitas    dan  kehilangan  unsur  pokok yang  menyusun  sel.  Reaksi  antar  komponen  membran  fosfolipid  dengan minyak  atsiri  atau  senyawa  fenolik  dalam  tanaman  obat  mengakibatkan perubahan komposisi asam lemak dan fosfolipid membran, yang diikuti dengan pembengkakan  sel.  Adanya  pembesaran  bahan  yang  terkandung  dalam  sel menunjukkan  pertahanan  permeabilitas  lemah  atau  rusak,  yang  selanjutnya menurunkan  ATP  sel.  Tanin  pada  jambu  biji  mampu  menghambat  sintesis protein bakteri. Pelczar dan Chan (1988) dalam Ajizah (2004) juga menyatakan, bahwa  cara  kerja  zat  antibakteri  dalam  menghambat  bakteri  dipengaruhi  oleh konsentrasi  zat  antibakteri.  Untuk  kontrol  positif,  yaitu  novobiosin  terjadi aktivitas  antibakteri,  dan  terlihat  zona  bening  yang  terbentuk  didaerah  sekitar cakram.  Antibiotik  novobiosin  pada  24  jam  pertama  bersifat  bakterisidal, dimana  antibiotik  kimia  ini  mampu  membunuh  bakteri A.hydrophila dalam waktu    24  jam.  Waluyo  (2011)  menyatakan  bahwa  antibiotik  ini  mampu menghambat sintesis asam nukleat dari bakteri. Sedangkan untuk kedua ekstrak pada  24  jam  pertama  keduanya  sama-sama  bersifat  bakteriostatik,  atau  hanya mampu  menghambat  dan  belum  mampu  membunuh  bakteri A.hyrophila . Menurut Fazlolahzadeh (2011) dalam Haryadi (2012), tumbuhan obat memiliki efek  imunostimulan  yang  dapat  berfungsi  sebagai  sistem  imun,  juga  akan meningkatkan  aktivitas  bakterisidal.  Uji    analisis  varians  pada  F  (0.01) diperoleh  hasil  bahwa  perbedaan  konsentrasi  ekstrak  daun  ketapang  dan  daun jambu biji berpengaruh sangat nyata. Perbedaan konsentrasi pada setiap ekstrak berpengaruh  sangat  nyata  hal  ini  dapat  disebabkan  karena  setiap  konsentrasi memiliki  dosis  yang  berbeda-beda.    Sedangkan  interaksi  antara  ekstrak  daun ketapang dan konsentrasi berpengaruh tidak nyata atau non signifikan pada uji F  (0.05)  hal  ini  juga  terjadi  pada  ekstrak  daun  jambu  biji  dan  konsentrasi.
Sehingga  hasil  uji  lanjut  dengan  uji  DMRT  interaksi  antara  ekstrak  dan konsentrasi berbeda tidak nyata.
Gambar 1 . Penghambatan bakteri waktu inkubasi 24 jam
Gambar  1 merupakan  grafik  yang  menunjukkan  penghambatan kedua  ekstrak  terhadap  bakteri A.hydrophila .  Pada  konsentrasi  terbentuknya zona  hambat  dan  yang  paling  efektif  adalah  konsentrasi  100%  ekstrak  daun ketapang  dengan  zona  hambat  19,46  mm,  sesuai  dengan  klasifikasi  respon hambatan (Greenwood, 1995) respon yang dihasilkan adalah sedang mendekati respon yang kuat. Sedangkan untuk jambu biji konsentrasi 100% menghasilkan respon  yang  sedang  yaitu  17,13  mm.  Konsentrasi  75%  ekstrak  daun  ketapang menunjukkan  respon  sedang,  untuk konsentrasi 75% pada  ekstrak  daun jambu biji  menunjukkan  respon  yang  lemah  yaitu  14,42  mm.  Konsentrasi  50%  pada ekstrak  ketapang  14,92  mm  dan  jambu  biji  12,88  mm  menunjukkan  respon yang  lemah.  Sedangkan  untuk  konsentrasi  25%    pada  daun  ketapang menunjukkan  respon  lemah  yaitu  11,50  mm.  Sedangkan    ekstrak    jambu  biji pada konsentrasi 25%  menunjukkan respon relatif lebih lemah yaitu 10,79 mm. Dikatakan tidak ada respon jika zona hambat atau bening  yang dihasilkan  ≤ 10 mm, semua konsentrasi menunjukkan respon  ≥ 10 mm.
Ekstrak  daun  ketapang  dan  daun  jambu  biji  dapat  menghambat (bakteriostatik)  terhadap    pertumbuhan  bakteri A.hydrophila ketika  diinkubasi pada  waktu  24  jam,  dikarenakan  kedua  tumbuhan  ini  memiliki  senyawa metabolit  sekunder  yang  terdeteksi  sebagai  antibakteri.  Seperti  senyawa fenolik,  tannin,  terpen  dan  steroid,  flavonoid  serta  alkaloid  pada  ketapang. Sedangkan  pada  jambu  biji  terdeteksi  senyawa  metabolit  sekunder  seperti senyawa  fenolik,  tannin,  terpen  dan  steroid,  flavonoid,  alkaloid,  dan  saponin, yang  mampu merusak  diding  sel  bakteri,  merusak  komponen  sel  bakteri  (Kim et ., al .,  1995 dalam Harianto,  2010).  Ekstrak  daun  ketapang  dan  daun  jambu biji  sama-sama  efektif  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri A.hydrophila , namun  ekstrak  daun  ketapang  diduga  lebih  efektif    menghambat  pertumbuhan A.hydrophila .

## 3.3 Aktivitas antibakteri pada waktu inkubasi 48 jam
Proses  inkubasi dilanjutkan  hingga  48  jam,  Darwis  (1992) dalam Haryadi  (2012)  menyatakan  bahwa  aktivitas  antibakteri  dapat  meningkat  jika faktor  lingkungan  mendukung  (suhu,  kondisi  fisik  kimia  bakteri,  konsentrasi zat  dan  lain  sebagainya).  Ekstrak  daun  ketapang  dan  daun  jambu  biji  diduga bersifat  bakterisidal  (membunuh)  terhadap  bakteri A.hydrophila ketika diinkubasi selama 48 jam. Hal ini terlihat dari zona baru yang terbentuk ulang di daerah cakram disk.  Dimana pada zona baru yang terbentuk ini menyerupai zona bening yang terbentuk pada antibiotik novobiosin. Menurut  Jawet et., al. , (1976) dalam Haryadi  (2012) beberapa antibakteri  yang  bersifat  bakteriostatik dapat  berubah  menjadi  bakterisidal  jika  digunakan  dengan  konsentrasi  tinggi dan diinkubasi lebih lama.  Hasil pengukuran aktivitas antibakteri yang diukur pada  waktu inkubasi  48 jam  menunjukkan hasil  yang  cenderung  menurun,  hal ini  karena  yang  diukur  hanya  pada  zona  baru  yang  terbentuk.    Pada  zona  ini bakteri  tidak  tumbuh  dan  bakteri  tetap  akan  dimatikan,  hal  ini  sesuai  dengan Suwandi  (1992)  yang  menyatakan  bahwa  zona  bening  merupakan  daerah disekitar  disk  yang  mengadung  senyawa  yang  berpotensi  sebagai  antibiotik, dimana  pertumbuhan  bakteri  dihambat  oleh  disk  antibiotik  tetapi  tetap mematikan
Umumnya diameter zona hambat cenderung meningkat sebanding dengan meningkatnya konsentrasi ekstrak. Dari tabel hasil pengukuran aktivitas antibakteri  kedua  ekstrak  pada  waktu  48  jam,  diameternya  berkurang  untuk ekstrak  daun  ketapang,  bahkan  pada  konsentrasi  100%  terjadi  penurunan diameter zona hambat. Hal ini dapat terjadi karena pada 24 jam pertama ekstrak ini hanya menghambat sehingga bakteri masih dapat bertumbuh kearah cakram disk  secara perlahan, namun  ekstrak ini diduga  sudah  bersifat bakterisidal  dan mulai  mampu  membunuh  bakteri  saat  diinkubasi  selama  48  jam  dan pengukuran  zona  hambatnya  menurun  karena  yang  diukur  adalah  zona  baru yang  terbentuk  pada  daerah  sekitar  cakran  disk  dan  merupakan  daerah bakterisidal.  Hal  ini  karena  senyawa  aktif  yang  terkandung  didalam  ekstrak yang kompleks berupa fenolik, tanin, terpen dan steroid, saponin, flavonoid dan alkaloid  yang  mampu  membunuh  bakteri  ketika  diinkubasi  lebih  lama.  Pada konsentrasi  0%  setelah  diinkubasi  selama  48  jam  tidak  ada  zona  bening  yang terbentuk.  Pada  kontrol  positif antibiotik novobiosin  setelah diinkubasi  selama 48  jam  tetap  mampu  membunuh  bakteri A.hydrophila .  .  Hasil  pengukuran aktivitas antibakteri kedua ekstrak pada waktu 48 jam dapat dilihat pada tabel 2.
0 5 10 15 20 25 25 50 75 100 P en g h a m ba ta n ( m m ) Konsentrasi (%) ekstrak daun ketapang ekstrak daun jambu biji
Tabel 2 . Aktivitas antibakteri ekstrak daun ketapang dan daun jambu biji waktu inkubasi 48 jam
Ekstrak Ulangan Zona hambat waktu 48 jam (mm) Novobiosin Konsentrasi 0% 25% 50% 75% 100% Ketapang 1 15,37 0,00 11,88 15,00 18,50 16,50 2 15,87 0,00 11,38 15,25 17,25 16,75 3 15,62 0,00 11,63 13,75 15,75 15,75 Rerata 15,62 0,00 11,63a  14,67a  17,17a 16,33a Jambu biji 1 16,00 0,00 12,13 14,50 14,63 14,88 2 15,25 0,00 10,88 12,38 15,13 17,88 3 14,37 0,00 11,00 11,88 14,50 14,38 Rerata 15,21 0,00 11,33a  12,92a  14,75a 15,71a
Hasil  analisis  varians untuk  waktu  inkubasi 48 jam  menunjukkan bahwa  pada  F  (0.01)  perlakuan  antara  jenis  ekstrak  daun  ketapang  dan konsentrasi  berpengaruh sangat nyata, demikian juga pada ekstrak daun jambu biji dan konsentrasi. Sedangkan interaksi ekstrak dan konsentrasi pada F (0.05) berpengaruh tidak nyata. Pengaruh konsentrasi terhadap aktivitas penghambatan bakteri waktu  inkubasi 48 jam dapat dilihat pada tabel 2.
Tumbuh  atau  tidaknya  bakteri  pada  setiap  konsentrasi  dapat disebabkan karena pada setiap konsentrasi mengandung kadar antibakteri yang berbeda.    Gambar  2  menunjukkan  penghambatan  kedua  ekstrak  terhadap bakteri A.hydrophila .
Gambar  2. Penghambatan bakteri waktu 48 jam
Waktu    inkubasi  selama  48  jam  menunjukkan  bahwa  konsentrasi 75%  ekstrak  daun  ketapang  merupakan  konsentrasi  dengan  respon  diameter zona hambat sedang yaitu 17,17 mm, konsentrasi 100% ekstrak daun ketapang juga  memberikan  respon  sedang  yaitu  16,33  mm.  Ekstrak  daun  jambu  biji dengan konsentrasi 100%  menghasilkan  respon  lemah  mendekati  sedang yaitu 15,71%.  Sedangkan  untuk  konsentrasi  75%  ekstrak  daun  jambu  biji menghasilkan respon lemah yaitu 14,75%, untuk konsentrasi 50% dan 25% dari kedua  ekstrak  sama-sama  menghasilkan  respon  lemah.  Dari  penjelasan  ini dapat  disimpulkan  bahwa  setelah  diinkubasi  selama  48  jam  ekstrak  daun ketapang  merupakan  yang  paling  efektif  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri A.hydrophila pada  konsentrasi  75%  dan  100%  dan  diduga  bersifat bakterisidal.  Sedangkan  untuk  jambu  biji  konsentrasi  terbaik  adalah  100%. Perbedaan  zona  yang  terjadi  pada  setiap  konsentrasi  menunjukkan  bahwa semakin tinggi  konsentrasi  ekstrak daun ketapang  dan  daun jambu biji  waktu zona hambat atau zona bening yang terbentuk akan semakin  luas.
Aktivitas  antibakteri  dari  kedua  ekstrak  dapat  terjadi  karena senyawa  kimia  yang  terkadung  didalam  kedua  tumbuhan  obat  tersebut,  yaitu fenolik,  tannin,    terpen  dan  steroid,  saponin,  flavonoid,  alkaloid  dan  minyak atsiri. Senyawa flavonoid yang terkadung dalam daun   ketapang dan jambu biji bekerja  sebagai  antibakteri  karena  dapat  mendenaturasi  dan  mengkoagulasi protein  sel  bakteri  sehingga  sel  bakteri  mati.  Selain  itu  Evans  (1989) berpendapat  bahwa  zat  antibakteri  pada  flavonoid  bekerja  dengan  cara menghambat  pertumbuhan  bakteri  dengan  cara  merusak  dinding  sel  dan membran  sitoplasma,  mencegah  pembelahan  bakteri  sehingga  bakteri  tidak dapat berkembang biak.
Menurut  Robinson  (1991)    Selain  flavonoid,  senyawa  yang berkhasiat  sebagai  antibakteri  yang  dikandung  daun  ketapang  dan  jambu  biji adalah  tanin.  Tuti  (1997)  mengatakan  bahwa  tanin  merupakan  salah  satu antimikroba  yang  berasal  dari  tumbuhan  dan  bekerja  dengan  cara  membentuk ikatan  yang  stabil  dengan  protein,  sehingga  terjadi  koagulasi  protoplasma bakteri dan membentuk senyawa kompleks terhadap protein ekstraseluler yang mengganggu integritas membran sel bakteri.
Ajizah  (2004),  menyatakan  bahwa  antibakteri  tanin  dapat membunuh pertumbuhan bakteri karena tanin mempunyai daya toksisitas. Daya toksisitas  tanin  akan  mengerutkan  membran  sel  bakteri  yang  menyebabkan membran sitoplasma mengerut sehingga mengakibatkan perubahan permeabilitas  sel.  Pada  sel,  Membran  sitoplasma  merupakan  tempat  keluar masuknya  makanan  dan  memelihara  integritas  komponen-komponen  sel, sehingga  apabila  membran  sel  bakteri  rusak  akibatnya  bakteri  akan  mati
(Berghe,  1991);  hal  ini  sesuai  dengan  Ewing    and  Edward  (1973)  yang berpendapat  bahwa  tanin  berdaya  antibakteri  dengan  cara  mempresipitasi protein.
Kandungan  alkaloid  juga  memberikan  kontribusi  yang  besar dalam  menghambat  dan  membunuh  bakteri A.hydrophila .  Wibowo  (1989) dalam Haryadi,  (2012)  mengemukakan  bahwa  alkaloid  bekerja  sebagai antibakteri  dengan  cara  merusak  komponen  penyusun  peptidoglikan  pada  sel bakteri,  sehingga  lapisan  dinding  sel  tidak  terbentuk  secara  utuh  dan menyebabkan  kematian  sel.  Daun  ketapang  memiliki  senyawa  aktif  yaitu minyak  atsiri  dimana  atsiri  ini  merupakan  zat  aktif  yang  dapat  membunuh bakteri  dan  dapat  membersihkan  darah  dari  racun-racun  yang  diproduksi  oleh bakteri A.hydrophila .
Ekstrak daun ketapang dan jambu biji memiliki kandungan kimia yang  efektif  sebagai  antibakteri,  keduanya  bersifat  bakteriostatik    dan  diduga bersifat  bakterisidal.  Kedua  ekstrak  ini  mampu  menghambat  pertumbuhan bakteri A.hydrophila pada  konsentrasi  25%.  Konsentrasi  terbaik  dari  kedua ekstrak adalah 100%, ekstrak daun ketapang menunjukkan aktivitas antibakteri yang lebih tinggi dari ekstrak daun jambu biji pada setiap konsentrasinya baik pada waktu inkubasi 24 jam, 48 jam dan 72 jam. Sehingga daun ketapang lebih efektif dalam menghambat pertumbuhan bakteri A.hydrophila jika dibandingkan dengan daun jambu biji,  yang menghasilkan aktivitas antibakteri yang  lebih  rendah  untuk  setiap  konsentrasi  baik  pada  waktu  inkubasi  24  jam dan    48  jam  sesuai  dengan  hasil  pengukuran  yang  dilakukan  dalam  penelitian ini.

## 4. Simpulan
Dari  hasil  dan  pembahasan  yang  dilakukan,  maka  dapat  disimpulkan sebagai  berikut  :  Ekstrak  daun  ketapang  ( Terminalia  catappa L.)  dan  daun jambu  biji  ( Psidium  guajava L.)  berpotensi  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri Aeromonas hydrophila. Ekstrak daun ketapang ( Terminalia catappa L.) diduga  lebih  efektif  dalam  menghambat    pertumbuhan  bakteri Aeromonas hydrophila pada konsentrasi 75% pada waktu 48 jam yaitu 17,17 mm, dan 100% pada waktu 24 jam yaitu 19,46 mm. Dibandingkan  dengan ekstrak daun jambu biji  ( Psidium guajava L.)  pada konsentrasi 100% tertinggi  pada  waktu 24 jam yaitu  yaitu  17,13  mm  bersifat  bakteriostatik  sedangkan  pada  waktu  48  jam 15,71 mm diduga bersifat bakterisidal.

## Pustaka
Anonim. 2010 2 . Laporan Pemantauan Hama Penyakit Ikan dan Hama Penyakit Ikan Karantina . Stasiun Ikan Kelas I El Tari. Badan Karantina Ikan, Pengendalian  Mutu  dan  Keamanan  Hasil  Perikanan.  Kementerian Kelautan dan Perikanan. Kupang.
Austin, B and D.A. Austin. 1993. Bacterial Fish Pathogens. Disease in Farmed and Wild Fish .Second Edition. Ellis Horwood. New York. Berghe,  V.  1991. Screening  Methods  For  Bacterial  Antiviral  Agents  For Higher Plants . Hercource Brace Jauvanovich Publ. London. Bhuvaneswari,  R.  And  Balasundaram,  C.  2006 .  Traditional  Indian  Herbal Extracts  Used  In  Vitro  Against  Growth  of  the  Pathogenic  Bacteria Aeromonas  hydrophila. The  Israeli  Journal  of  Aquaculture  – Bamidgeh 58 (2) 89-96.
Bima, F. 2009. Aeromonas hydrophila In Fish and In Humans . Universitas Brawijaya Malang. (dikunjungi 12 agustus 2011).
Boyd,  R.F.  1995. Basic  Medical  Microbiology .  Five  edition.  Litle  Brown  and Company (Inc), Boston.
Chandra, F. 2010. Potensi Jambu biji ( Psidium guajava L) Sebagai Tanaman Obat.Universitas Ahmad Dahlan. Yogyakarta. (dikunjungi 12 desember 2011).
Cipriano, R.C. 2001. Aeromonad hydrophila and Motile aeromonad Septicemia as of fish . US Department of Interior. Dana,  D.  Dan  S.L.  Angka.  1990. Masalah  penyakit  parasit  dan  bakteri  pada ikan  air  tawar  serta      cara  penanggulangannya .  Hal.:  10  –  23. Prosiding  Seminar  Nasional  II  penyakit  Ikan  dan  Udang.  Balai Penelitian Perikanan Air Tawar. Bogor. 227 hal.
Erwiyani,  A.  R.  2009. Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  buah  Ceremai (Phyllanthus  acidus  (L.)  Skeels)  terhadap  Staphylococcus  aureus dan  Escherichia  coli  dan  Bioautografinya .  Skripsi.    Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. Surakarta.
Evans, W.C. 1989. Trease and Evans Pharmacognosy Basic of Therapeutics . 4 th ed. W.B. Sanders. Bailliere Tindal. London .420 P. Ewing, H.W. and P.R.Edward, 1973. Identification of Enterobactericeae By Biochemichal Reaction . Burgess Publishing Co. Mineapolis. 61- 89 P.
Gazperz, V. 1995. Teknik Analisis Dalam Penelitian percobaan jilid 1 . Tarsito. Bandung.
Greenwood.  1995. Antibiotics,  Susceptibility  (Sensitivity)  Test  Antimicrobial and Chemoterapy . Mc. Graw Hill Company, USA.
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 25 50 75 100 P en g h a m ba ta n ( m m ) Konsentrasi (%) ekstrak daun ketapang
ekstrak daun jambu biji
Hardiko, R. S. 2004. Aktivitas Antimikroba Ekstrak Etanol, Ekstrak Air Daun yang Dipetik dan Daun Gugur Pohon Ketapang ( Terminalia catappa L.). Acta Pharm. Indon., 22(4), 129-133.(30 juli 2011). Harianto,  G.  R.  2010. Pengaruh  Pemberian  Ekstrak  Daun  Ketapang ( Terminalia  catappa L.) dan  Ketokonazol  2%  Terhadap Pertumbuhan  Candida  albicans  Secara  In  Vitro  Pada  Kandidiasis vulvovaginalis .Universitas  diponegoro.  Semarang  (dikunjungi  pada 12 november 2011). Haryadi,  L.  2012. Analisis  Efektifitas  Daun  Sirih ( Piper  bettle L.) dan  Daun Jarak  Pagar ( Jatropha  curcas L.) dan  kombinasi  dalam Menghambat  Perkembangan  Bakteri Aeromonas  hydrophila pada Ikan Lele ( Clarias gariephinus ). Tesis. Undana. Kupang. Hayes,  J.  2000. Aeromonas  hydrophila .  Oregon  State  University. http://hmsc.oregonstate.edu/classes/MB492/hydrophilahayes Tanggal akses: 13 December 2011 Hendra,  Ismail.  2007. Studi  Kandungan  Kloramfenikol  Pada  Perairan,  Pakan dan  Ikan  Lele  di  Kota  Sukabumi. Program  Studi  Kimia,  Program Sarjana. Universitas Muhammadiyah Sukabumi.
Heyne, K.1987. Tumbuhan Berguna  Indonesia . jil.  3:1502-1503  Terj.  Yayasan Sarana Wana Jaya. Jakarta. Kordi,  M.G.H.K.  2004. Penanggulangan  Hama  dan  Penyakit  Ikan .  Rineka Cipta. Jakarta. Malik, A., Soediro, I., Padmawinata, K., Yulinah, E.1993. Bahan Alam . ITB. http:// bahan-alam.fa.itb.ac.id. (dikunjungi 21 september 2011). Mandasari,  I.  2006. Isolasi,  Identifikasi,  dan  Uji  Toksisitas  Alkaloid  dalam Ekstrak Kloroform Daun Ketapang ( Terminalia catappa L ) . Skripsi, Jurusan  Kimia  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam, Universitas Diponegoro, Semarang. (dikunjungi 15 november 2011). Momo.  2008. Prinsip  Ekstraksi ( Maceration ).  http//prinsip-ekstraksi- maceration.html Mueller M, De la Pena A, Derendorf H. 2004. Issues in pharmacokinetics and pharmacodynamics of anti-infective agents: kill curves versus MIC. Antimicrobial  agents  and  chemotherapy ;  48:369-77.  (14  oktober 2011). Nitimulyo,  K.H.,  I.Y.B.  Lelono,  dan  A.  Sarono.  1993. Deskripsi  Hama  dan Penyakit Ikan Karantina Golongan Bakteri Buku 2 . Pusat Karantina Pertanian. Jakarta. Nurlailasari, F. 2011. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak N- Heksana Dan Etanol Dari Daun Jambu Biji, Daging Buah Putih, Pepaya, Dan Sambiloto . Skripsi. UIN Sunan Kalijaga Yogyakarta.(2 februari 2012). Nuryati, S., Rahman., dan Taukhid. 2005. Kajian Potensi Antifungi Ketapang ( Terminalia cattapa L), Sirih ( Piper betle L), Jambu Biji (Psidium guajava L), dan Sambiloto ( Andrographis peniculata (Burm. F) Ness) Terhadap Pertumbuhan Cendawan Akuatik Aphanomyces Secara In Vitro . Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor.
Ojewole, J.A.  2006. Pengaruh  ekstrak  encer  daun Psidium  guajava Linn. ( Myrtaceae ) sebagai anti peradangan dan analgesik terhadap tikus . Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology . 28(7): 441–446. (5 februari 2012). Pelczar,  M.J  &  Chan,  E.C.  S.  2008. Dasar-dasar  Mikrobiologi. Universitas Indonesia. Jakarta. Pereira,  A.D.S.,  M.A.A.  Serrano,  F.R.  de.  A.  2000. Neto  and  Quantitation  of Rotenoids  and  Flavonoid  in  Derris ( Lonchocarpus urucu ) by  High Temperatore  High-Resolution  Gas  Chromatograthic  Science . Volume 38. Number 4. PP. 174-180. (12 september 2011). Putra, S.E. 2007. Alkaloid : Senyawa Organik Terbanyak di Alam . http://www.chemistry.Org/artikel kimia/biokimia/alkaloid senyawa organik terbanyak di alam/ (15 Mei 2012). Rahayu,  Dwi  Sri  and  Kusrini,  Dewi  and  Fachriyah,  Enny.  2009 .  Penentuan Aktivitas  Antioksidan  Dari  Ekstrak  Etanol  Daun  Ketapang ( Terminalia  catappa L) dengan  Metode  1,1-Difenil-2-Pikrilhidrazil (DPPH) .  In:  Seminar  Tugas  Akhir  S1  Jurusan  Kimia  FMIPA UNDIP , Jurusan Kimia UNDIP (12 juli 2011). Sugiyono. 2010. Metode Penelitian Kuantitatif, Kualitatif dan  R&D .  Alfabeta. Bandung. Sujatno, R.M. 1997. Efek Attapulgit, Ekstrak daun  Psidium guajava L dan Ekstrak Akar Curcuma domestica terhadap Diare Akut Non- spesifik .Maj. Kedokt.Indon 47: 197-201. (dikunjungi 10 januari 2012 ). Suwandi,  Usman.  1992. Mekanisme  Kerja  Antibiotik .  Jakarta  .  cermin  dunia kedokteran.  (http:  //www.  Kalbe.co.id/files/18mekanisme  kerja antibiotik.pdf/18mekanisme-kerja-antibiotik  html)(dikunjungi  10 januari 2012). Waluyo, Lud. 2011 .  Mikrobiologi Umum . UMM Press. Malang. White.  1991. Diagnoseand  Treatment  of  Aeromonas  hydrophyla  Infection  of Fish. Aquaculture Extension: Illinois.
Wijayakusuma,  H.  M.,  S.  Dalimartha,  dan  A.S.  Wirian.  1992. Tanaman berkhasiat Obat di Indonesia jilid I . Pustaka Kartini. Jakarta. Yulianto. 2008. Kandungan fenol dan sifat antibakteri dengan berbagai ekstrak produk gambir ( Uncaria  gambir Roxb)  5_18-3-2008.pdf. (dikunjungi 19 juli 2012).