Bulletin of Applied Animal Research
Kajian Pengaruh Fermentasi Kulit Kacang Tanah Amoniasi Menggunakan Starter Aspergillus niger terhadap Kandungan Selulosa, Hemiselulosa dan Lignin
Muhammad Lukman Hakim, B. I. M. Tampoebolon dan S. Mukodiningsih
Fakultas Peternakan dan Pertanian, Universitas Diponegoro, Semarang Jl. Prof.H. Soedarto, S. H. – Tembalang Semarang, Indonesia (50275 Corresponding E-mail : hakimmuhammadlukman@gmail.comm

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengkaji  pengaruh  perlakuan  perbedaan  lama  fermentasi menggunakan  Aspergillus  niger  setelah  dilakukan  proses  amoniasi  pada  kulit  kacang  terhadap kandungan  selulosa,  hemiselulosa  dan  lignin.  Metode  penelitian  menggunakan  rancangan  acak lengkap dengan 4 ulangan. Perlakuan yang diberikan adalah perbedaan lama peram proses fermentasi 0  hari  (T0),  5  hari  (T1),  10  hari  (T2)  dan  15  hari  (T3).  Hasil  penelitian  menunjukkan  terdapat pengaruh  (P<0,05)  lama  fermentasi  terhadap  kandungan  selulosa  dan  lignin  dan  tidak  berpengaruh terhadap  kandungan  hemiselulosa.  Kandungan  selulosa  dan  hemiselulosa  menurun  sampai  lama peram  15  hari  (33,93%)  dan  (8,96%).  Kandungan  lignin  meningkat  sampai  lama  peram  15  hari (30,85%).  Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa  perlakuan  lama  fermentasi  dapat meningkatkan  kualitas  kulit  kacang  tanah  amoniasi.  Perlakuan  terbaik  terjadi  pada  lama  fermentasi 15 hari.
Kata kunci : kulit kacang tanah, Aspergillus niger, selulosa, lignin

## ABSTRACT
The aim of this research is to examine the treatment effect of different duration of fermentation using Aspergillus niger of peanut shells ammoniated against cellulose, hemicellulose and lignin content. The research method used a completely randomized design with 4 replications. The treatment that given is difference in duration of fermentation process of 0 days (T0), 5 days (T1), 10 days (T2) and 15 days (T3). The results showed that there was an effect (P <0.05) of fermentation time on cellulose and lignin content and had no effect on hemicellulose content. The total celluse and hemicellulose decreased to 15 days (33,93%) and (8,96%). Lignin content increased until 15 days (30,85%). Based on the results of the study it can be concluded that the old fermentation treatment can improve the quality of peanut shells ammoniated. The best treatment occurs at 15 days of fermentation.
Keywords : kulit kacang tanah, Aspergillus niger, selulosa, lignin. .

## PENDAHULUAN
Populasi  ternak  yang  semakin  meningkat harus  diimbangi  dengan  ketersediaan  jumlah pakan, baik dalam hal kualitas, kuantitas maupun kontinuitas.  Sebagian  besar  ternak  ruminansia pakannya berupa hijauan, sedangkan ketersediaan  hijauan  sangat  bergantung  pada musim.  Di  sisi  lain,  lahan  untuk  penanaman hijauan  semakin  sempit  karena  dimanfaatkan untuk  pertanian,  perkebunan  dan  pembangunan gedung  pemukiman.  Salah  satu  cara  untuk menanggulangi  hal  tersebut  yaitu  dengan membuat  pakan  sendiri  dengan  memanfaatkan sumber-sumber pakan potensial non konvensional  yang    belum  diketahui  oleh peternak.  Pemanfaatan  sumber  pakan  non konvensional  yang  dapat  digunakan  salah satunya adalah produk samping industri pertanian yaitu  kulit kacang tanah.
Kulit  kacang  tanah  merupakan  hasil  ikutan tanaman  kacang  tanah  yang    produk  utamanya telah digunakan sehingga memiliki kualitas yang rendah. Pakan yang berasal dari produk samping pertanian  memiliki  kualitas  yamg  rendah sehingga  perlu  dilakukan  pengolahan  supaya dapat  digunakan    sebagai    pakan  yang  memiliki kualitas  tinggi  (Retnani  et  al.,  2015).  Produksi kacang tanah di Jawa Tengah menurut data BPS tahun 2018  mencapai 91.234 ton. Kacang tanah memiliki  bagian  kulit  sebesar  ±  30%  (Junior  et al.,  2015).  Berdasarkan  data  tersebut  dapat diperkirakan  bahwa  produksi  kulit  kacang  tanah di  Jawa  Tengah  pada  tahun  2018  sebesar  ± 27.370  ton.  Kulit  kacang  tanah  memiliki kandungan  kadar  air  sebesar  11,23%,  bahan kering  88,57%,  protein  kasar  10,87%,  lemak kasar  2,03%,  serat  kasar  61,30%  dan  BETN 20,27%  (Rosniningsih,  2004).  Jumlah  produksi dan  kandungan  nutrisi  kulit  kacang  tanah  yang memiliki  kadar  protein  yang  cukup  tinggi  maka kulit  kacang  tanah  sangat  berpotensi  untuk dijadikan salah satu bahan pakan. Namun,  Kulit kacang  tanah  juga  memiliki  kandungan  serat kasar  yang  sangat  tinggi  yaitu  sebesar  61,30%. hal  tersebut  menjadi  kendala  untuk  diberikan kepada  ternak  secara  langsung,  utamanya  untuk ternak  ruminansia.  Salah  satu  cara  untuk menurunkan  kandungan  serat  kasar  tersebut yaitu  dengan  melakukan  proses  pengolahan berupa  perpaduan  antara  proses  amoniasi  dan fermentasi.
Amoniasi  merupakan  upaya  peningkatan kualitas  pakan  berserat  tinggi  melalui  proses pengolahan dengan menggunakan NH3 (amonia).  Proses  amoniasi  berfungsi  untuk
merenggangkan ikatan serat dan memutus sebagian ikatan  lignin  dan  selulosa  serta  ikatan  lignin  dan hemiselulosa  (Prastyawan  et  al.,  2012).  Fermentasi merupakan  salah  satu  upaya  peningkatan  kualitas bahan  pakan  yang  telah  banyak  dilakukan.    Proses fermentasi bertujuan menurunkan kadar serat kasar, meningkatkan kecernaan dan sekaligus meningkatkan kadar protein kasar (Tampoebolon et al,  2019).  Aspergillus  niger  merupakan  kapang yang  digunakan  untuk  proses  fermentasi  bersifat selulolitik,  mudah  tumbuh  pada  suasana  aerob  dan pertumbuhannya  cepat  (Tampoebolon  et  al,  2019). Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengkaji pengaruh  perlakuan  perbedaan    lama    waktu fermentasi  menggunakan  Aspergillus  niger  setelah dilakukan  proses  amoniasi  pada  kulit  kacang terhadap  kandungan  selulosa,  hemiselulosa  dan lignin. Manfaat dari penelitian ini adalah memperoleh informasi tentang lama waktu fermentasi  terbaik  kulit  kacang  tanah  yang  sudah diamoniasi  ditinjau  dari  kandungan  selulosa, hemiselulosa dan lignin.

## MATERI DAN METODE
Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan  Agustus 2018  –  Januari  2019  di  Laboratorium  Teknologi Pakan  dan  Laboratorium  Ilmu  Nutrisi  Pakan, Fakultas  Peternakan  dan  Pertanian,  Universitas Diponegoro, Semarang.

## Materi Penelitian
Materi  yang  digunakan  dalam  penelitian  meliputi kulit  kacang  tanah  yang  telah  digiling,  urea  untuk proses amoniasi, Aspergilus niger sebagai inokulum  pada  proses  fermentasi,  grinder  untuk memperkecil  ukuran  kulit  kacang  tanah,  plastik dan  drum  untuk  tempat  amoniasi,  penampan plastik  untuk  tempat  fermentasi,  timbangan  untuk mengukur  penggunaan  urea  dan  starter  serta peralatan  yang  akan  digunakan  untuk  melakukan analisis selulosa, hemiselulosa dan lignin.

## Rancangan Percobaan
Penelitian  menggunakan  rancangan  acak  lengkap (RAL)  dengan  4  perlakuan  dan  4  ulangan. Perlakuan  pendahuluan  yang  dilakukan  yaitu amoniasi  kulit  kacang  tanah  dengan  menggunakan amonia  5%  terhadap  bahan  kering  kulit  kacang tanah  yang  dilanjutkan  dengan  fermentasi.  Proses fermentasi  dengan  penambahan  starter  Aspergillus niger  sebanyak  5%  terhadap  bahan  kering. Kemudian  dilakukan  pemeraman  dengan  lama waktu  fermenasi  0,  5,  10  dan  15  hari.  Parameter yang diamati adalah kandungan selulosa,
hemiselulosa  dan  lignin.  Perlakuan  yang diberikan yaitu :
T0 = Lama waktu fermentasi 0 hari T1 = Lama waktu fermentasi 5 hari T2 = Lama waktu fermentasi 10 hari T3 = Lama waktu fermentasi 15 hari

## Tahap Persiapan
Tahap  persiapan  meliputi  pengadaan  kulit kacang  kemudian  mengeringkan  menggunakan sinar  matahari  lalu  dihaluskan  menggunakan mesin  grinder,  penyediaan  urea  dan  Aspergillus niger  dalam  bentuk  bubuk  dengan  konsentrasi minimal  108/gram  sebagai  starter  dalam  proses fermentasi  yang  diperoleh  dari  Agrotekno  Lab Yogyakarta.

## Tahap Amoniasi
Proses  amoniasi  dilakukan  dengan  cara  basah menggunakan  kadar  ammonia  5%  BK.  Kulit kacang  tanah  yang  sudah  dicampur  dengan larutan  urea  kemudian  dimasukkan  ke  trash  bag dan  disimpan  dalam  drum  selama  21  hari.  Kulit kacang  tanah  yang  sudah  selesai  diamoniasi kemudian diangin-anginkan supaya bau menyengat  amonia  hilang  kemudian  ditimbang sebanyak  100  gram  dan  dicampur  dengan molases  1%  dan  air.  Kulit  kacang  tanah  yang sudah  dicampur  molases  dan  air  kemudian disterilisasi  menggunakan  autoclave  selama  1 jam.

## Tahap Fermentasi
Tahap fermentasi dilakukan dengan
mencampurkan kulit kacang tanah amoniasi yang sudah  steril  dengan  starter  Aspergillus  niger  5% BK secara aerob dengan lama fermentasi 0, 5, 10 dan  15  hari.  Kulit  kacang  tanah  amoniasi  yang sudah difermentasi dengan masing-masing perlakuan kemudian dianalisis kandungan selulosa, hemiselulosa dan lignin.

## Analisis Laboratorium
Tahap  pengambilan  data  dilakukan  dengan melakukan  analisis  kandungan  neutral  detergent fiber (NDF), acid detergent fiber ADF dan lignin (Van  Soest,  1994).  Analisis  kandungan  NDF menggunakan  metode  Van  Soest  (1994),  yaitu dengan cara menimbang ± 1 gram sampel kering udara dimasukkan kedalam beaker glass 250 ml, dituangi  100  ml  larutan  deterjen  netral  (NDS) dan  0,5  gram  Na2SO3.  Beaker  glass  dipanaskan selama  1  jam,  suhu  pemanasan  diatur  agar  tidak terjadi pembuihan. Sampel disaring menggunakan  krusibel  yang  sudah  diketahui
beratnya dan terpasang pada pompa vacum. Sampel dicuci menggunakan air panas dengan suhu ± 80oC dan  selanjutnya  dicuci  lagi  menggunakan  aseton, diulang  sebanyak  2  kali.  Setelah  bau  aseton  hilang, sampel  beserta  krusibel  dimasukkan  kedalam  oven pada  suhu  105oC  selama  8  jam  kemudian didinginkan  dalam  eksikator  dan  ditimbang  serta dihitung menggunakan rumus sebagai berikut :
Analisis  kandungan  ADF  menggunakan  metode Van  Soest  (1994),  yaitu  dengan  cara  menimbang  ± 1  gram  sampel  kering  udara  dimasukkan  ke  dalam beaker  glass  250  ml  dan  dituangi  100  ml  larutan deterjen  asam  (ADS).  Beaker  glass  dipanaskan sampai  mendidih  dan  suhu  pemanasan  diatur  agar tidak  terjadi  pembuihan.  Residu  sampel  disaring dengan  krusibel  yang  telah  diketahui  beratnya  dan terpasang  pada  pompa  vacum.  Residu  di  cuci dengan  aquadest  panas,  dilanjutkan  pencucian dengan  aseton  yang  diulangi  sebanyak  2  kali. Setelah  bau  aseton  hilang,  sampel  dikeringkan dalam oven bersuhu 105oC selama 8 jam kemudian didinginkan  dalam  eksikator    dan  selanjutnya ditimbang  serta  dihitung  menggunakan  rumus sebagai berikut :
Kandungan  hemiselulosa  diperoleh  dengan  cara mengurangkan  kandungan  NDF  dengan  ADF (Harris, 1970).
%Hemiselulosa = %NDF - %ADF
Kandungan lignin diperoleh dengan cara melakukan analisis  menggunakan  metode  Van  Soest  (1994), yaitu  dengan  cara  residu  beserta  krusibel  dari penetapan kandungan ADF diletakkan pada nampan berisi  air  dingin  yang  mengalir  dengan  hati-hati, diatur  dengan  memiringkan  nampan  yang  diberi  2 lubang  pada  pinggir  nampan  bagian  bawah  supaya krusibel  dapat  terendam  air  sedangkan  isi  krusibel tidak  terkena  air.  Krusibel  dituang  H2SO4  72% sekitar  setengah  penuh  isi  krusibel  dan  biarkan sampai  H2SO4  72%  habis.  Krusibel  dipasang  pada pompa vacum dan dilakukan pencucian menggunakan  aquadest  panas  sebanyak  2  kali supaya  residu  tidak  mengandung  asam  sulfat  lagi. Kemudian  dikeringkan  dalam  oven  pada  suhu 105oC  selama  8  jam  kemudian  didinginkan  dalam eksikator    dan  selanjutnya  ditimbang.  Sampel dilakukan  pengabuan  dengan  tanur  bersuhu  400  - 600oC  selama  4  –  6  jam  setelah  itu  didinginkan
dalam  eksikator    dan  selanjutnya  ditimbang. Perhitungan  kandungan  lignin  menggunakan rumus sebagai berikut :
Kandungan  selulosa  diperoleh  dengan  cara mengurangkan kandungan ADF dengan kandungan lignin.
%Selulosa = %ADF - %lignin

## Parameter Penelitian
Parameter  yang  diamati  yaitu  kandungan selulosa, hemiselulosa dan lignin.

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  kemudian  diolah  dan dianalis  menggunakan  ANOVA  dengan  tingkat signifikansi  5%  untuk  mengetahui  adanya pengaruh  perlakuan  terhadap  parameter  yang diamati.  Jika  diperoleh  hasil  signifikan  atau menunjukan  pengaruh  nyata  (P<0,05)  maka dilanjutkan  uji  Duncan  dengan  taraf  5%  untuk mengetahui  perbedaan  nilai  tengah  masing- masing perlakuan (Srigandono, 1989).
Yij = µ + τi + εij   ; i = (1,2,3,4)  ;  j = (1,2,3,4)
Keterangan :
Yij =  Kualitas nutrien kulit kacang pada unit  ke-j  yang  memperoleh perlakuan ke-i µ = Nilai  tengah  umum  kualitas kecernaan kulit kacang τi = Pengaruh aditif dari perlakuan ke- i εij = Pengaruh  galat  percobaan  pada kulit kacang ke-j yang memperoleh perlakuan ke-i

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  analisis  kandungan  selulosa,  hemiselulosa dan lignin fermentasi kulit

## Kandungan Selulosa
Hasil penelitian mengenai pengaruh lama fermentasi  kulit  kacang  tanah  amoniasi  terhadap kandungan selulosa pada masing-masing perlakuan  disajikan  pada  Tabel  1.  Lama  waktu fermentasi  mempengaruhi  kandungan  selulosa, semakin  lama  waktu  fermentasi,  kandungan selulosa semakin menurun. Penurunan kandungan
selulosa disebabkan karena selama proses fermentasi dinding  sel  mengalami  perombakan  menjadi komponen  yang  lebih  sederhana.  Hal  ini  erat kaitannya  dengan  proses  pertumbuhan  Aspergillus niger yang merupakan mikrobia pencerna serat yang mampu  mensekresikan  enzim  selulase.  Setyoko  dan Utami  (2016)  dalam  penelitiannya  melaporkan bahwa  enzim  selulase  merupakan  enzim  yang disekresikan  oleh  mikrobia  pencerna  serat  yang berfungsi  mendegradasi  selulosa  menjadi  glukosa. Semakin  lama  proses  hidrolisis  berjalan  maka semakin  banyak  enzim  yang  berdifusi  ke  dalam substrat  kulit  kacang  tanah  sehingga  produk  yang dihasilkan semakin meningkat.
Perlakuan  amoniasi  mampu  memutus  atau merenggangkan ikatan antara selulosa dengan lignin yang sering disebut dengan ikatan lignoseluosa. Hal ini  sesuai  dengan  pendapat  Sumarsih  et  al.  (2007) bahwa  perlakuan  amoniasi  dapat  meningkatkan proses  degradasi  dengan  merenggangkan  ikatan lignoselulosa  sehingga  karbohidrat  dapat  dengan mudah  untuk  dicerna.  Ikatan  lignin  dan  selulosa yang  semakin  renggang,  mempermudah  mikrobia pada  proses  fermentasi  dalam  melakukan  penetrasi ke  bagian-bagian  dalam  substrat  sehingga  proses fermentasi  dapat  lebih  cepat  dan  optimal  dalam mendegradasi selulosa. Prasetya (2009) menyatakan bahwa  perlakuan  alkali  dapat  mendelignifikasi dengan  cara  memutus  ikatan  ester  antara  lignin dengan selulosa serta pembekakan selulosa, sehingga  menurunkan  kristalinitasnya.  Van  Soest (1994)  menambahkan  bahwa  turunnya  kristalinitas selulosa akan memudahkan penetrasi enzim selulase mikrobia rumen.
Kandungan selulosa pada lama fermentasi 0 dan 5 hari lebih besar dibandingkan lama fermentasi 10  –  15  hari.  Hal  tersebut  diduga  karena  pada  awal proses fermentasi pola pertumbuhan mikrobia masih pada  fase  adaptasi.  Hal  ini  sesuai  dengan  pendapat Pelczar  dan  Chan  (2006)  bahwa  mikroorganisme yang  di  masukkan  kedalam  medium  baru  akan melakukan  adaptasi terlebih dahulu dan mempunyai waktu  generasi  yang  masih  lambat  sehingga membutuhkan waktu untuk tumbuh. Oleh karena itu, pada  lama  fermentasi  0  dan  5  hari,  penurunan kandungan selulosa masih sedikit.

## Kandungan Hemiselulosa
Hasil  penelitian  mengenai  pengaruh  lama fermentasi  kulit  kacang  tanah  amoniasi  terhadap kandungan hemiselulosa pada masing-masing perlakuan  disajikan  pada  Tabel  1.  kandungan hemiselulosa  kulit  kacang  tanah  amoniasi  semakin lama  waktu  fermentasi,  hasilnya  semakin  menurun. Hal  ini  disebabkan  semakin  lama  proses  fermentasi maka  jumlah  Aspergillus  niger  semakin  banyak, sehingga enzim hemiselulase yang disekresikan oleh Aspergillus  niger  juga  semakin  banyak.  Enzim hemiselulase  yang  semakin  lama  waktu  fermentasi
semakin  banyak,  maka  akan  mempermudah dalam  proses  degradasi  hemiselulosa  menjadi komponen  yang  lebih  sederhana.  Pendapat  ini sesuai  dengan  pernyataan  Winarno  et  al.  (1981) bahwa  bahan  pakan  yang  mengalami  fermentasi mempunyai  nilai  gizi  yang  lebih  tinggi,  karena adanya mikrobia yang mempunyai sifat katabolik terhadap  komponen  organik  kompleks,  sehingga akan mengubahnya menjadi komponen
sederhana. Proses degradasi yang tinggi disebabkan karena  jumlah  mikrobia  yang semakin  lama  waktu  fermentasi  tumbuh  dan berkembang  biak  secara  optimal,  menyebabkan kemampuan  mencerna  bahan  semakin  baik.  Hal ini  sesuai  dengan  pendapat  Saha  (2003)  bahwa dalam proses fermentasi, mikrobia pencerna serat yang mampu mensekresikan enzim hemiselulase, sehingga hemiselulosa dipecah menjadi komponen yang lebih sederhana meliputi pentosa (xilosa,  arabinosa),  heksosa  (manosa,  glukosa, galaktosa) dan asam uronat.
Amoniasi  pada  kulit  kacang  tanah berfungsi  untuk  merenggangkan  ikatan  lignin dengan  hemiselulosa  sehingga  mempermudah kerja  mikrobia  dalam  menguraikan  hemiselulosa pada saat proses fermentasi. Pernyataan ini sesuai dengan  pendapat  Komar  (1984)  bahwa  amoniasi dapat  mengakibatkan  perubahan  komposisi  dan struktur dinding sel yang berperan membebaskan ikatan antara lignin dengan hemiselulosa sehingga  serat  tersebut  akan  mudah  diuraikan oleh enzim mikrobia.

## Kandungan Lignin
Hasil penelitian mengenai pengaruh lama fermentasi  kulit  kacang  tanah  amoniasi  terhadap kandungan  lignin  pada  masing-masing  perlakuan disajikan  pada  Tabel  1.  Peningkatan  kandungan lignin kulit kacang tanah  amoniasi  terjadi seiring dengan semakin lama waktu fermentasi. Peningkatan  kandungan  lignin  bukan  merupakan peningkatan  absolut  tetapi  peningkatan  secara proporsional.  Hal  ini  diduga  karena  terdapat komponen  selain  lignin  yang  turun  seperti selulosa,  hemiselulosa  dan  BETN.  Van  Soest (1994)  menyatakan  bahwa  komponen  ADF adalah  selulosa,  lignin  dan  silika  (abu), sedangkan  komponen  acid  detergent  soluble (ADS)  adalah  hemiselulosa  dan  nitrogen  yang terdapat dalam dinding sel.
Kandungan  lignin  yang  tidak  mengalami penurunan  pada  proses  fermentasi  disebabkan karena  starter  Aspergillus  niger  yang  digunakan dalam  fermentasi  tidak  menghasilkan  enzim ligninase  sehingga  tidak  dapat  mendegradasi lignin.  Schuster  et  al.  (2002)  menyatakan  bahwa Aspergillus  niger  merupakan  mikrobia  yang mampu menghasilkan  enzim ekstraseluler  seperti selulase, hemiselulase, amyloglukosidase,
xylanase,  galaktosidase,  glucose  oxidase  dan amylase.  Selain  itu  lignin  merupakan  bagian  dari serat  yang  bukan  termasuk  karbohidrat  sehingga tidak  dapat  dicerna  oleh  mikroba  Aspergillus  niger. Hal  ini  sesuai  dengan  pendapat  Chang  et  al.  (1981) bahwa  Lignin  merupakan  bahan  organik  bukan karbohidrat  karena  memiliki  proporsi  karbon  yang tinggi.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat disimpulkan  bahwa  perlakuan  perbedaan  lama waktu  fermentasi  pada  kulit  kacang  tanah amoniasi dapat menurunkan kandungan selulosa dan  hemiselulosa  sedangkan  kandungan  lignin meningkat.  Penurunan  kandungan  selulosa  dan hemiselulosa  paling  efektif  terjadi  pada  lama fermentasi selama 15 hari.

## REFERENSI
Chang,  S.T.  dan  T.H.  Quimio.1981.  Tropical Mushrooms  Biological  Nature  and  Cultivation Methodes.  The  Chinese  University  Press, Hongkong.
Junior, L. K. P., D. A. Swastini dan N. P. E. Leliqia. 2015.  Pengaruh  pemberian  ekstrak  etanol  kulit kacang tanah dengan metode maserasi terhadap profil  lipid  pada  tikus  Sprague  Dawley  diet lemak tinggi. Jurnal Farmasi. 4 (1): 18 - 25.
Komar,  A.  1984.  Teknologi  Pengolahan  Jerami Sebagai  Makanan  Ternak.  Cetakan  Pertama. Yayasan Dian Grahita, Bandung.
Pelczar,  M  dan  E.C.S.  Chan.  2006.  Dasar-Dasar Mikrobiologi. UI-Press, Jakarta.
Prasetya, D.E. 2009. Pengaruh  Level Biofad sebagai Starter Mikrobia dan Lama Fermentasi terhadap Penurunan  Komponen  Serat  Ampas  Tebu Amoniasi.  Program  Studi  Nutrisi  dan  Makanan Ternak,  Universitas  Diponegoro,  Semarang. (Skripsi Sarjana Peternakan)
Prastyawan,  R.M.,  B.I.M.  Tampoebolon    dan  S. Surono.  2012.  Peningkatan  kualitas  tongkol jagung  melalui  teknologi  amoniasi  fermentasi (amofer)  terhadap  kecernaan  bahan  kering  dan bahan organik serta protein total secara in vitro. J. Animal Agriculture. 1 (1): 611-621.
Retnani,  Y.,  I.G.  Permana,  N.R.  Kumalasari  dan Taryati.  2015.  Teknik  Membuat  Biskuit  Pakan
Ternak  dari  Hasil  samping  Pertanian. Penebar Swadaya, Jakarta.
Rosningsih, S. 2004. Pengaruh fermentasi dengan Aspergillus niger terhadap kandungan nutrient  dan  kecernaan  protein  in  vitro  kulit kacang  tanah  sebagai  sumber  bahan  pakan berserat.  Buletin  Peternakan.  28  (4):  155- 161.
Saha,  B.C.  2003.  Hemicelluse  Bioconversion.  J. Ind. Microbiol. Biotechnol. 30 (5): 279–291.
Schuster, E., N.D. Coleman dan Frisvad. 2002. On
Savety of Aspergillus niger. Appl. Microbial Biotechnol. 4 (59): 426-435.
Setyoko,  H.  dan  B.  Utami.  2016.  Isolasi  dan Karakterisasi  Enzim  Selulase  Cairan  Rumen Sapi  untuk  Hidrolisis  Biomassa.  Dalam  :
Proceeding  Biology  Education  Conference:
Biology, Science, Enviromental, and Learning.13 (1):  863-867.
Srigandono,  B.  1989.  Rancangan  Percobaan. Fakultas Peternakan Universitas Diponegoro, Semarang. 140 hlm.
Sumarsih,  S.,  C.I.  Sutrisno  dan  E.  Pangestu.  2007.
Kualitas  nutrisi  dan  kecernaan  daun  eceng gondok  amoniasi  yang  difermentasi  dengan Trichoderma  viride  pada  berbagai  lama pemeraman  secara  In  vitro.  Indonesian  J. Tropical Animal Agricultural. 32 (3): 257–261.
Tampoebolon,  B.I.M.,  B.W.H.E.  Prasetiyono  dan  S. Mukodiningsih. 2019. The effect of fermentation  with  different  times  of  corn  husk which  has  obtained  ammoniation  treatment  in the  production  of  VFA-NH3  by  in  vitro digestibility.  Dalam  :  IOP  Conference  Series: Earth and Environmental Science. IOP Publishing Lth., England. 247 (1): 012073.
Van  Soest,  P.J.  1994.  Nutritional  Ecology  of Ruminant;  Ruminant  Metabolism,  Nutritional Strategies,  The  Cellulolytic  Fermentation  and The  Chemistry  of  Forages  and  Plant  Fibers. Second  Edition.  Cornell  University  Press, Ithaca.
Winarno,  F.G.,  S.  Fardiaz  dan  D.  Fardiaz.  1984. Pengantar  Teknologi  Pangan.  PT.  Gramedia, Jakarta.