(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2021, 4 (2), 48-52
Efektivitas Antilitiasis Ekstrak Etanol Daun Nusa Indah Putih ( Mussaenda pubescens ) Terhadap Kadar Kreatinin Serum Darah Tikus Putih
( Rattus norvegicus )
Christi Devita Laoh 1 , Ferdy A. Karauwan 2* , Vlagia I. Paat 1 , Douglas N. Pareta 1
1 Program Studi Farmasi, Fakultas MIPA, Universitas Kristen Indonesia Tomohon
2 Program Studi Biologi, Fakultas MIPA, Universitas Kristen Indonesia Tomohon *Penulis Korespondensi; Email: fakarauwan@gmail.com Diterima: 5 Agustus 2021; Disetujui : 4 Oktober 2021

## ABSTRAK
Penelitian  ini bertujuan : untuk  mengetahui efektivitas ekstrak daun  nusa indah putih ( Mussaenda pubescens) untuk  menurunkan  kadar  kreatinin  pada  tikus  urolitiasis  pada  tikus    putih  ( Rattus norvegicus ).  Metode  Penelitian  yang  digunakan  adalah  metode  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL) dengan 5 kali ulangan. Sebanyak 20 ekor tikus jantan dewasa dengan berat rata-rata 150-200 gram dibagi dalam 4 kelompok perlakuan. Kelompok kontrol normal (P0), kelompok etilen glikol 0,75 % (P1), kelompok ekstrak daun nusa indah putih ( Mussaenda pubescens) dosis 150 mg/kg BB (P2) dan kelompok ekstrak daun nusa indah putih ( Mussaenda pubescens) dosis 300 mg/kg BB (P3) dengan parameter  pengamatan  kadar  kreatinin  serum  darah  tikus  pada  setiap  kelompok  perlakuan  dengan pengujian selama 28 hari.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  pada pemberian  etilen  glikol  selama  14  hari  pada  kelompok perlakuan  (P1)  nilai  kreatinin  serum  mencapai  1.13  mg/dL  (p<0.05)  dibandingkan  dengan  konrol normal (P0) 0.66 mg/dL (p<0.05) dengan kreatinin normal tikus 0,2-0,8 mg/dL. Hal ini disebabkan karena etilen glikol merupakan agen nefrotoksik yang membantu pembentukkan batu kalsium oksalat diginjal sehingga tikus menjadi urolitiasis (batu ginjal). Kesimpulannya adalah bahwa ekstrak daun nusa indah putih ( Mussaenda pubescens) memiliki  efektivitas dalam  menurunkan kadar kreatinin dalam darah pada tikus urolitiasis.
Kata Kunci : Antilitiasis, Daun Nusa Indah Putih (Mussaenda pubescens), Kreatinin

## ABSTRACT
The purpose of this research : to determine the effectiveness of the leaf extract of Nusa Indah Putih (Mussaenda  pubescens)  to  reduce  creatinine  levels  in  urolithiasis  rats  in  white  rats  (Rattus norvegicus). The research method used was a completely randomized design (CRD) method with 5 replications. A total of 20 adult male rats with an average weight of 150-200 grams were divided into 4 treatment groups. Normal control group (P0), ethylene glycol group 0.75% (P1), white nusa indah leaf extract group (Mussaenda pubescens) dose 150 mg/kg BB (P2) and white nusa beautiful leaf extract group (Mussaenda pubescens) dose 300 mg/kg BB (P3) with observation parameters of rat blood serum creatinine levels in each treatment group with testing for 28 days.
The results showed that in the administration of ethylene glycol for 14 days in the treatment group (P1) serum creatinine value reached 1.13 mg / dL (p<0.05) compared to normal conrol (P0) 0.66 mg / dL (p<0.05) with the normal creatinine of mice 0.2-0.8 mg / dL. This is because ethylene glycol is a nephrotoxic agent that helps form calcium oxalate stones so that rats become urolithiasis (kidney stones). The conclusion is that the extract of white beautiful nusa leaves (Mussaenda pubescens) has effectiveness in lowering creatinine levels in the blood in urolithiasis rats.
Keywords : Antilitiasis, White Nusa Indah Leaves (Mussaenda pubescens), Creatinine

## PENDAHULUAN
Urolitiasis  (batu  ginjal)  merupakan material kristal yang keras yang terbentuk dalam
ginjal atau saluran kencing yang disebabkan oleh karena  kelebihan  garam-garam  dalam  aliran darah yang  kemudian mengkristal dalam ginjal.
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2021, 4 (2), 48-52
Terdapat beberapa jenis batu namun yang paling umum  adalah  kalsium  fosfat  dan  kalsium oksalat.  Urolitiasis  merupakan  penyakit  yang dapat  menyebabkan  rasa  nyeri  bahkan  sering terjadi pendarahan kecil [1][3][9].
Di  dunia,  diperkirakan    terdapat    12% kejadian batu ginjal dimana  70-81% adalah laki- laki  dan  hanya    47-60%    terdapat  pada perempuan,  khususnya  pada  usia    40-50  tahun. Hal  ini  disebabkan  karena  hormon  testosteron yang terdapat pada laki-laki   memiliki aktivitas meningkatkan  terbentuknya    batu  ginjal, sedangkan  pada  perempuan  hormon  estrogen bekerja  menghambat  pembentukkan  batu  ginjal [3][4][10].
Berdasarkan penelitian di RSU Prof. Dr. R.  D.  Kandou  Manado  angka  kejadian  batu ginjal tertinggi pada tahun 2012 (48,6%) dengan jumlah pasien laki-laki lebih banyak ditemukan daripada perempuan [11].
Pemanfaatan  obat-obatan  sintesis  dalam mengobati  penyakit  batu  ginjal  selain  harganya mahal penggunaan  obat-obatan seperti diuretik ataupun operasi untuk mengeluarkan batu ginjal sering  memiliki  resiko  dan  kemungkinan  laju terulangnya penyakit sangat besar [3][4].
Oleh  karena  itu  sekarang  ini  banyak dikembangkan  obat-obatan  herbal  yang  selain mudah  didapat    harganya  juga  terjangkau. Beberapa  penelitian  pemanfaatan  tanaman  obat dilaporkan dapat memperbaiki urolitiasis seperti daun sukun ( Artocarpus altilis ) [7], kulit batang pakoba ( Syzygium sp ) [15], daun sirsak ( Annona muricata L.) [8].
Salah satu obat herbal yang juga selama ini  digunakan  secara  empiris  untuk  mengatasi batu ginjal adalah daun dari tanaman nusa indah putih ( Mussaenda pubescens) . Nusa indah putih ( Mussaenda  pubescens )  termasuk  dalam  genus Mussaenda  yang    secara  farmakologi  memiliki produk  alamiah  aktif  khususnya  iridoid, triterpen, dan flavonoid [14].
Keuntungan  spesies  dari  genus  ini mudah bertumbuh, bebas penyakit dan peptisida. Aktivitas  pengobatan  termasuk  sitotoksik, antiinflamasi, antivirus, antioksidan dan antibakteri [14], diuretik, antipiretik  dan  efektif dalam mengatasi
laringoparengitis, gastroenteritis    dan  disentri  akut  dan  aktivitas anti fertilitas [13].
Nusa indah putih ( Mussaenda pubescens )  dapat  digunakan  sebagai  diuretik, antiphlogistic, antipiretik dan untuk detoksifikasi  racun  jamur  [16].  Analisis
fitokimia  dari bagian tanaman  nusa indah putih ( Mussaenda
pubescens ) mengandung triterpenoid saponin [17].
Selama ini pemanfaatan daun nusa indah putih  ( Mussaenda  pubescens )    sebagai  obat herbal  untuk  mengatasi  penyakit  batu  ginjal belum    dilakukan  penelitian  secara  ilmiah. Berdasarkan  hal  tersebut  maka  perlu  dilakukan penelitian  mengenai  efektivitas  antilitiasis ekstrak  daun  nusa  indah  putih  ( Mussaenda pubescens )  dengan  melihat  kadar  kreatinin serum  pada  tikus  putih  ( Rattus  norvegicus ) sebagai hewan uji.

## METODE PENELITIAN
Alat : Blender,  botol  kaca,  timbangan analitik  ( AND ),  ayakkan  plastik,  gelas  kimia, oven ( memmert ), rotary evaporator ( Heindolph ),  suntik  3  ml,  sonde  lambung, seperangkat alat bedah, sentrifugasi ( Eppendorf ),  mikropipet  ( Eppendorf ),  tabung serum, Fotometer ( Mikrolab 300).
Bahan  : Daun  nusa  indah  putih ( Mussaenda  pubescens ) , alkohol,  aquadest, aluminium  foil,  label,  kertas  saring,  kit  randox creatinine (PT. Rajawali Nusindo), serum darah tikus, eter, etilen glikol ( Merck ).

## Jenis Penelitian dan Rancangan Penelitian
Jenis penelitian ini adalah Eksperimental  Laboratorium.  Menggunakan metode  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  yang terdiri  dari  4  kelompok  perlakuan  masing- masing  5  kali  ulangan.  Dalam  penelitian  ini parameter  yang  diamati  adalah  kadar  kreatinin serum darah tikus dengan analisis kuantitatif . Hewan uji yang digunakan adalah tikus putih ( Rattus novergicus ) dengan  kisaran bobot 150-200  gr  sebanyak  20  ekor.  Tikus-tikus dipelihara dalam kandang plastik berukuran 40 x 25  x  15  cm  dengan  penutup  kawat.  Pemberian pakan  dan  air  minum  dilakukan  secara ad libitum .
Tikus-tikus  dibagi  ke  dalam  4  kelompok perlakuan dimana setiap perlakuan terdiri dari 5 ekor tikus sebagai berikut :
Kelompok I
: Kelompok kontrol (P0) Kelompok II :  Kelompok  perlakuan  dengan etilen glikol (P1) (14 hari).
Kelompok III  :  Kelompok  perlakuan  dengan etilen  glikol  (14  hari)  kemudian  diikuti  dengan ekstrak etanol daun nusa indah putih ( Mussaenda pubescens ) 150 mg/kg BB (P2) (14 hari).
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2021, 4 (2), 48-52
Kelompok IV  :    Kelompok  perlakuan  dengan etilen glikol (14 hari)  kemudian diikuti dengan ekstrak etanol daun nusa indah putih ( Mussaenda pubescens ) 300 mg/kg BB (P3) (14 hari) [7][8][15].

## Prosedur Penelitian
1. Pembuatan  Simplisia Daun  nusa  indah  putih  ( Mussaenda pubescens )  diperoleh  dari  daerah    Winangun kota  Manado.  Daun  dibersihkan  dengan mengeluarkan ranting-ranting daunnya, dipotong-potong dan dicuci dengan air mengalir sampai bersih kemudian dikeringkan pada suhu kamar  dengan  menggunakan  kipas  angin  tanpa sinar matahari.
Setelah kering, daun dihaluskan menggunakan blender, kemudian ditimbang dan diukur  kadar  air,  dengan  nilai  KA  5  %.
Penentuan  kadar  air  menggunakan  metode pengeringan (oven) dilakukan dengan
mengambil  sedikit  sampel  kering  (kira-kira segenggam)  kemudian  timbang  (P1).  Sampel kemudian  dimasukkan  ke  dalam    gelas  kimia, selanjutnya dipanaskan  pada suhu 100 o C selama 5 menit kemudian ditimbang (P2). Pengukuran kadar air dilakukan menurut rumus :
% Kadar Air = (P1- P2) x 100%
2. Pembuatan Ekstrak Serbuk  kering  daun  nusa  indah  putih
( Mussaenda  pubescens )  dimasukkan  ke  dalam botol  bertutup,  lalu  dimaserasi  dengan  etanol 70%  selama  24  jam,  kemudian  disaring. Maserasi  dilakukan  sebanyak  5  kali.  Filtrat ditampung  kemudian  dievaporasi  pada  suhu 40 o C sampai diperoleh ekstrak kental [2].
3. Perlakuan Hewan Uji Setelah  adaptasi,  tikus  perlakuan  untuk kontrol (P0) hanya diberi pakan dan air minum, sedangkan  kelompok    P1,  P2  dan  P3  diberi inducer etilen  glikol  0.75%  dalam  air  minum selama  14  hari  untuk  mendapatkan  tikus urolitiasis. Pada hari ke 15 perlakuan, kelompok P2 dan P3 diberi ekstrak etanol daun nusa indah putih  masing-masing  dengan  dosis  150  mg/kg BB  dan  300  mg/kgBB  yang  telah  diencerkan dengan aquades hingga hari ke 28.
Pemberian  ekstrak  etanol  daun  nusa indah  putih  dilakukan  melalui  oral  dengan menggunakan sonde lambung. Di akhir percobaan,  tikus-tikus  dikorbankan  melalui pembiusan dengan menggunakan eter [7][8][15]. 4. Analisis Kreatinin
Tikus-tikus dibedah, kemudian sebanyak  3  ml  darah  diambil  melalui  jantung dengan  menggunakan  suntik.  Darah  disentrifus dengan  kecepatan  10000  rpm  selama  10  menit dengan  alat  sentrifugasi untuk  mendapatkan serum  darah  guna  analisis  kadar  kreatinin  [8]. Analisis kreatinin dilakukan dengan metode jaffe reaction menggunakan  kit  randox creatinine (reagen)  dan  dibaca  dengan  alat fotometer mikrolab 300 [5]. Adapun langkah-langkah yang dilakukan  untuk  menganalisis  kreatinin  dengan alat fotometer mikrolab 300 sebagai berikut:
a. Menyiapkan  tabung  sesuai  banyaknya sampel (20 buah).
b. Dengan menggunakan mikropipet masukkan  reagen  ke  dalam  masing masing tabung.
c. Tambahkan  masing-masing  5  µL    serum tikus.
d. Dibaca pada alat fotometer mikrolab 300 .
5. Variabel Yang Diamati
Variabel  yang  diamati  adalah  hasil analisis kadar kreatinin serum darah tikus pada 4 kelompok perlakuan (P0, P1, P2, P3).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Data hasil analisis kadar kreatinin  yang terdapat pada serum darah tikus disajikan dalam Tabel 1.
Tabel 1. Kadar Kreatinin Efektivitas Antilitiasis Ekstrak Daun Nusa Indah Putih ( Mussaenda pubescens )* Kelompok Kadar Kreatinin mg/dL Kontrol (PO) Dosis 150 mg/Kg BB (P2) Dosis 300 mg/Kg BB (P3) Kontrol Negatif (EG) (P1) 0.66   ±   0.065 a 0.47   ±   0.085 a
0.48   ±   0.055 a 1.13   ±   0.348 b
* Disajikan dalam rataan dan SD
a,b , signifikan pada p<0.05
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2021, 4 (2), 48-52
Gambar  Grafik    Kadar  Kreatinin  Efektivitas Antilitiasis  Ekstrak  Daun  Nusa  Indah Putih ( Mussaenda pubescens )
Dalam penelitian ini menggunakan tikus putih  jantan.  Hal  ini  dikarenakan  tikus  jantan sebagai  hewan  uji  untuk  urolitiasis  memiliki sistem urinaria yang menyerupai sistem urinaria pada manusia [12].
Pemberian etilen glikol dalam penelitian ini  adalah  untuk  merangsang  terbentuknya urolitiasis, karena  etilen  glikol  merupakan agen nefrotoksik  yang  sering  digunakan  pada  suatu eksperimen  dengan  hewan  model  tikus  untuk merangsang  terbentuknya  kalsium  oksalat  di ginjal [6[.
Pada  penelitian  ini,  kadar  kreatinin serum  pada  tikus  urolitiasis  akibat  pemberian etilen  glikol  selama  14  hari  mencapai  1.13 mg/dL lebih tinggi dibandingkan dengan kontrol yang  hanya  mencapai  0.66  mg/dL.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  adanya  penurunan  fungsi ginjal akibat pemberian etilen glikol yang dapat dilihat  pada  tikus  yang  diinduksi  etilen  glikol yang  membuat  kadar  kreatinin  pada  tikus urolitiasis naik mencapai 1.13 mg/dL.
Pemberian  ekstrak  etanol  daun  nusa indah  putih  ( Mussaenda  pubescens )  sebanyak 150  dan  300  mg/KgBB  dalam  penelitian  ini ternyata  mampu  menurunkan  kadar  kreatinin masing-masing  0.47  dan  0.48  mg/dL.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  pemberian  ekstrak  etanol tersebut  mampu  menurunkan  kadar  kreatinin serum,  namun  tidak  berbeda  nyata  secara statistik.
Nusa indah putih ( Mussaenda pubescens )  termasuk  dalam  genus Mussaenda yang    secara  farmakologi  memiliki  produk alamiah  aktif  khususnya  iridoid,  triterpen,  dan flavonoid.  Keuntungan  spesies  dari  genus  ini
mudah bertumbuh, bebas penyakit dan peptisida. Aktivitas  pengobatan  termasuk  sitotoksik, antiinflamasi, antivirus, antioksidan dan antibakteri  [14],  diuritik,  antipiretik  dan  efektif dalam mengatasi
laringoparengitis, gastroenteritis    dan  disentri  akut  dan  aktivitas anti fertilitas [13].
Pada  pemberian  Dosis  150  mg/kg  BB dan  300  mg/kg  BB  terjadi  penurunan  kadar kreatinin    dalam  darah  tikus  kembali  normal. Ekstrak  daun  nusa  indah  putih  memiliki effektivitas dalam pengobatan urolitiasis karena dapat  menurunkan  kadar  kreatinin  pada  darah tikus.

## KESIMPULAN
Ekstrak daun nusa indah putih ( Mussaenda  pubescens) memiliki  efektivitas dalam  menurunkan kadar kreatinin dalam darah pada tikus urolitiasis.

## DAFTAR  PUSTAKA
1. Choubey  A,    Amarchand  P  ,  Aadarsh  C, Deepa I, Pawar R S, Patil U K. 2010. Potensial  of  Medicinal  Plants  in Kidney,  Gall  and  Urinary  Stone.  Int  J of  Drug  Development  &  Research.
2.9344.
2. Harborne  JB.  1996.    Metode  Fitokimia, penuntun dan cara modern menganalisis Tumbuhan. Penerjemah:  Padmawinata  K  dan Soediro I. Penerbit ITB. Bandung.6-7.
3. Joy, J.W.,
S. Prathyusha., S.
Mohanalakshmi., A.V.S. Praveen
Kumar.,  C.K.  Ashok  Kumar.  2012. Potent  Herbal  Wealth  with  Litholytic Activity.  A Review. Int. J. Innovative Drug Discovery. 2:66-75.
4. Lee,  Y.,  C.H.  Wan,  K.H.  Yong  and  S.C. Luke.  1996.    Testosteron  Enhances Whereas  Estrogen  Inhibits  calcium oxalate  stone  formation  in  ethylene glycol treated Rats. The J. of Urologi. 156:502-505.
5. Mahdi    A.M,  Modawe  A.G,  Amanullah  M, Elrouf  A.B.M,  Zaman  S.G.2014.  a comparative  estimation  of  plasma creatinine  concentration  using  Jaffe’s reaction and kinetic method in patients with  chronic  renal  failure.American Journal  of  Advances  in  Medical Science.                     Vol 2 (1).12-17.
Kadar Kreatinin mg/dL 0 0.5 1 1.5 0.66 1.13 0.470.48 Kadar Kreatinin mg/dL
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2021, 4 (2), 48-52
6. Palmar,  R.K. et  al .  2012.    Preclinical evaluation  of  Antiurolithiatic  Activity of Swertia  chirata steam.  Int.  Res.  J Pharmacy 3:198-202.
7. Pelealu,  J.J.  Tuju,  E.A.  Agu,  J  .2015. Antilithiatic  activity  of  artocarpus altilis  leaves  ethanol  ektract  in  male albino rats.1:(1-8).
8. Rumondor, R. 2015. Uji efektivitas antilitiasis ekstrak daun sirsak
( Annona muricata L) Pada tikus putih ( Rattus novergicus ).
9. Sellaturay, S and C. Fry. 2008. The metabolic basis for urolithiasis.  Surgery 26: 136- 139.
10. Soundararajan,  P.,  R.  Mahesh,  T.  Ramesh, B.V.  Hazeena.  2006.  Effect  of Aerva Lanata on calcium oxalate urolithiasis in rats. Indian J Exp. Biol. 44:981-986. 11. Tondok  B.E.M,  Manoarfa,  A,  Limpeleh,  H.
2012. Angka Kejadian Batu Ginjal Di RSUP Prof DR.R.D. Kandou Manado Periode Januari 2010-Desember 2012.hal 1-7. 12. Umesh  G.,  A.J.M  Christina.  2011.  Effect  of
Rotula  aquatic Lour.  On  ethylene- glicol  induced  urolithiasis  in  rats. IJDDR, Vol 3:0975-9344. 13. Venkatesh  K,  U.Upendra  Rao,  G.V.N.
Kiranmayi, R.Narasimha Naik, N.S.V. Mukharjee, V.N.V Vinay K. Phanindra. International  Journal  of Biological & Pharmaceutical Research , 2013, 4(1), 8-10. 14. Vidyalakshmi K.S, Hannah R.Vasanthi G.V.
Rajamanickam. Ethnobotanical Leaflets, 2008, 12, 469-475.
15. Walean,  M.  2015.  Dna barcode dan  uji efektivitas  antilitiasis  ekstrak  etanol kulit  batang  Pakoba  ( Syzygium  sp ). Tesis.  Program  pasca  sarjana  Jurusan Biologi UNIMA.
16. Xu  R  ,  Zhao  W,    Xu  J,  Shao  B,  Qin  G. Advances  in  Experimental  Medicine and Biology , 1996, 404, 371-382.
17. Zhao,W, J.L . Wolfender, K. Hostettmann, K. Cheng, R. Xu, G. Qin. Phytochemistry , 1997, 45(5), 1073-1078.