## PERTUMBUHAN STEK KRISAN ( Chrysanthemum morifolium
(L.) Ramat) PADA BERBAGAI MEDIA KULTUR IN VITRO
Adven Kristianti 1 ,Kamsinah 1 , Murni Dwiati 1
1 Fakultas Biologi  Universitas Jenderal Soedirman, Purwokerto e-mail: adven.kristianti@gmail.com

## Abstract
Chrysanthemum  ( Chrysanthemum  morifolium (L.)  Ramat  is  one  of  ornamental  plant  commodities with high aesthetic value. As a consequence of increasing demand, the availability of seeds in adequate number  is  needed  with  method  in  vitro.  This  study  aims  to  find  out  the  effect  of  various in  vitro culture media on the growth of chrysanthemum explants and to determine alternative media other than MS for in vitro  growth  of  chrysanthemum  explants.  Experimental  method  arranged  in  a  Randomized  Complete Block Design (RCBD) with four treatments and four blocks is applied. The treatments are Murashige and Skoog    (MS),  Vacint  and  Went    (VW),  Knudson    and      modified  media,  while  node  position  serves  as block. Time of shoot emergence, shoot length, number of leaves on each shoot, and number of roots are measured.  Data  are  analyzed  using  Analysis  of  Variance  (F  test)  with  confidence  intervals  of  95%  and 99%.  Least  Significant  Difference  (LSD)  test  is  applied  when  significant  difference  among  variables  is observed.  Culture  media  shows  significant  effect  on  chrysanthemum  explant  in  vitro  growth.  Knudson media  is  found  as  an  alternative  media  besides  MS  sufficiently  suitable  to  increase  chrysanthemum explants in vitro growth.

## Key words: chrysanthemum, micropropagation, alternative media

## Abstrak
Bunga  krisan  ( Chrysanthemum  morifolium (L.)Ramat  merupakan  salah  satu  komoditas  tanaman hias yang memiliki nilai estetika.Sebagai konsekuensi meningkatnya permintaan bunga krisan diperlukan bibit  krisan  dalam  jumlah  yang  memadai  dengan  metode in  vitro .Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  pengaruh  berbagai  media  kultur in  vitro terhadap  pertumbuhan  stek  tanaman  krisan  dan menentukan  media  alternatif  selain  media  MS  bagi  pertumbuhan  stek  krisan.Metode  yang  digunakan adalah  eksperimental  dengan  Rancangan  Acak  Kelompok  (RAK).Perlakuan  yang  digunakan  adalah media  Murashige  &  Skoog  (MS),  media  Vacint  &  Went  (VW),  media  Knudson,  dan  media  modifikasi. Sebagai  kelompok  atau  blok  digunakan  letak  ruas  batang.  Parameter  yang  diamati  adalah  waktu munculnya  tunas,  panjang  tunas,  jumlah  daun  pada  tunas,  dan  jumlah  akar.Data  yang  diperoleh dianalisis  menggunakan  Analisis  Ragam  (uji  F)  dengan  taraf  kepercayaan  95%  dan  99%.Apabila perlakuan  berpengaruh  nyata,  maka  dilakukan  uji  lanjut  dengan  uji  Beda  Nyata  Terkecil  (BNT).  Media kultur  berpengaruh  terhadap  pertumbuhan  stek  tanaman  krisan  secara in  vitro .  Media  Knudson merupakan  media  alternatif  selain  media  MS  yang  cukup  baik  dalam  meningkatkan  pertumbuhan  stek tanaman krisan secara in vitro .

## Key words: chrysanthemum, mikropropagasi, media alternatif

## Pendahuluan
Bunga  krisan  ( Chrysanthemum  morifolium (L.)  Ramat)    merupakan  tanaman  hias  yang dikenal  pula  sebagai Golden  Flower (Purwanto dan  Martini,  2009).  Menurut  Marwoto  (2005) krisan merupakan komoditas bunga  yang  populer saat  ini,  karena  memiliki  keunggulan  antara  lain, memiliki  bentuk  dan  tipe  yang  beragam.Karena tanaman  krisan  memiliki  bentuk,  ukuran,  dan warna bunga yang bervariasi, maka krisan sangat disenangi konsumen.Puspitasari (2009) menambahkan  bahwa  tanaman  krisan  dapat
dijadikan sebagai bunga potong, karena umumnya  vase  life  bunga  krisan  potong  dapat bertahan selama 10 hari.  Selain itu,  bunga krisan dapat  pula  dijadikanelemen  dalam  dekorasi ruangan dantanaman pot, sebagai penghias meja kantor,hotel serta ruangan.
Permintaan  bunga  potong  krisan  baik  di pasar  domestik maupun  pasar  internasional  yang meningkat,harus  diimbangi  oleh  penyediaan  bibit krisan.Menurut  Sanjaya  (1996)  dalam  rangka mengembangkan  dan  membudidayakan  krisan, diperlukan teknik kultur in vitro . Manfaat penggunaan  teknikkultur in  vitro dapat  digunakan
Biosfera Vol 33, No 2 Mei 2016 : 60- 65
untuk  memproduksi  bibit  krisan  yang  berkualitas danmendapatkan  bibit  dalam jumlah  besar  dalam waktu  yang  relatif  singkat.Beberapa  faktor  yang mendukung  keberhasilan  dalam  teknik  kultur in vitro adalah media, zat pengatur tumbuh (ZPT), dan faktor lingkungan seperti cahaya, kelembapan, dan suhu. Macam-macam
media
yang biasa digunakan  dalam  kultur in  vitro antara  lain,  media Murashige  and  Skoog (MS), Vacint  and  Went (V&W), media Gamborg, Knudson, White, Woody Plant  Medium (WPM),  dan  media  modifikasi. Dixon  (1985)  berpendapat  bahwa  media  yang umum  digunakan  untuk  menumbuhkan  krisan adalah  media Murashige  and  Skoog (MS).Media MS  merupakan  media  dengan  kandungan  nutrisi yang  lengkap.Media Murashige  and  Skoog (MS) mengandung  unsur  hara  makro,  hara  mikro, vitamin,  karbohidrat,  asam  amino,  dan  zat pengatur  tumbuh.  Selain  media  MS  perlu  dicari media tumbuh lain, seperti misalnya media Vacint and  Went (VW),  Knudson,  dan  media  modifikasi, agar  dapat  diketahui  media  pertumbuhan  yang cocok  bagi  pertumbuhan  stek  krisan.  Masing- masing  media  tumbuh  perlu  ditambahkan  arang aktif,  air kelapa,  dan  kentang.Penambahan  arang aktif  berfungsi  untuk  menyerap  senyawa  toksik, sedangkan air kelapa berfungsi sebagai zpt alami dan  kentang  sebagai  sumber  energidalam  media kultur in vitro .
Berdasarkan  uraian  di  atas  maka  muncul permasalahan  yang perlu dikaji, yakni bagaimana pengaruh berbagai media kultur terhadap pertumbuhan  stek  tanaman  krisan  secara in  vitro dan  mencari  media  alternatif  selain  media  MS yang paling baik bagi pertumbuhan stek tanaman krisan secara in vitro . Tujuan penelitian ini adalah untuk  mengetahui  pengaruh  berbagai  media kulturterhadap  pertumbuhan  stek  tanaman  krisan secara in vitro .Menentukan media alternatif selain media  MS  yang  terbaik  bagi  pertumbuhan  stek tanaman krisan secara in vitro .

## Metode Penelitian
Penelitian  dilaksanakan  di  Laboratorium Fisiologi  Tumbuhan  Fakultas  Biologi  Universitas Jenderal Soedirman Purwokerto, dari bulan Maret hingga Mei 2015.
Metode  penelitian  yang  digunakan  adalah metode  eksperimental  menggunakan  Rancangan Acak Kelompok (RAK). Perlakuan yang digunakan  terdiri  atas  4  macam  media,  yaitu media Murashige  and  Skoog (MS),  media Vacint and  Went (V&W),  media  Knudson,  dan  media modifikasi.  Eksplan  yang  digunakan  adalah  stek dengan  satu  daun.Daun  paling  ujung  dibuang. Pembagian  blok  didasarkan  pada  letak  ruas batang.  Ruas  batang  pertama  sebagai  blok pertama,  kemudian  disusul  ruas  dibawahnya sebagai  blok  kedua,  blok  ketiga,  dan  blok keempat, sehingga terdapat 16 satuan percobaan.
Parameter  yang  diamati  adalah  saat munculnya tunas (hari), saat munculnya akar(hari), panjang tunas (cm), jumlah daun pada tunas dan jumlah akar(cm). Parameter pendukung meliputi intensitas cahaya, suhu, dan kelembaban udara.

## Cara Kerja
Pembuatan Media Murashige and Skoog (MS) Pembuatan  media Murashige  and  Skoog (MS)  dilakukan  dengan  cara  menimbang  bahan- bahan  yang  diperlukan  untuk  membuat  larutan stok A, larutan stok B, larutan stok C, larutan stok D,  dan  FeEDTA.  Pengambilan  masing-masing larutan stok yang digunakan untuk membuat 1000 ml media MS adalah sebagai berikut, larutan stok A sebanyak 100 ml, stok B sebanyak 0,1 ml, stok C sebanyak 0,1 ml, stok D sebanyak 0,05 ml, dan stok  E  sebanyak  0,1  ml.  Kemudian,  air  kelapa ditambahkan  150  ml  dan  gula  sebanyak  20  g. Setelah  itu, akuades  ditambahkan  hingga  volume larutan 980 ml. Media dihomogenkan menggunakan magnetic  stirrer .  pH  media  diukur sebesar  5,8.  Apabila  media  terlalu  asam,  maka ditambah  NaOH  1N.Namun,  jika  terlalu  basa, media dapat ditambah dengan HCl 1N. Selanjutnya,  agar  dimasukkan  sebanyak  8  g  dan arang  1  g.  Akuades  ditambahkan  hingga  volume media  mencapai  1000  ml.  Media  dipanaskan sampai  mendidih.  Selanjutnya,  masing-masing botol  kultur  yang  telah  disterilisasi  diisi  media sebanyak  50  ml.  Botol  kultur  ditutup  dengan alumunium foil dan diikat dengan karet gelang.
Data yang diperoleh dianalisis menggunakan  Analisis  Ragam  (Uji  F)  dengan taraf kepercayaan 95% dan 99%.Apabila hasilnya berpengaruh  nyata,  maka  dilanjutkan  dengan  uji Beda Nyata Terkecil (BNT).

## Pembuatan Media  VW
Pembuatan  media  dilakukan  dengan  cara menimbang  bahan-bahan  kimia  yang  digunakan untuk membuat larutan stok A dan larutan stok B pada media V&W sebanyak1000 ml. Pengambilan larutan  stok  A  dan  larutan  stok  B  masing- masingsebanyak100ml.  Kemudian,  air  kelapa ditambahkan  sebanyak  150  ml,  gula  sebanyak 20g,  dan  kentang  150  g.  Setelah  itu,  media ditambahdengan  akuades  hingga  volumenya sebesar
980 ml. Media dihomogenkan menggunakan magnetic  stirrer .  pH  media  diukur sebesar  5,8.  Apabila  media  terlalu  asam,  maka ditambah  NaOH  1N.Namun,  jika  terlalu  basa maka dapat ditambah dengan HCl 1N. Selanjutnya,  agar  dimasukkan  sebanyak  8  g  dan arang  sebanyak  1  g.  Akuades  ditambahkan hingga  volume  media  mencapai  1000  ml.  Media dipanaskan sampai mendidih. Selanjutnya, masing-masing botol kultur yang telah disterilisasi diisi media sebanyak 50 ml. Kemudian botol kultur ditutup  dengan  alumunium  foil  dan  diikat  dengan karet gelang.

## Pembuatan Media Knudson
Pembuatan  media  dilakukan  dengan  cara menimbang  bahan-bahan  kimia  yang  digunakan sesuai komposisi media Knudson. Masing-masing bahan dilarutkan sendiri-sendiri dengan akuades.Setelah  bahan  dilarutkan,  kemudian semua  bahan  dicampurkan  ke  dalam beaker glass .  Selanjutnya,  air  kelapa  ditambahkan sebanyak  150  ml,  gula  sebanyak  20  g,  dan kentang 150 g. Setelah itu, akuades ditambahkan hingga  volumenya  sebesar  980  ml.  Media dihomogenkan menggunakan magnetic stirrer . pH media  diukur  sebesar  5,8.  Apabila  media  terlalu asam,  maka  ditambah  NaOH  1N.Namun,  jika terlalu  basa  ditambah  HCl  1N.  Selanjutnya,  agar dimasukkan sebanyak 8  g  dan  arang sebanyak 1 g.Akuades  ditambahkan  hingga  volume  media mencapai  1000  ml.Media  dipanaskan  sampai mendidih.  Selanjutnya,  masing-masing  botol kultur yang telah disterilisasi diisi media sebanyak 50  ml.  Kemudian  botol  kultur  ditutup  dengan alumunium foil dan diikat dengan karet gelang.

## Pembuatan Media Modifikasi
Pembuatan  media  dilakukan  dengan  cara menimbang  bahan-bahan  kimia  yang  digunakan sesuai  komposisi  media  Modifikasi.  Kemudian  air kelapa  ditambahkan  sebanyak  150  ml,  gula sebanyak  20  g,  dan  kentang  150  g.  Setelah  itu, akuades ditambahkan hingga volumenya sebesar 980 ml. Larutan media dihomogenkan menggunakan magnetic  stirrer .  pH  media  diukur sebesar  5,8.  Apabila  media  terlalu  asam  maka ditambah  NaOH  1N.Namun,  jika  terlalu  basa ditambah  HCl  1N.  Selanjutnya,  agar  dimasukkan sebanyak  8  g  dan  arang  sebanyak  1  g.  Akuades ditambahkan  hingga  volume  media  mencapai 1000  ml.  Media  dipanaskan  sampai  mendidih. Selanjutnya,  masing-masing  botol  kultur  yang telah  disterilisasi  diisi  media  sebanyak  50  ml. Kemudian  botol  kultur  ditutup  dengan alumunium foil dan diikat dengan karet gelang.
Botol  kultur  yang  berisi  media  perlakuan dimasukkan  ke  dalam  autoklaf  dan  ditata  secara vertikal, kemudian autoklaf ditutup rapat. Serilisasi media  dilakukan  dengan  tekanan  0,15  MPa  dan suhu 121 0 C selama 20 menit.
Penanaman eksplan dilakukan dengan cara mengambil plantlet dari dalam botol menggunakan  pinset,  lalu plantlet diletakkan  di dalam  cawan  petri  yang  telah  di  alasi  dengan kertas saring steril. Plantlet dipotong menggunakan scalpel . Planlet yang  ditanam berupa  satu  stek  dengan  satu  daun.Daun  paling ujung dibuang terlebih dahulu, kemudian tanaman krisan distek sesuai dengan pembagian blok yang menggunakan  letak  ruas  batang.  Ruas  batang pertama  sebagai  blok  pertama, kemudian  disusul ruas  dibawahnya  sebagai  blok.  kedua,  blok ketiga,  dan  blok  keempat.  Stek  atau  eksplan ditanam  ke  dalam  botol  kultur  yang  telah  berisi media  perlakuan.  Mulut  botol  dipanaskan  di  atas api  bunsen  dan  ditutup  dengan aluminium  foil
serta wraper .  Selanjutnya,  botol  kultur  diikat dengan karet gelang. Botol kultur yang telah berisi stek  diletakkan  di  dalam  rak  kultur  dengan  suhu antara 24 0 C dan 26 0 C.

## Hasil dan Pembahasan
Pengaruhmedia
kultur terhadap saat munculnya tunas pada stek krisan
Hasil analisis ragam pengaruh media kultur terhadap  saat  muncul  tunas  krisan  menunjukkan bahwa  media  kultur in  vitro mampumemberikan pengaruh yang berbeda terhadap saat muncultunas pada stek krisan. Hal ini disebabkan oleh ke empat media kultur in vitro yang digunakan mengandung  unsur  hara  makro  dan  unsur  mikro yang berbeda.
Tabel  1.  Uji  BNT  pengaruh  media  kultur terhadap  saat  munculnya  tunas  pada stek krisan (hari) Perlakuan Rerata Media MS 7,00 a Media V&W 8,75 b Media Knudson 9,00 b Media Modifikasi 11,5 bc BNT 0,05 1,07
Keterangan:  angka  yang  diikuti  oleh  huruf  yang  sama tidak berbeda nyata pada taraf uji 0,05
Tabel  2.  Uji  BNT  pengaruh  pengelompokan ruas  terhadap  saat  munculnya  tunas pada stek krisan (hari) Kelompok Rerata I 8,25 a II 9,75 b III 9,5   b IV 8,75 a BNT 0,05 1,07
Keterangan:  angka  yang  diikuti  oleh  huruf  yang  sama tidak berbeda nyata pada taraf uji 0,05
Tabel  1.  menunjukkan  bahwa  saat  muncul tunas  paling  cepat  adalah  stek  krisan  yang ditumbuhkan  pada  media  MS.  Sementara  itu, inisiasi  munculnya  tunas  krisan  pada  media modifikasi  paling  lambat.  Hal  ini  disebabkan  oleh kandungan  unsur  hara  makro  dan  unsur  hara mikro  yang  tersediapada  masing-masing  media kultur  berbeda.  Semua  mediamengandung  air kelapa dan kentang, kecuali pada media MS tidak ditambahkan kentang, karena media MS merupakan  media  yang  komposisinya  paling lengkap  dibandingkan  komposisi  media  kultur yang lain. Burnet & Ibrahim (1973) dalam George &  Sherrington  (1984)  menambahkan  bahwa penambahan  air  kelapa  ke  dalam  media  MS berhasil  menumbuhkan  eksplan  stek  krisan menjadi planlet yang  paling  baik.Penambahan  air
kelapa  dapat  memacu  pertumbuhan  kalus  dan meningkatkan pertumbuhan jaringan serta morfogenesis.
Hasil  analisis  ragam  terhadap  saat  muncul tunas  krisan  memperlihatkan  bahwa  kelompok memberikan hasil yang signifikan. Tabel2. menunjukkan  bahwa  Uji  BNT  pengelompokan ruas terhadap saat muncul tunas. Kelompok yang paling baik terdapat pada kelompok I dengan rata- rata  8,25  hari.  Hasil  pada  kelompok  I  tidak berbeda nyata dengan kelompok IV, yaitu dengan rata-rata  sebanyak  8,75  hari.  Kelompok  ruas  ke  I menghasilkan  waktu  paling  cepat  memacu muncul  tunas.  Hal  ini  karena  ruas  ke  I  terletak pada  zona sub apikal, dengan jaringan  yang aktif membelah,  dan  kelompok  ke  IVsesuai  dengan pernyataan Dwijoseputro (1980) yang menyatakan  bahwa  kandungan  auksin  paling tinggi  terjadi  di  puncak  koleoptil,  sehingga kandungan  auksin  sekitar  pucuk  relatif  tinggi. Sementara  itu,  pada  kelompok  IV  yang  terletak pada  pangkal  juga  memiliki  kandungan  auksin cukup  tinggi.  Hal  ini  karena  menurut  Zunaidah (2011)  transport  auksin  pada  akar  terjadi  secara akropetal,  auksin  ditranspor  polar  dari  pangkal akar  menuju  ke  arah  ujung  akar  melalaui parenkim disekitar jaringan vaskuler. Oleh karena itu,  saat  muncul  tunas  stek  krisan  selanjutnya pada kelompok IV.
Pengaruh media kultur terhadap saatmunculnya akar pada stek krisan
Hasil  analisis  ragam  perlakuan  berbagai media  kultur in  vitro dan  pengelompokan  ruas terhadap saat muncul akar stek krisan berpengaruh sangat nyata.
Tabel  3.  Uji  BNT  pengaruh  media  kultur terhadap  saat  munculnya  akar  pada stek krisan (hari) Perlakuan Rerata Media MS 4,75  a Media VW 5,00  a Media Knudson 11,25 b Media Modifikasi 12,50 b BNT 0,05 1,66 Keterangan:  angka  yang  diikuti  oleh  huruf  yang  sama tidak berbeda nyata pada taraf uji 0,05
Tabel  4.  Uji  BNT  pengaruh  pengelompokan ruas  terhadap  saat  munculnya  akar pada stek krisan (hari) Kelompok Rerata I 6,5  a II 8,0  b III 8,5  b IV 10,5 c BNT 0,05 1,66
Keterangan:  angka  yang  diikuti  oleh  huruf  yang  sama tidak berbeda nyata pada taraf uji 0,05
Tabel  3.  uji  BNT  perlakuan  media  kultur in vitro terhadap  saat  muncul  akar  stek  krisan menunjukkan  bahwa  media  MS  mampu  memacu muncul  akar  stek  krisan  paling  cepat  apabila dibandingkan  dengan  muncul  akar  stek  pada media  lainnya.  Sementara  itu,  saat  muncul  akar pada stek krisan pada media modifikasi menunjukkan hasil yang paling lambat dibandingkan  dengan  media  kultur  lainnya. Menurut  Muhit  (2007)  akar  stek  krisan  mulai terbentuk  pada  saat  umur  plantlet  12-15  hari setelah tanam.Tahapan pembentukan akar dimulai dari pembentukan kalus embriogenik pada sel-sel penyusun akar, dilanjutkan dengan inisiasi pembentukan  akar  pada  sel-sel  yang  dekat dengan  jaringan  pengangkut  yang  menjadi meristimatik. Selanjutnya, akar membentuk primordia  akar  di  dalam  jaringan.  Primordia tersebut akan terus tumbuh dan membentuk akar ke  luar  jaringan.  Empat  tahapan  pembentukan akar pada tanamanherba pada umumnya berlangsung sekitar 1 dan 7 hari.
Berdasarkan  Tabel  4.  saat  muncul  akar krisan  yang  paling  baik  yaitu  terdapat  pada kelompok  I  dengan  rata-rata  6,5  hari.Hal  ini sesuai  dengan  pernyataan  dari  Sutejo  (1994) yang menyatakan bahwa pertumbuhan akar yang optimal  terutama  terjadi  pada  kelompok  I  yaitu pada ruas teratas pada bagian zona pendewasaan.Hal  ini  karena  kandungan  auksin pada ruas teratas cukup tinggi.
Brenner  et  al.  (2007)  menjelaskan  bahwa pembentukan  akar  umumnya  dimulai  dengan memindahkan indol  acetic  acid (IAA)  yang diproduksi  oleh  pucuk  tanaman ke  bagian  batang yang luka. Hal ini dapat menstimulasi pembentukan  akar.  Konsentrasi  IAA  dalam jaringan  batang  yang  terluka  meningkat  tajam pada  hari  pertama  setelah  pemotongan.  Tahap awal, 24 jam setelah pemotongan, umumnya stek krisan  tidak  sensitif  terhadap  hormon,  sehingga IAA  bertindak  sebagai  aktivator  pembentukan akar.  Selanjutnya,  kandungan  IAA  akan  menurun pada  hari  ketiga.  Sel-sel  penyusun  akar  aktif membelah  diikuti  dengan  pembentukan  primordia akar, pembentukan akar sampai akar tumbuh dan berkembang.Auksin  umumnya  berperan  penting dalam  inisiasi  pembentukan  akar.  Peran  auksin akan  optimal  bila  faktor  lingkungan  sekitar  juga optimal. Sementara itu, Hendaryono (1998) dalam Widiyatmanto  et  al.  (2012)  menyatakan  kalsium dapat memacu munculnya akar lebih cepat.Kalsium  berfungsi  mengatur  permiabilitas membran  sel.  Akibatnya,  kalsium  dapat  melewati membran  sel  dengan  baik.Kalsium  berpengaruh terutama dalam hal pembentukan ujung bulu-bulu akar.

## Pengaruhmedia kultur terhadap panjang tunas pada stek krisan
Hasil  analisis  ragam  perlakuan  berbagai media kultur terhadap panjang tunasmenunjukkan
bahwa  media  kultur  berpengaruh  nyata  dalam mempengaruhi panjang tunas.
Tabel  5.  Uji  BNT  pengaruh  media  kultur
terhadap  panjang  tunas  pada  stek krisan (cm) Perlakuan Rerata Media MS 4,76  b Media V&W 3,60  b Media Knudson 4,95 b Media Modifikasi 1,60 a BNT 0,05 1,36
Keterangan:  angka  yang  diikuti  oleh  huruf  yang  sama tidak berbeda nyata pada taraf uji 0,05
Hasil uji BNT pada Tabel 5.pengaruhmedia terhadap  panjang  tunas  stek  krisan  menunjukkan bahwa  media  Knudson  mampu  memacu  panjang tunas  sebesar  4,95  cm.  Panjang  tunas  pada media Knudson lebih baik daripada panjang tunas pada  media  MS.  Hal  ini  karena  di  dalam  media Knudson juga ditambahkan bahan organik berupa kentang  sebanyak  150  gram  dan  air  kelapa sebanyak  150  ml.  Sementara  itu,  di  dalam media MS  hanya  ditambahkan  air  kelapa  sebanyak  150 ml.  Kandungan  karbohidrat  pada  kentang  yang menjadi penyusun dalam media Knudson merupakan  komposisi  yang  paling  sesuai  untuk memacu  panjang  tunas  tanaman  krisan.  Menurut Widiastoety & Bahar (1995) karbohidrat merupakan  sumber  karbon  dan  energi.Sumber karbon  dan  energi  yang  sering  digunakan  adalah sukrosa  dan  glukosa.Senyawa-senyawa  organik tersebut  selain  sebagai  bahan  bakuproses respirasi  berupa  ATP  dan  NADPH 2 untuk menghasilkan  energi,  kedua  senyawa  ini  juga sebagai bahan pembentuk sel-sel baru.
Pengaruh  media  kultur  terhadap  jumlah  daun pada tunas stek krisan
Hasil  analisis  ragam  perlakuan  berbagai media  kultur  terhadap  jumlah  daun  menunjukkan bahwa  aplikasi  media  kultur  cukup  signifikan dalam memacu jumlah daun stek krisan.
Tabel  6.  Uji  BNT  pengaruh  media  kultur terhadap  jumlah  daun  pada  stek krisan Perlakuan Rerata Media MS 10,00  b Media V&W 9,00    b Media Knudson 9,62    b Media Modifikasi 6,50    a BNT 0,05 2,24 Keterangan:  angka  yang  diikuti  oleh  huruf  yang  sama tidak berbeda nyata pada taraf uji 0,05
Hasil  uji  BNT  pada  Tabel6.menunjukkan bahwa pembentukan daun paling banyak diperoleh  pada  stek  yang  ditumbuhkan  pada
media  MS,  sebanyak  10  helai  daun.Jumlah  daun stek  krisan  yang  ditanam  pada  media  MS  tidak berbeda  jauh  dengan  jumlah  daun  pada  media Knudson sebanyak  9,62 helai daun.
Hasil penelitian Matatula (2003)
menggunakan  bahan  organik  air  kelapa  dengan perlakuan  media  MS  50%  dan  50%  air  kelapa ternyata  memberikan  hasil  yang  terbaik  pada pertumbuhan tanaman stek krisan secara in vitro . Menurut  Morel  (1974),  air  kelapa  merupakan endosperm  dalam  bentuk  cair  yang  mengandung unsur  hara  dan  zat  pengatur  tumbuh,  sehingga dapat  menstimulasipertumbuhan.  Air  kelapa  juga mengandung  zeatin  yang  termasuk  ke  dalam golongan  sitokinin.  Zeatin  bermanfaat  untuk memacuterjadinya proses organogenesis daunyang  dapat  mempercepat  pertumbuhan daun.  Berdasarkan  hasil  penelitian  Sari  et  al. (2011)jumlah  daun  terbanyak  pada  perlakuan penambahan  air  kelapa  300  ml/l.  Menurut Wuryaningsih  &  Sutater  (1992)  jumlah  daun berhubungan  erat  dengan  jumlah  cabang  dan tinggi  tanaman.Semakin  banyak  jumlah  cabang yang  terbentuk  dan  semakin  tinggi  suatu tanaman, maka semakin banyak pula jumlah daun yang terbentuk.
Pengaruh berbagai
media kultur terhadapjumlah akar pada stek krisan
Hasil  analisis  ragam  pengaruh  berbagai media  kultur  terhadap  jumlah  akar  stek  krisan menunjukkan hasil yang tidak signifikan.
Hipotesis  penggunaan  media  kultur in  vitro berpengaruh terhadap pertumbuhan stek tanaman  krisan.  Media  modifikasi  merupakan media alternatif selain media MS untuk pertumbuhan  stek  krisan  secara in  vitro tidak sesuai  dengan  hasil  yang  diperoleh,  karena komposisi  media  modifikasi  sangat  sederhana. Hasil  pengamatan  secara  visual  menunjukkan bahwa  pertumbuhan  stek  krisan  pada  berbagai media  kultur in  vitro yang  paling  baik  ditunjukkan pada  perlakuan  media  Knudson.  Secara  visual dapat  dilihat  dari  panjang  tunas  dan  jumlah  daun yang dihasilkan pada media Knudson paling baik. Media  selain  MS  yang  cukup  baik  memacu pertumbuhan  stek  krisan  adalah  media  Knudson. Media  ini  dapat  dijadikan  media  alternatif  dalam memperbanyak stek krisan secara in vitro .
Simpulan
Berdasarkan hasil penelitian diatas disimpulkan  bahwa  media  kultur  berpengaruh terhadap  pertumbuhan  stek  tanaman  krisan
secara in vitro . Media Knudson merupakan media alternatif selain media MS yang cukup baik dalam meningkatkan  pertumbuhan  stek  tanaman  krisan secara in vitro .

## Daftar Referensi
Brenner,  M.L.,  Wolley,  D.J,  Sjut,  V.  &  Salerno,
D.,1987.  Analysis  of  Apical  Dominance in relation to IAA Transport. Hortscience , 25(5), pp. 833-835.
Dixon,  R.A.,  1985. Plant  Cell  Culture  a  Pratical Approach ,  IRL,  Press,  Limited,  Oxford, Washington DC,4.
Dwijoseputro, 1980. Pengantar Fisiologi Tumbuhan . Jakarta: Penerbit PT. Gramedia.
George,  E.F  &  Sherington,  P.D.,  1984. Handbook of  Plant  Propagation  by  Tissue  Culture . England (GB): Eastern Press Ltd.709p.
Marwoto, B., 2005. Standar Prosedur Operasional Budidaya  Krisan  Potong.  Direktorat
Budidaya Tanaman Hias. Jakarta: Direktorat Jenderal Hortikultura. Departemen Pertanian. Matatula,  A.J.,  2003.  Substitution  of  MS  Medium with  Coconut  Nater  and  Gandasil-D  on Chrysanthemum Tissue Culture. Eugenia ., 9(4), pp. 203-211.
Morel,  G.M.  1974.  Clonal  multiplication  of Orchids.,  (C.  Withner  eds.)  Scientific Wiley, NewYork. pp. 169-222.
Muhit,  A.,  2007.,  Teknik  Produksi  Tahap  Awal Benih Vegetatif Krisan ( Chrysanthemum morifolium R.). Buletin Teknik Pertanian , 12 (1), pp. 14-18.
Purwanto,  A.  W.  &  Martini,  T.,  2009. Krisan  :
Bunga Seribu Warna . Yogyakarta: Kanisius.
Puspitasari,  I.,  2009.  Budidaya  Bunga  Potong
Krisan ( Chrysanthemum
sp.) di
Kelompok Tani Udi Makmur Wonokerso, Hargobinangun, Pakem, Sleman.Skripsi. Surakarta: Jurusan Agribisnis Hortikultura  dan  Arsitektur  Pertamanan. Universitas Sebelas Maret. Sanjaya,  L.,  1996.  Krisan  Bunga  Potong  dan Tanaman  Pot  yang  Menawan.  Litbang Pertanian, 3(15), pp. 55-60. Sari,  Y.P,  Manurung,  H  &  Asipah.,  2011. Pengaruh Pemberian Air Kelapa terhadap Pertumbuhan Anggrek Kantong Semar ( Paphiopedilum supardii
Braem  &  Loeb)  pada  Media  Knudson Secara In  Vitro . Mulawarman  Scientifie , 10(2), pp. 1412-498X.
Sutejo  MM.  1994. Pupuk  dan  Cara  Pemupukan .
Jakarta: Rineka Cipta.
Widiastoety,  D.  &  Bahar,  F.A.,  1995.Pengaruh
Berbagai Sumber dan Kadar Karbohidrat terhadap Pertumbuhan
Planlet  Anggrek  Dendrobium. J.Hort ., 5(3), pp.76-80.
Widiyatmanto,  P.P., Nurhidayati, T.,  & Nurfadilah,
S.  2012.  Pengaruh  Jenis  Media  dan Konsentrasi  NAA  ( Naphthalene  Acetic Acid ) terhadap Pertumbuhan dan Perkembangan Biji Dendrobium capra J.J Smith Secara In Vitro . Skripsi.Biologi FMIPA ITS, Surabaya.
Wuryaningsih,  S.  &  Sutater,  T.,  1992.Pengaruh Dosis  N  dan  K  terhadap  Pertumbuhan dan  Produksi  Bunga  Krisan  Putih  Lokal Cipanas. J. Hort ., 2 (3), pp. 23-27.
Zunaidah,  S.  2011.  Laporan  Praktiukum  Fisologi Tumbuhan  Pengaruh  Hormon  Auksin terhadap Pertumbuhan dan Perkembangan Akar. (4), pp. 1315-01.