## SCREENING SENYAWA METABOLIT SEKUNDER PADA FUNGI LAUT EMERICELLA NIDULANS
Irah Namirah 1 , Antonius Herry Cahyana 2 , Muhammad Nursid 3 , Nurrahmi Dewi Fajarningsih 3
1 Pendidikan Kimia, FKIP, Universitas Sultan Ageng Tirtayasa, Serang, Indonesia
2 Kimia, FMIPA, Universitas Indonesia, Depok, Indonesia
3 Balai Balai Besar Riset Pengolahan Produk dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan, Kementrian Kelautan dan Perikanan, Jl. KS tubun Petamburan VI, Jakarta 10260, Indonesia
*E-mail: irahnamirah@untirta.ac.id
Abstract: Investigation  bioactive  secondary  metabolite  previously,  Research  Center  for Marine and  Fisheries  Product Processing  and Biotechnology  found  anticancer  properties  to Emericella nidulans marine fungi strain MFW39 isolated from ascidia Aplidium longithorax collected  from  Wakatobi  Marine  National  Park.  Emestrin  was  a  compound  with  an  ETP (epipolithiodioxopiperazine)  group  that  found  in Emericella  nidulans marine  fungi  have cytotoxicity  properties.  Emestrin  show  cytotoxic  activity  to  breast  cancer  cell  line  [T47D], cancer  cervic  cell  line  [HeLa],  colon  cancer  cell  line  [WiDr]  and  liver  cancer  cell  line (HepG2).  The  aim  of  the  research  to  investigated  other  derivative  of  emestrin  compound. The  screening  with  UPLC  (Ultra  Performance  Liquid  Chromatography)  mass  analysis  q- TOF/MS  (quadrupole-Time  of  Flight/Mass  spectra)  positif  mode  (ES+)..  Monoisotopic  ion Derivative compound of emestrin that detected from (ES+) UPLC-ESI-qTOF-MS spectrum are emestrin B, emestrin C. Another compound that detected are cytochalasin B dan C.
Keywords: Emericella  nidulans ,  Emestrin,  Emestrin  derivative,  UPLC-  q-TOF/MS spectrum
Abstrak: Pada  penelitian  pencarian  metabolit  sekunder  bioaktif  sebelumnya,  Balai  Besar Riset  Pengolahan  Produk  dan  Bioteknologi  Kelautan  dan  Perikanan  menemukan  fungi Emericella  nidulans strain  MFW39  yang  diisolasi  dari  ascidia Aplidium  longithorax dari Taman  Nasional  Laut  Wakatobi,  Sulawesi  tenggara  memiliki  aktivitas  sitotoksik  terhadap beberapa sel kanker, diantaranya sel turunan kanker payudara (T47D), liver (HepG2), kanker usus (C28) dan serviks (HeLa). Senyawa yang berkontribusi terhadap sifat sitotoksik adalah senyawa emestrin yang  memiliki gugus ETP (epipolithiodioxopiperazine). Hasil isolasi dan karakterisasi  senyawa  bioaktif  yang  ditemukan  pada  fungi Emericella  nidulans strain MFW39 adalah senyawa emestrin. Penelitian ini bertujuan mencari derivat senyawa emestrin lain.  Proses  screening  dilakukan  dengan  mencari  puncak  monoisotopik  senyawa  emestrin beserta  derivatnya  dan  beberapa  metabolit  sekuder  dengan  menggunakan  metode  UPLC (Ultra Performance Liquid Chromatography) analisa massa q-TOF/MS (quadrupole-Time of Flight/Mass  spectra)  mode  positif  (ES+).  Senyawa  metabolit  sekunder  yang  berhasil terdeteksi  diantaranya  adalah  derivat  senyawa  emestrin  yaitu  emestrin  B,  emestrin  C,  dan senyawa cytochalasin B dan C.
Kata kunci: Emericella nidulans , Emestrin, Derivat emestrin, Spektrum UPLC- q-TOF/MS

## PENDAHULUAN
Beberapa  metabolit  sekunder  yang
telah berhasil diisolasi dari fungi
Emericella  nidulans ,  diantaranya  adalah senyawa  turunan  dihidroxanton,  nidulalin A, senyawa turunan benzophenon, nidulalin  B  (Kawahara  et  al.,  1994), senyawa  EPT,  emestrin  (Nursid  et  al., 2011),  Emestrin  B  (Nursid  et  al.,  2015).
Senyawa  nidulalin  A  dan  B  diisolasi  dari kultur Emericella nidulans var. Lata, strain
IN-68,  yang  diisolasi  dari  tanaman  obat Indonesia, Trigonella foenumgraecum .
Senyawa  xanton  ini  secara  biogenesis merupakan  turunan  antraquinon  melalui pemutusan oksidatif cincin quinone (Greve et al., 2010).
Turunan  benzophenon,  arugosin,  dan alkaloid indol, emindole DA, diisolasi dari fungi Emericella  nidulans var.  Acristata,
yang diisolasi dari alga hijau Mediterranean  (Greve  et  al,  2010). Emericella nidulans pun diketahui menghasilkan sterigmatocystin, suatu mikotoksin  yang  biasa  ditemukan  pada Aspergillus  versicolor (Pitt  &  Hocking,
2009). Beberapa struktur metabolit sekunder pada kapang Emericella nidulans
disajikan pada Gambar 1. Genus Emericella atau Aspergillus membiosintesis beragam metabolit
sekunder  dengan  aktivitas  biologi  yang menarik, sehingga dapat dijadikan
senyawa  pemandu  dalam  pengembangan agen obat baru.
Arugosin A Arugosin B Emindole DA Nidulalin A Nidulalin B
Gambar 1. Beberapa metabolit sekunder pada kapang Emericella nidulans
Genus Emericella merupakan  genus yang paling banyak menghasilkan senyawa bioaktif. Diantaranya, Emericella nidulans mengandung  senyawa  alkaloid indole, poliketida terprenilasi, benzophenon,  dan  xanthon  (memiliki aktivitas  sebagai  antitumor). Emericella variecolor mengandung quinone
(sitotoksik),  indole  alkaloid  (aktivitas penangkal radikal), poliketida (antimikroba). Emericella  quadrilineata
O O OH O OH OH O O OH O OH OH OH H N H O O OH COOMe OH O H O OH O H O O
O N N O O S S O O O OH OH O O H
mengandung senyawa xanton (immunostimulant). Emericella heterothalica dan Emericella striata mengandung senyawa e pitetrathiodioxopiperazine (antialergi) (Figueroa et al., 2009). Epipolithiodioxopiperazine (ETP)
merupakan salah satu kelas senyawa toksin yang  telah  diketahui  aktivitas  biologinya selain  poliketida,  peptida  siklik,  alkaloid, dan  sesquiterpenoid.  Ciri  khas  kelas  ETP adalah  jembatan  disulfida  internal.  ETP merupakan metabolit sekunder toksik yang hanya  diproduksi  oleh  fungi  (Gardiner  et al., 2005).
Senyawa  emestrin  dihasilkan  dari fungi  laut  yang  bergenus Emericella .
Pertama  kali,  emestrin  diisolasi  dari  fungi Emericella
quadrilineata
oleh
Maebayashi,dkk  dan  diketahui  sebagai
mycotoxin.  Sementara  mycotoxin  yang ditemukan pada Emericella striata
diantaranya  adalah  sterigmatocystin  dan emestrin.  Sterigmatocystin  lebih  menjadi perhatian para mikotoksikologis, dikarenakan senyawa ini ditemukan sebagai kontaminan makanan, pada beberapa  jenis  produk  seperti  keju, gandum, beras,  biji kopi  hijau, jagung dan lain  –  lain.  Sementara  emestrin  tidak ditemukan.  Emestrin  sendiri  memiliki aktivitas  antifungal  (Seya et  al .,    1985).
Struktur Emestrin dan derivatnya diberikan pada Gambar 2.
Emestrin
(C s H 22 N 2 O 10 S 2 ) Emestrin B (C 27 H 22 N 2 O 10 S 3 )
Emestrin C (C 28 H 24 N 2 O 10 S 2 )
Gambar 2. Struktur Emestrin dan derivatnya
Penelitian beberapa dekade
sebelumnya telah mengisolasi dan mengidentifikasi  senyawa emestrin berasal dari Emericella striata (Seya et al ., 1985),
Aspergillus  sp (Seya et  al .,  1986),
Emericella  faveolata (Ooike et  al .,  1997),
Verticimonosporium  ellipticus (Herath et al ., 2005) dan Emericella nidulans (Nursid et  al .,  2011).  Senyawa  ini  diketahui memiliki  kemampuan  aktivitas  biologi sebagai  antifungal  (Seya et  al .,    1985).
O N N O O S S O O O OH OH OH O H O NMe N O O O O O OH OH OH OMe H S 3
Perkembangan berikutnya diketahui, bahwa  emestrin  memiliki  kemampuan aktivitas  biologi  terhadap  beberapa  sel kanker  (Nursid et  al .,  2011),  sel  kanker prostat (Onodera et al., 2004) dan  sebagai antagonis  reseptor  chemokine  (Herath et al ., 2005).

## METODE

## Bahan
Spora fungi Emericella  nidulans MFW-39 merupakan koleksi Laboratorium Bioteknologi Balai Besar Riset
Pengolahan  Produk  dan  Bioteknologi Kelautan dan Perikanan.

## Kultivasi dan kultur
Fungi  (1L  x30)  dikultur  selama  4  -  5 minggu  dalam kondisi  statis  pada  suhu 27 – 29 0 C dalam  medium MEA  cair.  Metode kerja  kultivasi dan  isolasi senyawa emestrin  berdasarkan  prosedur  yang  telah dilakukan  Nursid  et  al.,  (2011).  Spora strain  fungi Emericella  nidulans MFW-39 yang  disimpan  dalam  freezer  suhu  -70 0 C dikultur  dalam  cawan  petri  media  MEA ( Malt  Extract  Agar )  dan  CYA  ( Czepak Yeast Agar ) padat.  Setelah 3-4 hari, spora dipindahkan ke  dalam tabung reaksi 5 mL media  MEA  cair.  Spora  fungi  cair dipindahkan  ke  dalam  labu  Erlenmeyer 500 mL media MEA cair. Setelah 2 hari, 2
mL  spora  dalam  kultur  cair  dimasukan  ke dalam labu ukur 3L yang berisi 1 L media cair  MEA  dengan  kandungan    0.3% ekstrak  malt,  0.3%  ekstrak  yeast,  0,5  % dan  air  laut  dengan  kadar  salinitas  31%. Fungi dikultur selama 4 – 5 minggu dalam kondisi statis pada suhu 27 – 29 0 C.

## Fraksinasi ekstrak kering
Prosedur berdasarkan yang telah dilakukan  Nursid et  al ., (2011).  Miselium kering  dimaserasi  dengan  pelarut  metanol dan diklorometana (1:1) 1200 mL. Ekstrak diuapkan  dengan  evaporator  buchi  pada kondisi  tekanan  vakum  130  –  100  mbar, temperatur 35 0 C dan rotasi 75 rpm.
Fraksinasi  terhadap  ekstrak  kasar miselium dilakukan dengan kolom kromatografi vakum  sepra silika (50μm) 2 x  12  cm  dan  dielusi  dengan    n-heksana  : etil asetat = 8 :  1, n-heksana : etil asetat = 1 : 1, etil asetat100 %,  dan  metanol 100% dengan volume masing-masing 200 mL.

## Identifikasi fraksi
Penentuan  massa  per  muatan  (m/z) beberapa metabolit sekunder menggunakan  metode  UPLC-qTOF-MS ( Ultra Performance
Liquid Chromatography–qToF-Mass
Spectrometry ).  Kolom  yang  digunakan UPLC BEH C18 1.7 µm, 2.1x50 mm. Laju alir eluen 0.3 mL/min. Fase gerak A: H2O
+  0.1%  asam  format  dan  B:  Asetonitril  + 0.1% asam format dengan metode gradien.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Kultivasi fungi Emericella nidulans
Proses  kultivasi  fungi  diawali  dengan mengkultur  spora  strain  fungi Emericella nidulans MFW-39  (koleksi  Balai  Besar Riset Pengolahan Produk dan Bioteknologi Kelautan  dan  Perikanan)  yang  disimpan dalam  freezer  -70 0 C  dalam  cawan  petri dengan  menggunakan  dua  jenis  media yaitu  MEA ( Malt Extract Agar )  dan  CYA ( Czapek  Yeast  Agar )  padat.  Penggunaan dua media ini dilakukan untuk mengidentifikasi Emericella nidulans . Ciri koloni Emericella  nidulans pada  media CYA  diantaranya  adalah  berdiameter  40- 50  mm,  cukup  padat,  miselium  berwarna putih,  sel  hulle  berwarna  putih  kekuning- kuningan.  Sementara  pada  media  MEA, memiliki ciri koloni  yaitu berdiameter 35- 60 mm, miselium berwarna putih, sel hulle berwarna  kuning  pucat  atau  kekuning- kuningan (Pitt et al ., 2009).
Gambar 3. Koloni Emericella nidulans
Biomassa  fungi  dikultivasi  dari  spora atau dari sel – sel vegetatif pada kultur cair dan  akan  meningkat  dengan  pembentukan sel  vegetatif  maupun  filamen  –  filamen hifa serta pembentukan sekelompok miselium  yang  sering  memiliki  bentuk yang  bervariasi.  Kultivasi  fungi  pada media cair memungkinkan untuk memperoleh  senyawa  metabolit  sekunder yang memiliki bioaktivitas tertentu (Nursid, et  al ,.  2010).  Metabolit  sekunder bioaktif  dihasilkan  oleh  suatu  organisme laut sebagai upaya pertahanan diri terhadap  perubahan  lingkungan  yang ekstrim,  diantaranya  faktor  suhu,  salinitas, pH,  dan  cahaya  matahari.  Penelitian Nursid  (2010),  kondisi  optimum  yang diperlukan  untuk  mendapatkan  senyawa bioaktif  (emestrin)  adalah  kadar  salinitas 31% dan suhu 27 0 C.
Proses  kultivasi  fungi Emericella nidulans menghasilkan 498,4 gram
miselium. Ekstraksi miselium menghasilkan  ekstrak  kasar  sebanyak
44,8390  gram  dan  berwarna  coklat  tua kemerahan. Ekstraksi miselium menggunakan  pelarut  diklorometana  – metanol  (1:1)  dengan  target  senyawa organik semipolar.
Ekstrak  kasar  miselium  difraksinasi dengan variasi  pelarut berdasarkan tingkat kepolaran.  Tujuan  dari  fraksinasi  adalah untuk  memisahkan  senyawa  –  senyawa
berdasarkan  tingkat  kepolaran.  Senyawa organik  larut  dalam  air  atau  polar (misalnya  alkaloid,  sikimat,  poliketida, gula,  asam  amino,  polihidroksisteroid  dan saponin) dapat ditemukan dengan menggunakan pelarut n-butanol, kloroform (CHCl 3 ),  etil  asetat  (EtOAc),  aseton, metanol  (MeOH),  etanol,  air  atapun kombinasi pelarut  tersebut. Senyawa
semipolar dapat diekstraksi dengan diklorometana  atau  metanol.  Sementara senyawa  dengan  kepolaran  yang  rendah (terpene,  hidrokarbon  dan  asam  lemak) diekstraksi  menggunakan  pelarut  karbon tetraklorida dan heksana (Duarte, 2005).
Berdasarkan  penelitian  Nursid  (2011), ekstrak  kasar  difraksinasi  menggunakan  4 jenis  eluen  yaitu  n-heksana  –  etil  asetat (8:1),  n-heksana  –  etil  asetat  (1:1),  etil asetat dan metanol. Ekstrak kasar difraksinasi  menggunakan  kromatografi kolom  vakum  dengan  fase  diam  silika (50μm)  menghasilkan  4  fraksi.  Senyawa emestrin  ditemukan  pada  fraksi  yang semipolar  yaitu  fraksi  etil  asetat  (F3) (Nursid et al .,  2011).
Fraksi etil asetat (F3) dilakukan proses pemurnian lebih lanjut untuk menghilangkan  senyawa  –  senyawa  yang lebih non polar. Proses pemurnian dilakukan  dengan  menggunakan  kolom tabung  silika  LC preparative  phenomenex (10gr/60mL) dan fraction collector dengan
kecepatan  150  tetes/tabung.  Hal  ini bertujuan  untuk  mendapatkan  fraksi  yang lebih kecil sehingga mendapatkan pemisahan yang lebih baik. F3 difraksinasi dengan  variasi  eluen:  n-heksana  –  etil asetat  (8:1),  n-heksana  –  etil  asetat  (5:1), n-heksana – etil asetat (1:1), etil asetat dan etil  asetat  –  metanol  (8:1)  (Nursid et  al ., 2011).

## Screening  senyawa  metabolit  sekunder pada fungi Emericella nidulans
Beberapa  metabolit  sekunder  yang telah berhasil diisolasi dari fungi Emericella  nidulans ,  diantaranya  adalah senyawa  turunan  dihidroxanton,  nidulalin A, senyawa turunan benzophenon, nidulalin  B  (Kawahara et  al .,  1994),
senyawa  EPT,  emestrin  (Nursid et  al .,
2011).  Senyawa  nidulalin  A  dan  B diisolasi  dari  kultur Emericella  nidulans var.  Lata,  strain IN-68,  yang  diisolasi  dari tanaman obat Indonesia, Trigonella foenumgraecum .  Senyawa  xanton  ini secara  biogenesis  merupakan  turunan antraquinon  melalui  pemutusan  oksidatif cincin quinone (Greve et al ., 2010).
Nielsen  et  al,  telah  mengidentifikasi dan  mengklasifikasi  474  mikotoksin  dan metabolit  fungi  dari  beberapa  genus, diantaranya Penicillium , Aspergillus , Fusarium , Alternaria , Trichoderma dan stachybortys .  Berdasarkan  data  Nielsen
(2003)  menjadi  acuan  dalam  pencarian beberapa metabolit sekunder selain emestrin terhadap fraksi etil asetat menggunakan  metode    UPLC-ESI-qTOF- MS.
UPLC
merupakan metode kromatografi  cair  kinerja  ultra  tinggi. Kolom yang  digunakan  memiliki  diameter partikel yang lebih kecil dibanding HPLC, sekitar  1.7  μm  (Schwartz,2005).  Sehingga resolusi lebih tinggi  dan  waktu  pemisahan akan  lebih  cepat.  Sumber  ionisasi  yang digunakan  adalah  Electrospray  ionisation (ESI). MS-ESI merupakan metode analitik yang  baik  untuk  menganalisa  ion  molekul polar  dan  senyawa  –  senyawa  berbobot molekul tinggi (Supratman, 2010).
Kombinasi  ESI/MS  dengan  analisa  massa
q-TOF/MS ( quadrupole-Time of Flight/Mass spectra ) menyebabkan UPLC- ESI-qTOF-MS memiliki selektivitas, sensitivitas dan resolusi lebih tinggi (Chen, 2007),  sehingga  puncak  –  puncak  minor pada kromatogram HPLC dan berkonsentrasi  rendah  dapat  terbaca  pada UPLC.
Tabel 1. Data Kalkulasi Puncak Monoisotopik senyawa Rumus struktur M M+H Emestrin Emestrin B Emestrin C Emestrin D Emestrin E Secoemestrin Cytochalasin A Cytochalasin B Cytochalasin C
C 27 H 22 N 2 O 10 S 2 C 27 H 22 N 2 O 10 S 3 C 28 H 24 N 2 O 10 S 2 C 28 H 24 N 2 O 10 S 3 C 28 H 24 N 2 O 10 S 4 C 26 H 22 N 2 O 7 S 2 C 29 H 35 NO 5 C 29 H 37 NO 5 C 30 H 37 NO 6 598,0716 630,0437 612,0872 644,0593 676,0314 538,0864 477,2515 479,2672 507,2621 599,0794 631,0515 613,0951 645,0671 677,0392 539,0947 478,2593 480,2750 508,2699
Gambar 4. Spektrum Mode Positif (ES+) LC-ESI-qTOF-MS Emestrin
Gambar 5. Spektrum Mode Positif (ES+) LC-ESI-qTOF-MS Emestrin B
Gambar 6. Spektrum Mode Positif (ES+) LC-ESI-qTOF-MS Emestrin C
Gambar 7. Spektrum Mode Positif (ES+) LC-ESI-qTOF-MS Cytochalasin B
Pada  gambar  4,  puncak  monoisotopik ion  molekul  emestrin  UPLC-ESI-qTOF- MS mode positif (ES+) pada waktu retensi
3.985 terdapat ion fragmentasi dengan  m/z 517.1248 [M-S 2 -OH]+, 599.0801 [M+H] + , 621.0627  [M+Na] + dan  622.0651  [M- H 2 O+ACN] + . Hal
ini dapat dikonfirmasikan  dengan  publikasi  Nielsen et  al. puncak  dasar  ion  monoisotopik predominan  molekular  emestrin  517,  499, 535, 489, 599. Kedua  fraksi  menunjukkan puncak dasar ion monoisotopik molekul.
Pada  gambar  5,  spektrum  UPLC-ESI- qTOF-MS mode positif (ES+)
menunjukkan adanya puncak monoisotopik ion molekul emestrin B pada m/z  631.0525  [M+H]+,  613.0396  [M- OH]+,  dan  653.0437  [M+Na]+,  pada waktu  retensi  4.031.  Data  m/z  fraksi  3.7 sesuai  dengan  data  Nielsen et  al. (2003) puncak monoisotopik ion molekul senyawa  emestrin  B  pada  517,  499(21), 613(2), 631(10).
Menurut  Seya et  al. (1985)  senyawa emestrin selalu diisolasi bersamaan dengan emestrin B. Berdasarkan pencarian puncak ion  monoisotopik  [M+H] + pada  fraksi  etil asetat didapatkan puncak ion
Gambar 8. Spektrum Mode Positif (ES+) LC-ESI-qTOF-MS Cytochalasin C
monoisotopik  emestrin  (m/z  599.0773) pada waktu retensi 3.935,  emestrin B (m/z 631.0518)  pada  waktu  retensi  4.035, Emestrin  C  (m/z  613.0934)  pada  waktu retensi 4.508.
Fraksi ini juga terdeteksi senyawa lain selain  derivat  emestrin,  yaitu  cytochalasin B dan cytochalasin C. Spektrum ditunjukan  pada  gambar  7  dan  8, cytochalasin B (m/z 480.2368) pada waktu retensi  4.844  dan  cytochalasin  C  (m/z 508,2699) pada waktu retensi 4,712.
Puncak ion monoisotopik dikonfirmasi  dengan  data  Nielsen  (2003) dan  didapatkan  m/z  517,  599,   (emestrin).
m/z 631 (emestrin B), m/z 480 (cythochalasin B) dan m/z 508
(cytochalasin C). Berdasarkan perhitungan puncak monoisotopik melalui UPLC-qTof- MS  menunjukan  puncak  monoisotopik senyawa emestrin, emestrin B, emestrin C, cythochalasin B dan cytochalasin C.
Pada  penelitian  Nursid,  et  al.,  (2015) telah  berhasil  diisolasi  Emestrin  B  dan isolat  diidentifikasi  melalui  spektrum  H- NMR  dan  C-NMR.  Data  terkonfirmasi dengan  data  Nozawa, et  al. Berdasarkan
penelitian Nursid, et al, kedua senyawa ini menunjukan  aktivitas  sitotoksik  terhadap beberapa  sel  kanker  yaitu  kanker  serviks (Hela),  kanker  payudara  (T47D)  dan kanker usus (WiDr).
Onodera et al. (2004) berhasil mengisolasi  emestrin  C  (MPC1001)  dan analognya  (MPC1001B-H)  dari  kelas fungi Cladorrhinum sp . MPC1001 memiliki  aktivitas  biologi  yang  sangat potensial  sebagai  antitumor.  Oleh  karena itu diharapkan penelitian berikutnya adalah dapat mengisolasi senyawa emestrin C pada fungi Emericella nidulans dan menguji aktivitas sitotoksiknya.

## KESIMPULAN
Beberapa  senyawa  metabolit  sekunder yang  terdeteksi  melalui  spektrum  mode positif  UPLC-ESI-qTOF-MS  pada  fungi laut Emericella  nidulans adalah  emestrin,
emestrin  B,  emestrin  C,  cytochalasin  B dan cytochalasin C. Data ini dapat menjadi acuan untuk mengisolasi senyawa emestrin C  yang  diketahui  memiliki  potensi  yang lebih besar.

## DAFTAR RUJUKAN
Chen, G., Pramanik, B. N., Liu, Y., Mirza, A.  U.  (2007).  Applications  of  LC/MS in  structure  identifications  of  small
molecules  and  proteins  in  drug discovery. Journal of Mass
Spectrometry , vol 42, hh. 279-287.
Duarte, K., Rocha-santos, T., Freitas, A.C., dan  Duarte,  A.C.  (2012).  Analytical techniques  for  discovery  of  bioactive compounds from marine fungi. Trends in Analytical Chemistry , hh. 97-110.
Figueroa,  M.,  Gonzalez,  M.,  Rodriguez- Sotres, R., Sosa-peinado,
A.,
Gonzalez-Andrade,  M.,  Cerda-Garcia- Rojas, C., Mata, R. (2009).
Calmodulin inhibitors from the fungus Emericella sp. Bioorganic &
Medicinal chemistry , vol 17, hh. 2167-
2174.
Gardiner, D. M., Waring, P., dan Howlett,
B. J. (2005). The epipolythiodioxopiperazine (ETP)
class  of  fungal  toxins:  distribution,
mode of action, functions and biosynthesis. Journal of Microbiology , vol.151, hh. 1021-1032.
Greve,  H.,  Mohamed,  I.  E.,  Pontius,  A.,
Kehraus,  S.,  Gross,  H.,  Konig,  M.
(2010).  Fungal  metabolites:  structural diversity  as  incentive  for  anticancer drug development. Pyhtochem Review , vol 9, hh. 537-545.
Herath,  K.B.,  Jayasuriya,  H.,  Ondeyka, J.G., Polishook, J.D., Bills, G.F., et al .
(2005).  Isolation  and  Structures  of
Novel Fungal Metabolites as Chemokine receptor (CCR2) Antagonists. The Journal of
Antibiotics ,  vol  58,  no.  11,  hh.  686-
694.
Kawahara,  N.,  Sekita,  S.,  Satake,  M., Udagawa,  S.,  dan  Kawai,  K.  (1994). Structures  of  a  new  dihydroxanthone derivative,  nidulalin  A,  and  a  new benzophenone  derivative,  nidulalin  B, fom Emericella  nidulans . Chem. Pharm  Bull ,  vol  42,  no.  9,  hh.  1720- 1723.
Nielsen, K. F., dan Smedsgaard, J. (2003).
Fungal  metabolite  screening:  database of 474 mycotoxins and fungal metabolites for dereplication by standarsdised  liquid  chromatography- UV-mass  spectrometry  methodology. Journal  of  Chromatography  A ,  1002,
hh.111-136
Nursid,  M.,  Chasanah,  E.,  Murwantoko.,
Wahyuono,  S.  (2011).  Isolation  and
Identification of Emestrin from
Emericella  nidulans and  Investigation of its anticancer properties.
Microbiology  Indonesia ,  vol  5,  no.  4, hh. 160-169.
Nursid,  M.,  Namirah,  I.,  Cahyana,  A.H., Fajarningsih,  N.D.,  dan  Chasanah,  E.
(2015). Emestrin B: Epipolythiodioxypiperazine from marine  derived  fungus Emericella nidulans. Journal  of  Medical  and Bioengineering ,  vol  4,  no.6,  hh.  441- 445.
Nozawa,  K.,  Udagawa,  S.,  Nakajima,  S., dan  Kawai,  K.  (1987). Studies  on Fungal  Products : XIV,  Emestrin B, a new  ETP,  from  Emericella  striata .
Chem. Pharm. Bull , vol. 35, no. 8, hh.
3460 – 3461.
Onodera  H,  Hasegawa  A,  Tsumagari  N,
Nakai  R,  Ogawa  T,  Kanda  Y.  (2004). MPC1001  and  its  analogues:  new antitumor  agents  from  the  fungus Cladorrhinum species. Org  Lett ,  vol.
6, no. 22, hh. 4101-4104.
Ooike,  M.,  Nozawa,  K.,  dan  Kawai,  K. (1997). An epitetrathiodioxopiperazine related  to  emestrin  from  Emericella foveolata. Phytochemsitry,  Elsevier science.
Pitt, Jhon.L dan Hocking, Alisa. D. (2009).
Fungi and Food Spoilage . Springer.
Schwartz,  Michael.  E.  (2005). Ultra Performance Liquid Chromatography:
An introduction .
www.cromatographyonline.com, hal 8-14.
Seya,  H.,  Nakajima,  S.,  Kawai,  K.,  dan Udagawa,  S.  (1985).  Structure  and absolute  configuration  of  emestrin,  a
New Macrocyclic Epidithiodioxopiperazine from Emericella striata . J.  Chem.  Soc ,  hh.
657-658.
Seya,  H.,  Nozawa,  K.,  Nakajima,  S.,
Kawai,  K.,  dan  Udagawa,  S.  (1986).
Studies  on  Fungal  Product.  Part  8. Isolation  and  structure  of  Emestrin,  a
Novel Antifungal Macrocyclic Epidithiodioxopiperazine from
Emericella  striata. X-Ray  Molecular Structure  of  Emestrin. J.  Chem.  Soc ., http://pubs.rsc.org, hh. 109-116.
Seya,  H.,  Nozawa,  K.,  Udagawa,  S, Nakajima,  S.,  dan  Kawai.  (1985). Studies  on  Fungal  Product.  IX. DethiosecoEmestrin, a New metabolite    related  to  Emestrin,  from Emericella striata . Chem.  Parm.  Bull , vol. 34, no. 6, hh. 2411-2416.
Supratman,  Unang.  (2010). Elusidasi Struktur  Senyawa  Organik .  Widya Padjajaran, 299-300.
Terao, K., Ito, E., Kawai, K., Nozawa, K.,
dan Udagawa, S. (1990). Experimental acute  poisoning  in  mice  induced  by emestrin,  a  new  mycotoxin  isolated from
Emericella species.
Mycopathologia ,  vol.  112,  no.  2,  hh. 71-79.
Zhang, G., Sun, S., Zhu, T., Lin, Z., Gu, J. (2011). Antiviral isoindolone derivatives from an endophytic fungus
Emericella sp. associated with Aegiceras corniculatum .
Phytochemistry 72,  hh.  1436-1442. www.elsevier.com/locate/phytochem.