## Indonesian Journal of Pharmaceutical
and Clinical Research Journal homepage: https://idjpcr.usu.ac.id
Formulasi  Sediaan  Patch  dari  Ekstrak  Daun  Salam  (Syzygium polyanthum  [Wight.]  Walp.)dan  Uji  Aktivitas  Antibakteri Propionibacterium acne Secara In Vitro
Mariadi *1,2 , Wilbert Bernardi 3
1 Departemen Farmasetika dan Teknologi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Sumatera Utara, Medan, 20155, Indonesia
2 Pusat Unggulan IPTEK (PUI) Nanomedisin, Universitas Sumatera Utara, Medan, 20155, Indonesia
3 Program Studi S1 Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Sumatera Utara, Medan, 20155, Indonesia *Corresponding Author: mariadi@usu.ac.id

## ARTICLE INFO

## ABSTRACT
The use of S. polyanthum as an alternative to treat acne has been widely studied  because  it  contains  active  substances  that  have  antibacterial properties  against Propionibacterium  acne .  The  formulation  of S. polyanthum extract  into  a  patch  preparation  has  many  advantages.  This study  aimed  to  formulate  and  evaluate  the  physical  properties  of S. polyanthum extract  patches,  and  determine  their  antibacterial  activity against Propionibacterium acne . Patch preparations were made using the solvent casting method in 6 formulas with various polymer concentrations. Evaluation  of  the  preparations  included  organoleptic  tests,  weight uniformity,  thickness,  pH,  folding  resistance,  swelling,  and  turbidity. Antibacterial activity test against Propionibacterium acne was carried out on  the  resulting  extract  and  patch  preparations.  The  resulting  patch provides  a  distinctive  color  and  aroma  of  the  extract,  with  a  weight between 0.036–0.050 mm, thickness between 0.21–0.30 mm, pH between 4.43–5.06,  folding  power  >500  folds,  swelling  percentage  in  medium phosphate  buffer,  pH  5.8,  between  19.2%-30.8%,  and  distilled  water between 18.8%-29.2%, and turbidity in medium phosphate buffer, pH 5.8, between  5.50–8.16  NTU,  and  distilled  water  between  4.02–5.57  NTU. S.polyanthum extract had the largest inhibition zone at 5% concentration, namely 13.56±1.40 mm. Meanwhile, patch preparations had the greatest inhibition in F1, namely 11.31±0.175 mm. S. polyanthum extract can be formulated  into  patches  with  a  concentration  of  5%  at  various concentrations  of  HPMC  and  chitosan.  Patch  preparations  on  F1  with  a comparison  of  HPMC  :  chitosan  (7:3)  gave  the  largest  inhibition  zone against Propionibacterium acne , namely 11.31±0.175 mm. Keyword: Syzygium polyanthum , Acne, Patch, Propionibacterium acne
How to cite:

## ABSTRAK
Pemanfaatan  daun  salam  sebagai  alternatif  mengatasi  jerawat  sudah banyak  diteliti  karena  mengandung  zat  aktif  yang  berkhasiat  sebagai antibakteri Propionibacterium  acne .  Formulasi  ekstrak  daun  salam menjadi  sediaan  patch  memiliki  banyak  keuntungan  seperti  simple, mudah,  nyaman  saat  pemakaian,  waktu  kontak  yang  lebih  lama,  dan menyembunyikan  jerawat  secara  bersamaan.  Penelitian  ini  bertujuan untuk memformulasikan dan mengevaluasi sifat fisik patch ekstrak daun salam, serta mengetahui aktivitas antibakterinya terhadap Propionibacterium  acne. Ekstrak  daun  salam  dibuat  dengan  metode maserasi.  Sediaan  patch  dibuat  menggunakan  metode solvent  casting dalam  6  formula  dengan  berbagai  variasi  konsentrasi  polimer.  Evaluasi
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-ShareAlike 4.0 International. http://doi.org/10.32734/idjpcr.v6i2.13523
Article history: Received : 11 September 2023 Revised   : 14 December 2023 Accepted : 16 December 2023
Available online 21 December 2023 E-ISSN: 2620-3731 P-ISSN: 2615-6199
Mariadi  dan  Wilbert  Bernardi. Formulasi  Sediaan Patch dari Ekstrak  Daun  Salam  ( Syzygium polyanthum [Wight.]  Walp.)  dan Uji Aktivitas Antibakteri Propionibacterium acne Secara In Vitro .  Indonesian  Journal  of
Pharmaceutical and Clinical Research.  2023  Dec  21;6(2):01- 12.
sediaan  meliputi  uji  organoleptis,  keseragaman  bobot,  ketebalan,  pH, ketahanan lipat, swelling , dan turbiditas. Uji aktivitas antibakteri terhadap Propionibacterium acne dilakukan pada ekstrak dan  sediaan  patch  yang dihasilkan. Sediaan patch yang dihasilkan memberikan warna dan aroma khas  ekstrak,  dengan  bobot  antara  0,036  –  0,050  mm,  ketebalan  antara 0,21 – 0,30 mm, pH antara 4,43 – 5,06, daya lipat > 500 lipatan, persentase swelling pada  medium  dapar  fosfat  pH  5,8  antara  19,2%  –  30,8%,  dan akuades antara 18,8% – 29,2%, serta turbiditas pada medium dapar fosfat pH  5,8  antara  5,50  –  8,16  NTU,  dan  akuades  antara  4,02  –  5,57  NTU. Ekstrak daun salam memiliki zona hambat terbesar pada konsentrasi 5% yaitu 13,56 ± 1,40 mm. Sedangkan sediaan patch memiliki daya hambat terbesar  pada  F1  yaitu  11,31  ±  0,175  mm.  Ekstrak  daun  salam  dapat diformulasikan  menjadi  patch  dengan  konsentrasi  5%  pada  berbagai variasi  konsentrasi  HPMC  dan  kitosan.  Sediaan  patch  pada  formula  1 dengan  perbandingan  HPMC  :  kitosan  (7:3)  memberikan  zona  hambat terbesar terhadap Propionibacterium acne yakni 11,31 ±  0,175 mm. Kata  Kunci:  Syzygium  polyanthum,  Jerawat,  Patch,  Propionibacterium acne
1. Pendahuluan
Jerawat  merupakan  penyakit  peradangan  yang  terjadi  akibat  penyumbatan  pada pilosebasea yang ditandai dengan adanya komedo, papul, pastul dan bopeng ( scar ) pada daerah wajah, leher, lengan atas, dada dan punggung. Salah satu pemicu utama peradangan pada jerawat yaitu bakteri Propionibacterium acne. Berdasarkan  tingkat  keparahannya,  jerawat  diklasifikasikan  menjadi  3  kelompok  yaitu  ringan, sedang, dan berat [1]. Pengobatan jerawat dapat dilakukan dengan berbagai cara meliputi pengobatan topikal, pengobatan sistemik dan bedah kulit. Umumnya, jerawat diobati dengan obat-obatan dari bahan kimia sintesis, namun penggunaan bahan alam menjadi suatu alternatif dengan harapan mampu untuk meminimalisir  efek  samping  yang  tidak  diinginkan.  Salah  satu  bahan  alam  yang  memiliki  aktivitas antibakteri terhadap bakteri Propionibacterium acne adalah daun salam [2, 3]. Hal tersebut dikarenakan daun salam memiliki kandungan kimia  yang berkhasiat seperti tanin (21,7%), flavonoid (0,4%), dan minyak atsiri (0,05%) [4].
Sampai  saat  ini,  pemanfaatan  ekstrak  daun  salam  sebagai  anti  jerawat  telah  banyak  diteliti seperti  penelitian formulasi  ekstrak  daun  salam  menjadi  gel  anti jerawat  [2],  formulasi  ekstrak  daun salam sebagai salep anti jerawat [5], dan formulasi sediaan krim dari ekstrak daun salam sebagai anti jerawat [6]. Namun, untuk formulasi ekstrak daun salam menjadi patch masih belum pernah dilakukan. Salah satu bentuk sediaan kosmetik yang sedang marak di pasaran saat ini adalah patch . Hal tersebut disebabkan  karena patch merupakan  inovasi  sediaan  yang  memiliki  banyak  keuntungan  dan memberikan  kenyamanan  lebih  bagi  pengguna  seperti  formulasi patch ekstrak  etanol  daun  murbei ( Morus alba L.) [7]. Selain itu, penggunaan patch juga lebih diminati dibandingkan dengan sediaan pengobatan  jerawat  lainnya  karena  dapat  menghindarkan  kulit  dari  kontaminasi  bakteri  dan mengandung  bahan  yang  mempunyai  aktivitas  terhadap  bakteri  [8].  Sediaan patch juga  memiliki kemampuan  untuk  menyembunyikan  sekaligus  mengobati  jerawat  secara  bersamaan  sehingga  dapat meningkatkan rasa percaya diri bagi para penggunanya, sehingga sediaan patch sudah umum digunakan untuk  pengobatan jerawat terutama patch hidrogel,  karena sifatnya  yang  tahan  air  dapat  melindungi jerawat dari infeksi sekunder dan dapat menyerap cairan di dalam jerawat [9].
Salah satu komponen dasar dari patch adalah polimer. Polimer memberikan peranan penting dalam menghasilkan sediaan patch dengan sifat fisik yang baik. Polimer larut air (hidrofilik) memiliki kemampuan untuk mengembang dan membentuk konsistensi yang menyerupai gel. Kombinasi polimer hidrofilik  dalam  pembuatan patch akan  mendukung  penyerapan  air,  mengembang  membentuk  pori, sehingga memudahkan zat aktif untuk berdifusi sekaligus menjadi barrier dalam mengatur pelepasan zat aktif [10], [11]. Hidroksi Propil Metil Selulosa (HPMC) dan Kitosan merupakan kombinasi polimer hidrofilik yang cocok untuk diformulasikan menjadi sediaan patch. Hal tersebut dikarenakan polimer HPMC  dapat  membentuk  film  yang  jernih,  mudah  terhidrasi,  dan  memiliki  daya  mengembang ( swelling ) matriks yang baik sehingga meningkatkan kecepatan pelepasan obat [12]. Sedangkan kitosan
merupakan polimer yang dapat membentuk film dengan sifat fisik yang kokoh dan elastis. Ditambah lagi dengan kitosan yang berfungsi sebagai antibakteri sehingga diharapkan dapat bersinergi dengan efek antibakteri dari ekstrak daun salam.
Berdasarkan hal diatas, peneliti tertarik untuk membuat sediaan patch dari kombinasi polimer HPMC dan kitosan yang mengandung ekstrak daun salam ( Syzygium polyanthum [Wight.] Walp.) yang memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri Propionibacterium  acne yang  merupakan  bakteri penyebab jerawat.

## 2. Bahan dan Metode

## 2.1. Bahan
Hidroksi  propil  metil  selulosa  (HPMC)  (Alpha  Chem),  kitosan  (Sigma-Aldrich),  Bakteri Propionibacterium  acne diperoleh  dari  Laboratorium  Mikrobiologi  Farmasi  Universitas  Sumatera Utara. Propil paraben, propilen glikol, etanol 96%, dan medium dapar fosfat pH 5,8 merupakan produk Merck.

## 2.2. Persiapan Ekstrak Daun Salam
Pada penelitian ini, daun salam ( Syzygium polyanthum [Wight.] Walp.) diperoleh dari Pasar Sei Sikambing  kota  Medan,  dan  telah  diidentifikasi  di  Medanense  Herbarium  (MEDA),  Departemen Biologi FMIPA USU, Medan, dengan nomor pengesahan 084/MEDA/2022. Tanaman tersebut diolah menjadi ekstrak daun salam di laboratorium fitokimia fakultas Farmasi USU. Serbuk simplisia daun salam dimaserasi sesuai Farmakope Herbal Indonesia [13], menggunakan 10 bagian etanol 96% selama 4 hari. Kemudian maserat tersebut diuapkan dengan rotary evaporator pada suhu 50°C dan tekanan 100 mbar sehingga diperoleh ekstrak kental daun salam.

## 2.3. Karakterisasi dan Skrining Fitokimia
K arakterisasi ekstrak dilakukan  meliputi penentuan kadar air, penentuan kadar sari larut air, penentuan kadar sari larut dalam etanol, penentuan kadar abu total dan penentuan kadar abu asam tidak larut. Sedangkan skrining fitokimia dilakukan untuk mengetahui senyawa metabolit yang terdapat pada daun salam, meliputi skrining alkaloid, saponin, tanin, steroid/triterpenoid dan flavonoid.

## 2.4. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Salam
Pengujian  aktivitas  antibakteri  dilakukan  terhadap  ekstrak  daun  salam  dengan  berbagai konsentrasi dengan metode difusi agar menggunakan pencadang kertas. Dilakukan penanaman bakteri dengan metode tuang dengan diambil 0,1 ml inokulum bakteri dimasukkan kedalam cawan petri steril, kemudian  dituangkan  15  ml  media muller  hinton  agar dengan  suhu  45-50℃.  Lalu,  homogenkan campuran media dan ditunggu memadat. Dijenuhkan kertas pencadang steril dengan konsentrasi ekstrak daun salam yang telah ditetapkan dan diletakkan diatas media yang telah memadat. Media yang berisi bakteri dan kertas pecadang berisi larutan uji diinkubasi pada suhu 37℃ selama kurang lebih 24 jam. Diameter  hambat  yang  terbentuk  diamati  dan  diukur  dengan  jangka  sorong.  Dilakukan  tiga  kali pengulangan pengujian [14].

## 2.5. Pembuatan Sediaan Patch Ekstrak Daun Salam
Sediaan patch ekstrak daun salam dibuat menggunakan kombinasi polimer HPMC dan kitosan sebagai basis patch dengan berbagai rasio dalam 6 formula yang berbeda.  Propilen glikol digunakan sebagai Plasticizer dengan konsentrasi 2,5 % sesuai hasil orientasi yang telah dilakukan sebelumnya. Konsentrasi ekstrak daun salam yang digunakan dalam penelitian ini adalah 5%, merupakan konsentrasi optimum  yang  menunjukkan  diameter  zona  hambat  kategori  kuat  terhadap Propionibacterium  acne yang telah dilakukan sebelumnya. Rancangan formula sediaan patch dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Formula sediaan patch ekstrak daun salam Komposisi Fungsi Formula F0 F1 F2 F3 F4 F5 F6 Ekstrak daun salam (g) Zat Aktif - 5 5 5 5 5 5 HPMC (g) Polimer 45,24 62,53 53,81 45,24 38,17 27,33 18,09 Kitosan (g) Polimer 47,73 28,80 39,02 47,73 57,68 66,48 75,96 Propil paraben (g) Pengawet 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 Propilen glikol (ml) Plasticizer 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 Etanol 96% (ml) Pelarut ekstrak 10 10 10 10 10 10 10 Akuades (ml) Pelarut ad 100 ad 100 ad 100 ad 100 ad 100 ad 100 ad 100 Keterangan: F0 = Patch tanpa ekstrak daun salam kombinasi HPMC : Kitosan (5 : 5) F1 = Patch ekstrak daun salam kombinasi HPMC : Kitosan (7 : 3) F2 = Patch ekstrak daun salam kombinasi HPMC : Kitosan (6 : 4)
F3 = Patch ekstrak daun salam kombinasi HPMC : Kitosan (5 : 5) F4 = Patch ekstrak daun salam kombinasi HPMC : Kitosan (4 : 6)
F5 = Patch ekstrak daun salam kombinasi HPMC : Kitosan (3 : 7) F6 = Patch ekstrak daun salam kombinasi HPMC : Kitosan (2 : 8) Formulasi sediaan patch dibuat dengan metode solvent casting , yaitu dibuat dengan melarutkan polimer dan plasticizer dalam pelarut yang mudah menguap, kemudian obat/bahan aktif dilarutkan atau disuspensikan  ke  dalamnya.  Selanjutnya larutan dimasukkan  ke  dalam  cetakan, diuapkan  pelarutnya sampai  kering,  dan  akhirnya  diperoleh  suatu  film  atau patch [15].    Dalam  penelitian  ini  pembuatan sediaan patch diawali dengan mengembangkan masing-masing polimer menjadi hidrogel menggunakan pelarut  yang  sesuai,  yakni  HPMC  dikembangkan  dengan  menggunakan  akuades,  sedangkan  kitosan dikembangkan  dengan  menggunakan  asam  asetat  1%.  Dilarutkan  ekstrak  daun  salam  dalam  pelarut etanol 96%, kemudian dimasukkan ke dalam campuran polimer HPMC dan kitosan yang sebelumnya sudah dikembangkan dan diaduk pada kecepatan 100 rpm sampai homogen selama selama 15-20 menit. Propilen  glikol  dan  propil  paraben  ditambahkan  ke  dalam  campuran  dan  diaduk  kembali  hingga homogen.  Dicukupkan  campuran  dengan  akuades  hingga  batas  kalibrasi.  Campuran  lalu  dituang  ke dalam cetakan cawan petri berdiameter ± 9 cm dan dibiarkan kering sempurna pada suhu kamar selama 2 hari (2x24 jam). Patch yang telah kering kemudian dikeluarkan dari cetakan [15], [16].

## 2.6. Evaluasi Sediaan Patch Ekstrak Daun Salam 2.6.1. Uji Organoleptis dan Fisik Sediaan
Uji  organoleptis  dilakukan  dengan  mengamati  tampilan  sediaan  secara  visual  yang  meliputi bentuk,  warna,  tekstur,  dan  bau  pada  sediaan.  Uji  fisik  sediaan  meliputi  uji  ketebalan  sediaan menggunakan  jangka  sorong  (ketelitian  0,05  mm)  [17],  dan  keseragaman  bobot  menggunakan Electronic balance (Shimadzu ATX224 Analytical Balance ) [16].

## 2.6.2. Uji pH
Uji pH dilakukan dengan mengembangkan patch ke dalam cawan porselen yang berisi 50 ml aquadest selama 2 jam pada suhu ruangan. Kemudian dilakukan pengujian dengan menggunakan pH meter (pH Meter Ezdo).

## 2.6.3. Uji Ketahanan Lipat
Uji ketahanan lipat dilakukan dengan melipat patch berkali-kali pada posisi yang sama sampai sediaan tersebut terputus (rusak) atau hingga 500 kali lipatan. Jumlah pelipatan tersebut yang dianggap sebagai nilai ketahanan terhadap pelipatan [18].

## 2.6.4. Uji Swelling
Uji swelling dilakukan dengan  mengukur  diameter awal patch menggunakan jangka sorong. Kemudian diletakkan patch yang telah diukur ke dalam gelas beaker yang telah berisi larutan medium dan  dipanaskan  pada  suhu  37  ±  0,5°C.  Diangkat  dan  diukur  panjang  sisi patch pada  setiap  interval waktu 1, 2, dan 3 jam. Dicatat hasil yang diperoleh dan dihitung nilai persentase swelling patch dengan rumus berikut [19].
Keterangan : D = diameter patch pada interval waktu tertentu
D0 = diameter patch mula-mula

## 2.6.5. Uji Turbiditas
Uji  turbiditas  merupakan  uji  yang  dilakukan  untuk  mengetahui  tingkat  kekeruhan  larutan setelah  pelepasan  ekstrak  dari patch yang  mengalami swelling atau  erosi.  Uji  turbiditas  dilakukan menggunakan  turbidimeter  ( Benchtop  turbidity  meter,  TB20 0)  dengan  meletakkan patch yang  telah diukur ke dalam gelas beaker yang telah berisi larutan medium. Kemudian dipanaskan pada suhu 37 ± 0,5°C. Pada setiap interval waktu 1, 2, dan 3 jam, diambil larutan uji hasil perendaman patch . Diukur larutan uji menggunakan turbidimeter dan dicatat hasil yang diperoleh.

## 2.7. Uji Aktivitas Antibakteri Patch Ekstrak Daun Salam
Pengujian  aktivitas  antibakteri patch dilakukan  dengan  metode  difusi  agar  menggunakan pencadang kertas. Dilakukan penanaman bakteri dengan metode tuang dengan diambil 0,1 ml inokulum bakteri dimasukkan kedalam cawan petri steril, kemudian dituangkan 15 ml media muller hinton agar dengan  suhu  45-50℃.  Selanjutnya,  dihomogenkan  campuran  media  dan  ditunggu  hingga  memadat. Pada  media  yang  telah  padat  diletakkan  sediaan patch ekstrak  etanol  daun  salam,  kontrol  positif (klindamisin),  dan  kontrol  negatif  ( patch yang  tidak  mengandung  ekstrak  daun  salam)  yang  telah dibentuk lingkaran serta diinkubasi pada suhu 37℃ selama kurang lebih 24 jam. Diameter hambat yang terbentuk diukur menggunakan jangka sorong. Dilakukan tiga kali pengulangan pengujian [20].

## 3. Hasil

## 3.1. Ekstrak Daun Salam
Ekstrak daun  salam yang diperoleh  pada penelitian ini  berupa cairan kental berwarna coklat kehitaman  dengan  bau  khas  daun  salam.  Hasil  rendemen  ekstrak  daun  salam  yang  diperoleh  adalah sebanyak 19,7%. Hasil rendemen tersebut telah sesuai dengan persyaratan, dimana tidak kurang dari 18,2% [21].

## 3.2. Karakterisasi dan Skrining Fitokimia
Hasil karakterisasi dan skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak daun salam dapat dilihat pada Tabel 2. Hasil karakterisasi serbuk simplisia dan ekstrak daun salam meliputi penetapan kadar air, kadar sari larut dalam air, kadar sari larut dalam etanol, kadar abu total dan kadar abu tidak larut asam telah memenuhi persyaratan sebagai simplisia dan ekstrak yang baik dan berkualitas [13], [21], [22].
Tabel 2. Hasil karakterisasi dan skrining serbuk simplisia dan ekstrak daun salam
No. Karakterisasi Skrining fitokimia Parameter Hasil pemeriksaan (%) Golongan Hasil Serbuk Ekstrak Serbuk Ekstrak 1. Kadar air 5,99% 7,32% Alkaloid + + 2. Kadar sari larut air 16,65% - Tanin + + 3. Kadar sari larut etanol 27,82% - Flavonoid + + 4. Kadar abu total 2,28% 2,16% Saponin + + 5. Kadar abu tidak larut asam 1,61% 0,15% Glikosida + + Triterpenoid/Steroid + +
% swelling = D − D0
D0 x 100%
Keterangan: (+) : Mengandung golongan senyawa (-)  : Tidak mengandung golongan senyawa
Sedangkan  hasil  skrining  fitokimia  daun  salam  yang  dilakukan  menunjukkan  bahwa  daun salam  mengandung  metabolit  sekunder  alkaloid,  tanin,  flavonoid,  saponin,  glikosida,  dan triterpenoid/steroid.  Skrining  fitokimia  dilakukan  sebagai  tahap  pendahuluan  untuk  memberikan gambaran mengenai kandungan senyawa tertentu dalam bahan alam yang akan diteliti [23].

## 3.3. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Salam
Hasil  pengujian  aktivitas  antibakteri  menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  salam  dapat menghambat pertumbuhan bakteri Propionibacterium acne dengan data hasil uji yang dapat dilihat pada Tabel  3.  Konsentrasi  ekstrak  daun  salam  yang  memberikan  diameter  hambat  paling  besar  terhadap pertumbuhan  bakteri Propionibacterium  acne adalah  konsentrasi  50  mg/ml  (5%)  dengan  diameter hambat  sebesar  13,5  ±  1,40  mm.  Konsentrasi  tersebut  dipilih  sebagai  konsentrasi  ekstrak  yang digunakan  dalam  formulasi patch karena  konsentrasi  50  mg/ml  (5%)  merupakan  konsentrasi  yang memberikan daya hambat dengan kategori kuat dengan diameter zona hambat terbesar.
Tabel 3. Data diameter hambat ekstrak daun salam terhadap bakteri P.acne No. Konsentrasi (%) Rata-rata diameter hambat (mm) ± SD No Konsentrasi (%) Rata-rata diameter hambat (mm) ± SD 1. 0,1 8,23 ± 1,78 6. 4 10,03 ± 0,66 2. 0,5 8,26 ± 1,09 7. 5 13,56 ± 1,40 3. 1 8,60 ± 2,10 8. 6 12,10 ± 0,35 4. 2 9,30 ± 2,27 9. 7,5 11,46 ± 0,30 5. 3 9,70 ± 1,65 10. 10 9,63 ± 1,20
Pada umumnya, peningkatan konsentrasi ekstrak akan diikuti dengan peningkatan konsentrasi zat bioaktif sehingga efek antibakterinya semakin tinggi dan diameter zona hambat yang diberikan juga akan semakin besar. Akan tetapi, pernyataan tersebut justru berbanding terbalik dengan hasil pengujian diameter  zona  hambat  yang  diperoleh.  Hal  tersebut  terlihat  pada  konsentrasi  5%  hingga  10%  yakni memberikan zona hambat yang semakin menurun atau tidak sesuai dengan teori sebelumnya, walaupun diameter zona hambat yang diberikan oleh konsentrasi 0,1% hingga 5% telah sesuai dengan teori.
Hasil  ini  sejalan  dengan  penelitian  sebelumnya  yang  memperoleh  hasil  serupa,  yakni menunjukkan adanya penurunan diameter zona hambat dari konsentrasi 5% ke 10%. Hal tersebut dapat disebabkan  karena  pada  rentang  konsentrasi  ekstrak  daun  salam  50  mg/ml  (5%)  hingga  100  mg/ml (10%)  memiliki  tingkat  kepekatan  yang  tinggi  sehingga  akan  mengurangi  daya  difusi  dari  zat  aktif ekstrak  daun  salam  pada  media Muller  Hinton  Agar yang  digunakan.  Dengan  demikian,  meskipun konsentrasi  ekstrak  yang  diberikan  bertambah,  jumlah  zat  bioaktif  yang  dapat  berdifusi  ke  dalam medium  lebih  sedikit  atau  tidak  akan  bertambah  sehingga  akan  berpengaruh  pada  pembentukan diameter zona hambat yang juga semakin kecil [4], [24], [25].

## 3.4. Evaluasi Sediaan Patch Ekstrak Daun Salam 3.4.1. Uji Organoleptis
Data hasil pengamatan organoleptis patch ekstrak daun salam dapat dilihat pada Tabel 4 dan Gambar  1.  Hasil  uji organoleptis  menunjukkan  bahwa  keenam  formula patch memiliki  karakteristik tampilan yang bervariasi meliputi warna kecoklatan dengan aroma yang khas, tipis, permukaan yang halus dan terlihat adanya gelembung udara. Hal ini karena adanya pengaruh konsentrasi HPMC yang digunakan sebagai polimer. Semakin tinggi konsentrasi HPMC yang digunakan, maka kekentalan gel HPMC  yang  dihasilkan  semakin  meningkat.  Peningkatan  kekentalan  tersebut  membuat  udara terperangkap dan tidak bebas sempurna pada saat pengadukan [26].
Tabel 4. Hasil pengamatan organoleptis sediaan patch ekstrak daun salam F1 F2 F3 F4 F5 F6 Diameter 8,8 cm 9,0 cm 8,7 cm 8,5 cm 8,7 cm 8,6 cm Warna Coklat tua Coklat tua Coklat tua Coklat tua Coklat tua Coklat tua Aroma Aroma khas ekstrak Aroma khas ekstrak Aroma khas ekstrak Aroma khas ekstrak Aroma khas ekstrak Aroma khas ekstrak Tekstur Halus Halus Halus Halus Halus Halus Gelembung Udara Sangat banyak Banyak Banyak Banyak Banyak Cukup Banyak Gambar 1. Sediaan patch ekstrak daun salam

## 3.4.2. Uji Ketebalan dan Keseragaman Sediaan Patch
Data hasil uji sifat fisik sediaan patch ekstrak daun salam dapat dilihat pada Tabel 5. Dari data menunjukkan  hasil  yang  bervariasi  namun  secara  umum  masih  memenuhi  persyaratan  mutu  fisik sediaan meliputi, ketebalan patch tidak lebih dari 1 mm dan keseragaman bobot patch mempunyai nilai koefisien variasi (CV) yang tidak lebih dari atau sama dengan 5% [26].
Ketebalan patch dapat  dipengaruhi  oleh  luas  cetakan,  volume  larutan  dan  banyaknya  total padatan dalam larutan, dan teknik penuangan larutan patch ke dalam cetakan. Sedangkan keseragaman bobot patch dapat  dipengaruhi  oleh  ketebalan  dari  masing-masing  formula.    Selain  itu,  proses penuangan  yang  tidak  rata  atau saat  pengeringan  tidak  diletakkan  pada  bidang  datar  sehingga patch yang terbentuk memiliki ketebalan yang berbeda sehingga mempengaruhi bobot tiap patch [26], [27].
Tabel 5. Data hasil uji sifat fisik sediaan patch ekstrak daun salam Formula Sifat fisik Bobot (gram) ± SD CV Ketebalan (mm) ± SD pH ± SD Uji ketahanan lipat F1 0,050 ± 0,00 0% 0,30 ± 0,00 5,06 ± 0,04 > 500 lipatan F2 0,046 ± 0,05 1,23% 0,23 ± 0,06 4,88 ± 0,04 > 500 lipatan F3 0,036 ± 0,05 1,57% 0,20 ± 0,00 4,75 ± 0,02 > 500 lipatan F4 0,036 ± 0,05 1,57% 0,23 ± 0,06 4,64 ± 0,01 > 500 lipatan F5 0,046 ± 0,05 1,23% 0,26 ± 0,06 4,54 ± 0,02 > 500 lipatan F6 0,050 ± 0,00 0% 0,30 ± 0,00 4,43 ± 0,01 > 500 lipatan

## 3.4.3. Uji pH
Data hasil uji pH pada sediaan patch ekstrak daun salam disajikan di Tabel 5. Hasil uji pH yang dilakukan  menunjukkan  bahwa  semakin  besar  konsentrasi  kitosan  yang  digunakan  maka  nilai  pH sediaan semakin menurun, pada formula 1 (F1) sampai formula 5 (F5) telah memenuhi syarat pH kulit yakni  berada  dalam  rentang  4,5  –  6,5.  Namun,  pada  formula  6  (F6)  memiliki  nilai  pH  yang  tidak memenuhi  syarat  pH  kulit.  Hal  ini  diduga  karena  adanya  pengaruh  pelarut  yang  digunakan  untuk melarutkan kitosan yaitunya asam asetat 1%, sehingga berpengaruh pada penurunan pH sediaan, oleh karena itu semakin besar konsentrasi kitosan yang ditambahkan pada sediaan, maka pH sediaan yang diperoleh juga terlihat akan semakin menurun [28], [29].
F F F F F F
0 5 10 15 20 25 30 35 1 2 3 S w ellin g (%) Waktu (Jam) F1 F2 F3 F4 F5
F6

## 3.4.4. Uji Ketahanan Lipat (Folding endurance)
Data  hasil  uji  ketahanan  lipat  dapat  dilihat  pada  Tabel  5.  Uji  ketahanan  lipat  sediaan patch mempunyai nilai yang tinggi (>500 x lipatan) untuk semua formula yang mengindikasikan kekuatan mekanik dan sifat plastis dari sediaan patch. Hal ini dipengaruhi oleh kombinasi polimer HPMC dan kitosan serta rasio plastisizer yang sesuai telah menghasilkan sifat fisik yang lebih baik terhadap daya tahan lipat sediaan patch. Campuran hydrogel kedua polimer dan plastisizer yang homogen diduga juga menyebabkan terjadinya interaksi fisik antar polimer sehingga menghasilkan matriks membran patch yang kuat dan plastis. Hal ini sesuai dengan yang dilaporkan oleh peneliti sebelumnya [27], [29], [30], [31].

## 3.4.5. Uji Swelling
Pengujian swelling dilakukan  pada  2  medium  berbeda  yaitu  medium  dapar  fosfat  5,8  dan akuades dengan suhu yang menyesuaikan pada suhu normal tubuh manusia yakni 37° ± 0,5°C. Medium dapar  fosfat  5,8  digunakan  sebagai  gambaran  kondisi  pada  pH  kulit  sedangkan  akuades  digunakan sebagai gambaran kondisi pada pH netral. Data hasil uji swelling pada sediaan patch ekstrak daun salam disajikan pada Tabel 6, Gambar 2 dan 3.
Tabel 6. Data hasil uji swelling
Gambar 1. Grafik hasil uji swelling pada medium dapar fosfat pH 5,8
Formula % Swelling Dapar fosfat pH 5,8 Akuades 1 Jam (%) 2 Jam (%) 3 Jam (%) 1 Jam (%) 2 Jam (%) 3 Jam (%) F1 23,3 26,7 30,8 27,2 29,2 29,2 F2 19,5 23,5 27,5 25,5 27,5 28,5 F3 18,3 21,9 23,9 18,9 19,9 22,3 F4 16,3 18,3 22,9 15,0 17,5 19,0 F5 17,4 19,9 21,3 14,9 16,9 18,9 F6 11,6 15,2 19,2 14,7 16,8 18,8 0 5 10 15 20 25 30 35 1 2 3 S w ellin g (%) Waktu (Jam) F1 F2 F3 F4 F5 F6
Hasil  uji swelling yang  diperoleh  menunjukkan  bervariasi,  persen  nilai swelling tertinggi diberikan oleh formula 1 (F1) secara konsisten baik pada medium air maupun dalam dapar pospat pH 5,8. Hasil ini juga menunjukkan bahwa nilai persentase swelling cenderung menurun dari formula 1 (F1) hingga formula 6 (F6) semakin kecil, baik pada  medium dapar fosfat pH 5,8 maupun akuades. Formula  (F1),  formula  2  (F2),  dan  formula  3  (F3)  merupakan  3  formula  yang  menunjukkan  nilai swelling yang tertinggi atau  hasil terbaik pada uji swelling dari formula lainnya.  Hal tersebut terjadi karena  kitosan  adalah  polimer  dengan  kemampuan  pembasahan  yang  rendah  dibanding  HPMC sehingga mengurangi masuknya air ke dalam patch . Semakin tinggi konsentrasi kitosan maka susunan dari polimer patch juga semakin rapat sehingga perlu waktu mengembang lebih lama ketika berkontak dengan air [26], [32], [33].
Selain  itu,  pada  Tabel  6,  sebagian  sediaan patch menunjukkan  nilai swelling pada  medium dapar  fosfat  pH  5,8  lebih  besar  dari  pada  dalam  akuades  meskipun  tidak  signifikant.  Hal  tersebut disebabkan karena salah satu polimer yang digunakan, yaitu kitosan lebih mudah larut dalam senyawa yang bersifat asam sehingga patch yang diformulasi lebih mudah swelling pada medium dapar fosfat pH 5,8 dari pada akuades [28], [33].

## 3.4.6. Uji Turbiditas
Uji turbiditas ini dilakukan untuk melihat indikasi pelepasan ekstrak dari matriks sediaan patch ke  medium  atau  adanya  erosi  sediaan  patch  dalam  rangkaian  proses  disintegrasi  sediaan  menjadi partikel atau bagian-bagian yang menjadi lebih kecil dalam medium yang ditunjukkan dengan adanya peningkatan  kekeruhan  medium.  Pengujian  turbiditas  diukur  dengan  turbidimeter,  dengan  satuan pengukuran yaitu Nephelometric Turbidity Units (NTU). Data hasil uji turbiditas sediaan patch ekstrak daun salam disajikan di Tabel 7.
Tabel 7 . Data hasil uji turbiditas
Hasil pengujian turbiditas yang diperoleh menunjukkan bahwa larutan uji dari medium dapar fosfat  pH  5,8  lebih  keruh  dibandingkan  dengan  larutan  uji  dari  akuades.  Selain  itu,  dari  hasil  yang diperoleh juga menunjukkan bahwa nilai NTU cenderung menurun dari formula 1 (F1) ke Formula 6 (F6).  Nilai  NTU  terbesar  secara  konsisten  ditunjukkan  oleh  formula  1  (F1)  baik  pada  medium  air maupun  dalam  dapar  pospat  pH  5,8.  Hasil  yang  diperoleh  tersebut  berbanding  lurus  atau  konsisten dengan hasil uji swelling yang dilakukan sebelumnya. Semakin tinggi nilai persentase swelling sediaan patch , maka pelepasan zat aktif yang dikandung juga akan semakin besar. Semakin besar pelepasan zat aktif  yang  dikandung,  maka  akan  semakin  keruh  pula  larutan  uji  hasil  perendaman  sediaan patch tersebut. Formula (F1), formula 2 (F2), dan formula 3 (F3) merupakan 3 formula yang menunjukkan nilai NTU yang tertinggi atau hasil terbaik pada uji turbiditas dari formula lainnya.

## 3.4.7. Aktivitas Antibakteri Patch Ekstrak Daun Salam
Pengujian  aktivitas  antibakteri  sediaan patch ekstrak  daun  salam  dilakukan  pada  3  dari  6 formula, yaitu formula 1 (F1), formula 2 (F2), dan formula 3 (F3). Alasan dipilihnya ketiga formula tersebut adalah karena ketiganya memiliki sifat fisik yang baik, memenuhi syarat uji evaluasi sediaan, serta memiliki hasil terbaik pada uji swelling dan uji turbiditas sehingga diyakini dapat memberikan
Formula Nilai kekeruhan Dapar fosfat pH 5,8 Air suling 1 Jam (NTU) 2 Jam (NTU) 3 Jam (NTU) 1 Jam (NTU) 2 Jam (NTU) 3 Jam (NTU) F1 2,87 4,26 8,16 2,07 3,75 5,57 F2 2,12 5,18 7,62 2,11 3,68 5,51 F3 4,29 5,68 7,4 1,79 2,49 5,31 F4 3,63 4,36 6,99 2,55 3,66 5,16 F5 3,02 4,7 6,73 3,44 4,67 5,01 F6 2,58 3,66 5,5 2,04 2,77 4,02
hasil yang baik pula terhadap uji aktivitas antibakteri. Data pengujian aktivitas antibakteri sediaan patch dapat dilihat pada Tabel 8.
Tabel 8. Data diameter hambat sediaan patch ekstrak daun salam terhadap P. acne
Sampel Diameter hambat (mm) ± SD F1 11,31 ± 0,18 F2 9,60 ± 0,13 F3 8,85 ± 0,10 Kontrol positif 35,7 ± 0,36 Kontrol negatif 14,63 ± 3,35
Keterangan:  kontrol  positif  (larutan  antibiotik  klindamisin);  kontrol  negatif  (formula  blanko mengandung HPMC dan kitosan pada rasio 5 : 5)
Berdasarkan pada hasil pengujian aktivitas antibakteri, didapatkan bahwa sediaan patch yang memberikan  diameter  hambat  tertinggi  adalah  formula  1  (F1).  Sedangkan  sediaan patch yang memberikan diameter hambat terendah adalah formula 3 (F3). Hasil yang diperoleh tersebut berbanding lurus dengan hasil uji swelling dan uji turbiditas yang menggambarkan kemampuan pelepasan ekstrak yang terkandung oleh sediaan. Semakin tinggi nilai persentase swelling dan turbiditas sediaan, maka semakin tinggi pula ekstrak (zat aktif) yang terlepas dari matriks sehingga nilai diameter hambat yang diperoleh juga akan semakin besar  [3], [4], [25]. Kontrol positif yang digunakan pada penelitian ini adalah larutan antibiotik klindamisin. Diameter zona hambat pada kontrol positif yang diperoleh sebesar 35,7 ± 0,360 mm menunjukkan bahwa antibiotik klindamisin efektif dalam menghambat pertumbuhan bakteri Propionibacterium acne. Sedangkan kontrol negatif yang digunakan adalah sediaan patch tanpa ekstrak  daun  salam  (F0).  Kontrol  negatif  juga  menunjukkan  adanya  aktivitas  diameter  zona  hambat terhadap pertumbuhan bakteri Propionibacterium acne yakni sebesar 14,63 ± 3,35 mm. Hal tersebut terjadi  dapat  dipahami  karena  beberapa  faktor  antara  lain,  polimer  kitosan  selain  digunakan  sebagai eksipien  dalam  banyak  penelitian  juga  dapat  berfungsi  dan  menunjukkan  adanya  aktivitas  sebagai antibakteri. Kitosan merupakan polimer poli  kation mempunyai  potensi mengikat banyak komponen seperti protein, mengakibatkan terjadinya kerusakan pada dinding sel bakteri, sehingga tidak mampu mengatur pertukaran zat-zat dari dan ke dalam sel membran, akhirnya sel bakteri mengalami lisis dan kematian. Hal ini sesuai dengan laporan peneliti sebelumnya [34], [35], [36].
Zona hambat yang diperoleh dari kontrol negatif lebih besar daripada zona hambat dari ketiga sediaan patch ekstrak daun salam yang turut diuji aktivitas antibakterinya. Hal tersebut dapat terjadi karena  diduga  adanya  interaksi  antagonis  dari  segi  farmakologis  yang  terjadi  dikarenakan  kedua komponen antara kitosan dan zat aktif/senyawa yang terkandung dalam ekstrak daun salam memiliki mekanisme  antibakteri  yang  mirip  yaitu  masuk  ke  dalam  sel  untuk  mendenaturasi  protein  bakteri sehingga mempengaruhi permeabilitas membran sel. Sehingga keduanya berkompetisi untuk masuk ke dalam sel bakteri tersebut kemudian menyebabkan efek antagonistik dalam menghambat pertumbuhan bakteri Propionibacterium acne [34], [35].
Selain itu, beberapa penelitian telah menunjukkan bahwa pengaruh ekstrak biasanya memiliki aktivitas  antibakteri  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  adanya  campuran  dengan  komponen  lain  yang mempunyai potensi interaksi seperti kitosan, karena adanya efek antagonis yang dilaporkan [35], [37], [38], [39], [40].

## 4. Kesimpulan
Dari  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  daun  salam  ( Syzygium  polyanthum [Wight.]  Walp.)  dapat  diformulasikan  menjadi  sediaan patch dengan  konsentrasi  5%  menggunakan kombinasi  polimer  HPMC  dan  kitosan  yang    memenuhi  persyaratan  uji  sifat  fisik  sediaan.  Sediaan patch ekstrak  daun  salam  ( Syzygium  polyanthum [Wight.]  Walp.)  memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap Propionibacterium  acne dengan  diameter  hambat  terbesar  ditunjukkan  pada  rasio  polimer HPMC : kitosan (7:3) pada formula 1 (F1) yaitu 11,31 ± 0,175 mm.

## Daftar Pustaka
[1]     Tan AU, Schlosser BJ, Paller AS. A review of diagnosis and treatment of acne in adult female patients. International journal of women's dermatology . 2018 Jun 1; 4 (2):56-71.
[2]     Purba JS, Manullang HF. Aktivitas Formulasi Sediaan Gel Ekstrak Etanol Daun Salam ( Syzgium polyanthum ) Terhadap Bakteri Propionibacterium acne dan Staphylococcus aureus Tahun 2021. BEST Journal (Biology Education, Sains and Technology). 2021 Sep 2; 4 (2):56-63.
[3]    Apriliana E, Soleha TU, Ramadhian MR. Potensi Ekstrak Daun Salam ( Syzygium polyanthum [Wight.]  Walp.)  sebagai  Antibakteri  terhadap Staphylococcus  aureussecara In  Vitro . Agromedicine Unila. 2018; 5 (2):562-6.
[4]   Saputri TE. Pengaruh Konsentrasi Ekstrak Etanol Daun Salam ( Syzygium Polyanthum ) Terhadap Hambatan  Pertumbuhan  Bakteri  Enterococcus  Faecalis  Dominan  di  Saluran  Akar In  Vitro (Doctoral dissertation, Universitas Muhammadiyah Surakarta). 2015
[5] Kilis TN, Karauwan FA, Sambou CN, Lengkey YK. Formulasi sediaan salep ekstrak daun salam Syzygium polyanthum sebagai antibakteri Staphylococcus aureus . Biofarmasetikal Tropis ( The Tropical Journal of Biopharmaceutical ). 2020 May 11; 3 (1):46-53.
[6] Kurniawati R. Formulasi Sediaan Krim Antijerawat Ekstrak Daun Salam ( Syzygium polyanthum ) Dan  Aktivitas  Antibakterinya  Terhadap Staphylococcus  aureus (Doctoral  dissertation, Universitas Muhammadiyah Purwokerto). 2015
[7] Fatmawaty A, Nisa M, Irmayani I, Sunarti S. Formulasi patch ekstrak etanol daun murbei ( Morus alba L.)  dengan  variasi  konsentrasi  polimer  polivinil  pirolidon  dan  etil  selulosa.  Journal  of Pharmaceutical and Medicinal Sciences. 2017 Oct 20; 2 (1).
[8] Yulianti T, Puspitasari D, Wahyudi D. Optimasi Formula Patch Dan Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Biji Pepaya ( Carica papaya L.) Dengan Kombinasi Matriks HPMC Dan PEG 400 Terhadap Staphylococcus aureus . Jurnal Insan Farmasi Indonesia. 2021 Dec 29; 4 (2):256-65.
[9] Qothrunnadaa TA, Hasanah AN. Patches for acne treatment: an update on the formulation and stability test. Int. J. Appl. Pharm. 2021; 13 :21-6.
[10]   Zakaria N, Bangun H, Vonna A, Oesman F, Fajriana F. Pengaruh penggunaan polimer HPMC dan polivinil pirolidon terhadap karakteristik fisik transdermal patch natrium diklofenak. Jurnal Sains Dan Kesehatan Darussalam. 2021 Dec 31; 1 (2):58-66.
[11]   Yudhantara SM, Febrianto Y. Formulasi Patch Buccal Mucoadhesive Nifedipin Menggunakan Kombinasi Matriks Carbopol® 940p Dan Hidroksi Propil Metil Selulosa (HPMC) K15m. Jurnal Farmasi & Sains Indonesia. 2019 Oct 20; 2 (1):32-9.
[12]   Ermawati  DE,  Prilantri  HU.  Pengaruh  Kombinasi  Polimer  Hidroksipropilmetilcelulosa  dan Natrium Karboksimetilselulosa terhadap Sifat Fisik Sediaan Matrix-based Patch Ibupropen. J. Pharm Sci C. 2019; 2 (1):109-19.
[13]   Kemenkes RI. Farmakope Herbal Indonesia . Edisi II. Jakarta: Kementerian Kesehatan Republik Indonesia. 2017.
[14]   Ditjen POM. Farmakope Indonesia. Edisi Keempat. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. 1995.
[15]   Deng L, Kang X, Liu Y, Feng F, Zhang H. Characterization of gelatin/zein films fabricated by electrospinning vs solvent casting . Food Hydrocolloids. 2018 Jan 1; 74 :324-32.
[16]   Wardani VK, Saryanti D. Formulasi transdermal patch ekstrak etanol biji pepaya (C arica papaya L.) dengan basis Hydroxypropil Metilcellulose (HPMC). Smart Medical Journal. 2021; 4 (1):38- 44.
[17]   Puspitasari  KD,  Nurahmanto  D,  Ameliana  L.  Optimasi  Hidroksipropil  Metilselulosa  dan Carbopol terhadap Moisture Content dan Laju Pelepasan Patch Ibuprofen In Vitro ( Optimization of  Hydroxypropyl  Methylcellulose  and  Carbopol  for  Moisture  Content  and  Release  Rate  of Ibuprofen Patch In Vitro ). Pustaka Kesehatan. 2016 May 6; 4 (2):229-34.
[18]   Febriani  A,  Kusuma  IM.  Formulasi  dan  Uji  Iritasi  Sediaan  Gel  Kombinasi  Ekstrak  Etanol Rimpang Kencur ( Kaempferia galanga L.) dan Ekstrak Etanol Herba Pegagan ( Centella asiatica (L.) Urban. Sainstech Farma Jurnal Ilmu Kefarmasian. 2020; 13 (1):46-54.
[19]   Jaydatt KJ, dan Sreenivas. Formulation and Invitro Evaluation of Endometachin Transdermal Patches Using Polimes PVP and Etil Cellulose . Pharmaceutical Sciences . 2012; 4 (1):1-7.
[20]   Ardiyana RI, Putri NE, Prasetya F. Formulasi Sediaan Patch Bukal Ekstrak Daun Sirih Hitam (Piper betle L. var Nigra): Buccal Patch Preparation Formulation of Black Betel Leaf Extract
(Piper betle L. var Nigra ). InProceeding of Mulawarman Pharmaceuticals Conferences . 2021 Apr 10 (Vol. 13, pp. 171-174).
[21]   Depkes  RI. Farmakope  Herbal  Indonesia. Edisi  I.  Jakarta:  Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia; 2008.
[22]   Group TW. The World Health Organization quality of life assessment (WHOQOL): development and general psychometric properties. Social science & medicine . 1998 Jun 15; 46 (12):1569-85.
[23]   Widiyastuti L, Putranti W. Penetapan Parameter Non Spesifik Dan Spesifik Ekstrak Daun Salam ( Syzgium polyanthum ). Jurnal Ilmiah Ibnu Sina. 2019 Mar 31; 4 (1):107-16.
[24]   Vifta RL, Advistasari YD. Skrining Fitokimia, Karakterisasi, dan Penentuan Kadar Flavonoid Total  Ekstrak  dan  Fraksi-Fraksi  Buah  Parijoto  ( Medinilla  speciosa B.).  InProsiding  Seminar Nasional Unimus 2018 (Vol. 1).
[25]   Nugroho  DA,  Wardani  TS.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Dan  Fraksi  N-Heksan, Fraksi  Etil  Asetat,  Fraksi  Air  Daun  Salam  ( Syzygium  polyanthum )  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923. InProsiding Seminar Informasi Kesehatan Nasional 2022 Jun 18 (pp. 376-388).
[26]   Ismiyati  N.  Formulasi  dan  Uji  Sifat  Fisik  Patch  Transdermal  Ekstrak  Etanol  Daun  Binahong ( Anredera  cardifolia (Tenore)  Steenis)  Dengan  Matriks  HPMC-PVP.  Jurnal  Ilmu  Kesehatan Bhakti Setya Medika. 2019 Sep 1; 4 :29-35.
[27]   Shirsand SB, Ladhane GM, Prathap S, Prakash PV. Design and evaluation of matrix transdermal patches of meloxicam. RGUHS J Pharm Sci. 2012; 2 (4):58-65.
[28]   Afriani K, Ismail I, Agustin PA. Pembuatan dan Pengujian Efektifitas Antibakteri Gel Pembersih Tangan Berbahan Aktif Kitosan. Warta akab. 2021 Sep 6; 45 (1).
[29]   Banne  Y,  Angelina  AA.  Pembuatan  Sediaan  Gel  Basis  Hidroksipropil  Metilselulosa  (HPMC) Dari Ekstrak Umbi Bakung Putih ( Crinum Asiaticum L.). Inprosiding Seminar Nasional Tahun 2018 ISBN: 2549-0931 2018 Oct 31 (Vol. 1, No. 3, pp. 657-663).
[30]   Ismail I, Ningsi S, Putrianti N. Formulasi, Karakterisasi dan Uji Penetrasi In Vitro Patch Ekstrak Biji  Kopi  Robusta  ( Coffea  canephora )  Sebagai  Sediaan  Anti  Selulit.  Jurnal  farmasi  UIN Alauddin Makassar. 2017 Feb 15; 2 (3):87-92.
[31]   Kandavilli  S,  Nair  V,  Panchagnula  R.  Polymers  in  transdermal  drug  delivery  systems. Pharmaceutical technology. 2002 May; 26 (5):62-81.
[32]   Patel  VM,  Prajapati  BG,  Patel  MM.  Design  and  characterization  of  chitosan-containing mucoadhesive  buccal  patches  of  propranolol  hydrochloride.  Acta  pharmaceutica.  2007  Mar 1; 57 (1):61-72.
[33]   Rowe  RC,  Sheskey  P,  Quinn  M.  Handbook  of  pharmaceutical  excipients. 6th  Edition. Libros Digitales-Pharmaceutical Press; 2009
[34]   Zheng LY, Zhu JF. Study on antimicrobial activity of chitosan with different molecular weights. Carbohydrate polymers. 2003 Dec 1; 54 (4):527-30.
[35]   Goy RC,  Britto DD, Assis OB. A review of the antimicrobial activity of chitosan. Polímeros. 2009; 19 :241-7.
[36]   Mardyaningsih,  M.,  Leki,  A.,  dan  Rerumg,  O.  D.  Pembuatan  Kitosan  dari  Kulit  dan  Kepala Udang  Laut  Perairan  Kupang  Sebagai  Pengawet  Ikan  Teri  Segar. Jurnal  Rekayasa  Proses. 2014; 8 (2):72.
[37]   Davidson PM, Parish ME. Methods for testing the efficacy of food antimicrobials.
[38]   Gill  AO,  Delaquis  P,  Russo  P,  Holley  RA.  Evaluation  of  antilisterial action  of cilantro oil  on vacuum packed ham. International journal of food microbiology. 2002 Feb 25; 73 (1):83-92.
[39]   Mourey  A,  Canillac  NJ.  Anti-Listeria  monocytogenes  activity  of  essential  oils  components  of conifers. Food control. 2002 Jun 1; 13 (4-5):289-92.
[40]   Bassolé, I.H.N., dan Juliani, H. R. 2012. Essential Oils in Combination and their Antimicrobial Properties. Molecules 1 7 (4):3989–4006