ISSN 2354-6565

## EFEK ANTILELAH EKSTRAK AIR MESOKARP SEMANGKA KUNING
( Citrullus lanatus Thunb.) TANPA BIJI
I Ketut Adnyana, Nisrina Dita Arlinda, Dewi Safitri Institut Teknologi Bandung nisrina.da@gmail.com

## ABSTRAK
Buah semangka adalah buah yang sering dijumpai dan dikonsumsi. Akan tetapi, pada umumnya semangka  hanya  dikonsumsi  daging  buahnya  saja,  sedangkan  kulit  putihnya  (mesokarp) seringkali  hanya  menjadi  limbah.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  efek  antilelah ekstrak  air  mesokarp  semangka  sehingga  bisa  dijadikan  suplemen  energi  alami.  Pengujian antilelah  dilakukan  dengan  metode Weight-loaded  Forced  Swimming  Test (WFST).  Mencit Swiss  Webster  jantan  dibagi  menjadi  empat  kelompok,  yaitu  kelompok  kontrol,  kelompok  uji yang  diberikan  ekstrak  dosis  1  g/kg  bb,  kelompok  uji  ekstrak  dosis  2  g/kg  bb,  dan  kelompok pembanding  yang  diberi  kafein  dengan  dosis  19,5  mg/kg  bb.  Ekstrak  uji  dan  pembanding diberikan secara peroral selama 21 hari, sedangkan kelompok kontrol hanya diberikan pembawa berupa suspensi CMC Na.  Selanjutnya, waktu renang,  kadar glukosa darah, asam  laktat darah, bobot  badan,  dan  glikogen  hati  serta  otot  ditentukan  saat  uji  WFST.  Ekstrak  air  mesokarp semangka dengan dosis 1 g/kg bb memiliki kemampuan mempertahankan kadar glukosa darah (P<0,05)  dibandingkan  kelompok  kontrol.  Sementara  untuk  dosis  2  g/kg  bb  memiliki kemampuan  mempertahankan  kadar  glukosa  darah  (P<0,01)  dan  glikogen  hati  (P<0,05),  serta menurunkan produksi asam laktat (P<0,05), dibandingkan kelompok kontrol. Pemberian ekstrak juga  tidak  memiliki  efek  terhadap  bobot  badan  hewan  uji.  Pemberian  ekstrak  air  mesokarp semangka  dapat  memperbaiki  aktivitas  dan  beberapa  parameter  biokimia  tubuh  yang  memiliki kaitan dengan kelelahan sehingga dapat digunakan sebagai suplemen antilelah alami.
Kata kunci :  Kelelahan, Uji renang, Mesokarp semangka, Suplemen

## ABSTRACT
Watermelon  is  a  well-known  fruit  in  Indonesia  and  often  consumed  after  exercise.  Generally, only a half of a watermelon fruit is edible while the white rind or mesocarp goes to waste. This research  was  conducted  to  observe  the  anti-fatigue  effect  of  watermelon  water  extract  and  its potency  to  be  a  natural  supplement.  Anti-fatigue  effect  was  tested  by  weight-loaded  forced swimming  test  (WFST)  method.  Male  Swiss  Webster  mice  were  divided  into  four  groups, normal group, two extract groups with the doses at 1 g/kg bw and 2 g/kg bw, and caffeine group which  was  given  caffeine  with  the  dose  at  19.5  mg/kg  bw.  Watermelon  extract  and  caffeine were  given  for  21  days  orally,  whereas  the  normal  group  was  only  given  sodium  CMC suspension.  The  test  was  followed  by  determination  in  swimming  time,  blood  glucose  level, blood  lactic  acid  level,  body  weight,  liver  glycogen  level,  and  muscle  glycogen  level. Watermelon water extract  with the dose at 1 g/kg bw had an ability to maintain blood glucose level  (P<0.05)  compared  with  the  normal  group.  While  the  extract  with  the  dose  at  2  g/kg  bb had  an  ability  to  maintain  the  blood  glucose  level  (P<0.01)  and  liver  glycogen  (P<0.05), decrease  lactic  acid  production  (P<0.05),  compared  with  the  normal  group.  Although  in  both doses, the extract had no effect in body weight parameter. Watermelon  water  extract  can  improve  the  body  activity  and  biochemical  parameters  that concerned with fatigue, in consequence, the extract has a potency as a natural supplement.
Key words  : Fatigue, Swimming test, Watermelon mesocarp, Supplement

## PENDAHULUAN
Kelelahan  didefinisikan  sebagai  kesulitan atau  ketidakmampuan  dalam  memulai  atau melanjutkan aktivitas yang
dapat berhubungan  dengan  mekanisme  sentral maupun  periferal  (Tanaka,  2008).  Kelelahan menyebabkan penurunan pada performa yang dikaitkan  dengan  aktivitas  otot.  Otot  yang digunakan secara intensif  akan menunjukkan penurunan performa yang secara umum akan mengalami pemulihan setelah melalui periode  istirahat  (Allen,  2008).  Semakin intensif  kerja  yang  dilakukan  otot,  maka semakin  lama  periode  pemulihan  yang dibutuhkan  untuk  mengembalikan  kondisi otot seperti semula. Peristiwa kelelahan akan membuat proses pemulihan tersebut semakin lama  dan  dapat  membuat  performa  menjadi tidak  maksimal.  Selain  itu,  seringkali kelelahan  juga  dihubungkan  secara  langsung maupun  tidak  dengan  terjadinya  berbagai macam  cedera  pada  atlet  maupun  non-atlet (Slobounov, 2008). Hubungan antara kelelahan  dan  cedera  dapat  diperantarai  oleh melemahnya  fungsi  kognitif  yang  dapat meningkatkan risiko cedera.
Kelelahan diakibatkan oleh banyak faktor, termasuk  akibat  akumulasi  metabolit  dan deplesi  glikogen  otot  (Bergstrom,  1967). Oleh  karena  itu,  kadar  glikogen  dalam  otot dan  hati  menjadi  salah  satu  parameter terjadinya kelelahan. Semakin berat aktivitas, maka  kebutuhan  energi  dalam  bentuk adenosin trifosfat (ATP) semakin meningkat. Semakin  banyak  ATP  yang  dihasilkan  maka akan menghasilkan asam laktat yang semakin banyak.  Oleh  karena  itu,  kadar  asam  laktat menjadi  salah  satu  parameter  yang  dapat menunjukkan terjadinya
kelelahan.
Sementara  glukosa  juga  dijadikan  parameter karena keterlibatannya dalam proses pembentukan ATP. Kelelahan dapat diatasi dengan menghentikan  kerja  otot  untuk  sementara yang
berfungsi menghambat atau mengurangi  faktor  pemicu  lelah.  Namun, seringkali  waktu    pemulihan  ataupun  waktu istirahat  yang  dimiliki  tidak  cukup  untuk memulihkan  kembali  kondisi  otot.  Oleh karena  itu,  dibutuhkan  tindakan  yang  dapat menghambat atau mengurangi faktor – faktor pemicu lelah, misalnya dengan mengonsumsi
makanan  atau  suplemen  berenergi  yang diharapkan dapat bersifat antilelah. Suplemen  yang  beredar  pada  umumnya mengandung  glukosa  atau  zat  yang  bersifat stimulan  seperti  kafein  atau  vitamin  B  dan homosistein  seperti  taurin  yang  berfungsi meningkatkan  fungsi  kognitif  (Durga,  2006; Duthie, 2002).
Semangka  ( Citrullus  lanatus Thunb.) merupakan  tanaman buah berupa  herba  yang berasal  dari  Afrika.    Buah  semangka berbentuk  bulat  atau  oval  dengan  kulit  yang berwarna hijau lurik dan dagingnya berwarna merah  atau  kuning.  Semangka  termasuk dalam divisi Magnoliophyta, kelas Magnoliopsida, bangsa Violales, suku
Cucurbitaceae,  marga  Citrullus  (Cronquist, 1981).
Semangka  termasuk  buah  yang  memiliki kandungan  air  dan  gula  yang  cukup  tinggi. Kandungan  air  pada  daging  buah  semangka segar mencapai 91,82  dan 67,75 % b/b pada bagian  putihnya  (Fila,  2013).  Oleh  karena itu,  seringkali  semangka  dikonsumsi  setelah berolahraga karena dapat memberikan sensasi  segar  dan  meningkatkan  kadar  air dalam  tubuh.  Selain  itu,  terdapat  pula kandungan  gula  yang  bisa  menjadi  sumber energi. Akan tetapi pada umumnya, semangka  hanya  dikonsumsi  bagian  daging buah yang berwarna merah atau kuning saja, sedangkan  bagian  kulit  yang  berwarna putihnya  (mesokarp)  tidak  digunakan.  Pada bagian  putih  tersebut  diketahui  terdapat banyak  kandungan  sitrulin  yang  merupakan salah  satu  jenis  asam  amino  (Rimando, 2005). Rimando melaporkan bahwa kandungan  sitrulin ternyata lebih tinggi pada semangka  kuning  dibandingkan  semangka merah atau jingga. Jika dibandingkan dengan daging  buahnya  yang  berwarna  kuning  pun, kandungan  sitrulin  pada  kulit  putih  lebih tinggi.
Sitrulin adalah asam amino yang merupakan  komponen  dari  siklus  urea. Meneguello (2003) melaporkan bahwa bersama arginin dan ornitin, sitrulin diketahui  dapat  menekan  akumulasi  amonia dalam darah setelah berolahraga dan memperpanjang  waktu  hingga  terjadinya kelelahan.  Briand  (1992)  juga  melaporkan bahwa  sitrulin  dapat  mempercepat  klirens amonium  dan  laktat  dalam  plasma  serta
terlibat  dalam  eliminasi  hasil  metabolisme otot.
Berdasarkan penelitian –  penelitian sebelumnya,  dapat  ditentukan  hipotesis bahwa  ekstrak  air  bagian  putih  semangka kuning tanpa biji memiliki aktivitas antilelah dan  potensial  sebagai  suplemen  energi alami.Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menguji  aktivitas  antilelah  dari  ekstrak  air mesokarp buah semangka kuning tanpa biji.

## METODE
Pengujian  aktivitas  antilelah  dilakukan dengan mengamati beberapa parameter, yaitu waktu  renang,  kadar  glukosa  darah,  kadar asam  laktat  darah,  bobot  badan,  dan  kadar glikogen  pada  hati  serta  otot.  Data  hasil pengukuran  diolah  menggunakan  perangkat lunak SPSS versi 16. Perbandingan reratanya dianalisis  menggunakan  ANOVA  satu  arah diikuti  analisis post  hoc LSD  ( Least Significant Difference ).
Ekstrak yang digunakan adalah ekstrak air dari  bagian  putih  semangka.  Ekstrak  dibuat dengan cara memotong bagian putih semangka kemudian potongan di- blender dan disaring.  Selanjutnya  filtrat  diambil  dan dikering-bekukan  menggunakan  alat freeze drying .
Pengujian efek antilelah dilakukan selama 21  hari.  Pemberian  ekstrak  dalam  dua  dosis, bahan  pembawa,  dan  pembanding  dilakukan setiap  hari  secara  oral.  Penimbangan  bobot badan  hewan  uji  juga  dilakukan  setiap  hari. Sebelum dilakukan uji efek antilelah, seluruh populasi  hewan  uji  diuji  renang  terlebih dahulu untuk menentukan kemampuan renang  hewan  uji.    Pengujian  antilelah dilakukan  dengan  metode Weight-loaded Forced  Swimming  Test (WFST)  dengan beban  seberat  10%  dari  bobot  badan. Kelelahan  ditentukan  dengan  mengamati hilangnya  gerakan  yang  mampu  dilakukan hewan  uji  dan  ketidakmampuan  hewan  uji untuk  kembali  ke  permukaan  atau  telah tenggelam  selama  5  detik.  Pada  hari  saat WFST  dilakukan,  kecuali  hari  ke  –  1, ekstrak,  bahan  pembawa,  dan  pembanding diberikan  30  menit  sebelum  WFST.  WFST dilakukan pada hari ke – 1, 7, 14, dan 21.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Beberapa  faktor  yang  dapat  memicu kelelahan  otot,  di  antaranya  akumulasi metabolit dan deplesi glikogen otot (Bergstorm,  1967),  inhibisi  ion  kalsium dalam  otot  oleh  hidrogen  akibat  akumulasi asam laktat, kehilangan cairan, dan melemahnya  impuls  elektrik  pada  otot  saat beraktivitas.  Faktor  –  faktor  tersebut  saling berkaitan  satu  sama  lain,  seperti  pada  proses deplesi glikogen pada otot akan memperlambat refosforilasi adenosin difosfat dan  meningkatkan  penurunan  cairan  tubuh. Hal  ini  dapat  menurunkan  kemampuan  otot untuk membentuk cross-bridge dan menurunkan  sensitivitas  miofibril  terhadap Ca 2+ ,  kedua  hal  ini  sangat  penting  dalam kontraksi otot. Kenaikan kadar amonia dalam darah  juga  menjadi  salah  satu  faktornya. Secara tidak langsung, amonia dapat menurunkan produksi ATP dan
meningkatkan  produksi  asam  laktat  (Allen,
2008). Parameter  yang  pertama  adalah  waktu renang  hewan  uji.  Parameter  ini  diperlukan untuk  menguji  pengaruh  ekstrak  semangka terhadap ketahanan hewan uji dalam melakukan aktivitas fisik. Data waktu renang pada  hari  –  1  dan  21  dapat  dilihat  pada gambar 1.
Gambar 1. Waktu Renang Hari 1 dan 21.
Keterangan: Kontrol  = Diberi pembawa CMC Na 1%.
Eks 1 = Diberi ekstrak 1 g/kg bb. Eks 2 = Diberi ekstrak 2 g/kg bb. Kafein = Diberi kafein 19,5 mg/kg bb.
Dari  gambar  1  terlihat  bahwa  waktu renang  di  hari  1  homogen  untuk  seluruh hewan  uji.  Hal  yang  sama  terjadi  pula  pada hari  21.  Tidak  terdapatnya  perbedaan bermakna  pada  parameter  waktu  renang  di
0 100 200 300 Kontrol  Eks 1 Eks 2  Kafein Wak tu Re n an g (d et ik ) Hari Ke - 1 Hari Ke - 21
hari 21 untuk kelompok uji dan kontrol dapat disebabkan  oleh  aktivitas  ekstrak  yang cenderung memperlambat terjadinya kelelahan, bukan memperkuat kontraksi otot. Hal ini disebabkan, fenomena kelelahan pada mencit hanya ditentukan dari
ketidakmampuan  mencit  untuk  kembali  ke permukaan  air  selama  5  detik,  bukan ketidakmampuan  mencit  untuk  melakukan pergerakan  atau  kontraksi  otot.  Oleh  karena itu,  kemungkinan  yang  terjadi  adalah  mencit tidak  mampu  kembali  ke  permukaan  setelah 5  detik,  yang  dianggap  sebagai  kondisi kelelahan, disebabkan oleh kekuatan
kontraksi  yang  menurun  bukan  karena ketidakmampuan  untuk  berkontraksi  akibat kelelahan.
Kadar glukosa yang rendah akan membuat  produksi  ATP  turun  dan  memicu terjadinya  kelelahan.  Data  kadar  glukosa setelah  uji  renang  pada  hari  1  dan  21  dapat dilihat pada gambar 2.
Gambar  2.  Kadar  akhir  glukosa  darah  setelah  uji renang hari 1 dan 21.
Keterangan: Kontrol  = Diberi pembawa CMC Na 1%. Eks 1 = Diberi ekstrak 1 g/kg bb. Eks 2 = Diberi ekstrak 2 g/kg bb. Kafein = Diberi kafein 19,5 mg/kg bb. * : p<0,05. ** : p<0,01.
Dari  gambar  2  terlihat  bahwa  ekstrak semangka memiliki kemampuan
mempertahankan kadar glukosa darah, terlihat  dengan  kadar  akhir  glukosa  darah pada  kelompok  uji  lebih  tinggi  secara berbeda  bermakna  dibandingkan  dengan
kelompok kontrol dengan waktu renang yang sama.  Hal  ini  juga  berarti  ekstrak  mampu menjaga  produksi  ATP  sehingga  ketahanan dalam melakukan aktivitas meningkat.
Uji renang yang dilakukan akan membutuhkan  peningkatan  produksi  energi yang  juga  akan  meningkatkan  kadar  asam laktat  darah.  Data  peningkatan  kadar  asam laktat  dalam  darah  setelah  uji  renang  dapat dilihat pada gambar 3.
Gambar 3.   Peningkatan kadar asam laktat setelah uji renang hari 1 dan 21. Keterangan Kontrol  = Diberi pembawa CMC Na 1%. Eks 1 = Diberi ekstrak 1 g/kg bb. Eks 2 = Diberi ekstrak 2 g/kg bb. Kafein = Diberi kafein 19,5 mg/kg bb. * : p<0,05. ** : p<0,01.
Pada  gambar  3  terlihat  bahwa  terdapat perbedaan  bermakna  antara  kelompok  dosis 2  g/kg  bb  dibandingkan  kelompok  kontrol pada  peningkatan  asam  laktat  darah  setelah uji  renang  hari  1.  Sementara  setelah  uji renang  hari  21,  tidak  terdapat  perbedaan bermakna  pada  peningkatan  asam  laktat darah untuk semua kelompok. Hal ini berarti, ekstrak  semangka  dapat  menurunkan  asam laktat  yang  terbentuk  setelah  uji  renang. Dengan  kata  lain,  ekstrak  semangka  dapat mengurangi  pembentukan  laktat,  dengan tidak  mengurangi  produksi  ATP  karena waktu  renang  untuk  semua kelompok di hari
1 dan 21 adalah sama atau homogen. Glikogen otot akan langsung mempengaruhi  pembentukan  ATP  dalam otot,  sedangkan  glikogen  hati  akan  dipecah jika  kadar  glukosa  darah  menurun.  Kadar glikogen yang rendah akan memicu kelelahan karena penurunan ATP yang dapat diproduksi. Data kadar glikogen hati dan otot
0 20 40 60 80 100 120 140 160 Kontrol  Eks 1  Eks 2 Kafein K adar Gl uk os a D ar ah (m g/dL ) Hari Ke - 1 Hari Ke - 21 0 50 100 150 Kontrol Eks 1  Eks 2  Kafein P er u b ah an K ad ar As am L ak tat Dar ah ( % )
Hari - 1 Hari - 21
* **
*
dapat dilihat pada gambar 4.
Gambar 4.   Kadar  glikogen  hati  dan  otot  setelah uji renang hari 21.
Keterangan
Kontrol  = Diberi pembawa CMC Na 1%.
Eks 1 = Diberi ekstrak 1 g/kg bb. Eks 2 = Diberi ekstrak 2 g/kg bb. Kafein = Diberi kafein 19,5 mg/kg bb. * : p<0,05. ** : p<0,01. Tingginya kadar glikogen
hati membuktikan  bahwa  ekstrak  semangka mampu  mempertahankan  kadar  glukosa darah  sehingga  tidak  perlu  dilakukan pemecahan  glikogen.  Selain  itu,  tingginya kadar  glikogen  otot  menunjukkan  bahwa ekstrak  semangka  mampu  menurunkan pemecahan  glikogen  sebagai  sumber  energi pada otot dengan tidak mengurangi kemampuan  otot  untuk  berkontraksi.  Hal  ini berarti,  ekstrak  semangka  yang  diberikan mampu  mengefisienkan  penggunaan  energi pada hewan uji.
Ekstrak  semangka  yang  berefek  antilelah diharapkan  tidak  memberikan  perubahan bobot  badan  yang  berarti.  Data  bobot  badan hewan uji dapat dilihat pada gambar 5.
Gambar 5. Bobot badan hewan uji hari 1 dan 21. Keterangan Kontrol  = Diberi pembawa CMC Na 1%. Eks 1 = Diberi ekstrak 1 g/kg bb. Eks 2 = Diberi ekstrak 2 g/kg bb. Kafein = Diberi kafein 19,5 mg/kg bb.
* : p<0,05. ** : p<0,01.
Dari  gambar  5  terlihat  bahwa  tidak terdapat  perbedaan  berarti  pada  bobot  badan hewan  uji  untuk  seluruh  kelompok.  Dengan demikian,  pemberian  ekstrak  semangka secara  terus  menerus  selama  21  hari  tidak mempengaruhi bobot badan hewan uji.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian, dapat ditarik simpulan  bahwa  ekstrak  air  mesokarp semangka  dosis  1  g/kg  bb  memiliki  efek mempertahankan kadar glukosa darah, secara bermakna,  dan  dapat  mempertahankan  kadar glikogen hati. Sementara ekstrak air mesokarp  semangka  dosis  2  g/kg  bb memiliki efek antilelah
dengan mempertahankan  kadar  glukosa  darah,  kadar glikogen  hati,  dan  menurunkan  produksi asam  laktat,  secara  bermakna.  Selain  itu, pemberian ekstrak mesokarp semangka dosis 2  g/kg  bb  juga  dapat  mempertahankan  kadar glikogen  otot.  Jika  dibandingkan  antara kedua  dosis  tersebut,  dosis  2  g/kg  bb memiliki  efek  lebih  baik.  Selain  itu,  ekstrak yang  diberikan  selama  21  hari  tidak berpengaruh terhadap bobot badan.
0 5 10 15 20 25 30 Glikogen Hati Glikogen Otot K a d a r G li k o g en ( µ g /g ) Kontrol Eks 1 Eks 2 Kafein 0 10 20 30 40 Kontrol  Eks 1 Eks 2 Kafein B o b o t B a d a n ( g ra m )
Hari Ke - 1 Hari Ke - 21 *

## DAFTAR PUSTAKA
Allen,  D.  G.,  Lamb,  G.  D.,  Westerblad,  H 2008,  ‘Skeletal  Muscle  Fatigue:  Cellular Mechanism’, Physiol.  Rev., vol.  88,  pp. 287 – 332.
Bergstorm,  J.,  Hermansen,  L.,  Hultman,  E., Saltin,  B  1967,  ‘Diet.  muscle  glycogen and  physical  performance’, Acta  Physiol. Scand. , vol. 71, pp. 140 – 150.
Briand, J., Blehaut, H., Calvayrac, R., Laval- Martin,  D  1992,  ‘Use  of  a  microbial model  for  the  determination  of  drug effects on cell metabolism and energetics: study  of  citrulline-malate’, Biopharm. Drug Dispos., vol. 13, pp. 1–22.
Cronquist,  A  1981,  An  Integrated  System  of
Classification of Flowering Plants,
Columbia University Press, New York. Durga, J., van Boxtel, M. P. J., Schouten, E. G 2006, ‘Folate and the methylenetetrahydrofolate reductase 677C
 T  mutation  correlate  with  cognitive performance’, Neurobiol.  Aging ,  vol.  27, pp. 334 – 343.
Duthie,  S.  J.,  Whalley,  L.  J.,  Collins,  A.  R., Leaper,  S.,  Berger,  K.,  Deary,  I.  J  2002, ‘Homocysteine,  B  vitamin  status,  and cognitive  function  in  the  elderly’, Am  J Clin Nutrit , vol. 75, pp. 908–913.
Fila, W A, Itam, E H, Johnson, J T, Odey, M O,  Effiong,  E  E,  Dasofunjo,  K,  Ambo,  E E 2013, ‘Comparative Proximate
Compositions  of  Watermelon Citrullus
lanatus ,  Squash Cucurbita  Pepo’l ,  and Rambutan Nephelium Lappaceum ’, International  Journal  of  Science  and Technology , vol. 2, no.1, pp. 81 – 88.
Meneguello,  M  O,  Mendonca,  J  R,  Lancha, A H Jr., Costa Rosa, L F 2003, ‘Effect of arginine, ornithine, and citrulline supplementation  upon  performance  and metabolism of trained rats’, Cell Biochem. Funct., vol. 21, pp. 85 – 91.
Rimando,  A  M,  Perkins-Veazie,  P  M  2005,
‘Determination of citrulline in watermelond rind’, Journal of Chromatography A , pp. 196 – 200.
Sidit, N A, 2011, Effect of watermelon juice (red  flesh  and  white  rind)  on  athlete performance, Skripsi ,  Bandung,  Sekolah Farmasi Institut Teknologi Bandung.
Slobounov,  S  M  2008,  Injuries  in  Athletic Causes  and  Consequences,  Springer Science + Bussiness Media, New York, p. 97-110.
Takeda, K, Machida, M, Kohara, A, Omi, N, Takemasa,  T  2011,  ‘Effect  citrulline supplementation  on  fatigue  and  exercise performance  in  mice’, J.  Nutr.  Sci.
Vitamin , vol. 57, pp. 246 – 250.
Tanaka,  M,  Mizuno,  K,  Fukuda,  S,
Shigihara, Y, Watanabe, Y 2008,
‘Relationships between dietary habits and the  prevalence  of  fatigue  in  medical students’, Nutrition, vol. 24, pp. 985–989.