Hilakore et al .: Penggunaan Khamir Saccharomyces Cereviseae ……….

## PENGGUNAAN KHAMIR SACCHAROMYCES CEREVISEAE UNTUK MEMERBAIKI KUALITAS NUTRIEN  DEDAK  PADI

## (USING YEAST SACCHAROMYCES CEREVISEAE TO IMPROVE NUTRIENTS QUALITY OF RICE BRAN)
Maritje A. Hilakore * , Mariana Nenobais,  Twenfosel Oc. Dami Dato Fakultas Peternakan, Universitas Nusa Cendana Jl. Adi Sucipto, Penfui Kupang 85111, Telp. 0380-833215
* Correspondent author, email: hukimaku@yahoo.com

## ABSTRAK
Penelitian  dilakukan  untuk  memerbaiki  kualitas  nutrien  dedak  padi  melalui  fermentasi  yang  menggunakan Saccharomyces cereviseae secara in vitro. Metode yang digunakan adalah eksperimental dengan menggunakan rancangan  acak  lengkap  (RAL)  pola  faktorial  yakni  level  inokulum  S.  cerevisiae:  1,  2,  dan  3%  (b/b)  sebagai faktor pertama dan lama inkubasi: 24, 48, dan 72 jam sebagai faktor kedua dan masing-masing diulang tiga kali. Parameter yang diukur adalah kadar protein kasar, protein terlarut, asam fitat dan lemak kasar. Level inokulum S.cerevisiae 2% dan lama inkubasi 72 jam merupakan kombinasi terbaik memengaruhi perbaikan kualitas dedak padi  fermentasi  yakni:  peningkatan  kandungan  protein  kasar  dari  10,88  menjadi  14,36%,  protein  terlarut    dari 6,14  menjadi    9,82%,  kandungan  asam  fitat  berkurang  dari  5,48  menjadi  2,98%,  serta  lemak  kasar  turun  dari 8,23 menjadi 6,91%.
Kata-kata kunci: S.cerevisiae , khamir, fermentasi

## ABSTRACT
The  experiment  was  conducted  to  improve  the  nutrients  quality  ofrice  bran  fermented  with  Saccharomyces cereviseae.A laboratorium experimental  method  was used andarranging factorially in Completely  Randomized Design3  x  4  x  3  namely  three    inoculant  levels  of  S.cerevisiae  1,  2,  and  3  %  (w/w)  as  the  first  factor  and inkubation  time:  24,  48  and  72  hours  as  the  second  factor.  Parameters  observed  were  crude  protein,  soluble protein,crude fat, and phytic acid.The best result of this study was combination 2% S.cerevisiae inoculant level and  72  hours  incubation  time  was  supporting  to  increasing  crude  protein  (10,88  to  14,  36%),  soluble  protein content (6.14 to 9.82%), and  decreased   phytic acid content (5.48 to 2.98%) and crude fat (8,23 to 6,91%).
Keywords: S.cerevisiae, yeast, fermentation

## PENDAHULUAN
Dedak  padi  merupakan  bahan  favorit penyusun  ransum  ternak  namun  dibatasi  oleh 6,9%  kandungan  asam  fitat  (Amrullah,  2002; Richardson et  al .,  2012),  terkhusus  pada  non ruminan.  Asam  fitat  (mio-inositol  heksa- kisfosfat)  merupakan  bentuk  penyimpanan fosfor  yang  terbesar  pada  tanaman  serealia  dan leguminosa.  Di  dalam  biji,  fitat  merupakan sumber  fosforus  dan  inositol  utama  bagi tanaman,  terdapat  dalam  bentuk  garam  dengan kalium,  kalsium,  magnesium,  dan  logam  lain. Pada kondisi alami, asam fitat akan membentuk ikatan  baik  dengan  mineral  bervalensi  dua  (Ca, Mg, Fe), maupun protein menjadi senyawa yang sukar  larut  (Huang et  al .,  (2017).  Hal  ini menyebabkan  mineral  dan  protein  tidak  dapat diserap  melalui  vili  usus  khususnya  unggas
(Aureli et  al .,  (2016).    Namun  asam  fitat  juga berfungsi  sebagai  antioksidan,  serta  merupakan bentuk  penyimpanan  fosfor  terbesar  pada tanaman serealia (Nissar et al ., (2017).
Asam fitat relatif tahan terhadap pemanasan  sehingga  perlakuan  pemanasan terhadap  bahan  pangan  tidak  efektif  bila digunakan  untuk  menurunkan  kadar  asam  fitat. Setiarto dan Widhyastuti (2016) mengemukakan bahwa perendaman, fermentasi dan perkecambahan  adalah  cara  yang  efektif  dalam mereduksi  kadar  senyawa  fenol  dan  asam  fitat pada bahan pangan.
Fermentasi merupakan aktivitas mikroorganisme untuk memperoleh energi yang dibutuhkan  untuk  pertumbuhannya  melalui katabolisme  terhadap  senyawa-senyawa  organik
Hilakore et al .: Penggunaan Khamir Saccharomyces Cereviseae ……….
secara  aerob  maupun  anaerob.  Pada  proses fermentasi  akan  terjadi  perubahan-perubahan terhadap  komposisi  kimia,  seperti  kandungan protein,  lemak,  karbohidrat,  asam  amino, vitamin dan mineral sebagai akibat aktivitas dan perkembangbiakan mikroorganisme selama proses  fermentasi.    Dengan  demikian  melalui fermentasi  dapat  meningkatkan  kualitas  nutrien dedak serta mengurangi unsur anti nutrisi dalam bahan (Hilakore et al ., 2013)
Upaya  meningkatkan  nilai  guna  limbah pangan  seperti  dedak  padi  dapat  dilakukan dengan  memanfaatkan  kemampuan  dari  khamir Saccharomyces  cereviseae,  yaitu  mikroba  atau khamir utama yang terkandung dalam ragi tape. Noubariene et al . (2015) dan Garcia-Mantrana et al .  (2016)  melaporkan  bahwa  S.cerevisiae mampu  menghasilkan  enzim  fitase  selanjutnya enzim  fitase  berperan  penting  dalam  proses defosforilasi  asam  fitat  menghasilkan  produk inositol  dan  fosfat  organik  dengan  kapasitas pengkelat  rendah  dan  kelarutan  yang  lebih
tinggi,  sehingga  dapat  menghilangkan  efek penghambatan pada penyerapan mineral di usus.
Menurut  Shin  (1996),    ragi  yang  hidup dan  aktif  dapat  memroduksi  enzim  amilase, lipase,  protease  dan  enzim-enzim  lain  yang dapat  mengubah  molekul  komplek  menjadi molekul  yang  lebih  sederhana.  Penggunaan  S. cereviseae  dapat  mengurangi  kadar  asam  fitat dalam tempe kara benguk sebagaimana dilaporkan  oleh  Rokhmah et  al .,  (2009)  juga Setiarto  dan  Widhyastuti  (2016)  pada  kedelai jenis  lokal  dan  impor,  selanjutnya  Nissar et  al ., (2017)  pada  sorghum;  Nurfahriani  (2018)  pada tepung jagung.
Ttujuan  penelitian  ini  adalah  mengetahui kemampuan  khamir    S.  cereviseae  dalam memerbaiki  kualitas  nutrisi  serta  mengurangi kandungan asam fitat dalam dedak padi sebagai pakan.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  dilakukankan  di  Laboratorium Kimia  Pakan  Fakultas  Peternakan  Undana Kupang.  Materi  yang  digunakan  kultur  murni S.cerevisiae diperolehdari PAU Pangan dan Gizi UGM  Yogyakarta,  dedak  padi  yang  dibeli  dari penggilingan  padi  di  Kota Kupang,  serta  materi dan alat pendukung lainnya.

## Pembuatan Bubuk Inokulum
Proses peremajaan kultur murni pada agar miring  (PDA),  diinkubasi  pada  suhu  kamar selama  tiga  hari.  Setelah  tiga  hari  kultur  murni dalam  agar  miring  dipanen  dengan  cara menambahkan  aquades  steril  sebanyak  9  ml  ke dalam  tabung  agar  miring.  Menggunakan  ose untuk  mengambil  mkroba  yang  menempel  pada agar miring, selanjutnya disebut cairan inokulan. Sebanyak  500  g  tepung  beras  ditambahkan aquades  steril  agar  kadar  air  tepung  beras menjadi 70%. Tepung beras dimasukan kedalam autoclave, disteril pada suhu 120oC dan tekanan 1  Atm  selama  15  menit.  Tepung  beras didinginkan selanjutnya dicampur dengan cairan inokulan hingga homogen Di inkubasi pada suhu
kamar selama tiga hari. Dikeringkan dalam oven suhu  35 o C.  Siap  digunakan  sebagai  bubuk inokulum penelitian.

## Metode Penelitian
Metode penelitian menggunakan Rancangan Acak Lengkap pola faktorial dengan level  kultur  S.cerevisiae  :  1,  2,  dan  3%  (b/b) sebagai faktor pertama dan lama inkubasi (1, 2, dan  3  hari)  sebagai  faktor  kedua  dengan  3  kali ulangan. Kandungan nutrisi sampel (protein dan lemak kasar) dianalisis sesuai prosedur Proksimat  dan  dikerjakan  di  Laboratorium Kimia  Pakan  Fakultas  Peternakan  Universitas Nusa Cendana Kupang, sedangkan kadar protein terlarut  dan  asam  fitat,  di  Lab  Layanan  Kimia BPT Ciawi, Bogor.

## Analisis Data
Data  penelitian  dianalisis  dengan  Sidik Ragam dan dilanjutkan uji Duncan bila terdapat perbedaan.

## HASIL  DAN  PEMBAHASAN
Tabel.  1  menunjukkan  data  kandungan nutrien  dedak  padi  yang  difermentasi  (DF) dengan khamir S.cerevisiae. Secara keseluruhan
kualitas nutrien DF lebih baik setelah mangalami fermentasi.
Hilakore et al .: Penggunaan Khamir Saccharomyces Cereviseae ……….

## Protein Kasar
Tabel  1  memerlihatkan  kadar  protein kasar  (PK)  dedak  padi  pada  level  kultur    2% dengan  lama  inkubasi  72  jam  (tiga  hari)  adalah 14,36% nyata lebih tinggi (P≤0.05) dibandingkan  level  1  maupun  3%  dengan  lama inkubasi  yang  sama  (3  hari)  masing-masing 14,27  dan  11,33%.    Pada  level  kultur  rendah (1%) ragi sudah melakukan proses metabolisme dan  merombak  senyawa  makromolekul  substrat (dedak  padi)  menjadi  senyawa  yang  lebih sederhana  meskipun  belum  sempurna,  yang ditunjukkan adanya kenaikan kandungan protein kasar  (Tabel  1).  Sebaliknya  pada  level  3% terjadi ketidakseimbangan antara nutrisi medium dengan  jumlah  ragi  sehingga  pertumbuhan  ragi cepat  mencapai  tahap  stationer,  akibat  nutrien medium  yang  minim  serta  akumulasi  metabolit sekunder  sehingga  menghambat  pertumbuhan ragi.  Level  2%  dan lama  inkubasi  72 jam  nyata memengaruhi  kadar  protein  kasar  substrat, karena  masih  terjadi  kenaikan  kadar  protein
hingga  inkubasi  hari  ketiga  sedangkan  pada level  3%  inkubasi  hari  ketiga  jumlah  PK  mulai menurun.  Artinya  bahwa  pada  level  kultur rendah  mikroba  membutuhkan  fase  adaptasi (lag) yang lebih lama sebagaimana dikemukakan oleh  Fardiaz  (1988)  bahwa  jumlah  awal  sel memengaruhi kecepatan fase adaptasi. Pertumbuhan  mikroba  menyumbang  protein kedalam  media/substrat  yang  berasal  dari  sel mikroba,  semakin  baik  pertumbuhan  mikroba akan  menambah  jumlah  mikroba  selanjutnya semakin  tinggi  protein  yang  disumbangkan kedalam media/substrat.
Uji  Duncan  terhadap  kadar  protein  kasar menunjukkan  bahwa  level  kultur  2%  dan  lama inkubasi  72  jam  merupakan  kombinasi  terbaik, keseimbangan  ketersediaan  nutrien  substrat masih sesuai dengan kebutuhan mikroba. Faktor pembatas pertumbuhan mikroba adalah ketersediaan  nutrien  serta  akumulasi  metabolit sekunder dalam substrat
Tabel 1. Kandungan Nutrien Dedak Hasil Fermentasi S.cerevisiae
Dosis S.cerevisiae (% b/b) Lama Inkubasi (jam ) Kandungan Nutrisi (% Bahan Kering) PK LK Protein terlarut Asam pitat Kontrol 0 10,88 8,23 6,14 5,48 1 24 11.58  ± 0.48 a 7.04  ± 0.14 a 6,65  ± 1,29 a 4,50  ± 0,29 a 48 12.00  ± 0.35 b 7.92  ± 0.84 a 6,46  ±  0,59 a 4,85  ±  0,18 a 72 14,27 ±  0.46 c 6.46  ± 0.48 a 7,70  ± 0,25 a 4,80  ± 0,43 a 2 24 11.18  ± 0.69 a 8.48 ±  0.65 b 7,67  ± 0,36 a 3,40  ± 0,11 b 48 11.99 ±0.51 a 6.71 ±0.97 a 8,78  ± 0,12 b 3.23±  0,12 b 72 14.36 ± 0.57 b 6.91 ± 0.80 a 9.82  ± 0,34 b 2.98  ±  0,12 a 3 24 12.23 ± 0.26 a 7.38 ± 1.15 a 6,35 ± 0,26 c 2,44  ±  0,08 b 48 11.10 ± 0.24 a 6.64 ± 0.21 a 5,66 ± 0,18 a 2,77  ±0,91 a 72 11.33 ± 0.56 a 7.33 ± 0.58 a 5,59 ± 0,14 b 2,89  ±  0,02 a
Superskrip yang berbeda  pada kolom yang sama menunjukan perbedaan yang nyata (P<0,05).
Dikemukakan oleh Fardiaz (1988), pertumbuhan adalah pertambahan jumlah massa sel  atau  organisme,  selanjutnya  dengan  adanya kenaikan  jumlah  massa  sel  kapang  akibat pertumbuhan  akan  meningkatkan  kadar  protein medium  (Wang et  al .,  1979).  Semakin  banyak level  kultur  maka  ratio  antara  ketersediaan nutrien  dalam  substrat  dengan  jumlah  mikroba tidak  seimbang  menyebabkan  mikroba  lebih cepat memasuki fase stasioner akibat kekurangan  nutrisi,  seperti  dikemukakan  (Shin, 1996)  keterbatasan  nutrisi  dapat  menghambat pertumbuhan  ragi.  Kapang,  termasuk  ragi merupakan  mikroba  yang  bertumbuh  dengan
membentuk  hifa  atau  miselium,  sehingga semakin  lama  waktu  fermentasi,  maka  semakin banyak  jumlah  mikroba  yang  ditunjukkan  oleh padatnya  miselium  yang  menutupi  permukaan medium,  sel  mikroba  merupaka  sumber  protein sel tunggal bagi ternak maupun manusia.
Setiarto et al. (2016) melaporkan fermentasi  sorghum  dengan  R.oligosporus selama  24  jam  terjadi  penurunan  kadar  protein kasar  dari  11,89  menjadi  11,42%,  sedangkan Rokhmah et  al .  (2009)  melaporkan  penelitian pada  kara  benguk  yang  di  fermentasi  dengan ragi  tempe,  meningkatkan  protein  kasar  dari 7,32 menjadi 21,44%.
Hilakore et al .: Penggunaan Khamir Saccharomyces Cereviseae ……….

## Asam Pitat
Data  Tabel  1  menunjukkan  bahwa kombinasi  level  kultur  2%  dengan  waktu inkubasi  72  jam  sebagai  hasil  terbaik  variabel ukur yakni kadar asam fitat penelitian ini, secara statistik  nyata  (P≤0.05)  lebih  rendah  dari kombinasi  lainnya.  Uji  Duncan  menunjukkan level  inoc  ulum  2%  dan  waktu  fermentasi  72 jam  berkorelasi  dalam  menurunkan  kandungan asam  pitat  DF,  dari  5,48 menjadi  2,98%. Kadar asam  fitat  DF  juga  jauh  berkurang  sebagai akibat  proses  fermentasi.  Hal  ini  menunjukkan asam  fitat  efektif  direduksi  selama  proses fermentasi sejalan dengan pesatnya pertumbuhan mikroba/ragi. Makin baik pertumbuhan  ragi  akan  semakin  banyak  pula enzim fitase yang dihasilkan, semakin berkurang kadar  asam  fitat  menyebabkan    kadar  protein terlarut (asam amino bebas) mengalami peningkatan.
Menurut    Aureli et  al .  (2016),  asam  fitat mempunyai  sifat  antigizi  terhadap  protein dengan  cara  mengikat  protein  sehingga  protein akan  mengendap  dan  tidak  tercerna.  .  Garcia et al .  (2016)  dan  Noubariene et  al .  (2015) melaporkan bahwa S.cerevisiae mampu menghasilkan  enzim  fitase  yang  berperan penting  dalam  proses  menghidrolisis  asam  fitat menjadi  imioinositol  dan  ortoreduktase  dan semakin  banyak  pula  protein  yang  diurai  oleh kapang  menjadi  senyawa  yang  lebih  sederhana yaitu  protein  terlarut  (asam  amino  bebas) sehingga dapat menghilangkan efek penghambatan pada penyerapan asam amino dan mineral di usus.  Juga Nyman et al ., (1989), fitat memiliki kemampuan untuk membentuk kompleks  yang    kuat  dengan  beberapa  protein dan  menghambat  pemecahan  protein  kompleks menjadi protein sederhana.
Rendahnya  kadar  asam  pitat  pada  DF memberi  keuntungan  bagi  ternak  akibat  dari chelat  yang  dibentuk  asam  pitat  dengan  protein dan mineral akan mudah diurai. Kadar asam fitat berbanding  terbalik  dengan  protein  terlarut, asam fitat semakin berkurang  memberi dampak terhadap kadar protein terlarut yang bertambah . Hasil  yang  diperoleh  sama  dengan  yang dilaporkan  oleh  Rokhmah et  al .  (2009)  asam fitat  tempe  kara  benguk  (Mucuna  pruriens) berkurang dari 5,11  menjadi 3.08 % pada lama fermentasi  48  jam.  Hal  yang  sama  dilaporkan Perdani dan Zaki (2020) pada fermentasi kedelai (tempe  kedelai)  kadar  asam  fitat  berkurang  dari 1,29 menjadi 0,48 pada lama fermentasi 48 jam.

## Protein Terlarut
Terlihat dari Tabel 1 diatas,  kadar protein terlarut  (PTl)  dedak  padi  pada  level  kultur    2% dengan  lama  inkubasi  72  jam    adalah  9,82% nyata  lebih  tinggi  (P≤0.05)  dibandingkan  level 1%  (PTl 7,70%) maupun 3% (PTl 5,59%) pada lama  inkubasi  yang  sama  (72  jam).  Selama proses  fermentasi  terjadi  degradasi  komponen penyusun dedak padi, termasuk protein menjadi komponen  yang  lebih  sederhana.  Semakin  lama fermentasi maka jumlah protein yang terdegradasi menjadi asam amino semakin besar. Asam  amino  lebih  mudah  larut  dalam  air  dan nilai kecernaannya lebih tinggi
Kadar  protein  terlarut  DF  secara  umum menurun  dengan  bertambahnya  waktu  inkubasi dan  dosis  inoc  ulum.  Uji  Duncan  juga menunjukkan  adanya  korelasi  antara  dosis  inoc ulum  dengan  waktu  inkubasi,  yakni  kombinasi optimum  dosis  2%  S.cerevisiae  dengan  masa inkubasi  72  jam    adalah  yang  terbaik  ditinjau dari  kandungan  protein  terlarut  DF.  Semakin lama  waktu  inkubasi  miselium  ragi  semakin tebal  akibat  pertumbuhan  ragi  yang  makin meningkat.  Dengan  makin  tebalnya  miselium ragi  maka  semakin  banyak  enzim  fitase  yang diproduksi Enzim tersebut selanjutnya menghidrolisis  asam  fitat  menjadi  mioinositol dan  ortoreduktase  sehingga  semakin  banyak pula  protein  yang  diurai  oleh  kapang  menjadi senyawa  yang  lebih  sederhana  yaitu  protein terlarut (asam amino bebas).
Menurut Deng et al . (2019), kinerja enzim sangat  dipengaruhi  oleh  konsentrasi  substrat. Pada  konsentrasi  substrat  yang  sangat  rendah, kecepatan  reaksi  yang  dikatalisis  enzim  juga sangat  rendah.  Sebaliknya,  kecepatan  reaksi akan meningkat dengan meningkatnya konsentrasi  substrat  sampai  tercapai  titik tertentu,  yaitu  titik  batas  kecepatan  reaksi maksimum.  Dengan  demikian  kadar  protein terlarut  akan  sejalan  dengan  jumlah  protein kasar.  Selanjutnya  Perdani  dan  Utama  (2020) menyatakan  bahwa  peningkatan  protein  terlarut dapat  disebabkan  karena  protein  tidak  terikat oleh  asam  fitat  membentuk  protein  yang mengendap (fitat-protein). Hal tersebut dikarenakan  asam  fitat  telah  direduksi  selama fermentasi berlangsung.
Peningkatan protein terlarut pada substrat juga dilaporkan oleh Perdani dan Utama (2020) pada  pembuatan  tempe  kedelai,  fermentasi  48 jam  meningkatkan  protein  terlarut  tempe  dari 1,93  menjadi  5,28%,  oleh  Nurfahriani et  al . (2018)  pada  nasi  jagung  yang  di  fermentasi
Hilakore et al .: Penggunaan Khamir Saccharomyces Cereviseae ……….
Nuorospora  Sp.  dari  5,40  menjadi  17,56%, selanjutnya  Hilakore et  al .,  (2013)  pada fermentasi  putak  (pati  batang  pohon  Corypha gebanga) dengan kapang T.reesei meningkatkan  kadar  protein  terlarut    putak  dari 3,25  menjadi  13,25%  dengan  lama  inkubasi  4 hari. Demikian halnya yang dilaporkan oleh juga Rokhmah et  al .  (2009)  pada  pembuatan  tempe kara  benguk  (Mucuna  pruriens)  meningkatkan protein terlarut dari 16,81 menjadi 22,48.

## Lemak Kasar
Secara  umum  kadar  lemak  DF  (dedak fermentasi) mengalami penurunan akibat fermentasi,  dan  tidak  dipengaruhi  oleh  jumlah inoculum maupun lama inkubasi. Bila ditumbuhkan  pada  substrat  mengandung  lemak,
S.  cerevisiae  juga  dapat  menghasilkan  enzim lipase.  Dengan  demikian  penurunan  kandungan lemak pada penelitian ini dapat disebabkan oleh aktivitas  enzim  lipase  yang  dihasilkan  oleh khamir  untuk  merombak  kandungan  lemak substrat sebagai sumber energi bagi pertumbuhannya.  Chopra  dan  Khuller,  (1987) mengemukakan,  khamir  akan  menyerang  lemak dan  protein  setelah  menyerang  karbohidrat sebagai  sumber  energinya.  Hasil  penelitian Setiarto et  al .  (2016)  melaporkan  terjadi penurunan  kandungan  lemak  kasar  sorghum setelah  di  fermentasi  Rhyzopus  oligosporus selama  24  jam  dari  2,03  menjadi  4,69  %.  Hasil yang sama dilaporkan oleh Murtini et al ., (2011) juga  terjadi  pada  lemak  sorgum  coklat penelitiannya.

## SIMPULAN
Proses  fermentasi  dedak  padi  dengan khamir  S.cerevisiae  berpengaruh  signifikan dalam  meningkatkan  kandungan  protein  kasar dan  terlarut  berturut-turut  dari  10,88  menjadi
14.36%,    dan  6,14  menjadi  9,82%  serta penurunan  kadar  asam  fitat  dan  lemak  kasar masing-masing    dari  5,48  menjadi  2,98%  dan 8,23 menjadi 6,91%.

## SARAN
Disarankan  untuk  dilakukan  uji  produk biokonversi  ini  agar  diketahui  pengaruhnya
terhadap  performa  ternak  non  ruminansia maupun ruminansia.

## DAFTAR PUSTAKA
Amrullah  KI.  2002. Nutrisi  Ayam  Broiler . Lembaga Satu Gunung Budi. Bogor. Aureli  R,  Ueberschlag  Q,  Klein  F,  Noel  C,
Guggenbuhl P. 2016. Use of near infrared reflectance spectroscopy to predict phytate phosphorus, total phosphorus, and crude  protein  of  common  poultry  feed ingredients. Poult. Sci. 96(1): 60-68.
Chopra A, Khuller GK. 1987. Lipid metabolism of fungi. Crit. Rev. Microbiol . 11: 209.
Deng  Y,    Butre  CI,  Wierenga  PA.  2018. Influence  of  substrate  concentration  on the extent of protein enzymatic hydrolysis. Int. Dairy J . 86:39-48. Fardiaz  S.  1988. Fisiologi  Fermentasi .  Pusat Antar Universitas IPB. Bogor.
García-Mantrana  I,  Yebra  MJ,  Haros  M, Monedero  V.  2016.  Expression  of bifidobacterial  phytases  in  Lactobacillus casei and their application in a food model of whole-grain sourdough bread.
International Journal of Food Microbiology 216: 18-24.
Ginting  MU.  2000.  The  influence  of  fermented putak in pig diets digestibility and growth performance  of  weanling  pigs. Disertasi.
Gottingen/Germany:  Institute  of  Animal Physiology  and  Animal  Nutrition  Georg- August-University
Hilakore  MA,  Suryahadi,  Wiryawan  IGK,
Mangunwidjaja Dj. 2011. Peran
Aspergillus  niger dalam  Meningkatkan Protein  Putak. Media  Kedokteran  Hewan 1(27): 16-20.
Hilakore  MA,  Suryahadi,  Wiryawan  IGK,
Mangunwidjaja  Dj.  2013.  Peningkatan kadar  protein  putak  melalui  fermentasi oleh  kapang Trichoderma  reesei . Jurnal Veteriner 14(2): 250-254.
Huang  L, Wang C, Zhang Y, Chen X, Huang Z, Xing G. 2019. Original article degradation of  antinutritional  factors  and  reduction  of immunoreactivity of tempeh by cofermentation with Rhizopus oligosporus RT-3  and  actinomucor  elegans  DCY-1.
Hilakore et al .: Penggunaan Khamir Saccharomyces Cereviseae ……….
Int.  J.  Food  Sci.Technol. 54(5):  1836- 1848.
Knuckles BE, Kusmickzy DD, Gumbmann MR,
Beschart  AA.  1989.  Effect  of  myo- inositol phosphate ester on in vitro and in vivo digestion of protein. J. Food Sci. 54: 1348-1350.
Murtini  ES,  Radite  AG,  Sutrisno  A.  2011.
Karakteristik  kandungan  kimia  dan  daya cerna  tempe  sorgum  coklat  (  Sorghum bicolor). J.  Teknol.  dan  Industri  Pangan 22(2): 150-155.
Nissar    J,  Ahad  T,  Naik  HR.  2017.  A  review phytic acid : As antinutrient or nutraceutical. J.  Pharmacogn.  Phytochem 6(6): 1554-1560.
Nuobariene  L,  Cizeikiene  D,  Gradzeviciute  E, Hansen  AS,  Rasmussen  SK,  Uodeikiene G,  Vogensen  FK.  2015.  Phytase-active lactic  acid  bacteria  from  sourdoughs: Isolation  and  Identification. LWT  -  Food Science and Technology 63:766-772.
Nurfahriani  D,  Nurhaeni,  Khairuddin.  2018. Analisis  kandungan  protein  terlarut  dan karotenoid  nasi  jagung  ( Zea  mays  var. indentata )  yang  difermentasi  dengan kapang oncom merah ( Neurospora sp. ). J. Kovalen 4(2): 166-173.
Nyman ME, Bjorck IM. 1989. In vivo effects of phytic  acid  and  polyphenols  on  the bioavailability  of  polysaccharides  and other  nutrient. J.  Food  Sci. 54:  1332- 1335.
Setiarto RHB, Widhyastuti N. 2016.  Penurunan kadar  tanin  dan  asam  fitat  pada  tepung sorgum  melalui  fermentasi Rhizopus oligosporus , Lactobacillus Plantarum dan Saccharomyces  cerevisiae . Berita Biologi 15(2): 149-157.
Setiarto  RHB,  Widhyastuti  N,  Asakiawan  I. 2016. Pengaruh Fermentasi Fungi, Bakteri Asam  Laktat  dan  Khamir  terhadap Kualitas Nutrisi Tepung Sorgum. Agritech 36(4): 440-449.