Efektivitas Ekstrak Etanol Daun Gamal ( Gliricidia sepium ) Terhadap Mortalitas Ascaridia galli Secara In Vitro
The Effectiveness of Ethanol Extract of Gamal Leaves (Gliricidia sepium) on Ascaridia galli Mortality in Vitro
Berliana Dwi Nandita Sandy 1 *, Endang Suprihati 2 , Aditya Yudhana 2 , Poedji Hastutiek 2 , Prima Ayu Wibawati 3 , Ratih Novita Praja 4
1 Pendidikan Profesi Dokter Hewan, 2 Departemen Parasitologi Veteriner, 3 Departemen Kesehatan Masyarakat Veteriner, 4 Departemen Mikrobiologi Veteriner, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Airlangga, Kampus C Mulyorejo, Surabaya, Jawa Timur, Indonesia, 60115.
* Corresponding author : berlianadwinandita123@gmail.com

## Abstrak
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas anthelmintik ekstrak etanol daun gamal ( Gliricidia sepium ) terhadap Ascaridia galli secara in vitro. Ada enam kelompok perlakuan dan masing-masing terdiri dari empat ulangan. Penelitian ini menggunakan sepuluh ekor A. galli pada setiap perlakuan untuk semua ulangan. Pengamatan dan pencatatan kematian A. galli dilakukan pada jam ke-2, 4, 6, 8, 10 dan 12. Kematian A. galli dinyatakan  jika  tidak  ada  gerakan  saat  dijepit  dengan  pinset  anatomi.  Data  yang  diperoleh  dianalisis menggunakan uji ANOVA dan dilanjutkan dengan uji Duncan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun gamal  memiliki efek anthelmintik terhadap cacing A. galli secara in vitro. Pada ekstrak dengan konsentrasi  5%  terdapat  sifat  anthelmintik  yang  hampir  sama  dengan  piperazine  sitrat  10  mg/ml. Kesimpulannya, semakin tinggi konsentrasi ekstrak maka semakin tinggi pula sifat antelmintiknya.
Kata kunci: daun gamal, Gliricidia sepium , Ascaridia galli , anthelmintik

## Abstract
This study aimed to determine the anthelmintic activity of the ethanol extract of gamal leaves (Gliricidia sepium) against Ascaridia galli in vitro. There were six treatment groups and each consisted of four replicates. This study used ten A. galli in each treatment for all replications. Observation and recording of death of A. galli was carried out at the 2nd, 4th, 6th, 8th, 10th and 12th hours. Death of A. galli was declared if there was no movement when clamped with anatomical tweezers. The data obtained were analyzed using the ANOVA test and  continued  with  Duncan's  test.  The  results  showed  that  the  ethanol  extract  of  gamal  leaves  had  an anthelmintic effect on A. galli worms in vitro. The extract  with a concentration of 5% has almost the same anthelmintic  properties  as  piperazine  citrate  10  mg/ml.  In  conclusion,  the  higher  the  concentration  of  the extract, the higher the anthelmintic properties.
Keywords: gamal leaves, Gliricidia sepium, Ascaridia galli, anthelmintic
Received: 15 July 2021 Revised: 22 November 2022 Accepted: 3 January 2023

## PENDAHULUAN
Tanaman gamal ( Gliricidia sepium ) merupakan  tanaman  asli  daerah  tropis  Pantai Pasifik di Amerika Tengah. Pada tahun 1600-an penyebaran  tanaman  ini  terbatas  pada  hutan musim kering gugur daun, tetapi banyak tumbuh di  dataran  rendah  yang  tersebar  di  Meksiko, Amerika Tengah, Amerika Selatan bagian utara, Asia  dan  diperkirakan  masuk  ke  Indonesia
pertama kali sekitar tahun 1900. Tanaman gamal merupakan tanaman perdu yang mudah dijumpai dimana  saja  terutama  di  daerah  tropis  seperti Indonesia.  Tanaman  ini  umumnya  digunakan sebagai pagar lahan pertanian, peneduh tanaman, tanaman  rambatan  vanili  dan  lada  (Elevitch  dan Francis, 2006).
Tanaman gamal dari genus Gliricidia sudah banyak  diketahui  manfaatnya  oleh  masyarakat, salah  satunya  digunakan  sebagai  pagar  hidup
dalam  penanaman  lada,  vanili  dan  ubi  jalar. Ekstrak  daun  gamal  memiliki  aktivitas  biologi antara  lain  sebagai  anti  jamur,  redontisida  dan insektisida nabati. Untuk mengetahui kandungan senyawa  metabolit  sekunder  pada  daun  gamal dapat  dilakukan  dengan  pendekatan  skrining fitokimia (Harbone, 1987).
Hasil  analisis  skrining  fitokimia  ekstrak daun gamal memperlihatkan ekstrak ini mengandung senyawa metabolit sekunder golongan  alkaloid,  terpenoid,  steroid  dan flavonoid  dengan  kandungan  flavonoid  yang paling  banyak.  Adanya  flavonoid  ini  diduga sebagai  senyawa  toksik  yang  dapat  mematikan hama  kutu  putih  (Nukmal et  al .,  2010).  Ekstrak daun gamal memiliki aktivitas biologi antara lain yaitu  sebagai  anti  jamur,  rodentisida,  serta sebagai  insektisida  nabati.  Hasil  yang  diperoleh dari  analisis  fitokimia  ekstrak  daun  gamal menunjukkan  bahwa  ekstrak  ini  memiliki kandungan  senyawa  metabolit  sekunder  seperti alkaloid, tanin, saponin, dan flavonoid. Senyawa kandungan metabolit sekunder tersebut merupakan unsur-unsur yang bertanggung jawab terhadap  aktivitas  farmakologi  daun  gamal (Odhiambo et al ., 2014).
Menurut  perhitungan  Dirjen  Peternakan tahun  1985  kerugian  ekonomi  yang  disebabkan oleh  infeksi  cacing  mencapai  250  milyar  rupiah per tahun. Kusumamihardja (1992) menganalisis bahwa kerugian kasar akibat cacing internal pada saluran pencernaan ayam potong sebesar 2.240– 3.148  juta  kg  atau  4,48–6,29  milyar  rupiah setahun.  Kerugian  ekonomi  yang  ditimbulkan oleh  infeksi Ascaridia  galli sekitar  US  $  2,49- 3,48 juta per tahunnya (Athaillah, 1999).
Infeksi  cacing A.  galli sering  menyebabkan penurunan  tingkat  pertumbuhan serta  penurunan berat  badan.  Infeksi  cacing A.  galli juga menyebabkan  terjadinya  pengurasan  cairan makanan serta penyumbatan usus. Infeksi cacing ini  juga  menyebabkan  penurunan  produksi  telur pada  ayam  yang  terinfeksi.  Infeksi  yang disebabkan oleh cacing A. galli dapat menyebabkan kualitas telur menjadi rendah yang disebabkan  karena  penurunan  berat  telur mencapai  5,35%,  kerabang  telur  menjadi  lebih tipis dengan persentase penurunan kerabang telur
mencapai  5,55%  serta  penurunan  kadar  kalsium dalam serum sebesar 36,26% (Zalizar dan Satrija, 2009).
Akibat  banyak  kerugian  yang  ditimbulkan oleh  infeksi  cacing A.  galli ,  maka  dibutuhkan pengobatan yang tepat untuk mengatasi ascariasis.  Anthelmintik  merupakan  salah  satu pilihan  pengobatan  yang  dapat  diberikan  untuk mengobati  ascariasis.  Obat-obat  anthelmintik yang digunakan untuk mengobati cacing A. galli yaitu  piperazine,  albendazol,  fenbendazol,  atau levamisol.  Namun  penggunaan  anthelmintik  ini tidak aman digunakan jangka panjang dikarenakan  obat tersebut memiliki  keterbatasan yaitu resistensi penggunaan jangka panjang, dapat timbul efek samping yang merugikan seperti diare serta  harga  obat  anthelmintik  yang  relatif  mahal (Walter, 2008). Oleh karena itu, perlu dikembangkan  alternatif  obat  anthelmintik  yang berasal  dari  tanaman  dengan  harga  yang  relatif murah  dan  mudah  diperoleh  sehingga  dapat menambah  keragaman  untuk  obat  cacing  serta mampu menghindari efek samping yang ditimbulkan dari obat cacing sintesis.
Terapi  untuk  mencegah  penyakit  ascariasis pada unggas yang disebabkan oleh cacing A. galli selain  penggunaan  obat  anthelmintik  juga  dapat diupayakan dengan menggunakan tanaman yang memiliki khasiat obat, contohnya adalah tanaman gamal.  Salah  satu  penelitian  telah  membuktikan adanya  daya  anthelmintik  daun  gamal,  seperti aktivitas  ekstrak  daun  gamal  pada  larva Tricostrongylus  sp .  yang  disebabkan  oleh senyawa  kandungan  metabolit  sekunder  tanin mampu menghambat daya tetas telur cacing dan selanjutnya  menyebabkan  kematian  larva  cacing (Satrijat et  al .,  2001).  Berdasarkan  uraian  diatas tentang kemampuan kandungan senyawa metabolit sekunder yang dimiliki oleh daun gamal maka dilakukan uji efektivitas ekstrak daun gamal terhadap  tingkat  kematian cacing A.  galli secara in vitro.

## METODE PENELITIAN

## Desain Penelitian
Jenis penelitian ini menggunakan penelitian eksperimental  yang  dilakukan  untuk  menguji
efektivitas daya anthelmintik ekstrak daun gamal terhadap  cacing A.  galli secara  in  vitro. Rancangan  penelitian  yang  digunakan  adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL) yang memiliki keragaman pada setiap perlakuan. Jumlah cacing A. galli yang digunakan sebagai sampel yaitu 10 ekor untuk setiap kelompok perlakuan dengan 6 perlakuan  dan  4  kali  pengulangan  sehingga jumlah sampel yang diperlukan untuk keseluruhan adalah 240 ekor cacing.

## Alat dan Bahan
Bahan  yang  digunakan  untuk  penelitian  ini adalah  daun  gamal,  aquades,  NaCl  fisiologis, piperazine  sitrat  konsentrasi  10  mg/ml  sebagai kontrol obat, ethanol 96%, CMC-Na 0,5%, cacing A.  galli dewasa  yang  diperoleh  dari  usus  ayam buras yang diduga terinfeksi cacing A. galli . Alat yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah neraca analitik, blender, toples simplisia, scalpel, saringan, kertas saring, gelas ukur 500 ml, rotary evaporator , vacum  evaporator ,  pinset  anatomis, gunting bedah, batang pengaduk, kamera, cawan petri,  mikroskop,  pot  sampel,  jam,  masker, gloves, botol, dan lembar pencatat.

## Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Gamal
Serbuk halus sebanyak 500 gram dimasukkan  ke  dalam  labu  ekstraktor  dan ditambahkan  larutan  etanol  96%,  shaker  labu ekstraktor  digoyang  dengan  kecepatan  100  rpm selama  dua  hari.  Larutan  yang  diperoleh selanjutnya  disaring  dan  diuapkan  pada  alat vacum evaporator pada suhu 50-60°C selama 5-8 jam  sampai  semua  alkohol  terpisah,  sehingga akan  dihasilkan  ekstrak  daun  gamal  yang  kental dengan  konsentrasi  murni  100%.  Pada  saat digunakan  ekstrak  daun  gamal  diencerkan menggunakan larutan CMC-Na 0,5% untuk setiap perlakuan yang akan digunakan.
Pembuatan  larutan  ekstrak  daun  gamal dengan  berbagai  konsentrasi  pada  penelitian  ini menggunakan konsentrasi 2%, 3%, 4%, dan 5%. Konsentrasi ini didasarkan oleh penelitian Astiti et  al .  (2016)  yang  menggunakan  konsentrasi efektif ekstrak daun gamal terhadap larva cacing Trichostrongylus sp . sebesar 5%, 10%, dan 20%.

## Pembuatan Larutan Piperazine Sitrat
Larutan  piperazine  yang  digunakan  sebagai kontrol  obat  adalah  bubuk  Contra-Worm ® yang memiliki  kandungan  piperazine  sitrat  600 mg/gram sedangkan dosis standar untuk penggunaan  piperazine  sitrat  adalah  10  mg/ml (Ashab dan Lina, 2011).

## Persiapan dan Pengelompokan Cacing
Cacing A.  galli diperoleh  dari  tempat pemotongan  ayam  buras  di  salah  satu  tempat pemotongan  ayam  di  Kabupaten  Banyuwangi. Cacing A.  galli yang  digunakan  adalah  cacing dewasa yang aktif bergerak dan memiliki panjang 7-11  cm.  Cacing  dipisahkan  menjadi  enam kelompok  dengan  sepuluh  ekor  cacing  di  tiap kelompok.  Kelompok  (K+)  diberikan  piperazine sitrat,  kelompok  (K-)  diberikan  CMC-Na  0,5%, kelompok (P1) diberikan ekstrak daun gamal 2%, kelompok (P2) diberikan ekstrak daun gamal 3%, kelompok (P3) diberikan ekstrak daun gamal 4%, kelompok (P4) diberikan ekstrak daun gamal 5%.

## Pewarnaan Carmine Semichen-Acetic
Pewarnaan  cacing A.  galli mengacu  pada Kuhlman  (2006)  dengan  menggunakan  metode Semichen-Acetic  Carmine  dengan  cara  cacing disimpan  dalam  alkohol  gliserin  5%  lalu diletakkan  antara  dua  kaca  objek  dan  diikat dengan  benang.  Kemudian  dicelupkan  ke  dalam alkohol  70%  selama  5  menit.  Setelah  itu pindahkan cacing ke dalam larutan carmine yang sudah  diencerkan  dengan  alkohol  70%  dengan perbandingan  1:2  didiamkan  selama  4  jam. Cacing  dilepaskan  dari  objek  kaca  dan dipindahkan  ke  dalam  larutan  alkohol  asam selama  2  menit.  Pindahkan  ke  dalam  larutan alkohol  basa (Alkohol  70%  +  NaHCO3)  selama 20  menit.  Proses  dehidrasi  bertingkat  dengan alkohol  70%,  85%,  dan  95%  masing-masing selama 5 menit. Proses terakhir adalah mounting dengan  menggunakan  larutan  entelan,  cacing diletakkan diatas objek kaca lalu teteskan larutan entelan untuk merekatkan kaca penutup.

## Pengamatan Kematian Cacing
Untuk melihat apakah cacing A. galli sudah mati,  paralisis,  atau  masih  hidup  setelah
dilakukan inkubasi, dapat dilakukan dengan cara mengusik  cacing  tersebut  dengan  menggunakan pinset.  Jika  cacing  terlihat  diam  tanpa  ada pergerakan  maka  cacing  telah  mengalami kematian (Ali et al ., 2012).

## Lama Pengamatan
Setiap  cawan  petri  diisi  larutan  perlakuan dengan volume 25 ml dan 10 cacing A. galli yang masih  aktif  bergerak.  Pengamatan  dilakukan setiap dua jam sekali setelah pemberian perlakuan mulai dari jam ke-2, jam ke-4, jam ke-6, jam ke- 10, dan jam ke-12.

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dari  hasil  perhitungan berupa  cacing A.  galli yang  mati,  kemudian dianalisis  menggunakan  uji  ANOVA  dan  untuk membandingkan  efektivitas  antar  perlakuan dilakukan  uji  Duncan  (p<0,05).  Uji  statistik menggunakan bantuan SPSS v21.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan terhadap  cacing A.  galli dalam  enam  perlakuan perendaman  yaitu  (K+)  larutan  piperazine  sitrat 10  mg/ml,  (K-)  larutan  CMC-Na,  (P1)  ekstrak etanol  daun  gamal  2%,  (P2)  3%,  (P3)  4%,  dan (P4)  5%,  didapatkan  hasil  kumulatif  kematian cacing  tertinggi  pada  perlakuan  K+  dan  P4. Berdasarkan  hasil  tersebut  didapatkan  rata-rata persentase cacing A. galli yang mati pada semua perlakuan dalam waktu pengamatan 2 jam, 4 jam, 6  jam,  8  jam,  10  jam,  dan  12  jam  setelah perlakuan (Tabel 1).
Dapat  dilihat  pada  Tabel  1  menunjukkan bahwa kematian cacing A. galli pada P4 memiliki kemampuan lebih cepat dibandingkan dengan P1, P2,  P3,  dan  juga  memiliki  kemampuan  yang hampir sama K+. Rata-rata dan simpangan baku A.  galli yang  mati  pada  tiap  2  jam  setelah perlakuan (Tabel 2).
Berdasarkan  hasil  dapat  diketahui  bahwa pada  jam  ke  2  setelah  perlakuan  terdapat perbedaan  nyata  (p<0,05)  pada  perlakuan  K+ dengan  K-,  P1,  dan  P3,  namun  tidak  berbeda nyata  (p>0,05)  dengan  P4.  Jam  ke-4  setelah
perlakuan  dapat  diketahui  bahwa  terdapat perbedaan  nyata  (p<0,05)  pada  perlakuan  K+ dengan K-, P1, P2, P4, dan P4. Sementara itu hasil tidak  berbeda  nyata  (p>0,05)  pada  perlakuan  K- dengan P1, P1 dengan P2, P2 dengan P3 dan P4 (Tabel 2).
Pada  jam  ke-6  setelah  perlakuan  dapat diketahui  bahwa  terdapat  perbedaan  nyata (p<0,05) pada perlakuan K+ dengan  K-, P1, P2, P3,  dan  P4.  Sementara  itu,  hasil  tidak  terdapat perbedaan  nyata  (p>0,05)  pada  perlakuan  K- dengan P1, P2 dengan P3, dan P4 (Tabel 2).
Pada  jam  ke-8  setelah  perlakuan  dapat diketahui  bahwa  terdapat  perbedaan  nyata (p<0,05) pada perlakuan K+ dengan  K-, P1, P2, dan  P3.  Sementara  itu,  hasil  tidak  terdapat perbedaan  nyata  (p>0,05)  pada  perlakuan  K+ dengan P4, K- dengan P1, P2 dengan P3. Jam ke- 10  dan  jam  ke-12  setelah  perlakuan  didapatkan hasil  tidak  berbeda  nyata  (p>0,05)  pada  uji ANOVA,  sehingga  tidak  dilakukan  uji  Duncan (Tabel 2).
Menurut  (Bairagi et  al .,  2011)  flavonoid dapat  menyebabkan  kelumpuhan  pada  tubuh dengan  cara  mengganggu  impuls  saraf  dan keseimbangan  cacing,  sehingga  cacing  akan mengalami paralisis cacing sehingga cacing dapat cepat mengalami kematian. Flavonoid mempunyai  efek  farmakologi  pada  pembuluh darah  dengan  terjadinya  vasokonstriksi  kapiler dan  menurunkan  permeabilitas  pembuluh  darah Ini  menyebabkan  adanya  gangguan  pembuluh darah sehingga zat-zat makanan dan oksigen yang dibutuhkan  untuk  kelangsungan  hidup  cacing terganggu,  sehingga  mempercepat  kematian cacing.  Menurut  (Kuntari,  2008)  saponin  dapat berpotensi  sebagai  anthelmintik  dengan  cara menghambat  enzim  asetilkolinesterase,  sehingga cacing  akan  mengalami  paralisis  otot  yang  akan menyebabkan  kematian.  Saponin  menyebabkan iritasi  pada  selaput  lendir  saluran  pencernaan, menekan  sistem  saraf,  sistem  pernapasan  dan sistem gerak. Diduga apabila zat ini tertelan oleh cacing  akan  menyebabkan  iritasi  pada  selaput lendir  sehingga  mengganggu  proses  penyerapan zat  makanan  dalam  usus  cacing.  Tertekannya sistem  saraf  dan  sistem  gerak  menyebabkan kelemahan umum cacing, sedangkan tertekannya
Tabel 1. Rata-rata persentase kematian cacing A. galli tiap 2 jam pada semua perlakuan Perlakuan Waktu Pengamatan 2 jam (%) 4 jam (%)  6 jam (%) 8 jam (%)  10 jam (%) 12 jam (%) K+ 40 82,5 92.5 100 100 100 K- 0 10 27,5 57,5 100 100 P1 0 22,5 37,5 60 87,5 100 P2 0 37,5 57,5 77,5 95 100 P3 0 45 65 80 100 100 P4 32,5 50 72,5 95 100 100 Tabel 2. Persentase A. galli yang mati jam ke-2 pada setiap perlakuan Perlakuan Mean dan Simpangan Baku Jam ke-2 Jam ke-4 Jam ke-6 Jam ke-8 Jam ke-10 Jam ke-12 K+ 4,0 b ±1,4 8,3 d ±2,1 9,3 c ±1,5 1,0 c ±0,0 10,0±0,0 10,0±0,0 K- 0,0 a ±0,0 1,0 a ±1,2 2,8 a ±0,9 5,3 a ±1,5 9,0±2,0 10,0±0,0 P1 0,0 a ±0,0 2,3 ab ±0,5 3,8 a ±1,3 6,0 a ±0,0 8,8±1,5 10,0±0,0 P2 0,0 a ±0,0 3,8 bc ±3,8 5,8 b ±0,5 7,8 b ±0,5 9,5±1,0 10,0±0,0 P3 0,0 a ±0,0 4,5 c ±0,6 6,5 b ±1,0 8,0 b ±0,0 10,0±0,0 10,0±0,0 P4 3,3 b ±0,9 5,0 c ±1,2 7,3 b ±0,9 9,5 c ±1,0 10,0±0,0 10,0±0,0
a,b,c,d Superskrip berbeda dalam kolom yang sama menunjukkan perbedaan yang signifikan (p<0,05). sistem  pernapasan  menyebabkan  kekurangan oksigen sehingga cacing mati (Gardner, 1957).
Menurut (Min et al ., 2003) bahwa tanin dari berbagai  tanaman  dapat  memutus  siklus  hidup cacing  nematoda  di  dalam  saluran  pencernaan dengan  menghambat  penetasan  telur  cacing  dan perkembangan  larva  infektif.  Tanaman  yang mengandung 5% ekstrak tanin dapat mengurangi kontaminasi  larva  dan  dapat  digunakan  sebagai anticacing.  Pengendalian  parasit  disarankan menggunakan  tanaman  yang  mengandung  tanin karena dapat mengurangi parasit saluran pencernaan  dan  meningkatkan  performa  ternak. Populasi cacing berkurang sehingga absorpsi zat makanan  optimal  sehingga  jumlah  nutrien  yang diserap  dan  dideposit  dalam  tubuh  lebih  banyak yang menyebabkan bobot badan akhir ayam lokal lebih  tinggi.  Efek  anthelmintik  yang  ada  dalam ekstrak  daun  gamal  hampir  sama  dengan piperazine sitrat. Piperazine bekerja sebagai obat cacing  dengan  cara  blokade  respon  otot  cacing yang  menyebabkan  cacing  mengalami  paralisis sehingga  cacing  akan  kehilangan  motilitas  dan kemampuannya  untuk  menempel  pada  traktus intestinum  dan  cacing  akan  dengan  mudah dikeluarkan  oleh  peristaltik  usus  (Sukarban  dan Sardjono, 1995).

## KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  ini  dapat  disimpulkan bahwa  konsentrasi  5%  yang  memberikan  hasil terbaik dalam hal jumlah kematian cacing A. galli dibandingkan dengan konsentrasi lainnya. Hal ini menunjukkan  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi ekstrak  etanol  daun  gamal,  semakin  tinggi  pula kandungan aktif untuk membunuh cacing A. galli .

## UCAPAN TERIMA KASIH
Peneliti  mengucapkan  terimakasih  kepada Universitas Airlangga PSDKU Banyuwangi atas izin  dan  dukungan,  yang  telah  diberikan  kepada peneliti untuk melaksanakan penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
Ashab,  I.,  &  Lina,  S.  M.  M.  (2011).  In  Vitro Phytocthemical and Anthelmintic Activity of Cocculus hirsutus Linn and Rumex dentatus Linn . Journal  Pharmacy  Science ,  4(2),  63- 65.
Astiti,  L.  G.,  Prisdiminggo,  S.,  &  Panjaitan,  T. (2016).  Efektivitas  Ekstrak  Daun  Gamal ( Gliricidia  sepium )  terhadap  Larva  Cacing
Trichostrongylus  sp.  pada  Kambing  PE. Prosiding Seminar Nasional Inovasi
Teknologi  Pertanian  Banjarbaru,  20  Juli 2016. Balai Pengkajian Teknologi Pertanian Nusa Tenggara Barat. Nusa Tenggara Barat.
Athaillah, F. (1999). Respons Pertahanan Selaput Lendir  Usus  Halus  Ayam  Kampung Terhadap  Infeksi  Cacing Ascaridia  galli pada  Ayam  Petelur.  Tesis.  Program Pascasarjana.  Institut  Pertanian  Bogor.
Bogor.
Bairagi, G., Kabra, B., & Mandade, R. J. (2011).
Anthelmintic  Activity  of  Citrus  medica  L. Leaves in Indian Adult Earthworm. Journal of Pharmatech Research , 3(2), 664-667.
Elevitch, C. R., & Francis, J. K. (2006). Gliricidia sepium (gliricidia),  Fabaceae  (Legume Family). Species Profiles For Pacific Island Agroforestry.
Gardner,  R.  J.  (1957).  Veterinary  Toxycology. Bailiere Tindall and Cox. London. pp: 43.
Harborne,  J.  B.  (1987).  Phytochemical  method.
Chapman and Hall ltd. London. pp: 67.
Kuhlman,  W.  F.  (2006).  Preservation,  Staining and Mounting Parasite Speciment.
Kuntari,  T.  (2008).  Daya  Antihelmintik  Air Rebusan  Daun  Ketepang  ( Cassia  alata  L .)
terhadap  Cacing  Tambang  Anjing  In  Vitro. Universitas Islam Indonesia. Yogyakarta.
Kusumamihardja,  S.,  (1992).  Parasit  dan parasitosis  pada  hewan  ternak  dan  hewan piaraan  di  Indonesia.  Bogor:  Pusat  Antar Universitas  Bioteknologi  Institut  Pertanian Bogor, Hal: 432.
Min,  B.  R.,  Barry,  T.  N.,  Attwood,  G.  T.  & McNabb,  W.  C.  (2003).  The  effect  of
condensed tannins on the nutrition and health of  ruminants  fed  fresh temperate  forages:  a review. Animal Feed Science and
Technology , 106(1-4), pp.3-19.
Nukmal,  N.,  Utami,  N.,  &  Suprapto.  (2010).
Skrining  Potensi  Daun  Gamal  ( Gliricidia maculata  Hbr .)  Sebagai  Insektisida  Nabati. Laporan  Penelitian  Hibah  Strategi  Unila. Universitas Lampung. 2010.
Odhiambo,  R.  S.,  Patrick,  K.  G.,  Helen,  K.  L.,
Gathu, N. C., Francis, N. K., & Richard, W. W.  (2014).  Evaluation  of  in  Vitro  Ovicidal Activity  of  Ethanolic  Extracts  of  Prosopis juliflora (Sw.) DC (Fabaceae). IOSR Journal of Pharmacy and Biological Sciences , 9(3), 15-18.
Satrija, F., Retnani, E. B., Ridwan, Y., & Tiuria,
R. (2001). Potential  use of herbal anthelmintics  as  alternative  antiparasitic drugs  for  small  holder  farms  in  developing countries.  In  Livestock  community  and environment.  Proceedings  of  the  10th Conference of the Association of Institutions for Tropical Veterinary Medicine, Denmark.
Sukarban,  S.,  &  Sardjono,  O.  S.  (1995). Farmakologi  dan  Terapi.  Edisi4:  Jakarta: Gaya Baru. Hal: 525-534.
Walter,  H.  H.  (2008).  Handbook  of  Veterinary Pharmacology.  1th  Ed.  USA:A  John  Wiley and Sons, Ltd., Publication. Hal: 379-389.
Zalizar,  L.,  &  Satrija,  F.  (2009).  Effect  of different  Dosage  Infection Ascaridia  galli and  Piperazine  Treatment  on  Total  Worm and  Layers’  Body  Weight. Animal Production , 11(3).