Jurnal Pendidikan, Matematika dan Sains http://ejournal.uki.ac.id/index.php/edumatsains
POTENSI EKSTRAK DAUN BINAHONG ( Anredera cordifolia (Ten.) Steeni s ) DAN MINYAK ATSIRI SERAI ( Cymbopogon citratus (DC. ) Stapf)

## SEBAGAI BAHAN AKTIF HAND SANITIZER SPRAY
Adonia Felma Mosse 1 , Aniek Prasetyaningsih 2* Dwi Aditiyarini 3
1,2,3 Program Studi Biologi, Fakultas Bioteknologi, Universitas Kristen Duta Wacana
Diterima: 15 Februari 2021     Direvisi: 04 Mei 2021     Diterbitkan : 01 Juli 2021

## ABSTRACT
Maintaining  hand  hygiene  is  an  important  habit  to  prevent  disease  caused  by  microorganisms  and  viruses. Handsanitizer  is  one  of hygiene  products as antibacterial and  practical  use.  However, the  use  of  alcohol as its main  ingredient  could  irritate  skin. Therefore,  the  alternative  of  alcohol  is  urgently  found  to  prevent this  side effect  in  same  effectiveness.  in  this  research,  Binahong  (Anredera  cordifolia  (Ten.)  Steenis  leaf  extract  and lemongrass oil (Cymbopogon citratus (DC.) Stapf) are used to replace alcohol as the main ingredient. This study aims  to  know  the  potential  antibacterial  activity  of  binahong  leaf  extract,  lemongrass  oil  and  its  combination against S.aureus and its effectiveness as an active ingredient in hand sanitizer spray. Binahong extraction using the  maceration  method. The  secondary  metabolites  of  both  extracts  were  identified  by  phytochemical  assay. Then,  their  antibacterial  activity  was  determined  using a  disk  diffusion  test  for  S.  aureus. The  organoleptic  of hand  sanitizer  spray  was  observed.  The  highest  antibacterial  activity  was  obtained  from  the  combination  of binahong  leaf  extract and  lemongrass  oil  100%  at ratio 1:1. This  combination  was  used to  formulate  the hand sanitizer spray.  The highest inhibitory activity of hand sanitizer spray  was shown in the formulation with 3% active ingredients (extracts). This product had dark yellow  in colour, distinctive aroma, and liquid texture and effectively  suppresses  bacterial  growth  on  the  hands.  According  to  the  results,  binahong  leaf  extract  and lemongrass oil are potentially used as active ingredients for natural hand sanitizer sprays.
Keywords: Hands, hand sanitizer, antibacterial, binahong leaf extract, lemongrass oil

## PENDAHULUAN
Tangan merupakan salah satu media transmisi  mikroorganisme.  Edmons-Wilson et  al (2015)  mengidentifikasi  pada  tangan petugas kesehatan ditemukan bakteri patogen seperti Staphylococcus  aureus , Methicillin- Resistant S.aureus (MRSA) dan Enterococcus sp. Oleh karena itu, kebersihan tangan  perlu  dijaga  untuk  mengurangi populasi mikroorganisme pada tangan.
Cara  sederhana  yang  dapat  diterapkan untuk  menjaga  kebersihan  tangan  yaitu mencuci tangan menggunakan air dan sabun. Penggunaan  air  dan  sabun  dinilai  kurang praktis sehingga  dikembangkan produk inovatif  sebagai  alternatif yaitu hand sanitizer. Produk  ini  lebih  praktis  dan  dapat digunakan  ketika  kesulitan  menemukan  air dan  sabun  (Radji et  al., 2007). Hand sanitizer umumnya  berbahan  aktif  alkohol untuk memberikan kemampuan antibakterial.
Akan  tetapi,  pemakaian  alkohol  dalam jangka waktu yang lama dapat menyebabkan kulit  kering  dan  iritasi  (Sari  &  Isadiartuti, 2006;  Shu,  2013).  Oleh  karena itu, diperlukan  bahan  aktif  lain  yang  bersifat antibakteri  namun  aman  digunakan  dalam kurun  waktu  yang  lama.  Bahan  aktif  dari tanaman  dapat  menjadi  salah  satu  bahan alternatif  pengganti  alkohol  dalam hand sanitizer . Tanaman
Binahong ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) diketahui memiliki aktivitas  antibakteri  terhadap  berbagai  jenis bakteri,  salah  satunya  adalah S.aureus, karena  mengandung  senyawa  metabolit sekunder seperti alkaloid, flavonoid, saponin dan steroid (Garmana et al., 2014 ; Khunaifi,
2010). Tanaman lain yang berpotensi sebagai antibakteri yaitu serai  ( Cymbopogon citratus (DC.)  Stapf)  khususnya  minyak  atsiri. Minyak  atsiri  serai  memiliki  aroma  wangi yang  khas  dan  aktivitas  antibakteri  terhadap berbagai bakteri patogen khususnya S.aureus (Naik et al., 2010).
Berdasarkan  uraian  diatas,    penelitian ini  dilakukan  untuk  mengetahui  aktivitas antibakteri  ekstrak  daun  binahong  (EBD), minyak atsiri serai (MAS) dan kombinasinya terhadap bakteri S.aureus serta efektivitasnya  sebagai  bahan  aktif hand sanitizer  spray .  Selain  itu,  juga  dilakukan identifikasi metabolit sekunder yang terkandung  dalam  kedua  bahan  tersebut
untuk memberikan informasi yang komprehensif.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium Bioteknologi  Dasar  Fakultas  Bioteknologi, Universitas Kristen Duta Wacana, Yogyakarta.  Bahan  utama  yang  digunakan meliputi daun binahong ( Anredera cordifolia (Ten.)  Steenis)    kering  yang  diperoleh  dari Pasar  Tradisional  Beringharjo,  Yogyakarta, minyak  atsiri  serai  ( Cymbopogon  citratus (DC.)  Stapf)  dari  PT.  Rumah  Atsiri Indonesia  dan  kultur  murni  bakteri S.aureus dari  Balai  Laboratorium  Kesehatan  dan Kalibrasi Yogyakarta.
1. Ekstraksi daun binahong
Daun  binahong  kering  dihaluskan  dengan blender  sampai  berbentuk  serbuk  simplisia. Sebanyak  300  g  simplisia  dimaserasi menggunakan  pelarut  etil  asetat  dengan perbandingan  1:4  (b/v)  selama  3  hari. Maserat disaring menggunakan kertas saring. Pelarut  dalam  filtrat  diuapkan  menggunakan rotary  evaporator .  Kemudian  sisa  pelarut diuapkan  kembali  menggunakan  oven  pada suhu 50 0 C untuk memperoleh ekstrak dalam bentuk  pasta  (ekstrak  kental)  dan  siap  untuk diuji.

## 2. Uji Fitokimia
Kandungan  metabolit  sekunder  pada  ekstrak kental  daun  binahong  diuji  secara  kualitatif. Pengujian ini bertujuan untuk mengidentifikasi  senyawa  alkaloid,  saponin,
steroid,  terpenoid,  flavonoid  dan  tanin (Harborne, 1987).
a. Uji Alkaloid
Ekstrak daun sebanyak 0,3 g ditambahkan  dengan  5  ml  HCl  (asam klorida)  2  N  dan  dipanaskan  selama  2-3 menit. Ekstrak didinginkan dan ditambahkan 0,3  g  NaCl  (natrium  klorida)  dan  disaring menggunakan  kertas  saring.  Sebanyak  5  ml HCl  (asam  klorida)  2  N  ditambahkan  ke dalam  filtrat  kemudian  dibagi  menjadi  3 tabung  meliputi  1A,  1B  dan  1C. Tabung  1A ditambahkan  3  tetes  pereaksi  Mayer,  1B ditambahkan 3 tetes pereaksi Wagner dan 1C ditambahkan akuades sebagai blanko. Pembentukan endapan atau larutan berwarna keruh mengindikasikan adanya alkaloid. b. Uji Saponin
Ekstrak daun sebanyak 0,3 g ditambahkan  5  ml  akuades,  dikocok  kuat selama  30  detik.  Keberadaan  busa  yang stabil selama lebih dari 30 detik mengindikasikan adanya saponin.
c. Uji Terpenoid/Steroid
Identifikasi terpenoid/steroid dilakukan pada  ekstrak  daun  binahong  (EDB)  dan minyak atsiri sereh (MAS).
Sebanyak  0,3  g  EDB  dilarutkan  dalam 15  ml  etanol  95%  dan  dibagi  menjadi  3 tabung  meliputi  2A,  2B  dan  2C. Tabung  2A digunakan  sebagai  blanko,  2B  ditambahkan 3  tetes  asam  asetat  anhidrat  dan  1  tetes H 2 SO 4 (asam  sulfat)  kemudian  dikocok  dan diamati perubahan warnanya.
Perlakuan  yang  sama  dilakukan  pada MAS.  Minyak  atsiri  sebanyak  3-7  tetes ditambahkan 1-2 tetes asam asetat glasial dan 1-2  tetes  H 2 SO 4 (asam  sulfat).  Perubahan warna menjadi biru kehijauan mengindikasikan  adanya  steroid  sedangkan warna  merah  atau  jingga  mengindikasikan adanya terpenoid.
d. Uji Flavonoid
Sebanyak  0,3  g  EDB  ditambahkan  3 ml  n-heksan,  lalu  dikocok  berkali-kali. Kemudian  ditambahkan  20  ml  etanol  80% dan dibagi menjadi 3 tabung meliputi 3A, 3B dan  3C.  Tabung  3A  digunakan  sebagai blanko,  3B  ditambahkan  0,5  ml  HCl  (asam klorida) pekat dan dipanaskan diatas penangas.  Perubahan  warna  menjadi  merah atau ungu mengindikasikan adanya leukoantosianin  dan  3C  ditambahkan  0,5  ml HCl (asam klorida) pekat dan empat  potong Mg.  Perubahan  warna  menjadi  jingga mengindikasikan adanya  flavonol sedangkan merah tua mengindikasikan adanya flavonon. e. Uji Tanin
Sebanyak  0,3  g  EDB  dilarutkan  dalam 10  ml  akuades  panas  dan  dihomogenkan. Ditambahkan  3-4  tetes  NaCl  (natrium klorida)  10%  dan  disaring  menggunakan kertas  saring.  Filtrat  dibagi  menjadi    tabung meliputi  4A,  4B  dan  4C.  Tabung  4A digunakan  sebagai  blanko,  4B  ditambahkan beberapa tetes larutan gelatin dan 5 ml NaCl (natrium klorida) 10%. Terbentuknya endapan  putih  mengindikasikan  adanya
tannin. Sementara 4C ditambahkan beberapa tetes  larutan  FeCl 3. (Besi  (III)  klorida).
Perubahan  warna  menjadi  hijau  kehitaman mengindikasikan adanya tannin.

## 3. Uji Aktivitas Antibakteri
Pengujian  aktivitas  antibakteri  dilakukan menggunakan  metode Kirby-Bauer ( disk diffusion )  yaitu  dengan  merendam  ekstrak tanaman  dengan  variasi  konsentrasi  0,  12,5, 25,  50,  75  dan  100%  masing-masing sebanyak  20  µl  ke  dalam  kertas  Whatman No.42,  kemudian  meletakkannya  ke dalam petridish yang  berisi  media Mueller  Hinton Agar (MHA)  yang  telah  diinokulasi  bakteri uji,  kontrol  positif  ( ciprofloxacin )  dan kontrol  negatif  (akuades  steril  untuk  EDB dan  DMSO  ( Dimetil  Sulfoksida )  untuk  MAS) secara  aseptis.  Inkubasikan  pada  suhu  37 o C selama 24 jam. Diameter zona hambat diukur menggunakan  penggaris.  Setiap  perlakuan pada  uji  ini  diulang  sebanyak  tiga  kali.
Ekstrak  dengan  aktivitas  tertinggi  akan digabungkan untuk pengujian kombinasi dan diformulasikan untuk uji aktivitas antibakteri sediaan hand sanitizer spray .
4. Formulasi  Sediaan Hand  Sanitizer Spray
Formulasi  sediaan hand  sanitizer  spray dimodifikasi  dari  penelitian  Martono  & Suharyani (2018). Sediaan dibuat dalam tiga variasi konsentrasi bahan aktif yaitu 1%, 2% dan 3%. Pembuataan sediaan diawali dengan mengembangkan 0,1 g HPMC ( Hydroxypropyl Methylcellulose ) dalam akuades  panas hingga berbentuk  gel. Kemudian  ditambahkan  propilen  glikol  15 ml, trietanolamin 8 tetes, kombinasi EBD+MAS  dengan  konsentrasi  yang  telah ditentukan  untuk  masing-masing  formulasi, yaitu  1%,  2%  dan  3%.  Setelah  itu, ditambahkan  akuades  hingga  mencapai volume akhir 100 ml (Tabel 1).
Tabel 1. Formula Sediaan Hand Sanitizer Spray Komponen Jumlah (ml) A B C HPMC 0,1 0,1 0,1 Trietanolamin 8 tetes 8 tetes 8 tetes Propilen Glikol 15 15 15 Kombinasi EDB + MAS 1 % 2 % 3 % Aquadest Ad 100 Ad 100 Ad 100
Keterangan:  A  (Formula  bahan  aktif  1%),  B  (  Formula  bahan  aktif  2%),  C  (Formula  bahan  aktif  3%),  EDB (Ekstrak Daun Binahong) dan MAS (Minyak Atsiri Serai)
5. Evaluasi  Sediaan Hand  Sanitizer

## Spray
Evaluasi  sediaan  meliputi:  uji  organoleptik (warna,  aroma  dan  tekstur),  uji  pH berdasarkan  SNI  No.06-2588  (2017),  uji homogenitas, uji pola penyemprotan serta uji efektivitas.  Pengujian  efektivitas    probandus berjumlah  10  orang  dengan  kriteria  sebagai berikut  :  (1)  mahasiswa  UKDW  berusia  15- 20  tahun,  (2)  sehat,  (3)  aktivitas  normal tanpa mencuci tangan, (4) tidak terdapat luka pada tangan dan (5) tidak sedang mengkonsumsi antibiotik.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
EDB  memiliki  karakteristik  berupa  pasta (ekstrak  kental),  berwarna  coklat  kehitaman dan  berbau  aromatis.  Persentase  rendemen EDB yang diperoleh sebesar 9,50%. Rendemen  dihitung  dengan  membandingkan berat  ekstrak  yang  diperoleh  dengan  berat simplisia.  Ekstrak  kental  yang  diperoleh digunakan  untuk  skrining  fitokimia  dan aktivitas antibakteri.
Skrining  fitokimia  terhadap  EDB menunjukkan  kandungan  alkaloid,  saponin dan  steroid.  Akan tetapi, senyawa terpenoid, flavonoid  dan  tannin  tidak  terdeteksi  dalam EDB.  Penelitian  oleh  Kunaifi  (2010) menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  binahong mengandung  metabolit  sekunder  seperti alkaloid,  flavonoid  dan  polifenol.  Garmana et  al., (2012)  berhasil  mengidentifikasi flavonoid,  saponin,  dan  steroid  pada  ekstrak
daun  binahong. Salah  satu  faktor  yang menyebabkan  perbedaan  ini  adalah  jenis pelarut  yang  digunakan.  Penelitian  ini menggunakan  etil  asetat  dalam  proses ekstraksi.  Etil  asetat  merupakan  pelarut dengan polaritas menengah sehingga komponen  yang  bersifat  semi  polar  seperti alkaloid, saponin dan steroid dapat terdeteksi pada  skrining  fitokimia  EDB. Ulung  (2018) menyebutkan  bahwa  saponin  merupakan glikosida  yang  dapat  bersifat  non-polar  atau polar, sedangkan steroid bersifat non-polar.
Skrining  fitokimia  terhadap  MAS menunjukkan kandungan senyawa terpenoid. Hal  ini  sesuai  dengan  Astuti  (2012)  yang menyatakan  bahwa  terpenoid  merupakan senyawa utama penyusun MAS. Aroma khas pada  MAS  dipengaruhi  oleh  tingginya kandungan senyawa aromatis turunan terpenoid seperti sitral.  Terpenoid terbanyak diketahui berasal dari golongan monoterpena (C 10 )    seperti  sitral  dan  seskuiterpena  (C 15 ) seperti tujhopsena.

## 1. Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Tunggal
Pengujian  aktivitas  antibakteri  dilakukan menggunakan  salah  satu  bakteri  patogen dominan, S.aureus yang  dijumpai  pada tangan  (Edmonds-Wilson et  al., 2015). Patogenitas S.aureus berasal  dari  kontak langsung tangan yang kotor dengan makanan sehingga memicu agen kontaminan masuk ke dalam makanan dan menghasilkan enterotoksin yang dapat menyebabkan
keracunan  makanan  (Luthfiyyani,  2019; Harris et al., 2002).
Aktivitas  antibakteri  ekstrak  tanaman dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri S.aureus ditentukan  dari  diameter  zona hambat  pada  metode Kirby-Bauer ( disk diffusion ). Melalui disk diffusion test , tingkat kekuatan  antibakteri  suatu  ekstrak  diukur berdasarkan  diameter  zona  hambat  yang terbentuk.  Menurut  David  and  Stout  (1971), diameter  zona  hambat  <5  mm  dikategorikan lemah, 5-10 mm dikategorikan sedang, 10-19 dikategorikan kuat dan >20 mm dikategorikan sangat kuat.
Hasil uji aktivitas antibakteri EDB dan MAS  menunjukkan  bahwa kedua ekstrak ini
memiliki aktivitas antibakteri terhadap S.aureus (Tabel 2). Semakin tinggi konsentrasi  EDB  dan  MAS,  semakin  besar diameter  daya  hambat  yang  dihasilkan.  Hal ini mengindikasikan peningkatan kemampuan  ekstrak  dalam  menghambat pertumbuhan bakteri. Kemampuan penghambatan  ditandai  dengan  ukuran  zona hambat  yang  semakin  besar  (Pelzcar  & Chan, 1988).
Kemampuan  EDB  dan  MAS  tunggal tertinggi  dalam  menghambat  pertumbuhan S.aureus diperoleh  masing-masing  pada konsentrasi  100%,  dengan  kategori  kuat untuk EDB dan sangat kuat untuk MAS.
Tabel  2. Aktivitas  Antibakteri Anredera  cordifolia (Ten.)  Steenis)  dan  Minyak  Atsiri ( Cymbopogon citratus (DC.) Stapf) terhadap Bakteri S. aureus
Perlakuan Konsentrasi (%) (b/v) Daya Hambat (mm) Rata-rata (mm) ± SD I II III Ekstrak Daun Binahong (EDB) 0 % 0 0 0 0 e ±0.000 12,5 % 0 0 0 0 e ±0.000 25 % 8 8 7 7,67 d ±0.577 50 % 10 10 8 9,33 cd ±1.154 75 % 10 10 13 11 c ±1.732 100 % 14 14 17 15 b ±1.732 AS 0 0 0 0 e ±0.000 CIP 30 30 30 30 a ±0.000 Minyak Atsiri Serai (MAS) 0 % 0 0 0 0 f ±0.000 12,5 % 8 8 8 8 e ±0.000 25 % 9 9 9 9 e ±0.000 50 % 18 13 13 14,67 d ±2.886 75 % 24 22 22 22,67 c ±1.154 100 % 80 75 71 75,33 a ±4.509 DMSO 0 0 0 0 f ±0.000
CIP 30 30 30 30 b ±0.000
Keterangan:  Akuades  steril:  control  negative,  DMSO  (Dimetil SUlfo ksida):  control  negative,  Ciprofloxacin: kontrol positif.
Aktivitas penghambatan diduga dipengaruhi oleh senyawa metabolit sekunder  dalam  EBD  dan  MAS  seperti alkaloid, saponin dan steroid dari EBD  serta senyawa  terpenoid  dari  MAS.  Alkaloid menghambat  pertumbuhan  bakteri  dengan menghambat  sintesis  asam  nukleat  melalui penghambatan  kerja  enzim dihydrofolate reductase .  Enzim  ini  berfungsi  untuk mereduksi dihydrofolate menjadi tetrahydrofolate yang  berperan  dalam pembentukan  asam  nukleat.  Alkaloid  juga berperan  dalam  mengganggu  komponen penyusun  peptidoglikan  dinding  sel  bakteri sehingga  sel  bakteri  tidak  dapat  terbentuk secara sempurna (Astridwiyanti et al., 2019). Saponin bersifat antibakteri dengan menurunkan  tegangan  permukaan  dinding sel.  Pembentukan  ikatan  antara  saponin dengan  lipopolisakarida  dapat  meningkatkan permeabilitas  dinding  sel  dan  menurunkan tegangan  permukaan  dinding  sel  yang mengakibatkan  terjadinya  lisis  (Dwicahyani et al., 2018).
Steroid  bekerja  dengan  menyebabkan kebocoran  pada  lisosom  bakteri  (Madduluri et  al., 2013).  Interaksi  terpenoid  dengan membran  protein  pada  membran  luar  sel membentuk  ikatan  polimer  kuat  yang mengakibatkan  kerusakan  membran  protein (Bobbarala, 2012).
Hasil analisis statistik One-way Analysis of Variance ( ANOVA ) menunjukkan nilai  taraf  kepercayaan  perlakuan,  p  <0,055 (p=0,000) artinya terdapat pengaruh signifikan  dari  perlakuan  konsentrasi  EBD dan  MAS  terhadap  aktivitas  antibakteri. Adanya  pengaruh  yang  signifikan  maka dilanjutkan  dengan  pengujian Post  Hoc  Test ( Duncan )  untuk  mengetahui  perbedaan  yang dihasilkan (Tabel 2).\
2. Uji  Aktivitas  Antibakteri  Kombinasi Ekstrak
Konsentrasi  EBD  dan  MAS  tunggal  yang memiliki aktivitas antibakteri tertinggi digunakan  sebagai  acuan  pengujian  aktivitas antibakteri  dari  kombinasi  bahan  alam. Kombinasi  bahan  alam  ini  bertujuan  untuk mengetahui  potensi  kombinasi  EDB  dan MAS dalam meningkatkan aktivitas antibakterinya.
Hasil  pengujian  menunjukkan  bahwa kombinasi EBD:MAS 100% memiliki aktivitas  penghambatan  bakteri S.  aureus paling tinggi sebesar 90 mm (Tabel 3). Nilai ini tergolong dalam kategori kekuatan sangat kuat. Aktivitas antibakteri ekstrak kombinasi lebih  kuat  daripada  ekstrak  tunggal.  Hal  ini menunjukkan bahwa  EBD  dan MAS bersinergi dalam menentukan aktivitas antibakteri. Besarnya diameter hambat
dipengaruhi oleh keragaman senyawa metabolit sekunder pada ekstrak tanaman.
Hasil analisis statistik One-way Analysis of Variance (ANOVA) menunjukkan  taraf  kepercayaan  perlakuan dengan  nilai  p<0,05  (p=0,000)  artinya terdapat  pengaruh  yang  signifikan  dari perlakuan  kombinasi  EBD  dan  MAS terhadap aktivitas antibakteri. Oleh sebab itu, dilakukan  uji  lanjutan Post  Hoc  Test ( Duncan )  untuk  mengetahui  perbedaan  yang dihasilkan  (Tabel  3).  Hasil  pengujian kombinasi terbaik dalam menghambat pertumbuhan  bakteri S.  aureus yaitu kombinasi  EBD:MAS  dengan  konsentrasi 100% (Tabel 3 dan Gambar 1)
3. Uji  Aktivitas  Antibakteri  Formulasi Hand sanitizer Bahan Alam
Kombinasi EDB dan MAS dengan konsentrasi  100%  digunakan  sebagai  acuan dalam  formulasi  sediaan hand  sanitizer spray .  Tabel  4  menunjukkan  bahwa  tiga formula hand sanitizer spray (F1, F2 dan F3) dengan  variasi  konsentrasi  kombinasi  EDB dan  MAS    berturut-turut  1%,  2%  dan  3% memiliki  kemampuan  dalam  menghambat pertumbuhan S.aureus dengan  diameter hambat  berturut-turut  sebesar  7,  7,3  dan  8 mm. Aktivitas penghambatan tertinggi ditunjukkan  oleh  F3  dengan  kombinasi
EDB+MAS  3%  dan  diameter  zona  hambat sebesar 8 mm.
Aktivitas penghambatan dapat terjadi karena perpaduan antara EDB dan MAS berinteraksi dalam  membentuk  zona  hambat.    Penelitian oleh  Veronita et  al., (2017)  menguji  tiga formula hand  sanitizer dengan  variasi konsentrasi  ekstrak  daun  binahong  yaitu 0,25%,  1,50%  dan  1%  terhadap  bakteri E.coli dan S.aureus. Hasil menunjukkan bahwa  ketiga  formula hand  sanitizer tidak memiliki  kemampuan  menghambat  bakteri S.aureus .  Penelitian  Veronita et  al., (2017) berbeda  dengan  penelitian  ini.  Perbedaan daya  hambat hand  sanitizer terhadap  bakteri S.aureus diduga  akibat  variasi  konsentrasi yang  digunakan  terlalu  kecil  dan  hanya menggunakan  ekstrak  tunggal  atau  tidak menambahkan  bahan  ekstrak  tanaman  lain yang  dapat  membantu  meningkatkan  kinerja hand  sanitizer. Akibatnya, hand  sanitizer tersebut  tidak  memiliki  kemampuan  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri S.aureus . Berdasarkan  data  pada  Tabel  4,  formula dengan kemampuan menghambat pertumbuhan S.aureus paling tinggi yaitu F3 dengan  penambahan  bahan  aktif  kombinasi EDB+MAS  3%  digunakan  untuk  evaluasi dan  pengujian  efektivitas  sediaan hand sanitizer spray .
Tabel  5. Uji  Organoleptik,  Homogenitas  dan  Pola  Penyemprotan  Sediaan Hand  Sanitizer Spray
Formula Pengamatan pH  Homogenitas Pola penyemprotan Warna Aroma Bentuk HS EDB+MA 3% Kuning gelap Kombinasi Ekstrak (Serai lebih khas) Cair 4,8 Homogen 10 cm

## 4. Evaluasi Sediaan Hand Sanitizer Spray
Evaluasi  sediaan  terdiri  atas  beberapa tahapan  yaitu  uji  organoleptik  (visualisasi warna,  aroma  dan  bentuk),  uji  pH,  uji homogenitas  serta  uji  pola  penyemprotan (Martono  &  Suharyani,  2018).  Berdasarkan hasil yang diperoleh pada Tabel 5, pengujian organoleptik  diketahui  bahwa  sediaan hand sanitizer kombinasi EBD+MAS 3% memiliki  warna  kuning  gelap,  aroma kombinasi  ekstrak  tetapi  aroma  serai  lebih khas  dan  berbentuk  cair.  Pengukuran  pH menggunakan  pH  meter.  Uji  pH  bertujuan untuk  menjamin  keamanan  produk  ketika diaplikasikan  pada  kulit.  Kulit  manusia berada  pada  interval  pH  4,5-6,5  (Noor, 2009). Nilai pH harus memenuhi persyaratan SNI  No.06-2588  yaitu  pH  4-10.  Nilai  pH produk  yaitu  4,8  ditunjukkan  pada  tabel  5, artiya  produk  masih  memenuhi  range  pH kulit dan  memenuhi persyaratan SNI No.06- 2588 sehingga sedian aman untuk digunakan.
Produk  dengan  pH  terlalu  asam menyebabkan iritasi pada kulit sementara pH terlalu  basa  menyebabkan  kulit  kering  dan bersisik (Putri et al., 2019). Uji homogenitas
bertujuan  untuk  mengetahui  distribusi  zat aktif  dan  komponen hand  sanitizer lainnya tersebar merata (homogen) atau tidak. Ditjen POM  (1979)  menyebutkan  suatu  sediaan dikatakan  homogen  apabila  tidak  terbentuk butiran-butiran  kasar.  Tabel  5  menunjukkan produk hand sanitizer spray homogen karena tidak  terbentuk  butiran  kasar  maupun gumpalan.  Uji  pola  penyemprotan  bertujuan untuk mengetahui kemampuan produk ketika diaplikasikan pada tangan.
Pola  penyemprotan  ditunjukkan  pada Tabel  5,  pola  penyemprotan  yang  terbentuk yaitu  bulat  menyebar.  Semakin  jauh  jarak penyemprotan  maka  semakin  besar  diameter pola penyemprotannya. Penelitian sebelumnya  oleh  Martono  &  Suharyani (2018)  melakukan  evaluasi  tiga  formula hand  sanitizer dari ekstrak aloe  vera sementara penelitian ini hanya mengevaluasi satu formula hand sanitizer berdasarkan hasil dengan formula terbaik .
Dilihat  dari  pengamatan  organoleptis, pH  dan  pola  penyemprotan  memiliki perbedaan dimana organoleptis sediaan hand sanitizer dari  ekstrak aloe  vera memiliki warna  kuning  transparan,  aroma  khas aloe
vera dan  berbentuk  gel  cair  sementara hand sanitizer dari EBD dan MAS memiliki warna kuning  gelap,  aroma  kombinasi  EBD  dan MAS  tetapi  lebih  dominan  MAS  dan berbentuk cair. Selain itu, hand sanitizer dari ekstrak aloe  vera memiliki  pH  6,  6  dan  7 sedangkan hand  sanitizer dari  EDB  dan MAS  memiliki  pH  4,8  tetapi  masih memenuhi  standar  sediaan hand  sanitizer .
Pola  penyemprotan  yang  terbentuk  variatif yaitu 6,8 , 4,3 , dan 2,5 cm sedangkan dalam penelitian  ini  diperoleh  pola  penyemprotan yaitu 10 cm, dengan demikian diameter pola yang terbentuk lebih besar sehingga diasumsikan  produk  menyebar  luas  pada telapak tangan. Perbedaan pola
penyemprotan  yang  terbentuk  kemungkinan dipengaruhi  oleh  viskositas  dari  suatu produk.  Menurut  Kamishita et  al (1992) semakin tinggi viskositas maka tekanan yang diperlukan  untuk  menyemprot  akan  semakin sulit  sehingga  pola  penyemprotan  yang terbentuk tidak dapat menyebar dengan baik. 5. Efektivitas  Sediaan Hand  Sanitizer

## Spray
Pengujian efektivitas bertujuan untuk mengetahui  perbedaan  higienitas  tangan sebelum  dan  sesudah  menggunakan hand sanitizer spray dengan cara melakukan swab tangan probandus sebanyak tiga kali pengulangan/probandus (Gambar 2).
Berdasarkan  hasil  pada  gambar  2 mewakili  10  probandus,  secara  visualisasi terlihat  ada  perbedaan  antara  sebelum  dan sesudah  penggunaan hand  sanitizer  spray dimana  sebelum  penggunaan  bakteri  yang tumbuh  pada  tangan  banyak  sementara
sesudah  penggunaan bakteri  berkurang bahkan tidak mengalami pertumbuhan sehingga  dapat  diasumsikan  bahwa  sediaan hand sanitizer spray berbahan aktif kombinasi  EDB  dan  MAS  3%  efektif menekan  pertumbuhan  bakteri  pada  tangan.
Gambar 1. Efektivitas HSS Kombinasi EBD+MAS 3%
Keterangan : HSS ( Hand Sanitizer Spray ),        (Sebelum Pengunaan HSS), (Sesudah penggunaan HSS), 1 (Pengulangan I), 2 (Pengulangan II) dan 3 (Pengulangan III).
Oleh  sebab  itu,  EDB  dan  MAS  potensial dijadikan  sebagai  sediaan hand  sanitizer spray ditinjau dari efektivitasnya.

## KESIMPULAN
EDB,  MAS  serta  kombinasinya  memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri S.aureus .  Sediaan hand  sanitizer  spray dengan  formula  bahan  aktif  3%  memiliki kemampuan  menghambat    pertumbuhan bakteri S.aureus serta  efektif  menekan pertumbuhan  bakteri  pada  tangan  sehingga potensial  dijadikan  sebagai  bahan  aktif sediaan hand  sanitizer  spray .  Selain  itu, identifikasi  metabolit  sekunder  mengandung senyawa  alkaloid,  saponin  dan  steroid  dari EBD  sementara  senyawa  terpenoid  dari MAS  yang  berkontribusi  menghasilkan aktivitas antibakteri.

## DAFTAR PUSTAKA
Astridwiyanti, A. A. B., Mahendra, A. N., & Dewi, N. W. S. (2019). Uji Efektivitas Ekstrak Etanol Kulit Buah Naga Merah ( Hylocereus polyrhizus ) terhadap Staphylococcus  aureus ATCC  25923
secara  In  Vitro. Intisari  Sains  Medis , 10 (3), 482–486.
Astuti,  E.  P.  (2012).  Pemisahan  Sitral  dari
Minyak Atsiri Serai Dapur ( Cymbopogon citratus ) sebagai
Pelangsing Aromaterapi. Institut
Pertanian Bogor .
Bobbarala,  V.  (2012). Antimicrobial  Agents . Intech.
Davis,  W.  W.  and  Stout,  T.  R.  (1971).  Disc
Plate Method  of Microbiological Antibiotic Assay. Applied
Microbiology , 22 (4): 659-665.
Ditjen  POM.  (1979). Farmakope  Indonesia .
Edisi  Ketiga.  Departemen  Kesehatan RI. Jakarta.
Dwicahyani,  Tiara  ,  Sumardianto,  L.  R.
(2018). Uji Bioaktivitas Ekstrak Teripang Keling Holothuria atra sebagai  Antibakteri Staphylococcus aureus  dan Escherichia  coli . Jurnal Pengolahan  Dan  Bioteknologi  Hasil Perikanan , 7 (1), 15–24.
Edmonds-Wilson,  S.  L.,  Nurinova,  N.  I., Zapka, C. A., Fierer, N., & Wilson, M. (2015).  Review  of  Human  Hand Microbiome  Research. Journal  of Dermatological Science , 80 (1), 3–12.
Garmana,  A.  N.,  Sukandar,  E.  Y.,  & Fidrianny,  I.  (2014).  Activity  of Several  Plant  Extracts  Against  Drug- sensitive  and  Drug-resistant  Microbes. Procedia Chemistry , 13 , 164–169.
Harborne,  J.B.  (1987).  Metode  Fitokimia Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis Tumbuhan. ITB , Bandung .
Harris,  L.  G.,  Foster,  S.  J.,  Richards,  R.  G.,
& Harris, L. (2002). An Introduction to Staphylococcus aureus , and
Techniques for Identifying and Quantifying S.aureus Adhesins  in
Relation  to  Adhesion  to  Biomaterials :
Review. European Cells and Materials , 4 , 39–60.
Kamishita et al. (1992). Spray Gel Base and Spray  Gel  Preparation  Using  Thereof. United States Patent , 19 .
Khunaifi, M. (2010). Uji Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Daun  Binahong ( Anredera  cordifolia (Ten)  Steenis terhadap Bakteri Staphylococcus aureus Dan Pseudomonas  aeruginosa .
Universitas  Muhammadiyah  Malang.
Skripsi.
Luthfiyyani, A. D. (2019). Pengaruh Kebersihan  Tangan  Pada  Saat  Makan Menggunakan  Terhadap  Kontaminasi Pada Makanan. Program Studi
Kesehatan  Dan  Keselamatan  Kerja, Fakultas  Kedokteran,  Sekolah  Vokasi Universitas  Sebelas  Maret,  Surakarta,
Indonesia , 1–6.
Madduluri,  S.,  Babu  Rao,  K.,  &  Sitaram,  B.
(2013). In vitro Evaluation of Antibacterial Activity of Five Indigenous Plants Extract Against Five
Bacterial Pathogens of Human.
International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences , 5 (SUPPL.4), 679–684.
Martono,  C.,  dan  Suharyani,  I.  (2018). Formulasi Sediaan Spray Gel
Antiseptik  dari  Ekstrak  Etanol  Lidah Buaya  ( Aloe  vera ). Jurnal  Farmasi Muhammadiyah  Kuningan , 3 (1),  29–
37.
Naik,  M.  I.,  Fomda,  B.  A.,  Jaykumar,  E.,  & Bhat,  J.  A.  (2010).  Antibacterial Activity  of  Lemongrass  ( Cymbopogon citratus )  Oil  Against  Some  Selected Pathogenic  Bacterias. Asian  Pacific Journal  of  Tropical  Medicine , 3 (7),
535–538.
Noor  Siti  Umrah.  (2009).  Lauret7-7  Sitrat sebagai  Detergensia  dan  Peningkat Busa  pada  Sabun  Cair  Wajah Glysine soja  (Sieb.)  Zucc (pp.  39–47). Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia .
Pelczar,  M.  J.  dan  Chan,  E.  C.  S.,  (1988).
Dasar-Dasar
Mikrobiologi diterjemahkan oleh Hadioetomo, R. S., Universitas Indonesia , Jakarta.
Putri, M. A., Saputra, M. E., Amanah, I. N.,
& Fabiani, V. A. (2019). Uji Sifat Fisik Sediaan  Gel  Hand  Sanitizer  Ekstrak Daun Pucuk Idat (Cratoxylum
Glaucum) . 39–41.
Radji,  M.,  Suryadi,  H.,  &  Ariyanti,  D.
(2007).  Uji  Aktivitas  Antimikroba Beberapa  Merek  Dagang  Pembersih Tangan  Antiseptik. Majalah  Ilmu
Kefarmasian , 4 (1), 1–6.
Sari,  R.,  &  Isadiartuti,  D.  (2006).  Studi Efektivitas  Sediaan  Gel  Antiseptik Tangan  Ekstrak  Daun  Sirih  ( Piper betle Linn .). Majalah Farmasi Indonesia , 17 (4), 163–169.
Shu, M. (2013). Formulasi Sediaan Gel Hand
Sanitizer Dengan Bahan Aktif
Triklosan 0,5% dan 1%. Jurnal  Ilmiah
Mahasiswa, Universitas Surabaya ,
2 (1), 1–14.
Standar  Nasional  Indonesia.  (2017).  Sabun
Cair Pembersih Tangan. Badan
Standar Nasional , 1–2.
Ulung,  anggraito yustinus. (2018). Metabolit
Sekunder Dari Tanaman : Aplikasi dan
Produksi .  Fakultas  Matematika  dan
Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas Negeri Semarang.
Veronita,  F.,  Wijayati,  N.,  &  Mursiti,  S.
(2017).  Isolasi  Dan  Uji  Aktivitas
Antibakteri  Daun  Binahong  Serta
Aplikasinya  Sebagai Hand  Sanitizer .
Indonesian Journal of Chemical
Science , 6 (2), 138–144.