## Spektra Fluorosens Darah Golongan O dan AB dalam Pelarut Metanol p.a dan Etanol 98%
Mochammad Zaki Nasrulloh, Fredy Kurniawan Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS) Jl. Arief Rahman Hakim, Surabaya 60111 Indonesia
e-mail : fredy@chem.its.ac.id
Abstrak —Darah  telah  di  uji  fluorosensinya  untuk mendeteksi  suatu  penyakit.  Spektra  fluorosens  yang dihasilkan  darah  berbeda  tergantung  kondisi  lingkungan darah  tersebut.  Berdasarkan  hal  tersebut  pelu  dilakukan studi  mengenai  darah  dengan  spektrofotometer  fluorosens untuk  mengetahui  spektra  fluorosens  darah.  Penentuan spektra fluorosens darah golongan O dan AB dalam pelarut metanol  p.a  dan  etanol  98%  telah  dilakukan.  Hasil  yang didapat  adalah  golongan  darah  O  dan  golongan  AB memiliki  spektra  yang  sama  dalam  pelarut  metanol  p.a. Dalam  pelarut  metanol  p.a  darah  golongan  O  dan  AB memiliki  spektra  eksitasi  dengan  puncak  maksimum  di panjang  gelombang  210  nm,  255  nm,  277  nm  dan  spektra emisi dengan puncak maksimum di panjang gelombang 303 nm,  557  nm,  600  nm.  Darah  golongan  O  dan  golongan  AB memiliki  spektra  yang  sama  dalam  pelarut  etanol  98%. Dalam  pelarut  etanol  98%  darah  golongan  O  dan  AB memiliki  spektra  eksitasi  dengan  puncak  maksimum  di panjang  gelombang  221  nm,  257  nm,  342  nm  dan  spektra emisi dengan puncak maksimum di panjang gelombang 427 nm, 686 nm.
Kata  Kunci — Spektrofotometer  fluorosens; Golongan darah O; Golongan darah AB.

## I. PENDAHULUAN
arah  adalah  cairan  tubuh  yang  mengantarkan  zat yang  diperlukan  seperti  nutrisi  dan  oksigen  ke  sel- sel dan mengangkut produk sisa metabolisme dari sel-sel yang sama. Bagian plasma  merupakan 55% dari volume darah  utuh  dan  45%  lainnya  adalah  bagian  seluler. Plasma terdiri dari 92 % air dan melakukan fungsi yang berguna  dalam  tubuh  seperti  bertindak  sebagai  media perjalanan  untuk  sel-sel  darah.  Selain  itu  dalam  plasma juga  mengandung  albumin,  fibrinogen  dan  globulin. Sedangkan  bagian  seluler  mengandung  sel  darah  merah, sel darah putih dan trombosit [2].
Biasanya,  7-8%  dari  berat  badan  manusia  adalah  dari darah.  Pada  orang  dewasa,  jumlah  ini  sekitar  4,5-6  liter darah.  Cairan  ini  penting  melaksanakan  fungsi  kritis mengangkut  oksigen  dan  nutrisi  ke  sel-sel  kita  dan menyingkirkan  karbon  dioksida,  amonia,  dan  produk- produk  limbah  lainnya.  Selain  itu,  memainkan  peran penting  dalam  sistem  kekebalan  tubuh  kita  dan  dalam mempertahankan  suhu  tubuh  relatif  konstan.  Darah adalah  jaringan  yang  sangat  khusus  yang  terdiri  dari lebih dari 4.000 jenis komponen. Empat dari yang paling penting  adalah  sel  darah  merah,  sel  darah  putih, trombosit, dan plasma. [2].
Uji  fluorosensi  senyawa  telah  digunakan  untuk mempelajari  darah  manusia  yang  berguna  untuk penentuan penyakit. Metode ini membandingkan spektra fluorosens darah orang normal dengan darah orang yang sakit  untuk  mengetahui  perbedaan  struktur  penyakit
dalam  darah.  Darah  manusia  adalah  sistem  kimia  yang sangat  kompleks.  Darah  dapat  mengemisikan  spektra fluorosens yang berbeda dalam kondisi lingkungan yang berbeda [1].
Fluoresensi  adalah  terpancarnya  sinar  oleh  suatu  zat fluorofor  yang  telah  menyerap  sinar  atau  radiasi elektromagnet  lain.  Sinar  yang  dipancarkan  memiliki gelombang  lebih  panjang  dan  energi  lebih  rendah daripada radiasi yang diserap. Fluorosensi suatu senyawa bergantung pada pelarut yang digunakan. Untuk itu darah dilarutkan  dalam  pelarut  metanol  p.a  dan  etanol  98% untuk mengetahui spektra fluorosens yang dihasilkan [4].

## II. METODOLOGI PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Peralatan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah neraca  analitik  Ohauss,  gelas  kimia,  labu  ukur  10mL, pipet  ukur  1mL  dan  2mL,  pipet  tetes,  pengaduk  kaca, kuvet  Parkin  Elmer,  botol  semprot,  botol  vial,  propipet, corong  gelas,  kertas  saring.  Sedangkan  instrument  yang digunakan  adalah  PerkinElmer  LS  55  spektrofotometer fluoresens  yang  terhubung  dengan  software  FL  Winlab. Bahan  yang  dipakai  dalam  penelitian  ini  adalah  darah golongan  O  dari  3  orang  pendonor  darah  yang  telah dipastikan golongan darahnya dengan antisera komersial, darah  golongan  AB  dari  3  orang  pendonor  darah  yang telah  dipastikan  golongan  darahnya  dengan  antisera komersial,  metanol  p.a  dari  Merck  dan  etanol  98%  dari Brataco.

## Pembuatan Larutan Darah dengan Pelarut Metanol p.a dan Etanol 98%
Sampel yang digunakan adalah darah golongan O dari 3  orang  pendonor  darah  dan  darah  golongan  AB  dari  3 orang  pendonor  darah.  Setiap  satu  orang  diambil darahnya  sebanyak  3  tetes  (masing  masing  1mg-16mg). Untuk  pelarut  metanol  p.a,  Masing  masing  darah dilarutkan  dengan  metanol  p.a  dan  ditimbang  massa darah  yang  mengendap  untuk  menghitung  massa  darah yang  terlarut.  Masing  masing  darah  diencerkan  dengan metanol  p.a  hingga  konsentrasi  0,001  mg/mL.  Untuk pelarut  etanol,  Masing  masing  darah  dilarutkan  dengan etanol  dan  ditimbang  massa  darah  yang  mengendap untuk  mengitung  massa  darah  yang  terlarut.  Masing masing  darah  diencerkan  dengan  etanol  98%  hingga konsentrasi 0,1 mg/mL.

## Uji Fluorosensi Larutan Darah yang Sudah Dibuat
3  tetes  darah  yang  sudah  diencerkan  dengan  masing masing pelarut di uji fluorosensinya dengan menggunakan  spektrofotometer  fluorosens.  Penentuan panjang gelombang pada intensitas maksimum
D
menggunakan  alat  spektrometer  fluoresens.  Sebelum dilakukan  pengukuran,  terlebih  dahulu  alat  diatur  dalam kondisi scan speed = 500nm/min, Slit Ex/Em = 10nm/10nm. Kemudian dilakukan prescan pada λ eks = 200-800, λ em = 200-900nm  untuk  menentukan  parameter  eksitasi  dan emisi  maksimum.  Setiap  tetes  darah  di  uji  3x menggunakan spektrofotometer fluorosens.

## Uji F dan Uji t
Uji  F  dilakukan  untuk  mengetahui  apakah  kedua spektrum  fluorosens  pada  setiap  pendonor  darah  yang dibandingkan sebanding atau tidak. Uji t dilakukan untuk mengetahui  apakah  golongan  darah  mempengaruhi spektrum  fluorosens  pada  setiap  pendonor  darah  yang dibandingkan.  Kedua  uji  dikerjakan  menggunakan Microsoft  Excel  2013 .  Data  nilai  panjang  gelombang pada  puncak  maksimum  spektra  fluorosens  pada  setiap golongan  darah  dilakukan  uji  F  melalui data analysis→F-Test  Two  Sample  for  Variances .  Jika  H 0 diterima  maka  dilakukan  uji  t  dengan  cara data analysis→t-Test:  Two  Sample  Assuming  Equal variances .  Jika  H 0 ditolak  maka  dilakukan  uji  t  dengan cara data  analysis→t-Test:  Two  Sample  Assuming Unequal  variances .  H 0 adalah  tidak  ada  perbedaan  data yang signifikan dari kedua data yang dibandingkan.

## III. HASIL/PEMBAHASAN

## Uji Fluorosensi Darah dengan Pelarut Metanol p.a
Setiap sampel tetes darah yang sudah diencerkan di uji fluorosensinya  dengan  menggunakan  spektrofotometer fluorosens  sebanyak  tiga  kali.  Hasil  spektra  fluorosens dari  golongan  darah  O  dengan  pelarut  metanol  p.a ditunjukkan  pada  Gambar  1  dan  golongan  darah  AB dengan pelarut metanol p.a ditunjukkan pada Gambar 2.
Gambar 1 . Spektra Fluorosens Golongan Darah O dengan Pelarut Metanol p.a
Berdassarkan Gambar 1 pada spektra eksitasi golongan darah O dengan pelarut metanol p.a terdapat tiga puncak di  panjang  gelombang  210  nm,  255  nm  dan  277  nm. Spektra emisi golongan darah O dengan pelarut metanol p.a memiliki tiga puncak di panjang gelombang 303 nm, 557  nm  dan  600  nm.  Tidak  terjadi  pergeseran  panjang gelombang  pada  setiap  pedonor,  hal  ini  menunjukkan bahwa spketra fluorosens larutan darah yang menggunakan  pelarut  metanol  p.a  golongan  darah  O sama  di  setiap  pendonor  darah.  Spektra  fluorosens golongan  darah  AB  dengan  pelarut  metanol  p.a ditunjukkan pada Gambar 2.
Gambar 2. Spektra Fluorosens Golongan Darah AB dengan Pelarut
Metanol p.a
Berdasarkan Gambar 2 pada spektra eksitasi golongan darah  AB  dengan  pelarut  metanol  p.a  terdapat  tiga puncak di  panjang gelombang 210 nm,  255 nm dan 277 nm.  Spektra  emisi  golongan  darah  AB  dengan  pelarut metanol p.a memiliki tiga puncak di panjang gelombang 303  nm,  557  nm  dan  600  nm.  Tidak  terjadi  pergeseran panjang  gelombang  pada  setiap  pedonor,  hal  ini menunjukkan  bahwa  spketra  fluorosens  golongan  darah AB dengan pelarut metanol p.a sama di setiap pendonor darah.  Spektra  fluorosens  golongan  darah  O  yang menggunakan pelarut metanol p.a memiliki puncak yang sama  dengan  golongan  darah  AB  yang  menggunakan pelarut  metanol  p.a,  spektra  fluorosens  larutan  darah yang  menggunakan  pelarut  metanol  p.a  golongan  darah O dengan golongan darah AB ditunjukkan pada Gambar 3.
Gambar 3. Spektra Fluorosens Darah dengan Pelarut Metanol p.a Golongan Darah O dan Golongan Darah B
Berdasarkan Gambar 3 pada spektra eksitasi golongan darah O dengan pelarut metanol p.a terdapat tiga puncak di  panjang  gelombang  210  nm,  255  nm  dan  277  nm. Spektra emisi golongan darah O dengan pelarut metanol p.a memiliki tiga puncak di panjang gelombang 303 nm, 557 nm dan 600 nm. Spektra eksitasi golongan darah AB dengan  pelarut  metanol  p.a  memiliki  tiga  puncak  di panjang  gelombang  210  nm,  255  nm  dan  277  nm. Spektra  emisi  golongan  darah  AB  dengan  pelarut metanol p.a memiliki tiga puncak di panjang gelombang 303 nm, 557 nm dan 600 nm. Spektra fluorosens larutan darah  yang  menggunakan  pelarut  metanol  p.a  golongan darah  O  dengan  golongan  darah  AB  memiliki  bentuk spekta yang sama dan memiliki puncak maksimum yang sama.  Untuk  membuktikan  bahwa  spektra  fluorosens golongan  darah  O  dan  AB  yang  menggunakan  pelarut metanol p.a berbeda atau tidak maka dilakukan uji F dan t. Kesimpulan dari hasil uji F dan uji t pada setiap puncak eksitasi  spektra  fluorosens  darah  yang  menggunakan pelarut  metanol  p.a  golongan  darah  O  dengan  golongan darah  AB  dapat  dilihat  pada  Tabel  1.  Kesimpulan  dari hasil  uji  F  dan  uji  t  pada  setiap  puncak  emisi  spektra
fluorosens darah yang menggunakan pelarut metanol p.a golongan  darah  O  dengan  golongan  darah  AB  dapat dilihat pada Tabel 2.
T ABEL 1. H ASIL U JI F DAN U JI T SETIAP P UNCAK E KSITASI S PEKTRA
F LUOROSENS D ARAH YANG M ENGGUNAKAN P ELARUT M ETANOL P . A
G OLONGAN D ARAH O DENGAN G OLONGAN D ARAH B Spektra Uji Golongan Darah O dengan Golongan Darah B Eksitasi Puncak Pertama Uji F Ditolak Uji t Diterima
Eksitasi Puncak Kedua Uji F Diterima Uji t Diterima Eksitasi Puncak Kedua Uji F Diterima Uji t Diterima
T ABEL 2. H ASIL U JI F DAN U JI T SETIAP P UNCAK E MISI S PEKTRA F LUOROSENS D ARAH YANG M ENGGUNAKAN P ELARUT M ETANOL P . A G OLONGAN D ARAH O DENGAN G OLONGAN D ARAH B Spektra Uji Golongan Darah O dengan Golongan Darah B Eksitasi Puncak Pertama Uji F Diterima Uji t Diterima Eksitasi Puncak Kedua Uji F Diterima Uji t Diterima Eksitasi Puncak Kedua Uji F Diterima Uji t Diterima
Pada  Tabel  1  dan  Tabel  2  dapat  disimpulkan  bahwa seluruh  puncak  spektra  fluorosens  larutan  darah  yang menggunakan  pelarut  metanol  p.a  golongan  darah  O tidak  berbeda  dengan  spektra  fluorosens  larutan  darah yang  menggunakan  pelarut  metanol  p.a  golongan  darah B.

## Uji Fluorosensi Darah dengan Pelarut Etanol 98%
Setiap sampel tetes darah yang sudah diencerkan di uji fluorosensinya  dengan  menggunakan  spektrofotometer fluorosens  sebanyak  tiga  kali.  Hasil  spektra  fluorosens dari  golongan  darah  O  dengan  pelarut  etanol  98% ditunjukkan  pada  Gambar  4  dan  golongan  darah  AB dengan pelarut etanol 98% ditunjukkan pada Gambar 5.
Gambar 4. Spektra Fluorosens Golongan Darah O dengan Pelarut Etanol 98%
Berdasarkan Gambar 4 pada spektra eksitasi golongan darah O dengan pelarut etanol 98% terdapat tiga puncak di  panjang  gelombang  221  nm,  257  nm  dan  342  nm. Spektra  emisi  golongan  darah  O  dengan  pelarut  etanol 98% memiliki dua puncak di panjang gelombang 427 nm
dan 686 nm. Tidak terjadi pergeseran panjang gelombang pada setiap pedonor, hal ini menunjukkan bahwa spektra fluorosens golongan darah O dengan pelarut etanol 98% sama  di  setiap  pendonor  darah.  Tidak  terjadi  pergeseran panjang  gelombang  pada  setiap  pedonor,  hal  ini menunjukkan  bahwa  spketra  fluorosens  larutan  darah yang menggunakan pelarut etanol 98% golongan darah O sama  di  setiap  pendonor  darah.  Spektra  fluorosens golongan  darah  AB  dengan  pelarut  etanol  98% ditunjukkan pada Gambar 5.
Gambar 5. Spektra Fluorosens Golongan Darah AB dengan Pelarut Etanol 98%
Berdassarkan Gambar 5 pada spektra eksitasi golongan darah  AB  dengan  pelarut  etanol  98%  terdapat  tiga puncak di  panjang gelombang 221 nm,  257 nm dan 342 nm.  Spektra  emisi  golongan  darah  AB  dengan  pelarut etanol  98%  memiliki  dua  puncak  di  panjang  gelombang 427  nm  dan  686  nm.  Tidak  terjadi  pergeseran  panjang gelombang  pada  setiap  pedonor,  hal  ini  menunjukkan bahwa  spektra  fluorosens  golongan  darah  AB  dengan pelarut  etanol  98%  sama  di  setiap  pendonor  darah. Spektra  fluorosens  larutan  darah  yang  menggunakan pelarut  etanol  98%  golongan  darah  O  dengan  golongan darah AB ditunjukkan pada Gambar 6.
Gambar 6. Spektra Fluorosens Darah dengan Pelarut Etanol 98%

## Golongan Darah O dan Golongan Darah B
Berdasarkan Gambar 6 pada spektra eksitasi golongan darah O dengan pelarut etanol 98% terdapat tiga puncak di  panjang  gelombang  221  nm,  257  nm  dan  342  nm. Spektra  emisi  golongan  darah  O  dengan  pelarut  etanol 98% memiliki dua puncak di panjang gelombang 427 nm dan 686 nm. Spektra eksitasi golongan darah AB dengan pelarut  etanol  98%  memiliki  tiga  puncak  di  panjang gelombang  221  nm,  257  nm  dan  342  nm.  Spektra  emisi golongan darah AB dengan pelarut etanol 98% memiliki dua  puncak di  panjang  gelombang  427  nm  dan  686  nm. Spektra  fluorosens  larutan  darah  yang  menggunakan pelarut  etanol  98%  golongan  darah  O  dan  AB  memiliki bentuk  spektra  yang  sama  dan  memiliki  puncak maksimum  yang  tidak  berbeda.  Untuk  membuktikan bahwa  spektra  fluorosens  golongan  darah  O  dan  AB yang  menggunakan  pelarut  etanol  98%  berbeda  atau tidak  maka  dilakukan  uji  F  dan  t.  Kesimpulan  dari hasil uji  F  dan  uji  t  pada  setiap  puncak  eksitasi  spektra
fluorosens  darah  yang  menggunakan  pelarut  etanol  98% golongan  darah  O  dengan  golongan  darah  AB  dapat dilihat pada Tabel 3. Kesimpulan dari hasil uji F dan uji t pada  setiap  puncak  emisi  spektra  fluorosens  darah  yang menggunakan  pelarut  etanol  98%  golongan  darah  O dengan golongan darah AB dapat dilihat pada Tabel 4.
T ABEL 3. H ASIL U JI F DAN U JI T SETIAP P UNCAK E KSITASI S PEKTRA F LUOROSENS D ARAH YANG M ENGGUNAKAN P ELARUT E TANOL 98% G OLONGAN D ARAH O DENGAN G OLONGAN D ARAH B Spektra Uji Golongan Darah O dengan Golongan Darah B Eksitasi Puncak Pertama Uji F Ditolak Uji t Diterima Eksitasi Puncak Kedua Uji F Diterima Uji t Diterima Eksitasi Puncak Kedua Uji F Diterima Uji t Diterima
T ABEL 4 H ASIL U JI F DAN U JI T SETIAP P UNCAK E MISI S PEKTRA
F LUOROSENS D ARAH YANG M ENGGUNAKAN P ELARUT E TANOL 98% G OLONGAN D ARAH O DENGAN G OLONGAN D ARAH B Spektra Uji Golongan Darah O dengan Golongan Darah B Emisi Puncak Pertama Uji F Ditolak Uji t Diterima Emisi Puncak Kedua Uji F Ditolak Uji t Diterima
Pada  Tabel  3  dan  Tabel  4  dapat  disimpulkan  bahwa seluruh  puncak  spektra  fluorosens  larutan  darah  yang menggunakan pelarut etanol 98% golongan darah O tidak berbeda  dengan  spektra  fluorosens  larutan  darah  yang menggunakan pelarut etanol 98% golongan darah B.
Hal ini menunjukkan bahwa spektra fluorosens larutan darah  golongan  darah  O  dan  golongan  darah  AB  tidak terdapat  perbedaan  dengan  menggunakan  pelarut  etanol 98%.

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan,  Dalam pelarut  metanol  p.a  darah golongan  O  dan  AB  memiliki spektra  eksitasi  dengan  puncak  maksimum  di  panjang gelombang  210  nm,  255  nm,  277  nm  dan  spektra  emisi dengan  puncak  maksimum  di  panjang  gelombang  303 nm,  557  nm,  600  nm.  Dalam  pelarut  etanol  98%  darah golongan  O  dan  AB  memiliki  spektra  eksitasi  dengan puncak  maksimum  di  panjang  gelombang  221  nm,  257 nm, 342 nm dan spektra emisi dengan puncak maksimum di panjang gelombang 427 nm, 686 nm.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] S.  Lowndes,  Blood  interference  in  fluorescence  spectrum : Experiment, analysis and comparison
with intraoperativemeasurements on brain tumor. 2010.
[2] T.  Kanchan  and  K.  Krishan,  “Blood Grouping,”  in  Encyclopedia of  Forensic  and  Legal  Medicine  (Second  Edition),  Oxford: Elsevier, 2016, pp. 425–432.
[3] D.  A.  Skoog,  F.  J.  Holler,  and  S.  R.  Crouch,  Principles  of Instrumental  Analysis,  6  edition.  Belmont,  CA:  Cengage Learning, 2006.
[4] P.  Atkins  and  J.  de  Paula,  Atkins’  Physical  Chemistry.  Oxford University Press, 2010.