## VIABILITAS SEL EPITEL RONGGA MULUT ( KB CELL LINE ) YANG DIPAPAR EKSTRAK ETANOL KOPI
Agustinus Rudolf Phyma 1 , Suryani Hutomo 2 , Yanti Ivana Suryanto 3 , Heni Susilowati 4
1 Fakultas Kedokteran, Universitas Kristen Duta Wacana
2 Bagian Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Kristen Duta Wacana 3 Bagian Fisiologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Kristen Duta Wacana 4 Bagian Biologi Mulut, Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Gadjah Mada

## ABSTRAK
Latar belakang: Kafein merupakan zat yang terkandung dalam kopi, teh, coklat, dan minuman bersoda. Zat dengan struktur kimia 1, 3, 7- ini merupakan derivat yang dikonsumsi hampir oleh seluruh masyarakat di seluruh dunia. Kandungan terbanyak kafein terdapat pada kopi. Penelitian terdahulu melaporkan adanya apoptosis pada osteoblas setelah dipapar kafein. Mengingat tingginya konsumsi kopi di dunia yang mengalami peningkatan 1,2 % per tahun sejak tahun 1980 hingga lebih dari 2 % pada tahun 2010, perlu dilakukan penelitian untuk mengetahui efek kafein pada epitel rongga mulut yang berkontak langsung dengan kafein. Pada penelitian ini digunakan sel KB sebagai model epitel oral. Tujuan penelitian ini adalah untuk menganalisis respon sel epitel rongga mulut terhadap paparan ekstrak etanol kopi ditinjau dari viabilitas sel KB.
Metode: Sel KB (2 x 10 ΀ sel) dikultur dalam DMEM pada sebelum perlakuan. Sel selanjutnya dipapar dengan ekstrak etanol kopi dalam berbagai konsentrasi (50 g/ml, 100 g/ml, 200 g/ml, 400 g/ml, 800 g/ ml) dan diinkubasi selama 24 jam dalam medium tanpa antibiotik. Sitotoksisitas diukur dengan menggunakan metode MTT
. Data berupa nilai-nilai densitas optik dianalisis dengan satu jalur.
Hasil: Analisis varian satu jalur terhadap nilai-nilai densitas optik pada MTT assay menunjukkan perbedaan bermakna pada p<0,05. Hal ini mengindikasikan bahwa ekstrak etanol kopi mampu menurunkan viabilitas sel KB setelah dipapar selama 24 jam. Analisis LSD juga menunjukkan perbedaan antara semua kelompok perlakuan, yang artinya semakin tinggi konsentrasi semakin rendah viabilitas sel KB yang terpapar.
Kesimpulan: Ekstrak etanol kopi menyebabkan kematian sel KB. Diperlukan kafein.
Kata kunci:

## THE ORAL CAVITY EPITHELIAL CELL’S VIABILITY (KB CELL LINE) EXPOSED TO COFFEE ETHANOLIC EXTRACT
Agustinus Rudolf Phyma 1 , Suryani Hutomo 2 , Yanti Ivana Suryanto 3 , Heni Susilowati 4
1 Medical Faculty of Duta Wacana Christian University
2 Department of Microbiology
3 Department  of  Physiology  Medical  Faculty  of  Duta  Wacana Christian University
4 Oral Biology Department, Faculty of Dentistry of Gadjah Mada University

## ABSTRACT
Background: ! !! !" #$%& !! ! !"'!! ! "( #")*#+,)*),#,!!! ! ! "-!  !!      " .! / !   "
Methods: 0)#, ΀ 1 !2343 "  ! 05,67 #,,67 ),,67 8,,67 +,,67 1!!)8 !"!!3..". !  /!&"
Results: . !     /!  &  ! 9  !   : ,,5" -  !! !!   )8";<2 / ! ! "
Conclusion: 4     !       " - !  ! !!"
Keywords:

## PENDAHULUAN
Kafein merupakan zat yang terda pat dalam minuman yang biasa dikonsumsi oleh masyarakat sehari- hari. Zat ini terkandung dalam kopi, teh, coklat, dan minuman bersoda. Kafein mempunyai struktur kimia 1, 3, 7-
, merupakan derivat dan dikonsumsi hampir
oleh masya rakat di seluruh dunia.
Kandungan ter banyak kafein terdapat pada kop, yaitu sebesar 40-180 mg/ cang kir. 1 Kandungan kafein dalam teh lebih sedikit dibandingkan kopi. mempunyai kandungan yang lebih ba nyak dibandingkan dan . Satu kaleng minuman cola berisi 45,6 mg/12-oz kaleng sedangkan seba tang coklat mempunyai 6-26 mg kafein . Konsumsi kopi di dunia mengalami peningkatan 1,2 % per tahun sejak tahun 1980 hingga lebih dari 2 % pada tahun 2010. 2 Survei yang dilakukan Barone dan Robert pada tahun 1996 melaporkan, konsumsi kafein di dunia sehari-hari mencapai 1-2 mg/kg/hari. Konsumsi tersebut setara dengan 70- 140 mg kafein pada individu dengan berat badan 70 kg. 3 Menurut Badan Pengawas Obat dan Makanan (BPOM), konsumsi kafein maksimum adalah sebesar 150 mg/hari. Batas kandungan kafein dalam minuman adalah sebesar 50 mg per saji.
Kafein dapat menstimulasi otak dan mempengaruhi ! , meningkatkan kemampuan berpikir, menunda onset tidur, meningkatkan aliran pembuluh darah koroner, produksi urin, sekresi lambung dan meta bolisme basal. 3,4,5,6
Konsumsi kafein juga dapat me- nurunkan faktor resiko penyakit Parkinson, menurunkan densitas mineral tulang femur pada pria usia lanjut, serta menyebabkan
! (IUGR) dan berat badan lahir rendah pada bayi. 7 Penelitian lain menunjukkan bah wa kafein juga mempunyai efek sitotoksik dengan konsentrasi 10 ml terhadap osteoblas. 8
Selain itu kafein juga menurunkan viabilitas dari &!! (rBMSCs). Kafein akan menginduksi apoptosis pada konsentrasi 1 ml, sementara semakin tinggi konsentrasinya akan me nyebabkan semakin banyak sel yang mengalami nekrosis.
Epitel oral merupakan bagian dari tubuh yang pertama kali akan terpapar langsung oleh kafein, sehingga perlu diwaspadai dosis kafein yang dapat ditoleransi olehnya. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui efek ekstrak etanol kopi terhadap epitel oral. Pada penelitian ini digunakan sel KB merupakan
yang berasal dari
karsinoma epidermal mulut sebagai model epitel oral. Sel ini mempunyai kromosom sel HeLa.

## METODE PENELITIAN

## 1. Kultur sel KB
Sel KB diperoleh dari koleksi Lembaga Penelitian dan Pengujian Terpadu (LPPT) Universitas Gadjah Mada Yogyakarta. Sel ditumbuhkan dalam 10 ml media penumbuh DMEM yang disuplementasi dengan FBS,
100 IU/ml,
100 g/ml dan
. Kultur yang telah mencapai tingkat kepadatan 80% dipanen untuk selanjutnya dikultur kembali pada sebagai subjek perlakuan yang akan dipapar dengan kafein. Sel KB disiapkan sejumlah lima replikasi untuk tiap kelompok. Sel kemudian diinkubasi pada inkubator dengan suhu 37ºC dan 5% CO 2 selama 24 jam.
2. Analisis viabilitas sel KB setelah paparan berbagai konsentrasi ekstrak kopi
Ekstrak kafein didapatkan dari biji kopi arabika yang diambil dari Temanggung, Jawa Tengah. Pembuatan ekstrak dilakukan dengan cara maserasi. Ekstrak kafein diencerkan dengan DMSO untuk didapatkan konsentrasi sebesar 0, 50, 100, 200, 400, 800, 1600 g/ml untuk perlakuan. Sel KB (2 x 10 ΀ sel) yang telah dikultur semalam pada disiapkan untuk perlakuan. Sebagian dari kultur sel KB ( 5 ) tidak diberi perlakuan dan dikultur dengan DMEM tanpa antibiotik sebagai kelompok kontrol negatif. Setelah paparan kafein maka sel diinkubasi pada suhu 37 o C dalam inkubator dengan tekanan 5% CO 2 selama 24 jam.
Setelah selesai inkubasi, dilakukan MTT dengan menambahan larutan MTT pada kultur dilanjutkan pembacaan densitas optik (nilai absorbansi) supernatan kultur menggunakan ! pada panjang gelombang 570 dengan 630 nm.

## HASIL PENELITIAN
Hasil penelitian menunjukkan bah  wa viabilitas sel KB mengalami penu runan karena adanya paparan eks trak kopi. Viabilitas sel berbanding lurus dengan nilai densitas optik MTT pada panjang gelombang 670 nm. Nilai-nilai simpangan baku densitas optik disajikan pada Gambar 1, sementara prosentase kematian sel KB juga meningkat sebanding dengan besarnya konsentrasi ekstrak eta nol kopi seperti tercantum pada Gam bar 2.
Gambar 1. Nilai densitas optik sel KB setelah paparan ekstrak kopi berbagai konsentrasi. Nilai-nilai densitas optik semakin menurun sesuai dengan peningkatan konsentrasi ekstrak kopi yang dipaparkan. Rerata dan simpangan baku merupakan hasil representatif dari tiga eksperimen.
Gambar 2. Prosentase kematian sel KB pada pemberian seri dosis ekstrak kafein
Perhitungan IC 50 menggunakan metode analisis regresi linear dengan sumbu x berupa seri konsentrasi kafein dari ekstrak etanol kopi Arabika dalam g/ml dan sumbu y berupa persentase kematian sel. Analisis regresi linear menunjukkan bahwa kafein dari ekstrak etanol kopi arabika menyebabkan
secara statistik dengan nilai p sebesar 0,005 (p<0,05).
Analisis regresi linear memberikan angka IC 50 kafein dari ekstrak etanol kopi arabika sebesar 370,19 g/ml. Hasil ini menandakan bahwa dibutuhkan konsentrasi kafein dari ekstrak etanol kopi Arabika sebesar 370,19 g/ml untuk membunuh 50 % sel KB.
Hubungan antara konsentrasi kafein dari ekstrak etanol kopi Arabika dan persentase kematian sel KB dapat dilihat pada gambar 3.
!"# densitas optik
<<> df 3<> ? <" ( ,347 4 ,087 271,895 ,000 @( ,003 10 ,000 . ,350 14
Hasil analisis normalitas Saphiro- Wilk terhadap nilai densitas optik
$&'*+"&&'*+:&&'* +;&&'* =&&'*> turut 0,174; 0,175; 0,216; 0,890 dan 0,157. Hal ini menunjukkan bahwa data pada masing-masing kelompok terdistribusi secara normal. Sementara itu tes homogenitas menunjukkan @&+&$" berarti data homogen. Berdasarkan ha sil tes normalitas dan homogenitas maka ana lisis statistik dilakukan mengguna kan satu jalur. Hasil
p=0,000, yang berarti bahwa ekstrak kopi mampu menginduksi kematian sel KB (tabel 1).
Gambar 3. X sel KB pada seri konsentrasi kafein dari ekstrak etanol kopi Arabika
Suatu senyawa dikatakan memiliki aktivitas sitotoksik apabila memiliki efek penghambatan pertumbuhan sel yang menyebabkan penurunan persentase sel yang hidup dan mengakibatkan pe ningkatan persentase kematian sel pada kenaikan setiap dosis. Hal ini sesuai dengan hasil dari penelitian ini dimana prosentase kematian sel KB juga meningkat sebanding dengan besarnya konsentrasi ekstrak etanol kopi.
Ada beberapa faktor yang mem pengaruhi nilai IC 50 suatu ekstrak ta naman seperti perbedaan , spesies tanaman dan jenis pelarut yang

## DISKUSI
Hasil penelitian menunjukkan bahwa kafein dari ekstrak etanol kopi Arabika dengan konsentrasi 370,19 g/ml dapat menyebabkan kematian 50 % sel KB. Penelitian terdahulu yang dilakukan oleh Kuhlman tahun 1968 melaporkan bahwa kafein menghambat pertumbuhan sel HeLa pada konsentrasi di atas 200 g/ml. 9 Penghambatan disebabkan adanya hambatan pada sintesis RNA. Hambatan ini terjadi 2-3 jam setelah pemberian kafein pada sel HeLa. Kafein juga dapat menghambat sintesis DNA setelah 48 jam perlakuan dengan konsentrasi diatas 500 g/ml.
A   3! . 1992; 157 :
544-553.
2.  International Coffee Organization.
@ !  !B 2010. Available from : www.ico.org/trade_e. asp[Accessed 1 July 2013].
3.  Nehlig, A. Dependence upon coffee and caffeine: an update. In: Nehlig A. ed. .   ! . Florida : CRC press; 2004: 138.
4.  Fredholm ,B.B., Battig, K., Holmen, J., Nehlig, A & Zuartav, E. Ac tions of caffeine in the brain with special reference to factors that contribute to its widespread use. '
, 1999; 51, 83-133. available from: phrmrev.aspetjournals.org/ con tent/51/1/83.long [Accessed 1 July 2013].
5.  Snel, J., Tieges, Z., Lorist, M.M. Effects of caffeine on sleep and wakefulness: an update. In: Nehlig A. ed. .   ! . Florida : CRC press, 2004: 22.
6. Louisa, M. & Dewoto, H.R. Perangsang su sunan saraf pusat. In: Guna wan,S. ed. ? ! edisi 5. Jakarta : Departemen
Far makologi dan Terapeutik Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.
7.  Liu, R., Guo, X., Park, Y., Huang, X., Sinha, R., Freedman, N.D., Hollenbeck, A.R. Caffeine Intake, smoking and risk of Parkinson disease in men and women.
A ! .2012;
175(11): 1200-1207.
8.  Tsuang, HY., Sun, J.S., Chen, L.T., Sun, S.C.K., Chen, S.C. Direct effects of caffeine on osteoblastic cells me tabolism: the possible causal effect of caffeine on the formation of osteoporosis. A D! <!EB 2006; 1:7.
digunakan. 8 Kafein menunjukkan besar konsentrasi toksik yang berbeda pada yang berbeda. Kafein dengan konsentrasi 10 mM bersifat toksik terhadap sel neuroblastoma manusia SK-N-MC. 10 Terhadap sel endotel vena umbilikus manusia, untuk bersifat toksik hanya dibutuhkan konsentrasi sebesar 500 M. 11 Pada penelitian ini kafein dari ekstrak etanol kopi arabika tidak menyebabkan kematian 50 % sel KB dengan konsentrasi dibawah 200 g/ ml. Hal ini dapat disebabkan nilai IC 50 juga dipengaruhi oleh ekspresi gen dan protein dari sel. Sel KB mengekspresi gen keratin, gen keratin yang diekspresikan adalah keratin 7,8,17 dan 18. Ekspresi gen keratin pada sel KB lebih rendah dibandingkan sel HeLa.
Menurut kriteria F - (NCI), suatu ekstrak bahan ala- mi dengan nilai IC 50 < 30 g/ml bersifat toksik. Semakin  rendah  nilai  IC 50 senyawa tersebut maka semakin toksik senyawa tersebut terhadap sel. 12 Menurut Meyer, ekstrak mentah atau substansi murni suatu tanaman dikatakan berpotensi toksik apabila mempunyai nilai IC 50 < 1000 g/ml. 5,13 Dari kriteria tersebut dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol    ko pi arabika dengan nilai IC-
50 370,19 g/ml bersifat toksik terhadap sel KB. Mengingat kopi yang dikonsumsi se hari-hari dilarutkan dengan air, maka perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang sifat sitotoksik ekstrak kopi dengan bahan pelarut air, sehingga akan dapat ditentukan dosis kopi yang dapat ditoleransi oleh sel epitel mukosa mulut. Diperlukan pula studi lebih lanjut untuk
diakibatkan oleh ekstrak etanol kopi.

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Chou,T. Wake Up and Smell the coffee - Caffeine,coffee and the medical consequences. .@
9. Kuhlmann, W., Fromme, H.G., Heege, E.M., Ostertag, W. The mutagenic action of caffeine in higher orga nism. E 1968; 28: 2375-2389.
10. Jang, M.H., Shin, M.C., Kang, I.S., Baik, H.H.,Cho, Y.H.,Chu, J.P., Kim, E.H., Kim, C.J. Caffeine in- duces apoptosis di human neuro- blastoma cell line SK-N-MC. A .  !  3! < 2002; 17: 674-8.
11.  Li, H.,Jin, S.Y., Son, H.J., Seo, J.H., Jeong, G.B. Caffeine- induced endo-
thelial cell death and the inhibition of angiogenesis. !
2013;46:57-67.
12. Itharat, A., B, Ooraikul. Research on Thai Medicinal Plants for Cancer Treatment. !  3!
' EB 2007.
13. Meyer, B.N., Ferrigni, N.R., Putnam, J.E., Jacobson, L.B., Nichols, D.E., McLaughlin, J.L. Brine Shrimp; A Convenient General Bioassay for Active Plant Constituent "A
3! ' E . 1982; 45: 31-3.