## KARAKTERISASI EKSTRAK ETANOL DAUN SELUTUI PUKA Tabernaemontana macrocarpa Jack.
Asmi Risyah Ekawati, Risa Supriningrum, Fitri Handayani *
Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Samarinda, Jl. Brig. Jend. Abdul Wahab Sjahranie No. 226. Air Hitam. Samarinda. Kalimantan Timur *email: sausanrukan@yahoo.co.id
Received: 03-02-2023 Accepted:09-06-2023 Published:30-06-2023

## INTISARI
Selutui  puka  ( Tabernaemontana  macrocarpa Jack.)  secara  empiris  digunakan  oleh  Suku  Dayak sebagai obat sakit gigi dan sariawan. Getahnya digunakan sebagai pengobatan tumor, kudis dan kulit melepuh.  Selutui  puka  berpotensi  untuk  dikembangkan  menjadi  obat  tradisional,  sehingga  perlu dilakukan karakterisasi.  Tujuan penelitian adalah untuk mengetahui karakteristik spesifik dan non spesifik ekstrak etanol daun selutui puka (EEDSP). Daun selutui puka diekstraksi secara maserasi dengan  etanol  70%.  EEDSP  dikarakterisasi  meliputi  parameter  spesifik  yaitu  organoleptik,  kadar senyawa larut air dan etanol serta kandungan metabolit sekunder. Parameter non-spesifik meliputi kadar abu total, kadar abu tidak larut asam, cemaran mikroba dan angka kapang khamir (AKK). Hasil diperoleh rendemen ekstrak sebesar 20,76%. EEDSP berwarna hijau kehitaman, kental, rasa pahit, dan berbau khas. Kadar rata-rata senyawa terlarut dalam air dan etanol masing-masing 20± 0,00% dan 36,66±5,50%. EEDSP mengandung alkaloid, flavonoid, saponin, tanin, dan steroid. Kadar air, abu total dan abu tidak larut asam masing-masing 0,38 ± 0,01; 21,66 ± 2,08 dan 8,35 ± 0,03 . Hasil dari total cemaran mikroba sebanyak  6,1 × 10 -2 koloni/g serta AKK 5,7 × 10 -2 koloni/g. Seluruh parameter karakteristik EEDSP memenuhi persyaratan.
Kata kunci : ekstrak, selutui puka, Tabernaemontana macrocarpa Jack.

## ABSTRACT
Selutui puka (Tabernaemontana macrocarpa Jack.) has been empirically used by the Dayak tribe in Karangan Village, Mook Manar Bulant District for toothache and canker sores. The puka selutui have the potential to be developed into traditional medicine. The aim of the research was to determine the specific and non-specific characteristics of selutui puka leaf extract. The selutui puka leaves were extracted  by  maceration  with  70%  ethanol.  Specific  characterization  were  organoleptic,  total dissolved compound in water and ethanol and also microbial contamination. The data obtained were analyzed descriptively.  The  result  obtained  a  yield  of 20.76%.  The  extract  were viscous,  blackish green with bitter taste, and specific odor. The average content of dissolved compounds in water was 20%, while in the ethanol was 36.66%. The extract contains alkaloids, flavonoids, saponins, tannins, and steroids. The average total ash content was 8.35% and the average acid insoluble ash content was 0.38%. The average water content was 21.66%. The average extract specific gravity was 1.01 g/mL and the total microbial contamination was 6.1 × 10-2 colonies/g and the yeast mold count was 5.7 × 10-2 colonies/g. All of the parameters were met the requirements.
Keywords : extract, selutui puka, Tabernaemontana macrocarpa Jack.
Corresponding Author Nama : Fitri Handayani Institusi : Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Samarinda
Alamat institusi  : Jl. Brig. Jend. Abdul Wahab Sjahranie No. 226. Air Hitam. Samarinda. Kalimantan Timur E-mail : sausanrukan@yahoo.co.id

## PENDAHULUAN
Hutan Kalimantan memiliki potensi sebagai penghasil obat tradisional sehingga berpeluang untuk dikembangkan bagi kesejahteraan masyarakat dan kemajuan ilmu pengetahuan (Noorhidayah, 2006). Pengobatan menggunakan tumbuhan obat sangat ekonomis dan relatif aman serta memiliki efek samping yang kecil jika dikonsumsi dengan tepat (Wijayakusuma, 2005). Salah satu tumbuhan berkhasiat obat tradisional yang berada di hutan dan di tepi sungai  Kabupaten Kutai Barat, Provinsi Kalimantan  Timur  yaitu  selutui  puka  ( Tabernaemontana  macrocarpa Jack.).  Secara  empiris, masyarakat  suku  Dayak,  Desa  Karangan,  Kecamatan    Mook    Manar  Bulant    menggunakan  air rebusan  daun  dan  buah  selutui  puka  sebagai  obat  sakit  gigi  dan  sariawan  (Apriliana  dkk.,  2019; Handayani dkk., 2020). Getah tanaman ini dapat diminum sebagai obat tumor dan dapat dioles untuk mengobati penyakit kudis dan kulit melepuh (Handayani dkk., 2019). Batangnya dapat digunakan sebagai obat kanker (Pratiwi dkk., 2014).
Pengembangan  obat  tradisional  berpotensi  untuk  dilakukan.    Pengendalian  mutu  ekstrak perlu dilakukan untuk bahan baku pengobatan atau sediaan galenik. Oleh karena itu, perlu dilakukan karakterisasi  yang  merupakan  langkah  awal  untuk  mengetahui  sifat-sifat  ekstrak.  Parameter  yang digunakan adalah parameter spesifik dan non spesifik.
Karakterisasi tumbuhan selutui puka telah dilakukan pada beberapa bagian tumbuhan dalam bentuk simplisia. Karakterisasi dari simplisia buah selutui puka yaitu kadar sari larut etanol 36%, kadar sari larut air 47%, serta mengandung senyawa alkaloid, flavonoid dan saponin, kadar air 8%, kadar  abu  4,36%  dan  kadar  abu  tidak  larut  asam  0,57%  (Handayani  dkk.,  2020).  Karakterisasi simplisia kulit batang menunjukkan kandungan ekstrak larut dalam air 7%, larut dalam etanol 4%, simplisia kulit batang mengandung alkaloid, flavonoid, saponin dan steroid, kadar air 8%, kadar abu 5,08% dan kadar abu tidak larut asam 0,68% (Handayani dkk., 2022).   Serbuk simplisia daun selutui puka mengandung alkaloid, flavonoid, tannin, saponin dan steroid (Handayani dkk., 2019). Tujuan penelitian adalah untuk mengetahui karakteristik spesifik dan non spesifik pada ekstrak daun selutui  puka.  Ekstrak  sebagai  bahan  dan  produk  konsumsi  manusia  sebagai  obat,  diupayakan memenuhi mutu, keamanan dan manfaat (Depkes RI., 2000). Potensi ekstrak daun selutui puka masih perlu dikembangkan lebih lanjut, sehingga dapat dijadikan alternatif  pengobatan tradisional berbasis bahan alam.
Berdasarkan uraian di atas maka dilakukan  karakterisasi ekstrak daun selutui puka meliputi parameter spesifik berupa uji organoleptik ekstrak,  kandungan senyawa metabolit sekunder, kadar sari larut air, kadar senyawa terlarut dalam pelarut tertentu  dan  parameter non spesifik berupa bobot jenis,  kadar  air,  kadar  abu  total,  kadar  abu  tidak  larut  asam,  total  cemaran  kapang,  total  cemaran mikroba.

## METODE PENELITIAN
Tahapan penelitian meliputi determinasi tumbuhan, pengumpulan sampel, pembuatan simplisia dan ekstrak, pemeriksaan karakteristik ekstrak meliputi parameter spesifik dan  parameter non spesifik.

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  adalah  alat-alat  gelas  (Pyrex®),  blender  (Miyako®),  cawan  petri,  cawan porselen,  inkubator  (Memmert®),  autoklaf  (Memmert®), macerator (Thermo®),  penangas  air, pengayak mesh 60, pinset, pipet tetes, sendok tanduk, timbangan analitik (Ohaus®), penjepit, tanur, oven, pengaduk kinetik (IKA®RW 20 digital), desikator, piknometer, Laminar Air Flow . Bahan yang digunakan adalah alkohol, amil alkohol, asam asetat anhidrat, asam klorida 2N, asam klorida pekat, asam  sulfat  pekat,  aquades,  besi  (III),  klorida  1%,  kloroform,  pereaksi  bouchardat,  pereaksi dragendorff, pereaksi mayer, serbuk magnesium, PDA ( Potato Dextrose Agar ), NA ( Nutrient Agar ).

## Determinasi Tumbuhan
Determinasi  tumbuhan  selutui  puka  dilakukan  di  Laboratorium  Fisiologi  Tumbuhan  Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Mulawarman, Kalimantan.
Sampel dan Teknik Sampling
Sampel yang digunakan berupa ekstrak etanol daun selutui puka. Daun selutui puka diperoleh dari Desa  Karangan,  Kecamatan  Mook  Manar  Bulant,  Kabupaten  Kutai  Barat,  Provinsi  Kalimantan Timur.  Teknik  sampling  yang  digunakan  adalah purposive  sampling dimana  pengambilan  sampel disesuaikan dengan pertimbangan yaitu daun selutui puka yang berwarna hijau tua.

## Pembuatan Simplisia
Daun selutui puka yang telah dipanen, dipisahkan dari bagian yang tidak dikehendaki, seperti ranting dan pengotor lainnya. Selanjutnya daun selutui puka dicuci dengan air bersih dan mengalir kemudian ditiriskan  dilanjutkan  dengan  perajangan  daun  dengan  memotong  seperti  dadu  dan  pengeringan dilakukan  dengan  cara  diangin-anginkan  hingga  diperoleh  simplisia  kering.  Simplisia  yang didapatkan kemudian diperkecil ukurannya dengan blender dan diayak dengan mesh 60 kemudian serbuk disimpan dalam wadah bersih dan tertutup rapat.

## Pembuatan Ekstrak
Simplisia serbuk ditimbang sebanyak 450 g kemudian dimaserasi 1000 mL etanol 70%. Dilakukan pengadukan  secara  kontinyu  selama  2  jam  dan  didiamkan  selama  22  jam  kemudian  dilakukan penyaringan  dan  ampas  dimaserasi  kembali  dengan  jenis  dan  jumlah  pelarut  yang  sama.  Maserat yang diperoleh diuapkan diatas penangas air hingga diperoleh ekstrak kental.
Karakterisasi Spesifik

## Uji organoleptik
Uji organoleptik dilakukan untuk menilai konsistensi, warna, bau dan rasa ekstrak daun selutui puka.

## Penetapan kadar sari larut air
Sebanyak 5 gram ekstrak dimaserasi selama 24 jam dengan air 100 mL air, kloroform dimasukkan ke dalam erlenmeyer dengan sesekali dikocok selama 6 jam pertama kemudian diamkan selama 18 jam.  selanjutnya  disaring  dan  diuapkan 20  mL  filtrat hingga  kering  dalam  cawan  dangkal  beralas datar yang telah dipanaskan pada suhu 105°C dan ditara.  Residu dipanaskan pada suhu 105°C hingga bobot tetap. Kadar sari larut air dihitung terhadap bahan yang dikeringkan di udara.

## Penetapan kadar sari larut etanol
Sebanyak  5  gram  ekstrak  ditambahkan  dengan  100  mL  etanol  (95%)  dimasukkan  ke  dalam Erlenmeyer  sambil  sesekali  diaduk  selama  6  jam  pertama  kemudian  dibiarkan  selama  18  jam. Disaring dan diuapkan 20 mL filtrat hingga kering dalam cawan dangkal beralas datar yang telah dipanaskan pada suhu 105°C dan ditara. Residu dipanaskan pada suhu 105°C hingga bobot tetap. Kadar sari larut etanol dihitung terhadap bahan yang dikeringkan di udara (Depkes, RI., 2008).

## Identifikasi senyawa metabolit sekunder
Pembuatan  larutan  ekstrak  dengan  menimbang  0,5  gram  kemudian  dilarutkan  dalam  etanol  70% sebanyak 10 mL di dalam labu ukur dan ditambahkan air suling hingga 100 mL.
Uji senyawa alkaloid

## Pereaksi mayer
Sebanyak 10 tetes ekstrak dimasukkan ke dalam tabung reaksi, ditambahkan 2 tetes pereaksi mayer. Apabila terbentuk endapan putih atau kuning menunjukkan adanya senyawa alkaloid.

## Pereaksi Bouchardat
Sebanyak  10  tetes  ekstrak  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi,  ditambahkan  2  tetes  pereaksi bouchardat. Apabila terbentuk endapan coklat sampai hitam menunjukan adanya senyawa alkaloid.

## Pereaksi dragendorff
Sebanyak  10  tetes  ekstrak  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi,  ditambahkan  2  tetes  pereaksi dragendorf. Apabila terbentuk endapan jingga sampai merah coklat menunjukkan adalnya senyawa alkaloid.

## Uji senyawa flavonoid
Sebanyak  5  mL  ekstrak  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi,  ditambahkan  0,1  gram  serbuk magnesium dan 1 mL asam klorida pekat dan 2 mL amil alkohol kemudian dikocok dan dibiarkan
hingga memisah. Flavonoid positif jika terjadi endapan warna merah, kuning, jingga pada lapisan amil alkohol.

## Uji senyawa tanin
Sebanyak 10 tetes ekstrak dimasukkan ke dalam tabung reaksi, ditambahkan 1-2 tetes pereaksi besi (III) klorida jika terjadi warna biru atau hijau kehitaman menunjukkan adanya tanin.

## Uji senyawa saponin
Sebanyak  10  tetes  ekstrak  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi,  ditambahkan  5  tetes  air  panas dinginkan kemudian dikocok cepat hingga 10 detik jika terbentuk buih selama 10 menit dan setinggi 1 cm dan tidak hilang jika diberi tetesan asam klorida 2N maka positif mengandung saponin (Depkes, RI., 1995).

## Uji senyawa steroid
Sebanyak 0,5 gram ekstrak dimasukkan ke dalam tabung reaksi, ditambahkan 10 mL n-heksan dan disaring. Filtratnya diuapkan di dalam cawan uap dan ditambahkan 3 tetes pereaksi asam sulfat pekat jika terjadi reaksi warna hijau maka menunjukan adanya steroid.

## Karakteristik Non Spesifik Penetapan kadar air
Sebanyak 1 gram ekstrak etanol dimasukkan kedalam oven selama 2 jam dengan suhu 105°C setelah itu  dimasukkan ke dalam desikator selama kurang lebih 15 menit kemudian ditimbang berturut-turut hingga perbedaan antara 2 penimbangan tidak lebih dari 0,25% . Penetapan kadar air menggunakan rumus :
Keterangan : a = berat cawan kering yang sudah konstan b = berat sampel awal c = berat cawan dan sampel awal yang sudah konstan (Supomo, dkk., 2016).

## Penetapan kadar abu
Sebanyak 2  gram ekstrak etanol yang telah ditimbang secara seksama dimasukkan ke dalam  krus platina atau krus silikat yang telah dipijarkan dan ditara, diratakan selama 3 jam dipijarkan dengan suhu  600°C  kemudian  didinginkan  lalu  ditimbang  sampai  memperoleh  bobot  tetap.  Jika menggunakan  cara  ini  arang  tidak  dapat  dihilangkan,  dapat  ditambahkan  air  panas  disaring menggunakan kertas saring bebas abu. pijarkan sisa dan kertas saring dalam krus lalu uapkan dan pijarkan  hingga  bobot  tetap  lalu  ditimbang  dan  dihitung  kadar  abu  terhadap  bahan  yang  telah dikeringkan di udara (Depkes, RI., 2008).

## Penetapan kadar abu tidak larut asam
Abu yang diperoleh dari penetapan kadar abu yang dididihkan dengan 25 mL asam klorida encer selama 5 menit. Bagian yang tidak larut asam dikumpulkan kemudian disaring melalui kertas saring bebas abu, dicuci dengan air panas kemudian dipijarkan pada suhu 450°C selama 15 menit sampai diperoleh bobot konstan. Dinginkan kemudian ditimbang beratnya. Kadar abu yang tidak larut dalam asam dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (Depkes, RI., 2000). Rentang kadar abu tidak larut asam untuk memenuhi persyaratan yaitu 0,7% (Depkes, RI., 2008). Penetapan kadar abu tidak larut asam menggunakan rumus :

## Penetapan bobot jenis
Piknometer  dibersihkan  dan  dikeringkan,  ekstrak  diencerkan  5%  menggunakan  air.  Ekstrak  cair dimasukkan ke dalam piknometer, dibuang kelebihan ekstrak cair dan ditimbang. Bobot piknometer
kosong  dikurangi  dengan bobot piknometer  yang  telah  diisi.  Bobot jenis  ekstrak  cair adalah  hasil yang diperoleh dengan membagi kerapatan ekstrak dengan kerapatan air dalam piknometer pada suhu 25°C. Penetapan bobot jenis menggunakan piknometer 25 mL.

## Uji cemaran mikroba
Sebanyak 1  gram ekstrak  dilarutkan dalam 10  mL larutan pengencer didalam satu tabung dengan aquades  kemudian  dikocok  hingga  homogen  untuk  mendapatkan  pengenceran  10 -1 disiapkan  3 tabung  lalu  masukkan  9  mL  larutan  pengencer  kemudian  pada  masing-masing  tabung  dipipet sebanyak  1  mL  dari  pengenceran  10 -1 kedalam  tabung  pertama  dikocok  hingga  homogen    untuk mendapatkan pengenceran 10 -2 kemudian lakukan perlakuan hingga mendapatkan pengenceran 10 -4 .

## Angka Kapang/Khamir (AKK)
Pengenceran ke dalam cawan petri yang steril (triplo) dengan menggunakan pipet yang berbeda dan steril  sebanyak  1  mL    kemudian  dituang  masing-masing  ke  dalam    cawan  petri  sebanyak  15  mL media PDA ( Potato Dextrose Agar ) yang telah dicairkan lalu cawan petri digoyang agar suspensi tercampur rata. setelah media memadat cawan diinkubasi pada suhu 25°C selama 5 hari dengan posisi terbalik  (Depkes,  RI.,  2000).  Khamir  berbentuk  bulat  silinder  atau  bulat  telur  dan  koloni  yang dihitung adalah koloni yang berbentuk bulat, berwarna putih dan terpisah serta koloni kapang yang memiliki  serabut  putih  seperti  kapas  tanpa  membedakan  tiap  warna  koloni  serta  tunggal  (Radji, 2010).

## Angka Lempeng Total (ALT)
Dipipet 1 mL dari tiap pengenceran ke dalam cawan petri dengan menggunakan pipet yang berbeda dan steril untuk masing-masing pengenceran. Ke dalam masing-masing cawan petri dituangkan 15 mL  media  NA  (Nutrient  Agar)  yang  telah  dicairkan    kemudian  cawan  digoyang  agar  suspense tercampur  rata.  Setelah  media  memadat,  cawan  petri  diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  24  jam dengan posisi terbalik (Depkes, RI., 2000).

## Analisis Data
Analisis data yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode deskriptif yaitu berupa data dari kadar senyawa terlarut dalam pelarut air dan etanol, organoleptik, dan senyawa metabolit sekunder. Parameter non spesifik dalam penelitian ini meliputi kadar air, bobot jenis, kadar abu total, kadar abu tidak  larut  asam,  cemaran  mikroba  dan  cemaran  kapang.  Data  disajikan  dalam  bentuk  tabel  dan gambar.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Determinasi
Determinasi tumbuhan dilakukan untuk mengetahui otentikasi atau kepastian spesies dari tumbuhan yang  digunakan  dalam  penelitian.  Determinasi  tumbuhan  selutui  puka  dilakukan  di  Laboratorium Fisiologi Tumbuhan  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas Mulawarman. Hasil  determinasi  menunjukkan  bahwa  sampel dari  tumbuhan  yang  digunakan  pada  penelitian ini adalah berspesies Tabernaemontana Macrocarpa Jack.

## Hasil Pemeriksaan Karakteristik Spesifik
Karakterisasi  spesifik  merupakan  proses  untuk  mengetahui  karakteristik  ekstrak  yang  berkaitan langsung  dengan  aktivitas  farmakologi.  Karakterisasi  spesifik  yang  dilakukan  pada  penelitian meliputi uji organoleptik, kadar sari terlarut (sari larut air dan sari larut etanol) dan senyawa metabolit sekunder (Supriningrum, dkk., 2019).

## Hasil uji organoleptik
Penentuan  parameter  organoleptik  ekstrak  bertujuan  untuk  memberikan  pengenalan  awal  ekstrak secara objektif dan sederhana yang dilakukan dengan panca indra (Supriningrum dkk., 2019). Hasil organoleptik dilihat pada tabel I.
Tabel I. Hasil uji organoleptik Parameter Hasil Konsistensi Kental Warna Coklat Kehitaman Bau Khas Rasa Pahit
Pemeriksaan organoleptik ekstrak etanol daun selutui puka meliputi bentuk atau konsistensi, warna, bau dan rasa. Konsistensi ekstrak berupa ekstrak kental, berwarna kehitaman, rasa pahit dan berbau khas hasil uji dilakukan selama 5 hari.

## Hasil penetapan kadar sari larut air dan sari larut etanol
Prinsip dari pengujian ini adalah melarutkan ekstrak dengan pelarut (etanol atau air) untuk ditentukan jumlah solute yang identik dengan jumlah senyawa kandungan secara gravimetri (Depkes, RI., 2000). Penetapan  kadar  senyawa  terlarut  dalam  pelarut  tertentu  bertujuan  memberikan  gambaran  awal jumlah kandungan senyawa aktif (Saifudin dkk., 2011).
Tabel II. Hasil kadar sari terlarut dalam pelarut air dan etanol
Uji Kadar (%) Rata-rata Kadar (%) Sari larut air 20 20 ± 0 20 20 Sari larut etanol 42 36,66 ± 5,50 31 37
Berdasarkan tabel II diketahui bahwa ekstrak etanol daun selutui puka lebih besar kelarutannya dalam etanol  dibandingkan  kelarutannya  dalam  air.  Konsentrasi  etanol  yang  digunakan  pada  penetapan kadar sari larut etanol adalah 95% sehingga tingkat kepolaran zat lebih kecil.

## Hasil identifikasi senyawa metabolit sekunder
Identifikasi  senyawa  kimia  ekstrak  etanol  merupakan  gambaran  golongan  senyawa  (metabolit sekunder) yang terdapat di dalam ekstrak. Hasil identifikasi  metabolit sekunder dapat dilihat pada tabel III.

## Tabel III. Hasil identifikasi senyawa metabolit sekunder pada ekstrak etanol daun selutui
Uji senyawa Hasil pengamatan Hasil Alkaloid Endapan  kuning  (Mayer), endapan  coklat  kehitaman (Bouchardat), endapan Jingga (Dragendorff) + Flavonoid Jingga + Steroid Hijau + Tanin Hijau kehitaman + Saponin Buih stabil selama 13 menit setinggi 2 cm +
(+) = terdeteksi,   (-) = tidak terdeteksi
Tabel  III  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  selutui  puka  terdeteksi  positif  mengandung senyawa  alkaloid,  flavonoid,  steroid,  tanin  dan  saponin.  Hasil  ini  sejalan  dengan  penelitian sebelumnya  yaitu  Soemarie,  dkk.,  2018  yang  telah  mengidentifikasi  senyawa  metabolit  sekunder pada  ekstrak  etanol  dan  Handayani,  dkk.,  (2019)  pada  simplisia,  kedua  penelitian  tersebut  juga menunjukkan bahwa baik ekstrak maupun simplisia mengandung senyawa yang sama.
Semua  metabolit  sekunder  yang  terdapat  pada  ekstrak  daun  selutui  puka  memiliki  fungsi  yang berbeda-beda.  Alkaloid  yang  berfungsi  sebagai  antihipertensi  dan  antidiabetes,  flavonoid  sebagai antihipertensi,  saponin  sebagai  antikolesterol,  tanin  antidiabetes  dan  steroid  sebagai  antimalaria (Sangi  dkk.,  2008).  Ekstrak  etanol  daun  selutui  puka  juga  memiliki  potensi  sebagai  antibakteri terhadap  bakteri Streptococcus  mutans penyebab  karies  gigi dan Porphyromonas  gingivalis penyebab periodontitis (Sabatini dkk., 2023).

## Hasil Pemeriksaan Karakteristik Non Spesifik Hasil penetapan kadar air, kadar abu dan kadar abu tidak larut asam
Penetapan kadar air ekstrak adalah pengukuran kandungan air yang berada dalam bahan, dilakukan dengan  cara  gravimetri.  Tujuan  penetapan  kadar  air  adalah  memberikan  batasan  maksimal  atau rentang besarnya kandungan air dalam ekstrak.  Prinsip penetapan kadar abu ekstrak adalah bahan dipanaskan  pada  temperatur,  dimana  senyawa  organik  dan  turunannya  terdestruksi  dan  menguap, sehingga  hanya  tertinggal  unsur  mineral  dan  anorganik.  Penetapan  kadar  abu  tidak  larut  asam merupakan penetapan agar mengetahui kadar senyawa tidak larut asam misalnya silica logam-logam berat seperti Pb, Hg, (Depkes, RI., 2000). Hasil penetapan kadar air, abu dan abu tidak  larut asam dapat dilihat pada tabel IV.
Tabel IV. Hasil penetapan kadar air, abu dan abu tidak larut asam
Uji Kadar (%) Rata-rata kadar (%) Persyaratan Mutu Kadar Air 21 21,66 ± 2,08 Ekstrak kental 5%-30%,
Ekstrak Cair lebih dari 30%
Ekstrak kering 5%
20
24 Kadar Abu 8,38 8,35 ± 0,03 ≤16,66 8,32 8,35 Kadar Abu Tidak Larut Asam 0,39 0,38 ± 0,01 <0,7% 0,38
0,37
Tabel IV menunjukkan kadar air ekstrak kental diperoleh rata-rata kadar 21,66% hal tersebut masih sesuai  dengan  persyaratan  yang  ditetapkan  oleh  Voight  (1995).  Kadar  air  yang  besar  dapat menyebabkan  pertumbuhan  mikroba  karena  air  merupakan  media  pertumbuhan  mikroorganisme (Saifudin dkk., 2011).  Kadar abu ekstrak etanol daun selutui puka rata-rata 8,35%. Penetapan kadar abu bertujuan untuk mengetahui memberikan gambaran kandungan mineral internal dan eksternal yang berasal dari proses awal sampai terbentuknya ekstrak. Hasil penetapan kadar abu tidak larut asam  diperoleh  sebesar  0,38%.  Hasil  tersebut  memenuhi  persyaratan  yaitu  tidak  lebih  dari  0,7% (Depkes, RI., 2008).

## Hasil penetapan bobot jenis
Prinsip  bobot  jenis  massa  per  satuan  volume  pada  suhu  kamar  tertentu  (25°C)  yang  ditentukan dengan  alat  khusus  piknometer  dengan  tujuan  memberikan  batasan  rentang  besarnya  massa  per satuan volume yang merupakan parameter khusus ekstrak cair sampai ekstrak pekat (kental) yang masih dapat dituang serta memberikan gambaran kandungan kimia terlarut. Hasil penetapan bobot jenis ekstrak dapat dilihat pada tabel V.
Tabel V. Hasil penetapan bobot jenis Uji g/mL Rata-rata kadar (%) Aquadest 1 0,98 ± 0,02 1 0,96 Ekstrak 1,01 1,01 ± 0,02 1 0,96

## Hasil uji cemaran mikroba
Uji cemaran mikroba dan kapang bertujuan untuk memberikan jaminan bahwa ekstrak tidak boleh mengandung  mikroba  patogen  dan  tidak  mengandung  mikroba  non  patogen  melebihi  batas  yang ditentukan  karena  berpengaruh  terhadap  stabilitas  ekstrak  dan  berbahaya  bagi  kesehatan  (toksik) (Depkes, RI., 2000). Media yang digunakan adalah NA terhadap cemaran mikroba dan PDA pada cemaran kapang  karena media yang paling umum digunakan dalam pertumbuhan mikroorganisme, pada  pengujian  cemaran  mikroba  daun  selutui  puka  menggunakan  metode  sebar  yaitu  dengan menghitung jumlah bakteri aerob mesofil yang terdapat pada cawan petri dan diinkubasi pada suhu 37°C  selama  24  jam  dengan  posisi  terbalik.  Bakteri  yang  tergolong  mesofil  adalah  bakteri  yang mempunyai  suhu  pertumbuhan  20-40°C  (Hardianto,  dkk.,  2012).  Pada  pengujian  angka  kapang khamir juga menggunakan metode sebar dan inkubasi pada suhu 25°C, koloni kapang yang dihitung adalah yang berbentuk seperti kapas sedangkan  khamir berbentuk bulat, komponen yang dihasilkan oleh kapang atau khamir bersifat karsinogenik dan semakin kecil angka kapang/khamir pada daun simplisia maka menunjukan semakin bagus untuk proses pembuatan obat (Saweng, dkk.,  2020). Perhitungan ALT dan AKK dapat menggunakan metode kuantitatif yaitu dengan menghitung jumlah koloni yang tumbuh pada media dalam cawan petri dengan cara tuang  (BPOM., 2008). Hasil uji cemaran mikroba dapat dilihat pada tabel VI.
Tabel VI. Hasil uji cemaran mikroba
Uraian Total Cemaran (Koloni/g) Syarat (koloni/g) (BPOM RI, 2014) Angka Lempeng Total 6,1 × 10 -2 < 10.000 Angka Kapang Khamir 5,7 × 10 -2 < 1000
Hasil uji menunjukkan cemaran mikroba dan kapang dalam ekstrak etanol daun selutui puka masing- masing sebanyak 6,1 × 10 -2 koloni/g dan 5,7 × 10 -2 koloni/g hasil ini sesuai dengan peraturan Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia tentang Persyaratan Mutu Obat Tradisional yaitu batas maksimum mikroba < 10.000 koloni/g dan kapang < 1000 koloni/g.

## KESIMPULAN
Karakteristik  spesifik  dari  ekstrak  etanol  daun  selutui  puka  didapatkan  identitas  ekstrak  dengan pengamatan organoleptik  ekstrak kental, berwarna hijau kehitaman pekat berasa pahit dan berbau khas, didapatkan hasil rendemen ekstrak sebesar 20,76% dan susut pengeringan 57,04%. Kandungan senyawa yang larut dalam air sebesar 20% dan di dalam etanol sebesar 36,66%. Ekstrak etanol daun selutui puka mengandung  alkaloid, flavonoid, tanin, saponin dan steroid.  Kadar air ekstrak etanol daun selutui puka sebesar 21,66%, kadar abu sebesar 8,35% dan kadar abu tidak larut asam 0,38%. Cemaran  mikroba  ekstrak  daun  selutui  puka  sebesar  6,1  ×  10 -2 dan  kapang  5,7  ×  10 -2 .  Seluruh karakteristik spesifik dan non-spesifik ekstrak etanol daun selutui puka memenuhi syarat acuan.

## DAFTAR PUSTAKA
Apriliana, A., Handayani, F., dan Ariyanti, L. (2019) “Perbandingan Metode Maserasi dan Refluks Terhadap Rendemen Ekstrak Daun Selutui Puka (Tabernaemontana macrocarpa Jack)”, Jurnal Farmasi Galenika , 6(1), 33 - 42.
Badan Pengawasan Obat dan Makanan, (2008) Pengujian Mikrobiologi Pangan . Infopom , 9(2), 1 - 11.
Badan Pengawasan Obat dan Makanan, RI., (2014) Peraturan Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan  Republik  Indonesia  Nomor.  12  Tahun  2014  Tentang  Persyaratan  Mutu  Obat Tradisional , BPOM RI., Jakarta.
Departemen Kesehatan RI., (1995) Materia Medika Indonesia Jilid VI , Depkes RI., Jakarta. Departemen  Kesehatan  RI.,  (2008) Farmakope  Herbal  Indonesia  Edisi  I ,  Depkes  RI.,  Jakarta, 169,171,175.
Departemen Kesehatan RI., (2000) Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat , Depkes RI., Jakarta, 10, 13 - 17, 31.
Febrianti, D.R., Mahrita, Ariani, N,. Putra, M.P., (2019), “Uji Kadar Sari Larut dan Kadar Sari Larut Etanol Daun Kumpai Mahung ( Eupathorium inulifolium HB dan K)”, Jurnal Pharmascience , 6(2), 19 – 24.
Handayani, F., Apriliana, A., dan Natalia, H., (2019) “Karakterisasi dan Skrining Fitokimia Simplisia Daun Selutui Puka (Tabernaemontana macrocarpa Jack)”. Jurnal Ibnu Sina Ilmu Farmasi dan Kesehatan , 4(1), 49 – 58.
Handayani,  F.,  Apriliana,  A.,  dan  Novianti,  I.,    (2020)  “Karakterisasi  dan  Skrining  Fitokimia Simplisia  Buah  Selutui  Puka  (Tabernaemontana  macrocarpa  Jack.)”, As-Syifaa  Jurnal Farmasi , 12(1), 9 - 15.
Handayani, F., Apriliana, A., dan Arlanda, D., (2022) “Karakterisasi Simplisia Kulit Batang Selitui Puka (Tabernaemontana macrocarpa Jack.) ”, Chemical Studies Journal , 5(2), 37 - 42. Hardianto,  Suarjana  IGK.,  Rudiyanto,  MD.,  (2012)  “Pengaruh  Suhu  dan  Lama  Penyimpanan terhadap  Kualitas  Telur  Ayam  Kampung  Ditinjau  dari  Angka  Lempeng  Total  Bakteri”, Indonesia Medicus Veterinus , 1(1), 71 - 84.
Ngaissona,  P.,  Loumpangou,  NC.,  Namkona,  FA.,  Koane,  JN.,  Tsiba,  G.,  Syssa-Magale,  JL., Ouamba, JM., (2016) “Phytochemical Screening and Evaluation of The Antioxidant Activity of The Polar Extracts Picralima nitida Stapf. (Apocynaceae) Family”, J of Pharmacognosy and Phytochemistry , 5(4), 198 - 204.
Noorhidayah, Sidiyasa, K., dan Hajar, I., (2006) “Potensi dan Keanekaragaman Tumbuhan Obat di Hutan Kalimantan dan Upaya Konservasinya”, Jurnal  Analisis  Kebijakan  Kehutanan ,  3(2), 107 - 95.
Pratiwi, D.R.,  Bintang,  M.,  dan  Simanjuntak,  P.,  (2014)  “Lelutung  Tongkak  (Tabernaemontana macrocarpa  Jack.)  sebagai  Sumber  Zat  Bioaktif  Antioksidan  dan  Antikanker”, Jurnal  Ilmu Kefarmasian Samarinda , 12(2), 267 - 272. Radji, M., (2010), Buku Ajar Mikrobiologi Panduan Mahasiswa Farmasi dan Kedokteran , Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, 125 - 127.
Sabatini,  SD.,  Handayani,  F.,  dan  Sundu,  R.,  (2023)  “Potensi  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun Selutui Puka (Tabernaemontana macrocarpa Jack.) terhadap Bakteri Streptococcus mutans dan Prophyromonas gingivalis ”, Jurnal Riset Kefarmasian Indonesia , 5(2), 273-283. Saifudin,  A.,  Rahayu,  V.,  dan  Teruna,  HY.,  (2011), Standarisasi  Bahan  Obat  Alam ,  Graha  Ilmu, Yogyakarta.
Sangi,  M.,  M.R.J.  Runtuwene.,  H.E.I.  Simbala.,  dan  V.M.A.  Making,  (2008)  “Analisis  Fitokimia Tumbuhan Obat di Kabupaten Minahasa Utara”, Chem. Prog , 1(1), 47 - 53.
Saweng,  C.F.I.,  Sudirmatini,  L.M.,  dan  Suartha,  I.N.,  (2020)  “Uji  Cemaran  Mikroba  pada  Daun Mimba  (Azadirachta  Indica  A.Juss)  Sebagai  Standarisasi  Bahan  Obat  Herbal”, Indonesia Medicus Veterinus , 9(2), 270 - 280.
Soemarie, Y.B., Handayani, F., dan Annisa, E.N., (2018) “Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak  Etanol Daun  Selutui  Puka  ( Tabernaemontana  macrocarpa Jack)  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus ”, Jurnal Ilmiah Ibnu Sina , 3(2), 266 - 274.
Supriningrum, S., Fatimah N., dan Purwanti, Y.E., (2019) “Karakterisasi Spesifik Dan Non Spesifik Ekstrak Etanol Daun Putat ( Planchonia valida )”, Al Ulum Sains dan Teknologi, 5(1), 11-6.
Voight,  R.,  (1995), Buku  Pelajaran  Teknologi  Farmasi ,  diterjemahkan  oleh  Soendari  Noerono, Gajah Mada University Press, Yogyakarta, 566 - 567. Wijayakusuma, H., (2005), Atasi Kanker dengan Tanaman Obat , Puspa Swara, Jakarta.