Analisis Kadar Fenolik Total dari Ekstrak Etanol dan Ekstrak Terpurifikasi Daun Oyong ( Luffa acutangula (Linn.) Roxb.)
Analysis of Total Phenolic Content of Ethanol Extract and Purified Extract of Oyong Leaves (Luffa acutangula (Linn.) Roxb)
Ridha Istiqomah 1 , Novena Yety Lindawati 2 , Nastiti Utami 3 1,2,3 Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Nasional ridha21.istiqomah@gmail.com 1 , novena.yl@stikesnas.ac.id 2 , nastiti.utami@stikesnas.ac.id 3
DOI: https://doi.org/10.55181/ijms.v10i2.426
Abstract :  Secondary  metabolites  found  in  oyong  leaves  (Luffa  acutangula  (Linn.)  Roxb.)  include phenolics, flavonoids, saponins, terpenes and tannins. Phenolic compounds have an important role as antioxidants.  Antioxidant  be  able  to  protect  the  body  from  degenerative  diseases  caused  by  cell damage due to free radicals. Extract that undergo a purification process will give the different levels of total  phenolic  to  the  crude  extract.  In  this  research, the  total  phenolic  content  of  ethanol  extract  and purified  extract  of  oyong  leaves  will  be  determined.  Maceration  with  96%  ethanol  was  used  as  an extraction technique. The liquid extraction technique was employed for extract purification, with warm water,  n-hexane  and  ethyl  acetate  serving  the  solvent.  The  phenolic  content  was  detected  by  Thin Layer  Chromatography  (TLC),  the  stationary  phase  of  silica  gel 𝐺𝐹 254 ,  the  geraneous  phase  of  n- hexane  :  ethyl  acetate  :  methanol  (2:7:2).  Phenolic  content  was  measured  using  UV-Vis Spectrophotometry,  Folin-Ciocalteau  reagent  and  standard  gallic  acid.  The  total  phenolic  levels obtained  in  the  ethanol  extract  and  purified  extract  of  oyong  leaves  were  (34,000  ±  0,350)  mg GAE/gram  extract  and  (40,117  ±  0,195)  mg  GAE/gram  extract.  Purified  extract  have  higher  levels because pass through a purification stage which produce pure extract with higher compound content. Keywords: folin ciocalteau, galat acid, UV-Vis spectrophotometry
Abstrak : Metabolit sekunder yang terdapat pada daun oyong ( Luffa acutangula (Linn.) Roxb.) antara lain  fenolik,  flavonoid,  saponin,  terpen  dan  tanin.  Senyawa  fenolik  memiliki  peran  penting  sebagai antioksidan.  Antioksidan  mampu  menjaga  tubuh  dari  penyakit  degeneratif  yang  diakibatkan  oleh kerusakan  sel  akibat  radikal  bebas.  Ekstrak  yang  mengalami  proses  purifikasi  akan  memberikan kadar  total fenolik  yang  berbeda  pada  ekstrak  kasar. Pada  penelitian ini  akan  ditetapkan  kandungan total  fenolik  ekstrak  etanol  dan  ektrak  terpurifikasi  daun  oyong.  Maserasi  dengan  etanol  96% digunakan  sebagai  teknik  ekstraksi.  Teknik  ekstraksi  cair-cair  digunakan  untuk  purifikasi  ekstrak dengan  air  hangat,  n-heksan  dan  etil  asetat  sebagai  pelarut.  Kandungan  fenolik  dideteksi  dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT), fase diam silica gel 𝐺𝐹 254 , fase geran n-heksan : etil asetat : methanol (2:7:2).  Kadar  fenolik  diukur  dengan  spektrofotometri  UV-vis,  pereaksi  Folin-Ciocalteau  dan  standar asam galat. Kadar total fenolik yang didapat pada esktrak etanol dan ekstrak terpurifikasi daun oyong yaitu  (34,000  ±  0,350)  mg  GAE/gram  esktrak  dan  (40,117  ±  0,195)  mg  GAE/gram  ekstrak.  Ekstrak terpurifikasi  memiliki  kadar  lebih  besar  karena  melalui  tahap  purifikasi  yang  menghasilkan  ekstrak murni dengan kandungan senyawa lebih besar.
Kata Kunci: folin ciocalteau, asam galat, spektrofotometi UV-Vis

## PENDAHULUAN
Perubahan gaya hidup masyarakat Indonesia  yang  seringkali  tidak  sehat  dan kondisi  lingkungan  yang  mengandung  banyak polusi  dapat  menyebabkan  penurunan  kualitas hidup  karena  terjadi  penurunan  produksi senyawa  dalam  tubuh  yang  dapat  menangkal radikal  bebas  (Arnanda and Nuwarda,  2019). Radikal bebas dalam tubuh dapat mengoksidasi  molekul  besar  seperti  lipid, protein, dan DNA yang mengakibatkan terjadinya  kerusakan  sel  atau  poliferasi  sel yang tidak dapat dikendalikan sehingga terjadinya  stress  oksidatif.  Stress  oksidatif memicu  terjadinya  penyakit  degeneratif  seperti
diabetes millitus, kardiovaskular, kanker, rematik,  liver  dan  aging  (Sayuti and Yenrina, 2015)
Antioksidan  merupakan  zat  aktif  yang dapat  menurunkan  kadar  radikal  bebas. Senyawa  antioksidan  akan menetralkan  radikal bebas yang tidak stabil dengan menyumbangkan  elektronnya  untuk  mencegah gangguan  dalam  metabolisme  tubuh  (Rahmi, 2017).  Kandungan  antioksidan  pada  tanaman memiliki  fungsi  sebagai radical  scavenger . Karotenoid,  vitamin,  flavonoid,  dan  fenolik merupakan  antioksidan  alami  yang  terdapat dalam tumbuhan (Kusriani et al. , 2017)
Tanaman oyong ( Luffa acutangula (Linn.) Roxb)  adalah  tanaman  yang  menjanjikan sebagai  antioksidan  alami.  Tanaman  oyong termasuk  dalam famili  curcubitacecae yang berasal  dari  India  dan  mampu  beradaptasi dengan  baik  di  Asia  Tenggara  salah  satunya yaitu di Indinoesia. Penelitian (Iyyamperumal et al. , 2013) melaporkan kandungan senyawa aktif yang  dimiliki  oleh  daun  oyong  yaitu  alkaloid, flavonoid,  saponin,  terpen,  protein,  tanin  dan fenolik.  Daun  oyong  memiliki  aktivitas  sebagai hepatoprotektif, antidiabetic, analgesik, antiinflamasi  dan  antibakteri  (Shendge and Balemkar, 2018)
Golongan  senyawa    terbesar  yang bertindak  menjadi  agen  antioksidan  alami dalam  tubuh  yaitu  fenolik.  Karena  senyawa fenol mempunyai gugus hidroksil yang terhubung  pada  cincin  aromatik  sehingga mudah  teroksidasi  dengan  memberikan  atom hydrogen  terhadap  radikal  bebas.  Oleh  karena itu, senyawa fenolik berpotensi sebagai antioksidan karena kemampuannya
menghasilkan  radikal  fenoksi  yang  stabil selama reaksi oksidasi (Dhurhania and Novianto,  2019).  Daun  oyong  berpotensi sebagai antioksidan dengan adanya kandungan senyawa  fenolik  didalamnya  (Iyyamperumal et al. ,  2013).  Penarikan  senyawa  fenolik  dapat dilakukan  dengan  proses  ekstraksi  atau purifikasi.  Senyawa  fenolik  memiliki  hubungan kuat terhadap aktivitas antioksida.
Peneliti  melakukan  penelitian  untuk menetapkan  kadar  total  fenolik  yang  terdapat dalam  ekstrak  etanol  dan  ekstrak  terpurifikasi daun  oyong  ( Luffa  acutangula (Linn.)  Roxb) sehingga  daun  oyong  dapat  dimanfaatkan dengan  maksimal    dibidang  pengobatan  dalam penyembuhan berbagai penyakit degeneratif.

## METODE PENELITIAN
Jenis  penelitian  yaitu  eksperimental dengan mengekstrak dan purifikasi daun oyong kemudian  dilakukan  uji  KLT  dan  kadar  total fenolik.
Alat  yang  digunakan  meliputi  timbangan analitik  (Ohaus,  EP  214),  alat  gelas  (Iwaki), wadah,  kain  flannel,  kertas  saring,  oven (Memmert),  blender  (Nasional),  ayakan  mesh 40,  rotary  evaporator  (IKA  HB  10  Basic), waterbath ,  mikropipet,  pipet  ukur,  chamber, spektrofotometri  UV-Vis  (Shimadzu  UV  Mini- 1240).
Bahan  yang  digunakan  meliputi  daun oyong,  etanol  96%  (teknis),  n-heksan  (teknis), etil  asetat  (teknis),methanol  p.a  (emsure  ®), etanol  p.a  (emsure  ®),  aquades,  plat  silica  gel 𝐺𝐹 254 , asam galat, Folin-Ciocalteau, 𝑁𝑎 2 𝐶𝑂 3 . Preparasi Sampel
Determinasi tanaman  oyong  dilakukan  di B2P2TOOT Tawangmangu, Karanganyar. Daun  yang  telah  dipanen  dan  disortasi  basah dicuci  dengan  air  mengalir  lalu  di  angin- anginkan  dan  diekeringkan  dengan  oven  suhu 40˚C.  Simplisia  daun  oyong  dibuat  serbuk dengan diblender dan diayak.

## Ekstraksi dan Purifikasi
Pembuatan  ekstrak  etanol  dilakukan dengan 700 gram serbuk daun oyong dimaserasi  dalam  etanol  96%  (1:75)  selama  3 hari.  Filtrat  yang  diperoleh  diremaserasi  dalam etanol  96%  (1:2,5)  selama  2  hari.  Untuk mendapatkan  ekstrak  kental  maserat  diuapkan pelarutnya menggunakan rotary evaporator dan waterbath . Ekstrak  terpurifikasi  dibuat  dengan  40 gram ekstrak etanol dilarutkan dalam 100 ml air hangat  dimasukkan  dalam  corong  pisah ditambah  pelarut  n-heksan  (1:1)  digojog kemudian didiamkan hingga diperoleh pemisahan  air  dan  n-heksan,  penambahan  n- heksan  diulang  hingga  didapat  lapisan  n- heksan  bening.  Fase  air  ditambah  dengan pelarut etil asetat (1:1), penambahan etil asetat diulang  hingga  didapat  lapisan  etil  asetat bening.  Fase  etil  asetat  dipekatkan  dengan waterbath suhu 50˚C.

## Uji Kualitatif Fenolik
Uji  kualitatif  komponen  fenolik  ekstrak etanol  dan  terpurifikasi  daun  oyong  dilakukan dengan  metode  KLT.  Pembanding  asam  galat, ekstrak  etanol  dan  terpurifikasi  daun  oyong masing-masing  dilarutkan  dengan  methanol dan  ditotolkan  pada  plat  KLT  silica  gel 𝐺𝐹 254 . Selanjutnya  digunakan  fase  gerak  (2:7:2)  n- heksan  :  etil  asetat  :  methanol  untuk  elusi, disemprot  dengan  penampak  bercak  Fe 𝐶𝑙 3 , hasil  positif  ditunjukkan  bercak  noda  berwarna merah,  hijau,  ungu,  biru  dan  hitam  pekat  (Ayu, Pratiwi and Nurbaeti, 2019).
Penentuan Kadar Total Fenolik Operating Time ( OT ) Konsentrasi 30 ppm asam galat digunakan  untuk  mengukur Operating  time . Pereaksi  Folin-Ciocalteau  ditambah  akuades (1:10  v/v)  diambil  1,5  ml  lalu  ditambahkan  ke dalam  300  µl  asam  galat  dihomogenkan  dan didiamkan  3  menit.  Selanjutnya,  ditambah  1,2 ml 𝑁𝑎 2 𝐶𝑂 3 7%, dihomogenkan kemudian diukur absorbansinya  hingga  menit  60  dan  panjang gelombang 765 nm.
Panjang Gelombang Maksimum Konsentrasi 30 ppm asam galat digunakan untuk menetapkan panjang gelombang maksimum. Pereaksi Folin-
Ciocalteau ditambah akuades (1:10 v/v) diambil 1,5 ml lalu ditambahkan ke dalam 300 µl asam galat  dihomogenkan  dan  didiamkan  3  menit. Selanjutnya,  ditambahk  1,2  ml 𝑁𝑎 2 𝐶𝑂 3 7%,
dihomogenkan dan didiamkan dalam waktu OT . Absorbansi ditentukan antara penjang gelombang 600 – 850 nm.

## Kurva Baku Asam Galat.
Dibuat deret asam galat 10,20,30,40 dan 50  ppm.  Setiap  konsentrasi  dipipet  300  µl. Pereaksi  Folin-Ciocalteau  ditambah  akuades (1:10  v/v)  diambil  1,5  ml  lalu  ditambahkan  ke dalam  300  µl  asam  galat,  dihomogenkan  dan didiamkan  3 menit.  Selanjutnya,  ditambahk  1,2 ml 𝑁𝑎 2 𝐶𝑂 3 7%,  dihomogenkan  dan  didiamkan dalam  waktu OT .    Diukur  absorbansi  terhadap panjang gelombang maksimum.
Total Fenolik Ekstrak Etanol dan Ekstrak terpurifikasi daun oyong.
Ekstrak  etanol  dan  esktrak  terpurifikasi daun  oyong  ditimbang  25,0  mg  kemudian ditambah  etanol  p.a  25  ml  dalam  labu  ukur. Dipipet  ekstrak  etanol  dan  esktrak  terpurifikasi 300  µl.  Pereaksi  Folin-Ciocalteau  ditambah akuades  (1:10  v/v)  diambil  1,5  ml  lalu ditambahkan ke dalam 300 µl sampel
dihomogenkan  dan  didiamkan    3  menit. Selanjutnya,  ditambah  1,2  ml 𝑁𝑎 2 𝐶𝑂 3 7%, dihomogenkan dan didiamkan dalam waktu OT . Diukur absorbansi terhadap panjang gelombang maksimum.
Kadar total fenolik ditunjukkan dalam mg GAE/  gram  ekstrak  dengan  rumus  perhitungan sebagai berikut :
Fenolik total = 𝐶 𝑥 𝑉 𝑔 Dimana : C = konsentrasi sampel V = Volume larutan sampel g = Berat sampel

## HASIL PENELITIAN
Hasil  uji  kualitatif  ekstrak  etanol  dan ekstrak  terpurifikasi  daun  oyong  setelah penyemprotan
reagen 𝐹𝑒𝐶𝑙 3 positif
mengandung senyawa fenolik adanya perubahan  warna  biru  kehitaman  dengan  nilai Rf  asam  galat  0,675,  ekstrak  etanol  0,675  dan ekstrak terpurifikasi 0,688. Hasil KLT ditunjukkan pada gambar 1. X Y Z
Gambar 1. Hasil KLT Fenolik (A) Baku asam galat (B) Ekstrak Etanol (C) Ekstrak terpurifikasi pada (X) Tampak mata, (Y) UV 254 nm dan (Z) UV 366 nm
Penetapan kadar fenolik total didapatkan persamaan  kurva  kalibrasi  asam  galat  y  = 0,0103x  +  0,1508,  koefisien  korelasi  0,9974. Koefisien  korelasi  (R)  yang  mendekati  satu persamaan  regresi  yang  didapatkan  yaitu
linear. Berdasarkan hukum Lamber-Beer
menyatakan adanya hubungan antara peningkatan  konsentrasi  terhadap  kenaikan absorbansi. Tabel 1 menunjukkan hasil absorbansi asam galat.
Tabel 1. Absorbansi Asam Galat Konsentrasi (ppm) Absorbansi 10 0,257 20 0,346 30 0,463 40 0,572 50 0,658
Gambar 2. Kurva Regresi Linier Asam Galat
Kandungan  total  fenolik  ekstrak  etanol dan  ekstrak  terpurifikasi  daun  oyong  dari
persamaan  regresi  linier.  Hasil  ditunjukkan tabel 2. Tabel 2. Kadar Total Fenolik Sampel Absorbansi Kadar Total Fenol (mg GAE/ gram ekstrak) Rata – Rata (mg GAE/ gram ekstrak) Ekstrak Etanol 0,502 34,097 34,000 + 0,350 0,504 34,291 0,497 33,612 Ektrak Terpurifikasi 0,566 40,311 40,117 + 0,195 0,562 39,922 0,464 40,117

## PEMBAHASAN
Daun  oyong  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  dilakukan  determinasi  terlebih dahulu  yang  bertujuan  untuk  menetapkan kebenaran dan menghindari kesalahan penggunaan  sampel  penelitian    .  Daun  oyong kemudian dicuci bersih dan dikeringkan dengan oven  suhu  40˚C  kemudian  dibuat  serbuk simplisia. Serbuk simplisia kemudian diekstraksi  selama  tiga  hari  dengan  metode maserasi  dan  diremaserasi  selama  dua  hari. Proses remaserasi bertujuan untuk memaksimalkan  penyarian  metabolit  sekunder dalam simplisia daun oyong. Pemilihan ekstraksi  metode  maserasi  karena  maserasi merupakan proses perendaman serbuk sampel tanpa  adanya  pemanasan  sehingga  dapat melindungi  senyawa  aktif  yang  mudah  rusak oleh  pemanasan.  Fenolik  merupakan  salah satu  metabolit  sekunder  yang  tidak  tahan terhadap  pemanasan  (Yuliantari,  Widarta and Permana, 2017).
Ekstrak terpurifikasi daun oyong didapatkan  dari  ekstraksi  cair-cair  dengan corong  pisah  yang bekerja  berdasarkan pemisahan senyawa berbasis polaritas. Penggunaan  pelarut  n-heksan  untuk  menarik senyawa  yang  tidak  diharapkan  seperti  lemak, minyak  dan  klorofil.  Sifat  senyawa  fenolik  yang polar cenderung semi polar akan banyak tersari
dalam  fase  etil  asetat  (Al  Huda,  Susanti and Sugihartini,  2020).  Fase  etil  asetat  yang dipekatkan  menghasilkan  ekstrak  kental  yang murni terbebas dari zat ballast.
Metode  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT) digunakan  untuk  melakukan  uji  kualitatif terhadap  kandungan  fenolik  ekstrak  etanol  dan ekstrak  terpurifikasi  daun  oyong.  Pemeriksaan kualitatif bertujuan untuk memvalidasi keberadaan  zat  metabolit  sekunder  yang terdapat  dalam  ekstrak.  Prinsip  uji  KLT  yaitu pemisahan  campuran  menurut  variasi  cara sampel  berinteraksi  terhadap  fase  gerak  dan fase  diam  (Suputri  et  al.,  2020).  Fase  diam yang  digunakan  yaitu  silica  gel 𝐺𝐹 254 yang dapat berfluoresensi baik pada panjang gelombang  sinar  UV  254  nm.  N-heksan  ,  etil asetat,  methanol  (2:7:2)  merupakan  komponen fase  gerak  yang  digunakan.  Fase  gerak  yang semi  polar  dapat  mengelusi  fenolik  dengan baik.  Sebelum  plat  KLT  dielusi  chamber  yang digunakan dilakukan penjenuhan untuk memastikan  bahwa  tekanan  uap  fase  gerak  di dalam  chamber  sama  sehingga  pemisahan berlangsung maksimal (Dewi, 2018).
Gambar 1 menunjukkan hasil uji kualitatif esktrak  etanol  dan  ekstrak  terpurifikasi  positif mengandung  fenolik.  Hasil  dapat  dikatakan positif  karena  esktrak  etanol  memiliki  nilai  Rf
y = 0,0103x  + 0,1508 R² = 0,9974 0 0.2 0.4 0.6 0.8 0 20 40 60 A b s o rb a n s i Konsentrasi (ppm) Kurva Asam Galat
yang  sama  dengan  pembanding  asam  galat yaitu 0,675 dan ekstrak terpurifikasi menunjukkan  nilai  Rf  yang  tidak  jauh  berbeda dengan standar dan ekstrak etanol yaitu 0,688. Hal  tersebut  juga  didukung  dengan  warna bercak  noda  yang  sama  yaitu  biru  kehitaman setelah  disemprot  dengan  penampak  bercak FeCl 3 . Folin-Ciocalteau digunakan dalam penetapan  kadar  total  fenolik  karena  fenolik dapat bereaksi bersama reagen Folin- Ciocalteau untuk menghasilkan larutan berwarna  yang  absorbansinya  dapat  diuji dengan Spektrofotometri UV-Vis. Kombinasi ion polimer  dari  asam  fosfomolibdat  dan  asam heterofosfotungstan merupakan pembentuk
reagen  Folin-Ciocalteau.  Prinsip  penetapan kadar  fenolik  ekstrak  etanol  dan  ekstrak terpurifikasi  daun  oyong  yaitu  mengukur kemampuan  hidroksi  fenol  dalam  sampel mereduksi  fosfomolibdat  fosfotungstat  menjadi molybdenum  biru.  Folin-Ciocalteau  dan  fenolik mampu  bereaksi  dalam  lingkungan  basa. Pereaksi 𝑁𝑎 2 𝐶𝑂 3 7% digunakan untuk menghasilkan  lingkungan  basa.  Karena  asam galat  bagian  dari  asam  hidroksibenzoat,  yang merupakan  anggota  dari  gugus  fenolik  yang sederhana,  murni,  dan  stabil,  maka  digunakan sebagai  standar  (Sam,  Malik and Handayani, 2016).
Gambar 2. Reaksi Senyawa Fenolik dengan Pereaksi Folin Ciocalteau (Pallawagau et al. , 2019).
Pengukuran  kadar  total  fenolik  diawali dengan  pencarian operating  time ( OT )  yang untuk memperoleh lama waktu yang diperlukan larutan  uji  bereaksi  sempurna  bersama  reagen pembentuk  senyawa  kompleks  berwarna  dan memberikan  absorbansi  stabil.  Watu  OT diperoleh  pada menit  ke-45  yang menunjukkan absorbansi  stabil.  Hasil  OT  yang  didapatkan dalam  penelitian  ini  serupa  dengan  penelitian dari Dewantara et al ., (2021)   penetapan kadar fenolik ekstrak kacang panjang yang menghasilkan operating  time menit  ke-45. Selanjutnya,  panjang  gelombang  maksimal asam  galat  diukur  untuk  mengidentifikasi panjang gelombang yang menghasilkan serapan optimal. Panjang gelombang maksimal memiliki  sensitivitas  tinggi  terhadap  analisis, maka  digunakan  panjang  gelombang maksimal yang diperoleh yaitu 758,5 nm untuk analisis.
Kadar total fenolik dalam sampel dinyatakan  dalam  mg  GAE/gram  ekstrak setelah  dikonversikan  dengan  persamaan regresi  linier  standar.  Persamaan  regresi  linier asam galat yaitu y = 0,0103x + 0,1508, nilai (R) 0,9974.  Dari  persamaan  regresi  tersebut didapatkan  kadar  fenolik  ekstrak  etanol  dan
ekstrak  terpurifikasi  daun  oyong  dengan mensubstitusikan  absorbansi  dari  sampel. Pengukuran  absorbansi  sampel  dilakukan  tiga kali  replikasi  kemudian  diapatkan  rata-rata kadar  fenolik  ekstrak  etanol  sebesar  34,000  ± 0,350  mg  GAE/gram  ekstrak  dan  ekstrak terpurifikasi yaitu 40,117 ± 0,195 mg GAE/gram ekstrak.  Kadar  total  fenolik  ekstrak  terpurifikasi daun  oyong  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan ekstrak  etanol  daun  oyong.  Hal  tersebut menunjukkan  bahwa  pada  ekstrak  terpurifikasi mengandung  senyawa  fenolik  lebih  banyak dibandingkan ekstrak etanol. Esktrak terpurifikasi  memiliki  kadar  fenolik  lebih  tinggi karena  telah  melalui  tahap  purifikasi  dimana tujuan  dari  purifikasi  yaitu  untuk  mendapatkan ekstrak dengan kemurnian lebih tinggi, terbebas dari zat ballast seperti lipid dan klorofil (pigmen)  sehingga  efektivitas  ekstrak  tinggi dengan  adanya  kandungan  metabolit  sekunder dalam  jumlah  yang  besar  (Atika  Amalia, Wahyuni and Fikri,  2021).  Akan  tetapi,  hasil KLT menunjukkan bercak noda setelah penyemrprotan  dengan  reagen  Fe 𝐶𝑙 3 hampir tidak terdapat perbedaan yang dapat dipengaruhi oleh beberapa faktor yaitu  volume
penotolan  sampel  yang  tidak  sama  dan stabilitas pereaksi semprot.

## SIMPULAN
Kadar  total  fenolik  ekstrak  etanol  daun oyong  yaitu  34,000  ±  0,350  dan  ekstrak terpurifikasi  daun  oyong  yaitu  40,117  ±  0,195. Kadar total ekstrak terpurifikasi lebih besar dari pada  ekstrak  etanol  karena telah melalui  tahap purifikasi  yang  menghasilkan  ekstrak  lebih murni dengan kandungan senyawa lebih besar.

## DAFTAR PUSTAKA
Arnanda,  Q.P.  and  Nuwarda,  R.F.  (2019) ‘Penggunaan  Radiofarmaka  Teknisium- 99M Dari  Senyawa Glutation dan Senyawa Flavonoid Sebagai Deteksi Dini Radikal Bebas Pemicu Kanker’, Farmaka Suplemen ,  14(1),  pp.  1 –15.  Available  at: https://jurnal.unpad.ac.id/farmaka/article/ view/22071.
Atika  Amalia,  I.,  Wahyuni,  D.  and  Fikri,  K.
(2021)  ‘Toksisitas  Ekstrak  Terpurifikasi
Daun  Pulutan  (Urena  lobata  L.)  Fraksi Etanol Terhadap Mortalitas Larva Nyamuk Aedes aegypti’, Jurnal Saintifika ,
23(2), pp. 19 –32.
Ayu,  S.I.,  Pratiwi,  L.  and  Nurbaeti,  S.N.  (2019) ‘Uji  Kualitatif  Senyawa  Fenol  dan Flavonoid  Dalam  Ekstrak  N-Heksan Daun Senggani (Melastoma malabathricum L.) Menggunakan Metode Kromoatografi Lapis Tipis’, Jurnal
Mahasiswa Farmasi Fakultas Kedokteran
UNTAN , 4(1), pp. 1 –6.
Dewantara, L.A.R., Ananto, A.D. and Andayani,
Y. (2021) ‘Penetapan Kadar Fenolik Total Ekstrak Kacang Panjang (Vigna unguiculata) dengan Metode Spektrofotometri  UV- Visible’, Lumbung Farmasi:  Jurnal  Ilmu  Kefarmasian ,  2(1),
p. 102. Available at:
https://doi.org/10.31764/lf.v2i1.3759.
Dewi,  N.L.A.  (2018)  ‘Pemisahan,  Isolasi,  dan Identifikasi Senyawa Saponin Dari Herba Pegagan  (Centella  asiatica  L.  Urban)’, Jurnal Farmasi Udayana , 7(2), p. 68.
Dhurhania,  C.E.  and  Novianto,  A.  (2019)  ‘Uji
Kandungan Fenolik Total dan Pengaruhnya terhadap Aktivitas Antioksidan dari Berbagai Bentuk
Sediaan  Sarang  Semut  (Myrmecodia pendens)’, Jurnal  Farmasi  Dan  Ilmu Kefarmasian Indonesia , 5(2), p. 62.
Al  Huda,  B.H.,  Susanti,  H.  and  Sugihartini,  N.
(2020)  ‘The  Purification  effect  on Organoleptic  Profile,  Yield,  Total  Phenol and  Total  Flavonoids  from  96%  Ethanol Extract  of  Moringa  (Moringa  oleifera.  L) leaves.’, Jurnal Farmasi Indonesia , 17(2),
pp. 188 –198. Available at: https://doi.org/10.31001/jfi.v17i2.983.
Iyyamperumal, U. et al. (2013)  ‘Anti- inflammatory  and  in  vitro  antioxidant potential  of  extracts  leaves  of  Luffa acutangula  (var)  amara  in  rodent  model (rats)’, International  Journal  of  Pharmacy and Pharmaceutical Sciences , 5(SUPPL. 2), pp. 79 –83.
Kusriani,  H. et  al. (2017)  ‘Aktivitas  antioksidan dan  sitotoksik  serta  penetapan  kadar senyawa fenol total ekstrak daun, bunga, dan  rimpang  kecombrang  (Etlingera elatior)’, Journal  Pharmacy ,  14(1),  pp.
51 –63.
Pallawagau,  M. et  al. (2019)  ‘Penentuan
Kandungan  Fenolik  Total  Liquid  Volatile Matter dari Pirolisis Kulit Buah Kakao dan Uji Aktivitas  Antifungi terhadap  Fusarium oxysporum’, ALCHEMY Jurnal Penelitian Kimia ,  15(1),  p.  165.  Available  at: https://doi.org/10.20961/alchemy.15.1.24 678.165-176.
Rahmi, H. (2017) ‘Review: Aktivitas Antioksidan dari  Berbagai  Sumber  Buah-buahan  di Indonesia’, Jurnal  Agrotek  Indonesia , 2(1), pp. 34 –38. Available at: https://doi.org/10.33661/jai.v2i1.721.
Sam,  S.,  Malik,  A.  and  Handayani,  S.  (2016) ‘Penetapan  Kadar  Fenolik  Total  dari Ekstrak  Etanol  Bunga  Rosella  Berwarna Merah  (Hibiscus  sabdariffa  L.)’, Jurnal Fitofarmaka  Indonesia ,  3(2),  pp.  182 – 187.
Sayuti,  K.  and  Yenrina,  R.  (2015) Alami  dan Sintetik (1 ed) . Yuliantari, N.W.A., Widarta, I.W.R. and Permana,  I.D.G.M.  (2017)  ‘Pengaruh
Suhu  dan  Waktu  Ekstraksi  Terhadap Kandungan  Flavonoid  dan  Aktivitas Antioksidan Daun Sirsak (Annona muricata  L.)  Menggunakan  Ultrasonik The  Influence  of  Time  and  Temperature on  Flavonoid  Content  and  Antioxidant Activity  of  Sirsak  Leaf  (Annona  mur’, Media Ilmiah Teknologi Pangan , 4(1), pp.
35 –42.