## PENETAPAN KADAR FLAVONOID TOTAL JUS BUAH DELIMA
( Punica granatum L.) YANG BERPOTENSI SEBAGAI

## HEPATOPROTEKTOR DENGAN METODE SPEKTOFOTOMETRI UV-VIS
Submitted : 06 Mei 2020 Edited : 22 Desember 2020
Accepted : 29 Desember 2020
Suharyanto, Anisa Dinda Ramadhani
DIII Farmasi Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Nasional Email: suharyanto522@gmail.com

## ABSTRACT
Pomegranate  is  one  of  the  plants  of  the  Lythraceae  family. Pomegranate  plants  are spread  from  the  subtropics  to  the  tropics,  from  the  lowlands  to  altitudes  below  1000  masl. Pomegranate  contains  flavonoid  compounds  that  can  be  used  as  traditional  medicine  for hepatoprotectors.  The  aim  of  the  researcher  was  to  determine  the  total  flavonoid  levels  in pomegranate juice (Punica granatum L) by UV-Vis Spectrophotometry. The method used in the study  is  the  Chang  method.  Identification  of  flavonoids  with  concentrated  HCl  reagents  and magnesium metal causes a change in color to red which indicates a positive sample containing flavonoids.  The  results  of  the  study  showed  total  flavonoid  levels  contained  in  pomegranate juice  0.0075766% QE.  Results  Variation  Coefficient Value  (% KV)  of  the  sample  is  0.7475%, Variation  Coefficient  (%  KV)  is  the  percentage  ratio  between  the  standard  deviation  and  the average. % KV is used in grading to express precision.
Keywords  : determination, flavonoid, juice,
Pomegranate, Total Flavonoids, Spectrophotometry PENDAHULUAN Di Indonesia penyakit hati
mempunyai  prevalensi  yang  cukup  tinggi. Hepatitis atau radang hati dapat disebabkan oleh  berbagai  faktor,  seperti  virus,  bakteri, parasit,  obat-obatan,  alkohol,  cacing,  atau gizi buruk (1) . Adapun penyakit hati lainnya yaitu kerusakan hati. Kerusakan hati terjadi karena  adanya  radikal  bebas,  sebagaimana yang  telah  dibuktikan  pada  penelitian sebelumnya  bahwa  buah  delima  dapat mengeliminasi radikal bebas sehingga dapat digunakan  sebagai  protektor  organ  hati akibat dari paparan radikal bebas (2) . Penyakit hepar dapat diatasi
menggunakan  obat  baik  secara  kimia maupun herbal. Tujuan pengobatan
penyakit hepar adalah mengurangi peradangan hati dengan cara
menghilangkan  atau  menekan  replikasi virus  penyebab  kerusakan  hati  sehingga tidak  berlanjut.  Sampai  saat  ini  belum  ada terapi yang optimal serta biaya terapi mahal, efek  samping  yang  serius,  maka  para  ahli mencoba  terapi  alternatif  seperti  terapi herbal (3) .  Oleh  karena  itu,  penelitian  ini diharapkan  dapat  memberikan  informasi kepada  masyarakat  kandungan  flavonoid jus buah delima.
Buah  delima  atau  yang  dikenal dengan sebutan buah pomegranate, memiliki  beberapa  senyawa  aktif,  yaitu alkaloid,  flavonoid,  saponin,  tannin  dan triterpenoid (4) . Aktivitas antioksidan
tertinggi  ditemukan  pada  buah  delima
(Punica granatum  Linn .)  dengan  dua  tipe komponen polifenol, yaitu flavonoid (antosianin)  dan  tanin  terhidrolisis (5) . Murugesh et  al (2005)  mengatakan  bahwa senyawa  alami  yang  dihasilkan  oleh tumbuhan seperti flavonoid, terpenoid, dan steroid  dapat  memulihkan  kerusakan  hati yang disebabkan parasetamol (6) . Penelitian mengenai  ekstrak  polifenol  buah  delima sebagai  hepatoprotektor  telah  dilakukan oleh Dian, A ,dkk., (2015) yang menyatakan bahwa  pemberian  ekstrak  polifenol  buah delima dengan dosis 500 mg/kg BB selama 16  hari  perlakuan  berfungsi  sebagai hepotoprotektor paling baik dalam
menghambat kerusakan jaringan hati akibat induksi parasetamol 500 mg/kg BB selama 34 hari (7) .
Efek proteksi flavonoid penting untuk diaplikasikan  pada  penyakit-penyakit  yang diakibatkan oleh radikal bebas (8) . Aktivitas antioksidannya mungkin dapat menjelaskan mengapa  flavonoid  tertentu  merupakan komponen  aktif  tumbuhan  yang  digunakan secara tradisional untuk mengobati
gangguan fungsi hati (9) .

## METODE PENELITIAN
Teknik pengumpulan data
Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  buah  delima  ( Punica granatum L.) segar yang diperoleh di Pasar Gedhe  Surakarta,  aquadest,  AlCl3  ,  HCl pekat, logam magnesium, standar kuersetin, metanol p.a, kalium asetat.
Alat
yang digunakan
Spektrofotometri  uv-vis;  mikropipet,  pipet volume,  labu  ukur,  gelas,  beaker  glass, kuvet,  pusbol,  tabung  reaksi,  rak  tabung reaksi, batang pengaduk, juicer, kaca arloji, spatel,  stopwatch,  cawan  porselen,  kertas saring,  pisau,  timbangan  analitik,  nampan, pipet.

## Prosedur penelitian
Penyiapan Sampel Sampel Buah delima ( Punica granatum L.) diperoleh di pasar
Gedhe,Surakarta. Pengambilan sampel dilakukan  dengan  cara  mengambilan  buah yang  yang  berumur  3-4  bulan  yang  sudah matang,  yang  berwarna  merah  dengan kuncup buah yang sudah mekar.

## Pengolahan Sampel
Buah  delima  ( Punica  granatum L.) yang  telah  diambil,  dicuci  hingga  bersih dengan air kemudian dipotong menjadi dua lalu di ambil bagian buahnya.

## Ekstraksi
Sebanyak  masing  masing  100  gram Buah delima ( Punica granatum L.) sebanyak  tiga  kali  dilakukan  proses pengambilan  sari  buah  dengan  diekstraksi menggunakan  mesin  juicer.  Ekstraksi dengan mesin juicer menghasilkan sari buah lebih banyak daripada menggunakan blender.  Hasil  ekstraksi  sari  buah  delima, kemudian dilakukan penyaringan menggunakan kertas saring untuk pengambilan sari buah delima yang jernih. Analisis Kualitatif Kandungan Flavonoid Jus buah delima ditambahkan beberapa  tetes  HCl  pekat  dan  logam magnesium Adanya flavonoid,
diidentifikasi  dari  terbentuknya  warna merah (10) .

## Analisis  Kuantitatif  dan  Penetapan Kadar Flavonoid Total
Analisis kuantitatif senyawa flavonoid total dilakukan secara spektrofotometri  uv-visibel  menggunakan metode Chang (11) Analisisnya  dilakukan dengan beberapa langkah sebagai berikut:

## Pembuatan Reagen AlCl3 10%
Serbuk aluminium  klorida  ditimbang 1  gram  lalu  dilarutkan  dalam  beaker  glass dengan  sebagian  aquadest  hingga  larut sempurna.  Masukkan  ke  dalam  labu  ukur 10,0  ml  dan  tambahkan  aquadest  sampai tanda batas.

## Pembuatan CH3COOK 1 M
Serbuk  kalium  asetat ditimbang  0,98 gram  lalu  dilarutkan  dalam  beaker  glass dengan  sebagian  aquadest  hingga  larut sempurna.  Masukkan  ke  dalam  labu  ukur 10,0  ml  dan  tambahkan  aquadest  sampai tanda.
Pembuatan Larutan Baku Induk Kuersetin 1000 ppm Kuersetin  ditimbang  100,0  mg  lalu larutkan  dalam  labu  ukur  100,0  ml  dengan metanol p.a. sehingga didapatkan konsentrasi 1000 ppm.
Pembuatan Larutan kerja induk
kuersetin 100 ppm
Larutan  baku  induk  kuersetin  1000 ppm dipipet 1 ml dimasukan ke dalam labu ukur 10 ml, diencerkan  dengan metanol pa sampai tanda batas.
Pembuatan Larutan Baku Kerja

## Kuersetin 8 ppm
Larutan  baku  induk  kuersetin  100 ppm  dipipet  sebanyak  0,8  ml,  dimasukkan dalam  labu  ukur  10,0  ml,  kemudian ditambahkan 3 ml metanol p.a; 0,2 ml AlCl3 10%;  0,2  ml  CH3COOK  1  M  dan diencerkan  dengan  aquadest  sampai  tanda batas.

## Pembuatan Larutan Blangko
Metanol p.a sebanyak 3 ml dimasukkan  kedalam  labu  ukur  10,0  ml tambahkan  0,2  ml  AlCl3  10%;  0,2  ml
CH3COOK 1 M dan ditambahkan aquadest sampai tanda batas.
Penentuan Operating  Time Kuersetin  8 ppm
Larutan  baku  induk  kuersetin  100 ppm  dipipet  sebanyak  0,8  ml  masukkan dalam  labu  ukur  10,0  ml,  kemudian ditambahkan 3 ml metanol p.a; 0,2 ml AlCl3 10%;  0,2  ml  CH3COOK  1  M  dan diencerkan  dengan  aquadest  sampai  tanda batas. Larutan dikocok homogen lalu diukur absorbannya  pada  panjang  gelombang maksimum teoritis 428 nm dengan spektrofotometer  pada  0-60  menit.  Amati kurva  hubungan  antara  waktu  dengan absorbansi dan tentukan operating time . Penentuan Panjang Gelombang

## Maksimum Kuersetin 8 ppm
Larutan  baku  induk  kuersetin  100
ppm dipipet sebanyak 0,8 ml , dimasukkan dalam  labu  ukur  10,0  ml,  kemudian ditambahkan 3 ml metanol p.a; 0,2 ml AlCl3 10%;  0,2  ml  CH3COOK  1  M  dan diencerkan  dengan  aquadest  sampai  tanda batas.  Dikocok  homogen  lalu  dibiarkan selama  waktu operating  time ,  diukur absorbannya pada panjang gelombang 250- 500 nm dengan spektrofotometer.

## Pembuatan Kurva Baku Kuersetin
Deret standar kuersetin 4, 6, 8, 10 dan 12 ppm dibuat dari larutan baku induk 100 ppm.  Larutan  baku  kerja  100  ppm  dipipet sebanyak  0,4;  0,6;  0,8;  1,0  dan  1,2  ml kemudian dimasukkan dalam labu ukur 10,0 ml. Selanjutnya ditambahkan 3 ml metanol p.a; 0,2 ml AlCl3 10%; 0,2 ml CH3COOK 1  M  dan  diencerkan  dengan  aquadest sampai tanda batas. Dikocok homogen lalu dibiarkan  selama operating  time kemudian diukur absorbannya pada panjang gelombang maksimal dengan spektrofotometer.  Amati  kurva  hubungan
antara  konsentrasi  dengan  absorbansi  dan tentukan koefisien korelasi.

## Penetapan Kadar Flavonoid Total
Larutan  sampel  jus  buah  delima dipipet sebanyak 0,2 ml, kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 10,0 ml lalu ditambahkan 3 ml metanol p.a; 0,2 ml AlCl3 10%; 0,2 ml CH3COOK 1 M dan aquadest sampai  tanda  batas,  dikocok  homogen  lalu dibiarkan selama operating time , kemudian serapan  dari  sampel  diukur  pada  panjang gelombang  maksimum.  Kadar  flavonoid dihitung  dalam  larutan sampel  kerja  (ppm) dengan memasukkan absorban yang
diperoleh  sebagai  nilai  Y  ke  dalam persamaan  regresi  linier  dari  kurva  baku kuersetin Keterangan X = konsentrasi (ppm) Y = absorbansi A = intersep B = slope Kemudian kadar flavonoid total yang diperoleh masing-masing dihitung koefisien korelasinya  (%  KV)  dari  tiga  kali pengukuran (triplo).
Keterangan:
% KV = koefisien korelasi
SD = standar deviasi Rata-rata = rata-rata kadar flavonoid dalam jus
Koefisien  variasi  digunakan  untuk mengetahui kesesuaian analisis atau metode suatu  sampel  secara  berulang-ulang  dari sampel  yang  homogen.  Nilai  persen  KV dikatakan  baik  jika  <2%,  hal  tersebut
menunjukan bahwa yang diperoleh dilakukan  dengan  tingkat  ketelitian  yang baik.

## HASIL DAN  PEMBAHASAN Penyiapan Larutan Uji
Buah  delima  yang  akan  di juicer diperoleh dari pasar Gedhe Surakarta. Buah Delima  yang  didapatkan  dari  pasar  Gedhe Surakarta  disortir  basah  bertujuan  untuk memastikan  bahwa  bahan  baku  yang digunakan,  sudah  benar  berasal  dari  bagian tumbuhan yang dimaksud dan bukan berasal dari  bagian  tumbuhan  lain  yang  tidak diperlukan.
Pencucian  pada  buah  delima  untuk memisahkan  bagian  yang  tidak  layak digunakan,  pencucian  harus  dilakukan dengan  air  bersih,  agar  tidak  mencemari buah.  Setelah  itu  dipotong  menjadi  dua bagian untuk memudahkan proses
pengambilan  daging  buah  delima  yang nantinya akan di juicer .
Hasil  pengambilan  sari  buah  delima kemudian  di  saring  menggunakan  kertas saring  supaya  terhindar  dari  gelembung gelembung udara dan diperoleh hasil bening. Pada  penelitian  ini  senyawa  yang  akan diteliti adalah flavonoid maka yang diambil adalah  sari  buah  delima  yang  berbentuk cairan  karena  flavonoid  adalah  senyawa yang  lebih  mudah  larut  dalam  pelarut  polar seperti air. Sari buah delima yang didapatkan dari  hasil  preparasi  sampel  dengan  volume 35  ml,  dengan  volume  yang  diperoleh sebanyak  100  gram  pada  replikasi  1,  35  ml pada replikasi 2, 35 ml pada replikasi 3.

## Uji Kualitatif Flavonoid
Hasil uji kualitatif kandungan flavonoid  pada  sari  buah  delima  dengan penambahan  logam  Mg  dan  larutan  HCl menunjukkan  hasil  yang  positif.  Secara teoritis, sampel yang mengandung flavonoid ketika dilakukan penambahan logam Mg dan
larutan  HCl  akan  menimbulkan  perubahan warna menjadi merah atau jingga.
Penambahan  logam  Mg  dan  larutan
HCl bertujuan untuk mereduksi inti benzopiron  yang  terdapat  di  struktur flavonoid kemudian terbentuk garam flavilium.  Garam  flavilium  yang  terdapat pada  larutan  sampel  akan  berubah  warna menjadi warna jingga atau merah. Penambahan HCl mengakibatkan terjadinya reaksi  oksidasi  reduksi  antara  logam  Mg sebagai pereduksi dengan senyawa flavonoid
(12) .
Uji  Kuantitatif  dan  Penetapan  Kadar Flavonoid Total
Penetapan kadar  flavonoid  total
dilakukan secara spektrofotometri uv- visibel  karena  flavonoid  memiliki  gugus kromofor  dan  auksokrom.  Gugus  kromofor adalah gugus yang memiliki ikatan rangkap terkonjugasi,  sedangkan  gugus  auksokrom adalah  gugus  fungsional  yang  memiliki pasangan  elektron  bebas  yang  terikat  pada gugus kromofor. Kandungan total flavonoid dalam ekstrak pada penelitian ini ditetapkan dengan  metode  Chang,  sebagai  Quercetin Equivalent  (%)  dari  persamaan  kurva  baku kuersetin.
Penetapan  kadar  flavonoid  pada sampel  dengan  Spektrofotometri  UV-Vis dapat  menggunakan  metode  Chang  atau metode Zhou. Pada praktikum ini penetapan kadar flavonoid dalam sampel menggunakan metode  Chang.  Kelebihan  dari  metode Chang  adalah  metode  Chang  menghasilkan parameter  analitik  yang  meliputi  λ  max, operating time, batas deteksi (LOD), rentang linier,  kurva  kuantifikasi  (LOQ)  yang  baik untuk  semua  standard  flavonoid  meliputi flavonoid  apigenin,  kuersetin,  rutin  dan hesperidin.  Parameter  analitik  tidak  dapat dipenuhi pada metode Zhou yang diterapkan pada  apigenin,  kuersetin  dan  hesperidin, sedangkan  pada  rutin  terpenuhi.  Metode Chang  merupakan  metode  terpilih  untuk analisis  flavonoid  secara  Spektroskopi  UV- Vis.

## Penentuan operating time
Tujuan  perlakuan operating  time selama  29  menit  dimaksudkan  agar  reaksi berjalan sempurna dan memberikan intensitas  warna  yang  maksimal,  sehingga dihasilkan  absorbansi  larutan  yang  stabil. Operating time kuersetin pada penelitian ini tercapai  pada  menit  ke-29,  yang  artinya kuersetin  setelah  direaksikan  dengan  AlCl3 dan  CH3COOK  menghasilkan  absorbansi yang  stabil  pada  saat  menit  tersebut. O perating  time dari  kuersetin  adalah  pada menit  ke-30.  Penentuan  Operating  Time berfungsi  untuk  mengetahui  waktu  yang stabil saat sampel jus buah Delima bereaksi sempurna  membentuk  kompleks  dengan reagen pembentukan warna, sehingga
dihasilkan absorbansi yang stabil (12) . Penentuan panjang gelombang maksimum Pada penelitian ini, panjang
gelombang maksimal kuersetin yang diperoleh  yaitu  440  nm.  Penentuan  panjang gelombang  maksimal  kuersetin  dilakukan pada rentang 250-500 nm pada saat tercapai operating  time yaitu  pada  menit  ke-29 dengan menggunakan larutan 8 ppm. Secara teori,  hasil  panjang  gelombang  maksimal untuk  suatu  senyawa  pasti  sama  meskipun konsentrasi  yang  digunakan  berbeda  dan tinggi rendahnya konsentrasi akan mempengaruhi tinggi rendahnya absorbansi, tetapi tidak mempengaruhi panjang gelombang (13) .

## Pembuatan kurva baku
Kurva baku kuersetin digunakan untuk mengetahui hubungan korelasi antara konsentrasi  dan  absorbansi  dari  kuersetin. Kurva  baku  kuersetin  diperoleh  nilai  r  = 0,9999; nilai A = 0,3600 dan nilai B = 0,0250 sehingga  diperoleh  persamaan  regresi  linier y = 0,0250x + 0,3600 yang ditunjukkan pada gambar11.  Nilai  (koefisien  korelasi)  r merupakan parameter linearitas kurva. Nilai r  digunakan  untuk  mengetahui  linearitas
hubungan antara konsentrasi dan absorbansi, dimana  linearitas  kurva  semakin  baik  jika nilai r mendekati 1 atau minimal 0,997. Pada penelitian ini korelasi antara konsentrasi dan absorbansi  adalah  berbanding  lurus,  yang artinya  kenaikan  konsentrasi  diikuti  dengan kenaikan  absorbansi.  Nilai  A  merupakan intersep kurva, yaitu titik potong kurva pada sumbu  y.  Semakin  kecil  harga  A  maka penyimpangan juga semakin kecil, sehingga kurva  ideal  memiliki  harga  A  =  0,  dengan demikian  apabila  kurva  diperpanjang  maka akan  melalui  titik  (0,0).  Nilai  B  merupakan harga  kemiringan  kurva  baku,  sehingga menjadi parameter sensitifitas metode pengukuran. Kurva yang representatif memiliki nilai sudut α yang dihasilkan oleh slope  kurva  baku  mendekati  45°,  sehingga metode  penelitian  menjadi  semakin  sensitif
(13) .

## Kadar Flavonoid dalam jus buah delima
Rata-rata  kadar  flavonoid total  dalam jus buah delima 0,0075766 % QE (Tabel 1). Kadar  flavonoid  yang  terukur  ekuivalen terhadap  kuersetin.  Nilai  Standar  Deviasi (SD)  dari  sampel  ditunjukkan  pada  tabel yaitu 7,5608 x 10 -3 .
Standar  Deviasi  (SD)  adalah  nilai statistik  yang  digunakan  untuk  menentukan bagaimana  sebaran  data  dalam  sampel  dan seberapa  dekat  titik  data  individu  ke  mean atau  rata-rata  nilai  sampel.  Sebuah  standar deviasi dari kumpulan data sama dengan nol menunjukkan bahwa semua nilai-nilai dalam himpunan tersebut adalah sama. Sebuah nilai deviasi  yang  lebih  besar  akan  memberikan makna  bahwa  titik  data  individu  jauh  dari
nilai  rata-rata.  Nilai  Standar  Deviasi  (SD) dari  jus  buah  delima  sangat  kecil  atau mendekati nilai nol sehingga dapat diketahui bahwa  jus  buah  delima  ketika  dilakukan pengukuran  triplo  menghasilkan  kadar flavonoid yang sama atau seragam (Jamaluddin, 2012). Nilai Koefisien Variasi (% KV) dari sampel ditunjukkan pada tabel 3 yaitu 0,7475%, Koefisien Variasi (% KV) adalah  persentase  perbandingan  antara standar  deviasi  dengan  rata-rata.  %  KV digunakan  dalam  penetapan  kadar  untuk menyatakan  presisi.  Presisi  menunjukkan sejauh  mana  ketepatan  dan  pengulangan pengukuran  dalam  kondisi  yang  tidak berubah  menghasilkan  hasil  yang  sama. Nilai koefisien korelasi menunjukkan seberapa  dekat  perbedaan  nilai  pada  saat dilakukan  pengulangan  pengukuran.  Syarat %  KV  yang  baik  adalah  kurang  dari  2  %, sehingga  kadar  flavonoid  dalam  jus  buah delima  memenuhi  syarat  parameter  presisi. Tetapi  kadar  flavonoid  masih  lebih  tinggi apabila  buah  Delima  dilakukan  penelitian menggunakan  metode  refluks  dibandingkan dengan pengambilan sari buah. Karena pada metode  refluks  ekstrak  yang  didapatkan lebih  murni  sedangkan  pada  metode  jus masih banyak sari yang belum keluar tetapi metode  jus  lebih  aplikatif  dalam  penerapan di masyarakat.
Dari  hasil  diatas  dapat  diketahui korelasi  antara  kadar  flavonoid  dengan potensi  hepatoprotektor.  Semakin  tinggi kadar flavonoid maka semakin rendah dosis yang  dibutuhkan  untuk  hepatoprotektor. Rata-rata  kadar  flavonoid  jus  buah  delima sebesar  0,0075766  %  QE  dapat  sebagai hepatoptotektor.
Tabel 1. Rata-rata kadar flavonoid total dalam jus buah delima

## SIMPULAN
Hasil  penetapan  kadar  flavonoid  total pada jus buah delima diperoleh kadar rata-rata sebesar  0,0075766  %  QE  .  Kadar flavonoid yang terukur ekuivalen terhadap kuersetin.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Ulfa,  M.,  2008,  Efek  hepatoprotektif ekstrak  etil  asetat  daun  sambung  nyawa (Gynura  procumbens  Lour.)  terhadap mencit  jantan  galur  swiss  terinduksi parasetamol, Skripsi, Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta 2. Mills SE., 2007, Histology for Pathologists Ed ke-3 , Lippincott Williams and Wilkins, USA 3. Merinda,  D.,  2014, Hepatoprotective
Effect Of Curcumin In Chronic Hepatitis , Faculty of Medicine, Lampung University, Lampung
4. Yuniarti T., 2008, Ensiklopedia Tanaman
Obat Tradisional, Pressindo, Yogyakarta
5. Malik, et  al .,  2005, Pomegranate  fruit juice for chemoprevention and chemotherapy  of  prostate  cancer ,  Proc. Natl. Acad. Sci, USA
6. Murugesh  KS et  al ,  2005,  Hepato protective  and  antioxidant  role  of Berberis  tinctoria  lesch  leaves  on
paracetamol induced hepatic damage in rats, Irian  J  Pharmacology  and Therapeutics
7. Dian, A., 2015, Aktivitas Hepatoproteksi Ekstrak  Polifenol  Buah  Delima  (Punica granatum L.) Terhadap Tikus Putih Yang
Diinduksi  Parasetamol,  Skripsi  Fakultas kedokteran Yarsi
8. Winarsi, Hery. 2007., Antioksidan Alami dan Radikal Bebas. Kanisius.Yogyakarta
9. Robinson,  Trevor.,  1995, Kandungan Organik  Tumbuhan  Tinggi .  Penerbit ITB, Bandung.
10. Malik,  A.,  Edward,  F.,  &  Waris,  R., 2013,  Skrining  Fitokmia  dan  Penetapan Kandungan  Flavonoid  Total  Ekstrak Metanolik  Herba  Boroco  ( Celosia argentea L.). Jurnal  Fitofarmaka ,
Indonesia, 1 (1)
11. Chang, C. C., Yang, M. H., Wen, H. M.,
Chern,  J.  C.,  2002,  Estimation of total flavonoid  content  in  propolis  by  two complementary  colorimetric  methods, Journal Food Drug Analysis,Vol.10,No.3 12. Marzuki,  Asnah.,  2012, Kimia  Analisis
Farmasi, Dua Satu Press, Makassar 13. Aeni,  N.,  2012, Spektrofotometer  UV- Visible , Untad Press, Palu