Jurnal Farmasi Sains dan Terapan (Journal of Pharmacy Science and Practice) pISSN 2338-8404 and eISSN 2657-2311 Journal Homepage: http://journal.wima.ac.id/index.php/JFST/ DOI: 10.33508/jfst.v10i2.4893

## Penentuan  Aktivitas  Antioksidan  dengan  Metode  DPPH  dan Kandungan Fenol Total dalam Minyak Atsiri Daun Sirih Hijau
Determination  of  Antioxidant  Activity  by  DPPH  Method  and  Total  Phenolic Content in Green Betel Leaves Essential Oil
Grace Joy Christiani a) , Ellsya Angeline Rawar a) *, Novena Adi Yuhara a )
a) Fakultas Farmasi, Universitas Kristen Immanuel Yogyakarta, Indonesia
Article info:
Received Date : 09/08/2023 Revised Date   : 22/10/2023 Accepted Date : 30/10/2023 Abstrak
Sirih  hijau  telah  dimanfaatkan  dalam  pengobatan  tradisional  dan menginang. Golongan senyawa yang terkandung dalam daun sirih hijau beranekaragam, salah satunya adalah minyak atsiri sebesar 0,8-1,8 %. Fenol adalah  salah satu  jenis  golongan  senyawa  dalam  minyak atsiri yang  berpotensi  sebagai  antioksidan.  Tujuan  penelitian  ini  adalah menentukan aktivitas antioksidan dan kadar fenol total dalam minyak atsiri  daun  sirih  hijau.  Distilasi  uap-air  digunakan  untuk  mengisolasi minyak  atsiri  dalam  daun  sirih  hijau.  Metode  DPPH  (1,1-difenil-2- pikrilhidrazil)  digunakan  untuk  menguji  aktivitas  antioksidan, sedangkan  metode  kolorimetri  dengan  reagen  Folin-Ciocalteu digunakan untuk menentukan kandungan fenol total. Rendemen dari hasil isolasi minyak atsiri dalam daun sirih hijau dengan distilasi uap- air  adalah  0,1%  dengan  kandungan  fenol  total  sebesar  595,4  mg GAE/100 gram dan aktivitas antioksidan dengan nilai IC 50 sebesar 5,67 µg/mL. Minyak atsiri daun sirih hijau mengandung golongan senyawa fenol dan dapat menjadi alternatif sumber antioksidan.

## Abstract
Green betel is usually used in traditional medicine and herbs. There are various  compound  classes  contained  in  green  betel  leaves,  one  of which  is  essential  oil  amounting  to  0.8-1.8%.  Phenol  is  a  compound class in essential oils that has the potential to act as an antioxidant. This  research  aimed  to  determine  the  antioxidant  activity  and  total phenol  content  in  green  betel  leaves  essential  oil.  Steam-water distillation was used to isolate essential oils in green betel leaves. The DPPH  (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)  method  was  used  to  test antioxidant activity, while the colourimetric method with Folin-Ciocalteu reagent was used to determine the total phenol content. The yield from the isolation of essential oils in green betel leaves using steam-water distillation was 0.1% with a total phenol content of 595.4 mg GAE/100 grams sample and antioxidant activity with an IC 50 value of 5.67 µg/mL. Green betel leaves essential oil contains phenolic compound class and could be an alternative source of antioxidants.
Keywords: Sirih Hijau ( Piper betle L.) Daun Fenol Antioksidan Minyak atsiri Corresponding Authors*: Ellsya Angeline Rawar Fakultas Farmasi
Universitas Kristen Immanuel Yogyakarta Jl. Solo Km 11,1, Yogyakarta e-mail: ellsya@ukrimuniversity.ac.id

## PENDAHULUAN
Sirih  dikenal  masyarakat  dengan  bentuk tanamannya  yang  tumbuh  menjalar  atau merambat  di  dinding,  tiang,  dan  batang  pohon (Kusuma et al.,  2017). Sirih hijau  ( Piper betle L.) merupakan  jenis  sirih  yang  paling  banyak digunakan.  Selain  digunakan  untuk  menginang, daun  sirih  hijau  juga  digunakan  sebagai  obat tradisional secara turun-temurun untuk menghentikan pendarahan, menyembuhkan luka, mengobati  gatal,  serta  sebagai  obat  kumur  dan obat penenang (Rivai et al ., 2014). Daun sirih hijau mengandung gula, asam amino, vitamin B1, asam askorbat,  asam  nikotinat,  karoten,  dan  minyak atsiri  (Primadiamanti,  Amura,  and  Ulfa,  2020). Kandungan minyak atsiri dalam sirih hijau sebesar 0,8-1,8 %.
Minyak  atsiri  dapat  diperoleh  dari  bunga, daun,  biji,  akar,  buah,  dan  kulit  batang  dari tanaman  dengan  cara  distilasi,  ekstraksi, pengepresan, atau kompresi enzimatik (Saraswati, Palupi,  and  Eka,  2018).  Metode  distilasi  atau penyulingan  terbagi  dalam  3  jenis  metode  yaitu distilasi  uap,  distilasi  air,  dan  distilasi  uap-air. Distilasi uap-air cocok untuk bahan-bahan seperti rumput,  biji-bijian,  dan  daun.  Kelebihan  dari distilasi  uap-air  adalah  dapat  menghasilkan minyak  atsiri  lebih  cepat  dan  optimal  (Suryani, 2020).
Salah  satu  golongan  senyawa  yang terkandung  dalam  minyak  atsiri  adalah  fenol. Kandungan  fenol  total  dalam  ekstrak  etanol  70% dari  daun  sirih  merah  adalah  157,61  mg  GAE/g, dalam  ekstrak  metanol  daun  sirih  hijau  adalah 165,45  ppm, dan dalam  ekstrak etanol daun sirih hijau  adalah  19,42  mg  GAE/g  sampel  (Andriani dan  Murtisiwi,  2018;  Prayitno,  Kusnadi,  and Murtini, 2018;  Primadiamanti, Amura, and Ulfa, 2020). Kandungan fenol total dalam minyak atsiri daun  sirih  hijau  belum  pernah  ditetapkan.  Fenol merupakan  antioksidan  alami  yang  terkandung dalam  tumbuhan  (Maulidha,  Fridayanti,  dan Masruhim,  2015).  Mekanisme  aksi  fenol  sebagai antioksidan adalah membentuk senyawa kompleks radikal  fenoksi  yang  stabil  dalam  reaksi  oksidasi dengan  radikal  bebas  (Husain et  al .,  2023). Golongan  senyawa  fenol  memiliki  kemampuan antioksidan  yang  potensial  dan  beberapa  telah terbukti  lebih  efektif  daripada  vitamin  E,  asam askorbat, dan karotenoid (Fitria, 2020). Tanaman sirih  memiliki  aktivitas  antioksidan,  misalnya ekstrak  metanol  sirih  hitam  memiliki  nilai  IC 50 sebesar  158,53  ppm,  ekstrak  metanol  daun  sirih kuning  memiliki  nilai  IC 50 sebesar  33,355  ppm, sedangkan  ekstrak  terpurifikasi  sirih  merah memiliki nilai IC 50 sebesar 53,91 ppm (Maulidha et al ., 2015). Aktivitas antioksidan dalam daun sirih hijau telah dilakukan dalam bentuk sediaan infusa dengan nilai IC 50 sebesar  22,809 mg trolox/gram
ekstrak  (Suarantika,  Patricia,  and  Rahma,  2023). Dalam  bentuk  minyak  atsiri,  daun  sirih  merah memiliki  aktivitas  antioksidan  dengan  nilai  IC 50 sebesar  136,947  ppm.  Penentuan  aktivitas antioksidan dalam minyak atsiri daun hijau belum pernah  dilakukan.  Tujuan  penelitian  ini  adalah menentukan aktivitas antioksidan dengan metode DPPH  dan  kandungan  fenol  total  dalam  minyak atsiri  daun  sirih  hijau  dengan  menggunakan metode kolorimetri.

## METODE

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  adalah  timbangan analitik  (Ohaus,  Amerika),  spektrofotometer  UV- Vis  (B-One,  China),  blender, vortex (B-One, China), sentrifugasi, alat distilasi, mikropipet, dan peralatan  gelas  laboratorium  lainnya.  Daun  sirih hijau ( Piper betle L.) yang digunakan berasal dari Berbah, Sleman, Yogyakarta, dan sudah dideterminasi  di  Laboratorium  Struktur  dan Perkembangan Tumbuhan (SPT) Fakultas Biologi UGM  dengan  No.0358/S.Tb/VII/2023.  Bahan kimia  yang  digunakan  adalah  pereaksi  Folin- Ciocalteu  (Merck,  Germany),  besi  (III)  klorida (Merck, Germany), etanol p.a (Fulltime), metanol p.a  (Fulltime),  1,1-difenil-2-pikrihidrazil  (DPPH) (Merck,  Germany),  natrium  karbonat  (Merck, Germany), natrium sulfat (Merck, Germany), dan akuades.

## Isolasi Minyak Atsiri
Daun sirih hijau dipisahkan dari batang dan ranting,  disortasi  basah  menggunakan  air mengalir,  ditiriskan,  kemudian  dipotong  dengan gunting  sehingga  menjadi  potongan  daun  yang lebih  kecil.  Potongan  daun  sirih  hijau  ditimbang sebanyak 3 kg kemudian diambil minyak atsirinya dengan  distilasi  uap-air  dengan  10  liter  akuades dalam  suhu  100°C.  Proses  distilasi  dilakukan sampai minyak atsiri tidak menetes lagi, kemudian minyak  atsiri  dipisahkan  dengan  air  dengan menggunakan  natrium  sulfat  (Widayani  & Cahyono, 2018).

## Uji Kualitatif Fenol
Analisis  kualitatif  golongan  senyawa  fenol dilakukan dengan menggunakan larutan uji FeCl 3 . Proses  pengujian  diawali  dengan  2  tetes  minyak atsiri ke dalam tabung reaksi kemudian ditambah 1  tetes  larutan  FeCl 3 .  Sampel  dihomogenkan dengan vortex kemudian  diamati.  Jika  terbentuk warna coklat kehitaman atau hijau kehitaman, hal ini menunjukkan bahwa dalam sampel mengandung  golongan  senyawa  fenol  (Fitria, 2020).

## Uji Kuantitatif Fenol Total
Uji  kuantitatif  fenol  total  merupakan modifikasi dari metode penelitian yang digunakan (Primadiamanti et al ., 2020). Kadar larutan induk baku  asam  galat  yang  digunakan  adalah  100 µg/mL.  Reagen  yang  digunakan  adalah  larutan Na2CO3 7,5% yang dibuat dengan cara melarutkan 3,75 gram Na 2 CO 3 dalam akuades pada labu ukur 50  mL  dan  larutan  Folin-Ciocalteu  (1:10)  dibuat dengan  cara  mencampurkan  reagen  Folin- Ciocalceu  dengan  akuades  dengan  perbandingan 1:10.  Seri  kadar  larutan  baku  asam  galat  dibuat dengan 5 titik kadar dari rentang kadar 60 sampai 100  µg/mL.  Larutan  sampel  minyak  atsiri  yang digunakan adalah 100 µL/mL yang dibuat dengan cara melarutkan 2,5 µL minyak atsiri dengan 250 µL  etanol  p.a  sebagai  kosolven  hingga  larut sempurna, lalu ditambahkan akuades hingga batas tanda pada labu ukur 25 mL. Dari masing-masing larutan baku dan larutan sampel, diambil 300 µL ke  dalam  tabung  reaksi,  lalu  ditambahkan  Folin- Ciocalteu  (1:10)  sebanyak  1,5  mL,  dihomogenkan dengan  vortex,  lalu  didiamkan  pada  suhu  kamar selama  3  menit.  Selanjutnya,  larutan  Na 2 CO 3 sebanyak  1,2  mL  ditambahkan  ke  dalam  tabung reaksi, lalu didiamkan pada suhu kamar selama 60 menit.  Serapan  larutan  diukur  pada  panjang gelombang maksimum 766 nm dengan spektrofotometer  UV-Vis.  Dari  seri  kadar  larutan baku asam galat, dilakukan regresi linier sehingga didapatkan  persamaan  kurva  baku  yang  akan digunakan  untuk  menghitung  kadar  fenol  total dalam sampel.

## Penentuan Aktivitas Antioksidan
Aktivitas  antioksidan  ditentukan  berdasar- kan  metode  yang  dilakukan  Suhaling  (2012) dengan sedikit modifikasi. Larutan stok DPPH 50 µg/mL  dibuat  dengan  DPPH  baku  5,0  mg ditimbang  lalu  dimasukkan  ke  dalam  dalam  labu ukur 100 mL kemudian dilarutkan dengan metanol p.a  sampai  tanda  batas.  Larutan  kontrol  negatif dibuat  dengan  mencampurkan  2  mL  DPPH  50 µg/mL  dan  2  mL  metanol  p.a  di  dalam  tabung reaksi. Larutan induk baku asam askorbat dibuat dengan  menimbang  2,5  mg  baku  asam  askorbat kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 50 mL dan dilarutkan dengan  metanol p.a  sampai tanda batas,  kemudian  dihomogenkan  dan  dibuat  seri kadar 0,5; 1; 1,5; 2; dan 2,5 µg/mL. Larutan sampel dibuat  dengan  cara  mengambil  25  µL  larutan minyak  atsiri  daun  sirih  hijau,  dimasukkan  ke dalam  labu  ukur  25  mL  dan  dilarutkan  dengan metanol  p.a  sampai  tanda  batas  kemudian dihomogenkan dan dibuat 5 titik seri kadar dari 2 hingga  10  µg/mL.  Larutan  kontrol  negatif,  baku asam askorbat dan larutan sampel diambil masing- masing sebanyak 2 mL larutan lalu dimasukkan ke dalam tabung reaksi kecil yang dibungkus  dengan aluminium foil ,  kemudian    ditambahkan  2  mL
larutan  DPPH.  Masing-masing  larutan  di- vortex selama  10  detik  kemudian  diinkubasi  pada  suhu 25°C selama 30 menit. Setelah diinkubasi, serapan dibaca pada panjang gelomb P. ang 517 nm dengan instrumen spektrofotometri UV-Vis.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Isolasi Minyak Atsiri Daun Sirih Hijau
Daun  sirih  hijau  yang  digunakan  dalam isolasi minyak atsiri adalah daun yang terletak dari bagian  tengah  ke  arah  pangkal  batang  sehingga umur  daun  cukup  tua  untuk  mendapatkan  kadar minyak atsiri yang optimal (Tripathi dan Hazarika, 2014).  Isolasi  minyak  atsiri  dari  daun  sirih  hijau dapat  dilakukan  dengan  teknik  distilasi.    Teknik distilasi  yang  digunakan  adalah  distilasi  uap-air karena  dapat  efektif  dalam  menghasilkan  volume minyak  atsiri  yang  optimal  untuk  bahan  yang berbentuk rumput, biji, dan daun. Distilasi uap-air ini  menggunakan  saringan  yang  berlubang  untuk memisahkan  antara  air  yang  berada  di  bawah saringan  dengan  ketinggian  mencapai  sedikit  di bawah  saringan  dan  bahan  yang  didistilasi  yang berada di atas saringan. Air yang berada di bawah saringan  dapat  dipanaskan  dengan  uap  jenuh dengan tekanan tertentu atau dipanaskan langsung dengan  api.  Kelebihan  distilasi  uap-air  ini  adalah sampel tidak langsung kontak dengan air sehingga dapat  mencegah  terjadinya  kerusakan  senyawa akibat  reaksi  hidrolisis.  Selain  itu,  sampel  tidak mudah  menggumpal  apabila  kontak  dengan  air panas  dan  penguraian  minyak  lebih  kecil.    Dari hasil isolasi dengan distilasi uap-air, minyak atsiri daun sirih hijau yang didapatkan berwarna kuning jernih  dengan  rendemen  sebesar  0,1%.  Gambar  1 menunjukkan penampilan dari minyak atsiri yang didapatkan.
Gambar 1. Minyak Atsiri Daun Sirih Hijau

## Analisis Kualitatif Fenol
Golongan senyawa fenol merupakan komponen yang memiliki aktivitas antioksidan dan merupakan  kelompok  fitokimia  terbesar  pada tumbuhan  dengan  kemampuan  meregenerasi oksigen  aktif,  karena  pada  cincin  aromatik mengandung  gugus  hidroksil  yang  berperan sebagai  donor  elektron  (Primadiamanti et  al ., 2020).  Analisis  kualitatif  fenol  digunakan  untuk mengidentifikasi  keberadaan  golongan  senyawa fenol  dalam  suatu  sampel.  Pereaksi  yang
digunakan  adalah  larutan  FeCl 3 yang  dapat bereaksi  dengan  golongan  senyawa  fenol  dalam minyak atsiri membentuk senyawa kompleks yang berwarna  hijau  kehitaman.  Hasil  positif  yang menunjukkan  adanya  golongan  senyawa  fenol pada  sampel  jika  terbentuk  warna  merah,  hijau, biru  ungu,  atau  hitam.  Gambar  2  menunjukkan adanya  warna  hijau  kehitaman  sehingga  minyak atsiri  daun  sirih  hijau  mengandung  golongan senyawa fenolik.

## Gambar 2. Hasil Analisis Kualitatif Fenol

## Analisis kuantitatif fenol total
Kandungan  fenol total dalam minyak atsiri ditentukan  kadarnya  dengan  menggunakan metode  kolorimetri  dengan  pereaksi  Folin- Ciocalteu  karena  reagen  tersebut  dapat  bereaksi dengan  golongan  senyawa  fenol  membentuk larutan yang dapat diukur serapannya. Instrumen yang  digunakan  adalah  spektrofotometer  UV-Vis dengan  panjang  gelombang  766  nm.  Asam  galat digunakan  sebagai  baku  karena  asam  galat merupakan  golongan  senyawa  polifenol  turunan dari  asam  benzoat  hidrosiklik  yang  dapat dimurnikan  dan  bersifat  stabil.  Larutan  natrium karbonat memberikan suasana basa sehingga asam galat  maupun  golongan  senyawa  fenol  yang terkandung  dalam  minyak  atsiri  daun  sirih  hijau dapat  bereaksi  dengan  pereaksi  Folin  Ciocalteu menghasilkan  perubahan  warna  larutan  menjadi biru.  Inkubasi  dilakukan  sehingga  reaksi  antara senyawa golongan senyawa fenol dan reagen dapat berlangsung secara optimal.
Fenol merupakan golongan senyawa dengan anggota  yang  memiliki  tingkat  kepolaran  yang beragam dari polar, semi polar, hingga non polar. Pada umumnya, golongan senyawa fenol ini larut dalam  pelarut  polar  seperti  pelarut  organik  yaitu metanol dan etanol. Minyak atsiri daun sirih hijau mengandung  beberapa  senyawa,  antara  lain kariofilena, isoeugenol, dan α -kubebena (Rahmawati,  Mujahid,  and  Widiyastuti,  2020). Pada umumnya minyak atsiri tidak larut dalam air, namun minyak atsiri dapat larut dalam air dengan konsentrasi yang kecil misalnya kelarutan eugenol dalam air sebesar 0,64 g/liter atau setara dengan 640 ppm pada suhu 25 °C (Chen dkk., 2014). Oleh
karena  itu,  dalam  proses  preparasi  larutan  induk sampel  konsentrasi  sampel  yang  digunakan  kecil yaitu  100  ppm.  Etanol  p.a  digunakan  sebagai kosolven  yang  dapat  membantu  melarutkan minyak  atsiri  sehingga  golongan  senyawa  dalam minyak  atsiri  yang  bersifat  polar  dan  semi  polar dapat  larut.  Persamaan  kurva  baku  asam  galat menggunakan  seri  kadar  dengan  5  titik  yang berada pada rentang kadar 60 sampai dengan 100 μ g/mL ditunjukkan oleh gambar 3.
Gambar 3. Grafik Kurva Regresi Linier Asam Galat
Pengukuran  serapan  dari  asam  galat berguna  untuk  menentukan  kadar  fenol  total dalam  sampel  menggunakan  kurva  kalibrasi dengan persamaan kurva baku y=0,0059x – o,0709 dengan  nilai  koefisien  determinasi  (r 2 )  sebesar 0,9983.  Persamaan  kurva  baku  yang  diperoleh kemudian digunakan untuk menentukan kandungan  fenol  total  dari  sampel.  Tabel  1 menunjukkan  data  absorbansi  sampel  dari instrumen spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang  766  nm.  Hasil  pengujian  kadar  fenol total dalam minyak atsiri daun sirih hijau sebesar 595,40 mg GAE/100 gram. Kandungan fenol total dalam  minyak  atsiri  daun  sirih  hijau  lebih  kecil daripada  kandungan  fenol  total  dalam  ekstrak etanol  70%  daun  sirih  merah  adalah  157,61  mg GAE/g.  Hal  ini  disebabkan  karena  fenol  bersifat semi  polar  sehingga  lebih  larut  dalam  pelarut organik seperti etanol dan metanol.

## Aktivitas antioksidan
Uji  aktivitas  antioksidan  yang  digunakan adalah peredaman DPPH terhadap radikal bebas. Nilai  IC 50 digunakan  sebagai  parameter  untuk menentukan  kekuatan  antioksidan.  Nilai  IC 50 ( inhibitory  concentration )  merupakan  kadar larutan sampel yang dibutuhkan untuk menghambat 50% radikal bebas. Semakin rendah nilai IC 50 maka nilai antioksidan semakin kuat. Uji aktivitas antioksidan dilakukan dengan mengukur larutan kontrol positif yaitu larutan asam askorbat. Seri  kadar  yang  dilakukan  untuk  larutan  kontrol positif  yaitu  0,5  hingga  2,5  µg/mL,  seri  kadar
tersebut  dibaca  serapannya  pada  panjang gelombang  517  nm.  Tabel  2  menunjukkan  bahwa semakin  tinggi  kadar  asam  askorbat  maka  nilai absorbansi  semakin  rendah  dan  nilai  persentase penghambatan  (IC)  juga  semakin  meningkat. Setelah data persen inhibisi diperoleh, selanjutnya dibuat grafik untuk memperoleh persamaan kurva baku  yang  digunakan  untuk  menentukan  jumlah kandungan  antioksidan  pada  sampel.  Persamaan kurva  baku  antara  kadar  dengan  persen  inhibisi yaitu  y  =  13,078x  +  5,2519  dengan  koefisien korelasi (r) adalah 0,9601. Asam askorbat sebagai
antioksidan  menghasilkan  nilai  IC 50 sebesar  4,22 μ g/mL.
Tabel 1. Data Serapan Minyak Atsiri Daun Sirih Hijau
Pengulangan  Serapan Kadar Gallic Acid Ekuivalen (mg GAE / 100 g) Rata- rata Kadar 1 0,492 594,58 595,40 2 0,494 596,34 3 0,493 595,28 Tabel 2. Data Persentase Penghambatan Asam Askorbat Kadar (µg/mL) Serapan Rata-Rata Serapan % IC IC 50 (µg/mL)
0,5 0,699
0,701 1,96 4,22 0,701 0,702 1
0,660 0,650 9,10 0,656 0,633 1,5 0,630 0,627 12,27 0,637 0,614 2 0,582 0,582 18,61 0,581 0,582 2,5 0,504 0,501 29,90 0,505 0,494
Keterangan : masing-masing kadar dilakukan replikasi 3 kali untuk mendapatkan data absorbansi
Untuk  melihat  aktivitas  antioksidan  pada sampel dibuat 5 titik seri kadar 2 hingga 10 µg/mL. Hasil  uji  aktivitas  antioksidan  pada  sampel ditunjukkan oleh tabel 3. Nilai IC 50 yang dihasilkan yaitu 5,67  µg/mL sehingga sampel yang digunakan termasuk  dalam  antioksidan  sangat  kuat  karena nilai  IC 50 yang  dihasilkan  masuk  dalam  rentang kurang  dari  50  μg/mL.  Aktivitas  antioksidan dalam  daun  sirih  hijau  lebih  kuat  dibandingkan dengan  jenis  sirih  lainnya,  hal  ini  dapat  dilihat pada  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Widayani  & Cahyono  (2018),  ditemukan  bahwa  minyak  atsiri daun  sirih  merah  memiliki  aktivitas  antioksidan sedang karena memiliki nilai IC 50 sebesar 136,947 μg/mL,  begitu  juga  dengan  pada  penelitian  yang dilakukan oleh Maulidha et al. (2015),  ditemukan bahwa ekstrak daun sirih hitam memiliki aktivitas antioksidan  lemah  karena  memiliki  nilai  IC 50 sebesar 158,530 μg/mL. Minyak aktsiri daun sirih hijau  juga  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang tinggi  dibandingkan  dengan  jenis  sediaan  sirih hijau  lainnya,  dapat  dilihat  pada  penelitian  yang
dilakukan  oleh  Zulfah  (2021),  ditemukan  bahwa ekstrak  daun  sirih  hijau  mempunyai  aktivitas antioksidan sangat kuat karena memiliki nilai IC 50 sebesar  2,0375  μg/mL,  dan  pada  penelitian  yang dilakukan  oleh  Nastiti et  al. (2021),  ditemukan bahwa  infusa  daun  sirih  hijau  memiliki  aktivitas antioksidan  sedang  karena  memiliki  nilai  IC 50 sebesar 128 μg/mL.

## KESIMPULAN
Distilasi  uap-air  dapat  digunakan  untuk memperoleh  minyak  atsiri  dari  daun  sirih  hijau dengan  rendemen  sebesar  0,1%.  Aktivitas antioksidan  yang  dimiliki  minyak  atsiri  tersebut ditunjukkan dengan nilai IC 50 sebesar 5,67 µg/mL. Kadar  fenol  total  dalam  minyak  atsiri  sebesar 595,40  mg  GAE/100  gram  ikut  berkontribusi dalam  aktivitas  antioksidan  yang  dimiliki  oleh minyak  atsiri  daun  sirih  hijau.  Aktivitas farmakologis  minyak  atsiri  daun  sirih  hijau  yang berkaitan  dengan  antioksidan  dapat  diteliti  lebih lanjut.
Tabel 3. Data Persentase Penghambatan Minyak Atsiri Daun Sirih Hijau
Kadar (µg/mL) Serapan Rata-Rata Serapan % IC IC 50 (µg/mL)
2 0,517
0,512 28,40 5,67 0,516 0,502 4
0,414 0,409 42,72 0,412 0,402 6 0,340 0,336 53,03 0,335 0,332 8 0,242 0,241 66,32 0,241 0,239 10 0,232 0,230 67,86 0,230 0,227
Keterangan: masing-masing kadar dilakukan replikasi 3 kali untuk mendapatkan data absorbansi

## DAFTAR PUSTAKA
Andriani,  D.,  &  Murtisiwi,  L.,  2018,  Penetapan  Kadar  Fenol Total  Ekstrak  Etanol  Bunga  Telang  ( Clitoria  ternatea L.) Dengan  Spektrofotometri  Uv  Vis, Cendekia  Journal  of Pharmacy , 2 (1):32 – 38, https://doi.org/10.31596/cjp.v2i1.15.
Chen, H., Davidson, P.M., Zhong, Q., 2014, Impacts of Sample Preparation  Methods  on  Solubility  and  Antilisterial Characteristics  of  Essential  Oil  Components  in  Milk, Applied and Environmental Microbiology , 80:907 – 916.
Dzulhijar, Situmeang, B., Ibrahim A.M., Muamaliyah, E., Amin, F., Mahardika, M., Susparini, N.T., Bialangi, N., Musa, W.J.A, 2022,  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Metanol  Daun  Sirih Kuning ( Piper betle ), J-Medsains , 2(1): 1-8.
Fitria,  E.H.N.,  2020,  Penentuan  Kadar  Fenolat  Total  Ekstrak Etanol  Daun,  Batang  dan  Akar  Tutup  Bumi  ( Elephantopus mollis Kunth)  Secara  Spektrofotometer  UV-Vis, ‘ Skripsi ’ , Universitas Perintis Indonesia, Padang.
Husain,  F.,  Yunus,  F.A.M.,  &  Basri,  I.F.,  2023,  Aktivitas Antioksidan  dan  Kandungan  Fenol  Totalik  pada  Ekstrak Teripang  (Holothroidea), Medical  Sains :  Jurnal  Ilmiah Kefarmasian , 8 (2):695 – 704, https://doi.org/10.37874/ms. v8i2.665 .
Januarti,  I.B.,  Wijayanti,  R.,  Wahyuningsih  S.,  Nisa,  Z.,  2019, Potensi  Ekstrak  Terpurifikasi  Daun  Sirih  Merah  ( Piper crocatum Ruiz  &Pav)  sebagai  Antioksidan  dan  Antibakteri, JPSCR:  Journal  of  Pharmaceutical  Science  and  Clinical Research ,  02:60-68, https://doi.org/10.20961/jpscr.v4i2.
27206 .
Kusuma, M., Susilorini, T., & Surjowardojo, P., 2017, Pengaruh Lama dan Suhu Penyimpanan Ekstrak Daun Sirih Hijau ( Piper betle Linn)  dengan  Aquades  terhadap  Daya  Hambat  Bakteri Streptococcus Agalactiae Penyebab Mastitis  pada Sapi Perah, Ternak  Tropika:  Journal  of  Tropical  Animal  Production , 18 (2):14 – 21, https://doi.org/10.21776/ub.jtapro.2017.018.02.3
Maulidha,  N.,  Fridayanti,  A.,  &  Masruhim,  M.A.,  2015,  Uji Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Daun  Sirih  Hitam  ( Piper sp.) terhadap DPPH (1,1-Diphenyl-2-Picryl Hydrazyl), Jurnal Sains dan Kesehatan , 1 (1):16 – 20, https://doi.org/10.25026/jsk.v1i1.4
Nastiti, K., Noval, & Darini, K., 2021, Uji Aktivitas Antioksidan Kombinasi Infusa Daun Sirih ( Piper betle L), Ekstrak Etanolik Tanaman  Bundung  ( Actinuscirpus  grossus )  dan  Kulit  Jeruk
nipis ( Citrus surantifolia ), Jurnal Surya Medika , 7 :115 – 122.
Prayitno,  S.A.,  Kusnadi,  J.,  Murtini,  E.S,  2018,  Karakteristik (Total  Flavonoid,  Total  Fenol,  Aktivitas  Antioksidan)  Ekstrak Serbuk  Daun  Sirih  Merah  ( Piper  crocatum Ruiz&Pav.), Foodscitech , 1(2):26-34.
Primadiamanti,  A.,  Amura,  L.,  &  Ulfa,  A.M.,  2020,  Analisis Senyawa  Fenolik  Pada  Ekstrak  Daun  Sirih  Hijau  ( Piper  betle L.), Jurnal Farmasi Malahayati , 3 (1):23 – 31.
https://doi.org/10.33024/jfm.v3i1.2363 .
Rahmawati, N., Mujahid, R., & Widiyastuti, Y., 2020, Budidaya dan Manfaat Sirih untuk Kesehatan , Jakarta: Badan Penelitian Dan Pengembangan Kesehatan Kementerian Kesehatan RI, 1 – 122.
Rivai, H.,  Nanda,  P.E., &  Fadhilah,  H.,  2014,  Pembuatan  dan Karakterisasi Ekstrak Kering Daun Sirih Hijau ( Piper betle L.).
Jurnal Farmasi Higea , 6 (2):133 – 144.
Saraswati, A., Palupi, S., Eka, N.I., 2018, Analisis Kualitatif dan Kuantitatif Minyak Atsiri Daun Sirih Hijau ( Piper betle L .) dan Daun  Sirih  Merah  ( Piper  crocatum Ruiz  &  Pav.)  Berasal dari Kupang,  NTT, Jurnal  Ilmiah  Mahasiswa  Universitas Surabaya , 7 (2):1640 – 1659.
Suarantika,  F.,  Patricia,  V.M.,  Rahma,  H.,  2023,  Optimasi Proses  Ekstraksi  Daun  Sirih  Hijau  ( Piper  betle L.)  yang Memiliki  Aktivitas  Antioksidan  Berdasarkan  Penggunaan secara  Empiris, Jurnal  Ilmiah  Medicamento ,  9(1):16-21, https://doi.org/10.36733/medicamento.v9i1.5253 .
Suhaling, S., 2012, Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Kacang Merah ( Phaseolus vulgaris L.) dengan Metode DPPH, ‘ Skripsi ’ , UIN-Allaudin, Makassar.
Suryani,  E.,  2020,  Perbandingan  Kualitas  Minyak  Atsiri ( Patchouli  Oil )  dari  Tanaman  Nilam  Menggunakan  Metode Distilasi  Air,  Distilasi  Uap-air  dan  Distilasi  Uap  Langsung, ‘ Skripsi ’ , UIN-Allaudin, Makassar.
Tripathi, Y.C. & Hazarika, P., 2014, Impact of Harvesting Cycle, Maturity Stage, Drying and Storage on Essential Oil Content of Patchouli Leaves Grown in Northeast Region of India, Journal of  Essential  Oil  Bearing  Plants ,  17(6):  1389-1396,  DOI: 10.1080/0972060X.2014.1001189.
Widayani, A., & Cahyono, E., 2018, Isolasi dan Uji Antioksidan Minyak Atsiri Daun Sirih Merah ( Piper crocatum Ruiz & Pav.) pada Minyak  Goreng  Curah, Indonesian Journal  of  Chemical Science , 7 (3):  214 – 220, http://journal.unnes.ac.id/sju/index. php/ijcs .
Zulfah, M., 2021, Perbandingan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Sirih Hijau ( Piper betle L.) dan Daun Sirih Merah ( Piper crocatum ), ‘ Skripsi ’ , Politeknik Harapan Bersama, Tegal.