## POTENSI KULTUR CAMPURAN BAKTERI ENDOFIT SEBAGAI PEMACU PERTUMBUHAN BIBIT TANAMAN KARET
The Potency of Mixed Culture of Endophytic Bacteria as Plant Growth Promoting for Rubber Rootstock Growth
1,2 2 2 Umi HIDAYATI , Iswandi Anas CHANIAGO , Abdul MUNIF ,
3 2
SISWANTO , dan Dwi Andreas SANTOSA
1 Balai Penelitian Sembawa, Pusat Penelitian Karet PO BOX 1127 Palembang 30001 Email : umihidayati123@gmail.com
2 Fakultas Pertanian Institut Pertanian Bogor Jl. Meranti, Kampus IPB Darmaga, Bogor 16680
3 Balai Penelitian Bioteknologi Perkebunan Indonesia Jl. Taman Kencana No.1 Bogor, 16151
Diterima : 19 Mei 2014 / Direvisi : 30 Mei 2014 / Disetujui : 21 Juni 2014
Jurnal Penelitian Karet, 2014, 32 (2) : 129 - 138 Indonesian  J.  Nat. Rubb. Res. 2014, 32 (2) :  129 - 138

## Abstract
Endophytic  bacteria  was  bacteria  living  in plant  tissue,  and  they  can  be  isolated  through sterilization  of  tissue  surface.  Isolation  of endophytic  bacteria  from  rubber  plant  that  are potentially  involved  in  enhanching  growth  is important  to  be  carried  out.  Mixed  cultures  of endophytic  bacteria  are  expected  to  increase  the plant  growth  and    improve  the  quality  of  rubber rootstocks.  The  objective  of  this  experiment  was getting  mixed  cultures  of  endophytic  bacteria  as plant growth promoting for rubber rootstocks. Five endophytic  bacteria  from  rubber  trees  that  had been  known  their  potency  as  plant  growth promoting,  namely Bacillus  cereus KPD6, P s e u d o m o n a s   a e r u g i n o s a K P A 3 2 , Brachybacterium  paraconglomeratum LPD74, unknow  bacterium  LPD76,  and Providencia vermicola KPA38, were tested in their compatibility to obtain the compatible mixed cultures that could enhance the growth of PB 260 rootstocks. All of the selected  endophytic  bacteria  were    compatible each other. Application of mixed cultures to improve rubber  rootstocks  growth  gave  the  best  results  2 mixed cultures. The first mixed cultures contains 2 b a c t e r i a s ,   n a m e l y B r a c h y b a c t e r i u m paraconglomeratum LPD74  and Providencia vermicola KPA38.  The  second  mixed  cultures contains  3  bacterias,  namely Bacillus  cereus KPD6, Pseudomonas  aeruginosa KPA32,  and Brachybacterium  paraconglomeratum LPD74. Endophytic  bacteria  were able  to  enter  to  planlet originated  from  micro  cutting  was  proven  by Scanning Electron Microscopy.
Keywords : Endophytic  bacteria,  mixed  culture, plant  growth  promoting,  rubber rootstock.

## Abstrak
Bakteri endofit adalah bakteri yang hidup dalam jaringan tanaman, dapat diisolasi melalui sterilisasi  permukaan  jaringan  tanaman.  Isolasi bakteri  endofit  dari  tanaman  karet  yang berpotensi sebagai pemacu pertumbuhan sangan penting dilakukan. Pembuatan kultur campuran dari  bakteri  endofit  diharapkan  meningkatkan potensi dalam memacu pertumbuhan yang dapat meningkatkan  kualitas  bibit  batang  bawah tanaman  karet.  Penelitian  ini  dilakukan  dengan tujuan  mendapatkan  kultur  campuran  bakteri endofit  sebagai  pemacu  pertumbuhan  bibit tanaman karet. Lima bakteri endofit dari tanaman karet  yang  berpotensi  sebagai  pemacu pertumbuhan  yaitu Bacillus  cereus KPD6 , P s e u d o m o n a s   a e r u g i n o s a K P A 3 2 , Brachybacterium  paraconglomeratum LPD74 , bacterium  (bakteri  tidak  dikenal)  LPD76 , dan Providencia vermicola KPA38, diuji kompatibilitas untuk mendapatkan kultur campuran yang dapat meningkatkan pertumbuhan bibit batang bawah PB 260. Semua bakteri endofit terpilih kompatibel satu dengan yang lain. Aplikasi kultur campuran untuk meningkatkan pertumbuhan bibit batang bawah  PB  260  memberikan  hasil  2  kultur campuran  terbaik.  Kultur  campuran  1  terdiri  2 s p e s i e s   b a k t e r i   y a i t u B r a c h y b a c t e r i u m paraconglomeratum LPD74 dan Providencia vermicola KPA38. Kultur  campuran  2  terdiri  3 spesies  bakteri  yaitu Bacillus  cereus KPD6 , P s e u d o m o n a s   a e r u g i n o s a K P A 3 2 ,   d a n Brachybacterium  paraconglomeratum LPD74. Bakteri  endofit  mampu  masuk  ke  planlet  bibit karet microcutting yang  dibuktikan  dengan Scanning Electron Microscopy .
Kata  kunci  :  Bakteri  endofit,  kultur  campuran, pemacu  pertumbuhan,  bibit tanaman karet

## PENDAHULUAN
Tanaman  karet  ( Hevea  brasiliensis Müll. Arg.), pohon hutan yang asli dari hutan hujan tropis di Amerika Tengah dan Selatan merupakan  sumber  utama  karet  alam (Thomas  dan  Panikkar,  2000).  Tanaman karet ditanam di Indonesia pada tahun 1876 yang  berasal  dari  Brazil,  dimana  bahan t a n a m   t e r s e b u t   m e m i l i k i   r a t a - r a t a produktifitas  yang  rendah  berkisar 400kg/ha/th  (Dijkman, 1951). Pada saat ini tanaman karet telah semakin luas ditanam pada  berbagai  kondisi  agroklimat  yang menandakan  kemampuan  beradaptasi dengan kondisi lingkungan. Tanaman karet s e b a g a i   t a n a m a n   a l t e r n a t i f   u n t u k d i k e m b a n g k a n   p a d a   l a h a n   b e k a s pertambangan.  Tanaman  karet  sangat potensial,  karet  sebagai  komoditas  utama perkebunan merupakan sumber devisa US$ 11.8  M  (Balai  Penelitian  Sembawa,  2012) dengan  produksi  2,73  juta  ton  dan  areal karet  Indonesia  seluas  3,45  juta  ha  pada tahun 2010 (Ditjenbun, 2011).
Selain  potensi  sebagai  penghasil lateks dan dapat dikembangkan secara luas, tanaman  karet  mengalami  kendala  seperti produktivitas  yang  rendah,  matang  sadap yang  lama,  penyakit  tanaman  karet,  dan penyiapan bibit tanaman karet yang unggul. Kendala  tersebut  memberikan  peluang u n t u k   m e l a k u k a n   u p a y a   d a l a m mengatasinya, salah satu upaya mengatasi masalah  bibit  dengan  cara  meningkatkan pertumbuhan  agar  diperoleh  bibit  yang unggul untuk ditanam di perkebunan karet. Upaya  untuk  meningkatkan  pertumbuhan dengan  aplikasi  bakteri  endofit  yang berpotensi sebagai pemacu pertumbuhan.
Pada  saat  ini  eksplorasi  mikrob untuk  berbagai  kepentingan  terutama  di b i d a n g   p e r t a n i a n   t e l a h   b a n y a k dikembangkan,  bukan  hanya  mikrob  di rizosfer,  tetapi  juga  mikrob  di  dalam tanaman  (endofit)  yang  berpotensi  sebagai pemacu pertumbuhan untuk meningkatkan pertumbuhan  tanaman.  Hallmann et  al. (1997)  mendefinisikan  bakteri  endofit adalah  bakteri  yang  hidup  dalam  jaringan tanaman,  dapat  diisolasi  melalui  sterilisasi permukaan  jaringan  tanaman  tersebut. Bakteri  endofit  sebagai  organisme  yang hidup  berasosiasi  dengan  tanaman  dalam seluruh  atau  sebagian  siklus  hidupnya. Mikrob  di  dalam  tanaman  (endofit)
b e r p o t e n s i   u n t u k   m e n i n g k a t k a n pertumbuhan  tanaman  dan  pengendalian hama  penyakit.  Kebanyakan  dari  bakteri endofit  adalah  menguntungkan,  karena mampu  sebagai  agen  biokontrol,  dan pemacu  pertumbuhan  karena  dapat meningkatkan  ketersediaan  nutrisi  dan m e n g h a s i l k a n   h o r m o n   p e m a c u pertumbuhan  (Bacon  dan  Hinton,  2007). Endofit, mikrob yang berada dalam jaringan tanaman hidup,  berpotensi  sumber produk alami    baru  untuk  bidang  kedokteran, pertanian, dan industri. Endofit bermanfaat antara  lain  untuk  produk  mikrob  endofit sebagai  antibiotik,  senyawa  antiviral, antibiotik  volatile,  sedangkan  produk cendawan  endofit  sebagai  antikanker. Produk dari endofit dapat digunakan sebagai insektisida  maupun  agen  antidiabetes (Strobel dan Daisy, 2003).
Hasil  penelitian  Elbeltagy et  al. (2001)  menyatakan  bahwa  beberapa  jenis bakteri  endofit  seperti Azospirillum, E n t e r o b a c t e r   c l o a c a e , A l c a l i g e n e s , Acetobacter  diazotrophicus,  Herbaspirillum seropedicae,  Ideonella  dechlorantans ,  dan Azoarcus sp.  telah  terbukti  meningkatkan fiksasi  N   pada  tanaman  padi.  Penelitian 2 Mendes et  al .  (2007)  memberikan  hasil bahwa  bakteri  endofit  yang  ditemukan dalam  akar  dan  batang  tanaman  tebu menghasilkan hormon pemacu tumbuh IAA ( Indole  Acetic  Acid ),  dan  populasi  bakteri endofit  ditemukan  lebih  tinggi  pada  akar, i s o l a t   y a n g   d i p e r o l e h   d a r i   g e n u s Burkholderia,  Pantoea,  Pseudomonas ,  dan Microbacterium .
Bakteri  endofit  dapat  berfungsi meningkatkan  pertumbuhan  dengan perannya  sebagai  PGPB  ( Plant  Growth Promoting  Bacteria ),  seperti  pernyataan Bashan  dan  Bashan  (2005)  bahwa  PGPB meningkatkan  pertumbuhan  tanaman dengan  dua  cara  yang  berbeda:  (1)  mereka langsung  mempengaruhi  metabolisme tanaman  dengan  menyediakan  zat  yang dibutuhkan  tanaman.  Bakteri  ini  mampu memfiksasi  N ,  meningkatkan  kelarutan 2 f o s f a t   d a n   k e t e r s e d i a a n   z a t   b e s i , menghasilkan  hormon  pemacu  tumbuh, seperti  auksin,  giberelin,  sitokinin,  etilen, dan  asam  absisik.  Selain  itu,  mereka meningkatkan  toleransi  tanaman  terhadap stres,  seperti  kekeringan,  salinitas  tinggi, dan  toksisitas  logam.  Satu  atau  lebih  dari mekanisme  ini  berkontribusi  untuk
p e n i n g k a t a n   p e r t u m b u h a n   d a n perkembangan tanaman. Namun, bakteri ini tidak  meningkatkan  kapasitas  genetik tanaman,  karena  bahan  genetik  tidak ditransfer. Selanjutnya (2) kelompok kedua PGPB,  disebut  sebagai  PGPB-biokontrol, secara  tidak  langsung  meningkatkan pertumbuhan  tanaman  dengan  mencegah efek  buruk  dari  mikrob  patogen  (bakteri, jamur, dan virus). Mereka menghasilkan zat yang  membahayakan  atau  menghambat mikrob  lain,  tetapi  tidak  menghambat pertumbuhan tanaman, dengan membatasi ketersediaan  besi  untuk  patogen  atau dengan  mengubah  metabolisme  tanaman inang  untuk  meningkatkan  ketahanan terhadap  patogen  yang  menginfeksi. B e b e r a p a   b a k t e r i   e n d o f i t   d a p a t meningkatkan  pertumbuhan  pohon  hutan seperti pinus sampai pohon di daerah kering seperti  kaktus.    Bakteri  endofit,  seperti Pseudomonas  fluorescens dan Bacillus  sp . dapat  berfungsi  sebagai  PGPB-biokontrol mengendalikan  patogen Fusarium tanah  di kapas, Rhizoctonia solani dan Sclerotium .
Hormon pemacu tumbuh terdiri dari lima  golongan  yaitu  auksin,  giberelin, sitokinin, asam absisat, dan etilen. Hormon pemacu  tumbuh  adalah  zat  endogen maupun  eksogen  yang  dapat  mengubah pertumbuhan  tanaman.  Auksin  berfungsi merangsang pembesaran sel, pertumbuhan akar,  pembungaan,  dan  mencegah  gugur buah, dapat berupa Indole Acetic Acid (IAA), Naphthalene  Acetic  Acid (NAA), 2.4-D, CPA. Etilen adalah hormon yang berupa gas yang dalam  kehidupan  tanaman  berperan  aktif d a l a m   p r o s e s   p e m a t a n g a n   b u a h . Giberelin/asam  giberelat  (GA)  adalah hormon  untuk  memicu  munculnya  bunga dan pembungaan yang serempak. Sitokinin berfungsi  merangsang  pembelahan  sel  dan diferensiasi  mitosis,  sintesis  pada  ujung akar,  dan  ditranslokasi  melalui  pembuluh xylem,  dapat  berupa  Kinetin,  Benzeladenin (BA),  2l-P,  Zeatin,  Thidiazuron,  dan  PBA. Asam  absisat  (ABA)  berperan  dalam mengompakkan  pertumbuhan  batang, merangsang  pertumbuhan  tunas  anakan dengan  cepat  dan  serentak  (Wattimena, 1987).
Sedangkan penelitian yang berkaitan dengan  hormon  tumbuh  pada  tanaman karet  telah  dilakukan,  antara  lain  hasil penelitian Siagian et al. (1995) menyatakan
bahwa  penggunaan  IAA  1000ppm,  IBA 2000ppm,  dan  NA  1000ppm  dapat meningkatkan  keberhasilan  perakaran cangkokan  tanaman  karet  sebesar  28,9%, 21,1%,  dan  26,8%  dibandingkan  kontrol. Husny et  al. (1986)  menyatakan  bahwa pemberian  IBA  pada  bibit  batang  bawah tanaman  karet  dapat  meningkatkan persentase mata okulasi yang pecah, tinggi tanaman, diameter batang dan jumlah akar dengan  dosis  optimum  2000-3000ppm, sedangkan GA3 dapat meningkatkan pecah mata okulasi dan tinggi tanaman. Beberapa hormon  pemacu  tumbuh  seperti  IAA,  GA3, B A   t e l a h   d i c o b a   u n t u k   d i k e t a h u i p e n g a r u h n y a   t e r h a d a p   k e c e p a t a n pemulihan  kulit  pada  bidang  sadap, produksi  karet  kering,  dan  Kadar  Karet Kering.  Hasil  penelitian  menunjukkan pemakaian IAA mempercepat pertumbuhan jumlah  pembuluh  lateks,  tebal  kulit  dan meningkatkan  produksi  berat  kering (Siagian et al., 1985). Bakteri yang diisolasi dari akar tanaman karet ( Hevea brasiliensis Müll.  Arg.),  diinokulasikan  dalam  medium Kings B yang mengandung L-tryptophan dan diinkubasi  selama  6  hari,  kemudian dilakukan  analisis  konsentrasi  IAA  ( Indole Acetic Acid ) dan diperoleh hasil bakteri dari perakaran  karet  mampu  memproduksi  IAA (Maslahat dan Suharyanto, 2005).
Penelitian  mikrob  endofit  dari tanaman karet antara lain cendawan endofit dari  daun  dan sapwood (kulit  sadapan) tanaman karet ( Hevea brasiliensis Müll. Arg.) diperoleh  keragaman  cendawan  endofit, sebanyak  175  isolat,  dengan  cendawan endofit  paling  dominan Ascomycota , sedangkan  cendawan  endofit  yang  banyak terisolasi Penicillium,  Pestalotiopsis dan Trichoderma .  Keanekaragaman  cendawan endofit  lebih  besar  ditemukan  di  kulit sadapan dari pada di daun, namun frekuensi kolonisasi  cendawan  endofit  lebih  tinggi pada  daun  dibandingkan  dengan  kulit sadapan (Gazis dan Chaverri, 2010).
Isolasi  bakteri  endofit  dari  tanaman karet  yaitu  penelitian  Setyawan  (2010) diperoleh isolat bakteri endofit dari tanaman karet  HR-1,  HR-2,  HR-3,  dan  HR-4  (isolasi dari akar) dan HR-5, HR-7, HR-10, dan HR- 11  (isolasi  dari  daun)  memiliki  potensi sebagai antagonis terhadap penyakit jamur akar  putih  ( Rigidoporus    microporus) yang menyerang  perakaran  tanaman  karet.
Hidayati, Chaniago, Munif, Siswanto, Santosa
Aplikasi  bakteri  endofit  ke  tanaman  karet dengan  metode  penyiraman  ke  akar t a n a m a n   l e b i h   b a i k   d i b a n d i n g k a n penyemprotan ke daun tanaman karet.
Kultur  campuran  bakteri  endofit d a p a t   m e m b e r i k a n   m a n f a a t   l e b i h dibandingkan  aplikasi  tunggal  bakteri endofit  pada  bibit  tanaman  karet  sehingga meningkatkan pertumbuhan bibit tanaman karet.  Hasil  penelitian  Gofar et  al. (2008) memperoleh dua konsorsium bakteri endofit yang  konsisten  memacu  pertumbuhan tanaman  dan  meningkatkan  serapan Nitrogen tanaman padi dan hasil identifikasi bakteri  memperoleh  konsorsium  I   terdiri 1 Pseudomonas  fluorescens,  Klebsiella pneumoniae dan Enterobacter  aerogenes , sedangkan  konsorsium  I   terdiri  dari 2 Pseudomonas  aeruginosa,  Pseudomonas diminuta,  Klebsiella  pneumoniae, dan Burkholderia cepacia .
Hasil  isolasi  bakteri  endofit  dari tanaman  karet  memiliki  potensi  untuk sebagai  pemacu  pertumbuhan.  Pembuatan kultur  campuran  dari  bakteri  endofit diharapkan  meningkatkan  potensi  dalam m e m a c u   p e r t u m b u h a n   y a n g   d a p a t meningkatkan kualitas bibit tanaman karet. Pertumbuhan  bibit  yang  cepat  dan  efisien dalam  pemupukan  sangat  diharapkan u n t u k   m e n u n j a n g   p e m b a n g u n a n perkebunan  karet.  Penelitian  ini  dilakukan dengan  tujuan  mendapatkan  kultur campuran  bakteri  endofit  sebagai  pemacu pertumbuhan bibit batang bawah tanaman karet.

## BAHAN DAN METODE
P e n e l i t i a n   d i l a k u k a n   d i   d i L a b o r a t o r i u m   P r o t e k s i   T a n a m a n , Laboratorium  Fisiologi,  dan  Laboratorium Tanah  Balai  Penelitian  Sembawa  di Sembawa,  Banyuasin  III,  Banyuasin, Sumatera  Selatan.  Selain  itu  juga dilaksanakan  di  Laboratorium  Bioteknologi Tanah  Departemen  Ilmu  Tanah  dan Sumberdaya  Lahan,  dan  Laboratorium Nematologi  Departemen  Proteksi  Tanaman, Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor di  Kampus  Dramaga,  Bogor,  Jawa  Barat. P e n e l i t i a n   j u g a   d i l a k s a n a k a n   d i Laboratorium  Bioteknologi  Lingkungan  di Indonesian  Center  for  Biodiversity  and Biotechnology di  Situgede,  Bogor,  Jawa
Barat. Penelitian dilakukan mulai November 2012 sampai dengan April 2013.
Dalam  penelitian  ini  digunakan  5 bakteri endofit terseleksi yang diisolasi dari klon  karet    IRR  39  dan  IRR  118  yang berproduksi  (tanaman  menghasilkan dengan  tahun  tanam  2002)  dari  jaringan daun dan akar tanaman karet. Lima bakteri endofit tersebut yaitu Bacillus cereus KPD6 , P s e u d o m o n a s   a e r u g i n o s a K P A 3 2 , Brachybacterium  paraconglomeratum LPD74 , bacterium  (bakteri  tidak  dikenal) LPD76 , dan Providencia  vermicola KPA38 (Tabel  1).  Lima  bakteri  terseleksi  memiliki kemampuan penambatan N  berkisar 2,843 2 –  4,230  nmol  C H /μ L/jam,  menghasilkan
2 4 hormon  IAA  berkisar  28,167  -  119 μg/mL , giberelin  berkisar  7,5-60 μg/mL ,  dan sitokinin  (zeatin)  berkisar  0,012-0,025 μg/mL  dan sitokinin  (kinetin)  berkisar 0,004-0,029 μg/mL (Hidayati et al., 2014).
Selanjutnya  pada  penelitian  ini dilakukan  pengujian  kompatibilitas  dari beberapa  kombinasi  5  bakteri  endofit tersebut.  Bakteri  endofit  dan  kultur campuran  bakteri  endofit  diaplikasikan pada  bibit  batang  bawah  tanaman  karet untuk mendapatkan kultur campuran yang terbaik dalam meningkatkan pertumbuhan tanaman  karet.  Selain  itu  dilakukan  SEM ( Scanning  Electron  Microscopy) untuk membuktikan  kemampuan  bakteri  endofit untuk masuk ke dalam planlet karet.

## Pengujian  kompatibilitas  antar  bakteri endofit terpilih
Pengujian  kompatibilitas  5  bakteri endofit dibutuhkan untuk membuat kultur campuran  bakteri  endofit.  Seandainya d i a n t a r a   b a k t e r i   e n d o f i t   t e r n y a t a kompatibel,  maka  dapat  digunakan bersamaan  dalam  kultur  campuran. Pengujian kompatibilitas dilakukan dengan menumbuhkan 2 jenis bakteri endofit yang digoreskan  lurus  pada  2  sisi  dalam  cawan petri  yang  telah  berisi Nutrient  Agar . Selanjutnya  diinkubasikan  selama  24-72 jam,  kemudian  diamati  seandainya terbentuk  zona  bening  menandakan  ada antagonis diantara bakteri endofit tersebut, sehingga tidak dipilih. Jika tidak terbentuk zona  bening  yang  berarti  bakteri  endofit tersebut  kompatibel  satu  dengan  yang lainnya,  maka  dipilih.  Hal  serupa  juga dilakukan  untuk  pengujian  kompatibilitas dari 3 bakteri endofit.
Pengujian  kultur  campuran  bakteri e n d o f i t   u n t u k   m e n i n g k a t k a n pertumbuhan tanaman karet
Pengujian  kemampuan  kultur c a m p u r a n   b a k t e r i   e n d o f i t   u n t u k meningkatkan  pertumbuhan  tanaman karet, menggunakan biji karet klon PB 260. Perendaman  biji  karet  ke  dalam  suspensi kultur  campuran  bakteri  endofit.  Kultur campuran  bakteri  endofit  dibiakkan  dalam media  NB  yang  disaker  selama  24  jam, diukur  tingkat  kekeruhannya  pada spektrofotometer dengan panjang gelombang 600 nm hingga diperoleh Optical Density (OD) 8 0,25  yang  setara  kerapatan  bakteri  ±10 cfu/ml.  Setelah  biji  tanaman  karet  PB  260 direndam dalam suspensi kultur campuran bakteri endofit selama 24 jam, lalu disemai pada  media  tanah  steril.  Media  tanah  yang digunakan, disterilkan pada autoklaf dengan o suhu 121 C, tekanan 1 Atm selama 20 menit. Setiap  perlakuan  isolat  bakteri  endofit diulang  4  kali,  dan    kontrol  biji  tanaman karet  klon  PB  260  hanya  direndam  dalam akuades  steril.  Biji  tanaman  karet ditumbuhkan  selama  satu  bulan  setelah berkecambah, dan diamati pertumbuhannya dengan tinggi tanaman. Setelah satu bulan dari  berkecambah,  bibit  yang  tumbuh dibongkar  dan  panjang  trubus  ( upper  part ) dan akar, serta diukur berat basah dan berat kering bibit tanaman karet.
S k o r i n g   d i l a k u k a n   u n t u k menentukan kultur campuran terbaik. Skor diperoleh  dari  perkalian  parameter pengukuran dengan persen bobot nilai tiap parameter.  Bobot  nilai  panjang  trubus  dan panjang  akar  15%,  sedangkan  bobot  nilai u n t u k   b o b o t   b a s a h   b i o m a s a   2 0 % ,
selanjutnya  bobot  nilai  untuk  bobot  kering biomasa  30%.  Selanjutnya  panjang  trubus dikalikan bobot nilainya (15%), panjang akar dikalikan  bobot  nilainya  (15%).  Sedangkan bobot  basah  biomasa  dikalikan  bobot nilainya  (20%),  dan  bobot  kering  biomasa dikalikan bobot nilainya (30%). Selanjutnya hasil  perkalian  4  parameter  tersebut dijumlahkan.  Penentuan  kultur  campuran berdasarkan 10% terbaik dari 25 perlakuan aplikasi  bakteri  endofit  dan  kultur campuran,  diperoleh  2  kultur  campuran yang memiliki skor tertinggi.
Pengamatan Scanning Electron Microscopy
Pengamatan  menggunakan  SEM untuk  mengetahui  kemampuan  bakteri endofit masuk ke dalam jaringan tanaman. Suspensi  bakteri  endofit  diinokulasikan pada  planlet  bibit  karet  hasil microcutting yang  merupakan  produk  dari  Balai Penelitian  Bioteknologi  Perkebunan Indonesia. Setelah 24 jam, planlet dipotong 2 – 5 mm, kemudian difiksasi dan direndam dengan  pewarna  selama  2  hari  pada  suhu o 37 C. Selanjutnya didehidrasi menggunakan etanol,  kemudian  dibekukan  dalam  wadah tembaga.    Kemudian  dicairkan  dan  dibilas etanol,  selanjutnya  diletakkan  pada  alat pengering  bertekanan.  Selanjutnya  setelah kering dilapisi emas dalam mesin pengering. Sampel  kemudian  diamati  dengan    SEM ( Scanning  Electron  Microscopy) ,  untuk melihat  gambar  jaringan  tanaman  dan bakteri  endofit  dan  dipilih  untuk  difoto (Musetti dan Favali, 2004). Pengamatan SEM dilakukan  di  Laboratorium  Mikroskop Elektron di Bidang Zoologi Pusat Penelitian Biologi LIPI Cibinong.
Diisolasi dari tanaman karet Bakteri endofit Isolated from rubber plant Endophytic bacteria Klon Pohon Bagian tanaman Clone Tree Part of tree B. cereus KPD6 IRR 39 produksi daun P. aeruginosa KPA32 IRR 39 produksi akar B. paraconglomeratum LPD74 IRR 118 produksi daun bacterium (bakteri tidak dikenal) LPD76 IRR 118 produksi daun P. vermicola KPA38 IRR 39 produksi akar
Tabel 1. Lima bakteri endofit yang diisolasi dari tanaman karet Table 1. Five endophytic bacterias were isolated from rubber plant
Sumber ( Source ) : Hidayati et al., 2014
Hidayati, Chaniago, Munif, Siswanto, Santosa

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  pengujian  kompatibilitas terhadap  5  bakteri  endofit  yaitu Bacillus cereus KPD6 ,  Pseudomonas  aeruginosa K P A 3 2 ,   B r a c h y b a c t e r i u m paraconglomeratum LPD74 , bacterium (bakteri  tidak  dikenal)  LPD76 , dan Providencia vermicola KPA38, menunjukkan hasil  positif  semua  pasangan  yang  berarti kompatibel (Tabel 2) dengan tidak terbentuk zona  bening  pada  pertemuan  2    dan  3 bakteri endofit yang diuji.
Pada  Gambar  1  (a)  terlihat  hasil pengujian  kompatibilitas  2  spesies  bakteri e n d o f i t   y a i t u B r a c h y b a c t e r i u m paraconglomeratum LPD74 dan Providencia vermicola KPA38 (pasangan nomer 14) tidak terdapat  zona  bening  pada  pertemuan  2
spesies  bakteri  yang  digoreskan.  Pada Gambar  1  (b)  memperlihatkan  hasil pengujian  kompatibilitas  3  spesies  bakteri endofit  yaitu Bacillus  cereus KPD6 , Pseudomonas  aeruginosa KPA32,  dan Brachybacterium paraconglomeratum LPD74 (pasangan  nomer  16)  tidak  terdapat  zona bening  pada  pertemuan  3  spesies  bakteri yang  digoreskan.  Hal  ini  menunjukkan bahwa antara species bakteri tersebut saling bersesuaian  (kompatibel)  dan  dapat digunakan sebagai kultur campuran. Hal ini seperti dinyatakan oleh Putra (2011) bahwa pembuatan  formulasi  yang  mengandung lebih dari satu jenis mikrob, terlebih dahulu diperlukan  adanya  kajian  mengenai kompatibilitas  mikrob  tersebut,  hal  ini untuk  mengetahui  mikrob  yang  digunakan tidak  memiliki  sifat  antagonis  antar keduanya.
No Bakteri endofit Endophytic bacteria Uji kompatibilitas Compatibility test
1 B. cereus
2 P. aureginosa
3 B. paraconglomeratum
4 bacterium
5 P. vermicola
6 B. cereus P. aureginosa + 7 B. cereus B. paraconglomeratum + 8 B. cereus bacterium + 9 B. cereus P. vermicola + 10 P. aureginosa B. paraconglomeratum + 11 P. aureginosa bacterium + 12 P. aureginosa P. vermicola + 13 B. paraconglomeratum bacterium + 14 B. paraconglomeratum P. vermicola + 15 bacterium P. vermicola + 16 B. cereus P. aureginosa B. paraconglomeratum + 17 B. cereus P. aureginosa bacterium + 18 B. cereus P. aureginosa P. vermicola + 19 B. cereus B. paraconglomeratum bacterium + 20 B. cereus B. paraconglomeratum P. vermicola + 21 B. cereus bacterium P. vermicola + 22 P. aureginosa B. paraconglomeratum bacterium + 23 P. aureginosa B. paraconglomeratum P. vermicola + 24 P. aureginosa bacterium P. vermicola + 25 B. paraconglomeratum bacterium P. vermicola +

## Tabel 2. Pengujian kompatibilitas terhadap 5 bakteri endofit
Table 2. Compatibility test on 5 endophytic bacteria
Keterangan : (+) hasil pengujian kompatibel
Remaks : (+) the test result shows compatible
Selanjutnya  aplikasi  25  perlakuan bakteri  untuk  meningkatkan  pertumbuhan bibit karet klon PB 260. Perendaman biji PB 260 dengan suspensi bakteri, kemudian biji disemai  pada  tanah  steril,  setelah  tumbuh sampai  stadia  pancing  dipindahkan  pada gelas  plastik  berisi  tanah  steril  dan dipelihara  selama  1  bulan.    Bibit  dipanen setelah 1 bulan dan memperoleh data rata- rata  panjang  tanaman  trubus  ( upper  part ) dan  akar,  berat  basah,  serta  berat  kering biomassa.  Kemudian  dilakukan  skoring, untuk panjang 15%, berat basah 20%, dan berat  kering  30%  (Tabel  3).  Selanjutnya
dipilih 10% hasil tertinggi dari 25 perlakuan aplikasi terbaik dari aplikasi bakteri endofit dan kultur campuran bakteri endofit, yaitu 2 pasang  kultur  campuran.  Diperoleh  hasil skoring  tertinggi  9,32  untuk  kultur campuran 1 (nomer 14) yang terdiri 2 spesies bakteri  endofit  yaitu Brachybacterium paraconglomeratum LPD74 dan Providencia vermicola KPA38.  Sedangkan  kultur campuran 2 (nomer 16) yang terdiri 3 spesies bakteri endofit yaitu Bacillus cereus KPD6 , Pseudomonas  aeruginosa KPA32,  dan Brachybacterium paraconglomeratum LPD74 dengan hasil skoring 9,22.
B. paraconglomeratum KPD74 P. vermicola KPA38 B. cereus KPD6 P. aeruginosa KPA32 B. paraconglomeratum KPD74 (a) (b)
Gambar  1.  Pengujian  kompatibilitas  bakteri  endofit  pada  media  NA,  (a)  pengujian kompatibilitas Brachybacterium  paraconglomeratum LPD74 dan Providencia vermicola KPA38,  (b)  pengujian  kompatibilitas Bacillus  cereus KPD6 , Pseudomonas  aeruginosa KPA32,  dan Brachybacterium  paraconglomeratum LPD74
Figure  1.  Compatibility  test  of  endophytic  bacteria  on  NA  medium,  (a)  compatibility  test  of Brachybacterium paraconglomeratum LPD74 and Providencia vermicola KPA38 , (b) compatibility test of Bacillus cereus KPD6 , Pseudomonas aeruginosa KPA32, and Brachybacterium paraconglomeratum LPD74
Perlakuan  bakteri  memberikan pengaruh pertumbuhan pada bibit tanaman karet, seperti diungkapkan oleh Malik et al. (1997)  bahwa  bakteri  diketahui  dapat m e n g u b a h   m o r f o l o g i   a k a r   d a n m e n i n g k a t k a n   b i o m a s s a n y a   j u g a memungkinkan mengeksploitasi lebih dalam pengambilan nutrisi tanah.
Penelitian  ini  memperoleh  2  pasang kultur  campuran  yang  kompatibel  yang mampu  meningkatkan  pertumbuhan  bibit PB  260  yaitu  kultur  campuran  1  terdiri  2 p a s a n g   s p e s i e s   b a k t e r i   y a i t u
Brachybacterium paraconglomeratum LPD74 dan Providencia vermicola KPA38 dan kultur campuran  2  terdiri  3  spesies  bakteri  yaitu Bacillus  cereus KPD6 ,  Pseudomonas aeruginosa KPA32,  dan Brachybacterium paraconglomeratum LPD74.
Pengamatan  SEM (Scanning  Electron Microscopy) terhadap  bakteri  endofit Brachybacterium paraconglomeratum LPD74 yang diinokulasikan pada planlet bibit karet hasil microcutting yang  merupakan  produk d a r i   B a l a i   P e n e l i t i a n   B i o t e k n o l o g i Perkebunan  Indonesia,  sepeti  terlihat  pada
Hidayati, Chaniago, Munif, Siswanto, Santosa
Gambar  2.  Terlihat  bakteri  endofit  yang masuk  dalam  jaringan  tanaman  planlet, membuktikan  kemampuan  bakteri  endofit untuk  hidup  dalam  jaringan  tanaman, sedangkan  kontrol  tanpa  perlakuan inokulasi  bakteri  endofit  tidak  terlihat adanya bakteri dalam jaringan tanaman.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Pengujian  kompatibilitas  terhadap
Bacillus  cereus KPD6 ,  Pseudomonas aeruginosa KPA32 ,  Brachybacterium
paraconglomeratum LPD74 , bacterium (bakteri  tidak  dikenal)  LPD76 , dan Providencia  vermicola KPA38  dalam  25 perlakuan  memberikan  hasil  positif  yang berarti  kompatibel  terhadap  pasangannya. A p l i k a s i   k u l t u r   c a m p u r a n   u n t u k meningkatkan  pertumbuhan  bibit  PB  260 memberikan  hasil  2  kultur  campuran terbaik  yaitu  kultur  campuran  1  terdiri  2 s p e s i e s   b a k t e r i   e n d o f i t   y a i t u Brachybacterium paraconglomeratum LPD74 dan Providencia vermicola KPA38 dan kultur campuran 2 terdiri 3 spesies bakteri endofit yaitu Bacillus  cereus KPD6 ,  Pseudomonas
Kode
Code Rata- rata panjang Trubus Average of upper part length (cm) Skor Score 15% Rata- rata Skor Score 15% Rata- rata berat basah Average of wet weight (g) Skor Score 20% Rata- rata berat kering Average of dry weight (g) Skor Score 30% Total Skor Total Score panjang akar Average of root lenght (cm) K 27.95 4.19 9.45 1.42 2.35 0.47 0.55 0.16 6.24 1 41.38 6.21 6.58 0.99 2.73 0.55 0.65 0.20 7.93 2 37.98 5.70 15.28 2.29 3.76 0.75 0.68 0.20 8.94 3 34.08 5.11 5.48 0.82 2.30 0.46 0.56 0.17 6.56 4 34.83 5.22 12.38 1.86 2.50 0.50 0.66 0.20 7.78 5 37.85 5.68 8.65 1.30 2.95 0.59 0.64 0.19 7.76 6 28.28 4.24 8.93 1.34 1.73 0.35 0.40 0.12 6.04 7 34.45 5.17 9.98 1.50 2.35 0.47 0.34 0.10 7.23 8 33.75 5.06 10.70 1.61 2.58 0.52 0.48 0.14 7.33 9 28.90 4.34 10.58 1.59 1.93 0.39 0.21 0.06 6.37 10 34.93 5.24 10.45 1.57 2.52 0.50 0.57 0.17 7.48 11 33.83 5.07 11.20 1.68 2.81 0.56 0.73 0.22 7.53 12 31.43 4.71 12.48 1.87 2.98 0.60 0.45 0.14 7.32 13 31.13 4.67 12.13 1.82 2.59 0.52 0.59 0.18 7.18 14 35.90 5.39 20.95 3.14 2.90 0.58 0.69 0.21 9.32 15 37.40 5.61 15.63 2.34 3.08 0.62 0.60 0.18 8.75 16 40.63 6.09 15.53 2.33 2.88 0.58 0.75 0.23 9.22 17 30.75 4.61 5.65 0.85 2.03 0.41 0.38 0.11 5.98 18 28.48 4.27 12.80 1.92 2.13 0.43 0.32 0.10 6.71 19 40.73 6.11 13.48 2.02 3.29 0.66 1.05 0.32 9.10 20 33.65 5.05 10.80 1.62 2.29 0.46 0.37 0.11 7.23 21 31.80 4.77 10.23 1.53 2.22 0.44 0.48 0.14 6.89 22 31.23 4.68 14.70 2.21 2.45 0.49 0.40 0.12 7.50 23 31.78 4.77 7.75 1.16 2.55 0.51 0.70 0.21 6.65 24 32.78 4.92 8.03 1.20 2.17 0.43 0.43 0.13 6.68 25 22.70 3.41 9.55 1.43 1.40 0.28 0.23 0.07 5.19
Tabel 3. Rata-rata panjang trubus dan akar, berat basah dan berat kering biomasa, serta hasil scoring
Table 3. Average of upper part and root length, wet and dry weight of biomass, and scoring result
Potensi Kultur Campuran Bakteri Endofit Sebagai Pemacu Pertumbuhan Bibit Tanaman Karet
aeruginosa KPA32,  dan Brachybacterium paraconglomeratum LPD74.  Bakteri  endofit mampu masuk ke jaringan tanaman planlet bibit  karet  hasil microcutting yang dibuktikan  dengan  SEM (Scanning  Electron Microscopy).
Saran  yang  dianjurkan  untuk melakukan penelitian lanjutan dari 2 kultur campuran  terpilih  diaplikasikan  pada  bibit t a n a m a n   k a r e t   d e n g a n   p e r l a k u a n pemupukan  yang  diharapkan  dapat diperoleh  efisiensi  pemupukan  dengan perlakuan kultur campuran.

## DAFTAR PUSTAKA
Bacon  CW,  Hinton  DM.  2007.  Bacterial endophytes : The endophytic niche, its occupants,  and  its  utility.  Di  dalam Gnanamanicham  SS,  editor. Plant-
A s s o c i a t e d   B a c t e r i a .   S p r i n g e r .
Netherlands. hlm 155-194.
Balai Penelitian Sembawa. 2012. Sapta Bina Karet .  Penerbit  Balai  Penelitian Sembawa  Pusat  Penelitian  Karet. Palembang.  ISBN  979-529-002-9  dan 6 3 3 . 9 1 2 . 1 1 : 6 3 1 . 1 . 0 1 7 . 3 ( 9 1 0 ) . Palembang. 125 h.
Bashan LE, Bashan Y. 2005. Bacteria: Plant growth-promoting soil. Di dalam Hillel D,  editor. Encyclopedia  of  soil  in environment vol 1 . Elsevier, Oxford. hlm 103-115.
Dijkman  MJ.  1951.  Hevea,  thirty  year  of research in the Far East.  University of Miami Press, Florida.
[Ditjenbun] Direktorat Jenderal Perkebunan. 2011.  S tatistik  Perkebunan  2009  - 2 0 1 2 .   D i r e k t o r a t   J e n d e r a l Perkebunan, Jakarta. hlm 1-3.
Elbeltagy  A,  Nishioka  K,  Salo  T,  Ye  B,
Hamada  T,  Isawa  T,  Mitsam  H, Minomusawa  K.  2001.  Endophytic colonization  and  in  planta  nitrogen fixation by a Herbaspirillum sp. isolated from  wild  rice  species. Appl  Environ Microbiol 67: 5285-5293
Gazis R, Chaverri P. 2010. Diversity of fungal endophytes in leaves and stems of wild rubber  trees  ( Hevea  brasiliensis )  in Peru. Fungal Ecol 3:240–254
B. paraconglomeratum LPD74
Gambar  2.  Hasil  SEM  terhadap Brachybacterium  paraconglomeratum LPD74,  (a)  bakteri endofit pada planlet bibit karet (750x) , (b) planlet tanpa inokulasi bakteri endofit (5,000x)
Figure  2.  SEM  result  of Brachybacterium  paraconglometatum ,  (a)  endophytic  bacteria  on rubber rootstock planlet (750 x), (b) planlet without inoculation of endophytic bacteria (5000 x)

## Hidayati, Chaniago, Munif, Siswanto, Santosa
Gofar  N,  Napoleon  A,  Harun  MU.  2008.
S e l e k s i   k e m a m p u a n   b e r b a g a i konsorsium  bakteri  endofitik  pemacu t u m b u h   d a l a m   m e n i n g k a t k a n biomassa dan kadar Nitrogen tanaman padi  di  tanah  asal  rawa  lebak.  Di dalam: Pemanfaatan  Lahan  Basah untuk  Pertanian  Berkelanjutan  dalam Menghadapi  Peluang  dan  Tantangan Krisis  Pangan  Global . Prosiding P e r t e m u a n   I l m i a h   T a h u n a n ; P a l e m b a n g ,   1 7 - 1 8   D e s   2 0 0 8 . Palembang:  Himpunan  Ilmu  Tanah
Indonesia. hlm 280-288
Hallmann  J,  Hallmann  AQ,  Mahaffee  WF, K l o e p p e r   J W .   1 9 9 7 .   B a c t e r i a l endophytes in agricultural crops. Can J Microbiol 43: 895-914.
Hidayati U, Chaniago IA, Munif A, Siswanto, Santosa  DA.  2014.  The  Potency  of Plant  Growth  Promoting  Endophytic Bacteria  from  Rubber  Plant  ( Hevea brasiliensis , Mull. Arg). J of Agronomy . Masih dalam proses.
Husny Z, Yahya S, Wattimena GA, Harran S. 1986.  Penggunaan  zat  tumbuh  asam indol  butirat  dan  asam  gibberellat pada bahan tanam karet okulasi mata tidur. Buletin  Perkaretan 4(2).  Pusat Penelitian Karet. Medan. hlm.31-36.
Malik KA, Bilal R, Mehnaz S, Rasul G, Mirza MS,  Ali  S.  1997.  Association  of N i t r o g e n - f i x i n g ,   p l a n t - g r o w t h - promoting  rhizobacteria  (PGPR)  with kallar grass and rice. Plant and Soil 194
: 37-44
Maslahat  M,  Suharyanto.  2005.  Produksi Indol Asetic Acid (IAA) oleh bakteri yang diisolasi  dari  akar  tanaman  karet ( Hevea brasiliensis ). Jurnal Nusa Kimia 5 (2), Fakultas MIPA Universitas Nusa Bangsa. Bogor. hlm 26 – 35.
Mendes R, Pizzirani-Kleiner AA,   Araujo WL, and  Raaijmakers  JM.  2007.  Diversity of cultivated endophytic bacteria from Sugarcane  :  Genetic  and  biochemical characterization  of Burkholderia cepacia cmplex  isolates. Appl  Environ Microbiol 73 (22) :. 7259–7267.
Musetti  R,  Favali  MA.  2004.  Microscopy technique  applied  to  the  study  of phytoplasma  disease  :  traditional  and innovative  methods. Curr  Iss  Multidic Micros res and Educ . 72-80.
Putra,  MC.  2011.  Kompatibilitas  Bacillus spp.  dan  Aktinomiset  sebagai  Agen Hayati Xanthomonas oryzae pv.oryzae dan  Pemicu  Pertumbuhan  Padi [skripsi]. Bogor : Departemen Proteksi Tanaman Fakultas Pertanian IPB
Setyawan B. 2010. Bakteri endofitik sebagai antagonis  dalam  meningkatkan resistensi  batang  bawah  terhadap Jamur  Akar  Putih Rigidoporus Microporus .  Laporan  intern  Proyek Penelitian  Pusat  Penelitian  Karet. Medan.
Siagian  N,  Wattimena  GA,  Solahuddin  S. 1985.  Pemakaian  hormon  untuk mempercepat pemulihan kulit pulihan tanaman karet. Buletin Perkaretan 3(3). Pusat Penelitian Karet. Medan. hlm 67- 72.
Siagian  N,  Sitompul  D,  Manurung  A.  1995.
P e n g a r u h   a u k s i n   t e r h a d a p pertumbuhan  akar  cangkokan  karet. Jurnal  Penelitian  Karet 13(1).  Pusat Penelitian Karet. Medan. hlm 21-31.
Strobel G, Daisy B. 2003. Bioprospecting for microbial endophytes and their natural products. Microbiology  and  Molecular Biology Review 67(4) : 491-502.
Thomas  KK,  Panikkar  AON.  2000.  Indian rubber  plantation  industry  :  Genesis and development. Di dalam : George PJ, Kuruvilla CK, editor. Natural Rubber, Agromanagement and Crop Processing . Rubber  Research  Institute  of  India. Kottayam, India. hlm 1-19.
Wattimena GA. 1987. Zat Pengatur Tumbuh . Institut Pertanian Bogor. Bogor.