Menara Perkebunan 2015 83(2), 54-59

## Pengaruh matriks kapsul terhadap perkecambahan benih

## sintetik teh ( Camellia sinensis L.)
Effect of capsule matrix on germination of synthetic seeds of tea (Camellia sinensis L. )
SUMARYONO *) & Rizka T SAPTARI
Pusat Penelitian Bioteknologi dan Bioindustri Indonesia, Jl. Taman Kencana No.1,   Bogor 16128, Indonesia
Diterima tanggal 19 Agustus 2015/disetujui tanggal 5 Oktober 2015

## Abstract
Synthetic seed technology has been developed to combine the practical use of ordinary seeds and clonal  plant  materials.  Single  somatic  embryos  of tea  ( Camellia  sinensis L.)  clone  GMB  9  were encap-sulated  using  sodium  alginate  and  CaCl 2 at different concentrations to produce synthetic seeds. Encapsulating  matrices  with  and  without  somatic embryos  were  made  of  WP  medium  and  20  g/L sucrose with    1, 2 or 3%  sodium alginate and 50 or 100 mM CaCl 2 . Encapsulating matrices without somatic  embryos  were  then  tested  its  physical characteristics,  whereas  the  capsules  with  somatic embryos  were  observed  its  germination  rate  and secondary  embryo  formation  every  week  up  to  six weeks.  The  results  showed  that  the  concentrations of  sodium  alginate  and  CaCl 2 were  affected significantly  the  physical  characteristics  of  encap- sulating  matrix  produced.  The  sufficient  level  of hardness  and  highest  germination  rate  was obtained  from  2%  sodium  alginate  and  50  mM CaCl 2 .  Sodium  alginate  at  1%  or  less  produced soft,  leaky  and  oval  encapsulating  matrices  which were  not  suitable  for  synthetic  seeds.  Sodium alginate 3% and 100 mM CaCl 2 produced rounded and very hard encapsulating matrices and inhibited the  germination  of  somatic  embryos.  Germination rates  of  tea  synthetic  seeds  and  somatic  embryos without  encapsulation  were  5  to  20%  after  six weeks.
[Key  words:  Artificial  seed, Camellia  sinensis L., encapsulation,  germination,  somatic embryo, synthetic seed]

## Abstrak
Teknologi benih sintetik dikembangkan untuk memadukan  kepraktisan  penggunaan  benih  biasa dengan  bahan  tanam  klonal.  Embrio  somatik tunggal  dari  tanaman  teh  ( Camellia  sinensis L.) klon  GMB  9  dienkapsulasi  menggunakan  natrium alginat      dan  CaCl 2 untuk membuat  benih  sintetik. Matriks  kapsul  dengan  dan  tanpa  embrio  somatik dibuat  dari  medium  WP  dengan  sukrosa  20  g/L dicampur dengan natrium alginat 1, 2, atau 3% dan CaCl 2 50  atau 100 mM.  Matriks  kapsul  tanpa
embrio  somatik  kemudian  diuji  sifat  fisiknya, sedangkan  matriks  kapsul  dengan  embrio  somatik diamati  daya  kecambah  dan  pembentukan  embrio somatik  sekunder  setiap  minggu  sampai  dengan enam minggu. Hasil penelitian menunjukkan bahwa konsentrasi  natrium  alginat  dan  CaCl 2 sangat berpengaruh  terhadap  sifat  fisik  matriks  kapsul yang  dihasilkan. Tingkat  kekerasan  yang  memadai dan  menghasilkan  persentase  perkecambahan  yang tinggi  diperoleh  dengan  alginat  2%  dan  CaCl 2 50 mM. Natrium alginat pada konsentrasi 1% atau kurang  menghasilkan  matriks  kapsul  yang    lunak, mudah bocor dan berbentuk lonjong sehingga tidak sesuai  untuk  benih  sintetik.  Natrium  alginat konsentrasi  3%  pada  larutan  CaCl 2 100  mM menghasilkan  benih  sintetik  yang  bulat,  sangat keras  dan  menghambat  perkecambahan  embrio somatik  teh.    Daya  kecambah  benih  sintetik  dan embrio  somatik  teh  tanpa  enkapsulasi  berkisar 5 - 20% setelah enam minggu.
[Kata  kunci:  Benih  buatan, Camellia  sinensis L., enkapsulasi,  perkecambahan,  embrio somatik, benih sintetik]

## Pendahuluan
Tanaman  teh  ( Camellia  sinensis L.  Kuntze) telah  berhasil  diperbanyak  secara in  vitro melalui embriogenesis somatik (Tahardi et al ., 2000; Akula &  Akula,  2005).  Teknik  enkapsulasi  embrio somatik  teh  menjadi  benih  sintetik  dikembangkan untuk  memudahkan  pengiriman  embrio  somatik, mempertahankan  viabilitas  embrio  dalam  jangka waktu yang lebih lama, serta meningkatkan partum- buhan  dan  daya  hidup  benih  dengan  cara  me- nambahkan  hara,  mikoriza,  zat  pengatur  tumbuh dan pestisida ke dalam matriks gel. Di samping itu benih  sintetik  dapat  menghilangkan  tahap  perke- cambahan  dan  pendewasaan  embrio in  vitro yang biasa dilakukan untuk planlet.
Teknologi benih sintetik telah diterapkan pada berbagai  macam  bahan  tanaman  seperti  embrio somatik, akar berambut ( hairy roots ), pucuk tunas, tunas  aksiler,  setek,  dan  benih  biasa  dari  banyak jenis  tanaman  (Arun  Kumar et  al. ,  2005;  Latif et al. , 2007; Nor Asmah et al. , 2011; Siong et al. ,
*) Penulis korespondensi: sumaryono@iribb.co.id
Pengaruh matriks kapsul terhadap perkecambahan ...... (Sumaryono & Saptari)
2012;  Cheruvatur et  al .,  2013b;  Haque  &  Ghosh, 2014).  Teknik  enkapsulasi  embrio  zigotik  tanaman Camellia  sinensis telah  dilakukan  (Seran et  al. , 2005), namun belum pernah dilakukan pada embrio somatik teh.
Enkapsulasi  pada  umumnya  menggunakan bahan  gel  untuk membentuk pembungkus  (matriks kapsul)  benih  yang  dapat  melindungi  embrio somatik  tanpa  merusak  embrio    namun  masih memungkinkan embrio untuk berkecambah (Cheruvatur et  al. ,  2013a).    Kapsul    harus  cukup padat ( rigid ) dan kuat ( durable ) seperti benih biasa sehingga mudah ditangani untuk disimpan, dikirim atau  ditanam.    Matriks  kapsul  juga  tidak  boleh mudah  bocor  ( leaky )  sehingga  ke  dalam  matriks kapsul  dapat  ditambahkan  hara,  zat  pengatur tumbuh  dan  pestisida.  Penambahan  hara  atau  zat pengatur tumbuh seperti giberellin (GA 3 ) ke dalam matriks  kapsul  diperlukan  untuk  membantu perkecambahan  benih  (Arun  Kumar et  al. ,  2005;
Cheruvatur et  al .,  2013b).  Oleh  karena  itu, pengembangan  struktur  (matriks)  kapsul  yang sesuai  sangat  penting  dalam  pembuatan  benih sintetik.    Penelitian  ini  dilakukan  untuk  meng- enkapsulasi  embrio  somatik  teh  klon  unggul GMB  9  menggunakan  alginat  dan  CaCl 2 serta mengevaluasi  sifat  kapsul  dan  pengaruhnya terhadap  perkecambahan  embrio  somatik  tanaman teh.

## Bahan dan Metode

## Bahan tanam dan kondisi kultur
Bahan  tanam  yang  digunakan  adalah  embrio somatik teh klon GMB 9 pada tahap perkembangan kotiledon (Gambar 1A). Prosedur untuk menghasil- kan  embrio  somatik  teh  mengikuti  protokol  oleh Tahardi et  al. (2000).  Embrio  somatik  tunggal dengan  panjang    4-5  mm  diperoleh  dari  kultur proliferasi  embrio  pada  umur  2-3  minggu  setelah subkultur dan digunakan langsung tanpa perlakuan sterilisasi.  Media  dengan  alginat,  larutan  CaCl 2 , pipet,  cawan  Petri  dan  air  disterilisasi  dalam autoklaf  pada  suhu  121 C  dan  tekanan  1,0  kg/cm 2 selama  20  menit    sebelum  digunakan.    Seluruh kultur  diletakkan  pada  ruang  kultur  dengan intensitas  cahaya  20 mol  foton/m 2 /s  dengan fotoperiode 12 jam dan suhu sekitar 25 C.
Pengaruh  alginat  dan  CaCl 2 terhadap  sifat  fisik kapsul
Medium WP (Lloyd & McCown, 1981) dibuat dengan  sukrosa  20  g/L  dan  ditambahkan  natrium alginat dengan beberapa konsentrasi yakni 1, 2, dan 3%  (w/v).    Kapsul  tanpa  embrio  somatik  dibuat dengan  memipet  larutan  campuran  alginat  dan medium tersebut kemudian dijatuhkan ke dalam
larutan  CaCl 2 50  mM  atau  100  mM  selama  20 menit.    Kapsul  yang  terbentuk  dibilas  dengan  air steril selama 20 menit.
Sifat  fisik  yang  meliputi  tingkat  kekerasan, ukuran, kebundaran, bobot segar dan kandungan air dari  matriks  kapsul  tanpa  embrio  yang  dihasilkan dari  masing-masing  perlakuan  diamati  dengan ulangan  sebanyak  sepuluh.  Tingkat  kekerasan ( hardness )  kapsul  diukur  dengan  alat texture analyzer menggunakan  probe  TA4/100  diameter 1  cm,  tekanan  30%,  dan  kecepatan  0,5  mm/s. Angka  kekerasan  kapsul  adalah  tekanan  maksimal ( peak  force )  terukur  yang  dikonversikan  ke  satuan tekanan  F  Newton.  Ukuran  kapsul  adalah rata-rata dari  diameter  tertinggi  dan  terendah  dari  kapsul. Perbandingan  antara  diameter  tertinggi  dan terendah mencerminkan tingkat kebundaran ( roundness )  dari  kapsul  yang  terbentuk,  dengan angka  satu  menunjukkan  tingkat  kebundaran  yang sempurna,  semakin  tinggi  angkanya  bentuk  benih sintetik semakin lonjong. Untuk menetapkan bobot segar,  kapsul  segar  diletakkan  pada  kertas  filter sebelum  ditimbang  guna  menghilangkan  air  yang menempel  pada  permukaan  kapsul.  Bobot  kering diperoleh  setelah  kapsul  dikeringkan  dalam  oven pada  suhu  60°C  selama  24  jam.  Kandungan  air adalah  bobot  segar  dikurangi  bobot  kering  dibagi bobot  segar  dan  dikalikan  dengan  100%.  Untuk mengukur  tingkat  kebocoran  ( leaking ),  diukur bobot  segar  dikurangi  bobot  segar  benih  setelah disimpan  selama  dua  minggu  dalam  keadaan tertutup  rapat  dibagi  bobot  segar  dan  dikalikan dengan 100%.

## Enkapsulasi dengan alginat dan CaCl 2
Medium  WP  dibuat  seperti  di  atas  dengan natrium  alginat  1,  2,  3%  (w/v).    Embrio  somatik fase  kotiledon  (Gambar  1A)  dicampur  ke  dalam medium dan diambil dengan pipet (diameter dalam 5,5  mm)  kemudian  dijatuhkan  ke  dalam  larutan CaCl 2 (50  atau  100  mM)  selama  20  menit.  Kapsul yang  mengandung  embrio  (benih  sintetik)  dibilas dengan  air  steril  selama  20  menit.    Benih  tersebut selanjutnya  dikultur  pada  medium  padat  WP  di cawan  Petri  untuk  uji  perkecambahan.  Dalam medium  perkecambahan  ditambahkan  sukrosa 20 g/L dan Gelrite 2 g/L. Tiap perlakuan terdiri dari 10  embrio  dalam  satu  cawan  Petri  dengan  delapan ulangan.  Embrio  somatik  tanpa  enkapsulasi digunakan sebagai kontrol. Perkecambahan embrio diamati  setiap  minggu  sampai  dengan  umur  enam minggu.  Embrio  somatik  dinyatakan  berkecambah apabila  telah  mempunyai  akar  atau  tunas  dengan panjang lebih dari 2 mm (Gambar 1C). Pembentuk- an  embrio  sekunder  pada  benih  sintetik  juga diamati  setiap  minggu  sampai  dengan  umur  enam minggu.

## Analisis statistik
Data  pengamatan  dianalisis  dua-arah  dengan sidik  ragam  ( analysis  of  variance =  ANOVA) menggunakan program SPSS Statistics 22. Apabila hasil analisis menunjukkan  adanya perbedaan yang nyata  maka  perbedaan  antara  rerata  perlakuan ditentukan menurut uji jarak berganda Duncan pada P=0,05.  Korelasi  antar  parameter  ditentukan menurut uji korelasi Pearson.

## Hasil dan Pembahasan

## Sifat fisik kapsul
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  natrium alginat 1, 2, dan 3% dapat membentuk kapsul yang cukup  padat  ( rigid )  pada  larutan  CaCl 2 100  mM (Gambar  1B).  Pada  larutan  CaCl 2 50  mM,  kapsul yang  terbentuk  lunak,  mudah  pecah  dan  lengket satu  sama lainnya,  baik  dengan alginat  konsentrasi 1%  maupun  2%.  Sifat  fisik  matriks  kapsul  tanpa embrio  somatik  memperlihatkan  bahwa  kekerasan kapsul  tertinggi  diperoleh  dengan  konsentrasi alginat  3%  pada  larutan  CaCl 2 50  mM  dan  100 mM.  Jika konsentrasi alginat 1%, baik pada larutan CaCl 2 50  mM  maupun  100  mM,  kapsul  yang  ter- bentuk  memiliki  tingkat  kekerasan  yang  rendah (Tabel  1).  Tingkat  kekerasan  dapat  mempengaruhi daya  kecambah  benih.  Namun, kapsul  yang terlalu lunak  juga  tidak  diharapkan  karena  menyebabkan benih  sintetik  mudah  hancur  atau  mengalami
kebocoran.  Analisis  korelasi  menunjukkan  bahwa tingkat  kekerasan  berbanding  terbalik  dengan tingkat  kebocoran  kapsul.  Berdasarkan  hasil penelitian, kapsul yang memiliki tingkat kekerasan yang rendah memiliki tingkat kebocoran yang lebih tinggi dibandingkan kapsul yang lebih keras (Tabel 1). Tingkat kebocoran juga dipengaruhi konsentrasi alginat.  Konsentrasi  alginat  1%  memiliki  rata-rata tingkat kebocoran tertinggi yaitu 84,0% pada CaCl 2 50 mM dan 87,3% pada CaCl 2 100 mM. Sedangkan konsentrasi alginat 3% memiliki rata-rata kebocor- an  terendah  yaitu  20,7%  pada  CaCl 2 50  mM  dan 28,0%  pada  CaCl 2 100  mM.  Kebocoran  terjadi karena  kapsul  yang  terbentuk  tidak  sepenuhnya padat  atau  mengalami  kerusakan  sehingga  bocor. Kebocoran  menyebabkan  zat  hara  yang  ditambah- kan  tidak  sepenuhnya  dapat  digunakan  oleh  benih, melainkan terlepas ke luar kapsul.
Prinsip  dari  enkapsulasi  adalah  terjadinya pertukaran  ion  Na + dari  Na-alginat  dengan  Ca + ketika  diteteskan  ke  dalam  larutan  CaCl 2 ,  mem- bentuk  gel  Ca-alginat.  Banyaknya  ion  Na + yang bertukar  dengan  ion  Ca + menentukan  tingkat kekerasan  kapsul.  Kapsul yang terbentuk diharap- kan  cukup  padat  agar  tidak  mudah  terjadi kebocoran.  Beberapa  penelitian  menggunakan konsentrasi  alginat  3% dan  larutan  CaCl 2 100 mM untuk membentuk benih sintetik yang bulat, padat, dan mampu  melindungi  benih  (Arun  Kumar et  al. , 2005;  Roostika et  al. ,  2012;  Cheruvatur et  al. , 2013a).
Gambar  1.  Benih  sintetik  teh.  (A)  embrio  somatik  fase  kotiledon,  (B)  embrio  somatik  yang  telah dienkapsulasi,  (C)  benih  sintetik  sedang  berkecambah,  dan (D)  pembentukan  embrio  sekunder. Bar = 5 mm.
Figure  1.  Synthetic  seed  of  tea.  (A)  somatic  embryos  at  cotyledonary  stage,  (B)  encapsulated  somatic embryos, (C) a germinating synthetic seed, and (D) formation of secondary embryos. Bar = 5 mm.
A B C D
Pengaruh matriks kapsul terhadap perkecambahan...... (Sumaryono &  Saptari)
Konsentrasi  natrium  alginat  3%  baik  pada larutan CaCl 2 50 mM maupun 100 mM membentuk kapsul  dengan  rata-rata  diameter  terbesar,  sedang- kan  dengan  alginat  konsentrasi  1%  kapsul  yang terbentuk  rata-rata  memiliki  diameter  lebih  kecil (Tabel  1).  Konsentrasi  alginat  juga  mempengaruhi bobot  segar  kapsul.  Bobot  segar  kapsul  terbesar diperoleh  dengan  konsentrasi  alginat  3%  pada larutan  CaCl 2 50  mM,  kemudian  alginat  3%  pada larutan  CaCl 2 100  mM.  Kapsul  yang  dibentuk dengan  alginat  konsentrasi  2  dan  3%  pada  larutan CaCl 2 100  mM  memiliki  tingkat  kebundaran  yang paling  baik,  yaitu  1,0  (Tabel  1).  Sedangkan  pada larutan  CaCl 2 50  mM,  kapsul  yang  terbentuk cenderung lonjong dan mudah hancur. Kapsul yang mudah  hancur  kemungkinan  juga  disebabkan tingginya  kadar  air  matriks  kapsul.  Berdasarkan Tabel  1,  kapsul  yang  dibentuk  pada  larutan  CaCl 2 50  mM  memiliki  tingkat  kadar  air  tertinggi. Semakin  tinggi  kadar  air  kapsul,  kapsul  yang terbentuk menjadi mudah hancur. Namun, kadar air yang  mencukupi  diperlukan  benih  untuk  dapat berkecambah, juga untuk mempermudah penyerap- an  hara  maupun  zat  pengatur  tumbuh  yang ditambahkan pada matriks kapsul.
Pengaruh  alginat  dan  CaCl 2 terhadap  daya kecambah  benih  dan pembentukan embrio  somatik sekunder
Embrio  somatik  tunggal  fase  kotiledon (Gambar  1A)  telah  berhasil  dienkapsulasi  meng- gunakan  alginat  yang  dicelupkan  dalam  larutan CaCl 2 membentuk  benih  sintetik  (Gambar  1B). Embrio somatik teh sangat beragam dalam ukuran, fase perkembangan, warna dan bentuk  (Sumaryono et al ., 2001) sehingga menyulitkan dalam produksi benih  sintetik.    Ukuran  embrio  somatik  teh  harus
lebih  kecil  dari  5  mm,  dan  embrio  fase  torpedo merupakan  fase  perkembangan  terbaik  untuk produksi  benih  sintetik  seperti  yang  dinyatakan juga oleh Baskaran et al. (2015).
Benih  sintetik  rata-rata  mulai  berkecambah pada umur satu minggu dan dua minggu. Selanjut- nya  persentase  daya  kecambah  mulai  meningkat hingga  mencapai  nilai  tertinggi  pada  umur  lima minggu,  dan  enam  minggu  pada  perlakuan konsentrasi  alginat  1%  dengan  larutan  CaCl 2 50 mM dan 100 mM (Gambar 2). Daya kecambah tertinggi  yaitu  pada  perlakuan  enkapsulasi  alginat 2%  dan  CaCl 2 50  mM.  Perlakuan  enkapsulasi alginat  2%  dan  CaCl 2 50  mM  secara  signifikan meningkatkan daya kecambah dibandingkan embrio  somatik  tanpa  enkapsulasi.  Sedangkan enkapsulasi  dengan  alginat  1%  dalam  CaCl 2 50  mM  dan  alginat  3%  dalam  CaCl 2 100  mM secara  signifikan  menurunkan  daya  kecambah dibandingkan benih tanpa enkapsulasi (Gambar 2). Perbandingan  konsentrasi  alginat  dengan  CaCl 2 yang  tepat  membentuk  matriks  kapsul  dengan struktur yang baik untuk melindungi benih, namun tidak  terlalu  padat  sehingga  menghambat  benih untuk  berkecambah  (Cheruvatur et  al. ,  2013a). Konsentrasi  alginat  dan  CaCl 2 yang  terlalu  rendah yaitu  1%  alginat  dan  CaCl 2 50  mM  tidak  mampu membentuk  kapsul  yang  melindungi  benih,  tingkat kebocoran  tinggi  sehingga  perkecambahan  benih tidak  maksimal.  Fungsi  kapsul  itu  sendiri  adalah sebagai sumber nutrisi untuk membantu daya hidup dan pertumbuhan benih (Arun Kumar et al ., 2005). Konsentrasi  alginat  dan  CaCl 2 yang  terlalu  tinggi, yaitu  3%  alginat  dan  CaCl 2 100  mM  membentuk kapsul yang terlalu keras sehingga benih sulit untuk tumbuh menembus dinding kapsul.
Tabel 1. Pengaruh alginat dan CaCl 2 terhadap sifat fisik kapsul yang dibuat tanpa embrio somatik.
Table 1. Effect of alginate and CaCl 2 on physical characteristics of the capsules formed without somatic embryos.
Perlakuan Treatment Kekerasan Hardness F(N) Kebocoran Leaking (%) Diameter Diameter (mm) Kebundaran Roundness Bobot segar Fresh weight (mg) Kadar air Water content (%) Alg1 CaCl 2 50* 27,7 c** 84,0 a 5,5 c 1,3 b 79,5 e 98,9 a Alg2 CaCl 2 50 46,6 b 53,2 b 5,4 c 1,6 a 96,9 d 98,6 a Alg3 CaCl 2 50 53,3 a 20,7 d 7,1 a 1,2 b 193,4 a 98,8 a Alg1 CaCl 2 100 31,3 c 87,3 a 4,9 d 1,2 b 62,6 f 98,2 b Alg2 CaCl 2 100 48,2 b 38,7 c 6,3 b 1,0 c 120,9 c 98,0 bc Alg3 CaCl 2 100 53,2 a 28,0 cd 6,7 a 1,0 c 149,6 b 97,7 c
*Alg1 CaCl 2 50 menunjukkan konsentrasi alginat 1% (w/v) dan CaCl 2 50 mM. Alg1 CaCl 2 50 represents 1% (w/v) alginate and 50 mM CaCl 2 .
**Angka rata-rata dalam kolom yang sama yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata menurut uji jarak berganda Duncan pada P = 0,05. ( Means in the same column followed by the same letters are not significantly different according to Duncan’s multiple range test at P = 0.05 ) .
Pada  medium  perkecambahan  WP,  benih sintetik  teh  juga  membentuk  embrio  somatik sekunder  (Gambar  1D).  Embrio  sekunder  pada umumnya  terbentuk  dua  minggu  setelah  kultur. Pada umur  enam  minggu, persentase  pembentukan embrio  sekunder  berkisar    90%  -  96%  (Tabel  2). Hal ini memperlihatkan bahwa sebagian besar dari embrio  somatik  teh  membentuk  embrio  sekunder tanpa  terjadi  perkecambahan.  Persentase  pem- bentukan embrio somatik sekunder pada embrio
yang  dienkapsulasi  sama  dengan  yang  tanpa enkapsulasi.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  pem- bungkusan  embrio  somatik  dengan  matriks  kapsul tidak dapat menurunkan terjadinya embrio sekunder.  Pembentukan  embrio  somatik  sekunder merupakan  fenomena  umum  yang  dijumpai  pada embriogenesis  somatik  tanaman  teh    (Sumaryono et  al .,  2001).    Hal  ini  menghambat  diferensiasi embrio  somatik  menjadi  kecambah,  namun  me- nguntungkan dalam hal proliferasi embrio somatik.
Gambar 2.  Perkecambahan benih sintetik teh dengan berbagai konsentrasi alginat dan CaCl 2 selama periode kultur  enam  minggu.    Catatan:  Ktrl  =  kontrol,  embrio  tanpa  enkapsulasi;  1-50  menunjukkan alginat 1% dan CaCl 2 50 mM.
Figure 2.  Germination of synthetic seed of tea with different concentrations of alginate and CaCl 2 over six week  culture  period.   Note:  Ktrl  =  control,  embryos  without  encapsulation;  1-50  represents  1% alginate and  50 mM CaCl 2 .
Tabel 2. Pengaruh alginat dan CaCl 2 terhadap pembentukan embrio sekunder setelah enam minggu dalam kultur.
Table 2.  Effect of alginate and CaCl 2 on the formation of secondary embryos after six weeks in culture.
Perlakuan Treatment Pembentukan embrio sekunder Secondary embryo formation (%) Kontrol ( Naked embryo ) 96,3 * Alg1 CaCl 2 50 92,5 Alg1 CaCl 2 100 97,5 Alg2 CaCl 2 50 92,5 Alg2 CaCl 2 100 91,2 Alg3 CaCl 2 50 93,8 Alg3 CaCl 2 100 90,0
* Nilai rata-rata pada kolom tidak berbeda nyata. Means in the column are not significantly different.
0 5 10 15 20 25 0 1 2 3 4 5 6 D ay a kec am bah (% ) G er m inat ion rat e (% ) Periode kultur (minggu) / Culture period  (week ) Kontrol 1.50 1.100 2.50 2.100 3.50
3.100
Pengaruh matriks kapsul terhadap perkecambahan...... (Sumaryono &  Saptari)

## Kesimpulan
Enkapsulasi  embrio  somatik  teh  dengan  Na alginat 2% pada larutan CaCl 2 50 mM menghasilkan benih  sintetik  yang  cukup  padat  dan  mampu meningkatkan  daya  perkecambahan  dibandingkan dengan embrio somatik tanpa enkapsulasi. Enkapsulasi  dengan  Na  alginat  1%  pada  larutan CaCl 2 50  mM  tidak  menghasilkan  benih  sintetik yang  bagus  dan  bulat,  sedangkan  enkapsulasi dengan  Na alginat  3%  pada  larutan  CaCl 2 100 mM menghasilkan  benih  sintetik  yang  bulat  namun terlalu  keras  sehingga  menurunkan  daya  perke- cambahan embrio somatik. Lebih dari 90% embrio somatik  teh  tanpa  dan  dengan  enkapsulasi  yang dikultur  pada  medium  WP  padat  membentuk embrio somatik sekunder.

## Ucapan Terima Kasih
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada Balai  Besar  Pascapanen,  Badan  Litbang  Pertanian atas bantuannya dalam pengukuran tingkat kekerasan  benih  sintetik  serta  kepada  Sdri.  Rani Puspita Sari dan Siti Wahyu atas bantuan teknisnya.

## Daftar Pustaka
Akula A &  C  Akula  (2005) Protocol  for  somatic embryogenesis  in  woody  plants. Forestry  Sci 77, 181-190.
Arun Kumar MB, V Vakeswaran & V Krishnasamy (2005)  Enhancement  of  synthetic  seed conversion  to  seedlings  in  hybrid  rice. Plant Cell Tiss Org Cult 81, 97-100.
Baskaran  P,  A  Kumari  &  JV  Staden  (2015) Embryogenesis and synthetic seed production in Mondia  whitei.  Plant  Cell  Tiss  Org  Cult 121(1), 205-214.
Cheruvatur MK, N Najeeb & TD Thomas (2013a).
In  vitro  propagation  and  conservation  of Indian  sarsaparilla, Hemidesmus  indicus LR. Br.  through  somatic  embryogenesis  and synthetic  seed  production. Acta  Physiol  Plant 35, 771-779.
Cheruvatur MK, GK Kumar & TD Thomas (2013b)
Somatic  embryogenesis  and  synthetic  seed production in Rhinacanthus nasutus (L.) Kurz. Plant Cell Tiss Org Cult 113, 63-71.
Haque  SKM  &  B  Gosh  (2014)  Somatic embryogenesis and synthetic seed production- a  biotechnological  approach  for  true-to-type propagation  and in  vitro conservation  of  an ornamental bulbaceous plant Drimiopsis kirkii Baker. Appl  Biochem  Biotechnol 177,  4013- 4024.
Latif  Z,  Idrees,  A  Nasir  &  S  Riazuddin  (2007) Indigenous  production  of  synthetic  seeds  in Daucus carota. Pak J Bot 39(3), 849-855.
Lloyd  G  &  B  McCown    (1981)  Commercially feasible micropropagation of mountain laurel, Kalmia  latifolia ,  by  use  of  shoot-tip  culture. Comb Proc Intl Plant Prop Soc 30, 421-427.
Nor  Asmah  H,  HN  Hasida,  NM  Zaimah,  NA Noraliza  &  NN  Salmi  (2011)  Synthetic  seed technology  for encapsulation and regrowth of in  vitro- derived Acacia hybrid  shoot  and axillary  buds. Afr  J  Biotechnol 10(40),  7820- 7824.
Roostika  I,  R  Purnamaningsih,  Y  Supriati, I  Mariska,  N  Khumaida  &  GA  Wattimena. (2012)  Pembentukan  benih  sintetik  tanaman nenas. J Hort 22(4), 316-326. Seran TH, K
Hirimburegama &
MTK  Gunasekare  (2005)  Encapsulation  of embryonic  axes  of Camellia  sinensis (L.)  O. Kuntze  (tea)  and  subsequent in  vitro germination. J  Hort  Sci  Biotechnol 80,  154- 158.
Siong  PK,  S  Mohajer  &  RM  Taha  (2012) Production  of  artificial  seeds  derived  from encapsulated in  vitro micro  shoots  of cauliflower, Brassica  oleracea var. botrytis. Rom Biotechnol Lett 17(4), 7549-7556.
Sumaryono,  I  Riyadi  &  JS  Tahardi  (2001) Morphological variations during the development  of  somatic  embryos  of  tea ( Camellia  sinensis L.) in  vitro.  Menara Perkebunan 69(2), 46-57.
Tahardi  JS,  T  Raisawati,  I  Riyadi  &  WA  Dodd (2000)    Direct  somatic  embryogenesis  and plant  regeneration  in  tea  by  temporary  liquid immersion. Menara Perkebunan 68(1), 1-9.