Ekologia : Jurnal Ilmiah Ilmu Dasar dan Lingkungan Hidup
Volume 19, Nomor 1, April 2019, Hal.27-33
https://journal.unpak.ac.id/index.php/ekologia
e-ISSN: - ; p-ISSN: 1411-9447

## AKTIVITAS EKSTRAK ETANOL 96% KULIT BIJI MELINJO
(Gnetum gnemon) SEBAGAI ANTIBAKTERI Salmonella enteritidis
Ade Kusmiati 1 , Tri Saptari Haryani 1 , Triastinurmiatiningsih 1*
1 Program Studi Biologi FMIPA Universitas Pakuan, Bogor * e-mail: triastinur@gmail.com
diterima: 20 Februari 2019; direvisi: 2 Maret 2019; disetujui: 30 Maret 2019

## ABSTRAK
Kontaminasi Salmonella  enteritidis pada  daging  ayam  menyebabkan  daging  ayam  cepat mengalami  pembusukan.  Penggunaan  pengawet  kimia  sangat  membahayakan,  maka  dari  itu penggunaan bahan alami sangat dianjurkan karena lebih aman dikonsumsi bagi manusia. Salah satunya  adalah  menggunakan  kulit  biji  melinjo  yang  memiliki  daya  antibakteri.  Penelitian  ini berujuan  dari  untuk  mengetahui  aktivitas  ekstrak  kulit  biji  melinjo  dalam  menghambat pertumbuhan Salmonella enteritidis yang dapat digunakan sebagai pengawet alami pada daging ayam. Tahap pertama yang dilakukan pada penelitian ini adalah dengan mengekstrak kulit biji melinjo menggunakan etanol 96% dengan metode maserasi selama 6 hari. Uji aktivitas ekstrak kulit  biji  melnjo  terhadap Salmonella  enteritidis menggunakan  metode  kertas  cakram  dengan variasi perlakuan 25%, 50%, 75% dan kontrol positif tetrasiklin. Parameter yang diamati adalah pengukuran  Diameter  Daerah  Hambat  (DDH)  dan  uji  fitokimia  terhadap  ekstrak  kulit  biji melinjo. Hasil penelitian untuk pengujian Diameter Daerah Hambat (DDH) didapat konsentrasi yang  paling  efektif  yaitu  pada  konsentrasi  75%  dengan  diameter  daerah  hambat  sebesar  10,3 mm  dan  dikategorikan  mempunyai  daya  antimikroba  tingkat  sensitifitas  sedang  serta  dapat dijadikan  pengawet  alami  pada  daging  ayam.  Hasil  uji  fitokimia  menunjukkan  adanya kandungan senyawa flavonoid, tannin, saponin dan triterpenoid.
Kata Kunci: Kulit biji melinjo, Salmonella enteritidis, antibakteri
ACTIVITY of ETHANOL EXTRACT 96% SEED BARK MELINJO ( Gnetum gnemon ) AS a Salmonella enteritidis ANTIBACTERIAL

## ABSTRACT
Salmonella enteritidis contamination in chicken meat causes chicken meat to rapidly decay. The use  of  chemical  preservatives  is  very  harmful,  therefore  the  use  of  natural  materials  is recommended  because  it  is  safer  to  consume  for  humans.  One  of  them  is  using  Melinjo  seed skin  which  has  antibacterial  power.  The  purpose  of  the  study  is  to  find  out  the  activity  of Melinjo seed bark extract (Gnetum gnemon) in inhibiting the growth of Salmonella enteritidis that can be used as a natural preservative in chicken meat. The first stage of the study was by extracting  Melinjo  seed  bark  using  ethanol  96%  with  maceration  method  for  6  days.  Activity test of Melnjo seed bark extract against Salmonella enteritidis using method of disc paper with a variation  of  the  treatment  of  25%,  50%,  75%  and  tetracycline  positive  control.  The  observed parameter  is  the  measurement  of  the inhibited region Diameter (DDH)  and the phytochemical test against Melinjo seed bark extract. The research results for the testing of the area Diameter of the hhibited region obtained the most effective concentration of 75% in the diameter of the area  of  the  barrier  of  10.3  mm  and  categorized  with  antimicrobial  power  levels  of  moderate sensitivity as well as can be used as natural preservatives in chicken meat. Phytochemical test results indicate the presence of compound flavonoids, tannins, saponins and triterpenoid.
Key words: Melinjo seed skin, Salmonella enteritidis , antibacterial
Ade Kusmiati, dkk: Aktivitas Ekstrak Etanol 96% Kulit Biji Melinjo ( Gnetum gnemon ) .....

## PENDAHULUAN
Salmonella enteritidis adalah bakteri yang  tak  terpisahkan  dari  manusia  karena habitat  utamanya  berada  pada  saluran pencernaan  manusia. Salmonella  enteritidis juga merupakan penyebab terjadinya penyakit salmonellosis dan  gangguan  pada bagian saluran pencernaan atau gastroenteritis, dengan cara mengkontaminasi  telur  atau  daging  ayam yang  dikonsumsi  oleh  manusia  (Ariyanti dan  Supar,  2005).  Kontaminasi Salmonella pada  daging  ayam  menyebabkan  daging ayam  cepat  mengalami  pembusukan  karena daging ayam memiliki kadar air yang tinggi yaitu  sekitar  75%.  Selain  itu  juga  daging ayam  cepat  terkontaminasi  bakteri  pada proses pemotongan (Rahardjo, 2012). Untuk menekan  pertumbuhan  bakteri Salmonella , umunya  daging  ayam  disimpan  dengan berbagai cara seperti: pendinginan, pembekuan,  proses  termal  (pemanasan), dehidrasi (pengeringan), atau dengan pengawetan menggunakan bahan-bahan pengawet  seperti  garam,  gula,  asam,  dan berbagai  pengawet  sintetis  atau  pengawet kimia (Usmiati, 2010).
Penggunaan pengawet  kimia  seperti  formalin,  asam borat, asam salisilat, kalium klorat, kloramfenikol, dan lain-lain sangat membahayakan,  apabila  dikonsumsi  oleh manusia.  Maka  dari  itu  penggunaan  bahan alami  sangat  dianjurkan  karena  lebih  aman dikonsumsi  bagi  manusia.  Salah  satunya adalah menggunakan kulit biji melinjo yang memiliki daya antibakteri.
Tanaman  melinjo (Gnetum  gnemon) merupakan  tanaman  yang  sering  dipakai untuk  bahan  makanan,  mulai  dari  daun, bunga  maupun  biji.  Selain  itu  juga menghasilkan  senyawa  antioksidan  serta mengandung  antimikroba  alami,  artinya protein  melinjo  juga  bisa  dipakai  sebagai pengawet alami  makanan  (Mukhlisah, 2014).
Kulit  biji  melinjo  yang  berwarna merah memiliki berbagai macam komponen atau  senyawa  yang  berguna  bagi  tubuh  dan dapat  digunakan  sebagai  pewarna  makanan alami.  Komponen  atau  senyawa  di  dalam
kulit  biji  melinjo  yang  berwarna  merah adalah  fenolik,  flavonoid,  likopen,  vitamin C, dan β-karoten. Sifat dari kulit biji melinjo yang  berwarna  merah  dapat  digunakan sebagai  pewarna  alami  karena  memiliki pigmen likopen dan β-karoten  (Siregar dkk , 2009).  Pada  umumnya  daging  ayam  yang dijual  dipasar  memiliki  warna  daging  yang pucat,  maka  dari  itu  penggunaan  kulit  biji melinjo  merah  ini  dimaksudkan  agar tampilan  dari  daging  ayampun  telihat  lebih segar dan alami.

## BAHAN DAN METODE Bahan
Kulit  biji  melinjo  yang  sudah  tua (berwarna merah) segar diperoleh dari Desa Ragemanunggal  Kec.  Setu,  Bekasi.  Kulit biji  melinjo  dikeringkan  dalam  oven  pada suhu  60°C  selama  2×24  jam  kemudian digiling hingga menjadi serbuk dan disaring.
Bakteri yang dipakai dalam penelitian ini adalah kultur Salmonella enteritidis .

## Metode
Pembuatan  Ekstrak  Kulit Biji  Melinjo (Silaban, 2009)
Serbuk  kulit  melinjo  sebanyak  300  g diekstraksi  dengan  metode  maserasi  selama 6  hari  dengan  nisbah  sampel:  etanol  96% sebesar 1:10 sambil sesekali diaduk. Dengan cara  300  gr  serbuk  kulit  biji  melinjo dimaserasi  dengan  etanol  96%  sebanyak 2250  ml  selama  3×24  jam,  kemudian disaring  dengan  menggunakan  kertas  saring dan bantuan vacum flask, filtrat di tampung dalam  Erlenmeyer  (filtrat  I).  Residu  yang diperoleh  direndam  kembali  dengan  750  ml etanol  96%  selama  3x24  jam.  Kemudian hasil  rendaman  disaring  kembali  dan didapatkan  filtrat  II.  Setelah  itu  filtrat  I  dan filtrat  II  disatukan  dan  dievaporasi  dengan menggunakan rotary  evaporator pada  suhu 55˚C sampai tidak terjadi lagi pengembunan pelarut  pada  kondensor sehingga  diperoleh ekstrak kental.

## Analisis Kadar Air
Cawan  porselen  dikeringkan  menggunakan oven  pada  suhu  105°C  selama  1  jam
Ekologia : Jurnal Ilmiah Ilmu Dasar dan Lingkungan Hidup
kemudian  didinginkan  ke  dalam  desikator selama  15  menit  dan  ditimbang  bobotnya. Sampel  ditimbang  menggunakan  neraca analitik 1-2 g dan dimasukkan kedalam oven dengan  suhu  105°C  selama  3  jam. Kemudian  sampel  didinginkan  didalam desikator  selama  20  menit  dan  ditimbang bobotnya.  Rumus  %  Kadar  air  sebagai berikut:

## Persiapan Bakteri Uji
Bakteri Salmonella enteritidis disubkultur  pada  agar  miring  Nutrient  Agar (NA)  kemudian  diinkubasi  selama  24  jam pada  suhu  37°C.  Setelah  masa  inkubasi, bakteri  dipanen  dengan  cara  menambahkan aquades  steril  dan  mengkikis  permukaan agar miring dengan ose kemudian dimasukan  kedalam  tabung  dan  dijadikan sebagai  stok.  Untuk  membuat  larutan  10 -1 dibuat dengan cara bakteri diambil sebanyak 1 ml dari stock dan dicampurkan dalam 9 ml aquades steril dan dihomogenkan (pengenceran pertama). Diambil sebanyak 1 ml  dari  larutan  10 -1 dan  dilarutkan  kedalam 9 ml aquades steril dan dihomogenkan maka didapat  larutan  10 -2 (pengenceran  kedua). Diambil  kembali  1  ml  dari  larutan  10 -2 dan dilarutkan  kedalam  aquades  steril  dan dihomogenkan  maka  didapat  larutan  10 -3
(pengenceran  ketiga).  Hal  ini  dilakukan hingga pengenceran keenam (larutan 10 -6 ).

## Pembuatan Variabel Konsentrasi
Disiapkan  sampel  ekstrak  induk  100%, larutan induk  dibuat dengan mencampurkan 30  gram  ekstrak  kulit  Gnetum  gnemon  dan 30  ml  aquades  steril  kemudian  dikocok hingga  homogen.  Selanjutnya  dibuat  seri konsentrasinya  yaitu  25%,  50%,  75%  dan kontrol positif dengan menggunakan antibiotik tetrasiklin 10 ppm.
Uji Konsentrasi Hambat Minimum (KHM)
Stok bakteri  yang sudah diencerkan 10-6 dan  ekstrak  kulit  biji  melinjo  yang  dengan beberapa  konsentrasi  (10%,  15%,  20%  dan
25%)  di  tuang  kedalam  cawan  petri  steril dengan  banyaknya  bakteri  0,2  ml  dan ekstrak 1 ml. Selanjutnya dipanaskan media agar  hingga  mendidih  dan  didinginkan. Setelah  dingin  media  agar  dituang  kedalam cawan  petri  yang  sudah  berisi  bakteri  dan ekstrak  kulit  biji  melinjo  selanjutnya dihomogenkan  dan  diinkubasi  selama  1×24 jam  dengan  suhu  30°-  35°C.  Setelah  masa inkubasi  ilakukan  pengamatan  KHM  yang ditentukan  dari  tidak  adanya  pertumbuhan bakteri uji pada media agar.

## Uji Diameter Daerah Hambat (DDH)
Kertas cakram (diameter 6 mm) dimasukkan  ke  dalam  ekstrak  kulit  biji melinjo  dengan  masing-masing  konsentrasi diambil  sebanyak  2  ml,  kertas  cakram tersebut  direndam  dalam  ekstrak  kemudian disimpan  terlebih  dahulu  dipermukaan  petri steril  dan  dimasukan  kedalam  oven  dengan suhu  50°  C  selama  24  jam.  Setelah mengering  kertas  cakram  diletakkan  di  atas medium  NA  yang  telah  diinokulasi  bakteri uji  dengan  cara  tuang.  Masing-  masing sampel  uji  diinkubasi  dalam  inkubator dengan  suhu  30  -  35°C  selama  24  jam, kemudian  dihitung  zona  hambat  yang terbentuk.

## Perhitungan Rendemen
Rendemen  ekstrak  total  uji  dihitung dengan  membandingkan  berat  ekstrak  yang dihasilkan dan berat awal simplisia. Sedangkan  rendemen  serbuk  kering  kulit biji  melinjo  diuji  untuk  membandingkan berat  simplisia  dan  berat  basah  awal. Rumusnya adalah:
Uji Fitokimia a. Flavonoid Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia ditambahkan  10  ml  air  panas,  didihkan selama 10 menit dan disaring dalam keadaan panas, kedalam 5 ml filtrat ditambahkan 0,1
Bobot Ekstrak
Bobot Simplisia
Rendemen Ekstrak × 100% =
Bobot Simplisia Bobot Basah
Rendemen Serbuk × 100% = % Kadar Air = A+B-D × 100% B
Ade Kusmiati, dkk: Aktivitas Ekstrak Etanol 96% Kulit Biji Melinjo ( Gnetum gnemon ) .....
g serbuk magnesium dan 1 ml asam klorida pekat  dan  2  ml  amil  alkohol,  dikocok  dan biarkan  memisah.  Flavonoid  positif  jika terjadi warna merah, kuning dan jingga pada lapisan amil alkohol (Depkes RI, 1989).

## b. Saponin
Sebanyak 0,5  g serbuk simplisia dimasukan kedalam  tabung  reaksi,  ditambahkan  10  ml air  panas,  dinginkan  kemudian  dikocok selama  10  detik,  jika  terbentuk  busa  yang stabil  tidak  kurang  dari  10  menit  dan  tidak hilang  dengan  penambahan  1  tetes  asam klorida  2  N  menunjukkan  adanya  saponin (Depkes RI, 1989).

## c. Tanin
Sebanyak  0,5  g  serbuk  simplisia  disaring dengan  10  ml  air  suling,  filtratnya diencerkan dengan air sampai tidak berwarna.  Larutan  diambil  sebanyak  2  ml dan ditambahkan 1-2 tetes pereaksi besi (III) klorida  1%.  Jika  terjadi  warna  hijau,  biru atau kehitaman menunjukkan adanya tannin (Harborne, 1987).

## d. Triterpenoid
Asam asetat anidrat 2 ml ditambahkan pada 1  ml  ekstrak  kulit  biji  melinjo  kemudian ditambahkan  2  ml  asam  sulfat  pekat. Adanya triterpenoid ditandai dengan perubahan  warna  dari  violet  menjadi  biru atau hijau (Sumiyati, 2014).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Ekstraksi Kulit Biji Melinjo
Dari  hasil  ekstraksi  kulit  biji  melinjo diperoleh  ekstrak  cair  berwarna  merah  tua setelah  penyaringan,  kemudian  menjadi berwarna merah tua pekat setelah dievaporasi  dengan  menggunakan  rotary evaporator dengan tujuan untuk memisahkan antara pelarut  dengan senyawa aktif  yang  terkandung  di  dalam  kulit  biji melinjo. Ekstrak yang dihasilkan dari proses maserasi ditimbang massanya dan didapatkan ekstrak kental seberat 55,8 gram . Pada  penelitian  ini  digunakan  pelarut jenis  etanol  96%  karena  etanol  merupakan pelarut  organik  yang  bersifat  polar.  Kulit
biji  melinjo  selain  mengandung  komponen karotenoid,  juga  rnengandung  komponen lain  seperti  senyawa-senyawa  fenolik  dan flavonoid  yang  bersifat  polar.  Oleh  karena itu  penggunaan  pelarut  etanol  juga  dapat melarutkan sebagian besar senyawa- senyawa  fenolik  dan  flavonoid  yang terkandung dalam kulit biji melinjo (Siregar dkk,. 2009).
Kadar  air  yang  diperoleh  menunjukkan hasil  7,5%,  hasil  ini  sesuai  dengan pernyataan  dari  Depkes  RI  (2000)  bahwa penimbangan  bobot  sampel  sebelum  oven dan  setelah  pengovenan  tidak  lebih  dari 0,25%.  Faktor-faktor  yang  mempengaruhi kadar  air  yaitu  suhu  pengeringan,  waktu pengeringan dan luas permukaan bahan.
Hasil  Rendemen  Ekstrak  kulit  biji melinjo sebesar 18,6% menunjukkan keefektivan  pada  saat  ekstraksi.  Karena semakin  besar  nilai  rendemennya  maka semakin  efektif  pula  proses  ekstraksinya. Hal  ini  dipengaruhi  oleh  lamanya  ekstraksi, jenis  pelarut  yang  digunakan  sebagai penyari,  ukuran  partikel  simplisia,  metode dan  lamanya  ekstraksi.  Sedangkan  hasil rendemen serbuk menunjukan hasil 37%.
Uji Konsentrasi Hambat Minimum (KHM)  Ekstrak  Kulit  Biji Gnetum gnemon Terhadap Pertumbuhan

## Salmonella enteritidis
Pada  Gambar  1.  terlihat  bahwa  bakteri masih dapat tumbuh pada perlakuan dengan konsentrasi  ekstrak  10%,  15%  dan  20%, namun  pada  perlakuan  konsentrasi  ekstrak sebesar  25%,  pertumbuhan  bakteri  mulai menurun.  Hal  ini  terlihat  dari  pertumbuhan bakteri  yang  sangat  sedikit  dibandingkan dengan pertumbuhan bakteri pada perlakuan konsentrasi  sebesar  10%,  15%  dan  20%. Pertumbuhan bakteri mulai menurun apabila kandungan nutrisi dalam media pertumbuhan  mulai  menipis,  demikian  pula faktor  lingkungan  seperti  terkontaminasi atau  tidaknya  media  uji  dan  senyawa  aktif yang terkandung dalam ekstrak.
Hasil  pengujian  KHM  selengkapnya tersaji pada Gambar 1.
Gambar 1. KHM ekstrak kulit biji Gnetum gnemon pada konsentrasi 25%

## Uji Diameter Daerah Hambat (DDH)
Hasil Uji Diameter Daerah Hambat (DDH) tersaji pada Tabel 1.
Tabel 1. Rata-rata Diameter Daerah Hambat (DDH) Ekstrak Kulit Biji Melinjo Terhadap Salmonella enteritidis
Dari  hasil  uji  aktivitas  ekstrak  kulit melinjo terhadap bakteri Salmonella enteritidis diperoleh rata-rata DDH berturut- turut  pada  perlakuan  dengan  konsentrasi 25%  (7,4  mm),  50%  (8,6  mm),75%  (10,3 mm) dan kontrol (22,3 mm).
Dari  hasil  pengujian  ini  tampak  bahwa DDH  tertinggi  diperoleh  pada  perlakuan dengan  konsentrasi  ekstrak  sebesar  75%. Dari  tabel  diatas  terlihat  bahwa  semakin tinggi  konsentrasi  ekstrak  maka  zona hambat  yang  terbentuk  akan  semakin  besar sehingga  dapat  dikatakan  bahwa  aktivitas senyawa  aktif  dalam  ekstrak  kulit  biji melinjo  semakin  tinggi,  dan  menyebabkan pertumbuhan bakteri semakin sedikit. Dapat
dikatakan  bahwa  bakteri Salmonella  enteritidis sensitif terhadap senyawa aktif yang terkandung dalam ekstrak kulit biji melinjo.
Sensitifitas suatu bakteri dapat ditentukan pula  dari  KHM  suatu  ekstrak  terhadap pertumbuhan  bakteri  tersebut.  Dari  Gambar 1. diperoleh KHM ekstrak dalam menghambat pertumbuhan bakteri Salmonella  enteritidis yaitu  pada  perlakuan konsentrasi  ekstrak  sebesar  25%,  sementara zona  hambat  yang  terbentuk  sebesar  7,4 mm.  Dari  hasil  pengamatan  ini  dapat dikatakan bahwa konsentrasi ekstrak sebesar 25%  efektif  menghambat  pertumbuhan bakteri Salmonella enteritidis, tetapi perlakuan  dengan  ekstrak  sebesar  75% membentuk zona hambat terbesar yaitu 10,3 mm  dan  dapat  dikatagorikan  mempunyai aktivitas  antimikroba  tingkat  sensitifitas sedang.  Hal  ini  sesuai  dengan  pernyataan Prawira  (2013)  yaitu  aktivitas  antimikroba memiliki  diameter  zona  hambat  >12  mm dikategorikan  memilki  tingkat  sensitifitas tinggi, dikategorikan sensitifitas sedang jika memiliki  diameter  zona  hambat  9-12  mm, dimeter  zona  hambat  6-9  mm  dikegorikan sensitifitas rendah, sedangkan apabila diameter  zona  hambat  <6  mm  maka dikatakan resisten.
Ekstrak kulit melinjo dikatakan mempunyai  aktivitas  antimikroba  tingkat sedang  diduga  karena  kurangnya  senyawa bioaktif  yang  terkandung  dalam  ekstrak. Dari hasil pengamatan yang telah dilakukan, bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak yang  digunakan  menunjukkan  peningkatan daya  hambat  yang  lebih  besar.  Kandungan senyawa  bioaktif  yang  ada  pada  kulit melinjo  adalah  flavonoid,  tannin,  saponin dan  triterpenoid.  Menurut  Dewi  (2011) flavonoid  dan  tannin  bekerja  dengan merusak  dan  menembus  dinding  sel. Sedangkan  Saponin  dapat  meningkatkan permeabilitas  membran  sehingga  dapat menghambat  pertumbuhan  mikroba  dan bahkan menyebabkan lisis.
Selain  kurangnya  senyawa  bioaktif  yang terkandung dalam ekstrak, bakteri Salmonella  enteritidis juga  merupakan bakteri  gram  negatif  yang  memiliki  lapisan
Konsentrasi ekstrak (%) Diameter Daerah Hambat (mm) 25% 7,4 a 50% 8,6 a
75% 10,3 a Kontrol (+)
22,3 b
Ade Kusmiati, dkk: Aktivitas Ekstrak Etanol 96% Kulit Biji Melinjo ( Gnetum gnemon ) .....
lipopolisakarida pada dinding selnya, sehingga  memiliki  sistem  seleksi  terhadap zat-  zat  asing  dilingkungannya,  maka  dari itu daya serap terhadap ekstrak kulit melinjo rendah (Rahmawati dan Bintari, 2014).
Gambar 2. Uji Diameter Daya Hambat

## Ekstrak Kulit Biji Melinjo Terhadap Salmonella enteritidis

## Pengujian Fitokimia Ekstrak Kulit Biji Melinjo
Pada  tabel  2.  senyawa  yang  terkandung didalam  ekstrak  kulit  melinjo  yang  paling banyak  adalah  flavonoid  dan  tannin  dengan adanya  perubahan  warna  yang  sangat  jelas pada  saat  pengujian.  Diketahui  bahwa flavonoid  mempunyai  kecendrungan  untuk mengikat  protein,  sehingga  mengganggu proses metabolisme (Praptiwi, 2010). Sedangkan  senyawa  tanin  bekerja  dengan cara  membentuk  ikatan  yang  stabil  dengan protein sehingga terjadi koagulasi protoplasma  bakteri  (Nikham  dan  Basjir, 2012).
Dari  hasil  uji  Fitokimia  ekstrak  kulit  biji Gnetum  gnemon diperoleh  senyawa  aktif golongan  flavonoid,  saponin,  triterpenoid dan  tannin.  Diketahui  bahwa  flavonoid, saponin dan tannin memiliki sifat antibakteri.  Hal  ini  terbukti  dengan  adanya zona  hambat  yang  dibentuk  oleh  bakteri Salmonella enteritidis pada perlakuan konsentrasi  ekstrak  75%  sebesar  10,3  mm. Pengamatan  pada  flavonoid,  tannin  dan triterpenoid didasarkan pada reaksi pembentukan  warna,  sedangkan  uji  saponin berdasarkan pembentukan busa. Hasil selengkapnya pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil Identifikasi Golongan Senyawa Fitokimia Kulit Biji Melinjo Uji Fitokimia Indikasi Hasil Flavonoid Terjadi warna merah, kuning dan jingga pada lapisan amil alkohol (++) Saponin Ada busa yang bertahan ± 10 menit (stabil) dan busa tidak hilang setelah penambahan 1 tetes HCl 2N (+) Tanin Terjadi warna hijau, biru atau kehitaman (++) Triterpenoid Perubahan warna dari violet atau merah menjadi hijau (+) Keterangan: Tanda (++): Menunujukan adanya senyawa yang lebih banyak terkandung dalam ekstrak
Tanda (+)   : Menunjukan adanya kandungan senyawa yang terkandung dalam ekstrak namun hanya sedikit

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  mengenai  aktivitas  ekstrak  kulit biji melinjo sebagai penghambat pertumbuhan Salmonella  enteritidis maka dapat ditarik kesimpulan bahwa: Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM) ekstrak  kulit  biji  melinjo  yaitu  pada perlakuan  konsentrasi  25%.    Ekstrak  kulit biji  melinjo  memiliki  aktivitas  antibakteri paling tinggi terhadap Salmonella enteritidis pada  konsentrasi  75%  dengan  diameter daerah  hambat  sebesar  10,3  mm  dan dikatagorikan mempunyai  daya  antimikroba tingkat sensitifitas sedang. Hasil uji fitokimia  yang  telah  dilakukan  diperoleh senyawa  dari  golongan  flavonoid,  saponin, tannin dan triterpenoid.

## DAFTAR PUSTAKA
Ariyanti dan Supar. (2005). Deteksi Antibodi  terhadap Salmonella  enteritidis dan  Salmonella  pullorum  pada  Ayam dengan  ELISA  Menggunakan  Antigen Somatik  dan  Flagela.  Laboraturium
Ekologia : Jurnal Ilmiah Ilmu Dasar dan Lingkungan Hidup
Bakteriologi Balai besar Penelitian Veteriner. 8(3): 111-118.
Depkes RI. (1989). Materia Medika Indonesia Jilid V. Jakarta.
Depkes  RI.  (2000).  Parameter  Standar Umum  Ekstrak  Tumbuhan  Obat  cetakan pertama. Jakarta.
Dewi.  (2011).  Aktivitas  Antioksidan  dan Antimikroba  Ekstrak  Melinjo  ( Gnetum gnemon L.) Terhadap Mikroba Pembusuk. Fakultas Pertanian Universitas Sebelas Maret, Surakarta.
Harborne,  J.B.  (1987).  Metode  Fitokimia:
Penuntun  Cara  Moderen  Menganalisis
Tumbuhan, edisi kedua. Bandung: Penerbit ITB.
Mukhlisah.  (2014).  Pengaruh  Level  Ekstrak Daun  Melinjo (Gnetum  gnemon  Linn) dan  Lama  Penyimpanan  yang  Berbeda Terhadap  Kualitas  Telur  Itik,  Fakultas Peternakan Universitas Hasanudin, Makasar.
Nikham  dan  Basjir.  (2012).  Uji  Bahan
Antibakteri  dari  Buah  Mahkota  Dewa (Phaleria  macrocarpa  (Scheff)  Boerl.) Hasil  Iridasi  Gamma  dan  Antibiotik Terhadap  Bakteri  Patogen.  Prosiding Pertemuan  Ilmiah  Ilmu  Pengetahuan  dan Teknologi Bahan.
Prawira. (2013). Daya Hambat Dekok Daun
Kersen (Muntingia calabura L.) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus Penyebab Penyakit  Masitis  pada  Sapi  Merah. Fakultas Peternakan Universitas Brawijaya. Praptiwi.  (2010).  Uji  Aktivitas  Antibakteri
Ekstrak  Kulit  Buah  Manggis (Garcinia
mangostana Linn) . Balai Besar Penelitian Veteriner. Bogor. Vol. XX(2).
Rahardjo.  (2012).  Efektivitas  Jeruk  Nipis dalam  Menurunkan  Bakteri Salmonella dan  Escherchia  coli pada  Karkas  Ayam Broiler.  Universitas  Jenderal  Sudirman. 2(3).
Rahmawati  dan  Bintari.  (2014).  Studi Aktivitas Antibakteri Sari Daun Binahong (Anredera cordifolia)
Terhadap  Pertumbuhan  Bacillus  cereus dan  Salmonella  enteritidis.  Fakultas MIPA,  Universitas  Negeri  Semarang. Unnes  Journal  of  Life  Science  3(2).
(2Juli014).
Silaban.  (2009).  Skrining  Fitokimia  dan  Uji
Aktivitas  Antibakteri  dari  Kulit  Buah Sentul (Sandoricun Koetjape (Burn.f.)Merr) Terhadap
Beberapa Bakteri Secara In vitro. Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara. Medan.
Siregar,  Cornelia,  Ermiziar  dan  Raskita. (2009).  Studi  Kandungan  Karotenoid, Vitamin  C,  dan  Aktivitas  Antioksidan Kulit  Melinjo (Gnetum  gnemon  L) . Jurusan  Teknologi  Universitas  Pelita Harapan, Tanggerang. Banten.
Sumiyati. (2014). Efektivitas Ekstrak Padina  australis sebagai  antibakteri E.Coli penyebab penyakit diare. Fakultas Matematika dan  Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Pakuan. Bogor.
Usmiati.  (2010).  Pengawetan  Daging  Segar dan  Olahan.  Balai  Besar  Penelitian  dan Pengembangan  Pascapanen  Pertanian Kampus Penelitian Pertanian. Bogor.