## CURRENT BIOCHEMISTRY
ISSN: 2355-7877 e-ISSN: 2355-7931 Journal homepage: http://journal.ipb.ac.id/index.php/cbj Journal E-mail: current.biochemistry@gmail.com

## Potency of Bioactive Compounds in Indramayu Mango Peel Waste to Inhibit ACE2
(Potensi Senyawa Bioaktif pada Limbah Kulit Mangga Indramayu dalam Menghambat ACE2)
Mustika Luthfia 1 *, Assifah Eryandini 1 , Deki Geraldi 1 , Chelsy Narita 2 , Choirunnisa Miftahul Jannah 2 , Laksmi Ambarsari 1
1 Department of Biochemistry, IPB University, Bogor, 16680, Indonesia 2 Department of Biology, IPB University, Bogor, 16680, Indonesia
Received: 20 October 2021 ; Accepted: 2 December 2021
Corresponding author : Mustika Luthfia, Depatemen Biokimia IPB: e-mail: mustika_luthfia@apps.ipb.ac.id

## ABSTRACT
It  was  reported  that  mango  peel  contains  bioactive  compounds—especially  phenolic—threefold higher  than  the  flesh.  This  underlies  the  present  research  that  aims  to  identify  bioactive  compounds  from indramayu mango peel which have the potential as ACE2 inhibitors. The study was initiated by extracting mango peel simplicia using aquadest, followed by phytochemical screening, and identification of compound content by LC-MS. The extraction process resulted in 21.3% of yield. The results of phytochemical screening showed that secondary metabolites in the form of alkaloids, flavonoids, saponins, and tannins were identified in  the  mango  peel.  At  the  same  time,  the  LC-MS  fragmentation  resulted  in  40  compounds  based  on  the largest  sample  area.  The  results  from  fragmentation  were  subjected  to  Lipinski  bioavailability  prediction and ADMET test which resulted in 10 potential compounds. Molecular docking was performed on the ACE2 receptor with 10 sample ligands and 1 comparison ligand using YASARA Structure. All of the ligand samples (from  Lipinski  and  ADMET  test)  showed  higher  free  energy  than  comparison  ligand,  chloroquine. Mangiferin is a typical  mango  compound  identified  in  LC-MS, had inhibitory  activity  against  ACE2.  Two- dimensional  visualization  using  Discovery  Studio  showed  that  mangiferin  interacts  with  the  receptor  via hydrogen  bond,  hydrogen  carbon  bond  and  phi-anion  interactions  at  three  amino  acid  residues  (Thr371, Glu375, Glu402) on the active site of ACE2.
Keywords: ACE2, bioactive compound, mango peel, mangiferin, waste

## ABSTRAK
Kulit  mangga  dilaporkan  mengandung  senyawa  bioaktif  dengan  kandungan  fenolik  tiga  kali  lebih tinggi  dibandingkan  daging  buahnya.  Hal  ini  mendasari  penelitian  ini  yang  bertujuan  mengidentifikasi senyawa  bioaktif  kulit  mangga  indramayu  yang  berpotensi  sebagai  inhibitor  ACE2.  Penelitian  diawali dengan melakukan ekstraksi terhadap simplisia kulit mangga menggunakan akuades, kemudian dilanjutkan penapisan fitokimia, dan identifikasi kandungan senyawa dengan LC-MS. Ekstraksi menghasilkan rendemen sebesar  21.3%.  Hasil  penapisan  fitokimia  menunjukkan  kandungan  metabolit  sekunder  berupa  alkaloid, flavonoid,  saponin,  dan tanin  yang  teridentifikasi  pada  kulit  mangga. Sementara  hasil fragmentasi  LC-MS menunjukkan  adanya  40  senyawa  berdasarkan  luas  area  sampel  terbesar.  Terhadap  senyawa  hasil fragmentasi  dilakukan  uji  prediksi  bioavailabilitas  Lipinski  dan  Uji  ADMET  dan  diperoleh  10  senyawa potensial.  Penambatan  molekuler  dilakukan  terhadap  reseptor  ACE2  dengan  10  ligan  uji  dan  1  ligan
pembanding menggunakan YASARA Structure. Semua ligan uji (dari uji Lipinski dan ADMET) menghasilkan energi ikatan yang lebih besar dari senyawa pembanding chloroquine. Mangiferin merupakan senyawa khas mangga yang teridentifikasi pada LC-MS memiliki aktivitas inhibisi terhadap ACE2. Visualisasi dua dimensi Discovery Studio, memperlihatkan mangiferin berinteraksi dengan reseptor melalui ikatan hidrogen, ikatan karbon hidrogen dan interaksi phi-anion pada tiga residu asam amino (Thr371, Glu375, dan Glu402) pada sisi aktif ACE2.
Kata kunci : ACE2, kulit mangga, limbah, mangiferin, senyawa bioaktif

## 1. PENDAHULUAN
Coronavirus  disease  2019 (Covid-19) merupakan penyakit pneumonia yang disebabkan oleh virus Severe Acute
Respiratory Syndrome Corona Virus-2
(SARS-CoV-2).  Kapasitas  transmisi  SARS- CoV-2  lebih  cepat  dibandingkan  dengan SARS-CoV dan MERS-CoV (Gao et al. 2020; Zheng et  al .  2020).  Menurut  WHO  (2021), kasus  Covid-19  per  2  September  2021  telah terkonfirmasi  pada  223  negara  dengan  jumlah kasus  sebanyak  218.205.951  jiwa.  Sementara total kasus positif Covid-19 di Indonesia per 2 September  2021  tercatat  telah  mencapai 4.100.138 jiwa (KPCPEN 2021).
SARS-CoV-2 menyerang sel-sel pernapasan  yang  diawali  dengan  adanya  fusi antara  membran  virus  dengan  membran plasma  pada  sel.  Glikoprotein spike pada selubung  ( envelope )  virus  berikatan  dengan reseptor  sel, angiotensin  converting-enzyme 2 (ACE2).  SARS-CoV-2  mengikat  reseptor ACE2  dengan  afinitas  10  kali  lebih  tinggi dibandingkan  SARS-CoV  (Atmojo  et  al. 2020). ACE2 adalah protein membran pada sel alveolus  yang  berperan  sebagai  pintu  masuk virus  ke dalam tubuh  manusia (Hasanah et  al . 2020). Salah satu upaya pencegahan Covid-19 ialah  dengan  menghambat  enzim  ACE2  yang akan  berikatan  dengan  virus  menggunakan senyawa bioaktif pada kulit mangga.
Mangga ( Mangifera indica L.) merupakan  hortikultura  Indonesia  dengan jumlah  produksi  tertinggi  pada  tahun  2020, yakni  mencapai  2.90  juta  ton  (BPS  2021). Salah  satu  varietas  mangga  ialah  mangga indramayu, yang setiap tahun mampu
memproduksi  buah  hingga  400  kg/pohon (Rasmikayati  et  al.  2020).  Mangga  indramayu merupakan  jenis  mangga yang  banyak digunakan di bidang industri. Namun sayangnya, hanya dimanfaatkan daging buahnya  saja,  sedangkan  kulit  buahnya  jarang dimanfaatkan  dan  hanya  berakhir  sebagai limbah.  Limbah  kulit  mangga  justru  memiliki kandungan  flavonoid  dan  fenolik  tiga  kali lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  daging buahnya.  Hal  ini  dibuktikan  oleh  penelitian Kim et  al .  (2010),  yang  melaporkan  bahwa kulit  mangga  matang  mengandung  kadar  total fenolik  sebesar  70.1  ±  4.61  (mg  GAE/g)  dan kadar  total  flavonoid  sebesar  21.2  ±  2.47  (mg RE/g). Hasil yang lebih besar ditemukan pada kulit  mangga  mentah,  yakni  mengandung kadar  total  fenolik  sebesar  92.6  ±  3.40  dan kadar  total  flavonoid  sebesar  22.2  ±  3.32  (mg RE/g).
Mangiferin  merupakan  senyawa  khas yang  terdapat  pada  seluruh  bagian  tanaman mangga,  baik  pada  daging  buah,  kulit  batang, daun,  bahkan  bijinya.  Mangiferin  berperan sebagai  antivirus,  antioksidan,  antikanker, antiinflamasi, antibakteri, antifungi,
antihelmintik,
analgesik, dan immunomodulator  (Imran et  al .  2017). Penelitian ini difokuskan pada analisis potensi limbah  kulit  mangga  indramayu  sebagai antivirus  SARS-CoV-2  melalui  penambatan molekuler

## 2. METODOLOGI
Penelitian ini dilakukan dengan tahapan  seperti  alur  penelitian  yang  tersaji pada Gambar 1.

## Preparasi dan Pembuatan Simplisia
Sampel  berupa  limbah  kulit  mangga indramayu  dicuci  menggunakan  air  mengalir kemudian  dikeringkan  menggunakan  oven pada suhu 50 ºC untuk mendapatkan simplisia. Setelah  kering,  simplisia  dihaluskan  dan diayak menggunakan ayakan 40 mesh. Serbuk simplisia  disimpan  dalam  wadah  bersih  dan kering (Lie 2018).

## Ekstraksi
Terhadap  serbuk  simplisia  dilakukan ekstraksi  (maserasi)  menggunakan  pelarut akuades  dengan  perbandingan  sampel:pelarut
1:10 (b/v). Hasil maserasi disaring menggunakan  corong  Buchner,  lalu  dilakukan maserasi  kembali (remaserasi) selama 24 jam. Setelah  itu,  sampel  dipekatkan  dengan rotary evaporator pada  suhu  50  ºC  sehingga  didapat ekstrak kental (modifikasi Lie 2018).

## Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  dilakukan  secara kualitatif meliputi flavonoid, alkaloid, saponin, dan tanin dengan menambahkan reagen uji lalu diamati perubahan warna yang terjadi (Sastrawan et al. 2013).
Gambar 1 Alur penelitian
Penentuan Senyawa Bioaktif dengan

## Metode LC-MS
Sebanyak  5  mg  sampel  dilarutkan dalam  5  mL  metanol,  lalu  difilter  dengan membran PTFE 0.2 µm. Sebanyak 5 µl larutan sampel  diinjeksi  pada  kolom  LC  dengan  laju alir  0.2  mL/menit.  LC-MS  yang  digunakan ialah UHPLC  Vanquish  Tandem  Q  Exactive Plus Orbitrap HRMS ThermoScientific dengan spesifikasi  kolom  Accucore  C18,  100  x  2.1 mm,  1.5  µm.  Temperatur  kolom  yang digunakan  adalah  30°C  dan  waktu  akhir  30 menit. Hasil pemisahan dengan LC dilanjutkan dengan  analisis  MS  untuk  mengidentifikasi komponen senyawa kimia. Bobot molekul dan rumus  molekul  yang  diperoleh  diidentifikasi
menggunakan ChemSpider (Modifikasi Fitrilia 2015).

## Penambatan  Molekuler
Senyawa bioaktif hasil metode LC-MS dikenakan  dua  tahap  penapisan,  yakni  uji Lipinski dan ADMET. Senyawa yang lolos uji Lipinski  dan  ADMET  diunduh  dari  PubChem dan  disimpan  untuk  digunakan  sebagai  ligan uji. Ligan uji dipreparasi dengan meminimalisasi  energi  dan  membuat gridbox pada  pusat  ligan  dengan  extension  1  Å. Reseptor  yang  digunakan  adalah  ACE2  (PDB ID:  1R42)  yang  sebelumnya  telah  diunduh melalui laman RCSB.
Sampel kulit buah mangga indramayu Ekstraksi Penentuan senyawa bioaktif dengan LC-MS Skrining fitokimia Penambatan molekuler
Reseptor  1R42  dipreparasi  dengan dihilangkannya  molekul  air  dan  molekul  lain yang  tidak  diperlukan,  ditambahkan  hidrogen polar,  lalu  muatan  ditambah  dan  ditambatkan dengan  ligan  pembanding chloroquine yang telah  dipreparasi  sebelumnya.  Penambatan dilakukan  pada  situs  aktif  yang  bertujuan untuk  validasi  sehingga  diperoleh  ukuran gridbox dengan  resolusi  terbaik. Gridbox dengan  energi  pengikatan  terbaik  digunakan dalam  proses  penambatan  ligan  uji  yang sebelumnya  telah  dipreparasi  pada  situs  aktif reseptor. Berdasarkan  hasil  penambatan, diperoleh  nilai  energi  bebas  yang  dianalisis
untuk  melihat  potensi  senyawa  bioaktif  kulit buah  mangga  Indramayu  sebagai  kandidat inhibitor ACE2 (Modifikasi Chen et al . 2014).

## 3. HASIL
Rendemen Ekstrak Kulit Mangga

## Indramayu
Hasil  rendemen  ekstrak  kulit  mangga Indramayu  menggunakan  pelarut  akuades ditunjukkan oleh Tabel 1. Sebanyak 150 gram serbuk  yang  ditambahkan  1.500  mL  pelarut menghasilkan  ekstrak  kental  berwarna  coklat gelap  sebesar  32  gram  dengan  perolehan rendemen sebanyak 21.3%.
Tabel 1 Hasil rendemen ekstrak akuades kulit mangga Indramayu Pelarut Serbuk + pelarut Perubahan warna filtrat Warna ekstrak kental Berat ekstrak kental Rendemen (%b/b) Akuades 150 gram + 1.500 mL Coklat Coklat gelap 32 gram 21.3 Tabel 2 Komponen fitokimia ekstrak kulit mangga Indramayu Metabolit sekunder Hasil pengamatan Gambar Alkaloid
++ Flavonoid ++ Saponin + Tanin +++
Keterangan: (+++) = banyak; (++) = cukup banyak; (+) = sedikit
Komponen Fitokimia Ekstrak Kulit

## Mangga Indramayu
Komponen  fitokimia  pada  ekstrak  kulit mangga  Indramayu  disajikan  pada  Tabel  2. Hasil  pengujian  menunjukkan  bahwa  ekstrak kulit mangga indramayu mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, saponin, dan tanin.
Kromatogram LC-MS Ekstrak Kulit Mangga Indramayu
Sebanyak  315  senyawa  teridentifikasi pada  kulit  buah  mangga  indramayu.  Hasil analisis  LC-MS  kemudian  ditapis  berdasarkan luas area sampel terbesar. Tabel 3 menunjukkan  40  senyawa  dengan  luas  area terbesar. Tabel 3 Hasil skrining LC-MS Senyawa bioaktif Bobot molekul (g/mol) Waktu retensi (menit) Luas area sampel N1-(3-chlorophenyl)-2-[2-(trifluoromethyl)- 4-quinolyl]hydrazine-1-carboxamide 380.07036 1.041 1.5 × 10 9 2-Hexyl-3,5-dipentylpyridine 303.29137 19.266 1.5 × 10 9 Avobenzone 310.15582 25.011 1.12 × 10 9 α-Lactose 359.14119 1.067 1.03 × 10 9 Palmitelaidic acid methyl ester 268.23912 19.516 1 × 10 9 Choline 103.09972 1.001 6.94 × 10 8 Bisthiosemi 194.04161 1.02 6.66 × 10 8 Dodecyl sulfate 266.15461 16.585 6.23 × 10 8 Citroflex A-4 402.22386 23.07 5.85 × 10 8 Methyl 3-hydroxypalmitate 286.24944 19.516 4.38 × 10 8 AL 8810 424.2051 23.072 3.93 × 10 8 2-C-methylerythritol 4-phosphate 216.03921 0.997 3.8 × 10 8 D-(+)-Galactose 226.06807 1.06 3.62 × 10 8 Gallic acid 170.02046 1.822 3.56 × 10 8 1,2-dihydroxyheptadec-16-yn-4-yl acetate 308.23375 19.4 3.53 × 10 8 16-Heptadecyne-1,2,4-triol 266.22338 16.884 3.47 × 10 8 D-(+)-Maltose 364.09691 1.01 3.19 × 10 8 4-Dodecylbenzenesulfonic acid 326.19108 18.735 2.81 × 10 8 2,4-dihydroxyheptadec-16-en-1-yl acetate 328.25984 22.311 2.71 × 10 8 6-phenylundecane 232.2181 19.517 2.63 × 10 8 Cetrimonium 283.32296 23.773 2.45 × 10 8 Civetone 250.22858 19.516 2.17 × 10 8 Gonan-3-ol 248.21289 16.884 2.04 × 10 8 1-[(3-Carboxypropyl)amino]-1-deoxy-beta- D-fructofuranose 265.11528 1.008 1.92 × 10 8 Mangiferin 422.08363 6.634 1.89 × 10 8 DL-Malic acid 134.02032 1.02 1.83 × 10 8 3,4,5-trihydroxycyclohex-1-ene-1-carboxylic acid 174.05173 1.111 1.8 × 10 8 Hexitol 182.07814 1.047 1.63 × 10 8 Dibutyl phthalate 278.15083 21.397 1.6 × 10 8 Trigonelline 137.04732 1.029 1.52 × 10 8 Betaine 117.07882 1.019 1.47 × 10 8 γ-Linolenic acid ethyl ester 312.26535 25.432 1.43 × 10 8 bis-beta-D-fructofuranose 1,2':2,3'- dianhydride 324.10457 1.031 1.28 × 10 8 Methyl stearate 298.28597 24.58 1.28 × 10 8 L-Phenylalanine 165.07845 2.154 1.20 × 10 8 Avocadyne 1-acetate 308.23375 21.27 1.18 × 10 8 1,3,4-Trihydroxy-5- oxocyclohexanecarboxylic acid 190.04683 1.022 1.18 × 10 8 α,α-Trehalose 342.11558 1.048 1.13 × 10 8 Methyl (9E)-9- octadecenoate 296.27022 22.495 1.07 × 10 8 α-glucoheptitol 212.08892 1.03 1.07 × 10 8
Penambatan Molekuler
Hasil skrining LC-MS dilanjutkan dengan  tahap  penapisan  melalui  uji  Lipinski dan  ADMET  sehingga  menghasilkan  sepuluh ligan  uji  dan  satu  ligan  pembanding. Penambatan  molekuler  pada  sepuluh  ligan  uji menunjukkan bahwa seluruh ligan uji memiliki energi ikatan lebih kecil dibandingkan  dengan  senyawa chloroquine , yang  selama  ini  digunakan  dalam  terapi pengobatan pasien Covid-19 (Tabel 4).
Selain  itu,  didapat  juga  visualisasi  dua dimensi  interaksi  senyawa  bioaktif  kulit  buah mangga  indramayu  dengan  reseptor  ACE2. Berdasarkan hasil visualisasi, senyawa mangiferin berinteraksi dengan reseptor melalui  ikatan  karbon  hidrogen  pada  Glu375, ikatan  hidrogen  pada  residu  asam  amino Thr371,  dan  interaksi  phi-anion  pada  residu asam amino Glu402 (Gambar 2).
Tabel 4 Hasil penambatan molekuler Ligan Uji Energi Bebas (kkal/mol) Ki (M) Residu Asam Amino Chloroquine ( ligan pembanding) -0.4420 0.4742 PRO146 GLU150 ASN154 Citroflex A-4 -1.9840 0.0351 ARG273  PHE274  PRO346  GLU402  GLU406 THR445 TYR515 ARG518 D-(+)-Maltose -2.2200 0.0244 GLU145 HIS345 PRO346 THR347 PHE504 16-Heptadecyne-1,2,4-triol -1.5580 0.0721 TYR510 ARG514 TYR515 Mangiferin -5.0440 2.008 × 10 -4 HIS345 PRO346 THR347 ALA348 THR371 HIS374 GLU375 GLU402 ARG 514 3,4,5-trihydroxycyclohex-1- ene-1-carboxylic acid -2.2070 0.0241 THR294 LYS363 THR365 Hexitol -0.4620 0.2774 PRO146 GLU150 Dibutyl phtalate -3.2040 4.4817 × 10 -3 PHE274  LEU370  THR371  HIS374  GLU402 GLU406 SER409 THR445 ILE446 TYR515 ARG518 Trigonelline -2.2410 0.0228 GLU145  ASN149  GLU150  ALA153  ASP269 MET270 TRP271 Bis-beta-D-fructofuranose 1,2':2,3'-dianhydride -1.7080 0.0560 GLU145 HIS345 PRO346 α-Glucoheptitol -1.9800 0.0354 HIS345 PRO346 LYS363 ASP367 ASP368 THR371
Gambar 2 Hasil visualisasi dua dimensi interaksi mangiferin dengan ACE2

## 4. PEMBAHASAN
Rendemen Ekstrak Kulit Mangga Indramayu
Rendemen ekstrak akuades kulit mangga  indramayu  adalah  21.3%  (Tabel  1). Nilai  ini  tidak  jauh  berbeda  dengan  rendemen ekstrak  etanol  kulit  mangga  varietas  apel, yakni  sebesar  21,85%  (Rahmawati  dan  Rini 2021).  Semakin  besar  nilai  rendemen  yang dihasilkan  menandakan  bahwa  proses  ektraksi yang dilakukan semakin efisien (Elygio 2017). Salah  satu  faktor  yang  mempengaruhi  nilai rendemen  tersebut  ialah  pelarut.  Akuades dipilih  sebagai  pelarut  karena  termasuk senyawa  polar  dengan  tingkat  polaritas  yang paling  tinggi.  Kelarutan  senyawa  dalam pelarut akan memengaruhi efektivitas ekstraksi sehingga  diperlukan  pemilihan  pelarut  yang sesuai (Verdiana et al . 2018).

## Skrining Fitokimia
Pengujian  komponen  fitokimia  ekstrak kulit  mangga  indramayu  dilakukan  secara kualitatif untuk menentukan metabolit sekunder yang terkandung. Komponen fitokimia  yang  diuji  antara  lain  alkaloid, flavonoid,  saponin,  dan  tanin  (Tabel  2).  Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  kulit mangga  indramayu  mengandung  keempat komponen  fitokimia  tersebut.  Hal  ini  sesuai
dengan  penelitian  Wulandari  dan  Sulistyarini (2018) bahwa kulit mangga arumanis mengandung alkaloid,  flavonoid,  saponin,  dan tanin.  Penelitian  Rahmawati  dan  Rini  (2021) dengan  kulit  mangga  varietas  apel  juga mengandung  komponen  fitokimia  berupa alkaloid, flavonoid, saponin, dan tanin. Pelarut akuades  yang  bersifat  polar  dapat  menarik senyawa-senyawa semipolar ataupun polar.
Alkaloid  merupakan  senyawa  yang bersifat  semipolar  karena  terdapat  substituen seperti  fenol,  amida,  amina,  dan  metoksi. Flavonoid  termasuk  bagian  dari  senyawa fenolik  (bersifat  polar)  yang  memberikan pigmen  warna  pada  tumbuhan.  Tanin  juga bagian  dari  senyawa  fenolik  yang  umum ditemui  pada  tanaman.  Saponin  tersusun  atas glikosida  triterpen  dan  sterol.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  kandungan  senyawa saponin  pada  ekstrak  kulit  mangga  indramayu sangat rendah dibandingkan komponen fitokimia  lain.  Hal  ini  disebabkan  saponin memiliki  gugus  hidrofil  sehingga  sangat  larut dalam  air.  Selain  itu,  rendahnya  kandungan saponin  juga  dapat  terjadi  karena  senyawa glikosida  pembentuk  saponin  tidak  bereaksi secara maksimal (Novita 2018).

## Analisis LC-MS
Hasil identifikasi senyawa ekstrak kulit mangga  indramayu  menggunakan  LC-MS berupa  kromatogram  dan  bobot  molekul senyawa.  Hasil  kromatogram  menunjukkan terdapat  40  senyawa  yang  teridentifikasi dengan  luas  area  terbesar  (Tabel  3).  Senyawa dengan nama N1-(3-chlorophenyl)-2-[2- (trifluoromethyl)-4-quinolyl]hydrazine-1 carboxamide memiliki bobot molekul 380.07036    teridentifikasi  pada  waktu  retensi 1.041 menit sebagai senyawa dengan kelimpahan terbesar,  yakni  memiliki luas area sebesar  1.5  ×  10 9 .  Sementara  senyawa mangiferin  yang  merupakan  senyawa  khas tanaman  mangga  teridentifikasi  pada  waktu retensi  6.634  menit  dengan  luas  area  sebesar 1.89  ×  10 8 .  Hal  ini  menandakan  bahwa senyawa  mangiferin  terdapat  dalam  jumlah yang  besar  pada  sampel  kulit  buah  mangga indramayu. Mangiferin merupakan bagian dari senyawa  fenolik  golongan xanthone yang memiliki aktivitas sebagai antivirus (Mahdiyah et  al .  2020).  Mangiferin  terbukti  secara in silico mampu  berperan  dalam  penghambatan kerja  protein  penyebab  infeksi  virus dengue
(DENV) (Herman 2019). Selain itu, mangiferin juga terbukti secara in vitro mampu berperan  sebagai  antivirus  HSV,  HIV,  dan influenza (Matkowski et al . 2013).
Sebanyak  40  senyawa  bioaktif  dengan kelimpahan  terbesar  dari  LC-MS  dilanjutkan dengan tahap skrining awal untuk memprediksi bioavailabilitas senyawa menggunakan  uji  Lipinski  dan  uji  ADMET. Aturan Lipinski digunakan untuk menganalisis kemampuan obat ( drug-likeness ) yang berbasis kelarutan  dan  absorptivitas  senyawa  dalam tubuh.  Senyawa  yang  memiliki  tiga  dari  lima kriteria  di  luar  aturan  Lipinski,  yaitu  bobot molekul> 500  g/mol,  donor  hidrogen > 5, akseptor  hidrogen > 10,  dan  C  logP > 5  tidak dianggap  sebagai  kandidat  obat  yang  baik, terutama  dalam  aktivitas  oral  (Maurya et  al . 2020).  Prediksi  bioavailabilitas  Lipinski  yang
dilakukan  terhadap  40  senyawa  bioaktif menunjukkan ke-40 senyawa tersebut memenuhi  paling  sedikit  tiga  dari  lima  aturan Lipinski.
Sebanyak 40 senyawa tersebut kemudian  dievaluasi  farmakokinetik  dan toksisitasnya  melalui  uji  ADMET  pada  laman admetSAR. Uji ADMET bertujuan mengevaluasi profil farmakokinetik dan toksisitas obat untuk mengukur keamanan dan kemanjuran  dalam  sistem  biologis  (Maurya et al .  2020).  Kandidat  suplemen  atau  obat berkualitas  tinggi  seharusnya  tidak  hanya memiliki  kemanjuran  yang  cukup  terhadap target terapeutik, tetapi juga menunjukkan sifat ADMET  yang  sesuai  pada  dosis  terapeutik (Guan et  al .  2018).  Berdasarkan  uji  ADMET, diperoleh sepuluh senyawa potensial berdasarkan  parameter  inhibisi  gen human ether-a-go-go , sifat karsinogenik, dan toksisitas  oral  akut.  Ketiga  parameter  ini menjadi  acuan  untuk  memastikan  keamanan kandidat suplemen

## Penambatan Molekuler
Studi penambatan molekuler merupakan  penelitian  berbasis  komputer  yang mempercepat  proses  pengembangan  kandidat obat dan suplemen karena dapat menghilangkan  pengujian  senyawa  yang  tidak relevan  (Jain  2017)⁠.  Desain  kandidat  obat secara  komputasi  dikelompokkan  menjadi ligand-based  drug  design (LBDD)  dan structure-based  drug  design (SBDD)  (Yu  dan MacKerell  2017)⁠.  Metode  SBDD  merupakan metode  yang  didasarkan  pada  interaksi struktur  tiga  dimensi  (3D)  protein  dengan senyawa  uji.  Metode  ini  banyak  digunakan karena menghasilkan prediksi interaksi protein yang  akurat.  Salah  satu  metode  SBDD  yang umum digunakan adalah penambatan molekuler  ( molecular  docking )  (Batool et  al . 2019)⁠.  Penambatan  molekuler  memprediksi afinitas  pengikatan  antara  ligan  dan  protein dan  struktur  kompleks  protein-ligan,  yang
merupakan informasi berguna untuk perancangan  obat  dan  suplemen  (Wang  dan Zhu 2016).
Penambatan molekuler dilakukan melalui  perangkat  lunak YASARA  Structure menggunakan  reseptor  ACE2  yang  diperoleh dari RCSB Protein Data Bank (PDB ID: 1R42) yang telah dipreparasi. Angiotensin-converting enzyme  terkait  karboksipeptidase (ACE2) merupakan  protein  membran  integral  tipe  I yang terdiri dari 805  asam  amino dengan satu sekuen  konsensus  pengikatan zinc HEXXH  + E.  Wilayah  ekstraseluler  dari  enzim  ACE2 manusia  terdiri  dari  dua  domain.  Domain pertama  adalah zinc metalopeptidase  pada residu  19–611  dan  domain  kedua  terletak  di ujung  C  pada  residu  612-740.  ACE2  terlibat dalam  regulasi  fungsi  jantung  dan  reseptor fungsional untuk virus corona yang menyebabkan  sindrom  pernapasan  akut  parah atau Severe  Acute  Respiratory  Syndrome (SARS)  (Towler et  al .  2004).  ACE2 merupakan  salah  target  terapeutik  penting dalam  pengendalian  wabah  Covid-19,  hal  ini disebabkan  virus  SARS-CoV-2  memasuki  sel melalui  mekanisme  yang  dimediasi  ACE2. Studi in silico saat ini berusaha mengeksplorasi  beberapa  obat  yang  telah  ada sekaligus mencari potensi senyawa baru untuk digunakan  sebagai  inhibitor  jalur  masuk  virus yang  menargetkan  ACE2  manusia  (Teralı et al . 2020).
Proses penambatan molekuler ( molecular  docking )  terhadap  enzim  ACE2 (PDB ID: 1R42) diawali dengan tahap validasi dengan  menambatkan  ligan  pembanding  pada reseptor  enzim  ACE2.  Pemilihan  reseptor 1R42 dikarenakan struktur kristalografi protein tersebut  memiliki  resolusi  yang  cukup  baik, yakni  sebesar  2.20  Å.  Resolusi  menunjukkan jarak  terkecil  antara  bidang  kristal  protein dengan  pola  difraksi  yang  dihasilkan  dalam struktur  protein.  Nilai  resolusi  rendah  dengan kisaran  nilai  antara  1.5-2.5  Å  menunjukkan kualitas  struktur  yang  baik  untuk  studi
penambatan  molekuler  (Didierejean  dan  Tête- Favie 2016).
Validasi  penambatan  menghasilkan energi  bebas  Gibbs  (ΔG)  yang  merupakan parameter  kestabilan  konformasi  antara  ligan dengan  reseptor  (Arwansyah et  al .  2014). Hasil validasi gridbox protein ACE2 (PDB ID: 142) menunjukkan energi pengikatan terendah pada extension 1.0  Å  dengan  nilai  sebesar  - 1.4860  kkal/mol.  Validasi  reseptor  pada extension 1.0  Å  menghasilkan  nilai  RMSD sebesar 0.000 Å berdasarkan hasil superimpose dari setiap ulangan terhadap 4871 atom  yang  sesuai.  RMSD  digunakan  sebagai parameter  untuk  melihat  kemiripan  antara ligan hasil penambatan dengan hasil kristalografi. Nilai yang sangat kecil menunjukkan  letak  posisi  penambatan  ikatan antara  kompleks  ligan  standar-protein  dan ligan  hasil  validasi-protein  dalam  setiap ulangan  presisi  (Noviardi  dan  Fachrurrazie 2015). Berdasarkan  Kheldafaoui et  al .  (2020), nilai energi bebas Gibbs yang kurang dari atau sama  dengan  -7  kkal/mol  dan  RMSD  kurang dari 2 Å merupakan kriteria skor terbaik untuk memvalidasi hasil penambatan molekuler.
Penambatan  molekuler  dilakukan  pada sisi  aktif  enzim  ACE2,    yaitu  Arg73,  Phe274, Pro346,  Asp367,  Leu370,  Thr371,  His374, Glu375,  Glu402,  Glu406,  Ser409,  Leu410, Ala413,  Phe438,  Gln442,  Thr445,  Ile446, Thr449,  Thr453,  Phe512,  Tyr515,  Arg518, Thr519,  Gln522  (Kheldafaoui et  al .  2020). Sebanyak  sepuluh  ligan  uji  dan  satu  ligan pembanding ditambatkan pada sisi aktif enzim ACE2  untuk  dianalisis  aktivitas  inhibisinya berdasarkan parameter energi pengikatan yang dihasilkan  dari  interaksi  tersebut.  Hasil penambatan  molekuler  menunjukkan  seluruh ligan  uji  memiliki  energi  pengikatan  lebih besar dibandingkan dengan senyawa pembanding,  yaitu chloroquine (Tabel  4). Chloroquine dan  senyawa  turunannya  berupa hydroxychloroquine merupakan senyawa  yang telah  diadopsi  secara  luas  dalam  mengobati
Covid-19  (Zhan et  al .  2020).  Senyawa  khas pada  tanaman  mangga,  yakni  mangiferin menghasilkan  energi  bebas  Gibbs  (ΔG)  yang paling  besar  dengan  nilai  -5.0440  kkal/mol, diikuti dibutyl  phthalate (-3.2040  kkal/mol), trigonelline (-2.2410 kkal/mol), D-(+)-maltose (-2.2200  kkal/mol), citroflex A-4  (-1.9840 kkal/mol), α-glucoheptitol (-1.9800  kkal/mol),
bis-beta-D-fructofuranose
1,2':2,3'- dianhydride (-1.7080 kkal/mol), 16-
heptadecyne-1,2,4-triol (-1.5580  kkal/mol), hexitol (-0.4620  kkal/mol), dan chloroquine (- 0.4420  kkal/mol).  Energi  pengikatan  yang semakin negatif menunjukkan semakin kuatnya  suatu  ligan  dalam  mengikat  sisi  aktif reseptor (Du et al . 2016).
Visualisasi  dua  dimensi  dilakukan terhadap ligan uji mangiferin yang menghasilkan  energi  bebas  Gibbs  (ΔG) terbesar  dari  hasil  penambatan  molekuler menggunakan  perangkat  lunak  Discovery Studio.  Visualisasi  dua  dimensi  bertujuan mengetahui  jenis  ikatan  antara  ligan  dan reseptor  saat  berinteraksi  sehingga  kekuatan ikatan  dapat  diprediksi.  Berdasarkan  hasil visualisasi  (Gambar  2),  senyawa  mangiferin tertambat  pada  reseptor  ACE2  melalui  ikatan karbon hidrogen pada Glu375, ikatan hidrogen konvensional pada residu asam amino Thr371, dan  interaksi  phi-anion  pada  residu  asam amino  Glu402.  Ketiga  asam  amino  tersebut terletak  pada  sisi  aktif  ACE2  (Kheldafaoui et al .  2020).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa senyawa mangiferin terikat dengan benar pada sisi  aktif  ACE2  sehingga  berpotensi  dalam menginhibisi kerja enzim ACE2.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih kepada Kementerian  Pendidikan  dan  Kebudayaan Republik  Indonesia  yang  telah  membiayai penelitian  ini.  Terima  kasih  juga  kepada Institut Pertanian Bogor, Fakultas  Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Institut Pertanian
Bogor, dosen pendamping dan dosen reviewer
Institut
Pertanian Bogor yang telah memfasilitasi  dan  memberi  arahan  dalam penyelesain penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Arwansyah,  Ambarsari  L,  Sumaryada  TI. 2014. Simulasi docking senyawa kurkumin dan analognya sebagai inhibitor  reseptor  androgen  pada  kanker prostat. Current  Biochemistry .  1(1):  11- 19.
Atmojo  JT,  Akbar  PS,  Kuntari  S,  Yulianti  I, Darmayanti AT. 2020. Definisi dan jalur penularan Severe  Acute  Respiratory Syndrome Coronavirus 2 (SARS-CoV-2) atau Covid-19. J. Pendidikan Kesehatan . 9(1): 57-64.
Batool  M,  Ahmad  B,  Choi  S.  2019.  A structure-based drug discovery
paradigm. Int.  J.  Mol  Sci .  20(11):  1-18. doi:10.3390/ijms20112783.
[BPS]  Badan  Pusat  Statistik.  2021. Statistik Hortikultura . URL: https://www.bps.go.id/.  Diakses  tanggal 1 Oktober 2021.
Chen  DE,  Willick  DL,  Ruckel  JB,  Floriano WB. 2014. Principal component analysis of  binding  energies  for  single-point mutants  of  hT2R16  bound  to  an  agonist correlate  with  experimental  mutant  cell response. J. Comput. Biol . 22(1): 1-17.
Didierjean  C  dan  Tête-Favie  F.  2016.
Introduction to Protein Science:
Architecture,  Function  and  Genomics . Third Edition. Oxford: Oxford University Pr.
Du X, Li Y, Xia YL, Ai SM, Liang J, Sang P, Ji  XL,    Liu  SQ.  2016.  Insights  into protein-ligand  interactions:  mechanisms, models,  and  methods. Int.  J.  Mol.  Sci . 17(2): 144.
Elygio, Y.D. 2017. Karakteristik curd berbahan  dasar  ekstrak  kacang  hijau (Vigna  radiata)  dengan whey tahu kedelai  ( glycine  max )  sebagai  bahan
penggumpal [Skripsi].
Semarang:
Universitas Diponegoro.
Fitrilia T. 2015. Ekstrak daun benalu  cengkeh ( Dendrophthoe  pentandra (L.)  Miq) sebagai agen antioksidan dan antidiabetes  secara  in  vitro  [skripsi]. Bogor: Institut Pertanian Bogor
Gao Y, Yan L, Huang Y, Liu F, Zhao Y, Cao L, Wang T, Sun Q, Ming Z, Zhang L, et al .  2020.  Structure  of  the  RNA- dependent RNA polymerase from COVID-19  virus. Science .  368(6492):
779-782.
Guan  L,  Yang  H,  Cai  Y,  Sun  L,  Di  P,  Li  W, Liu G, Tang Y. 2018. ADMET-score - a comprehensive  scoring  function  for evaluation  of  chemical  drug-likeness.
Medchemcomm . 10(1):148-157.
Hasanah,  M.I.  2017.  Potensi  antibakteri kurkuminoid dan nanokurkuminoid temulawak ( Curcuma xanthoriza ) secara in  silico dan in  vitro [skripsi].  Bogor:
Institut Pertanian Bogor.
Herman R. 2019. Studi in silico lima senyawa aktif  sebagai  penghambat  protein  virus dengue . J.  Kefarmasian  Indones .  9(1):
40-47.
Imran  M,  Arshad  MS,  Butt  MS,  Kwon  JH,
Arshad MU, Sultan MT. 2017. Mangiferin:  a  natural  miracle  bioactive compound against lifestyle related disorders. Lipids  in  Health  Dis. 16(1):1-
7 .
Jain  A.  2017.  Computer  aided  drug  design. J. Phys. Conf. Ser . 884(1):012072. doi:10.1088/1742-6596/884/1/012072.
Kheldafaoui  H,  Harkati  D,  Saleh  BA.  2020. Molecular  docking,  molecular  dynamics simulations  and  reactivity,  studies  on approved  drugs  library  targeting  ACE2 and SARS-CoV-2 binding with ACE2. J. Biomol. Struct. Dyn. 1(1): 1-17.
Kim  H,  Moon  JY,  Kim  H,  Lee  DS,  Cho  MJ, Choi  HK,  Kim  YS,  Mosaddik  A,  Cho SK. 2010. Antioxidant and antiproliferative  activities  of  mango
( Mangifera  indica L.)  flesh  and  peel. Food Chem . 121(2): 429-436.
[KPCPEN] Komite Penanganan Covid-19 dan Pemulihan  Ekonomi  Nasional.  2021. Data sebaran Covid-19. URL: https://covid19.go.id/.  Diakses  tanggal 22 Maret 2021.
Lie  E.  2018.  Aktivitas  antiinflamasi  ekstrak etanol  kulit  mangga  ( Mangifera   indica
L.)  indramayu  pada  mencit  jantan  galur Swiss terinduksi karagenin 1%
[Skripsi] . Universitas Sanata Dharma.
Mahdiyah  LLZT,  Muhtadi  A,  Hasanah  AN. 2020.  Teknik  isolasi  dan  penentuan struktur  mangiferin:  senyawa  aktif  daari tanaman  mangga  (Mangifera  indica  L.). Majalah Farmasetika. 5(4): 167-179.
Matkowski A, Kus P, Goralska E, Wozniak D. 2013. Mangiferin –  a  bioactive xanthonoid,  not  only  from  mango  and not  just  antioxidant. Mini  Rev.  Med. Chem . 13(3): 439–455.
Maurya  VK,  Kumar  S,  Prasad  AK,  Bhatt  M, Saxena  SK.  2020.  Structure-based  drug designing  for  potential  antiviral  activity of  selected  natural  products  from Ayurveda  against  SARS-CoV-2  spike glycoprotein  and  its  cellular  receptor.
Virusdisease .  31(2): 179–193.  doi: 10.1007/s13337-020-00598-8.
Noviardi  H  dan  Fachrurrazie.  2015.  Potensi senyawa  bullatalisin  sebagai  inhibitor protein  leukotrien  A4  hidrolase  pada kanker kolon secara in silico.
Fitofarmaka. 5(2): 65-73. Novita NT. 2018. Skrining fitokimia, aktivitas peredaman radikal
DPPH dan sitotoksisitas  ekstrak  bunga  dan  buah belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.) [skripsi]. Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Rahmawati  VP,  Rini  CS.  2021.  The  potential of  mango  ( Mangifera  indica L.)  peel  of apple varieties by infusion and maceration  in  inhibiting Pseudomonas aerugin osa and Propionibacterium acnes . Medicra  (Journal  of  Medical
Laboratory Science/Technology) . 4(1):1-
6.
Rasmikayati  E,  Elfadina  EA,  Kusumo  RAB, Saefudin  BR,  Supriyadi.  2020.  Policy analysis of mango's agribusiness development  (a  case  in  Cikedung District,  Indramayu  Regency). Jurnal Manajemen  dan  Agribisnis .  17(1):  52-
62.
Sastrawan  IN,  Sangi  M,  Kamu  V.  2013. Skrining  fitokimia  dan  uji  aktivitas antioksidan ekstrak biji adas ( Foeniculum vulgare ) menggunakan metode  DPPH. J.  Ilmiah  Sains .  13(2):
11-115.
Teralı  K,  Baddal  B,  Gülcan  HO.  2020.
Prioritizing potential ACE2 inhibitors in the  COVID-19  pandemic:  Insights  from
a molecular mechanics-assisted
structure-based
virtual screening
experiment. J.  Mol.  Graph.  Model .  100: 1-11. doi: 10.1016/j.jmgm.2020.107697.
Towler  P,  Staker  B,  Prasad  SG,  Menon  S, Tang  J,  Parsons  T,  Ryan  D,  Fisher  M, Williams  D,  Dales  NA,  Patane  MA, Pantoliano  MW.  2004.  ACE2  X-ray structures  reveal  a  large  hinge-bending motion  important  for  inhibitor  binding and catalysis. J. Biol. Chem . 279: 17996-
18007. doi: 10.1074/jbc.M311191200.
Verdiana  M,  Widarta  IWR,  Permana  IDGM. 2018.  Pengaruh  jenis  pelarut  pada ekstraksi menggunakan gelombang ultrasonik  terhadap  aktivitas  antioksidan ekstrak  kulit  buah  lemon  ( Citrus  limon (Linn.) Burm F.). J.  Ilmu  Teknol.
Pangan . 7(4): 213-222.
Wang G dan Zhu W. 2016. Molecular docking for  drug  discovery  and  development:  a widely  used  approach  but  far  from perfect. Future Med. Chem . 8(14): 1-4.
Wulandari,  Sulistyarini  I.  2018.  Antibacterial activity  test  of  extract  ethanol  mango arum  manis  skin  ( Mangifera  indica L.) on Methicillin  Resistant  Staphylococcus aureus (MRSA). Media  Farm.  Indones . 13(2):47-53.
[WHO]  World  Health  Organization.  2021.
WHO Coronavirus (COVID-19) Dashboard. URL: https://covid19.who.int/. Diakses tanggal 1 September 2021.
Yu W, MacKerell AD. 2017. Computer-Aided Drug  Design  Methods. Methods  Mol Biol .  1520:85–106.  doi:10.1007/978-1- 4939-6634-9_5
Zhan  X,  Dowell  S,  Shen  Y,  Lee  DL.  2020. Chloroquine  to  fight  COVID-19:  A consideration of mechanisms and adverse ef fects?. Heliyon . 6(9): 1-7. doi:
10.1016/j.heliyon.2020.e04900
Zheng YY, Ma YTJ,  Zhang JY, Xie  X. 2020. COVID-19 and the cardiovascular system. Nat.  Rev.  Cardiol .  17(5):  259- 260.