## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 85-90
Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Daun Tagalolo Ficus septica Burm F Terhadap Larva Artemia salina Leach dengan Metode
Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Johrawati  Aritan 1* , Jeane Mongie 1 , Sonny Untu 2 , Douglas Pareta 1
1 Program Studi Farmasi, Fakultas MIPA, Universitas Kristen Indonesia Tomohon
2 Program Studi Biologi, Fakultas MIPA, Universitas Kristen Indonesia Tomohon
* Penulis Korespondensi; Joraaritan@gmail.com Diterima: 19 Maret 2019; Disetujui : 29 Maret 2019

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  penelitian  tentang  uji  toksisitas  ekstrak  daun  Tagalolo  (Ficus  septica  Burm.F) terhadap larva artemia salina leach dengan metode brine shrimp lethality test (BSLT). Penelitian ini  bertujuan  Untuk  mengetahui  toksisitas  akut  ekstrak  etanol  daun  Tagalolo  terhadap  kematian larva  Artemia  salina  L  menggunakan  metode  BSLT.  Daun  Tagalolo  (Ficus  septica  Burm.F) mengandung  senyawa  flavonoid,  alkaloid,  tanin  (katekol).  Larva  Artemia  salina  leach  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  larva  yang  baru  menetas  sebanyak  150  ekor.  Kemudian Pengamatan  dilakukan  selama  1  x  24  jam  terhadap kematian  larva  udang.  Untuk  persen  jumlah kematian pada kosentrasi 12,5 ppm sebesar 30%, kosentrasi 25 ppm sebesar 50%, kosentrasi 50 ppm sebesar 75%,  kosentrasi 100 ppm sebesar 100%. Hasil pengujian terhadap ekstrak etanol daun Tagalolo menggunakan analisis probit LC 50 sebesar 39,710.
Kata kunci : Toksisitas, Daun Tagalolo, Artemia salina

## ABSTRACT
A research on the toxicity test of tagalolo leaf extract (Ficus septica Burm.F) has been carried out on artemia salina leach larvae using the brine shrimp lethality test (BSLT) method. This study aims to  determine  the  acute  toxicity  of  the  ethanol  extract  of  Tagalolo  leaves  on  the  death  of  Artemia salina L larvae using the BSLT method. Tagalolo leaves (Ficus septica Burm.F) contain flavonoids, alkaloids, tannins (catechol). Artemia salina leach larvae used in this study were 150 newly hatched larvae. Then the observations were carried out for 1 x 24 hours against the death of shrimp larvae. For percent of deaths at a concentration of 12.5 ppm by 30%, the concentration of 25 ppm is 50%, the  concentration  of  50  ppm  is  75%,  the  concentration  of  100  ppm  is  100%.  The  test  results  on Tagalolo leaf ethanol extract using LC 50 probit analysis of 39,710.
Keywords : Toxicity, Tagalolo Leaves, Artemia salina

## PENDAHULUAN
Penggunaan  tumbuhan  obat  sebagai obat  alami  telah  lama  dikenal  oleh  masyarakat yang disebut sebagai obat tradisional,
pengobatan dengan menggunakan obat tradisional  saat  ini  sangat  popular  dan  semakin disukai  oleh  masyarakat  (Probowo,  2010).  Hal ini  disebabkan  karena  disamping  harganya murah  dan  mudah  didapat.  Banyak  tanaman

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 85-90
disekitar kita yang belum di manfaatkan dengan baik  bahkan  ada  tanaman  yang  dianggap  tidak bermanfaat,  hal  ini  dapat  terjadi  karena keterbatasan  informasi  kepada  masyarakat (Dalimartha, 2000).
Salah  satu  tanaman  obat  yang  sering digunakan  yaitu Ficus  septica Burm.F  atau dikenal dengan nama Tagalolo adalah salah satu anggota  family Moraceae. Tumbuhan Tagalolo mengandung senyawa flavonoid, alkaloid, tanin (katekol) (Moenier, 2013). Tumbuhan Tagalolo secara empiris digunakan sebagai obat penyakit kulit, radang usus buntu, gigitan ular berbisa dan penyakit  asma  (Sudarsono, dkk .,  2002).  Di daerah  Banggai  Laut  tumbuhan  tagalolo  secara empiris  digunakan  sebagai  obat  demam  dan pengobatan bisul.
Daun  tagalolo  bersifat  antibakteri . Hal ini telah dibuktikan oleh penelitian (Tuna, dkk ., 2016) Ekstrak daun tagalolo berpotensi memiliki daya  hambat  terhadap  pertumbuhan  bakteri S.aureus dan E.coli .  Penelitian  (Yang, dkk. 2005)  menyebutkan  daun  tanaman  tagalolo memiliki efek antiinflamasi melalui penghambatan inducible  nitic  oxide  synthase (iNOS)  dan  enzim  siklooksigenase-2  (COX-2). Penelitian  (Chu ,  dkk. 2001)  membuktikan kumarin eskuletin mampu menginduksi apoptosis dan menurunkan ekspresi protein Bcl- 2 hingga 58% pada sel leukemia HL-60 selama inkubasi 9 jam.
Toksisitas  merupakan  sifat  relatif  dari suatu zat kimia, dalam kemampuannya menimbulkan efek
berbahaya atau
penyimpangan  mekanisme  biologi  pada  suatu organisme (Wirasuta, dkk., 2006). Metode Brine Shrimp  Lethality  Test (BSLT)  merupakan  cara paling  cepat,  murah,  dapat  dipercaya  dan  hasil yang  didapatkan  sering  berhubungan  dengan aktivitas  sitotoksik  yang  merupakan  syarat utama obat-obatan antitumor (Prasetyorini, dkk., 2011).

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat
Waktu pelaksanaan penelitian dilakukan pada bulan November 2018 - April 2019.
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium terpadu Fakultas Matematika dan Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas  Kristen Indonesia  Tomohon  dan  Laboratorium  Farmasi Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi Manado

## Jenis Penelitian
Jenis  penelitian  yang  penelitian  ini adalah eksperimental  laboratorium.

## Bahan Dan Alat
Bahan yang digunakan dalam penelitian adalah  daun Tagalolo, telur Artemia  Salina, air laut, etanol 70 % dan Tween 80 0,5% .
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  rotary  evaporator,  blender,  toples kaca,  aluminium  foil,  kertas  saring,  gelas  ukur, botol  kaca,  erlemeyer,  corong,  gelas  beaker, label,  batang  pengaduk,  pipet  tetes,  timbangan analitik,  cawan  petri,  pot  salep,  aerator,  lampu pijar,  wadah  penetasan,  gunting,  hanskun, batang pengaduk, kaca pembesar dan senter.

## Prosedur penelitian

## Pembuatan Ekstrak
1. Pengambilan Sampel
Sampel  daun  Tagalolo  segar  sebanyak 3000 gram diambil di Tomohon, Sulawesi utara.

## 2. Preparasi sampel
Sampel  dibersihkan  terlebih  dahulu dengan  menggunakan  air  mengalir  kemudian dikeringkan  dengan  cara  diangin-anginkan selama  2  minggu  tanpa  cahaya  sinar  matahari secara langsung.
Setelah sampel kering, kemudian dirajang  dan  diblender  sampai  mendapatkan serbuk agar pada proses meserasi pelarut dapat menembus kedalam dinding sel yang mengikat

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 85-90
senyawa  aktif  yang  terkandung  dalam  daun Tagalolo.
3. Proses maserasi
Serbuk  daun  tagalolo  di  rendam  dengan menggunakan etanol 70% selama 5 hari sambil sesekali di aduk, setelah itu disaring menggunakan  kertas  saring  kemudian  filtrat yang diperoleh dipekatkan dengan menggunakan rotary evaporator sampai didapatkan ekstrak kental daun Tagalolo.

## Uji Toksisitas Menggunakan Metode BSLT.
1. Penyiapan Larva Artemia Salina
Penyiapan larva udang dilakukan dengan  mengambil  telur A.  salina ditimbang sebanyak  50  mg.  Penetasan  dilakukan  dengan cara  merendam  telur  tersebut  dalam  air  laut sebanyak  2,5  Liter  dan  diberi  penerangan  serta diaerasi.

## 2. Penyiapan Larutan Stok
Untuk  pembuatan  larutan  stok,  ekstrak ditimbang sebanyak 200 mg kemudian dilarutkan  sampai  100  mL  dengan  air  laut  dan tween 80 0,5%, kemudian dari larutan stok 2000 ppm  dibuat  pengeceran  100  ppm,  50  ppm,  25 ppm, 12,5 ppm dan 0 ppm sebagai kontrol tanpa penambahan ekstrak.

## 3. Uji Toksisitas
Perlakuan  uji  toksisitas  ekstrak  daun Tagalolo  terhadap  larva  udang A.  salina . Disiapkan  5  wadah  pengujian  dan  1  wadah sebagai kontrol. Selanjutnya pada tiap konsentrasi  larutan  dimasukan  10  ekor  larva udang A. salina. Pengamatan dilakukan selama 1 x 24 jam terhadap kematian larva udang.

## Analisis Data
Data  hasil  penelitian  uji toksisitas  diolah dengan  analisis  probit  menggunakan  program SPSS untuk mengetahui nilai LC 50 .

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Penyiapan Sampel
Sampel  daun  Tagalolo  yang  digunakan diambil  di  Tomohon  Sulawesi  utara,  sampel yang digunakan dalam penelitian ini yaitu daun tagalolo  yang  berwarna  hijau  dan  tidak berlubang,  sampel  yang  telah  dikumpulkan kemudian ditimbang berat segar yaitu 3 kg lalu dibersihkan  dengan  air  mengalir  dan  di  kering anginkan  selama  2  minggu  tanpa  cahaya matahari  secara  langsung  agar  kandungan senyawa  yang  terdapat  dalam  daun  Tagalolo tidak mengalami kerusakan.
Setelah sampel kering kemudian dirajang  dan  diblender  sampai  menjadi  serbuk agar  pada  proses  meserasi  pelarut  dapat menembus  dinding  sel  yang  mengikat  senyawa aktif  yang  terkandung  dalam  daun  Tagalolo, serbuk  kering  daun  Tagalolo  yang  didapat sebanyak  900  gr  dan  kadar  air  yang  terdapat dalam simplisia daun tagalolo yaitu 2,99%.

## Pembuatan Ekstrak Daun Tagalolo
Sampel yang telah ditimbang kemudian diekstraksi  menggunakan  metode  maserasi. Maserasi  merupakan  proses  penyarian  yang sederhana dan banyak digunakan untuk menyari bahan  obat  yang  berupa  serbuk  simplisia  yang halus.  Simplisia  ini  direndam  dalam  penyari sampai  meresap  dan  melemahkan  susunan  sel sehingga  zat-zat  akan  terlarut,  serbuk  simplisia yang akan disari ditempatkan pada wadah bejana bermulut besar, ditutup rapat kemudian dikocok berulang-ulang, sehingga memungkinkan pelarut  masuk  ke  seluruh  permukaan  serbuk simplisia (Ansel, 1989).
Proses  maserasi  dilakukan  dengan merendam  900  gram  simplisia  daun  Tagalolo dengan etanol 70% selama 5 hari, kemudian di saring  dengan  menggunakan  kertas  saring. Filtrat yang didapatkan berwarna hijau tua dapat dilihat  pada  lampiran  2  dokumen  penelitian. Efektivitas  pelarut  dapat  dilihat  dari  Itensitas warna yang terbentuk. Itensitas warna yang lebih pekat  menunjukan  bahwa  ekstrak  tersebut

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 85-90
mempunyai kadar metabolit sekunder yang lebih tinggi  (Ulfa,  2014).  Kemudian  Filtrat  yang diperoleh  dipekatkan  dengan  menggunakan rotary  evaporator dengan  suhu  40°C  hingga diperoleh ekstrak kental sebanyak 45 gram. Penetesan telur Artemia salina Leach
Penetasan  telur A. salina  menggunakan wadah  plastik  ukuran  5  liter  kemudian dimasukan  air  laut  sebanyak  2,5  liter  dan  telur artemia sebanyak 50 mg serta diberi penerangan dengan lampu pijar 40 watt yang berfungsi untuk menjaga  kondisi  air  laut  agar  tetap  hangat sehingga  mempercepat  proses  penetasan  dan diaerasi  menggunakan  aerator  yang  bertujuan untuk  memberikan  oksigen  yang  cukup  bagi kelangsungan  hidup A. salina  sehingga  kadar oksigen tetap terjaga. Telur A. salina akan sulit menetas jika oksigen dalam air laut kurang.
Larva Artemia salina  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  yaitu  larva  yang  baru menetas berwarna kemerah-merahan dan masih mempunyai cadangan makanan, setelah 24  jam
menetas  cadangan  makanan  akan  habis  karena larva akan memasuki fase instar I dimana pada tahap ini larva belum bisa makan karena mulut dan saluran pencernaan belum terbentuk secara sempurna  lalu  bermetamorfosisi  memasuki instar  II  sudah  memiliki  mulut  dan  sistem pencernaannya telah sempurna. Sehingga ekstrak yang ada di lingkungan larva masuk  ke dalam  tubuh  larva  dan  menyebabkan  kematian larva. Lalu pada saat larva menjadi instar III atau lebih dari 48 jam, tubuhnya akan bermetamorfosis lebih lanjut dan meningkatkan ketahanan tubuh larva (Mudjiman, 2004).

## Hasil Uji Toksisitas Dengan Metode BSLT
Kematian  larva  secara  keseluruhan ditunjukan pada tabel 1. Dari tabel tersebut dapat diketahui  bahwa  setiap  kosentrasi  ekstrak  daun Tagalolo  ( F.  septica )  pada  penelitian  ini pemperlihatkan pengaruh yang berbeda terhadap kematian larva A. salina.
Tabel 1 : Data persentase kematian larva Artemia salina Leach.
Kosentrasi (ppm)
Ulangan
Berdasarkan tabel di atas dapat disimpulkan bahwa jumlah kematian larva pada konsentrasi  12,5  ppm  adalah  30%  sedangkan pada  konsentrasi  25  ppm  adalah  50%,  hal  ini menunjukkan  peningkatan  kematian  larva  pada kosentrasi  12,5  ke  25  ppm  sebesar  20%.  Lalu pada  konsentrasi  50  ppm,  total  kematian  larva yaitu 73% terjadi peningkatan dari kosentrasi 25 ppm ke 50 ppm sebesar 23%. Pada konsentrasi 100  ppm  angka  kematian  sebesar  100%  terjadi peningkatan dari kosentrasi 50 ppm ke 100 ppm sebesar  27%.  Kematian  terendah  yaitu  di  12,5 ppm  sebesar  30%  dan  kematian  terbanyak  100 ppm sebesar 100%.
Hal  ini  menunjukkan  bahwa  besarnya konsentrasi ekstrak yang diberikan mempengaruhi  jumlah  kematian  larva  udang. Dari tabel diatas dapat diketahui bahwa kenaikan konsentrasi ekstrak daun Tagalolo selalu diikuti dengan kenaikan kematian larva udang A. salina. Semakin  besar  nilai  konsentrasi  ekstrak  yang diberikan,  maka  mortalitas  pada A.  salina Juga semakin besar (Setyowati dan Cahyanto, 2016).

## Penentuan LC 50
Hasil pengujian terhadap ekstrak etanol daun Tagalol menunjukan nilai LC 50 sebesar
0 ppm 12,5 ppm 25 ppm 50 ppm 100 ppm 1 0 3 5 7 10 2 0 3 5 7 10 3 0 3 5 8 10 Jumlah total 0 9 15 22 30 % kematian 0% 30% 50% 73% 100%

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 85-90
39,710 sehingga dapat dikatakan ekstrak etanol daun  Tagalolo  pada  penelitian  yang  dilakukan memiliki  toksisitas  akut  pada  larva A.  salina menggunakan  metode  BSLT  sesuai  dengan
tingkat  nilai  toksisitas  yaitu  0-250  ppm  maka sampel  yang  digunakan  dalam  penilitian  di katakan  sangat toksik.
Grafik 1. Respon kematian larva A. salina Leach

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  ekstrak etanol  daun  Tagalolo  memiliki  efek  toksik terhadap  larva  udang,  dengan  perolehan  nilai hasil analisis probit LC 50 39,710 ppm.

## DAFTAR PUSTAKA
Ansel,  H.C.,  1989, Pengantar  Bentuk  Sediaan Farmasi ,  diterjemahkan  oleh  Ibrahim,  F., Edisi  IV,  Jakarta,  Universitas  Indonesia Press, 616-617.
Chu, C. Y., Y. Y. Tsai., C. J. Wang., W. L. Lin., and T.  H.  Tseng.  2001. Induction  of apoptosis  by  esculetin  in  human  leukemia cells, Eur J Pharmacol, 416 ( 2):25-32.
Dalimartha,  2000. Atlas  tumbuhan  obat Indonesia (jilid II). Jakarta:  Trubus Agriwida.
Moenier,  R.  2013. Laporan  Skrining  Fitokimia Daun Awar-Awar. https: //www. academia. edu/7731965/Laporan_Skrining_Fitokimia_ Daun_Awar-Awar. (Diakses 3 Mei 2019). Mudjiman, A. 2004. Makanan Ikan . Edisi Revisi Penebar Swadaya. Jakarta. hal 192.
Probowo  E.  2010. Cara  Hidup  Sehat  Dengan Herbal . Surya Medika. Yogyakarta.
Prasetyorini,  I.Y.  Wiendarlina  dan  A.B.  Peron.
2011. Toksisitas Beberapa Ekstrak Rimpang
Cabang  temulawak  (Curcumaxanthoriza Roxb.)  pada  Larva  Udang  (Artemia  salina Leach.), Fitofarmaka, 1(2), 14-21.
Sudarsono, G. Didik., S. Wahyuono., I. Donatus,
Purnomo.  2002. Tumbuhan  Obat  II  (Hasil Penelitian, Sifat -Sifat dan Penggunaan) , 69 -  71,  Pusat  Penelitian  Obat  Tradisional, UGM: Jakarta.
Setyowati, W. A.E dan M.A.S. Cahyanto. 2016. kandungan  kimia  dan  uji  aktivitas  toksik menggunakan  metode  bslt  (brine  shrimp lethality  test)  dari  ekstrak  daun  kersen (muntingia  calabura). Jurnal  kimia  dan pendidikan kimia (jkpk) 1 (2) : 45.
Tuna, I.D.A., P.M. Wowor., H. Awaloei. 2016.
Uji  daya  hambat  ekstrak  daun  awar-awar (ficus septica burm.f) terhadap pertumbuhan bakteri staphylococcus aureus dan eschericia coli. e-Biomedik 4 (1): 4.
Ulfa,  A.  2014. Uji  Toksisitas  dan  Identifikasi Golongan  Senyawa  Aktif  Ekstrak  Kulit Dahan  Sirsak  (Annona  Muricata  Linn)
Terhadap  Larva  Udang  Artemia  salina leach. Universitas  Islam  Negeri  Maulana Malik Ibrahim Malang.
120 100 80 60 40 20 0 y = 23.3x + 5 R² = 0.9955 0 1 2 3 4 5 kosentrasi (ppm) % ke m atian

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 85-90
Wirasuta,  I.M.A.G.  dan  R.  Niruri.  2006.
Toksikologi  Umum .  Bandung:  Universitas Udayana.
Yang,  Cheng-Wei,  Chen,  Wei  Liang.,  Wu,  Pei
Lin.,  Tseng,  Huan  Yi.,  Lee,  and  Shiow  Ju. 2005, Anti-Inflammatory  Mechanisms  of
Phenanthroindolizidine Alkaloid, Mol Pharmacol ,  69:749-758,  National  Cheng Kung University, Taiwan.