## Research Article

## The Profile of Anticancer Activities of Sambiloto Extract (Andrographis paniculata Nees) from Several Locations in East Java
Profil  Aktivitas  Antikanker  Ekstrak  Sambiloto  (Andrographis  paniculata  Nees)  dari Beberapa Lokasi di Jawa Timur
Roihatul Mutiah 1* , Fina Luthfiana 1 , Arief Suryadinata 1 , Wirda Anggraini 1 , Anik Listiyana 2
1 Jurusan Farmasi, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang, Malang, Indonesia
2 Jurusan Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang, Malang, Indonesia
*Corresponding author: Roihatul Mutiah | Email: roiha@farmasi.uin-malang.ac.id
Received: 2 November 2019; Revised: 25 December 2019; Accepted: 31 December 2019; Published: 20 January 2020
Abstract: Sambiloto (Andrographis paniculata Nees) contains andrographolid compound which has potential as an anticancer. The difference of growth location has affected the distinction of metabolite content. This study aims to determine the profile of anticancer activities of A. paniculata extract from several locations in East Java. The extracts from several locations were tested for activity on T47D cancer cell using MTT assay method. Thus, the  result  of  this  study  describes  that  A.  paniculata  extract  from  several  different  locations  does  not  provide significantly  different  anticancer  activities  with  the  amount  of  (p>0.05).  The  extracts  which  have  moderate anticancer  activity  were  A. paniculata  extracts  from  Selopuro  Subdistrict  Blitar  Regency, Singosari  Subdistrict Malang Regency, Lowokwaru Subdistrict Malang City, Klojen Subdistrict Malang City, Purwodadi Subdistrict Pasuruan Regency, Purwosari Subdistrict Pasuruan Regency, and Pandaan Subdistrict Pasuruan Regency.

## Keywords: andrographis paniculata nees; east java; MTT assay; activity profile
Abstrak: Sambiloto (Andrographis paniculata Nees) mengandung senyawa andrografolid yang berpotensi sebagai antikanker.  Adanya  perbedaan  lokasi  tumbuh  pada  tanaman  mempengaruhi  perbedaan  kandungan metabolitnya. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui profil aktivitas antikanker ekstrak A. paniculata dari beberapa lokasi di Jawa Timur. Ekstrak dari beberapa lokasi diuji aktivitasnya terhadap sel kanker T47D dengan metode  MTT  assay.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  A.  paniculata  dari  beberapa  lokasi  yang berbeda tidak memberikan aktivitas antikanker yang berbeda secara bermakna (p>0.05). Ekstrak yang memiliki aktivitas antikanker sedang yaitu ekstrak A. paniculata dari Kecamatan Selopuro Kabupaten Blitar, Kecamatan Singosari  Kabupaten  Malang,  Kecamatan  Lowokwaru  Kota  Malang,  Kecamatan  Klojen  Kota  Malang, Kecamatan  Purwodadi  Kabupaten  Pasuruan,  Kecamatan  Purwosari  Kabupaten  Pasuruan,  dan  Kecamatan Pandaan Kabupaten Pasuruan.
Kata kunci: andrographis paniculata nees; jawa timur; MTT assay; profil aktivitas

## 1. PENDAHULUAN
Kanker merupakan proliferasi (pertumbuhan) sel yang abnormal dan tidak teratur muncul dari sel organ tertentu. Sel kanker mempunyai kemampuan untuk membuat suplai darah sendiri, melepaskan  diri  dari organ  asal,  melakukan  perpindahan,  dan  menyebar  ke  organ  tubuh  lain  [1]. Sebagian  besar  jenis  sel  kanker  akan  membentuk  benjolan  yang  disebut  tumor.  Penamaan  tumor disesuaikan dengan asal bagian tumbuhnya. Kanker payudara merupakan salah satu jenis kanker dimana  sel  jaringan  payudara  berubah  dan  membelah  secara  tidak  terkontrol,  antara  lain  pada kelenjar  untuk  memproduksi  susu  (lobulus)  atau  pada  saluran  yang  menghubungkan  lobulus dengan puting susu [2].
Menurut  data  Global  Burden  of  Cancer  Study  (GLOBOCAN)  2018,  kanker  payudara menempati  urutan  pertama  dengan  kasus  terbanyak  menurut  perkiraan  tingkat  kasus  kejadian standar  usia  diantara  kasus  kanker  lain  di  dunia  [3].  Sedangkan  di  Indonesia,  jumlah  kasus  baru kanker  payudara  mencapai 16.7%  atau  sekitar  58,256  dari  total 348,809  kasus  kanker  [4].  Estimasi jumlah  penderita  kanker  payudara  di  Jawa  Timur  sendiri  mencapai  9,688  dari  total  61,682  kasus kanker payudara pada perempuan di Indonesia pada Tahun 2013 [5].
Penanganan  kanker  payudara  dapat  dilakukan  dalam  berbagai  cara  diantaranya  yakni operasi, terapi radiasi, terapi sistemik, kemoterapi, terapi hormon, terapi target, serta imunoterapi. Akan tetapi dari beberapa pengobatan tersebut seperti halnya operasi tidak dilakukan ketika tumor sudah  berkembang  menjadi  stadium  lanjut.  Terapi  sistemik  dapat  berefek  terhadap  kesuburan wanita premenopous dan tidak disarankan pada wanita hamil sehingga perlu konsultasi lanjutan [2]. Oleh sebab itu, pengobatan tradisional menggunakan bahan alam dapat menjadi solusi terbaru. Salah satunya yakni dari sambiloto (A. paniculata).
Sambiloto (A. paniculata) merupakan tanaman obat tradisional yang sudah dipercayai oleh masyarakat secara turun-temurun [6]. Diantaranya sebagai obat demam, disentri, kolera, diabetes, sakit paru-paru, influenza, bronkitis, gigitan ular, dan reumatik. Pada penelitian sebelumnya telah dilaporkan  bahwa  senyawa  diterpenoid  dari  sambiloto  menunjukkan  sifat  sitotoksiknya  pada berbagai human tumor cell lines diantaranya yakni sel kanker ovarium Caov-3, sel kanker payudara T47D dan H8-578T, sel kanker hati HepG2, dan sel kanker paru-paru NCI-H23 [7]. Pengujian ekstrak herba  sambiloto  terhadap  human  cell  line  T47D  dan  hewan  coba  tikus  Sprangue  Dawley  yang diinduksi  DMBA  memperlihatkan  aktivitas  antikanker  dan  potensinya  sebagai  preventif  kanker payudara  [8-10].  Pengujian  isolat  andrografolid  yang  diisolasi  dari  A.  paniculata  mampu menginduksi apoptosis pada cell line kanker payudara T47D dalam waktu dan cara yang tergantung pada konsentrasi dengan meningkatkan ekspresi p53 bax, caspase-3, dan penurunan ekspresi dari bcl-2 [11]. Penelitian-penelitian tersebut dapat menjadi dasar acuan bahwa A. paniculata berpotensi sebagai  agen  antikanker  dan  juga  memiliki  potensi  untuk  dikembangkan  manjadi  produk fitofarmaka.
Dalam pengembangan bahan baku obat diperlukan konsistensi mutu dan kandungan aktif. Namun terdapat suatu kendala berupa perbedaan metabolit akibat perbedaan lokasi tumbuh. Hal tersebut dikarenakan adanya faktor internal dan eksternal dari tanaman itu sendiri, sehingga akan berpengaruh  pada  efek  farmakologis  yang  ditimbulkan  (12).  Oleh  sebab  itu,  perlu  dilakukan pemprofilan aktivitas antikanker ekstrak sambiloto (A. paniculata) dari beberapa lokasi di Jawa Timur terhadap sel kanker payudara T47D, sehingga didapatkan bahan obat yang paling berpotensi sebagai antikanker.

## 2. BAHAN DAN METODE

## 2.1. Bahan
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  yaitu  etanol  80%  (Merck,  Jerman),  kloroform (Merck,  Jerman),  metanol  (Merck,  Jerman),  asam  sulfat  10%  (Merck,  Jerman),  aquadest.  Silika  gel GF 254 (Sigma  Aldrich  Chemie  GmnH,  Jerman),  Dimethyl  Sulfoxide  (DMSO)  (Sigma  Aldrich  Chemie GmbH, Jerman), media Rosewell Park Memorial Institute (RPMI-1640) (Gibco, USA), Phospat Buffered Saline  (PBS)  (Gibco,  USA),  3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl  tetrazolium  bromide  (MTT)  (Sigma Chemical, USA), Sodium Dodecycle Sulphate (SDS) 10% (Sigma Co, USA).

## 2.2. Preparasi ekstrak
A.  paniculata  didapatkan  dari  5  lokasi  berbeda  di  Jawa  Timur,  meliputi  Tulungagung (Kecamatan  Besuki  disebut  ApTB;  Kecamatan  Ngunut  disebut  ApTN;  Kecamatan  Sumbergempol disebut  ApTS),  Blitar  (Kecamatan  Talun  disebut  ApBT;  Kecamatan  Selopuro  disebut  ApBS; Kecamatan  Kanigoro  disebut  ApBK),  Malang  (Kecamatan  Singosari  disebut  ApMS;  Kecamatan Lowokwaru disebut ApML;  Kecamatan  Klojen disebut ApMK), Pasuruan (Kecamatan  Purwodadi disebut  ApPPd;  Kecamatan  Purwosari  disebut  ApPPs;  Kecamatan  Pandaan  disebut  ApPP),  dan Jombang  (Kecamatan  Kabuh  disebut  ApJK;  Kecamatan  Megaluh  disebut  ApJM;  Kecamatan  Ploso disebut ApJP). Dilakukan determinasi di UPTD Materia Medika Batu Malang Jawa Timur dengan nomor surat 074/355A/102.7/2018. Bagian herba  A. paniculata dikeringkan dan dihaluskan menjadi serbuk simplisia, selanjutnya diekstraksi dengan etanol 80% menggunakan metode maserasi dengan bantuan  Ultrasound  Assisted  Extraction  (UAE).  Masing-masing  ekstrak  dipekatkan  dengan  rotary evaporator  suhu  40 0 C  dan  diuapkan  sisa  pelarutnya  dengan  oven  suhu  40 0 C  [13].  Selanjutnya dilakukan analisis kandungan senyawa metode  Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dengan fase diam silika gel GF 254 dan kloroform: methanol (9: 1) sebagai fase gerak. Dibuat plat KLT dengan ukuran 16 cm × 10 cm. Sejumlah 15 sampel ekstrak yang sudah dilarutkan dengan etanol 80% ditotolkan pada plat  dengan  jarak  antar  totolan  1  cm.  Plat  KLT  divisualisasi  dengan  menggunakan  sinar  tampak, sinar  UV  λ  =  254  nm,  dan  sinar  UV  λ  =  366  nm,  disemprot  dengan  asam  sulfat  10%,  dipanaskan dengan TLC Plate Heater    (CAMAG, Switzerland), suhu 105 0 C selama 5 menit. Dilanjutkan dengan TLC Visualizer (CAMAG, Switzerland).

## 2.3. Kultur sel
Sel T47D diperoleh dari Laboratorium Parasitologi Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, Indonesia. Sel dikultur dalam media RPMI (Gibco, USA), ditambah  Fetal Bovine Serum (FBS) 10% (v/v) (Sigma Aldrich Chemie GmbH, Jerman), 1% penicillin-streptomycin dan 0.5% fungizone  (Gibco,  USA)  dalam  inkubator  37 0 C  dengan  5%  CO 2 (Hera  cell  (Heraeus)  Kendro Laboratory Product, Jerman).

## 2.4. Uji aktivitas antikanker Ekstrak A. paniculata
Suspensi sel T47D sebanyak 100 µL didistribusikan ke dalam sumuran-sumuran pada 96- well plate dan diinkubasi dalam inkubator CO 2 selama 24 jam pada suhu 37 0 C, 5% CO 2 .    Setelah diinkubasi, diamati morfologi sel dengan mikroskop inverted untuk melihat kondisi sel. Setelah itu, media  dalam  plate  dibuang,  diganti  dengan  100  µL  media  baru  yang  sudah  mengandung  ekstrak dengan  seri  konsentrasi:  250,  125,  62.5,  31.25,  15.625  µg/mL.  Kemudian  plate  diinkubasi  dalam inkubator  selama  24  jam  pada  suhu  37 0 C,  5%  CO 2 .  Setelah  24  jam,  morfologi  sel  diamati  dengan
mikroskop  inverted,  media  dibuang.  Pada  tiap  sumuran  ditambahkan  100  µL  larutan  MTT  dalam media komplit. Selanjutnya diinkubasi selama 3-4 jam. Reaksi MTT dihentikan dengan penambahan reagen stopper SDS 10% dalam HCl 0.1 N sebanyak 100 µL. 96-well plate dibungkus dengan kertas dan diinkubasi  dalam  ruangan  gelap  bersuhu  kamar  selama  1  malam  [14].  Absorbansi  dibaca  dengan menggunakan ELISA reader pada λ = 595 nm (Bio-rad, USA) [15]. Data absorbansi yang diperoleh dari  pengukuran  dapat  dikonversikan  ke  persentase  viabilitas  sel  dengan  menggunakan  rumus berikut:
Persentase % sel hidup = (abs. perlakuan − abs. kontrol media) (abs. kontrol sel − abs. kontrol media) × 100%

## 3. HASIL DAN DISKUSI

## 3.1. Hasil
3.1.1. Identifikasi senyawa aktif ekstrak A. paniculata dari beberapa lokasi di Jawa Timur
Identifikasi  senyawa  pada  ekstrak  A.  paniculata  dilakukan  dengan  metode  KLT.  Uji  KLT bertujuan untuk profiling kandungan senyawa pada ekstrak yang diambil dari beberapa lokasi di Jawa  Timur.  Pengujian  ini  menggunakan  fase  diam  plat  KLT  GF 254 dan  fase  gerak  kloroform: methanol  perbandingan  9:  1  [16].  Didapatkan  nilai  Rf  kisaran  0.51-0.53.  Nilai  Rf  andrografolid menurut Farmakope Herbal yakni sebesar 0.55, sehingga diduga Rf yang hampir sama merupakan senyawa andrografolid [17,18]. Hasil uji disajikan pada Gambar 1.
Gambar 1. KLT ekstrak A. paniculata (fase diam silica gel GF 254 ; fase gerak kloroform: metanol= 9: 1, penampak noda  asam sulfat  10%), 254  nm  sebelum  derivatisasi  (a),  366  nm  setelah  derivatisasi  (b). ApTB  (a), ApTN (b), ApTS (c), ApBT (d), ApBS (e), ApBK (f), ApMS (g), ApML (h), ApMK (i), ApPPd (j), ApPPs (k), ApPP (l), ApJK (m), ApJM (n), ApJP (o).
3.1.2. Aktivitas antikanker ekstrak A. paniculata dari beberapa lokasi di Jawa Timur
Tujuan uji aktivitas antikanker ekstrak A. paniculata terhadap sel T47D dari beberapa lokasi yang  berbeda  di  Jawa  Timur  yakni  untuk  mengetahui  perbedaan  aktivitas  antikanker  akibat perbedaan  lokasi  tumbuh.  Perbandingan  efek  penghambatan  pertumbuhan  sel  T47D  akibat perlakuan ekstrak A. paniculata dari beberapa lokasi disajikan pada Gambar 2.
Aktivitas  antikanker  ekstrak  tanaman  obat  dikategorikan  dalam  tiga  kategori.  Kategori pertama  yakni  aktivitas  antikanker  tinggi  apabila  nilai  IC 50 <50,  kategori  kedua  yakni  aktivitas antikanker  sedang  50  µg/mL-200  µg/mL,  kategori  ketiga  yakni  aktivitas  antikanker  rendah  200 µg/mL-1000 µg/mL, dan kategori keempat tidak memiliki aktivitas apabila >1000 µg/mL [19,20].
Data nilai IC 50 yang disajikan dalam Tabel 1 menunjukkan bahwa terdapat perbedaan nilai IC 50 sampel  yang  diambil  dari  kecamatan  yang  berbeda.  Berdasarkan  nilai  IC 50 maka  aktivitas
(a) (b) a  b  c  d  e  f  g  h  i  j  k  l  m  n  o a  b  c  d  e  f  g  h  i  j  k  l  m  n  o
antikanker dari beberapa lokasi di Jawa timur dapat diklasifikasikan sebagai berikut; ApBS, ApMS, ApML, ApMK, ApPPd, ApPPs, ApPP  memiliki aktivitas antikanker sedang  karena terdapat pada rentang nilai 50 µg/mL sampai 200 µg/mL sedangkan ApTB, ApTN, ApBT, ApBK, ApJK, ApJM, ApJP memiliki aktivitas antikanker rendah karena terdapat pada rentang 200 µg/mL sampai 1000 µg/mL. Akan  tetapi  ApTS  diduga  tidak  memiliki  aktivitas  antikanker  dikarenakan  melebihi  1000  µg/mL [19,20].
Gambar 2. Perbandingan efek penghambatan pertumbuhan sel T47D akibat perlakuan ekstrak ApTB; ApTN; ApTS; ApBT; ApBS; ApBK; ApMS; ApML; ApMK; ApPPd; ApPPs; ApPP; ApJK; ApJM; ApJP.
Tabel 1. Analisis probit nilai IC 50 sampel terhadap sel T47D
Sampel Nilai IC 50 (µg/mL) ± SD ApTB 335.166 ± 84.900 ApTN 281.168 ± 84.024 ApTS >1000 ApBT 266.383 ± 205.523 ApBS 196.414 ± 23.922 ApBK 240.025 ± 11.842 ApMS 97.694 ± 3.266 ApML 112.774 ± 3.622 ApMK 128.127 ± 6.443 ApPPd 154.906 ± 17.343 ApPPs 185.873 ± 20.203 ApPP 110.327 ± 7.237 ApJK 200.707 ± 1.691 ApJM 343.444 ± 48.658 ApJP 224.576 ± 4.677 Doksorubisin 0.617 ± 0.066 *Rata-rata nilai IC 50 ± Simpang deviasi dengan replikasi 3 kali
0.000 20.000 40.000 60.000 80.000 100.000 120.000 140.000 % S el H id u p Sampel 15.625 31.25 62.5
125 250
Pemberian  ekstrak  A.  paniculata  dari  lokasi  pengambilan  sampel  yang  berbeda  sangat berkaitan  dengan  adanya  perbedaan  aktivitas  antikanker  yang  ditimbulkan.  Perbedaan  aktivitas disebabkan karena perbedaan matabolit. Perbedaan metabolit dipengaruhi oleh karakteristik lokasi pengambilan. Karakteristik lokasi pengambilan sampel disajikan pada Tabel 2.

## Tabel 2. Karakteristik lokasi pengambilan sampel
No. Sampel Ketinggian (MDPL) Suhu Rata- rata ( o C) Curah Hujan (mm) Iklim Jenis Tanah 1. ApTB 146 25,2 1897 Am Alluvial;  Assosiasi  alluvial kelabu  dan  alluvial  coklat kelabuan; Litosol 2. ApTN 106 25,3 1735 Aw Assosiasi  alluvial  kelabu  dan alluvial coklat kelabuan; Regosol coklat kelabuan 3. ApTS 102 25,4 1742 Aw Assosiasi  alluvial  kelabu  dan alluvial coklat kelabuan; Litosol mediteran dan resina 4. ApBT 258 24,0 2181 Am Regosol; Litosol 5. ApBS 184 24,3 2040 Am Regosol; Litosol 6. ApBK 174 24,5 1954 Am Regosol; Litosol 7. ApMS 486 23,8 2203 Am Alluvial;  Mediteran;  Asosiasi latosol  coklat  kemerahan  atau keabu-abuan;  Asosiasi  coklat dan humus keabuan 8. ApML 459 23,8 2101 Am Andosol 9. ApMK 454 23,7 2090 Am Alluvial;  Mediteran;  Asosiasi latosol  coklat  kemerahan  atau keabu-abuan;  Asosiasi  coklat dan humus keabuan 10. ApPPd 345 24,6 2003 Am Alluvial;  Mediteran;  Labosal; Grumasol; Andosol 11. ApPPs 255 25,1 1844 Aw Alluvial;  Mediteran;  Labosal; Grumasol; Andosol 12. ApPP 194 25,5 1794 Aw Alluvial;  Mediteran;  Labosal; Grumasol; Andosol 13. ApJK 36 26,5 1727 Aw Grumasol kelabu tua 14. ApJM 35 26,4 1686 Aw Komplek mediteran coklat dan latosol 15. ApJP 35 26,4 1723 Aw Assosiasi  alluvial  kelabu  dan alluvial keabuan 21
*Keterangan: Aw = Iklim Sabana Tropik; Am = Iklim Muson Tropis

## 3.2. Diskusi
Hasil  penelitian  yang  diperoleh  dari  sampel  ekstrak  A.  paniculata  berdasarkan  klasifikasi aktivitas  memiliki  efek  antikanker  yang  berbeda.  Hal  tersebut  dikarenakan  adanya  perbedaan kandungan senyawa dari suatu tanaman yang dipengaruhi oleh faktor internal dan eksternal [22]. Faktor  internal  berupa  genetik  dan  variasi  fisiologi  [23].  Sedangkan  faktor  eksternal  (lingkungan) seperti air, intesitas cahaya, temperature, kelembapan, kondisi tanah (jenis dan komposisi), paparan sinar  matahari,  letak  geografis,  curah  hujan,  dan  bahan  kimia  (mineral/pupuk)  [24,25,12].  Faktor lingkungan  lain  berupa  stres  yang  diinduksi  radiasi UV,  perubahan  iklim,  serta  kerusakan  akibat mikroorganisme dan serangga [26,27].
Karakteristik lokasi pengambilan sampel pada Tabel 2 memperlihatkan adanya perbedaan dari tiap daerah. Dilihat dari segi ketinggian tempat, Kecamatan Singosari memiliki ketinggian 486 MDPL, hal tersebut membuktikan bahwa semakin tinggi ketinggian lokasi tumbuh maka semakin tinggi  pula  kadar  senyawa  yang  dikandungnya  [28].  Sedangkan  dari  segi  jenis  tanah,  unsur  hara sangat  berperan  dalam  kesuburan  tanah  sehingga  menyebabkan  perbedaan  kandungan  senyawa pada satu spesies yang sama. Lalu dari segi iklim, curah hujan, serta suhu pun merupakan faktor- faktor yang memang berperan pada perbedaan kandungan metabolit sekunder dari suatu tanaman [12].
Hasil analisa stastistik dengan software IBM SPSS Statistik versi 24 menggunakan uji pos hoc LSD menunjukkan  tidak terdapat perbedaan yang  bermakna pada  aktivitas antikanker ekstrak  A. paniculata yang diambil dari lokasi yang berbeda di Jawa timur (p>0.05), kecuali pada ApTS dengan doksorubisin  dan  sampel  lain.  Hal  tersebut  membuktikan  bahwa  dimungkinkan  ApTS  tidak memiliki  aktivitas  antikanker  karena  nilai  IC 50 jauh  berbeda  dengan  doksorubisin,  padahal doksorubisin berperan sebagai kontrol positif dari penelitian ini. Pengaruh dari faktor internal dan eksternal yang tidak dapat  diprediksi berpotensi menjadi penyebabnya. Begitu juga dengan tidak adanya perbedaan yang bermakna pada sampel lain menurut uji statistik. Meskipun demikian, nilai IC 50 yang  telah  didapat  dari  penelitian  ini  tetap  dapat  dikelompokkan  sesuai  kriteria  kekuatan aktivitas antikankernya antara lain aktivitas antikanker sedang yang meliputi ApBS, ApMS, ApML, ApMK, ApPPd, ApPPs, ApPP dan aktivitas antikanker rendah ApTB, ApTN, ApBT, ApBK, ApJK, ApJM, ApJP.

## 4. KESIMPULAN
Ekstrak  A.  paniculata  dari  lokasi  yang  berbeda  di  Jawa  Timur  tidak  memiliki  perbedaan aktivitas antikanker secara bermakna (p>0.05), kecuali ApTS dengan antar sampel maupun kontrol positif doksorubisin. Sampel yang memiliki aktivitas antikanker berkekuatan sedang meliputi ApBS, ApMS, ApML, ApMK, ApPPd, ApPs, dan ApPp.
Ucapan  terimakasih:  Tim  Peneliti  mengucapkan  terimakasih  kepada  Lembaga  Penelitian  dan Pengabdian Kepada Masyarakat (LP2M) UIN Maulana Malik Ibrahim Malang yang telah mendanai penelitian ini (Hibah Penelitian Kompetitif tahun 2019).
Konflik kepentingan: Pada penelitian tidak terdapat konflik kepentingan.

## Referensi
1. Garnick, M. B. An Introduction to Cancer and Basic Cancer Vocabulary; US News & World Report: USA, 2008.
2. American Cancer Society. Breast Cancer Facts and Figures 2019-2020; American Cancer Society, Inc: Atlanta, 2019.
3. International Agency for Research on Cancer. Estimated Age-standardized Incident Rates (World) in 2018, Worldwide, both Sexes, all Ages. Available online:    https://gco.iarc.fr/today/online-analysis-multi- bars?v=2018&mode=cancer&mode_population=countries&population=900&populations=900&key=asr&se x=0&cancer=39&type=0&statistic=5&prevalence=0&population_group=0&ages_group%5B%5D=0&ages_g roup%5B%5D=17&nb_items=10&group_cancer=1&include_nmsc=1&include_nmsc_other=1&type_multipl e=%257B%2522inc%2522%253Atrue%252C%2522mort%2522%253Afalse%252C%2522prev%2522%253Afal se%257D&orientation=horizontal&type_sort=0&type_nb_items=%257B%2522top%2522%253Atrue%252C %2522bottom%2522%253Afalse%257D&population_group_globocan_id= (Diakses pada 23 Agustus 2020).
4. International  Agency  for  Research  on  Cancer.  Indonesia  Fact  Sheets.  Available  online: https://gco.iarc.fr/today/data/factsheets/populations/360-indonesia-fact-sheets.pdf (Diakses pada 23 Agustus 2020).
5. Kementerian  Kesehatan  RI.  InfoDatin  Pusat  Data  dan  Informasi  Kementerian  Kesehatan  RI;  Pusat  Data  dan Informasi Kementerian Kesehatan RI: Jakarta Selatan, Indonesia, 2015.
6. Limyati,  D.A.;  Junior,  B.I.I.  Jamu  Gendong,  A  Kind  of  Traditional  Medicine  in  Indonesia:  the  Microbial Contamination of its Raw Material and End Product. Journal Ethnopharmacol 1998, 63, 201-308.
7. Tan, M.L.; Kuroyanagi, M.; Sulaiman, S.F.; Najimudin, N.; Muhammad, T.S.T. Cytotoxic Activities of Major Diterpenoid Constituents of Andrographis paniculata in a Panel of Human Tumor Cell Lines. Pharmaceutical Biology 2005, 43(6), 501-508. DOI: 10.1080/13880200500220557.
8. Sastyarina, Y.; Khotib, J.; Sukardiman. Efek Ekstrak Sambiloto (Andrographis paniculata Nees) pada Ekspresi P53 dari Kanker Payudara Tikus yang Diinduksi dengan DMBA. Journal of Tropical Pharmacy and Chemistry 2011, 1(2), 165-173. DOI: https:doi.org/10.25026/jtpc.v1i2.25.
9. Widjajakusuma, E.C.; Tamayanti, W.D.; Hendriati, L.; Hamid, I.S.; Ferawati; Surjadhana, A.; Jonosewojo, A. Efek Antikanker Mammae dari Ekstrak Centella asiatica dan Andrographis paniculata: Suatu Rangkuman Studi Aktivitas secara In Vitro dan In Vivo. Prosiding InSINas 2012, 20-25.
10. Ramadhani, A. Potensi Aktivitas Antikanker Kombinasi Ekstrak Herba Sambiloto (Andrographis paniculata Nees.) dengan Doksorubisin terhadap Sel Kanker HeLa, Sel Kanker WiDr, dan Sel Kanker T47D secara In Vitro. Skripsi, Universitas Airlangga, Surabaya, 2014.
11. Sukardiman,  H.;  Widyawaruyanti,  A.;  Sismindari;  Zaini,  N.C.  Apoptosis  Inducing  Effect  of Andrographolide on TD-47 Human Breast Cancer Cell Line. Afr. J. Trad.CAM. 2007, 4(3), 345-351.
12. Verma, N.; Shukla, S. Impact of Various Factors Responsible for Fluctuation in Plant Secondary Metabolites. Journal of Applied Research on Medicinal and Aromatic Plants 2015, 1-9.
13. Badan Pengawas Obat dan Makanan (BPOM). Acuan Sediaan Herbal; Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia: Jakarta, Indonesia, 2010.
14. Cancer Cemoprevention Riset Center (CCRC) Farmasi UGM.  Prosedur Tetap Kerja In Vitro; Fakultas Farmasi UGM: Yogyakarta, Indonesia, 2009.
15. Nugroho, A.E.; Hermawan, A.; Putri, D.D.P.; Novika, A. Combination Effects of Hesane Insoluble Fraction of Ficus septica Burm and Doxorubicin Chemotherapy on T47D Breast Cancer Cells Combinational. Asian Pasific Journal of Tropical Biomedicine 2013, 3(4), 297-302.
16. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Farmakope Herbal Indonesia; Departemen Kesehatan Republik Indonesia: Jakarta, Indonesia, 2009.
17. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Farmakope Herbal Indonesia, Edisi Ke-1.; Departemen Kesehatan Republik Indonesia: Jakarta, Indonesia, 2008.
18. Purnamasari, A. Kendali Mutu Daun Sambiloto (Andrographis paniculata) menggunakan Pengolahan Citra dan Teknik Pengenalan Pola secara Kemometrik. Skripsi, Program Sarjana Institut Pertanian Bogor, Bogor, 2013.
19. Kuete,  V.(Ed).  Medicinal  Spices  and  Vegetables  from  Africa:  Therapeutic  Potential  Againts  Metabolic, Inflammatory, and Systemic Diseases; Academic Press: Cambridge, Inggris, 2017.
20. Fatmawati,  D.;  Suparmi;  Yusuf,  I.;  Israhnanto.  Selektivitas  Antikanker  Ekstrak  Daun  Sirsak  (Annona muricata) pada Lini Sel Kanker Payudara. Bio-Site 2018, 4(2), 78-83.
21. En Climate Data. Available online: https://en.climate-data.org (Diakses 21 Januari 2019).
22. Heuberger, A.L.; Broeckling, C.D.; Kirkpatrick, K.R.; Prenni, J.E.  Application of Non Targeted Metabolite Profiling to Discover Novel Markers of Quality Traits in an Advanced Population of Malting Barley. Plant Biotechnology Journal 2014, 12, 147-160.
23. Taufik,  I.  Profil  Metabolit  Kulit  Batang  Artocarpus  champeden  Spreng  secara  HPLC  Densitometri  serta Hubungannya dengan Antimalaria dan Toksisitas In Vitro. Tesis, Universitas Airlangga, Surabaya, 2017.
24. Kim, E.J.; Kwon, J.; Park, S.H.; Park, C.; Seo, Y.; Shin, H.; Kim, H.K.; Lee, K.; Choi, S.; Ryu, D.H.; Hwang, G. Metabolite Profiling of Angelica gigas from Different Geographical Origins Using 1H NMR and UPLC-MS Analysis. Journal of Agricultural and Food Chemistry 2011, 59, 8806-8815.
25. Radusiene, J.; Karpaviciene, B.; Stanius, Z. Effect of External and Internal Factors on Secondary Metabolites Accumulation in St. John’s Worth. Botanica Lithuanica 2012, 18(2), 101-108.
26. Hounsome, N.; Hounsome, B.; Tomos, D.; Edward-Jones, G. Plant Metabolites and Nutritional Quality of Vegetables. Journal of Food Science 2008, 73(4), 48-65.
27. Canas,  R.A.;  Canales,  J.;  Hernandez,  C.M.;  Granadoz,  J.M.;  Avila,  C.;  Martin,  M.L.G.;  Canovas,  F.M. Understanding Developmental and Adaptive Cues in Pine Through Metabolite Profiling and Co Expression Network Analysis. Journal of Experimental Botany 2015, 66(11), 3113-3127.
28. Nikolova, M.T.; Ivancheva, S.V. Quantitative Variations of Artemisia vulgaris L. and Veronica chamaedrys L. in Relation to Altitude and Polluted Environment. Acta Biologica Szegediensis 2005, 49(3-4), 29-32.
© 2020 by the authors. Submitted for possible open access publication under the terms and  conditions  of  the  Creative  Commons  Attribution  (CC  BY)  license (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).