## PHYTOCHEMICAL AND TOXICITY ASSAY EXTRACT ETHYL ACETATE OF
Melochia umbellata (Houtt) Stapf. var. Visenia BY Brine Shirmp Lethality Test METHOD
Uji Fitokimia dan Toksisitas Ekstrak Etil Asetat Kulit Batang Melochia umbellata (Houtt) Stapf. var. Visenia dengan Metode Brine Shirmp Lethality Test (BSLT)
Fauziah Ahmad * , Nunuk Hariani Soekamto, Firdaus
* Departemen of Chemistry, Faculty of Science, University of  Hasanuddin Jl. Perintis Kemerdekaan 90245, Makassar-Indonesia
* Corresponding author, phone: 085239686637, email: auzhyahmad@gmail.com
Received: Dec.2016 Published: Jan. 2017

## ABSTRACT
Melochia  umbellata (Houtt)  Stapf.  var.  Visenia  is  plant  species  included  in  Malvaceae  family.  This  spesies  is known  as  paliasa  and  used  as  traditional  medicine  by  the  people  of  South  Sulawesi.  This  study  aimed  to determine the secondary metabolites by reagents and toxicity characteristic testing from bark extract of Melochia umbellata (Houtt)  Stapf.  var.  Visenia  using Brine  Shirmp  Lethality  Test (BSLT)  method.  The  extract  was prepeared  by  maceration  ethyl  acetate.  Phytochemical  test  result  showed  that  the  ethyl  acetate  extract  was containing  the  steroid  compound,  alkaloids  and  terpenoids.  Toxicity  test  performed  by  shrimp Artemia  salina Leach larvae was at 48 hours. The toxic effects of the extract were identified by the percentage of the number of shrimp larvae mortality using probit value analysis (LC 50 ). The toxicity test of bark Melochia umbellata (Houtt) Stapf. var. Visenia extract showed that the ethyl acetate extract is toxic to A. salina LC 50 = 54,55 mg / mL.
Keywords: Melochia umbellata (Houtt) Stapf. var. Visenia, alkaloid, terpenoid, steroid , Artemia salina Leach

## PENDAHULUAN
Salah  satu  tanaman  yang  biasa  digunakan sebagai  obat  tradisional  oleh  masyarakat Sulawesi  Selatan  adalah  paliasa.  Tumbuhan paliasa  merupakan  salah  satu  tumbuhan  yang termasuk  dalam  famili  Malvaceae  (Raflizar, dkk.,  2006).  Tumbuhan  ini  terdiri  atas  tiga  jenis tumbuhan yang berbeda yaitu Kleinhovia hospita Linn dari genus Kleinhovia , Melochia umbellata (Houtt)  Stapf  var.  Degrabrata  dan Melochia umbellata (Houtt) Stapf var. Visenia dari spesies M.  umbellata (Houtt)  Stapf  dan  genus Melochia (Tayeb, dkk., 2008).
Semua  bagian  dari  tumbuhan  paliasa  yang terdiri  atas  jaringan  kulit  akar,  kayu  akar,  kulit batang,  kayu  batang,  dan  daun  telah  banyak diteliti.  Secara  umum  kulit  tumbuhan  paliasa mengandung minyak atsiri, triterpenoid, senyawa sianogenik,  asam  lemak,  skopoletin,  kuersetin, dan  keampferol  ( Philippine  Medicinal  Plants , 2013).  Sementara  ekstrak  metanol  kulit  batang tumbuhan M.  umbellata mengandung  senyawa golongan  alkaloid,  flavonoid,  terpenoid,  fenolik, dan saponin (Usman, dkk., 2012).
Hasil  uji  toksisitas  ekstrak  metanol  pada bagian  jaringan  kulit  akar,  kayu  akar,  kulit
batang, kayu batang, dan daun dari M. umbellata (Houtt)  stapf  var.  Degrabrata  terhadap  benur udang A.  salina memperlihatkan  nilai  LC 50 masing-masing  sebagai  berikut;  66,22;  37,343; 30,27;  1,80  dan  84,26  μg/mL.  Hasil  ini menunjukkan  ekstrak  kayu  batang  dan  kulit batang M.  umbellata (Houtt)  stapf  var. Degrabrata  merupakan  bagian  yang  paling  aktif dibandingkan  bagian  jaringan  lainnya  (Erwin, dkk.,  2009).  Hal  tersebut  mendasari  sehingga salah satu jaringan tumbuhan M. umbellata yang akan  dipilih  pada  penelitian  ini  adalah  jaringan kulit batang.
Penelitian  terhadap  ekstrak  n-heksan  kulit batang M.  umbellata (Houtt)  stapf  var. Degrabrata  memiliki  bioaktivitas  antibakteri terhadap Bacillus subtilis dan antijamur terhadap Candida  albicans (Usman,  dkk.,  2014).  Ekstrak etil asetat kulit batang M. umbellata (Houtt) stapf var. Degrabrata sangat aktif terhadap larva udang A. salina Leach dengan nilai LC 50 405,58 μg/mL juga  memiliki  bioaktivitas  antibakteri  terhadap bakteri Staphylococcus  aureus (Usman,  dkk., 2014).  Senyawa  turunan  steroid  telah  diisolasi dari  kayu  akar M.  umbellata yaitu  stigmasterol (5,22-stigmastadien-3 β -ol)  dari  fraksi  n-heksan
yang  aktif  terhadap  jamur Aspergillus niger dengan  zona  penghambatan  sebesar  13,03  mm pada  konsentrasi  50  mg/mL  (Ridhay,  dkk., 2012),  sedangkan  ekstrak  metanol  kulit  akar M. umbellata (Houtt.)  Stapf  var.  degrabrata  bersifat toksik  terhadap A.  salina dengan  nilai  LC 50 sebesar  66,22  ppm.  Ekstrak  etil  asetat  daun M. umbellata aktif  terhadap A.  salina L.  dengan nilai  LC 50 0,9517  μg/mL.  (Ahmad,  A.,  2013). Beberapa  penelitian  terhadap  ekstrak  tertentu dari  tumbuhan M.  umbellata (Houtt)  stapf  var. Degrabrata  serta  berbagai  bioaktivitasnya  telah dilaporkan,  tetapi  penelitian terhadap M. umbellata (Houtt)  stapf  var.  Visenia    belum pernah dilakukan.
Pada  penelitian  telah  dilakukan  penelitian tentang  toksisitas  ekstrak  dari  jaringan  kulit batang M.  umbellata (Houtt)  stapf  var.  Visenia dengan menggunakan metode BSLT yaitu, suatu metode  uji  toksisitas  terhadap  larva A.  Salina yang  dianalogikan  dengan  kemampuan  suatu bahan  obat  yang  memiliki  efek  antikanker. Metode  ini  digunakan  untuk  skrining  awal senyawa bioaktif bahan alam karena menunjukkan  adanya  korelasi  dengan  metode sitotoksik in vitro lainnya (Carballo, dkk., 2002).

## METODOLOGI

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  di  dalam penelitian  ini  adalah  5  kg  serbuk  kulit  batang tumbuhan M. umbellata var. Visenia, pelarut etil asetat digunakan untuk ekstraksi dan kromatografi, plat KLT (merk Kieselgel 60 F254 0,25  mm),  NaCl  laut  (Sigma,  no.  katalog  S- 9883),  DMSO  (Merk,  no.  katalog  802912),  dan telur  udang A.  salina Leach serta  beberapa pereaksi untuk uji fitokimia.

## Alat
Alat  yang  digunakan  adalah  alat-alat  gelas, plat  tetes,  corong  Buchner,  rotary  evaporator, timbangan digital, pompa vakum, lampu UV 254 nm, dan wadah penetasan.

## Prosedur Kerja Preparasi Sampel
Kulit batang tumbuhan M. umbellata (Houtt) stapf  var.  Visenia    diperoleh  dari  desa  Baring, kecematan  Sigeri,  kabupaten  Pangkep,  Sulawesi Selatan dipotong kecil-kecil kemudian
dikeringkan  dengan  cara  diangin-anginkan  di tempat yang tidak terkena sinar matahari. Setelah kering sampel digiling hingga halus.

## Ekstraksi
Sebanyak  5  kg  kulit  batang M.  umbellata (Houtt)  stapf  var.  Visenia    dimaserasi  dengan pelarut  etil  asetat  selama  tiga  kali  24  jam. Ekstrak  etil  asetat  yang  diperoleh  kemudian dipekatkan.  Selanjutnya  dilakukan  uji  fitokimia tehadap ekstrak yang diperoleh.

## Uji Toksisitas
Ekstrak  etil asetat kulit batang M. umbellata (Houtt)  stapf  var.  Visenia  selanjutnya  diuji aktivitasnya  terhadap  larva  udang A.  Salina dengan metode BSLT.
a. Penyemaian Benur Udang A. Salina Sebanyak  15  mg  telur  udang A.  Salina dimasukkan ke dalam wadah yang berisi air laut dan  diaerasi  dibawah  cahaya  lampu  pijar  40-60 watt.  Lampu  dinyalakan  selama  48  jam  hingga telur A. Salina menetas menjadi larva.

## b. Penyiapan sampel
Sebanyak  1,0  mg  sampel  dilarutkan  dengan 100 μL DMSO kemudian diencerkan dengan 150 μL aquades hingga volume total menjadi 250 μL. Pengenceran  dan  pengukuran  dilakukan  triplo dalam  mikroplate  dengan  deret  konsentrasi  500, 250, 125, 62.5, dan 31.25 μg/mL.
c. Pelaksanaan Uji Toksisitas
Larva A.  Salina sebanyak  7-15  ekor  yang sudah menetas dimasukkan kedalam lubang baris mikroplate dengan konsentrasi yang berbeda dan diinkubasi  selama  24  jam.  Setelah  24  jam, jumlah A.  Salina yang  mati  dan  hidup  pada mikroplate  dihitung  untuk  memperoleh  nilai LC 50

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Melochia  umbellata (Houtt)  stapf  var. Visenia  merupakan  salah  satu  tumbuhan  yang termasuk  dalam  famili  Malvaceae  yang  biasa digunakan sebagai obat tradisional oleh masyarakat  Sulawesi  Selatan  yang  dikenal dengan  nama  tumbuhan  paliasa.  Tumbuhan  ini terdiri  atas  tiga  jenis  tumbuhan  yang  berbeda yaitu Kleinhovia  hospita Linn  dari  genus
Libermann-Burchard Mayer
FeCl 3
Kleinhovia , Melochia  umbellata (Houtt)  Stapf var. Degrabrata dan Melochia umbellata (Houtt) Stapf  var.  Visenia  dari  spesies M.  umbellata (Houtt) Stapf dan genus Melochia.
Gambar 1. Tumbuhan M. umbellata (Houtt) stapf var. Visenia
Pada  penelitian  ini  yang  diambil  sebagai sampel  adalah  bagian  kulit  batang.  Berdasarkan hasil  uji  toksisitas  ekstrak  metanol  pada  bagian jaringan kulit akar, kayu akar, kulit batang, kayu batang, dan daun dari M. umbellata (Houtt) stapf var.  Degrabrata  terhadap  benur  udang Artemia salina Leach memperlihatkan nilai LC 50 masing- masing  sebagai  berikut;  66,22;  37,343;  30,27; 1,80 dan 84,26 μg/mL.
Hasil  ini  menunjukkan  ekstrak  kulit  batang M.  umbellata (Houtt)  stapf  var.  Degrabrata merupakan  bagian  kedua  yang  paling  aktif dibandingkan  bagian  jaringan  lainnya  (Erwin, dkk.,  2009).  Ekstrak  etil  asetat  yang  diperoleh dari  maserasi  kulit  batang M.  umbellata (Houtt) stapf  var.  Visenia  sebanyak  8,51  g.  Selanjutnya ekstrak diuji fitokimia dengan beberapa pereaksi yaitu pereaksi Libermann-Burchard untuk mengetahui  golongan  senyawa  steroid  dan terpenoid,  pereaksi  Meyer  untuk  mengetahui
golongan  senyawa  alkaloid  sedangkan  pereaksi FeCl 3 untuk  mengetahui  golongan  senyawa flavonoid.
Tabel 1. Hasil Uji fitokimia ekstrak kulit batang M. umbellata (Houtt) stapf var. Visenia.
Adapun  hasil  uji  fitokimia  ekstrak  kulit batang  seperti  yang  terlihat  pada  Tabel  1.  Hasil skrining  fitokimia  menunjukkan  bahwa  ekstrak etil  asetat  mengandung  senyawa  golongan terpenoid, steroid dan alkaloid. Pereaksi Libermann  Burchard  merupakan  uji  positif golongan senyawa steroid/terpenoid yaitu perubahan warna merah (terpenoid) dan hijau tua (steroid).
Gambar 2. Hasil uji fitokimia ekstrak kulit batang M. umbellata (Houtt) stapf var. Visenia
Pereaksi Mayer uji positif senyawa golongan alkaloid adanya endapan putih sedangkan  FeCl 3 untuk  uji  positif  golongan flavonoid  berwarna  hijau  kehitaman,  tetapi  pada hasil  uji  berwarna  kuning  menunjukkan  bahwa negatif mengandung flavonoid.
Uji  toksisitas  dengan  metode Brine  Shirmp Lethality  Test (BSLT)  merupakan  praskrining
Tabel 2. Hasil uji toksisitas ekstrak kulit batang M. umbellata (Houtt) stapf var. Visenia dengan metode BSLT
terhadap  senyawa  aktif  yang  terkandung  dalam ekstrak tanaman. Hasil uji toksisitas ekstrak kulit batang M. umbellata (Houtt) stapf var. Visenia. dengan metode BSLT terlihat pada Tabel 2.
Uji A.  salina dengan  ekstrak  etil  asetat dilakukan  dengan  tiga  kali  pengulangan  pada masing-masing  konsentrasi  500,  250,  125,  62.5, dan 31.25 μg/mL. Pada Tabel 2 diketahui bahwa semakin  rendah  konsentrasi  ekstrak  maka semakin kecil pula efek kematian pada A. Salina yakni  34,78  %  dan  pada  kematian  100% ditunjukkan pada konsentrasi 500 μg/mL.
Hasil  analisa  probit  pengujian  toksisitas ekstrak  etil  asetat  diperoleh  nilai  LC 50 =  54,55 μg/mL. Menurut Meyer (1982), ekstrak dianggap toksik  apabila  memiliki  nilai  LC 50 <  1000 μg/mL. Berdasarkan batasan tersebut maka dapat dinyatakan  bahwa  ekstrak  etil  asetat  bersifat toksik.

## KESIMPULAN
Ekstrak  etil  asetal  dari  kulit  batang M. umbellata (Houtt) stapf var. Visenia mengandung senyawa golongan steroid,
terpenoid  dan  alkaloid  serta  bersifat  toksik terhadap Artemia Salina dengan nilai LC 50 = 54,55 μg/mL.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmad,  asbullah.  2013. Isolasi  Metabolit Sekunder  Dari  Fraksi  Ekstrak  Etil  Asetat Daun  Melochia  Umbellata  Yang  Aktif Terhadap  Larva  Udang  Artemia  Salina Leach. Skripsi  tidak  diterbitkan.  Jurusan Kimia  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam  Universitas  Hasanuddin;
Makassar.
Carballo,  J.L ., Hernandes-Inda,  Z.L.,  Perez,  P., Garcia-Gravalos,  M.D.,  2002,  A  comparison between two brine  shrimp assays  to detect in vitro cytotoxicity  in  marine  natural  products,
BMC Biotechnology , 2(17),1-5.
Erwin,  Noor,  A.,  Soekamto,  N.H.,  Harlim  T. 2009,  β-Sitosterol  sebagai  Komponen  Utama pada  Fraksi  Heksan  Kayu  Batang Melochia umbellata (Houtt).  Stapf  var.  Degrabrata  K . (Paliasa), Journal  Kimia  Mulawarman, Vol. 6, No. 2, Mei 2009. Kimia FMIPA Unmul.
Meyer,  B.N.,  Ferrigni,  N.R.,  Putnam,  J.E., Jacobson,  L.B.,  Nichols,  D.E.,  McLaughlin, J.L.,  1982,  Brine  shrimp:  A  convenient general bioassay for active plant constituents, Plant. Med. 45, 31-4
Raflizar,  Adimunca,  C.,  dan  Tuminah,  S.,  2006, Dekok  Daun  Paliasa  ( Kleinhovia  hospita Linn.)  Sebagai  Obat  Radang  Hati  Akut, Cermin Dunia Kedokteran , 50, 10-14 Philippine Medicinal Plants, “Tan-
nag/ Kleinhovia  hospita Linn.  Guest  Tree, Alternative  Medicine  in  the  Philippines”, available  at  http://www.stuartxchange.com/ Tan-ag.html, April, 1, 2013.
Ridhay,  A.,  Noor,  A.,  Soekamto,  N.  H., et  al ., 2012,  A  Stigmasterol  Glycoside  from  the Root  Wood  of Melochia  umbellata (Houtt) stapf var .  degrabrata  K., Indonesian Journal of Chemistry , 12(1), 100-103. Tayeb,  R.,  Rahim,  A.,  Alam,  G., Wahyuono,  S., dan  Hartati,  M.S.  2007,  Fraksinasi  Senyawa Antikanker Daun Paliasa ( Melochia
umbellata (Houtt)  Staff  Var. Deglabrata ,
Majalah  Farmasi  dan  Farmakologi, 11,  61- 71.
Usman,  Soekamto,  N.H.,  Usman,  H.,  dan Ahmad,  A.,  2012,  Uji  Fitokimia  dan Antibakteri  dari  Ekstrak  Metanol  Kulit Batang Melochia umbellata (Houtt) Stapf var. Degrabrata Terhadap Bakteri Patogen, Jurnal Kimia Sains , 6(1), 30-33.