## UJI EFEK ANALGESIK EKSTRAK ETANOL DAUN KERSEN
( Muntingia calabura L . ) PADA MENCIT PUTIH JANTAN ( Mus musculus ) DENGAN INDUKSI NYERI ASAM ASETAT
Submitted : 1 Oktober 2016 Edited : 18 November 2016
Accepted : 30 November 2016
Triswanto Sentat, Susiyanto Pangestu
Akademi Farmasi Samarinda Email : acuan3s@gmail.com

## ABSTRACT
Kersen  leaf  (Muntingia  calabura  L.)  contains  tannins,  flavonoids  and  polyphenol compounds allegedly have analgesic effect. The objective was to determine the analgesic effect of ethanol extract of kersen leaves and to determine the most effective analgesic dose. This study was an experimental research. Leaves were extracted with ethanol 70% and the analgesic effect test  was  divided  into  5  groups:  negative  control  treatment  (distilled  water),  positive  control (mefenamic  acid  2.6mg/kg),  kersen  leaf  ethanol  extract  first  dose  (100mg/kg),  second  dose (200mg/kg) and tthird dose (400mg/kg). Giving treatments by oral, after 30 minutes, the mices were given a pain inductor with 0.5% acetic acid by intra peritonial administration. Analgesic power  was  calculated  by  counting  the  number  of  writhing  in  mice  for  1  hour.  The  results showed that the ethanol extract of cherry leaf has analgesic effect. From the calculation of the first dose analgesic power (42.9%), second dose (59.4%) and the third dose 69.9%. Statistical test results kruskal wallis value of p=0.011 (p<0.05) showed a significant difference between all analgesic  treatment  groups.  The  conclusion  of  this  study  is  all  of  the  ethanol  extract  had analgesic  effects  on  male  white  mice,  whereas  a  dose  of  400mg/kg  is  the  most  effective analgesic dose.
Keywords : Muntingia calabura L., Analgesic, Mus musculus, Acetic Acid Induced, number of Writhing

## PENDAHULUAN
Penggunaan  obat  tradisional  secara umum dinilai lebih aman dibandingkan obat modern,  hal  ini  disebabkan  karena  obat tradisional  memiliki  efek  samping  yang relatif  lebih  sedikit  daripada  obat  modern. Efek  samping  obat  tradisional  relatif  kecil jika digunakan secara tepat (1) .
Secara empiris daun kersen
merupakan  tanaman  obat  tradisional  yang telah  lama  digunakan  masyarakat  untuk berbagai  tujuan  pengobatan  antara  lain sebagai  obat  batuk,  penyakit  kuning,  dan asam  urat.  Menurut  Danugroho  dan Widyaningrum,  ekstrak  infusa  daun  kersen
memiliki aktivitas sebagai analgesik, setelah diujikan  pada  mencit  jantan  Ras  Swiss (2) . Daun kersen mengandung berbagai senyawa bioaktif  yaitu  senyawa  flavonoid,  saponin, triterpen,  steroid  dan  tannin (3) . Penggunaan pelarut etanol 70% pada proses ekstraksi di penelitian  ini  diharapkan  dapat  menarik kandungan  metabolit  sekunder  yang  lebih besar  dibandingkan  dengan  infusa  daun kersen yang menggunakan pelarut air.
Oleh  karena  itu,  berdasarkan  uraian tersebut  peneliti  ingin  mengetahui  efek analgesik  ekstrak  etanol  daun  kersen ( Muntingia  calabura L .) pada  mencit  putih jantan  dengan  induksi  nyeri  asam  asetat
serta  untuk  mengetahui  dosis  ekstak  paling efektif  yang  dapat  digunakan  sebagai  agen analgesik.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental  yang  dilaksanakan  di Laboratorium Terpadu III Akademi Farmasi Samarinda. Subjek yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  ekstrak  etanol  daun kersen.  Daun  kersen  diekstraksi  dengan pelarut etanol 70% dengan metode maserasi. Objek penelitian yaitu 15 ekor mencit putih jantan  ( mus  musculus )  yang  dipilih  secara purposive  sampling (4) . Uji  efek  analgesik yang  dibagi  dalam  5  kelompok  yaitu kelompok  perlakuan  kontrol  negatif (aquadest), kontrol positif (asam mefenamat 65  mg/kgBB),  ekstrak  etanol  daun  kersen dosis  I  (100  mg/kgBB),  dosis  II  (200 mg/kgBB) dan dosis III (400 mg/kgBB).
Bahan Bahan  yang digunakan yaitu  daun kersen, asam mefenamat, asam asetat 0,5%, Na-CMC  0,5%,  aquadest,  etanol  70%,  HCl pekat, serbuk Mg, pereaksi Mayer, pereaksi Bouchardat, pereaksi Dragendrof, FeCl 3 1%, larutan gelatin, dan amil alkohol.

## Hewan Uji
Hewan  uji  yang digunakan adalah mencit  putih  ( Mus  muculus )  berjenis kelamin  jantan  dengan  berat  badan  antara 20-30  gram,  berumur  2-3  bulan  dalam kondisi sehat.

## Peralatan
Alat-alat  yang digunakan adalah  alat maserasi  ( Kika  Labortechnik ®),  alat-alat gelas,  blender,  kandang  mencit, mortir, stamper,  sonde  oral,  spuit  injeksi  1  ml, timbangan  analitik  dan stop  watch ,  toples kaca,  cawan  porselin,  penangas  air, corong buchner dan rotary evavorator .
Prosedur Penelitian Determinasi Tanaman Kersen ( Muntingia calabura L . )
Tanaman kersen yang akan digunakan dalam  penelitian  ini  dideterminasi  di Laboratorium Fisiologi Fakultas Matematika dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  (F-MIPA) Jurusan  Biologi  Universitas  Mulawarman Samarinda.  Determinasi  tanaman  dilakukan untuk memastikan kebenaran jenis tumbuhan kersen.
Pengumpulan  dan  Pengolahan  Daun Kersen ( Muntingia calabura L . ) Simplisia  dipilih  dari  daun  kersen yang tua dan segar, kemudian dicuci dengan air  bersih  yang  mengalir. Pengeringan dilakukan dengan di angin-anginkan sampai kering di udara terbuka dan ditutupi dengan kain hitam tipis agar terlindung dari cahaya matahari  langsung.  Sampel  yang  sudah kering kemudian dihaluskan dengan blender untuk  memperkecil  luas  permukaan simplisia  sehingga  luas  permukaan  kontak dengan  pelarut  penyari  lebih  besar.
Permukaan daun kersen berbulu menyebabkan  partikel-partikel  serbuk  daun kersen  dapat  saling  berikatan  dan menggumpal  sehingga  proses  pengayakan tidak dapat dilakukan.
Ekstraksi  Daun  Kersen  ( Muntingia calabura L . )
Proses  pembuatan  ekstrak  pada penelitian  ini  menggunakan  metode maserasi.  Serbuk  kering  daun  kersen ditimbang  sebanyak  200  gram  dimasukkan ke  dalam  wadah  kaca  lalu  ditambahkan dengan  2,8  liter  pelarut  etanol  70%, direndam selama  5  jam  dengan  diaduk dengan  menggunakan  maserator.  Hasil ekstraksi  disaring  menggunakan corong buchner ,  kemudian  dilakukan  remaserasi dengan  2,5  liter  etanol  70%  dan  dilakukan pengadukan  kembali  selama  3  jam. Dilakukan  penyaringan  kembali,  kemudian
hasil  filtrat  maserasi  pertama  disatukan dengan  hasil  filtrat  remaserasi.  Hasil  filtrat yang  diperoleh  dikentalkan menggunakan rotary  evavorator pada  suhu  30-40  C, ekstrak  cair  yang diperoleh  diuapkan menggunakan  alat  penangas  air.  Setelah dipekatkan dengan cara diuapkan kemudian diperoleh ekstrak kental.
Identifikasi  Fitokimia  Ekstrak  Daun Kersen ( Muntingia calabura L . ) Identifikasi  senyawa  kimia  dilakukan pada  ekstrak  daun  kersen  dengan  prosedur sesuai  Materia  Medika  Indonesia,  sebagai berikut (5) :

## Uji Alkaloid
Sepuluh  tetes  ekstrak  etanol  daun  kersen dimasukkan  ke  dalam  tabung  ditambahkan 1ml  HCl  2  N  lalu  ditambahkan  9  ml  air suling,  dipanaskan  selama  2  menit  setelah dipanaskan kemudian disaring dengan kertas saring  sehingga  didapat  ekstrak  dari  daun kersen.  Filtrat  yang  didapat  selanjutnya digunakan  untuk  percobaan  berikut  : Diambil  3  tetes  filtrat,  lalu  ditambahkan  2 tetes pereaksi Mayer menghasilkan endapan kuning/putih. Diambil  3  tetes  filtrat,  lalu ditambahkan  2  tetes  pereaksi  Bourchardat menghasilkan endapan coklat-hitam. Diambil  3  tetes  filtrat,  lalu  ditambahkan  2 tetes  pereaksi  Dragendrof  menghasilkan endapan  merah  bata. Alkaloid  dianggap positif  jika  terjadi  endapan  atau  paling sedikit dua atau tiga dari percobaan di atas.

## Uji Tanin
Sepuluh  tetes  ekstrak  etanol  daun  kersen dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi ditambahkan 1 sampai 2 tetes larutan FeCl 3 1%. Bila terbentuk warna biru tua atau hijau kehitaman  memberikan  indikasi  adanya tannin atau sepuluh tetes ekstrak etanol daun kersen  dimasukkan  ke dalam  tabung  reaksi ditambah  1  sampai  2  tetes  larutan  gelatin.
Bila  menimbulkan  endapan  memberikan indikasi adanya tanin.

## Uji Flavonoid
Sepuluh  tetes  ekstrak  etanol  daun  kersen dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi ditambahkan  1  ml  HCl  pekat  0,1  gram serbuk Mg dan 2 ml amil alkohol kemudian dikocok.  Bila  terbentuk  warna  merah, jingga,  atau  kuning  indikasi  adanya flavonoid.
Uji Saponin Sepuluh  tetes  ekstrak  etanol  daun  kersen dimasukkan  kedalam  tabung  ditambahkan 10  ml  air  panas  dan  dikocok  selama  15 menit lalu ditambahkan 1 sampai 2 tetes HCl 2  N.  Jika  terbentuk  busa  permanen memberikan indikasi adanya saponin.
Uji Efek Analgesik Ekstrak Etanol Daun Kersen ( Muntingia calabura L . ) Lima  belas  ekor  mencit  putih  jantan dipuasakan  terlebih  dahulu  selama  18  jam dan  tetap  diberi  air  minum.  Mencit  dibagi menjadi 5 kelompok  masing-masing 3 ekor mencit..  Kelompok  kontrol  negatif  diberi aquadest dalam suspensi Na-CMC.
Kelompok  kontrol  positif  diberi  suspensi asam  mefenamat  65  mg/kgBB.  Kelompok perlakuan pada mencit putih jantan masing- masing  diberi  suspensi  ekstrak  etanol  daun kersen  dengan  dosis  100,  200  dan 400mg/kgBB.  Tiga  puluh  menit  kemudian seluruh  kelompok  hewan  yang  telah mendapatkan  perlakuan diberi  induktor nyeri  secara  intra  peritonial  menggunakan asam  asetat 0,5%  berdasarkan  dosis  yang telah  ditetapkan.  Geliat  mencit  yang  terjadi diamati selama 1 jam.

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dari uji  efek  analgesik dianalisis  secara  statistika  menggunakan metode Kolmogorov  Smirnov dengan program SPSS (Statistical Product Solution
Service) dan dilanjutkan dengan uji Kruskall
Wallis.
Perhitungan Persentase Daya Analgesik :

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Determinasi  tumbuhan  dilakukan dengan  tujuan  untuk  mengetahui  kebenaran dari  sampel  yang  digunakan  dalam penelitian  ini. Hasil  determinasi  tanaman menunjukkan bahwa sampel yang digunakan adalah daun kersen ( Muntingia calabura L .) dari  genus  Muntingia dan  famili
Elaeocarpaceae.
Daun segar yang digunakan sebanyak 3570 gram kemudian dilakukan pengeringan dengan  cara  di angin-anginkan  dan didapatkan  simplisia  kering  sebesar  1000 gram, sehingga didapatkan susut
pengeringan  28,02%,  Pengayakan  tidak dapat  dilakukan  karena  permukaan  daun berbulu  sehingga  daun  kersen  setelah dijadikan serbuk dapat saling mengikat.
Proses  ekstraksi  dengan  jumlah simplisia sebanyak 200 g dan pelarut etanol 70%  sebanyak  2,8  liter  lalu  dilakukan maserasi  menggunakan  alat  maserator selama  5  jam.  Kemudian  dilakukan
penyaringan  menggunakan  alat corong buchner , Setelah didapatkan filtrat, kemudian  dilakukan  remaserasi  kembali terhadap  residu  dengan  menggunakan  2,5 liter etanol 70% dan dilakukan pengadukan kembali  selama  3  jam.  Dilakukan penyaringan  kembali,  kemudian  hasil filtrat maserasi  pertama  disatukan  dengan  hasil filtrat  remaserasi  kemudian  filtrat  yang diperoleh  dikentalkan  menggunakan  alat rotary evavorator pada suhu 30-40 o C suhu rendah digunakan untuk mencegah terjadinya  kerusakan  senyawa  yang terkandung pada ekstrak. Setelah didapatkan ekstrak  yang  pekat  dilanjutkan  dengan penangasan ekstrak sampai  menjadi ekstrak kental,  ekstrak  kental  yang  diperoleh  yaitu sebesar  43,57  g,  sehingga  rendemen  yang diperoleh  dari  200  g  simplisia  adalah 21,78%.

## Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Kersen
Hasil  identifikasi  golongan  metabolit sekunder yang ada pada ekstrak etanol daun kersen, dapat dilihat pada tabel 1 berikut :

## Tabel 1. Hasil Skrining Fitokimia
Uji Hasil Keterangan Alkaloid 1. Bening kekuningan (Uji Mayer) (-) 2. Bening kecoklatan (Uji Bouchardat) (-) 3. Endapan merah kecoklatan (Uji Dragendorf) (+) Flavonoid Lapisan orange pada amil alkohol (+) Tannin Warna hijau kehitaman (+) Saponin Terdapat busa permanen pada lapisan atas (+)
Hasil  uji  alkaloid  pada  ekstrak  daun kersen  dinyatakan  negatif  karena  dari  3  uji yang  dilakukan  untuk  golongan  alkaloid,  2 pengujian  (uji  Mayer  dan  Bouchardat) dinyatakan  negatif.  Hasil  positif  terdapat pada  flavonoid,  tanin  dan  saponin  dari ekstrak etanol daun kersen dipengaruhi oleh kelarutan  golongan  metabolit  sekunder tersebut  pada  pelarut  selama  ekstraksi. Ketiga  metabolit  sekunder  tersebut  larut dalam pelarut polar. Pelarut yang digunakan adalah  etanol  70%  sehingga  metabolit sekunder tersebut  tersari dalam ekstrak dan teridentifikasi  saat  skrining  fitokimia.  Hasil identifikasi  golongan  metabolit  sekunder pada penelitian  ini  mempunyai  hasil  yang sama dengan pustaka (3) .

## Uji Efek Analgesik Ekstrak Etanol Daun Kersen
Pada  penelitian  uji  efek  analgesik ekstrak etanol daun kersen ini menggunakan penginduksi  asam  asetat,  yang  disebut dengan  asam  etanoat, atau  asam  cuka  yaitu senyawa  kimia  asam  organik  yang  dikenal sebagai  pemberi  rasa  asam  dan  pengaroma pada  makanan.    Pemilihan  asam  asetat sebagai  induksi  nyeri,  karena  nyeri  yang dihasilkan berasal dari reaksi inflamasi akut lokal,  inflamasi  terjadi  karena  peningkatan protein pada cairan peritonial setelah terjadi iritasi oleh asam asetat (6) .
Asam  mefenamat  digunakan  sebagai kontrol positif dalam penelitian ini pada uji analgesia asam mefenamat memiliki khasiat anti  radang,  antipiretik  dan  analgesic,  dan merupakan  satu-satunya  fenamat  yang menunjukan  kerja  pusat  dan  juga  kerja perifer.  Mekanisme  kerja  asam  mefenamat adalah  dengan  menghambat  kerja  enzim siklooksigenase  berbeda  dengan  obat-obat golongan  Anti  Inflamasi  Non  Steroid (AINS) yang lain (7)(8) .
Pengamatan  geliat  pada  hewan  uji dilakukan  selama  1  jam  setelah  hewan  uji disuntikkan  asam  asetat  0,5%  secara intraperitonial.  Presentase  daya  analgesik dihitung  sesuai  data  jumlah  geliat  mencit selama  1 jam  dari  kelompok  perlakuan  dan kelompok  kontrol  negatif.  Geliat  pada mencit  diamati  sebagai  torsi  pada  satu  sisi, menarik  kaki  ke  belakang,  penarikan kembali  abdomen,  kejang  tetani  dengan membengkokkan kepala  dan  kaki  ke belakang  serta  adanya  penurunan  aktivitas motorik.  Pada  tabel  2  berikut  dapat  dilihat hasil rata-rata jumlah geliat mencit selama 1 jam  dan  hasil  perhitungan  persentase  daya analgesik  ini  data dosis  I  (100  mg/kgBB), dosis  II  (200  mg/kgBB)  dan  dosis  III  (400 mg/kgBB).
Tabel 2. Rataan Jumlah Geliat Mencit dan % Daya Analgesik
Kelompok Perlakuan (jumlah geliat) I II III IV V Rataan  SD 155,3  2,9 52,6  4,5 88,6  11 63  3 46,6  7,5 % Daya Analgesik - 66,1% 42,9% 59,4% 69,9% Keterangan Tabel Kelompok Perlakuan : I : Kontrol negatif (Aquadest) II : Kontrol positif (Asam mefenamat 65 mg/kgBB) III : Ekstrak etanol daun kersen Dosis I (100 mg/kgBB) IV : Ekstrak etanol daun kersen Dosis II (200 mg/kgBB) V : Ekstrak etanol daun kersen Dosis III (400 mg/kgBB)
Data  dari  tabel  2  menunjukkan  data rata-rata  jumlah  geliat  mencit  setiap kelompok perlakuan, dan perhitungan persen daya  analgesik.  Kelompok  III  yang menggunakan  ekstrak  etanol  daun  kersen dosis  I  (100mg/kgBB)  memberikan  daya analgesik  yang  paling  lemah  yaitu  42,9% daya  analgesik,  sedangkan  kelompok  V yang  menggunakan  ekstrak  etanol  daun kersen  dosis  III(400mg/kgBB)  memberikan daya  analgesik  paling  kuat  dari  semua perlakuan  yaitu  69,9%  daya  analgesik. Kenaikan  konsentrasi  ekstrak  etanol  daun kersen  berbanding  lurus  dengan  daya analgesik.  Semakin  besar  konsentrasi ekstrak  maka  semakin  besar  kemampuan dalam  mengurangi  nyeri  .  Berdasarkan penelitian Dewi (2013), ekstrak etanol daun kersen memiliki aktivitas antioksidan sangat kuat dengan nilai IC 50 14,4873 µg/ml, salah satu  senyawa  yang  bersifat  antioksidan dalam  daun  kersen  adalah  flavonoid (9) . Kemampuan  daun  kersen  dalam  mengatasi nyeri  dapat  dikarenakan  adanya  kandungan flavonoid.  Mekanisme  kerja  flavonoid adalah menghambat kerja enzim
siklooksigenase,  dengan  demikian  akan mengurangi  produksi  prostalglandin  oleh asam  arakidonat  sehingga  mengurangi  rasa nyeri, selain itu flavonoid juga menghambat degranulasi  neutrofil  sehingga  akan menghambat  pengeluaran  sitokin,  radikal bebas,  serta  enzim  yang  berperan  dalam peradangan (10) . Hasil  uji  statistik kolmogorov- Smirnov didapatkan  nilai  p=0,158  (p>0,05) yang  berarti  bahwa  data  berdistribusi normal,  namun  dari  uji  analisis  varian didapatkan  nilai  p=0.002(p<0.05)  yang berarti  data  jumlah  geliat  antar  kelompok perlakuan  tidak  homogen  (0,02  <  0,05). Sehingga uji statistik dilanjutkan dengan uji Kruskall  Wallis yang  bertujuan  untuk mengetahui  perbedaan  bermakna  beberapa sampel  dari  5  kelompok  perlakuan  dan didapatkan  hasil  nilai  p=0,011  (p<0,05)
yang  berarti  terdapat  perbedaan  yang bermakna  antara  kontrol  positif,  dosis  I, dosis  II,  dosis  III  terhadap  kontrol  negatif. Ekstrak  etanol  dosis  III  memiliki memberikan  daya  analgesik  paling  efektif dengan  persentase  69,9%  karena  memiliki perbedaan  bermakna  dengan  kelompok perlakuan yang lain

## SIMPULAN
Dari penelitian yang telah dilakukan, dapat  disimpulkan  bahwa Ekstrak  etanol daun  kersen  memiliki  efek  daya  analgesik pada mencit putih jantan dengan presentase 42,9% pada dosis I (100 mg/kgBB), 59,4% pada  dosis  II  (200  mg/kgBB),  dan  69,9% pada  dosis  III  (400  mg/kgBB). Dosis  yang paling efektif sebagai analgesik adalah dosis III (400 mg/kgBB).

## DAFTAR PUSTAKA
1. Mursito, B., 2001. Ramuan Tradisional Untuk  Kesehatan  Anak.  Jakarta:
Penebar Swadaya.
2. Danugroho,  E.S.,  dan  Widyaningrum, N.R.  2014.  Aktivitas  Analgesik  Infusa
Daun  Kersen  ( Muntingia  calabura L.)
Pada  Mencit  Jantan  Ras
Swiss.
Indonesian    Journal  On  Medical Science. 1. (2): 59. Hal 56-57.
3. Zakaria,  Z.  A.  2007.  Free  Radical Scavenging  Activity  of  Some  Plants Available  in  Malaysia.Iranian  Journal Of  Pharmacoglogy  &  Therapeutics.  6: Hal 87-91.
4. Wahyuningsih.  S.  S  dan  Linda.  W. 2015. Uji Efek Analgesik Infusa Daun Beluntas  ( Pluchea  indica L.)  Pada
Mencit  Jantan  Galur  Swiss.  Papua: Universitas Cendrawasih. Hal 66. 5. Departemen Kesehatan Republik Indonesia.1989. Materia Medika Indonesia.  Edisi  IV.  Jakarta:  Depkes RI. 6. Tomisawa S.  dan  Sato  NL.  1973.
Preventive  and  Curative  Effects  of
Non-Steroidal Anti-Inflammatory Drugs  on  Experimental  Peritonial Inflamation  in  Mice.  Japan  Journal
Pharmacol. 23, 453-458
7. Marlyne.  R.  2012.  Uji  Efek  Analgesik Ekstrak  Etanol  70%  Bunga  Mawar ( Rosa  chinensis Jacq).  Pada  Mencit Yang  Diinduksi  Asam  Asetat.  Skripsi. Depok: Universitas Indonesia. Hal 22.
8. Goodman,  A.,  dan  Gilman,  H  (2007). Dasar  Farmakologi  Terapi.  Edisi  10.
Volume 1. Jakarta: EGC. Hal. 687.
9. Gunawan  S.G.,  dan  Nafrialdi,  R.S., 2007, Farmakologi dan Terapi, Edisi 5, Balai Penerbit FKUI, Jakarta. Hal.239-
240. 10. Dewi,  E.T.  2013  “Fraksinasi  Dan Identifikasi Senyawa Antioksidan Pada Ekstrak Etanol Daun Kersen ( Muntingia calabura L.) Secara Kolom Kromatografi”.  Skripsi.  Surabaya: Universitas  katolik  Widya  Mandala. Hal i.