## Association of Breastmilk Storage Duration with Growth and Colonies Count of Lactic Acid Bacteria (LAB)
Yanti 1, Siska Helina 2 Polytechnic Ministry of Health Riau 1 , Polytechnic Ministry of Health Riau 2 yanti@pkr.ac.id

## Abstract
Changes  in  social  trend  make  many  women  pursue  the  career,  thus  storing breastmilk cannot be avoided if mothers needs to continue giving breastmilk. Storing breastmilk for a long period of time increase yhe likelihood of growth and contamination by pathogenic bacteria, thus making breast milk unsafe to consume.  The  purpose  of  this  study  was  to  obtain  an  overview  of  the  total number of colonies of Lactic Acid Bacteria (LAB) based on the storage duration of expressed breastmilk at room temperature 30 o C, in  the refrigerator and freezer.  The  design  of  the  study  was  experimental  presenting  data  in descriptive design. The sample in the study were 8 mothers who were able to give as much as 50 ml of breastmilk in Pekanbaru City Child Care Center (TPA). The  storage  and  inspection  of  total  LAB  colonies  were  carried  out  at  the Microbiology  Laboratory  of  Health  Polytechnic  Ministry  of  Health  Riau.  The study was conducted from February to October 2018. Each breastmilk will be divided  into  10  groups  consisting  5  ml  breastmilk.  Breastmilk  also  will  be grouped into 10 parts consisting of 8 groups, with 1 group becomes a control group  which  the  number  of  LAB  colonies  will  be  counted  directly.  The  other group  was  a  treatment  group,  which  consists  of  5  groups  of  expressed breastmilk stored at room temperature of 30 o C for 2 to 6 hours. The next group was kept in the refrigerator (4 o C) for 5 days, 7 days and freezer (-15 o C) for 14  days  and  16  days,  respectively.  The  results  of  the  examination  of  the number  of  LAB  colonies  in  the  control  group  showed  an  average  count  of 1593.7x10 6 , and showed a rapid decline up to 2 hours of storage at room temperature, which was 347.5x10 6 . The minimum limit for the LAB count that was suitable for consumption was after being stored for 4 hours, which is the average  LAB  yield  of  11.25x10 6 .  At  refrigerator  storage  the  maximum storage time is up to 5 days with the LAB count of 1.125x10 6 . Longer storage in  the  freezer,  ie  16  days  showed  LAB  count  of  2.37x10 6 .  There  was  a significant difference in the number of LAB colonies in  each  group of stored breastmilk at room temperature with a p value = 0,000 based on the Annova test. The storage duration for breast milk will reduce the levels of LAB colonies in breast milk.

## Keywords:
Breastmilk storage duration, Lactic Acid Bacteria (LAB)

## Abstrak
Perubahan  tatanan  sosial  membuat  wanita  banyak  yang  bekerja, penyimpanan  ASI  tidak  dapat  dihindarkan  bila  ibu  tetap  memberikan  ASI. Penyimpanan ASI untuk jangka waktu yang cukup lama, kemungkinan dapat terkontaminasi bakteri dan pertumbuhan bakteri patogen, sehingga membuat ASI  tidak  aman  untuk  di  konsumsi.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mendapatkan  gambaran  jumlah  total  koloni  Bakteri  Asam  Laktat  (BAL) berdasarkan lama penyimpanan ASI perah pada suhu ruangan 30 o C, pada refrigerator dan freezer. Desain penelitian adalah eksperiment, data disajikan dalam bentuk deskriptif . Sampel pada penelitian adalah  8 orang ibu  yang dapat memberikan ASI nya sebanyak 50 ml di Tempat Penitipan Anak (TPA) Kota  Pekanbaru.  Penyimpanan  dan  pemeriksaan total  koloni  BAL  dilakukan pada  Laboratorium  Mikrobiologi  Poltekkes  Kemenkes  Riau.  Penelitian dilaksanakan pada bulan Februari sampai dengan Oktober 2018. Setiap ASI akan dibagi menjadi 10 bagian yaitu sebanyak 5 ml. ASI akan dikelompokkan

## Article Info

## Article history
Received date: 2019-11-20 Revised date: 2019-11-28 Accepted date: 2019-12-17
menjadi 10 bagian terdiri dari 8 ASI, 1 bagian menjadi kelompok kontrol yang langsung  di  dihitung  jumlah  koloni  BAL  nya.  Bagian  ASI  yang  lain  menjadi kelompok  perlakuan, yang terdiri dari 5 bagian ASIP di simpan  pada suhu ruangan  30 o C  selama  2  jam  sampai  dengan  6  jam.  Kelompok  berikutnya disimpan di refrigerator (4 o C) selama 5 hari, 7 hari dan freezer (-15 o C) selama 14  hari  dan  16  hari.  Hasil  pemeriksaan  jumlah  koloni  BAL  pada  kelompok kontrol  rata-rata  1593,7x10 6 ,  dan  mengalami  penurunan  pesat  sampai dengan 2 jam penyimpanan disuhu ruangan yaitu 347,5x10 6 . Batas minimum jumlah  BAL  yang  layak  dikonsumsi  setelah  disimpan  selama  4  jam,  yaitu dengan  hasil  rata-rata  BAL  11,25x10 6 .  Pada  penyimpanan  di refrigerator maksimal waktu penyimpanan sampai dengan 5 hari dengan jumlah BAL yaitu 1,125x10 6 .  Penyimpanan  pada freezer lebih  lama  yaitu  16  hari  dengan jumlah BAL 2,37x10 6 . Terdapat perbedaan yang signifikan jumlah koloni BAL pada  setiap  kelompok  perlakuan  penyimpanan  ASI  pada  suhu  ruangan dengan nilai p value = 0,000 berdasarkan uji Annova . Lama penyimpanan ASI akan menurunkan kadar koloni BAL dalam ASI.
Kata Kunci Lama Penyimpanan ASI, Bakteri Asam Laktat (BAL)

## PENDAHULUAN
Pemberian ASI mempunyai peranan penting untuk pertumbuhan, kesehatan dan kelangsungan hidup bayi, karena ASI kaya dengan  zat  gizi  dan  antibodi  yang  terdiri dari karbohidrat, lemak, protein, imunoglobulin, laktoferin, komplemen, lisozim, oligosakarida, sitokin, dan makrofag 2.1 . Selain zat-zat yang terkandung  didalamnya,  pada  ASI  juga ditemukan bakteri probiotik yang mengatur fungsi  kekebalan  tubuh  dan  meningkatkan resistensi  terhadap  bakteri  patogen  pada usus 13.25 .  Menurut  Syukur  dan  Purwati (2013) 25 ,  bakteri  probiotik  yang  banyak dikenal  termasuk  kelompok  bakteri  asam laktat  (BAL)  dan  termasuk  mikroorganisme yang  aman  dan  dapat  membantu kesehatan total.
Laporan  hasil  survey  di  lapangan menyebutkan pemberian ASI eksklusif belum maksimal.  Dilihat  dari  cakupan  pemberian ASI  Eksklusif  pada  bayi  0-6  bulan berfluktuatif.  Berdasarkan  data  dari Departemen  Kesehatan  pada  pekan  ASI pada tahun 2013 cakupan ASI eksklusif di Indonesia mengalami penurunan dari tahun 2010  yang  pencapaian  awal  61,3% menjadi 30,2 %. Penggalakan ASI memang bukan  hal  yang  baru  namun  berbagai upaya  untuk  meningkatkannya  terus dilakukan  dengan  baik  oleh  Pemerintah maupun swasta dan juga masyarakat peduli
ASI,  karena  hasil  cakupan  ASI  eksklusif belum  mencapai  target  yang  diinginkan secara nasional yaitu sebanyak 80% 26.22. Hal  tersebut  diatas  disebabkan  karena beberapa  faktor  salah  satunya  isu  yang paling  utama  adalah  perubahan  tatanan sosial yang membuat wanita banyak yang bekerja  sehingga  mereka  beranggapan tidak  dapat  memberikan  ASI  eksklusif kepada  bayinya 23. .  Faktor-faktor  yang menjadi  penghambat  bagi  ibu  yang bekerja  dalam  pemberian  ASI  bukanlah suatu    alasan  yang  tepat  untuk  tidak memberikan  ASI.  Hal  ini  dikarenakan dengan  pengetahuan  yang  benar  tentang menyusui,  perlengkapan  memerah  ASI dan dukungan  lingkungan  kerja  seorang  ibu yang bekerja tetap memberikan ASI secara ekslusif  karena  menyusui  sebenarnya adalah  proses  alamiah  bagi  setiap  ibu yang seharusnya diberikan kepada anaknya. Oleh karena itu bagi ibu bekerja yang mempunyai masalah dengan menyusui karena tidak ada waktu untuk memberikan ASI  secara  langsung  maka  ibu  dapat menyimpan  ASI  yang  telah  diperah sebelumnya untuk diberikan kepada bayi 6 . Penyimpanan  ASI  untuk  jangka  waktu tertentu  tidak  dapat  dihindari,  dimana terjadi  peningkatan  jumlah  ibu  yang kembali bekerja segera setelah melahirkan. Banyak  ibu,  mengetahui  akan  pentingnya ASI eksklusif sehingga menyimpan ASI yang
telah  diperah  untuk  digunakan  selama  ibu meninggalkan  bayinya.  Menurut  Medela (2011) 15 , ketakutan terbesar yang menghalangi  prospek  ‘ Bank  ASI ’  untuk jangka  waktu  yang  cukup  lama  adalah kemungkinan  kontaminasi  bakteri  dan pertumbuhan  bakteri  patogen  dari  ASI yang  disimpan,  sehingga  membuat  ASI tidak  aman  untuk  dikonsumsi.  Selain  itu penurunan  pH  ASI  selama  penyimpanan mungkin  menunjukkan  pertumbuhan  bakteri yang berlebihan dan kebanyakan terjadinya  kontaminasi  pada  ASI  yang disimpan dan kemungkinan terjadi pada ibu yang  tidak  mengikuti  metode  yang  sesuai dan dianjurkan.
Kondisi  penyimpanan  ASI  yang  dilakukan oleh  ibu  selama  bekerja  yang  kemudian diberikan  kepada  bayinya  terkadang kurang  optimal.  Survey  awal  dilakukan pada  pegawai  Poltekkes  Kemenkes  Riau ditemukan bahwa dari sekitar 4 orang ibu yang menyusui, 3 diantaranya mengatakan tetap  memberikan  ASI  eksklusif  dengan cara memerah ASI nya selama bekerja, lalu menyimpan  ASI  tersebut  di  dalam cooling bag sebelum ke lemari pendingin. Hal ini sesuai dengan Marin et al. (2009) 14 , mengatakan  bahwa  ASI  segar  yang dikumpulkan biasanya mengandung bakteri yang berasal dari kulit dan puting saluran mikroflora  ibu  dan  bakteri  tersebut  tidak menghasilkan  efek  buruk  pada  ibu menyusui.  Iqbal  (2010) 10 ,  pada  dasarnya ASI adalah steril, tetapi dapat terkontaminasi oleh mikroorganisme selama pemerasan dan juga terpapar oleh udara. Selama  penyimpanan  dalam  suhu  kamar, jumlah  bakteri  dapat  meningkat  dan menurunkan
kualitas
ASI. Cara penyimpanan  yang  tidak  benar  dilemari pendingin pun bisa menurunkan kualitas ASI.
Meletakkan  botol ASI di  pintu  kulkas  akan lebih  cepat  rusak,  karena  perubahan  suhu yang  tidak  teratur.  Cara  menyimpan  ASI harus mengikuti cara yang tepat supaya ASI tidak rusak dan aman untuk dikonsumsi bayi. Proses  penyimpanan  di  lemari  pendingin bermanfaat untuk mempertahankan kualitas
ASI,  akan  tetapi  lama  penyimpanan  yang tidak sesuai anjuran juga akan mempengaruhi  kualitas  ASI.  Dari  hasil penelitian  bahwa  pertumbuhan  mikroba pada  bahan  pangan  dapat  bersifat diinginkan atau tidak diinginkan.
Pertumbuhan mikroba pada bahan pangan yang tidak diinginkan dapat menyebabkan kerusakan bahan pangan atau menurunkan kualitas  dari  ASI yang telah  disimpan  dan dapat  juga  menyebabkan  penyakit  bagi manusia  yang  mengkonsumsinya  apabila ditemukan  bakteri  non  patogen.  Dilain pihak, beberapa jenis pertumbuhan mikroba  pada  bahan  pangan  justru diinginkan karena membawa keuntungan 21 .

## METODE
Penelitian ini merupakan penelitian eksperiment. Data  disajikan  dalam  bentuk deskriptif. Desain terdiri dari dua kelompok, yaitu  kelompok  intervensi  dan  kelompok kontrol. Kelompok kontrol adalah kelompok yang sesuai dengan rekomendasi yaitu ASI yang  disimpan  pada  suhu  yang  telah ditentukan berdasarkan rekomendasi, yang kemudian di hitung jumlah koloni bakterinya. Kelompok  intervensi  adalah  kelompok  ASI yang disimpan pada suhu yang ditentukan dengan  lama  penyimpan  yang  melebihi waktu yang sudah direkomendasikan. Total koloni BAL dalam ASI yang telah diinkubasi selama 48 jam, dihitung menggunakan alat ukur Quebec  Colony  Counter  Forming  Unit, dengan hasil ukur CFU/ml ASI. Media tanam BAL menggunakan De Mann Rogosa Sharpe Broth (MRS B) dan MRS Agar.
Populasi  penelitian  ini  adalah  ASI  yang didapatkan  dari  ibu-ibu  yang  menitipkan anaknya  di  TPA  yang  ada  di  kota Pekanbaru. Selanjutnya ASI akan disimpan dan diperiksa di Laboratorium
Mikrobiologi  Poltekkes  Kemenkes  Riau bekerja  sama  dengan  Laboratorium  FK UNRI.  Analisa  data  yang  digunakan adalah Uji Anova one way dan independent T  test untuk  melihat  pengaruh  lama penyimpanan  ASI  terhadap  total  koloni bakteri asam laktat (BAL).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Penelitian
Bakteri  Asam  Laktat  (BAL)  dalam  ASI segar Berdasarkan  hasil  isolasi  yang  telah dilakukan  pada  sampel  ASI  dari  8  ibu menyusui  bahwa  dalam  ASI  segar  yang belum dilakukan penyimpanan didapatkan Bakteri  Asam  Laktat  (BAL).  Adapun  jenis Bakteri  Asam  Laktat  (BAL)  yang  ada  di dalam ASI setelah proses pewarnaan gram ditemukan  bakteri  gram  positif  yang berbentuk bacil dan coccus.
Pengaruh lama penyimpanan terhadap total koloni Bakteri Asam Laktat (BAL) dalam ASI a. Hasil Uji Prasyarat Parametrik Pengujian  perbandingan  rerata  jumlah koloni BAL dalam ASI yang disimpan pada suhu  ruangan,    refrigator  dan  freezer dilakukan  dengan  menggunakan Annova one  way dan independent  T  test .  Hampir semua  variabel  didapatkan p-value lebih dari α =  0,05  (p>0,05)  kecuali  variabel penyimpanan  ASI  pada  suhu  ruangan selama  6  jam.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa asumsi  normalitas  pada  sejumlah  variabel telah  terpenuhi  kecuali  penyimpan  ASI selama  6  jam  pada  suhu  ruangan  yang memiliki p-value 0,007 (p<0,05).
b. Perbedaan  Rerata  Jumlah  BAL  Pada Kelompok  Penyimpanan  ASI  di  Suhu Ruangan (30 o C)
Hasil  pengujian  perbedaan  rerata  jumlah koloni  BAL  pada  kelompok  penyimpanan ASI pada suhu ruangan dengan menggunakan Annova one way . Tabel 1. Hasil Uji Annova dan LSD 5%
No Penyimpanan ASI Suhu Ruangan Total koloni BAL Rerata ± BAL (10 6) P value 1 Penyimpanan suhu ruangan 0 jam (kontrol) 1593,7 ± 495,89 a
0,000 2 Penyimpanan suhu ruangan 2 jam
347,5 ± 127,58 b 3  Penyimpanan suhu ruangan 3 jam 52,37 ± 26,61 c 4  Penyimpanan suhu ruangan 4 jam 11,25 ± 4,68 c 5  Penyimpanan suhu ruangan 5 jam 0,176 ± 0,119 c 6  Penyimpanan suhu ruangan 6 jam 0,021 ± 0,031 c
Berdasarkan  tabel  diatas  dapat  dilihat bahwa terdapat perbedaan rerata jumlah koloni  BAL  dalam  ASI  pada  suhu  ruangan. Terjadi  penurunan  jumlah  koloni BAL  pada kelompok ASI kontrol, penyimpanan 2 jam, 3 jam, 4 jam, 5 jam dan 6 jam. Tabel diatas juga menunjukkan bahwa terdapat perbedaan  yang  signifikan  jumlah  koloni BAL  pada  setiap  kelompok  perlakuan penyimpanan  ASI  pada  suhu  ruangan dengan  nilai p  value =0,000 ( p-value  < 0,05).
Terdapat  penurunan  rerata  jumlah  koloni BAL  secara  signifikan  pada  kelompok penyimpanan ASI 3 jam. Nilai rerata koloni BAL  pada  kelompok  2  jam  lebih  besar dibandingkan dengan penyimpanan 3 jam. Kemudian  tidak  tedapat  perbedaan  yang signifikan  rerata  jumlah  koloni  BAL  antara kelompok penyimpanan ASI 3 jam, 4 jam, 5 jam  dan  6  jam  yang  berarti  walaupun terjadi penurunan jumlah koloni BAL, namun secara statistik tidak signifikan. Hasil uji LSD ini  juga  membuktikan  bahwa  lama penyimpanan ASI pada suhu ruangan akan menurunkan  kadar  koloni  BAL  dalam  ASI. Rerata jumlah koloni BAL yang paling tinggi adalah pada kelompok  kontrol (0 jam) dan yang  paling  rendah  koloni  BAL  adalah pada  ASI  yang  disimpan  selama  6  jam pada suhu ruangan 30 o C. Penurunan jumlah koloni BAL mengalami penurunan pesat dari kolompok  kontrol  (0  jam)    pada  kelompok perlakuan  2  jam  dan  seterusnya sampai 6 jam.  Minimal  jumlah  BAL  yang  dapat bermanfaat bagi usus adalah 1x10 6 , rerata nya  dapat  di  lihat  pada  penyimpanan maksimal  4  jam  pada  suhu  ruangan  30 o C. Rerata  penurunan  jumlah  BAL  tersebut secara  lengkap  ditunjukkan  dalam  grafik means plots berikut ini :
Gambar 1: Means plots tren penurunan rerata jumlah koloni BAL pada setiap kelompok penyimpanan ASI pada suhu  ruangan  antara 0 jam, 2 jam, 3 jam, 4 jam dan 6 jam .
c. Pengujian  Perbedaan  Jumlah  Koloni BAL  pada  Kelompok  Penyimpanan  di Refrigerator
Pengujian  untuk  mengetahui  perbedaan jumlah  koloni  BAL  pada  kelompok penyimpanan ASI di refrigerator selama 5 hari  dan  penyimpanan  7  hari  dilakukan secara parametrik dengan menggunakan uji Independent T test
Tabel 2
Perbandingan Rerata Koloni BAL ASI pada Penyimpanan di Refrigerator Penyimpanan Refrigerator Mean ± SD  Koloni BAL (10 6 ) p- value 5 hari 1,1250 ±  0,99103 0,008 7 hari 0,0338 ± 0,02925
Terdapat  perbedaan  rerata  jumlah  koloni BAL  pada  kelompok  penyimpanan  ASI refrigerator antara 5 dan 7 hari. Tampak koloni  BAL  pada  kelompok  penyimpanan ASI  5  hari  lebih  banyak  (1,1250 ±0,99103)  dibandingkan  dengan  koloni BAL  pada  kelompok  penyimpanan  7  hari (0,0338±0,02925).  Terjadi  penurunan jumlah  koloni  BAL  antara  kelompok  5  hari dan  7  hari  secara  statistik  adalah signifikan. Semakin lama penyimpanan ASI di  refrigerator,  maka  semakin  menurun jumlah koloni BAL dalam ASI.
d. Pengujian  Perbedaan  Jumlah  Koloni BAL  pada  Kelompok  Penyimpanan  di Freezer Tabel 3 Perbandingan Rerata Koloni BAL ASI pada Penyimpanan di Freezer Penyimpanan Freezer Mean ± SD  Koloni BAL (10 6 ) p-value 14 hari 17,0000 ±  7,13142 0,000 16 hari 2,3750 ± 1,50594
Terdapat perbedaan  rerata  jumlah  koloni BAL  pada  kelompok  penyimpanan  ASI  di dalam  Freezer  antara  14  hari  dengan  16 hari.  Tampak  koloni  BAL  pada  kelompok penyimpanan  ASI  14  hari  lebih  banyak (17,0000±7,13142) dibandingkan dengan koloni  BAL  pada  kelompok  penyimpanan ASI 16 hari (2,3750±1,50594). Pada tabel diatas  juga  tampak  bahwa didapatkan p- value kurang dari 0.05 (p= 0,000). Artinya penurunan jumlah koloni BAL pada ASI yang disimpan di freezer selama 14 hari dan 16 hari  bermakna  secara  statistik.  Semakin lama  penyimpanan  ASI  di  freezer,  maka semakin  menurun  jumlah koloni BAL  dalam ASI.

## Pembahasan Jenis Bakteri Dalam ASI Segar
Berdasarkan  hasil penelitian  ini dari 8 ASI ditemukannya  bakteri  gram  positif  yang berbentuk bacil dan coccus yang merupakan Bakteri Asam Laktat (BAL). Pada uji  karakteristik  bakteri  ini  nonmotil  dan menunjukkan hasil positif pada uji proteolitik dan uji amilolitik. Bakteri Asam Laktat (BAL) menunjukkan hasil negatif pada uji lipolitik, sedangkan pada uji bakteri ini menunjukkan hasil  yang  negatif.  ASI  mengandung Laktosa  (Karbohidrat),  Protein,  Lemak, Elektrolit  dan  mineral  serta vitamin. Hal  ini terlihat bahwa ASI kaya akan nutrisi sehingga ASI merupakan media yang baik bagi  pertumbuhan  bakteri  karena  nutrisi merupakan  salah  satu  faktor  yang mempengaruhi pertumbuhan bakteri. Menurut Rahayu dan Nurwitri (2012),
mikroba membutuhkan air, nitrogen, karbon, vitamin, dan mineral yang terdapat dalam bahan pangan untuk pertumbuhannya. Menurut  Lara-Villoslada et  al. (2007), mengatakan pada abad ke 21 didapatkan laporan  hasil  penelitian  yang  menunjukan adanya  Bakteri  Asam  Laktat  (BAL)  dalam ASI  dan  merupakan  bakteri  probiotik. Menurut  WHO  probiotik  merupakan organisme  hidup  yang  dapat  memberikan keuntungan  terhadap  kesehatan  kepada host apabila  dikonsumsi  sebagai food suplemen .  Probiotik  disebut  juga  dengan bakteri  baik.  Hal  ini  juga  sejalan  dengan hasil  penelitian  Marin, et  al .  (2009),  yang menggambarkan  bahwa  isolasi  bakteri asam  laktat  (BAL)  dari  susu  manusia  yaitu,
L.gasseri,  L.salivarius CECT5713  dan L.fermentum CECT5716.  Berdasarkan  hasil penelitian diatas dapat disimpulkan bahwa Bakteri Asam Laktat (BAL) yang terdapat di dalam ASI sangat berperan pada fase-fase penting dalam proses awal pada kolonisasi usus neonatus, sesuai dengan hasil penelitian Olivares et  al .  (2006)  13  bahwa  bakteri asam laktat (BAL) yang terdapat di dalam ASI dapat berkontribusi untuk perlindungan anti-infeksi  pada  neonatus  dan  memiliki sifat antibakteri terhadap bakteri patogen. ASI  adalah  sumber  utama  bakteri nonpatogen  ke  usus  bayi  dan  hal  ini dianggap  bahwa  bakteri  pada  usus merupakan  salah  satu  rangsangan  yang paling  penting  untuk  pengembangan jaringan limfoid terkait dengan mukosa usus, yang mengarah ke pematangan yang tepat dari  sistem  kekebalan  tubuh  bayi  dan akibatnya ASI juga merupakan anti infeksi dan proses anti-alergi.
Menurut  Olivares et  al .  (2006),  bahwa apabila  mengkonsumsi  800  ml  susu  bayi diperkirakan  akan  menelan  antara  1x10 5 hingga 1x10 7 bakteri, oleh karena itu tidak mengherankan  bahwa  jumlah  koloni mikrobiota  pada  feses  bayi    akan  lebih banyak pada bayi yang mendapatkan ASI eksklusif,  sesuai  dengan  penelitan  Fitri (2015)  mengatakan  bahwa  bayi  yang mendapatkan  asupan  ASI  akan  memiliki koloni Bifidobacterium dan  bakteri  asam laktat (BAL) yang lebih banyak
dibandingkan dengan bayi yang diberikan susu formula.
Pengaruh Lama Penyimpanan ASI pada Suhu Ruangan 30 o C Terhadap Total Koloni Bakteri Asam Laktat (BAL) Hasil  penelitian  memperlihatkan  rata-rata total  koloni  bakteri  asam  laktat  (BAL) mengalami penurunan, pada  suhu  ruangan 30 o C  berdasarkan  lama penyimpanan  ASI 2  jam  sampai  dengan  6  jam.  Terjadi penurunan  yang  pesat    sampai  pada penyimpanan    2  jam,  dengan  rata-rata 347,5  dibandingkan  jumlah  koloni  BAL kontrol yaitu 1593,7. Penurunan koloni BAL terus  turun  sampai  dengan  6  jam penyimpanan,  rata-rata  penurunan  jumlah koloni  BAL  dapat  dilihat  pada  tabel  4.4. Hasil  uji  Annova  menunjukkan  bahwa terdapat perbedaan yang signifikan jumlah koloni BAL pada setiap kelompok perlakuan penyimpanan  ASI  pada  suhu  ruangan dengan  nilai p  value =  0,000 ( p  value  < 0,05).
Pada penyimpanan 5 jam dan 6 jam koloni BAL  sudah  turun    menjadi  rata-rata 0,176,x10 6 dan  0,021x10 6 ,  merupakan jumlah koloni yang sangat kecil, berdasarkan standar SNI tidak layak untuk di  konsumsi.  Menurut  SNI,  syarat  sebagai probiotik yang mampu memberikan pengaruh  positif  bagi  kesehatan  yaitu 1x10 6 sampai  1x10 9 CFU/ml.  Sedangkan lama penyimpanan 4 jam pada suhu 30°C sudah  berada  di  batas  minimum  sebagai probiotik yang mampu memberikan pengaruh positif bagi kesehatan.
Hal ini menggambarkan bahwa total koloni BAL  lama  penyimpanan  4  jam  menjadi batas  minimum  standar  penyimpanan  ASI pada  suhu  ruangan  30 o C.  Rekomendasi penyimpanan  ASI  pada  suhu  ruangan  di kota Pekanbaru dengan cuaca yang cukup panas, sebaiknya dapat di simpan kurang dari  4  jam  saja.  Untuk  mendapatkan manfaat  BAL  bagi  usus  bayi  dengan maksimal sebaiknya di simpan kurang dari 2  jam,  karena  suhu  yang  tinggi berpengaruh  besar  terhadap  penyusutan jumlah koloni BAL.
ASI  adalah  makanan  terbaik  untuk  bayi
karena  memberikan  kombinasi  unik  dari protein,  karbohidrat,  lipid,  mineral  dan vitamin  yang  menjamin  pertumbuhan  dan perkembangan  bayi  secara  optimal  dan menyusui  adalah  penentu  utama  dalam kolonisasi usus neonatus. Hal ini dikarenakan adanya temuan bakteri probiotik dalam ASI selain  dari  komponen  lainnya  dimiliki  oleh ASI.  Selain  manfaat  gastrointestinal, modulasi mikrobiota oleh  bakteri probiotik telah  terbukti  untuk  mengatur  fungsi kekebalan tubuh dan meningkatkan pertahanan  terhadap  bakteri  patogen  di usus (Lara-Villoslada et al ., 2014).
Menurut Puspawati dkk (2010), dalam hasil penelitiannya  menjelaskan  bahwa  proses penyimpanan  dapat  menurunkan  jumlah bakteri  asam  laktat  (BAL)  sehingga perannya  sebagai  probiotik  juga  akan menurun.  Penyimpanan  kultur  dalam keadaan  segar  yang  mana  dalam penelitian  ini  digunakan  adalah  ASI  segar yang  tidak  dapat  dilakukan  untuk  jangka waktu  yang  lama.  Kita  ketahui  bahwa penyimpanan  ASI  tidak  dapat  dihindari terutama  dikalangan  ibu  bekerja  yang kembali bekerja setelah cuti melahirkan. Bakteri Asam Laktat (BAL) juga menunjukkan aktivitas  penghambatan  terhadap  bakteri patogen Vibrio  cholerae .  Hal  ini  diketahui dari hasil penelitian yang mana terbentuknya  zona  penghambatan  yang dihasilkan oleh adanya aktivitas antimikroba  dari  9  isolat  BAL  terhadap bakteri patogen Vibrio cholerae 19 .
Pengaruh lama penyimpanan ASI pada Refrigerator (4 o C) dan Freezer (-15 o C) terhadap Total Koloni Bakteri Asam Laktat
Berdasarkan hasil tabel 4.5 nilai mean total BAL  penyimpanan  ASI  hari  ke  5  di refrigerator  1,125x10 6 ,  merupakan  nilai minimum total BAL yang masih bermanfaat bagi  usus.  Bila  dibandingkan  dengan  nilai mean total BAL hari ke 7 yaitu 0,0338x10 6 , jumlah yang sangat kecil berada di bawah standar SNI. Dari
hasil rerata, direkomendasikan sebaiknya penyimpanan
ASI  pada  suhu  4 o C  di  refrigerator  kurang dari 5 hari. Hasil uji statistik didapatkan p- value kurang dari 0.05 (p= 0,008). Artinya penurunan  jumlah  koloni  BAL  antara kelompok 5 hari dan 7 hari secara statistik adalah signifikan.
Semakin lama penyimpanan  ASI  di  refrigerator,  maka semakin  menurun  jumlah  koloni  BAL  dalam ASI.
Penelitian  ini  juga  mendapatkan  hasil bahwa  penyimpanan  ASI  selama  14  hari dan  16  hari  pada  suhu  -15°C  (freezer) menunjukkan  perbedaan  yang  signifikan terhadap  total  koloni  bakteri  asam  laktat (BAL).  Tampak  koloni  BAL  pada  kelompok penyimpanan  ASI  14  hari  lebih  banyak (17x106) dibandingkan dengan koloni BAL pada  kelompok  penyimpanan  ASI  16  hari (2,37x106). Pada tabel 4.6. didapatkan p- value kurang dari 0.05 (p= 0,000). Artinya penurunan jumlah koloni BAL pada ASI yang disimpan di freezer selama 14 hari dan 16 hari bermakna secara statistik. Penyimpanan ASI pada freezer suhu -15 o C mempunyai waktu simpan yang lebih lama untuk pertumbuhan BAL, bila dibandingkan dengan penyimpanan di refrigerator. Penyimpanan pada suhu dingin adalah cara terbaik  untuk  menjaga  bakteri  meskipun viabilitas akhir tergantung pada beberapa faktor,  seperti  spesies  bakteri,  suhu  atau lama penyimpanan. Dalam hasil penelitian jumlah  bakteri  pada  sampel  ASI  yang didapatkan  dari  memerah  ASI  dengan menggunakan pompa payudara didapatkan  lebih  tinggi dari pada  sampel ASI  yang  diperoleh  dengan  menggunakan tangan. Stafilokokus dan streptokokus adalah  bakteri  dominan  di  kedua  sampel segar dan beku, Staphylococcus epidermidis menjadi  spesies  yang  paling  melimpah  di kedua  sampel.  Bakteri  asam  laktat  (BAL) dan bifidobacteria juga hadir dalam sampel ASI segar dan beku 14 . Iqbal (2010) 10 , mengatakan bahwa suhu dan  lama  penyimpanan  selama  3  hari memilki pengaruh yang signifikan terhadap kadar  protein  dan  karbohidrat  yang terdapat pada ASI. Semakin lama
penyimpanan ASI maka semakin berkurang kadar  protein  di  dalam  ASI.  Begitu  juga dengan hasil penilitian yang dilakukan oleh Sari  (2015) 23 ,  yang  mengatakan  bahwa penyimpanan di suhu 4°C sebaiknya hanya sampai  4  hari.  Disebabkan  karena penyimpanan selama 48 jam sudah memilki perbedaan yang signifikan terhadap kadar protein dan selama 72 jam sudah memiliki perbedaan  signifikan  terhadap  kadar lemak yang terkandung di dalam ASI. Menurut  Syukur  dan  Purwati  (2013) 25 , hampir  semua  bakteri  asam  laktat  (BAL) hanya memperoleh energi dari metabolisme gula  sehingga  habitat  pertumbuhannya hanya  terbatas  pada  lingkungan  yang menyediakan cukup gula atau bisa disebut dengan  lingkungan  yang  kaya  nutrisi. Kemampuan  mereka  untuk  menghasilkan senyawa  (biosintesis)  juga  terbatas  dan kebutuhan  nutrisi  kompleks  bakteri  asam laktat  (BAL)  meliputi  asam  amino,  vitamin, purin, dan pirimidin.
Menurunnya total koloni bakteri asam laktat (BAL)  selama  penyimpanan  terjadi  karena sumber nutrisi yang dibutuhkan bakteri untuk melakukan metabolisme
dalam mempertahankan  hidupnya  juga  sudah mulai  berkurang  yang  juga  disebabkan oleh  lama  penyimpanan  ASI.  Terutama kebutuhan  nutrisi  kompleks  bakteri  asam laktat (BAL) meliputi asam amino, vitamin,
purin,  dan  pirimidin.  Sehingga  lama penyimpanan  dapat  mempengaruhi  total koloni bakteri asam laktat (BAL) yang ada di dalam ASI.

## SIMPULAN
1. Bakteri  yang  terdapat  di  dalam  ASI segar adalah bakteri asam laktat (BAL) yang merupakan bakteri gram positif.
2. Rata-rata  jumlah  koloni  BAL  pada  suhu ruangan  30 o C  mengalami  penurunan sampai  batas  minimum  penyimpanan  4 jam.
3. Rata-rata  jumlah  koloni  BAL  pada  suhu 4 o C mengalami penurunan sampai batas minimum penyimpanan 5 hari.
4. Rata-rata  jumlah  koloni  BAL  pada  suhu 15 o C  mengalami  penurunan  sampai batas minimum penyimpanan 16 hari.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada Kepala dan  staf  TPA  Family  kids  dan  TPA Alfitiyah  yang  telah  memberi  izin  untuk penelitian
sehingga membantu
penyelesaian laporan penelitian ini. Penulis juga    mengucapkan  terima  kasih  kepada Kepala  dan  Staf  Laboratorium  Poltekkes Kemenkes  Riau  dan  Laboratorium  FK  UNRI yang  telah  membantu  dalam  pemeriksaan sampel

## DAFTAR PUSTAKA
1. ABM. ABM  Clinical  Protocol  #8:  Human
Milk Storage Information for Home Use For
Full-Term Infants (Original Protocol March 2004;  Revision  #1  March  2010) .
Breastfeeding  Medicine.  Volume  5,
Number 3, 2010: 127-130.
2. Ballard,  O.,  andMorrow,  A.  L.  2013. Human Milk Composition : Nutrients and Bioactive Factors. Pediatr Clin North Am, 60 (1), 1–24. http://doi.org/10.1016/j.pcl.2012.10.0 02.Human.
3. Bergmann, H.,  Rodriguez, J.M.,  Salminen, S. and Szajewska, H. 2014. Probiotics in human milk  and probiotic  supplementation in infant nutrition : a workshop report : British  Journal  of  Nutrition.  112,  1119- 1128.
4. Buckley,  K.  (2009). A  Double-Edged Sword:Lactation  Consultants’  Perceptions of  The  Impact  of  Breast  Pumps  on  The Practice  of  Breastfeeding .  Journal  of Perinatal Education, 18(2): 13-22.
5. Fernandez,  L.,  Langa,  S.,  Martin,  V., Maldonado, A., Jimenez, E., Martin, R. and Rodriguez,  J.  2013. The  human  milk microbiota:  Origin  and  potential  roles  in health  and  disease. Pharmacological Research 69 (2013) 1- 10.
6. Gibney,  Michael.  J  dkk.  2008. Gizi Kesehatan  Masyarakat .  Diterjemahkan oleh: Andry Hartono. Jakarta: EGC.
7. Hikmawati,  Isna.  2008 .  Faktor-faktor resiko  kegagalan  pemberian  ASI  selama dua  bulan .  Universitas  Diponegoro Semarang.
8. IDAI.  2008. Bedah  ASI-  Kajian  dari berbagai  sudut  pandang  ilmiah :  Balai Penerbit FK UI.
9. IDAI. 2014. Penyimpanan ASI Perah . Akses
11 Januari 2018.
http://www.idai.or.id/artikel/klinik/ asi/penyimpanan-asi-perah.
10. Iqbal,  M.  2010. Pengaruh  Variasi  Suhu dan  Lama  Penyimpanan  Terhadap  Kadar Gizi  Pada  Air  Susu  Ibu  (ASI). Program Studi Gizi Kesehatan Fakultas Kedokteran
Universitas Gadjah Mada Yogyakarta. 11. Kementerian Kesehatan Republik Indonesia. 2011. Menuju Masyarakat Sehat  Yang  Mandiri  dan  Berkeadilan .
Jakarta: Kementerian Kesehatan RI. 12. Kementerian Kesehatan Republik Indonesia.  2013. Pekan  ASI  Sedunia 2013 .Breastfeeding  Support.  Akses  11 Januari2018.http://www.gizikita.depkes .go.id/pekan-asi-sedunia-2013/.
13. Lara-Villoslada, F., Olivares, M.,Sierra, S., Rodrıguez,  J.  M.,  Boza,  J,  and  Xaus,  J. 2007. Beneficial  effects  of  probiotic bacteria  isolated  from  breast  milk. British Journal of Nutrition (2007), 98, Suppl. 1, S96–S100.
14. Marin,  M.L.,  Arroyo,  R.,  Jimenez,  E., Gomez, A., Fernandez, L. and Rodriguez, J.M.  2009. Cold  storage  of  Human  Milk: effect  on  its  bacterial  composition. J Pediatr Gastroenterol Nutr. 49 (3) 343-8. 15. Medela,  2011. Collection  &  Storage  of Human  Milk :  Innovating  Practice  Through Research  &  Evidence.  Diakses  dari www.medela.com  pada  tanggal  20 Februari 2018.
16. Nirwana,  Ade  Benih.  2014. ASI  &  Susu Formula. Yogyakarta: Nuha Medika.
17. Nurhayati. 2015. PenuntunPraktikum Mikrobiologi. Fakultas Pertanian :Universitas Sriwijaya Indralaya.
18. Puspawati,  N.N,  Nuraida,  L,  Adawiyah, D.R.  2010. Penggunaan  Berbagai  Jenis Bahan  Pelindung  Untuk  Mempertahankan Viabilitas  Bakteri  Asam  Laktat  Yang  Di Isolasi dari Air Susu Ibu Pada Proses
Pengeringan  Beku .  J.  Teknol  dan  Industri Pangan, Vol. XXI No. 1 Yh. 2010.
19. Putra, Putu Vinanta Agus. 2015. Aktivitas Antimikroba  Bakteri  Asam  Laktat  yang Diisolasi Dari Air Susu Ibu (ASI) terhadap
Bakteri  Patogen  Vibrio  cholerae . Skripsi .
Jurusan  Ilmu  dan  Teknologi  Pangan Fakultas  Teknologi  Pertanian.  Universitas Udayana. Bukit Jimbaran.
20. Pollard, Maria. 2015. ASI Asuhan Berbasis Bukti .  Diterjemahkan  oleh:  E.  Elly Wiriawan. Jakarta: EGC.
21. Rahayu dan Nurwitri. 2012. Mikrobiologi Pangan . Bogor. Percetakan IPB.
22. Riset  Kesehatan  Dasar.  2013. Badan Penelitian  dan  Pengembangan  Kesehatan Kementerian Kesehatan RI Tahun 2013 .
23. Sari,  Indri  Putri.  2015. Efek  Lama
Penyimpanan ASI Terhadap Kadar Protein dan Lemak Yang Terkandung Didalam
ASI. Tesis. Program PascaSarjana
Kebidanan. Universitas Andalas. Padang.
24. Sastroasmoro,  S.  dan  Ismael  S.  2011. Dasar-Dasar  Metodologi  Penelitian  Klinis .
Edisi ke 4. Jakarta: CV. Sagung Seto.
25. Syukur,  Sumaryati  dan  Purwati,  Endang.
2013. Biotekologi Probiotik untuk
Kesehatan  Masyarakat .  Penerbit  Andi Yogyakarta.
26. Survey  Demografi  Kesehatan  Indonesia. 2012. Situasi  dan  Analisa  ASI  Eksklusif .
Akses 11 Januari  2018. http://www.depkes.go.id/resources/wnl oad/pusdatin/infodatin/infodatin-
asi.pdf.
27. World  Health  Organization  (WHO). 2012.  P roposed  Global  Targets  for Maternal, Infant and child nutrition: Akses 11  Januari    2018.  Available  at: http://apps.who.int/gb/archive/pdf_file s/WHA55/ea5515.pdf.