## AQUASAINS
(Jurnal Ilmu Perikanan dan Sumberdaya Perairan)

## POTENTIAL IMMUNOGENICITY OF BACTERIA A eromonas hydrophila
GPL-05 AND GL-02 STRAINS AS A CANDIDATE VACCINES
Dini Siswani Mulia 1 · Ani Khusniah 1 · Heri
Maryanto 1
Ringkasan Aeromonas hydrophila is very potential to be used in vaccines and disease control MAS (Motile Aeromonas Septice- mia) caused by the bacteria. However, stra- ins of A. hydrophila bacteria which have high immunogenicity limited. Not to men- tion, in the field often decrease the patho- genicity of the bacteria as vaccine material resulting in a decrease in the immunoge- nicity of a vaccine made. Therefore, it is necessary to inventory and collecting stra- ins of A. hydrophila bacteria potentially go- od that vaccination continuity can be ma- intained. This study used an experimental method with a completely randomized de- sign (CRD), with treatments such as P1: A. hydrophila vaccine strain GPL-05; P2: A. hydrophila vaccine strain GL-02; and P3: control (PBS), with five replicates.This study aims to assess the potential immu- nogenicity A.hydrophila bacterial strains as vaccine candidates. Test fish used is Afric- an catfish was about 2 months with a length of 10-15 cm and width 15-20 g. The main parameters are observed antibody titer and cross-reaction test, while supporting para- meters are parameters of water quality in- clude water temperature, pH, dissolved oxygen. Antibody titer data was analyzed by Ana- lysis of Variance (ANOVA) and Duncan’s
1 ) P. Biologi, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pen- didikan, Universitas Muhammadiyah Purwokerto Jl. Raya Dukuh Waluh PO BOX 202 Purwokerto 53182 Tlp. 0281-636751, Fax. 0281-637239 E-mail: dinisiswanimulia@ump.ac.id
Multiple Range Test (DMRT) at the test le- vel of 5%, while the data and the results of cross-reaction of water quality parameters observed descriptively. The results showed that the bacteria A. hydrophila strain GPL- 05 and GL-02 has a high immunogenicity, thus recommended a candidate vaccine.
Keywords Aeromonas hydrophila, bacte- ria, candidate vaccine, immunogenicity, strain GPl-05 and GL-02
Received: 24 Agustus 2015 Accepted: 17 September 2015

## PENDAHULUAN
Usaha budidaya ikan air tawar se- ring mendapat kendala oleh adanya penyakit yang datang secara tiba-tiba. Bahkan, belum sempat petani me- nyadari dan mengambil tindakan un- tuk antisipasi, penyakit sudah ter- lebih dahulu menyebar dan menye- babkan kematian massal pada ikan. Akibatnya, petani ikan merugi. Sa- lah satu penyakit yang menimbulkan kerugian seperti itu adalah penya- kit MAS ( Motile Aeromonas Septi- cemia ) yang disebabkan oleh bakte- ri Aeromonas hydrophila . Bakteri A.
hydrophila merupakan salah satu mik- robia patogen terpenting pada budi- daya ikan, terutama ikan air tawar. Bakteri ini bersifat patogen oportu- nistik dan dapat menyerang berba- gai jenis ikan air tawar seperti gu- rami, patin, nila, ikan mas, koi, dan udang galah, tidak terkecuali ikan le- le, baik lele lokal maupun lele dumbo Rahman et al. (2001); Kamiso (2004); Mulia et al. (2004); Suryantinah et al. (2005); Mulia (2007); Olga and Ai- siah (2007). Serangan penyakit MAS dapat menimbulkan kerugian yang sa- ngat besar. Pada ikan lele, tingkat kematian dapat mencapai 80%, bahk- an 100% dalam waktu sekitar satu minggu Mulia (2012).
Berbagai usaha penanggulangan telah diterapkan oleh petani ikan ter- masuk perbaikan pengelolaan dan peng- gunaan obat-obatan, tetapi hasilnya kurang memuaskan. Penggunaan obat- obatan dan antibiotika sintetik de- ngan pemakaian yang terus-menerus dan terlalu lama dapat menimbulk- an kerugian, tidak hanya pada ikan, tetapi juga dapat memicu resistensi bakteri, dan yang lebih fatal lagi da- pat mencemari lingkungan. Oleh ka- rena itu, perlu upaya pengendalian terhadap serangan bakteri A. hydro- phila yang aman, ramah lingkungan, dan tidak memiliki dampak negatif. Perlu upaya pengembangan teknolo- gi yang berwawasan lingkungan, sa- lah satunya adalah dengan vaksinasi menggunakan vaksin A. hydrophila . Vaksinasi merupakan teknologi ber- wawasan lingkungan karena berasal dari makhluk hidup, tidak mence-
mari lingkungan, dan tepat sasaran. Vaksinasi merupakan salah satu cara penanggulangan penyakit MAS yang efektif dan efisien, karena tingkat per- lindungannya cukup tinggi dan da- pat melindungi ikan dalam waktu yang lama, lebih dari 3 bulan. Vaksinasi tidak menimbulkan dampak negatif, baik pada ikan, lingkungan, maupun konsumen dan dapat dilakukan pa- da berbagai ukuran ikan dari benih sampai induk. Oleh karena itu, pe- nanggulangan penyakit melalui vak- sinasi mempunyai prospek yang sa- ngat baik di masa yang akan datang.
Keberhasilan suatu vaksinasi di- pengaruhi oleh berbagai faktor. Sa- lah satunya adalah kualitas strain bak- teri sebagai kandidat vaksin. Di la- pangan, penelitian vaksinasi sering terkendala oleh menurunnya kuali- tas bahan vaksin, menurunnya pato- genisitas bakteri selama penyimpan- an, sehingga berdampak pada imu- nogenisitas dan akan mempengaruhi kualitas vaksin yang digunakan. Per- lu upaya untuk mencari, menginven- tarisir, dan menggali potensi strain- strain bakteri A. hydrophila yang ber- kualitas dan imunogenik dalam meng- endalikan penyakit MAS. Bakteri A. hydrophila mempunyai strain yang berbeda-beda, umumnya virulensinya berbeda pula dan apabila dibuat vak- sin maka akan sangat berpengaruh terhadap imunogenisitas vaksin yang dihasilkan tersebut. Mulia et al. (2012) menggunakan vaksin whole cell A.
hydrophila dari 5 strain berbeda, ya-
itu GPW-02, KLK-11, GLR-08, KLK- 05, dan KLK-14. Hasil uji reaksi si- lang menunjukkan bahwa GPW-02 merupakan strain yang paling imu- nogenik dengan hasil reaksi silang ber- kisar 2 9 , 00 sampai 2 9 , 73 .
Penelitian ini mengupayakan dam- pak negatif sekecil mungkin dan apa- bila diperoleh kandidat vaksin dapat diteruskan untuk dijadikan vaksin yang dapat diterapkan pada kalangan pe- tani sehingga masalah utama budi- daya ikan air tawar yang selama ini dihadapi petani dapat teratasi. Pe- nelitian ini bertujuan untuk meng- kaji potensi imunogenisitas bakteri
A. hydrophila strain GPl-05 dan GL- 02 sebagai kandidat vaksin.

## MATERI DAN METODE
Penelitian ini telah dilaksanakan di Laboratorium Mikrobiologi dan La- boratorium Zoologi, Universitas Mu- hammadiyah Purwokerto dari bulan Desember 2014-Mei 2015. Alat yang digunakan adalah tabung reaksi, rak tabung, cawan petri, beker glass, ja- rum ose lurus, pipet tetes, erlenme- yer, drugalsky, lampu bunsen, corong, tabung sentrifuse, tabung konikal, ta- bung eppendorf, pengaduk, autocla- ve, mikropipet dan tip, spatula, vor- tex, shaker, inkubator, timbangan ana- litik, refrigerator, dan sentrifuse. Alat yang digunakan adalah ember plas- tik sebanyak 17 ember, timbangan untuk mengukur berat ikan, peng- garis untuk mengukur panjang ikan, alat suntik, dan alat pengukur kuali-
tas air (thermometer, pH meter, dan DO meter).
Bahan yang digunakan dalam pe- nelitian ini adalah kultur bakteri A. hydrophila, medium GSP ( Glutama- te Starch Phenile ), medium TSA ( Tr- yptone Soya Agar ), medium TSB ( Tr- yptone Soya Broth ), larutan PBS ( Phos- phate Buffer Saline ), formalin 2 %, dan hewan uji. Hewan uji yang digu- nakan adalah ikan lele dumbo beru- mur sekitar 2 bulan dan berukuran panjang 10 – 15 cm dengan berat 15- 20 g yang diperoleh dari kolam bu- didaya dari daerah Purbalingga.
Penelitian ini menggunakan me- tode eksperimen. Rancangan pene- litian yang digunakan adalah Ran- cangan Acak Lengkap (RAL) dengan 3 perlakuan dan 5 kali ulangan, yai- tu P1: strain GPl-05, P2: strain GL- 02, dan P3: kontrol (larutan PBS). Kultur bakteri berasal dari isolat bak- teri murni A. hydrophila yang dida- patkan dari penelitian sebelumnya. Setiap strain bakteri terpilih diisola- si pada medium GSP ( Glutamat Star- ch Phenile ) agar (Merck) dan diin- kubasi pada suhu 37 o C selama 18-24 jam. Selanjutnya dikultur pada me- dia TSA miring sebagai stock culture dan work culture .
Semua isolat A. hydrophila ditum- buhkan pada medium GSP dan diin- kubasi pada suhu 37 o C selama 18 - 24 jam. Kemudian satu koloni bakte- ri dari medium GSP dipindahkan ke dalam medium TSB cair 10 ml dan diinkubasi pada suhu 37 o C selama
Dini Siswani Mulia et al
24 jam. Kultur bakteri dari medium TSB, kemudian dituang pada medi- um TSA cawan petri besar selama 24 jam pada suhu 37 o C. Panen bak- teri dengan menggunakan drugalsky dan pencucian dengan larutan PBS dilakukan sebanyak 3 kali, kemudian ditambahkan formalin 2% dan digo- jog selama 24 jam. Selanjutnya di- sentrifuse dengan kecepatan 3000 rpm selama 20 menit. Cairan yang bera- da di bagian atas pada tabung sen- trifuse (supernatan) dibuang. Endap- an dicuci dengan PBS dan sentrifu- gasi dilakukan 3 kali. Endapan ( an- tigen whole cell ) dilarutkan dengan PBS sebanyak 2 ml. Selanjutnya, an- tigen diuji viabilitasnya pada medi- um selektif Aeromonas-Pseudomonas (GSP, Merck) secara goresan.
Antigen whole cell A. hydrophi- la dari semua isolat selanjutnya diu- ji imunogenisitasnya pada lele dum- bo berukuran panjang 10 - 15 cm. Setiap jenis antigen disuntikkan se- cara intramuskular dengan dosis 0,1 ml/ekor dengan kepadatan bakteri 10 8 sel/ekor. Booster (vaksinasi ulang) dengan dosis yang sama dilakukan seminggu berikutnya. Pada minggu ke-0,1,2,3, dan 4 dilakukan pengam- bilan sampel darah dengan jarum sun- tik (spuit) steril melalui arteri cau- dalis. Selanjutnya dilakukan uji titer antibodi dengan metode aglutinasi pada mikropipet Anderson (1974).
Uji reaksi silang dilakukan pada antigen dengan titer antibodi yang tinggi, yaitu ≥ 25. Uji ini dilakukan
untuk mencari antigen yang dapat bereaksi positif dengan dirinya sen- diri maupun dengan antigen lain.
Pengukuran titer antibodi dilakuk- an dengan metode Anderson (1974) dengan cara sebagai berikut : darah lele dumbo diambil dengan jarum sun- tik (spuit) steril melalui arteri ca- udalis, kemudian darah ditampung dalam tabung eppendorf, didiamkan dalam suhu kamar selama 1 jam, ke- mudian didiamkan dalam refrigera- tor pada suhu 4 o C selama 18 - 24 jam. Bagian supernatan yang meru- pakan serum darah diambil dengan mikropipet. Sementara itu dipersi- apkan mikrotiter plate yang berisi 12 sumur. Perlakuan pada masing- masing sumur adalah sebagai beri- kut :
1. Sumur ke-2 sampai dengan ke-12 diisi dengan 25 µl PBS
2. Sumur ke-1 dan ke-2 diisi dengan 25 µl serum
3. Serial pengenceran dilakukan de- ngan cara mengambil 25 µl larut- an pada sumur ke-2 dimasukkan ke sumur ke-3, dihomogenkan. Se- lanjutnya, 25 µl larutan pada su- mur ke-3 dimasukkan ke sumur ke-4, dan seterusnya hingga su- mur ke-11
4. Sumur ke-1 sampai ke-12 ditam- bahkan 25 µl suspensi bakteri A.
hydrophila yang telah dilemahkan dengan 2% formalin
5. Lempeng mikrotiter plate ditutup kemudian di goyang pelan-pelan selama 3 menit dengan gerakan
memutar. Lalu, didiamkan pada suhu kamar selama 18-24 jam
6. Cara menghitung titer antibodi : ke-12 sumur pada mikrotiter pla- te diamati. Sumur paling kiri (su- mur ke-1) adalah kontrol positif, sedangkan sumur yang paling kan- an (sumur ke-12) adalah kontrol negatif. Terbentuknya titer anti- bodi ditandai dengan terjadinya aglutinasi antara antigen dengan antibodi yang tampak dari mun- culnya lapisan keruh seperti aw- an dalam sumur mikrotiter plate, sedangkan pada sumur yang ti- dak terbentuk antibodi ditandai dengan adanya dot pada sumur yang menunjukan adanya antigen yang mengendap (tidak terjadi aglu- tinasi). Perhitungan titer antibo- di dimulai dari 21 sampai 210 (da- ri sumur ke-2 sampai ke-11). Se- bagai contoh : apabila terjadi aglu- tinasi sampai sumur ke-6, maka titer antibodi yang terbentuk ada- lah 25. Selanjutnya, angka terse- but ditransformasikan ke dalam bentuk logaritma (data log 2) agar bisa dilakukan analisis data.
Uji reaksi silang dilakukan pada an- tigen dengan titer antibodi yang ting- gi, yaitu ≥ 25. Uji ini dilakukan un- tuk mencari antigen yang bisa ber- eaksi positif dengan dirinya sendiri maupun dengan antigen lain.
Pengamatan kualitas air meliputi suhu air, pH, dan O 2 terlarut diama- ti setiap hari. Data titer antibodi di- analisis dengan menggunakan anali-
sis sidik ragam ( Analysis of Varian- ce /ANOVA) pada taraf uji 5% un- tuk mengetahui pengaruh perlaku- an. Apabila data yang telah dianali- sis sidik berbeda nyata, maka dilan- jutkan dengan uji Duncan Multiple Range Test (DMRT) pada taraf uji 5%. Adapun data hasil reaksi silang dan parameter kualitas air diamati secara deskriptif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Titer Antibodi
Imunogenisitas strain bakteri diama- ti dari produksi titer antibodi dan hasil uji reaksi silang, setelah stra- in tersebut direaksikan dengan stra- in yang sama dan disilangkan dengan strain yang berbeda. Produksi titer antibodi strain GPl-05 dan GL-02 tersaji pada tabel 1. Secara umum vaksin A. hydrophila bersifat imuno- genik yaitu mampu merespons sel- sel imun pada ikan lele dumbo. Ik- an lele dumbo yang diberi vaksin A. hydrophila memiliki peningkatan ti- ter antibodi yang signifikan diban- dingkan dengan kontrol.
Satu minggu setelah vaksinasi (ming- gu ke-1) titer antibodi antar perla- kuan berbeda nyata (P<0,05). Stra- in GPl-05 dan GL-02 mengalami pe- ningkatan titer antibodi dibandingk- an kontrol, yaitu sebesar 2 5 , 48 dan 2 4 , sedangkan kontrol hanya sebesar 2 2 , 14 . Satu minggu setelah booster (ming- gu ke-2), titer antibodi terus mening-
Dini Siswani Mulia et al kat, yaitu strain GPl-05 dan GL-02 sebesar 2 6 , 26 dan 2 5 , 59 , sedangkan kon- trol hanya sebesar 2 3 . Dua minggu setelah booster (minggu ke-3) rata- rata titer antibodi pada masing-masing perlakuan meningkat. Perlakuan de- ngan strain GPl-05 menghasilkan rata- rata titer antibodi tertinggi sebesar 2 9 , 13 dan tidak berbeda nyata (P>0,05) dengan perlakuan strain GL-02 se- besar 2 9 , 07 . Namun, perlakuan vak- sinasi berbeda nyata (P<0,05) de- ngan kontrol, yaitu 2 3 , 49 . Antibodi spesifik akan memberikan kekebalan saat kondisi ideal, yaitu setelah dua atau tiga minggu setelah rangsang- an (Anderson, 1974). Pada minggu ke-4 atau akhir penelitian, titer an- tibodi masih mengalami peningkat- an dari minggu sebelumnya. Perla- kuan vaksinasi tidak berbeda nyata (P>0,05), dengan rata-rata titer an- tibodi yang sama yaitu sebesar 2 9 , 67 , tetapi berbeda nyata dengan kontrol (P<0,05), sebesar 2 3 , 68 .
Suatu substansi yang memiliki ke- mampuan dalam menimbulkan res- pons imun apabila dipertemukan de- ngan tubuh disebut imunogenisitas (Subowo, 2009). Vaksinasi ikan le- le dumbo dilakukan untuk menge- tahui imunogenisitas 2 strain vaksin bakteri A. hydrophila dalam memp- roduksi titer antibodi. Hasil pengu- kuran titer antibodi dapat diketahui berdasarkan kemampuan antibodi di dalam serum dalam melakukan aglu- tinasi terhadap antigen A. hydrophi- la . Berdasarkan hasil penelitian, per-
lakuan vaksinasi dengan strain yang berbeda-beda mampu memproduksi antibodi. Hal ini terlihat pada ming- gu ke-1 (seminggu setelah ikan di- vaksinasi) titer antibodi mulai me- ningkat. Hal tersebut menunjukkan bahwa ke-2 strain bakteri A. hydro- phila dapat memberikan imunogeni- sitas secara signifikan pada ikan lele dumbo. Peningkatan produksi anti- bodi juga tampak pada minggu ke- 2. Booster sebagai vaksinasi ulang- an/penguat, mampu memicu pening- katan antibodi. Peningkatan titer an- tibodi terjadi karena ikan uji telah mempunyai memori imunitas sehing- ga dengan booster atau vaksinasi ulang- an dapat menghasilkan respons imun yang lebih tinggi (Mulia, 2012).
Pada minggu ke-3 dan ke-4, stra- in GPl-05 dan GL-02 tetap mening- kat sampai akhir penelitian. Perbe- daan antar strain ini diduga kare- na setiap strain memiliki patogenisi- tas dan karakter biokimia yang khas, meskipun semuanya adalah isolat bak- teri A. hydrophila . Perbedaan pato- genisitas dan karakter biokimia ini- lah yang menguatkan perlunya pen- carian kandidat vaksin dari strain- strain bakteri A. hydrophila .
Produksi antibodi adalah suatu pro- ses yang terjadi dalam limfosit seba- gai reaksi terhadap kehadiran bahan protein asing (antigen), dalam hal ini sel-sel bakteri A. hydrophila . An- tibodi sangat diperlukan untuk meng- hadapi serangan dari patogen yang masuk ke dalam tubuh (Mulia et al.,
2008). Keuntungan cara vaksinasi sun- tik secara intramuskular adalah di- fusi vaksin ke dalam tubuh berjalan konstan dan prosesnya lebih cepat untuk merangsang antibodi (Mulia et al., 2006), sehingga dari hasil pe- nelitian, antibodi yang dihasilkan da- ri minggu ke minggu meningkat. Se- lain itu, antigen akan langsung ma- suk ke dalam jaringan tubuh sehing- ga lebih efektif dan akan mudah di- respons oleh sel-sel imun (Setyawan et al., 2012). Sistem imunitas selu- ler dihasilkan oleh aktivitas limfosit yang disebut sel T yang berasal da- ri kelenjar timus, sedangkan imuni- tas humoral dihasilkan oleh golong- an limfosit yang disebut sel B yang berasal dari ginjal pada tubuh ikan (Fujaya, 2004).
Pemaparan pertama terhadap su- atu antigen merangsang sel T me- munculkan sel-sel efektor respons ke- kebalan yang diperantai sel. Sel-sel efektor berpartisipasi dalam penying- kiran atau pemusnahan bahan asing atau mikroorganisme penyerbu. Di samping itu, sel T dapat mempero- leh bantuan makrofag dalam menga- hancurkan patogen atau merangsang sel B untuk meningkatkan produksi antibodi. Sel B berdiferensiasi men- jadi sel plasma yang membuat dan mengeluarkan antibodi spesifik un- tuk menstimulasi antigen tertentu. Selain membentuk sel-sel plasma, li- mfosit B juga dapat membentuk sel- sel ingatan ( memory cells ) jika ter- jadi infeksi ulang terhadap antigen
tersebut. Sel-sel ini merupakan limfo- sit yang berumur lama dan timbul akibat terjadi kontak sebelumnya de- ngan suatu antigen (Fujaya, 2004). Menurut Ellis (1988), apabila men- dapat pemaparan kedua dengan an- tigen yang sama, maka produksi an- tibodi akan lebih cepat dihasilkan de- ngan jumlah yang lebih besar dan dalam konsentrasi yang lebih ting- gi dalam darah daripada pemapar- an pertama, sehingga dari hasil pe- nelitian setelah vaksinasi ulang atau booster, produksi titer antibodi ikan lele dumbo semakin meningkat.
Antigen yang digunakan dalam pe- nelitian ini adalah antigen H A. hydro- phila yang berasal dari 2 strain ber- beda. Antigen H merupakan whole cell yang dimatikan dengan forma- lin, mengandung flagela dan prote- in yang memungkinkan adanya re- aksi kuat dengan antibodi (Kamiso, 1997). Protein merupakan makromo- lekul yang imunogen, pada bagian tertentu dari molekul protein dapat menentukan spesifitas reaksi antigen- antibodi dan sebagai penentu tim- bulnya respons imun (Mulia et al., 2008). Menurut (Subowo, 2009) ba- gian tertentu dari molekul protein tersebut dinamakan epitop yang asing bagi tubuh ikan lele dumbo. Bebera- pa penelitian dilaporkan bahwa wak- tu pembentukkan antibodi sangat ber- variasi. Hasil penelitian yang dila- kukan oleh (Kamiso and Triyanto, 1992) diperoleh titer antibodi paling tinggi pada minggu kedua dan ke-
Dini Siswani Mulia et al tiga bahkan tetap terdeteksi dalam waktu 6 minggu berikutnya.
Strain bakteri A. hydrophila yang berasal dari daerah yang berbeda pa- da umumnya virulensinya juga ber- beda dan hal ini berpengaruh terha- dap imunogenisitas vaksin yang di- hasilkan (Mulia, 2012). Strain A. hydro- phila mempunyai variasi genetik. Per- bedaan strain dapat menyebabkan per- bedaan patogenisitas bakteri, karak- ter biokimia, dan serologi. Hasil pe- ngamatan terhadap produksi titer an- tibodi yang dihasilkan oleh ikan le- le dumbo yang divaksinasi menggu- nakan vaksin bakteri A. hydrophila dengan 6 strain, menunjukkan ada- nya perbedaan yang nyata. Hal ini menunjukkan adanya variasi genetik antar strain. Hasil penelitian yang telah dilakukan oleh (Kamiso et al., 1997) menggunakan strain A. hydro- phila dari beberapa daerah, yaitu stra- in PA 01, PA 05, PA 06, PA 07, dan BA 02 menunjukkan bahwa jenis an- tigen yang dapat menimbulkan titer antibodi tertinggi adalah antigen H pada strain PA 01, PA 05, dan BA 02.

## Uji Reaksi Silang
Uji reaksi silang merupakan uji yang mereaksikan suatu antigen dengan an- tibodi secara in vitro untuk menge- tahui imunogenisitas antigen A. hydro- phila dari beberapa strain yang di- berikan pada lele dumbo. Strain bak- teri yang digunakan untuk uji reak-
si silang terdiri atas 6 strain. Strain tersebut yaitu GPl-02, GPl-03, GPl- 05, GL-02, GB-01, dan GK-01(berperan sebagai antigen) direaksikan dengan GPl-05 dan GL-02 (berperan seba- gai antibodi).
Hasil uji reaksi silang menunjukk- an bahwa strain GPl-05 dan GL-02 memiliki imunogenisitas yang ting- gi dan bereaksi positif dengan diri- nya sendiri maupun dengan antigen lain. Titer antibodi yang dihasilkan ≥ 25 (Tabel 2). Hal ini menunjukk- an bahwa ke-2 strain tersebut me- miliki kemampuan yang baik dalam melindungi ikan terhadap serangan bakteri A. hydrophila , sehingga sa- ngat baik untuk dijadikan kandidat vaksin karena tidak hanya mampu bereaksi terhadap antigen yang sa- ma (satu jenis), tetapi mampu bere- aksi dengan antigen dari strain lain (Mulia, 2012). Vaksin yang berasal dari strain terpilih tersebut akan le- bih mampu mengendalikan penyakit yang disebabkan bakteri A. hydro- phila apabila terjadi di alam.

## Kualitas Air
Beberapa faktor yang dapat mempe- ngaruhi perkembangan respons ke- kebalan pada ikan di antaranya ada- lah faktor lingkungan. Pengamatan parameter kualitas air selama pene- litian berlangsung yang meliputi su- hu, derajat keasaman (pH), dan ok- sigen terlarut. Hasil pengamatan pa- rameter kualitas air pada semua per-
Tabel 1 Hasil Uji Reaksi Silang antar Strain A. hydrophila Antigen Serum GPl-02 GPl-03 GPl-05 GL-02 GB – 01 GK-01 GPl-05 25 26 26 25 26 25 GL-02 26 26 25 26 26 26
lakuan tidak menunjukkan adanya per- bedaan yang besar dan masih ber- ada pada batas toleransi untuk ke- hidupan lele dumbo sehingga dapat menunjang proses pembentukan res- pons kekebalan pada tubuh ikan.
Suhu air selama penelitian berki- sar antara 27-28 o C, kisaran tersebut masih layak bagi kehidupan ikan le- le dumbo. Menurut Bachtiar (2007) suhu minimum dalam budidaya ik- an lele dumbo yaitu 20 o C, sedangk- an suhu maksimumnya yaitu 30 o C. Suhu berpengaruh pada pembentuk- an antibodi (Anderson, 1974). Pa- da suhu yang optimal pembentukan antibodi akan berjalan dengan baik. Kisaran suhu optimal bagi kehidup- an ikan di peraiaran tropis antara 25–32 o C (Kordi, 2010). Suhu air se- lama penelitian merupakan suhu yang masih tergolong optimal bagi kehi- dupan lele dumbo. Lele dumbo sa- ngat toleran terhadap suhu air yang cukup tinggi, yaitu pada kisaran 20- 35 o C (Kamiso and Triyanto, 1992). Kisaran derajat keasaman (pH) air selama penelitian yaitu 7,2-7,72. Menurut Kordi (2010) kisaran opti- mal pH adalah 7,5-8,7, sehingga pH air untuk semua perlakuan selama penelitian masih dalam kisaran nor- mal untuk kehidupan lele dumbo. As- mawi (1995) mengungkapkan ikan da-
pat bertahan terhadap pergeseran pH berkisar 5-8.
Oksigen terlarut (DO) selama pe- nelitian berkisar 6,7-8,5 ppm. Kisar- an kandungan oksigen terlarut ter- sebut masih dalam batas kelayakan hidup ikan lele dumbo. Kordi (2010) mengungkapkan kandungan oksigen yang baik untuk budidaya perairan adalah antara 5-7 ppm. Menurut Pur- bomartono and Mulia (2009) kandung- an oksigen terlarut yang mendukung bagi kehidupan ikan adalah > 3 ppm. Ikan-ikan yang dapat mengambil ok- sigen langsung dari udara seperti spe- sies Clarias kurang sensitif terhadap kandungan oksigen (Zonneveld et al., 1991). Ikan lele dumbo memiliki alat pernapasan tambahan sehingga mam- pu hidup pada perairan dengan kan- dungan oksigen rendah hingga 2 ppm dan mampu menghirup oksigen lang- sung dari udara dengan menyembul ke permukaan air (Kordi, 2010).

## SIMPULAN
Bakteri A. hydrophila strain GPl-05 dan GL-02 memiliki imunogenisitas yang baik yang ditunjukkan dengan produksi titer antibodi pada lele dum- bo. Strain bakteri A. hydrophila ber- eaksi positif pada uji reaksi silang. Strain GPl-05 dan GL-02 memiliki
Dini Siswani Mulia et al
imunogenisitas yang tinggi, sehingga direkomendasikan menjadi kandidat vaksin.
Acknowledgements Penelitian ini merupakan ba- gian dari Hibah Kompetitif yang dibiayai oleh LP- PM UMP. Oleh karena itu, penulis mengucapkan terima kasih kepada LPPM UMP yang telah mem- biayai penelitian ini.

## Pustaka
Anderson, D. P. (1974). Fish Immunology,
In Diseases of Fishes . T.F.H. Publica-
tions, Ltd.
Asmawi, S. (1995). Pemeliharaan Ikan da-
lam Karamba . Gramedia.
Bachtiar, Y. (2007). Panduan Lengkap Bu- didaya Lele Dumbo . Agromedia.
Ellis, A. E. (1988). Optimizing Factors For Fish Vaccination . Fish Vaccination.
Academic Press Ltd.
Fujaya, Y. (2004). Fisiologi Ikan Dasar Pe- ngembangan Teknologi Perikanan . Rine- ka Cipta.
Kamiso, H. N. (1997). Uji lapang penggu-
naan vaksin aeromonas hydrophila pada lele dumbo (clarias gariepinus). Jurnal Perikanan UGM , 1(2):17–24.
Kamiso, H. N. (2004). Status penyakit
ikan dan pengendaliannya di indonesia.
In Prosiding Seminar Nasional Penyakit
Ikan dan Udang IV, Purwokerto .
Kamiso, H. N. and Triyanto (1992). Vak- sinasi monovalen dan polivalen vaksin untuk mengatasi serangan aeromonas hydrophila pada ikan lele (clarias sp.).
Jurnal Ilmu Pertanian , 4(8):447–464.
Kamiso, H. N., Triyanto, and Hartati, S.
(1997). Uji antigenitas dan efikasi ae- romonas hydrophila pada lele dumbo (clarias gariepinus). Jurnal Perikanan UGM , 1(2):9–16.
Kordi, M. G. (2010). Panduan Lengkap
Memelihara Ikan Air Tawar di Kolam
Terpal . Lily Publisher.
Mulia, D. S. (2007). Keefektivan vaksin ae- romonas hydrophila untuk mengendalik- an penyakit mas (motile aeromonas sep- ticemia) pada gurami (osphronemus go- uramy lac.). Jurnal Pembangunan Pede- saan , 7(1):43–52.
Mulia, D. S. (2012). Vaksinasi Lele Dumbo .
Pustaka Pelajar.
Mulia, D. S., Apriyanti, W., Maryanto,
H., and Purbomartono, C. (2012). Imu- nogenisitas antigen whole cell bakteri aeromonas hydrophila. Sains Akuatik ,
14(1):25–32.
Mulia, D. S., Pratiwi, R., and Triyanto
(2004). Efikasi vaksin debris sel aeromo- nas hydrophila secara suntik dengan va- riasi cara booster pada lele dumbo (cla- rias gariepinus burchell). Berkala Ilmiah
Biologi , 3(3):145–156.
Mulia, D. S., Pratiwi, R., and Triyanto
(2006). Pengaruh cara booster terhadap
efikasi vaksinasi oral dengan debris sel aeromonas hydrophila pada lele dumbo (clarias sp.). Jurnal Perikanan UGM ,
8(1):96–104.
Mulia, D. S., Purbomartono, C., Isnan-
setyo, A., and Murwantoko (2008).
Penggunaan vaksin polivalen aeromonas hydrophila untuk pengendalian penyakit mas (motile aeromonas septicemia) pada gurami (osphronemus gouramy lac.). In Prosiding Seminar Nasional Tahunan V Hasil Penelitian Perikanan dan Kelaut- an . Jurusan Perikanan, Fakultas Perta- nian, Universitas Gadjah Mada.
Olga and Aisiah, S. (2007). Vaksin protein produk ekstraseluler aeromonas hydro- phila untuk meningkatkan tanggap kebal patin (pangasius hypophthalmus) terha- dap motile aeromonas septicemia (mas).
Sains Akuatik , 10(2):105–110.
Purbomartono, C. and Mulia, D. (2009).
Pengaruh pemberian kombinasi levami- sol dan vaksin aeromonas hydrophila ter-
hadap pertumbuhan, jumlah neutrofil, dan sintasan ikan gurami (osphronemus gouramy lac.). Sains Akuatik , 12(1):27– 38.
Rahman, M. H., Suzuki, S., and Kawai, K.
(2001). The effect of temperature on ae- romonas hydrophila infection in goldfish, carassius auratus. Journal of Applica-
tion Ichthyology , 17:282–285.
Setyawan, A., Hudaidah, S., Ronapati,
Z. Z., and Sumino (2012). Imunogeni- sitas vaksin inaktif whole cell aeromo- nas salmonicida pada ikan mas (cyprinus carpio). Aquasains , 1(1):18–22.
Subowo (2009). Imunobiologi . Sagung Se-
to.
Suryantinah, R., Rini, K., and Olga (2005).
Optimasi dosis vaksin debris sel aero- monas hydrophila terhadap pengendali- an penyakit mas (motile aeromonas sep- ticemia) pada ikan nila (oreochromis ni- loticus). In Prosiding Seminar Nasio- nal Tahunan Hasil Penelitian Perikanan dan Kelautan. Yogyakarta. , pages 108– 114. Universitas Gajah Mada.
Zonneveld, N., Huisman, E. A., and Boon,
J. H. (1991). Prinsip-prinsip Budidaya
Ikan . Gramedia Pustaka Utama.