## Jurnal Ilmu Farmasi dan Farmasi Klinik (JIFFK)

## PENGARUH WAKTU ULTRASONIKASI TERHADAP
KARAKTERISTIK FISIKA NANOPARTIKEL KITOSAN EKSTRAK ETANOL DAUN SUJI ( Pleomele angustifolia ) DAN UJI STABILITAS FISIKA MENGGUNAKAN METODE CYCLING TEST
Malinda Prihantini * , Elya Zulfa, Listyana Dewi Prastiwi , Ikha Dyah Yulianti
Bidang Farmasetika dan Teknologi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Wahid Hasyim Jl. Menoreh Tengah X/22 Semarang 50236 Sampangan Semarang
* E-mail: malindap@unwahas.ac.id

## INTISARI
Sistem nanopartikel mengenkapsulasi dan melindungi flavonoid pada daun suji dari ketidakstabilan fotolisis  dan  oksidasi.  Kitosan  merupakan  polimer  pembentuk  nanopartikel  yang  bersifat biokompatibel,  biodegradabel  dan  tidak  toksik.  Ultrasonikasi  merupakan  teknik  pencampuran dengan  energi  getaran  tinggi.  Waktu  ultrasonikasi  mempengaruhi  ukuran  partikel.  Tujuan penelitian  ini  untuk  mengetahui  pengaruh  waktu  utrasonikasi  terhadap  karakteristik  fisika nanopartikel  kitosan  ekstrak  etanol  daun  suji  ( Pleomele  angustifolia )  dan  mengetahui  stabilitas fisikanya  setelah  c ycling  test .  Ekstrak  etanol  daun  suji  (EEDS)  diperoleh  dengan  maserasi menggunakan  etanol  70%.  Nanopartikel  kitosan  EEDS  dibuat  menggunakan  metode  gelasi  ionik dengan  waktu  ultrasonikasi  3  menit  (FI),  6  menit  (FII),  dan  9  menit  (FIII).  Karakterisasi  fisika nanopartikel  meliputi  ukuran  partikel,  indeks  polidispersitas,  dan  potensial  zeta.  Nanopartikel kitosan  EEDS  dengan  karakteristik  fisika  terbaik  (FIII)  diuji  stabilitasnya  menggunakan  metode c ycling  test .  Data  yang  diperoleh  dianalisis  menggunakan  metode  statistika  Anova  dengan  taraf kepercayaan  95%.  Ukuran  nanopartikel  kitosan  EEDS  (nm)  berbeda  bermakna  pada  semua formula,  FI  (374,47),  FII  (288,43),  dan  FIII  (233,37).  Indeks  polidispersitas  FI  (0,38)  dan  FIII (0,65) berbeda bermakna,  FII (0,41) berbeda tidak bermakna. Potensial zeta (mV) FI (51,70), FII (46,10),  dan  FIII  (48,60)  berbeda  tidak  bermakna  pada  semua  formula.  Karakteristik  fisika  FIII setelah  c ycling  test menunjukkan  ukuran  partikel  455,0  nm,  indeks  polidispersitas  0,174,  dan potensial zeta 20,1 mV.
Kata kunci : ultrasonikasi, nanopartikel, kitosan, cycling test , daun suji ( Pleomele angustifolia )

## ABSTRACT
The  nanoparticle  system  encapsulates  and  protects  flavonoids  of  suji  leaves  from  photolysis  and oxidation  instability.  Chitosan  is  a  biocompatible,  biodegradable  and  non-toxic  nanoparticles forming  polymer.  Ultrasonication  is  a  materials    mixing  technique  under  high  vibration  energy. The ultrasonication time affects the particle size. The aim of this study was to determine the effect of the ultrasonication time on physical characteristics of chitosan nanoparticles of suji (Pleomele angustifolia) leaf ethanol extract and its physical stability after cycling test. Ethanol extract of suji leaves (EEDS) was obtained by maceration using 70% ethanol. Chitosan EEDS nanoparticles were made under ionic gelation method using an ultrasonication time of 3 minutes (FI), 6 minutes (FII), and  9  minutes  (FIII).  The  physical  characterization  of  nanoparticles  includes  particle  size, polydispersity  index,  and  zeta  potential.  Chitosan  EEDS  nanoparticles  with  the  best  physical characteristics  (FIII)  were  tested  for  stability  using  cycling  test  method.  The  data  obtained  were
analyzed  using  the  Anova  statistical  method  with  a  95%  confidence  level.  The  size  of  EEDS chitosan nanoparticles (nm) was significantly different in all formulas, FI (374.47), FII (288.43), and FIII (233.37). The polydispersity index of FI (0.38) and FIII (0.65) were significantly different, while FII (0.41) was not significantly different. The zeta potential (mV) FI (51.70), FII (46.10), and FIII  (48.60)  were  not  significantly  different  in  all  formulas.  The  physical  characteristics  of Formula III after Cycling Test showed a particle size of 455.0 nm, a polydispersity index of 0.174, and a zeta potential of 20.1 mV.
Keywords : ultrasonication, nanoparticles, chitosan, cycling test, suji leaf ( Pleomele angustifolia )
* Corresponding author: Malinda Prihantini Universitas Wahid Hasyim Jl. Menoreh Tengah X/ 22, Semarang E-mail: malindap@unwahas.ac.id

## PENDAHULUAN
Tanaman  suji  mengandung  flavonoid  yang  diduga  memiliki  aktivitas  antioksidan (Prangdimurti dkk., 2006). Flavonoid umumnya memiliki kelarutan yang rendah serta tidak stabil terhadap  pengaruh  cahaya,  oksidasi  dan  perubahan  kimia.    Karena  itu,  apabila  teroksidasi, strukturnya  akan  berubah  dan  fungsinya  sebagai  bahan  aktif  akan  berkurang  dan  bahkan  hilang (Kitao  dan  Sekine.,1994).  Salah  satu  cara  melindungi  senyawa  flavonoid  tersebut  dibuat nanopartikel. Pada sistem ini senyawa aktif dapat terperangkap, dilarutkan, atau dienkapsulasi pada nanopartikel matriks (Mohanraj dan Chen, 2006) sehingga dapat melindungi senyawa aktif tersebut dari  pengaruh  kondisi  lingkungan.  Pembuatan  nanopartikel  juga  berfungsi  untuk  meningkatkan penetrasi pada lapisan kulit (Santini dkk., 2015).
Kusuma (2018) mengembangkan sistem nanopartikel untuk daun suji menggunakan metode gelasi  ionik  dengan  metode  pencampuran  menggunakan  pengaduk  magnetik.  Namun,  hasilnya belum  optimal  karena  ukuran  partikel  dan  indeks  polidispersitas  mengalami  kenaikan  selama penyimpanan. Ulum (2018), mengembangkan sistem nanopartikel untuk daun sawo menggunakan gelasi  ionik  dengan  metode  pencampuran  ultrasonikasi  dan  didapatkan  ukuran  partikel  pada rentang  400-500  nm.  Meningkatnya  kecepatan  dan  lama  pencampuran  dalam  pembentukan nanopartikel  dapat  menurunkan  ukuran  partikel  hingga  pada  titik  optimalnya  (Gupta  dan  Karar, 2011;  Dangi  dan  Shakya,  2013).  Semakin  lama  pengadukan  akan  menghasilkan  ukuran  partikel yang  semakin  kecil  karena  semakin  banyak  partikel  yang  terpecah  menjadi  partikel  berukuran nano.  Waktu  sonikasi  pada  rentang  optimal  diketahui  akan  menghasilkan  ukuran  partikel  yang cenderung lebih homogen dan stabil secara fisika (Delmifiana dkk., 2013). Karena itu perlu diteliti pengaruh  waktu  ultrasonikasi  terhadap  karakteristik  fisika  nanopartikel  EEDS  dan  uji  stabilitas fisikanya.

## METODE PENELITIAN Bahan dan Alat
Bahan  yang  digunakan  adalah  daun  suji  ( Pleomele  angustifolia )  diperoleh  dari  Pekalongan Jawa  Tengah  Indonesia,  etanol  70%  (hasil  preparasi  di  laboratorium),  kitosan  (pharmaceutical grade),  natrium  tripolifosfat  (NaTPP),  asam  asetat  glasial  dan  aqua  de  mineralisata.  Alat  yang digunakan  adalah  PSA  ( Particle  Size  Analyzer )  (Horiba  SZ-100),  Zeta  Sizer  (Horiba  SZ-100), Ultrasonic  Homogenizer  (Biologics.  Inc  300  V/T),  satu  set  alat  maserasi,  satu  set  Evaporator (Heidolph),  neraca  analitik  (Ohaus  dan  Mettler  Toledo),  Climatic  Chamber  (Memmert),  lemari pendingin/ refrigerator (Sharp),  labu  ukur,  gelas  kimia,  gelas  ukur,  mikropipet,  vial,  pipet  tetes, dan peralatan gelas yang umum di laboratorium.
Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Suji
EEDS diperoleh dari hasil maserasi menggunakan etanol 70% yang dapat menyari senyawa golongan flavonoid dalam EEDS. Etanol sebagai penyari relatif tidak toksik dibandingkan metanol dan  lebih  cepat  menguap  dibandingkan  air  (Agustin  dan  Ismiyati,  2015).  Maserasi  dibagi  dalam dua  proses,  pertama  maserasi  dengan  perbandingan  1:7  selama  3  hari,  diikuti  dengan  proses remaserasi  menggunakan  perbandingan  1:3  dengan  pelarutnya  selama  3  hari  sambil  sesekali diaduk. Maserat I dan II dicampur, kemudian diuapkan pelarutnya menggunakan rotary evaporator dengan  suhu  50°C  hingga  diperoleh  ekstrak  kental,  lalu  disimpan  dalam  wadah  kaca  berwarna gelap  terlindung  dari  cahaya  dan  ditimbang  bobotnya  untuk  menghitung  rendemen  ekstrak  yang didpatkan,  kemudian  disimpan  di  dalam  desikator  untuk  mengurangi  kelembaban  pada  ekstrak. Rendemen ekstrak dihitung menggunakan persamaan di bawah ini.

## Pembuatan Nanopartikel Kitosan Ekstrak Etanol Daun Suji .
Nanopatikel  kitosan  EEDS  dibuat  dengan  metode  gelasi  ionik  dengan  pencampuran menggunakan  ultrasonikasi.  Pembuatan  nanopartikel  kitosan  EEDS  dibuat  konsentrasi  kitosan 0,2% b/v  yang dilarutkan ke dalam asam asetat 1 % b/v. Campuran disonifikasi menggunakan alat ultrasonik selama 10 menit dengan pulser 50 dan power 20 bar sampai kitosan terlarut sempurna. Dibuat  larutan  NaTPP  0,1%  b/v  yang  dilarutkan  dalam  aqua  demineralisata  menggunakan  alat ultrasonik selama 10 menit dengan pulser 50 dan power 20 bar . Campuran kedua bahan tersebut disonifikasi  menggunakan  alat  ultrasonik  selama  2  menit.  Dibuat  larutan  stok  EEDS,  dengan menimbang  100  mg  EEDS  dilarutkan  dalam  1  mL  etanol  70%.  Kemudian  ekstrak  yang  sudah dilarutkan  dengan  etanol  70%  dimasukkan  ke  dalam  campuran  larutan  kitosan  0,1%  dan  NaTPP 0,2% yang sudah disonifikasi. Campuran disonifikasi menggunakan alat ultrasonik dengan variasi lama  waktu  pencampuran  yaitu  FI  3  menit,  FII  6  menit  dan  FIII  9  menit  dengan  pulser  50  dan power  20  bar  sampai  terlarut  sempurna  hingga  terbentuk  suspensi  nanopartikel.    Formula nanopartikel kitosan EEDS dapat dilihat pada Tabel I.
Tabel I. Formula Nanopartikel Kitosan EEDS Bahan Formula EEDS (mg/mL) 100 Kadar kitosan (% b/v) dalam 6 mL larutan asam asetat glasial 1% 0,2 Kadar NaTPP (% b/v) dalam 1 mL larutan air 0,1 Rasio massa Kitosan : NaTPP 12:1

## Pengukuran Ukuran Nanopartikel dan Indeks Polidispersitas
Ukuran nanopartikel dan indeks polidispersitas diperoleh melalui pengukuran menggunakan alat  PSA.  Volume  sampel  yang  digunakan  sebanyak  10  mL  untuk  masing-masing  formula  dan dilakukan  replikasi  sebanyak  3  kali. Nanopartikel  dimasukkan  ke  dalam  kuvet.  Selanjutnya  PSA dioperasikan.

## Pengukuran Potensial Zeta
Nilai potensial zeta dari nanopartikel diukur dengan menggunakan alat Zeta Sizer. Volume sampel  yang  digunakan  sebanyak  10  mL  untuk  masing-masing  formula  dan  dilakukan  replikasi sebanyak  3  kali. Nanopartikel  dimasukkan  ke  dalam  kuvet  kemudian  dilakukan  pengukuran terhadap potensial zeta menggunakan Zeta Sizer.

## Stabilitas Fisika Nanopartikel Kitosan EEDS
Evaluasi  stabilitas  fisika  dilakukan  terhadap  formula  nanopartikel  kitosan  EEDS  dengan karakteristik  fisika  terbaik.  Nanopartikel  kitosan  EEDS  dimasukkan  ke  dalam  lemari  pendingin pada  suhu  4°C  selama  24  jam,  kemudian  dimasukkan  ke  dalam climatic  chamber bersuhu  40°C
Pengaruh Waktu Ultrasonikasi terhadap Karakteristik Fisika Nanopartikel Kitosan… (Malinda Prihantini)
selama  24  jam  sehingga  terjadi  1  siklus.  Setelah  mengalami  6  siklus cycling  test nanopartikel kitosan EEDS diuji kembali karakteristik fisikanya meliputi ukuran partikel, indeks polidispersitas dan potensial zeta.

## Analisis Data
Data  hasil  karakteristik  fisik  nanopartikel  kitosan  EEDS  berupa  ukuran  partikel  dan  indeks polidispersitas dianalisis secara statistik parametrik yaitu One Way Anova dan Tukey dengan taraf kepercayaan 95% untuk melihat perbedaan antar formula.
Data  hasil  karakteristik  fisik  nanopartikel  kitosan  EEDS  berupa  potensial  zeta  dianalisis menggunakan  metode  uji  statistik  non  parametrik  yaitu  Kruskal  Wallis  dengan  taraf  kepercayaan 95% untuk melihat perbedaan antar formula.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil ekstrak kental EEDS didapatkan sebanyak 241,36 g dengan rendemen sebesar 16,53%. Rendemen EEDS kental dari daun suji yang diperoleh dari sumber yang sama memiliki rendemen 30,73% (Kusuma, 2018). Perbedaan disebabkan karena pemanenan bahan dilakukan di waktu yang berbeda sehingga kemungkinan senyawa metabolit memiliki persentase kandungan yang berbeda.
Metode  gelasi  ionik  merupakan  metode  pembuatan  nanopartikel  yang  melibatkan  proses sambung  silang  antara  polielektrolit  dengan  pasangan  ion  multivalennya.  Kitosan  merupakan polimer  kationik  yang  dapat  membentuk  nanopartikel  karena  dapat  menangkap  makromolekul (Ribeiro  dkk.,  2015). Kitosan  juga  bersifat  kompatibel,  tidak  toksik,  mudah  terdegradasi,  larut dalam larutan asam organik yang pHnya kurang dari 6,5 seperti asam laktat, asam asetat dan lain- lain  (Ponnuraj  dkk.,  2015). Pembentukan  ikatan  sambung  silang  pada  metode  gelasi  ionik memerlukan  agen  penyambung  silang  ( crosslinker )  berupa  senyawa  polielektrolit  seperti  NaTPP. Senyawa NaTPP  bersifat  amfoterik  sehingga  ion  fosfat  (TPP)  yang  bermuatan  negatif  akan mengikat gugus amina (NH 3 + ) yang bermuatan positif dari kitosan sedangkan Na + dari NaTPP akan mengikat ion bermuatan negatif pada senyawa yang terkandung dalam ekstrak. Mekanisme reaksi sambung silang antara kitosan dan TPP ditampilkan pada Gambar 1.

## Gambar 1. Mekanisme reaksi sambung silang kitosan-TPP (Hsieh dkk., 2008)
Reaksi  sambung  silang  akan  membentuk  struktur  seperti jaring  dan  akan  melapisi  senyawa yang terkandung di dalam ekstrak. Proses sambung silang secara fisika ini menguntungkan karena tidak hanya menghindari penggunaan pelarut organik, tetapi juga mencegah kemungkinan rusaknya bahan  aktif  yang  akan  dienkapsulasi  dalam  nanopartikel  kitosan  (Kunjachan  dkk.,  2014). Nanopartikel yang dibuat menggunakan metode gelasi ionik dengan komposisi kitosan dan NaTPP dapat menghasilkan nanopartikel dengan ukuran 250-350 nm dengan efisiensi penjerapan zat aktif sekitar 72,2% (Dustgania dkk., 2008).
Proses  pembentukan  partikel  menggunakan  metode  ultrasonikasi  melalui pemanfaatan gelombang suara dan getaran dalam memisahkan penggumpalan partikel dan memecahnya menjadi ukuran  yang  lebih  kecil.  Peningkatan  kecepatan  memperbesar  intensitas  molekul  pelarut  untuk kontak dengan kitosan sehingga semakin besar intensitas kecepatan maka partikel yang dihasilkan semakin kecil. Namun, hal tersebut hanya berlaku hingga titik optimum dicapai. Berdasarkan hasil optimasi proses menggunakan metode Box-Behnken dinyatakan bahwa w aktu sonikasi selama 6-10 menit  mampu  menghasilkan  nanoemulsi  yang  memiliki  karakteristik  fisika  yang  optimal  (Suciati dkk, 2019).
Pada awal proses ultrasonikasi, pemutusan rantai kitosan belum terjadi dengan sempurna dan agregat nanopartikel magnetik belum terpisah dengan baik sehingga viskositas masih tinggi, karena medium  hanya  mengalami  perenggangan  ikatan  sebelum  terjadinya  pemutusan  sempurna  ikatan (Ruan  dan  Jacobi,  2012).  Semakin  lama  waktu  proses,  pemutusan  ikatan  dan  dispersi  agregat menjadi makin sempurna namun tetap dengan ukuran partikel yang cenderung kecil dan homogen. Metode  ultrasonikasi  juga  memiliki  kelebihan  selain  prosesnya  yang  sederhana,  metode  ini  lebih cepat  dan  efisien  menghasilkan  partikel  berukuran  nano  dibandingkan  dengan  metode konvensional. Hasil ukuran partikel sistem nanopartikel kitosan EEDS untuk FI, FII dan FIII dapat dilihat pada Tabel II.
Tabel II. Hasil Ukuran Partikel Kitosan EEDS
Formula Ukuran Partikel (nm) Rata-rata ± SD Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 FI 370,90 367,00 385,50 374,47± 9,75 FII 287,10 272,80 305,40 287,43 ±16,34 FIII 234,60 233,60 231,90 233,37 ± 1,37
Keterangan:
FI  : Formulasi nanopartikel kitosan EEDS dengan variasi lama waktu pencampuran 3 menit. FII  : Formulasi nanopartikel kitosan EEDS dengan variasi lama waktu pencampuran 6 menit. FIII : Formulasi nanopartikel kitosan EEDS dengan variasi lama waktu pencampuran 9 menit.
Ukuran nanopartikel terkecil ditunjukkan oleh FIII sedangkan yang paling besar ditunjukkan oleh  FI.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  waktu  ultrasonikasi  berpengaruh  terhadap  ukuran partikel  sistem  nanopartikel  kitosan  EEDS.  Waktu  ultrasonikasi  yang  optimum  dinilai  dari kemampuan melarutkan dan mendistribusikan suatu bahan secara merata di dalam sistem. Semakin lama  waktu  pencampuran,  maka  ukuran  partikel  semakin  kecil  (Jusnita,  2014).  Hal  tersebut disebabkan  durasi  yang  lebih  lama  dari  kekuatan  radiasi  ultrasonik  untuk  menyebarkan  tetesan koloid  ke  ukuran  yang  lebih  kecil  (Li  dan  Chiang,  2012).  Ukuran  partikel  semakin  kecil  dengan peningkatan  gaya  yang  diberikan.  Menurut  Lachman  dan  Lieberman  (1994),  jika  pencampuran terlalu  lambat  maka  bahan-bahan  sulit  menjadi  homogen  karena  kurangnya  intensitas  tumbukan antar  partikel.  Pada  FI  dan  FII  memiliki  ukuran  partikel  yang  lebih  besar  dari  FIII  hal  ini disebabkan pencampuran belum sempurna sehingga mudah terbentuk koloid (Taurina dkk., 2017). Ukuran  tersebut  telah  memenuhi  syarat  ukuran  nanopartikel  yaitu  kisaran  10-1000  nm (Tiyabooncai., 2003) sehingga FI, FII, dan FIII memenuhi syarat ukuran nanopartikel karena hasil yang diperoleh memiliki ukuran partikel < 1000 nm. Hasil statistik One Way Anova menunjukkan nilai signifikansi p<0,05 yang berarti ada perbedaan bermakna antar formula, selanjutnya hasil uji Tukey menunjukkan bahwa ada perbedaan bermakna ukuran partikel antar formula.
Hasil pengukuran indeks polidispersitas nanopartikel kitosan EEDS dapat dilihat pada Tabel III.  Indeks  polidispersitas  yang  paling  kecil  ditunjukkan  oleh  FI  sedangkan  yang  paling  besar ditunjukkan  oleh  FIII.  Nilai  indeks  polidispersitas  menunjukkan  keseragaman  ukuran  partikel. Semakin  kecil  nilai  indeks  polidispersitas  maka  ukuran  partikel  semakin  homogen  (Yuan  dkk., 2008). Indeks polidispersitas mendekati 0 menunjukkan ukuran partikel yang semakin seragam dan
homogen  (Haque,  2015).  Nilai  indeks  polidispersitas  menunjukkan  distribusi  ukuran  yang  dapat mempengaruhi  penghantaran  obat,  pelepasan  obat  dan  stabilitas  nanopartikel  (Ko  dkk.,  2002). Nanopartikel dengan nilai indeks polidispersitas 1 memiliki distribusi ukuran yang sangat luas dan mengandung  partikel  besar  atau  agregat  yang  dapat  mengalami  sedimentasi.  Nilai  indeks polidispersitas 0,01 sampai 0,5 biasanya dimiliki oleh sistem monodispersi. Sedangkan indeks >0,7 menyatakan  sistem  nanopartikel  dengan  distribusi  ukuran  partikel  yang  sangat  luas  (Nidhin  dkk., 2008).  Indeks  polidispersitas  ini  memberikan  informasi  mengenai  kestabilan  fisik  suatu  sistem dispersi yang terbentuk bersifat lebih stabil untuk jangka panjang (Gao dkk., 2008).

## Tabel III. Hasil Pengukuran Indeks Polidispersitas Nanopartikel Kitosan EEDS
Formula Indeks Polidispersitas Rata-rata ± SD Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 FI 0,50 0,31 0,32 0,38 ± 0,11 FII 0,53 0,29 0,41 0,41 ± 0,12 FIII 0,64 0,68 0,65 0,65 ± 0,03
Keterangan :
FI  : Formulasi nanopartikel kitosan EEDS dengan variasi lama waktu pencampuran 3 menit. FII : Formulasi nanopartikel kitosan EEDS dengan variasi lama waktu pencampuran 6 menit. FIII: Formulasi nanopartikel kitosan EEDS dengan variasi lama waktu pencampuran 9 menit.
Nilai  indeks  polidispersitas  yang  dihasilkan  dari  ketiga  formula  menunjukkan  bahwa distribusi ukuran partikel pada FI dan FII  yang dihasilkan bersifat monodispers, artinya distribusi partikel dari kedua formula tersebut memiliki ukuran partikel yang seragam, dengan nilai rata-rata indeks  polidispersitas  yang  dihasilkan  berada  pada  rentang  0,4-0,5  sehingga  menunjukkan nanopartikel  kitosan  EEDS  memiliki  kecendrungan  stabil  secara  fisik  maka  tidak  menyebabkan partikel  saling  beragregasi  (Avadi  2010;  Rahmawanty,  2014).  Walaupun  demikian,  nilai  indeks polidispersitas yang dihasilkan dari FIII masih dapat diterima karena distribusi ukuran droplet yang seragam  dan  homogen  yaitu  <0,7  (Abdellatif  dkk.,  2015).  Berdasarkan  data  tersebut,  dapat dinyatakan  bahwa  peningkatan  waktu  pencampuran  mengakibatkan  indeks  polidispersitas  yang semakin  tinggi.  Hal  ini  karena  semakin  tingginya  vibrasi  getaran  dari  ultrasonik  akan mengakibatkan  semakin  kecil  ukuran  partikel.  Semakin  kecil  ukuran  partikel,  ketidakteraturan antar partikel akan semakin tinggi sehingga partikel koloid yang dihasilkan menjadi tidak stabil dan memiliki  kecenderungan  saling  bersatu  untuk  menstabilkan  membentuk  suatu  agregat  yang  lebih besar. Agregat-agregat yang terbentuk memiliki kecenderungan ukuran partikel yang tidak seragam sehingga  nilai  indeks  polidispersitasnya  semakin  tinggi.  Hasil  statistik One  Way  Anova menunjukkan  nilai  signifikansi  p  <0  ,05  yang  berarti  ada  perbedaan  bermakna  antar  formula, selanjutnya  uji  Tukey  menunjukkan  bahwa  FI  dan  FIII  ada  perbedaan  bermakna  nilai  indeks polidispersitas, sedangkan FI dan FII serta FII dan FIII tidak ada perbedaan bermakna nilai indeks polidispersitas.
Nilai potensial zeta dari FI, FII, dan FIII yaitu +51,70 mV, 46,10 mV, dan 48,60 mV. Hasil tersebut  menandakan  bahwa  nanopartikel  kitosan  EEDS  memiliki  kestabilan  yang  baik,  karena memiliki nilai potensial zeta lebih dari 30 mV (Akhtar dkk, 2012). Idealnya muatan dari potensial zeta  harus  lebih  tinggi  dari  pada  medium  pendispers  untuk  mencegah  adanya  agregasi.  Sistem dispersi  dengan  nilai  muatan  potensial  zeta  yang  rendah  lebih  mudah  untuk  membentuk  agregat seiring dengan adanya gaya Van der Waals (Nanocomposix, 2012). Muatan  positif pada potensial zeta kemungkinan berasal dari muatan positif dari kitosan yang tidak terikat dengan muatan negatif dari tripolifosfat. Gugus amina (NH 3 + ) yang bermuatan positif dari kitosan akan berikatan dengan ion  fosfat  (P 3 O 10 )  dari  NaTPP  yang  bermuatan  negatif,  sedangkan  muatan  positifnya  (Na + )  akan berikat an dengan muatan negatif dari zat aktif sehingga zat aktif EEDS terenkapsulasi dengan baik dan terdistribusi di dalam polimer kitosan.
Nilai  potensial  zeta  secara  umum  digunakan  untuk  mengetahui  muatan  partikel  dan kestabilan  nanopartikel.  Pengukuran  potensial  zeta  dapat  memberikan  informasi  mengenai stabilitas sistem dispersi koloidal saat penyimpanan yaitu kemungkinan terbentuknya agregat pada partikel yang bermuatan. Selain itu, muatan permukaan partikel dapat digunakan sebagai informasi apakah  zat  aktif  terenkapsulasi  dalam  nanopartikel  atau  hanya  teradsorpsi  di  permukaan nanopartikel (Mohanraj dan Chen., 2006). Hasil uji statistik non parametrik menggunakan Kruskall Wallis  menunjukkan  nilai  signifikansi  0,061  (p>0,05),  yang  berari  secara  statistik  tidak  terdapat perbedaan  bermakna  dari  lama  waktu  pencampuran  terhadap  nilai  potensial  zeta  sediaan nanopartikel kitosan EEDS.
Hasil  evaluasi  stabilitas  fisika  nanopartikel  kitosan  EEDS  setelah  mengalami cycling  test selama 6 siklus (12 hari penyimpanan) mengalami peningkatan ukuran partikel menjadi 455,0 nm, peningkatan  nilai  indeks  polidispersitas  menjadi  0,174  dan  penurunan  potensial  zeta  menjadi  20 Mv. Peningkatan ukuran partikel selama penyimpanan cycling test terjadi karena adanya pengaruh gravitasi  dalam  sistem  dispersi  koloid  dapat  mengakibatkan  partikel  saling  menempel  satu  sama lain dan membentuk agregat dengan ukuran yang meningkat secara berturut-turut (Attwood, 2002; Florence dan Attwood,  1998).  Terjadinya  agregasi  tersebut  juga  berpengaruh  terhadap  potensial zeta  yang  mengakibatkan  terjadinya  penurunan,  sedangkan  nilai  indeks  polidispersitas  yang menurun  kemungkinan  disebabkan  karena  agregat  yang  terbentuk  memiliki  ukuran  yang  hampir seragam  atau  lebih  homogen  dari  segi  ukuran.  Masalah  stabilitas  ini  dapat  diatasi  dengan meningkatkan  konsentrasi  kitosan  dalam  formula  sehingga  viskositas  dalam  sistem  suspensi nanopartikel menjadi lebih tinggi dan kecepatan agregasi menurun sejalan dengan Hukum Stokes.

## KESIMPULAN
Hasil karakteristik fisik nanopartikel kitosan EEDS dengan metode ultrasonikasi pada semua formula  memenuhi  syarat  karakteristik  fisika  nanopartikel,  yaitu  ukuran  partikel  FI  (374,47  nm), FII (288,43 nm), dan FIII (233,37 nm). Indeks polidispersitas FI (0,38), FII (0,41), dan FIII (0,65). Potensial  zeta  FI  (51,70  mV),  FII  (46,10),  dan  FIII  (48,60).  Hasil  Anova  ukuran  partikel menunjukkan adanya perbedaan bermakna pada semua formula,  uji indeks polidispersita s FI dan FIII berbeda bermakna, potensial zeta menunjukkan adanya perbedaan, tetapi tidak bermakna pada semua formula. Karakteristik fisika Formula III setelah Cycling Test menunjukkan ukuran partikel 455,0 nm, indeks polidispersitas 0,174, dan potensial zeta 20,1 mV.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdellatif, A. A. H., dan Abou-taleb, A. H. , 2015, Optimization of nano-Emulsion Formulation for Ceratin  Emollient  Effect, World  Journal  of  Pharmacy  and  Pharmaceutical  Sciences ,  4 (12): 1314-1328.
Agustin,  D.,  dan  Ismiyati.,  2015,  Pengaruh Konsentrasi  Pelarut  Pada  Proses  Ekstraksi  Antosianin Dari Bunga Kembang Sepatu, Skripsi , Universitas Muhammadiyah Jakarta.
Akhtar,  F.,  Rizvi,  M.M.A.,  Kar,  S.K.,  2012,  Oral  Delivery  of  Curcumin  Bound  to  Chitosan Naoparticles  Cured Plasmodium  yoellii Infected  Mice. Biotechnology  Advances ,  30  (1): 310- 320.
Attwood,  D.,  2002,  Pharmaceutics,  In  The  Science  of  Dosage  Form  Design  2nd  ed.,  Edited  by Aulton, M. E., Churchill Livingstone, Edinburgh, 70−100.
Avadi  M.,  2010,  Preparation  and  Characterization  Of  Insulin  Nanoparticles  Using  Chitosan  and Arabic Gum With Ionic Gelation Method, Journal Nanomed: Nanotech, Biol Med . 6 : 58– 63.
Dangi,  R.,  Shakya,  S.,  2013,  Preparation,  Optimization  and  Characterization  of  PLGA Nanoparticle, International Journal of Pharmaceutical and Life Sciences . 4(7): 2810-2818. Delmifiana, B. dan Astuti, 2013, Pengaruh Sonikasi Terhadap Struktur dan Morfologi Nanopartikel Magnetik yang Disintesis dengan Metode Kopresipitasi, Jurnal Fisika Unand , 2(3).
Dustgania, A., frahani, E. V., dan Imani, M., 2008, Preparation of Chitosan Nanopaerticle Loaded
Pengaruh Waktu Ultrasonikasi terhadap Karakteristik Fisika Nanopartikel Kitosan… (Malinda Prihantini)
by  Dexamethasone  Sodium  Phosphate, Iranian Journal  of  Pharmaceutical  Science ,  4 (2):111-114.
Florence,  A.  T.,  Attwood,  D.,  1998, Physicochemical  Principles  of  Pharmacy,  3rd  ed.; Pharmaceutical, Press, London,  255−264.
Gao, L., Zhang, D., dan Chen, M., 2008, Drug Nanocrystals for The Formulation of Poorly Soluble Drugs  and  Its  Application  as  a  Potential  Drug  Delivery  System,  J ournal  of  Nanoparticle Research , 10(5), 845-862.
Gupta, V. dan Karar, PK., 2011, Optimization of Process Variables for the Preparation of Chitosan- Alginate  Nanoparticle, International  Journal  of  Pharmacy  and  Pharmaceutical Sciences., 3(2): 78-80.
Haque,  F.  A.  K,  2015,  Karakteristik  Nanoemulsi  Ekstrak  Jahe  ( Zingiber  officinale var.  amarum), Skripsi , Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Hsieh,  F.  M.,  Huang,  C.,  Lin,  T.  F.,  Chen,  Y.  M.,  dan  Lin,  J.  C.,  2008,  Study  of  Sodium Tripolyphosphate-Crosslinked  Chitosan  Beads  Entrapped  with Pseudomonas  putida for Phenol Degradation, Process Biochemistry , 43(1): 83-92. Jusnita, N., 2014, Produksi Nanoemulsi Ekstrak Temulawak dengan Metode Homogenisasi, Tesis , Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Kitao,  S.,  dan  Sekine,  H.,  1994,  α-D-glukosyl  Transfer  to  Phenolic  Compounds  by  Sucrose Phosphorylase from Leuconostoc Mesenteroides and Production of α-arbutin, Bioscience, Biotechnology. Biochemistry, 58 (1): 38-42.
Ko  JA.,  Park  HJ.,  Hwang  SJ.,  Park  JB.,  Lee  JS.,  2002,  Preparation  and  Characterization  of Chitosan  Microparticles  Intended  for  Controlled  Drug  Delivery, International  Journal  of Pharmaceutics , 249 (1-2): 165-174.
Kunjachan, S., Jose, S., dan Lammers, T., 2014,. Understanding The Mechanism of Ionic Gelation For  Synthesis  of  Chitosan  Nanoparticles  Using  Qualitative  Techniques. Asian  Journal  of Pharmaceutics (AJP) : 4(2).
Kusuma,  H . S.,  2018,  Pembuatan  dan  Karaketisasi  Nanopartikel  Ekstrak  Etanol  Daun  Suji ( Pleomele  angustifolia )  pada  Berbagai  Variasi  Komposisi  Kitosan, Skripsi ,  Universitas Wahid Hasyim Semarang.
Lachman,  L.,  dan  Lieberman,  H.  A.,  1994, Teori  dan  Praktek  Farmasi  Industri,  Edisi  Kedua , diterjemahkan oleh Siti Suyatmi, UI Press, Jakarta, 1091-1098.
Li,  P.  H.,  dan  Chiang,  B.  H.,  2012,  Process  Optimization  and  Stability  of  D-Limonene-In-Water Nanoemulsions  Prepared  by  Ultrasonic  Emulsification  Using  Response  Surface Methodology. Ultrasonics sonochemistry , 19(1):192-197.
Mohanraj U. J dan Y Chen, 2006, Nanoparticles – A Review, Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 5(1):561-573.
Nanocomposix,  2012,  Zeta  Potential  Analysis  Of  Nanoparticles  Vol  1.1.,  NanoComposix,  San Diego
Nidhin M., Indumathy R., Sreeram KJ., Nair BU, 2008, Synthesis of Iron Oxide Nanoparticles of Narrow Size Distribution on Polysaccharide Templates, Journal Bull. Mater. Sci ,  31 (1): 93-96.
Ponnuraj,  R.,  Janakiraman,  K.,  Gopalakrishnan,  S.,  Senthilnathan,  K.,  and  Saravanan,  P.,  2015, Formulation  and  Characterization  of  Epigallocatechin  Gallate  Nanoparticles, Indo American Journal of harmaceutical Research , 5(1).
Prangdimurti, E., Muchtadi D., Aswatan M., Zakaria F., 2006, Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Suji ( Pleomele angustifolia , N.E Brown), Jurnal Teknoligi dan Industri Pangan , (17)2 . Rahmawanty  D.,  Effionora    A.,  Anton,  B.,  2014,  Formulasi  Gel  Menggunakan  Ikan  Haruan ( Channa striatus ) sebagai Penyembuh Luka, Jurnal Media Farmasi . 11(1): 29-40. Ribeiro, R. C. D. A., Barreto, S. M. A. G., Ostrosky, E. A., Rocha-Filho, P. A. D., Veríssimo, L. M.,  dan  Ferrari,  M.,  2015,  Production  and  Characterization  of  Cosmetic  Nanoemulsions Containing Opuntia  ficus -Indica  (L.)  Mill  Extract  as  Moisturizing  Agent, Molecules ,  20
(2): 2492-2509.
Ruan, B., dan Jacobi, A. M., 2012, Ultrasonication Effects on Thermal and Rheological Properties of Carbon Nanotube Suspensions. Nanoscale Research Letters , 7(1): 127.
Santini  B.,  Ivan  Z.,  Marzil  R.,  2015,  Cream  Formulation  Impact  on  Topical  Administration  of Engineered Colloidal Nanoparticles, Plos One Journal , 10.1371
Suciati, T., Prihantini, M., Fidrianny, I., 2019, Optimasi Nanoemulsi A/M/A Ekstrak Etanol Daun Binahong  dan  Konjugat  AG-Kitosan  Menggunakan  Desain  Box-Behnken, Jurnal  Ilmu Kefarmasian Indonesia , 17(2): 150-159.
Taurina, Wintari., Sari, Rafika., Hafinur, Uray C., Wahdaningsih, S., dan Isnindar, 2017, Optimasi Kecepatan  dan  Lama  Pengadukan  Terhadap  Ukuran Nanopartikel Kitosan-Ekstrak  Etanol 70% Kulit Jeruk Siam ( Citrus nobilis, L.var Microcarpa), Tradit. Med. Journal, 22(1): 16- 20.
Tiyaboonchai  W.,  2003,    Chitosan  Nanoparticles  :  A  Promising  System  for  Drug  Delivery, Naresuan University Journal , 11(3): 51-66. Ulum, S., 2018, Pembuatan dan Karaketisasi Nanopartikel Ekstrak Etanol Daun Sawo ( Manilkara zapota ,  L.)  pada  Berbagai  Variasi  Komposisi  Kitosan-Natrium  Tripolifosfat, Skripsi , Universitas Wahid Hasyim, Semarang.
Yuan  Y,  Gao  Y,  Zhao  J,  Mao  L.,  2008,  Characterization  and  Stability  Evaluation  of  Β-Carotene Nanoemulsions  Prepared  by  High  Pressure  Homogenization  under  Various  Emulsifying Conditions, Food Research International , 41: 61– 68.