Pengaruh Zat Pengatur Tumbuh 2,4-D (Dichlorophenoxyacetid- Acid) Dan Kinetin Terhadap Induksi Kalus Dari Eksplan Daun Kayu Manis ( Cinnamomun Burmanii)
Muhammad Teguh Satria * , Neliyati dan Jasminarni Jurusan Agroekoteknologi Fakultas Pertanian, Universitas Jambi Jl. Raya Jambi – Ma. Bulian KM. 15 Kampus Pinang Masak, Mendalo Darat, 36361 e-mail: satria.mtpr@gmail.com (* Penulis untuk korespondensi )

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mempelajari  pengaruh  interaksi  antara  konsentrasi  zat pengatur  tumbuh  2,4-D  dan  kinetin  terhadap  induksi  kalus  dari  eksplan  daun  kayu  manis  serta untuk  mendapatkan  kombinasi  konsentrasi  yang  tepat  untuk  menginduksi  kalus.  Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Bioteknologi Tanaman Fakultas Pertanian, Universitas Jambi, Desa Mendalo  Darat,  Kecamatan  Jambi  Luar  Kota,  Kabupaten  Muaro  Jambi,  Jambi.  Penelitian menggunakan  Rancangan  Acak  Kelompok  (RAK)  dengan  pola  faktorial,  faktor  pertama  taraf konsentrasi  zat  pengatur  tumbuh  2,4-D  1,2,3,4,5  ppm  dan  faktor  kedua  taraf  konsentrasi  zat pengatur  tumbuh  kinetin  0,1  ; 0,5 ;  1.0  ppm  sehingga  di dapatkan  15  perlakuan,  setiap  perlakuan diulang sebanyak 3 kali maka di dapatkan 45 satuan percobaan. Masing-masing satuan percobaan terdiri dari 3 botol dan terdapat satu eksplan dalam setiap botol. Eksplan di induksi selama 3 bulan. Parameter  yang  diamati  yaitu  waktu  muncul  kalus  diamati  2  hari  setelah  tanam  sampai  3  bulan, warna kalus, struktur kalus, persentase eksplan membentuk kalus dan berat kalus diamati di akhir penelitian. Hasil penelitian menunjukkan pada parameter waktu muncul kalus tercepat 15,33 HSK dengan  pemberian  zat  pengatur  tumbuh  2,4-D  1  ppm.  Semua  perlakuan  dapat  menginduksi  kalus 100%  dan  terdapat  berbagai  variasi  warna  yang  dihasilkan.  Serta  kalus  yang  dihasilkan  kalus berstruktur remah dan kompak.
Kata Kunci: kalus, kayu manis, 2,4-D, kinetin

## PENDAHULUAN
Kayu  manis  ( C.  burmanii )  merupakan  salah  satu  komoditi  perkebunan  yang  hasil produksinya  diperoleh  pada  bagian  kulit  batang.  Tanaman  kayu  manis  memiliki  banyak kandungan yang dapat digunakan sebagai rempah-rempah penyedap makanan dan sebagai obat  dalam  bidang  kesehatan  (Rismunandar  1995).  Kayu  manis  merupakan  salah  satu komoditi yang diekspor oleh Indonesia ke beberapa negara, seperti Arab, Turki, Korea, dan negara  lainnya.  Berdasarkan  data  statistik  perkebunan  Indonesia  Kementerian  Pertanian (2017)  ekspor  produk  kulit  manis  dari  tahun  ke  tahun  selalu  berfluktuasi.  Tahun  2013 terjadi kenaikan ekspor kayu manis yaitu sebanyak 52.507 ton dan tahun 2014 juga terjadi penaikan  sehingga  Indonesia  mengekspor  sebanyak  63.791  ton.  Pada  tahun  2015
berdasarkan  angka  sementara  yang  telah  di  update  pada  tahun  2017  terjadi  penurunan ekspor kayu manis sebanyak 55.027 ton.
Salah satu penyebab turunnya ekspor kayu manis adalah turunnya produktivitas kayu manis.  Pada  tahun  2014  dan  2015  terjadi  pertambahan  luas  area  kayu  manis,  kemudian diikuti  dengan  penaikan  produksi  kayu  manis.  Akan  tetapi  produktivitas  kayu  manis menurun.  Permasalahan  utama  yang  dihadapi  dalam  ekspor  kayu  manis  sampai  saat  ini adalah produktivitas yang menurun. Hal ini disebabkan oleh budidaya petani masih bersifat tradisional.  Permasalahan  ini  tidak  terlepas  dari  kendala  bahan  tanaman,  teknologi budidaya, serangan hama dan penyakit, pasca panen, agroekologi dan sosial ekonomi yang masih kurang menguntungkan petani kayu manis.
Perbanyakan  kayu  manis  bisa  dilakukan  dengan  cara  perbanyakan  generatif  dan vegetatif.  Perbanyakan  generatif  diperbanyak  melalui  biji  sedangkan  perbanyakaan vegetatif  dapat  diperbanyak  dengan  tunas,  stek  dan  kultur  jaringan  (Hadi  dan  Napitulu, 2011). Perbanyakan secara vegetatif lebih menguntungkan dibandingkan  secara  generatif, karena  perbanyakan  secara  generatif  akan  membutuhkan  waktu  yang  lebih  lama  dan tanaman  baru  bersifat  heterozigot  atau  tidak  sama  dengan  induknya  serta  membutuhkan bahan  tanam  yang  banyak.  Sedangkan  perbanyakaan  vegetatif  dengan  teknik  kultur jaringan  memiliki  keuntungan  yaitu,  tidak  merusak  pohon  induk,  membutuhkan  bahan tanam  yang sedikit dan dapat menghasilkan bibit dalam jumlah yang banyak dengan waktu yang singkat.
Solusi  yang  dapat  dilakukan  yaitu  dengan  teknik  kultur  jaringan.  Teknik  kultur jaringan  yang  dilakukan  untuk  memperbanyak  bibit  kayu  manis  adalah  dengan  induksi kalus.  Kalus  merupakan  suatu  kumpulan  sel  yang  terbentuk  dari  sel-sel  jaringan  yang membelah diri secara terus menerus dan belum mempunyai arah pertumbuhan baik ke arah tunas maupun akar. Tujuan induksi kalus adalah untuk produksi planlet baru secara besar- besaran,  dimana  sel-sel  kalus  diperbanyak  secara  terus-menerus  kemudian  dapat dipisahkan dan diinduksi untuk berdiferensiasi menjadi embrio somatik kemudian menjadi planlet (Sandra, 2013). Sehingga pemenuhan  bibit kayu manis dapat dicapai dalam waktu yang  singkat  dan  jumlah  yang  banyak . Penggunaan  kalus  sebagai  bentuk  perbanyakan tanaman  dapat  menguntungkan  karena  pembentukan  kalus  dapat  diinisiasi  dari  jaringan manapun pada tanaman.
Zat pengatur tumbuh sangat berperan penting dalam menginduksi kalus. Penggunaan zat pengatur tumbuh dengan konsentrassi  yang tepat dapat menentukan pembentukan dan pertumbuhan  kalus.  Faktor  yang  perlu  diperhatikan  dalam  penggunaan  zat  pengatur tumbuh  antara  lain  jenis  zat  pengatur  tumbuh  yang  akan  digunakan,  konsentrasi,  urutan penggunaan dan periode masa induksi dalam kultur tertentu (Gunawan, 1995).
Pengaruh  zat  pengatur  tumbuh  dalam  pembentukan  kalus  telah  banyak  dilaporkan, seperti;  menurut  Lizawati et  al .,  (2012)  pemberian  2,4-D  4  ppm  +  BAP  0,5  ppm menunjukkan  bahwa  waktu  muncul  kalus  pada  eksplan  daun  durian  paling  cepat  yaitu  8 hari  setelah  kultur  (HSK).  Menurut  Fadilah et  al .,  (2014),  Penambahan  zat  pengatur tumbuh  0,5  mg  L -1 IBA  dan  1,5  mg  L -1 kinetin  merupakan  kombinasi  konsentrasi  yang terbaik untuk kecepatan waktu induksi kalus daun tin yaitu 20 hari. Menurut Rahayu et al ., (2003),  penambahan  2,4-D  0,5  ppm  dan  kinetin  0,5  ppm  pada  media  MS  (Murrashig Skoog)  dapat  memacu  pembentukan  kalus Acalypha  indica .  Induksi  terbaik  embrio somatik kopi Arabika varietas Kartika-1 secara langsung dari kultur daun muda diperoleh pada media MS standard yang diberi 4 mg L -1 2,4-D dan dikombinasikan dengan 0,1 mg L -1 kinetin yang dapat menginduksi seluruh eksplan dalam waktu empat minggu setelah kultur menurut Riyadi dan Tirtoboma (2004).
Penelitian ini bertujuan untuk mempelajari pengaruh interaksi antara konsentrasi zat pengatur  tumbuh  2,4-D  dan  kinetin  terhadap  induksi  kalus  dari  eksplan  daun  kayu  manis dan untuk mendapatkan kombinasi yang tepat untuk menginduksi kalus.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Bioteknologi Tanaman Fakultas Pertanian, Universitas Jambi, Desa Mendalo Indah, Kecamatan Jambi Luar Kota, Kabupaten Muaro Jambi,  Jambi.  Pelaksanaan  penelitian  ini  berlangsung  selama  3  bulan  dari  bulan  Maret sampai  bulan  Juni  tahun  2017.  Bahan  yang  digunakan  adalah  eksplan  daun  kayu  manis yang  berasal  dari  bibit  daerah  Kabupaten  Kerinci  yang  berumur  6-7  bulan  dan  eksplan yang  diambil  daun  ke-3  dan  4  dari  pucuk.  Media  yang  digunakan  adalah  media Murashige dan Skoog (MS).
Sterilisasi  eksplan  dibilas  dengan  air  mengalir  hingga  bersih  kemudian  eksplan dicuci  dalam  air  yang  diberi  0,5  ml tween -80.  Setelah  itu  eksplan  direndam  dengan bakterisida dan fungsida masing-masing 5 g dalam 100 ml air. Kemudian disteril kembali dengan larutan NaClO yang sudah diencerkan 1% dalam 100 ml air. Selanjutnya eksplan
daun  steril  dibuang  bagian  tepi  daun  dan  pertulangan  daun.  Kemudian  daun  dipotong menjadi  3  bagian,  bagian  ujung,  tengah,  pangkal  daun  yang  berukuran  ±  1  x  0,5  cm dikulturkan dan ditumbuhkan pada ruang kultur pada suhu 25 ± 3 0 C.
Rancangan  penelitian  ini  menggunakan  Rancangan  Acak  Kelompok  dengan  pola Faktorial. Faktor pertama perlakuan konsentrasi 2,4-D 1, 2, 3, 4, 5 ppm dan faktor kedua konsenttrasi  kinetin  0,1  ;  0,5  ;  1,0  ppm. Setiap  perlakuan  terdiri  dari  9  botol  kultur  tiap botol  kultur  ditanam  1  eksplan.  Eksplan  dikulturkan    pada  media  induksi  selama  12 minggu.  Pengamatan  dilakukan  terhadap  waktu  muncul  kalus  yang  diamati  setiap  hari sedangkan untuk warna kalus, struktur kalus, persentase eksplan berkalus dan berat kalus diamati pada akhir penelitian.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Waktu munculnya kalus
Berdasarkan hasil analisis ragam terhadap waktu muncul kalus pada berbagai taraf konsentrasi  2,4-D  dan  kinetin  menunjukkan  tidak  terdapat  interaksi.  Pengaruh  berbagai konsentrasi dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1.  Pengaruh berbagai taraf konsentrasi 2,4-D dan kinetin terhadap waktu unculnya kalus (HSK).
2,4-D Kinetin Rata-rata 0,1 ppm 0,5 ppm 1,0 ppm 1 ppm 15,33 23,44 24,00 20,93 2 ppm 20,89 22,11 18,00 20,33 3 ppm 19,56 22,22 23,56 21,78 4 ppm 22,89 20,78 24,89 22,85 5 ppm 19,11 21,67 29,22 23,33 Rata-rata 19,56 22,04 23,93
Kalus  yang  terbentuk  berada  pada  eksplan  yang  mengalami  perlukaan  dan  kalus yang  muncul  lebih  cepat  pada  pertulangan  daun.  Menurut  Lizawati  et  al.,  (2012) menyatakan  bahwa  pembentukan  kalus  diawali  dengan  terjadinya  pembengkakan  pada permukaan  eksplan.  Pembengkakan  ini  disusul  dengan  terbentuknya  kalus  pada  pinggir daun  dan  permukaan  pertulangan  daun,  karena  pertulangan  daun  merupakan  daerah peyalur  makanan  ke  seluuruh  bagian  permukaan  daun  sehingga  sel  yang  terdapat  dekat pertulangan daun dapat membelah dan membentuk kalus.
Hasil  analisis  ragam  menunjukkan  bahwa  tidak  terdapat  pengaruh  faktor  tunggal. Berdasarkan Tabel 1. waktu muncul kalus paling cepat pada pemberian 1,0 ppm 2,4-D dan 0,5 ppm kinetin yaitu rata-rata waktu muncul kalus 15,33 HSK. Pemberian konsentrasi 1,0 ppm 2,4-D dan 0,5 ppm kinetin diduga merupakan konsetrasi yang seimbang untuk waktu muncul kalus  yang lebih cepat. Hal ini sejalan dengan  yang diungkapkan  oleh Skoog dan Miller (1957) dalam Ikeuchi et al., (2013) dengan penambahan auksin dan sitokinin dalam jumlah  yang seimbang dapat memacu pembentukan kalus.
Berdasarkan Tabel 1. waktu muncul kalus paling lama muncul pada taraf konsentrasi 5 ppm 2,4-D dan 1,0 ppm kinetin yaitu 29,22 HSK. Hal ini di duga karena auksin endogen yang  dimiliki  eksplan  cukup  tinggi  dan  konsentrasi  2,4-D  yang  diberikan  pada  eksplan termasuk tinggi sehingga menghambat pertumbuhan kalus pada eksplan. Pada kadar  yang tinggi,  auksin  lebih  bersifat    menghambat  dari  pada  merangsang  pertumbuhan (Hendaryono dan Wijayan, 1994).
Pemberian  auksin  sangat  efektif  untuk  menginduksi  pembentukan  kalus,  walaupun demikian peranan sitokinin sangat dibutuhkan untuk ploriferasi kalus sehingga kombinasi auksin  dan  sitokinin  sangat  baik  untuk  memacu  pertumbuhan  kalus  (Abidin,  1983 dalam Wahyuningtyas et  al., (2014)). Pemberian 2,4-D  lebih tinggi  dari pada pemberian kinetin dengan adanya perbedaan konsentrasi antara 2,4-D dan kinetin dapat memacu terbentuknya kalus.  Hal  ini  sependapat  dengan  Thomy  (2012)  menyatakan  bahwa  secara  umum penambahan  auksin  pada  konsentrasi  tinggi  memacu  pembentukan  kalus,  sebaliknya  jika perbandingan  auksin  dan  sitokinin  di  dalam  media  lebih  rendah  akan  memacu pertumbuhan eksplan beregenerasi membentuk organ.

## Warna Kalus
Hasil analisis deskriptif parameter warna kalus dengan berbagai taraf konsentrasi zat pengatur tumbuh 2,4-D dan kinetin pada eksplan daun kayu manis dapat dilihat pada Tabel 2.
Berdasarkan  tabel  Tabel  2.  warna  kalus  yang  terbentuk  dari  eksplan  daun  kayu  manis mengalami beberapa variasi warna kalus. Adapun warna kalus yang dihasilkan yaitu, putih, putih  kekuningan,  putih  kecoklatan,  putih  kehijauan,  putih  kehitanam,  coklat,  coklat keputihan, coklat kehitaman, hitam, dan hitam  keputihan. Warna kalus  dapat  dilihat pada Gambar  1.
Berdasarkan  hasil  pengamatan  deskriptif  terhadap  parameter  warna  kalus  dari eksplan  daun  kayu  manis  terhadap  pemberian  berbagai  taraf  konsentrasi  zat  pengatur
tumbuh 2,4-D dan kinetin menunjukkan berbagai variasi warna yang muncul. Warna kalus dominan  berwarna  putih  dan  putih  kekuningan,  warna  kalus  yang  berwarna  putih kekuningan dalam pertumbuhannya kalus tersebut memperlihatkan warna menjadi kuning muda. Menurut Fatmawati (2008) dalam Andaryani (2010), warna kalus mengindikasikan keberadaan  klorofil  dalam  jaringan,  semakin  hijau  warna  kalus  semakin  banyak  pula kandungan  klorofilnya.  Warna  terang  atau  putih  dapat  mengindikasikan  bahwa  kondisi kalus masih cukup baik. Berdasarkan warna kalus yang dominan pada penelitian ini dapat dikatakan kualitas kalus cukup baik.
Tabel 2. Pengaruh berbagai taraf konsentrasi 2,4-D dan kinetin terhadap warna kalus.
2,4-D Kinetin 0,1 ppm 0,5 ppm 1,0 ppm 1 ppm Dominan coklat kehitaman Dominan putih kekuningan Dominan putih Coklat keputihan Putih Putih kecoklatan Putih Putih kehijauan Putih kekuningan Putih kecoklatan Coklat keputihan Coklat kehitaman Hitam Coklat 2 ppm Dominan putih Dominan putih kekuningan Dominan putih Putih kekuningan Putih Coklat kehitaman Putih kecoklatan Putih kecoklatan Putih  kekuningan Putih kehijauan Hitam keputihan 3 ppm Dominan putih kekuningan Dominan putih kekuningan Dominan putih Putih Putih Putih kecoklatan Putih kecoklatan Putih kecoklatan Coklat Putih kekuningan 4 ppm Dominan putih Dominan putih Dominan putih Putih kekuningan Putih kekuningan Putih kekuningan Coklat keputihan Putih kecoklatan Coklat Coklat Coklat keputihan Putih kehitaman Coklat kehitaman Putih  kehijauan Hitam 5 ppm Dominan putih kekuningan Dominan putih Dominan putih Putih Coklat kehitaman Putih kecoklatan Putih kecoklatan Coklat keputihan Coklat Coklat Putih kecoklatan Putih kehijauan Hitam keputihan Putih kekuningan Hitam keputihan Hitam Hitam
Gambar  1.  Warna  kalus  yang  berumur  12  MSK.  a.  Putih,  b.  Putih  kekuningan,  c.  putih kecoklatan, d. Putih kehijauan, e. putih kehitaman, f. Coklat, g. Coklat keputihan, h. Coklat kehitaman, i. Hitam, j. hitam keputihan.
Pada  penelitian  ini  ada  juga  beberapa  kalus  yang  terbentuk  berwarna  kecoklatan hingga  hitam.  Warna  kalus  saat  masih  segar  atau  saat  eksplan  berumur  30-70  HSK dominan  berwarna  putih  dan  putih  kekuningan,  namun  pada  umur  71-  90  HSK  sebagian kalus  berubah  warna  menjadi  kecoklatan  hingga  hitam.  Warna  kecoklatan  dan  hitam diduga  disebabkan  adanya  metabolisme  senyawa  fenol  yang  bersifat  toksik,  adanya perubahan  warna  seperti  ini  disebut  dengan  browning.  Hal  ini  sejalan  dengan  yang diungkapkan  Hendraryono et  al .,  (1994)  yang  menyatakan  bahwa  browning  disebabkan oleh senyawa fenol yang dihasikan oleh eksplan yang mengalami oksidasi. Senyawa fenol akan  teroksidasi  membentuk  quinon  yang  memiliki  sifat  racun  terhadap  sel-sel  tanaman dan  dapat  menyebabkan  kematian  pada  sel-sel  tanaman.  Oksidasi  fenol  juga  dapat
j i h g f e d c b a
b
menyebabkan  pencoklatan  medium  dan  akan  mengakibatkan  kematian  eksplan, pencoklatan juga disebabkan oleh perlukaan saat pemotongan pada jaringan, jaringan yang terluka akan menyebabkan stres pada eksplan. Perubahan ini  dapat juga diduga terjadinya nekrosis,  menurut  Abousalim  dan  Mantell  (1994) dalam Zulkarnain  (2009),  menyatakan gejala awal dari fenomena ini adalah terjadinya nekrosis berwarna coklak pucat kemudian berkembang  pada  ujung  dan  tepi  daun  muda  sebelum  terjadi  nekrosis  yang  lebih  merata pada keseluruhan meristem yang pada akhirnya berwarna hitam atau mati.
Tabel 3. Pengaruh berbagai taraf konsentrasi 2,4-D dan kinetin terhadap struktur kalus.
2,4-D Kinetin 0,1 ppm                      0,5 ppm 1,0 ppm 1 ppm Remah, Kompak Remah, Kompak Remah, Kompak Dominan Remah Dominan Remah Dominan Kompak 2 ppm Remah, Kompak Remah, Kompak Remah, Kompak Dominan Remah Dominan Remah Dominan Remah 3 ppm Remah, Kompak Remah, Kompak Remah Dominan Kompak Dominan Remah Remah 4 ppm Remah, Kompak Remah, Kompak Remah Dominan Remah Dominan Remah Remah 5 ppm Remah, Kompak Remah, Kompak Remah Dominan Remah Dominan Remah Remah
Berdasarkan  Tabel  3.  Menunjukkan  bahwa  struktur  kalus  pada  penelitian  ini didominasi  berstruktur  remah  namun  juga  terdapat  kalus  yang  berstruktur  kompak. Struktur kalus dapat dilihat pada Gambar 2.

## Gambar  2.  Struktur  kalus  yang  berumur  12  MSK.  a.  Kalus  berstruktur  kompak,  b.  kalus berstruktur remah.
Berdasarkan  hasil  pengamatan  struktur  kalus  terhadap  pemberian  zat  pengatur tumbuh  2,4-D  dan  kinetin  dengan  beberapa  konsentrasi  pada  eksplan  daun  kayu  manis menghasilkan  kalus  yang  berstruktur  remah  dan  kompak.  Pengamatan  dilakukan  setelah kalus  berumur  12  MSK  dan  dilakukan  secara  visual.  Berbagai  perlakuan  pemberian  zat pengatur tumbuh 2,4-D dan kinetin

## Struktur Kalus
Berdasarkan  hasil  pengamatan  terhadap  parameter  struktur  kalus,  kalus  yang terbentuk dari induksi kalus ekplan daun kayu manis dengan pemberian perlakuan berbagai taraf  konsentrasi  zat  pengatur  tumbuh  2,4-D  dan  kinetin  pada  media  MS  secara  kultur jaringan  dapat  dilihat  pada  Tabel  3.  yang  struktur  remah  lebih  dominan  dibandingkan struktur  kompak.  berdasarkan  15  perlakuan,  13  perlakuan  membentuk  kalus  dominan berstruktur remah dan 2 perlakuan membentuk struktur dominan kompak.
Kalus  remah  merupakan  kalus  yang  tersusun  atas  sel-sel  yang  panjang  bebrbentuk tobular yang mana struktur sel-selnya renggang tidak teratur dan mudah rapuh (Manuhara, 2001).  Kalus  yang  kompak  mempunyai  struktur    sel  yang  rapat,  padat  dan  sulit  untuk dipisah-pisahkan  dan  mempunyai  vakuola  yang  lebih  besar  dalam  sel-selnya  serta mempunyai dinding polisakarida yang lebih besar (Herwinaldo, 2010). Terbentuknya kalus berstruktur  remah  dipicu  adanya  hormon  auksin  endogen  yang  diproduksi  secara  internal oleh eksplan yang timbul dalam membentuk kalus (Widyawati, 2010).
Kualitas  dari  suatu  kalus  juga  dapat  dilihat  dari  struktur  kalus,  pada  penelitian  ini kalus  yang  terbentuk  dominan  berstruktur  remah  dan  dapat  dikatakan  kalus  berkualitas baik. Hal ini sejalan dengan yang diungkapkan Thomy (2012) mengatakan bahwa struktur kalus yang remah atau mudah pecah dianggap baik. Hal ini dikarenakan kalus yang remah mudah  untuk  melakukan  pemisahan  menjadi  sel-sel  tunggal,  disamping  itu  akan meningkatkan    aerasi  oksigen  antar  sel.  Adanya  struktur  tersebut  dapat  mengupayakan untuk perbanyakan dalam hal jumlah kalus yaitu melalui suspense yang lebih mudah. Kalus terbentuk karena adanya keseimbangan antara pemberian auksin dan sitokinin.

## Persentase Eksplan Membentuk Kalus (%)
Hasil pengamatan terhadap persentase eksplan membentuk kalus pada penelitian ini menunjukkan bahwa 100% eksplan daun kayu manis yang dikulturkan dimedia MS dengan berbagai  konsentrasi  zat  pengatur  tumbuh  2,4-D  dan  kinetin.  Eksplan  dikatakan  berhasil apabila  eksplan  membentuk  kalus  dan  tidak  terjadi  kontaminasi.  Pemberian  berbagai konsentrasi  2,4-D  dan  kinetin  memberikan  respon  positif  dalam  menginduksi  kalus. Adanya  respon  tersebut  maka  dapat  dikatakan  bahwa  2,4-D  dan  kinetin  merupakan  zat pengatur  tumbuh  yang  baik  untuk  menginduksi  kalus  yang  berasal  eksplan  daun  kayu manis.
Salah  satu  penyebab  keberhasilan  dalam  teknik  kultur  jaringan  yaitu  kondisi fisiologis  eksplan.  Kondisi  fisiologis  ekplan  dari  suatu  tanaman  bervariasi  secara  alami.
Sejalan  dengan  pertumbuhan  tanaman  yang  melewati  fase-fase  yang  berbeda  dan perubahan kondisi lingkungan (Zulkarnain, 2009). Hal ini juga dijelaskan oleh Taji et al. , (1995) dalam Zulkarnain (2009) suatu respon pertumbuhan tertentu dalam kultur jaringan, adanya interaksi kondisi fisologis bahan yang dikulturkan dengan faktor-faktor lingkungan. Keadaan  lingkungan  kultur  seperti  cahaya,  suplai  air,  hara  ataupun  zat  pengatur  tumbuh dapat dimodifikasi sedemikian rupa untuk mengontrol kondisi fisologis eksplan.
Eksplan yang digunakan berasal dari jaringan muda dapat membentuk kalus. Hal ini sejalan dengan Chawla (2003) menyatakan bahwa eksplan yang berasal dari jaringan muda dan  sehat,  umumnya  lebih  responsif  dalam  kultur  jaringan  sehingga  proses  regenerasi  sel dapat berlangsung dengan cepat. Pemberian zat pengatur tumbuh 2,4-D dan kinetin dapat menginduksi pembentukan eksplan 100%.

## Berat Kalus
Hasil  analisis  ragam  terhadap  berat  kalus  dari  eksplan  daun  kayu  manis  pada berbagai taraf konsentrasi 2,4-D dan kinetin menunjukkan bahwa tidak terdapat interaksi. Akan  tetapi  berpengaruh  nyata  pada  faktor  tunggal  kinetin.  Pengaruh  berbagai  taraf konsentrasi 2,4-D dan kinetin terhadap berat kalus dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4. Pengaruh berbagai taraf konsentrasi 2,4-D dan kinetin terhadap berat kalus (g).
2,4-D Kinetin Rata-rata 0,1 ppm 0,5 ppm 1,0 ppm 1 ppm 0.39 0.34 0.32 0.35 2 ppm 0.38 0.36 0.43 0.39 3 ppm 0.37 0.36 0.33 0.35 4 ppm 0.38 0.35 0.33 0.35 5 ppm 0.41 0.33 0.32 0.35 Rata-rata 0.39 (b) 0.35 (a) 0.34 (a) 0.36
Berdasarkan  hasil  uji  Annova  zat  pengatur  tumbuh  kinetin  sangat  berpengaruh terhadap  parameter  berat  kalus.  Pemberian  0,5  ppm  dan  1,0  ppm  kinetin  tidak  berbeda nyata, akan tetapi berbeda nyata dengan pemberian konsentrasi 0,5 ppm kinetin.
Pemberian  zat  pengatur  tumbuh  auksin  dan  sitokinin  sangat  berpengaruh  terhadap berat  kalus  yang  terbentuk.  Pemberian  2,4-D  dalam  konsentrasi  tinggi  hanya  mampu memberikan  respon  pembengkakan,  karena  itu  diperlukan  penambahan  konsentrasi
sitokinin  yang  diharapkan  mampu  memicu  pembelahan  sel  lebih  cepat.  Adanya pembelahan  sel  maka  akan  terjadinya  pertumbuhan.  Pertumbuhan  adalah  peningkatan permanen  ukuran  organisme  atau  bagian  dari  tumbuhan  yang  merupakan  hasil  dari peningkatan  jumlah  dan  ukuran  sel.  Pertumbuhan  dicirikan  dengan  bertambahnya  berat yang irreversible. Berat yang dihasilkan sangat tergantung pada kecepatan sel-sel tersebut membelah diri, memperbanyak diri dan dilanjutkan dengan membesarnya kalus (Indah dan Dini, 2013).

## KESIMPULAN
1. Pemberian  zat  pengatur  tumbuh  2,4-D  dan  kinetin  tidak  terjadi  interaksi  pada parameter waktu muncul kalus dan berat kalus.
2. Pemberian  berbagai  taraf  konsentrasi  zat  pengatur  tumbuh  2,4-D  dan  kinetin  dapat membentuk  kalus  100%.  Pembentukan  kalus  tercepat 15,3 HSK pada pemberian taraf konsentrasi 1 ppm 2,4-D dan 0,1 ppm kinetin.
3. Pemberian  konsentrasi  2  ppm  2,4-D  dan  1,0  ppm  kinetin  menghasilkan  berat  kalus terberat pada eksplan asal daun kayu manis.

## DAFTAR PUSTAKA
Andaryani,  S.  2010.  Kajian  Penggunaan  Berbagai  Konsentrasi  BAP  dan  2,4-D  terhadap Induksi  Kalus  Jarak  Pagar  (Jatropha  curcas  L.)  secara  In  Vitro.  Skripsi.  Fakultas Pertanian. Universitas Sebelas Maret. Surakarta.
Chawla, H. S. 2003. Plant Biotecology Laboratory Manual for Plant Biotecnology.
Oxford & IBH Publishing. New Delhi.
Fadilah. R, E. Nurahmi dan Isnawati. 2014. Induksi dan pertumbuhan kalus daun tin ( Ficus carica )  dengan  penambatan  berbagai  kombinasi  konsentrasi  IBA  dan  kinetin  pada media MS secara in vitro. LenteraBio Vol. 3 No 3 : 141–146.
Gunawan.  L.  W.  1995.  Teknik  Kultur In  Vitro dalam  Hortikultura.  Penerbit  Penebar Swadaya. Jakarta.
Hadi. Q. A dan R. M. Napitulu. 2011. 10 Tanaman Investasi Pendulang Rupiah. Penerbit Penebar Swadaya. Jakarta.
Hendaryono,  P.,  S.  Daisy  dan  A.  Wijayani.  1994.  Teknik  Kultur  Jaringan.  Yogyakarta: Kanisius.
Herwinaldo, D. C. 2010. Pengaruh Variasi Konsentrasi Sukrosa terhadap Pertumbuhan dan Induksi Embriogenesis Somatik Kultur Kalus Tapak Dara ( Catharanthus roseus (L.) G. Don). Skripsi. Fakultas MIPA. Universitas Sebelas Maret. Surakarta.
Ikeuchi M, Sugimoto K, & Iwase A.2013. Review: Plant Callus: Mechanisms of induction and repression. The Plant Cell, Vol. 25: 3159–3173.
Indah N. P. dan E.  Dini. 2013.  Induksi daun nyamplung (Calophyllum  inophyllum  Linn.) pada  beberapa  kombinasi  konsentrasi  6-Benzylaminopurine  (BAP)  dan  2,4- Dichlorophenoxyacetic  Acid  (2,4-  D).  Jurnal  Sains  dan  Seni  Pomits.  2  (1)  :  2337- 3520.
Kementerian  Pertanian.  2017.  Statistik  Dinas  Perkebunan  2011-2015.  Jakarta.  Di  unduh dari www.pertanian.go.id/ (di akses 23 agustus 2017).
Lizawati,  Neliyati  dan  D.  Retna.  2012.  Induksi  kalus  eksplan  daun  durian  ( Durio zibethinus Murr.  Cv.  Selat  Jambi)  pada  beberapa  kombinasi  2,4-D  dan  BAP. Diunduh darihttps://online-
journal.unja.ac.id/index.php/bioplante/article/view/1739 (diakses 25 oktober 2016)
Manuhura,  Y.  S.  W.  2001.  Regenerasi  tanaman  sawi  ( Brassica  juncea L.  Var  Morakot) melalui teknik kultur jaringan, jurnal MIPA Universitas Airlanggga 6(2):127-130)
Rahayu.  B.  Solichatun.  Anggarwulan.  E.  2003.  Pengaruh  asam  2,4-Diklorofenoksiasetat  (2,4-D) terhadap  pembentukan  dan  pertumbuhan  kalus  serta  kandungan  flavonoid  kultur  kalus Acalypha indica L. Biofarmasi . Surakarta.
Rismunandar. 1995, Kayu Manis, Penerbit penebar swadaya. Jakarta.
Riyadi  I  dan  Tirtaboma.  2004.  Pengaruh  2,4-D  terhadap  induksi  embriosomatik  kopi  arabika. Buletin Plasma Nutfah Vol 10 No. 2.
Sandra.  E.  2013.  Cara  Mudah  Memahami  dan  Menguasai  Kultur  Jaringan  Skala  Rumah  Tangga.
Penerbit IPB Press. Bogor
Thomy,  Z.  2012.  Effect  of  plant  growth  regulator  2,4-D  and  BAP  on  callus  growth  of  plants producing gaharu (Aquilaria malaccensis Lamk.). Prasiding Seminar Hasil Nasional Biologi. Medan, 11 Mei 2012.
Wahyuningtiyas.  L,  R.  S.  Resmisari  dan  Nashichuddin.  2014.  Induksi  kalus  akasia  ( Acacia mangium )  dengan  penambahan  kombinasi  2,4-D  dan  BAP  pada  media  MS.  Jurnal  Jurusan Biologi Fakultas Sains dan Teknologi. Malang.
Widyawati, Geningsih. 2010. Pengaruh Variasi NAA dan BAP terhadap induksi kalus jarak pagar. Tesis. Universitas Sebelas Maret. Surakarta.
Zulkarnain. 2009. Kultur Jaringan Tanaman : Solusi Perbanyakan Tanaman Budidaya. Bumi Aksara, Jakarta.