Sterilisasi Eksplan Pisang Barangan ( Musa paradiciaca L.) melalui Teknik In Vitro dengan Perlakuan Lama Perendaman dan konsentrasi Klorok
Sterilization of Pisang Barangan ( Musa paradiciaca L.) through In Vitro Technique with Soaking Time Treatment and Cloroc Concentration
Lukman 1) dan Maryami 2)
1) Program Studi Agroekoteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Malikussaleh Kampus Cot Teungku Nie, Reuleut, Muara Batu Aceh Utara 24355, Indonesia
2) Balai Penyuluhan Pertanian Aron, Badan Ketahanan Pangan dan Penyuluhan Kabupaten Aceh Utara, Provinsi Aceh Email:
Diterima 5 Agustus 2014; Dipublikasi 1 September 2014

## Abstrak
Tujuan penelitian adalah untuk mengetahui lama perendaman dan konsentrasi klorok terhadap sterilisasi eksplan pisang barangan melalui teknik in vitro. Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Kultur Jaringan Tanaman Fakultas Pertanian Universitas Malikussaleh Lhokseumawe. Rancangan yang digunakan adalah Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  faktorial.    Faktor  yang  diteliti  yaitu    konserntasi  klorok  dan  lama perendaman  eksplan    dalam  klorok  yaitu:    P1  =  5  menit  perendaman  dalam  klorok,  P2  =  10  menit perendaman  dalam  klorok,  P3  =  15  menit  perendaman  dalam  klorok,  dan  P4  =  20  menit  perendaman dalam klorok. Faktor kedua yaitu Konsentrasi klorok (K) yang terdiri dari K1 = 10 % klorok, K2 =  20 % klorok dan  K3 =   30 % klorok. Terdapat 12 perlakuan yang diulang sebanyak 3 kali sehingga terdapat 36 unit percobaan, dan setiap unit percobaan ditanam 3 eksplan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa lama perendaman berkorelasi positif dengan konsentrasi klorok, semakin pekat larutan klorok yang digunakan dalam batas tertentu  maka  semakin  singkat  waktu  untuk  melakukan sterilisasi. Perendaman  klorok pada konsentrasi  10  %  waktu  yang  diperlukan  adalah  20  menit,  konsentrasi  klorok  20  %  waktu  yang diperlukan 10 menit dan konsentrasi klorok 30 % waktu yang diperlukan perendaman 5 menit.
Kata kunci: pisang ( Musa paradiciaca L.), sterilisasi, in vitro, perendaman

## Abstract
The  purpose  of  the  study  was  to  determine  the  immersion  time  and  cloroc  concentration  of  the sterilization explants pisang barangan ( Musa paradiciaca L.), through in vitro techniques. This research was  conducted  at  the  Plant  Tissue  Culture  Laboratory  of  the  Faculty  of  Agriculture,  Malikussaleh University,  Lhokseumawe,  Aceh  Utara,  Indonesia.  Research  arranged  on  a  factorial  completely randomized  design.  Factors  studied  were  cloroc  concentration  and  long  soaking  explants:  5  minutes immersion (P1), 10 minutes immersion in cloroc (P2), 15 minutes immersion in cloroc (P3), 20 minutes immersion in cloroc (P4), 20 minutes immersion in cloroc. The second factor is the cloroc consentration K1= 10% cloroc, K2 = 20% cloroc and K3 = 30% cloroc. There are 12 treatment was repeated 3 times so that there are 36 experimental units, and each unit of experiment 3 explants  grown. The results showed that  the  soaking  time  was  positively  correlated  with  the  cloroc  concentration,  the  more  concentrated cloroc  used  within  a  certain  limit  then  the  shorter  the  time  for  sterilization.  Soaking  in  cloroc  a concentration of 10% the time required is 20 minutes, the concentration cloroc 20% the time required 10 minutes and 30% concentration cloroc soaking time required is 5 minutes.
Keywords: pisang ( Musa paradiciaca L.), sterilization, in vitro, and soaking

## Pendahuluan
Pisang  merupakan  komoditas  hortikultura yang  produksinya  menduduki  tingkat  kedua setelah jeruk. Pisang banyak dikonsumsi masya- rakat, karena di dalam buah banyak mengandung karbohidrat,  vitamin  A,  vitamin  B6,  vitamin  C dan  mineral  seperti  potasium  dan  fosfor. Indonesia  merupakan  salah  satu  Negara    yang memiliki  pisang  yang  beragam  dan  lebih  dari 100 kultivar tersebar di berbagai wilayah. Pisang yang  dibudidayakan  sekarang  adalah  perkem- bangan  dari  2  jenis  liarnya  yaitu Musa acuminata (AA) dan M. balbisiana (BB). Dalam pencaturan  pasar  dunia,  kelompok  pisang terkenal  ialah  yang  mempunyai  susunan  gen tripel  (AAB  dan  AAA),  bersifat  triploid,  dan tidak berbiji (partenokarpi) (Sunarjono 2002).
Masalah  yang  sering  terjadi  dalam budidaya  tanaman  pisang  antara  lain:  adanya serangan  berbagai  macam  penyakit  seperti  layu fusarium,  virus  dan  layu  bakteri,  sulitnya dilakukan  persilangan  secara  konvensional karena sterilitas bunganya yang tinggi dan sukar- nya  memperoleh  bibit  dengan  anakan  atau bonggol  dalam  jumlah  yang  banyak  dan  dalam waktu yang relatif singkat, masalah ini kemudian diatasi  dengan  mengupayakan  genotipe  baru yang berkualitas baik dengan pemuliaan tanaman melalui  teknik  kultur  in  vitro  (kultur  jaringan) dan rekayasa genetika.
Bibit  merupakan  faktor  utama  yang menentukan  keberhasilan  agribisnis  pisang. Kendala  pengadaan  bibit  unggul  secara  konven- sional  adalah  sulit  mendapatkan  bibit  yang berkualitas  dalam  jumlah  besar  dalam  waktu singkat,  salah  satu  keunggulan  perbanyakan tanaman  melalui  teknik  kultur  jaringan  adalah sangat memungkinkan mendapatkan bahan tana- man  dalam  jumlah  besar  dalam  waktu  singkat (Priyono et al., 2000).
Kultur  jaringan  merupakan  pengisolasian bagian  tanaman  seperti  daun,  mata  tunas  serta menumbuhkan  bagian-bagian  tersebut  dalam media  buatan  secara  aseptik  yang  kaya  nutrisi dan  zat  pengatur  tumbuh  dalam  wadah  tertutup yang  tembus  cahaya  sehingga  bagian  tanaman dapat  memperbanyak  diri  dan  bergenerasi menjadi  tanaman  lengkap).  Bibit  pisang  yang bebas  hama  dan  penyakit  perlu  dipersiapkan, salah  satu  caranya  adalah  perbanyakan  dengan teknik  in  vitro.    Keuntungan  perbanyakan  bibit pisang  melalui  teknik  in  vitro  antara  lain: menghasilkan  bibit  dalam  jumlah  banyak,
bermutu  seragam  dan  dalam  waktu  yang  relatif singkat,  dapat  dilakukan  sepanjang  tahun  tanpa tergantung  musim,  bibit  bebas  hama  dan penyakit, kesehatan bibit lebih terjamin, tanaman asal  kultur  jaringan  akan  berbuah  lebih  awal, berkualitas  dan  seragam/serentak,  pengiriman bibit hasil kultur lebih mudah karena volumenya relatif  kecil  sehingga  menjadi  lebih  ekonomis (Anonymous, 2004).
Keberhasilan perbanyakan tanaman pisang melalui  tehnik  in  vitro  sangat  tergantung  pada eksplan yang steril dan alat–alat yang steril serta lingkungan  yang  sesuai  untuk  pertumbuhan eksplan.  Sterilisasi  eksplan  dengan  memakai sodium  hipoklorit  dengan  nama  dagangnya adalah  klorok.  Konsentrasi  klorok  untuk  steri- lisasi eksplan tergantung dari kelunakan eksplan (Anonymous, 2006).
Hasil  penelitian  sterilisasi  dengan  meng- gunakan  klorok  yang  telah  dilakukan  menunju- kan  persentase  keberhasilan  yang  lebih  tinggi, karena  peranan  klorok  untuk  sterilisasi  eksplan sangat  efektif.  Keefektifitasan  peranan  klorok dalam  sterilisasi  suatu  eksplan  perlu  dipelajari lebih  lanjut  sehingga  kita  akan  mendapatkan suatu formulasi dalam takaran tertentu dan dalam batasan waktu tertentu yang cukup efektif untuk kegiatan  sterilisasi.  Penelitian  yang  dilakukan pada tahap ini adalah mendapatkan satu konsen- trasi tertentu  dan lama  waktu  perendalam  dalam melakukan sterilisasi eksplan pisang barangan.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui konsentrasi  klorok  dan  lama  perendaman terhadap  sterilitas  eksplan  pisang  barangan melalui teknik in vitro.

## Metode Penelitian
Penelitian  dilaksanakan  di  Laboratorium Kultur  Jaringan  Tanaman  Fakultas  Pertanian Universitas  Malikussaleh  Lhokseumawe.  Bahan tanaman yang digunakan sebagai eksplan adalah bonggol  pisang  barangan  yang  memiliki  sisir sembilan,  yang  diambil  dari  Desa  Meunasah Pante  Kecamatan  Syamtalira  Aron  Kabupaten Aceh  Utara,  bahan  lain  yang  digunakan  adalah klorok,  Benlate,  BAP  dan  NAA.  Media  yang digunakan  adalah  media  Murashige  dan  Skoog (MS  Padat)  yang  telah  dimodifikasi.  Alat  yang digunakan  adalah  Autoclave,  timbangan  analitik digital,  Laminar  Air  Flow  Cabinet,  gelas  ukur, Erlenmayer, botol kultur, pH meter, kompor, rak kultur, AC, Hotplate, pipet, oven magnetik stirer, kamera digital.
Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan Acak Lengkap (RAL) pola faktorial. Faktor yang diteliti  yaitu  lama  perendaman  eksplan  (P)  dan konsentrasi  klorok  (K).  Lamanya  perendaman (P)  terdiri  dari  empat  taraf  yaitu:  P1  (5  menit perendaman);  P2 (10  menit  perendaman);  P3(15 menit  perendaman);  P4  (20  menit  perendaman). Konsentrasi klorok (K) terdiri dari 3 taraf  yaitu: K1  (10%);  K2  (20%);  K3  (30%).  Kombinasi perlakuan  yang  didapatkan  sebanyak  12  dan masing-masing  kombinasi  dibuat  dalam  3 ulangan,  sehingga  didapat  36  unit  percobaan. Pengolahan data dilakukan dengan menggunakan uji-F,  Apabila  terdapat  perbedaan  dilakukan  uji lanjut Duncan pada taraf 5%.
Pembuatan media dilakukan dengan menggunakan  metode  Gunawan  1992.  Inisiasi merupakan  pengambilan  eksplan  dari  bagian tanaman  yang  akan  dikulturkan.  Eksplan  yang diambil  adalah  bonggol  anakan  pisang  barangan yang  dipisahkan  dari  induknya,  kemudian dibersihkan  dari  kotoran  dan  dengan  meng- gunakan  deterjen  dicuci  dengan  air  mengalir sampai bersih.
Eksplan  yang  sudah  bersih  dikecilkan sehingga tersisa ± 2 cm x 2 cm dari pangkalnya, selanjutnya  direndam  dengan  klorok.  Lama perendaman  dan  konsentrasi  klorok  dilakukan sesuai  perlakuan,  setiap  selesai  perendaman eksplan dibilas dengan air steril/aquades sebanyak  5  kali,  selanjutnya  ekpslan  dikecilkan kembali hingga tersisa ± 1,5 x 1,5 cm agar dapat mengurangi tingkat kontaminasi.
Eksplan  yang  telah  siap  sterilisasi  dikul- turkan dalam media MS yang ditambahkan BAP dan  NAA.  Banyaknya  eksplan  yang  ditanam untuk  setiap  media  adalah  sebanyak  3  tanaman. Eksplan  yang  sudah  ditanam  ditempatkan  di ruang inkubasi pada suhu 21-25 oC, kelembaban (RH)  70%  intensitas  cahaya  1000  Luv  dengan lamanya penyinaran 16 jam /hari.
Pengamatan  meliputi  persentase  eksplan yang  hidup/tumbuh,  persentase  eksplan  yang tumbuh dihitung dengan persamaan berikut:
Jumlah eksplan yang tumbuh x 100% Jumlah eksplan yang ditanam
Persentase eksplan yang bertunas dihitung dengan persamaan berikut:
Jumlah eksplan yang bertunas
x 100%
Jumlah eksplan yang ditanam
Pengamatan  dilakukan  pada  minggu  pertama sampai minggu ke delapan setelah tanam.

## Hasil dan Pembahasan

## Persentase Eksplan yang Tumbuh
Hasil  pengamatan  rata-rata  persentase eksplan  yang  tumbuh  umur  5  minggu  setelah tanam akibat perlakuan lama perendaman  dengan klorox  terhadap  pertumbuhan  eksplan  pisang barangan disajikan pada Gambar 1, 2, 3 dan 4.
Gambar  1  memperlihatkan  bahwa  perla- kuan  A  pada  minggu  kelima  sampai  minggu keenam  eksplan  dapat  tumbuh  100  %  dan  pada minggu  ketujuh  dan  kedelapan  eksplan  yang tumbuh  mencapai  66,67  %.    Hal  ini  merupakan hasil  yang  terbaik  jika  dibandingkan  dengan perlakuan  lainnya.  Gambar  2  terlihat  bahwa perlakuan  E  mencapai  100  %  merupakan  hasil yang  paling  bagus  dibandingkan  dengan  perla- kuan lainnya.
Gambar  3  juga  menjelaskan  perlakuan yang  paling  baik  adalah  perlakuan  G  mencapai 66,67  %  dibandingkan  dengan  perbandingan perlakuan  H  dan  perlakuan  I.    Gambar  4  juga menjelaskan  hampir  seluruh  eksplan  dapat tumbuh dengan baik, kecuali perlakuan J umur 8 minggu setelah tanam. Keempat Gambar tersebut dapat  disimpulkan  bahwa  perlakuan  E  meru- pakan  perlakuan  yang  terbaik  dibandingkan dengan perlakuan lainnya.
0 20 40 60 80 100 Ek sp lan yan g tu mb u h (P e r se n ) 5 6 7 8 Waktu Pengamatan (Minggu)
5 menit perendaman dalam 10 % klorok (A) 5 menit perendaman dalam 20 % klorok (B) 5 menit perendaman dalam 30 % klorok ( C )
Gambar  1.    Persentase  eksplan  yang  tumbuh  pada  5 menit  perendaman  dengan  berbagai  konsentrasi klorox (10%, 20%, dan 30%)
0 20 40 60 80 100 Ek sp lan yan g tu mb u h (P e r se n ) 5 6 7 8 Waktu Pengamatan (Minggu)
10 menit perendaman dalam 10 % klorok (D) 10 menit perendaman dalam 20 % klorok (E) 10 menit perendaman dalam 30 % klorok (F)
Gambar 2.  Persentase eksplan  yang tumbuh pada 10 menit  perendaman  dengan  berbagai  konsentrasi klorox (10%, 20%, dan 30%)
0 20 40 60 80 100 Ek sp la n y a n g tu m b u h (P er se n ) 5 6 7 8 Waktu Pengamatan (Minggu)
15 menit perendaman dalam 10 % klorok (G) 15 menit perendaman dalam 20 % klorok (H) 15 menit perendaman dalam 30 % klorok (I)
Gambar  3.  Persentase  eksplan  yang  tumbuh  pada  15 menit  perendaman  dengan  berbagai  konsentrasi klorox (10%, 20%, dan 30%)
0 20 40 60 80 100 Ek sp lan s yan g tu mb u h (P er se n ) 5 6 7 8
Waktu Pengamatan (Minggu) 20 menit perendaman dalam 10 % klorok (J)
20 menit perendaman dalam 20 % klorok (K) 20 menit perendaman dalam 30 % klorok (L)
Gambar  4.  Persentase  eksplan  yang  tumbuh  pada  20 menit  perendaman  dengan  berbagai  konsentrasi klorox (10 %, 20 %,  dan 30 %)
Data  tersebut  terlihat  bahwa  penggunaan bahan sterilisasi sedikit tidak dapat mensterilkan eksplan  dengan  baik.  Penggunaan  bahan  steri- lisasi  pada  konsentrasi  yang  tinggi  dapat mensterilkan eksplan dari mikroorganisme seperti bakteri, virus, dan cendawan, akan tetapi penggunaan  bahan  sterilisasi  pada  konsentrasi
tinggi  dapat  menghambat  pertumbuhan  eksplan (Gambar 1).
Eksplan  dapat  tumbuh  dengan  baik  jika jaringan  tidak  rusak  dan  tidak  terganggu  oleh mokroorganisme.  Penggunaan  klorok  pada konsentrasi  20  g/l  dan  lama  perendaman  10 menit  merupakan  hasil  yang  terbaik  untuk sterilisasi eksplan pisang barangan.
Respon perubahan eksplan bonggol pisang setelah dikulturkan dapat dikatakan cukup cepat. Pertumbuhan  awal  dari  setiap  eksplan  yang ditanam, terjaid perubahan dari putih kekuningan menjadi  coklat  pada  bagian  bekas  pemotongan dan  menjadi  kehijauan  pada  bagian  yang  tidak mengalami  pelukaan.  Pengamatan  umur  1 minggu  setelah  kultur,  eksplan  membengkak, pada  ujungnya  tumbuh  tunas,  dan  setelah beberapa  minggu  kemudian  tunas  membentuk organ yang sempurna.
Perlakuan  E  pertumbuhan  eksplan  terus berlangsung,  diduga  bahwa  kosentarsi  klorok yang  direndam  selama  10  menit  dapat  memati- kan  bakteri  dan  virus  yang  ada  dalam  eksplan pisang.  Sterilisasi  adalah  perlakuan  yang dilakukan  untuk  membuat  steril  dan  bebas  ter- kontaminasi  dari  bakteri  dan  virus  serta  patogen baik  yang  ada  di  luar  eksplan  maupun  di  dalam eksplan,  sehingga  perbanyakan  tanaman  secara teknik in vitro berhasil. Tingkat kepekatan bahan sterilan dan lama waktu perendaman untuk setiap eksplan berbeda-beda, tergantung dari kelunakan eksplan,  sehingga  konsentrasi  bahan  sterilan yang  digunakan  untuk  tanaman  angrek  belum tentu cocok digunakan untuk sterilisasi  tanaman pisang  (Anonymous,  2006).  Kontaminasi  dapat disebabkan  oleh  bakteri,  jamur,  dan  kecoklatan karena  pengaruh  senyawa  fenolik  (Hendaryono dan Wijayani, 1994).
Selain  faktor  sterilisasi  pemilihan  bagian tanaman  sebagai  calon  eksplan  juga  dapat mempengaruhi  pertumbuhan  planlet.  Hendar- yono  dan  Wijayani  (1994)  menjelaskan  bahwa bagian  tanaman  yang  mempunyai  sel  aktif membelah,  yaitu  sel  meristem  yang  banyak mengandung  hormon  akan  dapat  berdeferensiasi dan  berkembang  serta  dapat  melanjutkan pertumbuhan dengan cepat.

## Persentase Eksplan yang Bertunas
Eksplan  yang  bertunas  tidak  didapatkan dalam  pengamatan  ini  meskipun  sebahagian eksplan  sudah  ada  yang  tumbuh  dan  telah membentuk  organ  yang  sempurna.  Diduga
bahwa  pada  kondisi  sepeti  ini  eksplan  masih membutuhkan  waktu  yang  lebih  lama  untuk pertumbuhan organ lain seperti batang dan daun. Hal  lain  juga  dapat  dijelaskan  bahwa  planlet tersebut  pelu  dilakukan  sub  kultur  pada  media baru yang diberi hormon multiplikasi petunasan, sehingga  planlet  akan  dapat  membentuk  tunas dalam jumlah yang banyak.
Media  yang  digunakan  dalam  percobaan ini  juga  telah  diberikan  dua  jenis  hormon  yang berbeda  yaitu  IAA  (hormon  dari  kelompok auksin)  dan  BAP  yaitu  kelompok  hormon  dari sitokinin. Kita ketahui bahwa salah satu hormon yang sering digunakan untuk pertumbuhan tunas adalah  BAP,  namun  dalam  pecobaan  ini  kita belum  mendapatkan  hasil  yaitu  terbentuknya tunas seperti yang diharapkan, juga dapat diduga bahwa  penggunaan  BAP  dan  IAA  pada konsentrasi  2  ppm  tidak  sesuai  untuk  multi- plikasi  tunas  pada  tanaman  pisang  barangan. Teori  tentang  keseimbangan  hormon  auksi  dan sitokinen  dalam  kultur  jaringan  menjelaskan bawah morfogenesis dari eksplan selalu tergantung  pada  interaksi  antara  auksin  dan sitokinin.  Wattimena  et  al.  1992  menjelaskan bahwa  prinsip keseimbangan auksin dan sitokinin  tetap  diperlukan  dalam  suatu  kultur jaringan.  Lebih  lanjut  menjelaskan  keseim- bangan  antara  auksin  dan  sitokinin  yaitu  dalam proses  pembentukan  tunas  adventif  selain membutuhkan  sitokinin  dalam  konsentrasi  yang tinggi  juga  diperlukan  auksin  dalam  konsentrasi yang rendah.
Wattimena  et  al.  1992  malaporkan  bahwa penggunaan  2ip  dapat  memicu  pertumbuhan tunas asparagus  plomulus dari pada penggunaan kinetin  dan  BAP,  akan  tetapi  dalam  kultur jaringan  untuk  proliferasi  tunas  lebih  baik menggunaan  kinetin  dan  BAP  terlebih  dahulu karena  BAP  lebih  tahan  terhadap  degradasi  dan harganya  terjangkau,  akan  tetapi  jika  peng- gunaan BAP planlet juga belum merespon maka perlu diuji dengan pemberian 2ip dan zeatin.

## Kesimpulan
Lama  perendaman  berkorelasi  positif dengan  konsentrasi  klorok,  semakin  pekat larutan  klorok  yang  digunakan  dalam  batas tertentu  maka  semakin  singkat  waktu  yang diperlukan  untuk  melakukan  sterilisasi  ekspaln pisang  barangan.  Perendaman  klorok  pada konsentrasi  10%,  waktu  yang  diperlukan  adalah 20  menit,  konsentrasi  klorok  20  %  waktu  yang diperlukan 10 menit dan konsentrasi klorok 30 % waktu yang diperlukan perendaman 5 menit.
Lama  perendaman    selama  10  menit  dan kosentrasi klorok 20 % (perlakuan E) merupakan kombinasi  perlakuan  terbaik  dalam  meningkat- kan  persentase  eksplan  yang  tidak  terkon- taminasi dan persentase eksplan yang tumbuh.

## Daftar Pustaka
Anonymous.    2004.  Budi  Daya  Pisang  Asal Kultur  Jaringan.  Dinas  Pertanian  dan Perkebunan.  Pemerintah  Propinsi  DKI, Jakarta.
Anonymous.  2006  Perbanyakan  BIbit  Pisang Secara  Kultur  Jaringan. Http://www. dki.go.id
Gunawan  L.  W.  1992  Tekhnik  Kultur  Jaringan Departemen  Pendidikan  dan  Kebudayaan. Direktorat  Jendral  Pendidikan  Tinggi, Pusat  Antara  Universitas  Bioteknologi.
IPB.
Hendaryono, D.P.S. dan Wijayani  1994. Tekhnik
Kultur Jaringan dan Petunjuk
Perbanyakan  Tanaman  Secara  Vegetatif  – Modrn. Kanisius. Yogyakarta.
Priyono  D.  Suhandi  dan  Matsaleh.  2000. Pengaruh  Zat  Pengatur  Tumbuh  I  AA  dan z-    IP  Pada  Kultur    Jaringan  Bakal  Buah Pisang. Jurnal Hortikultura.
Sunarjono.  2002.  Budi  Daya  Pisang  dan  Bibit Ku;tur  Jaringan,  Penebar  Swadaya  . Jakarta.
Wattimena  GA,  Gunawan  LW,  Mattjik  NA,
Syamsudin  E,  Wiendi  NM,  dan  Ernawati A.  1992.  Bioteknologi  Tanaman,  Labora- torium  Kultur  Jaringan  Tanaman.  Pusat Antar  Universitas  Bioteknologi.  Institut
Petanian Bogor, Bogor.