Identifikasi Jamur Kontaminan pada Berbagai Eksplan Kultur Jaringan Anggrek Alam ( Bromheadia finlaysoniana (Lind.) Miq
(Identification of Contaminant Fungi in Tissue Culture of Nature Orchid (Bromheadia finlaysoniana (Lind.) Miq)
Desta Andriani 1 , Pebra Heriansyah 2♥
Universitas Islam Kuantan Singingi; Jl. Gatot Subroto KM 7 Teluk Kuantan, Riau
♥ Email korespondensi: hpebra92@gmail.com
Abstract. Generative propagation of orchid plants has problems because orchid seeds do not have endosperm need  to be  multiplied using  tissue  culture.  Contamination  is  a  limiting  factor  in  the  multiplication  of plants  in tissue culture. This study aims to describe the types of contaminants found in Bromheadia finlaysoniana callus. This research was carried out in two stages. The first stage is carried out culture of various explants of Bromheadia finlaysoniana  using  murashige  and  Skoog  media  with  enrichment  of  hormone  Benzylaminopurine  1  mg/l; (Naphthalene  acetic  acid)  0.5  mg/l;  100  mg  myoinositol;  pyridoxine-HCl  0.5  mg/l;  thiamine-HCl  0.1  mg/l; nicotinic-acid 0.5 mg/l; glycine 2 mg/l. The second stage is observed  and the percentage of contaminant fungi. The  second  stage  calculates  the  number  and  percentage  of  contaminant  fungi  and  performs  macroscopic  and microscopic observations. The macroscopic characters of the contaminant fungi observed included colony color, ...the  direction  of  colony  growth,  and  the  surface  shape  of  hyphae  colonies,  microscopic  characters  observed included  hyphae  shape  (insulated/uninsulated)  and  spore  production.  Determine  the  type  of  contaminant compared  to  the  morphology  from  the  references.  The  results  obtained  were  the  highest  percentage  of contamination in flower stalk explants, namely 81%, and the highest number of contaminants occurred in leaf explants as many as 28 colonies. contaminant fungus that grows is predominantly white and gray with a rough surface. The contaminant fungus that grows is dominated by fungi with white and gray colors with a rough surface shape. from microscopic characters, most of them have insulated hyphae and do not produce spores. The results of the observation of microscopic macroscopic characters of contaminant fungi in tissue culture of several orchid explants were found from the types of Rhizoctonia sp and Mucor sp.
Keywords: Bromheadia finlaysoniana (Lind.) Miq.; contaminant; fungi; tissue culture
Abstrak. Perbanyakan  tanaman anggrek secara  generatif  memiliki  masalah  karena biji anggrek tidak  memiliki endosperm  perlu  diperbanyak  menggunakan  teknik  kultur  jaringan.  Kontaminasi  merupakan  faktor  pembatas dalam  perbanyakan  tanaman  secara  kultur  jaringan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mendeskripsikan  jenis-jenis kontaminan  yang  terdapat  pada  kultur  kalus  Bromheadia  finlaysoniana.  Penelitian  ini  dilaksanakan  dua  tahap. Tahap pertama dilakukan kultur dari berbagai eksplan Bromheadia finlaysoniana menggunakan media Murashige dan Skoog dengan pengayaan hormon 6-BAP (Benzylaminopurine) 1 mg/l; NAA (Naphthalene acetic acid) 0,5 mg/l; 100 mg myo inositol; pyridoxine-HCl 0,5 mg/l; thiamine-HCl 0,1 mg/l; nicotinic-acid 0,5 mg/l; glysine 2 mg/l.  Tahap  kedua  menghitung  jumlah  dan  persentase  jamur  kontaminan  serta  melakukan  pengamatan makroskopik dan mikroskopik. Karakter makroskopis jamur kontaminan yang diamati meliputi warna koloni, arah pertumbuhan koloni dan bentuk permukaan koloni hifa, karakter mikroskopik yang diamati meliputi bentuk hifa (bersekat/tidak bersekat) dan  produksi spora. Penentuan jenis kontaminan dibandingkan dengan  morfologi dari Pustaka. Hasil yang diperoleh adalah persentase kontaminasi tertinggi pada eksplan tangkai bunga yaitu 81 % dan jumlah  kontaminan  tertinggi  terjadi  pada  eksplan  daun  sebanyak  28  koloni.  Jamur  kontaminan  yang  tumbuh didominasi jamur dengan warna putih dan abu-abu dengan bentuk permukaan kasar. dari karakter mikroskopik sebagian  besar  memiliki  hifa  bersekat/bersepta  dan  tidak  memproduksi  spora.  Hasil  pengamatan  karakter makroskopik mikroskopik jamur kontaminan pada kultur jaringan beberapa eksplan anggrek ditemukan dari jenis Rhizoctonia sp dan Mucor sp. Kata kunci: Bromheadia finlaysoniana (Lind.) Miq.; jamur; kontaminasi; kultur jaringan

## PENDAHULUAN
Anggrek  adalah  tanaman  yang  terkenal dengan  keindahan  dan  bentuk  bunga  yang sangat  khas.  Tanaman  ini  memiliki  sejuta pesona  yang  menarik  bagi  pecinta  anggrek, maupun  penikmat  keindahan  tanaman  ini, selain  keindahan  morfologinya  tanaman
anggrek  juga  memiliki  aroma  yang  begitu khas,  sehingga  menimbulkan  relaksasi  bagi penikmat  nya.  Nilai  estetika  anggrek  tidak hanya pada keindahan dan aromanya t anaman anggrek  juga    mempunyai  bentuk,  ukuran,  dan warna  bunganya    yang  sangat  bervariasi.  Daya tahan atau kesegaran bunga anggrek yang relatif
lama  menjadi  faktor  tingginya  nilai  ekonomi anggrek. Bromheadia finlaysoniana merupakan  salah  satu  spesies  anggrek  alam yang  keberadaan sudah  sedikit  seiring berkurangnya  areal  hutan,  di  Kabupaten Kuantan  Singingi  hanya  dijumpai  di  hutan- hutan  konservasi  dan  hutan  lindung  seperti kawasan  suaka  margasatwa  rimbang  baling dan  hutan  lindung  sintajo  raya.  Menurut Heriansyah et  a l,    (2020)  beberapa  spesies anggrek  masih  ditemukan  dalam  kawasan suaka margasatwa rimbang baling diantaranya Bromheadia finlaysoniana . Perbanyakan  anggrek  secara  generatif sering menghadapi kendala fisiologis seperti rendahnya kemampuan, lamanya waktu yang diperlukan  biji  untuk  berkecambah  serta adanya  simbiosis  anggrek  dengan  mikoriza. Biji tanaman anggrek memiliki sedikit sekali bahkan  hampir  tidak  memiliki  endosperma, sehingga tidak tersedianya cadangan makanan pada awal perkecambahan biji yang menyebabkan  tertundanya  perkecambaha n. (Rita et al 2015).
Kendala  inilah  yang  menyebabkan perbanyakan anggrek lebih sering dilakukan secara  vegetatif  yaitu  dengan  teknik  kultur jaringan Kultur  jaringan  merupakan  suatu teknik  mengisolasi  bagian  tanaman,  baik berupa organ, jaringan, sel ataupun protoplasma  dan  selanjutnya  mengkultur bagian  tanaman  tersebut  pada  media  buatan dengan  kondisi  lingkungan  yang  steril  dan terkendali (Heriansyah, et al 2020), untuk itu anggrek  perlu  diperbanyak  menggunakan teknik  kultur  jaringan.    Kultur  jaringan merupakan  suatu  teknik  mengisolasi  bagian tanaman,  baik  berupa  organ,  jaringan,  sel ataupun protoplasma dan selanjutnya mengkultur  bagian  tanaman  tersebut  pada media  buatan  dengan  kondisi  lingkungan yang
steril
dan terkendali (Heriansyah,  et  al    2014).  Bagian  tanaman tersebut dapat beregenerasi hingga membentuk tanaman
lengkap (Sulichantini, et al, 2021).
Eksplan tanaman anggrek yang diperbanyak secara kultur jaringan mengalami kendala tingkat kontaminan yang
tinggi.  Kontaminasi  merupakan  Faktor pembatas  dalam  perbanyakan  tanaman secara  kultur  jaringan.  Kontaminasi  dapat berasal  dari  eksplan  (baik  internal  maupun eksternal),  organisme  kecil  yang  masuk kedalam  media,  botol  kultur  atau  alat-alat yang  kurang  steril,  lingkungan  kerja  dan ruang  kultur  yang  kurang  steril  (spora  di udara).  Kontaminasi  pada  kultur  jaringan lebih didominasi dari jenis jamur dibandingkan mikroba lain ( Wati et al 2020). Oratmangun  (2017)    pada  kultur  jaringan Kalus Catharanthus  roseus terdapat  jamur kontaminan  jenis, Aspergillus,  Rhizopus, Mucor .  Jamur  yang  menjadi  sumber kontaminan  harus  dideskripsikan  untuk memudahkan dalam melakukan identifikasi. Informasi  dari  karakteristik  jamur  tersebut, akan  mudah  untuk  menentukan  metode sterilisasi.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah untuk  mendeskripsikan  kontaminan  dari jenis  jamur  pada  kultur  jaringan  tanaman Bromheadia  finlaysoniana (Lind.)  Miq. Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah menggunakan identifikasi makroskopik  dan  mikroskopik  cendawan yang  muncul  pada  kultur  tanaman  anggrek tersebut.

## METODE
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium  Kultur  Jaringan  Universitas Islam Riau. Rangkaian yang dilakukan dalam penelitian diantaranya:
Sterilisasi alat Alat-alat yang digunakan dalam kegiatan  kultur  jaringan  dan  identifikasi jamur  terutama  peralatan  kaca  yang  tahan terhadap  panas  disterilisasi  terlebih  dahulu dengan  autoklaf bertekanan 2  atm dan suhu 121°C  selama  15  menit  (Gunawan et  al ., 2004).

## Pembuatan media dan sterilisasi media
Media MS dengan pengayaan hormon 6- BAP  (Benzylaminopurine)  1  mg/l;  NAA (Naphthalene  acetic  acid)  0,5  mg/l;  100  mg myo  inositol;  pyridoxine-HCl  0,5  mg/l; thiamine-HCl  0,1  mg/l;  nicotinic-acid  0,5 mg/l; glysine 2 mg/l; 30 g/l sucrose and 10 g/l
agar; dengan pengaturan pH 5,7 menggunakan NaOH dan/atau HCl. Sterilisasi  media  menggunakan  autoclave pada  suhu  1210C;  1,2  kg/cm2  selama  30 menit.

## Sterilisasi Eksplan
Sterilisasi  eksplan  dilakukan  dengan cara  sterilisasi  bertingkat  menggunakan cairan  hipoklorit  70%,  alkohol  95  %  dan aquades.  Semua  bagian  eksplan  dicuci dengan  air  mengalir,  kemudian  direndam larutan  hipoklorit    70  %  sambil  di  goyang- goyang  tunggu  hingga  15  menit,    dan selanjutnya  direndam  dalam  alkohol  95% dengan  cara  yang  sama  kemudian  dibilas dengan akuades.
Penanaman eksplan Penanaman eksplan di dalam laminar air flow cabinet. eksplan tanaman anggrek yang digunakan  yaitu  bagian  akar,  batang,  daun dan  tangkai  bunga  dipotong  dengan  ukuran 0,5  mm  x  1  mm.  Setiap  eksplan  tanaman ditanam  sebanyak  4  eksplan,  kemudian masukkan  dalam  media  yang  sudah  steril dengan  menggunakan  pinset  steril.  Mulut botol dibakar terlebih dahulu kemudian baru
ditutup  dan  diikat  dengan  karet.    Kemudian diinkubasi dalam ruang kultur untuk induksi kalus.  Hasil  inokulasi  dikeluarkan  dari laminar  dan  ditempatkan  dalam  ruang inkubasi, suhu ruangan.

## Pengamatan Kontaminasi
Kontaminasi  diamati  setiap  hari  secara kasat sampai hari ke-7  di dalam botol kultur. Karakter  makroskopis  jamur  kontaminan yang  diamati  meliputi  warna  koloni,  arah pertumbuhan  koloni  dan  bentuk  permukaan koloni  hifa,  karakter  mikroskopik  yang diamati  meliputi  bentuk  hifa  (bersekat/tidak bersekat)  dan  produksi  spora. Identifikasi mengacu pada pustaka-pustaka: Alexopoulos dan  Bold  (1967),  Alexopoulos  dan  Mimms (1979) dan Gandjar et al, (2006)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Persentase  jamur  kontaminan  yang tumbuh  pada  kultur  jaringan  anggrek  alam bromheadia finlaysoniana (Lind.) Miq pada beberapa eksplan didapatkan persentase yang beragam  dengan  jumlah  koloni  kontaminan yang berbeda tabel 2.
Tabel 1. Jumlah Jamur Kontaminasi pada kultur jaringan anggrek alam Bromheadia finlaysoniana (Lind.) Miq Eksplan tanaman Persentase kontaminan (%) Jumlah kontaminasi (koloni) Akar 18 % 4 koloni Batang 68% 18 koloni Tangkai Bunga 81 % 25 koloni Daun 75 % 28 koloni Persentase  jamur  kontaminan  pada kultur  jaringan  anggrek  alam Bromheadia finlaysoniana tertinggi terdapat pada eksplan tangkai  bunga  yaitu  sebesar  81%  dan  yang terendah  terdapat  pada  eksplan  akar  yaitu sebesar  18%.  Kultur  yang  terkontaminasi jamur  ditumbuhi  oleh  koloni  jamur  dengan jumlah yang bervariasi. Jumlah koloni jamur kontaminan yang tumbuh terbanyak terdapat pada  kultur  eksplan  daun  yakni  28  koloni, meskipun  persentase  kontaminannya  hanya 75%. Jumlah koloni jamur kontaminan yang tumbuh  dihitung  dari  perbedaan  karakter
morfologi  jamur  yang  tumbuh  pada  setiap botol eksplan.
Perbedaan persentase dan jumlah koloni jamur  kontaminan  pada  masing  eksplan diduga  karena  perbedaan  struktur  dari masing-masing  eksplan.  Eksplan  daun memiliki  struktur  lebih  lebar  sehingga berpotensi untuk  saling menempel satu sama lain ketika proses sterilisasi.
Menurut  Juarna  (2016)  eksplan  daun lebih rentan terhadap munculnya kontaminasi dibanding organ tumbuhan yang lain. Widiastoety (2001), bahwa kontaminasi pada  eksplan  yang  ditanam  dapat  terjadi
karena  infeksi  secara  eksternal  maupun internal. Kontaminasi eksternal akan muncul dua  sampai  tiga  hari  setelah  tanam, sedangkan  kontaminasi  secara  internal  akan terjadi setelah empat hari setelah tanam. Pada penelitian ini rata-rata tumbuh jamur tiga hari setelah tanam.
Jamur  kontaminasi  yang  tumbuh  pada masing-masing eksplan dikelompokan
berdasarkan warna koloni, arah pertumbuhan dan  bentuk permukaan.  Terdapat 10 kelompok  jamur  yang  memiliki  kesamaan karakter  makroskopik  tabel  2.  Sepuluh kelompok  jamur  kontaminan  ini  akan dilanjutkan  untuk  mengetahui  karakter mikroskopiknya.
Tabel 2. Karakter Makroskopis Jamur Kontaminan beberapa eksplan tanaman Anggrek Alam
Bromheadia finlaysoniana (Lind.) Miq Kelompok jamur kontaminan Warna koloni Arah pertumbuhan Tekstur koloni I II Abu-abu Putih Simetris Simetris Halus Halus III IV V Putih keabuan Hijau
Putih Menyebar Menyebar Menyebar Kasar Kasar Kasar VI VII Keabuan Abu-abu kehitaman Simetris Simetris Kasar Kasar VIII IX X Abu kehijauan Putih
Abu-abu Simetris Simetris Menyebar Kasar Kasar Kasar
Pada setiap perlakuan jamur kontaminan yang  tumbuh  didominasi  jamur  dengan warna  putih  dan  abu-abu  dengan  bentuk permukaan  kasar.  Sejalan  dengan  penelitian yang  dilakukan  Kristina et  al ,  (2017)  yang mengamati  jamur  kontaminasi  pada  kalus Catharanthus  roseus (L.)  G.  Don  bahwa jamur kontaminasi  yang  tumbuh didominasi dengan  warna  koloni  putih  dan  abu-abu dengan  bentuk  permukaan  kasar.  karakter makroskopis  jamur  kontaminan  pada  kultur jaringan  sebagian  besar  berasal  dari  kelas deuteromycetes  dan  zygomycetes.  Kelas deuteromycetes  memiliki  dengan  ciri-ciri makroskopik  warna  koloni  putih,  abu-abu hingga  coklat  kehitaman  dengan  arah pertumbuhan simetris dan permukaan kasar, sedang  kelas  zygomycetes  memiliki  warna koloni  putih,  abu-abu,  hijau  dengan  arah pertumbuhan menyebar dan permukaan kasar (Abdullah, 2020).
Kontaminan pada kultur jaringan dipengaruhi oleh beberapa faktor diantaranya kebersihan  alat,  bahan  serta  eksplan  yang
digunakan,  perbedaan  jamur  kontaminan yang  tumbuh  pada  beberapa  kultur  diduga karena jenis eksplan yang berbeda. Menurut Juarna  (2016)  adanya  perbedaan  karakter jamur  kontaminan  yang  tumbuh pada kultur eksplan  daun  dan  eksplan  tangkai  daun. Persamaan  karakter  jamur  kontaminan  pada setiap  kultur  diduga  disebabkan  karena perlakuan  dan  penggunaan  media  tumbuh yang sama. Menurut Waluyo (2004) mikroorganisme  membutuhkan  nutrien  untuk kelangsungan  hidupnya  yang  berperan  sebagai sumber energi dan bahan pembangun sel. Bahan makanan  yang  diperlukan  adalah  air,  sumber energi,  sumber  karbon,  sumber  mineral,  dan nitrogen.  Kebutuhan  akan  zat-zat  nutrisi bervariasi dari setiap mikroorganisme.
Oratmangun et al , (2017) terdapat kesamaan karakter jamur kontaminan pada penggunaan media medium MS (Murashige dan Skoog).
Data  pengamatan  karakter  mikroskopis jamur  kontaminan  pada  kultur  jaringan
beberapa  eksplan  tanaman  anggrek  alam Bromheadia finlaysoniana ditampilkan pada tabel  3.  karakter  mikroskopik  yang  diamati
dari  jamur  kontaminan  yang  diamati  seperti struktur  hifa  (bersekat/atau  tidak),  produksi spora.
Tabel 3. Karakter Mikroskopik Jamur Kontaminan beberapa eksplan tanaman anggrek alam Bromheadia finlaysoniana (Lind.) Miq
Kelompok jamur Karakter mikroskopik Struktur hifa (bersekat/tidak) Produksi spora/ konidia Kelompok I Hifa bersekat Tidak ada spora/konidia Kelompok II Hifa bersekat Tidak ada spora/konidia Kelompok III Hifa tidak bersekat Ada spora Kelompok IV Hifa tidak bersekat Ada spora Kelompok V Hifa bersekat Tidak ada spora/konidia Kelompok VI Hifa bersekat Tidak ada spora/konidia Kelompok VII Hifa bersekat Tidak ada spora/konidia Kelompok VIII Hifa bersekat Tidak ada spora/konidia Kelompok IX Hifa bersekat Tidak ada spora/konidia Kelompok X Hifa bersekat ada konidia Pengamatan  karakter  mikroskopik  pada kelompok
jamur kontaminan dari pengamatan  hifa  sebagian  besar  jamur kontaminan  memiliki  hifa  yang  bersekat. Berdasarkan  literatur  jamur  yang  memiliki struktur  hifa  bersekat  tergolong  kedalam perfect fungi yang dibagi menjadi tiga kelas yaitu  ascomycetes,  basidiomycetes,  dan deuteromycetes  dengan  ciri  yang  berbeda. Kelas  ascomycetes  merupakan  kelas  jamur yang memiliki hifa bersekat dengan ciri khas memproduksi  spora  dalam  askus.  Pada penelitian  ini  tidak  dijumpai  jamur  yang memproduksi  spora  di  dalam  askus.  Kelas
basidiomycetes merupakan  kelas jamur yang memiliki  hifa  bersekat  dengan  ciri  khas memproduksi  spora  didalam  basidium dengan berbagai fase basidiosporanya. Pada penelitian  ini  tidak  dijumpai  jamur  yang memproduksi  spora  di  dalam  basidium. Kelas  deuteromycetes  disebut  juga  dengan imperfect fungi yaitu kelas jamur yang belum diketahui  bentuk  spora  generatifnya. Fase vegetatif  dari  kelas  basidiomycetes  dan ascomycetes  masih  digolongkan  kedalam kelas deuteromycetes karena tidak ditemukan spora generatifnya.
Gambar 1. Pengamatan mikroskopik jamur kontaminan, a. kelompok jamur kontaminan yang hifa bersekat, b.kelompok jamur kontaminan ciri khusus, c. kelompok jamur kontaminan yang hifa bersekat dan memproduksi spora.
Perbedaan antar spesies pada kelas deuteromycetes yaitu terbentuknya bentuk spora yang berbeda dan adanya ciri khas pada pertumbuhan hifa, seperti pertumbuhan hifa sekunder yang membentuk  sudut  90 0 seperti  pada  spesies Rhizoctonia sp  (Alexopoulos  dan  Bold  (1967), Alexopoulos dan Mimms 1979). Pada penelitian ini ditemukan ciri hifa yang pertumbuhan hifa sekundernya    yang  membentuk  sudut  90 0 yaitu  pada  kelompok  jamur  I  yang  berasal  dari
b a c
kontaminan eksplan  akar. Beberapa spesies Jamur Rhizoctonia merupakan jamur tanah  yang mengkolonisasi  akar  secara  umum  merupakan  patogen  penyebab  rebah  kecambah  (damping off) pada pembibitan tanaman tahunan seperti jati dan sengon (Istikorini dan Yulia 2020).
Menurut Reiter et al (2018) spesies Rhizoctonia sp juga dapat berasosiasi dan bersimbiosis dengan  jaringan  akar  anggrek  dengan  membentuk  lilitan  hifa  yang  menempel  pada  jaringan korteks sebagai mikoriza . Asosiasi Rhizoctonia mikoriza dengan tanaman anggrek terjadi pada saat  embrio  membentuk  akar dan tunas  yang dikenal  dengan protocorm. Sesudah protocorm berkembang menjadi tanaman yang sempurna yang dikenal sebagai planlet, maka jaringan hifa Rhizoctonia mikoriza  akan  berada  di  bagian  korteks  akar  anggrek  membentuk  peloton (Soelistijono, 2015).
Gambar 2. Karakter mikroskopis jamur Rhizoctonia sp a. sumber pribadi b. sumber pustaka (Zumri et al , 2017)
Kelompok  jamur  yang  memiliki  hifa tidak  bersekat  tergolong  ke  dalam  kingdom chromista,  protozoa  dan  kelas  zygomycetes dapus nya. Kelompok jamur ini memproduksi  jumlah  spora  di  dalam sporangium  dengan  jumlah  yang  banyak. Kelompok  jamur  chromista  dan  protozoa akan  membentuk  spora  dengan  flagel  yang disebut dengan zoospora dalam penelitian ini tidak  ditemukan  jamur  kontaminan  yang memproduksi  zoospora.  Kelas  zygomycetes memproduksi  spora  di  dalam  sporangium dengan ciri sporangium bulat dengan bentuk tangkai spora sederhana. Karakter mikroskopik Kelompok III dan IV mengarah pada  ciri-ciri  jamur  dari  kelas  zygomycetes karna arah  pertumbuhan  menyebar  dan permukaan  kasar,  memiliki  hifa  tidak bersekat dan  memproduksi  spora  dalam sporangium.  Menurut  oratmangun  spesies dari kelas zygomycetes yang ditemukan pada kontaminasi  kultur  jaringan  yaitu Rhizopus sp  dan Mucor sp.  Pada  penelitian  ini ditemukan  jenis  Mucor  sp  karena  koloni berwarna putih atau putih keabuan memiliki spora dan hifa tidak bersekat.
Mucor sp  merupakan  jamur  yang  yang banyak mengkontami kultur bahkan subkultur eksplan pada perbanyakan
tanaman  secara  kultur  jaringan  ( Susilowati dan  Listyawati  2001).  jamur  mucor  sp  juga dapat  diisolasi  dari  dalam  jaringan  tanaman sebagai  jamur  endofit  pada  tanaman (Izzatinnisa’ et al 2020).
Widiastoety (2001), bahwa kontaminasi pada  eksplan  yang  ditanam  dapat  terjadi karena  infeksi  secara  eksternal  maupun internal. Kontaminasi eksternal dapat berasal dari alat dan bahan yang tidak steril, hewan- hewan  kecil  yang  masuk  ke  dalam  botol kultur serta dari udara. Kontaminasi internal berasal  dari  dalam  jaringan  tanaman. Menurut Joko  et  al,  (2021)  mikroba  yang berasal  dan  berasosiasi  di  dalam  jaringan tanaman  disebut  dengan  mikroba    endofit merupakan jamur.
Identifikasi  dan  karakterisasi  jamur- jamur  kontaminan  merupakan  langkah  awal dalam  menentukan  jenis  dan  metode sterilisasi  yang  akan  digunakan  dalam melakukan kultur jaringan anggrek. Penggunaan berbagai jenis eksplan bertujuan untuk  mendapatkan  jenis  eksplan  yang  bisa digunakan  untuk  meningkatkan  produksi bibit dalam kultur jaringan anggrek.
Dalam penelitian ini eksplan akar dapat dikembang  dalam  kultur  jaringan  anggrek karena  rendahnya  tingkat  kontaminan  yang
a b
terjadi. Pemilihan jenis bahan sterilisasi juga merupakan faktor
penting dalam keberhasilan kultur jaringan anggrek. Pengambilan sampel tanaman juga berpengaruh  terhadap  pertumbuhan  jamur kontaminan  internal/  kontaminan  yang berasal  dari  dalam  jaringan  tanaman (endofit). Pengambilan sumber eksplan juga mempengaruhi  tingkat  pertumbuhan  jamur kontaminan  internal  karena  isolasi  jamur endofit lebih tinggi dijumpai pada  tanaman yang tumbuh ekosistem alami.

## SIMPULAN
Jamur  kontaminan  terbanyak  yang ditemukan pada eksplan daun yaitu sebanyak 28  koloni,  persentase  kontaminan  tertinggi pada  eksplan  tangkai  bunga  yaitu  81  %. karakteristik morfologi masing-masing jamur  kontaminan  didominasi  warna  koloni putih dan abu-abu dengan arah pertumbuhan simetris  serta  tekstur  koloni  kasar.  Hasil pengamatan karakter makroskopik mikroskopik  jamur  kontaminan  pada  kultur jaringan beberapa eksplan anggrek ditemukan  dari  jenis Rhizoctonia sp  dan Mucor sp.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  didanai  Kementerian Riset,  Teknologi  dan  Pendidikan  Tinggi Republik Indonesia melalui Hibah Penelitian Pemula 2020.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdullah,  M.K.,  2020.  Isolasi,  identifikasi dan uji fitokimia flavonoid fungi endofit dari kulit  buah naga merah (hylocereus polyrhizus)  serta  potensinya  sebagai antioksidan (Doctoral dissertation, UIN Sunan Ampel Surabaya).
Gandjar, Indrawati and
Wellyzar
Sjamsuridzal. 2006. Mikologi Dasar dan
Terapan. Jakarta: Yayasan Obor. Jakarta
Heriansyah,  P.,  Sagiarti,  T.  and  Rover,  R.,
2014. Pengaruh Pemberian Myoinositol
Dan Arang Aktif Pada Media Sub Kultur
Jaringan Tanaman Anggrek
( Dendrobium SP). Jurnal Agroteknologi, 5(1), pp.9-16.
Heriansyah  P,  Seprido,  and  Andriani  D.
2020.  Identifikasi  Anggrek  Alam  Pada Kawasan  Rawan  Gangguan  di  Suaka Margasatwa  Bukit  Rimbang  Dan  Bukit Baling  Resort  Kuantan  Singingi.  Agro Bali: Agricultural Journal 3(2): 164-170 Heriansyah, P., Jumin, H. B., & Maizar, M.
2020.  In-Vitro  Rooting  Induction  On The  Embryo  Somatic  Of  Dendrobium Species From Riau Province Indonesia. Paspalum: Jurnal Ilmiah Pertanian, 8(2), 93-98
Istikorini Y and Yulia. O.S. 2020. survei dan identifikasi  penyakit  damping  off  pada sengon  ( Paraserianthes  falcataria )  di persemaian permanen IPB. Jurnal Silva Lestari. 8:1. 32-41
Izzatinnisa,  U.  Utami,  and  A.  Mujahidin. 2020. Uji Antagonisme Beberapa Fungi Endofit pada Tanaman Kentang terhadap Fusarium oxysporum secara in vitro. Jurnal Riset Biologi dan Aplikasinya. 2:1, 18-25.
Joko,  T.  and  Arwiyanto,  T.,  2021. Karakteristik  Morfologi  Dan  Fisiologi Bakteri  Endofit  Dan  Rizobakteri  Dari Tanaman  Cengkeh  Sehat.  Jurnal  Agro Wiralodra, 4(1), pp.1-8.
Juarna  K.S  2016.  Contamination  explant Centella  asiatica (L.)  Urban  (Pegagan)
In  Vitro  culture  through  comparison  of two  sterilization  methods.  Jurnal  Pro- Life. 3: 2.119-128
Ningsih R, Ambardini S, and Denofia. 2014.
Peranan  Jamur Rhizoctonia sp  Asal Taman Nasional Rawa Aopa Watumohai Sulawesi Tenggara
Terhadap  Keberhasilan  Aklimatisasi dan Laju Pertumbuhan Planlet Anggrek Macan  (Grammatophyllum  scriptum BL.Al-kauniya. Jurnal Biologi 7: 2. 58- 68
Oratmangun K.M, Pandiangan D , Febby E. and  Kandou  F.E.  2017.  Description Types  of  Contaminants  From  Culture Callus Catharanthus roseus (L.) G. Don.
Jurnal MIPA Unsrat Online. 6 : 1. 47-- 52
Soelistijono,  R.,  2015.  Kajian  Efektifitas
Rhizoctonia  SP  Mikoriza  Dataran Rendah  dan  Sedang  pada  Tingkat
Keparahan  Penyakit  (Dsi)  Anggrek Phalaenopsis amabilis
terhadap
Fusarium  sp.  Biosaintifika:  Journal  of
Biology & Biology Education, 7(2).
Sulichantini,  E.D.,  Eliyani,  E.,  Saputra,  A. and Susylowati, S., 2021. Pengaruh Zat Pengatur  Tumbuh  dan  Bahan  Organik terhadap  Pertumbuhan  Anggrek  Tebu
Grammatophyllum  speciosum  Blume Secara Kultur
Jaringan. Jurnal Agroekoteknologi  Tropika  Lembab, 4(1)
Susilowati  A,  and  Listyawati  S  2021.
Keanekaragaman Jenis Mikroorganisme Sumber Kontaminasi Kultur In vitro  di Sub-Lab.  Biologi  Laboratorium  MIPA Pusat UNS.BIODIVERSITAS.2:1, 110- 114 Wati, T., Astarini. I. A, Pharmawati. M, and
Hendriyani.  E.  2020.  Propagation  Of
Begonia Bimaensis Undaharta & Ardaka Using Tissue Culture Technique. Journal  of  Biological  Sciences  7(1): 112-122. DOI: 10.24843/metamorfosa.2020.v07.i01.p1 5
Zumri M, Daryanti, and Soelistijono R. 2017. isolasi  dan  identifikasi  Rhizoctonia mikoriza  anggrek  Vanda  Tricolor  dari kopeng jawa tengah. AGRINECA.17:1