Licensed: Creative Commons Attribution 4.0 International License. (CC-BY)
Pengaruh konsentrasi asam klorida dan metode ekstraksi microwave terhadap karakterisik kolagen tulang ikan tuna (Thunus sp)
The effect of clorida acid and microwave extraction method on the characteristics of collagen bone tuna fish (Thunnus sp)
Marisa Rizky Hanivia 1)*, Jariah 1)
1) Program Studi Teknologi Pangan, Universitas Pembangunan Nasional “Veteran” Jawa Timur *Email Korespondensi: marisarizky077@gmail.com
Informasi Artikel: Dikirim: 23/05/2022; ditinjau: 10/06/2022; disetujui: 15/09/2022

## ABSTRACT
Indonesia  still  imports  more  than  6200  tons  of  collagen  with  the  price  reaching approximately  1$.  Therefore,  domestic  industrial  developers  are  needed  to  produce collagen. Collagen itself is usually made from bone or skin raw materials from pigs or cows, but recently there are frequent infectious diseases from these livestock so that raw materials  from  fisheries  can  overcome  these  problems  to  be  used  as  materials  for making collagen. Tuna fish bones have a high collagen protein content and can be used as an alternative raw material for collagen. The purpose of this study was to determine the  characteristics  of  tuna  bone  collagen  made  by  Factor  I  concentration  of hydrochloric acid  (1%,3%,5%) with factor II extraction time  (30  minutes, 60 minutes, 90 minutes). In this study using a Completely Randomized Design (CRD). In the results of  the  study,  the  best  treatment,  namely  the  treatment  of  5%  hydrochloric  acid concentration with an extraction time of 90 minutes, had a yield value of 21.05%, water content  2.69%,  ash  content  0.27%,  pH  value  7.23,  viscosity  value  3  .38cP  and  Color (L*) 75.31. Furthermore, the results of the FTIR analysis of Amide A, Amide B, Amide I, Amide  II,  Amide  III  with  absorption  peaks  in  a  row  (3362.52  cm-1),  (2935.25  cm-1), (1626.46cm-1 ),(1517,14cm-1),(1235.52cm-1) Keywords: Collagen,  tuna  fish  bone,  FT-IR,  Microwave  Assisted  Extraction, hydrochloric acid

## ABSTRAK
Indonesia  masih  mengimpor  lebih  dari  6200  ton  kolagen  dengan  harga  per  gram mencapai  kurang  lebih  1$.  Oleh  karena  itu  diperlukan  pengembang  industri  dalam negeri  untuk  memproduksi  kolagen.  Kolagen  sendiri  biasanya  terbuat  dari  bahan  baku tulang/kulit dari babi maupun sapi, namun baru-baru ini sering terjadi penyakit menular dari  hewan-hewan  ternak  tersebut  sehingga  bahan  baku  yang  berasal  dari  perikanan yang  bisa  mengatasi  masalah  tersebut  untuk  dijadikan  bahan  pembuatan  kolagen. Tulang  ikan  tuna  memiliki  kandungan  protein  kolagen  yang  tinggi  dan  dapat menjadikan  alternatif  bahan  baku  kolagen.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  karakteristik  kolagen  tulang  ikan  tuna  yang  dibuat  dengan  Faktor  I konsentrasi asam klorida (1%,3%,5%) dengan faktor II lama waktu ekstraksi (30 menit, 60  menit,  90  menit).  Pada  penelitian  ini  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL).  Pada  hasil  penelitian  perlakuan  terbaik  yakni  dari  perlakuan  konsentrasi  asam klorida  5%  dengan  lama  waktu  ekstraksi  90  menit  memiliki  nilai  rendemen  21,05%, Kadar  air  2,69%,  kadar  abu  0,27%,  nilai  pH  7,23,  nilai  viskositas  3,38cP  dan  Warna
(L*)  75,31.  Selanjutnya  didapatkan  hasil  analisa  FTIR  Amida  A,  Amida  B,  Amida  I, Amida II, Amida III dengan puncak serapan berturut-turut (3362,52 cm-1),(2935,25 cm- 1),(1626,46 cm-1),(1517,14cm-1),(1235,52cm-1) Kata Kunci: Kolagen,  tulang  ikan  tuna,  FT-IR, Microwave  Assisted  Extraction ,  asam klorida

## PENDAHULUAN
Produksi  kolagen  pada  negeri  masih belum  optimal.  Data International  Trade Center (2016)  menjelaskan  bahwasanya Indonesia  mengimpor  kolagen  lebih  dari 6200 ton  per tahunnya. Pemanfaatan kolagen sendiri cukup luas  baik  pada bidang pangan, farmasi  bahkan  kecantikan.  Kolagen  sendiri memiliki  sifat biodegradable , biocompatible dan  afinitas  rendah  ( Liu  et  al. ,  2009)  begitu pula dengan  Zhang (2018)  yang menyatakan bawasanya  kolagen  adalah  memiliki  bio- kompatibilitas dan biodegradabilitasnya yang sangat  baik  untuk  diaplikasikan  sebagai bahan  tambahan  pangan,  farmasi  dan  kos- metik.  Oleh  karena  itu  diperlukan    pengem- bangan  industri  dalam  negeri  untuk  meng- atasi masalah impor di Indonesia.
Indonesia  merupakan  negara  maritim yang memiliki banyak keanekaragaman sum- berdaya  perikanan.  Produksi  perikanan  di ndonesia  sangat  tinggi  di  iringi  dengan jumlah  limbah  perikanan  yang  tidak  diman- faatkan  dengan  optimal  (Ramli,  2019). Menurut KKP (2007) limbah perikanan yang dihasilkan  industri  bisa  mencapai  25-30% berupa  tulang,  kepala,  kulit  dsb,  banyaknya limbah berkisar 36 ton pertahun.
Sumber  kolagen  biasanya  berasal  dari kulit/tulang  hewan  ternak  seperti  sapi,  babi, unggas. Baru baru ini penyakit menular pada hewan  ternak    sering  terjadi  terus  menerus seperti  ( Bovine  Spongiform )  penyakit  sapi gila  Flu  Burung  dsb  (Elango et  al .,  2019). Sehingga  diperlukan  adanya  bahan  alternatif pengganti hewan ternak tersebut. Tulang ikan adalah  jawaban  dari  masalah  tersebut. Dikarenakan  ikan  tidak  memiliki  penyakit menular seperti yang ada pada hewan ternak. Menurut  Havez et  al .  (2020)  Pemanfaatan kolagen  berbasis  tulang  ikan  berkembang pesat karena sifatnya yang unik dibandingkan dengan  kolagen  berbasis  mamalia,  seperti
tidak  ada  risiko  penularan  penyakit,  ku- rangnya  batasan  agama,  proses  hemat  biaya, berat  molekul  rendah, biokompatibilitas, dan mudah diserap oleh tubuh manusia.
Ikan  tuna  merupakan  salah  satu  jenis ikan  yang  banyak  dikonsumsi  oleh  ma- syarakat  Indonesia,  tulang  ikan  tuna  pada industri  pengolahan  tidak  dimanfaatkan dengan baik sehingga diperlukan pengolahan lebih  lanjut  (Mala,  2020).  Protein  yang terdapat  pada  tulang  ikan  tuna  sangat  tinggi apabila  dibandingkan  dengan  jenis  ikan  lain menurut  Thalib  (2015)  protein  yang  terkan- dung  pada  100  gr  tulang  ikan  tuna  berkisar 24,1gr.
Dalam  melakukan  proses  pembuatan kolagen  tulang  ikan  tuna  diperlukan  pelarut dan  metode  ekstraksi.  Penelitian  ini  meng- gunakan  pelarut  asam  klorida  dan  saat dilakukan  perbandingan  dengan  basa  kuat, asam  mampu  dengan  cepat  memutus  ikatan tripel  heliks menjadi  rantai  tunggal  sedang- kan basa hanya mampu memutus rantai triple heliks kolagen menjadi rantai ganda (Wart & Court,  2007).  Metode  ekstraksi  yang  digu- nakan dalam penelitian ini adalah Microwave Assisted  Extraction atau  biasa  disingkat MAE, dengan Microwave oven yang mampu menghasilkan  radiasi  gelombang  mikro sebagai  penghasil  getaran  sehingga  meng- getarkan  makanan  dan  terjadi  gesekan  ion pada  senyawa  yang  ada  pada  bahan  yang kemudian  menjadi  panas.  Ekstraksi  ini  lebih cepat  dan  efisien  apabila  dibandingkan dengan  metode  konvensional  (Rafiee et  al ., 2011).
Berdasarkan  penjelasan  di  atas  maka tujuan  penelitian  adalah  mengetahui  penga- ruh konsentrasi asam klorida dan lama waktu ekstraksi  menggunakan  metode  ekstraksi MAE (Microwave  Assisted  Extraction) ter- hadap  karakteristik  fisikokimia  kolagen tulang ikan tuna.

## Gambar 1. Bahan utama pembuatan kolagen tulang ikan

## METODE
Metode  olah  data  yang  digunakan adalah  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL). Rancangan  ini  merupakan  rancangan  perco- baan  dengan  menggunakan  9  perlakuan (Konsentrasi Asam Klorida 1%, 2%, 3%) dan Lama  waktu  ekstraksi  (30  menit,  60  menit, 90  menit).  Dengan  pengulangan  tiap  perla- kuan 2 kali.

## Bahan
Bahan  baku  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  tulang  ikan  tuna  yang merupakan  sisa  proses  pengalengan  ikan  di BANTU.  Banyuwangi  Cannery  Bantu.  Ba- han  kimia  yang  digunakan  yaitu  HCl, aquades,  NaCl,  NaOH,  Na2SO4-HgO,  dan tablet kjeldahl.

## Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi antara lain, timbangan digital, water  bath , cabinet  dryer ,  kompor gas,  termometer,  pisau,    wadah  plastik  dan gelas.  Alat-alat  yang  digunakan  untuk analisis  antara  lain  neraca  analitik,  oven, desikator, furnace, pH  meter,  Microwave Oven,    satu  set Viscometer model  RVT, ColorideR ,FT-IR (Spektrofotometer  Fourier Transform  Infra  Red) ,  dan  SEM (Scanning Electron Microscope).

## Metode/pelaksanaan
Pelaksanaan penelitian ini dilakukan di laboratorium  Teknologi  Pengolahan  Pangan, laboratorium  Analisa  Pangan,  laboratorium Instrumen  Program  Studi  Teknologi  Pangan UPN “Veteran” Jawa Timur.
Analisis kolagen tulang ikan tuna yang dilakukan  pada  penelitian  ini  meliputi  :  1) rendemen,  2)  kadar  air,  3)  kadar  abu,  4) kadar  protein,  5)  uji  warna,  Analisa  dilan- jutkan  dengan  analisis  keputusan  perlakuan terbaik dari karakteristik dan sensori kolagen tulang  ikan  tuna.  Perlakuan  terbaik  selan- jutnya  dilakukan  analisis  gugus  fungsi kolagen dengan menggunakan FT-IR
(Spektrofotometer Fourier
Transform Infrared) dan  Morfologi  Kolagen  meng- gunakan SEM (Scanning
Electron Microscope). Analisa  data  dilakukan  secara ANOVA  dengan  selang  kepercayaan  5%. Apabila  ditemukan  pengaruh  terhadap  salah satu  variabel  maka  dilanjutkan  dengan  uji beda nyata terkecil

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Pembuatan kolagen tulang ikan tuna
Tulang yang telah dibersihkan direndam  dengan  air  mendidih  selama  1-5 menit,  tujuan  perendaman  dengan  air  panas ini untuk membuang sisa daging yang masih menempel  pada  bahan  ( Sembiring  et  al ., 2020).
Selanjutnya  tulang  ikan  yang  telah bersih  dari  sisa  daging  yang  menempel dilakukan  pemotongan  2-5  cm  tujuannya agar  lebih  cepat  saat  proses  denaturasi  oleh asam.  Pengecilan  ukuran  diperlukan  untuk memperluas  permukaan  bahan  sehingga proses  dapat  berlangsung  lebih  cepat  dan sempurna.  (Sembiring  dkk,  2020).  Proses selanjutnya  yakni  melakukan  demineralisasi, dengan menggunakan pelarut asam kuat yaitu Asam  Klorida  selama  72  jam  dengan  kon- sentrasi  1%,  3%,  5%.  Asam  klorida  dinilai mampu melarutkan protein kolagen yang ada pada tulang ikan.
Tulang  yang  telah  menjadi  ossain dicuci  sampai  pH  mendekati  7.  Setelah  itu

## dilakukanya  ekstraksi  menggunakan  metode
MAE  ( Microwave  Assisted  Extraction )  de- ngan  lama  waktu  ekstraksi  30,  60,  dan  90 menit.  Setelah  di  ekstraksi  larutan  kolagen ditambahkan  Nacl  untuk  mengendapkan kolagen.  Pisahkan  supernatan  dan  ambil endapan  kolagen.  Setelah  itu  dikeringkan menggunakan  cabinet  dryer  selama  24  jam dengan  suhu  50C.  Setelah  kering  ditumbuk untuk menjadi bubuk kolagen

## Analisa fisikokimia

## 1. Rendemen
Berdasarkan  hasil  dari  analisis  ragam dapat diketahui bahwasanya adanya interaksi yang  nyata  antara  konsentrasi  asam  klorida dan lama waktu ekstraksi.
Tabel 1. Nilai rendemen rata-rata Perlakuan Total Rerata M1R1 17,40 8,70 ± 0,28 a M1R2 24,60 12,30±0,28 b M1R3 25,02 12,51± 0,16 b M2R1 34,92 17,46± 0,06 c M2R2 39,28 19,64 ±0,03 d M2R3 40,48 20,24 ±0,08 e M3R1 40,70 20,53 ±0,07 e M3R2 41,54 20,77 ±0,18 f M3R3 42,10 21,05 ±0,35 g
Nila rata-rata rendemen kolagen tulang ikan  tuna  yang  didapatkan  pada  4  berkisar antara 8,70 – 21,05%. Pada perlakuan waktu ekstraksi selama 90 menit dengan konsentrasi HCl  5%  menghasilkan  nilai  rendemen  ter- tinggi  yakni  sebanyak  21,05%,  sedangkan pada  perlakuan  waktu  ekstraksi  selama  30 menit  konsentrasi  asam  1%  menghasilkan nilai  rendemen  yang  paling  sedikit  sebanyak 8,7%.  Pada  penelitian  yang  dilakukan Rahmawati  (2020)  diperoleh  nilai  rendemen kolagen  tulang  ikan  tongkol  dengan  pelarut asam  klorida  konsentrasi  5%  sebesar  21%. Sedangkan pada penelitian Romadhon (2019) diperoleh nilai rendemen kolagen tulang ikan nila  sebesar  0,53%.  Grafik  hubungan  antara perlakuan  lama  waktu  ekstraksi  dan  kon- sentrasi  asam  terhadap  rendemen  kolagen tulang  ikan  tuna  dapat  diamati  pada Gambar 2.
Gambar 2. Rerata rendemen kolagen tulang ikan tuna
Gambar  2  menunjukkan  bahwasanya semakin tinggi konsentrasi dan semakin lama waktu  ekstraksi  dapat  menghasilkan  rende- men  kolagen  yang  tinggi.  Hal  tersebut  dise- babkan  karena  konsentrasi  asam  yang  tinggi dapat  memecah  rantai  triple-heliks  menjadi rantai  tunggal  sehingga  kolagen  pada  saat proses  ekstraksi  semakin  banyak.  Hasil tersebut  sesuai  dengan  Nalinaon et  al . (2011), meningkatnya konsentrasi asam yang ditambahkan,  mengakibatkan  jumlah  mole- kul  asam  dalam  larutan  tersebut  bertambah sehingga  kerapatan  molekulnya  semakin besar.

## 2. Kadar air
Berdasarkan  hasil  dari  analisis  ragam dapat diketahui bahwasanya adanya interaksi yang  antara  konsentrasi  asam  klorida  dan lama waktu ekstraksi. Nilai rata-rata kadar air dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Nilai kadar air rata-rata Perlakuan Total Rerata M1R1 17,65 8,83±0,50 a M1R2 17,61 8,81±0,49 a M1R3 17,59 8,80±0,55 a M2R1 13,67 6,83±0,37 a M2R2 11,18 5,59±0,56 a M2R3 10,06 5,03±0,63 b M3R1 9,66 4,83±0,91 c M3R2 9,38 4,69±0,57 d M3R3 9,08 4,54±0,79 d
Nilai  rata-rata  yang  didapatkan  pada perlakuan di atas berkisar antara 4,54-8,83%. Dimana  hasil  analisa  kadar  air  diatas,  dida- patkan  nilai  kadar  air  terendah  pada  per-
8 .7 1 7 .4 6 2 0 .5 5 1 2 .3 1 9 .6 4 2 0 .7 7 1 2 .5 1 2 0 .2 4 2 1 .0 5 0 5 10 15 20 25 1% 3% 5%
30 menit 60 menit 90 menit
lakuan  konsentrasi  5%  dengan  waktu ekstraksi 30 menit dan 60 menit yang memi- liki  hasil  sebesar  4,54%  dan  yang  paling tertinggi  pada  perlakuan  konsentrasi  1%  de- ngan  waktu  ekstraksi  30  menit  sebesar 8,83%.  Nilai  kadar  air  di  atas  memenuhi persyaratan  mutu  kolagen  BSN  (2014)  yang menyatakan bahwasannya standar mutu kola- gen memiliki kadar air maksimum 12%.
Pada penelitian Romadhon et al . (2019) didapatkan hasil pengujian kadar air kolagen tulang  ikan  nila    berkisar  antara  2,17%- 7,25%.  Begitu  pula  dengan  penelitian Rahmawati (2020) yang memiliki nilai kadar air  dengan  rentan  5,00-6,00%  dengan  hasil terendah menggunakan perlakuan konsentrasi asam klorida sedangkan yang tertinggi meng- gunakan  konsentrasi  asam  asetat.  Grafik  hu- bungan  antara  perlakuan  lama  waktu  eks- traksi  dan  konsentrasi  asam  terhadap  kadar air  kolagen  tulang  ikan  tuna  dapat  diamati pada Gambar 3.
Gambar 3.  Rerata kadar air kolagen tulang ikan tuna
Dapat  di  ketahui  bahwasannya  kadar air  semakin  menurun  saat  konsentrasi  asam klorida  tinggi,  meningkatnya  konsentrasi asam  yang diberikan diikuti dengan mening- katnya  ion  H+  yang  dihasilkan  sehingga hidrolisis  kolagen  semakin  tinggi,  hal  ini menyebabkan  gugus  polar  bebas  yang  diha- silkan  dan  ikatan  peptida  protein  yang banyak  sehingga  air  yang  akan  diikat  juga semakin  banyak  karena  gugus  polar  bersifat bebas  dan  ikatan  peptida  mampu  mengikat air.  Pengaruh  konsentrasi  asam  juga  mem- berikan  pengaruh  nyata  terhadap  kolagen tulang  ikan  tuna.  Ketiga  konsentrasi  tersebut diberikan  pada  proses  demineralisasi  dapat
memecah  struktur  asam  amino  yang  menyu- sun  protein  pada  tulang.  Hal  ini  Menag- kibatkan  struktur  asam  amino  berubah  men- jadi  sangat  lemah,  sehingga  terjadi  suatu proses  yang  disebut  denaturasi.  Hal  tersebut juga sesuai dengan Lombu et al. (2015) yang menyatakan  proses  denaturasi  disebabkan karena  perubahan  molekul  dan  jumlah  air yang  terikat  menjadi  lebih  lemah  dan  menu- run,  menyebabkan  molekul  air  mudah  lepas sehingga  pada  saat  dilakukan  proses  penge- ringan  nilai  kadar  air  kolagen  menjadi  lebih rendah.

## 3. Kadar abu
Berdasarkan  hasil  dari  analisis  ragam dapat diketahui bahwasanya adanya interaksi yang  nyata  antara  konsentrasi  asam  klorida dan  lama  waktu  ekstraksi.  Nilai  rata-rata kadar abu dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Nilai kadar abu rata-rata Perlakuan Total Rerata M1R1 0,26 0,13±0,01 a M1R2 0,39 0,20±0,04 a M1R3 0,44 0,22±0,03 b M2R1 0,55 0,28±0,04 b M2R2 0,68 0,34±0,01 c M2R3 0,84 0,42±0,03 d M3R1 0,87 0,44±0,06 d M3R2 1,00 0,50±0,07 e M3R3 1,48 0,74±0,07 f
Nilai rata yang didapatkan pada analisa kadar abu di atas berkisar antara 0,13-0,74%. Dimana  nilai  rata-rata  tertinggi  didapat  pada perlakuan  5%  dengan  lama  waktu  ekstraksi 60  menit  sebesar  0,74%,  sedangkan  nilai rata-rata  terendah  didapat  pada  perlakuan dengan  konsentrasi  asam  klorida  1%  dengan lama waktu ekstraksi 30 menit. Nilai rata-rata tersebut  sesuai  dengan  syarat  mutu  yang  di- tentukan  oleh  BSN  (2014)  yang  menyatakan bahwasannya nilai maksimal kadar abu kola- gen maksimal 1%. Pada penelitian Rahmawati  (2020)  didapatkan  hasil  tertinggi analisa  kadar  abu  kolagen  tulang  ikan  tong- kol  dengan  menggunakan  pelarut  asam  klo- rida  yakni  sebesar  0,52%  sedangkan  yang paling  rendah  dengan  menggunakan  pelarut asam  sitrat  yakni  sebesar  0,17%.  Grafik  hu-
8.83 6.83 4.83 8.81 5.59 4.69 8.8 5.03 4.54 0 2 4 6 8 10 1 % 3 % 5 % 30 menit 60 menit 90 menit
bungan  antara  perlakuan  lama  waktu  eks- traksi  dan  konsentrasi  asam  terhadap  kadar air  kolagen  tulang  ikan  tuna  dapat  diamati pada Gambar 4.
Gambar 4. Rerata kadar abu kolagen tulang ikan tuna
Banyaknya  mineral  yang  terikat  dapat menyebabkan  jumlah  kolagen  yang  terbebas semakin  banyak  dan  menurut  Suarno et  al.
(2015)  Menyatakan  bahwasannya  asam  klo- rida  merupakan  jenis  asam  anorganik  yang mengandung mineral, sehingga ketika proses pengabuan  mineral  tersebut  tidak  ikut  ter- bakar  sehingga  mempengaruhi  nilai  kadar abu  yang  ada  pada  sampel.  Pernyataan tersebut juga didukung oleh Sudarmaji dalam Fitria  (2017)  menyatakan  bahwa  semakin rendah  kadar  abu  pada  bahan  maka  semakin tinggi  kemurniannya.  Dan  tinggi  rendahnya kadar abu suatu bahan dipengaruhi pada saat proses demineralisasi pada proses pembuatan kolagen.

## 4. Kadar protein
Berdasarkan  hasil  dari  analisis  ragam dapat diketahui bahwasanya adanya interaksi yang  nyata  antara  konsentrasi  asam  klorida dan  lama  waktu  ekstraksi.  Nilai  rata-rata kadar  protein  kolagen  tulang  ikan  tuna dengan  perlakuan  konsentrasi  asam  klorida dan  lama  waktu  ekstraksi  dapat  dilihat  pada Tabel 4.
Tabel 4. Nilai protein rata-rata Perlakuan Total Rerata M1R1 39,89 19,95±0,08 a M1R2 44,40 22,20±0,03 b M1R3 51,46 25,73±0,02 c M2R1 50,93 25,47±0,04 d M2R2 58,56 29,28±0,02 e M2R3 65,69 32,85±0,05 f M3R1 66,22 33,11±0,06 g M3R2 73,19 36,60±0,13 h M3R3 80,38 40,19±0,06 i
Rata-rata  kadar  protein  kolagen  tulang ikan  tuna  berkisar  antara  19-40%.  Perlakuan dengan nilai rata-rata tertinggi diperoleh pada konsentrasi  asam  klorida  5%  dengan  lama waktu  ekstraksi  90  menit.  Sedangkan perlakuan  dengan  nilai  rata-rata  terendah diperoleh  pada  konsentrasi  1%  dengan  lama waktu ekstraksi 30 menit.
Pada  penelitian  Tridar  (2016)  nilai rata–rata  kadar  protein  kolagen  tulang  ikan gurame  yang  tertinggi  diperoleh  sebanyak 12,3%  dengan  perlakuan  menggunakan enzimatis,  sedangkan  terendah  diperoleh dengan  perlakuan  menggunakan  pelarut kimiawi  sebesar  10,03%,  penelitian  tersebut jauh  lebih  rendah  dibandingkan  dengan penelitian  Alhan et  al (2015)  nilai  rata-rata kadar  protein  kolagen  tripang  tertinggi diperoleh  sebesar  40,54%  dengan  perlakuan yang  digunakan    ekstraksi  Asam  Asetat  3%, sedangkan  nilai  rata-rata  terendah  diperoleh sebesar  30,3%  dengan  perlakuan  yang  di- gunakan  ekstraksi  asam  asetat  1%.  Grafik hubungan  antara  perlakuan  lama  waktu ekstraksi  dan  konsentrasi  asam  terhadap kadar protein kolagen tulang ikan tuna dapat diamati pada Gambar 5.
Gambar 5. Rerata kadar protein kolagen tulang ikan tuna
0 .1 3 0 .2 8 0 .4 4 0 .2 0 .3 4 0 .5 0 .2 2 0 .4 2 0 .7 4 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 % 3 % 5 % 30 menit 60 menit 90 menit
1 9 .9 5 2 5 .4 7 3 3 .1 1 2 2 .2 2 9 .2 8 3 6 .6 2 5 .7 3 3 2 .8 5 4 0 .2 9 0 20 40 60 1 % 3 % 5 % 30 menit 60 menit 90 menit
Semakin  tinggi  konsentrasi  dan  lama waktu  ekstraksi  menyebabkan  kandungan protein semakin tinggi. Hal ini sesuai dengan Setiawati  (2009)  bahwa  banyaknya  jumlah kolagen  dipengaruhi  oleh  banyaknya  asam yang  dapat  melarutkan  garam  kalsium  dan menyebabkan  kolagen  di  dalam  ossein  ikut mengalami  peningkatan  demikian  pula  ter- hadap  peningkatan  jumlah  kolagen  yang dihasilkan  setelah  proses  ekstraksi.  Hidayat et al. (2016) konsentrasi asam yang semakin tinggi, menyebabkan kation asam yang terpe- rangkap  dalam  ossein  semakin  banyak, sehingga  pH  yang  terukur  semakin  rendah dan  hidrolisis  kolagen  akan  berlanjut  pada proses penguraian polimer kolagen.

## 5. Warna
Nilai  rata-rata  analisa  warna  kolagen tulang ikan tuna dengan perlakuan konsentrasi  asam  klorida  dan  lama  waktu ekstraksi dapat dilihat pada Tabel 5. Tabel 5. Nilai kadar abu rata-rata
Hasil penelitian ini lebih tinggi apabila dibandingkan  dengan  penelitian  Romadhon et al. (2019) pada perlakuan  tulang ikan nila dengan ekstraksi asam asetat dengan konsen- trasi 5% menghasilkan rerata nilai kecerahan (L*),  kemerahan  (a*),  kekuningan(b*)  ber- turut-turut  (76,91),  (3,57),  dan  (5,17).  Se- dangkan  pada  penelitian  Gunawan et  al. (2017)  pada  kolagen  kulit  ikan  tenggiri  de- ngan  konsentrasi  asam  asetat  5%  dengan  la- ma  waktu  ekstraksi  3  jam  menghasilkan  re- rata  nilai  kecerahan  (L*),  kemerahan  (a*), kekuningan(b*) berturut-turut (70,78), (1,14), dan (19,34). ).
Perbedaan  warna  kolagen  dipengaruhi oleh  banyaknya  pigmen  yang  terdapat  pada bahan  baku  di  mana  pigmen  tersebut  dapat dilepaskan  selama  proses  perendaman  de-
ngan  asam/  alkali,  pH  larutan  ekstraksi  ber- pengaruh  terhadap  kestabilan  warna  pigmen, asam  mampu  melarutkan  pigmen  yang  ada pada bahan sehingga semakin tinggi konsen- trasi asam dan lama waktu ekstraksi nya ma- ka  semakin  larut  pigmen  warna  kecerahan yang ada pada bahan sehingga membuat hasil ekstrak  kolagen  semakin  keruh  (Alhana  & Tarman, 2015).

## 6. Analisa keputusan
Pemilihan  perlakuan  terbaik  dari kolagen  tulang  ikan  tuna  dengan  parameter konsentrasi  Asam  Klorida  5%  dan  lama waktu  ekstraksi  90  menit  didasarkan  pada standar mutu kolagen SNI 8076:2014 dengan parameter  utama  antara  lain  kadar  air,  kadar abu,  serta  parameter  pendukung  antara  lain kadar protein, analisis warna,. Nilai keseluruhan  yang  didapat  menggunakan metode degarmo. Perlakuan terbaik selanjutnya  dilakukan  analisis  gugus  fungsi kolagen dengan menggunakan FT-IR (Spektrofotometer  Fourier  Transform  Infra Red) dan  Morfologi  Kolagen  menggunakan SEM (Scanning Electron Microscope).

## 7. Analisis morfologi kolagen
Hasil  pengamatan  morfologi  kolagen menggunakan  SEM  disajikan  pada  gambar. Pada  analisis  morfologi  kolagen  perlakuan terbaik  dari  konsentrasi  asam  5%  dengan lama waktu ekstraksi 90 menit dibandingkan dengan  Kontrol  atau  kolagen  ikan  yang beredar  dipasaran.  Analisis  morfologi  ko- lagen  tulang  ikan  tuna  dibandingkan  dengan kontrol dapat dilihat pada Gambar 6.
Gambar  6.  Morfologi  kolagen  tulang  ikan  tuna dan kontrol P.Terbaik 500x Kontrol 200x P.Terbaik Kontrol 500x
Hasil pengukuran partikel yang didapat,  pada  perlakuan  terbaik  memiliki panjang  14,5µm  sedangkan  untuk  kontrol memiliki  ukuran  sebesar  124µm    pada  Pada gambar  tersebut  dapat  diamati,  bentuk partikel  yang  terlihat  seperti  bulatan  dengan sedikit berpori pada permukaannya. Menurut (Romadhon et  al .,  2019)  Adanya  pori  yang terlihat  pada  kolagen  tulang  ikan  tuna  juga dapat    disebabkan  adanya  ruang  antara  serat kolagen.  Dapat  diketahui  kedua  kolagen tersebut  memiliki serabut-serabut putih pada permukaannya  (Astina et  al. ,  2016)  me- nyatakan bahwasanya struktur ini merupakan protein  yang  mengalami  ikatan  silang ( crosslink )  dengan  protein  lain.  Ikatan crosslink ini  akan  menyebabkan  protein saling  berikatan  dan  membentuk  agregat sehingga  struktur  permukaan  pada  kolagen memiliki serabut-serabut putih.

## 8. Analisis gugus fungsi kolagen
Analisis  gugus  fungsi  kolagen  tulang ikan  tuna  dilakukan  pada  perlakuan  terbaik yaitu perlakuan asam klorida konsentrasi 5% lama  ekstraksi  90  menit.  Analisis  gugus fungsi  kolagen  dilakukan  dengan  meng- gunakan alat FT-IR (Spektrofotometer Fourier Transform Infra Red) dan hasil yang diperoleh berupa grafik serapan gugus fungsi kolagen.
Amida  A  menunjukkan  keberadaan gugus  fungsi  NH  yang  dekat  dengan  ke- beradaan  ikatan  hidrogen  sehingga  muncul pada  panjang  gelombang  3300-3500  cm-1. Hasil  FTIR  pada  wilayah  serapan  tersebut didapatkan  puncak  serapan  Amida  A  pada kolagen  tulang  ikan  tuna  berada  di  angka 3362,52  cm-1  yang  mana  menunjukkan Vibrasi Stretching NH  dari  gugus  amida yang  berikatan  dengan  ikatan  hidrogen  dan OH dari hidroksi  prolin (Singh, 2011). Hasil pengujian gugus fungsi kolagen dapat dilihat pada Gambar 7.
Gambar 7. Analisis FTIR kolagen tulang ikan tuna
Amida  B  menandakan  keberadaan gugus  fungsi  CH,  sehingga  muncul  pada panjang gelombang 2915-2935, Dimana pada hasil  yang  diperoleh  pada  wilayah  serapan tersebut didapatkan puncak serapan Amida B
pada  kolagen  tulang  ikan  tuna  berada  di angka 2935,25 cm-1.
Sementara  daerah  Amida  I  me- nunjukkan  adanya  gugus  C=C  yang  meru- pakan  struktur  sekunder  protein,  sehingga muncul  pada  panjang  gelombang  1600-1690
(Singh et al. , 2011). Pada hasil analisis gugus fungsi  kolagen  didapatkan  nilai  puncak serapan  berada  di  angka  1626,46  cm-1. Daerah Amida II menunjukkan adanya ikatan NH  sehingga  muncul  pada  panjang  gelom- bang  1480-1575cm-1(Singh et  al. ,  2011). Dimana  hasil  yang  didapatkan  pada  analisis FTIR  kolagen  tulang  ikan  tuna  nilai  puncak serapan berada pada angka 1517,14 cm-1 dan Amida  III  menunjukkan  adanya  ikatan  NH pada  struktur  heliks  kolagen  (Singh et  al. , 2011), sehingga muncul pada panjang gelom- bang  1229-1301  cm-1  dimana  hasil  yang  di- dapatkan  pada  analisis  FTIR  kolagen  tulang ikan  tuna  puncak  serapan  nya  berada  pada angka 1235,52cm-1

## KESIMPULAN
Berdasarkan  dari  hasil  penelitian  di atas dapat disimpulkan bahwa:
1. Hasil  penelitian  diperoleh  perlakuan terbaik yang didapatkan pada konsentrasi asam  klorida  5%  dan  lama  waktu ekstraksi 90  menit memiliki  nilai rendemen  sebesar  21,05%,  kadar  air sebesar 2,69%, kadar abu sebesar 0,27%, nilai  pH  7,23,  kadar  protein  sebesar 40,19%,  viskositas  3,38cP,  dan  Warna 75,31.
2. Hasil identifikasi FTIR didapatkan puncak-puncak serapan kolagen Amida A berada  pada  puncak  serapan  3362,52, Amida  B  berada  pada  puncak  2935,25, Amida  I  berada  pada  puncak  serapan 1626,46,  Amida  II  berada  pada  puncak serapan  1517,14  dan  Amida  III  berada pada puncak serapan 1235,52.

## SARAN
Hal  yang  perlu  dilakukan  untuk penelitian  lebih  lanjut  yakni  diperlukannya proses  pemurnian  hasil  kolagen  meng- gunakan  dialisis  membran  untuk  memas- ktikan  hasil  kolagen  kering  sudah  terpisah dengan protein non kolagen lainya dan untuk mengetahui  apakah  kolagen  sudah  layak untuk di konsumsi atau tidak

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  dapat  dilakukan  dengan baik atas bantuan rekan-rekan keluarga mau- pun  teman-teman  terdekat  saya  saat    berku- liah  di  jurusan  Teknologi  Pangan.  Saya  juga berterima kasih kepada pembimbing saya ibu Dr.,  Dra.  Jariah,  MP.  yang  selalu  mem- berikan  bimbingan  dan  arahan  sehingga  pe- nelitian ini dapat terselesaikan.

## DAFTAR PUSTAKA
Alhana, S.P., & Tarman, K. (2015). Ekstraksi dan  karakterisasi  kolagen  dari  daging teripang  gamma. Jurnal  Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia , 18 (2), 150- 161.
Astiana,  I.,  Nurjanah.,  ,  &  Tati  N.  (2016) Karakteristik  kolagen  larut  asam  dari kulit  ikan  ekor  kuning. Jurnal  Intitute Pertanian Bogor, 2(3),44-49
Badan  Standardisasi  Nasional.  (1995).  SNI 06-3735-1995 : Standar Mutu Kolagen . Jakarta:  Badan  Perhitungan  Statistik.
Retrived from https://pesta.bsn.go.id/produk/detail/13
176-sni80762020
Elango,  J.,  Robinson,  J.,  Zhang,  J.,  Bao,  B., Ma, N., de Val, J. E. M. S., & Wu, W.
(2019).  Collagen  peptide  upregulates osteoclastogenesis  from  bone  marrow mesenchymal stem cells through MAPK-Runx2. Cells , 8 (5),
446. https://doi.org/10.3390/cells8050446.
Fitria, D.L. (2017). Pengaruh lama perendaman  dalam  naoh  terhadap produksi  gelatin  tulang  ayam  broiler (gallus  domesticus). [Thesis].  Malang: Universitas  Islam  Negeri  Maulana Malik Ibrahim Malang.
Havez,  J.,  Lista,  A.,  &  Maffozo,  M.  (2020).
Fish collagen
extraction, characterization,  and  applications  for biomaterials  engineering. Multidisiplin Digital  Publishing  Institute .  12(10), 2230. https://doi.org/10.3390/polym 12102230
Hidayat,  G.,  Eko,  N.D.,  &  Laras  R.(2016). Karakteristik  gelatin  tulang  ikan  nila
dengan  hidrolisis  menggunakan  asam phospat  dan  enzim  papain. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia , 19 (1), 33. International Trade
Center. (2016).
Trademap list of supplying markets for a  product  imported  by  united  states  of america .  Washington:  ITC.  Retrieved from https://intracen.org/.
Kementerian Kelautan dan Perikanan.
(2007).  Indonesian  fisheries  statistics index. 2006. Kementerian Kelautan dan Perikanan. Jakarta: KKP.
Liu,  T.,  Dai,  H.,  Ma,  L.,  Yu,  Y.,  Tang,  M., Li,  Y.,  ...  &  Zhang,  Y.  (2019). Structure of Hyla rabbit skin gelatin as affected by microwave-assisted extraction. International  Journal  of Food Properties , 22 (1), 1594-1607. Lombu,  F.  V.,  Agustin,  A.  T.,  &  Pandey,  E. V..  (2015).  Pemberian  konsentrasi asam  asetat  pada  mutu  gelatin  kulit ikan  tuna. Jurnal  Media  Teknologi Hasil Perairan , 3 (2), 25-28
Mala,  N.,  M.,  Hizbullah,  H.  H.,  Karnia,  E., Kusumaningtyas,  E.,  &  Ochiai,  Y. (2020). Characterization and antioxidant activity of collagen, gelatin, and the derived peptides from yellowfin  tuna  (Thunnus  albacares) skin. Marine drugs , 18 (2), 98.
Rafiee,  Z.,  Jafari,  S.  M.,  Alami,  M.,  & Khomeiri,  M.  (2011).  Microwave- assisted extraction of phenolic compounds  from  olive  leaves;  a comparison with maceration. The Journal of Animal
& Plant Sciences , 21 (4), 738-745.
Rahmawati,  R.,  &  Nurjanah,  S.  (2020). Pengaruh  konsentrasi  enzim  papain terhadap  mutu  gelatin  bubuk  dari tulang  dan  cakar  ayam. Konversi , 9 (12),  39-52.  https://doi.org/10.24853/ konversi.9.1.14
Ramli,  L.,  Natsir,  H.,  Dali,  S.,  &  Danial,  S.. (2019).  Collagen extraction from bone of  lutjanus  sp.  and  toxicity  assay Indonesia  Chimica  Acta.  15 (9),  25. https://doi.org/10.20956/ica.v12i1.5925
Romadhon, R., Darmanto, Y.S., & Kurniasih,
R.A. (2019). Karakteristik kolagen dari tulang, kulit, dan sisik ikan nila. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia , 22(2), 403-410
Sembiring, T. E. S., Reo, A. R., Onibala, H.,
Montolalu,  R.  I.,  Taher,  N.,  Mentang, F.,  &  Damongilala,  L.  J.  (2020). Ekstraksi  kolagen  tulang  ikan  tuna (thunnus  sp)  dengan  asam  klorida. Media  Teknologi  Hasil  Perikanan , 8 (3), 107-110. https://doi.org/10.35800/ mthp.8.3.2020.29573
Setiawati,  I.  H.  (2009). Karakterisasi  mutu fisika  kimia  gelatin  kulit  ikan  kakap merah  (lutjanus  sp)  Hasil  Proses Perlakuan  Asam [Skripsi].  Bogor:
Intitut Pertanian Bogor.
Singh,  P.,  Benjakul,  S.,  Maqsood,  S.,  &
Kishimura,  H.  (2011).  Isolation  and characterization  of  collagen  extracted from  the  skin  of  striped  catfish (Pangasianodon hypophthalmus) . Food Chemistry, 12 (4), 97-105.
Suwarno,  S.,  Ratnani,  R.  D.,  &  Hartati,  I. (2015).  Proses  pembuatan  gula  invert dari sukrosa dengan katalis asam sitrat, asam tartrat, dan asam klorida. Majalah Ilmiah Momentum,11 (2),99 -103
Thalib,  A.  (2015). Efek  tepung  tulang  ikan madidihang (thunnus albacares bonnaterre)  terhadap  profil  kalsium dan fosfor serta gambaran histopatologi  pada  tikus  ovariektomi .
Malang: Universitas Brawijaya
Tridhar, N.A. (2016). Perbandingan produksi  kolagen  dari  sisik  dan  tulang ikan  gurami  (osphronemus  gouramy) secara  kimia  dan  enzimatis .  [Skripsi]. Bandung: Universitas Pasundan
Ward, A. G. and Courts. (1977.) The science and  technology  of  gelatin. Academic Press . Zhang,  D.,  Wu,  X.,  Chen,  J.,  &  Lin,  K. (2018).  The  development  of  collagen based  composite  scaffolds  for  bone regeneration. Kaei  Chinese  Roots Global  Impact . 3 (1),  129-138.  https:// doi.org/10.1016/j.bioactmat.2017.08.00