Research Article

## UNPAD

## Formulation and Characterization Liposome of Oxcarbazepine
Dina P. Wijaya 1 *, Budi Untari 1 , Najma A. Fithri 1 , Herlina Herlina 1 , Putri S. Rahayu 1 1Jurusan Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sriwijaya, Sumateras Selatan, 30802, Indonesia
Submitted 08 June 2021; Revised 14 June 2021; Accepted 03 November 2022; Published  30 June 2023 *Corresponding author: dinapermatawijaya@unsri.ac.id

## Abstract
Oxcarbazepine  (OXC)  was  used  as  first  line  therapy  or  additional  therapy  for  treatment  of  partial and secondary of seizures. The penetration of OXC into nasal mucosa can be enhanced by forming liposome. This research has the aim to prepare and characterize iposome laoding OXC. The OXC liposome formula was composed by using soya lechitin and cholesterol with various amount using thin film hydration method. Characterization by determining the encapsulation efficiency (%EE), pH, viscosity, particle size, polydispersity of index, zeta potential, and in vitro release. The liposome of OXC was also analyzed for its stability based on heating-coling cycle method. The proportion of best formula was obtained at the amount of cholesterol of 42,11 mg yield %EE of 92,63%, pH of 8,47, viscosity of 1,10 cP, and decreased amount of OXC in stability test of 0,34%. The results of particle diameter were 579 nm, polydispersity index (PDI) of 0,34, and zeta potential of -99,38 mV. The in vitro release of the liposome of OXC was studied and compared with OXC. The result of in vitro release liposome OXC (F2) ahowed increase (62,26%) than (41,97%).
Keywords: liposome, oxcarbazepine, cholesterol, PDI, encapsulation.

## Formulasi dan Karakterisasi Sediaan Liposom Okskarbazepin

## Abstrak
Okskarbazepin (OXC) digunakan pengobatan lini pertama atau pengobatan tambahan untuk kejang tipe parsial dan sekunder. Penetrasi OXC melalui mukosa nasal dapat ditingkatkan dengan pembentukan liposom. Penelitian ini bertujuan untuk preparasi dan karakterisasi liposom OXC. Formula liposom OXC  menggunakan  soya  lesitin  dan  kolesterol  dengan  variasi  jumlah  dan  menggunakan  metode hidrasi laps tipis. Karakterisasi yang diukur adalah efisiensi enkapsulasi (%EE), pH, viskositas, ukuran partikel, indeks polidispersitas, zeta potential, dan uji pelepasan secara in vitro . Liposom OXC dianalisi juga stabilitas dengan meggunakan metode heating-cooling . Formula liposom terbaik dengan jumlah kolesterol 42,11 mg (F2) menghasilkan %EE sebesar 92,63%, pH sebesar 8,47, viskositas sebesar 1,10 cP dan jumlah penurunan kadar OXC pada uji stabilitas sebesar 0,34%. Hasil diameter partikel liposom OXC sebesar 579 nm, dengan indeks polidispersitas sebesar 0,34, dan zeta potential sebesar -99,38 mV. Pelepasan OXC secara in vitro dari liposom dibandingkan dengan OXC murni. Hasil pelepasan secara in vitro liposom OXC (F1) menunjukkan meningkat yaitu (62,26%) dibandingkan OXC murni (41,97%).
Kata Kunci: liposom, okskarbazepin, kolesterol, PDI, enkapsulasi.

## 1.  Pendahuluan
Epilepsi  merupakan  gangguan  saraf kronik  dengan  ciri  timbulnya  gejala-gejala yang  dating  dalam  serangan  berulang secara  spontan  yang  disebabkan  lepasnya muatan  listrik  abnormal  sel-sel  saraf  otak yang  bersifat  reversibel.  Data World Health Organization (WHO) menunjukkan epilepsy menyerang 70 juta dari penduduk. Prevalensi penderita epilepsi di Indonesia berkisar antara 0,5-4%  dengan  rata-rata  prevalensi  epilepsi 8,2 per 1000 penduduk. Angka ini tergolong cukup  tinggi  dibandingkan  dengan  negara berkembang lainnya di dunia1.
Salah satu terapi epilepsi yang digunakan untuk pilihan pertama adalah okskarbazepin. Aktivitas farmakologi okskarbazepin diketahui  terjadi  terutama  melalui  metabolit 10-monohidroksi  (10-MHD).  Studi  in  vivo menunjukkan blockade yang  diinduksi MHD  dari  saluran  natrium  (menghambat kanal natrium) yang peka terhadap tegangan, menghasilkan  stabilisasi membrane neuron yang tinggi, penghambatan pelepasan neuron berulang,  dan  berkurangnya  propagasi impuls  sinaptik  sehingga  mengaktivasi kanal  kalsium2.  Kelemahan  okskarbazepin oral  yaitu  kelarutan  rendah  sehngga membatasi  efektivitasnya.  Okskarbazepin termasik  klasifikasi  BCS  ( Biopharmaceutics Classification  System )  kelas  II  dengan kelarutan  dalam  ar  sebesar  8,40  mg/100  ml dan nilai log P sebesar 1,2043.
Gangguan saraf kronik yang terjadi pada epilepsi  membutuhkan  sistem  penghantaran obat yang cepat dan segera untuk mencapai sistem  saraf  pada  otak.  Rute  intranasal merupakan  salah  satu  rute  pengobatan yang  membantu  penghantaran  obat  untuk mencapai  sistem  saraf  pusat  dengan  cepat. Efikasi okskarbazepin yang diberikan secara intranasal  dapat  ditingkatkan  dengan  cara diformulasikan  ke  dalam  liposom  dengan menggunakan  soya  lesitin  dan  kolesterol sebagai  pembentuk lipid bilayer .  Kolesterol digunakan  untuk  memperbaiki  rigiditas  dari membrane  liposom,  menstabilkan bilayer , dan mengontrol permeabilitas membran4. Rute  intranasal  merupakan  rute penghantaran agen terapetik dari rongga nasal
ke otak secara langsung. Rute ini melibatkan rute  ekstraseluler  dan  intraseluler,  yang melibatkan  organ  olfaktori  dan  pernapasan dari  rongga  hidung5.  Senyawa  aktif  dapat melewati  sawar  darah  otak  melalui  rute intranasal dan memasuki sistem saraf pusat. Sawar  darah  otak  hanya permeable untuk molekuk  lipofilik  dengan  berat  molekul (Mw) kurang dari 600 Da6. Keuntungan rute intranasal  yaitu  luas  permukaan  yang  besar untuk  absorpsi  obat,  kepatuhan  yang  baik, bioavaibilitas  yang  baik,  dapat  menghindari gastrointestinal yang dapat merusak senyawa aktif  yang  tidak  satbil,  sistem  penghantaran yang langsung ke otak7.
Pemilihan  liposom  yaitu  merupakan salah  satu  bentuk  sistem  penghantaran  obat yang  aman  dan  efektif  sehingga  liposom dapat membantu meningkatkan penetrasi obat melalui  mukosa  nasal  dan  masuk  ke  dalam sistem  saraf  pusat.  Liposom  merupakan vesikel yang terdiri dari membran fosfolipid lapis  ganda  yang  mengenkapsulasi  atau menjerat  zat  aktif  di  dalamnya.  Liposom merupakan  sistem  penghantaran  yang  dapat membawa  obat  dengan  sifat  hidrofilik  dan hidrofobik.  Komposisi  utama  dari  liposom terdiri dari fosfolipid, kolesterol, kloroform, dan  zat  aktif8.  Fosfolipid  yang  digunakan dapat  berasal  dari  alam  dan  atau  sintesis. Fosfolipid  melakukan  peran  yang  penting dengan  sifat  yang  ampifilik  dan self- assembly untuk mengenkapsulasi suatu agen terapeutik9.  Permeabilitas  liposom  sangat berperan  penting  dalam  meningkatkan efisiensi enkapsulasi senyawa obat hidrofilik di dalam struktur liposom10.
Penggunaan  jumlah  atau  konsentrasi kolesterol  dapat  berpenagruh  terhadap kestabilan  membran bilayer liposom. Kolesterol  banyak  digunakan  sebagai penyusun  liposom  dengan  memperbaiki rigiditas  atau  fluiditas  dari membrane bilayer liposom  dan  dapat  mengontrol permeabilitas  membran  liposom.  Liposom yang  diformulakan  tanpa  kolesterol  akan berinterasi cepat dengan albumin, transferin, dan  makroglobulin 11 .  Protein  akan  menarik fosfolipid dari liposom dan akan menyebakan ketidakstabilan  fisik  dari  liposom  sehingga
penggunaan  kolesterol  pada  liposom  dapat mengurangi interasi tersebut12.
Pada  penelitian  ini,  kami  melakukan formulasi  dan  karakterisasi  liposom  dari okskarbazepin.  Evaluasi  yang  dilakukan untuk  menentukan  formula  terbaik  adalah persen  efisiensi  enkapsulasi,  pH,  viskositas, dan  stabilitas  okskarbazepin.  Evaluasi yang  dilakukan  untuk  menentukan  formula terbaik  adalah  persen  efisiensi  enkapsulasi, pH, viskositas, dan stabilitas okskarbazepin. Formula terbaik dikarakerisasi berupa ukuran partikel, indeks polidispersitas, zeta potensial, dan  pelepasan  secara in vitro .  Pelepasan in vitro liposom  okskarbazepin  menggunakan Franz Diffusion Cell 13 .
2.  Metode 2.1.  Alat
Spektrofotometer  UV-Vis  (Shimadzu UV-1700), rotary evaporator (SCO), pengaduk magnetik (IKA C-MAG HS 4), pipet mikro  (Dragonlab),  sentrifugator  (Hettich Universal 320R), PSA (Horiba Scientific SZ- 100), Franz  diffusin  cell (Prima  Medika), vortex (Corning,  LSETM),  viskometer Ostwald (PSL  Kinematic Viscometer ),  dan peralatan gelas (Pyrex dan Iwaki).
2.2.  Bahan Okskarbazepin  (PT.  Mersi  Farma), soya  lesitin  (PT.  Dira  Sonita),  kolesterol (PT. Dira Sonita), Kloroform  (Pt. Brataco), natrium  hidroksida  (PT.  Brataco),  kalium dihidrogen fosfat (PT. Brataco), akuades (PT. Bratachem), metanol p.a (Pt. Brataco).
2.3.  Prosedur 2.3.1. Formulasi Liposom Okskarbazepin Pembuatan  liposom  okskarbazepin dilakukan dengan metode hidrasi lapis tipis. Liposom dibuat dengan cara mencampurkan kolesterol dan soya lesitin dengan komposisi masing-masing  formula.  Liposom  dibuat dengan  mencampurkan  kolesterol  dan  soya lesitin  dengan  perbandingan  yang  dapat dilihat pada tabel 1. Kemudian ditambahkan kloroform sebanyak 5 ml. Setelah larut, larutan dipindahkan  ke  dalam rotary evaporator dengan  suhu  45 o C.  Proses  ini  dilakukan
dengan penyemprotan gas nitrogen kemudian okskarbazepin  dilarutkan  ke  dalam  PBS  pH 7,4 sebanyak 10 ml kemudian di vortex selama 10 menit dan kemudian disonikasi pada suhu 40 o C  selama  30  menit.  Lapisan  lipid  film diambil dan suspense liposom disimpan pada suhu 4 o C sebelum dilakukan pengujian 14 .
2.3.2. Karakterisasi Liposom Okskarbazepin % Efisiensi Enkapsulasi (%EE) Suspensi liposom okskarbazepin disentrifugasi  dengan  kecepatan  3000  rpm selama 10 menit. Kemudian supernatan yang terbentuk  disentrifugasi  dengan  kecepatan selama 30 menit. Kemudian supernatan diukur dengan  menggunakan  spektrofotometer UV-Vis 15 .  Penentuan  efisiensi  enkapsulasi ditentukan dengan rumus berikut:
16
Analisis pH Liposom Okskarbazepin: Pengujian  pH  liposom  dilakukan  dengan menggunakan pH meter . Pengujian dilakukan dengan cara mencelupkan elektroda dari pH meter ke dalam sediaan. Proses ini dilakukan selama  30  detik,  kemudian  catat  pH  yang muncul pada alat pH meter 17 . Analisis Viskositas Liposom OXC: Pengujian viskositas liposom OXC dilakukan dengan  menggunakan viscometer Ostwald . Sediaan liposom OXC dimasukkan ke dalam alat viscometer sampai  garis  bawah  dari alat.  Setelah  dibandingkan  waktu  alir  yang dihasilkan dengan akuades yang telah diketahui viskositasnya.  Perhitungan  viskositas  dapat dilakukan  dengan  persamaan  dibawah  ini:
17
Analisis Stabilitas: Pengujian stabilitas liposom  OXC  dilakukan  menggunakan metode heating cooling cycle dengan menyimpan liposom OXC di lemari pendingin dengn suhu 4 o C selama 24 jam dan kemudian disimpan pada oven suhu 40 o C selama 24 jam dan merupakan 1 siklus. Pengujian dilakukan dengan sebanyak 6 siklus 16 . Stetlah pengujian dilakukan  pengamatan  pada  kadar  OXC dalam liposom.
Ukuran Partikel, PDI, Zeta Potensial: Penentuan  ukuran  partikel,  PDI,  dan  zeta potensial  dilakukan  dengan  menggunakan
alat  PSA  ( Particle  Size  Ananlyzer )  melalui metode dynamic light scattering (DLS). Sampel  formula  dimasukkan  ke  dalam kuvet  PSA,  lalu  cahaya  monokromatik akan  ditembakkan  oleh  instrument,  hasil cahaya  yang  dibiaskan  pada  sudu  173 o dan detektor  akan  mengungkap  hasil  pembiasan cahaya  untuk  menghasilkan  zeta  potensial, sedangkan  hasil  penghamburan  cahaya pada sudut 90 o akan ditangkan oleh detektor sehingga  dapat  menghasilkan  diameter  dan indeksi polidispersitas 18 . Analisis Uji Pelepasan Secara In Vitro: Penentuan  difusi  liposom  OXC  dialkuakn dengan  menggunakan Franz  Diffusion  Cell . Suhu yang digunakan adalah 37±0,5 o C dengan kecepatan  pengadukan  100  rpm.  Kemudian uji  difusi  menggunakan  membran  mukosa hidung  kambing  dan  menggunakan  dapar fosfat  pH  7,4.  Sampling  dilakukan  dengan mengambil  2  ml  sampel  kemudian  wktu pengukuran sebagai berikut; 0, 5, 10, 15, 30, 45, 60, 90, 120, 180, 240, 300, 360 menit dan 24 jam. Sampel yang diambil kemudian diukur dengan menggunakan spektrofotometer UV- Vis dengan menggunakan Panjang gelombang 254 nm 15 .

## 3.  Hasil dan Pembahasan
Penetuan  persen  efisiensi  enkapsulasi dilakukan  dengan  cara  memisahkan OXC  yang  tidak  terenkapsulasi  dan  yang terenkapsulasi  dengan  cara  disentrifugasi. Hasil %EE dapat dilihat pada tabel 2. Persen efisiensi enkapsulasi terjadi penurunan persen EE  dengan  bertambahnya  kolesterol  hal  ini dapat  dimungkinkan  terjadinya  salting  out
OXC  dari  membran  liposom  karena  jumlah kolesterol semakin bertambah. Hal ini dapat menyebabkan OXC yang ada didalam liposom keluar karena afinitas kolesterol lebih tinggi dibandingkan dengan OXC 19 . Pentuan pH liposom OXC dapat dilihat pada  tabel  3.  pH  sediaan  yang  diharapkan yaitu  dnegan  rentang  4,5-6,5.  Rentang  pH ini  aman  jika  liposom  OXC  diberikan  pada rute  intranasal.  Berdasarkan  tabel  3  maka dihasilkan pH yang semakin menurun dengan adanya  jumlah  kolesterol  yang  semakin meningkat. Hasil yang didapatkan pada ketiga formula liposom adalah lebih dari 7 yang tidak ada  yang  masuk  rentang  syarat  penggunaan untuk  intranasal.  Hasil  pH  liposom  dapat disesuaikan  untuk  mendapatkan  syarat  pH aman  untuk  penggunaan  intranasal  dengan penambahan asam sehingga pH yang didapat sekitar 4,5-6,5.
Pengujian  viskositas  dilakukan  untuk mengetahui  kemampuan  sediaan  untuk mengalir.  Semakin  tinggi  viskositas  maka akan semakin besar tenaga yang dibutuhkan untuk  mengalirkan  sediaan  liposom  OXC. Hasil  pengujian  viskositas  formula  liposom OXC  dapat  dilihat  pada  tabel  4.  Viskositas yang  didapatkan  lebih  dari  viskositas  air sehingga  dapat  meningkatkan  daya  lekat liposom pada saat penghantaran.
Stabilitas  sediaan  liposom  penting dilakukan  karena  akan  melihat  ketahanan liposom terhadap lingkungan. Meningkatnya suhu  dapat  menyebabkan  peningkatan  laju reaksi  karena  semakin  cepat  pergerakan partikel  maka  akan  semakin  cepat  pula tumbukan  antar  partikel  dan  laju  reaksi 20 .
Tabel 1. Formula Liposom Okskarbazepin
Formula Komponen Liposom Okskarbazepin (mg) Kolesterol (mg) Soya lesitin (mg) Kloroform (ml) 1 50 42,11 379 5 2 50 82,22 379 5 3 50 126,22 379 5
Tabel 3. pH Liposom Okskarbazepin
Formula Rata-rata (%)±SD %CV 1 8,45±0,0435 0,51584 2 7,65±0,0057 0,07543 3 7,26±0,0264 0,36493 Formula Rata-rata (%)±SD %CV 1 92,63±0,0691 0,07464 2 83,65±0,0914 0,10934 3 75,84±0,0914 0,12059 Tabel 2. Persen  Efisiensi  Enkapsulasi  Liposom
Okskarbazepin
Gambar 1. Persen Difusi Liposom Okskarbazepin (OXC) dan Okskarbazepin (OXC) murni
Reaksi  kimiawi  ini  dapat  menyebabkan obat  terdegradasi  sehingga  kadar  obat  yang berada  dalam  sediaan  menjadi  berkurang 2 . Hasil  penurunan  kadar  pada  pengujian stabilitas  liposom  OXC  dapat  dilihat  pada tabel  5.  Berdasarkan  tabel  hasil  stabilitas didapat  bahwa  semakin  banyak  jumlah kolesterol maka penuruan kadar OXC dalam liposom  semakin  kecil  karena  kolesterol akan berikatan dengan soya lesitin sehingga memperkuat liposom. Dengan bertambahnya jumlah  kolesterol  yang  digunakan  maka menyababkan peningkatan rigiditas liposom.
Formula  terbaik  dalam  penelitian  ini ditentukan  dengan  menganalisis  pengujian %EE dan stabilitas sediaan karena merupakan parameter  yang  sangat  berpengaruh  dengan potensi  dari  liposom  OXC.  Berdasarkan parameter tersebut maka formula 1 merupakan formula terbaik karena %EE sebesar 92,63% dan uji stabilitas yang mengukur penurunan kadar  OXC  sebesar  0,34%.  Walaupun nilai  penurunan  kadar  formula  1  lebih besar  dibandingkan  dengan  yang  lainnya namun  apabila  semakin  banyak  jumlah kolesterol  yang  ditambahkan  maka  sifat rigiditas  liposom  semakin  tinggi  sehingga liposom  sulit  pecah  dan  kurang  fleksibel untuk  menembus  membran  mukosa.  Persen efisiensi enkapsulasi yang semakin mendekati 100%  menunjukkan  bahwa  potensi  liposom untuk  mengenkapsulasi  OXC  semakin besar  sehingga  penghantaran  OXC  dengan
menggunakan liposom akan lebih baik. Formula  1  yang  merupakan  formula terbaik dikaraktersasi verupa ukuran partikel, indekspolidispersitas,  dan  zeta  potensial. Karakterisasi dilakukan dengan menggunakan PSA.  Ukuran  partikel  yang  didapatkan  dari liposom  OXC  formula  1  adlah  579  nm. Rentang indeks polidispesitas berkisar anatar 0  sampai  1,  semakin  mendekati  0  maka partikel  yang  didapatkan  semakin  seragam. Indeks  polidispersitas  yang  dihasilkan  dari liposom  OXC  formula  1  adalah  0,34  yang berarti  partikel  yang  dihasilkan  cenderung seragam  karena  ada  34%  partikel  liposom OXC  yang  tidak  seragam.  Zeta  potensial juga  dikarakterisasi  untuk  formula  1 liposom  OXC,  zeta  potensial  menunjukkan muatan  permukaan  dari  partikel  liposom yang  dihasilkan.  Zeta  potensial  yang  stabil menunjukkan  nilai  ±25  mV 21 .  Nilai  zeta potensial  yang  didapatkan  oleh  liposom OXC adalah -99,39 mV, muatan negatif yang dihasilkan  dipengaruhi  oleh  komponen  dari liposom yaitu gugus fosfat dari soya lesitin. Formula liposom OXC terbaik dilakukan uji  difusi  yang  bertujuan  untuk  mengetahui jumlah  OXC  yang  dapat  berpenetrasi melalui  membran  mukosa.  Hasil  uji  difusi liposom OXC dan OXC murni dapat dilihat pada  gambar  1.  Hasil  uji  persen  terdifusi menunjukkan  bahwa  formula  terbaik  dari liposom OXC lebih besar jika dibandingkan dengan OXC murni. Persen terdifusi formula
Tabel 5. Persen Penurunan Kadar Okskarbazepin (Uji Stabilitas)
Formula Rata-rata (%)±SD %CV 1 0,34±0,0984 28,5647 2 0,11±0,0412 34,5665 3 0,10±0,0454 43,1731 Tabel 4. Viskositas Liposom Okskarbazepin Formula Rata-rata (%)±SD %CV 1 1,10±0,0800 7,31093 2 1,03±0,0730 7,12248 3 1,08±0,0900 8,33333
terbaik OXC sebesar 62,26% dan untuk OXC murni  sebesar  41,9%. Vesikel  liposom  pada formula  1  yang  berfungsi  untuk  membuak tight  junction  yang  merupakan  penghalang dalam  menembus  membran  sel  sehingga memudahkan  masuknya  liposom  masuk  ke dalam membrane sel mukosa, tight junction dapat  menutup  kembali  apabila  kontak antara tight junction dan membran sel tidak berkontak 1 .
4.  Kesimpulan Penelitian ini menghasilakn komponen pembentuk  liposom  yaitu  kolesterol  dapat mempengaruhi  %EE  dan  stabilitas  yang dilihat  penurunan  kadar  OXC.  Jumlah kolesterol pada formula liposom OXC trbaik sebanyak  42,11  mg  dengan  persen  efisiensi eknkapsulasi  sebesar  92,63%  dan  persen penurunan  kadar  pada  uji  stabilitas  sebesar 0,34%. Liposom OXC menghasilkan persen terdifusi  yang  lebih  tinggi  dibandingkan dengan  OXC  murni  yaitu  sebesar  62,26% sedangkan OXC murni sebesar 41,9%.
Daftar Pustaka 1.  Brodie  MJ,  French  JA.  Management of  epilepsy  in  adolescents  and  adults.
Handbook of Pharmacology:  A Pathophysiology  approach  7th  Edition, McGrawa-Hill, USA. 2000.
2.  Shorvon  S.  Oxcarbazepine:  a  Review, Seizure, 9:75-79.2000
3.  Douroumis D, Fahr A. Nano and micro- particulate  formulations  of  poorly  water soluble drugs by using a novel optimized technique. Eur J Pharm Bipharm, 63:173- 175. 2016.
4.  Shukla  JB,  Patel  SJ.  Formulation  and evaluation  of  self  micro  emulsifying system candesartan cilexetil. Int J Pharm Sci, 2(4): 2-5. 2010.
5.  Woensel  MV,  Wauthoz  N,  Rosiere R,  Amighi  K,  Mathieu  V,  Lefranc  F. Formulations  for  intransal  delivery  of pharmacological  agents  to  combat  brain disease:  A  new  opportunity  to  tackle GBM.  Cancers  Journal.  5:  1020-1048. 2013.
6.  Parvathi  M.  Intranasal  drug  delivery  to
brain: An overview. Internastional Journal of Research Pharmacy Chem. 2(3): 889- 894. 2012.
7.  Ghori  MU,  Mahdi  MH,  Smith  AM, Conway  BR.  Nasal  drug  delivery systems: An overview. American Journal of Pharmacological Sciences. 3(5): 110- 119. 2015
8.  Jufri M. Liposome drug delivery system. Pharmaceutical  sciences  and  research. 1(2); 59-68. 2012.
9.  Eloy JO, Claro SM, Petrilli R, Barcellos JP,  Lee  RJ,  Marchetti  JM.  Liposomes as  carriers  of  hydrophilic  small molecule  drugs:  strategies  to  enhance encapsulation and delivery. Colloids Surf B: Biointerfaces. 123C: 345-363. 2014.
10. Khan  I,  Elhissi  A,  Shah  M,  Alhnan, MA, Ahmed W. Liposome-based carrier systems and devices used for pulmonary drug  delivery.  Wooodhead  Publishing Limited, United Kingdom. 395-443. 2013 11. Bhuchard G. Chitosan for gene delivery. Adv Drug Deliv Rev, 52:145-150. 2001 12. Sashi K, Satinder K, Bharat P. A complete review  on:  Liposomes.  International Research  Journal  of  Pharmacy.  3(7). 2012.
13. Yu Nie LJ, Ding H, Xie L, Li L, He B, Wu  Y,  Gu  Z.  Cholesterol  derivatives based charged liposomes for doxorubicin delivery: Preparation in vitro and in vivo characterization.  Theranostics,  2(11): 1092. 2012.
14. Shivera  Du,  et  al.  Formulation  and Evaluation  of  Pentoxifiline  Liposome Formulation. Digest Journal of Nanomaterial and Biostructure. 4. 2019. 15. Gulati N, Nagaich U, Saraf S. Fabrication and in vitro characterization of polymeric nanoparticles  for  Parkinson’s  therapy: a  novel  approach.  Barzilian  Journal  of Pharmaceutical  Sciences,  50(4):  869- 876.2014.
16. Anusha  RR,  Vijaykumar  N,  Shruthi P.  Encapsulation  of  emulsifying  drug delivery systems (sedds) of lercanidipine hydrochloride into hard gelatin capsules. International Journal of Biopharmaceutics, 5(2): 73-82. 2014.
17. Aremu  OI,  Oduyela  OO.  Evaluation of  metronidazole  suspension.  African Journal  Biochem  Res,  9(12):  595-597. 2015
18. Rajaran  S,  Natham  R.  Design  and characterization of asorbic acid stabilized rifampicin nanoparticles for oral delivery. Int  J  Bio  and  Pharm  Research,  4(12): 993-999. 2013.
19. Putra,  I  Gusti  NS,  Darijanto,  Sasanti TS, Yeyet C. Formulasi sediaan liposom nimodipine:  Studi  pengaruh  komposisi lipida  terhadap  efisiensi  inkorporasi nimodipine dan stabilitas ukuran partikel liposom. Acta  Pharmaceutica  Indonesia, 39(1):18-25.2014.
20. Kuruvila  FS,  Mathew  F,  Kuppuswanny S. Solid Self Nanoemulsifying Drug  Delivery  System  (SNEDDS) Development,  Applications,  and  Future Perspective: A Review. Indo Am J Pharm Sci. 4(3): 651-669. 2017.
21. Das  Neves  JM,  Amiji  M,  MF  Bahia, and  B.  Sarmeto. Assesing  the  physical- chemical  properties  and  stability  of dapirine-loaded polymeric nanoparticles.
International  Journal  of  Pharmacutics, 456(2): 307-314. 2013