Creative Commons Attribution 4.0 International License
OPTIMIZATION OF DEOXYRIBONUCLEIC ACID (DNA) ISOLATION METHODS FROM SEVERAL TYPES OF COSMETIC SAMPLES FOR MOLECULAR-BASED HALAL TESTS
OPTIMASI METODE ISOLASI DEOXYRIBONUCLEIC ACID (DNA) DARI BEBERAPA JENIS SAMPEL KOSMETIK UNTUK UJI HALAL BERBASIS MOLEKULER
Received: 17/01/2023; Revised: 12/05/2023; Accepted: 07/06/2023; Published: 30/06/2023
Nafisa Arini, Afifatul Achyar*
Department of Biology, Faculty of Mathematics and Natural Sciences, Universitas Negeri Padang, West Sumatera, Indonesia *Corresponding author: afifatul.achyar@fmipa.unp.ac.id

## ABSTRACT
For a Muslim, the halal status of a food or non-food product must be fulfilled absolutely, as well as cosmetic products. The critical point for the halal status of a cosmetic product is the possibility of using pig-derived ingredients such as gelatin, fatty acids, glycerin and collagen which are very commonly used in the manufacture of cosmetic products. This study aims to optimize the DNA isolation method on several cosmetic samples for molecular-based halal testing. The research was carried out in three stages,  namely  DNA  extraction,  rt-PCR  amplification,  and  visualization  with  agarose  gel electrophoresis.  The  optimization  of  DNA  isolation  was  carried  out  using  three  methods,  using  the QIAamp®  DNA  Mini  Kit  (QIAGEN)  commercial  DNA  isolation  kit,  isolation  with  phenol-chloroform GENEzol™  (Geneaid)  solution,  and  using  10%  Chelex-TE  resin  mixture.  The  results  showed  that colorless cosmetic products with liquid characteristics such as facial toners were suitable for isolation using all three methods. Colorless cosmetic products with gel characteristics such as exfoliator gels are suitable for isolation using the QIAamp® DNA Mini Kit (QIAGEN). Meanwhile, colored cosmetic products such as liquid lipstick or lip stain are suitable for isolation using the QIAamp® DNA Mini Kit (QIAGEN) and Genezol™ (Geneaid) methods. The results of the rt-PCR amplification showed that the cosmetic sample contained animal DNA contamination, which could be cows, pigs or mices.
Keywords: Optimization of DNA Isolation, Halal, Cosmetics, rt-PCR

## ABSTRAK
Bagi seorang muslim, status halal suatu produk pangan maupun non-pangan harus terpenuhi secara mutlak,  begitu  juga  dengan  produk  kosmetik.  Titik  kritis  status  kehalalan  suatu  produk  kosmetik adalah adanya kemungkinan penggunaan bahan dasar yang berasal dari babi seperti gelatin, asam lemak,  gliserin  dan  kolagen  yang  sangat  umum  digunakan  dalam  pembuatan  kosmetik.  Tujuan penelitian ini adalah untuk mengoptimasi metode isolasi DNA pada beberapa sampel kosmetik untuk uji halal berbasis molekuler. Penelitian dilakukan dalam tiga tahap, yaitu ekstraksi DNA, amplifikasi dan analisis rt-PCR, dan visualisasi dengan media elektroforesis gel agarose. Optimasi isolasi DNA dilakukan dengan tiga metode yaitu menggunakan kit isolasi DNA komersial QIAamp® DNA Mini Kit (QIAGEN),  isolasi  dengan  larutan  phenol-chlororoform GENEzol™  (Geneaid),  dan  menggunakan campuran resin Chelex-TE 10%. Hasil menunjukkan bahwa produk kosmetik dengan karakteristik cair tidak  berwarna  seperti  toner  wajah  cocok  diisolasi  menggunakan  ketiga  metode.  Produk  kosmetik dengan  karakteristik  berbentuk  gel  tidak  berwarna  seperti  gel  eksfoliator  cocok  diisolasi  dengan QIAamp® DNA Mini Kit (QIAGEN). Sedangkan produk kosmetik berwarna seperti lipstik cair atau lip stain cocok diisolasi dengan metode QIAamp® DNA Mini Kit (QIAGEN) dan Genezol™ (Geneaid). Hasil uji amplifikasi dengan rt-PCR menunjukkan bahwa di dalam sampel kosmetik tersebut terdapat kontaminasi DNA hewan yang mungkin adalah DNA sapi, babi, atau tikus.
Kata Kunci: Modal Spiritual, Pola Pikir, Perilaku
How to cite: Arini, M., and Achyar, A. 2023. Optimasi Metode Isolasi Deoxyribonucleic Acid (DNA) Dari Beberapa Jenis Sampel Kosmetik Untuk Uji Halal Berbasis Molekuler. Journal of Halal Product and Research . 6(1), 1-10, https://dx.doi.org/10.192501/jhpr.vol.6-issue.1.1-10

## PENDAHULUAN
Dewan Perwakilan Rakyat (DPR) Republik Indonesia dan Presiden Republik Indonesia telah menetapkan undang-undang tentang Jaminan Produk Halal atau yang disingkat dengan JPH bahwa produk-produk yang masuk, beredar, dan diperdagangkan di wilayah Indonesia wajib bersertifikat halal. Sertifikat  Halal  adalah  bukti  diakuinya  status  halal  suatu  produk  yang  diberikan  oleh  Badan Penyelenggara  Jaminan  Produk  Halal  (BPJPH)  berdasarkan  fatwa  halal  Majelis  Ulama  Indonesia (MUI). Dalam memproses sertifikasi halal, bukan hanya bahan-bahan yang digunakan saja yang dikaji dan  diteliti,  tetapi  mencakup  penyediaan  bahan,  pengolahan,  penyimpanan,  pengemasan, pendistribusian, penjualan dan penyajian produk (UU RI No. 33 Pasal 4, 2014).
Bagi seorang muslim, status halal suatu produk non-pangan seperti produk kosmetik maupun obat-obatan  harus  terpenuhi  secara  mutlak.  Produk  yang  beredar  di  pasaran  harus  terbebas  dari kandungan babi beserta turunannya dan bahan lain yang menyebabkan produk tersebut menjadi tidak halal. Indonesia adalah negara dengan mayoritas penduduk beragama islam dengan jumlah populasi setara dengan 86,7% dari total penduduk (Nasreddin, 2022). Gaya hidup yang mementingkan status halal dari suatu produk  yang akan digunakan adalah salah satu hal  yang dipengaruhi oleh tingginya jumlah penduduk beragama islam di Indonesia. Isu mengenai status halal suatu produk sudah menjadi perhatian publik, hal ini tidak terbatas untuk produk pangan saja namun juga untuk produk non-pangan seperti obat-obatan hingga kosmetika. Oleh karena itu pemerintah menerbitkan undang-undang yang dapat menjamin status halal dari suatu  produk hingga produk tersebut sampai  ke tangan konsumen (Widayat et al. , 2019).
Kosmetik terdiri dari berbagai bahan termasuk air, minyak, surfaktan, polimer, pelarut organik, pewarna,  protein,  vitamin,  ekstrak  tumbuhan,  pengawet,  dan  antioksidan  (Iwata  &  Shimada,  2013). Dengan  campuran  bahan  yang  kompleks  dalam  produk  kosmetik,  produsen  kosmetik  harus  secara kritis  mengevaluasi  bahan  dan  sumber  yang  sesuai  sebelum  pengembangan  dan  produksi.  Sumber bahan  yang  dimaksudkan  untuk  pengembangan  dan  pembuatan  kosmetik  halal  memainkan  peran penting  dalam  hasil  dan  kinerja  produk  secara  keseluruhan.  Produsen  bertanggung  jawab  sebagai regulator untuk mendukung keamanan bahan produk kosmetik halal (Dent et al. , 2018).
Produk  kosmetik  yang  mengandung  bahan-bahan  yang  berasal  dari  hewan  disebut  dengan istilah zooceuticals (Cristiano  &  Guagni,  2022).  Titik  kritis  untuk  status  halal  suatu  produk  kosmetik adalah beberapa bahan  yang dapat berasal dari babi seperti gelatin (Aris et al. , 2020), asam lemak, gliserin  dan  kolagen.  Beberapa  bahan  tersebut  adalah  bahan  yang  paling  umum  ditemukan  dalam produk kosmetik seperti body lotion , krim dan masker wajah (Yorgancioglu & Bayramoglu, 2013) yang sudah umum tersebar di pasaran.
Berbagai metode analisis dapat digunakan untuk mengidentifikasi unsur haram dalam produk halal.  Metode  seperti, electronic  nose (e-nose), gas  chromatography (Nurjuliana et  al. ,  2011), High Performance  Liquid  Chromatography (HPLC)  (Al-Rashood et  al. ,  1995;  Von  Bargen et  al. ,  2014), Nuclear  Magnetic  Resonance (NMR) Spectroscopy (Siciliano et  al. ,  2013),  dan Polymerase  Chain Reaction (PCR)  (Wijaya et  al. ,  2022)  dapat  digunakan  untuk  mendeteksi  bahan  hewani  yang tersembunyi dalam produk pangan seperti lemak dan protein. Deteksi komponen tertentu dalam produk akhir bergantung pada metode analisis yang digunakan, karena berbagai komponen dapat dimodifikasi atau didegradasi dengan perlakuan termal, fisik, atau kimia selama proses produksi. DNA adalah materi yang relatif stabil jika diberikan berbagai perlakuan fisik dan kimia selama proses pembuatan makanan. Bahan  baku  produk  pangan  atau  kosmetik  yang  berasal  dari  hewan atau  tumbuhan  umumnya  tidak dimurnikan lebih lanjut karena memerlukan biayanya yang tinggi, sehingga besar kemungkian produk akhir terkontaminasi DNA  spesifik spesies (Kim et al. , 2018). Dalam metode untuk identifikasi unsur haram, dalam hal ini adalah bahan  yang berasal dari babi juga turunannya, diperlukan metode  yang dapat secara spesifik mendeteksi keberadaan bahan tersebut di dalam suatu produk.
Metode Polymerase Chain Reaction (PCR) dan variasinya adalah metode standar dan paling umum  digunakan.  Meskipun  PCR  adalah  teknik  molekuler  dasar,  berbagai  metode  deteksi  dapat
dikembangkan  darinya.  PCR  adalah  suatu  teknik  yang  digunakan  untuk  mengamplifikasi Deoxyribonucleic  acid (DNA).  Pengujian  menggunakan  metode  PCR  telah  banyak  dilakukan  oleh peneliti sebelumnya, seperti digunakan untuk mendeteksi bakteri patogen dalam air minum isi ulang (Achyar et al. , 2021; Putri et al. , 2021), identifikasi pemalsuan produk olahan daging (Balia et al. , 2014), mendeteksi kandungan babi dan sapi pada campuran gelatin (Cai et al. , 2012), dan juga digunakan dalam  penelitian  untuk  mendeteksi  kandungan  babi  pada  pelarut  farmasi  dan  produk  obat-obatan (Husni et al. , 2017).
PCR  adalah  metode  yang  cepat,  akurat,  dan  sangat  sensitif  yang  dapat  secara  selektif mengamplifikasi  sejumlah  kecil  DNA  target  yang  ada  dalam  produk  menggunakan  primer  spesifik spesies.  Salah  satu  jenis  metode  pendeteksi  komponen  babi  dan  turunannya  berbasis  DNA  adalah dengan  menggunakan  real  time  PCR  (rt-PCR).  Metode  deteksi  dengan real  time PCR  (rt-PCR) memberikan  hasil  dengan  lebih  cepat,  lebih  sensitif,  lebih  akurat,  dan  kuantitatif  jika  dibandingkan dengan PCR konvensional karena adanya tambahan probe fluorescent (Kim et al. , 2018).
Metode  deteksi  DNA  babi  menggunakan  PCR  pada  pangan  dan  obat-obatan  telah  banyak dilakukan  pada  penelitian  sebelumnya,  sementara  itu  penelitian  mengenai  deteksi  DNA  babi  dari produk  kosmetik  masih  minim  sehingga  perlu  dilakukan  pengembangan  analisis.  Salah  satu  faktor penentu keberhasilan teknik PCR dalam mendeteksi adanya bahan yang berasal dari babi pada suatu produk adalah pada kualitas dan kuantitas DNA template. Kompleksitas komposisi produk dan teknik pengolahan  kosmetik  akan  berpengaruh  pada  hasil  DNA  yang  diekstraksi.  Oleh  karena  itu, berdasarkan uraian di atas maka pada penelitian bertujuan untuk mengoptimasi metode isolasi DNA pada beberapa jenis sampel kosmetik untuk uji halal berbasis molekuler.

## MATERIAL
Penelitian  yang  dilakukan  adalah  jenis  penelitian  deskriptif  yang  dilakukan  di  Laboratorium Genetika  dan  Bioteknologi,  Departemen  Biologi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam, Universitas  Negeri  Padang.  Sampel  yang  digunakan  adalah  sampel  kosmetik  yang  beredar  dengan luas  dipasaran  yang  dipilih  secara  acak.  Keterangan  lebih  lanjut  mengenai  sampel  kosmetik  yang digunakan dalam penelitian ini adalah sebagaimana yang dijelaskan dalam tabel 1 berikut ini.

## Tabel 1. Sampel Kosmetik yang digunakan
KODE SAMPEL JENIS PRODUK KARAKTERISTIK MEREK L5 Make up , Lip Tint/ Lipstik Cair Merah, cair > Gel Merek A L6 Make up , Lip Tint/ Lipstik Cair Merah, cair > Gel Merek B T2 Skin care, Toner/ Pelembab wajah Bening, Cair Merek C T4 Skin care, Toner/ Pelembab wajah Bening, Cair Merek D G2 Skin care, Eksfoliator Gel Bening, Gel + bahan eksfoliator tekstur kasar Merek E G3 Skin care, Eksfoliator Gel Bening, Gel Merek F

## METODE PENELITIAN
Penelitian dilakukan dalam tiga tahap, yaitu ekstraksi DNA, amplifikasi dan analisis rt-PCR, dan tahap  terakhir  adalah  visualisasi  dengan  media  elektroforesis  gel  agarose.  Optimasi  isolasi  DNA dilakukan  dengan  tiga  metode  yang  berbeda,  yaitu dengan  menggunakan  kit  isolasi  DNA  QIAamp® DNA  Mini  Kit  (QIAGEN),  isolasi  dengan  larutan  phenol- chlororoform  GENEzol™  (Geneaid),  dan menggunakan campuran resin Chelex-TE 10% (Satria et al., 2015). Sampel ditimbang sebelum proses isolasi, untuk dua metode pertama massa sampel yang digunakan disesuaikan dengan anjuran dalam protokol resmi masing-masing reagen, dimana untuk metode isolasi dengan menggunakan QIAamp® DNA Mini Kit (QIAGEN) sampel yang di timbang adalah sebanyak ≤ 25 mg, metode isolasi dengan larutan GENEzol™ (Geneaid) sampel ditimbang sebanyak 50 mg dan 100 mg. Sementara itu, metode isolasi dengan campuran resin Chelex-TE 10%, massa sampel yang digunakan adalah 20 mg, 40 mg, dan 60 mg.
Hasil isolasi DNA yang telah didapatkan dicek konsentrasi dan kemurniannya lalu diamplifikasi dengan rt-PCR. Tahapan rt-PCR pertama dilakukan den gan master mix 2x SensiFAST™ Probe No- ROX  mix  (Bioline)  dan  menggunakan  primer  pair  BoSusRat  yang  mengjasilkan  produk  amplikon dengan  ukuran  166bp  dan  probe  Sus  (Tabel  2),  sedangkan  untuk  tahapan  rt-PCR  selanjutnya menggunakan master mix 2x SensiFAST™ SYBR® No-ROX mix (Bioline) dengan primer yang sama. Hal ini dilakukan dengan tujuan untuk memastikan apakah metode isolasi DNA yang telah disebutkan sebelumnya dapat mengisolasi DNA dari sampel kosmetik yang telah dikumpulkan. Setelah PCR, DNA yang  telah  diamplifikasi  divisualisasikan  dengan  elektroforesis  dengan  media  gel  agarose  1,5%, tegangan 100 V, selama 34 menit.
Tabel 2. Primer dan Probe yang akan digunakan pada saat rt-PCR
PRIMER/PROBE SEKUEN REFERENSI BoSusRat_F 5’-AGCAATAGAAGGCCCAAC-3’ (Achyar et al ., in press ) BoSusRat_R 5’-TAGTGCTGTAAATAAGGTGGT-3’ Probe Sus 5’-GGTATTTCTACTCATCCGCTTCTACC-3’

## DISKUSI DAN PEMBAHASAN

## Analisis Isolasi DNA
Hasil  isolasi DNA dengan metode pertama  yaitu dengan menggunakan QIAamp® DNA Mini Kit  (QIAGEN)  dapat  dilihat  pada  tabel  3.  Berdasarkan  pengukuran  konsentrasi  DNA  pada  seluruh sampel didapatkan konsentrasi tertinggi sebesar 196,3 ng/μl. Namun perlu dicatat bahwa sampel L5 perlu melewati tiga tahap elusi untuk menghilangkan zat pewarna, sementara zat pewarna sampel L6, yang  merupakan  produk  dengan  jenis  yang  sama,  tersaring  sebelum  tahap  elusi.  Pengukuran konsentrasi  sampel  L5  elusi  pertama memiliki  nilai  yang  tinggi  dapat dikarenakan  masih  banyak  zat pewarna  yang  tertinggal.  Hal  ini  didukung  dengan  hasil  pengukuran  kemurnian  DNA  pada  rasio absorbansi A260/A280 yang memiliki nilai kemurnian yang tidak sesuai standar kemurnian DNA yang baik. Oleh karena itu hasil isolasi DNA sampel L5 yang digunakan untuk amplifikasi adalah Elusi 2 dan 3 karena zat pewarna sudah cukup berkurang, namun masih berwarna.
Tabel 3. Hasil Pengukuran Konsentrasi dan Kemurnian Isolat DNA Metode Isolasi QIAamp® DNA Mini Kit (QIAGEN )
SAMPEL KONSENTRASI (ng/μl) KEMURNIAN (A260/A280) KODE ELUSI L5 E1 196,3 6,25 E2 117,25 6,61 E3 20,65 6,45 L6 E1 1,3 3,25 E2 1,15 2,30 T2 E1 0,1 0,33 E2 -0,4 -8,00 T4 E1 16,75 2,58 E2 11,3 2,22 G2 E1 4,75 3,96 E2 5,2 2,42 G3 E1 -0,15 -0,50 E2 1,7 1,48
Hasil  isolasi  DNA  dengan  metode  selanjutnya  yaitu  dengan  menggunakan  larutan  phenol- chloroform GENEzol™ (Geneaid) dapat dilihat  pada tabel 4. Metode  isolasi  dengan  larutan phenol- chloroform GENEzol™ (Geneaid) tidak berhasil mengisolasi DNA dari sampel G2 dan G3 karena di akhir tahap isolat DNA masih berbentuk gel sehingga tidak bisa diukur konsentrasi dan kemurniannya, sehingga  sampel  G2  dan  G3  tidak  dapat  dilanjutkan  ke  tahap  amplifikasi  DNA.  Hasil  isolat  dengan konsentrasi tertinggi untuk metode isolasi ini adalah isolate dari sampel T4 dengan massa sampel 50 mg yaitu dengan nilai konsentrasi 2,85 ng/μl. Kemurnian DNA terbaik juga diperoleh sampel T4 dengan massa sampel 100 mg, yaitu dengan nilai rasio absorbansi A260/A280 sebesar 2,00.
Tabel 4 . Hasil Pengukuran Konsentrasi dan Kemurnian Isolat DNA Metode Isolasi GENEzol™ (Geneaid)
SAMPEL KONSENTRASI (ng/μl) KEMURNIAN (A260/A280) KODE MASSA (mg) L5 50 -0,4 -1,14 100 0,5 0,63 L6 50 -1,75 3,50 100 2,25 0,98 T2 50 1,25 0,93 100 3,8 1,41 T4 50 2,85 1,27 100 1,8 2,00
Hasil isolasi DNA dengan metode isolasi terakhir yaitu dengan menggunakan larutan Chelex- TE  10%  dapat  dilihat  pada  tabel  5.  Hasil  pengukuran  kebanyakan  isolat  DNA  yang  diisolasi menggunakan  metode  ini  terukur  jauh  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  dua  metode  sebelumnya. Namun pada metode ini sampel berwarna seperti L5 dan L6 perlu diberikan perlakuan pemurnian lanjut karena zat pewarna yang tidak hilang saat proses isolasi DNA. Selain itu, untuk sampel seperti sampel T2 perlu melewati  proses  pengenceran terlebih  dahulu sebelum diambil data konsentrasinya karena mendapatkan peringatan maksimum absorbansi saat pertama kali pengukuran konsentrasi. Sampel T4 juga mendapatkan peringatan maksimum absorbansi namun tidak dilakukan pengenceran lebih lanjut karena  nilai  rasio  absorbansi  A260/A280  berubah  menjadi  7,00.  Sampel  yang  memiliki  nilai  rasio absorbansi A260/A280 yang paling mendekati standar yang baik adalah sampel T2 yaitu dengan nilai 1,78.  Metode  isolasi  dengan  Chelex-TE  10%  adalah  metode  paling  sederhana  jika  dibandingkan dengan dua metode sebelumnya namun isolasi dengan metode ini memerlukan beberapa perlakuan lanjutan, hal ini dikarenakan isolat DNA yang dihasilkan masih mengandung banyak zat pengotor. Zat pengotor tersebut tidak terpisahkan  dari isolat DNA karena dalam metode  ini sampel tidak melewati proses filtrasi maupun pencucian DNA seperti halnya pada dua metode sebelumnya.
Pengukuran  konsentrasi  DNA  adalah  bertujuan  untuk  mengetahui  banyaknya  DNA  yang terkandung dalam larutan isolat DNA. Konsentrasi DNA diukur menggunakan spektrofotometer yang prinsip  kerjanya  adalah  penyerapan  sinar  ultraviolet  oleh  nukleotida  dan  protein  dalam  larutan. Kemurnian  larutan  DNA  dilihat  dari  rasio  absorbansi  DNA  A260/A280.  Standar  isolat  DNA  yang dikatakan murni  dan  baik  apabila  mendapatkan  rasio  perbandingan  A260  nm  dan  A280  nm  dengan nilai  1,8  sampai  dengan  2,0.  Kemurnian  dengan  nilai  dibawah  1,8  dan  diatas  2,0  mengindikasikan adanya kontaminasi RNA dan protein (Mulyani et al., 2011). Namun pada beberapa kasus, nilai rasio A260/230 di bawah standar tidak mempengaruhi  analisis rt-PCR, sehingga sampel dapat digunakan untuk analisis lanjutan pada dengan menggunakan rt-PCR (Widayat et al., 2019).
Tabel 5 . Hasil Pengukuran Konsentrasi dan Kemurnian Isolat DNA Metode Isolasi Chelex-TE 10%

## Analisis Amplifikasi DNA dengan rt-PCR dan Elektroforesis
Setelah  mendapatkan  isolat  DNA,  tahap  selanjutnya  adalah  proses  analisis  amplifikasi  DNA dengan  menggunakan  rt-PCR  dan  visualisasi  elektroforesis  dengan  media  gel  agarose  1,5%.  Kurva amplifikasi dari isolat DNA yang didapatkan dengan metode isolasi QIAamp® DNA Mini Kit (QIAGEN) dapat dilihat pada gambar 1. Tahap rt-PCR pertama ini dilakukan dengan menggunakan master mix 2x SensiFAST™  Probe  No-ROX  mix  (Bioline)  dan  menggunakan  primer  pair  BoSusRat  yang  dapat mengamplifikasi DNA yang berasal dari sapi, babi, dan tikus yang mana menghasilkan produk amplikon dengan  ukuran  166  bp,  disertai  juga  dengan  probe  Sus,  yang  merupakan  probe  spesifik  DNA  babi untuk mendapatkan hasil analisis yang lebih spesifik. Berdasarkan kurva amplifikasi pada gambar 1, nilai Ct kontrol positif didapatkan sebesar 26,95 lalu nilai Ct untuk sampel didapatkan rentang nilai 1,97 sampai dengan 10,06. Nilai Ct sampel yang didapatkan jauh lebih kecil dibandingkan dengan nilai Ct control positif. Hasil rt-PCR yang didapatkan divisualisasikan dengan elektroforesis yang dapat dilihat pada gambar 2, yang mana hasil visualisasi tersebut menunjukkan adanya pita-pita berukuran 166 bp yang membuktikan bahwa adanya keberadaan DNA  yang teramplifikasi pada semua sampel namun pita  pada  sampel  G3  terlihat  sangat  samar.  Sedangkan  untuk  pita  dengan  ukuran  dibawah  166bp diperkirakan adalah pita yang muncul karena adanya primer dimer.
SAMPEL KONSENTRASI (ng/μl)  KEMURNIAN (A260/A280) KODE MASSA (mg) L5 20 1 1,67 40 0,5 0,29 60 2,7 1,57 L6 20 0,85 1,13 40 1 1,67 60 0,55 3,67 T2 20 162,4 0,75 40 162,8 1,38 60 171,6 1,78 T4 20 115,55 7,00 40 7451,2 1,15 60 7462,7 2,45 G2 20 17,6 0,91 40 12,4 1,11 60 16,05 1,05 G3 20 102,55 1,30 40 25,6 0,87 60 33,7 1,02
K+ K+
Gambar 1. Kurva Amplifikasi Isolat DNA Metode Isolasi QIAamp® DNA Mini Kit (QIAGEN)
Gambar 2. Visualisasi Elektroforesis Produk PCR Isolat DNA Metode Isolasi QIAamp® DNA Mini Kit (QIAGEN)
Tahap rt-PCR selanjutnya  untuk isolat DNA metode Genezol™ (Geneaid) dilakukan dengan menggunakan master mix 2x SensiFAST™ SYBR® No-ROX mix (Bioline) dan menggunakan primer pair  BoSusRat.  Berdasarkan  kurva  amplifikasi  pada  gambar  3,  nilai  Ct  kontrol  positif  didapatkan sebesar 20,77 lalu nilai Ct untuk sampel didapatkan rentang nilai 28,62 sampai dengan 36,07. Nilai Ct sampel  yang  didapatkan  jauh  lebih  besar  dibandingkan  dengan  nilai  Ct  control  positif.  Hasil  rt-PCR yang didapatkan divisualisasikan dengan elektroforesis yang dapat dilihat pada gambar 4, yang mana hasil  visualisasi  tersebut  menunjukkan  adanya  pita-pita  berukuran  166  bp  yang  teramplifikasi  pada sampel T2 dan T4.
Gambar 3. Kurva Amplifikasi Isolat DNA Metode Isolasi GENEzol™ (Geneaid)
L5 E2 L5 E3 L6 E1 L6 E2 T2 E1 T2 E2 T4 E1 T4 E2 G2 E1 G2 E2 G3 E1 G3 E2 K+ NTC 200 bp 100 bp
Gambar 4. Visualisasi Elektroforesis Produk PCR Isolat DNA Metode Isolasi GENEzol™ (Geneaid)
Tahap  rt- PCR  terakhir  untuk  isolat  DNA  metode  Genezol™  (Geneaid)  dilakukan  dengan menggunakan master mix 2x SensiFAST™ SYBR® No-ROX mix (Bioline) dan menggunakan primer pair  BoSusRat.  Berdasarkan  kurva  amplifikasi  pada  gambar  5,  nilai  Ct  kontrol  positif  didapatkan sebesar 20,77 lalu nilai Ct untuk sampel didapatkan rentang nilai 28,49 sampai dengan 34,27. Nilai Ct sampel  yang  didapatkan  jauh  lebih  besar  dibandingkan  dengan  nilai  Ct  control  positif.  Hasil  rt-PCR yang didapatkan divisualisasikan dengan elektroforesis yang dapat dilihat pada gambar 6, yang mana hasil  visualisasi  tersebut  menunjukkan  adanya  pita-pita  berukuran  166  bp  yang  teramplifikasi  pada sampel T2 dan T4 dengan pita yang samar.
Gambar 5. Kurva Amplifikasi Isolat DNA Metode Isolasi Chelex-TE 10%
Gambar 6. Visualisasi Elektroforesis Produk PCR Isolat DNA Metode Isolasi Chelex-TE 10%

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh  dapat  disimpulkan  bahwa  produk  kosmetik  dengan karakteristik  cair  tidak  berwarna  seperti  toner  wajah  cocok  diisolasi  dengan  menggunakan  ketiga metode.  Produk  kosmetik  dengan  karakteristik  berbentuk  gel  tidak  berwarna  seperti  gel  eksfoliator cocok diisolasi dengan menggunakan QIAamp® DNA Mini Kit (QIAGEN). Sedangkan produk kosmetik berwarna  seperti  lipstik  cair  atau  lip  stain  cocok  diisolasi  dengan  metode  QIAamp®  DNA  Mini  Kit (QIAGEN) dan Genezol™ (Geneaid). Hasil uji amplifikasi dengan rt-PCR pada sampel DNA berbagai jenis produk kosmetik menunjukkan beberapa sampel dengan nilai Ct. Hal ini menunjukkan bahwa di
L5 50 L6 50 T2 50 T4 50
K+ NT C L5 100 L6 100 T2 100 T4 100
L5 20 L5 40 L5 60 L6 20 L6 40 L6 60 T2 20 T2 40 T2 60 T4 20 T4 40 T4 60 G2 20 G2 40 G2 60 G3 20 G3 40 G3 60 200 bp 100 bp K+ K+ NTC 200 bp 100 bp
dalam sampel kosmetik tersebut terdapat kontaminasi DNA hewan  yang mungkin adalah DNA sapi, babi, atau tikus.

## DAFTAR PUSTAKA
Achyar,  A.,  Atifah,  Y.,  &  Putri,  D.  H.  (2021).  In  Silico  Study  of  Developing  a  Method  for  Detecting Pathogenic Bacteria in Refillable Drinking Water Samples. Journal of Physics: Conference Series , 1940 (1). https://doi.org/10.1088/1742-6596/1940/1/012061
Achyar, A., Chatri, M., Putri, D. H., & Handayani, D. (n.d.). Sekuen Primer dan Probe Multiplex Real Time PCR untuk Deteksi Gen Non-Halal pada Sampel Makanan. In Press .
Al-Rashood,  K.  A.,  Abdel-Moety,  E.  M.,  Abou-Shaaban,  R.  R.,  Al-Khamis,  K.  I.,  &  Abdul,  R.  (1995). Triacylglycerols-profiling by high performance liquid chromatography: A tool for detection of pork fat (lard) in processed foods. Journal of Liquid Chromatography , 18 (13). https://doi.org/10.1080/10826079508009316
Aris, S. E., Jumiono, A., & Akil, S. (2020). Identifikasi titik kritis kehalalan gelatin. Jurnal Pangan Halal , 2 (1), 17 –22.
Balia, R. L., Suryaningsih, L., & Putranto, W. S. (2014). Pengujian Pemalsuan Bakso dengan Daging Babi Melalui Pendekatan Ensimatis Dan Molekuler Pada UKM di Kawasan Pendidikan Jatinangor Kabupaten  Sumedang. Dharmakarya:  Jurnal  Aplikasi  Ipteks  Untuk  Masyarakat , 3 (2),  70 –72. http://jurnal.unpad.ac.id/dharmakarya/article/view/8350
Cai, H., Gu, X., Scanlan, M. S., Ramatlapeng, D. H., & Lively, C. R. (2012). Real-time PCR assays for detection and quantitation  of porcine and bovine DNA in gelatin mixtures and gelatin capsules. Journal of Food Composition and Analysis , 25 (1). https://doi.org/10.1016/j.jfca.2011.06.008
Cristiano,  L.,  &  Guagni,  M.  (2022).  Zooceuticals  and  Cosmetic  Ingredients  Derived  from  Animals.
Cosmetics , 9 (1). https://doi.org/10.3390/cosmetics9010013
Dent, M., Amaral, R. T., Da Silva, P. A., Ansell, J., Boisleve, F., Hatao, M., Hirose, A., Kasai, Y., Kern, P., Kreiling, R., Milstein, S., Montemayor, B., Oliveira, J., Richarz, A., Taalman, R., Vaillancourt, E., Verma, R., Posada, N. V. O. R. C., Weiss, C., & Kojima, H. (2018). Principles underpinning the  use  of  new  methodologies  in  the  risk  assessment  of  cosmetic  ingredients. Computational Toxicology , 7 (April), 20 –26. https://doi.org/10.1016/j.comtox.2018.06.001
HUSNI, P., Putriana, N. A., & Wicaksono, I. A. (2017). Metode Deteksi Kandungan Babi dan Alkohol dalam  Eksipien  Farmasi  dan  Produk  Obat  untuk  Menjamin  Kehalalan  Sediaan  Obat. Farmasetika.Com (Online) , 2 (1). https://doi.org/10.24198/farmasetika.v2i1.12653
Iwata,  H.,  &  Shimada,  K.  (2013).  Formulas,  ingredients  and  production  of  cosmetics:  Technology  of skin-  and  hair-care  products  in  Japan.  In Formulas,  Ingredients  and  Production  of  Cosmetics: Technology of Skin- and Hair-Care Products in Japan (Vol. 9784431540618). https://doi.org/10.1007/978-4-431-54061-8
Kim,  Y.  S.,  Yu,  H.  K.,  Lee,  B.  Z.,  &  Hong,  K.  W.  (2018).  Effect  of  DNA  extraction  methods  on  the detection  of  porcine  ingredients  in  halal  cosmetics  using  real-time  PCR. Applied  Biological Chemistry , 61 (5), 549 –555. https://doi.org/10.1007/s13765-018-0389-x
Mulyani, Y., Purwanto, A., & Nurruhwati, I. (2011). Perbandingan Beberapa Metode Isolasi Dna Untuk Deteksi  Dini  Koi  Herpes  Virus  (Khv)  Pada  Ikan  Mas  (Cyprinus  Carpio  L.). Jurnal  Akuatika Indonesia , 2 (1).
Nurjuliana, M., Che Man, Y. B., Mat Hashim, D., & Mohamed, A. K. S. (2011). Rapid identification of pork  for  halal  authentication  using  the  electronic  nose  and  gas  chromatography  mass spectrometer with headspace
analyzer. Meat Science , 88 (4). https://doi.org/10.1016/j.meatsci.2011.02.022
Peraturan  Pemerintah  Republik  Indonesia.  (2014).  Undang-Undang  Republik  Indonesia  Nomor  33
Tahun 2014 Tentang Jaminan Produk Halal. Undang – Undang Republik Indonesia , 1 , 1 –40.
Putri,  A.  I.,  Achyar,  A.,  Putri,  D.  H.,  &  Ahda,  Y.  (2021).  Primer  design,  in  silico  PCR  and  optimum annealing temperature for Escherichia coli detection in refillable drinking water samples. Tropical Genetics , 1 (2), 52 –60.
Satria,  R.,  Kurushima,  H.,  Herwina,  H.,  Yamane,  S.,  &  Eguchi,  K.  (2015).  The  trap-jaw  ant  genus Odontomachus  Latreille  (Hymenoptera:  Formicidae)  from  Sumatra,  with  a  new  species description. Zootaxa , 4048 (1), 1 –36. https://doi.org/10.11646/zootaxa.4048.1.1
Siciliano, C., Belsito, E., De Marco, R., Di Gioia, M. L., Leggio, A., & Liguori,  A.  (2013). Quantitative determination of fatty acid chain composition in pork meat products by high resolution 1H NMR spectroscopy. Food Chemistry , 136 (2). https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2012.08.058
Von  Bargen,  C.,  Brockmeyer,  J.,  &  Humpf,  H.  U.  (2014).  Meat  authentication:  A  new  HPLC-MS/MS based  method  for  the  fast  and  sensitive  detection  of  horse  and  pork  in  highly  processed  food. Journal of Agricultural and Food Chemistry , 62 (39). https://doi.org/10.1021/jf503468t
Widayat, W., Winarni Agustini, T., Suzery, M., Ni’matullah Al-Baarri, A., & Rahmi Putri, S. (2019). Real Time-Polymerase  Chain  Reaction  (RT-PCR)  sebagai  Alat  Deteksi  DNA  Babi  dalam  Beberapa Produk Non-Pangan. Indonesia Journal of Halal , 2 (1), 26. https://doi.org/10.14710/halal.v2i1.5361
Wijaya, N. N., Achyar, A., Putri, D. H., & Farma, S. A. (2022). Optimization of Specific PCR Conditions for Cows (Bos taurus) in Rendang Samples for Molecular-Based Halal Tests. Tropical Genetics , 2 (1), 11 –16. https://ojs.genetikawan-muda.com/index.php/tg/article/view/20
Yorgancioglu,  A.,  &  Bayramoglu,  E.  E.  (2013).  Production  of  cosmetic  purpose  collagen  containing antimicrobial  emulsion  with  certain  essential  oils. Industrial  Crops  and  Products , 44 . https://doi.org/10.1016/j.indcrop.2012.11.013