## ARTIKEL RISET
URL artikel: http://jurnal.fkmumi.ac.id/index.php/woh/article/view/woh2206
Isolasi Dan Uji Aktivitas Anti Bakteri Fungi Endofit Bunga Cengkeh ( Syzygium aromaticum L.) Dalam Menghambat Bakteri Penyebab Karies Gigi
Nabila Adelina 1 , Fitriana 1 , Tadjuddin Naid 1 , K Seniwati 2 1 Fakultas Farmasi, Universitas Muslim Indonesia
2 Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Hasanuddin Email Penulis Korespondensi ( K ): seniwatid@gmail.com No Telepon Penulis Korespondensi ( K ): 08124266134

## ABSTRAK
Cengkeh  merupakan  salah  satu  tanaman  yang  memiliki  potensi  sebagai  antibakteri.  Cengkeh,  selain  dikenal sebagai penyedap makanan, juga memiliki khasiat sebagai analgesik, bakteriostatik, dan mengobati kejang perut. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan memperoleh profil kromatogram dari bunga cengkeh ( Syzygium aromaticum L.) terhadap bakteri penyebab  infeksi karies gigi. Pencarian senyawa bioaktif dalam penelitian  ini adalah mengisolasi fungi endofit pada bunga cengkeh lalu dimurnikan dan diuji secara makroskopik. Kemudian dilakukan uji skrining lalu dilanjutkan fermentasi selama 21 hari menggunakan medium Potato Dextrose Broth untuk  dipisahkan  supernatan  dan  miselia,  kemudian  diekstraksi  menggunakan  pelarut  etil  asetat  untuk mendapatkan  ekstrak  etil  asetat.  Pengujian  aktivitas  antibakteri  dilakukan  dengan  metode  KLT-Bioutografi menggunakan eluen etil asetat : n-heksan (4 : 1). Hasil dari penelitian ini diperoleh lima isolat fungi endofit yang aktif  terhadap  bakteri Streprococcus  mutans dan Porphyromonas  gingivalis. Isolat  yang  memiliki  aktivitas terbesar, yaitu isolat dengan kode IFBC-01. Hasil dari KLT-Bioautografi diperoleh satu bercak dengan nilai rf : 0.67 yang berarti memiliki aktivitas antibakteri.
Kata  kunci  :  Bunga  cengkeh  ( Syzygium  aromaticum L.),  KLT-Bioutografi, streprococcus  mutans , porphyromonas gingivalis
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 2 No. 2 (April, 2019)                                        E-ISSN 2614-5375

## Article history :
Received 22 February 2019 Received in revised form 13 March 2019 Accepted 18 March 2019 Available online 25 April 2019
licensed by Creative Commons Attribution-ShareAlike 4.0 International License .

## PUBLISHED BY :
Public Health Faculty Universitas Muslim Indonesia Address : Jl. Urip Sumoharjo Km. 5 (Kampus II UMI) Makassar, Sulawesi Selatan.
Email : jurnal.woh@gmail.com , jurnalwoh.fkm@umi.ac.id Phone : +62 85255997212
Penerbit : Fakultas Kesehatan Masyarakat Universitas Muslim Indonesia
148
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 2 No. 2 (April, 2019)                                        E-ISSN 2614-5375

## ABSTRACT
Clove  is  one  of  the  plants  that  has  the  potential  as  an  antibacterial.  Clove,  besides  being  known  as  a  food flavoring,  also  has  properties  as  an  analgesic,  bacteriostatic,  and  treat  stomach  cramps.  This  study  aims  to isolate  and  obtain  a  chromatogram  profile  of  clove  flowers  (Syzygium  aromaticum  L.)  against  bacteria  that cause dental caries infection. The search for bioactive compounds in this study was to isolate endophytic fungi in clove  flowers  and  then  purified  and  tested  macroscopically.  Then  a  screening  test  was  carried  out  and  then continued  for  21  days  fermentation  using  Potato  Dextrose  Broth  medium  to  separate  the  supernatant  and mycelia, then extracted using ethyl acetate solvents to obtain ethyl acetate extract. Antibacterial activity testing was  carried  out  by  TLC-Bioutography  method  using  ethyl  acetate:  n-hexane  (4:  1)  eluent.  The  results  of  this study  obtained  five  endophytic  fungi  isolates  that  were  active  against  the  bacteria  Streprococcus  mutans  and Porphyromonas gingivalis. Isolates that have the greatest activity, namely isolates with the code IFBC-01. The results  of  TLC-Bioautography  obtained  one  speck  with  a  value  of  rf:  0.67  which  means  it  has  antibacterial activity .
Keywords  : Clove  flowers  (Syzygium  aromaticum  L.),  TLC-Bioutography,  streprococcus  mutans, porphyromonas gingivalis

## PENDAHULUAN
Penyakit infeksi merupakan masalah terbesar di dunia dan merupakan penyakit yang frekuensi kejadiannya  masih  lebih  besar  daripada  jenis  penyakit  yang  lain.  Infeksi  terjadi  karena  adanya interaksi  antara  mikroorganisme  dengan  hospes.  Menurut  Laporan  Riset  Kesehatan  Dasar  2007, sebanyak 72.1% penduduk Indonesia mengalami karies. Karies merupakan suatu penyakit infeksi pada jaringan  keras  gigi.  Bakteri  berperan  penting  pada  proses  terjadinya  karies.yang  menyebabkan terjadinya kerusakan pada jaringan keras gigi. 1
Streptococcus mutans sebagai bakteri penyebab utama terjadinya karies gigi, yang sebelumnya diketahui sebagai bagian dari flora normal dalam rongga mulut yang berperan dalam proses fermentasi karbohidrat  sehingga  menghasilkan  asam  menyebabkan  terjadinya  demineralisasi  email  gigi.  Bakteri ini  merupakan  bakteri  patogen  pada  mulut  yang  berkoloni  pada  permukaan  gigi,  merupakan  agen penyebab utama karies gigi, gingivitis, dan stomatitis. 2
Setiap  tanaman  dapat  mengandung  satu  atau  lebih  mikroorganisme  endofit  yang  terdiri  dari fungi atau bakteri. Fungi endofit hidup intraseluler di dalam jaringan tanaman sehat yang menginduksi inang  untuk  menghasilkan  senyawa  sekunder.  Huang  (2007)  menyebutkan  bahwa  terdapat  kolerasi antara  keberadaan  fungi  endofit  dengan  kemampuan  tanaman  inang  dalam  memproduksi  metabolit sekunder. 3
Salah  satu  tanaman  yang  memiliki  potensi  sebagai  penghasil  senyawa  antibakteri  adalah cengkeh.  Cengkeh  memiliki  beragam  manfaat,  tidak  hanya  sebagai  penyedap  makanan,  tetapi  juga untuk mengobati berbagai macam penyakit. 4 Cengkeh berkhasiat menghilangkan rasa sakit (analgesik) terutama  sakit  gigi,  memberi  aroma,  menghambat  pertumbuhan  bakteri  (bakteriostatik),  dan mengobati  kejang  perut.  Dalam  pengobatan  sakit  gigi,  biasanya  cengkeh  digunakan  sebagai  pereda sakit secara topikal. 5
Minyak  cengkeh  juga  digunakan  sebagai  bahan  aktif  dalam  pembuatan  obat  kumur  karena sifatnya  sebagai  antibakteri.  Hasil  penelitian  para  ahli  kesehatan  menunjukkan  bahwa  formula  obat
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 2 No. 2 (April, 2019)                                        E-ISSN 2614-5375
kumur yang dibuat dari minyak cengkeh dapat menghambat tumbuhnya bakteri Streptococcus mutans dan Streptococcus viridians yang terdapat pada plak gigi. Ekstraksi  bunga  cengkeh  dengan pelarut n-heksana  menghasilkan  rendemen  minyak  17.61%  dan  kadar eugenol 65.02%. 6 Senyawa eugenol sebagai hasil isolasi dari minyak cengkeh biasa digunakan sebagai obat sakit gigi baik dalam bentuk cairan maupun sebagai bahan campuran untuk menambal sementara gigi berlubang. 4
Penelitian ini bertujuan untuk menguji aktivitas isolasi antibakteri fungi endofit bunga cengkeh ( Syzygium aromaticum L.) dalam menghambat bakteri penyebab karies gigi.

## METODE

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang digunakan pada penelitian ini  yaitu  Alat-alat  gelas, Otoklaf (SMIC Model YX- 280 B), cawan Petri (Normax), gelas Erlenmeyer 250 dan 500 mL (Iwaki Pyrex), gelas kimia 250 dan 500  mL  (Iwaki  Pyrex),  inkubator  (Memmert),  lampu  spiritus,  lampu  UV  254  dan  366  nm  (Philips), oven (Memmert), shaker, timbangan analitik (Chyo).
Bahan-bahan yang digunakan pada penelitian ini yaitu aqua destilata, bakteri uji Streptococcus mutans, bakxteri  uji Porphyromonas  gingivalis, etanol  70%,  etil  asetat,  kloramfenikol,  medium  NA ( Nutrient  Agar ),  medium  PDA  ( Potato  Dextrose  Agar ),  medium  PDB  ( Potato  Dextrose  Broth ),  n- heksan, dan sampel bunga cengkeh ( Syzygium aromaticum L).

## Penyiapan Sampel
Sampel  penelitian  yang  digunakan  berupa  bunga  cengkeh  ( Syzygium  aromaticum L.)  segar, dicuci  dengan  air  mengalir  guna  menghilangkan  tanah  dan  kotoran  yang  menempel.  Selanjutnya desinfeksi  permukaan  bunga  cengkeh  menggunakan  etanol  70%  selama  2  menit,  kemudian  dibilas dengan aquadest steril sebanyak 3 kali masing-masing selama 1 menit.

## Isolat Fungi Endofit
Bunga  cengkeh  ( Syzygium  aromaticum L.)  dipotong  berbentuk  persegi  panjang  ±  1cm. Potongan  tersebut  ditanam  pada  media  agar  yang  dibuat  dari  PDA  ( Potato  Dextrose  Agar ) Sebelumnya  ditambahkan  kloramfenikol  100  mg/L  ke  dalam  media  agar  untuk  mencegah pertumbuhan  bakteri  lainnya.  Cawan  petri  yang  berisi  bunga  cengkeh  ( Syzygium  aromaticum L.) tersebut ditutup, lalu disimpan pada suhu kamar (25 o C) selama 3-5 hari. Setelah 3-5 hari akan terlihat pertumbuhan dari jamur disekitar bunga cengkeh ( Syzygium aromaticum L.) pada media agar. 7

## Pemurnian dan Uji Makroskopis
Isolat  fungi  yang  diperoleh  dimurnikan  dengan  menggunakan  medium  PDA  ( Potato  Dextrose Agar ),  yaitu  masing-masing  isolat  ditanam  ke  dalam  medium  PDA  ( Potato  Dextrose  Agar )  dengan metode  tusuk  menggunakan  jarum  ose.  Kemudian  di  inkubasi  selama  5-7  hari  pada  suhu  kamar. Pemurnian  isolat  fungi  dilakukan  hingga  diperoleh  isolat  tunggal  atau  koloni  tunggal. 8 Karakterisasi morfologi  fungi  dilakukan  dengan  mengamati  beberapa  karakter  secara  makroskopis.  Pengamatan
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 2 No. 2 (April, 2019)                                        E-ISSN 2614-5375
makroskopis  meliputi  warna  dan  permukaan  koloni  (granular,  seperti  tepung,  menggunung,  licin), tekstur, zonasi, daerah tumbuh, garis-garis radial dan konsentris, dan warna balik koloni. 8

## Uji Skrining Aktivitas Antibakteri
Isolat  fungi  endofit  dipotong  kecil  ±  1  cm,  ditempatkan  dipermukaan  medium  NA  ( Nutrient Agar ) yang telah berisi bakteri uji. Selanjutnya diinkubasi 1 x 24 jam pada suhu 37 0 C. Masing-masing isolat diamati kemampuannya dalam menghambat bakteri uji yang ditandai dengan terbentuknya zona jernih  dan  dievaluasi  berdasarkan  diameter  zona  hambatannya.  Menurut  Davis  &  Stout  1971, menyatakan bahwa  ketentuan antibakteri  adalah  sebagai  berikut: daerah hambatan 20 mm atau lebih berarti sangat kuat, daerah hambatan 10 – 20 mm berarti kuat, 5 – 10 mm berarti sedang, dan daerah hambatan  5  mm  atau  kurang  berarti  lemah. 9 Isolat  yang  memberikan  aktivitas  yang  paling  baik, kemudian di produksi dalam jumlah yang besar dan dilanjutkan pada pengujian aktivitas secara KLT- Bioautografi.

## Fermentasi Isolat
Fungi  endofit  yang  memberikan  aktivitas  terbesar  sebagai  isolat  terpilih  selanjutnya ditumbuhkan pada media PDA ( Potato Dextrose Agar ). Jamur yang tumbuh dipotong 1,5 cm x 1,5 cm dengan ose bulat, dimasukkan ke dalam erlenmeyer 250 mL yang berisi 100 mL media PDB ( Potato Dextrose Broth ) untuk fermentasi. Fermentasi secara dinamis menggunakan shaker dengan kecepatan 200 rpm selama 3 minggu. Setelah 3 minggu hasil fermentasi disaring untuk memisahkan supernatan dan  miselia.  Supernatan  di  ekstraksi  2  kali  dengan  pelarut  etil  asetat.  Pelarut  diuapkan  sampai diperoleh ekstrak kering. 8

## Identifikasi Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Lempeng  KLT  sebelum  digunakan  diaktifkan  terlebih  dahulu  dengan  pemanasan  dalam  oven pada  suhu  100 0 C  selama  30  menit.  Fermentat  dilarutkan  dengan  pelarut  etil  asetat  ditotolkan  pada lempeng KLT ukuran 7x1 cm menggunakan pipa kapiler. Kemudian dielusi  dengan cairan pengelusi n-heksan  dan  etil  asetat  dengan  perbandingan  4  :  1.  Lempeng  di  masukkan  ke  dalam  chamber. Lempeng  dikeluarkan  dari chamber dan  diangin-anginkan  sehingga  cairan  pengelusinya  menguap. Kemudian kromatogram yang dihasilkan diamati nodanya dibawah sinar UV pada panjang gelombang 254 nm dan 366 nm. 10

## Pengujian Secara KLT-Bioautografi
Hasil  identifikasi  KLT  menggunakan  eluen  n-heksan  dan etil  asetat  (4  :  1) dilanjutkan  dengan uji  KLT-Bioautografi  kontak  dengan  cara  dituang  NA  ( Nutrient  Agar )  sebanyak  10  mL  ke  dalam cawan  petri  dan  ditambahkan  suspensi  bakteri  sebanyak  1  ose,  kemudian  dihomogenkan.  Lempeng KLT  yang  telah  dielusi  diletakkan  diatas  permukaan  medium  agar  yang  telah  diinokulasikan  dengan mikroba uji, dibiarkan selama 60 menit. Setelah itu lempeng diangkat dan dikeluarkan, lalu diinkubasi
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 2 No. 2 (April, 2019)                                        E-ISSN 2614-5375
selama  1  x  24  jam  pada  suhu  37 o C.  Setelah  itu  diamati  bercak  yang  memberikan  aktivitas penghambatan terhadap pertumbuhan bakteri uji. 10 .

## HASIL

## Uji Skrining Aktivitas Antibakteri
Tabel 1. Hasil uji skrining isolat fungi pada bunga cengkeh ( Syzygium aromaticum L) No. Kode Isolat Diameter Zona Hambatan (mm) SM PG 1 IFBC-01 17.81 22.89 2 IFBC-02 16.47 21.67 3 IFBC-03 17.21 19.11 4 IFBC-04 17.69 18.93 5 IFBC-05 17.26 22.74 Keterangan: SM = ( Streptococcus mutans )
PG = ( Porphyromonas gingivalis)
Berdasarkan  tabel  1,  diperoleh  isolat  fungi  endofit  dengan  kode  IFBC-01  memberikan aktivitas  tertinggi  terhadap  bakteri  uji Streptococcus  mutans dan Porphyromonas  gingivalis dengan daerah hambatan 17.81 mm dan 22.89 mm. Menurut Davis & Stout (1971), apabila daerah hambatan 20 mm atau lebih berarti sangat kuat, daerah hambatan 10 – 20 mm berarti kuat. Dari hasil penelitian diperoleh  klasifikasi respon hambat pertumbuhan terhadap bakteri  uji Streptococcus mutans adalah kuat dan Porphyromonas gingivalis sangat kuat.

## Pengujian KLT-Bioautografi
Tabel 2. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etil Asetat Bunga Cengkeh Isolat IFBC-01 secara KLT Bioautografi
Identifikasi  profil  KLT  ini  menggunakan  eluen  n-heksan  dan  etil  asetat  (4  :  1),  hal  ini disebabkan karena masing-masing pelarut memiliki kepolaran yang berbeda dapat terpisahkan dengan eluen  tersebut  dan  diperoleh  bercak  dan  zona  hambat  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri  uji. Hasil pengujian secara KLT-Bioautografi untuk ektrak etil asetat isolat IFBC-01 pada UV 254 nm dan 366  nm  diperoleh  1  bercak  aktif  dengan  nilai  rf  :  0.67  untuk  bakteri  uji Streptococcus  mutans dan bakteri uji Porphyromonas gingivalis.
No. Bercak Rf Warna pada penampak bercak Bakteri UV 254 nm UV 366 nm 1. 1 0.67 Hijau Ungu SM 2. 1 0.67 Hijau Ungu PG
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 2 No. 2 (April, 2019)                                        E-ISSN 2614-5375

## PEMBAHASAN
Sampel  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  isolat  fungi  endofit  dari  bunga  cengkeh ( Syzygium  aromaticum L.).  Bunga  cengkeh  ( Syzygium  aromaticum L.)  didesinfeksi  menggunakan etanol 70% , karena etanol lebih efektif pada konsentrasi 70% daripada konsentrasi yang lebih tinggi. Campuran etanol 70% dapat menembus lebih dalam untuk desinfeksi karena memiliki 30% kandungan air. Molekul air harus ada agar etanol dapat bekerja untuk mengkoagulasi protein. Oleh sebab itu air penting untuk koagulasi.
Isolasi  fungi  endofit  pada  bunga  cengkeh  ( Syzygium  aromaticum L.)    dengan  menggunakan medium  Potato  Dextrosa  Agar  Chloramfenikol  (PDAC),  dimana  PDA  (Potato  Dextrosa  Agar) memiliki  sumber  karbohidrat  dan  dextrosa  sebagai  sumber  karbon  untuk  menunjang  pertumbuhan fungi  endofit.  Tujuan  penambahan  kloramfenikol  adalah  untuk  mencegah  pertumbuhan  bakteri  pada medium sehingga hanya didapatkan jamur yang akan tumbuh.
Isolat  yang  diperoleh  selanjutnya  dimurnikan  dengan  tujuan  untuk  mendapatkan  kultur  murni dari masing masing isolate. Pemurnian ini menggunakan metode tusuk dengan cara ujung ose yang di ujungnya terdapat isolat, sampai ditemukan kultur murni. Perolehan isolat jamur endofit hasil isolasi selanjutnya  dilakukan  pengamatan  secara  makroskopis.  Masing-masing  isolat  memiliki  ciri  khas morfologi yang berbeda.
Hasil  pengujian  skrining  isolat  fungi  endofit  dari  bunga  cengkeh  terhadap  bakteri  uji  dapat dilihat pada tabel 1. Berdasarkan tabel tersebut, diperoleh isolat fungi  endofit dengan kode  IFBC-01 memberikan  aktivitas  tertinggi  terhadap  bakteri  uji Streptococcus  mutans dan Porphyromonas gingivalis dengan daerah hambatan 17.81 mm dan 22.89 mm. Menurut Davis & Stout (1971), apabila daerah hambatan 20 mm atau lebih berarti sangat kuat, daerah hambatan 10 – 20 mm berarti kuat. Dari hasil penelitian diperoleh  klasifikasi respon hambat pertumbuhan terhadap bakteri uji Streptococcus mutans adalah kuat dan Porphyromonas gingivalis sangat kuat.
Isolat  murni  dengan  kode  IFBC-01  kemudian  dilanjutkan  dengan  proses  fermentasi  dalam medium Potato Dekstrose Broth (PDB) selama 21 minggu, sambil diputar dengan kecepatan 200 rpm, dimana  pada  kecepatan  ini  diharapkan  proses  fermentasi  jamur  dapat  mencapai  fase  stationer  dan menghasilkan metabolit sekunder
Hasil fermentasi kemudian diekstraksi menggunakan pelarut etil asetat dengan metode ekstraksi cair- cair pada supernatan dan diperoleh ekstrak supernatant. Tujuan pemilihan metode tersebut karena supernatan bersifat cair dan senyawa kimia yang akan ditarik pada supernatan berada pada larutannya. Hasil  fermentasi  kemudian  dilanjutkan  untuk  pengujian  aktivitas  antibakteri  terhadap  beberapa mikroba uji  yang bertujuan  untuk melihat isolat  IFBC-01 yang memiliki potensi sebagai  antibakteri. Isolat  IFBC-01  dilarutkan  menggunakan  pelarut  etil  asetat  karena  etil  asetat  merupakan  salah  satu pelarut semi polar yang dapat menarik senyawa nonpolar hingga polar.
Window of Health : Jurnal Kesehatan, Vol. 2 No. 2 (April, 2019)                                        E-ISSN 2614-5375
Hasil  identifikasi  dengan  profil  KLT  dapat  dilihat  pada  tabel  2.  Identifikasi  profil  KLT  ini menggunakan eluen n-heksan dan etil asetat (4 : 1), hal ini disebabkan karena masing-masing pelarut memiliki  kepolaran  yang  berbeda  dapat  terpisahkan  dengan  eluen  tersebut  dan  diperoleh  bercak  dan zona  hambat  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri  uji.  Hasil  pengujian  secara  KLT-Bioautografi untuk ektrak etil asetat isolat IFBC-01 pada UV 254 nm dan 366 nm diperoleh 1 bercak aktif dengan nilai rf : 0.67 untuk bakteri uji Streptococcus mutans dan bakteri uji Porphyromonas gingivalis.
Profil kromatogram aktivitas antibakteri ekstrak etil asetat secara KLT-Bioautografi diperoleh 1 bercak dengan nilai rf : 0.67, yang berarti bahwa ada satu senyawa yang berperan sebagai anti bakteri dalam menghambat pertumbuhan bakteri penyebab karies gigi.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan dapat disimpulkan bahwa  isolat fungi endofit dari bunga  cengkeh  ( Syzygium  aromaticum L.)  dengan  kode  isolat  IFBC-01  memiliki  aktivitas  sebagai antibakteri  terhadap  bakteri  uji Streptococcus  mutans kuat  dan Porphyromonas  gingivalis yang merupakan bakteri penyebab karies gigi.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Fitriani, Dewi N, Budiarti YL. Efek antibakteri sediaan tunggal dan kombinasi air perasan jeruk nipis dan madu terhadap  Streptococcus mutans. Jurnal Kedokteran Gigi, 2016; 1(2): 146-150.
2. Andries  JR,  Gunawan  PN,  Supit  A.  Uji  Efek  Bakteri  Bunga  Cengkeh  terhadap  Bakteri Streptococcus mutans Secara In Vitro’. Jurnal e-GIGI (eG), 2014; Vol.14, no.2.
3. Huang  H,  She  Z,  Lin  Y,  Vrijmoed,  LLP,  Lin  W.  Cyclic  Peptides  from  an  Endophytic  Fungus Obtained  from  a  Mangrove  Leaf  (Kandelia  candel).  Journal  of  Natural  Products,  2007;  70(11): 1696-1699.
4. Rukmana  H,  Rahmat.  Untung  Selangit  dari  Agribisnis  Cengkeh.  Yogyakarta:  Lily  Publisher; 2016.
5. Maryani  H,  Suharmiati.  Tanaman  Obat  Untuk  Mengatasi  Penyakit  Pada  Usia  Lanjut.  Jakarta: AgroMedia Pustaka; 2006.
6. Hadi S. Pengambilan minyak atsiri Bunga cengkeh (clove oil) menggunakan pelarut n-heksan dan benzene. Jurnal Bahan Alam Terbarukan, 2012: Vol. 1 No. 2: 25-30.
7. Kasi  A,  Yolanda.  Uji  Efek  Antibakteri  Jamur  Endofit  Daun  Mangruve  (Avicenna  marina) Terhadap Bakteri Uji  Staphylococcus aureus dan Shigella dysenterae. Jurnal e-Biomedik  (eBn), 2016; vol.3, no.1: 112-117.
8. Widowati T, Bustanussalam, Sukiman H, Simanjuntak P. Isolasi Dan Identifikasi Kapang Endofit Dari  Tanaman  Kunyit  ( Curcuma  longa L.)  Sebagai  Penghasil  Antioksida . Biopropal  Industri , 2016; vol. 7 no.1: 9-16.
9. Davis  WW,  Stout  TR.  Disc  plate  methods  of  microbiological  antibiotic  assay.  Microbiology, 1971; 22: 659-665.
10. Kjer JA, Debbab HA, Aly, Proksch P. Methods for isolation of marine-derived  endophytic fungi and their bioactive secondary  products. Nature Protocols, 2010; vol.5, no.3: 479-490.