JFFI. 2018; 5(2) 299-308 www.jurnal.farmasi.umi.ac.id/index.php/fitofarmakaindonesia
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK DAUN DARUJU (Acanthus ilicifolius L.) DENGAN METODE PEREDAMAN RADIKAL BEBAS 1,1-DIPHENYIL-2-PICRYLHIDRAZIL
(DPPH)
Selpida Handayani * , Ahmad Najib, Nurul Purnama Wati Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia, Fakultas Farmasi, Universitas Muslim Indonesia
* selpida.handayani@umi.ac.id

## ABSTRAK
Sea  holly  leaves  (Acanthus  ilicifolius L .)  belongs  to  Acanthaceae  family,  contain  flavonoid  compounds, alkaloids, an phenols. This research aimed to determine the antioxidant activity of sea holly leaf extract by free radical damping  method  1,1-Diphenyl-2-Picrylhydrazil  (DPPH).  The  extraction  method  multilevel  maseration  using  n- hexane extract, ethyl acetate extract, and ethanol extract is 1,55%, 0,65% and 4,97% respectively. On each extract, the  antioxidant  activity  was  assayed  by  DPPH  free  radical  inhibition  method  by  measuring  is  absorbance  at  the maximum wavelength of 515nm using UV-VIS spectrophometer with quercetin compound as comparator. The result of antioxidant assay showed that IC 50 value, ethanol extract is 34,659 μg/mL (strong antioxidant), ethyl acetate extract is 162,512 μg/mL (weak antioxidant), n-hexane extract is361,730 μg/mL (not active as antioxidant).
Keywords: Antioxidant, Acanthus ilicifolius L , DPPH, Acanthaceae, Sea holly leaves

## I. PENDAHULUAN
Berubahnya  pola  hidup  masyarakat  serta pola  makan  yang  tidak  benar  dan  pertambahan  usia mengakibatkan  pembentukan  radikal  bebas  dalam tubuh. Padatnya aktivitas kerja cenderung menyebabkan  masyarakat  mengkonsumsi  makanan yang serba instan dan menerapkan pola makan yang tidak  sehat.  Makanan  yang  tidak  sehat  akan menyebabkan  akumulasi  jangka  panjang  terhadap radikal bebas di dalam tubuh. Lingkungan tercemar, kesalahan  pola  makan  dan  gaya  hidup,  mampu merangsang tumbuhnya radikal bebas ( free radical ) yang  dapat  merusak  tubuh  (Nugraha,  Batubara,  & Ginting, 2015, h. 1).
Untuk melindungi tubuh dari radikal bebas, terdapat senyawa antioksidan sebagai penangkal dan dapat menstabilkan radikal bebas dengan melengkapi kekurangan  elektron  radikal  bebas  sehingga  dapat menghambat  terjadinya  reaksi  berantai  (Julfitriyani, Runtuwene, Wewengkang, 2016, h.95).
Antioksidan  adalah  senyawa  yang  dapat melindungi  sel  dari  kerusakan  yang  disebabkan radikal bebas. Antioksidan akan berinteraksi dengan cara  menstabilkan  radikal  bebas  sehingga  dapat mencegah  kerusakan  karena  radikal  bebas  yang mungkin  dapat  terjadi  (Hamid et  al., 2010,  h.142).
Antioksidan  alami  berupa  senyawa  flavonoid  yang merupakan  kelompok  senyawa  polifenol  yang berasal  dari  tanaman  seperti  teh,  buah  -buahan  dan sayuran. Senyawa flavonoid  dapat bekerja langsung
untuk  meredam  radikal  bebas  oksigen  seperti superoksida yang dihasilkan dari reaksi enzim xantin oksidase.  Selain  bekerja  sebagai  antioksidan, flavonoid  dapat  bekerja  sebagai  bekerja  sebagai antiaterosklerosis,  antitrombogenik,  antiinflamasi, antitumor, antivirus dan antiosteoporosis (Simanjuntak, 2012).
Dey Avijit et al (2012, h.153) telah meneliti tentang  aktivitas  ekstrak  metanol  pada  tanaman daruju ( Acanthus ilicifolius L.) dengan menggunakan 1,1  Diphenil  2  Picrylhidrazil (DPPH)  hasilnya menunjukkan  bahwa  nilai  IC 50 ekstrak  metanol tanaman  daruju  ( Acanthus  ilicifolius L)  yaitu  5.1 µg/ml  yang  termasuk  pada  kategori  intensitas antioksidan yang sangat kuat.
Daun  daruju  ( Acanthus  ilicifolius L.) mengandung  Protein,  Alkaloid,  Resin,  Steroid, Tanin,  Glikosida,  karbohidrat,  Saponin,  Steroid, Sterol,  Terpenoid,  Fenol,  dan  katakol  (Sachin, Shahana  &  Gaikwad  Rupali,  2014  h.  27).  Daruju mengandung  flavonoid,  triterpenoid,  derivate  asam lemak, dan saponin. Daun daruju ( Acanthus ilicifolius L.)  memili  kandungan  flavonoid  yaitu  Quercetin, quercetin  3-O-β-D-glucopyranoside  dan  vitexin (Saranya et al ., 2015, h.245). Daruju  ( Acanthus  ilicifolius L)  digunakan sebagai anti inflamasi, diabetes, asma, hepatitis, dan pengobatan  rheumatoid  (Firdaus,  Prihanto,  & Nurdiani, 2013, h. 18).  Sedangkan pada daun daruju ( Acanthus  ilicifolius L)  digunakan  untuk  mengobati
rematik  dan  luka  pada  panah  beracun,  asma, pengobatan  akibat  gigitan  ular  dan  rematik (Wostmann  &  Liebezeit,  2008).  Dalam  pengobatan tradisional  Cina  (TCM)  daruju (Acanthus  ilicifolius
L .) digunakan  untuk  mengobati  peradangan, hepatitis, bengkak Limpa, asma dan tumor ganas (Lin Liu et al ., 2013, h. 796).
Berdasarkan  uraian  di  atas,  maka  telah dilakukan  penelitian  sebagai  skrining  awal  untuk menguji  toksisitas  ekstrak  daun  daruju  ( Acanthus ilicifolius L.) dengan menggunakan metode peredaman radikal bebas 1,1-diphenyl-2-
picrylhidrazil (DPPH).
II. METODE PENELITIAN A. Pengambilan dan Pengolahan Sampel
Daun daruju ( Acanthus ilicifolius L.) yang telah  dikumpulkan,  dicuci  bersih  terlebih  dahulu, setelah  itu  dilakukan  perajangan.  Selanjutnya, dikeringkan  dengan  cara  diangin-anginkan  tanpa paparan  sinar  matahari  langsung,  kemudian diserbukkan  dan  siap  untuk  diekstraksi  (Munawar, 2016).

## B. Ekstraksi Sampel
Simplisia  daun  daruju  ( Acanthus  ilicifolius
L.)  ditimbang  sebanyak  200  gram  dan  dimasukkan kedalam  wadah  maserasi,  kemudian  ditambahkan pelarut dengan perbandingan 1:10. Prosedur ekstraksi dilakukan  dengan  merendam  sampel  dengan  n- Heksan,  etil  asetat  dan  etanol  secara  berurutan. Dimaserasi selama 3 x 24 jam, dimana hasil maserasi kemudian  disaring  dengan  kertas  saring  sehingga dihasilkan  ekstrak  cair  dan  residu.  Proses  maserasi dilakukan  2  kali,  kemudian  ekstrak  cair  yang diperoleh  kemudian  dipekatkan  dengan  alat Rotary Vacum Evaporator pada suhu 50 0 C hingga diperoleh ekstrak  kental  n-Heksan,  etil  asetat  dan  etanol (Putranti, 2013, h.14).

## C. Uji Skrining
1. Flavonoid Ekstrak  dilarutkan  kemudian  dipipet  1  mL dan ditambahkan serbuk Mg secukupnya lalu ditetesi dengan larutan asam klorida pekat sebanyak 10 tetes.
Positif mengandung flavonoid jika terjadi perubahan warna  maka  positif  mengandung  flavonoid  (Gafur, Isa, dan Bialangi, 2014, h.4).
2. Alkaloid Ekstrak  dimasukkan  kedalam  masing- masing tabung reaksi kemudian ditetesi (Syarif et al., 2015, h.84):
a. HCl 0,5 N dan pereaksi Mayer, jika mengandung alkaloid  maka  akan  menghasilkan  endapan kuning.
b. HCl  0,5  N  dan  pereaksi  Bauchardat,  jika mengandung  alkaloid  maka  akan  menghasilkan endapan coklat.
c. HCl  0,5  N  dan  pereaksi  Dragendrof,  jika mengandung alkaloid akan menghasilkan endapan jingga.
3. Saponin Uji  busa:  Larutan  uji  dicampur  dengan  air dan dikocok. Diamati pembentukan buih, buih stabil selama 15 menit  maka  menandakan  adanya saponin (Waris, Najib, & Pratiwi, 2016, h.344).
4. Fenol
Uji  FeCl 3 :  Ekstrak  ditambahkan  3-4  tetes larutan  FeCl 3 .  Pembentukan  warna  hijau  atau  hijau biru menunjukkan adanya fenol (Syarif et al., 2015, h.84).
5. Steroid
Ekstrak dilarutkan kemudian dipipet sebanyak 1 mL dan ditambahkan 2 mL kloroform lalu dikocok,  kemudian  ditambahkan  2  tetes  larutan Lieberman  –  Bauchard.  Terbentuknya  larutan berwarna  merah  untuk  pertama  kali  kemudian berubah menjadi biru dan hijau menunjukkan reaksi positif (Syarif et al 2015, h.84).

## D. Pengujian Antioksidan
1. Pengujian Kualitatif
Ekstrak  n-Heksan,  etil  asetat  dan  etanol dilarutkan dengan menggunakan pelarut yang sesuai kemudian ditotolkan pada lempeng silika gel F 254 lalu dielusi  dengan  menggunakan  eluen  n-heksan  :  etil asetat  dengan  perbandingan  4:6  pada  ekstrak  n- heksana,  eluen  n-Heksan  :  etil  asetat  dengan perbandingan 6:4 pada ekstrak etil asetat dan eluen n- Heksan  :  etil  asetat  dengan  perbandingan  3:7  pada ekstrak etanol . Lempeng tersebut disemprot dengan menggunakan  asam  sulfat  10%  dan  kemudian lempeng  disemprotkan  dengan 1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl (DPPH)  dan  dibiarkan  mengering hingga terjadi perubahan dengan terbentuknya  noda berwarna  kuning  dengan  latar  berwarna  ungu  pada lempeng KLT (Syarif et al., 2015, h.85).
Penentuan  panjang  gelombang  maksimum terhadap  larutan  DPPH  dilakukan  dengan  cara mengukur  pada  panjang  gelombang  515  nm, kemudian dari hasil pengukuran ditentukan panjang gelombang maksimumnya (Syarif et al ., 2015, h.85).
2. Pengujian Kuantitatif
a. Pembuatan Larutan DPPH Sebanyak  3,5  mg  DPPH  dilarutkan  dengan metanol  dalam  labu  ukur  sampai  100  mL  sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 35 ppm.
b. Pembuatan Larutan Sampel
Sebanyak  10  mg  sampel  masing-masing dilarutkan  dengan  10  mL  metanol  p.a  dalam  labu ukur  10  mL  sehingga  diperoleh  konsentrasi  1000 ppm.  Kemudian  dilakukan  pengenceran  dalam  labu ukur  10  mL  dengan  menambahkanmetanol  p.a sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 20, 40, 60, 80 dan 100 ppm.
c. Pembuatan Larutan Kuersetin sebagai
Pembanding
Sebanyak  5  mg  larutan  perbandingan dilarutkan  dengan  50  mL  methanol  p.a  dalam  labu ukur 50mL sehingga diperoleh konsentrasi 100 ppm. Kemudian dilakukan pengenceran dalam ukur 50mL dengan  menambahkan  methanol  p.a  sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 2, 4, 6, 8 dan 10 ppm.
d. Penentuan Panjang Gelombang Maksimal
Sebanyak 3,5 mL larutan DPPH  35 ppm dan ditambahkan dengan 1 mL metanol. Serapan larutan diukur  dengan  spektrofotometer  UV-Vis  pada panjang gelombang 515 nm.
e. Penentuan Aktivitas Antioksidan Penentuan  aktivitas  antioksidan  dilakukan dengan cara 4 mL larutan DPPH 1000 ppm ditambah dengan masing-masing 1 mL larutan uji konsentrasi 20,  40,  60,  80  dan  100  ppm.  Larutan  ini  kemudian diukur  absorbansinya  pada  panjang  gelombang maksimum. Sebagai pembanding digunakan kuersetin  dengan  konsentrasi  2,  4, 6,  8  dan  10 ppm dengan perlakuan yang sama dengan larutan uji.
f. Penentuan Persentase Peredaman
% inhibisi = A1-A2 A1 ×100%
A1 = absorbansi kontrol A2 = absorbansi sampel Nilai  IC 50 merupakan  bilangan  yang menunjukkan konsentrasi sampel uji yang memberikan  peredaman  sebesar  50%  (mampu menghambat  atau  meredam  proses  oksidasi  sebesar 50%). Nilai IC 50 ditentukan dengan cara dibuat kurva linear antara konsentrasi larutan uji (sumbu x) dan % peredaman (sumbu y) dari persamaan y = a + bx dapat di hitung nilai IC 50 dengan menggunakan rumus
IC 50 = (50−𝑎ሻ
𝑏 diuji dikatakan mempunyai efek toksik apabila harga LC 50 < dari 1000 mg/mL.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Radikal  bebas  adalah  atom  atau  molekul yang  tidak  stabil  dan  sangat  reaktif  karena mengandung  satu  atau  lebih  elektron  tidak berpasangan  pada  orbital  terluarnya.    Untuk mencapai  kestabilan  atom  atau  molekul,  radikal bebas  akan  bereaksi  dengan  molekul  disekitarnya untuk  memperoleh  pasangan  elektron.    Reaksi  ini akan  berlangsung  terus-menerus  dalam  tubuh  dan bila  tidak  dihentikan  akan  menimbulkan  berbagai penyakit  seperti  kanker,  jantung,  katarak,  penuaan dini, serta penyakit degeneratif lainnya.  Oleh karena itu  tubuh  memerlukan  suatu  substansi  penting  yaitu antioksidan  yang  mampu  menangkap  radikal  bebas tersebut  sehingga  tidak  dapat  menginduksi  suatu penyakit (Kikuzaki et al., 2002).
Senyawa  antioksidan  yaitu  senyawa  yang mampu menetralisir atau menstabilkan radikal bebas dengan  cara  melengkapi  kekurangan  elektron  pada radikal  bebas  tersebut.  Substansi  ini  mampu mencegah terjadinya reaksi berantai dari pembentukan radikal bebas yang dapat menimbulkan stress oksidatif (ketidakseimbangan antara prooksidan  dan  antioksidan).  Ada  banyak  bahan pangan  yang  dapat  menjadi  sumber  antioksidan alami,  misalnya  rempah-rempah,  teh,  coklat, dedaunan, biji-biji, serelia, sayur-sayuran, enzim dan protein (Cheleng, 2015, h.2).
Pada  penelitian  ini  telah  dilakukan  uji aktivitas  antioksdain  ekstrak  daun  daruju  ( Acanthus illicifolius L.)  serta  menentukan  nilai  ic 50 dari  daun daruju  dengan  menggunakan  variasi  pelarut  untuk menentukan  pelarut  mana  yang  mengandung  nilai IC 50 yang baik serta mendekati range . Adapun tujuan penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  aktivitas antioksidan ekstrak daun daruju ( Acanthus ilicifolius L.).
Pada  penelitian  ini  menggunakan  daun daruju  ( Acanthus  ilicifolius L.)  yang  berasal  dari Makassar.  Daun  daruju  segar  kemudian  di dideterminasi di laboratorium farmakognosi- fitokimia  untuk  memastikan  bahwa  tanaman  yang digunakan  merupakan  salah  satu  tanaman  penting dalam proses selanjutnya. Hasil identifikasi tanaman menunjukkan  bahwa  sampel  adalah Acanthus ilicifolius L.  dari suku Acanthaceae. Selanjutnya  Sampel  daun  daruju  ( Acanthus ilicifolius L.) yang segar dibersihkan dan dikeringkan,  kemudian  diserbukkan  sehingga  siap untuk  diekstraksi.  Sampel  ditimbang  sebanyak  200 gram,  kemudian  diekstraksi  dengan  menggunakan ekstraksi bertingkat yang bertujuan untuk mendapatkan senyawa aktif dengan tingkat kepolaran yang berbeda dengan menggunakan tiga pelarut yaitu n-heksana, etil asetat, dan etanol. Kemudian masing- masing  ekstrak  cair  diuapkan  menggunakan  alat
rotary vacum evaporator untuk menghasilkan ekstrak kental.
Adapun  hasil  yang  diperoleh  dari  ekstraksi daun  daruju  ( Acanthus  ilicifolius L.)  dapat  dilihat pada tabel dibawah ini:

## Tabel 1. Berat Ekstrak dan Persen Rendemen
Jenis pelarut Berat sampel kering (g) Berat Ekstrak (g) Persen Rendemen (%) n -Heksan Etil Asetat Etanol 200 200 200 3,10 1,29 4,98 1,55 0,65 4,97
Setelah  didapat  ekstrak  kental  dari  daun daruju  ( Acanthus  ilicifolius L.)  kemudian  dilakukan skrinning  fitokimia  untuk  mengetahui  kandungan kimia dari ekstrak n -heksana, etil asetat, dan etanol.
Uji  skrinning  fitokimia  yang  dilakukan  adalah
alkaloid,  fenol,  flavonoid,  saponin  dan  steroid. Adapun  hasil  skrinning  fitokimia  dari  ekstrak  daun daruju ( Acanthus ilicifolius L.) dapat diliihat dibawah ini:
Tabel 2. Data Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak
Keterangan: (+) = Positif mengandung senyawa uji (-)  = Negatif mengandung senyawa uji
Dari tabel diatas diketahui ektrak n-heksana mengandung alkaloid, ekstrak etil asetat mengandung flavonoid,  alkaloid,  fenol  dan  steroid,  dan  pada ekstrak etanol mengandung flavonoid, alkaloid, fenol serta  steroid.  Kandungan  fenol  yang  di  dapat  pada ekstrak etil asetat dan etanol tetapi tidak didapatkan pada  ekstrak  n-heksana  menunjukkan  bahwa senyawa  fenol  cenderung  larut  pada  pelarut  polar. Menurut Chundakkadu (2011) daun daruju ( Acanthus
ilicifolius L.)  pada  ekstrak  methanol  memiliki kandungan  kimia  saponin,  alkaloid,  terpenoid, flavonoid, antrakuinon dan tannin.
Selanjutnya  dilakukan  uji  kualitatif  dan  uji kuantitatif dengan menggunakan metode peredaman bebas  DPPH.  Alasan  penggunaan  DPPH  untuk metode penangkapan radikal mempunyai keuntungan yaitu:  mudah  digunakan,  mempunyai  tingkat sensitivitas  tinggi,  dan  dapat menganalisis  sejumlah
Uji Ekstrak Kental Pustaka n-Heksan Etil asetat Metanol 1. Flavonoid - + + Positif jika terjadi perubahan warna (Endang 2014) 2. Alkaloid a. Bouchardat + + + Positif jika terbentuk endapan coklat (Syarif et al 2015) b. Mayer + + + Positif jika terbentuk endapan kuning (Syarif et al 2015) c. Dragendorf + + + Positif jika terbentuk endapan jingga (Syarif et al 2015) 3. Saponin - - - Positif jika terbentuk busa (Waris, Najib, & Pratiwi 2016) 4. Fenol - + + Positf jika terbentuk warna hijau/ hijau biru (Syarif et al 2015) 5. Steroid - + - Positif jika berwarna merah berubah menjadi biru/hijau (Syarif et al 2015)
besar sampel dalam jangka waktu yang singkat selain itu  secara  teknis  simpel,  dapat  dikerjakan  dengan cepat  dan  hanya  membutuhkan  spektrofotometer UV-Vis.
Pada pengujian antioksidan diawali dengan uji  kualitatif  dimana  menggunakan  kromatografi lapis tipis. Uji kualitatif dilakukan untuk mengetahui ada tidaknya aktivitas antioksidan pada ekstrak daun daruju.  Uji  kualitatif  diawali  dengan  melarutkan Ekstrak daun daruju dengan masing-masing pelarut, setelah  itu  ditotolkan  pada  lempeng  klt.  Kemudian dielusi dengan n-heksana dan etil asetat menggunakan  perbandingan  pada  masing-masing ekstrak  yaitu  pada  ekstrak  n-heksana  menggunakan eluen n-heksana : etil asetat (4:6), ekstrak etil asetat menggunakan  eluen  n-heksana  :  etil  asetat  (  6  :  4  ) dan  ekstrak  etanol  menggunakan  eluen  n-heksana  : etil asetat ( 3:7 ). Kemudian diamati pada sinar uv 254 dan 366 nm. Lempeng disemprot dengan asam sulfat 10  %  dan  selanjutnya  disemprot  dengan  DPPH, didiamkan  selama  30  menit  dan  diamati  perubahan warna  dari  ungu  menjadi  kuning.  Senyawa antioksidan  akan  bereaksi  dengan  radikal  DPPH melalui  mekanisme  donasi  atom  hidrogen  dan menyebabkan terjadinya peluruhan  warna dari ungu ke kuning (Handayani, Ahmad dan Sudir 2014, h.90).
Adapun hasil dari uji kualitatif ekstrak daun daruju dapat dilihat pada gambar:

## a            b            c          d         e
Gambar 1 . Kromatografi lapis tipis pemantauan ekstrak n-heksana dengan fase silica gel F254, fase gerak n-heksana-etil asetat (4 : 6 ), (a) sinar tampak, (b) UV 366, (c) UV 254, (d) H 2 SO 4 10 % dibawah sinar tampak, (e) DPPH
Berdasarkan  gambar  1  hasil  uji  kualitatif ekstrak  n-heksana  daun  daruju  ( Acanthus  ilicifolius
L.)  yaitu  ekstrak  n-heksana  daun  daruju  ditotolkan pada  lempeng  KLT  dan  dielusi  dengan  eluen  n- heksan : etil asetat dengan perbandingan 4:6, diamati pada  sinar  uv  254  dan  uv  366  kemudian  disemprot dengan menggunakan larutan asam sulfat dan larutan DPPH. Hasil yang diperoleh dari uji kualitatif ekstrak
n-heksana  daun  daruju  menunjukkan  hasil  positif mengandung  antioksidan  yang  ditandai  dengan terbentuknya  warna  kuning  dengan  latar  ungu menunjukkan adanya aktivitas antiradikal bebas.

## a          b         c          d         e
Gambar 2 . Kromatografi lapis tipis pemantauan ekstrak etil asetat dengan fase silica gel F254, fase gerak n-heksana-etil asetat (6 : 4), (a) sinar tampak, (b) UV 366, (c) UV 254, (d) H 2 SO 4 10 % dibawah sinar tampak, (e) DPPH
Berdasarkan  gambar  2  hasil  uji  kualitatif ekstrak  n-heksana  daun  daruju  ( Acanthus  ilicifolius L.)  yaitu  ekstrak  etil  asetat  daun  daruju  ditotolkan pada  lempeng  KLT  dan  dielusi  dengan  eluen  n- heksan : etil asetat dengan perbandingan 6:4, diamati pada  sinar  uv  254  dan  uv  366  kemudian  disemprot dengan menggunakan larutan asam sulfat dan larutan DPPH. Hasil yang diperoleh dari uji kualitatif ekstrak etil  asetat  daun  daruju  menunjukkan  hasil  positif mengandung  antioksidan  yang  ditandai  dengan terbentuknya  warna  kuning  dengan  latar  ungu menunjukkan adanya aktivitas antiradikal bebas.

## a          b         c        d         e
Gambar 3 . Kromatografi lapis tipis pemantauan ekstrak etanol dengan fase silica gel F254, fase gerak n-heksana-etil asetat (3:7), (a) sinar tampak, (b) UV 366, (c) UV 254, (d) H 2 SO 4 10 % dibawah sinar tampak, (e) DPPH
Berdasarkan  gambar  3  hasil  uji  kualitatif ekstrak  n-heksana  daun  daruju  ( Acanthus  ilicifolius L.) yaitu ekstrak etanol daun daruju ditotolkan pada lempeng  KLT  dan  dielusi  dengan  eluen  n-heksan  : etil  asetat  dengan  perbandingan  3:7,  diamati  pada sinar uv 254 dan uv 366 kemudian disemprot dengan menggunakan larutan asam sulfat dan larutan DPPH. Hasil yang diperoleh dari uji kualitatif ekstrak etanol daun daruju menunjukkan hasil positif mengandung antioksidan  yang  ditandai  dengan  terbentuknya warna  kuning  dengan  latar  ungu  menunjukkan adanya aktivitas antiradikal bebas.
Kemudian dilakukan uji kuantitatif mengetahui berapa kadar nilai IC 50 dari ekstrak daun daruju.  Pada  masing  masing  ekstrak  daun  daruju dibuat  larutan  stok  1000  ppm  dan  dilarutkan menggunakan metanol pa dikarenakan metanol tidak mempengaruhi  dalam  reaksi  antara  sampel  uji sebagai  antioksidan  dengan  DPPH  sebagai  radikal bebas  (Syarif et  al 2015,  h.87).    Dari  larutan  stok tersebut  dibuat  beberapa  konsentrasi  20  ppm,  40 ppm, 60 ppm, 80 ppm dan 100 ppm. Sedangkan untuk konsentrasi  pembanding  adalah  2  ppm,  4  ppm,  6 ppm,  8  ppm  dan  10  ppm.  Pembanding  yang digunakan  sebagai  kontrol  positif  adalah  kuersetin. Kuersetin  digunakan  sebagai  pembanding  karena merupakan golongan flavonoid yang sering
ditemukan  dalam  tumbuhan  dan  diketahui  memiliki banyak  aktivitas  biologis,  khususnya  antioksidan (Perwiratami, Suvery dan Cahyono 2014, h.37).
Kemudian pada masing-masing konsentrasi dipipet 0,5 ml sampel dan ditambahkan 3,5 ml larutan DPPH  35  ppm.  Dan  pengukuran  absorbansi  sampel diukur  pada  panjang  gelombang  maksimum  dengan panjang  gelombang  515  nm.  Pengukuran  aktivitas antioksidan sampel dilakukan pada panjang gelombang  515  nm  yang  merupakan  panjang gelombang maksimum DPPH (Permana, 2003) Setelah dilakukan pengerjaan dan pengukuran,  dilakukan  perhitungan  persen  inhibisi dan IC50 antiradikal bebas dari ekstrak daun daruju. Persen inhibisi adalah kemampuan suatu bahan untuk menghambat aktivitas radikal bebas yang berhubungan  dengan  konsentarasi  suatu  sampel, sedangkan  IC50  merupakan  salah  satu  parameter yang  digunakan  untuk  menginterprestasikan  hasil dari pengujian DPPH, semakin rendah nilai IC50 dari suatu sampel maka kemampuan sebagai antioksidan semakin  besar  (Aminah,  Muzakir  Baits  dan  Ummi Kalsum 2016, h. 149).
Pada Tabel 3. dapat dilihat hasil pengukuran absorbansi,  persentase  pengikatan  DPPH,  dan  nilai IC 50 dari ekstrak n-Heksan, etil asetat dan etanol daun daruju dan pembanding kuersetin.
Tabel  3 .  Pengukuran  Absorbansi,  Persentase  inhibisi  dari  ekstrak  n-Heksan,  etilasetat  dan  etanol  daun  daruju ( Acanthus ilicifolius L.) Sampel Konsentrasi (ppm) Absorbansi blanko Absorbansi sampel % inhibisi Ekstrak n-Heksan 20 40 60 80 100 0,763 0,763 0,763 0,763 0,763 0,659 0,648 0,63 0,614 0,594 13,630 15,072 17,431 19,528 22,149 Ekstrak etil asetat 20 40 60 80 100 0,763 0,763 0,763 0,763 0,763 0,571 0,545 0,524 0,5496 0,461 25,163 28,571 31,323 34,993 39,580 Ekstrak etanol 20 40 60 80 100 0,763 0,763 0,763 0,763 0,763 0,399 0,375 0,353 0,333 0,317 47,706 50,851 53,735 56,356 58,453 Kuersetin 2 4 6 8 10 0,763 0,763 0,763 0,763 0,763 0,631 0,573 0,519 0,483 0,431 17,300 24,901 31,979 36,697 43,512
Kemudian  dibuat  persamaan  regresi  linear antara konsentrasi (ug/mL) sebagai absisnya (sumbu x)  dan  nilai  aktivitas  antioksidan  (%)  sebagai ordinatnya (sumbu y) dari persamaan regresi tersebut dapat  ditentukan  nilai  IC 50 masing-masing  ekstrak. Regresi  linear  yang  didapat  oleh  ekstrak  n-Heksan daun daruju adalah y = 0,1075+11,114 dengan nilai R 2 adalah  0,9917;  ekstrak  etil  asetat  daun  daruju adalah y = 0,1763x + 21,349 dengan nilai R 2 adalah 0,9916  dan  ekstrak  etanol  daun  daruju  adalah  y  =
0,135x  +  45,321  dengan  nilai  R 2 adalah  0,9945 sedangkan  kuersetin  adalah  y  =  3,211x  +  11,612 dengan nilai R 2 adalah 0,9943. Kemudian dari regresi linear tersebut dimasukkan dalam persamaan y = bx+ a, dimana y adalah % inhibisi 50 dan x adalah nilai IC 50 . Grafik  hubungan antara  konsentrasi ekstrak  n- Heksan, ekstrak etil asetat, ekstrak etanol daun daruju dan  pembanding  kuersetin  dengan  %  inhibisi  dapat dilihat pada gambar berikut.
Gambar 4. Grafik hubungan konsentrasi ekstrak n-heksana daun daruju ( Acanthus ilicifolius L.) dengan % inhibisi
Gambar 5. Grafik hubungan konsentrasi ekstrak etil asetat daun daruju ( Acanthus ilicifolius L.) dengan % inhibisi
y = 0.1075x + 11.114 R² = 0.9917 0 5 10 15 20 25 0 50 100 150 inh ibi si konsentrasi ppm n-Heksana Series1 Linear (Series1) y = 0.1763x + 21.349 R² = 0.9916 0 10 20 30 40 50 0 50 100 150 inh ibi si konsentrasi ppm Etil Asetat Series1 Linear (Series1)
Gambar 6. Grafik hubungan konsentrasi ekstrak etanol daun daruju ( Acanthus ilicifolius L.) dengan % inhibisi
Gambar 7. Grafik hubungan konsentrasi ekstrak kuersetin daun daruju ( Acanthus ilicifolius L.) dengan % inhibisi
Tabel 4 . Nilai IC 50 dari ekstrak n-Heksan, etil asetat dan  etanol  daun  daruju  ( Acanthus  ilicifolius )  dan pembanding kuersetin.
Sampel IC 50 (μg/mL) Ekstrak n-Heksan 361,730 Ekstrak etil asetat Ekstrak etanol Ekstrak Kuersetin 162, 512 34, 659 11,955 Menurut Phongpaichit et al (2007, hal. 522), suatu  senyawa  dikatakan  memiliki  aktivitas  sebagai antioksidan sangat kuat apabila nilai IC 50 < 10 μg/mL, kuat  apabila  nilai  IC 50 antara  10-50  μg/mL,  sedang apabila  nilai  IC 50 berkisar  antara  50-100  μg/mL, lemah  apabila  nilaiIC 50 berkisar  antara  100-250 μg/mL dan tidak aktif apabila IC 50 diatas 250 μg/mL. Dari hasil yang di dapat pada tabel 5 diketahui pada ekstrak  n-heksana  daun  daruju  memiliki  aktivitas
antioksidan yang tidak aktif dengan nilai IC 50 adalah 361,730  μg/mL,  pada  ekstrak  etil  asetat  memiliki aktvitas  antioksidan  lemah  dengan  nilai  IC 50 adalah 162,512 μg/mL dan pada ekstrak etanol daun daruju memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  tinggi  dengan nilai  IC 50 adalah  34,659  μg/mL.  Adanya  perbedaan nilai  IC 50 pada  masing-masing  ekstrak  dikarenakan adanya perbedaannya kandungan kimia yang terdapat pada  masing-masing  ekstrak  tersebut.  Sehingga mempengaruhi  persen  inhibis  dan  nilai  IC 50 yang diperoleh.

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan, maka dapat disumpulkan bahwa aktivitas antioksidan eksktrak daun daruju ( Acanthus ilicifolius L.)  pada  ekstrak  n-heksana  aktivitas antioksidan  tidak  aktif  dengan  nilai  IC 50 361,730 µg/ml,  pada  ekstrak  etil  asetat  aktivitas  antioksidan lemah  dengan  nilai  IC 50 162,512  µg/ml  dan  pada
y = 0.135x + 45.321 R² = 0.9945 0 20 40 60 80 0 50 100 150 inh ibi si konsentrasi ppm Etanol Series1 Linear (Series1) y = 3,211x + 11,612 R² = 0,9943 0 10 20 30 40 50 0,0 5,0 10,0 15,0 inh ibi si konsentrasi ppm Kuersetin Series1 Linear (Series1)
ekstrak  etanol  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang kuat  dengan  nilai  IC 50 34,659  µg/ml.  Sedangkan kuersetin  sebagai  pembanding  memiliki  nilai  IC 50 11,955 µg/ml.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim  1986,  ‘Sediaan  Galenik’, Edisi  1,
Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, p.10.
Avijit, D, Sarkar, R, Howlader, IS, Hamiduzzaman,
& Al-Hossain, 2012,  ‘Phytochemical Screening  and  The  Evaluation  Of  The Antioxidant,  Cytotoxic  And  Antimicrobial Properties  Of Acanthus  ilicifolius (Family: Acanthaceae)’, Vol.3, no. 8, pp. 153.
Djamil,  R,  Desfonda,  L,  2010,  ’Isolasi  Dan Identifikasi Jenis Senyawa Flavonoid dalam Fase  n-Butanol  dari  Ekstrak  Metanol  Daun
Daruju ( Acanthus ilicifolius Linn.), Acanthaceae.
Erviana, L, Malik, A & Najib, A 2016, Uji Aktivitas Antiradikal  Bebas  Ekstrak  Etanol  Daun Kemangi  ( Ocimum  basilicum L.)  Dengan Menggunakan Metode DPPH, Jurnal Fitofarmaka Indonesia, vol 3, no. 2, pp.164- 168.
Firdaus,  M,  Prihanto,  AA,  Nurdiani,  R,  2013,
‘Antioxidant  and  cytotoxic  activity  of Acanthus ilicifolius flower’, Vol,3, no.1, pp 17-21.
Gandjar,  I,G  &  Rohman,  A  2007,  Kimia  Farmasi Analisis,  Pustaka  Pelajar,  Yogyakarta, pp.261-262
Gayathri,  G.A,  Mahaligam,  G,  Nathiya,  R,  2014,
‘Quantitative  Phytochemical  Analysis,  In vitro  Reducing  Power  and  Anti-oxidant Activity  of  Methanol  Leaf  Extract  of Acanthus  ilicifolius ’,  Vol.7,  no.1,  pp.  181- 186 Govindasamy, C, Arulpriya, M,2013, ’ Antimicrobial
activity  of Acanthus  ilicifolius :  Skin infection pathogens’ , Vol.3, no.3, pp. 180- 183.
Gusdinar,  T,  Herowati,  R,  Kartasasmita,  RE,  & Adnyana,  IK  2009, Sintesis  Kuersetin Terklorinasi  dan  Aktivitas  Perlindungan terhadap Tukak Lambung , Majalah Farmasi Indonesia , 20 (4), pp. 171-177.
Hamid, AA, Aiyelaagbae, OO, Usman, LA, Ameen,
OM,  &  Lawal,  A,  2010,  ‘Antioxidants:  Its medicinal and pharmacological
Applications’, Vol. 4, no.8, pp 142-151. Hanani,  Endang,    2015,  Analisis  Fitokimia,  Buku Kedokteran EGC, Jakarta, p.10.
Harborne,  J,  B.  1987,  Metode  Fitokimia:  Penuntun Cara  Modern  Menganalisa  Tumbuhan
Terbitan  Kedua,  Terjemahan  Kosasih Padmawinata  dan  Iwang  Soediro,  ITB, Bandung. Harmita.,  2006, Petunjuk  pelaksanaan  Validasi Metode dan Cara Perhitungannya . FMIPA,
Universitas Indonesia: Depok
Irianti,  T,  Puspitasari,  A,  Suryani,  E,’  Aktivitas
Penangkapan Radikal 2,2-Difenil-1-
Pikrilhidrazil  oleh  Ekstrak  Etanolik  Batang Brotowali ( Tinospora crispa (L.) Miers) dan Fraksi-Fraksinya,  The  Activity  of  Radical Scavenging  2,2-Difenil-1-Pikrilhidrazil  by Ethanolic Extracts of (Tinospora crispa (L.) Miers) Stem and Its Fractions, Vol.16, no.3, pp.139-146.
Julfitriyani, Runtuwene, RM, Wewengkang, D, 2016, ‘Uji  Aktivitas  Antioksidan  Dan  Toksisitas Ekstrak Etanol Daun Foki Sabarati ( Solanum Torvum ), Vol.5, no.3. Kosasih,  EN,  Setiabudhi,  T,  Heryanto,  H  2004, Peranan  Antioksidan  pada  Lanjut  Usia, Pusat Kajian Nasional Masalah Lanjut Usia, Jakarta, hal. 56-57.
Kumalaningsih,  S  2006,  Antioksidan  Alami,
Penangkal Radikal Bebas: Sumber, Manfaat, Cara Penyediaan Dan Pengolahan, Cetakan  Pertama,  Trubus  Agrisarana, Surabaya, hal. 24.
Liu, Lin, Fan, Hui, Qi, Ping, Mei, Yan, Zhou, Lijuan, Liping,  Cai,  Xing,  Lin  &  Lin,  Jun 2013,’Synthesis and hepatoprotective properties of Acanthus ilicifolius alkaloid A and  its  derivatives’, Exprimental  and therapeutic medicine , Vol. 6, pp. 796-802. Marliana,  SD,  Suryanti,  Venty  &  Suyono,  2005,
Skrining Fitokimia
dan Analisis
Kromatografi Lapis Tipis Komponen Kimia Buah  Labu  Siam  ( Sechium  edule  jacq. Swartz )  Dalam  Ekstrak  Etanol, Universitas Sebelas Maret , Surakarta Miksusanti,  Elfita,  Hotdelina,  S,  2012,  ‘ Aktivitas Antioksidan  dan  Sifat  Kestabilan  Warna Campuran  Ekstrak  Etil  Asetat  Kulit  Buah Manggis  ( Garcinia  mangostana L.)  dan Kayu Secang ( Caesalpinia sappan L.)’, Vol.
15, no.2.
Molyneux,  P.,  2004,  The  Use  Of  The  Stable  Free Radical  DiphenylPicrylhydrazyl  (DPPH) For Estimating Antioxidant Activity, Songklanakarin J. Sci. Technol, vol 26, no.2, pp.211-219. Munawar,  Lungguh,  2016,  Pengaruh  Konsentrasi Senyawa Phospat Dan Perbandingan  Air  Perebusan  Terhadap Karakteristik Tepung Instan
Hanjeli (Coix Lacryma-Jobi L.), Universitas Pasundan Bandung Najib,  A.,  Hartati,  S.  and  Elya,  B.  (2011)  ‘In  vitro bioassay  of  n-buthanol  isolate  of  Acorus calamus  L.  on  inhibitory  of  activity  a- glucosidase’, International  Journal  of PharmTech Research , 3(4), pp. 2085–2088. Nugraha, R, Batubara, R, Ginting, H,’ Uji Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Daun  Gaharu (Aquilaria  malaccensis  Lamk )  Berdasarkan Umur  Pohon,  Activity  Testing  of  Ethanol Extract  Antioxidant  of  Agarwood  Leafs ( Aquilaria malaccensis Lamk ) Based on The
Age Of The Tree’, 2015, Vol. 4, no.1
Noor, Y., R. Khazali, M. Suryadiputra, I. N. N. 1999,
‘Panduan Pengenalan Mangrove di Indonesia’, Wetlands International- Indonesia Programme, Bogor. Sachin,  R,  Shahana,  K,  Rupali,  G,  2014,  ‘Isolation and characterization of major
phytoconstituents  from  the  leaves  of Rhizophora mucronata Lamk and Acanthus ilicifolius Linn. ‘, Vol. 2, no.2, pp. 51-59.
Saranya,  A,  Ramanathan,  T,  Kesavanarayanan,  SK, &  Adam,  A  2015,  ‘Traditional  Medical Uses, Chemical Constituents and Biological Activities  of  a  Mangrove  Plant, Acanthus ilicifolius Linn.: A Brief Review’, Vol. 15,
no. 2, pp. 243-250.
Silalahi,  J  2006,  Makanan  Fungsional,  Penerbit Kanisius, Yogyakarta, p.40. Simanjuntak, K, 2012, ‘Peran Antioksidan Flavonoid Dalam  Meningkatkan Kesehatan’, Vol.  23, no. 3, pp 135-140. Sudjaji,  2007, Kimia  Farmasi  Analisis, Pustaka Pelajar, Yogyakarta. Suparmi,  Anshory,  H,  Dirmawati,  N,  2012,’  Uji Aktivitas  Etanol  Kulit  Buah  Rambutan ( Nephelium lappaceum , L.) dengan  metode Linoleat-Tiosianat’, Vol.9, no.1 Syamsuni, A, D, H 2006, Ilmu Resep, Peneribit Buku Kedokteran, EGC, Jakarta, p.243. Syarif,  RA,  Muhajir,  M,  Ahmad,  AR  &  Malik,  A 2015,  Identifikasi  Golongan  Senyawa Antioksidan Dengan Menggunakan Metode Peredaman  Radikal  DPPH  Ekstrak  Etanol Daun Cordia  myxa L.,  Jurnal  Fitofarmaka Indonesia, vol 2, no. 1, pp. 83-89. Tarigan, D., 2009, Penentuan Kadar Natrium Sklamat Minuman  Ringan  Secara  Spektrofotometri Uv-Vis, Skripsi ,  Universitas  Sumatera Utara, Medan. Utomo,  AR,  Retnowati,  R.,  Juswono,  UP  2013, ‘Pengaruh  Konsentrasi  Minyak  Kenanga ( Cananga  odorata )  Terhadap  Aktivitasnya
Sebagai Antiradikal Bebas’, Kimia Student Journal, Vol 1 (02), pp. 265
Waris,  R,  Najib,  A  &  Pratiwi,  ED  2016,  Radical Scavenging  Activity  of  Leaf  Extract  of Edible Hibiscus ( Abelmoschus Manihot (L.)
Medik) Using 1,1- Diphenyl-2-Picryl
Hydrazil  (DPPH),  International  Journal  of PharmTech Research, vol 9, no. 6, pp. 343- 347.
Widyowati,  H,  Ulfah,  M,  Sumantri,  2014,  ‘Uji Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Etanolik
Herba Alfalfa ( Medicago sativa L.) Dengan Metode DPPH ( 1,1-diphenil-2-
pikrylhidrazil )’, Vol.11, no. 1
Winarsih  H,  2007,  Antioksidan  Alami  dan  Radikal Bebas;  Potensi  dan  Aplikasinya  dalam Kesehatan, Kanisius, Yogyakarta.
Wostmann,  R,  Liebezeit,  G,  2008,’  Chemical Composition  of  the  Mangrove  Holly Acanthus ilicifolius (Acanthaceae) – Review and  Additional  Data’. Senckenbergiana Maritima , vol 38 no. 1 hal. 31-3 Yenrina,  R,  &  Sayuti,  K  2015, Antioksidan,  Alami dan  Sintetik ,  Andalas  University  Press, Padang, pp 75-76.
Yuliani,  S,  Satuhu,  S.,  2012.  Panduan  lengkap minyak atsiri. Penebar swadaya: Jakarta.