DOI: https://doi.org/10.24114/jbio.v7i3.28837

## JBIO: JURNAL BIOSAINS (The Journal of Biosciences)
http://jurnal.unimed.ac.id/2012/index.php/biosains email : jbiosains@unimed.ac.id

## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI PENYEBAB INFEKSI PADA KULIT DARI  JAMUR ENDOFIT DAUN KEMANGI ( Ocimum sanctum L.)
Uswatun Hasanah*, Ahmad Shafwan S Pulungan, Endang Sulistyarini Gultom Program Studi Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Negeri Medan *email korespondensi: uswatun.hasanah241@gmail.com
Diterima: Oktober.; Direvisi: November; Disetujui: Desember 2021

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menemukan  isolat  jamur  endofit  dari  daun  kemangi  ( Ocimum sanctum L.) yang  memiliki  daya  hambat  terhadap  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus, Staphylococcus epidermidis dan Streptococcus pyogenes. Target khusus yang ingin dicapai dari penelitian ini  adalah  daya  hambat  dari  masing-masing  isolat  jamur  endofit  daun  kemangi  ( Ocimum  sanctum L.) terhadap Staphylococcus  aureus,  Staphylococcus  epidermidis dan Streptococcus  pyogenes .  Metode  yang digunakan dalam penelitian ini adalah dengan  uji antibakteri menggunakan metode Kirby-Bour dengan bakteri uji berupa bakteri pathogen. Penelitian ini menghasilkan 26 isolat jamur endofit dari daun kemangi ( Ocimum  sanctum L.),  dua  (2)  di  antaranya  memiliki  daya  hambat  terhadap  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis dan Streptococcus pyogenes . Kesimpulan yang didapat dari penelitian ini adalah zona hambat yang dihasilkan rata-rata 11.3-12.6 mm, tergolong memiliki respon hambatan pertumbuhan yang kuat.
Kata kunci : daya hambat, daun kemangi , jamur endofit, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis dan Streptococcus pyogenes .

## ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST CAUSES INFECTIONS ON THE SKIN FROM
THE ENDOPHYTIC FUNGI OF BASIL LEAVES ( Ocimum sanctum L.)

## ABSTRACT
The aim of this study was to find isolates of endophytic fungi from basil leaves (Ocimum sanctum L.)  which  had  inhibition  against  the  growth  of  Staphylococcus  aureus,  Staphylococcus  epidermidis  and Streptococcus pyogenes bacteria. The specific target to be achieved from this research is the inhibition of each  isolate  of  the  basil  leaf  endophytic  fungus  (Ocimum  sanctum  L.)  against  Staphylococcus  aureus, Staphylococcus  epidermidis  and  Streptococcus  pyogenes.  The  method  used  in  this  research  is  an antibacterial test using the Kirby-Bour method with the test bacteria in the form of pathogenic bacteria. This study produced 26 isolates of endophytic fungi from basil (Ocimum sanctum L.) leaves, two (2) of which  were  inhibitory  to  the  growth  of  Staphylococcus  aureus,  Staphylococcus  epidermidis  and Streptococcus  pyogenes  bacteria.  The  conclusion  obtained  from  this  study  is  that  the  inhibition  zone produced is on average 11.3-12.6 mm, classified as having a strong growth inhibition response.
Keyword:  inhibition,  basil  leaves,  endophytic  fungi,  Staphylococcus  aureus,  Staphylococcus epidermidis and Streptococcus pyogenes bacteria.
DOI: https://doi.org/10.24114/jbio.v7i3.28837

## Pendahuluan
Penyakit  infeksi  merupakan  salah  satu permasalahan kesehatan di masyarakat yang tidak pernah dapat diatasi secara tuntas. Penyakit infeksi dapat ditularkan dari satu orang ke orang lain atau dari  hewan  ke  manusia.  Penyakit  infeksi  dapat disebabkan oleh beberapa mikroorganisme seperti bakteri, virus, parasit, dan jamur (Libertucci, et al. 2019).  Penyakit  karena  bakteri  sering  terjadi  di lingkungan  sekitar,  salah  satunya  adalah  jerawat yang  umumnya  ditemukan  pada  masa  remaja. Staphylococcus  epidermidis umumnya  dapat menimbulkan  penyakit  pembengkakan  (abses) seperti jerawat, infeksi kulit, infeksi saluran kemih, dan  infeksi  ginjal  (Radji,  2011).  Selain  bakteri Staphylococcus  epidermidis yang  menyebabkan penyakit, Staphylococcus  aureus juga  merupakan bakteri  patogen  yang  utama  pada  manusia. Staphylococcus  aureus bersifat  koagulase  positif, yang  membedakan  dengan  spesies  lain.  Hampir setiap  orang  pernah  mengalami  berbagai  infeksi karena Staphylococcus  aureus selama  hidupnya, dari  keracunan  makanan  yang  berat  atau  infeksi kulit  yang  kecil,  sampai  infeksi  yang  tidak  bisa disembuhkan (Ondusko et al, 2018). Streptococcus pyogenes dapat  menyebabkan  infeksi  superfisial atau sistemik berdasarkan toksin dan respon imun yang memerantarai mekanisme timbulnya penyakit.  Penyakit  yang  umum  disebabkan  oleh bakteri ini adalah faringitis bakterial dan impetigo. Penyakit  impetigo  merupakan  infeksi  kulit  yang disebabkan oleh bakteri Staphylococcus aureus atau Streptococcus pyogene s yang mengakibatkan  timbul  ruam  merah  yang  berisi cairan dan dapat pecah kapan saja. Jika ruam merah pecah,  maka  dapat  meninggalkan  luka  pada kulit. Ruam  merah dapat  timbul  pada  beberapa bagian  tubuh  seperti  area  hidung,  mulut,  dan tangan.
Bakteri Staphylococcus aureus di Asia mulai mengalami resisten terhadap antimikroba ciprofloxacin  dengan  angka  resistensi  mencapai 37% dan meticilin 70% dan di Indonesia mencapai 23.5%  (Jacob, 2005).  Oleh  sebab itu  perlu  adanya alternatif  lain  untuk  pengobatan  infeksi  yang disebabkan  oeh  bakteri Staphylococcus  aureus dengan  memanfaatkan  tumbuhan  yang  memiliki senyawa bioaktif sebagai antibakteri salah satunya adalah kemangi ( Ocimum sanctum L.) Staphylococcus  epidermidis mempunyai kepekaan  tertinggi  berturut-turut  terhadap kanamisin,  netilmisin,  tobramisin,  sefotaksim, seftizoksim,  amoksisilin-asam  klavulanat  dan kotrimoksazol.  Resistensi  tertinggi  berturut-turut diberikan untuk ampisilin, amoksisilin, penisilin G. tetrasiklin dan kloramfenikol.
Persentase  antibiotika  yang  sensitive terhadap Streptococcus  pyogenes ,  yaitu  co- amoksiklav  72,72%,  siprofloksasin  54,54%, cortimoksazol  36,36%,  amoksisislin  18,18%,  dan Eritromisin 0%. Untuk antibiotika yang menujukkan  intermedit  persentasinya  masing masing yaitu siprofloksasin 45,45%, co-amoksiklav 27,27%, Eritromisin 18,18%, amoksisislin 0%, dan cortimoksazol  0%.  Sedangkan  persentasi  resisten yang  dihasilkan  dari  masingmasing  antibiotika, yaitu  amoksisislin  81,81%,  Eritromisin  81,81%, cortimoksazol  63,63%,  co-amoksiklav  0%,  dan siprofloksazim 0% (Asriadi, 2012). Seiring tingkat resistensi yang meningkat ditandaai dengan tingkat sensitivitas  antibiotic  yang  menurun,  maka diperlukan  usaha  untuk  mencari  alternatif antimikroba.  Salah  satunya  adalah  menggunakan bahan  alami  yang  tersedia  melimpah  dialam. Banyak  bahan  alami  yang  tersedia  yang  dapat dijadikan  sebagai  antimikroba  seperti  sembung rambat  (Nasution  et  al,  2019),  Delima  Merah (Pulungan dkk, 2021)
Kandungan  minyak  atsiri  dalam  daun kemangi  mampu  menghambat  pertumbuhan bakteri Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli, Bacilus  cereus,  Pseudomonas  fluorescens,  Candida albicans,  Streptococcus  alfa dan Bacillus  subtilis (Sudarsono et al ., 2002). Penelitian  mengenai  aktivitas  antibakteri dari  ekstrak  daun  kemangi  ( Ocimum  santum L) telah  banyak  dilakukan  oleh  para  peneliti sebelumnya. Namun, penelitian aktivitas antibakteri  jamur  endofit  dari  daun  kemangi ( Ocimum  santum L.)  yang  diuji  terhadap  bakteri Stapylococcus  aureus,  Stapylococcus  epidermidis dan Streptococcus  pyogenes ,  masih  sedikit dilakukan  sebelumnya.  Isolat  jamur  endofit  dari daun kemangi ( Ocimum santum L) yang dihasilkan dari penelitian ini diharapkan dapat menghasilkan senyawa  antibakteri,  sehingga  nantinya  dapat dikembangkan  sebagai  produk  antibiotik  alami yang  lebih  efektif,  aman,  dan  terjangkau. Berdasarkan uraian di atas, maka perlu  dilakukan penelitian  untuk  mengetahui  daya  hambat  isolat jamur endofit daun kemangi terhadap pertumbuhan  bakteri Stapylococcus  aureus, Stapylococcus  epidermidis dan Streptococcus pyogenes.

## Bahan dan Metode
Tempat dan Waktu Penelitian Penelitian  dilakukan  di  Laboratorium Mikrobiologi Universitas Negeri Medan (UNIMED), Jl.  Williem  Iskandar  Pasar  V  Medan.  Penelitian dilakukan  dari  November  2020-Januari  2021. Penelitian  ini  merupakan  penelitian deskriptif eksploratif  laboratoris dengan  tahapan  skrining
DOI: https://doi.org/10.24114/jbio.v7i3.28837
antibakteri  isolat  jamur  endofit  daun  kemangi terhadap bakteri Stapylococcus aureus,
Stapylococcus  epidermidis dan Streptococcus pyogenes . Alat dan Bahan Penelitian Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini  adalah:  Kamera  digital  (Kodak),  Petridish (Herma),  Autoklaf  (Tomy  ES-315),  Laminar  Flow Cabinet  (Stream  Line),  Magnetic  stirer  (Biosan), Timbangan  Analitik  (AND  HR-200),  Oven,  Lampu Bunsen,  Beaker  glass  (Pyrex),  Inkubator,  Shaker atau  Orbital  Shaker  (Gallenkamp),  Gelas  ukur (Pyrex), Erlenmeyer (Pyrex), Mikro pipet dan Single Chanel, Jarum ose, Kertas label, Jangka sorong atau Mistar, Pipet tetes, Gunting tanaman dan Sikat Gigi.
Bahan-bahan  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  sampel  daun  kemangi ( Ocimum sanctum L .) diperoleh dari petani di desa Sambirejo,  kecamatan  Binjai,  kabupaten  Langkat, Sumatera  Utara.  Bakteri  uji Stapylococcus  aureus, Stapylococcus  epidermidis dan Streptococcus pyogenes diperoleh  dari  laboratorium  Fakultas farmasi Universitas Sumatera Utara (USU) Medan. Media PDA ( Potato Dextrose Agar ), Potato Dextrose Broth , Malt Ekstrak Agar , Malt Ekstrak Broth , Media NA  ( Nutrient  Agar ).  Kertas  cakram,  Aquades, Aquades steril,   Sabun dan Kapas. Uji Antibakteri
Uji  antibakteri  menggunakan  metode Kirby-Bour,  dengan  prosedur: Mengambil  stok bakteri  uji  pada  media  NA  miring,  swabkan  pada media PDA di dalam cawan secara merata, diamkan selama  kurang  lebih  60  menit,  Kertas  cakram dengan diameter 10 mm dimasukkan dalam cairan ekstrak jamur endofit selama 15 menit, tiriskan dari cairan  ekstrak  hingga  tidak  menetes. Meletakkan kertas cakram tersebut secara aseptis di atas media yang  telah  diswab  dengan  bakteri  uji,  diinkubasi selama 18 – 24 jam pada suhu 37° C. Mengukur zona bening  yang  terdapat  di  sekitar  kertas  cakram
(yang  merupakan  zona  hambat  pertumbuhan bakteri) dengan menggunakan jangka sorong atau mistar (Murray, 2007 dengan modifikasi).

## Fermentasi jamur uji terpilih
Membiakkan  terlebih  dahulu  isolat terpilih ke dalam media PDA miring selama 5 hari, kemudian dipindahkan ke media MEA ( Malt Ekstrak Agar ) miring selama 7 hari, kemudian dipindahkan ke media MEB ( Malt Ekstrak Broth ) di dalam tabung reaksi  selama  7  hari. Inokulasi  sebanyak  1  mL  ke dalam  erlenmeyer  yang  berisi  40  mL  media Dilakukan  kultur  diam  selama  30  hari, ke mudian disaring  untuk  memperoleh  biomassa  dan supernatan  (filtrat)  yang  kemudian  diekstrak dengan  menggunakan  etanol  96  %  dengan perbandingan 1 : 1 dengan berat biomassa maupun jumlah  supernatan    (Sutjaritvorakul, dkk .  2010 dengan modifikasi).

## Hasil dan Pembahasan
Uji  Aktivitas  Antijbakteri  Jamur  Endofit  terhadap Bakteri  Staphylococcus  aureus,  Staphylococcus epidermidis dan Streptococcus pyogenes Isolat jamur endofit yang berasal dari daun kemangi  ( Ocimum  sanctum L.)  diseleksi  dengan metode skrining. Hasil yang diperoleh dari skrining ini adalah  6 isolat jamur  yang dapat  menghambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus, Staphylococcus  epidermidis dan Streptococcus pyogenes
Dari  semua  isolat  jamur  hasil  skrining, jamur  endofit  yang  memiliki  spektrum  terhadap bakteri Staphylococcus  aureus,  Staphylococcus epidermidis dan Streptococcus  pyogenes dilakukan pengulangan  sebanyak  tiga  kali,  dan  diperoleh bahwa isolat jamur endofit dengan kode SDK 19 dan SDK 12  memiliki diamater zona hambat yang paling besar  dibandingkan  dengan  isolat  jamur  endofit yang lainnya seperti yang disajikan pada Tabel 1.
Tabel  1. Hasil  Pengukuran  Diameter  Zona  Hambat  Jamur  Endofit  terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus,  Staphylococcus  epidermidis dan Streptococcus  pyogenes dengan  Tiga Kali Pengulangan
No. Kode Isolat Jamur Endofit Diameter Zona Hambat Bakteri (mm) Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Streptococcus pyogenes U1 U2 U3 Rata- rata U1 U2 U3 Rata- rata U1 U2 U3 Rata- rata 1. SDK 19 12.4  12.6  12.5  12.5 12.3  12.8  12.7 12.6 12.4  12,8  12,3 12.5 2. SDK 18 11.3  11.6  11.4  11.4 11.5  11.6  11.4 11.5 10,9  10,9  10.3 10.7 3. SDK 10 11.4  11.3  11.4  11.4 11.5  11.5  11.2 11.4 12,4  12,3  12,4 12.4 4. SDK 12 12.4  12.6  12.8  12.6 12.9  12.5  12.4 12.6 12.6  12,3  12,9 12.6 5. SDK 5B  12.4  12.4  12.5  12.4 12.6  12.5  12.4 12.5 12,1  12,4  12,4 12.3 6. SDK 3 11.5  11.3  11.1  11.3 11.8  11.2  11.3 11.4 11,3  11,5  11,1 11.3
DOI: https://doi.org/10.24114/jbio.v7i3.28837
Dari  Tabel  1  dapat  dilihat  bahwa  jamur endofit  dari  daun  kemangi  menghasilkan  zona hambat antara 11.3-12.6 yang memberikan respon hambatan pertumbuhan tergolong kuat. Greenwood  (1995)  menyatakan  bahwa  diameter zona  bening  antara  10-20  mm  memiliki  respon hambatan  yang  kuat  terhadap  pertumbuhan
mikroba.  Jamur  endofit  dengan  kode  SDK  19 menghasilkan zona hambat  rata-rata sebesar 12.5 mm untuk bakteri Staphylococcus aureus , 12.6 mm untuk Staphylococcus  epidermidis dan  12.5  mm untuk bakteri Streptococcus pyogenes . Isolat SDK 12 memiliki  zona  hambat  rata-rata  sebesar  12,6  mm untuk semua bakteri uji
Gambar 1 . Grafik diameter zona hambat dari 6 isolat jamur endofit terhadap 3 jenis bakteri uji
Pada  penelitian  ini  digunakan  ekstrak jamur endofit yang diharapkan dapat menghambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus, Staphylococcus  epidermidis dan Streptococcus pyogenes Isolat  jamur  endofit  yang  berasal  dari daun  kemangi  diseleksi  dengan  metode  skrining. Hasil seleksi diperoleh, 6 isolat jamur endofit positif menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis dan Streptococcus  pyogenes. Hal  ini  menunjukkan adanya kandungan metabolit sekunder pada jamur endofit tersebut. Menurut Holler (1999) bila suatu senyawa  dapat  memb entuk  zona  hambat  ≥  3,14 mm 2 , maka senyawa tersebut positif menghambat pertumbuhan mikroorganisme uji.
Pelaksanaan  uji  aktivitas  antimikroba ekstrak  jamur  endofit  dilakukan  dengan  metode Kirby-bour.  Ekstrak  jamur  endofit  diperoleh  dari fermentasi dengan cara kultur diam selama 30 hari yang  kemudian  dilakukan  penyaringan  untuk memperoleh  biomassa  dan  supernatan  dari fermentasi  tersebut.  Biomassa  dan  supernatan inilah yang kemudian digunakan untuk uji aktivitas antimikroba.
Jamur  endofit  hasil  skrining  positif menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus, Staphylococcus
epidermidis dan Streptococcus  pyogenes .  Isolat  jamur  endofit mampu  menghambat  bakteri Staphylococcus aureus,
Staphylococcus epidermidis dan Streptococcus pyogenes Jamur endofit tersebut bisa dikategorikan  mempunyai  spektrum  yang  luas, karena  dalam  penelitian  ini  digunakan  tiga  jenis bakteri  uji    yaitu Staphylococcus  aureus, Staphylococcus  epidermidis dan Streptococcus pyogenes maka  dapat  dikategorikan  ke  dalam kelompok antibiotik berspektrum luas (Tjay, 2002).
Zona  hambat  ditunjukkan  dengan  adanya zona bening di sekitar bakteri uji, ini menandakan bahwa  ada  aktivitas  antibakteri  yang  dikeluarkan oleh  isolat  jamur  endofit  dari  daun  kemangi. Semakin  besar zona  bening yang dihasilkan  maka semakin  besar  pula  aktivitas  antibakteri  yang dimiliki oleh jamur endofit tersebut.
Dari  hasil  penelitian  ditemukan  bahwa ekstrak  jamur  endofit  dari  daun  kemangi memberikan  aktivitas  antimikroba  terhadap pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus, Staphylococcus  epidermidis dan Streptococcus
DOI: https://doi.org/10.24114/jbio.v7i3.28837
pyogenes Daya hambat oleh ekstrak jamur endofit ditandai  dengan  berubahnya  warna  pada permukaan agar atau  di sekitar cakram disk yang diletakkan  di  daerah  perkembangbiakan  jamur sehingga menjadi jernih. Zona hambat yang terjadi tampak melebar di sekeliling tempat cakram yang berisi  ekstrak  jamur  endofit  diletakkan.  Warna jernih/bening ini membuat hilangnya warna dasar pada media PDA itu sendiri.
Kemampuan
mikroba endofit memproduksi senyawa metabolit sekunder sesuai dengan   tanaman  inangnya  merupakan   peluang yang  sangat  besar  dan  dapat  diandalkan untuk memproduksi  metabolit  sekunder  dari  mikroba endofit    yang    diisolasi    dari  tanaman    inangnya tersebut.  Dari sekitar 300.000 jenis tanaman yang tersebar  di  muka  bumi    ini,    masing-masing tanaman  mengandung  satu  atau  lebih  mikroba endofit  yang terdiri dari bakteri dan jamur (Radji, 2005).  Jamur  endofit  mampu  menghasilkan mikotoksin,  enzim  serta  antibiotika  (Worang, 2003).  Beberapa  metabolit  endofit  menunjukkan aktivitas antibakteri, antifungi, hormon pertumbuhan tanaman, insektisida, imunosupresan dan  lain-lain  (Tan  dan  Zou,  2001).  Aktivitas antimikroba isolat jamur endofit dihasilkan sebagai mekanisme  pertahanan  diri  terhadap  serangan bakteri dan jamur patogen bagi inangnya (Rayner, 1991).

## Kesimpulan Dan Saran Kesimpulan
Berdasarkan hasil penilitian yang telah dilakukan, maka diperoleh kesimpulan sebagai berikut : 1. Ditemukan enam (6) isolat jamur endofit dari daun  kemangi  ( Ocimum  sanctum L.)  yang memiliki  aktifitas  sebagai  antijamur  terhadap bakteri penyebab infeksi kulit, yaitu isolat SDK 3, 5B, 10, 12, 18, dan 19
2. Zona  hambat  yang  dihasilkan  rata-rata  11.3- 12.6 mm, tergolong memiliki respon hambatan pertumbuhan yang kuat

## Saran
Berdasarkan hasil penelitian ini disarankan untuk:
1. Melakukan  penelitian  lanjutan  aktifitas metabolit  sekunder  antibakteri  dari  jamur endofit  daun  kemangi  ( Ocimum  sanctum L.) dengan menggunakan bermacam-macam bakteri  uji,  mengingat  penelitian  ini  hanya menggunakan tiga jenis bakteri uji saja.
2. Melakukan  skrining  metabolit  sekunder antijamur  dari  jamur  endofit  daun  kemangi
( Ocimum  sanctum L.) yang  belum  dilakukan pada penelitian ini.

## Daftar Pustaka
Greenwood. Antibiotics,  Susceptibility  (Sensitivity) Test Antimicrobial And Chemoterapy . Mc.
Graw Hill Company, USA. 1995.
Holler,  U.    Isolation,  biological  activity    and secondary metabolite  investigations  of marine  derived  fungi  and selected  host sponges. Wihelmina. Carolo University. www.opus.tu_bs.de/opus/vol ltexte/ 1999/40
Libertucci, J., & Young, V. B. (2019). The role of the microbiota in infectious diseases. Nature Microbiology, 4(1), 35-45.
Ondusko,  D.  S.,  &  Nolt,  D.  (2018).  Staphylococcus aureus. Pediatrics in review, 39(6), 287- 298.
Pulungan,  A.  S.  S.,  Chairani,  F.,  &  Wulandari,  W. (2021).  Aktivitas  Antimikroba  Delima Merah Dalam Menghambat Pertumbuhan  Mikroba  Patogen.  Journal of Natural Sciences, 2(1), 1-7. Radji, M., 2005. Peranan Bioteknologi dan Mikroba
Endofit  Dalam  Pengembangan  Obat Herbal,
Majalah Ilmu  Kefarmasian,
2(3):113-126. Radji  M,  Sumiati  A,  Rachmayani  R  and  Elya  B. Isolation  of  fungal  endophytes  from Garcinia mangostana
and their antibacterial  activity.  African  Journal  of Biotechnology 2011; 10 (1):103-07.
Rayner ADM.  The Challenge of The Individualistic Mycelium. Mycologia, 1991, 83 : 48 – 71. Sudarsono,  Gunawan  D,  Wahyuono  S,  Donatus  IA, Purnomo.  Tumbuhan  obat  II  (hasil penelitian, sifat-sifat, dan penggunaannya).  Yogyakarta  :  Pusat Studi  Obat  Tradisional  Universitas Gadjah Mada; 2002.
Tan,  R.X.,  Zou,  W.X,  Endophytes:  A  Rich  Source  of Functional  Metabolites, Nat  Prod  Rep . 2001, 18: 488-459.
Tjay. Obat-obat Penting, Khasiat, Penggunaan, dan Efek  Sampingnya , PT.  Exel  Media Komputindo, Jakarta. 2002. Worang, R.L. Makalah Individu Pengantar Falsafah Sains (PPS702) Program Pascasarjana/S3 Institut Pertanian Bogor, Oktober 2003