## UJI AKTIVITAS HEPATOPROTEKTOR KOMBINASI EKSTRAK
ETANOL DAUN PANDAN WANGI ( Pandanus amaryllifolius roxb ) DAN KAYU MANIS ( Cinnamomum burmanii ) TERHADAP KADAR MDA

## YANG DIINDUKSI PARASETAMOL
Eka Wisnu Kusuma 1) , Yuni Asri Mulatsih Agami 2)
1,2 Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Nasional
E mail: yuniasri.yama24@gmail.com

## ABSTRAK
Kasus  penyakit  hati  semakin  meningkat  seiring  penggunaan  senyawa  hepatotoksin  salah satunya  karena  penggunaan  parasetamol  dengan  dosis  berlebih.  Hal  tersebut  dapat meningkatkan  produksi  radikal  bebas  sehingga  memicu  terjadinya  stress  oksidatif  yang dapat  menimbulkan  kerusakan  jaringan  yang  ditandai  dengan  peningkatan  kadar Malondialdehyde (MDA). Stress oksidatif dapat diatasi dengan antioksidan dari berbagai tanaman.  Kulit  kayu  manis  memiliki  aktivitas  antioksidan  dengan  nilai  IC 50 53ppm  dan daun pandan wangi 39,7%  Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas kombinasi ekstrak etanol daun pandan wangi dan kayu manis dalam menurunkan kadar MDA. tikus yang  diinduksi  parasetamol.  Penelitian  menggunakan  metode  eksperimental,  dilakukan selama  9  hari  dengan  30  ekor  tikus  jantan  dibagi  menjadi  6  Kelompok,  yaitu:  Normal diberi  aquadest,  Kontrol  Positif  diberi  silimarin  100  mg/kgBB,  Kontrol  Negatif  diberi CMC-Na  0,05%,  serta  3  kelompok  lainnya  diberi  kombinasi  ekstrak  daun  pandan wangi:kayu manis berturut-turut dosis I (25:75), dosis II (50:50), dosis III (75:25). Semua kelompok diinduksi parasetamol 2,5 g/kgBB pada hari ke-7  setelah 30 menit perlakuan, kecuali  kelompok  normal.  Pada  hari  ke  9  dilakukan  pengukuran  kadar  MDA  dengan metode  TBARs  menggunakan  spektrofotometri.  Pemberian  kombinasi  ekstrak  etanol daun  pandan  wangi  dan  kayu  manis  dapat  menurunkan  kadar  MDA  dengan  kombinasi dosis  yang  paling  optimal  adalah  75:25  berdasarkan  statistik  dengan  nilai  signifikan 0,000<0,05 dibandingkan dengan kelompok negatif.
Kata kunci : MDA, Pandan Wangi, Kayu Manis, Parasetamol

## ABSTRACT
Cases  of  liver  disease  have  increased  with  the  use  of  hepatotoxin  compounds,  one  of which  is  due  to  the  use  of  paracetamol  with  excessive  doses.  This  can  increase  the production  of  free  radicals  so  that  it  triggers  oxidative  stress  which  can  cause  tissue damage which is characterized by increased levels of Malondialdehyde (MDA). Oxidative stress  can  be  overcome  with  antioxidants  from  various  plants.  Cinnamomum  burmanii has  antioxidant  activity  with  IC50  value  of  53ppm  and  Pandanus  amarrylifolius  39.7%. This  study  aims  to  determine  the  combined  activity  of  ethanol  extract  of  Pandanus amarrylifolius  and  Cinnamomum  burmanii    in  reducing  MDA  levels.  Paracetamol- induced  rats.  Research  using  experimental  methods,  conducted  for  9  days  with  30  male rats divided into 6 groups, namely: Normal given aquadest, Positive Control were given silimarin  100  mg  /  kgBB,  Negative  Control  was  given  CMC-Na  0.05%,  and  3  other groups  were  given  a  combination  of  Pandanus  amarrylifolius  extract:  Cinnamomum burmanii  dose  I  (25:75),  dose  II  (50:50),  dose  III  (75:25).  All  groups  induced
paracetamol 2.5 g / kgBB on the 7th day after 30 minutes of treatment, except the normal group.  On  the  9th  day  MDA  levels  were  measured  using  the  TBARs  method  using spectrophotometry. Giving a combination of Pandanus amarrylifolius and Cinnamomum burmanii ethanol extract can reduce MDA levels with the most optimal dose combination is  75:25  based  on  statistics  with  a  significant  value  of  0,000<0.05  compared  with  the negative group.
Keywords : MDA, Pandanus amarrylifolius, Cinnamomum burmanii, Paracetamol

## 1. PENDAHULUAN
Hati  memiliki  peran  penting dalam  tubuh  yaitu  sebagai  sistem metabolisme  dan  detoksifikasi  tubuh (Nurachmah  dan  Angriani,  2010). Penyakit  hati  bisa  terjadi  karena beberapa faktor, salah satunya penggunaan parasetamol dalam dosis berlebihan.  Konsumsi  parasetamol dengan  dosis  berlebih  dan  secara terus  menerus  dapat  menyebabkan jalur  sulfat  dan  glukoronat  menjadi jenuh,  sehingga  proses  detoksifikasi parasetamol  lebih  banyak  dilakukan oleh sitokom P450. Akibatnya NAPQI  menjadi  sangat  banyak  dan asupan glutation untuk hati berkurang, pada saat itu NAPQI yang berada  didalam  hati  masih  dalam bentuk  racun  yang  akan  bereaksi dengan  membran  sel  hati  memicu kerusakan dan kematian sel hati yang kemudian  berakibat  pada  terjadinya nekrosis sel hati (Rahmawati, 2016).
Malondialdehyde  (MDA)  adalah senyawa dialdehid hasil akhir peroksidasi  lipid  dan  digunakan sebagai  indikator  stres  oksidatif. Tinggi rendahnya kadar MDA bergantung  pada  status  antioksidan dalam  tubuh.  Tingginya  kadar  MDA menunjukkan adanya kerusakan membran sel karena proses peroksidasi  lipid.  MDA  dapat  diukur dengan  metode Thiobarbituric  Acid Reactive Subtance (TBARS) menggunakan spektrofotometri (Sandhiutami dkk, 2017). Ekstrak  etanol  kulit  kayu  manis mengandung sinamaldehid, ditemukan  pula  senyawa  fitokimia dari  kelas  phenylproponoids  berupa
cinnamic  acid.  Dosis  ekstrak  etanol kayu manis yang efektif menurunkan kadar SGOT-SGPT tikus yang diinduksi  parasetamol  adalah  320 mg/KgBB (Rafita dkk ., 2015). Ekstrak etanol daun pandan wangi memiliki kandungan senyawa bioaktif seperti tanin, alkaloid, flavonoid,  dan  polifenol  (Rahmawan dkk,  2016).  Dosis  ekstrak  etanol daun  pandan  wangi  yang  efektif menurunkan kadar SGOT-SGPT tikus  yang  diinduksi  parasetamol adalah 200 mg/kgBB (Sagala, 2016). Tujuan penelitian ini untuk mengetahui efek pemberian kombinasi ekstrak etanol daun pandan  wangi  dan  kayu  manis terhadap  kadar  MDA  tikus  jantan galur wistar yang diinduksi parasetamol. 2. METODE PENELITIAN
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental yang dilakukan  di  Laboratorium  Obat Tradisional dan Laboratorium
Farmakologi  Sekolah  Tinggi  Ilmu Kesehatan  Nasional  pada  November 2019 hingga Januari 2020.
a. Alat dan Bahan
Bejana  maserasi, rotary  efaporator , spuit  oral, waterbath ,  bedah  set,
sentifuge, neraca analitik,
sperktrofotometer,  gelas  ukur,  daun pandan  wangi,  kulit  kayu  manis, etanol  70%,  parasetamol,  CMC-Na, Silimarin,  TBA,  TCA,  SDS,  asam asetat, Tris HCl pH 7,4.
b. Cara kerja Preparasi sampel Daun  pandan  wangi  dan  kulit kayu manis di maserasi menggunakan  etanol  70%  dan diuapkan  hingga  didapat  ekstrak kental. c. Uji fitokimia
Uji flavonoid pada sampel ekstrak  daun  pandan  wangi dilakukan  dengan  penambahan serbuk Mg + HCl (Hanani, 2017) dan uji sinemaldehid pada sampel ekstrak kayu manis dilakukan  dengan  penambahan sudan III (Oktaviana dkk, 2016). d. Uji aktivitas hepatoprotektor Uji  hepatoprotektor  dilakukan mengikuti  cara  kerja  Novianto dan  Hartono  (2016)  berdasarkan rancangan  Hurkadale  dkk  (2012)
dan  Paramaguru  dkk  (2011). Hewan  uji  dibagi  menjadi  6 kelompok,  yaitu:  Normal  diberi aquadest,  Kontrol  Positif  diberi silimarin  100  mg/kgBB,  Kontrol Negatif  diberi  CMC-Na  0,05%, serta  3  kelompok  lainnya  diberi kombinasi  ekstrak  daun  pandan wangi:kayu  manis  berturut-turut dosisI(50mg/kgBB:240mg/kgBB) dosisII(100mg/kgB:160mg/kgBB) dosisIII(150mg/kgBB:80mg/kgB B).  Semua  kelompok  diinduksi parasetamol 2,5 g/kgBB pada hari ke-7    setelah  30  menit  perlakuan, kecuali  kelompok  normal.  Pada hari  ke  9  dilakukan  pembedahan dan  pengambilan  organ  hati  serta pengukuran  kadar  MDA  dengan metode  TBARs  menggunakan spektrofotometri.
e. Pengamatan makroskopi hati
Pengamatan hati dilakukan terhadap  konsistensi  hati  dan warna hati. f. Pengukuran kadar MDA Pengukuran kadar MDA dilakukan sesuai penelitian terdahulu  yang  dilakukan  oleh Novianto  dan  Hartono  (2016) yang  mengacu  pada  rancangan penelitian  Ohkawa et  al., (1979). Organ hati dikeringkan dan timbang,  diambil  10%  dari  berat organ dan kemudian di homogenkan  dengan  larutan  Tris HCl  0,15M  (pH  7,4).  0,2ml  hati yang telah dihomogenkan ditambahkan  0,2ml  SDS  8,1%, 1,5ml Asam asetat 20% dan 1,5ml TBA  0,8%  tambahkan  aquadest hingga  4ml.  Hangatkan  campuran pada  suhu  95°C  selama  60  menit. Setelah diinkubasi didiamkan pada  suhu  kamar,  dengan  volume yang sama tambahkan TCA 10% . selanjutnya  di  centrifugasi  selama 10 menit dengan kecepatan
3000rpm.  Lapisan  atas  yang terbentuk,  di  ukur  nilai  OD ( Optical  Density )  pada  panjang gelombang  520  nm  terhadap blanko  yang  tidak  diberikan sampel.  Jumlah  MDA  dinyatakan dalam jumlah Thiobarbituric Acid Reactive  Substance (TBARS)/mg Protein dengan menggunakan koefisien ekstingsi 1,56 x 10 5 M - 1 em -1 .

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji  fitokimia  dilakukan  untuk mengetahui keberadaan senyawa dari sampel yang digunakan. Uji
flavonoid  menggunakan  serbuk  Mg dan  HCl  terhadap  ekstrak  daun pandan  wangi,  diketahui  terjadi perubahan warna yang berarti sampel positif  mengandung  flavonoid.  Uji sinemaldehid menggunakan sudan III terhadap ekstrak kayu manis, diketahui  terjadi  perubahan  warna yang berarti sampel positif mengandung sinemaldehide.
Uji aktivitas hepatoprotektor dilakukan  untuk  mengetahui  efek hepatoprotektif sampel terhadap parameter  kadar malondialdehyde (MDA).  MDA  merupakan  produk akhir dari peroksidasi lipid. Peroksidasi  lipid  adalah  suatu  proses auto oksidasi lipid oleh radikal bebas. MDA  dapat  diukur  dengan  metode Thiobarbituric Acid Reactive Subtance (TBARS)  menggunakan spektrofotometri. Hasil analisis MDA tercantum pada tabel 1. Tabel 1. Hasil analisis MDA Kelompok Berat hati (g) MDA (µM/berat hati) Normal 6,51 0,057 Positif 7,16 0,052* Negatif 7,67 0,131ª Dosis I 8,11 0,079* Dosis II 8,54 0,048* Dosis III 7,32 0,058* Keterangan: (a) berbeda signifikan dengan kelompok normal (p<0,05)
(*)  berbeda  signifikan  dengan  kelompok negatif (p<0,05) Tabel  1  menunjukkan  bahwa parasetamol dimungkinkan dapat menyebabkan kerusakan hati ditandai dengan  meningkatnya  kadar  MDA secara  signifikan  0,000  (p<0,05) dibandingkan dengan kelompok normal.  Silimarin  sebagai  kontrol positif  beberbeda  signifikan  0,000 (p<0,05) dibandingkan dengan kelompok  negatif  yang  berarti  dapat menurunkan kadar MDA serta dimungkinkan  dapat  memperbaiki kerusakan  hati  yang  disebabkan parasetamol. Hasil  analisis  juga  menunjukkan bahwa kelompok kombinasi senyawa uji berbagai konsentrasi dosis memiliki  perbedaan  yang  signifikan (p<0,05)  terhadap  kelompok  negatif yang berarti bahwa kombinasi ekstrak daun pandan  wangi dan  kayu manis semua konsentrasi dosis memiliki  aktivitas  hepatoprotektor
dengan  menurunkan  kadar  MDA. Kombinasi  ekstak  daun  pandan wangi dan kayu manis Dosis III (150 mg/kgBB : 80 mg/kgBB) menunjukkan tidak terdapat perbedaan signifikan ketika dibandingkan  dengan  kelompok positif  dan  kelompok  normal,  hal tersebut berarti Dosis III memiliki kemampuan  yang  sama  dengan silimarin dalam menurunkan kadar MDA dan merupakan kombinasi  dosis  yang  paling optimal  dari  ketiga  kombinasi yang lain . Aktivitas hepatoprotektor ekstrak  etanol  daun  pandan  wangi dan  kulit  kayu  manis  dipicu  oleh kandungan flavonoid dan sinemaldehide. Sifat  antioksidan  dari flavonoid  berasal  dari  kemampuan untuk mentransfer sebuah elektron ke senyawa  radikal  bebas  dan  juga membentuk  kompleks  dengan  logam (Pamungkas  dkk,  2017).  Flavonoid memiliki  beberapa  efek,  seperti menghambat peroksidasi lipid, menekan  kerusakan  jaringan  oleh radikal bebas dan menghambat aktifitas  beberapa  enzim  ( Juniarti , 2011). Sinemaldehid berfungsi sebagai  antioksidan  dengan  cara menghambat kerja enzim yang berperan  dalam  pembentukan  stress oksidatif (Hastuti, 2014).
Antioksidan  menjadi  salah  satu mekanisme hepatoprotektor berdasarkan  penggunaan  parasetamol dosis berlebih yang memicu terbentuknya  NAPQI  dengan  jumlah berlebih  yang  berupa  radikal  bebas. Radikal  bebas  dapat  menyebabkan terjadinya  lipid  peroksidasi  dan diikuti  dengan  terbentuknya  MDA. Keberadaan  ekstrak  daun  pandan wangi dan kayu manis dapat menghambat  radikal  bebas  NAPQI dan  mengurangi  risiko  kerusakan hati.
4. KESIMPULAN
Kesimpulan yang didapat dari penelitian ini antara lain:
a. Pemberian  kombinasi  ekstrak etanol  daun  pandan  wangi  dan kayu  manis  dapat  menurunkan kadar  MDA  tikus  yang  diinduksi parasetamol.
b. Kombinasi  dosis  optimal  ekstrak etanol  daun  pandan  wangi  dan kayu manis yang dapat menurunkan  kadar  MDA  adalah Dosis III. 5. SARAN
a. Perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut terhadap aktivitas antioksidan  kombinasi  ekstrak etanol  daun  pandan  wangi  dan kayu  manis  terhadap  parameter lain,  seperti  SGOT-SGPT,    dan histopatologi hati. b. Perlu  adanya  penelitian  lebih lanjut terhadap toksisitas kombinasi  ekstrak  etanol  daun pandan  wangi  dan  kayu  manis terhadap indeks terapi. REFERENSI Hanani, Endang., 2014, Analisis Fitokimia , EGC: Jakarta Hastuti, A.M. dan Rustanti, N., 2014, Pengaruh Penambahan Kayu  Manis  Terhadap  Aktivitas Antioksidan dan Kadar Gula Total Minuman  Fungsional  Secang  dan Daun  Stevia  Sebagai  Alternatif Minuman Bagi Penderita Diabetes Melitus Tipe 2, Disertasi Doktoral , Universitas Diponegoro Hurkadale,  P.J.,  Shelar,  P.A.,  Palled, S.G., Mandavkar, Y.D. and Khedkar, A.S., 2012, Hepatoprotective activity of Amorphophallus paeoniifolius tubers against paracetamol- induced liver damage in rats, Asian  Pacific  Journal  of
Tropical Biomedicine , 2 (1), pp.S238-S242 Juniarti  Departemen  Biokimia,  F.K., 2011, Analisis Senyawa Metabolit  Sekunder  Dari  Ekstrak Metanol Daun Surian Yang Berpotensi Sebagai Antioksidan, Makara  Journal  of Science Novianto,  A.  dan  Hartono,  H.  2016, ‘Studi  Aktivitas  Hepatoprotektif Fraksi Etil Asetat Kenikir (Cosmos  Caudatus)  Pada  Tikus Yang Diinduksi Parasetamol Kajian  Stress  Osidatif  (Lipid Perosidase)’, Jurnal Kesehatan Kusuma Husada Nurachmah,  Elly  dan  Anggraini,  Rida 2010, Dasar-Dasar  Anatomi  dan Fisiologi , 192-196, Salemba Medika, Jakarta. Ohkawa,  H.,  Ohishi,  N.  and  Yagi,  K., 1979, Assay for lipid peroxides in animal  tissues  by  thiobarbituric acid reaction. Analytical biochemistry , 95 (2), pp.351-358 Oktaviana, P., Yunita, E.P. dan Triastuti, E., 2015, Efek Nanopartikel PLGA  Ekstrak  Biji  Nigella  sativa terhadap  Kadar  Katalase  Hepar Tikus  Model  Diabetes  Melitus Tipe 2, Disertasi Doktoral , Universitas Brawijaya Pamungkas,  D.K.,  Retnaningtyas,  Y. dan Wulandari, L., 2017, Pengujian  Aktivitas  Antioksidan Kombinasi Ekstrak Metanol Daun Mangga Gadung (Mangifera indica  L.  var.  gadung)  dan Ekstrak  Etanol  Daun  Pandan Wangi  (Pandanus  amaryllifolius Roxb.)(Antioxidant Activity Assay  of  Methanolic  Extract  of Gadung Mango Leaves (Mangifera indica L. var. gadung) and  Ethanolic  Extract  of  Pandan Leaves  (Pandanus  amaryllifolius Roxb.) Combination). Pustaka Kesehatan , 5 (1), pp.46-49
Paramaguru,  R.,  Singh,  S.K.,  dan Rajasekar,  N.,  Raj,  N.A.V.  dan Paramaguru, R., 2011, Hepatoprotective And Antioxidant Effects Of Amorphophallus Campanulatus Against  Acetaminophen–Induced Hepatotoxicity  In  Rats. Int.  J. Pharm.  Pharm.  Sci , 3 (2),  pp.202- 205 Rafita,  I.D.,  Lisdiana,  L.,  dan  Marianti, A., 2015, ‘Pengaruh Ekstrak Kayu Manis Terhadap Gambaran Histopatologi  Dan  Kadar  SGOT- SGPT Hepar Tikus Yang Diinduksi Parasetamol’, Life Science , 4(1)
Rahmawan,  A.A.,  Supriyadi,  S.  dan
Wijayanti,  T.,  2016,  ‘Grant  Of Influence  Of  Pandan  Leaves (Pandanus  amaryllifolius  Roxb.) Ethanol  Extract  To  Rate  Alp  In White Rats Isoniazid And Rifampisin’, Jurnal Farmasi Indonesia , 13(1), pp.41-50
Rahmawati,  N.,  2016,  ‘Pengaruh Pemberian  Cuka  Apel  Anna Terhadap  Kadar  MDA  Hepar Tikus Jantan Galur Wistar (Rattus norvegicus) Yang Diinduksi Parasetamol Dosis Toksik’ , Skripsi , Universitas Jember
Sagala,  F.R.A.,  2016,  ‘Uji  Aktivitas Hepatoprotektif  Ekstrak  Etanol Daun  Pandan  Wangi  (Pandanus amaryllifolius  Roxb.)  pada  Tikus Jantan  yang  Diinduksi  dengan Parasetamol’ ,  Skripsi ,  Universitas Sumatra Utara Sandhiutami, N.M.D., Desmiaty, Y. dan Anbar, A., 2017, ’Efek Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Biji Pepaya (Carica Papaya L.) Terhadap Aktivitas Enzim Superoksida Dismutase Dan Kadar Malondialdehid Pada Mencit  Stress  Oksidatif  Dengan Perenangan’, Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia , 14(1), pp.26-23