## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARI FRAKSI BUAH SIRIH HUTAN
( Piper cubeba ) DENGAN METODE DPPH
Leo Budiarso 1) , Edi Suryanto 2) dan Sri Sudewi 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115
1) Program Studi Kimia FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
This  study  was  intended  to  determine  the  antioxidative  effects  from  the  fraction  of  betel ( Piper cubeba ) fruits. Betel fruits was dried with wind dried method for 3 days, and extracted with  maseration  method  with  Ethanol  80%.  Furthermore  betel  fruits  extract  liquid successively fractioned using petroleum eter, etyl acetate, butanol, ethanol and aquades. The antioxidative  effect  of  the  fraction  were  determined  by  1,1-diphenyl-2-pycrylhydrazyl (DPPH). Total phenolic content were determined using Folin-Ciocalteu method. The result of this study indicate that the butanol fraction has the highest content of total phenolic followed by etyl acetate, petroleum eter, aquades and ethanol. Total phenolic content of a row is 38.67; 30.30;  28.87;  25.00  and  19.89  mg/kg.  Butanol  fraction  also  has  the  highest  antioxidative effect  than  the  other  fraction.  This  research  concludes  fraction  of  butanol  can  act  as antioxidant as well, and betel fruits can be a natural antioxidant resources.
Key words : betel fruit, antioxidant, fraction, total phenolic content, DPPH

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  efek  antioksidan  dari  fraksi  buah  sirih  hutan ( Piper  cubeba ).  Buah  sirih  hutan  dikeringkan  dengan  cara  dianginkan  selama  3  hari,  dan diekstraksi  dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  80%.  Kemudian  ekstrak buah sirih hutan difraksinasi berturut turut dengan pelarut petroleum eter, etil asetat, butanol, etano,  dan  aquades.  Efek  antioksidan  dari  fraksi  ditentukan  dengan  menggunakan  1,1- diphenyl-2-pycrylhydrazyl (DPPH). Kandungan total fenolik ditentukan dengan menggunakan  metode  Folin-Ciocalteu.  Hasil  dari  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  fraksi butanol  memiliki  kandungan  total  fenolik  tertinggi  diikuti  fraksi  etil  asetat,  petroleum  eter, aquades dan etanol. Kandungan total fenolik berturut-turut adalah 38.67; 30.30; 28.87; 25.00 dan 19.89 mg/kg. Fraksi butanol juga memiliki efek antioksidan dibandingkan dengan fraksi lain.  Berdasarkan  penelitian  ini,  dapat  disimpulkan  bahwa  fraksi  butanol  dapat  berperan sebagai  penangkal  radikal  bebas  dan  buah  sirih  hutan  bisa  digunakan  sebagai  sumber antioksidan alami.
Kata kunci : Buah sirih hutan, antioksidan, fraksi, kandungan total fenol, DPPH

## PENDAHULUAN
Alam menyediakan kebutuhan hidup manusia mulai dari makanan sampai udara. Seiring majunya kehidupan manusia dan  populasi  manusia  yang  semakin bertambah dari tahun ke tahun, lingkungan sekitar  tempat  manusia  hidup  menjadi tercemar. Lingkungan tercemar oleh aktivitas  manusia  sendiri  mulai  dari sampah  yang  dibuang  sembarang  tempat, asap  kendaraan  bermotor,  pembakaran hutan,  dan  sumber  pencemaran  lainnya. Keseimbangan  yang  terganggu  ini  dapat menimbulkan  dampak  yang  tidak  sehat terutama kepada manusia karena ketergantungannya  pada  alam  sekitar. Lingkungan  yang  mulai  rusak  ini  dapat membahayakan  kesehatan  manusia,  salah satu  penyebabnya  ialah  terbentuknya radikal  bebas  yang  berbahaya.  Radikal bebas  sebagai  molekul  atau  atom  dengan elektron bebas dalam jumlah normal dapat berfungsi  dalam  membunuh  virus  dan bakteri,  namun  dalam  jumlah  sangat banyak  dan  energi  yang  sangat  besar  zat ini  dapat  merusak  jaringan  normal, mengganggu  produksi  DNA,  merusak dinding  sel  khususnya  lapisan  lipid,  serta mempengaruhi pembuluh darah (Halliwell, 1991).
Radikal  bebas  dapat  merusak  sel dalam  tubuh  dengan  mengambil  elektron molekul dalam sel sehingga keseimbangan sel  terganggu  dan  dapat  menyebabkan kematian sel. Radikal bebas dapat distabilkan  oleh  antioksidan  sehingga menjadi lebih stabil dan tidak mengoksidasi  molekul  dalam  sel  tubuh (Gordon, 1990).
Antioksidan  ialah  molekul  yang dengan mudah dapat memberikan elektronnya  ke  molekul  radikal  bebas sehingga  dapat  menstabilkan  molekul radikal  bebas  dan  mencegah  proses oksidasi  yang  tidak  diinginkan  dalam  sel. Antioksidan  dapat  diperoleh  secara  alami yang  banyak  terdapat  dalam  tanaman  dan juga  dapat  dibeli,  umumnya  berupa antioksidan sintetik (Widowati , 2011).
Tanaman sirih hutan ( Piper cubeba ),  khususnya  pada  bagian  daun sangat kaya akan zat berkhasiat. Diantaranya terdapat minyak atsiri, hidroksi kavikol, kavikol, kavibetol, allylpirokatekol, sineol, kariopilen, kadinen, estragol, terpenena, sesquiterpena, fenil propana, tanin, diatase, gula  ,  pati  dan  eugenol.  Informasi  tentang kadar senyawa fenolik dan sifat antioksidan  yang  terdapat  pada  buah  sirih hutan belum diketahui. Informasi mengenai  sifat  antioksidan  tanaman  ini penting untuk diketahui bila ingin menjadikan  buah  sirih    hutan  sebagai tanaman
sumber antioksidan (Tjitrosoepomo, 2000).

## METODOLOGI PENELITIAN Bahan dan Alat
Sampel  yang  digunakan  pada penelitian ini adalah buah sirih hutan yang berasal  dari  daerah  Ratahan.  Bahan  kimia yang  digunakan    adalah  etanol  80%, petroleum  eter,  etil  asetat,  butanol,  reagen Folin-Ciocalteu  50%,  larutan  natrium karbonat, 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil
(DPPH)  0,2%.  Alat  yang  digunakan  yaitu alat-alat  gelas pyrex ,  mikropipet,  spatula, vorteks,  kertas  saring,  ayakan  65  mesh, aluminium foil, rotary evaporator, spektrofotometer  uv-vis  ( Genesiys 20), timbangan analitik, alat penggiling, Sentrifuse, waterbath, oven.

## Preparasi Sampel
Buah  sirih  hutan  dibersihkan  dari kotoran  yang  menempel  dengan  air  yang mengalir,  kemudian  dikeringkan  dengan cara  diangin-anginkan  3-4  hari  kemudian diblender dan diayak menggunakan ayakan 65 mesh, ditimbang sebanyak 50 g.

## Ekstraksi Buah Sirih Hutan
Ekstraksi  dilakukan  dengan  cara maserasi  menggunakan  pelarut  etanol 80%.  Sebanyak  50  g  serbuk  dimasukkan dalam  erlenmeyer  (500  mL)  kemudian rendam  menggunakan  200  mL  pelarut etanol 80% lalu ditutup dengan aluminium
foil  dan  didiamkan  selama  24  jam, kemudian  saring  dan  ditambahkan  pelarut 200  mL  dan  diamkan  24  jam.  Seterusnya lakukan  cara  yang  sama  hingga  pelarut menjadi  bening.  Pekatkan  ekstrak  yg diperoleh  dengan  menggunakan  vakum rotary evaporator pada suhu 70 o C sehingga diperoleh ekstrak pekat buah sirih.
Fraksinasi Ekstrak pekat buah sirih difraksinasi  dengan  4  macam  pelarut  dan menghasilkan  5  macam  fraksi  yaitu  fraksi etanol  (Et),  butanol  (Bu),  etil  asetat  (Ea), petrolium  eter  (Pe)  dan  air  (Aq).  Ekstrak Et buah sirih hutan difraksinasi dengan Pe menggunakan  corong  pisah,  dikocok kemudian  didiamkan  hingga  terbentuk  2 lapisan  yaitu  lapisan  Aq  dan  Pe,  ambil lapisan  Pe.  Lakukan  beberapa  kali  sampai lapisan  Pe  menjadi  bening.  Lapisan  air kemudian  difraksinasi  kembali  dengan cara  yang  sama  menggunakan  pelarut  Ea, Bu,  dan  Et.  Sisa  dari  proses  fraksinasi dianggap  sebagai  fraksi  air  (Aq).  Semua Fraksi  Aq,  Et,  Bu,  Ea,  Pe,  dipekatkan dengan evaporator kemudian hasil evaporasi  dimasukkan  ke  dalam  oven hingga fraksi menjadi kental.

## Penentuan Kandungan Total Fenolik
Kandungan  total  fenolik  ekstrak buah sirih hutan ditentukan  menggunakan metode  Folin  Ciocalteu  (Conde,  1997). Sebanyak 0,1 mL larutan fraksi konsentrasi  1000  µg/mL    dimasukkan  ke dalam tabung reaksi, lalu ditambahkan 0,1 mL reagen Folin Ciocalteu 50%. Campuran tersebut divortex, lalu ditambahkan  2  mL  larutan  natrium karbonat 2%. Selanjutnya campuran diinkubasi  dalam  ruang  gelap  selama  30 menit.  Absorbansinya  dibaca  pada  λ  750 nm.
Penentuan Aktivitas Antioksidan
dengan Metode DPPH
Penentuan aktivitas penangkal radikal  bebas  menurut  Burda  dan  Olezek (2001).  Sebanyak  0,1  mL  masing-masing
ekstrak  ditambahkan  dengan  1,5  mL larutan  fraksi  1000  µg/mL,  1,1-difenil-2- pikrilhidrazil  (DPPH)  0,2  %  dalam  etanol dan divorteks selama 2 menit. Berubahnya warna  larutan  dari  ungu  ke  kuning menunjukkan  efisiensi  penangkal  radikal bebas.  Selanjutnya  pada  5  menit  terakhir menjelang  30  menit  inkubasi,  absorbansi diukur  pada  λ  517  nm  dengan menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis. Aktivitas penangkal radikal bebas dihitung sebagai  presentase  berkurangnya  warna DPPH dengan menggunakan persamaan :
Aktivitas penangkal radikal bebas (%)
= 1 – x 100%

## HASIL DAN PEMBAHASAN Preparasi Sampel
Penelitian  ini  menggunakan  sampel  buah sirih hutan yang telah dikeringkan 3-4 hari dengan tujuan untuk menghilangkan kandungan air dalam pelarut yangberakibat ekstraksi menjadi lebih sulit dan memerlukan  waktu  yang  lama  (Pomeranz dan  Meloan,  1994).  Sampel  dihaluskan dan  diayak  dengan  ayakan  65  mesh  untuk memudahkan proses ekstraksi. Makin kecil ukuran  partikel  maka  makin  besar  luas permukaannya  sehingga  makin  banyak bagian  sampel  yang  berinteraksi  dengan pelarut (Pomeranz dan Meloan, 1994).

## Ekstraksi Sampel
Buah  sirih  hutan  diekstraksi  dengan pelarut  etanol  80%.  Digunakan  etanol karena  etanol  adalah  pelarut  yang  bersifat polar,  hal  ini  dimaksudkan  agar  semua komponen  yang  bersifat  polar  dalam sampel dapat terekstrak.

## Fraksinasi Sampel
Ekstrak  difraksinasi  menjadi  5  macam fraksi. Pelarut untuk fraksinasi dipilih dari bermacam  macam  tingkat  kepolaran  yaitu air,  etanol,  butanol,  etil  asetat  dan petroleum  eter.  Hal  ini  dimaksudkan  agar metabolit  sekunder  yang  terekstraksi dalam  etanol  80%  dapat  dikelompokkan
menjadi  lebih  spesifik  sesuai  kepolaran masing-masing metabolit sekunder.

## Kandungan  Total  Fenolik  Fraksi  Buah Sirih Hutan
Kandungan total senyawa fitokimia dari  Fraksi  buah  sirih  hutan  dengan konsentrasi 1000 µg/mL dapat dilihat pada tabel 1. Tabel 1. Kandungan total senyawa fitokimia (mg/kg) Fraksi Fenolik Aquades (Aq) 25,00±0,05 Etanol (Et) 19,89±0,03 Butanol (Bu) 38,67±0,05 Etil asetat (Ea) 30,30±0,00 Petrolium eter (Pe) 28,87±0,00
Pada saat direaksikan antara reagen Folin-Ciocalteu  dengan  senyawa  fenolik akan  terjadi  perubahan  warna  dari  kuning menjadi biru. Menurut Singleton dan Rossi (1965), Warna biru yang teramati berbanding  lurus  dengan  konsentrasi  ion fenolat  yang  terbentuk,  semakin  besar konsentrasi senyawa fenolik maka semakin banyak ion fenolat yang terbentuk sehingga  warna  biru  yang  dihasilkan semakin  pekat.  Fenolat  hanya  terdapat pada  larutan  basa,  tetapi  pereaksi  Folin- Ciocalteu dan produknya tidak stabil pada kondisi  basa.  Nely  (2007)  mangatakan, penambahan  Na 2 CO 3 pada  uji  fenolik bertujuan  untuk  membentuk  suasana  basa agar  terjadi  reaksi  reduksi  Folin-Ciocalteu oleh gugus hidroksil dari  fenolik di  dalam sampel.
Tabel  1  menunjukan  bahwa  fraksi buah sirih hutan memiliki total fenol  yang tinggi.  Hal  ini  kemungkinan  disebabkan senyawa  fenolik  bersifat  polar  sehingga fenol terlarut lebih banyak pada fraksi Bu. Menurut  penelitian  yang  dilakukan  oleh Larson  (1988)  dan  Shahidi  (1997)  bahwa komponen  fenolik  dari  tanaman  secara umum bersifat polar. Hal ini menunjukkan bahwa  sebagian  besar  senyawa  yang terdapat  pada  fraksi  buah  sirih  hutan merupakan  senyawa  fenol  yang  bersifat polar.

## Aktivitas Antioksidan Fraksi Buah Sirih Hutan
Aktivitas  antioksidan  daru  fraksi buah  sirih  hutan  dengan  metode  DPPH dapat dilihat pada gambar 1.
Gambar 1.  Aktivitas antioksidan fraksi Aquades, Etanol, Butanol, Petrolium eter dan Etil asetat
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 Aq Et Bu Ea Pe Jenis fraksi 1000 µg/mL Akt iv it as Anti o ksida n (% )
Perubahan  warna  ungu  menjadi kuning  pada  uji  aktivitas  antioksidan menandakan
terbentuknya radikal antioksidan.  Semakin  banyak  atom  H  dari suatu senyawa antioksidan
yang
didonorkan  pada  DPPH  maka  semakin banyak radikal antioksidan  yang terbentuk (Suratmo dalam Lomempow, 2012).
Reaksi DPPH dapat dilihat pada gambar 2.
Gambar  1  menunjukkan  Fraksi  dari Bu  memiki  aktivitas  yang  paling  tinggi yaitu  80,60  %  .  Hasil  ini  sejalan  dengan kandungan  total  fenol  yang  menunjukkan fraksi  Bu  memiliki  kandungan  yang  lebih tinggi  daripada  fraksi  lain.  Pada  fraksi  Aq dan  Et  juga  menunjukkan  aktivitas antioksidan yang tinggi yaitu 78,57 % dan 77,24  %  walaupun  kedua  fraksi  ini menunjukkan  kandungan  total  fenol  yang paling  rendah.  Fraksi  Pe  menunjukan kadar  fenol  yang  tinggi  namun  aktivitas antioksidannya  rendah,  diduga  fraksi  ini banyak  mengandung  lignin  karena  tidak semua  senyawa  fenol  yang  diekstrak dalam pelarut alkohol merupakan senyawa fenol  yang  dapat  berfungsi  sebagai antioksidan.  Contohnya  saja  lignin  yang berfungsi sebagai bahan pembentuk dinding  sel  tanaman  juga  termasuk kedalam  golongan  fenol  namun  fungsinya sebagai antioksidan belum diketahui (Maulida. R, 2007).

## PENUTUP
Kesimpulan Menurut hasil penelitian yang didapat,  dapat  disimpulkan  bahwa  semua fraksi  buah  sirih  hutan  memiliki  senyawa fenol  dengan  kandungan  total  fenol tertinggi  terdapat  pada  fraksi  butanol diikuti etil asetat, petroleum eter, aquades, dan  etanol.  Untuk  antivitas  antioksidan
tertinggi  terdapat  pada  fraksi  butanol diikuti  aquades,  etanol,  etil  asetat,  dan petroleum eter. Hasil ini semua fraksi buah sirih  hutan  memiliki  aktifitas  antioksidan sehingga  buah  sirih  hutan  dapat  dijadikan sebagai sumber antioksidan alami.

## DAFTAR PUSTAKA
Burda, S. dan W. Olezek. 2001. “Antioxidant  and  Antiradical Activities  of  Flavonoids”. J. Agric.  Food  Chem. 49  :  2774-
2779.
Conde,  E.E,  M.C.  Cadahia,  Garcia- Vallejo, B.F.D. Simon dan J.R.G. Adrados.  1997.  Low  Molecular Weight  Polyphenol  in  Cork  of Querceus  Suber. J.  Agric.  Food Chem. 45 : 2695-2700. Gordon  MH.  1990. The  Mechanism  of Antioxidant  Action  in  vitro .  (In) Food Antioxidant . Editor: Hudson BJF.  Elsevier  Applied  Science, New York.
Halliwel  B  dan  Gutteridge  C.  1999. Free Radical in Biology and Medicine .
Oxford  University  Press,  New
York.
Maulida  R.  2007. Aktivitas  Antioksidan Rumpul
Laut Caulerpa
lentillifera .  [Skripsi].  Universitas
Institut Pertanian Bogor.

## Gambar 2.  Reaksi DPPH
Nely  F.  2007.  Aktivitas  Antioksidan
Rempah Pasar dan Bubuk Rempah  Pabrik  dengan  Metode Polifenol  dan  Uji  AOM  ( Active Oxygen Method ) [Skripsi]. Institud Pertanian Bogor, Bogor.
Rorong  J.  A.  2008.  Uji  Aktivitas
Antioksidan  dari  Daun  Cengkeh ( Eugenia  carryophyllus )  dengan
Metode  DPPH. Chem.  Prog .
2:111-116
Shahidi,  F.  and  M.  Naczk.  1995 .  Food Phenolic  :  Sources,  Chemistry, Effect,  Applications .  Lancaster, Technomic Publishing, Co.inc.
Singleton  V  L  dan  Rossi  J  A  Jr.  1965. “Colorunetry  of  total  phenolics with phosphomolybdic- phosphotungstic  acid  reagents”. American  Journal  Enology  and Viticult ure. 16: 145-147.
Lomempuow,  L.I.,  J.  Paendong.,  L.I. Momuat.,  dan  E.  Suryanto.  2012. Potensi  Antioksidan  dari  Ekstrak Etanol Tongkol Jagung ( Zea mays L.). Chem. Prog . 5:49-56.
Tjitrosoepomo, G. 2000. Taksonomi Tumbuhan (Spermatophyta) . Universitas Gadjah Mada : Yogyakarta. Widowati Wahyu, 2011. Uji Fitokimia dan Potensi Antioksidan Ekstrak Etanol Kayu Secang (Caesalpinia sappan  L.) .  Pusat  Penelitian  Ilmu Kedokteran,  Universitas  Kristen Maranatha, Bandung
Wungkana,  I.,  Suryanto,  E.,  Momuat,  L. 2013.  Aktivitas  Antioksidan  Dan Tabir  Surya  Fraksi  Fenolik  Dari Limbah  Tongkol  Jagung  ( Zea  mays
L.). Jurnal Ilmiah Farmasi Universitas Sam Ratulangi . 4: 2302- 2493