# Korespondensi:  Balai  Riset  Perikanan  Budidaya  Air  Tawar  dan Penyuluhan  Perikanan.  Jl.  Sempur  No.  1,  Bogor  16129,
Indonesia. Tel.  +  62  251  8313200 E-mail:    mulyasari_bogor@yahoo.co.id
Tersedia  online  di:  http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/jra

## PENINGKATAN  KUALITAS  NUTRIEN  ONGGOK  YANG  DIFERMENTASI MENGGUNAKAN Bacillus megaterium SS4b SEBAGAI BAHAN BAKU  PAKAN IKAN
Mulyasari *)# ,  Subaryono **) ,  Reza  Samsudin *) ,  dan  Yohanna  Retnaning  Widyastuti *)
*) Balai Riset Perikanan Budidaya Air Tawar dan Penyuluhan Perikanan Jl. Sempur  No. 1, Bogor 16129
**) Balai Besar Riset Pengolahan Produk dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan Jl. KS Tubun, Petamburan VI, Slipi, Jakarta Pusat 10260
(Naskah diterima: 17 Januari 2018; Revisi final: 22 Juni 2018; Disetujui publikasi: 22 Juni 2018)

## ABSTRAK
Onggok adalah hasil produk samping pengolahan ubi kayu menjadi tapioka yang berpotensi dikembangkan sebagai bahan baku pakan ikan. Permasalahan yang dihadapi yaitu kecernaan onggok masih relatif rendah sehingga  perlu  ditingkatkan  melalui  teknik  fermentasi.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  mengevaluasi kemampuan bakteri B. megaterium SS4b dalam  menyederhanakan nutrien kompleks dari onggok, serta menentukan dosis bakteri yang sesuai untuk proses tersebut. Penelitian ini terdiri atas dua tahap yaitu: 1) penentuan aktivitas enzim selulase, amilase, dan protease bakteri B. megaterium SS4b secara semi-kualitatif; 2) penentuan dosis inokulum yang efektif untuk proses fermentasi onggok (0%, 3%, 6%, dan 9%). Parameter yang  diukur  meliputi  glukosa  terlarut/gula  pereduksi,  protein  terlarut,  protein  kasar,  serat  kasar, dan kecernaan protein secara in vitro. Percobaan dilakukan menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) dengan empat perlakuan beda dosis bakteri untuk fermentasi onggok dan tiga ulangan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa B. megaterium SS4b memiliki aktivitas selulase, amilase, dan protease, serta mampu menghidrolisis onggok. Dosis penambahan isolat bakteri sebanyak 9% pada kepadatan 10 11 sel/mL dan inkubasi selama 72 jam merupakan dosis terbaik dalam meningkatkan kualitas nutrien onggok. Proses fermentasi ini dapat meningkatkan kandungan protein terlarut, kecernaan protein, ketersediaan gula pereduksi, dan penurunan serat onggok berturut-turut adalah sebesar 2,9 kali, tiga kali, satu kali, dan enam kali dibandingkan dengan kontrol.
KATA KUNCI: Bacillus megaterium SS4b; fermentasi; kualitas; onggok; pakan ikan
ABSTRACT: Enhancement of nutrient quality of cassava starch residue as fish feedstuff through fermentation using Bacillus megaterium SS4b. By: Mulyasari, Subaryono, Reza Samsudin, and Yohanna Retnaning Widyastuti
Cassava starch residue is a by-product in tapioca production that has the potential to be used as one of the ingredients in fish feed. The problem was that the digestibility of cassava starch residue was relatively low but could be improved through fermentation. The purpose of this study was to evaluate the ability of B. megaterium SS4b bacteria in simplifying the nutrient complex of cassava starch residue and determine the appropriate bacterial dose for the process. The study consisted of two stages: 1) determining, semi-qualitatively, the activity of cellulase, amylase, and protease enzyme of B. megaterium SS4; 2) determining the effective inoculum dose for the fermentation process of cassava starch residue (0%, 3%, 6%, and 9%). Parameters measured included dissolved glucose/reducing sugar, dissolved protein, crude protein, crude fibre, and protein digestibility in vitro. The experiment was arranged in a completely randomized design (CRD) with four different treatments of bacterial dose for fermentation of cassava starch residue and three replicates. The results showed that B. megaterium SS4b has cellulase, amylase, and protease activities and was able to hydrolyze cassava starch residue. The dosage level of the bacterial isolate at 9% with a density of 1011 cells mL-1 and incubation for 72 hours was the best treatment in improving the nutrient quality of cassava starch residue. This fermentation process could increase soluble protein content, protein digestibility, availability of reducing sugar, and decrease significantly the fiber content of cassava starch residue
KEYWORDS: Bacillus megaterium; fermentation; quality; cassava starch residue; fish feed

## PENDAHULUAN
Pakan merupakan salah satu faktor penting penentu keberhasilan  suatu  usaha  budidaya  ikan,  karena memberikan  kontribusi  tertinggi  terhadap  biaya produksi. Biaya pakan ini dapat mencapai 40%-89% dari total biaya produksi (Suprayudi, 2010). Oleh karena itu,  harga  bahan  baku  pakan  sangat  berpengaruh terhadap tingkat keuntungan yang akan diperoleh dari usaha budidaya ikan. Sampai saat ini, bahan baku pakan seperti bungkil kedelai dan tepung ikan masih diimpor dari luar negeri sehingga harga bahan baku tersebut di pasar Indonesia cukup mahal. Salah satu upaya yang dapat  dilakukan  untuk  mengatasi  permasalahan tersebut adalah dengan memanfaatkan bahan pakan lokal alternatif, yang memiliki kualitas yang cukup baik dan ketersediaannya terjamin sepanjang tahun. Hasil samping  pertanian  atau  agroindustri  merupakan sumber bahan baku pakan lokal yang ketersediaannya cukup melimpah di Indonesia, di mana hasil samping tersebut salah satunya adalah onggok (Yuwono & Hadi, 2008).
Onggok adalah hasil produk samping pengolahan ubi  kayu  menjadi  tapioka.  Setiap  ton  ubi  kayu  bisa menghasilkan 114 kg onggok (Tarmudji, 2004) atau sekitar  11,4%.  Jika  setengah  dari  produksi  ubi  kayu tahun 2015 yang mencapai 21,8 juta ton (BPS, 2016) diproses  menjadi  tepung  tapioka,  maka  onggok  yg dihasilkan  dapat  mencapai  1,24  juta  ton.  Jumlah tersebut  sangat  besar  untuk  dimanfaatkan  sebagai bahan baku pakan ikan. Onggok mengandung energi sebesar  3.000  kkalkg -1 (Kalsum  &  Sjofjan,  2008) sehingga  dapat  dimanfaatkan  sebagai  salah  satu sumber energi pada pakan ikan. Kelemahan onggok adalah kandungan serat kasarnya yang cukup tinggi yaitu  14,27%;  yang  menjadi  pembatas  utama pemanfaatan onggok untuk bahan pakan (Wizna et al., 2009).  Mengingat onggok  berpotensi  dimanfaatkan sebagai  bahan  baku  pakan  ikan,  maka  kualitas nutriennya perlu ditingkatkan, salah satunya dengan proses  fermentasi.
Fermentasi  adalah  proses  penggunaan  mikroba seperti bakteri  atau kapang untuk  mengubah suatu substrat  menjadi  produk  tertentu  yang  diinginkan. Fermentasi memiliki  kapasitas untuk  meningkatkan kualitas nutrien dan sifat fungsional dari suatu substrat (Frias  et  al.,  2008);  serta  banyak  digunakan  untuk meningkatkan ketersediaan nutrien (Hotz & Gibson, 2007).  Fermentasi  dapat  meningkatkan  kecernaan pakan dengan cara melepas ikatan senyawa kompleks menjadi senyawa yang mudah dicerna, baik itu molekul protein, lemak, maupun karbohidrat seperti pati dan serat.
Pada penelitian sebelumnya, telah diperoleh isolat bakteri Bacillus  megaterium  strain baru  yaitu  Bacillus megaterium  SS4b  yang  memiliki  kemampuan menghasilkan alginat lyase dan dapat digunakan dalam produksi oligosakarida alginat (Subaryono et al., 2015; Subaryono et al., 2016). Bakteri B. megaterium SS4b tersebut  juga  dilaporkan  mampu  menyekresikan enzim-enzim ekstraseluler seperti amilase, protease maupun  selulase  (Mulyasari  et  al.,  2015).  Dalam penelitian  ini  dicoba  pemanfaatan  bakteri  B. megaterium  SS4b  untuk fermentasi  onggok,  dengan tujuan menyederhanakan kandungan nutrien kompleks seperti protein, karbohidrat, dan lemak dalam onggok menjadi  senyawa  yang  lebih  sederhana  dan  lebih mudah dicerna oleh ikan.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  terdiri  atas  dua  tahap  yaitu:  1) penentuan aktivitas enzim selulase, amilase, dan pro- tease bakteri B. megaterium SS4b dalam substrat pati, carboxymethylcellulose (CMC), susu skim, dan onggok secara semi-kualitatif; 2) penentuan dosis inokulum yang paling efektif untuk proses fermentasi onggok.

## Pembuatan  Inokulum
Satu ose kultur B. megaterium SS4b diinokulasikan pada 10 mL media TSB kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu 28°C dalam kondisi statis. Setelah itu,  diambil  1  mL  kultur  bakteri  kemudian diinokulasikan pada 9 mL media TSB yang mengandung CMC 1% dan diinkubasi selama 24-48 jam pada suhu 28°C  dalam  kondisi  statis.  Kultur  bakteri  kemudian siap digunakan untuk fermentasi.
Percobaan  1.  Pengujian  aktivitas  enzim  selulase, amilase,  dan protease  B.  megaterium  SS4b  secara semi-kualitatif
Media  yang  digunakan  dalam  penelitian  adalah media TSA yang terdiri atas 1,5% kasein (pankreatik); 0,5% tepung kedelai; 0,5% sodium klorida; dan 1,5% agar  (Oxoid).  Untuk  menguji  kemampuan  bakteri menghasilkan  selulase,  media  TSA  ini  ditambahkan 1%  CMC.  Untuk  menguji  kemampuan  bakteri menghasilkan  amilase,  media  TSA  ditambahkan  1% pati,  demikian  pula  untuk  melihat  adanya  aktivitas proteolitik media TSA ini ditambahkan 1% susu skim. Untuk  melihat  kemampuan  bakteri  dalam memanfaatkan onggok, media TSA ini ditambahkan 1% onggok. Penyiapan media TSA yang mengandung bahan uji tersebut yaitu sebanyak 40 g TSA dilarutkan dalam 1 L aquades dan ditambahkan 1 g CMC atau pati atau  susu  skim  atau  onggok  sesuai  jenis  uji  yang dilakukan.  Volume  media  dibuat  menjadi  100  mL
dengan penambahan akuades, dan disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121°C, tekanan 1,1 atm selama 15 menit.
Aktivitas  enzim  selulase,  amilase,  dan  protease secara semi-kuantitatif dapat diketahui dengan cara mengukur  zona  bening  pada  cawan  petri  yang mengandung  media  uji.  Pengujian  aktivitas  enzim selulase  secara  semi-kuantitatif  dilakukan  sebagai berikut.  Satu  ose  kultur  B.  megaterium  SS4b ditempelkan pada permukaan media TSA yang sudah ditambahkan dengan bahan uji dan diinkubasi selama 48 jam. Setelah 48 jam, kemudian dilihat pembentukan zona bening yang dihasilkan bakteri. Pada media yang mengandung  CMC,  pati,  dan  onggok  diberi  larutan iodin  1%  untuk  melihat  ada  tidaknya  pembentukan zona  bening.  Indeks  selulase  kemudian  diukur menggunakan rumus (Febriyanto et al., 2015):
di mana: IS = indeks selulase Ø TZB = diameter total zona bening (cm)
Ø KB
= diameter koloni bakteri (cm)
Penghitungan  indeks  amilase  dan  protease dihitung  menggunakan  rumus  yang  sama  dengan indeks selulase.
Percobaan  2.  Penentuan  dosis  inokulum  untuk proses  fermentasi  onggok
Sebanyak 25 g onggok ditambah dengan akuades steril 70 mL pada wadah aluminium foil steril kemudian diaduk secara merata. Selanjutnya ditambahkan isolat bakteri B. megaterium SS4b dengan kepadatan bakteri 10 11 cfu mL -1 dan dosis 0%, 3%, 6%, dan 9% (v/v) dari volume media yang digunakan, ditutup menggunakan plastic  wrap.  Proses  inokulasi  ini  dilakukan  secara aseptis. Onggok kemudian difermentasi dalam kondisi statis pada suhu 37°C selama dua hari. Setelah proses fermentasi selesai, onggok dikeringkan dengan oven pada suhu 60°C selama 2-3 hari.

## Komposisi  Kimia  Onggok
Analisis kandungan glukosa terlarut/gula pereduksi onggok mengacu pada Miller (1959) dengan sedikit modifikasi.  Onggok  hasil  fermentasi  sebanyak  1  g diekstrak  dengan  20  mL  akuades,  disaring  dan dimasukkan ke dalam labu ukur 100 mL, ditera sampai tanda batas. Setelah itu, diambil 1 mL dan diencerkan kembali sampai 100 mL. Sebanyak 1 mL sampel dalam 0,05 M buffer asetat (pH 4,8) ditambahkan 3 mL reagen DNS dan dididihkan selama lima menit. Setelah dingin, absorbansi diukur dengan spetrofotometer Eppendorf
pada  panjang  gelombang  550  nm.  Sebagai  standar digunakan glukosa 0,6-4 µmolmL -1 dalam 0,05 M buffer asetat (pH 4.8). Analisis kadar protein terlarut onggok hasil  fermentasi  dilakukan  menggunakan  metode Bradford  (Mulyasari,  2017).  Sampel  onggok  hasil fermentasi  dosis 0%,  3%, 6%,  dan 9%  masing-masing sebanyak  0,5  g  ditambah  5  mL  Tris  HCl  pH  6,5 kemudian disentrifuse dengan kecepatan 10.000 rpm selama  20  menit.  Sampel  diambil  0,5  mL  dan ditambahkan  0,5  mL  larutan  Bradford  kemudian diinkubasi  pada  suhu  kamar  selama  15  menit. Absorbansi diukur pada panjang gelombang 595 nm. Sebagai  standar  digunakan  bovine  serum  albumin (BSA)  (100  mg  dalam  100  mL  akuades).  Kandungan protein  kasar  onggok  yang  difermentasi  (dosis  0%, 3%, 6%,  dan 9%) dilakukan dengan  metode Kjeldahl. Kandungan  serat  kasar  onggok  difermentasi  (dosis 0%, 3%, 6%, dan 9%) dengan metode gravimetri setelah dilakukan pemanasan pencucian contoh dalam asam dan  basa  secara  bergantian.  Kadar  abu  ditentukan dengan pembakaran contoh dalam tanur pada suhu 550°C.
Penentuan kecernaan protein dilakukan secara in vitro (Ali et al., 2009). Analisis dilakukan menggunakan enzim yang diekstrak dari saluran pencernaan ikan nila (25 ekor) berukuran rata-rata 10 ± 68 g dengan berat total  saluran  pencernaan  10,8  g.  Enzim  saluran pencernaan  ikan  nila  diekstrak  dengan  cara menambahkan  larutan  akuades  dingin  dengan perbandingan 1:10, dan digerus menggunakan mortar sampai  halus.  Sampel  kemudian  disentrifugasi menggunakan  alat  centrifuge  Hanil  Mega  17R  pada kecepatan 12.000 rpm selama 15 menit pada suhu 4°C, dan filtratnya diambil sebagai ekstrak enzim saluran pencernaan ikan nila. Pengukuran kecernaan protein dilakukan menggunakan metode pH drop (Ali et al., 2009). Onggok hasil fermentasi dengan dosis 0%, 3%, 6%,  dan  9%  masing-masing  ditimbang  dengan  berat yang  ekuivalen  dengan  160 mg  protein  kasar  (hasil analisis  proksimat)  dan  dicampur  dengan  20  mL akuades  dan  2  mL  ekstrak  enzim  pencernaan. Campuran  disesuaikan  pH-nya  menjadi  delapan menggunakan NaOH dan HCl. Selanjutnya campuran diinkubasikan selama 10 menit. Penurunan pH selama inkubasi diukur dengan pH meter Hanna Instrument setiap menit.Sebagai standar proteindigunakan kasein sebanyak 170 mg dan diperlakukan sama seperti pada perlakuan onggok. Kecernaan protein dikalkulasikan sebagai berikut:
menit 10 selama pH perbedaan - 100 x kasein pH sampel pH protein Kecernaan
      
        KB Ø KB Ø TZB Ø IS
Percobaan  perlakuan  dosis  bakteri  dilakukan menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) dengan empat  perlakuan  dan  tiga  ulangan.  Data  parameter kecernaan protein kemudian ditabulasi menggunakan bantuan  excel  2013  dan  dianalisis  statistik menggunakan  ANOVA  (Analysis  of  Variance)  dengan software SPSS versi 20.0.

## HASIL DAN BAHASAN
Berdasarkan  hasil  uji  aktivitas  enzim  selulase, amilase,  dan  protease,  serta  kemampuan mendegradasi  onggok  terlihat  bahwa  bakteri  B. megaterium SS4b yang diisolasi dari rumput laut Sar- gassum  sp.  positif  memiliki  aktivitas  ketiga  enzim tersebut. Aktivitas enzim ini terlihat dari munculnya zona  bening  di  sekitar  koloni  bakteri  setelah ditambahkan  larutan  iodin  (Gambar  1).  Dari  zona bening  yang  terbentuk,  diperoleh  nilai  indeks selulolitik  yang  terukur  masing-masing  sebesar selulolitik 1,15 ± 0,077; amilolitik 0,20 ± 0,071; dan proteolitik 0,29 ± 0,152; serta mampu mendegradasi onggok dengan indeks zona hidrolisis sebesar 0,27 ± 0,008 seperti ditampilkan pada Tabel 1.
Zona bening yang terbentuk pada media agar yang masing-masing mengandung pati, CMC atau susu skim
mengindikasikan bahwa B. megaterium SS4b memiliki aktivitas enzim  amilase, selulase, dan  protease. Hal ini sesuai dengan sejumlah literatur yang melaporkan bahwa  B.  megaterium  memiliki  aktivitas  amilase (Oyeleke et al., 2010; Gurudeeban et al., 2011); aktivitas selulase (Shobharani et al., 2013; Shakoor et al., 2013); dan aktivitas protease (Rajkumar et al., 2011; Asker et al.,  2013).  Bakteri  B.  megaterium  SS4b  dapat  pula menghidrolisis onggok yang terlihat dari zona bening yang terbentuk  pada media  agar yang  mengandung onggok.  Karbohidrat  onggok  yang  terdiri  atas  pati dan  serat  kasar  merupakan  sumber  nutrien  bagi  B. megaterium SS4b. Bakteri tersebut akan menyekresikan enzim amilase dan selulase untuk dapat menghidrolisis onggok menjadi gula sederhana dan memanfaatkannya sebagai  sumber  energi.  Amilase  merupakan  enzim yang mampu memutus ikatan glikosidik pada rantai polimer  pati  dengan menyisipkan  molekul  air.  Hasil pemutusan tersebut akan menghasilkan gugus aldehid yang dikenal sebagai gugus reduksi ujung (Nangin & Sutrisno,  2015).  Banyaknya  gugus  reduksi  ujung berbanding lurus dengan derajat hidrolisis pati (Hii et al., 2012 dalam Nangin & Sutrisno, 2015).
Selain  amilase,  bakteri  B.  megaterium  SS4b  juga memiliki  aktivitas  selulase  yang  mampu  mengubah
Tabel 1. Indeks  selulolitik,  amilolitik,  proteolitik,  dan  kemampuan menghidrolisis onggok dari B. megaterium SS4b
Table 1. Cellulolytic, amylolytic, proteolytic index, and the ability to hydrolysis cassava starch residue by B. megaterium SS4b Selulase Cellulase Amilase Amylase Protease Onggok (Selulase; amilase; protease ) Cassava starch residue (Cellulase; amylase; protease) 1.15 ± 0.077 0.20 ± 0.071 0.29 ± 0.152 0.27 ± 0.008
Nilai indeks enzim (Index value of enzymes )
Gambar 1. Zona  bening  yang  terbentuk  dari  proses  hidrolisis  CMC  (1), pati (2), susu skim (3), dan onggok (4) oleh B. megaterium SS4b.
Figure 1. Halo  formed  by  hydrolysis  of  CMC  (1),  starch  (2),  skim  milk  (3), and cassava starch residue by B. megaterium SS4b.
serat kasar onggok menjadi gula sederhana. Menurut Oso  et  al.  (2010),  onggok  mengandung  serat  kasar dalam bentuk selulosa sebesar 11,4% dan hemiselulosa 10%.  Bakteri  B.  megaterium  SS4b  mampu menghidrolisis selulosa onggok menggunakan enzim selulasenya. Ada tiga enzim utama yang membentuk kompleks  enzim  selulase  untuk  mendegradasi selulosa, yaitu endo-â-selulase/glukanase yang bekerja dengan cara memotong rantai molekul yang memiliki tingkat  kristalinitas  rendah  dalam  serat  selulosa sehingga  menciptakan  ujung  rantai  bebas,  ekso-â- selulase/glukanase yang bekerja dengan cara memotong molekul lebih lanjut dengan melepaskan unit selobiose dari  ujung  rantai  bebas,  dan  â-glukosidase  yang bekerja dengan cara menghidrolisis selobiosa menjadi glukosa (Mussato & Teixeira, 2010).
Proses  hidrolisis  onggok  menjadi  senyawa  yang lebih  sederhana  dipengaruhi  oleh  dosis  inokulum bakteri. Hal ini terlihat dari hasil pengukuran glukosa terlarut,  kadar  serat,  protein  terlarut,  dan  protein kasar pada penelitian ini yang menunjukkan adanya hubungan dengan dosis inokulum yang ditambahkan. Pengaruh dosis inokulum B. megaterium SS4b terhadap nilai glukosa terlarut disajikan pada Gambar 2. Semua perlakuan  dosis  penambahan  B.  megaterium  SS4b menghasilkan kadar glukosa terlarut yang lebih tinggi dibanding  kontrol  (dosis  0%).  Semakin  tinggi  dosis inokulum yang ditambahkan, kadar glukosa terlarut
yang dihasilkan cenderung semakin tinggi. Kandungan glukosa  terlarut  tertinggi  terdapat  pada  dosis  9% (17,07 mg g -1 ) dan terendah terdapat pada dosis 0% (14,67 mg g -1 ). Glukosa terlarut pada penambahan B. megaterium SS4b dosis 3% tidak berbeda nyata dengan dosis 6% (P>0,05) tetapi keduanya lebih rendah dan berbeda  nyata  dengan  dosis  9%  (P<0,05).  Menurut Sandi  et  al.  (2010),  penambahan  inokulum menyebabkan  pertumbuhan  bakteri  pada  substrat semakin  banyak,  sehingga  aktivitas  enzim  dalam mengurai komponen serat menjadi molekul yang lebih sederhana  juga  meningkat.  Semakin  tinggi  dosis inokulum  yang  ditambahkan  maka  jumlah  bakteri starter  yang  tersedia  untuk  memulai  proses fermentasi semakin banyak, sehingga fermentasi akan berlangsung lebih cepat.
Hasil analisis glukosa terlarut berbanding terbalik dengan  hasil  analisis  serat  kasar,  di  mana  semakin tinggi dosis inokulum yang ditambahkan, kadar serat onggok semakin menurun (Gambar 3). Dosis inokulum 0%  menghasilkan  kadar  serat  kasar  tertinggi  yaitu 14,83%; sedangkan yang terendah adalah pada dosis 9%  sebesar  9,42%.  Hasil  uji  statistik  menunjukkan bahwa fermentasi menggunakan B. megaterium SS4b berpengaruh nyata terhadap kandungan kadar serat kasar  onggok  (P<0,05).  Meskipun  demikian kandungan serat kasar antar perlakuan dosis 3%, 6%, dan  9%  tidak  berbeda  nyata  (P>0,05)  tetapi  lebih
Gambar 2. Kadar  gula  pereduksi  (mg  g -1 )  onggok  yang  difermentasi menggunakan B. megaterium SS4b pada dosis yang berbeda (huruf yang  sama  mengindikasikan  tidak  berbeda  nyata  pada  selang kepercayaan 95%).
Figure 2. Reducing sugar content (mg g -1 ) of cassava starch residue fermented by B. megaterium SS4b at different doses (the same letter indicates no significant difference at 95% confidence interval).
0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 0 3 6 9 K ad ar g u la p er ed uk si R ed uc in g su ga r con te nt (m g g- 1 ) Dosis perlakuan (Dosage of treatments) (%) a b b c
rendah  dan  berbeda  nyata  dibandingkan  dengan kontrol. Hasil penelitian ini sejalan dengan penelitian Anggraeni et al. (2013) yang bertujuan meningkatkan kualitas  nutrien  limbah  tahu  menggunakan  Bacillus amyloliquefaciens.  Hasil  penelitian  tersebut menunjukkan  bahwa  bakteri  B.  amyloliquefaciens mampu menurunkan kadar serat limbah tahu. Semakin tinggi dosis bakteri, semakin tinggi pula penurunan serat kasar yang terukur.
Penambahan B. megaterium SS4b dengan dosis yang berbeda pada onggok berpengaruh terhadap proses depolimerisasi  pati  dan  serat  onggok  tersebut. Amilum  dan  serat  yang  terdapat  pada  onggok mengalami  proses  hidrolisis  menjadi  senyawa  yang lebih  sederhana,  salah  satunya  adalah  glukosa. Peningkatan  konsentrasi  gula  sederhana  tersebut diikuti oleh peningkatan gula reduksi. Semakin tinggi konsentrasi bakteri yang ditambahkan pada onggok, semakin  banyak  enzim  amilase  dan  selulase  yang dihasilkan  sehingga  semakin  banyak  onggok  yang didegradasi menjadi glukosa. Hal ini berakibat pada semakin tingginya kadar glukosa dalam substrat, yang tercermin  dari semakin  tingginya  gula reduksi  yang terukur. Menurut Wizna et al. (2009), dosis inokulum yang  tinggi  akan  mempercepat  proses  fermentasi, karena  semakin  tinggi  dosis  inokulum  akan menghasilkan bakteri yang lebih banyak dan bakteri akan memproduksi enzim dalam jumlah besar sehingga substrat  yang  akan  didegradasi  juga  menjadi  lebih banyak.
Terjadinya  proses  degradasi  onggok  oleh  B. megaterium SS4b tercermin pula dari hasil pengukuran protein terlarut. Seperti halnya glukosa terlarut, kadar protein terlarut pada onggok yang dihidrolisis dengan B.  megaterium  SS4b  juga  meningkat  seiring  dengan meningkatnya dosis bakteri yang diberikan. Pengaruh dosis inokulum B. megaterium SS4b terhadap nilai pro- tein terlarut disajikan pada Gambar 4. Semua perlakuan dosis  (3%,  6%,  dan  9%)  menghasilkan  kadar  protein terlarut yang lebih tinggi dan berbeda nyata (P<0,05) dibandingkan  dengan  kontrol  (dosis  0%).  Dalam penelitian ini, kadar protein terlarut tertinggi terdapat pada dosis 9% (125,18 µg g -1 ) dan terendah terdapat pada dosis  0% (50,96  µg g -1 ).  Kadar protein  terlarut pada dosis 3% tidak berbeda nyata dengan dosis 6% (P>0,05)  tetapi  kadar  protein  pada  kedua  dosis tersebut lebih rendah dan berbeda nyata dibandingkan dengan dosis 9% (P<0,05).
Peningkatan  protein  terlarut  pada  penelitian  ini terjadi karena protein onggok dihidrolisis oleh enzim protease yang diseksresikan oleh B. megaterium SS4b. Semakin  tinggi  dosis  bakteri,  semakin  tinggi  pula protein  terlarut  yang  terbentuk.  Enzim  protease mengubah protein onggok menjadi peptida atau asam amino  bebas  yang  mudah  larut.  Bakteri  umumnya mampu menyekresikan beberapa jenis enzim sekaligus untuk menghidrolisis substrat. Hal ini ditujukan untuk meningkatkan  efektivitas  pemanfaatan  substrat sebagai  sumber  N  bagi  bakteri  untuk  mendukung pertumbuhannya (Mulyasari, 2017).
Gambar 3. Kandungan  serat  kasar  (%)  onggok  yang  difermentasi menggunakan B. megaterium SS4b pada dosis inokulum yang berbeda  (huruf  yang  sama  mengindikasikan  tidak  berbeda nyata pada selang kepercayaan 95%).
Figure 3. Crude fiber content (%) of cassava starch residue fermented by B. megaterium SS4b at different inoculum doses (the same letter in-
dicates no significant difference at 95% confidence interval).
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 0 3 6 9 K ad ar s er at k as ar C ur de f ib er c on te nt (% )
Dosis perlakuan (Dosage of treatments) (%)
Peningkatan  protein  terlarut  ini  sejalan  dengan hasil  analisis  protein  kasar,  di  mana  semakin  tinggi dosis inokulum yang ditambahkan semakin tinggi pula kadar  protein  kasar  onggok  yang  difermentasi menggunakan  B.  megaterium  SS4b.  Perlakuan  dosis inokulum berpengaruh nyata (P<0,05) terhadap kadar
protein  kasar  onggok  (Gambar  5).  Semakin  tinggi dosis  inokulum  yang  ditambahkan,  semakin  tinggi kadar protein kasar yang terukur. Kadar protein kasar dosis 0% secara signifikan berbeda dengan 6% dan 9% (P<0,05);  tetapi  tidak  berbeda  nyata  dengan  3% (P>0,05).  Nilai  tertinggi  dihasilkan  pada  perlakuan
Gambar 4. Kandungan protein terlarut (µg g -1 ) onggok yang difermentasi menggunakan B. megaterium SS4b pada dosis yang berbeda (huruf yang sama mengindikasikan tidak berbeda nyata pada selang kepercayaan 95%).
Figure 4. Soluble protein content (µg g -1 ) of cassava starch residue fermented by B. megaterium SS4b at different doses (the same letter indicates no significant difference at 95% confidence interval).
Gambar 5. Kandungan protein kasar (%) onggok yang difermentasi menggunakan B. megaterium SS4b pada dosis yang berbeda (huruf yang sama mengindikasikan tidak berbeda nyata pada selang kepercayaan 95%).
Figure 5. Crude protein content (%) of cassava starch residue fermented by B. megaterium SS4b at different doses (the same letter indicates no significant difference at 95% confidence interval).
0.000 20.000 40.000 60.000 80.000 100.000 120.000 140.000 0 3 6 9 K ad ar p ro te in t er lar u t Sol ub le p rot ei n con te nt (u g g - 1 ) Dosis perlakuan (Dosage of treatments) (%) 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 0 3 6 9 K ad ar p ro te in k as ar C ru de p rot ei n con te nt (% ) Dosis perlakuan (Dosage of treatments) (%) a b a b
dosis  9%  yaitu  4,36%  dan  terendah  adalah  dosis  0% yaitu 380%.
Kadar  protein  kasar  dalam  penelitian  ini  sejalan dengan  penelitian  Kurniati  et  al.  (2016).  Peneliti tersebut  melaporkan  bahwa  dosis  inokulum berpengaruh terhadap kadar protein kasar fermentasi Jatropha curcas L. menggunakan Aspergillus niger dan Rhizopus oryzae. Semakin tinggi dosis inokulum yang ditambahkan, semakin tinggi kandungan protein kasar yang terukur. Hal yang sama dilaporkan pula oleh Lie et al. (2015) bahwa kadar protein kasar pada limbah solid  kelapa  sawit  yang  difermentasi  menggunakan Trichoderma  reesei  mengalami  peningkatan  seiring dengan peningkatan dosis inokulum. Penulis tersebut melaporkan bahwa peningkatan protein kasar terjadi karena kapang T. reesei mampu mengikat nitrogen dari udara.  Semakin  tinggi  dosis  inokulum  bakteri  yang ditambahkan, semakin banyak T. reesei yang tumbuh sehingga  semakin  banyak  nitrogen  yang  bisa  diikat dari udara. Bakteri B. megaterium SS4b yang digunakan dalam  penelitian  ini  tidak  termasuk  ke  dalam  jenis bakteri  penambat  nitrogen  dari  udara.  Oleh  karena itu, terjadinya peningkatan kadar protein kasar dalam penelitian ini diduga terjadi karena kadar nutrien lain seperti  karbohidrat  (pati  dan  serat),  mengalami penurunan  selama  proses  fermentasi  berlangsung, sehingga  secara  proporsional  kadar  protein meningkat. Hal ini kemungkinan besar terjadi karena karbohidrat lebih banyak dimanfaatkan bakteri sebagai sumber energi karena ketersediaannya yang dominan di dalam bahan. Bakteri membutuhkan energi untuk pertumbuhan  dan  perkembangbiakannya.  Energi tersebut diperoleh dengan cara mendegradasi nutrien yang mengandung senyawa karbon seperti pati, serat, lemak, maupun protein.
Kecernaan  protein  onggok  secara  in  vitro menunjukkan  bahwa  secara  umum  perlakuan fermentasi mampu meningkatkan kecernaan protein dari  onggok (Tabel  2).  Semakin  tinggi dosis  bakteri yang  diberikan  semakin  tinggi  pula  kecernaan  pro- tein yang terukur. Hasil ini sejalan dengan penelitian Oboh & Akindahunsi (2003) dalam Aro (2008) bahwa fermentasi menggunakan campuran Aspergillus niger dengan  dua  spesies  Lactobacillus  sp.  mampu meningkatkan kecernaan protein secara in vitro pada bahan baku kulit ubikayu dari 66,0 ± 3,1% menjadi 75,1  ±  2,1%.  Hal  yang  sama  dilaporkan  pula  oleh Ogodo et al. (2018), bahwa fermentasi tepung kacang tanah bambara menggunakan bakteri asam laktat secara signifikan  mampu  meningkatkan  kecernaan  protein in vitro bahan  tersebut dari 68,70 ±  1,73% menjadi 85,24  ±  1,21%.  Sedangkan  Samadi  et  al.  (2015) melaporkan bahwa  fermentasi menggunakan  kultur bakteri  asam  laktat  komersial  SBP  mampu meningkatkan  kecernaan  bahan  kering  dan  bahan organik secara in vitro pada ampas sagu masing-masing dari 68,98% menjadi 70,89% dan dari 70,41% menjadi 72,71%.
Berdasarkan  hasil  penelitian  ini  terlihat  bahwa fermentasi  onggok  menggunakan  bakteri  B. megaterium SS4b mampu mengubah senyawa kompleks menjadi sederhana, yang tercermin dari peningkatan gula sederhana dari 14,36 mg g -1 menjadi 17,07 mg g - 1 ; protein terlarut dari 50,96 µg g -1 menjadi 125,18 µg g -1 dan  penurunan  serat  dari  14,83%  menjadi  9,42% sehingga  mampu  meningkatkan  kecernaan  bahan onggok dari 43,48% menjadi 78,79%. Menurut Hasan et  al.  (2014),  mikroba  memiliki  kemampuan  untuk mengkatabolisme  senyawa  kompleks  dan  berperan dalam pelepasan nutrien yang  terikat pada struktur
Tabel 2. Kecernaan  protein  secara  in  vitro  bahan  onggok  yang  difermentasi menggunakan B. megaterium SS4b
Table 2. In  vitro  protein  digestibility  of  cassava  starch  residue  fermented  by B. megaterium SS4b Dosis  perlakuan Dosage of treatments  (%) Kecernaan protein in vitro In vitro protein digestibility  (%) 0 36.36 ± 15.75 a 3 45.45 ± 27.27 ab 6 72.73 ± 15.75 ab 9 78.79 ± 20.99 b Keterangan: Nilai pada kolom yang diikuti huruf yang sama mengindikasikan tidak berbeda nyata pada selang kepercayaan 95%
Remarks: Values in the same  column followed by the same letter  indicates no  significant  difference  at  95%  confidence  interval
sel  bahan  nabati  yang tidak  tercerna.  Bakteri  dapat memecah  dinding  sel  tersebut  dan  mendegradasi, selulosa, hemiselulosa, dan polimer lainnya kemudian mengubahnya menjadi gula sederhana atau turunan gula. Selain itu, bakteri juga mampu menyintesis vi- tamin, asam organik, dan faktor pertumbuhan lainnya. Asam organik yang dihasilkan dari proses fermentasi dapat  meningkatkan  aktivitas  enzim  mikroba  (suhu sekitar  22°C-25°C)  seperti  amilase,  protease,  fitase, dan  lipase.  Enzim-enzim  tersebut  mampu menghidrolisis polisakarida, protein, lemak, dan fitat sehingga  meningkatkan  ketersediaan  gula,  protein, lemak  sederhana,  serta  mineral  dalam  produk. Ketersediaan senyawa sederhana dalam onggok akan mempermudah  proses  pencernaan  dan  penyerapan bahan  tersebut  dalam  saluran  pencernaan  ikan. Penyerapan nutrien yang lebih baik akan menghasilkan retensi protein yang lebih tinggi pada ikan. Selain itu, gula sederhana yang dihasilkan dari proses degradasi selulosa  onggok  dapat  dimanfaatkan  ikan  sebagai sumber  energi,  sehingga  protein  yang  tersedia disimpan  untuk  pembentukan  jaringan  tubuh  atau pertumbuhan (Orire & Sadiku, 2011). Retensi protein yang tinggi pada akhirnya akan memberikan dampak positif pada peningkatan laju pertumbuhan harian dan efisiensi pakan ikan.
Beberapa literatur melaporkan bahwa fermentasi mampu  meningkatkan  kualitas  nutrien  dari  suatu bahan baku pakan ikan sehingga penggunaannya dalam pakan dapat ditingkatkan, serta dapat dimanfaatkan untuk  meningkatkan  pertumbuhan  ikan.  Handajani (2011) melaporkan bahwa penggunaan bungkil kedelai dan tepung azolla terfermentasi berpengaruh signifikan pada tingkat pertumbuhan dan parameter daya cerna ikan nila GIFT. Hal yang sama dilaporkan Dhamayanti et  al.  (2016)  bahwa  substitusi  tepung  ikan  dengan tepung Hydrilla verticillata terfermentasi sebesar 10% mampu  meningkatkan  produktivitas  ikan  nila. Kecernaan  H.  verticillata  meningkat  sebesar  7%;  laju pertumbuhan  spesifik  ikan  nila  meningkat  sebesar 24,8%; dan konversi pakan sebesar 21,85%. Mulyasari (2017)  juga  melaporkan  bahwa  fermentasi  daun singkong menggunakan bakteri B. clausii UG3 mampu meningkatkan kecernaan daun singkong sebesar 7%; laju pertumbuhan harian ikan nila sebesar 19,80%; dan efisiensi  pakan  sebesar  15,7%.  Sedangkan  Soltan  & Samra  (2010)  melaporkan  bahwa  substitusi  tepung ikan dengan silase ikan sampai 25% dalam pakan masih dapat  digunakan  dan  tidak  memberikan  pengaruh negatif terhadap pertumbuhan ikan nila (Oreochromis niloticus). Penggunaan silase ini dapat mereduksi biaya pakan sebesar 7,93%.

## KESIMPULAN
Bakteri  B.  megaterium  SS4b  memiliki  aktivitas selulase,  amilase,  dan  protease,  serta  mampu menghidrolisis  onggok.  Dosis  inokulum  9% merupakan dosis terbaik dalam meningkatkan kualitas nutrien onggok, menghasilkan peningkatan kadar gula sederhana  dari  14,36  mg  g -1 menjadi  17,07  mg  g -1 ; protein terlarut dari 50,96 µg g -1 menjadi 125,18 µg g -1 ; dan penurunan serat dari 14,83% menjadi 9,42%; serta  kecernaan  protein  in  vitro  dari  36,6%  menjadi 78,79%.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih disampaikan kepada Balai Riset Perikanan Budidaya Air Tawar dan Penyuluhan Perikanan Bogor yang telah memfasilitasi penelitian ini. Terima kasih juga penulis ucapkan kepada Bapak Mikdarullah dan Bapak Khazaidan yang telah membantu penulis dalam melaksanakan penelitian ini.

## DAFTAR  ACUAN
Ali, H., Haque, M.M., Chowdury, M.M.R., & Shariful,
I.  (2009).  In  vitro  digestibility  of  different  feed ingredients in Thai koi (Anabas testudineus). Jour- nal of Bangladesh Agricultural University, 7(1), 205- 210.
Anggraeni, Hasibuan, S., Malik, B., & Wijaya, R. (2013). Improving the quality of tofu waste as a source of  feed  through  fermentation  using  the  Bacillus amyloliquefaciens culture. International Journal of Ad- vanced Science Engineering Information Technology, 3(4), 22-25.
Aro, S.O. (2008). Improvement in the nutritive qual- ity of cassava and its by-products through micro- bial fermentation. African Journal of Biotechnology, 7(25), 4789-4797.
Asker, M.M.S.,  Mahmoud, M.G., El-Shebwy, K.,  & El- Azis, M.S.A. (2013). Purification and characteriza- tion of two thermostable protease fractions from Bacillus megaterium. Journal Genetic Engineering and Biotechnology, 11(2), 103-109.
Badan Pusat Statistik [BPS]. (2016). Produksi ubi kayu menurut Provinsi (ton) Tahun 1993-2015. Jakarta (ID): BPS.
Dhamayanti, R.R., Nursyam, H., & Hariati, A.M. (2016). Utilization of Hydrilla verticillata fermented meal as alternative sources of protein in feed formula- tion for tilapia (Oreochromis sp.) growth. Interna- tional Journal of Scientific & Technology Research, 5(3), 34-35.
Febriyanto,  A.,  Rusmana,  I.,  &  Raffiudin  R.  (2015).
Characterization and identification of cellulolytic bacteria  from  gut  of  worker  Macrotermes  gilvus. HAYATI Journal of Biosciences, 22, 197-200.
Frias, J., Song, Y.S., Martínez-Villaluenga, C., González de  Mejia,  E.,  &  Vidal-Valverde,  C.  (2008).  Immu- noreactivity and amino acid content of fermented soybean products. Journal of Agricuture Food Chem- istry, 56(1), 99-105.
Gurudeeban,  S.,  Satyavanim  K.,  &  Ramanathan,  T.
(2011).  Production  extracellular α -amilase  using Bacillus megaterium isolated from white mangrove (Avicenniamarina). Asian Journal of Biotechnology, p. 1-7, DOI, 10.3923/ajbkr.2011. [5 Oktober 2017].
Handajani, H. (2011). Optimalisasi substitusi tepung azolla  terfermentasi  pada  pakan  ikan  untuk meningkatkan produktivitas ikan nila GIFT. Jurnal Teknik Industri, 12(2), 177-181.
Hassan,  M.N.,  Sultan,  M.Z.,  &  Mareum,  M.  (2014). Significance  of  fermented  food  in  nutrition  and food science. Journal of Science and Research, 6(2), 373-386.
Hotz, C. & Gibson, R.S. (2007). Traditional food-pro- cessing  and  preparation  practices  to  enhancing the bioavailability of micronutrients in plant-based diets. Journal of  Nutrition, 137, 1097-1100.
Kalsum,  U.  &  Sjofjan,  O.  (2008).  Pengaruh  waktu inkubasi campuran ampas tahu dan onggok yang difermentasi dengan Neurosphora sitophila terhadap kandungan zat makan. Dalam Prosiding Seminar Nasional  Teknologi  Peternakan  dan  Veteriner, Bogor, Indonesia, hlm. 226-232. Pusat Penelitian dan  Pengembangan  Peternakan,  Kementerian Pertanian.
Kurniati,  T.,  Nurlaila,  L.,  &  Iim.  (2016).  Effect  of  in-
oculum dosage Aspergillus niger and Rhizopus oryzae mixture with fermentation time of oil seed cake (Jatropha curcas L) to the content of protein and crude fiber. Journal of Physics, 824(012604), 1-12. doi:10.1088/1742-6596/824/1/012064. [15 Novem- ber 2017].
Lie,  M.,  Najoan,  M.,  &  Wolayan,  F.R.  (2015). Peningkatan nilai nutrien protein kasar dan serat kasar  limbah  solid  kelapa  sawit  terfermentasi dengan Trichoderma reesei. Jurnal LPPM Bidang Sains dan Teknologi, 2(1), 34-43.
Miller, G.L. (1959). Use of dinitrosalicylic acid reagent for  determination  of  reducing  sugar.  Analytical Chemistry, 31, 426-428.
Mulyasari, Melati, I., & Sunarno, M.T.D. (2015). Isolasi, seleksi  dan  identifikasi  bakteri  selulolitik  dari rumput  laut  Turbinaria  sp.  dan  Sargassum  sp.
sebagai kandidat pendegradasi serat kasar pakan ikan. Jurnal Riset Akuakultur, 10(1), 51-60.
Mulyasari. (2017). Kajian pemanfaatan bakteri selulolitik untuk perbaikan kualitas bahan baku daun singkong (Manihot  utilissima)  dan  sebagai  probiotik  untuk meningkatkan  performa  pertumbuhan  ikan  nila (Oreochromis  niloticus).  Disertasi.  Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.
Mussatto, S.I., & Teixeira, J.A. (2010). Lignocellulose as  raw  material  in  fermentation  processes.  Cur- rent Research, Technology and Education Topics. In Mendez-Vilas (Ed). Microbiology and Microbial Technology.  Extremadura  (ES),  p.  897-907. Formatex Publisher.
Nangin,  D.  &  Sutrisno,  A.  (2015).  Enzim  amilase pemecah pati mentah dari mikroba: kajian pustaka. Jurnal Pangan dan Agroindustri, 3(3), 1032-1039.
Ogodo,  A.C.,  Ugbogu,  O.C.,  Onyeagba,  R.A.,  &
Okereke, H.C. (2018). Proximate composition and in-vitro  starch/protein  digestibility  of  bambara groundnut flour fermented with lactic acid bacte- ria  (LAB)-consortium  isolated  from  cereals.  Fer- mentation Technology, 7(1), 1-9.
Orire,  A.M.  &  Sadiku, S.O.E.  (2011).  Protein  sparing effect  of  carbohydrate  in  the  practical  diet  of Oreochromis niloticus.  Nigerian  Journal of  Fisheries, 8(1), 168-175.
Oso, A.O., Oso, O., Bangbose, A.M., & Eruvbetine, D. (2010). Utilization of unpeeled cassava (Manihot esculenta)  root  meal  in  diets  of  weaner  rabbits. Livestock Science, 127, 192–196.
Oyeleke, S.B., Auta, S.H., & Egwim, E.C. (2010). Pro- duction and characterization of amylase produced by Bacillus megaterium isolated from a local yam peel  dumpsite  in  Minna,  Niger  State.  Journal  of Microbiology and Antimicrobials, 2(7), 88-92.
Rajkumar,  R.,  Jayappriyan,  K.R.,  &  Rengasamy,  R.
(2011). Purification and characterization of a pro- tease produced by Bacillus megaterium RRM2: ap- plication  in  detergent  and  dehairing  industries. Journal of Basic Microbiology, 51(6), 614-624.
Samadi, Wajizah, S., & Usman, Y. (2015). In vitro study of  fermented complete  feed  by  using sago  resi- dues as main source diet. Animal Production, 17(3), 129-137.
Sandi, S., Laconi, E.B., Sudarman, A., Wiryawan, K.G., & Mangundjaja, D. (2010). Kualitas nutrisi silase berbahan baku singkong yang diberi enzim cairan rumen  sapi  dan  Leuconostoc  mesenteroides.  Media Peternakan, 33(1), 25-30.
Shakoor, S., Aftab, S., & Rehman, A. (2013). Charac- terization of cellulose degrading bacterium, Bacil-
lus megaterium S3, isolated from indigenous envi- ronment. Pakistan Journal of Zoology, 45(6), 1655- 1662.
Shobharani, P., Yogesh, D., Halami. P.M., & Sachindra,
M.N.  (2013).  Potential  of  cellulase  from  Bacillus megaterium for hydrolysis of Sargassum. Journal of Aquatic Food Product Technology, 22(5), 520-535.
Soltan,  M.A.  &  Samra,  I.M.  (2010).  Partial  or  com- plete replacement of fish meal by fermented fish by-product  silage  in  the  diets  of  nile  tilapia (Orechormis niloticus) fingerlings. In The Third Sci- entific Conference (p. 1-19). Cairo, Egypt: Al-Azhar University.
Subaryono, Ardilasari, Y., Peranginangin, R., Zakaria, F.R., & Suhartono, M.T. (2016). Alginate lyase from Indonesian Bacillus megaterium s245 shows activ- ity toward polymannuronate and polyguluronate. Squalen Bulletin of Marine and Fisheries Postharvest and Biotechnology, 11(2), 45-52.
Subaryono,  Peranginangin,  R.,  Suhartono,  M.T.,  & Zakaria, F.R. (2015). Isolasi dan identifikasi bakteri
penghasil alginat lyase dari rumput laut Sargassum crassifolium.  Jurnal  Pasca  Panen  dan  Bioteknologi Kelautan dan Perikanan, 10(1), 1-9.
Suprayudi,  M.A.  (2010).  Bahan  baku  pangan  lokal: tantangan  dan  harapan  akuakultur  Indonesia. Prosiding Simposium Nasional Bioteknologi Akuakultur III.  Bogor,  Indonesia:  Institut  Pertanian  Bogor, 31 hlm.
Tarmudji. (2004). Pemanfaatan onggok untuk pakan unggas.  http://www.litbang.deptan.go.id/artikel/ one/71/. [11 September 2017].
Wizna, H.A., Rizal. Y., & Dharma, A. (2009). Improv- ing the quality of tapioca by product (onggok) as poultry  feed  through  fermentation  by  Bacillus amyloliquefaciens. Pakistan Journal of Nutrition, 8(10), 1636-1640.
Yuwono, S.D. & Hadi, S. (2008). Production of lactic acid from onggok and tofu liquid waste with con- centrate Maguro waste supplementby Streptococ- cus  bovis.  Australian  Journal  of  Basic  and  Applied Sciences, 2(4), 939-942.