## AKTIVITAS ANTIOKSIDAN MADU HUTAN DI BEBERAPA KECAMATAN DI KABUPATEN SUMBAWA BESAR

## Dinar Suksmayu Saputri, Yolli Eka Putri

## Fakultas Teknologi Pertanian Universitas Teknologi Sumbawa

## ABSTRAK
Madu merupakan zat alami yang dihasilkan oleh lebah madu dari nektar bunga dan sekresi tanaman. Madu  mengandung  mineral,  protein,  vitamin,  asam  organik,  flavonoid,  senyawa  fenolik,  dan  enzim seperti  katalase,  peroksida,  glukosa  oksidasi,  dan  fitokimia  lainnya,  madu  juga  memiliki  aktivitas antioksidan enzimatik dan non-enzimatik. Komposisi utama madu terdiri dari 80% karbohidrat, 17-20% air,  1-2%  mineral  dan  senyawa  organik.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  identifikasi  kandungan antioksidan pada madu hutan di beberapa daerah di Kabupaten Sumbawa. Untuk identifikasi kandungan antioksidan  dilakukan  analisa  aktivitas  antioksidan,  total  fenol,  ekstraksi  senyawa  fenolik,  dan identifikasi  senyawa  fenolik  pada  madu.  Jumlah  sampel  yang  digunakan  adalah  sampel  madu  yang diperoleh dari 2 lokasi hutan di Kecamatan Batu Lanteh, 1 lokasi hutan Kecamatan Labuhan Badas dan 1 lokasi hutan Kecamatan Lape Kabupaten Sumbawa. Hasil dari penelitian menunjukkan bahwa madu hutan di beberapa daerah tersebut mengandung senyawa fenol (asam galat) sebesar 0,0633  – 0,3875 mg/g  dan  memiliki  aktivitas  antioksidan  antara  3,3365  –  30,9680%  dengan  nilai  IC50  60,2  –  572,3 mg/mL.
Kata kunci: madu hutan, antioksidan, Sumbawa

## 1.  PENDAHULUAN
Madu  merupakan  zat  alami  yang dihasilkan  oleh  lebah  madu  dari  nektar  bunga dan sekresi tanaman. Madu diketahui memiliki aktivitas  antioksidan  enzimatik  dan  non- enzimatik. Selain itu, madu merupakan larutan gula yang sangat jenuh, madu juga mengandung  mineral,  protein,  vitamin,  asam organik, flavonoid, senyawa fenolik, dan enzim seperti  katalase,  peroksida,  glukosa  oksidasi, dan fitokimia lainnya. Tergantung pada kondisi geografis  dan  iklim,  berbagai  jenis  madu mengandung  berbagai  fitokimia  termasuk polifenol  dan  asam  fenolik  yang  berperan sebagai  antioksidan.  Polifenol  utama  dalam madu adalah flavonoid dengan kandungan yang bebeda-beda  antara  60  dan  460µg  per  100g madu (Sime et al , 2007).
Penelitian mengenai madu telah banyak dilakukan, namun penelitian dan kajian khusus  madu  lokal  yang  dihasilkan  dari  lebah madu  Indonesia  khususnya  Pulau  Sumbawa masih  jarang  ditemukan.  Selain  itu,  penelitian dan  kajian  mengenai  madu  lokal  ini  menjadi penting  karena  komposisi  madu,  termasuk kandungan  antioksidan,  dipengaruhi  oleh perbedaan  jenis  tanaman,  iklim,  dan  kondisi lingkungan.  Hutan  pulau  Sumbawa  yang  luas dan  subur  merupakan  sumber  makanan  yang berlimpah  bagi  lebah  penghasil  madu.  Madu hutan  di  pulau  Sumbawa  sebagian  besar  di hasilkan oleh jenis lebah Apis dorsata .
Mengambil madu di hutan merupakan mata  pencaharian  sampingan  bagi  para  petani di pulau Sumbawa. Madu hutan Sumbawa telah dipercaya sejak dahulu memiliki manfaat yang baik  untuk  kesehatan.  Melalui  penelitian  ini diharapkan  dapat  membuktikan  aktivitas antioksidan  madu  hutan  Sumbawa.  Dengan diketahuinya aktivitas antioksidan madu Sumbawa  dalam  menangkal  radikal  bebas, diharapkan  akan  meningkatkan  nilai  ekonomi madu  Sumbawa  dan  memberi  informasi  lebih detail  pada  konsumen  tentang  fungsi  madu Sumbawa bagi kesehatan.

## 2.  METODE PENELITIAN A. Waktu dan Lokasi
Penelitian  dilakukan  di  Laboratorium
Pangan Terpadu Universitas Teknologi Sumbawa,  Laboratorium  Analisis  Terpadu
Fakultas  Teknologi  Pertanian  Universitas
Jember dan Laboratorium Pengujian Mutu dan Keamanan Pangan Jurusan THP FTP Universitas  Brawijaya.  Jadwal  penelitian dimulai  bulan  Januari  2017,  berakhir  pada November 2017.
B. Bahan dan Alat
Bahan  yang  digunakan  adalah  madu hutan dari Kecamatan Lape, Tepal, Punik dan Pulau  Moyo.  Bahan  kimia  yang  digunakan antara lain reagen Folin – Ciocalteau, Na 2 CO 3 , asam  galat,  reagen  DPPH,  0,1  N  HCl, (NH 4 ) 2 SO 4 ,  indicator  amilum  dan  iodin  0,1N. Alat yang digunakan dalam penelitian ini antara
lain tabung reaksi, beaker glass, spektrofotometer,  buret,  pipet, neraca analitik, dll.
C. Tahapan Penelitian Analisa Aktivitas Antioksidan (Chua, L.S. et al ., 2013)
0,75  mL  larutan  madu  dan  methanol  dengan konsentrasi  20-40mg/mL  ditambahkan  1,5mL larutan DPPH, lalu diukur absorbansinya pada panjang gelombang 517 nm.
Analisa Total Fenol (Marshall, S.M., 2013) 5  g  madu  dilarutkan  dengan  25  mL  aquadest. Setiap  sampel  lalu  ditambahkan  reagen  Folin- Ciocalteau  dan  Na 2 CO 3 (15%).  Larutan diinkubasi  pada  suhu  ruang  selama  30  menit dan  diukur  absorbansinya  pada  panjang gelombang 765nm.
Analisa Vitamin C (Siti, N. dkk., 2016) 10 g madu dimasukkan dalam labu takar 50 mL dan  ditambahkan  aquades  sampai  garis  batas. Sampel  disaring  untuk  memisahkan  filtratnya. 5  mL  filtrate  diambil  menggunakan  pipet volume, dimasukkan dalam erlenmeyer, ditambahkan 2 tetes larutan amilum dan 20 mL aquadest.  Sampel  dititrasi  dengan  larutan iodium  0,1N  sampai  warna  berubah  menjadi biru mantap.

## 3.  HASIL DAN PEMBAHASAN Aktivitas Antioksidan
Analisa  aktivitas  antioksidan  madu dilakukan  menggunakan  metode  DPPH  (2,2- Diphenyl-  1-picrylhydrazyl).  DPPH  adalah radikal  bebas  yang  stabil  di  suhu  ruang  dan menghasilkan  larutan  berwarna  ungu  dalam alkohol.  DPPH  akan  tereduksi  dengan  adanya antioksidan. Analisa aktivitas antioksidan pada sampel madu ditentukan berdasarkan kemampuan  antioksidan  pada  madu  untuk melawan radikal bebas (DPPH). Elektron pada DPPH yang tidak berpasangan akan membentuk  ikatan  dengan  hidrogen  yang didonasikan  oleh  antioksidan  pada  madu. Reaksi  ini  akan  mengubah  warna  ungu  pada larutan  DPPH  menjadi  kuning.  Derajat perubahan  warna  ini  diukur  menggunakan spektrofotometer
UV- visible untuk menentukan aktivitas antioksidan madu (Pontis, J.A. et al ., 2014; Chua et al ., 2013). Dari  hasil  analisa  didapatkan  bahwa persen penghambatan madu Sumbawa terhadap radikal bebas sebesar 3,34% untuk madu daerah Tepal,  3,24%  madu  Punik,  9,87%  madu  Lape dan  30,97%  madu  Pulau  Moyo.  Persen penghambatan  radikal  bebas  oleh  madu Sumbawa dapat dilihat pada grafik di bawah,
Gambar 4. Aktivitas Antioksidan Madu Sumbawa
Hasil  tersebut  menunjukkan  bahwa  aktivitas  antioksidan  sampel  madu  yang  diambil  dari beberapa  daerah  di  Sumbawa  tersebut  lebih  kecil  daripada  madu-madu  dalam  penelitian  lain. Moniruzzaman et  al. (2013)  menganalisa  madu  dari  lebah Apis  dorsata di  Malaysia  mendapatkan persen  penghambatan  radikal  bebas  sebesar  59,89%.  Chayati dkk .  (2014)  mendapatkan  aktivitas antioksidan  sebesar  21,06  –  32,14%  pada  madu  di  daerah  Jawa  dan  Sumatera.  Husein et  al. (2011) mendapatkan  aktivitas  antioksidan  madu  dari  pohon  gelam  dan  nanas  di  Malaysia  sebesar  17,7  – 82,68%.  Hasil  ini  juga  lebih  kecil  daripada  madu  India  (57,5%),  madu  Algeria  (44,55%).  Aktivitas antioksidan  suatu  bahan  dipengaruhi  oleh  kandungan  senyawa  fitokimia  yang  memiliki  sifat antioksidan.  Senyawa  tersebut  diantaranya  adalah  asam  fenolik,  flavonoid,  enzim  (glukosa  oksidase dan katalase), asam askorbat, karotenoid, asam organik, asam amino dan protein. Aktivitas antioksidan komponen fenolik berkontribusi terhadap kesehatan manusia (Khalil, M.I. et al ., 2010).
3.34 3.24 9.87 30.97 0 5 10 15 20 25 30 35 Tepal Punik Lape Pulau Moyo % P eng ha m ba ta n Ra dik a l B eba s Daerah Pengambilan Sampel
Aktivitas  antioksidan  juga  dinyatakan  dalam  parameter  IC50.  IC50  menyatakan  konsentrasi sampel  yang  dibutuhkan  untuk  menghambat  50%  radikal  bebas,  yang  dalam  hal  ini  adalah  DPPH. Semakin rendah nilai IC50, maka konsentrasi sampel yang digunakan untuk menangkal 50% radikal bebas semakin kecil, yang berarti sampel tersebut lebih kuat dalam menangkal radikal bebas (Pontis et al . 2014). Nilai IC50 sampel madu dari beberapa kecamatan di Sumbawa dapat dilihat pada grafik di bawah:
Gambar 4. Nilai IC50 Madu Sumbawa

## Total Fenol
Analisa  kandungan  senyawa  fenolik  menggunakan  metode  Follin-Ciocalteau.  Reaksi  antara reagen Follin-Ciocalteau dengan senyawa fenolik akan membentuk warna biru kompleks yang dapat menyerap radiasi sehingga bisa diukur (Pontis, J.A. et al. , 2014). Standar senyawa fenol yang digunakan dalam analisa ini adalah asam galat. Dari hasil analisa didapatkan total fenol madu dari Tepal sebesar 0,0704 mg/g, dari Punik 0,063 mg/g, dari Lape 0,2927 mg/g dan dari Pulau Moyo sebesar 0,3875 mg/g.
Gambar 5. Total Fenol (mg/g) madu Sumbawa
Nilai  total  fenol  madu  yang  diambil dari  beberapa  daerah  di  Sumbawa  ini  hampir sama dengan hasil penelitian madu lain. Khalil et  al .  (2012)  meneliti  madu  tualang  dari Malaysia  mendapatkan  total  fenol  madu sebesar  0,22  -  0,38  mg/g.  Kumazawa et  al . (2012) menganalisa madu multifloral di Jepang dan mendapatkan total fenol sebesar 0,17 – 1,32 mg/g;  madu  Portugis  0,23  –  0,73  mg/g (Ferreira et  al .,  2009);  madu  dari  Echium vulgare  0,29  mg/g  (Nagai et  al .,  2012);  madu Czech 0,03 – 0,16 mg/g (Lachman et al ., 2010); madu  Brazil  0,25  –  0.54  mg/g  (Pontis et  al ., 2014).
Walaupun  nilai  total  fenol  madu Sumbawa tidak jauh berbeda dengan madu dari daerah  lain,  tetapi  aktivitas  antioksidannya sangat  kecil  apabila  dibandingkan  dengan penelitian  lain.  Hal  ini  disebabkan  karena banyak  gangguan  dalam  metode  Follin  – Ciocalteau.  Gangguan  pada  metode  ini diantaranya  adalah  reagen  Follin-Ciocalteau (campuran asam phosphotungstic dan phosphomolibdic )  yang  juga  bereaksi  dengan senyawa  selain  senyawa  fenol  seperti  vitamin C,  sehingga  hasil  total  fenol  menjadi berlebihan. Senyawa pereduksi lain seperti gula dan  asam  amino  juga  dapat  mengganggu
572.29 562.3 304.93 60.2 0 100 200 300 400 500 600 700 Tepal Punik Lape Pulau Moyo IC5 0 ( m g /m L ) Daerah Pengambilan Sampel 0.07 0.06 0.29 0.39 0.00 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 Tepal Punik Lape Pulau Moyo To ta l F eno l ( m g /g ) Daerah Pengambilan Sampel
analisa. Hal ini menyebabkan kesalahan positif ( positive  error )  pada  hasil  (Ferreira et  al ., 2009). Kandungan senyawa fenol dan aktivitas antioksidan  pada  madu  berbanding  lurus dengan warna madu. Warna madu berhubungan dengan  keberadaan  pigmen  seperti  karotenoid dan flavonoid. Madu yang berwarna lebih gelap memiliki  total  fenol  dan  aktivitas  antioksidan lebih  tinggi  (Kumazawa et  al .,  2012).  Teori tersebut sesuai dengan hasil yang diperoleh dari penelitian  madu  Sumbawa  ini,  dimana  warna madu dari pulau Moyo lebih gelap daripada dari daerah lain (Lape, Tepal dan Punik).

## Vitamin C
Asam  askorbat  (vitamin  C)  bertindak sebagai antioksidan dengan cara mendonasikan dua  electron  dari  ikatan  rangkap  diantara karbon ke-2 dan ke-3, pendonoran elektron ini yang  mencegah  senyawa  lain  teroksidasi. Oksidasi vitamin C ini menghasilkan senyawa radikal  bebas  baru  yaitu  semidehydroascorbic atau radikal ascorbyl yang lebih stabil daripada radikal  bebas  lain  dan  tidak  bertahan  lama (Padayatty,  S.J. et  al .,  2013;  Siti,  N.  dkk., 2016).  Kandungan  vitamin  C  pada  madu  dari beberapa  kecamatan  di  Kabupaten  Sumbawa dapat dilihat pada grafik di bawah:
Gambar 6. Kadar Vitamin C (mg/100g) pada Sampel Madu
Dari  hasil  tersebut  dapat  dilihat  bahwa  kadar vitamin C pada sampel madu dari Pulau Moyo, diikuti sampel dari Kecamatan Lape, Punik dan Tepal.  Hasil  ini  sesuai  dengan  aktivitas antioksidan madu, dimana aktivitas antioksidan (% penghambatan dan IC50) madu dari Pulau Moyo  paling  tinggi  daripada  sampel  madu daerah lain. Tetapi hasil ini lebih kecil daripada penelitian-penelitian  sebelumnya.  Vitamin  C pada  madu  Tualang,  Gelam  dan  akasia  dari Malaysia  mengandung  52,2  –  67,4  mg/100g). Madu dari Nigeria mengandung 18,52 – 25,16 mg/100g  vitamin  C.  Vitamin  C  pada  madu sangat  sensitif  terhadap  penyimpanan  dan proses,  sehingga  jarang  dideteksi  pada  madu yang  sudah  mengalami  proses  pengolahan seperti penyaringan dan pemanasan (Buba, F. et al ., 2013; Chua, L.S. et al ., 2013).

## 4.  KESIMPULAN
Kesimpulan  yang  diperoleh  dari  penelitian Identifikasi Senyawa Antioksidan Madu Hutan di Kecamatan Lopok Sumbawa ini antara lain:
a. Madu  hutan  Sumbawa  dari  Pulau  Moyo memiliki  kandungan  senyawa  fenol  dan
aktivitas  antioksidan  yang  lebih  tinggi daripada madu dari Lape, Tepal dan Punik.
b. Aktivitas antioksidan, kandungan senyawa fenolik  dan  vitamin  C  madu  hutan  di beberapa kecamatan Kabupaten Sumbawa Besar  lebih  kecil  daripada  penelitian  di daerah lain.
c. Perlu adanya perbaikan mutu madu hutan Sumbawa

## DAFTAR PUSTAKA
Campone,  L.  et  al.,  2014. Determination  of
Phenolic  Compounds  in  Honey  Using Dispersive Liquid-Liquid Microextraction . Journal of
Chromatography A 1334: 9 – 15 Chayati,  I. dkk .,  2014. Kandungan  Komponen Fenolat,  Kadar  Fenolat  Total  dan Aktivitas  Antioksidan  Madu  dari Beberapa  Daerah  di  Jawa  dan Sumatera . MGMI Vol. 6 No.1: 11 – 24. Buba, F. et al., 2013. Analysis of Biochemical Composition  of  Honey  Samples  From North-East  Nigeria .Biochemistry  and Analytical Biochemistry Vol. 2 Issue 3.
7.18
10.13 10.33 32.72 0 5 10 15 20 25 30 35 Tepal Punik Lape Pulau Moyo Vit a m in C (m g /1 0 0 g ) Daerah Pengambilan Sampel
Chua,  L.S.,  Rahaman,  N.L.A.,  Adnan,  N.A., and  Tan,  T.T.E.,  2013. Antioxidant Activity  of  Three  Honey  Samples  in Relation  with  Their  Biochemical Components .  Journal  of  Analytical Methods in Chemistry Vol. 13: 1-8 Darmawan,  S.  dan  Agustarini,  R.,  2011.
Penurunan  Kadar  Air  Madu  Hutan
Alam  Sumbawa .  Prosiding  Seminar Nasional Peranan Hasil Litbang HHBK dalam Mendukung Pembangunan Kehutanan: 313-321
Ferreira,  I.C.F.R. et  al .,  2009. Antioxidant Activity of Portuguese Honey Samples: Different  Contributions  of  the  Entire Honey  and  Phenolic  Extract .  Food Chemistry Vol. 114 issue 4: 1438 -1443
Hussein,  S.Z.,  Yusoff,  K.M.,  Makpol,  S.,  and Yusof,  Y.A.M.,  2011. Antioxidant Capacities and Total Phenolic Contents Increase with Gamma Irradiation in Two Types of Malaysian
Honey . Molecules Vol. 16: 6378-6395 Khalil, M.I., Sulaiman, S.A., and Boukraa, L., 2010. Antioxidant Properties of Honey and  its  Role  in  Preventing  Health Disorder .  The  Open  Nutraceuticals Journal Vol. 3: 6-16 Khalil,  MD.I.  et  al.,  2012. Content  and Antioxidant  Properties  of  Processed Tualang Honey Collected From Different Regions in Malaysia .
International Journal of Pharmacy and
Pharmaceutical Sciences Vol. 4: 214 – 219.
Kumazawa, S. et al., 2012. Antioxidant Activity in  Honeys  of  Various  Floral  Origins:
Isolation and Identification of Antioxidants  in  Peppermint  Honey . Food Science and Technology Research Vol. 18 (5): 679 – 685.
Lachman, J. et al ., Contents of Major Phenolic and Flavonoid Antioxidants in Selected Czech  Honey .  Czech  Journal  of  Food
Science Vol. 28: 412 - 426
Marshall,  S.M.,  2013. Identification  and
Concentration of Phenolic and
Carbonyl  Compounds  in  Florida Honeys .  Thesis-University  of  Florida: Florida Moniruzzaman, M. et al ., 2013. Physicochemical and Antioxidant Properties of Malaysian Honey Produced by Apis cerana, Apis dorsata
and Apis melifera . BMC Complementary and Alternative Medicine Vol. 13: 1 - 12
Nagai, T. et al .,  2012. Functional  Property of Honey from Echium vulgare . Food and Nutrition Science Vol. 3: 614 – 620 Nascimento, D.L. et al ., 2012. Extreme Effects of  Season  on  The  Foraging  Activities and Colony Productivity of a Stingless Bee (Melipona asilvai Moure, 1971) in Northeast Brazil . Psyche: A Journal of Entomology  Vol.  2012  artile  ID 267361 Neupane,  B.P.  et  al.,  2015 Antioxidant Properties  of  Honey  From  Different Altitudes  of  Nepal  Himalayas .  Polish Journal of Food and Nutrition Science Vol. 65 No.2: 87 - 91
Pontis,  J.A.,  Costa,  M.A.,  Silva,  S.J.R.,  and Flach,  A.,  2014. Color,  Phenolic, Flavonoid  Content  and  Antioxidant Activity  of  Honey  from  Roraima, Brazil .  Food  Science  and  Technology Vol. 34(1): 69-73 Prica, N. et al., 2014. Moisture and Acidity as Indicators  of  the  Quality  of  Honey Originating  From  Vojvodina  Region . Arhiv  Veterinarske  Medicine  Vol.  7 No.2: 99 -109 Puskadija, Z. et al., 2007. Influence of Weather Conditions  on  Honey  Bee  Visits  (Apis melifera  carnica)  During  Sunflower (Helianthus  annuus  L.)  Blooming Period . ISSN 1330-7142
Sime, D., Atlabachew, M., Abshiro, M. R., and Zewde,  T.,  2015. Total  Phenols  and Antioxidant  Activities  of  Natural Honeys  and  Propolis  Collected  from Different  Geographical  Regions  of Ethiopia. Bull  Chem  Soc  Ethiop.  29 (2): 163-172.
Siti, N. dkk., 2016. Penetapan Kadar Vitamin C  pada  Jerami  Nangka  ( Artocarpus hetertopophyllus  L.).  Jurnal  Farmasi Sains dan Praktis Vol.II No1 Trimanto  dan  Sialiaan,  F.A.,  2017. Botanical Survey  in  Moyo  Island,  West  Nusa Tenggara,  Indonesia:  Inventory  of Flora Collection at Forest . The Journal of  Tropical  Life  Science  Vol.  7  No.2: 158 – 166 Wiriadinata, H. dkk. 2013. Floristic Study of West Sumbawa, Indonesia . A Journal of Taxonomic Botany, Plant Sociology and
Ecology Vol. 13(5): 391-455