Jurnal Pharmascience, Vol 3, No. 1, Februari 2016, hal: 66 - 74 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 http://jps.ppjpu.unlam.ac.id/

## Research Article

## Skrining Fitokimia dan Uji Kualitatif Aktivitas Antioksidan Tumbuhan Asal Daerah Rantau Kabupaten Tapin Kalimantan Selatan
*Sutomo 1,5 , Arnida 1,5 , M. Ikhwan Rizki 1,5 , Liling Triyasmono 1,5 , Agung Nugroho 2,5 , Evi Mintowati 3,5 , Salamiah 4,5
1 Program Studi Farmasi FMIPA Universitas Lambung Mangkurat Banjarmasin 2 Fakultas Pertanian Universitas Lambung Mangkurat Banjarmasin 3 Program Studi Biologi FMIPA Universitas Lambung Mangkurat Banjarmasin 4 Fakultas Kehutanan Universitas Lambung Mangkurat Banjarmasin 5 Pusat Studi Obat Berbasis Bahan Alam Universitas Lambung Mangkurat Banjarmasin *Email : suto_farm@yahoo.co.id

## ABSTRAK
Kalimantan  selatan  merupakan  salah  satu  kawasan  tropis  dengan  sumber keanekaragaman  hayati  yang  melimpah.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  melakukan ekstraksi  dan  skrining  fitokimia  terhadap  beberapa  tumbuhan  yang  secara  etnis digunakan  sebagai  pengobatan.  Metode  ini  sangat  penting  untuk  mendapatkan gambaran  terhadap  golongan  senyawa  yang  terkandung  dalam  tumbuhan  obat. Tumbuhan  yang  diteliti    adalah  rimpang  patiti,  kulit  batang  ambaratan,  batang carikang habang, daun puspa, kulit batang balik anngin, daun bilaran tapah, dan daun karamunting.  Hasil  ekstraksi  menggunakan  etanol  70%  rendemen  terbanyak  adalah daun  puspa  (30,76%)  diikuti  secara  berturut-turut  kulit  batang  balik  angin  (27,05%), daun  bilaran  tapah  (23,53%),  daun  karamunting  (10,88%),  rimpang  patiti  (8,48%), batang  carikang  habang  (3,56%),  dan  kulit  batang  ambaratan  (2,04%).  Skrining fitokimia  menunjukkan  bahwa  rimpang  patiti  mengandung  senyawa  golongan flavonoid,  fenol,  tanin,  saponin,  dan  terpenoid.  Kulit  batang  ambaratan  mengandung senyawa  golongan  alkaloid,  flavonoid,  fenol,  tanin  dan  antrakinon.  Batang  carikang habang  mengandung  senyawa  golongan  alkaloid,  flavonoid,  fenol,  tanin,  saponin, steroid,  dan  antrakuion.  Daun  puspa  mengandung  senyawa  golongan  alkaloid, flavonoid,  fenol,  saponin,  dan  terpenoid.  Kulit  batang  balik  anngin  mengandung senyawa  golongan  alkaloid,  flavonoid,  fenol,  tanin,  terpenoid,  dan  antrakuinon.  Daun bilaran tapah mengandung senyawa golongan alkaloid, flavonois, fenol, tanin, saponin, terpenoid,  dan  antrakuinon.  Daun  karamunting  mengandung  senyawa  golongan alkaloid, flavonois, fenol,  tanin, saponin, dan terpenoid. Hasil  uji aktivitas antioksidan dengan  menggunakan  metode  DPPH  melalui  kromatpgrafi  lapis  tipis  menunjukkan bahwa ketujuh tumbuhan yang diuji mengandung senyawa yang bersifat antioksidan.
Kata kunci : eksplorasi, ekstraksi, skrining fitokimia, antioksidan.

## ABSTRACT
Kalimantan  Selatan  is  a  province  in  the  southern  of  Borneo  island.  As  one  of  the tropical  areas,  this  province    has  a  high  biological  diversity.  The  recent  study  aims  to identify  the  secondary  metabollites  through  screening  test  and  evaluate  the antioxidative  capacities  of  several  medicinal  plants  growing  in  Tapin  regency.  Seven plants used in this study were: the rhizome of Patiti (RP), the bark of Ambaratan (BA), the stem of Carikang Habang (SC), leaves of Puspa (LP), the bark of Balik Angin (BB), leaves  of  Bilaran  Tapah  (LB),  and  leaves  of  Karamunting  (LK).  Arranged  from  the highest to the lowest, the yield of 70% ethanol extracts were 30.76% (LP), 27.05% (BB), 23.53%  (LB),  10.88%  (LK),  8.48%  (RP),  3.56%  (BC),  and  2.04%  (BA).  The phytochemical  screening  test  shown  that  flavonoid,  phenolic,  tanin,  saponin,    and terpenoid  were  detected  in  RP.  In  BA,  alkaloid,  flavonoid,  phenolic,  tanin,  and antraquinon were identified. SC possessed alkaloid, flavonoid, phenolic, tanin, saponin, steroid, and antraquinon. LP had alkaloid, flavonoid, phenolic, saponin, and terpenoid. BB  contained  alkaloid,  flavonoid,  phenolic,  tanin,  terpenoid,  and  antraquinon.  LB shown  the  presence  of    alkaloid,  flavonoid,  phenolic,  tanin,  saponin,  terpenoid,  and antraquinon.  Meanwhile,  LK  indicated  the  presence  of  alkaloid,  flavonoid,  phenolic, tanin,  saponin,  and  terpenoid.  Antioxidant  analyis  of  the  seven  extracts  using  DPPH showed  that  all  the  tested  plants  possessed  the  active  compounds  with  antioxidative effects.
Keywords: exploration, extraction, phytochemical screening, antioxidant.

## I. PENDAHULUAN
Bahan obat yang berasal dari alam secara  turun-temurun  telah  digunakan  di Indonesia untuk mengatasi berbagai penyakit  (Elfahmi et  al ,  2014).  Metabolit sekunder  yang  ada  di  dalam  bagian  dari tumbuhan  memiliki  banyak  khasiat  dalam mengatasi  berbagai  penyakit,  terutama untuk penyakit degeneratif (Heinrich et al , 2012).  Efek  sinergisme  antar  senyawa metabolit sekunder menyebabkan kemampuan  bahan  alam  dapat  melebihi kemampuan  obat  sintesis  yang  hanya terdiri  dari  senyawa  tunggal  (Bone  & Mills,  2013).  Untuk  pengembangan  obat bahan  alam  yang  lebih  komprehensip dapat  dilakukan  isolasi  senyawa  aktif
melalui  pendekatan  metode bioassay guided .  Pengembangan  obat  bahan  alam dapat diarahkan pada produk obat tradisional  yaitu  jamu,  herbal  terstandar, dan fitofarmaka.
Bedasarkan  data World  Health Organization (WHO)  pada  tahun  2011, penyakit degeneratif yang disebabkan oleh radikal  bebas  termasuk  dalam  penyebab utama  kematian  manusia  (Budilaksono, 2013).  Radikal  bebas  dapat  menyebabkan berbagai  penyakit  seperti  kanker,  jantung, aterosklerosis,  hipertensi  diabetes  melitus, iskemia,  dan  neurodegeneratif  (Valko, 2007).  Senyawa  yang  dapat  menghambat efek  radikal  bebas  di  dalam  tubuh  adalah senyawa antioksidan. Kemampuan
antioksidan suatu tumbuhan dapat dikorelasikan  dengan  aktivitas  tumbuhan tersebut dalam mengatasi berbagai penyakit  (Sutomo et  al .,  2011).  Penelitian aktivitas antioksidan merupakan penelitian awal  yang  bersifat  eksploratif  untuk menuntun  pada  khasiat  suatu  tumbuhan terhadap penyakit degeneratif.
Kalimantan  Selatan merupakan salah  satu  wilayah  yang  memiliki  hutan yang  kaya  bahan  alam  yang  berkhasiat sebagai  obat.  Eksplorasi  bahan  alam  yang dapat  digunakan  sebagai  obat  penting untuk  dilakukan  seiring  tingginya  minat masyarakat  terhadap  obat  herbal.  Salah satu hutan lindung yang ada di Kalimantan Selatan  yaitu  berada  di  Desa  Klumpang Kecamatan  Bungur  Kabupaten  Tapin. Tumbuhan  yang  tumbuh  terdiri  dari  jenis Acacia mangium, Cassia siamea, Gmelina arborea,  Shorea  spp .,  Rotan,  Ulin,
Mersawa dan lain-lain. Dari hasil inventarisasi  BPK  diketahui  terdapat  120 jenis  tumbuhan  yang  terdiri  dari  11  jenis anggrek,  29  jenis  tumbuhan  obat,  dan  80 jenis  tumbuhan  berguna  lainnya  (BPK, 2015).  Sebanyak  29  jenis  tumbuhan  obat belum banyak dieksplorasi karena terbatas pada  penggunaan  empiris  di  masyarakat. Pada  penelitian  ini  dilakukan  eksplorasi terhadap  7  jenis  tumbuhan  obat  terkait kandungan senyawa aktif (skrining fitokimia),  skrining  kualitatif  aktivitas antioksidan, menentukan kekuatan
aktivitas  antioksidan  berdasarkan  nilai Inhibitory  Concentration 50  (IC 50 ),  dan penentuan  kadar  flavonoid  total.  Hasil eksplorasi  dapat  dijadikan  dasar  dalam penelitian  yang  lebih  spesifik  terhadap aktivitas tumbuhan tersebut dalam mengatasi penyakit.

## II. BAHAN DAN METODE

## A. Bahan
Bahan  yang  digunakan  adalah akuades,  pelarut  etanol  70%  teknis, pereaksi DPPH (2,2-difenil-1- pikrilhidrazil), n -heksana, etil asetat, asam klorida (HCl) pekat, asam sulfat pekat, plat KLT  aluminium  sheed  1.05554.0001, kapiler, n -heksana  pa  (merck),  etil  asetat pa  (Merck),  dan  kertas  saring.  Sampel yang  digunakan  adalah  7  jenis  tumbuhan obat  yang  ada  di  Kawasan  Hutan  Dengan Tujuan Khusus (KHDTK) Desa Kelumpang Kecamatan Bungur Kabupaten Tapin  yang  dibawah  pengelolaan  Balai Penelitian Kehutanan Banjarbaru .

## B. Pembuatan Serbuk Simplisia
Sampel  7  tumbuhan  obat  diambil  di Desa  Kelumpang  Kecamatan  Bungur Kabupaten Tapin. Pengumpulan dilakukan pada pagi hari. Tumbuhan yang digunakan telah berusia cukup dewasa agar didapatkan  senyawa  metabolit  sekunder yang  maksimal  dan  seragam.  Proses penyiapan  simplisia  dilakukan  dengan
melakukan sortasi basah untuk memisahkan  kotoran  atau  bahan  asing  . Sampel yang diambil dilakukan pencucian dengan  air  bersih  untuk  menghilangkan tanah  dan  pengotor  lainnya  yang  melekat pada bahan, kemudian dilakukan penirisan untuk  mengurangi  jumlah  air  yang  masih menempel  pada  simplisia.  Perajangan dilakukan  untuk  memperluas  permukaan bahan  sehingga  mempermudah  proses pengeringan. Proses pengeringan dilakukan  di  bawah  sinar  matahari  tidak langsung,  kemudian  dilakukan  sortasi kering  untuk  memisahkan  bahan  organk asing  dan  simplisia  yang  rusak  akibat proses  sebelumnya.  Selanjutnya  dilakukan penyerbukan  terhadap  simplisia  kering yang diperoleh  (BPOM RI, 2013).

## C. Pembuatan Ekstrak
Sebanyak  1,0  kg  serbuk  kering ditimbang  seksama  kemudian  diekstraksi dengan  metode  maserasi  menggunakan etanol  pelarut  70%  dengan  perbandingan 1  :  2,5.  Untuk  mempercepat  terjadinys difusi dan osmosis maka sesekali dilakukan  pengadukan.  Setelah  24  jam dilakukan  penyaringan  menggunakan  kain flanel.  Filtrat  dipisahkan  untuk  diuapkan sedangkan  ampas  disari  kembali  dengan pelarut  yang  baru.  Perlakuan  dilakukan sebanyak  tiga  kali  atau  cairan  ekstrak sudah  berwarna  bening.  Ekstrak  cair  yang diperoleh dipekatkan menggunakan rotary
evaporator ,  kemudian  diuapkan  di  atas waterbath hingga  terbentuk  ekstrak  kental (Jamshidi et al, 2014).

## D. Skrining Fitokimia

## 1. Uji Flavonoid
Uji  Reagen  Alkalin:  Sampel  (100 mg)  dilarutkan  dalam  10  mL  pelarut, sampel  disaring,  filtrat  (2  mL)  ditambah beberapa  tetes  larutan  NaOH.  Apabila terbentuk  warna  kuning  dan  memudar setelah  ditambah  dengan  asam  berarti positif  mengandung  flavonoid  (Tiwari et al ., 2011).
Uji Timbal Asetat: Sampel (100 mg) dilarutkan  dalam  10  mL  pelarut.  Sampel disaring,  filtrat  (2  mL)  dimasukkan  dalam tabung reaksi, ditambahkan 1 mL Pb asetat 10% dan dikocok. Apabila terjadi perubahan warna menjadi coklat kekuningan  berarti  positif  mengandung flavonoid (Tiwari et al ., 2011).

## 2. Uji Alkaloid
Uji  Dragendroff:  Sampel (100 mg) dilarutkan  dalam  10  mL  pelarut.  Sampel disaring, filtrat (2 mL) ditambah dengan 1 mL  reagen  Dragendroff,  Terbentuknya endapan  merah  menunjukkan  adanya alkaloid (Tiwari et al. , 2011).
Uji  Mayer:  Sampel  (100  mg) dilarutkan  dalam  10  mL  pelarut.  Sampel disaring, filtrat (2 mL) ditambah dengan 1 mL  reagen  Meyer.  Terbentuknya  endapan
kuning  menunjukkan  adanya  alkaloid (Tiwari et al. , 2011).

## 3. Uji Tanin
Uji Besi (III) Klorida: Sampel (100 mg)  dilarutkan  dalam  10  mL  pelarut. Sampel  disaring,  filtrat  (2  mL)  ditambah dengan  1  mL  FeCl 3 3%.  Adanya  endapan hijau kehitaman menandakan adanya tanin (Koleva, et al. , 2002).
Uji  Gelatin:  Sampel  (100  mg) dilarutkan  dalam  10  mL  pelarut.  Sampel disaring, filtrat (2 mL) ditambah dengan 2 mL  larutan  gelatin  1%  yang  mengandung NaCl.  Jika  terbentuk  endapan  putih menunjukkan  adanya  tanin  (Tiwari et  al. ,
2011).

## 4. Uji Saponin
Metode  Froth:  Sampel  (100  mg) dilarutkan  dalam  10  mL  air  dan  disaring. Filtrat  dimasukkan  ke  dalam    tabung reaksi,  lalu  dikocok.  Terdapatnya  busa yang  stabil  menunjukkan  adanya  saponin (Tiwari et al. , 2011)

## 5. Uji Antrakuinon
Sampel  (100  mg)  dilarutkan  dalam 10 mL akuades. Campuran disaring, filtrat
(2  mL)  ditambah  dengan  5  mL  benzena. Hasil  ekstrak  kemudian  ditambah  dengan amonia  lalu  dikocok.  Terbentuknya  warna merah  menunjukkan  adanya  antrakuinon (Koleva, et al. , 2002).
6. Uji Steroid
Libermann  Burchard’s  Test:  50  mg sampel dilarutkan dengan kloroform
kemudian  disaring.  Filtrat  ditambah  asam asetat  anhidrat    lalu  dipanaskan  dan didinginkan.  Ditambahkan  asam  sulfat pekat  melalui  dinding  tabung  secara perlahan-lahan,  jika  terbentuk  cincin coklat menandakan adanya steroid (Tiwari et al. , 2011).
Salkowski’s  Test:  50  mg  sampel diekstraksi  dengan  kloroform  kemudian disaring. Filtrat yang diperoleh ditambahkan  beberapa  tetes  asam  sulfat pekat,  lalu  dikocok.  Jika  campuran berwarna  kuning  menunjukkan  adanya triterpen (Tiwari et al. , 2011).
E. Analilis Kualitatif Aktivitas

## Antioksidan
Analisis kualitatif dilakukan terhadap  tumbuhan  uji  menggunakan reagen  spesifik  yaitu 2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl (DPPH) terhadap hasil KLT (kromatogram).  Reagent  dibuat  dengan cara  melarutkan  DPPH  dengan  metanol pro analisis dengan konsentrasi 0,02% b/v. Sampel dari ekstrak metanol dan fraksinya dilakukan  uji  kromatografi  lapis  tipis (KLT) menggunakan eluen dengan perbandingan  yang  tepat.  Senyawa  yang telah  terelusi  disemprot  dengan  penampak bercak  DPPH  0,02%  b/v.  Bercak  yang dapat  menangkap  radikal  bebas  akan menghasilkan  warna  kuning  dengan  latar belakang  ungu  dalam  waktu  tidak  lebih dari 30 menit terindikasi sebagai
antioksidan  (Sutomo et  al .,  2013;  Sutomo et al ., 2014).

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  dilakukan  terhadap  7 tumbuhan  yang  meliputi  uji  makroskopik, uji  mikroskopik,  skrining  fitokimia,  dan uji  aktivitas  antioksidan  secara  kualitatif. Tumbuhan diambil pada siang hari dimana proses  fotosintesis  terjadi.  Selama  proses fotosintesis  metabolit  sekunder  dalam tumbuhan  berada  pada  posisi  maksimal.
Tumbuhan  yang  dipilih  secara  visual tampak  sehat,  tidak  terkena  hama,  dan terkena  sinar  matahari  yang  cukup.  Tujuh tumbuhan (berdasarkan nama daerah) yang diteliti  adalah  patiti,  ambaratan,  carikang merah,  puspa,  balik  angin,  bilarang  tapah, dan karamunting.
Ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi, yaitu dengan merendam simplisia  yang  telah  diserbukkan  dengan pelarut  etanol  pada  suhu  kamar.  Metode maserasi dipilih karena mengurangi resiko kerusakan  senyawa  karena  penanasan ( thermolabil ),  metode  relatif  sederhana, dan pelarut  yang digunakan relatif sedikit. Etanol  merupakan  salah  satu  pelarut  yang dapat mengekstraksi sebagian besar golongan senyawa aktif baik  yang bersifat polar  maupun  non  polar.  Hasil  ekstraksi (rendemen) yang diperoleh secara berturut-turut adalah rimpang patiti (8,48%),  kulit  batang  ambaratan  (2,04%),
batang  carikang  habang  (3,56%),  daun puspa  (30,76%),  kulit  batang  balik  angin (27,05%),  daun  bilarang  tapah  (23,53%), dan  daun  karamunting  (10,88%)  (gambar 1).
Gambar  1. Rendemen  dari  7  tumbuhan yang diteliti
Skrining fitokimia dilakukan terhadap  beberapa  golongan  kimia  yang pada  umumnya  memiliki  aktivitas  sebagai obat.  Beberapa  golongan  senyawa  yang diuji antara lain adalah alkaloid, flavonoid, fenol,  tanin,  saponin,  terpenoid,  steroid, dan  antrakuinon.  Hasil  uji  menunjukkan bahwa dari ketujuh tumbuhan mengandung senyawa fenol  dan flavonoid (tabel 1).
Tabel  I .  Hasil  skrining  fitokimia  tujuh tumbuhan asal tapin
Keterangan :  a.  rimpang  patiti,  b.  kulit  batang  ambaratan,  c. batang  carikan  habang,  d.  daun  puspa,  e.  kulit  batang  balik angin, f. daun bilaran tapah, dan g. daun karamunting.
Untuk  golongan  senyawa  steroid  hanya tumbuhan carikang habang yang menunjukkan hasil positif .
Analisis kualitatif aktivitas antioksidan  dilakukan  dengan  pereaksi spesifik  yaitu  larutan 2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl  ( DPPH)  dalam  metanol pa
0,004%  b/v.  Sebagai  obyek  terdeteksi adalah  hasil  kromatogram  menggunakan eluen n -hexane-etilasetat (1:1)v/v.
Gambar 2a. Analisis uji kualitatif dengan metode DPPH terhadap sampel uji
Secara umum eluen yang digunakan belum mampu  mendeteksi  senyawa  antioksidan yang  bersifat  polar,  tetapi  gambaran  awal aktivitas  antioksidan  telah  ditunjukkan pada  penggunaan  eluen  tersebut.  Sifat
antioksidan  ditunjukkan  dengan  warna bercak  berubah  menjadi  kuning  dengan latar  belakang  ungu  pada  kromatogram setelah  disemprot  dengan  larutan  DPPH (gambar 2a; 2b).
Gambar 2b. Analisis uji kualitatif dengan metode DPPH terhadap sampel uji
Dari  hasil  uji  diketahui  bahwa beberapa  senyawa  yang  terdapat  dalam sampel  bersifat  antioksidan.  Sifat  yang mencolok  dapat  dilihat  pada  gambar  2b, dimana  hasil  kromatogram  sampel  daun bilarang  tapah  terdapat  beberapa  senyawa yang bersifat antioksidan

## IV. KESIMPULAN
Dari hasil penelitian dapat diambil suatu kesimpulan bahwa :
1. Rendemen  ekstrak  etanol  yang  paling besar  adalah  daun  puspa  (30,76%), dilanjutkan berturut-turut batang balik angin  (27,05%),  daun  bilarang  tapah (23,53%), daun karamunting
(10,88%),  rimpang  patiti  (8,48%), batang  carikang  habang  (3,56%),  dan kulit batang ambaratan (2,04%).
2. Skrining fitokimia menunjukkan bahwa semua sampel uji mengandung golongan senyawa flavonoid dan fenol
3. Sampel yang diuji mengandung senyawa antioksidan

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terimakasih kepada Pemprov Kalimantan
Selatan yang telah memberikan bantuan dana dalam penelitian  ini  melalui  Rektor  Universitas Lambung Mangkurat dan telah dilaksanakan  oleh  Pusat  Studi  Obat Berbasis Bahan Alam.

## DAFTAR PUSTAKA
Badan Penelitian Kehutanan, 2015, Kawasan  Hutan  Dengan  Tujuan Khusus (KHDTK) Rantau , http://foreibanjarbaru.or.id/khdtk- 2/rantau.
Bone,  K.,  and  Mills,  S.,  2013, Principles and  Practice  of  Phytotherapy,
Second Edition ,
Churchill
Livingstone Elsevier, New York.
Budilaksono,  Widyo,  Sri  W.,  Andhi  F. 2013.  Uji  Aktivitas  Antioksidan Fraksi N-heksana Kulit Buah Naga Merah ( Hylocereus lemairei britton dan  rose )  Menggunakan    Metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil)
Elfahmi.,  Woerdenbag,  H.,  Kayser,  O., 2014,  Jamu:  Indonesian  traditional herbal  medicine  towards  rational phytopharmacological  use ,  Journal of  Herbal  Medicine ,  4  (2014),  51–
73 Heinrich,  M.,  Barnes,  J.,  Gibbons,  S., Williamson, E, 2012, Fundamentals  of  Pharmacognosy and Phytotherapy , Churchill Livingstone Elsevier, New York Javanmardi,  J.,  Stushnoff,  C.,  Locke,  E., and Vivanco, J.M. 2003. Antioxidant  Activity  and  Total Phenolic Content of Iranian
Ocimum Accessions. Journal Food Chem . 83 (4) : 547-550
Koleva, I. I., Van Beek T. A., Linssen J. P.
H.,  Groot  A.  De,  Evstatieva  L.  N.
2002.  Screening  of  Plant  Extract for Antioxidant Activity: A
Comparative  Study  On  Three Testing  Methods.  Phytochemical Analysis. 13 : 8-17
Sutomo,  Wahyuono,  s.,  Rianto,  S., Setyowati, E.P., Yuswanto, A., 2011, Antioxidant  and  Immunomodulatory Activity  of  Isolated  Compounds  Of Kasturi Fruit  ( Mangifera  casturi
Kosterm.) from South Borneo Indonesia. Disertation ,  Faculty  Of Pharmacy  Gajah  Mada  Univercity Yogyakarta.
Sutomo,  Wahyuono,  s.,  Rianto,  S.,  and Setyowati,  E.P.,  2013,  Isolation  and identification of actives compound of n-hexane fraction from kasturi ( Mangifera casturi Kosterm.) against antioxidant  and  immunomodulatory activity, J. Biol. Sci. 13(7) : 596-604.
Sutomo,  Wahyuono,  s.,  Rianto,  S., Setyowati, E.P., Yuswanto, A., 2014, Antioxidant activity assay of extracts and  active  fractions  of  kasturi  fruit ( Mangifera  casturi Kosterm.)  using 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl
method. J. Nat. Prod. (7) : 124-130.
Tiwari, Prashant., Bimlesh Kumar, Mandeep  Kaur,  Gurpreet  Kaur, Harleen Kaur. 2011. Phytochemical Screening and Extraction : A Review. International Pharmaceutica Scienca . 1 (1) : 98-106. Valko,  M.,  Dieter  L.,  Jan  M.,  Mark  T.  D.
C., Milan M. Joshua T. 2007. Free
Radicals and Antioxidants in Normal  Physiological  Functions and Human.