Abstrak —  Kadmium  adalah  salah  satu  logam  berat  yang beracun  walaupun  dalam  konsentrasi  yang  rendah.  Beberapa bakteri  genus Azotobacter resisten  terhadap  logam  kadmium. Tujuan dari penelitian ini adalah mendapatkan genus Azotobacter yang  resisten  terhadap  CdCl 2 .  Uji  resistensi  menggunakan medium Nutrient  Agar (NA)  yang  mengandung  CdCl 2 10-50 mg/L.  Uji  viabilitas Azotobacter dilakukan  pada  3  isolat  yang dipilih  dari  uji  resistensi.  Isolat  tersebut  dikategorikan  lebih resisten  dari  isolat  yang  lain.  Uji  viabilitas  dilakukan  pada medium Nutrient Broth (NB) yang mengandung CdCl 2 10, 20, dan 30  mg/L.  Kepadatan  sel  diukur  dengan Spektrofotometer  UV-Vis pada panjang gelombang 600 nm selama 24 jam. Hasil penelitian menunjukkan  isolat Azotobacter A1a,  A1b,  A2,  A3,  A5,  A6,  A7, A8,  A9,  A10  resisten  pada  medium Nutrient  Agar (NA)  yang mengandung  CdCl 2 sampai  dengan  konsentrasi  50  mg/L.  Kurva pertumbuhan isolat Azotobacter yang tercekam CdCl 2 relatif lebih rendah  dibandingkan  isolat Azotobacter yang  tidak  tercekam CdCl.
Kata Kunci — Azotobacter , kadmium, konsentrasi, resistensi.

## I. PENDAHULUAN
ADMIUM  (Cd)  merupakan  logam  berat  yang  dapat ditemukan  pada  lingkungan  dan    memiliki  efek  toksik yang  tinggi,  walaupun  pada  konsentrasi  yang  rendah [1].  Kontaminan  Cd  pada  lahan  pertanian  berasal  dari  pupuk fosfat berbahan dasar batuan fosfat yang mengandung Cd [2]. Sedangkan  kontribusi  logam  berat Cd di perairan berasal dari limbah  industri,  di  antaranya  industri  bahan  bangunan, pertambangan,  dan  industri  logam  [3].  Menurut  [4],  Cd memiliki  efek  toksik  yang  tinggi  dan  memiliki  waktu  paruh yang  panjang  di  dalam  tubuh  organisme.  Cd  juga  dapat bersifat  karsinogenik  pada  manusia,  menyebabkan  kanker paru-paru,  prostat,  pankreas,  dan  ginjal  [5].  Selain  itu,  Cd dapat mengganggu proses metabolisme, menghambat pembentukan  asam  nukleat,  dan  sintesis  protein.  Beberapa penelitian  tentang  efek  paparan  logam  berat  Cd  pada  hewan telah  banyak  dilaporkan  dapat  memicu  kematian  sel  [6], menghambat  pengambilan  nutrisi,  serta  menghambat  aktivitas enzim, termasuk sistem antioksidan organisme hidup [7].
Beberapa  bakteri  resisten  terhadap  logam  Cd  dan  bahkan dapat  dijadikan  sebagai  agen  pereduksi  konsentrasi  Cd  pada lingkungan  yang  tercemar  logam  berat.  Bakteri  resisten kadmium  biasanya  memiliki  gen  resisten  kadmium  yang disebut gen cad-operon [8]. Bakteri Gram positif resisten Cd 2+
mempunyai  jalur  masuk  logam  Cd 2+ melalui  Mn Transport , pada bakteri Gram negatif menggunakan Metal Ion Transport (MIT) atau Mn uptake System [9].
Bakteri  yang  telah  diteliti  dan  mampu  mengurangi konsentrasi  Cd  adalah Bacillus  anthracis PS2010  [10].  Salah satu mikroorganisme yang banyak diteliti dan resisten terhadap logam  berat  adalah Azotobacter. Berdasarkan  penelitian  [11], genus Azotobacter yang  diisolasi  dari  hilir  sungai  Kali  Mas resisten  terhadap  logam  berat  Cu.  Menurut  penelitian  [14], isolat Azotobacter A1a,  A5,  dan  A9  yang  diisolasi  dari  lahan Eco  Urban  Farming ITS  resisten  terhadap  HgCl 2 sampai dengan konsentrasi 5 mg/L.
Penelitian  mengenai  isolat  diatas  baik Azotobacter yang  diisolasi  dari  hilir  Kali  Mas  maupun  dari  lahan Eco Urban Farming ITS telah diketahui resistensinya dan mampu me- removal HgCl 2 ,  namun  isolat  tersebut  belum  diketahui resistensinya terhadap CdCl 2.

## II. METODOLOGI

## A. Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  dilakukan  pada  bulan  Desember  2014  hingga bulan  Februari  2015  di  Laboratorium  Mikrobiologi  dan Bioteknologi Jurusan Biologi FMIPA-ITS.

## B. Uji Resistensi Azotobacter Terhadap CdCl 2
Uji  resistensi  dilakukan  dengan  menumbuhkan  isolat Azotobacter pada  medium Nurient  Agar (NA)  yang mengandung CdCl 2 dan sampai dengan konsentrasi yang dapat ditoleransi isolat. Satu ose isolat diinokulasikan secara  aseptis dengan  metode streak  slant pada  medium  miring  NA-CdCl 2 dengan  konsentrasi  10  mg/L  CdCl 2 selanjutnya  diinkubasi selama  24  jam  pada  suhu  ruang.  Isolat  yang  tumbuh merupakan isolat yang resisten terhadap CdCl 2.
C. Uji Viabilitas Isolat Azotobacter yang Tercekam CdCl 2 Satu  ose  isolat  secara  aseptis  diinokulasikan  pada  20  ml medium Nutrient  Broth (NB),  dihomogenkan  dan  diinkubasi dengan rotary shaker berkecepatan 100 rpm dalam suhu ruang selama 24 jam.
Kultur  isolat  yang  telah  diinkubasi  selama  24  jam ditambahkan ke dalam 180 ml medium NB steril tanpa CdCl 2 , diinkubasi  kembali  dengan rotary  shaker 100  rpm  pada  suhu ruang.  Pada  jam  ke-0  dilakukan  pengukuran  kepadatan  sel

## Viabilitas Azotobacter A1a, A3, dan A9 pada Medium yang Terpapar Logam Cadmium (Cd)
D.A. Prasidya, dan E. Zulaika
Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS) Jl. Arief Rahman Hakim, Surabaya 60111 Indonesia e-mail : enny@bio.its.ac.id
K
(Optical Density) menggunakan Spectrophotometer Spectronic GENEYSS  20® (λ  =  600  nm).  Pengukuran  OD  dilakukan selama  24  jam  dengan  interval  waktu  1  jam.  Pengukuran  OD juga  dilakukan  pada  CdCl 2 dengan  konsentrasi  sesuai range finding test (x 1 , x 2 , dan x 3 mg/L).

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. Uji Resistensi Azotobacter Terhadap CdCl
2
Semua  isolat  Azotobacter  resisten  pada  medium Nutrient Agar (NA)  yang  mengandung  CdCl 2. Pada  konsentrasi  40 mg/L  CdCl 2, tiga  isolat  ( Azotobacter A1a,  A1b,  dan  A10) tumbuh  sangat  baik.  Empat  isolat  ( Azotobacter A3,  A6,  A7, dan  A9)  tumbuh  baik.  Dua  isolat  ( Azotobacter A2  dan  A5) tumbuh  kurang  baik,  serta  satu  isolat  ( Azotobacter A8)  tidak tumbuh (Tabel 1 dan Gambar 1).
Tabel 1. Resistensi Azotobacter Terhadap CdCl 2
Gambar. 1.  Hasil Resistensi Isolat Azotobacter terhadap CdCl 2
Beberapa  spesies  dari  genus Azotobacter dapat  resisten terhadap  beberapa  logam  berat seperti Hg 2+ , Cd 2+ , Cu 2+ , Cr 3+ , Co 2+ ,  Ni 2+ ,  Zn 2+ ,  dan  Pb 2+ [12]. Azotobacter yang  diisolasi dari  tanah  tercemar  logam  berat  dapat  hidup  dan  mengurangi konsentrasi  logam  berat  Cd  di  lingkungan  sebesar  20  mg/L [13].  Berdasarkan  penelitian  [11],  isolat Azotobacter S8  yang diisolasi  dari  hilir  sungai  Kali  Mas  sangat  resisten  terhadap kadmium CdCl 2 sampai pada konsentrasi 50 mg/L. Sedangkan pada penelitian [14], isolat Azotobacter yang diisolasi dari Eco Urban  Farming ITS  resisten  terhadap  logam  merkuri  HgCl 2 dengan  konsentrasi  sebesar  5  mg/L.  Penelitian  sebelumnya menunjukkan  bahwa  genus Azotobacter yang  diisolasi  dari Eco  Urban  Farming ITS  merupakan  salah  satu  genus  bakteri yang resisten terhadap logam berat.
Bakteri dikatakan resisten terhadap logam kadmium apabila bakteri tersebut dapat bertahan pada lingkungan yang tercemar kadmium  dengan  konsentrasi  diatas  1  mg/L  karena  pada
konsentrasi  tersebut,  kadmium  dapat  menyebabkan  tingkat pertumbuhan  berkurang,  fase  lag  yang  panjang,  densitas  sel yang  lebih  rendah,  dan  bahkan  dapat  menyebabkan  kematian bakteri [15].
Resistensi bakteri terhadap Cd dapat disandi oleh suatu gen yaitu  gen cad-operon [8]. Bakteri  mampu  menurunkan akumulasi logam berat di sel melalui sistem pompa efluks yang didorong  oleh  protein  resistensi,  P-type  ATPases,  fasilitator difusi kation dan protein Porter [16]. Bakteri resisten Cd pada bakteri  Gram  negatif  menggunakan Metal  Ion  Transport (MIT) atau Mn uptake system [9]. Pada bakteri Gram negatif, efluks  ion  Cd 2+ memerlukan  protein  CzcA,  CzcB,  dan  CzcC dan diregulasi oleh CzcD [17].
Menurut  [18],  bakteri,  alga,  dan  jamur  dapat  menghasilkan polisakarida  ekstraseluler  atau exopolysaccharides (EPS) sebagai  agen  aktif  pada  permukaan  dinding  sel  untuk mengkelat  logam  berat . EPS  merupakan  polimer  dari  gula pereduksi dengan berat molekul tinggi yang disekresikan oleh mikroorganisme  ke  lingkungan  eksternalnya.  EPS  umumnya terdiri  dari  monosakarida  dan  beberapa  substituen  non- karbohidrat  seperti  asetat,  piruvat,  suksinat,  dan  fosfat  [19] juga  biomolekul  seperti  protein,  asam  nukleat,  dan  lipid. Adsorpsi  logam  berat  dengan  EPS  adalah  proses  interaksi antara kation logam dan muatan negatif  dari gugus fungsional asam  EPS  [18]. Azotobacter merupakan  genus  bakteri  yang memproduksi  lapisan exopolysaccharides yang  mampu melindungi  sel  dari  kontaminan  logam  berat  di  lingkungan [12].
Isolat Azotobacter menunjukkan  tingkat  resistensi  yang berbeda-beda.  Perbedaan  tingkat  resistensi  terhadap  kadmium CdCl 2 dapat disebabkan oleh produksi EPS pada setiap spesies yang berbeda [20].
B. Uji Viabilitas Isolat Azotobacter yang Tercekam CdCl 2 Pertumbuhan  isolat Azotobacter pada  medium  tanpa  logam CdCl 2 (kontrol)  dengan  isolat Azotobacter yang  tumbuh  pada medium  yang  mengandung  logam  CdCl 2 dengan  konsentrasi 10  mg/L,  20  mg/L,  dan  30  mg/L  terjadi  perbedaan  yang menyolok.  Ketiga  isolat Azotobacter pada  medium  tanpa logam  menunjukkan  pertumbuhan  lebih  baik,  hal  ini ditunjukkan dengan nilai OD yang lebih tinggi daripada ketiga isolat Azotobacter yang  tercekam  logam  CdCl 2 .  Kemampuan setiap isolat untuk tumbuh di beberapa konsentrasi CdCl 2 tidak sama.  Pertumbuhan  isolat Azotobacter A1a  memiliki kemampuan  tumbuh  lebih  baik  pada  medium  yang mengandung CdCl 2 10 mg/L dibandingkan pada medium yang mengandung  CdCl 2 20  dan  30  mg/L  (Gambar  2).  Isolat Azotobacter memiliki  daya  hidup  di  semua  medium  yang mengandung  CdCl 2 10,  20,  dan  30  mg/L  walaupun  nilai  OD yang kecil tetapi masih terlihat adanya penambahan nilai OD.
Pola  pertumbuhan  pada Azotobacter A1a,  A3,  dan  A9 memasuki  fase  lag  terlebih  dahulu.  Fase  lag  merupakan  fase adaptasi  yang  diperlukan  untuk  sel  bakteri  pada  kondisi lingkungan baru [21]. Selama fase lag terjadi proses perbaikan kerusakan  makromolekul  yang  terakumulasi  selama  fase stationer  dan  peningkatan  sintesis  komponen  seluler  seperti RNA  yang  diperlukan  untuk  pertumbuhan.  Selama  fase  lag,
jumlah ribosom per sel akan meningkat demikian juga dengan proses translasi protein [22].
Isolat Azotobacter A3 dan A9 membutuhkan fase lag atau  fase  adaptasi  lebih  panjang  daripada Azotobacter A1. Menurut  [23],  hal  ini  dapat  terjadi  karena  medium mengandung  logam  CdCl 2 yang  dapat  menyebabkan  fase  lag menjadi  lebih  panjang,  densitas  sel  yang  lebih  rendah,  dan bahkan  dapat  menyebabkan  kematian  bakteri.  Sedangkan menurut  [21],  ada  tidaknya  fase  lag  pada  kurva  pertumbuhan bakteri  dipengaruhi  oleh  waktu  inokulasi  dan  usia  inokulum. Apabila  inokulum  diinokulasikan  pada  medium  baru  yang sama  pada  saat  fase  eksponensial,  maka  pertumbuhan  bakteri langsung melanjutkan fase eksponensial tanpa melalui fase lag lagi.
Gambar. 2. Kurva Pertumbuhan Azotobacter A1a, A3, dan A9 yang Tercekam CdCl 2 .
Sedangkan  apabila  inokulum  diinokulasikan  ke  medium baru  pada  saat  memasuki  fase  kematian,  maka  pertumbuhan bakteri  akan  mengalami  fase  lag  terlebih  dahulu  sebelum  ke fase  eksponensial.  Isolat  akan  memasuki  fase  eksponensial setelah fase lag terlewati.
Isolat Azotobacter A1a  mulai memasuki fase eksponensial pada  jam  ke-3  sampai  dengan  jam  ke-14. Azotobacter A1a
yang  tercekam  CdCl 2 10  mg/L  menunjukkan  pertumbuhan yang lebih signifikan daripada isolat A1a yang tercekam CdCl 2 20  mg/l  dan  30  mg/L. Azotobacter A3  mulai  memasuki  fase eksponensial  pada  jam  ke-4  sampai  dengan  jam  ke-18, sedangkan Azotobacter A9  memasuki  fase  eksponensial  pada jam ke-4 sampai dengan jam ke-16. Namun, untuk Azotobacter A9 yang tercekam logam CdCl 2 30 mg/L mulai memasuki fase eksponensial  pada  jam  ke-8  sampai  dengan  jam  ke-18  dan kurva pertumbuhannya menunjukkan pertumbuhan yang lemah karena medium mengandung logam CdCl 2 dengan konsentrasi tinggi yang  dapat  menghambat  pertumbuhan  isolat  tersebut. Isolat Azotobacter A9  mengalami  pertumbuhan  yang  lebih stabil  dan  lebih  resisten  terhadap  medium  yang  mengandung CdCl 2 mulai dari konsentrasi 10 mg/L, 20 mg/L, dan 30 mg/L daripada  isolat  A1a  dan  A3,  karena  nilai  OD  pada  fase eksponensial mencapai hampir 0,400.
Resistensi  bakteri  Gram  negatif  terhadap  Cd  dikarenakan adanya  czc  operon  yang  terdapat  dalam  plasmid  bakteri.  Czc operon  terdiri  dari  tiga  strukturan  gen  yaitu  czcC,  czcB,  dan czcA yang menghasilkan kompleks kation dengan efflux pump [24].  Tingkat  resistensi  bakteri  terhadap  Cd  ditentukan  oleh tingkat  ekspresi  dari  czc  operon,  sehingga  semakin  tinggi ekspresi  czc  operon  maka  tingkat  resistensi  bakteri  juga semakin  tinggi.  Sedangkan  berdasarkan  [20],  paparan  CdCl 2 dalam  konsentrasi  tinggi  menyebabkan  peningkatan  produksi EPS  untuk  adsorpsi  Cd 2+ supaya  tidak  memasuki  proses fisiologis  bakteri.  Berdasarkan  [25]  membuktikan  bahwa EPS pada Azotobacter sp.  strain  AC2  dapat  mengadsorpsi  logam berat Zn 2+ yang memiliki struktur kimia mirip dengan Cd 2+ . Pada  fase  stationer  terjadi  penurunan  jumlah  sel  pada populasi,  jumlah  sel  yang  tumbuh  sama  dengan  jumlah  sel yang  mati.  Hal  ini  disebabkan  karena  berkurangnya  nutrisi dalam medium dan kemungkinan bakteri juga tercekam logam berat CdCl 2.
Logam  berat  dengan  konsentrasi  tinggi  beracun  bagi mikroorganisme, dapat mengganggu membran sel, mengganggu  reaksi  enzimatik  dan  pembentukan  protein,  serta DNA  [12].  Sedangkan  fase  kematian  adalah  fase  dimana  sel- sel  bakteri  mengalami  kematian  yang  disebabkan  karena nutrisi  dalam  medium  habis.  Pada  gambar  4.2  fase  kematian terlihat setelah memasuki jam ke- 22 pada semua isolat.
Kurva  pertumbuhan Azotobacter A1a,  A3,  dan  A9 yang tercekam  logam  pada  medium Nutrient  Broth (NB)-CdCl 2 berbeda  dengan  hasil  resistensi Azotobacter A1a, A3, dan A9 dengan  medium  NA-  CdCl 2 .  Uji  resistensi  dengan  medium menunjukkan Azotobacter A1a,  A3,  dan  A9  sangat  resisten terhadap  CdCl 2 30  mg/L  yang  ditandai  dengan  pertumbuhan isolat yang baik. Perbedaan tipe medium dari medium padat ke medium  cair  juga  dapat  mempengaruhi  pertumbuhan  dan viabilitas  bakteri  meskipun  nutrisi  dalam  medium  yang digunakan  adalah  sama.  Pada  medium  padat,  pertumbuhan bakteri  melekat  pada  permukaan  medium (attached  growth) , sedangkan pada medium cair tipe pertumbuhannya menyerupai suspensi  terlarut (suspensed  growth) [26].  Bakteri  dalam keadaan  tersuspensi  akan  tumbuh  merata  di  semua  bagian medium baik di permukaan, di kolom air, atau di dasar [27].

## IV. KESIMPULAN/RINGKASAN
Sepuluh  isolat Azotobacter yang  diisolasi  dari  lahan Eco Urban  Farming ITS  resisten  terhadap  CdCl 2 .  Isolat  yang resistensinya  sangat  baik  pada  medium Nutrient  Agar (NA) yang  mengandung  sampai  dengan  40  mg/L  adalah  isolat Azotobacter A1a,  A1b,  dan  A10.  Kurva  pertumbuhan  isolat Azotobacter  yang  tercekam  CdCl2  relatif  lebih  rendah dibandingkan kontrol.

## UCAPAN TERIMA KASIH
D.A.P mengucapkan terima kasih kepada Dr. Enny Zulaika, MP  atas  bimbingan  dan  dukungan  pendanaan  melalui  PNBP ITS  dengan  nomor  kontrak  003246.256/IT2.11/PN.08/2015 tahun anggaran 2015.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] J.A.  Almeida,  R.E.  Barreto,  L.B.  Novelli,  F.J.  Castro,  and  S.E.  Moron, “Oxidative Stress Biomarkers and Aggressive Behavior in Fish Exposed to  Aquatic  Cadmium  Contamination,”  Neotropical  Ichtyology,  Vol.  7 (2009) 103-108.
[2] S.H.  Chien,  G. Carmona, L.L. Prochnow, and E.R. Austin, “Cadmium Avalability  From  Granulated  and  Bulk-blended  Phosphate-potassium Fertilizers,” Journal Environ. Qual 32 (2003) 1911-1914.
[3] M.  Maanan,  “Biomonitoring  of  Heavy  Metals  Using Mytilus galloprovincialis in  Safi  Coastal  Waters,  Morocco,”  Environmental Toxicology, Vol. 22, Issue 5 (2007) 525-531.
[4] L.  Patrick,  “Toxic  Metals  and  Antioxidants  Part  II  the  Role  of Antioxidant Ni Arsenic and Cadmium Toxicity – Toxic Metals part II,” Review, Alternativer Medicine (2003).
[5] S.J.S. Flora, “Metal Poisoning: Treatment and Management,” Review Article, Al Ameen Journal Medicine Science, Vol. 2 (2009) 4-26.
[6] J.  Gzy,  K.  Rymer,  and  E.A.  Gwozdz,”  Differential  Response  of Antioxidant Enzymes to Cadmium Stress in Tolerant and Sensitive Cell Line of Cucumber ( Cucumis sativus L), Acta Biochemica Polonica Vol. 56 (2009) 723-727.
[7] R.  John,  P.  Ahmad,  K.  Gadgila,  and  S.  Sharmab,  “Heavy  Metal Toxicity:  Effect  on  Plant  Growth,  Biochemical  Parameters  and  Metal Accumulation  by Brassica  juncea L.,”  International  Journal  of  Plant Production, Vol. 3 (2009) 65-76.
[8] M.R.  Bruins,  S.  Kapil,  and  F.W.  Oehme,  “Microbial  Resistance  to Metals in the Environment (Review),”  Exotoxicology  and Environmental Safety Vol. 45 (2000) 198-207.
[9] D.H. Nies, “Efflux- mediated Heavy Metal Resistance in Prokaryotes, “ Federation  of  European  Microbiological  Societes,  Microbiology Reviews 27 (2003) 313-339.
[10] S.E.  Elsilk,  A.E.R.  El-Shanshoury,  and  P.S.  Ateya,  “Accumulation  of some  heavy  metals  by  metal  resistant  avirulent Bacillus  anthracis PS2010  isolated  from  Egypt,”  African  Journal  of  Microbiology Research Vol 8 (2014) 1266-1276.
[11] A.  Luqman,,  M.  Shovitri,  dan  E.  Zulaika,  “Resistensi  Bakteri Azotobacter Terhadap  Logam  Berat.  Seminar  Nasional  Scientific Conference  of Environmetal Technology IX “Advances in Agricultural and Municipal Waste Technology to Anticipate Food and Energy Crisis, July 10 (2012). Teknik Lingkungan, FTSP-ITS Surabaya Indonesia.
[12] A.E.  Abo-amer,  M.A.  Abu-gharbia,  E.M.  Soltana,  and  W.M.  Abd  El- Raheem,  “Isolation  and  Molecular  Characterization  of  Heavy  Metal- Resistant Azotobacter  chroococcum from  Agricultural  Soil  and  their Potential  Application  in  Bioremediation,”  Geomicrobiology  Journal Vol. 31(2014) 551–561.
[13] P.M. Joshi, dan A.A. Juwarkar, “In Vivo Studies To Elucidate The Role Of  Extracellular  Polymeric  Substances  From Azotobacter In Immobilization  Of  Heavy  Metals,”  Environmental  Science  & Technology Vol. 43, No. 15 (2009) 5884–5889.
[14] K.  Khotimah,  dan  E.  Zulaika,  “ Azotobacter sebagai  Bioakumulator Merkuri,” Jurnal Sains Pomits. Vol. 2 (2013).
[15] H.  Abd-Elnaby,  G.M.  Abou-Elela,  and  N.A.  El-Sersy,  “Cadmium resisting  Bacteria  in  Alexandria  Eastern  Harbor  (Egypt)  and Optimization of Cadmium Bioaccumulation by Vibrio harveyi ,” African Journal of Biotechnology Vol. 10, No. 17 (2011) 3412-3423.
[16] T.I.  Stuczynski,  G.W.  McCarty,  and  G.  Siebielec,  “Response  of  Soil Microbiological  Activities  to  Cadmium,  Lead,  and  Zinc  Salt Amendments. Journal Environ. Qual Vol. 32 (2003) 1346-1355.
[17] D.H. Nies, “Microbial Heavy Metal Resistance: Molecular Biology and Utilisation for Biotechnological Processes,” Appl. Microbiol Biotechnol Vol. 51 (1999) 730-750.
[18] B.A.  Rasulov,  A.  Yili,  and  H.A.  Aisa,  “Biosorption  of  Metal  Ions  by Exopolysaccharide  Produced  by Azotobacter  chroococcum XU1. Journal of Environmental Protection (2013) 989-993.
[19] S.A.F.T. van Hijum, GS van, H. Rahaoui, D.M. van, and L. Dijkhuizen, “Characterization  of  a  novel  fructosiltransferase  from Lactobacillus reuteri that  synthesizes  high-molecular-weight  inulin  and  Inulin oligosaccharides,”  Appl.  Environ.  Microbiol  Vol.  68  No.  9  (2002) 4390- 4398.
[20] R.  Hindersah,  D.H.  Arief,  S.  Soemitro,  dan  L.  Gunarto,  ”Pengaruh CdCl 2 terhadap  Produksi  Eksopolisakarida  dan  Daya  Hidup Azotobacter ,” Jurnal Natur Indonesia Vol. 12 No. 1 (2009) 34-37.
[21] M.T.  Madigan  and  J.M.  Martinko,  “ Brock  Biology  of  Microbiology. Prentice-Hall ” (2000).
[22] M.D.  Rolfe,  C.J.  Rice,  S.  Lucchini,  C.  Pin,  A.  Thompson,    A.D.S. Cameron, M. Alston, M.F. Stringer, R.P. Betts, J. Baranyi, M.W. Peck, and  J.C.D.  Hintona,  “Lag  Phase  is  a  Distinct  Growth  Phase  That Prepares Bacteria for Exponential Growth and Involves Transient Metal
Accumulation,” Journal of Bacteriology (2012) 686–701.
[23] H.  Abd-Elnaby,  G.M.  Abou-Elela,  and  N.A.  El-Sersy,  “Cadmium resisting  Bacteria  in  Alexandria  Eastern  Harbor  (Egypt)  and Optimization of Cadmium Bioaccumulation by Vibrio harveyi ,” African Journal of Biotechnology Vol. 10, No. 17 (2011) 3412-3423.
[24] R.  Choudhury,  and  S.  Srivastava,  “Zinc  Resistance  Mechanisms  in Bacteria,”  Review  Article  Current  Science  Vol  81  No.  7  (2001)  768- 775.
[25] G.  Emtiazi,  Z.  Ethemadifar,  and  M.H.  Habibi,  “Production  of Extracellular  Polymer  in Azotobacter and  Biosorption  of  Metal  by Exopolymer,” Africa Journal Biotechnology Volume 3 (2004) 330-333.
[26] C.  Li,  and  H.H.P.  Fang,  “Fermentative  Hydrogen  Production  from Waste  Water  and  Solid  Wastes  by  Mixed  Cultures  Cr,”  Rev  Environ
Sciences Technology Volume 37 No.1 (2007) 31-39.
[27] N. Hidayah, dan M. Shovitri, “Adaptasi Isolat Bakteri Aerob Penghasil Gas Hidrogen pada Medium Limbah Organik. Jurnal Sains dan Seni ITS Volume 1 (2012).