POTENSI ANTIBAKTERI AIR PERASAN BAWANG PUTIH ( Allium sativum L ) TERHADAP PERTUMBUHAN Staphylococcus aureus
Shinta Anatasya Pajan 1) , Olivia Waworuntu 1) , Michael A. Leman 1)
1) Program Studi Pendidikan Dokter Gigi Fakultas Kedokteran UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Garlic (Allium sativum L.) is a medicinal plant that is often used in everyday life and contains Allicin which has antibacterial properties, allicin is a substance that is used by the garlic to protect themselves from bacteria. This experiment to determine how much potential antibacterial garlic juice on  the  growth  of  Staphylococcus  aureus.  Staphylococcus  aureus  is  the  bacteria  that  cause  abscess. This study is an experimental research laboratory and the method used in this study is serial dilution method  with  turbidimetry  and  spectrophotometry  as  the  test  methods  used  garlic  juice  with concentration  of  100%,  50%,  25%,  12.5%,  6.25%,  3.125%,  1.56%,  0.78  %,  and  0.39%,  then  the proceed  continue  with  recultural  use  Trypticase  Soya  Agar  (TSA).  To  get  the  value  of  Minimal Inhibitory  Concentration  (MIC)  is  done  by  observes  at  the  turbidity  in  the  tube  and  Minimum  Kill Concentration (MBC) was determined by observes at their colonies Staphylococcus aureus bacteria on  disk.  The  results  showed  that  the  juice  of  garlic  (Allium  sativum  L.)  has  the  ability  inhibit  the growth  of  Staphylococcus  aureus  (MIC)  at  a  concentration  of  3.12%,  while  the  ability  to  kill Staphylococcus aureus (MBC) at a concentration of 6.25%.
Keywords : juice of garlic, Staphylococcus aureus, Antibacterial.

## ABSTRAK
Bawang putih (Allium Sativum L .) merupakan salah satu tanaman obat yang sering digunakan sehari-hari  dan  mengandung  Allicin  yang  memiliki  sifat  antibakteri,  allicin  merupakan  zat  yang digunakan  oleh  bawang  putih  untuk  melindungi  diri  dari  serangan  bakteri.  Penelitian  ini  bertujuan untuk mengetahui seberapa besar potensi antibakteri air perasan bawang putih terhadap pertumbuhan Staphylococcus  aureus . Staphylococcus  aureus merupakan  bakteri  penyebab  terjadinya  abses. Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental  laboratorium  dan  metode  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  metode  serial  dilusi  dengan  metode  pengujian  turbidimetri  dan  spektrofotometri megunakan air perasan bawang putih dengan konsentrasi 100%, 50%, 25%, 12,5%, 6,25%, 3,125%, 1,56%,  0,78%, dan 0,39%, kemudian dilanjutkan dengan rekulturasi mengunakan media Trypticase Soya Agar (TSA). Untuk mendapatkan nilai Konsentrasi Hambat Minimal (KHM) dilakukan dengan melihat  kekeruhan  pada  tabung  dan  Konsentrasi  Bunuh  Minimal  (KBM)  ditentukan  dengan  cara melihat adanya koloni bakteri Staphylococcus aureus pada piring petri. Hasil penelitian menunjukan bahwa air perasan bawang putih (Allium sativum L.) memiliki kemampuan mengbambat pertumbuhan Staphylococcus  aureus (KHM)  pada  konsentrasi  3,12%,  sedangkan  kemampuan  untuk  membunuh Staphylococcus aureus (KBM) pada konsentrasi 6,25%.
Kata Kunci: Air perasan bawang putih, Staphylococcus aureus , antibakteri

## PENDAHULUAN
Rongga  mulut  merupakan  bagian tubuh  yang  penting  bagi  manusia    karena rongga mulut yang tidak terjaga kesehatannya  akan  menimbulkan  berbagai macam  penyakit.  Salah  satu  bagian  yang terpenting  dalam  rongga  mulut  yaitu  gigi- geligi. Gigi-geligi yang terjaga kesehatannya  dapat  menunjang  kesehatan rongga  mulut,  bahkan  kesehatan  tubuh secara  umum.  Kondisi  gigi-geligi  yang buruk  dapat  menyebabkan  terjadinya infeksi.  Salah  satu  bakteri  yang  menjadi etiologi  infeksi  yaitu Staphylococcus aureus .
Pada umumnya masyarakat di Indonesia  lebih  memilih  antibiotik  untuk menangani  infeksi  karena  harganya  yang terjangkau  dan  dapat  diperoleh  dengan mudah.  Data  Riset  Kesehatan  Dasar  2013 menunjukkan  bahwa  proporsi  penduduk Indonesia  yang  mengobati  diri  sendiri dalam satu bulan terakhir dengan membeli obat  ke  toko  obat  atau  ke  warung  tanpa resep  dokter  adalah  26,4%.  Hal  ini  dapat menyebabkan resistensi bakteri di Indonesia meningkat akibat penyalahgunaan antibiotik.
Staphylococcus  aureus merupakan bakteri  yang  selama  ini  dikenal  telah resisten terhadap berbagai  antibiotik.  Oleh karena  itu,  saat  ini  telah  dilakukan berbagai  penelitian  menggunakan  bahan atau  tumbuhan  herbal  yang  berpotensi menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus .
Bawang  putih (Allium  sativum) merupakan salah satu jenis rempah-rempah yang  sering  digunakan  sebagai  bumbu masak.  Selain  sebagai  bumbu  masak, bawang putih juga memiliki efek farmakologis seperti antibakteri, antijamur,
hipolidemik,  hipoglikemik,  antitrombotik, antioksidan,  dan  antikanker  sehingga memiliki banyak manfaat seperti menurunkan tekanan darah,
menghilangkan pening di kepala, meredakan  nyeri  haid  dan  meredakan  flu ( Herbalajib.2016 ).
Zat  kimia  yang  terdapat  dalam Bawang putih yang berperan pada rasa dan aroma yaitu Allicin.
Kandungan Allicin diperoleh  ketika  bawang  putih segar dicincang, dipotong, maupun dikunyah  secara  langsung.    Zat  ini  juga memiliki  potensi  sebagai  antibakteri  dan telah  dibuktikan  pada  penelitian  yang dilakukan  oleh  tim  peneliti  dari  The University of Edinburgh tahun 1994, yang menemukan bahwa Allicin dapat membunuh  bakteri  yang  resisten  terhadap antibiotik.
Penelitian  yang  dilakukan  oleh Annisa  Indah  tahun  2015  di  Manado membuktikan bahwa ekstrak bawang putih dan  perasan  murni  dari  bawang  putih memiliki  potensi  antibakteri  terhadap Staphylococcus  aureus .  Namun,  dari penelitian tersebut belum diketahui konsentrasi hambat minimum dan
konsentrasi  bunuh  minimum  dari  air perasan bawang putih terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus .
Berdasarkan  uraian  di  atas,  peneliti tertarik  untuk  melakukan  penelitian  lebih lanjut  tentang  potensi  antibakteri  air perasan bawang putih terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus ,  sehingga  dapat  diketahui  nilai konsentrasi  hambat  minimum  (KHM)  dan konsentrasi  bunuh  minimum  (KBM)  air perasan bawang putih terhadap
pertumbuhan Staphylococcus aureus .

## METODE PENELITIAN Subjek Penelitian
Bakteri Uji Bakteri Staphylococcus aureus yang digunakan  dalam  penelitian  ini  diperoleh dari  Laboratorium  Mikrobiologi  Program Studi  Farmasi  Fakultas  MIPA  Universitas Sam Ratulangi Manado.
Bahan  Uji  Bawang  putih  yang  digunakan dalam penelitian ini diperolah dari Manado dan  pembuatan  air  perasan  dari  bawang putih dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi  Program  Studi  Farmasi Fakultas MIPA Universitas Sam Ratulangi Manado.

## Definisi Operasional
1. Air  perasan  bawang  putih  ( Allium sativum L)    adalah  hasil  saring  dari umbi bawang putih yang sudah diblender  hingga  halus.  Pembuatan konsentrasi  dari  air  perasan  bawang putih  diperoleh  dengan  pengenceran bertingkat  atau  serial  dilusi  dengan menggunakan  perbandingan  1:2  (w/v), sehingga  diperoleh  konsentrasi  100%, 50%,  25%,  12,5%,  6,25%,  3,125%, 1,56%, 0,78%, 0,39%.
2. Pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus adalah  bakteri Staphylococcus aureus dapat  dilihat  setelah  dilakukan inkubasi  selama 1x24 jam, jika larutan pada dalam tabung reaksi terlihat keruh, maka menandakan masih adanya
pertumbuhan  bakteri Staphylococcus
aureus ,  sementara  jika  larutan  dalam tabung  reaksi  terlihat  jernih,  maka menandakan tidak adanya pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus .

## Alat dan Bahan
Alat-  alat  yang  digunakan  dalam penelitian ini yaitu: Timbangan, blender,gelas  ukur,  tabung  reaksi  dan  rak tabung reaksi,  kapas steril, pipet ukur, ose steril, lampu spiritus,incubator, kain saring,autoclave,piring  petri,  kain  saring, oven.  Bahan  penelitian  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  yaitu:  Air  perasan bawang  putih (Allium  sativum  L) ,  bakteri Staphylococcus aureus , brain heart infusion  broth (BHI-B),  larutan  BaCl 2 1,175%  0,1  mL,  larutan  H 2 SO 4 1%  9,9 mL,  akuades,  larutan  NaCL,  trypticase soya agar (TSA).

## Langkah Kerja
Pembuatan  air  perasan  bawang putih dilakukan diLaboratorium Mikrobiologi  Program  Studi  Farmasi Fakultas MIPA Universitas Sam Ratulangi Manado.  Bawang  putih  yang  digunakan sebanyak  500  gram  kemudian    kulit bawang  putih  dikupas  lalu  dicuci  dengan air bersih, setelah dicuci dengan air bersih bawang  putih  tersebut  diblender  hingga halus, kemudian disaring dengan mengunakan  kertas  saring,  dan  air  hasil penyaringan tersebut disimpan dalam botol kaca yang tertutup.
Sterilisasi alat dan bahan.
Sterilisasi  alat-alat  yang  digunakan, disterilkan dengan oven pada suhu 180 o C- 200 o C  selama  satu  jam,  sedangkan  untuk media  disterilkan  dengan  autoclave  pada suhu 200 o C selama 15 menit.

## Prosedur  pengambilan bakteri
Bakteri Staphylococcus  aureus yang digunakan dalam penelitian ini merupakan stok  bakteri  murni  yang  diperoleh  di laboratorium  mikrobiologi  Program  Studi Farmasi  Fakultas  MIPA  Universitas  Sam Ratulangi  Manado.  Bakteri  ini  disimpan pada  agar  miring  kemudian  dimasukan  ke
dalam  wadah    steril  dan  ditutup,  sehingga sterilisasi terjaga.

## Pembuatan media peremajaan bakteri
Nutrient Agar (NA) ditimbang sebanyak 23 gram lalu dilarutkan dengan 1 liter akuades mengunakan tabung Erlenmeyer,kemudian  dihomogenkan  dan dituang ke dalam tabung reaksi steril yang ditutup  dengan  aluminium  foil.  Media tersebut  disterilkan  ke  dalam  autoclave pada  suhu  121 o C  selama  30  menit  sampai media  memadat  pada  kemiringan  30 o . Pembuatan  media  suspensi  bakteri BHI-B
Media  Brian  Heart  Infusion  Broth (BHI-B) ditimbang sebanyak 37 gram dan dilarutkan  dalam  1  liter  akuades  dalam tabung Erlenmeyer, kemudian dihomogenkan.  Setelah  homogen  Media disterilisasi  dalam    autoclave  pada  suhu 121° C selama 15 menit.
Pembuatan  standar  kekeruhan  larutan McFarland  1.    Larutan  baku  McFarland  1 terdiri  atas  dua  komponen  yaitu  larutan BaCl2  1,175%  dan  H2SO4  1%.  Larutan BaCl2 1,175% sebanyak 0,1 mL dicampur dengan  larutan  H2SO4  1%  sebanyak  9,9 mL dan dikocok homogen. Nilai absorban larutan  baku  McFarland  1  setara  jumLah sel  bakteri  dengan  kepadatan  0,3  x  10 9 bakteri/mL.
Peremajaan bakteri
Bakteri Staphylococcus  aureus yang disimpan  di  media  agar  yang  berasal  dari bakteri  biakan  murni  yang  diperoleh  di Laboratorium Mikrobiologi Program Studi Farmasi  Fakultas  MIPA  Universitas  Sam Ratulangi Manado, diambil dengan menggunakan  jarum  ose  steril,  lalu ditanamkan  pada  media  agar  miring dengan  cara    menghapus,  kemudian diinkubasi  selama  1x24  jam.    Pembuatan suspensi  bakteri  sesuai  standar  kekeruhan larutan  McFarland  1%  Bakteri  yang  telah
diremajakan  pada  media  agar  miring, kemudian  diambil  koloninya  dari  media agar  miring  dengan  menggunakan  jarum ose steril. Koloni  yang diambil dimasukan kedalam  media  BHI-B  dalam  tabung reaksi  kemudian  diinkubasi  1  x  24  jam. Setelah  diinkubasi,  dilakukan  pembuatan suspensi Staphylococcus  aureus sesuai dengan  standar  kekeruhan  McFarland  1. Jika media BHI-B terlihat lebih keruh dari larutan  McFarland  1,  maka  di  tambahkan larutan  salin  steril  sedikit  demi  sedikit dalam  media  BHI-B  hingga  kekeruhannya sesuai dengan standar kekeruhan McFarland 1.

## Persiapan tabung reaksi perlakuan
Sebanyak  11  tabung  reaksi  steril disiapkan. Setiap tabung uji diberi label 1- 9,  kemudian  tabung  10  diberi  label  K(+) yang  merupakan  kontrol  positif,  yaitu tabung  yang  berisi Staphylococcus  aureus setara dengan standar kekeruhan McFarland  1.  Tabung  11  diberi  label  K(-) yang  merupakan  kontrol  negatif,  yaitu tabung  berisi  air  perasan  bawang  putih ( Allium  sativum L)  dengan  konsentrasi 100%.  Tabung  1  diisi  sebanyak  4  mL  air perasan  bawang  putih  ( Allium  sativum L) konsentrasi  100%.  Tabung  2-9  diisi dengan  2  mL  media  cair  BHI.  Kemudian ambil  2  mL  larutan  dari  tabung  1, dimasukkan  ke  dalam  tabung  2,  dicampur hingga homogen sehingga didapat konsentrasi 50%. Hal yang sama dilakukan hingga tabung 9 hingga  didapatkan semua konsentrasi air perasan dengan perbandingan  1:2  (w/v).  Kemudian  pada setiap tabung diisi dengan bakteri staphylococcus aureus yang sudah disetarakan  dengan  larutan  McFarland sebanyak 1 mL.

## Pembuatan media Trypticase Soy Agar

## (TSA)
Sebanyak 40 g bubuk TSA dilarutkan  dalam  1  liter  akuades  dalam tabung Erlenmeyer,
kemudian dihomogenkan.  Setelah  homogen  media disterilisasi  dalam  autoclave  pada  suhu 121 o C selama 15 menit, dan media dituang pada piring petri.

## Metode Pengujian
Metode dilusi cair/broth dilution test (serial dilution) . Metode ini untuk mengukur  KHM  dan  KBM.  Cara  yang dilakukan  adalah  dengan  membuat  seri pengenceran agen antimikroba pada medium  cair  yang  ditambahkan  dengan mikroba  uji.  Larutan  uji  agen  antimikroba pada  konsentrasi  terkecil  yang  terlihat jernih  tanpa  adanya  pertumbuhan  mikroba uji  ditetapkan  sebagai  KHM,  selanjutnya dikultur  pada  media  agar  dan  diinkubasi selama  18-24  jam.  Media  agar  yang terlihat  jernih  setelah  inkubasi  ditetapkan sebagai KBM.

## Pengamatan dan Pengukuran
Metode  Turbidimetri,  setelah    media tabung  perlakuan  diinkubasi  selama  1x24 jam,  semua  tabung  tersebut dilihat kekeruhannya  secara  visual.  Apabila kekeruhan  masing-masing  tabung  masih setara  atau  lebih  keruh  dari  tabung  K(+) yang berisi suspensi bakteri Staphylococcus  aureus  sesuai  standar kekeruhan  McFarland  1  berarti  bakteri masih  dapat  bertumbuh,  tetapi  ketika larutan  dalam  tabung  terlihat  mulai  lebih jernih  daripada  tabung    K(+)  berarti pertumbuhan bakteri mulai terhambat. Hal inilah  yang  menunjukkan  konsentrasi hambat minimum (KHM).

## Metode spektrofotometri
Pengamatan kekeruhan menggunakan  alat spektrofotometer yang lebih akurat dalam menentukan kekeruhan yang  berfungsi  untuk  mengukur  panjang gelombang serta nilai absorbansi kekeruhan  yang  ada  pada  setiap  tabung perlakuan.

## Colony Counter
Hasil inkubasi dilanjutkan dengan uji rekulturasi  untuk  mengetahui  konsentrasi bunuh  minimum  dari  air  perasan  bawang putih menggunakan media TSA (trypticase soya  agar)  pada  piring  petri  dan  diberi nomor sesuai dengan nomor tabung  reaksi dan  diinkubasi  kembali  selama  1x24  jam, bila  dalam  piring  petri  masih  ditemukan koloni  bakteri S.aureus maka  air  perasan bawang putih tersebut tidak dapat membunuh  bakteri  tetapi  bila  tidak ditemukan  koloni  bakteri S.  aureus maka air  perasan  bawang  putih  tersebut  dapat membunuh  bakteri,  pertumbuhan  bakteri pada  piring  petri  ditandai  dengan  adanya bintik-bintik putih pada media agar.Perhitungan  koloni  bakteri  dilakukan secara  manual  menggunakkan Colony counter .

## Analisis Data
Data  hasil  penelitian  dihitung  secara manual, kemudian diolah secara komputerisasi menggunakan program Microsoft  Excel 2007.  Data  yang  sudah ada diolah disajikan dalam bentuk gambar, tabel, dan tulisan.

## HASIL PENELITIAN
Penentuan konsentrasi hambat minimum  (KHM)  air  perasan  bawang putih  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus dilakukan dengan pengujian
turbidimetri, serta pengukuran nilai absorbansi
dengan
menggunakan
Spektrofotometer
UV-Vis setelah dilakukan  inkubasi  selama  1x24  jam  pada suhu  37 o C.  Penentuan  KHM  dengan metode  turbidimetri  ditentukan  dengan melihat  konsentrasi  terendah  pada  tabung yang terlihat mulai jernih.
Hasil  pengujian  turbidimetri  pada perlakuan  pertama  sesudah  inkubasi  1x24 jam  didapatkan  bahwa  tabung  yang  berisi air perasan bawang putih dengan konsentrasi  1,56%  (tabung  nomor  7) terlihat  mulai  jernih.  Hasil  pengujian dengan metode turbidimetri pada perlakuan 1 dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Hasil pengujian dengan metode turbidimetri pada perlakuan
Hasil pengujian dengan metode turbidimetri pada perlakuan 2 dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2. Hasil pengujian dengan metode turbidimetri pada perlakuan 2
Gambar  2  menunjukkanbahwa  perubahan menjadi lebih jernih terlihat pada tabung 7,
pada perlakuan 2 yang berarti mulai terjadi penghambatan  bakteri.  Pengamatan  pada
1 7 6 5 4 3 2 K- 9 8 K+ 9 8 7 6 5 4 3 2 1 K- K+
perlakuan 1 dan 2 mendapatkan hasil yang sama  bahwa  tabung  nomor  7  dengan konsentrasi 1.56% mulai terlihat jernih dan pada konsentrasi selanjutnya larutan dalam tabung akan terlihat keruh. Hasil pengujian
air  perasan  bawang  putih  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dengan  metode turbidimetri  pada  perlakuan  pertama  dan kedua  dapat  dilihat  pada  Tabel  1.
Tabel 1.Hasilpengujian Air perasan bawang putih ( Allium sativum L) terhadap bakteri Staphylococcus aureus denganmetodeturbidimetripadaperlakuanpertamadan kedua
Keterangan : Tanda
(+): larutan di dalamtabungterlihatkeruh, artinyaterdapatpertumbuhanbakteri.  Tanda  (-):  larutan  di  dalamtabungmulaijernih,  yang artinyapertumbuhanbakterimulai dihambat.
Tabel  1  menunjukkan  tabung  nomor  7 memiliki  hasil  negatif,  pada  perlakuan pertama  dan  kedua.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  pada  tabung  tersebut,  pertumbuhan bakteri mulai dapat terhambat. Berdasarkan hasil pengujian dengan metode turbidimetri pada perlakuan pertama  dan  kedua,  tabung  dengan konsentraasi  1.56%  (tabung  nomor  7) ditetapkan  sebagai  konsentrasi  hambat minimum  air  perasan  bawang  putih ( Allium  sativum L)  terhadap  pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus.
Pengujian  kemudian  dilanjutkan dengan pengukuran nilai absorbansi menggunakan  Spektrofotometer  UV-Vis untuk  mendapatkan  hasil  pengukuran kekeruhan  secara  kuantitatif.  Pengukuran dilakukan  pada  tabung  nomor  1  hingga nomor  9,  kontrol  negatif,  dan  kontrol positif sebelum dan sesudah inkubasi 1x24 jam.  Panjang  gelombang  maksimum  yang dapat diserap pada tabung-tabung perlakuan yaitu 400 nm. Hasil pengukuran menggunakan  Spektrofotometer  UV-Vis dapat dilihat pada Tabel 2.
NomorTa bung Konsentrasi Air perasan bawang putih ( Allium sativum L) Hasil Perlakuan I Perlakuan II 1 100% - - 2 50% - - 3 25% - - 4 12,5% - - 5 6,25% - - 6 3,125% - - 7 1,56% - - 8 0,78% + + 9 0,39% + + 10 K(+) + + 11 K(-) - -
Tabel  2. Hasil uji KHM Air perasan bawang putih ( Allium sativum L) terhadap bakteri Staphylococcus aureus dengan menggunakan Spektrofotometer UV-Vis
Keterangan:  “Tetap”  atau  “Turun”  menunjukkan  nilai  absorbansi  setelah  inkubasi,  sama  atau lebih kecil dibandingkan dengan absorbansi sebelum inkubasi, yang berarti pertumbuhan bakteri dapat terhambat; “Naik” menunjukkan nilai absorbansi setelah inkubasi lebih besar dibandingkan dengan  nilai  absorbansi  sebelum  inkubasi,  yang  berarti  terdapat  pertumbuhan bakteri.
Berdasarkan  hasil  pengujian  KHM dengan  menggunakan  Spektrofotometer pada  Tabel  2,    penurunan  nilai  rata-rata absorbansi  pertama  kali  terjadi  pada konsentrasi  3,125%  baik  pada  perlakuan pertama maupun perlakuan kedua. Berdasarkan pengujian menggunakan Spektrofotometer, konsentrasi hambat minimum  air  perasan  bawang  putih terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus berada pada konsentrasi 3.125%.
Penelitian ini kemudian dilanjutkan dengan  rekulturasi  mengunakan  media Trypticase  Soya  Agar  (TSA),  untuk
mengatahui  jika  air  perasan  bawang  putih dapat  membunuh  bakteri Staphylococcus aureus sehingga dapat ditentukan konsentrasi  bunuh  minimum  (KBM). Penentuan KBM dilakukan dengan melihat jika  masih  terdapat  pertumbuhan  bakteri setelah  diinkubasi  1x24  jam    pada  piring petri  dengan  cara  menghitung  jumLah bintik-bintik putih yang terdapat pada kaca piring  petri  menggunakan colony  counter (Gambar  2).  Piring  petri  yang  tidak terdapat pertumbuhan koloni bakteri ditentukan  sebagai  KBM.  Hasil  uji rekulturasi  dapat  dilihat  pada  Gambar  3 dan 4.
Konsentrasiair perasan bawang putih (Allium sativum L ) Hasil Ket Perlakuan 1 Perlakuan II Selisih      Hasil Sebelum Inkubasi SesudahI nkubasi Sebelum Inkubasi SesudahI nkubasi 100% 4.000 3.875 3.993 3.950 - 0.168   -0.084 Turun 50% 4.000 4.000 3.847 2.699 - 1.148 -0.574 Turun 25% 3.847 3.996 3.844 3.314 - 0.679 -0.339 Turun 12,5% 3.504 2.960 3.277 2.946 - 0.875 -0.437 Turun 6,25% 3.007 2.516 2.997 2.572 - 0.916 -0.458 Turun 3,125% 2.918 2.342 2.757 2.260 - 1.073   -0.536 Turun 1,56% 2.105 2.793 2.097 2.744 1.335 0.667 Naik 0,78% 1.998 3.478 1.979 3.258 2.759 1.379 Naik 0,39% 1.947 3.607 1.888 3.508 3.280 1.640 Naik K(+) 1.421 1.922 1.448 1.998 1.051 0.525 Naik K(-) 4.000 4.000 3.962 3.978 0.016 0.008 Naik
( Perlakuan 1 )
( Perlakuan 2 )
Gambar  3.  Hasil  uji  rekulturasi  air  perasan  bawang  putih (  Allium  sativum  L) terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus pada konsentrasi 3,125%
( Perlakuan 1 )
( Perlakuan 2 )
Gambar  4.  Hasil  uji  rekulturasi  air  perasan  bawang  putih (  Allium  sativum  L) terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus pada konsentrasi 6,25%
Pada  Gambar  3  terlihat  pertumbuhan bakteri  pada    perlakuan  1  sebanyak  85 koloni  dan  perlakuan  2  sebanyak  62 koloni.  Hal  ini  menunjukan  bahwa  pada konsentrasi  3.125%  air  perasan  bawang putih tidak dapat  membunuh bakteri,  pada
Gambar  4  sudah  tidak  terlihat  adanya pertumbuhan  bakteri  pada  konsentrasi 6.25%, maka dengan pengamatan ini dapat ditentukan  bahwa  pada  konsentrasi  bunuh minimum  (KBM)  adalah  konsentrasi 6.25%.

## PEMBAHASAN
Pada penelitian ini dilakukan pengujian untuk mengetahui KHM dari air perasan  bawang  putih  ( Allium  saivum L) terhadap pertumbuhan
bakteri Staphylococcus  aureus. Metode  yang
digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah
serial  dilusi,  dengan  mengaplikasikan bakteri Staphylococcus  aureus pada  air perasan  bawang  putih  dengan  berbagai konsentrasi  dan  selanjutnya  dilakukan inkubasi selama 1x24  jam.
85 koloni 62 koloni
Pengujian  yang  dilakukan  setelah inkubasi terhadap tabung-tabung perlakuan pada  pengulangan  1  dan  2  dilakukan dengan metode turbidimetri dan spektofotometri. Pengujian dengan metode turbidimetri  dilakukan  dengan  melihat kekeruhan  yang  terjadi  pada  tabung  uji secara  visual  setelah  dilakukan  inkubasi (Harmita,  dkk,  2008).  Pengujian  dengan metode spektrofotometri dilakukan dengan membandingkan  nilai  absorbansi  yang dihasilkan  sebelum  dan  sesudah  inkubasi dengan  menggunakan  spektrofotometer UV-Vis (Magase H, Petesch B,.2011).
Hasil  penelitian  dengan  metode turbidimetri, konsentrasi hambat minimum air  perasan  bawang  putih  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus yaitu pada konsentrasi  1,56%.  Hal  ini  terlihat  dari mulai  jernihnya  larutan  dalam  tabung nomor  7  dengan  konsentrasi  1,56%  pada perlakuan pertama dan kedua, yang berarti pertumbuhan bakteri sudah dapat terhambat.  Pada  konsentrasi    yang  lebih rendah  yaitu  konsentrasi  0,39%-0,78% larutan  terlihat  semakin  keruh  mendekati kekeruhan  dari  tabung  K(+)  yang  berisi bakteri Staphylococcus  aureus .  Hal  ini disebabkan    karena  konsentrasi  yang rendah,  sehingga  kemampuan  dari  air perasan tidak mampu menghambat pertumbuhan bakteri,
sehingga pertumbuhan bakteri dapat terjadi.
Hasil turbidimetri (kekeruhan secara  visual)  sebenarnya  sudah  cukup menentukan  KHM,  tetapi  karena  itu bersifat  subjektif  dan  warna  larutan  bisa mencapai  kecoklatan  (pekat),  maka  hal tersebut  dapat  mempersulit  pengamatan. Selain  itu,  metode  turbidimetri  memiliki kelemahan  yaitu  mata  manusia  pada  saat pengamatan kekeruhan tidak bisa membedakan antara sel bakteri yang hidup dengan sel bakteri yang mati. Oleh karena
itu,  perlu  dilakukan  pengujian  lebih  lanjut dengan  cara  mengukur  nilai  absorbansi untuk mengetahui ada tidaknya pertumbuhan bakteri dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Hasil penelitian selanjutnya menggunakan spektrofotometer
menunjukkan bahwa bahwa nilai absobansi  setelah  inkubasi  pada  perlakuan pertama  dan  kedua  mengalami  perubahan (turun)  dimulai  pada  konsentrasi  3,125% dan  seterusnya  ke  konsentrasi  yang  lebih tinggi.  Selanjutnya  pada  konsentrasi  yang lebih rendah dari konsentrasi 3,125% yaitu 1,56%-0,39%  terjadi  peningkatan  nilai absorbansi  (pada  perlakuan  pertama  dan kedua) sesudah inkubasi dari nilai absorbansi sebelum inkubasi yang menandakan bahwa pada ketiga konsentrasi tersebut masih terdapat pertumbuhan bakteri. Nilai absobansi yang besar (bertambah) menunjukkan pertumbuhan  bakteri  terus  berlangsung, sedangkan nilai absorbansi yang tetap atau berkurang menunjukkan pertumbuhan bakteri terhambat (Coyle MB, Astutiningsih  C,  dkk,  2014). Dari  hasil pengukuran menggunakan
Spektrofotometer  pada  perlakuan  pertama dan  kedua  didapatkan  bahwa  KHM  air perasan bawang putih terhadap staphylococcus aureus yaitu pada konsentrasi  3,125%.  Konsentrasi  tersebut merupakan  konsentrasi  terkecil  yang mengalami  penurunan  nilai  absorbansi pada  pengulangan  satu  dan  pengulangan dua  setelah  dilakukan  inkubasi  1x24  jam, yang  menunjukkan  terjadinya  penurunan pertumbuhan bakteri. Menurut teori semakin  tinggi  konsentrasi  suatu  ekstrak (dalam  penelitian  ini  yaitu  air  perasan bawang  putih)  maka  nilai  absorbansinya akan  semakin  berkurang  (Astutiningsih  C, dkk .2014).
Perbedaan  hasil  pengukuran  pada metode  turbidimetri  dan  spektrofotometri disebabkan  oleh  perbedaan  prinsip  kerja dari  kedua  metode  tersebut.Pengujian dengan  menggunakan  metode  turbidimetri bersifat  subjektif  karena  pada  metode  ini pengamatan hanya dilakukan secara visual, serta kesulitan pengamatan pada larutan uji yang  pekat  sehingga  resiko  terjadinya kesalahan lebih besar.Pada metode spektrofotometri  memiliki  hasil  pengujian berupa  data  kuantitatif  sehingga  memiliki kecermatan  lebih  tinggi  dalam  perincian nilai pengukuran yang dihasilkan (Hendayana S, dkk, 1994).
Kemudian  Penelitian  dilanjutkan untuk  mengetahui  KBM  dari  air  perasan bawang  putih  terhadap staphylococcus aureus pada piring petri dengan menghitung  pertumbuhan  koloni  yang ditandai dengan adanya bintik-bintik putih pada  piring  petri  setelah  dilakukan inkubasi  kembali  selama  1x24  jam. Berdasarkan pengamatan  dan perhitungan dengan Colony  counter pada  konsentrasi 3.125%    (perlakuan  pertama)  masih terlihat pertumbuhan koloni bakteri sebanyak  85  koloni  dan  Konsentrasi 3.125%  (perlakuan  kedua)  sebanyak  62 koloni, selanjutnya pada konsentrasi 6.25%  (pada  perlakuan  pertama  dan kedua)  sudah  tidak  ditemukan  adanya pertumbuhan  koloni  bakteri.  Dari  hasil pengamatan  dan  perhitungan  dengan Colony  counter dapat  ditentukan  bahwa konsentrasi  6.25%  adalah  konsentrasi bunuh  minimum  (KBM)  air  perasan bawang  putih  terhadap staphylococcus aureus .
Berdasarkan  penelitian National Nutrient  Database  For  Reference bawang putih memiliki kandungan agen antimikroba  yang  paling  banyak  salah satunya yaitu allicin .Senyawa allicin dapat
meningkatkan permeabilitas dinding bakteri  yang  menyebabkan  gugus  SH (sulfihidril dan disulfide) pada asam amino sistin  dan  sistein  hancur,  gugus  SH  yang hancur  dapat  menghambat  sistesis  enzim protease yang merusak membran sitoplasma  pada  dinding  bakteri  dan mengganggu  metabolisme  protein  dan asam  nukleat  sehingga  tidak  terjadi poliferasi  pada  bakteri.  Penelitian  lainnya yang  dilakukan  oleh Feldberg  et  al menyatakan  bahwa  allicin  menunjukkan aktivitas  antimikroba  dengan  menghambat sistesis RNA dengan cepat dan menyeluruh.  Disamping  itu,  sintesa  DNA dan  protein  juga  dihambat  secara  partial. Hal  ini  menunjukkan  RNA  adalah  target utama  dari  aksi  allicin.  Kemampuan senyawa  inilah  yang  berperan  untuk mengahambat  dan  membunuh  bakteri Staphylococcus aureus .
Beberapa  studi In  vitro telah menunjukkan  aktivitas  bawang  putih terhadap  banyak  tipe  bakteri  gram  negatif dan  gram  positif,  seperti Escherichia, Salmonella,Staphylococcus,  streptococcus, Klebsiella,  Proteus,  Bacillus,  Clostridium, dan Mycobacteriumtuberculosis . Pada studi in  vitro yang dilakukan pada ekstrak bawang  putih  yang  didapatkan  dari bawang  putih  yang  segar,  langsung diekstrak  tanpa  perlakuan  tambahan  lain, hasil  menunjukkan  aktivitas  antibakteri yang kuat terhadap bakteri Staphylococcus aureus,  Pseudomonas  aeruginosa,  dan Escherichia  coli .  Bahkan  terhadap  bakteri yang biasanya resisten terhadap antibiotik, seperti Meticillin Resistant Staphylococcus aureus (MRSA)  atau  strain  bakteri  yang telah resisten terhadap beberapa pengobatan antibiotik ( E. coli,
Enterococcus spp. Shigella spp .) (Wang R, dkk, 2007).
Daya  antibakteri  bawang  putih dikatakan lebih berpotensi terhadap bakteri gram positif seperti Staphylococcus aureus dibanding  bakteri  gram  negatif  seperti E.coli dan P. Aeruginosa . Hal ini mungkin disebabkan  karena  bakteri-bakteri  gram negatif  memiliki  kemampuan  untuk  untuk memproduksi  suatu  enzim  yang  dapat menonaktifkan fitokonstituen dan komponen  bioaktif  yang  dimiliki  ekstrak bawang  putih.  Selain  itu  pula,  selubung bakteri  gram  negatif  yang  secara  alami memang lebih kompleks disbanding struktur  selubung  bakteri  gram  positif mempersulit proses penetrasi agen
antimikroba  ke  dalam  dinding  sel  bakteri gram negative (El-mahmood M, 2009).
Potensi  antibakteri  airc  perasan bawang  putih  terhadap  pertumbuhan Staphylococcus aureus merupakan penelitian baru dan belum pernah dilakukan sebelumnya. Berdasarkan penelitian  ini  nilai  konsentrasi  hambat minimum  (KHM)  ditentukan  dengan metode yang akurat menggunakan spektrofotometer  UV-VIS  yaitu  pada konsentrasi 3,125% dan konsentrasi bunuh minimum  (KBM)  yang  menggunakan pengamatan  visual  dan colony  counter yaitu pada konsentrasi 6.25%.

## KESIMPULAN
Penelitian  ini  disimpulkan  bahwa semakin  tinggi  konsentrasi  suatu  perasan maka  perasan  tersebut  berpotensi  untuk membunuh bakteri.

## SARAN
1. Penelitian  ini  perlu  dilanjutkan dengan uji toksisitas.
2. Dapat dilakukan penelitian mengenai  uji  daya  hambat  dan  uji konsentrasi hambat minimum (KHM)  air  perasan  bawang  putih ( Allium sativum L) terhadap
partumbuhan  bakteri  lain  yang berasal dari rongga mulut.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim.  2003. Riset  Kesehatan  Dasar. Badan penelitian dan pengembangan kesehatan. kementrian  kesehatan RI.
Astutiningsih  C,  Setyani  W,  Hindratna  H. 2014.  Uji  daya  antibakteri  dan identifikasi  isolate  senyawa  katekin
dari  daun  teh  ( Camellia  sinensis  L. var    Assamica ). Jurnal  Ilmiah farmasi sains dan komunitas Semarang. 11(2): 55.
Cai Y, Wang R, Pei F, dan Liang B. 2007. Antimicrobial  activity  of  allicin alone  and  in  combination  with  beta lactams  against Staphylococcus  spp. And  Pseudomonas  aeruginosa . J Antibiot.
Coyle MB. 2005. Manual of antimicrobial susceptibility testing.
USA: American                             society for microbiology; P 53-60.
El-mahmood  M.  2009.  Efficacy  of  crude extract  of  garlic (Allium  sativum
Linn.) against nosocomial Eschericia coli, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniea, Pseudomonas  aeruginosa.  J  Med
Plants Res.
European  Committee  for  Antimicrobial Susceptibility  Testing  (EUCAST). 2003.  Determination  of  minimum inhibitory  concentrations  (MICs)  of antibacterial agents by broth
dilution. Clinical  Microbiology  and Infection . 9(8):1-7.
.Harmita,  Radji  M.  2008. Buku  ajar analisis hayati. Jakarta: EGC; h. 12-
3.
Hendayana S, Kadorohman A, Sumarna A, Supriatna  A.  1994. Kimia  analitik instrumen. Edisi1.  IKIP:  Semarang; h.30
Magase H, Petesch B, Matsuura H. 2011.
Intake of garlic and its bioactive components . New York: American society of nutrients.
Miran T, Wilchek M, Weiner L.2005. The mode  of  action  of  Allicin  :  its  ready permeability  through  phospholipid membranes  may  contribute  to  its Biological  activity :  New  York: Biochim Biophys.