Medika Kartika : Jurnal Kedokteran dan Kesehatan

## ANALISIS POLIMORFISME CYP2D6*4 DAN CYP2D6*10 SEBAGAI
METABOLIZER PRIMAKUIN DI RSUD JAYAPURA PAPUA INDONESIA
(POLYMORPHISM ANALYSIS OF CYP2D6*4 AND CYP2D6*10 AS PRIMAQUINE METABOLIZER IN RSUD JAYAPURA PAPUA INDONESIA)
Octavia Permata Sari 1*
1 Departemen Parasitologi Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Soedirman Indonesia E-mail korespondensi: octavia.sari@unsoed.ac.id

## ABSTRAK
Primakuin  adalah  antimalaria  yang  digunakan  untuk  mengeliminasi  stadium  gametosit Plasmodium  falciparum dan  stadium  hipnozoit  dari P.  vivax .  Efektivitas  primakuin dipengaruhi  oleh  kemampuan  individu  dalam  memetabolisme  obat.  Metabolisme  primakuin utama  diperankan  melalui  jalur  enzim  sitokrom  P  450  2D6.  Polimorfisme  gen  pengkode enzim  tersebut,  yakni  gen CYP2D6 berdampak  pada  perubahan  dalam  kemampuan memetabolisme  obat.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  distribusi  genotipe  dan frekuensi alotipe dari CYP2D6*4(G/A) dan CYP2D6*10(C/T) . Metode yang digunakan untuk menilai  polimorfisme  pada  penelitian  ini  adalah  PCR-RFLP  dengan  desain  penelitian deskriptif  observasional.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  alel CYP2D6*4 yang  dapat bermanifestasi  sebagai poor  metabolizer tidak  ditemukan  pada  sampel  penelitian.  Frekuensi alel CYP2D6*10 yang  dapat  bermanifestasi  sebagai intermediete  metabolizer adalah  10%. Genotipe homozigot mutan CYP2D6*4 dan CYP2D6*10 tidak ditemukan pada penelitian ini.
100%  sampel  penelitian  ini  memiliki  kemampuan  metabolisme  yang  baik (extensive metabolizer) terhadap primakuin.
Kata Kunci : CYP2D6*4, CYP2D6*10, malaria, polimorfisme, primakuin

## ABSTRACT
Primaquine is antimalarial used to eliminate Plasmodium falciparum gametocytes stage and hipnozoit stage of P. vivax. Effectiveness primaquine influenced by the individual's ability to
ARTIKEL PENELITIAN
DOI
DOI
DOI
metabolize  drugs.  The  main  metabolism  of  primaquine  occurred  through  cytochrome  P450 2D6  enzyme  pathway.  CYP2D6  polymorphism  impact  on  the  ability  to  metabolize primaquine.  The  purpose  of  this  study  were  to  determine  the  distribution  of  genotypes  and frequency  alotypes  of  CYP2D6*4  and  CYP2D6*10.  The  method  used  to  assess polymorphisms  in  this  study  were  PCR-RFLP  with  observational  description  method.  The results  of  this  study  showed  that  the  allele  CYP2D6*4  which  can  manifest  as  a  poor metabolizer not found in all sample. The frequency of allele CYP2D6*10 which can manifest as  intermediete  metabolizer  is  10%.  Homozygous  mutant  genotype  CYP2D6*4  and CYP2D6*10  is  not  found  in  this  study.  100%  sample  of  this  research  has  good  metabolic capabilities (extensive metabolizer) to primaquine.
Keywords: CYP2D6 * 4, CYP2D6 * 10, malaria, polymorphism, primaquine
PENDAHULUAN Profil Kesehatan Republik Indonesia yang dikeluarkan oleh Kementerian Kesehatan RI (2019) menunjukkan bahwa Anual Parasite
Incidence (API)  yang merupakan indikator angka kesakitan malaria mengalami peningkatan  dibanding  tahun  2018.  Papua termasuk salah satu wilayah dengan angka kejadian  malaria  yang  tinggi  di  Indonesia dengan skor API mencapai 64,03 per 1000 penduduk. Malaria falciparum dan malaria vivax dilaporkan sebagai kasus yang paling banyak dijumpai di  Indonesia, termasuk di Papua. 1 Primakuin  digunakan  sebagai pendamping Arthemisinin  Combination Therapy (ACT)  karena  memiliki  aktivitas gametosidal pada P. falcifarum yang dapat mencegah transmisi infeksi malaria. Primakuin  juga  efektif  melawan  dan mencegah penyebaran strain P. falciparum
yang  resistan  terhadap  artemisinin.  Pada malaria  vivax,  penggunaan  primakuin bertujuan  untuk  menghilangkan  stadium hipnozoit yang menjadi penyebab rekurensi  dari  infeksi  ini. 2 Efektivitas primakuin  dipengaruhi  oleh  kemampuan individu  dalam  memetabolisme  obat. Pybus et  al. (2012) menunjukkan  aktivasi primakuin  sebagai  antimalaria  dimediasi melalui  jalur  aktivasi  enzim  sitokrom  P- 450  yang  melibatkan  gen CYP2D6 dalam mengaktifkan  metabolit  fenolik.  Metabolit ini  mempunyai  kemampuan  pada  siklus redoks  dan  spesies  oksigen  reaktif  dalam aktivitasnya  sebagai  antimalaria. 3 Jalur metabolisme yang diperantarai gen CYP2D6 ini memproduksi cincin hidroksilasi  primakuin  yang  bersifat  aktif sebagai antimalaria. Metabolisme primakuin melalui jalur monoamin oksidase (MAO) menghasilkan
karboxiprimakuin  yang  bersifat  nontoksik dan tidak aktif. 4,5
Polimorfisme  pada  beberapa  lokus gen CYP dapat  mengakibatkan  perubahan dalam kemampuan memetabolisme primakuin.  Hal  ini  mengakibatkan  terapi primakuin  sebagai  gametositosidal P. falciparum dan eliminasi hipnozoit P.vivax menjadi tidak efektif. 6 Polimorfisme CYP2D6 diantaranya  dipengaruhi  oleh etnis.  Papua  merupakan  provinsi  yang terletak  di  wilayah  Indonesia  Timur.  Etnis Papua  tergolong  unik,  karena  meskipun secara  teritorial  termasuk  dalam  wilayah Asia, penduduk Papua didominasi oleh ras Australoid. Etnis Papua lebih mirip dengan India Selatan, Srilangka, dan Australia. Hal ini menimbulkan ketertarikan untuk meneliti  polimorfisme CYP2D6 di  Papua.
Genotipe  yang  berkaitan  dengan  fenotipe poor  metabolizer adalah CYP2D6*4.
Individu dengan poor metabolizer membawa  dua  alel  non  fungsional  dan tidak memiliki kemampuan untuk memetabolisme  obat.  Individu  dengan poor metabolizer , akan mengalami penurunan dalam
kemampuan memetabolisme  obat  sehingga  berpotensi meningkatkan  interaksi  antar  obat  dan peningkatan  kejadian  efek  samping.  Alel CYP2D6*4 terbentuk karena terjadi mutasi basa  tunggal  pada  gen CYP2D6 dari  basa G  menjadi  A  pada  urutan  nukleotida  ke
1937. Adanya polimorfisme ini
mengakibatkan  mRNA  yang  terbentuk menjadi  tidak  sempurna  sehingga  dapat menyebabkan turunnya efektivitas primakuin. 6 Individu dengan fenotipe intermediete  metabolizer (IM)  disebabkan karena  adanya  alel  yang  mengalami penurunan  fungsional. CYP2D6*10 adalah salah  satu  genotipe  untuk intermediete metabolizer yang  terbentuk  karena  ada perubahan  basa  C  menjadi  T  di  urutan nukleotida ke 190. Frekuensi alel ini cukup tinggi  pada  populasi  Asia.  Frekuensi  alel CYP2D6*10 pada  penduduk  India  selatan sebesar 10,2%. Angka ini lebih rendah jika dibandingkan  dengan  frekuensi  alel *10 pada  populasi  Asia  lainnya  yang  berkisar antara  50-70%.  Frekuensi  alel  pada  ras Afrika dilaporkan sejumlah 75-85%. Frekuensi  ini  lebih  tinggi  dibandingkan dengan  ras  Asia. 7 Perbedaan  frekuensi alotipe  dan  distribusi  genotipe  pada populasi  Asia  menimbulkan  pertanyaan mengenai  frekuensi  alotipe  dan  distribusi genotipe  di  Papua.  Informasi  mengenai kondisi  alotipe  dan  genotipe  berperan penting dalam menentukan prediksi keberhasilan penggunaan primakuin. Penemuan  frekuensi  alotipe  yang  tinggi mengharuskan  dunia  medis  memikirkan formulasi  lain  yang  memiliki  efikasi seperti  primakuin.  Jika  efikasi  primakuin
hanya  tergantung  dari  jalur  metabolisme CYP2D6 ,  hal  ini  dapat  menimbulkan
permasalahan yang serius pada penggunaan terapi primakuin untuk mengatasi  malaria, khususnya pada daerah endemik  yang  memiliki  prevalensi  tinggi aktivitas  metabolisme CYP2D6 jenis poor metabolizer dan intermediete metabolizer . 8
Saladores dan Schwab menyatakan dengan memahami polimorfisme yang terjadi pada etnis tertentu, dapat membantu meningkatkan prediksi efek
menguntungkan  dan  efek  samping  dari suatu substrat, yakni obat. 9

## BAHAN DAN METODE
Analisis polimorfisme gen CYP2D6*4 dan CYP2D6*10 dilakukan dengan menghitung proporsi frekuensi alel. Distribusi  genotipe  dinilai  dengan  teori Hardy  Weinberg  Equilibrium (HWE).
Jumlah  sampel  penelitian  menggunakan rumus proporsi didapatkan sampel minimal adalah 34 orang. Penelitian ini menggunakan 44 sampel penelitian.
Pasien  yang  telah  terdiagnosis menderita  malaria  falciparum  dan  atau vivax  tanpa  komplikasi  berdasarkan  hasil pemeriksaan  klinis  dan  laboratorium  di RSUD Jayapura, Papua, memenuhi kriteria inklusi  dan  eksklusi  serta  menandatangani informed consent menjadi sampel penelitian. Penelitian dilakukan di
Laboratorium  Genetika,  Fakultas  Biologi Universitas
Jenderal Soedirman, Purwokerto Indonesia pada tahun 2016. Sampel  darah  dimasukkan  dalam  tabung EDTA.  Isolasi  untuk  memperoleh  DNA dilakukan dengan menggunakan kit isolasi DNA.  Campuran  PCR  dibuat  dalam volume  15  μL  yang  terdiri  dari  7,5  μL Dream  Taq  Green  PCR  master  mix- Thermo,  (22mM  Tris-HCL  (pH  8.4),  55 mM KCl, 1,65 mM MgCl2, 220 μM dGTP, 220  μM  dATP,  220  μM  dCTP,  220  μM dTTP,  22  U  recombinant  Taq  DNA Polymerase/mL,  stabilizers),  7,5  μM primer forward dan reverse , 20 ng template DNA,  dan water  free  nuclease yang dimasukkan dalam mikrotube.
Amplifikasi gen CYP2D6*4 dilakukan dengan mesin PCR sebanyak 35 siklus  pada  kondisi  PCR  sebagai  berikut: denaturasi  awal  95°C  selama  5  menit, 95°C  selama  30  detik,  penempelan  60°C selama  45  detik,  pemanjangan  72°C selama  30  detik,  dan  pemanjangan  akhir 72°C  selama  5  menit.  Amplikon  DNA dideteksi  dengan  elektroforesis  pada  gel agarose 1% dengan ukuran 255 pb. Primer yang  digunakan  untuk  mengamplifikasi situs  polimorfik  BstNI  adalah  forward  5’- CAAGAAGTCGCTGGAGCAGT-3’  dan reverse
5’
GAGGGTCGTCGTACTCGAAG-3’.
Amplifikasi  gen CYP2D6*10 dilakukan
dengan  mesin  PCR  sebanyak  35  siklus pada  kondisi  PCR  sebagai  berikut  : denaturasi  awal  95°C  selama  5  menit, 95°C  selama  30  detik,  penempelan  61°C selama  45  detik,  pemanjangan  72°C selama  30  detik,  dan  pemanjangan  akhir 72°C  selama  5  menit.  Amplikon  DNA dideteksi  dengan  elektroforesis  pada  gel agarose 1% dengan ukuran 344 pb. Primer yang  digunakan  untuk  mengamplifikasi situs  polimorfik  pada  posisi  190C>T adalah forward 5’- GTGCTGAGAGTGTCCTGC  C  -3’  dan reverse 5’- CACCCACCATCCATGTTTGC -3’. Menganalisis polimorfisme selanjutnya dilakukan Restriction
Fragment  Length  Polymorphism (RFLP) dengan  enzim  restriksi BstNI untuk mengenali  situs CYP2D6*4 dan HphI untuk mengenali situs CYP2D6*10 selama 3 jam di dalam waterbath suhu 37 o C. Hasil restriksi DNA diidentifikasi dengan elektroforesis pada gel agarosa 2%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
1. Analisis Polimorfisme CYP2D6*4
CYP2D6*4 mengalami  mutasi  basa tunggal  pada  urutan  nukleotida  ke  1937. Mutasi yang terjadi pada urutan nukleotida tersebut  disebabkan  karena  ada  perubahan dari  basa  G  menjadi  A.  Mutasi  ini  terjadi pada  daerah  perbatasan  intron  ke  3  dan
ekson  ke  4  yang  menyebabkan  adanya perubahan  pada  ujung  3’  sebagai  daerah pengenalan splicing . Adanya polimorfisme ini  mengakibatkan  mRNA  yang  terbentuk menjadi  tidak  sempurna.  Fenotipe  yang dihasilkan  dari  SNP  ini  adalah  hilangnya secara  total  sitokrom  yang  dihasilkan  di liver  dan  menghasilkan  kondisi poor metabolizer . 6
Analisis  polimorfisme CYP2D6*4 dengan  teknik  RFLP  menggunakan  enzim restriksi BstNI . 6 Enzim  ini  mengenali lokasi  mutasi  pada  urutan  basa  ke  1937 dari basa G menjadi  A.  Enzim BstNI akan memotong alel CYP2D6*4 tipe normal/ wildtype (G),  sehingga  didapatkan 2  fragmen  pita  berukuran  158  pb  dan  97 pb.  Mutasi  basa  G  menjadi  basa  A  pada urutan  basa  ke  1937  menyebabkan  tidak ditemukannya situs restriksi pada CYP2D6*4 sehingga  alel  tersebut  tidak akan terpotong oleh enzim BstNI dan tetap berukuran  255  pb.  Elektroforegram    untuk genotipe  homozigot wildtype (G/G)  akan menghasilkan  pita  berukuran  158  pb  dan 97  pb.  Genotipe  heterozigot  (A/G)  akan terlihat  dengan  adanya  pita  berukuran  255 pb, 158 pb dan 97 pb, sedangkan genotipe homozigot  tipe  mutan  (A/A)  disimpulkan apabila hasil elektroforegram menunjukkan pita  tidak  terpotong  dan  tetap  berukuran 255  pb.  Hasil  digesti CYP2D6*4 dengan
menggunakan BstNI pada  penelitian  dapat dilihat pada Gambar 1.
M=Marka 100 pb;K+=Kontrol positif;1-8=sampel
Gambar 1 Elektroforegram hasil RFLP gen CYP2D6*4 situs pengenalan BstNI.
Sumuran kode K+ pada elektroforegram  berfungsi  sebagai  kontrol positif  berisi  produk  amplifikasi  awal yang  berukuran  255  pb.  Elektroforegram pada Gambar 3 menunjukkan bahwa pada sumuran  berkode  1-8  terdapat  fragmen pita  hasil  digesti  dengan  ukuran  158  pb dan  97  pb.  Hasil  ini  menunjukkan  bahwa sampel  pada  sumuran  berkode  1-8
memiliki  alel wildtype /tipe  normal  (G). Analisis terhadap 44 sampel penelitian ini menunjukkan bahwa 44 sampel penelitian memiliki  genotipe  homosigot wildtype (G/G). Hal  ini berarti 88 alel  yang diteliti pada  penelitian  ini  merupakan  alel  tipe normal.  Frekuensi  alotipe CYP2D6*4 pada  penelitian  ini  dapat  dilihat  pada Tabel 1.
Tabel 1 Distribusi genotip dan frekuensi alotip CYP2D6*4 etnis Papua Jenis Jumlah AA GA GG Frekuensi alel A (%) G(%) Gen CYP2D6*4 44 0 0 44 0 100
Alel wild type : GG : ekstensive metabolizer Alel mutan : AA dan GA : poor metabolizer
Genotip sampel  yang terdapat  pada sumuran  berkode  1-8  adalah  homozigot wildtype .  Hasil  ini  menunjukkan  bahwa  di dalam  individu  tersebut  tidak  ditemukan alel CYP2D6*4 dan  secara    termasuk dalam extensive  metabolizer .  Penderita malaria  falciparum  dan  atau  malaria  vivax yang  memiliki    ini,  memiliki  kemampuan yang  baik  dalam  memetabolisme  obat antimalaria primakuin.  Pada terapi  malaria primakuin  berfungsi  sebagai  gametosidal
pada  malaria  falciparum  dan  eliminasi stadium  hipnozoit  pada  malaria  vivax, sehingga  dapat  mencegah  kekambuhan malaria vivax. 6
Konfirmasi terhadap ketepatan sekuen amplikon mendeteksi lokasi mutasi dilakukan dengan mengirimkan satu sampel penelitian, untuk dilakukan analisis sequencing .  Hasil  dari  analisis sequencing dapat dilihat pada Gambar 2.
: situs pengenalan enzim (G/A)
: situs polimorfisme
Gambar 2 Hasil s equencing pada amplikon CYP2D6*4.
Gambar  2  menunjukkan  bahwa pada  urutan  basa  ke  1937  gen CYP2D6 , basa  G  (ditunjuk  dengan  anak  panah hitam)  tidak  mengalami  mutasi  menjadi basa  A.  Tidak  ditemukannya  mutasi  pada gen  ini  menggambarkan  bahwa  pita tersebut  masih  mengandung  situs  restriksi dari enzim BstNI . Kondisi ini
menyebabkan  amplikon  akan  terpotong menjadi  2  bagian  saat  proses  digesti dengan  enzim  tersebut.  Hasil  analisis  ini juga  membuktikan  bahwa  teknik  RFLP masih  dapat  digunakan  untuk  mendeteksi adanya SNP pada suatu gen.
Analisis  polimorfisme CYP2D6 pada penderita malaria falciparum dan atau
malaria  vivax  di  etnis  Papua  dengan menggunakan  enzim BstNI menunjukkan bahwa  frekuensi  alel  G  bersifat  dominan terhadap  alel  tipe  mutan  (A)  dengan proporsi  100%  dari  total  44  sampel. Kondisi ini serupa dengan kondisi masyarakat  etnis  Jawa  pada  penelitian yang telah dilakukan sebelumnya. Sukmawati (2015) menemukan bahwa gen CYP2D6 penduduk  etnis  Jawa  yang diwakili dari penderita malaria di Purworejo  didominasi  alel  tipe  normal. Frekuensi alel CYP2D6*4 sebagai alel non fungsional  pada  penduduk  etnis  Jawa adalah 0% dari total 51 sampel.
Frekuensi  alotip CYP2D6*4 yang tidak  ditemukan  pada  masyarakat  Papua serupa  dengan  Jawa  dan  Asia  secara global.  Jika  dibandingkan  dengan  sesama populasi di Indonesia, karakteristik genetik etnis  Papua  lebih  banyak  memiliki kesamaan  dengan  masyarakat  wilayah Bajo,  Sulawesi  Selatan  dan  Alorese,  Nusa Tenggara  Timur. 10 Tumonggor et  al .  juga menemukan  bahwa  secara  genetik  Papua lebih  banyak  memiliki  kesamaan  dengan populasi  negrito  di  Filipina  dan  populasi indigo  Taiwan. 11 Penelitian  terkait  gen serupa, belum pernah dilakukan di wilayah tersebut.
Frekuensi alotipe CYP2D6*4 bervariasi  dan  dipengaruhi  oleh  etnis. Morseburge et al . menyatakan bahwa pada
pohon  filogenesis  Papua  memiliki  posisi yang  sama  dengan  populasi  di  India selatan. 10 Hasil penelitian ini menunjukkan frekuensi  alotipe CYP2D6*4 yang  tidak ditemukan  pada  penduduk  etnis  Papua lebih rendah dari penelitian yang dilakukan di India Selatan. Adhitan et al . menemukan frekuensi  alel CYP2D6*4 yang  cukup tinggi pada populasi Tamillian, India yakni sebesar 6,6%. 5
Wright et al . menemukan frekuensi alel  non  fungsional  sebesar  1-1,9%  pada masyarakat Xhosa, Afrika Selatan. Frekuensi  alel  non  fungsional  tertinggi ditemukan pada populasi Kaukasia dengan frekuensi 21%. Frekuensi alotipe CYP2D6*4 di  Asia  sebesar  1%  dan  di
Afrika  sebesar  2%.  Adanya  perbedaan  ini menunjukkan bahwa polimorfisme CYP2D6*4 dipengaruhi  pula  oleh  faktor etnis. 12
Alel  tipe  mutan  (A)  yang  tidak ditemukan dalam penelitian ini merupakan alel  non  fungsional.  Genotipe  homozigot (A/A) juga tidak ditemukan pada penduduk Etnis  Papua.  Kondisi  yang  sama  juga terjadi pada masyarakat di Jawa. Penelitian yang  dilakukan  oleh  Theophilus et  al . hanya  menemukan  0,2%  individu  dengan genotipe  homozigot  mutan  (A/A)  dengan jumlah  sampel  mencapai  447  orang. 9
Keberadaan  alel  non  fungsional  dapat menurunkan  kemampuan  individu  dalam
memetabolisme primakuin apabila ditemukan heterozigot bersama dengan alel
fungsional (A/G) dan dapat pula menghilangkan  kemampuan  metabolisme terhadap  primakuin  atau poor  metabolizer apabila  ditemukan  homozigot  dengan  alel non fungsional (A/A). 13
Genotip  homozigot  (A/A)  yang tidak  ditemukan  pada  seluruh  sampel penelitian menunjukkan bahwa masyarakat etnis  Papua  masih  didominasi  oleh  alel fungsional dan memiliki kemampuan yang baik  dalam  memetabolisme  primakuin. Primakuin memiliki peranan penting dalam tatalaksana malaria. Penambahan primakuin  dalam  tatalaksana  malaria falciparum  berfungsi  sebagai  gametosidal yang  dapat  membunuh  stadium  yang berperan  dalam  transmisi  infeksi  malaria. Penggunaan primakuin pada malaria vivax berguna  untuk  mengeliminasi  stadium hipnozoit  yang  berada  di  hepar,  sehingga dapat  menurunkan  angka  kekambuhan penderita malaria vivax. 4
Primakuin  menjadi  terapi  pilihan sejak  ditemukan  kasus  resistensi  terhadap klorokuin. Hasil penelitian ini meyakinkan bahwa  populasi  etnis  Papua  sebagai populasi  yang  rentan  terinfeksi  malaria memiliki  kemampuan  yang  baik  dalam memetabolisme primakuin. Primakuin sebagai satu-satunya pilihan untuk memutus transmisi malaria falciparum dan
mencegah  kekambuhan  malaria  vivax masih  dapat  diterima  oleh  penderita malaria, khususnya di Etnis Papua.

## 2. Analisis Polimorfisme CYP2D6*10
Mutasi  pada  gen CYP2D6*10 terjadi pada urutan basa nukleotida ke 190 dari  basa  C  menjadi  T.  Polimorfisme  ini menyebabkan perubahan pada asam amino ke  34,  yakni  dari  prolin  menjadi  serin (Pro34Ser).  Pada  level  protein,  variasi  ini berdampak  pada  kestabilan  dari  protein CYP2D6 . Pro34 merupakan area yang kaya akan  prolin  yang  berfungsi  seperti  engsel yang  menghubungkan  antara  membran hidrofobik  dan heme  binding domain  dari enzim.  Hal  tersebut  berdampak  pada ketidakstabilan  dari  enzim  sitokrom  yang dihasilkan    dari  adanya  mutasi  190C>T dikenal  dengan intermediete  metabolizer (IM) . 6
Alel CYP2D6*10 memiliki  ukuran 344  pb.  Enzim HphI akan  memotong  alel tipe  normal  menjadi  dua  pita  berukuran 282  pb  dan  62  pb.  Mutasi  dari  basa  C menjadi T pada alel tipe mutan CYP2D6*10 menyebabkan alel tipe mutan memiliki  situs  restriksi  lain  yang  tidak ditemukan pada alel tipe normal.  Alel  tipe mutan  akan  terpotong  menjadi  pita berukuran  182  pb,  100  pb,  dan  62  pb. Elektroforegram  pada  genotipe  homozigot wildtype (C/C)  akan  menunjukkan  pita berukuran  282  pb  dan  62  pb.  Genotipe
heterozigot (C/T) akan diperlihatkan dengan adanya pita berukuran 282 pb, 182 pb, 100 pb, dan 62 pb. Genotipe homozigot tipe  mutan  (T/T)  akan  terlihat  pada
elektroforegram dengan adanya pita berukuran 182 pb, 100 pb dan 62 pb. Hasil digesti CYP2D6*10 dengan  menggunakan enzim Hph1 dapat dilihat pada Gambar 3.
M=marka 100 pb, K+=kontrol positif, 1-6= sampel
Gambar 3 Elektroforegram hasil RFLP gen CYP2D6*10.
Sumuran  M  pada  elektroforegram di Gambar 3, berisi marka 100 pb. sumuran K+  adalah  pita  amplikon CYP2D6*10 dengan  ukuran  344  pb.  Pada  sumuran dengan  kode  1-3,  5-6  tampak  adanya fragmen  pita  DNA  berukuran  282  pb  dan 62 pb. Kondisi ini menggambarkan bahwa sampel pada sumuran tersebut mengandung  alel  tipe  normal.  Hasil elektroforesis  pada  sumuran  dengan  kode no.4  menunjukkan  adanya  pita  berukuran 282  pb,  182  pb,  100  pb  dan  62  pb. Elektroforegram  tersebut  menunjukkan bahwa  sampel  pada  sumuran  tersebut
mengandung  alel  tipe  normal  dan  tipe mutan,  sehingga  secara  genotipe  termasuk heterozigot (C/T).
Analisis  polimorfisme CYP2D6*10 pada penelitian ini menemukan bahwa dari 44  sampel  penelitian,  didapatkan  35 sampel  merupakan  homozigot wildtype (C/C),  sembilan  sampel  memiliki  alel mutan  yang  bersifat  heterozigot  (C/T), namun  homozigot  tipe  mutan  (T/T)  tidak ditemukan  pada  seluruh  sampel  penelitian ini.  Rincian  hasil  analisis CYP2D6*10 dengan  RFLP.  Distribusi  genotipe  dan
frekuensi  alotipe  gen CYP2D6*10 pada penelitian ini dapat terlihat pada Tabel 2.
Tabel 2 Distribusi genotip dan frekuensi alotip CYP2D6*10 etnis Papua
Jenis Jumlah CC CT TT Frekuensi alel X2 P C (%) T(%) 0,57 0,45 Gen CYP2D6*10 44 35 9 0 0,90 0,10
If p<0,05 = not consistent with HWE
Frekuensi alotipe C dominan terhadap T dengan proporsi 90%. Frekuensi  alel  mutan  T  adalah  10%. Berdasarkan  perhitungan  yang  dilakukan dengan  menggunakan  program Court-lab HW  Calculator seperti  pada  tabel  2,  maka didapatkan  nilai  p  =0,45.  Nilai  p  yang didapat pada penelitian ini lebih besar dari 0,05,  sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa kondisi  polimorfisme  gen CYP2D6*10 yang  terjadi  pada  masyarakat  etnis  Papua berada  pada Hardy-Weinberg  Equilibrium (HWE).  Prinsip  dari  HWE  adalah  bahwa kondisi  genetik  suatu  populasi  tidak mengalami  perubahan  bermakna  dari generasi ke generasi.
Frekuensi  alel CYP2D6*10 yang ditemukan pada penelitian ini lebih rendah jika  dibandingkan  dengan  hasil  penelitian serupa yang telah dilakukan pada penduduk  etnis  Jawa.  Frekuensi  alotipe gen yang mampu menurunkan kemampuan metabolisme  tubuh  terhadap  primakuin
pada  etnis  Jawa  adalah  56%. 6 Dari  hasil tersebut  dapat  terlihat  bahwa  kondisi polimorfisme CYP2D6*10 pada  etnis Papua berbeda dengan etnis Jawa.
Perbedaan  polimorfisme  yang  ditemukan antara  populasi  etnis  Papua  dan  populasi etnis  Jawa  mendukung  penelitian  yang telah dilakukan sebelumnya yang menemukan  adanya  perbedaan  signifikan antara  etnis  Jawa  dengan  etnis  Papua. Tumonggor et  al .    (2013)  mengemukakan bahwa  meskipun  termasuk  dalam  satu wilayah  Indonesia,  karakteristik  genetik etnis  Papua  berbeda  dengan  Indonesia bagian barat. 11
Frekuensi  alotip CYP2D6*10 pada masyarakat  etnis  Papua  yang  ditemukan pada  penelitian  ini  mendekati  hasil  yang ditemukan  pada  populasi  di  India  Selatan. Frekuensi alel intermzs31qwediete metabolizer di India Selatan adalah 10,2%. Dibandingkan dengan ras Kaukasia, frekuensi  alotipe CYP2D6*10 pada  etnis
Papua  lebih  tinggi.  Di  Kaukasia,  alel CYP2D6*10 hanya  ditemukan  sejumlah 2%. Namun, jika dibandingkan dengan ras Asia, kondisi di Papua lebih rendah karena di Jepang alel CYP2D6*10 ditemukan pada rentang 50-70%. 7
IM  dapat  muncul  pada  individu apabila  ditemukan  secara  heterozigot  satu alel  tipe  mutan CYP2D6*10 dan  satu  alel nonfungsional atau ditemukan dua alel tipe mutan CYP2D6*10 .  Alel  tipe  mutan  yang hanya  ditemukan  heterozigot  (C/T)  pada 10%  penduduk  etnis  Papua  yang  terlibat dalam  sampel  penelitian,  menunjukkan bahwa  semua  sampel  memiliki extensive metabolizer .  Jika  alel  ini  ditemukan homozigot  mutan  (T/T)  maka  penderita malaria  falciparum  dan  atau  malaria  vivax yang memiliki genotipe ini dapat mengalami penurunan kemampuan metabolisme  obat  antimalaria  primakuin. Kondisi  ini  dapat  berpengaruh  pada kegagalan terapi dan secara tidak langsung berdampak pada kegagalan upaya
pemerintah dalam mengeradikasi malaria. 6

## KESIMPULAN
Analisis polimorfisme gen CYP2D6*4 dan CYP2D6*10 pada
penderita  malaria  falciparum  dan  atau malaria vivax di etnis Papua menunjukkan bahwa  genotipe  mutan CYP2D6*4 tidak ditemukan pada sampel penelitian.
Frekuensi  alotip  mutan CYP2D6*4 yang merupakan  alel  non-fungsional  dan  dapat bermanifestasi  sebagai poor  metabolizer adalah  0%.  Frekuensi  alotipe  mutan CYP2D6*10 yang  dapat  bermanifestasi sebagai intermediete  metabolizer adalah 10,2%.  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan bahwa  100%  sampel  penelitian  memiliki kemampuan metabolisme yang baik (extensive metabolizer) terhadap primakuin. Primakuin masih dapat digunakan sebagai terapi pendamping ACT pada  malaria  falciparum  dan  atau  malaria vivax  tanpa  komplikasi  di  Papua  yang berfungsi memutus rantai penularan malaria falciparum dan mencegah kekambuhan dari malaria vivax. Penelitian selanjutnya  disarankan  untuk  melakukan penelitian  serupa  terkait CYP2D6*4 dan CYP2D6*10 di wilayah  Indonesia lainnya, untuk menilai adanya variabilitas interetnik pada gen CYP2D6 .

## KONFLIK KEPENTINGAN
Tidak ada konflik kepentingan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada  pihak  yang  telaah  membantu penulisan karya ilmiah ini.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Kementerian  Kesehatan  Republik Indonesia. Data dan Informasi
Tahun 2014 (Profil Kesehatan Indonesia) . 2019.
2. Kementerian  Kesehatan  Republik Indonesia. Pedoman Penatalaksanaan  Penyakit  Malaria. Jakarta, Indonesia. 2017.
3. Pybus, B.S., J.C Sousa, X. Jin, et al .. CYP450 Phenotyping  and  Accurate
Mass Identification of Metabolites of 8-aminoquinoline, Anti-malarial Drug  Primaquine. Malaria  Journal.
2012;11.
4. Fasinu,  P.S.,  B.L.  Tekwani,  N.P. Dhammika, et  al . Enantioselective Metabolism of Primaquine by Human  CYP2D6 .  Malaria  Journal.
2014;13 :507.
5. Macias,  M.S.,  and  A.  Lierena.
Cytochrome P450 Genetic Polymorphisms Of Mexican Indigenous Populations. Review.
Drug  Metabolism  Drug  Interaction. 2013;28(4):193 – 208.
6. Sukmawati, D.D.
Kajian
Polimorfisme  Gen  Cyp2d6  Pada Pasien  Malaria  Non  Komplikasi  Di Kabupaten Purworejo Yang Diterapi Dengan Dhp-Primakuin . 2015. Tesis Fakultas Farmasi UGM.
7. Baclig,  M.O.,  R.Z.  Predicala,  C.A. Mapua, et  al . Allelic  and  Genotype Frequencies of Catechol- Omethyltransferase (Val158Met) and CYP2D6*10 (Pro34Ser) Single
Nucleotide  Polymorphisms  in  the Philippines. International  Journal Moleculer  Epidemiology  Genetic. 2012;3 (2) : 115 – 121.
8. Bennett,  J.W.,  B.S.  Pybus,  A. Yadava, et  al . Primaquine  Failure and  Cytochrome  P-450  2D6  in P.vivax  Malaria. New  England Journal of Medicine . 2013;14 : 369.
9. Saladores,  P.  H.,  and  M.  Schwab.
CYP2D6 : Interethnic Variability . In Bauman, P. (ed), CYP2D6 :
Genetics, Pharmacology and Clinical Relevance . London
:UK.2014;43-54.
10. Morseburg,  A.,  L.  Pagani,  F.X. Ricaut,  B.  Yngvadottir,  E.  Harney, C.Castilo et al. Multi -layered population structure in Island Southeast  Asians. European  Journal of Human Genetics. 2016; 1-7.
11. Tumonggor,  M.K.,  T.M.  Karafet,  B. Hallmark,  J.S.  Lansing,  H.  Sudoyo, M.F.  Hammer,  et  al. The  Indonesian archipelago:  an  ancient  genetic highway linking Asia and the Pacific.
Journal  of  Human  genetics.  2013; 58:165-173.
12. Wright, G. E. B., Dana J. H. N., Britt I.  D.  G., et  al. Elucidation  of
CYP2D6  Genetic  Diversity  in  a UniqueAfrican Population:
Implications for the Future
Applicationof  Pharmacogenetics  in the  Xhosa  Population .  Annals  of
Human  Genetics.  2010;  74  :  340– 350.
13. Pett,  H.,  Bradley,  J.,  Okebe,  J.,
Dicko,  A.,  Tiono,  A.B.,  Goncalves,
B.P., et  al . CYP2D6  Polymorphisms and  the  Safety  and  Gametocytocidal Activity  of  Single-Dose  Primaquine
for Plasmodium falciparum. Antimicrobial Agents and
Chemotherapy. 2019;63 : 1-9