## UJI AKTIVITAS SEDIAAN SPRAY HAND SANITIZER KOMBINASI EKSTRAK DAUN KEMANGI DAN DAUN JERUK NIPIS SEBAGAI ANTIBAKTERI TERHADAP Staphylococcus aureus
Idham H Zakaria 1 *, Cecilia Anna Seumahu 2 , Amos Killay 3 1,2.3 Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Pattimura, Ambon, Indonesia
*Corresponding author, e-mail: idhamzakaria11@gmail.com

## A B S T R A C T
Basil and lime leaf extracts have chemical compounds that function to inhibit the growth of Staphylococcus aureus and total bacteria on the palms of the hands. The purpose of this study  was  to determine  the  antibacterial activity  of  basil  and  lime  leaf  extracts  against Staphylococcus  aureus total  bacteria  on  the  palms  of  the  hands.  This  experimental laboratory  research  used  basil  and  lime  leaves  which  were  extracted  using  the  partial maceration method. The formulation of the hand sanitizer spray combination of basil leaf extract  with  lime  leaves  is  1:2,  2:1,  and  2:2.  The  formulation  was  tested  for  an antibacterial  effect  on Staphylococcus  aureus and  total  bacteria  on  the  palms.  Data analysis used descriptive quantitative. The results showed that the extracts of basil leaves and lime leaves had an antibacterial activity of Staphylococcus aureus and total bacteria. Formulation 2:2 is the best formulation with bactericidal power of formula is 0 CFU/ml and total bacteria with antiseptic power of formula are 7 CFU. The study concluded that basil  and  lime  leaf  extracts  were  effective  in  killing Staphylococcus  aureus and  total bacteria on the palms of the hands.
Keywords : Antibacterial, Basil Leaves, Hand Sanitizer, Lime Leaves, Staphylococcus aureus

## PENDAHULUAN
Kulit  merupakan  lapisan  penutup  tubuh  yang  selalu  bersentuhan  dengan lingkungan  luar,  baik  itu  sinar  matahari,  iklim  maupun  faktor  kimia.  Kulit  sangat rentan  terkena  infeksi  ataupun  penyakit  kulit  lain,  salah  satunya  disebabkan  oleh bakteri Staphylococcus  aureus . Staphylococcus  aureus bertanggung  jawab  atas  80% penyakit supuratif, dengan permukaan kulit sebagai habitat alaminya.
Hand  sanitizer  merupakan  salah  satu  bahan  antiseptik  berupa  gel  atau  spray yang  sering  digunakan  masyarakat  sebagai  media  pencuci  tangan  yang  praktis. Penggunaan  hand  sanitizer  lebih  efektif  dan  efisien  bila  dibanding  dengan menggunakan  sabun  dan  air  sehingga  masyarakat  banyak  yang  tertarik menggunakannya  (Asngad  et  al.,  2018).  Spray  hand  sanitizer  dapat  bekerja  lebih cepat, dengan kecepatan <15 detik, sedangkan gel hand sanitizer memerlukan waktu hingga 30 detik untuk menghilangkan kandungan bakteri (Sanilife Solutions, 2021).
Adapun kelebihan hand sanitizer dapat membunuh kuman dalam waktu relatif cepat, karena mengandung senyawa alkohol (etanol, propanol, isopropanol)  dengan konsentrasi  ±60-80%  dan  golongan  fenol  (klorheksidin,  triklosan).  Senyawa  yang terkandung  dalam  hand  sanitizer  memiliki  mekanisme  kerja  dengan  cara mendenaturasi dan mengkoagulasi protein sel kuman (Sanilife Solutions, 2021).
Banyak  jenis  sediaan  antibakteri  yang  bersifat  sintetis,  dimana  penggunaan antibakteri sintetis tersebut lama kelamaan dapat menimbulkan resistensi (Rohmani
&  Kuncoro,  2019).  Untuk  mencegah  terjadinya  resisten  bakteri  terhadap  sediaan sintetis,  maka  dilakukan  inovasi  produk  antiseptik  hand  sanitizer  dengan menggunakan ekstrak tanaman yang ada di alam yang mengandung sifat antibakteri, misalnya  daun  mangga,  daun  serai,  batang  pisang,  daun  kemangi,  dan  daun  jeruk nipis (Afrina et al., 2016).
Daun kemangi  memiliki banyak kandungan senyawa kimia antara lain saponin, flavonoid,  tanin,  glikosid,  alkaloid  dan  minyak  atsiri  (Nuzulia  &  Santoso,  2017). Kandungan  senyawa  kimia  pada  ekstrak  daun  kemangi  seperti  saponin,  flavonoid, tanin, glikosid, alkaloid, dan minyak atsiri memiliki kemampuan dalam menghambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus , Escherichia  coli , Bacilus  cereus , Pseudomonas  fluorescens , Candida  albicans , Streptococcus  alfa ,  dan Bacillus  subtilis (Cahyani, 2014). Daun jeruk nipis memiliki banyak kandungan senyawa kimia antara lain  saponin,  flavonoid,  tanin,  glikosid,    fenol,  terpenoid,  dan  alkaloid  (Zage  et  al., 2018). Berdasarkan Redy et al (2012), kandungan senyawa kimia pada ekstrak daun jeruk  nipis  seperti  saponin,  flavonoid,  tanin,  glikosid,  alkaloid,  fenol  dan  terpenoid memiliki kemampuan menghambat pertumbuhan bakteri Gram-negatif, diantaranya Salmonella  paratyphi , Escherichia  coli , Proteus  vulgaris , Pseudomonas  aeruginosa , Serratia marcescens , Klebsiella pneumonia , dan juga dapat menghambat bakteri Gram- positif, yaitu Bacillus cereus , Enterobacter faecalis , dan Staphylococcus aureus (Redy et al., 2012).
Berdasarkan uraian di atas,  tujuan dari penelitian ini  untuk  menguji aktivitas sediaan  spray  hand  sanitizer  kombinasi  ekstrak  daun  kemangi  ( Ocimum  basilicum ) dan daun jeruk nipis ( Citrus aurantifolia ) sebagai antibakteri terhadap Staphylococcus aureus .

## METODE Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Mikrobiologi  Jurusan  Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Pattimura, pada bulan Maret – April 2021.

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan adalah neraca analitik, mikropipet, pipet volume 1,0 mL, lemari pendingin, waterbath, erlenmeyer, beaker glass, inkubator, inkubator shaker, autoclave,  oven,  spatula,  batang  pengaduk,  spektofotometer,  vortex,  tabung  reaksi, batang L, blender, colony counter, mikropipet, tip mikropipet, alumunium foil, rotary evaporator, ayakan, kamera dan magnetic stirrer. Bahan yang digunakan adalah daun kemangi segar, daun jeruk  nipis segar, etanol 96%, gliserin, aquades, kultur  bakteri Staphylococcus aureus , tisu, NaCl, media NB, bacto agar, kertas pH, dan media NA.
Prosedur Kerja Pembuatan serbuk dan ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis Daun  kemangi  dan  daun  jeruk  nipis  dikeringkan  menggunakan  oven  pada suhu  40-60 O C  (Widarta  &  Wiadnyani,  2019).  Selanjutnya  daun  kemangi  dan  daun jeruk  nipis  di  blender  dan  di  haluskan  menggunakan  ayakan  40  mesh  (Barus  & Sutopo, 2019). Masing-masing sebanyak 100 gram serbuk kering daun kemangi dan daun  jeruk  nipis  menggunakan  metode  maserasi  parsial  dengan  menggunakan pelarut etanol 96% 500 mL selama 72 jam dengan menggunakan rotary evaporator (Meiliawati et al., 2018; Angelia et al., 2015).

## Formulasi spray hand sanitizer
Formulasi  spray  hand  sanitizer  adalah  formulasi  1  (formulasi  ekstrak  daun kemangi  dan  daun  jeruk  nipis  dengan  perbandingan  1:2),  formulasi  2  (formulasi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis dengan perbandingan 2:1), dan formulasi 3 (formulasi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis dengan perbandingan 2:2) dengan  masing-masing  formulasi  ditambahkan  dengan  gliserin  (Santoso  &  Riyanta, 2019; Thaddeus, 2018).

## Uji karakteristik fisik dan kimia pada spray hand sanitizer
Uji  karakteristik  fisik.  Kriteria  yang  digunakan  untuk  uji  karakteristik  fisik adalah sediaan spray yang dihasilkan warna, bentuk, dan bau (Anindhita & Oktaviana, 2020).  Uji  karakteristik  kimia  dilakukan  dengan  uji  pH.  Uji  pH  dilakukan menggunakan  kertas  pH.  Persyaratan  pH  sediaan  topikal  atau  tidak  (4,5-7),  untuk menjamin sediaan tidak akan menyebabkan iritasi pada kulit (Martono & Suharyani, 2018).

## Uji aktivitas antibakteri sediaan kombinasi spray hand sanitizer
Bakteri  uji  yang  digunakan  adalah Staphylococcus  aureus . Staphylococcus aureus didapatkan  dari  koleksi  Laboratorium  Mikrobiologi  FMIPA  UNPATTI. Staphylococcus  aureus disimpan  beku  dalam  menggunakan  gliserol  dan  media  NB (Nutrient  Broth)  menggunakan  metode  gores.  Uji  aktivitas  antibakteri  sediaan kombinasi spray hand sanitizer terdiri dari berbagai tahapan:
Penentuan daya hambat formula.
Penentuan daya hambat formula dilakukan dengan metode dilusi cair.  Metode dilusi  cair  adalah  metode  yang  digunakan  untuk  membuat  seri  pengenceran  agen antimikroba pada medium cair yang ditambahkan dengan mikroba uji (Fitriana et al., 2019).  Media  yang  digunakan  untuk  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus adalah  media  NB  (Nutrient  Broth).  Media  NB  (Nutrient  Broth)  digunakan  sebanyak 1,28  gram  NB  dengan  160  mL  aquades.  Seluruh  tabung  diinkubasi  (24  jam,  37 O C), kemudian  diamati  pertumbuhan  bakteri  berupa  kekeruhan  menggunakan spektofometer  dengan  konsentrasi  108  sel  bakteri/ml.  Tabung  uji  (A,  B,  dan  C) ditambahkan 1 mL larutan ekstrak masing-masing formulasi. Tabung kontrol positif (K+)  ditambahkan  1  mL  spray  hand  sanitizer  komersil  dengan  kandungan  alkohol 70%. Tabung kontrol  negatif hanya berisi media NB. Seluruh tabung diinkubasi (24 jam,  37 O C),  kemudian  diamati  pertumbuhan  bakteri  berupa  kekeruhan menggunakan spektofometer.
Penentuan daya bakterisidal formula.
Penentuan  daya  bakterisidal  formula  dilakukan  dengan  metode  dilusi  padat. Metode  dilusi  padat  adalah  metode  yang  dilakukan  dengan  menginokulasi  mikroba uji dengan konsentrasi awal 108 sel bakteri/mL pada media agar yang mengandung agen  antimikroba  (Fitriana  et  al.,  2019).  Hasil  inkubasi  dapat  dilihat  dengan  ada tidaknya  pertumbuhan  koloni  pada  nutrient  agar  [19].  Media  NA  (Nutrient  Agar) yang  digunakan  adalah  sebanyak  16,58  gram  dimasukkan  kedalam  erlenmeyer  lalu dilarutkan  dengan  menambahkan  592  mL  aquades.  Total  koloni  bakteri  dihitung menggunakan colony counter (Zen et al., 2015). Formulasi spray hand sanitizer yang diinokulasi pada bakteri dikulturkan untuk melihat bakteri yang masih mampu hidup. Hasil inkubasi dapat dilihat dengan ada tidaknya pertumbuhan koloni pada nutrient agar  (Akib  et  al.,  2019).  Total  koloni  bakteri  dihitung  menggunakan  colony  counter (Zen et al., 2015).

## Uji daya antiseptik formula
Berdasarkan Shu (2013), penentuan uji daya antiseptik menggunakan metode replika. Metode tersebut dilakukan dengan cara sebagai berikut: kontrol dan sediaan uji  (Shu,  2013).  Kontrol.  Spray  hand  sanitizer  komersil  disemprot  pada  telapak tangan.  Selanjutnya  ibu  jari  ditempelkan  pada  media  padat  nutrient  agar  dalam cawan  petri.  Media  diinkubasi  pada  suhu  37 O C  selama  24  jam.  Setelah  diinkubasi, jumlah  koloni  bakteri  dihitung  menggunakan  colony  counter.  Sediaan  uji.  Telapak tangan dituangkan sedian spray hand sanitizer kombinasi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis, kemudian diratakan dan didiamkan kira–kira 30 detik. Selanjutnya dilakukan  kontak  ibu  jari  dengan  media  nutrient  agar  dalam  cawan  petri.  Media diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam. Setelah diinkubasi, jumlah koloni bakteri dihitung menggunakan colony counter. Uji daya antiseptrik formula.

## Analisis Data
Pada uji karakteristik menggunakan uji karakteristik fisik dan uji karakteristik kimia (Anindhita & Oktaviana, 2020). Nilai uji daya hambat formula, daya bakterisidal formula,  dan  daya  antiseptik  formula  pada  telapak  tangan  akan  dianalisis  secara deskriptif kuantitatif (Priyono, 2016).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengamatan  dilakukan  setelah  media  diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  24 jam  untuk  melihat  ada  atau  tidaknya  penghambatan  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus yang  ditandai  dengan  kekeruhan  menggunakan spektofotometer.  Kekeruhan  dapat  diketahui  berdasarkan  nilai  OD.  Hasil  dari penelitian ini dapat ditunjukkan pada tabel 1.
Tabel  1 .  Nilai  uji  daya  hambat  formula  berdasarkan  nilai  OD  pada  formulasi spray  hand sanitizer kombinasi  ekstrak  daun  kemangi  dan  daun  jeruk  nipis terhadap Staphylococcus aureus dan spray hand sanitizer komersil (K+) Formulasi Nilai OD 558 nm 1 2,154 2 2,5 3 2,5 K+ 0,068 K- 1,679 Keterangan: Formulasi 1 :  Formulasi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis dengan perbandingan 1:2 Formulasi 2 :  Formulasi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis dengan perbandingan 2:1 Formulasi 3 :  Formulasi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis dengan perbandingan 2:2 K+ : Spray hand sanitizer komersil
K- :  Aquades
Dari  hasil  penelitian  di  atas,  diketahui  bahwa  formulasi spray  hand  sanitizer kombinasi  ekstrak  daun  kemangi  dan  daun  jeruk  nipis  memiliki  potensi  dalam menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus . Hal tersebut berdasarkan hasil  nilai  uji  daya  bakterisidal  formula  dan  hasil  uji  daya  antiseptik  formula  pada telapak tangan yang terbentuk pada setiap formulasi. Pada tabel ke-1, nilai OD pada setiap  formulasi  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  K + dan  K-.  Pengukuran  nilai  OD menggunakan  spektrofotometri,  blanko  yang  digunakan  adalah  aquades.  Warna ekstrak  yang  pekat  pada  formulasi  1,  2,  dan  3  sehingga  larutan  pada  formulasi tersebut  keruh.  Nilai  uji  daya  hambat  formula  pada  formulasi spray  hand  sanitizer kombinasi  ekstrak  daun  kemangi  dan  daun  jeruk  nipis  tidak  terbaca.  Hal  tersebut
karena pengukuran nilai OD  menggunakan spektrofotometri lebih dari dua pada uji daya  hambat  formula  adalah  salah  atau  tidak  benar.    Untuk  melihat  tingkat kekeruhan  (OD)  ditentukan  melalui  nilai  absorbansi  yang  dihasilkan  pada spektofotometer. Kekeruhan  pada formulasi spray hand sanitizer kombinasi ekstrak daun  kemangi  dan  daun  jeruk  nipis  memiliki  warna  ekstrak  yang  pekat,  meskipun sudah melakukan penyaringan pada proses ekstraksi. Kekeruhan pada formulasi 1, 2, dan  3  menunjukkan  nilai  OD  yang  tinggi  dibandingkan  K+  dan  K-.  Semakin  tinggi kekeruhan pada formulasi spray hand sanitizer kombinasi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis maka nilai OD Staphylococcus aureus spray hand sanitizer kombinasi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis lebih tinggi.  Sebaliknya, semakin jernih pada formulasi spray hand sanitizer kombinasi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis  maka  nilai  OD Staphylococcus  aureus spray  hand  sanitizer kombinasi  ekstrak daun  kemangi  dan  daun  jeruk  nipis  semakin  rendah.  Hal  tersebut  juga  dibuktikan pada  penelitian  sebelumnya  yang  dilakukan  Mutammima  (2017),  nilai  OD  pada ekstrak etanol daun  plethekan tinggi dikarenakan adanya  kosentrasi ekstrak  etanol daun plethekan tinggi sehingga harus melakukan pengenceran.
Pengamatan dilakukan setelah   media diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam  untuk  melihat  ada  atau  tidaknya  penghambatan  pertumbuhan  jumlah  koloni Staphylococcus  aureus yang  ditandai  dengan  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus . Hasil uji daya bakterisidal dapat ditunjukkan pada tabel 2.
Tabel 2. Nilai  Uji  Kosentrasi  Bakterisidal  Berdasarkan  Pertumbuhan  Jumlah  Koloni Staphylococcus  aureus Pada Spray  Hand  Sanitizer Kombinasi  Ekstrak  Daun Kemangi dan Daun Jeruk Nipis dan Spray Hand Sanitizer Komersil (K+) Formulasi Pengulangan (Jumlah Koloni (CFU/ml)) 1 2 3 1 0 0 0 2 0 0 0 3 0 0 0 K+ 0 0 0 K- TBUD TBUD 7 Keterangan: Formulasi 1 : Formulasi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis dengan perbandingan 1:2 Formulasi 2 : Formulasi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis dengan perbandingan 2:1 Formulasi 3 : Formulasi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis dengan perbandingan 2:2 K+ : Spray hand sanitizer komersil K- : Aquades TBUD : Terlalu banyak untuk dihitung CFU
: Colony forming unit
Hasil  uji  daya  bakterisidal  formula  pada  formulasi spray  hand  sanitizer kombinasi  ekstrak  daun  kemangi  dan  daun  jeruk  nipis  dapat  menghambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus .  Hal  tersebut  dilihat  pada  tabel  2  yang menunjukkan tidak ada pertumbuhan koloni Staphylococcus aureus pada formulasi 1, 2,  dan  3.  Sedangkan,  hasil  uji  daya  antiseptik  formula  pada  telapak  tangan  dengan menggunakan  formulasi spray  hand  sanitizer kombinasi  ekstrak  daun  kemangi  dan daun jeruk nipis dapat menghambat pertumbuhan bakteri total pada telapak tangan. Hal tersebut dilihat pada tabel 5 bahwa pada formulasi 1, 2, dan 3 dapat menghambat pertumbuhan jumlah bakteri total pada telapak tangan.
Hasil  dari  penelitian  ini  terlihat  bahwa  daya  baktersidal  pada  tabel  2, formulasi spray hand sanitizer kombinasi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis memiliki  nilai  efektifivitas  yang  sama  dengan  penggunaan spray  hand  sanitizer
komersil  dalam  menghambat  pertumbuhan  jumlah  koloni  bakteri Staphylococcus aureus .  Hasil  dari  penelitian  ini  terlihat  bahwa  daya  baktersidal  pada  tabel  ke-2, formulasi spray hand sanitizer kombinasi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis memiliki  nilai  efektifivitas  yang  sama  dengan  penggunaan spray  hand  sanitizer komersil  dalam  menghambat  pertumbuhan  jumlah  koloni  bakteri Staphylococcus aureus .  Formulasi  1,  2,  dan  3  mampu  menurunkan  jumlah  koloni  bakteri Staphylococcus aureus . Untuk menguji lebih lanjut pada formulasi spray hand sanitizer kombinasi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis memiliki aktivitas antimikroba pada bakteri total, maka dilakukan pengujian uji daya antiseptik.
Pengamatan  dilakukan  suhu  ruang  37 o C  untuk  melihat  warna,  bentuk,  bau, dan pH. Hasil dari penelitian ini dapat ditunjukkan pada tabel 3 dan 4.
Tabel 3. Nilai  Uji  Karakteristik  Fisik  Pada  Formulasi Spray  Hand  Sanitizer Kombinasi
Ekstrak Daun Kemangi dan Daun Jeruk Nipis Formulasi Kriteria Warna Bentuk Bau 1 Hijau kehitaman Liquid Ekstrak kemangi 2 Hijau kehitaman Liquid Ekstrak kemangi 3 Hijau kehitaman Liquid Ekstrak kemangi K + Bening Liquid Alkohol
Tabel 4 . Nilai  Uji  Karakteristik  Kimia  Pada  Formulasi Spray  Hand  Sanitizer Kombinasi Ekstrak Daun Kemangi dan Daun Jeruk Nipis Formulasi pH 1 6 2 5 3 5 K + 5 Keterangan: Formulasi 1 : Formulasi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis dengan perbandingan 1:2 Formulasi 2 : Formulasi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis dengan perbandingan 2:1 Formulasi 3 : Formulasi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis dengan perbandingan 2:2 K+

## : Spray hand sanitizer komersil
Dari  hasil  penelitian  sebelumnya  mengenai  daya  antibakteri,  hasil  skrining fitokimia  ekstrak  daun  kemangi  dan  skrining  fitokimia  ekstrak  daun  jeruk  nipis dengan  menggunakan  pelarut  etanol  96%  diketahui  bahwa  adanya  kandungan senyawa-senyawa  kimia  didalamnya,  antara  lain  alkaloid,  flavonoid,  fenol,  tannin, terpenoid, steroid, triterpenoid, dan saponin (Khalil, 2013; Zage et al., 2018; Asngad et al., 2018). Senyawa-senyawa dalam  daun kemangi dan daun jeruk nipis memiliki kemampuan dalam menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus Peranan  dan  fungsi  senyawa-senyawa  yang  terkandung  dalam  ekstrak  daun kemangi  dan  daun  jeruk  adalah  sebagai  berikut.  Alkaloid  adalah  senyawa  yang memiliki  gugus  basa  yang  apabila  berkontak  dengan  bakteri  akan  bereaksi  dengan asam  amino  penyusun  dinding  sel  bakteri  dan  DNA  bakteri  yang  merupakan penyusun utama inti sel (Siregar et al., 2012). Adapun flavonoid merupakan senyawa yang dapat  menghambat sintesis asam nukleat yang peran dalam proses interkelasi atau ikatan hidrogen dengan menumpuk basa pada asam nukleat yang menghambat pembentukan DNA dan RNA (Akib et al., 2019). Senyawa fenol bekerja dengan cara denaturasi protein, mengganggu metabolisme sel dan menyebabkan lisis sel bakteri (Theerenesia  &  Ramadhian,  2019).  Tanin  berfungsi  sebagai  antibakteri  karena memiliki kemampuan membentuk senyawa kompleks dengan protein melalui ikatan
hidrogen, jika terbentuk ikatan hidrogen antara tanin dengan  protein maka  protein akan terdenaturasi sehingga metabolisme bakteri menjadi terganggu (Angelia et al., 2015).  Terpenoid  berfungsi  untuk  menghambat  aktivitas  pertumbuhan  bakteri melalui  mekanisme  denaturasi  protein  bakteri  (Yosephine  et  al.,  2013).  Steroid merusak  membran  sel  bakteri  dengan  meningkatkan  permeabilitas  sel,  sehingga terjadi  kebocoran  sel  yang  diikuti  keluarnya  material  interaseluler.  Saponin menyebabkan  kebocoran  protein  dan  enzim  di  dalam  sel.  Bahan  antimikroba  yang mengganggu membran sitoplasma bersifat bakterisidal (Akib et al., 2019).
Hasil evaluasi uji karakteristik fisik yang tercantum pada tabel 3 menunjukkan pada setiap formulasi spray hand sanitizer kombinasi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk  nipis  berpotensi  sebagai  formula  untuk spray  hand  sanitizer .  Akan  tetapi, formulasi spray hand sanitizer kombinasi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis memiliki  kelemahan  dari  sisi  warna  yang  terlalu  pekat.  Sehingga  warna  yang dihasilkan  pada  setiap  formulasi spray  hand  sanitizer kombinasi  ekstrak  daun kemangi dan daun jeruk nipis adalah berwarna hijau kehitaman. Untuk itu diperlukan proses ekstraksi bertingkat sehingga dihasilkan  ekstrak yang lebih jernih. Bau khas pada setiap formulasi spray hand sanitizer kombinasi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis adalah bau khas dari ekstrak daun kemangi. Bentuk pada setiap formulasi spray  hand  sanitizer kombinasi  ekstrak  daun  kemangi  dan  daun  jeruk  nipis  adalah bentuk  cair.  Hal  tersebut  sesuai  dengan  hasil  ditentukan,  yaitu  bentuk spray  hand sanitizer.
Rentang pesyaratan nilai pH sediaan gel yang memenuhi persyaratan SNI No. 06-2588 yaitu 4,5-6,5. Menurut Titaley dkk (2014), kondisi sediaan dengan pH yang sangat rendah mengakibatkan kulit menjadi iritasi, sedangkan pada kondisi pH yang sangat tinggi mengakibatkan  kulit tangan menjadi bersisik  (Titaley et al., 2014). Uji pH  dilakukan  dengan  mengukur  pH  pada  formulasi spray  hand  sanitizer kombinasi ekstrak  daun  kemangi  dan  daun  jeruk  nipis  menggunakan  kertas  pH  (Putri  et  al., 2019).  Berdasarkan  hasil  penelitian  tersebut,  pH  yang  dihasilkan  oleh  formulasi  1 (ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis dengan perbandingan 1:2), formulasi 2 (ekstrak  daun  kemangi  ekstrak  daun  kemangi  dan  daun  jeruk  nipis  dengan perbandingan  2:1),  dan  formulasi  3  (ekstrak  daun  kemangi  dan  daun  jeruk  nipis dengan perbandingan 2:2) sesuai dengan standar yang ditentukan.
Hasil  uji  daya  antiseptik  pada  formulasi spray  hand  sanitizer kombinasi  dari ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis dapat menurunkan jumlah koloni bakteri total pada telapak tangan. Hal tersebut dapat dilihat pada tabel 5.
Tabel 5 .  Hasil  Uji  Daya  Antiseptik  terhadap  Pertumbuhan  Jumlah  Koloni  Bakteri  Total pada  Telapak  Tangan  dengan  Menggunakan  Formulasi Spray  Hand  Sanitizer Kombinasi Ekstrak Daun Kemangi dan Daun Jeruk Nipis Formulasi Jumlah Koloni (CFU) 1 102 2 39 3 7 K + 0 K- TBUD Keterangan: Formulasi 1 : Formulasi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis dengan perbandingan 1:2 Formulasi 2 : Formulasi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis dengan perbandingan 2:1 Formulasi 3 : Formulasi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis dengan perbandingan 2:2 K+ : Spray hand sanitizer komersil
K- : Aquades
Pada  tabel  ke-5,  hasil  uji  daya  antiseptik  formula  pada  formulasi  3  (ekstrak daun  kemangi  dan  daun  jeruk  nipis  dengan  perbandingan  2:2)  lebih  efektif dibandingkan dengan formulasi 1 (ekstrak daun kemangi ekstrak daun kemangi dan daun jeruk nipis dengan perbandingan 1:2), formulasi 2 (ekstrak daun kemangi dan daun  jeruk  nipis  dengan  perbandingan  2:1),  kontrol  positif  ( spray  hand  sanitizer komersil),  dan  kontrol  negatif.  Hal  tersebut  sesuai  dengan  pernyataan  Rini  dan Nugraheni (2018), yang menyatakan bahwa formula spray hand sanitizer yang efektif adalag  formula  yang  memiliki  daya  bunuh  dan  daya  hambat  yang  terbaik  pada Staphylococcus  aureus. Formulasi  3  dengan  (ekstrak  daun  kemangi  dan  daun  jeruk nipis  dengan  perbandingan  2:2)  mampu  menurunkan  jumlah  koloni  bakteri  total pada  telapak  tangan  dibandingkan  dengan  formulasi  1  dan  2.    Hasil  uji  daya antiseptik kontrol negatif pada telapak tangan menunjukkan bahwa bakteri total yang tumbuh  pada  telapak  tangan  sangat  banyak.  Sedangkan  pada  perlakuan spray  hand sanitizer komersil  mampu  mengurangi  jumlah  bakteri  total  pada  telapak  tangan. Akan tetapi, penggunaan spray hand sanitizer komersil berbahaya karena berpotensi membunuh  semua  bakteri  total  pada  telapak  tangan  yang  merupakan  flora  normal. Sehingga  dapat  diketahui  bahwa  formulasi spray  hand  sanitizer dengan  kombinasi ekstrak  daun  kemangi  dan  daun  jeruk  nipis memiliki  kemampuan  menurunkan jumlah  bakteri  lebih  besar  dibandingkan spray  hand  sanitizer komersil.  Sehingga dapat  diketahui  bahwa  formulasi  3 spray  hand  sanitizer dengan  kombinasi  ekstrak daun  kemangi  dan  daun  jeruk  nipis memiliki  kemampuan  menurunkan  jumlah bakteri lebih besar dibandingkan spray hand sanitizer komersil.

## SIMPULAN
Kesimpulan  dalam  penelitian  ini  adalah  formulasi  3  merupakan  formulasi yang  terbaik  dalam  menurunkan  jumlah  koloni  bakteri Staphylococcus  aureus dan jumlah  bakteri  total  pada  telapak  tangan  dibandingkan  dengan  formulasi  1  dan formulasi 2.

## REFERENSI
Afrina,  S.,  Chismirina,  dan  Magistra,  R.  Y.  (2016).  Konsentrasi  Hambat  dan  Bunuh Minimum  Ekstrak  Daun  Jeruk  Nipis  ( Citrus  aurantifolia )  terhadap Aggregatibacter  actinomycetemcomitans Secara In  Vitro . Cakradonya  Dent . J , 8(1), 68-76. http://www.jurnal.unsyiah.ac.id/CDJ/article/view/10467/8245. Akib, N. I., Wulandari, I. W., Suryani, dan Hanari. (2019). Formulasi Gel Hand Sanitizer Antibakteri Kombinasi Ekstrak Rumput Laut Eucheuma spinosum dan Eucheuma cotonii Asal Kepulauan Wakatobi Sulawesi Tenggara. J. Fish Protech , 2(2), 180- 189. http://dx.doi.org/10.33772/jfp.v2i2.9232.
Angelia,  M.,  Turnip,  M.,  dan  Khotimah,  S.  (2015).  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Etanol  Daun  Kemangi  ( Ocimum  sanctum L.)  terhadap  Pertumbuhan  Bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus . Jurnal  Protobiont ,  4(1),  184-189. http://dx.doi.org/10.26418/protobiont.v4i1.9768.
Anindhita, M. A. dan Oktaviana, N. (2020). Formulasi Spray Gel Ekstrak Daun Pandan Wangi    sebagai  Antiseptik  Tangan. Jurnal  Ilmiah  Farmasi , 9(1),  14-21. http://dx.doi.org/10.30591/pjif.v9i1.1503.
Asngad, A., Bagas, R. A., dan Nopitasari. (2018). Kualitas Gel Pembersih Tangan ( Hand Sanitizer )  dari  Ekstrak  Batang  Pisang  Dengan  Penambahan  Alkohol,  Triklosan dan  Gliserin  Yang  Berbeda  Dosisnya. Bioeksperimen ,  4(2),  61-20. https://doi.org/10.23917/bioeksperimen.v4i2.6888.
Barus,  L.  dan  Sutopo,  A.  (2019).  Pemanfaatan  Ekstrak  Daun  Kemangi (Ocimum sanctum) sebagai  Repelan  Lalat  Rumah  ( Musca  domestica ). Jurnal  Kesehatan . 10(3),
329-336. https://www.researchgate.net/publication/338603600_Pemanfaatan_Ekstrak_ Daun_Kemangi_Ocimum_sanctum_sebagai_Repelan_Lalat_Rumah_Musca_domes tica.
Cahyani,  N.  M.  E.  (2014).  Daun  Kemangi  ( Ocimum  cannum )  sebagai  Alternatif Pembuatan Hand  Sanitizer . Jurnal  Kesehatan  Masyarakat ,  9(2),  136-142. https://doi.org/10.15294/kemas.v9i2.2843.
Fitriana, Y. A. N., Fatimah, V. A. N., dan Fitri, A. S. (2019). Aktivitas Antibakteri Daun Sirih: Uji Ekstrak KHM (Kadar Hambat Minimum) dan KBM (Kadar Bakterisidal Minimum). SAINTEKS ,
16(2), 101-108.
http://dx.doi.org/10.30595/sainteks.v16i2.7126.
Khalil,  A.  (2013).  Antimicrobial  Activity  of  Ethanolic  Extracts  of Ocimum  basilicum Leaf From Saudi Arabia.
Biotechnology , 12(1), 61-64. https://dx.doi.org/10.3923/biotech.2013.61.64.
Martono,  C.  dan  Suharyani,  I.  (2018).  Formulasi  Sediaan Spray  Gel Antiseptik  dari Ekstrak  Etanol  Lidah  Buaya (Aloe  vera) . Jurnal  Farmasi  Muhammadiyah Kuningan , 3(1), 29-37. http://ojs.stikes-
muhammadiyahku.ac.id/index.php/jurnalfarmaku/article/view/55/19.
Meiliawati,  N.  A.  A.,  Pramanti  N.,  Amalia,  L.  Z.,  Salsabila,  G.  A.  F.,  Puspito,  R.  I.,  dan Retnoningrum.  (2018).  Hand  Sanitizer  Ekstrak  Daun  Trembesi  ( Albizia  saman (Jacq.) Merr) Aroma Anggur Sebagai Antiseptik. Jurnal Kedokteran Diponegoro , 7(1), 359-365. https://doi.org/10.14710/dmj.v7i1.19394. Mutammima,  N.  2017.    Uji  Aktivitas  Antijamur,  Penentuan  Konsentrasi  Hambat Minimum  (KHM)  dan  Konsentrasi  Bunuh  Minimum  (KBM)  serta  Klt- Bioautografi  Ekstrak  Etanol  Daun  Plethekan  ( Ruellia  tuberosa L.)  terhadap Candida  albicans .  Skripsi.  Jurusan  Kimia  Fakultas  Sains  dan  Teknologi Universitas
Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang. https://core.ac.uk/download/155775587.pdf
Nuzulia,  R.  dan  Santoso,  O.  (2017).  Pengaruh  Ekstrak  Daun  Kemangi  ( Ocimum basilicum L.)  Pada  Berbagai  Konsentrasi  Terhadap  Viabilitas  Bakteri Streptococcus  mutans : Studi  Pada  Mahasiswa  Fakultas  Kedokteran  Universitas Diponegoro. Jurnal
Kedokteran
Diponegoro , 6(4), 1565-1571. https://doi.org/10.14710/dmj.v6i4.18386.
Priyono. (2016). Metode Penelitian Kuantitatif . Surabaya: Zifatama Publishing. Putri,  M.  A.,  Saputra,  M.  E.,  Amanah,  I.  N.,  dan  Fabiani,  V.  A.  (2019).  Uji  Sifat  Fisik Sediaan  Gel  Hand  Sanitizer  Ekstrak  Daun  Pucuk  Idat  ( Cratoxylum  glaucum ). Seminar  Nasional:  Prosiding  Seminar  Nasional  Penelitian  &  Pengabdian  Pada Masyarakat, 3, 39-41. https://doi.org/10.33019/snppm.v3i0.1309.
Reddy,  L.,  Jalli,  D.,  Jose,  B.,  and  Gopu,  S.  (2012).  Evaluation  of  Antibacterial  & Antioxidant  Activities  of  The  Leaf  Essential  Oil  &  Leaf  Extracts  Of Citrus aurantifolia . Asian  Journal  of  Biochemical  and  Pharmaceutical  Research ,  2(2), 346-354. Doi: 10.30492/ijcce.2020.38253.
Rini, E.P. dan Nugraheni, E.R. 2018. Uji Daya Hambat Berbagai Merek Hand Sanitizer Gel terhadap Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus . Journal  of  Pharmaceutical  Science  and  Clinical  Research ,  01,  18-26.  DOI: 10.20961/jpscr.v3i1.15380.
Rohmani,  S.  dan  Kuncoro,  M.  A.  A.  (2019).  Uji  Stabilitas  dan  Aktivitas  Gel Hand Sanitizer Ekstrak Daun Kemangi. Journal of Pharmaceutical Science and Clinical Research , 1, 16-28. https://doi.org/10.20961/jpscr.v4i1.27212. Sanilife Solutions. (2021). Sanilife Hand Sanitizer . https://sanilifesolutions.com/liquid-hand-sanitizer-vs-gel/. Diakses pada tanggal 18 Januari 2021, pk. 10.01 wit.
Santoso,  J.  dan  Riyanta,  A.  B.  (2019).  Aktivitas  Antibakteri  Sediaan Foot  Sanitizer Spray yang Mengandung Ekstrak Biji Kopi dan Jahe . Jurnal Ilmiah Farmasi , 8(1), 47-50. http://dx.doi.org/10.30591/pjif.v8i1.1300.
Shu, M. (2013). Formulasi Sediaan Gel Hand Sanitizer Dengan Bahan Aktif Triklosan 0,5% Dan 1%. Calyptra: Jurnal Ilmiah Mahasiswa Universitas Surabaya , 2(1), 1- 14. https://journal.ubaya.ac.id/index.php/jimus/article/view/173
Siregar,  A.  F.,  Sabdono,  A.,  dan  Pringgenies,  D.  (2012).  Potensi  Antibakteri  Ekstrak Rumput  Laut  Terhadap  Bakteri  Penyakit  Kulit Pseudomonas aeruginosa , Staphylococcus epidermidis, Dan Micrococcus luteus . Journal of Marine Research , 1(2), 152-160. https://doi.org/10.14710/jmr.v1i2.2032.
Thaddeus,  N.  I.,  Francis,  E.  C.,  Jane,  O.  O.,  Obumneme,  A.  C.,  and  Okechukwu,  E.C. (2018).  Effects  of  Some  Common  Additives  On  The  Antimicrobial  Activities  Of Alcohol-Based Hand Sanitizer. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine , 11(3), 222-226. DOI: 10.4103/1995-7645.228437.
Titaley,  S.,  Fatimawali,  dan  Lolo,  W.A.  (2014).  Formulasi  dan  Uji  Efektifitas  Sediaan Gel  Ekstrak  Etanol  Daun  Mangrove  Api-Api  ( Avicennia  marina )  Sebagai Antiseptik Tangan.
Jurnal Ilmiah Farmasi , 3(2), 99-106. https://doi.org/10.35799/pha.3.2014.4781.
Widarta,  W.  R.  dan  Wiadnyani,  S.  (2019).  Pengaruh  Metode  Pengeringan  Terhadap Aktivitas Antioksidan Daun Alpukat. Jurnal Aplikasi Teknologi Pangan , 8(3), 80- 85. https://doi.org/10.17728/jatp.3361.
Yosephine,  A.  D.,  Wulanjati,  M.  P.,  Saifullah,  T.  N.,  dan  Astuti,  P.  (2013).  Formulasi Mouthwash Minyak  Atsiri  Daun  Kemangi  ( Ocimum  basilicum L.)  Serta  Uji Antibakteri  Dan  Antibiofilm  Terhadap  Bakteri Streptococcus  mutans Secara In Vitro. Trad. Med. J ., 18(2),  95-102. https://doi.org/10.22146/tradmedj.8036.
Zage,  A.  U.,  Tajo,  S.,  and  Ali,  M.  (2018).  Antibacterial  Activity  of Citrus  aurantifolia Leaves  Extracts  Against  Some  Enteric  Bacteria  of  Public  Health  Importance.
Modern Approaches on Material
Science , 1(2), 33-38. http://dx.doi.org/10.32474/MAMS.2018.01.000107.
Zen,  N.  A.  M.,  Queljoe,  E.D.,  dan  Singkoh,  M.  (2015).  Uji  Bioaktivitas  Ekstrak Padina Australis Dari  Pesisir  Pantai  Molas  Sulawesi  Utara  terhadap  Bakteri Staphylococcus  epidermidis . Jurnal  Pesisir  dan  Laut  Tropis ,  2(1),  34-40. https://doi.org/10.35800/jplt.3.2.2015.10451.