Perbandingan Antibakteri dari Ekstrak Etanol dan Fraksi Ekstrak Etanol Tanaman Ceguk ( Quisqualis indica L.)
Terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli
Comparison of Antibacterial Activity of the Ethanol Extract and Fraction of  the Ethanol Extract of Ceguk Plant (Quisqualis indica L.) on Staphylococcus aureus and Escherichia coli
Ceguk  is  a  plant  which  come  from  Myanmar  and  Malaysia.  It  has  some  pharmacological  effects  such  as Immunomodulator,  antihyperlipidemic,  antipyretic,  antioxidant  and  antibacterial.  Antibacterial  activity  had been examined before at the flower. This study was aimed to compare antibacterial activity from extract and its  fraction  (n-hexane,  ethyl  acetate,  and  water)  on  Staphylococcus  aureus  and  Escherichia  coli.  Selected active  fraction  was  determined  from  contact  bioautography  method.  Antibacterial  activity  was  examined using MIC (Minimum Inhibition Concentration) and MBC (Minimum Bactericidal Concentration) with microdilution assay method and triphenyl tetrazolium chloride 1% as visual indicator. Meanwhile selected active fraction was determined by qualitative TLC method using spray reagent. Extract and n-hexane fraction inhibits growth of  Gram  positive  bacteria  Staphylococcus  aureus  with  MIC  value  of  n-hexane  fraction  was  500  ppm  and 1000  ppm  for  extract.  Extract  and  n-hexane  fraction  were  not  active  to  kill  Staphylococcus  aureus  and Escherichia coli. Respectively chemical group of selected active fraction that found in n-hexane fraction was triterpenoid groups with Rf  0,63.
Keywords: antibacteria, Ceguk, fraction, minimum inhibition concentration, minimum bactericidal concentration.
Sepvan Valeri (a) , Lisa Soegianto (a)* , Sumi Wijaya (a)
(a) Fakultas Farmasi, Universitas Katolik Widya Mandala , Surabaya , Indonesia
Tanaman Ceguk merupakan tanaman yang berasal dari Myanmar dan Malaysia. Tanaman ini memiliki beberapa efek farmakologi  antara  lain immunomodulator , antihiperlipidemia, antipiretik, antioksidan  dan  antibakteri. Aktivitas  antibakteri  sebelumnya  telah  diteliti  pada  bagian  bunga.  Pada  penelitian  ini  ekstrak  etanol  dan fraksi ( n -heksana, etil asetat dan air) dari daun tanaman ceguk diuji aktivitas antibakterinya terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli . Fraksi aktif terpilih ditentukan dengan bioautografi kontak. Pengujian aktivitas antibakteri meliputi KHM (Kadar Hambat Minimum) dan KBM (Kadar Bunuh Minimum) dilakukan dengan metode mikrodilusi dan trifenil tetrazolium klorida 1% sebagai indikator visual. Golongan senyawa fraksi aktif ditentukan dengan uji kualitatif KLT dengan menggunakan penampak noda. Ekstrak dan fraksi n -heksana tanaman ini menghambat pertumbuhan pada bakteri Gram positif yaitu Staphylococcus aureus dengan nilai KHM 500 ppm pada fraksi n -heksana dan 1000 ppm untuk ekstrak. Ekstrak dan fraksi n -heksana tanaman ini tidak mampu membunuh Staphylococcus aureus dan Escherichia coli . Berdasarkan uji KLT, golongan senyawa fraksi aktif pada fraksi n -heksana yang diduga memiliki potensi sebagai antibakteri adalah golongan triterpenoid dengan harga Rf 0,63.
Kata kunci : antibakteri, ceguk, fraksi, kadar hambat minimum, kadar bunuh minimum.
Perbandingan Antibakteri dari Ekstrak Etanol dan Fraksi Ekstrak Etanol Tanaman Ceguk ( Quisqualis indica L.) Terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli

## PENDAHULUAN
Salah satu tanaman yang dapat digunakan sebagai  salah  satu  sumber  senyawa  obat  adalah tanaman ceguk. Tanaman ceguk ( Quisqualis indica L.)  merupakan tanaman asli dari Myanmar dan Malaysia, jarang ditemui di Indonesia dan meru- pakan famili Combretaceae (Bairagi et al. , 2012). Aktivitas farmakologi yang terdapat dalam ekstrak tanaman  ceguk  antara  lain immunomodulator , antihiperlipidemia,  antipiretik,  antioksidan  dan antibakteri.  Aktivitas immunomodulator dalam ekstrak bunga hidroalkohol pada tikus menunjukan adanya peningkatan aktivitas fagositosis, peningkatan sekresi sitokin dan peningkatan jumlah sel darah putih  (Yadav , Mohanty  and  Katsure , 2011).  Ak- tivitas antihiperlipidemia dibuktikan dengan pem- berian  ekstrak  metanol  dari  bagian  aerial  tana- man ceguk pada hewan coba hiperlipidemia yang hasilnya hampir sama dengan pemberian standar (Atorvastatin) (Sahu, 2012).
Aktivitas  antipiretik  ditunjukkan  dengan pemberian ekstrak metanol daun ceguk pada tikus yang dibuat demam dengan penginduksian suspensi Brewer yeast (20% b/v) pada daerah dorsum (Singh et al. , 2010). Aktivitas antioksidan, terbukti pada uji secara in vitro dengan menghitung jumlah fenol total, aktivitas radikal bebas dan aktivitas reduksi. Pada penelitian ini ekstrak metanol hasil maserasi difraksinasi  dengan  pelarut n -heksana,  karbon tetraklorida dan kloroform. Fraksi kloroform memiliki aktivitas  antioksidan  tinggi  yang  terlihat  pada pengukuran fenol total dan aktivitas reduksi (Kaisar et  al. ,  2009).  Aktivitas  antibakteri  pada  ekstrak bunga hasil ekstraksi dengan metanol dibuktikan dengan  metode  difusi  agar  sumuran,  dimana ekstrak bunga ceguk menghambat pertumbuhan bakteri Gram negatif (Pseudomonas aeruginosa dan Escherichia coli) serta Gram positif (Staphy - lococcus aureus dan Bacillus subtilis). Daerah hambat pertumbuhan terhadap bakteri di atas ditunjukkan dengan pemberian ekstrak metanol bunga ceguk pada rentang konsentrasi 10-100 µg/ml (Kiruthika et  al., 2011).  Pada  penelitian  ini  digunakan bagian daun dari tanaman ceguk untuk diuji ak- tivitas antibakteri antara ekstrak dan fraksi.

## METODE PENELITIAN

## Alat
Alat-alat gelas, seperangkat alat uji antibakteri, ro- tary vacuum evaporator (Heidolph, Germany).

## Bahan
Daun Ceguk, Etanol 70%, metanol, n -heksana, etil asetat, akuades, KLT silika gel 60 F 254 (Merck KGaA, Germany), asam formiat, tetrazolium klorida, etanol 96%, NaCl, MHA, MHB, kultur bakteri Staphylo- coccus aureus ATCC 25922, dan Escherichia coli ATCC 25923.

## Tahapan Penelitian
Penelitian  dilakukan  dari  bulan  Agustus  2013 sampai  Desember  2013  di  Fakultas  Farmasi, Universitas Katolik Widya Mandala Surabaya.

## Cara Penyiapan Sampel Simplisia
Daun Ceguk diperoleh dari Materia Medika Malang, kemudian dicuci dan dikeringkan dengan oven ± 50°C. Setelah dikeringkan kemudian dihaluskan. Sehingga dihasilkan serbuk simplisia kering daun Ceguk sebanyak 600 g.

## Standardisasi Simplisia dan Ekstrak
Standardisasi  simplisia  yang  dilakukan  antara lain, organoleptis, penetapan kadar air, kadar abu, kadar  sari  larut  air,  dan  kadar  sari  larut  etanol. Untuk standarisasi ekstrak meliputi organoleptis, kadar air dan kadar abu sesuai dengan prosedur MMI (Departemen Kesehatan RI, 1977).

## Ekstraksi dan Fraksinasi
Metode  ekstraksi  yang  digunakan  adalah  rema- serasi selama 3 hari dimana serbuk simplisia kering daun Ceguk direndam dengan pelarut etanol 70% (1:7). Kemudian hasil ekstraksi tersebut dipekatkan menggunakan Rotary vaccum evaporator dengan suhu  di  bawah  50 o C  hingga  dihasilkan  ekstrak kental. Ekstrak kental diencerkan dengan metanol 10%, kemudian difraksinasi cair-cair secara ber- turut-turut dengan pelarut n -heksana, etil asetat dan air.

## Bioautografi
Bioautografi kontak digunakan dalam penelitian kali ini. Plat KLT ditotolkan dengan ekstrak, fraksi n -heksana, fraksi etil asetat dan fraksi air masing- masing  5000  ppm.  Plat  KLT  kemudian  dieluasi dengan fase gerak etanol : etil asetat : asam formiat (6:4:0,2). Konsentrasi bakteri yang digunakan 10 6 CFU/ml diinokulasikan pada lempeng agar MHA, kemudian diprainkubasi selama 1,5-2 jam (Naka- mura et al ., 1999). Plat KLT yang telah dieluasi, kemudian ditempelkan pada lempeng agar yang telah  diinokulasikan  bakteri.  Waktu  kontak  plat KLT dan lempeng agar selama satu jam, kemudian diinkubasi selama 24 jam, 37°C. Daerah yang jernih dari noda plat KLT diambil sebagai fraksi aktif.

## Penentuan Golongan Senyawa Fraksi Aktif
Ekstrak dan fraksi ( n -heksana, etil asetat dan air) dengan konsentrasi 5000 ppm ditotolkan 10 µl pada plat  KLT,  kemudian  dieluasi  dengan  fase  gerak etanol : etil asetat : asam formiat (6:4:0,2). Penentuan golongan senyawa aktif meliputi polifenol/ flavo- noid, alkaloid dan terpen/steroid. Maka digunakan beberapa penampak noda antara lain FeCl 3 untuk polifenol/ flavonoid, Dragendorff untuk alkaloid dan Liebermann Burchard untuk terpen/ steroid (Sarker, Latif and Gray, 2006).

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Pengujian aktivitas antibakteri meliputi KHM dan KBM. Pada penentuan KHM digunakan metode mikrodilusi. Ekstrak dan fraksi aktif terpilih dengan konsentrasi 2-1000 ppm dimasukkan 100 µl pada 96-sumuran mikroplate. Kemudian ke dalam mikro- plate ditambahkan 100 µl konsentrasi bakteri 10 5 CFU/ml. Hasil pengujian KHM ini diamati dengan penambahan indikator visual yaitu Trifenil Tetra- zolium  klorida  1%,  jika  ada  pertumbuhan  maka akan ditemui perubahan warna menjadi merah
TABEL 1. Hasil Standarisasi Simplisia Daun  Ceguk
(Departemen Kesesehatan  RI, 1989)
TABEL 2. Hasil Standardisasi Ekstrak Daun Ceguk
(Isnawati, Raini, dan Alegantina S, 2006)
TABEL 3 . Hasil Skrining Kualitatif Fitokimia Simplisia dan
Ekstrak (Varsha et.al. , 2013)
(A) (B)
GAMBAR  1. Hasil pengujian bioautografi pada Staphylococcus aureus (A) dan Escherichia coli (B) dengan menggunakan fase diam KLT silika gel GF 254 pada pengamatan dan fase gerak etanol:etil asetat:asam formiat (6:4:0,2) pada konsentrasi 5000 ppm.
Keterangan : 1: ekstrak daun ceguk, 2: fraksi n -heksana daun ceguk, 3: fraksi etil asetat daun ceguk, 4: fraksi air daun ceguk.
atau merah muda.  Pengujian KBM diperoleh dari hasil  uji  KHM  yang  tidak  menunjukan  adanya pertumbuhan (Basri, Tan and Zin, 2012).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penetapan  standardisasi  dilakukan  pada simplisia dan ekstrak. Penetapan standardisasi pada simplisia meliputi organoleptis, kadar abu, kadar air, kadar sari larut air, dan kadar sari larut etanol dapat dilihat pada Tabel  1 . Penetapan standard- isasi ekstrak meliputi organoleptis, kadar abu, dan kadar air dapat dilihat pada Tabel 2 .
Skrining kualitatif fitokimia dilakukan pula pada simplisia dan ekstrak. Pada simplisia mau- pun ekstrak diperoleh hasil bahwa simplisia dan ekstrak  mengandung  golongan  senyawa  tanin, flavonoid, saponin dan alkaloid  ( Tabel  3 ).  Hasil ekstraksi memiliki rendemen sebesar 10,02% dari
600 gram serbuk kering simplisia daun Ceguk yaitu 60,11 gram. Penetapan standardisasi ekstrak meli- puti pemeriksaan organoleptis, pemeriksaan ka- dar air dan  kadar abu. Pada pemeriksaan  kadar air  diperoleh  kadar  air  yang  cukup  tinggi  yaitu 12,06%. Hasil yang cukup tinggi ini dapat disim- pulkan bahwa ekstrak ini masih terdapat banyak air yang dikarenakan penguapan pelarut yang tidak sempurna.
Hasil pengujian bioautografi pada Staphy- lococcus aureus dan Escherichia coli menunjukan bahwa pada fraksi heksana dan etil asetat memiliki aktivitas antibakteri yang ditandai dengan adanya daerah jernih. Fraksi heksana memiliki aktivitas antibakteri yang lebih tinggi dibandingkan fraksi etil asetat karena daerah hambatan pertumbuhan bakteri pada fraksi heksana menunjukkan intensitas kejernihan secara visual yang lebih tinggi sehingga fraksi aktif yang terpilih untuk pengujian  KHM dan KBM yaitu fraksi heksana ( Gambar 1 ). Pada  penentuan  golongan  senyawa  fraksi aktif  (fraksi  heksana)  yang  dipilih  berdasarkan hasil dari bioautografi. Rf yang memiliki aktivitas antibakteri yaitu pada 0,63-0,69. Penyemprotan dengan  penampak  noda  Liebermann-Burchard memberikan  hasil  yang  positif  yang  ditandai dengan warna noda merah muda ( Gambar  2 ). Hasil  yang  positif  dengan  penampak  noda Liebermann-Burchard dapat disimpulkan bahwa golongan senyawa fraksi aktif yaitu dari golongan triterpenoid. Golongan triterpenoid bekerja sebagai antibakteri dengan mekanisme pengrusakan pada membran  sel  bakteri.  Fraksi  dan  ekstrak  yang tidak menghambat pertumbuhan bakteri ini yang ditandai  dengan  perubahan  warna  merah  atau merah muda setelah penambahan larutan trifenil tetrazolium klorida karena terjadi pembentukan formazan.
Formazan  dibentuk  karena  terjadi  reduksi dehidrogenase dari sel yang masih hidup. Ekstrak maupun fraksi n-heksana tidak memiliki aktivitas antibakteri  pada Escherichia  coli .  Hasil  KHM menunjukkan  pada  konsentrasi  minimum  dari fraksi n -heksana yang menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus  aureus yaitu  500  ppm ( Tabel 4 ). Pada pengujian dengan Escherichia coli , tidak aktif  menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Hasil pengujian KBM diperoleh dengan menginokulasikan hasil  uji  KHM  yang  tidak  menunjukkan  adanya pertumbuhan bakteri. Pengujian KBM hanya di- lakukan pada Staphylococcus aureus karena pada uji KHM terdapat konsentrasi minimal yang meng- hambat  pertumbuhan  bakteri  yaitu  pada  500- 1000 ppm. Hasil pengujian KBM Staphylococcus aureus pada  konsentrasi  500-1000  ppm  tidak aktif membunuh bakteri, sedangkan pada Escherichia coli tidak  dilakukan  uji  KBM  karena  pada  uji KHM masih menunjukkan adanya pertumbuhan bakteri.
Dari  uji  KBM  didapat  pada  konsentrasi 500-1000  ppm  dari  ekstrak  maupun  fraksi n - heksana  daun  Ceguk  tidak  membunuh  bakteri Staphylococcus aureus.
Parameter Hasil Keterangan Organoleptis (bau, bentuk, dan warna) Bau khas, serbuk kering, dan berwarna hijau tua - Kadar Abu 11,54% ± 0,31 Tidak memenuhi persyaratan Kadar Air 8,69%  ± 0,05 Memenuhi persyaratan Kadar Sari Larut Air 14,42% ± 1,06 Memenuhi persyaratan Kadar Sari larut Etanol 7,32% ± 0,63 Tidak memenuhi persyaratan Parameter Hasil Keterangan Organoleptis (bau, bentuk, dan warna) Bau khas, kental, dan hitam - Kadar Abu 6,08% ± 0,24 Memenuhi persyaratan Kadar Air 60,03% ± 0,6 Tidak memenuhi persyaratan Skrining Pereaksi Keterangan Tanin FeCl 3 + Flavonoid NaOH   0,1 N + Alkaloid Dragendroff + Saponin Kocok kuat +
TABEL 4 . Hasil Uji KHM (Kadar Hambat Minimum) Ekstrak Daun Ceguk dan Fraksi n -heksana Ekstrak Etanol Daun Ceguk pada Staphylococcus aureus dan Escherichia coli
GAMBAR  2. Profil  KLT  dengan  fase  diam  silika  gel  GF 254 pada  penyemprotan  dengan  pereaksi  Liebermann-Burchard dengan fase gerak etanol : etil asetat : asam formiat (6:4:0,2).
Keterangan : 1 : ekstrak daun ceguk, 2 : fraksi n -heksana daun ceguk, 3 : fraksi etil asetat daun ceguk, 4 : fraksi air daun ceguk.

## KESIMPULAN
Fraksi aktif (fraksi n -heksana) daun Ceguk memiliki aktivitas yang lebih baik sebagai antibakteri daripada ekstrak daun Ceguk pada bakteri Staphylococcus aureus dengan KHM = 500 ppm dan KBM di atas 1000  ppm.  Sedangkan  ekstrak  maupun  fraksi daun Ceguk tidak aktif menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli . Golongan senyawa fraksi aktif yang diduga aktif sebagai antibakteri adalah yaitu golongan triterpenoid.

## DAFTAR PUSTAKA
Bairagi  VA,  Shinde  PR,  Senthikumar  KL,  dan  Shandu  N, 2012,  Pharmacognostic  and  Phytochemical  Investigation  of Leaves and Flowers of Quisqualis indica Linn., Int  J  Pharm Biomed Sci, 3(1), 13-9.
Basri FD, Tan LS, Shafiei Z, dan Zin NM, 2012, In Vitro Anti- bacterial Activity of Galls of Quercus infectoria Olivier Against Oral Pathogens, J  Evid  Based  Complementary  Altern Med , 1-7.
Departemen Kesehatan RI, 1977, Materia Medika Indonesia , Jilid I, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, 135.
Departemen Kesehatan RI, 1989, Materia  Medika  Indonesia , Jilid V, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, 485.
Isnawati  A,  Raini, M, dan Alegantina,  S,  2006, Standarisasi Simplisia dan Ekstrak Etanol Daun Sembung ( Bluema balsam- ifera L.) dari Tiga Tempat Tumbuh, Media  Litbang  Kese- hatan XVI , (2), 1-6.
Kaisar,  Islam  MR,  Rahman  MS,  Hossain  MK,  dan  Rashid MA,  2009, Total Phenolic Content, Free Radical Scavenging Activity and Reducing Power of Quisqualis indica Linn., Dhaka  Univ J Pharm Sci , 8(2), 173-175.
Kiruthika KA, Jaisheeba AA, dan Sornaraj R, 2011, Evaluation of  Antibacterial  Activity  of  Some  Selected  Angiosperm Flower Extract, Int J Chem Tech Res , 3(4), 1945-951.
Nakamura CS et  al., 1999, Antibacterial Activity of Ocimum gratissimum L. Essential Oil, Mem  Inst  Oswaldo  Cruz, Rio de Janeiro , 94(5), 675-78.
Sahu J, 2012, Effect of Quiqualis indica Linn. on Cholesterol Diet  Induced  Hyperlipidemia  in  Wistar  albino  Rats, Int  J Pharm Res Develop , 4(6), 86-94.
Sarker SD,  Latif Z, dan Gray AI, 2006, Natural  Products Isolation , 2 nd ed., Humana Press Inc., Totowa, 31-35, 88-89.
Singh N, Khatri P, Samantha KC, dan Damor, R, 2010, Anti- pyretic  Activity  of  Methanolic Extracts  of  Leaves Quisqualis indica Linn., Int J Pharm Res Develop , 9(11), 122-26.
Varsha  S,  Agrawal  RC,  dan  Sonam  P,  2013,  Phytochemical Screening  and  Determination  of  Antibacterial  and  Antioxi- dant Potential of Glycyrrhiza glabra Root Extract, J  Environ Res and Develop , 7(4a), 1552-1558.
Yadav  Y,  Mohanty  PK,  dan  Kasture  SB,  2011,  Evaluation  of Immunomodulatory  Activity  of  Hydroalcoholic  Extract  of Quiqualis indica Linn. Flower in Wistar Rats, Int  J  Pharm and Life Sci , 2(4), 686-89.
Perbandingan Antibakteri dari Ekstrak Etanol dan Fraksi Ekstrak Etanol Tanaman Ceguk ( Quisqualis indica L.) Terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli
Bakteri Uji Bahan Uji Konsentrasi (µg/ml)
1000 500 250 125 62,5 31,25 16 8 4 2 Staph. aureus Ekstrak - + + + + + + + + + Fraksi heksana - - + + + + + + + + Tetrasiklin - - + + + + + + + +
Kontrol (+) + Kontrol (-) - E. coli Ekstrak + + + + + + + + + + Fraksi heksana + + + + + + + + + + Tetrasiklin - - - - - - - - - - Kontrol (+) + Kontrol (-) -