Potensi Ekstrak Etanol Daun Meniran (Phyllantus niruri L.) sebagai Larvasidal Nyamuk Aedes aegypti
Aedes aegypti Mosquito Potential Larvacidal of Phyllantus niruri L. Leaves Ethanol Extracts
Moh. Lutfi Hasbullah 1 , Yudha Nurdian 2 , Cholis Abrori 3
1 Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran Universitas Jember
2 Laboratorium Parasitologi, Fakultas Kedokteran Universitas Jember
3 Laboratorium Farmakologi, Fakultas Kedokteran Universitas Jember Jalan Kalimantan No.37, Jember, Indonesia 68121 e-mail korespondensi: mlh.040896@gmail.com

## Abstrak
Demam berdarah dengue (DBD) adalah penyakit yang disebabkan oleh virus dengue yang ditularkan oleh  nyamuk  betina Aedes aegypti  dengan  empat  manifestasi  klinis  utama,  yaitu  demam  tinggi, perdarahan, hepatomegali, dan tanda-tanda kegagalan sirkulasi darah. Indonesia dilaporkan sebagai negara  ke-2  dengan  kasus  DBD  terbesar  di  antara  30  negara  wilayah  endemis.  Bubuk  larvasida digunakan  sebagai  salah  satu  pengendali  vektor  virus  dengue.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui pengaruh ekstrak etanol daun meniran ( Phyllantus niruri L.) terhadap kematian nyamuk Aedes aegypti. Penelitian ini menggunakan metode quasi experimental dengan rancangan post test only  controlled  grup  design dengan  1  kelompok  kontrol  positif  ( Temephos ),  1  kelompok  kontrol negatif  (air  ledeng),  dan  5  kelompok  perlakuan  (ekstrak  0,0625%;  0,125%;  0,25%;  0,5%;  dan  1%) masing-masing  20  ekor  larva Aedes  aegypti instar  III.  Hasil  penelitian  kelompok  perlakuan  ekstrak dengan  konsentrasi  0,5%  dan  1%  didapatkan  100%  larva  mati.  Hasil  uji  regresi  linear  didapatkan pengaruh ekstrak daun meniran terhadap kematian larva Ae. aegypti dengan nilai R 2 sebesar 65,2%. Aktivitas larvasida ekstrak etanol daun meniran terhadap larva Ae. aegypti instar III berbanding lurus dengan  konsentrasi  dengan  nilai  LC 50 sebesar  0,174%  dengan  interval  kepercayaan  95%  (0,155- 0,195).
Kata kunci : ekstrak etanol daun meniran, DBD, larva Aedes aegypti

## Abstract
Dengue hemorrhagic fever (DHF) is a disease caused by dengue virus transmitted by Aedes aegypti female  mosquitoes  with  four  major  clinical  manifestations,  such  as  high  fever,  hemorrhage, hepatomegaly, and signs of circulatory failure. Indonesia was reported as the 2nd country with the largest  dengue  cases  among  30  endemic  countries.  The  larvicidal  powder  is  used  as  one  of  the dengue virus vector controllers. This  study aims to determine the effect of ethanol extract of small gooseberry  leaves  (Phyllantus  niruri  L.)  to  the  death  of  Aedes  aegypti  mosquitoes.  This  study  used quasi experimental method with post test only controlled group design with 1 positive control group (Temephos),  1  group  of  negative  control  (tap  water),  and  5  treatment  groups  (0.0625%,  0.125%, 0.25% , 0.5% and 1% extract) used 20 larvaes of Aedes aegypti instar III each group. The results of the treatment group extract with a concentration of 0.5% and 1% obtained 100% dead larvae. The result of linear regression test showed the effect of meniran leaf extract on the death of larvae Ae. aegypti with  R2  value  of  65.2%.  The  larvacid  activity  of  ethanol  extract  leaves  meniran  against  larvae  Ae. aegypti instar III was directly proportional to concentration with LC 50 of 0.174% with 95% confidence interval (0.155-0.195).
Keywords: ethanol extract of small gooseberry leaves, DHF, Aedes aegypti larvae
10 41,25 72,5 100 100 0 20 40 60 80 100 120 P1 P2 P3 P4
P5

## Pendahuluan
Berdasarkan data Profil Kesehatan Indonesia tahun 2015,  jumlah  penderita  DBD  pada  tahun  2015 mengalami peningkatan dibandingkan tahun 2014. Jumlah penderita DBD di Jawa Timur pada Januari 2015  terjadi  kenaikan  cukup  tinggi  mencapai 21.266  orang.  Jumlah  kasus  DBD  di  Jember  pada Januari  2017,  tercatat  sebanyak  70  kasus  DBD, kemudian  Februari  menurun  menjadi  64  kasus, dan  pertengahan  Maret  ini  tercatat  sekitar  20 kasus  (Nurdian  dan  Lelono,  2008;  Solichah,  2017; Kementerian Kesehatan RI, 2017).
Demam berdarah  dengue (DBD) adalah salah satu penyakit  yang  diterapi  secara  suportif  dan ditunjukkan  dengan  empat  manifestasi  klinis utama yaitu demam tinggi, manifestasi perdarahan,  sering  dengan  hepatomegali,  dan tanda-tanda  kegagalan  sirkulasi  darah.  Demam berdarah  dengue  (DBD)  disebabkan  oleh  virus dengue yang ditularkan oleh nyamuk betina Aedes aegypti dan  Indonesia  dilaporkan  sebagai  negara ke-2  dengan  kasus  DBD  terbesar  diantara  30 negara wilayah endemis.
Penggunaan  zat  kimia  alami  yang  berasal  dari tumbuhan  (bioinsektisida)  sudah  dianjurkan  WHO sejak  tahun  1985  karena  memiliki  sifat  yang mudah  terurai  ( biodegradable )  dibandingkan insektisida kimiawi. Ada beberapa bahan aktif pada tumbuhan yang memiliki sifat racun terhadap larva nyamuk  penyebab  DBD,  seperti  minyak  atsiri, anonin,  saponin,  flavonoid,  tanin,  dan  alkaloid. Meniran  ( Phyllanthus  niruri L.)  juga  merupakan salah  satu  tanaman  mengandung  bahan  aktif untuk  membunuh  larva  nyamuk  vektor  penyebab penyakit DBD (Masruroh et al ., 2014). Tujuan dari penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  pengaruh ekstrak etanol daun meniran  ( Phyllanthus niruri L ) terhadap kematian nyamuk Aedes aegypti .

## Metode Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  metode quasi experimental dengan  rancangan post  test  only controlled  group  design .  Sampel  menggunakan larva Aedes  aegypti instar  III  yang  dibagi  dalam  7 kelompok  yaitu,  1  kontrol  positif  ( Temephos ),  1 kontrol  negatif  (air  ledeng),  dan  5  kelompok perlakuan (ekstrak 0,0625%, 0,125%, 0,25%, 0,5%, dan  1%)  yang  masing-masing  kelompok  diulang sebanyak  4  kali.  Jumlah  sampel  larva Aedes aegypti pada  masing-masing  kelompok  adalah  20 ekor.  Setelah  24  jam  perlakuan,  dilakukan observasi  jumlah  kematian  larva Aedes  aegypti . Kemudian  dilakukan  analisis  data  dengan  uji normalitas Shapiro-wilk , uji regresi dan uji probit.

## Hasil Penelitian
Setelah perlakuan selama 24 jam, didapatkan hasil jumlah  kematian  larva Ae.  aegypti pada  masing- masing kelompok dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel  1  Jumlah  kematian  larva Ae.  aegypti setelah  24
jam perlakuan pada penelitian Kelompok Perlakuan Rata- Rata±SD Persentase Larva Mati (%) KP Temephos 1% 20 100% KN Air Ledeng 0 0% P1 Ekstrak 0,0625% 2±0,816 10% P2 Ekstrak 0,125% 8,25±1,708 41,25% P3 Ekstrak 0,25% 14,5±1,291 72,5% P4 Ekstrak 0,5% 20 100% P5 Ekstrak 1% 20 100%
Berdasarkan  hasil  penelitian,  pada  kelompok kontrol  positif  didapatkan  jumlah  larva  yang  mati mencapai 100% sedangkan pada kelompok kontrol negatif didapatkan hasil tidak ada larva yang mati. Pada  kelompok  dengan  pemberian  ekstrak  daun meniran  konsentrasi  0,5%  dan  1%,  didapatkan jumlah kematian larva mencapai 100%. Persentase kematian  larva Ae.  aegypti pada  kelompok penelitian  yang  diberikan  ekstrak  daun  meniran setelah  24  jam  perlakuan  dapat  dilihat  pada Gambar 1 berikut.
Gambar 1. Persentase kematian larva Ae. aegypti
Analisis  data  dilakukan  pada  data  hasil  penelitian pada  kelompok  perlakuan  yang  diberikan  ekstrak daun  meniran.  Hasil  uji  normalitas Shapiro-Wilk pada  P1,  P2,  dan  P3,  diperoleh  nilai  p>0,05
sedangkan  p  pada  P4  dan  P5  tidak  keluar  karena memiliki  hasil  yang  konstan  atau  sama.  Distribusi data  dianggap  normal  apabila  pada  semua konsentrasi  memiliki  nilai  p>0,05  (Dahlan,  2011). Hasil uji normalitas dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Tes normalitas Shapiro-Wilk
Tests of Normality b,c Shapiro-Wilk Statistic df Sig. P1 .945 4 .683 P2 .971 4 .850 P3 .993 4 .972 a. Lilliefors Significance Correction b. P4 is constant. It has been omitted.
c. P5 is constant. It has been omitted.
Selanjutnya  dilakukan  analisis  dengan  uji  regresi linear  untuk  mengetahui  pengaruh  ekstrak  daun meniran terhadap kematian larva Ae. aegypti dan diperoleh R 2 =0,652 yang berarti pengaruh ekstrak daun meniran terhadap jumlah kematian larva Ae. aegypti sebesar  65,2%.  Dari  uji  regresi  linear, didapatkan  persamaan  y=12,95+4,38x  dimana  y menunjukkan  jumlah  kematian  larva  dan    x menunjukkan  konsentrasi  ekstrak  daun  meniran (Dahlan, 2011). Hasil uji regresi linear dapat dilihat pada Gambar 2.
Uji  regresi probit digunakan  untuk  menentukan LC 50 yang  menyebabkan  kematian  50%  total  larva uji  dari  semua  perlakuan.Hasil  dari  uji  regresi probit didapatkan  nilai  LC 50 sebesar  0,174% dengan  interval  kepercayaan  95%  (0,155 – 0,195) sehingga LC 50 pada penelitian ini bernilai signifikan (Dahlan,  2011).  Hasil  uji  analisis Probit dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Hasil uji analisis Probit

## Pembahasan
Penelitian  ini  menggunakan  ekstrak  etanol  daun meniran  ( P.  niruri L . ) sebagai  larvasida  nabati terhadap  larva Ae.  aegypti instar  III.  Penelitian bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  ekstrak daun  meniran  terhadap  kematian  larva Ae. aegypti .  Sebelum  melakukan  uji  sebenarnya, peneliti  melakukan  uji  pendahuluan  dengan konsentrasi  0,0625%,  0,125%,  0,5%,  1%  ,  2%,  5%, dan  25%.    Dari  uji  pendahuluan  diperoleh konsentrasi  yang  digunakan  pada  uji  sebenarnya, 0,0625%, 0,125%, 0,125%, 0,5%, dan 1% .
Pada    penelitian  ini  terdapat  7  kelompok  yang terdiri  dari  5  kelompok  perlakuan,  1  kelompok positif    dan  1  kelompok  negatif    yang  setiap kelompoknya  berisi  20  larva  tiap  100ml  dengan  4 kali  pengulangan.  Pada  kelompok  kontrol  positif, didapatkan  kematian  larva Ae.  aegypti mencapai 100%.  Kontrol  positif  pada  penelitian  ini menggunakan  larvasida  yang  umum  digunakan untuk  mengendalikan  populasi  nyamuk  vektor  di masyarakat  yaitu temephos yang  termasuk  dalam golongan  organofosfat  dan  bekerja  pada  sistem saraf  larva  yaitu  dengan  menghambat  enzim asetilkolinesterase,    struktur  organofosfat  meniru struktur  asetilkolinesterase  sebagai  substrat  dari
Probability 95% Confidence Limits for KONSENTRASI Estimate  Lower Bound  Upper Bound .400 .147 .127 .166 .450 .161 .142 .180 .500 .174 .155 .195 .550 .188 .169 .211 .600 .202 .182 .227 .650 .216 .195 .244
enzim  asetilkolinesterase  akibatnya  akumulasi asetilkolinesterase yang berlebihan dan menyebabkan penurunan koordinasi otot, konvulsi serta kematian nyamuk (Lesmana, 2010; Kementerian Kesehatan Republik Indonesia, 2012).
Pada  kelompok  kontrol  negatif  yang  diberikan  air ledeng dan DMSO, tidak terdapat larva Ae. aegypti yang  mati.  Hal  ini  membuktikan  bahwa  DMSO aman  sebagai  pelarut  dari  ekstrak  daun  meniran karena tidak menimbulkan kematian  pada sampel uji.  Suhu  untuk  tempat  perkembang  biakan nyamuk Ae. argypti berkisar antara suhu 25 o C – 27 o C  dan  pH  normal  untuk  perkembangan  nyamuk dari bertelur sampai menjadi pupa berkisar antara 4 – 9. Air ledeng atau air sumur memiliki suhu 26 o C dan  pH  5 – 6  sehingga  air  ledeng  atau  air  sumur menjadi  tempat  yang  optimal  untuk  larva Ae. aegypti (Adifian et al ., 2013; Lesmana, 2017).
Pada  kelompok  perlakuan  yang  diberikan  ekstrak daun  meniran,  terdapat  larva Ae.  aegypti yang mati  sehingga  membuktikan  bahwa  ekstrak  daun meniran memiliki aktivitas larvasida terhadap larva Ae.  aegypti .  Ekstrak  daun  meniran  mengandung zat  aktif  seperti  alkaliod,  flavonoid,  dan  tanin. Biolarvasida membunuh serangga melalui berbagai cara,  diantaranya  sebagai  racun  kontak  yang masuk  melalui  kulit  atau  dinding  tubuh,  maupun sebagai  racun  perut  atau  mulut  yang  masuk melalui alat pencernaan (Minarni et al ., 2013).
Flavonoid  berfungsi  sebagai  inhibitor  pernapasan atau sebagai racun pernapasan sehingga menghambat  sistem  pernapasan  nyamuk  yang dapat  mengakibatkan  nyamuk Ae.  aegypti mati. Flavonoid  masuk  ke  dalam  tubuh  larva  melalui sistem pernapasan yang kemudian akan menimbulkan kelayuan pada saraf serta kerusakan pada sistem pernapasan dan mengakibatkan larva tidak  bisa  bernapas  dan  akhirnya  mati.  Posisi tubuh  larva  yang  berubah  dari  normal  bisa  juga disebabkan  oleh  senyawa  flavonoid  yang  masuk melalui siphon dan  mengakibatkan  kerusakan sehingga  larva  harus  mensejajarkan  posisinya dengan permukaan air untuk memudahkan dalam mengambil oksigen (Gautar et al ., 2013).
Alkaloid  merupakan  senyawa  yang  berfungsi sebagai  inhibitor  enzim  asetilkolinerase  yang menyebabkan  kelumpuhan  otot Ae.  aegypti seperti  cara  kerja  organofosfat  dan menghambat proses  metamorfosis  pada  larva  dengan  cara menghambat  proses  pengelupasan  kulit  ( molting ) seperti  cara  kerja Insect  Growth  Regulator (IGR) . Kelumpuhan  otot  tidak  hanya  berpengaruh terhadap pergerakan larva saja, akan tetapi dalam waktu  yang  lama  kelumpuhan  otot  juga  akan berpengaruh  terhadap  pencernaan  larva.  Otot-
otot  pada  sistem  pencenaan  larva Ae.  aegypti tidak  berfungsi,  akibatnya.  Larva  tidak  dapat melakukan aktifitasnya dalam mencerna makanan dikarenakan tidak berfungsinya organ pencernaan yang  membuat  larva Ae.  aegypti semakin  lemas dan  pada  akhirnya  mati. Penghambatan metamorfosis  disebabkan  oleh  adanya  penolakan dan  pembelokan  ( blocking) pada  sistem  endokrin (neuroendokrin),  sehingga  menghambat  sintesis ekdison  dalam  jaringan.  Blocking  pada  sistem endokrin  ini  terjadi  karena  alkaloid  bertindak sebagai  analog  hormon  juvenil,  alkaloid  mampu berikatan  dengan  JHBP  ( juvenile  hormone  binding protein )  atau  menganggu  jalur  sinyal  ekdisteroid untuk  gen  aktivasi  dari  ekdisteroid  dalam  sel target.  Dengan  kata  lain,  alkaloid  menghambat perubahan  dari  ekspresi  gen  di  sel  target  yang diinduksi oleh ekdison untuk kebutuhan metamorfosis.  Hal  ini  dapat  menghambat  proses molting dan  gangguan  pertumbuhan,  bahkan menyebabkan  kematian  pada  larva Ae.  aegypti (Sandika et al. , 2012; Minarni et al ., 2013).
Tanin  dapat  menyebabkan  penurunan  aktivitas enzim  protease  dalam  mengubah  asam-asam amino.  Senyawa  tanin  dapat  mengikat  enzim protease  yang  menghambat  kerja  dari  enzim tersebut,  sehingga  proses  metabolisme  sel  dapat terganggu  dan  larva  akan  kekurangan  nutrisi.  Hal ini  dapat  mengakibatkan  pertumbuhan  larva terhambat  dan  jika  proses  ini  berlangsung  secara terus  menerus  maka  akan  berdampak  pada kematian larva. Selain itu tanin dapat mengganggu serangga dalam proses mencerna makanan karena tanin  akan  mengikat  protein  dalam  sistem pencernaan yang dibutuhkan larva untuk pertumbuhan sehingga proses penyerapan protein dalam  sistem  pencernaan  menjadi  terganggu. Namun  teori  dasar  pembentukan  kompleks protein-tanin belum sepenuhnya diketahui. Susunan  tanin  yang  kompleks  dan  bervariasi merupakan  salah  satu  faktor  kesulitan  dalam mempelajari kompleks protein-tanin (Tandi, 2010).
Berdasarkan  analisis  data  yang  telah  dilakukan, terdapat  sebaran  data  jumlah  kematian  larva Ae. aegyti yang  normal.  Kelompok  P1,  P2,  dan  P3 memiliki  nilai  p  lebih  dari  0,05  sedangkan  p  pada P4 dan P5 tidak keluar karena memiliki hasil yang konstan  atau  sama  (Gambar  4,2).  Distribusi  data dianggap  normal  apabila  pada  semua  konsentrasi memiliki nilai p>0,05 (Dahlan, 2011).
Hubungan ekstrak daun meniran terhadap jumlah kematian  larva Ae.  aegypti bernilai  positif,  yang berarti  semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak  daun meniran semakin besar pula jumlah kematian larva Ae.  aegypti .  Saat  ditinjau  dari  kenaikan
konsentrasi,  maka  jelas  terlihat  bahwa  kelompok perlakuan  dengan  konsentrasi  0,5%  dan  1% menunjukkan  kematian  jumlah  larva Ae.aegypti yang  setara  atau  sama.  Penggunaan  zat  kimia alami yang berasal dari tumbuhan  (bioinsektisida) sudah dianjurkan WHO sejak 1985 karena memiliki sifat  yang  mudah  terurai  ( biodegredable ). (Kementerian Kesehatan Republik Indonesia, 2012; Untung, 2004).
Hasil  analisis  Larva Ae.  aeypti yang  mati  pada penelitian  ini,  sebanyak  65,2%  disebabkan  oleh ekstrak  daun  meniran.  Sedangkan  sisanya  dapat disebabkan  oleh  hal  lain,  seperti  salah  satunya suhu ruangan berbeda dengan tempat perindukan awal  dan  kesehatan  larva  yang  tidak  bisa disamakan atau diperiksa (Wahyuni, 2016).
Hasil LC 50 ekstrak daun meniran terhadap larva Ae. aegypti adalah  0,174%  pada  interval  kepercayaan 95%  (0,155-0,195). Temephos memiliki  nilai  LC 50 0,169%  yang  artinya  ekstrak  daun  meniran memiliki  nilai  LC 50 yang  mendekati temephos dalam membunuh larva. Semakin rendah nilai LC 50 suatu  larvasida  alami  maka,  semakin  baik  pula efektifitasnya  karena  dengan  bahan  baku  yang sedikit  dapat  menghasilkan  daya  larvasida  yang tinggi,  selain  itu  larvasida  nabati  lebih  ramah lingkugan (Untung, 2004, Fuadzy et al. , 2015).
Peneliti  menyarankan  perlu  dilakukan  penelitian lanjutan  mengenai  uji  efektivitas  ekstrak  daun meniran  terhadap  larva Ae.  aegypti dengan menggunakan  bagian  lain  dari  tanaman  meniran, seperti biji, kulit batang atau akar. Selain itu, perlu dilakukan  penelitian  tentang  residu,  penggunaan, dan batas konsentrasi aman ekstrak daun meniran ( Maximum Allowable Toxicant Concentration atau MATC)  terhadap  larva Ae.  aegypti dalam  skala yang  lebih  luas  serta  penggunaan  ekstrak  daun meniran  sebagai  alternatif  pengendalian  vektor pada  stadium  pupa  serta  nyamuk  dewasa Ae. aegypti dan pada spesies nyamuk lain.

## Kesimpulan
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilaksanakan, dapat  diambil  kesimpulan  bahwa  ekstrak  etanol daun  meniran  ( P.  niruri L.)  memiliki  aktivitas larvasida  terhadap  larva Ae.  aegypti instar  III berbanding lurus dengan konsentrasi. LC 50 ekstrak daun meniran terhadap larva Ae. aegypti instar III adalah  0,174%  dengan  interval  kepercayaan  95% (0,155-0,195).

## Ucapan Terimakasih
Pada    kesempatan      ini      peneliti    mengucapkan terimakasih  kepada  Departemen  Penyakit  Tropis
Fakultas  Kedokteran  Universitas  Airlangga  atas fasilitas  dan    bantuan    yang    diberikan  hingga terlaksananya penelitian ini.

## Daftar Pustaka
Adifian,  H.  Ishak,  R.L.  Ane.  2013.    Kemampuan Adaptasi Nyamuk Aedes Aegypti Dan Aedes
Albopictus Dalam Berkembang Biak Berdasarkan  Jenis  Air. Skripsi. Makassar: Fakultas Kesehatan Masyarakat.
Dahlan,  M.S.  2011. Statistika  untuk  Kedokteran dan  Kesehatan .  Edisi  5.  Jakarta:  Penerbit Salemba Medika.
Fuadzy,  H.,  D.N.  Hodijah,  A.  Jajang,  M.  Widawati. 2015.  Kerentanan  Larva Aedes  Aegypti Terhadap  Temefos  Di  Tiga  Kelurahan Endemis  Demam  Berdarah  Dengue  Kota Sukabumi. Buletin  Penelitian  Kesehatan .
43(1): 41-46S.
Gautar,  Kumar,  dan  Poonia.  2013.  Larvicidal activity and GC-MS analysis of flavonoids of Vitex negundo and Andrographis paniculata against  two  vector  mosquitoes Anopheles stephensi and Aedes  aegypti . J  Vector Borne . 50(9): 171-178.
Kementerian Kesehatan Republik Indonesia. 2012.
Pedoman Penggunaan Insektisida (Pestisida)  dalam  Pengendalian  Vektor . Jakarta:  Kementerian  Kesehatan  Republik Indonesia.
Kementerian Kesehatan Republik Indonesia. 2017.
Data  dan  Informasi Profil  Kesehatan Indonesia  2016 .  Jakarta:  Kementerian Kesehatan RI.
Lesmana,  A.W.  2017.  Uji  Aktivitas  Ekstrak  Daun Sirsak (Annona Muricata Linn ) Pada  Caplak ( Boophilus  Microplus) Berdasarkan  Waktu Kematian  ( In  Vitro ). Skripsi. Makasar: Program Studi Kedokteran Hewan.
Lesmana,  S.D.  2010.  Resistensi  A edes  aegypti Terhadap Insektisida. Jurnal Ilmu
Kedokteran .  4(1): 10-13.
Masruroh,  E.,  Tukiran,  Suyatno,  dan  N.  Hidayati.
2014.  Analisis Awal  Fitokimia  Pada Tanaman  Meniran .  20  September  2014. Prosiding Seminar Nasional Kimia : 252-258.
Minarni,  E.,  T.  Armansyah,  M.  Hanafiah.  2013.
Daya  Larvasida  Ekstrak  Etil  Asetat  Daun Kemuning  ( Murraya  paniculata (L) Jack) terhadap  Larva  Nyamuk Aedes  aegypti . Jurnal Medika Veterinaria . 7(1): 27 – 29.
Nurdian,  Y.,  dan  A.  Lelono.  2008.  Prediction  of Distribution  Pattern  of Aedes  aegypti as DHF  Main  Vector  in  Jember. Folia  Medica Indonesiana . 44: 11-14.
Sandika,  Bayu,  Raharjo,  dan  D.  Nur.  2012. Pengaruh  Pemberian  Air  Rebusan  Akar Delima  ( Punica  granatum L.)  terhadap Mortalitas Ascarissuum Goesze.  secara  In Vitro. LenteraBio .1(2): 81-86.
Solichah,  Z.  2017.  Penderita  DBD  di  Jember  Capai 460 Orang. http://www.antarajatim.com/berita/18721 2/penderita-dbd-di-jember-capai-460- orang?utm_source=fly&utm_medium=relat ed&utm_campaign=news. [Diakses pada 14
Mei 2017].
Tandi,  E.J.  2010.  Pengaruh  Tanin  terhadap Aktivitas Enzim Protease. Seminar Nasional
Teknologi Peternakan dan  Veteriner. Fakultas Peternakan UNHAS.
Untung,  K.  2004. Manajemen  Resistensi  Pestisida Sebagai  Penerapan  Pengelolaan  Hama Terpadu .  Yogyakarta:  Universitas  Gadjah Mada.
Wahyuni,  D.  2016. Toksisitas  Ekstrak  Tanaman sebagai  Bahan  Dasar  Biopeptisida  Baru Pembasmi  Larva  Nyamuk  Aedes  aegypti (Ekstrak Daun Sirih, Ekstrak Biji Pepaya, dan Ekstrak  Biji  Srikaya  Berdasarkan  Hasil Penelitian . Malang: Media Nusa Creative.
World  Health  Organization.  2005. Guidelines  for Laboratory  and  Field  Testing  Mosquito Larvicides . Geneva: WHO Press.
World  Health  Organization.  2010. Generic Risk Assessment  Model for Insecticides Used for Larviciding . Geneva: WHO Press.