## DOI: 10.30644/rik.v7i1.216
Toksisitas kombinasi ekstrak etanol 70% daun petai cina (Leucaena leucocephala (Lam.) de Wit) dan kulit jengkol (Archidendron jiringa (Jack) I.C.Nielsen) dengan metode Brine Shrimp Lethality Test
Harry Noviardi  1 , Sitaresmi Yuningtyas 1 , Diah Ajeng Tri 1 , Ahmad Ben 1 , Padmono Citroreksoko 1
1 Program Studi Farmasi, Sekolah Tinggi Teknologi Industri dan Farmasi Bogor, Indonesia
 Email korespondensi: harry.noviardi@gmail.com
Diterima: 14 Mei 2019 ; direvisi: 22 Mei 2019; dipublish: 30 Juni 2019

## Abstrak
Latar  Belakang :  Daun  Petai  cina  dan  kulit  jengkol  mengandung  senyawa  bahan  alam  seperti  alkaloid, flavonoid,  saponin,  tanin  dan  triterpenoid.  Senyawa  bahan  alam  tersebut  diduga  berpotensi  sebagai antikanker.  Uji  toksisitas  digunakan  untuk  mendeteksi  potensi  senyawa  antikanker.Tujuan  penelitian  ini adalah untuk menentukan nilai toksisitas dari kombinasi ekstrak daun petai cina dan kulit jengkol. Metode: Proses  ekstraksi  menggunakan  perbandingan  bobot  ekstrak  daun  petai  cina  dan  kulit  jengkol yang digunakan secara berturut-turut 1:1, 1:3, 1:5, 1:7, dan 1:9. Metode toksisitas yang digunakan adalah Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) dengan hewan uji Artemia salina L. Parameter yang diukur adalah nilai lethal concentration (LC 50 ). Hasil: Nilai LC 50 yang diperoleh dari kombinasi ekstrak daun petai cina dan kulit jengkol 1:1, 1:3, 1:5, 1:7 dan  1:9  secara  berturut-turut  sebesar  85.27,  30.41,  21.76,  14.06  &  1.358  ppm.  Hasil  penelitian  ini menunjukkan semua kombinasi ekstrak daun petai cina dan kulit jengkol termasuk dalam kategori sangat toksik.
Kesimpulan: Kombinasi ekstrak  daun  petai cina  dan  kulit  jengkol  memberikan  efek  sangat  toksik  yang diduga berpotensi sebagai antikanker.
Kata Kunci : Brine Shrimp Lethality Test (BSLT), daun petai cina, kulit jengkol, LC 50, toksisitas.

## Abstract
Background: Leaves of petai cina and jengkol rind are containing natural compounds such as alkaloids, flavonoids, saponins, tannins and triterpenoids. These natural compounds are thought to have the potential as anticancer agents. Toxicity tests are used to detect potential anticancer compounds. The purpose of this study was to determine the toxicity value of a combination of leaves petai cina and jengkol rind. Method: The extraction process used leaves petai cina and jengkol rind, which combination of  mass1:1, 1:3, 1:5, 1:7, and 1:9 respectively. The toxicity method used was Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) with test animals Artemia salina L. The measured parameters were the value of lethal concentration (LC 50 ). Results: LC 50 values obtained from a combination of leaves petai cina and jengkol rind 1:1, 1:3, 1:5, 1:7 and 1:9 were 85.27, 30.41, 21.76, 14.06 & 1,358 ppm respectively. The results of this study showed that all combinations of leaves petai cina and jengkol rind were included in the category of very toxic. Conclusion: All combinations of leaves petai cina and jengkol rind have a very toxic effect which is thought to have potential as anticancer.
Key words: BSLT, jengkol rind, LC 50 , leaves of petai cina, toxicity.

## PENDAHULUAN
Kanker merupakan suatu kondisi dimana sel telah kehilangan pengendalian dan mengalami  pertumbuhan  yang  tidak  normal,
cepat  dan  tidak  terkendali 1 .  Kanker  dapat menyebar ke dalam jaringan melalui pembuluh  darah  maupun  limpa  pada  kondisi ganas atau mestatase 2 . Berdasarkan statistika
Harry Noviardi, Sitaresmi Yuningtyas, Diah Ajeng Tri,
Toksisitas kombinasi ekstrak etanol 70% daun petai cina
Ahmad Ben,  Padmono Citroreksoko
( Leucaena leucocephala ( Lam.) de Wit ) dan kulit jengkol ( Archidendron jiringa (Jack) I.C.Nielsen) dengan metode Brine Shrimp Lethality Test
pada  tahun 2012, jumlah  kasus kanker  pada negara  dengan  penghasilan  menengah  ke bawah,  terjadi  sebanyak  57%  kasus  dengan tingkat  angka  kematian    sebesar  65% 3 . Pengobatan kanker dengan dengan menggunakan obat-obatan maupun kemoterapi  umum  dilakukan  akan  tetapi memerlukan  biaya  cukup  tinggi 4 .  Selain  dari segi biaya yang mahal, penggunaan radioterapi  dan  kemoterapi  menimbulkan toksissitas  tinggi  dan  efek  samping  yang bersifat  merusak 5 .  Oleh  sebab  itu  perlu dilakukan  pengembangan  obat  antikanker dengan pemanfaatan bahan alam.
Penggunaan obat herbal dalam pengobatan antikanker telah banyak dilakukan. Obat herbal memiliki efek samping yang  lebih  rendah  dibandingkan  dengan penggunaan  obat  kimia 6 .  Contoh  tumbuhan yang memiliki  potensi  toksisitas  adalah  daun petai cina dan kulit jengkol.
Daun petai cina ( Leucaena leucocephala (Lam) de Wit) memiliki kandungan  senyawa  aktif  alkaloid,  flavonoid, saponin, tannin dan triterpenoid 7 . Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh [7] ekstrak etanol 70% daun petai cina ( Leucaena leucocephala (Lam)  de  Wit ) memiliki  efek toksik  terhadap Artemia  salina L.  Metode  uji yang  digunakan,  yaitu Brine  Shrimp  Lethality Test dan  diperoleh  LC 50 sebesar  291  ppm. Tumbuhan  lain  yang  memiliki  efek  toksisitas adalah  kulit  jengkol  ( Archidendron  jiringa (Jack)  I.C.Nielsen)  berdasarkan  pada  hasil penapisan fitokimia ekstrak etanol kulit jengkol menunjukkan  adanya  kandungan  senyawa kimia, diantaranya alkaloid, flavonoid, saponin,  tannin,  glikosida  dan  steroid/ triterpenoid. Flavonoid memiliki gugus hidroksil  yang  terikat  pada  cincin  aromatik yang  dapat  berperan  sebagai  antioksidan dalam  menangkap  radikal  bebas.  Satu  atom hidrogen  disumbangkan  untuk  menstabilkan radikal  peroksi  lemak 8 .  Ekstrak  metanol  dari kulit  jengkol  ( Archidendron  jiringa (Jack) I.C.Nielsen) memiliki efek toksik tehadap larva
udang  dengan  menggunakan  metode Brine Shrimp  Lethality  Test dan  diperoleh  LC 50 sebesar 39,27 ppm 9 .
Penggunaan kombinasi tanaman obat dalam  mengobati  suatu  penyakit  sudah banyak  dilakukan  dalam  beberapa  tahun terakhir. Kombinasi ekstrak dalam pengobatan  tradisional  memiliki  kelebihan terkait sinergisitas. Beberapa penyakit memberikan  pengaruh  yang  lebih  baik terhadap obat dibandingkan dengan penggunaan obat tunggal 10,11 . Aktivitas terapi dalam  pengobatan  kanker  dan  penyakit degeneratif sangat efektif jika diberikan dalam bentuk  kombinasi  ekstrak  yang  sinergis  dan simultan 12,13 . Salah satu penelitian antikanker dalam  kombinasi  ekstrak  adalah kombinasi ekstrak  benalu  belimbing ( Macrosolen cochinensis ) dan bawang sabrang ( Eleutherine  palmifolia (L)  Merr.)  dalam pengobatan  kanker  serviks 6 .  Sedangkan penelitian pengaruh sinergisitas kombinasi  ekstrak  daun  petai  cina  dan kulit jengkol belum ada dilakukan.
Berdasarkan pada uraian diatas, pada penelitian  ini  dilakukan  uji  toksisitas  dari kombinasi ekstrak etanol 70% daun petai cina ( Leucaena  leucocephala (Lam)  de  Wit)  dan ekstrak etanol 70% kulit jengkol ( Archidendron jiringa (Jack) I.C.Nielsen) terhadap hewan uji Artemia salina L. pengujian toksisitas dilakukan  dengan  kombinasi  dua  tanaman diharapkan  diperoleh  nilai  LC 50 yang  lebih bagus  dibandingkan  dengan  nilai  LC 50 dari masing-masing ekstrak.

## METODE
Penelitian  dilaksanakan  di  Laboratorium Sekolah Tinggi Teknologi Industri dan Farmasi Bogor
Ekstraksi  daun  petai  cina  dan  kulit jengkol. Daun  petai  cina  dan  kulit  jengkol dipanen kemudian dibersihkan dan dikeringkan.  Simplisia  kering  digiling  agar memudahkan  dan  mengoptimalkan  proses ekstraksi.  Sebanyak  800  g  serbuk  simplisia
Harry Noviardi, Sitaresmi Yuningtyas, Diah Ajeng Tri,
Toksisitas kombinasi ekstrak etanol 70% daun petai cina
Ahmad Ben,  Padmono Citroreksoko
( Leucaena leucocephala ( Lam.) de Wit ) dan kulit jengkol ( Archidendron jiringa (Jack) I.C.Nielsen) dengan metode Brine Shrimp Lethality Test
daun  petai  cina  dan  700  g  serbuk  simplisia kulit  jengkol,  masing-masing  dimasukkan pada  botol  cokelat  kemudian  ditambahkan etanol  70%  sampai  terendam.  Maserasi dilakukan  selama  3x24  jam  dan  setiap  1x24 jam  dilakukan  penggantian  pelarut  untuk menghindari jenuhnya pelarut. Filtrat diuapkan pelarutnya  dengan rotary  evaporator dan pemekatan  dengan water  bath hingga diperoleh  ekstrak  kental.  Kemudian  pada ekstrak  kental  dilakukan  penapisan  fitokimia untuk identifikasi senyawa golongan alkaloid, flavonoid, tanin, saponin dan triterpenoid/steroid.
Persiapan  air  laut  buatan. Pembuatan air  laut  buatan  dilarutakan  35  g  garam  NaCl dalam 1 liter air suling, kemudian ditambahkan soda  kue  sambil  diukur  pH  air  hingga mencapai  pH  8.  Air  laut  buatan  yang  sudah siap disaring menggunakan kertas saring.
Persiapan  larva  udang. Bejana  untuk penetasan  larva  udang  yang  telah  berisi  air laut  (pH  8),  ditaburkan  telur  larva  udang sebanyak 1 sendok makan (± 1 gram). Bejana tersebut  disimpan  di  bawah  lampu  (suhu 30 o C) dengan sisi terbuka menghadap lampu dan  diberi  oksigen  melalui  aerator.  Aerator mengalirkan  udara  yang  berisi  oksigen  ke dalam  media  penetasan  telur  larva  udang yakni  air  laut.  Setelah  48  jam,  telur  akan menetas  dan  siap  dipakai  untuk  pengujian, kemudian dipindahkan ke wadah lain sebagai tempat untuk memudahkan pengambilan larva yang  sudah  menetas  pada  saat  dilakukan pengujian.  Larva  udang  yang  akan  diuji diambil dengan cara dipipet.
Persiapan sampel. Ekstrak kental etanol 70%    daun  petai  cina  dan  kulit  jengkol ditimbang  masing-masing  sebanyak  0,2  g kemudian  dilarutkan  dengan  air  laut  sampai 100  mL,  sehingga  konsentrasinya  menjadi 2000 ppm sebagai larutan induk ekstrak kental daun  petai  cina  dan  kulit  jengkol.  Kemudian pada  penelitian  ini  dibuat  kombinasi  bobot ekstrak antara ekstrak etanol 70% daun petai cina  ( Leucaenaleucocephala (Lam)  de  Wit)
dikombinasikan dengan kulit jengkol ( Archidendron  jiringa (Jack)  I.C.Nielsen) dengan  perbandingan  1:1,  1:3,  1:5,  1:7,  dan 1:9. Untuk kontrol dilakukan tanpa penambahan ekstrak.
Pembuatan  kelompok  uji. Sebelum dilakukan  pengujian  dengan  metode  BSLT terlebih  dahulu  dibuat  kelompok  pengujian dari  kedua  ekstrak,  tujuannya  adalah  untuk memudahkan pengambilan data dari masing- masing sampel, karena sampel yang digunakan  lebih  dari  satu  sampel  yakni ekstrak  etanol  70%  daun  petai  cina  dan ekstrak etanol 70% kulit jengkol. Setiap kedua sampel  ekstrak  etanol  70%  daun  petai  cina dan  ekstrak  etanol  70%  kulit  jengkol  dibuat kombinasi dengan 1:1, 1:3, 1:5, 1:7, dan 1:9.
Uji  toksisitas  metode  BSLT. Larva Artemia salina L berumur 48 jam yang masih bergerak  aktif  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi. Pada tiap-tiap tabung reaksi dimasukkan 10 ekor larva udang menggunakan  pipet  tetes.  Selanjutnya  pada tiap-tiap tabung reaksi dimasukkan larutan uji sebanyak 10 mL kecuali pada kontrol negatif. Pada kontrol negatif hanya dimasukkan 10 mL air  laut.  Semua  tabung  reaksi  baik  kelompok kontrol maupun kelompok perlakuan diletakkan  di  bawah  lampu  (suhu  30 o C)  dan dibiarkan  diudara  terbuka.  Pengamatan dilakukan  20  jam  terhadap  kematian  larva Artemia  salina L.  Percobaan  ini  dilakukan pengulangan 3 kali (triplo).
Analisis  Data. Pengolahan  dengan menggunakan regresi linear dengan memplotkan  sumbu  x  adalah  log  konsentrasi sampel  uji  dan  sumbu  y  adalah  persentase kematian hewan. Berdasarkan pada persamaan garis tersebut, akan dihitung  nilai Lethal concentration (LC 50 ) pada 50% hewan uji.  Dengan  menggunakan  persamaan  garis:
y = bx + a Keterangan : x = Log konsentrasi sampel uji y = % Kematian hewan
Harry Noviardi, Sitaresmi Yuningtyas, Diah Ajeng Tri,
Toksisitas kombinasi ekstrak etanol 70% daun petai cina
Ahmad Ben,  Padmono Citroreksoko
( Leucaena leucocephala ( Lam.) de Wit ) dan kulit jengkol ( Archidendron jiringa (Jack) I.C.Nielsen) dengan metode Brine Shrimp Lethality Test
HASIL
Hasil ekstraksi. Ekstraksi secara
maserasi  dipilih  pada proses   ekstraksi  daun petai cina dan kulit jengkol karena pengerjaannya  yang  cukup  sederhana  dan tidak  memerlukan  pemanasan.  Pelarut  yang digunakan pelarut etanol 70% karena sifatnya yang  semipolar  dan  merupakan  pelarut universal  sehingga    diharapkan  semua metabolit  sekunder  yang  terkandung  dalam daun  petai  cina  dan  kulit  jengkol  dapat berdifusi  ke  dalam  pelarut.  Proses  maserasi dilakukan  3x24  jam  dan  penggantian  pelarut tiap 1x24 jam dengan harapan senyawa yang terkandung  dapat  terlarut  semua  ke  dalam pelarut.  Filtrat  yang  diperoleh  kemudian diuapkan pelarutnya dengan rotary evaporator dan pemekatan dengan water bath sehingga diperoleh ekstrak kental. Ekstrak kental daun petai cina diperoleh sebanyak 21 g dari serbuk simplisia  800  g  yang  digunakan.  Sedangkan ekstrak  kental  kulit  jengkol  yang  diperoleh sebanyak 45 g dari 700 g serbuk simplisia kulit jengkol yang digunakan.
Hasil penapisan fitokimia. Berdasarkan pada  penapisan  fitokimia  yang  dilakukan, diperoleh  hasil  pada  ekstrak  kulit  jengkol mengandung  senyawa  golongan  alkaloid, flavonoid,  tanin,  saponin  dan  triterpenoid. Golongan  senyawa  di  atas  merupakan senyawa  yang  diduga  dapat  digunakan sebagai antikanker.
Hasil penentuan Toksisitas. Uji toksisitas  dilakukan  dengan    metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). BSLT merupakan  metode  yang  banyak  digunakan sebagai  langkah  awal  pencarian  senyawa antikanker  baru.  Hasil  uji  toksisitas  dengan metode  tersebut  telah  terbukti  memiliki korelasi dengan daya sitotoksik senyawa anti kanker.  Keuntungan  dari  metode  tersebut diantaranya  mudah  dilakukan,  cepat,  mudah diperbanyak, dan dapat menunjukkan adanya korelasi terhadap suatu spesifik anti kanker 9 .
Perbandingan nilai LC 50 pada masing-masing kombinasi dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Perbandingan nilai LC50 kombinasi ekstrak daun petai cina dan kulit jengkol

## PEMBAHASAN
Uji  toksisitas  dengan  metode Brine Shrimp  Lethality  Test adalah  salah  satu  uji pendahuluan  atau  penapisan  awal  yang bertujuan  untuk  mengetahui  kandungan senyawa-senyawa yang bersifat toksik dengan menggunakan larva udang ( Arthemia salina Leach). Hal ini dikarenakan larva udang Arthemia  salina sangat  sensitif  terhadap senyawa toksik disebabkan oleh kulitnya yang sangat  tipis  dan  sel  nya  masih  sederhana. Oleh  sebab  itu,  metode  BSLT  menggunakan larva  udang  sebagai  uji  penapisan  awal aktivitas  antikanker.  Hasil  yang  didapat dengan  menghitung  50%  kematian  larva udang  terhadap  konsentrasi  uji,  dimana mortalitas larva udang Arthemia salina Leach memiliki  nilai LC 50 <  1000  ppm.  Parameter yang menunjukan adanya aktivitas antikanker pada  suatu  senyawa  dapat  dilihat  dari  nilai LC 50 ( Lethal Concentration ) . Tingkat toksisitas yang  didapat  akan  memberikan  makna terhadap  potensial  aktivitasnya  sebagai antikanker 14 . Penelitian ini menggunakan telur Artemia  salina L.  dengan  merek  dagang Supreme  Plus produk  Amerika.  Penetasan telur  dilakukan  dengan memasukkan  telur A. salina L. ke dalam air  laut buatan yang telah
46.34 57.64 85.27 30.415 21.76 14.06 1.358 0 20 40 60 80 100 Petai Cina Jengkol 1:1 1:3 1:5 1:7 1:9 LC 50 (p p m) Perlakuan
Harry Noviardi, Sitaresmi Yuningtyas, Diah Ajeng Tri,
Toksisitas kombinasi ekstrak etanol 70% daun petai cina
Ahmad Ben,  Padmono Citroreksoko
( Leucaena leucocephala ( Lam.) de Wit ) dan kulit jengkol ( Archidendron jiringa (Jack) I.C.Nielsen) dengan metode Brine Shrimp Lethality Test
diukur  pH-nya  8  dan  dicek  temperatur  waktu penetasan  adalah  30 0 C.  Proses  penetasan Artemia salina L setelah 24 jam sehingga telur menjadi  larva  ( nauplius ). Nauplius yang digunakan  memiliki  syarat  berumur  48  jam dan  aktif  bergerak.  Pada  fase nauplius merupakan fase paling aktif membelah secara mitosis. Hal ini menyebabkan naupilus identik dengan sel kanker. Nauplius yang berumur di bawah  48  jam  mempunyai  epitel  saluran pencernaan  yang  belum  dapat  berkontak dengan medium eksternal. Selain itu, nauplius yang berumur di bawah 48 jam  hanya hidup dari  kantung  kuning  telurnya  sehingga dikhawatirkan kematian larva tidak berhubungan  dengan  efek  toksisitas  dari kombinasi  ekstrak  daun  petai  cina  dan  kulit jengkol.
Penelitian  ini  menggunakan  kombinasi ekstrak  etanol  70%  daun  petai  cina  dan kulit jengkol. Langkah pertama dibuat larutan induk 1000  ppm  dari  masing-masing  perbandingan kombinasi  1:1,  1:3,  1:5,  1:7,  1:9  dan  tiap kombinasi dibuat seri konsentrasi uji 50 ppm, 100 ppm,  200 ppm,  400 ppm,  800  ppm,  dan 1000  ppm  dalam  10  mL  air  laut  buatan. Jumlah hewan uji larva udang 10 ekor setiap pengujian dilakukan 3 kali pengulangan.
Berdasarkan  Gambar  1,  kombinasi ekstrak  daun  petai  cina  dan  kulit  jengkol memberikan  efek  toksisitas lebih baik dibandingkan  ekstrak  tanpa  dikombinasi. Ekstrak  daun  petai  cina  dan  kulit  jengkol memiliki efek yang sinergis terhadap kematian larva  udang Artemia  salina L.  hal  ini  dapat dilihat  dari  lebih  rendahnya  nilai  LC 50 yang dihasilkan pada kombinasi ekstrak dibandingkan  dengan  ekstrak  tunggal.  Efek sinergis  obat  merupakan  efek  dua  obat  atau senyawa yang memiliki efek terapi yang sama sehingga saling menguatkan efek terapi  baik dengan mekanisme aksi yang sama maupun berbeda 15 .  Secara  umum,  terlihat  adanya peningkatan  persentase  penghambatan  sel seiring  dengan  bertambahnya  konsentrasi sampel  yang  diberikan,  hal  ini  dinamakan
dengan dose  dependent 16 .  Pada  kombinasi 1:3,  1:5,  1:7  dan  1:9  memberikan  nilai  LC 50 lebih baik dibandingkan dengan kedua ekstrak tunggal. Oleh karena itu kombinasi dari ektrak daun  petai  cina  dan  kulit  jengkol  dapat digunakan sebagai agen antikanker.
Berdasarkan  pada  kategori  toksisitas menurut Clarkson (2004) 17 , semua kombinasi ekstrak  menghasilkan  nilai  LC 50 <  100  ppm maka  semua  kombinasi  esktrak  bersifat sangat  toksik  dan  nilai  LC 50 lebih  baik  bila konsentrasi dari esktrak kulit jengkol ditingkatkan pada setiap kombinasi ekstrak.
Pada  penelitian  kombinasi  ekstrak dilakukan uji pendahuluan kandungan fitokimia.  Ekstrak  daun  petai  cina  dan  kulit jengkol  mengandung  alkaloid,  flavonoid, saponin,  tanin,  dan  triterpenoid.  Kandungan flavonoid dan tanin pada kadar tertentu dapat berperan  dalam  menghambat  pertumbuhan larva dalam proses kematian larva 4 . Selain itu kandungan flavonoid dan tanin dapat berperan  sebagai  antikanker.  Flavonoid bersifat antioksidan yang dapat menimbulkan proses  apoptosis  pada  sel  kanker  serta menghambat aktivitas protein kinase pada sel tumor maupun kanker 18 .

## KESIMPULAN
Berdasarkan pada hasil penelitian yang telah  dilakukan  maka  dapat  disimpulkan ekstrak  daun  petai  cina  dan  kulit  jengkol mengandung  senyawa  golongan  alkaloid, flavonoid,  saponin,  tanin  dan  triterpenoid. Kombinasi  ekstrak  daun  petai  cina  dan  kulit jengkol  berpotensi  sebagai  kandidat  obat antikanker  dengan  kategori  toksik  pada  nilai toksisitas. Nilai toksisitas LC 50 yang diperoleh pada  kombinasi  ekstrak  ekstrak  daun  petai cina dan kulit jengkol memberikan hasil yang lebih  baik  dibandingkan  dengan  ekstrak tunggal.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian
ini dibiayai oleh
Kemenristekdikti dalam skema Hibah
Harry Noviardi, Sitaresmi Yuningtyas, Diah Ajeng Tri,
Toksisitas kombinasi ekstrak etanol 70% daun petai cina
Ahmad Ben,  Padmono Citroreksoko
( Leucaena leucocephala ( Lam.) de Wit ) dan kulit jengkol ( Archidendron jiringa (Jack) I.C.Nielsen) dengan metode Brine Shrimp Lethality Test
Penelitian  Dosen  Pemula  tahun  2019 . Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada LPPM  STTIF  Bogor  yang  telah  mendukung terlaksananya penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
1.   Suastina IDAR, Ticoalu SHR, Onibala F.
Pengaruh  Pendidikan  Kesehatan  Terh Adap  Tingkat  Pengetahu  An  Siswi Tentang  Sadari  Sebagai  Deteksi  Dini Kanker  Payudara  Di  SMA  Negeri  1 Manado. Ejournal  Keperawatan 2013; 1(1) :1-6.
2.   Kusumawardani  N.  Penanganan  Nutrisi pada Penderita Kanker. Media Libangkea 1996; 6(4) :10-15.
3. Torre  LA,  Bray  F,  Siegel  RL,  Ferlay  J, Tieulent  JL,  Jemal  A.  Global  cancer statistics. 2012. CA: A Cancer Journal for Clinicians 2015; 65(2) : 87 –108.
4. Muaja  AD,  Koleangan  HSJ,  Runtuwene MRJ. Uji Toksisitas dengan Metode BSLT dan Analisis Kandungan Fitokimia Ekstrak Daun Soyogik ( Saurauia bracteosa DC) dengan Metode
Soxhletasi. Jurnal  MIPA  Unsrat  Online 2013; 2(2) :115-118.
5.  Prasetyo  D,  Maryono  S,  Purwanto  B. Pengaruh  Ekstrak  Propolis  terhadap Peningkatan  Ekspresi  p21,  Ekspresi Protein Bax dan  Induksi  Apoptosis  Pada Kultur Sel Kanker Kolon ( Cell Line WiDr ). Biomedika 2017; 9(1) :14-23.
6. Mutiah  R,  Listyanan  A,  Suryadinata  A.
Aktivitas  Antikanker  Kombinasi  Ekstrak
Benalu Belimbing ( Macrosolen cochinensis ) dan Bawang Sabrang
( Eleutherine palmifolia (L) Merr.) pada Sel Kanker Serviks (SEL HeLa). Trad. Med. J. 2017; 22(3) :146-152.
7. Sailillah  GS.  Toksisitas  Ekstrak  Air, Etanol  dan  Etil  Asetat  Daun  Petai  Cina ( Leucaena  leucocephala  ( Lam.)  de  Wit)
Dengan  Metode Brine  Shrimp  Lethality Test. [Skripsi].  Bogor:  Sekolah  Tinggi
Teknologi  Industri  dan  Farmasi  Bogor; 2018.
8. Hamid  AA,  Aiyelaagbe  OO,  Usman  LA, Ameen  OM,  Lawal  A.  Antioxidant  :  its Medidal and Pharmacological Applications. African Journal of pure and applied chemistry 2010; 4(8) : 142-151.
9. Lubis  MY,  Lamek  M,  Nasution  MP, Simanjuntak  P.  Uji  Fenolik  dan  Uji Toksisitas  Ekstrak  Metanol  Kulit  Jengkol ( Archidendron jiringa) . Chempublish
Journal 2016; 1(2) :42-51.
10.  Yuan  H,  Ma  Q,  Ye  L,  Piao  G.  The traditional medicine and modern medicine from natural products.
Molecules 2016; 21 :559 .
11.  Kiyohara  H,  Matsumoto  T,  Yamada  H. Combination  effects  of  herbs  in  a  multi- herbal formula: Expression of juzen-taiho- to’s  immuno-modulatory  activity  on  the intestinal  immune  system.  Evid.-Based Complement. Altern. Med. 2004; 1 :83 –91. 12.  Li,  F.S.;  Weng,  J.K.  Demystifying traditional  herbal  medicine  with  modern approach. Nat. Plants 2017; 3 :17109.
13.  Leonti,  M.;  Verpoorte,  R.  Traditional Mediterranean  and  European  herbal medicines. J.  Ethnopharmacol 2017; 199 :161 –167.
14.  Meyer  BN,  Ferrigni  NR,  Putnam  JE, Jacobsen LB, Nichols DE, McLaughlin, J L.  Brine  Shrimp:  A  Convenient  General Bioassay  for  Active  Plant  Constituent. Planta Medica 1982; 45 :31-34.
15.  Rahmiati S, Woro S. Kajian Interaksi Obat antihipertensi  Pada  Pasien  Hemodialisis Di  Bangsal  Rawat  Inap  RSU  PKU Muhammadiyah Yogyakarta Periode Tahun  2010. Jurnal  Ilmuah  Kefarmasian 2012; 2(1) :97-110.
16.  Mahardika  AB,  Subagus  W,  Mae  SHW. Sitotoksisitas Senyawa Hasil Isolasi Daun Tithonia  Diversifolia  ( Hemsley)  A.  Gray Terhadap sel T47D, MCF-7 dan EVSA-T. Majalah  Farmaseutik 2016; 12(2) :  401- 10.
Harry Noviardi, Sitaresmi Yuningtyas, Diah Ajeng Tri,
Toksisitas kombinasi ekstrak etanol 70% daun petai cina
Ahmad Ben,  Padmono Citroreksoko
( Leucaena leucocephala ( Lam.) de Wit ) dan kulit jengkol ( Archidendron jiringa (Jack) I.C.Nielsen) dengan metode Brine Shrimp Lethality Test
17.  Clarkson  C,  Maharaj  VJ,  Crouch  NR, Grace  OM,  Pillay  P,  Matsabisa  MG,
Bhagwandin N, Smith PJ, Folb PI. In Vitro
Antiplasmodial  Activity  of  Medicinal Plants  Native  to  or  Naturalized  in  South Africa. J Ethnopharm 2004; 92 :177-191.
18. Woo HD, Kim J. Dietary Flavonoid Intake and  Risk  of  Stomach  and  Colorectal
Cancer. World Journal of Gastroenterology 2013; 7 :1011-1019.