## EFEKTIVITAS BIOLARVASIDA EKSTRAK DAUN KEMANGI (Ocimum basilicum) TERHADAP LARVA Aedes aegypti

## THE EFFECT OF BASIL (Ocimum basilicum) LEAVES EXTRACT AS BIOLARVACIDE AGAINST Aedes aegypti LARVAE
Anastasia Christella 1 , Robby Makimian 2 , Rita Dewi 3, *
1 Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Unika Atma Jaya, Jalan Pluit Raya no. 2, Jakarta Utara, 14440
2 Departemen Parasitologi, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan  Unika Atma Jaya, Jalan Pluit Raya no. 2, Jakarta Utara, 14440
3 Departemen Biokimia-Kimia, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Unika Atma Jaya, Jalan Pluit Raya no. 2, Jakarta Utara, 14440
* Korespondensi: rita.dewi@atmajaya.ac.id

## ABSTRACT
Introduction:  Indonesia  as  a  tropical  country  is  vulnerable  to  mosquito-borne  diseases  like  dengue  fever, chikungunya, and zika by Aedes aegypti mosquito. Various efforts have been made to eradicate mosquitoes, one of which is by fogging. But this method only eradicates adult mosquitoes and its smoke can also have a bad impact for human health. Therefore, a variety of herbal plants began to be used as biolarvacide, including basil plants (Ocimum basilicum).
Methods: This is an experimental research by comparing the lethal effect between concentration and time. In this experiment there were 10 larvas used for each concentration, which were 0,4%, 0,7%, 1,0%, 1,5%, and 2,0%. The lethal effect arising in larval groups is observed every 1 hour in the first 6 hours, and subsequently every 3 hours until 24 hours after exposure.
Results:  With  one  way  ANOVA  test,  the  result  is  p=0,012  (p<0,05)  this  shows  that  there  is  a  significance difference between the different concentrations and the lethal effect of  A.aegypti larvae. With Friedman test, the result is p=0,000 (p<0,05), this shows that there is a significance difference between the different time of exposure of the extract and the lethal effect of A.aegypti larvae.
Conclusion:  Leaves  extract  of  O.basilicum  has  lethal  effect  as  biolarvacide  against  A.aegypti  larvae.  The higher  concentration  and  the  longer  time  of  exposure  to  O.basilicum  extract,  increases  the  lethal  effect  of A.aegypti larvae.
Key Words: Aedes aegypti, basil leaves, biolarvacide, Ocimum basilicum

## ABSTRAK
Pendahuluan: Indonesia  sebagai  negara  beriklim  tropis  rentan  terkena  berbagai  penyakit  yang  ditularkan oleh nyamuk, seperti demam dengue, chikungunya, dan zika yang disebabkan oleh nyamuk Aedes aegypti . Berbagai upaya telah dilakukan untuk memberantas nyamuk ini, salah satunya adalah dengan pengasapan. Namun cara ini hanya dapat memberantas nyamuk dewasa, selain itu asapnya juga dapat berdampak buruk bagi kesehatan manusia. Maka dari itu berbagai tanaman herbal mulai digunakan sebagai biolarvasida, antara lain tanaman kemangi ( Ocimum basilicum ). Metode: Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental  dengan  membandingkan  efek  letal  antar konsentrasi  dan  waktu.  Sampel  penelitian  ini  adalah  larva A.aegypti instar  IV  sebanyak  10  ekor  per konsentrasi.  Konsentrasi  ekstrak  daun O.basilicum yang  digunakan  adalah  0,4%,  0,7%,  1,0%,  1,5%,  dan 2,0%.  Efek  letal  yang  timbul  pada  kelompok  larva  diamati  pada  setiap  1  jam  dalam  6  jam  pertama,  dan selanjutnya setiap 3 jam hingga 24 jam setelah pemaparan. Penelitian ini dilakukan sebanyak dua kali. Hasil: Dengan uji one way ANOVA didapatkan hasil  p=0,012 (p<0,05),  yaitu terdapat perbedaan efek letal terhadap konsentrasi yang signifikan. Selain itu juga efek letal yang dilihat setiap satu jam selama enam jam pertama  menunjukkan  adanya  perbedaan  yang  signifikan,  yaitu  p=0,000  (p<0,05),  menggunakan  uji Friedman.
Simpulan: Ekstrak daun kemangi ( O.basilicum ) memiliki potensi sebagai biolarvasida alternatif terhadap larva A.aegypti .  Semakin tinggi  konsentrasi dan semakin lama waktu pemaparan, dapat meningkatkan efek letal terhadap larva nyamuk A.aegypti instar IV.
Kata Kunci: Aedes aegypti, biolarvasida, daun kemangi, Ocimum basilicum

## ARTIKEL PENELITIAN

## PENDAHULUAN
Indonesia sebagai negara beriklim tropis rentan  terkena  berbagai  penyakit  yang ditularkan  oleh  nyamuk. 1 Salah  satunya adalah  nyamuk Aedes  aegypti ,  yang  dapat menyebabkan  berbagai  macam  penyakit, seperti  demam  dengue,  chikungunya,  dan zika. 2-6 Kejadian penyakit yang ditularkan oleh nyamuk ini meningkat saat terjadi perubahan iklim,  kenaikan  suhu,  dan  juga  kemampuan nyamuk  untuk  beradaptasi  terhadap  paparan obat nyamuk. 1,7
Berbagai  upaya  telah  dilakukan  untuk memberantas  nyamuk  ini,  salah  satunya adalah  dengan  pengasapan.  Namun  cara  ini hanya  dapat  memberantas  nyamuk  dewasa dan  tidak  dapat  membunuh  telur  dan  jentik- jentik  nyamuk.  Selain  itu,  bahan-bahan pestisida dalam asapnya juga dapat berdampak buruk bagi kesehatan manusia. 8
Oleh  karena  itu  berbagai  tanaman herbal mulai digunakan sebagai biolarvasida, antara  lain  tanaman  kemangi  ( Ocimum basilicum ). 9,10 Tanaman  ini  dikenal  sebagai tanaman  sayuran  yang  sering  digunakan sebagai lalap dan bahan masakan. 11,12 Namun selain  itu  tanaman  kemangi  juga  dapat digunakan sebagai antimikroba dan insektisida. 13
Pada daun O.basilicum terdapat beberapa senyawa, seperti linalool yang dapat memberikan  efek  toksik  pada  sistem  trakeal dan  pencernaan  larva,  sehingga  dapat menyebabkan  perubahan  morfologi  pada larva. 14-16 Selain  itu  juga  terdapat  eugenol yang  berperan  sebagai    racun  kontak,  perut dan juga pernafasan. 17-18 Kandungan lainnya
adalah  1,8-cineol  yang  juga  memiliki  efek racun kontak. 19-21
Penelitian  serupa  telah  dilakukan  oleh Rizky  (2017),  menggunakan  ekstrak  etanol 70%  daun O.basilicum dengan  konsentrasi 0,2%, 0,3%, 0,4%, 0,5%, 0,75%, 1% dan 2%, terhadap larva instar III. Kemudian didapatkan hasil  bahwa Lethal  Concentration  50 (LC 50 ) adalah  0,763%  dan Lethal  Concentration  90 (LC 99 )  adalah  1,513%,  setelah  paparan selama 24 jam. 22
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  menge- tahui  potensi  biolarvasida  ekstrak  daun O.basilicum terhadap nyamuk A.aegypti serta konsentrasi  dan  waktu  yang  efektif  untuk menimbulkan  efek  letal  biolarvasida  dari nyamuk A.aegypti .

## METODE
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental yang dilakukan di laboratorium Biokimia  Fakultas  Kedokteran  dan  Ilmu Kesehatan Universitas Katolik Indonesia Atma Jaya.  Pada  penelitian  ini  daun O.basilicum diperoleh  dari  perkebunan  di  Bogor  dan kemudian  dilakukan  identifikasi  tanaman  di Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI), Pusat  penelitian  Konservasi  Tumbuhan  dan Kebun  Raya.  Penelitian  ini  diawali  dengan ekstraksi simplisia daun O.basilicum menggunakan  metode  maserasi.  Metode  ini digunakan  karena  alat  yang  digunakan sederhana, teknik ekstraksi relatif mudah dan juga tidak dilakukan pemanasan pada metode ini,  sehingga  tidak  merusak  senyawa  yang hendak  digunakan.  Pada  proses  ini,  120  g simplisia daun O.basilicum direndam di dalam
700 ml etanol 96% selama 24 jam, kemudian larutan tersebut disaring menggunakan kertas saring. 19 Langkah  ekstraksi  menggunakan etanol  96%  dengan  penyaringan  tersebut dilakukan  sebanyak  5  kali.  Selanjutnya terhadap hasil penyaringan tersebut dilakukan penguapan etanol menggunakan rotary evaporator. Ekstrak hasil penguapan dikeringkan  dengan  cara  dimasukkan  ke dalam  toples  berisi  gel  silika  hingga  ekstrak berbentuk gel dengan berat stabil. 23
Selagi menunggu ekstrak siap digunakan, dilakukan pembiakan larva A.aegypti . Telur A.aegypti yang diperoleh dari Institut  Pertanian  Bogor  (IPB),  ditetaskan  di dalam  wadah  berisi  air  bersih. 24,25 Larva  dari telur yang telah menetas dipelihara dan diberi makanan  ikan  sebagai  sumber  makanan, kemudian dilakukan observasi dengan mengamati morfologinya hingga berkembang menjadi larva instar IV selama sekitar 8 hari. 26
Pengujian efikasi ekstrak daun O.basilicum diawali dengan melarutkan ekstrak  daun O.basilicum ke  dalam  air menjadi  5  konsentrasi  berbeda  (0,4%,  0,7%, 1,0%, 1,5%, 2,0%). Selain itu juga digunakan kontrol  negatif  berupa  air  saja  tanpa  larutan ekstrak daun O.basilicum . Selanjutnya dilakukan  pemindahan  10  larva  kedalam masing-masing  konsentrasi  ekstrak  dengan menggunakan  pipet.  Jumlah  larva  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  ditentukan dengan menggunakan rumus Federer dengan hasil  perhitungan  minimal  5  sampel  untuk setiap  kelompoknya.  Oleh  karena  itu,  dalam
penelitian  ini  digunakan  10  larva  untuk masing-masing sampel konsentrasi, sehingga total  larva  yang  digunakan  adalah  sebanyak 110 larva. Pada penelitian ini digunakan larva stadium  IV,  karena  pada  stadium  ini pertumbuhan  larva  sudah  lebih  lengkap  dan pertahanan  tubuh  larva  juga  sudah  lebih maksimal. Pengamatan larva A.aegypti diamati  secara  visual  setiap  1  jam  selama  6 jam  dan  setelah  itu  setiap  3  jam  sampai dengan  24  jam.  Jumlah  larva  yang  mati dihitung dan dicatat pada setiap pengamatan. Percobaan tiap konsentrasi diulang sebanyak 2 kali.
Data  yang  terkumpul  akan  diolah dengan  menggunakan  uji  statistik one  way ANOVA untuk mengetahui hubungan konsentrasi terhadap efek letal, bila syarat uji parametrik  terpenuhi.  Bila  tidak,  maka digunakan  uji  alternatif  Kruskal-Wallis.  Untuk menguji hubungan waktu pemaparan terhadap  efek  letal,  digunakan  uji repeated ANOVA bila  syarat  uji  parametrik  terpenuhi, bila  tidak  maka  digunakan  uji  alternatif Friedman.

## HASIL
Pada  jam  pertama  setelah  paparan larutan ekstrak daun O.basilicum dapat dilihat pada Tabel 1, bahwa hanya pada konsentrasi 2,0% yang memiliki efek letal pada larva, yaitu sebanyak  25%.  Selanjutnya  pada  jam berikutnya,  jam  kedua  setelah  pemaparan, dapat  dilihat  bahwa  larva  pada  konsentrasi lain mulai mengalami efek letal.
Tabel 1. Efek letal antar konsentrasi ekstrak O.basilicum dan waktu terhadap larva A.aegypti instar IV Waktu (Jam) Efek letal (%) Konsentrasi 0% (Kontrol negatif) Konsentrasi 0,4% Konsentrasi 0,7% Konsentrasi 1,0% Konsentrasi 1,5% Konsentrasi 2,0% 1 0 0 0 0 0 25 2 0 5 5 10 20 35 3 0 5 15 20 45 40 4 0 5 15 45 60 70 5 0 5 20 55 60 75 6 0 10 25 65 75 80 9 0 35 45 90 100 100 12 0 65 75 100 100 100 15 0 80 85 100 100 100 18 0 100 100 100 100 100 21 0 100 100 100 100 100 24 0 100 100 100 100 100
Kemudian  pada  jam-jam  berikutnya tetap terjadi peningkatan efek letal pada larva, hingga  pada  jam  kesembilan,  larva  pada konsentrasi  1,5%  dan  2,0%  mengalami  efek letal  sebanyak  100%.  Pada  jam kedua  belas larva pada konsentrasi 1,0% mengalami efek letal sebanyak 100%. Pada konsentrasi 0,4% dan  0,7%  ditemukan  efek  letal  larva  100% pada jam kedelapan belas.
Pada  penelitian  ini  juga  digunakan kontrol negatif, yaitu 10 larva A.aegypti instar IV yang ditempatkan di dalam wadah berisi air saja. Setelah 24 jam percobaan, dapat diamati bahwa kesepuluh larva tersebut tetap hidup.
Hasil  dari  penelitian  ini  menunjukkan bahwa  ekstrak  daun O.basilicum dapat berperan  sebagai  biolarvasida  dari  larva
A.aegypti instar IV. Penelitian ini menunjukan bahwa peningkatan konsentrasi dapat meningkatkan  jumlah  larva A.aegypti yang mati.  Demikian  juga  dengan  waktu,  semakin lama  waktu  yang  digunakan,  semakin meningkat  pula  jumlah  larva A.aegypti yang mati.
Efek  letal  dari  larva A.aegypti terhadap konsentrasi dari ekstrak daun O.basilicum diuji dengan menggunakan uji parametrik one way ANOVA  dan  diperoleh  nilai  p=0,012,  yaitu p<0,05.  Sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa rata-rata  efek  letal  yang  disebabkan  oleh kelima konsentrasi berbeda secara signifikan.
Uji  efek  letal  dari  larva A.aegypti terhadap  waktu  pemaparan  ekstrak  daun O.basilicum menggunakan uji non-parametrik Friedman  diperoleh  nilai  p=0,000  (p<0,05) yang menunjukkan H ᴏ ditolak dan Hα diterima.
Dengan  demikian  dapat  disimpulkan  bahwa terdapat perbedaan yang signifikan pada efek letal  larva A.aegypti terhadap  waktu  paparan ekstrak daun O.basilicum .

## DISKUSI
Hasil yang didapatkan dari penelitian ini mendukung  teori  bahwa  daun O.basilicum dapat berpotensi sebagai biolarvasida alternatif dari nyamuk A.aegypti . Hal ini dapat terjadi  akibat  dari  kandungan  senyawa linalool,  eugenol,  dan  1,8-cineol  dalam  daun
O.basilicum yang  memiliki  efek  toksik  pada larva nyamuk.
Bila  dibandingkan  dengan  penelitian Rizky  (2017)  yang  mendapatkan  LC 50 pada konsentrasi 0,763% dan LC 99 pada konsentrasi  1,513%  setelah  24  jam,  pada penelitian  ini,  efek  letal  larva  setelah  24  jam pada  semua  konsentrasi  uji  telah  mencapai 100%. 22 Hal ini kemungkinan disebabkan oleh penggunaan  konsentrasi  zat  pelarut  yang berbeda.  Penelitian  Rizky  menggunakan pelarut  etanol  70%  sedangkan  penelitian  ini menggunakan  pelarut  etanol  96%.  Senyawa yang berada di dalam daun O.basilicum lebih banyak yang terlarut pada konsentrasi pelarut yang  lebih  tinggi,  sehingga  ekstraksi  dengan pelarut etanol 96% menghasilkan larutan yang lebih konsentrat dibandingkan dengan ekstraksi  menggunakan  pelarut  etanol  70%. Hal  ini  menyebabkan  terjadinya  efek  yang lebih  letal  pada  uji  dengan  pelarut  ekstraksi etanol  96%  dibandingkan  dengan  uji  dengan pelarut ekstraksi etanol 70%, pada konsentrasi yang sama.
Pada  penelitian  ini  terdapat  beberapa keterbatasan  yang  harus  dipertimbangkan, seperti  dibutuhkannya  keterampilan  untuk memindahkan larva dari wadah kembang biak kedalam wadah uji. Dalam pemindahan larva, peneliti  menggunakan  pipet  plastik  dengan diameter kurang lebih sebesar 2 mm. Proses pemindahan  larva  ini  harus  dilakukan  satu persatu dengan hati-hati agar larva tetap utuh dan  tidak  mengalami  cedera  mekanik  akibat pemindahan.  Selain  itu,  pada  konsentrasi yang lebih besar, larutan tampak lebih keruh, sehingga dibutuhkan penerangan lebih dalam pengamatan  larva.  Pada  penelitian  ini  juga ada  beberapa  faktor  eksternal  yang  tidak
dapat  dikontrol,  seperti  suhu,  kelembaban udara, dan intensitas cahaya.
Penggunaan daun O.basilicum ini dapat digunakan oleh masyarakat untuk membasmi larva nyamuk A.aegypti. Berbacai cara dapat dilakukan,  salah  satunya  adalah  dengan melarutkan  ekstrak  daun O.basilicum ke dalam  bak  mandi  atau  pada  tempat  yang sering  tergenang  oleh  air,  seperti  pada  ban bekas atau pot kosong di kebun.

## SIMPULAN
Ekstrak daun O.basilicum memiliki efek biolarvasida terhadap larva A.aegypti instar IV. Konsentrasi yang tinggi dan waktu pemaparan yang  lama  dapat  meningkatkan  efek  letal terhadap larva nyamuk A.aegypti instar IV.
Berdasarkan  hasil  dan  pembahasan penelitian  ini,  maka  dapat  disampaikan beberapa  saran,  antara  lain  uji  efektivitas ekstrak  daun O.basilicum diulang  sebanyak lebih  dari  dua  kali.  Pengeringan  ekstrak sebaiknya dilakukan dalam  satu wadah yang sama untuk menghindari penyebaran zat aktif dalam ekstrak yang tidak merata pada wadah pengeringan yang berbeda. Dianjurkan penggunaan  pipet  plastik  dengan  diameter sedikit  lebih  besar  dari  2  mm  untuk memudahkan  pemindahkan  larva.  Penelitian selanjutnya  perlu  melakukan  penelitian  pada konsentrasi yang lebih kecil.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Intan  N.  Bahaya  penyebaran  penyakit  ditularkan nyamuk  [Internet].  Republika  Online.  2017  [cited 2019  Mar  4].  Available  from:  https://republika.co. id/share/oxk0uu284
2. What  is  the  Aedes  aegypti  mosquito?  [Internet]. [cited  2019  Mar  4].  Available  from:  https:// mosquitoes.scjohnson.com/info/aedes-aegypti.html
3. Candra A. Dengue hemorrhagic fever:
Epidemiology,  pathogenesis,  and  its  transmission risk factors. 2010;2(2):110 –6.
4. Brooks  G,  Carroll  KC,  Butel  J,  Morse  S.  Jawetz Melnick  &  Adelbergs  medical  microbiology  26/E.
[Internet].  Blacklick:  McGraw-Hill  Publishing;  2012 [cited  2019  Mar  9].  Available  from:  http://public. eblib.com/choice/publicfullrecord.aspx?p=4958514
5. Soegijanto S. Kumpulan makalah penyakit tropis di Indonesia  Jilid  1.  Surabaya:  Airlangga  University Press; 2016.
6. Seda H. Dengue and the Aedes aegypti mosquito. CDC. 2012 Jan 30;1 –2.
7. Karyanti MR, Hadinegoro SR. Perubahan epidemiologi  demam  berdarah  dengue  di  Indone- sia. Sari Pediatri. 2016 Nov 29;10(6):424 –30.
8. Hermana B. Awas, “Fogging”! [Internet]. [cited 2019 Mar  4].  Available  from:  https://www.kompasiana. com/budihermana/550f626b813311ba2cbc6862/a was-fogging?page=al
9. Amin  M.  Selasih/kemangi  [Internet].  Biodiversity Warriors. 2016 [cited 2019 Mar 4]. Available from: http://biodiversitywarriors.org/isi-katalog.php?idk=5158
10.   Rahmawati  M.  Kemangi  [Internet].  Biodiversity
Warriors.  2016  [cited  2019  Mar  4].  Available  from: http://biodiversitywarriors.org/isi-katalog.php?idk=4911
11.   Widyaningrum  H.  Kitab  tanaman  obat  nusantara. Yogyakarta: MedPress; 2011. 309 –310 p.
12.   Hardiman  I,  editor.  Sehat  alami  dengan  herbal. Jakarta: Penerbit PT Gramedia Pustaka Utama; 2014.
13.   Solikhah S, Kusuma SBW, Wijayati N. Uji aktivitas antimikroba  ekstrak  etanol  batang  dan  daun kemangi  (Ocimum  basilicum L.).  Indones J  Chem Sci. 2016 Aug 10;5(2):105.
14.   PubChem.  Linalool  [Internet]. [cited  2019  Apr  14]. Available  from:  https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/ compound/6549
15.   ICSC 0912 - Linalool [Internet]. [cited 2019 Apr 14]. Available from: http://www.ilo.org/dyn/icsc/show card.display?p_version=2&p_card_id=0912
16.   Fujiwara  GM,  Annies  V,  de  Oliveira  CF, Lara  RA,
Gabriel  MM,  Betim  FCM,  et  al.  Evaluation  of larvicidal activity and ecotoxicity of linalool, methyl cinnamate  and  methyl  cinnamate/linalool  in combination against Aedes aegypti. Ecotoxicol En-
viron Saf. 2017 May;139:238 –44.
17.   PubChem. Eugenol [Internet]. [cited 2019 Apr 24].
Available  from:  https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/ compound/3314
18.   Sriwahyuni  P.  Toksisitas  granula  eudenol  daun cengkeh  (Syzygium  aromaticum  L.)  terhadap mortalitas larva nyamuk Aedes aegypti L. 2013 Dec 13 [cited 2019 May 6]; Available from: http://repository.unej.ac.id/handle/123456789/8740 19.   Silalahi  M.  Minyak  essensial  pada  kemangi (Ocimum basilicum L.). 2018;557 –63.
20.   Govindarajan  M,  Sivakumar  R,  Rajeswary  M,
Yogalakshmi  K.  Chemical  composition  and larvicidal  activity  of  essential  oil  from  Ocimum basilicum  (L.)  against  Culex  tritaeniorhynchus, Aedes  albopictus  and  Anopheles  subpictus (Diptera: Culicidae). Exp Parasitol. 2013 May;134(1):7 –11.
21.   Omara T, Kateeba FK, Musau B, Kigenyi E, Adupa E,  Kagoya  S.  Bioinsecticidal  activity  of  eucalyptol and  1R-alpha-pinene  rich  acetonic  oils  of Eucalyptus saligna on Sitophilus zeamais Motschulsky,  1855  (Coleoptera:  Curculionidae).  J Health Environ Res. 2019 Jan 22;4(4):153.
22.   Purwanti  R.  Uji  efektivitas  ekstrak  daun  kemangi (Ocimum  basilicum  L.)  sebagai  larvasida  Aedes aegypti  instar  III  [Internet].  Universitas  Airlangga; 2017. Available from: http://repository.unair.ac.id/66378/
23.   Permana  E.  Ekstraksi  dengan  metode  maserasi (tanpa  pemanasan)  untuk  bahan  pestisida  nabati [Internet].  [cited  2020  Jan  8].  Available  from: http://balaipontianak.ditjenbun.pertanian.go.id/web/ page/title/218/ekstraksi-dengan-metode-maserasi- tanpa-pemanasan-untuk-bahan-pestisida-nabati? post_type=berita
24.   Sutanto I, Ismid I, Sjarifuddin P, Sungkar S, editors. Buku ajar parasitologi kedokteran. 4th ed. Jakarta: Badan penerbit FKUI; 2015. 265 p.
25.   Mosquito Life-Cycle | Dengue | CDC [Internet]. 2019 [cited  2019  Mar  9].  Available  from:  https://www. cdc.gov/dengue/entomologyecology/m_lifecycle.html 26.   Aradilla A. Uji efektivitas larvasida ekstrak ethanol daun  mimba  (Azadirachta  indica)  terhadap  larva Aedes aegypti. Univ Diponegoro. 2009;20 –1.