UJI TOKSISITAS SUBKRONIS INFUSA DAUN SIRIH MERAH ( Piper crocatum Ruiz & Pav)

## PADA TIKUS: STUDI TERHADAP GAMBARAN MIKROSKOPIS JANTUNG DAN KADAR SGOT DARAH

## Ignasius Kuncarli, Ipang Djunarko
Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta
Abstract: Red  betel  (Piper  crocatum  Ruiz  &  Pav)  is  one  of  the  plants  used  as  traditional  medicine community. To determine the level of safety of long-term consumption, then tested subchronic toxicity. The study  aimed  to  determine  the  relationship  spectrum  of  toxic  effects  of  infusion  with  changes  in  levels  of serum  glutamic  oxaloacetic  transaminase  (SGOT)  and  cardiac  histopathology.  The  study  was  purely experimental, randomized study design complete unidirectional pattern. A total of 40 Wistar rats (20 males and 20 females), 2-3 months were divided randomly into 4 groups: control group distilled water and 1.38; 2.07;  3.105  g/KgBW  of  red  betel  leaf  infusion  with  administration  once  daily  for  28  days.  Observations were  made  before  treatment  and  on  day  28  by  orbital  sinus  sampling  through  to  measurement  of  blood levels  of  SGOT be analyzed by one way ANOVA and partially dissected mouse to  see the damage to  the heart. The results showed there was no significant change (p <0.05) in SGOT levels compared the control group. Histology showed no specific changes were observed after administrating 28 days of red betel leaf infusion. The red betel leaf infusion did not cause significant change in SGOT level and histology of heart.
Keywords : red betel, subchronic toxicity tests, SGOT, cardiac histology.

## 1. Pendahuluan
Tanaman  sirih  merah  merupakan  salah  satu tanaman  obat  yang  daunnya  telah  lama  dikenal mempunyai  khasiat  obat  untuk  meyembuhkan berbagai  penyakit.  Efek  farmakologis  sirih  merah sebagai  antioksidan  dan  antibakteri  merupakan potensi  yang  mungkin  dapat  digunakan  untuk penyembuhan  luka  (Manoi,  2007).  Senyawa flavonoid dan polifenol sendiri  berguna  sebagai antioksidan, antiflamasi dan antidiabetes. Sementara itu, senyawa alkaloid sangat baik untuk menghambat  pertumbuhan  sel-sel  kanker.  Rebusan daun  sirih  merah  yang  diberikan  pada  tikus  putih yang  terkena  diabetes  juga  ternyata  mampu menurunkan  kadar  gula.  Hal  ini  merupakan  salah satu  bukti  bahwa  sirih  merah  dapat  digunakan sebagai  pengontrol  gula  darah  dalam  tubuh penderita  diabetes  mellitus.  Kandungan karvakrol dalam  sirih  merah  memiliki  manfaat  sebagai desinfektan  dan  antijamur,  sangat  baik  jika digunakan  sebagai  obat  kumur  dan  keputihan (Ningrum dan Murtie, 2013).
Beberapa  penelitian  tentang  daun  sirih  merah sebagai  obat  telah  dilakukan,  yaitu  sebagai imunomodulator,  memiliki  sifat  sebagai  anti inflamasi,  anti  fungi,  anti  diare,  analgetik  dan masih banyak lagi. Penelitian yang dilakukan oleh Salim  (2006)  pada  rebusan  sirih  merah  dengan dosis  20  g/KgBB memiliki  efek  antihiperglikemia dengan  menurunkan  kadar  glukosa  darah  tikus diabetes  galur Sprague-Dawley yang  telah diinduksi aloksan tetrahedrat dari 17,76 % - 40,17 %.  Minyak  atsiri    pada  daun  sirih  merah berpengaruh  terhadap  penurunan  berat  badan  dan berpotensi sebagai pelangsing aromaterapi (Utami, 2011).  Pada  uji  aktivitas  fagositosis  makrofag senyawa  kode  pc-2  dari  daun  sirih  merah  secara in-vivo ,  menyatakan  bahwa  pada  dosis  10  mg/Kg BB  senyawa  kode  Pc-2  dari  ekstrak  metanolik daun  sirih  merah  mampu  meningkatkan  aktivitas fagositosis  makrofag  peritoneal  mencit  yang diinduksi  dengan  bakteri Lysteria  monocytogenes baik  pada  parameter  indeks  fagositosis,  persen fagositosis maupun efisiensi fagositosisnya (Hartini, Wahyuono, Widyarini, Yuswanto, 2013).
Namun,  belum  ada  penelitian  guna  mengetahui pengonsumsian  daun  sirih  merah  dalam  jangka waktu yang lama, sehingga diperlukan uji toksisitas. Tujuan  uji  toksisitas  adalah  untuk  mengetahui spektrum  efek  toksik  serta  hubungan  dosis  dan toksisitas  pada  pemberian  berulang  dalam  jangka waktu  tertentu.  Umumnya  pengukuran  toksisitas dapat  dilakukan  secara in  vivo yang  menggunakan hewan  percobaan.  Pada  uji  toksisitas  akut  yang dilakukan  oleh  Salim  (2006),  rebusan  daun  sirih merah  tidak  memiliki  toksisitas  hingga  dosis  20 g/KgBB.  Hingga  saat  ini,  belum  ada  penelitian mengenai  potensi  ketoksikan  sirih  merah  jika digunakan  dalam  jangka  waktu  yang  lama. Pentingnya pemeriksaan toksisitas subkronis dilakukan  terutama  terhadap  pemakaian  obat tradisional  atau  tanaman  obat  yang  sering digunakan  dalam  jangka  waktu  lama,  guna mengetahui  spektrum  efek  toksik  yang  disebabkan oleh  infusa  daun  sirih  merah.  Pemilihan  infusa karena  sediaan  ini  sering  digunakan  dalam masyarakat  dalam  mengonsumsi  obat  tradisional. Selain  itu,  cara  pembuatannya  yang  mudah sehingga masyarakat bisa melakukannya.
Secara umum, fungsi jantung adalah memompa darah  dari  jantung  ke  seluruh  bagian  tubuh  dan menampungya  kembali  setelah  dibersihkan  oleh paru-paru.  Jika  terdapat  penurunan  fungsi  jantung, misalnya  terjadi  infeksi  otot  jantung,  dapat mempengaruhi kebutuhan oksigen serta nutrisi yang dibutuhkan  seluruh  tubuh  (Herman,  2009).    Pada nekrosis  otot  jantung,  protein  intraseluler  akan masuk  dalam  ruang  interstitial  dan  masuk  ke sirkulasi  sistemik  melalui  mikrovaskuler  lokal  dan aliran  limfatik.  Profil  kadar  petanda  biokimia terhadap  waktu  pengambilan  di  sirkulasi  perifer bergantung pada berat molekulnya, lokasi dalam sel dan  karakterisitik  pelepasannya  dan  kecepatan aliran  vaskuler  atau  limfatik  dan  klirens  sistemik. Protein – protein intraseluler meliputi salah satunya aspartate  aminotransferase (AST)  atau  serum glutamic oxaloacetic transaminase (SGOT) diperkenalkan  sebagai  salah  satu  petanda  biokimia kerusakan otot jantung (Samsu, Sargowo, 2007).
Berawal dari permasalahan ini, perlu dilakukan penelitian  mengenai  pengaruh  pemberian  infusa daun  sirih  merah  secara  subkronis  terhadap  tikus jantan  dan  betina  selama  28  hari.  Penelitian  ini
iharapkan  dapat  memberikan  informasi  kepada masyarakat  mengenai  potensi  ketoksikan  akibat pemakaian  berulang  infusa  sirih  merah  dengan melihat perubahan kadar SGOT, dalam darah tikus serta  perubahan  mikroskopis  pada  organ  jantung pada tikus, di mana penelitian ini adalah salah satu uji toksisitas subkronis infusa daun sirih merah

## 2. Metode Penelitian
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah  empat  puluh  tikus  putih  galur Wistar di mana  20  jantan  dan  20  betina  berumur  2-3  bulan, berat  badan  100  –  200  gram.  Daun  sirih  merah berasal  dari  Sewon,  Bantul  diambil  yang  masih muda  pada  bulan  Maret  2013. Aquadest untuk asupan  minum  dan  sebagai  pelarut  dalam pembuatan infusa. Pelet BR-2 untuk asupan pakan. Alat yang digunakan antara lain, mesin penyerbuk ( blender ), timbangan, oven , bekker glass, timbangan,  batang  pengaduk,  gelas  ukur,  panci infusa, heater ,  s topwatch ,  kain  flannel,  kandang tikus  ( metabolic  cage ),  timbangan,  Beker  gelas, jarum  suntik  per  oral,  spuit  injeksi, Eppendorf , pipa kapiler ( haematokrit ).
Tata  cara  yang  dilakukan  yaitu  determinasi tanaman. Setelah determinasi, dilakukan pengumpulan  daun  sirih  merah  dalam  kondisi segar  dan  berwarna  hijau  pada  bagian  tengah antara pucuk dan pangkal  daun. Bahan  yang telah didapat,  dipetik,  dicuci,  dikeringkan,  kemudian dimasukkan  ke  dalam  oven  dengan  suhu  ± 50 o C selama  24  jam.  Daun  yang  telah  kering  kemudian diserbuk dan diayak dengan menggunakan ayakan no.  30,  dan  dilakukan  perhitungan  rendemen serbuk  daun  sirih  merah.  Dari  perhitungan rendemen,dilakukan penetapan kadar air menggunakan  metode  gravimetri  dengan  bantuan alat Moisture  Balance .  Dimasukkan  ±5  g  serbuk daun  sirih  merah  ke  dalam  alat,  kemudian diratakan.  Timbang  bobot  zat  sebagai  bobot sebelum pemanasan (bobot a) panaskan pada suhu 110 ⁰ C  selama  30  menit.  Setelah  itu,  ditimbang bobot  zat  setelah  pemanasan  (bobot  b).  Selisih bobot  a  dan  bobot  b  merupakan  kadar  air  yang diselidiki.
Penetapan  dosis  infusa  daun  sirih  merah berdasarkan  pemakaian  daun  sirih  merah  di masyarakat,  yaitu  sekitar  7-8  helai  daun  sirih
merah  sekitar  23  gram.  Dosis  terapi  infusa  daun sirih merah adalah 23g/70Kg BB untuk manusia 70 Kg.  Konversi  manusia  (70  kg  ke  tikus  200  g)  = 0,018  (Laurence  and  Bacharach,  1964).  Dalam penelitian ini dibuat 3 peringkat  dosis,  dengan cara menggunakan  kelipatannya.  Angka  kelipatan  yang digunakan  sebesar  satu  setengah  kalinya,  sehingga diperoleh  tiga  peringkat  dosis  yaitu  1,38  ;  2,07  ; 3,105  g/kgBB.  Untuk  penentuan  dosis aquadest digunakan dosis  tertinggi  untuk  mengetahui jumlah volume  maksimum  yang  diberikan  kepada  hewan uji.  Dosis  tertinggi  3,105  g/kgBB,  dan  didapatkan dosis  sebesar  15,252  g/Kg  BB.  Pembuatan  infusa dilakukan  dengan  merebus  20  g  serbuk  daun  sirih merah  dalam  100  mL aquadest selama  15  menit pada  90 0 C.  Setelah  dingin,  larutan  disaring  dengan kain  flanel  dan  di  tambahkan  volumenya  dengan aquadest hingga  100  mL.  Konsentrasi  infusa  yang didapat  adalah  20%.  Pada  penelitian  ini  digunakan empat  puluh  ekor  tikus,  dibagi  menjadi  empat kelompok secara acak, yaitu satu kelompok kontrol dan  tiga  kelompok  perlakuan,  masing-masing kelompok  uji  terdiri  dari  sepuluh  ekor  tikus  (lima jantan  dan  lima  betina).  Kelompok  II  sampai  IV diberi  perlakuan  infusa  daun  sirih  merah  dengan peringkat  dosis  berturut-turut,  yaitu  1,38  ;  2,07  ; 3,105  g/KgBB  tikus.  Kelompok  I,  yaitu  kelompok kontrol kontrol diberi aquadest dengan dosis 15,252 g/KgBB.
Sediaan  uji  berupa  infusa  daun  sirih  merah diberikan  pada  hewan  uji  sesuai  dosis  pemberian dengan kekerapan pemberian satu kali sehari selama 28  hari  pada  tikus  jantan  dan  betina  dengan  tetap diberi makan dan minum. Pada awal dan akhir masa uji yaitu pada hari pertama dan dua puluh sembilan, darah  semua  tikus  diambil  melalui sinus  orbital mata,  ditampung  pada Eppendorf berisi  heparin untuk  diambil  serum  darah  kemudian  dilakukan pengukuran  kadar  SGOT  darah  tikus.  Pengukuran kadar  SGOT  darah  dilakukan  di  Parahita  Medical Lab.  Pada  hari  ke-29  juga  dilakukan  pembedahan setengah  dari  hewan  uji  baik  jantan  maupun  betina untuk  dilakukan  pemeriksaan  histopatologi.  Pada hari  ke-42  (14  hari  setelah  28)  dilakukan pembedahan  hewan  uji  yang  tersisa  untuk  melihat reversibilitas .
Pengamatan  dilakukan  dengan  melihat  berat badan, jumlah pakan dan jumlah minum pada tikus.
Pengamatan  berat  badan  terhadap  hewan  uji dilakukan  dengan  cara  menimbang  hewan  uji dengan  timbangan  tiap  hari.  Perhitungan  purata berat  badan  tikus dilakukan  dengan  cara menambahkan  berat  badan  tikus  kemudian  dibagi dengan  jumlah  tikus  ditiap  kelompok  dilakukan pada  hari  0,  7,  14,  21,  28.  Hewan  uji  diberikan asupan  pakan  setiap  hari  sebanyak  20  g  dan dilakukan  penggantian  pakan  setiap  harinya.  Cara mengukur  besarnya  asupan  pakan  tikus  yaitu dengan  menimbang  pakan  yang  diberikan  pada hari  pertama,  kemudian  pada  hari  kedua  pakan yang  masih  tertinggal  pada  wadah  ditimbang. Selisih penimbangan antara berat pakan hari kedua dengan berat badan hari pertama, dihitung sebagai asupan  makanan  yang  dihabiskan  pada  hari pertama.  Hewan  uji  diberikan  minum  berupa aquadest sebanyak  150  mL.  Minuman  diberikan dalam  wadah  botol  kaca  yang  diberi  pipa  seperti tabung  reaksi  yang  diberi  lubang  pada  ujungnya. Pengukuran  asupan  minum  hewan  uji  dilakukan dengan cara memasukkan 150 mL air pada wadah dihari  pertama,  kemudian  pada  hari  kedua  jumlah sisa air yang masih terdapat dalam botol dihitung.
Selanjutnya,  dalam  menganalisa  data,  pada kadar  SGOT  darah  tikus  dianalisis  dengan  uji Kolmogorov Smirnov untuk melihat distribusi data tiap  kelompok.  Apabila  distribusi  data  normal maka  analisis  dilanjutkan  dengan  analisis  pola searah ( One Way ANOVA ) dengan taraf kepercayaan    95%.  Untuk  mengetahui  ada tidaknya  perbedaan  bermakna  sebelum  dan sesudah  perlakuan  dilakukan uji  paired-T  test untuk  tiap  kelompok.  Pengukuran  berat  badan tikus sebagai data pendukung dalam penelitian ini. Pengukurannya  dengan  dihitung  purata  kenaikan berat badan pada hari ke 0, 7, 14, 21, dan pada hari ke  28.  Data  perubahan  berat  yang  telah didapatkan, selanjutnya dianalisis dengan menggunakan General  Linier  Model dengan metode multivariate .  Asupan  pakan  dan  minum yang  diperoleh,  diolah  sehingga  didapatkan  data pengukuran  asupan  pakan  dan  minum  tikus. Selanjutnya  menghitung  purata  harian  asupan pakan  hewan  uji.  Setelah  28  hari,  profil  pola makan  dibuat  dengan  menggunakan  grafik. Pembacaan  preparat dilakukan  di  Fakultas Kedokteran Hewan UGM. Perubahan jantung yang
diamati  meliputi  kejadian  perubahan  susunan  sel dan  jaringan  pada  otot  jantung.  Pengamatan dilakukan  di  bawah  mikroskop  cahaya  pembesaran 400x dengan bantuan video mikrometer.

## 3.    Hasil dan Pembahasan
Determinasi tanaman dilakukan untuk menentukan  jenis  tanaman  apa  yang  peneliti gunakan  dalam  penelitian.  Hal  itu  dikarenakan tanaman  memiliki  berbagai  macam  varietas.  Hasil determinasi  menyimpulkan  bahwa  tanaman  sirih merah  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah benar  tanaman  sirih  merah  dengan  nama  ilmiah Piper  crocatum Ruiz  &  Pav.  Hasil  penyerbukkan dan  pengayakan  didapatkan  230,18  g  serbuk  daun sirih merah dengan rendemen sebesar 23,018% b/b.
Pada  pemeriksaan  kadar  SGOT  dilakukan pre (sebelum)  pemberian  infusa  daun  sirih  merah  dan
post (setelah)  pemberian  infusa  daun  sirih  merah selama  28  hari.  Hal  ini  ditujukan  untuk  melihat kebermaknaan  perbedaan  kadar  SGOT  darah sebelum  dan  seudah  pemberian  infusa  daun  sirih merah. Terdapat empat kelompok perlakuan dalam penelitian  ini,  yaitu  kelompok  kontrol aquadest 15,525  g/KgBB  sebagai  kontrol  pelarut  dan kelompok perlakuan infusa daun sirih merah, dosis 1,38 ; 2,07 ; 3,105 g/KgBB. Penggunaan aquadest sebagai kelompok kontrol bertujuan untuk melihat pengaruh aquadest sebagai  pelarut  infusa  daun sirsih  merah  terhadap  kadar  SGOT  darah  pada pemberian secara subkronis. Selama 28 hari, kadar SGOT darah pada tiap kelompok diukur ketika pre dan post pemberian  infusa  daun  sirih  merah. Selanjutnya, dianalisis dengan uji Paired T-test .
Tabel I. Uji Paired T-test pada Tikus Jantan Tiap Kelompok Perlakuan serta nilai p Kadar SGOT
Kelompok Perlakuan ( g/KgBB)
Kadar SGOT Darah (mg/dl)
Nilai p Pre
(Rerata ± SE ) Post
(Rerata ± SE ) I Kontrol aquadest 15,525 127,64 ± 4,79 123,64 ± 8,32 0,118 TB II IDSM 1,38 127,60 ± 10,23 119,74 ± 8,01 0,373 TB III IDSM 2,07 139,0 ± 15,48 113,01 ± 11,95 0,086 TB IV IDSM 3,105 143,44 ± 6,25 130,66 ± 16,99 0,110 TB
Ket. : TB  = Berbeda tidak bermakna (nilai p>0,05), Pre = Sebelum perlakuan, Post =Setelah perlakuan, IDSM = Infusa daun sirih merah, SE = Standar Error
Tabel II. Uji Paired T-test pada Tikus Betina Tiap Kelompok Perlakuan Serta Nilai p Kadar SGOT
Kelompok Perlakuan (g/KgBB)
Kadar SGOT Darah (mg/dl)
Nilai p Pre (Rerata± SE ) Post (Rerata± SE ) I Kontrol aquadest 15,525 138,18 ± 12,79 92,14 ± 4,50 0,984 TB II IDSM 1,38 112,66 ± 3,87 108,00 ± 8,06 0,606 TB III IDSM 2,07 116,34 ± 6,48 101,44 ± 10,28 0,097 TB IV IDSM 3,105 122,73 ± 11,92 93,32 ± 3,57 0,442 TB
Ket. : TB  = Berbeda tidak bermakna (nilai p>0,05), Pre = Sebelum perlakuan, Post =Setelah perlakuan, IDSM = Infusa daun sirih merah, SE = Standar Erro
Berdasarkan  data  pada  tabel  I,  menunjukkan bahwa  kadar  SGOT  darah  tikus  jantan  pada kelompok kontrol aquadest pada pre dan post masa uji menyatakan pemberian aquadest tidak memberikan pengaruh terhadap kadar SGOT darah. Pada  kelompok  perlakuan  infusa  daun  sirih  merah 1,38;  2,07;  3,105  g/KgBB,  kadar  SGOT  darah pre dan post infusa daun sirih merah menunjukkan hasil berbeda  tidak  bermakna  (p>0,05).  Kadar  SGOT darah post tikus  jantan pemberian infusa daun sirih merah  selama  28  hari  dianalisis  menggunakan varian  satu  arah  ( One  Way  Anova ).  dengan  tujuan melihat  adakah  pengaruh  pemberian  infusa  daun sirih  merah  pada  kelompok  perlakuan  infusa  daun sirih  merah  yang  dibandingkan  terhadap  kelompok perlakuan  kontrol aquadest .  Hasil  analisis  varian satu  arah  terhadap  kadar  SGOT  darah post tikus jantan pemberian infusa daun sirih merah diperoleh nilai  probabilitas  sebesar  0,767  (p>0,05).  Hasil  ini menunjukkan  perbedaan  tidak  bermakna  antar kelompok perlakuan pada tikus jantan.
Selanjutnya  data  kadar  SGOT  darah pre dan post pemberian  infusa  daun  sirih  merah  pada kelompok  kontrol  dan  kelompok  perlakuan  infusa daun sirih merah dosis dianalisis dengan uji Paired T-tes. Hal ini bertujuan untuk melihat kebermaknaan  perbedaan  dari  tiap  perlakuan. Kelompok  kontrol aquadest ,  menunjukkan  hasil berbeda  tidak  bermakna  terhadap  kadar  SGOT
darah pre dan post pada  tikus  betina.  Hasil  uji yang  terdapat  pada  tabel  II  menunjukkan  bahwa nilai  probabilitas  tiap  perlakuan  pemberian  infusa daun  sirih  merah  lebih  besar  dari  pada  0,05, menunjukkan bahwa rerata kadar SGOT darah pre dan post pada  semua  kelompok  perlakuan memiliki  hasil  berbeda  tidak  bermakna  sehingga dinyatakan  bahwa  pemberian  infusa  daun  sirih merah  selama  28  hari  tidak  mempengaruhi  kadar SGOT  darah  tikus  betina.  Selanjutnya  kadar post SGOT darah diuji dengan analisis varian satu arah ( One  Way  Anova ).  Hasil  uji  varian  satu  arah terhadap  kadar  SGOT  darah  setelah  pemberian infusa  daun  sirih  merah  selama  28  hari mendapatkan  nilai  probabilitas  sebesar  0,376 (p>0,05),  yang  berarti  antara  kelompok  kontrol aquadest dan kelompok  perlakuan  infusa  daun sirih merah berbeda tidak bermakna.
Spektrum efek toksik infusa daun sirih merah terhadap  histopatologi  jantung  pada  tikus  jantan dan  betina,  dilakukan  wujud  efek  toksik  secara struktural  selama  28  hari  dan  dilanjutkan  14  hari setelah  pemejanan  untuk  melihat reversibilitas yang  terjadi.  Uji reversibilitas dilakukan  untuk mengetahui  keterbalikan  efek  toksik  yang  terjadi setelah  senyawa  uji  tidak  diberikan,  sehingga dapat  melihat  dampak  efek  toksik  yang  muncul, apakah  memiliki  sifat  menetap  atau  kembali normal.
Tabel III. Hasil Pembacaan Preparat Organ Jantung pada Tikus Jantan
Kelompok Perlakuan Gambaran Histologis Jantung Hari ke-28 Hari ke-42 Aquadest 15,525 g/Kg BB Tidak  ditemukan  adanya  perubahan spesifik  yang teramati. Susunan sel dan jaringan tampak normal. Tidak  ditemukan  adanya  perubahan spesifik  yang  teramati.  Susunan  sel  dan jaringan tampak normal. IDSM 1,38 g/Kg BB Tidak  ditemukan  adanya  perubahan spesifik  yang teramati. Susunan sel dan jaringan tampak normal. Tidak  ditemukan  adanya  perubahan spesifik  yang  teramati.  Susunan  sel  dan jaringan tampak normal. IDSM 2,07 g/Kg BB Tidak  ditemukan  adanya  perubahan spesifik  yang teramati. Susunan sel dan jaringan tampak normal. Tidak  ditemukan  adanya  perubahan spesifik  yang  teramati.  Susunan  sel  dan jaringan tampak normal. IDSM 3,105 g/Kg BB Tidak  ditemukan  adanya  perubahan spesifik  yang teramati. Susunan sel dan jaringan tampak normal. Tidak  ditemukan  adanya  perubahan spesifik  yang  teramati.  Susunan  sel  dan jaringan tampak normal. Keterangan :IDSM = Infusa Daun Sirih Merah
Jurnal Farmasi Sains dan Komunitas
Tabel IV. Hasil pembacaan preparat organ jantung pada tikus betina
Kelompok Perlakuan Gambaran Histologis Jantung Hari ke-28 Hari ke-42 Aquadest 15,525 g/Kg BB Tidak  ditemukan  adanya  perubahan spesifik  yang teramati. Susunan sel dan jaringan tampak normal. Tidak  ditemukan  adanya  perubahan spesifik  yang  teramati.  Susunan  sel  dan jaringan tampak normal. IDSM 1,38 g/Kg BB Tidak  ditemukan  adanya  perubahan spesifik  yang teramati. Susunan sel dan jaringan tampak normal. Tidak  ditemukan  adanya  perubahan spesifik  yang  teramati.  Susunan  sel  dan jaringan tampak normal. IDSM 2,07 g/Kg BB Tidak  ditemukan  adanya  perubahan spesifik  yang teramati. Susunan sel dan jaringan tampak normal. Tidak  ditemukan  adanya  perubahan spesifik  yang  teramati.  Susunan  sel  dan jaringan tampak normal. IDSM 3,105 g/Kg BB Tidak  ditemukan  adanya  perubahan spesifik  yang teramati. Susunan sel dan jaringan tampak normal. Tidak  ditemukan  adanya  perubahan spesifik  yang  teramati.  Susunan  sel  dan jaringan tampak normal. Keterangan : IDSM = Infusa Daun Sirih Merah
Hasil  pembacaan  preparat  histopatologi  organ jantung tikus jantan dan betina dengan pengecatan hematoksilin  dan  eosin  pada  tabel  III  dan  IV menunjukkan  bahwa  tidak  ada  wujud  perubahan spesifik  yang  teramati  pada  organ  jantung. Kelompok  perlakuan,  kontrol aquadest serta perlakuan infusa daun sirih merah dosis 1,38 ; 2,07 ;  3,105  g/Kg  BB  menunjukkan  tidak  adanya kerusakan struktural pada sel jantung. Pada gambar 1,  seiring  dengan  meningkatnya  dosis  tertinggi perlakuan  infusa  daun  sirih  merah,  otot  jantung memiliki  warna  cerah,  daerah  interstitial  tampak normal,  tidak  terjadi  peregangan.  Susunan  sel  dan jaringan  pada  jantung  tampak  normal,  tidak ditemukan  adanya  sel  radang.  Tidak  adanya peradangan  dalam  kompartemen  sel  jantung menunjukkan  tidak  ada  kerusakan  pada  sel  epitel jantung  pada  semua  perlakuan  infusa  daun  sirih merah.
Berat  badan  tikus  adalah  salah  satu  data pendukung  guna  melihat  pengaruh  toksisitas. Penimbangan  berat  badan  hewan  uji  bertujuan untuk  mengetahui  kesehatan  hewan  uji  serta memantau  perubahan  berat  badan.  Pengukuran berat  badan  tikus  dilakukan  pada  hari  ke  0,  7,  14, 21, 28. Analisis perubahan berat badan tikus jantan dan  betina  dilakukan  dengan  uji General  Linear
Model dengan metode Multivariate . Guna menentukan  jumlah  purata  tiap  perlakuan,  maka dilanjutkan dengan analyze compare means dengan metode means .
Gambar 1. Preparat organ jantung pada jantan dosis infusa daun sirih merah 3.105 g/KgBB dengan perbesaran 400x, tanda anak panah menunjukkan daerah interstitial
Pada tabel V dan VI menunjukkan data purata berat badan tiap kelompok ± SE , merupakan purata berat badan tikus. Hasil analisis dengan uji General Linear  Model (metode Multivariate )  terhadap perubahan  berat  badan  tikus  jantan  menunjukkan hasil  yang  berbeda  bermakna  antara  kelompok perlakuan  dan  kontrol aquadest ,  sedangkan  pada tikus betina menunjukkan hasil yang tidak berbeda
bermakna  antara  kelompok  perlakuan  dan  kontrol aquadest .  Terjadinya  perubahan  berat  badan  dapat dikarenakan proses pertumbuhan yang dialami oleh tikus  jantan  maupun  betina  dan  adanya  pengaruh dari pemberian infusa daun sirih merah. Gambar  2
dan  3  menunjukkan  grafik  perubahan  berat  badan tikus  dengan  profil  yang  sama,  artinya  dengan pertambahan  umur  tikus  jantan  dan  betina  juga diikuti  dengan  pertambahan  berat  badan  tikus jantan.
Tabel V .Purata berat badan ± SE tikus jantan akibat pemberian infusa daun sirih merah Kelompok Perlakuan (g/kgBB) Purata berat badan  ± SE g Hari ke-0 Hari ke-7 Hari ke-14 Hari ke-21 Hari ke-28 I IDSM 1,38 151,32 ± 2,71  157,35 ± 2,97  173,755 ± 5,46  194,287 ± 7,00  209,11 ± 7,47 II IDSM 2,07 136,75 ± 3,41  142,36 ± 3,07 164,75 ± 4,53 182,84 ± 6,68  195,68 ± 8,10 III IDSM 3,105 116,51 ± 4,84  130,13 ± 5,62 147,78 ± 5,75 163,46 ± 6,77  177,83 ± 6,56 IV Aquadest 15,525 148,18 ± 6,28  160,15 ± 4,24 177,49 ± 3,10 188,27 ± 3,90  203,53 ± 3,45
Keterangan :  IDSM   = Infusa daun sirih merah , SE = Standar Error
Tabel VI .Purata berat badan ± SE tikus betina akibat pemberian infusa daun sirih merah
Kelompok Perlakuan (g/Kg BB) Purata berat badan ± SE g Hari ke-0 Hari ke-7 Hari ke-14 Hari ke-21 Hari ke-28 I IDSM 1.38 134,48 ± 4,23 139,57 ± 3,00 149,27 ± 3,88 156,77 ± 6,93 169,25 ± 6,44 II IDSM 2.07 141,71 ± 6,07 144,58± 5,19 151,15 ± 7,90 161,30 ± 5,9 164,27 ± 2,33 III IDSM 3.105 136,77 ± 7,95 141,91 ± 9,48 151,37 ± 11,51 159,77 ± 13,49 170,08 ± 13,25 IV Aquadest 15,525 119,16 ± 2,20 121,82 ± 2,73 130,83 ± 3,17 141,31 ± 4,29 154,16 ± 5,32
Keterangan :  IDSM   = Infusa daun sirih merah , SE = Standar Error
Gambar  2. Grafik perubahan berat badan tikus jantan selama pemberian infusa daun sirih merah
Gambar  3 . Grafik perubahan berat badan tikus betina selama pemberian infusa daun sirih merah Keterangan: Dosis 1 = kelompok pemberian infusa daun sirih merah 1.38 g/Kg BB Dosis 2 = kelompok pemberian infusa daun sirih merah 2,07 g/Kg BB Dosis 3 = kelompok pemberian infusa daun sirih merah 3,105 g/Kg BB
Kontrol = kontrol aquadest 15,525 g/Kg BB
Selain  berat  badan  tikus,  asupan  minum  dan pakan  pada  tikus  juga  merupakan  salah  satu  data pendukung  dalam  uji  toksisitas.    Berat  badan, asupan  minum  dan  asupan  pakan  merupakan indikator  umum  atau  spesifik  penanda  toksisitas, Data  asupan  minum  dan  pakan  tidak  dianalisis dengan  uji  statistik  karena  tujuan  dari  pengamatan
asupan  minum  dan  pakan  ini  untuk  melihat  pola minum dan pakan dari tikus jantan dan betina.
Pada  gambar  4  dan  5,  grafik  asupan  minum tikus  jantan  dan  betina  akibat  pemberian  infusa daun  sirih  merah  maupun  kontrol  pemberian aquadest menunjukkan peningkatan dan penurunan,  namun  tidak  menunjukkan  hasil perbedaan yang bermakna.
Gambar 4. Grafik asupan minum tikus jantan akibat pemberian infusa daun sirih merah Keterangan:  Dosis 1 = kelompok pemberian infusa daun sirih merah 1.38 g/Kg BB Dosis 2 = kelompok pemberian infusa daun sirih merah 2,07 g/Kg BB Dosis 3 = kelompok pemberian infusa daun sirih merah 3,105 g/Kg BB Kontrol = kontrol aquadest 15,525 g/Kg BB
Gambar 5. Grafik asupan minum tikus betina akibat pemberian infusa daun sirih merah Keterangan:  Dosis 1 = kelompok pemberian infusa daun sirih merah 1.38 g/Kg BB Dosis 2 = kelompok pemberian infusa daun sirih merah 2,07 g/Kg BB Dosis 3 = kelompok pemberian infusa daun sirih merah 3,105 g/Kg BB Kontrol = kontrol aquadest 15,525 g/Kg BB
Gambar  6 . Grafik asupan pakan tikus jantan akibat pemberian infusa daun sirih merah Keterangan:  Dosis 1 = kelompok pemberian infusa daun sirih merah 1.38 g/Kg BB Dosis 2 = kelompok pemberian infusa daun sirih merah 2,07 g/Kg BB Dosis 3 = kelompok pemberian infusa daun sirih merah 3,105 g/Kg BB Kontrol = kontrol aquadest 15,525 g/Kg BB
Gambar 7. Grafik asupan pakan tikus betina akibat pemberian infusa daun sirih merah Keterangan:  Dosis 1 = kelompok pemberian infusa daun sirih merah 1.38 g/Kg BB Dosis 2 = kelompok pemberian infusa daun sirih merah 2,07 g/Kg BB Dosis 3 = kelompok pemberian infusa daun sirih merah 3,105 g/Kg BB Kontrol = kontrol aquadest 15,525 g/Kg BB
Secara  garis  besar  berdasarkan  grafik  pada gambar  6  dan  7  menunjukkan  pola  makan  tikus jantan dan betina normal, bila terdapat peningkatan atau penurunan asupan pakan tetapi tidak bermakna. Perubahan berat badan pada tikus jantan dan betina disebabkan  oleh  proses  pertumbuhan  dan  asupan pakan tikus.

## 4. Kesimpulan
Dalam  penelitian  ini,  tidak  didapatkan adanya  spektrum  toksik  infusa  daun  sirih  merah selama  28  hari  terhadap  perubahan  kadar  SGOT darah di mana menunjukkan hasil perbedaan tidak bermakna serta perubahan pada gambaran histopatologi jantung yang tidak teramati perubahan yang spesifik. Tidak terdapat hubungan
antara  dosis  infusa  daun  sirih  merah  dengan spektrum  efek  toksik  pada  perubahan  kadar  SGOT darah dan histopatologi jantung.
Perlu  dilakukan  peningkatan  pemberian  infusa daun sirih merah dari 28 hari menjadi 90 hari guna mengetahui  seberapa  besar  efek  toksik  yang ditimbulkan.  Serta  peningkatan  jumlah  hewan  uji tiap  perlakuan  dari  5  ekor  jantan  dan  5  ekor  betina menjadi  10  ekor  jantan  dan  10  ekor  betina  guna mengetahui  efek  toksik  yang  ditimbulkan  oleh infusa daun sirih merah.

## Daftar Pustaka
Hartini,  Y.S.,  Wahyuono,  S.,  Widyarini,  S.,  Yuswanto,  Ag., 2013, Uji Aktivitas Fagositosis Makrofag Senyawa Kode Pc-2  dari  Daun  Sirih  Merah  ( Piper  crocatum Ruiz  & Pav.) Secara In-vivo , Seminar Nasional Tumbuhan Obat Indonesia  ke-44 ,  Stifi  Bhakti  Pertiwi  Palembang, Palembang.
Herman, R., 2009, Buku ajar FISIOLOGI JANTUNG , Penerbit Buku Kedokteran EGC, pp. 1, 2, 9, 10.
Laurence,  J.,  Bacharach,  M.,  1964, Analytical  Toxicology , CRC Press, Philadelphia.
Manoi,  F.  2007. Sirih  merah  sebagai  tanaman  obat multifungsi .  http://litbang.deptan.go.id,  diakses  tanggal 5 November 2012.
Menteri Kesehatan RI, 1994, Persyaratan Obat Tradisional , Menteri Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta. Ningrum,  K.  E.,  dan  Murtie,  M.,  2013, Tumbuhan  Sakti Basmi  Berbagai  Penyakit ,  Penerbit  Dunia  Sehat, Jakarta Timur, pp. 4.
Salim,  A.,  2006,  Potensi  Rebusan  Daun  Sirih  Merah  ( Piper crocatum )  Sebagai  Senyawa  Antihiperglikemia  Pada Tikus  Putih  Galur Sprague-Dawley , Skripsi, 11,  Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Samsu,  N.,  dan  Sargowo,  D.,  2007,  Sensitivitas  dan Spesifisitas  Troponin  T  dan  I  pada  Diagnosis  Infark Miokard Akut, Majalah Kedokteran Indonesia , Vol. 57, 365.
Utami, M.R., 2011, Fraksinasi Senyawa Aktif Minyak Atsiri Daun  Sirih  Merah  (Piper  Cf.  Fragile.  Benth)  Sebagai Pelangsing  Aromaterapi  Secara In  Vivo , Tesis ,  28, Institut Pertanian Bogor, Bogor.