Perhitungan Jamur Fusarium Oxysporum Menggunakan Media Cair
Yuda Dinata 1 , Sri Utami 2* , Stella Matthews 3
1,2 Program Studi Agroteknologi Fakultas Pertanian Universitas Muhammadiyah Sumatera Utara, Jl. Kapten Muchtar Basri, No 03 Medan
3 Program Penyelidikan Sains, Tanah, Air dan Pupuk, MARDI Serdang, Malaysia.
* Corresponding author, email: sriutami@umsu.ac.id

## ABSTRACT
Banana  plant  (Musa  acuminata)  is  a  type  of  fruit  horticulture  plant that  is  currently  widely cultivated  by  the  community,  in  the  cultivation  of  banana  plants  can  not  be  separated  from pests  and  diseases.  Fusarium  oxysporum  is  one  of  the  plant-disrupting fungi  that  can infect plants  to  cause  wilt  disease,  this  disease  is  the  most  dangerous  disease  that  attacks  banana plants  and  is  one  of  the  most feared  diseases,  especially  by  horticultural  farmers  because  it has the potential to cause large losses, therefore it is necessary to apply PGPR (Plant Growth Promoting  Rhizobacteria)  which  acts  as  a  biocontrol  in  the form  of  biopesticides  to  control pests and plant pathogens has been considered a good practice to maintain agroecosystems. This study was conducted to see the growth of Fusarium which will then be calculated using the  Koch  postulate  method  to  see  the  development  of  the  number  of  Fusarium  oxyporum colonies. One of the problems that cause inhibition of fusarium growth is air temperature and humidity. The results obtained based on that the method used is able to reduce the population of Fusarium at dilution 10 6 .
Keywords: banana plants, fusarium oxysporum, koch postulate, PGPR

## ABSTRAK
Tanaman  pisang  (Musa  acuminata)  adalah  tanaman  jenis  hortikultura  buah  yang  saat  ini banyak dibudidayakan oleh masyarakat, dalam budidaya tanaman pisang tidak terlepas dari serangan  hama  dan  penyakit.  Fusarium oxysporum merupakan salah  satu  fungi  penganggu tanaman yang dapat menginfeksi tanaman sehingga menyebabkan penyakit layu, penyakit ini merupakan penyakit paling  berbahaya  yang  menyerang  tanaman  pisang  dan  merupakan salah satu penyakit yang paling ditakuti terutama oleh petani hortikultura karena berpotensi menimbulkan  kerugian  besar,  oleh  karna  itu  perlu  adanya  pengaplikasian  PGPR  (Plant Growth  Promoting  Rhizobacteria)  yang    berperan  sebagai  biokontrol  dalam  bentuk biopestisida  untuk  mengendalikan  hama  dan  patogen  tanaman  telah  dianggap  praktek  baik untuk  mempertahankan  agroekosistem.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk  melihat  pertumbuhan fusarium  yang  kemudian  akan  di  hitung  menggunakan  metode  koch  postulate  untuk  melihat perkembangan  jumlah  colony  Fusarium  oxyporum.  Salah  satu  permasalahan  yang menyebabkan  terhambatnya  pertumbuhan  fusarium  ini  adalah  suhu  dan  kelembapan  udara. Hasil yang didapat berdasarkan bahwa metode yang digunakan mampu mengurangi populasi fusarium pada dilution 10 6 .
Kata kunci: tanaman pisang, fusarium oxysporum, koch postulate, PGPR

## PENDAHULUAN
Tanaman  pisang    merupakan    komoditas    hortikultura    buah    tropis  yang      sangat populer      dan      mempunyai      potensi  ekonomi      cukup      tinggi      untuk      dikelola      secara intensif   dan   berorientasi   agribisnis. Dilihat dari   sisi produksi dan jumlah konsumsi buah favorit  dubia,  pisang      merupakan      tanaman  pangan  terpenting  keempat    dunia    setelah gandum,  padi,  dan jagung          (Budilaksono,  2020). Permintaan pisang dalam negeri akan terus  mengalami  peningkatan  seiring  dengan  bertambahnya      jumlah      penduduk, meningkatnya  pendidikan    dan    pendapatan    serta    kesadaran    akan  pentingnya  gizi masyarakat (Martiansyah, 2021).
Fusarium oxysporum merupakan salah  satu  fungi  penganggu  tanaman  yang  dapat menginfeksi  tanaman  sehingga  menyebabkan  penyakit  layu Fusarium (Sopialena,  2015). Fusarium  oxysporum lebih  mudah  tumbuh  pada  kondisi  basah    permukaan  dan  badan  air dengan mendominasi permukaan lainnnya flora jamur asli dibandingkan dengan spesies jamur lainnya  dari  genus Fusarium .  Apalagi  isolasinya  ditularkan  melalui  air  FOSC  dapat ditingkatkan  dalam  kondisi  buruk  seperti  pada  suhu  tinggi,  paparan  bahan  kimia  (natrium hipoklorit)  dan  logam  berat  (tembaga)  dan  menunjukkan  resistensi  yang  lebih  kuat  dan menjadi dominan dibandingkan isolasi udara atau lingkungan lainnya (Steinberg dkk . 2015). Penyakit layu Fusarium atau  sering  disebut penyakit  tanaman  pada  tanaman  pisang yang  oleh  cendawan Fusarium  oxysporum  f.  Sp Cubense (FOC).  Penyakit ini merupakan penyakit paling berbahaya yang  menyerang tanaman pisang dan merupakan salah satu  penyakit yang  paling  ditakuti  terutama  oleh  petani  hortikultura  karena  berpotensi menimbulkan  kerugian  besar.  Bahkan  tidak  jarang penyakit ini  menjadi  penyebab  kegagalan budidaya. Pada tingkat serangan tinggi, penyakit layu Fusarium bisa menghabisi seluruh tanaman,  terutama  terjadi pada musim  hujan  dan  areal  pertanaman  mudah  tergenang air (Tarigan, 2019).
Mutan Fusarium  oxysporum  f.sp  cubense yang  bersifat  hipovirulen  dihasilkan  dari perlakuan  asam  nitrat  dengan  konsentrasi  1%.  Foc  mutan  1%  adalah  yang  paling  baik digunakan  sebagai  agen  hayati  dalam  mengendalikan  patogen Fusarium  oxysporum  f.sp cubense penyebab penyakit layu pada tanaman pisang (Sinaga dkk . 2021).
Rizobakteri  pemacu  tumbuh  tanaman  atau  lebih  dikenal  dengan Plant  Growth Promoting Rhizobacteria (PGPR) adalah bakteri  tanah  menguntungkan  yang  hidup  bebas  di daerah  rhizosfer  yang  memiliki  kemampuan  untuk  meningkatkan  pertumbuhan  tanaman  dan bersifat ramah lingkungan (Das, 2019). PGPR sebagai biofertilizer dapat menggantikan pupuk anorganik  yang  selama  ini  digunakan.  Dengan  memberdayakan  rhizobakteria  dan  siklus biologi  maka  pelayanan  agroekosistem  dapat  diperbaiki  menuju  keberlanjutan  pertanian. Selain  itu, peran PGPR  sebagai  biokontrol  dalam  bentuk  biopestisida  untuk  mengendalikan hama  dan  patogen  tanaman  telah  dianggap  praktek  baik  untuk  mempertahankan agroekosistem (Mishra et al ., 2015).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  perkembangan  jumlah colony fusarium oxysporum menggunakan metode koch postulate, penggunaan metode koch postulate dengan dilution  faktor  10 6 mampu  mengurangi  jumlah  populasi  pertumbuhan colony  fusarium oxysporum .

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  laboratorium  bioproses  Institut  Penyelidikan  dan Kemajuan Pertanian Malaysia (MARDI), Serdang selangor, Malaysia.  pada bulan September 2023.
Bahan  dan  alat  yang  digunakan  adalah  air  suling,  media  PDA,  media  PDB,  dan alkohol, petri, inkubator, autoclave,inkubator, colony counter, botol kaca, erlenmeyer,mikropipet, pipet, stick, sprayer, sarung tangan karet, dan masker.

## Pembuatan Media Potato Dextroge Agar (PDA)
Pembuatan  PDA  ini  dibutuhkan  sebanyak  1  lt  dengan  cara  mencampurkan  24  gr bubuk PDA dan kemudian dicampurkan dengan air suling sebanyak 1  liter dan kemudian di shake agar bubuk PDA tersebut tercampur merata di dalam erlenmeyer, setelah itu erlenmeyer tersebut  dimasukkan  kedalam  autoclave  selama  15  menit.  Setelah  menunggu  PDA  tersebut hingga suhu hangat selanjutnya media PDA tersebut dituangkan ke dalam petri hingga media tersebut menjadi agar.

## Pembuatan Media Potato Dextroge Broth (PDB)
Pada  pembuatan  media  PDB  diperlukan  sebanyak  60  pohon  dan  kebutuhan  setiap pohon membutuhkan 50 ml. Dalam pembuatan media ini membutuhkan sebanyak 4 liter dan perliternya  membutuhkan  24  gram  PDB,  jadi  PDB  yang  digunakan  totalnya  ada  96  gram, setelah itu bubuk PDB dicampur dengan air hangat sebanyak 4 liter kemudian diaduk sampai merata dan di tuangkan ke erlemeyer  masing  masing 500  ml, kemudian ditutup dengan kain kasa dan aluminium  foil,  lalu dimasukkan  ke dalam autoclave dengan kecepatan    selama 15 menit.

## Pemindahan PDB ke PDA
Pada total plate count  and serial dilution cara kerjanya adalah pemindahan bakteri ke media PDA tersedia enam botol berisikan cairan nutrient broth, botol pertama diisi dengan 1 ml media PDB kemudian dari botol pertama diambil 1 ml dan begitu seterusnya, ini dilakukan untuk mengurangi populasi bakteri. Pada botol ke 5 dan 6 diambil 1 ml dan di tuangkan pada media  PDA  masing  masing  dua  petri  dan  kemudian  dimasukkan  dalam  inkubator  dan ditunggu waktu munculnya bateri.

## Analisis Mikroskopis Koloni Fusarium
Analisis  mikroskopis dapat dilakukan ketika bakteri sudah muncul pada PDA. Dalam perhitungan  jumlah  koloni Fusarium  oxyporum yang  sudah  muncul  dihitung  menggunakan bantuan  alat  laboratorium  yaitu Colony  counter. Penggunaan  alat  tersebut  bertujuan  untuk memudahkan perhitungan koloni yang tumbuh pada media PDA. alat ini sangat memudahkan perhitungan  jumlah  colony  dengan  meletakkan  petri  yang  digunakan  sebagai  tempat pertumbuhan  bakteri  setelah  itu  menekan  setiap  koloni  yang  muncul,  maka  jumlah  koloni otomatis terhitung pada digital Colony counter .

## Metode Penelitian
Data  hasil  penelitian  ini  akan  dianalisis  menggunakan  metode koch  postulate untuk melihat perkembangan jumlah colony Fusarium oxyporum . Metode ini dilakukan dengan cara memindahkan 1 ml CFU/ml pada PDB ke botol 1 yang berisikan air suling, setelah itu botol 1 kocok agar air suling dan CFU tercampur merata. Setelah tercampur, kemudian dari botol ke 1 diambil  lagi 1  ml CFU/ml dan di campurkan ke botol 2. Kemudian hal tersebut dilakukan sampai  pada  botol  ke  6.  Setelah  itu  pada  botol  ke  6  diambil  0,1  ml  dan  di  tuangkan  pada media PDA dan diratakan agar colony dapat berkembang luas.  Pipet dan stik yang digunakan untuk memindahkan CFU akan diganti setiap sample.
Untuk  mendapatkan  hasil  akhir  perhitungan  CFU/ml  menggunakan  metode koch postulate dengan dilution faktor 10 6 dilakukan dengan rumus:
Jumlah colony X Dilution faktor Volume plated on plate

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan  hasil    penelitian  yang  sudah  dilakukan  menunjukkan  bahwa  pada pengamatan yang diamati 3 jam setelah pemindahan PDA ke PDB dengan menghitung koloni yang  tumbuh  menggunakan  alat  laboraturium  yaitu colony  counter .    Data  hasil  pengamatan perhitungan koloni disajikan pada tabel 1.
Banyak  faktor  yang  mempengaruhi  pertumbuhan  koloni  jamur Fusarium  oxysporum diantaranya  adalah  media  tanam  dan  juga  tempat  penyimpanan. Penyimpanan  pada  suhu ruangan  yang tidak sesuai  dapat mempengaruhi pertumbuhan Fusarium oxysporum. Sesuai dengan pernyataan Porter et  al (2015) bahwa  suhu penyimpanan akan  berpengaruh terhadap keberlangsungan hidup spora jamur, yang akan mempengaruhi umur simpan jamur.
Tabel  1.  Data  hasil  perhitungan  jumlah fusarium  oxysporum menggunakan  metode Koch postulate
No
Sample
PDA
CFU/ML Total Plate Count -6 1 Sample A (i) 76 7.6×10 8 Sample A (ii) 71 7.1×10 8 Average 73,5 7.35×10 8 2 Sample B (i) 169 1.69x10 9 Sample B (ii) 175 1.75x10 9 Average 172 1.72x10 9 3 Sample C (i) 113 1.33x10 9 Sample C (ii) 276 2.76x10 9 Average 194,5 1.945x10 9 4 Sample D (i) 70 7.0x10 8 Sample D (ii) 0 0 Average 70 7.0x10 8 5 Sample E (i) 140 1.40x10 9 Sample E (ii) 104 1,04x10 9 Average 122 1.22x10 9 6 Sample F (i) 194 1.94x10 9 Sample F (ii) 145 1.45x10 9 Average 169,5 1.695x10 9 7 Sample G (i) 95 9.5x10 8 Sample G (ii) 139 1.39x10 9 Average 117 1.17x10 9 8 Sample H (i) 170 1.70x10 9 Sample H (ii) 141 1.41x10 9 Average 155,5 1.555x10 9
Pada  tabel  1  diatas  bahwa  penggunakan  metode koch  postulate pada  dilution  -6, menunjukkan  sample  populasi Fusarium  oxysporum tersebut  diambil  dari  botol  ke-6.    Pada
sampel  A(i)  didapati  jumlah  populasi  sebanyak  76  dan  pada  A(ii)  sebanyak  71  dengan  rata- rata 73,5. Pada sample B(i) banyak jumlah populasi fusarium oxysporum adalah 169 dan pada B(ii)  sebanyak  175  dengan  rata-rata  172.    Sampel  C(i)  banyak  jumlah  populasi Fusarium oxysporum adalah  ada  113  dan  C(ii)  sebanyak  276,  dengan  rata-rata  194,5.  Pada  sample  C menunjukkan jumlah koloni terbanyak diantara semua sample yang ada.  Selanjutnya jumlah populasi Fusarium pada  sampel  D(i)  didapati  70  dan  pada  D(ii)  tidak  terdapat  pertumbuhan Fusarium atau  dikatakan  0,  dengan  rata-rata  70.  Sampel  E(i)  banyak  jumlah  populasi Fusarium  oxysporum adalah  140  dan  E(ii)  sebanyak  104  dengan  rata rata  122.  Pada  sampel F(i) didapati jumlah pupolasi yang tumbuh yaitu 194 dan F(ii) sebanyak 145 dengan  rata-rata 169,5.  Pada  sampel  G(i) Fusarium yang  tumbuh  sebanyak  95,  dan    G(ii)  sebanyak    139 dengan  rata-rata  sebanyak  117.  Dan  pada  sampel  terakhir  H(i)  jumlah  populasi  yang  ada sebanyak 170, dan pada  H(ii) adalah 141 dengan rata-rata sebanyak 155,5.
Hasil  penelitian  tersebut  menunjukkan  bahwa  populasi Fusarium  oxysporum terbanyak terdapat pada pada sampel C dengan rata-rata yang didapatkan sebanyak 194,5 dan hasil  akhir  yang  didapatkan  dengan  menggunakan  metode koch  pastulate yaitu    1.945x10 9 CFU/ml.  Sedangkan jumlah populasi jamur terendah terdapat pada sampel D dengan rata-rata hanya  70  dikarenakan  pada  sample  D(ii)  tidak  ada  pertumbuhan  populasi Fusarium oxysporum .  Hal  ini  sesuai  dengan  pernyataan  Sriwahyuni dkk, (2023),  bahwa  penurunan populasi  mikroba Fusarium  oxysporum (cendawan)  akhir  terjadi  karena  adanya  persaingan antar  mikroorganisme  dalam  memperoleh  ruang  dan  nutrisi  yang  terbatas  Pengurangan jumlah populasi mikroorganisme (cendawan) dapat dipengaruhi oleh faktor lingkungan yaitu suhu dan kelembaban.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan  dapat  diambil  kesimpulan  bahwasanya pertumbuhan  populasi  fungi Fusarium  oxysporum pada  dilution  10 6 dapat  mengurangi populasi Fusarium .  Faktor  yang  menjadi  penghambat  pertumbuhan  fungi Fusarium oxysporum disebabkan  oleh  suhu  dan  kelembapan  udara.  Perhitungan  jumlah  populasi  akhir dapat dihitung menggunakan metode koch postulate.

## DAFTAR PUSTAKA
Aryantha,      I.N.Y.P.,      P.L.      Dian.  &  P.D.P.  Nurmi.  (2004).  Potensi        isolat        bakteri penghasil IAA dalam peningkatan pertumbuhan  kecambah kacang hijau pada kondisi hidroponik. Jurnal Mikrobiologi Indonesia , 9: 43-46.
Budilaksono,  M.  (2020).  Sepuluh  negara  pengekspor  pisang  terbesar  di  dunia. https://hortikultura.sariagri.id/56082/sepuluh-negara-pengekspor-pisang-terbesar-di- dunia. Diunduh 03 Maret 2022.
Das,  S.,  Nurunnabi,  T.  R.,  Parveen,  R.,  Mou,  A.  N.,  Islam.  E.,  Islam,  K.  M.  D.  (2019). Isolation  and  characterization  of  indole  acetic  acid  producing  bacteria  from rhizosphere  soil  and  their  effect  on  seed  germination. International  Journal  Of Current Microbiology And Applied Sciences , 8(03), 2319-7706. Jumjunidang,  Hermanto  C,  &  Riska.  (2011).  Virulensi  isolat Fusarium  Oxysporum f.sp. cubense  VCG  01213/16  pada  pisang  barangan  dari  varietas  pisang  dan  lokasi  yang berbeda. J. Hort . 21(2): 145–151.
Martiansyah,  I.  (2021).  Petunjuk    teknis    budidaya  pisang    asal    kultur  in    vitro    dengan teknologi PPBBI. Puslit   Bioteknologi   dan   Bioindustri Indonesia (PPBBI),    PT Riset    Perkebunan Nusantara. 13 Hal.
Mishra J, Tewari S, Singh S, Arora NK .(2015). Biopesticides where we stand? In: Arora NK (ed) Plant Microbe Symbiosis: Applied Facets. Springer , New Delhi, pp 37–75
Palmero  D.,  Iglesias  C.,  De  Cara  M.,  Lomas  T.,  Santos  M.  &  Tello  J.C.  (2009)  Species  of Fusarium isolated  from  river  and  sea  water of  Southeastern  Spain  and  Pathogenicity On Four Plant Species. Plant Diseases 93, 377–385.
Porter,  L.D.,  Pasche,  J.S.,  Chen,  W.,  &  Harveson,  R.M.  (2015).  Isolation,  identification, storage, pathogenicity tests, hosts, and geographic range of Fusarium Solani F.Sp. Pisi Causing Fusarium Root  Rot  of  Pea. Plant  Health Progress , 16(3): 136-145. Doi: 10.1094/PHP-DG-15-0013.
Saraswati,     R.,     E.     Husen     &     R.D.M. Simanungkalit.   ( 2007). Metode    analisis biologi    tanah.  Balai    Besar    Penelitian    dan  Pengembangan  Sumberdaya  Lahan Pertanian. Jawa barat. 271 hal.
Sinaga  F,  Sritamin  M  &  Suada  I.K.  (2021).  Pembentukan  muatan  Hipovirulen Fusarium Oxysporum  F.SP Cubense penyebab layu pada tanaman pisang ( Musa paradisiaca L.) menggunakan asam nitrat. Vol 1, No 1, Hal 1-10.
Sriwahyuni,  S.,  Oktarina,  H.,  &  Chamzurni,  T.  (2023).  Pengaruh  bioaktivator  dalam  pupuk organik cair kulit pisang untuk mengnendalikan penyakit layu Fusarium pada tanaman tomat ( Solanum lycopersicum ). Jurnal Ilmiah Mahasiswa Pertanian , 8 (1), 438-452 Steinberg C., Laurent J., Edel-Hermann V., Barbezant M., Sixt N., Dalle F., Aho S., Bonnin A.,  Hartemann  P.  &  Sautour  M.  (2015)  Adaptation  of Fusarium  Oxysporum and Fusarium Dimerum to the specific aquatic environment provided by the water systems of hospitals. Water Research 76, 53–65
Suswati,  Indrawati  A  &  Putra,  D.P.  (2015).  Penapisan  limbah  pertanian  (sabut  kelapa  dan arang  sekam)  dalam  peningkatan  ketahanan  bibit  pisang  barangan  bermikroza terhadap  blood  disease  bacterium  dan Fusarium  Oxysporum  F.SP  Cubense . Jurnal HPT Tropika. Vol. 15, No 1:81-88.
Sopialena.
(2015). Ketahanan beberapa varietas tomat terhadap penyakit Fusarium oxysporum dengan    pemberian Trichoderma  sp.  Jurnal  Agrifor . 14(1)
Swathi J., Sowjanya K.M., Narendra K. & Satya A.K. (2013). Bioactivity assay of an isolated marine Fusarium  Sps . International  Journal  Of  Bio-Science  Bio-Technology 5,  179– 186.
Tarigan,  F.  (2019).  Sistem  pakar  mendiagnosa  penyakit  layu fusarium pada  tanaman  pisang dengan  menggunakan  metode  certainty  factor. Informasi  dan  Teknologi  Ilmiah (INTI) , 6 (2), 224-228.