## ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST OF EXTRACTS AND FRACTION OF SPONGE Mycale Vansoesti FROM MANTEHAGE ISLAND WATERS OF NORTH MINAHASA AGAINST THE

## GROWTH OF Escherichia coli AND Staphylococcus aureus BACTERIA

## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK DAN FRAKSI SPONS Mycale Vansoesti

## DARI PERAIRAN PULAU MANTEHAGE MINAHASA UTARA TERHADAP
PERTUMBUHAN BAKTERI Escherichia coli DAN Staphylococcus aureus
Brigita Michelle Luntungan 1) , Defny S. Wewengkang 1) ,  Erladys M. Rumondor 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT, 95115 *brigita.luntungan@gmail.com

## ABSTRACT
Sponges are multi-cell marine biota whose tissue and organ functions are very simple. In the development of medicine, sponges have been shown to contain active compounds as guiding compounds in the synthesis of the latest drugs. The purpose of this study was to determine the antibacterial activity of the extracts and fractions of the sponge Mycale vansoesti collected from the waters of Mantehage Island against Escherichia coli and Staphylococcus aureus bacteria. The sponge samples were extracted using the maceration method with 95% ethanol. The antibacterial activity test used the disc diffusion agar method of Kirby and Bauer.  The results showed that Mycale vansoesti sponge produced antibacterial activity in all extracts and fractions used namely ethanol extract, chloroform fraction, n-hexane fraction, and methanol fraction against Escherichia coli and Staphylococcus aureus bacteria with a value of about 6.63-8.82 mm and included in the moderate category of inhibition, this is proven by the formation of a clear zone around the disc.
Keywords : Mycale vansoesti, Antibacterial, Staphylococcus aureus, Escherichia coli.

## ABSTRAK
Spons  merupakan  biota  laut  multi  sel  yang  fungsi  jaringan  dan  organnya  sangat  sederhana.  Dalam perkembangan  pengobatan,  spons  terbukti  mengandung  senyawa  aktif  sebagai  senyawa  pemandu  dalam sintesis  obat-obatan  terbaru.  Tujuan  dari  penelitian  ini  untuk  mengetahui  adanya  aktivitas  antibakteri  dari ekstrak  dan  fraksi  spons Mycale  vansoesti yang  diperoleh  dari  perairan  Pulau  Mantehage  terhadap  bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. Metode ekstraksi yang digunakan adalah maserasi dengan pelarut etanol  95%.  Pengujian  Aktivitas  Antibakteri  menggunakan  metode  difusi  agar Kirby  and  Bauer.  Hasil penelitian menunjukkan bahwa spons Mycale vansoesti menghasilkan aktivitas antibakteri pada semua ekstrak dan fraksi yang digunakan yaitu ekstrak etanol, fraksi kloroform, fraksi n-heksan, dan fraksi metanol terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus dengan nilai sekitar 6,63-8,82 mm dan termasuk dalam daya hambat kategori sedang. Hal ini dibuktikan dengan terbentuknya zona bening disekitar cakram.
Kata Kunci : Mycale vansoesti , Antibakteri, Staphylococcus aureus , Escherichia coli.

## PENDAHULUAN
Pemanfaatan  organisme  laut  banyak digunakan sebagai sumber senyawa untuk obat baru.  Karena  kemampuan  organisme  laut seperti  tumbuhan  dan  invertebrata  laut  dalam memproduksi kandungan kimia yang mempunyai  keanekaragaman  hayati  dengan struktur kimia yang khas (Ismet,2007).
Spons  merupakan  biota  laut  multi  sel yang  fungsi  jaringan  dan  organnya  sangat sederhana. Spons adalah salah satu hewan dari filum porifera dan terdiri dari empat kelas yaitu Calcarea,  Demospongiae,  Hexactinellida,  dan Sclerospongia. Mycale  vansoesti termasuk dalam  kelas  Demospongiae  dimana  80%  dari semua spons di dunia merupakan anggota kelas ini,  spons  tersebar  luas  di  alam,  serta  jumlah jenisnya  maupun  organisme  yang  banyak (Suparno,2005).
Perkembangan metabolit sekunder dari spons  tertentu  telah  terbukti  mengandung senyawa aktif sebagai senyawa pemandu dalam sintesis obat-obatan terbaru. Hal ini membuktikan  bahwa  spons  memiliki  potensi yang  besar  dalam  perkembangan  industri farmasi, mengingat senyawa-senyawa aktifnya berbeda  dengan  senyawa  yang  dihasilkan  dari tumbuhan  darat  yang  selama  ini  merupakan sumber  utama  dalam  bahan  obat-obatan (Murniasih,  2003).  Antibakteri  diperlukan untuk mengobati infeksi yang disebabkan oleh bakteri,  contoh  beberapa  bakteri  yang  dapat menyebabkan  infeksi  diantaranya Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus adalah  flora normal  yang  dapat  ditemukan  pada  manusia, tetapi  dapat  menyebabkan  penyakit  infeksi. Staphylococcus  aureus dapat  menyebabkan infeksi  karena  menghasilkan  enterotoksin  dan menyebabkan  pembentukan  nanah  pada  luka yang sering dijumpai pada kulit, selaput lendir, bisul dan luka (Irianto, 2006). Escherichia coli merupakan salah satu spesies utama dari gram negatif fakulatif anaerob, dan menjadi patogen jika jumlah bakteri ini meningkat di saluran dan berada  di  luar  usus. Escherichia  coli menghasilkan  enterotoksin  yang  terikat  pada mukosa  usus  halus  yang,dapat  menyebabkan diare (Menon,2017).
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan oleh Zhou dkk, (2013) menunjukkan bahwa  terdapat  beberapa  senyawa  yang diisolasi  dari  genus  Mycale  yang  berasal  dari
Cina Selatan mengandung terpenoid, makrolida,  dan  steroid  yang  bisa  digunakan sebagai antibakteri.
Berdasarkan uraian diatas maka peneliti  tertarik  untuk  melakukan  pengujian aktivitas  antibakteri  dari  Spons Mycale vansoesti yang  diambil  dari  perairan  Pulau Mantehage.

## METODOLOGI PENELITIAN Bentuk, Waktu dan Tempat Penelitian Bentuk Penelitian
Penelitian  ini  berbentuk  eksperimen laboratorium  yang  dilakukan  dengan  cara menguji  komponen  yang  diekstrak  dari  spons Mycale  vansoesti sebagai  antibakteri  pada Escherichia coli dan Staphylococcus aureus .

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Oktober  2020  sampai  Maret  2021  di  Program Studi  Farmasi  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam dan di Laboratorium Hama dan  Penyakit  Tumbuhan  Fakultas  Pertanian Universitas Sam Ratulangi.

## Alat dan Bahan Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini yaitu masker, sarung tangan, gunting, botol 600  ml,  talenan, cool  box ,  pisau,  Erlenmeyer (Pyrex), corong, rotary evaporator, timbangan analitik,  corong  pisah,  gelas  ukur,  gelas  kimia (Pyrex), cawan petri, autoklaf, pinset, pembakar spritus, magnetic  stirrer ,  pipet  tetes, micro tubes , hot plate,  vortex,  batang  pengaduk, Laminar  air  flow, rak  tabung  reaksi,  tabung reaksi,  lemari  pendingin,  890ethanol890, mikropipet, mistar berskala.

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu spons Mycale vansoesti, bakteri uji Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli , etanol, akuades, metanol, n-heksan, kloroform , pepton,  natrium  klorida , ekstrak  daging  ( meat extract ), agar, kloramfenikol paper disc , kertas cakram  ( paper  disc) , tissue, aluminium  foil , kertas saring.
Pengambilan Sampel Sampel spons Mycale vansoesti diambil  dari  perairan  Pulau  Mantehage menggunakan alat bantu (masker, snorkel, fins dan  tabung  oksigen).  Sampel  yang  diperoleh dimasukkan  ke  dalam zipper  lock  bag dan diletakkan  di  dalam cool  box ,  kemudian langsung dibawa ke Laboratorium Farmakognosi  dan  Fitokimia,  Program  Studi Farmasi  Universitas  Sam  Ratulangi.  Sampel difoto  dan  diberi  label  serta  nomor  sampel, untuk selanjutnya dideterminasi.

## Ekstraksi Sampel
Ekstrak spons Mycale vansoesti dibuat dengan cara maserasi. Sampel dibersihkan dan dipotong  kecil-kecil  dimasukkan  ke  dalam botol  600  ml,  kemudian  direndam  dengan pelarut  etanol  sampai  sampel  terendam semuanya dan dibiarkan selama 24 jam. Sampel yang  direndam  disaring  menggunakan  kertas saring  menghasilkan  filtrat  1  dan  debris  1. Debris 1 kemudian diremaserasi dengan pelarut etanol  sampai  terendam  semuanya  dan dibiarkan  selama  24  jam,  sampel  tersebut disaring menggunakan kertas saring menghasilkan  filtrat  2  dan  debris  2.  Debris  2 kemudian  diremaserasi  dengan  pelarut  etanol sampai  terendam  semuanya  dan  dibiarkan selama  24  jam,  sampel  tersebut  disaring menggunakan kertas saring menghasilkan filtrat 3  dan  debris  3.  Filtrat  1,2,  dan  3  dicampur menjadi satu kemudian disaring, lalu dievaporasi  menggunakan rotary  evaporator pada suhu 40 ℃ hingga kering dan selanjutnya ditimbang  menggunakan  timbangan  analitik. Selanjutnya  ekstrak  kasar  spons Mycale vansoesti digunakan  dalam  fraksinasi  dan pengujian antibakteri (Silap dkk, 2020).

## Fraksinasi Sampel
Ekstrak  kasar  spons Mycale  vansoesti yang diperoleh dimasukkan ke dalam erlenmeyer,  kemudian  dilarutkan  dengan metanol 80% sebanyak 100 mL. Setelah larut, dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah  dan ditambahkan  pelarut  n-heksan  sebanyak  100 mL  setelah  itu  dikocok  dalam  corong  pisah sampai  homogen.  Dibiarkan  sampai  terbentuk lapisan metanol dan lapisan n-heksan, kemudian  masing-masing  lapisan  ditampung dalam  wadah  yang  berbeda.  Lapisan  n-heksan
kemudian  dievaporasi  menggunakan rotary evaporator hingga  kering,  lalu  ditimbang  dan diperoleh fraksi n-heksan. Selanjutnya, lapisan metanol  ditambahkan  akuades  sebanyak  100 mL kemudian dipartisi dengan pelarut kloroform dengan perbandingan 1:1 v/v dalam corong  pisah,  setelah  itu  dikocok  kembali sampai  homogen.  Dibiarkan  sampai  tebentuk dua  lapisan  yaitu  lapisan  metanol  dan kloroform,  kemudian  masing-masing  lapisan ditampung dalam wadah yang berbeda. Lapisan kloroform
selanjutnya dievaporasi menggunakan rotary evaporator hingga kering lalu  ditimbang  berat  sampel  dan  diperoleh fraksi  kloroform.  Lapisan  metanol  kemudian dievaporasi  menggunakan rotary  evaporator hingga  kering,  lalu  ditimbang  dan  diperoleh fraksi  metanol.  Ketiga  fraksi  yang  diperoleh akan  digunakan  dalam  pengujian  antibakteri. Rendemen-rendemen fraksi dihitung
berdasarkan persamaan sebagai berikut 𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 = 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 ℎ𝑎𝑠𝑖𝑙 𝑒𝑘𝑡𝑟𝑎𝑘
𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑒𝑘𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑎𝑤𝑎𝑙 𝑥 100%

## Sterilisasi Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian  aktivitas  antibakteri  ini  disterilkan terlebih  dahulu.  Alat-alat  gelas  disterilkan dengan  autoklaf  pada  suhu  121˚C  selama  15 menit,  pinset  dibakar  dengan  pembakaran  di atas  api  langsung  dan  media  disterilkan  di autoklaf  pada  suhu  121˚C  selama  15  menit (Ortez,2005).

## Pembuatan media cair B1
Pepton  0,5  g,  ekstrak  daging  ( meat extract )  0,3  g,  natrium  klorida  0,3  g,  dan aquades  sebanyak  100  mL  diaduk  sampai  rata kemudian  dibuat  homogen  menggunakan magnetic stirrer lalu diautoklaf pada suhu 121 ˚C  selama  15  menit,  ukur  pH  dengan menggunakan  kertas  pH.  Dipipet  1  mL  media cair  B1,  kemudian  masukkan  dalam  tabung reaksi dan tutup dengan aluminium foil . Media cair  B1  siap  digunakan  sebagai  media  kultur bakteri (Ortez, 2005)

## Kultur Bakteri
Media  cair  B1  yang  sudah  disiapkan sebelumnya,  ditambahkan  dengan  masing- masing bakteri yang sudah dikultur ( Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli )
dipipet sebanyak 100 µL kedalam tabung reaksi yang berbeda. Tutup dengan aluminium foil tiap tabung  reaksi  dan  dimasukkan  kedalam inkubator  selama  1x24  jam  pada  suhu  37  ˚C (Silap dkk, 2020).

## Pembuatan Kontrol Positif dan Kontrol Negatif
Kontrol positif dalam pengujian antibakteri  ini  menggunakan  kloramfenikol paper  disc. Kontrol  negatif  yang  digunakan dalam penelitian ini yaitu menggunakan pelarut metanol,  dengan  cara  membuat  larutan  stok metanol  dengan  mengambil  sebanyak  200  µL metanol  kemudian  ditotolkan  pada  kertas cakram (Silap dkk, 2020).

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan  uji  dibuat  dengan  cara  2  mg ekstrak kasar spons Mycale vansoesti kemudian dilarutkan  dalam  400μL  metanol  sehingga menghasilkan  konsentrasi  larutan  uji  sebesar 250 μg/50 μL. Perlakuan yang sama dilakukan pada  fraksi  n-heksan,  fraksi  kloroform  dan fraksi metanol (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Agar B1
Pepton  0,5  g,  ekstrak  daging  ( meat extract ) 0,3 g, natrium klorida 0,3 g, agar 1,5 g dan  aquades  sebanyak  100  mL  diaduk  sampai rata  kemudian  dibuat  homogen  menggunakan magnetic stirrer lalu diautoklaf pada suhu 121 ˚C  selama  15  menit.  Lakukan  pengujian  pH dengan  kertas  pH.  Media  agar  B1  siap digunakan untuk uji aktivitas antibakteri (Silap dkk, 2020).

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  metode  difusi  agar  ( disc diffusion  Kirby  and  Bauer ).  Pada  pengujian aktivitas  antibakteri  ini,  cakram  ( paper  disc ) yang digunakan berukuran 6 mm dengan daya serap  50  µL  tiap  cakram.  Sampel  yang  telah ditentukan  konsentrasinya  250  µg/50  µL ditotolkan pada masing-masing cakram dengan menggunakan  mikropipet.  Untuk  media  agar B1  yang  sudah  diautoklaf  pada  suhu  121  ˚C selama  15  menit,  kemudian  dinginkan  sampai suhu 40 ˚C. Tuangkan media agar B1 ke cawan petri,  Ambil  sebanyak  100  µL  bakteri  yang telah di kultur dalam tabung reaksi, dipipet dan
diinokulasi  pada  media  agar  B1  dan  tunggu sampai  media  agar  B1  mengeras.  Masing- masing  cawan  petri  diberi  label  dan  nomor sampel  yang  sesuai.  Letakkan  kertas  cakram yang telah ditotolkan sampel uji spons Mycale vansoesti dengan  pinset  kedalam  cawan  petri lalu  diinkubasi  selama  1x24  jam  pada  suhu 37˚C (Ortez, 2005).

## Pengamatan  dan  Pengukuran  Diameter Zona Bening
Pengamatan  dilakukan  setelah  24  jam masa  inkubasi.  Daerah  pada  sekitaran  cakram menunjukkan kepekaan bakteri terhadap antibiotik atau bahan antibakteri yang digunakan  sebagai  bahan  uji  yang  dinyatakan dengan  diameter  zona  bening.  Diameter  zona bening  diukur  menggunakkan  mistar  berskala dengan  cara  diukur  diameter  zona  bening horizontal  ditambahkan  dengan  diameter  zona bening  vertikal  lalu  dibagi  dua.  Diameter  ≤  5 mm memiliki kekuatan daya hambat lemah, 6- 10  mm  daya  hambat  sedang,  11-20  mm  daya hambat kuat dan ≥21 mm daya hambat sangat kuat (Silap dkk, 2020).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi Sampel
Determinasi  spons Mycale  vansoesti dilaksanakan  di  Program  Studi  Farmasi Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam  Universitas  Sam  Ratulangi  Manado. Determinasi sampel dilakukan untuk mengetahui  apakah  sampel  yang  diambil  dan dilakukan pengujian aktivitas antibakteri adalah sampel yang sesuai.

## Ekstraksi dan Fraksinasi Sampel
Sampel  spons Mycale  vansoesti yang diambil  dari  pulau  Mantehage,  Kabupaten Minahasa  Utara  dibersihkan  dan  dipotong kecil-kecil.  Sampel  dipotong  kecil-kecil  untuk memperluas ukuran permukaan sampel, karena semakin luas permukaan sampel maka semakin banyak  senyawa  aktif  yang  dapat  ditarik  atau terlarut kedalam pelarut (Kristanti dkk, 2008).
Sampel  di  ekstraksi  menggunakan metode  maserasi.  Maserasi  digunakan  karena pengerjaan yang mudah dan tidak menggunakan  pemanasan  sehingga  dapat mencegah zat aktif yang terurai akibat pengaruh suhu  dan  senyawa  yang  tidak  tahan  dengan
pemanasan. Proses perendaman sampel tumbuhan akan mengalami pemecahan dinding dan  membran  sel  akibat  perbedaan  tekanan antara  bagian  dalam  dan  luar  sel,  sehingga metabolit  sekunder  di  dalam  sitoplasma  akan terlarut  dalam  pelarut  organik.  (Lenny,2006). Pelarut  yang  di  gunakan  adalah  etanol  95% karena  pelarut  ini  mudah  didapatkan  dan memiliki  tingkat  popularitas  yang  lebar  mulai dari  senyawa  polar,  non  polar  dan  semi  polar (Sulastri  dkk.,  2015).    Proses  maserasi dilakukan  selama  3x24  jam,  dengan  dua  kali remaserasi  atau  pergantian  pelarut  yang  baru. Maserasi  lebih efisian jika  dilakukan  berulang kali  agar  senyawa  aktif  yang  tertarik  bisa optimum (Khopkar, 2008).
Hasil  ekstrak  kasar  etanol  diperoleh sebanyak  2,73  g  dengan  rendemen  0,54%  dan berwarna  coklat  pekat.  Selanjutnya  ekstrak etanol  difraksinasi,  metode  fraksinasi  yang digunakan  yaitu  fraksinasi  cair-cair  dimana menggunakan  tiga  pelarut  dengan  tingkat kepolaran  yang  berbeda  seperti  n-heksan, kloroform  dan  metanol.  Proses  fraksinasi dilakukan secara bertingkat berdasarkan tingkat kepolaran  pelarut  yaitu  mulai  dari  pelarut  non polar selanjutnya semi polar dan yang terakhir pelarut polar (Engka, 2016).
Pada  proses  fraksinasi  dengan  pelarut yang  berbeda  berdasarkan  tingkat  kepolaran, akan  terbentuk  2  lapisan,  dimana  pelarut dengan massa jenis lebih besar akan berada di bagian  bawah  dan  pelarut  dengan  massa  jenis kecil akan berada di lapisan atas. Terjadinya 2 lapisan  pelarut  ini  bertujuan  agar  kandungan kimia  yang  terdapat  dalam  sampel  secara selektif  dapat  ditarik  oleh  pelarut  yang digunakan. Massa fraksi beserta rendemen yang dihasilkan dalam proses fraksinasi ditunjukkan pada Tabel 1.
Tabel  1 .    Rendemen  ekstrak  dan  fraksi  spons
Mycale vansoesti No Sampel Berat (g) Rendemen (%) Warna 1 Ekstrak Etanol 2,73 0,54 Coklat pekat 2 Fraksi n- Heksan 0,30 30 Hijau Tua 3 Fraksi Kloroform 0,28 28 Coklat muda 4 Fraksi Metanol 0,82 82 Coklat muda
Hasil rendemen ini terdapat perbedaan nilai  rendemen  hal  ini  disebabkan  karena pelarut yang berbeda akan melarutkan senyawa yang berbeda juga sesuai tingkat kepolarannya (Mujipradhana dkk, 2018). Dari hasil ini terlihat bahwa  Fraksi  Metanol  memiliki  rendemen paling  tinggi  dari  pelarut  yang  lain  yaitu sebanyak  82%.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa dalam spons Mycale vansoesti terdapat banyak komponen  bioaktif  yang  bersifat  polar.  Hasil rendemen  ekstrak  tergantung  pada  metode ekstraksi,  kondisi  senyawa,  waktu  ekstraksi, ukuran partikel sampel.

## Uji Antibakteri
Pengujian aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi agar Kirby Bauer. Metode  difusi  agar  merupakan  metode  yang dilakukan  untuk  mengamati  dan  mengukur diameter zona bening yang terbentuk disekitar cakram  yang  telah  berisi  zat  antibakteri  yang telah  diinokulasi  bakteri.  Pengujian  dilakukan terhadap  bakteri Escherichia  coli yang mewakili bakteri gram negatif dan Staphylococcus  aureus mewakili  bakteri  gram positif.  Tujuan  digunakan  kedua  bakteri  ini untuk mengetahui apakah sampel spons Mycale vansoesti memiliki spektrum luas berarti dapat membunuh  banyak  jenis  mikroba  termasuk bakteri gram positif maupun gram negatif atau spektrum sempit yaitu hanya membunuh salah satu  dari  bakteri  gram  positif  maupun  gram negatif (Pratiwi, 2008).
Uji  aktivitas  antibakteri  konsentrasi yang  digunakan  250  µg,  dengan  daya  serap masing-  masing paper  disc 50  µL.  Hasil  yang diperoleh  melalui  pengamatan  yang  dilakukan selama  1x24  jam  masa  inkubasi  pada  suhu  37 dengan  3  kali  pengulangan  untuk  masing- masing  bakteri,  tujuannya  agar  lebih  akurat hasil pengujian yang diperoleh. Pada pengujian ini, daya antibakteri ditandai dengan munculnya zona  bening  disekitar  kertas  cakram  yang berukuran  ±  6  mm    (Mujipradana  dkk,  2018). Hasil  pengukuran  diameter  zona  bening  dari ekstrak etanol, fraksi n-Heksan, fraksi kloroform  dan  fraksi  methanol  terhadap terhadap Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus ditunjukkan  pada  Tabel  2.  Kontrol positif  yang  digunakan  yaitu  Kloramfenikol karena  merupakan  antibiotic  berspektrum  luas dan  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri gram  positif  maupun  gram  negatif.  Zona hambat  yang  terbentuk  pada  kontrol  positif
akan dibandingkan dengan daerah hambat lain yang terbentuk.
Tabel 2. Hasil pengukuran diameter zona hambat ekstrak dan fraksi spons Mycale vansoesti terhadap Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. Diameter Zona Hambat (mm) EtOH ChCl3 n-Hxn MeOH C+ C- Ec 7,41 8,44 7,96 6,85 7,71 7,79 7,72 7,76 21,7 - 7,13 8,45 8,16 7,73 ∑ 22,25 24,68 23,84 22,34 𝒙̅ 7,41 8,22 7,94 7,44 Sa 6,79 6,28 6,88 6,72 6,71 6,29 6,64 7,19 18,96 - 7,22 6,38 6,41 6,61 ∑ 20,72 18,95 19,93 20,52 𝒙̅ 6,90 6,31 6,64 6,84
Ket:  C+      =  Kontrol  Positif  ,  C-  =    Kontrol  Negatif,  Ec  =Bakteri Escherichia  coli ,Sa  =  Bakteri Staphylococcus aureus, mm= milimeter, ∑ = Jumlah total, 𝑥̅ = rata-rata.
Kriteria yang digunakan untuk menggolongkan daya  hambat  kontrol  uji  dan  bahan  uji  spons Mycale vansoesti menggunakan kriteria
kekuatan  antibakteri  yaitu  dapat  dilihat  pada Tabel 3 dibawah ini:
Tabel 3 . Kategori Kekuatan Daya Antibakteri (Davis and Stout,1971). Diameter Zona Bening (mm) Kategori ≥20 Sangat Kuat 10-20 Kuat 5-10 Sedang ≤5 Lemah
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh diameter  zona  bening  dari  kontrol  positif kloramfenikol  pada  bakteri Escherichia  coli yaitu  21,7  mm  dan  bakteri Staphylococcus aureus yaitu  18,96  mm.  Kontrol  Negatif  yang digunakan  pelarut  Metanol  dan  hasil  yang didapatkan  tidak  menunjukan  terbentuknya zona  hambat,  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian Mujipradana  dkk  (2018)  yaitu  menandakan bahwa  tidak  ada  pengaruh  pelarut  metanol terhadap antibakteri yang diuji.
Hasil pengukuran diameter zona bening ekstrak  dan  fraksi  spons Mycale  vansoesti terhadap bakteri Escherichia coli, yaitu ekstrak etanol  dengan  nilai  total  22,25  mm  dan  nilai rata-rata  7,41  mm,  kemudian  fraksi  kloroform yaitu 24,68 mm dengan nilai rata-rata 8,22 mm, fraksi  n-heksan  yaitu  23,84  mm  dengan  nilai rata-rata  7,94  mm  selanjutnya  fraksi  metanol nilai total 22,34 mm dan nilai rata-rata 7,44 mm.
Kemudian  hasil  pengukuran  diameter  zona bening  ekstrak  dan  fraksi  spons Mycale vansoesti terhadap  bakteri Staphylococcus aureus, didapatkan  pada  ekstrak  etanol  yaitu nilai total 20,72 mm dengan nilai rata-rata 6,90 mm , pada fraksi kloroform nilai total 18,95 mm dan  nilai  rata-rata  6,31  mm  ,  fraksi  n-heksan nilai total 19,93 mm dan nilai rata-rata 6,64 mm dan  yang  terakhir  fraksi  metanol  dengan  nilai total  20,52  mm  dan  nilai  rata  –  rata  6,84  mm. Dari hasil ini dapat dilihat bahwa ekstrak etanol, fraksi  kloroform,  fraksi  n-heksan,  serta  fraksi metanol  spons Mycale  vansoesti memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus dan  berdasarkan  kategori  kekuatan  daya antibakteri  oleh  David  and  Stout  (1971) termasuk dalam kategori sedang. Diameter zona hambat  yang  dihasilkan  juga  memiliki  nilai perbedaan yang sedikit yaitu pada sekitar 5-10
mm,  sehingga  semua  ekstrak  dan  fraksi  yang digunakan  termasuk  dalam  satu  kategori  yang sama yaitu kategori sedang.
Gambar 1 . Hasil Uji Aktivitas Antimikroba dari Ekstrak dan Fraksi Spons Mycale vansoesti. Ket : (A). Escherichia coli , (B). Staphylococcus aureus Keterangan (1).Ekstrak etanol, (2).Fraksi kloroform,
(3). Fraksi n-Heksan, (4). Fraksi metanol, (5). Kontrol Positif, (6) Kontrol Negatif.
Hasil yang sama diperoleh dari penelitian yang dilakukan oleh Ratu dkk (2019), menunjukkan bahwa semua ekstrak dan fraksi dari spons  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap bakteri  uji Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus . Sedangkan untuk perbedaan diameter zona hambat yang terbentuk menggunakan ekstrak dan fraksi  terhadap  bakteri  uji,  selain  senyawa  yang terkandung  didalam  sampel  bisa  juga  karena kepekaan dari masing-masing bakteri seperti gram positif dan gram negatif.

## KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa spons Mycale
vansoesti menghasilkan  aktivitas  antibakteri  pada semua  ekstrak  dan  fraksi  yang  digunakan  yaitu ekstrak  etanol,  fraksi  kloroform,  fraksi  n-heksan, dan  fraksi  metanol  terhadap  bakteri Escherichia coli  dan  Staphylococcus  aureus dengan  nilai sekitar  6,63-8,82  mm  dan  termasuk  dalam  daya hambat kategori sedang.

## SARAN
Berdasarkan hasil dan pembahasan aktivitas  antibakteri  ekstrak  dan  fraksi  spons Mycale  vansoesti ,  disarankan  perlu  dilakukan penelitian  lanjut  untuk  mengetahui  senyawa- senyawa apa yang terkandung pada spons Mycale vansoesti yang bisa berpotensi sebagai antibakteri dan perlu dilakukan pengujian aktivitas yang lain.

## DAFTAR PUSTAKA
Davis, W. W., T.R. Stout. 1971. Disc plate method of  microbiological  assay . Journal  of microbiology . 22 : 659-665.
Engka,  T.  2016.  Aktivitas  Antioksidan  dan Penentuan  Kandungan  Total  Fenolik dan  Flavonoid  dari  Umbi  Kuso Mafola (Drynaria  quercifolia  L.).
[Skripsi].  Program  Studi  Farmasi FMIPA  Universitas  Sam  Ratulangi, Manado.
Irianto, K. 2006. Mikrobiologi Menguak Dunia Mikroorganisme Jilid 1. Bandung Yrama Widya.
Ismet,  M.  S.  2007.  Penapisan  Senyawa  Bioaktif Spons Aaptops dan Petrosia  sp dari lokasi  yang  berbeda.  [Skripsi].  ITB  : Bandung.
Khopkar,  S.  2008. Konsep  Dasar  Kimia  Analitik . UI Press, Jakarta.
Kristanti,  A.  N.,  N.S.  Aminah.,  M.  Tanjung.,  B. Kurniadi. 2008. Buku Ajar Fitokimia . Unair Press, Surabaya.
Lenny, S. 2006.
Senyawa Flavonoida,
Fenilpropanoida dan Alkaloida .
FMIPA  Universitas  Sumatera  Utara, Medan.
Menon,dkk. 2017. Mengkaji Aktivitas Antibakteri Nasturtium  officinale dan  Ekstrak Etanol Pilea melastomoides terhadap Escherichia coli. Farmaka. 15 : 1.
Mujipradana, V.N., D. S. Wewengkang., dan E.
Suryanto. 2018. Aktivitas Antimikroba dari Ekstrak Ascidian Herdmania momus pada Mikroba Patogen Manusia. Pharmacon . 7(3) : 338-347.
Murniasih.  2003.  Metabolit  Sekunder  Dari  Spons Sebagai  Bahan  Obat-Obatan .  Jurnal
Oseana. 3 : 27-33.
Ortez, J. H. 2005. Disk Diffusion testing in manual of antimicrobial susceptibility testing . American society for Microbiology.
Pratiwi, S. T. 2008. Mikrobiologi Farmasi . Jakarta : Erlangga.
Ratu,  dkk.  2019.  Uji  Aktivitas  Antimikroba Ekstrak Dan Fraksi Spons Phyllospongia  Lamellosa Perairan Tumbak, Minahasa Tenggara Terhadap Pertumbuhan Mikroba
Escherichia  Coli,  Staphylococcus Aureus Dan Candida  Albicans . Pharmacon UNSRAT. 8 (4).
Silap,  dkk.  2020.  Uji  Aktivitas  Antimikroba
Karang Lunak Dendronephtya Sp., Yang Dikoleksi Dari Desa Tumbak Kecamatan Pusomaen, Kabupaten Minahasa Tenggara Terhadap Escherichia Coli, Staphylococcus Aureus, Dan Candida Albicans. Jurnal Pharmacon UNSRAT. 9(1) : 64-65.
Sulastri,  dkk.  2015.  Formulasi  Mikroemulsi
Ekstrak  Bawang  Hutan  dan  Uji Aktivitas Antioksidan. Jurnal Pharmascience . 2(2) : 2-5.
Suparno.  2005. Kajian  Bioaktif  spons  laut
(Porifera: Demospongiae) Suatu Peluang  Alternative  Pemanfaatan Ekosistem  Karang  Indonesia  Dalam Bidang  Farmasi. Bogor:  Institute Pertanian Bogor.
Zhou. Xuefeng, Xiuping. L , Xieyang. G , Bin .Y., Xian.  W,  dan  Yonghong.  L.  2013. Chemical Constituents of the Sponge Mycale  Species  from  South  China Sea.  Journal  of  Record  of  Natural Products. 7(2) : 119-123