## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI DARI ISOLAT CENDAWAN ENDOFIT
ASAL TUMBUHAN SENDUDUK ( Melastoma malabathricum L.)

## TERHADAP Escherichia coli DAN
Staphylococcus aureus
Israwati Harahap, Vivin Paddillah Rahmi, Nofripa Herlina
Fakultas MIPA Dan Kesehatan Universitas Muhammadiyah Riau Pekanbaru, 28293, Indonesia vivinfaddillah@gmail.com

## ABSTRACT
Endophytic fungi is a symbiotic microorganism which live inside plant tissues and not harm to their host. Several genera from endophytic fungi known to produce secondary metabolite compounds like antibiotics, anticancer, antifungal, antiviral and antimalarial. This study aimed to investigate antibacterial activity of endophytic fungi from senduduk (Melastoma malabathricum L.) against Escherichia coli and Staphylococcus aureus.  Based on the test result, 11 isolates endophytic fungi from senduduk were known to have antibacterial activities. Isolate code 23  have ability to inhibit  the growth of E.coli with diameters zone of inhibition is 22 mm and eight isolate endophytic fungi have ability to inhibit the growth of S.aureus (showed by inhibition zone).
Keyword :  Antibacterial, Endophytic fungi, Melastoma malabathricum L.

## 1 PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  salah  satu  negara tropis  yang  memiliki  keanekaragaman  hayati yang  cukup  tinggi.  Keanekaragaman  hayati hutan  tropika  Indonesia  yaitu  berupa tumbuhan  yang  berkhasiat  sebagai  obat  yang potensinya  perlu  dikaji  secara  sungguh- sungguh  untuk  kepentingan  kesejahteraan masyarakat. Untuk meningkatkan pengembangan budidaya dan produksi tumbuhan  obat  maka  diperlukan  berbagai usaha penelitian terhadap tumbuhan obat yang tumbuh di Indonesia (Wasitaningrum, 2009).
Salah  satu penelitian terhadap tumbuhan obat  yang  sedang  dikembangkan  adalah tumbuhan  obat  penghasil  mikroba  endofit. Mikroba  endofit  merupakan  mikroba  yang hidup  pada  jaringan  tumbuhan  sebagai  agen penghasil  senyawa  metabolit  sekunder. Mikroba  ini  meliputi  bakteri  dan  cendawan, yang  hidup  pada  akar,  batang  maupun  daun dari  suatu  tumbuhan.  Mikroba  ini  mampu melindungi  inangnya  dengan  menghasilkan senyawa  metabolit  sekunder  yang  merupakan senyawa  bioaktif  yang  dapat  membunuh patogen (Prihatiningtias, 2005). Senyawa yang
dihasilkan  oleh  mikroba  ini  mirip  dengan inangnya  dan  diduga  sebagai  hasil  koevolusi atau transfer genetik dari inang (Tan and Zou, 2001).
Salah  satu  tanaman  obat  yang  sudah dikenal  dan  dimanfaatkan  sejak  lama  oleh masyarakat  Indonesia  adalah  senduduk (Melastoma  malabathricum  L.)  Oktavianti (2016)  telah  melakukan  isolasi  cendawan endofit dari tumbuhan senduduk. Sebanyak 26 isolat  telah  berhasil  diisolasi  dan  beberapa isolat  tersebut  memiliki  aktivitas  sebagai antifungi  dalam  menghambat  pertumbuhan Candida albicans ,  Sedangkan  kemampuan isolat  cendawan  endofit  tersebut  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri  belum diketahui.  Oleh  karena  itu  perlu  dilakukan penelitian untuk  menguji  aktivitas antibakteri dari isolat cendawan endofit tersebut.
Bakteri  uji  yang  digunakan  yaitu Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. E. coli dan S. aureus merupakan flora normal di  saluran  pencernaan  tubuh  manusia.  Kedua bakteri  ini  dapat  menyebabkan  beberapa penyakit  seperti  infeksi  saluran  kemih, meningitis  dan  sepsis  (Kusuma,  2009;  2010;
Melliawati, 2009). S. aureus sering ditemukan sebagai  bakteri  flora  normal  pada  kulit  dan selaput lendir pada manusia, namun bakteri ini juga  dapat  menjadi  penyebab  infeksi  pada manusia  maupun  hewan.  S.  aureus  dapat menginfeksi jaringan atau alat tubuh lain yang menyebabkan  timbulnya  penyakit  dengan tanda-tanda  yang  khas  seperti  nekrosis, peradangan  dan  pembentukan  abses  (Aulia, 2007).
Penyakit  infeksi  dapat  ditangani  dengan menggunakan  antibiotik.  Terapi  antibiotik beberapa tahun lalu dinyatakan berhasil dalam mengatasi penyebaran mikroba patogen. Akan tetapi,  maraknya  penggunaan  antibiotik  yang tidak  tepat  dapat  menyebabkan  resistensi terhadap  mikroba  patogen  (Sjahrurrahman et al., 1999).  Hal  ini  mendorong  untuk dilakukannya  pencarian  antibiotik  (senyawa bioaktif) yang baru yaitu salah satunya dengan memanfaatkan senyawa bioaktif dari cendawan endofit asal tumbuhan senduduk ( M.
malabathricum L .).
2 METODE PENELITIAN
a. Waktu dan Tempat Penelitian Penelitian dilaksanakan pada bulan April sampai Juni 2017 di Laboratorium
Mikrobiologi  Fakultas  MIPA  dan  Kesehatan, Universitas  Muhammadiyah  Riau  dan  di Laboratorium  Biokimia,  FMIPA,  Universitas Riau.

## b. Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  oven  ( Memmert ),  autoklaf,  ( All American ),  kompor  listrik  (Maspion),  cawan petri (Pyrex), rak tabung reaksi, tabung reaksi, gunting,  erlenmeyer,  pipet  tetes,  tissue, alumunium  foil,  kapas,  beaker  glass  ( Pyrex ), kertas  label,  bunsen,  plastik,  kertas, glass object , jarum ose, cling wrep , laminar air flow (LAF),  timbangan  analitik  (Radweg),  dan cotton swab .
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  26  isolat  cendawan  endofit  asal tumbuhan  senduduk  ( M. malabathricum L.), biakan E. coli dan S. aureus, Potato Dextrose Agar (PDA), Potato Dextrose Broth (PDB),
Nutrient Agar (NA) dan Nutrient Broth (NB).
c. Prosedur Penelitian

## 1. Peremajaan Isolat
Peremajaan  isolat  cendawan  endofit dilakukan  dengan  menumbuhkan  kembali isolat-isolat cendawan endofit yang telah murni ke dalam media PDA dan diinkubasi selama 5- 7 hari pada suhu 25°C.

## 2. Produksi  Senyawa  Metabolit  Sekunder dari Isolat
Koloni  cendawan  endofit  yang  telah diinkubasi  pada  media  PDA  selama  5-7  hari pada  suhu  25°C,  diambil  satu  ose  dan diinokulasi ke dalam tabung reaksi yang berisi 10  ml  media  PDB  kemudian  diinkubasi  pada suhu  25°C  menggunakan shaker inkubator selama 21 hari.

## 3. Persiapan Bakteri Uji
Kultur murni E. coli dan S. aureus diambil dengan menggunakan jarum ose dan diinokulasi  ke  dalam  tabung  reaksi  yang  telah berisi  10  ml  NB.  Selanjutnya  diinkubasi selama 18-24 jam pada suhu ruang.

## 4. Uji Aktivitas Antibakteri
Pengujian  aktivitas  antibakteri  dilakukan dengan metode sumuran. Bakteri uji yang telah berumur  24  jam  diambil  dengan cotton swab . Selanjutnya cotton swab dicelupkan  ke  dalam tabung  reaksi  dan  ditekan  perlahan  pada dinding  tabung  reaksi  agar cotton swab tidak terlalu  basah,  kemudian  diusap  secara horizontal  pada  media  NA.  Media  NA dilubangi  dengan  menggunakan  sedotan  kecil berdiameter  6  mm.  Setiap  cawan  petri  terdiri dari  3  sumuran  yang  berisi  senyawa  metabolit sekunder  hasil  fermentasi  isolat  cendawan endofit.  Selanjutnya  diinkubasi  pada  suhu ruang dan diamati zona hambat yang terbentuk selama  24-48  jam.  Zona  hambat  yaitu  zona bening  yang  terbentuk  di  sekitar  sumuran. Zona hambat yang terbentuk disekitar sumuran selanjutnya diukur diameternya. Diameter zona hambat  diperoleh  dengan  cara  mengukur selisih  diameter  zona  hambat  (mm)  dengan diameter sumuran (Azzoro, 2002).
3

## HASIL DAN PEMBAHASAN
a. Peremajaan Isolat
Peremajaan  isolat  cendawan  endofit dilakukan  dengan  menumbuhkan  kembali isolat-isolat  cendawan  endofit  yang  telah murni  ke  dalam  media  PDA  dan  diinkubasi selama 5-7 hari pada suhu 25°C . Sebanyak 11 isolat  cendawan  endofit  berhasil  diremajakan dan  digunakan  untuk  uji  aktivitas  antibakteri. Setelah dilakukan peremajaan isolat cendawan endofit,  maka  dilanjutkan  dengan  proses fermentasi  untuk  memperoleh  ekstrak  yang mengandung senyawa metabolit sekunder dari isolat cendawan endofit. Fermentasi cendawan endofit dilakukan dengan cara
menumbuhkannya  di  dalam  media  PDB. Proses fermentasi cendawan endofit digunakan media  PDB  karena  fermentasi  dengan  media cair lebih efektif untuk memproduksi biomassa (Pokhrel  dan  Ohga,  2007)  dan  senyawa bioaktif dibandingkan fermentasi dalam media padat.  Hal  ini  karena  dalam  fermentasi  cair terdapat  proses  agitasi  yang  memungkinkan nutrisi  dalam  media  dapat  terus  homogen  dan tidak  ada  gradien  kosentrasi  produk/toksin, sehingga  dapat  lebih  optimal  mengabsorbsi nutrisi tersebut (Yan et al ., 2015).

## b. Uji Aktivitas Antibakteri
Pengujian  senyawa  antibakteri  dilakukan terhadap  dua  bakteri  target  yang  mewakili kelompok  bakteri  Gram  positif  dan  Gram negatif.    Menurut    Prescott, et  al .  (2002), adanya penghambatan isolat cendawan endofit terhadap  pertumbuhan  mikroba  target,  terlihat dari terbentuknya zona hambatan di sekeliling koloni  isolat  cendawan  endofit.  Sebelas  isolat yang  berhasil  diremajakan,  9  isolat  memiliki aktivitas  dalam  menghambat E. coli yaitu, isolat 8, 14, 16, 18, 19, 21, 22, 23, 25 dan 10 isolat  memiliki  aktivitas  dalam  mengambat S. aureus yaitu isolat 3, 10, 14, 16, 18, 19, 21, 22,
23,  25.  Zona  hambat  yang  dihasilkan  oleh isolat  cendawan  endofit  menunjukkan  adanya aktivitas antibakteri (Tabel 1)
Tabel  1.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  dari  Isolat Cendawan  Endofit  Asal  Tumbuhan Senduduk  ( M. malabathricum L.  ) Terhadap E. coli dan S. aureus No. Isolat E. coli Zona Hambat (mm) Kategori 1 Isolat 3 - - 2 Isolat 8 9 Medium 3 Isolat 10 - - 4 Isolat 14 14 Kuat 5 Isolat 16 11 Kuat 6 Isolat 18 19 Kuat 7 Isolat 19 18 Kuat 8 Isolat 21 13 Kuat 9 Isolat 22 5 Medium 10 Isolat 23 22 Sangat Kuat 11 Isolat 25 13 Kuat No. Isolat S. aureus Zona Hambat (mm) Kategori 1 Isolat 3 6 Medium 2 Isolat 8 - - 3 Isolat 10 20 Kuat 4 Isolat 14 4 Lemah 5 Isolat 16 19 Kuat 6 Isolat 18 14 Kuat 7 Isolat 19 12 Kuat 8 Isolat 21 19 Kuat
9 Isolat 22 19 Kuat 10 Isolat 23 12 Kuat 11 Isolat 25 18 Kuat Keterangan: - (tidak ada zona hambat)
Tabel 1 menunjukan bahwa 11 isolat yang di  uji  kemampuan  antibakterinya  terhadap E. coli ,  1  isolat  termasuk  ke  dalam  kategori sangat  kuat,  6  isolat  termasuk  ke  dalam kategori  kuat,  2  isolat  termasuk  ke  dalam kategori  medium  dan  2  isolat  tidak menunjukkan  aktivitas  antibakteri.  Sedangkan kemampuan  isolat  cendawan  endofit  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri S. aureus menunjukkan  8    isolat  termasuk  ke  dalam kategori  kuat,  1  isolat  termasuk  ke  dalam kategori  medium,  1  isolat  termasuk  ke  dalam kategori lemah dan 1 isolat tidak menunjukkan aktivitas antibakteri. Ketentuan daerah hambatan  adalah  sebagai  berikut:  daerah hambatan  >20  mm  tergolong  kategori  sangat kuat,  daerah  hambatan  10-20  mm  tergolong kuat,  5-9  mm  tergolong  sedang  dan  daerah hambatan  <5  mm  tergolong  kategori  lemah (Davis, 1971).
Menurut Hasim (2003), kekuatan antibiotik  dapat  ditentukan  sebagai  berikut: daerah  hambatan  20  mm  atau  lebih mempunyai  potensi  antibiotik  “sangat  kuat”, daerah  hambatan  10  mm-20  mm  mempunyai potensi  antibiotik  “kuat”,  daerah  hambatan  5- 10  mm  mempunyai  potensi  antibiotik “sedang”  dan  daerah  hambatan  5  mm  atau kurang mempunyai potensi antibiotik “lemah”.
Berdasarkan  hasil  pengamatan,  isolat  23 menghasilkan  zona  hambat  terbesar  terhadap
E. coli dengan  diameter  22  mm  dan  isolat  10 menghasilkan  zona  hambat  terbesar  terhadap
S. Aureus dengan  diameter  20  mm  (Gambar 1).
a.)
b.)
Gambar  1. Uji  Aktivitas  antibakteri  pada media  NA.  (a)  Isolat  23 terhadap E. Coli (b)  isolat  10 terhadap S. aureus
Gambar  1  menunjukkan  bahwa  zona hambat  terbesar  dihasilkan  oleh  isolat  23 dengan  diameter  sebesar  22  mm  terhadap E. coli ,  sedangkan  isolat  10  dengan  diameter sebesar 20 mm terhadap bakteri uji S. aureus . Zona hambat terkecil dihasilkan oleh isolat 22 dengan  diameter  sebesar  5  mm  yang  di  uji pada E. coli ,  dan    isolat  14  dengan  diameter sebesar  4  mm  yang  di  uji  pada S. aureus . Terbentuknya zona hambat di sekitar sumuran menandakan  bahwa  isolat  cendawan  endofit tersebut  diduga  mengandung  antibiotik. Antibiotik  adalah  zat  yang  dihasilkan  oleh suatu  mikroba,  terutama  fungi,  yang  dapat menghambat  atau  membasmi  mikroba  jenis lain (Setiabudi, 2007).
Aktivitas  antibakteri  dapat  diketahui dengan  melihat  ada  atau  tidaknya  daerah hambatan  (zona  hambat)  pada  pertumbuhan bakteri  di  media  padat.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  sebagian  besar  isolat cendawan  endofit  asal  tumbuhan  senduduk memiliki  aktivitas  antibakteri  yang  kuat.  Hal ini  ditunjukkan  dengan  pembentukan  daerah hambat  dengan  diameter  yang  cukup  besar, baik  pada  koloni E. coli maupun S. aureus (Tabel 1).
Zona  hambat  yang  dihasilkan  oleh cendawan  endofit  tersebut  menunjukkan
bahwa  isolat  mampu  menghasilkan  metabolit sekunder  sebagai  antibakteri.  Hal  ini  sesui dengan  pernyataan  Prihatiningtias,  (2005) bahwa  kemampuan  isolat  cendawan  endofit menghambat  pertumbuhan  bakteri  karena isolat cendawan endofit mengandung senyawa metabolit  sekunder  yang  merupakan  senyawa bioaktif yang dapat membunuh patogen.
Berdasarkan  hasil  pengukuran  diameter zona  hambatan  terlihat  bahwa  kemampuan isolat  cendawan  endofit  lebih  besar  dalam menghambat
pertumbuhan E coli dibandingkan  dengan S. aureus .  Hal  ini disebabkan karena  komponen dari  dinding  sel kedua  bakteri  uji  berbeda. E.coli merupakan bakteri  Gram  negatif,  dinding  sel  terdiri  atas satu  lapis  atau  lebih  peptidoglikan  yang  tipis, sehingga sensitif terhadap senyawa antimikroba,  dibandingkan  dengan S. aureus yang  merupakan  bakteri  Gram  positif  yang terdiri  atas  beberapa  lapisan  peptidoglikan yang  membentuk  struktur  yang    tebal  (Radji, 2011).
Perbedaan  diameter  zona  hambat  juga disebabkan  oleh  beberapa  faktor  diantaranya kecepatan difusi, ukuran molekul dan stabilitas bahan antibakteri, sifat media yang digunakan, jumlah organisme yang diinokulasi, kecepatan tumbuh bakteri, konsentrasi bahan kimia serta kondisi pada saat inkubasi (Munifatul, 2007).

## 4 KESIMPULAN
Sebanyak 11 isolat cendawan endofit asal senduduk memiliki  kemampuan  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Zona hambat  terbesar  dihasilkan  oleh  isolat  23 dalam  menghambat  pertumbuhan E. coli sebesar  22  mm  dan  8  isolat  berpotensi  dalam menghambat pertumbuhan S. aureus .

## DAFTAR PUSTAKA
Aulia  A,  Thihana  &  Mirhanuddin.  2007.
Potensi ekstrak kayu ulin ( eusideroxylon zwageri T  et  B)  dalam menghambat pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus secara in vitro .
Bioscientiae . 4(1):37-42.
Azzoro,  C.  2002.  Antibacterial  Activity  of Crude Extract of Azadirachta indica on Salmonella typhi . World J. Biotecnol .
3:354-357.
Davis, W.W., dan T. R. Stout. 1971. Disc Plate Method  of  Microbiological  Antibiotic Assay. Applied Microbiology .  22:  659 – 665.
Hasim.  2003. Menanam Rumput, Memanen Antibiotik .  Jakarta:  Kompas  No.  127. Tahun ke-39.
Kusuma S. A. F. 2009. Staphylococcus aureus.
[Makalah]. Jatinangor: Fakultas Farmasi Universitas Padjadjaran.
Melliawati,  R.  2009. Escherichia coli dalam Kehidupan Manusia. BioTrends . 4:10. Munifatul,  I.  2007.  Skreening  Potensi Antibakteri  pada  Beberapa  Spesies Rumput Laut terhadap Bakteri Patogen pada  Udang  Windu. Jurnal BIOMA . 9(2): 62-67. ISSN 1410-8801. Octavianti,  Rusi.  2016.  Isolasi  Cendawan Endofit  dari  Tumbuhan  Senduduk ( Melastoma malabathricum L.)  dan Potensinya Sebagai Antifungi. [Skripsi]. Pekanbaru: Universitas Muhammadiyah Riau.
Pokhrel,  C.P  &  Ohga,  S.  2007.  Submerged Culture  Conditions  for  Mycelial  Yield and  Polysaccharides  Production  by Lyophyllum decastes . Food Chemistry ,
105, 641 - 646.
Prescott, L. M., J. P. Harley, and D. A. Klein. 2002. Microbiology 5 th ed .  USA:  Mc Graw-Hill.
Prihatiningtias,  W.  2005.  Senyawa  Bioaktif Fungi Endofit Akar kuning ( Fibraurea chloroleuca Miers)  Sebagai  Senyawa Antimikroba.  [Tesis].  Yogyakarta: Sekolah Pascasarjana. Universitas Gajah  Mada.  Radji,  M..  2011. Buku Ajar Mikrobiologi, Panduan Mahasiswa Farmasi dan Kedokteran,
50 . Jakarta, EGC.
Setiabudi,  R.  2007. Farmakologi dan Terapi. Edisi 5 .  Departemen  Farmakologi  dan Terapeutik  FKUI.  Jakarta:  Balai Penerbit FKUI.
Sjahrurachman  A,  W.  Kumala  &  T.  Nurjadi. 1999.  Kepekaan  Kuman  Terhadap Antibiotika  Golongan  Kuinolon  dan Sefalosporin. CDK 124 . p. 17-20.
Tan, R. X. & Zou, W. X. 2001. Endophytes: a Rich Source of Functional Metabolites.
Nat Prod Rep . 18:448–459.
Wasitaningrum.  2009.  Uji  Resistensi bakteri Staphylococcus aureus terhadap beberapa Antibiotik. Surakarta: UMS