JFFI. 2019; 6(2) 368-373 www.jurnal.farmasi.umi.ac.id/index.php/fitofarmakaindonesia
ANALISIS KADAR TANIN TOTAL EKSTRAK ETANOL BUNGA CENGKEH (Syzygium aromaticum L.) MENGGUNAKAN METODE SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS

## Mamat Pratama*, Raiz razak, Vivien Sandra Rosalina
Fakultas Farmasi, Universitas Muslim Indonesia
* mamat.pratama@umi.ac.id
Submission Date : 26-05-2019; Review Completed: 05-06-2019; Accepted Date:15-06-2019

## ABSTRACT
Clove flower (Syzygium aromaticum L. ) contain saponins, tannins, alkaloids, glycosides and flavonoids. The research aimed to qualitatively and quantitatively determine the existence of tannins in ethanol extract of clove flower by UV-Vis Spectrophotometry. The extraction process used was maceration using ethanol of 30% with the yield value of 4.26%. The extract obtained was measured by UV-Vis Spectrophotometer at the maximum wavelength of 649.9 nm using tanic acid as the standard. The value of the measurement result of tannin content obtained in the ethanol extract of clove flower was 300.826 mg TAE/g extract or 30.0826% b/b TAE.
Keywords: tannin; tanic acid; clove flower; UV-Vis spectrophotometer

## I. PENDAHULUAN
Indonesia merupakan salah satu negara yang dikenal sebagai gudangnya tumbuhan obat.
Penelitian  tentang  khasiat  tumbuhan  obat  Indonesia sudah  banyak  dilakukan,  diantaranya  berbagai  jenis tumbuh-tumbuhan liar, buah-buahan, sayur-sayuran, tanaman  pangan,  rempah-rempah  (Kusuma  dkk, 2005, hh.2-7).
Diantara berbagai tanaman tersebut cengkeh merupakan  salah  satu        tanaman  yang  popular  dan digunakan di seluruh dunia sebagai bumbu. Cengkeh sendiri  merupakan  tanaman  rempah  yang  termasuk dalam komoditas sektor perkebunan yang mempunyai  peranan  cukup  penting  antara  lain sebagai penyumbang pendapatan petani dan sebagai sarana untuk pemerataan wilayah pembangunan serta turut  serta  dalam  pelestarian  sumber  daya  alam  dan lingkungan.  Pada  mulanya  bagian  dari  tanaman cengkeh  yaitu  bunga  cengkeh  hanya  digunakan sebagai  obat  terutama  untuk  kesehatan  gizi (Nurdjannah, 2004).
Adapun  bagian utama cengkeh  yang sering dijadikan  sebagai  bahan  obat-obatan  maupun rempah-rempah adalah bagian bunganya disebabkan adanya terdapat kandungan minyak atsiri sebesar 10- 20%, sedangkan tangkainya sebesar 5-10% dan 1-4% pada  bagian  daunnya.  Secara  tradisional  bunga cengkeh  banyak digunakan dalam dunia kedokteran karena  berfungsi  sebagai  fungisidal,  bakterisidal, analgesik,  antioksidan  dan  antiinflamasi  (Ketaren, 2008).
Menurut  penelitian  yang  dilakukan  oleh Chaniago  (1980)  dalam  Nurdjannah  (2004),  sejak tahun  22  sebelum  Masehi,  cengkeh  digunakan sebagai  rempah–rempah,  diantaranya  di  Tiongkok digunakan dalam upacara keagamaan yaitu dimasukan  ke  dalam  peti  mayat.  Begitu  juga  bagi perwira  yang  ingin  menghadap  kaisar  diharuskan mengunyah  cengkeh,  sedang  di  Persia  cengkeh digunakan  sebagai  lambang  cinta.  Kemudian berkembang  lagi  dan  sejak  tahun  1980  cengkeh digunakan sebagai periang yaitu sebagai  pencampur tembakau ditambah rempah-rempah (Kemala, 1988).
Secara  empiris  tanaman  cengkeh  banyak digunakan  sebagai  obat  tradisional  diantaranya sebagai  pengobatan  untuk  sakit  perut  dengan  cara mengunyah  bunga cengkeh tersebut dan untuk sakit mata  dengan  meneteskan  air  perendaman  bunga /cengkeh. Disamping itu cengkeh digunakan sebagai pembangkit nafsu makan, menyembuhkan kolik atau diberikan  pada  wanita  yang  baru  melahirkan  dalam bentuk  ramuan  dengan  bahan  bahan  obat  lainnya (Nurdjannah, 2004).
Dalam  penelitian  yang  telah  dilakukan bunga  cengkeh  kering  mengandung  minyak  atsiri, fixed  oil  (lemak),  resin,  tanin,  protein,  cellulosa, pentosan  dan  mineral.  Karbohidrat  terdapat  dalam jumlah dua per tiga dari berat bunga. Komponen lain yang  paling  banyak  adalah  minyak  atsiri  yang jumlahnya  bervariasi  tergantung  dari  banyak  faktor diantaranya  jenis  tanaman,  tempat tumbuh  dan  cara pengolahan (Purseglove et al ., 1981).
Telah  dilakukan  pemisahan  kandungan kimia  dari  serbuk  bunga,  tangkai  bunga  dan  daun cengkeh  hingga  didapatkan  hasil  bahwa  serbuk bunga dan daun cengkeh mengandung saponin, tanin, alkaloid, glikosida dan flavonoid, sedangkan tangkai bunga  cengkeh  mengandung  saponin,  tannin glikosida dan flavonoid (Ferdinanti, 2001).
Tanin  diketahui  merupakan  senyawa  aktif metabolit  sekunder  yang  mempunyai  beberapa khasiat yaitu sebagai astringen, anti diare, anti bakteri dan  antioksidan.  Tanin  merupakan  komponen  zat organik  yang  sangat  kompleks,  terdiri  dari  senyawa fenolik yang sukar dipisahkan dan sukar mengkristal, mengendapkan protein dari larutannya dan bersenyawa dengan protein tersebut (Desmiaty et al ., 2008).
Tanin memiliki beberapa khasiat
diantaranya menghentikan pendarahan dan mengobati luka bakar, menghentikan internal healing berjalan  dan  tanin  mampu  membuat  lapisan pelindung  luka  dan  ginjal.  Tanin  digunakan  sejak lama  sebagai  pengobatan  cepat  diare,  disentri, perdarahan,  dan  mereduksi  ukuran  tumor.  Berbagai virus  in  aktif  dengan  paparan  tanin  (Saifudin  dkk, 2011).
Maka berdasarkan penelitian diatas peneliti akan melakukan analisis kadar tanin tanaman bunga cengkeh dengan menggunakan
metode spektrofotometri UV-VIS.

## II. METODE PENELITIAN

## A. Pengambilan dan Pengolahan Sampel
Sampel  penelitian  yang  digunakan  berupa bunga  cengkeh  ( Syzigium  aromaticum L.)  yang diperoleh dari palu Sulawesi Tengah. Sampel bunga cengkeh  yang  dikumpulkan  kemudian  dibersihkan dan  dicuci  dengan  air  mengalir.  Bunga  cengkeh ( Syzygium aromaticum L.) yang masih segar diambil dan  dikumpulkan  untuk  kemudian  dilakukan beberapa  tahapan  sebelum  dibuat  ekstrak,  lalu dilakukan  pencucian  sampel  untuk  menghilangkan tanah  dan  pengotor  lainnya  yang  melekat  pada bahan  simplisia,  pencucian  dilakukan  dengan  air bersih  yang  mengalir.  Langkah  selanjutnya  adalah perajangan  bahan  simplisia  untuk  mempermudah proses  pengeringan  dan  penggilingan.  Lalu dilakukan pengeringan untuk mendapatkan simplisia  yang  tidak  mudah  rusak,  sehingga  dapat disimpan dalam waktu yang lebih lama. Pengeringan  daun  kopasanda  yaitu  dengan  cara dijemur tanpa sinar matahari atau diangin-anginkan. Dan  yang  terakhir  adalah  pembuatan  serbuk simplisia  dilakukan  dengan  cara  menghaluskan simplisia kering dengan menggunakan blender yang kemudian diayak.

## B. Pembuatan Ekstrak Sampel
Pembuatan ekstrak bunga cengkeh ( Syzygium  aromaticum L.)  dengan  menggunakan metode  maserasi.  Serbuk  bunga  cengkeh  ( Syzygium aromaticum L.)  ditimbang  sebanyak  50  gram kemudian  direndam  dalam  150  mL  etanol  30% selama  3  X  24  jam,  kemudian  disaring  untuk mendapatkan filtrat dan residu. Residu di remaserasi kembali sebanyak 2 kali hingga diperoleh filtrat dari hasil  penyaringan.  kemudian  diuapkan  dengan Rotaryvaccum  evaporator untuk  mendapatkan ekstrak kasar bunga cengkeh ( Syzygium aromaticum L.) kemudian dikeringkan menggunakan Freezdryer .

## C. Analisis Kualitatif Tanin
Sebanyak  2  gram  ekstrak  etanol  bunga cengkeh  ( Syzygium  aromaticum L.)  ditambahkan dengan  aquadest  100  mL  dan  dididihkan  selama  15 menit,  setelah  itu  ditambahkan  1  mL  NaCl  2%  dan disaring.  Filtrat  dibagi  2  bagian  A  dan  B  di tambahkan  3  tetes  pereaksi  FeCl 3 5%.  Positif  tanin apabila  tebentuk  warna  hitam  kebiruan.Filtrat  B ditambahkan  gelatin  terbentuknya  endapan  putih (Mukhriani, Nonci, dan Mumang 2014, h.155).
D. Analisis Kuantitatif Tanin
Pembuatan larutan standar Asam tanat 1000 ppm Sebanyak  10  mg  asam  tanat  ditimbang kemudian  dilarutkan  dengan  aquadest  dalam  gelas kimia.  Selanjutnya  dimasukkan  dalam  labu  ukur 10 mL  dan  ditambah  aquadest  sampai  tanda  batas. Larutan tersebut dijadikan sebagai larutan induk 1000 ppm,  dari  larutan  tersebut  dibuat  larutan  standar dengan  konsentrasi  10,  15,  20,  25,  30,  35  ppm. (Irianty dan Yenti 2014, hal.3).
Pembuatan Reagen Folin Denis Sodium tungstate diambil sebanyak 5 gram dan  dicampurkan  dengan  asam  fosfomolibdat sebanyak  1  gram.  Dilarutkan  dengan  menggunakan aquadest dalam gelas kimia. Setelah  larut sempurna dimasukkan  kedalam  labu  ukur  50  mL  selanjutnya ditambahkan  asam  fosfat  2,5  mL  dan  ditambahkan quadest sampai tanda batas (Vermerris W dkk, 2006). Pembuatan larutan Na 2 CO 3 jenuh Pembuatan larutan Na 2 CO 3 jenuh dilakukan dengan cara menimbang sebanyak 7,5 gram Na 2 CO 3 kemudian  dilarutkan  dengan  aquadest  dalam  gelas kimia dan dipanaskan pada suhu 60 o C. Setelah larut sempurna  dimasukkan  kedalam  labu  ukur  100  mL (Andriyani dkk, 2010).
Penetapan panjang gelombang serapan maksimum Salah satu konsentrasi larutan baku diambil dan  diukur  serapannya  pada  rentang  panjang gelombang  400-800  nm.  Panjang  gelombang  yang menunjukkan  nilai  serapan  tertinggi  merupakan panjang gelombang maksimum. Berdasarkan pengukuran panjang gelombang yang telah dilakukan
maka  digunakan  panjang  gelombang  maksimum 649,9 nm.
Pengukuran larutan standar asam tanat. Larutan standar dari masing-masing konsentrasi  10,  15,  20,  25,  30,  35  ppm  diambil sebanyak  1  mL  selanjutnya  dicampur  dengan  1  mL reagen  Folin.  Campuran  dibiarkan  selama  3  menit kemudian ditambah dengan Na 2 CO 3 jenuh sebanyak 1  mL  dan  diletakkan  di  tempat  yang  tidak  terkena cahaya selama 40 menit untuk proses homogenisasi. Setelah itu, dilakukan pengukuran dengan spektrofotometri sinar tampak pada panjang gelombang  649,9  nm.  Hasil  pembacaan  absorbansi yang  diperoleh  digunakan  untuk  pembuatan  kurva
kalibrasi  standar  terhadap  konsentrasi  dari  larutan standar asam tanat.(Irianty dan Yenti, 2014). Analisis kadar tanin
Sebanyak  1  mg  ekstrak  etanol  bunga cengkeh  ( Syzygium  aromaticum L.)  ditimbang  dan dilarutkan dengan aquades sampai 10 ml (100 ppm) dan dibuat replikasi sebanyak 3 kali. Masing-masing dari replikasi dipipet sebanyak 9  mL dan dilarutkan dengan  aquades  sampai  10  mL  (90  ppm). Ditambahkan  1  mL  pereaksi  folin  denis,  didiamkan selama 3 menit, ditambahkan 1,0 ml larutan Na 2 CO 3 jenuh  dan  diinkubasi  selama  40  menit,  kemudian dibaca  serapannya  pada  panjang  gelombang  649,9 nm (Irianty dan Yenti, 2014).

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Penelitian Tabel 1. Hasil ekstraksi dan persen rendemen ekstrak etanol bunga cengkeh ( Syzygium aromaticum L .) Sampel Berat sampel (gram) Total pelarut (mL) Berat ekstrak (gram) Rendemen ekstrak (%) Bunga cengkeh 30 450 1,28 4,26
Tabel 2. Hasil pengukuran absorbansi larutan pembanding Asam tanat menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimum 649,9 nm
Konsentrasi (ppm) Absorbansi Absorbansi blanko 10 0,231 0 15 0,337 0 20 0,454 0 25 0,587 0 30 0,685 0 35 0,843 0
Gambar 1. Panjang gelombang maksimum larutan asam tanat
Gambar 1. Foto panjang gelombang maksimum
Gambar 2. Kurva baku asam tanat
Tabel 3. Penetapan kadar tanin total ekstrak etanol bunga cengkeh ( Syzygium aromaticum L.)
Replikasi Berat ekstrak (gram) Absorban (Y) Absorban kontrol ekstrak Absorban sampel sesungguhnya Kandungan tanin total Rata-rata kandungan Tanin total (mgTAE/g Ekstrak) % Tanin total 1 0,00103 0,640 0 0,640 292,098 300,826 30,082 2 0,00106 0,680 0 0,680 300,984 3 0,00104 0,686 0 0,686 309,396

## Pembahasan
Tanaman  cengkeh  sejak  lama  digunakan dalam industri rokok kretek, makanan, minuman dan obat-obatan. Bagian tanaman yang dapat dimanfaatkan  untuk  berbagai  keperluan  adalah batang,  kulit  batang,  daun,  tangkai,  serta  bunga cengkeh.  Secara  tradisional  bunga  cengkeh  banyak digunakan dalam dunia kedokteran karena berfungsi sebagai fungisidal, bakterisidal, analgesik, antioksidan dan antiinflamasi. Serbuk bunga cengkeh sendiri  mengandung  saponin,  tanin,  alkaloid, glikosida dan flavonoid.
Tanin  merupakan  komponen  zat  organik yang sangat kompleks, terdiri   dari senyawa fenolik yang  sukar  dipisahkan  dan  sukar  mengkristal, mengendapkan protein dari larutannya dan bersenyawa  dengan  protein  tersebut.  Sifat  tanin sebagai  astringen  dapat  dimanfaatkan  sebagai antidiare,  menghentikan  pendarahan,  dan  mencegah peradangan  terutama  pada  mukosa  mulut,  serta digunakan sebagai antidotum pada keracunan logam berat  dan  alkaloid.  Tanin  dibedakan  menjadi  dua kelompok  yaitu  tanin  terhidrolisis  dan  tanin terkondensasi.
Pada uji analisis kualitatif digunakan FeCl 3 untuk menentukan apakah suatu sampel mengandung gugus  fenol  yang  ditunjukkan  oleh  warna  hijau kehitaman  atau  biru  gelap  setelah  ditambahkan dengan  FeCl 3 .  Hasil  yang  didapatkan  yaitu  sampel berubah  menjadi  warna  biru  kehitaman.  Dalam
pengujian fitokimia dengan menggunakan pengujian dengan  menggunaka  pereaksi  FeCl 3 memberikan hasil positif, maka dapat disimpulkan bahwa sampel ekstrak etano bunga cengkeh ( Syzygium aromaticum L .)  mengandung  senyawa  fenolik  dan  salah  satunya adalah  senyawa tanin. Pembentukan tinta  hijau atau biru-hitam pada ekstrak setelah ditambahkan dengan FeCl 3 sebagai  tanin  akan  membentuk  kompleks dengan ion Fe 3 + (Harborne, 1987). Pada penambahan kalium  ferrasianida  dan  ammonia  ekstrak  bunga cengkeh  ( Syzygium  aromaticum L.)  menghasilkan warna  coklat  tua.  Hal  itu  mengindikasikan  bahwa terdapat senyawa tanin. Pada ekstrak bunga cengkeh diketahui bahwa jenis tanin yang dimiliki yaitu tanin terhidrolisis  karena  memberikan  warna  biru  hitam pada penambahan FeCl 3 .
Sebelum  dilakukan  analisis  kuantitatif terlebih  dahulu  dilakukan  penentuan  panjang gelombang maksimum. Panjang gelombang maksimum  (λ max )  adalah  panjang  gelombang  pada saat  serapannya  maksimum  dengan  cara  membaca serapan  larutan  standar  asam  tanat  dan  kemudian diubah-ubah  panjang  gelombangnya  (Afrianto, 2008).  Penetapan  panjang  gelombang  maksimum bertujuan  untuk  mengetahui  besarnya  panjang gelombang yang dibutuhkan larutan asam tanat untuk mencapai serapan maksimum (Mulja dan Suharman, 1995). Diketahui hasil penetapan panjang gelombang serapan  maksimum  larutan  standar  asam  tanat  30 ppm dengan panjang gelombang 649,9 nm.
Selanjutnya  dilakukan  pembuatan  kurva baku.  Pembuatan  kurva  baku  bertujuan  untuk mengetahui  hubungan  antara  konsentrasi  larutan asam  tanat  dengan  nilai  nilai  absorbansi  sehingga konsentrasi  sampel  bunga  cengkeh  dapat  diketahui. Larutan standar 1000 ppm dibuat seri konsentrasi 10, 15,  20,  25,  30  dan  35  ppm  dan  dibuat regresi  linier seperti  pada  gambar  5.  Persamaan  kurva  baku  yang diperoleh  dari  konsentrasi  asam  tanat  yaitu  y  = 0,0242x – 0,0219 dengan nilai r = 0,9982 digunakan untuk  menetapkan  kadar  tanin  bunga  cengkeh ( Syzygium aromaticum L.).
Pada  uji  kuantitatif  dilakukan  dengan menggunakan spektrofotometri UV-Vis pada panjang  gelombang  190  nm-380  nm  (pada  daerah ultraviolet) atau panjang gelombang 380 nm-780 nm (pada  daerah  cahaya  tampak).  Untuk  menentukan kadar  tanin  diukur  dengan  menggunakan  kurva standar  tanin.  Standar  tanin  yang  digunakan  yaitu asam  tanat.  Pemilihan      asam      tanat      dikarenakan asam  tanat  merupakan  golongan  tanin  terhidrolisis sehingga  dapat  digunakan  sebagai  pembanding dalam  pengukuran  kadar  tanin  total  (Supriyanto,  R 2011). Tanin yang dibaca pada spektrofotmetri UV- Vis  harus  direaksikan  dengan  reagen  pembentuk warna  yaitu  folin  denis  dan  natrium  karbonat. Pembentukan  warnanya  berdasarkan  reaksi  reduksi oksidasi, dimana tanin sebagai reduktor. Folin denis sebagai  oksidator,  tanin  yang  teroksidasi  akan mengubah  fosmolibdat  dalam  folin  denis  menjadi fosmolibdenim  yang  berwarna  biru  yang  dapat menyerap  sinar  pada  daerah  panjang  gelombang ultraviolet visibel (Andriyani D dkk, 2010). Na 2 CO 3 bertujuan  untuk  membuat  suasana  basa  agar  terjadi reaksi  reduksi  folin  denis  oleh  gugus  hidroksil  dari polifenol  di  dalam  sampel  dan  akan  membentuk kompleks molybdenum-tungsten berwarna biru.
Sampel di timbang sebanyak 3 kali dengan berat  masing-masing  0,001  gram.  Kemudian  diukur dengan  menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis untuk  mengetahui  absorban  dari  sampel.  Untuk mendapatkan absorban sampel sesungguhnya dilakukan  dengan  cara  mengurangi  nilai  absorban sampel  dengan  nilai  absorban  kontrol  ekstrak. Setelah  di  dapatkan  absorban  sampel  sesungguhnya kemudian  dihitung  nilai  kandungan  tanin  total masing-masing dari hasil replikasi sampel. Rata-rata kandungan tanin total nilai ekstrak dari sampel bunga cengkeh  ( Syzygium  aromaticum L.)  didapatkan dengan  menjumlahkan  keseluruhan  nilai  kandungan tanin total kemudian dibagi 3. Hasil yang didapatkan yaitu setiap gram ekstrak mengandung tanin sebesar 300,826 mg TAE/g yang setara dengan asam tanat.

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan di Laboratorium Kimia Farmasi Universitas Muslim Indioensia,  maka  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak etanol  bunga  cengkeh  ( Syzygium  aromaticum L.) mengandung  senyawa  tannin.  Adapun  kadar  tanin pada  ekstrak  etanol  bunga  cengkeh  ( Syzygium aromaticum L.)  sebesar  300,826  mg  TAE/g  ekstrak atau 30,082 % b/b TAE.

## DAFTAR PUSTAKA
Andriyani,  D,  Utami,  PI,  Dhani,  BA  2010, ‘Penetapan  kadar  tanin  daun  rambutan ( Nephelium lappaceum
L.) secara spektrofotometri ultraviolet visibel’, Jurnal Pharmacy , Vol.7 No. 02 Agustus 2010. Afrianto,  E  2008 Pengawasan  Mutu  Bahan/Produk Pangan  jilid  IIUntuk  Sekolah  Menengah Kejuruan ,  Direktorat  Pembinaan  SM, Jakarta.
Azwanida,  N  N  2015,  A  Review  on  the  Extraction Methods  Use  in  Medical  Plants,  Principle, Strength and Limitation, 4(3), Hal. 1-6.
Desinta,  T  2015,  ‘Penentuan  jenis  tanin  secara kualitatif  dan  penetapan  kadar  tanin  dari kulit buah rambutan ( Naphelium loppaceum L.)  secara  permanganometri’, Calyptra: Jurnal  Ilmiah  Mahasiswa  Surabaya Vol.  4 No. 1, hal. 3.
Desmiaty, Y, Ratih H, Dewi M.A, Agustin, R 2008, ‘Penentuan Jumlah Tanin Total pada  Daun Jati Belanda ( Guazuma ulmifolia Lamk) dan
Daun Sambang Darah ( Excoecaria bicolor Hassk.)  Secara  Kolorimetri  dengan Pereaksi Biru Prusia’, Ortocarpus, 106-109.
Ferdinanti,  E  2001,  ‘Uji  Aktivitas  Antibakteri  Obat Kumur Minyak Cengkeh ( Syzygium aromaticum (L) Merr & Perry) Asal Bunga, Tangkai  Bunga,  dan  Daun  Cengkeh Terhadap  Bakteri’,  Skripsi  S1  Jurusan Farmasi, Fakultas Matematika dan
Pengetahuan  Alam,  Institut  Sains  dan Teknologi Nasional Jakarta.
Fitrah, M 2016, ‘Identifikasi ekstrak daun kopasanda ( Chromolaena  odorata L.)  terhadap  sel antiproliferasi  tikus  leukimia  L1210’,  JF FIK UINAM Vol.4 No.3, hal.100-101. Gandjar,  IG  &  Rohman,  A  2007, Kimia  Farmasi Analisis ,  Pustaka  Pelajar,  Yogyakarta,  hal. 240-241.
Gandjar,  IG  &  Rohman  A,  2012, Kimia  Farmasi Analisis ,  Pustaka  Pelajar.  Yogyakarta, hal.252-256.
Hagerman, AE 2002, Tannin Handbook , Department of  Chemistry  and  Biochemistry,  Miami University.
Hanani,  E  2015, Analisis  Fitokimia ,  EGC,  Jakarta, hal. 79-81. Harborne,  1987, Metode  Fitokimia  Penuntun  Cara Modern  Menganalisis  Tumbuhan ,  trans.
Padmawinata  K,  Soediro  E,  ITB  Press, Bandung,  Terjemahan  dari:  Phytochemical methods.
Integrated  Taxonomic  Information  System,  2018, Syzygium  aromaticum L.,  diakses  pada  25 Mei 2018. http://itis.gov/ .
Irianty, RS, Yenti, SR 2014, ‘Pengaruh perbandingan pelarut etanol-air terhadap kadar tanin pada sokletasi  daun  gambir  ( Uncaria  gambir Roxb)’, SAGU, Maret 2014 Vol.13 No.1:1- 7, ISSN 1412-4424, hal.3.
Kardinan, A 2003, Tanaman Pengusir dan Pembasmi Nyamuk ,  Agro  Media  Pustaka,  Jakarta, hal.22-23.
Ketaren,  2008, Konsep  dan  Penerapan  Metode Penelitian  Ilmu  Keperawatan ,  Salemba Medika, Jakarta.
Kusuma,  FR,  &  Zaky,  B  Muhammad  2005, Tumbuhan Liar Berkhasiat Obat , Agromedia, Jakarta, hal.2-7.
Maiola,  MC,  Mahendradatta,  M,  Laga,  A,  Djide,  N 2013,  ‘Tanin  extract  of  guajava  leaves ( Psidium  guajava L.)  variation  with concentration organic solvent’ , International journal  of  scientific  &  technology  research Vol.2, ISSUE 9, ISSN 2277-8616 , hal.107. Maryani  H,  Suharmiati2006, Tanaman  Obat  Untuk Mengatasi  Penyakit  Pada  Usia  Lanjut, AgroMedia Pustaka, Jakarta. Mukhriani,  Nonci,  FY,  Mumang  2014,  ‘Penetapan kadar  tanin  total  ekstrak  biji  jintan  hitam (Nigella sativa) secara spektrofotometri UV- Vis’, JK FIK UINAM Vol.2. No.4. Mulja,  M,  Suharman  1995, Analisis  Instrumental , Airlangga University Press, Surabaya. Nurhasanah,N2012,  ‘Isolasi  Senyawa  Antioksida Ekstrak  Metanol  Daun  Kersen (Muntingia calabura Linn)’,  S.Farm  Skripsi,  Fakultas MIPA, Universitas Achmad Yani,Cimahi. Nurdjanah,  N  2004,  ‘ DiversifikasiPenggunaan cengkeh.  Balai  Besar  Penelitian  Dan Pengembangan  Pasca  Panen  Pertanian Bogor’. [serial online]. Saifudin, Aziz, Viesa Rahayu, Hilwan, Yuda Teruna 2011, Standarisasi Bahan Obat Alam, Edisi I, Graha Ilmu, Yogyakarta. Sarker,  S.  d,  Latif,  z,  &  Gray,  AI  2006, Natural Products  S,  D.  Sarker,  z.  Latif,  &Gray, Natural  Product  isolation  (2 nd )  ed ,  Vol  18, Towota (New jersey, Humana Press Inc), hal 6-10.
Sujarnoko,  TUP  2012, Studi  Meta-Analisis  Efek Senyawa Metabolit Sekunder Tanin Terhadap Kualitas Silase , Institut Pertanian Bogor, hal.4-5.
Supriyatna,  MW,  M,  Iskandar,  Y,  Febriyanti,  RM 2014, Prinsip Obat Herbal Sebuah Pengantar  untuk  Fitoterapi ,  Deepublish, www.deepublish.co.id , hal. 35.
Supriyanto,  R  2011,  ‘Studi  Analisis  Spesiasi  Ion Logam  Cr(III)  dan  Cr(VI)  dengan  Asam Tanat  dari  Ekstrak  Gambirmenggunakan Spektofotometri  UV-VIS’, J.Sains  MIPA , April 2011, Vol. 17, No1, ISSN 1978-1873. Tersono,  L.A  2006, Tanaman  Obat  &  Jus  untuk Asam  Urat  dan  Rematik ,  AgroMedia Pustaka, Jakarta.
Thomas,  A.N.S  2007, Tanaman  Obat  Tradisional , Kanisus, Yogyakarta.
Vermerris  W,  Nicholson,  R  2006,  Phenolic
Compound,  Springer  Netherlands,  hal.88- 90.
Waluyo, S2004, Aneka Tip Obat Alami dalam Buah dan Sayuran , Elex Media, Jakarta.