## FERMENTASI TEPUNG KULIT UBI KAYU OLEH TRICHODERMA HARZIANUM UNTUK MEMPRODUKSI GLUKOSA
Ika Gusriani*, dan Hidayat Koto
Program studi Teknologi Industri Pertanian Jurusan Teknologi Pertanian Fakultas Pertanian Universitas Bengkulu
* ikagusriani@unib.ac.id

## ABSTRACT
Cassava peel is a waste product of Cassava that has not been utilized optimally, utilization  of  cassava  peel  is  constrained  by  the  components  of  Lignocellulose, hemicellulose and lignin which are difficult to break down into simpler forms so that it  is  easier  to  process  them  for  various  industrial  purposes.  Lignocellulosic components  can  be  remodeled  in  various  ways,  one  of  which  is  the  use  of  the Lignocellulosic  fungus  Trichoderma  harzianum.  The  purposes  of  this  study  was  to determine  the  optimum  conditions  of  fermentation  by  Trichoderma  harzianum  to cassava  peel  waste  in  producing  glucose.  The  research  was  carried  out  in  several stages,  namely:  preparation  of  Media  and  Reagents,  testing  and  Clarification  of Trichoderma  harzianum,  Fermentation  and  enzyme  filtrate  Collection  and  sample measurement. Fermentation reached its optimum condition on day 4 with the number of  conidia  reaching  1,05  x  10 7 cells/ml.  Optimum  pH  for  growth  of  Trichoderma harzianum  which  produces  the  highest  enzyme  activity  is  pH  5,  with  the  optimum concentrations of substrate usege being 1% producing 0,74 g of glucose in every 1 g sample of cassava peel.
Keywords : Cassava peel, Enzyme activity, Glucose, Trichoderma harzianum

## ABSTRAK
Kulit  ubi  kayu  merupakan  limbah  produk  ubi  kayu  yang  belum  dimanfaatkan secara optimal, pemanfaatan pada kulit ubi kayu terkendala komponen lignoselulosa, hemiselulosa  dan  lignin  yang  sulit  untuk  diuraikan  menjadi  bentuk  lebih  sederhana agar lebih mudah dalam mengolahnya untuk berbagai keperluan industri. Perombakan komponen  lignoselulosa  dapat  dilakukan  dengan  berbagai  cara  salah  satunya  yaitu penggunaan Jamur lignoselulosa Trichoderma harziaum . Tujuan penelitian ini yaitu menentukan  kondisi  optimum  fermentasi  oleh Trichoderma harzianum terhadap limbah  kulit  ubi  kayu  dalam  menghasilkan  glukosa.  Penelitian  dilakukan  dengan beberapa  tahap  yaitu:  penyiapan  media  dan  reagen,  pengujian  dan  klarifikasi Trichoderma harzianum , fermentasi dan pengambilan filtrat enzim serta pengukuran sampel. Fermentasi mencapai kondisi optimum pada hari ke-4 dengan jumlah konidia mencapai 1,05 x 10 7 sel/ml. pH Optimum pertumbuhan Trichoderma harzianum yang
menghasilkan  aktivitas  enzim  tertinggi  adalah  pH  5,  dengan  konsentrasi  optimum penggunaan substrat yaitu 1% menghasilkan 0,74 gr glukosa pada setiap 1 gr sampel kulit ubi kayu.
Kata Kunci: Aktivitas enzim, glukosa, kulit ubi kayu, Trichoderma harzianum

## PENDAHULUAN
Produksi  Ubi  kayu  di  Indonesia mengalami  peningkatan  dari  tahun  ke tahun,  hal  ini  dapat  dilihat  dari  jumlah produksi pada tahun 2019 yakni 13,4 juta ton, sedangkat tahun 2020 mencapai 18,5 juta  ton  [1]  Peningkatan  produksi  ubi kayu  tersebut  tentu  berimbas  pada peningkatan  limbah  kulit  ubi  kayu. Limbah  kulit  ubi  kayu  mengandung komponen utama yaitu lignoselulosa.
Lignoselulosa  adalah  komponen utama  tanaman  yang  menggambarkan jumlah sumber bahan organik yang dapat diperbaharui. Pada umumnya lignoselulosa mengandung tiga komponen utama yaitu selulosa,  hemiselulosa  dan  lignin  [2]. Kulit ubi kayu memiliki 43,63% selulosa, 36,58%  hemiselulosa,  7,65%  lignin  dan 10,38% pati [3]. Komponen lignoselulosa yang  cukup  tinggi  berpotensi  untuk dijadikan  sumber  gula  sederhana  dalam hal ini glukosa yang dapat dimanfaatkan lebih  lanjut  pada  pembuatan  bioetanol atau  produk  lain  yang  memiliki  nilai ekonomis lebih tinggi. Ditambahkan oleh [4]  senyawa  utama  yang  terdapat  di dalam  bahan  baku  nabati  yang  dapat digunakan untuk menghasilkan bioetanol adalah  glukosa.  Perombakan  bahan lignoselulosa  menjadi  gula  sederhana berupa  glukosa  dapat  dilakukan  dengan berbagai cara, salah satunya perombakan secara  biologis  dengan  memanfaatkan peran serta enzim yaitu selulase.
Enzim selulase merupakan kompleks enzim yang dapat mengkatalis penguraian  selulosa  menjadi  glukosa sehingga  dapat  dimanfaatkan  dengan optimal.  Salah  satu  cara  menghasilkan enzim selulase adalah dengan memanfaatkan mikroba selulolitik. Mikroba  selulolitik  seperti  bakteri, kapang,  jamur  dan  protozoa  merupakan agen penghasil enzim selulase.
Berdasarkan  penelitian  Susanti  (2007) melaporkan bahwa diantara Trichoderma viridie , Trichoderma harzianum dan
Aspergillus niger , yang memberikan hasil paling tinggi dalam mendegradasi selulosa adalah Trichoderma harzianum . Ditambahkan  oleh  Danielson  (2002) bahwa salah satu mikroba selulolitik yang telah  dikenal  luas  menghasilkan  enzim selulase adalah Trichoderma harzianum . Trichoderma harzianum adalah kapang  yang  memiliki  distribusi  yang luas dan mempunyai tingkat pertumbuhan  yang  cukup  cepat,  konidia yang  dihasilkan  berlimpah,  mampu bertahan pada
kondisi kurang menguntungkan  [5]. Trichoderma sp khususnya Trichoderma harzianum
berperan menguraikan lignoselulosa menjadi  senyawa-senyawa  yang  lebih sederhana. Enzim selulase yang dihasilkan  oleh  mikroba  tersebut  akan mendegradasi  selulosa  menjadi  gula sederhana. Waktu fermentasi berpengaruh pada kadar glukosa yang dihasilkan [6].
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  a). menentukan  waktu  optimum  dalam
Submit:6 April 2022 * Revisi: 18 April 2022 * Accepted: 21 April 2022 * Publish: 29 Mei 2022
menghasilkan  aktivitas  enzim  tertinggi dengan jumlah konidia terbanyak selama fermentasi  b).  Menentukan  kondisi  pH dan Konsentrasi optimum substrat untuk menghasilkan  aktivitas  enzim  tertinggi, c).  Menentukan  jumlah  glukosa  yang mampu  dihasilkan  setiap  gram  tepung kulit ubi kayu.

## METODOLOGI PENELITIAN
Bahan  yang  digunakan  adalah tepung kulit ubi kayu yang diperoleh dari home industri Tapai,  isolat  murni
Trichoderma harzianum dari  Balai
Pengembangan  dan  Pelatihan  Pertanian yang telah ditumbuhkan pada media PDA ( Potatoes Dekstrosa Agar ),  akuades, kapas,  aluminium  foil,  plastik  wrap, kertas  label,  Media  PDA, water  agar, APDB  (Accidified  Potatoes  Dekstrosa Broth),  tissue, alkohol  70% , CMC  1%,
buffer asetat, reagen Nelson,
fosfomolibdat 85%,
Alat-alat  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah object  glass,  cover glass,  autoclave, peralatan  gelas  seperti erlenmeyer, cawan petri, testube,
brighfield microscope, inkubator, vorteks, Laminar  air  flow,  shaker  water bath, Haemocytometer, Spectrofotometer.

## Pelaksanaan Penelitian
Penelitian  dilakukan  dalam  empat tahap  yaitu:  pertama  penyiapan  kultur, larutan,  reagen  dan  buffer;  kedua, pengujian  dan  klarifikasi Trichoderma harzianum yang  digunakan;  ketiga,
pelaksanaan  fermentasi,  pada  tahap  ini dilakukan proses fermentasi menggunakan Shaker Water Bath ;
keempat,  Pengambilan  filtrat  enzim  dari hasil fermentasi serta pengukuran jumlah konidia Trichoderma harzianum dan aktivitas  enzim  selama  fermentasi.
Setelah diketahui lama fermentasi dengan aktivitas  enzim  tertinggi,  selanjutnya digunakan  sebagai  waktu  optimum produksi enzim selulase. Tahap terakhir, pengujian kadar pH dan konsentrasi kulit ubi kayu yang optimum dalam memproduksi glukosa.
Tahap 1. Penyiapan Media dan Reagen a. Pembuatan  Media Potato Dextrose
Agar (PDA) [7]
Bahan  yang  digunakan  untuk pembuatan Media Potato Dextrose Agar
(PDA) adalah kentang 100 gr, agar 10 gr dan dekstrosa 10 gr. Kentang yang telah dikupas kulitnya dicuci bersih, kemudian dipotong-potong seukuran dadu, selanjutnya  ditimbang  sesuai  dengan jumlah yang dibutuhkan. Kentang tersebut  direbus  dalam  1  liter  akuades sehingga  mendidih,  setelah  mendidih, saring  dan  ambil  larutan  filtrat  kentang campur  dengan  agar  dan  dextrosa  yang telah dipersiapkan sesuai dengan kebutuhan, aduk-aduk di dalam api kecil, bila dirasa homogen, pindahkan ke dalam erlenmeyer  yang  telah  disterilkan  dan ditutup menggunakan kapas dan aluminium foil, selanjutnya medium siap disterilkan  di  dalam  autoklaf  pada  suhu 121 0 C  pada  tekanan  2  atm  selama  15 menit [8].
b. Pembuatan  Media  APDB  ( Acidified
Potatoes Dextrosa Broth ) [7]
Komposisi seperti PDA, tetapi tiak memakai  agar  sebagai  pemadat.  Proses pembuatannya  pun  lebih  sederhana, pencampuran ektrak kentang dan dekstrosa  sampai  homogen,  selanjutnya disterilisasi,  pH  diatur  3,5-4,0  [9].  Nilai pH  pertumbuhan  untuk Trichoderma harzianum adalah 5,0 sehingga pH diatur menjadi 5,0 dengan menggunakan larutan asam tartarat 10%.
c. Pembuatan Media WA ( Water Agar )
Komposisi  seperti  PDA,  tetapi tidak  menggunakan  ekstrak  kentang  dan dekstrosa, hanya menggunakan agar dan akuades.
d. Reagen Nelson [10]
Larutan  A:  12,5  gr  Natrium karbonat  anhidrat;  12,5  gr  Kalium natrium Tartarat, 10 gr natrium Hidroksi karbonat  dan  100  gr  Natrium  Sulfat anhidrat  dilarutkan  ke  dalam  500  ml akuades.
Larutan  B:  7,5  gr  Cupper  Sulfat  5 Hidrat dilarutkan ke dalam 50 ml akuades dan  ditambahkan  1  tetes  Asam  Sulfat pekat.  Reagen  Nelson  dibuat  dengan mencampurkan 25 volume Bagian A dan 1 volume bagian B.
e. Reagen Fosfomolibdat [10]
Dilarutkan  7  gr  asam  molibdat dan  1  gr  natrium  Tungsat  dalam  70  ml Natrium  Hidroksida  5%  dan  dididihkan selama  5  menit  untuk  menghilangkan amoniak.  Kemudian  didinginkan  dan ditambah  25  ml  asam  fosfat  85%, ditambahkan  dengan  akuades  hingga volume 100 ml.
f. Substrat  Carboxy  Metil  Cellulosa (CMC) 1% [11]
Substrat  CMC  dengan  konsentrasi 1%  (b/v)  atau  1  gr  yang  dilarutkan  ke dalam  100  ml  dan  dipanaskan  sampai mendidih.
Tahap  2.  Pengujian  dan  klarifikasi Trichoderma harzianum
Pengamatan morfologi Trichoderma harzianum dilakukan dengan menggunakan metode  Riddel  ( Slide culture )  yaitu: siapkan Water agar, object glass , cover glass , tissue basah dan pipet plastik yang telah  dipotong  dengan  ukuran  ±  3  cm,
letakkan  di  dalam  cawan  petri  dan sterilkan  seluruh  bahan  dan  alat  yang digunakan  dengan autoclave .  Setelah steril,  letakkan object glass di  atas potongan  pipet  yang  berada  di  dalam cawan  petri,  selanjutnya  potong  media
Water Agar yang  ada  di  dalam  cawan petri dengan ukuran ± (6 mm x 6 mm x 2 mm)  diletakkan  pada  bagian  tengah object glass . Inokulasikan dengan koloni Tricoderma harzianum pada  bagian  atas potongan agar, kemudian tutup potongan agar  dengan  cover  glass.  Inkubasi  pada suhu  kamar  selama  3  x  24  jam.    Amati menggunakan  mikroskop  untuk  melihat vesikel, permukaan spora dan konidiofor pada pembesaran 10x100. [12]. Dari hasil pengamatan diperoleh gambar miselium, hifa, dan konidia. Lakukan pembandingan  dengan  literatur  untuk dapat  memastikan  bahwa  preparat  yang ditumbuhkan adalah Trichoderma harzianum . Selanjutnya isolat ditumbuhkan pada media APDB ( Acidified Potatoes Dekstrosa Broth ) biarkan tumbuh pada suhu 30 0 C selama 7 hari.

## Tahap 3. Fermentasi
Siapkan  7  erlenmeyer  250  ml, masukkan  ke  dalam  erlenmeyer  tersebut 1 gr urea dan 5 gr tepung kulit ubi kayu selanjutnya  tambahkan  akuades  95  ml, tutup  rapat  menggunakan  kapas,  dan aluminium foil, lakukan sterilisasi menggunakan autoclave .  Isolat  yang telah  ditumbuhkan  pada  media  APBD, divorteks sehingga homogen, ambil 5 ml suspensi  selanjutnya  dimasukkan  ke masing-masing  erlenmeyer  yang  telah disiapkan  sebelumnya,  lakukan  secara aseptis.  Beri  label  pada  masing-masing erlenmeyer  dan  siap  untuk  difermentasi dalam shaker water bath selama  7  hari pada  suhu  30 0 C  dengan  kecepatan  110 rpm.
Tahap  4.  Pengambilan  Filtrat  Enzim serta Pengukuran Sampel [10] dan [11]
Setiap  hari  ambil  satu  erlenmeyer untuk  dilakukan  perhitungan  jumlah konidia  kapang Trichoderma harzianum dan pengujian aktivitas enzim.
Erlenmeyer  yang  telah  dikeluarkan  dari shaker water bath ,  diambil  5  ml  sampel filtrat dan dipindahkan ke dalam testube , tutup  rapat  menggunakan  kapas  dan aluminium  foil,  lapisi  dengan  plastik wrap, kemudian siap dilakukan perhitungan  jumlah  konidia  yang  ada. Sisa  filtrat  disaring  menggunakan  kertas saring dan dimasukkan ke dalam testube yang  berbeda,  tutup  rapat  menggunakan kapas,  dan  aluminium  foil  dan  lapisi plastik  wrap,  simpan  di  dalam  kulkas pada suhu 5 0 C untuk dilakukan pengujian selanjutnya.
a. Perhitungan konidia Trichoderma
harzianum menggunakan
haemocytometer . Haemocytometer dibersihkan menggunakan alkohol 70%, lalu
dikeringkan menggunakan tissue . Sampel filtrat 5 ml di dalam testube dikocok dan dihomogenkan, diambil satu tetes (50µml) suspensi dan diteteskan ke parit kaca Haemocytometer . Lakukan pengamatan di atas meja benda kemudian cari fokusnya pada pembesaran pembesaran 40 x 10. Lakukan perhitungan secara kasar apak diperlukan pengenceran atau tidak. Jika di dalam satu kotak  sedang  terdapat  sel-sel  yang banyak dan bertumpuk, maka diperlukan pengenceran  dengan  perbandingan  1:5 atau 1:10.
Jumlah  Konidia  sel/ml  =  Jumlah rata-rata x 2,5 x 10 5 x Faktor Pengenceran b.  Penentuan  Waktu  Optimum  aktivitas enzim selulase [10] dan [11]
Pada  setiap  waktu  perhitungan
konidia
Trichoderma harzianum,
dilakukan  pengujian  aktivitas  enzim selulase  pada  panjang  gelombang  560 nm.  Waktu  fermentasi  dengan  aktivitas enzim  selulase  tertinggi  digunakan sebagai waktu optimum produksi selulase. Tahap  5.  Pengujian  kadar  pH  dan konsentrasi optimum dalam memproduksi glukosa [10] dan [11] Hasil  penyaringan  sampel  pada tahap  sebelumnya  merupakan  ekstrak filtrat  kasar  enzim  selulase  yang  telah dipanen  berdasarkan  aktivitas  selulase pada waktu fermentasi tertinggi, selanjutnya  dilakukan  pengujian  pH  dan konsentrasi yang bervariasi untuk mengetahui kombinasi aktivitas optimum enzim  selulase.  Pengujian  pH  optimum pada  enzim  selulase  dilakukan  dengan menggunakan  Metode  Somogy-Nelson. Metode  Somogy-Nelson  ini  dipilih karena mimiliki kemampuan mendeteksi kisaran  relatif  perubahan  gula  yang tinggi,  sedikit  interfensi  dari  enzim  dan biaya yang relatif lebih murah [13].
a. Penentuan pH optimum [10] dan [11]
Tabung  reaksi  dimasukkan  1  ml CMC 1% dan 1 ml tepung kulit ubi kayu 1% tambahkan 1 ml buffer  asetat 0,2 M dengan  variasi  pH  4;  4,5;  5  dan  5,5  dan tambahkan  1  ml  ekstrak  enzim  dan divortex, selanjutnya diinkubasi 30 menit pada  suhu  40 0 C.  Enzim  diinaktifkan dengan  mencelupkan  pada  air  mendidih selama 20 menit. Kemudian didinginkan dengan  segera  sampai  suhu  26 0 C. Selanjutnya  tambahkan  1  ml  reagen Nelson  dipanaskan  selama  20  menit dinginkan sampai suhu 26 0 C, tambahkan 1  ml  reagen  fosfomolibdat  85%  dan dikocok  hingga  sempurna,  kemudian tambahkan  5  ml  akuades  dan  diamkan selama 30 menit untuk menyempurnakan reaksi.  Absorban  masing-masing  larutan
diukur pada panjang gelombang 560 nm. Sebagai blanko digunakan akuades yang diberi  perlakuan  yang  sama  dengan sampel tetapi tanpa penambahan substrat CMC 1% dan filtrat enzim.
b. Penentuan konsentrasi substrat optimum [10] dan [11]
Sebanyak 1 ml buffer asetat 0,2 M pH  optimum  yang  diperoleh  dari pengujian  sebelumnya  dan  1  ml  ekstrak ensim  divortex,  ditambahkan  1  ml substrat CMC dan tepung kulit ubi kayu dengan  variasi  konsentrasi  0,5;  1,0;  1,5; 2,0 (b/v), inkubasi pada suhu 40 0 C selama 30  menit.  Enzim  diinaktifkan  dengan mencelupkan  pada  air  mendidih  selama 20 menit. Kemudian didinginkan dengan segera  sampai  suhu  26 0 C.  Selanjutnya
tambahkan
1 ml reagen Nelson dipanaskan  selama  20  menit  dinginkan sampai  suhu  26 0 C,  tambahkan  1  ml reagen  Fosfomolibdat  85%  dan  dikocok hingga sempurna, kemudian tambahkan 5 ml akuades dan diamkan selama 30 menit untuk menyempurnakan reaksi. Absorban masing-masing  larutan  diukur  pada panjang gelombang 560 nm.
Setelah diperoleh hasil pengukuran absorban tertinggi pada pH dan konsentrasi optimum, dilakukan perhitungan  konsentrasi  glukosa  yang dihasilkan. Adapun perhitungan konsentrasi  glukosa,  pembanding  relatif larutan  glukosa,  dan  perhitungan  kadar glukosa  adalah  dengan  menggunakan rumus berikut:
Sampel x = 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛 𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡𝑎𝑛 𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟 𝑥 𝑘𝑜𝑛𝑠𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑠𝑖 𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟
Kadar glukosa = x (konsentrasi glukosa) x faktor pengenceran

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengujian dan klarifikasi Trichoderma harzianum Pengamatan morfologi dan pembandingan  hasil  isolat Trichoderma harzianum yang sebelumnya telah diperoleh dari Balai Perlindungan Tanaman  Pangan  Hortikultura  setelah dilakukan  peremajaan  dan  dimurnikan dapat dilihat pada Gambar 1.
Pada  pengamatan  makroskopis, sampel  memiliki  pertumbuhan  miselium berwarna  hijau  botol  bercampur  warna putih  dan  tumbuh  memenuhi  cawan petridish pada  hari  ke  7.  Koloni  yang terlihat  berwarna  hijau  muda  sampai
hijau  tua.  [14]  menambahkan  bahwa Trichoderma  harzianum memiliki  ciri menonjol antara lain koloninya berwarna hijau  muda  sampai  hijau  tua  yang memproduksi konidia aseksual berbentuk globus  dengan  pertumbuhan  yang  cepat. Pertumbuhan misselium membentuk lingkaran  seperti  cincin  yang  dipenuhi warna hijau botol, pada cawan petri pada Gambar 1.b dapat dilihat bahwa Trichoderma harzianum membentuk dua lapis  cincin  hal  ini  sesuai  dengan pernyataan  [14]  pada  media  PDA, Trichoderma harzianum membentuk 1-2 cincin konsentris dengan produksi konidia  hijau.  Penampakan  mikroskopis sampel Trichoderma harzianum dapat dilihat pada Gambar 3.
Gambar 1. Penampakan Secara Makroskopis Trichoderma harzianum Setelah
Diremajakan a). Pada Media PDA Miring dan b). Pada Media PDA di Cawan Petri
Penampakan  secara  mikroskopis menunjukkan Trichoderma  harzianum memiliki tiga cabang fialid berupa botol dengan  ujung  yang  meruncing  dan  pada ujung  fialid  terdapat  konidia  yang berbentuk  bulat.  Ditambahkan  oleh  [15] bahwa  konidia  yang  terdapat  diujung fialid  berbentuk  bulat,  berdinding  rata
dengan  warna  hijau  suram,  hijau keputihan,  hijau  terang  atau  agak kehijauan. Selanjutnya, bila dibandingkan dengan  Gambar  3  sebagai  referensi mikroskopis,  dapat  dipastikan  bahwa sampel yang digunakan terbukti merupakan Trichoderma harzianum .
Gambar 3. Penampakan Trichoderma harzianum [20]
Gambar 2. Penampakan Mikroskopis Trichoderma harzianum . a) Fialid, b) Konidia dan c). Konidiofor
Pengaruh  Lama  Fermantasi  terhadap Jumlah  Konidia  dan  Aktivitas  Enzim yang  dihasilkan  oleh  Trichoderma harzianum Fermentasi dilakukan dengan menetapkan kondisi awal berupa penggunaan Trichoderma harzianum sebanyak  5%  dari  volume  media pertumbuhan  yang  telah  dikondisikan pada  suasana  asam  agar  diperoleh pertumbuhan Trichoderma harzianum yang  optimal.  Sejalan  dengan  pendapat
[16] yang menyatakan bahwa jamur/kapang  menyukai  pH  rendah  dan optimumnya berkisar 4-6. Adapun media yang digunakan yakni Acidified Potatoes Dekstrosa Broth (APDB) pada pH 5  hal ini  sesuai  pendapat  [17],  5  gr  substrat tepung  kulit  ubi  kayu  (sebagai  sumber karbon),  1  gr  urea  sebagai  sumber nitrogen  pada  suhu  30 0 C  dengan kecepatan  adukan  ( shaker )  110  rpm selama  fermentasi.  Perhitungan  jumlah konidia Trichoderma  harzianum selama fermentasi dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Pengaruh Lama Fermentasi terhadap Jumlah Konidia Trichoderma harzianum No. Fermentasi hari ke- Jumlah Konidia (sel/ml) 1 2 3 4 5 6 7
1 2 3 4 5 6 7 6.5 x 10 6 7.5 x 10 6
9.0 x 10 6
1.05 x 10 7
1.02 x 10 7
1.01 x 10 7 8.5 x 10 6 Jumlah konidia Trichoderma harzianum mencapai  puncaknya  pada fermentasi hari ke-4 dengan jumlah 1.05 x  10 7 sel/ml,  dimana  pada  kondisi  ini, Trichoderma harzianum telah  melewati fase  adaptasi  dan  dapat  memanfaatkan seluruh sumber nutrient  yang ada secara optimal.  Penelitian  ini  menggunakan substrat  tepung  ubi  kayu  sebanyak  5  gr sebagai  sumber  karbon  yang  didukung oleh  penelitian  [18]  menyatakan  bahwa konsentrasi gula reduksi tertinggi diperoleh pada konsentrasi sabut 5 gr/ml dan  konsentrasi  inokulum Trichoderma sp 5  gr/ml,  yaitu  sebesar  0,7999  ml/L, pada  pH  5  dengan  waktu  fermentasi  72 jam.
Pengukuran  aktivitas  enzim  pada pH  5,  perhitungan  aktivitas  enzim  yang dialurkan  terhadap  lama  fermentasi dengan  persamaan  perbandingan  relatif glukosa dapat dilihat pada Gambar 4.
Satu  unit  aktivitas  enzim  adalah banyaknya enzim yang dapat
memproduksi  1µmol  glukosa  per  menit. Pada grafik di atas, aktivitas enzim yang diproduksi  dari  kulit  ubi  kayu  dengan menggunakan  pH  5  mencapai  titik optimum  pada  hari  ke-4,  jumlah  enzim yang diekresikan semakin banyak seiring dengan  pertumbuhan  jamur.  Melewati hari  ke-4,  aktivitas  enzim  semakin berkurang karena nutrien sebagai sumber energi  untuk  mensintesis  enzim  mulai habis.

## Gambar 4. Grafik aktivitas Enzim Selulase selama Proses fermentasi
Penentuan Kondisi Optimum Aktivitas Enzim  selulase  yang  dihasilkan  oleh Trichoderma  harzianum  pada substrat Kulit Ubi Kayu
Kemampuan  enzim  mendegradasi substrat  dipengaruhi  oleh  lingkungan ideal  untuk  aktivitas  enzim  tersebut, diantaranya  yaitu  kondisi  pH  dan konsentrasi substrat
a. Nilai pH Optimum
Kondisi  pH  sangat  menentukan aktivitas enzim selulase, untuk
menentukan  pH  optimum,  dilakukan reaksi  enzimatis  pada  suhu  40 0 C  selama 30 menit menggunakan tepung Kulit Ubi Kayu dengan konsentrasi  1% sedangkan variasi pH dilakukan pada larutan buffer yang  ditambahkan  pH  4;  4,5;  5  dan  5,5. Metode  yang  digunakan  adalah  dengan mengukur  gula  reduksi  yang  dihasilkan dengan Somogyi-Nelson.
Setelah  dilakukan  perubahan  pH, diperoleh  kurva  penentuan  pH  optimum supernatan  yang  dihasilkan  dari  media produksi  selulosa  tepung  kulit  ubi  kayu seperti di Tabel 2.
Pada  Tabel  2  terlihat  bahwa aktivitas enzim berubah dengan berubahnya  pH.  Pada  penelitian  ini diperoleh  pH  optimum  kulit  ubi  kayu pada pH 5 dengan aktivitas enzim sebesar 5,35  U/ml.  Enzim  bekerja  pada  pH tertentu,  umumnya  pada  pH  sekitar  5-8. Setiap  enzim  mempunyai  pH  optimum yang  khas.  Enzim  yang  sama  sering  pH optimumnya  berbeda,  tergantung  dari mana enzim itu diperoleh. Misal, selulase yang  diperoleh  dari  jamur  Trichoderma harzianum    pada  bahan  kulit  ubi  kayu memiliki  pH    optimum  5,  sedangkan enzim  yang  sama  yang  dihasilkan  oleh jamur yang sama dengan mengggunakan bahan  serbuk  gergaji  mempunyai  pH optimum 5,2 [11] dan enzim selulase dari bakteri Bacillus amyloliquenfaciens dengan  menggunakan  serbuk  gergaji mempunyai  pH  5,4.  [10]  Ditambahkan oleh [19], disekitar pH optimum yaitu pH antara  5  dan  5,4  aktivitas  enzim  masih mempunyai  stabilitas  yang  tinggi  yang disebut kestabilan mantab.
Trichoderma  sp adalah  salah  satu penghasil  selulase  terbaik,  berperan mengurai lignoselulosa menjadi
senyawa-senyawa  yang  lebih  sederhana.
Enzim  selulase  yang  dihasilkan  tersebut
0 1 2 3 4 5 6 7 8 1 2 3 4 5 6 7 A kti vi tas En zi m (U/m l) Lama Fermentasi (Hari) Grafik Aktivitas Enzim Selulase
mendegradasi  selulosa  menjadi  gula. Waktu  fermentasi  berpengaruh  pada kadar  glukosa  yang  dihasilkan.  Proses fermentasi  jerami  padi  menggunakan Aspergillus  niger  :  Trichoderma  reseei rasio  1:2,  kadar  gula  tertinggi  diperoleh pada  waktu  fermentasi  64  jam  dengan kadar  16.884%.  [6].  Penelitian  tentang
produksi glukosa menggunakan Trichoderma dilakukan oleh [18] menyatakan  bahwa  konsentrasi  gula reduksi tertinggi diperoleh pada konsentrasi sabut 5 gr/ml dan konsentrasi inokulum Trichoderma sp 5 gr/ml, yaitu sebesar  0,7999  ml/L,  pada  pH  5  dengan waktu fermentasi 72 jam. Tabel 2. Pengaruh Perubahan pH terhadap Aktivitas Enzim pH Kadar Glukosa (µg/ml) Aktivitas Enzim (U/ml) 4 4,5 5 5,5 4062,5 4843,75 5781,25 4821,43 3,76 4,48 5,35 4,46 b. Konsentrasi Optimum Substrat  tepung  kulit  ubi  kayu divariasikan  konsentrasinya  antara  0,5- 2%.  Penentuan  konsentrasi  substrat optimum dilakukan dengan menggunakan pH 5 sebagai pH optimum hasil penentuan sebelumnya, suhu
inkubasi 40 0 C selama 30 menit, digunakan  sebagai  suhu  dan  lama inkubasi  optimum  enzim  selulase  yang dihasilkan  oleh  Trichoderma  harzianum yang  berasal  dari  penelitian  [11].
Pengaruh  konsentrasi  substrat  enzim selulase dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Pengaruh Konsentrasi Substrat Kulit Ubi kayu terhadap aktivitas Enzim Konsentrasi Tepung kulit ubi kayu (%) Kadar Gula (µg/ml) Aktivitas enzim (U/ml) 0,5 1 1,5 2 3839,29 7455,36 6941,96 5691,96 3,55 6,90 6,42 5,27 Peningkatan  konsentrasi  substrat dapat menyebabkan meningkatnya aktivitas enzim semapai tercapai aktivitas optimum.  Pada  Tabel  di  atas,  aktivitas optimum enzim selulosa dengan menggunakan  substrat  tepung  kulit  ubi
kayu diperoleh titik optimum berada pada konsentrasi 1%.  Dengan aktivitas sebesar 6,90 U/ml dengan kadar glukosa sebesar 7455,36 µg/ml. 7455,36 µg/ml berasal dari konsentrasi 1 gr kulit ubi kayu salam 100 ml akuades. 1 𝑔𝑟 𝑡𝑒𝑝𝑢𝑛𝑔 𝑘𝑢𝑙𝑖𝑡 𝑢𝑏𝑖 𝑘𝑎𝑦𝑢 100 𝑚𝑙 𝑎𝑘𝑢𝑎𝑑𝑒𝑠 = 1000 𝑚𝑔 100 𝑚𝑙 = 10 𝑚𝑔/𝑚𝑙
Pada 10 mg/ml kulit ubi kayu mengandung 7455,36 µg/ml glukosa atau 74,55% yield. 10  mg/ml  =  7,455  mg/ml  glukosa  atau setiap  gram  kulit  ubi  kayu  mengandung 0,74 gr glukosa.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan  diperoleh  kesimpulan  sebagai berikut: 1. Waktu optimum menghasilkan glukosa  tertinggi  pada  hari  ke-4 dengan jumlah konidia Trichoderma harzianum  mencapai  1,05  x  10 7
sel/ml
2. Aktivitas  enzim  tertinggi  adalah  pH 5,  sedangkan  konsentrasi  substrat tepung kulit ubi kayu yang optimum adalah 1%
3. Kadar  glukosa  tertinggi  dihasilkan pada kondisi optimum adalah
74,55%  (b/b)  dengan  nilai  konversi adalah  1  gr  tepung  kulit  ubi  kayu menghasilkan 0,74 gr glukosa.

## Saran
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan, disarankan sebagai berikut:
1. Menambahkan faktor-faktor
lingkungan  yang  lebih  lengkap seperti suhu dan lama inkubasi untuk menunjang  optimalisasi  aktivitas enzim selulase 2. Diharapkan pada penelitian selanjutnya  dilakukan  perbandingan hasil  glukosa  antara  fermentasi menggunakan Trichoderma harzianum dengan yang tidak.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Direktorat Jenderal Tanaman Pangan, Laporan Tahunan Direktorat Jenderal Tanaman Pangan . Jakarta, 2020. [2] J.  Pérez,  J.  Muñoz-Dorado,  T.  De La  Rubia,  and  J.  Martínez,
“Biodegradation  and  biological treatments of cellulose, hemicellulose  and  lignin:  An overview,” Int.  Microbiol. ,  vol.  5, no.  2,  pp.  53–63,  2002,  doi: 10.1007/s10123-002-0062-3.
[3] A.  Artiyani  and  E.  S.  Soedjono, “Bioetanol  dari  Limbah  Kulit Singkong Melalui Proses Hidrolisis dan Fermentasi dengan Saccharomyces  cerevisiae,” Pros. Semin.  Nas.  Manaj.  Teknol.  XIII , pp. 1–8, 2011.
[4] K.  P.  Candra,  Sarwono,  and Sarinah,  “Study  on  bioethanol production  using  red  seaweed
Eucheuma  cottonii from  Bontang sea water,” J. Coast. Dev. , vol. 15,
no. 1, pp. 45–50, 2011.
[5] P. Wahyudi, U. Suwahyono, and S. Mulyati, “PERTUMBUHAN Trichoderma harzianum pada Medium yang Mengandung Xylan,” 1999. [6] O.  Jumadi  and  W.  Caronge, Trichoderma  dan  pemanfaatan . Makasar: Biologi FMIPA Uiversitas Negeri Makasar, 2021. [7] S.  Fardiaz, Analisis  Mikrobiologi Pangan .  Jakarta:  Raja  Grafindo
Persada, 1993.
[8] W. Swandi, N. Ilmi, and I. Rahim, “Pertumbuhan  Isolat  Jamur  Tiram (Pleurotus  sp.)  Pada  Berbagai Media Tumbuh,” Sinergitas Multidisiplin  Ilmu  Pengetah.  dan Teknol. , vol. 1, no. April, pp. 131– 136, 2018. [9] J.  E.  Herskovitz,  R.  W.  Worobo, and  J.  M.  Goddard,  “The  Role  of Solid Support Bound Metal Chelators  on  System-Dependent Synergy  and  Antagonism  with Nisin,” J. Food Sci. , vol. 84, no. 3,
pp. 580–589, 2019, doi: 10.1111/1750-3841.14444. [10]  N. Husnah, “Produksi dan
Karakterisaasi Enzim Selulase Bacillus amyloliquefaciens Fakumoto  dalam  media  substrat Serbuk Gergaji,” Universitas Andalas, 2008. [11]  A. Amran, “Produksi dan Karakterisasi  Enzim  Selulase  Jaur Trichoderma harzianum Rifai pada Substrat Serbuk Gergaji,” Universitas Andalas, 2008. [12]  R.  Dewi,  R.  Nursanty,  and  C.
Yulvizar,  “the  Effect  of  Storage Time  on  Total  of  Fungi  in  Kanji Pedah,” J. Nat. , vol.  11, no. 2, pp. 74–78, 2010.
[13]  W.  Anggraini,  “Pengaruh  Ph Terhadap Aktivitas Enzim Kitinase dari  Isolat  Actinomycetes  dengan Metode  Somogyi-Nelson,” J.  Ilm. Pendidik. Fis. Al-Biruni , vol. 4, no. 2,  pp.  219–230,  2015,  doi: 10.24042/jpifalbiruni.v4i2.94.
[14]  Y. A. Sandy, S. Djauhari, and A. W. Sektiono,  “Identifikasi  Molekuler
Jamur Antagonis Trichoderma harzianum  Diisolasi  dari  Tanah Pertanian Malang di Malang, Jawa
Timur,” J. Med. Assoc. Thail. , vol. 3, no. 1, pp. 1–8, 2015.
[15]  H.  Tindaon,  “Pengaruh  Jamur Antagonis Trichoderma  harzianum dan Pupuk Organik untuk mengendalikan Patogen Tular
tanah  Sclerotium  rolfsii  Sacc  pada tanaman  Kedelai  (Glycine  max  L) di  Rumah  Kasa,”  Universtias Sumatera Utara, 2008.
[16]  C.  Uruilal,  A.  M.  Kalay,  E.  Kaya, and  A.  Siregar,  “Pemanfaatan
Kompos  Ela  Sagu,  Sekam  Dan Dedak Sebagai Media Perbanyakan Agens Hayati Trichoderma harzianum  Rifai.,” Agrologia ,  vol.
1,  no.  1,  pp.  21–30,  2018,  doi: 10.30598/a.v1i1.295.
[17]  F.  D.  Sulistiyono,  “Karakteristik Fisiologi  Empat  Antagonis  Isolat Trichoderma  Sp.  Sebagai  Agensia Hayati,” J. Sains Nat. , vol. 5, no. 1, p. 24, 2017, doi: 10.31938/jsn.v5i1.96. [18]  S. Sukadarti, S. D. Kholisoh, and H. Prasetyo,  “Produksi  Gula  Reduksi dari  Sabut  Kelapa  Menggunakan Jamur Trichoderma reesei,” Pengemb.  Tenologi  Kim.  untuk Pengolah.  Sumber  Daya  Alam
Indones. , pp. 1–7, 2010.
[19]  F.G  .  Winarno, Enzim  Pangan . Jakarta: PT. Gramedia, 1983.
[20]  W.  Gams  and  W.  Meyer,  “  What exactly is Trichoderma harzianum ?
,” Mycologia ,  vol.  90,  no.  5,  pp. 904–915, 1998, doi: 10.1080/00275514.1998.1202698.