Jurnal Keperawatan Silampari Volume 4, Nomor 1, Desember 2020 e-ISSN: 2581-1975 p-ISSN: 2597-7482 DOI: https://doi.org/10.31539/jks.v4i1.1450

## ANALISIS LACTAT DEHYDROGENASE DALAM SERUM DARAH MENGGUNAKAN SENTRIFUGASI
Rosnita Sebayang 1 , Yuana Idawati 2 , Hotman Sinaga 3
Uiversitas Katolik Musi Charitas 1,2,3 ros.sebayang@gmail.com 1

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk memperpendek waktu pelayanan laboratorium dengan cara  mempersingkat  waktu  sentrifuse  serta  memperoleh  serum  sebagai  bahan pemeriksaan. Metode penelitian yang digunakan adalah penelitian pre-eksperimental. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  rata-rata  LDH  pada  kelompok  darah  yang disentrifugasi 3000 rpm 5 menit sebesar 309,9 U/L dan 306,4 U/L yang disentrifugasi 4400  rpm  3  menit  pada  kelompok  darah.  Simpulan,  tidak  terdapat  perbedaan  kadar LDH dalam serum dari darah  yang disentrifugasi 3000 rpm selama 5  menit dan 4400 rpm selama 3 menit
Kata Kunci : Centrifugation, Lactat Dehydrogenase, TAT

## ABSTRACT
This study shortens the laboratory service time by shortening the centrifuge time and obtaining  serum  as  an  examination  material.  The  research  method  used  was  pre- experimental  research. The  results  showed that  the average LDH in the blood group centrifuged  3000  rpm  5  minutes  was  309.9  U  /  L  and  306.4  U  /  L  centrifuged  4400 rpm 3 minutes in the blood group. In conclusion, there is no difference in serum LDH levels from blood centrifuged at 3000 rpm for 5 minutes and 4400 rpm for 3 minutes.

## Keywords: Centrifugation, Lactate Dehydrogenase, TAT

## PENDAHULUAN
Menurut  PMK  No.  43  tahun  2013  mengatakan  bahwa  pemeriksaan  laboratorium klinik terdiri dari beberapa jenis pemeriksaan yaitu pemeriksaan hematologi, pemeriksaan mikrobiologi, pemeriksaan parasitologi, pemeriksaan virologi, pemeriksaan kimia klinik, pemeriksaan  imunologi  dan  pemeriksaan  patologi  anatomi.  Pemeriksaan  kimia  klinik adalah suatu kegiatan pemeriksaan yang berhubungan dengan spesimen klinik. Salah satu pemeriksaan kimia klinik adalah pemeriksaan Lactat Dehidrogenase (LDH) yang umum untuk pemeriksaan kelainan jantung (Cadamuro et al., 2018).
Menurut data World Health Organization (WHO) dalam Info Datin  Kemenkes RI (2019)  menyebutkan  bahwa  17,5  juta orang (31%)  dari  56,5  juta orang  yang  meninggal dunia  disebabkan  penyakit  jantung.  Dari  seluruh  kematian  akibat  penyakit  jantung diantaranya  7,4  juta  orang  (42,3%)  disebabkan  Penyakit  Jantung  Koroner  (PJK).  Kasus penyakit  jantung  berdasarkan  diagnosis  dokter  sebesar  883.447  (0,5%)  sedangkan 2.650.340 (1,5%) diduga penyakit jantung.
Pada  kasus  penyakit  jantung  untuk  menegakkan  diagnosisnya  biasanya  dilakukan pemeriksaan  Elektrokardiogram  (EKG)  dan  pemeriksaan  laboratorium.  Pemeriksaan laboratorium  untuk  penyakit  jantung  ada  beberapa  analit  yang  dikenal  sebagai  panel jantung yaitu LDH, AST, CK, CK-MB, Troponin I, Troponin T, ALT dan HBDH. Salah satu analit yang diperiksa pada kelainan jantung adalah LDH Laktat dehidrogenase ( lactic dehidrogenase ,  LDH)  adalah  enzim  intraselular  yang  terdapat  pada  hampir  semua  sel yang  bermetabolisme,  dengan  konsentrasi  tertinggi  ditemukan  di  jantung,  otot  rangka, hati, ginjal, otak dan sel darah merah (Ghaniet al ., 2016).
Aktivitas  LDH  pada  semua  sel  tubuh terutama  di  dalam  sitoplasma  dalam  jumlah yang bervariasi. Konsentrasi LDH pada beberapa jaringan dapat mencapai 500 kali kadar normal  dalam  serum.  Oleh  karena  itu  kerusakan  jaringan  yang  kecil  pun  dapat menyebabkan  peningkatan  aktivitas  LDH  yang  bermakna.  Pada  pemeriksaan  LDH sampel  pemeriksaan  adalah  serum  atau  plasma  namun  yang  direkomendasi  terutama serum.
Sentrifugasi  merupakan  suatu  teknik  pengendapan  yang  dilakukan  untuk memisahkan endapan dari suatu suspensi Gressner & Gressner (2017). Kecepatan tersebut dinyatakan  dalam  rpm  ( revolution  per  minute atau  putaran  per  menit).  Pemeriksaan laboratorium  yang  sensitif  dan  akurasi  yang  tinggi  dapat  mendeteksi  98  %  pasien  pada saat diagnosis (Hermayanti & Nursiloningrum, 2018).
Bila waktu pemutaran  panjang akan menyebabkan naiknya suhu pada bahan yang diputar.  Kenaikan  suhu  dapat  menyebabkan  sel-sel  lisis  atau  analit  yang  akan  diperiksa rusak (Lippi et al., 2018). Penelitian sebelumnya menyebutkan bahwa waktu sentrifugasi 4  menit  dengan  kecepatan  4122  rpm  dan  10  menit  kecepatan  3783  rpm  untuk pemeriksaan LDH menunjukan tidak terdapat perbedaan yang signifikan (P> 0,05 untuk semua) (Magnette et al., 2016).
Faktor kecepatan dan waktu sentrifus memiliki hubungan yang berbanding terbalik berdasarkan  persamaan  gerak  melingkar  beraturan,  sehingga  semakin  tinggi  kecepatan sentrifugasi maka semakin sedikit waktu yang dibutuhkan sentrifus untuk memutar  (Eid- Lidt et al., 2019).
Salah  satu  faktor  yang  mempengaruhi  kualitas  serum  adalah  sentrifugasi. Sentrifugasi  adalah  teknik  pemisahan  cairan  dari  padatannya    Pada  penelitian  ini, sentrifugasi  digunakan  untuk  memisahkan  cairan  dari  padatan  sel  darah  sehingga diperoleh  serum. Sentrifugasi  merupakan  langkah  pertama  pada  hampir  semua  prosedur fraksionasi  atau  penguraian  sel  yang  digunakan  untuk  memisahkan  endapan  dari  suatu suspensi dengan ukuran yang jauh berbeda (Brassard et al., 2018).  Perbedaan serum dan plasma yang berada di dalam sel tidak boleh keluar sel agar tidak terjadi hemolisis yang dapat  mempengaruhi  hasil  pemeriksaan.  Selain  hemolisis,  sampel  lipemik  dan  ikhterik dapat mengganggu pembacaan pada spektrofotometer (Ramadhani et al., 2019).
Tanpa mengurangi kualitas serum maka dilakukan pengurangan waktu sentrifugasi karena  pemeriksaan Laktat  Dehydrogenase (LDH)  yang  berada  pada  jantung  dan  hati perlu penanganan cepat sehingga hasil pemeriksaan juga dibutuhkan cepat. Lalu yang bisa dilakukan  adalah  mengurangi  waktu  sentrifugasi  akan  memberi  dampak  yang  baik  bagi laboratorium (Brassard et al., 2018).
Sehubungan dengan pengurangan waktu maka akan di dapat juga manfaat lain dari aspek ekonomi  yaitu penghematan listrik sehingga variable cost dari suatu laboratorium tersebut  dapat  berkurang.  Berdasarkan  KepMenKes  RI  No. 605 Tahun 2008,  kebutuhan daya  listrik  suatu  laboratorium  kesehatan  120  kVA  untuk  penerangan,  AC,  dan  alat laboratorium. Menurut Tarif Tenaga Listrik PT. PLN (2017), golongan tarif dengan batas
daya 6.600 VA sampai dengan 200 kVA ialah Rp 1.467,28 per kWh. Pemeriksaan LDH di  laboratorium  dengan  hitungan  jumlah  kWh  adalah  9.960  kWh/tahun,  sehingga  dana yang dapat dihemat per tahun adalah Rp 14.614.109,00.
Dampak  pengurangan  waktu  sentrifugasi  dapat  memperlambat  penurunan produktivitas atau kinerja sentrifus akibat penggunaan yang terlalu lama sehingga fungsi alat  tersebut  menurun.  Selain  itu,  dapat  memperpanjang  penggunaan  alat,  menurunkan biaya perawatan sentrifus, mengurangi kerugian waktu ketika alat tidak berproduksi dan menurunkan biaya pengeluaran suku cadang alat (Schneider & Alcalay, 2017).
Penelitian  sebelumnya  menjelaskan  bahwa  bisa  menurunkan  waktu  dari  15  menit menjadi  7  dan  5  menit,  namun  pada  penelitian  ini  saya  akan  membuat  waktu  hanya  3 menit dalam proses darah menjadi serum, tanpa mengurangi kualitas serum.

## METODE PENELITIAN
Subjek  penelitian  adalah  30 mahasiswa  DIV  Analis  Kesehatan  Fakultas  Ilmu Kesehatan UKMC yang  memenuhi kriteria inklusi dan eksklusi kemudian diambil darah sebanyak 4 CC. Kemudian darah ditampung dalam 2 tabung bertutup merah (tabung clot) tabung  pertama  dan  kedua  didiamkan  30  menit  lalu  disentrifugasi  dan  dipisahkan serumnya. Selanjutnya dilakukan pemeriksaan LDH dalam serum dengan alat Byosistem Analyzer A15 dengan menggunakan metode IFCC yang dilakukan di laboratorium Balai Besar Laboratorium Kesehatan Palembang.
Jenis penelitian  yang digunakan adalah penelitian pre-eksperimental. Penelitian ini dilakukan  untuk  melihat  perbedaan  kadar  LDH  menggunakan  serum  dari  darah  yang disentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama 5 menit dan 4400 rpm selama 3 menit. Metode  pengambilan  sampel  adalah  total  sampling.  Sampel  yang  digunakan  adalah mahasiswa DIV Analis Kesehatan Fakultas Ilmu Kesehatan UKMC. Data  hasil penelitian di uji dengan uji statistik Paired T test.

## HASIL PENELITIAN Hasil Verfikasi Metode Pemeriksaan LDH
Tabel. 1
Hasil Verifikasi Metode Pemeriksaan LDH Bahan Kontrol Hasil Batas Keberterimaan Keterangan Presisi/CV Normal 1.9 % 7 % Diterima Tinggi 2,4 % Akurasi/Bias Normal 0,41% 4,3% Diterima Tinggi 0,81% Tea Normal 4,21% 11,4% Diterima Tinggi 5,61%
Berdasarkan  tabel  1  menunjukan  bahwa  presisi  metode  pemeriksaan  LDH  dari bahan kontrol normal sebesar 1,9 %, bahan kontrol high sebesar 2,4% dan untuk akurasi bahan kontrol normal sebesar 0,41%, bahan kontrol high sebesar 0,81% serta TEa normal sebesar  4,21%  dan  TEa high sebesar  5,61%.  Hasil  uji  presisi,  akurasi  dan  TEa  masih dalam batas yang diperbolehkan atau lebih kecil dari batas yang diperbolehkan. Pada hasil uji ini dapat diterima.

## Karakteristik Subjek Penelitian
Tabel. 2 Karakteristik Subjek Penelitian No. Jenis Kelamin Jumlah Presentase 1 Laki-laki 6 20% 2 Perempuan 24 80% Total 30 100%
Berdasarkan  tabel  2  dapat  diketahui  bahwa  kebanyakan  yang  menjadi  subjek penelitian ini adalah jenis kelamin perempuan dengan jumlah 18 orang dengan presentase sebesar 90%.

## Hasil Pemeriksaan Kadar LDH
Tabel. 3 Hasil Pemeriksaan Kadar LDH dalam Serum Variabel Mean/Kadar Rata-rata SD p value Centrifugasi  5 menit 3000 rpm 309,9 45,9 0,478 Centrifugasi 3 menit 4400 rpm 306,4 37,3
Berdasarkan tabel 3 hasil pengukuran kadar LDH darah serum yang disentrifugasi 3000 rpm 5  menit  sebesar  309,9  U/L dan  yang  disentrifugasi  4400 rpm 3  menit  sebesar 306,4 U/L. Hasil pengukuran ini kemudian diuji secara statistik menggunakan uji Paired T- Test , diperoleh nilai p : 0,478 (>0,05), artinya tidak ada perbedaan antara kadar LDH dalam serum yang disentrifugasi 3000 rpm 5 menit dan 4400 rpm 3 menit.

## PEMBAHASAN
Sebelum  dilakukan  penelitian,  metode  dan  alat  terlebih  dahulu  telah  dilakukan verifikasi  dan  pemantapan  mutu  internal.  Hal  ini  untuk  memastikan  kehandalan  metode pemeriksaan  yang  digunakan  dalam  penelitian.  Selain  dilakukan  verifikasi  metode, faktor-faktor yang memungkinkan  terjadinya kesalahan atau gangguan saat pemeriksaan juga  dihitung.  Faktor-faktor  yang  memungkinkan  terjadinya  kesalahan  atau  eror  dalam pemeriksaan  dinyatakan  sebagai  nilai  keberterimaan  total  eror  ( Allowable  Total  Error  : TEa ).  TEa  dihitung  dengan  menjumlahkan  persentase  bias  dengan  dua  kali  persentase CV.  Batas  nilai  TEa  ditentukan  sebagai  ukuran  suatu  metode  bisa  digunakan,  selain menghitung  presisi  dan  akurasi.  CLIA  ( Clinical  Laboratory  Improvement Amendments ) menuliskan  batas TEa untuk  metode  pemeriksaan  LDH  adalah  <11,4%.  Nilai  TEa  yang diperoleh  pada  penelitian  ini  sebesar  4,21%  untuk  kontrol  normal  dan  5,61%  untuk kontrol high. Hasil tersebut tidak melebihi TEa yang diperbolehkan. Hal ini membuktikan bahwa  metode  pemeriksaan  LDH  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  dalam  penelitian ini memang benar-benar layak digunakan (Lokhandwala et al., 2017).
Berdasarkan hasil  penelitian  yang  diperoleh  dapat  dilihat  bahwa  tidak  terdapat perbedaan  hasil  pengukuran  kadar  LDH  pada  sampel  yang  disentrifuse  dengan  waktu  5 menit dan kecepatan 3000 rpm, dengan waktu sentrifugasi 4400 rpm selama 3 menit.  Hal
ini  sejalan  dengan  penelitian  Minder  dkk  yang  menyebutkan  bahwa  tidak  terdapat perbedaan  hasil  pemeriksaan  kadar  LDH  dengan  menggunakan  kecepatan  dan  waktu sentrifugasi.
Hal ini sejalan dengan penelitian yang telah dilakukan oleh Cadamuro et al., (2018) menunjukkan  bahwa  hasil  penelitian  tidak  terdapat  perbedaan  yang  signifikan  pada pemeriksaan LDH dengan kecepatan sentrifugasi 2000 g (4230 rpm ) selama 10 menit dan kecepatan  sentrifugasi  3000  g  (5180 rpm )  selama  5  menit  dan  7  menit.  Hal  ini dikarenakan  sampel  diperlakukan  dengan  meningkatkan  kecepatan  sentrifugasi  dan mempersingkat  waktu  sentrifugasi  begitu  juga  sebaliknya.  Kecepatan  dan  waktu sentrifugasi  masih  sesuai  dengan  standar  untuk  mendapatkan  serum  yang  tidak mengandung sel darah dan tidak hemolisis.
Salah  satu  faktor  yang  mempengaruhi  kualitas  serum  adalah  sentrifugasi. Sentrifugasi  adalah  teknik  pemisahan  cairan  dari  padatannya.  Pada  penelitian  ini, sentrifugasi  digunakan  untuk  memisahkan  cairan  dari  padatan  sel  darah  sehingga diperoleh  serum. Sentrifugasi  merupakan  langkah  pertama  pada  hampir  semua  prosedur fraksionasi  atau  penguraian  sel  yang  digunakan  untuk  memisahkan  endapan  dari  suatu suspensi dengan ukuran yang jauh berbeda (Brassard et al., 2018).  Perbedaan serum dan plasma yang berada di dalam sel tidak boleh keluar sel agar tidak terjadi hemolisis yang dapat  mempengaruhi  hasil  pemeriksaan.  Selain  hemolisis,  sampel  lipemik  dan  ikhterik dapat mengganggu pembacaan pada spektrofotometer (Ramadhani et al., 2019).
Tanpa mengurangi kualitas serum maka dilakukan pengurangan waktu sentrifugasi karena  pemeriksaan Laktat  Dehydrogenase (LDH)  yang  berada  pada  jantung  dan  hati perlu penanganan cepat sehingga hasil pemeriksaan juga dibutuhkan cepat. Lalu yang bisa dilakukan  adalah  mengurangi  waktu  sentrifugasi  akan  memberi  dampak  yang  baik  bagi laboratorium (Brassard et al., 2018).
Faktor-faktor  yang  mempengaruhi  sentrifugasi  antara  lain  kecepatan,  waktu  dan suhu.  Semakin  tinggi  kecapatan  sentrifugasi  maka  semakin  sedikit  pula  waktu  yang dibutuhkan  untuk  melakukan  suatu  putaran,  hubungan  tersebut  berdasarkan  dari hubungan yang berbanding terbalik antara suatu kecepatan dengan waktu gerak melingkar suatu sentrifugasi (Magnette et al., 2016).
Hasil penelitian juga menunjukkan bahwa penerapan gaya-g (gravitasi) tertentu atau kecepatan  rotasi  dengan  sendirinya  tidak  memprediksi  kemampuan  pelet  eksosom,  dan waktu sentrifugasi yang berkepanjangan dapat mencapai hasil yang lebih besar dari RNA dan  protein  eksosomal,  sedangkan  waktu  sentrifugasi  yang  sangat  lama  menghasilkan konsentrasi protein yang berlebihan dalam pelet eksosom.
Perlunya  memperhatikan  pemantapan  mutu  internal  dalam  laboratorium  sebelum melakukan pemeriksaan terhadap suatu sampel. Hal ini harus dilakukan oleh laboratorium itu  sendiri  dan  dilakukan  secara  terus  menerus  setiap  hari  guna  mengurangi  kejadian penyimpangan  terhadap  suatu  hasil  pemeriksaan  sehingga  diperoleh  hasil  pemeriksaan yang dapat dipercaya.
Sehubungan dengan pengurangan waktu akan didapat juga manfaat lain dari aspek ekonomi yaitu penghematan listrik sehingga biaya dari suatu laboratorium tersebut dapat berkurang.  Dampak  pengurangan  waktu  sentrifugasi    dapat  memperlambat  penurunan produktifitas atau kinerja  sentrifus  akibat  penggunaan  yang terlalu  lama  sehingga  fungsi alat tersebut menurun.

## SIMPULAN
Tidak  terdapat  perbedaan  kadar  LDH  dalam  serum  dari  darah  yang  disentrifugasi 3000 rpm selama 5 menit dan 4400 rpm selama 3 menit.

## SARAN
Disarankan  untuk  melakukan  sentrifugasi  4400  rpm  selama  3  menit  pada pemeriksaan LDH untuk mempersingkat waktu dan menghemat biaya listrik.

## DAFTAR PUSTAKA
Brassard,  D.,  Clime,  L.,  Daoud,  J.,  Geissler,  M., Malic,  L.,  Charlebois,  D.,  &  Veres, T.
(2018).  Microfluidic-Based  Platform  for  Universal  Sample  Preparation  and Biological  Assays  Automation  for  Life-Sciences  Research  and  Remote  Medical Applications. Deep Space Gateway Science Workshop 2018
Cadamuro, J., Mrazek, C., Leichtle, A. B., Kipman, U., Felder, T. K., Wiedemann, H., & Haschke-Becher, E. (2018). Influence of  Centrifugation  Conditions  on the  Results of  77  Routine  Clinical  Chemistry  Analytes  using  Standard  Vacuum  Blood Collection  Tubes  and  the  New  BD-Barricor  Tubes. Biochemia  Medica,  28 (1), 010704. https://doi.org/10.11613/BM.2018.010704
Eid-Lidt,  G.,  Reyes,  J.,  Rivera,  A.,  Limon,  C., Soto,  M.,  &  Gaspar,  J. (2019). TCT-777 Prevention  of  Radial  Artery  Occlusion:  Comparison  of  3  Hemostatic  Methods  in Transradial  Intervention. Journal  of  the  American  College  of  Cardiology,  74 (13), B761. DOI: 10.1016/j.jacc.2019.08.920
Ghani,  L.,  Susilawati,  M.  D.,  &  Novriani,  H.  (2016).  Faktor  Risiko  Dominan  Penyakit Jantung Koroner di Indonesia. Buletin Penelitian Kesehatan, 44 (3). https://doi.org/10.22435/bpk.v44i3.5436.153-164
Gressner, A. M., & Gressner, O. A. (2017). International Federation of Clinical Chemistry and  Laboratory  Medicine. Lexikon  der  Medizinischen  Laboratoriumsdiagnostik . https://doi.org/10.1007/978-3-662-49054-9_1601-1
Hermayanti,  D.,  &  Nursiloningrum,  E.  (2018).  Hiperglikemia  pada  Anak  dengan
Diagnosis  Diabetes  Mellitus  Type-1,  Diferential  Diagnostic  Maturity  Onset Diabetes of The Young (Mody). Saintika Medika, 14 (2). https://doi.org/10.22219/sm.vol14.smumm2.7162
Kemenkes  RI.  (2019).  Info  Datin  Situasi  Kesehatan  Jantung. Journal  of  Chemical Information and Modeling . https://doi.org/10.1017/CBO9781107415324.004 Lippi,  G.,  Mattiuzzi,  C.,  &  Bovo,  C. (2018).  Are we  Getting  Better  at  the  Preanalytical Phase  or  Just  Better  at  Measuring  it? Journal  of  Laboratory  and  Precision Medicine, 3 , 11. https://doi.org/10.21037/jlpm.2018.01.03
Lokhandwala, P. M., Riel, S. L., Haley, L., Lu, C., Chen, Y., Silberstein, J., & Eshleman, J.  R.  (2017).  Analytical  Validation  of  Androgen  Receptor  Splice  Variant  7
Detection  in  a  Clinical  Laboratory  Improvement  Amendments (CLIA)  Laboratory Setting. Journal of Molecular Diagnostics, 18 (1), 115-125.
https://doi.org/10.1016/j.jmoldx.2016.08.003
Magnette,  A.,  Chatelain,  M.,  Chatelain,  B.,  Ten  Cate,  H.,  &  Mullier,  F.  (2016).  Pre- Analytical  Issues  in  the  Haemostasis  Laboratory:  Guidance  for  the  Clinical Laboratories. Thrombosis Journal, 14 (1). https://doi.org/10.1186/s12959-016-0123- z
Ramadhani, Q. A., Garini, A., Nurhayati, N., & Harianja, S. H. (2019). Perbedaan Kadar Glukosa  Darah  Sewaktu  Menggunakan  Serum  dan  Plasma  Edta. JPP  (Jurnal Kesehatan Poltekkes Palembang), 14 (2), 80-84.
https://doi.org/10.36086/jpp.v14i2.407
Schneider,  F.,  Maurer,  C.,  &  Friedberg,  R.  C.  (2017).  International  Organization  for Standardization  (ISO)  15189. Annals  of  Laboratory  Medicine,  37 (5),  365-370. https://doi.org/10.3343/alm.2017.37.5.365
Schneider, S. A., & Alcalay, R. N. (2017). Neuropathology of Genetic Synucleinopathies with  Parkinsonism:  Review  of  the  literature. Movement  Disorders,  32 (11),  1504- 1523. https://doi.org/10.1002/mds.27193