## THE EFFECT OF PEGAGAN GEL (CENTELLA ASIATICA (L.) URBAN) ON WOUND HEALING PROCESSES IN MICE (MUS MUSCULUS) IN VIVO
Hendri Poernomo*, Setiawan DS*

## ABSTRACT
Background  :  Tooth  extraction  and  incision  are  procedures  that  are often  performed  in  dentistry  that  cause  injury  and  damage  to  oral tissues. Injuries  to the oral tissue must  be treated immediately so as not  to  interfere  with  the  stomatognathic  system.  Pegagan  (Centella asiatica (L.) Urban) is one of the medicinal plants used to accelerate wound healing. The purpose of the study was to determine the effect of giving  extract pegagan gel on the oral mucosal wounds of mice (Mus musculus) in various concentrations on the number of fibroblast cells. Methods  :  The  research  method  used  experimental  post  test  only control  group  design.  Data  analysis  used  One  Way  Anova  test  and Least  Significant  Difference  (LSD)  test.  The  experimental  used  were 24  male  mice  aged  6-8  weeks  weighing  20-25  grams  and  healthy, divided into 4 (four) groups. The extraction wounds were smeared with 5%,  10%,15%  concentration  of  pegagan  extract  gel  and  the  placebo was smeared for 1 minute and done twice a day. Experimental animals were decapitated on day 5 without pain and continued with the stage of making microscopic preparations of tissue taken and fixed with buffer formalin 10% for a maximum of 24 hours.
Results : The results showed that the average number of fibroblasts in the administration of extract pegagan  gel was 15% with 400 cells, 10% was 291 cells, 5% was 262 cells and the average CMC Na gel group was  74  cells.Then  continued  with  the  One  Way  Anova  test  and  the Least Significant Difference (LSD) test and results showed the average number of fibroblast cells in the four groups after being given treatment was significantly different with a significant level (ρ) < 0.05 and followed by a post hoc test, it is known that the gel extract pegagan 5%, 10%, and 15% can increase the number of fibroblast cells.
Conclusion : Extract pegagan gel 15% more increased the number of fibroblast cells than  extract pegangan gel10% and 5%.

## LATAR BELAKANG
Pencabutan  gigi  dan  insisi  merupakan tindakan di bidang kedokteran gigi yang dapat menyebabkan  luka  serta  kerusakan  pada jaringan mulut. Kondisi ini dapat menjadi salah satu  komplikasi  yang  tidak  diinginkan  berupa terjadinya  pendarahan.  Luka  lokal  yang  tidak dilakukan  perawatan,  akan  menjadi  suatu permasalahan serta dapat menimbulkan ketidaknyamanan 1 .
Penyembuhan  luka  diperlukan  untuk memperbaiki  struktur  jaringan  sehingga  fungsi dari  jaringan  tersebut  dapat  kembali  normal. Proses  penyembuhan  luka  idealnya  terjadi secara sempurna dengan terbentuknya regenerasi,  tetapi  terkadang  hal  ini  sulit didapatkan  karena  proses  penyembuhan sangat  dipengaruhi  oleh  berbagai  faktor  baik lokal  maupun  sistemik 2 .  Proses  penyembuhan luka  yang  sedang  berlangsung  menyebabkan fibroblas  menjadi  lebih  hipertrofi  dan  lebih
* Oral Surgery Department, Faculty of Dentistry, Mahasaraswati University Denpasar
Correspondence: hendri_poernomo@yahoo.co.id

## Keywords:
Tooth Extraction, Wounds, Pegagan (Centella asiatica (L.) Urban), Fibroblast Cells, Mice (Mus musculus).
basofil,  ukuran  kompleks  golgi  menjadi  lebih besar dan retikulum endoplasmik menjadi lebih lebar. Fibroblas mulai muncul pada daerah luka 3 hari setelah terjadi laserasi jaringan 3 .
Obat-obatan  yang  berkhasiat  dalam penyembuhan  luka  di  pasaran    saat  ini  relatif mahal.  Penyembuhan  luka  dapat  dipengaruhi oleh  beberapa  senyawa  yang  terdapat  pada ekstrak  obat –  obatan  alami,  seperti  saponin, flavonoid, minyak atisri, protein, dan vitamin C. 4 Pegagan  ( Centella  asiatica )  merupakan  salah satu  tanaman  yang  banyak  dimanfaatkan dalam  pengobatan  tradisional  terutama  di kawasan Asia Tenggara dan China 5 . Pegagan ( Centella  asiatica )  juga  diklaim  memiliki
berbagai efek
farmakologis
untuk
penyembuhan luka, gangguan mental,
antioksidan, fungisida, antikanker, dan antibakteri 6 .
Penelitian  Amaliyan  (2013)  dengan pemberian  ekstrak  daun  pegagan  ( Centella asiatica )  dengan  konsentrasi  ekstrak  secara berturut-turut  25%,  50%,  75%  pada  mencit dengan  mengamati  luka  selama  14  hari  dan pengamatan  histopatologi  untuk  melihat  rata- rata  jumlah  fibroblas,  jumlah  limfosit  dan ketebalan  epitel  pada  penyembuhan  luka mencit (Mus  musculus) dimana  ekstrak  daun pegagan 25% lebih baik dibandingkan konsentrasi  lainnya 7 .  Penelitian  yang  lain dengan  menggunakan  ekstrak  daun  pegagan 10%,  25%  dan  40%  dalam  mempercepat penyembuhan luka bakar terhadap tikus betina, menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  pegagan 10% mempunyai pengaruh terhadap penyembuhan luka bakar derajat 2 dangkal 8 .
Penelitian  Sutisna  (2018)  dengan menggunakan  ekstrak  etanol  daun  pegagan dengan 12,5%, 25%, dan 50% terhadap kadar IGF-1  pasca  pencabutan  gigi  tikus  putih  galur Wistar  model  diabetes  disimpulkan  bahwa ekstrak  etanol  daun  pegagan  konsentrasi
12,5%  merupakan  konsentrasi  efektif  untuk meningkatkan  kadar  IGF-1  pasca  pencabutan gigi tikus putih galur Wistar model diabetes 9 . Pada penelitian sebelumnya juga telah dilakukan  uji  aktivitas  antibakteri  krim  ekstrak etanol  pegagan  ( Centella  asiatica )  terhadap bakteri Staphylococcus  aureus secara in  vitro dengan konsetrasi terendah 6% dan konsentrasi  tertinggi  10%,  dimana  keduanya memiliki daya  hambat terhadap bakteri Staphylococcus aureus. Berdasarkan uraian di atas  maka  peneliti  melakukan  penelitian pengaruh  pemberian  gel  ekstrak  pegagan dengan  konsentrasi  5%,  10%  dan  15% terhadap  proses  penyembuhan  luka  insisi mencit ( Mus musculus ).

## TINJAUAN PUSTAKA
Kerusakan  jaringan  bisa  disebabkan oleh gangguan fisik dan kimia. Faktor fisik dapat berupa  insisi,  temperatur  dan  obstruksi pembuluh darah sedangkan faktor kimia dapat berupa pH yang tidak fisiologis 10 .
Penyembuhan  luka  adalah  respon tubuh terhadap berbagai cidera berupa proses pemulihan  anatomi  atau  fungsi  suatu  jaringan yang  berjalan kompleks dan  dinamis 11 . Penyembuhan luka merupakan perbaikan yang meliputi, kombinasi regenerasi dan pengendapan  jaringan,  baik  jaringan  ikat maupun jaringan parut 12 . Proses penyembuhan luka terdiri dari fase awal, intermediate dan fase lanjut  dimana  masing –  masing  fase  memiliki proses biologis dan peranan sel yang berbeda.
Pada  fase  awal  terjadi  hemostasis  di  mana pembuluh darah yang terputus pada luka akan terjadi  reaksi  vasokontriksi  untuk  memulihkan aliran  darah  serta  inflamasi  untuk  membuang jaringan  rusak  dan  mencegah  infeksi  bakteri. Pada  fase  intermediet,  terjadi  proliferasi  sel mesenkim,  epitelisasi,  angiogenesis,  dan
sintesis  kolagen.  Pada  fase  akhir  terjadi remodeling pada luka 13 .
Komplikasi  pasca  pencabutan  dapat dipengaruhi  oleh  beberapa  hal,    yaitu  usia, perokok,  riwayat  penyakit  sistemik,  OH  yang buruk,  anatomi  gigi,  dan  gigi  yang  rapuh 14 . Komplikasi yang dapat terjadi setelah pencabutan  gigi  adalah  pendarahan  yang berlebihan,  fraktur  tulang  rahang  atau  gigi tetangga,  kerusakan  dari  syaraf  atau  jaringan sekitar gigi, dry socket , dan infeksi 15 .
Luka pada mukosa mulut menunjukkan penutupan  yang  lebih  cepat  dan  lebih  sedikit pembentukkan  jaringan  parut  dibandingkan dengan  luka  daerah  lain.  Mukosa  mulut memiliki  sifat  yang  khas  dimana  luka  terbuka pada mukosa mulut menutup dengan cepat dan sering kali tanpa bantuan suturing.
Penyembuhan  luka  pada  mukosa  mulut menunjukkan hasil yang lebih baik dibandingkan jenis luka yang sama pada kulit 16 .
Fibroblas  adalah  sel  dengan  rongga dalam  sitoplasma  dilapisi  oleh  banyaknya anyaman  retikulum  endoplasma  kasar  yang memanjang 17 , serta merupakan sel yang paling banyak  pada  jaringan  ikat  dengan  sifat  relatif stabil  dan  waktu  hidup  yang  panjang 3 .
Perbaikan  jaringan  secara  singkat  meliputi proses  pembentukan  pembuluh  darah  baru atau angiogenesis , proliferasi fibroblas,
deposisi matriks ekstraselular, dan remodeling jaringan.  Pemulihan  jaringan  dimulai  dalam waktu 24 jam setelah terjadinya jejas 15 .
Kandungan
astiatikosida pada
pegagan diketahui dapat meningkatkan kandungan hidroksiplorin dan
mukopolisakarida  yang  merupakan  bahan untuk mensintesis matriks ekstraseluler sehingga  mempercepat  penyembuhan  luka 18 . Penelitian yang lainnya menunjukkan pemberian  secara  topikal  kombinasi  rebusan pegagan dan sirih merah membantu
penyembuhan  luka  tikus  putih  jantan  yang dibuat diabetes 19 .
Gel  merupakan  sediaan  suspensi setengah  padat  dari  bahan  organik  atau anorganik,  menagandung  air  dan  digunakan pada  kulit  yang  peka  atau  berlendir  seperti mukosa 20 .  Obat  dalam  sediaan  gel  memiliki keuntungan  yaitu  kemampuan  penetrasi  obat dalam kulit yang baik, dengan daya lekat tinggi yang tidak menyumbat pori sehingga pernapasan  pori  tidak  terganggu.  Setelah diaplikasikan,  gel  ini  akan  melekat  pada permukaan mukosa rongga mulut, membentuk lapisan tipis dan bertindak sebagai baries untuk melindungi ujung syaraf 20 .

## METODE PENELITIAN

## Jenis Penelitian
Jenis penelitian yang digunakan eksperimental post test only control group.

## Rancangan Penelitian
Sampel penelitian menggunakan hewan  coba,  yaitu  pertama  diberi  gel  ekstrak pegagan 5%, kedua diberi gel ekstrak pegagan 10%,  kelompok  ketiga  diberi  gel  ekstrak pegagan  15%,  dan  kelompok  kontrol  yaitu diberi CMC-Na 2%.
Alat  yang  digunakan  :  ayakan  40 mesh, botol timbang,  neraca  analitik,  oven, moisture analyzer, batang  pengaduk,  spatula,  gelas,
rotary  evaporator, kertas  saring  bebas  abu, vakum gas, penyaring Buchner, blender.tabung reaksi,  pipet  tetes,  cawan  porselen, beaker glass, labu Erlenmeyer, UV-kabinet 254 & 366 nm,  mikroskop, Clamps, cotton  bud,    pinset, gunting bedah, scalpel, handle scalpel.
Bahan yang digunakan : s implisia pegagan, N- heksana,  etanol  95%,  aquades,  eter,  asam klorida,  asam  asetat  anhidrat,  kloroform,  besi (II)  klorida,  perekasi  dragendorf,  perekasi bouchardat, perekasi mayer, pereaksi wagner, aseton, asam borat, asam oksalat, asam sulfat,
gel  ekstrak  pegagan,  placebo,  cat Harris Hematoxylin Eosin, alkohol 70%, larutan buffer formalin 10%.

## Jalannya Penelitian
Pembuatan ekstrak pegagan dan dilanjutkan uji skrining  fitokimia  ekstrak  pegagan  untuk mengetahui kandungannya.
Tahapan  uji in  vivo, hewan  coba dianestesi
secara inhalasi dengan menggunakan chloroform kemudian  dilakukan  pencabutan gigi  insisivus  sentralis  mandibula  dengan menggunakan clamps dan scalpel . Luka bekas pencabutan  diolesi  gel  ekstrak  pegagan konsentrasi 5%, 10%, 15% dan placebo diolesi selama  1  menit  dengan  menggunakan cotton bud steril  dan  dilakukan  dua  kali  sehari  yaitu pagi pada pukul 10.00 dan sore hari pada pukul 16.00.
Hewan coba didekapitasi pada hari ke 5 tanpa rasa  sakit  dan  dilanjutkan  tahap  pembuatan sediaan  mikroskopis,  dimana  jaringan  yang diambil dilakukan fiksasi dengan buffer formalin 10% maksimum selama 24 jam.
Tahap  penghitungan  jumlah  fibroblas  dengan menghitung jumlah fibroblas yang aktif memiliki sitoplasma  yang  besar,  kromatin  halus, nukleusnya  ovoid  dan  tampak  nyata)  dilihat
dengan  lima  lapang  pandang  yang  dihitung menggunakan  mikroskop  elektrik  ( Olympus type CX 21 ) dengan pembesaran 400 kali.
Analisis Data
Data  dianalisa  menggunakan  dengan  Uji One Way Anova.

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
Hewan coba yang digunakan 24 mencit jantan berumur 6 – 8 minggu dengan berat 20 – 25 gram dan sehat terbagi menjadi
4 (empat) kelompok, yaitu diberikan gel natrium carboxymethyle cellulose 2% (CMC- Na 2%), kelompok perlakuan 1 diberikan gel ekstrak pegagan 5%, kelompok perlakuan 2 diberikan gel ekstrak pegagan 10% dan kelompok perlakuan 3 diberikan gel ekstrak pegagan 15%.
Hasil Uji Skrining Fitokimia Ekstrak Pegagan
Kandungan ekstrak pegagan ( Centella asiatica (L.) Urban ) dari hasil Uji skrining fitokimia didapatkan yaitu senyawa alkaloid, saponin, flavonoid, steroid, triterpenoid, fenol, tannin, glikosida dan minyak atsiri. Hasil uji skrining fitokimia dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Hasil uji skrining fitokimia ekstrak pegagan
Identifikasi Golongan Senyawa Metode Pegujian Pengamatan Hasil
Alkaloid
Meyer Tidak terbentuk endapan putih - Dragendorff Tidak terbentuk endapan jingga - Bouchardat Terbentuk endapan hitam + Wagner Terbentuk endapan coklat + Saponin Foam Terbentuk busa yang stabil + Flavonoid Pew Terbentuk warna kuning intensif +
Steroid Lieberman- Burchard Tidak  terbentuk  cincin  warna biru kehijauan - Triterpenoid Lieberman- Burchard Terbentuk cincin warna kecoklatan + Fenol FeCl 3 10% Terbentuk warna biru kehitaman + Glikosida Lieberman- Burchard Terbentuk warna hijau kebiruan + Tannin Pb Asetat 25%  Terbentuk  endapan  warna putih + Minyak atsiri residu Residu berbau aromatik +

## Hasil Perhitungan Sel Fibroblas
Hasil  perhitungan  rerata  sel  fibroblas pada preparat yang diberi
pewarnaan hematoxilin eosin (HE) dengan perbesaran 400 kali, didapat seperti tabel 2 dan gambar 1. Tabel 2 Hasil perhitungan rerata sel fibroblas setelah diberikan perlakuan Kontrol Negatif Gel Pegagan 5% Gel Pegagan 10% Gel Pegagan 15% Rerata 74 262 291 400
A B C D
Gambar 1. Preparat sel fibroblas diberi pewarnaan HE dengan perbesaran 400 kali pada mikroskop cahaya.  (A)  preparat  dengan  perlakuan  pemberian  gel  CMC – Na 2% murni, (B) gel ekstrak pegagan 5%, (C) gel ekstrak pegagan 10% dan (D) gel ekstrak pegagan 15%.
Tabel 2 menunjukkan bahwa hasil rerata sel fibroblas meningkat seiring dengan tingginya konsentrasi gel. Rerata sel fibroblas tertinggi pada pemberian perlakuan gel pegagan 15% dengan 400 sel dan rerata sel fibroblas terendah pada pemberian gel CMC – Na 2% murni dengan 74 sel.

## Analisis Data Statistik
Uji analisis menggunakan metode one way anova dengan tingkat kemaknaan 95%
atau ρ =0,05. Setelah data terdistribusi normal ( ρ >0,05) dan homogen dilanjutkan uji one way anova untuk mengetahui perbedaan rerata seluruh kelompok perlakuan.
Tabel 3. Hasil uji one way anova jumlah sel fibroblas Jumlah Kuadrat df Nilai Rata – rata Kuadrat F Sig. ( ρ ) Antar Kelompok 245022,458 3 81674,153 150,572 0,001 Dalam Kelompok 10848,500 20 542,425 Total 255870,958 23 Keterangan : df = derajat kebebasan F = uji simultan variabel Sig ( ρ )    = signifikan
Hasil tabel 3 analisis kemaknaan dengan uji one way anova menunjukkan nilai ρ =0,001, hal ini berarti bahwa rerata jumlah sel fibroblas pada keempat kelompok sesudah diberikan perlakuan berbeda secara bermakna. Selanjutnya, dilakukan uji post hoc untuk mengetahui kelompok mana saja yang berbeda.
Tabel 4 Hasil uji post hoc jumlah sel fibroblas Perlakuan Gel Pegagan 5% Gel Pegagan 10% Gel Pegagan 15% Kontrol Negatif 0,0001* 0,0001* 0,0001* Gel Pegagan 5% 0,001* 0,0001* Gel Pegagan 10% 0,0001*
Tabel  4  menunjukan  hasil  terdapat  perbedaan  antar  kelompok  dengan  tingkat  signifikan  ( ρ )  <  0,05. Maka dapat diketahui bahwa gel ekstrak pegagan 5%, 10% dan 15% dapat meningkatkan jumlah sel fibroblas.

## PEMBAHASAN
Pemilihan mencit sebagai hewan coba dikarenakan  mencit  merupakan  mamalia  yang memiliki waktu pertumbuhan yang relatif cepat dan  mudah  berkembang  biak  sehingga penggunaan mencit tidak akan mempengaruhi populasi mencit. Mencit juga memiliki komponen organ yang dapat mewakili mamalia lainnya  khususnya  manusia,  selain  itu  harga
mencit  lebih  terjangkau  dan  mudah  didapat. Mencit  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah mencit berkelamin jantan karena mencit jantan  memiliki  kadar  esterogen  yang  rendah sehingga  tidak  mudah  mengalami  stress  saat diberikan perlakuan.
Pada  penelitian  ini  digunakan  variasi konsentrasi gel ekstrak pegagan 5%, 10% dan 15% karena merujuk pada penelitian
Keterangan : * Berbeda bermakna
sebelumnya  dimana  penggunaan  ekstrak pegagan  dengan  konsentrasi  10%  dapat menginduksi angiogenesis dalam proses penyembuhan  luka  pasca  ekstraksi  gigi  pada hewan  marmut 16 .  Penelitian  yang  lainnya menunjukkan ekstrak pegagan dengan konsentrasi 6% sampai 10% efektif menghambat pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus secara in vitro sehingga dengan  sifat  antibakeri  dari  pegagan  dapat mencegah infeksi dan mempercepat penyembuhan  luka 21 .  Beberapa  penelitian menyebutkan  pegagan  ( Centella  asiatica  (L.)
Urban )
mempunyai efek terhadap penyembuhan  luka  yang  baik.  Efeknya  yaitu meningkatkan  sekresi  kolagen,  merangsang prorifelasi fibroblas, meningkatkan antiogenesis dan sintesis matriks ekstraseluler lainnya serta mempunyai aktivasi antibakteri dan antioksidan 22 .
Hasil uji fitokimia yang dilakukan pada pegagan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini diketahui  bahwa  pegagan  pada  penelitian  ini mengandung beberapa senyawa, yaitu alkaloid,  saponin,  flavonoid,  tritepenoid,  fenol, glikosida, tannin dan minyak atsiri 23 . Beberapa senyawa  yang  dapat  diidentifikasi  melalui  uji skrining  fitokimia  sesuai  dengan  deskripsi BPOM  yang  menyatakan  pegagan  memiliki kandungan  zat  aktif,  diantaranya  flavonoid, tritepenoid, asiatikosid, madekasosida, saponin dan  poliasetilen 24 .  Daun  pegagan  yang mengandung  asiatikosida  yang  merupakan golongan  flavonoid  sangat  poten  sebagai antiinflamasi  dan  antioksidan  sehingga  proses penyembuhan luka terjadi lebih cepat dan baik 9 .
Ekstrak pegagan sebagai  anti  imflamasi dapat membantu pengobatan luka. Komponen bioaktif  triterpenoid  dalam  pegagan  yaitu asiaticoside , asiatic  acid , madecassocide dan madeccasic  acid mempunyai  kemampuan sebagai obat luka dan anti imflamasi 22 .
Mencit  ditempatkan  pada  kandang plastik  dan  diadaptasi  selama  1  minggu. Pencabutan  gigi  pada  mencit  dibantu  dengan menggunakan kloroform yang diteteskan pada tisu  dan  didekatkan  pada  hidung  mencit, sehingga  mengurangi  rasa  sakit  pada  mencit dan mempermudah operator dalam memberikan  perlakuan.  Saat  memberikan perlakuan  tidak  semua  gigi  mencit  dapat tercabut  sempurna  sehingga  hampir  sebagian besar  mencit  hanya  mendapat  luka  pada mukosa oral.
Dekapitasi  mencit  dilakukan  pada  hari ke  5  dikarenakan  pada  saat  itu  terjadi  fase proliferasi  luka  dimana  terjadi  proliferasi  sel fibroblas di daerah luka 26 . Dekapitasi dilakukan tanpa  rasa  sakit  dengan  cara  memasukkan mencit ke dalam wadah berisi cairan kloroform yang  ditetesi  tisu  hingga  tewas,  lalu  rahang mencit  dipotong  dan  dimasukkan  ke  dalam cairan  formalin  untuk  selanjutnya  dibuat preparat.  Selanjutnya,  sisa  tubuh  hewan  coba yang telah digunakan dikubur dengan baik.
Penggunaan  pegagan  sebagai  bahan aktif pada sediaan oral ini karena mempertimbangkan kemungkinan hewan coba menelan gel yang akan diaplikasikan pada luka pencabutan gigi. Uji toksisitas ekstrak pegagan pada  mencit  yang  dilakukan  sebelumnya dengan  mencari  LD50  ( lethal  dose  50 )  dari ekstrak pegagan menunjukkan pegagan termasuk  dalam  kriteria  toksiksitas  rendah karena nilai LD50 diantara 5 – 15 g per kg/BB, yaitu  LD50  13,6  g  per  kg/BB  yang  berarti pegagan aman untuk organ dan jaringan tubuh hewan  coba  namun  tetap  membutuhkan pengawasan saat penggunaan 21 .
Proses penyembuhan luka tidak hanya terbatas  pada  proses  regenerasi  lokal,  tetapi merupakan kondisi keseluruhan yang melibatkan faktor – faktor endogen yang salah satunya  adalah  pengobatan.  Peningkatan
fibroblas  merupakan  indikator  penyembuhan luka  dan  akan  terlihat  jumlahnya  lebih  banyak pada  preparat yang mendapat perlakuan yaitu pemberian  gel  ekstrak  pegagan  dibandingkan dengan  kelompok  kontrolnya  yaitu  CMC-Na 2%.
Pada penelitian ini  menunjukkan hasil rerata  jumlah  sel  fibroblas  pada  4  perlakuan dengan 6 kali pengulangan. Rerata jumlah sel fibroblas  ada  kelompok  negatif,  yaitu  74  sel. Rerata jumlah sel pada pemberian gel ekstrak pegagan 5% adalah 262, rerata jumlah sel pada pemberian  gel  ekstrak  pegagan  10%  adalah 291 dan rerata jumlah sel pada pemberian gel ekstrak pegagan 15% adalah 400 (tabel 2).
Hasil  penelitian  setelah  analisis  data secara  statistik,  data  dinyatakan  signifikan apabila ρ < 0,05 dimana menunjukan data hasil penelitian  memiliki  angka  signifikan  0,001. Sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa  data  hasil uji  penelitian  yang  dilakukan  sudah  signifikan. Kemudian dilanjutkan uji post hoc, dimana hasil yang  diperoleh  adalah  terdapat  adanya perbedaan  antar  kelompok  dengan  tingkat signifikan  ( ρ )  <  0,05  dapat  diartikan  seluruh kelompok  memiliki  perbedaan  yang  signifikan karena seluruh ( ρ ) < 0,05.
Hasil  penelitian  ini  sejalan  dengan penelitian  yang  dilakukan  Amaliya  (2013) bahwa  indikator  penutupan  luka  ekstrak  daun pegagan  25%  lebih  baik  dari  pada  kelompok kontrol  karena  kandungan  triterpenoid  ekstrak daun  pegagan  yang  mampu  meningkatkan pembentukkan kolagen tipe I pada kulit dimana semakin meningkat konsentrasi ekstrak pegagan akan lebih kental dan mempermudah terjadinya oksidasi yang menghalangi hidroksilasi  prolin  dan  lisin  sehingga  kolagen tidak dikeluarkan oleh fibroblas 7 .
Tampilan  mikroskopis  jaringan  yang telah  diberikan  perlakuan  dapat  terlihat  pada gambar  1,  dimana  pada  kelompok  kontrol
negatif (gambar 1A) terlihat sedikit sel fibroblas. Hal itu disebabkan karena  pada jaringan yang diberikan  perlakuan  gel  CMC –  Na  2%  murni masih  mengalami  fase  inflamasi,  sehingga robeknya  jaringan  masih  terlihat  jelas  dan fibroblas  belum  banyak  terlihat.  Berbeda dengan tampilan mikroskopis kelompok kontrol negatif  (gambar  1A)  pada  kelompok  yang diberikan gel ekstrak pegagan (gambar 1B, 1C dan 1D) jaringan terisi penuh dengan fibroblas, namun jumlah selnya yang berbeda. Bertambahnya  jumlah  sel  fibroblas  pada pemberian  gel  ekstrak  pegagan  diakibatkan kandungan zat aktif yang ada dalam pegagan. Semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak  pegagan pada  gel  semakin  tinggi  juga  kandungan  zat aktif pada gel tersebut, sehingga jaringan yang diberikan  gel  ekstrak  pegagan  15%  (Gambar 1D) terlihat lebih penuh dan perhitungan rerata juga  menunjukkan  pemberian  gel  pegagan dengan  konsentrasi  15%  menghasilkan  lebih banyak  sel  fibroblas.  Hasil  ini  sejalan  dengan penelitian  Dwitiyanti  (2015)  dimana  pada  hari ke-2  sampai  hari  ke-14  adalah  fase  dimana terjadinya  granulasi  akibat  pembentukan  serat kolagen  yang  akan  bertautan  pada  tepi  luka. pegagan  ( Centella  asiatica )  dapat  mendukung penyembuhan  luka  karena  meningkatkan tensile  strength  dan  sintesis  kolagen  yang dapat  mempercepat  proses  penyembuhan luka.  Proses  penyembuhan  luka  merupakan proses  yang  kompleks  dan  dinamis  dalam pemulihan  struktur  sel  dan  lapisan  jaringan untuk  kembali  normal.  Setelah  terjadinya  luka proses penyembuhan dan regenerasi sel terjadi secara  otomatis  sebagai  respon  fisiologi tubuh 23 .
Kandungan  beberapa  zat  aktif  dalam pegagan dapat membantu penyembuhan luka. Senyawa  golongan  tritepenoid  dan  saponin pada daun pegagan dapat  mendukung penyembuhan  luka  karena  meningkatkan
tensile  strength dan  sinsetis  kolagen 21 .  Hal  ini dapat  mempersingkat  radang  dan  membantu proses  penyembuhan  pada  luka.  Penelitian mengenai  waktu  penyembuhan  luka  bakar derajat  II  dengan  menggunakan  gel  ekstrak pegagan  mendapatkan  hasil  pemberian  gel ekstrak  pegagan  mempercepat  penyembuhan luka  bakar  dibandingkan  pemberian  normal saline 23 .  Hal  ini  dikarenakan  ekstrak  daun pegagan  mengandung  zat  aktif  tritepenoid, asiatikosida,  flavonoid,  tannin,  dan  alkaloid yang  membantu  dalam  penyembuhan  luka. Pemberian  ekstrak  pegagan  10%  pada  luka pasca  pencabutan  gigi  dapat  menginduksi angiogenesis  pada  penyembuhan  luka  pasca ekstraksi  gigi 16 .  Hal  tersebut  dikarenakan ekstrak Pegagan dapat meregulasi dan infiltrasi neutrofil,  monosit  atau  makrofag,  dan  limfosit dengan meningkatkan monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) serta meningkatkan  jumlah  VEGF  dan  bFGF  yang diproduksi  oleh  makrofag  yang  berimplikasi dengan  peningkatan  jumlah  kapilerisasi  pada soket.

## SIMPULAN
Konsentrasi  gel  ekstrak  pegagan  15% lebih  optimal  dari  meningkatkan  jumlah  sel fibroblas pada  luka mukosa oral  mencit jantan dikarenakan  persentase  kandungan  zat  aktif yang  lebih  banyak  dari  konsentrasi  5%  dan 10%.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Indraswary  R. Efek  Konsentrasi  Buah Adas  (Foeniculum  vulgare  mill.)  Topikal pada  Epitelisasi  Penyembuhan  Luka Gingiva  Labial  Tikus    Sprague  Dawley  In Vivo . Jurnal Majalah Ilmiah Sultan Agung, 2011;49:124.
2. Ismardianita  E,  Soebijanto  dan  Sutrisno. Pengaruh Kuretase
Terhadap
Penyembuhan  Luka  Pasca  Pencabutan Gigi  dan  Kajian  Histologis  Pada  Tikus
Galur  Wistar. Dentica  Dental  Journal, 2003;8: 2:75-80.
3. Khoswanto  C. The  Effect  of  Mengkudu (Morinda citrifolia linn.) in Accelerating The Escalation  of  Fibroblas  Post  Extraction.
Majalah Kedokteran Gigi Den J, 2010;43:1:31-34.
4. Sudarsono  DG,  Subagus  W,  Imono  AD, Purnomo. Tumbuhan  Obat  II. Penerbit Pusat  Studi  Obat  Tradisional  UGM, Yogyakarta: 2002.
5. Winarto  WP,  Subakti  M. Khasiat  dan Manfaat  Pegagan  :  Tanaman  Penambah Daya Ingat .  AgroMedia, Jakarta: 2003.
6. Dash BK, Faruquee HM, Biswas SK, Alam MK,  Sisir  SM,  Prodhan  UK. Antibacterial and Antifungal Activities of Several Extract of  Centella  asiatica  L.  Against  some Human  Pathogenic  Microbe .  Life  Sciene and Medicine Research, 2011;2011.
7. Amaliyah  S,  Soemantri  B,  Utami  WY,  . Efek  Ekstrak  Daun  Pegagan  (  Centella asiatica) Dalam Mempercepat Penyembuhan  Luka Terkontaminasi pada Tikus  Putih  (Ratus  norvegicus)  Galur
Wistar . Jurnal Ilmu Keperawatan, Vol 1, No 1, 2013
8. Widianingtyas  D,  Wihastuti  AT,  Setijowati N. Pengaruh  Perawatan  Dengan  Ekstrak Daun  Pegagan  (Centella  asiatica)  Dalam Mempercepat  Penyembuhan  Luka  Bakar Derajat  2  Dangkal  pada  Tikus  Putih (Rattus norvegicus) Stran Wistar . Majalah Kesehatan FKUB. Vol 1, No 4, 2014
9. Sutisna,  Amanda  Tysa  Amalia. Pengaruh Ekstrak  Etanol  Daun  Pegagan  (Centella Asiatica)  terhadap  Kadar  IGF-1  Pasca Pencabutan Gigi Tikus Putih Galur Wistar Model Diabetes . Skripsi thesis, Universitas Jenderal Soedirman, 2018
10.  Hupp JR, Ellis E, Tucker . Contemporary Oral  and  Maxillofacial  Surgery. 5 nd ed., Elsvier, India: 2009.
11.  Hartini  IGAA. Pemberian  Ekstrak  Etanol Daun  Belimbing  Wuluh  (Averrhoa  bilimbi Linn.)  secara  Topikal  Konsentrasi  10% Lebih  Meningkatkan  Jumlah  Fibroblas daripada
20% dan 40% untuk Penyembuhan  Luka  Gingiva  Tikus  Putih Jantan ( Ratus norvegicus ). Tesis, 2011. 12.  Robbins  SL,  Cotran  RS,  Kumar  V. Buku Ajar  Patologi  Robbins. ed.7.  vol.1.  EGC, Jakarta: 2004.
13.  Suryadi  IA,  Asmarajaya  AAGN,  Maliawan S. Proses Penyembuhan dan Penanganan Luka. SMF  Ilmu  Penyakit  Bedah  FK Universitas  Udayana/Rumah  Sakit  Umum Pusat Sanglah, 2013.
14.  Cascarini  L,  Schilling  C,  Gurney  B,  dan Brennan P. Buku Saku Bedah Mulut dan Maksilofasial .  Alih  Bahasa  H.Y.Yusuf, M.Sylvani  dan  D.  Wulansari,    EGC Penerbit Buku Kedokteran, Jakarta: 2014.
15.  Howe GL. Pencabutan Gigi Geligi Edisi II.
Alih  Bahasa J.A.Budiman  dan  L.Yuwono, EGC Penerbit Buku Kedokteran,
Jakarta:1999. 16.  Azmi  EN,  Agus  P,  dan  Bahar  ML.
Pengaruh Aplikasi Ekstrak Daun Pegagan (Centella asiatica) 10% terhadap Angiogenesis  Luka  pasca  Ekstraksi  Gigi.
J. Oral and Maxillofacial Surgery, 2014;3:1:15-19.
17.  Mescher  AL. Teks  dan  Atlas  Histologi Dasar  Junqueira .  Alih  Bahasa  dr  F  Dany, EGC, Jakarta: 2011.
18.  Kristanti  AN. Potensi  Ekstrak  Daun Pegagan  (Centella  asiatica  (L.)  Urban)
Dosis  Tinggi  sebagai  Antifertilitas  pada Mencit (Mus musculus) Betina.
Skripsi,Universitas  Islam  Negeri  Maulana Malik Ibrahim Malang: 2010.
19.  Agustina  DR. Pengaruh  Pemberian secara Topikal Kombinasi  Rebusan Daun Sirih Merah ( Pipper cf. Fragile, Benth.) dan Rebusan Herba Pegagan ( Centella asiatica (L.) Urban) terhadap Penyembuhan  Luka  Tikus  Putih  Jantan yang dibuat Diabetes . Skripsi,  Universitas Indonesia, Jakarta: 2011.
20.  Priyanto. Farmakologi Dasar Untuk Mahasiswa  Farmasi  dan  Keperawatan, Edisi II, Leskonfi, Jakarta: 2008.
21.  Anu  HV,  Amat  ALS,  Sasputra  IN. Perbandingan Efektivitas Ekstrak Pegagan (Centella asiatica L.) Urban) dengan Salep Gentamisin Terhadap Penyembuhan Luka Insisi Tikus Putih Sprague Dawley . Jurnal Cendana Medikal. Vol 18, No 2, 2019
22.  Darmalaksana IGN, Warditha AAGJ, Dada IKAD,  Sudimartini  LM,  . Gerusan  Daun Pegagan Mempercepat Kesembuhan Luka  Bakar  pada  Tikus  Putih. Jurnal Buletin  Veteriner  Udayana.  Vol  10,  No  2, 2018
23.  Dwitiyanti. Sediarso, Kusuma AA. Pengaruh  Pemberian  Fraksi  Etil  Asetat Ekstrak  Etanol  70%  Herba  Pegagan Terhadap Penyembuhan Luka Bakar pada Tikus Putih Jantan. Jurnal  media farmasi. Vol 12, No 2, 2015
24.  BPOM  RI. Monografi  Ekstrak  Tumbuhan Obat  Indonesia ,    Revisi,  Vol.1,  Badan Pengawas  Obat  dan  Makanan  Republik Indonesia, Jakarta: 2010.
25.  Sabir  A. Aktivitas  antibakteri  flavonovids propolis  Trigona  sp  terhadap  bakteri
Streptococcus mutans, J Dent, 2008;38:135 – 141.