## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI

## PHYTOCHEMICAL SCREENING AND TOXICITY TEST OF MANGROVE LEAF ETHANOL EXTRACT (Bruguiera gymnorrhiza) WITH BRINE SHRIMP LETHALITY TEST (BSLT) METHOD

## SKRINING FITOKIMIA DAN UJI TOKSISITAS EKSTRAK ETANOL DAUN MANGROVE (Bruguiera gymnorrhiza) DENGAN METODE BRINE SHRIMP LETHALITY
TEST (BSLT)
Friyan Criscanus Manopo 1)* , Fatimawali 1) ,  Olvie Syenni Datu 1)
1) Program Studi Farmasi Fakultas MIPA Universitas Sam Ratulangi Manado *friyanmanopo22@gmail.com

## ABSTRACT
Cancer is one of the biggest causes of death in the world. Therefore, efforts to manufacture drugs for cancer treatment continue to be developed. One of the efforts to develop cancer drugs is by using medicinal plants which are empirically used by local communities in various regions. This study aims to  analyze  the  content  of  secondary  metabolites  contained  in  the  leaf  extract  of  the  Mangrove Bruguiera  gymnorrhiza  and  to  determine  the  potential  as  an  anticancer  by  determining  the  LC50 value. The extract was obtained by maceration using 96% ethanol solvent, identification of secondary metabolites by phytochemical screening and to determine the anticancer potential using the BSLT method with data analysis using Microsoft Excel. The phytochemical test results showed that the leaf extract contained alkaloids, flavonoids, saponins, tannins, and did not contain steroid/triterpenoid compounds. The results of the analysis showed that the ethanol extract of mangrove leaf (Bruguiera gymnorrhiza) was highly toxic with an LC 50 value of 24.1 µg /ml.
Key Words : Phytochemical screening, Brine Shirmp Lethality Test, Bruguiera gymnorrhiza

## ABSTRAK
Kanker merupakan salah satu penyebab kematian terbesar di dunia. Oleh karena itu, upaya pembuatan obat  untuk  penanganan  kanker  terus  dikembangkan.  Salah  satu  upaya  pengembangan  obat  kanker yaitu dengan pemanfaatan tumbuhan obat yang secara empiris digunakan oleh masyarakat lokal di berbagai  daerah.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menganalisis  kandungan  metabolit  sekunder  yang terkandung  dalam  ekstrak  daun  Mangrove Bruguiera  gymnorrhiza dan  untuk  mengetahui  potensi sebagai  antikanker  dengan  menentukan  nilai  LC 50 .  Ekstrak  diperoleh  dengan  cara  maserasi menggunakan pelarut etanol 96%, identifikasi metabolit sekunder dengan cara skrining fitokimia dan untuk mengetahui potensi antikanker menggunakan metode BSLT dengan analisis data menggunakan Microsoft  Excel.  Hasil  uji  fitokima  menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  mengandung  alkaloid, flavonoid,  saponin,  tannin,  dan  tidak  mengandung  senyawa  steroid/triterpenoid.  Hasil  analisis menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  mangrove Bruguiera  gymnorrhiza bersifat  sangat  toksik dengan nilai LC 50 24,1 µg/ml.
Kata kunci : Skrining Fitokimia, Brine Shirmp Lethality Test, Bruguiera gymnorrhiza

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI

## PENDAHULUAN
Kanker  merupakan  salah  satu  penyebab kematian  terbesar  didunia.  Oleh  karena  itu, upaya  pembuatan  obat  untuk  penanganan kanker terus dikembangkan. Salah satu upaya pengembangan  obat  kanker  yaitu  dengan pemanfaatan  tumbuhan  obat  yang  secara empiris  digunakan  oleh  masyarakat  lokal  di berbagai daerah (Yuli et al ., 2011).
Indonesia  adalah  salah  satu  negara  yang memiliki keanekaragaman hayati yang sangat tinggi.  Dengan  luas  kawasan  hutan  tropis terkaya  kedua  di  dunia  setelah  Brazil,  negara kita menyimpan potensi hayati yang merupakan  sumber  bahan  pangan  dan  obat- obatan  yang  telah  lama  dimanfaatkan  oleh masyarakat di Indonesia (Hohakay, 2019).
Sekitar 30.000 jenis tumbuhan berada dan hidup  di  Indonesia,  banyak  diantaranya mengandung  bahan  yang  digunakan  untuk pengobatan.  Tumbuhan  perlu  terus  digali, diteliti,  dikembangkan  dan  dioptimalkan pemanfaatannya.  Kecenderungan masyarakat dunia untuk “ Back to Nature ” dengan indikasi utama  peningkatan  kebutuhan  produk-produk konsumsi  untuk  kesehatan  dari  bahan  alam, merupakan peluang besar bagi pengembangan tanaman  obat  dan  obat  tradisional  Indonesia (BPOM, 2020).
Tanaman  mangrove  diketahui  memiliki banyak  potensi  sebagai  obat.  Beberapa diantaranya memiliki potensi sebagai antioksidan,  antimikroba,  dan  antikanker. Bagian  dari  tumbuhan  mangrove  yang  dapat dimanfaatkan  adalah  akar,  kulit  batang,  dan daun.  Tumbuhan  mangrove  sendiri  diketahui mengandung  senyawa  flavonoid,  polifenol, tanin,  senyawa  fenolat,  klorofil,  karotenoid, terpenoid  dan  alkaloid.  Karena  kandungan senyawa-senyawa  ini,  tanaman  mangrove biasa digunakan sebagai antikanker, antibakteri, antimalaria, antiviral dan antioksidan (Ridlo et al ., 2017).
Pada  penelitian  terdahulu  ditemukan adanya  korelasi  positif  antara  toksisitas brine shrimp dengan sitotoksisitas 9 KB ( karsinoma nasofaring  pada  manusia.  Kegunaan  BSLT sebagai  uji  pendahuluan  untuk  aktivitas antitumor  dipertegas  dengan  uji  sitotoksisitas
in vitro dan aktivitas 3ps (Sel murni leukimia p388 in  vivo) secara Blind  Comparison .  Uji BLST telah digunakan dalam 20 tahun terakhir dan  telah  menuntun  ditemukannya  efek sitotoksik dari berbagai bahan alam. Kelebihan BSLT yaitu lebih cepat, biaya yang sedikit dan sederhana (Syarie, 2010).
Pada  penelitian  yang  dilakukan  oleh Widia Rahma pada tahun 2021 tentang potensi tanaman  mangrove  sebagai  agen  anti  kanker mengatakan bahwa ekstrak tanaman mangrove memiliki potensi sebagai agen antikanker yang bekerja  dengan  menghambat  dan  membunuh sel  kanker  untuk  berkembang  sebagaimana mestinya  dalam  tubuh.  Oleh  karena  itu penelitian ini dilakukan untuk melihat potensi anti  kanker  pada  mangrove Bruguiera gymnorrhiza yang  terdapat  di  kecamatan Waisai Kota Kabupaten Raja Ampat Provinsi Papua Barat.

## METODOLOGI PENELITIAN Bentuk Penelitian
Bentuk  penelitian  ini  berupa  penelitian eksperimental  di  laboratorium  yang  dilakukan dengan  cara  menguji  senyawa  pada  ekstrak  daun mangrove ( Bruguiera  gymnorrhiza ) yang bersifat toksik terhadap larva udang Artemia salina Leach.

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Januari 2022  –  Februari  2022  di  Laboratorium  Penelitian Program  Studi  Farmasi  Fakultas  Matematika  dan Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas  Sam Ratulangi Manado.

## Prosedur Penelitian Pengambilan Sampel
Daun  mangrove  yang  sudah  diambil kemudian  dibersihkan  dan  dicuci  dengan  air mengalir.  Daun  mangrove  yang  sudah  bersih dicuci  lalu  dipotong  kecil-kecil  dengan  pisau kemudian  dikeringkan  dalam  oven  pada suhu 50˚C.  daun  mangrove  yang  sudah  kering selanjutnya  di  blender  agar  halus  (serbuk simplisia).

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI
Ekstraksi dengan Metode Maserasi Serbuk simplisia daun mangrove ditimbang  170  gr  untuk  diekstraksi  dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol 96  %.  Sampel  dimasukan  kedalam  bejana maserasi  kemudian  direndam  dengan  etanol 96%  sebanyak  1200  ml.  Wadah  maserasi disimpan selama kurang lebih 5 hari di tempat yang terlindungi dari sinar matahari langsung sambil  sesekali  di  aduk,  selanjutnya  disaring, dipisahkan  antara  ampas  dan  filtrat.  Ampas diekstraksi kembali dengan etanol 96  % yang baru  dengan  jumlah  yang  sama,  dilakukan pengulangan  sampai  hasil  rendaman  tidak terlalu  pekat.  Ekstrak  etanol  yang  di  peroleh kemudian  di  uapkan  pelarut  etanolnya menggunakan Rotary  evaporator hingga diperoleh ekstrak kental.

## Uji Fitokimia
1. Uji Alkaloid Sebanyak  1  g  ekstrak  etanol  daun mangrove ( Bruguiera
gymnorrhiza ) dimasukan ke dalam tabung reaksi, selanjutnya ditambahkan  2  mL  kloroform  serta  2,  5  mL ammonia  10%,  kemudian  ditambahkan  10 tetes  asam  sulfat  2  M  untuk  memperjelas terjadinya  pemisahan  2  fase  yang  berbeda. Bagian atas dari fase yang terbentuk diambil, setelah  itu  ditambahkan  reagen  Mayer. Keberadaan  alkaloid  dalam  sampel  ditandai dengan terjadinya endapan putih ataupun kabut putih atau kekeruhan.

## 2. Uji Flavonoid
Sebanyak  0,5  g  ekstrak  etanol  daun mangrove ( Bruguiera gymnorrhiza ) dimasukkan ke dalam
tabung reaksi,ditambahkan 5 mL etanol dan dipanaskan  selama  5  menit  dalam  tabung reaksi.  Setelah  dipanaskan,  ditambahkan  10 tetes  asam  klorida  (HCl)  pekat.  Kemudian ditambahkan  0,2  g  serbuk  magnesium  (Mg). Adanya flavonoid ditunjukkan oleh timbulnya warna merah.

## 3. Uji Tanin
Sebanyak  0,5  g  ekstrak  etanol  daun mangrove ( Bruguiera
gymnorrhiza )
dimasukkan ke dalam tabung reaksi,
selanjutnya  ditambahkan  dengan  10  mL  air panas,  kemudian  ditetesi  besi  (III)  klorida (FeCl3),  keberadaan  tannin  dalam  sampel ditandai  dengan  munculnya  warna  hijau kehitaman.

## 4. Uji Saponin
Sebanyak  0,5  g  ekstrak  etanol  daun mangrove ( Bruguiera gymnorrhiza ) ditambahkan dengan 10 mL akuades kemudian dikocok  selama  kurang  lebih  1  menit. Selanjutnya  didiamkan  selama  10  menit  dan diamati  buih  atau  busa  yang  terbentuk. Keberadaan  senyawa  saponin  dalam  sampel ditandai dengan terbentuknya buih yang stabil selama 10 menit.

## 5. Uji Steroid dan Terpenoid
Sebanyak  0,5  g  ekstrak  etanol  daun mangrove ( Bruguiera
gymnorrhiza ) ditambahkan  dengan  1  mL  kloroform (CHCl3).  Selanjutnya  campuran  dikocok. Ditambahkan  masing-masing  asetat  anhidrat (C4H6O3)  dan  asam  sulfat  (H2SO4)  pekat sebanyak  2  tetes.  Larutan  dikocok  perlahan lalu  dibiarkan  selama  beberapa  menit.  Jika mengandung steroid maka larutan memberikan warna biru atau hijau dan apabila mengandung triterpenoid  maka  larutan  memberikan  warna merah atau ungu.

## Uji Toksisitas dengan metode BSLT
1. Penyiapan Larva Artemia salina L.
Penetasan  telur Artemia  salina L. dilakukan dengan cara merendam sebanyak 50 mg telur A. salina dalam wadah yang berisi air laut  dan  aerator  dibawah  cahaya  lampu  25 watt. Telur A. salina akan menetas dan menjadi larva setelah 24 jam. Larva A. salina yang baik digunakan untuk uji BSLT yaitu yang berumur 48  jam  sebab  jika  lebih  dari  48  jam dikhawatirkan  kematian A.  salina bukan disebabkan toksisitas melainkan oleh terbatasnya persediaan makanan.

## 2. Pembuatan Konsentrasi Sampel Uji
Konsentrasi  larutan  uji  untuk  BSLT adalah 1000 μg/mL, 500 μg/mL, 250 μg/mL, 125  μg/mL,  62,5  μg/mL,  31,25  μg/mL  dan larutan kontrol. Untuk pembuatan larutan stok,

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI
ekstrak kental etanol 96% ditimbang sebanyak 1000  mg,  kemudian  dilarutkan  dengan menambahkan  air  laut  hingga  1  L,  hingga diperoleh  konsentrasi  larutan  stok  1000 μg/mL.
a. Larutan  konsentrasi  1000  μg/mL  dibuat dengan  cara  diambil  10  mL  dari  larutan stok.
b. Larutan  konsentrasi  500  μg/mL  dibuat dengan  cara  diambil  10  mL  dari  larutan stok  dan  ditambahkan  air  laut  hingga  20 mL.
c. Larutan  konsentrasi  250  μg/mL  dibuat dengan  cara  diambil  10  mL  dari  larutan 500  μg/mL  dan  ditambahkan  air  laut hingga 20 mL.
d. Larutan  konsentrasi  125  μg/mL  dibuat dengan  cara  diambil  10  mL  dari  larutan 250  μg/mL  dan  ditambahkan  air  laut hingga 20 mL.
e. Larutan  konsentrasi  62,5  μg/mL  dibuat dengan  cara  diambil  10  mL  dari  larutan 125  μg/mL  dan  ditambahkan  air  laut hingga 20 mL.
f. Larutan  konsentrasi  31,25  μg/mL  dibuat dengan  cara  diambil  10  mL  dari  larutan 62,5  μg/mL  dan  ditambahkan  air  laut hingga 20 mL, setelah itu di ambil 10 mL untuk  digunakan  agar  volume  yang digunakan  dengan  tabung  uji  lain seragam.
g. Larutan kontrol dibuat dengan mengambil 10 mL air laut saja.
3. Uji Toksisitas
Pada uji toksisitas masing-masing konsentrasi dilakukan 3 duplikasi dengan tiap kelompok  sebanyak  10  ekor  larva Artemia salina L.  Disiapkan  wadah  untuk  pengujian, untuk  masing  -  masing  konsentrasi  ekstrak sampel  membutuhkan  3  wadah  dan  3  wadah sebagai  kontrol  untuk  masing  -  masing duplikasi.  Selanjutnya  pada  tiap  konsentrasi larutan  dimasukan  10  ekor  larva A.  salina . Pengamatan dilakukan selama 24 jam terhadap kematian  larva A.  salina dimana  setiap konsentrasi  dilakukan  3  duplikasi  dan dibandingkan dengan kontrol. Kriteria standar
untuk  menilai  kematian  larva A.  salina yaitu bila  larva A.  salina tidak  menunjukkan pergerakkan selama 5 detik observasi.

## 4. Analisis data
Data  yang  dikumpulkan  adalah  data primer  yang  didapatkan  dari  jumlah  larva udang yang mati 24 jam setelah perlakuan pada tiap-tiap konsentrasi daun mangrove ( Bruguiera gymnorrhiza ). Data hasil penelitian  dari  uji  toksisitas  akan  dianalisis dengan  analisis  Microsoft  Excel  untuk menentukan  nilai  LC 50 ,  serta  disajikan  dalam bentuk tabel.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Preparasi Sampel
Daun  mangrove  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  diperoleh  dari  Kelurahan warmasen, Kecamatan Waisai Kota, Kabupaten Raja Ampat, Sulawesi Utara. Daun mangrove  yang  diperoleh  dilakukan  sortasi, pencucian  dan  pengeringan.  Sortasi  dan pencucian  pada  air  mengalir  yang  bertujuan untuk  membersihkan  dari  kotoran-kotoran yang melekat ataupun bagian dari tanaman lain yang tidak akan digunakan yang terbawa saat pengumpulan daun.
Tujuan dari pengeringan untuk menghilangkan kadar air yang terdapat dalam sampel  yang  dapat  menyebabkan  terjadinya reaksi enzimatis yang mengakibatkan rusaknya  sampel  karena  susunan  senyawa yang  terdapat  dalam  daun  tersebut  telah berubah (Ningsih dkk , 2016).
Daun mangrove yang sudah kering dihaluskan menggunakan  blender  dan  diayak.  Sampel yang  diperoleh  dari  hasil  pengayakan  berupa serbuk, bertujuan untuk memperluas permukaan  sampel  sehingga  interaksi  pelarut dengan  senyawa  yang  akan  diambil  lebih efektif dan senyawa dapat terekstrak sempurna.  Semakin  kecil  ukuran  bahan  yang digunakan  maka  semakin  luas  bidang  kontak antara bahan dengan pelarut. Kondisi ini akan menyebabkan  kecepatan  untuk  mencapai kesetimbangan  sistem  menjadi  lebih  besar. Jaringan bahan atau simplisia dapat mempengaruhi  efektivitas  ekstraksi.  Ukuran bahan  yang  sesuai  akan  menjadikan  proses

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI
ekstraksi  berlangsung  dengan  baik  dan  tidak memakan  waktu  yang  lama  (Ningsih dkk , 2016).

## Ekstraksi
Serbuk kering daun mangrove diekstraksi  dengan  metode  maserasi.  Serbuk daun mangrove yang digunakan sebesar 200 g dan  diekstraksi  dengan  pelarut  etanol  96% sebanyak  1000  mL  selama  5  hari.  Setelah  5 hari dilakukan lagi remaserasi 1 kali selama 3 hari  dengan  ditambahkan  pelarut  etanol  96% mencapai 600 mL.
Pemilihan metode maserasi dikarenakan  pelaksanaanya  lebih  mudah  dan tidak  memerlukan  peralatan  yang  spesifik. Selain  itu,  metode  maserasi  dapat  digunakan untuk jenis senyawa yang tahan panas maupun yang  tidak  tahan  panas  dan  dapat  digunakan
untuk jenis senyawa yang belum diidentifikasi (Herawati et  al .,  2012).  Proses  ini  sangat menguntungkan dalam isolasi senyawa bahan alam,  karena  selama  perendaman  terjadi peristiwa  plasmolisis  yang  menyebabkan terjadi pemecahan dinding sel akibat perbedaan  tekanan  didalam  dan  diluar  sel, sehingga senyawa yang ada dalam sitoplasma akan  terlarut  dan  proses  ekstraksi  senyawa akan  sempurna  karena  dapat  diatur  lama perendaman  yang  diinginkan  (Ningsih et  al ., 2016).
Hasil ekstraksi daun mangrove diperoleh  rendemen  ekstrak  kental  sebanyak 38,4  g.  Persen  rendemen  ekstrak  daun mangrove  didapat  dengan  membagi  jumlah rendemen  ekstrak  dengan  berat  serbuk sebelum  ekstraksi  kemudian  dikalikan  100%. Persen rendemen yang didapat yaitu 19%.

## Uji Fitokimia
Tabel 1. Hasil Uji Fitokimia dari Ekstrak Etanol Daun Mangrove ( Bruguiera gymnorrhiza )
Senyawa Metabolit Penambahan Perubahan Positif Perubahan Warna Hasil Pengujian Alkaloid 2 mL kloroform + 10 tetes asam sulfat Pereaksi Meyer: endapan putih Pereaksi Dragendorf: merah jingga Pereaksi Wagner: coklat merah jingga + Flavonoid 10 tetes asam klorida pekat + 0,2 g serbuk magnesium Warna merah bata Warna merah bata ++ Tanin 10 mL air panas + 5 tetes besi (III) klorida Warna hijau kehitaman Warna hijau kehitaman + Saponin 10 mL akuades Terbentuknya buih stabil selama 10 menit Terbentuknya buih stabil selama 10 menit + Steroid dan Triterpenoid 1 mL kloroform + 2 tetes asetat anhidrat + 2 tetes asam sulfat pekat Steroid: warna biru atau hijau Triterpenoid: warna merah atau ungu Warna kecoklatan - Steroid - Triterpenoid
Ketrangan hasil pengujian : hasil  negative ditandai dengan (-), hasil positif ditandai dengan (+), dan hasil positif yang diduga mempunyai jumlah yang besar ditandai dengan (++).

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI
Pengujian  fitokimia  ini  menunjukkan bahwa ekstrak daun mangrove positif memiliki senyawa  metabolit  sekunder  yakni  alkaloid, flavonoid, tanin dan saponin. Sedangkan untuk metabolit  sekunder  triterpenoid  dan  steroid menunjukkan hasil negatif. Penelitian sebelumnya  yang  dilakukan  oleh  Jayanti  dkk pada    tahun  2021  menjelaskan  bahwa tumbuhan  mangrove Bruguiera  gymnorrhiza mengandung  Alkaloid,  Flavanoid,  Saponin, Steroid,  Tanin  dan  Triterpenoid.  Keberadaan metabolit  sekunder  tersebut  menunjukkan bahwa  daun  mangrove  mempunyai  efek farmakologis  dan  berpotensi  untuk  dijadikan sebagai bahan obat-obatan.
Alkaloid termasuk dalam golongan antikanker.  Mekanisme  dari  alkaloid  vinca yaitu menghambat proliferasi sel dengan cara mempengaruhi dinamika mikrotubulus selama mitosis, sehingga menyebabkan proses mitosis terhambat dan menyebabkan terjadinya apoptosis (Sisodiya, 2013). Menurut Nogrady (1992),  mekanisme  dari  alkaloid  vinca  yaitu menghentikan  pembelahan  sel  pada  tahap metaphase sehingga sel kanker dapat dihambat pertumbuhannya. Alkaloid memiliki mekanisme  sitotoksik  dengan  cara  berikatan dengan  tubulin  (protei  nyang  menyusun mikrotubulus)  sehingga  polimerisasi  protein menjadi mikrotubulus terhambat dan menyebabkan  pembentukan  benang  spindle terhambat.  Hal  tersebut  menyebabkan  siklus terhenti  pada  tahap  metaphase  sehingga  tidak terjadi pembelahan sel dan memicu terjadinya apoptosis (Bertomi, 2011).
Flavanoid  mempunyai  bebrapa  sifat biologis seperti Manfaat flavonoid antara lain adalah untuk melindungi struktur sel, meningkatkan  efektivitas  vitamin  C,  anti- inflamasi,  mencegah  keropos  tulang  dan sebagai  antibiotik.  Dalam  tubuh  manusia flavonoid  berfungsi  sebagai  antioksidan sehingga  sangat  baik  untuk  pencegahan kanker.  Golongan  flavonoid  yang  memiliki aktivitas antioksidan meliputi flavon, flavonol, isoflavon dan flavanon (Harjito, 2015).
Tanin  adalah  salah  satu  senyawa  aktif metabolit sekunder yang mempunyai beberapa
khasiat  seperti  sebagai  astringen,  anti  diare, antibakteri dan antioksidan (ummah, 2010).
Saponin  memiliki  berbagai  macam  sifat biologis seperti kemampuan hemolitik, aktivitas  antibakteri,  antimolluska,    aktivitas sitotoksik  atau  antikanker  dan  anti  protozoa (Yanuartono et al ., 2017).

## Pengujian Toksisitas dengan Metode BSLT
Pengujian  toksisitas  dilakukan  dengan metode  BSLT  ( Brine  Shrimp  Lethality  Test ) menggunakan  larva Artemia  salina L. Kemampuan toksisitas dari ekstrak etanol daun mangrove dalam mematikan larva udang yang telah  diberikan  perlakuan  dengan  konsentrasi 1000,  500,  250,  125,  62,5  dan  31,25  μg/mL beserta  larutan  kontrol  yang  hanya  berisi  air laut dapat dilihat dalam Tabel 2. Penambahan larutan  kontrol  dilakukan  untuk  mengetahui pengaruh air laut maupun faktor lain terhadap kematian larva, sehingga kematian larva dapat dipastikan  karena  efek  dari  ekstrak  yang ditambahkan.
Air  laut  yang  digunakan  merupakan  air laut  sintetik  yang  dibuat  dengan  cara melarutkan  garam  non  iodium  sebanyak 20  g dalam  1000  mL  akuades.  Dapat  diketahui bahwa  masing-masing  konsentrasi  ekstrak daun mangrove yang digunakan memperlihatkan  pengaruh  yang  berbeda. Jumlah  larva  tiap  uji  adalah  10  ekor  dan  tiap konsentrasi dilakukan hingga 3 kali duplikasi. Jumlah  total  larva  udang A.  salina yang digunakan adalah 210 ekor larva.
Larva  yang  digunakan  adalah  larva  yang berumur 48 jam dan aktif bergerak. Pada fase ini  disebut  dengan  fase  nauplii  atau  telur menjadi larva, dimana fase ini merupakan fase paling aktif membelah secara mitosis sehingga identik  dengan  sel  kanker.  Nauplii  yang berumur  dibawah  48  jam  mempunyai  epitel saluran  pencernaan  yang  belum  dapat berkontak  dengan  medium  eksternal  dan nauplii  ini  hanya  hidup  dari  kantung  kuning telurnya  sehingga  dikhawatirkan  kematian larva tidak berhubungan dengan efek toksisitas dari  ekstrak  etanol  sampel  (Panggabean, 1984).

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI
Tabel 2. Presentase Jumlah Kematian Larva Udang
Pengujian Larutan Kontrol Jumlah Kematian Setiap Konsentrasi 31,25 μg/mL 62,5 μg/mL 125 μg/mL  250 μg/mL  500 μg/mL 1000 μg/mL 1 0 7 7 8 9 10 10 2 0 7 8 9 9 10 10 3 0 6 7 7 9 9 10 Total Kematian Larva 0 20 22 24 27 29 30 Rata-rata 0 6,6 7,3 8 9 9,6 10 Presentase Kematian 0% 66% 73% 80% 90% 96% 100%
Berdasarkan Tabel 2, dapat dilihat bahwa semakin  tinggi  konsentrasi  maka  semakin besar  juga  tingkat  kematian  larva  udang, dimana  diperoleh  tingkat  kematian  tertinggi pada  konsentrasi  1000  μg/mL  dan  kematian terendah pada konsentrasi 31,25 μg/mL.
Mekanisme kematian larva udang berhubungan  dengan  senyawa  metabolit sekunder  ekstrak  yang  bersifat  toksik  yang dapat  menghambat  daya  makan  larva  udang. Ketika  senyawa  tersebut  tertelan  oleh  larva, alat  pencernaanya akan terganggu.  Selain  itu, senyawa ini menghambat reseptor perasa pada daerah  mulut  larva  udang.  Sehingga  larva udang tidak bisa makan, sehingga menyebabkan larva udang mati (Meyer et al ., 1982).
Menurut  Meyer et  al .,  (1982),  ekstrak dapat disebut bersifat toksik apabila memiliki nilai  LC 50 dengan  konsentrasi  kurang  dari 1000  μg/mL,  semakin  kecil  nilai  LC 50 menunjukkan  bahwa  senyawa  metabolit sekunder  yang  terkandung  dalam  ekstrak tersebut semakin kuat.
Gambar 9 . Kurva Regresi Linear
Tabel 3. Perhitungan nilai LC 50 menggunakan Excel.
Nilai x yang didapatkan kemudian diolah untuk  mendapatkan  nilai  LC 50 menggunakan formula  “=POWER(10,nilai  x)”.  Nilai  LC 50 yang didapatkan yaitu 24,1 μg/mL
Berdasarkan perhitungan LC 50 meggunakan excel  didapatkan  hasil  24,1 μg/mL.  hasil  ini  masuk  kedalam  kategori hightly  toksik  dengan  kisaran  nilai  LC 50 (10 μg/mL-30  μg/mL).  Pada  penelitian  yang dilakukan  oleh  Anamardliyah,  Undri  Rastuti dan  Santy  Nurhandayani  pada  tahun  2021
menunjukan  nilai  LC 50 dari  daun  mangrove Bruguiera gymnorrhiza sebesar 34,109 μg/mL.
Flavonoid,  alkaloid,  dan  saponin  yang dapat  berperan  sebagai  antioksidan  dan antikanker.  Antioksidan  merupakan  senyawa yang  dapat  menghambat  reaksi  radikal  bebas didalam tubuh. Flavonoid dan alkaloid bekerja sebagai  antioksidan  yaitu  dengan  cara
y = 1.4673x + 2.9723 R² = 0.9173 0 2 4 6 8 10 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 Log Log P robi t Perhitungan LC 50 y = 5 a = 1,4673 b = 2,9723
𝑦 = 𝑎𝑥  + 𝑏
𝑥 = 𝑦 − 𝑏 𝑎 𝑥 = 5 − 2,9723 14673 𝑥 = 1.381925987 1 2 3 Rata-rata 1000 3.0 10 10 10 10 10 100 7.73 500 2.7 10 10 10 9 9.6 96 6.75 250 2.4 10 9 9 9 9 90 6.28 125 2.1 10 8 9 7 8 80 5.84 62.5 1.8 10 7 8 7 7.3 73 5.61 31.25 1.5 10 7 7 6 6.6 66 5.41 LC50 = 24.09494762 Jumlah Larva mati Persen Kematian (%)Nilai probit
Konsentrasi Uji μg/mL Log Konsentrasi Jumlah Larva Uji

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI
menyumbangkan  atom  hydrogen,  sehingga radikal  DPPH  dapat  tereduksi.  Senyawa saponin  juga  mempunyai  efek  antioksidan dengan  membentuk  spesies  reaktif  seperti hidroperoksida  dan  superoksida  sebagai antioksidan sehingga menghambat pembentukan lipid peroksida. Senyawa Flavonoid dan alkaloid juga dikatakan sebagai antikanker  yaitu  dengan  cara  menghambatan mekanisme pembelahan serta pengaktifan jalur apoptosis sel kanker ( Desi et al ., 2020). Tanin dapat digunakan sebagai antikanker. Aktifitas antikanker suatu senyawa tanin terjadi melalui mekanisme  penghambatan  kerja  enzim  sel, pencegahan proses mutagenesis sel yang dapat menimbulkan  kanker,  dan  pengaktifan  sel makrofag  kanker.  Mekanisme  kerja  tanin  ini menggunakan  inhibitor  histone  deacetlyase (HDAC) (Intan,2016).

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan sebagai berikut: 1. Ekstrak  etanol  96%  daun  mangrove ( Bruguiera gymnorrhiza ) mengandung senyawa metabolit sekunder yakni alkaloid, flavonoid,  tanin  dan  saponin  yang  dapat memberikan aktivitas farmakologis.
Senyawa yang berpotensi sebagai antikanker yaitu Alkaloid, Flavanoid, Tanin dan saponin.
2. Ekstrak  etanol  96%  daun  mangrove ( Bruguiera  gymnorrhiza )  memiliki  sifat toksik  dengan  nilai  LC 50 sebesar  24,1 μg/mL. sangat toksik terhadap larva udang Artemia salina sehingga dapat dikembangkan sebagai tanaman antikanker.

## SARAN
Dengan  hasil  penelitian  yang  dilakukan ini, perlu dilakukan penelitian yang lebih lanjut mengenai  daun  mangrove,  karena  daun mangrove memiliki berbagai senyawa metabolit sekunder yang bermanfaat dan juga ekstrak  etanol  daun  mangrove  bersifat  toksik yang  sangat  berpotensi  sebagai  bahan  obat antikanker.  Penelitian  selanjutnya  disarankan untuk  menggunakan  metode  yang  lebih
spesifik  lagi  seperti Microtetrazolium (MTT) atau Cell Line .

## DAFTAR PUSTAKA
Arum  Syarie,  S.  2010.  “Uji  Toksisitas  daun Gracinia porrecta Wall var. Schizogyna Boerl  dengan  Metode  Brine  Shrimp Letality  Test   (BSLT)  dan  Identifikasi Golongan Senyawa Kimia dari Ekstrak dan  yang  Aktif”.  Skripsi.  Universitas Indonesia.
Abdullah,  S.  S.,  Antasionasti,  I.,  Rundengan, G., Abdullah, R. P. I. (2022). Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Biji  Dan Daging Buah Pala ( Myristica fragrans ) Dengan  Metode  DPPH. Chemistry Progress, 15(2), 70–75.
Badan Pengawas Obat Dan Makanan Republik Indonesia.  2020.  Potensi  Obat  Herbal Indonesia. https://www.pom.go.id/new/view/mor e/pers/531/Potensi-Obat-Herbal- Indonesia.html
Bertomi  R.  P.,  2011,  Uji  Toksisitas  Akut Ekstrak Kulit Batang Pulasari (Alyxiae cortex)  dengan  Metode  Brine  Shrimp Lethality Test (BST), [Skripsi].
Program Studi Farmasi Fakultas Farmasi  Universitas  Sanata  Dharma Yogyakarta.
Desi, E.Gusingi, Wilmar, M. Hariyadi.,Nerni,
O.  Potalangi.  2020.  Studi  Aktivitas Antioksidan Dan Antikanker Payudara (MCF-7)  Ekstrak  Etanol  Daun  Benalu Langsat Dendrophthoe pentandra. [Skripsi]  Fakultas  Matematika  dan Ilmu Pengetahuan Alam UKIT, Tomohon. Hohakay,  Jio.  2019.  Pengaruh  Metode Pengeringan Terhadap Kadar Flavanoid Daun Sesewanua (Clerodendron squamatum Vahl.).
[Skripsi].  FMIPA  Universitas  SAM Ratulangi, Manado
Intan,  A,  Firdaus.  2016.  Identifikasi  Tanin Pada  Fraksi  Air  Tanaman  Rumput Bambu  (Lophatherum  gracile  B.)  Dan

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI
Uji  Aktivitas  Antikanker  Isolat  Tanin
Terhadap Sel Kanker Payudara T47D
Ningsih,  D.R.,  Zusfahair,  D.  Kartika.  (2016).
Identifikasi Senyawa Metabolit Sekunder  Serta  Uji  Aktivitas  Ekstrak Daun  Sirsak  Sebagai  Antibakteri.
Molekul. 11 (1) : 101-111.
Panggabean, M. G. L. 1984. Teknik Penetasan dan Pemanenan Artemia salina. Jurnal Oseana, 9 (2) : 57-65
Ridlo,  A.,  Pramesti,  R.,  Supriyantini,  E.,  & Soenardjo, N. 2017. Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Daun  Mangrove Rhizopora Mucronata. Buletin Oseanografi Marina. oktober, 6 (2) : 1–
8.
Ummah, M.K. 2010. Ekstraksi Dan Pengujian
Aktivitas  Antibakteri  Senyawa  Tanin Pada Daun Belimbing Wuluh (Averrhoa  bilimbi  L.)  (kajian  variasi pelarut)  [disertasi].  Universitas  Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim,
Malang. Yanuartono, H. Purnamaningsih. A. Nururrozi. Indarjulianto. 2017. Saponin  :  Dampak  Terhadap  Ternak.
Jurnal Peternakan Sriwijaya.
Yuli  Dkk.  2011.  Eksplorasi,  Identifikasi  dan Uji  Sitotoksik  Tanaman  Obat  Serta Pengembangan  Formolanya  Sebagai
Antikanker berbasis Etnobotani Medis.