Jurnal Pharmascience, Vol. 8, No. 2, Oktober 2021, hal: 90-101 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 https://ppjp.ulm.ac.id/journal/index.php/pharmascience Research Article

## Uji Aktivitas Antioksidan dan Antitirosinase Fraksi

## n -Butanol Daun Sungkai ( Peronema canescens
Jack.) Secara Kualitatif Menggunakan Kromatografi Lapis Tipis
Fadlilaturrahmah 1 *, Aditya Maulana Perdana Putra 2 , Titin Nor 2
1 Program Studi D3 Analisis Farmasi dan Makanan, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Lambung Mangkurat, Banjarbaru, Kalimantan Selatan,
Indonesia
2 Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Lambung Mangkurat, Banjarbaru, Kalimantan Selatan, Indonesia *Email: fadlilaturrahmah@ulm.ac.id

## ABSTRAK
Kerusakan  oksidatif  dalam  tubuh  manusia  dapat  disebabkan  oleh  radikal bebas, sehingga menimbulkan berbagai permasalahan. Daun P. canescens memiliki kandungan  senyawa  fenolik,  tanin,  alkaloid,  steroid,  saponin  dan  flavonoid  yang potensial  sebagai  antioksidan.  Tujuan  penelitian  ini  yaitu  untuk  melakukan  uji aktivitas  antioksidan  dan  antitirosinase  fraksi  n-butanol  daun  sungkai  secara kualittaif  menggunakan  kromatografi  lapis  tipis.  Metode  yang  digunakan  yaitu preparasi  sampel  dengan  pembuatan  simplisia  yang  kemudian  diekstraksi  secara maserasi  menggunakan  etanol  96%.  Hasil  ekstrak  kental  kemudian  difraksinasi bertingkat  dengan  pelarut n- heksan,  etil  asetat,  dan n- butanol.  Selanjutnya dilakukan  skrining  fitokimia,  uji  aktivitas  antioksidan,  dan  antitirosinase  secara kualitatif  menggunakan  kromatografi  lapis  tipis.  Hasil  rendemen  ekstrak  etanol daun P.  canescens yaitu  sebesar  7,28%  sedangkan  rendemen  fraksi  yaitu  24,8%. Skrining  fitokimia  ekstrak  etanol P.  canescens  me ngandung  alkaloid,  flavonoid, terpenoid,  steroid,  tanin,  saponin,  dan  fenol.  Kesimpulan  yang  didapatkan  dari penelitian ini yaitu fraksi n -butanol daun P. canscens berpotensi memiliki aktivitas antioksidan  yang  ditandai  adanya  noda  kuning  pucat  setelah  penyemprotan dengan  reagen  DPPH,  serta  berpotensi  memiliki  aktivitas  antitirosinase  secara kualitatif yang ditandai dengan adanya bercak putih pada plat KLT.
Kata Kunci: DPPH, L-DOPA, Asam askorbat, Enzim

## ABSTRACT
Oxidative  damage  in  the  human  body  can  be  caused  by  free  radicals,  causing various  problems.  P.  canescens  leaves  contain  phenolic  compounds,  tannins,  alkaloids, steroids, saponins  and flavonoids  that  have potential  as antioxidants. The purpose of this study  was  to  test  the  antioxidant  and  antityrosinase  activity  of  the  n-butanol  fraction  of sungkai leaves qualitatively using thin layer chromatography. The method used is sample preparation by making simplicia which is then extracted by maceration using 96% ethanol. The  viscous  extract  was  then  fractionated  with n-hexane,  ethyl  acetate,  and  n-butanol  as solvents.  Furthermore,  phytochemical  screening,  antioxidant  activity,  and  antityrosinase tests  were  carried  out  qualitatively  using  thin  layer  chromatography.  The  yield  of  P. canescens  leaf  ethanol  extract  was  7.28%,  while  the  fraction  yield  was  24.8%. Phytochemical screening of P. canescens ethanol extract containing alkaloids, flavonoids, terpenoids,  steroids,  tannins,  saponins,  and  phenols.  The  conclusion  obtained  from  this study  is  that  the  n-butanol  fraction  of  P.  canscens  leaves  has  the  potential  to  have antioxidant  activity  which  is  indicated  by  a  pale  yellow  stain  after  spraying  with  DPPH reagent, and has the potential to have qualitative antityrosinase activity which is indicated by the presence of white spots on the TLC plate.
Keywords: DPPH, L-DOPA, Ascorbic Acid, Enzymes

## I. PENDAHULUAN
Kerusakan  oksidatif  dalam  tubuh manusia  dapat  disebabkan  oleh  radikal bebas,  sehingga  menimbulkan  berbagai permasalahan  (Winarsi,  2007).  Penyakit yang  diakibatkan  oleh  radikal  bebas diantaranya penyakit peradangan, penuaan dini,  dan  degeneratif  (Nurani,  2013). Radikal bebas dapat berasal dari lingkungan  luar,  seperti  zat  polutan  dan makanan  berpengawet  (Nurani,  2013). Kerusakan  oksidatif  yang  diakibatkan reaksi  oksidasi  dapat  terjadi  setiap  saat seperti  saat  bernapas  dan  selama  proses metabolisme  dalam  tubuh  (Yuslianti, 2018).  Hal  tersebut  dapat  diatasi  dengan pemberian asupan makanan yang mengandung  antioksidan  alami  yang
berasal  dari  tumbuhan  (Marjoni et  al ., 2015).
Tumbuhan  juga  memiliki  banyak senyawa  yang  terkandung  yang  dapat digunakan untuk menangkal radikal bebas, sehingga tumbuhan  yang memiliki khasiat dapat digunakan sebagai bahan baku untuk pembuatan obat-obatan. Salah satu tumbuhan  yang  dapat  dijadikan  obat tradisional  adalah  tumbuhan Peronema canescens Jack, dari suku Verbenaceae. P. canescens terkenal  dengan  nama  sungkai.
Penelitian  sebelumya  yang  terdahulu  pada tanaman  sungkai  sudah  banyak  dilakukan pada  uji  antioksidan,  salah  satunya  uji aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol P. canescens pada penelitian Meyvina (2019) didapatkan  hasil  IC 50 44,933  ppm.  Hasil ini menunjukkan bahwa konsentrasi
44,933  ppm  ekstrak  etanol  daun P. canescens dapat menghambat 50% aktivitas  radikal  bebas  DPPH.  Manfaat lain dari P. canescens sebagai antiplasmodium dan antibakteri serta telah diuji  farmakognostik  (Suwandi,  2009; Kusriani et al ., 2011).
Daun P. canescens memiliki kandungan senyawa fenolik, tannin, alkaloid,  steroid,  saponin  dan  flavonoid (Kusriani et al ., 2015). Flavonoid termasuk  senyawa  fenolik  alam  yang potensial  sebagai  antioksidan.  Flavonoid dalam  tubuh  manusia  berfungsi  sebagai antioksidan  sehingga  sangat  baik  untuk mencegah kanker (Hasbi, 2012).
Flavonoid  pada  tanaman  sungkai  dapat mengikat  radikal  bebas  dan  oksigen  aktif lainnya  dengan  cara  menghambat  reaksi oksidasi yang terjadi dengan mendonorkan atom  hidrogen  (Puspitasari et  al .,  2016;
Formagio et al. , 2014).
Salah  satu  sumber  radikal  bebas yakni  sinar  ultra  violet.  Melanin  memiliki peran yang sangat penting untuk melindungi kulit terhadap sinar ultra violet (UV).  Kulit  terlihat  berwarna  lebih  gelap biasanya  dikarenakan  produksi  melanin yang  berlebihan  (Lin  &  Fisher,  2007). Cara  yang paling banyak digunakan untuk proses  mengurangi  munculnya  bercak gelap muncul pada kulit ialah penghambatan enzim tirosinase (Seo et al ., 2007).
Salah  satu  metode  yang  digunakan untuk  melihat  ada  atau  tidaknya  aktivitas antioksidan  dan  antitirosinase  adalah dengan  menggunakan  kromatografi  lapis tipis  (KLT).  KLT  dapat  dipakai  sebagai metode  untuk  mencapai  hasil  kualitatif, kuantitatif  dan  preparatif  (Putri,  2017). Keuntungan  dari  metode  ini  adalah  dapat melakukan analisis beberapa sampel secara simultan dengan menggunakan fase gerak  dalam  jumlah  kecil  sehingga  lebih hemat waktu dan biaya analisis serta lebih ramah  lingkungan.  Teknik  pemisahan  dari KLT  lebih  sederhana  dari  kromatografi lainnya  dan  dengan  peralatan  yang minimal  (Wulandari,  2011).  Metode  KLT dapat  digunakan  untuk  menguji  aktivitas antioksidan dan antitirosinase karena KLT merupakan  metode  paling  sederhana  yang dapat  dilakukan  untuk  menguji  kualitatif aktivitas  tertentu  pada  suatu  sampel sebelum  dilanjutkan  dengan  metode  yang lebih kompleks.

## II. METODE

## A. Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia, Laboratorium  Kimia  Farmasi,  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam, Universitas  Lambung  Mangkurat,  Desa Sungkai  Kabupaten  Banjar.  Penelitian  ini dilakukan  dalam  rentang  waktu  3  bulan dari bulan Juli hingga September 2020.

## B. Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  blender  philips, bejana maserator, batang pengaduk, kertas saring  (W hatman) nomor  1, rotary evaporator, waterbath (Memmert) , cawan penguap,  corong Buchner  ( Iwaki) , tabung reaksi (Pyrex),  aluminium  foil,  lempeng KLT,  pipa  kapiler,  chamber,  labu  ukur (Pyrex) 5; 10; 25 mL, pH meter, hot plate, neraca  analitik, oven ,  rak  tabung,  sendok besi,  propipet,  pipet  ukur  (Iwaki),  gelas ukur, serta lampu UV 254 dan 366 nm.
Bahan  yang  digunakan  adalah daun P.  canescens Jack.,  alumunium  foil, etanol  96%,  aquades,  n-heksana,  etil asetat, reagen mayer dan dragendroff (p.a), HCl  pekat  (teknis),  serbuk  magnesium (teknis),  larutan  gelatin  1%  (teknis), reagen  Liberman-Burchard  (p.a),  FeCl 3
1%  (teknis),  DPPH  ( Aldrich ),  Metanol
p.a.,  enzim  tirosinase,  L-DOPA  (Sigma, St.  Louis,  MO,  USA),  dapar  fosfat,  OMC (Octyl-p-Methoxycinnamate), asam askorbat (Merck).

## C. Pengumpulan dan Pengolahan

## Sampel
Sampel  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  bagian  daun  dari tanaman P.  canescens didapatkan  dari Desa  Sungkai  Kalimantan  Selatan  pada tanggal  6  Januari  2020.  Daun  tanaman P. canescens dikumpulkan,  disortasi  basah
untuk memisahkan kotoran yang menempel pada  daun,  membuang  bagian daun  yang  rusak  serta  menghilangkan bahan asing lainnya. Pengeringan tanaman menggunakan  metode  sinar  matahari dengan  ditutupi  kain  hitam  mampu menjaga  kadar  flavonoid  yang  terdapat pada  daun  agar  tidak  rusak  (Utomo et  al ., 2009).  Benda-benda  asing  yang  masih berada  pada  sampel  setelah  pengeringan dipisahkan  (Kartono,  2008).  Daun  kering yang  sudah  didapat  kemudian  diblender hingga menjadi serbuk.

## D. Ekstraksi
Ekstraksi  dilakukan  dengan  cara merendam  sebanyak  1000  gram  serbuk kasar  dengan  ukuran  ayakan  No.25  daun P.  canescens dan  menambahkan  pelarut etanol  96%  kemudian  didiamkan  selama 24  jam  pada  suhu  kamar.  Ekstraksi dilakukan  berulang  kali  (1  kali  maserasi dan  2  kali  remaserasi)  sambil  dilakukan pengadukan untuk mengoptimalkan proses penyarian  sehingga  metabolit  sekunder yang terkandung dalam buhan P. canescens dapat terekstraksi secara maksimal  (Wikanta et  al., 2012).  Setelah proses perendaman didapatkan ekstrak cair daun P. canescens berwarna hijau. Ekstrak cair  ini  kemudian  disaring  dengan  kertas saring  yang  bertujuan  untuk  memisahkan serbuk  sampel  atau  pengotor  yang  dapat mengganggu  proses  selanjutnya.  Ekstrak
cair  selanjutnya  diuapkan  menggunakan waterbath  dengan  suhu  70 o C,  kemudian dihitung renemennya. Rendemen menggunakan satuan persen (%).
Rendemen menyatakan presentase banyaknya  zat  yang  didapat  dari  proses ektraksi  dengan  cara  membandingkan antara berat ekstrak yang diperoleh dengan berat simplisia awal yang digunakan untuk ekstraksi.

## E. Fraksinasi
Sejumlah  ±  200  gram  ekstrak etanol  daun P.  canescens yang  diperoleh dilakukan fraksinasi cair-cair menggunakan  pelarut  dengan  kepolaran bertingkat  yaitu n- heksan,  etil  asetat,  dan n- butanol.  Ekstrak  kental  disuspensikan dalam  aquadest,  ekstrak  diaduk  hingga homogen  dan  dimasukkan  ke  dalam corong  pisah.  Partisi  dengan  pelarut n- heksan  dan  air  (1:1)  larutan  dikocok hingga  tercampur  dan  didiamkan  selama 10-15  menit  hingga  terdapat  dua  lapisan (air pada lapisan bawah dan n -heksan pada lapisan atas). Kedua lapisan yang terbentuk  kemudian  dipisahkan.  Proses penambahan n -heksan pada lapisan bawah (air)  yang  sudah  dipisahkan  diulangi hingga didapatkan fraksi n -heksan bening.
Lapisan  atas  ( n -heksan)  yang  terbentuk selama beberapa kali fraksinasi digabungkan dan disebut sebagai  fraksi n -
heksan. Fraksi n -heksan dipisahkan kemudian  fraksi  air  dilakukan  fraksinasi menggunakan  pelarut  etil  asetat  dan  air (1:1)  dengan  perlakuan  yang  sama  seperti fraksinasi  sebelumnya  hingga  didapatkan hasil  fraksi  etil  asetat  bening.  Fraksi  etil asetat  dipisahkan,  kemudian  fraksi  air dilakukan  fraksinasi  menggunakan  pelarut n- butanol  dan  air  (1:1)  larutan  dikocok hingga  tercampur  dan  dibiarkan  hingga terbentuk 2 lapisan.
Proses  fraksinasi  diulangi  hingga didapatkan fraksi n -butanol bening. Fraksi n -butanol dipisahkan, residu yang diperoleh  berupa  fraksi  air.  Fraksi n- heksan,  etil  asetat  dan n- butanol  yang diperoleh diuapkan dengan vacuum rotary evaporator pada suhu 50 o C hingga terjadi penyusutan volume. Kemudian dipekatkan dengan waterbath sampai  diperoleh  bobot konstan, selanjutnya dihitung % rendemennya  yang  dihitung  berat  ekstrak yang digunakan (Rochmah, 2018).

## F. Skrining Fitokimia
Uji  alkaloid  dilakukan  dengan memasukan 2 mL sampel ke dalam tabung reaksi  dan  ditambahkan  2  mL  HCl. Larutan  dibagi  menjadi  2  tabung  reaksi, tabung pertama ditambahkan reagen Dragendroff  3  tetes,  dan  tabung  kedua ditambahkan  reagen  Mayer  3  tetes. Terbentuknya endapan jingga pada tabung
Mayer dan endapan putih hingga kekuningan  pada  tabung  Dragendroff menunjukkan
adanya alkaloid (Simaremare, 2014).
Uji  flavonoid  dilakukan  dengan memanaskan 2 mL sampel, kemudian ditambahkan  2  tetes  HCl.  Selanjutnya ditambahkan serbuk magnesium secukupnya.  Terbentuk  larutan  berwarna merah  menunjukkan  adanya  flavonoid (Simaremare, 2014).
Uji  saponin  dilakukan  dengan menambahkan 5 mL  air  panas  ke dalam 2 mL sampel, lalu didinginkan, dan dikocok kuat selama 10 detik. Terbentuk buih yang mantap  selama  tidak  kurang  10  menit setinggi  1-10  cm  menandakan  adanya saponin (Simaremare, 2014).
Uji tanin dilakukan dengan menambahkan  1  mL  larutan  FeCl 3 ke dalam 1 mL sampel. Terbentuk warna biru tua,  biru  kehitaman  atau  hitam  kehijauan menunjukkan adanya senyawa tanin (Simaremare, 2014).
Uji fenol dilakukan dengan menambahkan 1 mL aquadest dan 10 tetes FeCl3  5%  ke  dalam  sampel.  Hasil  positif ditandai  dengan  adanya  perubahan  warna menjadi  hijau,  merah,  ungu,  biru,  atau hitam pekat (Wijaya et al ., 2014).
Uji  terpenoid  dilakukan  dengan sebanyak  0,1  gram  sampel  ditambahkan  5 mL etanol. Campuran ditambahkan pereaksi  Liebermann  Burchard.  Hasil
positif  ditandai  dengan  sampel  berubah warna membentuk cincin coklat (Harborne, 1984).
G. Analisis Kualitatif Aktivitas

## Antioksidan  Dengan  Kromatografi Lapis Tipis
Sampel  dibuat  kosentrasi  5000 ppm.  Sampel  kemudian  ditotolkan  pada plat  KLT.  Pada  plat  KLT  diberi  tanda batas  atas  dan  batas  bawah.  Pada  batas bawah diberikan jarak antara sampel 1 cm dan  pada  jarak  atas  0,5  cm.  sampel  fraksi n- butanol daun P.canescens Jack. ditotolkan  pada  plat  KLT  menggunakan pipa  kapiler.  Proses  elusi  dilakukan dengan  cara  plat  KLT  dimasukkan  dalam chamber  yang  telah  berisi  eluen  yakni metanol  :  kloroform  (9:1)  dan  telah dijenuhkan. Eluen dibiarkan terelusi hingga  mencapai  tanda  batas  plat  yang telah ditandai sebelumnya. Setelah selesai, plat  KLT  dikeluarkan  dari  chamber  dan diamati  dibawah  lampu  UV  366  dan  254 nm.  Setelah  itu,  plat  KLT  disemprotkan dengan larutan DPPH 0,01 %. Bercak pada plat KLT yang memiliki aktivitas antioksidan  berubah  menjadi  warna  putih kekuningan  denga  latar  belakang  warna ungu (Mahmuda, 2018).

## H. Uji Aktivitas Penghambatan Tirosinase  Fraksi  n-Butanol  Daun P.
Canescens
Asam  askorbat  dibuat  dengan konsentrasi  4  mM  menggunakan  pelarut metanol. Sampel ditotolkan pada plat KLT (batas atas 0,5 cm dan batas bawah 1 cm). Plat kemudian dimasukkan kedalam chamber  yang  telah  berisi  fase  gerak berupa  metanol  :  kloroform  (9:1)  yang telah dijenuhkan sebelumnya. Plat kemudian  dikeluarkan  dari  chamber  jika sudah  mencapai  batas  atas  dan  keringkan plat  pada  suhu  kamar.  Larutan  enzim tirosinase dan L-DOPA kemudian disemprotkan  kepermukaan  plat.  Amati plat  KLT  dengan  menggunakan  sinar  UV, bercak yang memiliki aktivitas penghambatan  tirosinase  akan  berwana putih (Whangthong et al ., 2007).
Sampel dibuat menjadi satu konsentrasi yaitu 5000 ppm lalu ditotolkan pada plat KLT. Plat kemudian dimasukkan kedalam  chamber  yang  telah  berisi  fase gerak  berupa  metanol  :  kloroform  (9:1) yang  telah  dijenuhkan  sebelumnya.  Plat dikeluarkan  dari  chamber  jika  sudah mencapai  batas  atas  dan  keringkan  plat pada suhu kamar. Larutan enzim tirosinase dan  L-DOPA  disemprotkan  kepermukaan plat.  Plat  KLT  yang  telah  siap  kemudian diamati  dengan  menggunakan  sinar  UV, bercak yang memiliki aktivitas penghambatan  tirosinase  akan  berwana putih (Whangthong et al ., 2007).

## I. Analisis Data
Bercak pada uji aktivitas antioksidan  dan  penghambatan  tirosinase secara  KLT  dianalisis.  Pada  bercak  yang telah  didapat  kemudian  difoto,  lalu dianalisis.  Hasil  positif  memiliki  aktivitas antioksidan ditandai dengan adanya bercak berwarna  kuning  pada  plat  KLT.  Positif memiliki aktivitas penghambatan tirosinase  ditandai  dengan  adanya  bintik berwarna  putih  kekuningan  dan  latar belakang kecoklatan-ungu pada plat KLT

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  yang  didapat  berupa  ekstrak kental  berwarna  hijau  tua.  Ekstrak  kental yang  didapat  kemudian  ditimbang  dan dihitung  rendemen  nya.  Hasil  rendemen ekstrak  etanol  daun P.  canescens dengan bobot  tetap  72,88  gr  adalah  7,28  %,  yang berarti  bahwa  presentase  banyaknya  zat yang  didapat  dari  proses  ekstraksi  yaitu 7,28%  atau  terdapat  7,28  gram  zat  yang didapat dari 1000 gram simplisia. Hasil ini lebih tinggi daripada hasil yang didapatkan dalam  penelitian  daun  sungkai  asal Kalimantan  Timur  yang  dilakukan  oleh Ahmad  dan  Ibrahim  (2015),  dimana rendemen ekstrak nya adalah 3,38%.
Tahap selanjutnya yaitu melakukan fraksinasi.  Fraksi  kental  n-butanol  yang didapat  yaitu  sebesar  6,2  g  sehingga rendemen  dari  fraksi  yaitu  24,8  %,  yang berarti  terdapat  24,8  bagian  zat  dari  total
100  bagian.  Hasil  ini  juga  lebih  tinggi dibandingkan dengan penelitian sebelumnya yang dilakukan terhadap daun sungkai  asal  Kalimantan  Timur  dengan total  rendemen  fraksi  sebesar  3,64% (Ahmad & Ibrahim, 2015).
Uji  organolpetik  atau  uji  indra merupakan cara pengujian dengan menggunakan  indra  manusia  sebagai  alat utama  untuk  memberikan  karakteristik esktrak  daun P.  canescens Uji  ini  juga digunakan  untuk  menilai  mutu  suatu ekstrak dan fraksi simplisia. Uji organoleptik  meliputi  warna,  aroma,  rasa dan tekstur. Hasil organoleptik menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  dan fraksi  n-butanol  daun P.  canescens
berwarna  hijau  kehitaman,  hal  ini  karena daun P.  canescens memiliki  dasar  warna hijau.  Adapun  rasa  yang  pahit  dan  aroma khas  dari  daun  ini  dapat  berasal  dari metabolit sekunder yang terdapat didalamnya , dimana  dari  hasil  skrining fitokimianya  terdapat  tanin  yang  memiliki kontribusi  memberikan  rasa  sepat  pahit terhadap  suatu  tumbuhan.  Tekstur  ekstrak dan fraksi yang kental menandakan bahwa pelarut  yang  digunakan  telah  menyari senyawa-senyawa didalam daun P. canescens, serta  setelahnya  dilakukan proses  oven  guna  menguapkan  pelarut sehingga  menghasilkan  ekstrak  dan  fraksi yang kental.
Skrining fitokimia merupakan tahap  pendahuluan  dalam  suatu  penelitian fitokimia yang bertujuan untuk memberikan  gambaran  tentang  golongan senyawa yang terkandung dalam tumbuhan  yang  sedang  diteliti.  Metode skrining fitokimia dilakukan dengan melihat  reaksi  pengujian  warna  dengan menggunakan  suatu  pereaksi  warna.  Hal penting  yang  berperan  penting  dalam skrining fitokimia adalah pemilihan pelarut  dan  metode  ekstraksi  (Kristianti et al .,  2008).  Hasil  skrining  fitokimia  pada penelitian  ini  memberikan  hasil  positif pada  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  steroid, fenol dan tanin.
Gambar 1 . Hasil Uji Aktivitas
Antioksidan dengan KLT,
(a) Penampakan noda setelah penyemprotan reagen DPPH, (b) Penampakan noda dengan lampu  UV  254  nm,  (c)
Penampakan noda dengan lampu  UV  366  nm,  nilai
Rf 0,92
Berdasarkan  Gambar  1  terlihat bahwa pada bagian plat yang terdapat spot hasil  pemisahan  menggunakan  KLT terjadi  pemudaran  warna  ungu  larutan DPPH.  Hal  ini  terjadi  karena  adanya aktivitas  antioksidan.  Antioksidan  yang terdapat  pada  sampel  fraksi n- butanol daun P.canescens Jack  mampu  bereaksi dengan radikal bebas sehingga menyebabkan  radikal  tersebut  berubah menjadi  bentuk  tereduksinya  (DPPH-H) dan  perubahan  itulah  yang  menyebabkan terjadinya pemudaran warna ungu.
Larutan  DPPH  radikal  berwarna  ungu, sedangkan  DPPH  tereduksi  berwarna ungu  pudar  dan  lama  kelamaan  menjadi kuning atau tidak berwarna. Semakin kuat aktivitas  antioksidan  suatu  senyawa  maka semakin pudar warna ungu yang dihasilkan  (Prayoga,  2013).  Aktivitas antioksidan  daun P.  canescens secara kuantitatif telah dilakukan oleh Gholivand dkk (2009), dimana tanaman P. canescens diekstraksi  dengan  pelarut  metanol  dan diuji aktivitas antioksidannya menggunakan metode DPPH. Hasil penelitian  tersebut  menunjukkan  bahwa ekstrak  metanol  tanaman P.  canescens memiliki  aktivitas  antioksidan  sebesar 49.5±1.21mg/mL.
a b         c
Gambar  2 .  Profil  KLT  Penghambatan Tirosinase  Asam  Askorbat (a)  Penampakan  noda  setelah penyemprotan larutan
tirosinase  dan  L-DOPA , (b) Penampakan  noda  dengan lampu  UV  254  nm,  (c) Penampakan  noda  dengan lampu  UV  366  nm,  nilai  Rf 0,84
Sensitivitas,  stabilitas  dan  biaya merupakan  pertimbangan  utama  dari kondisi eksperimental yang optimal untuk pengembangan  KLT  berbasis  tirosinase. Berdasarkan Gambar 2, dapat disimpulkan bahwa asam askorbat memiliki penghambatan tirosinase yang ditunjukkan  oleh  adanya  bercak  berwarna putih.  Bercak  ini  terjadi  karena  adanya interaksi  dengan  ion  logam  dari  enzim dalam menurunkan dopakuinon dan menghalangi oksidasi dari bentuk dihidrosiindol 2-asam karboksilat
(Handayani et al ., 2015).
Deteksi  penghambatan  tirosinase fraksi  n-butanol P.  canescens Jack dilakukan dengan menyemprotkan larutan enzim tirosinase dan L-DOPA kepermukaan plat.
Gambar  3 .  Profil  KLT  Penghambatan Tirosinase  Fraksi n -butanol daun P. canescens Jack,  (a)
Penampakan  noda  setelah penyemprotan  larutan  enzim tirosinase dan  L-DOPA;  (b) Penampakan  noda  dengan lampu  UV  254  nm;  (c)
Penampakan  noda  dengan lampu  UV  366  nm;  nilai  Rf 0,77
Berdasarkan  Gambar  3,  dapat disimpulkan  bahwa  fraksi  n-butanol P. canescens Jack memiliki aktivitas penghambatan  tirosinase  secara  kualitatif, terlihat  dari  bercak  putih  yang  muncul pada  plat.  Menurut  Hsu et  al (2018), penggunaan L-DOPA menunjukkan bintik gelap  setelah  reaksi  10  menit  dengan tirosinase  (2  unit)  dibandingkan  dengan penggunaan L-tirosin dengan jumlah yang
bervariasi  (20  sampai  60  nmol),  yang menunjukkan  bahwa  L-DOPA  lebih disukai daripada L-tirosin untuk pengamatan dengan mata tanpa alat bantu. ImageJ,  perangkat  lunak  analisis  gambar, digunakan  untuk  mengukur  setiap  titik gelap  pada  KLT  berbasis  tirosinase. Kelompok  L-DOPA,  L-tyrosin  tidak terlalu  menunjukkan  latar  belakang  yang gelap  pada  jumlah  atau  konsentrasi  yang sama.  Secara  keseluruhan,  L-DOPA adalah  substrat  yang  lebih  kompeten daripada L-tirosin untuk pengujian tirosinase  untuk  menunjukkan  bercak melanin  yang  jelas  pada  pelat  KLT  (Hsu et  al .,  2018).  Oleh  karena  itu,  L-DOPA digunakan dalam penelitian ini.
Penelitian sebelumnya telah membuktikan  bahwa  dari  lima  fraksi sampel (F1-F5) yang diperoleh berdasarkan  proffl  KLT,  F1  dan  F2  tidak memiliki aktivitas penghambatan tirosinase  hanya  ketika  diamati  tidak terdapat  bercak  putih  terang  pada  plat KLT  nya.  Namun F3  hingga  F5 memberikan  efek  penghambatan  pada tirosinase  karena  memberikan  penampak bercak  putih  terang.  Untuk  membuktikan hal ini, peneliti memisahkan dan mengidentifikasi  zat  aktif  utama  dalam fraksi sampel yang diuji (F1-F5) dipisahkan  dengan  KLT  sebelum  uji skrining inhibitor tirosinase. Hasil percobaan  menegaskan  lagi  bahwa  baik
F1  dan  F2  sebenarnya  tidak  memiliki potensi  penghambat  tirosinase.  Selain  itu, zona  hambat  bintik-bintik  tertentu  pada KLT  menggambarkan  lebih  dari  satu senyawa  aktif  di  F4  dan  F5.  Hasil  ini menyiratkan bahwa KLT berbasis tirosinase  memungkinkan  peneliti  untuk mengidentifikasi senyawa potensial selama  evaluasi  bioaktivitas  (Hsu et  al .,
2018).  Adapun  hasil  penelitian  secara kuantitatif terhadap ekstrak etanol daun A. microcarpus menunjukkan bahwa tumbuhan ini memiliki persen penghambatan  tirosinase  sebesar  29.9  ± 0.14.  Hasil  ini  lebih  besar  dibandingkan ekstrak  air  dan  ekstrak  metanol  nya.  (Di Petrillo et al ., 2016) .

## IV. KESIMPULAN
Fraksi n -butanol  daun P.  canscens berpotensi  memiliki  aktivitas  antioksidan berdasarkan  pengujian  secara  kualitatif dengan metode KLT ditandai adanya noda kuning pucat setelah penyemprotan dengan reagen DPPH.  Fraksi n -butanol daun P.  canscens berpotensi  memiliki aktivitas  penghambatan  tirosinase  secara kualitatif menggunakan metode KLT yang yang ditandai dengan adanya bercak putih pada plat.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terimakasih kepada  Program  Dosen  Wajib  Meneliti
Universitas  Lambung  Mangkurat  yang sudah membiayai penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Capillas, C. R. & L. M. L. Nollet. (2015).
Flow  Injection  Analysis  of  Food Additives . CRC Press, Francis.
Formagio, A. S. N., C. R. F. Volobuff., M. Santiago., C. A. L., Cardoso., M. D. C.,  Vieira  &  Z.  V.  Pereira.  (2014). Evaluatoin  of  Antioxidant  Activity, Total  Flavonoids,  Tannins  and Phenolic  Compounds  in Psychotria Left  Extract. Antioxidants . 3 :  745- 757.
Gholivand  MB,  Rahimi-Nasrabadi M,
Batooli H, Ebrahimabadi AH. (2010).  Chemical  composition  and antioxidant activities of the essential oil  and  methanol extracts of Psammogeton  canescens.  Food  and Chemical Toxicology : an International  Journal  Published  for the  British  Industrial  Biological Research Association. 2010 Jan;48(1):24-28. DOI: 10.1016/j.fct.2009.09.007. Handayani,  F.,  Rissyelly,  &  Katrin. (2015).  Uji  Efek  Pemutih  Ekstrak
Etanol  dan  Fraksi  dari  Kulit  Batang
Mentangau ( Calophyllum pulcherrimum Wall.) dengan Metode  Penghambatan  Aktivitas
Tirosinase. FFarmasi UI. 1-20.
Handayani, V., A. R. Ahmad, & M. Sudir.
(2014).  Uji  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Metanol  Bunga  dan  Daun Patikala  ( Etlingera  elatior (Jack)  R. M.  Sm)  Menggunakan  Metode DPPH. 0Pharm Sci Res .0 1 : 86-93. Hasbi, S. (2012). Uji Sensitivitas Perasan Daun Alpukat (P. americana Miller) terhadap  Pseudomonas  sp  Metode Invitro . Akademi Analisa
Kesehatan. Banda Aceh. Ibrahim,  A.,  M.,  Arifudin,  P.W.,  Cahyo,
W.,  Widayat,  &  M.,  Bone.  (2019). Isolation and Characterization

## Endophytic  Fungal  Isolate  From
Peronema canescens Jack Leaf And Coptosapelta  tomentosa Val.  K. Heyne  Root. Journal  of Topical Pharmacy  and  Chemistry . 4 :  215- 225. Kartono.  (2008). Pengelolaan  Pasca
Panen  Tanaman  Obat .  Balai  Besar
Penelitian dan Pengembangan Tanaman Obat Tradisional (B2P2TO-OT), Jakarta. Kusriani,  R.  R.,  A.  Nawawi.,  &  T.
Turahman.  (2011).  Uji  Aktivitas Ekstrak dan Fraksi Kulit Batang dan Daun  Sungkai (P.  Canescens  Jack)
Terhadap  Staphylococcus  Aureus Atcc  25923  dan  Escherichia  Coli
ATCC  25922. Jurnal  Farmasi Galenika  Volume . 02 ISSN  :  2406-
9299.
Linn, J. Y & D. E. Fisher. (2007).
Melanocyte Biology and Skin Pigmentation. Review: Nature. 4 : 843-850.
Marjoni,  M.  R.,  Afrinaldi,  &  A.  D.
Novita.(2015)  .  Kandungan  Total Fenol  dan  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak Air Daun Kersen
( Muntingia  calabura L.). 0Jurnal Kedoteran Yarsi .0 23 : 187-196.
Meyvina, D.  S.  (2019) .  Penetapan  Kadar
Flavonoid  Total  Dan  Uji  Aktivitas
Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Daun Sungkai (Peronema Canescens Jack)  Asal  Kalimantan  Selatan . Skripsi  Fakultas  Matematika  dan Pengetahuan Alam, Universitas Lambung Mangkurat, Banjarbaru.
Nurani,  L.  H.  (2013).  Isolasi  dan  Uji Penangkapan  Radikal  Bebas  DPPH oleh  Isolat-1,  Fraksi  Etil  Asetat  dan Ekstrak  Etanol  Akar  Pasak  Bumi ( Eurycoma  longifolia Jack.). Jurnal Ilmiah Kefarmasian . 3 : 95-104.
Puspitasari, M. L., T. V. Wulansari., T. R.
Widyaningsih., J. M. Maligan., & N.
I.  P.  Nugrahini.  (2016).  Aktivitas Antioksidan Suplemen Herbal Daun Sirsak (A. muricata L.)  dan  Kullit Manggis ( G. mangostana L.) Kajian
Pustaka. Jurnal Pangan dan
Agroindustri . 4(1): 283-290.
Rochmah,  C.  D.  (2018).  Aktivitas  Gel Fraksi n- Butanol  Umbi  Tawas  Ut ( Ampelocissus Rubiginosa Lauterb.) Terhadap  Infiltrasi  Sel  Radang, Pembentukan Kelenjar Sebasea, dan Kolagen  Pada  Luka  Bakar  Tikus.
Skripsi .  Fakultas  Matematika  dan
Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas  Lambung  Mangkurat. Banjarbaru. Seo, J.H., Lee, Y.M., Lee, J. S., Kang,
H.C., & Kim, H.D. (2007). Efficacy and Tolerability of the Ketogenic
Diet According to Lipid: Nonlipid
Ratios--Comparison of 3:1 With 4:1 Diet. Epilepsia. 48 : 801-805.
Simaremare.  E.  S.  (2014).  Skrining Fitokimia  Ekstrak  Etanol  Daun Gatal  ( Laportea decumana (Roxb . ) Wedd). Pharamcy . 11 : 98-107. Utomo, A.D., W.S. Rahayu., B.A. Dhiani.
2009.  Pengaruh  Beberapa  Metode
Pengeringan Terhadap Kadar
Flavonoid  Total  Herba  Sambiloto ( A. paniculata). PHARMACY .
Wijaya,  D.  P.,  J.  E.  Paendong,  &  J.
Abidjulu. (2014). Skrining Fitokimia dan Uji Aktivitas Antioksidan dari Daun Nasi ( Phrynium capitatum ) dengan Metode
DPPH (1,1-difenil-2- pikrilhidrazil). 0JURNAL MIPA
UNSRAT ONLINE . 03 : 11-15.
Winarsi, H.(2007) . Antioksidan Alami dan Radikal Bebas . Kanisius, Jakarta.
Yuslianti,  E.  R.  (2018). Radikal  Bebas dan Antioksidan . Deepublish,
Yogyakarta.