## UJI SENYAWA SITOTOKSISITAS DARI TUMBUHAN AKAR PKI
( Mikania micrantha H.B.K)
Emma Susanti, Kamalrullah, Alfian Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau, Pekanbaru

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  uji  senyawa  sitotoksik  dari  tumbuhan  Akar  PKI  ( Mikania micrantha. H.B.K).  Metoda  yang  digunakan  adalah Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT) dengan  menggunakan  larva udang Artemia  salina Leach.  Hasil  yang  diperoleh menunjukkan  bahwa  analisa  probit  pengujian  sitotoksisitas  ekstrak  n-heksan  diperoleh nilai LC 50 = 2,19 µg/ml, ekstrak etil asetat diperoleh nilai LC 50 = 13,49 µg/ml dan pada ekstrak metanol diperoleh nilai LC 50 = 2,19  µg/ml.
Kata kunci : Uji senyawa sitotoksisitas, Mikania micrantha , HBK.

## PENDAHULUAN
Kanker adalah suatu penyakit yang terjadi akibat pertumbuhan tidak normal dari sel-sel  jaringan  tubuh,  sel-sel  yang  tidak  normal  ini  (sel  kanker)  dapat  menyebar  ke bagian  tubuh  lainnya  sehingga  dapat  menyebabkan  kematian.  Upaya  membebaskan masyarakat dari penderitaan kanker sangat perlu dilakukan, tetapi ditemui banyak kendala karena  biaya  pengobatan  penyakit  kanker  yang  mahal,  serta  obat  antikanker  memiliki efek  samping  yang  besar.  Efek  samping  timbul  karena  belum  adanya  obat  kanker  yang bekerja  spesifik.  Obat  antikanker  yang  ada  sekarang  ini  selain  bekerja  pada  sel  kanker, juga bekerja pada sel-sel yang  memiliki petumbuhan yang cepat seperti sel-sel kelamin, rambut dan sebagainya. Oleh sebab itu usaha untuk menemukan obat antikanker terutama yang  bekerja  spesifik  terus  dilakukan  terutama  yang  berasal  dari  bahan  alam  (Anonim, 2006).  Salah  satu  uji  pendahuluan  yang  dapat  dilakukan  adalah  dengan  metoda Brine Shrimp  Lethality  Test ( BSLT )  dengan  menggunakan  larva  udang  laut Artemia  salina Leach. Metoda ini merupakan penapisan awal dalam upaya pencarian senyawa antikanker karena  hasil  dari  uji  toksisitasnya  memiliki  korelasi  positif  dengan  aktivitas  sitotoksik antikanker (Ayo et al ., 2007; Krishnaraju et  al ., 2005; Pisutthanan et al ., 2004; Lellau et al ., 2003, Meyer et al. , 1982).
Secara tradisional beberapa  tumbuhan telah digunakan  untk  mengobati  penyakit kanker  maupun  penyakit  infeksi.  Beberapa  dari  tumbuhan  tersebut  mempunyai  potensi untuk  dikembangkan  menjadi  sediaan  fitofarmaka  dan  sebagai  sumber  senyawa antikanker, antioksidan, antibakteri dan antifungal yang baru. Pencarian sumber obat dari alam  sangat  memungkinkan  di  Indonesia  yang  kaya  akan  berbagai  sumber  flora  dan fauna.  Pemakaian  bahan  yang  bersumber  dari  ala  mini  jelas  akan  memiliki  resiko toksisitas  yang  lebih  ringan  serta  tingkat  keamanan  yang  lebih  tinggi  dibandingkan dengan obat sintesis yang berasal dari bahan kimia murni.
Salah  satu  tumbuhan  yang  dapat  dimamfaatkan  sebagai  pengobatan  adalah tumbuhan  akar  PKI  ( Mikania  micrantha H.  B.  K).  Tumbuhan  akar  PKI  ini  merupakan tumbuhan  yang  merambat  pada  pohon  dan  hidup  di  tempat  basah,  kadang  pada  daerah tinggi, hutan dan bantaran sungai. Khasiat tumbuhan ini pada suku Indian dan suku-suku lainnya  di  Amerika  Tengah  terutama  sebagai  anti  infeksi  dan  untuk  mengatasi  gigitan serangga  dan  juga  sebagai  gulma  pada  tanaman  inangnya  (Anonim,  2006).  Di  Riau khususnya pada masyarakat kabupaten Kuantan Singingi Taluk Kuantan tumbuhan akar
PKI  ( Mikania  micrantha )  ini  digunakan  untuk  mengobati  penyakit  infeksi.  Tumbuhan gulma  ini  secara  empiris  digunakan  sebagai  penanganan  penyakit  tukak,  borok,  gatal- gatal,  kudis  dan  penyakit  kulit  lainnya.  Dari  penelusuran  literature  belum  banyak penelitian  menegnai  tumbuhan Mikania  micrantha ini.  Literatur  yang  ada  hanya membahas  penanganan  tumbuhan  sebagai  gulma  yang  mengganggu  tanaman  budi  daya karena sifat allelopati tumbuhan ini terhadap tanaman lain (Huang, 2009; Zhang, 2002). Tujuan  penelitian  ini  adalah  melakukan  uji  sitotoksisitas  terhadap  tumbuhan  akar  PKI dengan menggunakan metode Brine Shrimp Lethality (BSLT) dengan menggunakan larva udang laut Artemia Salina Leach.

## METODOLOGI

## Bahan Penelitian
Bahan  yang  digunakan  adalah  kista  udang Artemia  salina Leach,  air  laut, metanol,  dimetilsulfoksida  (DMSO),  ekstrak.  Ekstraksinya  menggunakan  pelarut n - Heksan, Etil asetat dan Metanol

## Alat Penelitian
Seperangkat  alat  pembiakan  larva  udang Artemia  salina Leach  (wadah  gelap,  aerasi, lampu dengan intensitas cahaya rendah), vial, pipet mikro, timbangan analitik, pipet tetes, kaca pembesar.

## Jalannya Penelitian
Pada  pengujian  ini  digunakan  sampel  kering  tumbuhan  akar  PKI  ( Micania micrantha H.B.K).  Sampel  dikering  anginkan,  kemudian  dihaluskan  dengan  blender sehingga  didapat  serbuk  halus.  Serbuk  halus  tersebut  ditimbang  1  kg    selanjutnya dimaserasi dengan n -Heksana, Etil asetat dan Metanol selama 3 x 3 hari dalam botol kaca berwarna gelap. Hasil maserasi disaring dan diekstrak sehingga diperoleh ekstrak kental n -Heksana  sebanyak  23,04  gr,  ekstrak  Etil  Asetat  sebanyak  62,85  gr,  ekstrak  Metanol sebanyak 97,43 gr.
Kista  udang Artemia  salina Leach  ditetaskan  dalam  wadah  pembiakan  yang berisi air laut, dan digunakan setelah 48 jam setelah membentuk larva. Vial uji dikalibrasi sebanyak  5  ml.  Pengujian  dilakukan  dengan  konsentrasi  1000,  100,  10  μg/ml  dengan pengulangan masing-masing tiga kali. Sebanyak 40 mg ekstak uji dilarutkan dalam 4 ml methanol  maka  didapat  larutan  induk  ekstrak  uji  dengan  kosentrasi  10.000 g/ml, kemudian    larutan  induk  dengan  konsentrasi  10.000  g/ml  tersebut  dipipet  sebanyak 0,5ml    ke  dalam  vial  uji  hingga  nantinya  didapat  konsentrasi  1000 g/ml  setelah penambahan  air  laut  hingga  5  ml.  Pembuatan    konsentrasi  100  g/ml  dengan  cara pengenceran larutan induk 10.000  g/ml sebanyak 0,5 ml ditambahkan methanol hingga 5 ml maka diperoleh kosentrasi ekstak uji 1000  g/ml kemudian dipipet sebanyak 0.5 ml larutan  ekstrak  uji  tersebut  ke  dalam  vial  uji  hingga  nantinya  didapat  konsentrasi  100 g/ml setelah penambahan air laut hingga 5 ml. Larutan  konsentrasi 10  g/ml dibuat dari larutan  uji  100  g/ml  dengan  cara  yang  sama.  Pelarut  etanol  pada  vial  uji  dibiarkan menguap.  Zat  uji  dilarutkan  kembali  dengan  50  l  DMSO,  selanjutnya  ditambahkan  air laut  hampir  mencapai  batas  kalibrasi.  Masukkan  larva  udang  pada  masing-masing  vial sebanyak  10  ekor.  Tambahkan  lagi  air  laut  beberapa  tetes  hingga  batas  kalibrasi, kematian  larva  udang  diamati  setelah  24  jam.  Dari  data  yang  dihasilkan  dihitung  LC 50 dengan  metode kurva menggunakan tabel probit.
Untuk  kontrol,  50  l  DMSO  dipipet  dengan  pipet  mikro  ke  dalam  vial  uji, ditambahkan  air  laut  hampir  mencapai  batas  kalibrasi.  Larva Artemia  salina Leach  10
ekor  dimasukkan  lagi  air  laut  beberapa  tetes  hingga  batas  kalibrasi.  Masing-masing konsentrasi dibuat 3 kali pengulangan (Meyer et al., 1982; Harefa, 1997).

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
Hasil analisa probit pengujian sitotoksik ekstrak n -heksana diperoleh nilai LC 50 = 2,19  µg/ml,  etil  asetat  diperoleh  nilai  LC 50 =  13,49  µg/ml  dan  Metanol  diperoleh  nilai LC 50 = 2,19 µg/ml. LC 50 adalah  konsentrasi  yang  dapat  menyebabkan  kematian  50%  hewan percobaan,  selama  waktu  tertentu.  Pada  metoda  BSLT , sampel  uji  dikatakan  aktif  jika LC 50 kecil dari 1000 ppm. Sejauh ini metoda penentuan LC 50 ada 3 macam, yaitu Metoda Kurva, Metoda Farmakope Indonesia dan Metoda Finney.
Uji  aktivitas  sitotoksik  dilakukan  terhadap  larva Artemia  salina Leach  dengan menggunakan  metoda  (BSLT) . Pemilihan  metoda  ini  sebagai  penapisan  awal  dalam upaya  pencarian  senyawa  antikanker  karena  biaya  percobaan  yang  murah,  proses pengerjaan yang cepat, sederhana, dan tidak diperlukan kondisi yang aseptis. Selain itu, larva Artemia  salina Leach  memiliki  beberapa  keunggulan  diantaranya  mudah  didapat, mudah  dibiakkan  dan  dapat  hidup  pada  rentangan  salinitas  yang  tinggi.  Larva Artemia salina Leach  diperoleh  dengan  menetaskan  telur  selama  48  jam.  Larva  yang  telah menetas  akan  berenang  ketempat  yang  terang.  Hal  ini  akan  dapat  memudahkan  untuk pemisahan dan pengambilan hewan ini  yang telah berkembang menjadi larva. Masing-masing  ekstrak  yang  akan  diuji  dibuat  dalam  kosentrasi  1000,  100,  10  μg/ml dalam  air  laut.  Pembuatan  larutan  uji  menggunakan  pelarut  organik  metanol  karena pelarut  ini  dapat  melarutkan  hampir  semua  senyawa  dan  mudah  menguap.  Pelarut tersebut  pada  akhirnya  nanti  harus  dibiarkan  sampai  menguap  sempurna  agar  tidak mengganggu pada pengujian toksisitas yang dilakukan. Sebelum ditambahkan air laut ke dalam  vial  yang  digunakan  sebagai  wadah  pengujian,  terlebih  dahulu  ditambahkan DMSO (dimetil sulfoksida) untuk dapat membantu kelarutan senyawa uji dalam air laut sehingga  senyawa  dapat  terdistribusi  secara  merata.  Banyaknya  DMSO  yang ditambahkan adalah 50 µl, karena jika lebih dari 50 µl akan dapat menyebabkan kematian pada larva udang, sifatnya yang tidak terlalu toksik ini menjadi alasan dipilihnya DMSO untuk membantu kelarutan senyawa dalam air laut.
Tabel 1.  Hasil uji aktivitas sitotoksik ekstrak-ekstrak Mikania micrantha

## KESIMPULAN
Hasil analisa probit pengujian sitotoksik ekstrak n -heksana diperoleh nilai LC 50 = 2,19 µg/ml, Etil Asetat diperoleh nilai LC 50 = 13,49 µg/ml, sedangkan Metanol diperoleh nilai LC 50 = 2,19 µg/ml. Pada hasil yang diperoleh  terlihat bahwa LC 50 ekstrak Akar PKI ( Mikania  micrantha )  lebih  kecil  dari  1000  ppm  .  Pada  metoda  BSLT , sampel  uji dikatakan aktif jika LC 50 kecil dari 1000 ppm.
No Ekstrak Nilai  LC 50 1 n- heksana 2,19 µg/ml 2 Etil Asetat 13,49 µg/ml 3 Metanol 2,19 µg/ml

## DAFTAR PUSTAKA
Ayo,  R.G,  J.O.  Amupitan,  Y.  Zhao,  2007,  “Cytotoxicity  and  Antimicrobial  Studies  of  1,6,8- trihidroxy-3-methyl-antraquinone (emodin) Isolated from the Leaves of Cassia nigricans vahl”, African Journal of Biotechnology, 6(11), 1276-1279.
Anonim, 2006, http/www.issg.org/database/haeringer/violaine/asp?si=18&Fr=1&sts=sss) acced on 18 Nov 2006.
Krishnaraju,  A.V,  Rao,  T.V.N,  Sundararaju,  D,  Vanisree,  M,  Tsay,  H.S,  Subbaraju,  G.V,  2005, “Assesment  of  Bioactivity  of  Indian  Medicinal  Plant  Using  Brine  Shrimp  ( Artemia salina ) Lethality Assay”, International Journal of Applied Science and Engineering , 3(2) , 125-134.
Lellau, T. F, Liebezeit, G, 2003, “Cytotoxic and Antitumor Activities of Ethanolic Extracts of Salt Marsh  Plants  from  the  Lower  Saxonian  Wadden  Sea,  Southern  North  Sea”  , Pharmaceutical Biologi , 41(4), pp 293-300
Meyer,  B,  Ferrigni,    N.  R,   Putnam  L.  J.  E,  Jacobsen,  B, Nicholas,  D,  E  and,  Laughin  J.  L.  Mc, 1982, “Brine Shrimp: A convenient General Bioassay For Active Plant Constituens”, J. of Medical Plant Medica , 45 , 31-34.
Pisutthanan,  S,  P.  Plianbangchang,  N.  Pisutthanan,  S.  Ruanruay,  O.  Muanrit,    2004,  “Brine Shrimps Lethality Activity of Thai Medicinal Plants in the Family Meliaceae”, Naresuan University Journal, 12(2), 13-14.