PENGARUH EKSTRAK BIJI ANGGUR ( VITIS VINIFERA ) VAR ALPHONSO LAVALLEE TERHADAP FUNGSI GINJAL MENCIT JANTAN ( MUS MUSCULUS ) MODEL HIPERURISEMIA
Mira  Wiji  Lestari 1 ,  Isbandiyah 1 ,  Annisa’  Hasanah 1
Fakultas  Kedokteran,  Universitas  Muhammadiyah  Malang Jl.  Bendungan  Sutami  188  A  Malang,  65156
Email  :  mirawijilestari@gmail.com

## ABSTRAK
Pengaruh Ekstrak Biji Anggur ( Vitis vinivera ) var Alphonso lavallee Terhadap Fungsi Ginjal Mencit Jantan ( Mus musculus ) Model Hiperurisemia.Latar Belakang : Prevalensi hiperurisemia di Indonesia sebesar 18% populasi. Hiperurisemia dapat menyebabkan terjadinya disfungsi ginjal.Kreatinin merupakan salah satu parameter untuk mengukur fungsi ginjal.Terjadinya disfungsi ginjal dapat dicegah menggunakan biji anggur var Alphonso lavallee. Biji anggur ini memiliki kandungan polifenol tinggi terutama proanthocyanidin, flavonoid, dan resveratrol yang berfungsi sebagai antiinflamasi, antioksidan, inhibisi  COX-2,  dan  meningkatkan  produksi  NO. Tujuan: Mengetahui  pengaruh  ekstrak  biji  anggur  var Alphonso  lavallee terhadap fungsi ginjal mencit jantan ( Mus musculus ) model hiperurisemia. Metode : Eksperimental, The Post Test Only Control Group Design . Sampel terdiri dari 30 ekor mencit jantan yang dibagi menjadi 5 kelompok diantaranya kelompok kontrol - , kontrol + , dam 3 kelompok perlakuan. Semua kelompok kecuali kontrol – diinduksi dengan kalium oksonat 250 mg/ kg/hari dan 3 kelompok perlakuan diberi ekstrak biji anggur var Alphonso lavallee dengan dosis 3.5 mg/ekor mencit/hari, 7  mg/ekor  mencit/hari,  dan  14  mg/ekor  mencit/hari  peroral  selama  7  hari.  Kreatinin  serum  diukur  menggunakan spektrofotometer  untuk  menilai  fungsi  ginjal  mencit.Analisis  data menggunakan  uji One  way  ANOVA , post  hoc  bonferroni , dan uji regresi. Hasil Penelitian : Ekstrak biji anggur var Alphonso lavallee dapat menurunkan kadar kreatinin serum secara signifikan dengan p < 0.001 pada dosis mulai dari 7 mg/ekor mencit/hari. Kesimpulan : Ekstrak biji anggur var Alphonso lavallee berpengaruh dalam mencegah terjadinya kerusakan fungsi ginjal pada mencit hiperurisemia.
Kata kunci :  Biji  anggur  var Alphonso  lavallee ,  polifenol,  fungsi ginjal,  kalium  oksonat

## ABSTRACT
Effects  of  Grape  Seed  ( Vitis vinifera)  var Alphonso  lavallee Extracts  for  Renal  Function  in  Male Hyperuricemic Mice ( Mus musculus ).Background : The prevalence of Hyperuricemia in Indonesia amounted to 18% of population. Hyperuricemic is associated with renal dysfunction. Serum creatinine is one of parameter to measure renal function. Renal dysfunction caused by hyperuricemia can be prevented by grape seed var Alphonso lavallee which has a high polyphenols content particularly proanthocyanidin, flavonoid and resveratrol that posses various biological effects including anti-inflammation, anti-oxidant, COX-2 inhibition, increase of  NO production. Objective : This study was to evaluate the effects of grape seed var Alphonso lavallee extracts for renal function in male hyperuricemic mice ( Mus musculus ). Methods : This study used experimental, the post only control group design. The sample consisted of 30 male mice were devided into 5 groups, including negative control, positive control, and 3 treatment groups. All group except for negative control induced with potassium oxonate  at dose 250  mg/kg/day and 3 treament groups were also given grape seed var Alphonso  lavallee extracts orally at dose 3.5 mg/mice/day, 7 mg/mice/day, and 14 mg/mice/day for 7 days. Serum creatinine levels were determined by spectrophotometer to evaluate renal function in mice. Data were analized using one way ANOVA, Post hoc bonferroni and Regression test. Results : Grape seed var Alphonso lavallee extracts significantly (p < 0.001) decreased serum
46 VOLUME 13 NOMOR 1 JUNI 2017
creatinine at dose 7 mg/mice/day. Conclusion : Grape seed var Alphonso lavallee extracts has nephroprotective effects on hyperuricemic mice.
Keywords : Grape seed var Alphonso lavallee , polyphenols, renal function, potassium oxonate
vitamin  C,  vitamin  E,  dan  betakaroten (Hussein  S, 2015) .  Selain  itu,  polifenol  yang  dapat  diekstraks sebesar  10%  atau  kurang  pada  daging  buah,  60- 70% pada biji, dan 28-35% pada kulit buah anggur. P roanthocyanidin dapat berperan sebagai vasodilator, menghambat interleukin-6, TNF-á serta cyclooxygenase- 2,  menginduksi  NO  dan  juga  memiliki  pengaruh secara non-kompetitif dalam menghambat aktivitas dari  xanthin  oksidase  yang  merupakan  salah  satu pembangkit  radikal  bebas (Limtrakul  P,  2016) .
Anggur var alphonso lavallee merupakan salah satu varietas unggul yang ada di Indonesia.Anggur ini  memiliki  kandungan phenolic,  antocyanin,  catechin, dan procyanidin yang  tinggi  dan  terdistribusi  paling banyak  pada  biji  anggur  Hasil  penelitian menunjukkan bahwa biji anggur var alphonso lavallee mengandung fenol sebanyak 105,3 ± 6,1 mg GAE ( Gallic Acid Equivalents )/g (Bozan B,  2008) .
Berdasarkan  uraian  diatas,  maka  penulis ingin mengetahui pengaruh ekstrak biji anggur var alphonso lavallee terhadap fungsi ginjal mencit jantan model hiperurisemia dengan menilai kadar kreatinin serum. Kreatinin merupakan parameter yang sering digunakan untuk menilai fungsi ginjal dimana hasil metabolit  kreatin  ini  secara  bebas  difiltrasi  oleh glomerulus (Rodrigues WF,  2014) .

## BAHAN  DAN  METODE  PENELITIAN

## Hewan  Coba
Hewan coba yang digunakan adalah mencit jantan ( Mus musculus ) yang diambil secara acak dengan berat  20  ±  2g,  usia  3  –  6  bulan,  dengan  kondisi sehat yang ditandai dengan gerakan yang aktif dan mata  jernih.  Mencit  diaklimatisasi  dahulu  dengan lingkungan dan pakan standar BR-1  selama  7 hari di  Laboratorium  Biomedik  Fakultas  Kedokteran Universitas  Muhammadiyah  Malang  sebelum dilakukan perlakuan sambil diamati kesehatanya. 30 ekor mencit diambil secara acak dan dibagi kedalam 5  kelompok  diantaranya  kelompok  1  (  kelompok kontrol  negatif)  yaitu  kelompok  tanpa  perlakuan yang  hanya  diberi  pakan  standart,  kelompok  2

## PENDAHULUAN
Hiperurisemia adalah keadaan dimana kadar asam urat lebih besar dari 7.0 mg/dl pada laki-laki dan  lebih  besar  dari  6.0  mg/dl  pada  perempuan ( Prasad  Sah  OS,  Qing  YX,  2015) .  Meningkatnya kadar  asam  urat  dapat  disebabkan  oleh  berbagai faktor  diantaranya  diet  tinggi  purin  atau  protein, konsumsi alkohol yang berlebihan, adanya kondisi turnover sel  maupun  gangguan  pada  enzim  yang memetabolisme  purin ( Busuioc  M,  2007) . Meningkatnya  kadar  asam  urat  atau  hiperurisemia dapat berkembang menjadi gout dan juga disfungsi ginjal.  Dari  hasil  studi  epidemiologi,  didapatkan prevalensi  terjadinya  hiperurisemia  di  Indonesia sebesar 18% ( Smith E, 2015) . Menurut Zhou B et al ,  lebih  dari  40%  pasien gout pada  akhirnya mengalami CKD ( Chronic    Renal  Disease ) (Zhou  B, 2014). Sebuah  studi  menunjukkan  dari  13.000 partisipan  dengan  fungsi  ginjal  normal,  terdapat peningkatan resiko terjadinya penyakit ginjal sebanyak 7%  dengan  peningkatan  1  mg/dL  dari  serum asam  urat (Viazzi  F,  2011) .
Hiperurisemia  berkontribusi  secara patologis  terhadap  terjadinya  vasokonstriksi  pada renal,  disfungsi  endotel  akibat  inhibisi  NO  ( Nitric Oxide ), peningkatan respon inflamasi salah satunya adalah IL-1â ( Interleukine-1â) , stres oksidatif, sistem RAS  ( Renin  Angiotensin  System ),  dan  COX-2 ( Cyclooxygenase-2 ) yang umumnya terjadi pada ARF ( Acute Renal Failure ) dan pada akhirnya berkembang menjadi CKD . Salah satu penyebab disfungsi ginjal adalah  adanya  stres  oksidatif  akibat  asam  urat, sehingga untuk mencegah hal tersebut dibutuhkan antioksidan.Antioksidan yang dapat berpotensi salah satunya  ada  pada  biji  anggur  yangmengandung polifenol  tinggi  yang  dapat  berfungsi  sebagai antioksidan (Godevac  D,  2010) .    .
Polifenol  pada  biji  anggur  diantaranya adalah proanthocyanidin , anthocyanin dan resveratrol .Aktifitas  antioksidan  dari  polifenol  yang ada  pada  biji  anggur  lebih  tinggi  dibandingkan antioksidan  yang  telah  banyak  diketahui  seperti
(kelompok  kontrol  positif)  yaitu  kelompok  yang diberi  kalium  oksonat  5  mg/ekor  mencit/hari, kelompok  3  yaitu  kelompok  yang  diberi  kalium oksonat  5  mg/ekor  mencit/hari  dan  ekstrak  biji anggur  sebanyak  3.5  mg/ekor  mencit/hari, kelompok  4  yaitu  kelompok  yang  diberi  kalium oksonat  5  mg/ekor  mencit/hari  dan  ekstrak  biji anggur  sebanyak  7  mg/ekor  mencit/hari,  dan kelompok  5  yaitu  kelompok  yang  diberi  kalium oksonat  5  mg/ekor  mencit/hari  dan  ekstrak  biji anggur  sebanyak  14  mg/ekor  mencit/hari. Perlakuan  diberikan  pada  hewan  coba  selama  7 hari berturut-turut.
Induksi  Obat
Kalium  oksonat  digunakan  untuk menginduksi  peningkatan  kadar  asam  urat  pada mencit.  Kalium  oksonat  yang  digunakan  didapat dari  Sigma-Aldrich.  Kalium  oksonat  diberikan dengan  dosis  250  mg/kg/hari  dilarutkan  terlebih dahulu dengan 15 ml aquades dan diberikan peroral dengan  sonde  selama  7  hari.

## Pembuatan, Penentuan Dosis, dan Pemberian Ekstrak  Biji  Anggur
Buah  anggur  dipisahkan  dari  bijinya, kemudian  biji  dibersihkan  dari  sisa  daging  yang masih  melekat  setelah  itu  dikeringkan  (di  tempat teduh,  suhu  udara  25-30ºC selama  1  minggu dan digiling menjadi bubuk halus.Bubuk biji anggur (100g)  diekstraksi  dengan soxhlet  extractor dengan petroleum  ether pada  suhu  60ÚC  selama  6  jam. Setelah  itu  diekstrak  ulang  selama  8  jam  dengan mengunakan 200 ml campuran etil asetat : metanol : air (60:30:10). Filtrat yang didapatkan dipekatkan di rotary  evaporator pada  suhu  70ÚC.
Dasar penentuan dosis berdasarkan jurnal yang  berjudul  “ Effect  of  grape  seed  extract  on  renal ischaemic  reperfusion  in  Rats” dimana  dalam  jurnal tersebut dijelaskan tentang efek proteksi ginjal pada studi  in  vivo  bahwa  dengan  pemberian  250  mg/ kg ektrak biji anggur pada tikus. Untuk mengetahui efek dengan menggunakan dosis lebih rendah dan juga lebih tinggi. Maka pada penelitian digunakan dosis  125mg/kg  ,  250mg/kg,  dan  500mg/kg. Setelah  itu,  dosis  pada  tikus  dikonversi  ke  dalam dosis  mencit  didapatkan  hasil  dosis  3.5  mg/ekor mencit,  7  mg/ekor  mencit,  dan  14  mg/ekor mencit.  Masing-masing  dosis  ektrak  diberikan peroral  melalui  sonde  1  jam  setelah  pemberian kalium  oksonat  pada  masing-masing  3  kelompok perlakuan.
Proses  Anastesi,  Pengambilan  Sampel  Darah, dan Pengukuran  Kadar Kreatinin  Serum
Proses  anastesi  dilakukan  satu  per  satu terhadap  hewan  coba  yaitu  dengan  memasukkan hewan coba ke dalam toples kaca yang berisi kapas yang  sudah  dicampur  dengan  kloroform.
Setelah hewan coba teranastesi dengan baik (keadaan  pingsan),  hewan  coba  diletakkan  pada meja  lilin  dan  keempat  kaki  hewan  coba  difiksasi terhadap  meja  lilin  dengan  menggunakan  jarum pentul.Masukkan  jarum  diantara  sisi  kiri  dari processus  xiphoideus  dan  costae  terakhir.Seketika masuk  ke  kulit,  tarik  bagian plugger spuit  untuk memberikan  tekanan  negatif  di  dalam  tabung spuit.Kemudian  masukkan  jarum  secara  perlahan ke  kavum  toraks  menuju  jantung  dengan  sudut antara  40-45  derajat.  Ketika  sejumlah  kecil  darah sudah  masuk,  stabilkan  spuit  dan  tarik plugger perlahan-lahan,  ambil  sampel  ±  1  cc  (Mc  Gill, 2009).  Sampel  kemudian  disentrifus  dengan kecepatan  3000 rpm  selama  15  menit dan  diambil serumnya  untuk  pemeriksan  kadar  ureum  dan kreatinin.
Pengukuran kadar kreatinin serum dilakukan dengan  oleh  peneliti  dengan  didampingi  laboran menggunakan spektrofotometer yang di lakukan di Laboratorium Biomedik Universitas Muhammadiyah  Malang. Analisis  Data
Hasil penelitian dianalisis menggunakan uji normalitas  dengan  metode Shapiro-Wilk ,  uji homogenitas Levene’,uji ANOVA, uji post hoc beferroni , uji korelasi menggunakan analisis regresi linier dengan menggunakan  aplikasi  SPSS  19.

## HASIL  PENELITIAN
Hasil  penelitian,  didapatkan  hasil  kadar kreatinin serum sebagai  berikut :
Perlakuan Kadar Kreatinin serum (mg/dL) ( Rerata ± Standar Deviasi Nomal 2.92 ± 0.49 Kontrol Positif 6.33 ± 0.41 P 1 (Perlakuan 1) 5.83 ± 0.52 P 2 (Perlakuan 2) 4.83 ± 0.41 P 3 (Perlakuan 3) 3.92 ± 0.38

## 48 VOLUME 13 NOMOR 1 JUNI 2017
Tabel  diatas  menunjukkan  bahwa  rerata kadar  kreatinin  serum  pada  kelompok  kontrol negatif  sebesar  2.92  mg/dL.    Kelompok  kontrol positif  yaitu  kelompok  yang  hanya  diberi  kalium oksonat selama 7 hari memiliki rerata  sebesar 6.33 mg/dL.  Pada  kelompok  perlakuan  yang  diinduksi dengan  kalium  oksonat  dan  diberi  dengan  ekstrak biji anggur var Alphonso lavallee , kelompok perlakuan 1  dengan  dosis  ekstrak  biji  anggur  3.5  mg/ekor mencit/hari  memiliki  rerata  kadar  kreatinin  serum sebesar 5.83 mg/dL, kelompok perlakuan 2 dengan dosis  7  mg/ekor mencit/hari  memiliki  rerata  4.83 mg/dL,  sedangkan  kelompok  perlakuan  3  dengan dosis  14  mg/ekor  mencit/hari  memiliki  rerata sebesar  3.92mg/dL.
Hasil  uji  normalitas  diperoleh  nilai  p  > 0.05 yang dapat disimpulkan bahwa distribusi data bersifat normal. Sedangkan uji homogenitas ( levene test )  untuk  mendeteksi  adanya  kesamaan  ragam didapatkan  nilai  p  =  0.863.  Karena  nilai  p  >  0.05 maka varian data bersifat homogen.Sehingga syarat untuk dilakukan  uji One way ANOVA terpenuhi. Hasil uji oneway ANOVAmenunjukkan nilai p  <  0.05  berarti  terdapat  perbedaan  bermakna antara  kadar  kreatinin  serum  kelompok  perlakuan yang  diberi  dosis  tertentu  ekstrak  biji  anggur  var Alphonso lavallee dengan kadar kreatinin serum pada kelompok  kontrol.  Karena  uji One  way ANOVA menunjukkan  bahwa  terdapat  perbedaan  yang bermakna, maka untuk mengetahui pada kelompok mana  yang  memiliki  perbedaan  bermakna,  maka dilakukan  uji Post  hoc .  Dari  hasil  uji Post hoc menunjukkan  bahwa  hanya  antara  kelompok kontrol positif dengan kelompok perlakuan 1 (dosis ekstrak biji anggur var Alphonso lavallee 3.5 mg/ekor mencit/hari)  yang  menunjukkan  tidak  berbeda signifikan.  Sedangkan  antar  kelompok  yang  lain menunjukkan  berbeda  signifikan  karena  diperoleh nilai  p  <  0.05.
Berdasarkan  hasil  uji  regresi  didapatkan nilai  koefisien  korelasi  (r)  sebesar  0,910.  Sehingga dapat  disimpulkan  bahwaekstrak  biji  anggur  var Alphonso lavallee memiliki pengaruh yang sangat kuat terhadap kadar kreatinin serum mencit jantan yang diinduksi kalium oksonat. Selain itu, pada uji regresi diatas  didapatkan  persamaan  sebagai  berikut  :
Y  =  6.317  +  (  -  0.178)  X Keterangan:
Y  =  kadar  kreatinin  serum
X  =  dosis  ekstrak  biji  anggur  var Alphonso  lavallee Aplikasi dari persamaan diatas adalah untuk memprediksi penurunan kadar kreatinin serum pada mencit yang diinduksi kalium oksonat selama 7 hari bila  mencit  tersebut  diberi  ekstrak  biji  anggur  var Alphonso lavallee dengan dosis lain yang tidak diteliti. Untuk menilai kualitas persamaan hasil analisis regresi linier, dapat dinilai dengan melihat hasil uji ANOVA yang ada pada statistik uji regresi.Suatu persamaan dikatakan layak untuk digunakan bila nilai p < 0.05. Pada  uji  anova  didapatkan  p  =  0.000  sehingga persamaan diatas layak untuk digunakan. Hasil juga menunjukan bahwa adjusted R square sebesar 0.820, sehingga  dapat  dikatakan  bahwa  dosis  ekstrak  biji anggur  var Alphonso  lavallee berpengaruh  terhadap penurunan kadar kreatinin serum sebesar ( adjusted R square x  100)  =  82%.  Sisa  presentase  18% menunjukkan  bahwa  penurunan  kadar  kreatinin serum  pada  penelitian  ini  dipengaruhi  oleh  faktor lain  selain  dosis  ekstrak  biji  anggur  var Alphonso lavallee .

## PEMBAHASAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dan  analisis statistik menunjukkan bahwa pemberian ekstrak biji anggur var Alphonso lavallee dapat menurunkan kadar kreatinin serum mencit jantan yang diinduksi kalium oksonat.  Pada  penelitian  ini,  induksi  oksonat ditujukan untuk meningkatan kadar asam urat dalam darah,dimana  asam  urat  ini  dapat  menyebabkan terjadinya kerusakan fungsi ginjal (Busuioc M, 2007) . Kalium  oksonat  bekerja  dengan  cara menghambat  enzim  urikase  sehingga    asam  urat tidak  dapat  berubah  menjadi  alantoin  untuk diekskresikan,sehingga kadar asam urat meningkat. Hal ini sesuai dengan penelitian sebelumnya dimana mencit  yang  diberi  kalium  oksonat  dengan  dosis 250  mg/kg/hari  selama  7  hari  menunjukkan peningkatan kadar ureum yang signifikan dari 4.91 mg/dL  menjadi  7.37  mg/dL (Chen  YS,  2013) .
Peningkatan  kadar  asam  urat  dapat menyebabkan  terjadinya  kerusakan  fungsi  ginjal. Hal  ini  dikarenakan  asam  urat  menyebabkan vasokonstriksi  ginjal  dan  disfungsi  endotel  akibat terjadinya stres oksidatif dan respon inflamasi 2 .Stres oksidasi timbul akibat reaksi xanthin oksidase dalam proses metabolisme asam urat. Adanya stress oksidasi menyebabkan  inhibisi  produksi  NO  ( Nitric  oxide). Penurunan  produksi  NO  menyebabkan  terjadinya
PENGARUH EKTRAK BIJI  ANGGUR TERHADAP FUNGSI GINJAL 49 disfungsi  endotel  yang  berhubungan  erat  dengan terjadinya  hipertensi.Hipertensi  sendiri  dapat menyebabkan  gangguan  pada  pembuluh  darah kecil terutama pada pembuluh darah preglomerulus ginjal (Prasad  Sah  OS,  2015) .
Asam  urat  akan  masuk  ke  dalam  sel  otot polos  vaskular  (VSMC  ( Vascular  Smooth  Muscle Cell )) melalui transporter anion organic (OAT). Di dalam VSMC, asam urat akan mengaktivasi protein kinase  P38  maupun  Erk1/2  yang  mempengaruhi faktor transkripsi nuklear NF-KB dan AP-1 untuk menghasilkan fenotip proliferasi dan proinflamasi, sehingga otot polos vaskular dari pembuluh darah memproduksi  COX2,  senyawa  vasokostriktif (angiotensin  II,  tromboksan  A 2 ),  sitokin,  dan molekul  proinflamasi  ( C-reactive  protein (CRP), monocytechemoattractan protein-1 (MCP-1). COX2 dan TXA2  menyebabkan  peningkatan  ekspresi  dari faktor  pertumbuhan  ( platelet-derived  growth  factor (PDGF))  yang  menyebabkan  proliferasi  VSMC. Proliferasi  sel,  peningkatan  ekspresi  senyawa vasokonstriktif,  dan  infiltrasi  makrofag  akibat ekspresi MCP-1 , menyebabkan dinding pembuluh darah  preglomerulus  menebal  dan  terjadi arteriolopati  preglomerulus.  Hal  ini  menyebabkan hipoperfusi  yang  berakhir  menjadi  injuri  ginjal. Selain itu, injuri ginjal juga dapat disebabkan akibat asam urat melalui aktivasi RAS dan juga peningkatan faktor proinflamasi IL1â, IL6, dan TNFá. Disfungsi ginjal  dapat  dinilai  dengan  kadar  kreatinin  serum.
Peningkatan asam urat pada akhirnya dapat menyebabkan  kerusakan  ginjal  yang  ditunjukkan dengan peningkatan kadar kreatinin serum. Hal ini sesuai dengan hasil penelitian yang dilakukan yaitu pada mencit kelompok kontrol positif yang diberi kalium  oksonat  dengan  dosis  250  mg/kg/hari pada  mencit  selama  7  hari,  memiliki  rerata  kadar kreatinin serum sebesar 6.33 mg/dL. Pada mencit kelompok  kontrol  negatif didapatkan  rerata  kadar kreatinin  serum  sebesar  2.92.  Hasil  penelitian  ini sesuai  dengan  penelitian  sebelumnya  yang menunjukkan  bahwa  pemberin  kalium  oksonat dengan  dosis  250  mg/kg/hari  menyebabkan peningkatan kreatinin serum yang signifikan sejalan dengan  peningkatan  kadar  asam  urat.  Namun dengan hasil kadar serum kreatinin yang meningkat tersebut  belum  dapat  dipastikan  bahwa  mencit jantan  telah  mengalami  disfungsi  ginjal.  Hal  ini disebabkan  karena  hasil  dari  berbagai  penelitian yang  menggunakan  kalium  oksonat  dengan  dosis
250mg/kg/hari  selama  7  hari  berbeda- beda.Penelitian  yang  dilakukan  Shi  YW et  al menunjukkan peningkatan yang signifikan dari ±0.98 menjadi  ±1.18  mg/dL,  penelitian  Chen  YS et  al menunjukkan  peningkatan  dari  0.89  menjadi  1.06 mg/dL.  Sedangkan  penelitian  Wang  R et  al menunjukkan  peningkatan  dari  0.99  menjadi  1.24 mg/dL,  namun  meskipun  tidak  diketahui  secara pasti  terjadi  disfungsi  ginjal,  pada  penelitian  ini disebutkan  bahwa  ginjal  mencit  mengalami perubahan histopatologi yaitu terjadi dilatasi tubular pada ginjal dan degenerasi vakuolar sel epitel tubular.
Hasil kreatinin serum peneliti berbeda jauh dengan  hasil  pada  penelitian  terdahulu.  Hal  ini karena  peneliti  menggunakan Jaffe  Methods untuk mengukut  kadar  serum  kreatinin. Jaffe  methods memiliki  hasil  perhitungan  kadar  kreatinin  yang overestimasi  akibat  pengaruh  dari  kromatogen nonkreatinin (Dunn SR, 2004) .
Penelitian  menunjukkan  bahwa  dengan pemberian  ekstrak  biji  anggur  var Alphonso  lavallee memiliki  korelasi  atau  hubungan  yang  sangat  kuat (r  =  0.910)  dalam  mencegah  peningkatan  kadar kreatinin  serum  kelompok  perlakuan  yang  lebih rendah  dibanding  kontrol  positif.  Hambatan  ini diduga disebabkan karena biji anggur mengandung banyak  senyawa  polifenol  yaitu flavonoid, proanthocyanidin ,  dan resveratrol .Senyawa  polifenol secara umum telah diketahui memiliki fungsi sebagai antioksidan  dan  juga  antiinflamasi. Flavonoid dan proanthocyanidin diketahui  dapat  menghambat aktivitas xanthin  oxidase, COX-2,  TNF-á,  IL-6,dan MCP-1.  Selain  itu proanthocyanidin juga  dapat meningkatkan produksi NO sama seperti resveratrol . Hal  ini  sesuai  dengan  beberapa  penelitian terdahulu  bahwa  ekstrak  biji  anggur  dapat menurunkan  terjadinya  stres  oksidatif  dan  TNF-á pada  organ  testis  akibat  pengaruh  paparan  asap rokok  pada  tikus.  Selain  itu,  pada  penelitian  lain menunjukkan  bahwa  ekstrak proanthocyanidin biji anggur  meningkatkan  aktivitas  enzim  antioksidan dan  menurunkan  kadar  protein c-reactive ,  ekspresi TNF-á,  MCP-1pada  ginjal  tikus  diabetes  tipe-2. Selain  itu  ekstrak proanthocyanidin biji  anggur meningkatkan nitric  oxide endotel  pada  tikus  yang dibuat  hipertensi.  Resveratrol  memiliki  aktivitas nefroprotektif  pada  mencit  hiperurisemia  yang diinduksi oleh kalium oksonat melalui regulasi organic ion  transporter .  Dan  juga proanthocyanidin (ekstrak beras  merah)  menghambat  IL-6,  TNF-á,  COX-2
50 VOLUME 13 NOMOR 1 JUNI 2017
pada  sel Raw  264.7  macrophages melalui  hambatan AP-1,  NF-êB,dan  MAPK.
Hasil  uji  regresi  didapatkan  persamaan  Y = 6.317 + ( - 0.178) X. Persamaan diatas digunakan untuk memprediksi penurunan kadar kreatinin serum bila  mencit  tersebut  diberi  ekstrak  biji  anggur  var Alphonso lavallee dengan dosis lain yang tidak diteliti atau sebaliknya yaitu untuk memprediksi dosis yang diperlukan agar kadar kreatinin mencit yang diinduksi kalium  oksonat  selama  7  hari  sama  dengan  kadar kelompok  kontrol  negatif.  Pada  hasil  penelitian didapatkan  rerata  2.92,  bila  dimasukkan  pada persamaan  diatas,  maka  didapatkan  dosis  sebesar 19,10  mg/ekor  mencit/hari.  Dari  hasil  penelitian didapatkan  dosis  minimal  ekstrak  biji  anggur  var Alphonso  lavallee yang  memberikan  efekadalah  7 mg/ekor  mencit/hari  karena  menunjukkan penurunan  kadar  kreatinin  serum  yang  signifikan. Pada  dosis  3.5  mg/ekor  mencit/hari,meskipun memiliki  kadar  kreatinin  serum  yang  lebih  rendah dibandingkan  dengan  kontrol  positif,  namun perbedaan kadar tersebut tidak memiliki perbedaan yang signifikan.
Pengaruh  dosis  pemberian  ekstrak  biji anggur  var Alphonso  lavallee dalam  menghambat terjadinya disfungsi ginjal akibat peningkatan kadar asam  urat  sebesar  82%  sedangkan  18%  sisanya dipengaruhi oleh  faktor lain selain  dari  pemberian ekstrak  biji  anggur.  Sebab  peningkatan  atau penurunan  asam  urat  dan  kreatinin  dipengaruhi oleh  beberapa  faktor,  baik  dari  faktor  endogen maupun  eksogen.  Kreatinin adalah  hasil  metabolit kreatin yang  utamanya diproduksi oleh otot  skelet yang  kemudian  secara  bebas  akan  difiltasi  dalam glomerulus. Oleh karena itu, massa otot berpengaruh terhadap  kadar  kreatinin,  dimana  usia  secara  tidak langsung  akan  berpengaruh karena pada  usia yang lebih tua, jumlah massa otot akan menurun. Sehingga bisa  digunakan  parameter  lain  untuk  mengetahui apakah terdapat peningkatan secara statistik pengaruh hambatan  ekstrak  biji  anggur  terhadap  terjadinya disfungsi ginjal akibat peningkatan kadar asam urat pada mencit yang diberi kalium oksonat. Disebutkan pula bahwa inulinclearance -GFR adalah gold standart dalam  dalam  pengukuran  fungsi  ginjal  baik  pada studi  hewan  maupun  pada  klinis.  Selain  itu  dapat dipengaruhi  oleh  genetik  dari  mencit  meskipun mencit  yang  digunakan  dari  spesies  yang  sama. Pada  mencit  dengan  gen  tertentu  memiliki
kecenderungan memiliki kadar asam urat yang lebih tinggi.
Faktor  eksogen  yang  dapat  berpengaruh terhadap  kreatinin  serum  adalah  jumlah  diet  pada mencit.  Telah  diketahui  bahwa  kadar  asam  urat didapat  dari  endogen  dan  eksogen.  Dengan penggunaan  kalium  oksonat,  apabila  terdapat peningkatan intake protein juga lebih meningkatan kadar asam urat dibandingkan dengan intake protein yang  sedikit  karena  kalium  oksonat  menghambat asam urat menjadi allantoin untuk diekskresikan dan juga  meningkatkan xanthine  dehydrogenase maupun xanthine oxidase. Sehingga dapat diasumsikan terjadi peningkatan  jumlah  asam  urat  yang  masuk  dalam VSMC  ( Vasculaar  Smooth  Muscle  Cell) yang menyebabkan progresifitas disfungsi ginjal 15 . Selain itu dapat  dipengaruhi juga  oleh proses pembuatan ekstrak,  kondisi  lingkungan,  hormonal,  perlakuan hewan  coba  selama  penelitian  dan  metode  atau proses  pengukuran  kadar  kreatinin  serum menggunakan  spektrofotometer.  Penelitian  yang dilakukan  hanya  menggunakan post  test  only  control design sehingga tidak diketahui adakah kelainan pada mencit  sebelum  dilakukan  perlakuan  yang  dapat menyebabkan terjadinya bias.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh  dari penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  biji anggur  var Alphonso  lavallee dapat  mencegah terjadinya disfungsi ginjal pada mencit yang diinduksi kalium  oksonat.  Namun  belum  diketahui  secara pasti pada tahapan mana hambatan tersebut dalam patofisiologi  terjadinya  disfungsi  ginjal  akibat peningkatan kadar asam urat karena dalam penelitian ini hanya mengukur kadar kreatinin serum. Kreatinin merupakan salah satu parameter untuk menilai fungsi ginjal.

## DAFTAR  PUSTAKA
Bozan  B,  Tosun  G,  Ozcan  D,  2008, Study  of Polyphenol  Content  in  The  Seeds  of  Red  Grape (Vitis vinifera L.) Varieties Cultivated in Turkey and  Their  Antiradical  Activity , Food  Chemistry , 109  ,  426-430.
Breyer  MD,  Qi  Z,  2010, Better  Nephrology  for  Mice and  Man , Kidney  International, 77,  487-489.
PENGARUH EKTRAK BIJI  ANGGUR TERHADAP FUNGSI GINJAL 51 Busuioc  M,  Voroneanu  L,  Hogas  S,  et  al.  2007, Pathogenic Impact of  Hyperuricemia in Renal and Cardiovascular Disease , BANTAO journal , 5(1),1. Chen  YS,  Hu  QH,  Zhang  X,  et  al.  2013, Beneficial Effect on Rutin on Oxonate-Induced Hyperuricemia and Renal Dysfunction in Mice , Pharmacology , 92,
75-83.
Cui  X,  Liu  X,  Feng  H,  et  al.  2012, Grape  Seed Proanthocyanidin  Extracts  Enhance  Endothelial Nitric  Oxide  Synthase  Expression  Through  5’- AMP Activated Protein Kinase/Surtuin 1-Krupple Like  Factor  2  Pathway  and  Modulate  Blood Pressure  in  Ouabain  Induced  Hypertensive  Rats , The  Pharmaceutical  Society  of   Japan ,  35(12),
2192-2197.
Dunn  SR,  Qi  Z,  Bottinger  EP,  2004, Utility  of Endogenous Creatinine Clearance As a Measure of Renal Function in Mice , Kidney International , 65,
1959  –  1967.
Filiopoulos  V,  Hadjiyannakos  D,  Vlassopoulos  D,
2011, New Insights  into Uric  Acid  Effects  on the Progression and Prognosis of Chronic Kidney Disease , CIN.
Godevac  D,  Tesevic  V,  Velickovic  M,  et  al.  2010, Poliphenolic Compounds in Seeds From Some Grape Cultivars Grow in Serbia , Journal of  the Serbian Chemical Society ,  75  (12),  1641-1652.
Hashemi M, et al . 2012, Effect of grape seed extract on renal ischaemic reperfusion in Rats,Journal of  Animal and  Veterinary  Advance ,  vol  11  (14),  2529-
2532.
Hussein  S,  Abdrabba  S,  2015, Physico-chemical Characteristics, Fatty Acid, Composition of  Grape Seed Oil and Phenolic Compounds of  Whole Seeds, Seeds  and  Leaves  of  Red  Grape  in  Libya , International  Journal  of   Applied  Science  and Mathematics ,  vol.2, issue  5,  2394-2894. Kang DH, Nakagawa T, 2005, Uric Acid and Chronic Renal Disease: Possible Implication of Hyperuricemia on  Progression of  Renal  Disease , Research  Gate. Limtrakul P, Yodkeeree S, Pitchakarn P, et al. 2016,
Antiinflammatory Effects of  Proanthocyanidin-rich Red  Rice  Extract  Via  Suppression  of  MAPK, AP-1  and  NF-êB  Pathways  in  Raw  264.7 Macrophages , Nutrition  Research  and  Practice , 10(3),  251-258.
Prasad Sah OS, Qing YX, 2015, Associations Between Hyperuricemia  and  Chronic  Kidney  Disease  :  A
Review , Nephrology  and  Urology  Reseach  Center , 7(3),  e27233.
Rodrigues  WF,  Miguel  CB,  Napimoha  MH,  et  al. 2014, Establishing  Standards  for Studying  Renal Function in Mice  Through Measurements of Body Size Adjusted Creatinine and Urea Levels , Biomed Research International ,  872827. Shi YW, Wang CP, Lie L, et al. 2012, Antihyperuricemic and Nephroprotective Effects of Resveratrol and its Analogues  in  Hyperuricemic  Mice , Molecular Nutrient  Food  Research ,  1-12. Smith  E,  Marshal  L,  2015, Global  Prevalence  of Hyperuricemia: A Systematic Review of Population- Based Epidemiological Studie ’, American College of Rheumatology , 2236. Viazzi  F,  Leoncini  G,  Pontremoli  R, 2011, Cardiovascular  and  Renal  Effects  of Hyperuricaemia  and  Gout , Reumatismo ,  64(4), 253-262.
Wang  R,  MA  Chun  H,  Zhou  F,et  al.2016, Siwu Decoction Attenuates Oxonate-Induced Hyperuicemia and Kidney Inflammation in Mice , Chinese Journal of  Natural  Medicine ,  14(7),  0499-0507.
Zhou B, Chen T, Liu C, et al. 2014, IL-1â is Related to  Hyperuricemic  Nephropathy  Induced  by  High- Purine Diet , Gout and Hyperuricemia , 1(4), 151- 156.