## Kadar Fenolik dan Flavonoid Total Ekstrak Etanol Daun Anggur (Vitis vinifera L)
Total Phenolic and Flavonoid Content of Grapevine (Vitis vinifera L) Leaves Ethanol Extract
Mukhriani 1* , Ratna Sugiarna 2 , Nadhila Farhan 2 , Muh Rusdi 1 , Muh Ikhlas Arsul 1 ,
1 Jurusan Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Alauddin Makassar, Jl H.M. Yasin Limpo No.36 Kecamatan Sombaopu Kabupaten Gowa, Sulawesi Selatan
2 Mahasiswa Prodi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Alauddin Makassar, Jl H.M. Yasin Limpo No.36 Kecamatan Sombaopu Kabupaten Gowa, Sulawesi Selatan
Kontak sur-el*: fm.tetty@gmail.com

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  penelitian  mengenai  analisis  kadar  fenolik  dan  flavonoid  total  ekstrak  daun  anggur  ( Vitis vinifera L ) dengan metode Spektrofotometri UV-Vis.  Penelitian ini bertujuan untuk  menentukan kadar fenolik dan flavonoid total dalam ekstrak etanol daun anggur. Sampel diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol.  Penentuan  kadar  fenolik  total  ekstrak  menggunakan  pembanding  asam  galat  dengan  beberapa  variasi konsentrasi. Penentuan kadar flavonoid  total  menggunakan pembanding kuersetin. Nilai  absorbansi diukur dengan spektrofotometer.  Nilai  absorbansi  kemudian  dimasukkan  ke  dalam  persamaan  regresi  linier.  Hasil  penelitian menunjukkan  kadar  total  fenolik  dan  kadar  total  flavonoid  dalam  ekstrak  berturut-turut  adalah  sebesar  95,28  mg GAE /g dan 4,07 mg QE /g.
Kata Kunci : Vitis vinifera , maserasi, kadar fenolik total, kadar flavonoid total

## ABSTRACT
Studies on the analysis of  the total phenol  and flavonoid  content of grapevine  leaf extract  (Vitis vinifera L) using  UV-Vis  spectrophotometry  has  been  researched.  The  aim  of  this  study  is  to  determine  the  total  content  of phenol  and flavonoids in the ethanol extract  from leaves of  Vitis vinifera L. The samples were extracted using  the maceration method with ethanol as the solvent. Determination of total phenol content of extract using a gallic acid as  standard  with  various  concentration  variations.  Determination  of  total  flavonoid  content  using  quercetin  as standard.  Absorbances  measured  with  spectrophotometer.  Absorbances  values  then  inserted  a  linear  regression equation.  The  results  showed  that  the  total  phenol  and  flavonoid  contents  of  extract  were,  respectively,  95,28  mg GAE/g and 4.07 mg QE/g.
Keywords : Vitis vinifera, maserasi, total phenolic content, total flavonoid content

## PENDAHULUAN
Anggur  kaya  akan  senyawa  golongan flavonoid  dan  fenolik.    merupakan  tanaman yang  tumbuh  merambat,  serta  memiliki keistimewaan dengan ranting-rantingnya yang dapat mengeluarkan buah yang lebat (Nurcahyo,  1999).    Senyawa  utama  yang terdapat  dalam  tanaman  anggur  adalah
flavonoid  proantosianidin,  antosianin  dan flavonol.  Dalam  kulit  anggur,  flavonol ditemukan sebagai glikosida dari kaempferol, kuersetin, mirisetin dan isoramnetin. Sedangkan biji anggur mengandung flavan-3- ols termasuk (+)katekin, (-)epikatekin,
(-)epikatekin-3-O-galat, baik sebagai monomer  maupun  polimer  proantosianidin.
Kulit anggur memiliki konsentrasi flavan-3-ol (monomer dari proantosianidin yang mengandung  (-)  epigalokatekin)  lebih  rendah jika  dibandingkan  dengan  biji anggur  (Cortel &  Kennedy,  2006).  Menurut  Farmakope Prancis, daun anggur kering harus mengandung  setidaknya  4%  polifenol  total dan 0,2% antosianin (Chinou, 2016).
Polifenol merupakan salah satu komponen fitokimia  yang  terkandung  dalam  tanaman anggur memiliki beberapa aktivitas farmakologi. Kandungan ini memiliki berkhasiat  seperti  menghambat  penyakit jantung,  kanker,  mengurangi  oksidasi  plasma serta  memperlambat  penuaan.  Selain  itu tanaman anggur juga memiliki efek antioksidan,  antiinflamasi,  dan  antimikroba. Senyawa  fenol  mempunyai  peranan  yang sangat  penting  sebagai  antioksidan  dalam buah dan sayuran. Kandungan senyawa fenol paling besar ditemukan pada kulit, stem, daun dan  biji  dari  anggur  (Xia,  Deng,  Guo,  &  Li, 2010).
Flavonoid  dalam  Anggur  juga  berkhasiat farmakologis.  Artanti  (2006)  menyatakan bahwa sejumlah tanaman obat yang mengandung  flavonoid  telah  dilaporkan memiliki  aktivitas  antioksidan,  antibakteri, antivirus,  antiradang,  antialergi  dan  anti kanker.
Kandungan fenolik yang terkandung dalam suatu  tumbuhan  dinyatakan  sebagai GAE ( galic acid equivalent ) yaitu jumlah kesetaraan  milligram  asam  galat  ( 3,4,5- trihydroxybenzoic  acid )  dalam  satu  gram
sampel.  Sedangkan  kandungan  senyawa flavonoid ( 2-[3,4-dihydroxyphenyl]-3,5,7- trihydroxy-4H-chromen-4-one )  yang  diukur menggunakan  standar  kuersetin,  dihitung sebagai QE ( quercetin  equivalent )  (Sari, 2017). Asam galat dan kuersetin memiliki khasiat utamanya sebagai antioksidan.  Ekuivalen  asam  galat  dan ekuivalen  kuersetin  merupakan  acuan  umum untuk  mengukur  jumlah  senyawa  golongan fenolik  dan  flavonoid  yang  terdapat  dalam suatu  sampel  atau  bahan  (Lee,  Kim,  Lee,  & Lee, 2003).
Beberapa  varietas  buah  anggur  memiliki kandungan  senyawa  fenolik  dan  flavonoid yang  berbeda-beda.  Kadar  fenolik  totalnya antara  95,3  -  686,5  mg GAE /100  g  buah. Sedangkan flavonoid total  antara 94,7 - 1055 mg Catechin  Equivalent /100  g  buah  (Liang, Cheng, Zhong, & Liu, 2014).

## METODE  PENELITIAN

## Pengambilan Sampel
Sampel  daun  anggur  yang  diperoleh  dari Kabupaten  Maros  Sulawesi  Selatan  dicuci bersih.  Setelah  itu  sampel  dikeringkan  dalam lemari  pengering  pada  suhu  ±  40 o C.  Daun anggur  yang  kering  dibuat  serbuk  dan disimpan dalam wadah kering.

## Ekstraksi
Sebanyak  400  g  serbuk  kering  dimaserasi selama  3  x  24  jam  pada  suhu  kamar menggunakan  pelarut  etanol  sebanyak  4000 ml.  Penyaringan  dilakukan  dengan  corong Buchner  dan  ampas  dimaserasi  dua  kali  lagi
dengan  cara  yang  sama  kemudian  disaring. Filtrat  digabung  dan  diuapkan  dengan rotavapor hingga diperoleh ekstrak kental.

## Identifikasi Senyawa Fenolik
Larutan uji berupa hasil ekstraksi dimasukkan dalam tabung reaksi.  Larutan uji ditambahkan  pereaksi  FeCl 3 3%  dalam pelarut  etanol  sebanyak  3  tetes  dan  diamati perubahan warnanya. Hasil positif ditunjukkan  dengan  adanya  warna  hijau, merah, ungu, biru atau hitam (Tiwari, Kumar, Kaur, Kaur, & Kaur, 2011).

## Identifikasi Senyawa Flavonoid
Ekstrak sebanyak 1 mg dimasukkan dalam tabung  reaksi  dan  dilarutkan  dalam  2  ml metanol 50%. Setelah itu ditambahkan serbuk logam  magnesium  dan  4-5  tetes  HCl  pekat. Hasil  positif  jika  terbentuk  larutan  berwarna merah bata.

## Penetapan Kadar Fenolik Total
Kandungan  fenolik  didasarkan  pada  kurva absorbansi  dari  larutan  standar  asam  galat. Larutan standar 1000 ppm dibuat dengan cara 10,0  mg  asam  galat  ditimbang  kemudian dilarutkan  dengan  etanol  p.a  hingga  volume akhir  10,0  ml.  Dari  larutan  stok  tersebut dipipet  sebanyak  2,5  mL  diencerkan  dengan etanol  p.a  hingga  volume  25,0  mL  sehingga dihasilkan  konsentrasi  100  ppm.  Dari  larutan tersebut dibuat seri konsentrasi 10, 20, 30, 40 dan  50  ppm.  Masing-masing  konsentrasi larutan  asam  galat  diambil  sebanyak  5,0  ml dan  ditambahkan  dengan  0,4  ml  pereaksi
folin-cioceltaeu lalu  dikocok  dan  dibiarkan sekitar  4-8  menit.  Lalu  ditambahkan  3  ml larutan  Na 2 CO 3 7%  dan  dikocok  hingga homogen  dan  dicukupkan  dengan  air  suling hingga 10,0 ml. Campuran didiamkan selama 2  jam  pada  suhu  kamar  kemudian  diukur absorbansinya  pada  panjang  gelombang maksimal 744,8 nm dengan Spektrofotometer UV-Vis.
Pengujian  kandungan  fenolik  total  sampel dimulai  dengan  melarutkan  10,0  mg  ekstrak etanol  daun anggur  dengan  etanol  p.a  hingga diperoleh  volume  akhir  10,0  ml.  Larutan sampel kemudian direaksikan dengan prosedur  yang  sama  dengan  larutan  standar asam  galat.  Seluruh  pengukuran  absorbansi dilakukan sebanyak tiga kali.

## Penetapan Kadar Flovonoid Total
Kandungan  flavonoid  didasarkan  pada kurva absorbansi dari larutan standar kuersetin.  Larutan  standar  dibuat  dimulai dengan  melarutkan  25,0  mg  baku  standar kuersetin  dalam  etanol  hingga  volume  25,0 ml dan diperoleh konsentrasi 1000 ppm. Dari larutan  stok  tersebut  dipipet  1,0  ml  lalu dicukupkan  volumenya  sampai  10,0  ml. Dari larutan  standar  kuersetin  100  ppm,  kemudian dibuat beberapa seri konsentrasi yaitu 4, 6, 8, 10,  dan  12  ppm.  Kemudian  masing-masing konsentrasi larutan standar kuersetin sebanyak 5,0 ml ditambahkan 3 ml etanol, 0,2 ml AlCl 3 10% dan  0,2 ml kalium asetat 1 M. Setelah  itu  sampel  diinkubasi  selama  30 menit  pada  suhu  kamar.  Campuran  diukur
absorbansinya pada spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang 440 nm.
Kandungan  flavonoid  total  merujuk  pada prosedur Chang, Yang, Wen, & Chern (2002) menggunakan  kuersetin  sebagai  standar. Ditimbang  ekstrak  sebanyak  25  mg  dan dilarutkan  dalam  25,0  ml  etanol.  Larutan sampel kemudian direaksikan dengan prosedur  yang  sama  dengan  larutan  standar kuersetin.  Pengukuran  dilakukan  sebanyak tiga kali.

## Analisis Data
Analisis  data  menggunakan  persamaan regresi  linear  yang  dihitung  dengan  program Microsoft Excel sehingga diperoleh persamaan linier standar dari kurva absorbansi (y) vs konsentrasi (x). Konsentrasi fenolik  dan  flavonoid  dari  larutan  sampel dihitung berdasarkan persamaan linier standar.
Perhitungan  kadar  fenolik  (PH)  dan flavonoid  (F)  total  dihitung  dengan  rumus berikut:

## 𝑃𝐻 𝑎𝑡𝑎𝑢 𝐹 = 𝑐. 𝑣. 𝑓𝑝
𝑔
dimana,  c  =  konsentrasi  sampel,  v  =  volume ekstrak  yang  digunakan,  fp  =  faktor pengenceran, dan g = berat sampel

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tanaman  anggur  merupakan  salah  satu tanaman  yang  memiliki  banyak manfaat baik dari  segi  buah,  biji  dan  daunnya.  Anggur memiliki fungsi sebagai antikaries, antiketombe, antifungi, antimikroba,
antioksidan, bahan flavor , light stabilizer , dan sunscreen .  Manfaat  lain  dari  daun  anggur adalah sebagai antibakteri. Kandungan senyawa  yang  terdapat  dalam  daun  anggur untuk mengobati infeksi bakteri (Papadopoulou,  Soulti,  &  Roussis,  2005). Dalam  penelitian  sebelumnya,  senyawa fenolik  dan  flavonoid  diketahui  memiliki berbagai  efek  biologis  sebagai  antioksidan, melindungi    struktur  sel,  antiinflamasi,  dan sebagai  antiseptik  (Xia,  Deng,  Guo,  &  Li, 2010).
Hasil  (tabel  1)  menunjukkan  bahwa ekstrak etanol daun anggur positif mengandung  senyawa  fenolik  dan  flavonoid yang  ditandai  dengan  perubahan  warna menjadi hijau kehitaman dan kuning. Identifikasi senyawa fenolik dilakukan dengan menggunakan  larutan FeCl 3 . Ion Fe 3+ akan  bereaksi  dengan  gugus  fenolik  yang berada  pada  sampel  membentuk  warna  hijau, biru,  atau  hitam,  sebagai  petunjuk  adanya senyawa  fenolik  (Xia,  Deng,  Guo,  &  Li, 2010).  Reaksi  dapat  dilihat  pada  gambar  1. Untuk identifikasi senyawa flavonoid penambahan  logam  Mg  dan  HCl  pada senyawa flavonoid bertujuan untuk mereduksi inti  benzopiron  yang  terdapat  dalam  struktur flavonoid  sehingga  terjadi  perubahan  warna
Tabel 1. Hasil uji pendahuluan ekstrak
Uji golongan Pereaksi Warna Kesim- pulan Fenolik FeCl 3 Hijau kehitaman + Flavonoid Mg + HCl Merah bata +
jingga  atau  merah  (lihat  gambar  2). Penambahan  HCl  mengakibatkan  reaksi oksidasi  reduksi  antara  logam  Mg  sebagai pereduksi dengan senyawa flavonoid.
Penelitian ini dilakukan untuk menentukan kadar senyawa fenolik total pada daun anggur dengan  menggunakan  asam  gallat.  Senyawa ini merupakan salah satu senyawa fenol alami turunan  asam  hidroksibenzoat.  Asam  galat direaksikan  dengan  Folin-Ciocalteu  dalam suasana  basa  menghasilkan warna  hijau kehitaman  yang  menandakan  positif  atau mengandung fenol. Senyawa fenolik direaksikan  dalam  suasana  basa  agar  terjadi disosiasi  proton  menjadi  ion  fenolat.  Reaksi senyawa  fenol  dengan  Folin-Ciocalteu  dapat dilihat  pada  gambar  3.  Larutan  basa  yang ditambahkan dalam penetapan kadar senyawa
fenolik  total  adalah  larutan  Na 2 CO 3 (Xia, Deng, Guo, & Li, 2010).
Berdasarkan  grafik  (gambar  4)  bahwa kurva  kalibrasi  dengan  persamaan  regresi untuk  absorbasi  asam  galat  adalah  y  = 0,0042x + 0,0625. Sedangkan pada penentuan kurva kalibrasi kuersetin (gambar 5) diperoleh  persamaan  regresi  y  =  0,0505x  + 0,0468. Pada persamaan kurva baku kuersetin dan  asam  galat  diperoleh  hubungan  yang linear  antara  absorbansi  dengan  konsentrasi dengan nilai koefisien korelasi sebesar >0,98. Nilai  (R)  yang  mendekati  satu  menunjukkan bahwa  persamaan  regresi  tersebut  adalah linear.  Perhitungan  ini  berdasarkan  hukum Lambert-Beer  yang  menunjukkan  hubungan antara  peningkatan  kadar  analit  terhadap kenaikan absorbansi.
Gambar 1. Reaksi senyawa fenol dengan FeCl 3
Gambar 2. Reaksi senyawa flavonoid dengan Mg dan HCl
Gambar 3. Reaksi senyawa fenol dengan reagen folin ciocalteu.
Hasil  dari  pengukuran  kadar  fenolik  dan flavonoid  total    ekstrak  etanol  daun  anggur (tabel  4  dan  5)  berturut-turut  adalah  sebesar
95,28  mg GAE /g  ekstrak  dan  4,07  mg QE /g ekstrak.  Kadar  fenolik  dan  flavonoid  yang telah dilaporkan Liang, Cheng, Zhong, & Liu
Tabel 2. Absobansi kurva kalibrasi asam galat
Konsentrasi Absorbansi 1 2 3 Rata-rata 10 0,105 0,107 0,109 0,107 20 0,149 0,151 0,156 0,152 30 0,178 0,174 0,176 0,176 40 0,225 0,227 0,229 0,227 50 0,278 0,280 0,280 0,279 Gambar 4. Kurva standar asam galat. Tabel 3. Absorbansi kurva kalibrasi kuersetin Konsentrasi Absorbansi 1 2 3 Rata-rata 4 0,248 0,240 0,234 0,240 6 0,350 0,348 0,346 0,348 8 0,482 0,480 0,478 0,480 10 0,533 0,540 0,529 0,534 12 0,656 0,642 0,662 0,653
Gambar 5. Kurva standar kuersetin
y = 0,0042x + 0,0625 R² = 0,9861 0,1 0,12 0,14 0,16 0,18 0,2 0,22 0,24 0,26 0,28 0,3 5 10 15 20
25 30 35 40 45 50 55 A b so rb an si Konsentrasi (ppm) y = 0,0506x + 0,0462 R² = 0,9879 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45 0,5 0,55 0,6 0,65 0,7 3 4 5 6
7 8 9 10 11 12 13 A b so rb an si
Konsentrasi (ppm)
(2014)  yaitu  0,95  –  6,865  mg GAE /g  dan 0,947  –  10,55  mg Catechin  Equivalent /g untuk sampel buah. Kandungan dalam sampel ekstrak  tentu  saja  lebih  besar  dari  pada sampel  buah  yang  tidak  diekstraksi.  Selain itu, perbedaan dalam pengamatan ini sebagian besar  tentu  dikaitkan  dengan  varietas  yang digunakan dalam penelitian, lokasi pengambilan sampel, proses perawatan tanaman dan prosedur analisis.

## KESIMPULAN
Ekstrak  etanol  daun  anggur  positif mengandung  senyawa  fenolik  dan  flavonoid. Kadar  fenolik  total  ekstrak  etanol  sebesar 95,277 mg GAE /g dan flavonoid total sebesar 4,069 mg QE /g.

## DAFTAR PUSTAKA
Artanti, M. (2006).
Isolation and identification of active antioxsidant compound  from  star  fruit. Journal  of applied sciences , 1659-1663.
Chang,  C.,  Yang,  M.,  Wen,  H.,  &  Chern,  J. (2002).  Estimation  of  Total  Flavonoid
Content in Propolis by Two Complementary  Colorimetric  Methods.
Journal of Food and Drug Analysis, 10 (3),
178-182.
Chinou, I. (2016). Assessment Report on Vitis vinifera  L.,  Folium. London:  European
Medicines  Agency,  Science  Medicine Health. Retrieved from https://www.ema.europa.eu/en/documents/ herbal-report/draft-assessment-report-vitis- vinifera-l-folium_en.pdf
Cortel,  J.,  &  Kennedy,  J.  (2006).  Effect  of Shading  on  Accumulation  of  Flavonoid Compounds  in  (Vitis  vinifera  L.)  Pinot Noir  Fruit  and  Extraction  in  a  Model System. J.  Agric  Food  Chem,  54 (22), 8510-20.
Lee, K., Kim, Y., Lee, H., & Lee, C. (2003). Cocoa  Has  More  Phenolic  Phytochemical and  Higher  Antioxidant  Capacity  than Teas and Red Wine. J. Agric. Food Chem, 51 , 7292-7295.
Liang,  Z.,  Cheng,  L.,  Zhong,  G.,  &  Liu,  R. (2014).  Antioxidant  and  Antiproliferative Activities  of  Twenty-Four  Vitis  vinifera Grapes.
PLoS One , e105146.
doi:10.1371//journal.pone.0105146
Nurcahyo,  E.  (1999). Anggur  Dalam  Pot. Jakarta: Penebar Swadaya.
Papadopoulou,  C.,  Soulti,  K.,  &  Roussis,  I. (2005). Potential Antimicrobial Activity of
Red  and  White  Wine  Phenolic  Extracts against Strains of Staphylococcus aureus,Escherichia coli and Candida albicans. Food Technology and
Biotechnology , 547579616-92.
Sari, N. (2017). Penentuan Kadar Total Fenol dan  Total  Flavonoid  dari  Ekstrak  Etanol Buah Andaliman
(Zanthoxylum acanthopodium  DC.). Sumatra  Utara:
Repositori  Institusi  USU.  Retrieved  from http://repositori.usu.ac.id/bitstream/handle/ 123456789/12813/121501075.pdf?sequenc e=1&isAllowed=y

## Tabel 4. Kandungan fenolik total
Berat bahan (g)  Absorbansi  Absorbansi rata-rata
Kadar fenolik total (mg GAE /g ekstrak) 0,01 0,347 0,336 95,277 0,314 0,348 Tabel 5. Kandungan flavonoid total Berat bahan (g)  Absorbansi  Absorbansi rata-rata  Kadar flavonoid total (mg QE /g ekstrak) 0,025 0,268 0,252 4,069
0,235 0,254
Tiwari, P., Kumar, B., Kaur, M., Kaur, G., & Kaur,  H.  (2011).  Phytochemical  screening and  Extraction:  A  Review. Internationale Pharmaceutica Sciencia , 98-106.
Xia,  E.,  Deng,  G.,  Guo,  Y.,  & Li,  H.  (2010).
Biological  Activities  of  Polyphenol  from Grapes. Int. J. Mol. Sci , 11.