Copyright © 2023, JPLP, e ISSN 2654-251X
Validasi Kurkumin Hasil Isolasi Rimpang Kunyit Dengan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Photodiode Array Detector
Ida Nur Farida a , Annisa Muliya b
a Laboratorium Sentral Universitas Padjadjaran, Bandung
b Laboratorium Sentral Universitas Padjadjaran, Bandung Corresponding Author: ida.n.farida@unpad.ac.id
Received: 23 nd December  2022; Revised: 23 th Juny 2023; Accepted: 09 th July 2023
Available online: 18 th July 2023; Published regularly: July 2023

## Abstract
Curcumin  is  the  main  compound  in  turmeric  and  has  problems  in  its  stability.  The  analytical  method  used  to determine  curcumin  levels  is  by  using  high  performance  liquid  Chromatography  (HPLC) Photodiode  Array  Detector (PDA).  HPLC  has  a  high  separation  capability  and  good  reproducibility  with  a  low  detection  limit.  The  purpose  of  this research is that the isolation curcumine determined by HPLC-PDA and has been validated can be applied as a standard in quantitative analysis in the laboratory. The validation parameters specified include accuracy, precision, linearity, detection limits  and  quantification  limits.  The  results  of  HPLC-PDA  research  used  acetonitrile  mobile  phase  condition:  buffer phosphate pH 3,5 (70:30 v/v), flow rate of 1 mL/min, wavelength 426 nm  showed curcumin from isolation had resolution (Rs= 5.7172), linearity (r=0.9991), accuracy (0.5 and 1 ppm), presicion at a concentration of 5 ppm %RSD  < 20.0%, and BD  values  also  BK  are  0.1122  and  0.3401  ppm.  Validation  of  curcumin  from  isolation  using  HPLC-PDA  has  the requirements as a good validation and can be used as a reference in the laboratory.
Key Words : Curcumin, HPLC-PDA, Validation

## Abstrak
Kurkumin merupakan senyawa utama yang terdapat dalam rimpang kunyit dan bermasalah dalam stabilitasnya. Metode analisis yang digunakan untuk penentuan kadar kurkumin yaitu dengan menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi  (KCKT)  Photodiode  Array  Detector  (PDA).  KCKT  memiliki  kemampuan  daya  pisah  yang  tinggi  serta reproduksibilitas yang baik dengan limit deteksi yang rendah. Adapun tujuan dari penelitian ini adalah agar kurkumin hasil isolasi  yang  ditentukan  dengan  KCKT-PDA  dan  telah  divalidasi  dapat  diterapkan  sebagai  standar  dalam  analisis kuantitatif di Laboratorium. Adapun parameter validasi yang ditentukan meliputi akurasi, presisi, linearitas, batas deteksi, dan batas kuantifikasi. Hasil penelitan KCKT-PDA menggunakan kondisi fase gerak asetonitril: buffer fosfat pH 3,5 (70:30 v/v),  laju  alir  1mL/menit,  panjang  gelombang 426nm  menunjukkan  kurkumin hasil  isolasi  memiliki  resolusi  (Rs=5,7172), linearitas  (r=0,9991),  akurasi  (0,5  dan  1  ppm),  presisi  pada  konsentrasi  5  ppm  %RSD  ≤  20,0%,  dan  nilai  BD  juga  BK adalah 0,1122 dan 0,3401 ppm. Validasi kurkumin hasil isolasi dengan menggunakan KCKT-PDA hasilnya telah memenuhi dalam persyaratan sebagai validasi yang baik dan dapat digunakan sebagai referensi di Laboratorium.
Kata Kunci : Kurkumin, KCKT-PDA, validasi

## PENDAHULUAN
Kunyit  merupakan  sediaan  dengan  kandungan  senyawa  paling  utamanya  yaitu  kurkumin.  Kurkumin memiliki  antioksidan,  antiinflamasi,  aktivitas  antikanker  pada  target  molekul  yang  beragam,  antibakteri  dan antiagen hepatotoksik yang ampuh (Hirlekar et al ., 2018). Kurkumin bermasalah dalam stabilitasnya. Kurkumin akan terdegradasi pada pH di atas 6,5 atau karena terpapar cahaya berlebih (Tonnesen et al ., 1985b). Stabilitas  kurkumin  dipengaruhi  oleh  pH  dan  cahaya.  Kurkumin  dalam  larutan  air  akan  mengalami reaksi  hidrolisis  yang  sangat  tergantung  pada  pH  lingkungan.  Pada  larutan  asam  (pH  rendah),  kurkumin berwarna kuning, sedangkan dalam suasana alkali kurkumin menghasilkan warna coklat kemerahan yang pekat sampai  kuning  muda  (Tonnesen  et  al.,  1985a).  Kurkumin  stabil  pada  pH  di  bawah  6,5  dan  akan  terdegradasi pada pH di atas 6,5. Hal ini disebabkan adanya gugus metilen aktif. Produk degradasi kurkumin dalam suasana alkali (pH 7-10) akan menghasilkan asam ferulat dan feruloil metan (Tonnesen et al ., 1995b).
Metode  analisis  yang  digunakan  untuk  penentuan  kadar  kurkumin  yaitu  dengan  menggunakan Kromatografi  Cair  Kinerja  Tinggi  (KCKT).  KCKT  memiliki  kemampuan  daya  pisah  yang  tinggi  serta reproduksibilitas  yang  baik  dengan  limit  deteksi  yang  rendah  KCKT  merupakan  teknik  kuantitatif  dangan analisis yang lebih cepat (Schiborr et al ., 2010).
Pada  penelitian  ini  penulis  bertujuan  untuk  melakukan  pengembangan  validasi  metode  KCKT menggunakan PDA dari hasil isolasi kurkumin rimpang kunyit. Metode yang akan digunakan pada penelitian ini disesuaikan  dengan  metode  yang  dilakukan  oleh  Hirlekar et  al .,  (2018).  Analisis  kurkumin  dilakukan  dengan sistem  KCKT  dengan  kondisi  optimum  fasa  gerak  asetonitril  :  buffer  fosfat  pH  3,5  (70:30  v/v)  pada  1,0 mL/menit,  fasa  diam  kolom  C18    (250  mm  ×  4,6  mm,  5μm),  pengukuran  dengan  detektor  UV  pada  panjang gelombang  360  nm  disesuaikan  dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Schiborr  (2010).  Pengembangan  dan validasi metode KCKT yang kuat, tepat dan akurat serta cepat pada kurkumin hasil isolasi dari sampel rimpang kunyit dapat diterapkan sebagai standar dalam analisis kuantitatif di Laboratorium.

## BAHAN DAN METODE
Rancangan  riset  yang  dilakukan  adalah  metode  kuantitatif  dengan  tahapan  secara  umum  dapat  dilihat pada diagram alir penelitian pada Gambar 1.
Gambar 1. Diagram alir penelitian
Uji Kesesusaian Sistem KCKT dengan Photodiode Array Detector
(PDA)
Fasa gerak  asetonitril : buffer fosfat pH 3 (70:30 v/v) pada 1,0 mL/menit. Fasa diam R-18) endcapped (5 𝜇𝑚) berukuran 125 x 4 mm
Validasi Metode KCKT (Linearitas, Akurasi, Presisi, Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi)
Hasil validasi kurkumin hasil isolasi

## 1. Penyiapan Fase Gerak KCKT
Fase  gerak  yang  digunakan  terdiri  dari  asetonitril  dan  buffer  fosfat  pH  3,5.  Kalium  dihidrogen  fosfat ditimbang sekitar 1.7011 g secara akurat dilarutkan dalam air mili-Q (500mL), dan pH disesuaikan dengan asam ortofosfat sampai pH 3,5. Masing-masing komponen fase gerak disaring melalui organic solvent membrane filter berukuran pori 0,45 μm; diameter 47 mm dengan bantuan pompa vakum, selanjutnya dihilangkan udara terlarut dengan ultrasonikator selama 15 menit. Pencampuran kedua komponen fase gerak dilakukan di dalam instrument KCKT dengan perbandingan asetonitril : buffer fosfat pH 3,5 (70:30 v/v) pada 1,0 mL/menit.
2. Pembuatan Larutan Baku Kurkumin
a. Pembuatan larutan stok kurkumin 1000 ppm
b. Pembuatan larutan intermediet kurkumin 500 ppm
c. Pembuatan seri larutan baku kurkumin (5, 10, 20, 40, dan 80 ppm)

## 3. Uji Kesesuaian Sistem
Uji  kesesuaian  sistem  dilakukan  dengan  menyuntikkan  standar  campuran  20  ppm  pada  kondisi  optimum sebanyak  lima  kali  ulangan  (n=5)  berdasarkan  USP.  Kromatogram  yang  diperoleh  kemudian  ditentukan keterulangan  penyuntikan  larutan  bakunya  yang  dinyatakan  dengan  KV  dari  waktu  retensi,  luas  area  puncak, tailing faktor, resolusi (Rs), efisiensi kolom (N), dan tinggi plat teoritis (HETP).

## 4. Validasi Metode Analisis

## 1.  Linearitas
Larutan baku campuran dengan konsentrasi 5; 10; 20; 40; dan 80 ppm, masing-masing, lima seri konsentrasi larutan  yang  sesuai  diinjeksikan  ke  KCKT  kemudian  dilakukan  replikasi  sebanyak  tiga  kali.  Kurva  kalibrasi dibuat  dengan  memplotkan  rata-rata  luas  area  kroamatogram  dan  konsentrasi  standar.  Hasil  plot  adalah  kurva linear, y=ax+b dengan r sebagai determinan linearitas (Enner et al ., 2005).

## 2.  Akurasi
Penentuan akurasi dilakukan dengan membuat 5 kosentrasi yang berbeda, yaitu 5; 10; 20; 40; dan 80 ppm dan  setiap  konsentrasi  diukur  masing-masing  sebanyak  tiga  kali.  Luas  area  yang  dimasukkan  ke  dalam persamaan  regresi  dari  kurva  kalibrasi. Konsentrasi  perolehan  kembali (%  PK) harus antara  nilai  akurasi yang diperoleh sesuai dengan persyaratan, yaitu 80-120% (Shabir, 2004).  % PK diperoleh dari persamaan (1)
(1)
Keterangan:
a : kosentrasi perolehan kembali
b  : kosentrasi standar

## 3.  Presisi
Presisi  diukur  dengan  cara  menyuntikkan  minimal  6  kali  konsentrasi  yang  sama  pada  sistem  KCKT, kemudian dihitung nilai presisinya yang dinyatakan dengan simpangan  deviasi relatif (RSD) respon ≤2,0 sesuai dengan persamaan (2).
SD= √ ) RSD= (2)
Keterangan: SD  : Standar Deviasi x i : kadar analit pada setiap ulangan
x : kadar analit rata-rata
n : jumlah pengulangan
RSD : simpangan deviasi relatif  atau koefisien variasi (KV)
%𝑃𝐾 = 𝑎 𝑏 %

## 4.  Batas Deteksi (BD) dan Batas Kuantifikasi (BK)
BD dan BK diperoleh dengan metode penentuan berdasarkan standar deviasi dan slope. BD dan BK dihitung sesuai dengan persamaan (3) dan (4).
Keterangan : Q : LOD ( limits of detection ) atau LOQ ( limits of  quantitation ) K : 3 untuk LOD dan 10 untuk LOQ
Sb  : simpangan baku respon analitik dari blanko Sl  : arah garis linear (kepekaan arah) dari kurva antara respon terhadap kosentrasi  = slope (b pada persamaan garis y = a + bx a. Limits of detection (Q)
Karena K = 3, Simpangan baku (Sb) = Sy / x, maka
(3)
b. Limits of quantitation (Q) K = 10 maka
(4)
(Susanti et al ., 2017)

## HASIL DAN PEMBAHASAN/RESULTS AND DISCUSSION
1. Penyiapan Fase Gerak dan Penyiapan Larutan Standar dan KCKT
Optimasi  pelarut  dilakukan  dengan  perbandingan  jumlah  pelarut  asetonitril:buffer  fosfat  pH  3  (80:20; 70:30; 60:40; 50:50; 40:60 v/v) dan pada penelitian sebelumnya oleh (Widjaja, 2010) penetapan kadar kurkumin dalam  sediaan  cair  obat  herbal  terstandar  menggunakan  fasa  gerak  metanol  :  asam  asetat  glasial  2%  (90:10; 80:20;  70;30  v/v).  Berdasarkan  hasil  optimasi  diperoleh  kondisi  optimal  pada  sistem  KCKT  untuk  penentuan senyawa kurkumin dengan menggunakan fasa gerak asetonitril : buffer fosfat pH 3 (70:30 v/v) dengan laju alir 1 mL/  menit.   Fase  gerak  asetonitril :  buffer  fosfat pH 3  (70:30  v/v)  memiliki  pH  3,89,  pH  ini  merupakan  salah satu tindakan untuk mencegah kerusakan pada kolom kromatografi.

## 2. Uji Kesesuaian Sistem KCKT
Uji kesesuaian sistem dilakukan guna memastikan bahwa sistem yang digunakan berjalan baik, sehingga metode yang digunakan dalam analisis ini memberikan data yang akurat,  spesifik, reprodusibel dan tahan pada kisaran  analit  yang  dianalisis.  Parameter  –  parameter  yang  digunakan  meliputi:  bilangan  lempeng  teori  (N), efisiensi  kolom  (HETP),  faktor tailing (FT),  resolusi  atau  keterpisahan  (Rs),  kapasitas  kolom  (k’)  dan selektivitas ( ) .
Q = 𝑘  𝑆𝑏 𝑆𝑙 Q = 0𝑆𝑦 𝑥 𝑆𝑙 Q = 3𝑆𝑦 𝑥 𝑆𝑙
Tabel 1 Data hasil uji kesesuaian sistem KCKT standar kurkumin
N HETP (mm) TF Rs 2026,9773 0,0123 0,8000 5,7172 1,0837 1,9892
Dari tabel 1 dapat disimpulkan bahwa dalam pengujian standar kurkumin dengan KCKT menggunakan kolom  oktadesilsilan  (R-18) endcapped (5 ) berukuran  250  x  4  mm  dengan  fase  gerak  asetonitril  : buffer fosfat  pH  3,5  dengan  laju  alir  1mL/menit  memenuhi  syarat  uji  kesesuaian  sistem.  Diantaranya  syarat keberterimaan menurut (Susanti dan Dachriyanus, 2017) dan (Bahti, 2011) nilai N > 1000, HETP 0,01-1 mm, TF
Rs  >  1,5, , .  Sehingga  metode  yang  digunakan  dalam  analisis  dapat  digunakan  untuk mengetahui kemurnian dari senyawa kurkumin dari hasil isolasi rimpang kunyit.

## 3. Validasi Metode Analisis

## 1. Hasil Uji Linearitas
Pembuatan  kurva  standar  bertujuan  untuk  mendapatkan  persamaan  regresi  linear yang  akan  digunakan untuk  analisis  kuantitatif.  Linearitas  dinyatakan  dengan  koefisien  korelasi  (r).  Konsentrasi  larutan  standar kurkumin  yang  diperoleh  diplotkan  terhadap  luas  area  pada  kromatogram  sehingga  diperoleh  nilai  koefisien korelasi (r) dari persamaan y = bx + a (Harmita, 2004).
Larutan seri standar dibuat dalam tujuh variasi konsentrasi berbeda yaitu 0,5; 1; 2; 4; 6; 8; dan 10 ppm yang  masing-masing  dibuat  replikasi  tiga  kali  dan  didapat  tiga  kurva  hubungan  antara  konsentrasi  terhadap respon  area  (Au*sec)  sehingga  dapat  dipilih  salah  satu  kurva  standar  yang  akan  digunakan  untuk  analisis kuantitatif selanjutnya. Pemilihan kurva standar didasarkan pada nilai koefisien korelasi (r). Nilai r yang masih dapat diterima untuk sebagian besar pengujian adalah lebih besar dari 0.999 (Yuwono dan Indrayanto, 2005).
Kurva  kalibrasi  diperoleh  dari  hasil  plot  antara  konsentrasi  dengan  nilai  respon  area  (Au*sec)  yang diperoleh pada sistem KCKT  dengan persamaan y=173642,0064 - 33416,4420 seperti terlihat pada Gambar 2 .
Gambar 2 . Kurva kalibrasi kurkumin pada konsentrasi 0 – 10 ppm

## 2. Hasil Uji Akurasi
Penentuan akurasi dilakukan dengan menambahkan standar kedalam sampel dengan konsentrasi standar yang  ditambahkan  sebesar 0,5;  1;  dan  2 ppm  dan  setiap  konsentrasi  diukur  masing-masing  sebanyak  tiga  kali. Akurasi  suatu  metode  dinyatakan  dalam  persen  perolehan  kembali  (%PK).  Syarat  keberterimaan  akurasi suatu
y = 173.642,0064x - 33.416,4420 R² = 0,9991 0 500000 1000000 1500000 2000000 0 2 4 6 8 10 Ar ea (A u *sec ) Konsentrasi (ppm) Kurva Kalibrasi Kurkumin
Copyright © 2023, JPLP, e ISSN 2654-251X
metode adalah tergantung kepada konsentrasi analit yang diukur, dimana konsentrasi analit yang diukur ≤0,1 % maka rentang % PK yang dapat diterima adalah 75-125% (APVMA, 2004).
Tabel 2 Hasil penetapan perolehan kembali standar kurkumin konsentrasi 0,5; 1 dan 2 ppm
% Perolehan Kembali (%) Simpangan Deviasi Relatif (%RSD) Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Sampel Adisi 0,5 ppm 95,66 101,11 101,54 0,35 Sampel Adisi 1 ppm 85,39 95,04 90,42 0,95 Sampel Adisi 2 ppm 158,89 158,23 149,40 1,45
Pada Tabel 2, hasil perhitungan akurasi pada konsentrasi penambahan 0,5 ppm standar memberikan nilai rentang akurasi sebesar 95,66-101,54%, pada konsentrasi 1 ppm sebesar 85,39-95,04%, dan pada konsentrasi 2 ppm  sebesar  149,40-158,89%.  Nilai  yang  memenuhi  untuk  syarat  validasi  adalah  pada  konsentrasi  0,5  dan  1 ppm yaitu 75-125% (APVMA, 2004).

## 3. Hasil Uji Presisi
Penentuan presisi suatu metode dilakukan dengan melakukan replikasi sebanyak 5 kali terhadap sampel, masing-masing diukur sebanyak tiga kali dan repitisi pada standar dengan konsentrasi 10 ppm sebanyak 5 kali untuk menguji presisi alat. Perhitungan pada uji presisi dinyatakan sebagai persentase simpangan deviasi relatif (%RSD) dengan respon ≤ 20,0% pada pengukuran analit < 0,1%, maka analisis yang dilakukan dapat diterima sebagai salah satu syarat validasi metode.
Tabel 3 Data persentase simpangan deviasi relatif Presisi Waktu retensi (menit) Area (Au*sec) (Rata-rata ± SD) Simpangan Deviasi Relatif (%RSD) Sampel 1 4,99 715308,33 ± 5400,60 0,76 Sampel 2 5,03 6776161,00 ± 9669,74 1,43 Sampel 3 4,96 667357,00 ± 6217,50 0,93 Sampel 4 5,09 660777,00 ± 6593,62 1,00 Sampel 5 4,87 693843,33 ± 3510,36 0,51 Standar Kurkumin 10 ppm 4,54 1891852,93 ± 45373,97 2,40
Pada Tabel 3 diperoleh hasil untuk persentase simpangan deviasi relatif   ≤20,0% dapat terpenuhi pada keseluruhan data dalam setiap replikasinya dan untuk standar 10 ppm. Maka daripada itu dapat dikatakan metode analisis yang digunakan untuk hasil uji presisi memenuhi sebagai kriteria validasi yang baik.

## 4. Hasil Uji Batas Deteksi (BD) dan Batas Kuantifikasi (BK)
Batas  deteksi  adalah  jumlah  terkecil  analit  yang  dapat  dideteksi  yang  masih  memberikan  respon signifikan  dibandingkan  dengan  blanko.  Batas  kuantifikasi  merupakan  kuantitas  terkecil  analit  dalam  sampel yang masih dapat memenuhi kriteria cermat dan seksama.
Hasil uji batas deteksi dan batas kuantifikasi dari sampel isolat kurkumin 0-0,5 ppm adalah 0,1122 dan 0,3401 ppm.
Tabel 4 Batas deteksi dan batas kuantifikasi sampel isolat kurkumin 0-0,5 ppm
Konsentrasi (ppm) Area (Au*sec) (y) Area (Au*sec) (yi) (y-yi) (y-yi) 2 0 0 1742,63 -1742,63 3036776,39 0,1 13696 11877,43 1818,91 3308426,14 0,2 23534 22012,22 1522,12 2316841,60 0,3 28371 32147,01 -3775,67 14255706,65 0,4 46704 42281,80 4422,54 19558829,21 0,5 50171 52416,59 -2245,25 5041165,37 47517745,38 slope 101347,90 S(y/x) 3446,66 LOD 0,11 LOQ 0,34

## KESIMPULAN
Metode  analisis  yang  didapatkan  dari  hasil  pengujian  untuk  standar  kurkumin  dan  sampel  isolat kurkumin dengan KCKT menggunakan fase gerak asetonitril: buffer pH 3,5 (70:30 v/v) telah memenuhi dalam persyaratan  sebagai  validasi  metode  yang  baik,  dengan  parameter  validitas  meliputi  resolusi  (Rs=5,7172), linearitas (r=0,9991), akurasi (0,5 dan 1 ppm), presisi ( pada konsentrasi 5 ppm .%RSD  ≤ 20,0%). dan nilai BD dan BK untuk sampel isolat kurkumin konsentrasi 0-0,5 ppm adalah 0,11 dan 0,34 ppm.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terimakasih  kepada  Unpad  melalui  Direktorat  Riset  dan  Pengabdian  Kepada Masyarakat yang telah mendanai penelitian. Penelitian ini dilakukan dengan menggunakan fasilitas yang ada di Laboratorium Sentral Universitas Padjadjaran. Penulis mengucapkan terima kasih kepada Kepala Laboratorium dan juga Prof. Dr. Husein H. Bahti yang telah memberikan referensi dan bantuan selama melakukan penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
Aggarwal, B. B., Bhatt, I. D., Ichikawa, H., Ahn, K.S., Sethi, G., Sandur, S. K., dkk. 2006. Curcumin- Biological-and-Medical Properties . http://www.indsaff.com/10%20Curcumin%20
biological.pdf. diakses tanggal 23 November 2018.
[APVMA]  Australian  Pesticides  and  Veterinary  Medicines  Authority.  2004.  Guidelines  for  the  Validation  of Analytical Methods for Active Constituen Agricultural and Veterinary Chemical Products.
Desai, N., Momin, M., Sigh, U., Khan, T., Sherje, A. 2019. Analytical Method Development and Validation For Simultaneous  Estimation  Of  Curcumin  And  Cyclosporine  By  RP-HPLC. International  Journal  of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences . 11(2): 26-33.
Hanwar, D., Handayani, V.R., Suhendi, A. 2020. Validasi Metode HPLC untuk Analisis Kurkumin pada Ekstrak Rimpang  Temulawak  (Curcuma  xanthorrhiza  Roxb.). Proceeding  of  The  12th  University  Research Colloquium 2020: Bidang MIPA dan Kesehatan . 12 Sep 2020. Surakarta, Jawa Tengah, Indonesia.
Hirlekar,  R.,  Khismatrao,  A.,  Bhairy,  S.  2018.  Development  And  Validation  Of  RP-HPLC  Method  For Simultaneous  Estimation  Of  Curcumin  And  Piperine . Innovare  Academic  Sciences  Pvt.  Ltd .  India. 10,Issue-5. DOI: http://dx.doi.org/10.22159/ijap.2018v10i5.21140
Lee,  Y.S.,  Oh,  S.M.,  Li,  Q.Q.,  Kim,  K.W.,  Yoon,  D.,  Lee,  M.H.,  Kwon,  D.Y.,  Kang,  O.H.,  Lee,  D.Y.  2022. Validation of a Quantification Method for Curcumin Derivatives and Their Hepatoprotective Effects on Nonalcoholic Fatty Liver Disease. Molecular biology . 44(1): 409-432.
Nadaf,  S.,  Killedar,  S.  2020.  Development  and  Validation  of  RP–HPLC  Method  for  Estimation  of  Curcumin from  Nanocochleates  and  Its  Application  in  in–vivo  Pharmacokinetic  Study. Acta  Chimica  Slovenica . 67(4): 1100-1110.
Nanda, E.V., Yopi, Y. Pratiwi, Y. 2021. Validasi dan Penetapan Kadar Kurkumin Pada Jamu Gendong Kunyit Asam dengan Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi. Sainstech Farma: Jurnal Ilmu Kefarmasian . 14 (1): 12-18. DOI: https://doi.org/https://doi.org/10.37277/sfj.v14i1.932
Raut,  R.,  Shaji,  J.  2021.  HPLC  method  validation  for  quantification  of  tetrahydrocurcumin  in  bulk  drug  and formulation. Futur J Pharm Sci . 7 (42). DOI: https://doi.org/10.1186/s43094-021-00194-7 Schiborr,  C.,  Gunter,  P.  E.,  Rimbach,  G.,  dan  Frank,  J.  2010. A  validated  method  for  the  quantification  of curcumin in plasma and brain tissue by fast narrow-bore high-performance liquid chromatography with fluorescence  detection . University  of  Frankfurt .  Germany.  397,1917-1925. DOI  10.1007/s00216-010- 3719-3
Susanti,  M.,  dan  Dachriyanus.  2017. Kromatografi  Cair  Kinerja  Tinggi .  Lembaga  Pengembangan  Teknologi Informasi dan Komunikasi. Universtas Andalas. Padang.
Susanto.,  Winarno,  E.K.  2018.  Penentuan Kadar Kurkumin  Dari  Beberapa Tanaman Curcuma Setelah  Iradiasi Gamma. Prosiding Seminar Nasional APISORA 2018 . 95-100. Tonnesen,  H.H.  and  Karlsen,  J..  1985 a .  Studies  on  Curcuminand  Curcuminoids,  V.  Alkaline  Degradation  of Curcumin, Z. Lebensm. Unters. Forsch. 180, 132-134. Tonnesen,  H.H.  and  Karlsen,  J..  1985 b . Studies  on  Curcuminand  Curcuminoids,  VI.  Kinetics  of  Curcumin Degradation in Aqueous Solution , Z. Lebensm.Unters. Forsch. . 180, 402-404.
Vikri,  M.,  Sholih,  M.G.,  Gatera,  M.M.  2022.  Identifikasi  Kadar  Kurkumin  pada  Minuman  Serbuk  Berbahan Temulawak  dengan  Metode  Spektrofotometri  Uv-Vis. Lumbung  Farmasi;  Jurnal  Ilmu  Kefarmasian . 3(2): 191-196.