## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL RIMPANG
LENGKUAS MERAH (Alpinia purpurata (Vieill) K. Schum) TERHADAP BAKTERI Klebsiella pneumoniae ISOLAT SPUTUM PENDERITA BRONKITIS SECARA  IN VIVO
Lilis Alfianthi Kandou 1) , Fatimawali 1) , Widdhi Bodhi 2)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115
2) Bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
This  study  aims  to  determine  the  antibacterial  activity  of  ethanol  extract  of  red  galangal rhizome (Alpinia purpurata (Vieill) K. Schum) against the bacterium Klebsiella pneumoniae isolates bronchitis  sputum  of  patients  in  vivo.  This  study  using  mice  infected  intraperitoneally  bacterium Klebsiella  pneumoniae.  The  sample  consisted  of  18  male  rats  wistar  strain  were  divided  into  6 groups. Group 1 (normal control) was not infected by the bacteria, group 2 (negative control), group 3  (positive  control),  for  three  days  group  of  4,5,6  (treatment  group)  was  given  a  dose  of  ethanol extract of red ginger rhizome with graded doses (group 4: 0.756 g / 200g rat body weight), (group 5: 1,512g  /  200g  body  weight  rats),  (group  6:  3,024g  /  200g  body  weight  rats).    Data  were  analyzed using one-way ANOVA. The results showed that the ethanol extract of red ginger rhizome in a graded rise has antibacterial activity against Klebsiella pneumoniae isolates patients with bronchitis sputum in vivo with a percentage of group 4: 3.07%, group 5: 15.05% and group 6: 19.20%.
Keywords : red ginger rhizome, antibacterials, K.pneumoniae, in vivo.

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  etanol  rimpang lengkuas merah ( Alpinia purpurata (Vieill) K. Schum) terhadap bakteri Klebsiella pneumoniae isolat sputum  penderita  bronkitis  secara  in  vivo.    Penelitian  ini  menggunakan  tikus  yang  diinfeksi  bakteri Klebsiella  pneumoniae secara  intraperitoneal.  Sampel  terdiri  dari  18  ekor  tikus  putih  jantan  galur wistar  yang  dibagi  menjadi  6  kelompok.  Kelompok  1  (kontrol  normal)  tidak  diinfeksi  bakteri, kelompok 2 (kontrol negatif), kelompok 3 (kontrol positif), Selama 3 hari kelompok 4, 5, 6 (kelompok perlakuan)  diberikan  dosis  ekstrak  etanol  rimpang  lengkuas  merah  dengan  dosis  yang  bertingkat (kelompok  4:  0,756g/200g  BB  tikus),  (kelompok  5:  1,512g/200g  BB  tikus),  (kelompok  6: 3,024g/200g  BB  tikus).  Data  dianalisis  menggunakan  metode  Anova  satu  arah.  Hasil  penelitian menunjukan  bahwa  ekstrak  etanol  rimpang  lengkuas  merah  dalam  dosis  yang  bertingkat  memiliki aktivitas antibakteri terhadap Klebsiella pneumoniae isolat sputum penderita bronkitis secara in vivo dengan persentase sebesar kelompok 4: 3,07%, kelompok 5: 5,05%, dan kelompok 6:  19,20%.
Kata kunci : Rimpang lengkuas merah, Antibakteri, K.pneumoniae, Invivo.

## PENDAHULUAN
Infeksi  saluran  pernapasan  adalah penyakit yang umum terjadi pada manusia. Secara  umum  penyebab  dari  infeksi saluran pernapasan adalah berbagai mikroorganisme,  namun  yang  terbanyak akibat  infeksi  virus  dan  bakteri.  Infeksi saluran  pernapasan  berdasarkan  wilayah infeksinya  terbagi  menjadi  infeksi  saluran pernapasan  atas  dan  infeksi  saluran pernapasan  bawah  (Depkes  RI,  2005). Berdasarkan hasil survey kesehatan nasional  2001  penyakit  infeksi  saluran pernapasan  bawah  merupakan  salah  satu infeksi yang penyebab kematian terbanyak di dunia (Depkes RI, 2001).
Bronkitis  adalah  penyakit  infeksi saluran  pernapasan  bawah  yang  ditandai dengan  kondisi  peradangan  pada  daerah trakheobronkial. Bronkitis seringkali diklasifikasikan sebagai bronkitis akut dan bronkitis  kronis.  Bronkitis  akut  mungkin terjadi  pada  semua  usia,  namun  bronkitis kronis  umumnya  hanya  dijumpai  pada dewasa (DepKes RI, 2005). Bronkitis akut disebabkan  infeksi  virus  dan  bronkitis kronis  sebagian  besar  disebabkan  oleh bakteri.  Salah  satu  bakteri  penyebab bronkitis  yaitu Klebsiella  pneumoniae (Ikawati, 2011).
Pengobatan klinis untuk
menangani  penyakit  infeksi  penggunaan antibiotik  sangat  diperlukan.  Tingginya penggunaan  antibiotik  secara  tidak  tepat dikalangan masyarakat saat ini menyebabkan
terjadinya masalah resistensi antibiotik. Permasalahan
resistensi  terjadi  ketika  bakteri  berubah dalam satu atau lain hal yang menyebabkan  turun atau  hilangnya efektivitas  obat,  senyawa  kimia  atau bahan  lainnya  yang  digunakan  untuk mencegah atau mengobati infeksi (Utami, 2012).
Penggunaan antibiotik perlu dilandasi  adanya  pengetahuan  tentang antibiotik.  Pengetahuan  ini  penting  karena berpengaruh  terhadap  keberhasilan  terapi antibiotik  dan  mencegah  menyebabkan resistensi  bakteri  (Grigoryan et  al., 2007). Penggunaan  antibiotik  hanya  diperlukan jika memang pasien benar-benar diindikasikan  terinfeksi  oleh  bakteri.  Efek samping  penggunaan  antibiotik  dapat berupa  reaksi  alergi,  reaksi  toksik  dan perubahan  biologik  maupun  metabolik (Setiabudy,  1995).  Oleh  karena  itu,  dicari pengobatan  maksimal  dan  alternatif  lain seperti bahan alam.
Penggunaan bahan alam kini semakin meningkat pemanfaatannya sebagai  obat  tradisional.  Karena  obat tradisional  banyak  digunakan,  mudah didapat,  ekonomis  dan  memiliki  efek samping yang relatif rendah.
Salah  satu  keanekaragaman  hayati yang memiliki potensi untuk dikembangkan  sebagai  obat  tradisional adalah Lengkuas merah ( Alpinia purpurata (Vieill)  K.  Schum)  menurut hasil  penelitian  Arbain  2004  lengkuas merah  selain  mengandung  minyak  atsiri juga  mengandung  golongan  senyawa flavonoid,  fenol  dan  terpenoid.  Karena lengkuas  memiliki  kandungan  senyawa flavonoid yang diduga mampu menghambat pertumbuhan bakteri (Yuharmen, 2002).
Sehubungan  dengan  adanya  indikasi ekstrak lengkuas merah ( Alpinia purpurata (Vieill)  K.  Schum  )  mempunyai  daya antibakteri, maka hal ini menarik perhatian peneliti  untuk  melakukan  Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Rimpang Lengkuas Merah ( Alpinia purpurata (Vieill)  K.  Schum)  Terhadap  Isolat
Klebsiella    pneumonia Isolat    Sputum Pasien Bronkitis secara In Vivo.

## METODOLOGI PENEITIAN ALAT
Kandang  tikus,  pisau,  gelas  ukur, tabung  reaksi  (Pyrex),  timbangan  analitik, Erlenmeyer,  beker  gelas  (Pyrex),  corong, batang  pengaduk,  gunting,  sudip,  cawan petri, kertas saring, blender, ayakan (mesh 200),  mikropipet  (Ecopipette),  hot  plate, rotary  evaporator (Strike  300), laminar air  flow (Biotek), autoclave ,  incubator (Ecocell), aluminium  foil, lampu  Bunsen, pot  salep,  lumapang  dan  alu,  tabung EDTA, bench  mixer , disposible 1mL
(OneMed),  NGT (Naso  Gatric  Tube) No. 3,5 (Terumo), colony counter .

## BAHAN
Rimpang  lengkuas  merah,  bakteri isolat sputum penderita bronkitis ( Klebsiella  pneumoniae ),  tikus putih jantan  galur  wistar  ( Rattus  norvegicus), etanol  96%,  cairan  fisologi  NaCl  0,9% (Otsuka), aquades steril (Otsuka), siprofloksasin  (P.T  Hexpharm  Jaya), media nutrient  agar, larutan  standar Mc.Farland 0,5.

## PROSEDUR KERJA

## Determinasi Tanaman
Identifikasi  tanaman  dilakukan  di Laboratorium Taksonomi Tumbuhan, Program Studi Biologi, FMIPA Universitas Sam Ratulangi Manado,
dengan  nama  tanaman Alpinia  purpurata (Vieill) K. Schum
Persiapan Tanaman
Rimpang  lengkuas  merah  disortasi basah  untuk  memisahkan  kotoran  atau bahan-bahan asing dari rimpang. Selanjutnya  rimpang  lengkuas  merah
disikat  dibawah  air  yang  mengalir, ditiriskan  kemudian  dirajang  kecil-kecil dengan  menggunakan  pisau,  selanjutnya dikeringkan dengan cara diangin-anginkan selama  7  hari.  Sampel  kering  kemudian dihaluskan  menggunakan  blender  dan diayak  menggunakan  ayakan mesh 200 dan didapatkan serbuk simplisia halus

## Ekstraksi
Pembuatan  ekstrak  etanol  rimpang lengkuas  merah  dilakukan  dengan  metode maserasi.  Ditimbang  sebanyak  150  g kemudian  dimasukkan  kedalam  wadah tertutup rapat. Sampel yang telah ditimbang  ekstraksi  dengan  2000  mL etanol 96% pada suhu kamar selama 5 hari (setiap  hari  digojok).  Ekstrak  kemudian disaring dengan kertas saring (filtrat I) dan sisanya  dimaserasi  kembali  dengan  1000 mL  pelarut  etanol  96%  selama  2  hari (setiap  hari  digojok)  kemudian  disaring dengan  kertas  saring  (filtrat  II).  Filtrat  1 dan  filtrat  2  dikumpulkan  dan  diuapkan dengan rotary  evaporator pada  kecepatan 50 rpm dan suhu 40°C kemudian diperoleh ekstrak kental rimpang lengkuas merah.

## Sterilisasi Alat
Alat –alat  gelas  yang  akan digunakan  dicuci  terlebih  dahulu  hingga bersih.  Bahan  yang  akan  digunakan dimasukkan ke dalam alat gelas. Kemudian  alat  dan  bahan  dibungkus dengan aluminium foil .Setelah itu dimasukkan  ke  dalam  autoklaf  untuk sterilisasi  dengan  suhu  121°C  selam  15
menit.

## Pembuatan Suspensi Bakteri
Bakteri uji (isolat sputum) dibiakkan pada media nutrient agar selam 24 jam pada suhu 37°C. Kemudian bakteri diambil dengan jarum Ose dan disuspensikan dengan  cara dimasukkan ke dalam  tabung  reaksi  berisi  5  mL  larutan Nacl  fisiologi  steril  0,9%.  Suspensi  yang
terbentuk disetarakan kekeruhannya dengan  larutan  standar  Mcfarland  No.0,5 yaitu  1,5 x 10 8 CFU/mL  (Kumala et al., 2009).

## Perlakuan Terhadap Hewan Uji
Hewan uji dikelompokkan menjadi 6  kelompok  masing-masing  kelompok terdiri  dari  3  ekor  hewan  uji  yang  telah diaklimatisasi selama 14 hari dan diberikan  makan  dan  minum.  Untuk kelompok  1  tidak  diinfeksi  bakteri Klebsiella  pneumonia dan  kelompok  2,  3, 4, 5 dan 6 diinfeksi dengan 2 mL suspensi bakteri Klebsiella pneumonia secara intraperitoneal dengan cara bakteri disuntikkan  dibagian  perut.  Pengobatan dilakukan  setelah  24  jam  infeksi  dan hewan  uji  dipuasakan  selama  8  jam sebelum pemberian pengobatan.
Kelompok  1  dan  2  diberikan  masing- masing  2  mL  aquades,  kelompok  3 diberikan dosis siprofloksasin, kelompok 4 diberikan  dosis  I  ekstrak  lengkuas  merah, kelompok  5  diberikan  2x  dosis  I  ektrak lengkuas merah, dan kelompok 6 diberikan 4x  dosis  I  ekstrak  lengkuas  merah.  Dosis siprofloksasin  dan  ekstrak  dilarutkan dalam 2 mL aquades. Pengobatan
dilakukan  secara  oral  1  kali  sehari  selama 3 hari.
Pengambilan darah hewan uji pada hari  ke-4.  Hewan  uji  dipuasakan  selam  8 jam  dan  dilakukan  pemotongan  ekor hewan uji di laminar air flow . Darah tikus yang  diperoleh  sebanyak  0,1  mL  masing- masing  dimasukkan  dalam  tabung  EDTA.
Darah  tikus  yang  telah  diambil  sebanyak 0,1  mL dilakukan pengenceran bertingkat. Kemudian  dipipet  sebanyak  0,1  mL sampel  pada  tingkat  pengenceran  10 -2 dan dikulturkan  pada  media nutrient  agar setelah  diinkubasi  pada  suhu  37°C  selam 24  jam.  Koloni  yang  terbentuk  kemudian dihitung dengan menggunakan alat colony counter.

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dianalisis dengan metode One-way ANOVA dengan menggunakan  program  statistika  SPSS versi  22.  Bila P-value kurang  dari  0,05 artinya  pemberian  ekstrak  etanol  umbi bawang  putih  dengan  berbagai  dosis mempengaruhi penghambatan bakteri isolat  sputum  penderita  bronkitis  dengan cara in vivo secara signifikan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  diperoleh  dengan perhitungan  koloni  yang  terbentuk  pada
masing-masing  cawan  petri.  Adapun  data hasil perhitungan koloni dapat dilihat pada tabel dibawah ini.
Tabel 1. Hasil Hitung Koloni Bakteri Darah Tikus  dengan Colony Counter
No. Tikus K1 K2 K3 K4 K5 K6 1 0 400 7 250 30 15 2 0 325 3 260 90 47 3 0 450 19 275 65 50 Tabel 2. Hasil Perhitungan Koloni Bakteri No. Tikus K1 K2 K3 K4 K5 K6 1 0 4 x 10 5 7 x 10 3 2,5 x 10 5 3 x 10 4 1,5 x 10 4 2 0 3,25 x10 5 3 x 10 3 2,6 x 10 5 9 x 10 4 4,7 x 10 4 3 0 4,5 x 10 5 19 x 10 3 2,75 x 10 5 6,5 x 10 4 5 x 10 4
Tabel 3 .  Hasil Perhitungan Persentase Aktivitas Antibakteri
Persentase Aktivitas Antibakteri (%) K1 K2 K3 K4 K5 K6 - - 30,8 3,07 15,05 19,20
Pada  penelitian  ini  pemberian infeksi  bakteri Klebsiella  pneumoniae secara  intraperitoneal  pada  tikus  jantan, bakteri  ini  bersifat  patogen  jika  terdapat ditempat  lain  (bukan  flora  normal) (Kumala,  2009). Klebsiella  pneumonia terdapat  dalam  feses  dan  saluran  napas sebanyak  5%  (Elfidasari,  2013).  Infeksi secara  intraperitoneal  dirongga  perut merupakan  tempat  yang  tidak  ada  bakteri (Kumala,  2009).  Jika  bakteri Klebsiella pneumoniae diberikan  secara  oral  maka akan  menuju  ke  saluran  napas  dan  akan bercampur  dengan  flora  normal  sehingga saat  akan  direisolasi  kemungkinan  bakteri yang  akan  ditemukan  adalah  flora  normal bukan bakteri yan diinjeksi.
Dari  hasil  pengamatan  diperoleh, pada  kelompok  kontrol  normal  tidak terdapat  pertumbuhan  jumLah  koloni bakteri Klebsiella  pneumoniae, hal  ini dikarenakan  darah  bersifat  steril.  Oleh karena  itu  pada  kelompok  kontrol  normal tidak  terdapat  pertumbuhan  koloni  bakteri karena  kelompok  ini  tidak  diberi  infeksi bakteri.
Pada  kelompok  kontrol  negatif, terjadi  pertumbuhan  koloni  bakteri  yang paling  banyak.  Hal  ini  disebabkan  karena setelah 24 jam terinfeksi dan selama 3hari berturut-turut kelompok ini hanya diberikan  aquades  steril.  Aquades  steril tidak memiliki potensi sebagai antibakteri, sehingga  bakteri  yan  disuntikkan  pada tikus terus bertumbuh.
Kelompok-kelompok perlakuan yang  diberikan  ekstrak  etanol  rimpang lengkuas  merah  dengan  berbagai  dosis menunjukkan  adanya  penurunan  jumLah koloni bakteri dibandingkan dengan jumLah  koloni  bakteri  pada  kelompok kontrol  negatif.  Pada  kelompok  perlakuan I dengan dosis  I (0,756  g/  200g  BB tikus) sebesar  3,07%,  2x  dosis  1(1,512  g/200  g BB  tikus)  sebesar  15,05%,    4x  dosis  I (3,024  g/200g  BB  tikus)  sebesar  19,20%. Adanya penurunan koloni dengan pemberian ekstrak etanol rimpang lengkuas  merah  menunjukkan  adanya aktifitas antibakteri Klebsiella pneumoniae. Aktivitas antibakteri ekstrak
lengkuas merah terkandung pada kandungan kimianya. Minyak atsiri tersusun  dari  berbagai  macam  komponen yang  secara  garis  besar  terdiri  dari kelompok  terpenoid  dan  fenil  propana. Fenil propana memiliki percabangan rantai berupa  gugus-gugus  fenol  dan  eter  fenol. Senyawa  fenol  memilifi  efek  korosif, dapat  mendenaturasi  protein,  merusak dinding dan membran sel dan menonaktifkan  enzim-enzim.  Senyawa  ini bersifat bakterisid (termasuk mikobakteri), fungisid, dan mampu menonaktifkan virus- virus lipofilik (Guenther, 2006).
Zat  aktif  pada  ekstrak  lengkuas merah  diduga  mempunyai  efektivitias sebagai  antibakteri  adalah  minyak  atsiri berwarna  kuning  kehijauan  yang  terdiri dari flavonoid dan fenil propana.
Mekanisme  kerja  antibakteri  eksttrak lengkuas merah dalam menghambat bakteri  adalah  merusak  susunan  dan perubahan mekanisme permeabilitas dinding sel bakteri.
Pada  setiap  kelompok  perlakuan yang  diberikan  ekstrak  etanol  rimpang lengkuas  merah  dengan  pemberian  dosis memberikan  aktivitas  antibakteri  yang berbeda.  Semakin  tinggi  dosis  yang diberikan  aktivitas  antibakterinya  semakin besar  atau  semakin  banyak  jumLah  zat aktif  yang  sebagai  antibakteri.  Hal  ini sesuai  dengan  pendapat  Pelczar  dan  Chan (1988)  yang  menyatakan  bahwa  semakin tinggi  konsentrasi  suatu  zat  antibiotik maka  semakin  cepat  mikroorganisme terbunuh dan terhambat pertumbuhannya.
Pada  kelompok  yang  diberikan pengobatan dengan antibiotik siprofloksasin  memiliki  persentase  30,8%. Menurut  PerMenkes  Nomor  2406  (2011), pemilihan  jenis  antibiotik  salah  satunya harus  berdasarkan  pada  pola  kepekaan kuman  terhadap  antibiotik.  Selain  itu siprofloksasin  merupakan  pilihan  terapi pada  penderita  bronkitis  yang  disebabkan oleh Klebsiella  pneumoniae (Ikawati, 2011).  Pemilihan  siprofloksasin  sebagai kontrol  positif  menunjukkan  ada  aktivitas antibakteri  oleh  antibiotik  siprofloksasin. Siprofloksasin bekerja menghambat sintesis DNA bakteri  dengan menghambat enzim, girase DNA(Kee dan Hayer, 1996). Dimana pada bakteri terjadi penghambatan DNA  gyrase  yaitu  mencegah  relaksasi supercoiled  DNA  secara  positif  yan dibutuhkan  untuk  transkripsi  dan  replikasi normal.
Pada hasil uji statistik yang diawali dengan  uji  homogenitas  varian,  diperoleh nilai  signifikansi  lebih  besar  dari  0,05 (0,098  >  0,05)  yang  berarti  H 0 diterima jika  nilai  signifikansi  >  0,05.  Data  yang
diuji memiliki varian yang sama (homogen)  sehingga  dapat  memenuhi syarat  untuk  dilakukan  metode ANOVA One Way.
Pada uji statistik ANOVA One Way didapatkan nilai signifikansi sebesar 0,000 (Sig  <  0,05).  Nilai  F  hitung  yang didapatkan  yaitu  76,111.  Nilai  F  tabel 3,48.  Maka  diperoleh  F  hitung  >  F  tabel (76,111  >  0,05),  sehingga  H 1 diterima yaitu  data  jumLah  koloni  bakteri  darah tikus  ada  perbedaan  yang  bermakna  pada setiap kelompok perlakuan.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol rimpang lengkuas merah ( Alpinia purpurata (Vieill)  K.  Schum ) dengan  dosis  yang berbeda  memberikan  aktivitas  antibakteri terhadap  tikus  yang  diinfeksi  bakteri Klebsiella  pneumoniae isolat  sputum pasien  bronkitis.  Semakin  tinggi  dosis yang  diberikan  maka  semakin  besar persentasi aktivitas antibakteri dari ekstrak etanol  rimpang  lengkuas  merah  ( Alpinia purpurata (Vieill) K. schum ) yaitu 3,07 %,
15,05 %,dan 19,20 %.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim,  2000,Profil  Kesehatan  Indonesia 2001.
Anonim  2005. Pharmaceutical  Care Untuk  Penyakit  Infeksi  Saluran Pernapasan. Depkes RI, Jakarta
Elfidasari,  D.,  Noriko,  N.,  Mirasaraswati,
A.,Feroza, A., Canadianti, Siti Fauziah.  2013.  Deteksi  Bakteri
Klebsiella pneumoniae pada
Beberapa  jenis  Rokok  Konsumsi Masyarakat. Jurnal Al-Azhar
Indonesia  Seri  Sains  dan  Teknologi,
2(1).
Guenther,E., 2006, Minyak Atsiri.Penerbit
Universitas Indonesia, Jakarta.
Grigoryan, L, Burgerhof, J.G.M., Degener, et  al, 2007. Attitude,  Beliefs  and
Knowledge  Concerning  Antibiotic Use  and  Self  -Medication:  A
Comparative  Europe  Study .  Wiley InterScience,p. 1234- 1234.
Ikawati,
Z.2011. Penyakit Sistem Pernafasan dan Tatalaksana Terapinya . Bursa Ilmu, Yogyakarta.
Kee,  Joyce  L.,  Hayer,  Evelyn  R.  1996.
FarmakologiPendekatan Proses
Keperawatan. EGC.Jakarta
Pelczar, M.J. Chan, E. C. S. 1988. Dasar- dasar  Mikrobiologi  Jilid .  UI  Press.
Jakarta
Setiabudy,R., dan Gan H.S.V.1995. Antimikroba  : Farmakologi  dan Terapi. Edisi  ke  4.  Gaya  Baru,
Yogyakarta
Utami  ER.  Antibiotika,  resistensi,  dan rasionalitas  terapi.  Saintis  2012: 1(1):124-38
Yuharmen, 2002. Uji Aktivitas Antimikroba  Minyak  Atsiri  dan Ekstrak Methanol Lengkuas
(Lenguas  galanga) Jurusan  Kimia,
FMIPA. Universitas Riau: Riau