Potensi Ekstrak Kasar Teripang Holothuria atra , Jaeger, 1833 (Holothuroidea : Holothuriidae) Dari Pulau Panjang, Jepara
Sonny Rieldo Damanik*, Bambang Yulianto, Subagiyo Departemen Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl. Prof. H. Soedarto S.H, Tembalang,Semarang, Jawa Tengah 50275 Indonesia *Corresponding author, e-mail: sonny_damanik@student.undip.ac.id
ABSTRAK : Aktivitas antibakteri yang terdapat dalam Holothuria atra dapat dimanfaatkan sebagai makanan fungsional yang dapat mengendalikan mikroflora dalam saluran pencernaan. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui potensi aktivitas antibakteri dari teripang H. atra terhadap bakteri B. cereus (gram positif) dan V. alginolyticus (gram negatif) sebagai foodborne pathogens. Sampel  teripang H.  atra diambil  dari  ekosistem  lamun  perairan  Pulau  Panjang  dengan  metode purposive sampling method untuk mengambil teripang berukuran panjang > 16 cm sebanyak 1 kg . Sampel H.  atra dibersihkan  lalu  dipisahkan  antara  daging  dan  jeroannya,  kemudian  di  maserasi menggunakan pelarut etil asetat dengan perbandingan 1:3 (w:v) selama 1x24 jam. Hasil maserasi diuapkan  dengan rotary  evaporator pada  suhu  38 o C.  Ekstrak  daging  dan  jeroan  yang  diperoleh adalah  669,8  mg  dan  625,2  mg.  Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan  dengan  metode paper  disk diameter  6  mm  dengan  konsentrasi  500  µg/ disk ,  1000  µg/ disk ,  2000  µg/ disk ,  dan  4000  µg/ disk . Aktivitas  antibakteri  yang  diperoleh  dari  perbedaan  konsentrasi  yang  diberikan  berbeda  secara nyata    dengan  adanya  peningkatan Activity  Unit ( AU )  di  setiap  kenaikan  konsentrasi.  Aktivitas antibakteri  terbesar  yang  diperoleh  dari  ekstrak  daging H.  atra pada  konsentrasi  4000  µg/ disk terhadap  bakteri V.  alginolyticus (gram  negatif)  dan B.  cereus (gram  positif)  masing-masing adalah 14214,08 mm 2 /ml dan 10508,62 mm 2 /ml. Aktivitas antibakteri terbesar yang diperoleh dari ekstrak  jeroan H.  atra pada  konsentrasi    4000  µg/ disk terhadap  bakteri V.  alginolyticus (gram negatif) dan B. cereus (gram positif) masing-masing adalah 7858,72 mm 2 /ml dan 4919,68 mm 2 /ml. Berdasarkan  penelitian  ini,  daging  dan  jeroan  teripang H.  atra keduanya memiliki  aktivitas antibakteri terhadap bakteri B. cereus (gram positif) dan V. alginolyticus (gram negatif).
Kata Kunci : Antibakteri, Foodborne pathogen , Holothuria atra , Makanan fungsional
Potential of Sea Cucumber Raw Extract Holothuria atra, Jaeger, 1833 (Holothuroidea: Holothuriidae) From Panjang Island, Jepara
ABSTRACT  : The  antibacterial  activity  contained  in  the  bioactive  compounds  of  sea  cucumber Holothuria  atra  can  be  used  as  functional  foods  that  can  control  microflora  in  the  digestive  tract. The purpose of this study was to determine the potential antibacterial activity of sea cucumber H. atra  against  B.  cereus  (gram  positive)  and  V.  alginolyticus  (gram  negative)  as  foodborne pathogens.  The  samples  of  H.  atra  in  this  study  were  taken  from  the  seagass  ecosystem  of Panjang  Island  waters  using  the  purposive  sampling  method  so  that  the  sea  cucumbers  taken were > 16 cm long. The obtained sea cucumber samples were cleaned and separated between the meat and the viscera, then macerated using ethyl acetate with a ration of  1:3 (w/v) for 24 hours. The  solvent  was  evaporated  using  rotary  evaporator  at  38 o C.  The  obtained  meat  and  viscera extract  of  H.  atra  in  this  study  were  669,8  mg  and  625,2  mg.  The  antibacterial  activity  test  was carried  out  using  the  diffusion  method  with  a  6  mm  paper  disk  (Kirby-Bauer  Method),  and  the concentrations of each extract are 500 µg/disk, 1000 µg/disk, 2000 µg/disk, and 4000 µg/disk. The antibacterial activity of extracts from different concentrations were significantly different in line with the increasing results of activity unit (AU) at each increased concentration.  The largest activity unit was  obtained from meat  extract  at  a concentration  of  4000  µg/disk.  The  antibacterial  activity  unit from  meat  extract  against  V.  alginolyticus  (gram-negative)  and  B.  cereus  (gram-positive)  are 14214,08 mm2 / ml and 10508,62 mm2 / ml. The largest antibacterial activity unit of viscera extract against V. alginolyticus and B. cereus are 7858,72 mm2 / ml and 4919,68 mm2 / ml. Based on this
study,  meat  and  viscera  extracts  from  H.  atra  both  have  antibacterial  activity  against  B.  cereus (gram-positive) and V. alginolyticus (gram-negative).
Keywords: Antibacterial, Foodborne pathogen, Holothuria atra, Functional food

## PENDAHULUAN
Teripang merupakan biota laut yang termasuk ke dalam golongan hewan Echinodermata. Teripang H.  atra hidup  di  habitat  berpasir  atau  habitat  yang  agak  lunak  (pasir berlumpur).  Teripang H.  atra merupakan  salah  satu  spesies  teripang  yang  mampu  beradaptasi dengan  baik  (Wiranto et  al., 2016).  Metabolit  sekunder  teripang  memiliki  senyawa  bioaktif  yang diantaranya  adalah  alkaloid,  saponin,  triterpenoid,  flavonoid,  dan  steroid  (Pranoto et  al., 2012). Farouk  (2007)  menjelaskan  dalam  penelitiannya  bahwa  teripang Holothuria  atra dapat dimanfaatkan  sebagai  sumber  makanan  fungsional  karena  memiliki  potensi  antikoagulan, antikanker,  antitumor,  antibakteri,  antijamur,  antimalaria,  meningkatkan  imunitas,  antirematik  dan antivirus.
Makanan fungsional adalah makanan atau bahan pangan yang dapat memberikan manfaat tambahan  di  samping  fungsi  gizi  dasar  pangan  ( European  Commision  Concerted  Action  on Functional  Food  Science  in  Europe ,  1999).  Menurut  Khotimchenko  (2018),  aktivitas  antibakteri yang dimiliki oleh senyawa bioaktif teripang dapat dimanfaatkan sebagai pengendali bakteri dalam tubuh dan meningkatkan imunitas tubuh.
Bakteri patogen dapat masuk kedalam tubuh manusia ataupun hewan melalui makanan atau minuman yang kurang higienis. Beberapa jenis bakteri patogen yang masuk melalui makanan atau minuman digolongkan kedalam  jenis Foodborne Pathogen. Aktivitas antibakteri yang dimiliki oleh senyawa bioaktif teripang menurut Kaswandi et al. (2000) dapat dimanfaatkan untuk menghambat pertumbuhan  bakteri,  sehingga  aktivitas  antibakteri  dari  teripang  tersebut  dapat  dimanfaatkan untuk  mengendalikan  mikroflora  yang  terdapat  dalam  saluran  pencernaan  manusia  ataupun hewan.  Potensi  antibakteri  yang  dimiliki  oleh  teripang  tersebut  menyebabkan  perlunya  diadakan penelitian  mengenai  uji  aktivitas  antibakteri  dari  teripang H.  atra untuk  mengetahui  aktivitas antibakteri dari ekstrak teripang H. atra .

## MATERI DAN METODE
Materi pada penelitian ini menggunakan teripang Holothuria atra yang diambil dari ekosistem lamun  perairan  Pulau  Panjang,  serta  bakteri B.  cereus (gram  positif)  dan V.  alginolyticus (gram negatif)  sebagai  bakteri  uji . Penelitian  uji  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  kasar  teripang H.  atra dari Pulau Panjang ini dilakukan menggunakan metode experimental laboratory. Teripang Holothuria atra diambil  dari  perairan  Pulau  Panjang,  Jepara.  Sampel  teripang diambil  dengan purposive  sampling  method untuk  mendapatkan  teripang  yang  telah  memasuki stadia  dewasa  dengan  kriteria  yaitu  berukuran ≥16 cm dengan berat kotor  ≥100 gram (Darsono, 1999). Teripang diambil sebanyak ±1 kilogram dan dimasukkan kedalam cool box berisikan air laut dan sedimen, sampel teripang tetap segar saat sampai laboratorium.
Sampel  teripang  dimatikan  dengan  cara  membelah  tubuh  teripang  secara  memanjang  lalu dipisahkan antara daging dan jeroannya. Sampel teripang H. atra selanjutnya dibersihkan dengan air tawar kemudian dicincang menggunakan pisau.
Analisis  kadar  air  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  berat  kering  dari  sampel  basah  yang digunakan. Cara kerja metode ini, yaitu cawan kosong dipanaskan dalam oven pada temperature 105ºC  selama  30  menit,  didinginkan  dalam  desikator  selama  15  menit,  lalu  ditimbang  (W 0 ). Kemudian masing-masing sampel sebanyak 2 gram dimasukan pada cawan yang telah diketahui bobotnya,  ditimbang  (W 1 ),  lalu  dikeringkan  dalam  oven  pada  suhu  105ºC  selama  3  jam, didinginkan  dalam  eksikator  selama  15-30  menit,  kemudian  cawan  dan  isinya  ditimbang  dan dikeringkan  kembali  selama  1  jam,  serta  didinginkan  didalam  eksikator,  ditimbang  kembali  (W 2 ). Menurut Winarno (2004), Kandungan air dihitung dengan rumus:

## ( ) (       ) (       )
Keterangan : W 0 = berat cawan kosong; W 1 = berat cawan + sampel awal; (sebelum pemanasan dalam oven); W 2 = berat cawan + sampel awal (setelah pendinginan dalam eksikator) Sampel basah daging dan jeroan dari H. atra yang telah di cincang diambil masing-masing 300  g  untuk  diekstrak  menggunakan  metode  maserasi  tunggal.  Sampel H.  atra direndam  dalam C 4 H 8 O 2 (etil asetat) dengan perbandingan 1:3 (w/v) selama 1 x 24 jam. Residu kemudian disaring dengan vacuum  pump menggunakan  kertas whatman berbentuk  lingkaran  berdiameter  150  mm dengan  kerapatan  pori  11  mikron.  Air  yang  terdapat  dibagian  bawah  dari  filtrat  dipisahkan menggunakan separatory funnel kemudian di evaporasi dengan rotary evaporator pada suhu 38 o C (Sari et al., 2014).
Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan  dengan  metode  difusi  agar  (Kirby-Bauer)  menggunakan kertas cakram / papper disc 6 mm yang diujikan secara duplo . Aktivitas antibakteri ditandai dengan munculnya  zona  hambat.  Zona  hambat  diukur  menggunakan  jangka  sorong  dengan  tiga  kali pengukuran disetiap masing-masing pengulangan (Sabdono dan Radjasa, 2008).
Ekstrak  daging  dan  jeroan H.  atra dilarutkan  dalam  DMSO  (Dimethyl  sulfoxide)  untuk mendapatkan larutan stock dengan konsentrasi 4000 µg/ml. Pada penelitian dari Sari et al. (2014) pengujian aktivitas antibakteri dilakukan pada konsentrasi 500 µg/ disk , 1000 µg/ disk , 2000 µg/ disk , dan  4000  µg/ disk. Larutan  stock  diencerkan  menggunkan  DMSO  untuk  memperoleh  konsentrasi 2000 µg/10 µL, 1000 µg/10 µL, dan 500 µg/10 µL yang kemudian ditetesken dengan volume 10 µL pada paper  disc diameter  6  mm  dan  diletakkan  diatas  media  NA  dicawan  petri  yang  telah diinokulasi bakteri uji ( B. cereus dan V. alginolyticus ) dengan kepadatan 0,5 standar McFarland. Kontrol  positif  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  kloramfenikol  dengan konsentrasi 500 µg/ disk dan  pelarut DMSO sebagai kontrol negatif. Cawan petri yang sudah diberikan paper disk berisi  ekstrak  kemudian  di  inkubasi  selama  2x24  jam  dengan  suhu  37 o C.  Pengamatan dilakukan  setiap  1x24  jam  dan  diameter  zona  hambat  yang  terbentuk  diukur  sebanyak  tiga  kali (Gambar 2). Aktivitas antibakteri menurut Usmiati et al. (2007) dapat dihitung dengan rumus :
Activity Unit (mm 2 /ml) =
Keterangan: Lz = Luas zona hambat (mm 2 ); Ls = Luas paper disk (mm 2 ); V = Volume (0,01 ml)
Gambar 2. Cara Pengukuran d 1 , d 2, dan d 3

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada penelitian ini, hasil ekstrak daging dan jeroan dari teripang H. atra dengan berat basah masing-masing  300  gram  adalah  669,8  mg  dan  625,2  mg.  Bentuk  ekstrak  dari  daging  maupun jeroan H.  atra keduanya  berbentuk  pasta.  Warna  pada  ekstrak  daging  adalah  merah  bata,  dan jeroan adalah merah kekuningan.
Journal of Marine Research Vol.8, No.3 Agustus 2019, pp. 262-268
Proses ekstraksi teripang menggunakan sampel basah karena menurut penelitian Sari et al. (2014) keadaan sampel basah lebih unggul dibandingkan keadaan sampel kering. Sampel basah masih  mengandung  senyawa  alkaloid,  sedangkan  pada  sampel  kering  tingkat  alkaloidnya  akan berkurang bahkan dapat hilang karena pengaruh pemanasan. Alkaloid merupakan  senyawa yang dapat  menghambat  dan  merusak  dinding  sel  bakteri  sehingga  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri (Cushnie et al., 2014). Berat ekstrak daging H. atra lebih besar dibandingkan berat ekstrak jeroan H. atra menurut Inayah et al. (2013) disebabkan oleh perbedaan jumlah senyawa yang berhasil diikat oleh pelarut. Pernyataan tersebut diperkuat melalui penelitian Oktaviani et al. (2015) yang membuktikan bahwa dalam  ekstrak  jeroan  teripang  memiliki  senyawa  metabolit  sekunder  alkaloid,  triterpenoid,  dan saponin dengan kadar yang lebih rendah dibandingkan ekstrak daging teripang.
Bentuk  ekstrak  yang  dihasilkan  berupa  pasta  disebabkan  karena  sampel  yang  digunakan pada  ekstraksi  ini  adalah  sampel  basah  (kadar  air  daging  82  %  dan  jeroan  84%).  Perbedaan warna  dapat  disebabkan  karena  perbedaan  jumlah  senyawa  metabolit  sekunder  yang  terikat kedalam  pelarut.  Warna  merah  bata  pada  ekstrak  daging  teripang  disebabkan  oleh  kandungan senyawa triterpenoid, dan warna kekuningan disebabkan oleh kandungan senyawa alkaloid yang terkandung didalam ekstrak teripang (Oktaviani et al., 2015).
Hasil penelitian uji aktivitas antibakteri ekstrak daging dan jeroan terhadap bakteri B. cereus dan V.  alginolyticus menunjukkan  bahwa  Ekstrak  daging  dan jeroan H.  atra mempunyai  aktivitas antibakteri  terhadap B.  cereus dan V.  alginolyticus. Menurut  penelitian  Sari et  al. (2014) menyatakan bahwa salah satu faktor yang mempengaruhi luasan zona hambat adalah konsentrasi dari  ekstrak  tersebut.  Penelitian  Siti et  al. (2012)  juga  memperkuat  pendapat  tersebut  dengan membuktikan  adanya  peningkatan  aktivitas  antibakteri  seiring  dengan  penambahan  jumlah konsentrasi agen antibakteri.
Aktivitas antibakteri terbesar berdasarkan data setelah masa inkubasi 24 jam (Tabel 1 dan 3) terdapat pada ekstrak daging teripang dengan konsentrasi ekstrak 4000 µg/ disk terhadap bakteri
Tabel 1. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daging dan Jeroan H. atra terhadap Bakteri Bacillus cereus Inkubasi 24 jam dan 48 jam.
Konsentrasi Ekstrak (µg/disk) Activity Unit (mm 2 /ml) 24 jam 48 jam Daging Jeroan Daging Jeroan 500 0,00±0,00 a 0,00±0,00 a 0,00±0,00 a 0,00±0,00 a 1000 3345,50±0,42 b 0,00±0,00 b 2603,61±0,02 b 0,00±0,00 b 2000 4867,79±0,33 c 2603,61±0,26 c 4408,56±0.00 c 2366,86±0,52 c 4000 10508,629±1,32 d 4919,68±1,89 d 8985,98±2,40 d 4738,81±2,05 d
Tabel 2 .  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Daging  dan  Jeroan H.  atra terhadap  Bakteri Vibrio alginolyticus Inkubasi 24 jam dan 48 jam
Konsentrasi Ekstrak (µg/disk) Activity Unit (mm 2 /ml) 24 jam 48 jam Daging Jeroan Daging Jeroan 500 0,00±0,00 a 0,00±0,00 a 0,00±0,00 a 0,00±0,00 a 1000 5024,00±0,47 b 1570,02±0,45 b 4184,25±0,82 b 1187,12±0,45 b 2000 6161,47±0,61 c 4945,70±1,67 c 5208,24±,15 c 4061,15±1,23 c 4000 14214,08±0,52 d 7858,72±1,37 d 14214,08±1,15 d 7021,04±0,71 d
V. alginolyticus yaitu sebesar 14214,08 mm 2 /ml. Aktivitas antibakteri yang dihasilkan oleh ekstrak daging  dengan  konsentrasi  ekstrak  yang  sama  terhadap  bakteri B.  cereus menghasilkan activity unit yang  lebih  kecil  yaitu  10508,62  mm 2 /ml . Menurut  Sari et  al. (2014),  hal  ini  terjadi  karena bakteri V.  alginolyticus memiliki  struktur  dinding  sel  yang  lebih  tipis  dan  tidak  mampu  untuk membentuk endospora dibandingkan bakteri B. cereus , sehingga aktivitas antibakteri terhadap V. alginolyticus lebih besar dibandingkan aktivitas antibakteri terhadap B. cereus. Penurunan aktivitas antibakteri terhadap kedua bakteri setelah inkubasi 48 jam menunjukkan bahwa  antibakteri  yang  dihasilkan dari ekstrak daging dan jeroan H. atra bersifat bakteriostatik karena  hanya  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Hal  ini  sesuai  dengan  pendapat Dwijoseputro   (2005)   yang    menyatakan   bahwa   senyawa  yang  bersifat bakteriostatik adalah senyawa  yang  hanya  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri  dengan  tidak  membunuhnya, sehingga jika bahan antibakterinya hilang atau rusak, maka bakteri uji akan dapat tumbuh kembali. Akan  tetapi,  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  daging  dengan  konsentrasi  4000  µg/ disk terhadap bakteri V.  alginolyticus tidak  mengalami  penurunan  setelah  inkubasi  selama  48  jam  sehingga ekstrak  daging  dengan  konsentrasi  tersebut  bersifat bakteriocidal terhadap  bakteri Vibrio alginolyticus .
Berdasarkan hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak daging dan jeroan H. atra terhadap bakteri B.  cereus dan V.  alginolyticus membuktikan  bahwa  ekstrak  daging  lebih  unggul  dibandingkan ekstrak  jeroan H.  atra .  Berdasarkan  Tabel  1  dan  Tabel  3,  aktivitas  antibakteri  tertinggi  pada ekstrak  daging  adalah  14214,08  mm 2 /ml  dan  ekstrak  jeroan  adalah  7858,72    mm 2 /ml.  Hasil  ini disebabkan  karena  perbedaan  jumlah  senyawa  metabolit  sekunder  seperti  alkaloid,  triterpenoid, dan  saponin  yang  terkandung  didalam  sampel.  Hal  ini  diperkuat  dengan  pernyataan  Sari et  al. (2014)  yang  menyatakan  bahwa  senyawa  alkaloid,  triterpenoid,  dan  saponin  yang  terkandung didalam  ekstrak  jeroan  lebih  sedikit  dibandingkan  ekstrak  daging  dimana  senyawa-senyawa tersebut  merupakan  senyawa  yang  bekerja  dengan  menghambat  serta  merusak  dinding  sel  dari bakteri.
Penelitian  Pranoto et  al. (2012)  dan  Septiadi et  al. (2013)  menyatakan  bahwa  Saponin berkontribusi  sebagai  antibakteri  yang  dapat  menurunkan  tegangan  permukaan  membran sehingga  merusak  sifat  permeabilitas  dari  dinding  sel  bakteri B.  cereus dan V.  alginolyticus . Rusaknya  sifat  permeabilitas  dari  dinding  sel  menyebabkan  cairan  intraseluler  yang  lebih  pekat seperti  protein,  enzim,  dan  zat-zat  metabolisme  bakteri  lainnya  tertarik  keluar  dari  sel  dan menyebabkan  kematian  dari  bakteri  tersebut.  Senyawa  triterpenoid  dalam  ekstrak  menurut Bordbar et  al. (2011)  juga  memiliki  sifat  antibakteri  yang  bekerja  dengan  mengganggu  membran sel dan menghambat sintesis protein dari bakteri.
Hasil  uji  kontrol  negatif  menunjukkan  bahwa  tidak  terbentuknya  daya  hambat  dari  pelarut terhadap  bakteri  uji,  sehingga  pelarut  yang  digunakan  tidak  berpengaruh  terhadap  aktivitas antibakteri  pada  saat  pengujian  dengan menggunakan  ekstrak  daging  dan  jeroan H.  atra .  Hal  ini sesuai dengan pernyataan Rifai dan Trianto (2003) yang menyebutkan uji kontrol negatif dilakukan untuk mengetahui ada tidaknya pengaruh pelarut dalam pembentukan daya hambat.
Uji kontrol positif menggunakan kloramfenikol dengan konsentrasi 500 µg/ disk menunjukkan zona  hambat  yang  lebih  besar  dibandingkan  dengan  ekstrak  daging  maupun  jeroan  dari H.  atra. Uji  kontrol  positif  terhadap  bakteri B.  cereus mendapatkan  AU  sebesar  94438,64  mm 2 /ml  dan terhadap  bakteri V.  alginolyticus adalah  120689,39  mm 2 /ml.  Menurut  Sari et  al. (2014)  hal  ini dikarenakan  kloramfenikol  merupakan  senyawa  murni  yang  mempunyai  mekanisme  sebagai pengganggu  sintesis  protein  dari  bakteri  sehingga  dapat  mengakibatkan  kematian  bakteri, sedangkan  ekstrak H.  atra merupakan  ekstrak  kasar  dan  masih  mengandung  berbagai  senyawa lain  yang dapat mempengaruhi kemampuan alkaloid,  triterpenoid, steroid, flavonoid,  dan saponin untuk menghambat pertumbuhan bakteri. Hal ini sesuai dengan pendapat Dewi et al. (2014) yang menyebutkan  bahwa  mekanisme  kloramfenikol  dalam  menghambat  bakteri  dengan  bergabung pada  subunit-subunit  ribosom,  sehingga  mencegah  bergabungnya  asam  amino  menjadi  protein sehingga  sintesis  asam  amino  terganggu  bahkan  tidak  berlangsung  dan  menyebabkan kematian sel bakteri.

## KESIMPULAN
Teripang H.  atra berpotensi  untuk  dimanfaatkan  sebagai  makanan  fungsional  berbasis antibakteri  yang  menyehatkan  tubuh  karena  memiliki  akivitas  antibakteri  terhadap  bakteri B. cereus dan V.  Alginolyticus. Ekstrak  daging  dan  jeroan H.  atra dengan  konsentrasi  500  µg/ disk tidak memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri B. cereus dan V. alginolyticus pada inkubasi 24 dan 48 jam. Ekstrak jeroan H. atra dengan konsentrasi 1000 µg/ disk , 2000 µg/ disk , 4000 µg/ disk serta  ekstrak  daging H.  atra dengan  konsentrasi  1000  µg/ disk dan  2000  µg/ disk bersifat bakteriostatik terhadap  bakteri B.  cereus dan V.  alginolyticus karena  terjadi  penurunan  aktivitas antibakteri pada inkubasi 48 jam. Ekstrak daging H. atra dengan konsentrasi 4000 µg/ disk bersifat bakteriosidal terhadap  bakteri V.  alginolyicus karena  tidak  terjadi  penurunan  aktivitas  antibakteri pada inkubasi 48 jam.

## DAFTAR PUSTAKA
Bordbar,  S.,  Anwar,  F.  &  Saari,  N.  2011.  High-Value  Components  and  Bioactives  from  Sea Cucumber for Functional Foods – A Review . Marine Drugs. 9:1761-1805 Cushnie, T.P.T., Benjamart, C. & Andrew, J.L. 2014. Alkaloids: An Overview of Their Antibacterial,
Antibiotic-enhancing, and Antivirulence Activities. International journal of Antimicrobial Agents (44):377-386
Darsono,  P.  1999.  Perkembangan  Pembenihan  Teripang  Pasir, Holothuria  scabra Jaeger,  Di Indonesia. Oseana, 24(3):35-45.
Dewi,  M.K.,  Ratnasari,  E.  &  Guntur,  T.  2014.  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Daun  Majapahit ( Crescentia  cujete )  terhadap  Pertumbuhan  bakteri Ralstonia  solanacearum Penyebab Penyakit Layu . Lentera Bio, 3 (1):51-57 Dwijoseputro. 2005. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Gramedia: Jakarta.
European  Commision  Concerted  Action  on  Functional  Food  Science  in  Europe .  1999. Scientific Concepts  of  Functional  Foods  in  Europe  Consensus  Document . British  Journal  of  Nutrition (81): S1 –S27
Farouk,  A.E.,  Faizal,  A.H.G.,  &  Ridzwan,  B.H..  2007.  New  Bacterial  Species  Isolated  from Malaysian Sea Cucumbers with Optimized Secreted Antibacterial Activity. American Journal of Biochemistry and Biotechnology . 3(2):60-65.
Inayah, N., Ningsih, R. & Adi, T.K.. 2013. Uji Toksisitas dan Identifikasi Awal Golongan Senyawa Aktif  Ekstrak  Etanol  dan  N-Heksana  Teripang  Pasir  ( Holothuria  scabra )  Kering  Pantai Kenjeran Surabaya. Alchemy , 2(1):92-100 Kaswandi, M.A., Lian, H.H., Nurzakiah, S., Ridzwan, B.H., Ujang, S., Samsudin, M.W., Jasnizar S.
&  Ali,  A.M.  2000.  Crystal  Saponin  from  Three  Sea  Cucumber  Genus  and  Their  Potential  as Antibacterial Agents. 9 th Scientific Conference Elevtron Microscopic Society. 12-14 November 2000. Kota Bharu, Kelantan: 273-276.
Khotimchenko,  Y.  2018.  Pharmacological  Potential  of  Sea  Cucumber. International  Journal  of Molecular Sciences . 19(5):1342.
Oktaviani,  D.,  Yeni,  M.  &  Emma,  R.  2015.  Aktivitas  Antioksidan  dan  Antibakteri  Ekstrak  Jeroan Teripang Holothuria atra dari Perairan Pulau Biawak Kabupaten Indramayu. Jurnal Perikanan dan Kelautan 6(2):1-6.
Pranoto,  E.N., Widodo  F.M.  &  Delianis  P.  2012.  Kajian  Aktivitas  Bioaktif  Ekstrak  Teripang  Pasir ( Holothuria scabra ) Terhadap jamur Candida albicans. Jurnal Perikanan, 1(2): 1-8 Rifai,  A.  &  Trianto,  A.  2003.  Penggunaan Thin  Layer  Chromatogaphy untuk  Mengidentifikasi Kandungan  Bahan  Bioaktif  Antibakteri Vibrio  harveyi pada  Karang  Lunak Sarcophyton sp. Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Undip: Semarang.
Sabdono,  A.  &  Radjasa,  O.K.  2008.  Microbial  symbionts  in  Marine  Sponges:  Marine  Natural Product Factory. Journal of Coastal Development ., 11(2):57-61.
Sari  E.M.,  Widodo  F.M.  &  Sumardianto.  2014.  Kajian  Senyawa  Bioaktif  Ekstrak  Teripang  Hitam ( Holothuria  edulis )  Basah  dan  Kering  sebagai  Antibakteri  Alami. Jurnal  Pengolahan  dan Bioteknologi Hasil Perikanan , 3(4):16-24.
Septiadi, T., Delianis, P. & Ocky K.R. 2013. Uji Fitokimia dan Aktivitas Antijamur Ekstrak Teripang Keling  ( Holothuria  atra )  dari  Pantai  Bandengan  Jepara  terhadap  Jamur Candida  albicans . Journal of Marine Science. 2(2):76-84. Winarno. 2004. Kimia Pangan dan Gizi. Jakarta: Gramedia Pustaka Utama Wiranto,  E.,  Muhamad,  A.W.  &  Puji,  A.  2016.  Aktivitas  Antiinflamasi  secara  In-Vitro  Ekstrak Teripang  Butoh  Keling ( Holothuria  leucospilota  Brandt )  dari  Pulau  Lemukutan. Jurnal  Kimia Khatulistiwa , 5(1):52-57