Hasil Penelitian

## POTENSI KENTANG HITAM DALAM MEREDUKSI STRES OKSIDATIF DAN MENGHAMBAT PROLIFERASI SEL KANKER PAYUDARA MCF-7
[Potential of Black Potato in Reducing Oxidative Stress and Inhibiting the Proliferation of Breast Cancer Cells MCF-7]
Mutiara Nugraheni 1) *, Umar Santoso 2) , Suparmo 2) dan Hastari Wuryastuti 3)
1) Fakultas Teknik, Universitas Negeri Yogyakarta, Yogyakarta
2) Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta
3) Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta
Diterima 24 September 2012 / Disetujui 23 Juli 2013

## ABSTRACT
The ethanolic extracts of flesh and peel of Coleus tuberosus were evaluated for its ability to reduce oxidative stress using cellular antioxidant activity  testing  on  MCF-7  cells  based  on  oxidation  of  2.7-dichlorofluoresce  diacetate  (DCFH).  Meanwhile,  the  antiproliferative  activities  was evaluated based on 3-(4.5-Dimethylthiazol-2) -2.5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay in MCF-7 cells. The results showed that the ethanolic extract  of  flesh  and  peel  have  the  ability  to  reduce  oxidative  stress  and  inhibit  the  proliferation  of  breast  cancer  cells  MCF-7.  The  optimum concentration of ethanol extracts of peel in reducing oxidative stress was 200 μg/mL, while that of flesh was 400 μg/mL. Inhibitory concentration (IC 50 ) of cell proliferation of MCF-7 by peel extract was 698.23±1.61 (µg/mL), and flesh extracts was 829.86±5.73 (µg/mL). The ability to reduce and inhibit the proliferation showed a dose dependent manner. There is a high correlation between cellular antioxidant and antiproliferation. The correlation  of  cellular  antioxidant  activity  of  the  ethanolic  extract  of  flesh  Coleus  tuberosus  and  antiproliferation  was  0.93,  while  the  correlation between  cellular  antioxidant  activity  ofthe  ethanolicextract  ofthe  peel  and  anti-proliferation  was  0.98.  These  results  suggest  that  the  ethanolic extract of flesh and peel of Coleus tuberosus can be used as a source of natural antioxidants and anti-proliferation.
Keywords: anti-proliferation, black potato (Coleus tuberosus), cellular antioxidant, MCF-7 cells

## ABSTRAK
Ekstrak etanol daging dan kulit kentang hitam dievaluasi kemampuannya dalam mereduksi stress oksidatif dengan aktivitas antioksidan seluler pada sel  MCF-7 berdasarkan oksidasi 2.7-diasetat diklorofluoescin (DCFH). Sedangkan aktivitas antiproliferasi dievaluasi menggunakan  3-(4.5- dimetiltiazol-2)-2.5-dipfeniltetrazolium  bromida  (MTT)  pada  sel  MCF-7.  Hasil  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  daging  dan  kulit  memiliki kemampuan mereduksi stress oksidatif dan menghambat proliferasi sel kanker payudara MCF-7. Konsentrasi optimum esktrak etanol kulit kentang hitam  dalam  mereduksi  stress  oksidatif  adalah  200  µg/mL,  sedangkan  ekstrak  daging  adalah  400  µg/mL. Inhibitory  Concentration (IC 50 ) penghambatan  50%  proliferasi  sel  MCF-7  oleh  ekstrak  kulit  adalah  698.23±1.61  (µg/mL)  dan  esktrak  daging  adalah  829.86±5.73  (µg/mL). Kemampuan  mereduksi  dan  menghambat  proliferasi  tergantung  pada  konsentrasi  yang  digunakan.  Terdapat  korelasi  yang  tinggi  antara antioksidan seluler dan antiproliferasi. Korelasi aktivitas antioksidan seluler ekstrak etanol daging kentang hitam dan antiproliefrasi adalah 0.93, sedangkan korelasi aktivitas antioksidan seluler ekstrak etanol kulit kentang hitam dan antiproliefrasi adalah 0.98. Hasil ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol daging dan kulit kentang hitam dapat digunakan sebagai sumber antioksidan dan anti proliferasi alami.
Kata kunci: anti-proliferasi, antioksidan seluler, kentang hitam, sel-sel MCF-7

## PENDAHULUAN
1
Tubuh  manusia  setiap  hari  selalu  berinteraksi  dengan spesies oksigen reaktif (SOR) yang berasal dari sinar UV, asap rokok,  polusi  udara,  radiasi,  obat  (asetaminofen,  bleomisin), metabolisme  normal  tubuh,  dan inflamasi  yang  dapat  bereaksi dan  menyebabkan  terjadinya  kerusakan  dan  mutasi  pada  sel, mengoksidasi  karbohidrat,  lipida,  protein  dan  DNA  (Borek, 2004). Termasuk dalam SOR adalah radikal anion superoksida (O 2  - ),  oksigen  singlet  ( 1 O 2 ),  hidrogen  peroksida  (H 2 O 2 )  dan radikal hidroksil (  OH) (Lopez-Lazaro, 2007).
*Penulis Korespondensi: Email: mutiara_nugraheni@yahoo.com
Meskipun  dalam  tubuh  terdapat  sistem  pertahanan antioksidan  yaitu  antioksidan  enzim  (superoksida  dismutase, katalase,  glutation  peroksidase),  vitamin  E,  yang  mempunyai struktur molekul yang dapat mendonorkan elektronnya kepada molekul  SOR  tanpa  mengganggu  stabilitas  molekulnya  dan dapat memutus reaksi berantai dari radikal bebas, tetapi tubuh dapat  mengalami  stres  oksidatif  akibat  ketidakseimbangan antara  produksi  atau  konsentrasi  SOR  dan  kemampuan antioksidan  dalam  sel  yang  dapat  mengarah  pada  kerusakan oksidatif (Manda et al. 2009; Waris dan Ahsan, 2006). Spesies oksigen  reaktif  dapat  ditangkap  oleh  sistem  pertahanan antioksidan dalam tubuh dan senyawa fitokimia, seperti fenolik, karotenoid,  vitamin  yang  terdapat  dalam  buah-buahan  dan sayuran.
Hasil Penelitian
Kentang  hitam  ( Coleus  tuberosus )  termasuk  jenis  sayuran berbentuk  umbi,  termasuk  dalam  bangsa  yang  sama  dengan kentang ( Solanum tuberosum ) yaitu Solanales dan digolongkan dalam Famili Lamiceae dan sub Famili Nepetoideae . Berdasar- kan penggunaan ethnobotanical dan filogeni pada Plecthrantus , maka kentang hitam termasuk dalam kelompok tanaman yang tidak  hanya  digunakan  sebagai  makanan  namun  juga  diguna- kan  dalam  pengobatan.  Kentang  hitam  merupakan  tanaman pangan  yang  potensial  sebagai  sumber  pangan  alternatif, namun pembudidayaan di masyarakat makin langka. Pemilihan kentang  hitam  sebagai  objek  penelitian  ini  adalah  selaras pencanangan bidang strategis nasional oleh  Presiden RI pada tahun  2008.  Salah  satu  bidang  strategis  nasional  yang memerlukan  penelitian  intensif  yaitu  diversifikasi  konsumsi pangan  berbasis  sumber  daya  lokal  dengan  eksplorasi  pe- manfaatan  tanaman  pangan  non  konvensional,  termasuk diantaranya umbi-umbian.
Penelitian  Hsum et al. (2008) menunjukkan bahwa ekstrak umbi  kentang  hitam  (C oleus  tuberosus )  yang  menggunakan pelarut kloroform memiliki senyawa potensial sebagai antitumor pada  sel  Raji.  Mooi et  al .  (2010)  membuktikan  bahwa  ekstrak kentang  hitam  mengandung  fitosterol  dan  asam  triterpenoat (asam maslinat) dan mampu menghambat ekspresi EBV early- antigen pada sel Raji. Hsum et al . (2011) membuktikan bahwa asam  maslinat  memiliki  kemampuan  untuk  menekan  ekspresi COX-2 dan menghambat Nf-kB dan aktivasi AP-1 pada sel Raji. Nugraheni et  al. (2011)  membuktikan  bahwa  ekstrak  etanol kentang  hitam  mengandung  senyawa asam  triterpenoat yaitu asam  ursolat  dan  asam  oleanolat.  Beberapa  penelitian  mem- buktikan  asam  ursolat  dan  asam  oleanolat  memiliki  sifat fungsional  sebagai  anti-tumor  (Yasukawa et  al. 2009;  Feng et al. 2009; Duval et al. 2008).
Kanker adalah salah satu penyakit degeneratif yang meng- akibatkan  tingginya  angka  kematian.  Berdasarkan  laporan World  Cancer  Research  Fund (WCRF)  dan the  American Institute for Cancer Research (AICR), kasus kanker diramalkan kejadiannya  terus  meningkat  dari  10.3  juta  kasus  pada  tahun 1996  menjadi  14.7  juta  pada  2020,  dimana  kanker  payudara adalah  penyebab  kedua,  kematian  pada  wanita  (Opata  dan Izevbigie, 2006). Menurut WHO, 8-9% wanita menderita kanker payudara sehingga merupakan jenis kanker yang paling banyak diderita  oleh  wanita.  Berdasar  data  Sistem  Informasi  Rumah Sakit  (SIRS)  2007,  kejadian  kanker  payudara  mencapai  8.227 kasus  atau  16.85%  sedangkan  kanker  leher  rahim  sebanyak 5.786  kasus  atau  1178%.  Hal  ini  membuktikan  bahwa  kanker payudara  masih  menduduki  peringkat  pertama  di  Indonesia (Yusharmen, 2010).
Salah  satu  sel  kanker  payudara  yang  digunakan  dalam penelitian  tentang  kanker  payudara  adalah Michigan  Cancer Foundation - 7 (MCF-7). Michigan  Cancer  Foundation-7 adalah sel  kanker  payudara  yang  memiliki  reseptor  positif  estrogen, dalam  hal  ini  estrogen  tersebut  dapat  menstimulasi  proliferasi (perbanyakan)  sel  yang  telah  mengalami  mutasi.  Ciri  khas  sel kanker  adalah  mengalami  proliferasi  yang  cepat.  Proliferasi pada sel kanker adalah pertumbuhan tidak terkendali dan pem- belahan  tanpa  batas.  Saat  ini  yang  menjadi  masalah  paling penting  pada  kesehatan  masyarakat  dalam  mencegah  kanker adalah  mengembangkan  metode  yang  efektif  untuk  meng-
hentikan  rangkaian  karsinogenesis  dengan  kemopreventif  ber- basis  pada  senyawa  bioaktif  dari  tanaman  yang  dapat  meng- hambat  terjadinya  proliferasi.  Salah  satunya  adalah  dengan mengonsumsi senyawa-senyawa fitokimia yang terdapat dalam makanan  yang  memiliki  kemampuan  sebagai  antioksidan seluler. Hal ini dikarenakan senyawa fitokimia tersebut memiliki potensi  untuk  berinteraksi  dengan  proses  kanker  pada  tingkat genetik,  memodifikasi  sisi  detoksifikasi  obat,  perbaikan  DNA, dan  proliferasi  sel.  Intervensi  diet  yang  mengandung  senyawa fitokimia yang memiliki kemampuan sebagai antioksidan seluler dapat  menjadi  strategi  kunci  untuk  mencegah  perkembangan kanker.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  (1)  mengetahui  kemampuan ekstrak etanol daging dan kulit kentang hitam dalam mereduksi stres oksidatif pada sel kanker payudara MCF-7 yang dalam hal ini  dievaluasi  dengan  aktivitas  antioksidan  seluler.  (2)  me- ngetahui  kemampuan  esktrak  etanol  daging  dan  kulit  kentang hitam dalam menghambat proliferasi sel kanker MCF-7. (3) me- ngetahui  korelasi  antara  aktivitas  antioksidan  seluler  dengan kemampuan menghambat proliferasi sel kanker payudara MCF- 7.  Penggunaan  sel  kanker  MCF-7  diharapkan  lebih  dapat menggambarkan  kompleksitas  sistem  biologi  dan  merupakan alat  yang  penting  untuk  memeriksa  makanan,  fitokimia  dan suplemen  makanan  yang  potensial  untuk  aktivitas  biologi, karena  model  aktivitas  antioksidan  seluler  ini  memper- timbangkan  pengambilan  senyawa  oleh  sel,  distribusi  dan efisiensi  perlindungan  terhadap  radikal  bebas  dibawah  kondisi fisiologis tubuh.

## BAHAN DAN METODE
Bahan  untuk  penentuan  aktivitas  antioksidan  seluler  dan anti-proliferasi pada sel MCF-7
Bahan  yang  diuji  ada  dua  yaitu  ekstrak  etanol  kulit  dan daging  kentang  hitam  mentah , dan Sel  MCF-7  (ATCC, American  Type  Culture  Collection ).  Bahan  kimia: 2'.7'- dichlorfluorescein-diacetate (DCFH-DA)  (Sigma  Aldrich), Phorbol  myristate  acetate  ( PMA)  (Sigma  Aldrich), Dulbecco's modified eagle medium (DMEM) (Sigma  Aldrich), Fetal  Bovine Serum (Gibco). Dulbecco's  modified  eagle  medium (DMEM) (Sigma  Aldrich), 3-(4.5-Dimethylthiazol-2-yl)-2.5-diphenyltetra- zoliumbromide (MTT)  (Sigma  Aldrich),  DMSO  (Sigma  Aldrich), Phosphate buffered saline (PBS) (Gibco).
Persiapan ekstrak etanol daging dan kulit kentang hitam Kentang hitam mentah dipisahkan kulit dan daging umbinya. Ketebalan  pengupasan  kulit  (1-1.5  mm)  dan  daging  umbi dikeringkan  menggunakan cabinet  drier pada  suhu  40°C selama  24  jam.  Kemudian  dilakukan  pengecilan  ukuran  dan diayak  dengan  ayakan tyler ukuran  80  mesh.  Bahan  baku kemudian  disimpan  dalam freezer (-20°C).  Tepung  kulit  dan daging  umbi  kentang  hitam  mentah  dimaserasi  dengan  etanol selama  7  hari  (1:5),  kemudian  disaring  menggunakan  kertas whatman  No.1,  dikeringkan  dengan vacuum  rotary  evaporator suhu 45°C dan disimpan pada suhu -20°C (Mooi et al. 1999).
Hasil Penelitian
Terakreditasi Dikti: 80/DIKTI/Kep/2012
Evaluasi  aktivitas  antioksidan  seluler  ekstrak  daging  dan kulit kentang hitam mentah pada sel MCF-7
Penentuan  aktivitas  antioksidan  seluler  mengacu  pada Wolfe dan Liu (2007); Liu dan Finley (2005). Penumbuhan cell lines dari  penyimpanan  nitrogen  cair  untuk  uji  aktivitas antioksidan  adalah  sel  beku  dari  nitrogen  cair  dibiarkan  pada suhu  kamar  sampai  mencair  sebagian,  kemudian  dimasukkan dalam  tabung  konikal  15  mL,  dan  ditambah  10  mL  media pencuci  lalu  dikocok.  Setelah  itu  disentrifus  750  g  selama  7 menit.  Pelet  diambil  ditambahkan  dengan  media  kultur, kemudian  sel  dimasukkan  dalam flask .  Sel  MCF-7  dikulturkan menggunakan  media  kultur  DMEM.  Semua  kegiatan  dilakukan secara  aseptis  dalam  laminar airflow .  Sel  kemudian  diinkubasi pada  suhu  37°C  dengan  aliran  CO2  5%.  Perkembangan  sel diamati  tiap  hari  dan  jika  media  mulai  menguning  diganti dengan media baru.
Jika  sel  sudah  tumbuh  memenuhi flask ,  media  pada  sel MCF-7 diambil, dicuci dengan PBS secukupnya. Selanjutnya sel dilepas dari dinding flask ( scapper ) menggunakan 0.5 mL tripsin 0.05%. Flask dikocok  perlahan-lahan  sampai  semua  sel terlepas semua. Selanjutnya suspensi sel tersebut dimasukkan dalam  tabung conical 15  mL  dan  ditambahkan  dengan  media kultur  sebanyak  5  mL.  Jumlah  sel  dihitung  dengan hemo- cytometer , disuspensikan dalam media kultur sampai diperoleh kepadatan sel 1.5x10 4 sebanyak 100 µL pada setiap sumuran. Sel  MCF-7  ditumbuhkan  pada microplate yang  terdiri  dari  96 sumuran dengan medium DMEM yang ditambah 10% (v/v) fetal bovine  serum ,  100  U Penicilin dan  100  mg/mL Streptomycin pada  kondisi  37°C,  5%  CO 2 .  Dua  puluh  empat  jam  setelah ditumbuhkan  pada microplate ,  medium  pertumbuhan  dibuang dan  sumuran  dicuci  dengan  PBS.  Senyawa  yang  digunakan adalah  ekstrak  etanol  kulit  dan  daging  kentang  hitam,  dengan konsentrasi  100,  200,  400  dan  800  µg/mL  DMSO.  Tiga sumuran  diperlakukan  selama  20  menit  dengan  100  mikroml ekstrak etanol kulit dan daging kentang hitam mentah (100, 200, 400  dan  800  µg/mL).  Kemudian  ditambah  25  µM  DCFH-DA dilarutkan  dalam  medium  perlakuan  dan  PMA  (100  ng/mL DMSO)  selama  30  menit.  Sejumlah  10.000  sel  MCF-7  ditera fluoresensinya  menggunakan flow  cytometer BD  Facs  Calibur pada panjang gelombang 535 nm. Aktivitas antioksidan seluler ditentukan  dengan  menghitung  persentase  penurunan  ROS yang dimonitoring dengan intensitas fluoresensi:
Persentase penurunan ROS =(Fit o − Fit 1 ) × 100 / (Fit o − Fit 2 )
Fit o :  kontrol  dengan  stress  oksidatif;  Fit 1 :  sel  yang diperlakuan dengan ekstrakf; Fit 2 : kontrol tanpa stress oksidatif (Muanda et al. 2011).
Evaluasi anti-proliferasi menggunakan sel kanker MCF-7 Metode  mengacu  pada  Hogan et  al. (2010).  Sel  kanker payudara MCF-7 (1.5x10 4 sel/mL) ditumbuhkan pada microplate yang  terdiri  dari  96  sumuran  dengan  medium  DMEM  yang ditambah  10%  (v/v)  FBS,  100  U Penicilin dan  100  mg/mL Streptomycin pada  kondisi  37°C,  5%  CO 2 .  Sel  segera  di- inkubasi  dengan  ekstrak  etanol  kulit  (700-1000  µg/mL)  dan daging kentang hitam mentah (700-1000 µg/mL) selama 72 jam pada  kondisi  5%  CO 2 ,  37°C  pada  inkubator.  Medium  per-
tumbuhan  yaitu  DMEM  dihilangkan  setelah  72  jam  inkubasi, dicuci dengan HBSS dan kemudian sel diinkubasi selama 4 jam dengan 200 μL larutan reagen MTT (0.5 mg/mL dalam DMEM) ditambahkan  pada  tiap-tiap  sumuran.  Kemudian  ditambah dimethyl sulfoxida (200 μL), didiamkan selama semalam. Absorbansi  dimonitor  pada  550  nm  dengan Elisa  reader . Data  absorbansi  dibutuhkan  untuk  viabilitas  seluler  yang  di- ekspresikan  sebagai  persentase  perlakuan  ekstrak  etanol  kulit dan  daging  kentang  hitam  mentah  terhadap  kontrol.  Viabilitas sel akibat perlakuan ditentukan dengan:
Viabilitas sel (%) = (Abs perlakuan / Abs tanpa perlakuan) x 100
Kapasitas  ekstrak  etanol  kulit  dan  daging  kentang  hitam mentah  diekspresikan  dalam  IC 50 ( Inhibitory  Concentration 50) yaitu konsentrasi yang diperlukan untuk menghambat viabilitas sel  sebesar  50%.  Kurva  persentase  viabilitas  sel  kemudian  di plot kembali antara konsentrasi ekstrak dan viabilitas. Konsen- trasi  penghambatan  diperlukan  untuk  menurunkan  50% viabilitas  sel  (IC 50 )  dibandingkan  dengan  kontrol  yang  tidak diperlakukan.  Makin  rendah  IC 50 ,  maka  makin  tinggi  kapasitas atau kemampuan senyawa sebagai anti-proliferasi.

## Analisis statistik
Percobaan  dilakukan  dengan  tiga  ulangan.  Data  yang ditampilkan adalah rata-rata ± SD dari tiga ulangan. Pengujian antioksidan  aktivitas  antioksidan  seluler  dilakukan  dengan anova satu jalur, apabila terdapat beda nyata kemudian dilanjut- kan  dengan Duncan  Multiple  Range  Test (DMRT).  Pengujian antiproliferasi  dilakukan  dengan  rancangan  faktorial  (4  per- lakuan x 3 ulangan). Korelasi antara metode pengujian dilaku- kan  dengan spearman  correlation, menggunakan  SPSS  versi 16.0.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Aktivitas antioksidan seluler
Kemampuan  mereduksi  stres  oksidatif  dilakukan  dengan pengujian  aktivitas  antioksidan  seluler  (c elullar  antioxidant activity /CAA)  pada  kultur  sel  (Wolfe  dan  Liu,  2007;  Wolfe  dan Liu,  2008).  Sel  diinkubasi  dengan  senyawa  antioksidan  dan pewarna sel yaitu DCFH-DA ( 2’.7’-dichlorofluorescin diacetate ). Antioksidan berikatan dengan membran sel dan atau melewati membran  untuk  masuk  kedalam  sel.  DCFH-DA  berdifusi  ke dalam  sel  dimana  esterase  seluler  melepaskan  diasetat sehingga  membentuk  DCFH  yang  lebih  polar.  Sel  yang  diper- lakukan  dengan  peroksil  radikal  yang  dapat  berdifusi  kedalam sel,  misalnya 2.2'-Azo-bis-amidinopropane (ABAB),  H 2 O 2 , phorbol  miristate  acetate (PMA)  secara  spontan  akan  ter- dekomposisi menjadi bentuk peroksil radikal. Peroksil radikal ini menyerang  membran  sel  dan  menghasilkan  lebih  banyak radikal dan mengoksidasi DCFH intraseluler ke bentuk fluoresen DCF. Adanya antioksidan mencegah oksidasi DCFH, membran lipida  dan  menurunkan  pembentukan  DCF  (Wolfe  dan  Liu, 2007). Fluoresen DCF ini diukur dengan flow cytometer . Tingkat fluoresen  diukur  dan  proporsional  dengan  tingkat  oksidasi. Senyawa  fitokimia  murni  dan  ekstrak  buah,  sayuran  dan
Hasil Penelitian
Terakreditasi Dikti: 80/DIKTI/Kep/2012
79.74±0.72 a 81.79±0.45 b
84.54±1.00 c 84.96±0.22 c 74 76 78 80 82 84 86 88 100 200 400 800 % P en ur un an S O R (% te rh ad ap K on tro l) Ekstrak Ethanol Daging Kentang Hitam (µg/mL) 85.26±0.95 a
91.72±0.20 b 91.72±0.20 b 92.24±0.63 b 78 80 82 84 86 88 90 92 94 96 100 200 400 800 % P en ur un an S O R (% te rh ad ap K on tro l) Ekstrak Ethanol Kulit Kentang Hitam (µg/mL)
tanaman  dapat  menangkap  peroksil  radikal  dan  menghambat pembentukan DCF. Aktivitas antioksidan seluler menggunakan kemampuan peroksil radikal, produk reaktif dari oksidasi lipida, untuk  memicu  pembentukan  fluoresen  oksidatif  stress  sebagai indikator  dalam  kultur  sel  dan  mengukur  pencegahan  oksidasi oleh  antioksidan.  Perubahan  DCFH-DA  menjadi  bentuk fluoresen (DCF) sehingga dapat ditera dengan flow cytometer . Persentase  penurunan  SOR  pada  sel  MCF-7  yang diinkubasi  dengan  ekstrak  etanol  daging  kentang  hitam  pada konsentrasi  100,  200,  400  dan 800  µg/mL  kemudian  diinduksi PMA diperlihatkan pada Gambar 1.
Ekstrak  etanol  daging  kentang  hitam  mampu  menurunkan terbentuknya  SOR  pada  sel  MCF-7  yang  diinduksi  PMA  ter- gantung pada konsentrasi ekstrak yang digunakan. Persentase penurunan  terbentuknya  SOR  ekstrak  etanol  daging  kentang hitam pada konsentrasi 400 µg/mL tidak berbeda nyata dengan konsentrasi  800  µg/mL,  sehingga  penggunaan  ekstrak  etanol daging  kentang  hitam  optimum  pada  konsentrasi  400  µg/mL (Gambar 1).
Keterangan: Notasi yang berbeda menunjukkan beda nyata ( p <0.05)
Gambar 1.  Persentase  penurunan  spesies  oksigen  reaktif  (SOR) dengan  perlakuan  ekstrak  etanol  daging  kentang  hitam pada  sel  MCF-7  yang  diinduksi  dengan Phorbol  Miristate Asetat (PMA)
Persentase  penurunan  SOR  pada  MCF-7  yang  diinkubasi dengan ekstrak etanol kulit kentang hitam konsentrasi 100, 200, 400  dan  800  µg/mL  dan  diinduksi  PMA  (Gambar  2).  Ekstrak etanol  kulit  kentang  hitam  mentah  mampu  menurunkan  SOR pada  sel  MCF-7  yang  diinduksi  PMA  tergantung  pada konsentrasi  ekstrak  yang  digunakan.  Persentase  penurunan terbentuknya  SOR  ekstrak  etanol  kulit  kentang  hitam  pada konsentrasi 200 µg/mL tidak berbeda nyata dengan konsentrasi 400 dan 800 µg/mL, sehingga penggunaan ekstrak etanol kulit kentang  hitam  optimum  adalah  pada  konsentrasi  200  µg/mL (Gambar 2).
Penelitian  ini  membuktikan  bahwa  ekstrak  etanol  kulit kentang hitam mentah dan ekstrak etanol daging kentang hitam mentah  mampu  menurunkan  SOR  pada  sel  MCF-7  yang diinduksi PMA. Kemampuan menurunkan ROS diduga berkaitan dengan  kandungan  senyawa  bioaktif  dalam  kentang  hitam, seperti asam ursolat dan asam oleanolat yang dapat bertindak sebagai  penangkap  spesies  oksigen  reaktif.  Nugraheni et  al. (2011)  membuktikan  bahwa  kentang  hitam  mengandung senyawa asam ursolat dan asam oleanolat. Hasil penelitian ini
sesuai  dengan  hasil  penelitian  Dekanski et  al. (2009)  yang membuktikan  bahwa  perlakuan  ekstrak  daun Olive yang mengandung asam triterpenoat yaitu asam oleanolat dan asam maslinat dapat bertindak sebagai penangkap radikal bebas dan meningkatkan  kadar  antioksidan  enzim  SOD  dan  katalase dibandingkan dengan kontrol.
Keterangan: Notasi yang berbeda menunjukkan beda nyata ( p <0.05)
Gambar 2.  Persentase  penurunan  spesies  oksigen  reaktif  (SOR) dengan perlakuan ekstrak etanol kulit kentang hitam pada sel MCF-7 yang diinduksi dengan Phorbol Miristate Asetat (PMA)
Selain  asam  ursolat  dan  asam  oleanolat , ekstrak  etanol kentang  hitam  memiliki  beberapa  jenis  senyawa  bioaktif diantaranya asam maslinat, dan fitosterol, seperti stigmasterol, beta-sitosterol dan kampesterol (Mooi et al. 2010) dan senyawa fenol. Asam maslinat dan fitosterol dapat meningkatkan aktivitas antioksidan  seluler  baik  enzimatik  maupun  non  enzimatik (Dekanski et al. 2009;  Vivancos dan Moreno, 2008).  Senyawa fenol  memiliki  kemampuan  meningkatkan  sistem  pertahanan antioksidan  (Giovannini et  al. 2008;  Verma et  al. 2009; O’Sullivan et  al. 2011),  sehingga  mampu  mencegah  oksidasi DCFH  dan  menurunkan  pembentukan  DCF  fluoresen  (Salawu et al. 2011; Muanda et al. 2011).
Mekanisme pengurangan  SOR pada ekstrak etanol daging kentang  hitam  mentah  dan  ekstrak  etanol  kulit  kentang  hitam mentah  diduga  seperti  mekanisme  senyawa  bioaktif  yang terkandung  didalamnya  (asam  ursolat,  asam  oleanolat,  asam maslinat dan fitosterol) yaitu menangkap SOR yang menyerang membran sel. Peningkatan  SOR pada sel menyebabkan lipida pada membran sel mengalami oksidasi sehingga membran sel mengalami perubahan permeabilitas dan fluiditas (Prades et al. 2011). Asam ursolat, asam oleanolat, asam maslinat, fitosterol memiliki  kemampuan  menjaga  fluiditas  membran  sel  dengan menangkap  SOR,  sehingga  sinyal  komunikasi  tingkat  seluler dapat  berjalan  dengan  baik  termasuk  diantaranya  sinyal  yang berakaitan  dengan  aktivasi  antioksidan  enzim  (Nrf-2-ARE) (Zhao et al. 2010).
Peningkatan  ekspresi  Nrf-2-ARE  dengan  meningkatkan sistem  pertahanan  antioksidan  dalan  sel  (SOD,  CAT,  GPx, Glutatione,  vitamin  E  dan  karoten).  Peningkatan  sistem pertahanan  antioksidan  sel  (SOD,  CAT,  GPx)  memberikan pengaruh pada meningkatnya kemampuan menetralkan radikal anion  superoksida  (O 2  - ),  oksigen  singlet  ( 1 O 2 ),  hidrogen
Hasil Penelitian
56.98 ± 0.64 d 51.77 ± 1.18 c
47.26 ± 1.54 b 41.46 ± 0.44 a 0 10 20 30 40 50 60 70 700 800 900 1000 % S el H id up (% te rh ad ap K on tro l)
Konsentrasi Ekstrak Etanol Daging Kentang Hitam (µg/mL)
51.22 ± 0.34 d
40.14 ± 0.28 c 33.79 ± 0.80 b 29.74 ± 0.37 a 0 10 20 30 40 50 60 70 700 800 900 1000 % S el H id up (% te rh ad ap K on tro l)
Konsentrasi Ekstrak Etanol Kulit Kentang Hitam (µg/mL)
peroksida (H 2 O 2 ) dan radikal hidroksil (  OH) akibat induksi PMA. Peningkatan glutatione, vitamin E dan karoten dalam sel dapat meningkatkan penangkapan radikal bebas yang terdapat dalam sel,  sehingga  dapat  menurunkan  jumlah  radikal  bebas  dalam sel MCF-7.
Penelitian  ini  membuktikan  bahwa  ekstrak  etanol  kulit kentang  hitam  mentah  mampu  menurunkan  SOR  lebih  besar dibandingkan  ektrak  etanol  daging  kentang  hitam  mentah. Perbedaan  kemampuan  menurunkan  SOR,  salah  satunya diduga  berkaitan  dengan  perbedaan  kandungan  asam  ursolat, asam  oleanolat,  asam  maslinat,  fitosterol  dan  senyawa  fenol. Senyawa bioaktif dalam kentang hitam yaitu asam ursolat dapat menurunkan  SOR  lebih  besar  dibandingkan  asam  oleanolat. Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian  Ovesna et  al. (2006)  yang membuktikan bahwa asam ursolat memiliki aktivitas antioksidatif lebih  tinggi  dibandingkan  asam  oleanolat.  Perbedaan  ke- mampuan antiokidatif asam ursolat dan asam oleanolat diduga karena ada perbedaan posisi satu grup metil pada struktur kimia yang  menyebabkan  perbedaan  kemampuan  dalam  meningka- kan  sistem  pertahanan  antioksidan  (SOD,  CAT,  GPx,  GSH, vitamin E) yang mempengaruhi kemampuan dalam menetralisir dan menangkap SOR.

## Anti-proliferasi ekstrak daging dan kulit kentang hitam
Evaluasi  antiproliferasi  dilakukan  dengan  metode  MTT. Beberapa  jenis  metode  untuk  memprediksi  karsinogenitas dilakukan  secara in  vitro .  Prinsipnya  adalah  mereaksikan senyawa bioaktif dengan sel kanker yang menjadi sel uji coba. 3-(4.5-dimetiltiazol-2-il)-2.5-difeniltetrazolium  bromida  (MTT) assay  digunakan  untuk  mengevaluasi  aktivitas  anti-proliferasi ekstrak  yang  diuji  dengan  sel  kanker.  Konversi  garam tetrazolium  (MTT)  menjadi  formazan  biru  hanya  terdapat  pada sel  yang  masih  hidup  dan  jumlah  formazan  diproduksi  secara proporsional  pada  jumlah  sel  hidup  yang  ada.  Sehingga  MTT assay  potensial  digunakan  untuk  menguji  aktivitas  anti- proliferasi dari ekstrak bahan (Althunibat et al. 2009).
Persentase  sel  MCF-7  yang  hidup  pada  perlakuan  ekstrak etanol  daging  kentang  hitam  konsentrasi  700,  800,  900  dan 1000 µg/mL dengan waktu inkubasi 72 jam diperlihatkan pada Gambar 3.
Penelitian  ini  menunjukkan  persentase  sel  hidup  MCF-7 dipengaruhi oleh  konsentrasi ekstrak.  Makin besar konsentrasi yang  diberikan  (700-1000  µg/mL)  pada  sel  MCF-7,  makin sedikit  jumlah  sel  yang  hidup.Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa  ekstrak  etanol  daging  kentang  hitam  memiliki  potensii sebagai  anti-proliferasi  pada  sel  MCF-7,  yang  dibuktikan dengan  makin  menurunnya  jumlah  sel  hidup  pada  inkubasi dengan  variasi  konsentrasi  dibandingkan  dengan  kontrol (Gambar 3). Persentase sel MCF-7 yang hidup pada perlakuan ekstrak  etanol  kulit  kentang  hitam  konsentrasi  700,  800,  900 dan 1000 µg/mL dengan waktu inkubasi 72 jam disajikan pada Gambar 4.
Persentase  sel  hidup  MCF-7  tergantung  pada  konsentrasi ekstrak  etanol  kulit  kentang  hitam.  Makin  besar  konsentrasi yang diberikan (700-1000 µg/mL) pada sel MCF7, makin sedikit jumlah sel yang hidup (Gambar 4). Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol kulit kentang hitam memiliki potensi sebagai anti- proliferasi.
Keterangan: Notasi yang berbeda menunjukkan beda nyata ( p <0.05)
Gambar 3.  Pengaruh  ekstrak  etanol  daging  kentang  hitam  terhadap persentase  sel  hidup  MCF-7  dengan  waktu  inkubasi selama 72 jam yang diukur dengan metode MTT
Keterangan: Notasi yang berbeda menunjukkan beda nyata ( p <0.05)
Gambar 4.  Pengaruh  ekstrak  etanol  kulit  kentang  hitam  teradap persentase  sel  hidup  MCF-7  dengan  waktu  inkubasi selama 72 jam menggunakan metode MTT
Penelitian  ini  membuktikan  bahwa  ekstrak  etanol  daging dan  kulit  kentang  hitam  mampu  menghambat  proliferasi  sel MCF-7 yang bergantung pada konsentrasi yang digunakan . Hal ini diduga berkaitan dengan aktivitas anti-proliferasi sel kanker yang  dimiliki  oleh  senyawa  bioaktif  didalam  kentang  hitam, seperti asam ursolat, asam oleanolat, asam maslinat, fitosterol dan senyawa fenol (Arshad et al. 2010; Nisa et al. 2011).
Tabel  1  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  kulit  kentang hitam memiliki kemampuan antiproliferatif lebih besar dibanding- kan  dengan  ekstrak  etanol  daging  kentang  hitam.  Makin  kecil nilai IC 50 , maka makin sedikit konsentrasi yang diperlukan untuk menghambat  proliferasi  sel  kanker  MCF-7  selama  inkubasi  72 jam.  Hal  ini  dibuktikan,  perlakuan  ekstrak  etanol  kulit  kentang hitam menyebabkan jumlah sel MCF-7 yang hidup lebih sedikit dibandingkan perlakuan dengan ekstrak etanol daging kentang hitam pada variasi konsentrasi yang digunakan (Gambar 3 dan 4).  Hal  ini  diduga  berkaitan  dengan  perbedaan  kandungan asam  triterpenoat yaitu  asam  ursolat  dan  asam  oleanolat, dimana  ekstrak  etanol  kulit  kentang  hitam  mentah  memiliki kandungan asam ursolat dan asam oleanolat yang lebih besar dibandingkan  ekstrak  etanol  daging  kentang  hitam  mentah. Ekstrak  etanol  kulit  kentang  mengandung  asam  ursolat 13.78±0.15 µg/g sampel dan asam oleanolat 19.75±0.30 µg/g
Hasil Penelitian
Terakreditasi Dikti: 80/DIKTI/Kep/2012
A. Kontrol
B. EEDK 900 µg/mL
C. EEKK 900 µg/mL
sampel , sedangkan  ekstrak  etanol  daging  kentang  hitam mengandung  asam  ursolat  3.41±0.04  µg/g  sampel;  dan  asam oleanolat 3.71±0.07 µg/g sampel. Penelitian sebelumnya mem- buktikan  bahwa  asam  ursolat  dan  asam  oleanolat  sebagai senyawa  bioaktif  mampu  menghambat  proliferasi  sejumlah  sel kanker  dan  senyawa  bioaktif  ini  bertanggung  jawab  terhadap aktivitas  anti-proliferasi  pada  ekstrak  beberapa  tanaman  yang mengandung  asam ursolat dan  asam oleanolat (Yamaguchi et al. 2008).
Tabel 1.  IC 50 perlakuan ekstrak etanol daging dan kulit pada sel MCF 7 dengan waktu inkubasi 72 jam
Senyawa IC 50 (μg/mL) Ekstrak etanol daging kentang hitam 829.86±5.73 a Ekstrak etanol kulit kentang hitam 698.23±1.61 b
Keterangan: Angka diekspresikan sebagai rata-rata ± SD (n=3). Angka dengan notasi yang berbeda menunjukkan beda nyata ( p <0.05)
Keterkaitan  aktivitas  antioksidan  seluler  dalam  meng- hambat proliferasi sel kanker payudara MCF-7
Kemampuan  aktivitas  antioksidan  seluler  kentang  hitam dapat  menghambat  proliferasi  sel  kanker  payudara  melalui beberapa  mekanisme.  Mekanisme  penghambatan  proliferasi ekstrak  etanol  daging  kentang  hitam,  ekstrak  etanol  kulit kentang hitam, pada sel MCF-7 diduga melalui tiga jalur, yaitu: (1)  Aktivitas antioksidan seluler kentang hitam (Gambar 1 dan 2)  dapat  menurunkan  spesies  oksigen  reaktif  (SOR)  yang berdampak  pada  penurunan  stres  oksidatif.  Kemampuan menurunkan  stres  oksidatif  dapat  berdampak  pada penurunan  ekspresi Nuclear  Factor-kB (NF-kB)  beserta ekspresi gen yang berkaitan dengan stres oksidatif pada sel MCF-7  yaitu  COX-2,  AP-1,  Bcl-2  dan  Bcl-XL  yang  dapat menghambat  proliferasi  sel  kanker  payudara  MCF-7  (Li et al. 2010; Manu dan Kuttan, 2008; Pathak et al. 2007; Wang et al. 2009; Shan et al. 2009).
(2)  Penurun  SOR  dapat  berdampak  pada  pengendalian  siklus sel beserta ekspresi gen yang mengatur siklus sel yaitu p27, p21,  p53,  dan Cyclin  D1 .  Penurunan  SOR  diduga  ber- dampak  pada  penurunan  NF-kB,  sebab  ekspresi  NF-kB tergantung  pada  induksi  SOR.  Penurunan  NF-kB  dapat memberikan  efek  penurunan  ekpresi  Cyclin  D1  dan peningkatan tumor  suppressor seperti  p27,  p21  dan  p53, sehingga  terjadi cell  cycle  arrest, sehingga  proliferasi  sel kanker dapat dihambat (Chen et al. 2010; Shyu et al. 2010; Pathak et  al. 2007;  Martin et  al. 2006;  Jeong et  al. 2009; Obinaju et al. 2010; Chou et al. 2010).
(3)  Aktivitas  antioksidan  seluler  dapat  menginduksi  apoptosis sel  kanker  payudara  MCF-7  melalui  fragmentasi  DNA dengan  meningkatkan  ekspresi apoptosis-inducing  factor (AIF).  Fragmentasi  DNA  dibuktikan  dengan  evaluasi pengecatan  menggunakan acridine  orange–ethidium bromide yang  menunjukkan  terjadinya  induksi  apoptosis (Gambar  5).  Salah  satu  ciri  apoptosis  adalah  terjadinya fragmentasi  DNA  yang  dengan  pengecatan  AO-EB  akan berwarna orange karena  terjadi  interkalasi  antara  EB  dan DNA. Sel MCF-7 yang digunakan pada penelitian ini berasal dari ATCC, yang memiliki karakteristik tidak mengekspresi- kan caspase  3 sebagai  eksekutor  terjadinya  fragmentasi DNA  pada  induksi  apoptosis.  Berdasarkan  hal  tersebut,
maka  induksi  apoptosis  oleh  OA  pada  sel  MCF-7  melalui mekanisme lain yaitu Apoptosis inducing factor (AIF) (Kwon et al. 2010; Yang et al. 2010).
Gambar 5.  Induksi apoptosis pada sel MCF-7. (A) kontrol; (B) ekstrak etanol  daging  kentang  hitam  (EEDK)  dan  (C)  ekstrak etanol kulit kentang hitam (EEKK).  Pengamatan morfologi sel  MCF-7  yang  mengalami  apoptosis  dilakukan  dengan pengecatan acridine  orange/ethidium  bromide (AO-EB) dan  diamati  dengan  mikroskop  fluoresen.  Kontrol  (A)  sel hidup,  bentuk  normal  dan  berwarna  hijau;  B,  dan  C menunjukkan  induksi  apoptosis,  beberapa  sel  telah  mati, berubah  bentuk,  serta  warna  sel  menjadi  hijau  terang sampai orange . Tanda panah berwarna putih besar adalah apoptosis  awal  (warna  hijau  terang),  sedangkan  tanda panah  berwarna  putih,  adalah  apoptosis  akhir  (warna orange ). (A, B perbesaran 400x, sedangkan C perbesaran 200x)
Kemampuan  antioksidan  seluler  kentang  hitam  dalam menurunkan  sel  hidup  kanker  payudara  MCF-7  diduga  karena interaksi  dan  sinergenisitas  antara  senyawa-senyawa  bioaktif yang  terdapat  dalam  ekstrak  etanol  daging  dan  kulit  kentang hitam  yaitu  asam  ursolat,  asam  oleanolat,  fitosterol: stigmasterol,  beta-sitosterol  dan  campesterol  serta asam maslinat , dan senyawa.
Korelasi antara evaluasi aktivitas antioksidan seluler ekstrak etanol  daging  kentang  hitam  dan  anti-proliferasi  adalah  0.93; sedangkan  antara  aktivitas  antioksidan  seluler  esktrak  etanol kulit  kentang  hitam  hitam  dan  anti-proliferasi  adalah  0.98. Penelitian  ini  membuktikan  bahwa  makin  tinggi  kemampuan ekstrak  etanol  daging  kentang  hitam  dan  ekstrak  etanol  kulit kentang  hitam  sebagai  antioksidan  seluler,  makin  tinggi  ke- mampuannya  dalam  menghambat  proliferasi  sel  kanker payudara MCF-7, yang ditunjukkan dengan semakin menurun- nya jumlah sel hidup (Gambar 3 dan 4).
Kemampuan ekstrak etanol kulit kentang hitam mentah dan ekstrak  etanol  daging  kentang  hitam  mentah  sebagai  anti- proliferasi  berkaitan  dengan  potensi  antioksidan  seluler  yang dapat menurunkan persentase SOR pada sel kanker payudara (MCF-7) yang diinduksi PMA. Potensi ekstrak etanol bagian kulit
Hasil Penelitian
Terakreditasi Dikti: 80/DIKTI/Kep/2012
dan  daging  kentang  hitam  mentah  sebagai  antioksidan  seluler memiliki  pengaruh  menurunkan  persentase  SOR  yang  ber- dampak dalam menurunkan ekspresi Nuclear factor-kB (NF-kB) serta  gen-gen  lain  yang  dipengaruhi  oleh  NF-kB.  Pengaruh penurunan  SOR  dan  ekspresi  NF-kB  dapat  menghambat proliferasi sel kanker payudara (MCF-7).
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  kentang  hitam memiliki  potensi  sebagai  antioksidan  dan  anti-proliferasi  sel kanker in  vitro ,  sehingga  kentang  hitam  dapat  dikembangkan menjadi  makanan  fungsional  berbasis  potensi  lokal  sebagai alternatif  mencegah  penyakit  akibat  stres  oksidatif,  seperti kanker  payudara  reseptor  estrogen  positif.  Potensi  mencegah penyakit akibat stres oksidatif seperti penyakit kanker payudara reseptor  estrogen  positif  didukung  oleh  senyawa  bioaktif  di dalam kentang hitam yang telah diidentifikasi pada penelitian ini yaitu asam ursolat dan asam oleanolat .

## KESIMPULAN
Ekstrak  etanol  daging  dan  kulit  kentang  hitam  memiliki aktivitas  antioksidan  seluler  yang  dibuktikan  dengan  ke- mampuannya  dalam  menurunkan  spesies  oksigen  reaktif (SOR).  Konsentrasi  optimum  dalam  menurunkan  spesies oksigen reaktif ekstrak etanol daging kentang hitam 400 µg/mL dan  ekstrak  etanol  kulit  kentang  hitam  200  µg/mL.  Ekstrak etanol  daging  dan  kulit  kentang  hitam  memiliki  kemampuan menghambat  proliferasi  sel  kanker  payudara  MCF-7.  Ekstrak etanol  kulit  kentang  hitam  memiliki  kemampuan  menghambat proliferasi  lebih  tinggi  dibandingkan  ekstrak  etanol  daging kentang  hitam.  IC 50 ekstrak  etanol  daging  kentang  hitam 829.86±5.73  µg/mL  dan  ekstrak  etanol  kulit  kentang  hitam 698.23±1.61  µg/mL.  Terdapat  korelasi  yang  tinggi  antara antioksidan  seluler  dan  antiproliferasi.  Korelasi  aktivitas  anti- oksidan  seluler  ekstrak  etanol  daging  kentang  hitam  dan antiproliefrasi  adalah  0.93,  sedangkan  korelasi  aktivitas  anti- oksidan  seluler  ekstrak  etanol  kulit  kentang  hitam  dan antiproliefrasi adalah 0.98.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Peneliti  mengucapkan  terima  kasih  kepada  Departemen Pendidikan  Nasional  Direktorat  Pendidikan  Tinggi  atas pembiayaan  penelitian  ini,  Prof.drh.R.Wasito,  M.Sc.,Ph.D  atas saran dan masukan untuk penelitian ini; Tri Yuliati, S.KM. (LPPT UGM) atas bantuannya dalam pelaksanaan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Althunibat OY, Ridzwan Bin Hashim, Taher M, Daud JM, Ikeda MS,  Zali  BJ.  2009. In  vitro antioxidant  and  antiproliferative activities  of  three  Malaysian  sea  cucumber  species.  Eur  J Sci Res 37: 376-387.
Arshad QK, Ahsana DA, Siddiqui B, Kabir N, Aslam H, Ahmet S, Erum  S,  Habib  S,  Begum  S.  2010.  Anticancer  activity  of Ocimum  basilicum  and  the  effect  of  ursolic  acid  on
cytoskeleton pf MCF-7 human breat cancer cells. Lett Drug Des  Discov  7:  726-736.  DOI:  10.2174/157018081100 7010726.
Borek  C.  2004.  Dietary  antioxidant  and  human  cancer.  Integr Cancer Ther 3: 333-341. DOI: 10.1177/1534735404270578. Chen GQ, Yao ZW, Zheng WP, Chen L, Duan H, She Y. 2010.
Combined antitumor effect of ursolic acid and 5-fluorouracil on human esophageal carcinoma cell eca-109 in vitro. Chin J Cancer Res 22: 62-67 . DOI: 10.1007/s11670-010-0062-3. Chou CC, Yang JS, Lu HF, Ip SW, Lo C, Wu CC, Lin JP, Chung JG,  Chou  MJ.  2010.  Quercetin-mediated  cell  cycle  arrest and  apoptosis  involving  activation  of  a  caspase  cascade through the mitochondrial pathway in human breast cancer MCF-7 cells. Arch Pharm Res 33: 1181-1191. DOI: 10.1007/ s12272-010-0808-y.
Dekanski  D,  Janicijevic-Hudomal  S,  Ritic  S,  Radonji  NV, Petronijevic ND, Piperski V, Mitrovic DM. 2009. Attenuation of  cold  restraint  stress-induced  gastric  lesions  by  an  olive leaf extract. Gen Physiol Biophy 28: 135–142.
Duval  RE,  Harmand  PO,  Jayat-Vignoles  C,  Cook-Moreau  J, Pinon A, Delage C, Simon A. 2008. Differential involvement of  mitocondria  during  asam  ursolat-induced  apoptotic process  in  HaCaT  and  M4Beu  cells.  Oncol  Rep  19:  145- 149 .
Feng JH, Chen W, Zhao Y, Ju XL. 2009. Anti-tumor activity of oleanolic, ursolic and glysyrrhetinic acid. Open Nat Prod J 2: 48-52. DOI: 10.2174/1874848100902010048.
Giovannini  C,  Scazzocchio  B,  Matarrese  P,  Vari  R,  D’Archivio M,  Benedetto  RD,  Casciani  S,  Dessi  MR,  Straface  E, Malorni W, Masella R. 2008. Apoptosis induced by oxidized lipids is associated with up-regulation of p66Shc in intestinal Caco-2  cells:  protective  effects  of  phenolic  compounds.  J Nutr Biochem 19: 118–128. DOI: 10.1016/j.jnutbio.2007.01. 010.
Hogan  S,  Chung  H,  Zhang  L,  Li  J,  Lee  YW,  Dai  Y,  Zhou  K.
2010.  Antiproliferative  and  antioxidant  properties  of antocyanin-rich extract from acai. Food Chem 118: 208-214. DOI: 10.1016/j.foodchem.2009.04.099.
Hsum YW, Yew WT, Hong PLV, Soo KK, Hoon LS, Chieng YC, Mooi  LY.  2008.  Identificaton  and  Evaluation  of  Potential Anti-Tumor  Promoting  Compounds  from  Tubers  of Coleus tuberosus .  International  PSE  Symposium  On  Natural Products in cancer Therapy, 23-26 September 2008. Naples Italy.
Hsum YW, Yew TW, Hong PLV, Soo KK, Hoon LS, Chieng YC, Mooi  LY.  2011.  Cancer  chemopreventive  activit  y  of  asam maslinat: suppression of COX - 2 expression and inhibition of NF-κB and AP-1 activation in Raji cells. Planta Med 77:
152-157. DOI: 10.1055/s-0030-1250203.
Kwon SH, Park HY, Kim JY, Jeong IY, Lee MK, Seo KI. 2010. Apoptotic action of ursolic acid isolated from Corni fructus in RC-58T/h/SA#4  primary  human  prostate  cancer  cells. Bioorg Med Chem Lett 22: 6435-6438. DOI: 10.1016/j.bmcl. 2010.09.073.
Hasil Penelitian
Terakreditasi Dikti: 80/DIKTI/Kep/2012
Jeong JH, An JY, Kwon YT, Rhee JG, Lee YJ. 2009. Effects of low  dose  quercetin:  Cancer  cell-specific  inhibition  of  cell cycle  progression.  J  Cell  Biochem 106:  73-82.  DOI:
10.1002/jcb.21977.
Li  Y,  Xing  D,  Chen  Q,  Chen  WR.  2010.  Enhancement  of chemotherapeutic  agent-induced  apoptosis  by  inhibition  of NF-κB  using  ursolic  acid.  Int  J  Cancer  127:  462–473 . DOI: 10.1002/ijc.25044.
Liu  RH,  Finley  J.  2005.  Potential  cell  culture  models  for antioxidant research. J Agr Food Chem 53: 4311-4314. DOI: 10.1021/jf058070i.
Lopez-Lazaro  M.  2007.  Dual  role  of  hydrogen  peroxide  in cancer: possible relevance to cancer chemoprevention and therapy.  Cancer  Lett  252:  1-8.  DOI:  10.1016/j.canlet.2006. 10.029.
Manda  G,  Nechifor  MT,  Neagu  TM.  2009.  Reactive  oxygen species, cancer and  anti-cancer therapies. Curr Chem Biol 3: 22-46. DOI: 10.2174/187231309787158271.
Manu  KA,  Kuttan  G.  2008.  Ursolic  acid  induces  apoptosis  by activating  p53  and  caspase-3  gene  expressions  and suppressing NF-κB mediated activation of bcl-2 in B16F-10 melanoma  cells.  Int  Immunopharmacol  8:  974-981.  DOI: 10.1016/j.intimp.2008.02.013.
Martin  KR.  2007.  Targeting  apoptosis  with  dietary  bioactive agents. Exp Biol M 231: 117-129.
Mooi  LY,  Ali  AM,  Norhanom  AB,  Salleh  KM,  Murakami  A, Koshimizu  K.  1999.  Anti-tumor  promoting  activity  of  some Malaysian traditional vegetables (Ulam). Nat Prod Sci 5: 33- 38.
Mooi LY, Wahab NA, Lajis NH, Ali AM. 2010. Chemopreventive properties of phytosterols and asam maslinat extracted from Coleus tuberosus in inhibiting the expression of EBV early- antigen  in Raji cells.  Chem  Biodivers  7:  1267-1275.  DOI: 10.1002/cbdv.200900193.
Muanda FN, Bouayed J, Djilani A, Yao C, Soulimani R, Dicko A. 2011. Chemical composition and, cellular evaluation of the antioxidant activity of Desmodium adscendens leaves . Evid- Based Compl Alt 2011: 1-9. DOI:10.1155/2011/620862. Nisa  S,  Bibi  Y,  Waheed  A,  Zia  M,  Sarwar  S,  Ahmed  S, Chaudhary  MF.  2011.  Evaluation  of  anticancer  activity  of Debregeasia  Salicifolia extract  against  estrogen  receptor positive cell line. Afr J Biotechnol 10: 990-995.
Nugraheni  M,  Santoso  U,  Suparmo,  Wuryastuti  H.  2011. Potential of Coleus tuberosus as an antioxidant and cancer chemoprevention agent. Int Food Res J 18: 1471-1480.
Obinaju,  Blessing  E,  Martin,  Franchis  L.  2010.  Dose-related effects of quercetin in the human breast carcinoma MCF-7 cell line. Am J Sci Ind Res 1: 242-261. DOI: 10.5251/ajsir. 2010.1.2.242.261.
Opata MM, Izevbigie EB. 2006. Aqueous Vernomia amigdalina extracts alter MCF-7 cell membrane permeability and efflux. Int J Environ Res 3: 174-179.
O’Sullivan  AM,  O’Callaghan,  O’Grady  MN,  Quequineur  B, Hanniffy  D,  Troy  DJ,  Kerry  JP,  O’Brien  NM.  2011. In  vitro
and  cellular  antioxidant  activities  of  seaweed  extracts prepared  from  five  brown  seaweeds  harvested  in  spring from the west coast of Ireland. Food Chem 126: 1064–1070. DOI: 10.1016/j.foodchem.2010.11.127.
Ovesna Z, Kozics K, Slamenova D. 2006. Protective effects of ursolic  acid  and  oleanolic  acid  in  leukemic  cells.  Mutation Res 600: 131-137. DOI: 10.1016/j.mrfmmm.2006.03.008.
Pathak  AK,  Bhutani  M,  Nair  AS,  Ahn  KS,  Chakraborty  A,
Kandungana  H,  Guha  S,  Sethil  G,  Aggarwal  BB.  2007. Ursolic  acid  inhibits  STAT3  activation  pathway  leading  to suppression  of  proliferation  and  chemosensitization  of human multiple myeloma cells. Mol Cancer Res 5: 943-955. DOI: 10.1158/1541-7786.MCR-06-0348.
Prades  J,  Vogler  O,  Alemany  R,  Gomez-Florit  M,  Funari  SS, Ruiz-Guiterrez V, Barcelo F. 2011. Plant triterpenic acid as modulators  of  lipid  membran  physical  properties.  Biochim Biophys Acta 1808: 752-760. DOI: 10.1016/j.bbamem.2010. 12.007.
Salawu SO, Akindahunsi AA, Sanni DM, Decorti G, Cvorovic J,
Tramer  F,  Passamonti  S,  Mulinacci  N.  2011.  Cellular antioxidant  activities  and  cytotoxic  properties  of  ethanolic extracts of four tropical green leafy vegetables. Afr J Food Sci 5: 267–275.
Shan JZ, Xuan YY, Zheng S, Dong Q, Zhang SZ. 2009. Ursolic acid inhibits  proliferation  and  induces  apoptosis  of  HT-29 colon cancer cells by inhibiting the EGFR/MAPK pathway. J Zhejiang  Univ - Sci  B  10:  668-674.  DOI:  10.1631/jzus. B0920149.
Shyu  MH,  Kao  TC,  Yen  GC.  2010.  Oleanolic  acid  and  ursolic acid  induce  apoptosis  in  HuH7  human  hepatocellular carcinoma cells through a mitochondrial-dependent pathway and down regulation of XIAP. J Agr Food Chem 58: 6110- 6118. DOI: 10.1021/jf100574j.
Waris G, Ahsan H. 2006. Reactive oxygen species: role in the development  of  cancer  and  various  chronic  conditions.  J Carcinog 11: 1-8. DOI: 10.1186/1477-3163-5-14.
Wolfe K, Liu RH. 2007. Cellular antioxidant activity (CAA) assay for assessing antioxidants, foods, and dietary supplements. J Agr Food Chem 55: 8896–8907. DOI: 10.1021/ jf0715166.
Wolfe  K,  Liu  RH.  2008.  Structure-activity  relationships  of flavonoids  in  the  cellular  antioxidant  activity  assay.  J  Agr Food Chem 56: 8404-8411. DOI: 10.1021/jf8013074.
Verma AR, Vijayakumaar M, Mathela CS, Rao CV. 2009. In vitro and in  vivo antioxidant  properties  of  different  fractions  of Moringa  oleifera  leaves.  Food  Chem  Toxicol  47:  2196– 2201. DOI: 10.1016/j.fct.2009.06.005.
Vivancos M, Moreno JJ. 2008. Effect of resveratrol, tyrosol and β -sitosterol  on  oxidised  low-density  lipoprotein-stimulated oxidative stress, arachidonic acid release and prostaglandin E 2 synthesis  by  RAW  264.7  macrophages.  Brit  J  Nutr  99: 1199–1207. DOI: 10.1017/S0007114507876203.
Yamaguchi  H,  Noshita  T,  Kidachi  Y,  Umetsu  H,  Hayachi  M, Komiyama K, Funayama S, Ryoyama K. 2008. Isolation of ursolic  acid  from  apple  peels  and  its  specific  efficacy  as  a
Hasil Penelitian
Terakreditasi Dikti: 80/DIKTI/Kep/2012
potent  anti  tumor  agent.  J  Health  Sci  54:  54-660.  DOI: 10.1248/jhs.54.654.
Yang  L,  Liu  X,  Lu  Z,  Yuet-Wa  CJ,  Zhou  L,  Fung  KP,  Wu  S, 2010. Ursolic acid induces doxorubicin-resistant HepG2 cell death  via  the  release  of  apoptosis-inducing  factor.  Cancer Lett 298: 128-138. DOI: 10.1016/j.canlet.2010.06.010.
Yasukawa K, Kitanoka S, Kawata K, Gotu K. 2009. Anti tumor promoters  phenolics  and  triterpenoid  from Hippophae rhamnoides .  Fitoterapia  80:  164-167 . DOI:  10.1016/j.fitote. 2009.01.006.
Yusharmen D. 2010. Jika Tidak Dikendalikan 26 Juta Orang di Dunia  Menderita  Kanker.  Disampaikan  dalam  Seminar Sehari  Memperingati  Hari  Kanker  Sedunia.  Kementerian Kesehatan Republik Indonesia.
Wang X, Li L, Wang B, Xiang J. 2009. Effects of ursolic acid on the  proliferation  and  apoptosis  of  human  ovarian  cancer cells. Medicine J Huazhong Univ Sci-Med 29: 761-764. DOI 10.1007/s11596-009-0618-y.
Zhao CR, Gao ZH, Qu XJ. 2010. NRF2-ARE signaling pathway and  natural  products  for  cancer  chemoprevention.  Cancer Epidemiol 34: 523-533. DOI: 10.1016/j.canep.2010.06.012.