## PENGGUNAAN EKSTRAK KASAR SPONS LAUT UNTUK MENINGKATKAN
RESISTENSI IKAN NILA ( Oreochromis niloticus ) TERHADAP INFEKSI ( Streptococcus agalactiae)
( The Use Of Marine Sponge Crude Extract To Improve The Resistance Of Tilapia Fish ( Oreochromis niloticus ) To Streptococcus agalactiae Infections )
Shifa Aubriana Schram 1 , Reiny A. Tumbol 2 , Reni L. Kreckhoff 2 .
1 Program Studi Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi, Jl. Kampus Unsrat Bahu, Manado 95115 Sulawesi Utara, Indonesia
2 Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi, Jl. Kampus Unsrat Bahu, Manado 95115, Sulawesi Utara, Indonesia e-mail: shifa.schram@mail.com

## ABSTRACT
This study aims to examine the effect of the use of crude marine sponge extract  on  the  resistance  of streptococcus  agalactiae infection  in  tilapia, Oreochromis niloticus , and to establish the effective dose of crude sponge extract in improving the immune system and the growth of the fish. The sponge used in the study was Cribrochalina sp. taken from Malalayang waters, Manado. The fish were  taken  from  Freshwater  Aquaculture  Center,  Tatelu.  The  fish  were acclimatized for a week. After being acclimatized the fish were given feed added with sponge crude extract as a treatment with different concentrations of 20 g, 40 g and 60 g / Kg of feed for 14 days as much as 5% / body weight / day with the frequency of feeding twice a day at 10:00 am and at 5:00 p.m. After being treated, the fish was challenged with S. agalactiae . The data collected consisted of tilapia resistance,  Total  Leukocyte  Count  (TLC)  as  immune  parameters  and  absolute growth.  The results showed that the addition of crude extracts of Cribrochalina sp. into feed can increase TLC and growth of tilapia (p <0.05). The best results were achieved in fish fed with the addition of sponge crude extract of 40 g/kg feed. The survival rate of tilapia fed with treatment diet then challenged with pathogenic bacteria S. agalactiae showed the best results (100% survival rate) compared to controls  (75%). In  conclusion, feeding  with  a  crude  extract  of Cribrochalina sp. has the potential to increase the immune system and growth of tilapia.
Keywords: Crude  Extract,  Marine  Sponges, Cribrochalina sp.,  Tilapia, Resistance , Streptococcus agalactiae

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengkaji pengaruh penggunaan ekstrak kasar spons  laut  terhadap  resistensi  ikan  nila  dalam  menghadapi  serangan Streptococcus  agalactiae, mengidentifikasi  spons  yang  digunakan,  serta mengukur  pengaruh  serta  menetapkan  dosis  pemberian  ekstrak  kasar  spons untuk meningkatkan sistem imun dan pengaruhnya terhadap pertumbuhan ikan nila.  Spons  yang  digunakan  dalam  penelitian  adalah  spons Cribrochalina sp. yang  diambil  dari  perairan  Malalayang. Ikan  uji diambil  dari  Balai  Budidaya  Air Tawar  Tatelu,  Provinsi  Sulawesi  Utara.  Ikan  diaklimatisasi  selama  seminggu. Setelah diaklimatisasi ikan diberi pakan yang ditambahkan dengan ekstrak kasar spons sebagai perlakuan dengan konsentrasi berbeda yaitu 0 g, 20 g, 40 g dan 60 g/kg  pakan  selama 14  hari  sebanyak  5%/berat  tubuh/hari  dengan frekuensi pemberian pakan dua kali sehari yaitu jam 10.00 pagi dan jam 17.00 sore. Setelah diberi  perlakuan,  ikan  diuji  tantang  dengan  bakteri S.  agalactiae .  Data  yang dikumpulkan  terdiri  dari  kelangsunganhidup  ikan  nila.  Total  leukosit  sebagai
parameter imun dan pertumbuhan mutlak. Hasil penelitian mendapatkan bahwa penambahan  ekstrak  kasar  spons Cribrochalina sp.  ke  dalam  pakan  mampu meningkatkan  total  leukosit  dan  pertumbuhan  ikan  nila  (p<0.05).  Dimana  hasil terbaik dicapai pada ikan yang diberi pakan dengan penambahan ekstrak kasar spons sebanyak 40 g/kg pakan. Kelangsungan hidup ikan nila yang diberi pakan perlakuan  yang  diuji  tantang  dengan  bakteri  patogen  menunjukkan  hasil  yang paling  baik  (tingkat  kelangsungan  hidup  100%)  dibandingkan  dengan  kontrol (75%).  Sebagai  kesimpulan  bahwa  pemberian  pakan  dengan  ekstrak  kasar spons Cribrochalina sp. berpotensi untuk meningkatkan sistem kekebalan tubuh dan pertumbuhan pada ikan nila.
Kata  Kunci: Ekstrak  kasar,  Spons  laut, Cribrochalina sp.,  Tilapia,  Resistensi , Streptococcus agalactiae

## PENDAHULUAN
Spons merupakan biota laut potensial  untuk menghasilkan  senyawa bioaktif. Telah dilaporkan bahwa sebagian  senyawa  yang  diisolasi  dari spons mempunyai aktivitas antimikroba yang  tinggi  sehingga  dapat  dijadikan sebagai bahan maupun obat antibakteri, antikanker  dan  antiparasit  (Amir  dan
Budiyanto, 1996). Spons merupakan  salah  satu  komponen  biota penyusun terumbu karang yang penyebarannya  cukup  luas.  Terdapat 15.000  spesies  spons  di  seluruh  dunia dan  sekitar  45%  senyawa  bioaktif ditemukan pada spons (Alexander et al ., 2014).
Spons laut memiliki potensi bioaktif  yang  sangat  besar.  Selama  50 tahun  terakhir  telah  banyak kandungan bioaktif yang telah ditemukan. Kandungan bioaktif tersebut dikelompokan menjadi beberapa kelompok  besar  yaitu antiiflammantory , antitumor,
antivirus, antimalaria, antibiotik,  dan  antifouling.  Spons  telah dimanfaatkan  dalam  bidang  farmasi karena  sejak  dulu  berpotensi  sebagai obat karena kandungan senyawa bioaktif yang ada didalamnya. Usaha  budidaya  ikan  yang  telah berkembang pesat menyebabkan beberapa  masalah  akibat  dari  kegiatan budidaya  intensif.  Adanya  penyebaran penyakit yang disebabkan oleh
menurunnya kualitas air adanya degradasi mutu lingkungan ini membuka kesempatan bagi patogen yang
disebabkan  oleh  virus,  bakteri,  jamur maupun parasit untuk menginfeksi ikan yang  akan  menyebabkan  penyakit. Serangan  penyakit  dapat  mengganggu kualitas  ikan  yang  dibudidaya  bahkan mampu menurunkan nilai produksi yang pada akhirnya mengakibatkan kerugian ekonomi.  Salah  satu  penyakit  bakterial yang  menyerang  ikan  nila  adalah penyakit Streptococcucis yang disebabkan  oleh  bakteri Streptococcus agalactiae.
Ikan  nila  ( Oreochromis  niloticus ) merupakan  salah  satu  jenis  ikan konsumsi  air  tawar  yang  banyak digemari oleh konsumen. Usaha budidaya  ikan  nila  telah  berkembang pesat,  karena  pertumbuhan  ikan  nila yang  cepat  dan  mudah  dipelihara. Pesatnya  kegiatan  produksi  ikan  nila menyebabkan terjadinya serangan penyakit  bakterial  seperti S.  agalactiae akibat  dari  kegiatan  budidaya  intensif.
Penyakit yang disebabkan oleh serangan S.  agalactiae ini  dapat menyebabkan  kematian  40 –  60% dalam  waktu  6  hari  setelah  terinfeksi (Evans et  al .,  2006)  dilaporkan  telah terjadi  di  beberapa  Negara  seperti Amerika  Serikat,  Israel,  Jepang  dan Thailand. Beberapa daerah di Indonesia juga dilaporkan pernah terjadi serangan bakteri S.agalactiae pada budidaya ikan nila,  antara  lain  di  daerah  Sumatera Selatan,  Jawa  Tengah  dan  Jawa  Barat (Yuasa et  al .,  2008).  Bakteri  ini  dapat menginfeksi ikan dan lebih virulen pada kondisi lingkungan dengan suhu 24 – 29 0 C,  dan  suhu  ini  merupakan  kisaran
suhu  perairan  di  Indonesia  sehingga serangan S. agalactiae dapat meningkat jika tidak segera ditanggulangi (Conroy, 2009).  Ikan  yang  terinfeksi  oleh S. agalactiae mengalami gejala antara lain nafsu  makan  menurun,  bergerak  tidak beraturan, berenang kepermukaan, lesu,  tubuh  menghitam,  sisik  mudah lepas, luka, pendarahan pada operkulum  dan  anus,  mata  keruh  dan menonjol keluar (Bromage et al ., 1999).
Upaya  pengendalian  meluasnya penyakit harus dilakukan sedini mungkin,  agar  tidak  terjadi  wabah penyakit  yang  menyebabkan  kerugian ekonomi. Beberapa upaya pencegahagan seperti pemberian antibiotik, vaksin maupun imunostimulan  telah  banyak  dilakukan untuk mencegah penyakit Streptococcucis dan dapat memberikan ketahan  tubuh  (resistensi)  ikan  untuk melawan serangan bakteri S. agalactiae . Penggunaan imunostimulan merupakan  cara  paling  efisien  dalam mencegah penyakit bakterial dan merupakan  alternatif  atau  pengganti antibiotik  maupun  vaksin  (Payung  dan Manoppo,  2015),  karena  penggunaan antibiotik  maupun  vaksin  merupakan metode pencegahan penyakit ikan yang saat  ini  penggunaannya  telah  dilarang dan  mahal  harganya.  Berbagai  bahan alami  seperti  tanaman  obat,  bakteri, ragi, rumput laut atau bahan-bahan lain yang mengandung bahan atau senyawa antimikroba telah dimanfaatkan sebagai immunsotimulan atau bahan yang dapat digunakan  dalam  mencegah  penyakit infeksi (Galina et al ., 2009). Salah satu bahan alami yang mengandung senyawa antimikroba adalah spons laut. Kandungan antibakteri pada ekstrak spons diperlukan untuk
mengobati infeksi yang disebabkan oleh bakteri.  Namun,  penelitian  maupun informasi  mengenai  penggunaannya dalam bidang budidaya perikanan masih jarang  dilakukan.  Oleh  karena  itu, dilakukan penelitian mengenai penggunaan  spons  yang  mengandung senyawa bioaktif yang mempunyai sifat antibakteri  yang  diharapkan  dapat meningkatkan resistensi terhadap serangan  bakteri S.  agalactiae dan dapat  meningkatkan  kesehatan  ikan nila.

## METODE PENELITIAN
Waktu & Tempat Penelitian Persiapan  pakan  uji  dilakukan  di Laboratorium Kesehatan Ikan, Lingkungan  dan  Toksikologi  untuk persiapan pakan uji. Pemeliharaan ikan dilakukan  di  Laboratorium  Teknologi Akuakultur dan untuk kegiatan ekstraksi spons  laut  dilakukan  di  Laboratorium Bioekologi dan Farmasitika Laut
Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan, Universitas  Sam  Ratulangi  Manado.
Pengambilan  sampel  Spons  diambil  di
Pantai  Malalayang,  Manado.  Waktu pelaksanaan  penelitian  ini  berlangsung dari  bulan  Oktober  sampai  Desember 2018.

## Rancangan Percobaan
Penelitian ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL), yang terdiri dari empat perlakuan dan masing- masing  perlakuan  memiliki  3  ulangan. Dengan demikian jumlah unit percobaan yang  terdapat  dalam  penelitian  ini adalah 12 unit (4x3). Sebagai perlakuan adalah  ekstrak  spons  dengan  dosis berbeda, yaitu: Perlakuan Dosis A Pakan + 0 g ekstrak kasar spons laut B Pakan + 20 g ekstrak kasar spons laut C Pakan + 40 g ekstrak kasar spons laut D Pakan + 60 g ekstrak kasar spons laut

## Organisme Uji
Hewan uji yang digunakan adalah ikan nila sebanyak 120 ekor, berukuran panjang berkisar 5 – 8 cm/ekor. Ikan uji
diperoleh  dari  Balai  Benih  Air  Tawar (BBAT)  Tateli  Kabupaten  Minahasa Selatan Provinsi Sulawesi Utara.
Ekstrak  kasar  spons  yang  digunakan adalah spons Cribrochalina sp. Sampel spons  diambil  dari  Perairan  Pantai Malalayang, Manado pada kedalaman 6 – 10 m.

## Identifikasi Sampel
Pengambilan  sampel  dilakukan  di Perairan Pantai Malalayang pada kedalaman 6 – 10 m menggunakan alat
selam. Selanjutnya, sampel yang diambil  dimasukkan  dalam  kantung plastik yang dilengkapi dengan penutup, kemudian dimasukan kedalam cool box dan  di  bawa  ke  Laboratorium  Penyakit Ikan,  Lingkungan  dan  Toksikologi.
Pengidentifikasian sampel spons dilakukan dengan melihat bentuk, warna dan  struktur  spons.  Jenis  spons ditentukan  dengan  pencarian  melalui situs www.spongeguide.org .

## Ekstraksi dan Evaporasi
Proses  ekstraksi  sampel  dmulai dengan  memotong  spons  berbentuk kubus/dadu ukuran 1x1 cm dan dimaserasi  dalam  larutan  etanl  96% selama  24  jam  dengan  perbandingan 1:2. Selanjutnya disaring dengan menggunakan  kertas  Whattman  untuk mendapatkan  ekstrak  spons.  Ekstrak etanol  sampel  spons  sebanyak  1  liter diuapkan dengan Rotary vacuum evaporator pada  suhu  40 0 C  hingga diperoleh  esktrak  kasar  (berbentuk pasta).
Kultur Streptococcus agalactiae
Bakteri Streptococcus  agalactiae
dikultur terlebih dahulu sebelum digunakan dengan menggunakan media
Blood  Agar.    Media Blood  Agar dibuat dengan  cara  menimbang  bubuk Blood Agar sebanyak  4  g  dan  dilarutkan dengan  100  mL  aquades  dalam  botol schoot.  Larutan  kemudian  dimasak  di atas  api  bunsen  sambil  digoyang- goyang  agar  merata  sampai  mendidih dan  berubah  warna  menjadi  bening. Setelah mendidih, larutan diangkat dan dipindahkan  dalam  autoclave  untuk disterilkan.
Kultur  bakteri  dilakukan  dengan cara  menggores  jarum  ose  yang
dipanaskan  diatas  api  bunsen.  Bakteri diambil menggunakan  jarum ose dan di gores secara aseptik  pada permukaan media  kemudian  di  inkubasi  dalam inkubator  pada  suhu  28 0 C  selama  24 jam.  Bakteri  yang  sudah  tumbuh  di simpan dalam lemari pendingin dan siap digunakan.

## Persiapan Pakan Uji
Pakan  yang  digunakan  adalah pelet  komersil  FF-999.  Pertama-tama, pakan  tersebut  ditimbang  sesuai  dosis pemberian pakan yang ditentukan yaitu 5% dari bobot biomassa ikan.
Selanjutnya,  ekstrak  spons  ditimbang sesuai  dosis  yang  ditetapkan  yakni  0 (perlakuan  A),  20  (perlakuan  B),  40 (perlakuan  C)  dan  60  g/Kg  pakan
(perlakuan  D).  Penimbangan  dilakukan menggunakan timbangan digital. Setelah ditimbang, esktrak spons dimasukkan  ke  dalam  wadah  tabung yang  sebelumnya  telah  diisi  dengan aquades sampai 25 mL. Larutan spons 25 mL telah diuji cukup untuk menutupi permukaan  pelet  sebanyak  1  Kg. Tabung berisi larutan spons selanjutnya dikocok hingga ekstrak spons
tersuspensi  secara  merata  dalam  air, kemudian dimasukkan kedalam sprayer dan  disemprotkan  secara  merata  pada pakan.

## Prosedur Penelitian
Sebelum penelitian dilakukan, ikan yang  diambil  dari  BBAT  dimasukkan dalam  akuarium  berukuran  60x40x40 cm  untuk  diaklimatisasi  selama  satu minggu. Selama aklimatisasi ikan diberi pakan  pellet  komersil  yang  diberikan dua kali sehari yaitu pagi jam 10.00 dan sore jam 17.00. Selama proses aklimatisasi  kualitas  air  dipertahankan kestabilannya dengan melakukan penyiponan  dan  pergantian  air  untuk mengeluarkan  kotoran  dan  sisa  pakan dari dasar akuarium. Setelah proses aklimatisasi selesai,  ikan  dipindahkan  ke  dalam  12 akuarium kaca masing-masing berukuran 30x40x40 cm dengan
kepadatan  10  ikan/akuarium.  Selama
periode  penelitian,  ikan  diberi  pakan perlakuan yang sudah disiapkan sebelumnya  dengan  dosis  5%/bb/hari dengan frekuensi pemberian pakan dua kali sehari yaitu pagi jam 10.00 dan sore jam 17.00. Pemberian pakan perlakuan pada  hewan  uji  berlangsung  selama  2 minggu.  Kualitas  air  selama  masa percobaan  dijaga  agar  tetap  berada dalam  kondisi  yang  baik/terkontrol dengan cara melakukan pergantian air, menggunakan  aerator  dan  resirkulasi air.
Ikan  ditimbang  2  kali  untuk diketahui pertambahan beratnya.
Penimbangan  dilakukan  pada  minggu pertama dan minggu kedua setelah ikan diberikan  pakan  dengan  ekstrak  kasar spons.  Setelah  14  hari,  selanjutnya  6 ekor  ikan  dari  tiap  perlakuan  diambil untuk  dilakukan  uji  tantang  selama  1 minggu.  Uji  tantang  dilakukan  dengan cara  dipping  (perendaman).  Ikan  nila direndam  dalam  1  liter  air  yang  telah dicanpurkan  dengan  1x10 6 cfu/mL S.agalactiae (Aryanto,  2011,  Rodkhum et  al .,  2015,  Taukhid et  al .,  2018, Sukenda et  al. ,  2018).  Perendaman dilakukan  selama  3  jam.Selanjutnya, ikan  yang  dianggap  sudah  terinfeksi bakteri  dipindahkan kedalam  akuarium. Pengamatan  resistensi  ikan  dilakukan setiap  hari  selama  7  hari.  Resistensi diamati  setelah  ikan  diuji  tantang dengan bakteri patogen. Selama periode  uji  tantang  ikan  diberi  pakan tanpa penambahan ekstrak kasar spons sebanyak 5%/bb/hari dan diberikan dua kali sehari jam 10.00 dan 17.00.

## Parameter Uji Parameter Imun
Data  parameter  imun  yang diukur yaitu menghitung Total Leucocyte Count (TLC).  Untuk  total  leukosit  maka dibutuhkan sampel darah ikan. Pengambilan  darah  dilakukan  pada bagian  vena  caudalis.  Perhitungan jumlah leukosit dikerjakan
menggunakan  haemacytometer.  Darah yang  telah  berada  di  dalam  microtube ditambahkan larutan Turk’s sebanyak 1 ml atau perbandingan darah dan larutan
Turk’s  adalah  1:10.  Pengamatan  dan perhitungan  total  leukosit  dilakukan  di bawah  mikroskop  dengan  pembesaran 100x.  Jumlah  leukosit  dihitung  dengan formula:
TCL  =  Jumlah  leukosit  rata-rata  x  16  x pengenceran x 10 4 sel/ml

## Resistensi Ikan Nila
Resistensi  ikan  nila  terhadap serangan infeksi Streptococcus agalactiae dilihat dari tingkat kelulushidupan ikan. Tingkat kelangsunganhidup  dihitung  dengan menggunakan  rumus  sebagai  berikut
(Zonneveld et al., 1991; Nasution et al., 2014):
SR = 𝑵𝒕 𝑵𝒐 × 𝟏𝟎𝟎 %
Dimana: SR = Tingkat kelangsunganhidup No = Jumlah ikan pada awal penelitian Nt = Jumlah kultivan pada akhir penelitian

## Petumbuhan
Data  pertumbuhan  ikan  akan  diukur setiap minggu sekali. Pertumbuhan ikan yang  akan  diukur  adalah  pertumbuhan mutlak  yaitu  selisih  antara  berat  ikan yang diukur terakhir penelitian dan berat awal ikan. Pertumbuhan mutlak dihitung dengan  menggunakan  rumus  sebagai berikut  (Effendie,  2002;  Sari et  al ., 2017):
∆G = Wt – Wo
Dimana: ∆G = Pertumbuhan (g) Wt = Berat ikan pada waktu t (g) Wo = Berat ikan pada awal percobaan (g)

## Analisis Data
Pengaruh perlakuan ekstrak spons  terhadap  peningkatan  resistensi ikan nila terhadap S. agalactiae , sistem imun  dan  pertumbuhan  ikan  nila  akan dikerjakan menggunakan analisis ragam (ANOVA) dengan tingkat kepercayaan  95%.  Apabila  ekstrak spons  memberikan  pengaruh  maka akan  dilanjutkan  dengan  uji  lanjut Duncan, untuk
mengevaluasi perbedaan  pengaruh  antar  perlakuan.
Analisis  data  dilakukan  menggunakan
program Statistical Product and Service Solutions  (SPSS) Versi  22  untuk windows

## HASIL & PEMBAHASAN
Cribrochalina sp.
Spons laut yang digunakan dalam
penelitian adalah jenis Cribrochalina sp. Identifikasi  jenis  spons  yang  didapat dilakukan di website www.spongeguide.org dengan mencocokkan  ciri-ciri  dari  spons  yang digunakan.
Gambar 1. Morfologi sampel spons yang diambil dari perairan Malalayang ( Cribrochalina sp.)
Cribrocallina masuk dalam kelas spons Demospongiae berbentuk
kerucut terbalik  yang  halus,  berbentuk  telinga atau  berbentuk  kipas.  Adapula  yang berbentuk  bercabang  (tegak  lurus  atau dengan  ujung  tumpul)  dan  biasanya Cribrochalina  yang  berbentuk  cabang merupakan  spesies  Cribrochalina  dura. Berwarna coklat, ungu violet dan coklat dengan  sedikit  kehitaman.  Spons  ini memiliki  konsistensi  atau  bertekstur keras. Cribrchalina mengandung sebuah variasi senyawa bioaktif yang mengandung antimikroba yaitu cribrosatins 2 dan 4 (Pettit et al., 2000; Pettit et  al., 2004).  Spons  jenis  ini  juga telah  ditemukan  berpotensi  sebagai antijamur  dan  sedang  dikembangkan sebagai obat antikanker pada penderita kanker  ovarium  manusia  (Calabresi et al., 2001). Menurut Latundra dan Ahmad (2008), Cribrochallina yang diisolasi dari perairan Sulawesi Selatan menunjukkan adanya  senyawa  protein  bioaktif  yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri  patogen  seperti Salmonella typhy,  Vibrio  cholera,  Staphylococus aureus dan Echerichia coli .
Resistensi Ikan Nila .
Setelah  pemeliharaan  selama  14 hari,  selanjutnya  dilakukan  uji  tantang pada ikan nila dengan menginfeksi ikan dengan bakteri Streptococcus agalactiae (konsentrasi  10 6 cfu/mL) dengan  cara  perendaman.  Ikan  nila diamati  selama  7  hari,  dan  tidak  lagi diberikan  pakan  dengan  penambahan ekstrak spons. Kelangsungan hidup ikan yang  diberikan  pakan  dengan  ekstrak kasar  spons  (perlakuan  B,  C  dan  D) menunjukkan tingkat kelangsungan hidup 100%. Sedangkan pada perlakuan A (kontrol) tingkat kelangsungan  hidupnya  tidak  sampai 100%,  yaitu  hanya  sebesar  72,22%.
Tingginya  tingat  kelangsungan  hidup ikan nila terhadap S. agalactiae karena spons  Cribrochalina  telah  dilaporakan mengandung senyawa antimikroba yang  mampu  menghambat  bakteri patogen (Pettit et al., 2004 dan Latundra
& Ahmad, 2008).

## Total Leukosit
Hasil  perhitungan  menunjukkan bahwa  total  leukosit  yang  didapat perlakuan  C  (penambahan  ekstrak kasar  spons  sebanyak  40  g/kg  pakan)
menghasilkan  total  leukosit  tertinggi diikuti  oleh  perlakuan  D  (penambahan ekstrak  kasar  spons  60  g/kg  pakan).
Sedangkan total leukosit pada perlakuan  A  (kontrol)  lebih  tinggi dibandingkan dengan total leukosit pada perlakuan  B  (penambahan  ekstrak kasar spons 20 g/kg pakan).
Leukosit (sel darah putih) merupakan  sistem  pertahanan  tubuh ikan  untuk  melawan  berbagai  macam penyakit (Ellis, 1997). Leukosit
merupakan  unit  sistem  pertahan  tubuh paling  aktif  dan  beredar  di  dalam sirkulasi  darah.  Fungsi  leukosit  sendiri adalah  untuk  merusak  bahan-bahan infeksius  dan  toksis  melalui  proses fagositosis dengan membentuk antibodi (Erika,  2008).  Total  leukosit  rata-rata yang didapat berdasarkan hasil perhitungan  adalah  13.777,8  sel/mm 3 . Sasongko  (2001)  melaporkan  bahwa jumlah  leukosit  ikan  berkisar  antara 20.000 – 150.000 sel/mm 3 .
Tabel 1. Resistensi ikan nila setelah diinfeksi Streptococcus agalactiae Perlakuan SR (%) A 72.22 B 100 C 100 D 100
Gambar 1. Grafik total perhitungan leukosit ikan nila yang diberi pakan dengan penambahan ekstrak spons
Total leukosit yang terhitung jumlahnya jauh  dibawah  dari  jumlah  lekosit  ikan normal  seperti  yang  dilaporakan  oleh Sasongko  (2001).  Penurunan  total leukosit  ikan  dapat  disebabkan  oleh beberapa  faktor,  salah  satunya  adalah stress. Stress pada ikan bias dipicu oleh beberapa  faktor  abiotik  lingkungan (perubahan  suhu,  pH,  konsentrasi  O 2 ), interaksi  biotik  (gangguan  predator, masuknya  parasit  maupun  bakteri  atau adanya  kompetitor  yang  kuat),  serta oleh
aktivitas manusia yang berhubungan  dengan  penanganan  dan pemanenan  ikan  (Witeska,  2005  dan
Lubis et  al .,  2016).  Modra et  al .,  1998 menjelaskan  bahwa  stress  pada  ikan
dapat  menyebabkan  diferensial  total leukosit, yang menyebabkan total leukosit  menjadi  naik  ataupun  turun. Penurunan jumlah leukosit saat perhitungan dalam penelitian ini, diduga disebabkan karena adanya stress pada ikan, baik yang disebebakan oleh faktor abiotik di lingkungan ikan tinggal, faktor biotik  (adanya  infeksi  awal  sebelum dijadikan objek penelitian) ataupun oleh manusia.    Penurunan  leukosit  yang diakibatkan oleh adanya infeksi, karena total  leukosit  yang  berfungsi  sebagai pertahanan  non  spesifik  digunakan untuk  melokalisasi  dan  mengeliminir patogen melalui fagositosis (Prasetio et al ., 2017).
Namun demikian, walaupun jumlah  leukosit  yang  terhitung  masih dibawah rata-rata jumlah leukosit normal  ikan,  masih  terlihat  adanya perbedaan  jumlah  perlakuan  dimana perlakuan  C  (pemberian  ekstrak  kasar spons  40  g/kg  pakan)  menunjukkan hasil  yang  tertinggi.  Hasil  uji  lanjut Duncan  (Lampiran  6)  menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang signifikan  antara  perlakuan  C  dengan perlakuan A, juga pada perlakuan C dan perlakuan B, sedangkan antar perlakuan lainnya tidak terdapat perbedaan  signifikan  (Gambar  13). Perbedaan  signifikan  antara  perlakuan C  (penambahan  ekstrak  spons  40 g/kg pakan)  dengan  perlakuan  A  (tanpa perlakuan)  diduga  akibat  penambahan ekstrak kasar spons dalam pakan yang diberikan pada ikan uji.
Peningkatan jumlah leukosit dapat dipicu  oleh  pemberian  imunostimulan. Imunostimulan  merupakan  berbagai bahan  (zat  kimia,  obat-obatan  maupun bahan  lainnya)  yang  dinyatakan  dapat meningkatkan daya tahan tubuh terhadap  penyakit  (Handayani,  2015).
Berbagai ekstrak tumbuhan telah dilaporkan dapat berfungsi meningkatkan pertumbuhan, merangsang nafsu makan dan memiliki sifat antimikroba, serta bertindak sebagai imunostimulan dalam budidaya ikan  (Chi et  al .,  2016).  Senyawa flavonoid yang terdapat dalam tanaman herbal  meningkatkan  sistem  kekebalan atau respon imun (Parlinaningrum et al ., 2014 dan Rauf et al ., 2016). Kandungan
flavonoid juga telah dilaporkan terdapat dalam  spons  laut Callyspongi  aerizusa (Rumampuk et  al .,  2017)  dan  pada spons Axinella cateri Dendy (Rivai et al , 2010).
Spons  mirip  dengan  hewan  sesil laut lainnya, menampung banyak spesies bakteri dalam hubungan simbiosis  (Thomas et  al., 2010).
Mikroba  simbion  ini  menghasilkan senyawa aktif sebagai respon terhadap kondisi ekstrim terhadap lingkungannya melalui mekanisme
pertahanan tubuhnya.  Bakteri  simbion  beserta dengan  senyawa  aktif  yang  dihasilkan dapat  bersifat  sebagai  stimulus  apabila dihadirkan  dalam  tubuh  inang.  Hal  ini membuktikan  bahwa  esktrak  kasar spons  bukan  hanya  berfungsi  sebagai bahan  antimikroba  melainkan  ebagai bahan  imunostimulant.  Reha et  al .,
(2013) telah berhasil mengisolasi beberapa  jenis  protein  yang  dapat menjadi  imunostimulan  baik  yang  ada dalam  spons  sendiri  maupun  bakteri simbionnya.  Natori et  al .,  (1993)  dalam Yang et  al .,  (2004)  melaporkan  bahwa spons  laut  juga  memiliki  aktivitas imunostimulan dari α-C-
galactosylceramide  yang  berasal  dari spons Agelas mauritianus.

## Pertumbuhan Mutlak
Penambahan ekstrak kasar spons Cribrochalina sp.  dengan  konsentrasi yang berbeda setiap perlakuan memberikan  pengaruh  yang  sangat nyata  terhadap  pertumbuhan  mutlak ikan nila. Tabel 2. Pertumbuhan mutlak ikan nila yang diberi perlakuan selama 14 hari Perlakuan Pertumbuhan Mutlak A 2.45±0.97 ab B 2.64±0.38 ab C 4.90±2.33 b D 1.10±1.79 a
Keterangan : superscript yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata
Penelitian ini menunjukkan bahwa pertumbuhan  terbaik  dicapai  pada  ikan yang diberi pakan dengan penambahan ekstrak  spons  mengandung  40  g/kg pakan  (perlakuan  C),  disusul  oleh  ikan
yang diberi ekstrak spons 20 g/kg pakan (perlakuan  B)  dan  hasilnya  tidak  jauh berbeda  dengan  pertumbuhan  mutlak ikan  yang  tidak  diberi  ekstrak  spons (perlakuan  A).  Hal  ini  menunjukkan
bahwa  jumlah  ekstrak  spons  yang ditambahkan pada perlakuan B mungkin masih  belum  cukup  (jumlahnya  masih terlalu sedikit) untuk memberikan respon yang optimal terhadap
pertumbuhan ikan nila.
Pada  penambahan  ekstrak  spons yang  lebih  tinggi  (60  g/kg  pakan)  yaitu pada  perlakuan  D  pertumbuhan  yang teramati lebih kecil dari perlakuan A. Hal ini  menunjukkan  bahwa  pemberian ekstrak spons dengan jumlah yang lebih tinggi pada (60 g/Kg pakan),
pertumbuhan ikan nila semakin menurun.  Hasil  ini  diduga  karena konsentrasi yang diberikan diduga dosis yang  diberikan  sudah  melebihi  dosis optimum, maka spons yang
mengandung berbagai bahan aktif dapat menekan  sel-sel  tubuh  ikan  dan  dapat menjadi  racun  di  dalam  tubuh  jika jumlahnya  sudah  terlalu  banyak  (Tabel 3).
Berdasarkan  hasil  analisis  ragam pertumbuhan  ikan  nila  setelah  14  hari diberi  pakan  dengan  penambahan ekstrak  kasar  spons  diperoleh  nilai signifikansi (sig.) sebesar 0,039 menunjukkan hasil yang berbeda nyata.
Uji  lanjut  Duncan  menunjukkan  bahwa pertumbuhan  mutlak  ikan  nila  pada perlakuan  A,  B  dan  D  berbeda  nyata dengan  C  namun  di  antara  ketiga perlakuan tersebut tidak terdapat perbedaan nyata.

## KESIMPULAN
1.  Jenis  spons  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah Cribrochalina sp.
2.  Pemberian  ekstrak  kasar  spons
Cribrochalina sp. dapat meningkatkan  resistensi  ikan  nila terhadap infeksi bakteri Streptococcus agalactiae . 3.  Pemberian  ekstrak  kasar  spons dalam pakan memberikan pengaruh yang  baik  terhadap  pertumbuhan dan sistem imun ikan nila.
4.  Dosis ekstrak kasar spons Cribrchaliina sp. yang efektif secara optimal dalam
meningkatkan
pertumbuhan ikan nila dicapai pada perlakuan  C  (penambahan  ekstrak kasar spons 40 g/kg pakan).

## DAFTAR PUSTAKA
Alexander  BE,  Liebrand  K,  Osinga  R, Gees HGV, Admiraal W, Cleutjens JPM,  Schutte  B,  Verheyen  F,
Ribes M, Loon EV, Goeij JM. 2014. CellTurnover and Detritus Production  in  Marine  Sponges from  Tropical  and  Temperate Benthic  Ecosystems.  PLOS  ONE International Journal, 9(10): 1 – 11. Amir  I,  Budiyanto  A.  1996.  Mengenal Spons Laut (Demospongiae) Secara  Umum.  Jurnal  Oseana, 21:15 – 31. Aryanto, EW. 2011. Patogenitas Streptococcus  agalactiae Pada Ikan  Nila  ( Oreochromis  niloticus ). Skripsi.  Fakultas  Perikanan  dan Ilmu  Kelautan.  Institut  Pertanian Bogor: Bogor.
Bromage  ES,  Thomas  A,  Owens  L.
1999. Streptococcus iniae , a Bacterial  Infection  in  Barramundi Lates calcarifer . Journal of Diseases  of  Aquatic  Organisms,
36: 177 – 181. Calabresi,  P.,  F.A.  Goulette,  J.W. Darnowski. 2001. Taurolidine: Cytotoxic and Mechanistic Evaluation Asa Novel Antineoplastic  Agent.  Journal  of Cancer Res 61, 6816 –6821. Conroy G. 2009. Tilapia streptococcosis:  Prevalence  of Streptococcus  species  in  Latin America  and  their  pathological manifestations. Proceedings Managing Streptococcus in Warmwater Fish.15-20. Ellis,  A.E.  1997.  Leukocytes  of  Fish –
Review.  Journal  of  Fish  Biology,
11: 453 – 491. Erika  Y.  2008.  Gambaran  Diferensiasi Leukosit Pada Ikan Mujair ( Oreochromis  mossambicus )  di Derah  Ciampea  Bogor.Skripsi.
Fakultas Kedokteran Hewan; Institut Pertanian Bogor. Evans  JJ,  Pasnik  DJ,  Klesius  PH,  Al- Ablani  S.  2006.  First  Report  of Streptococcus agalactiae and Lactococcus garvieae From a Wild Bottlenose Dolphin ( Tursiops Truncates ).Journal of Wildlife Diseases. 42(3) : 561-569.
Galina J, Yin G, Ardo L, Jeney Z. 2009.
The  Use  of  Immunstimulating Herbs  in  Fish.  An  Overview  of Research.  Fish  Physiol  Bochem, 35: 669 – 676. Lubis, N.G., Sugito, Zuhrawati, Zuraidawati, N. Asmilia, Hamny, U. Balqis.  2016.  Efek  Peningkatan
Suhu  Terhadap  Jumlah  Leukosit Ikan  Nila  ( Oreochromis  niloticus ). Jurnal Medika Veterania, 10(1): 31 – 33.
Modra,  H.,  Z.  Svbodova,  J.  Kolarova.
1998.  Comparison  of  Differential Leukocyte  Counts  in  Fish  of Economic and Indicator Importance. Acta Veterinaria Brno. Article, 67(4): 215 – 226. Nasution,  I.,  A.  Supardi,  F.  Basuki,  S. Hastuti. 2014. Analisis kelulusanhidupan dan Pertumbuhan  Benih  Nila  Salin. Jurnal of Aquaculture Management  and  Technology, 3(2). Parlinaningrum,  D.,  S.  Widyarti,  M. Rifa’i. 2014. Pengaruh Pemberian Ekstrak  Etanol Annona  muricata Linnn. Terhadap Peningkatan Jumlah B220 Pada Mus musculus .
Jurnal Biotropika, 2(5): 269 – 272.
Payung,  C.N.,  &  Manoppo,  H.  2015.
Peningkatan  Respon  Kebal  Non- spesifik  dan  Pertumbuhan  Ikan Nila ( Oreochromis niloticus ) Melalui  Pemberian  Jahe, Zingiber officinale . Jurnal Budidaya Perairan, 3(1): 11 – 18. Pettit,  R.K.,  B.R.  Fakoury,  J.C.  Knight,
C.A.  Weber,  G.R.  Pettit,  G.D.
Cage,  S.  Pon.  2004.  Antibacterial
Activity  of  The  Marine  Spone
Sonstituent Cribrostatin 6. Journal of  Medical  Microbiology,  53:  61 – 65.
Prasetio,  E.,  M.  Fakhrudin,  H.  Hasan. 2017.  Pengaruh  Serbuk  Lidah
Buaya  ( Aloe  vera )  Terhadap Hematologi Ikan Jelawat ( Leptobarbus hoevenii ) Yang Diuji Tantang Bakteri Aeromonas hydrophila . Jurnal Ruaya, 5(2): 44 – 54.
Rauf,  A.,  Haeria,  D.  Anas.  2016.  Efek Imunostimulan Fraksi Daun Katuk ( Sauropus  androgyus L.  Merr.) Terhadap  Aktivitas  dan  Kapasitas Fagositosis Makrofag Pada Mencit Jantan  ( Mus  Musculus ).  Jurnal Farmasi, 4(1): 9 – 15. Reha,  W.,  A.  Noor,  A.  Ahmad,  N.L. Nafie, D. Salama. 2013. Karakterisasi  Protein  Aktif  Dari Spons  dan  Mikroba  Simbionnya Sebagai Usaha Awal Menuju Agen Imunostimulan. Jurnal Marina Chimica Acta, 14(1): 1 – 11.
Rivai, H., Meliyana, D. Handayani. 2010.
Karakterisasi  Ekstrak  Spon  Laut Axinella  carteri Dendy  Secara Fisika,  Kimia  dan  Fisikokimia. Jurnal Farmasi Higea, 2(1): 1 – 12.
Rodkhum,  C.,  P.  Kayansamruaj,  N.
Piratat.  2015.  Effect  of  Water Temperature  on  Sesceptibility  to Streptococcus agalactiae Serotype Ia Infection in Nile Tilapia ( Oreochromis niloticus ). Journal of Thai Vet Med, 41(3): 309 – 314.
Sari, I.P., Yulisman, Muslim. 2017. Laju Pertumbuhan dan Efisiensi Pakan Ikan  Nila  ( Oreochromis  niloticus ) yang  Dipelihara  Dalam  Kolam Terpal  yang  Dipuasakan  Secara Periodik.  Jurnal  Akuakultur  Rawa Indonesia, 5(1): 45 – 55.
Sasongko  A.  2001.  Biomassa  Bakteri Nitrifikasi  Pada  Berbagai  Bahan Filter  Dalam  Sistem  Resirkulasi
Aliran  Tertutup  dan  Pengaruhnya Terhadap Kondisi Ikan: Gambaran Darah.Tesis. Program Pasca
sarjana,  Institut  Pertanian  Bogor: Bogor.
Sukenda,  S.,  A.L.  Firmansyah,  R.
Rahman, S. Nuryati, D. Hidayatullah. 2018. Efikasi Vaksin Streptococcus  agalactiae Strains
N 3 M and N 4 M IN Pada Benih Ikan
Nila  yang  Diinfeksi  Strain S. agalactiae Jurnal Akuakultur Indonesia, 17(2): 168 – 180. Taukhid,  T.  Sumiati,  S.  Andriyanto. 2018.  Efektivitas  Metode  Aplikasi Vaksin Trivalen Untuk Pencegahan Penyakit Bakteri Potensial  Pada  Budiadya  Ikan  Air Tawar.  Jurnal  Riset  Akuakultur, 13(1): 67 – 76. The Sponge Guide. A Picture Guide To Caribbean Sponges. Dalam laman: http://spongeguide.org . Diakses pada: 15/01/2019. Thomas,  T.R.A.,  D.P.  Kavlekar,  P.A. LokaBharati.  2010.  Marine  Drugs from  Sponge-Microbe  Association
–  A  Review.  Article  in  National
Center for Biotechnology Information  (NCBI),  8(4):  1417 – 1468.
Witeska,  M.  2005.  Stress  in  Fish – Hematological  and  Immunological
Effects of Heavy Metals. Electronic Journal of Ichthyology, 1: 35 – 41.
Yang,  G.,  J.  Schmieg,  M.  Tsuji,  R.W.
Franck.  2004.  The  C-Glycoside Analogue  of  the  Immunostimulant α-Galactosylceramide (KRN7000): Synthesis and Striking Enhancement  of  Activity.  Journal of Angewandte Chemie International, 43: 3818 – 3822. Yuasa, K.T., K. Kamaishi, M. Hatai, P.
Bahnnan, Borisuthpeth. 2008. Two Cases of Streptococcal Infections of Cultured Tilapia in Asia. Journal of Diseases in Asian Aquaculture, 4: 259-268. Fish Health Section, Asian Fisheries Society: Manila.