JBE 4 (1) (April 2019) 22-28

## BIO-EDU: Jurnal Pendidikan Biologi
https://jurnal.unimor.ac.id/JBE/index

## Pengaruh Pemberian Air Kelapa terhadap Perkembangan  Embrio pada
Dendrobium anosmum Lindl.

## Ni Putu Yuni Astriani Dewi
Program Studi Magister Biologi Program Pascasarjana ,Udayana University Jl. P.B Sudirman, Denpasar-Bali 80232
Email: yuniastriani@ymail.com
DOI: https://doi.org/10.32938/jbe.v4i1.343

## Abstrak
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh penambahan air kelapa pada media kultur terhadap jumlah embrio pada D. anosmum Lindl.. Penelitian dilakukan di Laboratorium Struktur dan Perkembangan Tumbuhan, Jurusan  Biologi,  Fakultas  Matematika  dan Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas  Udayana  dan di  UPT.  Balai Benih Induk Tanaman Pangan dan Hortikultura Provinsi Bali pada Bulan Februari 2015 hingga Juli 2015. Tiga macam media dasar digunakan yaitu PDA, Organik, dan MS dengan tiga konsentrasi air kelapa sebanyak 0 ml/L, 50 ml/L dan 100 ml/L. Hasil penelitian menunjukkan bahwa penambahan air kelapa sebanyak 100 ml/L pada MS menunjukkan bahwa media tersebut mampu meningkatkan jumlah embrio tahap akhir yang terbentuk (> 32 sel).
Kata kunci: Kultur Jaringan, Anggrek, Perkecambahan, Murashige and Skoog , Perkembangan Embrio, dan Proembrio .

## Abstract
The aim of the research is to find out effect of addition of coconut water in the media to the number of last stage D. anosmum Lindl embryo. Research was conducted at the Plant Structure and Development of Laboratory, Department of Biology, Faculty of Mathematics and Natural Sciences University of Udayana and UPT. Balai Benih Induk Tanaman Pangan dan Hortikultura Provinsi Bali from February 2015 to July 2015. Three type of media were employed, i.e. PDA, Organic, MS. Three different concentration of coconut was added to media, i.e. 0 ml/L 50 ml/L, 100 ml/L. Results showed that addition of 100 ml / L coconut water in MS showed that media is capable to increase the formation of final stages embryos (> 32 cells).
Keywords: Tissue Culture , Orchid, Germination, Murashige and Skoog, Embryo Growth, and Proembryo.

## PENDAHULUAN
Beberapa  jenis  anggrek  mengalami  penurunan  populasi  yang  disebabkan  adanya eksploitasi  anggrek  yang  tidak  terkontrol,  kerusakan  habitat  akibat  kebakaran  hutan  dan tanah longsor (Lisnandar dkk., 2012). Pemanfaatan kawasan untuk pembukaan jalan baru di habitat aslinya juga merupakan salah satu penyebab populasi termasuk anggrek D. anosmum Lindl. semakin menurun.
Dendrobium  anosmum Lindl.  merupakan  salah  satu  anggrek  epifit  yang  tumbuh secara  alami  di  daratan  Asia  yaitu  Thailand,  India,  Sri  Lanka,  Laos,  Vietnam,  Filipina, Malaysia,  Indonesia,  dan  Papua  New  Guinea  (Tuhuteru  dkk.,  2012). D.  anosmum Lindl. dapat dijumpai di Indonesia seperti kawasan hutan tropis di Pegunungan Wilis dan Lereng Lawu Selatan (Yulia, 2010).
Kegiatan  perbanyakan D.  anosmum Lindl.  menjadi  sangat  penting  dilakukan mengingat kondisi habitatnya yang sudah tidak lagi mendukung kehidupan anggrek ini. Salah satu  upaya  dalam  melakukan  konservasi  terhadap D.  anosmum Lindl.  adalah  dengan melakukan perbanyakan secara massal di laboratorium (konservasi ex-situ ). Konservasi ex- situ pada D. anosmum Lindl. dapat dilakukan dengan menggunakan teknik kultur jaringan. Pada  teknik  kultur  jaringan  penggunaan  zat  pengatur  tumbuh  memiliki  peranan penting  dalam  pertumbuhan  dan  perkembangan  tanaman,  seperti  pembesaran  sel,  pada aktivitas sel kambium, pertumbuhan akar, pada pembentukan tunas adventif, dan proliferasi tunas aksilar, serta pembentukan akar (Pramanik dan Rachmawati, 2010). Salah satu bahan alami yang dapat digunakan sebagai zat pengatur tumbuh adalah air kelapa.
Penggunaan  air  kelapa  sebagai  bahan  organik  merupakan  salah  satu  cara  untuk menggantikan  penggunaan  bahan  sintetis  yang  dipakai  dalam  pembuatan  media  kultur, seperti Kinetin. Kelapa yang digunakan adalah kelapa yang berumur 7-8 bulan (± 210 hari) (Kristina dan Sitti, 2012). Tuhuteru dkk. (2012) telah melakukan penelitian dari eksplan D. anosmum Lindl. yang memiliki tinggi 2–4 cm.
Udomdee et al . (2014) telah melakukan penelitian mengenai perkecambahan benih Dendrobium  nobile dari  hasil  silangan  dengan  menggunakan  media  dasar  Murashige  and Skoog (MS) dan konsentrasi gula yang berbeda. Hasil penelitian menunjukkan bahwa media MS dengan konsentrasi gula 10 g/L mampu memacu perkecambahan secara optimal.
Penelitian ini menggunakan tiga media yaitu media PDA, Organik, dan MS dengan penambahan air kelapa sebagai zat pengatur tumbuh untuk mengetahui pertumbuhan benih anggrek D. anosmum Lindl. sebagai upaya dalam melakukan konservasi terhadap anggrek spesies di Indonesia.

## METODE
Penelitian  ini  dimulai  dari  Bulan  Februari  2015  hingga  Bulan  Juli  2015  di Laboratorium  Kultur  Jaringan  Anggrek  UPT.  Balai  Benih  Induk  Tanaman  Pangan  dan Hortikultura  Desa  Luwus,  Kecamatan  Baturiti,  Kabupaten  Tabanan  Provinsi  Bali  dan  di Laboratorium  Struktur  dan  Perkembangan  Tumbuhan  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam,  Universitas Udayana. Sampel  buah anggrek diambil  dari Kebun Raya Eka Karya Bali.

## Bahan Penelitian
Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah buah anggrek D. anosmum Lindl. yang berumur 5 bulan. Bahan-bahan yang digunakan pada kultur benih anggrek yaitu agar, pisang ambon, gula pasir, air kelapa, kentang, tomat, media MS, dan media organik.

## 1. Persiapan Air Kelapa
Air  kelapa  yang  digunakan  diambil  dari  buah  kelapa  yang  daging  buahnya  tidak terlalu lunak, tetapi juga belum terlalu keras (umur 210–240 hari). Air kelapa disaring dan selanjutnya dipanaskan hingga mendidih, lalu digunakan dalam pembuatan media (air kelapa ditambahkan saat media dipanaskan) (Tuhuteru dkk., 2012).

## 2. Bahan-bahan Media Organik
Media organik menggunakan bahan-bahan seperti gula (20 gr/L), agar (8 gr/L), arang (2 gr/L), vitamin C (100 mg/L), pisang ambon (150 gr/L), sari kentang (250 ml/L), Gandasil (4 gr/L) (Shintiavira dkk., 2014), aquadest , HCl, dan air kelapa.

## 3. Bahan-bahan Media Potato Dextrose Agar (PDA)
Media  PDA  menggunakan  bahan-bahan  seperti  gula  (20  gr/L),  agar  (8  gr/L),  fish emulsion  (3  ml/L),  sari  kentang  (250  ml/L),  Gandasil  (4  gr/L)  (Shintiavira  dkk.,  2014), aquadest , HCl, dan air kelapa.
4. Bahan-bahan Media Murashige and Skoog (MS)
Media MS menggunakan bahan-bahan seperti media MS instan (4,43 gr/L), gula (20 gr/L), agar (8 gr/L), tomat (100 g/L), aquadest , HCl, dan air kelapa.

## Sterilisasi Kapsul Dendrobium Anosmum Lindl.
Kapsul  anggrek  disterilkan  terlebih  dahulu  dengan  merendam  kapsul  ke  dalam alkohol  70%  selama  3  menit  dan  0,6% Sodium  hypochlorite selama  10  menit.  Kemudian kapsul  di  cuci  bersih  dengan  air  steril  sebanyak  3  kali  lalu  dimasukkan  ke  dalam  alkohol 95% selama 15 detik dan dipanaskan dengan api bunsen selama 2-3 detik (Udomdee et al ., 2014).
Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  Faktorial  dengan  2  faktor. Faktor pertama adalah zat pengatur tumbuh air kelapa yang terdiri dari 3 konsentrasi yaitu 0 (kontrol),  50  ml/L,  dan  100  ml/L.  Faktor  kedua  adalah  media  yang  terdiri  dari  3  macam media yaitu media organik, PDA, dan MS. Diperoleh 9 kombinasi perlakuan dan masing- masing kombinasi perlakuan diulang sebanyak 4 kali sehingga terdapat 36 unit percobaan (Tabel 1).
Tabel 1. Kombinasi Perlakuan Air Kelapa dan Media Kultur pada Benih Anggrek D. anosmum Lindl.
F1 Media Kultur F2 Mo MS PDA Air kelapa (K) 0 MoK0  MSK0  PDK0 (K1) 50 ml/L MoK1  MSK1  PDK1 (K2) 100 ml/L MoK2  MSK2  PDK2
Keterangan :
F1 = Faktor pertama, F2 = Faktor kedua, K0 = Perlakuan kontrol, K1 = Perlakuan dengan pemberian 50 ml/L air kelapa ke masing-masing media, K2 = Perlakuan dengan pemberian
100 ml/L air kelapa ke masing-masing media, Mo = Media organik, MS = Murashige and Skoog , PDA = Potato Dextrose Agar

## Analisis Data
Data  kuantitatif  yang  diperoleh  pada  penelitian  ini  dianalisis  dengan  analisis  sidik ragam  atau  ANOVA  ( Analysis  of  Variance )  dengan  menggunakan software SPSS for Windows pada taraf nyata (α) < 0,05. Uji akan dilanjutkan dengan uji Duncan dengan bantuan SPSS versi 16.0 for Windows (Priyatno 2012).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil
Pengaruh  Penambahan  Air  Kelapa  dengan  Konsentrasi  yang  Berbeda  pada  Media PDA, Organik dan MS Terhadap Jumlah Embrio D. anosmum Lindl Tahap Akhir yang Terbentuk (≥ 32 sel).
Hasil  uji  ANOVA  menunjukkan  bahwa  pengaruh  penambahan  air  kelapa  berbeda nyata pada tiga media terhadap jumlah embrio tahap akhir yang terbentuk. Penambahan air kelapa berpengaruh nyata terhadap jumlah embrio tahap akhir yang terbentuk. Hal ini dapat dilihat dari F hitung lebih besar dari 0,05. Hasil penelitian menunjukkan jumlah embrio tahap akhir tertinggi pada penambahan air kelapa sebanyak 100 ml/L pada media MS berpengaruh terhadap jumlah embrio tahap akhir yang terbentuk yaitu embrio tahap ≥ 32 sel (Tabel 2).
Tabel 2. Pengaruh Penambahan Air Kelapa pada Tiga Media terhadap Jumlah Embrio Tahap Akhir (≥ 32 sel ) yang Terbentuk pada 12 MST
No.  Perlakuan Jumlah embrio tahap akhir 1. Kontrol 0,37 a 2. PDK0 5,37 b 3. PDK1 8,33 bc 4. PDK2 6,73 b 5. MOK0 8,57 bc 6. MOK1 8,87 bc 7. MOK2 9,00 bc 8. MSK0 11,57 c 9. MSK1 20,70 d 10.  MSK2 24,40 e
Keterangan : Kontrol = Sebelum ditanam dalam media kultur, K0 = Perlakuan kontrol, K1 = Perlakuan dengan pemberian 50 ml/L air kelapa ke masing-masing media, K2 = Perlakuan dengan pemberian 100 ml/L air kelapa ke masing-masing media, Mo  =  Media  organik,  MS  = Murashige  and  Skoog ,  PDA  = Potato  Dextrose Agar

## Pembahasan
Pengaruh  Penambahan  Air  Kelapa  dengan  Konsentrasi  yang  Berbeda  pada  Media PDA,  Organik  dan  MS  Terhadap  Jumlah  Embrio  D.  anosmum  Lindl  ≥  32  sel  yang Terbentuk
Pengaruh  penambahan  air  kelapa  dengan  konsentrasi  50  ml/L  dan  100  ml/L  pada media  PDA,  Organik  dan  MS  terhadap  perkecambahan  benih D.  anosmum Lindl.  tidak terlihat.  Hal  ini  dapat  dilihat  dengan  tidak  terbentuknya  kalus  pada  media  kultur.  Namun pengamatan secara mikroskopis dari preparat Biji D. anosmum Lindl. yang sudah ditanam, melalui  hasil  ANOVA  bahwa  kontrol  dengan  penambahan  air  kelapa  dengan  konsentrasi berbeda  pada  masing-masing  media  Organik  dan  MS  berpengaruh  nyata  terhadap  jumlah embrio  ≥  32  sel  yang  ditemui.  Pada  umur  12  MST  di  masing-masing  perlakuan  media terutama media PDA dan organik dengan penambahan air kelapa  masih sedikit ditemukan embrio tahap akhir sedangkan jumlah embrio ≥ 32 sel lebih banyak ditemui pada media MS dengan penambahan air kelapa sebanyak 50 ml/L dan 100 ml/L.
Air kelapa baik digunakan pada media kultur jaringan karena mengandung zat atau bahan-bahan seperti vitamin, mineral, asam amino dan asam nukleat, fosfor serta zat tumbuh auksin dan giberelin yang berfungsi sebagai stimulator proliferasi  jaringan, memperlancar metabolisme  dan  respirasi  (Sari et  al .,  (2011)  ;  (Husain,  2012).  Menurut  Semiarti et  al . (2010),  air  kelapa  dapat  digunakan  sebagai  pengganti  hormon  sitokinin.  Pada  tingkat konsentrasi tertentu air kelapa dapat menginisiasi terbentuknya tunas. Penambahan air kelapa dengan konsentrasi 100 ml/L adalah efektif meningkatkan jumlah embrio ≥ 32 sel. Hal ini dilihat dari jumlah embrio ≥ 32 sel pada media MS 12 MST apabila dibandingkan dengan media PDA dan Organik yang ditambahkan air kelapa. Ini diduga karena kandungan sitokinin dalam media perlakuan dengan konsentrasi tersebut lebih tinggi sehingga memperlihatkan adanya pembelahan sel.
Air  kelapa  dengan  konsentrasi  100  ml/L  dalam  media  MS  merupakan  konsentrasi optimal dalam menghasilkan jumlah embrio ≥ 32 sel yang terbentuk. Hal ini didukung oleh penelitian Tuhuteru et al . (2012), di dalam air kelapa terdapat kandungan sitokinin sehingga proses  pembelahan  sel  terjadi  secara  terus  menerus.  Dapat  dikatakan  bahwa  kandungan sitokinin dalam air kelapa dalam konsentrasi 100 ml/L tersebut mempengaruhi asam nukleat sehingga  berpengaruh  terhadap  sintesa  protein  dan  pengatur  aktivitas  enzim  dalam  hal pembelahan sel pada embrio D. anosmum Lindl.
Dalam media perlakuan, juga adanya media organik yang ditambahkan arang aktif atau charcoal . Walaupun penelitian ini jumlah embrio ≥ 32 sel yang terbentuk hanya sedikit dijumpai dalam Media Organik, namun arang yang ditambahkan dalam Media Organik ini berguna  untuk  menyerap  racun  atau  senyawa  inhibitor  yang  disekresikan  oleh  plantlet  ke dalam  media.  Disamping  itu,  arang  aktif  dapat  mengurangi  pencoklatan  media  akibat pemanasan tinggi setelah sterilisasi (Vogel et al ., 2011). Menurut  Chyuam-Yih et  al. (2011),  penambahan  arang  aktif  proanalis  sebanyak  2 g/L ke dalam media kultur dapat meningkatkan pertumbuhan benih. Namun demikian, semua bahan-bahan  nutrisi  baik  yang  berasal  dari  senyawa  anorganik  maupun  senyawa  organik tersebut, tingkat penyerapannya oleh bahan tanaman sangat dipengaruhi oleh pH media itu sendiri. Untuk pertumbuhan, pH yang sesuai adalah 5.0–6.5 sedangkan bila pH terlalu tinggi
(>7.0) dapat menghambat atau bahkan menghentikan pertumbuhan dan perkembangan kultur secara in vitro (Vogel et al ., 2011).
Dalam penelitian juga menggunakan media sederhana yaitu Potato Dextrose Agar / PDA.  Walaupun  hasil  penelitian  dengan  menggunakan  media  PDA  tidak  menunjukkan perubahan pada jumlah embrio ≥ 32 sel D. anosmum Lindl. namun benih pada media tersebut tidak  mengalami  kematian.  Menurut  Widiastoety  (2001),  di  dalam  media  kultur  jaringan, bahan organik merupakan salah satu faktor penting pada media dikarenakan setiap bahan- bahan organik terdapat sumber-sumber zat pengatur tumbuh, asam nukleat, asam amino serta serta unsur hara tambahan yang diduga diperlukan oleh tanaman baik dalam pertumbuhan maupun perkembangan tanaman tersebut.
Pertumbuhan  dan  perkembangan  embrio  ≥  32  sel  yang  terbentuk  pada  media  MS lebih  baik  secara  kualitatif  jika  dibandingkan  dengan  kedua  media  lain  yakni  PDA  dan Organik.  Hal  ini  dapat  disebabkan  karena  kandungan  unsur  hara  makro  dan  mikro  pada media ini lebih kompleks jika dibandingkan dengan media lainnya. Menurut Chyuam-Yih et al. (2011), media MS adalah media yang kaya akan unsur nitrogen dalam proses pembelahan dan pembesaran sel maupun penyusunan asam amino.

## KESIMPULAN

## Kesimpulan
Dari penelitian ini dapat disimpulkan bahwa : Benih D. anosmum Lindl. pada media PDA, Organik dan MS tidak menunjukan terjadinya perkecambahan. Penambahan air kelapa sebanyak 100 ml/L pada media MS mampu meningkatkan jumlah embrio tahap akhir yang terbentuk (≥ 32 sel).

## DAFTAR RUJUKAN
Chyuam-Yih Ng., Norihan Mohd. Saleh. 2011. In vitro propagation of Paphiopedilum orchid through formation of protocorm-like bodies. Plant Cell Tiss Organ Cult . 105:193– 202.
Husain,  I.,  2012.  Induksi  Protocorm  pada  Eksplan  Bawang  Putih  pada  Media  MS  Minim Hara Makro dan Mikro yang Ditambahkan Air Kelapa. JATT  Vol. 1 No. 1. Hal: 31
Kristina, N. N dan  Sitti, F.S. 2012. Pengaruh Air Kelapa Terhadap Multiplikasi Tunas In Vitro , Produksi Rimpang, Dan Kandungan Xanthorrhizol Temulawak Di Lapangan. Bogor : Jurnal Littri 18 (3) : 125-134.
Lisnandar, D. S., Widya M., Ari P. 2012. Pengaruh pemberian variasi konsentrasi NAA (α- naphthaleneacetic  acid)  dan  2.4  D  terhadap  induksi protocorm  like  bodies (PLB) anggrek macan ( Grammatophyllum scriptum (Lindl.). Surakarta : Bioteknologi 9 (2): 66-72.
Pramanik, D., Rachmawati, F. 2010. Pengaruh Jenis Media Kultur In Vitro dan Jenis eksplan terhadap Morfogenesis Lili Oriental. Cianjur : J. Hort . 20 (2) : 111-119.
Priyatno,  D.  2012. Cara  Kilat  Belajar  Analisis  Data  dengan  SPSS  20 .  Cetakan  Kedua. Yogyakarta : Andi.
Sari,  Y.P.,  H.  Manurung,  Aspiah.  2011.  Pengaruh  Peberian  Air  Kelapa  Terhadap Pertumbuhan Anggrek Kantog Semar ( Paphiopedilum supardii Braem & Loeb) Pada Media Knudson Secara In Vitro. Mulawarman Scientifie 10 (2). ISSN 1412 – 498X
Semiarti,  E.,  Ari,  Indrianto.,  Eko,  A.  S.,  Rizqie,  L.  N.,  Ratih,  R.  2010.  Mikropropagasi Tanaman  Anggrek  Hitam Coelogyne  pandurata Lindl.  Dengan  Penyisipan  Gen Penumbuh  Tunas  Melalui Agrobacterium .  Yogyakarta  :  Seminar  Nasional  Biologi 2010.
Shintiavira., Rahmawati, H., I., Winarto, B. 2014. Aplikasi Modifikasi Media Generik Dalam Produksi  Bibit  Krisan  ( Dendranthema  grandiflora Tzvelev)  Berkualitas  Melalui Kultur In Vitro . Cianjur: J. Hort. 24(3):220-229 .
Tuhuteru,  S.,  Hehanussa,  M.  L.,  Raharjo,  S.H.T.  2012. Pertumbuhan  Dan  Perkembangan Anggrek Dendrobium  anosmum Pada  Media  Kultur In  Vitro Dengan  Beberapa Konsentrasi Air Kelapa. Agrologia , 1(1) : 1-12.
Udomdee,  W.,  Pei-Jung,  W.,  Chen-Yu,  L.,  Shih-Wen,  C.,  Fure-Chyi,  C.  2014.  Effect  of Sucrose Concentration and Seed Maturity on  In  vitro Germination of Dendrobium nobile hybrids. Plant Growth Regul 72 : 249–255.
Vogel,  Ingrid  N.  Andrea,  F.  Macedo.  2011.  Influence  of  IAA,  TDZ,  and  light  quality  on asymbiotic  germination,  protocorm  formation,  and  plantlet  development  of Cyrtopodium glutiniferum Raddi., medicinal orchid. Brazil : Plant Cell Tiss Organ Cult 104:147–155.
Yulia, N.D. 2010. Evaluasi Keragaman Anggrek Kawasan Hutan Alam Jawa Timur Bagian Selatan.  Purwodadi  :  Kementerian  Riset  dan  Teknologi  Republik  Indonesia  dan Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia.