## 1.  Pendahuluan
Dewasa  ini  banyak  penyakit    yang menyerang manusia. Penyebab dari penyakit ini  antara  lain  adalah  ketidakseimbangan antara kadar antioksidan dan radikal bebas  di dalam tubuh. Penyakit   yang sedang marak adalah penyakit-penyakit degeneratif seperti penyakit  jantung,  artritis,  diabetes  dan sebagainya. Salah satu penyakit degeneratif yang  mematikan  adalah  penyakit  kanker, yang biaya pengobatannya mahal   dan tidak ada  jaminan  bagi    penderita  untuk  dapat sembuh secara total, bahkan sewaktu-waktu dapat kambuh kembali.
Penyakit    degeneratif  ini  disebabkan karena antioksidan yang ada di dalam tubuh tidak  mampu  menetralisir  peningkatan konsentrasi    radikal  bebas.  Radikal    bebas adalah molekul   yang pada orbit   terluarnya mempunyai    satu  atau  lebih  elektron  tidak berpasangan, sifatnya sangat labil dan sangat reaktif  sehingga  dapat  menimbulkan kerusakan pada komponen sel seperti DNA, lipid,  protein,  dan  karbohidrat.  Kerusakan tersebut  dapat  menimbulkan  berbagai kelainan  biologis  seperti    arterosklerosis, kanker, diabetes   dan penyakit   degeneratif lainnya (Chyau et al. , 2006).
Adapun  pola  pencegahan  yang  baik adalah  dengan  mengkonsumsi  makanan
sehat    yang  kaya  antioksidan  yang  berasal dari   alam. Didasari   hal tersebut, maka kita perlu  mengeksplorasi    tumbuhan  yang memiliki  kemampuan  sebagai  antioksidan untuk menangkal penyebaran radikal   bebas di  dalam  tubuh.  Salah  satu  tanaman  yang diduga memiliki aktivitas antioksidan adalah pohon ketapang ( Terminalia catappa L.).
Ketapang  merupakan  tumbuhan  dari suku  Combreataceae  yang  kerap  dijadikan pohon peneduh di taman-taman dan tepi jalan karena  mempunyai  daun  lebar  dan  lebat, percabangannya mirip dengan payung yang tersusun. Sementara itu, daunnya juga telah diketahui  mengandung  total  122  senyawa tanin yang dapat dihidrolisis (van Valkenburg & Waluyo, 1991). Selain itu, daun ketapang mengandung flaavonoid dan terpenoid serta steroid  (Dewi et  al. ,  2004).  Menurut penelitian,  punikalagin dan punikalin adalah komponen tanin yang paling melimpah pada daun ketapang dan memiliki efek antioksidan yang terkuat dari kelompok tanin (Lin et al. , 2001).  Tanin  merupakan  senyawa  fenolik yang  mempunyai  kelarutan  yang  baik  pada pelarut    polar  seperti    air.  Oleh  karena  itu, pada  penelitian  ini    yang  diuji  aktivitas antioksidan  dan  ditetapkan  kadar  fenolat totalnya  adalah  fraksi  air  daun  ketapang ( Terminalia catappa L.) sehingga senyawa-
JURNAL FARMASI SAINS DAN KOMUNITAS, November 2012, hlm. 91-97
ISSN : 1693-5683
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN PENETAPAN KADAR FENOLAT TOTAL FRAKSI AIR DAUN KETAPANG ( Terminalia catappa L.) DENGAN METODE DPPH ( 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl ) DAN METODE

## FOLIN-CIOCALTEU

## ALDO SAHALA, C.J. SOEGIHARDJO

## Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta
Abstract: The aqueous fraction of methanolic extract of Ketapang (Terminalia catappa L. ). was investigated for its DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) free radical scavenger activity and the total   amount   of phenolic using Folin-Ciocalteu method. It was found that the aqueous fraction  of  methanolic  extract  of  Ketapang  tested  showed    significant  DPPH  free  radical- scavenging with IC  value  34,071 ± 0,424 µg/mL. The total phenolic amount was 5.429 ± 0.110 50 mg equivalent mass value of gallic acid per gram aqueous fraction of the methanolic extract of ketapang leaves.
Keywords: aqueous fraction, methanolic extract, Terminalia catappa, DPPH, total phenolic.
senyawa fenolik tersebut larut dalam pelarut yang  digunakan.  Untuk  mengetahui aktivitas    antioksidan  dari    daun  ketapang dipilih  metode Diphenyl  Picryl  Hydrazyl (DPPH).  Metode  DPPH  memberikan informasi    reaktivitas    senyawa  yang  diuji dengan  suatu  radikal  mantap.  DPPH memberikan  serapan  kuat  pada  panjang gelombang  517  nm  dengan  warna  violet g e l a p .   P e n a n g k a p a n   r a d i k a l   b e b a s menyebabkan  elektron  berpasangan  yang menyebabkan  pemucatan  warna  ungu  dari DPPH  sebanding  dengan  jumlah  elektron yang  diambil  (Sunarni,  2005).  Metode  ini sederhana  untuk  dikerjakan,  mudah,  cepat dan peka. Aktivitas   antioksidan dari   suatu senyawa dapat   diketahui   dari   penurunan absorbansi  DPPH  yang  terjadi  akibat penambahan senyawa tersebut (Zuhra et al. , 2008).
Tanaman  dengan  kandungan  fenolat yang  tinggi    diketahui    memiliki  aktivitas antioksidan  yang  kuat    juga  (Lee et    al. , 2004). Oleh karena itu, dalam penelitian ini juga  dilakukan  penetapan  kadar  fenolat total. Metode yang digunakan adalah metode Folin-Ciocalteu. Metode ini didasarkan pada kekuatan  mereduksi    dari    gugus  hidroksi fenolik.  Semua  senyawa  fenolik  termasuk fenol  sederhana  dapat    bereaksi    dengan reagen  Folin-Ciocalteu,  meskipun  bukan merupakan senyawa antiradikal yang efektif (Huang et al. , 2005).
Penelitian  ini  diharapkan  dapat  memberi informasi  bagi  penelitian  lebih  lanjut maupun masyarakat  luas  mengenai potensi daun  ketapang  sebagai  salah  satu  sumber antioksidan alami.

## 2. Bahan dan Metode
Bahan  tanaman  yang  digunakan  adalah daun ketapang merupakan daun dari tanaman ketapang  yang  diambil  dari  Dusun Manggung,  Kelurahan  Kepuhharjo, Kecamatan  Cangkringan,  Kabupaten Sleman, D.I.Yogyakarta.
Bahan kimia farmasetis berupa aquadest, bahan  kimia  pro  analitik  (Merck),  yaitu berupa metanol, n-butanol, asam asetat dan natrium karbonat. Bahan kualitas pro analisis
(Sigma)  berupa  DPPH  ( 2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl ),  rutin,  asam  galat,  dan pereaksi  Folin-Ciocalteu.  Bahan  kualitas teknis  (Brataco Chemica), yaitu wash benzin dan etil asetat.
Alat  yang digunakan dalam penelitian ini adalah:   spektrofotometer UV- Vis   (Perkin Elmer Lamda 20), vacuum rotary evaporator (Buchi), waterbath (Labo-tech,  Heraeus), neraca analitik (Scaltec SBC   22, BP 160P), blender,  oven,  vortex (Junke  &  Kunkel), tabung  reaksi    bertutup  (Schott,  Germany), seperangkat  alat-alat  untuk  KLT  dan  alat gelas  yang  lazim  (Pyrex,  Germany  dan Iwaki).

## 2.1. Tata Cara Penelitian

## 2.1.1. Determinasi tanaman
Determinasi tanaman ketapang dilakukan di Laboratorium  Farmakognosi-  Fitokimia, Fakultas    Farmasi    USD  menurut    buku “Flora of Java” (Backer and Bakhuizen van den Brink, 1968).

## 2.1.2. Pengumpulan bahan
Daun  yang  digunakan  adalah  daun  yang sudah  mencapai  besar  yang  maksimal, diambil  daun  yang  sudah  dewasa  yang bewarna hijau bukan yang masih muda atau yang  sudah  tua.  Daun  dipetik  pada  waktu pagi hari sekitar pukul delapan pagi.

## 2.1.3.  Pembuatan  ekstrak  metanolik  daun ketapang
Sebanyak  1  kg  daun  ketapang  segar, dibersihkan,  kemudian  dihaluskan  dengan blender Ketika  dihaluskan,  daun  tersebut ditambahkan  sedikit  cairan  penyari (metanol).  Simplisia  yang  telah  dihaluskan kemudian dimaserasi dengan pelarut metanol pada suhu ruangan selama dua hari, sambil sekali-sekali diaduk. Filtrat diperoleh dengan cara disaring dengan corong Buchner. Ampas diremaserasi lagi dengan metanol selama dua hari. Disaring, filtrat dicampur dengan filtrat yang lebih dahulu diperoleh. Seluruh filtrat diuapkan  penyarinya  hingga  kental  dengan evaporator.  Bobot  ekstrak  metanol    yang didapat    adalah  21,6841  g  dan  rendemen yang diperoleh sebesar ≈ 2,17 %.
ALDO SAHALA, C.J. SOEGIHARDJO
Jurnal Farmasi Sains dan Komunitas 92

## 2.1.4. Pembuatan fraksi air daun ketapang
Ekstrak  metanol  daun  ketapang  yang didapat  ditambah  300  mL  air  hangat    dan diekstraksi    cair-cair  menggunakan washbenzin dengan perbandingan larutan 1:1 (v/v)  dengan  corong  pisah,  lapisan washbenzin dipisahkan,  perlakuan  ini diulang  sampai  lapisan washbenzin hampir tidak  bewarna.  Residu  berair  diekstraksi k e m b a l i   d e n g a n   e t i l a s e t a t   d e n g a n perbandingan  1:1  dengan  corong  pisah, lapisan  etilasetat  dipisahkan,  perlakuan  ini diulangi  hingga  lapisan  etilasetat  hampir tidak  bewarna.  Residu  berair  ini  diuapkan airnya  dengan  bantuan waterbath dan dihembus  dengan  kipas  angin.  Hasil  fraksi tersebut  digunakan  analisis  lebih  lanjut. Bobot  fraksi  air  yang  didapatkan  sebesar 9,9479 g dan rendemen sebesar ≈ 0,995 %.

## 2.1.5. Uji pendahuluan antioksidan
Sebanyak 1 mL larutan DPPH dimasukan ke  dalam  masing-masing  tabung  reaksi. Ditambahkan  masing-masing  dengan  1  mL metanol  p.a,  larutan  pembanding  rutin  7,5 μ g/mL  dan  larutan  uji  60,0  µg/mL. Selanjutnya,  larutan  tersebut  ditambah dengan 3 mL metanol p.a. Larutan tersebut kemudian di vortex selama 30 detik. Setelah 30 menit, amati warna pada larutan tersebut.

## 2.1.6. Uji pendahuluan fenolik
Sejumlah 0,5 mL larutan uji 1000,0 µg/mL dan  larutan  pembanding  asam  galat  150,0 µg/mL  ditambahkan  2,5  mL  pereaksi  fenol Folin-Ciocalteu  yang  telah  diencerkan dengan  akuades  (1:1  v/v)  ke  dalam  tabung reaksi. Diamkan selama 2 menit. Tambahkan 7,5  mL  larutan  natrium  karbonat  1,9  M. Kemudian amati warna larutan tersebut.

## 2.1.7. Penentuan aktivitas antioksidan
Pembuatan  larutan  DPPH.  Sejumlah DPPH  dilarutkan  ke  dalam  metanol  p.a sehingga  diperoleh  larutan  DPPH  dengan konsentrasi 0,4 mM. Larutan tersebut ditutup dengan alumunium  foil dan  harus  selalu dibuat baru.
Pembuatan  larutan  stok  rutin.  Sebanyak 2,5  mg  rutin  dicampurkan  dengan  metanol
p.a sampai 10,0 mL.
Pembuatan larutan standar rutin. Diambil sebanyak 0,5 mL larutan stok rutin, ditambah metanol p.a sampai 10,0 mL menjadi larutan intermediet.  Kemudian  diambil  sebanyak 0,5;  1,0;    1,5;  2,0;    dan  2,5  mL  larutan intermediet,  lalu  ditambahkan  metanol  p.a sampai    10,0  mL,  sehingga  diperoleh konsentrasi larutan standar rutin sebesar 2,5; 5,0; 7,5; 10,0; dan 12,5 µg/mL.
Pembuatan larutan uji. Sejumlah 25,0 mg fraksi  air  ditimbang  dan  ditambah  metanol p.a  sampai  25,0  mL.  Diambil  sebanyak  1,0 mL larutan tersebut, kemudian ditambahkan metanol    p.a  sampai    10,0  mL  menjadi larutan intermediet. Kemudian diambil 2,0 ; 3,0  ;  4,0  ;  5,0  ;  6,0  mL  sehingga  diperoleh konsentrasi larutan uji sebesar 20; 30; 40; 50; 60 µg/mL.
Penentuan  panjang  gelombang  serapan maksimum dan OT ( operating time ). Pada 3 buah labu ukur 10 mL, dimasukan masing- masing  1,0;  2,0;  3,0  mL  laru tan  DPPH . Ditambahkan  larutan  tersebut  dengan metanol  p.a  hingga  tanda  batas.  Larutan tersebut kemudian di vortex selama 30 detik. Didiamkan  selama  OT.  Lalu  dilakukan scanning panjang  gelombang  serapan maksimum dengan spektrofotometer visibel pada  panjang  gelombang  400-6 00  nm. Kemudian  sebanyak  1  mL  larutan  DPPH dimasukkan  ke  dalam  masing-masing  tiga labu  ukur  10  mL,  ditambahkan  masing- masing  dengan  1  mL  larutan  pembanding rutin 2,5; 7,5 dan 12,5 µg/mL. Selanjutnya, larutan  tersebut  ditambahkan  dengan metanol    p.a  hingga  tanda  batas.  Larutan tersebut kemudian di vortex selama 30 detik. Setelah  itu,    dibaca  absorbansinya  dengan spektrofotometer  visibel  pada  panjang gelombang  517  nm  selama  satu  jam. Dilakukan  demikian  juga  untuk  larutan  uji 20, 40 dan 60 µg/mL.

## 2.1.8. Penentuan aktivitas antioksidan fraksi air ekstrak metanolik daun ketapang
Pengukuran  absorbansi  larutan  DPPH (kontrol) . Pada labu ukur 10 mL, dimasukan sebanyak 2 mL larutan DPPH. Ditambahkan ke  dalam  larutan  tersebut    dengan  metanol
ALDO SAHALA, C.J. SOEGIHARDJO 93
p.a  hingga  tanda  batas.  Kemudian  larutan tersebut  dibaca absorbansinya pada saat OT dan  panjang  gelombang  maksimum. Pengerjaan  tersebut  diulang  sebanyak  lima kali.
P e n g u k u r a n   a b s o r b a n s i   l a r u t a n pembanding dan larutan uji . Sebanyak 1 mL larutan DPPH dimasukkan ke dalam tabung reaksi bertutup kemudian ditambah dengan 1 mL  larutan  pembanding  dan  uji  pada berbagai    seri    konsentrasi    telah  dibuat. Selanjutnya,  larutan  tersebut    ditambah dengan  metanol  p.a  hingga  tanda  batas. Larutan  tersebut  kemudian  divortex  selama 30  detik  dan  diamkan  selama  OT.  Larutan d i b a c a   a b s o r b a n s i n y a   d e n g a n spektrofotometer  visibel    pada  panjang gelombang  maksimum  hasil    optimasi. Pengujian  dilakukan  dengan  lima  kali replikasi.

## 2.1.9.  Penentuan  kandungan  fenolat  total fraksi  air  ekstrak  metanolik  daun ketapang
Penyiapan larutan standar. Dibuat  larutan asam  galat    dengan  konsetrasi  500  µg/mL dalam akuades – metanol p.a (1:1). Diambil sebanyak  0,5;  1,0;  1,5;    2,0  dan  2,5  mL larutan  tersebut,  kemudian  ditambahkan akuades – metanol p.a (1:1) sampai 10,0 mL, sehingga diperoleh konsentrasi larutan baku asam galat sebesar 25; 50; 75; 100; dan 125 µg/mL.
Penyiapan  larutan  uji.  Sebanyak  10  mg fraksi  air  ditimbang,  lalu  ditambahkan metanol  p.a  sampai  diperoleh  konsentrasi larutan uji sebesar 1000 µg/mL.
Penentuan waktu Operating Time ( OT ) . Sebanyak 0,5 mL larutan asam galat 25; 75; dan  125  µg/mL  ditambahkan  dengan  5  mL r eag en   F o lin - C io calteu   y an g   telah diencerkan  dengan  air  (1:1  v/v).  Larutan selanjutnya  ditambahkan  dengan  4,0  mL natrium  karbonat  1  M.  Setelah  itu  dibaca absorbansinya  dengan  spektrofotometer visibel  pada  panjang  gelombang  750  nm selama satu jam.
Penentuan  panjang  gelombang  serapan maksimum. Sebanyak 0,5 mL larutan asam galat 25;   75; dan 125 µg/mL ditambahkan
dengan  5  mL.  reagen  Folin-Ciocalteu  yang telah  diencerkan  dengan  air  (1:1  v/v). Selanjutnya, larutan ditambah dengan 4,0 mL natrium  karbonat  1  M.  Didiamkan  selama OT , absorbansinya dibaca pada λ maksimum pada scanning pada panjang gelombang pada kisaran 600 – 800 nm.
Pembuatan  kurva  baku  asam  galat. Sebanyak 0,5 mL larutan asam galat 25; 50, 75, 100 dan 125 µg/mL ditambah dengan 5 mL  reagen  Folin-Ciocalteu  yang  telah diencerkan dengan air (1:1 v/v). Selanjutnya, larutan  ditambah  dengan  4,0  mL  larutan natrium  karbonat  1  M.  Setelah OT , absorbansinya  dibaca  pada λ maksimum terhadap blanko yang terdiri atas akuades – metanol    p.a  (1:1),  reagen  Folin-Ciocalteu dan  larutan  natrium  karbonat  1  M. Pengerjaan  ini  diulangi  sebanyak  lima  kali replikasi.
Pengukuran  kandungan  fenolik  total larutan uji. Diambil 0,5 mL larutan uji 1000 µg/mL, lalu masing-masing dimasukkan ke dalam  labu  takar  10,0  mL  dan  dilanjutkan sebagaimana  perlakuan  pada  pembuatan kurva  baku  asam  galat.  Kandungan  fenolik total    dinyatakan  sebagai    gram  ekivalen asam galat  dalam setiap gram berat fraksi air ekstrak metanol   daun ketapang. Pengerjaan ini diulangi sebanyak lima kali replikasi.

## 3. Hasil dan Pembahasan
3.1. Hasil uji pendahuluan
Uji pendahuluan antioksidan (Gambar 1) terlihat bahwa larutan sampel dalam tabung A  memucatkan  warna  ungu  DPPH  mirip warna  larutan  pada  tabung  C  (kontrol positif).
Uji pendahuluan fenolik total (Gambar 2) terlihat  larutan  sampel  (tabung  A) memberikan warna yang sama intensitasnya dengan larutan kontrol positif (tabung B).

## 3.2.  Hasil  optimasi  metode  uji  aktivitas antioksidan
Penetapan  panjang  gelombang  maksimum untuk  penetapan  daya  antioksidan  tercantum pada Gambar 3, sedangkan penetapan panjang gelombang maksimum untuk penetapan kadar fenolat total terantum pada Gambar 4.
Panjang  gelombang  maksimum  DPPH didapatkan  515,8  nm,  sedangkan  menurut pustaka sebesar 517 nm; menurut Farmakope Indonesia  Edisi  IV  ternyata  panjang gelombang yang diperbolehkan simpangannya tidak melebihi 2 nm.
Panjang  gelombang  maksimum  pada penetapan kadar fenolat total, yaitu senyawa bewarna biru sebesar 750 nm. Hal ini sesuai dengan  pustaka,  yaitu  senyawa  hasil  reaksi senyawa  fenolat  dan  pereaksi  Folin- Ciocalteu 750 nm (Zhang, et al. ,2006).
Penentuan operating  time (OT)  untuk penetapan antioksidan diperoleh bahwa pada menit 30 sampai 60 menunjukkan absorbansi yang  konstan,  sehingga  ditetapkan pengukuran  absorbansi  dilakukan  mulai  30 menit setelah reaksi terjadi.
Penentuan operating  time (OT)  untuk penetapan  kadar  fenolat  total  diperoleh b a h w a   p a d a   m e n i t   1 0   s a m p a i   3 0 menunjukkan  absorbansi  yang  konstan, sehingga ditetapkan pengukuran absorbansi dilakukan mulai 10 sampai 30 menit setelah reaksi terjadi.
Validasi metode daya antioksidan. Dalam penelitian  ini  juga  dilakukan  pengujian validasi kedua metode yang digunakan, yaitu linearitas,  akurasi,  presisi,  spesifitas  dan hasilnya semuanya memenuhi persyaratan.

## 3.3. Hasil perhitungan IC  pembanding rutin
50 dan fraksi air ekstrak metanolik
Hasil  perhitungan  IC   senyawa 5 0 pembanding rutin dan IC  fraksi air ekstrak 50 metanolik  daun  ketapang  diperoleh  dari perhitungan  melalui  kurva  regresi  linier senyawa pembanding rutin (Gambar 5) dan fraksi  air  ekstrak  metanolik  daun  ketapang (Gambar  6),  sedangkan  hasil  IC   dan  daya 50 antioksidannya tercantum pada Tabel 1 dan Tabel 2.
Potensi  aktivitas  antiksidan  fraksi  air ekstrak  metanolik  daun  ketapang  termasuk
Gambar 2. Hasil uji pendahuluan fenolik total: A) Pereaksi Folin Ciocalteu ditambah fraksi air ekstrak metanolik daun ketapang; B) Pereaksi
Folin Ciocalteu ditambah asam galat; dan C) Larutan blanko Gambar 4. Penetapan λ maks asam galat dalam tiga seri kadar ditambah pereaksi Folin- Ciocalteu
ALDO SAHALA, C.J. SOEGIHARDJO 95
Jurnal Farmasi Sains dan Komunitas
Gambar 3. Spektra UV λ maks  DPPH pada tiga seri konsentrasi
Gambar 1. Hasil uji pendahuluan aktivitas antioksidan: A) Larutan DPPH ditambah fraksi air ekstrak metanolik daun ketapang; B) Larutan DPPH (kontrol negatif) ; dan C) Larutan DPPH ditambah larutan rutin (kontrol positif)
kategori  sangat  kuat,  yaitu  IC sebesar 50 (34,071±0,424)  µg/mL.  Dalam  rangka eksplorasi tanaman yang mempunyai potensi antioksidan, ternyata daun ketapang  ini lebih lemah bila dibandingkan dengan IC  fraksi 50 etilasetat  ekstrak  etanolik  daun  selasih ( O c i m u m   s a n c t u m ) ,   y a i t u   s e b e s a r (26,814±0,281)  µg/mL  (Widodo  & Soegihardjo, 2012).
3.4. Hasil Penetapan Kadar Fenolik Total Hasil  penetapan  kadar  fenolat  total dilakukan  dengan  metode  Folin-Ciocalteu dengan  senyawa  pembanding  asam  galat. Dasar dari metode ini adalah pada kekuatan mereduksi  pada  gugus  hidroksil  senyawa fenol. Adanya gugus hidroksil pada senyawa fenol  dapat  mereduksi  senyawa  kompleks fosfomolibdat  fosfowolframat  dalam pereaksi  Folin-Ciocalteu  menjadi  senyawa kompleks  yang  bewarna  biru.  Penambahan n a t r i u m   k a r b o n a t   b e r t u j u a n   u n t u k menjadikan  gugus  hidroksi  pada  fenol menjadi ion fenolat, yang mudah dioksidasi oleh senyawa kompleks asam fosfomolibdat fosfowolframat.  Dalam  metode  ini digunakan  asam  galat  sebagai  senyawa pembanding  untuk  menyatakan  ekivalensi senyawa  fenolat  dalam  sampel  terhadap asam  galat,  yaitu  miligram  ekivalen  asam galat dalam setiap gram sampel. Asam dipilih sebagai senyawa pembanding dengan alasan tersedia  di  alam,  mudah  diisolasi,  serta memiliki stabilitas yang cukup mantap.
Hasil penetapan kadar fenolat total fraksi air  ekstrak  metanolik  daun  ketapang tercantum  pada  Tabel  3.  Hasil  yang tercantum dalam tabel ini, diperoleh dari data penetapan  absorbansi    deretan  konsentrasi asam galat, yaitu sebanyak lima replikasi dan dipilih  yang  terbaik  (yang  memiliki  nilai  r tertinggi), yang memiliki kurva regresi linier
Bahan uji IC 50 (µg/mL)
Replikasi Rerata IC 50 (µg/mL) SD CV (%) 1 2 3 4 5 Rutin 5,775 5,782 5,796 5,832 5,808 5,798 0,023 0,390 Fraksi air 33,932 34,493 34,486 33,954 33,490 34,071 0,424 1,246
Gambar 5. Kurva persamaan regresi linier aktivitas antioksidan rutin
Gambar 6. Kurva persamaan regresi linier aktivitas antioksidan fraksi air ekstrak metanolik daun ketapang
Tabel 1. Hasil perhitungan IC 50 rutin dan fraksi air ekstrak metanolik daun ketapang
Tabel 2. Potensi aktivitas antioksidan senyawa pembanding rutin dan fraksi air ekstrak metanolik daun ketapang (Ariyanto cit. Nusarini,2007)
Keterangan: SD = Standard Deviation;  CV=Coefficient of Variant
ALDO SAHALA, C.J. SOEGIHARDJO
dengan  persamaan  y  =  0,0048x  +  0,1311 (r  =0,9996).  Dari  persamaan  ini,  diperoleh rerata  kandungan  fenolat  total  (5,429  ± 0,110)  mg  ekivalen  asam  galat  per  gram fraksi air ekstrak metanolik daun ketapang, hasil  ini  lebih  rendah  dari  pada  kandungan fenolat  total  fraksi  etilasetat  daun  selasih ( Ocimum  sanctum ),  yaitu  sebesar  9,422  ± 0,783)  mg  ekivalen  asam  galat  per  gram fraksi etilasetat ekstrak etanolik daun selasih (Widodo & Soegihardjo, 2012).

## 4. Kesimpulan dan Saran

## 4.1. Kesimpulan
Potensi  antioksidan  fraksi  air  ekstrak metanolik  daun  ketapang  sebesar  dengan metode  DPPH  dinyatakan  sebagai  IC 50 sebesar  (34,071  ±  0,424)  µg/mL  dan tergolong  memiliki  daya  antioksidan  yang sangat kuat.
Kandungan fenolat total fraksi air ekstrak metanolik  daun  ketapang  sebesar  (5,429  ± 0,110)  mg  ekivalen  asam  galat  per  gram fraksi air ekstrak metanolik daun ketapang.

## 4.2. Saran
Perlu  dilakukan  pemeriksaan  parameter ekstrak  metanolik  daun  ketapang,  perlu dilakukan  uji  korelasi  antara  potensi antioksidan  dengan  kadar  fenolat  total ekstrak metanolik daun ketapang, dan perlu dilakukan  penelitian  serupa  dengan menggunakan simplisia daun ketapang.

## Daftar Pustaka
Backer,.A., and van den Brink,R.C.B., 1968, Flora ofr Java ( Spermatophytes  Only ),  Vol.I,  N.V.P. Noordhoff-Groningen-TheNetherlands.
Chyau,C.C.,  Ko,P.T.,  Mau,J.L.,  2006,  Antioxidant Properties from Terminalia catappa Leaves, LWT, 39, 1099-1011.
Dewi,R.,  Suganda,A.G.,  Ruslan,K.,  2004, Pemeriksaan  Kandungan  Flavonoid  dan  Asam Fenolat  Daun  Gugur  Ketapang  ( Terminalia catappa L.), Skripsi ,  Departemen  Farmasi  ITB, Bandung.
Huang,D.,  Ou,B.,  and  Prior,R.L.,  2005,  The Chemistry Behind Antioxidant Capacity Assays, J. Agric. Food Chem., 53, 1851- 1856.
Lee, J., N. Koo and D.B. Min, 2004. Comprehensive review in food science and food safety. Inst. Food Technol ., 3: 21-33.
Lin,C.C.,  Hsu,Y.F.,  Lin,T.C.,  2001, Antioxidant  and free  radical  scavenging  effects  of  the  tannins  of Terminalia  catappa leaves, Anticancer  Res. , 21(1A),237-243.
Sunarni,T.,  2005,  Aktivitas  Antioksidan  Penangkap Radikal  Bebas  Beberapa  Kecambah  dari  Biji Tanaman Familia Papilionaceae, MFI, 2 (2), 53- 61.
Van  Valkenburg,J.L.C.H.,  and  Waluyo,E.B.,  1991, Terminalia catappa L. , Record from Proseabase, Lemmens,R.H.M.J.  and  Wulijarni-Soetjipto,N. (Editors) PROSEA Foundation, Bogor, Indonesia, http://www.proseanet.org .  Diakses  24 Agustus 2011.
Widodo,Y.R.  dan  Soegihardjo,C.J.,  2012,  Uji Aktivitas Antioksidan Menggunakan Radikal 1,1- Difenil-2-Pikrilhidrazil  (DPPH)  dan  Penetapan Kandungan Fenolik Total Fraksi Etilasetat Ekstrak Etanolik  Daun  Selasih  ( Ocimum  sanctum L.), J.
Farm. Sains. Komun. , 9 (1), 43-51.
Zhang,Q.,  Zhang,J.,  Shen,J.,  Silva,A.,  Dennis,D.A., and  Barrow,C.J.,  2006,  A  simple  96-Well Microplate  Method  for  Estimation  of  Total Polyphenols  Content  in  Seaweeds,  J.  Appl. Phycol., 18, 445-450.
Zuhra,C.F.,  Tarigan,J.  Br.,  Sihotang,H.,  2008, Aktivitas  Antioksidan  Senyawa  Flavonoid  dari Daun  Katuk  ( Sauropus  androgynus (L.)  Merr.  , USU Press, Medan.
Replikasi Konsentrasi Absorbansi
Kadar fenolat total
(µg/mL) Kandungan fenolat
total (mg ekivalen asam galat per gram fraksi air) Rerata kandungan fenolat total (mg ekivalen asam galat per gram
fraksi air) SD 1 1030 0,670 112,271
5,450 5,49 0,110 2 1010 0,669 112,063 5,548 3 1040 0,665 111,229 5,348 4 1030 0,654 108,938 5,288 5 1020 0,677 112,479 5,514 Tabel 3. Hasil penetapan kadar fenolat total fraksi air ekstrak metanolik daun ketapang ALDO SAHALA, C.J. SOEGIHARDJO 97
Jurnal Farmasi Sains dan Komunitas