## ANTIOXIDANT ACTIVITY TEST OF ETHANOL OF SPONGE Callyspongia aerizusa FROM MANTEHAGE ISLANDS NORTH MINAHASA REGENCY

## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL SPONS Callyspongia aerizusa DARI PULAU MANTEHAGE KABUPATEN MINAHASA UTARA
Puput Soleman 1) , Adithya Yudistira 1) , Meilani Jayanti 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT, 95115
* puputsoleman23@gmail.com

## ABSTRACT
Sponges are one of the biota components that make up coral reefs that have bioactive potential, which has not been widely utilized. Callyspongia aerizusa is a sponge that has a compound with high activity and has a porous body surface structure. Antioxidants are compounds that can inhibit free radicals in the body, and inhibit oxidation of body cells, thereby preventing or reducing cell damage. This study aims to determine the antioxidant activity of the ethanol extracts of Sponges Callyspongia aerizusa from the waters of Mantehage Island. The Sponge Callyspongia aerizusa was extracted using the maceration method with ethanol as the solvent. Antioxidant activity testing was carried out using the DPPH (1,1- diphenyl-2-picrylhydrazyl) method with a concentration of 0.5 mg / L, 0.6 mg / L, and 0.7 mg / L which were measured using a UV-Vis spectrophotometer at the wavelength 517 nm. The results showed that the  ethanol  extracts  of  Sponge  Callyspongia  aerizusa  was  proven  to  have  antioxidant  activity.  The highest antioxidant content was found at the concentration of 0.7 mg / L with an antioxidant activity of 58.40%.
Keywords: Antioxidant, Callyspongia aerizusa, DPPH, Mantehage

## ABSTRAK
Spons  merupakan  salah  satu  komponen  biota  penyusun  terumbu  karang  yang  mempunyai potensi  bioaktif  yang  belum  banyak  dimanfaatkan. Callyspongia  aerizusa ialah  salah  satu spons yang memiliki senyawa dengan aktivitas tinggi dan memiliki struktur permukaan tubuh yang berpori – pori. Antioksidan merupakan senyawa yang dapat menghambat radikal bebas dalam tubuh, serta menghambat terjadinya oksidasi pada sel tubuh, sehingga dapat mencegah atau mengurangi terjadinya kerusakan sel. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol Spons Callyspongia aerizusa dari perairan Pulau Mantehage. Spons Callyspongia aerizusa diekstraksi menggunakan metode maserasi dengan etanol sebagai pelarut.  Pengujian  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  metode  DPPH  ( 1,1-difenil-2- pikrilhidrazil )  dengan  konsentrasi  0,5  mg/L,  0,6  mg/L,  dan    0,7  mg/L  yang  diukur menggunakan  Spektrofotometer UV-Vis pada  panjang  gelombang  517  nm.  Hasil  penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol Spons Callyspongia aerizusa terbukti memiliki aktivitas antioksidan. Kadar antioksidan tertinggi terdapat pada konsentrasi 0,7 mg/L dengan aktivitas antioksidan sebesar 58,40%.
Kata Kunci: Antioksidan, Spons Callyspongia aerizusa , DPPH, Mantehage

## PENDAHULUAN
Pergeseran pola hidup masyarakat dari pola hidup tradisional menjadi pola hidup yang praktis  dan  instan,  khususnya  pada  pemilihan makanan,  memiliki  dampak  negatif  bagi kesehatan.  Makanan  cepat  saji dengan pemanasan tinggi dan pembakaran merupakan pilihan dominan yang dapat memicu terbentuknya senyawa radikal bebas (Poumorad dkk, 2006). Radikal bebas merupakan  suatu  senyawa  atau  molekul  yang memiliki  satu  atau  lebih  elektron  tidak berpasangan  menyebabkan  senyawa  tersebut sangat  reaktif  mencari  pasangan,  dengan mengikat  elektron  molekul  yang  berada  di sekitarnya.  Radikal  bebas  dapat  berasal  dari dalam  tubuh  sebagai  bagian  dari  hasil  proses metabolisme.  Sedangkan  radikal  bebas  yang bersumber  dari  luar  tubuh  dapat  disebabkan oleh  faktor  lingkungan,  termasuk  kebiasaan merokok, penggunaan pestisida pada makanan, polusi dan radiasi (Mbaoji dkk, 2016).
Antioksidan merupakan senyawa yang dapat menghambat radikal bebas dalam tubuh, serta menghambat terjadinya oksidasi pada sel tubuh, sehingga dapat mencegah atau
mengurangi
terjadinya kerusakan sel. Penggunaan senyawa antioksidan berkembang dengan  pesat,  baik  untuk  makanan  maupun pengobatan.  Penggunaannya  sebagai  obat semakin  meningkat  dengan  bertambahnya pengetahuan  tentang  aktivitas  radikal  bebas terhadap  beberapa  penyakit  degenerative seperti  penyakit  jantung,  diabetes,  kanker, inflamasi  jaringan,  kelainan  imunitas  dan penuaan dini (Ardiansyah, 2007).
Spons merupakan salah satu komponen biota penyusun terumbu karang yang mempunyai  potensi  bioaktif  yang  belum banyak dimanfaatkan. Hewan laut ini mengandung  senyawa  aktif  yang  persentase keaktifannya lebih besar dibandingkan dengan senyawa-senyawa yang dihasilkan oleh tumbuhan darat (Suparno, 2005). Callyspongia aerizusa merupakan salah satu jenis spons yang banyak tumbuh di perairan wilayah Indonesia. Callyspongia  aerizusa ialah  salah  satu  spons yang memiliki senyawa dengan aktivitas tinggi dan  memiliki  struktur  permukaan  tubuh  yang berpori  –  pori  sehingga  dimasukkan  kedalam filum  porifera  (Sari  dkk,  2014).  Spons  ini mengandung  beberapa  senyawa  metabolit sekunder seperti alkaloid 3-alkilpiridin (Voogd dkk, 2005), akartepin yang merupakan inhibitor
dari fosfatidilinositol (Fukami dkk, 1997), dan meroterpenoid  sulfat  (Gray  dkk,  2006). Berdasarkan  penelitian  Hanani  dkk  (2005) bahwa  ekstrak  spons Callyspongia  aerizusa mempunyai aktivitas antioksidan dan senyawa yang  berkhasiat  sebagai  antioksidan  termasuk golongan alkaloid.
Berdasarkan  uraian  tersebut,  peneliti bermaksud untuk menguji aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol spons Callyspongia aerizusa yang  diambil  dari  perairan  Pulau  Mantehage dengan  menggunakan  metode  DPPH (1,1- difenil-2-pikrilhidrazil) .

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan November  2020  sampai  Januari  2021  di Laboratorium  Farmasi  Lanjut  Program  Studi Farmasi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam  dan  Laboratorium  Hama dan  Penyakit  Tumbuhan,  Fakultas  Pertanian, Universitas Sam Ratulangi.

## Alat dan Bahan Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian  ini  ialah  alat-alat  gelas  (Iwaki  ST Pyrex®),  timbangan  digital  (AE  Adam®), spektrofotometer UV-Vis , aluminium  foil , mikro  pipet,  vortex  (Mixer  Hwashin)  dan rotary evaporator .
Bahan Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  spons Callyspongia aerizusa ,  etanol  95%,  DPPH  ( 1,1-difenil-2- pikrilhidrazil ),  dan  serbuk  vitamin  C  (p.a) sebagai pembanding.

## Prosedur Kerja Pengambilan Sampel
Sampel  ini  diambil  di  perairan  Pulau Mantehage  menggunakan  alat  bantu  (Masker dan Snorkel). Sebelum diambil, sampel di foto menggunakan  kamera  bawah  laut,  setelah diambil  dimasukkan  dalam  kantong  plastik jepit yang sudah disiapkan dan disimpan dalam kotak pendingin lalu dibawah ke Laboratorium Farmasi  Lanjut,  Program  Studi  Farmasi, Universitas Sam Ratulangi.

## Preparasi Sampel
Spons Callyspongia  aerizusa yang sudah  diambil,  dicuci  kembali  dan  dipotong- potong  kecil  lalu  sebanyak  450  g  sampel dimasukkan  kedalam  wadah  botol,  sampel dimaserasi  dengan  etanol  95%  sebanyak  200 mL.

## Ekstraksi
Sampel  spons Callyspongia  aerizusa sebanyak  450  g  dimaserasi  dengan  pelarut etanol  95%  sebanyak  200  mL  dengan  3  kali pengulangan selama 24 jam. Sampel kemudian disaring untuk mendapatkan filtrat. Hasil yang didapatkan  kemudian  diuapkan  menggunakan evaporator  sehingga  menghasilkan  ekstrak kasar dari sampel spons Callyspongia aerizusa .
Pembuatan Larutan Ekstrak Spons

## Callyspongia aerizusa
Sebanyak  100  mg  ekstrak  spons Callyspongia  aerizusa dilarutkan  dalam  100 mL  etanol  95%  dengan  masing-masing konsentrasi 0,5, 0,6 dan 0,7 mg/L. Rumus yang dipakai yaitu:
Masing-masing  hasil  yang  didapatkan dari  hasil 𝑉 1 dipipet  dan  ditambahkan  etanol 95%  hingga  mencapai  tanda  batas  10  mL, kemudian dipindahkan ke dalam tabung reaksi dan  ditutup  dengan  menggunakan aluminium foil untuk digunakan pada perlakuan berikutnya.

## Pembuatan Larutan DPPH
Sebanyak  4  mg  DPPH  ditimbang  dan dilarutkan dalam etanol 95% sebanyak 100 mL dalam  labu  ukur.  Selanjutnya  larutan  yang dibuat  untuk  uji  aktivitas  antioksidan  yaitu ekstrak  etanol  spons Callyspongia  aerizusa di pipet  sebanyak  2  mL  dimasukkan  kedalam tabung reaksi dengan masing-masing konsentrasi  0,5,  0,6  dan  0,7  mg/L  dan ditambahkan  2  mL  larutan  DPPH  kedalam masing-masing  konsentrasi  dan  di  vortex selama 5 detik sebanyak 3 kali pengulangan.

## Pembuatan Larutan Vitamin C
Vitamin C (p.a) ditimbang sebanyak 10 mg dan dilarutkan dalam etanol 95% sebanyak 10  mL,  kemudian  buat  larutan  stok  untuk konsentrasi  0,5,  0,6  dan  0,7  mg/L  dengan
ditambahkan etanol 95% sampai tanda batas 10 mL  pada  masing-masing  larutan  sebanyak  3 kali  pengulangan.  Sampel  vitamin  C  (p.a)  di pipet  sebanyak  2  mL  dimasukkan  kedalam tabung reaksi dengan masing-masing konsentrasi  0,5,  0,6  dan  0,7  mg/L  dan ditambahkan  2  mL  larutan  DPPH  kedalam masing-masing  konsentrasi  dan  di  vortex selama 5 detik sebanyak 3 kali pengulangan. Di uji  pada  spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang 517 nm.
Pembuatan  Larutan  Kontrol  DPPH  dan Aktivitas Antioksidan dengan  Metode DPPH
Larutan  kontrol  DPPH  di  uji  pada spektrofotometer UV-Vis dengan  panjang gelombang 517 nm sebagai absorbansi kontrol dalam pengujian ini. Sampel di inkubasi selama 30  menit  pada  suhu  37 ° C.  Untuk  mengetahui aktivitas dari penangkal radikal bebas tersebut, di  uji  pada  spektrofotometer.  Berubahnya warna ungu menjadi warna kuning menunjukkan  efisiensi  penangkal  radikal bebas. Di ukur absorbansi pada spektrofotometer UV-Vis dengan  panjang gelombang 517 nm setelah di inkubasi selama 30  menit,  berubahnya  warna  menjadi  kuning menunjukkan bahwa, masing-masing konsentrasi  menunjukkan  efisiensi  penangkal radikal  bebas.  Di  amati  perbandingan  dengan vitamin C (p.a) sebagai standar. Kemudian data yang  diperoleh  dikumpulkan  dan  disajikan dalam  bentuk  tabel.  Aktivitas  penangkapan radikal bebas (persen inhibisi) dihitung sebagai presentase  berkurangnya  aktivitas  DPPH dengan menggunakan rumus:

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  pengukuran  pada  penelitian  ini diperoleh absorbansi yang kemudian digunakan untuk perhitungan nilai persen inhibisi senyawa antioksidan  terhadap  DPPH.  Data  persen inhibisi  ekstrak  etanol  spons Callyspongia aerizusa dan  vitamin  C  (p.a)  sebagai pembanding disajikan pada tabel 1 dibawah ini:
%𝐼𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑠𝑖 = 1 − 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑥 100%
𝑉 1 . 𝑀 1 = 𝑉 2 . 𝑀 2
Tabel  1.  Hasil  Perbandingan  Pengujian
Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Spons Callyspongia aerizusa Dengan
Vitamin C (p.a) Konsentrasi Ekstrak dan Vitamin C Pengulangan Rata- rata I II III 0,5 mg/ L Ekstr ak 55,60 % 57,70 % 56,50 % 56,60 % Vita min C 96,80 % 92,70 % 97,60 % 95,70 % 0,6 mg/ L Ekstr ak 56,20 % 57,80 % 57,60 % 57,20 % Vita min C 97,50 % 98,60 % 98,80 % 98,30 % 0,7 mg/ L Ekstr ak 58,50 % 58,40 % 58,30 % 58,40 % Vita min C 98,80 % 99,50 % 98,90 % 99,06 %
Untuk  mengetahui  apakah  biota  laut terbukti memiliki aktivitas pengikatan terhadap radikal  bebas,  maka  dilakukan  uji  aktivitas antioksidan.  Antioksidan  merupakan  senyawa yang  dapat  menghambat  radikal  bebas  dalam tubuh,  serta  menghambat  terjadinya  oksidasi pada sel tubuh, sehingga dapat mencegah atau mengurangi terjadinya kerusakan sel (Ardiansyah, 2007).
Pada  penelitian  ini,  biota  laut  yang digunakan  yaitu  spons Callyspongia  aerizusa yang diambil dari Pulau Mantehage. Pengolahan  sampel  dilakukan  dengan  metode ekstraksi  dengan  cara  dingin  yaitu  maserasi. Maserasi  merupakan  salah  satu  metode ekstraksi  yang  dilakukan  melalui  perendaman serbuk bahan alam dalam larutan pengekstrak. Alasan  pemilihan  metode  maserasi  karena mempunyai  banyak  keuntungan  dibandingkan dengan  metode  ekstraksi  lainnya.  Keuntungan utama metode ekstraksi maserasi yaitu prosedur dan  peralatan  yang  digunakan  sederhana, metode  ekstraksi  maserasi  tidak  dipanaskan sehingga  bahan  alam  tidak  menjadi  terurai (Heinrich  dkk,  2004).  Pelarut  yang  digunakan pada proses ekstraksi adalah etanol 95% karena pelarut  ini  hampir  bisa  melarutkan  semua senyawa organik baik polar ataupun non polar. Hal ini sesuai dengan pernyataan Santana dkk
(2009)  bahwa  etanol  merupakan  pelarut  polar yang digunakan untuk mengekstrak komponen polar  suatu  bahan  alam  dan  dikenal  sebagai pelarut  universal.  Ekstrak  yang  diperoleh dilakukan  pengukuran  aktivitas  antioksidan dengan  menggunakan  metode  DPPH  ( 1,1- difenil-2-pikrilhidrazil ).  Metode  DPPH  dipilih karena sederhana, mudah, cepat dan peka serta hanya memerlukan sampel dalam jumlah yang sedikit  (Hanani  dkk,  2005).  Pengukuran aktivitas antioksidan dilakukan dengan menggunakan  alat  spektrofotometer UV-Vis .
Pengukuran  dilakukan  dengan  mengukur absorbansi  larutan  DPPH  pada  panjang gelombang  antara  400-800  nm.  Hasil  yang didapat yaitu panjang gelombang 517 nm yang digunakan sebagai panjang gelombang maksimum untuk DPPH.
Larutan yang dibuat untuk uji aktivitas antioksidan  diambil  dari  ekstrak  etanol  spons Callyspongia aerizusa yang dipipet sebanyak 2 mL  dan  ditambahkan  2  mL  larutan  DPPH dengan masing-masing konsentrasi 0,5, 0,6 dan 0,7  mg/L  kemudian  divortex  selama  5  detik sebanyak  3  kali  pengulangan.  Campuran dihomogenkan dan diinkubasi selama 30 menit pada  tempat  gelap  dengan  suhu  37°C.  Setelah diinkubasi,  kemudian  masing-masing  ekstrak dilakukan  pengukuran  absorbansi  dengan menggunakan  spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 517 nm. Adanya antioksidan  pada  sampel  ditunjukkan  dengan adanya  perubahan  warna  dari  ungu  menjadi kuning. Perubahan warna menunjukkan adanya reaksi  antara  kandungan  senyawa  metabolit yang  ada  pada  ekstrak  spons Callyspongia aerizusa dengan  radikal  bebas  DPPH.  Hal  ini sejalan dengan penelitian Prakash (2001) yang menyatakan  bahwa  aktivitas  reduksi  oleh antioksidan ditunjukkan dengan adanya perubahan  warna  yang  menunjukkan  adanya reaksi  antara  elektron  tunggal  DPPH  menjadi berpasangan  dengan  atom  hidrogen  yang didonorkan.
Pembanding  yang  digunakan  pada penelitian ini adalah vitamin C (p.a). Vitamin C banyak digunakan sebagai pembanding karena vitamin  C  merupakan  antioksidan  alami  yang mempunyai empat gugus karboksil yang mana atom  hidrogen  pada  gugus  karboksil  mampu mendonorkan  elektronnya  pada  radikal  bebas untuk  menstabilkan  radikal  bebas  (Praditasari, 2016).
Hasil penelitian pada tabel 1 menunjukkan  persentase  ekstrak  etanol  spons Callyspongia  aerizusa yang  diperoleh  pada konsentrasi  0,5  mg/L  dengan  nilai  56,6%, konsentrasi 0,6 mg/L dengan nilai 57,2%, dan konsentrasi  0,7  mg/L  dengan  nilai    58,4%. Peningkatan persen inhibisi pada ekstrak etanol spons Callyspongia  aerizusa menandakan bahwa  konsentrasi  ekstrak  yang  ditambahkan mempengaruhi  kemampuan  ekstrak  dalam meredam radikal bebas. Hasil ini didukung oleh penelitian Hanani dkk (2005) yang menyatakan bahwa persentase aktivitas antioksidan terhadap radikal bebas akan meningkat seiring dengan  meningkatnya  konsentrasi.  Menurut Parwata  dkk  (2005)  suatu  bahan  dapat dikatakan  aktif  sebagai  antioksidan  bila persentase aktivitas antioksidan lebih atau sama dengan 50%.
Hasil pengujian perbandingan aktivitas antioksidan ekstrak etanol spons Callyspongia aerizusa dan  vitamin  C  menunjukkan  bahwa kemampuan  penangkal  radikal  bebas  dari vitamin  C  lebih  kuat  dibandingkan  dengan ekstrak  etanol  spons Callyspongia  aerizusa . Hal  ini  dikarenakan  vitamin  C  merupakan senyawa murni sedangkan ekstrak etanol spons Callyspongia  aerizusa masih  merupakan ekstrak kasar (Hanani dkk, 2005).

## KESIMPULAN
Berdasarkan dari hasil penelitian yang telah  dilakukan  maka,  dapat  disimpulkan bahwa  ekstrak  etanol  spons Callyspongia aerizusa dari Kepulauan Mantehage Kabupaten Minahasa Utara memiliki aktivitas antioksidan disetiap  konsentrasi.  Aktivitas  antioksidan tertinggi  terlihat  pada  konsentrasi  ekstrak  0,7 mg/L yang mencapai 58,4%.

## SARAN
Sebaiknya  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  untuk  mengetahui  senyawa  aktif  yang terkandung  dalam  ekstrak  etanol  spons Callyspongia aerizusa dan dilakukan pengujian antimikroba  untuk  melihat  apakah  terdapat aktivitas antimikroba pada spons Callyspongia aerizusa .

## DAFTAR PUSTAKA
Ardiansyah. 2007. Antioksidan dan Peranannya Bagi Kesehatan .
Artikel IPTEK.
De Voogd, N. J., Haftka, J. J. H., Hoeksema, B.
W.,  2005. Evaluation  Of  The Ecological  Of  Amphitoxin  In  The Reef-Dweeling Sponge
Callyspongea  (Euplacella)  Biru (Haploscerida) At South Sulawesi,
Indonesia .
Fukami,  A.,  Ikeda,  Y.,  Kondo,  S.,  Naganawa, H.,  Takeuchi,  T.,  Furuya,  S., Hirabayashi,  Y.,  Shimoike,  K., Hosaka,  S.  1997. Akartepin,  A Novel  Bioactive  Tripene  From Marine  Sponge  Callyspongia  Sp , Zoology, 7 (38) : 1201-1202.
Gray, C. A., De Lira, S. P., Silva, M., Pimenta, E. F., Thienmann, O. H., Oliva, G., Hajdu,  E.,  Andersen,  J.  A.,
Berlinck, R. G. S., 2006. Sulfated Meroterpenoids  from  Brazilian Sponge Callyspongia Sp , Org.Chem, 71 (23) : 8685-8690.
Hanani,  E,  Mun’im  A,  Sekarini,  R,  dan Wiryowidagdo,  S.  2005.  Uji aktivitas  antioksidant  beberapa spons  laut  dari  kepulauan  Seribu, Jurnal  Bahan  Alam  Indonesia . 5(1) : 127-133.
Heinrich,  Michael.,  Barnes,  Joanne.,  Gibbons,
Simon.,  Williamso,  Elizabeth  M. 2004. Fundamental of Pharmacognosy and Phytotherapi . Hungary: Elsevier.
Mbaoji,  F.  N.,  Ezike,  A.  C.,  Nworu,  C.  S., Onyeto,  C.  A.,  Nwabunike,  I.  A., Okoli, I. C., & Akah, P. A. 2016.
Antioxidant And Hepatoprotective Potentials Of Stemonocoleus Micranthus  Harms  (Fabaceae) Stem Bark Extract . 8(7) : 47-51.
Poumorad,  F.,  S.  J.  Hosseinimehr,  and  N. Shahabimajd.  2006.  Antioxidant activity  phenol  and  flavonoid contents  of  some  selected  Iranian medicinal  plants. African  Journal of Biotechnology . 11: 1142-1145.
Prakash,  A.,  2001. Antioxidant  Activity . Medallion Laboratories : Analytical Progres. 19(2): 1–4.
Praditasari,  A.  2016. Metode  Uji  Aktivitas
Antioksidan Secara In Vitro Pada Tanaman Ekstrak . Fakultas Farmasi Universitas Padjajaran
Sari, N.I., Ahmad A., Dali S. 2014. Isolasi dan karakterisasi protein bioaktif dari spons  Callyspongia  sp.  sebagai zat antioksidan . Makassar:
Universitas Hasanuddin.
Santana,  C.M.,  Z.S.  Ferrera,  M.E.T.  Padron,
and J.J.S. Rodriquez. 2009. Methodologies for The Extraction of  Phenolic  Compounds  from
Enviromental  Samples  :  New
Approaches. Molecules . 14: 298- 320.
Suparno.  2005.  Kajian  Bioaktif  Spons  Laut
(porifera:  Demospongiae)  Suatu Peluang  Alternatif  Pemanfaatan Ekosistem Karang Indonesia Dalam  Dibidang  Farmasi .  Jurnal Perikanan  Indonesia . 24(21): 41- 45.