DOI : https://doi.org/10.24114/jbio.v6i1.16839

## JBIO: JURNAL BIOSAINS
(The Journal of Biosciences)
http://jurnal.unimed.ac.id/2012/index.php/biosains email : jbiosains@unimed.ac.id
ISOLASI DAN UJI ANTAGONIS Trichoderma TERHADAP Fusarium oxysporum

## SECARA IN VITRO
Abdul Karim, Rahmiati, Ida Fauziah Fakultas Biologi Universitas Medan Area Email korespondensi: amirahmiati0405@gmail.com
Diterima:  Februari 2020; Direvisi: Februari 2020; Disetujui: Maret 2020

## ABSTRAK
Jamur Trichoderma sangat umum dijumpai dalam tanah dan merupakan jamur yang memiliki sifat. antagonistik  terhadap  jamur  lain  sehingga  dapat  diamanfaatkan  sebagai  agen  pengendali  hayati. Kemampuan antagonistik Trichoderma dibuktikan dengan kemampuannya dalam menghambat Fusarium oxysporum yang merupakan penyebab penyakit rebah kecambah pada tanaman. Metode yang digunakan dalam  penelitian  yaitu  metode  eksperimental  yang  terdiri  dari  tiga  tahapan  penting  yatiu:  isolasi Trichoderma ,  identifikasi  isolat Trichoderma dan  uji  potensi  isolat Trichoderma dalam  menghambat Fusarium oxysporum . Terdapat 4 isolat jamur Trichoderma yang berhasil diisolasi tanah yaitu Trichoderma sp.1, Trichoderma sp.2, Trichoderma sp.3 dan Trichoderma sp4. Isolat Trichoderma sp.1 diketahui memiliki nilai zona hambat terbesar terhadap Fusarium oxysporum.
Kata kunci: Jamur Trichoderma , antagonistik, Fusarium oxysporum
ISOLATION AND IN VITRO ANTAGONISM TEST OF Trichoderma to Fusarium oxysporum

## ABSTRACT
Trichoderma is a very common genus of fungus in the soil with antagonistic properties to other fungus. It is proven by its ability in inhibiting Fusarium oxysporum which cause sprout disease in plants. This  research  by  using  experimental  method  which  consists  of  three  important  stages:  isolation  of Trichoderma, identification of Trichoderma isolates. This potential of Trichoderma isolates in inhibiting Fusarium oxysporum were tested. There were 4 isolates of Trichoderma which were successfully isolated from  the  soil, Trichoderma sp.1, Trichoderma sp.2, Trichoderma sp.3  and Trichoderma sp4.  Isolate Trichoderma sp.1 presented the largest inhibitory zone when exposed against Fusarium oxysporum Keywords: Trichoderma , antagonistic, Fusarium oxysporum
Pendahuluan Trichoderma sp.  merupakan  jamur saprofit  di  tanah  yang  secara  alami  memiliki kemampuan  menyerang  jamur  patogen  pada tanaman. Trichoderma sp. diketahui memiliki spektrum pengendalian yang luas. Trichoderma dikenal  sebagai  jamur  yang menguntungkan  karena  sifat  antagonistik yang  kuat  dalam  menghambat  pertumbuhan jamr patogen. Trichoderma memiliki mekanisme  pengendalian  yang  bersifat spesifik  target  sehingga  diyakini  mampu
meningkatkan produktivitas tanaman (Muksin et al , 2013). Kemampuan Trichoderma dalam menghambar  jamur  petogen  tanaman  sudah banyak  diaplikasikan  antara  lain  terhadap jamur  Culvularia  lunata  (Purwandria,  2016), penghambatan  secara  in  vitro  terhadap Colletotrichum  capsici,  Fusarium  sp. dan Sclerotium  rolfsii (Alfizar et  al ,  2013), Ganoderma  boninense  (Dendang,  2015)  dan Alternaria porri (Muksin et al , 2013).
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  kemampuan  isolat Trichoderma
DOI : https://doi.org/10.24114/jbio.v6i1.16839
yang  diisolasi  dari  tanah  dalam  menghambat pertumbuhan  jamur Fusarium  oxysporum . Trichoderm a merupakan jamur yang tersebar luas  di  tanah,  dan  mempunyai  sifat mikoparasitik  yaitu  kemampuan  untuk menjadi parasit jamur lain.
F. oxysporum merupakan  jamur patogen penyebab rebah kecambah pada bibit tanaman cabai dan  layu pada tanaman tomat atau  dikenal  dikenal  dengan  nama  layu fusarium.  Jamur  ini  banyak  ditemukan  di dalam tanah  dengan membentuk  tiga  macam bentuk spora yaitu mikrokonidium, makrokonidium dan klaimidospora (Sastrahiidayat, 2011). Menurut  Murad et  al (2016)  bahwa keutamaan Fusarium oxysparum terletak pada makrokonidia  yang  berbentuk  panjang  dan pendek  menengah,  berdiding  tebal  dan melengkung.  Mikrokonidia  berbentuk  oval. Karakteristik lain berwarna putih sampai ungu pucat  dari  banyaknya  miselium  yang berwarna putih. Klamidospora berbentuk oval yang terbentuk secara tunggal dan berpasangan
Jika diamati di bawah mikroskop maka spora  berbentuk  seperti  bulan  sabit.  Pada media tumbuh morofologi jamur mula – mula berwarna  putih  dan  akan  berubah  menjadi pink  keunguan  seiring  dengan  usia  biakan jamur tersebut (Sastrahiidayat, 2011).
Penelitian Sunarwati dan Yoza (2010) menyebutkan bahwa , s alah satu faktor penting yang  menentukan  aktivitas  mikroorganisme antagonis yang dapat mengendalikan patogen adalah memiliki kecepatan pertumbuhan yang tinggi  sehingga  mampu  berkompetisi  dengan patogen dalam  hal  makanan  dan  penguasaan ruang  yang  pada  akhirnya  dapat  menekan pertumbuhan  jamur  patogen. Trichoderma diketahui  dapat  tumbuh  cepat  di  berbagai substrat  dan mempunyai kemampuan kompetisi  yang  baik  dalam  hal  mendapatkan makanan  dan  ruang tumbuh.  Sebagai  contoh, Trichoderma harzianum mampu memanfaatkan  bahan  organik  dalam  tanah untuk  tumbuh,  sehingga  mampu  bersaing dalam penggunaan ruang dan nutrisi.
Trichoderma merupakan  genus  jamur yang  bersifat  antagonis  terhadap  banyak patogen pada tumbuhan. Mekanisme antagonis yang terjadi antara mikroba patogen dengan jamur antagonis dapat terjadi melalui
proses antibiosis, kompetisi, serta mikoparasitisme (Purwandriya, 2016).
Kemampuan Trichoderma dalam menghambat  pertumbuhan  jamur  patogen sering  dikaitkan  dengan  kemampuannya dalam menghasilkan enzim kitinase (Habazar & Yaherwandi, 2006). Enzim ini menyebabkan kerusakan  sel  jamur  patogen  yang  akhirnya dapat  menyebabkan  kematian  sel  (Sunarwati dan Yoza, 2010).
Dendang  (2015)  menyatakan  bahwa, Trichoderma menghasilkan  enzim  ß – (1-3) glukanase  dan  kitinase  yang  menyebabkan eksolisis pada patogen sehingga menyebabkan hancurnya  dinding  sel  cendawan Fusarium . Kitin dan glukan merupakan komponen utama penyusun  dinding  sel  jamur  yang  dapat dihancurkan  dengan  menggunakan  enzim kitinase dan ß – (1-3) glukanase. Pengamatan in  vitro dari  isolat Trichoderma setelah patogen  mati,  nampak  bahwa  cendawan antagonis tumbuh terus menutupi permukaan koloni cendawan patogen. Hal ini membuktikan  bahwa  cendawan  antagonis Trichoderma sp.  dapat  digunakan  untuk mengendalikan cendawan patogen.
Metode Penelitian Penelitian dilaksanakan secara eksperimental  di  Laboratorium  Biologi Universitas Medan Area. Isolat jamur patogen Fusarium  oxysporum dan Trichoderma ,  di kutur  pada  media  potato  dekstrosa  agar  dan diinkubasi  pada  susu  25 – 30 0 C.  Masing – masing isolat jamur diremajakan pada media baru setiap 2 minggu sekali.
Isolasi Trichoderma dari  Tanah Ditimbang  sampel  tanah  sebanyak  1 gram. Kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi  dan  ditambahkan  akuades  steril sebanyak  10  ml.  Suspensi  kemudian dihomogenkan  dengan  vortex.  Dilakukan pengenceran  berseri  sampai  seri  10 -5 . Selanjutnya  sebanyak  0,1  ml  suspensi  tanah dari seri pengenceran terakhir diinokulasikan pada  media  potato  dekstrosa  agar  (PDA) dalam  cawan  Petri.  Isolasi  dilakukan  dengan metode  cawan  sebar  (Berlian et  al ,  2016). Kultur diinkubasi di suhu 25 - 30  C selama 3 x 24  jam.  Pengamatan  dilakukan  setiap  hari selama masa inkubasi. Isolat yang menunjukkan karakteristik Trichoderma
DOI : https://doi.org/10.24114/jbio.v6i1.16839
diberi label dan dikoleksi. Isolat ini kemudian ditumbuhkan kembali pada media yang sama hingga nanti diperoleh isolat murni. Identifikasi
jamur dilakukan berdasarkan ciri-ciri dan karakter morfologis,
secara  makroskopis  maupun  mikroskopis. Identifikasi  makroskopis  meliputi  warna koloni  dan  kecepatan  pertumbuhan  koloni (Amaria et a l, 2013). Identifikasi mikroskopis meliputi
bentuk hifa Trichoderma , didentifikasi  menggunakan  kunc  identiifkasi jamur Pitt & Hocking (1997).
Uji  Antagonis  Isolat Trichoderma Terhadap Jamur Patogen Uji  antagonis  dilakukan  dengan
metode dual culture method pada cawan petri yaitu
dengan menempatkan isolat
Trichoderma    dan  isolat F.  oxysporum pada satu  cawan  petri  berisi  media  PDA.  Isolat Trichoderma  diambil  dengan  cork  borer ukuran  6  mm  (Suazo et  al ,  2011).  Isolat Trichoderma  diletakkan  dengan  jarak  3  cm dari batas tepi cawan petri, sedangkan isolat F. oxysporum diletakkan  pada  jarak  3  cm  dari batas  tepi  cawan  petri  pada  garis  diameter yang  sama.  Diinkubasi  pada  suhu  ruang  (± 25ºC – 30ºC).  Pengamatan  daya  hambat dilakukan  selama  5  hari.  Hal  yang  sama dilakukan  untuk  setiap  isolat Trichoderma yang didapat.
Pengamatan Visual dan Mikroskopis Pengamatan  dilakukan  dengan  dua cara  yaitu  secara  visual  dan  mikroskopis. Pengamatan  secara  visual  dilakukan  dengan melihat zona/luas pertumbuhan miselium dari masing-masing  lempeng  inokulum  jamur Trichoderma dan jamur patogen. Pengamatan secara  mikroskopis  dilakukan  dengan  cara megamati  ujung  miselium  pada  daerah  zona hambat jamur patogen. Ujung miselium jamur patogen yang tumbuh pada permukaan media PDA  dipotong  berbentuk  petak , kemudian diletakkan pada permukaan benda. Selanjutnya diamati abnormalitas pertumbuhan miselium jamur patogen, berupa pembengkokan  ujung  miselium,  miselium pecah, miselium berbelah, miselium bercabang,  miselium  lisis  dan  miselium tumbuh kerdil (Anggani et al., 2015).

## Hasil dan Pembahasan
Berdasarkan isolasi dari sampel tanah diperoleh  4  isolat  jamur  yaitu Trichoderma sp.1, Trichoderma sp.2, Trichoderma sp.3  dan Trichoderma sp4.
Gambar 1. Empat jenis Trichoderma hasil isolasi (a) Trichoderma sp1. (b) Trichoderma sp2. (c) Trichoderma sp3. dan (d) Trichoderma sp4
Jamur Trichoderma merupakan  jenis jamur  yang  dapat  dijumpai  pada semua jenis tanah. Trichoderma dimanfaatkan  sebagai agensia hayati pengendali patogen tular tanah (soil  borne)  dan  telah  menjadi  perhatian penting  sejak  beberapa  dekade  terakhir  ini karena  kemampuannya  sebagai  pengendali biologis terhadap beberapa patogen tanaman (Keliat & Iftari, 2017).
Suanda & Ratnadi (2015) menyatakan bahwa  secara  makroskopis Trichoderma memiliki  karakteristik  permukaan  datar berbentuk  bulat  tetapi  tekstur  kasar  seperti berserat dengan bagian tepi halus. Mula-mula koloni  berwarna  putih  dan  bagian  tengah berwarna  hijau  muda  lalu  menjadi  hijau  tua berbentuk  lingkaran  dengan  batas  jelas, sedangkan  bagian  pinggir  berwarna  putih seperti kapas. Warna koloni berubah menjadi hijau  tua  pada  seluruh  permukaan  atas  saat umur 6 hari setelah isolasi.
Hasil  uji  antagonis  menunjukkan keempat isolat mampu mengambat F.oxysporum
.  Kemampuan  antagonis  isolat ditandai  dengan  adanya  zona  hambat  yang terbentuk  pada  daerah  pertemuan  kedua koloni jamur.
DOI : https://doi.org/10.24114/jbio.v6i1.16839
Gambar  2. Hasil  uji  antagonis  isolat Trichoderma terhadap jamur patogen (a) Trichorderma sp.1; (b) Fusarium  oxysporum (tanda  panah  menunjukkan daerah zona hambat)
Mekanisme  antagonis Trichoderma dalam  menghambat  pertumbuhan  jamur patogen  antara  lain  kompetisi,  parasitisme, antibiosis dan lisis. Mekanisme penghambatan secara  kompetisi  terjadi  jika  adanya persaingan  untuk  memperoleh  nutrisi  antara isolat  Trichoderma  dengan  jamur  patogen pada  media  yang  sama.  Sementara  itu, mekanisme  antibiosis  dan  lisis  melibatkan produksi  metabolit  beracun  (toksin)  atau enzim  ekstraseluler  yang  dihasilkan  oleh Trichoderma  (Dendang,  2015).  Enzim  yang dihasilkan oleh Trichoderma antara lain β -1,3- glukanase,  kitinase,  selulase  dan  proteinase (Kumar et  al ,  2012).  Trichoderma  juga diketahui  mampu  memproduksi  senyawa antibiotik, termasuk di dalamnya enzim yang mampu  mendegradasi  dinding  sel  (Dendang, 2015)
Tabel  1. Diameter  zona  hambat  isolat Trichoderma teradap jamur patogen Isolat jamur Nilai zona hambat (mm) Trichoderma sp1. 20,50 Trichoderma sp2. 20,00 Trichoderma sp3. 13,50 Trichoderma sp4. 11,55
Beberapa  hal  yang  mempengaruhi besar  kecilnya  zona  hambat  yang  dibentuk isolat Trichoderma terhadap  jamur  patogen antara lain: interaksi antara kemampuan isolat Trichoderma dalam  menghasilkan  enzim hidrolitik,  umur  biakan  jamur,  jumlah  enzim yang dihasilkan, komposisi medium dan waktu inkubasi.  Perbedaan  nilai  zona  hambat menggambarkan perbedaan kemampuan dari masing-masing  isolat  untuk  menghambat
pertumbuhan mikrooganisme patogen (Suanda & Ratnadi, 2015). Pengamatan abnormalitas hifa dilakukan  pada  hari  kelima  setelah  masa pengamatan  uji  antagonis.  Abnormalitas  hifa terjadi karena adanya reaksi antagionistik dari isolat Trichoderma .  Pertumbuhan  hifa  jamur patogen  akan  terhambat  sehingga  terjadi penipisan  dinding  hifa F.  oxysporum Abnormalitas  hifa  yang  terjadi  yaitu  berupa hifa mengalami lisis, hifa bengkok, hifa melilit dan  hifa  menggulung.  Hal  ini  sejalan  dengan penelitian  Keliat  &  Iftari  (2017)  yang menyatakan  bahwa  terjadi  abnormalitas  hifa Fusarium sp.  yang    diujikan  terhadap  bakteri kitinolitik.  Hal  ini  menginidkasikan  bahwa isolat  Trichoderma  asal  tanah  berpotensi untuk dikembangkan sebagai agen pengendali hayati patogen tanaman.

## Kesimpulan
Kesimpulan dari  penelitian  ini  adalah keempat isolat Trichoderma yaitu Trichoderma sp1, Trichoderma sp2, Trichoderma sp3  dan Trichoderma sp4  memiliki  kemampuan  yang bervariasi  dalam  menghambat  pertumbuhan F.  oxysporum .  Isolat  Trichoderma  sp1. memiliki nilai zona hambat terbesar terhadap Fusarium oxysporum yaitu 20,5 mm.

## Daftar Pustaka
Anggani,  F.,  Kusdarwati,  R  dan  Suprapto,  H.
2015.  Potensi Bacillus  licheniformis dan
Streptomyces olivaceoviridis sebagai  Penghambat  Pertumbuhan Jamur  Saprolegnia  sp  Penyebab Saprolegniasis Pada Ikan. Jurnal Ilmiah Perikanan  dan  Kelautan .  7(2):  133 – 139.
Alfizar,  Marlina  dan  Susanti  ,F.  2013. Kemampuan  Antagonis  Trichoderma sp. terhadap Beberapa Jamur Patogen In Vitro. Jurnal Floratek . 8: 45 – 51. Berlian, I., Anarqi, S dan Pudjihartati, E. Isolasi, Identifikasi  dan  Antagonisme  In  Vitro Isolat  Trichoderma  spp.  Asal  Kebun Karet  Blimbing,  Pekalongan,  Jawa Tengah. Jurnal Penelitian Karet . 34 (2): 201 – 212. Dendang, B. 2015. Uji Antagonisme Trichoderma spp. terhadap Ganoderma  sp.  yang  Menyerang Tanaman  Sengon  Secara  in-vitro.
DOI : https://doi.org/10.24114/jbio.v6i1.16839
Jurnal  Penelitian  Kehutanan  Wallace.
4(2): 147 – 156. Habazar, T dan Yaherwandi. 2006. Pengendalian  Hayati  Hama  dan Penyakit Tumbuhan. Andalas University Press. Padang. Keliat,  J  dan  Iftari  W.  2017.  Uji  Antagonis Fusarium sp. pada Kangkung Belerang terhadap  Isolat  Kitinolitik  LT4  dari Limbah  Cair  Tahu. Jurnal  Biosains . 3(3): 140- 143.
Kumar, K., N. Amaresan, S. Bhagat, K. Madhuri and R.C. Srivastava. 2012. Isolation and Characterization  of  Trichoderma  spp. for Antagonistic Activity Against Root Rot  and  Foliar  Pathogens. Indian Journal Microbiology. 52(2): 137 – 144. Muksin, R., Rosmini dan Panggeso J. 2013. Uji Antagonisme Trichoderma sp. terhadap  Jamur  Patogen Alternaria porri Penyebab Penyakit Bercak Ungu pada Bawang Merah Secara In-vitro. E-
Journal Agrotekbis . 1(2): 140 – 144. Murad, N. B. A., Kusai, N. A., dan Zainudin, N. A.
I. M. 2016. Identification and diversity of  Fusarium  species  isolated  from tomato  fruits. Journal  of  Plant
Protection Research . 56(3): 145 – 158.
Purwandriya, F. Kemampuan Trichoderma sp. dalam  Menghambat Curvularia  lunata
Penyebab Penyakit Bercak Daun pada Tanaman  Nenas  ( Ananas  comosus L Merr. Skripsi .  Fakultas  Pertanian. Universitas Lampung. Sastrahidayat, IR. 2011. Fitopatologi. Universitas Brawijaya Press: Malang. Suazo, M. P., Opazo, A., Zaldua, S., Gonzalez, G., &  Sanfuentes,  E.  2011.  Evaluation  of Trichoderma  spp.  and  Clonostachys spp.  strains  to  control  Fusarium circinatum  in  Pinus  radiata  seedlings. Chilean Journal of Agricultural Research . 71(3): 412-417. Suanda,  I  W.  dan  Ratnadi,  N.W.  2015.  Daya Antagonism Trichoderma sp.  Isolat Local terhadap Jamur Patogen penyebab  Penyakit  Rebah  Kecambah ( Schlerotium  rolfsii Sacc.)  pada Tanaman Tomat ( Lycopersicum esculentum Mill.). Jurnal  EmaSains  IV (2):155-162.
Sunarwati,  D.  &  R.  Yoza.  2010.  Kemampuan Trichoderma dan Penicillium dalam Menghambat Pertumbuhan Cendawan Penyebab Penyakit Busuk Akar Durian ( Phytophthora  palmivora )  Secara In Vitro. Balai  Penelitian  Tanaman  Buah Tropika.  Seminar  Nasional  Program dan  Strategi  Pengembangan  Buah Nusantara.