COMPARISON OF ANTIOXIDANT ACTIVITY OF SOME COCOR BEBEK LEAF EXTRACT (Kalanchoe pinnata) USING THE DPPH METHOD
Diana Sylvia, Fatimah, Dina Pratiwi
Sekolah Tinggi Farmasi Muhammadiyah, Jl. Tangerang KH Syekh Nawawi (Raya Pemda) Km.4 No. 13, Tangerang, Banten.
Korespondensi: Fatimah (fatimahfarmasi10@gmail.com)

## ARTICLE HISTORY
Received:  29 December 2019                  Revised: 23 January 2020           Accepted: 30 January 2020

## Abstract
Cocor bebek leaves, often used as traditional medicine because they have various kinds  of  compound,  one  of  which  is  antioxidant.  This  study  aims  to  determine secondary metabolites, antioxidant activity and IC 50 values contained in some extracts of  cocor  bebek  leaves.  This  research  was  conducted  at  several  stages,  which included making extracts using maceration method using various levels of polarity, each extract was identified by secondary metabolite  compound, water content test, total phenol test using the folin ciocalteau metodh and the antioxidant activity test with DPPH and  vitamin C as a comparison. The result of phytochemical screening tests on ethyl acetate extract and ethanol 70% have flavonoid, phenol, tannin and steroid compounds. While the n-hexane extract contain phenol compounds, flavonoids and tannins. Based on the testing of the total phenol content in the n-hexane extract it was 0,83 mg/g, the ethyl acetate extract obtained the totatl phenol content of 4,77 mg/g, while the 70% ethanol extract yield  8,94 mg/g. Antioxidant activity of n-hexane extract had  moderate  activity  with  IC 50 value  of  144,55  ppm,  ethyl  acetate  extract  had moderate antioxidant activity with IC 50 value of 118,96 ppm  and in ethanol 70% had strong antioxidant activity compared to n-hexane extract and ethyl acetate extract with a IC 50 value of 67,19 ppm.
Keyword: Antioxidant, Leaf cocor bebek, Multilevel extraction, IC 50 value

## PERBANDINGAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN BEBERAPA
EKSTRAK DAUN COCOR BEBEK ( Kalanchoe pinnata ) DENGAN MENGGUNAKAN METODE DPPH

## Abstrak
Daun  cocor  bebek  ( Kalanchoe  pinnata )  sering  dijadikan  sebagai  obat  tradisional karena  memiliki  berbagai  macam  khasiat  salah  satunya  antioksidan.  Penelitian  ini bertujuan untuk mengetahui metabolit sekunder dan aktivitas antioksidan serta nilai IC 50 yang  terkandung  dalam  beberapa  ekstrak  daun  cocor  bebek.  Penelitian  ini dilakukan  pada  beberapa  tahap  yaitu  meliputi  pembuatan  ekstrak  dengan  metode maserasi menggunakan berbagai tingkat kepolaran yaitu n-heksan, etil asetat, etanol 70%, masing-masing ekstrak dilakukan identifikasi senyawa metabolit sekunder, uji kadar  air,  uji  total  fenol  dengan  menggunakan  metode Folin  Ciocalteau dan  uji aktivitas antioksidan dengan metode DPPH dan vitamin C sebagai pembanding. Hasil
pengujian  skrining  fitokimia  pada  ekstrak  etil  asetat  dan  etanol  70%  memiliki kandungan senyawa flavonoid, fenol, tanin, dan steroid sedangkan pada ekstrak n- heksan  memiliki  kandungan  senyawa  fenol,  flavonoid  dan  tanin.  Berdasarkan pengujian  kandungan  total  fenol  pada  ekstrak  n-heksan  mendapatkan  hasil  0,83 mg/g, pada ekstrak etil asetat mendapatkan hasil kandungan total fenol sebesar 4,77 mg/g,  sedangkan  pada  ektrak  etanol  70%  mendapatkan  hasil  8,94  mg/g.  Aktivitas antioksidan ekstrak n-heksan memiliki akivitas yang sedang dengan nilai IC 50 144,55 ppm, ekstrak etil asetat memiliki aktivitas antioksidan yang sedang dengan nilai IC 50 118,96  ppm,  pada  ekstrak  etanol  70%  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  kuat dibandingkan  dengan  ekstrak  n-heksan  dan  ekstrak  etil  asetat  dengan  nilai  IC 50 sebesar 67,19 ppm.
Kata kunci : Antioksidan, Daun Cocor Bebek, Ekstraksi Bertingkat, Nilai IC 50

## Pendahuluan
Indonesia merupakan negara yang terkenal dengan kekayaan alam yang dimiliki, diantaranya  adalah  berbagai  jenis  tumbuhan  yang  berkhasiat  sebagai  obat.  Obat tradisional  telah  dikenal  dan  digunakan  secara  turun-temurun  oleh  masyarakat. Banyak  masyarakat  yang  jauh  dari  pelayanan  kesehatan  memanfaatkan  tanaman sebagai obat. 1
Salah satu obat tradisional yang dijadikan sebagai obat adalah daun cocor bebek ( Kalanchoe  pinnata ),  karena  memiliki  berbagai  macam  khasiat  seperti:  antikanker, antidiabetes, antifungal, antimikroba, antiinflamasi dan analgesik, antiulser, antiasma, antioksidan, dan aktivitas sedatif dari sistem saraf. 2
Antioksidan merupakan suatu substansi  pada konsentrasi kecil secara relevan mampu menghambat atau mencegah oksidasi pada substrat yang disebabkan oleh radikal bebas. 3 Radikal bebas yang dihasilkan secara terus menerus selama proses metabolisme normal, dianggap sebagai penyebab terjadinya kerusakan fungsi sel — sel tubuh yang akhirnya menjadi pemicu timbulnya penyakit degeneratif. 4

## Metode Penelitian

## Alat dan Bahan
Bahan  dasar  yang  digunakan  yaitu Simplisia  daun  cocor  bebek  ( Kalanchoe pinnata ) diperoleh dari kebun tanaman di kampung Sodong Pabuaran, Desa Sodong RT.002  RW.003,  Kecamatan  Tigaraksa,  Kabupaten  Tangerang,  Provinsi  Banten, Etanol 70%, larutan DPPH , serbuk magnesium, kloroform, asam sulfat pekat, serbuk vitamin C, etil asetat, N-heksan, HCl pekat, asam anhidrat, FeCl 3, asam galat, Folin Ciocalteau , Na 2 CO 3 15%, metanol p.a, larutan DPPH 0,002%, reagen Mayer, reagen Dragendroff,  aquadest.
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  Rotary  Evaporator  (Eyela), Spektrofotometer UV-Vis (Optizen), desikator, kuvet (Optizen) , oven (Memmert).

## Metode Pembuatan Simplisia
Daun cocor bebek ( Kalanchoe pinnata) yang telah dikumpulkan sebanyak 10 kg, disortasi basah, dipisahkan dari ranting, kemudian dicuci menggunakan air mengalir sampai  bersih.  Selanjutnya  daun  cocor  bebek  dirajang.  Daun  cocor  bebek dikeringanginkan  dan  di  oven  dengan  suhu  40 o C  selama  96  jam  sampai  kering,
kemudian simplisia disortasi kering dan dibuat menjadi serbuk dengan menggunakan blender. 5

## Pembuatan Ekstrak
Pembuatan  ekstrak  daun  cocor  bebek (Kalanchoe  pinnata) yaitu  dengan menggunakan  metode  ekstraksi  cara  dingin  dengan  cara  maserasi  dan  diekstrasi verdasarkan tingkat kepolaran dengan memakai pelarut n-heksana, etil asetat, dan etanol  70%.  Sebanyak  400  gram  simplisia  diekstraksi  secara  maserasi  dengan pelarut  n-heksan  (nonpolar)  sebanyak  2000  mL,  didiamkan  selama  24  jam  sambil diaduk, kemudian disaring. Filtrat ditampung dan residunya dimaserasi ulang dengan cara  yang  sama  sebanyak  tiga  kali  pengulangan,  yaitu  sampai  filtratnya  berwarna bening. Filtrat gabungan yang diperoleh dipekatkan dengan menggunakan penguap vakum  pada  suhu  60 o C  sampai  diperoleh  ekstrak  pekat  (bebas  pelarut).  Residu dikeringkan pada suhu kamar sampai bebas pelarut. Dengan cara yang sama residu berturut-turut dimaserasi lagi dengan etil asetat (semi polar) sebanyak 2000 mL dan dengan etano 70% (polar) sebanyak 2000 mL. 6

## Uji Kadar Air
Keringkan  cawan  kosong  yang  akan  digunakan  dalam  oven  selama  15  menit atau  sampai  berat  stabil,  kemudian  dimasukkan  dalam  desikator  selama  30  menit untuk didinginkan, dan ditimbang. Sekitar 1 gram sampel ditimbang dan diletakkan dalam cawan, kemudian dipanaskan dalam oven selama 3-4 jam pada suhu 105 o - 110 o C.  Cawan kemudian didinginkan dalam desikator dan ditimbang kembali. 7

## Uji Skrining Fitokimia
a. Identifikasi Alkaloid
Ekstrak    cocor  bebek  sebanyak  0,5  gram,  ditambahkan  5  mL  HCl  2N, dipanaskan  pada  penangas  air.  Setelah  dingin  campuran  disaring  dan  filtrat ditambahkan beberapa tetes reagen Mayer. Hasil positif mengandung alkaloid jika ditambahkan  pereaksi  Mayer  akan  membentuk  endapan  putih  dan  apabila ditambahkan pereaksi Dragendroff akan menghasilkan warna merah jingga. 8 b. Identifikasi flavonoid
Ekstrak  cocor  bebek  sebanyak  0,5  gram,  ditambahkan  2  mL  etanol  70%, kemudian diaduk dan ditambahkan serbuk magnesium 0,5 gram dan 3 tetes HCl pekat.  Terbentuknya  warna  jingga  hingga  merah  menunjukkan  adanya  flavon, merah hingga merah padam menunjukkan flavono, merah padam hingga merah keunguan menunjukkan flavonon. 8

## c. Identifikasi Steroid
Sebanyak 0,5 gram ekstrak ditambahkan kloroform dalam tabung reaksi yang kering,  lalu  ditambhakan  10  tetes  asam  asetat  anhidrat  dan  3  tetes  asam  sulfat pekat.  Reaksi  positif  ditunjukkan  dengan  terbentuknya  larutan  berwarna  merah kemudian berubah menjadi biru dan hijau. 9

## d. Identifikasi Tanin
Ekstrak  sebanyak  0,5  gram  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi,  kemudian ditambahkan  aquadest  dan  FeCl 3 sebanyak  3  tetes.  Jika  warna  yang dihasilkan biru  kehitaman/hijau  kehitaman,  biru,  hijau,  dan  biru  tua  menunjukkan  positif mengandung tanin. 10 e. Identifikasi Fenol
Sebanyak  1  mL  dari  masing-masing  ekstrak  daun  cocor  bebek  dimasukkan kedalam  tabung  reaksi,  kemudian  ditambahkan  FeCl3  5%  sebanyak  2-3  tetes. Sampel  yang  mengandung  fenolik  akan  mengalami  perubahan  warna  biru  atau hijau kehitaman. 7

## Uji Total Fenol Pembuatan Laruatan Asam Galat 100 ppm
Sebanyak 10 mg asam galat ditimbang dan dilarutkan dengan aquadest dalam labu ukur 100  mL dengan konsentrasi 10, 20, 40, 60, 80, dan 100 ppm. Diambil 0,5 mL masing-masing konsentrasi standar tersebut ke dalam tabung reaksi,  kemudian ditambahkan 2 mL aquadest. Larutan tersebut dihomogenkan dan diinkubasi selama 30  menit,  dan  semua  larutan  diukur  absorbansinya  pada λ  734,12  nm  lalu  dibuat kurva kalibrasi hubungan antara konsentrasi asam galat dengan absorbansinya.

## Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Asam Galat
Salah  satu  konsentrasi  standar  diukur  untuk  mencari  panjang  gelombang maksimum dengan blanko sebagai pembanding.

## Pembuatan Larutan Uji Ekstrak Daun Cocor Bebek
Persiapan larutan sampel ditimbang dengan 50 mg ekstrak n-heksan, etil asetat dan etanol 70%. Masing-masing kemudian dilarutkan dengan air ke dalam labu ukur 20 mL. Larutan uji diambil masing-masing 0,5 mL, kemudian ditambahkan dengan 2 mL Na 2 CO 3 15% dan divorteks, lalu tambahkan 0,3 mL reagen Folin Ciocalteu dan divorteks,  tambahkan  sebanyak  2,2 mL aquadest.  Larutan  tersebut  dihomogenkan dan diinkubasi selama 30 menit. Absorbansi larutan spektrofotometri UV- Vis pada λ 734,12 nm. Hasilnya dinyatakan sebagai ekuivalen asam galat dalam mg/L ekstrak.
Serapan yang didapatkan dihitung konsentrasinya dengan persamaan garis lurus yang didapat dari kalibrasi standar asam galat.

## Uji Aktivitas Antioksidan Pembuatan Larutan DPPH 0,002%
Sebanyak  2  mg  ekstrak,  dilarutkan  dengan  metanol  p.a  dan  dimasukkan  ke dalam labu ukur 100 mL. Volume dicukupkan dengan metanol p.a hingga tanda batas, lalu dihomogenkan (sebelumnya labu ukur sudah dilapisi alumunium foil) kemudian ditempatkan dalam botol gelap.

## Pembuatan Larutan Blanko 1000 ppm
Pipet  sebanyak  2  mL  larutan  DPPH,  ditambahkan  metanol  p.a  sampai  2  mL, kemudian  divorteks.  Larutan  blanko  diinkubasi  selama  30  menit.  Serapan  diukur menggunakan spektrofotometri UV_Vis pada panjang gelombang maksimum.

## Larutan Standar Induk Untuk Vitamin C 500 ppm
Timbang 10 mg vitamin C, dimasukkan ke dalam labu ukur 20 ml dan dilarutkan dengan metanol p.a sampai tanda batas.

## Penentuan Panjang Gelombang Maksimum DPPH
Sebanyak  2  ml  larutan  DPPH  ditambahkan  metanol  p.a  2  ml.  dan  diinkubasi selama  30 menit.  Kemudian  diukur  serapannya  pada  panjang gelombang  515-520 nm.

## Pengukuran Aktivitas Pengikatan Radikal Bebas DPPH dengan Vitamin C
Pengujian dilakukan dengan memipet masing-masing 5 µl, 10 µl, 20 µl, 40 µl, 80 µl, dan 160 µl dari larutan induk  vitamin C murni 500 ppm, campuran ditambah 2 ml DPPH  lalu  dicukupkan  volumenya  sampai  20  ml  dengan  metanol  p.a  sehingga diperoleh  larutan  dengan  konsentrasi  0,125;  0,25;  0,5;  1;  2;  dan  4 ppm,  kemudian
dihomogenkan dan dibiarkan selama 30 menit. Selanjutnya serapan diukur dengan spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang 517 nm.

## Pembuatan larutan uji ekstrak daun cocor bebek
Ekstrak  n-heksan,  ekstrak  etil  asetat,  ekstrak  etanol  70%  masing-masing ditimbang  0,1  g,  kemudian  dilarutkan  dengan  metanol  p.a.  larutan  dimasukkan  ke dalam labu ukur 20 ml. Volume dicukupkan dengan metanol p.a sampai tanda batas.

## Pengukuran Aktivtias Pengukuran Radikal Bebas DPPH dengan Sampel
Ekstrak n-heksan dilakukan dengan cara memipet masing-masing 310 ppm, 620 ppm, 1240 ppm, 2490 ppm, 5000 ppm, 10.000 ppm. Pada ekstrak etil asetat dipipet masing-masing  250  ppm,  500  ppm,  1000  ppm,  2000  ppm,  4000  ppm,  8000  ppm. Pada  ekstrak  etanol  70%  dipipet  masing-masing  500  ppm,  1000  ppm,  2000  ppm, 4000 ppm . Dari larutan stok sampel 500 ppm, campuran ditambah 2 ml DPPH lalu dicukupkan volumenya sampai 20 ml dengan metanol p.a sehingga, pada ekstrak n- heksan diperoleh larutan dengan konsentrasi 7,78125; 15,5625; 31,125; 62,25; 125; dan 250  ppm. Pada ekstrak  etil asetat diperoleh larutan dengan konsentrasi 6,25; 12,5; 25; 50; 100; dan 200 ppm. Pada ekstrak etanol 70% diperoleh larutan dengan konsentrasi  12,5;  25;  50; dan  100  ppm. Selanjutnya  dihomogenkan dan  diinkubasi selama 30 menit, lalu diukur serapan dengan spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang 516 nm.

## Analisis Data
Penentuan Nilai IC 50 ( Inhibitory Concentration) Parameter untuk menginterpretasikan hasil pengujian DPPH adalah dengan IC 50 ( inhibitor  concentration ).  IC 50 merupakan  konsentrasi  larutan  substrat  atau  sampel yang mampu mendeteksi aktivitas DPPH sebesar 50%. Semakin kecil nilai IC 50, maka semakin  tinggi  aktivitas  antioksidan  pada  sampel.  Persentase  inhibisi  terhadap radikal DPPH dan masing-masing konsentrasi larutan sampel dapat dihitung dengan rumus :
%  Inhibisi = Abs Blanko – Abs Sampel x 100%
Absorban Blanko persentase  inhibisi  dari  masing-masing  konsentrasi,  konsentrasi  sampel  dan persen  inhibisi  yang  didapat  diplotkan  masing-masing  pada  sumbu  x  dan  y  dalam persamaann regresi linear  y= b(x) + a. Persamaan IC 50 adalah konsentrasi sampel yang  dapat  meredam  radikal  DPPH  sebanyak  50%  konsentrasi  awal.  Nilai  IC 50 didapatkan dari nilai x setelah mengganti y dengan 50.

## Teknik Analisis Data
Analisis  data  pada  penelitian  ini  yaitu  dianalisis  secara  regresi  linier  dengan menggunakan Microsoft Excel yang digunakan untuk menentukan nilai IC 50 dan untuk melihat  perbandingan  aktivitas  antioksidan  beberapa  ekstrak  daun  cocor  bebek ( Kalanchoe pinnata ) terhadap nilai IC 50 sebagai parameter aktivitas antioksidan serta total  fenol.  Nilai  IC 50 pada  ekstrak  daun  cocor  bebek  dikatakan  sangat  kuat  jika memiliki konsentrasi kurang dari 50 ppm.

## Hasil dan Pembahasan

## Preparasi Sampel
Tanaman  cocor  bebek  pada  penelitian  ini  yang  digunakan  yaitu  bagian  daun cocor  bebek  sebanyak  10  kg  daun cocor  bebek disortasi  basah.  Selanjutnya  daun cocor  bebek  dicuci  hingga  bersih  dengan  air  mengalir,  lalu  dirajang  untuk memudahkan dalam proses mengoven selama 96 jam pada suhu 40º hingga kering,
kemudian daun yang sudah kering disortasi kering setelah itu disimpan dalam wadah kedap udara dan kemudian simplisia dihaluskan menggunakan blender, selanjutnya disimpan dalam wadah bersih, kering dan dilakukan pengujian selanjutnya.

## Ekstraksi
Pembuatan  ekstrak  daun  cocor  bebek  ( kalanchoe  pinnata )  menggunakan metode ekstraksi cara dingin dengan cara dimaserasi. Pelarut yang digunakan yaitu n-heksan, etil asetat, dan etanol 70% dengan metode maserasi bertingkat. Simplisia yang  telah  dihaluskan  kemudian  ditimbang  sebanyak  400  gram  dan  dimasukkan pelarut n-heksan sebanyak 2 L menggunakan perbandingan (1:5). Setelah pelarut n- heksan  dimasukkan  kedalam  wadah  campuran  tersebut  dilakukan  pengadukan, setelah  24  jam  dilakukan  remaserasi  sebanyak  2  L  pelarut  sampai  3x  remaserasi terhitung  setelah  maserasi  awal.  Setelah  itu  residu  dikeringkan  pada  suhu  kamar sampai bebas pelarut, kemudian ditambahkan dengan pelarut etil asetat sebanyak 2 L menggunakan perbandingan (1:5). Setelah itu residu dikeringkan pada suhu kamar sampai bebas pelarut, kemudian ditambahkan dengan pelarut etanol 70% sebanyak 2  L  menggunakan  perbandingan  (1:5).  Masing-masing  filtrat  pada  ketiga  pelarut tersebut  digabungkan  dan  dilakukan  proses  pengentalan  menggunakan rotary evaporator, dan  didapat  ekstrak  kental  n-heksan  11,0679  gram  dengan  hasil rendemen  2,76%,  ekstrak etil  asetat menjadi  9,7563  gram  dengan hasil  rendemen 2,439%, dan ekstrak etanol menjadi 32,0666 gram dengan hasil rendemen 8,01%.

## Uji Fitokimia
Uji  fitokimia  ini  merupakan  uji  kualitatif  untuk  mengetahui  senyawa  aktif  yang terkandung  dalam  setiap  sampel  ekstrak  sehingga  dapat  diketahui  metabolit sekunder yang berpotensi sebagai antioksidan.

## Tabel 1. Hasil uji senyawa fitokimia
No Golongan Senyawa Ekstrak N-heksan  Etil Asetat Etanol 70% 1. Alkaloid - Mayer - Dragendroff - - - - - - 2 Flavonoid + + + 3 Fenol + + + 4 Steroid - + + 5 Tanin + + +
Keterangan : Tanda (+)  positif mengandung senyawa metabolit sekunder Tanda ( –)  negatif mengandung senyawa metabolit sekunder

## Uji Kadar Air
Pengujian  kadar  air  pada  ekstrak  kental  daun  cocor  bebek  digunakan  dengan metode  gravimetri  yaitu  dengan  cara  cawan  kosong  yang  akan  digunakan dikeringkan  terlebih  dahulu  dalam  oven selama  15  menit  atau  sampai  berat  tetap, kemudian  didinginkan  dalam  desikator  selama  30  menit  dan  ditimbang.  Kira-kira sebanyak  2  gram  sampel  ditimbang  dan  diletakkan  dalam  cawan  kemudian dipanaskan  dalam  oven  selama  3-4 jam pada  suhu  105 o -110 o C.  Cawan  kemudian didinginkan dalam desikator dan ditimbang kembali. Kadar air (berat basah/bb ) . 7
Tabel 2. Hasil pengujian kadar air pada ekstrak daun cocor bebek No Sampel Ekstrak Kadar Air 1 n-Heksan 3, 02 % 2 Etil Asetat 12,67% 3 Etanol 70% 26, 85%
Tingginya kadar air dapat disebabkan karena proses pengeringan yang kurang optimal. 11 Serta  absorbsi  air  ke  dalam  ekstrak  saat  proses  penyimpanan  akibat lingkungan yang lembab. 12

## Uji Total Fenol
Pengukuran  total  fenol  digunakan  dengan  metode Folin-Ciocalteu yang berdasarkan  kekuatan  mereduksi  dari  gugus  hidroksi  fenol  dengan  menggunakan standar asam galat. Asam galat dipilih karena merupakan substansi yang murni dan stabil. Reaksi fenol dan Folin-Ciocalteu akan terlihat dari adanya warna kuning dan dengan menambahkan sodium karbonat akan memberikan warna biru. Semakin biru larutan menunjukkan semakin tingginya absorbansi. 13
Hasil  pengukuran  panjang  gelombang  serapan  maksimum  total  fenol  yaitu menghasilkan serapan maksimum pada panjang gelombang 734,12 nm. Penentuan kandungan total fenolik bertujuan untuk melihat korelasi antara aktivitas antioksidan dengan kandungan total fenolik. Kadar total fenol dihitung dengan memasukkan data nilai serapan sampel ke dalam persamaan garis regresi linear y = bx+a yang diperoleh dari  kurva  kalibrasi  asam  galat.  Hasil  kandungan  fenol  total  dalam  tumbuhan dinyatakan dalam satuan GAE ( gallic acid equivalent ) yaitu mg konsentrasi ekstrak per gram sampel (mg/g). Asam galat merupakan senyawa fenolik dengan tiga gugus hidroksi fenolat yang sudah dikenal memiliki aktivitas antioksidan. 14
Tabel 3. Hasil Persamaan Regresi Linear Asam Galat dan Nilai Total Fenol
Sampel Nilai Total Fenol Persamaan Regresi Linear Ekstrak n-Heksan 0,83 mg/g y = 0,012x - 0,093 R = 0,991 Ekstrak Etil Asetat 4,77 mg/g Ekstrak Etanol 70% 8,94 mg/g
Hasil ketiga ekstrak tersebut disimpulkan bahwa ekstrak etanol 70%  lebih tinggi dibandingkan  dengan  ekstrak  n-heksan  dan  ekstrak  etil  asetat.  Menunjukkan  hasil yang berbeda karena tingkat kepolarannya juga berbeda. Hal ini dikarenakan ekstrak etanol 70% secara sekuensial lebih efektif untuk melarutkan komponen dari fenolik dibandingkan dengan ekstrak n-heksan dan ekstrak etil asetat. 15
Hal  ini  diduga  karena  pelarut  etanol  70%  merupakan  suatu  senyawa  polar sehingga  mudah  untuk  dihilangkan  ketika  larut  dengan  senyawa  organik.  Pelarut yang bersifat polar mampu melarutkan senyawa fenol lebih banyak sehingga kadar total fenol pada ekstrak menjadi tinggi. 16

## Uji Aktivitas Antioksidan
Pengujian  pada  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  menggunakan  metode DPPH ( 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl ).  Metode ini dipilih karena merupakan metode
yang  sederhana,  mudah,  cepat  dan  hanya  memerlukan  sedikit  sampel  untuk pengujian aktivitas antioksidan dari senyawa bahan alam. 17
Prinsip pada pengukuran aktivitas antioksidan secara kuantitatif ini yaitu adanya perubahan intensitas warna ungu dari larutan DPPH. Perubahan warna yang terjadi akan memberikan perubahan absorbansi pada panjang gelombang maksimum DPPH ketika  diukur  menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis  sehingga  dapat  diketahui  nilai IC 50 . Nilai IC 50 dapat didefinisikan sebagai besarnya konsentrasi senyawa yang diuji yang  dapat  meredam  radikal  bebas  sebanyak  50%.  Semakin  kecil  nilai  IC 50 maka semakin besar nilai aktivitas antioksidan. 17
Hasil  pengukuran  panjang  gelombang  serapan maksimum  larutan  DPPH  ( 2,2- diphenyl-1-picrylhydrazyl )  pada  pelarut  metanol  menghasilkan  serapan  maksimum pada panjang gelombang 515,22 nm.
Tabel 4. Nilai IC 50 Ekstrak n-Heksan Daun Cocor Bebek
Nilai IC 50 Ekstrak n-heksan Y A B R X 50  7,7091  0,2936  0,9683  144,04 50 6,543 0,2996  0,9693  145,05 Rata-rata nilai x 144,55
Tabel 5. Nilai IC 50 Ekstrak Etil Asetat Daun Cocor Bebek
Nilai IC 50 Ekstrak Etil Asetat Y A B R X 50 4,9929  0,3786  0,974  118,88 50 4,7308  0,3803  0,975  119,04 Rata-rata nilai x 118,96
Tabel 6. Nilai IC 50 Ekstrak Etanol 70% Daun Cocor Bebek
Nilai IC 50 Ekstrak Etanol 70% Y A B R X 50 3,5901 0,678 0,997 68,45 50 6,3815 0,6617 0,993 65,92 Rata-rata nilai x 67,19
Tabel 7. Nilai IC 50 Vitamin C Nilai IC50 Vitamin C Y A B R X 50 24,941  2,593  0,959  1,90 50 24,115  5,053  0,969  1,86 Rata-rata nilai x 1,88
Berdasarkan data Tabel 4, 5, dan 6 , hasil ini menunjukan bahwa ekstrak etanol 70% memiliki sifat antioksidan yang kuat.  Molyneux 17 mengatakan bahwa semakin tinggi  nilai  IC 50 maka  semakin  tinggi  pula  nilai  antioksidan  yang  terkandung didalamnya.  Dari  ketiga  ekstrak  diatas  ekstrak  etanol  70%  mempunyai  kandungan antioksidan yang kuat dibandingkan dengan ekstrak n-heksan dan ekstrak etil asetat. Karena ekstrak etanol 70% mempunyai tingkat kepolaran yang tinggi dibandingkan dengan ekstrak n-heksan dan ekstrak etil asetat sehingga hasil yang didapatpun lebih kuat.  Perbandingan  jenis  pelarut  yang  digunakan  pada  proses  ekstraksi mempengaruhi  aktivitas  antioksidan  yang  diperoleh.  Hal  ini  diduga  karena  didalam sampel daun cocor bebek banyak terdapat senyawa bioaktif yang bersifat polar jika dibandingkan  dengan  senyawa  bioaktif  yang  bersifat  nonpolar  dan  semipolar sehingga pelarut polar (etanol 70%) lebih menarik komponen bioaktif yang ada pada daun  cocor  bebek.  Salah  satu  senyawa  metabolit  sekunder  yang  dapat mempengaruhi aktivitas antioksidan adalah flavonoid. Flavonoid sebagai antioksidan secara  langsung  adalah  dengan  mendonorkan  ion  hidrogen  sehingga  dapat menstabilkan radikal bebas yang reaktif dan bertindak sebagai scavenger/penangkal radikal  bebas  secara  langsung. 18 Dan  vitamin  C  sebagai  pembanding  mempunyai hasil yang positif dengan nilai IC 50 1,88 ppm  dan dikategorikan sebagai antioksidan yang snagat kuat karena vitamin C merupakan antioksidan alami. 19

## Hubungan Perbandingan Aktivitas Antioksidan dan Total Fenol
Tabel  8. Perbandingan  Aktivitas  Antioksidan  pada  Ekstrak  n-heksan,  Ekstrak  Etil Asetat dan Ekstrak Etanol 70%
No Sampel Nilai IC 50 Total Fenol (mg/GAE*) 1 Ekstrak n-heksan 144,55 0,915 2 Ekstrak etil asetat 118,96 6,93 3 Ekstrak etanol 70% 67,19 8,65
Berdasarkan Tabel 7. Menurut Huang 20 hubungan antara total fenol dan aktivtias antioksidan  yaitu  semakin  rendah  nilai  IC 50 maka  kandungan  total  fenol  semakin tinggi,  sehingga aktivitas  antioksidan  berbanding  lurus  dengan  total  fenol,  semakin tinggi kandungan fenol dalam suatu bahan semakin tinggi pula aktivitasnya sebagai antioksidan. Ekstrak etanol 70% daun cocor bebek memiliki kadar total fenol  tinggi hal  ini  karena  potensi  senyawa  fenolik  sebagai  antioksidan  disebabkan  oleh keberadaan  gugus  hidroksil  dalam  senyawa  fenol.  Semakin  besar  konsentrasi senyawa fenolik maka ion fenolat yang terbentuk pun semakin banyak. Pada ekstrak n-heksan  dan  etil  asetat  memiliki  kandungan  total  fenol  yang  rendah.  Menurut penelitian  yang  dilakukan  oleh  Wedaswari 21 perbedaan  nilai  ini  dipengaruhi  oleh tingkat kepolaran pelarut yang digunakan terhadap senyawa metabolit yang terdapat pada sampel. Bila kandungan senyawa fenolik di dalam sampel tinggi maka aktivitas antioksidannya  akan  tinggi.  Diduga  dengan  adanya  peningkatan  total  fenol  maka terdapat aktivitas antioksidan yang berlangsung dan semakin besar intensitas warna biru maka semakin besar juga kandungan fenolik yang terdapat pada sampel. 22

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  dari  penelitian  yang  telah  dilakukan,  dapat  disimpulkan sebagai berikut :
1.  Ekstrak  n-heksan  memiliki  metabolit  sekunder  flavonoid,  fenol  dan  tanin  pada ekstrak etil asetat memiliki metabolit sekunder flavonoid, fenol, steroid, dan tanin, dan pada ekstrak etanol 70% memiliki metabolit sekunder flavonoid, fenol, steroid dan tanin.
2.  Ekstrak  etanol  70%  mempunyai  aktivitas  antioksidan  yang  kuat  dibandingkan dengan ekstrak n-heksan dan ekstrak etil asetat yang sedang.
3.  Nilai IC 50 yang didapat menunjukkan bahwa ekstrak etanol 70% yaitu 67,19 ppm (kategori  antioksidan  kuat),  ekstrak  etil  asetat  yaitu  118,96  ppm  (kategori antioksidan sedang) dan ekstrak n-heksan yaitu 144,55 ppm (kategori antioksidan sedang).

## Ucapan Terima Kasih
Terima kasih penulis ucapkan kepada Seluruh Sivitas Akademika Sekolah Tinggi Farmasi  Muhammadiyah Tangerang  yang telah memberikan sumbangsih terhadap penelitian penulis.

## Daftar Pustaka
1.  Rahman N,  Bahirul  P,  Diah  AWM.  Uji  aktivitas  antioksidan ekstrak daun salam ( syzgium  polyanthum )  dengan  menggunakan 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil ).  J  Akad Kim. 2014:3(3);143-149.
2.  Putri V, Hasanah  AN. Review: profiling senyawa kuersetin dari tanaman cocor bebek  (kalanchoe  pinnata)  dengan  menggunakan  berbagai  metode  analisis.  J Farmaka.2017:15(1);134 –14.
3.  Isnindar,  Wahyuono  S,  Setyowati  EP.  Isolasi  dan  identifikasi  senyawa antioksidan  daun  kesemek  (diospyros  kaki  thunb.)  dengan  metode  dpph  (2,2- difenil-1- pikrilhidrazil). Maj Obat Tradis. 2011:16(3);157-164.
4.  Juniarti,  Osmeli  D,  Yuhernita.  Kandungan  senyawa  kimia  ,  uji  toksisitas  ( brine shrimp lethality test ) dan antioksidan ( 1,1-diphenyl-2- pikrilhydrazyl ) dari ekstrak daun saga ( abrus precatorius L .). Makara Sains. 2009:13(1);50 –54.
5.  Safitri AR. (2013). Uji efek analgetik infusa daun cocor bebek ( kalanchoe pinnata (lam.)pers. ) terhadap mencit jantan galur swiss yang diinduksi dengan asam asetat  [Skripsi] . Pontianak:  Program  Studi  Pendidikan  Dokter  Fakultas Kedokteran Universitas Tanjungpura; 2013. 1-8.
6.  Putri IJ, Fauziyah, Elfita. Aktivitas  antioksidan  daun  dan  biji  buah  nipah ( nypa fruticans ) asal pesisir banyuasin sumatera selatan dengan metode dpph. Maspari J. 2013:5(1);16-21.
7.  Huliselan  YM,  Runtuwewe  MJR,  Wewengkang  DS.  (2015).  Aktivitas antioksidan  ekstrak  etanol,  etil  asetat,  dan  n-heksan  dari  daun  sesewanua ( clerodendron squamatum vahl ). J Ilm Farm. 2015:4(3);155 –163.
8.  Mojab  F,  Kamalinejad  M,  Ghaderi  N,  Vahidipour  HR.(2003).  Phytochemical Screening of some species of iranian plants. Iranian Journal of Pharmaceutical Research. 2003:2(2); 77-82.
9.  Harborne JB. Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan.
Bandung: Penerbit ITB; 1987.
10.  Farnsworth NR. Biological and phytochemical screening of plants. J Pharm Sci. 1966:55(3);225-276.
11. Prasetyo,  Inoriah  E.  Pengelolaan  budidaya  tanaman  obat-obatan  (bahan simplisia). Bengkulu: Badan Penerbitan Fakultas Pertanian UNIB; 2013.
12.  Saifudin A, Rahayu V, Teruna HY. Standarisasi bahan obat alam.  Yogyakarta: Graha Ilmu; 2011.
13.  Senet MRM, Raharja IGMAP, Darma IKT, Prastakartini KT, Dewi NMA, Partawa IMOA. Penentuan Kandungan Total Flavonoid Dan Total Fenol Dari Akar Kersen ( Mutingia  Calabura )  Serta  Aktivitasnya  Sebagai  Antioksidan.  J  Chem. 2018:12(1);13 –18.
14.  Saeed  N,  Khan  MR,  Shabbir  M.  Antioxidant  activity  ,  total  phenolic  and  total flavonoid contents of whole plant extracts torilis leptophylla L. 2012:12(1);1472- 6882.
15.  Taroreh  M,  Raharjo  S,  Hastuti  P,  Murdiati  A.  Ekstraksi  daun  gedi ( Abelmoschus Manihot L ) secara sekuensial dan aktivitas   antioksidannya. Agritech. 2015:3(3);280-287.
16.  Lestari  DM,  Mahmudati  N,  Sukarsono,  Nurwidodo,  Husamah.  Aktivitas antioksidan  ekstrak  fenol  daun  gayam  ( inocarpus  fagiferus  fosb ).  Biosfera. 2018:35(1);37 –43.
17.  Molyneux, P.(2004). The use of the stable   free  radical  diphenyl  picrylhydrazyl (DPPH) for estimating antioxidant activity . Jurnal Scencei and Technology. 2004: 26;211-219.
18.  Nijveldt  RJ,  et  al.  Flavonoids:  a  review  of  probable  mechanisms  of  action  and potential applications. Am J Clin Nutr. 2001:74;418-425.
19.  Sayuti  K,  Yenrina  R.  Antioksidan  alami  dan  sintetik.  Padang:  Andalas University Press ; 7, 10, 15, 18, 32, 37-39, 47, 76.
20.  Huang  D,  Ou  B,  Prior  RL.  (2005).  The  chemistry  behind  antioxidant  capacity assays. J Agric Food Chem. 2005:53(6); 1841-1856.
21.  Wedaswari  IAI.  Aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  dan  fraksi  daun  sirih merah ( piper crocatum ) dengan metode rancimat dan identifikasi dengan Lc-Ms [Skripsi]. Bogor: Departemen Biokimia Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas  Pertanian Bogor; 2018.
22.  Dungir SG, Katja DG, Kamu VS. Aktivitas antioksidan ekstrak fenolik dari kulit buah manggis ( garcinia mangostana L .). Jurnal Kimia Unsrat 2012:1(1);11 –15.