## PENETAPAN KADAR FENOLIK TOTAL DAN FLAVONOID TOTAL EKSTRAK METANOL DAN FRAKSI ETIL ASETAT KULIT BUAH
NAGA MERAH  ( Hylocereus polyrhizus (F.A.C.WEBER) BRITTON
DAN ROSE)
Sri Wahdaningsih 1,2) , Subagus Wahyuono 2) , Sugeng Riyanto 2) , Retno Murwanti 2)
1) Prodi Farmasi, Fakultas Kedokteran Tanjungpura Pontianak 2) Fakultas Farmasi Universitas Gadjahmada Yogyakarta
*Email : wahdanieanie@gmail.com

## ABSTRACT
Dragon  fruit  is  a  tropical  fruit  with  latin  names  in  Cactacea  Hylocereus  polyrhizus (F.A.C.WEBER)  BRITTON  AND  ROSE.  red  dragon  fruit  peel  is  rich  in  antioxidant  compounds natural form of phenolic compounds, flavonoids, carotenoids, and anthocyanins. The Purpose of this study was to determine the total phenolic and flavonoids compounds of extract methanol, ethyl acetate and insoluble fraction  H. polyrhizus peel. Extraction is  with maceration method by using methanol and  then  do  trituration  with  ethyl  acetate  solvent.  Duration  of  phenolic  compounds  hearts  samples was  determined  the  colorimetric  method  maximum  wavelength  744.8  nm  and  flavonoids  maximum wavelength 431 nm. The Results showed that total phenolic content from methanol extract, Fraction ethyl acetate and insoluble fraction is successively 0.1994, 0.0196 and 0.4020μgGAE / g extract and total  flavonoid  content  from  methanol  extract,  Fraction  ethyl  acetate  and  insoluble  fraction  is successively 0.5139, 46.54 and 11.3811μgQE / g Extract.

## Keywords : phenol, flavonoid, H. polyrhizus peel

## ABSTRAK
Buah naga merupakan salah satu buah tropis yang termasuk di dalam suku Cactacea dengan nama  latin Hylocereus  polyrhizus (F.A.C.WEBER)  BRITTON  DAN  ROSE. Kulit  buah  naga  merah kaya  akan  senyawa  antioksidan  alami  berupa    senyawa  fenolik,  flavonoid,  karotenoid,  dan antosianin. Tujuan dari penelitian ini untuk mengetahui total senyawa fenolik dan flavonoid ekstrak metanol,  fraksi  larut  etil  asetat  dan  fraksi  tidak  larut  (endapan)  kulit H.  polyrhizus  . Ekstraksi dilakukan  dengan  metode  maserasi  dengan  menggunakan  metanol  kemudian  dilakukan  triturasi dengan  pelarut  etil  asetat.  Jumlah  senyawa  fenolik  dalam  sampel  ditentukan  dengan  metode kolorimetri  pada  panjang  gelombang  maksimum  744,8  nm  dan  flavonoid  pada  panjang  gelombang maksimum  431  nm.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  kadar  fenolik  total  dari  ekstrak  metanol, fraksi  larut  etil  asetat  dan  fraksi  tidak  larut  etil  asetat  (endapan)adalah  berturut  turut  0.1994,  0.0196 dan 0.4020µgGAE/g ekstrak dan kadar flavonoid total dari ekstrak metanol, fraksi larut etil asetat dan fraksi tidak larut etil asetat (endapan) adalah berturut-turut 0.5139, 46.54 dan 11.3811µgQE/g ekstrak.
Kata kunci : fenol, flavonoid, kulit buah naga merah

## PENDAHULUAN
Buah  naga  merupakan  salah  satu buah  tropis  yang  termasuk  di  dalam  suku Cactacea dan mulai banyak dikembangkan di  Indonesia.  Bentuk  buahnya  unik  dan menarik, kulitnya merah dan bersisik hijau mirip  dengan  sisik  seekor  naga,  rasanya manis,  asam  dan  segar.  Tingkat  konsumsi buah  naga  yang  semakin  meningkat,    hal ini  berdampak  terhadap  sisa  kulit  yang hanya  dibuang  sebagai  sampah  saja.  Kulit buah  naga  merah  ini  ternyata  menyimpan potensi yang cukup besar dalam pemanfaatannya sebagai antioksidan
alami. Berdasarkan penelitian yang dilakukan  oleh    Wu et  al .  (2006)  Ekstrak aseton  kulit  buah  naga  merah  mempunyai EC 50 sebesar  118  ±  4.12,  dengan  kadar flavonoid  total  8,33  ±  0,11  mg  setara catechin.    Kadar  fenol  total  (39,7  ±  5,39 mg  GAE  /  100  g  berat  basah  kulit).  Kulit buah  naga  merah  kaya  akan  senyawa antioksidan  alami  berupa    senyawa fenolik, flavonoid, karotenoid, dan antosianin.  Menurut  penelitian  Handayani dan  Rahmawati  (2012)  kulit  buah  naga merah menghasilkan kadar antosianin yang lebih  besar  yaitu  22,59335  ppm  daripada kadar  antosianin  pada  kulit  buah  naga daging  putih  yaitu  16,73593  ppm.  Kulit buah  naga  merah  juga  mengandung senyawa  pektin  dan  senyawa-senyawa lainnya seperti asam galakturonat, manossa,  galaktosa,  xilosa  dan  ramnosa (Muhammad et al ., 2014).
Senyawa fenolik merupakan senyawa  yang cukup luas  penggunaannya. Kemampuannya  memberikan  peran  besar sebagai senyawa biologik terhadap kepentingan  manusia.  Salah  satu  contoh sebagai  antioksidan  dalam  mencegah  dan mengobati  penyakit  degeneratife,  kanker, penuaan  dini  dan  gangguaan  sistem  imun
tubuh  (Apsari  dan  Susanti,  2011).  Begitu juga  dengan  flavonoid  dimana  sejumlah tanaman obat  yang mengandung flavonoid dilaporkan  mempunyai  atau  memiliki aktivitas  sebagai  antioksidan,  antibakteri, antivirus,  anti  radang  dan  anti  kanker (Miller, 1996).
Mengingat  peran  penting  dan fungsi  senyawa  fenolik  dan  flavonoid maka  perlu  dilakukan  penelitian  tentang kadar fenolik total dan flavonoid total dari kulit buah naga merah. Sehingga pemanfaatan  tumbuhan  ini  dapat  lebih maksimal.

## METODE PENELITIAN Pengambilan dan Pengolahan sampel
Sampel buah naga merah sebanyak 50  kg  yang  diperoleh  dari  daerah  Bantul Yogyakarta  dipanen  pada  bulan  Februari 2016,  kemudian  dicuci  bersih.  Setelah  itu kulit  buah  naga  merah  dipotong-potong dan  dikeringkan  dalam  oven  pada  suhu 50˚C.  Kulit  buah  yang  kering  dibuat serbuk dan disimpan dalam wadah kering.

## Ekstraksi
Serbuk kering (100 gram) dimaserasi  selama  3  x  24  jam  pada  suhu kamar  menggunakan  pelarut  metanol. Penyaringan  dilakukan  dengan  corong Buchner  dan  ampas  dimaserasi  dua  kali lagi  dengan  cara  yang  sama  kemudian disaring.  Filtrat  digabung  dan  diuapkan dengan rotavapor sampai diperoleh ekstrak kental.  Ampas  diangin-anginkan  sampai terbebas dari metanol. Sejumlah 8,33 gram ekstrak kental kemudian di triturasi dengan 50  mL  etil  asetat.  triturasi  dilakukan berulang ulang sampai diperoleh fraksi etil asetat  yg  jernih.  Fraksi  etil  asetat  dan fraksi  tidak  larut  etil  asetat  diuapkan hingga kental.

## Uji senyawa fenolik Penetapan kadar fenolik total
Penetapan  kadar  penolik  total dengan  metode  kolorimetri  yang  mengacu pada prosedur Malik et al ., (2015). Dengan beberapa  modifikasi  dengan  asam  gallat (GAE) sebagai standar.
a. Pembuatan  larutan  standar  asam galat.
Larutan  standar  asam  galat  1000 ppm  dibuat  dengan  menimbang  10 mg  asam  gallat  dilarutkan  dalam metanol p.a hingga volume 10 mL. Dari larutan stock dipipet sebanyak 2,5 mL diencerkan dengan metanol p.a hingga volume 25 mL dihasilkan  konsentrasi  100  ppm. Dari larutan tersebut dipipet 1, 2, 3, 4,  5  mL  dan  dicukupkan  dengan metanol  p.a  hingga  10  mL, sehingga  dihasilkan  konsentrasi 0.5, 1, 5, 10 dan 25 ppm.
b. Pengukuran  larutan  standar  asam galat.
Untuk  masing-masing  konsentrasi 0.5,  1,  5,  10  dan  25  ppm ditambahkan  0,4  mL  reagen  Folin- Ciocalteau  dikocok  dan  dibiarkan 4-8  menit,  ditambahkan  4,0  mL larutan  Na2CO3  7%  kocok  hingga homogen. Ditambahkan aquabidestilata  hingga  10  mL  dan didiamkan selama 2 jam pada suhu ruangan.  Diukur  absorbansi  pada panjang  gelombang  maksimum 744,8  nm,  dibuat  kurva  kalibrasi hubungan  antara  konsentrasi  asam galat (µg/mL) dengan absorbansi.
c. Pembuatan  larutan  ekstrak  dan fraksi kulit buah naga merah Masing-masing larutan ekstrak dan fraksi kulit buah naga merah dibuat
dengan  cara  menimbang  10  mg kemudian dilarutkan dengan 10 mL metanol p.a.
d. Penetapan  fenol  total  ekstrak  dan fraksi  kulit  buah  naga  merah. Masing-masing  dipipet  sebanyak  1 mL larutan  ekstrak dan fraksi  kulit buah naga merah, kemudian sampel  ditambahkan  dengan  0,4
mL reagen Folin-Ciocalteau dikocok  dan  dibiarkan  4-8  menit, tambahkan 4,0 mL larutan
Na2CO3 7% kocok hingga homogen.
Tambahkan aquabidestilata  hingga  10  mL  dan diamkan  selama  2  jam  pada  suhu ruang.  Ukur  serapan  pada  panjang gelombang serapan maksimum 744,8 nm. Lakukan 3 kali pengulangan  sehingga  kadar  fenol yang diperoleh hasilnya sebagai mg ekuivalen asam galat/g ekstrak.

## Uji Senyawa Flavonoid
Penetapan kadar flavonoid total dengan  metode  kolorimetri  yang mengacu  pada  prosedur    Ahmad AR et  al .,  (2014)  dengan  beberapa modifikasi  dengan  quersetin  (QE) sebagai standar.
a. Pembuatan larutan standar quersetin
Ditimbang  10  mg  baku  standar quersetin  dan  dilarutkan  dalam metanol  p.a  untuk  1000  ppm.  Dari larutan  standar  quersetin  1000 ppm,  kemudian  dipipet  1  mL  dan dilarutkan  dalam  10  mL  metanol p.a  untuk  100  ppm,  kemudian dibuat  beberapa  konsentrasi  12.5 ppm,  25  ppm,  50  ppm,  100  ppm dan  200  ppm.  Dari  masing-masing konsentrasi larutan standar quersetin ditambahkan 3 mL
metanol,  0,2  mL  AlCl3  10  %,  0,2 mL kalium asetat 1M dan dicukupkan  dengan  aquabidestilata sampai 10 mL. Setelah itu diinkubasi  selama  30  menit  pada suhu kamar dan ukur absorbansinya pada
spektrofotometri  UV-Vis  dengan panjang gelombang 431 nm.
b. Penetapan  kadar  flavonoid  total ekstrak  dan  fraksi  kulit  buah  naga merah.
Ditimbang  100  mg  ekstrak  dan fraksi  dilarutkan  dalam  10  mL metanol p.a. diambil 1 mL tambahkan  3  mL  metanol,  0,2  mL AlCl3  10%,  tambahkan  0,2  mL kalium  asetat  1M  dan  dicukupkan dengan  aquabidestilata  sampai  10 mL.    Setelah  itu  diinkubasi  selama 30  menit  pada  suhu  kamar  dan ukur absorbansinya pada spektrofotometri  UV-Vis  dengan panjang gelombang 431 nm.
Larutan sampel dibuat dalam 3 kali replikasi  sehingga  kadar  flavonoid yang  diperoleh  sebagai  ekuivalen quersetin.

## Analisa Data
Analisa  data  dengan  persamaan regresi linier menggunakan program microsoft  excel  kemudian  dihitung  kadar fenolik dan flavonoidnya.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Buah  naga  merupakan  salah  satu buah  tropis  yang  termasuk  di  dalam  suku Cactacea dan mulai banyak dikembangkan di  Indonesia.  Bentuk  buahnya  unik  dan menarik, kulitnya merah dan bersisik hijau mirip  dengan  sisik  seekor  naga,  rasanya manis, asam dan segar. Di Indonesia, buah
naga merah sudah mulai banyak dikembangkan.  Tingkat  konsumsi  buah naga  yang  semakin  meningkat,    hal  ini berdampak  terhadap  sisa  kulit  yang  hanya dibuang  sebagai  sampah  saja.  Kulit  buah naga  merah  ini  ternyata  menyimpan potensi yang cukup besar dalam pemanfaatannya  sebagai  tanaman  obat. Kulit buah naga merah kaya akan senyawa antioksidan  alami  berupa    senyawa fenolik, flavonoid, karotenoid, dan antosianin.
Ekstraksi  kulit  buah  naga  merah dilakukan dengan metode maserasi menggunakan  pelarut  metanol.  Ekstrak metanol  kemudian  di  triturasi  dengan pelarut etil asetat sehingga diperoleh fraksi larut  etil  asetat  dan  endapan.  Maserasi dipilih karena dapat mengekstrak senyawa dengan baik dan dapat mencegah dekomposisi  senyawa  yang  labil  terhadap pemanasan.
Prinsip ekstraksi menggunakan maserasi yaitu adanya difusi cairan  penyari  ke  dalam  sel  tumbuhan yang  mengandung  senyawa  aktif.  Difusi tersebut  mengakibatkan  tekanan  osmosis dalam  sel  menjadi  berbeda  dengan keadaan  diluar.  Senyawa  aktif  kemudian terdesak  keluar  akibat  adanya  tekanan osmosis  didalam  dan  diluar  sel  (Dean., 2009).
Penelitian  ini  dilakukan  untuk menentukan  kadar  senyawa  fenol  total pada  kulit  buah  naga  merah  dengan  asam gallat  (GAE)  sebagai  larutan  standar. Asam galat merupakan salah satu senyawa fenol alami turunan asam hidroksibenzoat. Asam  galat  direaksikan  dengan  Folin- Ciocalteu dalam suasana basa menghasilkan warna kuning yang menandakan  positif  atau  mengandung fenol.  Senyawa  fenolik  direaksikan  dalam suasana  basa  agar  terjadi  disosiasi  proton
menjadi  ion  fenolat.  Larutan  basa  yang ditambahkan  dalam penetapan  kadar senyawa  fenolik  total  adalah  larutan Na2CO3 (Apsari and Susanti, 2011). Pada penetapan  kadar  senyawa  flavonoid  total pada  sampel  kulit  buah  naga  merah menggunakan  quersetin  (QE)  sebagai
larutan standar. Penambahan larutan AlCl3 pada  pengukuran  flavonoid  agar  dapat membentuk  kompleks  dengan  warna  yang lebih  kuning  yang  diharapkan  terjadi pergeseran  panjang  gelombang  kearah visible (nampak).
Gambar 1. Kurva kalibari asam gallat (a) pada panjang gelombang 744,8 nm dan quersetin (b) pada panjang gelombang 431 nm
Hasil pengukuran dimasukkan dalam microsoft  excel  sehingga  diperoleh  kurva kalibrasi  larutan  standar  asam  gallat dengan  persamaan  regresi  linier  untuk asam  gallat  y  =  0.1020x  +  0.0920  dan quersetin  y  =  0.0369x  +  0.0017.  Dengan nilai  (r)  yang  mendekati  1  sehingga menunjukkan  bahwa  persamaan  regresi tersebut  linier.  Pada  pengukuruan  kadar fenol total dan flavonoid total dilakukan 3 kali replikasi atau pengulangan diharapkan memperoleh  data  yang  akurat.  Dari  hasil
penelitian ini diperoleh  kadar fenolik total sebesar 0.1994  (ekstrak metanol),  0.0196
(fraksi etil asetat) dan 0.4020 (endapan/fraksi  tidak  larut  etil  asetat) dihitung  terhadap  senyawa  fenol  asam gallat  (GAE).  Untuk  kadar  flavonoid  total diperoleh  kadar  sebesar  0.5139  (ekstrak metanol),  46.5483  (fraksi  etil  asetat)  dan 11.3811  (endapan/fraksi  tidak  larut  etil asetat) dihitung terhadap flavonoid quersetin (QE).
Tabel  1.  Hasil  pengukuran  absorbansi  kadar  fenolik  total  pada  ekstrak  metanol,  fraksi  etil asetat dan fraksi tidak larut etil asetat kulit buah naga merah
Sampel Abs Kadar terukur (µgGAE/g ektrak) rata- rata Ekstrak metanol 0,110 0,1765 0.1994 0,113 0,2059 0,114 0,2157 Fraksi etil 0,094 0,0196 0.0196 a b
asetat 0,094 0,0196 0,094 0,0196 Endapan/fraksi tidak larut EA 0,133 0,4020 0.4020 0,133 0,4020 0,133 0,4020
Tabel 2. Hasil pengukuran absorbansi kadar flavonoid total pada ekstrak metanol, fraksi etil asetat dan fraksi tidak larut etil asetat kulit buah naga merah
Sampel Abs Kadar terukur (µgQE/g ektrak) Rata-rata Ekstrak lama 0,021 0,5230 0,021 0,5230 0.5139 0,020 0,4959 Fraksi Etil Asetat 1,720 46,5664 1,718 46,5122 46,5483 1,720 46,5664 Endapan/fraksi tidak larut EA 0,421 11,3631 0,422 11,3902 11.3811 0,422 11,3902

## KESIMPULAN
Dari hasil penelitian  yang dilakukan dapat disimpulkan
1. Ekstrak  metanol,  fraksi  etil  asetat dan  endapan/  fraksi  tidak  larut  etil asetat  kulit    buah  naga  merah mengandung  senyawa  fenolik  dan flavonoid.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmad,  A.R.  Sakina,  Wisdawati,  Waode
Asrifa. 2014. Study of Antioxidant Activity and Determination  of  Phenol  and Flavonoid  Contents  of  Pepino’s Leaf Extract (Solanum
muricatum  Aiton). Chemistry . 51:8067-8072.
Apsari  Pramudita  Dwi.,  and  Susanti,  H. 2011.  Penetapan  Kadar  Fenoik Total  Ekstrak  Metanol  Kelopak Bunga  Rosella  Merah  ( Hibiscus sabdariffa L.)  dengan  Variasi Tempat Tumbuh secara Spektrofotometri. Jurnal  Ilmiah
Kefarmasian 2 (1) 73-80.
Dean,  J.  2009. Extraction  Techniques  In Analytical  Science .  London:  John Wiley  And  Sons  LTD.  Hal:  43- 46.
Handayani,  P.A.,  and  Rahmawati,  A., 2012.  Pemanfaatan  Kulit  Buah
Naga  (Dragon  Fruit)  sebagai Pewarna Alami Makanan Pengganti  Pewarna  Sintetis. J. Bahan Alam Terbarukan 1 . Malik, A. Ahmad, AR. 2015. Determonation  of  Phenolic  and flavonoids  contents  of  ethanolic extract of kanunang leaves
( Cordia  myxa L.). International
Journal  Of  PharmTech Research ,
7 (2), 243-246.
Miller, A. L. (1996). Antioxidant Flvonoids structure, Function and Clinical  Usage .  ALT  Med  Rev  :
103-111.
Muhammad,  K.,  Mohd.  Zahari,  N.I., Gannasin,  S.P.,  Mohd.  Adzahan,
N., Bakar, J., 2014. High methoxyl pectin from dragon fruit (Hylocereus polyrhizus) peel.
Food  Hydrocoll . 42 ,  289–297.
doi:10.1016/j.foodhyd.2014.03.02
1.
Wu,  L.,  Hsu,  H.-W.,  Chen,  Y.-C.,  Chiu, C.-C.,  Lin,  Y.-I.,  Ho,  J.A.,  2006.
Antioxidant  and  antiproliferative activities  of  red  pitaya. Food Chem . 95 , 319–327.
doi:10.1016/ j.foodchem .2005.01.0 02.