## Livestock and Animal Research
Accredited by Directorate General of Strengthening for Research and Development No. 10/E/KPT/2019
Open Access Livest. Anim. Res. , July 2020, 18(2): 142-150
p-ISSN 2721-5326 e-ISSN 2721-7086 https://doi.org/10.20961/lar.v18i2.42936

## Original Article

## Emisi metan dan fermentasi rumen in vitro dari ransum yang ditambahkan kitosan asal kulit udang
Rakhmad Perkasa Harahap 1 , 3 , Anuraga Jayanegara 2 , *, Nahrowi 2 , Sri Suharti 2 , Retno Budi Lestari 1 1 Program Studi Peternakan, Fakultas Pertanian, Universitas Tanjungpura, Pontianak, 78115
2 Departemen Ilmu Nutrisi dan Teknologi Pakan, Fakultas Peternakan, IPB University, Bogor, 16680
3 Program Studi Ilmu Nutrisi dan Pakan, Sekolah Pascasarjana, IPB University, Bogor, 16680
* Correspondence: anuraga.jayanegara@gmail.com
Received: January 30 th , 2020; Accepted: April 6 th , 2020; Published online: Juy 17 th , 2020

## Abstrak
Tujuan: Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengevaluasi  pengaruh  penambahan  kitosan  asal  kulit udang pada dosis yang berbeda ke dalam ransum basal terhadap emisi gas metan dan fermentasi rumen secara in vitro . Metode: Perlakuan  terdiri  dari:  P0  (ransum  basal),  P1  (ransum  basal  +  kitosan  2%  BK),  dan  P2 (ransum basal + kitosan 4% BK). Variabel yang diukur adalah kinetika produksi gas, produksi metan dinyatakan dalam produksi metan per unit bahan kering sampel dan produksi metan per unit bahan organik  yang  dicerna,  kecernaan  bahan  kering  (KCBK),  kecernaan  bahan  organik  (KCBO), volatile fatty acid (VFA), dan amonia (NH 3 ). Hasil: Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  penambahan  kitosan  2%  dan  4%  BK  dapat menurunkan  secara signifikan (P<0,05) total produksi gas, laju produksi  gas dan produksi  metan. Namun demikian penambahan kitosan asal kulit udang pada tidak berbeda nyata terhadap peubah KCBK, KCBO, VFA, dan NH 3 (P>0,05). Kesimpulan: Dapat disimpulkan bahwa kitosan dalam pakan bermanfaat dalam menurunkanemisi gas metan secara in vitro .
Kata Kunci: Metan; Kitosan; In vitro ; Kulit udang

## Abstract
Objective: This study was conducted to determine the effect of adding chitosan from shrimp waste at different doses into the basal ration on in vitro methane emission and rumen fermentation. Methods: The treatments consisted of: P0 (basal ration), P1 (basal ration + chitosan 2% DM), and P2 (basal  ration  +  chitosan  4%  DM).  The  variables  measured  were  gas  production  kinetics,  methane production  expressed  in  methane  production  per  unit  of  dry  matter  substrat  and  methane production  per  unit  of  digested  organic  matter, in vitro dry  matter  digestibility  (IVDMD), in vitro organic matter digestibility (IVOMD), volatile fatty acids (VFA), and ammonia (NH3).
Results: The  results  showed  that  the  addition  of  chitosan  2%  and  4%  DM  significantly  reduced (P<0,05) total gas production, gas production rate, and methane production. However, the addition of chitosan did not alter IVDMD, IVOMD, VFA, and NH 3 variables (P>0,05). Conclusions: It  can  be  concluded  that  chitosan  addition  is  useful  for  mitigating  enteric  methane emission in vitro.
Harahap et al (2020) Livest. Anim. Res. 18(2): 142-150
Keywords: Methane; Chitosan; In vitro ; Shrimp waste.

## PENDAHULUAN
Gas metan memiliki dampak gas rumah kaca  lebih  besar  dibandingkan  gas  karbon dioksida.  Produksi  metan  ternak  ruminansia berasal dari sintesis selama fermentasi pakan dalam  rumenyang  memasok  sekitar  5% hingga 7% dari gross energy pakan, sekitar 16 hingga  26  g/kg  pakan  yang  dikonsumsi  [1]. Dengan  demikian,  pendekatan  dengan  cara penghambatan produksi CH 4 pada ruminansia  dianggap  memberikan  efisiensi pemanfaatan energi pakan, manfaat ekonomi dan  mengurangi  efek  gas  rumah  kaca  global [2].  Penghambatan  produksi  CH 4 pada ruminansia  dapat  dilakukan  dengan  cara memanipulasi  ekosistem  rumen.  Beberapa jenis  senyawa  alami  yang  memiliki  sifat antimikroba dapat digunakan untuk memanipulasi ekosistem mikroba rumen.
Manipulasi  ekosistem  mikroba  rumen untuk  meningkatkan  efisiensi  penggunaan pakan  dan  mengurangi  dampak  lingkungan telah  lama  menjadi  tujuan  para  peneliti nutrisi  ternak  ruminansia.  Sejumlah  aditif pakan asal kimia, antibiotik, metan inhibitor, agen  defaunasi  dan  ekstrak  dari  tumbuhan telah  terbukti  meningkatkan  metabolisme rumen  dan  pertumbuhan  ternak  ruminansia [3],[4]. Namun, kekhawatiran tentang keberadaan  residu  kimiawi  dalam  produk ternak,  perkembangan  resistensi  bakteri terhadap  antibiotik,  dan  toksisitas  yang berlebihan  serta  biaya  beberapa  ekstrak tumbuhan  telah  membatasi  penggunaannya dalam  ransum  pakan  ternak  ruminansia  [5]. Sebagai  akibatnya,  para  peneliti  nutrisi ruminansia  masih  aktif  mencari  aditif  pakan alternatif  yang  dapat  meningkatkan  fungsi rumen.  Salah  satu  jenis  senyawa  alami  yang memiliki  sifat  antimikroba  dan  berpotensi digunakan  untuk  memanipulasi  ekosistem mikroba rumen adalah kitosan.
Kitosan  adalah  biopolimer  yang  dapat diperoleh  dalam  eksoskeleton  dari  kepiting dan  udang.  Kitosan  sangat  menarik  untuk diteliti  karena  dapat  mengubah  profil volatil fatty  acid (VFA)  dan  mengubah  fermentasi rumen,  serta  meningkatkan  konsentrasi propionat (C 3 ), sehingga mengurangi
produksi  CH 4 [6].  Lebih  lanjut,  reduksi  CH 4 bisa  disebabkan  oleh  derajat  deasetilasi  yang ditemukan  dalam  kitosan,  yang  dapat memodifikasi  permeabilitas  dinding  sel bakteri metanogen [7]. Penelitian sebelumnya menunjukkan  bahwa  penambahan  kitosan dapat menghambat sintesis CH 4 in vitro ketika ditambahkan  ke  substratpada  konsentrasi tinggi  [8].  Selanjutnya,  penambahan  kitosan yang berasal dari serangga lalat tentara hitam ( black soldier fly ) pada konsentrasi 2% substrat menghasilkan  efek  reduksi  yang  kuat terhadap  emisi  CH 4 [6].  Penelitian  ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh penambahan  kitosan  yang  berasal  dari  kulit udang pada konsentrasi berbeda padaransum ternak  ruminansia  terhadap  produksi  metan dan fermentasi rumen secara in vitro .

## MATERI DAN METODE

## Persiapan sampel
Aditif  pakan  yang  digunakan  adalah kitosan  asal  kulit  udang  (derajat  deasetilasi 87,5%;  viskositas  50  cps;  pH  7,1;  kelarutan 99%). Ransum basal (berdasarkan BK) terdiri dari  6,0%  onggok,  10,0%  dedak  padi,  13,0% pollard,  4,0%  bungkil  kedelai,  25,0%  bungkil sawit,  12,0%  bungkil  kelapa,  5,0%  molases, 1,0%  garam,  1,5%  CaCO 3 ,  20,0%  kulit  kopi, dan  2,5%  ampas  teh.  Kandungan  nutrisi ransum  basal  ditunjukkan  pada  Tabel  1, komposisi  kimia  dianalisis  sesuai  metode AOAC  secara  duplo  [9].  Ransum  basal diformulasikan  untuk  memenuhi  kebutuhan energi  dan  protein  domba  lokal  Indonesia [10].

## Uji  fermentasi  rumen  dan  kecernaan  secara in vitro
Pada  penelitian  ini  penggunaan  bagian cair dan partikel padat dari rumen diperoleh dari  dua  sapi  fistula  persilangan  Ongole sebelum  makan  pagi  di  Pusat  Penelitian Bioteknologi,  Lembaga  Ilmu  Pengetahuan dan  Penelitian  Indonesia  (LIPI),  Cibinong, Bogor,  Indonesia.  Persetujuan  penelitian diberikan  dari  Fakultas  Peternakan,  IPB University, Bogor, Indonesia.
Sampel percobaan yang dievaluasi untuk fermentasi  rumen in  vitro dan  pengujian
kecernaan dengan mengikuti prosedur Theodorou et al . [11]. Sejumlah 0,75 g sampel dicampur  dengan  75  ml  cairan  rumen  yang telah  disaring  dan  buffer  McDougall  (cairan rumen : buffer 1 : 4 v/v) dalam botol scott 125 ml.  Media  inkubasi  dan  botol scott dialirkan dengan gas karbon dioksida untuk memastikan kondisi anaerob sebelum inkubasi  dimulai.  Botol scott segera  ditutup dengan  sumbat  karet butyl dan  disegel dengan  penutup  botol  aluminium  kemudian proses  inkubasi  dimulai.  Untuk  penentuan kinetika  produksi  gas  in  vitro,  botol scott pertama  berupa  substrat  sampel  percobaan diinkubasi  selama  24  jam  dalam waterbath pada  suhu  konstan  39  °C.  Produksi  gas dikeluarkan dan dicatat pada 2, 4, 6, 8, 10, 12, dan  24  jam  setelah  inkubasi  menggunakan syringe 100  mL  yang  dilengkapi  dengan jarum.  Kinetika  produksi  gas  diperoleh
melalui persamaan eksponensial yang digagas  oleh  Orskov  dan  McDonald  (1979)
[12] berikut:
p = a + b (1 – e
– ct )
dengan p adalah produksi gas kumulatif pada  waktu  t  jam,  sedangkan  a,  b  dan  c merupakan konstanta dari persamaan eksponensial  tersebut.  Konstanta  a,  b  dan  c dapat diinterpretasikan sebagai produksi gas dari fraksi yang mudah larut (a), produksi gas dari  fraksi  yang  tidak  larut  namun  dapat difermentasikan (b) dan laju reaksi pembentukan gas (c). Dengan demikian a + b dapat  diartikan  sebagai  produksi  gas maksimum  yang  dapat  terbentuk  selama proses  fermentasi  pada  waktu  t  mendekati tak  terhingga  [12].  Perhitungan  dilakukan dengan persamaan regresi nonlinear
menggunakan SPSS versi 20. Pengambilan parameter produksi metan  dilakukan  setelah  24  jam  inkubasi
Tabel 1. Komposisi dan kandungan nutrien ransum perlakuan
Komponen Perlakuan P0 P1 P2 Bahan pakan (% BK) Onggok 6 6 6 Dedak padi 10 10 10 Pollard 13 13 13 Bungkil kedelai 4 4 4 Bungkil sawit 25 25 25 Bungkil kelapa 12 12 12 Molases 5 5 5 Garam 1 1 1 CaCO 3 1,5 1,5 1,5 Kulit kopi 20 20 20 Ampas teh 2,5 2,5 2,5 Kitosan 0 2 4 Komposisi kimia (% BK) Bahan kering (BK) 87,3 94,4 91,2 Neutral-detergent fiber (NDF) 59,9 61,4 61,1 Acid-detergent fiber (ADF) 48,6 48,5 47,4 Protein kasar 10,2 10,4 11,8 Lemak kasar 6,3 6,5 6,9 Serat kasar 6,7 8,3 8,5 Abu 12,6 13,4 13,5
Gambar 1. Produksi gas kumulatif perlakuan P0 (- ♦ -), P1 (- ■ -), dan P2 (- ▲ -) selama 24 jam waktu inkubasi. P0, ransum basal (kontrol); P1, ransum basal + 2% BK kitosan kulit udang; P2, ransum basal + 4% BK kitosan kulit udang
menggunakan syringe yang dilengkapi dengan jarum dan dimasukkan kedalam botol yang telah disegel dan divakum. Konsentrasi metan  diukur  menggunakan  Shimadzu  8A GC  dengan flame  ionization  detector (FID). Untuk  penentuan  produk  fermentasi,  yaitu, total volatile  fatty  acid (VFA),  amonia,  dan kecernaan in  vitro ,  botol scott kedua  berupa substrat  sampel  percobaan  diinkubasi  dalam dua  tahap  selama  2  ×  24  jam  [13].  Setelah inkubasi  24  jam  pertama,  supernatan dikeluarkan  dengan sentrifugasi  untuk pengukuran  total  VFA  dan  amonia  seperti yang dijelaskan dalam Jayanegara et al . (2016)
[14].  Dalam  inkubasi  24  jam  kedua,  residu selanjutnya diinkubasi dengan 75 ml pepsin-HCl 0,2 N untuk penentuan kecernaan bahan  kering in vitro (KCBK)  dan  kecernaan bahan  organik in  vitro (KCBO).  Berat  awal bahan  kering  (BK)  dan  bahan  organik  (BO) dikurangi  dengan  residu  BK  dan  BO masing-masing  untuk  mendapatkan  KCBK dan KCBO. Inkubasi in vitro dilakukan dalam 4 kali ulangan.

## Rancangan percobaan dan analisis data
Percobaan
yang
dilakukan
menggunakan  rancangan  acak  kelompok (RAK)  dengan  3  perlakuan  dan  4  ulangan. Perlakuan terdiri dari: P0 (Ransum basal), P1 (Ransum  basal  +  2%  BK  kitosan),  dan  P2 (Ransum basal + 4% BK kitosan).
Pengelompokan perlakuan ke dalam unit-unit  percobaan  mengikuti  rancangan acak  kelompok  (RAK),  sehingga  proses in vitro yang berbeda menjadi kelompok karena perbedaan  variasi  populasi  dan  aktivitas mikroba rumen dalam setiap waktu pengambilan  sampel.  Data outlier yang terdeteksi  kemudian  dihapus  dari  data  set ketika  skor  Z  lebih  rendah  dari  -2  atau  lebih tinggi  dari  2.  Data  yang  diperoleh  dianalisis sidik ragam (ANOVA) pada taraf 5%. Untuk perbandingan  antar  perlakuan  yang  berbeda mengunakan Duncan’s multiple range test pada taraf  5%.  Analisis  data  dilakukan  dengan menggunakan software IBM  SPSS  Statistics versi 20.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Kinetika produksi gas dan emisi metan
Kurva  produksi  gas in  vitro selama  24 jam  waktu  inkubasi  ditunjukkan  pada Gambar 1.  Produksi  gas pada P0, P1, dan P2 meningkat  seiring  dengan  bertambahnya waktu inkubasi. Kurva produksi gas pada P1 lebih  rendah  dibandingkan  dengan  P0 (kontrol),  yang  berarti  bahwa  pemberian kitosan  2%  BK  dapat  mengurangi  produksi gas.  Kurva  produksi  gas  P2  lebih  rendah dibandingkan dengan P1, yang berarti bahwa penambahan  dosis  kitosan  berbanding  lurus dengan  penurunan  produksi  gas.  Produksi
gas  yang  dihasilkan  pada  metode  ini  berasal dari proses fermentasi rumen. Volatil fatty acid (VFA), karbon dioksida (CO 2 ) dan molekul H (H 2 ) diproduksi
selama
fermentasi karbohidrat oleh bakteri, protozoa dan jamur di  rumen.  VFA  berfungsi  sebagai  sumber energi  utama  bagi  ternak  ruminansia  [15]. Laju  produksi  gas in  vitro setiap  perlakuan semakin berkurang
seiring
dengan bertambahnya waktu inkubasi yang disebabkan  semakin  berkurangnya  jumlah substrat  yang  dapat  difermentasi.  Korelasi positif  antara  waktu  inkubasi  dan  produksi gas in  vitro terkait  dengan  degradasi  sampel pakan  yang  diinkubasi  selama  waktu inkubasi yang lebih lama [16].
Persamaan  eksponensial  Orskov  dan McDonald  (1979)  [12]  digunakan  pada percobaan  ini  terdiri  dari  produksi  gas  total selama  inkubasi  24  jam  serta  koefisien kinetika  produksi  gas  yakni  produksi  gas maksimum  (a  +  b)  dan  laju  produksi  gas  (c) yang ditunjukkan pada Tabel 2. Penambahan kitosan  pada  ransum  basal  menurunkan produksi  total  gas  secara  nyata  pada  waktu inkubasi 24 jam (P<0,05), yaitu secara berturut P2<P1<P0.  Laju  produksi  gas  (koefisien  c) pada  P1  dan  P2  lebih  kecil  dibandingkan  P0 (P<0,05). Produksi gas maksimum (koefisien a +  b)  berbeda  nyata  (P<0,05),  yaitu  P2 menghasilkan  produksi  gas  maksimum terendah, sedangkan P0 menghasilkan produksi  gas  tertinggi.  Penambahan  kitosan dapat  menurunkan  produksi  gas  melalui mekanisme perubahan ekosistem
mikroorganisme  rumen.  Kitosan  memiliki aktivitas antimikroba untuk melawan berbagai  kelompok  mikroorganisme  rumen yang menghasilkan enzim untuk menghidrolisis  pakan  yang  mengakibatkan pengurangan hasil produksi gas [17].
Data produksi metan perlakuan terdapat pada Tabel 2. Peubah metan yang ditampilkan  pada  penelitian  ini  yaitu produksi metan per unit sampel dan produksi metan  per  unit  bahan  organik  tercerna. Produksi  metan  pada  setiap  perlakuan berbeda  nyata  (P<0,05).  Produksi  metan menurun dengan penambahan kitosan dalam ransum  basal  yang  diuji  pada  setiap  peubah produksi metan per unit sampel dan produksi metan  per  unit  bahan  organik  tercerna. Produksi  metan  per  unit  sampel  menurun dengan  penambahan  kitosan  2%  BK  dan  4% BK (P<0,05). Produksi metan per unit sampel menurun  secara  berurutan  yaitu  P2<P1<P0. Penambahan  kitosan  2%  BK  menunjukkan produksi  metan  per  unit  bahan  organik tercerna menurun 15,49%, sedangkan penambahan  kitosan  4%  BK  menunjukkan produksi  metan  per  unit  bahan  organik tercerna  menurun  19,76%  dibandingkan ransum  basal  tanpa  penambahan  kitosan (P<0,05).  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian sebelumnya yang menyatakan bahwa penambahan  kitosan  dapat  menurunkan metan  [18].  Penurunan  produksi  metan dengan
penambahan
kitosan dapat disebabkan melalui mekanisme penghambatan H 2 sebagai
substrat
Tabel 2. Kinetika produksi gas dan emisi metan (CH 4 ) ransum basal yang mengandung kitosan asal kulit udang
Peubah Perlakuan SEM P0 P1 P2 Gas 24jam (ml) 81,6 a 76,3 b 69,8 c 1,146 a + b (ml) 86,6 a 81,7 b 76,4 c 1,412 c (ml/jam) 0,131 a 0,122 ab 0,109 b 0,004 CH 4 (μ l/L gas) 4,49 a 4,39 b 4,42 b 0,012 CH 4 (μ l/g sampel) 0,915 a 0,806 b 0,754 c 0,016 CH 4 KCBO (μ l/g BO) 1,194 a 1,009 b 0,958 b 0,025
P0, ransum basal (kontrol); P1, ransum basal + 2% BK kitosan kulit udang; P2, ransum basal + 4% BK kitosan kulit udang; a + b,
produksi gas maksimum; c, laju produksi gas; KCBO, kecernaan bahan organik; BO, bahan organik.
a,b,c superskrip berbeda pada baris yang sama menunjukkan berbeda nyata (P<0,05).
Harahap et al (2020) Livest. Anim. Res. 18(2): 142-150
pembentukan CH 4 di dalam rumen. Penghambatan  H 2 merupakan  hasil  dari penurunan  aktivitas  protozoa  dan  bakteri fibrolitik karena
kitosan
dilaporkan berpengaruh lebih dominan sebagai antimikroba  terhadap  protozoa  dan  bakteri fibrolitik  [19].  Hal  ini  sesuai  dengan penelitian  sebelumnya  yang  menyatakan bahwa kitosan dapat menghambat pertumbuhan bakteri
fibrolitik
yang memproduksi H 2 [20].
Kecernaan  dan  karakteristik  fermentasi rumen in vitro Data  KCBK,  KCBO,  VFA,  dan  NH 3 terdapat  pada  Tabel  3.  Penambahan  kitosan pada  penelitian  ini  tidak  berbeda  nyata terhadap  peubah  KCBK  dan  KCBO  secara in vitro .  Hal  ini  tidak  sesuai  dengan  penelitian sebelumnya yang melaporkan bahwa penambahan  kitosan  dapat  meningkatkan kecernaan BK, protein kasar, dan NDF in vitro pada  substrat  silase  keseluruhan  tanaman kedelai [21]. Namun, penelitian lain melaporkan  bahwa  penambahan  kitosan dapat  menurunkan  kecernaan  BK  dan kecernaan  NDF in  vitro dengan  substrat hijauan yang tinggi [22]. Perbedaan ini dapat terjadi akibat perbedaan aktivitas mikroorganisme rumen dalam mendegradasi substrat.  Kitosan  dapat  mempengaruhi bakteri  melalui  interaksi  ionik  antara  gugus amino  bermuatan  positif  kitosan  dengan permukaan  bakteri  yang  bermuatan  negatif yang  menghasilkan  perubahan  permeabilitas membran bakteri [23]. Kitosan juga
dilaporkan dapat menghambat pertumbuhan mikroorganisme  yang  memproduksi  enzim CMCase [24].
Peubah  VFA  tidak  berbeda  nyata  pada setiap  perlakuan.  Hal  ini  sesuai  dengan penelitian  sebelumnya  yang  melaporkan bahwa penambahan kitosan tidak memberikan pengaruh yang signifikan terhadap  total  VFA,  tetapi  berpengaruh terhadap peningkatan proporsi molar propionat dan penurunan rasio acetat:propionat [25]. Profil fermentasi dengan  penambahan  kitosan  berdampak pada  produksi  H 2 yang  dapat  mendukung dalam  konversi  fermentasi  karbohidrat  dari produksi  asetat  (C 2 )  ke  propionate  (C 3 )  [26]. Penambahan  kitosan  dapat  menigkatkan efisiensi penggunaan energi pada ruminansia. Propionat,  asetat,  dan  butirat  adalah  produk utama  dalam  fermentasi  rumen.  VFA merupakan  bagian  dari  energi  yang  penting untuk ternak ruminansia [25].
Penambahan  kitosan  2%  BK  dan  4%  BK meningkatkan  kandungan  protein  kasar ransum  (Tabel  1).    Namun  penambahan kitosan  tidak  mempengaruhi  peubah  NH 3 pada setiap perlakuan. Kitosan tidak menghambat  degradasi  protein  oleh  bakteri proteolitik di rumen sesuai dengan penelitian sebelumnya  yang  menyatakan  bahwa  tidak ada  pengaruh  penambahan  kitosan  terhadap konsentrasi  NH 3 pada  rumen in  vitro  batch culture [19]. Penelitian sebelumnya
melaporkan bahwa
kitosan
dapat meningkatkan
kandungan
NH 3 pada fermentasi  rumen  dengan  menggunakan substrat  silase  seluruh  tanaman  kedelai  [27]. Peningkatan  kandungan  NH 3 dapat  juga disebabkan  oleh  peningkatan  kandungan protein  kasar  yang  dapat  digunakan  sebagai sumber nitrogen untuk ruminansia [28], [29]. Selain  itu,  unit  glukosamin  (−NH 2 )  kitosan
Tabel 3. Kecernaan ransum perlakuan kitosan kulit udang dan karakteristik fermentasi rumen
Peubah Perlakuan SEM P0 P1 P2 KCBK (%) 53,2 55,3 54,3 0,393 KCBO (%) 54,2 57,7 56,4 0,654 VFA (mmol/l) 77,8 83,4 77,5 1,753 NH 3 (mmol/l) 15,8 16,1 16,2 0,599
P0, ransum  basal  (kontrol); P1, ransum  basal + 2%  BK  kitosan  kulit  udang; P2, ransum  basal + 4%  BK  kitosan  kulit  udang;
KCBK, kecernaan bahan kering; KCBO, kecernaan bahan organik; VFA, volatile fatty acid .
a,b,c superskrip berbeda pada baris yang sama menunjukkan berbeda nyata (P<0,05).
diubah  menjadi  bentuk  terprotonasi  terlarut (−NH +3 )  ketika  kitosan  hadir  dalam  larutan asam encer [30].

## KESIMPULAN
Penambahan  kitosan  asal  kulit  udang pada dosis 2% dan 4% BK dapat mengurangi produksi  gas  pada  waktu  inkubasi  24  jam, laju  pembentukan  gas,  dan  produksi  metan secara in vitro . Penambahan kitosan asal kulit udang  pada  dosis  2%  BK  dan  4%  BK  tidak menurunkan  dan  meningkatkan  kecernaan bahan  kering  (KCBK)  dan  kecernaan  bahan organik  (KCBO)  secara in  vitro .  Kitosan  asal kulit  udang  pada  dosis  2%  BK  dan  4%  BK tidak menurunkan dan meningkatkan konsentrasi  VFA  dan  NH 3 di  dalam  rumen secara in  vitro yang  merupakan  hasil fermentasi rumen.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Penulis  menyatakan  tidak  ada  konflik kepentingan  dengan  pihak  manapun  terkait materi yang ditulis dalam naskah ini.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Kami berterima kasih kepada Direktorat Jenderal  Pendidikan  Tinggi,  Kementerian Pendidikan  dan  Kebudayaan  Indonesia, karena  memberikan  hibah  “ World  Class Research ” kepada penulis yang bersangkutan, dan Southeast  Asian  Regional  Center  for Graduate  Study  and  Research  in  Agriculture (SEARCA)  karena  menyediakan  Beasiswa Penelitian PhD ke penulis pertama.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Hristov, A. N., T. Ott, J. Tricarico, A. Rotz, G.  Waghorn,  A.  Adesogan,  J.  Dijkstra,  F. Montes,  J.  Oh,  and  E.  Kebreab.  2013. Mitigation  of  methane  and  nitrous  oxide emissions  from  animal  operations:  III.  A review  of  animal  management  mitigation options.  J.  Anim.  Sci.  91:5095-5113. doi:10.2527/jas.2013-6585.
2. Kaharabata, S. K., P. H. Schuepp, and R.L Desjardins.    2015.    Estimating    methane
emissions  from  dairy  cattle  housed  in  a barn  and  feedlot  using  an  atmospheric tracer. Environ. Sci. Technol. 34:3296-3302. doi:10.1021/es990578c.
3. Patra,  A.  K.  and  J.  Saxena.  2011.
Exploitation of dietary tannins to improve rumen metabolism and ruminant nutrition. J. Sci. 91:24-37. doi:10.1002/jsfa.4152.
4. Jayanegara, A., K. A. Sarwono, M. Kondo, H.  Matsui,  M.  Ridla,  E.  B.  Laconi,  and Nahrowi. 2018. Use of 3-nitrooxypropanol as  feed  additive  for  mitigating  enteric methane  emissions  from  ruminants:  a meta-analysis. Ital. J. Anim. Sci. 17:650-656. doi:10.1080/1828051X.2017.1404945.
5. Wina, E.,  S. Muetzel, and K. Becker. 2005. The impact of saponins or
saponin-containing  plant  materials  on ruminant  production  -  a  review.  J. Agric. Food Chem. 53:8093-8105.
doi:10.1021/jf048053d.
6. Haryati, R. P., A. Jayanegara, E. B. Laconi, M. Ridla, and P. Suptijah. 2019. Evaluation of  chitin  and  chitosan  from  insect  as  feed additives  to  mitigate  ruminal  methane emission. In: AIP Conf. Proc. 2120:040008.
7. Zanferari,  F.,  T.  H.  A.  Vendramini,  M.  F. Rentas, R. Gardinal, G. D. Calomeni, L. G. Mesquita,  C.  S.  Takiya.,  and  F.  P.  Rennó. 2018.  Effects  of  chitosan  and  whole  raw soybeans  on  ruminal  fermentation  and bacterial  populations,  and  milk  fatty  acid profile  in  dairy  cows.  J.  Dairy  Sci. 101:10939-10952.
doi:10.3168/jds.2018-14675.
8. Goiri,  I.,  A.  Garcia-Rodriguez,  and  L. Oregui.  2009.  Effects  of  chitosans  on  in vitro rumen digestion and fermentation of maize  silage.  Anim.  Feed  Sci.  Tech. 148:276-287.
doi:10.1016/j.anifeedsci.2008.04.007.
9. AOAC. 2005. Official methods of analysis. 18th  ed.  Assoc.  Off.  Anal.  Chem., Maryland Gaithersburg, USA.
10. Jayanegara,  A.,  M.  Ridla,  D.  A.  Astuti,  K. G.  Wiryawan,  E.  B.  Laconi,  and  Nahrowi. 2017. Determination of energy and protein requirements of sheep in indonesia using a meta-analytical approach.
Media Peternakan. 40:118-127.
Harahap et al (2020) Livest. Anim. Res. 18(2): 142-150
doi:10.5398/medpet.2017.40.2.118. 11. Theodorou,  M.  K.,  B.  A.  Williams,  M.  S.
Dhanoa,  A.  B.  McAllan,  and  J.  France. 1994.  A  simple  gas  production  method using  a  pressure  transducer  to  determine the  fermentation  kinetics  of  ruminant feeds.  Anim.  Feed  Sci.  Tech.  48:  185-197. doi:10.1016/0377-8401(94)90171-6.
12. Orskov,  E.  R.  and  I. McDonald.  1979.  The estimation  of  protein  degradability  in  the rumen  from  incubation  measurements weighted  according  to  rate  of  passage.  J.
Agri. Sci. 92:499-503. doi:10.1017/S0021859600063048.
13. Tilley,  J.  M.  A.  and  R.  Terry.  1963.  A two-stage  technique  for  the  in  vitro digestion of forage crops. Grass Forage Sci. 18:104-111.
doi:10.1111/j.1365-2494.1963.tb00335.x.
14. Jayanegara, A., S. P. Dewi, N. Laylli, E. B. Laconi,  N.  Nahrowi,  and  M.  Ridla.  2016. Determination  of  cell  wall  protein  from selected  feedstuffs  and  its  relationship with ruminal protein digestibility in vitro.
Media Peternakan. 39:134-140. doi:10.5398/medpet.2016.39.2.134. 15. Vyas,  D.,  S.  McGinn,  and  S.  Duval.  2016. Effects  of  sustained  reduction  of  enteric methane emissions with dietary supplementation of 3-nitrooxypropanol on growth  performance  of  growing  and finishing  beef  cattle.  J.  Anim.  Sci. 94:2024-2034. doi:10.2527/jas.2015-0268.
16. Maccarana, L., M. Cattani, F. Tagliapietra, S. Schiavon, L. Bailoni, and R. Mantovani. 2016.  Methodological  factors  affecting  gas and  methane  production  during  in  vitro rumen fermentation evaluated
by meta-analysis  approach.  J.  Anim.  Sci. Biotechno. 7:35. doi:10.1186/s40104-016-0094-8. 17. Goiri,  I.,  L.  M.  Oregui,  and  A. Garcia-Rodriguez. 2009. Dose-respon
effects  of  chitosans  on  in  vitro  rumen digestion  and  fermentation  of  mixtures differing  in  forage-to-concentrate  ratios. Anim.  Feed  Sci.  Tech.  151:215-227. doi:10.1016/j.anifeedsci.2009.01.016.
18. Goiri,  I.,  L.  M.  Oregui,  and  A. Garcia-Rodriguez.  2010.  Use  of  chitosans to  modulate  ruminal  fermentation  of  a 50:50 forage-to-concentrate diet in sheep. J.
Anim. Sci. 88:749-755. doi:10.2527/jas.2009-2377.
19. Belanche,  A.,  E.  Ramos-Morales,  and  C.  J. Newbold.  2016.  In  vitro  screening  of natural  feed  additives  from  crustaceans, diatoms,  seaweeds  and  plant  extracts  to manipulate  rumen  fermentation.  J.  Sci. 9:3069-3078. doi:10.1002/jsfa.7481.
20. Wang,  Y.,  T.  McAllister,  L.  Rode,  K. Beauchemin, and D. Morgavi. 2001. Effects on  exogenous  enzyme  preparation  on microbial  protein  synthesis,  enzyme activity  and  attachment  to  feed  in  the Rumen  Simulation  Technique  (RUSITEC). Br.
J. Nutr. 85:325-332.
doi:10.1079/bjn2000277.
21. Gandra, J.R., C. S. Takiya, T. A. Del Valle, E. R. Oliveira, R. H. T. B. de Goes, E. R. S. Gandra,  J.  D.  O.  Batista,  and  H.  M.  C. Araki.  2018.  Soybean  whole-plant  ensiled with  chitosan  and  lactic  acid  bacteria: Microorganism counts, fermentative profile,  and  total  losses.  J.  Dairy  Sci. 101:7871-7880. doi:10.3168/jds.2017-14268.
22. Wencelova, M., Z. Varadyova, K. Mihalikova,  S.  Kisidayova,  and  D.  Jalc. 2014.  Evaluating  the  effects  of  chitosan, plant  oils,  and  different  diets  on  rumen metabolism  and  protozoan  population  in sheep.  Turk.  J.  Vet.  Anim.  Sci.  38:26-33. doi:10.3906/vet/1307-19.
23. Kong,  M.,  X.  G.  Chen,  K.  Xing,  and  H.  J. Park.  2010.  Antimicrobial  properties  of chitosan and mode of action: a state of the art  review.  Int.  J.  Food  Microbiol. 144:51-63.
doi:10.1016/j.ijfoodmicro.2010.09.012.
24. Benhabiles, M. S., R. Salah, H. Lounici, N. Drouichie,  M.  F.  A.  Goosen,  and  N. Mameri.  2012.  Antibacterial  activity  of chitin, chitosan and its oligomers prepared from shrimp shell waste.  Food Hydrocoll. 29:48-56.
doi:10.1016/j.foodhyd.2012.02.013.
25. Li,  C.,  X.  Zhao,  Y.  Cao,  Y.  Lei,  C.  Liu,  H. Wang, and J. Yao. 2013. Effects of chitosan on  in  vitro  ruminal  fermentation  in  diets with different forage to concentrate ratios. J. Anim.
Vet. Adv. 12:839-845. doi:10.36478/javaa.2013.839.845.
26. Seankamsorn,  A.,  A.  Cherdthong,  and  M. Wanapat. 2020. Combining crude glycerin
with  chitosan  can  manipulate  in  vitro ruminal  efficiency  and  inhibit  methane synthesis. Anim. 10:30.
doi: 10.3390/ani10010037.
27. Gandra,  J.  E.,  C.  S.  Takiya,  E.  R.  Oliveira, P.G. Paiva, R. H. T. B. Goes, R. S. Gandra, and  H.  M.  C.  Araki.  2016.  Nutrient digestion, microbial protein synthesis, and blood  metabolites  of  Jersey  heifers  fed chitosan  and  whole  raw  soybeans.  Rev. Bras. Zootec. 43:130-137.
doi:10.1590/S1806-92902016000300007.
28. Manni,  L.,  O.  Ghorbel-Bellaaj,  K.  Jellouli, L.  Younes,  and  M.  Nasri.  2010. Extraction and  characterization  of  chitin,  chitosan, and  protein  hydrolysates  prepared  from shrimp  waste  by  treatment  with  crude protease  from  Bacillus  cereus  SV1.  Appl. Biochem. Biotech.
162:345-357. doi:10.1007/s12010-009-8846-y.
29. Fadel El-seed, A. N. M. A., H. E. M. Kamel, J. Sekine, M. Hishinuma, and K. Hamana. 2013.  Short  communication:  Chitin  and chitosan  as  possible  novel  nitrogen sources.  Can.  J.  Anim.  Sci.  83:161-163. doi:10.4141/A02-063.
30. Goy,  R.  C.,  D.  Britto,  and  O.  C.  G.  Assis.
2009. A review of the antimicrobial activity of chitosan. Polímeros. 19:241-247. doi:10.1590/S0104-14282009000300013.