## Jurnal Pendidikan Biologi Undiksha
p-ISSN : 2599-1450 e-ISSN : 2599-1485 Volume 11 Nomor  1 Tahun  2024 Open Acces : https://ejournal.undiksha.ac.id/index.php/JJPB/index
Efek  Pemberian  Ekstrak  Kulit  Kabau  (Archidendron  jiringoides komariah)  Terhadap  Konsentrasi  Spermatozoa  Mencit  Jantan yang Diinduksi Timbal (Pb)
Elisa Nurma Riana 1* , Novita Azizah 1 , Yanti Ariyanti 1
1 Prodi Biologi, Fakultas Sains, Institut Teknologi Sumatera,  Jl. Terusan Ryacudu   Way Hui,  Kec. Jati Agung, Kab. Lampung Selatan, Indonesia
* elisa.riana@bi.itera.ac.id

## Abstract
Infertility is currently an important problem in the world, including in Indonesia. Infertility can occur in men and women. In men, factors causing infertility can come from external sources. One environmental factor that can cause infertility is exposure to heavy metals from the environment. One way to prevent and treat infertility includes consuming natural antioxidants derived from plants. One plant that has antioxidant compounds and has antioxidant activity is the kabau plant. This research was conducted to test the effect of kabau  seed pod extract (Archidendron jiringoides Komariah) on male mice exposed to Pb metal to  determine  its  effect  on  the  concentration  of  spermatozoa  in  male  mice.  The  methods  used  in  this  research  include: preparation  of  test  animals,  making  simplicia  and  kabau  seed  pod  extract,  exposing  the  extract  to  test  animals,  isolating organs, and making spermatozoa suspensions. Giving kabau seed pod extract to mice that had previously been exposed to lead (Pb) increased the concentration of mice spermatozoa with the most effective dose of kabau bark extract, namely 190 mg/kg BW. However, statistical analysis shows that the increase is not significant.
Keywords: antioxidant; archidendron; infertility; spermatozoa

## Abstrak
Infertilitas sampai saat ini menjadi masalah penting di dunia, termasuk di Indonesia. Infertilitas dapat terjadi pada pria dan wanita.  Pada  pria,  faktor  penyebab  infertilitas  dapat  berasal  dari  eksternal.  Salah  satu  faktor  lingkungan  yang  dapat menyebabkan infertilitas adalah adanya paparan logam berat dari lingkungan. Salah satu cara untuk mencegah dan mengobati infertilitas antara lain dengan konsumsi antioksidan alami yang berasal dari tumbuhan. Salah satu tanaman yang memiliki senyawa antioksidan dan meiliki  aktivitas antioksidan  adalah tanaman  kabau. Penelitian  ini dilakukan untuk menguji  efek ekstrak kulit kabau ( Archidendron jiringoides Komariah) terhadap mencit jantan yang dipaparkan logam Pb untuk mengetahui efeknya terhadap konsentrasi spermatozoa mencit jantan. Metode yang dilakukan pada penelitian ini antara lain: persiapan hewan  uji  coba,  pembuatan  simplisia  dan  ekstrak  kulit  kabau,  pendedahan  ekstrak  pada  hewan  uji,  isolasi  organ,  dan pembuatan suspensi spermatozoa. Pemberian ekstrak kulit kabau terhadap mencit yang sebelumnya telah dipaparkan timbal (Pb)  meningkatkan konsentrasi  spermatozoa  mencit dengan dosis  ekstrak  kulit  kabau  yang paling efektif  yaitu  190  mg/kg berat badan BB, namun analisis secara statistik menunjukkan peningkatan yang terjadi tidak signifikan .
Kata-kata kunci: antioksidan; archidendron; ; infertilitas, spermatozoa

## PENDAHULUAN
Infertilitas sampai saat ini menjadi masalah penting di dunia, termasuk di Indonesia. Infertilitas  dapat  terjadi  pada  pria  dan  wanita.  Pada  pria,  faktor  penyebab  infertilitas  dapat berasal  dari  eksternal  maupun  internal.  Faktor  internal  penyebab  infertilitas  antara  lain kelainan  DNA,  kelaian  pada  spermatogenesis,  kelainan  anatomi  organ  reproduksi  sehingga mempengaruhi  kualitas  sperma  yang  dihasilkan.  Sedangkan  faktor  eksternal  penyebab infertilitas yaitu adanya paparan zat-zat tertentu dari lingkungan (Akbar, 2020). Salah satu zat yang dapat  menyebabkan infertilitas pada pria adalah logam berat.  Paparan Pb dan Cd dari lingkungan  dapat  menyebabkan  infertilitas  pada  pria  dengan  indikasi  penurunan  kualitas sperma (Calogero et al ., 2021). Selain itu, paparan logam berat dapat menyebabkan kerusakan struktur  histologi,  produksi  sperma  dan  kualitas  sperma  (Heidari et  al .,  2021).  Akumulasi logam  berat  pada  testis  menyebabkan  fungsi  sperma  tidak  normal,  meningkatnya  peroksida lipid,  dan  penurunan  antioksidan  yang  dapat  menyebabkan  infertilitas  pada  pria  (Nsonwu- Anyanwu et al ., 2019).
Gangguan reproduksi dapat dikurangi dan dicegah dengan meningkatkan antioksidan di  dalam  tubuh    (Falahati-Pour et  al .,  2024).  Antioksidan  secara  alami  ditemukan  pada beberapa  jenis  tumbuhan.  Senyawa  antioksidan  dapat  ditemukan  dari  bahan  pangan  yang mengandung vitamin E, vitamin C, dan karotenoid. Selain itu, senyawa antioksidan juga dapat dijumpai  pada  senyawa-  senyawa  fitokimia  seperti  alkaloid,  saponin,  fenol,  flavonoid,  dan steroid (Prayoga et al ., 2019). Tanaman kabau ( Archidendron bubalinum ) merupakan tanaman asli daerah Sumatera yang memiliki sifat antibakteri, antivirus, dan antiparasit (Rahmawati et al ., 2020). Selain itu, kulit kabau memiliki aktivitas antioksidan yang tergolong sangan kuat (Riana et al ., 2024). Dengan adanya aktivitas tersebut, penelitian ini dilakukan untuk melihat efek ekstrak kulit kabau terhadap konsentrasi sperma mencit jantan yang diinduksi Pb.

## Metode

## Persiapan Hewan Uji Coba
Hewan uji coba yang digunakan adalah mencit ( Mus musculus ) jantan dengan berat 20- 30 gram yang berumur 2-3 bulan. Mencit yang digunakan sebanyak 24 ekor dimasukkan ke dalam 6 buah kandang berukuran 42 cm x 36 cm x 15 cm. Setiap kandang berisi 4 ekor mencit yang telah dipilih secara acak. Mencit dihabituasi terlebih dahulu selama 1 minggu atau 7 hari. Mencit  diberikan  pakan  dan  minum.  Mencit  dipastikan  dalam  keadaan  sehat  dan  tidak memiliki  kelainan  pada  tubuhnya.  Larutan  Pb  dipaparkan  secara  intramuscular,  sedangkan ekstrak kulit kabau didedahkan secara oral.

## Pembuatan Simplisia Kulit Kabau
Pembuatan ekstrak kulit kabau ini diawali dengan pembuatan simplisia dengan cara 2 kg kulit kabau dicuci dan dikeringkan selama 1 minggu dengan cara dijemur di bawah sinar matahari.  Setelah  kering,  kulit  kabau  dihaluskan  dengan  menggunakan blender (Fitria Ningrum et al ., 2021).

## Pembuatan Ekstrak Kulit Kabau
Pembuatan ekstrak 1 kg serbuk simplisia kulit kabau dilakukan dengan menggunakan metode    meserasi  memakai  6  L  etanol  96%  sebagai  pelarut  selama  3  x  24  jam  pada  suhu ruangan sambil sesekali diaduk dan diulang beberapa kali. Selanjutnya dilakukan penyaringan dengan  menggunakan  kertas  saring  untuk  memperoleh  filtrat.  Filtrat  diperoleh  dilakukan evaporasi  menggunakan rotary  evaporator untuk  memisahkan  solven  dengan  ekstrak  agar mendapatkan ekstrak yang kental (Fitria Ningrum et al ., 2021).

## Pemberian Perlakuan Terhadap Hewan Uji Coba
Ekstrak kulit kabau didedahkan secara oral menggunakan sonde dengan spuit 1 mL. Sebelum  dipaparkan,  hewan  uji  dipuasakan  selama  kurang  lebih  6  jam.  Hewan  uji dikelompokkan menjadi 6 kelompok, yaitu kelompok diberi aquades, kelompok kontrol positif yaitu dipaparkan Pb dan diberikan Vitamin C, kelompok kontrol negatif yaitu dipaparkan Pb, kelompok P1 yaitu dipaparkan Pb dan diberikan ektrak kulit kabau dosis 1 yaitu 95 mg/kg BB mencit, kelompok P2 yaitu dipaparkan Pb dan diberikan ekstrak kulit kabau dosis 2 yaitu 190 mg/kg BB mencit, dan kelompok P3 yaitu dipaparkan Pb dan diberikan ekstrak kulit kabau dosis 3 yaitu 380 mg/kg BB mencit. Kelima kelompok yaitu kelompok kontrol positif, kontrol negatif, P1, P2, dan P3 dipaparkan dengan Pb terlebih dahulu selama 14 hari, setelah itu pada hari ke 15 sampai hari ke 35, kontrol positif dilanjurkan dengan diberikan vitamin C, kontrol negatif tidak diberikan apapun, P1 dirikan dengan ekstrak kulit kabau dosis 1, P2 diberikan dengan ekstrak kulit kabau dosis 2, dan P3 diberikan ekstrak kulit kabau dosis 3.

## Isolasi Organ
Mencit dimasukkan kedalam toples bening berisi kapas yang telah diteteskan beberapa tetes kloroform. Setelah mencit sudah tidak bergerak, mencit diangkat dan diletakkan diatas meja  bedah.  Mencit  diinsisi  mengikuti  garis  media  abdominal  untuk  mengekspos  organ reprodukdi  mencit.  Setelah  organ  reproduksi  terlihat,  testis  ditarik  keluar dari  skrotum,  lalu
dibersihkan dari jaringan disekitarnya. Selanjutnya testis yang telah diambil dimasukkan ke dalam  pot  organ  yang  di  dalamnya  telah  diisi  dengan  NBF  (Neutral  Buffer  Formalin)  10% sebanyak 2 ml (Sri Gunawati et al ., 2019).

## Pembuatan Suspensi Sperma Mencit
Pembuatan suspensi sperma mencit dapat dilakukan dengan mengambil bagian kauda dari  epididimis  mencit.  Lalu  ditempatkan  pada  cawan  petri  yang  sebelumnya  telah ditambahkan larutan NaCl 0,9% sebanyak 1 mL. Kemudian bagian kauda epididymis tersebut dicacah hingga terbentuk potongan-potongan kecil.

## Hasil dan Pembahasan
Berdasarkan  hasil  dari  perhitungan  konsentrasi  spermatozoa  (Gambar  6)  dapat diketahui  bahwa  konsentrasi  spermatozoa  tertinggi adalah  pada  mencit  perlakuan  P2  yaitu sebanyak 38.500.000 sperma/ml, sedangkan konsentrasi  sperma  terendah  adalah  pada  mencit perlakuan K-, yaitu 14.750.000 sperma/ml.
Gambar 1. Diagram batang konsentrasi spermatozoa mencit
Uji statistik menggunakan uji One-Way ANOVA menunjukkan bahwa pemberian ekstrak kulit kabau pada mencit yang sebelumnya telah dipaparkan oleh timbal (Pb) tidak memberikan efek  yang  signifikan  terhadap  konsentrasi  spermatozoa  mencit  dengan  distribusi  data  yang normal dan homogen didapatkan nilai P-value sebesar  0,647  ( p <0,05).  Namun  berdasarkan diagram  konsentrasi  spermatozoa  mencit  (Gambar  6),  pemberian  ekstrak  kulit  kabau  dapat meningkatkan konsentrasi spermatozoa mencit. Berdasarkan diagram tersebut diketahui bahwa terdapat kenaikan konsentrasi spermatozoa mencit pada mencit perlakuan P1, P2, dan P3 jika dibandingkan  dengan  mencit  perlakuan  K-.  Dosis yang paling  optimal  dalam  meningkatkan konsentrasi spermatozoa yaitu 190 mg/kg BB mencit yang diberikan pada mencit perlakuan P2. Kenaikan konsentrasi spermatozoa mencit pada mencit perlakuan P2 mampu melebihi kenaikan
konsentrasi  spermatozoa  mencit  pada  mencit  perlakuan  K+,  yaitu  mencit  yang  diberikan vitamin C.
Berdasarkan perhitungan konsentrasi spermatozoa tersebut pula, dapat diketahui bahwa mencit perlakuan K- yaitu mencit yang hanya dipaparkan oleh timbal dapat dikatakan infertile . Sementara itu, mencit perlakuan KP, K+, P1, P2, dan P3 dapat dikatakan fertile . Hal tersebut dikarenakan  spermatozoa  yang  tidak  normal  dapat  dianggap infertile .  Spermatozoa  sendiri dianggap tidak normal apabila konsentrasi spermatozoa kurang dari 20.000.000 sperma/ml, dan sebaliknya spermatozoa  dapat  dinyatakan  normal  apabila  konsentrasi  spermatozoa  lebih  dari 20.000.000  sperma/ml  (Fauziyah  &  Dwijananti,  20131).  Hasil  peningkatan  konsentrasi spermatozoa yang tidak signifikan kemungkinan karena waktu untuk perbaikan kurang lama.
Kemampuan  ekstrak  kulit  kabau  dalam  memperbaiki  morfologi  spermatozoa  dan meningkatkan  konsentrasi  spermatozoa  dikarenakan  adanya  kandungan  senyawa  fitokimia pada  ekstrak  tersebut  seperti  flavonoid,  saponin,  fenol,  tanin,  yang  merupakan  senyawa antioksidan.  Ekstrak kulit  kabau memiliki aktivitas antioksidan yang tergolong  sangat  kuat (Riana et al ., 2024) . Senyawa antioksidan dapat menetralisir radikal bebas yang berasal dari timbal  (Pb),  dengan  demikian  senyawa  antioksidan dapat  melindungi  fungsi  utama  dari spermatozoa  dari  serangan  radikal  bebas  sehingga  dapat  memperlancar  tahapan spermatogenesis dan kualitas sperma tetap baik (Kurniati & Nugraheni, 2019). Paparan timbal (Pb)  pada  tikus  dapat  menyebabkan  gangguan  spermatogenesi  yang  secara  langsung  dapat menyebabkan  penurunan  jumlah  sepermatozoa.  Senyawa  antioksidan  dapat  meningkatkan kualitas sperma dengan menyeimbangkan ROS ( Reactive Oxygen Species ) (Dorostghoal et al ., 2020).

## Penutup
Kesimpulan yang didapatkan dari penelitian ini adalah pemberian ekstrak kulit kabau ( Archidendron  jiringoides )  dapat  meningkatkan  konsentrasi  sperma,  namun  secara  statistik peningkatannya  tidak  signifikan.  Oleh  karena  itu  disarakan  pada  penelitian  selanjutnya, konsentrasi yang diberikan sebaiknya lebih tinggi dari penelitian ini.

## Daftar Pustaka
Akbar, A. (2020). Gambaran Faktor Penyebab Infertilitas Pria Di Indonesia : Meta Analisis.
Jurnal Pandu Husada , 1 (2), 66. https://doi.org/10.30596/jph.v1i2.4433
Calogero,  A.  E.,  Fiore,  M.,  Giacone,  F.,  Altomare,  M.,  Asero,  P.,  Ledda,  C.,  Romeo,  G., Mongioì,  L.  M.,  Copat,  C.,  Giuffrida,  M.,  Vicari,  E.,  Sciacca,  S.,  &  Ferrante,  M. (2021). Exposure to multiple metals/metalloids and human semen quality: A cross- sectional  study. Ecotoxicology  and  Environmental  Safety , 215 ,  112165.
https://doi.org/10.1016/j.ecoenv.2021.112165
Dorostghoal, M., Seyyednejad, S. M., & Tabrizi Nejad, M. N. (2020). Cichorium intybus L. extract  ameliorates  testicular  oxidative  stress  induced  by  lead  acetate  in  male  rats.
Clinical and Experimental Reproductive Medicine , 47 (3), 161–167. https://doi.org/10.5653/cerm.2019.03496
Falahati-Pour, S. K., Khoradmehr, A., Baghery, F., Amin, F., Parvaz, N., & Pourmasumi, S. (2024).  Antioxidant  Properties  of  Pistacia  vera  against  the  Effects  of Phenylhydrazine-Induced Hemolytic Anemia on Male Fertility in Mice. Andrologia , 2024 . https://doi.org/10.1155/2024/5512743
Fauziyah, A., & Dwijananti, P. (20131). Pengaruh Radiasi Sinar X Terhadap Motolitas Sperma pada  Tikus  Mencit. Jurnal  Pendidikan  Fisika  Indonesia , 9 ,  93–98.  PENGARUH RADIASI SINAR X TERHADAP MOTILITAS SPERMA PADA TIKUS MENCIT (Mus muculus)
Fitria Ningrum, R., Sipriyadi, S., & Nursa’adah, E. (2021). Potensi Pemanfaatan Kulit Buah Kabau (Archidendron bubalinum) sebagai Antifungi Candida albicans ATCC 10231. Biotropika: Journal of
Tropical Biology , 9 (2), 115–120. https://doi.org/10.21776/ub.biotropika.2021.009.02.03
Heidari, A. H., Zamiri, M. J., Nazem, M. N., Jafarzadeh Shirazi, M. R., Akhlaghi, A., & Ansari Pirsaraei,  Z.  (2021).  Detrimental  effects  of  long-term  exposure  to  heavy  metals  on histology, size and trace elements of testes and sperm parameters in Kermani Sheep. Ecotoxicology and Environmental Safety , 207 (October 2020), 111563. https://doi.org/10.1016/j.ecoenv.2020.111563
Kurniati,  I.  D.,  &  Nugraheni,  D.  M.  (2019).  Efektivitas  Pemberian  Ekstrak  Buah  Kersen (Muntingia  Calabura)  terhadap  Rasio  Berat  Testis  pada  Tikus  yang  Dipapar  Asap Rokok. MEDICA ARTERIANA (Med-Art) , 1 (1), 15.
https://doi.org/10.26714/medart.1.1.2019.15-21
Nsonwu-Anyanwu, A. C., Ekong, E. R., Offor, S. J., Awusha, O. F., Chukwuma, O. O., Umoh, E.  I.,  Aleruchim,  O.  J.,  Rowland,  E.  F.,  &  Opara,  U.  C.  A.  (2019).  Heavy  metals, biomarkers of oxidative stress and changes in sperm function: A case-control study. International Journal of Reproductive BioMedicine , 17 (3), 155–166. https://doi.org/10.18502/2) 96-294-2
Rahmawati, F., Kurniaty, L., & Bintang, M. (2020). Antioxidant potential and identification of active compounds on Kabau seed (Archidendron bubalinum) flesh and husk extract.
Jurnal Kimia Sains Dan Aplikasi , 23 (3), 83–88. https://doi.org/10.14710/jksa.23.3.83-88
Riana, E. N., Aulia, S., Azizah, N., Khairani, I. A., Ariyanti, Y., Imaniar, L. H., & Setiawan, T.  (2024).  Phytochemical  Screening  and  Antioxidant  Activity  of  Kabau  Seed  Pod Extract from South Lampung. BIO Web of Conferences , 101 . https://doi.org/10.1051/bioconf/202410103003
Sri  Gunawati,  L.,  Ketut  Berata,  I.,  Luh  Eka  Setiasih,  N.,  Pendidikan  Sarjana  Kedokteran Hewan,  M.,  Patologi  Veteriner,  L.,  &  Histologi  Veteriner,  L.  (2019).  Struktur
Histopatologi  Testis  Tikus  Wistar  dengan  Aktivitas  Fisik  Berlebih  yang  Diberikan Ekstrak  Daun  Kelor  (Histopathological  Structure  of  Wistar  Rats  Testicle  with Excessive  Physical  Activities  that  Given  Kelor  Leaf  Extract). Indonesia  Medicus Veterinus , 8 (5), 2477–6637. https://doi.org/10.19087/imv.2019.8.5.637