## Jurnal Ilmu Farmasi dan Farmasi Klinik (JIFFK)

## AKTIVITAS ANTIACNE DAN ANTIAGING EKSTRAK ETANOL
METANOL DAUN MINT ( Mentha piperita )
Risha Fillah Fithria * , Junvidya Heroweti, Farah Fadiyah Anwar, Ihsannur Laily Safara, Anisatuz Zahro Atsabitah
Fakultas Farmasi, Universitas Wahid Hasyim *Email : rishafithria@gmail.com

## INTISARI
Daun  mint  mengandung  flavonoid  sebagai  antibakteri  dan  antioksidan  yang  mampu  mengatasi jerawat dan penuaan pada kulit. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan pre and post test control group design yang bertujuan untuk mengetahui aktivitas antiacne ekstrak etanol- metanol daun mint (EEMDM) pada kelinci dan aktivitas antiaging pada tikus. Daun mint diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol (70%) – metanol (1:1). Uji aktivitas antiacne menggunakan 5 ekor kelinci, masing-masing terbagi menjadi kontrol positif, kontrol negatif dan 3 kelinci  lainnya  mendapatkan  perlakuan  dengan  ekstrak. Uji  aktivitas antiaging menggunakan  12 ekor tikus Wistar, terbagi menjadi 6 kelompok yaitu kontrol normal, kontrol negatif dan 4 kelompok lainnya mendapatkan perlakuan ekstrak. Parameter uji aktivitas antiacne berupa penurunan diameter eritema.  Parameter  uji antiaging berupa  penurunan  skor  keriput,  eritema,  dan  eksfoliasi.  Hasil pengujian menunjukkan EEMDM memiliki aktivitas antiacne pada konsentrasi 30%, 35%, dan 40%, namun tidak memiliki aktivitas antiaging pada konsentrasi 2%, 4%, 6%, dan 8%.
Kata kunci : antiacne , antiaging , daun mint, ekstrak etanol-metanol

## ABSTRACT
Mint leaves contain flavonoids as antibacterial and antioxidant that can treat acne and skin aging. This  study  is  an  experimental  study  with  pre  and  posttest  control  group  design  which  aims  to determine the anticne activity of ethanol-methanol extract of mint leaves (EEMDM) on rabbits and antiaging on rats. Mint leaves were extracted by maceration method using ethanol (70%) – methanol (1:1).  Antiacne  activity test  using five  rabbits,  divided  into  positive  control,  negative  control  and three rabbits treated with extracts. Antiaging activity test using 12 rats, divided into normal control group,  negative  control  group  and  four  extract  treatment  groups.  The  parameter  of  the  antiacne activity  test  was  a  decrease  in  the  diameter  of  the  erythema.  The  antiaging  parameters  were  a decreased  scores  of  wrinkles,  erythema,  and  exfoliation.  The  results  showed  that  EEMDM  had antiacne activity at concentration 30%, 35% and 40%,  but no antiaging activity at concentration 2%, 4%, 6% and 8%.
Keywords : antiacne, antiaging, ethanol-methanol extract, mint leaves
Nama : Risha Fillah Fithria Institusi : Universitas Wahid Hasyim
Alamat institusi  : Jl. Menoreh Tengah X/22 Sampangan Semarang
E-mail : rishafithria@gmail.com

## PENDAHULUAN
Jerawat dan penuaan kulit merupakan kondisi yang umum terjadi pada kulit manusia. Kedua kondisi tersebut sangat berpengaruh terhadap rasa percaya diri terutama pada kaum wanita. Sampai saat ini banyak produk dikembangkan untuk mengatasi kondisi jerawat dan mencegah penuaan pada kulit. Acne vulgaris atau jerawat merupakan suatu kondisi inflamasi yang umum terjadi pada remaja maupun  dewasa  muda  yang  ditandai  timbulnya  komedo,  papul,  pustul,  dan  nodul  (Barratt  dkk., 2009). Kondisi inflamasi pada kulit juga terlihat sebagai eritema. Salah satu penyebab jerawat adalah Propionibacterium acnes , yang merupakan bakteri Gram positif anaerob yang dapat memproduksi beberapa  substansi  penyebab  inflamasi  (seperti  lipase  dan  faktor  kemotaktik)  yang  menginduksi perkembangan lesi jerawat (Gollnick dkk., 2003). Penuaan kulit disebabkan beberapa faktor, salah satunya  oleh  sinar  matahari.  Kulit  yang  terpapar  sinar  matahari  terlalu  lama  memicu  terjadinya eritema  dan  berimbas  pada  rusaknya  serabut  kolagen.  Secara  histologis  dan  fisiologis,  pada  kulit yang  sudah  menua  ditemukan  tanda-tanda  yaitu  kulit  menjadi  kering  karena  menurunnya  fungsi kelenjar  minyak  kulit  (kelenjar  sebasea),  berkurangnya  kadar  air  kulit  dan  mengeringnya  serabut kolagen  dan  elastin  akibat  menurunnya  hormon-hormon  kelamin  dan  menurunnya  kecepatan metabolisme sel basal serta melambatnya proses keratinisasi yang mengakibatkan regenerasi sel-sel epidermis menjadi lambat (Tranggono dan Latifah, 2014).
Pengobatan  yang  biasa  dilakukan  untuk  mengatasi  jerawat  adalah  penggunaan  antibiotik seperti tetrasiklin, eritromisin, doksisiklin dan klindamisin. Selain itu pengobatan jerawat juga dapat menggunakan benzoil peroksida, asam azelat dan retinoid. Namun obat-obat tersebut memiliki efek samping dalam penggunaannya sebagai antiacne antara lain iritasi. Penggunaan antibiotik sebagai pilihan pertama dalam penyembuhan jerawat harus ditinjau kembali untuk membatasi perkembangan resistensi antibiotik (Muhammad dan Rosen, 2013). Oleh karena itu pilihan untuk mengembangkan terapi alternatif dari herbal dengan aktivitas antiacne dapat dijadikan pilihan (Patel dkk., 2015), salah satunya menggunakan Mentha piperita. Mentha  piperita merupakan  tumbuhan  umumnya  dikenal  sebagai  peppermint.  Beberapa penelitian  telah  mengungkapkan  potensi  penggunaan  peppermint  yaitu  sebagai  produk  farmasi ( peppermint oil ), produk makanan, dan obat nyamuk (Rita dan Animesh, 2011). Dalam daun Mentha piperita terdapat senyawa flavonoid, asam fenolat dan beberapa senyawa lainnya yaitu mentol, asam kafeic,  acetaldehyde,  amyl  alcohol,  metal  esters,  limonene,  ocimene,  diterpen,  gamma  triterpen, steroid,  fechene,  kumarin,  sitroneol,  karoten,  tokoferol,  betaine,  kolin,  saponin  dan  tannin. Peppermint juga dapat digunakan sebagai antijamur, antivirus, antioksidan dan antibakteri (Loolaie dkk., 2017).
Penelitian yang dilakukan oleh Qidwai dkk. (2016) menunjukkan bahwa ekstrak etanol Mentha piperita dapat memberikan efek pengahambatan bakteri yang tinggi terhadap P.acnes pada metode in-vitro secara dilusi. Penelitian yang dilakukan Singh dkk. (2011) menunjukkan bahwa essential oil dari M.piperita memiliki  konsentrasi  hambat  minimum  (KHM)  terhadap Staphylococcus  aureus, Streptococcus  pyogenes,  Escherchia  coli dan Klebsiella  pneumonia berkisar  antara  0,4%  sampai 0,7% v/v. Minyak dan ekstrak tanaman tersebut menunjukkan aktivitas antioksidan yang signifikan, di  mana  minyak  tanaman  tersebut  menunjukkan  potensi  setengahnya  jika  dibandingkan  dengan standar BHT. Antioksidan mampu mengatasi penuaan dan eritema pada kulit. Aktivitas antibakteri yang  dihasilkan  oleh  ekstrak  tersebut  diharapkan  mampu  menyembuhkan  jerawat  yang  ditandai dengan berkurangnya eritema pada kulit akibat inflamasi oleh bakteri Propionibacterium acnes.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  uji  aktivitas antiacne dan antiaging ini  merupakan  penelitian  eksperimental menggunakan pre  and  posttest  control  group  design untuk  uji  aktivitas antiacne sedangkan  uji aktivitas antiaging menggunakan posttest only control group design .

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan untuk penelitian ini yaitu timbangan simplisia (Henrerr), alat penyerbuk (Lokal),  almari  pengering  (Lokal), moisture  balance (Ohaus) , seperangkat  alat  gelas,  toples  dan pengaduk, desikator, timbangan elektrik (Ohaus), vakum dan corong Buchner, penguap vakum putar (Heidolph),  Spektrofotometer  UV-Vis  1800 (Shimatzu), magnetic  stirer dan  mikropipet, Laminar
Air  Flow (Airtech),  inkubator  (Binder),  cawan  petri,  bunsen,  ose,  spuit  injeksi,  kapas  alkohol, gunting, silet cukur, lampu UVB (Narrowband) 311 nm.
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu daun mint ( Mentha piperita ) yang diperoleh dari Toko Granari Fresh daerah Kampung Kali, Semarang,  etanol 70% (Teknis), methanol (Teknis), kuersetin (Sigma), pereaksi AlCl 3 10% (Emsure), CH 3 COOK (Emsure), aqua proinjection (Generik), etanol p.a (Emsure), bakteri Propionibacterium acnes (diperoleh dari Universitas Sumatera Utara), media Muller Hinton Agar (MHA) (Oxoid), media Brain Heart Infussion (BHI-B), NaCl fisiologis 0,9% (Generik), H 2 SO 4 1% (Emsure), BaCl 2 .2H2O 1% (Emsure), EEMDM 5%, 6%, 7%, kelinci 6 ekor dan tikus Wistar jantan 12 ekor.

## Determinasi Tanaman
Determinasi  tanaman  mint  ( Mentha  piperita. )    dilakukan  di  Laboratorium  Ekologi  dan Biosistematika,  Jurusan  Biologi  Fakultas  MIPA,  Universitas  Diponegoro  Semarang.  Determinasi tanaman  dilakukan  dengan  mencocokkan  bagian  tanaman  dari  akar,  batang,  daun,  bunga  dan  biji daun  mint  dengan  kunci  determinasi  tanaman  dalam  buku  Flora  of  Java  karangan  (Becker,  dan Brink., 1968)

## Pengumpulan Bahan
Tanaman  mint  ( Mentha  piperita )  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  berupa  daunnya  yang diperoleh dari Toko Granari Fresh daerah Kampung Kali, Semarang.

## Pembuatan Serbuk Simplisia
Daun  mint  dikumpulkan  lalu  dipisahkan  dari  batangnya,  kemudian  dilakukan  sortasi  basah yang bertujuan untuk menghilangkan kotoran-kotoran yang masih menempel pada bagian daunnya, setelah itu daun mint dicuci bersih menggunakan air mengalir. Daun mint dikeringkan dalam almari pengering pada suhu 45°C sampai kering. Simplisia daun mint yang sudah dikeringkan kemudian disortasi  kering  dan  dihaluskan  dengan  menggunakan  alat  penyerbuk  yang  dilengkapi  dengan pengayak lalu diukur kadar airnya dengan alat moisture content balance (Depkes RI, 1986).
Persyaratan  untuk  kadar air  pada simplisia  kering  daun  mint  sebelum  dilakukan  proses  penyarian yaitu kurang dari 10%. Setelah itu disimpan dalam wadah kering tertutup rapat dan diberi tambahan silica gel untuk menyerap kelembaban, kemudian wadah ditempatkan dalam ruangan terlindung dari cahaya matahari supaya tidak terjadi kerusakan dekomposisi kandungan senyawanya (Depkes RI, 1986).
Pembuatan  ekstrak  etanol  metanol  daun  mint  dilakukan  dengan  metode  maserasi. Perbandingan  bahan  dan  pelarut  yang  digunakan  yaitu  1:10.  Pelarut  yang  digunakan  adalah campuran  dari  etanol  70%  dan  metanol  dengan  perbandingan  1:1.  Serbuk  daun  mint  ditimbang sebanyak  219  gram  dimasukkan  ke  dalam  toples  kaca  kemudian  ditambahkan  pelarut  yang digunakan yaitu etanol 70% sebanyak 37,5 bagian (821 ml) dan metanol sebanyak 37,5 bagian (821 ml) campuran diaduk perlahan-lahan, kemudian direndam selama 3 hari dan terlindung dari sinar matahari, berada pada suhu ruang dengan dilakukan pengadukan setiap pagi dan sore. Setelah 3 hari, campuran tersebut disaring menggunakan corong Buchner sehingga diperoleh maserat 1 (Depkes RI, 1986). Proses remaserasi dilakukan dengan cara ampas sisa maserat 1 direndam kembali dengan 12,5 bagian  pelarut  etanol  70%  (274  ml)  dan  12,5  bagian  pelarut  metanol  (274  ml)  selama  2  hari, kemudian  diaduk  dan  disaring  kembali  sehingga  diperoleh  maserat  2.  Maserat  1  dan  maserat    2 dicampur dan ditempatkan pada wadah tertutup rapat, pada tempat sejuk serta terlindung dari cahaya. Filtrat disimpan selama 24 jam agar filtrat dan endapan yang telah terjadi dapat dipisahkan. Maserat diuapkan  menggunakan  penguap  vakum  putar  pada  suhu  50°C  hingga  diperoleh  ekstrak  kental. Ekstrak kental kemudian dihitung rendemennya dan disimpan dalam desikator (Depkes RI, 1986). Perhitungan rendemen ekstrak dapat dihitung menggunakan rumus sebagai berikut (Harbone, 1987):
Rendemen = x 100%

## Pembuatan Suspensi Bakteri
Koloni bakteri uji diremajakan di dalam media Mueller Hinton Agar (MHA) dan diinkubasi dalam inkubator dengan suhu 37°C selama 24 jam. Bakteri P. acnes yang sudah dibiakkan dalam media MHA kemudian ditumbuhkan pada media BHI ( Brain Heart Infusion ) dan diinkubasi selama
24 jam  pada  suhu  37°C.  Bakteri  yang  tumbuh  dalam  media  BHI  kemudian  disentrifugasi  dengan kecepatan 5000 rpm selama 15 menit. Endapan yang diperoleh ditambah dengan 10 mL NaCl 0,9% dan dihomogenkan, kemudian disentrifugasi kembali dengan kecepatan 5000 rpm selama 15 menit. Pencucian dilakukan sampai 3 kali hingga diperoleh bakteri murni dalam NaCl 0,9% tanpa ada media BHI  ( Brain  Heart  Infusion ) (Sa’diah  dkk.,  2013).  Endapan  bakteri  dibuat  suspensi  dalam  larutan NaCl 0,9 % fisiologis dengan kekeruhan sesuai dengan standar kekeruhan Mc. Farland 10 dengan kerapatan bakteri 3 x 10 9 CFU/mL. Mc. Farland 10 dibuat dengan mencampurkan larutan asam sulfat 1% sebanyak 9,0 mL dan BaCl 2 .2H2O 1% sebanyak 1,0 mL (Sa’diah dkk., 2013).
Uji Aktivitas Antiacne
Lima ekor kelinci diaklimatisasi selama 14 hari kemudian masing-masing dicukur bulu pada bagian  punduknya  di  5 lokasi (diberi  kode a,  b, c,  d, dan  e)  yang  berbeda  dengan  luas  area  yang dicukur di masing-masing lokasi ±3 cm 2 . Kulit kelinci pada tiap lokasi diinduksi 0,2 mL suspensi bakteri P.  acnes secara  intradermal  dan  diamati  timbulnya  jerawat.  Selanjutnya  setelah  timbul jerawat,  kemudian  dilakukan  pengolesan  pada  masing-masing  area  punggung  kelinci  dengan  K1 (klindamisin 0,1%), K2 (DMSO), C (EEMDM 30%), D (EEMDM 35%), E (EEMDM 40%). Semua perlakuan dioleskan 2 kali sehari (pagi dan sore) selama 15 hari. Pengamatan dilakukan setiap pagi sebelum pengolesan. Parameter yang diamati adalah penurunan diameter eritema.

## Uji Aktivitas Antiaging
Tikus  sebanyak  12  ekor  dibagi  menjadi  6  kelompok  (masing-masing  2  ekor):  5  kelompok (diberi perlakuan) dipapar sinar UVB dengan jarak  15 cm, dan 1 kelompok (tidak diberi perlakuan) sebagai kontrol normal. Iradiasi diterapkan 5 hari seminggu selama 2 minggu, dengan durasi iradiasi 20  menit  setiap  hari  dengan  jeda  2  hari  untuk  5  hari  berikutnya.  Setelah  dipapar  sinar  UVB,  4 kelompok  diberi  seri  konsentrasi  sampel  ekstrak  (2%,  4%,  6%,  dan  8%),  dan  1  kelompok  hanya diberi pelarut saja sebagai kontrol negative.  Sampel ekstrak diaplikasikan secara topikal sebanyak 10 µl pada area tungkai belakang tikus yang terpapar radiasi. Pada akhir minggu ke-2, kerutan di tungkai belakang terkena UVB kemudian diberi skor yang sesuai untuk kriteria pengamatan berikut ini:
0 = tidak ada kerutan kasar
1 = kerutan kasar yang agak dangkal
2 = beberapa kerutan kasar
3 = beberapa kerutan kasar yang dalam
Seiring  dengan  pengamatan  keriput,  terjadinya  pengelupasan  kulit  dan  eritema  juga  diamati  dan dinilai berdasarkan kriteria pengamatan berikut:
0 = tidak ada 1 = sedikit
2 = ringan
3 = banyak
Analisis Data Aktivitas antiacne ekstrak etanol metanol daun mint (EEMDM)
Data  yang  diperoleh  berupa  penurunan  diameter  eritema,  dianalisis  secara  statistik menggunakan software  SPSS  16.0. Homogenitas  varian  diuji  menggunakan Levene  test dan normalitasnya menggunakan uji Shapiro-wilk . Hasil kedua uji tersebut memenuhi syarat parametrik maka dilanjutkan dengan uji Anova satu jalan dan dilanjutkan dengan uji Pos Hoc Tukey . EEMDM dinyatakan  mempunyai  aktivitas antiacne jika  hasil  penurunan  diameter  eritema  pada  kelompok perlakuan lebih besar secara signifikan dibandingkan dengan kontrol negatif.
Aktivitas antiaging ekstrak etanol metanol daun mint (EEMDM)
Data yang diperoleh berupa skor kerutan, eritema, dan eksfoliasi dibandingkan antar kelompok perlakuan. Data dianalisis secara statistik menggunakan aplikasi IBM SPSS Statistics 23. Uji yang digunakan yaitu uji normalitas menggunakan uji Shapiro – Wilk , kemudian dilanjutkan uji Levene sebagai uji homogenitas. Hasil kedua uji tersebut menunjukkan tidak memenuhi syarat parametrik maka dilanjutkan uji Kruskal Wallis dan Mann Whitney . EEMDM dinyatakan mempunyai aktivitas antiaging jika  skor  kerutan,  eritema,  dan  eksfoliasi  pada  kelompok  perlakuan  lebih  kecil  secara signifikan dibandingkan dengan kontrol negatif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Aktivitas Antiacne
Hasil penurunan diameter eritema pada kelompok perlakuan EEMDM 30%, 35%, dan 40% menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan terhadap kelompok kontrol negatif (p<0,05), artinya EEMDM 30%, 35%, dan 40% memiliki aktivitas antiacne . Hasil data penurunan diameter eritema kelinci pada hari ke-15 dapat dilihat pada Tabel I.
Tabel I. Penurunan Diameter Eritema Kelinci Ekstrak Etanol-Metanol Daun Mint Kelompok Persentase Penurunan Diameter Eritema (%) ± SD DMSO (Kontrol Negatif) 0,69 ± 0,033 Klindamisin (Kontrol Positif) 1,34 ± 0,043 EEMDM 30% 1,05 ± 0,027* EEMDM 35% 1,26 ± 0,069* EEMDM 40% 1,27 ± 0,037*
Peningkatan konsentrasi EEMDM  mengakibatkan  kenaikan  aktivitas antiacne yang  terlihat  dari peningkatan  persentase  penurunan  diameter  eritema,  dan  hasil  paling  maksimum  terdapat  pada konsentrasi  40%  yaitu  sebesar  1,27  %.  Namun  pada  keseluruhan  perlakuan,  penurunan  diameter eritema paling besar terdapat pada kontrol positif klindamisin yaitu sebesar 1,34 %.
Senyawa yang  diduga  berperan  dalam  aktivitas antiacne adalah  flavonoid,  yang  bertindak sebagai antibakteri, karena flavonoid dapat menghambat sintesis asam nukleat bakteri, menghambat pembentukan DNA dan RNA, serta menyebabkan kerusakan permeabilitas dinding sel. Flavonoid juga menghambat metabolisme energi bakteri dengan cara menghambat penggunaan oksigen. Energi dibutuhkan bakteri untuk biosintesis makromolekul, sehingga jika metabolismenya terhambat maka molekul  bakteri  tersebut  tidak  dapat  berkembang  menjadi  molekul  yang  kompleks  (Cushnie  dan Lamb,  2005).  Ekstraksi  yang  dilakukan  didasarkan  pada  sifat  kepolaran  zat  dalam  pelarut  yang diekstraksi. Flavonoid merupakan senyawa polar sehingga akan larut pada pelarut polar seperti etanol dan metanol (Leksono dkk., 2018). Ekstraksi menggunakan kombinasi pelarut etanol dan metanol bertujuan  mendapatkan  senyawa  aktif  yang  lebih  banyak  dibandingkan  menggunakan  pelarut tunggal,  seperti  pada  penelitian  Farnad  dkk  (2014)  yang  mengekstraksi  daun  mint  menggunakan campuran pelarut etanol-metanol (1:1) mengandung total flavonoid dan antosianin yang lebih besar dibanding masing-masing pelarut tunggal.
Hasil  penelitian  ini  membuktikan  daun  mint  berpotensi  digunakan  sebagai  alternatif pengobatan  jerawat.  Senyawa  flavonoid  yang  terkandung  dalam  ekstrak  etanol-metanol dimungkinkan perlu untuk dilakukan isolasi guna memaksimalkan penarikan senyawa yang diduga memiliki aktivitas antiacne . Daun mint sebagai anti jerawat yang berbasis bahan alam diduga akan lebih efektif jika dikembangkan dalam bentuk formulasi yang sesuai seperti gel atau krim yang lebih mudah untuk diterima dan diaplikasikan.
Uji Aktivitas Antiaging Hasil uji aktivitas antiaging tersaji pada gambar 1. Hewan uji terlebih dahulu dipapar sinar UVB 311 nm  bertujuan untuk menginduksi terbentuknya parameter aging, yaitu kerutan, eritema, dan  eksfoliasi.  Uji  Mann  Whitney  menunjukkan  adanya  perbedaan  yang  signifikan  dari  masing- masing data kerutan, eritema, maupun eksfoliasi antara kelompok normal (tanpa disinari dan tanpa diberi perlakuan ekstrak) dengan kelompok kontrol negatif (disinari namun tanpa diberi perlakuan ekstrak)  dan  masing-masing  kelompok  perlakuan  3  konsentrasi  EEMDM  yang  ditandai  p<0,05. Artinya sinar UVB 311 nm telah mampu mempengaruhi dan atau merusak kulit hewan uji.
Rata-rata skor parameter kerutan yang paling kecil pada kelompok uji yaitu pada K1 (kelompok normal), namun jumlah ini setara dengan K2 (kontrol negatif) yaitu sebesar 0,75 ± 0,25. Hasil uji beda menggunakan Kruskal Wallis dan dilanjutkan uji Mann-Whitney pada parameter kerutan menyatakan EEMDM tidak memiliki aktivitas antiaging pada seluruh seri konsentrasi yang ditandai tidak adanya perbedaan antara masing-masing kelompok uji (C1- C4) yang dibandingkan dengan kelompok K2 (kontrol negatif) (p>0,05).
Rata-rata skor parameter eritema yang terkecil pada kelompok uji yaitu pada C1-C3 dengan jumlah yang sama yaitu sebesar 0,75 ± 0,25, namun jumlah ini lebih kecil dibanding K2  (kontrol  negatif)  yaitu  sebesar  1.  Hasil  uji  beda  menggunakan  Kruskal  Wallis  pada parameter eritema menyatakan EEMDM tidak memiliki aktivitas antiaging yang ditandai tidak adanya perbedaan yang signifikan (p>0,05).
Ket :
K1 = Kontrol normal K2 = Kontrol negatif C1 = EEMDM 2% C2 = EEMDM 4% C3 = EEMDM 6% C4 = EEMDM 8%

## Gambar 1. Rata-rata penurunan parameter keriput, eritema, dan eksfoliasi
Rata-rata skor parameter eksfoliasi yang terkecil pada kelompok uji yaitu pada C1 dan C3  dengan  jumlah  yang  sama  yaitu  sebesar  1,75  ±  0,25,  namun  jumlah  ini  lebih  kecil dibanding  K2  yaitu  sebesar  2,5  ±  0,29.  Hasil  uji  beda  menggunakan  Kruskal  Wallis  dan dilanjutkan  uji  Mann-Whitney  pada  parameter  eksfoliasi  menyatakan  EEMDM  tidak memiliki  aktivitas antiaging pada  seluruh  seri  konsentrasi  yang  ditandai  tidak  adanya perbedaan  antara  masing-masing  kelompok  uji  (C1-C4)  yang  dibandingkan  dengan kelompok kontrol negatif (K2) (p>0,05)
S enyawa  spesifik  yang  terkandung  dalam  ekstrak  etanol-metanol  daun  mint  yang berpotensi sebagai antiaging antara lain antosianin, asam kafeat, dan β-sitosterol (Hossain, dkk.,  2014).  Antosianin  berperan  dalam  peningkatan  kadar  kolagen,  elastin,  serta  asam hialuronat  pada  kulit  sehingga  berpotensi  sebagai antiaging (Nanashima  dkk.,  2018). Sementara  asam  kafeat  berpotensi antiaging melalui  pemulihan  sistem  pertahanan antioksidan pada tingkat  seluler dan molekuler (Pluemsamran dkk., 2012). Sedangkan β- sitosterol  memiliki  mekanisme  menjaga  kelembaban  kulit  (Haiyuan,  dkk.,  2019).  Ekstrak etanol-metanol daun mint tidak memiliki aktivitas antiaging secara signifikan diduga karena jumlah  senyawa  aktif  spesifik  yang  berpotensi  sebagai antiaging yang  terkandung  dalam ekstrak  etanol  etanol-metanol  daun  mint  yang  digunakan  sangat  kecil.  Perbedaan  jumlah senyawa aktif yang terkandung dalam ekstrak dapat dipengaruhi oleh berbagai macam faktor seperti kondisi lingkungan, iklim, intensitas cahaya, kelembaban, nutrisi dalam tanah, dan suhu  yang  berbeda-beda  sesuai  lokasi  geografisnya  (Bermawie  dkk.,  2008;  Barros  dkk., 2015).
K1 K2 C1 C2 C3 C4 kelompok keriput 0 0.75 1 1 0.75 1 eritema 0.5 1 0.75 0.75 0.75 2.25 eksfoliasi 0 2.5 1.75 3 1.75 2.5
0 0.75 1 1 0.75 1 0.5 1 0.75 0.75 0.75 2.25
0 2.5 1.75 3 1.75 2.5 -1 -0.5 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 keriput eritema eksfoliasi

## KESIMPULAN
Ekstrak etanol-metanol daun mint konsentrasi 30%, 35%, dan 40% memiliki aktivitas antiacne dan pada konsentrasi 2%, 4%, 6%, dan 8% tidak memiliki aktivitas antiaging .

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terimakasih  kami  sampaikan  kepada  Lembaga  Penelitian  dan  Pengabdian  Kepada Masyarakat (LP2M) Universitas Wahid Hasyim atas bantuannya dalam pembiayaan penelitian ini melalui program Hibah DIPA Unwahas dengan skema Penelitian Kompetitif  tahun 2021.

## DAFTAR PUSTAKA
Barratt H, Hamilton F, Car J, Lyons C, Layton A, dan Majeed A., 2009, Outcome measures in acne vulgaris: systematic review. British Journal of Dermatology . 160(3):132-6.
Barros, A. D. S., de Morals, S. M., Travassos Ferreira, P. A., Pinto Vieira, I. G., Craveiro, A. A., dos Santos  Fontenelle,  R.  O.,  dan  de  Sousa,  H.  A,  2015,  Chemical  composition  and  functional properties of essential oils from Mentha species. Industrial Crops and Products , 76, 557-564. Bermawie,  N.,  S.  Purwiyanti.,  dan  Mardiana.,  2008,  Keragaman  Sifat  Morfologi  hasil  dan  Mutu Plasma Nutfah Pegagan (Centella asiatica (L.) urban), Bul.Littro , 19 (1), 1-17.
Cushnie, T.P.T dan Lamb, A.J., 2005, Antimicrobial activity of flavonoids, Int. J. Antimicrob Agents, 26, 343–356.
Depkes RI, 1986, Sediaan Galenik , Departemen Kesehatan RI, Jakarta.
Farnad,  N.,  Heidari,  R.,  dan  Aslanipour,  B.,  2014,  Phenolic  composition  and  comparison  of antioxidant  activity  of alcoholic  extracts  of  Peppermint  (Mentha  piperita), Journal  of  Food Measurement and Characterization , 8 (2), 113-121.
Gollnick H, Cunliffe W, Berson D., Dreno, B., Finlay, A., Leyden, JJ., Shalita, A.R., dan Thiboutot, D., 2003, Management of acne: a report from a global alliance to improve outcomes in acne . J Am Acad Dermatol , 49 (1 Suppl.): SI-S37.
Haiyuan, Y.U., Shen, X., Liu, D., Hong, M., dan Lu, Y., 2019, The protective effects of β-sitosterol and vermicularin from Thamnolia vermicularis (Sw.) Ach. against skin aging in vitro, Anais da Academia Brasileira de Ciências , 91 (04). Harborne, J. B. 1987. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan . Institut Teknologi Bandung. Bandung.
Hossain, M. A., Al-Hdhrami, S. S., Weli, A. M., Al-Riyami, Q., dan Al-Sabahi, J. N., 2014, Isolation, fractionation  and  identification  of  chemical  constituents  from  the  leaves  crude  extracts  of Mentha  piperita  L.  grown  in  Sultanate  of  Oman, Asian  Pacific  journal  of  tropical biomedicine , 4 , S368-S372.
Kamatou, P.P. Guy, Vermaak a, I., Viljoen, A.M., dan Lawrence, B.M., 2013, Menthol: A simple monoterpene with remarkable biological properties. Department of Pharmaceutical Sciences, Faculty of Science, Tshwane University of Technology, Pretoria 0001, South Africa.
Leksono, W.B., Pramesti, R., Santosa, G.W., dan Setyati, W.A., 2018, Jenis Pelarut Metanol Dan N- Heksana Terhadap Aktivitas Antioksidan Ekstrak Rumput Laut Gelidium sp. Dari Pantai Drini Gunungkidul – Yogyakarta, Jurnal Kelautan Tropis, Vol. 21(1):9–16.
Loolaie,  M.,  Moasefi,  N.,  Rasouli,  H.,  dan  Adibi,  H.  2017,  Peppermint  and  Its  Functionality:  A Review Abstract, IMedPub Journals , 8(4), 1–16.
Muhammad M., dan Rosen T., 2013, A Controversial Proposal: No More Antibiotics for Acne. Skin Therapy Letter: Indexed by the US National Libraby of Medicine and PubMed. 18: 1-4.
Muliyawan, D., dan Suriana, N., 2013, A-Z Tentang Kosmetik, Jakarta: PT. Elex Media Komputindo. 138-289.
Nanashima,  N.,  Horie,  K.,  Maeda,  H.,  Tomisawa,  T.,  Kitajima,  M.,  dan  Nakamura,  T.,  2018, Blackcurrant  anthocyanins  increase  the  levels  of  collagen,  elastin,  and  hyaluronic  acid  in human skin fibroblasts and ovariectomized rats, Nutrients , 10 (4), 495.
Patel S., Shah S., dan Shah N. 2015, A review on herbal drugs acting against acne vulgaris, Journal of Pharmaceutical Science and Bioscientific Research , 5(2): 165-171.
Pluemsamran, T., Onkoksoong, T., dan Panich, U., 2012, Caffeic acid and ferulic acid inhibit UVA‐ induced  matrix  metalloproteinase‐1  through  regulation  of  antioxidant  defense  system  in keratinocyte HaCaT cells, Photochemistry and Photobiology , 88 (4), 961-968.
Qidwai, A., Pandey, M., Shukla, S.K., Kumar, R., Pandey, A., dan Dikshit, A, 2016, Antibacterial Activity Of Mentha Piperita And Citrus Limetta Against Propionibacterium Acnes (Anaerobic Bacteria), International Journal of Pharmaceutical Sciences and Research , 7(7): 2917-2924. Rao, R. S. dan Moller, I. M., 2011, Pattern of Occurrence and Occupancy of Carbonylation Sites in Proteins. Proteomics , 11: 4166-4173.
Rita,  P.  dan  Animesh,  D.K.,  2011,  An  updated  overview  on  peppermint  ( Mentha  piperita L.). International Research Journal of Pharmacy , 2(8):1-10.
Sa’diah, S., Darusman, L.K., Triwahyuni, W., dan Batubara, I., 2013, Efektivitas Krim Anti Jerawat Kayu  Secang  ( Caesalpinia  Sappan )  Terhadap Prpionibacterium  acnes pada  Kulit  Kelinci,
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia , Vol.11 No.2, 175-181
Singh,  R.,  Shushni,  M.A.M.,  dan  Belkheir,  A.,  2011,  Antibacterial  and  antioxidant  activities  of
Mentha piperita L. Arabian Journal of Chemistry , 8:322-328.
Tranggono, R.I.S dan Latifah, F., 2014, Buku Pegangan Dasar Kosmetologi, Edisi kedua. Jakarta: Sagung Seto. 9-19.
Trevisan, S.C.C., Menezes, A.P.P., Barbalho, S.M., dan Guiguer, É.L. Properties of Mentha Piperita :
A Brief Review, World Journal Of Pharmaceutical And Medical Research . 3(1): 309-313.