## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 107-114

## Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Kayu Kapur
Melanolepis multiglandulosa Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Bakteri Escherichia coli
Deo Tampongangoy 1* , Wilmar Maarisit 1 , Amal R. Ginting 1 , Silvana Tumbel 2 , Selvana Tulandi 2
1 Program Studi Farmasi, Fakultas MIPA, Universitas Kristen Indonesia Tomohon
2 Program Studi Biologi, Fakultas MIPA, Universitas Kristen Indonesia Tomohon
* Penulis Korespondensi: deotampongangoy@gmail.com Diterima: 4 Maret 2018, Disetujui: 21 Maret 2018

## ABSTRAK
Bakteri  adalah  salah  satu  penyebab  terjadinya  infeksi,  Staphylococcus  aureus  menjadi  penyebab infeksi  pada  kulit  dan  luka  sedangkan  Escherichia  coli  menyebabkan  peradangan  pada  saluran kemih. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas antibakteri serta nilai MIC dan MBC ekstrak daun Kayu Kapur (Melanolepis multiglandulosa) terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan  bakteri  Escherichia  coli.  Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  difusi  agar menggunakan  kertas  cakram.  Hasil  penelitian  semua  konsentrasi  ekstrak  daun  Kayu  Kapur (Melanolepis  multiglandulosa)  mulai  dari  400,  500,  600,  700,  800,  900  hingga  1000  µg/10  µL menunjukan  adanya  aktivitas  antibakteri  yang  ditandai  dengan  terbentuknya  zona  hambat  pada bakteri  Staphylococcus  aureus  dan  Escherichia  coli.  Dari  penelitian  yang  dilakukan  dapat disimpulkan bahwa ekstrak daun Kayu Kapur memilki aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Nilai MIC ekstrak daun Kayu Kapur terhadap bakteri Staphylococcus aureus  adalah  43,1  µg/10  µL  dan  nilai  MBC-nya  adalah  172,4  µg/10  µL,  sedangkan  nilai  MIC ekstrak daun Kayu Kapur terhadap bakteri Escherichia coli adalah 43,975 µg/10 µL dan nilai MBC- nya adalah 175,9 µg/10 µL.
Kata kunci : Kayu kapur, Antibakteri, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, MIC.

## ABSTRACT
Bacteria are one of the causes of infection, Staphylococcus aureus causes infections of the skin and wounds  while Escherichia coli causes inflammation of the urinary tract. The purpose of this study was to determine the antibacterial activity as well as the value of MIC and MBC of Kapur Wood leaf extract (Melanolepis multiglandulosa) against Staphylococcus aureus bacteria and Escherichia coli bacteria. The method used in this study is agar diffusion to use paper discs. The results of all research concentrations of Kapur Wood extract (Melanolepis multiglandulosa) ranging from 400, 500, 600, 700, 800, 900 to 1000 µg / 10 µL showed antibacterial activity characterized by the formation of inhibitory  zones  in  Staphylococcus  aureus  and  Escherichia  coli  bacteria.  From  the  research conducted  it  can  be  concluded  that  the Kapur Wood leaves extract  have  antibacterial  activity against  Staphylococcus  aureus  and  Escherichia  coli. The  MIC  value  of Kapur Wood  leaf  extract against Staphylococcus aureus bacteria was 43.1 µg / 10 µL and the MBC value was 172.4 µg / 10 µL, while the MIC value of Kapur Wood leaf extract against Escherichia coli bacteria was 43.975 µg / 10 µL and the MBC value is 175.9 µg / 10 µL.
Keywords : Kapur Wood, Antibacterial, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, MIC.

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 107-114

## PENDAHULUAN
Penyakit  infeksi  hingga  saat  ini  masih menjadi masalah besar bagi negara-negara berkembang,  salah  satunya  Indonesia.  Penyakit  ini dapat menular terutama pada individu dengan sistem kekebalan  tubuh  yang  lemah  (Mutsaqof et  al ., 2015).  Bakteri  menjadi  salah  satu  penyebab  utama terjadinya penyakit infeksi, bakteri dapat menyebabkan terjadinya infeksi pada individu yang ditempatinya,  terlebih  jika  terdapat  luka  terbuka pada bagian kulit. Bakteri terbagi atas bakteri gram positif  dan  bakteri  gram  negatif  (Campbell et  al ., 2003)
Staphylococcus  aureus adalah  salah  satu bakteri gram positif yang dapat ditemukan hidup di kulit,  saluran  pernapasan  dan  saluran  pencernaan (Vandepitte et al ., 2003). S. aureus umumnya dapat hidup  berdampingan  dengan  inangnya  namun, S. aureus dapat  menjadi  bakteri  patogen  jika  sampai masuk  ke  jaringan  bawah  kulit.  Pada  beberapa situasi S.  aureus dapat  menyebabkan  infeksi  yang serius dan berlangsung lama. S. aureus memproduksi  racun  yang  dapat  mencemari makanan  dan  dapat  membahayakan  kesehatan (Murray et al ., 2003).
Escherichia  coli adalah  salah  satu  flora normal  yang  dapat  ditemukan  pada  saluran pencernaan  hewan  maupun  manusia. E.  coli termasuk  dalam  bakteri  gram  negatif  yang  hidup normal  di  usus  besar,  akan  tetapi  dapat  menjadi patogen  apabila  menyebar  ke  organ  lain.  Misalnya dapat menyebabkan peradangan pada saluran kemih (Melliawati, 2009).
Tumbuhan Kayu Kapur ( Melanolepis multiglandulosa )  yang  adalah  salah  satu  jenis tumbuhan  dari  keluarga Euphorbiaceae .  Secara empiris, masyarakat Minahasa biasanya menggunakan  tumbuhan  ini  untuk  menyembuhkan barbagai macam penyakit seperti sakit kepala, patah tulang, cekok lender, obat penyakit kulit atau gatal- gatal  (Kinho et  al., 2011).  Di  desa  Toundanouw Satu,  Kecamatan  Touluaan,  Kabupaten  Minahasa Tenggara  tumbuhan
Kayu  Kapur  sering digunakan untuk mengobati patah tulang, luka gores ataupun  luka  yang  disebabkan  oleh  benda  tajam seperti  pisau,  tumbuhan  ini  juga  untuk  mengobati gatal-gatal.  Bagian  yang  digunakan  adalah  daun yang di tumbuk halus dan ditempelkan pada bagian yang sakit, luka atau gatal.
Penelitian terdahulu yang dilakukan Kinho et al., (2011) terhadap kandungan  metabolit sekunder pada  daun  Kayu  Kapur  terindikasi  mengandung senyawa  flavonoid,  saponin,  dan  alkaloid.  Apostol et  al .,  (2016)  dalam  penelitiannya  melaporkan
bahwa  daun  Kayu  Kapur  mengandung  senyawa metabolit  sekunder  β-sitosterol  dan  beberapa senyawa metabolit sekunder lainya. Diduga senyawa-senyawa metabolit sekunder yang terkandung  dalam  daun  Kayu  Kapur  memiliki aktivitas dalam  menghambat ataupun membunuh sel bakteri.
Antibakteri adalah zat yang digunakan untuk menghambat pertumbuhan sel bakteri (bakteriostatik),  ataupun  membunuh  sel  bakteri (bakterisida)  (Kohanski et  al .,  2010).  Antibakteri dapat  bekerja  pada  bagian  tertentu  dari  sel  bakteri yaitu, membran sitoplasma, dan ada juga yang dapat menghambat beberapa proses yang terjadi pada sel bakteri  yaitu  proses  sintesis  dinding  sel,  sintesis asam nukleat, sintesis protein, dan jalur metabolisme sel bakteri (Tenover, 2006).
Selain  digunakan  secara  empiris  untuk mengobati  berbagai  macam  penyakit,  daun  Kayu Kapur  juga  mengandung  beberapa  senyawa metabolit  sekunder  yang  diduga  memiliki  aktivitas antibakteri.  Hal  inilah  yang  melatarbelakangi peneliti  untuk  meneliti  tentang  uji  aktivitas antibakteri  dari  ekstrak  daun  Kayu  Kapur  terhadap bakteri S.  aureus dan  bakteri E.  coli .  Hipotesis penelitian,  ekstrak  daun  Kayu  Kapur  memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri S. aureus dan E.  coli .  Tujuan  penelitian  ini,  untuk  mengetahui apakah  ada  aktivitas  antibakteri  dari  ektrak  daun Kayu Kapur terhadap bakteri S. aureus dan bakteri E.  coli ,  serta  menentukan  nilai  MIC  ( Minimum Inhibitory  Concentration )  dan  MBC  ( Minimum Bactericidal  Concentration )  ekstrak  daun  Kayu Kapur terhadap bakteri S. aureus dan bakteri E. coli dari  nilai  zona  hambat  yang  terbentuk  setelah pengujian.

## METODE PENELITIAN
Metode  uji  antibakteri  yang  dipakai  dalam penelitian  ini  menggunakan  teknik  difusi  agar dengan  kertas  cakram.  Jenis  penelitian  ini merupakan  penelitian  eksperimental  laboratorium, dengan  menggunakan  7  konsentrasi  dengan  3  kali pengujian untuk dua jenis bakteri.

## Bahan dan Alat
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain daun Kayu Kapur, bakteri S.  aureus (ATCC  25923),  bakteri E.  coli (ATCC 25922),  etanol  70%  sebagai  pelarut,  aquadest, nutrient Broth (NB), Nutrien Agar (NA), etanol 70% sebagai  kontrol  negatif,  dan  ciprofloxacin  sebagai kontrol positif.

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 107-114
Alat-alat yang digunakan adalah gelas ukur, erlenmeyer,  oven, aluminium  foil ,  timbangan analitik (Pgl 20001), bejana kaca, botol kaca, batang pengaduk,  kertas  saring,  gelas beaker , rotary evaporator  eyela (N-1001V-W),  inkubator,  kawat ose, pembakar bunsen, jangka sorong, cawan petri, autoklaf,  gelas  ukur,  tabung  reaksi, Laminar  Air Flow (LAF), spektrofotometer (Uv-Vis T60), kuvet, magnetic stirrer , vortex, pinset, mikropipet, spatula, dan kertas cakram (advantec).

## Ekstraksi Sampel
Sampel  daun  Kayu  Kapur  yang  diambil, dibersihkan,  dirajang  dan  ditimbang  sebanyak  500 gram.  Setelah  itu,  diekstraksi  dengan  metode maserasi yaitu dengan merendam sampel menggunakan  etanol  70%  sebanyak  3  liter  selama 1x24  jam,  hasil  maserasi  difiltrasi  dengan  kertas saring  hingga  didapat  filtrat  dan  residu,  residu direndam  kembali  dengan  etanol  70%  sebanyak  3 liter.  Proses  ini  dilakukan  sebanyak  3  kali.  Filtrat yang  didapat  dievaporasi  hingga  didapat  ekstrak kental.
Pembuatan  Larutan  Nutrien  Agar  (NA)  dan Nutrien Broth (NB)
Untuk larutan Nutrient Agar (NA), sebanyak 1,2  g  dilarutkan  dalam  50  mL  aquadest  dalam erlenmeyer,  selanjutnya  dihomogenkan  dengan magnetic  stirrer ,  larutan  NA  digunakan  untuk pembuatan  media  agar  miring.  Selanjutnya, sebanyak  1  gram  NB  ditimbang  dan  dilarutkan dengan 100  mL aquadest kemudian dihomogenkan dengan magnetic  stirrer .  Larutan  NB  kemudian dibagi,  sebanyak  15  mL  NB  digunakan  sebagai larutan  blanko  untuk  analisis  spektrofotometer  dan 85 mL untuk  media kultur bakteri.

## Sterilisasi dan Pembuatan Media Agar Miring
Alat-alat  yang  berbahan  kaca  disterilkan menggunakan oven pada suhu 160°C selama 2 jam, untuk alat-alat yang tidak berbahan kaca disterilkan bersama  dengan  larutan  NA dan  NB dengan autoclaf  pada  tekanan  1  atm  dengan  suhu  121 0 C selama  15  menit.  Larutan  NA  yang  telah  steril didinginkan  sampai  suhu  ±  45-50 0 C.  Sebanyak  5 mL Larutan NA dituangkan dalam tabung reaksi dan diletakan  dengan  posisi  miring  dan  biarkan  hingga memadat.  Media  agar  miring  digunakan  untuk peremajaan bakteri uji.

## Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Bakteri  uji  pada  media  agar  miring  diambil dengan kawat ose steril lalu disuspensikan ke dalam
erlenmeyer  yang  berisi  100  ml  NB  yang  telah disterilkan  kemudian  diaduk,  selanjutnya  suspensi bakteri di inkubasi pada suhu 37ºc selama 24 jam.

## Pembuatan Media Padat
Sebanyak  1  gram  NB  dicampurkan  dengan 1,5  g  agar  yang  sudah  ditimbang  dan  tambahkan aquadest sebanyak 100 mL kemudian dihomogenkan  dengan magnetic  stirrer ,  larutan yang  sudah  homogen  diterilisasi  dengan  autoclaf pada suhu 121 ºc selama 15 menit.

## Prosedur Uji Antibakteri
Ekstrak  kental  daun  Kayu  Kapur  ditimbang sebanyak  1  g  kemudian  dilarutkan  dalam  10  mL etanol  70  %  sebagai  larutan  standar,  kemudian dibuat  7  serial  konsentrasi  yaitu  40  mg/mL,  50 mg/mL,  60  mg/mL,  70  mg/mL,  80  mg/mL,  90 mg/mL, 100 mg/mL . Untuk kontrol positif sebanyak 50  mg  ciprofloxacin  dilarutkan  dengan  100  mL aqudest  steril  dan  untuk  kontrol  negatif  digunakan etanol  70%.  Masing-masing  seri  konsentrasi ekstrak,  kontrol  positif  dan  kontrol  negatif  diambil menggunakan mikropipet sebanyak 10  µL dengan  konsentrasi  akhir  400,  500,  600,  700, 800, 900 dan 1000 µg/10 µL, kemudian ditotolkan pada kertas cakram. Konsentrasi tersebut digunakan karena  pada  pra  penelitian  yang  dilakukan sebelumnya, dengan konsentrasi 100, 150, 200, 250, 300, 350, dan 400 µg/10 µL, hanya konsentrasi 400 µg/10  µL  yang  menunjukan  adanya  aktivitas antibakteri ditandai terbentuknya zona hambat pada bakteri S.  aureus dan E.  coli .  Kertas  cakram  berisi ekstrak,  kontrol  positif,  dan  kontrol  negatif dikeringkan  dahulu  pada  suhu  ruangan  sebelum pengujian. Pengeringan bertujuan menghilangkan efek antibakteri etanol 70%.
S uspensi bakteri nilai kepadatan nya menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  pada panjang  gelombang  600  nm.  Myers et  al .,  (2013) menyatakan  bahwa  spektrofotometer  UV-Vis  akan mengukur  jumlah  cahaya  yang  diabsorpsi  dan dihamburkan.  Setelah  kepadatan  bakteri  diketahui, suspensi  bakteri  kemudian  diencerkan  hingga menjadi  1x10 6 .  Suspensi  bakteri  yang  telah diencerkan,  diambil  dan  dimasukan  kedalam erlenmeyer  yang  berisi  100  mL  media  padat  steril dan sudah didinginkan hingga suhu ± 45-50 0 C. Erlenmeyer  kemudian  digoyangkan  hingga suspensi bakteri tercampur dengan media, selanjutnya  media  dituang  sebanyak  20  mL  untuk setiap  cawan  petri  dan  dibiarkan  hingga  memadat. Kertas cakram yang telah  kering ditempelkan pada media  pengujian  dalam  cawan  petri  yang  telah diberi tanda dan dibiarkan selama 24 jam pada suhu

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 107-114
37ºc.  Selanjutnya  diukur  zona  hambat  yang terbentuk  menggunakan  jangka  sorong.  Pengujian ini dilakukan sebanyak 3 kali.

## Perhitungan Zona Hambat
Perhitungan  diameter  zona  hambat  Tethool (2017):
berpotongan  dengan  sumbu  X  merupakan  nilai  ln Mt, nilai MIC adalah 0,25 kali nilai Mt. sedangkan nilai  MBC  merupakan  nilai  MIC  dikali  empat (Bloomfield, 1991).

## Analisa Data
Data  hasil  yang  didapat  diuji  homogenitas menggunakan  uji One  Way  ANOVA dengan  nilai Rumus : 𝑑 = A+B (1) signifikan > α = 0,05. Apabilah nilai signifikan < 2
Keterangan :
d = diameter zona hambat
A = diameter vertikal B = diameter horisontal

## Tabel 1. Kategori antibakteri Davis dan Stout (1971)
Diameter Zona Hambat Aktivitas Antibakteri (mm) 2-5 Sangat Lemah 5-10 Sedang 10-20 Kuat ≥20 Sangat kuat

## Penentuan MIC Dan MBC
Nilai  MIC  ditentukan  untuk  mengetahui konsentrasi minimum dari ekstrak daun Kayu Kapur
α  =0,05  berarti  datanya  tidak  homogen,  sehingga harus  dianalisis  menggunakan  uji  non-parameter Kruskal-wallis dengan  tingkat  kepercayaan  95  %. Uji Kruskal-wallis untuk  melihat  perbedaan aktivitas  penghambatan  antara  tiap-tiap  perlakuan konsentrasi  yang  diberikan  pada  bakteri S.  aureus dan  bakteri E.  coli .  Uji Kruskal-wallis digunakan karena  tidak  memerlukan  data  homogen  seperti  uji One Way Anova .

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Perhitungan Rendemen Ekstrak
Tabel 2. Rendemen ekstrak daun kayu kapur
Sampel Berat Pelarut Berat % Sampel Ekstrak  Rendemen
yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus dan  bakteri E.  coli ,  sedangkan  penentuan Daun Kayu 500 gram Etanol 70% 42 gram 8.4
nilai MBC bertujuan untuk mengetahui konsentrasi minimum dari ekstrak daun Kayu Kapur yang dapat membunuh  bakteri S.  aureus dan  bakteri E.  coli . Nilai  MIC  dapat  ditentukan  dengan  cara  membuat kurva  regresi  linier  antara  sumbu  X  (ln  Mo  =  ln konsentrasi ekstrak) dan sumbu Y (Z 2 = nilai kuadrat dari    zona    penghambatan).    Kurva    linier    yang Hasil Pengujian Antibakteri

## Kapur
Dari tabel diatas dapat dilihat bahwa jumlah ekstrak  yang  didapat  setelah  evaporasi  adalah  42 gram  atau  8,4  %  dari  500  gram  sampel.  Persen rendemen  dihitung  untuk  membandingkan  berat ekstrak dengan berat sampel.
Tabel 3. Hasil pengujian aktivitas antibaktreri pada bakteri S. aureus dan E. coli
Diameter Zona Hambat (mm) Konsentrasi S. aureus E. coli Ekstrak I II III Rata-Rata I II III Rata-Rata 400 µg/10 µL 6.10 6.40 6.10 6.20 6.10 6.10 6.10 6.10 500 µg/10 µL 6.10 6.50 6.40 6.33 6.10 6.30 6.20 6.20 600 µg/10 µL 6.50 6.60 6.40 6.50 6.30 6.30 6.30 6.30 700 µg/10 µL 6.60 6.70 6.70 6.60 6.40 6.10 6.10 6.20 800 µg/10 µL 6.70 6.70 6.80 6.73 6.60 6.60 6.60 6.60 900 µg/10 µL 6.80 6.80 6.70 6.76 6.70 6.70 6.70 6.70 1000 µg/10 µL 6.70 6.90 6.90 6.83 6.70 6.70 6.80 6.73 Kontrol Positif Ciprofloxacin (5 µg/10 µL) 21.00 21.00 22.00 21.60 20.00 20.00 19.00 19.60 Kontrol Negatif Etanol 70 % 10 µL Keterangan: I = pengujian pertama, II = pengujian Kedua, III = pengujian ketiga 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 107-114
Data  hasil  pengujian  aktivitas  antibakteri ekstrak  daun  Kayu  Kapur  terhadap  bakteri S. aureus dan E. coli pada tabel 3 diatas, menunjukan bahwa semua konsentrasi ekstrak daun Kayu Kapur yang  digunakan  memiliki  aktivitas  antibakteri bakteri S. aureus dan E. coli . Konsentrasi ekstrak 400 µg/10  µL memiliki  nilai  zona  hambat terkecil pada bakteri S. aureus dan E. coli , yaitu masing-masing  6,20  mm  dan  6,10  mm. Sedangkan  konsentrasi  ekstrak 1000  µg/10  µL memiliki nilai zona hambat terbesar pada kedua bakteri, masing-masing 6,83 mm dan 6,73 mm. D apat  dilihat  pula  bahwa  konsentrasi  500  dan  700 µg/10 µL pada bakteri E. coli memiliki nilai zona hambat  yang  sama.  Hal  ini  dapat  disebabkan  oleh ekstrak pada  konsentrasi  700  µg/10  µL  dalam kertas  cakram tidak  berdifusi  dengan  baik kedalam  media,  sehingga  penghambatan  ekstrak terhadap bakteri E. coli tidak maksimal . D ari semua perlakuan yang diberikan pada kedua bakteri , nilai zona  hambat  terbesar  terdapat  pada  kontrol  positif ciprofloxacin  dengan  konsentrasi  5  µg/10  µL sedangkan  kontrol  negatif  etanol  70%  tidak menunjukan  adanya  zona  hambat  yang  terbentuk. Hasil  pengujian  antibakteri  dapat  dilihat  pada gambar 1 dan 2.
Gambar 1. Hasil Pengujian Antibakteri Pada
S. aureus
Gambar 2. Hasil Pengujian Antibakteri Pada

## E. coli Penentuan Nilai MIC dan MBC
Untuk  menentukan  nilai  MIC  dan  MBC diperlukan satu data konsentrasi ekstrak yang belum menunjukan  aktivitas  antibakteri,  karena  itu  data konsentrasi  300  µg/10  µL  pada  pra  penelitian
sebelumnya  yang  tidak  menunjukan  aktivitas antibakteri  pada  kedua  bakteri  uji,  ditambahkan untuk membuat kurva regresi linier.
Gambar 3. Kurva regresi linier penentuan MIC dan MBC pada bakteri S. aureus
Dari kurva diatas, diketahui bahwa persamaan regresi linier antara sumbu X dan sumbu Y adalah y=30,301x–156,14. Setelah dihitung, nilai MIC  ekstrak  daun  Kayu  Kapur  terdadap  bakteri S. aureus adalah  43,1  µg/10µL  dan  nilai  MBC-nya adalah 172,4 µg/10µL.
Gambar 4. Kurva Regresi Linier penentuan MIC dan MBC pada bakteri E. coli
Dari kurva diatas, diketahui bahwa persamaan regresi linier antara sumbu X dan sumbu Y  adalah  y  =  29,391x  –  152,14.  Setelah  dihitung, nilai MIC  dari ekstrak daun Kayu Kapur Terhadap bakteri E.  coli adalah  43,975  µg/10µL  dan  nilai MBC-nya adalah 175,9 µg/10µL.
Hasil  perhitungan  MIC  dan  MBC  dari ekstrak daun Kayu Kapur terhadap bakteri S. aureus dan bakteri E. coli tidak menunjukan adanya perbedaan  yang  besar,  meskipun  struktur  sel  dari bakteri S.  aureus (gram  positif)  dan  bakteri E.  coli (gram  negatif)  berbeda.  Hal  ini  dapat  disebabkan oleh mekanisme kerja antibakteri yang berbeda dari beberapa  kandungan  senyawa  metabolit  sekunder pada daun Kayu Kapur, daun Kayu Kapur diketahui memiliki mengandung beberapa senyawa metabolit sekunder  yang  memiliki  efek  antibakteri  yaitu flavonoid, alkaloid, saponin, dan β-sitosterol.
Ada banyak senyawa turunan dari flavonoid, diantaranya:  flavon,  flavonon,  isoflavon  dan flavonol.  Flavonoid  memiliki  banyak  aktivitas, salah satunya aktivitas antibakteri. Flavonoid diduga dapat  mengikat  protein  pada  membran  plasma  sel bakteri  dan  membentuk  senyawa  kompleks,
60 50 40 30 20 10 0 y = 30.301x - 156.14 R² = 0.6487 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Nilai ln Konsentrasi Ekstrak 60 50 40 30 20 10 0 y = 29.391x - 152.14 R² = 0.6625 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Nilai Ln Konsentrasi Ekstrak Nilai k u ad ra t Z o n a Ha m b at ( M m ) Nilai Ku ad ra t Z o n a Ha m b at ( m m )

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 107-114
sehingga  membran  plasma  bakteri  menjadi  lemah dan terjadi kebocoran pada membran plasma. Hal ini mengakibatkan  keluarnya  komponen-komponen dalam sel bakteri (Cowan, 1999).
Alkaloid  sebagai  salah  satu  metabolit sekunder  dari  tumbuhan  yang  diketahui  bersifat racun  bagi  organisme  lain,  hal  ini  juga  yang membuat alkaloid dapat berfungsi sebagai antibakteri.  Darsana dkk .,  (2012)  menyatakan alkaloid  yang  terkandung  dalam  daun  Binahong Anredera  Cordifolia dapat  menghambat  proses pembentukan  komponen  penyusun  peptidoglikan pada  sel  bakteri E.  coli ,  akibatnya  lapisan  dinding sel yang terbentuk juga lemah dan menyebabkan sel bakteri lisis oleh tekanan osmotik.
Selain menghambat pembentukan peptidoglikan  pada  dinding  sel  bakteri,  alkaloid dapat  merusak  enzim  RNA  polimerase  yang merupakan enzim yang bertanggungjawab mengatur  sintesis  asam  nukleat  dari  DNA  menjadi RNA  dan  hal  ini  akan  menghambat  proses pembentukan RNA itu sendiri (Aniszewski, 2007). Alkaloid  juga  berfungsi  sebagai  interkelator  DNA
membran  sel  bakteri,  sehingga  dapat  menghambat pertumbuhan sel bakteri.
Meskipun  bakteri  gram  positif  ( S.  aureus ) dan bakteri gram negatif ( E. coli) memiliki strusktur sel  yang  berbeda,  terutama  pada  dinding  sel,  akan tetapi  perbedaan  mekanisme  kerja  antara  senyawa- senyawa yang terkandung dalam daun Kayu Kapur menyebabkan  nilai  zona  hambat  serta  MIC  dan MBC dari ekstrak daun Kayu Kapur terhadap kedua bakteri uji tidak berbeda jauh.

## Uji Statistik
Data  hasil  uji  aktivitas  antibakteri  pada bakteri S.  aureus dan  bakteri E.  coli dianalisis dengan  program  SPSS  versi  22  menggunakan  uji One  Way  ANOVA untuk  melihat  apakah  data tersebut homogen atau tidak. Hasil uji homogenitas data aktivitas antibakteri pada bakteri S. aureus dan bakteri E. coli dapat dilihat pada tabel 4 dan 5 .
Tabel 4 .  Hasil  Uji  Homogenitas  Data  Aktivitas Antibakteri pada Bakteri S. aureus
dan   mengikat   enzim   topoisomerase   II,   enzim topoisomerase II adalah enzim yang bertugas untuk menahan  puntiran  pada  saat  sintesis  asam  nukleat
Levene Statistic df1 df2 Sig.
DNA  berlangsung.  Alkaloid  mengikat  enzim topoisomerase  II  dan  hal  ini  akan  menyebabkan relaksasi  pada  untai  DNA  dan  mengakibatkan kerusakan  DNA  bakteri  (Bonjean et  al .,  1998; Dassonneville et al ., 2000; Guittat et al ., 2003; 8,965 8 18 0,000
Tabel 5 .  Hasil  Uji  Homogenitas  Data  Aktivitas Antibakteri pada Bakteri E. coli
Karou dan Savadogo, 2005).
Saponin  (busa)  pada  tumbuhan  diketahui memiliki aktifitas toksik yang cukup kuat, sehingga
Levene Statistic df1 df2 Sig.
beberapa  tumbuhan  yang  memiliki  busa  yang banyak, sering digunakan masyarakat sebagai racun ikan. Karena sifat racunnya saponin memungkinkan untuk dapat membunuh atau menghambat pertumbuhan  bakteri.  Penelitian  yang  dilakukan oleh  Madduluri et  al .,  (2013)  melaporkan  saponin bekerja  sebagai  antibakteri  dengan  menyebabkan kebocoran protein dan enzim dari dalam sel bakteri. Secara spesifik Cavalieri et al ., (2005) mengatakan saponin  dapat  berdifusi  melalui  membran  luar  dan dinding  sel  yang  rentan  kemudian  mengikat membran  sitoplasma  kemudian  menyebabkan kerusakan pada membran plasma dan menyebabkan sel bakteri lisis.
Selain flavonoid, alkaloid dan saponin, daun Kayu  Kapur  diketahui  mengandung  senyawa  β- Sitosterol.  Johannes  (2013)  menyatakan  bahwa senyawa  β-Sitosterol  memiliki  sifat  bakteriostatik, senyawa  ini  bekerja  dengan  cara  berikatan  dengan membran  menimbulkan  ketidakaturan  pada
12,941 8 18 0,000
Dari kedua tabel hasil uji homogenitas yang telah dilakukan dapat dilihat bahwa nilai signifikan =  0,000  kurang  dari  α  =  0,05.  Hal  menunjukan bahwa data yang didapat setelah pengujian aktivitas antibakteri pada bakteri S. aureus dan E. coli tidak homogen,  karena  itu  uji  statistik  harus  dilakukan dengan menggunakan metode Kruskal-Wallis untuk melihat apakah tiap-tiap perlakuan konsentrasi yang diberikan  memiliki  aktivitas  penghambatan  yang berbeda pada bakteri S. aureus dan E. coli .
Tabel  6.  Hasil  Uji Kruskal-Wallis Aktivitas
Antibakteri Pada Bakteri S. aureus ZonaHambat Chi-Square 24.334 Df 8

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 107-114
Asymp. Sig. 0.002
Tabel  7.  Hasil  Uji Kruskal-Wallis Aktivitas
Antibakteri Pada Bakteri E. coli ZonaHambat Chi-Square 24.801 Df 8 Asymp. Sig. 0.002
Dari  hasil  uji  statistik  menggunakan  uji Kruskal-Wallis pada  tabel  4  dan  5  dapat  dilihat bahwa nilai signifikan 0,002 kurang dari α = 0,05, karena  itu  dapat  disimpulkan  bahwa  tiap-tiap perlakuan  yang  diberikan,  memiliki  nilai  zona hambat yang berbeda pada bakteri S. aureus dan E. coli .  Jones  (2010)  menyatakan  bahwa  jika  nilai derajat  bebas  atau  Df  =  8,  maka  nilai  Chi-Square yang  memenuhi  syarat  untuk  penelitian  dengan tingkat kepercayaan 95% atau nilai α = 0,05 adalah 15,507 dan nilai Chi-Square uji statistik pada tabel 9  untuk  bakteri S.  aureus adalah  24.334  dan  nilai Chi-Square  pada  tabel  10  untuk  bakteri E.  coli adalah  24.801.  Dengan  demikian,  telah  memenuhi syarat untuk penelitian dengan tingkat kepercayaan 95 %.
Setelah  dilakukan  penelitian,  maka  dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  daun  Kayu  Kapur memiliki aktivitas antibakteri pada bakteri S. aureus dan bakteri E. coli . Dengan demikian hipotesis awal yang menyatakan bahwa daun Kayu Kapur memiliki aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri S.  aureus dan bakteri E. coli terbukti benar.

## KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan dapat disimpulkan:
1. Ekstrak  daun  Kayu  Kapur  memilki  aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri S.  aureus dan bakteri E. coli dengan kategori sedang.
2. Nilai  MIC  dari  ekstrak  daun  Kayu  Kapur terhadap bakteri S. aureus adalah 43,1 µg/10µL dan  nilai  MBC-nya  yaitu  172,4  µg/10µL. Sedangkan nilai MIC ekstrak daun Kayu Kapur tehadap  bakteri E.  coli adalah  43,975 µg/10µL dan nilai MBC-nya yaitu 175,9 µg/10µL.

## DAFTAR PUSTAKA
Aniszewski,  T.  2007.  Alkaloids-Secret  of  Life: Alkaloid  Chemistry,  Biological,  Significance, Applications  and  Ecological  Role.  Elsevier Oxford. pp 6-12,130, and 187.
Apostol,  P.G, M.M.D.L.  Reyes,  I.A.V.  Altena, C.Y.
Ragasa.  2016.  Chemical  Constituents  of Melanolepis multiglandulosa. International Journal  of  jPharmaceutical  and  Clinical Research . 8(12): 0975-1556.
Bloomfield,  S.F.  1991.  Assesing  antimicrobial activity.  Di  dalam:  Denyer  SP,  Hugo  WB. (eds).  Mechanism  of  Action  of  Chemical
Biocides. Oxford. Blackwell Scientific Publicat.
Bonjean,  K,  D.  Pauw-Gillet,  M.P.  Defresne,  P. Colson,  C.  Houssier,  L.  Dassonneville,      C. Bailly,  R.  Greimers,  C.  Wright,  J.  Quentin- Leclercq, M. Tits, and L.  Angenot.  1998. The DNA intercalating alkaloid cryptolepine interferes  with  topoisomerase  II  and  inhibits the  primarily DNA synthesis in B16 melanoma  cells. Journal  Biochemistry 37(15): 5136-5146.
Campbell,  N.A,  B.R.  Jane,  and  G.M.  Lawrence. 2003.  Biologi  Jilid  II.  Edisi  V.  Jakarta. Erlangga. hal 118.
Cavalieri,  S.J,  I.D.  Rankin,  R.J.  Harbeck,  R.S.
Sautter, Y.S. McCarter, S.E. Sharp, J.H. Ortez, and C.A. Spiegel. 2005. Manual of Antimicrobial  Susceptibility  Testing.  USA: American Society for Microbiology.
Cowan, M.M. 1999. Plant Products as Antimicrobial Agents. Clinical Microbiology Reviews. 12: 564 – 582.
Darsana,  O.G.I,  K.N.I.  Besung,  dan  H.  Mahatmi.
2012.  Potensi  Daun  Binahong  (Anredera Cordifolia (Tenore) Steenis) dalam Menghambat Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli  secara  In  Vitro. Jurnal  Indonesia  Medicus Veterinus . 1(3): 337–351.
Dassonneville  L,  A.  Lansiaux,  A.  Wattelet,  N. Wattez,  C.  Mathieu,  S.  Van.  Miert,  L.  Pieters, and C. Bailly. 2000. Cytotoxicity and cell cycle effect  of  the  plant  alkaloids  cryptolepine  and neocryptolepine:  relation  to  drug-induced apoptosis.  Eur. Journal  Pharmacol .  409(1): 9- 18.
Davis,  W.W  and  Stout,  T.R.  1971.  Disc  Plate Method  of  Microbiological  Assay. Journal  of Microbiology . 22(4): 659-665.
Guittat  L,  P.  Alberti,  F.  Rosu,  S.  Van.  Miert,  E. Thetiot, L. Pieters, V. Gabelica, E.D. Pauw, A. Ottaviani,  J.F.  Roiu,  and  J.L.  Mergny.  2003. Interaction of cryptolepine and neocryptolepine with unusual DNA structures. Journal Biochemistry . 85(5): 535-541.
Johannes,  E.  2013.  Pemanfaatan  Senyawa  Bioaktif Hasil  Isolasi  Hydroid Aglophennia  cupressina
Lamoureoex  Sebagai  Bahan  Sanitizer  Pada

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 107-114
Buah Dan sayuran Segar. Disertasi. Universitas Hasanuddin. Makassar.
Jones,  D.S.  2010.  Statistik  Farmasi.  EGC.  Jakarta. hal 553
Karou,  D,  and  A.  Savadogo.  2005.  Antibacterial activity  of  alkaloids  from  Sida  acuta. African Journal of Biotechnology . 4(12): 1452-1457. Kinho,  J,  D.I.D.  Arini,  J.  Halawane,  L.  Nurani,
Halidah, Y. Kafiar, dan M.C. Karundeng 2011. Tumbuhan Obat Tradisional Di Sulawesi Utara Jilid  II.  Balai  Penelitian  Kehutanan  Manado, Manado. hal 45.
Kohanski, M.A, D.J. Dwyer, and J.J. Collins. 2010. How  antibiotics  kill  bacteria:  from  targets  to networks. Nature Journal Reviews Microbiology . 8(6):423-435.
Madduluri,  S,  K.B.  Rao,  and  B.  Sitaram.  2013.  In Vitro  Evaluation  of  Antibacterial  Activity  of Five  Indegenous  Plants  Extract  Against  Five Bacterial  Pathogens  of  Human. International
Journal  of  Pharmacy  and  Pharmaceutical Sciences . 5(4): 679-684. Melliawati  R.  2009. Escherichia  coli dalam kehidupan manusia. Bio Trends . 4(1): 10-14
Murray, P, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and  Y.H.  Yolken.  2003.  Manual  of  Clinical Microbiology.    8th    Ed.    Washington,    DC :American Society of Microbiology.
Mutsaqof,  A.A.N,  Wiharto,  E.  Suryani.  2015. Sistem  Pakar  Untuk  Mendiagnosis  Penyakit Infeksi  Menggunakan  Forward  Chaining.
Jurnal Itsmart . 4(1): 2301–7201.
Myers,  J.  A,  B.S.  Curtis,  and  W.R.  Curtis.  2013.
Improving  accuracy  of  cell  and  chromophore concentration  measurements  using  optical density. BMC Biophys . 6(1):4.
Tenover,  F.C.  2006.  Mechanisms  of  Antimicrobial Resistance in Bacteria. The American Journal of
Medicine . 119(1): 3-10.
Tethol, A.M. 2017. Pengaruh Daya Hambat Sediaan
Salep Ekstrak Daun Katuk ( Sauropus androgynus L.) Terhadap Pertumbuhan Bakteri
( Staphylococcus aureus ). Skripsi Program Studi
Farmasi  Fakultas  Matematika  Dan  Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Kristen Indonesia Tomohon.
Vandepitte,  J,  J.  Verhaegen,  K,  Engbaek,  P.
Rohner,  P.  Piot,  and  C.C  Heuck.  2003.  Basic laboratory  procedures  in  clinical  bacteriology.
2 nd edition. pp 94.