## ANALISIS CEMARAN BAKTERI COLIFORM DAN IDENTIFIKASI ESCHERICHIA COLI PADA AIR ISI ULANG DARI DEPOT DI KOTA MANADO
Andrian G. Bambang 1) , Fatimawali 1) , dan Novel, S. Kojong 2)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115
1) Program Studi Farmasi UKIT Tomohon

## ABSTRACT
Water is a basic needs for human life, but potable water is getting hard to find. The high rates of  environmental  pollution  affecting  the  availability  of  clean  water.  This  study  aims  to analyze  the  bacterial  contamination  in  drinking  water  refill  from  the  depots  with  random sampling  method  from  nine  districts  in  the  city  of  Manado.  This  research  included  the examination of Total Plate Count (TPC), examination of Coliform bacteria, and identification of Escherichia coli . The results of this study indicate that the all nine samples tested drinking water  contained  microbial  contamination  ranging  from  1.6  x  10 3 to  2.9  x  10 4 colonies/mL. All  samples  contained  coliform  bacteria  that  do  not  qualify  according  to  the  Ministry  of Health Regulation No. 492/MENKES/Per/IV/2010 which states 0 APM/100 mL sample. On the  identification  of Escherichia  coli ,  first  sample  and  ninth  sample  does  not  contain  the bacteria Escherichia coli . While the other samples contained the bacterium Escherichia coli that  do  not  qualify  according  to  the  Ministry  of  Health  Regulation  No. 492/MENKES/Per/IV/2010  are  stated  that  in  100  mL  of  drinking  water  should  not  be contained of bacterium Escherichia coli .
Key  words  :  drinking  water  refill,  Total  Plate  Count,  Most  Probable  Number, Coliform , Escherichia coli

## ABSTRAK
Air merupakan kebutuhan pokok bagi kehidupan manusia, tetapi air bersih yang layak minum semakin  sulit  ditemukan.  Tingginya  angka  pencemaran  lingkungan  mempengaruhi ketersediaan air bersih. Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis cemaran bakteri pada air minum  isi  ulang  dari  depot-depot  dengan  metode  pengambilan  sampel  secara  acak  dari  9 kecamatan di Kota Manado. Penelitian meliputi pemeriksaan Angka Lempeng Total (ALT), bakteri Coliform dan identifikasi Escherichia coli. Berdasarkan hasil menunjukan bahwa ke 9 sampel air minum yang di uji mengandung cemaran mikroba yang berkisar antara  1,6 x 10 3 sampai  2,9  x  10 4 koloni/mL.    Semua  sampel  mengandung  bakteri Coliform sehingga  tidak memenuhi  syarat  menurut  Peraturan  Menteri  Kesehatan  No.  492/MENKES/Per/IV/2010 yaitu 0 APM/100 mL sampel. Pada identifikasi Escherichia coli, sampel 1 dan sampel 9 tidak mengandung  bakteri Escherichia  coli .  Sedangkan  sampel  lainnya  mengandung  bakteri Escherichia coli sehingga tidak memenuhi syarat menurut Peraturan Menteri Kesehatan No. 492/MENKES/Per/IV/2010  yaitu  dalam  100  mL  air  minum  tidak  boleh  terdapat  kandungan bakteri Escherichia coli .
Kata kunci : Air minum isi ulang, Angka Lempeng Total, Angka Paling Mungkin, Coliform , Escherichia coli

## PENDAHULUAN
Air merupakan
kebutuhan manusia  yang  paling  penting.  Kadar  air tubuh  manusia  mencapai  68%  dan  untuk tetap  hidup  kadar  air  dalam  tubuh  harus dipertahankan.  Kebutuhan  air  minum setiap orang bervariasi mulai dari 2,1 liter hingga  2,8  liter  perhari,  tergantung  pada berat  badan  dan  aktivitasnya.  Agar  tetap sehat,  air  minum  harus  memenuhi persyaratan fisik, kimia maupun bakteriologis (Suriawiria, 2003).
Ketersediaan  air  bersih  semakin berkurang  seiring  dengan  perkembangan pertumbuhan  penduduk.  Pertumbuhan penduduk yang semakin padat menyebabkan  rendahnya  kemampuan tanah untuk menyerap air karena perubahan  tata  guna  tanah  yang  tidak terkendali  sebagai  dampak  kepadatan penduduk. Untuk dapat memenuhi kebutuhan  air  bagi  masyarakat,  menjadi alasan  tumbuhnya  industrialisasi  dalam penyediaan  air  minum  dengan  dukungan kondisi geografi daerah yang mempunyai beberapa  sumber  air  pegunungan.  Air minum dalam kemasan (AMDK) menjadi alternatif lain sebagai sumber air minum, namun harga AMDK dari berbagai merek yang  relatif  mahal  menyebabkan  AMDK sebagian  besar  hanya  dikonsumsi  oleh masyarakat  tingkat  ekonomi  menengah keatas.  Hal  ini  menyebabkan  air  menjadi benda  ekonomi  yang  mahal  sehingga masyarakat  mencari  alternatif  lain  untuk mendapatkan  air  yang  layak  minum, yaitu air minum  dari depot  dengan harga yang lebih murah.
Air  minum  isi  ulang  merupakan suatu jawaban akan kebutuhan masyarakat.  Air  minum  yang  biasa diperoleh dari depot, harganya jauh lebih murah,  bisa  sepertiga  dari  produk  air minum  dalam  kemasan  yang  bermerek. Tidak mengherankan bila banyak masyarakat konsumen beralih pada layanan air minum isi ulang, menyebabkan  depot  air  minum  di berbagai kota di Indonesia termasuk Kota Manado tumbuh dengan sangat pesat.
Menurut  Soemirat  (2004),  syarat air  minum  ialah  harus  aman  diminum artinya  bebas  mikroba  patogen  dan  zat berbahaya  dan  diterima  dari  segi  warna, rasa, bau dan kekeruhannya.
Masalah utama yang harus dihadapi  dalam  pengolahan  air  ialah semakin  tingginya  tingkat  pencemaran air, baik pencemaran yang berasal dari air limbah  rumah  tangga  maupun  limbah industri, sehingga upaya-upaya baru terus dilakukan untuk mendapatkan sumber air, khususnya  untuk  pemenuhan  akan  air minum yang memenuhi persyaratan yang telah  ditetapkan.  Dalam  pengelolaannya, air  minum  isi  ulang  rentan  terhadap kontaminasi dari berbagai mikroorganisme terutama bakteri coliform. Semakin tinggi tingkat
kontaminasi  bakteri coliform ,  semakin tinggi  pula  risiko  kehadiran  bakteri- bakteri  patogen  lain  yang  biasa  hidup dalam kotoran manusia dan hewan. Salah satu contoh bakteri  patogen yang kemungkinan terdapat dalam air terkontaminasi  kotoran  manusia  atau hewan  berdarah  panas  ialah  bakteri Escherichia coli, yaitu mikroba penyebab gejala  diare,  demam,  kram  perut,  dan muntah-muntah (Entjang, 2003).
Dari uraian di atas dapat diketahui tingginya kemungkinan kontaminasi mikroorganisme  pada  air  minum  isi ulang,  maka  pengujian  kualitas  air  yang diproduksi  dari  depot-depot  isi  ulang harus  dilakukan  secara  berkala  untuk menjamin  ketersediaan  air  minum  yang sehat  dan  aman  untuk  dikonsumsi masyarakat.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk menguji  cemaran  mikroba  pada  air minum isi ulang dari depot-depot di Kota Manado yang  dihitung  berdasarkan Angka  Lempeng  Total  (ALT),  menguji adanya cemaran bakteri coliform pada air minum isi ulang dari depot-depot di Kota Manado  dan  mengidentifikasi  adanya bakteri Escherichia coli pada air isi ulang dari depot-depot di Kota Manado.

## METODOLOGI PENELITIAN Bahan dan Alat
Sampel  air  isi  ulang  dari  9  depot air minum isi ulang masing-masing dari 9 kecamatan  yang  ada  di  Kota  Manado, Plate  Count  Agar (PCA)  Merck, Pepton
Dilution
Fluid (PDF), Triphenyl Tetrazolium Chloride (TTC), BD Briliant Green  Lactose  Bile 2%  (BGLB) Broth , Eosin  Methylene  Blue  Agar (EMBA)
HIMEDIA, Nutrient  Agar (NA)  Merck, Mac  Conkey  Broth (MCB)  Merck,  MR- VP  medium  ( Glucose  Phosphate  Broth ) HIMEDIA,  BD™  Difco Motility  Indol Ornithine (MIO)  Medium,  BD  BBL™ Simmons  Citrate  Agar (SCA), Nutrient Agar (NA) Merck, Larutan Kovac Merck, Kristal  Violet,  Lugol,  Alkohol  95% OneMed,  Safranin,  Alfanaftol  1%  dan Larutan Kalium Hidroksida (KOH) 40%.
Autoclave  All  American No.75X,
Laminar  Air  Flow  OMRON  H3BA , Memmert Modell 200 incubator , Microscoph Olympus  CX21,  Adam  Pgw
1502i Precision Balance , Cimarec
Hotplate ,  Brand Micropipette ,  Lemari Pendingin,  Jarum  Ose,  Spritus,  Kaca Preparat Sail  Brand ,  Kaca  penutup Sailing Boat dan alat-alat gelas Pyrex.

## Pengambilan sampel
Sampel  air  isi  ulang  diambil  dari 9  depot  air  minum  isi  ulang  masing- masing  dari  9  kecamatan  yang  ada  di Kota  Manado.  Sampel  air  diambil  dari depot menggunakan galon yang steril dan dibawah ke laboratorium untuk dilakukan penelitian tidak lebih dari 24 jam setelah pengambilan.

## Pengujian Angka Lempeng Total
Pada  pengujian  angka  lempeng total  dilakukan  sesuai  dengan  prosedur cara  uji  cemaran  mikroba  Standar Nasional  Indonesia  SNI  01-2897-1992. Sampel  dikocok  homogen  dan  dipipet sebanyak  25  mL  ke  dalam  labu  steril yang  telah  berisi  225  mL  larutan pengencer Pepton  Dilution  Fluid (PDF)
dan  dikocok  sampai  homogen  sehingga didapatkan pengenceran 10 -1 . Selanjutnya dilakukan  pengenceran  secara  serial sehingga  didapatkan  pengenceran  10 -2 dan seterusnya sampai 10 -7 . Dari masing- masing  hasil  pengenceran  sampel  dipipet 1  mL  ke  dalam  cawan  Petri  steril, kemudian  dituangkan  15-20  mL  media Plate  Count  Agar (PCA),  yang  telah dicairkan dan didinginkan hingga temperaturnya  45°C.  Digunakan  juga pereaksi  khusus Tri  Phenyl  Tetrazalim Chlotide (TTC).  Cawan  Petri  segera digoyang  dan  diputar  sampai  media tersebar merata dan homogen. Percobaan dilakukan  secara  duplo  dan  disertakan cawan petri yang mengandung media dan larutan  pengencer Pepton  Dilution  Fluid (PDF)  yang  tidak  mengandung  sampel sebagai  kontrol  uji  (blanko).  Setelah media  membeku,  inkubasi  cawan  petri pada  suhu  37°C  selama  24  -  48  jam dengan  posisi  terbalik.  Dihitung  koloni yang  tumbuh  pada  setiap  cawan  petri. Angka  total  bakteri  dalam  1  mL  sampel adalah  dengan  mengalikan  jumlah  rata- rata  koloni  pada  cawan  petri  dengan faktor pengenceran yang digunakan.

## Pengujian Bakteri Coliform
Coliform adalah  golongan  bakteri yang merupakan campuran antara bakteri fekal  dan  bakteri  non  fekal.  Prinsip penentuan  angka  bakteri coliform adalah bahwa  adanya  pertumbuhan  bakteri coliform yang ditandai dengan terbentuknya  gas  pada  tabung  Durham, setelah  diinkubasikan  pada  media  yang sesuai (Harmita dan Radji M, 2008).
Pada  pengujian  ini  dilakukan dengan  metode  Angka  Paling  Mungkin (APM). Pengujian APM dilakukan dengan  dua  tahap  yaitu,  Uji  Praduga ( Presumtif  Test )  dan  Uji  Konfirmasi ( Confirmative Test ).

## Uji Praduga (Presumtif Test)
Pada uji ini dilakukan pengenceran sampel dalam larutan pengencer Pepton  Dilution  Fluid (PDF)
sehingga  didapatkan  hasil  pengenceran 10 -1 dan  10 -2 .  Disiapkan  9  tabung  yang berisi  9  mL  medium Mac  Conkey  Broth (MCB) yang di dalamnya terdapat tabung Durham  terbalik.  Dipipet  1  mL  sampel air ke dalam 3 seri tabung pertama, 1 mL larutan hasil pengenceran 10 -1 ke dalam 3 seri tabung kedua, dan 1 mL larutan hasil pengenceran  10 -2 ke  dalam  3  seri  tabung ketiga.
Seluruh  tabung  diinkubasi  pada suhu 37°C selama 24 - 48 jam. Setelah 24 jam dicatat jumlah tabung yang membentuk  gas  pada  masing-masing pengenceran dan inkubasi kembali tabung yang tidak membentuk gas selama 24  jam,  kemudian  dicatat  jumlah  tabung yang membentuk gas.

## Uji Konfirmasi (Confirmative Test)
Untuk  uji  konfirmasi  dilakukan dengan  cara  memindahkan  sebanyak  1 Öse  dari  tiap  tabung  yang  membentuk gas  pada  media  MCB  ke  dalam  tabung yang  berisi  10  mL Brilliant  Green Lactose Bile (BGLB) 2%. Diinkubasikan semua tabung pada suhu 37°C selama 24 -  48  jam.  Adanya  gas  pada  tabung Durham dalam media BGLB 2% memperkuat  adanya  bakteri  coliform. Hasil  angka  bakteri  coliform  didapatkan dari  tabel  APM  yang  memberikan  nilai duga  terdekat  dengan  kombinasi  tabung
yang positif dan tabung yang negatif pada uji konfirmasi.

## Identifikasi bakteri Escherichia coli
Masing-masing  biakan  positif  pada uji  konfirmasi  bakteri  coliform,  diambil satu  Öse  dan  diinokulasikan  pada  media Eosin Methylene Blue Agar (EMBA), dan diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  24 jam.  Dipilih  koloni  warna  hijau  dengan kilap  logam  dan  bintik  biru  kehijauan dari  media  EMBA  dan  digoreskan  pada media Nutrient  Agar (NA).  Setelah diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam dilakukan  pewarnaan  Gram  dan  uji IMViC yang meliputi Uji Indol, Uji Metil merah,  Uji  Voges  Praskauer  dan  Uji Sitrat (Radji M, 2006).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Pengujian Angka Lempeng Total
Pada perhitungan koloni, berdasarkan  data  dari  setiap  sampel hanya  dihitung  pengenceran  dengan jumlah  koloni  antara  30-300.  Hal  ini bertujuan untuk memperkecil kemungkinan kesalahan dalam perhitungan. Karena percobaan dilakukan dua kali (duplo) maka harus menggunakan data dari kedua pengulangan  dengan  cara  mengambil rata-rata  dari  kedua  data,  dihitung  dan dibandingkan dengan standar uji cemaran mikroba untuk air minum. Tabel 1. Hasil Pengujian Angka Lempeng Total Sampel Angka Lempeng Total (koloni/mL) Standar (koloni/mL) Keterangan 1 1,9 x 10 3 1,0 x 10 2 TMS 2 1,3 x 10 4 1,0 x 10 2 TMS 3 2,4 x 10 3 1,0 x 10 2 TMS 4 1,5 x 10 4 1,0 x 10 2 TMS 5 2,3 x 10 3 1,0 x 10 2 TMS 6 1,4 x 10 4 1,0 x 10 2 TMS 7 2,5 x 10 4 1,0 x 10 2 TMS 8 2,9 x 10 4 1,0 x 10 2 TMS 9 1,6 x 10 3 1,0 x 10 2 TMS
Standar menurut SNI No. 01-3553 tahun 2006 Keterangan :TMS (Tidak Memenuhi Syarat)
Sebagaimana  terlihat  pada  Tabel  1, diantara  ke  9  (sembilan)  sampel  yang diuji,  semua  sampel  melebihi  batas cemaran mikroba menurut Standar Nasional  Indonesia  (SNI)  No.  01-3553 tahun  2006  yaitu  1,0  x  10 2 koloni/mL.
Sampel  dengan  jumlah  cemaran  mikroba terendah  adalah  sampel  9  dengan  jumlah koloni  1,6  x  10 3 koloni/mL.  Sedangkan sampel  dengan  jumlah  cemaran  mikroba tertinggi  adalah  sampel  8  dengan  jumlah koloni  2,9  x  10 4 koloni/mL.  Tingginya nilai  Angka  Lempeng  Total  menunjukan banyaknya  jumlah  bakteri  dalam  suatu sampel.  Banyaknya  jumlah  bakteri  pada air  minum  isi  ulang  dipengaruhi  oleh proses  pengolahan  depot  air  minum  isi ulang.  Proses  yang  dimaksud  disini meliputi penampungan/penyimpanan bahan baku, penyaringan, desinfeksi, dan sanitasi  tempat  pengolahan  air  minum atau  sistem  distribusi  pada  pipa  penyalur air  minum,  serta  kondisi  peralatan  yang digunakan  pada  proses  tersebut.  Pada penelitaian  sebelumnya  yang  dilakukan oleh Rido Wandrivel, dkk (2012), faktor-
faktor  lain  yang  dapat  mempengaruhi kualitas  produk  air  yang  dihasilkan adalah  bahan  baku,  penanganan  terhadap wadah  pembeli,  kebersihan  operator,  dan kondisi depot.
Pengujian Bakteri Coliform
Dalam pemeriksaan bakteri coliform dengan metode APM, dilakukan melalui  uji  praduga  ( presumptive  test ) dan uji konfirmasi/penegasan ( confirmative  test ).  Media  pada  tabung yang digunakan untuk uji praduga adalah Mac Conkey Broth (MCB) dan ditambah tabung  durham.  Media  ini  mengandung laktosa  dan  garam  empedu  ( bile  salt ) yang  mampu  menghambat  pertumbuhan bakteri  non  enterik  dan  menumbuhkan bakteri enterik sebagai dasar kemampuannya  untuk  memfermentasi laktosa  menjadi  asam  dan  gas.  Hasil positif  pada  uji  ini  dapat  dilihat  dari pembentukan  gas  yang  terdapat  pada tabung  durham,  dan  terbentuknya  asam yang  ditandai  dengan  perubahan  warna pada media.
Tabel 2. Hasil pada Uji Praduga Inokulum Jumlah Tabung Positif S.1 S.2 S.3 S.4 S.5 S.6 S.7 S.8 S.9 1 mL 2 2 3 2 3
3 2 3 2 0,1 mL 1 2 2 2 2 2 2 2 2 0,01 mL 1 3 2 2 1 2 1 3 0 Keterangan: S (Sampel) Dalam  uji  konfirmasi  digunakan  media selektif  yaitu  media Brilliant  Green Lactose Bile (BGLB) 2% yang mengandung  garam  empedu  yang  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  yang
tidak  hidup  dalam  saluran  pencernaan manusia  dan  mengandung  hijau  brilian yang  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri  Gram  positif  dan  bakteri  Gram negatif tertentu selain coliform.
Tabel 3. Hasil pada Uji Konfirmasi
Nilai APM ditentukan dengan kombinasi jumlah tabung positif (asam dan gas)  tiap  serinya  setelah  diinkubasi  dan hasil dilihat dari tabel APM/MPN
Coliform .  Pengujian  bakteri coliform menggunakan  metode Most  Probable Number mendapatkan  hasil  seperti  pada Tabel 4.
Tabel 4. Hasil Angka Paling Mungkin (APM) Coliform Sampel Coliform (APM/mL) Coliform (APM/100 mL) Standar Coliform (APM/100 mL) Keterangan 1 0,36 36 0 TMS 2 1,5 150 0 TMS 3 2,0 200 0 TMS 4 0,74 74 0 TMS 5 0,72 72 0 TMS 6 2,1 210 0 TMS 7 1,1 110 0 TMS 8 2,8 280 0 TMS 9 0,74 74 0 TMS Standar menurut PERMENKES NO. 492/MENKES/Per/IV/2010
Keterangan : TMS (Tidak Memenuhi Syarat)
Berdasarkan  Tabel  4  dapat  diketahui bahwa dari 9 (sembilan) sampel air minum isi  ulang  yang  diuji  semuanya  tidak memenuhi  syarat  batas  maksimal  total bakteri Coliform yang ditetapkan Peraturan Menteri Kesehatan No. 492/MENKES/Per/IV/2010 dan No. 907/MENKES/SK/VII/2002 yaitu 0
APM/100  mL  sampel.  Sampel  dengan total bakteri Coliform paling sedikit adalah sampel  1  dengan  36  APM/100  mL. Sedangkan  sampel  dengan  total  bakteri Coliform paling  banyak  adalah  sampel  8 dengan 280 APM/100 mL. Adanya bakteri coliform di  dalam  makanan/minuman menunjukan kemungkinan adanya mikroba yang bersifat enteropatogenik dan toksigenik yang berbahaya bagi kesehatan.
Identifikasi Escherichia Coli Masing-masing biakan positif pada uji  konfirmasi  bakteri coliform ,  diambil satu  Öse  dan  diinokulasikan  pada  media Eosin  Methylene  Blue  Agar (EMBA),  dan diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam. Koloni  warna  hijau  dengan  kilap  logam dan  bintik  biru  kehijauan  dari  media EMBA  yang  menandakan  keberadaan
bakteri Escherichia  coli digoreskan  pada media  miring Nutrien  Agar (NA)  dan diinkubasi  pada suhu 37°C selama 24 jam hingga  terdapat  pertumbuhan  koloni  di atas permukaan media miring. Selanjutnya biakan  dari  media  miring Nutrien  Agar (NA)  digunakan  untuk  pewarnaan  Gram dan Uji IMViC.

## Pewarnaan Gram
Dari  Gambar  1  menunjukan  bahwa bakteri yang terlihat dari hasil pengamatan di  bawah  mikroskop  adalah  bakteri berbatang  pendek  dan  berwarna  merah setelah proses pewarnaan. Hal ini disebabkan  karena  konsentrasi  lipid  dan ketebalan  lapisan  peptidoglikan  pada dinding sel bakteri.
Gambar 1. Hasil Pengamatan pada Mikroskop
Pada  sel  Gram-negatif,  alkohol meningkatkan porositas dinding sel dengan melarutkan lipid lapisan luar. Jadi, kompleks  KV-I  dapat  lebih  mudah dihilangkan  dari  lapisan  peptidoglikan yang tidak tertaut silang dengan kuat. Oleh sebab itu, efek pencucian alkohol memfasilitasi  pelepasan  kompleks  KV-I yang  tidak  terikat,  yang  membuat  sel-sel menjadi  kehilangan  warna  atau  tidak berwarna.  Karena  hanya  sel-sel  Gram- negatif  yang mengalami kehilangan warna sehingga  sel-selnya  menyerap  pewarna tandingan. Sedangkan Gram-positif mempertahankan warna ungu dari pewarna primer.

## Uji IMViC
Uji Indol, terbentuk lapisan (cincin)  berwarna  merah  muda  pada permukaan  biakan  setelah  penambahan reagen kovaks. Artinya bakteri ini membentuk  indol  dari  tryptopan  sebagai sumber  karbon.  Asam  amino  triptofan merupakan  komponen  asam  amino  yang lazim terdapat pada protein sehingga asam amino  ini  dengan  mudah  dapat  digunakan oleh  mikroorganisme  akibat  penguraian protein.  Ini  menunjukan  hasil  positif  dan menguatkan  kemungkinan  adanya  bakteri Escherichia  coli karena Escherichia  coli merupakan bakteri  yang dapat membentuk indol  dari  tryptopan  sebagai  sumber karbonnya.
Uji  metil  merah  akan  berwarna merah  pada  pH  4,4  dan  berwarna  kuning pada  pH  6,2.  Pada  uji  metil  merah mendapatkan  hasil  positif  karena  terjadi perubahan  warna  menjadi  merah  setelah ditambahkan indikator metal merah.
Artinya,  bakteri  ini  mengahasilkan  asam campuran  (metilen  glikon)  dari  proses
fermentasi glukosa yang terkandung dalam medium  MR-VP.  Terbentuknya  asam campuran  pada  media  akan  menurunkan pH  sampai  5,0  atau  lebih  rendah,  oleh karena itu bila indikator metil ditambahkan pada  biakan  tersebut  dengan  pH  serendah itu maka indikator tersebut menjadi merah.
Uji  VP  Hasilnya  negatif,  karena tidak terbentuk warna merah pada medium setelah  ditambahkan  alfanaftol  dan  KOH, hal  ini  disebabkan  karena  bakteri  tidak menghasilkan  produk  netral  seperti  asetil metil karbinol (asetoin) dari hasil metabolisme
glukosa melainkan menghasilkan  asam.  Adanya  kandungan asetoin  pada  biakan  akan  menyebabkan perubahan warna merah ketika ditambahkan alfanaftol dan KOH 40%. Uji ini  negatif  untuk Escherichia  coli karena Escherichia coli memfermentasikan karbohidrat  menjadi  produk  asam  dan tidak  menghasilkan  produk  netral  seperti asetoin.
Uji Sitrat, uji ini dilihat kemampuan  bakteri  untuk  menggunakan sitrat  sebagai  satu-satunya sumber karbon. Jika  bakteri  mampu  menggunakan  sitrat sebagai  sumberkarbonnya  maka  akan menaikan  pH  dan  mengubah  warna medium  biakan  dari  hijau  menjadi  biru. Uji  ini  negatif  untuk Escherichia  coli karena Escherichia  coli tidak  dapat menggunakan sitrat sebagai sumber karbon Pernyataan  hasil  dari  uji  deteksi Escherichia  coli yang  merupakan  bakteri gram negatif berbentuk batang pendek dan pada  reaksi  IMViC  memberikan  hasil sebagai berikut: Indol : positif Merah metil : positif Voges-proskauer : negatif Citrate : negatif
Tabel 5. Hasil Uji IMViC untuk Escherichia Coli pada air minum isi ulang Inokulum Jumlah Tabung Positif Escherichia coli S.1 S.2 S.3 S.4 S.5 S.6 S.7 S.8 S.9 1 mL 0 1 1 0 0 1 1 2 0 0,1 mL 0 0 1 1 0 1 0 1 0 0,01 mL 0 0 0 0 1 0 1 0 0
Keterangan: S (Sampel)
Pada  Tabel  5  menunjukan,  sampel  1  dan sampel  9  tidak  mengandung  bakteri
Escherichia  coli dan  memenuhi  syarat total  bakteri Escherichia  coli yang ditetapkan  Peraturan  Menteri  Kesehatan No.  492/MENKES/Per/IV/2010  dan  No. 907/MENKES/SK/VII/2002  yaitu  dalam 100  mL  air  minum  tidak  boleh  terdapat kandungan bakteri Escherichia coli. Sedangkan sampel lainnya tidak memenuhi  syarat  karena  mengandung bakteri Escherichia  coli. Adanya  bakteri Escherichia  coli pada  air  minum  isi  ulang menunjukan buruknya kualitas air tersebut. Bakteri Escherichia coli merupakan bakteri  yang  menjadi  salah  satu  mikroba indikator sanitasi dan juga bersifat patogen yang sering menyebabkan berbagai penyakit.

## PENUTUP Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang dilakukan  pada  sampel  air  minum  isi ulang, maka diperoleh kesimpulan sebagai berikut:
1. Cemaran  mikroba  pada  semua sampel  air  minum  isi  ulang  tidak memenuhi  standar  setelah  melalui pengujian  Angka  Lempeng  Total (ALT) karena melebihi batas cemaran  mikroba  menurut  Standar Nasional  Indonesia  (SNI)  No.  01- 3553  tahun  2006  yaitu  1,0  x  10 2 koloni/mL.  Sampel  dengan  jumlah cemaran  mikroba  terendah  adalah sampel 9 dengan jumlah koloni 1,6 x 10 3 koloni/mL. Sedangkan sampel  dengan  jumlah  cemaran mikroba  tertinggi  adalah  sampel  8 dengan  jumlah  koloni  2,9  x  10 4 koloni/mL.
2. Sampel  air  minum  isi  ulang  yang diuji  dengan  pengujian  Angka Paling Mungkin  (APM), semuanya positif mengandung bakteri Coliform dan tidak  memenuhi syarat  batas  maksimal  total  bakteri Coliform yang ditetapkan Peraturan Menteri Kesehatan No. 492/MENKES/Per/IV/2010 dan
No. 907/MENKES/SK/VII/2002 yaitu 0 APM/100 mL sampel.
3. Sampel  1  dan  sampel  9  tidak mengandung  bakteri Escherichia coli dan  memenuhi  syarat  total bakteri Escherichia  coli yang ditetapkan Peraturan Menteri Kesehatan No. 492/MENKES/Per/IV/2010 dan No. 907/MENKES/SK/VII/2002 yaitu  dalam  100  mL  air  minum tidak  boleh  terdapat  kandungan bakteri Escherichia coli. Sedangkan  sampel  lainnya  tidak memenuhi syarat
karena mengandung  bakteri Escherichia coli.

## Saran
1. Perlu  pengawasan  dari  instansi terkait  terhadap  cemaran  mikroba pada air minum isi ulang dari depot dengan melakukan
pemeriksaan/pengujian secara berkala.
2. Perlu  dilakukan  penyuluhan  untuk para pengusaha air minum isi ulang agar  menjamin  kualitas  air  minum yang dijual kepada masyarakat.
3. Masyarakat  harus  lebih  selektif dalam  memilih  air  minum  yang akan  dikonsumsi  agar  terhindar dari berbagai penyakit.

## DAFTAR PUSTAKA
Arifah, Isti Noor. 2010. Analisis Mikrobiologi Pada Makanan . Fakultas Pertanian Universitas Sebelas Maret. Arthur,  Sutikno.  2009. Cara  Menghitung Nilai MPN Uji Coliform . http://sutikno.Blog. Uns.ac.id. diakses tanggal 16 Juli 2014.
BPOM RI. 2006. Metode Analisis Mikrobiologi  Suplemen  2000 .  Pusat Pengujian Obat Dan Makanan Badan
Pengawasan  Obat  Dan  Makanan Republik Indonesia : Jakarta.
BPOM. RI. 2008. Pengujian Mikrobiologi Pangan .  Pusat  Pengujian  Obat  Dan Makanan  Badan  Pengawasan  Obat Dan Makanan Republik Indonesia.
Cappuccino,  J.  dan  Sherman  N.  2009.
Manual  Laboratorium  Mikrobiologi, Ed.  8 .  Penerbit  Buku  Kedokteran EGC.
DE  MAN,  J.C. MPN  tables  (corrected), Eur.  J.  Appl.  Biotechnol .  1983,  17, pp. 301-5
Departemen Perindustrian dan Perdagangan  RI.  2003,  Keputusan Menteri Perindustrian dan Perdagangan  No.  705/MPP/Kep/II/ 2003,  tentang Persyaratan  Teknis Industri Air Minum Dalam Kemasan dan Perdagangannya . Dwidjoseputro,  D.  2010. Dasar-Dasar Mikrobiologi . Jakarta : djambatan Dundu,  B.  2000. Penuntun  Praktikum Mikrobiologi .  Fakultas  Pertanian Universitas Sam Ratulangi, Manado. Entjang,  I.  2003. Mikrobiologi  dan Parasitologi untuk Akademi
Keperawatan  dan  Sekolah  Tenaga
Kesehatan yang Sederajat. Bandung: Citra Adtya Bakti.
Fardiaz, Srikandi. 1993. Analisis Mikrobiologi  Pangan. PT.  Raja Grafindo Persada, Jakarta.
Gwimbi,  P.  2011. The  Microbial  Quality of  Drinking  Water  in  Manonyane Community Maseru
District,
Lesotho .  African  Health  Sciences, Vol 11 hal 474-480.
Harmita  dan  Radji  M.  2008. Buku  Ajar Analisis  Hayati ,  Edisi 3 .  Penerbit
Buku Kedokteran EGC, Jakarta.
Irinto  koes,  2006. Mikrobiologi  jilid  1 . Bandung : yrama widya Irinto  koes,  2006. Mikrobiologi  jilid  2 . Bandung : yrama widya Jawert, Melnick, Adelberg, 2005,
Mikrobiologi Kedokteran (Medical Microbiology) . Salemba Medika.
Jakarta.
Jawetz,  E.  Melnick J.  L.  Dan  Adelberg  E.
A.  1986. MIKROBIOLOGI  Untuk Profesi  Kesehatan  edisi  16. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. Menteri  Kesehatan  RI.  2002. Syarat- Syarat  Dan  Pengawasan  Kualitas
Air Minum . PERMENKES NO.907/MENKES/SK/VII/2002.
Menteri  Kesehatan  RI.  2010. Persyaratan Kualitas  Air  Minum. PERMENKES
NO. 492/MENKES/Per/IV/2010. Mulia, Ricki M. 2005. Kesehatan Lingkungan. Yogyakarta: Graham Ilmu. Notoatmodjo,  S.  2003. Ilmu  Kesehatan Masyarakat. Jakarta: Penerbit Rineka Cipta.
Pelczar,  M.  J.  dan  Chan  E.C.S.  1988  .
Dasar-Dasar Mikrobiologi 2 . Jakarta
: UI-Press
Radji  M.  2006, Penuntun  Praktikum Mikrobiologi  Farmasi ,  Edisi 2 , Departemen Farmasi FMIPAUI, Depok.
Rido  Wandrivel,  Netty  Suharti,  Yuniar Lestari.  2012. Kualitas  Air  Minum yang  Diproduksi  Depot  Air  Minum Isi  Ulang  Di  Kecamatan  Bungus Padang  Berdasarkan  Persyaratan Mikrobiologi .  Fakultas  Kedokteran Universitas Andalas.
SNI.1992.  Cara  Uji  Cemaran  Mikroba, Standar Nasional Indonesia, SNI 01- 2897-1992, Badan Standar Nasional.
SNI.  2006.  Air  Minum  Dalam  Kemasan,
Standar Nasional Indonesia, SNI 01- 3553-2006, Badan Standar Nasional.
Soemirat, J. 2004. Kesehatan Lingkungan . Yogyakarta: Gadjah Mada University Press. Staf pengajar Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. 1993. Mikrobiologi  Kedokteran .  Binarupa Aksara. Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Suriawiria, U. 2003. Mikrobiologi Air . P.T Alumni Bandung. Suriawiria, U. 2008. Mikrobiologi Air dan Dasar-dasar  Pengolahan  Buangan Secara  Biologis .  Bandung:  Penerbit Alumni.