Anasari et al. : Eksplorasi Mikroorganisme Prokariot Asal Bonggol Pisang 461
Jurnal Agrotek  Tropika, Agustus  2022,  Vol  10,  No.  3,  pp.  461  -  468 DOI  :  http://dx.doi.org/10.23960/jat.v10i3.6107 ISSN:  2337-4993  (Print),  2620-3138  (Online)

## EKSPLORASI  MIKROORGANISME  PROKARIOT ASAL  BONGGOL PISANG UNTUK MENGENDALIKAN PENYAKIT LAYU BAKTERI

## (Ralstonia solanacearum Smith ) TANAMAN PISANG SECARA IN VITRO

## EXPLORATION OF PROKARYOTE MICROORGANISM FROM BANANA CORM  FOR  CONTROLLING BACTERIAL  WILT  DISEASE  (Ralstonia solanacearum Smith) ON BANANA PLANT IN VITRO
Selvi Anasari 1* ,  Muhammad Nurdin 2 , Ivayani 2 dan Suskandini Ratih 1 . 1 Jurusan Agroteknologi, 2 Jurusan Proteksi Tanaman Fakultas Pertanian Universitas Lampung, Bandarlampung, Indonesia *Email: selvianasari26@gmail.com
* Corresponding Author, Diterima: 17 Mar. 2022, Direvisi: 23 Mei 2022, Disetujui: 25 Jul. 2022

## ABSTRACT
The selection of banana plant corm as raw material for MOL is to reduce banana plantation waste and to make banana farmers find it easier  to obtain and manage it into  MOL solutions.  MOL solutions contain micro  and  macro  nutrients  as  well  as  biological  agents  that  function  as  biodecomposers,  biological fertilizers,  and  biopesticides.  The  microorganisms  that  have  been  identified  in  banana  corm  include Pseudomonas fluorescen., Bacillus sp., Aeromonas sp., Aspergillus niger, Azospirillium, Azotobacter and cellulolytic  microbes.  The  purpose  of  this  research  was  to  explore  the  microorganisms  contained  in  the MOL solution from healthy banana plant corm, to test the ability of microorganisms from healthy banana plant corm to suppress the growth of R. solanacearum in vitro, and to test the ability of microorganisms from healthy banana corm to push the plant growth. The method in this research consisted of two stages, namely exploration  of  microorganisms  contained  in  the  MOL  from  healthy  banana  plant  corm,  and  testing  the suspension of each bacteria contained in the MOL solution against pathogens. The results obtained three isolates, namely SA-1 isolate, SA-2 isolate, and SA-3 isolate and several trait tests had been carried out, namely the Ryu method, softrot test, hypersensitivity test and hypovirulent test. The Ryu method showed that SA-1 isolates and SA-2 isolates were gram-positive bacteria while SA-3 isolates was gram-negative. Softrot test  and  hypersensitivity  test on  all  isolates  reacted  negatively  while  in  the hypovirulent  test  all  isolates tested positive. SA-2 isolates and SA-3 isolates obtained from MOL from healthy banana plant corm were able to inhibit the growth of R. solanacearum in vitro, while SA-1 isolates were unable to inhibit them. The microorganisms obtained from MOL from healthy banana corm, namely SA-1 isolate, SA-2 isolate, and SA- 3 isolate can stimulate root length growth and the number of root hairs.
Keywords: Healthy banana corm, local microorganism, PGPR, R. solanacearum bacteria .

## ABSTRAK
Pemilihan bonggol tanaman pisang sebagai bahan baku MOL yaitu  untuk mengurangi limbah perkebunan pisang dan para petani pisang lebih mudah mendapatkannya serta mengelolanya menjadi larutan MOL. Larutan MOL mengandung unsur hara mikro dan makro serta agensia hayati yang berfungsi sebagai biodekomposer, pupuk  hayati,  dan biopestisida.  Mikroorganisme yang telah  didentifikasi pada  bonggol pisang  antara lain Pseudomonas  fluorescens ., Bacillus sp .,  Aeromonas sp .,  Aspergillus  niger,  Azospirillium,  Azotobacter dan mikroba selulolitik. Tujuan dilakukannya penelitian ini adalah untuk mengeksplorasi mikroorganisme yang terkandung di dalam larutan MOL asal bonggol tanaman pisang sehat, menguji kemampuan mikroorganisme asal bonggol tanaman pisang sehat dalam menekan pertumbuhan Ralstonia solanacearum secara in vitro, dan menguji kemampuan mikroorganisme asal bonggol tanaman pisang sehat dalam memacu pertumbuhan tanaman. Metode pada penelitian ini terdiri dari 2 tahap yaitu eksplorasi mikroorganisme yang terdapat dalam MOL asal bonggol tanaman pisang sehat, dan pengujian suspensi masing- masing bakteri yang terkandung
462 Jurnal Agrotek Tropika 10(3): 461-468, 2022
dalam larutan MOL terhadap patogen.  Hasil penelitian didapatkan 3 isolat yaitu isolat SA-1, isolat SA-2, dan isolat SA-3 serta sudah dilakukan beberapa uji sifat yaitu metode Ryu, uji softrot , uji hipersensitif dan uji hipovirulen. Metode Ryu pada isolate SA-1, dan isolat SA-2 bersifat bakteri gram positif sedangkan isolat SA-3 bersifat gram negatif.  Uji softrot dan uji hipersensitif pada semua isolat bereaksi negatif sedangkan pada uji hipovirulen semua isolat bereaksi positif. Isolat SA-2 dan isolat SA-3 yang didapatkan dari MOL asal bonggol tanaman pisang sehat mampu menghambat pertumbuhan R. solanacearum secara in vitro, sedangkan isolate SA-1 tidak mampu menghambat. Mikroorganisme yang didapatkan dari MOL asal bonggol pisang sehat yaitu isolat SA-1, isolat SA-2, dan isolat SA-3 dapat memacu pertumbuhan panjang akar dan jumlah rambut akar.
Kata Kunci : Bakteri R. solanacearum , mikroorganisme lokal (MOL) bonggol pisang sehat, PGPR

## 1.  PENDAHULUAN
Budidaya  pisang  di  Indonesia  memberikan kontribusi terhadap pendapatan negara. Melansir data dari Badan Pusat Statistik, produksi pisang 2018 sebanyak 30.373 ton, atau naik 67% dari 2017 sebesar 18.192 ton. Dari total volume ini, nilai ekspor mencapai Rp 204,54 miliar, naik 70,65% dibanding  2017  sebesar  Rp  119,86  miliar (Prasetyo, 2019).
Penyakit  layu  bakteri  yang  disebabkan  oleh Ralstonia    solanacearum sudah  sampai  tingkat menurunkan  produktivitas  tanaman  pisang  di Indonesia karena penyakit ini sulit dikendalikan sehingga  perlu  dilakukan  pengendalian  secara terpadu  (Machmud et  al .,  2002).  Penyakit R.solanacearum pertama dilaporkan di Sulawesi Selatan, namun sekarang patogen penyebab layu ini telah dilaporkan di 90% provinsi di Indonesia (Subandiyah et al. , 2006) dan pada tingkat kebun serangan penyakit dapat mencapai lebih dari 80%, misalnya  di  Lombok  Nusa  Tenggara  Barat mencapai 86,8% (Supeno et al. , 2002).
Pengendalian  dengan  cara  yang  lebih  aman adalah  pengendalian  dengan  memanfaatkan agensia hayati yang berasal dari bahan alami yang mengandung  mikroorganisme  lokal  (MOL). Pemilihan bonggol tanaman pisang sebagai bahan baku  MOL  yaitu  untuk  mengurangi  limbah perkebunan pisang dan para petani pisang lebih mudah  mendapatkannya  serta  mengelolanya menjadi larutan MOL. Larutan MOL mengandung unsur hara mikro dan makro serta agensia hayati yang  berfungsi  sebagai  biodekomposer,  pupuk hayati, dan biopestisida (Purwasasmita et al. , 2009). Pemanfaatan  mikroorganisme  asal  bonggol tanaman pisang ini diharapkan  mampu menekan penyakit layu bakteri pada tanaman pisang yang sakit. Sehingga pemanfaatan MOL dapat menjadi solusi yang ramah lingkungan dan mudah dikelola dalam menekan pertumbuhan penyakit layu bakteri pada tanaman pisang

## 2.  BAHAN  DAN  METODE
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Ilmu  Penyakit  Tumbuhan  Fakultas  Pertanian Universitas Lampung untuk pengujian secara in vitro dan  PT.  Great  Giant  Food  (PT.  GGF) Lampung  Timur  untuk  pengambilan  bonggol tanaman  pisang  dan  sumber  inokulum R. solanacearum pada bulan November 2019 sampai April 2020.
Penelitian ini terdiri dari 2 tahap yaitu eksplorasi mikroorganisme yang terdapat dalam MOL asal bonggol  tanaman  pisang  sehat,  dan  pengujian suspensi masing- masing bakteri yang terkandung dalam  larutan  MOL  terhadap  patogen.  Jumlah perlakuan  berdasarkan  hasil  inventaris mikroorganisme  yang  terkandung  dalam  larutan MOL  asal  bonggol  tanaman  pisang  kemudian masing-masing perlakuan diulang sebanyak 3 kali.

## 2.1  Pembuatan  Larutan  MOL Asal  Bonggol Tanaman Pisang Sehat
Pelaksanaan  penelitian  pertama  pembuatan larutan MOL, larutan MOL dibuat dengan cara, mengumpulkan bonggol tanaman pisang sehat yang sudah ditebang. Sebanyak 5 kg bonggol pisang yang telah dicacah dicampurkan dengan 1 kg gula merah dan 10 liter air kelapa (Gambar 1). Semua bahan tersebut dicampurkan, kemudian didiamkan dalam drum  plastik  tertutup.  Pengambilan  sempel dilakukan pada hari ke 21.

## 2.2  Penyiapan  dan  Perbanyakan  Isolat

## R.solanacearum
Perbanyakan isolat R. solanacearum diisolasi dari potongan akar, bonggol dan batang tanaman pisang  yang  menunjukan  gejala  layu  bakteri  di perkebunan  PT GGF Way Jepara. Lampung Timur. Isolasi dilakukan dengan memotong bonggol dan batang  tanaman  yang  bergejala  dengan  cara
mengambil bagian diantara yang sehat dan sakit dengan  ukuran  0,5  cm  x  0,5  cm,  lalu  potongan tersebut  dicelupkan  dalam  aquades  1  menit. Kemudian  potongan  tersebut  ditiriskan  dengan meletakkannya di tissu dan selanjutnya diletakkan dalam cawan petri yang sudah diberi media YPA ( Yeast Extract Agar ). Pengamatan dilakukan 3-5 hari  setelah  ditemukan  bakteri  kemudian dimurnikan dengan teknik penggoresan ke media YPA  ( Yeast  Extract  Agar ).

## 2.3  Eksplorasi  Mikroorganisme  yang Terkandung dalam Larutan MOL
Pengenceran  dilakukan  dengan  mengambil suspensi MOL sebanyak 10 ml kemudian dengan mikropipet  sebanyak  1  ml  suspensi  tersebut dimasukan  kedalam  tabung  reaksi  berisi  9  ml akuades  untuk  mendapatkan  pengenceran  10 -1 dengan  cara  yang  sama  dilakukan  hingga pengenceran 10 -4 , 10 -6 , 10 -8 , dan 10 -10 . Selanjutnya suspensi tersebut diambil 50 µl dan dituang pada permukaan  media  PCA  ( Plate  Count  Agar Pepton ) dalam cawan petri. Pengamatan dilakukan selama 3 hari, setelah ditemukan koloni kemudian ditransfer pada media YPA untuk dimurnikan.

## 2.4 Pengujian Gram
Dilakukan dengan metode Ryu. Menggunakan KOH 3% untuk mengetahui bakteri yang dibiakan termasuk dalam kategori gram positif atau gram negatif  dengan  mengambil  1-2  ose  bakteri  dan meletakkannya  di  atas  gelas  preparat  kemudian ditetesi KOH sebanyak 1-2  tetes  dan dicampur- ratakan. Kemudian tusuk gigi steril ditempelkan pada  campuran  tersebut  dan  diangkat  secara perlahan. Apabila terbentuk benang lendir tidak terputus, maka bakteri dibiakan merupakan bakteri gram negatif, namun apabila terputus maka bakteri tersebut termasuk bakteri gram positif.

## 2.5 Pewarnaan gram
Dilakukan  untuk  mengkonfirmasi  dari  uji metode  Ryu  sebelumnya.  Langkahnya  yaitu dengan  cara  mengoleskan  tipis  isolat  bakteri berumur 24 jam pada gelas preparat yang bersih, kemudian  difiksasi  menggunakan  bunsen, selanjutnya ditetesi dengan larutan kristal violet selama 1 menit, dibilas dengan aquades, diteteskan kembali  dengan  larutan  iodin  selama  1  menit, kembali  dibilas  dengan  aquades,  dibilas  lagi dengan alkohol  selama 30 detik, kemudian dibilas lagi dengan akuades lalu ditetesi larutan safranin selama 10 detik dan dibilas lagi dengan aquades. Pengamatan  dilakukan  dengan  menggunakan mikroskop. Sel-sel bakteri gram positif akan nampak berwarna biru gelap sedangkan sedangkan gram negatif berwarna merah (Schaad et al ., 2001).

## 2.6 Uji Softrot
Dilakukan dengan pembusukkan umbi kentang. Masing-masing isolat bakteri digoreskan sebanyak satu ose pada bagian tengah umbi kentang yang telah  dipotong  dan  dicuci  dengan  air  mengalir selama 35 menit. Umbi kentang diletakkan pada cawan petri dengan alas tisu yang dibasahi dengan air steril dan diinkubasi selama 2-3 hari. Reaksi positif  ditunjukkan  dengan  pembusukkan  umbi kentang tersebut (Oviana et al ., 2015).

## 2.7  Uji  Hipersensitif
Dilakukan untuk mengetahui apakah bakteri bersifat patogenik atau non-patogenik. Pembuatan suspensi bakteri dengan mengambil satu ose bakteri yang  dicampurkan  dengan  1  ml  air  steril  dan dihomogenkan. Suspensi bakteri diinjeksi sebanyak 300 µl menggunakan suntikan ke dalam jaringan bagian  belakang  helaian  daun  tembakau  secara perlahan  sehingga  suspensi  dapat  menyebar  ke
Gambar 1.  Bahan Pembuatan  Suspensi MOL seperti:  (a)  Bonggol Tanaman  Pisang Sehat,  (b) Gula Merah, (c) Air Kelapa, dan (d) Semua Bahan yang Telah Dicampurkan.
dalam jaringan. Daun tembakau akan muncul gejala nekrotik  dalam  waktu  24-48  jam.  Pengamatan dengan melihat adanya nekrotik atau tidak pada daerah daun tembakau yang disuntikkan bakteri (Zuraidah, 2013).

## 2.8  Uji  Hipovirulen
Dilakukan pada kecambah mentimun. Benih diinkubasi selama 3 hari dalam kondisi aseptik pada suhu 25 o C yang sebelumnya telah direndam etanol 70%  dan  larutan  NaOCl  2%.  Setelah  itu,  benih dikecambahkan pada nampan yang telah dilapisi dengan  kertas  merang  lembab  dan  kemudian nampan ditutup menggunakan plastic wrap selama 3 hari dan dipindahkan pada media agar air ( Water Agar) yang terbuat dari 1 liter akuades dengan agar batang  sebanyak  20  g  dan  disterilisasikan menggunakan autoklaf. Setiap cawan petri berisi 3 kecambah dengan 3 ulangan, lalu satu ose bakteri dicampur dengan air steril 1 ml dihomogenkan dan diambil sebanyak 10 µl diletakkan bagian hipokotil kecambah ketimun. Pengamatan dilakukan selama 2 minggu dan dihitung indeks keparahan penyakit (DSI) dengan rumus:
Keterangan : N = kategori serangan per individu, Z = jumlah individu yang digunakan.
Dalam  Suryantini et  al. (2011)  kategori keparahan penyakit adalah 0 = sehat, tanpa bercak pada hipokotil, 1 = 1 atau 2 bercak coklat terang dengan  ukuran  pada  kecambah<  0,25  cm,  2  = bercak coklat terang (ukuran 0,25-0,5 cm) daerah basah  pada  kecambah<10%,  3  =  bercak  coklat terang sampai gelap (ukuran>1 cm) luas daerah basah  pada  kecambah  10-100%,  4  =  kecambah mengalami kelayuan dan kematian. Nilai DSI < 2 menunjukkan bersifat hipovirulen.
2.9  Pengamatan  PGPR  ( Plant  Growth Promoting Rhizobacteria ) dalam memacu pertumbuhan benih tanaman mentimun.
Uji  PGPR  ( Plant  Growth  Promoting Rhizobacteria ) benih mentimun hal yang pertama dilakukan  adalah  perendaman  benih  mentimun kedalam  air  hangat  selama  30  menit,  kemudian direndam  etanol  70%  dan  larutan  NaOCl  2%. Setelah itu,  benih  dikecambahkan pada  nampan yang telah dilapisi dengan kertas merang lembab
dan kemudian nampan ditutup menggunakan plastic wrap selama 3 hari dan dipindahkan pada media agar  air  ( Water  Agar) yang  terbuat  dari  1  liter akuades  dengan  agar  batang  sebanyak  20  g  dan disterilisasikan menggunakan autoklaf.  Setiap cawan petri berisi 3 kecambah dengan 3 ulangan, lalu satu ose  bakteri  dicampur  dengan  air  steril  1  ml dihomogenkan dan diambil sebanyak 10 µl diletakkan bagian hipokotil kecambah ketimun. Pengamatan dilakukan  setelah  2  minggu  dengan  mengukur panjang akar dan melihat jumlah serabut akar.
2.10  Pengujian  bakteri  MOL  terhadap pertumbuhan R.  solanacearum secara in vitro.
Pengujian masing-masing bakteri dari suspensi larutan  MOL dilakukan dengan  cara  melakukan pengenceran  hingga 10 -8 . Selanjutnya pembuatan larutan stok dengan menambahkan 10 ml akuades ke dalam biakan bakteri di dalam cawan, kemudian dilakukan  pengenceran  10 -8 .  Suspensi  biakan bakteri setelah dilakukan pengenceran kemudian dituang  dan  diratakan  menggunakan drigalsky pada  permukaan  media  PDA  sebanyak  50  µl. Selanjutnya  suspensi  MOL  tersebut  kemudian digunakan untuk merendam kertas saring steril yang sebelumnya sudah dipotong dengan menggunkan pelubang kertas. Perendaman kertas saring steril dilakukan ± 1 menit kemudian diletakan pada media pada sisi-sisi media. Sedangkan sebagai kontrolnya menggunakan  suspensi  MOL  sebanyak  50  µl dituang  dan  diratakan  menggunakan drigalsky pada permukaan media PDA tanpa diberi kertas saring kemudian diinkubasi. Pengamatan dilakukan dengan cara melihat zona bening dan diukur diamter zona bening kemudian dibandingkan dengan  kontrol.

## 3.  HASIL  DAN  PEMBAHASAN
3.1  Hasil  Eksplorasi  dan  Beberapa  Uji  Sfat Isolat dalam Larutan MOL Asal Bonggol Pisang  Sehat.
Hasil eksplorasi suspensi MOL asal bonggol pisang  didapatkan  3  jenis  bakteri.  Pengambilan suspensi  MOL  di lakukan  pada hari  ke 21  HSI. Tiga jenis isolat bakteri tersebut akan digunakan untuk  pengujian  selanjutnya  (Gambar  2)  dan beberapa uji sifat yang dilakukan dari masing-masing isolat tersebut diuraikan pada (Tabel 1).
Dalam  Tabel  1  dapat  dilihat  bahwa  uji hipersensitif diperoleh hasil isolat SA-1, isolat SA-
DSI = ∑ N Z (1)
2, dan isolat SA-3 menghasilkan reaksi negatif (tidak bergejala). Pada uji hipovirulen isolat SA- 1,  isolat  SA-2,  dan  isolat  SA-3  semua  positif bersifat hipovirulen dan pada uji softrot isolat SA- 1, isolat SA-2, dan isolat SA-3 semua isolat bakteri bersifat negatif.

## 3.2 Pewarnaan Gram
Pada saat pengujian gram dihasilkan isolat SA1 menunjukan gram positif dan sel bakteri berwarna biru, isolat SA2 menunjukkan gram positif dan sel bakteri berwarna biru serta isolat SA3 menunjukkan gram  negatif  dan  sel  bakteri  berwarna  merah. Bakteri bersifat gram negatif ditunjukkan dengan terbentuknya lendir setelah dicampur dengan KOH 3% dan tidak terputus jika ditarik sedangkan gram positif tidak terbentuk lendir dan jika ditarik terputus (Gambar 3).

## 3.3 Uji Softrot
Hasil  uji softrot menunjukkan  bahwa  dari semua  isolat  bakteri yang  diuji  bersifat  negatif. Reaksi negatif pada uji softrot ditunjukkan dengan tidak  adanya  pembusukan  pada  bagian  tengah permukaan isisan umbi kentang (Gambar 4).

## 3.4  Uji  Hipersensitif
Hasil  pengujian  hipersensitif  menunjukkan bahwa dari isolat SA1, isolat SA2 dan isolat SA3 menghasilkan reaksi negatif atau tidak bergejala (Gambar 5).

## 3.5  Uji  Hipovirulen
Hasil uji hipovirulen didapatkan isolat bakteri yang  berasal  dari  suspensi  larutan  MOL  asal bonggol tanaman pisang semua bersifat hipovirulen. Isolat bakteri yang bersifat hipovirulen memiliki nilai DSI ( Disease Severity Index ) = 0 dan kecambah mentimun tidak atau sedikit menunjukkan gejala penyakit (Gambar 6).
Gambar 2.  Isolat Bakteri  Setelah Pemurnian (a) Isolat SA-1, (b) Isolat  SA-2, dan (c) Isolat SA-3.
Uji Karakteristik Isolat SA-1 Isolat SA-2 Isolat SA-3 Metode Ryu + + - Uji Softrot - - - Uji Hipersensitif - - - Uji Hipovirulen + + +
Tabel 1. Beberapa Sifat dari Masing-Masing Isolat yang Diperoleh dari MOL Asal Bongol Pisang
Gambar  3.  Isolat  Bakteri  yang  Bersifat  Gram
Negatif Berdasarkan Uji Ryu.
Gambar 4. Reaksi Negatif Pada Uji softrot Irisan Umbi Kentang (a) Isolat SA1, (b) Isolat SA2, dan (c) Isolat SA3.
Gambar 5. Reaksi Negatif Uji Hipersensitif Daun Tembakau
466 Jurnal Agrotek Tropika 10(3): 461-468, 2022
3.6  Uji  bakteri  sebagai  PGPR  ( Plant  Growth
Promoting  Rhizobacteria )
Hasil pengujian bakteri sebagai PGPR ( Plant Growth  Promoting  Rhizobacteria )  menujukan bahwa,  bakteri  yang  didapat  dalam  MOL  asal bonggol  tanaman  pisang  sehat  mampu  memacu pertumbuhan  akar.  Rata-rata  untuk  isolat  SA-1 yaitu 6,14 cm, isolat SA-2 7,03 cm, isolat SA-3 5,50 cm dan kontrol 5,23 cm. Hasil dilihat dari panjang akar  dan  jumlah  rambut  akar  pada  hari  ke  14 setelah inkubasi (Gambar 7 dan Gambar 8).
Diagram  pada  panjang  akar  menunjukan bahwa  isolat  SA1,  isolat  SA2,  dan  isolat  SA3 memiliki hasil lebih panjang dibandingkan dengan kontrol  dalam  memacu  pertumbuhan  tanaman. Sedangkan pada diagram jumlah rambut akar isolat SA-1, isolat SA-2, dan isolat SA-3 hasilnya lebih panjang  dibandingkan  dengan  kontrol  dalam memacu pertumbuhan tanaman benih mentimun. Pertumbuhan panjang akar dan jumlah rambut akar dapat dilihat pada (Gambar 9).
3.7  Daya  hambat  isolat  hasil  dari  suspensi MOL terhadap pertumbuhan R. solanacerum
Uji antagonis masing-masing bakteri dengan menggunakan kertas saring steril yang sebelumnya telah  direndam  dalam  suspensi  masing-masing bakteri  didapatkan  hasil  dengan  melihat  ada tidaknya zona hambat atau zona bening disekitar kertas cakram, dan terdapat 4 buah kertas cakram pada setiap cawan. Berikut hasil gambar dan tabel pengamatan pada hari ke 5 (Gambar 10).
Hasil  persentase  dari  daya  hambat  masing- masing bakteri yaitu isolat SA-1 17%, isolat SA-2 100%,  dan  isolat  SA-3  83%.  Dari  hasil  data tersebut dapat disimpulkan bahwa isolat SA-2 dan isolat SA-3 berpotensi menghambat perumbuhan R.  solanacearum, sedangkan  untuk  isolat  SA-1 kemungkinan berpotensi menghambat pertumbuhan R. solanacearum sangat kecil, dapat dilihat dari (Gambar 11).
Bakteri hasil isolasi  dari  MOL  asal  bonggol tanaman pisang sehat pada penelitian ini adalah isolat  SA-1,  isolat  SA-2,  dan  isolat  SA3. Berdasarkan dari hasil metode Ryu terdapat 2 isolat yang bersifat gram positif atau jika ditarik tidak terputus, sedangkan terdapat 1 bakteri yang bersifat gram  negatif  atau  jika  ditarik  terputus  dengan menggunakan KOH 3%.  Selanjutnya dilakukan pewarnaan  gram  untuk  mengkonfirmasi  hasil metode Ryu. Bakteri gram negatif berwarna merah,
Gambar 6. Isolat Bakteri Bersifat Hipovirulen
Gambar  7.  Rata-Rata  Panjang Akar  Kecambah Mentimun
Gambar 8. Rata-Rata Jumlah Rambut Akar Kecambah Mentimun
Gambar 9. Perbandingan Masing-Masing Perlakuan terhadap Pengaruh PGPR Pada Benih Mentimun
sedangkan  bakteri  gram  positif  berwarna  biru gelap. Gram positif memiliki dinding sel yang tebal dan  lemak  yang  tipis  sedangkan  gram  negatif memiliki lemak tebal dan berdinding sel tipis yang berada  di  ruang  periplasma.  KOH  3%  akan menyerang lemak ( bilayer lipid ) dan membuat sel gram negatif pecah sedangkan gram positif tidak terpengaruh (Chandra & Mani, 2012).
Uji softrot dari masing-masing bakteri tidak menunjukan adanya gejala pada irisan kentang tetap segar  dan  tidak  membusuk  hal  ini  menunjukan bahwa pada setiap bakteri tidak menunjukan sifat patogen. Menurut Oviana et al . (2015) bakteri yang bersifat softrot dapat menyebabkan busuk lunak pada tanaman dan bersifat patogenik.
Pada masing-masing isolat SA-1, isolat SA-2 dan  isolat  SA-3  setelah  pengujian  hipovirulensi menggunakan benih mentimun tidak menunjukan adanya  gejala  penyakit.  Menurut  Safitri  (2017) hipoverulen merupakan sifat patogen yang memiliki tingkat virulensi rendah.
Uji hipersensitif pada daun tembakau isolat SA-1, isolat SA-2, dan isolat SA-3 menunjukan reaksi negatif  atau  tidak  menunjukan  gejala.  Uji
hipersensitif  dengan  reaksi  positif  akan menimbulkan gejala nekrosis pada daun tembakau. Pengujian  hipersensitif  sangat  penting  untuk mengetahui kebanyakan patogen potensial.  Selain itu,  beberapa  patogen  tidak  memberikan  reaksi positif sehingga belum tentu semua patogen dapat bersifat positif pada uji hipersensitif daun tembakau (Danaatmadja et al. , 2009).
Uji  bakteri  sebagai  PGPR  ( Plant  Growth Promoting  Rizhobacteria )  dari  hasil  pengujian didapatkan bahwa  isolat SA-1, isolat SA-2, dan isolat SA-3 mampu memacu pertumbuhan panjang dan banyaknya rambut akar. Isolat SA-1, isolat SA- 2, isolat SA-3 memiliki panjang lebih dominan dan jumlah  rambut  akar  yang  banyak  dibandingkan dengan  kontrol.  Pengamatan  dengan  melihat perakaran  benih  mentimun  hal  tersebut berhubungan dengan auksin. Auksin adalah zat aktif dalam sistem perakaran. Senyawa ini membantu proses pembiakan vegetatif (Dewi, 2007).
Auksin banyak ditemukan pada embrio benih dan jaringan meristematik yang aktif tumbuh seperti tunas tanaman, ujung akar dan pucuk ranting atau daun (Sukmadi, 2013). Secara alamiah tanaman dapat mensintesis sendiri fitohormon auksin untuk pertumbuhannya. Selain itu, tanaman juga dapat memperoleh fitohormon auksin dari mikroba yang 8 bersimbiosis dengan tanaman tersebut. Mikroba- mikroba tersebut biasanya hidup di daerah rizosfer dan endofit tanaman. (Dewi, 2007).
Kelompok bakteri yang disebut sebagai PGPR ialah beberapa bakteri yang termasuk dalam genus Azotobacter , Bacillus,  Beijerinckia,  Burkholderia, Pseudomonas,  Enterobacter,  Erwinia,  Flavo- bacterium, Rhizobium dan Serratia (Akhtar et al ., 2012).  Mikroorganisme  yang  telah  didentifikasi pada  bonggol  pisang  antara  lain Pseudomonas fluorescen.,  Bacillus sp., Aeromonas sp., Aspergillus  nigger,  Azospirillium,  Azotobacter dan mikroba selulolitik (Budiyani et al ., 2016).
Bacillus sp . merupakan bakteri antagonis hal tersebut karena kemampuannya dalam menghambat pertumbuhan dan perkembangan penyakit tanaman dengan mekanisme penghambatan yang khas yang berbeda antar-antagonis lainnya. Menurut Holt et al. (1994), Bacillus sp . merupakan bakteri gram positif, warna koloni putih susu, bentuk koloni bulat dengan tepian keriput, memiliki endospora oval, dan sangat resisten pada kondisi yang tidak menguntungkan.
Menurut  Pelczar  &  Chan  (2008),  semakin besar zona bening yang terbentuk, maka semakin besar aktivitas penghambatan. Aktivitas isolat SA1 dan isolat SA2 (gram positif) dalam menghambat
Gambar 10. Hasil Uji Antagonis (a) Suspensi Bakteri Patogen  yang  Disebar  dan  Letak Kertas  Saring  yang Telah  Direndam Suspensi Bakteri Asal MOL dan (b) Zona Bening pada Kertas Cakram
Gambar  11.  Daya  Hambat  Pertumbuhan R.  solanacearum
468 Jurnal Agrotek Tropika 10(3): 461-468, 2022
bakteri R.  solanacearum lebih  peka  bila dibandingkan terhadap isolat SA3 (gram negatif). Hal ini disebabkan oleh adanya perbedaan struktur dinding sel kedua jenis bakteri tersebut.

## 4.  KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan dan hasil penelitian yang telah diuraikan, maka dapat diambil kesimpulan bahwa didapatkan 3 isolat yaitu isolat SA-1, isolat SA-2, dan isolat SA-3 hasil dari suspensi larutan MOL asal bonggol tanaman pisang sehat. Isolat SA-2 dan isolat SA-3 yang didapatkan dari  MOL  asal  bonggol  tanaman  pisang  sehat mampu  menghambat  pertumbuhan R.  solana- cearum secara in  vitro, sedangkan  isolat  SA-1 tidak mampu menghambat. Isolat SA-1, isolat SA- 2,  dan  isolat  SA-3  dapat  memacu  pertumbuhan panjang akar dan jumlah rambut akar.

## 5.  DAFTAR  PUSTAKA
Akhtar, A., M. I. Robab, & S. Rushda. 2012. Plant Growth  Promoting  Rhizobacteria:  an overview. Journal of Natural Product and Plant Resources. 2 (1): 19–31. Budiyani, N. K., N. N. Soniari, & N. W. S. Sutari. 2016.  Analisis  Kualitas  Larutan Mikroorganisme  Lokal  (MOL)  Bonggol Pisang. E-Jurnal  Agroekoteknologi Tropika. 5 (1): 63–72. Chandra, T. J., & P. S. Mani. 2011. A Study of 2 Rapid Tests to Differentiate Gram positive and  Gram  negative  Aerobic  Bacteria. Journal  of  Medical  &  Allied  Sciences . 1 (2): 84–85.
Danaatmadja, Y., S. Subandiyah, T. Joko, & C. U.
Sari.  2009.  Isolasi  dan  Karakterisasi Ralstonia  syzygii . Jurnal  Perlindungan Tanaman  Indonesia 15:  7–12.
Dewi,  I.R.  2007. Rhizobakteria  Pendukung Pertumbuhan  Tanaman .  Universitas Padjadjaran. Bandung.
Holt, J.G., N. R. Krieg, P. H. A. Sneath, J. T. Staley, &  S. T. Williams. 1994. Bergey’s  Manual Determinative  Bacteriology .  9th.  William
& Wilkins. Baltimor.
Machmud,  M.,  M.  Sudjadi,  &  Suryadi.  2002. Seleksi  dan  Karakterisasi  Mikroba Antagonis. Balai Pertanian Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik Pertanian. Bogor.
Oviana,T., T. N. Aeny, & J. Prasetyo. 2015. Isolasi dan Karakterisasi Penyebab Penyakit Busuk
Buah  Pada  Tanaman  Nanas  ( Ananas comosus [l.]  merr.). Jurnal  Agrotek Tropika . 3 (2): 220–225. Pelczar, M.J. & E. C. S. Chan. 2008. Dasar-Dasar Mikrobiologi Jilid 2 . Universitas Indonesia Press.  Jakarta.
Prasetyo, W.B. 2019. Budi Daya Meluas, Ekspor Pisang  2018  Naik  70,4%. https:// www.beritasatu.com/ekonomi/540708/ budi-daya-meluas-ekspor-pisang-2018- naik-704 . Diakses 27 Agustus 2019. Purwasasmita , Mubiar,  &  K.  Kurnia.  2009. Mikroorganisme  Lokal  sebagai  Pemicu Siklus  Kehidupan  dalam  Bioreaktor Tanaman. Seminar Nasional Teknik Kimia Indonesia .  19–20 . Safitri, D.A. 2017. Pengujian Antagonisme Bakteri Endofit  Nanas (Ananas  comosus  L.) . Skripsi .  Fakultas  Pertanian  Universitas Lampung. Lampung.
Schaad,  N . W.,  J.  B.  Jones,  &  W.  Chun.  2001. Laboratory  Guide  for  Identification  of Plant Pathogenic Bacteria. Third Edition . American  Phytopatological  Society  (APS press).
Subandiyah, S., N. E. Hadiwiyono, A. Wibowo, M. Fegan & P. Taylor. 2006. Survival of Blood Disease  Bacterium of  Banana  in  Soil. Proceeding  of  the  11st  International conference on Plant Pathogenic bacteria.
Edinburgh. pp. 10–14.
Sukmadi, R.B. 2013. Aktivitas Fitohormon IAA dari Beberapa  Isolat  Bakteri  Rizosfer  dan Endofit. Jurnal  Sains  dan  Teknologi Indonesia . 14 (3): 221–227.
Supeno, B., A. Purwantoro, I. Mustika, D. Sitepu, K. Mulya, M. S. Sudjono, M. Mahmud, S. H.  Hidayat,  Supriadi,  &  Widodo.  2002. Isolasi  dan  Karakterisasi  Penyakit  Darah Pisang di Lombok. Prosiding Kongres XVI dan  Seminar  Nasional  Perhimpunan Fitopatologi Indonesia. Fakultas Pertanian IPB dan PFI . Bogor. Hal 31–33.
Suryantini, R., A. Priyatmojo, S. M. Widyastuti, & R.  S.  Kasimandari.  2011.  Karakteristik Rhizoctonia spp.  dari  Tanah  di  Bawah Tegakan Tusam  ( Pinus  merkusi  jungh.  et de  vriese ). Jurnal  Budidaya  Pertanian .  7 (1): 8–  13.
Zuraidah.  2013.  Pengujian  Beberapa  Bakteri Penghambat  Pertumbuhan Xanthomonas oryzae pv. oryzae pada  Tanaman  Padi. Jurnal Biologi Edukasi .  5 (1):  18–24.