## IDENTIFIKASI SENYAWA AKTIF CRUDE EKSTRAK BUNGA LAWANG
( Illicium verum ) DAN UJI ANTIMIKROBIA PEMBUSUK

## DARI DAGING AYAM BROILER
Identification of Active Compounds in Crude Extracts Star Anise (Illicium verum) and Antimicrobial Activity for Microbe from The Broiler Chicken Meat
Sri Winarsih 1) * , Rena Enik Vamelia 1) , Nia Nurlaily 1) , Merdha Gustifa Tanzila 1)
1) Prodi Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Pertanian Peternakan, Universitas Muhammadiyah Malang
Jalan Raya TlogomasNo.246 Malang
* E-mail: sriwinarsih26@gmail.com
- - ABSTRACT
Star anise is an important spicepart for human needs, commonly used as an enhancer of taste, color  and  aroma  of  the  food.The  purpose  of  this  study  were  to  identify  the  active  compounds contained in crude extract star anise and its antimicrobial activity. In this study identified component of extract star anisewas  extracted using maceration method for 24 hours. The result showed that the crude extract of  star anise had  6 compounds as active compound  by UPLC method  i.e Orthidine E, Adriadysiolide,  8-Decene-4,6-diyne-1,2,10-triol,   Chrysogedone  A,  Egomaketone,  Lepalone .  Crude extract  of  star  anise  also  determined  amount  of  total  phenolic  content  and  flavonoid  content. Ethanolic  extract    contained  81.46  ppm  of  phenolic  compound  and  16.97  ppm    of    flavonoid.  The crude extract of star anise about 6% concentration had highest antimicrobial activity with inhibition zone around  1.5 cm for the microbe isolated  from the spoilage of broiler chicken meat.
Keywords : active component, antimicrobe activity, crude extract, Illium verum

## PENDAHULUAN
Rempah-rempah di Indonesia berlimpah,  berbagai  jenis  rempah  dapat ditumbuhkan  salah  satunya  adalah  bunga lawang  yang  biasa  dikenal  sebagai  pekak, bunga lawang memiliki bau yang khas dan kuat.Umumnya  digunakan  sebagai  bahan perisa  dalam  minuman,  juga  penambah cita rasa masakan. Tanaman ini merupakan jenis  pohon-pohonan  atau  perdu,  dengan tinggi mencapai 4-6 m dan memiliki daun tunggal,  berbintik  dengan  ujung  runcing. Bunganya berwarna kuning kehijau- hijauan.  Buah  terdiri  atas  6-8  folikel, masing-masing  folikel  berisi  1  biji (Tjitrosoepomo,  2005).  Buah  berdiameter 2,5-4,5  cm. Buah  ini  tergolong  rempah- rempah  dan  terlihat  seperti  bintang berkepala  empat  simetr is  (Ong,  2008).
Buah  masak  berwarna  coklat  dan  akan pecah  pada  bagian  tengahnya  yang bentuknya  menyerupai  bintang.  Pada
setiap  folikel  buah  yang  pecah  tadi terdapat  biji  berwarna  coklat,  mengkilap dan tidak berbulu (Ali et al., 2010).
Menurut  Yazdani et  al. (2009), bunga lawang berfungsi sebagai antifungal (anti  jamur),  antimikrobia  (Borghin, et  al. 2016),  antioksidan  (Yang et  al., 2012), berpotensi  sebagai anticancer (Bhadra et al., 2011)  dan  juga  efektif  mencegah dermatitis  (Rudzki  and  Grzywa,  1976). Manfaat bunga lawang yang telah dibuktikan oleh para peneliti membuktikan bahwa  dalam  bunga  lawang  terkandung berbagai  komponen  bioaktif.  Menurut Fardeau et  al. (2013)  bunga  lawang mengandung poliphenols, flavonols
(quercetin dan kaempferol), antosianin, tanins dan asam fenolik seperti shikimac dan asam galat.
Penggunaan  bunga  lawang  yang masih  terbatas  pada  perisa  minuman  dan penyedap makanan dirasa perlu
dikembangkan lagi sesuai dengan komponen aktif yang terkandung didalamnya. Potensi yang bisa dikembangkan  adalah  sebagai  pengawet alami  untuk  komoditi  yang  mudah mengalami  kerusakan.  Bahan  pengawet alami dapat diperoleh dengan cukupmudah,  untu  memudahkan  proses aplikasi  sebagai  pengawet,  maka  bunga lawang perlu diubah dalam bentuk ekstrak, yang perlu diuji aktivitasnya dalam produk yang ingin diawetkan.
Ayam  boiler  merupakan  komoditi hasil  peternakan  yang  mudah  mengalami kerusakan.  Kerusakan  dapat  disebabkan oleh  benturan  fisik,  perubahan  kimia  dan aktivitas  mikroba  (Suparno,  2005).  Oleh karena  itu,  perlu  dilakukan  cara  untuk mengatasi  kerusakan  (pembusukan)  yang disebabkan oleh aktivitas mikroba. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengidentifikasi  senyawa  aktif  yang terdapat  dalam crude ekstrak  bunga lawang dan menguji aktivitas antimikrobianya terhadap mikroba pembusuk dari daging ayam boiler.

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  untuk  analisis para  meter  uji  pada  penelitian  ini  adalah mesin Ultra
Perfomance
Liquid Chromatography (UPLC)  dengan  detector Time  of  Flight-Mass  Spectometry (TOF- MS),  Spektrofotomer  UV–Vis,  inkubator, dan  lampu  UV.  Bahan  utama  yang digunakan  untuk  penelitian  ini  adalah daging  ayam  boiler  yang  disembelih langsung, bunga lawang kering dan etanol pro  analisis,  sedangkan  bahan  yang digunakan  untuk  analisis  adalah  reagen Folin–Ciocalteu, Na 2 CO 3, asam  galat, aquades,  etanol  70%,  media nutrient  agar
(NA) sebagai media pertumbuhan mikroba.

## Tahapan Penelitian
Penyiapan Crude Ekstrak Bunga lawang dicuci dan dikeringanginkan  selama  6  jam  untuk hingga  kering.  Bunga  lawang  kemudian dihancurkan    menggunakan  blender  dan diayak menggunakan ayakan berukuran 60 mesh.  Serbuk  bunga  lawang  yang  telah dihasilkan ditambah pelarut etanol perbandingan 1:5. Proses ekstraksi dilakukan  pada  suhu  ruang  dan  digojog menggunakan shaker dengan kecepatan 75 rpm  selama  24  jam  pada  suhu  ruang (37 o C).  Ekstrak  yang  diperoleh  akan  di saring menggunakan kertas Saring Whatman  No.  1,  dan  filtrat  yang dihasilkan akan diperkatkan menggunakan evaporator  wakum  bersuhu  50 o C  hingga mencapai  volume  ¼  dari  volume  semula. Sisa etanol pada ekstrak pekat dihilangkan dengan cara dikeringkan menggunakan gas Nitrogen.

## Analisis  Total  Fenol,  Total  Flavonoid (Khatiwora et al., 2010)
Ekstrak  bunga  lawang  ditimbang sebanyak  100  mg  kemudian  dilarutkan sampai  10  mL  dengan  aquades  sehingga diperoleh  konsentrasi  10  mg/mL.  Dari konsentrasi  10  mg/mL  dipipet  1  mL dan  diencerkan  dengan  aquades  hingga 10 mL dan diperoleh konsentrasi ekstrak  1  mg/mL.  Larutan  konsentrasi  1 mg/mL dipipet sebanyak 0,2 mL ekstrak  kemudian  ditambahkan  15,8  mL aquades.  Larutan  ini  1  mL  reagen Folin– Ciocalteu lalu dikocok. Didiamkan selama 8  menit  kemudian  ditambahkan  3  mL Na 2 CO 3 10% ke dalam campuran.  Larutan didiamkan selama 2 jam pada suhu kamar, kemudian  sampel  diukur  serapannya dengan  spektrofotometer  UV- Vis pada panjang  gelombang  serapan  maksimum 765 nm. Dilakukan 3 (tiga) kali pengulangan  sehingga  kadar  fenol  yang diperoleh  hasilnya  didapat  sebagai  mg ekuivalen asam galat/g sampel segar.
Identifikasi Senyawa Aktif  Crude Ekstrak Bunga Lawang dan.... Jurnal Agroteknologi Vol. 12 No. 02  (2018)
Analisis  Senyawa  Aktif  Bunga  Lawang menggunakan  Ultra  Perfomance  Liquid Chromatography (UPLC) (Solikhah, 2016) Pemisahan  senyawa  menggunakan UPLC bertujuan untuk identifikasi kualitatif  senyawa  dengan  mendasarkan pada  parameter  waktu  retensi.  Pengujian ini  dilakukan  untuk  mengetahui  senyawa aktif    yang  terkandung  dalam  ekstrak bunga  lawang  yang  diinjeksikan  dalam mesin  TOF-LCMS  dan  akan  dideteksi dengan Flight-Mass  Spectometry  detector. Deteksi senyawa aktif pada bunga Lawang ekstrak  Etanol    menggunakan  fasa  diam berupa  kolom  Sunfire  C18.  Kolom  C18 merupakan  kolom  dengan  fasa  terbalik dimana  fasa  diam  C18  bersifat  non  polar dan  fasa  gerak  bersifat  polar.  Kolom pengaman atau pra-kolom (guard column) yang  digunakan  berukuran  1,7  um  dengan diameter  2,1  x  50  mm.  Fase  gerak  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  berupa  2 campuran  yakni  air  (H 2 O)  dengan  0,1  % asam format (HCOOH), asetonitril (CH 3 CN)  dengan  0,1  %  asam  format (HCOOH).
Aktifitas  Antimikrobia  (Metode  Difusi Dengan Modifikasi (NCCLS, 1993)
Aktivitas antimikrobia diuji menggunakan  metode  difusi  cawan,  yaitu dengan  cara  menuangkan  30  ml  media nutriet  agar (NA)  pada  cawan  petri, menunggu  media  agar  mengeras.  Setelah media  agar  mengeras,  inokulum  mikrobia yang  diisolasi  dari  daging  ayam  broiler yang rusak ditebarkan di permukaan media nutrient  agar (NA)  dengan  menggunakan mikropipet  dan  disebarkan  merata  dan diamkan  selama  10  menit.  Kemudian meletakkan kertas saring steril berdiameter 6  mm  yang  mengandung  50  μl  sampel diatas  permukaan  media  agar.  Kemudian media  diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama 24 jam. Setiap sampel diulang sebanyak 3 kali.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Senyawa Aktif Bunga Lawang
Identifikasi  senyawa  yang  terdapat dalam  c rude ekstrak  etanol  bunga  lawang diuji menggunakan UPLC with Ultra High
Resolution Time of Flight-Mass Spectometry detector (TOF-MS)
sebagaimana  ditunjukkan  pada Tabel  1 . Sesuai dengan hasil uji ini, dapat diketahui bahwa ekstrak bunga lawang  mengandung senyawa fenolik.
Senyawa  fenolik  adalah  senyawa yang  memiliki  satu  atau  lebih  gugus hidroksil  yang  menempel  pada  cincin aromatis. Senyawa fenolik yang teridentifikasi  adalah  orthidine  E.Senyawa lain yang teridentifikasi adalah Adriadysiolide merupakan senyawa terpenoid,8-Decene-4,6-diyne-1,2,10- triol,chrysogedone  A,  Egomaketone/perilla ketone dan Lepalone/5-(3-Furyl)-2- methyl-1-penten-3-one.

## Total Fenol dan Flavonoid
Dalam crude ekstrak  bunga  lawang terdapat  senyawa  fenolik  sebesar  81,46 ppm.  Penetapan  kadar  fenolik  dalam ekstrak ditentukan dengan metode spektrofotometri dengan asam galat sebagai larutan standar.
Serapan  maksimum  asam  galat diperoleh  padapanjang  gelombang  765 nmkonsentrasi  ekstrak  sebagai  sampel  uji ditetapkan  sebesar  1  mg/mm.  Kandungan flavonoid  pada crude ekstrak  sebesar 16,97ppm sesuai dengan pernyataan Fardeau et al. (2013) bahwa bunga lawang juga  mengandung  flavonoid.  Total  fenol dan flavonoid ekstrak kasar bunga lawang ditunjukkan pada Tabel 2 .
Tabel  2. Kadar  fenol  dan  flavonoid  ekstrak  bunga lawang konsentrasi 1 mg/ml Komponen Jumlah (ppm) Fenolik Flavonoid 81,46 16,97
Flavonoid termasuk ke dalam golongan  senyawa  fenolik.  Flavonoid secara  luas  terdapat  dalam  tanaman, peranan  senyawa  ini  beragam  yaitu sebagai  pemroduksi  pigmen  berwarna kuning,  merah  atau  biru  pada  bunga, hingga sebagai penangkal terhadap mikroba dan insekta. Tabel 2
menunjukkan  kandungan  flavonoid  dalam ekstrak  kasar  bunga  lawang  dengan konsentrasi  1  mg/ml  sebesar  16,97  ppm, kandungan flavonoid dianalisis menggunakan  spektrofotometri  dengan standar  kuersetin.  Menurut  Fardeau et  al.
(2013)  jenis  senyawa  flavonoid  yang terkandung  dalam  bunga  lawang  adalah
Tabel 1 . Senyawa aktif ekstrak kasar bunga lawang
Room
temperature ( o C) Rumus molekul Prediksi nama senyawa Struktur molekul 5,37 C 18 H 22 N 6 O 4 Orthidine E 5,96 C 10 H 12 O 31 Adriadysiolide
C 10 H 12 O 31 8-Decene-4,6-diyne- 1,2,10-triol 6,49 C 10 H 15 NO 2 Chrysogedone A 8,15 C 10 H 12 O 2
Egomaketone/
Perilla ketone C 10 H 12 O 2 Lepalone/5-(3-Furyl)- 2-methyl-1-penten-3-
one
golongan  flavonol  yaitu  kuercetin  dan kaempferol, sedangkan dari hasil identifikasi TOF-MS.

## Aktivitas Antimikrobia Bunga Lawang
Aktivitas  antimikrobia  merupakan parameter  untuk  mengetahui  kemampuan suatu zat atau senyawa dalam meminimalkan atau menghambat pertumbuhan mikrobia. Aktivitas antimikrobia ditetapkan menggunakan metode  difusi  cakram.  Inokulum  mikrobia pembusuk yang  digunakan memiliki kepadatan sel 10 9 cfu/g.
Bhorgin et  al. (2016)  membuktikan bahwa  ekstrak  bunga  lawang  dalam methanol mampu menghambat pertumbuhan  mikrobia  patogen  yaitu Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus dan Candida  albicans, secara  berturut- turut  7,45±0,52  mm,  5,84±0,40  mm,  dan 5,62±0,39  mm pada  konsentrasi   ekstrak 1  mg/ml.  Pada  daging  ayam  broiler  yang sudah  rusak  (busuk)  ditemukan  beberapa mikroba coliform antara lain B. thermosphacta,  Enterobacteriaceae dan Pseudomonas spp.  yang  menyebabkan rusaknya  jaringan  daging  ayam  dan  bau busuk (Rouger et al., 2017).
Inokulum  mikrobia  yang  dihambat dengan ekstrak kasar bunga lawang adalah mikrobia  pembusuk  yang  diambil  dari daging  ayam  broiler  yang  telah  rusak (busuk).  Diameter  zona  hambat  mikrobia pembusuk  daging  ayam  broiler  terdapat pada Tabel 3 .
Tabel  3 .  Diameter  zona  hambat  ekstrak  bunga lawang Konsentrasi (%) Diameter (cm)
1
2
3
4 6 0,73 1,1
1,23 1,33 1,5 Tabel 3 menunjukkan bahwa ekstrak kasar  bunga  lawang  yang  diencerkan menggunakan  aquades  dengan  konsentrasi 1-6%  b/v  mampu  menghambat  mikroba pembusuk  pada  daging  ayam  broiler. Aktivitas  antimikroba  tertinggi  terdapat pada konsentrasi 6% ekstrak kasar ditandai dengan  1,5  cm  zona  hambat.  Diduga mikroba pembusuk yang dihambat pertumbuhannya adalah B. thermosphacta, Enterobacteriaceae dan Pseudomonas spp. sesuai  dengan  bakteri  yang  ada  pada daging  ayam  broiler  yang  sudah  rusak (Rouger et al., 2017).
Aktivitas  antimikrobia  dari  ekstrak dipengaruhi  oleh  adanya  senyawa  fenolik dan  berbagai  senyawa  metabolit  sekunder yang belum teridentifikasi dari UPLC with Ultra  High  Resolution  Time  of  Flight- Mass  Spectometry  detector (TOF-MS) dalam  ekstrak.  Menurut  Bhorgin et  al.
(2016) aktivitas anti-mikrobia juga dipengaruhi  oleh  gugus  hydroksil  dalam gugus  aktif  dalam  metabolit  sekunder, karena  kemampuan  komponen  ini  untuk berikatan  dengan  bakteri  dan  akhirnya menganggu kinerja reseptor pada permukaan  bakteri.  Menurut  Bluma et  al . (2008)  komponen  fenolik  dalam  bunga lawang  berperan  dalam  pembentukan dinding penghalang ( building block ) dalam struktur  dinding  sel  yang  akan  berperan sebagai  penghalang  terhadap  terinfeksinya mikrobia pathogen.
Penggunaan  inokulum  mikrobia  dari daging  ayam  bertujuan  untuk  mengetahui secara  langsung  berapa  besar  kemampuan ekstrak  kasar  bunga  lawang  dalam menghambat pertumbuhan mikrobia pembusuk  dari  daging  ayam  broiler.  Data tersebut  selanjutnya  digunakan  sebagai dasar  penggunaan  ekstrak  bunga  lawang sebagai  pengawet  alami  daging  ayam broiler.

## KESIMPULAN
Ekstrak kasar bunga lawang mengandung senyawa Orthidine E, Adriadysiolide, 8-Decene-4,6-diyne-
1,2,10-triol, Chrysogedone A, Egomaketone,  dan  Lepalone.  Ekstrak kasar ( crude ) bunga lawang dapat menghambat  mikrobia  yang  teridentifikasi sebagai coliform yang diisolasi dari daging ayam  broiler  yang  rusak.  Konsentrasi ekstrak bunga lawang 6% b/v menghasilkan antimikrobia tertinggi terhadap  mikroba  pembusuk  daging  ayam broiler  yang  dibuktikan  dengan  adanya zona hambat sebesar 1,5 cm.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih kepada Kemenristekdikti  yang  telah  mendanai penelitian  ini  melalui  Program  Kreatifitas Mahasiswa  tahun  2017  dan  pendanaan Block Grant Fakultas Pertanian Peternakan Universitas Muhammadiyah Malang tahun 2017.

## DAFTAR PUSTAKA
Ali,  K.,  Sutaryo,  Purwanto,  I.,  Mulatsih,
Supriyadi, E., 2010. Yogyakarta pediatric cancer registry: An
International      collaborative  project  of University  Gadjah  Mada,  University  of Saskatchewan,  and  the  Saskatchewan Cancer Agency. Asian Pasific Journal of Cancer Prevention , 11: 131-136.
Awoyinka, O., Balogun , I. O., Ogunnowo, A.
A.,  2007.  Phytochemical  screening  and in-vitro  bioactivity  of Cnidoscolus aconitifolius (Euphorbiaceae). J.  Med. Plant Res., 1(3): 63-65.
Bhadra, S., Mukherjee, P.K., Kumar, N.S., and Bandyopadhyay, A. (2011) Anticholinesterase activity of standardized  extract  of Illicium  verum
Hook.f.  fruits. Fitoterapia, 82(3):  342- 346.
Bluma,  R.  V.,  and  Etcheverry,  M.  V.2008.
Application  of  essential  oils  in  maize grain:  impact  on Aspergillus section Flavi growth  parameters  and  aflatoxin accumulation. Food  Microbiol .,  25  (2): 324–334.
Bhorgin  Lourdu  Mary  A.  J.,  and  Perumal, U.M.  2016.  Characterization  and  anti microbial effect of methanolic extract of Illucium verum on pathogenic bacteria. World  Journal  of  Pharmacy and  Pharmaceutical  Science .,  5  (9): 2040-2054.
Fardeau,  M.  L.,  Benmalek,  Y.,  Yahia,  O.  A., and  Belkebir,  A.  2013.  Anti-microbial and  anti-oxidant  activities  of Illicium verum, Crataegus oxyacantha ssp Monogyna and Allium
cepa red and white varieties. Bioengineered Journal, 4 (4): 244–248.
NCCLS.  1993.  National  Committee  for Clinical
Laboratory Standards.
Performance standards for
antimicrobial disc susceptibility tests. PA: NCCLS Publications , 2-5.
Nazrul,  M.,  Daud,  H.,  AbdullahN.,  and
Ahmad,  R.  2018.  Bioassay-guided Fractionation of Artocarpus heterophyllus L.  J33  variety  fruit  waste extract and identification of its antioxidant constituents by TOF-LCMS. J. Food Chemistry , 266: 200-214.
Rouger,  A.,  O.  Tresse,  M.  Zagorec.  2017. Bacterial  contaminants  of  poultry  meat: Sources, species, and dynamics Microorganisms        Journal, 5  (50):    2- 16.
Rudzki,  E.,  and  Grzywa.  Z.  1976. Sensitizing  and  irritating  properties of star anise oil.
Contact Dermatitis , 2 (6): 305-8.
Suparno.  2005. Ilmu  dan  Teknologi  Daging . Edisi Keempat. Gadjah Mada University Press, Yogyakarta.
Sholikhah,  R.M.  2016.  “Identifikasi  Senyawa
Triterpenoid dari Fraksin-Heksana Ekstrak  Rumput  Bambu  ( Lophatherum gracile Brongn) dengan Metode UPLC- MS”.  Skripsi.  Univ.  Maulana  Malik Ibrahim, Malang.
Tjitrosoepomo,
G. 2005. Taksonomi Tumbuhan (Spermatophyta) . UGM- Press, Yogyakarta.
Ong,  H.C.,  Bunga  Lawang.  In  H.C.,  Ong (Ed.).  2008. Rempah-Ratus:  Khasiat
Makanan & Ubatan . Utusan
Publication  &  Distributors  Sdn.  Bhd
94., Malaysia.
Yang,  J.F.,  Yang,  C.H.,  Chang,  H.W.,  Yang, C.S.,  Wang,  S.M.,  Hsieh,  M.C.,  and
Chuang, L.Y. 2010. Chemical composition and antibacterial activities  of Illicium  verum against antibiotic-resistant  pathogens .  J.  Med.
Food , 13: 1-9.
Yazdani, D., Rezazadeh, S., Amin, G., Zainal, A., Shahnazi  S., and Jamalifar H. 2009. Antifungal  activity  of  dried  extracts of  anise  ( Pimpinella  anisum L.) and    star    anise  ( Illicium  verum Hook. f.) against dermatophyte and saprophyte  fungi. Journal of Medicinal Plants , 8 (5): 24-29.