ISSN: 1410-8917
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 16 (3) (2013) : 97 – 101
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa
Isolasi dan Karakterisasi Kitinase dari Isolat Jamur Akuatik Kitinolitik berasal dari Kupu-kupu ( Lepidoptera )
Reny Ingemer Selvia a , Wuryanti a* , Sriatun a
a Biochemistry Laboratory, Chemistry Department, Faculty of Sciences and Mathematics, Diponegoro University, Jalan Prof. Soedarto, Tembalang, Semarang
* Corresponding author: wuryanti@live.undip.ac.id
A r t i c l e   I n f o A b s t r a c t
Keywords: chitinase, chitinolytic aquatic fungi, Ueda Arai, Lowry
Research on the isolation and characterization of chitinase from the chitinolytic aquatic fungi  isolate  derived  from  butterfly  (Lepidoptera)  has  been  done.  This  study  aimed  to obtain  chitinase  from  chitinolytic  aquatic  fungi  isolate  derived  from  butterfly (Lepidoptera), data  of  the  chitinase  specific  activity  and  chitinase  optimum  conditions include pH and temperature. Chitinase activity assays in this study performed with the method  of  Ueda  Arai,  while  the  protein  concentration  measurements  performed  with Lowry method.  The specific  activity  in  this study  was  obtained  from  the ratio  between units of chitinase activity by protein content. The highest specific activity of chitinase in this  study  is  shown  by  the  fraction  3  is  51.17  units/mg  protein.  The  results  from  the characterization  of  chitinase  shows  that  pH  3.8  and  a  temperature  of  40.5°C  is  the optimum condition of chitinase.

## A b s t r a k
Kata Kunci: kitinase, jamur akuatik kitinolitik, Ueda Arai, Lowry
Telah  dilakukan  penelitian  tentang  isolasi  dan  karakterisasi  kitinase  dari  isolat  jamur akuatik kitinolitik berasal dari  kupu-kupu ( Lepidoptera ). Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh  kitinase  dan  data  aktivitas  spesifik  kitinase  dari  isolat  jamur  akuatik kitinolitik yang berasal dari kupu-kupu serta memperoleh data kondisi optimum kitinase meliputi pH dan suhu. Pengujian aktivitas kitinase pada penelitian ini dilakukan dengan metode Ueda Arai, sedangkan pengukuran kadar protein dilakukan dengan metode Lowry. Aktivitas  spesifik  pada  penelitian  ini  diperoleh  dari  rasio  antara  unit  aktivitas  dengan kadar protein kitinase. Aktivitas spesifik tertinggi kitinase pada penelitian ini ditunjukkan oleh  fraksi  3  yaitu  sebesar  51,17  unit/mg  protein.  Hasil  karakterisasi  kitinase menunjukkan bahwa pH 3,8 dan suhu 40,5 o C merupakan kondisi optimum kitinase.

## 1. Pendahuluan
Kitinase  merupakan  suatu  enzim  glikosil  hidrolase yang  mengkatalisis  degradasi  kitin  yaitu  senyawa polimer  dari  N-asetilglukosamin  yang  membentuk ikatan  linier β -1,4  [1].  Enzim  ini  ditemukan  dalam berbagai  mikroorganisme  yang  termasuk  dalam  jenis jamur  dan  bakteri.  Salah  satu  jenis  jamur  penghasil kitinase adalah jamur akuatik kitinolitik. Jamur akuatik kitinolitik merupakan jamur yang memiliki habitat di air, baik  di  permukaan  maupun  di  dalam  air,  dan menghidrolisis kitin dengan mensekresikan kitinase [2]. Jamur  akuatik  kitinolitik  dapat  berperan  sebagai
dekomposer  serangga  yang  telah  mati  dengan  cara menghidrolisis tubuh serangga yang tersusun atas kitin sehingga  menghasilkan  senyawa-senyawa  yang  lebih sederhana  seperti  karbon  dan  nitrogen.  Kupu-kupu merupakan  salah  satu  jenis  serangga  yang  termasuk dalam ordo lepidoptera. Kupu-kupu memiliki ciri bentuk dewasanya mempunyai dua pasang sayap yang ditutupi dengan bulu-bulu  atau sisik. Tubuh  kupu-kupu  terbagi atas tiga bagian, yaitu kepala, toraks, dan abdomen yang dilapisi oleh eksoskeleton yang terdiri dari lapisan kitin [3].
Aplikasi  kitinase  pada  bidang  pertanian  dan perkebunan sangat potensial karena dapat dimanfaatkan sebagai  agen  biokontrol  terutama  bagi  tanaman  yang terserang  infeksi  jamur.  Hal  ini  dikarenakan  kitin  yang merupakan  komponen  utama  dinding  sel  jamur  dapat didegradasi  kitinase  menghasilkan  produk  yang  ramah lingkungan  dibandingkan  penggunaan  zat  kimia. Kitinase dari organisme laut berperan dalam proses daur ulang  kitin.  Banyak  bakteri  dan  jamur  mengeluarkan kitinase  untuk  menguraikan  kitin  menjadi  karbon  dan nitrogen.  Dua  senyawa  terakhir  ini  selanjutnya  dipakai sebagai  sumber  energi  biota  lainnya  Dengan  adanya kitinase penguraian kitin berlangsung kontinyu sehingga tidak  terjadi  akumulasi  kitin  dari  sisa  cangkang  udang, kepiting, cumi dan organisme laut lainnya. Produk hasil hidrolisis senyawa kitin juga banyak manfaat di bidang pertanian  dan  industri  makanan.  Senyawa  oligo-kitin telah dilaporkan dapat membantu meningkatkan sistem kekebalan di dalam tubuh, memiliki sifat anti bakteri dan anti  kapang,  serta  meningkatkan  daya  tahan  pada tanaman sedangkan monomernya, yaitu N- asetilglukosamin  dapat  digunakan  sebagai  obat  untuk mengontrol  kadar  gula  dalam  darah.  Untuk  kosmetik, senyawa gula ini dapat membantu mengurangi hilangnya hiperpigmentasi,  karena  N-asetil-D-glukosamin  dapat membantu mengurangi aktivitas  enzim  tirosinase  yang berperan dalam produksi melanin [1].
Kitinase yang diisolasi dari jamur yang berbeda akan memiliki  aktivitas  tertinggi  pada  pH  dan  suhu  yang berbeda.  Karakterisasi  dilakukan  berdasarkan  pH  dan suhu  karena  kedua  parameter  tersebut  berperan langsung  pada  aktivitas  enzim.  Jika  lingkungan  suatu enzim  memiliki  pH  dan  suhu  optimum  maka  aktivitas enzim yang dihasilkan pun akan maksimum.
Oleh karena itu, pada penelitian ini dilakukan isolasi kitinase dari isolat jamur akuatik kitinolitik yang berasal dari  kupu-kupu  dan  kemudian  dilakukan  pula karakterisasi  kitinase  yang  dihasilkan  meliputi  pH  dan suhu.

## 2. Metode Penelitian

## Alat dan Bahan
Peralatan  gelas  laboratorium,  lampu  spirtus, autoklaf, shaker, mikropipet, alumunium foil , spektrofotometer UV-VIS ,  sentrifus,  membran  selofan, pengaduk  magnet,  botol  vial,  neraca  analitik,  oven, kompor  listrik,  kertas  saring,  kapas,  kain  kasa,  benang kasur. Biakan murni jamur akuatik kitinolitik, aquades, media kitin padat, media kitin cair, buffer asetat 0,05M pH  5,  amonium  sulfat,  BaCl 2 ,  EDTA  Alkali, BSA ,  kalium natrium tartrat, CuSO 4 , dan folin-ciocalteau

## Produksi Kitinase
Isolat  jamur  akuatik  kitinolitik  hasil  peremajaan dipindahkan  secara  aseptik  ke  dalam  media  fermentasi dengan volume media fermentasi 500 mL sebagai kultur produksi. Media fermentasi ini diinkubasi pada inkubator shaker selama  3  hari.  Media  fermentasi  hasil  inkubasi tersebut  disaring  menggunakan  kertas  saring  lalu disentrifugasi  dengan  kecepatan  5000  rpm  selama  20
menit. Filtrat yang didapatkan merupakan ekstrak kasar enzim.

## Fraksinasi dan Dialisis
Tingkat kejenuhan amonium sulfat dikelompokkan menjadi  fraksi  I,  20-40%  fraksi  II,  40-60%  fraksi  III, 60-80%  fraksi  IV,  80-100%  fraksi  V.  Tahap  fraksinasi dimulai  dengan  menambahkan  amonium  sulfat  pada larutan ekstrak kasar enzim sambil diaduk menggunakan pengaduk  magnet  kemudian  larutan  didiamkan  satu malam. Selanjutnya disentrifugasi pada suhu 4 o C dengan kecepatan  5000  rpm  selama  20  menit.  Filtrat  dan endapan  akan  terpisah  setelah  disentrifugasi.  Filtrat yang diperoleh dilanjutkan untuk fraksinasi selanjutnya, sedangkan  endapan  disuspensikan  dalam  bufer  asetat 0,05 M pH 5.
Hasil  fraksinasi  kemudian  didialisis  dengan merendam  kantong  selofan  yang  berisi  enzim  dalam bufer  asetat  0,00005  M  dan  diaduk  menggunakan pengaduk magnet. Setiap dua jam bufer diganti serta diuji kandungan  amonium  sulfatnya  dengan  BaCl 2 .  Proses dialisis dihentikan sampai dengan bebas sulfat.

## Penentuan Aktivitas Kitinase
Penentuan  aktivitas  kitinase  dilakukan  dengan metode Veda dan Arai [4]. Sebanyak 1 mL koloidal kitin 0,3%,  2  mL  bufer  asetat  0,05  M  pH  5  dan  1  mL  filtrat enzim  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  dan diinkubasi  pada  suhu  40 o C  selama  1,5  jam.  Larutan kemudian  diukur  serapannya  pada  panjang  gelombang 660 nm menggunakan spektrofotometer UV-VIS .

## Pengukuran Kadar Protein
Sebanyak  0,5  mL  enzim  ditambah  dengan  2,5  mL lowry C dikocok perlahan kemudian diinkubasi pada suhu kamar  selama  10  menit.  Selanjutnya  ditambahkan  0,25 mL lowry D dan segera dikocok lalu diinkubasi pada suhu kamar  selama  30  menit.  Larutan  tersebut  kemudian diukur  absorbansinya  pada  panjang  gelombang maksimum,  yaitu  695  nm  dengan  menggunakan spektrofotometer UV-VIS .

## Karakterisasi pH Optimum Kitinase
Sebanyak 1 mL koloidal kitin 0,3% yang dilarutkan dalam bufer asetat dengan variasi pH 3,6; 3,8; 4; 4,2; dan 4,4 ditambah 2 mL bufer asetat dengan variasi pH yang sama  lalu  ditambah  1  mL  filtrat  enzim  dimasukkan  ke dalam  tabung  reaksi  dan  diinkubasi  pada  suhu  40 o C selama  1,5  jam.  Larutan  kemudian  diukur  serapannya pada  panjang  gelombang  660  nm  menggunakan spektrofotometer UV-VIS .

## Karakterisasi Suhu Optimum Kitinase
Sebanyak 1 mL koloidal kitin 0,3% yang dilarutkan dalam bufer asetat dengan variasi pH 3,6 ; 3,8 ; 4 ; 4,2 ; 4,4, ditambah 2 mL bufer asetat dengan variasi pH yang sama lalu ditambah 1 mL filtrat enzim hasil karakterisasi pH  optimum  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  dan diinkubasi  pada  suhu  40 o C  selama  1,5  jam.  Larutan kemudian  diukur  serapannya  pada  panjang  gelombang 660 nm menggunakan spektrofotometer UV-VIS .
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 16 (3) (2013) : 97 – 101

## 3. Hasil dan Pembahasan

## Produksi Kitinase
Produksi  kitinase  dari  jamur  akuatik  kitinolitik memerlukan  nutrien  dasar  yang  terdiri  dari  sumber karbon,  nitrogen,  dan  faktor  esensial  pertumbuhan (mineral  dan  vitamin)  untuk  tumbuh,  oleh  karena  itu untuk  mendapatkan  hasil  yang  maksimum,  media pertumbuhan  yang  digunakan  harus  mengandung nutrien  dasar.  Media  produksi  enzim  yang  digunakan terdiri atas koloid kitin 1%, yeast ekstrak 0,25%, pepton 0,25%, NaNO 3 0,2%,  KH 2 PO 4 0,1%,  MgSO 4 .7H 2 O  0,05%, KCl  0,05%,  dan  FeSO 4 0,01%.  Isolat  jamur  akuatik kitinolitik ditumbuhkan sampai waktu eksponensialnya, yaitu 72 jam atau 3 hari. Hal ini sesuai dengan data kurva pertumbuhan dimana jamur akuatik kitinolitik mencapai puncak  fase  eksponensial  pada  jam  ke  72.  Pemanenan yang  dilakukan  pada  waktu  yang  terlalu  singkat  akan menghasilkan enzim yang sedikit karena mikroba belum beradaptasi dengan lingkungannya [5]. Jumlah mikroba yang  semakin  meningkat  dari  hari  ke  hari  akan membutuhkan  nutrien  yang  semakin  banyak.  Nutrien yang  berbentuk  polimer  tidak  dapat  memasuki  sel mikroba  secara  langsung.  Polimer  ini  akan  dicerna terlebih  dahulu  oleh  enzim-enzim  ekstraseluler  yang disekresikan  oleh  mikroba  [6].  Produksi  enzim-enzim mikrobial  memanfaatkan  kitin  sebagai  substrat  untuk menghasilkan enzim kitinase.
Produksi  kitinase  setelah  72  jam  dilanjutkan disentrifugasi untuk memisahkan media yang mengandung  kitinase  dengan  sel  jamur  akuatik kitinolitik sehingga dihasilkan filtrat yang berisi ekstrak kasar  enzim  dan  terpisah  dari  sel  jamur  serta  sisa-sisa media  yang  tidak  larut.  Proses  sentrifugasi  dilakukan pada suhu 4 0 C selama 20 menit dengan kecepatan 5000 rpm.

## Fraksinasi dan Dialisis
Pemurnian protein dengan menggunakan amonium sulfat  merupakan  salah  satu  metode  pemurnian  awal pada enzim. Pemilihan amonium sulfat didasarkan pada tingkat  kelarutan  garam  amonium  sulfat  yang  besar sehingga  mudah  berinteraksi  dengan  molekul  air  [7]. Filtrat  hasil  sentrifugasi  yang  berupa  ekstrak  kasar kitinase  yang  bebas  sel  untuk  selanjutnya  disebut  EK, diendapkan  dengan  amonium  sulfat.  Pengendapan kitinase  dilakukan  dengan  variasi  tingkat  kejenuhan amonium sulfat yaitu 0-20% (Fraksi 1), 20-40% (Fraksi 2),  40-60%  (Fraksi  3),  60-80%  (Fraksi  4),  80-100% (Fraksi  5).  Pengendapan  dengan  garam  menggunakan prinsip salting  out .  Kelarutan  protein  akan  berkurang pada konsentrasi garam yang tinggi. Konsentrasi garam yang  meningkat  mengakibatkan  air  akan  lepas  dari protein  yang  menyebabkan  terjadinya  penempelan ikatan hidrofobik dari satu protein dengan protein yang lain dan menghasilkan endapan [8]. Peristiwa pemisahan protein ini disebut salting out .
Penambahan garam dilakukan secara perlahan pada suhu dingin sambil dilakukan pengadukan. Pengkondisian pada suhu dingin dilakukan karena terjadi peningkatan suhu akibat proses pelarutan yang dibantu
dengan magnetic stirrer. Hal ini dapat dilakukan dengan mengkondisikan  larutan  dalam  air  yang  dicampur  es. Pengendapan  protein  disetimbangkan  dengan  cara supernatan  enzim  yang  bebas  sel  yang  telah ditambahkan dengan amonium sulfat didiamkan selama semalam.  Selama  proses  ini  molekul  protein  akan beragregasi,  tetapi  tidak  semuanya  akan  langsung mengendap. Pemisahan supernatan dan endapan protein dilakukan  dengan  sentrifugasi.  Endapan  tersebut dilakukan dalam bufer asetat 0,05 M pH 5.
Dialisis dalam penelitian ini merupakan proses yang dilakukan  untuk  memisahkan  atau  menghilangkan molekul garam amonium sulfat dan ion-ion pengganggu lainnya  yang  berpengaruh  terhadap  kestabilan  molekul protein  enzim  selama  penyimpanan,  dimana  molekul- molekul  kecil  dan  ion-ion  akan  melewati  pori-pori selaput semipermiabel dan keluar dari kantong selofan. Menurut Rachmadani [5], untuk menghindari kontaminan  dari  bahan  logam,  maka  kantung  dialisis terlebih  dahulu  direbus  selama  10  menit  dalam  larutan EDTA  alkali  lalu  dicuci  dan  direbus  kembali  dengan  air bebas  ion  selama  10  menit  sebanyak  2  kali.  Dialisis dilakukan di lingkungan yang dingin untuk mengurangi terjadinya  penurunan  aktivitas  enzim.  Pengadukan dengan kecepatan rendah bertujuan untuk mempermudah  keluarnya  molekul  berukuran  kecil  dari kantung  dialisis  dan  mencegah  molekul  tersebut terkonsentrasi  di  sekitar  kantung.  Pada  proses  dialisis keberadaan amonium sulfat diharapkan sudah tidak ada karena amonium  sulfat akan mengganggu  kerja  enzim. Keberadaan  amonium  sulfat  di  dalam  kantong  dialisis diuji dengan menambahkan BaCl 2 ke dalam larutan bufer yang berada di luar kantung dialisis.

## Penentuan Aktivitas Kitinase
Kitinase  bekerja  mengkatalisis  hidrolisis  kitin menjadi  monomer  N-Asetilglukosamin  [9].  Pada penelitian  ini,  aktivitas  kitinase  diukur  dengan  metode Veda  dan  Arai  [4]  berdasarkan  pengurangan  substrat dengan mengukur tingkat kekeruhan substrat yang telah bereaksi  dengan  kitinase  dan  diukur  pada  panjang gelombang  660  nm.  Satu  unit  aktivitas  enzim didefinisikan sebagai  jumlah enzim  yang menyebabkan pengurangan absorbansi sebesar 0,001 campuran reaksi per menit.

## Pengukuran Kadar Protein
Kadar  protein  pada  tiap-tiap  fraksi  diukur  dengan menggunakan  metode  Lowry dkk. [10].  Analisa kuantitatif pada metode ini dilakukan dalam 3 tahapan. Pertama  menentukan  panjang  gelombang  maksimum BSA yang pada penelitian ini didapatkan 695 nm sebagai panjang  gelombang  maksimumnya.  Kedua,  pembuatan kurva  standar BSA untuk  mengetahui  konsentrasi  dan absorbansi dari protein standar, sehingga bila absorbansi sampel  diketahui,  maka  kadar  sampel  dapat  dihitung dengan  cara  mensubstitusikan  ke  persamaan  kurva standar Y = ax + b. Ketiga merupakan tahap pengukuran kadar protein kitinase.
Melalui  metode  ini,  protein  dalam  kitinase  akan bereaksi  dengan  Cu  dalam  larutan  alkalis  membentuk
kompleks  ion  tembaga  dengan  ikata amida.  Warna  biru menjadi  semakin  pekat  setelah  bereaksi  dengan  reagen folin  ciocalteau karena  terjadi reduksi  fosfotungstat  dan fosfomolibdat  yang  berwarna  kuning  oleh  tirosin  dan triptofan yang ada dalam protein menjadi molybdenum biru dan tungsten biru [10].

## Pengukuran Aktivitas Spesifik Kitinase
Aktivitas  spesifik  kitinase  dapat  dihitung  dari  unit aktivitas  enzim  per  mg  protein.  Fraksi  dengan  nilai aktivitas  spesifik  tertinggi  merupakan  fraksi  dengan jumlah  enzim  paling  banyak  dibandingkan  fraksi  lain, sehingga  kemungkinan  menemukan  enzim  lebih  besar dimana  aktivitas  spesifik  merupakan  rasio  antara  unit aktivitas  enzim  dengan  total  protein  dalam  miligram. Dengan  demikian,  aktivitas  spesifik  menggambarkan tingkat  kemurnian  suatu  enzim.  Berikut  adalah  kurva masing-masing fraksi dengan nilai aktivitas spesifiknya :
Gambar 1. Aktivitas spesifik kitinase tiap fraksi
Berdasarkan  gambar  1  fraksi  3  (40-60%)  memiliki aktivitas spesifik enzim tertinggi sebesar 51,17 Unit/mg protein.  Hal  ini  mengindikasikan  bahwa  pada  fraksi tersebut  keberadaan  protein  enzim  paling  banyak dibandingkan  dengan  fraksi  lain,  sehingga  fraksi  ini dapat dikatakan sebagai fraksi yang paling murni dalam kelompok fraksinasi amonium sulfat.

## Karakterisasi pH Optimum Kitinase
Setiap enzim mempunyai pH optimum yaitu kisaran pH  dimana  enzim  menunjukkan  aktivitas  maksimum dengan  stabilitas  yang  tinggi.  Mikroba  yang  hidup  di alam  tersebar  luas  mulai  yang  hidup  di  daerah  asam sampai  dengan  alkali,  dari  suhu  rendah  sampai  suhu tinggi [11]. Menurut Palmer [12] setiap enzim mempunyai karakteristik pH optimum dan enzim tersebut aktif pada kisaran pH yang relatif sempit. Penentuan pH optimum bertujuan untuk mengetahui kondisi optimum aktivitas enzim  sehingga  penggunaan  enzim  dapat  disesuaikan dengan  karakteristiknya  tersebut  sehingga  pada  saat digunakan  dapat  diperoleh  aktivitas  enzim  yang maksimal.
Gambar 2. Grafik pH optimum
Gambar  2  menunjukkan  bahwa  aktivitas  kitinase mengalami  peningkatan  sampai  pH  3,8  (pH  optimum) dengan  unit  aktivitas  sebesar 24,44  Unit/mL  kemudian menurun pada pH 4 dan kembali mengalami peningkatan pada pH 4,2 dan 4,4.

## Karakterisasi Suhu Optimum Kitinase
Berdasarkan pertumbuhannya mikroba digolongkan menjadi  lima  kelompok,  yaitu  psikrofil  tumbuh  pada suhu -5 – 20°C, mesofil suhu 20 – 45°C, termofil 45 – 65°C,
termofil  ekstrim  65 – 85°C  dan  hipertermofil  85 – 100°C. Dalam  reaksi  enzimatis,  suhu  berperan  dalam meningkatkan  reaksi  antara  substrat  dengan  enzim. Aktivitas  kitinase  mengalami  peningkatan  pada  suhu 40,5 o C  (suhu  optimum)  dengan  unit  aktivitas  sebesar 57,77 Unit/mL.
Gambar 3. Grafik suhu optimum
Aktivitas enzim pada suhu 39 o C rendah disebabkan tidak semua substrat berikatan dengan sisi aktif enzim. Saat suhu meningkat sampai suhu optimum yaitu 40,5 o C, kecepatan  reaksi  enzim  naik  karena  energi  kinetik bertambah.  Hal  ini  memperbesar  peluang  enzim  dan substrat  bereaksi  untuk  menghasilkan  produk  yang maksimal.  Pada  suhu  41 o C  aktivitas  enzim  menurun. Menurunnya aktivitas mengikuti meningkatnya suhu di atas  optimum  biasanya  disebabkan  oleh  perusakan enzim [11].
Adanya perubahan suhu juga akan memperngaruhi ikatan hidrogen atau interaksi hidrofobik yang berperan dalam  menjaga  konformasi  molekul  enzim  [13]. Perubahan  konformasi  akan  mempengaruhi  sisi  aktif dari enzim, kondisi panas tertentu menyebabkan ikatan hidrogen  tersebut  akan  putus.  Putusnya  satu  ikatan hidrogen  akan  menyebabkan  mudahnya  pemutusan ikatan  hidrogen  selanjutnya  dalam  rantai  polipeptida tersebut, sehingga protein enzim mengalami denaturasi.

## 4. Kesimpulan
Hasil penelitian menunjukkan bahwa kitinase dapat diperoleh  dari  isolat  jamur  akuatik  kitinolitik  yang berasal  dari  kupu-kupu  dengan  menggunakan  substrat koloidal  kitin.  Aktivitas  spesifik  tertinggi  kitinase  yang diperoleh  dari  jamur  akuatik  kitinolitik  berasal  dari kupu-kupu  adalah  51,17  Unit/mg  protein  pada  fraksi  3. Kondisi  optimum  kerja  kitinase  dari  jamur  akuatik kitinolitik dicapai pada pH 3,8 dan suhu 40,5 o C.

## 5. Daftar Pustaka
[1]  Nuniek  Herdyastuti,  Tri  Joko  Raharjo,  Mudasir Mudasir, Sabirin Matsjeh, Chitinase and chitinolytic microorganism:  Isolation,  characterization  and potential, Indonesian Journal of Chemistry , 9, 1, (2010) 37-47 http://dx.doi.org/10.22146/ijc.457
[2] Maria Swiontek Brzezinska, Elżbieta Lalke -porczyk, Wojciech Donderski, The role of chitinolytic bacteria and fungi in biodegradation of crustacean remains in lacustrine habitats, Pol. J. Ecol , 56, 2, (2008) 335-342
[3]  Hazel  Davies,  Carol  A  Butler,  Do  butterflies  bite?: Fascinating  answers  to  questions  about  butterflies and moths, Rutgers University Press, 2008.
[4]  Mitsuhiro  Veda,  Motoo  Arai, Purification  and  some properties of chitinases from Aeromonas sp. No. 10S- 24, Bioscience, biotechnology, and biochemistry , 56, 3,
(1992)
460-464 http://dx.doi.org/10.1271/bbb.56.460
[5]  Dian  Rachmadani,  Mempelajari  pemurnian  enzim kitosanase termostabil dari isolat Bacillus
licheniformis  MB-2  asal  Tompaso,  Manado, Sulawesi  Utara,  Jurusan  Teknologi  Pangan,  IPB, Bogor
[6]  Maggy  T  Suhartono,  Enzim  dan  bioteknologi, PAU Bioteknologi IPB, Bogor , (1989)
[7]  Nico  Dynnar,  Pemurnian  dan  karakterisasi  enzim katepsin  dari  ikan  bandeng  (Chanos  chanos Forskall),  Jurusan  Teknologi  Produk  Perairan,  IPB, Bogor
[8]  IPD Arjito, Analisis protein jaringan otak sapi dengan metode  isolasi,  purifikasi  dan  visualisasi, Jurnal GaneÇ Swara , 3, 2, (2009) 55-58
[9]  Andestian  Wijaya, Pengembangan  Teknologi Papan Komposit  Dari  Limbah  Batang  Pisang  (Musa  Sp.): Sifat Fisis Dan Mekanis Papan Pada Berbagai Tingkat Asetilasi, Fakultas Kehutanan, IPB, Bogor
[10] Oliver  H  Lowry,  Nira  J  Rosebrough,  A  Lewis  Farr, Rose J Randall, Protein measurement with the Folin phenol  reagent, The  Journal  of  biological  chemistry , 193, 1, (1951) 265-275
[11]  Wesley  A.  Volk,  Margaret  F.  Wheeler,  Mikrobiologi Dasar, Markham, Erlangga, Jakarta, 1993.
[12] Trevor  Palmer,  Understanding  enzymes,  4  ed., Prentice Hall/Ellis Horwood, 1995.
[13] Rudy  Wijaya,  Karakteristik  Enzim  serupa  Tripsin dari Cacing Tanah, Teknologi Pertanian, IPB, Bogor