## KARAKTERISASI FALOVONOID DARI DAUN BUNGO PERAK-PERAK
( Begonia versicolar
. Irmsch)
Ermi Abriyani, M.Si
Program Studi Farmasi, Fakultas Teknologi dan Ilmu Komputer, Universitas Buana Perjuangan Karawang (cimutssi@gmail.com)

## ABSTRACT
This  research  was  conducted  to  isolate  the  compounds  from Begonia  versicolar  Irmsch plants. Flavonoid compounds that produced from Begonia versicolar Irmsch is flavonol were isolated and purified  by  using  silica  gel  and  sephadex  LH-20  and  the  melting  point  was  observed. Characterization of isolated compounds was carried out by using the UV and IR spectroscopy. The purification  results  were  yellow  powder.  The  melting  point  is  195-197 o C;  and  the  wave  length maximum are λmax of (MeOH) = 257nm, 357 nm.
Keywords; Flavonol, Begonia versicolar Irmsch., melting point, UV and IR spectroscopy

## ABSTRAK
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengisolasi  senyawa  dari  tanaman Begonia  versicolor Irmsch . Senyawa flavonoid yang dihasilkan dari Begonia versicolar Irmsch adalah flavonol yang diisolasi dan dimurnikan dengan menggunakan silica gel dan sephadex LF-20 dan diamati titik lelehnya. Karakterisasi senyawa yang telah diisolasi dilakukan dengan menggunakan spektroskopi UV dan IR. Hasil purifikasinya adalah serbuk kuning. Titik lelehnya 195-197 o C dan panjang gelombang maksimum, λ max dalam MeOH = 257 nm , 357 nm.
Kata kunci; Flavonol, Begonia versicolar Irmsch., titik leleh, Spektroskopi UV dan IR

## 1. PENDAHULUAN
Begonia  merupakan  salah  satu  tanaman  yang  diperkirakan  memiliki  lebih  dari  1600 species yang tersebar di kawasan tropis dan subtropics. Di Indonesia diperkirakan lebih dari 200 jenis  yang  di  Pulau  Jawa,  Sumatera,  Kalimantan,  Sulawesi,  dan  Irian  (Hartutiningsih,  dan  M.
Vol. 1 No 2 November 2016
Siregar,  2008).  Beberapa  spesies  dari  Begonia  dimanfaatkan  sebagai  obat  tradisional,  namun masih  sedikit  jenis  tanaman  ini  yang  diteliti  dalam  hal  kandungan  metabolit  sekundernya. Pemanfaatan sebagai obat tradisional tersebut antara lain; obat luka baru, panas dalam, nyeri haid, obat panas, dan malaria
Adapun  tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengisolasi  dan  mengkarakterisasi flavonoid dari daun Begonia versicolar Irmsch. Wu, Pei-Lin (2004) telah melakukan penelitian dari  genus  yang  sama, Begonia  nantoensis ,  dan  dihasilkan  begonanline,  nantoamida,  metil  (S)- gliserat, cucurbitacin B, dihidrocucurbitacin B, cucurbitacin E, dihidrocucurbitacin E, cucurbitacin I,  (-)-auranamida,  asam  3β,22α-dihidroksiolean-12-en-29-oat,  asam  indol-3-karboksilat,  5,7- dihidrokromon, (-)-katekin. Pada jenis lain seperti Begonia Linn. ditemukan dua senyawa rutin dan quercetin (Yan zhu yun,  ). Dari penelitian sebelumnya ditemukan adanya kandungan vitamin C  dari Begonia  floccifera Bedd.  dan Begonia  malabarica Lamk.  (Ariharan et  al .,  2012) Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan dari genus ini, maka peneliti  melakukan penelitian terhadap jenis lain yakni Begonia versicolar Irmsch dengan  mengisolasi dan mengkarakterisasi hasil metabolit sekunder yang dihasilkan.

## 2. METODE PENELITIAN
Peralatan  yang  digunakan  adalah  peralatan  gelas  yang  umum  dipakai  pada  penelitian kimia organik bahan alam, seperangkat alat destilasi pelarut, rotary evaporator Heidolph WB 2000, oven, pompa vakum, plat KLT (Silika gel Merk 60 GF ₂ 54 ), kolom kromatografi biasa, lampu UV dengan  λ  254  dan  356  nm,  melting  point  apparatus  (Stuart  SMP10),  spektroskopi  UV-Vis (Shimadzu PharmaSpec UV-170), Spektroskopi IR (Thermo Scientific Nicolet iS10).
Bahan yang digunakan adalah : n-heksana teknis, etilasetat teknis, metanol teknis, asam klorida  proanalisis  (Merck-germany),  aquades,  serbuk  Magnesium,  amonia  proanalisis  (Merck- Germany), asam asetat (Merck-Germany), natrium hidroksida 1%, asam sulfat proanalisis (Merck- Germany), besi(III) klorida 1% , reagen sitoborat. Silika gel Merk 60  GF ₂ 54 (230-400 mesh), asam sulfat  2N,  natrium  tiosulfat  pentaoksida.  Pereaksi  Meyer  digunakan  untuk  identifikasi  alkaloid, pereaksi  Lieberman  Burchard  untuk  identifikasi  terpenoid  dan  steroid,  Sianidin  tes  untuk identifikasi flavonoid dan FeCl 3 untuk identifikasi fenolik.

## Ekstraksi dan isolasi
Isolasi dilakukan secara maserasi dimana sampel kering Begonia versicolar Irmsch seberat 280 gram direndam dengan pelarut n-heksana selama 5 sampai 6 hari kemudian disaring dengan kertas  saring  dan  dilanjutkan  kembali  berulang  kali  dengan    pelarut  yang  sama  sampai  hasil perendaman  tersebut  tidak  berwarna  lagi.  Hasil  maserasi  heksana  tersebut  dipekatkan  dengan rotary evaporator pada suhu 40 o C dan digabungkan sehingga didapatkan ekstrak heksana berwarna hijau.
Ampas  dari  maserasi  heksana  tadi  dikeringkan  dengan  cara  menguapkan  sisa  pelarut tersebut  kemudian  dilanjutkan  dengan  pelarut  etil  asetat  tentunya  dengan  lama  perendamannya sama dengan pelarut sebelumnya. Selanjutnya hasil dari pelarut etil asetat yang sudah dipekatkan tersebut digabungkan dan didapatkan ekstak etil asetat berwarna hijau.
Setelah penguapan pelarut etil asetat, perlakuan berikutnya adalah maserasi dengan pelarut metanol  dan  pengerjaannya  juga  sama  dengan  pelarut  sebelumnya.  Kemudian  disaring  dan dipekatkan sehingga dihasilkan ekstrak kental methanol berwarna merah.
Fraksi metanol dimurnikan dengan metoda kromatografi kolom. Pengelusian dimulai dari pelarut n-heksan, etil asetat dan diakhiri dengan metanol. Hasil kromatografi ditarnpung dengan vial  kemudian  diuapkan  pelarutnya  pada  suhu  kamar.  Selanjutnya  padatan  yang  terbentuk dijenuhkan dan diuapkan sehingga terbentuklah padatan. Padatan yang dihasilkan di uji dengan Kromatografi  lapisan  tipis  (KLT).  Pola  noda  yang  sama  pada  plat  KLT  digabungkan  untuk menyederhanakan fraksi yang terbentuk setelah dikromatografi kolom. Jika hasil pola noda yang terlihat pada plat KLT tailing/ kurang bagus, kemungkinan ada beberapa senyawa maka di lakukan rekolom dengan silika gel atau sephadex.
Pada  pengkoloman  dengan  sephadex  pengelusian  dilakukan  dengan  menggunakan  fasa gerak  metanol  100%.  Hasilnya  ditampung  pada  vial-vial  kemudian  larutan  atau  padatan  hasil rekolom di uji dengan menggunakan plat KLT. Jika hasil tersebut masih belum murni/terlihat satu pola  noda  pada  pengujian  dengan  plat  KLT  maka  dilakukan  rekolom.  Hasil  rekolom  yang memberikan noda tunggal dan jarak Rf-nya yang sama dikumpulkan untuk dilakukan perlakuan berikutnya.

## Uji Titik Leleh
Zat  yang  akan  diuji  kemurniannya  dimasukkan  ±  setinggi  1  mm  ke  dalam  pipa  kapiler yang  tertutup  salah  satu  ujungnya,  selanjutnya  kapiler  dimasukkan  ke  dalam  alat melting  point (Stuart  SMP10).  Pengamatan  dilakukan  pada  saat  kristal  mulai  meleleh  sampai  meleleh  secara keseluruhan. Zat baru dikatakan murni apabila range dari mulai meleleh sampai semuanya habis meleleh kecil dari 2 0 C.

## 3. PEMBAHASAN
Dalam pengisolasian dilakukan secara kromatografi kolom dengan fasa diam silika gel 60 ( 0,063- 0,200 mm ). Ekstrak metanol yang digunakan adalah 13 gram yang di preadsorbsi dengan 13 gram silika.  Hasil  kromatografi  kolom  tersebut  ditampung  pada  vial-vial  sehingga  dihasilkan  fraksi- fraksi, fraksi A, B dan C.
Dari  ketiga  fraksi  itu  yang  memberikan  pola  keberadaan  flavonoid  adalah  fraksi  C.  Hasil kromatografi lapis tipis pada fraksi C tailing yang dielusi dengan etil asetat : methanol. Fraksi C, vial 180 – 349 yang berupa padatan dan larut baik dalam pelarut metanol kemudian dijenuhkan dengan etil asetat.  Lalu dilakukan pengujian pola noda dengan menggunakan plat kromatografi lapis tipis, namun masih tailing sehingga dilakukan perlakuan berikutnya yaitu rekolom dengan menggunakan sephadex LH-20 dan di elusi dengan metanol 100 %. Hasil dari rekolom ditampung dengan vial-vial dan dilihat pola nodanya pada plat kromatografi lapis tipis, pola noda yang sama digabungkan. Dari hasil yang terlihat pada plat KLT di dapatkan dari vial nomor 4 sampai dengan nomor 20 mempunyai pola noda yang sama.
Dalam menentukan kemurnian suatu senyawa hasil isolasi dapat ditentukan dengan mengukur titik lelehnya.  Dari  hasil  senyawa  yang  telah  diisolasi  di  dapatkan  titik  lelehnya  195-197 o C.  Dalam pengamatan uji titik leleh senyawa hasil isolasi ini mempunyai range kurang dari 2 o C yang dapat menunjukkan bahwa senyawa relatif murni.
Hasil senyawa yang sudah murni diidentifikasi dengan reagen FeCl 3 dan dihasilkan warna biru. Ini  menunjukkan  bahwa  senyawa  tersebut  merupakan  fenolik.  Kemudian  diidentifikasi  dengan Shinoda  Test  ternyata  menghasilkan  warna  pink,  berarti  senyawa  ini  juga  golongan  flavonoid. Perlakuan berikutnya senyawa dianalisa dengan menggunakan spektroskopi UV (ultra violet), IR (infra red).
Penggunaan  spektrum  UV  dalam  mengkarakterisasi  struktur  senyawa-senyawa  flavonoid  telah dilakukan  oleh  Markham  (1988)  dan  Mabry  (1970).  Spektrum  flavonoid  biasanya  ditentukan dengan pelarut metanol dan diperoleh dua puncak absorbsi utama pada daerah panjang gelombang 240 – 289 nm (pita II), dan 330 – 550 nm (pita I).
Selanjutnya  dengan  menggunakan  percobaan  dengan  pereaksi  geser  seperti  natrium  metoksida (NaOMe) atau NaOH, natrium asetat anhidrat (NaOAc), aluminum klorida (AlCl 3 ), asam klorida (HCl)  dan  asam  borat    (H 3 BO 3 ),  maka  dapat  diketahui  kedudukan  hidroksi  bebas  pada  inti flavonoid. Penggunaan  pereaksi  geser  didasarkan  kepada  pengetahuan  bahwa  kerangka  dasar senyawa flavonoid yang memiliki dua system konyugasi yaitu sistem konyugasi benzoil (cincin A), karakteristik untuk pita II dan sistem konyugasi sinamoil (cincin B), karakteristik untuk pita I.
Berdasarkan  hasil  pengukuran  spektroskopi  UV-Vis  didapatkan  data  puncaknya  pada  panjang gelombang  maksimum,  λ max (nm);  357  nm  (puncak  I)  yang  merupakan  puncak  dari  system sinamoil dan 257,60 nm (puncak II) yakni puncak system benzoil. Seperti terlihat pada gambar 1 yakni merupakan perbandingan antara spectrum UV dari senyawa hasil isolasi dengan spectrum UV ketika senyawa hasil ditambahkan dengan NaOH.
Penambahan  NaOMe  atau  NaOH  2N  pada  senyawa  flavon  dan  flavonol  dalam  methanol menghasilkan  pergeseran  bathokromik  di  semua  pita  serapan.  Dari  data  spectrum  gambar  1 dibawah ini, spectrum (b) jika dibandingkan dengan spectrum (a) terlihat bahwa terjadi pergeseran batokromik  sebesar  +52  nm  pada  pita  I.  Ini  mengindikasikan  bahwa  terdeteksinya  3-OH  bebas pada senyawa hasil.

## MeOH
MeOH+ NaOH
(a) (b)
Gambar 1 .   Spektrum UV senyawa hasil isolasi (a) , spectrum UV ketika  senyawa hasil isolasi ditambahkan NaOH (b)
(c)
(d)
Gambar 2. Spectrum UV-Vis senyawa hasil MeOH + AlCl 3 (c) dengan MeOH + AlCl 3 + HCl (d) .
Pada gambar 2 diatas merupakan spectrum UV dari senyawa hasil MeOH + AlCl 3 (c) terdapatnya pergeseran batokromik 44 nm pada puncak I yang mengindikasikan 5-hidroksi flavonol dengan 3- hidroksi tersubtitusi. Pada spectrum (d) saat senyawa hasil dengan MeOH + AlCl 3 + HCl keadaan serapan hampir tidak berubah yang mengindikasikan tidak adanya o-dihidroksi pada cincin B.
(e) (f)
Gambar 3. Spectrum  UV-Vis  senyawa  hasil  isolasi  MeOH  +  NaOAc (e) dengan senyawa hasil dalam MeOH +  NaOAc + H 2 BO 3 (f)
MeOH
MeOH + AlCl 3 MeOH MeOH + AlCl 3 + HCl MeOH MeOH + NaOAc MeOH MeOH + NaOAc + H 2 BO 3
Senyawa  NaOAc  merupakan  reagen  yang  spesifik  dalam  mendeteksi  gugus  7-OH.  Jika  dilihat dari spectrum pada gambar 5 di (e) terlihat hanya  sedikit terjadi pergeseran batokromik (+13 nm). Ini  merupakan  ciri  khas  adanya  gugus  7-OH  di  cincin  A.  Namun  jika  ditambahkan  asam  borat tidak terjadi pergeseran batokromik sekitar (12-30 nm). Ini mengindikasikan bahwa tak ada bentuk o-dihidroksi pada cincin B, sehingga dapat disimpulkan  bahwa  senyawa  hasil  isolasi merupakan suatu flavonoid yang memiliki substituen hidroksi pada cincin aromatiknya.
Analisa spektroskopi IR
Gambar 4 . Spectrum infra merah
Pada  spectrum  Infra  Merah,  IR,  senyawa  hasil  isolasi  memperlihatkan  serapan  melebar  pada bilangan gelombang, ν max 3423.69 cm -1 mengindikasikan adanya gugus hidroksil,  -OH. 2938.26 cm -1 mengindikasikan C-H aromatis, 1654.88 cm -1 mengindikasikan C=O keton. Pada area sidik jari (finger print) terlihat serapan bilangan gelombang 1132-1062 memperlihatkan adanya ikatan C-O  alcohol,  serapan  di  bilangan  gelombang  1203  cm -1 merupakan  adanya  ikatan  C-O tert - alkohol, 1203,75 cm -1 memperlihatkan alkil aril eter, dan sekitar 969 cm -1 mengindikasikan adanya ikatan C=C bending.
Berdasarkan  analisa  data  diatas  dapat  disarankan  bahwa  senyawa  hasil isolasi memiliki  cincin benzen  dan  substiuten  hidroksi.  Berdasarkan  dari  data  infra  merah,  spectrum  UV  diperkirakan senyawa  hasil  berbentuk  flavonol.  Perkiraan  bentuk  kerangka  flavonol  senyawa  hasil  isolasi adalah sebagai berikut;
O O OH O HO OH O A B C Gambar 5 . Perkiraan struktur senyawa hasil berdasarkan UV dan   IR

## 4. PENUTUP
Dari hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa senyawa hasil isolasi dari daun bungo perak-perak ( Begonia versicolor Irmsch.) yang dikarakterisasi dengan spektroskopi UV dan IR dengan range titik leleh adalah 195-197 o C. Penelitian ini perlu dilanjutkan dikarenakan masih banyak yang dapat dicari informasi dari tanaman ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Ariharan et al. , 2012, A new natural source for vitamin C , International Journal of Plant, animal and Environmental Sciences, Vol. 2 (3); 92-94
Frei B., et al ., 1998, Phytochemical and biological investigation of Begonia heracleifolia , Planta Med, 64(4); 385-386,
Hartutiningsih dan Siregar, M., 2008, Mengenal dan Merawat Begonia , PT. AgroMedia Pustaka, Jakarta.
Li Dan-ping, et al. , 2012, Antimicrobial activity of sterol Extracts from Begonia sinensis Rhizome , Food Science, Vol. 33 (11); 70-74.
Maridass, M., 2010, Survey of phytochemical diversity of secondary metabolism in selected wild medicinal plants , Ethnobotanical leaflets, 14; 616-625.
Mabry, T.J., K.R. Markham and M.B Thomas, 1970, The systematic Identification of flavonoids , Springer-Verlag NewYork Inc. ;5-55.
Pandikumar, P., et al. , 2009, Hypoglycemic and antihyperglycemic effect of Begonia malabarica Lam. In normal and streptozotocin induced diabetic rats , J. Ethnopharmacol, 124 (1); 111- 115.
Ramesh  N., et  al .,  2012, Phytochemical  and  antimicrobial  studies  of  Begonia  malabarica .,  J. Ethnopharmacol, 79(1); 129-132.
Solomon Jeeva et al ., 2012, Anti-bacterial and phytochemical studies on methanolic extracts of Begonia  floccifera  Bedd.  flower, Asian  Pacific Journal  of  Tropical  Biomedicine;  S151- S154.
Velusamy K., et al ., 2012, In vitro antioxidant studies of Begonia malabarica Lamk. and Begonia floccifera Bedd. , Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine; S1572-S1577.
Wu, Pei Lin, et al. ,2004, Cytotoxic and anti-hiv principles from rhizomes of Begonia natoensis , Chem. Pharm. Bull. 52(3); 345-349.
Zhang J., et al ., 1997, Chemical constituents of Begonia evansiana Andr., Zhongguo Zhong Yao Za Zhi, 22(5); 295-296.