Volume 10 Nomor 2. Desember 2020
Halaman : 113 - 124
Jenis Kelamin dan Perkembangan Gonad Protogini Kerapu Tikus ( Cromileptes altivelis ) Setelah Rangsangan Hormon
(Types of Sex And Development of Gonad Protoginic Rice Grouper (Cromileptes altivelis) After Hormone Stimulation)
1*) Abdul Zahri, 2) Melissa Justin Renjaan , 3) Farida
1) Program Studi Teknologi Budidaya Perikanan, Politeknik Perikanan Negeri Tual, Maluku Tenggara
2) Program Studi Bioteknologi Perikanan, Politeknik Perikanan Negeri Tual, Maluku Tenggara
3) Program Studi Budidaya Perairan, Universitas Muhammadiyah Pontianak
1*) Koresponden: abdul.zahri25@gmail.com
Diterima : 7 Januari 2020 / Disetujui : 11 Desember 2020

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan menganalisis pengaruh estradiol (E2) dan metil testosteron (MT)  yang  dikombinasikan  dengan  hCG  terhadap  komposisi  jenis  kelamin  dan perkembangan  gonad  protogini  kerapu  tikus (Cromileptes  altivelis ).  Ikan  kerapu  tikus yang  digunakan  sebagai  hewan  uji  dengan  berat  13±1,5  g  pada  fase  pendederan. Perlakuan yang digunakan diantaranya larutan estradiol 3 mg mL –1 + hCG 20 IU mL –1 (CE), MT 3 mg mL –1 + hCG 20 IU mL –1 (CM), estradiol 3 mg mL –1 (E), MT 3 mg mL –1 (M), hCG 20 IU mL –1 (C) dan kontrol NaCl 9 mg mL –1 (K). Hormon dengan dosis 1 mL kg –1 diinjeksikan secara intra muskular pada dasar sirip punggung, sebanyak enam kali dan  periode  setiap  dua  minggu.  Ikan  dipelihara  dalam  wadah  fiberglass  kapasitas  500 liter  dengan  sistem  air  tenang  selama  11  bulan.  Ikan  diberi  pakan  pellet  dengan kandungan  protein  46%  dua  kali  sehari.  Penelitian  menggunakan  rancangan  acak lengkap dengan satu  faktor perlakuan,  yaitu hormon  dengan  kombinasinya.  Pemberian hormon secara kombinasi, yaitu perlakuan CE dan CM berdampak pada gametogenesis dengan  nilai  GSI  0,4161±0,0978%  dan  0,4161±0,1055%  sedangkan  HSI  pada  CE 0,6456±0,0419%  dan  CM  0,5797±0,1069%.  Gambaran  histologi  gonad  menunjukkan pola intersek dan perubahan jenis kelamin dari betina menjadi jantan pada perlakuan M dan  CM.  Hormon  MT  mampu  merangsang  perubahan  kelamin  betina  menjadi  jantan dan  kinerjanya  semakin  efektif  bila  dikombinasikan  dengan  hCG,  90%  dari  populasi sampel.  Perkembangan  gonad  betina  pada  fase  oogonia  dan  jantan  hasil  maskulinisasi pada fase spermatogonia.
Kata Kunci: hormon; jenis kelamin; perkembangan gonad; kerapu tikus

## ABSTRACT
This  study  aims  to  analyze  the  effect  of  estradiol  (E2)  and  methyltestosterone (MT)  combined  with  hCG  on  the  composition  of  sex  and  the  gonad  development  of protogynous humpback grouper (Cromileptes altivelis). The fish experiment 13±1,5g of body weight  in the  nursery  phase. Treatment  with  a estradiol solution of  3  mg mL –1 + hCG 20 IU mL –1 (CE), MT 3mg mL –1 + hCG 20 IU mL –1 (CM), estradiol 3 mg mL –1 (E),
MT 3 mg mL –1 (M) and 9 mg mL –1 NaCl to control (K). Hormone with dose 1 mL kg –1 was injected on dorsal fin base, with frequency of six times and periode of two weeks. The  fish  are  kept  in  a  500  liters  fiberglass  container  with  a  calm  water  system  for  11 months. Fish were fed pellets with protein content of 46% twice daily. The study used a completely  randomized  design  with  one  treatment  factor,  the  hormone  and  its combination.  Giving  hormones  with  combination,  i.e.  treatmenth  CE  and  CM  was effective  to  increase  the  percentage  of  gonad  development  with  GSI  value 0.4161±0.0978%  and  0.4161±0.1055%,  whilw  HSI  on  CE  0.6456±0.0419%  and  CM 0.5797±0.1069%    The  gonadal  histologic  observation  showed  transition  pattern  and sex  change  from  female  to  male  at  treatment  M  and  CM.  The  MT  hormone  is  able  to stimulate  masculinization  and  its  performance  is  more  effective  when  combined  with hCG, 90% from sample population. The development of female gonads in the phases of oogonia and male of masculinization result in the phase of spermatogonia.
Keywords: hormone; sex determination; gonad development; humpback grouper

## PENDAHULUAN
Perkembangan  organ  reproduksi  pada  ikan  kerapu  tikus  ( Cromileptes  altivelis Valenciennes,  1828)  merupakan  fase  yang  sangat  penting  karena  berhubungan  dengan kemampuan  untuk  menghasilkan  keturunan.  Kemampuan  untuk  menghasilkan keturunan  menjadi  sangat  fital  dalam  menunjang  kegiatan  budidaya,  terutama ketersediaan  stok  induk  jantan  dan  betina,  pembenihan  dan  pemuliaan  (Zahri  et  al. 2015)  dalam  mendukung  pengembangan  revitalisasi  perikanan  budidaya  komoditas unggulan. Salah satu faktor yang menjadi kendala usaha pembenihan ikan kerapu tikus adalah ketersediaan induk fungsional, bahkan di balai-balai milik pemerintah induk ikan kerapu  tikus  yang  dipijahkan  berasal  dari  alam  yang  dibeli  dari  tangkapan  nelayan (Sugama et  al .  2012).  Salah  satu  penyebab  sulitnya  mendapatkan  induk  dari  hasil budidaya  adalah  lamanya  waktu  untuk  mencapai  matang  kelamin  induk  ikan  kerapu tikus,  yaitu  pada  umur  3–4  tahun  (Sugama et  al .  2012).  Menurut  Standar  Nasional Indonesia  01-6488.1-2000  tentang  induk  ikan  kerapu  tikus  kelas  induk  pokok  ( parent stock ) pada induk jantan umur ≥3 tahun dengan berat >2,5 kg dan induk betina umur ≥2 tahun dengan berat 1–2,5 kg (SNI, 2009). Tersedianya induk fungsional hasil budidaya diharapkan  dapat  mendukung  produksi  benih  yang  berkualitas  tinggi  setiap  saat  dan tidak terjadi penurunan genetik.
Hormon  telah  banyak  dimanfaatkan  untuk  pengkondisian  jenis  kelamin, mempercepat  pertumbuhan  dan  perkembangan  gonad  pada  ikan.  Terutama  pada  jenis- jenis  ikan  yang  kecepatan  pertumbuhannya  dipengaruhi  oleh  jenis  kelamin  dan hermafroditisme  atau  gonokhorisme.  Hormon  estradiol-17  (E2)  memiliki  kemampuan untuk  mendorong  proses  oogenesis,  sedangkan  metyl  testosterone  (MT)  merangsang spermatogenesis. Human chorionic gonadotropin (hCG) mengandung bahan aktif yang terdiri  dari follicle  stimulating  hotmone (FSH)  dan luteinizing  hormone (LH)  dengan organ  target  gonad.  Pada  proses  perkembangan  gonad,  FSH  berperan  merangsang gametogenesis baik pada testis maupun ovarium.  Selanjutnya pada proses  pematangan gonad peran LH lebih dominan (Zahri et al . 2018).
Penelitian  pada  ikan  sidat  yang  gonokhoris,  membuktikan  kombinasi  hormon hCG  dengan  E2  atau  dengan  MT  dapat  menghasilkan  ikan  betina  70%  dari  populasi ikan  jantan  (Zahri et  al .  2016).  Ikan  betina  yang  dihasilkan  mempunyai  tingkat perkembangan  gonad  mencapai  vase  vitelogenesis  akhir.  Pada  perlakuan  dengan  MT
mempertahankan  populasi  jantan  dan  ditemukan  jantan  matang  (Zahri et  al .  2016; 2015).    Efek  feminisasi  juga  ditemukan  pada Lepomis  macrochirus dengan  dosis  150 mg  kg –1 pakan  (Wang et  al .  2008).  Estradiol  juga  berperan  selama  proses spermatogenesis sidat, yaitu merangsang aktifitas sel Sertoli menyalurkan energi selama proses spermatogenesis (Zahri et al . 2015) dan melindungi sel germinal (Higuchi et al . 2012).  Kemudian  Kearney et  al .  (2011),  menemukan  bahwa  interseks  menunjukkan tanda-tanda perubahan kelamin, gonad mengandung oogonia dan spermatogonia.
Pentingnya  penelitian  ini  untuk  menyediakan  calon  induk  secara  dini  dengan memanfaatkan  E 2 dan  MT  yang  dikombinasikan  dengan  hCG,  sehingga  dosis  yang digunakan merujuk pada penelitian Zahri et. al . 2015. Tujuan yang ingin dicapai adalah tersedianya  metode  pengkondisian  jenis  kelamin  dan  pematangan  gonad  pada  ikan hermaprodit protogni melalui rangsangan hormon.

## METODE PENELITIAN Waktu dan Tempat
Pemeliharaan  dan  eksperimen  pada  ikan  kerapu  tikus  dilakukan  bulan  Juni  – Agustus  2017  pada  hatchery  di  Politeknik  Perikanan  Negeri  Tual,  Maluku  Tenggara. Pembuatan preparat dan analisis histologi gonad dilakukan di  Laboratorium Kesehatan Ikan, Departemen Budidaya Perairan Institut Pertanian Bogor.

## Bahan dan Alat
Penelitian  menggunakan  benih  ikan  berasal  dari  hasil  pembenihan  di  Balai Budidaya Laut Tual dengan berat 13±1,5g sebanyak 200 ekor. Hormon yang digunakan meliputi  metil  testosteron  Polaris,  Estradiol  Argent,  hCG  Chorullon.  Bahan  untuk menenangkan  ikan  menggunkan  MS-222  Argent  dan  untuk  sterilisasi  wadah eksperimen menggunakan air panas dan detergent. Alat-alat yang digunakan antara lain bak  fiberglass,  syringe,  timbangan  digital  0,001  g,  batang  ukur,  0,01  cm,  serokan,  hi- blow, kamera dan alat tulis.

## Rancangan Penelitian
Penelitian  menerapkan  enam  perlakuan  dengan  tiap  perlakuan  diulang  sebanyak tiga  kali.  Benih  ikan  kerapu  tikus  yang  digunakan  berjumlah  27  ekor  tiap  perlakuan. Eksperimen dilakukan menggunakan wadah bak fiberglass di hatchery. Masing-masing perlakuan yang diterapkan merujuk pada Zahri et al. 2015 diantaranya:
a. Perlakuan E
: hormon E2 3 mg/L
b. Perlakuan M : hormon MT 3 mg/L
c. Perlakuan C
: hormon hCG 20 IU/mL
d. Perlakuan CE
: hormon E2 3 mg/L + hCG 20 IU/mL
e. Perlakuan CM
: hormon MT 3 mg/L + hCG 20 IU/mL
f. Perlakuan K
: larutan NaCl 9 mg/L
Tiap-tiap perlakuan disuntikkan melalui jaringan otot punggung (intra muscular) dengan dosis 1 mL/kg bobot tubuh ikan.

## Seleksi benih ikan
Stok ikan yang digunakan sebanyak 200 ekor yang dipelihara dalam bak fiberglass dengan kapasitas 3 ton.  Stok ikan kemudian diseleksi untuk masing-masing perlakuan
sebanyak 27 ekor. Seleksi benih ikan dilakukan untuk mengumpulkan benih ikan yang sehat  dan  tidak  terdapat  cacat  fisik.  Seleksi  juga  dilakukan  berdasarkan  bobot  tubuh dengan  tingkat  variasi  yang  tidak  lebih  dari  1,5  g  per  ekor.  Ikan  yang  telah  diseleksi kemudian dipelihara pada masing-masing wadah perlakuan.

## Persiapan wadah
Eksperimen  menggunakan  wadah  fiberglass  dengan  dimensi  1,5  x  1  x  0,45  m) sebanyak  18  unit.  Tiap-tiap  wadah  dilengkapi  dengan  instalasi  aerasi  dan  irigasi. Sebelum  digunakan  wadah  didesinfeksi  menggunakan  air  panas  yang  mengandung detergent, wadah dibilas dengan air laut dan dikeringkan selama 24 jam. Air laut dengan salinitas 30 ppt dialirkan ke dalam wadah hingga mencapai ketinggian 35 cm.

## Pemeliharaan ikan uji
Selama  rentang  pemeliharaan  dan  pengujian,  ikan  diberi  pakan  pellet  komersial dengan  kandungan  protein  46%  yang  diberikan  secara at  satiasi dua  kali  sehari  pada pukul 08:00 dan pukul 16:00. Kontrol dilakukan setiap hari terhadap kondisi kesehatan ikan secara visual dan parameter kualitas air yang meliputi suhu dan salinitas. Parameter suhu  diukur  menggunakan  thermometer  batang  Alk  dan  salinitas  menggunakan refraktometer ATAGO S/mill.

## Penyuntikan homon
Hormon  disuntikkan  secara intramuscular ,  yaitu  dibagian  pangkal  sirip  punggung pada  baris  sisik  ke  enam.  Ikan  ditenangkan  menggunakan  anaestesi  MS-222  dengan konsentrasi  50  mg/L.  Ikan  yang  telah  tenang  ditimbang  bobot  tubuhnya  untuk menentukan  dosis  perlakuan.  Dosis  perlakuan  yang  disuntikkan  adalah  1  mL/kg. Penyuntikan  hormon  dan  sampling  dilakukan  dengan  frekuensi  enam  kali  dan  periode setiap dua minggu, yaitu minggu ke-0 atau sampling pertama, minggu ke-2, minggu ke- 4, minggu ke-6, minggu ke-8 dan minggu ke-10.

## Parameter penelitian Komposisi jenis kelamin
Komposisi  jenis  kelamin  dilakukan  dengan  pengamatan  secara  mikroskopis setiap  sampling.  Contoh  gonad  diproses  secara  histologi  untuk  mendapatkan  citra topografi  gonad  sehingga  dapat  dibedakan  antara  gonad  jantan  dan  gonad  betina. Pengamatan  komposisi  jenis  kelamin  dilakukan  untuk  mengetahui  adanya  perubahan jenis kelamin akibat perlakuan.

## Gonad somatik indeks
Pengukuran  GSI  dilakukan  setiap  sampling  dengan  menimbang  bobot  tubuh ikan  sebelum  diambil  gonadnya.  Gonad  diambil  kemudian  ditimbang  secara  teliti dengan timbangan digital (tingkat ketelitian 0,001 g). Perbandingan antara bobot gonad dengan bobot tubuh merupakan nilai GSI setelah dipersentasekan. Pengamatan terhadap GSI dilakukan untuk mengetahui tingkat perkembangan gonad tiap perlakuan. Nilai GSI dihitung
dengan
rumus:
Keterangan: GSI : Gonado somatik indeks (%) Wg : Bobot gonad ikan kerapu tikus (g) Wt : Bobot tubuh ikan kerapu tikus (g)

## Tingkat perkembangan gonad
Tingkat  perkembangan  gonad  diukur  melalui  pengamatan  mikroskopis  setelah gonad  diproses  secara  histologi.  Preparat  histologi  gonad  diamati  dibawah  mikroskop yang  terhubung  dengan  komputer  untuk  merekam  citra  yang  dihasilkan  dan  gambar histologi  diolah  dengan  piranti  lunak  ImageRaster.  Pengamatan  fase  perkembangan telur dilakukan berdasarkan pada Erisman et al. 2007 serta Gaspare dan Bryceson 2013. Data  fase  perkembangan  telur  menjadi  dasar  untuk  menentukan  TKG  dan  diameter telur.

## Analisis Data
Data  hasil  penelitian  dianalisis  secara  statistik  ANOVA  dan  beda  nilai  tengah perlakuan  di  uji  dengan  Beda  Nyata  Terkecil.  Terhadap  data  histologi  gonad  dan diameter  telur  dianalisis  secara  deskriptif.  Data  tip-tiap  parameter  yang  telah  diolah kemudian di tabulasi dan ditampilkan dalam bentuk grafik menggunakan piranti lunak Microsoft Excel 2010.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Komposisi Jenis Kelamin
Penelitian  ini  menemukan  adanya  gonad  jantan  pada  perlakuan  M  sebesar  30  % dan  CM  mencapai  90%  dari  populasi  sampel.  Perubahan  kelamin  sebagaimana tercantum pada Tabel  1 mulai  terjadi pada minggu ke-8 pada perlakuan M, sedangkan pada  perlakuan  CM  perubahan  kelamin  telah  terdeteksi  sejak  minggu  ke-2  dengan adanya gonad fase intersek. Kelamin jantan definitif mulai terdeteksi pada minggu ke-4 hingga minggu ke-10 dengan indikator tidak diemukannya oogonia dan berkembangnya spermatogonia. Pola intersek  yang mengarah pada perubahan kelamin  ditemukan pada perlakuan M dan CM, yaitu perlakuan metiltestosteron dan kombinasinya dengan hCG.
Tabel 1. Komposisi jenis kelamin ikan kerapu tikus masing-masing perlakuan.
No. Perlakuan Minggu ke- 0 2 4 6 8 10 1. K 3 ♀ 3 ♀ 3 ♀ 3 ♀ 3 ♀ 3 ♀ 2. E 3 ♀ 3 ♀ 3 ♀ 3 ♀ 3 ♀ 3 ♀ 3. M 3 ♀ 3 ♀ 3♀ 3♀ 3♂ 3♂ 4. C 3 ♀ 3 ♀ 3 ♀ 3 ♀ 3 ♀ 3 ♀ 5. CE 3 ♀ 3 ♀ 3 ♀ 3 ♀ 3 ♀ 3 ♀ 6. CM 3 ♀ 3♀♂ 3♂ 3♂ 3♂ 3♂ K:  control;  E:  estradiol  (E2);  M:  metiltestosteron  (MT);  C: human  chorionic gonadotropin (hCG); CE: hCG + E2; CM: hCG + MT. ♂ : jantan; ♀ : betina; ♀♂ : intersek.  Data  yang  diberi  tanda  garis  bawah  sebagai  ikan  jantan  dan  data  yang diblok warna abu-abu gonad intersek.
Perlakuan  K, E, dan CE tidak ditemukan adanya fenomena intersek maupun perubahan kelamin. Zahri et al . (2016) dan Ijiri et al . (2011) menemukan bahwa testosterone secara kombinasi dengan hormon lain dapat merangsang perubahan kelamin dan pertumbuhan gonad  pada  ikan  gonokhoris.  Peran  testosterone  merangsang  maskulinisasi  pada  ikan kerapu tikus juga terbukti dengan ditemukanya populasi hewan jantan pada minggu ke- 8  dan  ke-10,  meskipun  kinerjanya  tidak  sebaik  bila  dikombinasikan  dengan  hCG. Penelitian  yang  dilakukan  pada Danio  rerio dengan  menerapkan  metiltestosteron, memicu terjadinya maskulinisasi (Lee et al . 2017).
Hormon  E2  berperan  mengekspresikan  ciri-ciri  feminisme,  salah  satunya  adalah merangsang  hati  untuk  memproduksi  vitelogenin  yang  merupakan  bahan  untuk membentuk kuning telur. Penelitian yang dilakukan pada Heteropneustes fossilis (Sing et al . 2009) dan Rhamdia quelen (Costa et al . 2010) mengungkap peran E2 selama masa vitelogenesis.  Perlakuan  E2  secara  tunggal  tidak  mampu  meningkatkan  perkembangan gonad,  demikian  pula  dengan  hCG  yang  diterapkan  secara  tunggal.  Estradiol memberikan  pengaruh  yang  sangat  nyata  terhadap  perkembangan  gonad  bila dikombinasikan bercama hCG.
Penambahan  hormon  terhadap  ikan  kerapu  tikus  mengakibatkan  adanya rangsangan  terhadap  organ  target  tertentu  terutama  gonad  untuk  meningkatkan aktifitasnya.  Kondisi  ini  mengakibatkan  pertumbuhan  somatik  gonad  pada  perlakuan kombinasi  hormon  meningkat  lebih  cepat  dibandingkan  dengan  kontrol.  Fenomena  ini juga  mengindikasikan  bahwa  stress  akibat  perlakuan  tidak  berdampak  pada perkembangan  organ  reproduksi.  Bagian  lain  yang  menjadi  perhatian  selain  efektifitas merangsang  terjadinya  perubahan  kelamin,  bahwa  untuk  tujuan  mendapatkan  induk jantan dan betina perlakuan juga harus efektif merangsang pertumbuhan gonad (Zahri et al . 2015).

## Perkembangan Gonad
Nilai GSI dan HSI tertinggi terlihat pada Gambar 1, yaitu perlakuan CE dan CM, yaitu  0,4161%.  Parameter  HSI  terbaik  terdapat  pada  perlakuan  CE,  yaitu  0,6456%, kemudian  CM  0,5797%.  Indeks  gonadosomatik  terendah  pada  perlakuan  estradiol secara  tunggal,  yaitu  0,2418%.  Perlakuan  hormon  secara  kombinasi  memberikan pengaruh nyata terhadap nilai GSI dan HSI pada taraf P<0,05 terhadap perlakuan K, E, M dan C, tetapi tidak terdapat perbedaan nyata P>0,05 diantara perlakuan CE dan CM.
Hormon  hCG  mengandung  bahan  aktif  FSH  dan  LH,  merupakan  kelompok hormon  yang  dihasilkan  oleh  kelenjar  hipofisa.  Transport  hormon  ini  melalui  sistem sirkulasi sesuai kebutuhan (Cerda-reverter & Canosa, 2009; Zahri et al . 2018), memicu respon kimiawi ataupun fisiologi pada organ target (Wilson & Davies, 2007; Yaron & Levavi-Sivan,  2011).  Gonad  yang  telah  dipengaruhi  oleh  aktifitas  FSH,  mensintesis hormon-hormon  reproduksi,  seperti  E2  dan  T,  merangsang  folikel-folikel  yang  masih sangat muda untuk berkembang (Kah, 2009; Kraak, 2009).
Penambahan  hormon  E2  dan  MT  pada  perlakuan  CE  dan  CM  meningkatkan sinergi  kerja  hormon  terhadap  organ  target.  Rangsangan  hormon  memicu  aktifitas  sel- sel  pada  gonad,  akibatnya  ukuran  dan  berat  gonad  meningkat.  Perkembangan  HSI berhubungan  dengan  reaksi  hati  terhadap  rangsangan  yang  disebabkan  meningkatnya E2  dan  T  dalam  darah.  Perlakuan  M  dan  C  menunjukkan  adanya  peningkatan  yang sama  pada  nilai  GSI,  walaupun  nilai  HSI  lebih  rendah  dari  kontrol,  sehingga  dapat disimpulkan  bahwa  hormon  tidak  bekerja  maksimal  bila  diaplikasikan  secara  tunggal (Zahri et al. 2015).

## Gambaran Histologi Gonad
Gambaran  histologis  gonad  pada  minggu  ke-0,  menunjukkan  semua  populasi sampel mengandung oogonia (Gambar 2). Tingkat perkembangan gonad rata-rata telah mencapai  fase  II  pada  perlakuan  C  dan  kinerja  perkembangannya  lebih  baik  pada perlakuan  CE.  Perlakuan  M  dan  CM  terdapat  perubahan  jenis  kelamin  dengan  tingkat perkembangan  mencapai  fase  spermatogonia.  Kombinasi  antara  hCG  dan  E2 memberikan  sinergi  yang  baik  terhadap  perkembangan  gonad  kerapu  tikus  yang mencapai  fase  oogonia.  Gambar  2  menampilkan  topografi  histologi  gonad  sesuai dengan  tingkat  perkembangannya  dari  perlakuan  CE,  mulai  minggu  ke-0  sampai minggu ke-10.
Gambar 1. Indeks gonadosomatik dan hepatosomatik ikan kerapu tikus ( Cromileptes altivelis )  tiap  perlakuan.  Huruf  yang  sama  diatas  tiap  balok  data  berarti tidak berbeda nyata P<0,05.
Mengamati pola kerkembangan gonad tiap sampling menunjukkan adanya kinerja perkembangan  yang  tinggi  pada  perlakuan  CE,  dibandingkan  dengan  perlakuan  E  dan C,  yaitu  perlakuan  yang  mempertahankan  jenis  kelamin  betina.  Pola  perkembangan gonad  dari  minggu  ke-2  (Gambar  2B),  ke-4  (Gambar  2C),  ke-6  (Gambar  2D)  dan minggu  ke-8  (Gambar  2E)  lebih  seragam.  Ovarium  didominasi  oogonia  dan  masih terdapat  sel  germinal.  Perkembangan  oogonia  semakin  meningkat  pada  minggu  ke-6 dan ke-8 dengan ukuran oogonia berkisar 3–4 µm. Minggu ke-10 (Gambar 2F) oogonia semakin berkembang dan ukurannya mencapai 5–6 µm.
Secara  alamiah  ukuran  telur  ikan  berbeda-beda  tergantung  spesies,  ukuran  tubuh dan  asupan  nutrisi.  Pakan  yang  diberikan  selama  masa  persiapan  penelitian  dan penelitian  mengandung  46%  protein,  termasuk  jenis  pakan  yang  tinggi  protein. Kandungan protein yang tinggi menyediakan nutrisi yang dibutuhkan ikan kerapu tikus untuk  pertumbuhan  dan  sebagian  lainnya  untuk  perkembangan  gonad  selama  masa perlakuan  hormon.  Tingginya  kinerja  pertumbuhan  dan  perkembangan  gonad  betina pada  perlakuan  CE  merupakan  rangsangan  yang  dihasilkan  dari  hormon  FSH  dan  LH
Gambar  2.  Pertumbuhan  gonad  kerapu tikus Cromileptes  altivelis perlakuan  CE.  A: jaringan oosit  dengan  fase  I,  pertumbuhan  sel  germinal;  B,  C,  D,  E:  oosit  fase  II;  F:  oosit fase IIb. GC: sel germinal; N: nukleus; Og: oogonia. Skala bar: 10 μm.
yang  terkandung  di  dalam  hCG.  Hormon  FSH  merangsang  gonad  mensintesis  dan melepaskan  E2  melalui  sistem  perdaran  darah,  dengan  organ  target  hati.  Organ  hati mensintesis vitelogenin yang merupakan bahan utama perkembangan oosit.
Gambar  histologis  gonad pada perlakuan M dan CM ditemukan adanya populasi sampel  berkelamin  jantan.  Pada  perlakuan  M  populasi  jantan  ditemukan  pada  minggu ke-8 dan ke-10, sedangkan pada perlakuan CM tanda-tanda maskulinisasi telah terlihat sejak  minggu  ke-2  dengan  ditemukan  adanya  pola  intersek.  Hasil  orservasi  terhadap histologi  gonad  ditemukan  spermatogonia  dan  oogonia.  Ditemukannya  oogonia  dan spermatogonia  menjadi  indikator  gonad  intersek  (Avise  &  Mank  2009;  Erisman et  al . 2007,  Kiewek-Martinez et  al . 2010, Özen &  Balcı  2012;  Tsai et  al .  2012;  Gaspare  & Bryceson 2013).
Intersek  merupakan  situasi  transisi  dan  efeknya  gonad  menjadi  tidak  fungsional. Pada  ikan  dewasa,  fenomena  intersek  dapat  menjadi  masalah  karena  kehilangan  induk betina  produktif,  sedangkan  ikan  jantan  hasil  perubahan  kelamin  membutuhkan  waktu untuk  mengembangkan  fungsi-fungsi  reproduksinya  sehingga  dapat  menghasilkan spermatozoa.  Permasalahan  yang  ditemukan  dilapangan  pada  ikan  kerapu  tikus, seringkali  ikan  jantan  hasil  perubahan  kelamin  tidak  dapat  menghasilkan  sperma  yang baik  untuk  membuahi  telur  atau  sama  sekali  tidak  dapat  menghasilkan  spermatozoa. Kondisi ini dikarenakan proses intersek tidak berjalan sempurna.
Proses maskulinisasi terjadi secara simultan, yaitu oogonia mengalami atresia atau tereduksi bersamaan dengan terbentuknya jaringan spermatogonia. Saat spermatogenesis  sel  dalam  testis  tidak  mengalami  perubahan  yang  berarti,  sel-sel  di dalam  testis  hanya  mengalami  transformasi  bentuk  sel  germinal  menjadi  sel spermatogonia,  akibatnya  volume  gonad  tidak  mengalami  penambahan  berat  maupun ukurannya.  Sel-sel  oogonia  ukuranya  lebih  besar  berkisar  2–4  µm  sedangkan  sel-sel spermatogonia  ukurnnya  lebih  kecil  dari  satu  micron,  sehingga  tereduksinya  oogonia memberikan dampak yang besar terhadap penyusutan ukuran dan berat gonad. Kondisi ini  tergambar  dari  nilai  GSI  yang  tidak  berbeda  terhadap  perlakuan  CE  dengan perkembangan oogonia terbaik.
Gambar  3C  sampai  3F  memperlihatkan  bahwa  populasi  ikan  kerapu  tikus  telah menyepurnakan  perkembangan  testisnya,  dengan  indikasi  bahwa  tidak  ditemukannya oogonia. Kondisi serupa ditemukan juga pada sampel perlakuan M minggu ke-8 dan ke- 10. Hasil penelitian ini menegaskan bahwa potensi untuk mendapatkan ikan jantan sejak dini dari ikan kerapu tikus yang bersifat hermaprodit protogini dapat dilakukan dengan perlakuan  kombinasi  hormon.  Perlakuan  hormon  yang  terbaik  untuk  menghasilkan populasi jantan adalah kombinasi hCG dengan metiltestosteron.

## KESIMPULAN
Pemanfaatan  teknologi  hormon  dengan  konsentrasi  dan  dosis  yang  tepat  dapat merangsang  perubahan  jenis  kelamin,  meningkatkan  perkembangan  gonad  dan pertumbuhan  somatik  ikan  kerapu  tikus.  Hormon  metiltestosteron  mampu  merangang terjadinya  perubahan  jenis  kelamin  dan  kinerjanya  lebih  efektif  bila  dikombinasikan dengan  hCG.  Homon  hCG,  E2  dan  MT  yang  digunakan  secara  tunggal  hasilnya  tidak berbeda nyata dari kontrol, tetapi efektifitas kerja hormon terlihat pada kombinasi antara hCG  dengan  E2  dan  hCG  dengan  MT  untuk  merangsang  gametogenesis  pada  ikan kerapu tikus.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Keberhasilan penelitian ini tidak terlepas dari peran Kementerian Riset Teknologi dan  Pendidikan  Tinggi  Republik  Indonesia  melalui  Dirjen  Riset  dan  Pengembangan yang telah mendukung dalam bentuk pembiayaan dari program desentralisasi penelitian tahun anggaran 2017.
Gambar  3.  Pertumbuhan  gonad  kerapu  tikus Cromileptes  altivelis perlakuan  CM.  A:  jaringan oosit  dengan  fase  I,  pertumbuhan  sel  germinal;  B:  fase  intersek,  terdapat  formasi oogonia  diantara  kelompok  spermatogonia;  C,  D,  E,  F:  gonad  jantan  fase spermatogonia.  GC:  sel  germinal;  GCH:  lubang  sel  germinal;  Og:  oogonia;  Sg: spermatogonia; Ts: jaringan testikuler. Skala bar: 10 μm.

## DAFTAR PUSTAKA
Avise,  JC,  Mank,  J.E.  2009. Evolutionary  perspectives  on  hermaphroditism  in  fishes . Sex Dev , 3(2), 152–16. DOI: 10.1159/000223079.
Cerda-Reverter  JM,  Canosa  LF.  2009.  Neuroendocrine  system  of  the  fish  brain. In : Farrell  AP,  Brauner  CJ  (Eds.). Fish  Physiology,  28:  Fish  Neuroendocrinology . Academic Press. London. 3–74 pp. DOI: 10.1016/S1546-5098(09)28001-0.
Costa  DDM,  Neto  FF,  Costa  MDM,  Morais  RN,  Garcia    JRE,  Esquivel  BM,  Ribeiro CAO.  2010.  Vitellogenesis  and  other  physiological  responses  induced  by  17-β- estradiol in males of freswater fish Rhamdia quelen . Comparative Biochemistry and Physiology . Part C 151(2), 248–257. DOI: 10. 1016/j.cbpc.2009.11.002.
Gaspare  L,  Bryceson  I.  2013.  Reproductive  biology  and  fishery-related  characteristics of the malabar  grouper ( Epinephelus  malabaricus ) caught in  the  coastal  waters of Mafia  Island,  Tanzania. Journal  of  Marine  Biology ,  vol.  2013,  1–12.  DOI: 10.1155/2013/786589.
Erisman  BE,  Rosales-Casián,  Hastings  PA.  2007.  Evidence  of  gonochorism  in  a grouper, Mycteroperca  rosacea ,  from  the  Gulf  of  California,  Mexico. Environ. Biol. Fish . Springer Science. 1–11 pp. DOI: 10.1007/s10641-007-9246-1. Higuchi M, Celino FT, Miura C, Miura T. 2012. The synthesis and role of taurine in the eel  spermatogenesis. Amino  Acids, 43(2),  773–781.  DOI:  10.1007/s00726-011- 1128-3.
Ijiri  S,  Tsukamoto  K,  Chow  S,  Kurogi  H,  Adachi  S,  Tanaka  H.  2011.  Controlled reproduction  in  the  Japanese  eel Anguilla  japonica past  and  present.  Aquaculture Europe 36: 13–17. DOI: hdl.handle.net/2115/47268.
Kah  O.  2009.  Endocrine  targets  of  the  hypothalamus  and  pituitary. In :  Farrell  AP, Brauner  CJ  (Eds.). Fish  Physiology,  28:  Fish  Neuroendocrinology .  Academic Press. London. 75–112 pp
Kearney M, Jeffs A, Lee P. 2011. Development and early differentiation of male gonads in  farmed  New  Zealand  shortfin  eel, Anguilla  australis . New  Zealand  Natural Sciences , 36(1), 33–44.
Kiewek-Martínez,  M,  Garcia-López  V,  Rodríguez-Jaramillo  C.  2010.  Evidence  of sexual  transition  in  Leopard  Grouper  ( Mycteroperca  rosacea )  individuals  held  in captivity. Hidrobioloógica , 20(3), 213–221. DOI: 10.24275/uam/izt/dcbs/hidro/2010v20n3.
Kraak  GVD.  2009.  The  GnRH  system  and  the  neuroendocrine  regulation  of reproduction. In :  Farrell  AP,  Brauner  CJ  (Eds.). Fish  Physiology,  28:  Fish Neuroendocrinology . Academic Press. London. 113–149 pp.
Lee  SLJ,  Horsfield  JA,  Black  MA,  Rutherford  K,  Fisher  F,  Gemmell  NJ.  2017. Histological  and  transcriptomic  effects  of  17α-methyltestosterone  on  zebrafish gonad development. BioMed Central Genomics , 18, 557–576. DOI: 10.1186/s12864-017-3915.a.
Ӧzen MR, Balci BA. 2012. Histological study on reproductive pattern and sex reversal of  dusky  grouper  Epinephelus  guaza  in  natural  environment  of  Atalaya  Bay  of Mediterranean  in  Turkey. Turkish  Journal  of  Fisheries  and  Aquatic  Sciences ,  12, 157–164. DOI: 10.41941303-2712-v12_1_18.
[SNI] Standar Nasional Indonesia. 2009. Induk ikan kerapu tikus ( Cromileptes altivelis , Valenciennes ) – Bagian 1: Induk. SNI 01-6487.1-2011.
Sugama K, Rimmer MA, Ismi S, Koesharyani I, Suwirya K, Giri NA, Alava VR. 2012.
Hatchery management of tiger grouper ( Epinephelus fuscoguttatus ): A best-practice
manual.  ACIAR  Monograph  No.  149.  Australian  Centre  for  International Agricultural Research: Canberra. 66 pp.
Tsai  YJ,  Lee  MF,  Chen  CY,  Chang  CF.  2011.  Development  of  gonadal  tissue  and aromatase  function  in  the  protogynous  orange-spotted  grouper Epinephelus coioides . Zoological Studies, 50(6), 693–704. DOI: 10.6620/ZS. Wang  HP,  Gao  Z,  Beres  B,  Ottobre  J,  Wallat  G,  Tiu  L,  Rapp  D,  O'Bryant  P,  Yao  H. 2008.  Effects  of  estradiol-17β  on  survival,  growth  performance,  sex  reversal  and gonadal  structure  of  bluegill  sunfish Lepomis  macrochirus . Aquaculture ,  285(2), 216–223. DOI: 10.1016/j.aquaculture.2008. 08.041.
Wilson CA, Davies DC. 2007. The control of sexual differentiation of the reproductive system and brain. Review. Reproduction, 133(2), 331–359. DOI: 10.1530/REP-06- 0078.
Yaron Z,  Levavi-Sivan B. 2011. Endocrine regulation of fish reproduction. In : Farrell AP, (ed.), Encyclopedia of Fish Physiology: From Genome to Environment , volume 2, pp. 1500–1508. Academic Press, San Diego (US).
Zahri  A,  Sudrajat  AO,  &  Zairin  MJ.  2015.  Pertumbuhan  gonad  sidat Anguilla  bicolor bicolor yang diinduksi kombinasi hormon hCG, MT, E2 dan Antidopamin. Jurnal Akuakultur Indonesia , 14, 69–78. DOI 10.19027/jai.14.69-78. Zahri A, Sudrajat AO, & Zairin MJ. 2016. Feminisasi sidat Anguilla bicolor bicolor Mc Clelland,  1844  melalui  penyuntikan  hormon  estradiol  dan  metiltestosteron  yang dikombinasi dengan hCG dan antidopamin. Jurnal Iktiologi Indonesia , 16(2), 159– 169. DOI 10.3291/jii.v16i2.38.
Zahri A, Sudrajat AO, & Zairin  MJ.  2018. Profil hormon FSH, LH dan estradiol serta kadar  glukosa  darah  sidat, Anguilla  bicolor  bicolor (Mc  Clelland,  1844)  yang dirangsang hormon HCG, MT, E2 dan anti dopamin. Jurnal Iktiologi Indonesia , 18, 57–67. DOI: 10.32491/jii.v18i1.34.