Stannum : Jurnal Sains dan Terapan Kimia, 5 (2) (2023) 75-82
Stannum : Jurnal Sains dan Terapan Kimia
Website: https://journal.ubb.ac.id/index.php/stannum doi: 10.33019/jstk.v5i2.4318 Research paper
Total Phenolic and Flavonoid Test of Gleichenia linearis Leaf Extract as Antioxidant Using Microwave Assisted Extraction
Uji Total Fenolik dan Flavonoid Ekstrak Daun Resam ( Gleichenia linearis ) Sebagai Antioksidan Menggunakan Metode Microwave Assisted Extraction
Sri Rizki Pratiwi * , Occa Roanisca, dan Nurhadini
Department of Chemistry, Universitas of Bangka Belitung Kampus Terpadu Universitas Bangka Belitung, Bangka, Bangka Belitung, 33172
* Corresponding author: sririzkipratiwi1010@gmail.com
Recieved: August 3, 2023 Accepted: October 29, 2023 Published: October 31, 2023 1*

## ABSTRACT
Exposure to ultraviolet (UV) light whic comes from sunlight and exposure to radiation such as using cellphones,  laptops,  etc  are  factors  in  the  formation  of  free  radicals.  Excessive  exposure  to  free radicals will cause oxidative stress. Using antioxidant is one way to prevent damage.One source of antioxidant is resam leaves. Resam leaf extracts is known to contain flavanoids, alkaloids, tannins, saponins,  steroids  and  triterpenoids.  This  study  aims  to  determine  the  effect  of  solvent  and variations in extraction time on yield, total phenolics, total flavanoids, and antioxidant activity of resam  leaf  extract,  as  well  as  determine  the  relationship  between  total  phenolics  content  and flavanoid content on antioxidant activity. The test consists of a total phenolic test using the Folin- Ciocalteau method, a total flavanoid test using the AlCl 3 method, and an antioxidant test using the DPPH method. The solvent used were acetone and ethanol, while the extraction times used were 5, 10, 15 dan 30 minutes. The highest yield, total phenolics, total flavanoids and antioxidant activity in this  study  were  produced  by  ethanol  solvent  with  an  MAE  time  of  10  minutes  with  respective values of 62,21%, 172,9 mg EAG/g, 110,60 mg EK/g, dan 24,12 µg/mL. Correlation testing showed that  tital  phenolics  played  a  role  of  95,5%,  while  total  flavanoid  played  a  role  of    56,5%    in  the antioxidant activity and (IC 50 ) produced. Phenolics are the most dominant compounds in resam leaf extract which act as antioxidants.
Keywords: resam, yield, phenolic, flavonoid, antioxidant

## PENDAHULUAN
Radikal  bebas  merupakan  molekul  yang tidak  stabil  dan  bersifat  sangat  reaktif.  Paparan radikal  bebas  yang  berlebih  akan  menimbulkan stres oksidatif yang dapat menyebabkan inflamasi, infeksi, dan infertilitas (Saleh dan Argawal, 2002) serta katarak, kanker dan penuaan dini (Ariavianti, 2016). Pembentukan radikal bebas dapat
diakibatkan  oleh  paparan  sinar  ultra  violet  (UV) yang bersumber dari cahaya matahari dan paparan radiasi  seperti  penggunaan  ponsel,  laptop,  dan lain-lain  (Victorya,  2015).  Oleh  karena  itu peredaman radikal bebas tersebut sangat diperlukan  sebagai  bentuk  pertahanan  yang  dapat mencegah kerusakan, salah satunya yaitu menggunakan antioksidan.
Antioksidan merupakan senyawa yang memiliki  kemampuan  untuk  melindungi  tubuh dengan  mengurangi  serangan  radikal  bebas. Antioksidan  dapat  menetralkan  radikal  bebas dengan  menyumbangkan  elektron  ke  molekul radikal bebas, menstabilkan reaksi berantai radikal bebas dan menghentikan radikal bebas (Ramayani,  2021).  Daun  resam  ( Gleichenia linearis )  merupakan  tumbuhan  paku-pakuan  dari famili Gleicheniaceae yang memiliki bentuk daun menyirip berjajar dua. Berdasarkan studi fitokimia pada  ekstrak  daun  resam  diketahui  memiliki kandungan  flavonoid,  alkaloid,  tanin,  saponin, steroid dan triterpenoid (Awit et al., 2014). Selain itu  daun  resam  mempunyai  kandungan  fenolik yang  tinggi  yang  dimana  senyawa  ini  memiliki keterkaitan dengan bioaktivitas antioksidan (Yohed, 2017).
Salah  satu  metode  yang  dapat  digunakan untuk mengekstraksi bahan alam adalah Microwave  Assisted  Extraction (MAE).  Ekstraksi menggunakan  MAE  ini  dibantu  oleh  gelombang mikro  untuk  memisahkan  senyawa  aktif  yang terkandung  dalam  bahan  alam  kedalam  pelarut. Metode  ini  lebih  menguntungkan  dalam  proses ekstraksi dibandingkan dengan metode konvensional  dikarenakan  waktu  ekstraksinya lebih  singkat,  volume  pelarut  yang  digunakan untuk  ekstraksi  lebih  sedikit,  dan  rendemen ekstrak  yang  dihasilkan  lebih  tinggi  (Mandal et al., 2007).
Penelitian Wahyuni et al., (2021)
melaporkan  bahwa rendemen  hasil  ekstraksi  daun singkong dan aktivitas antioksidannya menggunakan  metode  MAE  (9,35%-19,84%  dan
IC 50 sebesar 917,56 ppm) lebih tinggi dibandingkan  dengan  maserasi  biasa  (4,36%- 8,08%  dan  IC 50 sebesar  4617,0  ppm).  Selain  itu penelitian  yang  telah  dilakukan  oleh  Putranto et al., (2018)  terhadap  ekstrak  daun  kenikir menunjukkan  hasil  terbaik  terhadap  total  fenolik dan  aktivitas  antioksidan  dengan  ekstraksi menggunakan  metode  MAE  (2,978  mg  GAE/g dan  4,203  mg/mL)  dibandingkan  dengan  metode maserasi  biasa  (2,261  mg  GAE/g  dan  6,689 mg/mL)  dan  maserasi  menggunakan waterbath (2,163 mg GAE/g dan 6,352 mg/mL).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui pengaruh  pelarut  dan  variasi  waktu  metode Microwave  Assisted  Extraction (MAE)  terhadap rendemen,  total  fenolik,  flavonoid  dan  kekuatan aktivitas antioksidan ekstrak daun resam Microwave  Assisted  Extraction (MAE)  serta mengetahui  hubungan  antara  kandungan  total
fenolik  dan  kandungan  total  flavonoid  terhadap aktivitas antioksidan.

## METODOLOGI

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  adalah  daun resam,  etanol  teknis  96%,  aseton  teknis,  Asam galat  p.a  (Merck),  1,1-difenil  2-pikrilhidrazil (DPPH),  metanol,  reagen Follin-Cioceltaeu, natrium  karbonat,  akuades,  natrium  asetat  10%, aluminium klorida, kuersetin dan metanol p.a.

## Alat
Peralatan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  toples  kaca, blender ,  gelas  kimia,  gelas ukur,  tabung  reaksi,  botol  sampel,  pipet  tetes, pipet  volume,  mikropipet,  tip,  batang  pengaduk, spatula, aluminium  foil , plastic  wrapping , rotary evaporator , MARS 6, neraca analitik, ayakan 100 mesh,  spektofotometer  UV-Vis,  corong  kaca, kertas saring, vortex dan inkubator.

## Prosedur Preparasi Sampel
Daun  resam  didapatkan  dari  desa  Balunijuk, Kecamatan  Merawang,  Kabupaten  Bangka.  Daun resam dicuci menggunakan air mengalir, dikeringkan. dan dihaluskan menggunakan blender .  Kemudian,  serbuk  kasar  daun  resam disaring  menggunakan  ayakan  100  mesh  hingga didapatkan  serbuk  halus  daun  resam.  Daun  resam diekstraksi  menggunakan Microwave  Assisted Extraction.

## Ekstraksi Sampel
Serbuk  daun  resam  dimasukkan  sebanyak  2 gram  kedalam  tabung,  kemudian  ditambahkan dengan  20  mL  pelarut.  Pelarut  yang  dgunakan berupa  pelarut  aseton  dan  etanol.  Selanjutnya tabung  dimasukkan  kedalam  alat Microwave Accelerated  Reaction  System (MARS)  6  dengan pengaturan suhu yang digunakan 60°C, daya 1200 W, dan tekanan 800. Waktu ekstraksi divariasikan yaitu  5,  10,  15,  dan  30  menit.  Hasil  ekstraksi disaring  kemudian  dipekatkan  menggunakan rotary evaporator.

## Uji Total Fenolik
Larutan  standar  asam  galat  dibuat  dalam konsentrasi  1000  ppm,  kemudian  diencerkan menjadi konsentrasi 20, 40, 60, 80, dan 100  ppm. Larutan sampel dibuat pada konsentrasi 1000 ppm dengan melarutkan 10 mg ekstrak kedalam 10 mL metanol.  Kemudian  larutan  standar  atau  larutan sampel  dimasukkan  masing-masing  kedalam
tabung reaksi sebanyak 0,5 mL, lalu ditambahkan 0,5  mL  reagen Follin-Cioceltaeu dan  2,5  mL larutan  natrium  karbonat  7%.  Masing-masing larutan  dihomogenkan  dengan vortexer .  Larutan dimasukkan  kedalam  ikubator  selama  30  menit pada suhu 37°C.  Serapan diukur diukur menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  pada panjang  gelombang  760  nm  (Mukhriani et  al ., 2017). Dilakukan 2 kali pengulangan.

## Uji Total Flavonoid
Larutan  standar  kuersetin  dibuat  dalam konsentrasi  1000  ppm,  kemudian  diencerkan menjadi konsentrasi 20, 40, 60, 80, dan 100 ppm. Larutan sampel dibuat pada konsentrasi 1000 ppm dengan melarutkan 10 mg ekstrak kedalam 10 mL metanol.  Kemudian  larutan  standar  atau  larutan sampel  dimasukkan  masing-masing  kedalam tabung  reaksi  sebanyak  0,5  mL,  lalu  kedalamnya ditambahkan  AlCl 3 10%  sebanyak  0,1  mL, metanol p.a 1,5 mL, 0,1 mL CH 3 COONa 1 M dan 2,8 mL akuades. Masing-masing larutan dihomogenkan dengan vortexer.
Larutan dimasukkan  kedalam  ikubator  selama  30  menit pada  suhu  37°C.  Baca  serapan  pada  panjang gelombang
435
nm menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  (Chotimah,  2019). Dilakukan pengulangan sebanyak 2 kali
Uji Aktivitas Antioksidan (IC 50 ) Ekstrak daun resam dibuat dalam konsentrasi  100  ppm  dari  5  mg  ekstrak  daun resam  dengan  50  ml  metanol.  Kemudian konsentrasi larutan diperkecil dengan mengencerkannya  kedalam  10  ml  labu  ukur menjadi  beberapa  konsentrasi,  yaitu  10,  15,  20, 25,  dan  30  ppm.  Selanjutnya  dari  masing-masing konsentrasi  kedalam  tabung  reaksi  dimasukkan sebanyak  1  mL  lalu  ditambahkan  metanol  2  mL dan  1  mL  DPPH  yang  telah  dibuat  dari  5  mg DPPH  dalam  50  mL  metanol.  Kemudian  larutan blanko dibuat dengan mencampurkan 1 mL DPPH dan 3 mL metanol. Larutan dihomogenkan dengan vortexer selama 30 detik dan dimasukkan kedalam inkubator  dengan  suhu  37°C  selama  30  menit. Pembacaan  serapan  larutan  dilakukan  pada panjang  gelombang  515  nm  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  (Mahardika, et  al ., 2018 ) .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengaruh  Pelarut  dan  Variasi  Waktu Terhadap Rendemen .
Metode  ekstraksi  penelitian  ini  menggunakan Microwave  Assisted  Extraction (MAE).  Pada
penelitian  ini  digunakan  2  pelarut,  yaitu  pelarut aseton  dan  etanol.  Penggunaan  pelarut  aseton (semi polar) dan etanol (polar) dikarenakan kedua jenis  pelarut  ini  bersifat  mudah  menguap,  lebih aman  terhadap  lingkungan  dibandingkan  dengan pelarut  lainnya,  dapat  mengekstraksi  senyawa dalam  tumbuhan  lebih  baik,  dan  merupakan pelarut yang  paling  sering  digunakan  untuk mengekstraksi suatu bahan. Rendemen merupakan jumlah  persentase  dari  hasil  ekstraksi  yang  telah dilakukan,  diperoleh  dari  berat  ekstrak  kental dibandingkan  dengan  berat  simplisia  kering  yang digunakan.  Rata-rata  hasil  rendemen  ekstraksi daun resam ditampilkan dalam Gambar 1.
Gambar 1. Grafik Pengaruh Pelarut dan Variasi Waktu MAE Terhadap Rendemen Ekstrak Daun Resam
Berdasarkan  Gambar  1  dapat  dilihat  bahwa penggunaan  pelarut  etanol  dalam  mengekstraksi daun  resam  menghasilkan  rendemen  lebih  tinggi dibandingkan dengan menggunakan pelarut aseton. Sifat polar dari pelarut etanol menunjukkan bahwa ekstrak daun resam didominasi  oleh  senyawa  polar.  Kelarutan  suatu senyawa  terhadap  pelarut  menentukan  efektivitas dari  senyawa  yang  diekstraksi,  hal  ini  berkaitan dengan  prinsip like  disolve  like yaitu  suatu senyawa  akan  larut  dalam  pelarut  dengan kepolaran yang sama (Kemit et al. , 2016).
Sifat  dielektrik  pelarut  mempunyai  peran penting  terhadap  selektivitas  dan  keberhasilan dalam  pemanasan  berbantuan  gelombang  mikro. Etanol  mempunyai  konstanta  dielektrik  sebesar 24,30  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  pelarut aseton  yang  memiliki  konstranta  dielektrik  20,7. Dengan  nilai  konstanta  dielektrik  yang  lebih tinggi,  lebih  banyak  energi  yang  mampu menembus  permukaan  sampel,  menyebabkan pelarut  lebih  cepat  masuk  ke  sampel  dan meningkatkan  hasil  rendemen,  sehingga  etanol merupakan  penyerap  terbaik  terhadap  gelombang mikro (Veggi et al, 2013).
Rata-rata  rendemen  pada  pelarut  aseton mengalami  penurunan  seiring  lamanya  waktu ekstraksi. Rendemen tertinggi pada pelarut aseton dihasilkan  pada  waktu  ekstraksi  5  menit  yaitu 33,27%. Sedangkan pada pelarut etanol rendemen yang  dihasilkan  mengalami  peningkatan  pada waktu  10  menit  yaitu  62,21%,  kemudian  seiring bertambahnya waktu ekstraksi rendemen mengalami  penurunan.  Secara  umum  suhu  dan daya yang digunakan pada metode MAE memiliki keterkaitan  satu  sama  lain.  Suhu  larutan  akan semakin  meningkat  mendekati  titik  didih  pelarut seiring  besarnya  daya microwave dan  lamanya durasi  yang  digunakan.  Bahan  dan  pelarut memiliki kemampuan untuk menyerap energi dari gelombang mikro sehingga menyebabkan kenaikan suhu terjadi (Veggi et al ., 2013).
Pada penelitian ini digunakan suhu ekstraksi 60°C dengan daya yang digunakan 1200 watt. Pelarut aseton umumnya memiliki titik didih 56°C sehingga pada waktu ekstraksi 5 menit telah mencapai  titik  optimal  yang  menghasilkan rendemen  tertinggi.  Sedangkan  pelarut  etanol memiliki  titik  didih  78°C  sehingga  pada  waktu ekstraksi 5 menit suhu belum mencapai titik didih etanol  sehingga  belum  dapat  mengekstraksi  daun resam  secara  maksimal,  kemudian  pada  waktu  10 menit menjadi waktu optimal pelarut etanol untuk menghasilkan  rendemen  tertinggi  karena  suhu semakin  meningkat  dengan  daya  tinggi  yang digunakan.  Namun  semakin  lama  waktu  ekstraksi menyebabkan rendemen yang dihasilkan menurun karena  panas  yang  diserap  oleh  ekstrak  daun resam semakin tinggi dan menyebabkan senyawa- senyawa  yang  terkandung  mengalami  degradasi termal,  serta  memungkinkan  rendemen  akan mengalami  penguapan  karena  suhu  meningkat (Mandal et al, 2007).

## Pengaruh  Pelarut  dan  Variasi  Waktu Terhadap Total Fenolik
Hasil  analisis  terhadap  absorbansi  asam  galat yang  didapatkan  diperoleh  persamaan  regresi linear  y  =  0,0214x + 0,0102  dengan  R² = 0,9889. Rata-rata  hasil  pengukuran  total  fenolik  ekstrak daun resam disajikan dalam Gambar 2.
Gambar 2 . Grafik Pengaruh Pelarut dan Variasi Waktu MAE Terhadap Total Fenolik
Berdasarkan  Gambar  2  menunjukkan  rata- rata  total  fenolik  pada  pelarut  aseton  tertinggi pada  waktu  MAE  5  menit  sebesar  133,8  mg EAG/g, kemudian seiring lamanya waktu ekstraksi  total  fenolik  yang  dihasilkan  mengalami penurunan. Hal ini sejalan dengan penelitian yang dilakukan  oleh  Kusnadi,  (2017)  yang  melaporkan ekstraksi  terhadap  buah  cabai  rawit  mengalami penurunan  nilai  total  fenolik  seiring  semakin lamanya  waktu  ekstraksi.  Penurunan  tersebut dikarenakan  adanya  enzim  peroksidase  diluar vakuola atau didalam vakuola yang berdifusi i kedalam organel i yang menyebabkan terjadinya oksidasi saat proses ekstraksi berlangsung. Semakin lama waktu ekstraksi maka akan  terjadi  penurunan  kadar  total  fenolik  karena kemungkinan  proses  oksidasi  pun  berlangsung lebih  lama.  Senyawa  fenol  akan  semakin  mudah mengalami  kerusakan  jika  pada  cincin  aromatik mengandung  banyak  gugus  hidroksi.  Gelombang mikro  yang  membantu  proses  ektraksi  akan semakin  banyak  terserap  oleh  senyawa  fenol tersebut.
Rata-rata total fenolik tertinggi  dari ekstrak daun  resam  menggunakan  pelarut  etanol  terjadi pada  waktu  ekstraksi  10  menit  sebesar  172,9  mg EAG/g  yang  mengalami  kenaikan  dari  waktu  5 menit. Kemudian pada waktu  ekstraksi 15 dan 30 menit  kadar  total  fenolik  menjadi  berkurang.  Hal ini  karena  pada  waktu  10  menit  telah  mencapai titik didih optimal pelarut etanol untuk mengekstraksi  senyawa  fenol  yang  terkandung. Paparan  radiasi microwave yang  lama  dengan daya yang tinggi dapat menurunkan senyawa aktif yang  terkandung  akibat  senyawa  fenol  yang terdegradasi.
Sifat  polar senyawa etanol dan fenol memungkinkan  lebih  banyak  interaksi  antar molekul.  Selain  itu,  kemungkinan  terbentuknya ikatan  hidrogen  antara  senyawa  etanol  dan  fenol menambah  kuat  laju  ekstraksi  pelarut.  Ini  tidak terjadi  pada  aseton,  kemungkinan  terbentuknya ikatan  hidrogen  antara  senyawa  fenol  dan  aseton menjadi  lebih  kecil  sehingga  interaksi  lebih banyak terjadi pada kepolarannya. Kemudian pada waktu  ekstraksi  15  dan  30  menit  kandungan fenolik  semakin  menurun  disebabkan  radiasi gelombang  mikro  dan  panas  memungkinkan senyawa  fenol  terdegradasi.  Pada  kondisi  tertentu MAE membuat senyawa fenol mudah membentuk radikal bebas sehingga kadar fenol dapat menurun (Mahardika & Roanisca, 2019).
Pengaruh Pelarut dan Variasi Waktu Terhadap Total Flavonoid
Penentuan  total  fenolik  menggunakan  standar kuersetin  dengan  konsentrasi  20,  40,  60,  80,  dan 100 ppm. Berdasarkan absorbansi yang didapatkan diperoleh persamaan regresi linear y = 0,0052x  +  0,0369  dengan  R²  =  0,9847.  Rata-rata pengukuran  total  flavonoid  ekstrak  daun  resam disajikan pada Gambar 3.
Gambar 3. Grafik Pengaruh Pelarut dan Variasi Waktu MAE Terhadap Total Flavonoid
Berdasarkan  Gambar  3  rata-rata  total flavonoid  yang  dihasilkan  pada  pelarut  aseton mengalami  penurunan  seiring  lamanya  waktu ekstraksi.  Waktu  ekstraksi  5  menit  pada  pelarut aseton menunjukkan  kadar  total  flavonoid tertinggi sebesar 36,08 mg EK/g. Sedangkan pada pelarut etanol menunjukkan kenaikan dari waktu 5 menit  ke  10  menit  kemudian  mengalami penurunan  total  fenolik  pada  waktu  15  dan  30 menit. Waktu ekstraksi terbaik pada pelarut etanol yaitu  pada  waktu  10  menit  dengan  kadar  total flavonoid  sebesar  110,60  mg  EK/g.  Penurunan kadar total  flavonoid  seiring  bertambahnya  waktu ekstraksi  terjadi  karena  daya  yang  digunakan tinggi sehingga paparan radiasi akan menghasilkan panas yang terserap kedalam bahan dan  menyebabkan  senyawa  flavonoid  menjadi rusak  seiring  lamanya  waktu  ekstraksi  yang digunakan.
Pada  pelarut  etanol menghasilkan  total flavonoid  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan pelarut  aseton.  Senyawa  flavonoid  mempunyai beberapa  gula  terikat  sehingga  senyawa  ini termasuk  kedalam  kelompok  senyawa  polar. Sesuai  dengan  prinsip like  disolve  like maka flavonoid  lebih  mudah  larut  dalam  pelarut  polar seperti  etanol  dibandingkan  dengan  aseton  yang cenderung bersifat semi polar (Kemit et al , 2016).
Senyawa flavonoid  memiliki tingkat kepolaran yang  berbeda-beda,  menurut  Andersen  (2005) dalam  (Ulya,  2017)  pada  kepolaran  yang  rendah mengandung senyawa flavonoid seperti, flavones,
flavonols,  isoflavones,  dan  methylated  flavones yang  dapat  larut  dalam  pelarut  yang  memiliki kepolaran yang rendah, non polar atau semi polar seperti  kloroform,  dikloroform,  aseton dan lainnya.    Sedangkan  pada  kepolaran  yang  tinggi mengandung  senyawa  polar aglycones dan flavonoid  glycosides  yang  dapat  terekstraksi dengan  pelarut  yang  memiliki  kepolaran  yang tinggi  atau  pelarut  polar  seperti  pelarut  alkohol dan  akuades.  Pada  penelitian  ini  total  flavonoid tertinggi  dihasilkan  oleh  pelarut  etanol,  sehingga senyawa  flavonoid  yang  dihasilkan  oleh  ekstrak daun  resam  didominasi  oleh  senyawa  yang bersifat polar.
Pengaruh Pelarut dan Variasi Waktu Terhadap Antioksidan
Pengujian  aktivitas  antioksidan  dilakukan menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  pada panjang  gelombang  515  nm  untuk  menentuka IC 50 .  Nilai  IC 50 ( Inhibition  Concentration ) merupakan  kemampuan  suatu  senyawa  dalam mereduksi  radikal  bebas  sebesar  50%.  Rata-rata pengujian  aktivitas  antioksidan  ekstrak  daun resam disajikan dalam Gambar 4.
Berdasarkan Gambar 4 ekstraksi menggunakan pelarut  aseton  pada  waktu  5  dan  10  menit memiliki  nilai  IC 50 berturut-turut  sebesar  41,64 µg/mL dan 46,74 µg / mL dengan kategori aktivitas antioksidan tergolong sangat kuat. Kemudian pada waktu  ekstraksi  15  dan  30  menit  memiliki  nilai IC 50 berturut-turut sebesar 50,69 µg/mL dan 53,84 µg / mL  dengan  kategori  aktivitas  antioksidan tergolong  kuat.  Berdasarkan  Gambar  4.8  pada pelarut  aseton  diketahui  memiliki  nilai  IC 50 yang semakin  meningkat  seiring  lamanya  waktu ekstraksi.  Kenaikan  IC 50 menunjukkan  bahwa aktivitas antioksidan semakin kecil.
Selanjutnya  pada  pelarut  etanol  memiliki  nilai IC 50 dengan  waktu  MAE  5,  10,  15  dan  30  menit berturut-turut  26,75  µg/mL,  24,12  µg/mL,  25,43 µg/mL,  dan  26,34  µg/mL  dengan  kategori aktivitas  antioksidan  tergolong  sangat  kuat. Antioksidan  ekstrak  daun  resam  yang  diekstraksi menggunakan  MAE  menghasilkan  aktivitas  yang
kuat  dan  sangat  kuat,  hal  ini  terjadi  karena penggunaan  daya  yang  tinggi  akan  menghasilkan panas  oleh  gelombang microwave dan  terserap oleh bahan karena adanya rotasi dipol dan kondusi ionik  zat  terlarut  dan  pelarut  yang  berpotensi mengionisasi  hidrogen  dan  menghasilkan  efek pemanasan  saat  menggunakan  metode  MAE, meningkatkan  penetrasi  pelarut  untuk  menembus bahan target (Aisyah, 2018).
Berdasarkan  Gambar  4  diketahui  pada waktu  ekstraksi  5  ke  10  menit  mengalami peningkatan  aktivitas  antioksidan  dan  kemudian menurun  pada  waktu  15  dan  30  menit.  Pelarut aseton  dan  etanol  ketika  telah  mencapai  waktu optimal  akan  mengalami  penurunan  aktivitas antioksidan.  Waktu  ekstraksi  yang  terlalu  lama akan menurunkan kadar senyawa fenol dan flavon yang  berperan  dalam  antioksidan  ekstrak  daun
resam  dan  meningkatkan  resiko  komponen  tidak tahan  panas  mengalami  degradasi  (Veggi et  al, 2013).

## Perbandingan  Metode  MAE  dengan  Metode Maserasi
Ekstraksi yang dilakukan dengan menggunakan metode Microwave Assisted Extraction
(MAE) cukup baik dalam mengekstraksi  senyawa  fenolik,  flavonoid  dan antioksidan  yang  terkandung  didalam  ekstrak daun resam. Sebagai perbandingan dengan metode MAE  maka  dilakukan  ekstraksi  menggunakan metode  konvensional,  yaitu  maserasi.  Data perbandingan  hasil  ekstraksi  disajikan  dalam Tabel 1.
Tabel 1 . Perbandingan Metode MAE dengan Maserasi Metode Rendemen (%) Total Fenolik (mg EAG/g) Total Flavonoid (mg EK/g) Aktivitas Antioksidan IC 50 (µg/mL) MAE 62,21 172,9 110,60 24,12 Maserasi 24,26 81,30 21,85 57,11
Berdasarkan Tabel 1  diperoleh rendemen  hasil ekstraksi  daun  resam  menggunakan  metode maserasi  sebesar  24,26%  sedangkan  perlakuan terbaik  metode  MAE  menghasilkan  rendemen 62,21  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  maserasi. Total fenolik  metode  maserasi menghasilkan  nilai sebesar  81,30  mg  EAG/g  sedangkan  perlakuan terbaik  metode  MAE  menghasilkan  nilai  sebesar 172,4  mg  EAG/g.  Total  flavonoid  metode maserasi  menghasilkan  nilai  sebesar  21,85  mg EK/g  sedangkan  perlakuan  terbaik  metode  MAE menghasilkan  nilai  sebesar  110,60  mg  EK/g. Kemudian  aktivitas  antioksidan  menggunakan metode  maserasi  menghasilkan  nilai  IC 50 sebesar 57,11 µg/mL sedangkan perlakuan terbaik metode MAE  menghasilkan  nilai  IC 50 sebesar  24,12 µg/mL . Perlakuan terbaik metode MAE menghasilkan nilai pada setiap parameter pengujian  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan metode maserasi. Ekstraksi menggunakan bantuan gelombang  mikro  menghasilkan  panas  yang  lebih merata  karena  bukan  mentransfer  panas  dari  luar tetapi  membangkitkan  panas  dari  dalam  bahan tersebut.  Pemanasannya  juga  bersifat  selektif artinya  tergantung  dari  dielektrik  properties bahan.  Panas  yang  dihasilkan  ini  dapat  membuat senyawa  dari  dalam  bahan  menguap  sehingga terjadi  pemecahan  pada  dinding  sel  dan  elemen yang terdapat di dalam sel bahan akan keluar serta
terekstraksi  oleh  pelarut  (Julianto,  2019  dan Qorriaina et al., 2015).

## Uji  Korelasi  Total  Fenolik  dan  Total Flavonoid terhadap Antioksidan
Kandungan  total  fenolik  dan  total  flavonoid dalam  suatu  sampel  sangat  mempengaruhi aktivitas antioksidan yang dihasilkan.
Berdasarkan  hasil  analisis  yang  didapatkan, kemudian  dilakukan  pengujian  korelasi  senyawa bioaktif  terhadap  antioksidan  menggunakan  uji korelasi  Pearson  dengan  SPSS  yang  ditampilkan pada Tabel 2.
Tabel 2. Korelasi Total Fenolik dan Total
Flavonoid terhadap Antioksidan Parameter Korelasi Total Fenolik -0,955 0,000 Total Flavonoid -0,565 0,000
Berdasarkan  hasil  uji  korelasi  Pearson  terlihat bahwa  total  fenolik  dan  total  flavonoid  memiliki nilai  p-value  <0,05.  Hal  ini  berarti  diasumsikan bahwa  kadar  total  fenol  dan  total  flavonoid memiliki  korelasi  yang  linear  dengan  aktivitas antioksidan  (IC 50 ).  Nilai  koefisien  korelasi  yang negatif  berarti  semakin  tinggi  nilai  kadar  total
fenol  dan  total  flavonoid  maka  nilai  IC 50 akan semakin  rendah.  Nilai  koefisien  korelasi  paling tinggi dihasilkan  oleh  kadar total fenolik terhadap IC 50 sebesar  0,955  atau  95,5%.  Hal  ini  berarti senyawa  fenolik  memiliki  korelasi  sangat  kuat dengan  menyumbang  peranan  sebesar  95,5% terhadap  aktivitas  antioksidan  yang  dihasilkan. Sedangkan  pada  total  flavonoid  menghasilkan korelasi  yang  sedang  yaitu  sebesar 0,565  atau 56,5%,  artinya  senyawa  flavonoid  pada  daun resam  menyumbang  peranan  sebesar  56,5% terhadap aktivitas antioksidan.
Berdasarkan analisis korelasi, total fenol dalam ekstrak  merupakan  bahan  bioaktif  yang  paling besar  pengaruhnya  terhadap  nilai  aktivitas antioksidan IC 50 . Secara umum, senyawa golongan fenol dengan gugus hidroksi tersubstitusi  pada  cincin  benzena  dengan  posisi orto  dan  para  terhadap  gugus  –OH  dan  –OR merupakan  senyawa  dengan  bioaktivitas  sebagai antioksidan.  Dengan  menyumbangkan  proton  dan membentuk  radikal  stabil,  senyawa  fenol  dapat mencegah  produksi  radikal  bebas.  Elektron  bebas dalam  radikal  distabilkan  oleh  delokalisasi elektron  dengan  adanya  resonansi  pada  cincin aromatik yang bertanggung jawab untuk membentuk radikal stabil (Aisyah, 2018).

## KESIMPULAN
Pelarut aseton  memiliki  waktu  MAE  optimum selama 5 menit sedangkan pelarut etanol memiliki waktu optimum MAE selama 10 menit yang dapat menghasilkan  nilai  rendemen,  total  fenolik, flavonoid  dan  antioksidan  yang  tinggi.  Perlakuan dengan  pelarut  etanol  pada  waktu  MAE  10  menit menghasilkan  rendemen,  total  fenolik,  total flavonoid,  dan  aktivitas  antioksidan  ekstrak  daun resam  tertinggi  dengan  hasil  berturut-turut 62,21%,  172,9  mg  EAG/g,  110,60  mg  EK/g,  dan 24,12 µg/mL.
Korelasi  Pearson  kadar  total  fenolik  dan  total flavonoid  memiliki  korelasi  linier  terhadap antioksidan.  Total  fenolik  memiliki  korelasi sangat  kuat  sebesar  95,5%  terhadap  IC 50. Sedangkan  pada  total  flavonoid  menghasilkan korelasi sedang sebesar 56,5%. Kadar total fenolik memiliki peranan paling dominan dalam menghasilkan  aktivitas  antioksidan  pada  ekstrak daun resam.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Peneliti  mengucapkan  terimakasih  kepada dosen  pembimbing  atas  bimbingannya  baik  itu berupa  arahan  ataupun  pikiran  yang  diberikan
selama  proses  penyelesaian  penelitian  dan terimakasih  kepada  pihak  laboratorium  atas bantuan alat dan bahan serta bantuan analisis.

## REFERENSI
Aisyah, Z. 2018. Pengaruh Jenis Pelarut dan Lama Waktu Microwave  Assisted Extraction
(MAE)  Terhadap  Aktivitas  Antioksidan
Mikroalga (Porphyridium cruentum).
Skripsi. Malang : Universitas Brawijaya Ariavianti, E. 2016. Uji  Aktivitas Antibakteri  dan Antioksidan dari Ekstrak Metanol, Fraksi N heksan  dan  Fraksi  Etil  Asetat  Daun Vitex pubescens . Skrpsi .  Universitas  Jakarta,
Jakarta.
Awit,  TAS,  Mayta,  NI  &  Siti,  F,  2014,  ‘Potensi Allelopati  Ekstrak  Daun Gleichenialinearis (Burm). Underw. Terhadap Perkecambahan dan  pertumbuhan  Anakan  Gulma Mikania micrantha (L.)  Kunth’. JOM  FMIPA , 1(2):12-15
Chotimah,  Chusnul.  2019.  Uji  Total  Fenolik  dan Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Daun  dan Kulit  Batang  Dadap  Serep  Menggunakan Pelarut  Yang  Berbeda. Skripsi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim.
Enggiwanto,  S.,  Istiqomah,  F.,  Daniati,  K., Roanisca,  O.,  &  Mahardika,  R.  G.  2018.
Ekstraksi  Daun  Pelawan  ( Tristaniopsis merguensis ) Sebagai Antioksidan Menggunakan Microwave Assisted Extraction (MAE). Indonesian  journal  of pure and Applied Chemistry , 1 (2):50-55. Julianto, Tatang Shabur. 2019. Fitokimia Tinjauan Metabolit Sekunder Dan Skrining
Fitokimia. Yogyakarta  :  Universitas  Islam
Indonesia
Kemit, N., Widarta, I. W. R., & Nocianitri, K. A. 2016.  Kandungan  Senyawa  Flavonoid  dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Alpukat  (Persea  Americana  Mill). Jurnal Ilmu Teknologi Pangan , 5 (2), 130–141.
Kusnadi,  J.,  Dedi,  Yunianta,  &  Arumingtyas,  E. L.  2017.  Ekstraksi  Senyawa  Fenol  dan Aktivitas  Antioksidan  Dari  Buah  Cabai Rawit Dengan Metode Microwave  Assisted Extraction. Jurnal  Teknologi  Pertanian , 18 (3), 181–190.
Mahardika,  R.  G.,  &  Roanisca,  O.  2019.
Microwave-assisted extraction of
polyphenol content from leaves of tristaniopsis  merguensis  griff. ASEAN Journal  of  Chemical  Engineering , 19 (2),
110–119.
Mahardika,  R.G.,  dan  Roanisca,  O.  2018.
Aktivitas  Antioksidan  dan  Fitokimia  dari Ekstrak Etil Asetat Pucuk Idat ( Cratoxylum Glaucum ). Journal  Of  Chemical  Research (Ijcr) , 5(2): 481-486.
Mandal,  V.,  Mohan,  Y.,  dan  Hemalatha,  S.  2007.
Microwave Assisted Extraction An Innovative  and  Promising  Extraction  Tool for Medicinal Plant Research. Pharmacognosy Reviews, 1(1): 6-18.
Mukhriani,  M.,  Arsul,  M.  I.,  Sugiarna,  R.,  & Farhan,  N.  2019.  Kadar  Fenolik  dan Flavonoid  Total  Ekstrak  Etanol  Daun Anggur  ( Vitis  vinifera L.). ad-Dawaa’ Journal of Pharmaceutical Dciences , 2(2):95-102. Putranto, A. W., Dewi, S. R., Izza, N., Yuneri, D. R.,  Dachi,  M.  Y.  S., Sumarlan,  S.  H.  2018. Ekstraksi  Senyawa  Fenolik  Daun  Kenikir
( Cosmos
caudatus ) Menggunakan Microwave  Assisted  Extraction (MAE).
Jurnal Rona Teknik Pertanian, 11(1):59-18. Ramayani, S. L., Permatasari, E. A., Novitasari, I.,
&  Maryana,  M.  2021.  Pengaruh  Metode
Ekstraksi  Terhadap  Kadar  Total  Fenolik, Kadar  Total  Flavonoid  dan  Aktivitas
Antioksidan  Ekstrak  Daun  Mengkudu
( Morinda citrifolia L.). Jurnal Ilmu
Farmasi  dan  Farmasi  Klinik , 18(01):  40- 46.
Saleh  RA  &  Agarwal  A.  2002.  Oxidative  stress and  male infertility: from research bench to clinical  practice. Journal  of  Andrology , 23(6):737-752. Ulya,  Naily.  2017.  Analisis  Pengaruh  Rasio Pelarut  dan  Waktu  Ekstraksi  Terhadap Aktivitas  Antioksidan  dan  Total  Flavonoid Ekstrak  Jamur  Tiram  Putih (Pleurotus ostreatus) Menggunakan Microwave Asissted Extraction ( MAE ) . Skripsi.
Malang : Universitas Brawijaya Veggi,  P.,  Martinez,  J.,  &  Meireless,  M.  2013. Fundamental  of  Microwave  Extraction.
Microwave Assisted Extraction for Bioactive Compounds: Theory and
Practice. Food Engineering Series. Springer
Science , vol 4, pp 15-52
Victorya,  Roseana  Maria.  2015.  Effects  Of
Handphone’S Electromagnetic
Wave
Exposure  On  Seminiferous  Tubules. J Major , 4(3): pp. 96–100. Wahyuni, Y. A. T., Puspawati. G. A. K. D., Putra, I.  N.  K.  Pengaruh  Jenis  Pelarut  Pada Metode Microwave  Assisted  Extraction Terhadap Karakteristik Ekstrak Daun
Singkong  ( Manihot  utillissima  Pohl .).
Jurnal  Ilmu  dan  Teknologi  Pangan, 10(4):566-576.
Yohed,  I.,  &  Kristianita,  R.  A.  2017.  Pengaruh Jenis  Pelarut  dan  Temperatur  Terhadap Total  Phenolic  Conten,  Total  Flavonoid Content,  dan  Aktivitas  Antioksidan  di Ekstrak  Daun  Nyamplung  ( Calophyllum inophyllum ). Dissertation .
Institute
Teknologi Sepuluh Nopember, Surabaya