Online: https://jurnal.fk.uisu.ac.id/index.php/ibnusina
Ibnu Sina: Jurnal Kedokteran dan Kesehatan-Fakultas Kedokteran Universitas Islam Sumatera Utara
ISSN 1411-9986 (Print) | ISSN 2614-2996 (Online)

## Artikel Penelitian
EFEKTIVITAS EKSTRAK DAUN JERUK NIPIS (CITRUS AURANTIIFOLIA) DENGAN PEG 5%

## TERHADAP MORTALITAS LARVA AEDES AEGYPTI

## EFFECTS OF LIME LEAF (CITRUS AURANTIIFOLIA) EXTRACT WITH PEG 5% ON AEDES AEGYPTI LARVAE
Rochmadina Suci Bestari a , Talitha Ulima Santosa a , Devi Usdiana Rosyidah a , Retno Sintowati a , Tanjung Anitasari Indah Kusumaningrum b
a Prodi Pendidikan Dokter Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Surakarta Indonesia
b Prodi Kesehatan Masyarakat Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Surakarta
Histori Artikel

## A B S T R A K
Diterima: 8 Februari 2024 Revisi: 22 Februari 2024 Terbit: 1 Juli 2024 Demam Berdarah Dengue (DBD disebabkan oleh virus dengue dan ditularkan melalui vektor  nyamuk  A edes  aegypti yang  banyak  ditemukan  di  daerah  tropis,  termasuk Indonesia.  Dampak  yang  ditimbulkan  sangat  berat  salah  satunya  adalah  kematian. Penggunaan larvasida kimiawi konvensional yang digunakan untuk mengontrol Aedes aegypti telah  menimbulkan  populasi  yang  resisten  sehingga  dibutuhkan  dosis  yang lebih  tinggi,  berefek  toksik  bagi  manusia  dan  lingkungan,  maka  dikembangkan larvasida  biologi.  Daun  jeruk  nipis  ( Citrus  aurantiifolia )  memiliki  senyawa  kimia flavonoid, saponin, dan alkaloid yang memiliki peran penting dalam membunuh larva Aedes aegypti . Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui efektivitas ekstrak daun jeruk  nipis  PEG  5%  dalam  membunuh  larva Aedes  aegypti .  Metode  penelitian  ini adalah true  experiment dengan post-test  only  control  group  design. Larva  dibagi menjadi 6 kelompok yaitu kontrol positif, kontrol negatif, P1 (ekstrak daun jeruk nipis 2,5% dan PEG 5%), P2 (ekstrak daun jeruk nipis 5% dan PEG 5%), P3 (ekstrak daun jeruk nipis 10% dan PEG 5%). Setiap gelas diisi 25 ekor larva Aedes aegypti. Hasil didapatkan kematian larva 100% pada jam ke-6 oleh kelompok kontrol positif, P1, P2 dan P3. Kesimpulan penelitian ini adalah ekstrak daun jeruk nipis 2,5%, 5% dan 10% dengan PEG 5% efektif dalam membunuh larva Aedes aegypti pada jam ke-6 paparan.
Kata Kunci A B S T R A C T daun jeruk nipis, PEG 400, larva Aedes aegypti Dengue Hemorrhagic Fever (DHF) caused by dengue virus and transmitted through Aedes aegypti mosquito, found in tropical areas, including Indonesia. The impacts are very  serious,  one  of  which  is  death.  The  use  of  conventional  chemical  larvicides  to control Aedes aegypti has created resistant population so that higher doses are needed, toxic effects on human and environment, so biological larvicides have been developed. Lime leaves (Citrus aurantiifolia) contain chemical compounds flavonoids, saponins and alkaloids which have important role in killing Aedes aegypti larvae. The aim of this research is to determine the effectivity of lime leaf extract 5% PEG to kill Aedes aegypti  larvae.  This  research  method  is  true  experiment  with  post-test  only  control group  design.  Larvae  were  divided  into  6  groups,  namely positive  control,  negative control, P1 (2.5% lime extract and PEG5%), P2 (5% lime extract and PEG5%), P3 (10% lime extract and PEG5%). Each glass was filled with 25 Aedes aegypti larvae. The results showed 100% larval death at the 6th hour by the positive control group, P1, P2 and P3. The conclusion of the research is lime leaf extract 2.5%, 5% and 10% with PEG5% was effective in killing Aedes aegypti larvae at the 6th hour of exposure.
Korespondensi
Tel. 085647007391 Email: rsb156@ums.ac.id

## PENDAHULUAN
Demam  Berdarah  Dengue  (DBD)  atau
D engue  Hemorrhagic  Fever (DHF)  adalah penyakit  infeksi  yang  disebabkan  oleh  virus dengue  dan  ditularkan  melalui  vektor  nyamuk aedes aegypti yang banyak ditemukan di daerah tropis,  termasuk  Indonesia. 1 Dampak  yang ditimbulkan akibat infeksi virus dengue sangat berat  salah  satunya  adalah  kematian.  Maka diperlukan  pengendalian  vektor  nyamuk  yang diharapkan  akan  berdampak  pada  penurunan populasi  vektor  nyamuk Aedes  aegypti
sehingga tidak signifikan lagi sebagai penularan penyakit. 2 Penggunaan  larvasida  kimiawi konvensional yang digunakan untuk
mengontrol Aedes aegypti telah menimbulkan
populasi  yang  resisten  sehingga  dibutuhkan dosis yang lebih tinggi yang tentunya memiliki efek  toksik  bagi  manusia,  hewan,  serta lingkungan,  maka  dikembangkan  larvasida biologi. 3
Daun  jeruk  nipis  ( Citrus  aurantiifolia ) memiliki  senyawa  kimia  berupa  flavonoid, saponin,  dan  alkaloid  yang  memiliki  peran penting dalam membasmi larva instar III dan IV
Aedes  aegypti . 3,4 Tujuan  penelitian  ini  adalah untuk mengetahui efektivitas ekstrak daun jeruk nipis  PEG  400  5%  dalam  membunuh  larva
Aedes aegypti.

## METODE
Metode  penelitian  ini  adalah true experiment dengan post-test only control group design. Penelitian  dilakukan  di  Laboratorium
Farmakologi  dan  Parasitologi  FK  UMS, berlangsung  pada  bulan  Oktober-November
2023.  Tanaman  yang  digunakan  adalah  daun
jeruk  nipis.  Ekstraksi  menggunakan  metode maserasi.  Larva  yang  digunakan  merupakan larva Aedes  aegypti instar  III-IV.  Bahan  lain yang  digunakan  adalah  etanol  96%  dan  PEG 400 5%.
Penelitian  ini  mendapatkan ethical clearance dari KEPK FK UMS No.5124/A.1/KEPK-FKUMS/XI/2023. Determinasi tanaman diperoleh dari
Laboratorium Pengujian UPF Pelayanan Kesehatan  Tradisional  Tawangmangu  RSUP Dr. Sardjito Nomor :
TL.02.04/D.XI.5/16536.262/2023.

## Prosedur Kerja
Ekstraksi  tanaman  daun  jeruk  nipis  (Citrus aurantiifolia)
Pembuatan  ekstrak  terdiri  atas  beberapa tahapan.  Daun  jeruk  nipis  diperoleh  dari  Desa Pojok,  Tulungagung,  Jawa  Timur.  Keduanya dicuci  dan  kemudian  dikeringkan,  selanjutnya di  haluskan  dengan  blender  sampai  menjadi simplisia.  Kemudian,  simplisia  dimaserasi menggunakan  etanol  96%  selama  7  hari  dan diaduk.  Setelah  itu,  dilakukan  penyaringan dengan  kertas  saring.  Filtrat  kemudian  di evaporasi  dan  dilakukan  pemanasan  dengan waterbath .

## Rearing larva Aedes aegypti
Telur Aedes  aegypti diperoleh  dari Balitbangkes  Pangandaran  yang  ditetaskan  di Laboratorium  Parasitologi  FK  UMS.  Subjek yang  dipakai  yaitu  larva  Aedes aegypti instar
III-IV sejumlah 125 ekor untuk uji pendahuluan dan  600  ekor  untuk  uji  larvasida.  Larva sejumlah  25  ekor  larva  di  setiap  gelasnya, merujuk pada pedoman dari WHO.
Pengulangan dilakukan sebanyak 4 kali sesuai rumus Federer.

## Uji Pendahuluan
Uji  pendahuluan  dilaksanakan  untuk mengetahui  bahwa  variasi  konsentrasi  ekstrak sudah cukup efektif sehingga dapat dilanjutkan ke  uji  larvasida.  Kelompok  uji  pendahuluan terdiri  dari  2  kelompok  kontrol,  yaitu  kontrol positif (abate) dan kontrol negatif ( aquadest +
PEG  400  5%)  serta  3  kelompok  perlakuan.
Kelompok  perlakuan  terdiri  atas  :  P1  (ekstrak etanol daun jeruk nipis 2,5% + PEG 400 5%),
P2 (ekstrak etanol daun jeruk nipis 5% + PEG 400 5%), P3 (ekstrak etanol daun jeruk nipis 5% + PEG 400 5%). Larva mati dihitung pada jam ke-6, 12, 18 dan 24.

## Uji Larvasida
Uji  larvasida  merupakan  uji  mortalitas larva  yang  dilakukan  pengulangan  sesuai
Rumus Federer. Kelompok uji larvasida terdiri dari  2  kelompok  kontrol,  yaitu  kontrol  positif (abate)  dan  kontrol  negatif  ( aquadest +  PEG
400  5%)  serta  3  kelompok  perlakuan.
Kelompok  perlakuan  terdiri  atas  :  P1  (ekstrak etanol daun jeruk nipis 2,5% + PEG 400 5%), P2 (ekstrak etanol daun jeruk nipis 5% + PEG 400 5%), P3 (ekstrak etanol daun jeruk nipis 5% +  PEG  400  5%).  Uji  larvasida  dilakukan  4x pengulangan. Larva mati dihitung pada jam ke- 6, 12, 18 dan 24.

## HASIL
Hasil  uji  larvasida  disajikan  pada  Tabel 1.  Uji  normalitas  menggunakan  Kolmogorov Smirnov, menunjukkan nilai p=0,000 sehingga bisa diinterpretasi bahwa data tidak terdistribusi normal.  Uji  homogenitas  menunjukkan  nilai p=0,000 sehingga bisa diinterpretasi bahwa data tidak  homogen.  Uji  Mann-Whitney  jam  ke-6 disajikan pada Tabel 2.
Tabel 1. Efek ekstrak daun jeruk nipis terhadap mortalitas larva Aedes aegypti
Perlakuan Pengulangan Mortalitas larva jam ke- Rata- rata kematian larva dalam 24 jam ± SD
6 12 18 24 K (+) (Abate 1%) I 25 0 0 0 25 ± 0 0 II 25 0 0 0 III 25 0 0 0 IV
25 0 0 0 Rata-Rata Kematian 25 0 0 0 Persentase Kematian 100% 0% 0% 0% K (-)
(Aquadest + PEG 400 5%) I 0 0 0 0 0 II 0 0 0 0 III 0 0 0 0 IV 0
0 0 0 Rata-Rata Kematian 0 0 0 0 Persentase Kematian 0% 0% 0% 0% P1
(Daun Jeruk Nipis 2.5% + PEG 400 5%) I 25 0 0 0 25 ± 0 0 II 25 0 0 0 III 25 0 0 0 IV 25
0 0 0 Rata-Rata Kematian 25 0 0 0
Persentase Kematian
100% 0% 0% 0%
P2 (Daun Jeruk Nipis 5% + PEG 400 5% I 25 0 0 0 25 ± 0 0 II 25 0 0 0 III 25 0 0 0 IV
25 0 0 0 Rata-Rata Kematian 25 0 0 0
Persentase Kematian
100% 0% 0% 0% P3
(Daun Jeruk Nipis 10% + PEG 400 5%) I 25 0 0 0 25 ± 0 II 25 0 0 0 III 25 0 0 0 IV
25 0 0 0 Rata-Rata Kematian 25 0 0 0 Persentase Kematian 100% 0% 0% 0%
Tabel 2. Hasil Uji Mann-Whitney jam ke-6 pada uji efektivitas ekstrak daun jeruk nipis (Citrus aurantiifolia) terhadap kematian larva Aedes aegypti K (+) K(-) P1 P2 P3 K (+) 0.317 1,000 1,000 1,000 K(-) 0.317 0.008* 0.008* 0.008* P1 1,000 0.008* 1,000 1,000 P2 1,000 1,000 1,000 1,000 P3 1,000 1,000 1,000 1,000 *terdapat perbedaan signifikan

## DISKUSI
Dari  hasil  penelitian,  pada  jam  ke-6 didapatkan  kematian  larva  100%  di  larutan ekstrak  daun  jeruk  nipis  ( Citrus  aurantiifolia)
konsentrasi  2,5%,  5%  dan  10%.  Larutan tersebut menggunakan emulgator PEG 400 5%.
Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak daun jeruk nipis  ( Citrus  aurantiifolia) efektif  untuk membunuh larva Aedes aegypti .
Hayana dkk (2021) melakukan penelitian menggunakan ekstrak daun jeruk nipis dengan hasil  setelah  96  jam  pengamatan  didapatkan kematian 80% pada konsentrasi 10%, kematian
40%  pada  konsentrasi  6%  dan  25%  pada
konsentrasi  4%. 5 Perbedaan  hasil  ini  dapat terjadi  karena  ada  perbedaan  pengencer  dan pelarut.  Hayana  tidak  menggunakan  PEG sedangkan  penelitian  ini  menggunakan  PEG.
Pelarut  PEG  menyebabkan  kelarutan  bahan meningkat  secara  signifikan,  menjadi  lebih homogen  sehingga  paparan  ekstrak  lebih  baik terhadap  tubuh  larva. 6 Selain  itu,  penelitian
Borges dkk (2020) menunjukkan bahwa adanya PEG dapat mempercepat penyerapan ekstrak ke dalam tubuh nyamuk. 7
Penelitian ini  menunjukkan  hasil  yang efektif,  kematian  100%  pada  jam  ke-6,  sama dengan kontrol positif yang dipakai yaitu abate.
Abate  berisi  Temephos  1%,  merupakan larvasida  yang  telah  digunakan  selama berpuluh-puluh  tahun  di  Indonesia.  Penelitian Suparyati  (2020)  menunjukkan  bahwa  abate dengan  dosis  10  mg/100 ml  air sesuai  anjuran pemerintah, menunjukkan kematian larva 100% pada  menit  ke-120  atau  selama  2  jam.  Hal  itu dikarenakan  penetrasi  abate  ke  dalam  larva berlangsung  sangat  cepat. 8 Oleh  karena  itu, tidak  bisa  disimpulkan  bahwa  efektivitas ekstrak  daun  jeruk  nipis  ( Citrus  aurantiifolia)
konsentrasi 2,5%, 5% dan 10% sama bagusnya dengan  abate.  Perlu  penelitian  lebih  lanjut dengan  penghitungan  larva  mati  di  tiap  jam- nya.
Penelitian Muntasir dkk (2023)
menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  jeruk  nipis dengan  LC50  pada  650  ppm  dan  LC90  pada 1100  ppm  mampu  membunuh  larva  52%  dan 92%. 9
Selama penelitian, larutan yang
didapatkan keruh sehingga peneliti mengalami kesulitan  dalam  penghitungan  larva  mati. Larutan  lebih  homogen  dan  terdispersi  merata dengan  adanya  PEG  400  5%.  Larutan  keruh kurang baik untuk diaplikasikan ke masyarakat sebagai larvasida alami.
Kematian larva dapat disebabkan karena adanya  zat  aktif  pada  daun  jeruk  nipis  ( Citrus aurantiifolia) 4 , 10 , 11 . Kandungan senyawa kimia yang terkandung dalam daun jeruk nipis sebagai larvasida  adalah  flavonoid,  saponin,  tanin, triterpenoid,  limonoid/limonen  yang  dapat menyebabkan kematian larva. 5,12,13,14,15,16
Flavonoid mendenaturasi protein protein dinding sel larva sehingga mengganggu nutrisi dan  menyebabkan  kematian  larva,  saponin
mampu  merusak  lapisan  protein  pelindung tubuh sehingga zat toksin dapat masuk ke tubuh dan  menyebabkan  kematian  larva,  sedangkan alkaloid mendegradasi membran sel. 3,4,17

## KESIMPULAN
Ekstrak  daun  jeruk  nipis  ( Citrus aurantiifolia )    2,5%,  5%  dan  10%  dengan
PEG400  5%  efektif  dalam  membunuh  larva
Aedes aegypti pada jam ke-6 paparan.

## SARAN
Saran untuk penelitian selanjutnya adalah konsentrasi larutan sebaiknya dikurangi dengan mencari  konsentrasi  terkecil  namun  masih efektif untuk membunuh larva Aedes aegypti.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terimakasih kepada
Universitas
Muhammadiyah  Surakarta  sehingga  penelitian ini  bisa  terlaksana  dengan  skema  pendanaan Riset  Kompetitif  (RIKOM  UMS)  Nomor: 303.40/A.3-III/LRI/X/2023.

## DAFTAR REFERENSI
1.   Dewangga VS, Qurrohman MT, Dianggi Tamba NP, et al. Edukasi Manfaat Lilin Kayu  Manis  Sebagai  Anti  Nyamuk  Di Kelurahan  Pucang  Sawit. Budimas    J Pengabdi Masy . 2022;4(1):1-6. doi:10.29040/budimas.v4i1.3781
2.   Supangat U, Badriah DL, Mamlukah M,
Suparman R. Faktor-Faktor Yang Berhubungan  Dengan  Kematian  Kasus Demam  Berdarah  Di  Kota  Tasikmalaya 2022. J  Heal  Res  Sci .  2023;3(1):63-71. doi:10.34305/jhrs.v3i01.764
3.   Martias  I,  Simbolon  VA.  Ekstrak  Daun Mengkudu  dan  Daun  Pepaya  Sebagai Larvasida  Alami  terhadap  Kematian Larva  Nyamuk  Aedes  aegypti. J  Ilmu
Kesehat Masy . 2020;9(01):12-18. doi:10.33221/jikm.v9i01.820
4.   Maulana, Sidik; Musthofa, Faisal; Yamin,  Ahmad;  Juniarti,  Neti;  Putri  A.
Pengaruh  Biolarvasida  Daun  Tanaman Sebagai  Kontrol  Vektor  Nyamuk  Aedes Aegypti  Penyebab  Demam  Berdarah: Literature  Review. J  Med  Hutama . 2021;02(03).
5.   Hayana,  Maharani  R,  Sari  IP.  Uji efektivitas  ekstrak  daun  jeruk  nipis (Citrus Aurantifolia) dalam menghambat pertumbuhan  larva  nyamuk  Aedes aegypti. J Menara Ilmu . 2020;14(02):46- 50.
6.   Wasongko  H.  ADLN  Perpustakaan Universitas  Airlangga  Skripsi  Pengaruh peg  400  sebagai  kosolven  terhadap kelarutan  phenytoin.  Published  online 2006.
7.   Borges  GR,  Aboelkheir  MG,  de  Souza Junior  FG,  Waldhelm  KC,  Kuster  RM. Poly (butylene succinate) and derivative copolymer  filled  with  Dendranthema grandiflora biolarvicide extract. Environ Sci  Pollut  Res .  2020;27(19):23575- 23585. doi:10.1007/s11356-020-08679-3
8.   Suparyati  S.  Uji  Daya  Bunuh  Abate Berdasarkan Dosis Dan Waktu Terhadap Kematian  Larva  Nyamuk  Aedes  sp  dan Culex  sp. Pena  J  Ilmu  Pengetah  dan
Teknol . 2020;34(2):1. doi:10.31941/jurnalpena.v34i2.1193 9.   Muntasir,  Abanit  YM,  Weraman  P, Fudholi A. Natural larvicide mixed lime leaf  extract  and  galangal  rhizome  to mortality Aedes aegypti larvae. Biocatal Agric Biotechnol . 2022;39:102274. doi:10.1016/J.BCAB.2022.102274
10.   Putri SD, Ulfa AM, Nofita. Uji Aktivitas Variasi  Konsentrasi  Larutan  Ekstrak Kulit  Jeruk  Nipis  (Citrus  aurantifolia) Sebagai  Larvasida  Aedes  aegypti. J Pharm Trop Issues . 2021;1(2):1-9.
11.   Nirma,  Susilawaty  A,  Ibrahim  H, Amansyah  M.  Efektivitas  Larvasida Ekstrak  Kulit  Buah  Jeruk Nipis (  Citrus aurantifolia  )  Dalam  Membunuh  Jentik Nyamuk  Aedes  sp  (Studi  di  Daerah Epidemi  DBD  di  Wilayah  Kerja
Puskesmas Antang Kecamatan
Manggala). Hig  J  Kesehat  Lingkung . 2017;3(2):87-96.
12.   Isfanda I, Agustina E, Ahadi R. Efficacy Test  Of  Lime  Leaf  Ethanol  Extract (Citrus  aurantifolia)  Against  Aedes aegypti  Larvae. Biot  J  Ilm  Biol  Teknol dan Kependidikan . 2023;11(1):11. doi:10.22373/biotik.v11i1.16957
13.   Mangampa  Y,  Nisa  M,  Fahimah  N, Rannu SL, Anugrawan M, Doa FR. Efek Biolarvasida  Nyamuk  Aedes  Aegypti Dari  Granul  Ekstrak  Daun  Jeruk  Nipis (Citrus  aurantifolia). J  Ilm  Manuntung .
2018;3(2):116-121. doi:10.51352/jim.v3i2.117
14.   Sousa  DAD,  Paulo  Roberto  Barros  G, Souza RD, et al. Chemical Composition and  Larvicidal  Activity  of  Essential  Oil from  Citrus  aurantifolia  (Christm.) Swingle  bark  Against  Aedes  aegypti
Larvae  |  Composição  Química  e
Atividade Larvicida de Óleos Essenciais de Citrus aurantifolia (Christm.) Swingle bark Contr. Rev Virtual Quim .
2023;15(4):722-727. doi:10.21577/1984-
6835.20230008
15.   Gomes  PRB,  de  Assunção  GV,  Everton GO,  et  al.  Chemical  composition  and larvicidal  activity  of  essential  oil  of  the bark  of  Citrus  sinensis  (L.)  Osbeck  | Composição Química e atividade larvicida do óleo essencial das cascas do
Citrus sinensis (L.) Osbeck |
Composición química y actividad larvicida  del. Rev  Colomb  Ciencias Quim . 2021;50(1):48-60. doi:10.15446/rcciquifa.v50n1.95448
16.   Sheng Z, Jian R, Xie F, et al. Screening of  larvicidal activity of  53  essential  oils and  their  synergistic  effect  for  the improvement  of  deltamethrin  efficacy against  Aedes  albopictus. Ind  Crops Prod . 2020;145. doi:10.1016/j.indcrop.2020.112131 17.   Maulana M, Hidayah N, Fitri Nugraha D, Ketut Gunawan Kusuma I. Uji Efektivitas  Ekstrak  Etanol Daun  Pepaya (Carica papaya linn) Sebagai
Biolarvasida  Ae.  aegypti  Effectiveness Of  Papaya  Leaf  (Carica  papaya  linn) Ethanol  Extracts  As  Ae. aegypti
Biolarvacides. An-Nadaa  J  Kesehat Masy . 2022;9(1):14-21. https://ojs.uniska- bjm.ac.id/index.php/ANN/article/view/6 060