## EKSTRAKSI, FRAKSINASI DAN UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI KARANG LUNAK Sarcophyton sp. YANG DIPEROLEH

## DARI TELUK MANADO
Ayu Savitri Tombokan 1) , Defny S. Wewengkang 1) , Sri Sudewi 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT

## ABSTRACT
Soft coral as structure and framer of coral reef that have great bioactive potential. The aim of this  study  is  to  extract,  fraction,  and  determine  antibacterial  activity  from  soft  coral Sarcophyton  sp.  at  the  experiment  with  Staphylococcus  aureus  and  Escherichia  coli  bacteria. The soft coral sample extracted with maceration used ethanol solvent. Then fractionation with n-hexane, chloroform, and methanol solvent. This experiment use agar diffusion method (Kirby Bauer)  with  250 /50 concentration.  As  the  result  show  that  chloroform  fractions  have ability  to  inhibitor  both  of  experiment  bacteria  specifically  Staphylococcus  aureus  and Escherichia coli.
Key  words :  Soft  coral  Sarcophyton  sp.,  Antibacterial  activity,  Staphylococcus  aureus, Escherichia coli.

## ABSTRAK
Karang  lunak  merupakan  salah  satu  komponen  biota  penyusun  terumbu  karang  yang mempunyai potensi bioaktif yang belum banyak dimanfaatkan. Adapun penelitian ini bertujuan untuk  mengekstrak,  memfraksinasi,  serta  menguji  aktivitas  antibakteri  karang  lunak Sarcophyton sp.  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli. Sampel  di ekstrak  dengan  cara  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol,  kemudian  di  fraksinasi  dengan menggunakan  pelarut  n-heksan,  kloroforom,  dan  metanol.  Pengujian  aktivitas  antibakteri dilakukan  dengan  metode  difusi  agar  (Kirby  Bauer)  menggunakan  konsentrasi  250 /50 . Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  fraksi  kloroform  memiliki  daya  hambat  terhadap    kedua bakteri uji yakni Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.
Kata  kunci: .  Karang  lunak Sarcophyton sp., Aktivitas  antibakteri, Staphylococcus  aureus , Escherichia coli

## PENDAHULUAN
Berbagai  penelitian  menunjukkan bahwa  biota  laut  memiiki  potensi  yang sangat besar dalam menghasilkan senyawa-senyawa  aktif  yang  dapat digunakan  sebagai  bahan  baku  obat. Sejak  tahun  1980-an,  perhatian  dunia pengobatan  mulai  terarah  ke  biota  laut sebagai  sumber  daya  yang  sangat potensial.  Beberapa  biota  laut  yang diketahui  dapat  menghasilkan  senyawa aktif  antara  lain  adalah  karang  lunak, spons,  moluska,  bryozoa,  tunikata  dan lain-lain  (Ismet,  2007). Sarcophyton sp. merupakan salah satu jenis karang lunak yang  memproduksi  senyawa  kimia alami dan dikenal dengan istilah natural product .
Hasil  penelitian  yang  dilakukan Badria  (1998)  dan  Swant  (2006) menunjukkan  bahwa  adanya  senyawa kimia  aktif  yang  terdapat  pada  karang lunak Sarcopython sp. yang  diduga memiliki aktivitas antibakteri, antifungi, antitumor, neurotoksik, dan anti- inflamantori  yang  bermanfaat  bagi industri  farmasi.  Namun,  penelitian yang  dilakukan  Badria  (1998)  dan Swant  (2006)  tersebut  masih  dalam tahap  ekstrak  kasar,  oleh  karena  itu peneliti melanjutkan penelitian ke tahap uji  antibakteri  untuk  mengetahui  secara pasti  ada  tidaknya  aktivitas  antibakteri dari  karang  lunak Sarcophyton sp. tersebut.

## BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat Sampel  yang  digunakan  adalah  Karang Lunak Sarcophyton sp.  yang  diperoleh dari  teluk  Manado.  Dan  bahan  kimia
yang digunakan bakteri uji Staphylococcus  aureus,  Escherichia coli, aquades  100mL,  etanol  80%, metanol, n-heksan, kloramfenikol, pepton  0,5gr,  beef  ekstrak  0,3gr, natrium  klorida  0,3gr.  Alat  yang digunakan  yaitu  gelas  ukur,  tabung reaksi,  rak  tabung  reaksi,  pipet  tetes, timbangan analitik, corong pisah, batang pengaduk, stirrer (nesco), cawan petri, papper disc 6mm, rotary evaporator (Steroglass  Srike  300), pinset,  incubator  (Incucell),  autoklaf (alp),  mikropipet,  dan  alat  fotografi (Canon D50).

## Pembuatan Ekstrak
Ekstrak  Karang  Lunak Sarcophyton sp. dibuat  dengan  cara  maserasi.  Sampel sebanyak  470gr,  dipotong  kecil-kecil kemudian  direndam  dengan  etanol  1:5 ke  dalam  erlenmeyer,  perlakuan  yang sama dilakukan sebanyak 3x perendaman. Filtrat 1,2,3 yang dihasilkan dicampur menjadi satu kemudian  disaring,  lalu  di  evaporasi menggunakan rotary evaporator, sehingga  diperoleh  ekstrak  kasar  untuk pengujian antibakteri. Untuk pembuatan fraksinasi  ekstrak  kasar  karang  lunak yang  diperoleh  dimasukkan  ke  dalam corong  pemisah,  kemudian  dilarutkan dengan  metanol  80%  kemudian  di tambahan pelarut n-heksan 1:1
kemudian  dikocok  sampai  homogen, selanjutnya  dievaporasi  menghasilakn fraksi  n-heksan.  Perlakuan  yang  sama untuk pelarut kloroform.

## Pengujian Antibakteri
Pengujian  antibakteri  dilakukan  dengan metode  difusi  agar  (Kirby  Bauer).
Larutan  uji  ekstrak  kasar  karang  lunak dipipet  50µL  diresapkan  pada papper disc 6mm. Papper disc yang diresapkan larutan uji dimasukkan ke dalam cawan petri  berisi  bakteri.  Perlakuan  yang sama  dilakukan  pada  fraksi  n-heksan, fraksi  kloroform  dan  fraksi  metanol. Kemudian  diinkubasi  selama  1x24  jam pada  inkubatos  sushu  37 o C.  setelah  itu diobservasi  dan  diukur  diameter  zona bening  (clear  zone)  dari  masing  – masing papper disc (Ortez, 2005).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi Ekstraksi  karang  lunak sarcophyton sp.
dilakukan dengan cara maserasi. Keuntungan  metode  maserasi  adalah tidak  dipanskan,  sehingga  bahan  alam tidak  menjadi  terurai.  Ekstraksi  dengan cara  dingin  memungkinkan  beberapa senyawa  memiliki  kelarutan  terbatas dalam  pelarut  ekstraksi  pada  suhu kamar (Heinrich, 2004). Pelarut
ekstraksi  dengan  metade  maserasi
menggunakan  etanol,  karena  etanol mempunyai sifat selektif, dapat bercampur air dengan segala perbandingan,  ekonomis,  serta  mampu mengekstrak  sebagian  besar  senyawa kimia  yang  terkandung  dalam  simplisia seperki alkaloid, minyak atsiri,
glikosida, kurkumin, kumarin, antrakinon,  flavonoid,  steroid,  damar dan klorofil. Tahapan pemisahan terdiri dari evaporasi serta fraksinasi, penguapan  dengan  evaporasi  pada  suhu
40 o C  adalah  untuk  memperoleh  ekstrak kerign sebanyak 10,3g. kemudian tahap selanjutnya  adalah  dengan  fraksinasi menggunakan  pelarut  organik  yang memiliki  tingkat  kepolaran  berbeda, yaitu n-heksan, kloroform, dan metanol. Ekstraksi cair-cair menggunakan corong pisah  bertujuan  untuk  memisahkan senyawa  yang  memiliki  kepolaran berbeda yang terkandung dalam ekstrak tersebut.  Rendemen  ekstrak  yang  di peroleh  dapat  dilihat  pada  Tabel  1  di bawah ini.
Tabel 1. rendemen ekstrak dan fraksi karang lunak Sarcophyton sp.
No Sampel Rendemen % Warna Sampel 1 Etanol 2,19 % Kuning kecoklatan 2 n-Heksan 16,6 % Hijau pekat 3 Kloroform 6,9 % Kuning telur 4 Metanol 36,7 % Kuning pekat Uji Aktivitas Antibakteri Papper  disc yang  telah  diresapkan dengan larutan uji dimasukkan ke dalam cawan petri yang berisi bakteri.
Dilakukan pengamatan selanjutnya
diukur  diameter  zona  bening  yang  ada di sekeliling cakram. Pengujian antibakteri fraksi n-heksan, fraksi kloroform,  dan  fraksi  metanol  dapat dilihat pada Gambar di bawah ini.
(a) (b)
Gambar  1.  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  kasar,  fraksi  n-heksan,  fraksi kloroform,  dan  fraksi  metanol  karang  lunak Sarcophyton sp . terhadap  bakteri Escherichia coli (a) dan Staphylococcus aureus (b)
Keterangan   :  (1)  Ekstrak  kasar,  (2)  fraksi  heksan,  (3)  fraksi  kloroform,  (4)  fraksi metanol, (5) Kontrol positif, (6) Kontrol negatif.
Tabel 2.  Hasil  pengukuran  zona  hambat  ekstrak  kasar  dan  fraksi  karang  lunak Sarcophyton sp . terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus.
No. Sampel zona hambat (mm) Staphilococus aureus Escherichia coli 1 Ekstrak kasar - - 2 Fraksi heksan - 0,1 3 Fraksi kloroform 0,1 0,1 4 Fraksi metanol - - 5 Kontrol positif 27,17 30,30 Keterangan : (-) Diameter papper disc 6mm.
Pengujian  aktivitas  antibakteri dengan  metode  difusi  cakram  ini  hanya menggunanakan  satu  konsentrasi  yakni
250 /50µL.  pada  masing  –  masing cakram dengan ukuran 6mm diresapkan sebanyak  50µL  yang  mengandung
250 sampel  pada papper  disc . Diinkubasi pada suhu 30 o C selama 1x24 jam.
Fraksi  metanol  karang  lunak Sarcophyton sp.  tidak  menghambat pertumbuhan  bakteri.  Hal  ini  didiga disebabkan  oleh  senyawa  bioaktif  pada metanol  yaitu  senyawa  karotenoid (Harbone, 1987). Sehingga tidak efektif dalam menghambat bakteri uji.
Mekanisme  karotenoid  terhadap  bakteri adalah  dengan  merangsang  sintesis protein  dimna  untuk  antibakteri  yang
1 2 3 6 5 3 4 2 1 6 5 4
baik  salah  satunya  adalah  dengan menghambat sintesis protein. Karotenoid  membentuk  pori  –  pori membran  sel,  sehingga  sel  dapat berkomunikasi melalui pertukaran molekul  kecil,  karotenoid  memfasilitasi komunikasi intersel dengan meningkatkan ekspresi gen yang mengkode  protein.  Namun  karotenoid dapat  memberikan  manfaat  yang  lain yaitu  berfungsi  sebagai  antioksidan yang baik (Rao dan Rao, 2007).
Fraksi  kloroform  menghambat kedua  bakteri  uji  namun  tergolong kategori lemah (0-5mm). Diduga golongan  senyawa  aktif  dalam  fraksi kloroform  adalah  senyawa  fenol  dan terpenoid sehingga aktivitas antibakterinya  diduga  diakibatkan  oleh kandungan  senyawa  tersebut.  Aktivitas tersebut  sangat  efektif  ketika  bakteri dalam tahap pembelahan, dimana lapisan  fosfolipid  di  sekeliling  sel sedang  dalam  kondisi  yang  sangat  tipis sehingga  fenol  dapat  dengan  mudah merusak  isi  sel  (Volk  and  Wheller, 1984).

## KESIMPULAN

## Ekstrak  dan  fraksi  karang  lunak
Sarcophyton sp.  memiliki  aktivitas
dalam mengahambat bakteri uji
staphylococcus  aures dan Escherichia coli. Hambatan  terjadi  pada  fraksi kloroform namun masih  dalam kategori lemah (0-5mm), fraksi kloroform diduga  mengandung  senyawa  fenol  dan terpenoid  yang  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri.

## DAFTAR PUSTAKA
Badria  FA,  Guirguis  AN,  Perovic  S,
Steffen R, Muller WEG, Schroder HC. 1998. Sarcophytolide: a new neuroprotective  compound  from soft coral Sarcophyton glaucum.
Toxicology 131(3):133-143.
Heinrich,  Michael.,  Barnes,  Joanne, Gibbons, Simon, Wiliamso, Elizabeth M. 2004 Fundamental of pharmacognosy and phytotherapi. Hungary: Elevier.
Ismet,  M.S.  2007. Penapisan  Senyawa
Bioaktif  Spons  Spons  Aaptops dan  Petrosia  sp.  dari  lokasi yang berbeda . [Skripsi] Bandung : Pasca sarjana ITB.
Harbonne, J.B. 1987 . Metode Fitokimia .
Edisi kedua. Diterjemahkan oleh K.  Padmawinata  dan  I.  Soediro. Institut Teknologi Bandung. Bandung Rao  AV,  Rao  LG.  2007. Carotenoids and  Human  Health .  Pharmaco Res 55: 207-216. DOI: 10.1016/j.phrs.2007.01.012. Volk  and  Wheller,  1984, Mikrobiologi Dasar , diterjemahkan oleh Soenartono  Adisoemarto,  hal.
137-138,  Erlangga,  Jakarta  Rao
AV, Rao LG. 2007. Carotenoids and  Human  Health .  Pharmaco Res 55: 207-216. DOI: 10.1016/j.phrs.2007.01.012.