## Medika Kartika : Jurnal Kedokteran dan Kesehatan
UJI DAYA ANTIBAKTERI EKSTRAK DAUN SIRIH MERAH  ( Piper crocatum) TERHADAP BAKTERI Porphyromonas gingivalis SEBAGAI TERAPI PENUNJANG PERIODONTITIS KRONIS
(ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST THE LEAF OF RED BETEL EXTRACT ( Piper crocatum) TO Porphyromonas gingivalis AS ADJUCTIVE THERAPY IN CHRONIC

## PERIODONTITIS)
Frita Ferlita Shafri Djohan 1 , Florence Meliawaty 2
1 Bagian Periodonsia, Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi,
Jawa Barat, Indonesia
2 Bagian Bedah Mulut dan Maksilofasial, Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi, Jawa Barat, Indonesia
Email Korespondensi: frita.ferlita@lecture.unjani.ac.id

## ABSTRAK
Porphyromonas  gingivalis merupakan  bakteri  patogen  dalam  penyakit  periodontitis  kronis . Kandungan  senyawa  organik  daun  sirih  merah  ( Piper  crocatum) memiliki  efek  antibakteri. Ekstrak Piper  crocatum diharapkan  dapat  digunakan  sebagai  terapi  penunjang  penyakit periodontitis kronis. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek antibakteri ekstrak Piper crocatum melalui uji daya hambat terhadap Porphyromonas gingivalis. Prosedur kerja dengan membuat  sampel  ekstrak  etanol  80%  daun  sirih  merah  dengan  konsentrasi  2,5%;  5%;  dan 10%  dalam  10  mL  DMSO  10%.  Kultur  biakan  bakteri P.  gingivalis ATCC  33277  di  media Lempeng Agar Darah (LAD). Uji daya hambat dengan metode Kirby Bower pada konsentrasi ekstrak  2.5%,  5%,  10%  pengulangan  sebanyak  tiga  kali  pada  LAD  berisi  bakteri.  Hasil  uji daya  hambat  yaitu  tidak  didapat  zona  bening  pada  konsentrasi  ekstrak  2.5%,  5%,  10%. Kontrol  positif  tidak  ada  dan  kemungkinan  bakteri  terkontaminasi  dapat  menjadi  penyebab zona  bening  tidak  terbentuk.  Ekstrak Piper  crocatum pada  konsentrasi  2,5%,  5%,  dan  10% tidak memiliki efek terhadap bakteri P. gingivalis .
Kata kunci : antibackteri, daun sirih merah , Porphyromonas gingivalis

## ABSTRACT
Porphyromonas  gingivalis  is  a  pathogenic  bacteria  contribute  to  chronic  periodontitis disease.  Antibacterial  effect  found from  organic  compound  of  Red  betel  leaf.  The  extract  of red betel leaf expects as adjunctive therapy to chronic periodontitis. This research purposing to find out antimicrobial effects from the leaf of Red Betel exract to Porphyromonas gingivalis through bacterial inhibitory test. Research procedures are preparation of 80% etanol extract of  red  betel  leaf  in  10  ml  DMSO  10%  with  consentration  2.5%,  5%,  and  10%.
DOI : 10.35990/mk.v5n3.p308-320
DOI DOI

## ARTIKEL PENELITIAN
Porphyromonas gingivalis ATCC 33277 cultured on blood agar. Kirby Bower was a methode to bacterial inhibitory test  with consentration 2.5%, 5%, and 10% and repetition three times in  blood  agar  consist  of  bacteria.  The  result  of  bacteria  inhibitory  test  was  had  none  clear zone  in  consentration  2.5%,  5%,  and  10%.  There  wasn’t  positive  control  and  might  be bacteria  contamination  caused  clear  zone  wasn’t  formed.    Leaf  extract  of  red  betel  with concentration 2.5%, 5%, and 10% did not have effectiveness to the growth of P. gingivalis.
Keywords: antibacterial, piper crocatum, Porphyromonas gingivalis

## PENDAHULUAN
Gusi  merupakan  tempat  sistem  imun merespons  plak  yang  terbentuk  pada permukaan  gigi.  Penyakit  pada  gusi  dan jaringan pendukung lain yaitu periodontitis yang merupakan keberlanjutan dari gingivitis  yang  dipengaruhi  oleh  sistem imun  dan  respons  inflamasi.  Periodontitis mengakibatkan kerusakan struktur pendukung gigi termasuk ligamen periodontal,  tulang,  dan  jaringan    lunak. 1,2
Salah satu bakteri patogen yang berkontribusi  dalam  kerusakan  jaringan periodontal adalah Porphyromonas gingivalis .    Menurut  Grossi et  al. P.
gingivalis merupakan  spesies  dengan  ciri- ciri nonmotile,  asaccharolytic ,  anaerob obligat  dengan  bentuk  kokobasilus  yang hidup dalam koloni. Spesies ini memroduksi  banyak  enzim  yang  hasil metabolismenya secara aktif mampu melawan  protein-protein  dan  memiliki mekanisme  untuk  bertahan  dari  sel-sel pertahanan  tubuh  inang. 3,4 Terapi gold standard periodontitis yaitu dengan skeling dan rootplaning . 2 Selain itu,  terapi penunjang  juga  dapat  dilakukan  untuk
mengoptimalkan  hasil  dari  perawatan penyakit  periodontal.  Terapi  penunjang dari bahan-bahan herbal ada yang efektivitasnya  sudah  teruji  dan  ada  juga yang masih perlu diuji secara in vitro . Daun  sirih  merah  atau Piper  crocatum adalah  tanaman  merambat  yang  termasuk dalam  daftar  tanaman  obat  tradisional. Sirih merupakan tanaman yang berasal dari Peru,  lalu  menyebar  ke  seluruh  wilayah termasuk Indonesia. Bentuk daun berwarna hijau  gelap  dengan  bagian  tulang  daun berwarna  perak,  dan  di  sisi  sebaliknya berwarna ungu. Daunnya mengkilap dengan meruncing di ujung daun  serta tepi daun merata. Panjang daun antara 9-12 cm dan  lebarnya  4-5  cm.  Batang  berbentuk bulat,  berwarna  hijau  keunguan  dan berbuku-buku. 5,6 Dalam  dunia  kedokteran gigi, Piper  crocatum secara  empiris mampu  mengatasi  sakit  gigi,  namun memerlukan penelitian lebih lanjut. Penelitian in  vitro, berkaitan  dengan  efek antibakteri,  kandungan  senyawa-senyawa organik  pada Piper  crocatum yaitu flavonoid dan tanin yang terbukti memiliki aktivasi  antibakteri. 7 Namun,  pada P.
gingivalis belum  diketahui  efektivitasnya.
Maka dari itu penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  efek  antibakteri  ekstrak  daun sirih  merah  terhadap  bakteri P.  gingivalis melalui uji daya hambat bakteri.

## BAHAN DAN METODE
Pembuatan Gel Ekstrak Piper Crocatum
Daun  sirih  yang  digunakan,  terlebih dahulu  disortasi  berdasarkan  warna  dan kesegaran  daunnya.  Daun  sirih  sortasi, diambil 100 gram dan dikecilkan ukurannya,  kemudian  direndam  dengan pelarut  etanol  80%  sebanyak  500  ml (perbandingan  daun:  pelarut  =  1:5)  untuk mengetahui kandungan fitokimianya. Selanjutnya  senyawa  aktif  daun  sirih diekstraksi dengan cara digesti menggunakan pemanasan gelombang mikro ( microwave ) pada suhu 40 o C dengan variasi  waktu 1; 1,5;  2; 2,5; 3  menit. Pada tahap  ini  dilakukan  pengulangan  sebanyak tiga  kali.  Ekstrak  cair  selanjutnya  disaring dan  dipisahkan,  dipekatkan  menggunakan rotary  evaporator pada  suhu  40 o C  selama 60 menit. Pembuatan sampel ekstrak etanol
80%  daun  sirih  merah  dengan  konsentrasi 2,5%;  5%;  dan  10%  dalam  10  mL  pelarut DMSO  10%.  Ekstrak  etanol  daun  sirih merah  selanjutnya  dikarakterisasi  dengan menggunakan metode tabung untuk mengetahui  kandungan  fitokimia  yang terdapat di dalamnya (Tabel 1). 8
Pembiakan bakteri P. gingivalis
Persiapan  media  pembiakan  bakteri dengan  pembuatan  LAD  (Lempeng  Agar Darah) 5%. Sebanyak 20 gram blood  base menggunakan darah domba ditimbang dan dilarutkan  dalam  akuades  sebanyak  500 ml. Media didihkan sampai larut,
selanjutnya dilakukan sterilisasi menggunakan  autoklaf  121˚C  selama  15 menit.  Setelah  kondisi  steril,  media didinginkan sampai suhu 40˚C.
Penambahan darah sebanyak 25 ml (dalam 500  ml)  lalu  dihomogenkan,  selanjutnya dituang  ke  cawan  petri  steril  dan  ditunggu hingga  padat.  Lalu  bakteri P.  gingivalis ATCC  33277  digoreskan  di  permukaan LAD  dengan  metode  kultur.  Media  LAD disimpan pada suhu 2˚C – 8˚C (Gambar 1).

## Gambar 1 Penanaman bakteri P. Gingivalis ATCC 33277 pada LAD.
Penanaman Bakteri P. gingivalis ATCC 33277  dari kwick  stick dengan  cara  kultur pada  media  LAD  sebanyak  5  pelat.  Lalu diinkubasi  pada  suhu  35 ⸰ C  selama  2  x  24 jam.  Perlakuan  menggunakan anaerobic jar dengan  anaerogen  dan  indikator masing-masing  dua  buah.  Selanjutnya dimasukkan  ke  dalam  inkubator  anaerob dengan kadar CO 2 8% (Gambar 2).
Pengecekan  gram  dilakukan  dengan membuat  sediaan  oles  pada  gelas  objek kemudian dikeringkan dan difiksasi. Sediaan  dilakukan  pewarnaan  gram  dan dikeringkan. Pemeriksaan di bawah mikroskop  dengan  pembesaran  1000x, hasilnya  ditemukan  bakteri  gram  negatif batang pendek.
Gambar 2 Kultur Bakteri P. gingivalis pada LAD diinkubasi pada A naerobic Jar.
Uji  kekeruhan.  Kekeruhan  0.5  Mac Farland  dibuat  dengan  mencampurkan BaCl 2 1%  (ml)  dan  H 2 SO 4 1%  (ml).  Lalu melarutkan  koloni P.  gingivalis ATCC 33277  yang  tumbuh  pada  media  LAD  ke dalam  NaCl  fisiologis  0.9%.  Selanjutnya disesuaikan dengan kekeruhan Mac Farland.

## Uji Daya Hambat Bakteri
Uji  daya  hambat  dengan  metode  Kirby bower. Mempersiapkan konsentrasi ekstrak 2.5%,  5%,  dan  10%.  Cakram  kosong dicelupkan  pada  masing-masing  ekstrak. Kultur  bakteri P.  gingivalis pada  media LAD  5%  dikontakkan  pada  cakram  yang telah  berisi  konsentrasi  ekstrak  dan dilakukan pengulangan sebanyak tiga kali. Kontrol  negatif  menggunakan  akuades. Media  uji  dimasukkan  ke anaerobic  jar , dengan  menambahkan  dua  katalisator  dan dua  indikator,  segera  ditutup  agar  suasana anaerob tercapai. Inkubasi dalam anaerobic  jar pada  suhu  37 ⸰ C  dengan kadar C0 2 8% selama 2 x 24 jam.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji fitokimia ekstrak Piper crocatum
Klasifikasi  sirih  merah  menurut Backer (1963)  berasal  dari  kingdom Plantae , divisi Manoliophyta , kelas Magnoliopsida ,
Ordo Piperales ,  Familia Piperaceae ,
Genus Piper ,  dan  spesies Piper  crocatum Ruiz  & Pav . Tanaman sirih  merah tumbuh
subur di tempat yang teduh, berhawa sejuk dengan
sinar  matahari  60-75%  juga  dapat  tumbuh subur di daerah pegunungan. 9
Sebagai  tanaman  obat,  sirih  merah dapat  digunakan  dalam  bentuk  segar, simplisia  maupun  kapsul.  Secara  empiris, tanaman ini dapat menyembuhkan bermacam  jenis  penyakit  seperti  diabetes melitus, hepatitis, batu ginjal, menurunkan kadar  kolesterol,  mencegah  stroke,  asam urat,  hipertensi,  radang  prostat,  radang liver,  radang  mata,  keputihan,  nyeri  sendi, dan  memperhalus. 10 Efek  farmakologi yang  terkandung  di  dalamnya  bermacam- macam,  yaitu  antiinflamasi,  antimikroba dan antifungi, antihiperglikemik, antiproliferasi, antioksidan, tyrosinase inhibitor, antikanker. 11,12
Hasil  uji  fitokimia  ekstrak Piper crocatum pada  penelitian  ini  dapat  dilihat pada  Tabel  1  yang  menunjukkan  adanya golongan  senyawa  alkaloid,  flavonoid, saponin, tanin, triterpenoid dan steroid, dan polifenol.  Sejalan  dengan  hasil  skrining Reveny  (2011)  dan  Moerfiah  (2011) kandungan  kimia  menunjukkan  bahwa daun  sirih  merah  mengandung  senyawa kimia  golongan  flavonoid,  alkaloid,  tanin- polifenol, steroid-terpenoid, dan saponin. 11,13,14
Alkaloid didapat dari ekstrak daun sirih merah  dari  hasil  ekstrak  dengan  pereaksi Meyer  yang  menghasilkan  warna  akhir
kuning.  Memiliki  sifat  basa,  membuat alkaloid mudah terpisahkan dari komponen lainnya  pada  ekstrak. 15 Akimeya et  al (2001)  menjelaskan  bahwa  alkaloid  dapat menjadi agen antibakteri 9
dengan
membunuh  sel-sel  bakteri,  mengganggu susunan peptidoglikan pada sel bakteri dan mencegah  pembentukan  dinding  sel  pada bakteri sehingga bakteri tersebut mati. 16
Tabel 1 Hasil Uji Fitokimia ekstrak daun sirih merah
No Golongan Senyawa Hasil Penapisan Fitokimia Simplisia Ekstrak 1 Alkaloid (+) (+) 2 Flavonoid (+) (+) 3 Saponin (+) (+) 4 Tanin (+) (+) 5 Mono dan Seskuiterpenoid (-) (-) 6 Triterpenoid dan steroid (+) (+) 7 Polifenol (+) (+) 8 Kuinon (-) (-)
Keterangan: (+) = ada senyawa, (-) = tidak ada senyawa.
Dikutip dari : dokumentasi penelitian
Flavonoid  adalah  hasil  ekstrak  daun sirih  merah  yang  dicampur  dengan  amil alkohol,  logam  Mg  yang  larut  dalam  HCl 2N  menghasilkan  larutan  dan  endapan berwarna orange . 17 Struktur  flavon  dan flavanon  memiliki  aktivitas  antioksidan yang  dibentuk  dari  kelompok  hidroksil. 9
Flavonoid juga berfungsi sebagai antibakteri dengan terbukti mampu menghambat  pertumbuhan Streptococcus mutans dalam  konsentrasi  0,1%  dalam ekstrak propolis Trigonas sp . 18
Senyawa  Saponin  dari  ekstrak  daun sirih  merah  didapat  dari  pencampuran ekstrak dengan air panas hingga menimbulkan  busa  yang  bertahan  hingga 30  detik  setelah  ditambahkan  HCl  (dan tidak hilang). 13 Tanin dan saponin
memiliki fungsi melawan
hiperkolesterolemia yang bersifat
antibiotik dan anti bakteri. 9 Senyawa Tanin dari  ekstrak  daun  sirih  merah  didapat  dari uji  ekstrak  dengan  metanol  90%  dan larutan  agar-agar. 17 Didapat  endapan berwarna  cokelat yang menunjukkan adanya  senyawa  tanin  pada  ekstrak tersebut 2 .
Senyawa  steroid  dan  triterpenoid  dari ekstrak  daun  sirih  merah  didapat  dari pencampuran  ekstrak  dengan  reagen  eter, Liebermann-Bouchard.  Hasil  filtrasi  yang diuapkan  menghasilkan  warna  hijau  atau biru  yang  menandakan  adanya  steroid. Sedangkan  warna  merah  atau  ungu menunjukkan adanya senyawa triterpenoid. 19 Senyawa  polifenol  dari
ekstrak daun sirih didapat dari pencampuran ekstrak dengan reagen Akuades, FeCl 3 . Polifenol yang merupakan susunan  antar  senyawa  fenol  memiliki fungsi  sebagai  antibakteri  dengan  cara koagulasi  protein  dan  denaturasi  (Cowen, 1999). 20 Selain  itu  menurut  Rachmawati dan  Ciptati,  etanol  juga  memiliki  sifat antioksidan dengan harga IC 50 sebesar 3,61 ppm. 14

## Peremajaan Bakteri Uji
Penanaman Bakteri P. gingivalis ATCC 33277  dari kwick  stick dengan  cara  kultur
pada  media  LAD  sebanyak  5  pelat.  Lalu diinkubasi  pada  suhu  35 ⸰ C  selama  2  x  24 jam.  Perlakukan  menggunakan anaerobic jar dengan  anaerogen  dan  indikator masing-masing  dua  buah.  Selanjutnya dimasukkan  ke  dalam  inkubator  anaerob dengan  kadar  CO 2 8%.  Pembacaan  hasil kulturterdapat  pertumbuhan  pada  media LAD  berupa  koloni  berwarna  kecokelatan dengan  hemolisis  darah  sempurna  (beta hemolisis) (Gambar 3).
Gambar 3 Hasil kultur LAD hemolisis darah sempurna.
Pengecekan  gram  dilakukan  dengan membuat  sediaan  oles  pada  gelas  objek kemudian dikeringkan dan difiksasi.
Sediaan  dilakukan  pewarnaan  gram  dan dikeringkan. Pemeriksaan di bawah mikroskop  dengan  pembesaran  1000x, hasilnya  ditemukan  bakteri  gram  negatif batang  pendek.  Spesies P.  gingivalis memiliki bentuk nonmotile, asaccharolytic ,  bersifat  obligat  anaerob, dalam  bentuk koloni kokobasilus (Gambar 4).  Pada  media  agar,  koloni  ini  tumbuh
awalnya  berwarna  putih  hingga  krem, namun  setelah  4-8  hari  warnanya  berubah menjadi lebih gelap merah hingga kehitaman. 21,22
Pada  rongga  mulut,  gram  negatif anaerobik P.  gingivalis ditemui  dalam kolonisasi biofilm subgingiva yang berhubungan  pada  penyakit  periodontal, termasuk periodontitis dan peri-implantitis. P.  gingivalis yang  berkoloni  di  dalam jaringan  memiliki  sifat  patogen  yang virulensinya dapat merusak dan
mengganggu  sistem  pertahanan  inang. 12
Faktor  virulensi  bakteri  ini  pada fimbriae , protein-protein cysteine, hemaglutinin , lipopolisakarida  yang  berpotensi  patogen saat berinteraksi dengan sel inang. 22,23
Kekeruhan  Mac  Farland  terbuat  dari campuran  BaCl 2 1%  (ml)  dengan  H 2 SO 4
1% (ml) dengan cara melarutkan koloni P. gingivalis ATCC 33277 yang tumbuh pada media  LAD  ke  dalam  NaCl  fisiologis 0.9%.
Gambar 4 Bakteri Porphyromonas Gingivalis dalam foto mikroskop pembesaran 1000x.
Gambar 5 Uji Kekeruhan. (A) tabung berisi suspensi bakteri yaitu Koloni P. gingivalis dan NaCl 0.9%, (B) Tabung Berisi 0.9% NaCl.
Tabung  A  adalah  suspensi  bakteri yaitu  koloni P.  gingivalis dan  NaCl  0.9%.
Kontrol negatif pada tabung B adalah 0.9% NaCl.  Tabung  A  lebih  keruh  dari  pada tabung  B,  dengan  tingkat  kekeruhan  0,5 Mac  Farland  (Gambar  5).  Hasil  uji kekeruhan  bakteri P.  gingivalis yaitu
terdapat  kepadatan  bakteri  10 8 bakteri/ml pada tabung A.

## Uji Daya Hambat Bakteri
Uji  daya  hambat  dengan  metode  Kirby Bower.  Penggolongan  nilai  Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dengan  melihat zona  hambat  menurut  Davis  dan  Stout
A B
(1971)  dibagi  menjadi:  (1)  tidak  ada  zona hambat,  (2)  lemah  yaitu  zona  hambat kurang  dari  5  mm,  (3)  sedang  yaitu  zona hambat  5-10  mm,  (4)  kuat  yaitu  zona hambat  11-20  mm,  (5)  sangat  kuat  yaitu zona  hambat  21-30  mm.  Kadar  Hambat Minimal (KHM) didapat dengan mengukur diameter zona hambatnya dengan menggunakan mistar (milimeter). 24
Hasil  uji  daya  hambat  ekstrak terhadap bakteri P.  gingivalis dengan  memeriksa zona  bening  pada  agar  dari  ketiga konsentrasi  didapat  0  mm.  Sehingga disimpulkan  bahwa  ekstrak  daun  sirih merah  tidak  memiliki  daya hambat
terhadap P.  gingivalis pada  konsentrasi 2.5%, 5%, dan 10% (Gambar 6).
Penelitian  Lestari  dan  Pujiastuti  (2015) menunjukkan  zona  hambat  ekstrak  daun sirih merah terhadap P. gingivalis memiliki rata-rata  diameter  10,34  mm. 25 Penelitian Pujiastuti,  dkk  (2013)  menjelaskan  jika dibandingkan  antara  ekstrak  daun  sirih merah  dan  ekstrak  daun  sirih  hijau terhadap P.  gingivalis ,  zona  hambat  yang terbesar didapat dari uji ekstrak daun sirih hijau  dengan  rata-rata  diameter  zona hambat  22,5613  mm  dan  standar  deviasi 2,80705.
Gambar 6 Uji daya hambat ekstrak sirih merah terhadap P. gingivalis 2,5%, 5%, dan 10%.
Pada penelitian ini KHM dari ekstrak Piper  crocatum terhadap  bakteri P. gingivalis hasilnya  adalah  tidak  memiliki zona  hambat.  Kontrol  positif  antibiotik untuk  bakteri  spektrum  gram  negatif  tidak
dilakukan,  Kontrol  positif  ini  diharapkan dapat  membentuk  zona  bening.  Hal tersebut  sebagai  tolak  ukur  terhadap kelompok  uji.  Kontrol  positif  apabila terdapat zona bening, berfungsi juga untuk
mengklarifikasi  mengenai  bakteri  selama penelitian dalam kondisi laik uji.
Berikutnya, alasan tidak terbentuknya zona bening pada kelompok uji, dapat disebabkan  karena  kualitas  bakteri P. gingivalis ATCC 33277 yang kurang baik.
Peremajaan  bakteri  pada  penelitian  telah dilakukan  pengulangan  sebanyak  4  kali sesuai  dengan  prosedur  pembiakan  bakteri P.  gingivalis dan  hanya  satu  peremajaan yang berhasil.
Konsentrasi ekstrak 2.5%, 5%, dan 10% pada  penelitian  juga  dapat  mempengaruhi efektivitas  terhadap  bakteri P.  gingivalis .
Konsentrasi  ekstrak  dengan  prosentasi kecil, memiliki kemungkinan tidak memiliki  efek  antibakteri.  Ekstrak  daun sirih  merah  dengan  konsentrasi  100% memiliki  rata-rata  diameter  zona  hambat 22,5613  mm. 25 Pada  konsentrasi  10% ekstrak Piper crocatum efektif
menghambat  pertumbuhan  bakteri P.
gingivalis . 16 Keterbatasan  peneliti  juga dapat  menjadi  faktor  penyebab  penelitian uji  daya  hambat  ekstrak Piper  crocatum terhadap  bakteri P.  gingivalis tidak mencapai terbentuknya zona hambat.

## KESIMPULAN
Ekstrak Piper crocatum dengan konsentrasi  2.5%,  5%,  dan  10%  tidak memiliki  daya  antibakteri  terhadap  bakteri P. gingivalis . Uji KHM tidak terdapat zona
hambat  pada  kelompok  uji  dan  kelompok kontrol negatif.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Pernyataan penulis bahwa tidak terdapat  konflik  kepentingan  dalam  artikel ilmiah yang ditulis.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  disampaikan kepada  LPPM  selaku  pemberi  dana  dan sponsor, Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Unjani, Laboratorium Farmasi,  Fakultas  Farmasi  Unjani  yang telah  membantu  penelitian  dan  sarana penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
1.   Rateitschak  K,  Wolf  H,  Hassel  T. Periodontitis. In: Color Atlas of Dental Medicine  Periodontology.  3rd  ed.
Stuttgart: Thiem; 2011. p. 95–8.
2.   Newman  M,  Takei  H,  Klokkevold  P, FACD,  Carranza  F.  Newman  and Carranza’s  Clinical  Periodontology Thirteenth Edition. J Chem Inf Model. 2017;53(9):1689–99.
3.   Fiorillo  L,  Cervino  G,  Laino  L, D’Amico C, Mauceri R, Tozum TF, et al. Porphyromonas gingivalis, Periodontal and Systemic Implications:  A  Systematic  Review. Dent J [Internet]. 2019 Dec
11;7(4):114. Available from: https://www.mdpi.com/2304-
6767/7/4/114.DOI: 10.3390/dj7040114 4.   Craig  RG,  Kamer  AR.  A  Clinician’s
Guide to Systemic Effects of Periodontal  Diseases  [Internet].  Craig RG, Kamer AR, editors. A Clinician’s
Guide to Systemic Effects of Periodontal Diseases. Berlin, Heidelberg: Springer Berlin Heidelberg;  2016.  Available  from: http://link.springer.com/10.1007/978- 3-662-49699-2.  DOI:  10.1007/978-3- 662-49699-2 5.   Suri  MA,  Azizah  Z,  Asra  R.  A Review: Traditional Use,
Phytochemical  and  Pharmacological
Review  of  Red  Betel  Leaves  (Piper
Crocatum  Ruiz  &amp;  Pav).  Asian  J Pharm  Res  Dev  [Internet].  2021  Feb 15;9(1):159–63.
Available from: https://ajprd.com/index.php/journal/art icle/view/926. DOI: 10.22270/ajprd.v9i1.926 6.   Kanifah  U,  Lutfi  M,  Susilo  B,
Keteknikan J, Fakultas P, Pertanian T, et  al.  Karakterisasi  ekstrak  daun  sirih merah (Piper crocatum) dengan metode ekstraksi non-thermal berbantukan ultrasonik (kajian
perbandingan  jenis  pelarut  dan  lama ekstraksi).  Vol.  3,  Jurnal  Bioproses Komoditas Tropis. 2015.
7.   Lavu  V,  Venkatesan  V,  Rao  S.  The epigenetic  paradigm  in  periodontitis
pathogenesis. J Indian Soc Periodontol [Internet]. 2015;19(2):142–9. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/arti cles/PMC4439621/. DOI: 10.4102F0972-124X.145784 8.   Januarti IB, Wijayanti R, Wahyuningsih  S,  Nisa  Z.  Potensi Ekstrak  Terpurifikasi  Daun  Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz &amp;Pav)  Sebagai  Antioksidan  Dan
Antibakteri. JPSCR  J Pharm Sci Clin Res  [Internet].  2019  Nov  1;4(2):60. Available from: https://jurnal.uns.ac.id/jpscr/article/vie w/27206. DOI:
10.20961/jpscr.v4i2.27206
9.   Wulandari  W.  Review:  Black  Pepper (Piper  Nigrum  L.)  Botanical  Aspects, Chemical  Content,  Pharmacological Activities.  Int  J  Pharm  Sci  Med [Internet].  2021  Jan  21;6(1):83–91.
Available from: https://ijpsm.com/Publish/Jan2021/V6 I109.pdf. DOI:
10.47760/ijpsm.2021.v06i01.007
10.  Dewi  SR,  Nugroho  WA,  Hendrawan Y,  Nisa  GK.  Karakterisasi  ekstrak etanolil  daun  sirih  merah  (piper crocatum).  J  Chem  Inf  Model. 2019;53(9):1689–99.
ISBN:
9788578110796
11.  Moerfiah,  Supomo  FDS.  Pengaruh ekstrak  daun  sirih  merah  (Piper  cf.
fragile Benth.) terhadap bakteri penyebab sakit gigi. Ekologia. 2011;11(1):30–5.
12.  Zuhrotun  RKB.  Potensi  Khasiat  Obat Tanaman Marga Piper : Piper
nigrumL.,  Piper  retrofractum  Vahl., Piper betle Linn., Piper cubeba L., dan Piper  crocatum  Ruiz  &  Pav.  J Farmaka. 2018;16(3):204–9.
13.  Reveny  J.  Antimicrobial  Activity  of the  Extract  and  Fraction  of  Red  Betel Leaf  (Piper  betle  Linn.).  J  ILMU DASAR. 2011;12(1):6–12.
14.  Parfati N, Windono T. Media
Pharinaceutica  lndonesiana.  Media Pharinaceutica
lndonesiana. 2016;1(2):106–15.  ArXiv  ID:  2527- 9017
15.  Tawakkal,  Idrus  I,  Kurniawan  F.
Isolasi senyawa alkaloid ekstrak etanol daun  sirih  popar  (Ficus  septica BURM.F) menggunakan spetrofotometer  infra  merah.  J  Akrab Juara. 2021;6(1):54–62.
16.  Herryawan  H,  Sabirin  IPR.  The effectiveness  of  red  betel  leaf  (Piper crocatum)  extract  against  periodontal pathogens. Bali Med J [Internet]. 2018 Oct 3;7(3).
Available from:
https://www.balimedicaljournal.org/in dex.php/bmj/article/view/1173.  DOI:
10.15562/bmj.v7i3.1173
17.  Beon  AS,  Geovani  K,  Leki  B,
Program  ),  Sarjana  S,  Stikes  F,  et  al.
Identifikasi Komponen Fitokimia dalam  Ekstrak  Daun  Sirih  Merah (Piper crocatum).
18.  Sabir A. Aktivitas antibakteri flavonoid propolis Trigona sp terhadap bakteri Streptococcus mutans (in vitro) (In  vitro  antibacterial  activity  of flavonoids Trigona sp propolis against Streptococcus mutans). Dent J (Majalah  Kedokt  Gigi)  [Internet]. 2005 Sep 1;38(3):135. Available from: http://e- journal.unair.ac.id/index.php/MKG/art icle/view/1132.
DOI:
10.20473/j.djmkg.v38.i3.p135-141
19.  Puspita  PJ,  Safithri  M,  Sugiharti  NP. Antibacterial Activities of Sirih Merah ( Piper  crocatum )  Leaf  Extracts.  Curr Biochem. 2019;5(3):1–10. DOI: 10.29244/cb.5.3.1-10
20.  Afiff F., Amilah S. Efektivitas ekstrak daun mengkudu (Morinda citrifolia L.) dan  daun  sirih  merah  (Piper  crocatum Riuz  &  Pav)  terhadap  zona  hambat pertumbuhan  Staphylococcus  aureus. STIGMA  J  Mat  dan  Ilmu  Pengetah Alam  Unipa.  2017;10(01):12–6.  DOI: 10.36456/stigma.vol10.no1.a635
21.  Holt  SC,  Kesavalu  L,  Walker  S, Genco  CA.  Virulence  factors  of Porphyromonas gingivalis. Periodontol  2000  [Internet].  1999 Jun;20(1):168–238.  Available  from: https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.
1111/j.1600-0757.1999.tb00162.x
22.  Enersen  M,  Nakano  K,  Amano  A. Porphyromonas  gingivalis  fimbriae.  J Oral  Microbiol.  2013;5(1).  DOI: 10.3402/jom.v5i0.20265 23.  Septiwidyati  TR,  Bachtiar  EW.  The Role  of  Porphyromonas  gingivalis Virulence  Factors  in  Periodontitis Immunopathogenesis.  Dentika  Dent  J [Internet].  2020  Jul  7;23(1):6–12.
Available from: https://talenta.usu.ac.id/dentika/article/ view/3421. DOI: 10.32734/dentika.v23i1.3421 24.  Alibasyah  ZM,  Ningsih  DS,  Ananda
SF. Daya Hambat Minuman Probiotik
Yoghurt Susu Sapi Terhadap Porphyromonas  Gingivalis  Secara  In Vitro.  J  Syiah  Kuala  Dent  Soc. 2018;3(2):65–75. ISSN: 2502-0412 25.  Dwianggraini R, Pujiastuti W,
Ermawati  T.  Perbedaan  Efektifitas Antibakteri Antara Ekstrak Daun Sirih Merah  (Piper  crocatum)  dan  Ekstrak Daun  Sirih  Hijau  (Piper  betle  L.) Terhadap  Porphyromonas  gingivalis. STOMATOGNATIC-  J  Kedokt  Gigi [Internet].  2015;10(1):1–4.  Available from:
https://core.ac.uk/download/pdf/29794 6259.pdf