## DIFFRACTION: Journal for Physics Education and Applied Physics
http://jurnal.unsil.ac.id/index.php/Diffraction e-ISSN: 2685-7723
Deteksi  Tumor  Payudara ( Breast  Benign  Diseases ) B e r d a s a r   Interaksi Eritrosit Akibat Perubahan Ion-Ion Dalam Darah-Edta Menggunakan Spektrofotometer Uv-Vis
Nurlaili Sudita Lestari 1 , Kuncoro Asih Nugroho 1* , Ngadikun 2
1 Fisika, Universitas Negeri Yogyakarta, Yogyakarta, Indonesia 2 Biokimia, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, Indonesia

## Abstrak
Tujuan  dilakukannya  penelitian  ini  adalah  pertama, mengetahui  perbedaan  pola interaksi  eritrosit  dalam  darah- EDTA  antara  penderita  tumor  payudara  dan  subjek  normal ditinjau  dari  hukum  Coulomb.  Kedua,  mengeteahui  ada tidaknya  perbedaan  pola  absorbansi  eritrosit  berdasarkan hasil  analisis  parameter  deterministik  dan  stokastik. Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan  Juni-November  2021. Lokasi  penelitian  berada  di  gedung  Radioputro  dan  gedung PAU  Pascasarjana  UGM.  Pola  Absorbansi  Eritrosit  dalam darah-EDTA  dideteksi  menggunakan  spektrofotometer  UV- Vis  dengan  panjang gelombang  ( λ )  560nm.  Subjek  penelitian yang digunakan adalah33 subjek normal dan 32 subjek tumor payudara.  Sampel  darah  sebanyak  3  ml  diambil  dari  lengan bawah subjek penelitian. Sampel darah ini digunakan untuk uji  pola  absorbansi  sebanya  550 μ L,  dan  sisanya  untuk pengujian darah rutin dan metode Westergren. Hasil data dari uji spektrofotometer berupa nilai absorbansi terhadap waktu. Nilai absorbansi dianalisis menggunakan google colab dengan bahasa pemrograman python . Uji beda parameter deterministic  dan  stokastik  pola  absorbansi  eritrosit  kedua kelompok  penelitian  menggunakan Mann-Whitney .  Pola absorbansi  eritrosit  dalam  darah-EDTA  yang  tidak  menentu pada  kedua  kelompok  menyebabkan  data  sulit  dianalisis berdasarkan  hukum  Coulomb.  Analaisis  uji  beda  parameter deterministik  ( d )  dan  stokastik  ( s )  dari  kedua  kelompok diperoleh signifikansi  uji  beda 𝑑 1 , 𝑑 2 , 𝑑 3 , 𝑠 1 , 𝑠 2 ,  dan 𝑠 3 adalah sebesar  2.67 × 10 − 7 , 1.68 × 10 − 5 , 6.22 × 10 − 5 , 0.181, 3.94 × 10 − 7 dan 9.95  ×  10 − 8 .  Berdasarkan  hasil  uji  beda  tersebut,  hanya  ada satu parameter  yang  tidak  berbeda  signifikan    yaitu d 3 ( P > 0.05).
Masuk: 2 Januari 2023 Diterima: 18 Maret 2023
Diterbitkan: 30 Juni 2023 Kata kunci: Absorbansi, Eritrosit, Hukum
Coulomb, Tumor Payudara PENDAHULUAN Kanker sebagai salah satu penyebab angka kematian di Indonesia meningkat setiap tahunnya. Di Indonesia, kanker merupakan penyebab  ketiga  dari  banyak  kasus kematian  yang  terjadi  setelah  jantung dan stroke (Anonim, 2020; Rachmansyah,  2022;  Putri,  2015).
Tingkat  mortalitas  penderita  kanker sangat tinggi disebabkan oleh kesembuhan  pasien  kanker  sangat rendah.
Berbagai faktor yang menyebabkan  proses  penyembuhan kanker gagal diantaranya yaitu: masalah  kanker                tidak  terdeteksi sedini  mungkin  sehingga    biasanya kanker terdeteksi  saat  sudah stadium
*Korespondensi: Kuncoro Asih Nugroho       kuncoronugroho@uny.ac.id         Universitas Negeri Yogyakarta, Jl. Colombo Yogyakarta No.1 Daerah Istimewa Yogyakarta
DIFFRACTION: Journal for Physics Education and Applied Physics 5(1) Juni 2023
lanjut, dan proses penanganan terlambat (Nugroho, 2018). Lima faktor yang berpengaruh pada kasus kematian akibat  kanker  lebih  dari  30%  yaitu indeks  massa  tubuh  tinggi,  kurang biaya penyembuhan yang relatif mahal,  konsumsi  buah  dan  sayur, kurang  aktivitas  fisik,  penggunaan rokok, dan konsumsi alkohol berlebihan.  Selain  itu  kanker  juga mengakibatkan  kematian sebesar  20% kasus di negara berpenghasilan rendah dan menengah disebabkan oleh infeksi virus, seperti virus hepatitis B/ hepatitis C dan  virus human  papilloma (Budijanto, 2015).
Kanker dan tumor berkaitan erat. Kanker merupakan tumor yang bersifat ganas  sehingga  bisa  menyebar  ke bagian  tubuh  lain  secara  cepat  dan merusak  sel  sehat  yang  berada disekitarnya. Tumor merupakan benjolan  atau  jaringan  yang  tumbuh secara  tidak  normal.  Tumor  dapat bersifat  jinak  maupun  ganas.  Jenis tumor  yang  sifat  jinak  tidak  beresiko menyebar  ke  jaringan  atau  bagian tubuh  lain  sehingga  tumor  jenis  ini dianggap  tidak  berbahaya.  Berbeda dengan  tumor  yang  bersifat  ganas, tumor  ini  dapat  menyebar  ke  bagian tubuh  lain  dan  membentuk  tumor- tumor  baru  (Fadli,  2021;  Septarini, 2014).
Breast  Benign  Diseases (BBD) atautumor payudara merupakan masalah  yang  umum  terjadi  pada payudara  wanita.  Tumor  payudara adalah  benjolan  yang  berada  di payudara.  BBD  lebih  sering  terjadi dibandingkan  kanker  (maligna)  yaitu kejadiannya 10 kali lipat dan yang telah mengalami  perawatan  sekitar  30% (Sagma  dkk,  2013;  Lacey  dkk,  2009). Berbeda halnya dengan kanker payudara,  Tumor  payudara  tidak mengancam nyawa penderitanya, namun  ada  beberapa  jenis  tumor payudara  yang  dikemudian  hari  dapat berkembang  menjadi  kanker  payudara (ACS, 2019).
Berberapa metode deteksi kanker saat  ini  terus  dikembangkan  guna melacak  keberadaan  kaker  sedini
mungkin.  Metode  sebagai  standar deteksi marker kanker yang dilakukan untuk diagnosis sampai sekarang yaitu dengan biopsy jaringan,  dan/atau re- biopsy (Colomer dkk, 2018). Metode ini membutuhkan  biaya  yang  besar.  Oleh sebab  itu  usaha  pencarian  metode untuk  deteksi  alternatif  terhadap tumor  payudara  dengan  biaya  relatif murah  merupakan  suatu  kebutuhan yang  tidak  dapat  ditunda.  Selain  itu, metode biopsy sulit  diterapkan  pada stadium  awal.  Pemeriksaan  rutin  dan deteksi  dini  bila  diterapkan  bisa meningkatkan  peluang  pasien  untuk sembuh  sehingga  tingkat  morbilitas dan mortalitas dapat ditekan.
Pemeriksaan  payudara  dapat dilakukan  secara  rutin  dan  mandiri yaitu  dengan  cara  Periksa  Payudara Sendiri  (SADARI). Cara ini merupakan teknik pemeriksaan untuk mengetahui ada  tidaknya  benjolan  pada payudara wanita  (Ayu,  2016).  Metode diagnosis yang    pernah    dilakukan    yaitu Westergren  dan  deteksi biomarker dengan  sampel  darah  utuh.  Masing- masing  metode  memiliki  kelemahan. Metode  Westergren  dilakukan  dengan pemeriksaan  laju  endap  darah  atau LED.  Hasil  LED    dari    metode  ini kurang  spesifik  dan  sensitif  terhadap setiap  jenis  penyakit,  sehingga  belum mampu membedakan peradangan dengan  kanker.  Kedua  kasus  ini memiliki  nilai  LED  yang  sama-sama tinggi, sehingga hanya dengan  analisis byopsy yang bisa membedakan keduanya (Nugroho, 2018). Metode deteksi biomarker sering  digunakan untuk  deteksi  dini penyakit.  Metode  deteksi biomarker dengan sampel plasma.  Plasma merupakan biological  matrix yang mengandun biomarker paling  sulit dideteksi dengan proteomic (umumnya mengacu  pada  analisis  eksperimental protein  skala  besar  dan  proteom, tetapi  sering  mengacu  secara  khusus untuk pemurnian protein dan spektrometri  massa)  karena  didalam plasma  terdapat    protein  sangat komplek  dengan  rentang konsentrasi yang lebar (Faria dkk, 2017).
Biomarker atau penanda biologis dalam konteks biomedis adalah indikator terukur dari beberapa keadaan atau kondisi biologis. Biomarker pada kanker berupa protein tertentu  dalam  darah  yang meningkat dengan  adanya  kanker  (Nugroho, 2018).  Protein  yang  terkandung pada kanker  memiliki  muatan  negatif sehingga bisa mempengaruhi ion-ion di sekitar eritrosit. Protein dalam medium  kontinu  yang  berbeda  jenis akan  menimbulkan efek yang berbeda terhadap nilai  potensial  zeta  eritrosit (sel darah merah). Penyebab perubahan  nilai  potensial  zeta  yaitu karena  terjadi  perubahan  jumlah  ion- ion dan atau protein berbuatan. Ion-ion dan  atau  protein  berbuatan  bisa meninggalkan  dan  masuk  ke  dalam lapisan  ganda  listrik  (Nugroho,  2018). Perubahan  jumlah  keduanya  pada lapisan  ganda  listrik  menyebabkan perubahan nilai zeta poten sial.
Lapisan  ganda  listrik  terbentuk akibat  adanya  gaya  coulomb  antara Ion  dalam  dengan  muatan  pada permukaan eritrosit.
Permukaan membrane eritrosit mengandung group  karboksil  asam  sialic  yang memiliki  muatan  negatif  (Fernandes, Cesar,  dan  Barjas-castro,  2011). Muatan  pada  permukaan  eri  trosit akan  berinteraksi  dengan  ion-ions dalam plasma. Ion-ion yang berlawanan tanda (counterion) dengan muatan  pada  permuakan  eritrosif akan  ditolok  oleh  muatan  pada permukaan  eritrosit.  Sebaliknya  ion yang  sama  tanda  (coion)  akan  ditarik oleh muatan pada permukaan eritrosit (Prakash,  Mishra,  Malviya,  sharma, 2014).  Kejadian  ini  terjadi  akibat adanya gaya Coulomb atara ion dalam plasma dengan muatan pada permukaan eritrosit.
Interaksi  atara  ion  dalam plasma  dengan  muatan  eritrosit mengakibatkan  terbentunya  lapisan ganda listrik disekitar eritrosit. Lapisan ganda listrik terbentuk dalam rangka  menetralkan  muatan  dari partikel  (eritrosit)  (Prakash,  Mishra, Malviya, sharma, 2014).
Metode  spertofotometri  diguna-
kan  untuk  mendeteksi  keberadaan suatu  materi  dalam  larutan.  Metode ini dapat mengidentifikasi dan menghitung  jumlah  zat  yang  belum diketahui  dalam  laruatan  (Dadi  dan Yasir).  Pada  teknik  spektrofotometri mengukur  intensitas  sinar  yang diserap  materi  dari  seberkas  sinar yang melewati materi tersebut (Rejini dan Dileep, 2017).
Tahun            1997,            telah dimulai  penelitian  pengukuran  LED menggunakan matode spektrofotometri. Penelitian ini dilakukan untuk meningkatkan spesifisitas dari pengukuran LED. Pengukuran dilakukan  dengan  mengamati  proses terbentuknya bzp (perubahan
kejernihan  pada  bagian  atas  pada darah-  EDTA).  Penelitian  tersebut menunjukkan  bahwa  terdapat  kaitan antara  terjadinya  perubahan  kejernihan terhadap darah-EDTA dengan terbentuknya    bzp  (Ngadikun,  1998). Penelitian  dengan  metode  yang  sama dilanjutkan  dengan  subjek  kanker payudara  (2018 – 2019).  Berdasarkan hasil  penelitian  tersebut  menunjukkan bahwa  sensitivitas  dan  spesifisitas metode  spektrofotometri  untuk  kanker kolorektal, leukimia, dan kanker payudara masing-masing 100%.
Penelitian lain yang relevan yaitu disertasi  penelitian  tentang  pola  proses agregasi sel dalam darah-EDTA dengan metode spektrofotometri pada penderita kanker    ovarium    (Nugroho,    2018). Penelitian    ini    mengkaji    tentang mekanisme  agregasi  eritrosit  dalam darah-EDTA pada pasien kanker ovarium  berdasarkan  hukum  Coulomb. Dari  penelitian  ini  disimpulkan  bahwa adanya  keberhasilan  dalam  mendeteksi interaksi eritrosit  dengan menggunakan spektrofotometer dengan panjang gelombang 560 nm.
Metode spektrofotometri UV-Vis memiliki  kelebihan  yaitu  hasil  yang nantinya  diperoleh  akan  bersifat kuantitatif sehingga  bisa lebih akurat hasilnya  (Lelangan at  al., 2016). Penelitian  ini  mengkaji  spektrum absorbansi cahaya pada sampel darah penderita tumor payudara dan sampel darah  orang  normal (subjek  kontrol)
dengan menggunakan metode
spektrofotometri.  Pengamatan  dina- mika  agregasi  sel  dalam  darah-EDTA dilakukan  melalui  perubahan  nilai absorbansi .
METODE  PENELITIAN A. Jenis,  Tempat,  dan  Waktu
Penelitian
Penelitian ini menggunakan metode eksperimen dengan mengamati nilai  absorbansi  eritrosit  dalam  darah- EDTA  pada  dua  kelompok  uji  yaitu penderita  tumor  payudara  dan  subjek normal (sehat)  sebagai kelompok kontrol.  Pengambilan  data  dilakukan pada  bulan  Juni  2021  sampai  dengan bulan November 2021.
Proses pengambilan  sampel  darah  subjek tumor  payudara  yaitu  di  Rumah  Sakit Umum  Pusat  Dr.  Sardjito  Yogyakarta dan penelitian sampel darah dilakukan di  Radioputro  dan  Gedung  PAU Pascasarjana Universitas  Gajah  Mada. Alur penelitian disajikan pada Gambar 1.

## Gambar 1. Alur penelitian
B. Bahan dan

## Instrumen Penelitian
Bahan    yang    digunakan      adalah sampel darah manusia dari 32 penderita tumor  payudara  dan  33  subjek  normal.
Sampel  yang  dibutuhkan  adalah  darah vena  lengan  sebanyak  3    mL.  Darah sebanyak  550 μ L  akan  dipergunakan untuk  meneliti  pola  absorbansi  dengan metode spektrofotometri, sisanya digunakan untuk pengujian darah rutin dan metode Westergren.
Spektrofotometer  yang  diguna- kan  pada  penelitian  ini    adalah spektrofotometer UV-1600 merek VWR  yang  telah  dihubungkan  ke komputer  dari  port  interface  ADC ( analog  to  digital  converter ),  Cuvette Disposable  semi  Micro  1,5  cc  merk Brand,  Rak  Tabung  Stainless,  Spuit Injeksi merk Terumo 10 cc, Vacutainer-K2 EDTA 5.4 mg Volume 3 cc  merk  BD,  Darah  vena  manusia normal dan penderita
Tumor Payudara, Tabung  Westergren (untuk pengamatan  b zp ),  Kertas  Tissue, Blue Tips merk  Brand,  Sarung  Tangan latex, Jas  Lab,  Pipet  Mikro  (merk Acura  seri  821,  interval  skala  200 – 1000  cc,  skala  terkecil  10  cc),  Plester Sancoplas,  Tissue  Swap,  Tutup  karet,
Laptop HP dengan spesifikasi
processor AMD  A6-7310  APU  Radeon R4, RAM 2 GB, Google Colab (Program Python ) dan M. Wave Profesional.
C. Teknik Pengambilan Sampel
Pengambilan sampel dapat dilakukan  setelah  didapatkan Ethical
Clearance (EC).  Permohonan  EC  ini dilakukan  ke  Komisi  Etik  Penelitian Kedokteran  dan  Kesehatan  ( Medical and Health Research Ethics Committee ) Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada (UGM). Sebelum subjek penelitian  diambil  sampel  darahnya, terlebih  dahulu  subjek  penelitian menyetujui informed  consent .  Darah sampel tumor payudara diperoleh dari pasien  rawat  jalan dan  pasien  rawat inap  yang  berada  di  Rumah  Sakit Umum  Pusat  (RSUP)  Dr.  Sardjito Yogyakarta,  sedangkan  untuk  subjek normal  diambil  dari  masyarakat umum  yang  telah  memenuhi  kriteria inklusi dan eksklusi.
Kriteria        inklusi        untuk kelompok  subjek  tumor  payudara adalah pasien sudah mendapat
Subjek Normal Subjek Tumor Payudara Rumah sakit Darah utuh Uji absornasi Uji LED Darah rutin Analisis uji beda antara Subjek Normal dan Subjek Tumor Payudara
perlakuan biopsy atau  tes  Patologi
Anatomi  (PA)  yang  menjadi  bukti bahwa darah tersebut benar merupakan  sampel  darah  penderita tumor payudara bukan dari jenis tumor lain, tidak menderita penyakit diabetes militus, dan tidak mengalami penyakit berat  lain.  Subjek  normal  yang digunakan  dengan  kriteria  inklusi tidak  memiliki  riwayat  keturunan kanker  atau  tumor,  tidak  sedang mengidap  tumor  atau  kanker,  tidak pernah  menderita  penyakit  kronis, tidak sedang  haid,  subjek  sehat  saat pengambilan  sampel  yang  dibuktikan dengan  surat  keterangan  sehat  dari dokter. Subjek  penelitian  merupakan wanita  dengan  rentang  usia  17-60 tahun.  Subjek  penelitian  menyetujui angket  kesanggupan  ( inform  concent ) menjadi  subjek  untuk  dilakukan pengambilan  sampel  darah  untuk keperluan penelitian dan pihak Peneliti  akan  menjamin  kerahasian dari data yang diberikan.
Sampel Darah Vena-EDTA penderita tumor payudara dan sampel normal yang akan di uji menggunakan alat  spektrofotometer  terlebih  dahulu dibagi-bagi  sesuai  kebutuhan.  Sampel sebanyak ± 1 mL digunakan untuk uji spektrofotometer,  1  mL  digunakan untuk  pengujian  dengan  metode Westergren. Sisanya dibunakan untuk pengujian darah rutin.
Data nilai absorbansi dari spektrofotometer  yang  masih  analog akan direkam dalam  bentuk  digital menggunakan
komputer.
Output spektrofotometer  dihubungkan  dengan komputer yang telah dilengkapi aplikasi M.Wave . Nilai absorbansi direkam setiap sekon  selama  1800  sekon  dengan  suhu ruang  pada  saat  pengukuran  adalah 27 0 – 28 0 Celcius.    Proses    dalam pengambilan data menggunakan spektrofotometer adalah sebagai berikut: 1. Mempersiapkan  peralatan  peng- ambilan data menggunakan spektrofotometer seperti skema pada Gambar 2.
2. Mulai menyalakan spektrofoto-
meter, kemudian menunggu selama 20 menit dalam proses warm-up .
3. Jika proses warm-up selesai dilanjutkan dengan membuka program M.Wave pada komputer.
4. Dilakukan pengaturan pada lembar kerja  dengan  memilih Photometic Mode pada  Abs, Wavelength pada 560,0 nm, Delay pada 0,0s, Interval pada  7,0s. Scan time pada 1s, Path length pada  10  mm.  Kemudian bagian report  Output diatur  agar hasil  keluaran  data  absorbansi berupa Microsoft Excel .
Gambar 2. Skema peralatan pengambilan data
5. Menyiapkan Cuvette disposable semi micro kosong sebagai blanko (proses kalibrasi).  Kemudian  memilih  icon zero  base sampai  menunjukkan angka 0,000. Selanjutnya Cuvette itu dikeluarkan  kembali  untuk  diisi dengan  darah sampel  sebanyak  550 μL dan  dimasukkan  kembali  ke dalam cell holder spektrofotometer. Memilih icon  measurement untuk memulai proses absorbansi.
6. Data  akan  muncul  setelah  proses pengukuran selesai.

## D. Pengolahan Data
Data  hasil  pengukuran  disimpan dalam  folder  berdasarkan  kelompok subjek  penelitian  yaitu  subjek  normal dan subjek tumor payudara. Nama file setiap data subjek penelitian disimpan dalam  kode  tertentu  yaitu  subjek normal diawali  dengan            huruf  N  dan subjek tumor payudara diawali dengan BBD,  sedangkan  kode  angka  adalah menunjukan  urutan  data.  sebagai contoh  N5 untuk  subjek  normal  ke-5
dan  BBD1  untuk  subjek  tumor payudara ke-5.
E. Analisis Data E1. Karakteristik Subjek Penelitian Kelompok kontrol (subjek
normal)  dan  subjek  penderita  tumor payudara  memiliki  karakteristik  yaitu usia,  jenis  kelamin  (laki-laki  dan perempuan),  dan  jumlah  eritrosit. Berdasarkan  masing-masing  kriteria tersebut  akan  dihitung  nilai  mean, median, dan min-max. Persebaran data yang  terdidtribusi  normal  angka eritrosit  akan  ditunjukkan  dengan mean ± standar deviasi, sedangkan data yang  tidak  terdistribusi  normal  akan ditunjukkan dengan median.
Uji  normalitas  untuk  kriteria usia  dan  angka  eritrosit  dari  kedua kelompok  subjek  penelitian  akan  diuji dengan menggunakan tes Shapiro-Wilk (jumlahnya  subjek  <  50)  dengan aplikasi  SPSS.  Data  usia  dan  angka eritrosit terdistribusi normal, jika nilai P (taraf  signifikasi  >  0.05).  Data  yang terdistribusi  tidak  normal  diuji  beda menggunakan  tes Mann  Whitney , sedangkan  data  yang  terdistribusi normal  diuji  menggunakan  uji  T. Kriteria  usia  dan  angka  eritrosit  dari kedua  kelompok  subjek  penelitian  akan berbeda makna jika P <0.05.
E2.  Analisis  Perbedaan  Kedua Subjek  Uji  dengan  Pendekatan Hukum Coulomb
Nilai  Absorbansi  terhadap  waktu mengalami fluktuasi. Grafik
menbentuk  pola  gigi  gergaji.  Pola  ini memiliki rentang waktu yang berbeda- beda  dan  ketinggian  absosbansi  yang berbeda-beda.  Akibat perbedaaan nilai absorbansi  dan  rentang  waktu,  maka diperoleh  grafik  gigi  gergaji  yang terbentuk memiliki sudut yang bebeda- beda  setiap  bagiannya.      Hal  tersebut dikarenakan  adanya  gaya  Coulomb yang terjadi antara dua muatan, dalam kasus  ini  terjadi  antara  eritrosit  satu dengan  eritrosit  lainnya.  Kemiringan dari gigi gergaji ini berbeda-beda setiap bagiannya,  maka  pengamatan  grafik pola  absorbansi  eritrosit  tersebut
dengan  pendekatan  hukum  Coulomb dilakukan  dengan memperhatikan jarak antar titik saat t tertentu dengan t  berikutnya  atau  t  sebelumnya. Sebagai contoh yaitu saat t 14 sampai t 21 . Dalam  hal  ini,  kemiringan  grafik  dari kedua  titik  tersebut  dibandingkan antara subjek tumor  payudara dengan subjek normal.

## E3.  Analisis  Perbedaan  Pola
Absorbansi  dengan  Pendekatan Deterministik dan Stokastik Model analisis dengan pendekatan deterministik dan stokastik digunakan untuk menganalisis  pola  kecenderungan data  dan  pola  keacakan    perubahan potensial  zeta  yang  berkaitan  dengan komposisi  senyawa  dalam  plasma darah  (terjadi  perubahan  potensial zeta  dalam  darah-  EDTA).  F itting curva diawali dengan proses  ploting data absorbansi menggunakan program Python .  Berdasar  analisis fitting  curva dari  data  pengukuran diperoleh parameter deterministik ( d 1 , d 2 , d 3 ), parameter stokastik ( s 1 , s 2 , s 3 ), nilai autokorelasi, dan tampilan grafik. Nilai  parameter  yang  diperoleh  dari keduanya  deterministic  dan  stokastik diuji menggunakan uji normalitas (tes Shapiro-Wilk )  dan  uji  beda (Uji  T  jika data terdistribusi normal dan uji Mann Whitney jika  data  tidak  terdistribusi normal).  Perbedaan  nilai  Parameter dari  kedua  kelompok  akan  dikatakan berbeda signifikan jika P < 0.05.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Karakteristik Subjek Angka eritrosit untuk kelompok subjek  tumor  payudara  dan  subjek normal dilakukan uji beda menggunakan  uji Mann  Whitney dan uji T dengan hasil nilai signifikansi ( P ) yaitu  1.80  ×  10 − 12 ,  sehingga  kedua kelompok  uji  tersebut  ada  perbedaan bermakna.  Kriteria  selanjutnya  yaitu usia  subjek  penelitian.  Nilai P untuk subjek  Tumor  payudara  adalah  0.45 (terdistribusi normal), sedangkan untuk   subjek   normal   adalah 2.05 ×
10 − 7 (tidak  terdistribusi  normal). Pada penelitian  ini,  kriteria  jenis  kelamin tidak  begitu  memiliki  pengaruh  yang besar terhadap angka eritrositnya  dari kedua  kelompok  subjek  penelitian karena subjek penelitian yang digunakan  jenis  kelaminnya  sama yaitu perempuan. Angka eritrosit pada subjek  tumor  payudara  lebih  rendah dari subjek normal dengan angka rata- rata dari eritrosit masing-masing yaitu 3.96 × 10 6 sel/ μ L dan 4.56 × 10 6 sel/ μ L. Perbedaan  ini  disebabkan  oleh  sel-sel leukemia  (limfoblas)  pada  penderita Tumor  Payudara  (BBD)  meningkat sehingga  menekan  produksi  sel-sel darah lain, terutama sel darah merah. Selain  faktor tersebut,  peerbedaan  ini dapat  disebabkan  faktor  lain  yang yaitu terapi.

## B. Parameter Darah
Kelompok  subjek  normal  dapat diketahui  jika  nilai  yang  ditunjukkan oleh  semua  parameter  darah  dalam range  normal.  Nilai  parameter  darah kemudian diuji normalitasnya menggunakan  teknik Shapiro-Wilk test.  Data  parameter  darah  yang terdistribusi  normal  ( mean  ±  standar deviasi ).  Nilai  parameter  darah  yang terdistribusi  normal  pada  kelompok normal adalah NEUT, LYMPH,  WBC, RBC, HGB, HCT,  MCH,  PLT,  PWD, MPV,    dan    P-LCR.  Sedangkan  pada kelompok BBD adalah RBC,    HGB, HCT,    MCV,    MCH,    MCHC, PLT, MPV,  dan  P-LCR.  Selain  itu,  untuk data  nilai  parameter  yang  tidak terdistribusi  normal  ( median  dan min- max ).  Selanjutnya  kedua  nilai parameter  darah  di  uji  beda.  Nilai- nilai parameter darah diantara kedua subjek  tersebut  yang berbeda  secara bermakna adalah
LYMPH%,
NEUT#, LYMPH#, WBC, RBC, HGB,
HCT,  MCV,  MCH,  MCHC,  PLT, RDW-CV,      PWD,      MPV,      dan P-LCR (masing-masing  nilai P = 1.03  ×  10 − 4 ,  5.27  ×  10 − 6 , 4.15 × 10 − 12 , 5.33 × 10 − 8 , 1.85 × 10 − 8 , 1.76 × 10 − 3 , 1.49 × 10 − 2 , 4.95 × 10 − 6 ,  1.66 × 10 − 2 ,  7.68 × 10 − 4 ,  2.00 × 10 − 4 , 2.58 ×
10 − 3 ,   1.23 × 10 − 3 ,   2.50 × 10 − 3 ,   dan 4.56 × 10 − 2 ).
C. Pola  Absorbansi  Eritrosit  dan Kaitannya dengan Hukum Coulomb
Pola  proses  dinamika  agregasi eritrosit  dalam  darah-EDTA  dapat dideteksi menggunakan spektrofotometer. Metode ini mengukur proses terbentuknya  batas zona phlogistica (bzp)  atau  batas  antara daerah  jernih  pada  darah  yang  diberi antikoagulan  dengan  daerah  yang keruh.  Metode  ini  dipilih  karena  bisa dikatakan  lebih  rinci  dari  metode Westergren.  Selain  itu,  metode  lebih unggul  dari  pada  metode  lain  yang sudah  ada  saat  ini  (tumor  marker) yaitu  bisa  terdeteksinya  seluruh protein biomarker yang  akan  tampak pada grafik hasil nilai absorbansi yang dikeluarkan  oleh  spektrofotometer. Adanya kenaikan dan penurunan pada grafik  akan  menunjuk  spesifik  untuk protein tertentu. Tumor marker tumor payudara  saat  ini  sangatlah  banyak misalnya carcinoembryonic  antigen (CEA) dan cancer antigen 15-3 (CA 15- 3). Metode tumor marker memerlukan biaya sangat mahal disamping spesifikasinya  sangat  rendah  juga. Selain  itu,  dengan  metode  yang  ada saat ini jika ada satu biomarker , maka perlu  dilakukan  isolasi  terhadap biomarker jenis itu.
(a)
(b)
Gambar 3. Grafik hubungan pola absorbansi dalam darah-EDTA terhadap waktu (a) grafik subjek normal (b) grafik subjek tumor payudara
Gambar  3  menunjukkan  pada grafik nilai absorbansi terhadap waktu pada  subjek  normal  maupun  subjek tumor  payudara  memiliki  pola  gigi gergaji  yang  menunjukkan  adanya peristiwa  mendekat (agregasi)  dan menjauh  (disagregasi)  dari  sel-sel darah  merah  (eritrosit).  Laju  endap darah  dipengaruhi  oleh  komposisi darah.  Jenis  dan  jumlah  dari  ion-ion dan protein dalam plasma darah-EDTA memberikan pengaruh terhadap perubahan  yang  terjadi  pada  nilai potensial  zeta.  Penentuan  nilai  dari potensial zeta dapat ditentukan menggunakan  persamaan  1  (Nugroho, 2018).
R) 2sf( y 3    = (1)
dengan: 𝜁 = potensial zeta (volt) 𝜀 = pemitivitas ruang hampa (m-3, kg-1, s4, A2) 𝜂 = viskositas (Pa.s) 2
 = mobilitas partikel       s v m . 2
𝑓 ( 𝜅𝑅 ) = fungsi henry
Spektrum pola absorbansi selama 30 menit dari hasil pengukuran dijelaskan  menggunakan  persamaan hukum Coulomb.  Hasil  uji  darah  rutin yaitu  yang  dilihat  dari  komposisi darah-EDTA  menunjukkan  komposisi seluler yang saling berinteraksi selama proses  agregasi  terjadi  yang  akan berpengaruh pada besar kecilnya nilai
potensial  zeta  yang  terbentuk.  Jika nilai  dari  potensial  zeta  ini  berbeda, maka  akan  berakibat  pada  proses interaksi    tolakan  eritrosit yang  akan berbeda  pula.  Nilai  potensial  zeta yang semakin besar akan menyebabkan  tolakan  antar  eritrosit semakin jauh. Namun  interaksi eritrosit yang disebabkan oleh potensial zeta eritrosit bukan
merupakan  gaya  Coulomb  (Nugroho, 2018).
Peristiwa interaksi yang terjadi pada  permukaan  membran  eritrosit dalam darah-EDTA  antar  komponen darah  diantaranya  adalah  eritrosit dengan ion, ion dengan ion, ion dengan protein,  protein  dengan eritrosit ditinjau dengan hukum Coulomb. Pada gambar 4 menunjukkan bahwa adanya interaksi dalam darah sangat komplek saat  terjadi  reaksi  keseimbangan. Interaksi  tersebut  berupa  gaya  tarik- menarik atau tolak-menolak.
Gambar 4. Interaksi dalam darah yang kompleks saat terjadi keseimbangan antara eritrosit dengan ion, dan protein dengan ion
Komponen  darah  berupa  A + ,  B - , C + , D - yang         berinteraksi memungkin- kan  terjadinya  interaksi  Coulumb dengan  AB:  ikatan  antara  ion  dengan eritrosit, A + : ion bermuatan positif, B - : eritrosit bermuatan negatif pada permukaannya,  C + :  ion  bermuatan positif,  D - protein  bermuatan  negatif. Interaksi AB dengan A + ,  B - ,  C + , atau D - dan interaksi antara CD dengan A + , B - , C + ,    atau    D - belum  tentu  dapat dijelaskan  dengan  interaksi  Coulomb. AB atau CD berupa ikatan yang energi ikatnya tergantung  pada  jenis  ikatan yang  dibentuk.  Ikatan  kimia  yang terjadi  diantaranya  ikatan  kovalen, ikatan  ionik,  ikatan  hidrogen,  ikatan Van  der  Waals  yang  masing-masing memiliki kekuatan yang berbeda-beda.
Energi     interaksi long     range (Coulomb) ditentukan dengan persamaan  2.  Perhitungan  ini  dengan mempertimbangkan
ion sebagai muatan titik.
ij j i Coulomb ij r Q Q U 0 4  = (2)
keterangan:
Coulomb ij U = Energi Coulomb j i Q Q = Muatan 0  = Permitivitas ruang hampa
ij r = Jarak antar muatan
Gambar 5. Grafik fitting pola absorbansi eritrosit pada subjek N26 dan BBD4 berdasarkan jumlah eritrosit yang sama yaitu 4.3 x 10 6
sel/ μ l Gambar
5 menunjukkan absorbansi dari  eritrosit  subjek  tumor payudara cenderung memiliki serapan lebih  rendah  dibandingkan  subjek normal disebabkan oleh adanya faktor yang  mempercepat  terjadinya  proses sedimentasi  yaitu    protein biomarker . Kandungan protein biomarker tersebut memberikan  dampak  pada  proses agregasi  eritrosit  seperti  berdampak pada  laju  endap  darah  penderita tumor  payudara  yang  meningkat. Protein  ini  bermuatan  negatif  karena di  dalamnya  terdapat  kandungan residu  asam sialic terminal.  Muatan negatif  pada  protein  tersebut  bisa mempengaruhi  ion-ion  yang  berada disekitar  eritrosit.  Muatan  negatif yang terdapat pada permukaan protein  berinteraksi  tolak-menolak dengan  ion  negatif  dan  tarik-menarik dengan  ion  positif  (Felder  M.  dkk, 2014).  Protein  yang  berdifusi  sampai pada lapisan stern (permukaan
partikel)  di  sekitar  eritrosit,  maka protein itu berinteraksi dengan ion-ion pada lapisan tersebut. Keseimbangan ion-ion  yang berada  di  dalam  dan  di luar eritrosit bersifat dinamis. Terjadinya  interaksi  antara  ion-  ion dengan  protein  pada  lapisan stern menyebabkan perubahan nilai
potensial  zeta  disekitar  eritrosit (Imam, 2020).
Terjadi  interaksi   antar eritrosit yang  saling  mendekat  atau  bahkan overlap   (tumpang  tindih)  disebabkan oleh  menurunnya  nilai  potensial  zeta disekitar eritrosit, sehingga mengakibatkan  gaya  tolakan  antar eritrosit melemah yang memudahkan eritrosit mengalami agregasi. Begitupun  jika    terjadi  sebaliknya.
Nilai yang berbeda pada potensial zeta disebabkan  oleh  perbedaan  distribusi muatan  pada  lapisan stern di  sekitar eritrosit. Selama proses agregasi, nilai potensial zeta ini memiliki peran yang penting yaitu
mempengaruhi kecepatan  agregasi  dari  eritrosit  di sekitar  eritrosit.    Potensial  zeta  yang bernilai   kecil  mengakibatkan proses agregasi  berlangsung  cepat,  begitu pula sebaliknya (Imam, 2020).
Eritrosit  memiliki  energi  yang dari  waktu  ke  waktu  semakin berkurang  sampai  proses  agregasi terjadi karena pengaruh dari turunnya nilai  potensial  zeta.  Saat  gaya  tarik lebih  besar  daripada  gaya  tolak  antar partikel  yang  berdekatan  maka  akan menyebabkan  nilai  potensial  zeta eritrosit  berada  di  bawah  ambang batas laju endap darah dan kemudian eritrosit  akan  saling  mengumpul ( rouleaux ). Kumpulan eritrosit membentuk  struktur  dua  atau  tiga dimensi saat berada pada larutan yang berisi  protein  plasma.  Struktur  ini berbentuk  statis  saat  terdapat  gaya geser  cukup  kecil  dan  dengan  gaya geser  besar  akan  dapat  memisahkan bentuk  gumpalan  tersebut.  Proses agregasi akan reversible saat diturunkan  atau dihilangkannya  gaya gesek (Nugroho, 2018). Eritrosit yang bentuknya sempurna membentuk kumpulan bulat  stabil  dengan  ukuran  sama. N26 BBD4 0  365  730  1095 1460
t(s)
Kumpulan  eritrosit  tersebut  yang bergerak  ke  bawah  dapat  mengalami pemisahan disebabkan oleh timbulnya potensial zeta di sekitar eritrosit yang melebihi  ambang  sehingga  interaksi tolak-  menolak  antar  eritrosit  itu mampu  menjauhkan mereka. Adanya transport ion yang ke luar atau masuk membran  sel  menjadi  penyebab  dari perubahan nilai potensial zeta. Proses sedimentasi  (pengendapan)  berbeda- beda,  hal  ini  karena  kecepatan terbentuknya kumpulan eritrosit yang belum tentu terjadi secara bersamaan. Ketika  berat  dari  kumpulan  eritrosit lebih besar dari gaya apung dan gaya geseknya  maka  akan  terjadi  proses pengendapan. Setelah kumpulan eritrosit  ini  telah  mengendap,  posisi tersebut selanjutnya  akan  diisi  atau digantikan  oleh  eritrosit  lainnya. Proses  agregasi  dan  pengendapan akan  terus  berulang  hingga  semua eritrosit  pada  bagian  sama  dalam darah-EDTA
mengalami pengendapan,  dimana  proses  ini sesuai dengan Hukum Stokes   (Imam, 2020;      Nugroho.      2018,  Septiani, 2022).
Tiga  peristiwa  yang  dialami  oleh kumpulan  eritrosit  sesuai  dengan Hukum  Stokes  yaitu  keadaan  naik (kumpulan  eritrosit  memiliki  berat lebih  kecil  dari  gaya  apung    dan    gaya gesek),    keadaan  turun  (kumpulan eritrosit  memiliki  berat  lebih  besar  dari gaya  apung    dan    gaya  gesek),  dan keadaan  diam  (kumpulan  eritrosit memiliki berat sama dengan gaya apung dan gaya gesek).  Jumlah  kejadian dari peristiwa  Stokes  pada  kedua  kelompok uji  (subjek  normal  dan  tumor  payudara) berbeda-beda setiap sampelnya (Septiani, 2022).
Tiga  peristiwa  yang  dialami  oleh kumpulan  eritrosit  sesuai  dengan Hukum  Stokes  yaitu  keadaan  naik (kumpulan  eritrosit  memiliki  berat lebih  kecil  dari  gaya  apung    dan    gaya gesek),    keadaan  turun  (kumpulan eritrosit  memiliki  berat  lebih  besar  dari gaya  apung    dan    gaya  gesek),  dan keadaan  diam  (kumpulan  eritrosit memiliki berat sama dengan gaya apung dan gaya gesek).  Jumlah  kejadian dari peristiwa  Stokes  pada  kedua  kelompok uji  (subjek  normal  dan  tumor  payudara)
berbeda-beda setiap sampelnya (Septiani, 2022).
Proses interaksi eritrosit (tarik- menarik  atau  tolak-menolak)  dalam darah-EDTA  akan  mempengaruhi nilai absorbansi eritrosit pada daerah yang disinari oleh cahaya spektrofotometer. Gambar 6
menggambarkan  adanya  perubahan pola  absorbansi  interaksi  eritrosit dalam  darah-EDTA  pada subjek  N26 dan  subjek  BBD4  dengan  angka eritrosit  sama  yang  berbeda  dari waktu  ke  waktu  (Imam,  2020; Septiani,  2022).  Gambar  tersebut menunjukkan perubahan nilai absorbansi pada posisi a, b, c, d, e, dan f yang  menggambarkan  kondisi  dari eritrosit  yang  berbeda  dari  waktu  ke waktu. Posisi a ke b, grafik mengalami peningkatan sehingga terjadi peningkatan  nilai  absorbansi  yang menunjukkan  adanya  peningkatan luas permukaan eritrosit yang disinari oleh  sinar  datang  disebabkan  jumlah eritrosit yang juga bertambah (eritrosit saling mendekat). Posisi     b     ke     c    menunjukkan penurunan grafik sehingga nilai absorbansi  mengalami  penurunan,  hal ini  menggambarkan  luas  permukaan eritrosit yang disinari oleh sinar datang mengalami penurunan disebabkan oleh jumlah eritrosit yang berkurang (eritrosit saling menjauh atau tumpang tindih).  Pada  posisi  c  ke  d  grafik mendatar yang artinya nilai absorbansi tidak
mengalami perubahan (cenderung  konstan)  sehingga  luas permukaan  eritrosit  yang  tersinari konstan.  Dalam  keadaan  ini    eritrosit dalam  keadaan  diam  atau  bergerak dalam keseimbangan  (jumlah  eritrosit yang naik =  eritrosit  yang  turun  dan atau  jumlah eritrosit yang mendekat = jumlah eritrosit yang menjauh). Posisi d ke f pada Gambar 6  dan  Gambar  6  (b) menunjukkan adanya penurunan   nilai absorbansi disebabkan Proses interaksi eritrosit (tarik- menarik atau tolak-menolak)  dalam  darah-  EDTA akan  mempengaruhi  nilai  absorbansi eritrosit pada daerah yang disinari oleh
cahaya  spektrofotometer.  Gambar  6 menggambarkan  adanya  perubahan pola  absorbansi  interaksi  eritrosit dalam  darah-EDTA  pada subjek  N26 dan  subjek  BBD4  dengan  angka eritrosit sama yang berbeda dari waktu ke waktu (Imam, 2020; Septiani, 2022). Gambar tersebut menunjukkan perubahan nilai absorbansi pada posisi a, b,  c,  d,  e,  dan  f  yang  menggambarkan kondisi dari eritrosit yang berbeda dari waktu  ke  waktu.  Posisi  a  ke  b,  grafik mengalami peningkatan sehingga terjadi  peningkatan  nilai  absorbansi yang
menunjukkan adanya peningkatan  luas  permukaan  eritrosit yang  disinari  oleh  sinar  datang disebabkan  jumlah  eritrosit  yang  juga bertambah (eritrosit saling mendekat).
Posisi     b     ke     c    menunjukkan penurunan grafik sehingga nilai absorbansi  mengalami  penurunan,  hal ini  menggambarkan  luas  permukaan eritrosit yang disinari oleh sinar datang mengalami penurunan  disebabkan  oleh jumlah eritrosit yang berkurang (eritrosit saling menjauh atau tumpang tindih).  Pada  posisi    c  ke  d  grafik mendatar yang artinya nilai absorbansi tidak mengalami perubahan (cenderung konstan)  sehingga  luas  permukaan eritrosit yang tersinari            konstan. Dalam keadaan  ini    eritrosit  dalam  keadaan diam atau bergerak dalam keseimbangan  (jumlah  eritrosit  yang naik =  eritrosit  yang  turun  dan  atau jumlah  eritrosit  yang  mendekat  = jumlah eritrosit yang menjauh). Posisi d ke f pada gambar 6 (a) dan gambar 6 (b) menunjukkan adanya penurunan   nilai absorbansi    disebabkan  oleh  adanya eritrosit-eritrosit yang
telah
mengendap.
(a) Subjek N26
(b) Subjek BBD4
Gambar 6. Pola absorbansi subjek Tumor Payudara dan Normal dengan angka eritrosit 4.3 x 10 6 sel/ µ l
Gaya  Coulomb  terjadi  antara dua muatan, dalam kasus ini terjadi antara eritrosit satu dengan eritrosit lainnya.
Keberadaan protein biomarker dalam darah menyebabkan perubahan ke-
seimbangan dari ion-ion yang berada disekitar  eritrosit  disebabkan  oleh ion-ion  dalam  darah  berinteraksi dengan  protein.  Keseimbangan  ion- ion  yang  berubah  menggakibatkan perubahan  pula  pada  nilai  potensial zeta eritrosit, sehingga dalam penelitian ini sebenarnya yang ingin dilihat adalah keberadaan biomarker tersebut  dalam  darah.  Jika  nilai potensial zeta berubah maka mempengaruhi cepat atau lambatnya pergerakan  dari  eritrosit  untuk mengalami  agregasi.  Nilai  potensial zeta  yang  mengalami  penurunan akan  mempercepat  proses  agregasi pada eritrosit. Semakin cepat terbentuk kumpulan eritrosit
( rouleaux ),  maka  proses  sedimentasi juga  berlangsung  cepat  dan  pada kondisi  inilah  yang  bisa  dijadikan acuan  untuk  membedakan  antara subjek normal (sehat) dengan subjek sakit.

## Gambar 7. Pola gigi gergaji N26 dan BBD4 saat waktu tertentu
Gambar  7  merupakan  sampel untuk  mengetahui  pengaruh  gaya Coulomb  terhadap  proses  agregasi eritrosit  dalam  darah-EDTA.  Gaya Coulomb  terjadi  pada darah  sebelum terjadi hukum Stokes dan sebelum nilai absorbansi eritrosit dalam darah-EDTA didapatkan dengan analisis spektrofotometer.  Gambar  tersebut menunjukkan  bahwa  dalam  proses pembentukan pola gigi gergaji tersebut membutuhkan  waktu  seperti  untuk membentuk grafik yang landai (miring) atau tegak. Kemiringan dari gigi gergaji ini  berbeda-beda  setiap  waktunya. Seperti yang  ditunjukkan  pada  grafik yaitu saat t 1015 sampai t 1022 yang berbeda antara N26 dengan BBD4. Kemiringan ini menunjukkan cepat atau lambatnya gerak  dari  interaksi  eritrosit  yang sesuai  dengan hukum  Coulomb.  Pola semakin  landai  menunjukkan  semakin lambatnya gerak eritrosit untuk saling menjauh  atau  mendekat  sehingga membuat gaya Coulomb kecil. Sebaliknya  jika  semakin  tegak  atau tajam grafik, maka semakin cepat pula gerak  dari  eritrosit  untuk  saling menjauh  atau  mendekat  dan  gaya Coulomb  akan  semakin  besar  pula. Dalam  gambar  tersebut  pada  subjek N26 lebih tajam (tegak) dari pada BBD4 yang  lebih  landai.  Ini  menunjukkan gaya  Coulomb  pada  N26  lebih  besar dari  BBD4.  Namun  berbeda  saat t 1057 sampai t 1064 subjek N26 lebih landai dari pada  BBD4.  Sehingga  gaya  Coulomb dari BBD lebih besar dari N26. Proses   kenaikan   danpenurunan
pada  saat t lainnya  dalam  grafik memungkinkan  memiliki  hasil  yang beragam.  Dapat  disimpulkan  bahwa gaya Coulomb  setiap  waktunya  tidak menentu  (dapat  berubah-ubah)  dan tidak  sama  disetiap  rentang  titik waktunya  karena  adanya  pengaruh dari  protein biomarker pada  darah subjek  tumor  payudara  dan  subjek normal  menyebabkan  interaksi  gaya Coulomb  berbeda,  sehingga  jika diamati  berdasarkan  grafik  nilai absorbansi  terhadap  waktu  tersebut sebenarnya  dari  hukum  Coulombnya sudah menunjukkan adanya perbedaan  antara  kedua  subjek  uji, namun  penulis  mengalami  kesulitan dalam melakukan pengamatan karena sangat banyaknya jumlah titik (kenaikan  atau  penurunan  pada grafik), maka perlu dilakukan pengamatan secara menyeluruh untuk membandingkan lebih mendetail antara  subjek  satu  dengan  lainnya ditiap-tiap  titiknya  yang  jumlahnya sangat banyak.
Penelitian      ini       sangat      sulit dilakukan  untuk  melihat  perbedaan dengan  gaya  Coulomb  pada  subjek Tumor  Payudara  dengan  subjek normal  karena  penerapan  hukum Coulomb  sebenarnya  berlaku  untuk sistem  mati  sedangkan  eritrosit- eritrosit yang terdispersi dalam plasma darah-EDTA  masih  dalam  kondisi hidup  sehingga  mekanisme  transport ion  melalui  membran  eritrosit  masih terjadi (Nugroho, 2018). Perlu dilakukan  penelitian  lebih  lanjut sehingga  bisa  diketahui  perbedaanya secara  detail.  Analisis  yang  bisa digunakan yaitu pendekatan deterministik dan stokastik.

## D. Pola  Perubahan  Absorbansi Eritrosit
Interaksi  eritrosit  dalam  darah- EDTA terjadi disertai dengan endapan darah, maka pendekatan yang digunakan dalam penelitian ini adalah kombinasi dari pendekatan
deterministik dan stokastik. Gambaran pola  proses  dinamika  perubahan
potensial zeta dalam darah- EDTA dari kelompok  subjek  normal  dan  tumor payudara  sulit  diidentifikasi  secara langsung.  Maka  diperlukan  analisis yang  dapat  menemukan  ciri  khas (karakter)  dari  grafik  yang  bisa menggambarkan  perubahan  potensial zeta  tersebut  dengan  menggunakan model matematis (bentuk  fungsi kuadrat) yaitu
pendekatan deterministik.
Interaksi  antar  eritrosit  terjadi secara acak dan tidak pasti (proses yang komplek),  sehingga  model  pendekatan deterministik  tidak  dapat    digunakan untuk  menganalisis  proses  tersebut. Pendekatan  yang  cocok  digunakan adalah  pendekatan  stokastik  yang secara  umum  menggunakan  fungsi autokorelasi.  Proses  perhitungannya menggunakan google  colab dengan bahasa pemrograman python . Gambar 8 merupakan  grafik  hasil  keluaran dari fitting kurva.
(a) Pendekatan Deterministik
(b) Pendekatan Stokastik
Gambar  8.  Grafik fitting untuk  analisis
data dengan pendekatan
stokastik dan deterministik
Gambar 8 (b) menunjukkan nilai autokorelasi  yang    semakin    menurun absolut  maksimum  terjadi  pada  selang waktu  ( lag )  ke-2  sampai    ke-35. Lag tersebut  menunjukkan  bahwa  derajat korelasi  tertinggi  dari  nilai  respon spektrofotometer  pada  setiap  satuan waktu  terjadi  pada  saat lag ke-1    dan nilai  terendah  pada  lag  ke- 35 .  Nilai autokorelasi  terendah  dari  kelompok subjek  normal  adalah  -0.14826328 dimiliki oleh N6, sedangkan 0.00843291 pada  kelompok  subjek  tumor  payudara yaitu BBD12.
Nilai parameter deterministik  dan  stokastik  dari  kedua kelompok  sampel  tersebut  kemudian diuji normalitasnya menggunakan teknik Shapiro-Wilk test.    Selanjutnya dilakukan  uji  beda  pada  kedua kelompok  sampel  tersebut.  Masing- masing  parameter  di  uji  beda  antara kelompok subjek normal dan kelompok  subjek  tumor  payudara. Keenam parameter yang terdiri dari 3 parameter deterministik dan 3 parameter stokastik hampir seluruhnya berbeda  bermakna  yaitu parameter d 1 , d 2 , s 1 , s 2 , dan s 3 dengan nilai P secara  berturut- turut  2.67  × 10 − 7 ,  1.68 × 10 − 5 ,  6.22 × 10 − 5 , 3.94 × 10 − 7 , dan  9.95  ×  10 − 8 .  Keenam  parameter yang  diperoleh  hanya  ada  satu  yang tidak  berbeda  secara  bermakna  yaitu parameter d 3 ( P = 0.181).

## SIMPULAN
Data  pola  interaksi  eritrosit dalam  darah-EDTA  pada  penderita tumor  payudara  dan  subjek  normal tidak menentu sehingga sulit dianalisis berdasarkan hukum Coulomb.
Berdasarkan  pendekatan       determinis- tik ( d ) dan stokastik ( s ), perbedaan pola absorbansi  eritrosit  dalam  darah- EDTA pada  penderita  tumor payudara dan  subjek  normal  berbeda  secara signifikan pada parameter d 1 , d 2 , s 1 , s 2 , dan s 3, namun  tidak  berbeda  pada parameter d 3 .

## REFERENSI
ACS.  (2019). Non concerous Breast  Conditionts,  American Cancer Society. Diakses pada 17 Februari 2022 dari https://www.cancer.org/cancer/bre ast-cancer/non-cancerous-
breastconditions.html
Anonim.  (2020).  Jenis  Kanker  ini Rentan  Menyerang  Manusia. Diakses  pada 9  Oktober  2020 dari
https://www.kemkes.go.id/article/ vi  ew/20011400002/jenis-kanker-
ini- rentan-menyerang-
manusia.html.
Ayu,  Shinta,  A.,  dan  Rilyani.  (2016). Pengaruh Penyuluhan Kesehatan Terhadap  Keterampilan  Remaja Putri  dalam  Melakukan  Upaya Deteksi Dini Kanker Payudara di
SMA  Kartikatama  Metro  Tahun 2016. Jurnal  Kesehatan  Holistik (The Journal of Holistik Healthcare ), 10  (3)  1-4.  doi:
10.33024/hjk.v10i3.262.
Budijanto,  D.  (2015).  Data  dan Informasi  Kesehatan “Buletin Jendela”. Jakarta:  Kementrian Kesehatan  RI. Colomer, R., Aranda-Lopez, I., Albanell,  J.,  Garcia-Caballero, T.,  Ciruelos,  E.,  Lopez-Garcia, M.A.,  dkk.  (2018). Biomarkers in  Breast  Cancer:  A  Concensus Statement by the Spanish Society of  Medical  Oncology  and  the Spanish  Society  of  Pathology. Clin  Transl  Oncol,  20  (8),  815- 826,  doi:  10.1007/s12094-017-1800-
5.
Dadi,  M.  dan  Yasir,  M.,  (2022),
Spectroscopy and spectrophotometry:  principles  and Applications  for  Colorimetric  and Releted other Analisis, IntechOpen, 1-22. DOI: 10.5772/intechopen.101106 Fadli, R. (2021). Cara Efektif Mencegah Tumor  Payudara.  Diakses  pada 12 Januari 2022 dari www.halodoc.com/artikel/cara- efektif-mencegah-tumor- payudara.
Faria,  S.  S.,  Morris,  C.F.,  Silva,  A. R., Fonseca, M. P., Forget, P., Castro,  M.  S.,  &  Fontes,  W. (2017). A  Timely  Shift  from Shotgun  to  Targeted  Proteomics and How it Can Be Groundbreaking for Cancer Research.  Frontiers  in  Oncology, 7, 1-28. doi: 10.3389/fonc.2017.00013. Fernandes,  H.P.,  Cesar,  C.L,  dan Barjas-castro,  M.,  L,  2011,
Electrical  Properties  of  the  red blood cell membrane and immunohematological
investigation, Rev  Bras  Hematol Hemoter . 33(4), 297-301. Imam, M. F. (2020). Pola Agregasi Sel Darah  Merah  dalam  Darah- EDTA Penderita Kanker Payudara Ditinjau  dari  Hukum Stokes. Skripsi UNY Yogyakarta. Lacey, J. V., Jr Kreimer, A. R., Buys, S. S., dkk. (2009). Breast Cancer Epidemiology According to Recognized  Breast  Cancer  Risk Factors  in  the  Prostate,  Lung,
Colorectal and Ovarian (PLCO)
Cancer Screening Trial Cohort. MBC Cancer. 9:84. Diakses pada
20 Februari 2022 dari http://www.nbci.nlm.nih.gov/pubm ed/19292893. Lelangan,  R.  A.,  Waworuntu,  O.,  & Mintjelungan, C. N. (2016). Uji Konsentrasi Hambatan Minimum  (KHM) Ekstrak Daun  Pacar  Air  ( Impatiens Balsamian L. ) Terhadap Pertumbuhan Streptococuccmutans. Jurnal
Ilmiah PS.  Agrobisnis  Perikan- an  UNSTRAT.  Diunduh  dari https://ejournal.unstrat.ac.id/ind
ex.php/egigi/article/download/1416 1/13 735 Nugroho, K. A. (2018). Pola Agregasi Sel  dalam  Darah-EDTA  dengan Metode  Spektrofotometri  pada Penderita  Kanker  (Disertasi). Yogyakarta: UGM. Prakash,  Mishra,  Malviya,  sharma, 2014,  Measurement  Techniques and Pharmaceutical Applications of Zeta Potential: A Review, Journal of Chronotherapy  and  Drug  Delivery, 5(2), 33-40.
Putri,  B.  J.  (2015).  Kanker  Usus Besar Penyebab Kematian Ketiga  Terbesar  di  Indonesia. Diakses  pada  9  Oktober  2020
dari https://www.liputan6.com/health/r e d/2390583/kanker-usus-besar- penyebab-kematian-ketoga- terbesar-di-indonesia. Rachmansyah,  R.  (2022).  Optimasi
Material  Target  pada  Beam Shaping Assembly  untuk  Boron Neutron Capture Therapy Menggunakan Program  PHITS (Skripsi). Yogyakarta: UGM.
Sagma  MMB,  Panda  K,  Dasiah  S.
(2013). A  Clinico-Pathological Study on  Benign Breast Diseases. Journal  of  Clinical and Diagnostic Research. 7(3):503-506.
doi: 10.7860/JCDR/2013/5355.2807 Septarini,  H.  (2014).  Gambaran Kejadian  Tumor  Payudara  di RSUD  Serang  Tahun  2013 (Skripsi).  Jakarta:  UIN Syarif Hidayatullah.
Septiani,  M.  (2022).  Pola  Absorbansi
Eritrosit pada darah-EDTA Penderita  Artritsi  Reumatoid Berdasarkan Hukum Stokes (Skripsi). Yogyakarta: Universitas Negeri Yogyakarta.