EISSN: 2407-7690 https://ejournal3.undip.ac.id/index.php/jmr

## Fenomena Infeksi Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease pada Budidaya Udang Vaname di Kabupaten Bangkalan
Amirul Suryana, Eka Nurrahema Ning Asih * , Insafitri Program Studi Ilmu Kelautan, Fakultas Pertanian Universitas Tunojoyo Madura Jl. Raya Telang 02 Kamal, Bangkalan, Madura, Jawa Timur 69162 Indonesia Correspondng, author, e-mail: eka.asih@trunojoyo.ac.id
ABSTRAK:  Acute  hepatopancreatic  necrosis  disease (AHPND)  merupakan  salah  satu  penyakit yang  menginfeksi  udang  vaname  ( Litopenaeus  vannamei )  dengan  tanda  berupa  udang  lesu, hepatopankreas mengalami fenomena nekrosis, atrofi dan terlihat pucat. Infeksi penyakit ini minim publikasi, sehingga perlu dilakukan penelitian awal untuk menginspeksi keberadaan penyakit ini di udang vaname di Indonesia khususnya di tambak udang Bangkalan. Upaya ini dilakukan sebagai langkah antisipasi agar prevelensi AHPND tidak meluas di perairan Bangkalan. Tujuan penelitian ini  adalah  untuk  mengetahui  karakteristik  infeksi  dari  penyakit  AHPND  pada  budidaya  udang vaname  di  Kabupaten  Bangkalan.Pengambilan  sampel  udang  menggunakan  metode  purposive sampling  dari  tambak  udang  bagian  selatan  dan  utara  Bangkalan.  Identifikasi  AHPNDdilakukan dengan metode nested polymerase chain reaction ( nested PCR) menggunakan primer AP4. Hasil diagnosis  morfologis  yang  diduga  diakibatkan  oleh  penyakit  AHPND  terdapat  pada  sampel  1,  2, dan  3  dengan  karakteristik  pertumbuhan  yang  lambat  dan  pada  sampel  9  berupa  kotoran  yang berwarna  putih.  Diagnosis  genetik  DNA  Vp AHPND menunjukkan  sampel  1,  2,dan  3  positif  penyakit AHPND dan sesuai gejala morfologis yang di dapat. Munculnya penyakit AHPND  di duga karena ketidaksesuainsuhudan pH dengan standar baku mutu untuk pemeliharaan udang vanamei. Data penelitian  ini  menjadi  informasi  awal  tentang  visualisi  dan  ciri-ciri  udang  yang  terinfeksi  AHPND yang dapat dimanfaatkan pembudidaya udang vaname agar waspada terhadap penyakit tersebut.
Kata kunci: AHPND; Litopenaeus vannamei ; nested PCR; Bangkalan

## Infection Phenomenon of Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease on Vaname Shrimp Cultivation in Bangkalan District
ABSTRACT:  Acute  hepatopancreatic  necrosis  disease  (AHPND)  is  a  disease  that  infects  white shrimp  (Litopenaeus  vannamei)  with  signs  of  lethargic  shrimp,  hepatopancreas  experiencing necrosis, atrophy, and pale appearance. The infection of this disease is minimally published, so it is  necessary  to  conduct  preliminary  research  to  inspect  the  presence  of  this  disease  in  white shrimp  in  Indonesia,  especially  in  Bangkalan  shrimp  ponds.  This  effort  is  carried  out  as  an anticipatory  step  so  that  the  prevalence  of  AHPND  does  not  expand  in  Bangkalan  waters.  The purpose  of  this  study  was  to  determine  the  characteristics  of  infection  from  AHPND  disease  in vaname shrimp culture in Bangkalan Regency. A sampling of shrimp using the purposive sampling method from shrimp ponds in the south and north of Bangkalan. Identification of AHPND was done by nested PCR method using AP4 primer. The results of the morphological diagnosis suspected to be  caused  by  AHPND  were  found  in  samples  1,  2,  and  3  with  slow  growth  characteristics  and sample 9 in the form of white feces. Genetic diagnosis of Vp AHPND DNA showed samples 1, 2, and 3 were positive for AHPND disease and according to the morphological symptoms obtained.  The emergence  of  AHPND  disease  is  thought  to  be due  to the  incompatibility  of  temperature  and  pH with quality standards for the maintenance of vaname shrimp. The data of this study serve as initial information about the visualization and characteristics of shrimp infected with AHPND that can be used by vaname shrimp farmers to be aware of the disease.

## Keywords: AHPND; Litopenaeus vannamei; nested PCR; Bangkalan

## PENDAHULUAN
Budidaya  udang  vaname  ( Litopenaeus  vannamei )  merupakan  salah  satu  sektor  penting  di Indonesia.  Komoditas  jenis  udang  ini  memilki  berbagai  keunggulan  dengan  pertumbuhan  yang cepat,  kelulusan  hidup  yang  tinggi,  dan  tidak  mudah  terserang  penyakit  (Santanumurti et  al ., 2019).  Udang  vaname  juga  dikenal  sebagai  bahan  pangan  dengan  kandungan  zat  gizi  yang melimpah seperti protein dan berbagai senyawa dan mineral yang dibutuhkan oleh tubuh manusia serta memilki potensi asam lemak esensial yang melimpah (Gunalan et al ., 2013). Budidaya udang vaname berperan besar dalam peningkatan produksi udang di Indonesia (Asmawati et al ., 2022). Produksi udang vaname telah menyumbang sekitar 40% pada hasil perikanan secara keseluruhan dan  devisa  yang  diperoleh  pada  sektor  tersebut  (Santanumurti et  al .,  2019).  Pulau  Madura khususnya  Kabupaten  Bangkalan  memilki  potensi  yang  cukup  melimpah  pada  sektor  perikanan khususnnya  pada  kegiatan  budidaya  udang  vaname.  Kabupaten  Bangkalan  dikenal  sebagai daerah yang maju dalam mengembangkan kegiatan budidaya udang vaname (Hur et al ., 2020). Acute  hepatopancreatic  necrosis  disease (AHPND)  merupakan  jenis  penyakit  pada  yang menyerang  udang  penaeid  dengan  menunjukkan  tanda-tanda  infeksi  seperti  udang yang tampak lesuh  dan  hepatopankreas  yang  mengalami  fenomena  nekrosis,  atrofi  dan  terlihat  pucat (Boonyawiwat et  al .,  2018).  Penyakit  ini  dapat  meyebabkan  kematian  udang  hingga  mortalitas 100% pada usia udang 30-35 hari setelah pelepasan postlarva ke  AHPND di Filipina menyerang udang  pada  usia  46-96  ari  setelah  penebaran.  Fluktasi  dan  ketidaksesuaian  standar  baku  mutu pada  beberapa  parameter  kualitas  perairan  seperti  suhu,  salinitas  dan  pH  menjadi  penyebab munculnya  penyakit  AHPND  (Soto-Rodriguez et  al .,  2019).  Agen  dari  penyakit  AHPND  adalah strain spesifik dari bakteri Vibrio parahaemolyticus yang memiliki plasmid pVA1 (69-70 kbp) dalam fragmen 3,5 kb yang dapat mengkode gen toksin photorhabdus insect-related AB (PirAB) (Caro et al ., 2020).
Wabah  dari  penyakit  AHPND  telah  menyebabkan  kerugian  ekonomi  rata-rata  sebesar  7 miliar  USD  secara  global  pada  setiap  tahunnya  di  sektor  budidaya  udangsejak  kemunculan pertamanya  di  China  pada  tahun  2009  (Yen et  al .,  2021),  kemudian  meyebar  ke  Vietnam, Malaysia,  Thailand,  Meksiko  (Zorriehzahra  dan  Banaederakhshan,  2015).  Tahun  2015  AHPND ditemukan  di  Filipina  danlaporan  terakhir  penyebaran  penyakit  tersebut  teridentifikasi  atau terdeteksi  di  Bangladesh  dan  dan  Amerika  Serikat  pada  pada  tahun  2019  (Kumar et  al .,  2021). Wabah  penyakit  AHPND  telah  menyebabkan  kerugian  ekonomi  yang  besar,  Kasus  wabah penyakit ini  di Filipina pada tahun 2015 dari 6 provinsi beberapa titik lokasi dari provinsi tersebut terdeteksi positif positif AHPND (Dabu et al ., 2015). Vietnam akibat penyakit mengalami kerugian ekonomi  5700.000-7.200.000  USD  ada  tahun  2011  dan  2012  dan  di  Thailand  pada  tahun  2012 menyebabkan penurunan produksi udang hingga 7% (Zorriehzahra dan Banaederakhshan, 2015). Potensi  infeksi  oleh V.  parahaemolyticus penyebab  penyakit  AHPND  (Vp AHPND )dapat  terjadi rendahnya kepatuhan biosecurity and good aquaculture practices (GAPs) dari para pembudidaya dan  terlebih  lagi  iklim  tropis  di  Kabupaten  Bangkalan  dengan  cuaca  yang  terik  dan  panas  dapat menyebabkan terjadinya fluktasi suhu dan salinitas pada kolam tambak. Infeksi penyakit AHPND minim publikasi, sehingga perlu dilakukan penelitian awal untuk menginpeksi keberadaan penyakit udang vaname di Indonesia khususnya di tambak udang Bangkalan.
Budidaya udang vaname sendiri masuk dalam perikanan tambak utama yang tertuang dalam PERBUP  No.  27  Tahun  2021  tentang  Rencana  Kerja  Pemerintahan  Daerah  (RKPD)  Kabupaten Bangkalan Tahun 2022. Karakteristik infeksi dari penyakit AHPND pada budidaya udang vaname di  Kabupaten  Bangkalan  sebagai  salah  satu  Kabupaten  dengan  sentra  dan  potensi  produksi udang  vaname  yang  melimpah  belum  pernah  dilakukan.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah mengetahui  diagnosis  morfologis,  visualisasi  besar  ukuran  amplikon  DNA  infeksi  AHPND  serta faktor pemicu infeksi AHPND pada budidaya udang vanname di Kabupaten Bangkalan.

## MATERI DAN METODE
Lokasi pengambilan sampel betempat di wilayah Kabupaten Bangkalan yang menjadi sentral budidaya  produksi  udang  vaname  dan  terdiri  atas  3  stasiun  yaitu  dari  Kecamatan  Socah,
Kecamatan  Kwanyar  dan  Kecamatan  Sepuluh,  dengan  satu  stasiun  terdiri  atas  tiga  titik  lokasi yang  berbeda.  Peta  lokasi  penelitian  dapat  dilihat  pada Gambar  1 . Metode  pengambilan  sampel menggunakan  metode  purposive  sampling,  sampel  yang  diambil  dari  kelompok  budidaya  udang vaname  dapat  mewakili  dari  populasi  berdasarkan  karakteristik  yang  telah  diketahui  sebelumnya yang  berkaitan  dengan  tanda-tanda  dari  wabah  penyakit  AHPND  di  Kabupaten  Bangkalan. Sampel dibawa ke laboratorium dengan kondisi hidup ke laboratorium, kemudian disimpan selama 16 jam di dalam freezer dengan pengaturan suhu 4° C.
Pengamatan  karakteristik  morfologis  dilakukan  dengan  memeriksa  sampel  udang berdasarkan  tanda-tanda  klinis  yang  di  duga  karena  infeksi  dari  penyakit  AHPND  dan  dapat diamati  dengan  panca  indra,  langkah  ini  disebut  sebagai  diagnosis  morfologis.  Gejala  secara morfologi  dari  infeksi  AHPND  adalah  udang  yang  terlihat  lesuh,  berenang  secara  spiral, hepatoankreas  dan  usus  udang  kosong  dan  berwarna  pucat  hingga  putih,  pertumbuhan  udang yang terlambat (Zorriehzahra dan Banaederakhshan, 2015), cangkang udang yang melunak, dan kotoran  udang  yang  berwarna  putih  (Hong et  al .,  2016).  Langkah  ini  adalah  diagnosis  awal  dan merupakan  langkah  pertama  sebelum  melakukan  Langkah  diagnosis  secara  genetik  dengan metode biomolekuler dengan Teknik polymerase chain reaction (PCR).
Proses  yang  pertama  dilakukan  adalah  dengan  mengambil  5  sampel  udang  vaname  dan mengambil organ target infeksi Vp AHPND seperti hepatoankreas dan usus udang (Dhar et al ., 2019) dan  masukkan  ke  dalam  3  ml  media alkaline  peptone  water (APW),  proses  ini  disebut  sebagai pengkayaan  ( enrichment ).  Metode  ekstraksi  DNA  yang  digunakan  adalah kit  silica  extraction , sedangkan metode untuk identifikasi Vp AHPND dengan menggunakan metode nested PCR dengan primer  AP4.  Set  primer  AP4  untuk  reaksi  yang  pertama  (first  step  PCR):  AP4-F1  ( 5’-  ATG-AGT- AAC-AAT-ATA-AAA-CAT-GAA-AC –3’)  dan  AP4-R1  (5’-  ACG-ATT-TCG-ACG-TTC-CCC-AA–3’) dan  untuk  raksi  yang  kedua  (nested  PCR):  AP4-F2  ( 5’-TTG-AGA-ATA-AGG-GAC-GTG-GG–3’) dan  AP4-R2  ( 5’-  GTT-AGT-CAT-GTG-AGC-ACC-TTC–3’).  Besar  amplikon  DNA  yang  diinginkan dengan metode ini adalah sebesar 230 bp (OIE, 2019).
Journal of Marine Research Vol 12, No. 2 Mei 2023, pp. 212-220
Pengukuran parameter kualitas perairan dilakukan secara insitu dan parameter yang diukur terdiri  atas dissolved  oxygen  meter (DO  meter),  suhu,  pH,  dan  salnitas.  Parameter  kualitas perairan  adalah  faktor  penting  dalam  mempengaruhi  pertumbuhan  dan  waktu  yang  tepat  dari Vp AHPND dalam  menginfeksi  udang,  sehingga  data  yang  diperoleh  dari  pengukuran  parameter kualitas perairan pada tambak menjadi salah satu elemen penting untuk mengetahui faktor pemicu dari  infeksi  Vp AHPND .  Parameter  kualitas  perairan  juga  dapat  mempengaruhi  pertumbuhan  dan sistem imun dari udang.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penyakit  AHPND  pada  ummnya  menyerang  udang  vaname  pada  usia  30-35  hari  setelah penebaran postlarva pada kolam pemeliharaan (Han et al ., 2015), namun menurut Leobert et al ., (2015) kasus  wabah  penyakit  AHPND  di  Filipina  menyerang  udang  pada  usia  46-96  hari setelah penebaran  postlarva  ke  dalam  kolam  pemeliharaan.  Udang  yang  terinfeksi  penyakit  AHPND umumnya  memilki  berat  antara  0,2-2,5  gram,  akan  tetapi  menurut  Leobert et  al .,  (2015)  dalam Caro et  al .,  (2020)  udang  yang  terinfeksi  AHPND  memilki  berat  berkisar  6-15  gram.  Gejala morfologis  yang  dapat  diamati  pada  udang  yang  diduga  trinfeksi  AHPND  adalah  udang  tampak lesuh, kecepatan pertumbuhan yang terlambat, berenang secara spral, usus dan hepatopankreas terlihat kosong, hepatoankreas mengalami atrofi dan tampak pucat hingga putih (Zorriehzahra dan Banaederakshan, 2015), cangkang melunak, dan kotoran yang berwarna putih, selanjutnya pada fase akhir infeksi udang akan tenggelam dan mengarah pada kematian udang (Hong et al ., 2015). Hasil  diagnosis  morfologis  menunjukkan  sampel  1,  2  dan  3  memilki  karakteristik  yang  di dugakarena penyakit AHPNDyaitu pertumbuhan yang terlambat dan pada sampel 9 menunjukkan gejala morfologis yang berbeda yaitu kotoran udang yang berwarna putih. Berat udang pda sampel 1, 2, dan 3 memilki berat berkisar 2,5-3,5 gram pada usia udang 65 hari. Menurut Samadan et al ., (2018) usia udang 60 hari dapat memiliki berat antara 6-8,5 gram dan pada usia 75 hari beratnya mencapai  9,58-12,93  gram.  Keterangan  tersebut  menunjukkan  bahwa  udang  vaname  pada sampel  1,  2,  dan  3  seharusnya  pada  usianya memiliki  berat  8,5  gram  lebih,  hal  ini menunjukkan bahwa  udang  diduga  sedang  sakit  AHPND.  Sampel  9  memilki  gejala  morfologis  berupa  kotoran yang  berwarna  putih  yang  merupakan  gejala  morfologis  akibat  infeksi  AHPND,  akan  tetapi berbeda dengan sampel 1, 2, dan 3 dengan pertumbuhan yang terlambat pada sampel 9 memilki pertumbuhan yang normal. Gejala morfologis dapat dilihat pada Tabel 1.
Gejala  klinis  yang  berbeda  ditunjukkan  pada  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Dhar et  al ., (2019) pengamatan yang dilakukan dengan menggunakan mikroskop menunjukkan hepatopankreas udang mengalami lesi berat, usia udang berkisar antara 15-21 gram dengan usia udang  72-89  hari.  Gejala  morfologis  mengenai  sampel  yang  terinfeksi  AHPND  di  Filipina menunjukkan  perbedaan  yaitu  hepatopankreas  yang  tampa  pucat  dan  usus  yang  terlihat  kosong (Dabu et  al .,  2015).  Gejala  morfologis  hamper  sama  di  Meksiko  yaitu  hepatopancreas  yang berwarna  putih  dan  mengalami  atrofi  (Nunan et  al .,  2014).  Ekspresi  gejala  morfologis  yang ditunjukkan dan muncul tampaknya bergantung seberapa banyak toksin PirAB ang diprodujksi dan dilepaskan oleh Vp AHPND . Penjelasan ini sesuai dengan pernyataan oleh Tran et al ., (2013) dalam Lin et  al .,  (2019)  infeksi  yang  terjadi  tidak  disebabkan  karena  jumlah  koloni  dari  bakteri  Vp AHPND melainkan kareana jumlah toksin PirAB yang diproduksi dan dilepaskan.
Diagnosis  genetik  yang  dilakuakn  menunjukkan  sampel  1,  2,  dan  3  positif  AHPND  dengan besar amplikon DNA sebesar 230 bp, hasil ini berkorelasi dengan gejala morfologis AHPND yang didapat  dan  sejajar  dengan  kontrol  posistif  dari  AHPND.  Sampel  9  dengan  gejala  morfologis AHPND  menunjukkan  hasil  yang  negatif  dari  hasil  diagnosis  genetik.  Hong et  al .,  (2015) megatakan  bahwa  kotoran  berwarna  putih  pada  udang  tidak  hanya  disebabkan  oleh  infeksi  dari Vp AHPND ,  akan  tetapi  dapat  juga  diakibatkan  oleh  kondisi  lingkungan  dari  udang  vaname.  Hasil Analisa  diagnosis  DNA  Vp AHPND dapat  dilihat  pada  Gambar  2.  Deteksi  dan  identifikasi  penyakit AHPND  di  Bangladesh  yang  tersebar  di  tiga  distrik  yaitu  Distrik  Satkhira  (5  sampel),  Khulna  (4 sampel)  Bagerhat  (5  sampel),  sampel  positif  AHPND  berada  pada  dstrik  Bagerhat  2  sampel  dan Distrik Satkhira 2 sampel (Eshik et al ., 2017). Kasus wabah AHPND di Filipina dari 6 provinsi yang

## Journal of Marine Research Vol 12, No. 2 Mei 2023, pp. 212-220
menjadi lokasi penelitian, sebanyak dua Provinsi menunjukkan kondisi yang parah yaitu di Provinsi Bataan dari 8 sampel seluruhnya terdiagnosis positif penyakit AHPND dan Proinsi Pampanga dar 20 sampel sebanyak 13 diantaranya positif penyakit AHPND (Dabu et al ., 2015). Penyakit AHPND di Amerika Serikat teridentifikasi di daerah Cameron, Texas dan dari 3 sampel yang di diagnosis genetik 2 sampel diantaranya positif AHPND (Dhar et al ., 2019). Penelitian yang sama di Negara Bagian  Sonora,  Meksiko  dari  4  sampel  yang  diidentifikasi  3  sampel  positif  penyakit  AHPND (Nunan et al ., 2016).
Bakteri  Vp AHPND memilkin  pertumbuhan  yang  lebih  baik  dari  Vibrio  lainnya  dan  dapat memanfaatkan  nutrisi  yang  lebih  efisien.  Kemampuan  metabolism  yang  tinggi  memberikan keuntungan bagi bakteri untuk hidup dan berkembang dalam berbagai kondisi lingkungan perairan (Soto-Rodriguez et al ., 2019). Peristiwa penyisipan ISVal1 dan penghapusan 11 kb wilayah pada plasmid pVA1 termasuk gen encoding threonine dehydrogenase (dtds), opero scr, dan operon csu yang  berkaitan  dengan  kemampuan  berenang  dari  sel.  Hilangnya  wilayah  operon  scr menyebabkan  peningkatan  produksi  dan  kemampuan capsular  polysaccharide (CPS),  sehingga sel bakteri memiliki biofilm dengan kemampuan yang lebih tinggi secara signifkan (Fu et al ., 2022). Horizontal  gene  transfer (HGT)  mewadahi  Vp AHPND untuk  mewariskan  gene  pada  klade  spesies yang  berbeda  dari  genus Vibrio dan  melalui  proses  tersebut,  meningkatkan  campuran  dan pertukaran genetik, serta dapat mengubah dari spesies Vibrio dari avirulensi menjadi galur virulen (Restrepo et  al .,  2021).  Peristiwa  ini  memberikan  peningkatan  terhadap  adaptasi  populasi  dari spesies bakteri V. parahaemolyticus (Fu et al ., 2022).
Adaptasi  dan  kelangsungann  hidup  dari  Vp AHPND bergantung  pada  adaptasi  yang  cepat dalam  merespon  keadaan  lingkungan,  hal  ini  juga  mengisyaratkan  waktu  yang  tepat  untuk memproduksi dan melepaskan toksin PirAB. Menurut Soto-Rodriguez et al ., (2022) kelangsungan hidup  bakteri Vibrio bergantung  pada  karbon,  sumber  energi,  DO,  pH,  salinitas,  dan  suhu. V. parahaemolyticus adalah bakteri halofilik dan mendiami perairan laut, paau dan muara di seluruh dunia. Vp AHPND dapat tumbuh pada kandungan NaCl 0,5-10%. Lingkungan perairan yang memiliki kandungan  NaCl  lebih  rendah  atau  lebih  tinggi  menghasilkan  waktu  generasi  bakteri  yang  lebih lambat,  akan  tetapi  Vp AHPND akibat  kondisi  tersebut  dapat  meninkatkan  terjadinya  virulensiakibat faktor  stres  karena  tinggi  atau  rendahnya  dari  salinitas  dan  suhu  (Soto-Rodriguez et  al .,  2019). Menurut  Pragthong  dan  Chirapongsatonkul,  (2020)  dalam  Soto-Rodriguez et  al .,  (2020)  toksin PirAB diproduksi dan dilepaskan oleh Vp AHPND karena terjadinya flukas suhu dari tnggi antara 26- 32 °C ke rendah antara 22-28 °C. Menurut Amatul-Samahah Vp AHPND dapat tumbuh secara optimal pada  suhu  25  °C  dan  dengan  salinitas  25  ppt.Hasil  pengukuran  parameter  kualitas  perairan menunjukkan parameter suhu pada sampel 1, 2 dan 3 tidak memenuhi standart baku mutu untuk pemeliharaan  berdasarkan  PERMEN  KP  No.  75  Tahun  2016.  Parameter  suhu  tampaknya berpengaruh  besar  terhadap  waktu  untuk  memproduksi  dan  melepaskan  ravun  PirAB  oleh Vp AHPND .  Aspek  lain  dari  faktor  pemicu  infeksi  dari  Vp AHPND komposisi  mineral-mineral  seperti kalsium,  magnesium  dan  potassium  yang  berperan  penting  dalam  pertumbuhan  udang  vaname juga dapat menghambat pertumbuhan dan kelangsungan hidup dari Vp AHPND (Boonyawiwat et al ., 2018). Hasil pengukuran parameter kualitas perairan dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 1. Tabel hasil pengamatan gejala morfologis dari AHPND
Sampel Gejala Morfologis Berat (gram) Umur 1 Pertumbuhan lambat 2,5-3,5 65 hari 2 Pertumbuhan lambat 2,5-3,3 65 hari 3 Pertumbuhan lambat 2,5-3,4 65 hari 4 Normal 2,1-2,5 32 hari 5 Normal 2,1-2,5 32 hari 6 Normal 2,1-2,5 32 hari 7 Normal 5,5-6,5 48 hari 8 Normal 2,6-5 39 hari 9 Kotoran berwarna putih 5,5-6,5 48 hari
Tabel 2. Hasil pengukuran parameter kualitas perairan
Parameter Sampel Hasil Pengukuran Standar Baku Mutu Kesesuaian PERMEN KP No. 75 Tahun 2016 Disolved oxygen 1 20 ppm >3,0 ppm Sesuai Suhu 32,8 °C 28-32 °C Tidak sesuai pH 7,8 7,5-8,5 Sesuai Salinitas 20 ppt 5-40 ppt Sesuai Disolved oxygen 2 20 ppm >3,0 ppm Sesuai Suhu 35,1 °C 28-33 °C Tidak sesuai pH 7,7 7,5-8,5 Sesuai Salinitas 20 ppt 5-40 ppt Sesuai Disolved oxygen 3 20 ppm >3,0 ppm Sesuai Suhu 35,8 °C 28-32 °C Tidak sesuai pH 7,4 7,5-8,5 Tidak sesuai Salinitas 10 ppt 5-40 ppt Sesuai Disolved oxygen 4 5,4 ppm >3,0 ppm Sesuai Suhu 28,5 °C 28-32 °C Sesuai pH 6,9 7,5-8,5 Tidak sesuai Salinitas 19 ppt 5-40 ppt Sesuai Disolved oxygen 5 5,9 ppm >3,0 ppm Sesuai Suhu 28,5 °C 28-32 °C Sesuai pH 7,3 7,5-8,5 Tidak sesuai Salinitas 19 ppt 5-40 ppt Sesuai Disolved oxygen 6 5,9 ppm >3,0 ppm Sesuai Suhu 29,5 °C 28-32 °C Sesuai pH 7,2 7,5-8,5 Tidak sesuai Salinitas 19 ppt 28-32 ppt Sesuai Disolved oxygen 6,6 ppm >3,0 ppm Sesuai Suhu 29,5 °C 28-32 °C Sesuai pH 7,5 7,5-8,5 Sesuai Salinitas 7 17 ppt 5-40 ppt Sesuai Disolved oxygen 8 6,4 ppm >3,0 ppm Sesuai Suhu 29,5 °C 28-32 °C Sesuai pH 7,5 7,5-8,5 Sesuai Salinitas 17 ppt 5-40 ppt Sesuai Disolved oxygen 9 6,7 ppm >3,0 ppm Sesuai Suhu 29,5 °C 28-32 °C Sesuai pH 7,6 7,5-8,5 Sesuai Salinitas 17 ppt 5-40 ppt Sesuai Keterangan:  Sampel  yang  diambil  dari  Kecamatan  Socah  adalah  sampel  1,  2  dan 3,  dari  Kecamatan  Kwanyar  adalah  sampel  4,  5  dan  6  dan  dari
Kecamatan Sepuluh adalah sampel 7, 8 dan 9.
Fluktasi pH dapat menurunkan system imun dari udang vaname yang akan mengaran pada infeksi  Vp AHPND ,  karena  mengingat  bakteri V.  parahaemolyticus bersifat  oportunistik  (Amatul Samahah et al ., 2019). Hasil penelitian yang dilakukan oleh Soto-Rodriguez et al ., (2019) Vp AHPND dapat tumbuh optimal pada rentang pH 8-9. Hasil penelitian yang dilakukan oleh Soto-Rodriguez et al ., (2019) Vp AHPND dapattumbuh optimal pada rentang pH 8-9. Hasil pengukuran parameter pH
Gambar 2. Hasil  visualisasi  besar  ukuran  amplikon  DNA  AHPND.  Keterangan:  M:  marker;  K+: kontrol  positif;  K-:  kontrol  negatif;  sampel  positif  AHPND:  1,  2,  dan  3;  sampel  negatif AHPND: 4, 5, 6, 7, 8, dan 9.
sampel yang tidak  memenuhi  standar  baku  mutu  yaitu  pada  sampel  3, 4,  5,  dan  6,  nilai tersebut lebih  rendah  dari  standar  baku  mutu  dan  untuk  pertumbuhan  optimal  pH  yang  dibutuhkan  untuk pertumbuhan  dari  Vp AHPND .  Menurut  Kumar et  al .,  (2020)  dalam  Ahmed et  al .,  (2022)  faktor  yang juga    dapat  mendorong  Vp AHPND umtuk  memproduksi  dan  melepaskan  toksin  PirAB  adalah konsentrasi  asam  empedu  yang  dihasilkan  oleh  udang  vaname.  Masuknya  bakteri  Vp AHPND Menurut  Chen et  al .,  (2017)  dalam  de  Souza  Valente  dan  Wan et  al .,  (2021)  pada  pencernaan udang  dapat  mengakibatkan  pada  peristiwa  dysbiosis  karena  terjadinya  persaingan  langsunng dengan  bakteri  lain  yang  hidup  dalam  pencernaan  udang.  Kondisi  ini  dapat  menyebabkan penurunan keanekaragaman mikroba di dalam heatopankreas udang vaname hingga 53% dalam waktu  7  hari  dari  awal  terjadinya  infeksi  (Holt  et    al.,  2020).  Data  penelitian  ini  dapat  menjadi informasi  awal  tentang  visualisasi  dan  ciri-ciri  udang  yang  terinfeksi  AHPND  yang  dapat dimanfaatkan  pembudidaya  udang  vaname  di  Indonesia  untuk  lebih  waspada  dan  melakukan antisipasi agar tidak mengalami kerugian.

## KESIMPULAN
Hasil  diagnosis  morfologis  yang  diduga  diakibatkan  oleh  penyakit  AHPND  terdapat  pada sampel  1,  2,  dan  3  dengan  karakteristik  pertumbuhan  yang  lambat  dan  pada  sampel  9  berupa kotoran  yang  berwarna  putih.  Diagnosis  genetik  DNA  Vp AHPND menunjukkan  sampel  1,  2,dan  3 positi penyakit AHPND ditandai dengan besar amplikon DNA pada sampel 230 bp. Terdeteksinya infeksi penyakit AHPND pada sampel udang vanname di tambak budidaya udang di Bangkalan di duga  karena  dipicu  ketidaksesuain  parameter  kualitas  perairan  dengan standar  baku  mutu  untuk pememliharaan berdasarkan PERMEN KP No. 75 Tahun 2016 yaitupada parameter suhu dan pH yang ada di tambak tersebut.

## DAFTAR PUSTAKA
Amatul-Samahah, M.A., Muthukrishnan, S., Omar, W.H.H.W., Ikhsan, N.F.M., & Ina-Salwany, M.Y. 2020. Vibrio sp.  Associated  With  Acute  Hematopancreatic  Necrosis  Disease  (AHPND)  Found in Penaeid Shrimp Pond from East Cost of Peninsular Malaysia. Journal Enviromental Biology , 41:1160-1170. DOI: 10.22438/jeb/415(SI)/MS_07.
Asmawati,  N.A.,  Adhawati,  S.S.,  &  Jusni.  2022.  Analisis  efisiensi  produksi  udang  vaname ( Litopenaeus vannamei ) di Kabupaten Maros. Media Agribisnis , 6(1):96-103.
Boonyawiwat, V.I.S.A.N.U., Nga, N.T.V., & Bondadreantaso, M.G., 2018. Factors Associated with Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease (AHPND) Outbreak in the Mekong Delta, Viet Nam, Asian Fish. Sci , 31:226-241. DOI: 10.33997/j.afs.2018.31.SI.016.
Caro,  L.F.A.,  Mai,  H.N.,  Kanrar,  S.,  Cruz-Flores,  R.,  &  Dhar,  A.K.  2020.  A  Mutant  of Vibrio parahaemolyticus PirAB vp (+)  That  Carries  Binary  Toxin  Genes  but  Does  Not  Cause  Acute Hepatopancreatic Necrosis
Desease. Microorganisms, 8(10):1549. DOI:
10.3390/microorganisms8101549.
Dabu,  I.M.,  Lim,  J.J.,  Arabit,  P.M.T.,  Orense,  S.J.A.B.,  Tabardillo  Jr,  J.A.,  Corre  Jr,  V.L.,  & Maningas,  M.B.B.  2017.  The  first  record  of  acute  hepatopancreatic  necrosis  disease  in  the Philippines, Aquaculture research , 48(3):792-799. DOI: https:org/10.1111/are.12923. Dhar,  A.K.,  Piamsomboon,  P.,  Caro,  L.F.A.,  Kanrar,  S.,  Adami  Jr,  R.,  &  Juan,  Y.S.  2019.  First report of acute hepatopancreatic necrosis disease (AHPND) occurringin the USA. Diseases of aquaticorganisms ,132(3):241-247. DOI:10.3354/dao03330.
Eshik,  M.M.E.,  Abedin,  M.M.,  Punom,  N.J.,  Begum,  M.K.,  &  Rahman,  M.S.  2017.  Molecular identification  of  AHPND  positive Vibrio parahaemolyticus  causing  an  outbreak  in  south-west shrimp  farming  regions  of  Bangladesh. Journalof  Bangladesh  academy  of  Sciences , 41(2):127-135. DOI: 10.3329/jbas.v41i2.35492.
Fu, S., Wie, D., Yang, Q., Xie, G., Pang, B., Wang, Y., Lan, R., Wamg, Q., Dong, X., Zhang, X., & Huang,  J.  2020.  Horizontal  Plasmid  Transfer  Promotes  thhe  Dissemination  of  Asian  Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease and Provides a Novel Mechanism for Genetic Exchange and Enviromental Adaptation. Msystems , 5(2):1-18. DOI: 10.1128/mSystem.00799-19. Gunalan, B., Nina, T.S., Soundarapandian, P., & Anand, T. 2013. Nutritive value of cultured white leg shrimp Litopenaeus vannamei . International jounal of fisheries and acuaculture , 5(7):166- 171.
Han,  J.E.,  Tang,  K.F.,  Tran,  L.H.,  &  Lightner,  D.V.  2015.  Photorhabdus  insect-related  (Pir)  toxin- like  genes  in  a  plasmid  of Vibrioparahaemolyticus ,  the  causative  agent  of  acute hepatopancreatic  neceosis  disease  (AHPND)  of  shrimp .  Disease  of  aquatic  organisms , 113(1):33-40. DOI: 10.3354/dao02830.
Hong, X., Lu. L., & Xu, D. 2015. Prograam in research on acute hepatopancreatic necrosis disease (AHPND). Aquaculture  International ,  24(2):577-593.  DOI:10.1007/org/10.1007/s10499-015- 9948-x.
Hur,  R.R.,  Ruchimat,  T.,  &  Nuraini,  Y.  2020.  Analisis  Potensi  dan  Permasalahan  Pengembangan Wilayah Pesisir di Kecamatan Arosbaya Kabupaten Bangkalan Madura Provinsi Jawa Timur. Jurnal Penyuluhan dan Kelautan , 14(2):137-157. DOI: 10.33378/jppik.v14i2.202
Kumar, V., Roy,  S., Behera, B., Bossier, P., & Das,  B.K. 2021. Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease (AHPND): Virulence,  Pathogenesis and Mitigation Strategies in Shrimp Aquaculture. Toxins , 13,(8):1-28. DOI: 10.3390/toxins13080524.
Leobert,  D.,  Cabillon,  N.A.R.,  Catedral,  D.D.,  Amar,  E.C.,  Usero,  R.C.,  Monotilla,  W.D.,  Calpe, A.T.,  Fernandez,  D.D.,  &  Saloma,  C.P.  2015.  Acute  hepatopancreatic  necrosis  disease (AHPND) outbreaks in Penaeus vannamei and Penaeus monodon cultured in the Philippines.
Diseases of aquatic organisms, 116(3):251-254. DOI: 10.3354/dao02919. Lin, S.J., Chen, Y.F., Hsu, K.C., Chen, Y.L., Ko, T.P., Lo, C.F., Wang, H.C., & Wang, H.C. 2019. Structural  insights  to  the  heterotetrameric  interaction  between  the Vibrioparahaemolyticus PirAVP  toxins  and  activation  of  the  crt-like  pore-forming  domain, Toxins ,  11(4):1-15.  DOI: 10.3390/toxins11040233.
Nunan, L., Lighner, D., Pantoja, C., & Gomez-Jimenez, S. 2014. Detection of acute hepatopancreatic necrosis  disease  (AHPND)  in  Mexico. Diseases  of  aquaticorganisms ,111(1):81-86.  DOI: 10.3354/dao02776.
OIE  (Office  International  des  Epizootes).  2019.  Manual  of  Diagnostic  Test  for  Aquatic  Animal: Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease.
Restrepo, L., Domínguez-Borbor, C., Bajaña, L., Betancourt, I., Rodríguez, J., Bayot, B., & Reyes,
A. 2021. Microbial Community Characterization of Shrimp Survivors to AHPND Challenge Test Treated  With  an  Effective  Shrimp  Probiotic  ( Vibrio  diabolicus ). Microbime, 9:1-20.  DOI: 10.1186/s40168-021-010438.
Samadan,  G.M.,  Rustadi.,  Djumanto.,  &  Murwantoko.  2018.  Production  Performance  of  Whiteleg shrimp Litopenaeus  vannamei at  different  stocking  densities  reared  in  sand  ponds  using plastic mulch. Aquaculture, Aquarium, Conservation & Legislation , 11(4):1213-1221. Santanumurti, M.B., Samara, S.H., & Nindarwi, D.D. 2019. Water quality in teh North Madura: is it suittable  for  vannamei  shrimp  farming  or  not?. Jurnal  Ilmu  Perikanan  dan  Sumberdaya Perairan) , 8(1):753-758. DOI: 10.23960/aqs.v8il.p753-758.
Soto-Rodriguez,  S.,  Lozano-Olvera,  R.,  Palacious-Gonzales,  D.A.,  Bolan-Mejia,  C.,  &  Rendon- Anguilar, K.G. 2019. Characterization and growth conditions of Vibrioparahaemolyticus strains with  different  virulence  degrees  that  cause  acute  hepatopancreatic  necrosis  disease  in Litopenaeus  vannamei . Journal  of  the  World  Aquaculture  Society ,  50(5):1002-1015.  DOI: 10.1111/jwas.12617.
Soto-Rodriguez,  S.A.,  Lozano-Olvera,  R.,  Ramos-Clamont  Montfort,  G.,  Zenteno,  E.,  Sanchez- Salgado, J.L., Vibanco-Perez, N., & Anguilar, K.R.G. 2022. New Insights into the Mechanism of  Action  of  PirAB  from Vibrio parahaemolyticus. Toxins ,  14(4):1-18.  DOI:  10.3390/toxins140 40243.
Yen, S.C., Mao, J.Y., Lin, H,Y., Huang, H.T., Harroun, S.G., Nain, A., Chang, H.T., Lin, H.Y., Chen, L.  L.,  Huang,  C.,  &  Lin,  H.J.  2021.  Multifuncional  carbonized  nanogels  to  treat  lethal  acute hepatopancreatic  necrosis  disease. Journal  of  nanobiotechnology ,  19(1):1-15.  DOI:  10.1186/ s12951-021-01194-8.
Zorriehzahra,  M.J.,  &  Banaederakhshan,  R.  2015.  Early  Mortality  Syndrome  (EMS)  as  New Emerging Threat in Shrimp Industry. Advances in Animal and Veterinary Sciences , 3(2):64-72. DOI: 10.14737/journal.aavs/2015/3.2s.64.72.