## Jurnal Ilmu Farmasi dan Farmasi Klinik (JIFFK)
Vol. 16, No. 1, JUNI 2019, Hal. 80 – 85 ISSN: 1693 -7899

## IDENTIFIKASI DAN ISOLASI SENYAWA LIKOPEN DARI SEMANGKA ( CITRULLUS LANATUS)
Eva Monica 1) , Rollando Rollando 2*)
1,2 Program Studi Farmasi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Ma Chung Jl. Villa Puncak Tidar Blok N-01, Malang-Jawa Timur Indonesia-65151 Telp: (0341) 550171 ro.llando@machung.ac.id

## INTISARI
Likopen  adalah  salah  satu  senyawa  fitokimia  dari  golongan  karotenoid  penghasil  utama pemberi  pigmen  berwarna  merah  yang  terdapat  pada  semangka.  Semangka  merupakan  tanaman merambat berbentuk bulat mengandung vitamin C dan vitamin A serta memiliki kadar antioksidan tinggi. Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi senyawa likopen dalam semangka. Ekstraksi daging  buah  semangka  dengan  metode  maserasi.  Identifikasi  senyawa  likopen  dengan  instrumen spektrofotometri  UV-Visibel  yang  diikuti  identifikasi  dengan  metode  KLT  dan  fraksinasi  ekstrak menggunakan  KLT  preparatif  dengan  pelarut  kloroform:etanol  (1:1),  serta  identifikasi  hasil fraksinasi  dengan Fourier  Transform  Infrared  Spectroscopy (FT-IR).  Hasil  Penelitian  identifikasi ekstrak  buah  semangka  menggunakan  metode  KLT  didapatkan  tiga  spot  dan  pada  hasil spektrofotometri  UV-Vis  menunjukkan  tiga  puncak  yaitu  antara  440-520  nm.  Pada  identifikasi fraksinasi  ekstrak  buah  semangka  dengan  menggunakan  FT-IR  didapatkan  gugus  penyusun  dari struktur  likopen,  akan  tetapi  tidak  menunjukkan  gugus  R-CH=CH-R  yang  dimiliki  likopen, sedangkan pada hasil uji dengan spektrofotometri UV-Vis panjang gelombang yang muncul berada pada  206  dan  245  yang  menunjukkan  keberadaan  senyawa  lain.  Dari  hasil  penelitian  dapat disimpulkan  bahwa  pada  pengujian  identifikasi  ekstrak  diketahui  buah  semangka  memiliki kandungan  senyawa  likopen,  akan  tetapi  pada  pengujian  identifikasi  likopen  pada  hasil  fraksinasi ekstrak  buah semangka tidak ditemukan dengan pasti keberadaan likopen karena pada hasil FT-IR hanya  ditunjukkan  gugus-gugus  yang  terkandung  dan  pada  hasil  Spektrofotometri  UV-Vis ditemukan panjang gelombang dari senyawa lain.
kata kunci : Semangka , Likopen, Spektrofotometri UV-Vis, Spektrofotometri IR

## ABSTRACT
Lycopene  is  one  of  the  phytochemical  compounds  of  the  carotenoid  group,  the  main producer  of  red  pigments  found  in  watermelons.  Watermelon  is  a  round-shaped  vines  containing vitamin  C  and  vitamin  A  and  has  high  antioxidant  levels.  This  study  aims  to  identify  lycopene compounds  in  watermelons.  Extraction  of  watermelon  flesh  by  maceration  method.  Identification of lycopene compounds with UV-Visibel spectrophotometry instrument followed by identification with the TLC method and fractionation of extracts using preparative TLC with chloroform: ethanol (1:  1)  solvents,  and  identification  of  fractionation  results  with  Fourier  Transform  Infrared Spectroscopy (FT-IR). The results of the identification of watermelon fruit  extract  using the  TLC method  obtained  three  spots  and  the  results  of  UV-Vis  spectrophotometry  showed  three  peaks namely between 440-520 nm. The identification of fractionation of watermelon extract using FT-IR obtained a constituent group of lycopene structures, but did not show the R-CH = CH-R group that is owned by lycopene, whereas the results of the test with UV-Vis spectrophotometry appearing at 206 and 245 which indicate the presence of other compounds. From the results of the study it can
be concluded that the testing of known extracts of watermelon fruit contains lycopene compounds, but the testing of lycopene identification on the results of fractionation of watermelon fruit extracts was not found with certainty the existence of lycopene because the FT-IR results were only shown and  contained  on  the  results  UV-Vis  spectrophotometry  was  found  to  be  the  wavelength  of other compounds.
keywords : Watermelon, Lycopene, UV-Vis Spectrophotometry, IR Spectrophotometry
Corresponding author: Rollando Program Studi Farmasi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Ma Chung Jl. Villa Puncak Tidar Blok N-01, Malang-Jawa Timur Indonesia-65151 Email: ro.llando@machung.ac.id

## PENDAHULUAN
Likopen  adalah  salah  satu  senyawa  fitokimia  dari  golongan  karotenoid  penghasil  utama pemberi  pigmen  berwarna  merah  yang  terdapat  pada  semangka  dan  buah-buahan  lain  yang berwarna  merah.  Likopen  merupakan  antioksidan  yang  sangat  kuat,  mempunyai  BM  536,87,  titik cair 172-173°C, rumus molekul C 40 H 56 , serta karotenoid asiklis terbuka tak jenuh dengan 13 ikatan rangkap,  11  diantaranya  ikatan  rangkap  terkonjugasi  linier  serta  tidak  mempunyai  aktivitas provitamin A.

## Gambar 1. Struktur Likopen
Struktur khas dari likopen menunjukkan sifat unik antioksidan dengan kemampuan mengikat oksigen tunggal dan menangkap peroksida.Mampu mengikat oksigen tunggal dua kali lebih tinggi daripada  β-karoten  dan  sepuluh  kali  lebih  kuat  daripada  α-tokoferol.  Likopen  berbentuk  kristal jarum, panjang, dengan bentuk tepung yang berwarna kecoklatan. Terlarut dalam benzene, heksen, kloroform dan pelarut organik yang bersifat hidrofobik kuat. Mampu mengalami degradasi dengan asam,  proses  isomerasi  dan  oksidasi  akibat  cahaya,  oksigen,  suhu  tinggi,  teknik  pengeringan, penyimpanan dan proses pengelupasan.
Likopen merupakan suatu senyawa yang penting, bukan hanya karena penggunannya sebagai pewarna  alami  makanan  tetapi  juga  karena  likopen  telah  diakui  memiliki  manfaat  bagi  kesehatan (Nur  Syafaatur  dkk.,  2015).  Pada  pembentukan  likopen,  suhu  mempunyai  peranan  penting,  jika suhu naik maka likopen akan semakin banyak terbentuk. (Sari dkk., 2007). Pemisahan likopen dari buah  semangka  dapat  dilakukan  dengan  metode  ekstraksi  cair-cair,  menggunakan n -heksan  atau etanol sebagai solven, serta pengujian kadar likopen dengan menggunakan spektrofotometer.
Tanaman  semangka  merupakan  tanaman  merambat  yang  masih  kerabat  dari  labu-labuan ( Cucurbitaceae ),  melon  ( Cucumismelo )  dan  ketimun  ( Cucumissativus ).  Dalam  buah  semangka terdapat  kandungan  zat-zat  yang  sangat  berguna  bagi  kesehatan  tubuh  manusia.  Manfaat  dari kandungan  buah  semangka  antara  lain  melindungi  jantung,  memperlancar  pengeluaran  urine,  dan menjaga kesehatan kulit. Semangka termasuk keluarga Cucurbitaceae , tidak hanya memiliki fungsi penghilang  dahaga,  tetapi  berkhasiat  antioksidan  yang  baik.Buah  berbentuk  bulat  yang mengandung vitamin C dan vitamin A dengan jumlah besar. Dengan kadar antioksidan yang tinggi, semangka  dapat  diandalkan  sebagai  penetral  radikal  bebas  dan  mengurangi  kerusakan  sel  dalam tubuh (Laila dkk., 2012).

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  terdiri  dari  corong  pisah  250  ml,  cawan  penguap,  neraca  analitik,  plat KLT, gelas ukur 10 ml, erlenmeyer 50 ml, blender, evaporator,  pinset, oven, spektrofotomer UV- Vis  dan  FT-IR.  Bahan  yang  digunakan  terdiri  dari  buah  semangka,  kloroform,  etanol,    n-heksan, silica gel 60, dan aquades.

## Preparasi Buah Semangka
Disiapkan 1 buah semangka merah yang masih segar yang didapatkan di pasar mergan Dieng Malang. Di ambil daging semangka, kemudian diblender hingga halus. Saring jus buah semangka.

## Ekstraksi Buah Semangka
Ditimbang jus semangka 1000 gram, lalu dimasukkan ke dalam toples. Tambahkan 300 ml n - heksan ke dalam toples dan gojok kuat dan dibiarkan hingga larutan terpisah menjadi 2 fase yaitu fase  air  dan  fase n -heksan  yang  mengandung  likopen.  Diambil  bagian  fase n -heksan,  lalu  di evaporasi  menggunakan  evaporator  pada  suhu  40  C  dengan  kecepatan  75  rpm.  Hasil  evaporasi diuapkan  di  atas waterbath pada  suhu  40  C  hingga  didapatkan  ekstrak  kering.  Hasil  ekstraksi ditimbang kemudian dihitung :

## %Yield :
Identifikasi Likopen dari Ekstrak Buah Semangka dengan Spektrofotometri UV-Vis. Ditimbang  ekstrak  semangka  10  mg,  lalu  dimasukkan  ke  dalam  tube.  Ditambahkan  3  ml petroleum eter ke dalam tube. Kocok tube hingga ekstrak dapat homogen. Larutan dimasukkan ke dalam  labu  ukur  10  ml  dan  ditambahkan  petroleum  eter  hingga  tanda  kalibrasi.  Ukur  absorbansi larutan dengan spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang 300-600 nm.
Identifikasi Likopen dalam Ekstrak Buah Semangka dengan Kromatografi Lapis Tipis. Diukur plat KLT dengan panjang 10 cm dan lebar 1 cm, lalu dipanaskan di oven pada suhu 110  C  selama  15  menit.  Dibuat  pelarut  untuk  fase  gerak  menggunakan  kloroform  :  etanol  (1:1). Ekstrak dilarutkan dengan etanol. Dibuat spot larutan ekstrak pada plat KLT. Tunggu spot hingga mencapai batas, lalu dikeringkan. Amati spot pada sinar UV 366 nm dan hitung nilai RF.

## Pembuatan KLT-Preparatif
Ditimbang silica gel 30 gram. Ditambahkan aquadest 70 ml dan dicampur hingga homogen. Disiapkan  cetakan  KLT-Preparatif  ukuran  20  cm  X  20  cm.  Tuangkan  larutan  silica  gel  dengan ketebalan yang diinginkan pada cetakan. Diamkan silica gel hingga kering dan di oven pada  suhu 100  C.

## Fraksinasi likopen menggunakan KLT-Preparatif
Ditimbang ekstrak 10 mg dan dimasukkan tube, lalu ditambahkan etanol 20 ml dan di gojok hingga  homogen.  Dibuat  larutan  fase  gerak  sebanyak  20  ml  dengan  campuran  kloroform :  etanol (1:1) dan dimasukkan ke dalam  camber. Dibuat  garis lintas  spot 17 cm pada plat KLT-Preparatif. Buat  spot  larutan  ekstrak  dengan  pipa  kapiler.  Letakkan  plat  KLT-Preparatif  pada  camber  dan ditunggu  hingga  spot  sampaipada  tanda  batas.  Dibiarkan  pat  KLT-Prepaatif  hingga  kering, kemudian  amati pada  sinar UV dengan panjang  gelombang 366 nm. Spot  yang terbentuk  diambil dan disimpan pada wadah botol vial.  Serbuk  yang dihasilkan dilarutkan dengan campuran  larutan kloroform  :  etanol  (1:1)  hingga  serbuk  berwarna  putih.  Larutan  yang  dihasilkan  diuapkan  pada suhu ruang hingga didapatkan ekstrak etanol yang kering.
Identifikasi Likopen dari fraksinasi ekstrak buah semangka dengan FT-IR. Ekstrak likopen yang dihasilkan dari hasil fraksinasi diukur absorbansinya menggunakan FT- IR.  Dilakukan  pembersihan  pada  alat  dengan  pelarut  yang  sesuai  dengan  sifat  ekstrak  buah semangka.
Identifikasi  likopen  dari  fraksinasi  ekstrak  buah  semangka  dengan  Spektrofotometri UV-Vis.
Ekstrak  likopen  yang  dihasilkan  dari  proses  fraksinasi  dilarutkan  dengan  etanol  sebanyak  3 ml.  Kemudian  diukur  absorbansi  larutan  pada  panjang  gelombang  200-600  nm  dengan spektrofotometri  UV-Vis.  Dilakukan  pembersihan  pada  alat  dengan  pelarut  yang  sesuai  dengan sifat ekstrak buah semangka.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi
Ekstraksi buah semangka menggunakan metode cair-cair dengan pelarut n-hexsan didapatkan hasil  sebesar  0,515  gram  atau  sebesar  0,0515  %.  Hasil  yang  didapatkan    sangat  sedikit,  hal  ini dikarenakan kadar air dalam semangka sangat tinggi sehingga senyawa yang dapat larut ke dalam pelarut hanya sebagian kecil (Mariani dkk, 2018).
Identifikasi Ekstrak Semangka dengan Spektrofotometri UV-Vis. Ekstrak  yang  didapatkan  dari  proses  ekstraksi  kemudian  di  identifikasi  senyawa lycopene menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis  pada  panjang  gelombang  300-600  nm.  Pada  pengujian identifikasi  ekstrak  semangka  terdapat  3  puncak  pada  panjang  gelombang  440  –  520  nm  seperti pada gambar 2.Hasil yang didapatkan memungkinkan bahwa ekstrak buah semangka mengandung senyawa  likopen  hal  ini  dikarena  senyawa  likopenakan  muncul  pada  panjang  gelombang  472  nm (Tupe dkk , 2015).

## Gambar 2. Hasil Identifikasi Ekstrak Semangka dengan Spektrofotometri UV-vis

## Identifikasi Ekstrak Semangka dengan metode KLT
Identifikasi  senyawa  likopendilakukan  juga  menggunakan  metode  KLT.  Metode  ini dilakukan  untuk  melihat  nilai  Rf  pada  ekstrak  serta  digunakan  untuk  mencari  konsentrasi  pelarut yang  tepat  untuk  uji  menggunakan  KLT  preparatif.  Senyawa  likopen  akan  terdeteksi  pada  rentan 0,1  ingga  0,8  dengan  warna  merah  atau  orange.  (  Roh  dkk,  2013).  Pemilihan  Fase  gerak  sangat penting  dan  harus  disesuaikan  dengan  tingkat  kepolaran  terhadap  senyawa  yang  ingin  kita uji.Seperti  pada  likopenmerupakan  senyawa  non  polar  sehingga  di  perlukan  fase  gerak  non  polar atau semipolar (Saeid dkk, 2016).
Nilai  Rf  yang  didapat  dari  metode  KLT  sanggat  tinggi  dan  tidak  terdapat  pemisahan  serta berwarna Orange pada percobaan pertama. Sehingga dilakukan pencarian pelarut yang tepat untuk memisahkan  senyawa.Dari  beberapa  kali  percobaan  didapatkan  pelarut  yang  cocok  yaitu  pelarut kloroform  dan  etanol  (1:1).Penggunaan  Kloroform  dan  etanol  menghasilkan  3  spot  tetapi  masih terjadi tailing. Adanya  beberapa  spot  menunjukan  jika  ekstrak  semangka  yang  dimiliki mengandung lebih dari satu senyawa. Sehingga perlu dilakukan fraksinasi untuk memisahkan spot- spot yang nantinya akan di identifikasi untuk menemukan senyawa likopen dengan metode KLT-P.
Gambar 3. KLT (klorofrom dan etanol)

## Fraksinasi likopen dengan metode KLT Preparatif
Pada proses fraksinasi digunakan klorofrom dan etanol sebagai fase gerak untuk memisakan senyawa.  Dari  proses  KLT-P  didapatkan  3  spot  yang  berbeda  yang  dilihat  dari  sinar  UV  366  nm
dan  265  nm  seperti  pada  gambar  4.  Kemudian  3  spot  berbeda  sebelum  di  identifikasi  di  lakukan pencucian  terlebih  dahulu  menggunakan  pelarut  yang  sama  dengan  fase  geraknya.  Hasil  yang didapatkan karena terlalu sedikit kemudian akan dilakukan analisis menggunakan IR dan UV-Vis.
Gambar 4. KLT Preparatif
Karakteristik Fraksinasi ekstrak buah semangka dengan FT-IR. Karakteristik  fraksinasi  ekstrak  buah  semangka  dengan  FT-IR  dilakukan  untuk mengidentifikasi gugus fungsi dari senyawa likopen.Likopen memiliki struktur C 40 H 56 sehingga di perlukan  pengujian  menggunakan  FT-IR  untuk  mengetahui  apakah  semua  gugus  dari  struktur likopen terpenuhi. Hasil pengujian isolat menggunakan FTIR dapat dilihat seperti pada gambar 5.
Gambar 5 Karakteristik FT-IR
Data spektrum likopen yang akan muncul pada puncak serapan seperti berikut : 720,282 cm -1 ; 1100,19 cm -1 ; 1461,78 cm -1 ; 1576,52 cm -1 ; 1744,3 cm -1 ; 2850,27 cm -1 ; 2918,73 cm -1 dan 3346,85 cm -1 . Kemudian spktrum yang telah didapat  dianalisis dengan bantuan beberapa acuan pada buku dan  jurnal  sehingga  padat  disimpulkan  bahwa  pada  serapan  720,282  cm -1 menunjukan  adanya gugus  CH.  Pada  serapan  1100,19  cm -1 menunjukan  gugus  C-O streaching. Pada  serapan  1461,78 cm -1 menunjukan  gugus  CH 2 dari  likopen,  1576,52  cm -1 dan  1744,3  cm -1 menunjukan  adanya gugus  cincin  aromatis  C=C  pada  rantai  likopen.  Pada  serapan  2850,27  cm -1 dan    2918,73  cm -1 menunjukan  adanya  gugus  C-H  pada  likopen  serta  pada  serapan  3346,85  cm -1 memungkinkan tertapat gugus O-H yang terbentuk dari uap air yang berikatan dengan likopen atau adanya ikatan absorbsi  yang  kuat  dengan  air  (Christian  dkk,  2015).    Dari  hasil  FTIR  yang  didapatkan  diketahui bahwa  senyawa  yang  dianalisis  memiliki  gugus-gugus  lycopene  seperti  yang  diharapkan.  Tetapi pada senyawa tidak memiliki gugus R-CH=CH-R dari likopen yang terjadi pada serapan 960 cm - 1 (Priam dkk, 2016).

## Identifikasi hasil Fraksinasi dengan Spektrofotomatri UV-Vis
Pada  pengujian menggunakan spektro UV- vis didapatkan puncak pada 206 nm dan 245nm (Gambar  6).  Pada    panjang  gelombang  206  dan  245  menunjukan  adanya  ikatan  C=C  yang  tidak terkonjugasi  (Susilawati  ,  2016).  Panjang  gelombang  206  dan  245  dapat  terjadi  karena  adanya transisi  electron  dari  π->π*  ikatan  rangkap  diduga  merupakan  senyawa  steroid  (Maharani  dkk,
2016).  Tetapi  hal  ini  perlu  di  analisis  lebih  lanjut  untuk  membuktikan  apakah  memang  terdapat senyawa  steroid  atau  flavonoid  atau  hanya  ketidak  stabilan  antara  isolat  dan  pelarut.Peneliti  lebih menyimpulkan  bahwa  panjang  gelombang  yang  muncul  pada  serapan  206  dan  245  merupakan senyawa  flavonoid  hal  ini  dikarenakan  semangka  mengandung  flavonoid  tapi  tidak  mengandung steroid.

## Gambar 6. Identifikasi Lycopene dengan UV-Vis

## KESIMPULAN
Dari hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa pada pengujian identifikasi ekstrak diketahui buaha  semangka  memiliki  kandungan  senyawa  likopen,  akan  tetapi  pada  pengujian  identifikasi likopen  pada  hasil  fraksinasi  ekstrak    buah  semangka  tidak  ditemukan  dengan  pasti  keberadaan likopen  karena  pada  hasil  FT-IR  hanya  ditunjukkan  gugus-gugus  yang  terkandung  dan  pada  hasil Spektrofotometri UV-Vis ditemukan panjang gelombang dari senyawa lain. harus jelas dan mencerminkan hasilnya

## DAFTAR PUSTAKA
Christiant,D.,  Gavra,S.F.,  dan  Masyithah,  Z.,  2015,  Kristalisasi  likopen  dari  buah  Tomat ( Lycopersicon esculentum) menggunakan antisolven, Jurnal Teknik Kimia USU, 4(4). Laila D.R, Hesty K, Galih D.S. Niken I. M., 2012. Analisis Kadar Antioksidan pada Masker Wajah Berbahan Dasar Lapisan Putih Kulit Semangka ( Citrullus Vulgaris Schrad ). Seminar Nasional Penelitian, Pendidikan dan Penerapan MIPA, Fakultas MIPA, Universitas Negeri Yogyakarta.
Maharani,  T.,  Sukandar,  D  dan  Hermanto,  S.,  2016.  Karakterisasi  Senyawa  Hasil  Isolasi  dari Ekstrak Etil Asetat Daun. Jurnal Kimia Valensi.2(1). 55-62
Mariani,  S.,  Rahman,  N.,  dan  Supriadi.  2018.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Buah  Semangka ( Citrullus lanatus ). Jurnal Akademika Kimia. 7(2):96-101.
Nur,S.R.,  Panji,  R,  Reka,,W,  Rika  M,  dan  Cikra  NHS,  2015,  Perbandingan  Kadar  Likopen  pada Manilkara  zapota L., Gnetum  gnemon L., Ipomoea  batatas L.,  dan Momordica  charantia L. dengan Menggunakan Campuran Solven n-Heksan, Aseton, dan Etanol, Jurnal Farmasi Sains dan Terapan, 2(1).
Priam,  F.,  Odile,M.,  Marcus,R.,  Jô,  L.V,  Ravin.E.J.S.,  2016, Lycopene  extraction  from  Psidium guajava  L.  and  evaluation  of  its  antioxidant  properties  using  a  modified  DPPH  test ,  IOSR Journal of Environmental Science, Toxicology and Food Technology. 67-73
Roh,  M,  K.,  and  Hee.  M.J,  2013,  A  Simple  Method  For  The  Isolation  Of  Lycopene  From Lycopersicon Esculentum, Botanical Sciences. 91(2): 187-192.
Saeid,A., Eun J.B., Sagor M.S.A., Rahman A., Akter M.S., Ahmed M.  2016. Effects of Extraction and  Purification  Methods  on  Degradation  Kinetics  and  Stability  of  Lycopene  from Watermelon under Storage Conditions . Journal of Food Science 81(11):C2630-C2638.
Sari  I.K,  Kun  T.D,  Sunarmani.2007.  Potensi  Likopen  dalam  Tomat  Untuk  Kesehatan, Buletin Teknologi Pascapanen Pertanian, Vol. 3.11. Susilawati,  N.,  2016.  Isolasi  dan  identifikasi  senyawa  steroid  dari  daun  Rimbang  ( Solanum Torvum). Skripsi. Riau. Universitas Negeri Riau. Tupe,  R.B.,  Patil,  S.M.,  dan  Sakhale,  B.K.,  2015, Extraction  of  lycopene  by  supercritical  fluid extraction, International Journal of Science,  Spirituality, Business  and Technology, 3(2):  43- 48.