Potensi dan Karakteristik Bakteri Simbion Karang Lunak Sinularia sp. sebagai Anti Bakteri Escherichia coli dari Perairan Pulau Gili Labak Madura Indonesia
Eka Nurrahema Ning Asih*, Ary Giri Dwi Kartika
Program Studi Ilmu Kelautan, Fakultas Pertanian, Universitas Trunojoyo Madura Jl. Raya Telang, Telang-Kamal, Bangkalan, Jawa Timur 69162 Indonesia *Corresponding author, e-mail: eka.asih@trunojoyo.ac.id
ABSTRAK: Gili  Labak  merupakan  pulau  kecil  di  Kabupaten  Sumenep-Madura  yang  memiliki keanekaragaman  karang  lunak  melimpah  salah  satunya  Sinularia  sp..  Beberapa  studi  literatur menyatakan  bahwa  Sinularia  sp.  memiliki  berbagai  jenis  bakteri  simbion  yang  berperan  penting dalam siklus hidup karang lunak ini. Bakteri yang bersimbiosis dengan Sinularia sp. memiliki potensi besar sebagai agen anti bakteri khususnya bakteri gram negatif Escherichia coli. Identifikasi isolat bakteri  yang  bersimbiosis  dengan  Sinularia  sp.  ini  merupakan  alternatif  upaya  pemanfaatan sumberdaya  karang  lunak  secara  konservatif  dan  keberlanjutan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui potensi anti bakteri dan mengidentifikasi jenis bakteri simbion dari ekstrak karang lunak Sinularia  Sp.  yang  berasal  dari  perairan  Gili  Labak  Madura.  Metode  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  uji  zona  hambat  bakteri  menggunakan  overlay  dan  metode  difusi  dengan media ZoBell 2216E. Karakteristik molekuler sampel diamati menggunakan metode PCR 16s rDNA dengan  ekstraksi  DNA  menggunakan  Chelex  100  dan  Primer  amplifikasi  PCR  27F  dan  1492R. Pohon filogenetik dibangun dengan menggunakan aplikasi MEGA 6. Hasil penelitian diketahui dari 4 isolat bakteri (L2.2, L2.3, L2.4, dan L2.5), terdapat 1 isolat yang yang memiliki aktivitas antibakteri Escherichia  coli  kuat  yaitu  Isolat  L2.5.  Isolat  L2.5  memiliki  diameter  zona  hambat  terbesar  yaitu 2.207  ±  0.401  cm.  Strain  bakteri  aktif  di  Isolat  L2.5  adalah  Virgibacillus  marismortui  dengan kemiripan urutan 100%. Hasil penelitian ini menjadi  informasi awal yang dapat digunakan sebagai referensi  untuk  mengoptimalkan  potensi  pemanfaatan  bakteri  Virgibacillus  marismortui  di  bidang bioteknologi laut khususnya industri farmasi di masa yang akan datang.
Kata kunci: Escherichia coli ; Sinularia sp.; Virgibacillus marismortui; Zona hambat bakteri

## Potential and Characteristics of Bacteria Associated with Sinularia sp. as Escherichia coli Antibacterial from Gili Labak Madura Waters
ABSTRACT:  Gili  Labak  is  a  small  island  in  Madura  district  which  has  a  diversity  of  soft  coral Sinularia  sp.  Several  literature  studies  state  that  Sinularia  sp.  has  various  types  of  symbiotic bacteria that play an important role in the life cycle of this soft coral. This symbiotic bacterium with Sinularia sp. has great potential as an antibacterial agent especially inhibiting of gram-negative bacteria Escherichia coli. Identification of bacterial isolates that are in symbiosis with Sinularia sp.  is  an  alternative  to  conservative  and  sustainable  use  of  soft  coral  resources.  This  study aims  to  determine  the  anti-bacterial  potential  and  identify  the  type  of  bacteria  from  the  s oft coral  extract  of  Sinularia  sp.  from  the  waters  of  Gili  Labak-Madura.  The  method  used  in  this research  is  bacterial  inhibition  zone  test  using  overlay  and  diffusion  methods  with  ZoBell 2216E  media.  Molecular  characteristics  of  samples  were  observed  using  PCR  16s  rDNA method with DNA extraction using Chelex 100 and PCR amplification primers 27F and 1492R. Phylogenetic trees were constructed using MEGA 6 application. The results showed that there were  4  isolates  (L2.2,  L2.3,  L2.4,  and  L2.5),  there  was  1  isolate  that  had  strong  Escherichia coli  antibacterial  activity,  namely  Isolate  L2.5.  L2.5  isolate  has  the  largest  inhibitory  zone diameter  of  2.207  ±  0.401  cm.  The  active  bacterial  strain  in  the  L2.5  isolate  was  Virgibacillus marismortui with 100% sequence similarity. The results of this study serve as initial information that can be used as a reference to optimize the potential utilization of Virgibacillus marismortui bacteria in marine biotechnology, especially the pharmaceutical industry in the future.
Keywords:  Escherichia  coli;  Sinularia  sp.;  Virgibacillus  marismortui; Bacterial  inhibition  zone.

## PENDAHULUAN
Ekosistem  terumbu  karang  merupakan  ekosistem  hayati  laut  kompleks  yang  bersifat  multi peran diantaranya berperan penting bagi ekologis, ekonomi, wisata, kimia dan biologis (Salanggon dan Finarti, 2016). Salah satu peran penting terumbu karang khususnya karang lunak pada sektor ekonomi  yaitu  sebagai marine  natural  product ,  karena  biota  ini  memiliki  suatu  subtansi  yang berperan  sebagai  bahan  aktif  yang  disebut  kandungan  senyawa  bioaktif  (Rozirwan et  al., 2014). Kandungan senyawa bioaktif pada karang lunak terbentuk dari hasil metabolit sekunder. Senyawa bioaktif  yang  diproduksi  oleh  karang  lunak  ini  digunakan  sebagai  alat  mempertahankan  diri  dari acaman  yang  ada  di  sekitar  ekosistem  terumbu  karang  (Tanod et  al., 2019).  Karang  lunak  juga memiliki  sifat allelopatik yaitu  kemampuan  tubuh  biota  ini  untuk  mengeluarkan  zat  tertentu  yang biasanya digunakan sebagai alat perlindungan diri dari predator (Chen et al., 2012).
Salah  satu genus karang  lunak  yang  mendominasi  dan  banyak  di  temukan  di  perairan  laut Indonesia  adalah  Sinularia  (Dewanto et  al., 2019).  Karang  lunak Sinularia sp . tumbuh  dan berkembang  biak  secara  optimal  pada  rata-rata  suhu  perairan  berkisar  23-25°C  dan  salinitas sebesar 32- 35 ‰. Sinularia sp . memiliki potensi besar sebagai bahan baku farmasi karena biota ini menghasilkan  beberapa  senyawa  bioaktif  diantaranya  terpen  (Kamel  dan  Slattery,  2005), diterpenes  flexibilide  dan  sinulariolide  (Aceret et  al., 1998),  senyawa  sinugran-disterols  A-D  dan trihydroxysteroids  (Ahmed et  al., 2007),  cembrane  diterpenoids  (Lin et  al., 2009),  steroid hurgadacin  (Shaaban et  al., 2013)  dan  sesquiterpenoids  capillosananes  S-Z  (Chen et  al., 2014). Senyawa-senyawa  bioaktif  pada Sinularia sp . ini  berfungsi  sebagai  senyawa  bioaktif  yang berperan  menghabat  aktivitas  bakteri  atau  dikenal  sebagai  anti  bakteri  (Rozirwan et  al., 2014), antivirus dan anti inflamasi (Cheng et al., 2010), penghambat aktivitas NFkB dan iNOS (Riyadi et al., 2019) dan penghambat aktivitas NO (Fattorusso et al., 2011 dan Putra et al., 2012). Gili Labak adalah salah satu pulau kecil di Kabupaten Sumenep-Madura yang berdasarkan hasil foto citra LDCM ( Landsat Data Continuity Mission ) memiliki luas terumbu karang sebesar 66 ha dengan rincian luas terumbu karang hidup yaitu 49.089,6 cm 2 dan luas terumbu karang mati yaitu  51.654,6  cm 2 (Muhsoni,  2017).  Pulau  ini  yang  memiliki  keanekaragaman  karang  lunak melimpah salah satunya Sinularia sp . Beberapa literatur menyatakan bahwa ekstrak Sinularia sp. memiliki aneka ragam senyawa bioaktif misalnya steroid. Steroid yang terkandung dalam Sinularia sp. tergolong  senyawa  bioaktif  yang  berfungsi  sebagai  anti  bakteri  (Rajaram et  al .,  2014)  dan berpotensi menghambat pertumbuhan Escherichia coli sebesar  80-90% (Salanggon et  al ., 2020). Pemanfaatan Sinularia sp. sebagai  sumber  anti  bakteri Escherichia  coli membutuhkan  kajian yang cermat karena kegiatan ini secara tidak langsung dapat mengancam populasi karang lunak Sinularia sp. di  perairan  khususnya  perairan  Gili  Labak.  Salah  satu  upaya  konservatif  dalam pemanfaatan Sinularia sp. sebagai  anti  bakteri Escherichia  coli adalah  dengan  memanfaatkan mikroorganisme  berupa  bakteri  yang  bersimbiosis  dengan  karang  lunak  tersebut.  Identifikasi potensi  dan  karakteristik  bakteri  simbion  karang  lunak Sinularia sp.  sebagai  anti  bakteri Escherichia  coli dari  perairan  pulau  Gili  Labak  Madura  perlu  dilakukan  sebagai  upaya menemukan  informasi  tentang  pemanfaatan  bakteri  simbion Sinularia sp. sebagai  anti  bakteri dengan  tidak  mengganggu  populasi  karang  ini  di  alam.  Hal  inilah  yang  melatarbelakangi penelitian  ini  dilaksanakan.  Tujuan  dari  penelitian  ini  untuk  mengetahui  potensi  anti  bakteri  dan mengidentifikasi  jenis  bakteri  simbion  dari  ekstrak  karang  lunak Sinularia sp.  yang  berasal  dari perairan Gili Labak Madura.

## MATERI DAN METODE
Sampel Sinularia sp.  dikumpulkan  dari  perairan  Gili  Labak  Kabupaten  Sumenep-Madura menggunakan Scuba  diving dengan  kedalaman  7-11  meter  pada  titik  koordinat  07 o 12’17.2”  LS dan  114 o 02’59.9”  BT  (Gambar  1).  Sampel  yang  telah  dikolektif  kemudian  disimpan  dengan  cara dimasukkan  kedalam  plastik  zip  lock  dan  dimasukkan  ke  dalam cool  box .  Sampel  selanjutnya dibawa  ke  Laboratorium  Bioteknologi  Prodi  Ilmu  Kelautan  Universitas  Trunojoyo  Madura  untuk dilakukan  isolasi  bakteri.  Isolasi  bakteri  dilakukan  dengan  menghancurkan  sampel Sinularia sp. menggunakan mortar  dan alu steril. Sampel halus dihomogenkan dengan  9 mL air laut  sebagai pengenceran 10 -0 , kemudian dilakukan pengenceran berkala yaitu dari pengenceran  10 -1 sampai
Journal of Marine Research Vol 10, No.3 Agustus 2021, pp. 355-362
10 -5 .  Setiap  pengenceran  10 -3 ,  10 -4 dan  10 -5 dicuplik  sebanyak  100µL  lalu  disebar  di  atas  media agar half strength zobell 2216E dan diinkubasi selama 48 jam pada suhu kamar (Benson, 2002).

## Uji Zona Hambat Bakteri (Sabdono dan Radjasa, 2006)
Uji zona hambat bakteri simbion karang lunak Sinularia sp. terhadap bakteri Escherichia coli dilakukan dengan metode overlay (Sabdono dan Radjasa, 2006) dan metode difusi agar (Radjasa et al , 2007). Metode overlay dimulai dengan cara mengambil satu ose bakteri simbion Sinularia sp. ditanam  pada media  ZoBell  2216E  laut  dengan bentuk  bulatan kecil  sebanyak  5  -  12  titik  bakteri dalam  1  cawan  petri.  Sampel  biakan  tersebut  diinkubasi  pada  suhu  kamar  selama  2  hari.  Isolat bakteri Escherichia  coli ditanam  pada  media  cair  Zobell  2216E  kemudian  homogenkan  dengan rotary shaker selama 2x24 jam. Suspensi bakteri Escherichia coli tersebut kemudian diambil 1 mL (1% dari total volume soft agar) dan dimasukkan ke dalam 100 mL media Zobell 2216E soft agar. Aktivitas  zona  hambat  bakteri  diamati  dengan  indikator  terbentuknya  zona  bening  pada  biakan bakteri Escherichia coli pada media Zobell 2216E soft agar yang telah dituangkan kedalam cawan petri yang berisi biakan bakteri simbion Sinularia sp.
Metode  difusi  agar  dimulai  dari  membuat  biakan  bakteri Escherichia  coli dengan  cara mengambil  100µL  bakteri Escherichia  coli pada  fase  log  (10 9 sel/mL)  disebar  diatas  media  agar zobell  2216E.  Biakan  bakteri Escherichia  coli tersebut  kemudiaspn  diberi  sepuluh  kertas  cakram yang  telah  berisi  bakteri Sinularia sp. di  atas  permukaannya  dan  diinkubasi  pada  suhu  kamar selama  48  jam.  Aktivitas  antibakteri  ditunjukkan  dengan  terbentuknya  clear  zone  disekitar  kertas cakram.

## Ekstraksi DNA (Walsh et al., 1991)
Ekstraksi  DNA  dilakukan  dengan  menggunakan  Chelex  100  menurut  Walsh et  al., (1991). Sel bakteri simbion Sinularia sp. diambil dan dimasukkan ke dalam mikrotube steril berisi 100 µL Aquabides (ddH 2 O) dan 1 mL Saponin 0,5% dalam PBS. Simpan sampel tersebut selama 24 jam pada  suhu  40 o C.  Sampel  bakteri  dalam  mikrotube  yang  telah  disimpan  24  jam  tersebut disentrifuge dengan kecepatan 12.000 rpm selama 10 menit dan pisahkan supernatannya. Sampel ditambahkan 1 mL ddH 2 O steril dalam PBS  kemudian  dicentrifuge kembali  dan pisahkan supernatannya  untuk  mencuci  atau  menghilangkan  residu  saponin.  Pelet  yang  telah  bebas  dari residu saponin tersebut ditambahkan 100 µL Aquabides (ddH 2 O) dan 50 µL Chelex 100 20%,
Journal of Marine Research Vol 10, No.3 Agustus 2021, pp. 355-362
kemudian dipanaskan selama 10 menit pada suhu 90 o C dan di homogenkan menggunakan vortex sesekali  setelah  5  menit  serta  dicentrifuge  dengan  kecepatan  12.000  rpm  selama  10  menit. Konsentrasi  DNA  diukur  menggunakan  Spektrofotometer  Nano  Drop  2000m.  Ekstraksi  DNA disimpan dalam freezer dengan suhu -20 o C.

## Amplifikasi PCR 16S rDNA (Sabdono dan Radjasa, 2006)
Amplifikasi  PCR  16S  rDNA  adalah  metode  standar  yang  digunakan  untuk  mengecek filogenetik dan keanekaragaman mikroorganisme laut (Sabdono dan Radjasa, 2006) salah satunya bakteri  simbion Sinularia sp . Primer  yang  digunakan  dalam  analisa  filogenetik  bakteri  simbion Sinularia sp . untuk PCR 16s rDNA adalah primer universal 27 F (5’AGAGTTTGATCMTGGCTCAG- 3’)  dan  primer  spesifik eubacteria 1492R  (5’TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3’)  merujuk  pada Lane  (1991).  Komposisi  produk  PCR  yang  digunakan  GoTaq®Green  Master  Mix  Promega  (12,5 µL), primer 27 F (1 µL), primer 1492 R (1 µL), template DNA (1 µL) and ddH2O (9,5 µL), sehingga total  produk  PCR  yaitu  25  µL.  Perlakuan  temperatur  yang  digunakan  PCR  16S  rDNA  ini  yaitu tahap  denaturasi  awal  menggunakan  suhu  95 o C  selama  3  menit,  denaturasi  menggunakan  suhu 95 o C  selama  1  menit,  tahap  annealing  menggunakan  suhu  55 o C  selama  1  menit,  dan  tahap extension menggunakan suhu 72 o C selama 1 menit. Pengujian dilakukan di laboratorium Tropical Marine Biotechnology, UNDIP.

## Pembuatan Pohon Filogenetik (Altschul et al., 1997; Radjasa et al., 2008)
Produk  PCR  dilakukan  dianalisis  sekuen  DNA  kemudian  produk  dianalisa  menggunakan koneksi internet melalui program pelacakan database Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) pada laman National Center for Biotechnology Information, National Institute for Health, USA yaitu www.ncbi.nlm.nih.gov (Altschul et  al., 1997 ; Radjasa et  al., 2008) . Sekuens  yang  diperoleh selanjutnya      diolah     menggunakan  software  MEGA  6. Pohon filogenetik  dilakukan  dengan  cara mensejajarkan  seluruh  sekuens  dan  sekuens  pembandingnya  menggunakan  analisis  algortima metode Neighbor-Joining (NJ) dan pengujian nilai bootstrap 10000 kali.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Karang lunak secara alamiah memproduksi 60%  substansi bioaktif (Higa et al ., 2001; Sheu et  al .,  2002)  berupa  senyawa  metabolit  sekunder  diantaranya  steroid,  steroid  glikosida  dan terpenoid yang berfungsi sebagai antibakteri patogen (Wang et al ., 2012). Jenis dan struktur kimia metabolit sekunder yang dihasilkan oleh karang lunak beraneka ragam dan bersifat unik  (Minh et al ., 2011; Blunt et al ., 2013). Senyawa ini diproduksi oleh organisme saat kebutuhan metabolisme primer  tercukupi,  sehingga  senyawa  metabolit  sekunder  cenderung  digunakan  untuk  mekanisme evolusi dan bahan untuk adaptasi lingkungan (Yang et al ., 2018). Kemampuan ektrak Sinularia sp. dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri  tidak  lepas  dari  peran  kandungan  senyawa  metabolit sekunder  yang  dihasilkan  oleh  biota  laut  ini. Salanggon et  al .,  (2020)  melaporkan Sinularia sp. memproduksi beberapa senyawa meatabolit sekunder diantaranya turunan dari golongan alkaloid, flavonoid,  saponin,  dan  steroid. Senyawa  steroid  yang  terkandung  pada  karang  lunak  digunakan sebagai materi biologis untuk menghambat aktivitas inflamasi, kanker, bakteri dan alergi (Jia et al ., 2005). Ekstrak  karang  lunak  dari  genus Sinularia sp. memiliki  kemampuan  menghambat pertumbuhan  bakteri  patogen  yang kuat (Rozirwan et  al., 2014) . Berdasarkan  studi  literatur  hasil penelitian yang pernah dilaksanakan sebelumnya menyatakan bahwa ekstrak Sinularia sp. mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri  gram  negatif  diantaranya  menghambat  pertumbuhan  bakteri Bacillus  subtilis dengan  konsentrasi  hambat  minimum  (MIC)  mencapai  7,8  ug.L -1 dan  bakteri Escherichia  coli mencapai  62,5  ug.L -1 (Aboutabl et  al .,  2013).  Karang  lunak Sinularia sp. yang diekstrak menggunakan fraksi ethanol juga mampu menghambat aktivitas bakteri Escherichia coli dengan  membetuk  diameter  zona  hambat  sebesar  1,763±1,74  cm  dan  bakteri Staphylococcus aureus sebesar  1,743±2,29  cm  Tanod et  al .,  (2018).  Beberapa  hasil  penelitian  sebelumnya  ini menunjukkan bahwa pemanfaatan ekstrak Sinularia sp. sebagai anti Escherichia coli sudah sering dikaji dan digunakan .
Hasil  pengujian  aktivitas  anti  bakteri Escherichia  coli menggunakan  isolat  bakteri  simbion karang  lunak  dari  perairan  pulau  Gili  Labak-Madura  tertera  pada  Tabel  1.  Tabel  1  menunjukkan

## Journal of Marine Research
Vol 10, No.3 Agustus 2021, pp. 355-362
bahwa zona hambat bakteri menggunakan metode overlay dan metode difusi menggunakan media ZoBell 2216E diperoleh dari 4 isolat bakteri dan hanya ada 1 isolat yang mengindikasikan adanya kemampuan  menghambat  aktivitas  antibakteri Escherichia  coli .  Indikator  terjadinya  aktivitas  anti bakteri Escherichia  coli tersebut  ditunjukkan  dengan  terbentuknya  zona  bening  yang  di  sekitar kertas  cakram  yang  telah  ditempatkan  diatas  permukaan  biakan  bakteri Escherichia  coli .  Hasil pengujian  difusi  agar  ditemukan  isolat  dengan  kode  L2.5  memiliki  diameter  zona  hambat  lebih besar  yaitu  sebesar  2,207  ±  0,401  cm  (Tabel  1).  Diameter  zona  hambat  bakteri Escherichia  coli dari bakteri simbion Sinularia sp. yang berasal dari perairan Gili Labak ini termasuk kategori kuat dengan  ukuran  diameter  yang  lebih  besar  jika  dibandingkan  hasil  penelitian  sebelumnya. Katiandagho et  al., (2019)  menyatakan  karang Sinularia sp. yang  diekstrak  menggunakan  fraksi metanol  dapat  menghasilkan  daya  hambat  bakteri Escherichia  coli sebesar  1,267 cm  sedangkan pada fraksi kloroform sebesar 1,05 cm. Hal ini mengindikasikan bahwa penggunaan bakteri yang bersimbion  dengan  karang  lunak Sinularia sp. sebagai  antibakteri  bakteri Escherichia  coli berpeluang  besar  dan  konservatif  dibandingkan  penggunaan  ekstrak  karang  lunak Sinularia sp. secara langsung.
Identifikasi jenis bakteri simbion karang lunak Sinularia s . aktif pada isolat dengan kode L2.5 perlu dilakukan untuk memastikan jenis bakteri pada isolat tersebut. Pengujian jenis bakteri pada isolat  ini  dilakukan  dengan  uji  molekuler  berdasarkan  pendekatan  genetiknya  menggunakan  16S rDNA. Hasil identifikasi secara molekuler ditunjukkan pada Tabel 2 dan Gambar 2.
Tabel 1 Hasil uji aktifitas anti bakteri dan uji difusi dari bakteri simbion Sinularia sp.
Kode Isolat Uji aktifitas anti bakteri dan uji difusi bakteri simbion Sinularia sp. Aktivitas antibakteri Diameter Zona Hambat (cm) L2.5 + 2,207 ± 0,401 Tabel 2 Karakteristik molekuler dari bakteri simbion Sinularia sp.
Kode Isolat Karakteristik molekuler dari bakteri simbion Sinularia sp. Kerabat dekat Kemiripan (Simillarty) L2.5 Virgibacillus marismortui 100%
Gambar 2 .  Pohon  filogenetik  16s  menggunakan  metode  Neighbor-joining  dari  simbion  bakteri Sinularia sp . berpotensi sebagai antibakteri Escherichia coli.
Journal of Marine Research Vol 10, No.3 Agustus 2021, pp. 355-362
Tabel  2  menunjukkan  bahwa  hasil  analisis  filogenetik  molekuler  menunjukkan  bahwa  isolat bakteri simbion karang lunak Sinularia sp. aktif sebagai anti bakteri Escherichia coli kuat tersebut adalah Virgibacillus  marismortui dengan  kemiripan  100%. Virgibacillus  marismortui merupakan jenis  bakteri  yang  berkerabat  dekat  dengan Virgibacillus  massiliensis dan Virgibacillus  kapii (Gambar  2).  Genus Virgibacillus merupakan  klasifikasi  bakteri  yang  tergolong  gram  positif  motil dan  pembentuk  endospora,  serta  memiliki  sifat  halofilik  (Peng et  al .,  2009).  Terdapat  16  spesies yang ditemukan dari genus ini saat ini (Heyndrickx et al ., 1998). Bakteri Virgibacillus marismortui merupakan kelompok bakteri yang bersifat motil. Bakteri ini memiliki karakter visual koloni yang melingkar dan tidak beraturan, menonjol, dan berwarna putih krem  dengan  diameter  2-6  mm  (Tanasupawat et  al .,  2010). Virgibacillus  marismortui hidup  pada kondisi  aerobic  pada  kisaran  suhu  yang  luas  yaitu  15-50 o C,  pH  berkisar  6,0-8,0  dan  tumbuh optimal dengan kadar salinitas yang tinggi atau dikenal dengan sebutan bakteri halofilik (Arahal et al ., 1999). Bakteri halofilik adalah kelompok bakteri yang pertumbuhannya tergantung pada kadar NaCl  (Pelczar  dan  Chan,  1988).  Kadar  NaCl  yang  didiami  sebagai  habitat  bakteri  halofilik  ini berkisar antara 2% (setara dengan 0,3 M) hingga 30% (setara dengan 5 M) (Ford, 1993). Bakteri halofilik  diklasifikasikan  tiga  yaitu  spesies  halofil  rendah  (spesies  halofilik  yang  tumbuh  optimal pada 2-5% NaC), spesies halofil sedang (spesies halofilik yang tumbuh optimal pada 5-20 NaCl) dan jenis halofil yang ekstrim (spesies halofilik yang tumbuh optimal pada kadar garam sekitar 20- 30% NaCl) (Dassarma dan Arora, 2001).

## KESIMPULAN
Potensi  bakteri  simbion  karang  lunak Sinularia sp. sebagai  anti  bakteri Escherichia  coli dari Perairan  Pulau  Gili  Labak  Madura  teridentifikasi  pada  Isolat  L2.5  dengan  indikator  terbentuknya diameter  zona  hambat  sebesar  2,207±0,401  cm.  Strain  bakteri  aktif  di  Isolat  L2.5  adalah Virgibacillus marismortui dengan kemiripan 100%. Hasil penelitian ini menjadi informasi awal yang dapat digunakan sebagai referensi untuk mengoptimalkan potensi pemanfaatan bakteri Virgibacillus marismortui di bidang bioteknologi laut khususnya industri farmasi di masa yang akan datang.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terima  kasih  disampaikan  kepada  Lembaga  Penelitian  dan  Pengabdian  Masyarakat Universitas Trunojoyo Madura melalui Program Hibah Penelitian Mandiri UTM 2017 dengan nomor kontrak penelitian: 2717/UN46.3.1/PN/2017.

## DAFTAR PUSTAKA
Altschul, S.F., Madden, T.L., Schäffer, A.A., Zhang, J., Zhang, Z., Miller, W. & Lipman, D.J. 1997. Gapped  BLAST  and  PSI-BLAST:  A  New  Generation  of  Protein  Database  Search  Programs. Nucleic Acids Research , 25(17):3389-3402. DOI: 10.1093/nar/25.17.3389.
Aboutabl, E.S.A., Azzam, S.M., Michel, C.G., Selim, N.M., Hegazy, M.F., Ali, A.H. & Hussein, A.A. 2013.  Bioactive  Terpenoids  from  The  Red  Sea  Soft  Coral Sinularia  polydactyla . Natural Product Research , 27(23):2224-2226. DOI: 10.1080/14786419.2013.805333. Aceret, T.L., Coll, J.C., Uchio, Y. & Sammarco, P.W. 1998. Antimicrobial Activity of The Diterpenes Flexibilide  and  Sinulariolide  Derived  from Sinularia  flexibilis Quoy  and  Gaimard  1833 (Coelenterata:  Alcyonacea,  Octocorallia). Comparative  Biochemistry  and  Physiology  Part  C, 120(1):121-126. DOI: 10.1016/S0742-8413(98)00032-2.
Ahmed,  A.F.,  Tai,  S.H.,  Wu,  Y.C.  &  Sheu,  J.H.  2007.  Sinugrandisterols  A-D,  Trihydroxysteroids from  The  Soft  Coral Sinularia  grandilobata . Steroids ,  72(4):368-374.  DOI: 10.1016/j.steroids. 2007.01.001 Arahal,  D.R.,  Marquez,  M.C.,  Volcani,  B.E.,  Schleifer,  K.H.  &  Ventosa,  A.  1999. Bacillus marismortui sp. nov., A New Moderately Halophilic Species from The Dead Sea. International Journal of Systematic Bacteriology , 49(2):521 –530. DOI: 10.1099/00207713-49-2-521.
Benson,  H.J.  2002 . Microbiological  Applications  a  Laboratory  Manual  in  General  Microbiology, Ed.8, The Mcgraw-Hill Companies, New York.
Blunt,  J.W.,  Copp,  B.R.,  Keyzers,  R.A.,  Munro,  M.H.G.  &  Prinsep,  M.R.  2013.  Marine  Natural Products. Natural Product Report , 30(2):237 –323. DOI: 10.1039/c2np20112g. Chen, W.,  Li,  Y.  &  Guo,  Y.  2012.  Terpenoids  of Sinularia Soft  Corals:  Chemistry  and  Bioactivity. Acta Pharmaceutica Sinica B, 2(3):227 –237. DOI: 10.1016/j.apsb.2012.04.004.
Chen,  D.,  Cheng, W.,  Liu,  D.,  Ofwegen,  L.  V.,  Proksch,  P.  &  Lin, W.  2014.  Capillosananes  S –Z, New  Sesquiterpenoids  from  The  Soft  Coral Sinularia  capillosa . Tetrahedron  Letters , 55(19):3077-3082. DOI: 10.1016/j.tetlet.2014.03.132.
Cheng, S.Y., Chuang, C.T., Wen, Z.H., Wang, S.K., Chiou, S.F., Hsu, C.H., Dai, C.F., & Duh, C.Y., 2010. Bioactive Norditerpenoids from The Soft Coral Sinularia gyrosa . Bioorganic & Medicinal Chemistry , 18(10):3379-3386. DOI:10.1016/j.bmc.2010.04.012.
DasSarma,  S.  &  Arora,  P.  2001,  Halophiles:  Encylopedia  of  Life  Sciences,  Nature  Publishing Group, USA.
Dewanto,  D.K.,  Finarti,  Hermawan,  R.,  Ndobe,  S.,  Haryadi,  P.H.  &  Tanod,  W.A.  2019.  Aktivitas antioksidan  ekstrak  karang  lunak  asal  Teluk  Palu,  Sulawesi  Tengah,  Indonesia. Jurnal Pengolahan  dan  Bioteknologi  Kelautan  dan  Perikanan ,  14(2):163-178.  DOI:  10.15578/jpbkp. v14i2.583
Fattorusso, E., Luciano, P., Putra, M.Y., Taglialatela-Scafati, O., Ianaro, A., Panza, E. & Cerrano,
C.,  2011.  Chloroscabrolides,  Chlorinated  Norcembranoids  from  The  Indonesian  Soft  Coral Sinularia sp. Tetrahedron , 67(41):7983-7988. DOI: 10.1016/j.tet.2011.08.024. Ford,  T.E.  1993.  Aquatic  Microbiology  an  Ecological  Approach,  Blackwell  Scientific  Publication,
Boston.
Heyndrickx, M., Lebbe, L., Kersters, K., De, V.P., Forsyth, G. & Logan, N.A. 1998. Virgibacillus : A New  Genus  to  Accommodate  Bacillus  Pantothenticus  (Proom,  Knight  1950)  Emended Description Virgibacillus  pantothenticus.  International  Journal  of  Systematic  Bacteriology , 48(1):99-106. DOI: 10.1099/00207713-48-1-99.
Higa, T., Tanaka, J., Ohtani, I.I., Musman, M., Roy, M.C. & Kuroda, I., 2001. Bioactive Compounds from  Coral  Reef  Invertebrates. Pure  and  Applied  Chemistry ,  73(3):589-593.  DOI: 10.1351/pac200173030589.
Jia, R., Guo, Y., Mollo, E. & Cimino, G. 2005. Two New 19-oxygenated Polyhydroxy Steroids from The Hainan soft coral Sinularia sp.. Natural Product Research, 19(8):789 –794. DOI: 10.1080/ 14786410500123833.
Kamel, H.N. & Slattery, M. 2005. Terpenoids of Sinularia : Chemistry and Biomedical Applications. Pharmaceutical Biology , 43(3):253-269. DOI: 10.1080/13880200590928852.
Katiandagho,  L., Wewengkang,  D.S.  &  Sudewi,  S.  2019.  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  dan  Fraksi Karang  Lunak Sinularia  sp. di Teluk  Manado. Pharmacon ,  8(1):114-119.  DOI:  10.35799/pha. 8.2019.29244
Lane, D.J, 1991. 16S/32S rRNA Sequencing . In: Stackrbrandt, E. & Goodfellow M., 2013. Nucleiuc Acid Techniques in Bacterial Systematics, John Wiley and Sons Inc, New York.
Lin,  Y.S.,  Chen,  C.H.,  Liawa,  C.C.,  Chen,  Y.C.,  Kuo,  Y.H.  &  Shen,  Y.C.  2009.  Cembrane Diterpenoids  from  The  Taiwanese  Soft  Coral Sinularia  flexibilis . Tetrahedron ,  65(45):9157- 9164. DOI: 10.1016/j.tet.2009.09.031.
Minh, C.V., Kiem, P.V., Nhiem, N.X., Cuong, N.X., Thao, N.P., Nam, N.H., Anh, H.L.T., Tung, D.C.,
Thuy, D.T.T., Kang, H.K., Jang, H.D. & Kim, Y.H. 2011. Cytotoxic and Antioxidant Activities of Diterpenes and Sterols from The Vietnamese Soft Coral Lobophytum compactum . Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters , 21(7):2155-2159. DOI: 10.1016/j.bmcl.2011.01. 072. Muhsoni,  F.F.  2017.  Potensi  dan  Pengelolaan  Pulau  Gili  Labak  dan  Kajian  Pulau  di  Sumenep, UTMpress, Bangkalan.
Pelczar,  M.J.  &  Chan,  E.C.S.,  1988,  Dasar-dasar  Mikrobiologi,  Universitas  Indonesia  Press, Jakarta.
Peng, Q.Z., Chen, J., Zhang, Y.Q., Chen, Q. H., Peng, D.J., Cui, X.L., Li. W.J. & Chen, Y.G., 2009. Virgibacillus  zhangjiangensis sp. nov.,  A Marine Bacterium Isolated from Sea Water . Antonie van Leeuwenhoek, 96(4):645-652. DOI: 10.1007/s10482-009-9381-0.
Putra,  M.Y.,  Lanaro,  A.,  Panza,  E.,  Bavestrello,  G.,  Cerrano,  C.,  Fattorusso,  E.  &  Taglialatela- Scafati,  O.,  2012.  Sinularioside,  A  Triacetylated  Glycolipid  from  The  Indonesian  Soft  Coral Sinularia  sp. ,  is  An  Inhibitor  of  No  Release. Bioorganic  &  Medicinal  Chemistry  Letters , 22(8):2723 –2725. DOI: 10.1016/j.bmcl.2012.02.102.
Radjasa,  O.K.,  Sabdono,  A.,  Junaidi,  A.  &  Zocchi,  E.,  2007.  Richness  of  Secondary  Metabolite- Producing  Marine  Bacteria  Associated  with  Sponge Haliclona Sp. International  Journal  of Pharmacology , 3(3):275-279. DOI:10.3923/ijp.2007.275.279. Radjasa,  O.K.,  Sabdono,  A.,  Wiese,  J.  &  Imhoff,  J.F.  2008.  Coral  as  Source  of  Bacteria  with Antimicrobial Activity. Journal of Coastal Development , 11(3):121-130.
Rajaram,  S.,  Ramesh,  D.,  Ramulu,  U.,  Anjum,  M.,  Kumar,  P.,  Murthy,  U.S.N.,  Sastry,  G.N.  & Venkateswarlu, Y. 2014. Chemical Examination of The Soft Coral Sinularia kavarattiensis and Evaluation of Antimicrobial Activity. Indian Journal of Chemistry , 53(8): 1086 –1090. Riyadi,  P.H.,  Wahyudi,  D.  &  Tanod,  W.A.  2019.  Effects  of  Dichloromethane Sarcophyton  sp.p . extract  on  the  Lipopolysaccharide-induced  Expression  of  Nuclear  Factor-kappa  B  and Inducible  Nitric  Oxide  Synthase  Inmice. Veterinary World ,  12(12):1897-1902.  DOI:  10.14202/ vetworld.2019.1897-1902.
Rozirwan,  Bengen,  D.G.,  Zamani,  N.P.,  Effendi,  H.  &  Chaidir.  2014.  Screening  on  The  Potential Bioactive  Compounds  of  Antibacterial  Activity  in  Soft  Coral  Collected  from  South  Bangka Island Waters  and  Lampung  Bay. Journal  of  Tropical  Marine  Science  and  Technology ,  6(2): 283-295. DOI: 10.29244/jitkt.v6i2.9005.
Sabdono,  A.  &  Radjasa,  O.K.  2006.  Anti-Bacterial  Property  of  A  Coral-Associated  Bacterium Bacillus sp  Against  Coral  Pathogenic  BBD  (Black  Band  Disease). Journal  of  Coastal Development , 9(3):175-182.
Salanggon,  A.M.  &  Finarti.  2016,  Struktur  Populasi  Rekrut  Karang  Hermatifik  pada  Metode  Fish Home di Teluk Palu. Journal of Fisheries , Marine and Aquatic Science , 1(1):33-38.
Salanggon,  A.M.,  Aswani,  S.,  Hasanuddin,  A.,  Hermawan,  R.,  Riyadi,  P.H.,  Dewanto,  D.K.  & Tanod, W.A.  2020.  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Karang  Lunak Sinularia  sp.. dengan  Metode Broth-Dilution. Jurnal Kelautan Nasional , 15(3):153-164. Shaaban,  M.,  Shaaban,  K.A.  &  Ghani,  M.A.  2013.  Hurgadacin:  A  New  Steroid  from Sinularia polydactyla . Steroids , 78(9):866-873. DOI: 10.1016/j.steroids.2013.05.006.
Sheu,  J.H.,  Ahmed,  A.F.,  Shiue,  R.T.,  Dai,  C.F.  &  Kuo,  Y.H.  2002.  Scabrolides  A-D,  Four  New Norditerpenoids  Isolated  from  The  Soft  Coral Sinularia  scabra. Journal  of  Natural  Product , 65(12):1904-1908. DOI: 10.1021/np020280r Tanasupawat,  S.,  Chamroensaksri,  N.,  Kudo,  T.  &  Itoh  T.  2010.  Identification  of  Moderately Halophilic Bacteria from Thai Fermented Fish (pla-ra) and Proposal of Virgibacillus siamensis sp.nov. Journal  of  General  and  Applied  Microbiology ,  56(5):369-379.  DOI:  10.2323/jgam.56. 369 Tanod, W.A., Aristawati, A.T., Putra, M.Y. & Muliadin. 2018. Soft Coral ( Sinularia sp. ) Extracts with Antibacterial Activity. Omni Akuatika, 14(1):108-117. DOI: 10.20884/1.oa.2018.14.1.375. Tanod, W. A., Yanuhar, U., Maftuch, Wahyudi, D. & Risjani, Y. 2019. DPPH Scavenging Property of Bioactives from Soft Corals Origin Palu Bay, Central Sulawesi, Indonesia, Proceeding of 1st International Conference on Fisheries and Marine Science , Ternate, Oct 10-14.
Wang,  S.K.,  Hsieh,  M.K.  &  Duh,  C.Y.  2012.  Three  New  Cembranoids  from  The  Taiwanese  Soft Coral Sarcophyton ehrenbergi . Marine Drugs , 10(7):1433-1444. DOI: 10.3390/md10071433. Walsh, P. S., Metzger, D. A., & Higuchi, R., 1991. Chelex 100 as a Medium for Simple Extraction of DNA for PCR-based Typing from Forensic Material. Biotechniques , 10(4):506-513. Yang,  L.,  Wen,  K.S.,  Ruan,  X.,  Zhao,  Y.X.,  Wei,  F.,  &  Wang,  Q.,  2018.  Response  of  Plant Secondary  Metabolites  to  Environmental  Factors. Molecules ,  23(762):1-26.  DOI:  10.3390/ molecules23040762.