PERTUMBUHAN TANAMAN MARASI (Curculigo latifolia) DENGAN PERBEDAAN KONSENTRASI NAA (Naphthalene Acetic Acid) DAN  BAP (Benzyl Amino Purine) SECARA IN VITRO
In Vitro Marasi Plant (Curculigo latifolia) using different concentration of
NAA (Naphthalene Acetic Acid) and BAP (Benzyl Amino Purine)
Mohamad Ana Syabana 1) , Imas Rohmawati 1) , Endah Pamuji Ningsih 2 )
1) Dosen Jurusan Agroekoteknologi Fakultas Pertanian Universitas Sultan Ageng Tirtayasa;
2) Mahasiswa Jurusan Agroekoteknologi Fakultas Pertanian Universitas Sultan Ageng Tirtayasa
Email: anasyabana@untirta.ac.id

## ABSTRACT
The aim of this research was to know In Vitro initiation on shoots of marasi (Curculigo latifolia) by different concentration of  NAA (Naphthalene Acetic Acid)
And BAP (Benzyl Amino Purine). This research has been done at  Biotechnology Laboratory  of  Agriculture  Faculty,  Sultan  Ageng  Tirtayasa  University  since August  to  October  2014.  This  research  used  Randomized  Complete  Design (RCD)  with  two  factors.  The  first  factor  was  NAA  concentration  with  4  levels, they  were    mg/l;  0,2  mg/l;  0,4  mg/l;  0,6  mg/l.  The  second  factor  was  BAP concentration  with  4  levels,  they  were  0  mg/l;  0,5  mg/l;  1  mg/l;  1,5  mg/l.  The research  showed  that  the  NAA  concentration  gave  significant  effect  on  plant height  at  4,  5,  6  and  7  WAP  (Week  after  planting),  and  the    BAP  concentration gave  significant  effect  on  plant  height  at  7  WAP.  There  were  not  combination effect on NAA and BAP concentration on bud initiation time and plant height. All the  living  explants  during  the  observation  reached  83,5%  with  the  number  of contaminating explants was 60% and browning explants 87,5%.
Key words : explants , marasi , NAA, BAP

## PENDAHULUAN
Tanaman  marasi  merupakan  salah satu  tanaman  yang  banyak  ditemukan di hutan-hutan tropis Indonesia.
Tanaman ini termasuk ke dalam family
Hypoxidaceae. Salah  satu  bagian  yang  khas  dari tanaman  ini  adalah  buahnya  yang memiliki  rasa  manis  yang  unik.  Rasa manis dari buah tersebut akan tertinggal  di  lidah  sehingga  saat mengkonsumsi  air  putih  maka  air tersebut akan terasa manis. Rasa manis tersebut  bukan berasal  dari karbohidrat
tetapi  dari  protein  jenis  curculin (Yamashita et  al., 1990).  Curculin merupakan senyawa yang rendah kalori sehingga dapat dijadikan sebagai alternative pemanis alami yang menyehatkan.
Selain  buahnya,  daun,  batang  dan akar  dari C.  latifolia semuanya  telah digunakan  sebagai  obat  tradisional terhadap  penyakit  demam  (Brink  dan Escobin,  2003).  Bunga  dan  akar digunakan sebagai obat gangguan perut dan diuretik, sedangkan rimpang digunakan untuk mengobati menorrhagia  dan  diaplikasikan  dalam
pengobatan  tradisional  sebagai  krim untuk  penyakit  ophthalmia  (Brink  dan Escobin,  200.  Di  Kalimantan,  daun C.
latifolia digunakan  dalam  pengobatan tradisional.  Rimpang  tanaman  juga telah digunakan sebagai obat tradisional  untuk  penyakit  kuning  dan ekstrak  rimpang C.  latifolia dapat menghambat  virus  hepatitis  B,  yang selanjutnya telah di publikasikan penggunaannya sebagai obat tradisional (Wiart, 2000 ).  Oleh karena itu, C.  latifolia memiliki  potensi  besar untuk industri dimanfaatkan khususnya dalam bidang kesehatan. Berdasarkan banyaknya manfaat dari tanaman marasi ini, maka sebenarnya  tanaman  ini  layak  untuk dikembangkan  secara  lebih  maksimal.
Tetapi  perkembangan  tanaman  ini lambat  karena  sulit  untuk  melakukan perbanyakan secara konvensional. Studi awal pada tingkat perkecambahan benih  marasi  menunjukkan  bahwa benih  memiliki  tingkat  perkecambahan yang  rendah.  Hal  ini  diduga  bahwa benih bersifat rekalsitran atau membutuhkan media berkecambah dan perawatan  yang  khusus.  Selain  itu, keberhasilan  perkecambahan  biji  dapat dipengaruhi oleh kematangan buah dan kedewasaan, di mana penelitian tentang perkembangan dan pematangan tanaman ini belum pernah dilaporkan.
Alternatif yang dapat digunakan untuk melakukan perbanyakan tanaman ini  adalah  melalui  kultur  jaringan. Salah  satu  factor  yang  berpengaruh dalam  pelaksanaan  kultur  jaringan adalah  penggunan  hormone  khususnya hormone auksin dan giberelin. Babai et al., (2014) menyebutkan bahwa kombinasi  penggunaan  TDZ  0,5  ppm dan IBA 0,25 ppm merupakan kombinasi terbaik yang dapat meningkatkan pembentukan tunas tanaman  marasi  secara  in  vitro.  Selain hormone  diatas  perlu  juga  dicari
alternative  hormone  lain  sehingga dapat  ditemukan  metode  yang  optimal untuk  perbanyakan  tanaman  marasi secara in vitro diantaranya NAA (Naphthalene  Acetic  Acid) dan BAP (Benzyl Amino Purine).
Tujuan  penelitian  ini  adalah untuk  mengetahui inisiasi  tunas  marasi (Curculigo latifolia) dengan menggunakan  konsentrasi  NAA dan BAP yang berbeda  secara in vitro.
.

## METODE PENELITIAN
Penelitian dilaksanakan di Laboratorium  Bioteknologi  Jurusan Agroekoteknologi  Fakultas  Pertanian
Universitas  Sultan  Ageng  Tirtayasa Serang Banten. Penelitian dimulai pada bulan  Agustus  sampai  dengan  Oktober 2014.
Bahan-bahan  yang  digunakan dalam  percobaan  ini  adalah  eksplan yang  berasal  dari  tunas  tanaman marasi. Zat kimia penyusun media MS, BAP,  NAA,  NaOH  0,1  N,  HCl  0,1  N, alkohol  70%,  alkohol  96%,  bayclin, sukrosa,  aquadest,  bubuk  agar-agar, plastic wrap, penggaris, detergen, karet gelang, kertas label, tissue.
Adapun alat-alat yang digunakan  adalah  autoklaf,  timbangan analitik,  laminar  air  flow  cabinet (LAFC),  lemari  es,  oven,  pH  meter atau  kertas  indikator  pH,  botol  kultur, kompor  gas,  hand  sprayer,  scalpel, pinset,  bunsen,,  cawan  petri  dan  rak kultur  yang  dilengkapi  dengan  lampu neon 20 watt sebagai sumber
penyinaran dan alat tulis. Rancangan yang digunakan adalah  faktorial  dalam  Rancangan Acak  Lengkap  (RAL)  yang  terdiri  dari 2  faktor  dengan  3  ulangan.  Faktor pertama  adalah  NAA  dengan  4  taraf konsentrasi yaitu :
N0 = 0 mg/L NAA( kontrol ) N1 = 0,2 mg/L NAA

## N2 = 0,4 mg/L NAA
N3 = 0,6 mg/L NAA
Sedangkan  faktor  kedua  adalah sumber eksplan dengan 3 taraf konsentrasi yaitu : P0 = 0 mg/L BAP (kontrol)
P1 = 0,5 mg/L BAP
P2 = 1 mg/L BAP P3 = 1,5 mg/L BAP

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Secara umum pertumbuhan eksplan tanaman marasi pada penelitian ini menunjukan pertumbuhan yang baik sampai  dengan  8  MST.  Beberapa eksplan  yang  mati  dikarenakan  terjadi kontaminasi dan atau kecoklatan ( browning )  pada  eksplan  tersebut. Yusnita  (2003)    menyatakan  bahwa eksplan yang berasal dari alam memiliki  tingkat  kontaminasi  yang tinggi.  Pada  penelitian  ini  rerata persentase eksplan terkontaminasi adalah  sebanyak  60,38%  atau  29  dari 48  eksplan  yang  ditanam.  Penyebab kontaminasi pada penelitian ini bervariasi,  di  antaranya  disebabkan oleh cendawan yang gejalanya ditunjukan  dengan  munculnya  titik putih  abu-abu  atau  kehitaman  disekitar eksplan.
Selain itu masalah dalam penelitian  ini  adalah  munculnya  warna coklat  pada  media  disekitar  eksplan. Hal  ini  di  akibatkan  oleh  akumulasi senyawa  fenolik  yang  terkandung didalam  getah  tanaman  marasi  lalu kemiudian  teroksidasi  akibat  stres mekanik  atau  pelukaan  pada  eksplan.
Senyawa  fenol  tersebut  adalah  enzim polifenol  eksidase  dan  tirosinase. Dalam kondisi oksidatif akibat pelukaan,  enzim  tersebut  secara  alami disintesis  oleh  eksplan  sebagai  bentuk
pertahanan  diri,  senyawa  fenol  yang berlebihan  akan  bersifat  racun  yang dapat  merusak  jaringan  eksplan  dan akhirnya  menyebabkan  kematian  pada eksplan.  Substrat  untuk  enzim  ini  ada bermacam-macam  pada  jaringan  yang berbeda,  yang  umum  adalah  tirosin atau  o-hidroksifenol  seperti  asam klorogenik. Rerata presentase browning pada semua perlakuan adalah  87,5% .

## Waktu Muncul Tunas
Tabel  1  memperlihatkan  bahwa pada  perlakuan  NAA,  rerata  waktu tumbuh  tunas  tercepat  terdapat  pada perlakuan  N1  (0,2  mg/L)  yaitu  2,41 hari  sedangkan  pada  perlakuan  BAP terdapat  pada  perlakuan  P3  (1,5  mg/L) yaitu  2,39  hari.  Hasil  analisis  statistik menunjukkan bahwa perlakuan tunggal maupun kombinasinya tidak memberikan  pengaruh  yang  nyata terhadap  waktu  muncul  tunas  marasi. Tetapi  waktu  muncul  tunas  ini  lebih cepat dibandingkan secara konvensional menggunakan bagian rimpangnya  yang  membutuhkan  waktu sekitar  28  hari  (Abdullah et  al., 2010). Hal  ini  di  duga  berkaitan  dengan keberadaan  unsur  hara  pada  media kultur  jaringan  yang  lebih  mudah diserap  tanaman  dan  tidak  adanya persaingan  untuk  mendapatkan  unsur hara tersebut karena ditumbuhkan pada kondisi aseptik sehingga dapat menginisiasi  kemunculan  tunas  lebih cepat.
Tabel  1.  Waktu  Tumbuh  Tunas  Marasi  pada  Media  Kultur  Jaringan  dengan berbagai Konsentrasi NAA dan BAP secara In Vitro (hari) NAA BAP Rerata P0 (0 mg/L) P1 (0,5 mg/L) P2 (1mg/L ) P3 (1,5 mg/L) N0 (0 mg/L) 2,54 2,21 2,44 2,54 2,43 N1 (0,2 mg/L) 2,78 2,21 2,44 2,21 2,41 N2 (0,4 mg/L) 2,30 2,78 2,44 2,39 2,47 N3 (0,6 mg/L) 3,12 2,44 2,44 2,44 2,61 Rerata 2,68 2,41 2,44 2,39

## Tinggi Tanaman
Berdasarkan hasil analisis statistik pada parameter tinggi tanaman menunjukkan  bahwa  tidak  terdapat interaksi  antara  perlakuan  NAA  dan BAP yang diberikan. Sedangkan perlakuan  tunggal  NAA  memberikan hasil  yang  berbeda  nyata  pada  4,  5,  6 dan  7  MST  dengan  perlakuan  terbaik pada  N1  (0,2  mg/L)  dan  perlakuan terendah pada N0 (tanpa NAA) dan N3 (0,6 mg/L). Selanjutnya pada perlakuan tunggal  BAP  memberikan  hasil  yang berbeda  nyata  pada  7  MST  dengan perlakuan terbaik pada P2 (1 mg/L) dan terendah pada P3. Selain itu hasil penelitian tersebut juga menunjukkan bahwa jika
penambahan hormon kurang atau lebih dari  nilai  optimalnya  (NAA  0,2  ppm dan  BAP  1  ppm)  maka  perkembangan tinggi  tanaman  tidak  maksimal.  Ini terkait  dengan  kandungan  hormon endogen  pada  tanaman  marasi  yang belum  mencapai  jumlah  optimal  untuk menstimulasi  pertumbuhan  sehingga diperlukan tambahan dari luar (eksogen).  Sedangkan  jika  jumlahnya berlebih maka akan memicu pertumhan yang  lain  misalkan  peningkatan  tunas (Marlin, 2005).
Gambar 1. Tinggi tanaman eksplan marasi dengan berbagai konsentrasi NAA dan BAP secara in Vitro. 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 1 2 3 4 5 6 7 Ti n gg i tan am an (c m ) N0P0 N0P1 N0P2 N0P3 N1P0 N1P1 N1P2 N1P3 N2P0 N2P1 N2P2
Tabel 2. Persentase Eksplan Hidup Marasi pada Media kultur Jaringan dengan
Berbagai Konsentrasi NAA dan BAP Secara In Vitro Perlakuan ∑ Ekplan awal ∑Eksplan mati %Eksplan hidup Keterangan N0P0 3 0 100% - N0P1 3 1 67% Kontaminasi N0P2 3 1 67% Kontaminasi N0P3 3 1 67% Kontaminasi N1P0 3 0 100% - N1P1 3 0 100% - N1P2 3 0 100% - N1P3 3 0 100% - N2P0 3 0 100% - N2P1 3 0 100% - N2P2 3 0 100% - N2P3 3 0 100% - N3P0 3 1 67% Kontaminasi N3P1 3 1 67% Kontaminasi N3P2 3 1 67% Kontaminasi N3P3 3 1 67% Kontaminasi Total 48 7 83,50%
Persentase  eksplan  hidup  pada penelitian  ini  dilakukan  pada  akhir pengamatan, jumlah planlet yang hidup sampai  7  MST  sebesar  83,5%  dengan jumlah  41  planlet  dari  48  planlet  yang ditanam  (Tabel  2).  Eksplan  yang digunakan merupakan jaringan meristematik  yang  terdiri  dari  sel-sel yang  sedang  aktif  membelah,  dengan adanyan  pemberian  NAA  dan  BAP dapat mendorong terjadinya diferensiasi  sel  karena  pembentukan organ dan jaringan. Hal ini membuktikan bahwa morfogenesis tanaman  secara in  vitro dikendalikan oleh  kesetimbangan  dan  interaksi  ZPT baik  endogen  maupun  eksogen  yang terkandung  pada  media.  Menurut Sumardi  (1996),  auksin  dan  sitokinin bekerja  secara  bersama-sama  dalam menciptakan  sebuah  kondisi  yang optimum untuk pertumbuhan eksplan.
Pada perlakuan N0P0, Curculigo  latifolia dapat  bertahan hidup  pada  media Murashige  and skoog tanpa  zat  pengatur  tumbuh, karena sebenarnya pada media Murashige and skoog telah mengandung unsur-unsur yang memiliki  peranan  dalam  pembentukan jaringan dan aktivitas enzim. Gunawan (1992) menyatakan bahwa pertumbuhan dan perkembangan eksplan  juga  dipengaruhi  oleh  media yang  digunkan.  Salah  satunya  adalah media Murashige and skoog, merupakan  media  yang  cocok  untuk pertumbuhan dan perkembangan hampir semua jenis tanaman. Persentase eksplan hidup pada tanaman marasi sebesar 58% menunjukan bahwa pemberian NAA dan BAP tidak memberikan pengaruh
dalam pertumbuhan eksplan marasi (Tabel 2).
Tabel 3. Persentase Eksplan Marasi yang Terkontaminasi pada Media Kultur
Jaringan dengan Berbagai Konsentrasi NAA dan BAP Secara In Vitro Perlakuan ∑ Eskplan awal % Eksplan Terkontaminasi N0P0 3 33% N0P1 3 67% N0P2 3 100% N0P3 3 67% N1P0 3 67% N1P1 3 67% N1P2 3 33% N1P3 3 67% N2P0 3 33% N2P1 3 67% N2P2 3 33% N2P3 3 33% N3P0 3 33% N3P1 3 100% N3P2 3 100% N3P3 3 67% Total 48 60% Pada  penelitian  ini  persentase eksplan terkontaminasi adalah sebanyak  60%  atau  29  dari  48  eksplan yang  ditanam.  Penyebab  kontaminasi pada  penelitian  ini  bervariasi,  di antaranya  disebabkan  oleh  cendawan yang  gejalanya  ditunjukan  dengan munculnya  titik  putih  abu-abu  atau kehitaman  disekitar  eksplan.  Jumlah
eksplan  yang  terkontaminasi  setiap minggunya  mengalami  peningkatan, dengan  jumlah  terbanyak  menginfeksi perakuan  N0P2  dan  N3P1  dan  N3P2, dengan jumlah eksplan yang terkontaminasi  100%  atau  3  dari  3 eksplan  yang  ditanam  pada  7  MST (Tabel 3).
Tabel 4. Persentase Eksplan Browning Marasi pada Media Kultur Jaringan dengan
Berbagai konsentrasi NAA dan BAP secara In Vitro Perlakuan ∑ Eskplan awal % Eksplan Terkontaminasi N0P0 3 67% N0P1 3 100% N0P2 3 100% N0P3 3 100% N1P0 3 100% N1P1 3 100% N1P2 3 33% N1P3 3 100% N2P0 3 67% N2P1 3 67% N2P2 3 67% N2P3 3 100% N3P0 3 100% N3P1 3 100% N3P2 3 100% N3P3 3 100% Total 48 87,5% Pada  penelitian  ini  (Tabel  4) presentase browning pada semua perlakuan  adalah    87,5%  atau  42  dari 48  eksplan  yang  di  tanam.  Hal  ini  di akibatkan  oleh  akumulasi  senyawa fenolik yang terkandung didalam getah tanaman marasi lalu kemudian teroksidasi  akibat  stres  mekanik  atau pelukaan  pada  eksplan.Senyawa  fenol tersebut adalah enzim polifenol eksidase  dan  tirosinase.  Dalam  kondisi oksidatif akibat pelukaan, enzim tersebut  secara  alami  disintesis  oleh eksplan sebagai bentuk pertahanan diri, senyawa  fenol  yang  berlebihan  akan bersifat  racun  yang  dapat  merusak jaringan eksplan dan akhirnya menyebabkan  kematian  pada  eksplan. Substrat untuk enzim ini ada bermacam-macam  pada  jaringan  yang berbeda,  yang  umum  adalah  tirosin atau  o-hidroksifenol  seperti  asam klorogenik.
Enzim  dan  substrat  dalam  keadaan normal  akan  tertahan  dalam  ruang berbeda  di  dalam  sel  dan  akan  keluar bersama-sama  pada  saat  sel  dilukai atau  hampir  mati.  Toksisitas  fenol kemungkinan  disebabkan  oleh  ikatan reversibel  antara  hidrogen  dan  protein. Penghambatan pertumbuhan yang tidak dapat  diperbaiki  terjadi  ketika  fenol teroksidasi  menjadi  senyawa  aktif quinon  yang  tinggi  yang  kemudian memutar,  memolimerase  dan  atau mengoksidasi protein menjadi senyawa melanat yang makin meningkat. Berbagai  cara  untuk  menanggulangi masalah  pencoklatan  telah  dilakukan, salah  satunya  dengan  menggunakan bahan  anti  oksidan  seperti Polivinyl pyrolidone (PVP) dengan
menggunakan  dosis  3  gr/L  media  MS, akan  tetapi  dengan  dosis  3  gr/L  PVP yang  dicampurkan  dengan  media  tidak memberikan  pengaruh  yang  signifikan
terhadap media maupun ekpslan tanaman  marasi.  Hal  ini  disebabkan salah  satunya  karena  kandungan  getah pada umbi eksplan marasi yang banyak sehingga  proses browning tidak  dapat dihentikan. Selain itu , tingkat keparahan browning bervariasi menurut  spesies,  jaringan  atau  organ, fase  perkembangan  tanaman,  umur jaringan  atau  organ,  media  nutrisi  dan variabel  kultur  jaringan  lain  (Huang et
al dalam Babaei,  2013).  Fenomena
browning biasanya diperhitungkan untuk  mengetahui  senyawa  fenolik teroksidasi  oleh  senyawa polifenol oksidase (PPO) dan sebelum mengatasinya dengan polyvinyl pyrrolidone (PVP)  dan  antioksidan seperti  asam  askorbat  dan  asam  sitrat yang merupakan cara untuk menghilangkan atau mengurangi akumulasi  fenol  dalam  media  kultur jaringan  (Krishna et  al  dalam Babaei, 2013). Enzim fenol yang oksidasi dapat dipengaruhi  oleh  faktor  lingkungan juga. Kehadiran cahaya dan suhu tinggi juga dapat menaikkan persentase Browning dengan  melalui  peningkatan aktivitas enzim (Dobránszki dan
Teixeira dalam Babaei, 2013).

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian yang  dilakukan  maka  dapat  di  ambil kesimpulan sebagai berikut :
1. Zat  pengatur  tumbuh  NAA memberikan  pengaruh  yang nyata terhadap  parameter tinggi tanaman  pada  4,  5,  6  dan  7 MST  dengan  hasil  terbaik terdapat pada perlakuan N1 (0,2 mg/L NAA) 2. Zat  pengatur  tumbuh  BAP memberikan  pengaruh  nyata terhadap paremeter tinggi
tanaman  marasi  pada  7  MST dengan  hasil  terbaik  terdapat pada  perlakuan    P2  (1  mg/L BAP)
3. Tidak  terdapat  interaksi  anatara NAA  dan  BAP  pada  parameter waktu  inisiasi  tunas  dan  tinggi tanaman.

## SARAN
1. Konsentrasi  0,2  mg/L  NAA atau  1  mg/L  BAP  dapat memberikan hasil terbaik terhadap  pertumbuhan  tanaman marasi secara in vitro . 2. Perlu dilakukan penelitian tentang  sterilisasi  pada  eksplan
Curculigo latifolia

## DAFTAR PUSTAKA
Abidin, Z. 1994. Dasar-Dasar Pengetahuan Tentang Zat Pengatur Tumbuh. Penerbit Angkasa. Bandung. Abdullah.  N.  A.  P.,  Saleh.  G,  Shahari, R,  Lasimin,  V.  2010.  Shoot  and Root  Formation  On  Croms  and Rhizomes  of  Curculigo  latifolia Dryand.  J  Agrocrop  Sci.  2010. 1(1); 1-5 Ardiana, D.W. 2009. Teknik Pemberian  Benzil  Amino  Purin Untuk  Memacu  Pertumbuhan Kalus  dan  Tunas  Pada  Kotiledon Melon ( Cucumis melo L.). Sumatera  Barat.  Buletin  Teknik
Pertanian Vol 14 , No 2, 2009, hal 50-53
Andriyani, S. 2010. Kajian Penggunaan Berbagai  Konsentrasi  BAP  dan 2,4-D  Terhadap  Induksi  Kalus Jarak  Pagar  ( Jatropha  curcas L.)
Secara In Vitro. Skripsi. Universitas Sebelas Maret. Anonim.2007. Aktifitas Penelitian Dalam Kultur Jaringan Tanaman.Diakses dari http://www.indobiogen.or.id/bsj/ bsj_aktivitas.php.  Tanggal  17 Maret 2014 Babaei, N., Abdullah , N.A.P, Saleh, G, and  Abdullah,  T.L  .  2012. Isolation  and  characterization  of microsatellite markersand analysis  of  genetic  variability  in Curculigo  latifolia Dryand.  Mol
Bio Rep. 39(11): 9869-9877
Babaei, N .,Abdullah , N.A.P, Saleh, G,
and  Abdullah,  T.L  .  2013.
Control  of  contamination  and
explant  browning  in Curculigo latifolia in  vitro cultures.  Journal of  Medicinal  Plants  Research Vol. 7(8), pp. 448-454 Babaei,  N  .,  Abdullah  ,  N.A.P,  Saleh, G,  and  Abdullah, T.L . 2014. An Efficient In Vitro Planlet Regeneration  From  Shoot  Tip Cultures  Of Curculigo  latifolia a Medicinal  Plant  Research.  Vol
7(8), pp 448-
Bayu,  S.B.,  Siregar  Mahmud,  L.A., Rozaliana. 2013. Pengaruh Benzyl  Amino  Purin  dan  Asam Asetat Naftalene Terhadap Pembentukan  Tunas  Tanaman Nilam  Secara In  vitro .  Jurnal
Online  Agroekoteknologi.  Vol  . No 3, Juni 2013
Damayanti, N. 2014. Pemberian Beberapa Konsentrasi Zat Pengatur Tumbuh BAP dan NAA Terhadap Talas Beneng Secara in
vitro .  Skripsi.  Universitas  Sultan Ageng Tirtayasa
Gunawan,  L.  W.  1998. Teknik  Kultur Jaringan .  Laboratorium  Kutur Jaringan  PAU  Bioteknologi  IPB,
Bogor. Hal: 252 Hartmann,  H  T  and  D  E  Kester,  1983, Plant  Propagation,  principles  & practices, Fourth edition, Prentice-Hall International Inc. Hariyanti, E., R. Nirmala, dan Rudarmono. 2004. Mikropropagasi  Tanaman  Pisang Talas  dengan  Naphtalene  Acetic Acid  (NAA)  dan  Benzyl  Amino
Purine  (BAP). Jurnal  Budidaya
Pertanian 10 (1): 26-34.
Kashiani, P. Abdullah, NAP. Saleh, G. and Ranjbarfard, A. 2014. Genetic diversity of lemba (Curculigo  latifolia) populations in  Peninsular  Malaysia  using ISSR molecular markers. Journal. Crop. Sci 8(1): 9-17(2014) (KEMENHUT) Kementerian Kehutanan. 2010. Eksplorasi Jenis-Jenis Tumbuhan Hutan Sumber Pangan Berdasar Tipologi  Hutan.  Laporan  Hasil Kegiatan Penelitian Program Insentif  Ristek  Tahun  2010.  Hal 23-24 Kusumo,  S,  1984.  Zat  Pengatur Tumbuh  Tanaman.  Penerbit  CV.
Yasaguna. Jakarta.
Maidarnis, Y. 2014. Pengaruh Penggunaan  Aksesi,  Modifikasi, Krioprotektan  Dan  Jenis  Eksplan Terhadap  Daya  Pulih  Eksplan
Tanaman  Ubi  Kelapa  Dengan teknik Verifikasi Secara In Vitro .

## Skripsi.  Unversitas  sultan  Ageng
Tirtayasa
Palestine, A.S. 2008.Induksi Akar pada
biakan  tanaman  pule  pandak ( Rauvolfia  serpentine L.)secara kultur  jaringan.  Skripsi.  Fakultas
Pertanian.Universitas  Brawijaya. 41 hlm. Di akses pada http://elibrary.ub.ac.id/bitstream/ 123456789/18547/1/Induksi- akar-pada-biakan-tanaman-pule- pandak-(Rauvolfia-serpentine- L.)-secara-kultur-jaringan.pdf
Roy,  S.K.,  S.A.L.  Rahman  dan  R.
Majumdar. 1990. In vitro Propagation of Jackfruit( Artocarpus heterophyllus Lam.).  Journal.  of Hort. Sci. 65:355-358 . Sheng-Hong.  L.,  Darah.  I.  2013.
Assessment  Of  Anticandidal  and cytotoxity  Of  Root  Extract  From
Curculigo latifolia on Pathogenic candida  albican.  Reaserch  Paper.
Journal.  Med.  Sci.,  13(3);  193-
200
Siregar  C.  2006.  Penggunaan  2,4  D untuk  inisiasi  kalus  jaringan nucellus Mangifera odorata Griff
Melalui budidaya jaringan. Jurnal Floratek. ISSN 1907-2689
Sudarmadji.  2003.  Penggunaan  Benzil
Amino Purine Pada Pertumbuhan
Kalus Kapas  Secara  In  Vitro.  Buletin
Teknik Pertanian. 8 (1) : 8-10. Teo, C.K.H. dan L. K. Chan. 1994.The Effect of Agar Contents, Nutrient Concentration, Genotype and
Light  Intensity  on  the In  Vitro
Rooting of Papaya Microcuttings. J. of Hort. Sci. 69: 267-273.
Wetherell,  D.  F.  1982.  Introduction  to in  vitro  propagation.  Avery Publishing  Group,  Inc.  Wayne  – New Jersey. Penerjemaah Koensoemardiyah S
Winata,  L.  l987.  Teknik  Kultur Jaringan. PAU Bogor. 252 hlm.
Wudianto,  R.  1993.  Membuat  Setek, cangkok  dan  Okulasi.  Penerbit PT. Penebar Swadaya. Jakarta.
Zulkarnain,  H.  2009.  Kultur  jaringan tanaman. Bumi Aksara. Jakarta