Uji Kemampuan Antioksidan Ekstrak Etanol dan Kloroform Rumput Laut Gracilaria verrucosa melalui Penghambatan Peroksidasi Lipid Homogenat Hepar Mencit ( Mus musculus )
Cholilia Abadiatul Masruroh 1 dan Sri Widyarti 1)*
1 Laboratorium Biologi Molukuler dan Seluler, Jurusan biologi, Universitas Brawijaya, Malang
Email: 1)* swid@ub.ac.id

## ABSTRAK
Rumput  laut Gracilaria  verrucosa merupakan  tumbuhan  dengan  kandungan  polifenol  yang tinggi seperti rumput laut jenis yang lain sebagai salah satu sumber antioksidan alami untuk menangkap, menghambat dan  mencegah aktivitas radikal  bebas  berlebih di dalam tubuh. Tujuan dari penelitian ini adalah  mengetahui  kemampuan  antioksidan  ekstrak  ethanol  dan  kloroform  rumput  laut Gracillaria verrucosa .  Penentuan  kadar  fenolik  dilakukan  menggunakan  reagen  Folin-Cioceltau.  Analisis kemampuan  antioksidan  melalui penghambatan peroksidasi lipid secara in vitro pada  homogenat  hepar menggunakan uji TBA. Kemampuan antioksidan ekstrak G. verrucosa dibandingkan dengan antioksidan sintetik  asam  askorbat.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  kadar  fenolik  pada  ekstrak  ethanol  dan ekstrak  kloroform G.  verrucosa yaitu  155,94  dan  146,95  ppm.  Kemampuan  penghambatan  peroksidasi lipid  oleh  ekstrak  etanol  dan  ekstrak  kloroform  yaitu  13,59  %  dan  12,54  %,  sedangkan  asam  askorbat yatiu 32,54 %.
Kata kunci: Gracilaria verrucosa , peroksidasi lipid, TBA

## ABSTRACK
Gracilaria  verrucosa seaweed  is  a  plant  with  a  high  content  of  polyphenols  like  other  kinds  of seaweed as a source of natural antioxidants to arrest, inhibit and prevent excessive free radical activity in the body. The purpose of this study was to determine the antioxidant capacity of ethanol and chloroform extracts G.  verrucosa seaweed.  Determination  of  phenolic  using  Folin-Cioceltau  reagent. Analysis  of  the ability of antioxidants through inhibition of lipid peroxidation in vitro in liver homogenates using the TBA test. Ability of antioxidant G. verrucosa extracts compared with synthetic antioxidants ascorbic acid. The results showed that the phenolic content of the ethanol and chloroform extract of G. verrucosa are 155.94 and 146.95 ppm. Ability of lipid peroxidation inhibition by ethanol extract and chloroform extract is 13.59 % and 12.54 %, while 32.54 % yatiu ascorbic acid.
Kata kunci: Gracilaria verrucosa , lipid peroxidation, TBA

## PENDAHULUAN
Perairan  Indonesia  sebagai  daerah  tropis memiliki  sumberdaya  rumput  laut  yang  cukup besar  sebagai sumberdaya  plasma  nutfah  dengan kurang lebih 555 jenis rumput laut. dari berbagai jenis  tersebut,  yang  telah  banyak  dibudidayakan adalah Euchema sp.  dan Gracilaria sp. sehingga komoditasnya  sangat  tinggi.  Rumput  laut khususnya jenis Gracillariae merupakan tumbuhan  dengan  kandungan  polifenol  yang tinggi  sebagai  salah  satu  sumber  antioksidan alami  untuk  menangkap,  menghambat  dan mencegah  aktivitas  radikal  bebas  berlebih  di dalam tubuh [1] .
Kandungan  antioksidan  banyak  terdapat pada  makanan  berbahan  dasar  tanaman  seperti
karotenoid, α- dan β-karoten, lycopene, dan lain- lain.  Peran  utama  mereka  dalam  tanaman berkaitan  dengan  pemanfaatan  cahaya  sebagai komponen  tambahan  dan  menangkal  molekul reaktif,  seperti  oksigen  singlet,  yang  mungkin terbentuk  selama  fotosintesis.  Senyawa  fenolik juga  terdapat  pada  makanan  berbahan  dasar tanaman  [2].  Salah  satu  tumbuhan  penghasil antioksidan adalah rumput laut.
Penelitian yang telah dilakukan sebelumnya berkaitan dengan analisis antioksidan  seperti  pada  ekstrak  rumput  laut Exophylum  wentii , Gracilaria  coronopifolia [3], dan  ekstrak  rumput  laut Gracilaria  changii [4]. Berdasarkan  beberapa  penelitian  tersebut  dapat diketahui bahwa pengujian kemampuan antioksidan pada rumput laut Gracilaria
verucosa belum  ada  sehingga  perlu  adanya penelitian  untuk  memperkaya  data  yang  telah ada.
Radikal  bebas  merupakan  molekul  atau atom-atom yang tidak stabil karena memiliki satu atau  lebih  elektron  yang  tidak  berpasangan. Radikal  bebas  yang  terbentuk  dalam  tubuh  akan menghasilkan  radikal  bebas  yang  baru  melalui reaksi  berantai  yang  terus  berkembang  dan  pada akhirnya  jumlahnya  akan  terus  meningkat. Radikal  bebas  ini  dibentuk  melalui  mekanisme metabolisme  normal  [5].  Bentuk  radikal  bebas diantaranya  adalah  oksigen  reaktif  (ROS), termasuk  radikal  superoksidaanion  (O 2 - ),  radikal hidroksil  ( - OH),  hidrogen  peroksida  (H 2 O 2 ), singlet  oksigen  ( 1 O2)  dan  nitrat  oksida  (NO - ) yang  dapat  berkontribusi  pada  proses  penuaan manusia  dan  degradasi  DNA  selular  ketika berada  pada  jumlah  berlebihan  atau  pada  saat sistem pertahanan antioksidan mengalami penurunan [6].
Antioksidan  didefinisikan  sebagai  suatu substansi dimana ketika terdapat pada konsentrasi rendah  dibandingkan  substrat  yang  teroksidasi maka  secara  signifikan  akan  mencegah  atau menunda  proses  oksidasi  substrat  tersebut. Substrat  yang  teroksidasi  mencakup  setiap  jenis molekul yang ditemukan secara in vivo [7].
Penentuan kemampuan antioksidan melalui  penghambatan  peroksidasi  lipid  pada berbagai media dengan uji TBA dilakukan untuk mengukur jumlah [8]. Metode ini didasarkan atas reaksi TBA dengan MDA yang  merupakan salah satu  produk  aldehid  lipid  peroksidase.  Sampel dipanaskan  dengan  TBA  dibawah  kondisi  asam, MDA  akan  membentuk  suatu  produk  yang berwarna  pink  yang  nantinya  diukur  dengan spektrofotometer  pada  panjang  gelombang  532 nm. Peroksidasi lipid diinduksikan pada jaringan/mitokondria  dengan  ferrour  sulfate  [9]. Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  mengetahui penghambatan  peroksidasi  lipid  pada  homogenat hepar mencit ( Mus musculus ) oleh ekstrak etanol dan  ekstrak  kloroform G.  verrucosa yang dibandingkan dengan antioksidan asam askorbat.

## METODE PENELITIAN
Ekstraksi  Rumput  Laut  ( Gracillaria verrucosa ) . Rumput laut basah yang baru diambil dari  tambak  dibersihkan  dari  kotoran  yang menempel  dan  dilanjutkan  dengan  pengeringan pada  Glasshouse  selama  2-3  hari.  Setelah  bersih dari  lumut,  rumput  laut  dibuat  bubuk  dengan diblender 2-3 kali dan diayak untuk mendapatkan
bubuk Gracillaria verrucosa . Bubuk rumput laut yang didapat kemudian dilakukan ekstraksi yaitu direndam  dalam  Ethanol  70%  dan  kloroform selama satu malam. Setelah semalam, diletakkan dalam  Evaporator  untuk  mendapatkan  ekstrak rumput laut Gracillaria verrucosa . Penentuan  Kadar  Fenolik. Penentuan kadar  fenolik  ekstrak  etanol  dan  kloroform G. verrucosa berdasarkan  metode  [10].  Stock solution ekstrak etanol dan kloroform rumput laut diambil sebanyak 250 µL dan diencerkan dengan aquades  500  µL  sedikit  demi  sedikit.  Hasil pengenceran  tersebut  diambil  sebanyak  10  µL dan  diencerkan  lagi  dengan  aquades  sebanyak 990  µL.  Selanjutnya  ditambah  dengan  0,5  mL Follin  Cioceltou  dan  diinkubasi  selama  3  menit. Setelah  diinkubasi,  ditambah  dengan  1  mL saturated  NaCO 3 dan  aquadest  hingga  volume mencapai 10 mL lalu diinkubasi selama 30 menit pada  suhu  ruang.  Langkah  selanjutnya  diukur absorbansinya  pada  panjang  gelombang  760  nm dan  hasilnya  diplotkan  pada  persamaan  kurva baku tannin acid.
Pembuatan Kurva Standar MDA. Sebanyak  2  mL  larutan  standar  MDA  (1.25- 20µM) dengan berbagai konsentrasi lalu ditambahkan  1mL  TCA  20%  dan  200  µL  TBA 0.67%  lalu  dihomogenkan  dengan  vorteks. Selanjutnya  dipanaskan  dalam  waterbath  dengan suhu  100°C  selama  10  menit.  Setelah  10  menit, diangkat  dan  didinginkan  pada  suhu  ruang. Absorbansi diukur dengan spektrofotometer pada λ  maksimum.  Nilai  absorbansi  yang  didapat diplot  menggunakan  Microsoft  Excel  sehingga didapatkan kurva baku MDA.
Persiapan  Homogenat  Hepar  Mencit. Isolasi  homogenat  hepar  mencit  dilakukan menurut metode [11]. Sebanyak 1 g hepar mencit dihaluskan  menggunakan  mortar  pestle  dan ditambah  dengan  3mL  0.15  M  KCl  dingin  lalu dicampur.  Homogenate  hepar  ditambah  10  µM ferrous  sulfate  (1  mM,  10  µL)  dan  ditambahkan dengan  KCl-Tris-HCl  pH  7.4  hingga  volume mencapai 2mL, selanjutnya diinkubasi pada suhu 37  °C  selama  60  menit.  Langkah  berikutnya (Tabel  1)  ditambahkan  ekstrak  etanol G. verrucosa (3  tube),  ekstrak  kloroform  (3  tube), dan asam askorbat (3 tube) lalu diinkubasi selama 2  menit.  Larutan  kontrol  negatif  digunakan homogenat  hepar  saja,  kontrol  positif  digunakan homogenat  hepar  yang  ditambah  ferrous  sulfat, sedangkan  larutan  blanko  digunakan  10  µL etanol  70  %  untuk  bahan  uji  ekstrak  etanol G. verrucosa dan  10  µL  kloroform  untuk  bahan  uji ekstrak kloroform G. verrucosa .
% penghambatan peroksidasi lipid = [(A sampel - A kontrol ) / A kontrol ] x 100%
% penghambatan peroksidasi lipid = [(A sampel - A kontrol ) / A kontrol ] x 100%
Pengukuran penghambatan peroksidasi  lipid. Larutan  tersebut  kemudian ditambahkan  1mL  TCA  20%  dan  2mL  0.67% TBA.  Selanjutnya  larutan  dipanaskan  pada  suhu 100°C selama 10 menit, lalu dimasukkan pada es. Larutan  disentrifus  pada  3000rpm,  suhu  4°C, selama  15  menit.  Supernatan  yang  didapat dipindahkan  ke  tabung  baru  dan  dibaca absorbansinya  pada  gelombang  532nm.  Nilai yang didapat dimasukkan ke persamaan y = ax + b  dari  kurva  standar  MDA,  sehingga  didapatkan kadar MDAnya. Untuk mengetahui % penghambatan  peroksidasi  lipidnya  digunakan rumus berikut:
Rumus 1.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar  Fenolik  Ekstrak  Etanol  dan Kloroform  Rumput  Laut G.  Verrucosa. Hasil penentuan  kadar  fenolik  ekstrak  etanol  dan koroform  rumput  laut G.  verrucosa dapat  dilihat pada  Tabel  1.  Sedangkan  kurva  standar  Tannin Acid ditunjukan oleh Lampiran 1. Kurva standar tersebut berguna untuk menentukan kadar fenolik yang  terkandung  dalam  ekstrak  etanol  maupun kloroform  dari G.  verrucosa .  Ekstrak  etanol memiliki  kadar  fenolik  155,94±22,04  ppm  lebih tinggi daripada ekstrak kloroform yaitu 146,95±5,45  ppm.  Adapun  ekstrak  ethyl  acetate pada G.  verrucosa yang  dilakukan  oleh  [1] menunjukan  kadar  fenolik  dengan  nilai  berkisar antara 145 – 164 ppm.
Tabel  1.  Kadar  fenolik  ekstrak  rumput  laut G.
verrucosa Jenis Ekstrak Kadar Fenolik (ppm) *) Etanol 155,94±22,04 Kloroform 146,94±5,45
Kandungan  antioksidan  merupakan  hasil kemampuan  suatu  tumbuhan  sebagai  agen pereduksi,  donor  hidrogen,  dan  penghambar radikal  bebas.  Fenolik  juga  dapat  bertindak sebagai chelator logam yaitu mencegah katalisasi logam sebagai proses permulaan radikal. [12]. [7] mengatakan  bahwa  senyawa  fenol  gugus  –OH yang  terikat  pada  cicncin  benzene.  Fenol terkandung  dalam  sejumlah  besar  di  dalam tanaman.  Selain  vitamin  E,  senyawa  dapat memberi  efek  antioksidan  yang  kuat  secara  in vitro,  menghambat  peroksidasi  lipid  dengan berperan  sebagai  scavenger  rantai  bebas  radikal
peroksil.  Fenol  juga  dapat  mengikat  ion  logam transisi  (terutama  besi  dan  tembaga)  dalam bentuk  kurang  aktif  dalam  mendorong  reaksi radikal  bebas.  Selain  itu,  fenol  juga  dapat menangkap  ROS  secara  langsung,  seperti  OH, ONOOH, dan HOCl. Dengan demikian, senyawa fenol  dalam  tanaman  merupakan  inhibitor peroksidasi lipid yang baik secara in vitro . Analisis  Antioksidan in  vitro Ekstrak Etanol  dan  Kloroform  Rumput  Laut G. verrucosa menggunakan  TBA. Penghambatan peroksidasi  lipid  diketahui  dengan  penurunan kadar  MDA  pada  homogenat  hepar  sebagai sumber penghasil radikal bebas dan diberi ferrous sulfat  sebagai  penginduksi  radikal  bebas. Penurunan  kadar  MDA  yang  disebabkan  oleh pemberian  ekstrak  etanol G.  verrucosa ,  ekstrak kloroform G.  verrucosa ,  dan  asam  askorbat ditunjukkan oleh Gambar 1.
Keterangan:  1.  Homogenat  hepar  saja;  2.  Homogenat  + FeSO 4 ;  3.  Homogenat  +  FeSO 4 +  ekstrak etanol G. verrucosa ; 4. Homogenat + FeSO 4 +  ekstrak  kloroform G.  verrucosa ;  5. Homogenat + FeSO 4 + asam askorbat
Gambar  1. Kadar  MDA  sebagai  hasil  peroksidasi lipid  pada  homogenat  hepar  mencit ( Mus musculus )
Berdasarkan  kadar  MDA  yang  telah dihasilkan  pada  analisis  ini,  dapat  diketahui tingkat  penghambatan  peroksidasi  lipid  oleh ekstrak etanol G. verrucosa , ekstrak kloroform G. verrucosa ,  dan  asam  askorbat  (Tabel  1). Penghambtan  tersebut  dihitung  menggunakan rumus:
Rumus 1 .
Tabel 1 .  Kemampuan penghambatan peroksidasi lipid  oleh  ekstrak  etanol,  ekstrak kloroform G.  verrucosa dan  asam askorbat
Sumber % penghambatan P value
a d c c b 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 5 5,5 6 6,5 7 7,5 1 2 3 4 5 K ad ar M D A ( p p m ) Perlakuan
antioksidan Ekstrak etanol G. verrucosa 13,59 ± 2.34 0,030 Ekstrak kloroform G. verrucosa 12,54 ± 4.69 0,130 Asam askorbat 32,54 ± 1.27 0,002 Kadar  MDA  terendah  dihasilkan  oleh jaringan normal. Kadar MDA terendah selanjutnya  dihasilkan  oleh  perlakuan  dengan asam  askorbat,  akstrak  etanol,  dan  kloroform. Kadar  MDA  pada  perlakuan  kontrol  positif sangat  tinggi  karena  di  dalam  jaringan  hepar radikal  bebas  dihasilkan  secara  alami,  selain  itu jaringan  hepar  juga  telah  diberi  Ferrous  sulfat sebagai  penginduksi  radikal  bebas.  Perlakuan dengan pemberian asam askorbat, ekstrak etanol, dan  ekstrak  kloroform  yang  diberikan  kepada homogenat hepar dapat mengurangi kadar MDA. Penurunan  kadar  MDA  tersebut  disebabkan  oleh adanya  senyawa  antioksidan  yang  terkandung dalam  bahan  sehingga  dapat  menghambat aktifitas radikal bebas. Akan tetapi, penghambatan  aktifitas  radikal  bebas  oleh antioksidan  ekstrak  etanol  dan  kloroform  belum mendekati  batas  normal.  Meskipun  begitu, penghambatan  radikal  bebas  oleh  ekstrak  etanol sedikit  lebih  tinggi  daripada  ekstrak  kloroform. Semakin  tinggi  kadar  fenol  semakin  tinggi  pula kemampuan  suatu  ekstrak  menangkap  radikal hidroksil.  Gugus  fenol  dapat  menangkap  radikal hidroksil  dengan  cara  melepaskan  radikal hidrogen  yang  akan  berikatan  dengan  radikal hidroksil, membentuk molekul air (H 2 O). Persentase inhibition merupakan persentase penghambatan proses lipid peroksidasi oleh  antioksidan  yang  terkandung  dalam  bahan. Penghambatan  tertinggi  ditunjukan  oleh  asam askorbat,  lalu  ekstrak  etanol G.  verrucosa dan ekstrak  kloroform G.  verrucosa .  Semakin  tinggi kemampuan  suatu  bahan  untuk  menghambat proses  peroksidasi  lipid,  maka  diasumsikan bahwa  bahan  tersebut  mengandung  komponen antioksidan yang banyak. Asam askorbat sebagai inhibitor  tertinggi  disebabkan  oleh  sifatnya sebagai  antioksidan  saja,  sedangkan  ekstrak etanol  dan  ekstrak  kloroform G.  verrucosa dimungkinkan  tidak  hanya  bersifat  sebagai antioksidan  namun  juga  diperlukan  dalam mekanisme kerja sel lainya.
Beberapa  sampel  yang  bisa  digunakan dalam uji TBA meliputi homogenat otak, serum, homogenat hati, suspensi mitokondria,
homogenat jantung, dan lain-lain [11].
Homogenat  hepar  adalah  media  yang  digunakan dalam  uji  TBA  pada  penelitian  ini.  Hepar merupakan  temapt  utama  penyimpan  besi  (Fe) pada  resiko  tertentu  kerusakan  jaringan  yang disebabkan  oleh  besi.  Kelebihan  zat  besi disimpan  secara  berlanjutan  di  sel  parenkim hepar  dalam  hemochromatosis  sekunder  dan herediter yang menyebabkan kerusakan peroxidative  pada  membran  lipid  organel  seluler sehingga mengakibatkan kerusakan hati, fibrosis, dan akhirnya sirosis [13].
Uji  TBA  ini  ditambahkan  senyawa  FeSO 4 ( Ferrous  Sulfat )  didalamnya  yang  diharapkan sebagai penginduksi terjadinya proses pembentukan  radikal  bebas.  Menurut  [7],  besi berperan dalam peroksidasi lipid. Lipid peroksida murni biasanya stabil pada suhu fisiologis. Lipid peroksida  akan  membusuk  pada  pemanasan  dan juga  pada  ion  logam-transisi.  Besi(II)  dan  Fe2 2+ tertentu  bereaksi  dengan  lipid  peroksida  dengan cara  yang  hampir  sama  dengan  reaksi  lipid peroksida dengan H 2 O 2 yaitu memecah ikatan O- O. ketika berikatan dengan H 2 O 2 , akan terbentuk OH•. Ketika berikatan dengan lipid peroksida R- OOH,  akan  terbentuk  RO•  yang  disebut  radikal alkoxyl.
R-OOH + Fe 2+ Fe(III) + OH - + R - O• Lipid  hidroperoksida radikal alkoksil
Radikal  alkoxyl  melepaskan  H•  abstrak  dari PUFA dan dari peroksida.
R--O• + L-H           ROH + L• L – OOH + R--O•          LOO• + R – OH Hasil  dari  radikal  peroksil  dapat  berlanjut  ke propagasi  lipid  peroksidasi.  Fe(II)  dan  kelat Fe(III)  tertentu  dapat  mengurai  peroksida menjadi radikal peroksil.
Ion  Fe 2+ dan  besi  kelat  tertentu  bereaksi dengan  H 2 O 2 untuk  membentuk  OH•.  Reaksi protein  yang  mengandung  besi  dengan    H 2 O 2 dan/atau  O 2 • - secara  umum  tidak  membentuk formasi OH•, kecuali protein tersebut melepaskan besi di bawah kondisi uji. Kisaran kelat besi yang dapat merangsang peroksidasi lipid lebih luas [7].

## KESIMPULAN
Kadar fenolik yang dihasilkan oleh ekstrak ethanol  dan  ekstrak  kloroform G.  verrucosa 155,94 ppm 146,95 ppm. Kemampuan antioksidan  melalui  penghambatan  peroksidasi lipid  yang  dihasilkan  oleh  ekstrak  etanol  dan ekstrak  kloroform  yaitu  13,59  %  dan  12,54  %, sedangkan asam askorbat adalah 32,54 %.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa. Penelitian  ini  adalah  bagian  dari  penelitian  yang dibiayai  oleh  DPP/SPP  tahun  2012  FMIPA  UB. Orang  tua  tercinta  yang  selalu  memberi dukungan dan motivasi.

## DAFTAR PUSTAKA
[1]  Reddy,  S.M.  2001. University  Botany  I:
Algae, Fungi, Bryophyta, and
Pteridophyta .  New  Age  International: New Delhi
[2]  Lindsay,  D.G.  dan  Astley,  S.B.  2002. European research on the functional effects of  dietary  antioxidants-EUROFEDA. Mol Aspects Med . 23:1–38
[3]  Swantara,  I.M.  dan  Parwata,  I.M.  2011. Kajian Senyawa Antioksidan pada Rumput Laut dari Pantai sekitar Bali. The Excelent Research
[4]  Sreenivasan,  S.A.  2007.  Pengekstrakan Alga Gracilaria  changii, Pencirian  Aktiviti Antioksidan,  Antikanser  dan  Antimikroba serta  Potensi  Sebagai  Agen  Antikandida.
Tesis. University Sains Malaysia .
[5] Desmarchelier, C., Ciccia, G., dan Coussio, J.,
2000.  Recent Advances  In The  Search  For Antioxidant  Activity  In  South  American Plants.  In:  Atta-ur-Rahman  (Ed.),  Studies in  Natural  Products  Chemistr y . Elsevier . Amsterdam. 22:343–367
[6]  Sogut,  S.,  Zoroglu,  S.S.,  Ozyurt,  H., Yilmaz, H.R.,  dan  Sivasli,  E.  2003.  Changes  in Nitric  Oxide  Levels  and  Antioxidant Enzyme Activities  May  Have  a  role  in  the Pathophysiological  Mechanisms  Involved in Autism. Clin. Chim. Acta . 331: 111-11
[7]  Halliwell,  B.  dan  Gutteridge,  J.  1999. Free
Radicals in Biology and Madecine 3 th ed .
Oxford Science Publication: New York
[8]  SÖdergren,  E.  2000.  Lipid  Peroxidation  in vivo:  Evaluation  and  Application  of Method  for  Measurement.  Comprehensive
Summaries of Uppsala Dissertations
Faculty of Madecine
[9] Nagabubu, E., Rifkind, J.M., Boindala, S., & Nakka, L. 1992. Assessment of Antioxidant Activity  of  Eugenol in  vitro and in  vivo . Meth. Mol. Biol. 610 [10]  Faten,  M.  A. & Emad,  A.  S.  2009. Antioxidant  Activity  of  Extract  and  Semi- Purified Fractions of Marine Red Macroalga, Gracilaria  verrucosa . Aust.  J. Basic App. Sci. 3(4): 3179-3185.
[11]  Botsoglou,  N.,  Fletouris,  D.,  Papageorgiou, G.,  Vassilopous,  V.,  Mantis,  A.,  & Trakatellis, A. 1994. Rapid, Sensitive, and Specific  Thiobarbituric  Acid  Method  for Measuring  Lipid  Peroxidation  in  Animal Tissue,  Food,  and  Feedstuff  Sample. J. Agric. Food Chem. 42:1931-1937
[12]  Siriwardhana,  N.;  Lee,  K.  W.;  Kim,  S.  H.; Ha,  J.  W.;  Jeon,  Y.  J.  2003.  Antioxidant Activity of Hizikia Fusiformis on Reactive Oxygen  Species  Scavenging  and  Lipid Peroxidation Inhibition. Food Sci. Technol. Int.
[13]  Ajith,  T.A.  2010.  Ameliorating  Reactive Oxygen  Species-Induced in  vitro Lipid Peroxidation in Brain, Liver,
Mitochondria,  and  DNA  Damege  by
Zingiber  officinale . Indian  J.  Clin. Biochem. 25:67-73