## Arwana Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan
Fisiologi dan derajat pembuahan sperma ikan patin siam ( Pangasianodon hypophthalmus ) diencerkan menggunakan air kelapa muda dan gliserol [Physiology and degree of fertilization of Siamese catfish ( Pangasianodon hypophthalmus ) sperm diluted using young coconut water and glycerol]
Mahdaliana 1 , Rachmawati Rusydi 1 , Aminah 1 1 Program  Studi  Akuakultur,  Fakultas  Pertanian,  Universitas  Malikussaleh.  Kampus  utama  Reuleut,
Kabupaten Aceh Utara, Aceh, Indonesia
ABSTRACT ú Siamese catfish ( Pangasianodon hypophthalmus) is a freshwater fish that is widely cultivated widely in indonesia. The aim of this research is to see the best and the best dose for sperm dilution and determine the effect of sperm dilution using  young coconut  water  and glycerol on spermatozoa motility, spermatozoa survival, degree of egg fertilization, degree of egg hatching and water quality. The study was conducted in May to June 2018 at the UPT Aquaculture Department of the city of Agriculture and Marine city  of  Medan  Tuntungan.  The  method  used  a  non  factorial  completely  randomized  design  with  five treatments and three reapplication, namely A (control),  B (60% young coconut water + glycerol 40%), C (50%  young  coconut  water  +  glycerol  50%),  D  (young  coconut  water  40%  +  glycerol  60%)  and  E  (young coconut water 30% + glycerol 70%). The results showed that spermatozoa motility, degree of fertilization of eggs and degree of hatching of eggs were not significantly different but significantly affected the survival of spermatozoa. The best treatment is in treatment B with sperm dilution using 60% young coconut water and 40% glycerol.
Key words ú Siamese catfish, motility, survival, degree of fertilization, degree of hatching.
ABSTRAK ú Ikan  Patin  Siam  ( Pangasianodon  hypophthalmus)  merupakan  ikan  air  tawar  yangbanyak dibudidayakan secara luas di Indonesia. Penelitian ini bertujuan untuk melihat dosis terbaik dan yang paling bagus untuk pengenceran sperma serta mengetahui pengaruh pengenceran sperma menggunakan air kelapa muda dan gliserol terhadap motilitas spermatozoa, kelangsungan hidup spermatozoa, derajat pembuahan telur, derajat penetasan telur serta kualitas air. Penelitian ini dilaksanakan pada Bulan Mei sampai  Juni  2018  bertempatdi  UPT  Budidaya  Dinas  Pertanian  dan  Kelautan  Kota  Medan  Tuntungan. Metode  penelitian  ini  menggunakan  metode  eksperimental  dengan  menggunakan  Rancangan  Acak Lengkap (RAL) non faktorial yang terdiri dari 5 perlakuan dan 3 ulangan yaitu A (kontrol), B (air kelapa muda 60% + gliserol 40%), C (air kelapa muda 50% + gliserol 50%), D (air kelapa muda 40% + gliserol 60%) dan E (air kelapa muda 30% + gliserol 70%). Hasil penelitian menunjukkan bahwa motilitas spermatozoa, derajat pembuahan telur dan derajat penetasan telur tidak bebeda nyata tetapi berpengaruh sangat nyata terhadap  kelangsungan  hidup  spermatozoa.  Perlakuan  terbaik  terdapat  pada  perlakuan  B  dengan pengenceran sperma menggunakan air kelapa muda 60% dan gliserol 40%.
Kata kunci ú Ikan patin siam, motilitas, kelangsungan hidup, derajat pembuahan, derajat penetasan.
Received ú 27 April 2022, Accepted ú 25 Mei 2022, Published ú 29 Mei 2022. *Koresponden ú Mahdaliana,  Program  Studi  Akuakultur,  Fakultas  Pertanian,  Universitas  Malikussaleh.  Kampus utama Reuleut, Kabupaten Aceh Utara, Aceh, Indonesia. Email: mahdaliana87@gmail.com Kutipan ú Mahdaliana, M., Rusydi, R., & Aminah, A. (2022). Fisiologi dan derajat pembuahan sperma ikan patin siam ( Pangasianodon  hypophthalmus)  diencerkan  menggunakan  air  kelapa  muda  dan  gliserol. Arwana:  Jurnal  Ilmiah Program Studi Perairan, 4(1), 50-60. p-ISSN (Media Cetak) ú 2657-0254 e-ISSN (Media Online) ú 2797-3530
© 2022 Oleh authors. Arwana: Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan . Artikel ini bersifat open access yang  didistribusikan  di  bawah  syarat  dan  ketentuan Creative  Commons  Attribution-ShareAlike  4.0  International License .

## PENDAHULUAN
Ikan patin siam ( Pangasianodon hypophthalmus)  merupakan  ikan  air  tawar
yangbanyak  dibudidayakan  secara  luas  di Indonesia.  Ikan  patin  siam  diintroduksi  dari Thailand  pada  tahun  1972,  dan  dikenal  juga sebagai lele bangkok. Ikan patin siam memiliki
doi: 10.51179/jipsbp.v4i1.1200
Mahdaliana et al (2022)|Arwana ú Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan ú 4(1), 50-60
http://www.journal.umuslim.ac.id/index.php/jipsbp
beberapa  keunggulan  diantaranya  yaitu  laju pertumbuhan cepat, mempunyai daya toleransi yang tinggi pada perairan yang tidak mengalir dengan  kandungan  oksigen  terlarut  rendah serta  responsif  terhadap  pemberian  pakan tambahan.  Dengan  keunggulan  tersebut  ikan patin  siam  ini  menjadi  salah  satu  komoditas perikanan  yang  mempunyai  nilai  ekonomis tinggi,  baik  dalam  usaha  pembenihan  maupun usaha pembesarannya (Susanto, 2009). Tingginya  permintaan  pasar  mendorong  para pembudidaya untuk menambah jumlah produksi dalam  kegiatan  budidaya  ikan  patin  siam. Namun,  penyediaan  benih  patin  siam  yang berkualitas  dan  berkesinambungan  mengalami hambatan  karena  terbatasnya  ketersediaan induk  jantan  yang  matang  gonad  dan  siap dipijahkan.  Frekuensi  pemijahan  ikan  patin siam masih tergolong rendah, karena pemijahannya  hanya  terjadi  pada  musim penghujan (Rahardhianto et al., 2012). Masrizal dan Efrizal (1997) menyatakan bahwa salah satu permasalahan  fertilisasi  pada  budidaya  ikan patin siam adalah rendahnya tingkat fertilisasi dari  spermatozoa  di  dalam  air.  Hal  ini mengakibatkan banyaknya sel telur yang tidak terbuahi  secara  sempurna.  Permasalahan  lain adalah kurangnya ketersediaan cairan spermatozoa  pada  waktu  pembuahan  buatan. Rendahnya  pembuahan  spermatozoa  dalam fertilisasi  buatan  ini  juga  disebabkan  oleh aktivitas  spermatozoa  yang  relatif  singkat (Nurman, 1998).
Permasalahan umum disebabkan oleh singkatnya waktu viabilitas dan motilitas
dari spermatozoa, sehingga kemampuan  spermatozoa  untuk  menembus lubang  mikrofil  pada  sel  telur  rendah.  Volume cairan spermatozoa dapat ditingkatkan dengan rangsangan  hormonal,  sedangkan  menurut (Masrizal  dan  Efrizal,  1997)  volume  cairan spermatozoa  dapat  juga  dilakukan  dengan pengenceran serta penambahan larutan fisiologis.  Pengenceran  dibutuhkan  untuk mensuplai nutrisi dan bersifat isotonik dimana dapat  mempertahankan  tekanan  osmotik  dan keseimbangan  elektrolit  yang  sesuai  sehingga sperma dapat bertahan hidup. Salah satu bahan yang  digunakan  sebagai  bahan  pengencer adalah air kelapa muda dan gliserol. Air kelapa muda merupakan salah satu sumber nutrisi bagi spermatozoa  karena  mengandung  glukosa  dan fruktosa  yang  juga  terkandung  dalam  cairan semen sehingga dapat dijadikan sebagai sumber energi bagi spermatozoa untuk membuahi telur
(Toelihere, 1981). Toelihere, (1985) menyatakan bahan  pengencer  harus  mengandung  unsur- unsur  yang  hampir  sama  dengan  semen  dan tidak  mengandung  zat  yang  bersifat  racun. Dengan  demikian  air  kelapa  mudadiharapkan mampu  menggantikan  cairan  NaCl  sebagai bahan pengencer spermatozoa ikan patin siam. Selain air kelapa muda sebagai bahan pengencer gliserol  juga  diperlukan  sebagai  pelindung (protective  agent)  spermatozoa.  Gliserol  dapat berdifusi ke dalam sel dan membentuk fruktosa sebagai  sumber  energi  sehingga  dapat digunakan  untuk  melindungi  sel  dari  proses difusi  media  sekitarnya.  Penambahan  gliserol dalam pengencer dapat melindungi sperma dari suhu  rendah  yang  dapat  mematikan  sperma (Mumu,  2009).  Penelitian  terdahulu  dari  Isnan et  al.,  (2013)  menyatakan  bahwa  penambahan air  kelapa  dan  gliserol  berpengaruh  terhadap fertilisasi  spermatozoa  ikan  mas  (Cyprinus carpio L) dan spermatozoa masih bertahan hidup selama  penyimpanan  4  hari,  namun  semakin lama  disimpan  motilitas  akan  semakin menurun.  Hasil  terbaik  dari  penelitian  ini adalah penyimpanan sperma dengan perbandingan  dosis  50%  air  kelapa  dan  50% gliserol.  Berdasarkan  hal  tersebut  di  atas, penulis  tertarik  untuk  melakukan  penelitian tentang  “fisiologi  dan  derajat  pembuahan sperma  ikan  patin  siam  (Pangasianodon hypophthalmus)  diencerkan  menggunakan  air kelapa  muda  dan  gliserol”.  Penelitian  ini bermanfaat  sebagai  acuan  untuk  kalangan pembudidaya  dalam  hal  pengenceran  sperma ikan dengan menggunakan air kelapa muda dan gliserol, sehingga dapat meningkatkan produksi ikan patin siam kedepannya.

## BAHAN DAN METODE

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan  Mei sampai  Juni  2018.  Penelitian  ini  dilakukan  di UPT  Budidaya  Dinas  Pertanian  dan  Kelautan Kota Medan Tuntungan.

## Metode dan Rancangan Penelitian
Metode yang digunakan dalam penelitian adalah metode  dengan  menggunakan  analisis  data Rancangan  Acak  Lengkap  non  faktorial. Penelitian terdiri atas 5 perlakuan dengan 3 kali ulangan.  Adapun  faktor  dari  perlakuan  dalam penelitian  ini  adalah  fisiologi  dan  derajat
Mahdaliana et al (2022)|Arwana ú Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan ú 4(1), 50-60
pembuahan sperma ikan patin siam ( Pangasianodon  hypophthalmus)  diencerkan dengan  menggunakan  air  kelapa  muda  dan gliserol.  Perlakuan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah:  perlakuan  A  :  Kontrol (mengunakan  NaCL),  perlakuan  B  :  0,5  ml sperma dengan Pengencer gliserol 40% + 60% air kelapa,  perlakuan  C  :  0,5  ml  sperma  dengan Pengencer  gliserol  50%  +  50%  air  kelapa  dan perlakuan D : 0,5 ml sperma dengan pengencer gliserol 60% + 40% air kelapa, serta perlakuan E : 0,5 ml sperma dengan pengencer gliserol 70% + 30% air kelapa.

## Wadah untuk pemijahan induk
Wadah yang digunakan untuk pemijahan induk ikan  berupa  bak  fiber  yang  berukuran 163 × 113 × 69  cm 3 sebanyak  2  buah.Sebelum wadah  tersebut  digunakan  di  cuci  dan  disikat terlebih  dahulu  kemudian  dibilasdengan  air bersih  kemudian  dikerigkan  selama  1  hari. Setelah itu bak fiber diisi air dengan ketinggian ±50 cm.

## Wadah pengenceran sperma
Wadah  yang  digunakan  untuk  pengenceran sperma berupa baskom dengan ukuran, lebar 20 cm  dan  tinggi  7  cm  sebanyak  5  buah.  Sebelum digunakan,  wadah  tersebut  dicuci  dengan  air sampai bersih kemudian dikeringkan.

## Wadah inkubasi telur
Wadah  inkubasi  telur  menggunakan  baskom dengan ukuran lebar 30 cm, tinggi 14 cm, jumlah wadah  yang  digunakan  sebanyak  15  buah. Sebelum  wadah  digunakan  terlebih  dahulu dibersihkan dengan deterjen lalu dibilas dengan air bersih kemudian dikeringkan. Setelah kering diisi air sebanyak 10 cm. Selanjutnya dipasang aerasi sebagai penyuplai oksigen.

## Persiapan biota uji
Ikan  yang  digunakan  pada  saat  penelitian  ini adalah  ikan  patin  siam  jantan  dan  betinayang matang gonad, ikan yang digunaka sebanyak 2 ekor jantan dan 1 ekor betina.Induk ikan patin siam jantan dan betina berumur 2 tahun, berat induk ikan jantan 1,5kg dan 1,8kg sedang berat induk  ikan  betina  2kg.Sebelum  dilakukan pemijahan  induk  jantan  dan  betina  disuntik terlebih  dahulu  dengan  menggunakan  hormon ovaprim untuk mempercepat merangsang proses pemijahan.  Induk  jantan  dan  betina  disuntik dengan  mengunakan  hormon  ovaprim,  proses
penyuntikan  dilakukan  2  kali  yaitu  pagi  dan malam pada jam 10 malam dan jam 10 pagi.

## Persiapan bahan pengencer
Bahan  pengencer  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  air  kelapa  muda dangliserol yang ditambahkan dengan 5 macam perlakuan  air  kelapa  muda  dan  gliserol  yang berbeda.  Penggunaan  air  kelapa  muda  60%, 50%,  40%  dan  30%,  sedangkan  gliserol  yang digunakan  dalam  penelitian  yaitu  40%,  50% 60%  dan  70%.  Adapun  konsentrasi  tersebut diperoleh melalui penentuan berikut:
Air kelapa dan gliserol %  = !"#$"%&'$" ')# *"+'!' ,-.' / 0-,+'1 !"%2"%3"# 455 Pengambilan telur dan sperma Pengambilan telur
dilakukan setelah penyuntikan kedua, induk dimasukkan kedalam bak  fiber  selama  6-8  jam.  Pada  saat  itu,  induk betina  sudah  siap  untuk  dikeluarkan  telurnya dengan cara di striping.Wadah untuk penampungan  telur  berupa  baskom    kemudian siapkan  bulu  ayam  untuk  pengadukan pencampuran telur dengan sperma. Penangkapan  induk  betina  dengan  serok, kemudian  induk  bagian  tubuhnya  semua  dilap dengan  kain  dan  selimuti  tubuh  induk  dengan kain  lap  kecuali  bagian  lubang  telurnya. Pengambilan  telur  dan  sperma  dilakukan striping  dengan  cara  stiping  yaitu  mengurut bagian  perut  ikanke  arah  lubang  pengeluaran hingga  telur  dan  sperma  keluar.  Telur    dan sperma yang keluar ditampung didalam baskom secara terpisah.

## Pencampuran bahan pengencer
Sperma  yang  telah  dikeluarkan  dari  induk jantan harus segera dicampur dengan telur yang telah  disiapkan  sebelumnya.  Hal  itu  bertujuan agar  telur  dan  sperma  tersebut  tidak  mati. Berikut  adalah  langkah-langkah  pencampuran sperma dengan telur. Masukkan NaCL sebanyak 0,5  ml  kedalam  baskom.  Masukkan  bahan pengencer air kelapa muda dan gliserol dengan konsentrasi  yang  sudah  ditentukan  kedalam baskom  yang  lain  sebanyak  4  buah,  kemudian masukkan  sperma  sebanyak  0,5  ml  dan  telur sebanyak 100 butir kedalam baskom yang telah berisi air kelapa dan gliserol. Setelah bercampur air  kelapa  muda,  gliserol,  telur  dan  sperma kemudian semuanya diaduk dengan menggunakan bulu ayam hingga merata selama satu menit. Setelah itu buang larutan pengencer
Mahdaliana et al (2022)|Arwana ú Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan ú 4(1), 50-60
secara perlahan agar telurnya tidak ikut keluar. Apabila sudah siap telur ditebar kedalam wadah penetasan.

## Parameter Pengamatan Pengamatan motilitas spermatozoa
Pengamatan  motilitas  dilakukan  dengan  cara mengambil satu tetes sperma dengan menggunakan  pipet  (±0,01  ml)  dan  diletakkan pada obyek  glass  kemudian  diteteskan  dengan aquades  diamati  dibawah  mikroskop  dengan perbesaran  400X.  Menurut  Utami et  al.,(2016) pengamatan  persentase  motilitas  spermatozoa dapat dihitung dengan menggunakan rumus:
Motilitas spermatozoa = 6,+'1 7!"#,'&898' :'%2 ;8&)+ <#82#"$)= 6-,+'1 7!"#,'&898' :'%2 >)','&) × 100%
Kelangsungan hidup spermatozoa Penentuan persentase hidup sperma dilakukan dengan
metode pewarnaan
dengan menggunakan larutan pewarna eosin. Satu tetes sperma  yang telah diencerkan diletakkan pada obyek glass kemudian ditambah dengan cairan pewarna eosin  dan  dihomogenkan.Selanjutnya dibuat preparat ulas dengan cara menekan dan mendorong menggunakan cover glass membentuk  sudut  45 o C  kemudian  dilihat dibawah  mikroskop  untuk  dihitung  jumlah spermatozoa  yang  hidup  dan  berapa  jumlah spermatozoa  yang  mati  agar  dapat  diperoleh kelangsungan hidup spermatozoa. Sperma yang mati akan menyerap zat warna merah dan yang hidup  akan  tetap  berwarna  transparan  pada bagian dalam selnya. Pengamatan kelangsungan  hidup  spermatozoa  dibawah mikroskop dengan pembesaran 400x (Susilowati et al., 2010).
Kelangsungan hidup spermatozoa = 6-,+'1 7!"#,'&898' :'%2 ?).-! 6-,+'1 7!"#,'&898' :'%2 ;'&) × 100% Derajat pembuahan telur
Perhitungan  derajat  pembuahan  telur  dapat dilakukan dengan menggunakan rumus menurut  (Yusnita,  2003).  Perhitungan  jumlah telur menetas berdasarkan rumus dibawah ini:
FR= 6-,+'1 @"+-# @"#A-'1) 6-,+'1 @8&'+ @"+-# × 100%

## Derajat penetasan telur
Pengamatan tingkat penetasan telur dilakukan setelah 24 jam dengan melihat banyaknya telur yang  menetas.  Menurut  Effendi,  (2002)  derajat penetasan  adalah  banyaknya  telur  yang
menetas  menjadi  larva  dari  total  telur  yang dibuahi. Adapun derajat penetasan telur dapat dihitung dengan rumus:
Derajat penetasan= ∑ @"+-# :'%2 ;"%"&'$ ∑ @"+-# :'%2 @"#A-'1) × 100 %

## Analisis Data
Dari hasil penelitian, data yang diperoleh dibuat dalam  bentuk  tabel  dan  grafik,  selanjutnya dianalisis dengan uji F (ANOVA). Apabila F hitung > F tabel (berbeda nyata) , maka selanjutnya dilakukan uji lanjut dengan uji Tukey. Analisis data  dilakukan  dengan  menggunakan  SPSS versi 17.0.

## HASIL
Selama  penelitian,  pengamatan  spermatozoa ikan  patin  siam  yang  dihasilkan  yaitu  3,1  ml dari  2  ekor  induk  jantan  dengan  berat  induk masing-masing  1,8  kg  dan  2,0  kg  serta  umur ikan patin siam 2 tahun. Induk ikan patin siam yang digunakan yaitu matang gonad, induk yang matang  gonad  apabila  diurut  bagian  perut  ke arah  anus  akan  mengeluarkan  telur  dan spermatozoa berwarna putih susu. Spermatozoa hasil  striping,  dilakukan  pengamatan  secara makroskopis dan mikroskopis. Volume spermatozoa  ikan  patin  siam  dihasilkan  dari hasil penelitian yaitu 1,4 ml dan 1,7 ml dengan berat induk 1,8kg dan 2,0 kg (Tabel 1).
Tabel 1. Hasil Pengamatan Sperma Ikan Patin Siam.
No. Parameter Hasil 1. Volume 1,4 ml dan 1,7 ml 2. Warna Putih susu 3. Bau Amis 4. Konsistensi Kental

## Motilitas  Spermatozoa
Motilitas  spermatozoa  adalah  kemampuan spermatozoa  untuk  bergerak  maju  (progresif). Motilitas  spermatozoa  juga  salah  satu  faktor yang menentukan kelayakan kualitas spermatozoa setelah pengenceran karena sangat mempengaruhi  kemampuan  untuk  membuahi sel telur. Hasil pengamatan motilitas spermatozoa  tersebut  dapat  dilihat  pada Gambar 1 dibawah ini:
Mahdaliana et al (2022)|Arwana ú Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan ú 4(1), 50-60

## Gambar 1. Motilitas Spermatozoa (%)
Keterangan: Perlakuan A NaCL (kontrol) Perlakuan B Pengenceran sperma menggunakan gliserol 40% + air kelapa muda 60%.
Perlakaun C Pengenceran sperma menggunakan gliserol 50% + air kelapa muda 50%.
Perlakuan D Pengenceran sperma menggunakan gliserol 60% + air kelapa muda 40%.
Perlakaun E Pengenceran sperma menggunakan gliserol 70%  + air kelapa muda 30%.
Berdasarkan hasil penelitian motilitas spermatozoa  terlihat  bahwa  perlakuan  yang paling  baik  adalah  perlakauan  B  dengan  nilai 52,68%. Selanjutnya diikuti perlakuan C dengan nilai  33,34%,  A  dengan  nilai  32,50%  kemudian perlakuan D dengan nilai 30,20% dan terendah adalah  perlakuan  E  dengan  nilai  26,09%. Motilitas  spermatozoa  juga  dapat  dipengaruhi oleh bahan pengencer, adapun bahan pengencer yang  digunakan  yaitu  air  kelapa  muda  dan gliserol.  Hasil  analisis  statistik  (ANOVA) menunjukkan  bahwa  pengenceran  sperma menggunakan  gliserol  dan  air  kelapa  muda tidak  berbeda  nyata,  dengan  nilai  F hitung 3.224< F tabel(0,0.5) 3,48.

## Kelangsungan Hidup Spermatozoa
Kelangsungan  hidup  spermatozoa  adalah seberapa  banyak  jumlah  sperma  yang  hidup selama  pengenceran  dengan  menggunakan gliserol  dan  air  kelapa  muda  setelah menggunakan larutan eosin. Berdasarkan hasil penelitian  kelangsungan  hidup  sperma  terlihat bahwa  perlakuan  yang  paling  tinggi  terdapat pada  perlakuan  B  dengan  nilai  31,03%. Selanjutnya  diikuti  perlakuan  C  dengan  nilai 18,98%,  A  dengan  nilai  17,45%    kemudian perlakuan  D  dengan  nilai  16,09%  sedangkan hasil  terendah  terdapat  pada  Perlakuan  E dengan nilai 14,60%.Hasil pengamatan kelangsungan  hidup  sperma  tertinggi  terdapat pada  perlakuan  B,  hanya  memiliki  nilai persentase sebesar 31,03%.

## Gambar 2. Kelangsungan Hidup Sperma (%)
Keterangan: Perlakuan A NaCL (kontrol) Perlakuan B Pengenceran sperma menggunakan gliserol 40% + air kelapa muda 60%.
Perlakaun C Pengenceran sperma menggunakan gliserol 50% + air kelapa muda 50%.
Perlakuan D Pengenceran sperma menggunakan gliserol 60% + air kelapa muda 40%.
Perlakaun E Pengenceran sperma menggunakan gliserol 70%  + air kelapa muda 30%.
Nilai  yang  diperoleh  dari  hasil  kelangsungan hidup spermatozoa cukup rendah jika dibandingkan dengan nilai motilitas spermatozoa,  derajat  pembuahan  telur  dan derajat  penetasan  telur.  Adapun  nilai  31,03% yang dihasilkan dari pengamatan kelangsungan hidup  spermatozoa  dari  tiap-tiap  perlakuan memiliki nilai tertinggi dari pada  perlakuan  A, C,  D  dan  E.  Berdasarkan  hasil  uji  analisis statistik (ANOVA) pada penelitian ini menunjukkan  bahwa  kelangsungan  hidup sperma  ikan  patin  siam  berbeda  nyata  dengan nilai F hitung 9.238> F tabel(0,0.5) 3,48.

## 3.1. Derajat Pembuahan Telur
Derajat  pembuahan  telur  merupakan  proses bergabungnya inti sperma dengan inti sel telur dalam  sitoplasma  sehingga  membentuk  zigot (Murtini, 2005). Proses derajat pembuahan telur sangat  dipengaruhi  oleh  kualitas  telur,  sperma dan kecepatan sperma untuk bergerak spontan sehingga  mampu  masuk  ke  dalam  lubang mikropil telur.
Mahdaliana et al (2022)|Arwana ú Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan ú 4(1), 50-60
Keterangan: Perlakuan A NaCL (kontrol) Perlakuan B Pengenceran sperma menggunakan gliserol 40% + air kelapa muda 60%.
Perlakaun C Pengenceran sperma menggunakan gliserol 50% + air kelapa muda 50%.
Perlakuan D Pengenceran sperma menggunakan gliserol 60% + air kelapa muda 40%.
Perlakaun E Pengenceran sperma menggunakan gliserol 70%  + air kelapa muda 30%.
Berdasarkan hasil penelitian,persentase derajat pembuahan
telur ikan patin siam (Pangasianodon  hypophthalmus)  pada  semua perlakuan tergolong tinggi karena berada diatas 50%. Hal ini sesuai dengan pendapat Fani et al., (2018)  presentase  telur  ikan  yang  terbuahi diatas 50% tergolong tinggi, sedangkan 30-50% tergolong  sedang  dan  dibawah  30%  tergolong rendah. Rata-rata derajat pembuahan telur pada perlakuan  A  adalah  69,67%,  perlakuan  B 78,67%,  perlakuan  C  76,00%  kemudian perlakuan  D  67,33%  dan  perlakuan  E  63,00%. Hasil  analisis  statistik  (ANOVA)  menunjukkan bahwa  pengenceran  sperma  menggunakan gliserol  dan  air  kelapa  muda  tidak  berbeda nyata, dengan nilai F hitung 1.875< F tabel(0,0.5) 3,48.

## Derajat Penetasan Telur
Derajat penetasan telur merupakan persentase jumlah telur yang menetas dari sejumlah telur yang  dibuahi.  Berdasarkan  hasil  penelitian didapatkan  bahwa  derajat  penetasan  telur tertinggi  terdapat  pada  perlakuan  B  dengan nilai  60,95%  selanjutnya  pada  perlakuan  C dengan  nilai  54,86%,  diikuti  lagi  perlakuan  A dengan nilai 53,26%, D dengan nilai 41,72% dan perlakuan E dengan nilai 38,73%.

## Gambar 4. Derajat Penetasan Telur (%)
Keterangan: Perlakuan A NaCL (kontrol) Perlakuan B Pengenceran sperma menggunakan gliserol 40% + air kelapa muda 60%.
Perlakaun C Pengenceran sperma menggunakan gliserol 50% + air kelapa muda 50%.
Perlakuan D Pengenceran sperma menggunakan gliserol 60% + air kelapa muda 40%.
Perlakaun E Pengenceran sperma menggunakan gliserol 70%  + air kelapa muda 30%.
Derajat  penetasan  telur  berhubungan  erat dengan  tingkat  pembuahan,  apabila  tingkat perkembangan embrio pada derajat pembuahan telur  baik  maka  tingkat  penetasanpun  akan tinggi.  Derajat  penetasan  telur  tertinggi terdapat pada perlakuan B dengan nilai 60,95%. Hasil  analisis  statistik  (ANOVA)  menunjukkan bahwa  pengenceran  sperma  menggunakan gliserol  dan  air  kelapa  muda  tidak  berbeda nyata, dengan nilai F hitung 1.939< F tabel(0,05) 3,48.

## PEMBAHASAN
Penggunaan  air  kelapa  muda  dan  gliserol memberikan  perlindungan  untuk  spermatozoa secara intraseluler dan ekstraseluler. Mekanisme perlindungan intraseluler dipengaruhi oleh gliserol dengan cara memasuki sel  dan  menggantikan  sebagian  air  yang  bebas kemudian  mendesak  keluar  elektrolit-elektrolit tersebut  serta  mengurangi  daya  perusaknya terhadap spermatozoa (Toelihere, 1993). Sedangkan  perlindungan  secara  ekstraseluler juga diberikan oleh air kelapa muda karena air kelapa  muda  mengandung  glukosa,  fruktosa, mineral,  vitamin  dan  protein  yang  berfungsi menyediakan  kebutuhan  fisik  dan  kimiawi sehingga dapat mempertahankan motiltas serta kelangsungan hidup spermatozoa.
Motilitas  sperma  tertinggi  terdapat  pada perlakuan B dengan nilai 52,68% menunjukkan bahwa kualitasspermatozoa baik. Hal ini sejalan dengan  pendapat  Lopes,  (2002)  menyatakan bahwa  motilitas  spermatozoa  dinyatakan  baik apabila  memenuhi  kriteria  lebih  dari  50%. Motilitas  spermatozoa  tertinggi  dipengaruhi oleh bahan pengencer, adapun kosentrasi bahan pengencer  yang  digunakan  pada  perlakuan tersebut sesuai untuk pengenceran sperma serta penggunaan  air  kelapa  muda  lebih  banyak dibandingkan dengan perlakuan lainnya. Hal ini sesuai  dengan  literatur  Isnan et  al.,  (2013) menyatakan  komposisi  air  kelapa  muda  lebih banyak  dari  gliserol  sehingga  kombinasi tersebut  efektif  dalam  mensuplai  nutrisi  dan melindungi sel sperma.
Motilitas  spermatozoa  terendah  terdapat  pada perlakuan E dengan nilai 26,09%. Hal ini sejalan dengan  pendapat  Toelihere,  (1981)  persentase motilitas  spermatozoa  yang  dikatakan  kurang baik  dalam  proses  pembuahan  telur  apabila  di bawah 40%. Motilitas spermatozoa kurang baik
Mahdaliana et al (2022)|Arwana ú Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan ú 4(1), 50-60
dipengaruhi  oleh  bahan  pengencer  yang  tidak sesuai,  berkurangnya  cadangan  makanan  yang dibutuhkan oleh spermatozoa sehingga spermatozoa mengalami kelelahan dan menyebabkan  kematian.  Hal  ini  sesuai  dengan pernyataan  Diana,  (2015)  menyatakan  bahwa, penurunan  motilitas  spermatozoa  disebabkan oleh  berkurangnya  cadangan  zat-zat  makanan dalam larutan pengencer yang digunakan untuk pergerakan  dan  mempertahankan  hidupnya sehingga pada kondisi tertentuakan menyebabkan penurunan motilitas spermatozoa dan mengalami kematian.
Penurunan motilitas spermatozoa juga disebabkan  karena  konsentrasi  gliserol  lebih banyak  dibandingkan  dengan  bahan  pengencer air  kelapa  muda.  Penggunaan  gliserol  yang tinggi  dapat  menyebabkan  berkurangnya sumber  energi  sehingga  dapat  memicu terjadinya kerusakan langsung yang berpengaruh  pada  struktur  dan  fungsi  seluler, salah  satunya  yaitu  penurunan  motilitas spermatozoa. Gliserol akan memberikan perlindungan  yang  efektif  terhadap  sperma apabila konsentrasi di dalam pengencer optimal, dan  apabila  tidak  optimal  akan  menimbulkan gangguan  pada  sperma  berupa  penurunan motilitas  dan  kualitas  spermatozoa.  Adapun penyebab lain dari penurunan motilitas sperma dapat disebabkan oleh efek gliserol yang kurang berjalan dengan lancar dalam menggantikan air bebas dan mendesak keluar elektrolit-elektrolit pada  proses  pengenceran,  sehingga  elektrolit menumpuk  dan  merusak  dinding  sel  serta permeabilitas membran plasma akan menurun. Apabila  membran  plasma  spematozoa  sudah mengalami  kerusakan,  maka  metabolisme spermatozoa  akan  terganggu  dan  mulai kehilangan motilitasnya sehingga mengakibatkan  kematian  spermatozoa.  Hal  ini juga  sejalan  dengan  pendapat  Kusuma  (1990), kerusakan  metabolisme  spermatozoa  dapat menyebabkan  cadangan  makanan  berkurang dan  larutan  elektrolit  menjadi  tidak  seimbang sehingga spermatozoa mengalami kelelahan dan mati.
Nilai  kelangsungan  hidup  spermatozoa  tinggi dipengaruhi  oleh  bahan  pengencer  masih  aktif sehingga sperma memiliki makanan dan sumber energi  untuk  bertahan  hidup.  Hal  ini  sesuai dengan  pendapat  Yani et al., (2001) persentase kelangsungan  hidup  spermatozoa  masih  tinggi disebabkan  masih  tersedianya  zat  energi  yang
dibutuhkan  oleh  sperma,  larutan  penyanggah yang masih stabil, tekanan osmotik yang masih isotonis,  serta  umur  spermatozoa  yang  masih segar.
Pada  perlakuan  A  mengalami  penurunan kelangsungan  hidup  spermatozoa  dengan  nilai 17,45%,  hal  ini  disebabkan  spermatozoa  tidak terdapat  cukup  makanan  dari  pengenceran spermatozoa  mengguanakan  NaCL,  karena NaCL  tidak  sepenuhnya  memberikan  sumber energi dan makanan untuk sperma akan tetapi diperlukan  bahan  pengencer  yang  lain  untuk pengenceran
sperma yang
dapat mempertahankan  dan  melindungi  spermatozoa agar  kelangsungan  hidup  spermatozoa  tetap tinggi. Hal ini sesuai dengan pendapat Tilman, (1983)  menambahkan  bahwa  kekurangan  zat- zat  makanan  pada  bahan  pengencer  dapat mengurangi  pergerakan  spermatozoa,  daya membuahi  sel  telur  dan  jumlah  kelangsungan hidup spermatozoa.
Kelangsungan  hidup  spermatozoa  terendah terdapat pada perlakaun E dengan nilai 14,60%. Terjadinya  penurunan  kelangsungan  hidup disebabkan  karena  kekurangan  cadangan makanan  yang  dimanfaatkan  spermatozoa untuk  bergerak  dan  bertahan  hidup  pada  saat pengenceran.  Hal  ini  sesuai  dengan  pendapat Danang et  al.,  (2012)  bahwa  semakin berkurangnya cadangan makanan, dan ketidak seimbangan cairan elektrolit akibat metabolisme  spermatozoa  dapat  menyebabkan kerusakan
membran sel spermatozoa. Kerusakan  membran  sel  spermatozoa  akan berdampak  pada  membran  yang  pada  awalnya mempunyai  sifat  semi  permeabel  tidak  lagi mampu  menyeleksi  keluar  masuknya  zat, sehingga  pada  saat  dilakukan  uji  warna  eosin zat tersebut masuk ke dalam plasma dan sperma tersebut banyak mengalami kematian.
Tingginya  derajat  pembuahan  telur  pada perlakuan Byang mencapai 78,67% dikarenakan bahan  pengencer  yang  digunakan  pada  saat pengenceran  masih  aktif  dan  memberikan sumber  energi  untuk  spermatozoa.  Menurut pendapat  Masrizal  dan  Efrizal  (1997)  derajat pembuahan  telur  tinggi  berhubungan  erat dengan  bahan  pengencer  yang  mampu memberikan
sumber energi dan perlindunganuntuk spermatozoa. Adapun pergerakan  spermatozoa  aktif  dan  licah dipengaruhi oleh spermatozoa yang mempunyai kemampuan  dan  energi  untuk  menembus
Mahdaliana et al (2022)|Arwana ú Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan ú 4(1), 50-60
lubang  mikrofil  telur.  Hal  ini  sesuai  dengan pendapat Lismawati et al., (2016) bahwa derajat pembuahan telur dapat didukung oleh kualitas telur spermatozoa yang baik.
Motilitas spermatozoa pada perlakaun A dengan nilai  32,50%  tidak  mengalami  peningkatan disebabkan  karena  pemberian  NaCL  fisiologis saja  tidak  memberikan  sumber  energi  yang cukup, serta energi yang tersedia di dalam NaCL kurang untuk pengenceran spermatozoa sehingga  spermatozoa  mengalami  penurunan motiltas.  Hal  ini  sesuai  dengan  pendapat Solicah,  (2007)  bahwa  semakin  berkurangnya cadangan  makanan,  dan  ketidak  seimbangan cairan eletrolit akibat metabolisme spermatozoa dapat menyebabkan penurunan serta kerusakan membran sel spermatozoa.
Perlakuan  A  mengalami  penurunan  derajat pembuahan  telur  dengan  nilai  69,67%,  Hal  ini dikarenakan  dengan  penggunaan  NaCl  yang tinggi  tanpa  ada  bahan  pengencer  yang  lain dapat menyembabkan derajat pembuahan telur menurun dan tidak memberikan sumber energi yang  cukup  serta  telur  tidak  berkembang dengan  baik  sehingga  mengalami  penurunan derajat  pembuahan  telur.  Menurut  pendapat Ardias, (2008) pemberian larutan NaCl dengan dosis yang tinggi dapat menyebabkan telur yang berhasil dibuahi tidak berkembang dengan baik.
Derajat  pembuahan  telur  terendah  terdapat pada perlakuan E dengan nilai 63,00 butir/ekor hal  ini  disebabkan  oleh  bahan  pengencer  tidak dapat  memberikan  energi  bagi  spermatozoa sehingga spermatozoa untuk menembus lubang mikrofil  telur  rendah  dan  spermatozoa  banyak mengalami  kematian.  Pada  telur  yang  tidak mengalami  pembuahan,  disebabkan  oleh spermatozoa  tidak  dapat  masuk  ke  dalam lubang mikrofil. Masuknya spermatozoa kedalam sel telur melalui lubang mikrofil hanya berlangsung  antara  45-60  detik  kemudian lubang  mikrofil  tertutup  sehingga  dapat menyebabkan  derajat  pembuahan  menjadi rendah.  Riehl,  (1991)  menyatakan  bahwa kegagalan pembuahan telur disebabkan karena sperma  tidak  dapat  memasuki  lubang  mikrofil telur dan mengalami kematian.
Adapun  Derajat  penetasan  telur  pada  saat penelitian diangap tinggi karena memiliki nilai diatas  50%.  Hal  ini  sesuai  dengan  pendapat Hijriyati,  (2012)  menjelaskan  bahwa  derajat penetasan  dengan  nilai  diatas  50%  tinggi  dan
30%-50%  adalah  dianggap  rendah.  Derajat penetasan  tertinggi  dipengaruhi  oleh  embrio dapat  berkembang  dengan  baik  serta  kualitas sperma  yang  masih  bagus  dan  persediaan makan  untuk  spermatozoa  masih  cukup sehingga  sperma  bisa  bertahan  hidup  dan  bisa menembus lubang mirofil dengan cepat. Hal ini sejalan  dengan  pendapat  Kurniasih  dan Gustiano,  (2007)  yang  menyatakan  bahwa keberhasilan  derajat  pembuahan  telur  ikan ditentukan oleh keberhasilan penetrasi sperma terhadap mikrofil telur.
Derajat penetasan pada perlakuan A mengalami penurunan  dengan  nilai  53,26%.  Hal  ini  dapat disebabkan  karena  NaCL  tidak  sepenuhnya memberikan  sumber  energi  bagi  sperma  maka diperlukan  bahan  pengencer  lain  yang  dapat memberikan sumber makanan dan energi untuk bisa bergerak karena spermatozoa membutuhkan  energi  nenuju  lubang  mikrofil telur. Hal ini sesuai dengan pendapat Adipu et al., (2011) pada kondisi pergerakan sperma aktif dan lincah, sperma mempunyai kemampuan dan energi untuk menembus lubang mikrofil telur.
Sedangkan  nilai  daya  tetas  telur  terendah terdapat pada perlakuan E dengan nila 38,73% hal ini sesuai dengan pernyatan Hijriyati, (2012) menjelaskan  bahwa  derajat  penetasan  dengan nilai 30%- 50% adalah dianggap rendah.Derajat penetasan telur rendah disebabkan oleh sperma tidak  mampu  berkembang  setelah  membuahi telur  karena  kekurangan  energi  pada  saat sperma  bergerak  dan  berenag  kemudian spermatozoa kesulitan menembus mikrofil telur sehingga  banyak  telur  yang  tidak  menetas. Menurut Zairin et al., (2005) faktor yang diduga menyebabkan rendahnya penetasan telur yaitu telur  tidak  berkembang  setelah  terbuahi, perubahan  kemampuan  fisiologi  telur  saat embriogenesis,  atau  dapat  pula  disebabkan karena  kerusakan  telur  pada  saat  pembuahan. Kerusakan telur patin siam dapat terjadi karena telur  tersebut  bersifatlengket  dan  mudah tenggelam  sehingga  dapat  menyebabkan  telur banyak yang mengalami pembusukan kemudian telur  tidak  menetas.  Hal  ini  sesuai  dengan pendapat  Slembrouck et  al,.  (2005)  telur  ikan patin siam dapat menempel satu sama lain atau pada  substrat  melalui  selaput  lendir  lengket yang  menutupi  seluruh  permukaan  telur kemudian telur banyak yang tidak menetas.
Jumlah  sperma  ikan  sangat  tergantung  pada umur,  berat  tubuh,  pemberian  pakan  dan
Mahdaliana et al (2022)|Arwana ú Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan ú 4(1), 50-60
http://www.journal.umuslim.ac.id/index.php/jipsbp
frekuensi  pengeluaran  sperma  (Salisbury  and VanDemark,  1985).  Warna  spermatozoa  ikan patin  siam  pada  saat  penelitian  adalah  putih susu,  bau  spermatozoa  yaitu  amis  dan konsistensi yaitu kental. Hal ini sesuai dengan penelitian Japet (2011) sperma berwarna krem- putih  susu  serta  bau  sperma  amis  dan konsistensi  sperma  kental.  Sperma  erat kaitannya  drngan  motilitas  spermatozoa. Motilitas sperma merupakan indikator kualitas spermatozoa sebagai prasyarat pembuahan dan berhubungan erat dengan keberhasilan pembuahan  (Rurangwa et  al.,  2004).  Adapun motilitas  spermatozoatertinggi  juga  terjadi karena  tersedianya  sumber  energi  yang  cukup untuk  sperma  sehingga  sperma  masih  bisa bergerak,  dimana  motilitas  sel  spermatozoa berhubungan  erat  dengan  proses  metabolisme spermatozoa.  Metabolisme  bertujuan  untuk menghasilkan  ATP  dan  ADP  yang  digunakan untuk  motilitas  spermatozoa.  Hal  tersebut sesuai dengan Salisbury and Vandemark, (1961) menyatakan  bahwa  tingginya  nutrisi  yang dibutuhkan,  selain  itu  spermatozoa  dapat memanfaatkan  energi  berupa  ATP  untuk bergerak.
Pergerakan  sperma  dipengaruhi  oleh  makanan yang  menghasikan  energi  seperti  halnya  pada sel-sel  hidup  lainya.  Energi  yang  dibutuhkan oleh spermatozoa diperoleh dari gula sederhana seperti glukosa dan fruktosa (Affandi dan Tang, 2004). Glukosa dan fruktosa terkandung dalam air  kelapa  yang  berfungsi  menyediakan kebutuhan  fisik  dan  kimiawi  sehingga  dapat meningkatkan  motilitas  spermatozoa.Menurut Soehartojo,  (1995)  bahan  utama  yang  dipakai spermatozoa  sebagai  sumber  energi  dari  luar testis  adalah  fruktosa  yang  diubah  menjadi asam  laktat  dan  energi  dengan  enzim fruktolisin.  Faktor  lain  terjadinya  peningkatan motilitas  spermatozoa  diduga  karena  fruktosa dapat mengurangi kecepatan rusaknya permeabilitas  spermatozoa  di  dalam  air (Nainggolan et al., 2015). Salah satu faktor yang dapat  mempengaruhi  keberhasilan  derajat pembuahan telur ikan patin siam yaitu kualitas spermatozoa.  Spermatozoa  yang  memiliki tingkat  motilitas  yang  tinggi  dapat  membuahi sel  telur  lebih  tinggi,  dikarenakan  lama  waktu aktifitas spermatozoa menjadi panjang sehingga spermatozoa  memperoleh  banyak  waktu  untuk menemukan dan membuahi sel telur. Keberhasilan dari derajat pembuahan telur oleh
spermatozoa  sangat  dipengaruhi  oleh  motilitas spermatozoa  karena  kelangsungan  hidup spermatozoa  yang  panjang  belum  tentu  dapat menghasilkan  derajat  pembuahan  yang  tinggi oleh  sebab  itu  pada  keadaan  ini  spermatozoa sangat  membutuhkan  banyak  energi  untuk membuahi  sel  telur.  Derajat  pembuahan  telur mengikuti  apa  yang  terjadi  pada  tingkat kualitas spermatozoa, dimana motilitas spermatozoa  yang  tinggi  menghasilkan  derajat pembuahan  yang  tinggi  pula  begitu  juga sebaliknya. Hal ini diperkuat oleh Utami, (2010) bahwa  kualitas  spermatozoa  yang  rendah menyebabkan  derajat  pembuahan  telur  juga rendah.

## KESIMPULAN
Pengenceran  sperma  menggunakan  air  kelapa muda dan gliserol berpengaruh nyata terhadap kelangsungan  hidup  sperma  tetapi  tidak berbeda  nyata  terhadap  motilitas  sperma, derajat pembuahan telur  dan derajat penetasan telur.Motilitas  sperma  tertinggi  terdapat  pada perlakuan B dengan nilai 52,68%, kelangsungan hidup sperma tertinggi terdapat pada perlakuan B dengan nilai 31,03%, derajat pembuahan telur tertinggi terdapat pada perlakuan B denga nilai 78,67%  dan  derajat  penetasan  telur  tertinggi terdapat  pada  perlakuan  Bndengan  nilai 60,95%. Kisaran kualitas air untuk mendukung pemijahan dan penetasan telur ikan patin siam berada pada kisaran yang baik suhu (28,7-30,5 oC), pH (7-8,5) dan DO(6,5-7,5 mg/l).

## DAFTAR PUSTAKA
Adipu,  Y.  H.  Sinjal,  dan  J.  Watung.  (2011). Ratio Pengenceran  Sperma  Terhadap  Motlitas Spermatozoa, Fertilisasi Dan Dan Daya Tetas Telur Ikan Lele(Clarias sp). Jurnal Perikanan Dan Kelautan Tropis Vol. 7. 48-55.
Affandi,  R.  Tang,  M.U.  (2004). Biologi  Reproduksi Ikan. Uni Pres. Riau.Hal 20-34. Ardias,  N.  (2008). Peranan  NaCL  Terhadap  Derajat Pembuahan, Penetasan Telur dan Kelangsungan Hidup Larva Ikan Koi Cyprinus Carpio.  [Skripsi].  Fakultas  Perikanan  Dan Ilmu Kelautan. Institu Pertanian Bogor. 48 hlm.
Danang, D.R., dan Isnaini dan P. Trisunuwati. (2012). Pengaruh  Lama  Simpansemen  Terhadap Kualitas Spermatozoa Ayam Kampung Dalam Pengencer  Ringer’s  Pada  Suhu  4 o c.  Jurnal Ternak Tropika, 13(1): 47-57.
Mahdaliana et al (2022)|Arwana ú Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan ú 4(1), 50-60
http://www.journal.umuslim.ac.id/index.php/jipsbp
Diana, F., Rizal, M., & Mariani, D. (2015). Pengaruh Penggunaan  Konsentrasi  Air  Kelapa  Muda Pada  Pengencer  Nacl  Fisiologis  Terhadap Motilitas  Dan  Mortalitas  Spermatozoa  Ikan Tawes  (Puntius  javanicus). Jurnal  Perikanan Tropis, 2(2). Effendi,  M.  I.  (2002). Biologi  Perikanan.  Yayasan Pustaka Nusantara. Yogyakarta.
Fani,  F.,  Audia,  A.,  Rani,  Y.,  A’yunin,  Q.,  &  Evi,  T. (2018).  Penggunaan  Tanah  Liat  Untuk Keberhasilan  Pemijahan  Ikan  Patin  Siam (Pangasianodon  hypophthalmus)[The  Use  of Clay  for  Successful  Spawning  Patin  Siam (Pangasianodon
hypophthalmus)]. Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan, 10(2), 91-94.
Hijriyati,  K.  H.  (2012). Kualitas  Telur  Dan Perkembangan Awal Larva Ikan Kerapu Bebek ( Cromuileptes  altivelis)  Di  Desa  Air  Saga, Tanjung Pandang, Belitung. [Tesis]. Universitas  Indonesia.  Fakultas  Matematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam. Depok.
Isnan,  Y.  K.  Basuki,  F.  Dan  Susilowati,  T.  (2013). Penambahan  Air  Kelapa  Dan  Gliserol  Pada Penyimpanan Sperma Terhadap Motilitas Dan Fertilitas  Spermatozoa  Ikan  Mas  (Cyprinus carpio  L)  Jurnal  Of  Akuacultur  Managemen And  Teknology.  Universitas  Diponogoro. Semarang. Japet, N. (2011). Karakteristik Semen Ikan Ekonomis Budidaya:  Mas  (Cyprinus  carpio),  dan  patin
( Pangasius hypophthalmus).
Fakultas
Pertanian  dan  Ilmu  Kelautan.  Institut Pertanian Bogor. Skripsi.
Kurniasih, T., R. Gustiano. (2007). Hibridisasi sebagai Alternatif    untuk  Penyediaan  Ikan  Unggul. Balai  Riset  P  erikanan  Budidaya  Air  Tawar. Bogor. 3 Halaman.
Lismawati,  N.,  A.  Hendri  dan  Mahendra.  (2016).
Fertilisasi dan Daya Tetas Telur Ikan  Tawes (Puntius  javanicus)  dari  Sperma  Pasca Penyimpanan pada Temperatur 4oC. Jurnal Perikanan Tropis, 3(1):77-84. Lopes, F. P. (2002). Semen Collection And Evaluation In Ram. ANS 33161. University Of Florida. Masrizal  dan  Efrizal.  (1997). Pengaruh  Rasio Pengencer Madu Terhadap Fertilisasi Sperma dan  Daya  Tetas  Telur  Ikan  Mas  (Cyprinus carpio L). Fisheries Journal. Garing 6. Hal. 1-9. Mumu,  M.  I.  (2009).  Viabilitas  semen  sapi  simental yang  dibekukan  menggunakan  krioprotektan gliserol. Agroland: Jurnal Ilmu-ilmu Pertanian, 16(2). Murtini, A., (2005). Pengaruh Dosis Larutan Ringger
Terhadap Tingkat Pembuahan Dan Daya Tetas Telur  Ikan  Patin  (Pangasius  hypopthalmus). Laporan Skripsi Fakultas Perikanan UNLAM. Nainggolan,  R.,  R.  D.  Monijung,  dan  W.  Mingkid.
(2015). Penambahan Madu dalam Pengenceran Sperma untuk Motilitas
Spermatozoa, Fertilisasi dan Daya Tetas Telur Ikan Nila (Oreochromis niloticus). Jurnal Budidaya Perairan, 3(1):131-140.
Nurman  Helmi,  M.  (1998). Une  analyse  de  la compétitivité  pour  la  logistique  service client (Doctoral dissertation, Aix-Marseille 2). Rahardhianto,  A.,  N.  Abdulgani  dan  N  Trisyani. (2012). Pengaruh  Konsentrasi  Larutan  Madu Dalam Nacl Fisiologis Terhadap Viabilitas dan Motilitas Spermatozoa Ikan Patin (Pangasius- Pangasius) Selama Masa Penyimpanan. Jurnal Sains dan Seni ITS. 1 (1): 58-63.
Riehl,  R  dan  Appelbaum,  S.  (1991). A  Unique Adhesion  Apparatus  On  The  Eggs  Of  The Catfish Clarias Gariepinus ( Teleostei, Clariidae). Japanese Journal Of Ichtyology Vol
38 No 2.
Rurangwa, E., D. E. Kime, F. Ollevier & J. P. Nash.
(2004). The  Measurement  Of  Sperm  Motility And  Factors  Affecting  Sperm  Quality  In Culture Fish. Aquaculture, 234: 1-28.
Salisbury,  G.  W.,  &  VanDemark,  N.  L.  (1961). Physiology  of  reproduction  and  artificial insemination of cattle. Physiology of reproduction  and  artificial  insemination  of cattle.
Salisbury, G. W., & Vandemark, N. L. (1985). Fisiologi Reproduksi dan Inseminasi Buatan Pada Sapi. Alih Bahasa Djanuar R. Yogyakarta.
Slembrouck,  J.,  O.  Komarudin,  Maskur,  dan  M. Legendre. (2005). Petunjuk Teknis Pembenihan Ikan  Patin  Indonesia.  Pangasius  Djambal. Terjemahan: Subandi, A Dan Khan, Z. IRD Dan Pusat Riset Perikanan Budidaya. Badan Riset Kelautan Dan Perikanan. Jakarta.
Soehartojo,H.  (1995). Ilmu  Kemajiran  Pada  Ternak.
Airlangga University Surabaya. Solicah,  A.  2007. Pengaruh  Konsentrasi  Tris Aminomethan Yang Berbeda Dalam Pengencertris  Kuning  Telur  Dan  Lama Penyimpanan Terhadap Motilitas Spermatozoa Ikan  Mas  (Cyprinus  carpio).  Skripsi  Fakultas Sains  Dan  Teknologi  Universitas  Negeri Malang. Malang. 71 halaman.
Suryaningrat, E. (2016). Manajemen  Asuhan Kebidanan Antenatal dengan Kasus Hiperemesis  Gravidarum  Tingkat  II  di  RSKD Ibu  dan  Anak  Pertiwi  Tahun  2016 (Doctoral dissertation, Universitas Islam Negeri Alauddin Makassar).
Susanto  H.  (2009). Pembenihan  dan  Pembesaran Patin.  Penebar  Swadaya.  Jakarta.  132 Halaman.
Susilowati,  S.  Harydijanto,  T.W.    Suprayogi,  T. Sardjito,  dan  T.  Hernawati.  (2010). Penuntun Praktikum  Inseminasi  Buatan.  Airlangga University.Surabaya.
Teolihere,  M.  R.  1985. Inseminasi  Buatan  Pada Ternak, Penerbit Angkasa, Bandung.
Mahdaliana et al (2022)|Arwana ú Jurnal Ilmiah Program Studi Perairan ú 4(1), 50-60
Teolihere,  M.  R.  (1993). Inseminasi  Buatan  Pada Ternak. Angkasa, Bandung. Teolihere,  M.  S.  (1981). Inseminasi  Buatan  Pada Ternak,  Penerbit  Angkasa.  Bandung.  Hal  43- 39.
Tilman,  D.  (1983).  Plant  succession  and  gopher disturbance along an experimental gradient. Oecologia, 60(3), 285-292. Utami,  I.  P.  (2010). Fertilisasi  Spermatozoa  Ikan Tawes (Barbonymus gonionotus, Bleeker) Satu Hari Pascakriopreservasi Menggunakan Campuran Metanol  dan  Susu  Skim sebagai  Krioprotektan.[Skripsi].  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam, Universitas Indonesia, Depok.
Utami, R. T., Nuraini, N., & Sukendi, S. (2016). The Effect Opavrim Injection of Different Dosage to The  Ovulation  excibility,  fertiliti,  and  the
survival of larva ingir-ingir (Mystus nigriceps) (Doctoral dissertation, Riau University).
Yani,  A.,  Nuryadi,  dan  T.  Pratiwi.  (2001). Pengaruh
Tingkat  Subtitusi  Santan  Kelapa  Pada Pengencer  Tris  Dan  Waktu  Penyimpanan Terhadap Kualitas Semen Kambing Peranakan Ettawah(PE). Jurnal Biosain 22-23. Yusnita, (2003). Kultur Jaringan Cara Memperbanyak  Tanaman  Sacara  Efisien. Jakarta: Agro Media Pustaka.
Zairin, J. M., S. Handayani,dan I. Supriatna. (2005). Kualitas  Sperma  Ikan  Batak  (Tor  soro)  Hasil Kriopreservasi  Semen  Menggunakan  Dimetil Sulfoksida (DMSO) dan Gliserol 5,10 Dan 15%. Jurnal Akuakultur Indonesia. 4 (4):145-151.