p-ISSN 2354-6565 /e-ISSN 2502-3438

## UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA EKSTRAK ETANOL DAUN KARUK
( Piper sarmentosum Roxb.) TERHADAP Streptococcus mutans DAN Candida albicans
Vina Septiani, Anna Choirunnisa, Akhirul Kahfi Syam Fakultas Farmasi, Universitas Jenderal Achmad Yani, Indonesia Corresponding author e-mail : vinaseptiani@gmail.com

## ABSTRAK
Penggunaan antibiotik dengan intensitas yang relatif tinggi menimbulkan berbagai permasalahan dan merupakan ancaman  global bagi  kesehatan terutama resistensi bakteri terhadap antibiotik. Indonesia yang kaya akan keanekaragaman hayati, menjadi potensi besar bagi pengembangan obat-obatan dari tanaman, termasuk tanaman yang berkhasiat sebagai antimikroba. Salah satu tanaman tersebut adalah karuk  ( Piper  sarmentosum Roxb.).  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  antimikroba dari  ekstrak  etanol  daun  karuk  ( Piper  sarmentosum Roxb.) terhadap Streptococcus  mutans dan Candida  albicans .  Ekstraksi  dilakukan  dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  96%. Pengujian aktivitas antimikroba  menggunakan  metode difusi agar perforasi dan  metode  mikrodilusi. Hasil  menunjukkan  dari  3  konsentrasi  ekstrak  uji,  konsentrasi  ekstrak  etanol  daun  karuk  80% menghasilkan  diameter  hambat  terbesar  terhadap Streptococcus  mutans dan Candida albicans yaitu 19,87 mm dan 15,13 mm. Konsentrasi hambat minimum (KHM) ekstrak etanol daun karuk terhadap Streptococcus  mutans sebesar  4096  µg/mL,  sedangkan  KHM  tetrasiklin  sebesar  256  µg/mL.  Nilai KHM  ekstrak  etanol  daun  karuk  terhadap Candida  albicans sebesar  4096  µg/mL,  sedangkan  KHM ketokonazol sebesar 100 µg/mL.
Kata kunci  :  Antimikroba,  Daun  Karuk  ( Piper  sarmentosum Roxb.), Streptococcus  mutans, Candida albicans

## ABSTRACT
The use of antibiotics with relatively high intensity raises variety of problems and is a global threat to health, especially of bacterial resistance to antibiotics. Indonesia is rich in biodiversity, being a huge potential for development of medicines from plants, including plants that are useful as antimicrobials. One  of  that  plants  is  karuk  (Piper  sarmentosum  Roxb.).  The  aim  of  this  research  was  to  study antimicrobial activity of ethanolic extract from karuk leaf against Streptococcus mutans dan Candida albicans.  Extraction  was  done  by  maceration  method  using  ethanol  96%  as  solvent.  Antimicrobial activity  test  was  done  by  agar  diffusion  method  and  microdilution  method.  The  result  showed  that among 3 concentration of testesd extract,  extract concentrations 80% produce the biggest inhibition diameter 19,87 mm and 15,13 mm. The minimum inhibitory concentration (MIC) of ethanolic extract from  karuk  leaf  against  Streptococcus  mutans  was  4096  µg/mL,  while  MIC  of  tetracycline  was  8 µg/mL. MIC value of ethanolic extract from karuk leaf against Candida albicans was 4096  µg/mL, while MIC of ketokonazole was 100 µg/mL.
Keywords  : Antimicrobial,  Karuk  Leaf  (Piper  sarmentosum  Roxb.),  Streptococcus  mutans, Candida albicans

## PENDAHULUAN
Antibiotik  adalah  suatu  obat  yang membunuh  atau  menginhibisi  pertumbuhan bakteri. Antibiotik adalah suatu kelas antimikroba,  suatu  kelompok  yang  lebih  besar dimana  didalamnya  termasuk  obat  –  obat antifungi,  antivirus  dan  antiparasit.  Dalam pengobatan  modern,  antibiotik  merupakan  salah satu  obat  yang  paling  sering  diresepkan (Bayarski, 2016). Antibiotik intensitas
penggunaannya  relatif  tinggi  menimbulkan berbagai  persoalan  dan  merupakan  ancaman global bagi  kesehatan terutama resistensi bakteri terhadap  antibiotik.  Dampaknya  tidak  hanya terhadap  morbiditas  dan  mortalitas,  tetapi  juga berdampak  negatif  terhadap  ekonomi  dan  sosial yang sangat tinggi (Kemenkes, 2011).
Pengembangan  obat-obatan  dari  tanaman, termasuk  tanaman  yang  berkhasiat  sebagai antimikroba  memiliki  potensi  yang  besar  karena
keanekaragaman  hayati  di  Indonesia.  Salah  satu tanaman tersebut adalah karuk ( Piper sarmentosum Roxb.). Di masyarakat, tanaman ini digunakan  untuk  membantu  pencernaan  dan mengobati  demam.  Buahnya  berfungsi  sebagai ekspektoran, membantu dalam membawa mukus dan  material  lain  dari  saluran  pernafasan. Akarnya memiliki berbagai kegunaan, mengobati sakit  gigi,  batuk,  dan  asma,  serta  mengobati radang  pleura  dan  dermatitis  fungi  pada  kaki (Chian, 2016).
Untuk  itu,  perlu  dilakukan  penelitian lanjutan  aktivitas  antimikroba  ekstrak  etanol daun karuk ( Piper sarmentosum Roxb.) terhadap mikroba  didalam  mulut  yaitu Streptococcus mutans dan Candida  albicans . Streptococcus mutans adalah bakteri Gram positif yang terletak dalam  mulut  manusia,  dan  lebih  spesifik,  dalam biofilm  pada  permukaan  gigi. Candida  albicans adalah  spesies  fungi  komensal  yang  umum berkoloni  pada  permukaan  mukosa  manusia (Metwalli dkk., 2013).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui aktivitas  antimikroba  dari  ekstrak  etanol  daun karuk  terhadap Streptococcus  mutans dan Candida albicans . Hasil penelitian ini diharapkan  menghasilkan  data  dan  informasi baru  mengenai  tanaman  yang  memiliki  aktivitas antimikroba  terhadap Streptococcus  mutans dan Candida albicans .

## METODE PENELITIAN
Pengumpulan
Daun Karuk dan Penyiapan  Simplisia  Daun  Karuk  ( Piper sarmentosum Roxb.). Bahan  penelitian  yaitu daun  karuk  ( Piper  sarmentosum Roxb.) dikumpulkan  dari  Kebun  Percobaan  Cikampek, Purwakarta. Determinasi dilakukan di Laboratorium  Herbarium  Bandungense  Sekolah Ilmu  dan  Teknologi  Hayati  Institut  Teknologi Bandung  (ITB).  Tahap  penyiapan  simplisia meliputi  proses  panen,  sortasi,  pengeringan  dan tahap  selanjutnya  adalah  memperkecil  ukuran partikel.
Pemeriksaan Karakteristik, Organoleptik dan  Penapisan  Fitokimia  Simplisia  serta Ekstrak Etanol Daun Karuk ( Piper sarmentosum Roxb.). Dilakukan  pemeriksaan terhadap simplisia dan ekstrak etanol daun karuk ( Piper sarmentosum Roxb.) meliputi pemeriksaan  organoleptik  yaitu  pemeriksaan bentuk, warna, dan bau, pemeriksaan karakteristik yaitu penentuan kadar air, kadar abu total,  susut  pengeringan,  kadar  sari  larut  air, kadar sari larut  etanol, serta penapisan fitokimia
yaitu  pemeriksaan  terhadap  senyawa  alkaloid, flavonoid, saponin, polifenol, tanin, monoterpenoid  dan  seskuiterpenoid,  steroid  dan triterpenoid, kuinon.
Pembuatan  Ekstrak  Etanol  Daun  Karuk ( Piper sarmentosum
Roxb.). Ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi, sebanyak 180 g serbuk simplisia ditimbang, kemudian dimasukkan  ke  dalam  maserator.  Selanjutnya, ditambahkan  etanol  96%  sebanyak  2,2  L  dan dibiarkan selama 24 jam. Setelah 24 jam, maserat dikumpulkan.  Proses  diulang  hingga  diperoleh ekstrak  yang  jernih.  Seluruh  ekstrak  cair  yang didapat kemudian diuapkan hingga kental dengan rotary evaporator.
Penyiapan  Kultur Streptococcus  mutans dan  Suspensi Streptococcus  mutans. Bakteri Streptococcus mutans diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi Politeknik Kesehatan Bandung  Jurusan  Analis  Kesehatan.  Penyiapan kultur Streptococcus  mutans dan  suspensi Streptococcus mutans dilakukan dengan menginokulasikan  bakteri  uji  pada  agar  plat darah  (Muller-Hinton  Agar (MHA)  yang  telah ditambah  darah  golongan  O  10%)  dengan  cara digoreskan  rapat  secara  zigzag  menggunakan jarum  ose bundar dan diinkubasi pada inkubator selama 24 jam pada suhu 37ᵒC. Hari berikutnya, suspensi  bakteri  uji  diencerkan  dengan  MHB hingga  menghasilkan  absorban  0,08  -    0,13 menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  pada panjang  gelombang  625  nm  (setara  dengan  0,5 McFarland).  Setelah  dihasilkan  absorbansi  pada rentang tersebut, suspensi bakteri diencerkan lagi dengan  MHB  sehingga  diperoleh  jumlah  akhir bakteri  yang  terkandung  pada  tiap  satu  sumur pelat  setara  dengan  kira-kira  5x10 5 CFU/mL (rentang 2-8x10 5 CFU/mL).
Penyiapan  Kultur Candida  albicans dan Suspensi Candida  albicans. Khamir Candida albicans diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi  dan  Teknologi  Bioproses  Prodi Teknik  Kimia  FTI  Institut  Teknologi  Bandung. Penyiapan kultur Candida albicans dan suspensi Candida albicans dilakukan dengan menginokulasikan  khamir  uji  pada  media  agar plat  Sabouraud  Dextrose  Agar  (SDA)  kemudian diinkubasi pada suhu 28ºC selama 72 jam. Kultur Candida  albicans yang  telah  diinkubasi  selama satu  hari  diambil  dengan  menggunakan  jarum Ose  kemudian  disuspensikan  di  dalam  NaCl 0,85%.  Kekeruhan  suspensi  ini  diukur  dengan spektrofotometer UV-sinar tampak pada panjang gelombang  625  nm  dan  diatur  sedemikian  rupa sehingga  diperoleh  nilai  absorbansi  antara  0,08-
0,10  dengan  larutan  NaCl  0,85%  steril  sebagai blanko. Kekeruhan suspensi  khamir  ini  kira-kira setara dengan 0,5 standar McFarland ( 1x 10 6 – 5 x  10 6 CFU/mL).  Setelah  memenuhi  syarat, suspensi  inokulum  yang  setara  dengan  0,5 standar McFarland ini kembali diencerkan 1 : 50 dan  1  :  20  dengan  media  Sabouraud  Dextrose Broth  (SDB).  Suspensi  hasil  pengenceran  inilah yang  digunakan  dalam  pengujian  aktivitas antifungi  dengan  metode  mikrodilusi  (NCCLS, 2002).

## Pembuatan Ekstrak Uji dan Pembanding.
Untuk  pengujian  aktivitas  antimikroba  dengan metode difusi agar perforasi, ekstrak etanol daun karuk  dibuat  beberapa  konsentrasi  yaitu  80%, 60%,  dan  40%.  Untuk  pengujian  aktivitas antimikroba dengan metode mikrodilusi, ditimbang sebanyak 0,164 g  ekstrak etanol daun karuk  kemudian  dilarutkan  dalam  1  mL  DMSO 100%.  Sebanyak  0,1  mL  dari  larutan  tersebut diambil  dan  ditambahkan  0,9  mL  TSB  (untuk Streptococcus mutans ) atau SDB (untuk Candida albicans ) untuk memperoleh konsentrasi tertinggi  4096  µg/mL  dengan  DMSO  10%. Untuk pembanding tetrasiklin, ditimbang sebanyak  51,2  mg  tetrasiklin,  dilarutkan  dalam 200 mL DMSO. Untuk pembanding ketokonazol, ditimbang  sebanyak  100  mg  ketokonazol, dilarutkan  dalam  100  mL  DMSO,  kemudian diambil 0,5 mL dan ditambahkan media SDB ad 5 mL.
Penentuan  Nilai  Diameter  Hambat dengan  Metode  Difusi  Agar. Metode  yang digunakan  untuk  menilai  diameter  hambat ekstrak  uji  adalah  dengan  metode  difusi  agar yaitu  perforasi. Sebanyak  1,0  mL  suspensi mikroba  uji  diinokulasikan  pada  cawan  petri steril  dan  ditambahkan  20,0  mL  media pertumbuhan. Campuran dihomogenkan, dibiarkan  menjadi  dingin  dan  membeku.  Media yang telah beku dibuat sumuran-sumuran dengan menggunakan  perforator.  Setiap  cawan  dibuat beberapa lubang untuk konsentrasi yang berbeda masing-masing  sebanyak  50,0  μl.  Semua  cawan yang telah diisi zat uji diinkubasi pada suhu dan waktu  yang  tepat.  Bakteri Streptococcus  mutans diinkubasi  pada  suhu  37 0 C  selama  24  jam . Khamir Candida  albicans diinkubasi  pada  suhu 28ᵒC  selama  72  jam.  Diameter hambat  yang terbentuk  diukur  dengan  menggunakan  jangka sorong.
Penentuan  Nilai  KHM  dengan  Metode Mikrodilusi. Metode  yang  digunakan  untuk menilai  KHM  ekstrak  uji  adalah  mikrodilusi. Sejumlah 100 µL media steril ditambahkan pada
96 sumur pelat mikro. Kemudian, 100 µL larutan ekstrak  uji  ditambahkan  pada  posisi  ke-12A (baris  pertama(A),  kolom  ke-12)  pada  pelat mikro. Larutan ini diaduk perlahan menggunakan mikropipet hingga homogen, lalu 100 µL larutan ini  dipipet  dan  dipindahkan  ke  posisi  11A  pelat mikro. Pengenceran ini dilanjutkan hingga posisi 3A.  Pengenceran  dilakukan  dari  kanan  ke  kiri pada  pelat.  Setelah  pengenceran  dilakukan  pada seluruh  sumur,  100  µL  suspensi  bakteri  atau suspensi  khamir  yang  telah  dibuat  ditambahkan pada  masing-masing  pelat  mikro  hingga  volume total  tiap  sumur  200  µL.  Pada  kontrol  negatif diisi  200  µL  media,  sedangkan  pada  kontrol positif  diisi  dengan  100  µL  media  dan  100  µL suspensi  bakteri  uji.  Pelat  mikro  yang  telah mengandung kontrol negatif, kontrol positif, dan ekstrak  uji  kemudian  diinkubasi  selama  24  jam pada  suhu  37 o C  untuk Streptococcus  mutans (CLSI, 2014), sedangkan untuk  khamir Candida albicans diinkubasi  pada  suhu    28ºC  selama  72 jam, kemudian diamati bagian yang jernih (tidak ada  pertumbuhan  mikroba).  Konsentrasi  terkecil yang  tidak  memperhatikan  adanya  pertumbuhan mikroba,  ditetapkan  sebagai  konsentrasi  hambat minimum  (KHM).  (NCCLS,  2002;  Rukayadi dkk., 2007, Santos dkk., 2006).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pemeriksaan  Organoleptik  Simplisia  dan Ekstrak Etanol Daun Karuk ( Piper sarmentosum Roxb.). Sebelum  proses  ekstraksi dilakukan,  simplisia  daun  karuk  diperkecil ukurannya  dengan  menggunakan  blender  untuk memperbesar  luas  permukaan  bahan  serta menyeragamkan ukuran partikel agar mempermudah  kontak  antara  bahan  dengan pelarutnya,  sehingga  ekstraksi  berlangsung dengan  baik.  Simplisia  daun  karuk  diekstraksi dengan  cara  maserasi  menggunakan  pelarut etanol  96%.  Ekstrak  kental  yang  didapatkan sebanyak  58,83  g,  dengan  rendemen  14,70%. Tabel  1  menunjukkan  hasil  pemeriksaan organoleptik  simplisia  dan  ekstrak  daun  karuk. Simplisia  daun  karuk  berbentuk  serbuk  kasar, berwarna  hijau  dan  memiliki  bau  khas. Sedangkan  ekstrak  etanol  daun  karuk  berbentuk kental,  berwarna  hijau  kehitaman,  dan  memiliki bau khas.
Tabel 1.   Hasil  Pemeriksaan  Organoleptik  Simplisia
dan Ekstrak Etanol Daun Karuk Simplisia Ekstrak Bentuk Rajangan Kental Warna Hijau Hijau kehitaman Bau Khas Khas
Pemeriksaan  Karakteristik  Simplisia Daun  Karuk  ( Piper  sarmentosum Roxb.). Tabel 2, Gambar 1, 2, dan 3  menunjukkan  hasil pemeriksaan  karakteristik  simplisia  daun  karuk. Penentuan  kadar  air  dilakukan  dengan  metode destilasi, dimana kadar air yang diperoleh adalah 10%.  Prinsip  metode  ini  yaitu  perbedaan  titik didih  dan  perbedaan  kepolaran  antara  dua  zat. Penentuan  susut  pengeringan  bertujuan  untuk mengetahui persentase senyawa yang menghilang selama proses pemanasan pada suhu 105˚C  selama  30  menit  sampai  berat  konstan. Hasil  penentuan  susut  pengeringan  adalah sebesar  14,84%.  Penentuan  kadar  abu  adalah mengoksidasikan  senyawa  organik  pada  suhu yang  tinggi,  yaitu  sekitar  500-600°C  dan melakukan penimbangan zat yang tinggal setelah proses  pembakaran  tersebut.  Hasil  penentuan kadar  abu  total  adalah  sebesar  30,22%. Penentuan  kadar  sari  adalah  metode  kuantitatif untuk  jumlah  kandungan  senyawa  dalam simplisia  yang  dapat  tersaring  dalam  pelarut tertentu.  Penentuan  kadar  sari  dilakukan  dengan 2  cara  yaitu  kadar  sari  larut  air  dan  kadar  sari larut  etanol.  Kedua  cara  ini  didasarkan  pada kelarutan  senyawa  yang  terkandung  dalam simplisia. Hasil penentuan kadar sari menunjukkan  kadar  sari  larut  etanol  simplisia daun  karuk  lebih  besar  dibandingkan  kadar  sari larut  air  yaitu  sebesar  7%  dibandingkan  dengan 3%.

## Tabel 2.   Hasil  Pemeriksaan  Karakteristik  Simplisia
Daun Karuk Karakteristik Hasil Kadar air 10% Kadar abu total 30,22% Susut pengeringan 14,84% Kadar sari larut air 3% Kadar sari larut etanol 7%
Gambar 1. Penentuan Kadar Abu Total
Gambar 2. Penentuan Kadar Sari Air

## Gambar 3. Penentuan Kadar Sari Larut Etanol
Penapisan  Fitokimia  Simplisia  dan Ekstrak Etanol Daun Karuk ( Piper sarmentosum Roxb.). Tabel 3, Gambar 4 dan 5 menunjukkan hasil penapisan fitokimia simplisia dan  ekstrak  daun  karuk.  Simplisia  daun  karuk mengandung  flavonoid,  saponin,  polifenol, monoterpenoid  dan  seskuiterpenoid.  Sedangkan esktrak  daun  karuk  mengandung  flavonoid, saponin, polifenol, monoterpenoid dan seskuiterpenoid,  serta  triterpenoid  dan  steroid. Hasil  ini  menunjukkan  bahwa  triterpenoid  dan steroid  terekstraksi  oleh  pelarut  etanol  96% setelah proses ekstraksi dengan metode maserasi.
Tabel 3.  Hasil  Penapisan  Fitokimia  Simplisia dan Ekstrak Etanol Daun Karuk Simplisia Ekstrak Alkaloid - - Flavonoid + + Saponin + + Polifenol + + Tanin - - Monoterpenoid dan seskuiterpenoid + + Triterpenoid dan steroid - + Kuinon - - Keterangan: (+): mengandung metabolit sekunder;
(-): tidak mengandung metabolit sekunder
Alkaloid Flavonoid Saponin Polifenol Tanin Kuinon Monoterpenoid dan seskuiterpenoid Triterpenoid dan steroid Gambar 4. Penapisan Fitokimia Simplisia Daun Karuk ( Piper sarmentosum Roxb.) Alkaloid Flavonoid Saponin Polifenol Tanin Kuinon Monoterpenoid dan seskuiterpenoid Triterpenoid dan steroid
Gambar 5. Penapisan Fitokimia Ekstrak Daun Karuk ( Piper sarmentosum Roxb.)
Penentuan  Nilai  Diameter  Hambat dengan  Metode  Difusi  Agar. Metode  yang digunakan  untuk  menilai  diameter  hambat ekstrak  uji  adalah  dengan  metode  difusi  agar yaitu perforasi. Diameter hambat yang terbentuk diukur  dengan  menggunakan  jangka  sorong. Hasil  pengujian  aktivitas  antimikroba  metode difusi  agar  perforasi  terhadap Streptococcus mutans dan Candida  albicans ditunjukkan  pada Tabel 4 dan 5 serta Gambar 6 dan 7.
Tabel 4.  Nilai  Diameter  Hambat  terhadap
Streptococcus mutans Bahan Uji Diameter Hambat (mm) Ekstrak Daun Karuk 40% 12,63 Ekstrak Daun Karuk 60% 17,00 Ekstrak Daun Karuk 80% 19,87 Tetrasiklin 0,0256% 28,33
Gambar 6. Hasil Pengujian Difusi Agar Perforasi terhadap Streptococcus mutans
Diameter  hambat  ditunjukkan  oleh  zona bening  dimana  tidak  terdapat  pertumbuhan bakteri.  Hasil  penelitian  menunjukkan  ekstrak etanol  daun  karuk  yang  memiliki  konsentrasi terbesar memberikan hambatan terbesar terhadap Streptococcus  mutans ,  dimana  ekstrak  etanol daun karuk 80% memiliki diameter hambat 19,87 mm. Tetapi diameter hambat ekstrak etanol daun karuk  lebih  kecil  dibanding  diameter  hambat tetrasiklin yaitu 28,33 mm.
Tabel 5.  Nilai  Diameter  Hambat  terhadap

## Candida albicans
Bahan Uji Diameter Hambat (mm) Ekstrak Daun Karuk 40% 10,83 Ekstrak Daun Karuk 60% 12,27 Ekstrak Daun Karuk 80% 15,13 Ketokonazol 0,01% 28,50
Gambar 7. Hasil Pengujian Difusi Agar Perforasi terhadap Candida albicans
Diameter  hambat  ditunjukkan  oleh  zona bening  dimana  tidak  terdapat  pertumbuhan khamir.  Hasil  penelitian  menunjukkan  ekstrak etanol  daun  karuk  yang  memberikan  hambatan terbesar  terhadap Candida  albicans adalah konsentrasi  80%  dengan  diameter  hambat  15,13 mm. Tetapi diameter hambat ekstrak etanol daun karuk  lebih  kecil  dibanding  diameter  hambat ketokonazol 0,01% yaitu 28,50 mm.
Hasil penelitian Suwandri (2006)
menunjukkan  ekstrak  metanol  daun  karuk memiliki  aktivitas  terhadap Candida  albicans dengan  diameter  hambat  20,00  mm.  Sedangkan hasil penelitian Shinta (2010) menunjukkan daun karuk  dapat  menghambat  pertumbuhan Candida albicans , Escherichia  coli , Bacillus subtilis ,  dan Pseudomonas aeruginosa .
Penentuan  Nilai  KHM  dengan  Metode Mikrodilusi. Metode  yang  digunakan  untuk menilai  KHM  ekstrak  uji  adalah  mikrodilusi. Konsentrasi  terkecil  yang  tidak  memperlihatkan adanya pertumbuhan mikroba, ditetapkan sebagai konsentrasi hambat minimum (KHM). Keuntungan  metode  mikrodilusi  adalah  mudah dilakukan,  serta  memberikan  efektivitas  dalam segi  bahan  dan  tempat  (Jorgensen  dkk.,  2009). Hasil  pengujian  aktivitas  antimikroba  metode mikrodilusi  terhadap Streptococcus  mutans dan Candida albicans ditunjukkan pada Tabel 6  dan 7 serta Gambar 8 dan 9.
Tabel 6.  Nilai  KHM  terhadap Streptococcus mutans Bahan Uji KHM (µg/mL) Ekstrak Daun Karuk 4096 Tetrasiklin 8 Hasil penelitian menunjukkan ekstrak etanol daun karuk menghambat pertumbuhan Streptococcus  mutans pada  konsentrasi  4096 µg/mL  ditunjukkan  dengan  kejernihan  pada sumur  pertama  dibandingkan  dengan  sumur kesebelas  sebagai  kontrol  positif  dan  sumur kedua belas sebagai kontrol negatif, menandakan tidak  adanya  pertumbuhan  bakteri.  Sementara pembanding tetrasiklin menghambat pertumbuhan Streptococcus mutans pada konsentrasi 8 µg/mL.
Tabel 7. Nilai KHM terhadap Candida albicans Bahan Uji KHM (µg/mL) Ekstrak Daun Karuk 4096 Ketokonazol 100
80%
T 40% 60% 60% 40% 80% K
(-)        (+) 8 16 32 64 128 256 512  1024  2048  4096  µg/mL Gambar 8. Hasil Pengujian Mikrodilusi terhadap Streptococcus mutans (-)        (+) 8 16 32 64 128  256 512  1024  2048  4096  µg/mL Gambar 9. Hasil Pengujian Mikrodilusi terhadap Candida albicans
Hasil penelitian menunjukkan ekstrak etanol daun  karuk  menghambat  pertumbuhan Candida albicans pada  konsentrasi  4096  µg/mL ditunjukkan  dengan  kejernihan  pada  sumur pertama  dibandingkan  dengan  sumur  kesebelas sebagai  kontrol  positif  dan  sumur  kedua  belas sebagai  kontrol  negatif,  menandakan  tidak adanya pertumbuhan khamir. Sementara pembanding ketokonazol menghambat pertumbuhan Candida albicans pada konsentrasi 100 µg/mL.

## KESIMPULAN
Ekstrak etanol daun karuk 80% menghasilkan  diameter  hambat  terbesar  baik terhadap Streptococcus mutans maupun Candida albicans yaitu masing-masing sebesar 19,87 mm dan  15,13  mm.  Namun,  diameter  hambat  ini masih  lebih  kecil  dibandingkan  pembanding tetrasiklin dan ketokonazol.
Nilai  konsentrasi  hambat  minimum  (KHM) ekstrak etanol daun karuk terhadap Streptococcus mutans sebesar  4096  µg/mL,  sedangkan  KHM tetrasiklin  sebesar  256  µg/mL.  Nilai  konsentrasi hambat  minimum  (KHM)  ekstrak  etanol  daun karuk  terhadap Candida  albicans sebesar  4096 µg/mL,  sedangkan  KHM  ketokonazol  sebesar 100 µg/mL. Hal  ini  menunjukkan  ekstrak  etanol daun  karuk  memiliki  aktivitas  antimikroba  yang lebih lemah dibandingkan dengan pembanding.

## DAFTAR PUSTAKA
Bayarski,  Y.  Antibiotics  and  Their  Types,  Uses and Side Effects. Dari :
http://hamiltoncountypreppers.org/.  Diakses 12 Februari 2016.
Chian,  Lee  K.  Natural  History  Museum. Piper sarmentosum Roxb. Dari :
http://lkcnhm.nus.edu.sg/dna/organisms/detail s/347. Diakses 14 Februari 2016.
CLSI.  2014.  Performance  Standards  for Antimicrobial Susceptibility Testing; Twenty- Fourth  Informational  Supplement.  CLSI document  M100-S24  [ISBN  1-56238-898-3].
CLSI, Wayne, Pennsylvania, USA. pp. 98.
Jorgensen,
J.H.,
Ferraro,
M.J. 2009. Antimicrobial  Susceptibility  Testing:  A
Review of General Principles and Contemporary  Practices,  Clinical  Infectious Disease, 49 : 1749-55.
Kementerian  Kesehatan  Republik  Indonesia.
2011. Pedoman Umum Penggunaan Antibiotik. Jakarta.
Metwalli,  Khalid  H.,  Khan,  Shariq  A.,  Krom,
Bastiaan  P.,  Jabra-Rizk,  Mary  A.  2013. Streptococcus  mutans,  Candida  albicans,  and the Human Mouth: A Sticky Situation, PLOS Pathogens , 9 (10).
NCCLS.  2002.  Reference  Method  for  Broth Dilution  Antifungal  Susceptibility  Testing  of Yeasts; Approved Standard – Second Edition.
NCCLS  document  M27-A2  [ISBN  1-56238- 469-4]. NCCLS, Wayne, Pennsylvania, USA.
Rukayadi,  Y.,  Hwang,  J.K.  2007.  In  Vitro Antimycotic  Activity  of  Xanthorrhizol Isolated  from Curcuma  xanthorrhiza Roxb. Against  Opportunistic  Filamentous  Fungi, Phyrother. Res. , 21 : 434-438.
Santos,  D.A.,  Barros,  M.E.S.,  Hamdan,  J.S. 2006.  Established  a  Method  of  Inoculum Preparation  for  Susceptibility  Testing  of Trichophyton  rubrum and Trichophyton mentagrophytes , J.  Clin  Microbiol .,  44  :  98-
101.
Shinta.  2002.  Isolasi  dan  Identifikasi  Senyawa Aktif  Antimikroba  dari  Daun  Tumbuhan Piper  sarmentosum Roxb.  Ex  Hunter.  Tesis, Bandung  :  Program  Magister  Kimia  Institut Teknologi Bandung.
Suwandri,  H.  D.  2006.  Isolasi  dan  Identifikasi
Senyawa Kimia Serta Uji Aktivitas Anticandidiasis  Serbuk  Daun  Sirih  Duduk ( Piper  sarmentosum Roxb.  Ex  Hunter), Molekul , 1 (1): 19 – 23..