## ISOLASI DAN SELEKSI CENDAWAN ENDOFIT DARI TANAMAN BETADIN (Jatropha multifida L.) DAN POTENSINYA SEBAGAI ANTIMIKROBA
Israwati Harahap, Elsie, Indri Nurjanah
Universitas Muhammadiyah Riau israwatiharahap@umri.ac.id

## Abstract
This  research  aimed  to  isolate  and  select  endophytic  fungi  that  potentially  as  antimicrobial  from  betadin  plants (Jatropha  multifida  L.).  Isolation  of  endophytic  fungi  was  carried  out  using  surface  sterilization  and  selection  of endophytic fungi using well diffusion method. A total of 13 isolates of endophytic fungi were obtained from J. Multifida L. From a total of 13 isolates, 11 isolates were able to inhibit the growth of Candida albicans, 11 isolate was able to inhibit the growth of Staphylococcus aureus and 10 isolates were able to inhibit the growth of Escherichia coli.

## Keywords: Endophytic fungi, Jatropha multifida L., Antimicrobial

## 1. PENDAHULUAN
Cendawan  endofit  ialah  mikroorganisme yang menghabiskan seluruh atau sebagian siklus hidupnya  dengan  mengkolonisasi jaringan  sehat tumbuhan secara interseluler dan atau intraseluler tanpa  membahayakan  inangnya.  Cendawan endofit mampu menghasilkan senyawa metabolit sekunder yang sama dengan inangnya. Cendawan endofit  pada  tumbuhan  merupakan  sumber komponen bioaktif alami yang penting dan baru, salah satunya berupa zat antimikroba. Tumbuhan yang  sering  dieksplorasi  cendawan  endofitnya sebagai  sumber  zat  antimikroba  tersebut  ialah tanaman obat.
Tanaman obat telah diketahui sebagai inang yang  baik  bagi  berbagai  cendawan  endofit (Hongsheng et  al .  2010).  Betadin  ( Jatropha multifida L.) merupakan salah satu tanaman obat yang  belum  banyak  dikenal  dan  dimanfaatkan secara  optimal  oleh  masyarakat  Indonesia. Tanaman betadin diketahui mengandung alkaloid dan  flavonoid.  Flavonoid  merupakan  salah  satu metabolit  sekunder  yang  terdapat  pada  tanaman dan merupakan senyawa polar karena mempunyai  sejumlah  gugus  hidroksil,  sehingga akan larut dalam pelarut polar seperti etanol dan metanol.  Senyawa  ini  dapat  digunakan  sebagai antimikroba, obat infeksi pada luka dan antifungi. Selain itu flavonoid juga dapat digunakan sebagai antibakteri,  antialergi,  sitotoksik,  dan  anti hipertensi (Rijke, 2005).
Sejauh  ini  penelusuran  dan  pemanfaatan senyawa  aktif  dari  tanaman  betadin  masih terbatas  dalam  isolasi  senyawa  yang  dihasilkan oleh  tanaman  betadin  tersebut  sehingga  akan membutuhkan  banyak  biomassa.  Cara  yang efisien  untuk  memperoleh  senyawa  bioaktif tersebut adalah dengan menggunakan cendawan endofit.  Kemampuan  mikroorganisme  endofit dalam memproduksi senyawa metabolit sekunder sesuai  dengan  tanaman  inangnya  merupakan peluang  yang  sangat  baik  (Petrini et  al .,  1992; Ren & Wen 2001 ).
Manfaat  cendawan  endofit  yang  potensial tersebut  dapat  dimanfaatkan  untuk  mengobati penyakit infeksi, terutama yang disebabkan oleh bakteri  patogen.  Sejumlah  bakteri  patogen  telah mengalami resistensi terhadap antibiotik, contohnya  adalah  resistensi Staphylococcus aureus terhadap  oxacillin,  tetrasiklin,  dan trimetoprim (Shittu et al . 2011). Oleh karena itu, perlu  dilakukan  isolasi  dan  seleksi  cendawan endofit  dari  tanaman  betadin  dan  mengetahui potensinya dalam menghasilkan senyawa antimikroba.

## 2. METODOLGI PENELITIAN Isolasi Cendawan Endofit
Isolasi  cendawan  endofit  dilakukan  dengan mengacu  pada  Okane et  al .  (2008).  Bagian tanaman betadin yang digunakan adalah batang, daun  dan  bunga  dalam  kondisi  segar.  Sampel
tanaman  dalam  keadaan  segar  dibersihkan dengan  air  mengalir  kemudian  dipotong-potong sepanjang 1-3 cm dan dipisahkan menurut bagian tanamannya.  Potongan  sampel  direndam  dalam etanol  70%  selama  1  menit,  larutan  natrium hipoklorit 1% selama 2 menit, dan dicuci dengan etanol  70%  selama  30  detik.  Seluruh  sampel direndam  kembali  dengan  aquades  steril sebanyak  3  kali  pengulangan  selama  1  menit. Selanjutnya,  bilasan  terakhir  dari  aquades diambil sebanyak 5 ml dan diinokulasi ke cawan Petri yang telah berisi media Malt Extract Agar (MEA)  untuk  dijadikan  blanko.  Kemudian sampel  batang,  daun  dan  bunga  betadin dikeringkan  menggunakan  tisu  steril  selama  ±3 jam. Sampel dipotong-potong dengan ukuran 1-3 cm. Sebanyak 6 potong sampel (6 potong/cawan) dari setiap bagian tanaman diletakkan pada media Malt  Extract  Agar (MEA)  dan  diinkubasi  pada suhu 25˚C selama 1 bulan. Ujung hifa dari setiap koloni  yang  tumbuh  diisolasi  dan  dimurnikan dengan  menumbuhkan  pada  media Potato Dextrose Agar (PDA).

## Produksi  Senyawa  Antimikroba  dari Cendawan Endofit
Setiap isolat cendawan endofit yang tumbuh pada  media  PDA  diambil  sebanyak  6  potongan dengan menggunakan sedotan steril dan dimasukkan  ke dalam tabung reaksi yang sudah berisi 10 ml media Potato Dextrose Broth (PDB).
Kemudian diinkubasi di dalam shaking incubator selama 21-28 hari dengan kecepatan 120 rpm dan suhu 28°C.

## Persiapan Mikroba Uji
Sebanyak  satu  ose  koloni Candida  albicans diinokulasikan  ke  dalam  tabung  reaksi  yang sudah berisi 10 ml media Potato Dextrose Yeast (PDY)  cair,  kemudian  diinkubasi  pada  suhu ruang  selama  18-24  jam.  Sebanyak  satu  ose koloni Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli diinokulasikan  ke  dalam  masing-masing tabung  reaksi  yang  sudah  berisi  10  ml  media Nutrient Broth (NB), kemudian diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam.
Seleksi Untuk Memperoleh Isolat

## Cendawan Endofit Potensial
Uji  aktivitas  antimikroba  dari  cendawan endofit menggunakan metode sumuran. Candida albicans yang  sudah  ditumbuhkan  pada  media PDY cair selama 18-24 jam diambil menggunakan cutton  bud .  Selanjutnya  di swab secara  horizontal  ke  media  PDY  Agar  dan dibiarkan selama 5 menit. Kemudian, media PDY Agar  dilubangi  dengan  menggunakan  sedotan steril  yang  berdiameter  6  mm  sebanyak  3 sumuran percawan. Setiap sumuran diisi dengan 0,1µl  dari  hasil  fermentasi  cendawan  endofit yang  telah  ditumbuhkan  pada  media  PDB. Selanjutnya,  diinkubasi  pada  suhu  ruang  dan diamati zona hambat yang terbentuk selama 24- 48 jam.
Bakteri  uji  yang  sudah  ditumbuhkan  pada media  NB  selama  24  jam  diambil  dengan menggunakan cutton  bud .  Selanjutnya  di swab secara horizontal ke media NA. Cawan Petri yang sudah  berisi  media  NA  dilubangi  dengan menggunakan  sedotan  steril  yang  berdiameter  6 mm  sebanyak  3  sumuran  percawan.  Setiap sumuran diisi dengan 0,1µl dari hasil fermentasi isolat  cendawan  endofit.  Kemudian,  diinkubasi pada  suhu  37°C  dan  diamati  zona  hambat  yang terbentuk selama 24-48 jam.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Isolasi  Cendawan  Endofit  dari  Tanaman Betadin (J. multifida L.)
Sebanyak  13  isolat  cendawan  endofit berhasil  diisolasi  dari  tanaman  betadin  ( J. multifida L.) yaitu 8 isolat diperoleh dari daun, 3 isolat dari bunga dan 2 isolat dari batang (Tabel 3.1).

## Tabel 3.1.
Hasil Isolasi Cendawan Endofit dari Tanaman Betadin ( J. multifida L.) Kode isolat Organ tanaman betadin (J. multifida L.) Daun Batang Bunga IN 001 -  - IN 002 -  - IN 003 - -  IN 004 - - 
Kode isolat Organ tanaman betadin (J. multifida L.) Daun Batang Bunga IN 005 - -  IN 006 - - IN 007 - - IN 008 - - IN 009 - - IN 010 - - IN 011 - - IN 012 - - IN 013 - - Jumlah isolat 8 isolat 2 isolat 3 isolat
Keterangan:    √: ditemukan − :  tidak ditemukan
Tabel 3.1 menunjukkan bahwa jumlah isolat cendawan  endofit  yang  diperoleh  dari  bagian daun tanaman betadin lebih banyak dibandingkan dengan batang dan bunga. Hal ini diduga bahwa di  daun  merupakan  tempat  utama  terjadinya proses fotosintesis pada tumbuhan sehingga pada bagian organ tersebut jumlah nutrisi lebih banyak dibandingkan  organ  lain  dan  akan  mendukung pertumbuhan  cendawan  endofit.  Noverita et  al . (2009),  menyatakan  bahwa  sumber  nutrisi  yang terdapat  di  bagian  daun  lebih  banyak  atau  lebih mendukung  untuk  pertumbuhan  cendawan endofit.
Petrini et  al .  (1992),  menyatakan  bahwa kehadiran jenis cendawan endofit dapat dihubungkan dengan kondisi mikrohabitat tanaman  inang  dan  kecocokan  genotip  antara tanaman  inang  dan  cendawan  endofit,  sehingga akan  berpengaruh  terhadap  perbedaan  dalam kondisi  koloni  endofit  dan  tingkat  infeksi tanaman  inang  yang  di  tempati  oleh  cendawan endofit pada lokasi yang sama.
Seleksi  Isolat  Cendawan  Endofit  dalam

## Menghasilkan Senyawa Antimikroba
Hasil seleksi dari 13 isolat cendawan endofit yang  berhasil  diisolasi  menunjukkan  bahwa  11 isolat mampu menghambat pertumbuhan
Candida albicans (Tabel 3.2).

## Tabel 3.2.
Uji Aktivitas Antifungi Isolat Cendawan Endofit dari Tanaman Betadin ( J. multifida L.) terhadap
C.albicans Kode Isolat Zona Hambat (mm) Kategori IN 001 - - IN 002 7 mm Lemah IN 003 9 mm Lemah IN 004 - - IN 005 2 mm Lemah IN 006 9 mm Lemah IN 007 11 mm Sedang IN 008 14 mm Sedang IN 009 9 mm Lemah IN 010 8 mm Lemah IN 011 7 mm Lemah IN 012 9 mm Lemah IN 013 19 mm Kuat Keterangan: − : tidak memiliki zona hambat
Tabel 3.2 menunjukkan bahwa isolat IN 013 memperlihatkan aktivitas tertinggi dalam menghambat  pertumbuhan C.albicans dengan zona  hambat  sebesar  19  mm  yang  termasuk  ke dalam  kategori  kuat  (Gambar  3.1)  diikuti  oleh isolat  IN  008  dan  IN  007  dengan  zona  hambat masing-masing  sebesar  14  mm  dan  11  mm. Selanjutnya diikuti oleh isolat IN 002, IN 003, IN 005, IN 006, IN 009, IN 010, IN 011 dan IN 012 yang  termasuk  ke  dalam  kategori  lemah  dan  2 isolat  yaitu  IN  001  dan  IN  004  tidak  mampu menghambat pertumbuhan C.albicans. Alfiah et al .  (2015),  menyatakan  bahwa  daerah  hambat yang  terbentuk  <  10  mm  termasuk  ke  dalam kategori  lemah,  10-15  mm  termasuk  ke  dalam kategori  sedang,  16-20  mm  masuk  dalam kategori  kuat,  dan  >20  mm  termasuk  ke  dalam kategori sangat kuat.
Gambar 3.1. Uji aktivitas antifungi isolat IN 013 terhadap pertumbuhan C.albicans
Zona  hambat  yang  terbentuk  dari  senyawa antifungi  yang  dihasilkan  oleh  masing-masing isolat  memiliki  diameter  yang  berbeda-beda. Terbentuknya diameter yang berbeda-beda pada hasil pengamatan uji aktivitas antifungi dikarenakan
kemampuan
isolat dalam
menghambat  pertumbuhan C.albicans juga
berbeda-beda. Menurut Sugiyanto (2007), cendawan endofit mampu menghasilkan aktivitas antifungi,  antibakteri,  hormon  pertumbuhan tanaman dan insektisida
Uji  aktivitas  antibakteri  dari  13  isolat  yang berhasil  diisolasi  menunjukkan  bahwa  10  isolat mampu  menghambat  pertumbuhan Escherichia coli dan  11  isolat  mampu  menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus (Tabel 3.3).
Tabel  3.3.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Isolat Cendawan  Endofit  dari  Tanaman  Betadin  ( J. multifida L.)
Kode Isolat Bakteri Uji E.coli S.aureus Zona Hambat (mm) Kategori Zona Hambat (mm) Kategori IN 001 7 mm Kuat 10 mm Kuat IN 002 - - 11 mm Kuat IN 003 4 mm Sedang 7 mm Kuat IN 004 2 mm Lemah 4 mm Sedang IN 005 4 mm Sedang 6 mm Sedang
Kode Isolat Bakteri Uji E.coli S.aureus Zona Hambat (mm) Kategori Zona Hambat (mm) Kategori IN 006 6 mm Sedang 3 mm Lemah IN 007 2 mm Lemah 7 mm Kuat IN 008 4 mm Sedang 9 mm Kuat IN 009 8 mm Kuat 6 mm Sedang IN 010 4 mm Sedang 5 mm Sedang IN 011 - - - - IN 012 - - - - IN 013 6 mm Sedang 3 mm Lemah
Keterangan: − : tidak memiliki zona hambat
Tabel  3.3.  menunjukkan  hasil  uji  aktivitas antibakteri  dari  cendawan  endofit  yang  mampu menghambat  pertumbuhan E.coli ,  diperoleh  2 isolat yang termasuk ke dalam kategori kuat yaitu IN  001  dan  IN  009  dengan  diameter  masing- masing  sebesar  7  mm  dan  8  mm,  6  isolat termasuk ke dalam kategori sedang (IN 003, IN 005,  IN  006,  IN  008,  IN  010,  IN  013),  2  isolat dikategorikan  lemah  (IN  004,  IN  007),  dan  3 isolat  (IN  002,  IN  011,  IN  012)  tidak menunjukkan  adanya  zona  hambat.  Isolat  yang mampu menghambat pertumbuhan S.aureus yang masuk ke dalam kategori kuat yaitu 5 isolat (IN 001,  IN  002,  IN  003,  IN  007,  IN  008)  dengan diameter masing-masing 10 mm, 11  mm, 7 mm dan  9.  Empat  isolat  masuk  ke  dalam  kategori sedang (IN 004, IN 005, IN 009, IN 010), 2 isolat dikategorikan lemah (IN 006, IN 013) dan 2 isolat (IN  011,  IN  012)  tidak  memperlihatkan  zona hambat.  Pan et  al .  (2009)  menyatakan  bahwa diameter  zona  hambat  0-3  mm  masuk  ke  dalam kategori  lemah,  3-6  mm  dikategorikan  sedang dan  >  6  mm  masuk  ke  dalam  kategori  kuat. Kisaran  zona  hambat  yang  dihasilkan  oleh  13 isolat cendawan endofit tersebut adalah 3 mm-11 mm.
A

## B
Gambar  3.2.  Uji  aktivitas  antibakteri terhadap E.coli dari  isolat  IN  9  (A)  dan  Uji aktivitas antibakteri terhadap S.aureus dari isolat IN 2 (B)
Zona  hambat  yang  terbentuk  menunjukkan aktivitas  suatu  senyawa  antibakteri  dalam menghambat  pertumbuhan  atau  membunuh bakteri  patogen.  Menurut  (Prihatiningtias  & Wahyuningsih,  2006),  metabolit  sekunder  yang dihasilkan  cendawan  bersifat  bioaktif,  salah satunya dapat berupa senyawa antimikroba yang mampu menghambat atau membunuh mikroorganisme patogen.
Hasil  pengamatan  diameter  zona  hambat yang dihasilkan oleh cendawan endofit terhadap bakteri gram positif secara umum lebih besar dari pada  bakteri  gram  negatif.  hal  ini  diduga dikarenakan  oleh  komponen  penyusun  dinding sel dari masing-masing bakteri tersebut berbeda. menurut (Jawetz et al ., 2004) bahwa bakteri gram positif  memiliki  struktur  dinding  sel  berlapis tunggal dan mengandung lipid yang rendah yaitu 1  –  4%,  sedangkan  pada  bakteri  gram  negatif
mempunyai  dinding  sel  yang  berlapis  tiga  yaitu lipoprotein,  membran  luar  fosfolipid  dan lipopolisakarida  serta  kandungan  lipid  yang tinggi  yaitu  11  –  22%  sehingga  memudahkan senyawa  antibakteri  untuk  masuk  ke  dalam  sel bakteri gram positif.
Isolat yang tidak menunjukkan adanya zona hambat  di  sekitar  sumuran  pada  uji  aktivitas antibakteri  yang  telah  dilakukan,  diduga  isolat cendawan  endofit  tersebut  memiliki  kandungan senyawa bioaktif yang berbeda-beda kemampuannya dalam menghambat
pertumbuhan E.coli dan S.aureus .  Menurut  Son & Cheah (2002), bahwa tidak terbentuknya zona hambat  ketika  uji  aktivitas  antimikroba  yang telah dilakukan bukan karena cendawan tersebut tidak memiliki kandungan senyawa aktif, namun jumlahnya lebih kecil atau mengandung senyawa aktif  potensial  yang  lain.  Kemampuan  dalam menghambat pertumbuhan mikroba dapat dipengaruhi  oleh  berbagai  faktor  diantaranya konsentrasi  zat  antimikroba,  aktifitas  metabolit bakteri, serta fisik dan kimia makanan termasuk pH, suhu, kadar air, jenis dan jumlah senyawa di dalamnya (Frazier & Westhoff, 1988).

## 4. SIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  dapat  diambil  kesimpulan  yaitu  13 isolat  cendawan  endofit  berhasil  diperoleh  dari tanaman  betadin  ( Jatropha  multifida L.)  yang terdiri dari 8 isolat ditemukan pada daun 3 isolat dari  bunga  dan  2  isolat  ditemukan  pada  batang. Seleksi  dari  13  isolat  cendawan  endofit  yang berpotensi  penghasil  senyawa  antimikroba menunjukkan bahwa 11 isolat mampu menghambat pertumbuhan Candida albicans, 11 isolat mampu menghambat pertumbuhan Escherichia  coli dan  10  isolat  mampu menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus.
Sepuluh  isolat  yang  berhasil  diisolasi  dari tanaman betadin memiliki potensi yang berbeda dalam menghasilkan senyawa antimikroba. Oleh karena  itu,  perlu  dilakukan  penelitian  lanjutan untuk  mengidentifikasi  semua  isolat  yang  telah berhasil diisolasi.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada Universitas atas bantuan dana penelitian Internal yang  diberikan  sehingga  penelitian  ini  dapat diselesaikan.

## DAFTAR PUSTAKA
Alfiah, R. R., Khotimah, S. dan Turnip, M. 2015.
Efektivitas Ekstrak Metanol Daun
Sembung  Rambat  ( Mikania  micrantha Kunth)  Terhadap  Pertumbuhan  Jamur Candida  albicans . Jurnal  Protobiont . Vol. 4. No. 1. Hal 53.
Hongsheng Y, Lei Z, Lin L, Chengjian Z, Lei G, Wenchao  L,  Peixin  S,  Luping  Q.  2010. Recent developments and future prospects  of  antimicrobial  metabolites produced  by  endophytes. Microbiol Res
165:437 449.doi:10.1016/j.micres. 2009.11.009 Jawetz,  E.,  J.L.  Melnick.,  E.A.  Adelberg.,G.F.
Brooks., J.S  .  Butel.,  dan L.N.  Ornston. 2004. Mikrobiologi  Kedokteran .  Edisi ed.  20  (Alih  bahasa:  Nugroho  & R.F.Maulany).  Jakarta:  Penerbit  Buku Kedokteran EGC.
Noverita, D. Fitria, dan E. Sinaga. 2009. Isolasi dan  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Jamur Endofit  Dari  Daun  dan  Rimpang Zingiber  ottensii Val .  Jurnal  Farmasi
Indonesia Vol. 4 No. 4: 171-176.
Okane, I., Srikitikulchai, P., Toyama, K., Læssøe,
T.,  Sivichai,  S.,  Jones,  H.H.,  Nakagiri, A.,  Potacharoen,  W.,  Suzuki,  K.  2008. Study  of  endophytic  Xylariaceae  in Thailand: diversity and taxonomy inferred  from  rDNA  sequence  analyses with saprobes forming fruit bodies in the field. The Mycological Society of Japan and Springer 49:359–372.
Pan, X., Chen, F., Wu, T., Tang, H., and Zhao, Z.
2009.  The  acid,  Bile  Tolerance  and Antimicrobial  property  of Lactobacillus acidophilus NIT.  J. Food  Control 20: 598-602.
Petrini  O,  Thomas  NS,  Toti  L,  Viret  O.  1992. Ecology,  metabolite  production  and substrat  utilization  in  endophytic  fungi. Nat toxin. 1:185-196.
Prihatiningtias,  W  dan  M.  S.  H.  Wahyuningsih. 2006. Prospek Mikroba Endofit  Sebagai Sumber  Senyawa  Bioaktif. Artikel Kesehatan .  Universitas  Gadja  Mada.
Yogyakarta
Rijke  E.  2005. Trace-level  Determination  of Flavonoids and Their Conjugates
Application ti Plants of The Leguminosae Family .  Amst  erdam:  Universitas  Amst erdam.
Shittu AO, Okon K, Adesida S, Oyedara O, Witte W,  Strommenger  B,  Layer  F,  Nubel  U. 2011. Antibiotic resistence and molecular epidemiology of
Staphylococcus aureus in Nigeria. BMC Microbiol 11(92):1-8.doi:10.1186/1471- 2180-11-92
Son  R.  dan  Cheah  YK.  2002.  Preliminary Screening  of  Endophytic  Fungi  from Medical Plants in Malaysia for Antimicrobial  and  Antitumor  Activity.
Malaysian Journal of Medical Sciences , 9(2): 23–33.
Sugiyanto,  N.E.  2007. Isolasi  dan  Determinasi Berbagai  Jamur  Endofit  Dari  Tanaman Aglaia  Elliptica,  Aglaia  Eusideroxylon, Aglaia
Odorata dan Aglaia Odoratissima. Faculty  of  Pharmacy Airlangga University. http://www.library.unair.ac.id. Akses tanggal 10 Juli 2016