ANALISIS MUTU MINYAK ATSIRI BUNGA CENGKEH ( Syzygium aromaticum (L.) Meer. & Perry) DARI MALUKU, SUMATERA, SULAWESI DAN JAWA DENGAN METODE METABOLOMIC BERBASIS GC-MS
QUALITY ANALYSIS OF CLOVE BUD ESSENTIAL OILS (Syzygium aromaticum (L.) Meer. & Perry) FROM MALUKU, SUMATERA, SULAWESI AND JAVA WITH METABOLOMIC BASED ON GC-MS METHOD
Rizky Farah Megawati, Muhammad Da’i, Rima Munawaroh* Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta safirasyifa@yahoo.com

## ABSTRAK
Cengkeh  ( Syzygium  aromaticum (L.)  Meer.  &  Perry)  merupakan  salah  satu  tanaman penghasil minyak atsiri. Mutu minyak cengkeh ditentukan oleh sifat fisik dan kandungan metabolit. Penelitian  ini  dilakukan  bertujuan  untuk  mengetahui  metabolit  yang  ada  di  dalam  minyak  kuncup bunga  cengkeh  dari  Maluku,  Sumatera,  Sulawesi,  dan  Jawa.  Kuncup  bunga  cengkeh  kering didestilasi  uap  dan  air.  Destilasi  direplikasi  3  kali  untuk  setiap  daerah.  Minyak  atsiri  diuji  indeks bias, organoleptis, bobot jenis dan dianalisis menggunakan GC-MS dengan kolom Rxi TM -1MS, flow rate  helium  5,3  mL/menit,  dengan  temperature  programming  50 –245 o C  (kenaikan  10 o C/menit). Penentuan  metabolit  dilakukan  dengan  cara  membandingkan  spektra  massa  sampel  dengan internal  Willey  Library.  Hasil  yang  diperoleh  dianalisis  menggunakan  metode  analisis  Cluster. Pengelompokan didasarkan pada keberadaan senyawa dan %area masing-masing senyawa. Hasil penelitian menunjukkan minyak atsiri bunga cengkeh dari Maluku dan Jawa mempunyai metabolit yang lebih banyak dan mempunyai kadar senyawa mayor yang lebih tinggi dibanding minyak atsiri bunga cengkeh dari Sumatera dan  Sulawesi.
Kata  kunci: Cengkeh  ( Syzygium  aromaticum (L.)  Meer.  &  Perry),  metabolit,  kuncup  bunga,  GC- MS.

## ABSTRACT
Clove  ( Syzygium  aromaticum (L.)  Meer.  &  Perry)  is  one  of plant produce  essential  oil.  The quality of clove oil is determined by physical properties and metabolite content. This research was conducted to find metabolite content in clove bud oil from Maluku, Sumatera, Sulawesi, and Java. Dried  clove  buds  was  distilled  by  steam  and  water.  Destillation  replicated  three  times  for  each region. Essential oil are tested for refractive index, organoleptic, specific gravity and analyzed using GC-MS with Rxi TM -1MS column, helium flow rate 5,3 mL/min, temperature programming 50 –245 o C (10 o C/minutes increase). Determination of metabolite was done by comparing the mass spectra of sample with internal Wiley  Library. The result were analyzed  using cluster analysis methods. The grouping  is  based  on  the  presence  of  compounds    and  %  area  of  each  compound.  The  result showed  that  clove  bud  essential  oils  from  Maluku  and  Java  have  more  metabolite  content  and major compound was higher than clove bud essential oils from Sumatera and Sulawesi.
Keywords : Clove ( Syzygium aromaticum (L.) Meer. & Perry), metabolites, buds, GC-MS.

## PENDAHULUAN
Minyak cengkeh memiliki banyak metabolit  yang  bermanfaat  bagi  manusia. Secara  tradisional  minyak  cengkeh  digunakan untuk  obat  sakit  gigi.  Metabolit  cengkeh  yang paling  banyak  adalah  eugenol,  eugenol  asetat, dan  kariofilen.    Senyawa-senyawa  tersebut mempunyai  sifat  sebagai  antibakteri  dan antijamur  (Ayoola et  al., 2008).  Eugenol,  iso – eugenol,  dan  zat  vanili  dalam  minyak  atsiri cengkeh dipakai pada industri kimia sebagai zat dasar untuk menyusun bermacam-macam jenis persenyawaan (Anonim, 1991). Turunan
eugenol  atau  turunan  metoksifenol  secara besar –besaran  digunakan  dalam  parfum, perasa  ( flavoring) ,  formulasi  obat  oles  anti nyamuk,  penyerap  UV,  analgetik, bioside , antiseptik, stabilisator dan antioksidan pembuatan  plastik  dan  karet  (Lee  dan Shibamoto, 2001 cit Alma et al. , 2007).  Minyak cengkeh  mempunyai  aktivitas  biologi  sebagai antivirus  terhadap  virus  hepatitis  C  (Hussein et al. , 2000 cit Chaieb et al., 2007). Eugenin yang ada di dalam minyak atsiri cengkeh diidentifikasi sebagai senyawa anti-HSV (Kurokawa et al. , 1998 cit Chaieb et al., 2007).
Cinamaldehyde dari  minyak  cengkeh  dapat mereduksi  mutagenesis  yang  diinduksi  UV sebagus  mutagenesis  yang  induksi  oleh furylfuramide (AF-2) dalam E. Coli WP2s (Ohta et al., 1983 cit Chaieb et al., 2007).
Mutu  minyak  atsiri  sangat  ditentukan oleh  sifat  dan  senyawa  kimia  yang  terkandung di  dalamnya  dan  belum  ada  penelitian mengenai hal ini. Selama ini mutu minyak atsiri didasarkan  pada  sifat  fisik  seperti  bobot  jenis, indeks  bias,  putaran  optik,  dan  kelarutan  di dalam etanol 70%. Penentuan mutu berdasarkan kandungan metabolit dalam minyak  atsiri  sangat  penting  untuk  mengetahui secara umum komponen kimia yang terdapat di dalamnya.  Komposisi  kimia  minyak  atsiri  akan menentukan  nilai  dan  kegunaan  minyak  atsiri tersebut (Ketaren, 1985). Penelitian ini dilakukan untuk memberikan gambaran mengenai metabolit dalam minyak cengkeh dari daerah  di  Pulau  Sumatera,  Sulawesi,  Maluku, dan  Jawa  yang  berhubungan  dengan  mutu minyak  cengkeh  yang  diperoleh  dengan destilasi uap dan air.

## METODOLOGI PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  adalah destilator uap  dan  air,  alat  gelas,  GCMS  Shimadzu –GC 2010  dengan mass  selective  detector dengan kolom  Rxi TM -1MS,  piknometer,  refraktometer Abbe.
Bahan  yang  digunakan  adalah  bunga cengkeh  kering  dari  Pulau  Maluku  (daerah Amboyna),  Pulau  Sumatera  (daerah  Padang), Pulau  Sulawesi  (daerah  Palopo),  Pulau  Jawa (daerah  Tawangmangu), aquadest, Na 2 SO 4 eksikatus,  aseton,  etanol  70%,  gas  helium, metanol p.a.

## Jalannya Penelitian Pengumpulan Bunga Cengkeh
Bunga  cengkeh  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  bunga  cengkeh  kering yang diambil dari perkebunan cengkeh di Pulau Maluku, Sumatera, Sulawesi, dan Jawa.
Isolasi Minyak Atsiri Kuncup Bunga Cengkeh
Ditimbang kuncup bunga cengkeh kering sebanyak  75  gram,  dimasukkan  ke  dalam angsang  dandang  alumunium  yang  telah dilapisi  kertas  saring  dan  diisi aquadest secukupnya,  kuncup  bunga  cengkeh  diperciki aquadest secukupnya,  dandang  alumunium ditutup rapat. Rangkaian alat destilasi dipasang dan  air  dialirkan  melalui  pendingin  selama proses  destilasi.  Bunga  cengkeh  dipanaskan dengan kompor gas sampai minyak keluar dan tertampung  pada  tempat  penampung  berskala.
Destilasi  dihentikan  setelah  tidak  ada  minyak yang  tertampung  pada  tempat  penampung berskala.  Minyak  yang  diperoleh  dipisahkan dengan  air  menggunakan  corong  pisah, dimasukkan  Na 2 SO 4 eksikatus  ke  dalam minyak  untuk  mengikat  sisa  air.  Minyak  atsiri yang  diperoleh  disimpan  dalam  botol  berwarna gelap  dan  ditutup  rapat.  Destilasi  dilakukan sebanyak 3 kali untuk masing-masing daerah.

## Pemeriksaan  Organoleptis  Minyak  Atsiri Kuncup Bunga Cengkeh
Pemeriksaan  warna,  rasa  dan  bau terhadap  minyak  kuncup  bunga  cengkeh Syzygium  aromaticum (L)  Meer.&  Perry  dari hasil destilasi uap dan air.

## Pemeriksaan  Bobot  Jenis  Minyak  Atsiri Kuncup Bunga Cengkeh
Untuk  menetapkan  bobot  jenis  minyak atsiri  kuncup  bunga  cengkeh digunakan piknometer  25  mL  suhu  percobaan  25 o C dengan 4 kali replikasi pembacaan. Bobot jenis minyak  atsiri  merupakan  perbandingan  bobot minyak  atsiri  terhadap  bobot  air  pada  suhu yang sama (Guenter, 1987).

## Pemeriksaan  Indeks  Bias  Minyak  Atsiri Kuncup Bunga Cengkeh
Penetapan  indeks  bias  minyak  atsiri kuncup  bunga  cengkeh  dilakukan  dengan menggunakan  refraktometer  Abbe.  Nilai  indeks bias dapat langsung dibaca pada alat.  Sebagai kontrol digunakan air suling dengan pengerjaan sama seperti diatas (Guenter, 1987).
Analisis  Minyak  Atsiri  Kuncup  Bunga Cengkeh menggunakan GC-MS
Analisis minyak atsiri dilakukan menggunakan  Shimadzu –GC  2010  dilengkapi dengan Shimadzu –GCMS 2010S mass selective detector dan kolom kapiler Rxi TM –1MS (30  m  x  0,25  mm,  ketebalan  lapisan  0,25  µm). Detektor  MS  menggunakan  metode  ionisasi bombardement electron pada energi 70eV. Gas pembawa  yang  digunakan  adalah    Helium dengan  laju  alir  5,3  mL/menit.  Injektor  dan MS transfer  line suhunya  masing-masing  diatur pada  280  dan  245 o C. Temperatur kolom  dijaga pada  50 o C  lalu  secara  perlahan  ditingkatkan sampai 245 o C dengan laju peningkatan 10 o C/menit. Satu µL sampel dilarutkan metanol p.a  (2,5%  b/v)  diinjeksikan  secara  manual menggunakan splitless mode . Komponen diidentifikasi  dengan  membandingkan  spektra massa  sampel  dengan  internal  Willey Library . Replikasi  pengukuran  dilakukan  3X  dengan replikasi pembacaan 2X.

## Analisis Data
Data  rendemen  dianalisis  menggunakan uji
Kruskal-Wallis dan Mann-Whitney, sedangkan  data  yang  diperoleh  pada  analisis minyak  atsiri  kuncup  bunga  cengkeh  dengan GCMS  berupa  berat  molekul  dan  pola fragmentasi  yang  menunjukkan  jenis  metabolit, dan  intensitas  peak  yang  menunjukkan  kadar. Data  hasil  penelitian  yang  diperoleh  dianalisa menggunakan  metode  analisis Cluster .  Data hasil yang diperoleh dianalisis Cluster menggunakan program SPSS. Pengelompokan data  berdasarkan  keberadaan  senyawa  dan  % area.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  Isolasi  Minyak  Atsiri  Kuncup  Bunga Cengkeh
Rendemen
yang diperoleh pada penyulingan  minyak  bunga  cengkeh  dari Maluku  sebanyak  15,21  ±  0,40,  rendemen minyak bunga cengkeh dari Sumatera sebanyak  15,05  ±  0,40,  rendemen  minyak bunga  cengkeh  dari  Sulawesi  sebanyak    14,14 ±  0,00  dan  rendemen  minyak  bunga  cengkeh dari  Jawa  sebanyak  14,09  ±  0,00.  Perbedaan rendemen  tersebut  dapat  dipengaruhi  oleh perbedaan  daerah  dan  penanganan  bahan. Karakteristik  minyak  atsiri  kuncup  bunga cengkeh  yang  diperoleh  dari  keempat  daerah adalah kuning muda –jernih, bau khas aromatik, rasa pedas, agak pahit.
Data rendemen dianalisis  menggunakan Shapiro –Wilk  dan  dilanjutkan  uji  Kruskal-Wallis dengan Post Hoc  Mann Whitney. Hasil analisis rendemen kuncup bunga cengkeh dari keempat daerah  berbeda  signifikan,  kecuali  rendemen kuncup  bunga  cengkeh  dari  Maluku  dan Sumatera, sehingga dapat dikatakan rendemen kuncup  bunga  cengkeh  dari  Maluku  dan Sumatera sama besar.

## Hasil  Pemeriksaan  Bobot  Jenis  Minyak Atsiri Kuncup Bunga Cengkeh
Hasil  pengujian  bobot  jenis  terkoreksi suhu  25 o C/25 o C  minyak  atsiri  bunga  cengkeh Maluku  sebesar  1,0533  ±  0,0014  minyak cengkeh  Sumatera  1,0583  ±  0,0024  minyak cengkeh Sulawesi 1,0605 ± 0,0032 dan minyak cengkeh Jawa  1,0570 ± 0,0032.  Hasil pengujian  bobot  jenis  dari  keempat  daerah masuk  dalam  range  bobot  jenis  minyak  atsiri bunga  cengkeh  suhu    25 o C/25 o C  yang tercantum  dalam  SNI  yaitu  1,030 –1,060. Berdasarkan  hasil  tersebut  dapat  disimpulkan minyak atsiri kuncup bunga cengkeh ( Syzygium aromaticum (L.)  Meer.  &  Perry)  yang  didapat dari  destilasi  uap  dan  air  merupakan  minyak atsiri yang murni.

## Hasil Pemeriksaan Indeks Bias Minyak Atsiri Kuncup Bunga Cengkeh
Hasil  pengujian  indeks  bias  terkoreksi minyak  atsiri  bunga  cengkeh  Maluku  sebesar 1,5272  ±  0,0000  minyak  cengkeh  Sumatera 1,5314  ±  0,0000  minyak  cengkeh  Sulawesi 1,5300  ±  0,0003  dan  minyak  cengkeh  Jawa 1,5308  ±  0,0002.  Hasil  pengujian  indeks  bias dari  keempat  daerah  masuk  dalam  range indeks  bias  minyak  atsiri  bunga  cengkeh  yang tercantum  dalam  SNI  yaitu  1,527 –1,535. Berdasarkan  hasil  tersebut  dapat  disimpulkan minyak atsiri kuncup bunga cengkeh ( Syzygium aromaticum (L.)  Meer.  &  Perry)  yang  didapat dari  destilasi  uap  dan  air  merupakan  minyak atsiri yang murni.
Hasil  Analisis  Minyak  Atsiri  Kuncup  Bunga Cengkeh menggunakan GC-MS
Hasil  analisis  GC-MS  minyak  atsiri kuncup  bunga  cengkeh  dari  Maluku  dan  Jawa diperoleh  9 peak ,  dari  Sumatera  diperoleh  7 peak dan dari Sulawesi diperoleh 6 peak .
Berdasar  tabel  1.  dapat  diketahui bahwa  minyak  atsiri  kuncup  bunga  cengkeh dari  Maluku  terdiri  dari  9  senyawa  yaitu  p- eugenol;  3-allilguaiakol;  trans(beta)-kariofilen; 3,4-dimetilbisiklo[4.3.0]nona-3,8-dien-7-on; alfa- humulen;  eugenol  asetat;  asam  propanedioat, dibromo-bis(trimetilsilil)ester; 2,3,4- trimetoksiasetofenon  dan  satu  senyawa  yang tidak  dapat  diidentifikasi.  Minyak  atsiri  kuncup bunga  cengkeh  dari  Sumatera  terdiri  dari  7 senyawa yaitu 3-allilguaiakol; trans(beta)- kariofilen; 3,4-dimetilbisiklo[4.3.0]nona-3,8-dien- 7-on; alfa-humulen; eugenol asetat;          asam propanedioat,dibromo-bis(trimetilsilil)este dan etanone,  1-(3,4,5-trimetoksifenil).  Minyak  atsiri kuncup  bunga  cengkeh  dari  Sulawesi  terdiri dari 6 senyawa yaitu 3-allilguaiakol; trans(beta)- kariofilen; 3,4-dimetilbisiklo[4.3.0]nona-3,8-dien- 7-on;  alfa-humulen;  eugenol  asetat  dan  (-)-a- kopaen.  Minyak  atsiri  kuncup  bunga  cengkeh dari  Jawa  terdiri  dari  9  senyawa  yaitu  p- eugenol;  3-allilguaiakol;  trans(beta)-kariofilen; 3,4-dimetilbisiklo[4.3.0]nona-3,8- dien-7-on; alfa-humulen; eugenol asetat; asam propanedioat,dibromo-bis(trimetilsilil)ester; etanone,1-(2,4,6-trimetoksifenil) dan 3- trideuterometoksi-4-asetil-2(5H)-furanon. Komponen  mayor  penyusun  minyak  atsiri kuncup  bunga  cengkeh  dari  keempat  daerah adalah  sama,  sedangkan  komponen  minor penyusun  minyak  atsiri  kuncup  bunga  cengkeh dari keempat daerah berbeda-beda. Komponen mayor  penyusun  minyak  atsiri  dari  keempat daerah yaitu eugenol dengan bentuk p-eugenol dan 3-allilguaiakol, beta-kariofillen, alfa- humulen,  dan  eugenol  asetat.  Eugenol  dan
eugenol  asetat  mempunyai  peranan  sebagai antibakteri,  antijamur,  antioksidan,  bahan  baku parfum,  perasa,  analgetik,  stabilisator,  dan bioside (Anonim,  1991;  Lee  dan  Shibamoto, 2001 cit Alma et  al ,  2007).  Beta-kariofillen dapat digunakan sebagai anestesi lokal, dietary canabioid,  dan  sebagai  induktor  detoksifikasi
enzim  S-transferase  dalam  liver  dan  usus (Ghelardini et  al ,  2001;  Gertsch et  al 2008; Zheng et  al 1992).  Komponen  minor  seperti 2,3,4-trimetoksiasetofenon  tidak  mempunyai peranan  biologis  tetapi  dapat  digunakan sebagai starting material sintesis senyawa.
Tabel 1- Profil Kimia dan %Area Komponen Minyak Atsiri Bunga Cengkeh

## Hasil Analisis Data
Berdasarkan analisis data yang dianalisis menggunakan Cluster dapat  diketahui  ada  dua kelompok cluster berdasar kemiripan metabolit. Cluster pertama terdiri dari minyak atsiri kuncup bunga cengkeh daerah  Maluku dan Jawa yang mempunyai 11 komponen metabolit, sedangkan cluster yang  kedua  terdiri  dari  dari minyak  atsiri  kuncup  bunga  cengkeh  Sumatera dan  Sulawesi  yang  mempunyai  8  komponen metabolit.  Dilihat  dari  tabel  centroid  komponen metabolit  dari  kedua cluster tersebut  dapat dikatakan  bahwa  cengkeh  dari  daerah  Maluku dan  Jawa  memiliki  metabolit  lebih  banyak dengan  kadar relatif senyawa mayor yang lebih tinggi  daripada  cengkeh  dari  Sumatera  dan Sulawesi.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan,  maka  diperoleh  kesimpulan  sebagai berikut:
1.  Minyak  atsiri  bunga  cengkeh  Maluku mengandung metabolit p-eugenol; 3- allilguaiakol; trans(beta)-kariofilen;
3,4- dimetilbisiklo[4.3.0]nona-3,8-dien-7-on;  alfa- humulen; eugenol asetat;
asam propanedioat,dibromo-bis(trimetilsilil)ester;
2,3,4-trimetoksiasetofenon dan satu senyawa yang belum dapat diidentifikasi.
2.  Minyak  atsiri  bunga  cengkeh  Sumatera mengandung metabolit 3-allilguaiakol; trans(beta)-kariofilen; 3,4- dimetilbisiklo[4.3.0]nona-3,8-dien-7-on;  alfa- humulen;
eugenol asetat; asam propanedioat,dibromo-bis(trimetilsilil)ester dan etanone, 1-(3,4,5-trimetoksifenil).
3.  Minyak  atsiri  bunga  cengkeh  Sulawesi mengandung metabolit 3-allilguaiakol; trans(beta)-kariofilen; 3,4- dimetilbisiklo[4.3.0]nona-3,8-dien-7-on;  alfa- humulen; eugenol asetat dan (-)-a-kopaen.
4.  Minyak atsiri bunga cengkeh Jawa
mengandung metabolite p-eugenol; 3- allilguaiakol; trans(beta)-kariofilen; 3,4-
dimetilbisiklo[4.3.0]nona-3,8-dien-7-on;  alfa- humulen; eugenol
asetat; asam propanedioat,dibromo-bis(trimetilsilil)ester; etanone,1-(2,4,6-trimetoksifenil) dan 3- trideuterometoksi-4-asetil-2(5H)-furanon.
5.  Minyak  atsiri  kuncup  bunga  cengkeh  yang berasal  dari  Maluku  (Amboyna)  dan  Jawa (Tawangmangu)  mempunyai  mutu  yang lebih bagus daripada kuncup bunga cengkeh  yang  berasal  dari  Sumatera
(Padang)  dan  Sulawesi  (Palopo)  dilihat  dari kelengkapan  metabolit  dan  kadar  relatif komponen mayor.

## SARAN
Berdasarkan  hasil  penelitian,  disarankan penelitian  lebih  lanjut  mengenai  penetapan kadar  dari  masing-masing  metabolit  yang terdapat  pada  minyak  atsiri  kuncup  bunga cengkeh.

## DAFTAR PUSTAKA
Alma, M.H., Ertas, M., Nitz, S., and Kollmannsberger, H., 2007, Chemical composition and Content of Essensial Oil from the Bud of cultivated Turkish Clove ( Syzygium aromaticum L.), BioResource, 2(2),  256 –269.
Anonim, 1991, Petunjuk Bercocok Tanam Cengkeh , Penerbit Kanisius, Yogyakarta, hal 15.
Ayoola,  G.A.,  Lawore,  F.M.,  Adelowotan,  T.,  Aibinu,  I.E.,  Adenipekun,  E.,  and  Coker,  H.A.B., Odugbemi, T.O., 2008, Chemical analisys and antimicrobial activity of the essential oil of Syzygium aromaticum (clove), African Journal of Microbiology Res , 2, 162 –166.
Chaeib,  K.,  Hafedh, H.,  Tarek,   Z.,  Amel,    B.,  Mahmoud, R.,    Kacem,    M.,    Amina,  B.,  2007, The chemical composition and biological activity of clove essential oil, Eugenia caryophyllata ( Syzygium aromaticum L. Myrtaceae): a short review, Phytotherapy Res, 21, 501 –506.
Guenter, E., 1990, Minyak Atsiri , Jilid IVB, Universitas Indonesia Press, Jakarta, hal 485.
Ghelardini, C., Galeotti, N., Mannelli, L., Mazzanti, G., Bartolini, A., 2001, Local anaesthetic activity of β-caryophyllene, Farmaco II, 56, 387 –389.
Gertsch, J., Leonti, M., Raduner, S., Chen, J.Z., Xie, X, Q., Altmann, K.H., Karsak, M., Zimmer, A., 2008, Beta caryophyllene is dietary cannabioid, PNAS , 105 (26), 9099 –9104.
Hussein,  G.,  Miyashiro,  H.,  Nakamura,  N.,  Hattori,  M.,  Kakiuchi,  N.,  Shimotohno,  K.,  2000, Inhibitory  effect  of  Sudanese  medical  plant  extract  on  hepatitis  C  virus  (HCV)  protease, Phytoter Res , 14, 150 –516.
Ketaren, S., 1985, Pengantar Teknologi Minyak Atsiri ,  PN. Balai Pustaka, Jakarta, hal 49 –67,113, 239 –259.
Kurokawa,  M.,  Hozumi, T.,  Basnet,  P.,  1998,  Purification  and  characterization  of  eugenin  as  anti- herpesvirus compound from Geum japonicum and Syzygium aromaticum (L.) Merr. Et Perry, Food Chem, 74, 443 –448.
Lee,  K.G.,  and  Shibamoto,  T.,  2001,  Antioxidant  Property  of  Aroma  Extract  Isolated  from  Clove Buds ( Syzygium aromaticum (L.) Meer. Et Perry), food Chemistry , 74, 443 –448.
Ohta,  T.,  Watanabe,  K.,  Moriya,  M.,  Shirasu,  Y.,  Kada,  T.,  1983,  Anti-mutagenic  Effect  Of Cinnamaldehyde On Chemical Mutagenesis In Escherichia coli , Mutat Res, 107, 219 –227.
Zheng, G.C., Kenney, P.M., Lam, L.K.T., 1992, Sesquiterpenes from clove ( Eugenia caryophyllata ) as potential anticarcinogenic agents, J. Nat. Prod, 53(7), 999 –1003.