## KUALITAS SEMEN BABI LANDRACE DALAM PENGENCER SEMEN SITRAT- KUNING TELUR YANG DITAMBAH GLUKOSA DENGAN KONSENTRASI BERBEDA
Quality of Landrace Semen in Yolk Citrate Cement which Plus Glucose with Different Concentrations
Albertus Baku 1 *, Agustinus A. Dethan 2 dan Paulus K. Tahuk 3
1,2,3 Program Studi Peternakan, Fakultas Pertanian, Universitas Timor. Jl. El Tari, KM-9, Kefamenanu, Timor Tengah Utara,Nusatenggara Timur.
Coresponding author: albertusbaku@gmail.com

## ABSTRAK
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  pengaruh  penggunaan  pengencer  semen  sitrat kuning  telur  yang  ditambah  glukosa  dengan  konsentrasi  berbeda  terhadap  motilitas,  viabilitas, abnormalitas  dan  derajat  keasaman  (pH)  semen  babi  Landrace.  Semen  yang  digunakan  berupa semen  segar  dari  pejantan  babi  Landrace  berusia  3  tahun.  Penelitian  ini  menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan empat perlakuan (P 1 5%, P 2 10%, P 3 15% dan P 4 20%) dan empat ulangan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa  rata-rata motilitas spermatozoa adalah P 1 (65%),  P 2 (60%),  P 3 (63,8%)  dan  P 4 (67,5%).  Persentase  viabilitas  spermatozoa  masing- masing P 1 (83%), P 2 (90,1%),   P 3 (93,5%)dan P 4 (91,5%). Persentase abnormalitas spermatozoa masing-masing  adalah  P 1 (8,2%),  P 2 (9,2%),  P 3 (8,1%)  dan  P 4 (9,2%),  dan  derajat  keasaman masing-masing  perlakuan  adalah  P 1 (8,36),  P 2 (7,99),  P 3 (7,676)  dan  P 4 (6,83).  Uji  statistic menunjukkan  bahwa  perlakuan  berpengaruh  nyata  terhadap  persentase  viabilitas  dan  pH spermatozoa  P<0,05).  Disimpulkan  bahwa  kualitas  semen  babi  Landrace  dapat  ditingkatkan secara optimal pada penggunaan konsentrasi glukosa dalam pengencer semen sitrat kuning telur sebesar 15%.
Kata  kunci:  Abnormalitas  dan  pH  Semen,  Babi  Landrace,  glukosa  dan  sitrat  kuning  telur, viabilitas dan motilitas.

## ABSTRACT
The purpose of this study was to determine the effect of using yolk citrate diluent with different concentrations of glucose added on the motility, viability, abnormalities and pH of landrace pig cement.The cement used was fresh cement from a 3 year old Landrace pig stud.This study used an experimental method using a completely randomized design (CRD) with four treatments (P 1 5%,  P 2 10%,  P 3 15%  and  P 4 20%)  and  four  replications  so  that  there  were  16  experimental units.The  results  showed  that  the  concentration  of  glucose  in  the  yolk  citrate  diluent  was  not significantly  different  (P>0.05)  on  the  motility  of  spermatozoa  with  the  average  value  of  each treatment being P 1 (65%), P 2 (60%), P 3 (63, 8%) and P 4 (67.5%).The percentage of spermatozoa viability was very significantly different (P<0.01) between treatments, where in treatment P 2 was relatively the same as treatment P3 and P4 but higher than treatment P 1 with the value of each treatment  P 1 (83%),  P 2 (90.1  %),  P 3 (93.5%)  and  P 4 (91.5%).  Percentage  of  spermatozoa abnormalities  resulting  from  analysis  of  variance  (ANOVA)  from  each  treatment  there  was  a
E-ISSN:2685-452X Journal of Tropical Animal Science and Technology, Januari 2022:4 (1): 42-55 DOI: https://doi.org/10.32938/jtast.v4i1.1268
non-significant difference (P>0.05) where the values  were P 1 (8.2%), P 2 (9.2%),  P 3 (8.1%) and P 4 (9.2%). The pH was significantly different (P<0.05) between treatments, where P 1 treatment was relatively the same as P 2 but higher than P 4 treatment. On the other hand, treatment P 3 was relatively the same as treatment P 1 , P 2 and P 4 , with the values of each treatment being P 1 (8.36), P 2 (7.99),  P 3 (7.676)  and  P 4 (6.83).  It  can  be  concluded  that  the  use  of  different  glucose concentrations in the egg yolk citrate diluent with good quality, namely in the P 3 treatment with a glucose  concentration  of  15%,  the  average  percentage  of  individual  motility  was  64%,  the percentage of live spermatozoa was 93.5%, the percentage of abnormal spermatozoa was 8.1%. and the average pH of cement is 7.68. It was concluded that the quality  semen of Landrace pig could be improved optimally using glucose concentration in egg yolk citrate diluent  by 15%.
Keywords: Abnormality and pH of Semen, Landrace Pig, Glucose and citrate yolk, Motility and Viability.

## PENDAHULUAN
Babi  merupakan  salah  satu  komoditas ternak  penghasil  daging  yang  memiliki potensi  besar  untuk  dikembangkan.  Hal  ini dikarenakan  ternak  babi  memiliki  sifat  dan kemampuan  yang  dapat  menguntungkan diantaranya  yaitu  pertumbuhan  yang  cepat, jumlah anak per kelahiran ( Litter Size ) tinggi yaitu  mencapai  8-12  per  kelahiran.  Dalam proses  perkembangbiakan  ternak  babi  dapat dilakukan  dengan  kawin  alam  dan  kawin buatan  (inseminasi  buatan).  Umumnya peternak  menggunakan  inseminasi  buatan karena efektif dan cukup efisien.
Terdapat hal yang penting diperhatikan dalam program kegiatan Inseminasi  Buatan  pada  ternak  babi  tidak hanya  kualitas  dan  kuantitas  ataupun penanganan  semen  dari  hasil  ejakulasi seekor  pejantan,  tetapi  tergantung  kepada kemampuan untuk mempertahankan kualitas dan  memperbanyak  volume  semen  yang dapat disimpan untuk waktu yang lebih lama setelah  ejakulasi.  Sehingga  lebih  banyak betina yang di inseminasi.
Semen  adalah  cairan  atau  suspensi semi  gelatinous  yang  mengandung  gamet jantan atau spermatozoa dan sekresi kelenjar pelengkap  saluran  reproduksi  jantan,  bagian cairan  dari  suspensi  tersebut  yang  terbentuk pada  ejakulat  yang  disebut  plasma  semen
(Hafez, 2000). Dibandingkan dengan hewan domestik  lainnya,  semen  babi  mempunyai beberapa  aspek  perbedaan  seperti:  semen diproduksi  dalam  volume  besar  dan  sangat sensitif  terhadap  cold  shock,  daya  hidup  sel sperma  secara  dramatis  berkurang  bila terpapar suhu di bawah 15ºC (Gilmore et al., 1996).
Membran  plasma  spermatozoa  babi mengandung  asam  lemak  tak  jenuh  ganda tingkat  tinggi  dan  memiliki  kolesterol  yang rendah.  Oleh  karena  itu  perlu  dilakukan preservasi agar kualitas semen tetap dipertahankan  dalam  kurun  waktu  yang relative  lama.  Bahan  pengencer  yang  baik harus berfungsi  sebagai sumber energy bagi spermatozoa,  berfungsi  sebagai  buffer  serta mampu  mempertahankan  pH  dari  semen tersebut.  Syarat  bahan  pengencer  yang  lain yaitu tidak menghambat pergerakan spermatozoa  dan  tidak  bersifat  toksik  bagi spermatozoa.  Agar  sperma  yang  dihasilkan oleh  seekor  pejantan  dimanfaatkan  secara efisien  maka  semen  ini  dapat  diencerkan untuk  disimpan  dalam  waktu  yang  cukup lama  dengan  kualitas  sperma  yang  baik. Salah satu pengencer  yang berpotensi untuk digunakan  adalah  sitrat  kuning  telur  dan glukosa.
Kuning  telur  mempunyai  komponen berupa  lipoprotein  dan  lisetein  yang  dapat mempertahankan
dan melindungi spermatozoa  dari  cekaman  dingin  (Robert, 2006).  Kuning  telur  umumnya  ditambahkan ke  dalam  pengencer  semen  sebagai  energi, agen  pretektif  dan  dapat  memberikan  efek sebagai  penyangga  terhadap  spermatozoa (Waltson  dan  Martin,  1975  disistasi  oleh Siswanto,  2006).  Ketersediaan  sumber energi  yang berasal dari glukosa merupakan salah  satu  prasyarat  untuk  pengencer  semen yang  baik.  Glukosa  memiliki  beberapa fungsi  yaitu  sumber  energi  bagi  sperma
selama  penyimpanan,  memelihara  tekanan osmotik  cairan  dan  dapat  bertindak  sebagai krioprotektan (Ajrul, 2014). Penggunaan 2% glukosa  dalam  pengencer  skim  kuning  telur nyata  dalam  mempertahankan  motilitas spermatozoa (BIB Ungaran, 2011). Penggunaan  pengencer  yang  dari  alam sebagai  bahan  pengencer  semen  cair  telah banyak  dilakukan  pada  domba  ekor  tipis dengan menggunakan  air kelapa (Kewilla et al .  2013),  pada  babi  dengan  menggunakan air  kelapa  (Mere  2016),  Foeh  dan  Gaina (2017) pada pengencer sari buah lontar pada suhu penyumpanan 22 o C.

## MATERI DAN METODE

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  telah  dilaksanakan  di laboratorium  Fakultas  Pertanian  Universitas Timor,  Kelurahan  Sasi,  Kecamatan  Kota Kefamenanu,  Kabupaten  Timor  Tengah Utara.

## Materi Penelitian
Ternak yang digunakan dalam penelitian ini adalah menggunakan satu ekor ternak  babi  pejantan  yang  berumur  2  tahun (penghasil semen).

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  yaitu  pipet  tetes,  batang  pengaduk, tabung  penampung  berskala,  kertas  tissue, hand  counter,  mikroskop,  haemosytometer, gelas  objek,  gelas  penutup  kertas  indikator, induk  buatan (dummy), buku  agenda,  dan peralatan  tulis.  Sedangkan  bahan  yang digunakan  yaitu  semen  cair  ternak  babi landrace,  asam  sitrat,  sukrosa,  gliserol, kuning  telur,  streptomycin,  aquades,  larutan eosin, larutan hayem, alkohol, dan glukosa.

## Metode Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  metode experiment laboratorium menggunakan Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  yang
terdiri  dari  4  perlakuan  dan  4  ulangan sehingga terdapat 16 unit percobaan.
P1 =10 mL semen + 5 mL sitrat kuning telur
+ konsentrasi glukosa 5%
P2 =10 mL semen + 5 mL sitrat kuning telur + konsentrasi glukosa 10%
P3 =10 mL semen + 5 mL sitrat kuning telur + konsentrasi glukosa 15%
P4 =10 mL semen + 5 mL sitrat kuning telur + konsentrasi glukosa 20%

## Tahap Persiapan
Pada  tahap  ini  yang  dilakukan  yaitu mempersiapkan  bahan  yang  digunakan untuk  pembuatan  pengencer  seperti  asam sitrat,  babi  jantan  yang  akan  diambil semennya,  betina  buatan  ( dummy ),  danalat- alat yang sudah disterilkan untuk digunakan.

## Tahap Penampungan Semen
Proses  penampungan  semen  babi dalam  penelitian  ini  menggunakan  metode pengurutan  dan  dipancing  menggunakan induk buatan ( dummy )  yang telah dirancang menyerupai  ternak  betina,  ternak  pejantan yang  digunakan  sebagai  penghasil  sperma merupakan ternak pejantan terlatih. Prosedur penampungan  semen  babi  yaitu  sebagai berikut:
1. Ternak  jantan  digiring  dari  kandang menuju  kandang  kawin,  setelah  ternak jantan  berada  dalam  kandang  kawin ternak jantan diarahkan ke induk betina buatan  ( dummy )  hingga  ternak  jantan dengan sendirinya menaiki betina buatan tersebut.
2. Setelah  pejantan  menaiki  induk  buatan, maka dilakukan ransangan tubuh terutama  pada  daerah  scrotum  dengan cara massage sampai penisnya keluar.
3. Penis  yang  keluar  dipegang  dan  ditarik secara perlahan-lahan dan pegang dengan  kuat  sehingga  tidak  terlepas kemudian pada waktu bersamaan dilakukan peransangan pada ujung penis menggunakan  jari  kelingking.  Dengan ransangan  yang  dilakukan  dengan tenang  pejantan  akan  mengeluarkan semen.
4. Semen  yang  dikeluarkan  pertama  tidak perlu  ditampung  karena  mengandung urine dan gelatin, setelah semen terlihat berwarna putih segera ditampung karena mengandung spermatozoa.
5. Penampungan semen biasanya berlansung  selama  7-10  menit  dengan volume yang dihasilkan 200 sampai 250
cc sekali ejakulasi.
6. Semen yang telah ditampung secepatnya  disimpan  dalam coolbox yang  telah  diisi  dengan  air  dingin dengan  suhu  ruang  16-19ºC , kemudian melakukan evaluasi awal dilokasi penampungan  untuk  menilai  layak  atau tidaknya  semen  yang  akan  digunakan dalam penelitian.
7. Semen  dibawah  ke  laboratorium  untuk dilakukan evaluasi baik secara makroskopis maupun secara mikroskopis untuk selanjutnya digunakan dalam pengenceran.

## Tahap Evaluasi Semen
Pada  tahap  ini  peneliti  melakukan pemeriksaan  makroskopis  meliputi  pH,
volume,  warna,  konsistensi  semen,  dan pemeriksaan  mikroskopis  meliputi  motilitas semen,  persentase  spermatozoa  hidup,  dan abnormalitas spermatozoa.
Tahap Evaluasi Semen Secara Makroskopis:
a. pH Semen
Derajat  keasaman  (pH)  semen  diukur dengan  menggunakan  kertas  indikator dengan  cara  meneteskan  semen  di  atas kertas  indikator.  Selanjutnya,  amati perubahan  warna  pada  kertas  indikator dan  bandingkan  dengan  standar  warna pH meter.
b. Volume Semen Pemeriksaan  volume  semen  dapat langsung  dilakukan  dengan  melihat skala tabung penampung semen.
c. Warna Semen Prosedur  pemeriksaan  warna  semen dilakukan dengan melihat kelainan pada warna  semen  seperti  warna  merah akibat  kontaminasi  darah  atau  hijau akibat kontaminasi feses.
d. Konsistensi Semen Kekentalan diamati dengan cara memiringkan tabung semen lalu tegakakn  kembali.  Apabila  semen  yang mengalir  pada  dinding  tabung  lambat, maka  konsistensinya  tinggi  (kental). Namun jika sebaliknya maka
konsistensinya rendah (encer).

## Evaluasi Semen Secara Mikroskopis
Evaluasi mikroskopis dilakukan sebelum  dan  sesudah  semen  diencerkan adalah sebagai berikut:
a. Konsentrasi Spermatozoa
Konsentrasi  sperma  atau  kandungan sperma  dalam  setiap  milliliter  semen merupakan  salah  satu  parameter  kualitas semen  yang  sangat  berguna  untuk menentukan  jumlah  betina  yang  dapat diinseminasi menggunakan semen tersebut.
Kandungan  sperma  dalam  satu  contoh semen  dapat  dihitung  secara  lebih  akurat menggunakan pipet haemacytometer (pipet untuk menghitung jumlah sel darah merah) dan kamar hitung Neubauer.
1. Siapkan satu set pipet haemacytometer (pipet  berbatu  merah)  dan  kamar hitung  Neubauer  bersih,  lengkap dengan kaca penutupnya.
2. Teteskan  satu  tetes  kecil  semen  (kira- kira  sebesar  biji  kacang  hijau)  pada permukaan gelas objek bersih.
3. Hisap  semen  tersebut  ke  dalam  pipet haemacytometer sampai mencapai angka 0.5. Kemudian encerkan dengan larutan  Hayem  sampai  mencapai angka  101.  Keringkan  bagian  ujung luar  pipet  dari  cairan  dengan  kertas tissue.
4. Kocok  larutan  semen  tersebut  dengan gerakan  angka  delapan  (  8  )  supaya sperma  dalam  pipet  tercampur  secara merata  tetapi  sel-selnya  tidak  rusak karena  pengocokan  yang  dilakukan tidak menimbulkan benturan antara sel dengan  dinding  pipet.  Pengocokan dilakukan  selama  kurang  lebih  dua menit.
5. Siapkan  kamar  hitung  Neubauer  yang sudah  diberi  kaca  penutup  dan diletakkan  di  atas  meja  pada  posisi mendatar.  Alirkan  larutan  semen melalui  celah  di  pinggir  kiri  atau kanan  kamar  hitung.  Biarkan  cairan mengalir  dan  menyeberang  ke  bidang hitung di seberangnya.
6. Tempatkan  kamar  hitung  Neubauer  di bawah  mikroskop  dan  amati  dengan pembesaran  awal  10  x  10.  Temukan bidang  hitung  yang  berupa  areal  yang dibatasi oleh garis-garis.
7. Bidang hitung pada memiliki 25 kotak kecil  yang  masing-masing  dibatasi oleh tiga buah garis di keempat sisinya (kiri,  kanan,  atas,  dan  bawah).  Di dalam  setiap  kotak  yang  dibatasi  tiga
garis  tersebut  terdapat  16  kotak  yang lebih kecil lagi.
8. Setelah  bidang  hitung  tampak  dengan jelas, ubahlah pembesaran lensa mikroskop  menjadi  10  x  45  dengan jalan  memutar  lensa  objektif  dari  10 kali menjadi 45 kali.
9. Pilih  lima  buah  kotak,  yaitu  kotak yang  berada  di  setiap  sudut  (kiri  atas, kanan  atas,  kiri  bawah,  kanan  bawah, dan  tengah).  Jumlahkan  sperma  yang terdapat dalam kelima kotak.
10. Apabila  dari  kelima  kotak  yang dimaksud  terdapat X sel  sperma,  itu berarti  dalam  setiap  mililiter  semen yang  diperiksa  terdapat X x  10 6 sel sperma.
b. Motilitas Spermatozoa Teteskan  0,05  mL  semen  yang  sudah diencerkan  diatas  gelas  objek  yang hangat (37ºC), amati di bawah mikroskop dengan  pembesaran  10x10.  Gerakan massa dengan melihat adanya kecenderungan  bergerak  bersama-sama ke  satu  arah,  membentuk  gelombang yang  tebal  dan  bergerak  cepat  (+++), gelombang  tipis  bergerak  cepat  atau gelombang  tebal  bergerak  lambat  (++), gelombang  tipis  bergerak  lambat  (+)  dan tidak terdapat pergerakan (0).
Teteskan  0,05  mL  semen  yang  sudah diencerkan  diatas  gelas  objek  yang hangat  (37ºC)  lalu  ditutup  dengan  cover gelas,  amati  di  bawah  mikroskop  dengan pembesaran  10x40.  Kriteria  penentuan kualitas  semen  berdasarkan  motilitas individu  dengan grade 0-5  (Toelihere, 1993)  :  (0)  :  Sperma  inmotil  atau  tidak bergerak, (1) : Gerakan berputar ditempat,  (2)  :  Gerakan  berayun  atau melingkar  kurang  dari  50%  bergerak progresif,  (3)  :  50%  -  80%  spermatozoa bergerak progresif, (4) :Pergerakan progresif  yang  gesit,  90%  sperma  motil, (5)  :  Gerakan  yang  sangat  progresif
menunjukkan  100%  spermatozoa  motil aktif c. Spermatozoa Hidup (%) Pemeriksaan persentase spermatozoa hidup dilakukan dengan pengecatan eosin menurut  Kvist  and  Bjo¨rndahl  (2002). Campurkan  0,05  mL  semen  dengan  0,05 mL  eosin  lalu  homogenkan.  Setelah  30 detik  dibuat  preparat  ulas  lalu  keringkan dengan  cara  dianginkan,  diamati  di bawah  mikroskop  dengan  pembesaran
10x40 sebanyak 200 sel spermatozoa. Sel spermatozoa  yang  mati  akan  terlihat berwarnah merah, sedangkan  yang masih hidup  tidak  terwarnai/transparan.  Hitung spermatozoa  yang  mati  dan  yang  hidup dalam  satuan  persen.  Dapat  di  hitung dengan rumus (Mumu, 2009): Spermatozoa hidup (%) = 100% d. Abnormalitas Spermatozoa (%) Pemeriksaan  abnormalitas  spermatozoa dilakukan  dengan  cara  yang  sama dengan pemeriksaan
persentase spermatozoa hidup yaitu dengan pengecatan  eosin  menurut  Kvist  and
Bjo¨rndahl  (2002).  Diamati  dibawah mikroskop  dengan  pembesaran  450x sebanyak  200  sel  spermatozoa.  Sel spermatozoa  yang  mengalami  bentuk
abnormalitas  baik  di  daerah  kepala, badan  dan  ekor  dihitung  persentase abnormal.
Abnormalitas spermatozoa dihitung menggunakan rumus (Salmah, 2014):
Abnormalitas (%) =

## Proses Pengenceran
Tahap pengenceran dibagi menjadi 4 bagian yang  diencerkan  dengan  pengencer  sitrat kuning telur dan glukosa dengan konsentrasi masing-masing glukosa 5%, 10%, 15%, dan 20%.  Langkah-langkah  yang  dilakukan dalam  proses  pengenceran  yaitu  sebagai berikut:
1. Ukur  semen  Babi  dengan  gelas  ukur sebanyak  5  mL  masukkan  ke  dalam tabung  perlakuan  1  (P1)  yang  sudah disterilkan,
2. Ukur pengencer semen sitrat-kuning telur 5  mL  tambahkan  ke  dalam  tabung  P1 yang sudah diisi dengan semen,
3. Kemudian  pada  tabung  P1  tambahkan  5 mL  larutan  glukosa  dengan  dengan konsentrasi 5%
4. Setelah semuanya tercampur lalu dihomogenkan  dengan  cara  pengadukan secara  perlahan,  setelah  itu  semen  yang sudah  diencer  pada  perlakuan  pertama (konsentrasi  glukosa  5%)  dibagi  pada gelas  ulangan  1-4.  Langkah-langkah
diatas  dilakukan  pada  perlakuan  ke-2 sampai perlakuan yang ke-4
Evaluasi Semen Yang Telah Diencerkan Semen  yang  telah  diencerkan  disimpan dalam coolbox dengan  suhu  ruang  16-19ºC selama  3  jam  lalu  dievaluasi  untuk memperoleh data penelitian, evaluasi  semen setelah  pengenceran  ini  dilakukan  sesuai dengan variabel penelitian.

## Variabel Penelitian
Variabel  yang  diamati  dalam  penelitian  ini adalah:
1. Motilitas
2. Persentase Spermatozoa Hidup
3. Persentase Abnormalitas Spermatozoa
4. pH Semen

## Analisis Data
Data yang diperoleh dianalisis menggunakan  Analisis  Sidik  Ragam  atau analysis  of  varience (ANOVA).  Apabila terdapat  perbedaan  antara  perlakuan  pada taraf  5%  maka  dilanjutkan  dengan  uji  jarak berganda Duncan (Steel and Torrie1993).
Model  matematika  dari  rancangan acak lengkap (RAL)  yang digunakan adalah sebagai berikut:
Y ij = µ + πi+ € ij Keterangan: Y ij :Nilai pengamatan dari spermatozoa yang mendapat perlakuan ke-I dengan ulangan ke-j µ :Rerata nilai pengamatan umum/perlakuan πi :Rerata  nilai  pengamatan  pada  perlakuan ke-i
€ ij : Eror percobaan pada perlakuan ke-i dan ulangan ke-j

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Gambaran Umum Penelitian
Evaluasi semen segar dalam penelitian ini langsung dilakukan setelah penampungan dan  ditentukan  dengan  dua  cara  yaitu makroskopis dan mikroskopis. Secara makroskopis dapat dilakukan dengan melihat lansung tanpa bantuan dari mikroskop  yaitu  meliputi  volume,  warna, konsistensi,  bau  dan  pH,  sedangkan  secara mikroskopis yaitu diperiksa dengan menggunakan  mikroskop  yaitu  meliputi gerakan massa,
gerakan individu,
konsentrasi, viabilitas (persentase spermatozoa hidup) dan abnormalitas spermatozoa.
Hasil  pemeriksaan  semen  segar  babi landrace  dalam  satu  kali  penampungan  ini diperlukan  untuk  menentukan  kualitas semen  yang  selanjutnya  dijadikan  sebagai indikator dapat atau tidaknya semen tersebut diproses lebih lanjut. Adapun data awal hasil pengamatan  pada  semen  segar  tertera  pada Tabel 1.
Tabel 1. Evaluasi Semen Secara Makroskopis Semen Babi Landrace dalam Pengencer Semen
Sitrat-kuning Telur yang Ditambah Glukosa dengan Konsentrasi Berbeda No Uraian Hasil 1 Volume 230 mL 2 Warna Putih Susu 3 Bau Khas Semen Babi 4 Konsistensi Encer 5 pH 8,91 Sumber: Data Primer (terolah)
Hasil pemeriksaan karakteristik semen segar  secara  makroskopis  diperoleh  volume 230  mL,  warna  putih  susu,  bau  khas  semen babi,  konsistensi  semen  encer  dan  pH  8,91. Dari  hasil  penelitian  jika  dibandingkan dengan  beberapa  penelitian  terdahulu  maka tidak  terdapat  perbedaan  yang  signifikan. Secara  umum,  karakterisitik  semen  segar babi  yang  normal  menurut  Robert  (2006) AX et  al (2000)  menyatakan  volume  babi tanpa  gelatin  berkisar  200-250  mL,  warna
putih  dengan  konsentrasi  spermatozoa berkisar 200-300x10 6 sel/mL semen (Garner dan  Hafes,  2000)  dan  konsistensi  encer, persentase  abnormalitas  kurang  dari  20% sedangkan  untuk  pH  rata-rata  6,7,  Gadea (2000) yang menyatakan bahwa pH rata-rata 7,40. Hasil evaluasi semen secara mikroskopis dapat dilihat pada Tabel 2.
Hasil pemeriksaan mikroskopis menunjukkan  motilitas  spermatozoa  yaitu motilitas  massa  (+)  dan  motilitas  individu
70%,  hasil  ini  tidak  jauh  berbeda  dari  hasil penelitian  Yusuf et  al. (2017)  melaporkan motilitas spermatozoa berkisar antara 76,31%.    Hasil  pemeriksaan  mikroskopis didapatkan  konsentrasi  spermatozoa  adalah
23  x  10 6 sel/mL.  Ada  bebrapa  faktor  yang mempengaruhi  spermatozoa  antara  lain jumlah  ejakulat,  interval  penampungan, kondisi  pejantan  dan  linkungan  (Johnson et al., 2000).
Tabel 2. Evaluasi semen secara mikroskopis Semen Babi Landrace dalam Pengencer Semen
Sitrat-kuning Telur yang Ditambah Glukosa dengan Konsentrasi Berbeda No Uraian Hasil 1 Motilitas Massa + 2 Motilitas Individu 70% 3 Konsentrasi 230 x 10 6 sel /mL semen 4 Abnormalitas 7,5% 5 Viabilitas 95,5%

## Sumber: Data Primer (terolah)
Hasil pemeriksaan
viabilitas spermatozoa  yang  hidup  di  identifikasikan dengan  tidak  menyerap  warna  (transparan) pada bagian kepala spermatozoa, sedangkan spermatozoa  yang  mati  ditandai  dengan menyerap  warna  pada  bagian  kepala spermatozoa
karena
permiabilitas spermatozoa yang meningkat. Rataan viabilitas  spermatozoa  dari  penelitian  ini adalah  95,5%,  hasil  penelitian  ini  lebih tinggi  dari  hasil  penelitian  Johnson et  al.
(2000) yang memperoleh viabilitas spermatozoa  80%.  Persentase  spermatozoa hidup  lebih  tinggi  dari  pada  spermatozoa motil  karena  dari  jumlah  spermatozoa  yang hidup belum tentu semuanya motil progresif (Kostaman dan Sutama, 2006).
Pemeriksaan morfologi spermatozoa abnormal penting dilakukan sebab abnormalitas  yang  tinggi  akan  mengganggu fertilitas  jantan  secara  umum  (Garner  dan Hafez, 2000).  Hasil penelitian menunjukkan bahwa  persentase abnormalitas  spermatozoa mencapai  7,5  hasil  ini  sesuai  dengan pernyataan  Johnson et  al. (2000)  yakni persentase  abnormalitas  spermatozoa  babi per  ejakulat  tidak  boleh  lebih  dari  20%. Secara umum, abnormalitas pada
spermatozoa dapat disebabkan oleh berbagai factor  antara  lain  genetik,  stress,  suhu lingkungan,  penyakit  dan  bahkan  perlakuan krioperservasi pembekuan semen (Arifiantini dan Ferdian, 2006).

## Pengaruh  Perlakuan  Terhadap  Motilitas Individu Spermatozoa (%)
Motilitas  atau  daya  gerak  progresif spermatozoa  mempunyai  peranan  penting dalam  proses  fertilisasi  (Susilawati,  2003). Daya  gerak  spermatozoa  sangat  penting karena  diperlukan  untuk  bergerak  maju dalam saluran kelamin betina yang selanjutnya membuahi ovum. Syarat minimal motilitas spermatozoa post thawing agar  dapat  diinseminasikan  adalah  40% (Garner  dan  Hafez,  2000).  Rataan  motilitas spermatozoa dapat dilihat pada Tabel 3.
Hasil analisis sidik ragam menunjukkan  bahwa  pemberian  konsentrasi glukosa  dalam  pengencer  semen  sitrat kuning  telur  tidak  berpengaruh  nyata (P>0,05)  terhadap  motilitas  spermatozoa. Pada Tabel 3 diketahui bahwa nilai  rata-rata motilitas spermatozoa yang tertinggi terdapat  pada  perlakuan  P 4 67,5%  diikuti perlakuan  P 1 65%,  P 3 63,8%  dan  yang
terrendah  terdapat  pada  perlakuan  P 2 60%
hasil  ini  masih  cukup  baik  sesuai  dengan pendapat
Aminasari (2009) yang menyatakan  bahwa  motilitas  semen  yang telah diencercerkan dengan bahan pengencer tidak boleh berada di bawah 55%.
Tabel 3. Pengaruh perlakuan terhadap motilitas spermatozoa (%) Babi Landrace dalam Pengencer Semen Sitrat-kuning Telur yang Ditambah Glukosa dengan Konsentrasi Berbeda
Perlakuan Ulangan Jumlah Rerata I II III IV P1 70 70 60 60 260 65 P2 60 60 60 60 240 60 P3 60 65 65 65 255 63,8 P4 70 65 70 65 270 67,5 Keterangan: ns) non significant Penambahan  glukosa  cenderung  lebih mempertahankan motilitas setelah diencerkan,  hal  ini  disebabkan  karena glukosa  yang  ditambahkan  ke  dalam pengencer  yang  digunakan  merupakan  jenis karbohidrat  yang  sama  dengan  karbohidrat yang  terdapat  di  dalam  plasma  semen. Sesuai  dengan  pendapat  Toelihere  (1985) yang  menyatakan  bahwa  bahan  pengencer yang digunakan harus mempunyai sifat fisik dan sifat kimiawi yang hampir sama dengan plasma semen. Menurut Hammerstedt (1993), glukosa berupa monosakarida (C 6 H 12 O 6 )  akan  lebih  mudah  diolah  dalam sel  spermatozoa  menjadi  energi.  Menurut Rizal et al (2006), adanya perbaikan kualitas semen  beku  dengan  penambahan  berbagai jenis  gula  seperti  glukosa  dan  rafinosa  di dalam  pengencer  menjadi  indikator  bahwa
gula-gula tersebut efektif melindungi spermatozoa  dari  kerusakan  selama  proses kriopreservasi semen.
Pengaruh Perlakuan Terhadap Persentase Spermatozoa Hidup Daya tahan hidup merupakan kemampuan
spermatozoa untuk mempertahankan  kelangsungan  hidupnya dalam  waktu  tertentu  yang  dapat  diukur berdasarkan  motilitas.  Pengamatan  daya tahan  hidup  spermatozoa  bertujuan  untuk mengetahui  persentase  spermatozoa  hidup dalam media pengencer semen sitrat kuning telur  yang  ditambah  glukosa  dengan konsentrasi berbeda. Hasil penelitian mengenai  pengaruh  perlakuan  terhadap persentase  spermatozoa  hidup  dapat  dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4. Rataan persentase spermatozoa hidup Babi Landrace dalam Pengencer Semen Sitrat-
kuning Telur yang Ditambah Glukosa dengan Konsentrasi Berbeda Perlakuan Ulangan Jumlah Rerata I II III IV P1 83 79,5 85 84,5 332 83 b P2 90 91 85 94,5 360,5 90,1 a P3 93 94 92 95 374 93,5 a P4 85 94,5 93,5 93 366 91,5 a
Keterangan : superscip (a,b) yang berbeda pada kolom yang sama menunjukan berbeda nyata
Tabel 4 menunjukkan bahwa pengaruh perlakuan  pengencer  semen  sitrat  kuning telur  yang  ditambah  glukosa  dengan konsentrasi  berbeda  berpengaruh  sangat nyata  terhadap  persentase  spermatozoa hidup  yaitu  (P<0,01).  Badan  Standarisasi Nasional menetapkan kualitas semen sesudah proses pendinginan dan pembekuan harus menunjukan spermatozoa hidup (viabilitas)  minimal  40%.  Semen  yang  baik baik  memiliki  persentase  viabilitas  diatas 50%  (Toelihere,  1993).  Hal  ini  disebabkan sitrat-kuning telur yang mengandung lipoprotein dan lisetein yang berfungsi untuk melindungi  spermatozoa  dari  cekaman dingin dan tidak bersifat racun serta glukosa juga merupakan salah satu jenis karbohidrat yang  dapat  dijadikan  sebagai  sumber energi untuk  mendukung  pergerakan  dan  daya tahan  hidup  spermatozoa,  dimana  sangat bermanfaat  untuk  memberikan  energy  pada sel spermatozoa sehingga mampu memberikan  kebutuhan  energi  bertahan hidup  lebih  lama.  Hal  ini  sesuai  pendapat Sorensen  (1979)  kuning  telur  mengandung banyak bahan yang diperlukan oleh spermatozoa.  Selain  itu  kuning  telur mengandung  kolesterol  dan  karoten  yang menstimulasi aktivitas dehidrogenase suksinat,  malat  dan  gliseral  dehidrida  fosfat spermatozoa.  Karbohidrat  yang  terkandung dalam bahan pengencer mempunyai beberapa  fungsi,  yaitu  sebagai  sumber energi,  mengatur  tekanan  osmotik  dan sebagai      krioprotektan  ekstraseluler penambahan  sedikit  jumlah  glukosa  dapat meningkatkan dan memperpanjang spermatozoa  hidup  (Yildiz et  al .,  2000). Kuning  telur  juga  mengandung  komponen yang  bekerja  sebagai  substrak  oksidasi, pelindung  enzim  sufhidril  dan  faktor aglutinat  dalam  plasma  semen  mamalia sebagai  sumber  untuk  mencegah  aglutinasi spermatozoa  (Salisbury  &  Van  Demark 1985).  Pengencer  semen  cair  atau  semen beku  secara  praktis  harus  mengandung
kuning  telur  atau  susu  sebagai  unsur  dasar. Kuning  telur  juga  mengandung  glukosa sebagai  sumber  energi  bagi  spermatozoa disamping protein dan vitamin-vitamin yang larut dalam air atau minyak, serta mampunyai viskositas yang mungkin menguntungkan  spermatozoa  (Toelihere, 1993).
Uji  lanjut  jarak  berganda  Duncan menunjukkan  bahwa  pada  perlakuan  P 1 memberikan  respon  yang  berbeda  terhadap perlakuan  P 2 ,  P 3 dan  P 4 karena  pada  setiap perlakuan menggunakan konsentrasi glukosa yang  berbeda-beda,  sehingga  pada  P 1 rata- rata  spermatozoa  hidup  83%  karena  jumlah konsentrasi  glukosa  yang  diberikan  hanya 5%  sehingga  daya  tahan  hidup  spermatozoa lebuh  rendah  dari  perlakuan  P 2 ,  P 3 dan  P 4 . Hardis  (2005)  mengatakan  metabolisme spermatozoa dapat berlangsung dengan baik dalam  larutan  pengencer  yang  mengandung gula  yang  sudah  dipecah  yaitu  fruktosa  dan glukosa.  Selanjutnya  Yulnawati  (2009) menambahkan  bahwa  proses  metabolisme spermatozoa dapat berlangsung dengan baik dalam  pengencer  yang  mengandung  gula yang  sudah  didegradasi.  Mumu  (2009) menambahkan  kemampuan  spermatozoa untuk  bertahan  hidup  lebih  lama  didalam suatu medium pengencer sangat dipengaruhi oleh  sifat  fisik  dan  kimiawi  penencer  yang digunakan.
Pengaruh Perlakuan Terhadap Persentase Abnormalitas Spermatozoa Abnormalitas merupakan
suatu penyimpangan morfologis yang dapat menurunkan  fertilitas  semen  (Butar-butar, 2009).  Setiap  spermatozoa  yang  abnormal tidak dapat membuahi ovum, tanpa memandang  apakah  abnormalitas  tersebut terjadi  di  dalam  tubulus  seminiferi  atau  di dalam  saluran  kelamin  jantan  atau  waktu ejakulasi  dan  semen  yang  masih  layak diinseminasikan yaitu memiliki nilai abnormalitas spermatozoa
<20%
(Partodihardjo,  1992).  Rataan  persentase abnormalitas spermatozoa dapat dilihat pada Tabel 5. Tabel 5. Rataan persentase abnormalitas spermatozoa  Babi Landrace dalam Pengencer Semen Sitrat-kuning Telur yang Ditambah Glukosa dengan Konsentrasi Berbeda Perlakuan Ulangan Jumlah Rerata I II III IV P1 7,5 8,5 8 9 33 8,2 P2 8,5 10 10 8,2 36,7 9,2 P3 8 7 9 8,5 32,5 8,1 P4 10 10 8 9 37 9,2 Keterangan : ns) non significant
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa persentase abnormalitas spermatozoa mencapai  9,25%  dan  9,175%.  Hasil  ini masih  baik  karena  menurut  Foeh et  al . (2015) persentase abnormalitas spermatozoa babi  adalah  11.1%.  sedangkan  menurut Johnson et al . (2000) persentase abnormalitas  babi  per  ejakulat  tidak  boleh lebih  dari  20%.  Berdasarkan  hasil  analisis sidik ragam (ANOVA) menunjukkan bahwa pada pelakuan pertama P 1 hingga P 4 terdapat perbedaan  yang  tidak  nyata  (P>0,05)  antar perlakuan.  Hal  itu  disebabkan  karena pemberian  glukosa  pada  konsentrasi  yang optimal  mampu  mengurangi  peningkatan abnormalitas yang terjadi akibat peroksidasi lipid  secara  bersamaan.  Secara  umum, abnormalitas pada spermatozoa dapat
disebabkan  oleh  berbagai  faktor  antara  lain genetik,  stres,  suhu  lingkungan,  penyakit dan bahkan perlakuan pada saat pembekuan semen (Arifiantini dan Ferdian, 2006).

## Pengaruh Perlakuan Terhadap pH Semen
Derajat  keasaman  (pH)  semen  perlu diukur  untuk  memastikan  bahwa  cairan semen hasil penampungan memiliki karakteristik  yang  normal  atau  tidak.  pH dapat  dilihat  dengan  cara  mencocokkan warna dari kertas lakmus yang telah ditetesi semen  dengan  warna  pada  tabung  kemasan kertas  lakmus  (Garner  dan  Hafez,  2000). Analisis  pH  dari  semen  segar  yang  telah diencerkan  dengan  konsentrasi  glukosa  dan sitrat kuning telur tersaji dalam Tabel 6.
Tabel 6. Rataan pH Semen Babi Landrace dalam Pengencer Semen Sitrat-kuning Telur yang
Ditambah Glukosa dengan Konsentrasi Berbeda Perlakuan Ulangan Jumlah Rerata I II III IV P1 7,69 7,89 8,89 8,97 33,44 8,36 a P2 7,92 7,99 8,10 7,97 31,98 7,99 a P3 8,49 7,58 7,97 6,67 30,71 7,68 ab P4 6,19 7,11 7,17 6,86 27,33 6,83 b
Ket.  Superscrip  (a,  b)  berbeda  pada  kolom  yang  sama  menunjukkan  pengaruh  perlakuan berbeda nyata (P<0.05)
Derajat  keasaman  (pH)  semen  Babi Landrace  dalam  penelitian  ini  memiliki
kisaran  pH  6,5  –  8,5,  hasil  penelitian terhadap  pH  semen  masih  lebih  tinggi  dari
penelitian (Garner and E. S. S  Hafez, 2000) yaitu  6,4-7,8,  hasil  penelitian  (Sumardani, 2007)  yaitu  7,7  -  8.  Faktor-faktor  tersebut terjadi  karena  yang  mempengaruhi  adalah umur, tingkat rangsangan, frekuensi ejakulasi,  lingkungan  dan  kualitas  pakan (Feradis, 2010).
Hasil analisis sidik ragam menunjukan pengaruh  perlakuan  berbeda  nyata  (P<0.05) dengan  rataan  pH  yang  diperoleh  dari perlakuan  P 1 (8,36)  kemudian  terjadi perubahan  pada  setiap  perlakuan  dengan rataan P 2 (7,99), P 3 (7,676) dan P 4 (6,83).
Uji lanjut Duncan /DMRT menujukkan pada perlakuan  P 1 dan  P 2 memberikan  respon yang berbeda  terhadap perlakuan P 4 sedangkan  pada  perlakuan  P 3 tidak  terdapat perbedaan  yang  signifikan  pada  taraf  5%. Triana  (2006)  menyatakan  bahwa  hasil metabolisme spermatozoa akan
menghasilkan  CO2,  H2O  dan  asam  laktat. Akumulasi  asam  laktat  akan  menyebabkan perubahan  pH  sehingga  daya  tahan  hidup spermatozoa berkurang.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  ini  dapat disimpulkan  bahwa  penggunaan  konsentrasi glukosa  berbeda  dalam  pengencer  semen sitrat kuning telur dengan kualitas yang baik yaitu  pada  perlakuan  P 3 dengan  konsentrasi
glukosa  15%  rata-rata  persentase  motilitas individu 64%, persentase spermatozoa hidup 93,5%, persentase abnormalitas spermatozoa 8,1%  dan  rata-rata  pH  (derajat  keasaman) semen 7,68.

## DAFTAR PUSTAKA
Affandhy,  L.,  U.  Umiyasih,  dan  K. Maksu`m.  1998.  Evaluasi  kualitas semen  beku  sapi  Madura  dengan berbagai  ddiluter  dan  kandungan kuning  telur  yang  berbeda.  Hlm:  233- 239.  Prosiding  Seminar  Nasional Teknologi  Peternakan  dan  Veteriner
Ciawi-Bogor. Arifiantini, R.I., dan T.L.Yusuf. 2004.Keberhasilan penggunaan tigapengencer dalam dua jenis kemasan  pada  proses  pembekuan semen  sapi  Frisien  Holstein . Fakultas Kedokteran  hewan,  Institut  Pertanian Bogor, Bogor.
Arifiantini,  I.,  T.L.  Yusuf,  dan  D.  Yanti. 2005.  Kaji  banding  kualitas  semen beku sapi Friesian Holstein menggunakan pengencer dari berbagai Balai  Inseminasi  Buatan  di  Indonesia. Animal Production 7 (3):168-176.
BIB Ungaran.  2011.  Instruksi kerja.  Balai Inseminasi  Buatan  Ungaran.    Jawa Tengah.
Blakely,  J.  dan  D.  H.  Bade,  1992.  Ilmu Peternakan.  Edisi.  4.  Srigandono  B, Penerjemah:  Gadjah  Mada  University Press. Yogiakarta. Indonesia.
Butar,  E.    2009.    Efektifitas  Frekuensi Exercise Terhadap Peningkatan
Kualitas  Semen  Sapi  Simmental. http://repository.usu.ac.id/bitstream/1/
09E008  98.  pdf.  Diakses  pada  5 November  2013.  Direktorat  Jenderal Peternakan.    2000.    SNI  01.4869.1-
2005 Semen Beku Sapi. CasasI and AlthousGC. 2013.Theprotectiveeffect ofa17ºCholdingtimeonboarsperm plasmamembranefluidityafterexposure 5ºC. Cryobiology66:69-75.
Eriksson, B.M., Petersson, H. and Rodriguez-Martinez,  H.  2002.  Field
Fertility  with  Exported  Boar  Semen
Frozen in the New Flatpack Container. Theriogenology. 58: 1065- 1079.
Evans,  G.,  dan  W.M.C.  Maxwell,  1987.
Salamon’s  Artificial  Insemination  of Sheeps  and  Goat’s. Butterworth. London
Feradis.  2010.  Bioteknologi  Reproduksi padaTernak. Alfabeta, Bandung.
Gadea J, 2003. Semen extenders used in the artificial  insemination  of  swine.
Spanish Journal of Agricultural Research 1 (2): 17-27.
Garner  D.L,  Hafez  E  S  E.  2000.
Spermatozoa  and  Seminal  Plasma.In: Hafez  E.S.E.  and  B.  Hafez  (Eds.).
Reproduction  in  Farm  Animals.7th Ed.US: Lippincott Williams & Wilkins. Pp 96-109.
Gilmore,  J.A.,  Junying,  D.,  Jun,  T.,  Peter, A.T.  and  Crister,  J.K.  1996.  Osmotic Properties  of  Boar  Spermatozoa  and their Relevance to Cryopreservation. J. Reprod. Fertil. 107:87-95
Hardjosubroto. W, 1994. Aplikasi
pemuliabiakan ternak dilapangan.
Penerbit PT Grasindo. Jakarata.
Hafez,  E.S.E.  2000.  Semen  Evaluation,  In:
Hafez,  B.,  and  E.S.E.  Hafez  (Eds).
Reproductionin  Farm  Animals.  7 th . Ed.  Lippincot  Williams  and  Wilkins. Philadelphia
Hafez,  B.  and  Hafez.  E.  S.  E.  2000. Reproduction  in  Farm  Animals. 7thed.  Lippincott  Williams  and Wilkins, Philadelphia.
Johnson  LA , Weitze  KF , Fiser  P,  Maxwell WMC.  2000.  Storageof  boar  semen.
Journal Animals Reproduction
Science 62: 143-172. Kvist,  U.,  Bjo¨rndahl,  L.  (2002).  Editorial.
In:  Kvist  U,  Bjo¨rndahl  L,  eds. Manualon  Basic  Semen  Analysis.
ESHRE  Monographs.  Oxford,  United Kingdom. Oxford University Press. Moussa  M.,  Marinet,  V.,  Trimeche,  A. 2002.  Low  Density  Lipoproteins Extracted  from  hen  Egg  Yolk  by  an Easy  Method:  Cryoprotective  Effect on Frozen-thawed Bull Semen. Theriogenology,  v.57,  p.1695-1706, 2002. Mumu,  M.  I.  2009.  Viabilitas  Semen  Sapi Simmental yang Dibekukan
Menggunakan  Krioprotektal  Gliserol.
Skripsi. UniversitasTadulako. Palu
Partudihardjo.  1992.  llmu  reproduksi hewan . MutiaraWidya.Cetakanke-
S.Jakarta
Paulenz  H,  Kommisrud  E,  and  Hofmo  PO. 2000.  Effect  of  long-term  storage  eat different  temperatures  on  the  quality of  liquid  boar  semen.  Reprod.  Dom. Anim. 35:58–85.
Panglowpahan.  2003.  Influence of glucose and  fruktose  in  the  extender  during long  term  storage  of  chilled  canine semen.  Theriogenology  62:  1498  -- 1517.
Raharjo,  D.    2002.    Daya  Tahan
Spermatozoa  Semen  Cair  Sapi  FH dalam Kemasan Straw Mini Menggunakan Pengencer Citrat
Kuning  Telur  dan  Skim  Kuning  Telur dengan Penambahan Fruktosa.  Skripsi Fakultas  Kedokteran  Hewan  Institut Pertanian Bogor.  Bogor.
Rizal,  M.    2006.    Peranan  beberapa  jenis gula  dalam  meningkatkan  kualitas semen beku domba Garut. Jurnal Ilmu Ternak dan Veteriner 11:123--130.
Rienprayoon  C,  Klangnak  C,  Onton  S,
Tretipskul C, and Tummaruk P, 2012. Acomparitive study on the efficacy of four commercial semen extenders used during  the  holding  time  on  the qualities of frozen-thawed boar semen. Thai J. Vet. Med.42,195-200.
Salisbury, G.W. and N.L. Vandemark.,1985. Fisiologi  Reproduksi  dan  Inseminasi Buatan  Pada  Sapi. Terjemahan . Judul Asli: (Physiologyof  Reproduction  and Artificial  Insemination  of  Cattle), Penerjemah:  Djanuar,  R,  (Ed),Gadjah Mada University Press,Yogyakarta.
Salmah,  Nur.,  2014.  Motilitas,  Persentase
Spermatozoa  Hidup  dan  Abnormalitas Spermatozoa  Semen  Beku  Sapi  Bali Pada  Pengencer  Andromed  dan  Tris Kuning  Telur.  Skripsi.  Universitas Hassanudin. Makassar.
Setyono,  2007.  Pengaruh  penambahan streptomycin dalam skim kuning tekur sebagai  pengencer  terhadap  kualitas semen ikan mas (Cyprinus CarpioL). Sihombing, D.T.H. 1997. Ilmu Ternak Babi. Fakultas Peternakan IPB, Bogor.
Siswanto.  2006.  Kualitas  Semen  di  dalam pengencer  Tris  dan  Natrium  Sitrat dengan  berbagai  sumber  karbohidrat dan level gliserol pada proses kriopreservasi  semen  Rusa  Timor (Cervus  timorensis).  Sekolah  Pasca Sarjana  Institut  Pertanian  Bogor, Bogor. (Tesis)
Solihati, N., R. Idi., S. D. Rasad., M. Rizal.
Dan  M.  Fitriati.  2005.  Kualitas Spermatozoa Caudan Epididymis Sapi Peranakan Ongol (PO) Dalam
Pengencer  Susu,  Tris  Dan  Sitrat Kuning  Telur  Pada  Penyimpanan  4-5 o C.  Jurnal Animal  Produktion .  10  (1):
22-29.
Steel,  R.G.D.,  Torrie,  J.H.,  1993.  Prinsip dan Prosedur statistika
(diterjemahkan  dari:  Principles  and Procedure of Statistic, penerjemah: B.
Sumantri). PT. Gramedia, Jakarta.
Steinbach, J. and R.H.  Foote.1967. Osmotic Pressure and pH Effects on survival of frozen  on  liquid  spermatozoa.  Journal of Dairy Science 50 :205-213. Toelihere,  M.,  R.  1993. Inseminasi  Buatan pada Ternak . Angkasa, Bandung. Toelihere,  M.R.,  1985.  Inseminasi  Buatan pada  Ternak  Cetakan  II.  Angkasa, Bandung.
Triana,  I.  N.  2006.  Pengaruh  Waktu
Inseminasi  Terhadap  Motilitas  Dan Viabilitas Spermatozoa Pasca
Inseminasi  Pada  Kambing.  Berk.
Penel. Hayati. 11: 147-150.
Wagner, H.G., and Thibier, M. 2000. World Statistics for Artificial Insemination In Small  Ruminants  and  Swine.  Proc 14th  ICAR,  Stockholm,  Sweden.  vol. 2, 15:3
Walson,  P.F.  and  Martin,  C.A.  1975.The
Influences  of  same  fractions  of  egg yolkon the survival of ram spermatozoa at5 o C. Reprod Fertil Dev 69:856-857.
Woelders,  H.,  A.  Matthij  and  B.  Engelan cooling rate on viability and intactness of  bull  sperm  after  freezing  and thawing.    Cryobiology  35:  93†10.