## ANALISIS PROTEIN PADA INSANG UDANG
Macrobranchium sintangense (de Man) AKIBAT PERLAKUAN

## SALINITAS YANG BERBEDA
Anita Munawwaroh, M.Si.
IKIP  Budi Utomo, Jl. Citandui No. 46 Malang email: munawwarohanita86@gmail.com

## ABSTRACT
The  study  aimed  to  know  the  effect  of  different  salinity  on  shrimp  of protein  content  and  protein  profiles.  The  animal  in  this  study  was Macrobranchium  sintangense shrimp  with  average  length  ±  50  mm which has acclimation for three days. The shrimp was treated at different salinity, the salinity 0 0 / 00 , 5 0 / 00 , 10 0 / 00 ,15 0 / 00 and 20 0 / 00 for seven days. Protein content and protein profiles by taking shrimp gill. Shrimp gill test showed  that  has  a  different  protein  content,  protein  profiles  due  to treatment of different salinity. The result was conclude that salinity 0 0 / 00 , 5 0 / 00 , 10 0 / 00 ,15 0 / 00 and 20 0 / 00 affect protein content and protein profiles of M. sintangense .
Keywords : Salinity, Protein, M. Sintangense

## PENDAHULUAN
Udang  air  tawar  di  Indonesia didominasi oleh  dua  famili, yaitu Palaemonidae  dan  Atyidae.  Anggota famili  Palaemonidae  yang  paling  banyak ditemukan di Indonesia adalah dari genus Macrobrachium (Holthuis,  1980),  salah satunya
adalah
Macrobrachium sintangense (Wowor et  al .,  2009). M. sintangense adalah  jenis  udang  yang hidup  di  perairan  tawar  dan  dapat  di- jumpai  di  daerah  dataran  tinggi  maupun dataran rendah (Sastrapraja et al ., 1977).
Udang  air  tawar  berperan  dalam menjaga  keseimbangan  ekosistem  dalam suatu perairan. Udang air tawar berfungsi sebagai salah satu rantai makanan. Selain itu,  udang  air  tawar  merupakan  mangsa dari  hewan  akuatik  yang  lebih  besar, seperti  ikan  (Wowor et  al, 2009).  Jika udang air tawar tidak terdapat di perairan, maka  perairan  akan  mengalami  pembu- sukan  yang  akan  meningkatkan  zat
amoniak  dan  bersifat  racun,  yang  secara langsung dapat mempengaruhi kehidupan hewan perairan lainnya.
Salinitas  merupakan  salah  satu faktor lingkungan yang berpengaruh pada organisme.  Salinitas  berpengaruh  pada pengaturan  ion-ion  internal,  yang  secara langsung memerlukan energi untuk trans- por  aktif  ion-ion  dalam  mempertahankan lingkungan  internal.  Hal  ini  sangat  ber- pengaruh  pada  proses  fisiologis  suatu organisme  yang  dapat  berakibat  pada mortalitas (Astuti, 2008).
Perubahan  salinitas  dapat  menye- babkan percepatan metabolisme, dan me- ningkatnya  protein  yang  dapat  mem- berikan  energi  ekstra  atau  asam  amino pada  udang  sehingga  mendapatkan  per- tumbuhan maksimal.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  pengaruh  salinitas  yang  ber- beda  terhadap  kadar  protein  dan  profil
protein    udang  regang  ( Macrobrachium sintangense (de Man)).

## METODE PENELITIAN
Hewan  uji  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  Udang  Regang ( Macrobrachium  sintangense (de  Man)) yang  diperoleh  dari  Pasar  Burung Bratang, Surabaya. Udang-udang tersebut dipilih dengan panjang rata-rata ± 50mm. Selama  masa  aklimasi  (3  hari)  diberi makan  pakan  udang  berbentuk  butiran. Media uji yang digunakan berupa air laut dan  air  tawar  (air  PDAM).  Air  PDAM yang  digunakan  sebagai  bahan  media diendapkan selama 24 jam
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini, antara lain: akuades, insang  udang, buffer ekstrak,  larutan bradford, es, acrylamid-bis (30%  T,
2,67% C), 1.5 M  tris-HCl pH 8,8, 0,5 M tris-HCl pH 6,8, buffer s ampel pH 6,8, I0
% SDS, bufferrunning (tris base 2 g, SDS 1  g,  gylcine  14,4;  pH  8,3),    a mmonium persulphate 10 % (dibuat fresh saat  akan digunakan), coomassie  blue  staining (methanol 40%, asam asetat glacial 10%, dan coomassie blue 0,1%, akuades 50%),
larutan destaining (methanol  40%,  asam asetat  glacial  10%,  akuades  50%), aquabidest .
Alat-alat  yang  digunakan  antara lain:  akuarium  kaca,  bak  plastik,  aerator, jaring,  pipet,  penggaris,  pipet  volume berukuran  0,5  mL,  labu  ukur  1000  mL, thermometer,  DO  meter,  refractometer, pH meter, kamera, Mini protein electrophoresis  set dan Power  supply , Beker glass 50 mL, mortar, pestle, mikro pipet    (1-10  μL,  10-100  μL,  100-1.000 μL),  tip  : blue  tip , yellow  tip , white  tip, tabung eppendorf, refrigenerator, shaker, sentrifus, spektofotometer.
Pada  penelitian  ini  dilakukan beberapa tahapan sebagai berikut: 1. Tahap Aklimasi dan Perlakuan Udang  Regang  yang  digunakan ditempatkan  pada  akuarium  dengan salinitas  0 0 / 00 dan  diaklimasi  selama  3 hari,  kemudian  50  %  udang  redang  yang masih hidup dipindahkan pada salinitas 5 0 / 00 dan  diaklimasi  selama  3  hari.  Dari aklimasi  salinitas  5 0 / 00, 50  %  udang redang  yang  masih  hidup  dipindahkan pada  salinitas  10 0 / 00 dan  diaklimasi selama  3  hari,  kemudian  50  %  udang redang  yang  masih  hidup  dipindahkan pada  salinitas  15 0 / 00 dan  diaklimasi selama  3  hari.  Dari  aklimasi  salinitas  15 0 / 00, 50 % udang redang yang masih hidup dipindahkan  pada  salinitas  20 0 / 00 dan  di aklimasi  selama  3  hari.  Setelah  tahap aklimasi,  masing-masing  perlakuan  di- lakukan pengamatan setiap hari selama 7 hari.  Pada  tiap  perlakuan,  parameter kualitas air (pH, DO, suhu, dan salinitas) diukur  setiap  hari.  Media  diberi  aerasi dan  udang  diberi  pakan  berbentuk butiran.
2. Tahap uji
Sampel  insang  udang  dihaluskan dengan  mortar.  Hasil homogenate ditam- bahkan  sebanyak  300-500  μL buffer ekstrak dalam keadaan dingin. Kemudian di inkubasi dalam refrigerator selama 30 menit  dengan  dishaker  sekali  selama  10 menit,  setelah  itu  di  sentrifugasi  pada 1.600  rpm  selama  10  menit  dengan  suhu 4 0 C.  Supernatan  yang  didapatkan  di sentrifugasi  pada  14.000  rpm  selama  10 menit  dengan  suhu  4°C.  Pelet  (endapan) ditambahkan  100  μL  PBS  pH  7,4  dan diresuspensi  sehingga  didapatkan  protein hasil ekstraksi.
Penentuan  kadar  protein  total dilakukan  dengan  Uji Bradford .  Seba-
nyak    10  μL  protein  sampel  protein dimasukkan  ke  dalam  790  μL  akuades steril  kemudian  ditambahkan  200  μL larutan bradford .  Pengukuran  kadar protein  didasarkan  pada  OD 595 sampel menggunakan  spektro-fotometer  dengan kurva standar protein BSA ( bovine serum albumin ), profil protein dari insang udang diidentifikasi  menggunakan  SDS-PAGE dengan marker berat  molekul  medium range  tertentu.  Protein  divisualisasikan dengan  pewarnaan Coomassie  Brilliant Blue .

## HASIL
Hasil    uji Bradford digunakan untuk  mengetahui  kadar  protein  insang udang  dapat  dilihat  pada  Tabel  1.  Dari tabel  tersebut  diperoleh  kadar  protein tertinggi pada salinitas 0 ‰.

## Tabel 1. Kadar Protein Insang udang Macrobracuim sintangen
Salinitas (‰) Absorbansi (  595 nm) Kadar Protein (  g/mL) 0 0,335 11,036 5 0,139 4,036 10 0,205 6,393 15 0,137 3,964 20 0,281 9,107 Pengaruh pemaparan pada
salinitas 0 ‰, 5 ‰, 10 ‰, 15 ‰ dan 20 ‰  terhadap  profil  protein  dapat  dilihat pada  gambar  1.  Penanda  atau  marker protein  yang  digunakan,  menunjukkan terdapat  enam  macam  protein  standar dengan  kisaran  berat  molekul  antara  20 kDa  hingga  118  kDa.  Berat  molekul masing-masing  pita  penanda  protein adalah 118 kDa, 90 kDa, 50 kDa, 36 kDa, 27 kDa, dan 20 kDa.
Gambar 1. Gel elektroforesis protein insang udang
Hasil  perhitungan  berat  molekul insang udang dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Berat Molekul Protein Insang Udang
pada Berbagai Salinitas Berat Mole kul Salini tas 0 ppt Salini tas 5 ppt Salini tas 10 ppt Salini tas 15 ppt Salini tas 20 ppt 20 + - - - - 25 - + + + +
30
+ + + + + 34 - + - + - 35 - - + - + 37 - + - - - 38 + - - - - 41 - - - + - 47 - + + + - 48 - - - - + 52 - - - + + 53 + - - - - 54 - + + - - 58 - + + + + 65 - - - + - 67 - - + - - 69 + + - - + 73 - - + - - 83 - - - - + 85 + - - - - 88 - - + - + 91 - + - - - 92 + - - - - 109 + - - - -

## PEMBAHASAN
Salinitas  adalah  tingkat  keasinan atau  kadar  garam  terlarut  dalam  air (Fujaya,1999).  Salinitas  perairan  meng- gambarkan  kandungan  garam  pada  suatu
perairan.  Garam  yang  dimaksud  adalah garam  dapur  (NaCl)  yang  merupakan berbagai ion yang terlarut dalam air. Pada umumnya salinitas disebabkan oleh 7 ion utama  antara  lain:  natrium  (Na),  kalium (K), Kalsium (Ca), Klorit (Cl),
Magnesium  (Mg),  Sulfat  (SO 4 ),  dan Bikarbonat  (HCO 3 ).  Salinitas  dinyatakan dalam  satuan  gram/kg  atau  promil 0 / 00 (Effendi, 2003).
Salinitas  adalah  salah  satu  faktor eksternal  yang  sangat  berpengaruh  ter- hadap  fisiologis  hewan-hewan  aquatik. Masing-masing  spesies  memiliki  rentang toleransi fisiologis yang spesifik terhadap faktor  tersebut  sehingga  mekanisme adaptasinya pun juga berbeda.
Hasil  uji  kadar  protein  menun- jukkan  adanya  perbedaan  kadar  protein pada  setiap  perlakuan  salinitas.  Dimana kadar protein pada salinitas 0 0 / 00 sebesar 11,036  g/mL,  salinitas  5 0 / 00 sebesar  4, 036  g/mL, salinitas 10 0 / 00 sebesar 6,393  g/mL,  salinitas  15 0 / 00 sebesar  3,964  g/mL dan salinitas 20 0 / 00 sebesar 9,107  g/mL. Perubahan salinitas dapat menye- babkan  percepatan  metabolisme,  dan meningkatnya  protein  dapat  memberikan udang  energi  ekstra  atau  asam  amino untuk  meningkatkan  kapasitas  osmo- regulasi  dan  untuk  mendapatkan  pertum- buhan maksimal (Rosas et al ., 2001).
Pada  penelitian  ini  digunakan media uji dengan salinitas 0 ‰, 5 ‰, 10 ‰,  15  ‰  dan  20  ‰  yang  dapat mempengaruhi  ekspresi  protein  yang terdapat  pada  insang  Udang  Regang. Ekspresi protein diperoleh dengan metode elektroforesis menggunakan SDS-Page. Dimana pada perlakuan salinitas 0 ‰ dan pada salinitas 5 ‰, pita protein  yang  muncul  pada  gel  eletro- foresis  dengan  berat  molekul  antara  91-
109  kDa  dan  antara  30-38  kDa  terlihat lebih  tebal  dari  lainnya  yang  diduga adalah  protein  Na + -  K + ATPase,  seperti yang  dikemukaan  oleh  Peterson et  al (1978) dalam Lucu et  al (2003)  bahwa sub  unit  α  pada  protein  udang Artemia salima sebesar 95-101 kDa dan sub unit β sebesar  38-40  kDa  merupakan  protein Na + -  K + ATPase.  Sedangkan  pada perlakuan  salinitas  10  ‰,  15  ‰  dan  20
‰ tidak terlihat tebal.
Ketika terjadi perubahan salinitas,
tantangan  utama  bagi  hewan  air  adalah untuk  mengatur  tekanan  osmolalitasnya, dengan mengatur volume  sel dan menjaga  stabilitas  enzim  (Hochachka,
2002 dalam Erchao et  al .,  2011). Na + K + ATPase  telah  diyakini  penting dalam  regulasi ion  dan keseimbangan air dengan memompa  ion  Na + ke hemolimfe (Towle,  1981;1984).  Albert et  al .  (1994) dalam Bahrus  (2007)  menjelaskan  suatu model  sistematik  dari  siklus  pemompaan Na + /K + ATPase  sebagai  berikut:  (1) binding Na + dan (2) berikutnya fosforilasi oleh  ATP  pada  permukaan  sitoplasma dengan mengaktifkan ATPase (3) menye- babkan  protein  mengalami  suatu  peru- bahan penyesuaian yang mentransfer Na + melintasi  membran  dan  melepaskannya pada  bagian  luar.  (4)  kemudian  binding K + pada  permukaan  ekstraseluler  dan diikuti  (5)  defosforilasi  mengembalikan protein  pada  penyesuaian  aslinya,  (6) yang  mentransfer  K + melintasi  membran dan melepaskannya di dalam sitosol.
Berdasarkan  penjelasan  di  atas menunjukkan  bahwa  udang  yang  meng- alami perubahan salinitas (0 ‰, 5 ‰, 10 ‰,  15  ‰  dan  20  ‰)  dapat  mem- pertahankan kelangsungan hidupnya dengan    melakukan  osmoregulasi.  Terja- dinya  osmoregulasi  pada  udang  adalah
akibat  adanya  gradien  konsentrasi  ion- ion  (terutama  Na + dan  K + )  antara  intra- seluler  dan  ekstraseluler.  Melalui  pompa Na + /K + ,  udang  akan  melakukan  transpor aktif  ion  Na + dan  K + untuk  mem- pertahankan konsentrasi ion dalam tubuh- nya  sehingga  fungsi  fisiologis  organ- organ  dalam  tubuhnya  dapat  berjalan normal            (Becker  dan  Beamer,  1991 dalam Bahrus, 2007).

## SIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan  hasil  penelitian,  dapat disimpulkan:
1. Ada  perbedaan  kadar  protein  insang udang regang akibat perlakuan salinitas  yang  berbeda  yaitu  salinitas 0 0 / 00, 5 0 / 00 , 10 0 / 00 , 15 0 / 00 dan 20 0 / 00 yang  diperoleh  dari  hasil  spektro- fotometer.
2. Ada  perbedaan  profil  protein  insang udang regang akibat perlakuan
salinitas  yang  berbeda  yaitu  salinitas 0 0 / 00, 5 0 / 00 , 10 0 / 00 , 15 0 / 00 dan 20 0 / 00 yang  diperoleh  dari  hasil  elektro- foresis.

## RUJUKAN
Astuti,  O.  2008.  Pengaruh  Salinitas
Terhadap Perkembangan dan Kelangsungan Hidup Menjadi Megalopa  Rajungan. Tesis .  Program Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor.
Bahrus,  M,.  S.  2007.  Mekanisme  Pompa Natrium  Kalium  (Na + -K + )  pada Osmoregulasi  Ikan  Bertulang  Sejati (Teleost). Jurnal  Ilmiah  Perikanan dan Kelautan . Vol I (I): 24-33.
Effendi,  H.  2003. Telaah  Kualitas  Air bagi  Pengelolaaan  Sumberdaya  dan Lingkungan  Perairan .  Jurusan  MSP FPIK IPB. Bogor.
Erchao,  L.,  Leticia,  A.,  Gabriel,  L.,
Gabriela,  G.,  Gérard,  C.,  Carlos,  R., Liqiao,  C.,  and  Alain,  V.,  W.  2011 . Glutamate  dehydrogenase  and  Na+- K+  ATPase  expression  and  growth response of Litopenaeus vannamei to different salinities and dietary protein levels. Journal  of  Oceanology  and limnology . Vol 29 (2): 343-349
Fujaya,  Y.  1999. Dasar  Pengembangan Teknik Perikanan . Rineka Cipta:
Jakarta .
Holthuis,  L.  B.  1980.  Shrimps  and prawns  of  the  world  an  annotated catalog  of  species  of  interest  to fisheres. FAO  Fish  Synop 125:340- 350.
Lucu,  C.,  dan  Towle,  D.,  W.  2003.  Na + - K + ATPase in gill of aquatic crustacea.  Review. Comparative Biochemistry  and  Physiology 135:
195–214.
Rosas,  C.,  Cuzon,  G.,  Gaxiola,  G.,  Le
Priol, Y., Pascual, C., Rossignyol, J., Contreras,  F.,  Sanchez,  A.  and  van Wormhoudt,  A.  2001.  Metabolism and growth of juveniles of Litopenaeus  vannamei :  effect  of salinity  and  dietary  carbohydrates levels. Journalof Experimental
Marine Biology and Ecology 259 (1):
1–22.
Sastrapradja, S., Adisoemarto, S., Suyanto,  A.,  Mussadarim,  B.,  Sabar, F., Anggraitoningsih, W.,
Rahayuningsih,  Y.  1977. Sumber Protein Hewani . Lipi. Bogor.
Wowor, D., Muthu, V., Meier, R., Balke, M.,  Cai,  Y.,  Ng  PKL . 2009. Evolution  of  life  hystory  traits  in asian  freshwater  prawns  of  genus Macrobrachium ( Custacea : Decapoda : Palaemonidae ) based on
multilocus  molecular  phylogenetic analysis . Molecular  Phylogenetics
and Evolution ,52: 340-350.