Mutu Mikrobiologis Kecap Ikan Tongkol, Siahaan et al.
MUTU MIKROBIOLOGIS KECAP IKAN TONGKOL ( Euthynnus affinis ) DENGAN PENAMBAHAN SARI BUAH NANAS ( Ananas comosus )
Irandha Citra Marasi Siahaan*, Henny Adeleida Dien, Hens Onibala Program Studi Ilmu Perairan, Fakultas Perairan dan Ilmu Kelautan, Jalan Kampus Unsrat Bahu-Kleak, Pasca Sarjana Ged.B. PS:IPA Manado, Sulawesi Utara 95115 Telpon.(0431) 827441, 827240; Fax. (0431) 821212 *Korespodensi: irandha47@gmail.com
Diterima: 23 Oktober 2017/ Disetujui: 20 Desember 2017
Cara sitasi: Siahaan ICM, Dien HA, Onibala H. 2017. Mutu mikrobiologis kecap ikan tongkol ( Euthynnus affinis ) dengan penambahan sari buah nanas ( Ananas comosus ). Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia. 20(3): 505-514.
Abstrak
Kecap ikan merupakan salah satu produk perikanan dari proses fermentasi. Ikan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu ikan tongkol ( Euthynnus affinis ) yang merupakan komoditas tangkapan tertinggi di Sulawesi Utara. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan mutu mikrobiologi dari produk diversifikasi ikan tongkol menjadi kecap ikan yang aman untuk dikonsumsi. Penelitian ini menggunakan metode ekperimental. Penelitian ini menggunakan penambahan (A) 0%, (B) 9%, (C) 12%, (D) 15% sari buah nanas dan garam (G8) 8%, (G9) 9%, (G10)10% garam, dan penyimpanan didalam inkubator selama 6, 8, 10 hari. Variabel yang diamati adalah total lactic acid bacteria , Total mikroba, E. coli , Staphylococcus sp., pewarnaan gram, pH, kadar air dan uji organoleptik. Hasil penelitian menunjukkan bahwa sampel D (D1G10) dengan penambahan sari buah nanas 15 % menyebabkan penurunan jumlah total bakteri dan menyebabkan meningkatnya jumlah total bakteri asam laktat. Total lactic acid bacteria , Total mikroba, E. coli , Staphylococcus sp., pewarnaan gram, pH, kadar air dan uji organoleptik dengan penambahan sari buah nanas 15% masing-masing 1,0 x 10 2 ; 9,0 x 10 4 ; 5,46; 69,14%; negatif; 100 isolat positif batang; kenampakan 8; bau 8; dan rasa 8. Hasil tersebut sudah memebuhi standar nasional Indonesia (SNI) dan aman untuk dikonsumsi.
Kata kunci: bakteri asam laktat, cemaran mikroba, fermentasi

## Microbiologys Quality of Fish Sauce Tongkol (Euthynnus affinis) with Additions Pineapple Juice (Ananas comosus)

## Abstract
Fish sauce is one of fish fishery product from fermentation process. In this study fish sauce made from tongkol fish ( Euthynnus affinis ) that has high catching in North Sulawesi. This study aimed to make diversification product from Tongkol fish into fish sauce safe to eat. The research method applied was experimental laboratories. In this research was by additions (A) 0%, (B) 9%, (C) 12%, (D) 15% pineapple juice and (G8) 8%, (G9) 9%, (G10) 10% salt and stored in an incubator at temperature 50ºC during 6, 8, 10 days. Variable measured were total lactic acid bacteria, total plate count, E. coli , Staphylococcus sp., gram strain, pH, water consentration and organoleptic test. The result showed that sample D (D1G10) with additions pineapple juice 15% caused decrease total pathogen bacteria and caused increase lactic acid bacteria. Showed that  total lactic acid bacteria, total plate count, E. coli , Staphylococcus sp., gram strain, pH, water consentration, gram strain, organoleptic test with pineapple juice 15% was 1.0x10 2 ; 9.0x10 4 ; 5.46; 69.14%; negative; 100 isolate positive shaped rod; the appearance 8; smell 8; taste 8. The result accordance with Standard National Indonesia (SNI) and safe to eat.
Keywords: fermentation, lactic acid bacteria, microbilogy contamination
Available online: journal.ipb.ac.id/index.php/jphpi

## PENDAHULUAN
Sulawesi Utara merupakan salah satu provinsi yang memiliki potensi perikanan  yang  cukup  besar.  Ikan  tongkol ( Euthynnus affinis ) adalah salah satu jenis ikan  yang  paling  tinggi  produksinya  yaitu 59.488,6 ton (DKP 2017). Jumlah penangkapan ikan tongkol di Sulawesi Utara yang melimpah perlu adanya diversifikasi pengolahan ikan tongkol menjadi produk yang memiliki nilai tambah. Pemanfaatan ikan tongkol di Sulawesi Utara didominasi dengan pengolahan modern yaitu pembekuan dan pengolahan tradisonal yaitu pengasapan. Diversifikasi pengolahan lain yaitu fermentasi. Fermentasi merupakan pengolahan yang melalui proses penguraian senyawa protein kompleks yang diubah menjadi senyawa-senyawa lebih sederhana dengan bantuan enzim yang berasal dari tubuh ikan atau mikroorganisme dalam keadaan terkontrol (Adawyah 2008). Prasetyo et al. (2012) menyatakan bahwa fermentasi kecap dapat dilakukan dengan dua cara yaitu secara spontan dan dengan penambahan starter. Pengolahan kecap ikan yang banyak dilakukan adalah menggunakan teknik penggaraman sebagai kontrol. Teknik ini merupakan teknik paling tradisional yaitu dengan memanfaatkan bakteri-bakteri yang secara alamiah terdapat pada tubuh ikan, sehingga membutuhkan waktu yang cukup lama yaitu 4-12 bulan. Kelemahan pembuatan kecap ikan secara tradisional ini dapat diatasi dengan adanya penambahan bahan alami yang banyak terdapat di Sulawesi Utara yaitu buah nanas ( Ananas comosus ) dan pengaturan suhu. Penelitian mengenai diversifikasi ikan tongkol dengan penambahan sari buah nanas menjadi kecap ikan belum pernah dilaporkan sebelumnya di Sulawesi Utara. Proses produksi kecap ikan biasanya menggunakan spesies ikan kecil seperti Stolephorus sp., Sardinella sp., Rastrelliger sp., Gambusia affinis ,
Clarias sp., dan berbagai jenis ikan lainnya tergantung pada setiap daerah dan metodenya bervariasi sesuai dengan praktiknya (Tungkawachara et al. 2003; Ibrahim 2010;
Olubunmi et al. 2010; Hounhouigan et al. 2012), namun bahan baku yang digunakan untuk pembuatan kecap ikan dapat mempengaruhi
sifat fisikokimia dari kecap ikan (Nadiah et al. 2011). Pengolahan kecap ikan memerlukan waktu yang cukup lama yaitu 6-12 bulan (Adawyah 2008). Purwaningsih et al. (2012) menyatakan bahwa perubahan kimiawi dan mikrobiologi produk fermentasi bakasang dari bahan baku ikan cakalang dipengaruhi oleh lama fermentasi dan suhu. Pembuatan kecap ikan dengan bantuan enzim telah dilakukan sebelumnya, di antaranya oleh Zahirudin et al. (2010) dengan bahan baku ikan petek dengan penambahan nanas sebagai sumber enzim bromelin. Iskandar et al. (2009) menyatakan bahwa terdapat interaksi nyata antara perlakuan penambahan ekstrak buah nanas dan waktu inkubasi terhadap kadar total nitrogen terlarut, total padatan terlarut, dan volume cairan serta viskositas kecap ikan. Hal ini didukung oleh penelitian Loekman et al. (2008) bahwa dengan penambahan enzim bromelin dengan konsentrasi 9% dapat berfungsi sebagai katalisator yang membantu mempercepat proses hidrolisis pada fermentasi kecap ikan. Buah nanas mengandung enzim bromelin yang merupakan bagian dari enzim proteolitik yang mampu memecah senyawa protein komplek menjadi senyawa lebih sederhana. Aktifitas bakteri asam laktat merupakan salah satu faktor penting dalam proses fermentasi. Bakteri asam laktat dapat menghasilkan senyawa bakteriosin yang menunjukkan aktifitas bakterisidal terhadap bakteri patogen (Purwaningsih et al. 2012; Kusmarwati et al. 2014). Tujuan penelitian ini adalah menentukan mutu mikrobiologis dari produk diversifikasi kecap ikan tongkol dengan penambahan sari buah nanas agar memenuhi standar mutu mikrobiologi menurut Standar Nasional Indonesia.

## BAHAN DAN METODE Bahan dan Alat
Bahan baku yang digunakan yaitu ikan tongkol yang diperoleh dari Pasar Bersehati Manado, buah nanas yang digunakan diperoleh dari Kotamobagu dan garam. Bahan untuk pengujian yaitu NaCl, Lactose Broth (Himedia), nutrient agar (Merck), manitol salt agar (Merck), deMan Ragosa Shape Agar (Merck), ec broth (Himedia), Larutan safranin
Mutu Mikrobiologis Kecap Ikan Tongkol, Siahaan et al.
(Merck), larutan lugol (Merck), larutan kristal ungu (Merck), dan Alkohol 95%. Alat yang digunakan yaitu coolbox (28x18x20), timbagan analitik (Kern model 220-4), kotak styrofoam (53x28x34) dilengkapi dengan termometer dan terdapat 2 buah lampu pijar 5 Watt sebagai tempat fermentasi, pH meter (Adwa model 1030), inkubator, oven, autoclave (Hirayama HVE-50), tabung hach, cawan conway, petridisk, pipet, erlenmeyer, dan mikroskop (Olymphus CX31).

## Metode Penelitian
Fermentasi kecap ikan Metode penelitian yang digunakan yaitu metode eksperimental modifikasi dari penelitian Briani et al. (2014). Fermentasi kecap ikan tongkol dilakukan dengan perbandingan konsentrasi sari buah nanas 0%, 9%, 12%, 15% dan garam 8%, 9%, 10% dari berat ikan dengan 2 kali pengulangan. Ikan tongkol yang digunakan berasal dari pasar tradisonal dikota Manado, selama transportasi ikan diletakkan didalam coolbox berisi es batu untuk menjaga kesegaran ikan tersebut. Bahan baku ikan dikukus terlebih dahulu selama 15 menit, kemudian diambil dagingnya dan dihaluskan menggunakan blender. Buah nanas yang digunakan dipotong menjadi kecil dan masukkan kedalam juicer . Bagian buah nanas yang digunakan yaitu keseluruhan mulai dari bongkol, daun, hingga buah. Lumatan daging, sari buah nanas, yang telah jadi dimasukkan kedalam botol bervolume 360 mL dan ditambahkan
garam, kemudian botol ditutup kedap dan ditempatkan di dalam styrofoam untuk fermentasi selama 6, 8, 10 hari pada suhu 50ºC. Hasil hidrolisis pada hari ke 6, 8, dan
10 dilakukan pengujian mikrobiologi yang meliputi E.coli (BSN 2016), Staphylococcus (BSN 2015), total mikroba (BSN 2006), total bakteri asam laktat (Fardiaz 1993), pewarnaan gram dan pengujian kimia meliputi kadar air dan pH, serta pengujian organoleptik (BSN 2006).  Rancangan penelitian tersaji pada Tabel 1.

## Isolasi Bakteri Asam Laktat
Tahap pertama yang dilakukan pada isolasi dan identifikasi bakteri asam laktat yaitu pembuatan kultur sediaan yang dimodifikasi dari Lay (1994). deMan ragosa sharpe agar, nutrient agar dan nutrient broth di siapkan. Koloni yang bebas tumbuh pada deMan ragosa sharpe agar yang merupakan bakteri asam laktat diambil secara aseptis menggunakan jarum ose dan dipindahkan ke media nurient broth dan diinkubasi selama 24 jam dengan suhu 37ºC. Biakan bakteri yang telah tumbuh pada media nurient broth diambil secara aseptis menggunakan jarum ose dan dipindahkan ke media nutrient agar , kemudian diinkubasi selama 24 jam dengan suhu 37ºC, setelah 24 jam koloni yang tumbuh dipindahkan menggunakan jarum ose pada media miring ( slant agar ). Slant agar diinkubasi kembali pada suhu 37ºC selama 24 jam, kemudian disimpan pada suhu 5ºC untuk pengujian berikutnya. Tabel 1 Rancangan penelitian Sari buah nanas Ulangan Garam (G) (G8)8 % (G9)9 % (G10)10 % 0 % (A) 1 A1G8 A1G9 A1G10 2 A2G8 A2G9 A2G10 9 % (B) 1 B1G8 B1G9 B1G10 2 B2G8 B2G9 B2G10 12 % (C) 1 C1G8 C1G9 C1G10 2 C2G8 C2G9 C2G10 15 % (D) 1 D1G8 D1G9 D1G10 2 D2G8 D2G9 D2G10
Tabel 2 Perubahan nilai pH, kadar air (%), total mikroba (CFU/g), total bakteri asam laktat (CFU/g), Coliform/ E. coli , Staphylococcus sp. Sampel Hari Kadar Air pH TPC BAL Coliform/ E. coli Staphylococcus sp. A1G8 6 71,71% 5,84 8,2 x 10 4 1,0 x 10 2 Negatif Negatif 8 71,57% 5,82 8,0 x 10 4 1,1 x 10 2 Negatif Negatif 10 71,53% 5,81 7,8 x 10 4 1,0 x 10 2 Negatif Negatif A1G9 6 70,65% 5,75 7,8 x 10 4 1,6 x 10 2 Negatif Negatif 8 70,57% 5,74 7,5 x 10 4 2,0 x 10 2 Negatif Negatif 10 71,52% 5,73 7,5 x 10 4 2,0 x 10 2 Negatif Negatif A1G10 6 70,58% 5,77 8,0 x 10 4 1,4 x 10 2 Negatif Negatif 8 70,58% 5,75 7,5 x 10 4 1,0 x 10 2 Negatif Negatif 10 70,40% 5,75 7,4 x 10 4 1,0 x 10 2 Negatif Negatif B1G8 6 70,53% 5,63 6,5 x 10 3 4,0 x 10 4 Negatif Negatif 8 70,36% 5,62 6,0 x 10 3 4,0 x 10 4 Negatif Negatif 10 70,31% 5,6 5,8 x 10 3 4,5 x 10 4 Negatif Negatif B1G9 6 70,36% 5,62 6,4 x 10 3 4,4 x 10 4 Negatif Negatif 8 70,29% 5,61 5,8 x 10 3 4,3 x 10 4 Negatif Negatif 10 70,21% 5,59 5,5 x 10 3 4,5 x 10 4 Negatif Negatif B1G10 6 70,31% 5,61 5,4 x 10 3 5,0 x 10 4 Negatif Negatif 8 70,21% 5,6 5,2 x 10 3 4,6 x 10 4 Negatif Negatif 10 70,12% 5,57 4,9 x 10 3 4,5 x 10 4 Negatif Negatif C1G8 6 70,29% 5,57 6,5 x 10 3 5,5 x 10 4 Negatif Negatif 8 70,14% 5,57 5,5 x 10 3 6,0 x 10 4 Negatif Negatif 10 70,09% 5,54 4,6 x 10 3 6,2 x 10 4 Negatif Negatif C1G9 6 70,24% 5,57 5,5 x 10 3 6,7 x 10 4 Negatif Negatif 8 70,14% 5,57 3,5 x 10 3 7,0 x 10 4 Negatif Negatif 10 70,00% 5,55 3,0 x 10 3 7,0 x 10 4 Negatif Negatif C1G10 6 70,21% 5,56 4,8 x 10 3 7,5 x 10 4 Negatif Negatif 8 70,16% 5,56 4,0 x 10 3 7,8 x 10 4 Negatif Negatif 10 69,90% 5,52 3,0  x 10 3 7,8 x10 4 Negatif Negatif D1G8 6 69,70% 5,55 4,0 x 10 2 8,0 x 10 4 Negatif Negatif 8 69,68% 5,55 3,2 x 10 2 8,2 x 10 4 Negatif Negatif 10 69,50% 5,48 2,7 x 10 2 8,4 x 10 4 Negatif Negatif D1G9 6 69,65% 5,56 3,8 x 10 2 7,5 x 10 4 Negatif Negatif 8 69,57% 5,55 2,9 x 10 2 8,2 x 10 4 Negatif Negatif 10 69,45% 5,48 2,0 x 10 2 8,4 x 10 4 Negatif Negatif D1G10 6 69,50% 5,55 3,0 x 10 2 8,5 x 10 4 Negatif Negatif 8 69,26% 5,54 2,8 x 10 2 8,6 x 10 4 Negatif Negatif 10 69,14% 5,46 1,0 x 10 2 9,0 x 10 4 Negatif Negatif
Keterangan: A= Formulasi ikan dan garam, B= Formulasi ikan, garam dan sari buah nanas 9%, C= Formulasi
ikan, garam dan sari buah nanas 12%, D= Formulasi ikan, garam, dan sari buah nanas 15%.
Mutu Mikrobiologis Kecap Ikan Tongkol, Siahaan et al.

## Analisis Data
Data yang diperoleh dari analisis laboratorium dipaparkan secara deskriptif. Hasil uji cemaran mikroba dibandingkan dengan Standar Nasional Indonesia Kecap Ikan (BSN 1996).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Produk Kecap Ikan Fermentasi kecap ikan dengan penambahan sari buah nanas mengalami proses hidrolisis dari hari ke 6 (dapat dilihat pada jumlah total bakteri asam laktat pada Tabel 2), sedangkan fermentasi yang hanya menggunakan garam belum mengalami proses hidrolisis. Kecap ikan dengan penambahan sari buah nanas 15% lebih cepat terhidrolisis dibandingkan dengan penambahan sari buah nanas 9%. Perbedaan tersebut terjadi karena adanya perbedaan penambahan konsentrasi buah nanas yang dapat mempercepat proses hidrolisis. Buah nanas mengandung enzim bromelin yang dapat menghidrolisis protein  sehingga  dapat  melunakkan  daging (Iskandar dan widyasirini 2009).
Penelitian ini menggunakan kadar
garam 8%, 9%, dan 10%. Purwaningsih et al.
(2013) melaporkan bahwa semakin tinggi nilai konsentrasi penambahan garam maka nilai TPC, dan histamin menurun. Produk kecap ikan pada fermentasi hari ke 6 pada sampel B, C, dan D menunjukkan perubahan warna kecokelatan, sedangkan pada sampel A belum mengalami perubahan. Sampel A merupakan formulasi ikan dan garam tanpa penambahan sari buah nanas. Menurut Prasetyo et al. (2012) proses pembuatan kecap fermentasi memerlukan waktu yang cukup lama yaitu 4-12 bulan. Fermentasi yang cukup lama tersebut biasanya hanya menggunakan formuasi ikan dan garam sebagai kontrol sehingga memerlukan waktu yang cukup lama. Perubahan nilai pH, kadar air (%), total mikroba (CFU/g), total bakteri asam laktat (CFU/g), Coliform/ E. coli , Staphylococcus sp dapat dilihat pada Tabel 2.

## Nilai pH
Hasil pengukuran pH pada sampel kecap ikan Tongkol mengalami penurunan yang berkisar antara 5,37-5.84. Penurunan
nilai pH kecap ikan tongkol disebabkan oleh peningkatan total bakteri asam laktat yang menghasilkan asam laktat sehingga kondis fermentasi menjadi asam. Yanti dan Dali (2013) melaporkan bahwa pada fermentasi bakasang terjadi penurunan nilai pH bersamaan dengan meningkatnya total bakteri asam laktat yang dapat menghasilkan asam laktat. Menurut Desniar et al. (2007); Desniar et al. (2009) bahwa peningkatan jumah total bakteri asam laktat akan menyebabkan penurunan pH. Menurut Candra et al. (2007), bahwa penurunan pH diduga disebabkan oleh bakteri yang terdapat dalam produk fermentasi merupakan bakteri asam laktat, karena bakteri tersebut mampu tumbuh pada kisaran pH yang rendah, yaitu sekitar 3,0-6,0 dan mampu menghasilkan asam.
Nilai pH kecap ikan dengan formulasi ikan dan garam (A) hingga fermentasi hari ke 10 diketahui lebih tinggi dibandingkan dengan formulasi ikan, garam dan sari buah nanas (B, C, D). Hal ini disebabkan karena kandungan enzim bromelin yang terdapat didalam sari buah nanas yang dapat mempercepat proses fermentasi sehingga enzim proteolitik yang terdapat secara alami. Pertumbuhan mikroorgaisme khususnya bakteri asam laktat menjadi lebih cepat dibandingkan dengan fermentasi yang hanya menggunakan formulasi ikan dan garam, sehingga proses fermentasi dengan penambahan sari buah nanas jauh lebih cepat dibandingkan dengan formulasi ikan dan garam. Bakteri yang berperan dalam proses fermentasi kecap ikan digolongkan sebagai bakteri asam laktat yang dapat dikelompokkan menjadi dua kelompok besar yaitu bakteri yang menghasilkan enzim proteolitik dan bakteri yang terkait denga aroma perkembangan kecap ikan tersebut (Lopetcharat 2001).

## Kadar Air
Kadar air pada sampel kecap ikan berkisar antara 69,14-71,71%. Penurunan kadar air terjadi selama proses fermentasi dengan mengunakan formulasi ikan, garam dan sari buah nanas, hal ini disebabkan karena air yang terdapat didalam daging ikan telah diserap oleh garam yang ditambahkan. Penambahan sari buah nanas yang mengandung enzim bromelin
juga dapat memicu pertumbuhan bakteri asam laktat sehingga kondisi fermentasi menjadi asam.  Penelitian  serupa  yang  dilakukan  oleh Cho et al. (2000), diperoleh kadar air kecap ikan yaitu 60,6-72,8% hasil tersebut dilakukan pada beberapa sampel kecap ikan di Asia tenggara. Menurut Tungkawhacara (2003) apabila waktu fermentasi diperpanjang maka tingkat hidrolisis, kandungan total nitrogen, kandungan asam amino dan hipoksantin akan meningkan sementara kadar air dan pH akan menururn.

## Analisis Mikrobiologi
Bakteri Asam Laktat
Koloni yang tumbuh pada media deMann  Ragosa  Sharpe  Agar  berwarna  putih (Gambar 1). Kenaikan total bakteri asam laktat terjadi untuk sampel kecap ikan tongkol
B, C, D selama 10 hari, sedangkan untuk sampel A hanya terjadi kenaikan dalam jumlah kecil. Hal ini disebabkan oleh adanya penambahan sari buah nanas pada sampel B, C, D yang mengandung enzim bromelin.
Jumlah total bakteri asam laktat yang tertinggi adalah pada sampel D dengan konsentrasi penambahan sari buah nanas 15%. Sari buah nanas yang mengandung enzim bromelin dapat mempercepat proses penguraian protein menjadi senyawa-senyawa sederhana. Hasil penelitian menunjukkan bahwa meningkatnya total BAL dapat mengakibatkan kondisi fermentasi menjadi asam sehingga akan menghambat adanya pertumbuhan bakteri lain. Menurut Desniar et al. (2009) dalam penelitian serupa mengenai fermentasi peda bahwa kenaikan jumlah total bakteri asam laktat bersamaan dengan penurunan pH. Total BAL mengalami peningkatan pada formulasi ikan, garam dan sari buah nanas 15% pada hari ke 10.

## Identifikasi Bakteri Asam Laktat
Isolat-isolat bakteri yang telah dilakukan sebelumnya berjumlah 100, yang kemudian akan diidentifikasi melalui berbagai uji. Pengujian pertama yang dilakukan yaitu pewarnaan gram. Hasil pengujian pewarnaan gram menunjukkan bahwa dari 100 isolat diketahui bahwa seluruh isolat merupakan bakteri gram positif berbentuk batang. Isolat diamati menggunakan mikroskop dengan pembesaran 100x dapat dilihat pada Gambar 2. Mikroorganisme yang biasanya ada pada produk fermentasi pangan bersifat homofermentasi dan heterofermentasi.
Gambar 1 Koloni bakteri asam laktat pada media deMan Ragosa Sharpe Agar
Gambar 2 Hasil uji pewarnaan gram (pembesaran 100x)
Mutu Mikrobiologis Kecap Ikan Tongkol, Siahaan et al.
Jenis bakteri asam laktat yang terdapat pada beberapa produk fermentasi antara lain yaitu Lactobacillus acidophilus , Lactobacillus plantarum , Lactobacillus bulgaricus dan ada juga yang berbentuk kokus antara lain Streptococcus thermophillus , Streptococcus lactis , Streptococcus cremoris , Pediococcus pentosaceus (Yanti et al. 2013; Kusmarwati et al. 2014; Novianti 2013). Muchtadi (2010) menyatakan bahwa karakteristik bakteri asam laktat yaitu gram positif batang dan kokus, tidak bersopra, dan katalase negatif.

## Cemaran Mikroba
Hasil analisis mikrobiologi mengenai cemaran mikroba yang meliputi Staphylococcus , dan E. coli pada kecap ikan sampel A, B, C dan D adalah negatif. Hal ini mengiindikasikan bahwa produk kecap ikan tongkol tidak terkontaminasi oleh Staphylococcus sp. dan E. coli dan sesuai dengan Standar Nasional Indonesia (SNI) kecap ikan (BSN 1996). Staphylococcus merupakan salah satu bakteri patogen yang dapat menyebabkan berbagai jenis infeksi mulai dari infeksi kulit ringan hingga keracunan makanan, sehingga sangat penting untuk mengetahui keberadaan bakteri tersebut pada suatu produk makanan
(Herlina et al. 2015).
E. coli merupakan salah satu bakteri patogen yang dapat menyebabkan berbagai macam penyakit mulai dari diare, muntah- muntah, bahkan sampai kematian (Leboffe dan Pierce 2011). Menurut Standar Nasional Indonesia Kecap ikan (BSN 1996), persyaratan cemaran mikroba Coliform/ E. coli yaitu <3. Maruka et al. (2017) menyatakan bahwa penanganan yang tidak higienis seperti penggunaan air pencucian yang kotor, peralatan yang kotor akan menyebabkan adanya kontaminasi bakteri E. coli . Hal ini menunjukkan bahwa proses fermentasi kecap ikan tongkol diproses secara sanitasi. Jumlah total mikroba pada proses fermetasi kecap ikan dengan formulasi ikan dan garam (sampel A) jauh lebih tinggi dibandingkan formulasi ikan, garam dan sari buah nanas. Hal ini disebabkan oleh adanya penurunan nilai pH yang diikuti dengan peningkatan jumlah bakteri asam laktat yang mengakibatkan kondisi menjadi asam. Wicaksana et al. (2013) melaporkan bahwa adanya kecenderungan penurunan total mikroba pada proses fermentasi kecap ikan yang diikuti dengan adanya peningkatan jumlah total bakteri asam laktat.
Gambar 3 Pengujian Staphylococcus (Negatif)
Gambar 4 Pengujian E. coli (Negatif)
Purwaningsih et al. (2013) melaporkan bahwa lama fermentasi memberikan pengaruh nyata terhadap total mikroba yang tumbuh. Adanya penambahan garam sangat berpengaruh pada pertumbuhan bakteri tertentu yang akan tumbuh.

## Organoleptik
Uji organoleptik yang dilakukan pada sampel kecap ikan yaitu menggunakan skala 1-9 yang meliputi kenampakan, bau, dan rasa. Hasil yang diperoleh dari 30 orang panelis tidak standar yaitu mahasiswa dan ibu rumah tangga didaerah kleak - Manado.  Kecap ikan tongkol dengan penambahan sari buah nanas 15% dan garam 10% (D1G10) merupakan sampel yang paling baik dengan nilai rata-rata kenampakan 8, bau 8, dan rasa 8.
Kenampakan kecap ikan tongkol dengan penambahan sari buah nanas 15% dan garam
10% memiliki spesifikasi warna cokelat, jernih, dan bersih, bau spesifik kecap ikan, dan rasa asin. Hal ini disebabkan oleh adanya perbedaan konsentrasi sari buah nanas pada formulasi lainnya yang meyebabkan perubahan warna, bau, dan rasa, pada produk akhir kecap ikan. Konsentrasi sari buah nanas semakin tinggi menyebabkan warna semakin cokelat.
Zahiruddin (2010) melaporkan bahwa nilai organoleptik kecap ikan secara enzimatis sangat dipengaruhi oleh bahan tambahan yag digunakan dalam tahapan proses pengolahan kecap ikan tersebut.

## KESIMPULAN
Mutu mikrobiologi kecap ikan tongkol dengan penambahan sari buah nanas terbaik yaitu sampel D1G10 dengan formulasi ikan, garam 10%, dan sari buah nanas 15% dengan jumlah total mikroba 1,0 x 10 2 (CFU/g), total bakteri asam laktat 9,0 x 10 4 (CFU/g), sedangkan cemaran bakteri patogen Staphylococcus dan E. coli negatif. Pewarnaan gram yang dilakukan dari 100 isolat merupakan bakteri gram positif berbentuk batang. Uji organoleptik kecap ikan tongkol terbaik yaitu pada konsentrasi 15% dan garam 10% dengan spesifikasi warna bening kecokelatan, bau spesifik kecap ikan, dan rasa asin. Kecap ikan Tongkol dengan penambahan sari buah
nanas sudah sesuai dengan Standar Nasional Indonesia (SNI) dan dapat diproduksi untuk dipasarkan kedepannya.

## DAFTAR PUSTAKA
Adawyah R. 2008. Pengolahan dan pengawetan ikan. Jakarta (ID): Bumi aksara.
[BSN] Badan Standarisasi Nasional. 1996.
Kecap Ikan: SNI. 01-4271-1996. Jakarta (ID): Badan Standardisasi Nasional. [BSN] Badan Standarisasi Nasional. 2006 a . Cara Uji Mikrobilogi–Bagian 3: Penentuan Angka Lempeng Total (ALT) pada Produk Perikanan: SNI 01-2332.3- 2006. Jakarta (ID): Badan Standarisasi Nasional [BSN] Badan Standarisasi Nasional. 2006 b . Cara Uji Mikrobilogi–Bagian 3: Penentuan Coliform dan E.coli pada Produk Perikanan: SNI 01-2332.1-2006. Jakarta (ID): Badan Standarisasi Nasional [BSN] Badan Standarisasi Nasional. 2011. Pengujian Organoleptik Produk Perikanan: SNI. 01-2346-2011. Jakarta (ID): Badan Standardisasi Nasional [BSN] Badan Standarisasi Nasional. 2015. Pengujian Staphylococcus aureus : SNI. 01-2332-2015. Jakarta (ID): Badan Standardisasi Nasional Briani S, Darmanto YS, Rianingsih L. 2014. Pengaruh konsentrasi enzim papain dan lama fermentasi terhadap kualitas kecap ikan rucah. Jurnal Pengolahan dan Bioteknologi Hasil Perikanan . 3(3): 121- 128. Candra JL, Winarti, Desniar. 2007. Karakteristik bakteri asam laktat dari produk bekasam ikan bandeng ( Chanos chanos ). Buletin Teknologi Pengolahan Hasil Perikanan . 10(2): 14-24. Cho YJ, Im YS, Park HY, Choi YJ. 2000. Quality characteristics of Shoutheast Asial salt-fermented fish sauce. Journal of the Korean Fisheries Sociaty . 33 (2): 98- 102. Desniar, Poernomo D, Timoryana DVF. 2007. Studi pembuatan kecap ikan selar (Caranx leptolepis) dengan fermentasi spontan. Prosiding SEMNASKAN Tahun ke IV
Hasil Penelitian Perikanan dan Kelautan. Universitas Gajah Mada. Yogyakarta
Mutu Mikrobiologis Kecap Ikan Tongkol, Siahaan et al.
Desniar, Poernomo D, Wijatur. W. 2009. Pengaruh konsentrasi garam pada peda ikan kembung ( Rastrelliger sp.) dengan fermentasi spontas. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia . 12 (1): 73-87. [DKP] Dinas Kelautan dan Perikanan. 2017. Data Statistik Volume Penangkapan Sulawesi Utara. Jakarta (ID): Dinas Kelautan dan Perikanan. Fardiaz S. 1993. Mikrobiologi Pangan. Jakarta (ID): PT. Raja Grafindo Persada. Herlina N, Fifi A, Aditia DC, Poppy DH, Qurotunnada dan Baharuddin T. 2015. Isolasi dan identifikasi Staphylococcus aureus dari susu mastitis subklinis di Tasikmalaya, Jawa Barat (ID). Prosiding SEMNAS Masyarakat Biodiversitas Indonesia. Hounhouigan JD, Anihouvi VB, Kindossi JM. 2012. Processing and quality characteristics of some major fermented fish products from Africa. Journal of Biological Sciences . 1(7): 72-84. Ibrahim SM. 2010. Utilization of gambusia ( Affinis affinis ) for fish sauce production. Turkish Journal of Fisheries and Aquatic
Sciences . 10: 169-172. Iskandar T, Widyasirini TA. 2009. Pengaruh enzim bromelin dan waktu inkubasi pada  proses  hidrolisis  ikan  lemuru
( Sardinella sp.) menjadi kecap ikan. Jurnal Buana Sains . 9(2): 183-189. Kusmarwati A, Arief FR, Haryati S. 2014. Eksplorasi bakteorisin dari bakteri asam laktat asal rusip Bangka & Kalimantan. Jurnal Pengolahan dan Bioteknologi
Perikanan. 9(1): 29-40. Lay BW. 1994. Analisa Mikroba di Labpratorium. Jakarta (ID): Raja Grafindo Persada Leboffe MJ, Pierce BE. 2011. A Pthographic Atlas for the Microbiology Laboratory. United States of America: Morton Publishing Company. Loekman S, Karnila R, Dewi K. 2008. Pengaruh penambahan konsentrasi crude enzim bromelin berbeda terhadap kualitas kecap ikan lele dumbo ( Clarias garepinus ). Riau (ID): Universitas Riau.
Lopetcharat K, Choi YJ, Park JW, Daeschel
MA. 2001. Fish sauce products and
Manufacturing: A Review. Food Reviews International . 65-68.
Maruka SS, Siswohutomo G, Rahmatu GR. 2017.Identifikasi cemaran bakteri escherichia coli pada ikan layang ( Decapterus russelli ) segar diberbagai pasar Kota Palu. Jurnal Mitra Sains. 5(1):
84-89. Muchtadi R, Sugiyono, Agustaningwarno F. 2010. Ilmu Pengetahuan Bahan Pangan. Bandung (ID): CV. Alfa Beta. Nadiah W, Rosma A, Liong MT, Afif M, Lim YK, Afiza TS, Ng YF. 2011. Proteolytic action in Valamugil seheli and Ilisha melastoma for fish sauce production. Asian Journal of Food and Agro Industry.
4(04): 247-254. Novianti D. 2013. Kuantitasi dan identifikasi bakteri asam laktat serta konsentrasi asam laktat dari fermentasi ikan ( Channa striata ), ikan nila ( Oreochromis niloticus ), dan ikan sepat (Trichogaster trichopterus) pada pembuatan bakasam.
Jurnal Sainmatika. 10(2): 34-41.
Olubunmi F, Suleman S, Uche I, Olumide B. 2010. Preliminary production of sauce from clupeids. New York Science Journal . 3(3): 45-49. Prasetyo NM, Sari M, Budiyati CN. 2012. Pembuatan kecap ikan gabus secara hidrolisis enzimatis menggunakan sari nanas. Jurnal Teknologi Kimia dan Industri . 1(1): 329-337.
Purwaningsih S, Santoso J, Garwan R. 2013.
Perubahan fisiko-kimiawi, mikrobiologis dan histamin bakasang ikan cakalang
( Katsuwonus pelamis ) selama fermentasi dan penyimpanan. Jurnal Teknologi dan Industri Pangan . 24(2) 1-10. Tungkawachara S, Park JW, Choi YJ. 2003. Biochemical properties and consumer acceptance of Pacific whiting fish sauce.
Journal of Food Science 68(3): 855-860. Yanti DIW, Dali FA. 2013. Karakteristik bakteri asam laktat yang diisolasi selama fermentasi bakasang. Jurnal Pengolahan
Hasil Perikanan . 16(2): 133-141. Wicaksana ARB, Rianingsih L, Darmanto YS. 2013. Pengaruh penambahan starter Pediococcus sp pada pembuatan kecap ikan terhadap jumlah senyawa kimia dan
koloni bakteri. Jurnal Pengolahan dan Bioteknologi Hasil Perikanan . 2(3): 31-40. Zaharuddin. W, Septiani HS, Suptijah P. 2010. Pembuatan kecap ikan petek ( Leiognathus splendens ) secara fermentasi enzimatis.
Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia . 13(2): 143-156.
.