## PEMISAHAN ASAM AMINO DARI LIMBAH CAIR PABRIK KELAPA SAWIT DENGAN KROMATOGRAFI PENUKAR ION
Indah Rahmi Sari 1)* ,Ade Ayu Oksari 2) , Irma Kresnawaty 3)
1) Alumni Program Studi Kimia FMIPA Universitas Nusa Bangsa Bogor
2) Program Studi Biologi FMIPA Universitas Nusa Bangsa Bogor
3) Pusat Penelitian Bioteknologi dan Bioindustri Indonesia (PPBBI)
* e-mail : indahrsari@yahoo.co.id

## ABSTRACT

## Separation of Amino acid from Liquid waste of Oil palm Factory with Ion Exchange Chromatography
Research on Separation of Amino Acid Liquid Waste mills with Ion Exchange Chromatography was carried out  from  October  to  November  2015.  The  results  of    hydrolysis  of  6  N  HCl  results  showed    that  the  highest absorbance  reading  was  obtained  at  a  concentration  of  eluent  of  0,2  and  0,6  M  NaCl,  while  the  results  of  the protease  enzyme  hydrolysis  the  highest  absorbance  reading  at  NaCl  eluent  0,2  and  1  M.  There  was  no  significant difference  in  the  results  of  separation  by  ion  exchange  chromatography,  showed  that  the  concentration  of  NaCl eluent is not very influential, so for subsequent analysis used only one concentration of the eluent. Results  of linear regression obtained was equal to 0,9946, these results indicate that the series standard amino acid lysine has a value that is linear as it approaches 1. The amino acid levels obtained on the sample results LCPKS hydrolysis with 6 N HCl which was about 0 to 8.82 ppm and samples of the protease enzyme hydrolysis of about 0 to 4.31 ppm. Amino acid levels obtained were still far from the expected.
Keywords: Amino Acid, Oil Palm, Liquid Waste, Ion Exchange Chromatography

## ABSTRAK
Penelitian mengenai Pemisahan Asam Amino dari Limbah Cair Pabrik Kelapa Sawit dengan Kromatografi Penukar Ion telah dilaksanakan dari bulan Oktober sampai November 2015.  Hasil hidrolisis HCl 6 N menunjukkan bahwa  pembacaan  absorbansi  tertinggi  diperoleh  pada  konsentrasi  eluen  NaCl  0,2  dan  0,6  M,  sedangkan  hasil hidrolisis enzim protease pembacaan absorbansi tertinggi pada eluen NaCl 0,2 dan 1 M. Tidak ada perbedaan yang signifikan pada  hasil pemisahan dengan kromatografi  penukar ion  ini,  menunjukkan  bahwa konsentrasi  eluen  NaCl tidak terlalu berpengaruh, sehingga untuk analisis selanjutnya digunakan hanya satu konsentrasi eluen. Hasil regresi linear  yang  diperoleh  yaitu  sebesar  0,9946,  hasil  tersebut  menunjukkan  bahwa  deret  standar  asam  amino  lisin mempunyai  nilai  yang  linear  karena  mendekati  1.  Kadar  asam  amino  yang  diperoleh  pada  sampel  hasil  hidrolisis LCPKS dengan HCl 6N yaitu sekitar 0 – 8,82 ppm dan sampel hasil hidrolisis enzim protease sekitar 0 – 4,31 ppm. Kadar asam amino yang diperoleh masih jauh dari yang diharapkan.
Kata Kunci: Asam Amino, Minyak Kelapa Sawit, Limbah Cair, Kromatografi Penukar Ion

## PENDAHULUAN
Salah  satu  komoditas  perkebunan strategis  Indonesia  pada  saat  ini  adalah tanaman  kelapa  sawit.  Indonesia  adalah penghasil  minyak  kelapa  sawit  terbesar  di dunia  dan  penyebarannya  antara  lain  di daerah  Aceh,  pantai  timur  Sumatera,  Jawa, Kalimantan,  dan  Sulawesi.  Kelapa  sawit ( Elaeis )  adalah  tumbuhan  industri  penting penghasil  minyak  masak,  minyak  industri,
maupun bahan bakar ( biodiesel ). Perkebunan  kelapa  sawit  memiliki  potensi menghasilkan  keuntungan  besar  sehingga banyak hutan dan  perkebunan  lama dikonversi  menjadi  perkebunan  kelapa sawit.  Industri  kelapa  sawit  merupakan salah  satu  industri  yang  berkembang  pesat pada dua dekade terakhir dan diproyeksikan masih  akan  tetap  menjadi  salah  satu  sub sektor  perkebunan  pada  masa  mendatang (Hidayanto, 2007).
Proses  pengolahan  kelapa  sawit menjadi minyak kelapa sawit akan menghasilkan  limbah  cair  dalam  jumlah yang  cukup  besar.  Sebanyak  1  ton  minyak kelapa  sawit  menghasilkan  2,5  ton  limbah cair pabrik minyak kelapa sawit (Hidayanto,  2007).  Limbah  cair  tersebut berasal  dari  proses  perebusan,  klarifikasi dan  hidrosiklon.  Pengembangan  industri kelapa sawit yang diikuti dengan pembangunan  pabrik,  dapat  menimbulkan dampak negatif terhadap lingkungan berupa pencemaran terhadap lingkungan perairan.
Karakteristik  limbah  cair  dari kegiatan industri pabrik kelapa sawit seperti Biological  Oxygen  Demand (BOD)  sebesar 135,80  mg/L, Chemical  Oxygen  Demand (COD)  sebesar  394,7  mg/L, Total  Solid suspensed (TSS)  sebesar  271,  5  mg/L  dan pH 4,1. Baku mutu BOD sebesar 100 mg/L, baku  mutu  COD  sebesar  350  mg/L,  baku mutu TSS sebesar 250 mg/L dan baku mutu pH  6,0  –  9,0  (Satria,  1999).  Keadaan  ini menunjukkan  bahwa  angka-angka  tersebut berada  di  atas  toleransi  baku  mutu  yang direkomendasikan,  jika  dibuang  ke  badan air    akan  mengganggu  ekosistem  serta kualitas  kandungan  air  tanah  karena sebagian  akan  mengendap,  terurai  secara perlahan,  mengkonsumsi  oksigen  terlarut, menimbulkan  kekeruhan,  mengeluarkan bau  yang  tajam  dan  dapat  merusak ekosistem  badan  penerima  (Alaerts,  1987; Betty,  1996).  Masalah  lain  yang  timbul yaitu  tidak  semua  industri  kelapa    sawit dapat mengolah limbah sendiri atau dengan kata  lain  tidak  semua  memiliki  Instalasi Pengolahan  Air  Limbah  (IPAL)  yang memadai. Syarat IPAL yang memadai yaitu harus  memiliki  proses oil  separation  tank , anaerobic reactor , aerobic reactor, settling tank, dan receiving tank (Rahardjo, 2005). Pencemaran lingkungan yang terjadi  akibat  Limbah  Cair  Pabrik  Kelapa Sawit  (LCPKS)  ini  dapat  diatasi  dengan penanganan  yang  tepat,  salah  satunya adalah memanfaatkan hasil sampingan yang terkandung  didalamnya.  Hasil  sampingan LCPKS  yang  memiliki  potensi  besar  untuk diolah dan  dimanfaatkan adalah  kandungan bahan  organik.  LCPKS  mengandung  ber- bagai senyawa yang berpeluang untuk dapat diekstrak  kembali  dan  dikemas  menjadi
produk bernilai ekonomi yang cukup tinggi. Utomo  dan  Widjaja (2004)  mengemukakan bahwa  kandungan  nutrien  dalam  residu LCPKS adalah lemak, protein dan karbohidrat.
Menurut  Habib et  al. (1997), LCPKS  mengandung  asam  amino  esensial seperti  fenilalanin,  metionin,  leusin  dan lisin dalam jumlah tinggi, serta histidin dan tirosin  dalam  jumlah  kecil. Di samping  itu, LCPKS  juga  mengandung  sejumlah  asam amino  non  esensial  seperti  asam  aspartat, asam  glutamat,  serin,  glisin  dan  sistein dalam  jumlah  tinggi.  Asam  amino  inilah yang  merupakan  sumber  nutrisi  tambahan bagi  makhluk  hidup.  Aplikasi  LCPKS memiliki  keuntungan  diantaranya  adalah mengurangi  terjadinya  pencemaran  ling- kungan,  mengurangi  biaya  pengolahan limbah cair dan sekaligus berfungsi sebagai sumber hara bagi tanaman kelapa sawit dan nutrisi  tambahan  bagi  pupuk  dan  pakan ternak.
Asam amino sangat diperlukan oleh tubuh karena merupakan prekursor berbagai senyawa  yang  berperan  penting  baik sebagai  nutrisi  tubuh  maupun  untuk mempertahankan  kesehatan  manusia  dan hewan.  Industri  dan  volume  pasar  asam amino  juga  berkembang  pesat  dalam  20 tahun  terakhir.  Menurut  hasil  studi  yang dilakukan  oleh Business  Communication Company (Brown et  al. ,  2005),  pasar asam amino  meningkat  rata-rata  7  %  per  tahun dan  pada  tahun  2009  akan  mencapai  nilai satu  miliar  Dolar  Amerika.  Dengan demikian maka pemisahan asam amino dari LCPKS  akan  memberikan  dampak  positif dalam  mengatasi  masalah  pencemaran lingkungan  dan  memberikan  nilai  tambah kepada  pabrik  pengolahan  minyak  kelapa sawit.
Berdasarkan hasil penelitian Utomo dan  Widjaja  (2004),  menunjukkan  bahwa produksi  limbah  perkebunan  kelapa  sawit secara fisik cukup potensial sebagai sumber pakan  ternak  dengan  kandungan  protein kasar  sebesar  12,63  %. Penelitian  tentang limbah  cair  pabrik  kelapa  sawit  lain  yaitu diaplikasikan  untuk  menghasilkan  biogas. Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Mahajoeno et  al .  (2007)  menunjukkan  bahwa  total produksi  biogas  tertinggi  pada  LCPKS
sebesar  121  L  dan  residu  dari  biogas tersebut  dapat  dimanfaatkan  sebagai  pupuk organik non fitotoksin.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan dan Alat
Bahan-bahan  yang  digunakan  pada analisis  ini  yaitu  sampel  hasil  hidrolisis LCPKS  menggunakan  HCl  6N  dan  enzim protease,  matriks:  DEAE  (Dietilamino- etanol),  buffer  fosfat  sitrat  20  mM  pH  5,0; NaCl,  HCl  1  M,  aquadest,  piridin  10%, ninhidrin  2%,  dan  larutan  induk  lisin  500 ppm.
Alat-alat  yang  digunakan  yaitu kolom  Syringe  5  mL  dengan  diameter  2,5 cm dan tinggi 10 cm, botol vial 2 mL, statif dan  clamp,  pipet  mikro  1000  μL,  dan spektrofotometer  UV/VIS  merk  Multiskan Go Double Beam versi 100.40.

## Persiapan dan Penyetimbang Kolom
Kolom  syringe,  statif  dan  clamp disiapkan.  Clamp  dan  statif  yang  sudah terpasang  dihubungkan  dengan  kolom.  Air dimasukkan  pada  kolom  dan  ditempatkan kapas  pada  bagian  dasar  kolom.  Kolom diisi  dengan  3  mL  matriks  DEAE Toyopearl  yang  telah  dilarutkan  dengan
HCl  1  M.  Beberapa  saat  didiamkan  dan kran  dibuka  sehingga  air  akan  menetes secara  perlahan  (ditampung  dalam  tabung reaksi).  Kran  ditutup  ketika  terbentuk larutan jernih di atas matriks kolom (kolom tidak boleh kering) dan didiamkan beberapa saat  hingga  matriks  padat  dan  setimbang (Anonimous, 2014).
Pemisahan dengan Kromatografi

## Penukar Ion
Sampel  hasil  hidrolisis  LCPKS dengan  HCl  6N  dan  enzim  protease disiapkan  masing-masing  sebanyak  1  mL dan  dilarutkan  1,5  mL  larutan  buffer  fosfat sitrat  pH  5  dalam  gelas  piala  50  mL. Sebanyak  0,5  mL  sampel  dimasukkan  ke dalam  kolom  secara  perlahan.  Kran  dibuka lagi sampai semua sampel  masuk  ke  dalam gel.  Kolom  dielusi  dengan  peningkatan konsentrasi  garam  NaCl  0,2;  0,4;  0,6;  0,8 dan  1,0  M  sebanyak  10  mL.  Setiap  sampel yang  keluar  dari  kolom  ditampung  pada  4 tabung reaksi (setiap botol berisi ±2,5 mL).
Setiap sampel diukur menggunakan spektrofotometer  UV-VIS  pada  λ  280  nm.
Grafik  hasil  kromatografi  dibuat.  Sampel dimasukkan  dalam  tabung  reaksi  dan ditutup  dengan  alufo  kemudian  dilakukan perlakuan pada tahap selanjutnya (Anonimous, 2014). (a) (b)
Gambar 5. (a) Kolom Syringe; (b) Pemisahan dengan Kromatografi Penukar Ion

## Pengukuran Kadar Asam Amino
Deret standar asam amino (0 – 200  ppm)  dan  blanko  dibuat  dari  larutan induk  asam  amino  lisin  500  ppm.  Sampel hasil  kromatografi  masing-masing  dipipet sebanyak  1  mL,  kemudian  masing-masing deret  standar,  blanko  dan  sampel  hasil kromatografi  dimasukkan  dalam  labu  ukur 10  mL.  Setelah  itu  ditambahkan  0,5  mL piridin  10%  dan  0,5  mL  ninhidrin  2%. Dipanaskan  dalam  penangas  air  mendidih selama  20  menit  sampai  terjadi  perubahan warna  menjadi  biru.  Setelah  dingin  semua deret standar, blanko dan sampel ditambahkan  air  suling  hingga  volume  10 mL.  Deret  standar,  blanko  dan  sampel diukur absorbansi menggunakan
spektrofotometer pada λ 625 nm.
Konsentrasi  tiap  sampel  dihitung  dengan cara (Hidayati, 2007): ppm = x fp Keterangan: ppm = konsentrasi sampel slope = hasil pembacaan pada grafik abs = absorbansi sampel fp = faktor pengenceran intercept = hasil pembacaan dari grafik

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pembacaan Absorbansi terhadap Sampel
Hasil  Pemisahan  Kromatografi  Penukar
Ion Kromatografi penukar ion dilakukan  untuk  memisahkan  asam  amino dari sampel yang telah dihidrolisis sebelumnya  menggunakan  HCl  6  N  dan enzim  protease.  Asam  amino  tersebut  yang kemudian  akan  dianalisis  kadarnya.  Elusi dilakukan  oleh  NaCl.  Dalam  hal  ini digunakan teknik  kromatografi penukar ion (ion  exchange).  Kromatografi  penukar anion  menggunakan  fasa  diam  Dietil- aminoetanol  (DEAE)  dengan  gugus  aktif N + (C 2 H 5 ) 2 dan  eluen  NaCl  berbagai konsentrasi. Pada penambahan  eluen NaCI,
ion Cl - akan  menggantikan polipeptida atau asam amino bermuatan negatif yang semula terikat  pada  DEAE,  sehingga  polipeptida atau  asam  amino  tersebut  akan  lepas  dari matriks DEAE. Hasil pemisahan ditampung dalam  fraksi-fraksi  dan  diukur  kadar  asam amino dengan spektrofotometer UV-VIS.
Hasil hidrolisis HCl 6 N menunjukkan bahwa pembacaan absorbansi tertinggi  diperoleh  pada  konsentrasi  eluen NaCl 0,2 dan 0,6 M (Gambar 1), sedangkan hasil  hidrolisis  enzim  protease  pembacaan absorbansi  tertinggi  pada  eluen  NaCl  0,2 dan  1  M  (Gambar  2). Tidak  ada  perbedaan yang  signifikan  pada  hasil  pemisahan dengan  kromatografi  penukar  ion  ini, menunjukkan  bahwa  konsentrasi  eluen NaCl  tidak  terlalu  berpengaruh,  sehingga untuk analisis selanjutnya digunakan  hanya satu  konsentrasi  eluen.  Faktor yang berpengaruh pada kromatografi penukar ion adalah  kondisi  pH  pada  resin  dan  sampel (Underwood,  2001).  Oleh  karena  itu,  pada penelitian  ini  ditambahkan  buffer  fosfat sitrat  untuk  mempertahankan  kondisi  pH agar  tetap  asam  yaitu  pada  pH  5.  Pada kondisi  asam,  anion  Cl - dari  NaCl  akan bertukar  sempurna  dengan  asam  amino bermuatan positif.

## Kadar Asam Amino

## 1. Deret Standar Asam Amino Lisin
Pembuatan  deret  standar  dilakukan adalah untuk mengetahui konsentrasi
larutan sampel dengan menggunakan persamaan  regresi.  Deret  standar  diukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV VIS  pada  λ  625  nm.  Hasil  regresi  linear yang  diperoleh  yaitu  sebesar  0,9946 (Gambar  3),  hasil  tersebut  menunjukkan bahwa  deret  standar  asam  amino  lisin mempunyai  nilai  yang  linear  karena mendekati  1  (Harmita,  2004).  Grafik  deret standar menyatakan hubungan antara konsentrasi dengan absorbansi yang dihasilkan.
Gambar  1.  Grafik  Pembacaan  Absorbansi  Hasil  Kromatografi  Penukar  Ion  pada  Sampel Hidrolisis LCPKS dengan HCl 6 N.
Gambar  2.  Grafik  Pembacaan  Absorbansi  Hasil  Kromatografi  Penukar  Ion  pada  Sampel Hidrolisis LCPKS dengan Enzim Protease.
Keterangan:
Sumbu x : Konsentrasi NaCl yang mengelusi kolom. Tanda A-D merupakan pengerjaan ulang sebanyak 4 kali. Sumbu y : Pembacaan absorbansi pada spektrofotometer.
Gambar 3. Kurva Deret Standar Asam Amino Lisin

## NH 2
H 2 N     CH 2 CH 2 CH 2 CH 2 CH      COOH
Gambar 4. Struktur Asam Amino Lisin (Hart et al. , 2003)
Asam  amino  lisin  dipilih  sebagai larutan  standar  baku  karena  struktur  asam amino  lisin  sederhana  yaitu  memiliki  satu gugus karboksil dan amino primer, sehingga  mudah  untuk  bereaksi  dengan ninhidrin.  Semua  asam  amino yang ditemukan  pada  protein  mempunyai  ciri yang  sama,  gugus  karboksil  dan  amino diikat  pada  atom  karbon  yang  sama. Masing-masing  berbeda  satu  dengan  yang lain  pada  gugus  R,  yang  bervariasi  dalam struktur,  ukuran,  muatan  listrik,  dan kelarutan  dalam  air.  Beberapa  asam  amino mempunyai  reaksi  yang  spesifik  yang melibatkan gugus R. Lisin merupakan asam amino  polar  tanpa  muatan  pada  gugus  R (Hart et al ., 2003).
2. Kadar  Asam  Amino  pada  Sampel Hidrolisis  LCPKS  dengan  HCl  6N dan Enzim Protease
Kadar  asam  amino  yang  diperoleh pada sampel hasil hidrolisis LCPKS dengan HCl  6N  yaitu  sekitar  0  –  8,82  ppm  (Tabel 1)  dan  sampel  hasil  hidrolisis  enzim
protease  sekitar  0  –  4,31  ppm  (Tabel  2). Kadar  asam  amino  yang  diperoleh  masih jauh  dari  yang  diharapkan.  Suplemen  pada pakan  ternak  membutuhkan  asam  amino keseluruhan sekitar 7.140 ppm (Utomo dan Widjaja, 2004).
Sampel  hidrolisat  asam  dan  enzim protease  mengalami  perubahan  warna  biru keungungan  setelah  perlakuan  pemanasan seperti pada deret standar, walaupun  warna yang dihasilkan tidak sepekat deret standar. Reaksi  antara  ninhidrin  dengan  gugus amino primer membentuk warna ungu yang disebut  juga  dengan  ungu  Ruhemann karena  ditemukan  oleh  Siegfried  Ruheman pada  tahun  1910  (Gambar  5).  Prinsip  dari reaksi  ini  adalah  semua  asam  amino bereaksi  dengan  triketohidrindena  hidrat atau yang disebut ninhidrin untuk membentuk  aldehida  yang  lebih  kecil dengan  membebaskan  karbon  dioksida, amonia  dan  menghasilkan  warna  biru keunguan. Intensitas warna ini menunjukkan  konsentrasi  asam  amino bebas, semakin pekat warna yang diperoleh semakin  tinggi  konsentrasi  asam  amino pada sampel (Rohman dan Sumantri, 2007).
Tabel 1. Kadar Asam Amino pada Sampel hasil hidrolisis LCPKS dengan HCl 6N No Konsentrasi Eluen NaCl (M) Kadar Asam Amino (ppm) 1 0 0 2 0,2 2,74 3 0,4 3,27 4 0,6 8,82 5 0,8 3,79 6 1 3,43 Tabel 2. Kadar Asam Amino pada Sampel hasil hidrolisis LCPKS dengan Enzim Protease No Konsentrasi Eluen NaCl (M) Kadar Asam Amino (ppm) 1 0 0 2 0,2 3,79 3 0,4 2,40 4 0,6 4,31 5 0,8 2,74 6 1 2,75
Gambar 5. Reaksi antara Asam Amino dengan Ninhidrin (Hart et al ., 2003)
Pembacaan  absorbansi  yang  bernilai  kecil, dimungkinkan karena nilai limit deteksi dan limit  kuantitasi  pada  alat  spektrofotometer UV-VIS  lebih  besar  daripada  kadar  asam amino  yang  terkandung  dalam  sampel. Limit  deteksi  atau  Limit  of  Detection (LOD)  adalah  jumlah  terkecil  analit  dalam sampel  yang  dapat  dideteksi  serta  masih memberikan respon yang signifikan
dibanding  dengan  blanko.  Limit  kuantitasi atau  Limit  of  Quantity  (LOQ)  adalah kuantitas terkecil analit  dalam sampel  yang masih  dapat  memenuhi  kriteria  cermat  dan seksama  (Harmita,  2004).  Sensitivitas  pada alat  spektrofotometer  UV-VIS  juga  dapat menjadi  pertimbangan  yang  menyebabkan hasil pembacaan absorbansi sampel bernilai kecil,  sehingga  setelah  dihubungkan  nilai slope  dan  intercept  dari  deret  standar  hasil kadar asam amino pun bernilai kecil.

## KESIMPULAN
Asam  amino  dari  limbah  cair pabrik  kelapa  sawit  dapat  dipisahkan dengan  cara  kromatografi  penukar  ion  dan dielusi  dengan  NaCl  berbagai  konsentrasi. Hasil  pemisahan  menunjukkan  tidak  ada perbedaan  yang  signifikan  dari  konsentrasi eluen  NaCl.  Regresi  linear  yang  didapat dari  deret  standar asam  amino  lisin  sebesar 0,9946  menunjukkan  bahwa  linearitas  alat masih  masuk  standar  yaitu  mendekati  1. Kadar  asam  amino  yang  diperoleh  pada sampel hasil hidrolisis LCPKS dengan HCl 6N  yaitu  berkisar  antara  0  –  8,82  ppm  dan pada sampel hasil hidrolisis  enzim protease yaitu  berkisar  antara  0  –  4,31  ppm,  hasil yang  didapat  masih  jauh  dari  yang diharapkan.

## DAFTAR PUSTAKA
Alaerts,  G.  1987. Metode  Penelitian  Air .
Usaha Nasional. Surabaya. Anonimous. 2014. Ion-Exchange Chromatography .  Workshop  on Protein Purification and Characterization: 12-13.
Betty,  J.  S.  1996. Penanganan  Limbah Industri Pangan . Kanisius. Yogyakarta.
Brown, J. E., I. Janet, K. Bea, L. Ellen, M. Maureen.  2005. Nutrition  Through the Life Cycle . Wadsworth. USA.
Habib, M. A. B., F.M. Yusoff, S. M. Phang,
K.J.  Ang,  S.  Mohamed.  1997. Nutritional  values  of  chironomid larvae grown in palm oil mill effluent and  algal  culture. Aquaculture .  158: 95-105. Harmita.  2004.  Petunjuk  Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara Perhitungannya. Majalah Ilmu Kefarmasian . 1:117-135. Hart,  H.,  L.  E.  Craine,  D.  J.  Hart.  2003. Kimia Organik, Suatu Kuliah Singkat . Erlangga. Jakarta.
Hidayanto.  2007.  Limbah  Sawit  sebagai Sumber  Pupuk  Organik  dan  Pakan Ternak .  Seminar  Optimalisasi  Hasil Samping  Perkebunan  Kelapa  Sawit dan  Industri  Olahannya  sebagai Pakan Ternak . Samarinda.
Hidayati,  A.  2007. Petunjuk  Praktikum Kimia Analitik Dasar I .

## Laboratorium  Kimia  Dasar  FT  IAIN
Walisongo. Semarang. Mahajoeno,  E.,  W.  L.  Bibiana,  H.  S. Surjono,  Siswanto.  2007.  Potensi Limbah  Cair  Pabrik  Minyak  Kelapa Sawit untuk Produksi Biogas. Biodiversitas . IX (1) : 48-55. Rahardjo,  N.  2005. Permasalahan  Teknis Instalasi  Pengolahan  Air  Limbah Pabrik Minyak Kelapa Sawit . Laporan Teknis. Jakarta. Rohman,  A    dan  Sumantri.  2007. Analisis Makanan .  Gadjah  Mada  University
Press. Yogyakarta. Satria, H. 1999. Disain Instalasi Pengolahan Air  limbah  Industri  Minyak  Kelapa Sawit . Skripsi. Institut  Teknologi Bandung. Bandung.
Underwood,  A.  L.  2001. Analisis  Kimia Kuantitatif . Gramedia Pustaka Utama. Jakarta. Utomo, B. N dan E. Widjaja. 2004. Limbah Padat  Pengolahan  Minyak  Sawit sebagai  Sumber  Nutrisi  Ternak Ruminansia. Jurnal Litbang Pertanian . XXIII (1).