## Efek  Sitotoksik  Ekstrak  dan  Fraksi  Umbi  Paku  Atai  Merah  (Angiopteris ferox Copel) Terhadap Sel Kanker Payudara T47D
(Cytotoxic  Effects  of  Paku  Atai  Merah  (Angiopteris  ferox  Copel)  Tuber  Extract  and Fractions against T47D Breast Cancer Cells)
Andi  Nur  Aisyah 1 ,  Syamsu  Nur 2* , Endang  Lukitaningsih 3 ,  Rumiyati 3 ,  Asril  Burhan 4 , Syafia Mustika Adjara 4 , Kurnia Rahim 2
1 Bagian Farmasetika, Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Makassar, 90242, Indonesia.
2 Bagian Kimia Farmasi, Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Makassar, 90242, Indonesia
3 Departemen Kimia Farmasi, Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, 55281, Indonesia
4 Bagian Biologi Farmasi, Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Makassar, 90242, Indonesia
* E-mail: syamsunur19@gmail.com
Article Info: Received: 20 Agustus 2020 in revised form: 10 September 2020 Accepted: 20 September 2020 Available  Online:  30  September
2020

## ABSTRACT
The  use  of  natural  products  has  been  widely  used  as  a  resource  of  new bioactive  chemical  compounds.  One  of  them  is  the  Paku  Atai  Merah ( Angiopteris ferox Copel) tuber which has long been used empirically by the Dayak tribe of East Kalimantan as an anti-cancer. The purpose of this study was to determine the anticancer cytotoxic activity of the extract and fractions of Paku Atai  Merah tuber against T47D breast  cancer cells in vitro. Extract of  Paku  Atai  Merah  tubers  was  obtained  by  maceration  method  using ethanol  solvent  until  obtained  the  ethanolic  extract  then  fractionated  using various  solvents  to  obtain  n-hexane,  ethyl  acetate,  and  aqueous-ethanol fractions.  The  cytotoxic  effect  was  carried  out  based  on  the  MTT  assay. Phytochemical  screening  tests  showed  positive  results  for  the  presence  of flavonoid,  phenolic,  tannin,  saponin  and  steroid  compounds.  The  results  of the  cytotoxic  activity  study  showed  that  the  ethyl  acetate  fraction  had moderate cytotoxic activity in T47D cancer cells with an IC 50 value  of 84.8 µg/ml.  Ethanol  extract  (513.06  µg/ml)  and  n-Hexane  frsction  (881.97  µg/ ml) were also included in the weak category. This study indicates that ethyl acetate  fraction  can  be  developed  as  a  supportive  therapy  for  breast  cancer treatment.
Keywords : Paku Atai Merah Cytotoxic
Breast Cancer T47D Cell MTT Assay
Corresponding Author: Syamsu Nur Bagian Kimia Farmasi Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Makassar 90242 Indonesia email: syamsunur19@gmail.com
Copyright © 2019 JFG-UNTAD
This open access article is distributed under a Creative Commons Attribution (CC-BY-NC-SA) 4.0 International license.
How to cite (APA 6 th Style):
Aisyah, A. N., Nur, S., Lukitaningsih, E., Rumiyati., Burhan, A., Syafia., Kurnia.. (2020). Efek Sitotoksik dari Ekstrak dan Fraksi  Umbi  Paku  Atai  Merah  ( Angiopteris  ferox Copel)  Terhadap  Sel  Kanker  Payudara  T47D. Jurnal  Farmasi  Galenika :Galenika Journal of Pharmacy (e-Journal), 6 (2), 319-327. doi:10.22487/j24428744.2020.v6.i2.15255
Jurnal Farmasi Galenika (Galenika Journal of Pharmacy) (e-Journal) 2020; 6 (2): 319 – 327 ISSN : 2442-8744 (electronic); 2442-7284 (printed) Journal Homepage: https://bestjournal.untad.ac.id/index.php/Galenika DOI: 10.22487/j24428744.2020.v6.i2.15255

## ABSTRAK
Penggunaan  bahan  alam  telah  banyak  digunakan sebagai  sumber  senyawa  bioaktif  baru. Salah  satunya  adalah  umbi Paku  Atai  Merah  ( Angiopteris  ferox copel)  yang  telah  lama  digunakan  secara  turun  temurun  oleh  suku  Dayak Kalimantan  Timur  sebagi  anti  kanker. Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  aktivitas  sitotoksik  antikanker ekstrak  dan  fraksi  umbi  Paku  Atai  Merah  terhadap  sel  kanker  payudara  T47D  secara  in  vitro.  Ekstrak  umbi Angiopteris ferox Copel  diperoleh dengan metode maserasi  menggunakan pelarut  etanol 96% kemudian difraksinasi menggunakan berbagai pelarut sehingga diperoleh fraksi n-Heksan, etil asetat, dan etanol-air. Uji aktivitas sitotoksik dilakukan  berdasarkan  metode  MTT  assay.  Uji  skrining  fitokimia  menunjukkan  hasil  yang  positif  pada  senyawa golongan  flavonoid,  fenolik,  tanin,  saponin,  dan  steroid.  Hasil  penelitian  aktivitas  sitotoksik  menunjukkan  bahwa fraksi  etil  asetat memiliki aktivitas sitotoksik  dengan kategori  sedang pada sel  kanker T47D dengan nilai  IC 50 (84,8 µg/ml). Ekstrak etanol (513,06 µg/ml) dan fraksi n–heksan (881,97 µg/ml) masuk dalam ketagori lemah. Berdasarkan pada  hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  fraksi  etil  asetat  dapat  dikembangkan  sebagai  terapi  suportif  untuk pengobatan kanker payudara.
Kata kunci: Umbi Paku Atai Merah ( Angiopteris ferox Copel), Sitotoksik, Kanker Payudara, Sel T47D, MTT

## PENDAHULUAN
Kanker merupakan pertumbuhan yang tidak normal dari sel-sel jaringan tubuh yang berubah menjadi ganas (Kemenkes  RI 2016). Kanker atau tumor ganas merupakan salah satu penyakit yang sampai saat ini masih belum dapat ditangani secara tuntas (Lis dkk., 2014). Berdasarkan data GLOBOCAN, international Agency for  Research  on  Cancer  (IARC), Pada  tahun  2012,  kanker  menjadi  penyebab  kematian  sekitar  8,2  juta orang.  Kanker  payudara    menempati  urutan  kelima  kematian  akibat  kanker  secara  keseluruhan  dan sementara  itu  merupakan  penyebab  kematian  yang  paling  sering  terjadi  pada  perempuan  (Kemenkes  RI 2016).    Kanker  payudara  merupakan  gangguan  dalam  pertumbuhan  sel  normal  mammae  dimana  sel abnormal  timbul  dari  sel-sel  normal  berkembang  biak  dan  menginfiltrasi  jaringan  limfe  dan  pembuluh darah (Humaera et al., 2017).
Pengobatan  kanker  pada  umumnya  dapat  dilakukan  dengan  kombinasi  dari  metode  operasi,  penyinaran (radioterapi),  obat  penghambat  sel  kanker  (sitostatika),  obat  peningkat  daya  tahan  tubuh  dan  pengobatan dengan  hormone (Anam et  al., 2014). Terapi  kanker  dapat  dilakukan  dengan menghambat  perkembangan atau membunuh sel kanker melalui pemacuan apoptosis  (Fachreza, 2013) Pengobatan kanker pada pasien dengan  menggunakan  kemoterapi  mempunyai  efek  samping  yang  sangat  kuat  (Utari  K. dkk., 2013). Sehingga  perlu  dikembangkan  obat-obatan  antikanker  yang  rendahnya  efek  samping  seperti  obat-obatan yang berasal dari alam (Nurrochmad et al , 2011).
Penggunaan  bahan  alam  sebagai  obat  kanker  telah  berlangsung  sejak  lama  di  hampir  seluruh  wilayah Indonesia  salah  satunya  yaitu  tumbuhan  paku  yang  merupakan  tumbuhan  asli  Indonesia  yang  memiliki banyak  Khasiat  (Arini and Kinho,  2012).  Pada  masyarakat  Kutai  Barat  di  Kecamatan  Linggang  Bigung Kalimantan Timur telah lama memberdayakan paku atai merah ( Angiopteris ferox Copel) sebagai ramuan yang  diduga  memiliki  potensi  sebagai  antikanker  payudara  dan  sebagai  antiracun.  Bagian  tanaman  yang banyak digunakan berupa umbi, daun, batang, dan getah. Hasil analisis fitokimia ekstrak etanol umbi paku atai  merah  mengandung  golongan  senyawa  kimia  seperti  flavonoid,  alkaloid,  tanin,  saponin  dan  steroid. (Sundu dkk., 2018).
Pada  penelitian yang di lakukan oleh (Nur et al., 2019) menyatakan bahwa ekstrak etanol umbi paku atai merah (Angiopteris  ferox Copel)  memiliki  kadar  antioksidan  yang  kuat  dengan  nilai  IC 50 sebesar  72,3 μg/mL. Selain itu, juga dilaporkan bahwa ekstrak  etanol dari umbi paku atai merah memiliki efek toksik terhadap A.saline dengan  metode  BSLT.  Senyawa  yang  berperan  sebagai  antioksidan  dan  efek  toksik terhadap A.saline diantaranya flavonoid, alkaloid, tanin, dan juga fenolik. Salah satu senyawa antioksidan yang  diduga  memiliki  aktivitas  antikanker  yaitu  flavonoid    yang  bekerja  dengan  cara  penghambatan inaktivasi  karsinogenesis,  inhibisi  siklus  sel,  penghambatan  angiogenesis,  proliferasi  sel  dan  mekanisme apoptosis  (Burhan dkk., 2019).  Berdasarkan  latar  belakang  tersebut  maka  pada  penelitian  ini  dilakukan
pengujian aktivitas sitotoksik ekstrak paku atai merah (Angiopteris ferox Copel ) terhadap sel T47D atau sel kanker payudara secara in vitro dengan metode MTT yang ditunjukkan dengan parameter nilai IC 50 .

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian  yang  digunakan  adalah  tabung  reaksi  (Pyrex®),  batang  pengaduk, cawan porselin, gelas ukur (Pyrex®), erlemenyer, spatel, lampu spiritus, neraca analitik (Mettler Toledo), penjepit  tabung,  rak  tabung, rotary  evaporator (Buchi®), Laminar  Air  Flow (Esco), haemocytometer (Neubauer),  inkubator  (Nesco®),  mikroskop inverted (Olimpus),  mikro  pipet  (Bio  Rad), microplate 96 sumuran/well plate 96 (Iwaki), tabung eppendorf , ELISA reader ( Thermo Fischer Scientific ), vortex mixer (Heidolph), conical tube (Corning), tip mikropipet (Scilogex), botol duran, botol kultur / tissue culture flask ( Nunclone) dan bejana maserasi.
Bahan-bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  yaitu  umbi  paku  atai  merah  ( Angiopteris  ferox Copel), etanol  96%,  etil  asetat,  n-Heksan  (One  Med),  aquades  (One  Med),  aluminium  foil,kertas  lebel,  media Dulbecco’s  modified  eagle  medium (DMEM)  (Gibco), Dimethyl  Sulfoxide (DMSO)  (Merck),  FBS  ( Fetal Bovine  Serum )  (Merck),  MTT  ( 3-(4,5-dimetiliazol-2-il)-2,5-difenil  tetrazolium  bromida )  (Gibco),  PBS ( Phospate  Buffered  Salina ),  SDS  ( Sodium  dodecyl  sulphate )  (Merck),  Penisilin-streptomisin  (Gibco), tripsin EDTA 0,25% (Gibco), asam sulfat (Merck), pereaksi mayer, pereaksi dragendroff, pereaksi wagner, asetat  anhidrat  (Merck),  serbuk  magnesium, kloroform  (JT-Baker),  dan FeCl 3 1%  (Emsure),  asam  klorida (Merck) dan sel uji yang digunakan untuk uji toksisitas  adalah sel WiDr yang diperoleh dari  stok Cancer Chemoprevention Research Center (CCRC) Fakultas Farmasi UGM.

## Metode

## Penyiapan Sampel
Sampel  pada  penelitian  ini  adalah  umbi  paku  atai  merah  yang  diperoleh  di  Kutai  Barat  Kecamatan Linggang  Bigung  Kalimantan  Timur  dengan  kriteria  adalah  pada  bagian  umbi  yang  digunakan  berumur kurang  lebih 2  tahun.  Umbi  paku  atai  merah  yang  diperoleh  kemudian  dilakukan  sortasi  basah  kemudian dicuci di bawah air mengalir. Ditiriskan agar sisa air cucian terbuang kemudian dilakukan perajangan agar proses  pengeringan  berlangsung  lebih  cepat  dan  disebarkan  di  atas  kain  sehingga  air  terserap.  Simplisia dikeringkan dengan cara dijemur di bawah sinar matahari ditutup dengan kain hitam.

## Pembuatan Ekstrak
Umbi paku atai merah yang telah dikumpulkan disortasi basah untuk memisahkan kotoran atau benda asing lainnya  dari  sampel,  lalu  dicuci  menggunakan  air  mengalir  dan  ditiriskan.  Setelah  ditiriskan  dilakukan perajangan  lalu  dikeringkan  dengan  cara  ditempatkan  di  bawah  sinar  matahari  dan  ditutup  kain  hitam sampai  kering.  Simplisia  yang  telah  kering  disortasi  kering  dan  diserbukkan.  Simplisia  kering  yang  telah diserbukkan sebanyak 1,2 Kg diekstraksi menggunakan pelarut etanol 96% sebanyak 5 liter dengan metode maserasi.  Simplisia  dimasukkan  ke  dalam  wadah  maserasi  kemudian  ditambahkan  pelarut  secukupnya untuk  proses  pembasahan  lalu  didiamkan  selama  15-30  menit.  Sisa  pelarut  ditambahkan  hingga  semua simplisia terendam sempurna sambil sesekali diaduk selama 6 jam pertama, kemudian didiamkan di tempat yang terlindung dari cahaya matahari selama 3x24 jam. Hasil yang diperoleh dipisahkan antara residu dan filtrat. Residu diremaserasi kembali dengan pelarut yang sama seperti sebelumnya sampai cairan berwarna bening. Filtrat dikumpulkan kemudian diuapkan dengan rotary evaporator hingga diperoleh ekstrak kental.

## Fraksinasi dengan Metode Ekstraksi Cair-Cair
Ekstrak  kental  umbi  paku  atai  merah  dilarutkan  dalam  campuran  pelarut  etanol:akuades  (1:9).  Campuran dimasukkan ke  dalam  corong pisah,  kemudian  ditambah  pelarut  n-heksan  sebanyak  50  mL,  dikocok kuat dan  didiamkan  hingga  terpisah  sempurna.  Fase  n-Heksan  kemudian  dipisahkan  dan  fase  etanol:akuades
difraksinasi  lagi  dengan  n-Heksan  hingga  larutan  yang  diperoleh  bening.    Fase  etanol:air    kemudian ditambahkan  pelarut  etil  asetat  sebanyak  50  mL  dalam  corong  pisah.  Campuran  dikocok  dan  dibiarkan hingga terbentuk dua lapisan yaitu  fase etil asetat berada pada bagian atas dan  fase etanol:air berada pada bagian  bawah.  Kedua  lapisan  tersebut  dipisahkan.  Fase  etanol:air  yang  diperoleh  difraksinasi  kembali menggunakan  etil  asetat  hingga  larutan  yang  diperoleh  bening.  Masing-masing  filtrat  hasil  fraksinasi diuapkan sehingga diperoleh fraksi heksan, etil asetat dan etanol:air.

## Uji Aktivasi Penghambatan Sel Kanker T47D

## Isolasi dan panen sel kanker panyudara (T47D)
Pembuatan  medium  kultur  dilakukan  dengan  mengacu  pada  metode  (Doyle  &  Bryan,  1998;  Lee  et  al., 2012) yang telah dimodifikasi dengan mencampurkan media DMEM 10% fetal bovie serum (FBS), 2 mM glutamine, dan antibiotik (100 IU/ml penisilin dan 100 mg/ml streptomisin). Sel T47D yang diperoleh dari Cancer  Chemopreventive  Research  Center (CCRC),  dikultur  pada  media  DMEM  lengkap.  Diamati pertumbuhan  sel  dan  tiap  1  hari  media  diganti  dengan  media  DMEM  lengkap.  Setelah  sel  memenuhi permukaan dish atau  konfluen  sekitar  >80%,  dilakukan  panen  sel.  Sel  yang  menempel  pada plate dicuci dengan  media  DMEM.  Selanjutnya  sel  yang  menempel  pada dish dibilas  dengan  menggunakan  larutan tripsin-EDTA dengan tujuan untuk melepaskan sel yang menempel pada dasar dish. Selanjutnya dish yang berisi sel diinkubasi pada suhu 37 0 C selama 5 menit dan diamati hingga sel tidak lagi menempel pada dish . Ditambahkan  5  ml  media  lengkap  pada dish untuk  menginaktifkan  tripsin.  Selanjutnya  suspensi dipindahkan pada conical  tube dan disentrifugasi  pada  suhu  ruang dengan  kecepatan  1000rpm  selama  10 menit.  Supernatan  dibuang,  kemudian  pellet  diresuspensikan  dengan  1  ml  media  lengkap    (Rittié and Fisher, 2005). Sebanyak 10µL sel diambil dan ditransfer ke dalam hemocytometer dan sel dihitung dibawah mikroskop.  Sejumlah  sel  diperlukan  ditransfer  ke  dalam conical steril  yang  lain  dan  ditambah  medium kultur sesuai dengan konsentrasi yang dikehendaki.

## Uji aktivitas proliferasi dengan MTT assay
Sel  yang  telah  dihitung  (2  x  10 4 sel/  sumuran)  kemudian  didistribusikan  pada  sumuran  sesuai  jumlah ekstrak uji (1 sampai 1000 ppm), kontrol positif dan kontrol negatif. Kemudian campuran diinkubasi dalam inkubator yang dialiri CO 2 pada suhu 37 o C selama 24 jam untuk sel beradaptasi dan menempel di sumuran sampai sel siap untuk diberi perlakuan. Setelah akhir masa inkubasi, microplate yang berisi sel diambil dari inkubator  kemudian  dibuang  media  dengan  cara microplate dibalikan  di  atas  tempat  buangan  kemudian plate ditekan untuk meniriskan cairan.  Larutan uji ekstrak yang telah diencerkan dengan media pada 5 seri konsentrasi  yaitu  500;  250;  125; 62,5;  dan  31,25  µg/mL  dan  dimasukan  dalam  sumuran yang  telah  berisi sel  T47D  dimulai  dari  konsentrasi    terkecil  masing-masing  sebanyak  100  μL,  sedangkan  pada  sumuran kontrol  negatif  dimasukan  media  sesuai  sel  yang  digunakan  sebanyak  100  μL  kemudian microplate diinkubasi kembali dalam inkubator yang dialiri CO 2 pada suhu 37 o C selama 24 jam.  Setelah akhir masa inkubasi,  media  sel  dibuang  kembali  dan  reagen  MTT  (3-(4,5- dimetiltiazol -2- il )-2,5- difenil  tetrazolium bromida ) konsentrasi 0,5 mg/ml disiapkan dengan cara sebanyak 1 mL larutan MTT 5 mg/ml ditambahkan media  hingga  10  mL.  Larutan  MTT  didistribusikan  ke  dalam  sumuran  ekstrak  uji,  kontrol  negatif  dan blanko  masing-masing  100  μL, microplate diinkubasikan  kembali  selama  4  jam  dalam  inkubator  yang dialiri  CO 2 pada  suhu  37 o C.  Pada  akhir  inkubasi  ditambahkan stopper SDS sebanyak 100 μL, didiamkan semalaman lalu serapan diukur dengan microplate reader pada panjang gelombang 595 nm. Persentase sel hidup dihitung dari data serapan yang diperoleh (CCRC UGM, 2009; Nurrochmad et al , 2011)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji aktivitas sitotoksik ekstrak etanol umbi paku atai merah ( Angiopteris ferox Copel) terhadap sel kanker T47D secara in vitro dengan metode MTT (3-(4,5- dimetiltiazol -2- il )-2,5- difenil tetrazolium bromida ) yang ditunjukkan  dengan    parameter  nilai  IC 50 telah  dilakukan.  Tahapan  penelitian  dilakukan  dengan  proses
pengolahan sampel, ekstraksi, fraksinasi, uji fitokimia kandungan senyawa dan pengujian aktivitas ekstrak etanol dan fraksi umbi paku atai merah.

## Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  merupakan  salah  satu  cara  yang  dapat  dilakukan  untuk  mengetahui  potensi  tanaman yang  dapat  digunakan  dalam  pengobatan.  Pengujian  ini  dapat  memberikan  hasil  terkait  jenis  golongan metabolit  sekunder  seperti  alkaloid,  flavonoid,  fenolik,  steroid,  saponin  dan  triterpenoid.  Tabel  3 menunjukkan bahwa umbi paku atai merah ( Angiopteris ferox Copel) positif mengandung flavonoid, tanin, saponin, steroid dan fenolik. Berdasarkan penelusuran fitokimia yang telah dilakukan terhadap ekstrak dan fraksi umbi paku atai merah didapatkan hasil pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil uji skrining fitokimia dari esktrak dan fraksi umbi paku atai merah
Uji Ekstrak Etanol Fraksi n-heksan Fraksi Etil Asetat Fraksi Etanol-Air Alkaloid - - - - Flavonoid + - + + Tanin + - + + Saponin + + + + Steroid + + + + Fenolik + + + +
Keterangan : ( +) = Mengandung senyawa, (-) = Tidak terkandung senyawa

## Morfologi sel
Bentuk  morfologi  sel  merupakan  salah  satu  ciri  yang  dapat  dilihat  ketika  sel  mengalami  toksik  ketika adanya perlakuan oleh adanya senyawa atau bahan kimia. Aktivitas sitotoksik sel kanker T47D juga dapat diamati secara mikroskopis untuk melihat morfologi kontrol sel  T47D seperti pada gambar (A), morfologi sel T47D sebelum pemberian sampel pada gambar (B) dan morfologi  sel T47D setelah pemberian sampel seperti  pada  gambar  (C).    Hasil  pengamatan  sel  T47D  menunjukkan  adanya  perbedaan  morfologi  sel sebelum dan setelah adanya perlakuan oleh senyawa.
(A) (B)

## (C)                                                         (D)
Gambar 1. Morfologi Kontrol Sel (A) Sel sebelum adanya perlakuan (B), setelah adanya perlakuan penambahan MTT pada kosentrasi sampel yang tinggi (C), setelah adanya perlakuan penambahan MTT pada kosentrasi sampel yang rendah  (D).
Hasil pengamatan sel T47D dapat dilihat pada gambar terdapat perbedaan morfologi pada sel sebelum dan sesudah  penambahan  ekstrak/fraksi  dan  reagen  MTT.  Pada gambar  1  dapat dilihat  pada  bagian  C  dimana sel dengan konsentrasi tinggi terbentuk kristal formazan yang relative sedikit di bandingkan dengan bagian D  yang  memiliki  konsentrasi  rendah  terbentuk  Kristal  formazan  yang  lebih banyak. Hal  ini  menunjukkan bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  maka  kristal  formazan  yang  terbentuk  semakin  sedikit  artinya  semakin sedikit  sel  yang  hidup.  Hal  ini  terjadi  karena  sel  –  sel  yang  mati  akibat  perlakuan  ekstrak/fraksi, kemungkinan  besar  tidak  memiliki  enzim  mitokondria  reduktase  sehingga  pada  saat  penambahan  reagen MTT tidak mengalami perubahan menjadi kristal formazan (tetap berwarna kuning). Menurut (Kalantzi & Biskos, 2014) kristal formazan tersebut berbentuk kristal tajam yang berwarna hitam.

## Uji Aktivitas sitotoksik dengan metode MTT assay
Uji sitotoksisitas merupakan uji untuk mengetahui kemampuan suatu ekstrak dan fraksi dalam memberikan efek  toksik  pada  sel  dengan  konsentrasi  tertentu.  Salah  satu  metode  umum  yang  digunakan  untuk sitotoksisitas secara in vitro adalah metode MTT. Uji MTT adalah uji kolorimetri untuk mengukur aktivitas metabolisme sel hidup yang dilakukan dengan menambahkan sampel ke dalam setiap well lalu di inkubasi selama  4  jam,  pada  saat  inkubasi  MTT  yang  berwarna  kuning  dengan  kemampuan  nikotinamid adenin dinukleotida fosfat (NADPH) –dependen Enzim oksidoreduktase selule r untuk mengurangi MTT sehingga sel  menjadi  kristal  formazan  berwarna  ungu. Oleh  karena  itu uji  ini digunakan  untuk  mengukur viabilitas sel  dalam  hal  aktivitas  reduktif  sebagai  konversi  enzimatik  dari  senyawa  tetrazolium  untuk  air  kristal formazan  tidak  larut  oleh  dehidrogenase  yang  terjadi  di  mitokondria  (V.  Kuete  et  al.,  2017).  Pada  uji sitotoksisitas  dibuat  larutan  uji  mengunakan  ekstrak  dan  fraksi  umbi  paku  atai  merah  serta  doxorubicin sebagai  kontrol  positif.  Doxorubicin  merupakan  obat  agen  antikanker  yang  digunakan  untuk  pengobatan berbagai  macam  jenis  kanker  seperti  kanker  payudara,  leukimia  akut,  kanker  tulang  dan  kanker  ovarium (CCRC, 2014). Oleh karena itu pada uji sitotoksisitas doxorubicin digunakan sebagai kontrol positif.
Gambar 2. Grafik hubungan antara persentase viabilitas sel kanker T47D terhadap konsentrasi masing-masing sampel. (A) Ekstrak etanol, (B) Fraksi n-Heksan, (C) Fraksi etil asetat, (D) Fraksi etanol air dan (E) Kontrol positif.  Perlakuan dilakukan triplikasi (n=3)
Gambar  2  merupakan  grafik  hubungan  antara  persen  viabilitas  sel  T47D  terhadap  konsentrasi  masing- masing  sampel  uji.  Aktivitas  sitotoksik  ekstrak  dan  fraksi  umbi  paku  atai  merah  terhadap  sel  Hela tergantung  dari  konsentrasi  yang  digunakan,  semakin  tinggi  konsentrasi  larutan  uji  maka  semakin  sedikit kandungan kristal formazan yang terbentuk maka viabilitas sel semakin rendah artinya semakin sedikit sel hidup.  Berdasarkan  hal  tersebut  diperoleh  korelasi  antara  larutan  uji  dengan  efek  sitotoksik  yang menunjukkan pola dose dependent , yaitu semakin tinggi konsentrasi maka  semakin kecil persen viabilitas sel (Ismiyati & Nurhaeni, 2016).
Tabel 2. Nilai IC 50 dari ekstrak dan fraksi terhadap sel T47D
Sampel Konsentrasi (µg/mL) IC 50 31,25 62,5 125 250 500 Ekstrak 95,32±1,68  97,97±1,94  95,68±3,40  96,20±3,47  43,35±2,19  513,06±4,26 Fraksi Heksan 88,65±0,99  88,02±1,70  83,27±0,15  72,12±0,54  69,32±3,06  881,97±8,11 Fraksi Etil Asetat 97,95±0,78  91,50±2,29  51,86±1,41  32,13±1,75  23,13±1,08  84,81±1,92 Fraksi Air-etanol 98,83±1,57  91,73±5,24  85,90±4,32  66,35±0,66  45,02±4,43  434,41±1,61 Doxorubisin IC 50 (µg/mL)= 3,13±1,29
Data  hasil  persen  penghambatan  dan  nilai  IC 50 dari  masing-masing  sampel  diekspresikan  dalam  bentuk  mean±SD (n=3).
Pada  uji  sitotoksisitas  secara  kuantitatif  dibutuhkan  nilai  IC 50, nilai  IC 50 menunjukkan  konsentrasi  yang dibutukan  untuk  dapat  menghambat  pertumbuhan  sel  kanker  T47D  sebesar  50%  dari  total  populasi. Semakin  kecil  nilai  IC 50 maka  semakin  besar  aktivitas  sitotoksiknya.  Penentuan  nilai  IC 50 dihitung berdasarkan regresi  linear antara  konsentrasi  ekstrak  dan  fraksi  umbi  paku  atai  merah  ( Angiopteris  ferox Copel)  dengan  persen  viabilitas  sel.  Tabel  2  merupakan  hasil  penelitian  aktivitas  sitotoksik  yang menunjukkan bahwa fraksi etil asetat memiliki aktivitas sitotoksik pada sel kanker T47D dengan nilai IC 50 (84,81±1,92  µg/ml)  dengan  kategori  sedang  diikuti  oleh  fraksi  etanol  air  (434,41±1,61  µg/ml),  ekstrak etanol (513,06±4,26 µg/ml) dan fraksi n–Heksan (881,97±8,11 µg/ml) yang dikategorikan dengan aktivitas lemah.  Sementara  itu,  nilai  IC 50 dari  kontrol  positif  doxorubicin  diperoleh  nilai  IC 50 sebesar  3,13±1,29 µg/mL  yang  termasuk  dalam  kategori  sitotoksik  kuat.  Menurut  Kuete et  al (2017), Nilai  IC 50 <50  µg/mL dikategorikan  memiliki  efek  sitotoksik  kuat,  jika  nilai  50  -  <200  µg/mL  dikategorikan  sitotoksik  sedang, dan  nilai  200  µg/mL  -  <1000  µg/mL  dikategorikan  memiliki  efek  sitotoksik  lemah  dan  nilai  IC 50 >1000 µg/mL  tidak  memiliki  efek  sitotoksik.  Berdasarkan  pada hasil  penelitian  yang menunjukkan  bahwa  fraksi etil asetat memberikan efek sitotoksik dengan aktivitas sedang. Hal tersebut menunjukkan bahwa fraksi etil asetat  memiliki  aktivitas  yang  lebih  baik  jika  dibandingkan  dengan  lainnya  sehingga  perlu  dilakukan penelusuran lebih lanjut senyawa yang bertanggung jawab.
Beberapa  teori  yang  melaporkan  bahwa  beberapa  golongan  senyawa  yang  berkhasiat  sebagai  anti  kanker seperti  flavonoid  dan  saponin.  Flavonoid  dapat  sebagai  anti  kanker  melalui  mekanisme  pengaktifan  jalur apoptosis  sel  kanker  melalui  proses  fragmentasi  pada  DNA.  Fragmentasi  ini  terjadi  melalui  pelepasan rantai  proksimal  DNA  oleh  senyawa  radikal  seperti  radikal  hidroksil.  Selain  itu,  flavonoid  juga  bekerja dengan menghambat aktivitas protein kinase sehingga jalur transduksi sinyal dari membran ke sel inti akan terhambat  (Woo  &  Kim,  2013).  Selain  itu,  senyawa  tanin  memiliki  efek  antikanker,  dengan  mekanisme pengaktifan  jalur  apoptosis  sel  kanker  akibat  fragmentasi  DNA  (Meiyanto dkk., 2008).  Senyawa  saponin juga  diketahui  dapat  berpotensi  sebagai  antikanker  dengan  menghambat  pembentukan  Bcl-2  yang diekspresikan  terlalu  tinggi,  menginduksi  protein caspase-3 yang  diekspresikan  terlalu  rendah, meningkatkan ekspresi p53, dan dapat pula memicu G1 cellcycle arrest (Raju et al., 2004). Berdasarkan hal tersebut,  sehingga  fraksi  etil  asetat  memungkinkan  dilakukan  pencarian  senyawa  baru  yang  dapat dikembangkan sebagai terapi suportif untuk pencegahan dan pengobatan penyakit kanker payudara.

## KESIMPULAN
Ekstrak dan fraksi dari umbi paku atai merah ( Angiopteris ferox Copel) diperoleh hasil screening fitokimia mengandung  fenolik,  flavonoid,  steroid,  tanin  dan  saponin.  Berdasarkan  hasil  aktivitas  sitotoksik  dari ekstrak  dan  fraksi  umbi  paku  atai  merah  terhadap  sel  kanker  line  T47D  diperoleh  hasil  bahwa  fraksi  etil asetat  memberikan  efek  sitotoksik  yang  sedang  jika  dibandingkan  dengan  ekstrak  dan  fraksi  lainnya sehingga hasil penelitian ini dapat mendukung pencarian senyawa baru yang memiliki aktivitas sebagai anti kanker payudara .

## UCAPAN TERIMAKSIH
Penulis  mengucapkan  terimakasih  kepada  Kementrian  Pendidikan  dan  Kebudayaan  Republik  Indonesia yang memberikan bantuan dana penelitian melalui hibah penelitian kerjasama perguruan tinggi.

## DAFTAR PUSTAKA
Anam, S., Ritna, A., & Dwimurti, F. (2014). Aktivitas Sitotoksik Ekstrak Metanol Benalu Batu ( Begonia sp .):  Ethnomedicine  Suku  Wana  Sulawesi  Tengah  (  Cytotoxic  Activity  of  Benalu  Batu  (  Begonia  sp  .) Methanolic Extract : An Ethnomedicine of Wana Tribe Central Sulawesi ) . 12 (1), 10–16.
Arini, D. I. D., & Kinho, J. (2012). The pteridophyta diversity in Gunung Ambang Nature Reserve North Sulawesi. Info BPK Manado , 2 (1), 17–40.
Burhan,  A.,  Aisyah,  A.  N.,  Awaluddin,  A.,  Zulham,  Z.,  Taebe,  B.,  &  Gafur,  A.  (2019).  Uji  Aktivitas Antioksidan  Dan  Antikanker  Ekstrak  Batang  Murbei  (Morus  Alba  L.)  Terhadap  Sel  Kanker  Widr Secara in Vitro. Kartika : Jurnal Ilmiah Farmasi , 7 (1), 17. https://doi.org/10.26874/kjif.v7i1.173
CCRC UGM. (2009). Prosedur tetap. Uji Kombinasi Dengan Agen Kemoterapi . https://doi.org/10.1109/ICSMC.2011.6084006
Doyle, A., & Bryan, G. J. (1998). Cell and tissue culture: laboratory procedure in biotechnology. In CEUR Workshop Proceedings . https://doi.org/10.1017/CBO9781107415324.004
Fachreza  Erdi  Pratama,  R.  F.  N.  (2013).  Farmaka. Review:  Senyawa  Aktif  Antikanker  Dari  Bahan  Alam Dan Aktivitasnya , 4 , 1–15.
Humaera,  R.,  Mustofa,  S.,  Kedokteran,  F.,  &  Lampung,  U.  (2017).  Diagnosis  dan  Penatalaksanaan Karsinoma  Mammae  Stadium  2  Diagnosis  and  Management  of  Breast  Cancer  Stage  2. Journal Psikologi , 7 (April), 103–107.
Ismiyati,  N.,  &  Nurhaeni,  F.  (2016).  The  Effect  of  Ocimum  sanctum  L  .  Leaves  Ethanolic  Extract  as  A Chemopreventive  Agent  in  HeLa  Cervic  Cancer  Cells  Through  Cytotoxic  Activity  and  Induced Apoptosis. Media Farmasi .
Kalantzi,  O.  I.,  &  Biskos,  G.  (2014).  Methods  for  assessing  basic  particle  properties  and  cytotoxicity  of engineered nanoparticles. In Toxics . https://doi.org/10.3390/toxics2010079
Kemenkes Ri 2016. (n.d.). InfoDatin Bulan Peduli Kanker Payudara_2016.pdf .
Kuete, V., Karaosmanoğlu, O., & Sivas, H. (2017). Chapter 10 - Anticancer Activities of African Medicinal Spices  and  Vegetables (V.  B.  T.-M.  S.  and  V.  from  A.  Kuete  (ed.);  pp.  271–297).  Academic  Press. https://doi.org/https://doi.org/10.1016/B978-0-12-809286-6.00010-8
Lee, H.-J., Lee, J.-Y., Song, K.-C., Kim, J.-H., Park, J.-H., Chun, K.-H., & Hwang, G.-S. (2012). Protective Effect  of  Processed  Panax  ginseng,  Sun  Ginseng  on  UVB-irradiated  Human  Skin  Keratinocyte  and Human Dermal Fibroblast. Journal of Ginseng Research , 36 (1), 68–77.
https://doi.org/10.5142/jgr.2012.36.1.68
Lis, N., Kinho, J., & Tabba, S. (2014). kandungan bahan aktif dan toksisitas tumbuhan hutan asal sulawesi utara  yang  berpotensi  sebagai  obat  (  Active  Ingredients  and  Their  Toxicity  of  Several  Forest  Plant Species  Indigenous  from  North  Sulawesi  Potential  as  Efficacious  Medicine  ). Journal  of  Forest Products Research , 32 (2), 123–124.
Meiyanto, E., Susidarti, R. A., & Handayani, S. (2008). Ekstrak Etanolik Biji Buah Pinang ( Areca catechu L  .)  mampu  menghambat  proliferasi  dan  memacu  apoptosis  sel  MCF-7  Ethanolic  extract  of  Areca catechu seeds inhibit prolifera-. Majalah Farmasi Indonesia, .
Nur, S., Mubarak, F., Jannah, C., Winarni, D. A., Rahman, D. A., Hamdayani, L. A., & Sami, F. J. (2019). Total  phenolic  and  flavonoid  compounds,  antioxidant  and  toxicity profile  of  extract  and  fractions  of paku atai tuber (Angiopteris ferox Copel). Food Research , 3 (6). https://doi.org/10.26656/fr.2017.3(6).135
Nurrochmad et al. (2011). Anti cancer activity of rodent tuber (Thyphonium flagelliforme (lodd.) Blume on human breast  cancer  t47d  cells  . International  Journal of  Phytomedicine  3  (2011)  138-146 . 3 , 138– 146.
Raju, J., Patlolla, J. M. R., Swamy, M. V., & Rao, C. V. (2004). Diosgenin, a steroid saponin of Trigonella foenum graecum  (Fenugreek),  inhibits  azoxymethane-induced  aberrant  crypt  foci  formation  in  F344 rats and induces apoptosis in HT-29 human colon cancer cells. Cancer Epidemiology Biomarkers and Prevention .
Rittié, L., & Fisher, G. J. (2005). Isolation and culture of skin fibroblasts. Fibrosis Research: Methods and Protocols , 83–98.
Sundu,  Reksi,  &  Handayani,  F.  (2018).  uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  umbi  paku  atai  merah ( Angiopteris ferox Copel) terhadap Propionibacterium acnes. Jurnal Medical Sains , 2 (2), 75–82.
Utari K., E. N. tri, A., I. S., , Rafi ka Sari., W. A. K., & Harti, A. (2013). Kegunaan Daun Sirsak ( Annona Muricata L ) untuk Membunuh Sel Kanker dan Pengganti Kemoterapi. KesMaDaSka , 1–6.
Woo, H. D., & Kim, J. (2013). Dietary flavonoid intake and risk of stomach and colorectal cancer. World Journal of Gastroenterology . https://doi.org/10.3748/wjg.v19.i7.1011