POLA ISOZIM LACTATE DEHYDROGENASE (LDH) HATI PADA HIPOKSIA SISTEMIK KRONIK: HUBUNGANNYA DENGAN METABOLISME GLUKOSA
Agus Evendi
Jurusan Analis Kesehatan Poltekkes Kemenkes Kaltim
Abstrak. Hipoksia  adalah  kondisi    suplai  oksigen  yang  tidak  mencukupi  keperluan sel,  jaringan  atau  organ.  Sebagai  respon  terhadap  hipoksia,  terjadi  peningkatan glikolisis  anaerob  yang  ditandai  dengan  peningkatan  enzim  laktat  dehidrogenase (LDH).    Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mempelajari  konsumsi  glukosa,  aktivitas spesifik  LDH  dan  pola  isozim  LDH  pada  kondisi  hipoksia  sistemik  kronik.  Penelitian dilakukan  terhadap  hati  tikus  yang  diinduksi  hipoksia  sistemik  kronik  1,  3,  7  dan  14 hari.  Konsumsi  glukosa  diukur  dengan  metode  enzimatik  Trinder.  Aktivitas  spesifik LDH  diukur  dengan  metode German  Society  of  Clinical  Chemistry (DGKC).  Pola isozim LDH dianalisis dengan elektroforesis Titan Gel . Hasil penelitian menunjukkan bahwa  konsumsi  glukosa  pada  hipoksia  sistemik  kronik  cenderung  meningkat walaupun  tidak  berbeda  dengan  kontrol.  Aktivitas  spesifik  LDH  ditemukan  paling tinggi  pada  hipoksia  3  hari  sedangkan  pola  elektroforesis  isozim  LDH  menunjukkan perbedaan  pada  hari  ke-3  dan  ke-7  hipoksia  dengan  kontrol.  Tidak  terdapat hubungan antara konsumsi glukosa dengan aktivitas spesifik LDH.
Kata Kunci : Hipoksia, glukosa,   LDH, elektroforesis
Abtract. Hypoxia is a  condition of the supply of oxygen is insufficient for cell, tissue or  organ.  In  response  to  hypoxia,  an  increase  in  anaerobic  Glycolysis  which  is characterized by an increase in the enzyme lactate dehydrogenase (LDH).The aim of this  study  was  to  observe  glucose  consumption,  specific  activity  of  LDH  and electrophoretic LDH isoenzyme patterns on systemic chronic hypoxia. The study was carried  out  with  liver  tissue  of  rats  exposed  to  systemic  hypoxia  for  1,  3,  7  and  14 days. Glucose consumption was measured by Trinder method. The specific activity of LDH  was  performed  using German  Society  of  Clinical  Chemistry (DGKC)  method, while  LDH  isoenzyme  patterns  were  analyzed  using Titan  Gel electrophoresis. Results  indicated  that  glucose  consumption  showed  tendencies  to  increase compared to control group, although the difference were not significant. The specific activity of LDH was highest on day 3 of the hypoxic group. Electrophoretic patterns of LDH isoenzyme showed differences on day 3 and day 7 of hypoxia with control. It is concluded that glucose consumption is not related to specific activity of LDH.
Key words: hypoxia, glucose, LDH,  elecrophoresis

## PENDAHULUAN
Hipoksia  merupakan  suatu  kondisi dimana  suplai  oksigen  tidak  mencu- kupi untuk keperluan sel, jaringan atau organ.  Oksigen  diketahui  merupakan akseptor elektron terakhir dalam rantai transport  elektron.  Bila  oksigen  tidak mencukupi, transport  elektron menjadi terganggu, terjadi deplesi ATP sehing- ga kebutuhan energi tidak dapat dipe- nuhi.  Oleh  karena  pembentukan  ATP dalam  keadaan  hipoksia  harus  diper-
tahankan,  maka  metabolisme  akan beralih ke glikolisis anaerob.
Selama lebih dari satu dekade ter- akhir,  pemahaman  mengenai  meka- nisme  adaptasi  terhadap  hipoksia  pa- da  level  molekuler  telah  jauh  berkem- bang. Sebagai respon terhadap hipok- sia, terjadi peningkatan glikolisis anae- rob yang ditandai dengan peningkatan enzim  laktat  dehidrogenase  (LDH) (Lee,2004).
Selain  menyebabkan  peningkatan LDH,  hipoksia  juga  menyebabkan  pe-

## PENELITIAN
ningkatan HIF. Hypoxia Inducible Fac- tor merupakan molekul protein hetero- dimer,  terdiri  dari  subunit  α  dengan berat  molekul  120  kDa  yang  sensitif terhadap  perubahan  kadar  oksigen dan  subunit  β  dengan  berat  molekul 91-94  kDa  yang  merupakan  protein konsitutif.  HIF-1α  merupakan  protein yang labil karena pada kondisi normal HIF-1α didegradasi oleh sistem ubikitin proteasom  dan  mengalami  stabilisasi sebagai  respon  terhadap  hipoksia (Bartrons,2007). Agar  aktif,  HIF-1α harus  membentuk  kompleks  dengan HIF-1β,  dan  bertranslokasi  ke  inti  un- tuk  kemudian  berikatan  dengan hy- poxia  response  element (HRE)  pada promoter  gen  sasaran  HIF-1  dan menginisiasi ekspresi gen. Banyak gen yang  terlibat  dalam uptake glukosa dan  glikolisis ternyata  merupakan  gen sasaran  dari  HIF-1α.  HIF-1α  mere- gulasi  ekspresi  gen Glucose  Trans- porter (GLUT)  serta  LDH  (Semenza,
2007).  Pada  kondisi  hipoksia,  pe- ningkatan  ekspresi  gen  GLUT  akan meningkatkan  jumlah  GLUT  sehingga akan  menyebabkan  peningkatan up- take glukosa,  yang  merupakan  salah satu  mekanisme  untuk  memenuhi kebutuhan  ATP.  Pada  kondisi  hipoks- ia,  peningkatan  ekspresi  gen  LDH akan  meningkatkan  pembentukan  lak- tat,  oleh  karena  itu  laktat  sering  digu- nakan sebagai petanda hipoksia (Pathak,2005). Ada  dua  jenis  subunit LDH  yang  berbeda  pada  organisme yaitu  subunit  H  terutama  dihasilkan  di otak  dan  otot  jantung  dan  subunit  M terutama  dihasilkan  di  hati  dan  otot skeletal,  yang  disandi  oleh  gen  ber- beda  dan  sebagai  konsekuensinya masing-masing organ mempunyai karakteristik pola LDH.
Pada kondisi hipoksia terjadi penu- runan  ATP.  Untuk  mengatasinya,  me- tabolisme  beralih  menjadi  anaerob. Pada metabolisme anaerob, terjadi pe- ningkatan uptake glukosa dan pening- katan  aktivitas  LDH.  Hati  merupakan organ  yang  sangat  aerob  dengan fungsi  yang  sangat  vital.  Berdasarkan latar  belakang  yang  telah  diuraikan  di atas  maka  yang  menjadi  perumusan masalah  adalah  apakah  terjadi  peru- bahan metabolisme pada jaringan hati tikus yang diinduksi hipoksia sistemik?
Tujuan umum penelitian ini  adalah mempelajari proses glikolisis dalam ja- ringan  hati  tikus  yang  mengalami hipoksia  sistemik.  Adapun  tujuan  khu- susnya  adalah  membandingkan  kon- sumsi  glukosa  antara  jaringan  hati  ti- kus hipoksia dengan normoksia, mem- bandingkan  aktivitas  enzim  LDH  anta- ra  jaringan  hati  tikus  hipoksia  dengan normoksia,  membandingkan  pola  iso- enzim  LDH  antara  jaringan  hati  tikus hipoksia dengan normoksia dan meng- analisis  hubungan  antara  konsumsi glukosa, aktivitas LDH dan pola isozim LDH  pada  jaringan  hati  tikus  hipoksia dan normoksia

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  dilakukan  dengan cara  eksperimen in  vivo pada  hewan coba  tikus.  Bahan  yang  diperiksa  dari hewan  coba  adalah organ  hati.  Organ hati  diperoleh  dari  5  kelompok  tikus perlakuan,  yaitu:  kelompok  hipoksia  1 hari, kelompok hipoksia 3 hari, kelom- pok hipoksia 7 hari, kelompok hipoksia 14 hari dan kelompok kontrol (normoksia).
Penelitian  dilakukan  di  Laborato- rium  Departemen  Biokimia  dan  Bio- logi  Molekuler,  Fakultas  Kedokteran Universitas  Indonesia,  Jalan  Salemba
Raya  No.  6,  Jakarta  Pusat.  Penelitian berlangsung  sekitar  6  bulan,  mulai bulan  Juli  2009  sampai  dengan Desember 2009.
Penelitian  ini  menggunakan hewan  coba  tikus  putih  ( Rattus norvegicus  L. )  galur Sprague  Dawley jantan  yang  berusia  6  minggu dengan berat  antara  130-200g.  Etik  penelitian diperoleh  dari  Departemen  Kesehatan R.I.  Badan  Penelitian  dan  Pengem- bangan Kesehatan No. : LB.03.02/KE/ 4783/08. Perlakuan  hipoksia  diberikan selama  1,  3,  7  dan  14  hari.  Setelah perlakuan  tikus  di euthanasia dengan menggunakan  eter,  dan  jaringan  hati- nya  diambil  melalui  pembedahan.  Ja- ringan hati hasil perlakuan hipoksia ini, bila  tidak  langsung  dikerjakan  disim- pan di deep freezer bersuhu -86 o C. Jaringan hati dikeluarkan dari deep freezer -86 o C  dan  suhu  sekitar  ja- ringan  tetap  dijaga  4 o C  dengan  mele- takkan  es  kering  di  sekitar  jaringan. Kemudian  jaringan  hati  ditimbang  se- banyak  0,1  gram  dan  dimasukkan  ke dalam microtube .  Proses  pembuatan homogenat  dilakukan  dengan  meng- gunakan micro  homogenizer dalam kondisi dingin (dalam es). Jaringan ke- mudian  ditambah  larutan  dapar  fosfat 0,1M  pH  7,4  sebanyak  0,5  mL. Endapan  dipisahkan  dengan  sentry- fugasi  pada  suhu  4 o C,  5000  rpm, selama  10  menit.  Kemudian  super- natan diambil dan disimpan pada suhu -4 o C (homogenat hati).
Penentuan  kadar  protein  homo- genat  hati  menggunakan  metode Warburg-Christian.  Masing-masing  la- rutan  BSA  (standar  protein)  dibuat dalam  berbagai  kadar  (0,1mg/mL,
0,2mg/mL, 0,3mg/mL, 0,4mg/mL, 0,5mg/mL, 0,6mg/mL, 0,7mg/mL 0,8mg/mL,  0,9mg/mL  dan  1mg/mL).
Masing-masing  kadar  larutan  BSA dibaca  serapannya  pada  λ  280  nm. Hasil  serapan  masing-masing  kadar larutan BSA dibuat menjadi satu kurva standar  dengan  menggunakan  kadar larutan  BSA  sebagai  sumbu  x  dan serapan sebagai sumbu y.
Sebanyak 5 μL homogenat hati di- tambahkan  akuabides  hingga  volume akhir 1000 μL. Tiap larutan homogenat hati  dibaca  serapannya  pada  λ  280 nm. Jika serapan homogenat hati me- lebihi  serapan  kadar  standar,  maka dilakukan  pengenceran  dengan  akua- bides.  Kadar  protein  homogenat  hati diukur  berdasarkan  serapan  homoge- nat hati dan kurva standar. Nilai kadar protein  homogenat  hati  yang  dihasil- kan  kemudian  dikalikan  dengan  pe- ngenceran.
Pengukuran  kadar  glukosa  homo- genat  hati  menggunakan  metode  en- zimatik  TRINDER.  Sebanyak  100  µL homogenat  hati  ditambah  100  µL  glu- kosa  (50mg/dL).  Campuran  ini  kemu- dian  divorteks  dan  diinkubasi  pada suhu  ruang  selama  10  menit.  Kemu- dian  campuran  ini  ditambah  10  µL  la- rutan  TCA  8%  dan  divorteks  lagi  dan disentrifugasi  dengan  kecepatan  3000 rpm  selama  10  menit.  Supernatan diambil  untuk  pemeriksaan  selanjut- nya, sedangkan endapannya dibuang.
Sebanyak 10 µL supernatan diam- bil  dan  ditambahkan  1000  µL  rea- gensia  warna.  Campuran  ini  divorteks dan di inkubasi pada suhu ruang sela- ma  10 menit.  Untuk  blanko,  sebanyak 10  µL  akuabides  diambil  dan  ditam- bahkan  1000  µL  reagensia  warna. Campuran ini divorteks dan di inkubasi pada  suhu  ruang  selama  10  menit. Untuk standar, sebanyak 10 µL larutan glukosa  standar  (200  mg/dL)  diambil dan  ditambahkan  1000  µL  reagensia
warna.  Campuran  ini  divorteks  dan  di inkubasi  pada  suhu  ruang  selama  10 menit.  Masing-masing  sampel  dilaku- kan  dua  pengukuran  (duplo).  Serapan diukur  dengan  menggunakan  spektro- fotometer pada λ 507nm.
Perhitungan  kadar  glukosa  dilaku- kan  duplo  untuk  tiap  sampel.  Hasil kemudian  dirata-ratakan  untuk  tiap sampel  yang  sama  dan  penghitungan kadar  glukosa  dengan  menggunakan rumus :
Kadar glukosa(mg/dL) =  Serapan uji x 200 mg/dL

## Serapan standar
Pengukuran  aktivitas  LDH  homo- genat  hati  menggunakan  metode German  Society  of  Clinical  Chemistry (DGKC).  Sebanyak  10  µL  homogenat hati  ditambah  500  µL  monoreagen, kemudian  campuran  di  kocok-kocok. Masing-masing  sampel  dilakukan  dua pengukuran  (duplo).  Serapan  diukur dengan  menggunakan  spektrofoto- meter pada λ 340 nm. Serapan dibaca setelah  1  menit  dan  serapan  dibaca lagi setelah 1, 2 dan 3 menit.
Perhitungan  aktivitas  LDH  dilaku- kan duplo untuk tiap sampel. Hasil ke- mudian  dirata-ratakan  untuk  tiap  sam- pel yang sama dan penghitungan akti- vitas  LDH  dengan  menggunakan rumus :
Aktivitas LDH (U/L) =   ∆ serapan uji  x 8095 Menit
Isozim  LDH  dipisahkan  berdasar- kan  pergerakannya  dalam  agarose menggunakan metode  TITAN GEL LD Isoenzyme .
Uji  satistik  dilakukan  dengan  ban- tuan  program statistic  computer yaitu SPSS  12.0.  Urutan  uji  diawali  dengan
uji  normalitas  dan  homo-genitas.  Eva- luasi  perbedaan  antara  dua  kelompok yakni  kelompok  jaringan  hati  tikus normoksia dan jaringan hati tikus yang diinduksi  hipoksia  sistemik  kronik menggunakan ANOVA

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Telah  dilakukan  penelitian  terha- dap  kadar  glukosa,  aktivitas  LDH  dan pola  isozim  LDH  jaringan  hati  tikus normoksia dan jaringan hati tikus yang diinduksi hipoksia sistemik kronik.
Konsumsi  glukosa  jaringan  hati  ti- kus  normoksia  dan  jaringan  hati tikus  yang  diinduksi  hipoksia  sis- temik kronik
Dari  perhitungan  didapatkan  se- baran  nilai  pada  konsumsi glukosa ja- ringan hati tikus normoksia dan jaring- an  hati  tikus  yang  diinduksi  hipoksia sistemik kronik 1 hari, 3 hari, 7 hari, 14 hari, seperti ditampilkan pada Tabel 1.
Setelah  dilakukan  analisis  statistik menggunakan  uji  Saphiro-Wilk,  dida- pat  data  bahwa  konsumsi  glukosa berdistribusi  normal  (p>0,05).  Karena data  berdistribusi  normal  maka  ana- lisis  statistik  parametrik  dapat  dilaku- kan.  Analisis  parametrik  yang  diguna- kan  adalah  ANOVA  dan  didapat  hasil tidak berbeda bermakna antara kelom- pok perlakuan (p>0,05).
Meskipun secara statistik tidak me- nunjukkan perbedaan yang bermakna, namun  Tabel  1.  memperlihatkan  bah- wa  konsumsi  glukosa  pada  kelompok hipoksia  1  hari,  3  hari  dan  14  hari menunjukkan  konsumsi  glukosa  yang lebih  tinggi  dibanding  kelompok  nor- moksia, namun lebih rendah konsumsi glukosanya pada kelompok hipoksia 7 hari.
Tabel  1.  Konsumsi  glukosa  jaringan  hati  tikus  (g/mg  jaringan)  kelompok normoksia  dan  jaringan  hati  tikus  yang  diinduksi  hipoksia  sistemik kronik
Peningkatan  konsumsi  glukosa yang tidak berbeda bermakna ini didu- ga  diduga  adanya  sumber  energi  lain yang  digunakan  untuk  menghasilkan energi, seperti oksidasi beta pada me- tabolisme asam lemak.
Aktivitas  LDH  jaringan  hati  tikus yang  diinduksi  hipoksia  sistemik kronik  dan  jaringan  hati  tikus  nor- moksia
Penetapan aktivitas LDH dilakukan berdasarkan  protein  jaringan,  oleh  ka-
rena  itu  dilakukan  pemeriksaan  kadar protein jaringan hati.

## Perhitungan  kadar  protein  jaringan hati
Perhitungan  protein  jaringan  dila- kukan  pada  tiap  sampel  berdasar-kan kurva  standar  dengan  meng-gunakan Bovine  Serum  Albumin (BSA)  dengan kadar  0,1;  0,2;  0,3;  0,4;  0,5;  0,6;  0,7; 0,8; 0,9 dan 1 mg/mL (Gambar 1).
Gambar 1. Kurva standar protein Bovine Serum Agar (BSA)

## Kurva protein Standar
y = 0.699x - 0.0177 R 2 = 0.9988 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1
1.2
Kadar (ug/mL) S e ra p a n
Ulangan Normoksia Hipoksia 1 hari 3 hari 7 hari 14 hari 1 2.87 1.90 1.90 1.97 2.52 2 2.35 2.09 2.13 2.28 2.56 3 1.80 2.43 2.02 1.75 2.36 4 1.59 1.76 2.26 1.55 2.33 5 1.06 2.09 2.29 1.81 1.80 Mean±SE 1.93±0.31 2.05±0.11  2.12±0.07 1.87±0.18 2.31±0.13
Dari  persamaan  yang  didapat  dan setelah  dikoreksi  dengan  pengencer- an yang dilakukan, didapat kadar pro- tein  jaringan  hati  (mg/mL)  pada  ma- sing-masing sampel seperti Tabel 2.

## Perhitungan aktivitas LDH
Perhitungan  aktivitas  LDH  dilaku- kan  duplo  untuk  tiap  sampel  dan  ke- mudian  dihitung  aktivitas  spesifiknya per miligram protein. Dari perhitungan tersebut  didapatkan  sebaran  nilai yang  dapat dilihat pada Tabel 3.
Analisis  statistik  terhadap  aktivitas spesifik  LDH  jaringan  hati  menggu- nakan  uji  Saphiro-Wilk  menunjukkan bahwa data berdistribusi normal (p>0,05).  Oleh  karena  data  berdis-
tribusi  normal  maka  analisis  yang  da- pat  dilakukan  adalah  analisis  para- metrik.  Uji  parametrik  yang  dilakukan adalah  uji  ANOVA  untuk  menguji kemaknaan  suatu  kelompok  perla- kuan. Uji ini menunjukkan adanya per- bedaan bermakna antar semua kelom- pok  perlakuan  (p<0,05).  Selanjutnya untuk  mengetahui  kelompok  mana saja  yang  saling  berbeda  bermakna dilakukan uji LSD.
Tabel  3.  menunjukkan  bahwa  ter- dapat perbedaan yang bermakna akti- vitas spesifik LDH antar kelompok per- lakuan.  Tampak  bahwa  pada  awal hipoksia  (kelompok  hipoksia  1  hari), aktivitas spesifik LDH langsung menu-
Tabel  2.  Kadar  protein  jaringan  hati  tikus  (mg/mL)  kelompok  normoksia
dan yang diinduksi hipoksia sistemik Ulangan Perlakuan Normoksia (Kontrol) Hipoksia 1 hari Hipoksia 3 hari Hipoksia 7 hari Hipoksia 14 hari 1 48.84 39.54 55.42 48.27 54.99 2 55.99 42.69 52.99 37.83 41.40 3 51.56 42.69 51.13 45.55 42.55 4 57.14 45.84 52.99 46.55 42.55 5 58.43 43.98 44.41 48.56 53.71 Mean ± SE 54.39±1.81 42.95±1.03 51.39±1.87 45.35±1.96 47.04±3.00 Tabel  3.  Aktivitas  spesifik  LDH  jaringan  hati  tikus  (U/μg  protein) kelompok kontrol dan yang diinduksi hipoksia Perlakuan Normoksia (Kontrol) Hipoksia 1 hari 3 hari 7 hari 14 hari 1 0.80 0.72 0.66 0.64 0.32 2 0.72 0.70 0.99 0.46 0.55 3 0.60 0.57 1.11 0.44 0.54 4 0.71 0.44 1.27 0.46 0.48 5 0.76 0.64 1.06 0.31 0.50 Mean ± SE 0.72±0.03 0.61±0.05  1.02±0.10 0.46±0.05 0.48±0.04
run  secara  tidak  bermakna  dibanding kelompok  normoksia.  Hal  ini  menun- jukkan  sel  masih  dapat  beradaptasi terhadap  kondisi  hipoksia.  Aktivitas spesifik  LDH  tertinggi  terjadi  pada kelompok  hipoksia  3  hari,  meningkat secara  bermakna  dibanding  kelompok normoksia dan  hipoksia 1  hari.  Hal  ini diduga  pada  kondisi  hipoksia  3  hari terjadi  peningkatan  ekspresi  HIF1 yang menyebabkan peningkatan regu- lasi  ekspresi  gen  LDH.  Hal  ini  didu- kung  oleh  hasil  penelitian  Sadikin,  A. H.  (2008),  pada  hasil Western  Bolt yang  memperlihatkan  adanya  pening- katan  ekspresi  HIF1  yang  signifikan dari  kelompok  normoksia  dibanding kelompok  hipoksia  3  hari. Aktivitas spesifik LDH kelompok hipoksia 7 hari dan 14 hari mengalami penurunan se- cara  bermakna  dibanding  kelompok normoksia.  Hal  ini  menunjukkan  ada- nya penurunan aktivitas spesifik enzim LDH sejalan dengan lamanya hipoksia yang  diduga  adanya  apoptosis  sel. Ferdinal  (2008),  menyatakan  bahwa pemaparan  hipoksia  secara  terus  me-
nerus  dapat menyebabkan  kondisi  sel menurun, bahkan dapat menyebabkan terjadinya apotosis.
Analisis hubungan antara konsumsi glukosa  dengan  aktivitas  spesifik LDH  LDH  jaringan  hati  tikus  yang diinduksi  hipoksia  sistemik  kronik dan jaringan hati tikus normoksia
Konsumsi  glukosa  jaringan  hati antara kelompok normoksia, kelompok hipoksia  1  hari,  3  hari,  7  hari  dan  14 hari  tidak  menunjukkan  perbedaan yang  bermakna  dan  cenderung  kons- tan.  Glukosa  merupakan  substrat  da- lam  glikolisis  yang  menggambarkan aktivitas  LDH.  Jika  peningkatan  LDH yang ditimbulkan akibat hambatan alir- an  elektron  di  mitokondria  dalam  kon- disi hipoksia.
Pada  kelompok  hipoksia  hari  per- tama  aktivitas  spesifik  LDH  menurun, sedangkan konsumsi glukosa mening- kat  secara  tidak  bermakna  dibanding dengan  kelompok  normoksia.  Hal  ini menunjukkan  sel  masih  dapat  ber- adaptasi terhadap kondisi hipoksia.
Gambar  2.  Perbandingan  konsumsi  glukosa  dengan  aktivitas spesifik  LDH  pada  jaringan  hati  tikus  kelompok normoksia dan yang diinduksi hipoksia sistemik kronik
Hubungan antara konsumsi glukosa dengan aktivitas spesifik LDH 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 1 2 3 4 5 lama hipoksia (hari) Konsumsi glukosa (ug/mg jaringan) Aktivitas spesifik LDH (U/ug protein)
Pada  kelompok  hipoksia  hari  ke-3 aktivitas  spesifik  LDH  meningkat  se- cara  bermakna  dibandingkan  kelom- pok normoksia dan kelompok hipoksia 1  hari,  sedangkan  konsumsi  glukosa meningkat  secara  tidak  bermakna  di- banding  kelompok  normoksia  dan  ke- lompok  hipoksia  1  hari.  Hal  ini  meng- gambarkan  bahwa  sel  menggunakan sumber  energi  lain  selain  dari  peme- cahan  glukosa  (glikolisis),  seperti energi  dari  oksidasi  beta  pada  meta- bolisme  asam  lemak  yang  berakibat konsumsi  glukosa  tidak  banyak  ber- ubah.
Pada  kelompok  hipoksia  hari  ke-7 dan  hari  ke-14  aktivitas  spesifik  LDH semakin  menurun  secara  bermakna dibanding  kelompok  normoksia  se- dangkan  konsumsi  glukosa  menurun secara  tidak  bermakna  dibanding  ke- lompok normoksia.
Untuk  mengetahui  adanya  kore- lasi  antara  konsumsi  glukosa  dengan aktivitas  spesifik  LDH  jaringan  hati, dilakukan  uji  korelasi.  Karena  kedua data  berdistribusi  normal,  maka  uji korelasi  yang  digunakan  adalah  uji korelasi Pearson. Dari hasil uji korelasi Pearson  tidak  didapatkan  adanya  ko- relasi  antara  konsumsi  glukosa  de- ngan aktivitas spesifik LDH, hasil yang ditunjukkan  pada  Gambar  2  menun- jukkan  bahwa  stabilnya  konsumsi  glu- kosa  tidak  ada  hubungannya  dengan aktivitas spesifik LDH.
Elektroforesis isozim LDH jaringan  hati  tikus  yang  diinduksi hipoksia sistemik kronik dan
jaringan hati tikus normoksia
Hasil  elektroforesis  menunjuk-kan adanya  5  isozim  LDH  (LDH5,  LDH4, LDH3,  LDH2  dan  LDH1)  baik  pada jaringan  hati  tikus  yang  di-induksi
hipoksia  sistemik  kronik  mau-pun jaringan hati tikus normoksia (Gambar 3).
Gambar  3  menunjukkan  bahwa isozim  LDH1  bermigrasi  paling  cepat ke  arah  kutub  positif  sedangkan  iso- zim LDH5 bermigrasi paling lambat ke arah  kutub  positif  pada  elektroforesis isozim  LDH  jaringan  hati  tikus  yang diinduksi  hipoksia  sistemik  kronik maupun jaringan hati tikus normoksia. Hal  ini  karena  isozim  LDH1  mengan- dung  lebih  sedikit  residu  asam  amino bersifat  basa  dan  lebih  banyak  me- ngandung asam amino dengan residu bersifat  asam  sehingga  bermu-atan negatif  daripada  isozim  LDH5.  Pola distribusi  isozim  LDH  tetap  sama  dan selalu  didominasi  oleh  isozim  LDH5 dan  LDH4  diikuti  dalam  jumlah  kecil isozim LDH3, LDH2 dan LDH1.
Nilai bercak masing-masing isozim LDH  jaringan  hati  tikus yang  diinduksi hipoksia  sistemik  kronik  maupun jaringan  hati  tikus  normoksia,  seperti ditampilkan pada Tabel 4.
Tabel  4. menunjukkan  bahwa  nilai bercak  isozim  LDH5  cenderung  lebih tinggi  dibanding  keempat  isozim  LDH lainnya,  baik  pada  kelompok  normok- sia  maupun  hipoksia.  Nilai  bercak seluruh  isozim  LDH  (LDH5,  LDH4, LDH3, LDH2 dan LDH1) pada kelompok hipoksia 1 hari lebih rendah dibanding  kelompok  normoksia,  na- mun pada kelompok hipoksia 3 hari, 7 hari  dan  14  hari  hanya  isozim  LDH5, LDH4 dan LDH3 yang nilai bercaknya lebih  rendah  dibanding  kelompok  nor- moksia,  isozim  LDH2  dan  LDH1  nilai bercaknya  lebih  tinggi  dibanding  ke- lompok  normoksia.  Isozim  LDH2  nilai bercaknya  paling  tinggi  pada  kelom- pok hipoksia 3 hari, sedangkan isozim
LDH1  nilai  bercaknya  paling  tinggi pada kelompok hipoksia 7 hari. Isozim
LDH2  dan  LDH1  merupakan  isozim yang masing-masing mempu-nyai subunit  H3M1  dan  H4  yang  be-kerja optimal  mengkonversi  laktat  menjadi
piruvat  dalam  kondisi  aerob.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  adanya  usaha dari  tubuh  di  jaringan  hati  dalam kondisi cukup oksigen untuk menghasilkan energi. Sumur Arah migrasi
LDH5
LDH4 LDH3 LDH2
LDH1
Gambar  3.  Elektroforesis  isozim  LDH  jaringan  hati  tikus.  Sumur  1  (normoksia  1), sumur 2 (normoksia 2), sumur 3 (hipoksia 1 hari), sumur 4 (hipoksia 3 hari), sumur 5 (hipoksia 7 hari), dan sumur 6 (hipoksia 14 hari)
Tabel  4.  Rata-rata  nilai  bercak  isozim  LDH  (pixel.  mg/dL)  tikus  yang  diinduksi hipoksia sistemik kronik maupun jaringan hati tikus normoksia
Isozim Normoksia Hipoksia 1 hari 3 hari 7 hari 14 hari LDH5 95.95 83.23 88.45 82.95 90.18 LDH4 93.86 63.69 67.64 64.14 69.40 LDH3 39.89 35.29 39.15 36.44 38.67 LDH2 25.22 24.79 32.17 30.95 27.43 LDH1 13.98 12.91 15.55 18.26 14.92

## KESIMPULAN DAN SARAN
Kesimpulan penelitian ini adalah ti- dak  ada  perbedaan  yang  bermakna terhadap  peningkatan  konsumsi  glu- kosa  pada  kelompok  hipoksia  dengan kelompok  normoksia.  Ada  perbedaan yang bermakna terhadap aktivitas spe- sifik  LDH  pada  kelompok  hipoksia dengan kelompok normoksia. Aktivitas spesifik  LDH  tertinggi  terjadi  pada  ke- lompok  hipoksia  3  hari.  Tidak  ada  hu- bungan  bermakna  antara  konsumsi glukosa dengan aktivitas spesifik LDH. Hasil  elektroforesis  menunjukkan  ter- dapat  isozim  LDH5,  LDH4,  LDH3, LDH2  dan  LDH1  pada  jaringan  hati tikus  kelompok  hipoksia  dan  normok- sia serta mempunyai pola isozim yang sama.
Diharapkan  dapat  melakukan  pe- nelitian  selanjutnya  dengan  menggu- nakan  jaringan  lain  yang  bergantung metabolismenya terhadap oksigen, se- perti  otak,  sehingga  dapat  dibanding- kan mekanisme adaptasi metabolisme anaerobnya

## DAFTAR PUSTAKA
Lee,  J.W.  2002. Hypoxia-Inducible Factor  (HIF-1α):  Its  Protein  Sta- bility  and  Biological  Functions. Exp. Mol. Med, 36: 1-12. Bartrons,  R.,  Can,  J.  2007. Hypoxia,
glucose metabolism and the warburg’s effect. J. Bioenerg
Biomembr, 39: 223-229. Semenza,  G.L.  2007. HIF-1  mediates the  Warburg  effect  in  clear  cell renal carcinoma. J. Bioenerg Biomembr, 39: 231-234.
Stryer,  L.  2000. Biokimia. Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Pathak,  J.W.,  Vinayak,  M.  2005.
Modulation  of  lactate  dehydro-
genase isozymes by modified base queuine .  Molecular  Biology  Re- ports, 32: 191-196. Wenger,  R.  2002. Cellular  Adaptation to  Hypoxia:  O2-Sensing  Protein
Hydroxylases, Hypoxia-inducible Transcription  Factors,  and  O2- regulated Gene Expression. FASEB, 16: 1151-62. Koolman, J.; Roehm, K.H. 2005. Color
Atlas of Biochemistry. Thieme. Vaupel,  P.  2004. Tumour  Hypoxia: Causative  Factors,  Compensatory Mechanism,  and  Celluler  res- ponse. Oncologist, 9: 4-9. Giordano,  F.J.  2005. Oxygen,  oxi- dative  stress,  hypoxia,  and  liver failure. J  Clin  Invest,  115:  500- 5008. Semenza,  G.L.  2001. HIF-1  and  me- chanisms of hypoxia sensing. Curr Opin Cell Biol, 13(2):167-71. Bender,  David,  A.  2009. Carbo- hydrates  of  physiologic  signifi- cance  In:  Harper’s  Illustrated  Bio- chemistry. McGraw-Hills:149-155.
Lieberman,  M.,  Allan,  D.M.  2009. Basic medical biochemistry. Williams and Wilkins . Philandelpia:
341-420.
Alberti,  K., The  biochemical  conse- quences  of  hypoxia .  J.  Clin.  Path, 30: 14-20
Webster,  K.A.  2003. Evolution  of  the coordinate  regulation  of  glycolytic enzyme  genes  by  hypoxia. The Journal  of  experimental  biology, 206: 2911-2922.
Farco, V., and Gabrielle, A. 2005. Lac- tate as a maker of energy failure in critically  ill  patients:Hypothsis. Bio- med central ltd.
Mayes,  P.A.  2003. Glycolysis  and Piruvat Oxidation In: Murray, R. K., Granner, D. K. M., Rodwell, V. W.,
editors. Harper’s Biochemistry. McGraw-Hills. Newyork. Dufour,  J.F.,  Clavien,  P.A.  2005. Signaling Pathways in Liver
Disease. Springer-Verlag  Berlin
Heidelberg, Chapter 26.
Carraway,  M.S.,  et  al.  2000. Expres- sion of Heme Oxygenase-1 in The Lung  in  Chronic  Hypoxia. Am.  J. Physiol.  Lung  Cell  Mol.  Physiol, 278: L806-L12.
Semenza,  G.L.  2001. HIF-1  and  me- chanisms of hypoxia sensing . Curr
Opin Cell Biol, 13(2):167-71.
Sadikin,  A.H.  2008. Stres  oksidatif pada  hati  tikus  yang  diinduksi  hi- poksia sistemik. Tesis S2 Biokimia dan Biologi Molekuler. Jakarta Ferdinal,  F.  2008. Mekanisme  mole- kuler  gagal  jantung  pada  tikus yang  diinduksi  hipoksia  sistemik kronik:  peran  HIF1  dalam  regulasi ekspresi  gen  B-type  natriuretic eptide-45. Disertasi  S3  Biokimia dan Biologi Molekuler. Jakarta.