## ISOLASI DAN AKTIVITAS BAKTERI SELULOLITIK PADA LIMBAH DIAPERS
Devi Siruwahni 1 , Rasyidah 2
Universitas Islam Negeri Sumatera Utara 1,2
devisiruwahni11@gmail.com 1 , rasyidah@uinsu.ac.id 2

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengisolasi  bakteri  selulolitik  yang  berpotensi mendegradasi selulosa dengan mengambil sampel limbah diapers skala rumahan. Penelitian  ini  juga  dilakukan  untuk  mengisolasi  dan  mengetahui  kemampuan bakteri  dalam  mendegradasi  selulosa  berdasarkan  uji Congo  red dan  uji degradasi  kertas  filter.  Metode  penelitian  ini  adalah  deskriptif  kualitatif.  Isolasi bakteri selulolitik dilakukan dengan menggunakan media selektif Carboxymethyl Cellulose (CMC). Karakterisasi dilakukan dengan cara menumbuhkan isolat murni terpilih  pada  media  CMC  selanjutnya  ditetesi  congored  untuk  menguji  potensi selulolitiknya  (potensi  selulolitik  ditandai  dengan  munculnya  zona  bening  di sekitar koloni). Hasil  penelitian menunjukkan,  hasil  isolasi bakteri diperoleh 12 isolat yang mampu tumbuh dan memanfaatkan selulosa sebagai sumber  karbon. Pada uji Congo red isolat DS07 bakteri selulolitik dengan genus Hafnia memiliki nilai  indeks selulolitik  tertinggi  sebesar  2,5  mm.  Isolat  DS03  dengan  genus Bacillus memiliki kemampuan  tertinggi mendegradasi selulolasa pada uji kertas filter Whatman No. 1 sebesar 16,66%.
Kata Kunci: Bakteri, Diapers, Isolasi, Selulolitik

## ABSTRACT
This study aims to isolate cellulolytic bacteria that have the potential to degrade cellulose  by  taking  home-scale  diaper  waste  samples.  This  research  was  also conducted  to  isolate  and  determine  the  ability  of  bacteria  to  degrade  cellulose based  on  the  Congo  red  test  and  filter  paper  degradation  test.  This  research method is descriptive qualitative. Isolation of cellulolytic bacteria was carried out using selective Carboxymethyl Cellulose (CMC) media. The characterization was carried out  by growing selected  pure isolates on CMC media  and then dropping congored  drops  to  test  their  cellulolytic  potential  (cellulolytic  potential  is indicated  by  the  appearance  of  a  clear  zone  around  the  colony).  The  results showed that the results of isolating bacteria obtained 12 isolates that were able to grow and utilize cellulose as a carbon source. In the Congo red test isolate DS07 cellulolytic bacteria of the Hafnia genus had the highest cellulolytic index value of 2.5 mm. Isolate DS03 with  the genus Bacillus  had the highest  ability to  degrade cellulose on the Whatman No. filter paper test. 1 of 16.66%.
Keywords : Bacteria, Diapers, Isolation, Cellulolytic

## PENDAHULUAN
Diapers adalah popok  sekali pakai dengan komposisi terbesar berupa serat selulosa halus  23%  (Asrianti  et  al.,  2021).  Bahan  penyerap tinggi  yang  dimiliki berfungsi  menyerap  cairan  hasil  ekskresi  pada  tubuh  bayi  seperti  kencing  dan kotoran padat (Yunus et al., 2019). Departemen Kesehatan (DepKes) Indonesia di tahun  2016  melaporkan  usia  balita  berada  diangka  sebesar  14.333.515  jiwa.
Apabila  seorang  bayi  menggunakan  6  diapers  dalam  sehari  estimasi  ada  86  juta sampah  diapers  dibuang  setiap  hari.  Survei  Marine  Platic  Debris  (2020)  oleh Worldbank  dan  Kemen  Marinvest  menyatakan  sampah  popok  sekali  pakai menjadi penyumbang sampah terbesar didunia yakni sebesar 21%.
Dalam  menanggapi  masalah  tersebut,  salah  satu  upaya  yang  dapat dilakukan  adalah  memanfaatan  limbah diapers dengan  mendaur ulang  komponen terbesar  diapers  yaitu  selulosa. Penguraian  selulosa  bergantung  pada  kehadiran mikroorganisme pendegradasi  selulosa (Ningsih et al., 2014).
Faktor-faktor  yang  mempengaruhi  pertumbuhan  mikroba  adalah  jenis substrat,  medium  fermentasi,  kondisi  fermentasi  seperti  suhu,  pH,  agitasi,  waktu inkubasi,  dan  zat  tambahan  sebagai  sumber  karbon.  Pertumbuhan  dan perkembangan  mikroba  ditandai  dengan  bertambahnya  berat  dan  jumlah  sel (Pangesti et al., 2012). Aktivitas ekstrak kasar enzim selulase tertinggi oleh kedua isolat ada pada fermentasi 20 hari (Dahlena et al., 2014)
Berdasarkan  hasil  penelitian  oleh  Arifin  et  al.,  (2019),  isolasi  bakteri selulolitik  dari  kompos  didapatkan  38  isolat  bakteri  yang  mampu  tumbuh  pada media CMC dan yang memiliki zona bening hanya 14. Isolat degradasi tertinggi menghasilkan  zona  bening  sebesar  6,76  cm.  Isolat  yang  memilik  zona  bening tinggi  diambil  untuk  dilakukan  uji  filter  paperase yang didapatkan hasil  tingkat degradasi selulosa  pada  kertas  Whatman  no.  1  yaitu  dari  10,94  sampai  51,30%, sedangkan  untuk  uji  Motilitas  diperoleh  semua  isolat  bersifat  motil  dan  uji katalase  didapatkan  hasil  positif  dan  uji  sitrat  diperoleh  hasil  negative. Berdasarkan  latar  belakang  tersebut  maka  dilakukan  kajian  guna  mengetahui jenis bakteri selulolitik yang terdapat pada limbah diapers dan untuk mengetahui kemampuan  aktivitas  bakteri  selulolitik  hasil  isolasi  limbah  diapers  dalam mendegradasi selulosa.

## METODE PENELITIAN Tempat dan Waktu Penelitian
Pengambilan  sampel  dilaksanakan  di  Desa  Teluk  Dusun  Balai  Gajah Kecamatan  Secanggang  Kabupaten  Langkat.  Analisis  mikroba  di  Laboratorium Mikrobilogi, FMIPA, Universitas Sumatera Utara.

## Alat dan Bahan Penelitian
Pengambilan  sampel  menggunakan  alat berupa  masker,  sarung  tangan, wadah,  timbangan,  botol  kaca.  Proses  analisis  menggunakan  alat  berupa mikropipet,  tabung reaksi,  timbangan  analitik,  spatula,  erlenmeyer,  gelas  ukur, autoklaf,  bunsen,  cawan  petri,  jarum ose  lurus,  ose  cincin,  inkubator,  hot  plate, objek glass,  cover  glass,  batang  pengaduk.  Bahan  yang digunakan  yaitu  3  kg hidrogel  limbah  diapers,  akuades,  dan  media Carboxymethyl  Cellulose (CMC) yang  terbuat  dari, Congo  red ,  kertas  filter, media agar pati, media glatin, media SCA, media karbohidrat (sukrosa, glukosa, dan laktosa), media reagen H2O2 3%, Sulfide  Indole  Motili  (SIM)  Agar,  media  TSIA,  reagen  Kovac’s,  methyl  red  , kalbol kristal violet, lugol, safranin.

## Rancangan penelitian
Jenis  penelitian  ini  yaitu  deskriptif  kualitatif  yang  bertujuan  untuk mengetahui  bakteri  selulolitik  yang  ada  pada  limbah  diapers  tersebut.  Pada
penelitian  ini  isolasi  bakteri  selulolitik  dari  limbah  diapers  dilakukan  dengan menggunakan metode spread plate. Isolat bakteri yang  diperoleh  kemudian  di  uji skrining bakteri selulolitik secara kualitatif menghitung Indeks Selulolitik melalui perbandingan  diameter koloni  bakteri  dan  diameter  zona  bening  yang  dihasilkan dari pewarnaan dengan cong red. Karakteristik bakteri selulolitik dilakukan secara makroskopis  mengamati  morfologi  bakteri,  secara  mikroskopis  mengamati pewarnaan  gram dan  uji  biokimia.  Uji  degradasi  kertas  filter  diamati  melihat kemampuan  bakteri  dalam  mendegradasi  selulosa  yang  ditunjukkan  dengan berkurangnya  berat  akhir  pada  kertas  (Whatman no.1)  atau  dari  kerusakan  kertas filter.

## Pengambilan limbah diapers
Sampel diapers diambil dari  lingkungan pemukiman  yaitu berupa limbah skala rumah tangga. Pengambilan limbah diapers yang telah hancur menyatu dan bentuknya  sudah  terbagi-bagi  kemudian  dimasukkan  ke  dalam  wadah  toples  3 kg.

## Sterilisasi
Sterilisasi dilakukan pada semua alat yang akan digunakan dengan teknik yang  sesuai pada  jenis  dan  material  alat  tersebut.  Alat-alat  dicuci  besih dengan deterjen dan air, dikeringkan dan dibungkus menggunakan kertas, dimasukkan ke dalam  autoklaf  suhu  121 o C  selama  15  menit,  kemudian  dimasukkan  ke  dalam oven  pada  suhu  120 o C  selama  1  jam.  Alat yang  sifatnya  tidak  tahan  terhadap panas  tinggi  disterilkan  menggunakan  alkohol  70  %.  Sterilisasi  media  juga dilakukan mengikuti petunjuk dan menggunakan teknik yang sudah ditentukan.
Pembuatan media Carboxymethyl  Cellulose (CMC) Media CMC terbuat dari Agar 1,8 gr; K2HPO4, 0,05 gr; KNO3, 0,075 gr; MgSO4.7H2O,  0,02  g;  FeSO4.7H2O,  0,002  gr; CaCl2.2H2O, 0,004 gr; Glukosa 0,1  gr;  ekstra  yeast  0,2  gr;  CMC  1  gr.  dalam  100  ml  aquades  pada.  Setelah  itu diaduk  dan  disterilisasi  di  autoklaf  pada  suhu  121 0 C  selama  15  menit, kemudianPembuatan  media  selulosa  cair  sama  seperti  pembuatan  medium selulolitik padat di atas tanpa penambahan agar.

## Pengenceran
botol  kaca  yang  berisi  sampel  diambil  menggunakan  mikro  pipet sebanyak 1 ml dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi 9 ml NaCl 0,85 % steril,  dan  dihomogenkan  menggunakan  vortex,  diperoleh  pengenceran  10 - 1 . Pengenceran dilakukan hingga seri pengenceran 10 -6 .

## Isolasi Bakteri Selulolitik
Proses  ini  dilakukan  secara  aseptis,  hasil  pengenceran  10 -3 ,  10 -4 ,  10 -5 ditanamkan  dengan  metode  sebaran  (spread  plate)  pada  media  padat  selektif Carboximethil  cellulase (CMC)  dengan  cara  mengambil  1  ml  suspensi  masing- masing dimasukkan ke dalam cawan petri yang berisi media padat CMC. Bakteri diinkubasi selama 2 x 24 jam pada suhu 30°C.

## Pemurnian Isolat Bakteri Selulolitik dan Pengamatan Morfologi
Isolat bakteri yang akan dimurnikan ditentukan dari perwakilan tiap koloni yang  memiliki  ciri  yang  berbeda  bertujuan  untuk  mendapatkan  koloni  tunggal. Pemurnian bakteri dilakukan dengan mengambil koloni yang tumbuh terpisah dan menunjukkan  karakter  morfologi  yang  berbeda  dengan  cara  menginokulasikan isolat pada media NA dengan metode streak kuadran kemudian diinkubasi selama 2 x 24 jam pada suhu 37°C.
Pengamatan  morfologi  secara  makroskopis  dilakukan  dengan  cara mengamati morfologi koloni yang terbentuk dari bakteri, meliputi jumlah koloni, warna, bentuk koloni dan tepi koloni.

## Uji Skrining Bakteri Selulolitik
Isolat bakteri dari pemurnian kemudian ditotolkan pada cawan petri berisi media  CMC  padat.  Inkubasi  dilakukan  pada  suhu  30 0 C  selama  2  x  24  jam. Pengujian  aktivitas  selulolitik dilakukan  dengan  metode Congo  red .  Larutan Congo  red 0,1%  dituang  pada  kultur  dan  dibiarkan  selama  15  menit.  Larutan kemudian  dibuang  dan  dibilas  dengan  NaCl  1  M  selama  15 menit sebanyak tiga kali.  Pencucian ini  bertujuan untuk  membuang Congo  red yang  tidak  berikatan dengan  polisakarida.  Indeks  aktivitas  selulase  dapat  ditentukan  dengan  cara mengukur rasio diameter zona bening terhadap diameter koloni.

## Indeks Selulolitik
Indeks aktivitas enzim secara semi-kuantitatif diukur berdasarkan diameter zona bening  yang  terbentuk.

## Uji Degradasi Kertas Filter
Uji degradasi kertas filter dilakukan dengan cara erlenmeyen berisi media cair  CMC  ditambahkan  ketas  filter  whatman  no.1  (1x6  cm 2 x2,  per  20  mL) kemudian diinkubasi pada suhu ruang selama 10 hari pada shaker kecepatan 100 rpm, dan dicuci menggunakan aquades, kemudian dikeringkan dengan oven pada suhu 103 o C selama 3 jam sehingga didapat berat konstan. Hasil dari selilih berat antara kertas sebelum diinkubasi dengan setelah diinkubasi menunjukkan tingkat degradasi selulosa dari isolat yang diuji.

## Karakterisasi Bakteri Selulolitik
Pengamatan  bakteri  dilakukan  secara  makroskopis,  mikroskopis,  dan  uji biokimia.  Pengamatan  secara  makroskopis  meliputi  pengamatan  morfologi koloni  bakteri. Pengamatan  dilakukan dengan mengamati bentuk,  elevasi, tepian dan  warna  koloni  bakteri yang  tumbuh  pada  media  CMC.  Pengamatan secara mikroskopis  menggunakan  pewarnaan  gram.  Uji  biokimia  yang  dilakukan
meliputi uji katalase, uji motilitas, uji indol, uji oksidase, uji fermentasi, uji sitrat, uji urea, uji methyl red (MR), uji voges-proskauer (VP).

## Analisis Data
Penelitian  ini  melakukan  analisis  data  deskriptif  kualitatif.  Perhitungan indeks selulolitik. Aktivitas bakteri selulolitik dengan melihat variabel penelitian yaitu diarahkan untuk menjawab rumusan masalah.

## HASIL PENELITIAN
Hasil  isolasi  bakteri  selulolitik  dari limbah  diapers  diperoleh  12  isolat muni. Berdasarkan pengamatan, isolat murni tersebut menunjukkan  karakteristik morfologi  dan  fisiologis  bakteri  pendegradasi  selulosa  dan  indeks  selulolitik serta penyusutan berat kering kertas selulosa.
Pada  pengamatan  secara  makroskopis,  12  isolat  bakteri  selulolitik  dari limbah  diapers  menunjukkan  kecenderungan  koloni  berwarna putih  kekuningan, walaupun  ada  koloni  yang berwarna  putih  bening,  kuning,  dan  ada  koloni  yang berwarna  putih  susu.  Pengamatan  secara  uji  biokimia  isolat  bakteri  cenderung tergolong  ke  dalam  gram  negatif,  diantara  seluruh  isolat  hanya  2  isolat  bakteri gram  positif.  Pada  uji katalase  semua  isolat  bakteri  menunjukkan  hasil positif, sedangkan  pada  uji  indol  semua  isolat  bakteri  bersifat  negatif.  Pada  uji  SIM cenderung bersifat motil dengan 4 isolat bersifat nonmotil. Pada uji TSIA hanya 3 isolat yang memproduksi endapan hitam.
Karakteristik morfologi koloni bakteri selulolitik ditunjukkan pada Tabel 1 sebagai berikut:
Tabel 1. Karakter Morfologi Koloni Bakteri Selulolitik
Karakter koloni No Kode isolat Bentuk Margin Elevasi Warna 1 DS02 Irregular Filamentous Umbonate Putih kekuningan 2 DS03 Bulat Entire Flat Putih kekuningan 3 DS04 Bulat Entire Pulvinate Putih kekuningan 4 DS05 Irregular Entire Pulvinate Putih bening 5 DS07 Irregular Undulate Umbonate Putih kekuningan 6 DS08 Bulat Entire Convex Putih kekuningan 7 DS09 Bulat Filamentous Umbonate Putih kekuningan 8 DS10 Bulat Entire Pulvinate Kuning 9 DS11 Irregular Curled Umbonate Putih kekuningan 10 DS12 Irregular Undulate Raised Putih susu 11 DS13 Irregular Undulate Raised Putih susu 12 DS14 irregular Undulate Flat Putih susu
Hasil uji biokimia ditunjukkan pada Tabel 2 sebagai berikut:
Tabel 2. Uji Biokimia
Kode Isolat B en tu k G ra m K at al ase P at i G el at in T SIA S C A SIM In d o l H 2 S Genus DS02 Coccus + +/+ + Motil
Alcaligenes DS03 Basill + + + -/+ Motil Bacillus DS04 Coccus + + +/+ + Motil
Rahnella
DS05 Basill + + -/+ Motil + Enterobacter DS07 Basill + + -/+ Motil Hafnia DS08 Basill + -/+ + Nonmotil Klebsiella DS09 Coccus + + +/+ + Motil + Glucanobacter DS10 Coccus + +/+ + Motil + Moroccoccus DS11 Basill + + + +/+ + Motil Citrobacter DS12 Basill + +/+ Nonmotil Acinetobacter DS13 Basill + + + +/+ Nonmotil Obesumbacterium DS14 Basill + + + -/- Nonmotil Moraxella
Grafik indeks selulolitik dan persentasi uji degredasi bakteri selulolitik limbah diapers ditunjukkan pada Gambar 1 sebagai berikut:
Gambar 1. Grafik Indeks Selulolitik dan Persentase Uji Degradasi Bakteri Selulolitik

## Limbah Diapers Terhadap Kertas Filter

## PEMBAHASAN Isolasi Bakteri Selulolitik
Sampel yang digunakan merupakan limbah diapers yang diambil dari satu lokasi yaitu di Desa Teluk Dusun Balai Gajah Kecamatan Secanggang Kabupaten Langkat.  Berdasarkan  hasil  isolasi  yang  telah  dilakukan  didapatkan  12  isolat bakteri  yang  mampu  tumbuh  pada  medium  selulolitik  padat  yang  mengandung CMC.  Kemampuan  bakteri selulolitik  yang  tumbuh  pada  media  sepesifik  CMC agar, menunjukkan bahwa bakteri tersebut mampu memanfaatkan selulosa sebagai salah satu sumber nutrient terutama sebagai sumber karbon (Yusnia, 2019).
Dahlena et al., (2014) mengatakan bahwa popok bayi yang sebagian besar mengandung  selolusa,  selain  sebagai penginduksi  juga  digunakan  sebgai  sumber karbon  utama  untuk  bakteri  selulolitik  penghasil  enzim  selulase.  Popok  bayi dengan adanya enzim selulase akan terhidrolisi menjadi glukosa dengan  memutus ikatan  1,4- -glikosidik. Glukosa  adalah salah satu senyawa  karbohidrat  sederhana dan  yang  paling  mudah  untuk  digunakan  sebagai  sumber  energi  oleh mikroorganisme.
Selulase  merupakan  enzim  induktif  yang  disintesis  oleh  mikroorganisme selama  pertumbuhan  pada  media  yang  mengandung  selulosa  sebagai  sumber karbon.  Mikroorganisme  dan  enzim  pendegradasi  selulosa  telah  dipelajari  dan diaplikasikan  untuk proses  pengembangan  industri  tekstil,  makanan, dan  proses pulp-paper (Munifah, 2021).
Isolat  DS07  sebagai  isolat  dengan  nilai  IS  tertinggi  yaitu  2,5  mm  dan DS13 sebagai isolat dengan nilai uji degradasi kertas filter tertinggi dengan nilai
DS02 DS03 DS04 DS05 DS07 DS08 DS09 DS10 DS11 DS12 DS13 DS14 Indkes Selulolitik  0.01  1.2  0.26  0.1 2.5  0.15  0.27  0.19  0.9  1.16  0.75 1
Uji Degredasi 4.67% 16.662.72% 4.67% 11.923.66% 4.76% 8.33% 3.63% 6.48% 6.54% 11.81 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3
16,66%. Arifin  et  al., (2019)  dalam penelitiannya hasil  uji  biokimia  bakteri  yang bersifat  motil  ditunjukkan  dengan  adanya  kekeruhan  yang  disebabkan  oleh bakteri  yang  bergerak  aktif.  Pada  uji  katalase  hasil  yang  positif  ditunjukkan dengan  terbentuknya  gelembung  karena  pada  bakteri  mengandung  hidrogen peroksida  yang  diurai  oleh  enzim  katalase.  Pada  uji  sitrat  hasil  negatif ditunjukkan  dengan  warna  media  SCA  yang  tetap  hijau.  Apabila  bakteri menggunakan  sitrat  sebagai  sumber  karbon  maka  media  berubah  menjadi  basa dan  berubah  warna  menjadi  biru.  Identifikasi  12  isolat  berpanduan  pada  buku Bergey’s  Manual  of  Systematic  Bacteriology.  Hal  tersebut  dapat  dilihat  pada Tabel 2.

## Alcaligenes
Berdasarkan  hasil  pengamatan  isolat  DS02  memiliki  kesamaan  karakter genus Alcaligenes. Secara  makroskopis  berbentuk  irregular,  margin  atau  tepian filamentous,  elevasi  atau  permukaan  umbonate  dan  warna  putih  kekuningan. Secara  mikroskopis  termasuk  dalam  bakteri  gram  negatif  berbentuk  coccus.  Uji biokimia menunjukkan hasil bersifat motil, positif pada uji katalase, sitrat, mampu memfermentasi laktosa, sukrosa, glukosa, disertai terbentuknya gas. Sifat negative pada uji pati, gelatin, dan indol.

## Bacillus
Berdasarkan  hasil  pengamatan  isolat  DS03  memiliki  kesamaan  karakter genus Bacillus. Secara makroskopis koloni berbentuk bulat, margin entire, elevasi flat  dan  berwarna  putih  kekuningan.  Secara  mikroskopis  termasuk  dalam  bakteri gram positif  berbentuk  basil.  Uji  biokimia  menunjukkan  bakteri  bersifat  motil, positif pada uji katalase dan pati, hanya mampu memfermentasi glukosa. Negatif pada uji gelatin, sitrat, dan indol.
Bacillus merupakan organisme yang mampu mendegradasi selulosa secara aerob. Banyaknya isolat bacillus yang ditemukan dalam sampah karena bakteri ini mampu tumbuh  lebih cepat  dan  jumlah  jenis  yang tinggi. Disamping itu bacillus tersebar di semua tipe habitat terutam pada sampah (Kurniawan, 2018). Yusrizal  et  al., (2021)  mengatakan  bahwa dari  beberapa  kajian  potensi selulolitik bakteri, kelompok Bacillus merupakan salah satu kelompok yang paling banyak ditemukan dan memiliki kemampuan selulolitik.
Bacillus memiliki kemampuan dalam mendegradasi substrat bermikrofibril kristalin,  karena  bacillus  merupakan  jenis  bakteri  kemoorganotrof  yaitu  bakteri yang menggunakan  hasil  reduksi  dan  oksidasi  senyawa  organik  sebagai  donor elektron. Bacillus mampu  menxintesis  enzim  endo-ß-  glucanase  yang  dapat menghidrolisis  ikatan  glikosidik  internal  untuk  mengurangi  panjang dari  rantai selulosa (Ulfa et al., 2014). Nofu  et  al., (2014)  menambahkan  bahwa Bacillus merupakan  bakteri penghasil  enzim  amylase  ekstrasululer  terbesar.  Enzim  selulase  dan  enzim pendegradasi  selulosa  lainnya  seperti  xylanase  merupakan  enzim yang  umum ditemukan pada kelompok Bacillus
Bakteri bacillus dapat  menghasilkan  enzim  ekstraseluler  selain  selulase yaitu protease  untuk  menghidrolisis  ikatan  peptide pada  protein  menjadi  asam amino.  Aktivitas  spesifik  enzim  menunjukkan  suatu  ukuran kemurnian  enzim
atau dapat digunakan sebagai indikasi ada tidaknya inhibitor enzim atau repressor sintesis enzim di dalam media produksi enzim. Apabila kadar protein tinggi, tetapi aktivitas  spesifik  rendah,  maka  ini  menujukkan  selain  adanya  protein  lain, konsentrasi  inhibitor  dalam  media  produksi  enzim  tinggi.  Kadar  protein  tinggi juga  dapat  diakibatkan  karena  protein  yang  terukur masuk  protein  structural bakteri dan protein yang terkandung dalam medium (Yogyaswari et al., 2016).

## Rahnella
Berdasarkan  hasil  pengamatan  isolat  DS04  memiliki  kesamaan  karakter genus Rahnella. Secara  makroskopis  koloni  berbentuk  bulat,  margin  entire, elevasi  pulvinate  dan  warna  putih  kekuningan.  Secara  mikroskopis  termasuk dalam  bakteri  gram  negatif  sel  berbentuk  coccus.  Pengamatan  uji  biokimia bakteri  bersifat  motil,  positif  pada  uji  katalase,  gelatin,  dan  sitrat.  Bakteri  ini mampu  memfermentasi  laktosa,  sukrosa,  dan  glukosa  disertai terbentuknya  gas. Negatif pada uji pati dan indol.

## Enterobacter
Berdasarkan  hasil  pengamatan  isolat  DS05  memiliki  kesamaan  dengan genus Enterobacter. Secara  makroskopis  koloni  berbentuk  irregular,  margin entire,  elevasi  pulvinate,  dan  berwarna  putih  bening.  Secara  mikroskopis termasuk  dalam  bakteri  gram negarif  sel  berbentuk  basil.  Uji  biokimia  bakteri bersifat motil, positif pada uji katalase dan  pati.  Uji  TSIA  menunjukkan  bakteri hanya  mampu  memfermentasi  glukosa  disertai  terbentuknya  endapan  hitam (H2S). Negatif pada uji gelatin, sitrat, dan indol.

## Hafnia
Berdasarkan  hasil  pengamatan  isolat  DS07  memiliki  kesamaan  dengan karakter genus Hafnia. Secara  makroskopis  koloni  berbentuk  irregular,  margin undulate,  elevasi umbonate,  dan  berwarna  putih  kekuningan.  Secara  mikroskopis termasuk  dalam  bakteri  gram  negative  sel  berbentuk  basil.  Uji  biokimia  bakteri bersifat motil, positif katalase dan pati. Bakteri ini hanya mampu memfermentasi glukosa saja. Hal ini sejalan dengan hasil penelitian bahwa isolat DS07 memiliki IS  2,5  mm  yakni  merupakan  genus  dengan  aktivitas  enzim  selulase  yang  unggul dibandingkan dengan isolat yang lain.
Murtiyaningsih  &  Hazmi  (2017)  menambahkan  bahwa Hafnia dapat mendegradasi  selulosa  karena  menghasilkan  enzim  dengan  spesifikasi  berbeda yang  saling  bekerjasama.  Enzim  tersebut  akan  menghidolisis  ikata  (1,4)-ß- Dglukosa  pada  selulosa.  Selulosa  merupakan  polisakarida  linier  dari  satuan glukosa  yang  dihubungkan  oleh  ikatan  ß-1,4  glikosidik.  Enzim  selulase merupakan enzim yang mampu mendegradasi selulosa dengan memutuskan ikatan ß-1,4  glikosida  yang  menghasilkan  oligosakarida  turunan  selulosa  dan  glukosa. Jika  bakteri  dapat  tumbuh  pada  media  tersebut  maka  dapat  diindikasikan  bahwa bakteri tersebut merupakan bakteri selulolitik.
Uji  biokimia  bersifat  negative  pada  uji  gelatin,  sitrat,  dan  indol.  Genus hafnia  ditemukan  dalam  kotoran  manusia  dan  hewan,  limbah,  tanah,  dan  air (Parija,  2009). Hafnia merupakan bakteri basil  gram negatif, non  motil,  uji  indol negatif,  uji  katalase  positif, uji H2S positif maupun negatif dengan atau  tanpa  gas (Bahter et al., 2016).
Hafnia merupakan bakteri gram negatif berbentuk basil, umumnya bersifat motil  pada  suhu  30 o C,  namun  dapat  juga  nonmotil. Bakteri  ini  bersifat  fakultatif anaerob  dan  katalase  positif.  Genus  ini  hanya  memiliki  satu  spesies  heterogen, yaitu Hafnia  alvei. Bakteri  ini  dapat  ditemukan  pada  feses  manusia  sehat  dan dalam keadaan patologik pada gastroenteritis (Nainggolan & Bodhi, 2018). Janda et  al., (2006)  juga  menambahkan  bahwa Hafnia biasanya  membentuk  gas  dan lebih aktif bergerak.
Menurut  Washington  et  al., (2006)  hafnia  ditemukan  pada  kultur campuran, sulit untuk menganggap signifikansi klinis organisme tersebut. Tidak ada  media  khusus  untuk  mengisolasi  genus  hafnia,  namun  media  yang  biasa digunakan  untuk  mengisolasi  Enterobacter.  Murtiyaningsih  &  Hazmi  (2017), menambahkan  bahwa Enterobacter adalah  genus  yang  memiliki  kemampuan selulolitik.

## Klebsiella
Berdasarkan  hasil  pengamatan  isolat  DS08  memiliki  kesamaan  karakter dengan genus Klebsiella. Secara  makroskopis  koloni bakteri  berbentuk  bulat, margin  entire,  elevasi  convex,  dan  berwana  putih  kekuningan.  Secara mikroskopis  termasuk  dalam  bakteri  gram  negatif  sel  berbentuk  basil.  Uji biokimia  bakteri  bersifat  nonmotil, positif  pada  katalase  dan  sitrat  dan  hanya mampu  memfermentasi  glukosa  saja.  Uji  biokimia  bersifat  negatif  pati,  gelatin, dan indol.

## Glucanobacter
Berdasarkan  hasil  pengamatan  isolat  DS09  memiliki  kesamaan  karakter dengan genus Glucanobacter. Secara makroskopis koloni bakteri berbentuk bulat, margin  filamentous,  elevasi  umbonate,  dan  berwarna putih  kekuningan.  Secara mikroskopis  termasuk  dalam  bekteri  gram  negative  sel berbentuk  coccus.  Uji biokimia  bakteri  bersifat  motil,  positif  katalase,  pati,  dan  sitrat dan  mampu memfermentasi  glukosa,  sukrosa,  dan  laktosa  disertai  dengan  endapan hitam (H2S). Negatif pada uji biokimia gelatin dan indol.

## Moroccoccus
Berdasarkan  hasil  pengamatan  isolat  DS10  memiliki  kesamaan  karakter dengan genus Morococcus. Secara  makroskopis  koloni  bakteri  berbentuk  bulat, margin  entire,  elevasi  pulvinate,  dan  berwarna  kuning.  Secara  mikroskopis termasuk  ke  dalam  bakteri  gram  negatif  sel  berbentuk  coccus.  Uji  biokimia bakteri bersifat motil, positif pada katalase dan uji sitrat, mampu memfermentasi glukosa, laktosa, dan sukrosa disertai endapan hitam (H2S). Negatif pada uji pati, gelatin, dan indol.

## Citrobacter
Berdasarkan  hasil  pengamatan  isolat  DS11  memiliki  kesamaan  karakter dengan genus Citrobacter. Secara makroskopis koloni bakteri berbentuk irregular, margin  curled,  elevasi  umbonate,  dan  berwarna  putih  kekuningan.  Secara mikroskopis  termasuk  ke dalam  bakteri  gram  positif  sel  berbentuk  basil.  Uji biokimia  bersifat  motil,  positif  pada  katalase,  gelatin,  dan  sitrat  dan  mampu memfermentasi glukosa, laktosa, dan sukrosa. Negative pada pati dan indol.

## Acinetobacter
Berdasarkan  hasil  pengamatan  isolat  DS12  memiliki  kesamaan  karakter dengan  genus Acinetobacter. Secara  makroskopis  koloni  bakteri  berbentuk irregular,  margin undulate,  elevasi  raised,  dan  berwarna  putih  susu.  Pengamatan secara mikroskopis termasuk ke dalam bakteri gram negatif sel bakteri berbentuk basil. Uji biokimia bersifat nonmotil, positif pada katalase, mampu memfermentasi glukosa, sukrosa, dan laktosa. Hasil uji biokimia negative pada pati, gelatin negatif, sitrat negatif, dan indol negatif.

## Obesumbacterium
Berdasarkan  hasil  pengamatan  isolat  DS13  memiliki  kesamaan  karakter dengan genus Obesumbacterium. Secara makroskopis  koloni  bakteri  berbentuk irregular,  margin  undulate,  elevasi  raised,  dan berwarna  putih  susu.  Pengamatan secara  mikroskopis  bakteri  ini  adalah  bakteri  gram  negatif  sel  berbentuk  basil. Pengamatan secara  biokimia  menunjukkan  bakteri  ini  bersifat  nonmotil,  katalase positif,  pati  positif,  gelatin  positif,  dan  mampu  memfermentasi  glukosa,  laktosa dan sukrosa.  Bakteri bersifat negatif pada uji sitrat dan indol.

## Moraxella
Berdasarkan  hasil  pengamatan  isolat  DS14  memiliki  kesamaan  karakter dengan  genus Moraxella. Pengamatan  secara  makroskopis  koloni  bakteri berbentuk  irregular,  margin  undulate,  elevasi  flat,  dan  berwarna  putih  susu. Pengamatan secara mikroskopis bakteri ini adalah bakteri gram negatif dengan sel berbentuk  basil.  Uji biokimia  menunjukkan  bakteri  ini  bersifat  nonmotil,  positif pada  uji  katalase,  pati,  dan  gelatin.  Bakteri  ini  bersifat  sitrat  negatifdan  indol negatif.
Menurut  Hidayatulloh  et  al., (2022)  bakteri  gram  positif  ditandai dengan  morfologi bakteri  yang  berwarna  ungu  setelah  diberikan  zat pewarna. Bakteri  gram  negative  merupakan bakteri  yang  kehilangan  kompleks  ungu Kristal  pada  waktu  pembilasan  dengan  alcohol,  namun  kemudian  terwarnai dengan  pewarna  tandingan  yaitu  safranin  sehingga  sel-sel  tampak  berwarna merah  muda  pada  akhir  pewarnaan.  Struktur diding  sel  pada  isolat  bakteri merupakan  dasar yang membedakan hasil akhir pewarnaan gram.
Mairizal et al., (2021) mengatakan  bahwa perbedaan warna antara bakteri gram  positif  dan  bakteri  gram  negative  disebabkan perbedaan  pada  struktur, komposisi  dinding  sel  bakteri,  dan  perbedaan  permeabilitas  diantara  kedua kelompok  dinding  sel  bakteri.  Kompleks  ungu  kristal-iodium,  yang  telah memasuki  dinding  sel  selama  langkah  awal  dalam  proses  pewarnaan,  dapat diekstraksi,  oleh  sebab  itu  organisme  gram  negative  kehilangan  warna  tersebut maka  terbentuk  warna  merah  pada  media.  Kandungan  lipid  yang  lebih  rendah sehingga dinding sel bakteri gram positif menjadi terdehidrasi selama perlakuan dengan  etanol.  Ukuran  pori-pori  mengecil,  pemeabilitasnya  berkurang,  dan kompleks ungu Kristal-iodium tidak dapat terekstraksi.
Menurut Lubis et al., ( 2015) bakteri gram positif mempunyai dinding sel yang  tebal,  yaitu  sekitar  15-80nm,  dan  berlapis  tunggal  dengan  komposisi peptidoglikan  yang  tebal  dan  lipid  yang  tipis.  Khulud  et  al., (2020) menambahkan  bakteri  pathogen  di  alam  umumnya  merupakan  bakteri  gram negatif  meski  demikian  bakteri  gram  positif  juga  tidak  menjamin  tidak  bersifat
pathogen.  Terdapat  beberapa  jenis  bakteri  pathogen  yang  memiliki  sifat  gram positif.
Pada  pengujian  motilitas  didapatkan hasil  bakteri  yang  bersifat  motil ditunjukkan dengan adanya kekeruhan yang disebabkan oleh bakteri yang bersifat aktif.  Pada  uji  katalase  didapatkan  hasil  yang  positif  ditunjukkan  dengan terbentuknya  gelembung  karena  pada bakteri  mengandung  hydrogen  peroksida yang diurai oleh enzim katalase. Pada uji sitrat hasil negatif ditunjukkan dengan warna  yang  tetap  hijau,  hasil  positif  ditunjukkan  dengan  berubahnya  warna manjadi  biru  karena  bakteri  menggunakan  sitrat  sebagai  karbon  (Arifin  et  al., 2019).
Ulfa  et  al., (2014)  dalam  penelitiannya  karakteristik  pengujian  indol menunjukkan  hasil negative  untuk  setiap  isolat,  dikarenakan  isolat  bakteri  tidak menghasilkan  enzim  triptofamase  yang  berfungsi  menghidrolisis  asam  amino triptofan  yang  terdapat  pada  media  indol.  Hasil  sebaliknya  terjadi  pda  pengujian katalase,  tiap  isolat  bekteri  menunjukkan  hasil  positif.  Isolat  bakteri  seleksi memiliki  kemampuan  dalam  mensintesis  enzim  katalase  disamping  enzim selulase. Tiap isolat bakteri tersebut sebagai katalis pengurai hydrogen peroksida (H2O2) menjadi air dan oksigen ditandai dengan terbentuknya gelembung udara.
Uji  gelatin  digunakan  untuk  mengetahui  kemampuan  bakteri  dalam menghidrolisis  gelatin  menjadi  asam  amino  dengan  menghasilkan  enzim gelatinase (Fauziah &  Ibrahim, 2020).
Pada uji TSIA hasil merah pada keseluruhan media menunjukkan basa dan tidak terjadi  fermentasi  glukosa,  sukrosa,  dan  laktosa. bagian  merah  pada  bagian slant dan kuning pada bagian butt yang menunjukkan terjadinya reaksi alkali pada bagian slant dan reaksi asam pada media butt. Hal ini menujukkkan hanya terjadi reaksi fermentasi glukosa saja. Begitu pula pada isolat yang berwarna kuning pada keseluruhan  media  menunjukkan  reaksi  asam  dan  terjadi  fermentasi  glukosa, sukrosa, dan laktosa (Fauziah & Ibrahim, 2020).

## Uji Indeks Selulolitik
Uji indeks selulolitik pada seluruh isolat yang  memiliki bentuk  dan  warna koloni  yang  berbeda  menggunakan Congo  red untuk  memperjelas  zona  bening yang  dihasilkan.  Pada Gambar  1  dapat  dilihat  bahwa  IS  (Indeks  Selulolitik), dari ke  12  isolat  tersebut  didapatkan  tingkat  tertinggi  pada  isolat  DS07  yang menghasilkan  zona  bening  sebesar  2,5  mm,  hal ini  sejaladapat  diartikan  bahwa isolat  DS07 mempunyai kemampuan aktivitas enzim selulolitik yang lebih unggul dibandingkan dengan  isolat  yang  lain.  Zona  bening  yang dihasilkan  disebabkan oleh  reaksi  natrium benzidindiazo-bis-1-naftilamin-4-sulfonat  ( Congo  red )  yang berinteraksi  kuat  dengan ikatan β-1,4-glikosidik dalam CMC.
Kemampuan  hidrolisis  terhadap  selulosa karena  bakteri  memiliki  enzim selulase  yang  dapat  memutus  ikatan  glikosidik  ß-1,4  pada  selulosa.  Enzim selulase  terdiri  dari  tiga  jenis  yaitu  endoglukanase  yang  memecah  ikatan glikosidik internal selulosa menjadi selodekstrin, enzim eksoglukanase memcarah selodekstrin menjadi disakarida selobiosa, kemudian menjadi selobiose memecah substrat  selobiosa  menjadi  glukosa.  Selulosa  yang  belum  terhidrolisis  pada mediaum  yerlihat  berwarna  merah  karena  adanya  reaksi  antara Congo  red dengan  ikatan  ß-  1,  4-glikosidik  yang  terkandung  dalam  polimer  selulosa. Sedangkan  selulosa  yang  terhidrolisis  menghasilkan  zona  bening  karena  tidak
terjadi ikatan Congo red dengan ikatan ß-1,4-glikosidik selulosa (Firdausi et al., 2015).
Enzim  selulase  merupakan  enzim  yang  mampu  mendegradasi  selulosa dengan  memutuskan  ikatan  ß-1,4  glikosida  yang  menghasilkan  oligosakarida turunan  selulosa  dan  glukosa.  Enzim  ini  diklasifikasikan  menjadi  3  kelompok tergantung  spesifitas  dalam  menghidrolisis  selulosa,  yaitu  endo-1,4-  ß  - glukanase  (CMCase),  ekso-1,4-  ß  –glukanase  dan  ß  –D-glukosidae (Murtiyaningsih et al., 2017). Dewi  et  al., (2020)  mengatakan  bahwa  daya  degradasi  selulosa diklasifikasikan  berdasarkan  nilai  indeks  selulolitik  dengan  kategori  rendah apabila ≤ 1, sedang antara 1 sampai 2 dan tinggi apabila > 2.
Zona  bening  menujukkan  adanya  aktivitas  hidrolitik  oleh  enzim ekstraseluler  selulase  yang  diekskresikan  oleh  isolat-isolat  bakteri  dengan diameter tertentu. Produk hidrolisis tersebut berupa gula sederhana monosakarida dan tidak terjadi ikatan kompleks dengan Congo red . Congo red akan berikatan secara  spesifik  dengan  polisakarida  yang  memiliki  ikatan  ß-1,4  glikosida, polisakarida  yang  terkandung  dalam  media  adalah  CMC.  Sedangkan  warna merah  menunjukkan  sisa  selulosa  yang  tidak  terhidrolisis  sehingga  terjadi pembentukkan  selulosa Congo  red .  Zona benignyang  berbentuk  dapat  dapat dilihat  dengan  jelas  melalui  pencucian  menggunakan NaCl  1  M. Congo  red merupakan  garam  natrium  dari  benzidinediazo-bis-1  naphthylamine-4  asam sulfonat (C32H22N6Na2O6S2) sehingga pewarna ini akan larut dan tercuci oleh garam natrium lain, seperti NaCl. Dengan demikian, zona bening yang terbentuk akan terlihat jelas (Murtiyaningsih et al., 2017). Suhu  et  al., (2019)  dalam  penelitiannya  pembilasan  dengan  NaCl  akan melunturkan  congored  terutama  di  daerah  sekitar  koloni  yang  mengandung turunan  selulase  yang  terhidrolisis seperti  selodekstrin,  selobiosa  dan  glukosa karena congored tidak terikat secara kuat sehingga terlihat zona bening. Aktivitas CMC-  ase  koloni  bakteri  selulolitik  pada  media  agar  CMC  membentuk  zona bening  disekitar  koloni.  Umumnya  bakteri  yang  diketahui  dapat  menghasilkan xilanase.
Perbedaan  aktivitas  enzim  selulase  dari  12  isolat  dapat  terjadi  karena setiap  bakteri  selulolitik  menghasilkan  kompleks  enzim  selulase  yang  berbeda- beda  tergantung  yang  dimiliki.  Bakteri  selulolitik  memiliki kemampuan  yang berbeda  dalam  mendegradasi  substrat kerena dipengaruhi  oleh  gen penyusunnya. Gen  merupakan  faragmen  DNA  yang  memiliki  urutan  basa  tertentu  yang dipengaruhi oleh  sintesis  protein,  sehingga beberapa protein  enzim selulase  yang dihasilkan dari  genus  yang  sama  bias  memiliki  aktivitas  enzim  yang  berbeda apaligi dengan bakteri yang berbeda genus (Dahlena et al., 2014). Indeks selulolitik menunjukkan besarnya indeks selulase pada isolat diikuti pula besarnya  aktifitas  selulolitik  yang  dihasilkan  (Fahrudin,  2020).  Nilai  Indeks Selulolitik (IS)  yang berbeda dikarenakan perbedaan kemampuan masing-masing bakteri tersebut dalam mensintesis enzim selulase (Suprayatna et al., 2012).

## Uji Degradasi Kertas Filter
Pengujian  kemampuan  isolat  dalam  mendegradasi  selulosa  yaitu menggunakan  medium  selulolitik  cair  dan  kertas  filter  (Whatman  No.  1). Pengujian dilakukan pada 12 isolat. Hasil analisis tingkat degradasi selulosa dapat
dilihat pada Gambar 2.
Isolat  bakteri  selulolitik  yang  memiliki  kemampuan  untuk  mendegradasi selulosa ditunjukkan dengan berkurangnya berat akhir pada kertas (Whatman no. 1) atau dari kerusakan kertas  filter,  semakin  tinggi  selisih  antara  berat  awal  dan berat akhir kertas filter maka semakin tinggi degradasi yang terjadi (Arifin et al., 2019). Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan  didapatkan  hasil  tingkat degradasi  selulosa  pada kertas  (Whatman  no.  1)  rasio  3,63%  sampai  16,66%. Kemampuan  degradasi  tertinggi  ada  pada  isolat  DS13  sebesar  16,66%  hal  ini sejalan dengan  hasil  uji  IS Bacillus 1,3  mm  dapat  diartikan  bahwa  genus  ini memiliki kemampuan aktivitas enzim selulase yang baik.
Yusnia et  al., (2019) mengatakan bahwa besarnya  zona  bening  di  sekitar koloni  pada  medium  padat  dengan  kemampuan  organisme  tersebut  dalam mendegradasi  selulosa  kristalin  pada  media  cair  berbeda  disebabkan  karena perbedaan  kecepatan  pertumbuhan  setiap  isolat  pada  medium  padat  dan  cair. Selain itu, setiap bakteri selulolitik menghasilkan kompleks enzim selulase yang berbeda-beda,  tergantung  dari  gen  yang  dimiliki  dan  sumber  karbon  yang digunakan.
Perbedaan  kemampuan  setiap  isolat  dalam  mendegradasi  selulosa dipengaruhi  oleh  kemampuan  setiap  isolat  bakteri  dalam  mensistesis  enzim selulase.  Selulase  sebagai  enzim  ekstraseluler  pada  bakteri  umumnya  berfungsi memproduksi  nutrisi  dari  polimer-polimer  yang  terdapat  pada  substrat  yang mengandung  selulosa.  Jenis  bakteri  tertentu  akan  menghasilkan  partikel  yang disebut  selulosom.  Partikel  ini  akan  terdisintegrasi  menjadi  enzim-  enzim,  yang secara  sinergis  mendegradasi  selulosa.  Tidak  semua  bakteri  mampu  mensintesis tiga  jenis  kompleks  enzim  selulase  yang  digunakan  dalam  pemutusan  ikatan- ikatan  penyusun  senyawa  selulosa.  Hal  ini  yang  mempengaruhi  kemampuan  tiap bakteri  selulosa  dalam  mendegradasi  selulosa  khususnya  mikrofibril  penyususn serat selulosa (Ulfa et al., 2014).

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  isolasi  dan  aktivitas  bakteri  selulolitik  pada  limbah diapers  mengandung  bakteri  selulolitik  yang  dapat  tumbuh  pada  medium selulolitik  padat  yang  mengandung  CMC.  Isolat  bakteri  berhasil  diisolasi  dari sampel tersebut, menunjukkan kemampuan untuk tumbuh pada media CMC, serta membuktikan  bahwa  bakteri-bakteri  ini  dapat  memanfaatkan  selulosa  sebagai sumber nutrisi, terutama sebagai sumber karbon.
Indeks selulolitik tertinggi dimiliki isolate  DS07, mengindikasikan bahwa isolat tersebut memiliki aktivitas enzim selulase yang  lebih unggul  dibandingkan dengan  isolat  lainnya.  Uji  degradasi  kertas  filter  membuktikan  bahwa  beberapa isolat  bakteri  mampu  mendegradasi  selulosa  dalam  kertas  (Whatman  no.  1) dengan  tingkat  degradasi  yang  bervariasi.  Isolat  DS03  menonjol  dengan kemampuan  degradasi  tertinggi.  Perbedaan  kemampuan  isolat  bakteri  dalam menghasilkan enzim selulase dan mendegradasi selulosa ternyata dipengaruhi oleh gen penyusunnya, jenis bakteri, dan sumber karbon yang digunakan.

## DAFTAR PUSTAKA
Arifin,  Z.,  Gunam,  I.  B.  W.,  Antara,  N.  S.,  &  Setiyo,  Y.  (2019).  Isolasi  bakteri selulolitik  pendegradasi  selulosa  dari  kompos. Jurnal  Rekayasa  dan
Manajemen Agroindustri, 7 (1), 30-37.
https://doi.org/10.24843/JRMA.2019.v07.i01.p04
Bahter,  J.  V.,  &  Kepel,  B.J.  (2016).  Isolasi  Bakteri  Resisten  Merkuri  pada  Urin Pasien  dengan  Tumpatan  Amalgam  di  Puskesmas  Tuminting. eBiomedik,
4 (2), 1-7. https://doi.org/10.35790/ebm.v4i2.14265
Dahlena, M., Dahliaty, A., & Sya, S. D. (2014). Pemanfaatan Selulosa Popok Bayi Sebagai Substrat  untuk  Produksi  Enzim  Selulase  Pleh  Isolat  Bakteri  S-16 dan  S-22  Strain  Lokal  Riau. Jurnal  Online  Mahasiswa (JOM)  Bidang Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, 1 (2), 313-318.
https://jom.unri.ac.id/index.php/JOMFMIPA/article/view/3619/3512
Dewi,  Y.,  Robin,  R.,  Prasetyono,  E.,  &  Kurniawan,  A.  (2020).  Aktivitas Selulolitik dan  Patogenesitas  Bacillus  Cereus_TSS4  dari  Serasah  Daun Mangrove. Depik, 9 (1), 8-17.
Firdausi,  W.,  &  Zulaika,  E.  (2015).  Potensi  Azotobacter  spp.  Sebagai pendegradasi karbohidrat. Jurnal Sains dan Seni ITS, 4 (4), 15-26. Fahrudin, F. (2020). Isolasi dan Karakteristik Bakteri Pendegradasi Selulosa dari Limbah  Pusat  Industri  Mebel  Antang  Makassar. Jurnal  Serambi Engineering, 5 (2). https://ojs.serambimekkah.ac.id/jse/article/view/1922/0 Fauziah, S. I., & Ibrahim, M. (2020). Isolasi dan Karakterisasi Bakteri Selulolitik pada Tanah Gambut di Desa Tagagiri Tama Jaya, Kecamatan Pelangiran, Kabupaten Inhil, Riau. LenteraBio: Berkala Ilmiah Biologi, 9 (3), 194-203 Hidayatulloh,  A  Yahdiyani,  N.,  &  Nurhayati,  LS (2022).  Isolasi  dan  seleksi Bakteri  Kandidat Selulolitik dari Proses  Pembuatan Pupuk  Organic  pada Pengolahan  Limbah  Peternakan. Jurnal  Teknologi  Hasil  Peternakan,  3 (2), 65-72.
Janda,  J,  M.,  &  Abbott,  S  L.  (2006).  The  Genus  Hafnia:  from  Soup  to  Nuts. Clinical Microbiology Reviews, 19 (1), 12-28.
Kurniawan,  A.  (2018).  Bakteri  Selulolitik  Pada  Kayu  Lapuk  di  Mangrove
Sungailiat, Bangka dan Tukak Sadai, Bangka Selatan. Prosiding Seminar Nasional Lingkungan Lahan Basah, 3 (1), 301-305. https://snllb.ulm.ac.id/prosiding/index.php/snllb-lit/article/view/63/63 Khulud,  L.,  J.,  Febrianti,  D.,  Prasetiyono,  E., Robin,  R.,  &  Kurniawan,  A.
(2020).  Eksplorasi,  Seleksi  dan  Identifikasi  Kandidat  Bakteri  Selulolitik Asal  Ekosistem  Mangrove  Sungailiat,  Pulau  Bangka. Jurnal  Sains Dasar, 9 (1), 23-29.
Lubis,  S.,  Riwayat,  R.,  &  Idramsa,  I.  (2015). Seleksi dan Karakteristik Bakteri Endofit  dari  Tumbuhan  Raru  (Cotilelobium  melanoxylon)  pendegradasi selulosa. JBIO:  jurnal  biosains  (the  journal  of  biosciences),  1 (3),  100- 106).
Murtiyaningsih, H., & Hazmi, M. (2017). Isolasi dan uji aktivitas enzim selulase pada  bakteri  selulolitik  asal  tanah  sampah. Agritrop:  Jurnal  Ilmu-Ilmu Pertania (Journal of Agricultural Science), 15(2).
Munifah,  I.  (2021).  Limbah  Padat  Industry  Agar-Agar  Kajian  Karakteristik Beserta Bakteri Pendegradasinya. Pekalongan:  NEM
Mairizal,  M.,  Yurleni,  Y.,  Adriani,  A.,  &  Manin,  F.  (2021).  Iso  Isolasi  Bakteri Selulolitik  Asal  Saluran  Pencernaan  Rayap  dan  Daya  Hidupnya  pada berbagai  substrat  yang  berasal  dari  limbah  pertanian  dan  perkebunan. Jurnal ilmiah ilmu-ilmu peternakan, 24 (2), 81-96.
Nainggolan,  I.  C.,  &  Bodhi,  W.  (2018).  Isolasi  Bakteri  Resisten  Arsen  pada Sedimen  Tanah  di  Muara  Sungai  Buyat. eBiomedik,  6 (2),  111-117. https://ejournal.unsrat.ac.id/v3/index.php/ebiomedik/article/view/21994/21 694
Nofu,  K.,  Khotimah,  S.,  &  Lovadi,  I.  (2014). Isolasi dan  Karakteristik  Bakteri Pendegradasi  Selulosa  pada  Ampas  Tebu  Kuning  ( Bagasse ). Jurnal Protobiont, 3 (1), 25-33. https://jurnal.untan.ac.id/index.php/jprb/article/view/4577/4666
Parija,  S.  C.  ( 2009). Text  Book  of  Microbiology  and  Immunology .  India: Rajkamal Electric Press Suhu,  O.,  Gen,  P,  U,  D.,  Seprianto,  S.,  P.,  &  Wahyuni,  F,  D.  (2019).  Laporan Akhir Tahun Penelitian Hibah Internal. https://digilib.esaunggul.ac.id/public/UEU-Research-14111-16_0454.pdf
Suprayatna,  A.,  Rohimah,  I.,  Suryani,  Y.,  &  Sa’adah,  S.  (2012).  Isolasi  dan Identifikasi  Bakteri  Selulolitik  dari  Limbah  Sayuran  dan  Buah-buahan Organic Untuk Berperan Dalam Pembuatan Bahan Biogas. Jurnal ISTEK,
6 (1-2). https://etheses.uinsgd.ac.id/1297/1/1_cover.pdf Ulfa,  A.,  Khotimah,  S.,  &  Linda  R,  (2014).  Kemampuan  Degradasi  Selulosa Bakteri  oleh  Selulolitik  yang  Diisolasi  dari  Tanah  Gambut. Jurnal Protobiont, 3 (2), 259-267. https://jurnal.untan.ac.id/index.php/jprb/article/view/6836/7045 Washington,  W.  J.,  Stephen,  A.,  William,  J.,  Koneman,  E.,  Procop,  G.,  & Scheckenberger,  P.  (2006). Color  Atlas  and  Textbook  of  Diagnostic
Microbiology , (6 th ed.). New York: Lippincott Williams and Wilkins
Yogyaswari, SA, Rukmi, MI, & Raharjo, B. (2016). Eksplorasi bakteri selulolitik dari  cairan  rumen  sapi  Peranakan  Fries Holland  (PFH)  dan  Limousine Peranakan  Ongole  (Limpo). Jurnal  Akademik  Biologi,  5 (4),  70-80. https://ejournal3.undip.ac.id/index.php/biologi/article/view/19516
Yusrizal  &  Agustinur.  (2021).  Isolasi  Bakteri  Selulolitik  Indigenous
Pendegradasi Limbah Tandan Kosong Kelapa Sawit. Jurnal Metamorfosa of Biological Sciences 8(1), 150-155. https://ojs.unud.ac.id/index.php/metamorfosa/article/download/85497/465 58