Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanolik Daun Singkil ( Premna corymbosa ) Terhadap Bakteri Salmonella typhi Secara In Vitro
In Vitro Antibacterial Activity Ethanolic Extract of Singkil Leaves ( Premna corymbosa ) Against Salmonella typhi Bacteria
Margareta Retno Priamsari 1 , Eka Aprilia Nuraida 2 1,2 Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Nusaputera Semarang marga_rhee@yahoo.co.id , eituhaku65@gmail.com
DOI : https://doi.org/10.55181/ijms.v9i2.368
Abstract : Singkil leaves (Premna corymbosa) contain secondary metabolites in the form of flavonoids, saponins,  tannins  and  triterpenoids/steroids  that  can  inhibit  the  growth  of  Salmonella  typhi  bacteria. The purpose of this study was to determine the antibacterial activity of the ethanolic extract of singkil leaves  in  inhibiting  Salmonella  typhi  bacteria  in  vitro.  Extraction  was  carried  out  using  maceration method  with  70%  ethanol  solvent,  then  continued  with  extract  quality  control  and  phytochemical screening  of  flavonoid  compounds,  saponins,  and  tannins.  Antibacterial  activity  using  disc  diffusion method with Mueller Hilton Agar (MHA) media. The antibacterial concentration of the extract was 50%, 60%, 70%, 80%, and 90%; positive control (chloramphenicol 30µg) and negative control (DMSO 10%) with  3 replications.  Incubation  was carried out at 37°C for 24 hours. The parameter observed was a clear  zone  formed  around  the  paper  disc.  The  data  obtained  were  then  analyzed  statistically  using Kruskal  Wallis  followed  by  Man  Whitney  with  a  95%  confidence  level.  The  results  showed  that variations in the concentration of the ethanolic extract of singkil leaves had a significant effect (p<0.15). The largest inhibition zone was seen at a concentration of 90% at 20.1 ± 1.05 mm with a very strong category. The minimum inhibitory power produced at a concentration of 70% was 17.7 ± 0.88 mm with a strong inhibition category.
Keywords: antibacterial activity, salmonella typhi, premna corymbosa, disc diffusion method.
Abstrak : Daun singkil ( Premna corymbosa ) memiliki kandungan senyawa metabolit sekunder berupa flavonoid,  saponin,  tanin  dan  triterpenoid/steroid  yang  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri Salmonella  typhi. Tujuan  penelitian  ini  untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanolik  daun singkil dalam menghambat bakteri Salmonella typhi secara in vitro . Ekstraksi dilakukan menggunakan metode  maserasi  dengan  pelarut  etanol  70%,  kemudian  dilanjutkan  kontrol  kualitas  ekstrak  dan skrining  fitokimia  senyawa  flavonoid,  saponin,  dan  tanin.  Aktivitas  antibakteri  menggunakan  metode difusi cakram dengan media Mueller Hilton Agar (MHA). Konsentrasi antibakteri ekstrak sebesar 50%, 60%,  70%,  80%,  dan  90%;  kontrol  positif  (kloramfenikol  30µg)  dan  kontrol  negatif  (DMSO  10%) dengan 3 kali replikasi. Inkubasi dilakukan pada suhu 37°C selama 24 jam. Parameter yang diamati berupa zona bening yang terbentuk disekitar kertas cakram. Data yang diperoleh kemudian dianalisis statistik menggunakan Kruskal Wallis dilanjutkan Man Whitney dengan taraf kepercayaan 95%. Hasil penelitian menunjukkan  bahwa variasi  konsentrasi ekstrak etanolik  daun singkil  berpengaruh  secara signifikan  (p<0.15).  Zona  hambat  terbesar  terlihat  pada  konsentrasi  90%  sebesar  20,1±1,05  mm dengan  kategori  sangat  kuat.  Daya  hambat  minimum  dihasilkan  pada  konsentrasi  70%  sebesar 17,7±0,88 mm dengan kategori penghambatan kuat.
Kata kunci: aktivitas antibakteri, salmonella typhi, premna corymbosa , metode difusi cakram.

## PENDAHULUAN
Salmonella  typhi ,  merupakan  bakteri gram  negatif  penyebab  penyakit  demam  tifoid  / typhus  abdominalis /  demam  enteri    yang spesifik  menyerang  manusia.  Pada  pasien demam  tifoid,  bakteri  ini berada  di  dalam aliran darah  dan  saluran  pencernaan.  Penyakit demam  tifoid  dapat  menular  melalui  makanan dan  minuman  yang  telah  tercemar  oleh Salmonella typhi sehingga berpotensi menimbulkan wabah (Soedarto, 2007).
Angka  kejadian  demam  tifoid  di  dunia diperkirakan sebanyak 21 juta kasus dan sekitar
128.000 sampai 161.000 kematian setiap tahun, kasus  terbanyak  terdapat  di  Asia  Selatan  dan Asia Tenggara. Demam tifoid termasuk penyakit yang  mudah  menular.  Pada  daerah  endemik penyebab utama penularan demam tifoid adalah air  yang  tercemar  sedangkan  daerah  non endemik berasal dari makanan yang terkontaminasi.    Demam  tifoid  dapat  di  atasi dengan penggunaan antibiotik (Nurvina, 2013).
Antibiotik  pertama  untuk  mengobati demam  tifoid  adalah  kloramfenikol  dan selanjutnya  menjadi  terapi  pilihan  sampai  tiga dekade  di  samping  ampisilin  dan  trimetoprim-
sulfametoksazol,  sehingga  dilaporkan  resistensi Salmonella  typhi  terhadap  kloramfenikol  dan ampisilin  atau  dikenal  sebagai  MDR  (Multiple Drug  Resistance)  Salmonella  typhi  (Erviani, 2013).  Uji  sensitivitas  menunjukkan  ampisilin, amoksisilin, dan kloramfenikol resisten terhadap bakteri tersebut (Juwita dkk, 2013).
Dalam upaya mengatasi masalah tersebut salah satunya dengan mengambil jalan alternatif yaitu menggunakan  obat-obatan alami berbahan  dasar  tumbuhan  atau  bisa  disebut obat herbal. Obat herbal telah digunakan secara tradisional pada negara dengan akses pelayanan  kesehatan  formal  yang  terbatas (Depkes RI, 2007).
Tanaman  singkil  (Premna  corymbosa) biasa  tumbuh  di  pekarangan  rumah  atau perkebunan  pada  daerah  Tenggarong.  Daun singkil muda digunakan sebagai obat asam urat. Cara  pengolahan  dan  penggunaan  adalah dengan  merebus  daun  singkil  kemudian  air rebusannya diminum (Vavidu et al., 2009). Daun dan  akar  berkhasiat  sebagai  astringen, antiinflamasi,  antibakteri,  gangguan  jantung, batuk,  kusta,  penyakit  kulit,  sembelit,  demam, diabetes,  obesitas,  sakit  perut,  antikoagulan, hepatoprotektif dan tumor (Ravinder, 2011).
Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Oktaviani dkk (2015) tentang penapisan fraksi antioksidan daun singkil menyatakan bahwa fraksi n-heksan mengandung  senyawa  steroid,  fraksi  kloroform mengandung  alkaloid,  polifenol,  steroid  dan saponin.  Fraksi  metanol  mengandung  senyawa flavonoid,  polifenol,  terpenoid  dan  saponin. Banyaknya  kandungan  senyawadalam  daun singkil  berpotensi  untuk  dikembangkan  sebagai obat bahan alam.
Hasil  penelitian  Widiyastuti  &  Martina (2017)  menunjukkan  bahwa  pemberian  ekstrak daun  singkil  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri Staphylococcus
aureus dengan konsentrasi  maksimum  penghambatan  ekstrak sebesar 90% dan rata-rata zona hambat 11 mm.
Berdasarkan  penelusuran  pustaka belum pernah  dilakukan  penelitian  tentang  aktivitas antibakteri ekstrak daun singkil terhadap bakteri Salmonella typhi.

## METODE PENELITIAN Alat
Seperangkat  alat  gelas  (Pyrex),  mikro pipet,  moisture  analyzer  (MA  50.R  radwaf), hot plate (Scilogex MS7-H550-S), waterbath , magnetic  stirer ,  jarum  ose  bulat,  cawan  petri, gelas ukur 100 ml (Herma), Pipet, kertas saring, oven  (WTC  binder),  inkubator  (Memmert), autoklaf  (All  American),  kapas,  neraca  analitik digital (Mettler Toledo).
Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  meliputi  daun  singkil  berumur  ±  4  bulan, suspensi biakan bakteri Salmonella typhi , media MHA  (Kimia  Jaya  Labora),  alkohol  70% (Brataco), FeCl ₃ , akuades, disk kloramfenikol 30 µg (Oxoid), DMSO 10%, HCl 2N, FeCl ₃ . .

## Jenis dan Rancangan Penelitian
Jenis  penelitian  berupa  eksperimental untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  ekstrak etanolik  daun  singkil.  Rancangan  penelitian yang digunakan adalah rancangan acak lengkap pola searah dengan dilakukan replikasi 3 kali.

## Preparasi Sampel dan Ekstraksi
Daun singkil setelah dideterminasi kemudian  dicuci,  ditimbang  dan  dilakukan pencucian dan pengeringan menggunakan oven suhu  50°C  (BPOM  RI,  2013).  Pengeringan dilakukan hingga didapat kadar susut pengeringan di bawah 10% kemudian diekstraksi  secara  maserasi  dengan  pelarut etanol 70% selama 3 hari.

## Analisis Kualitas Ekstrak
Penentuan  kualitas  ekstrak  dilakukan secara  organoleptis,  perhitungan  rendemen, susut  pengeringan  dan  skrining  fitokimia. Pengujian  skrining  fitokimia  dilakukan  terhadap senyawa  metabolit  sekunder  flavonoid,  saponin dan tannin sebagai berikut:

## Senyawa Flavonoid
Larutan  ekstrak  sebanyak  lebih  kurang  2 mL  ditambah  akuades,  dipanaskan  dan  saring. Filtrat  ditambah  1  mL  HCl  (p),  serbuk magnesium, dan amil alkohol kemudian dikocok. Bila  terbentuk  kuning,  orange  atau  merah  pada lapisan  amil  alkohol  menunjukkan  adanya flavonoid (Simaremare, 2014).

## Senyawa Saponin
Larutan  ekstrak  sebanyak  lebih  kurang  2 mL  ditambahkan  air  panas  dan  didinginkan kemudian  dikocok  kuat  selama  10  detik.  Jika terbentuk  buih  selama  tidak  kurang  10  menit, setinggi  1-10  cm  dan  tidak  hilang  jika ditambahkan 1 tetes HCl 2N maka menunjukkan adanya saponin (Tiwari dkk, 2011).

## Senyawa Tannin
Larutan  ekstrak  sebanyak  ±  2  mL ditambahkan  1-2  tetes  pereaksi  FeCl ₃ 1%.  Jika terjadi  warna  biru  tua  atau  hitam  kehijauan menunjukkan adanya tanin (Priyanto, 2012).

## Pengujian  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Etanolik Daun Singkil
Sterilisasi Media yang digunakan disterilisasi dengan  autoklaf  pada  suhu  121 ̊  C  selama  15
menit. Cawan petri dan tabung reaksi disterilkan dengan oven pada suhu 170 ̊ - 180 ̊ C selama 2 jam,  sedangkan  alat  alat  seperti  jarum  ose disterilkan  dengan  pemanas  api  langsung (Suriawiria,2005).

## Pembuatan Media
Sebanyak  3,8  g  media  MHA  ditimbang dan dimasukkan akuades 100mL dan dipanaskan  hingga  terlarut.  Media  kemudian disterilisasi  menggunakan  autoklaf  pada  suhu 121°C selama 15 menit (Handayani dkk., 2017).

## Pembuatan Suspensi Bakteri
Bakteri Salmonella  typhi yang  telah diinokulasi  dengan  jarum  ose  steril  lalu disuspensikan  dalam  tabung  berisi  3  mL  NaCl 0,9%  hingga  diperoleh  kekeruhan  yang  sama dengan Mc. Farland (Bresson & Borges, 2004).

## Aktivitas Antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  menggunakan metode  difusi  cakram.  Pengujian  dilakukan dengan  mempersiapkan  cawan  petri  steril  yang terbagi  menjadi  7  juring,yaitu  sebagai    kontrol negatif  (DMSO  10%),    kontrol    positif (kloramfenikol  30  µg),  dan      lima      konsentrasi ekstrak   etanolik daun singkil 50, 60, 70, 80 dan 90%.  Suspensi  bakteri  1  mL  dimasukkan  ke dalam  cawan  petri  kemudian  ditambahkan media  MHA  dan  dihomogenkan.  Cakram dimasukkan  dalam  larutan  uji,  ditiriskan  dan ditempatkan  pada  setiap  juring.  Inkubasi dilakukan pada suhu 37°C selama 24 jam. Hasil pengamatan  terlihat  berupa  zona  bening  yang terbentuk di sekitar cakram dan diukur diameter zona  hambat  secara  vertikal  dan  horizontal. Replikasi dilakukan tiga kali.
Analisis Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanolik Daun Singkil
Data  yang  diperoleh  berupa  diameter zona  hambat  di  analisis  statistik  menggunakan Kruskal-Wallis lalu  dilanjutkan Mann  Whitney dengan taraf kepercayaan 95%

## HASIL PENELITIAN
Hasil  penentuan  kontrol  kualitas  ekstrak dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Kontrol Kualitas Ekstrak Parameter Hasil Pengujian Organoleptis Konsistensi Ekstrak kental Bau Khas Warna Coklat kehitaman Rasa Pahit Rendemen (%) 18 Kadar Susut pengeringan (%) 3,44 ± 1,28 Tabel 2. Hasil Skrining Fitokimia Senyawa Pereaksi Pustaka Hasil
Flavonoid HCl (p) + serbuk magnesium + amil alkohol Merah / kuning / orange Merah tua Saponin Air panas + HCl 2N busa stabil busa stabil Tanin FeCl 3 Hitam kehjauan Hitam kehjauan
Hasil  pengujian  aktivitas  antibakteri terhadap  bakteri Salmonella  typhi dapat  dilihat pada Tabel 3 berikut ini.
Tabel  3. Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanolik
Daun Singkil Konsentrasi Diameter Zona Hambat (mm) 1 2 3 Rata-rata ± SD 1 0 0 0 0 a 2 0 0 0 0 a 3 17,2  17,3  18,7 17,7 ± 0,84 b 4 18,4  17,9  19,0 18,4 ± 0,55 c 5 19,5  20,0  20,8 20,1 ± 0,66 d 6 25,9  27,0  28,0 26,9 ± 1,05 e 7 0 0 0 0 a Keterangan: 1.  Konsentrasi ekstrak etanol daun singkil 50%
2.  Konsentrasi ekstrak etanol daun singkil 60%
3.  Konsentrasi ekstrak etanol daun singkil 70%
4.  Konsentrasi ekstrak etanol daun singkil 80%
5.  Konsentrasi ekstrak etanol daun singkil 90%
6.  Kontrol positif (kloramfenikol 30 µg)
7.  Kontrol negatif (DMSO 10%)
Nilai subscript yang  berbeda  menunjukkan  perbedaan bermakna  (p<0.05)  dengan  uji Mann  Whitney taraf kepercayaan 95%.

## Gambar 1. Hasil Pengujian Aktivitas Antibakteri
Keterangan: 1.  Konsentrasi ekstrak etanol daun singkil 50%
2.  Konsentrasi ekstrak etanol daun singkil 60%
3.  Konsentrasi ekstrak etanol daun singkil 70%
4.  Konsentrasi ekstrak etanol daun singkil 80%
5.  Konsentrasi ekstrak etanol daun singkil 90%
6.  Kontrol positif (kloramfenikol 30 µg)
7 . Kontrol negatif (DMSO 10%)

## PEMBAHASAN
Tabel  1  menunjukkan  bahwa  pada pengujian  secara  organoleptis  ekstrak  daun singkil memiliki konsistensi kental dengan warna coklat  kehitaman,  bau  khas  dan  rasa  pahit.
Perhitungan rendemen bertujuan untuk mengetahui  banyaknya  ekstrak  yang  diperoleh selama  proses  ekstraksi.  Semakin  tinggi rendemen  suatu  simplisia  maka  semakin banyak  senyawa  yang  terisolasi  (Nurasiah, 2010).  Susut  pengeringan  ekstrak  daun  singkil memenuhi  syarat  dengan  nilai  rata-rata 3,44±1,28%.
Kadar susut
pengeringan memenuhi  persyaratan  jika  ≤  10%  (Voight, 1994)  karena  kadar  susut  pengeringan  ≥  10% akan mempengaruhi stabilitas ekstrak.
Pengujian  skrining  fitokimia  dilakukan untuk  mengidentifikasi  kandungan  senyawa dalam  ekstrak  etanolik  daun  singkil  yang berpotensi  sebagai  antibakteri.  Hasil  pengujian skrining  dapat  dilihat  pada  Tabel  2.  Data  pada Tabel  3  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanolik daun  singkil  dengan  lima  dari  dua  konsentrasi, yaitu  50  dan  60%  tidak  mempunyai  aktivitas antibakteri  terhadap  Salmonella  typhi.  Zona hambat  konsentrasi    70  dan  80%  memiliki aktivitas  antibakteri  dengan  kategori  kuat, Sedangkan  pada  konsentrasi  90%  termasuk kategori  daya  hambat  sangat  kuat.  Gambar hasil pengujian aktivitas antibakteri terlihat pada gambar 1.
Pada  pengujian  flavonoid,  penambahan serbuk  Mg  dan  HCl  pekat  bertujuan  untuk mereduksi  inti  benzopiron  yang  terdapat  pada struktur  flavonoid  sehingga  terbentuk  garam flavilium.  Serbuk  Mg  dan  HCl  bereaksi membentuk gelembung yang merupakan gas H ₂
(Illing  dkk.,  2017).  Hasil  pengujian  fitokimia menunjukkan  ekstrak  etanolik  daun  singkil mengandung  flavonoid  yang  ditandai  dengan adanya  warna  merah  tua  pada  lapisan  amil alkohol.
Pada  pengujian  saponin  pengocokan larutan  ekstrak  terbentuk  buih  ±  1-2  cm  yang tidak  hilang  dengan  penambahan  HCl  2N. Saponin  merupakan  senyawa  yang  memiliki gugus  hidrofilik  dan  hidrofobik.  Gugus  hidrofilik berikatan  dengan  air  dan  gugus  hidrofobik berikatan  dengan  udara  sehingga  membentuk buih ketika dikocok (Harborne, 1987).
Penambahan  HCl  2N  bertujuan  agar  tingkat kepolaran  bertambah,  sehingga  gugus  hidrofilik memiliki  ikatan  yang  lebih  kuat  dan  busa  yang terbentuk  stabil.  Gugus  polar  menghadap  ke luar dan gugus non polar menghadap ke dalam pada  struktur  misel  dan  keadaan  ini  yang membentuk busa (Simaremare, 2014).
Pada  pengujian  tanin  ditambahkan reagen  FeCl ₃ 1%.  Hasil  positif  ditunjukkan dengan  perubahan  warna  hitam  kehijauan.
Penambahan FeCl ₃
digunakan untuk menentukan gugus fenol dalam ekstrak. Dugaan adanya gugus fenol ditunjukkan dengan adanya warna hijau kehitaman atau biru tinta (Harbome, 1987).  Terbentuknya  warna  hitam  kehijauan
setelah  penambahan  FeCl ₃ disebabkan  karena tanin  akan  membentuk  senyawa  kompleks dengan ion Fe 3+ (Effendi, 2007).
Pengujian  aktivitas  antibakteri  ekstrak etanolik  daun  singkil  menggunakan  metode difusi  cakram.  Metode  ini  menjadi  metode  yang dipilih  karena  memiliki  keuntungan  yaitu prosedurnya  yang  sederhana  (praktis  dan mudah)  untuk  dilakukan  dan  dapat  digunakan untuk melihat sensitivitas berbagai jenis bakteri. Penanaman  suspensi  bakteri  menggunakan teknik  pour  plate  (metode  tuang).  Metode  pour plate  dipilih  karena  untuk  mendapatkan  koloni murni mikroorganisme (Angelia,2020).
Ekstrak  etanolik  daun  singkil  diencerkan dengan  pelarut  dimethylsulfoxide  (DMSO)  dan akuades  steril.  Tujuan  menggunakan  pelarut DMSO  adalah  merupakan  pelarut  organik  dan tidak  bersifat  bakterisidal  (Assidqi et  al .,  2012). Hal  ini  menandakan  bahwa  DMSO  tidak memiliki  aktivitas  antibakteri  sehingga  hasilnya tidak  dipengaruhi  pengamatan.  DMSO  juga merupakan  pelarut  yang  dapat  melarutkan hampir semua senyawa polar maupun non polar sehingga dapat  digunakan  juga sebagai control negatif  (Amalia dkk ,  2016).  Konsentrasi  ekstrak etanol  menggunakan  50,  60,  70,  80  dan  90%. Kontrol positif menggunaan klorampenikol 30 µg karena  kloramfenikol  merupakan  antibiotik golongan amphenicol yang bersifat bakteriosidal dengan  memiliki  aktivitas  spektrum  luas  aktif terhadap bakteri patogen (Martaleni, 2007).
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa ekstrak etanolik daun singkil mampu menghambat  pertumbuhan Salmonella  typhi secara in vitro. Ekstrak etanolik daun singkil dari hasil  pengujian  skrining  fitokimia  menunjukkan adanya  kandungan  senyawa  flavonoid,  saponin dan  tannin.  Flavonoid  merupakan  golongan terbesar  senyawa  fenol.  Mekanisme  kerja senyawa  flavonoid  sebagai  antibakteri  dengan membentuk senyawa kompleks terhadap protein ekstraseluler  yang  mengganggu  keutuhan membran  sel  bakteri.  Mekanisme  kerjanya dengan  cara  mendenaturasi  protein  sel  bakteri dan merusak membran sel tanpa diperbaiki lagi (Haryati, 2015). Darmawi, dkk. (2013)
menyatakan  bahwa  senyawa  fenol  mampu memutuskan ikatan peptidoglikan dalam usahanya  menerobos  dinding  sel.  Setelah menerobos  dinding  sel,  senyawa  fenol  akan menyebabkan  kebocoran  nutrient  sel  dengan cara  merusak  ikatan  hidrofobik  komponen membran  sel  (seperti  protein  dan  fospolipida) sehingga  terjadinya  kerusakan  pada  membran sel  bakteri  yang  mengakibatkan  terhambatnya aktivitas  dan  biosintesa  enzim-enzim  spesifik yang  diperlukan  dalam  reaksi  metabolisme bakteri.
Saponin  akan  mengganggu  tegangan permukaan  dinding  sel,  maka  saat  tegangan
permukaan terganggu zat antibakteri akan dapat dengan  mudah  masuk  kedalam  sel  dan  akan mengganggu  metabolisme  hingga  akhirnya terjadilah  kematian  bakteri.  Saponin  termasuk dalam  zat  antibakteri  yang  menghambat  fungsi membran  sel  mikroba.  Saponin  membentuk senyawa  kompleks  dengan  membran  sel melalui ikatan hidrogen sehingga menghancurkan  sifat  permeabilitas  dinding  sel, menyebabkan pelepasan isi sel dan menimbulkan  kematian  sel  (Permatasari  dkk., 2013).
Mekanisme kerja tanin sebagai antibakteri yaitu  dengan  cara  menyebabkan  sel  menjadi lisis.  Hal  ini  terjadi  karena  tanin  memiliki  target pada  dinding  polipeptida  dinding  sel  bakteri sehingga  pembentukan  dinding  sel  menjadi kurang  sempurna  dan  kemudian  sel  bakteri akan  mati.  Tanin  juga  memiliki  kemampuan untuk  menginaktifkan  enzim  bakteri  serta mengganggu  jalannya  protein  pada  lapisan dalam sel (Ngajow dkk, 2013).

## SIMPULAN
Ekstrak  etanolik  daun  singkil  mempunyai aktivitas antibakteri terhadap bakteri Salmonella typhi secara in vitro. Semakin tinggi konsentrasi ekstrak  etanolik  daun  singkil  maka  aktivitas antibakteri  semakin  besar.  Konsentrasi  90% mempunyai  aktivitas  antibakteri  kategori  sangat kuat  dengan  diameter  zona  penghambatan sebesar 20,1±0,66 mm.

## DAFTAR PUSTAKA
Amalia  S.,  Wahdaningsih  S.,  Untari  E.K.,  2016, Uji  Aktivitas  Antibakteri  Fraksi  n-Heksan Kulit  Buah  Naga  Merah  ( Hylocereus polyrhizus Britton  &  Rose)  Terhadap Bakteri Staphylococcus  aureus ATCC 25923. Jurnal  Fitofarmaka  Indonesia . 2016;1(2): 61-64.
Angelia O.I., 2020, Penggunaan Metode Cawan Tuang Terhadap Uji Mikroba Pada Tepung Kelapa, Journal  of  Agritech  Science , Volume 4, Nomor 1., Politeknik Gorontalo.
Assidqi  K.,  Tjahjaningsih  W.,  Sigit  S.,  2012, Potensi  Ekstrak  Daun  Patikan  Kebo ( Euphorbia  hirta )  sebagai  Antibakteri terhadap Aeromonas  hydrophila secara In Vitro . Journal  of  Marine  and  Coastal Science , 1(2):113 – 124.
BPOM RI, 2013, Pedoman Teknologi Formulasi Sediaan  Berbasis  Ekstrak, Volume  2, BPOM RI, Jakarta.
Bresson,  W.,  dan  Borges  M.T.,  2004.  Delivery Methods for Introducing Endophitic Bacteria into Maize. Biocontrol. 49: 315-322.
Darmawi,  Zakiah  M.,  dan  Fahri  P.,  2013.  Daya Hambat  Getah  Jarak  Cina  ( Jatropha multifida  L .)  terhadap Staphylococcus aureus secara In  Vitro. Journal  Medika Veterinaria, Vol.7 No.2.
Depkes  RI.  1995. Farmakope  Indonesia (Edisi IV). Jakarta: Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Depkes  RI.,  2000. Parameter  Standar  Umum Ekstrak  Tumbuhan  Obat .  4  ed.  3  vol. Direktorat Pengawasan Obat Tradisional.
Depkes RI., 2006, Monografi Ekstrak Tumbuhan Obat  Indonesia ,  Vol.  2,  124,  Jakarta, Depkes RI.
Depkes RI., 2007. Keputusan Mentri Kesehatan RI No: 900/MENKES/VII/2007.
Effendi, 2007, Perspektif Baru Kimia Koordinasi ,
Jilid 1, Banyu Media Publishing, Malang. Erviani, E.A., 2013, Analisis Multidrug Resistensi Terhadap Antibiotik  Pada Salmonella  typhi Dengan  Teknik  Multiplex PCR,  Vol  1,  Nomor  1, Biogenesis  Jurnal Ilmiah Biologi , Hal 51-60.
Handayani. F., Reksi. S.,  dan  Ria. M. S.,  2017. Formulasi  dan  Uji  Aktivitas  Antibakteri Streptococcus mutans dari Sediaan Mouthwash  Ekstrak  Daun  Jambu  Biji (Psidium guajava L.).  Samarinda:  Akademi Farmasi Samarinda.
Harborne,  J.  B.  1987. Metode  Fitokimia . Bandung: Institut Teknologi Bandung.
Haryati, N.A., 2015, Uji Toksisitas Dan Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Daun  Merah  Tanaman Pucuk Merah ( Syzygium myrtifolium Walp.) Terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus Dan Escherichia  coli , Jurnal  Kimia Mulawarman , 13 (1): 35-40.
Illing,  I.,  W.  Safitri,  dan  Erfiana.  2017.  Uji Fitokimia  Ekstrak  Buah  Dengen. Jurnal Dinamika 08 (1), 66-84.
Juwita, S., Hartoyo, E., Budiarti, Y.L., 2013, Pola
Sensitivitas In  Vitro Salmonella  typhi Terhadap Antibiotik Kloramfenikol, Amoksisilin,  dan  Kotrimoksazol, Berkala Kedokteran , 9 (1) : 25-34.
Martaleni.,  2007.  Deteksi  Residu  Antibiotika Pada  Karkas,  Organ  Dan  Kaki  Ayam
Pedaging  Yang  Di  Peroleh  Dari  Pasar
Tradisional  Kabupaten  Tangerang. Tesis, Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Ngajow, M., Abidjulu, J. dan Kamu, V. S., 2013, Pengaruh  Antibakteri  Ekstrak  Kulit  Batang Matoa  ( Pometia  pinnata )  Terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus secara In  Vitro, Jurnal MIPA Unsrat Online 2 (2): 128-132.
Nurasiah,  E.    S.    2010.    Pengoptimuman Ekstraksi  Andrografolida  Dari  Sambiloto dengan  Rancangan  Fraksional  Faktorial. Skripsi Departemen Kimia Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam Institut Pertanian Bogor, Bogor Nurvina.  2013.  Hubungan  antara  Sanitasi
Lingkungan,  Hygiene  perorangan  dan Karakteristik  Individu  dengan  Kejadian Demam Tifoid di Wilayah Kerja Puskesmas Kedungmundu  Kota  Semarang. Skripsi . Semarang: Universitas Negeri Semarang
Oktaviani.  E,  Wibowo  M.  A.  Idiawati.  N,  2015. Penapisan  Fraksi  Antioksidan  Daun  Buas- buas ( Premna serratifolia Linn). Pontianak : Universitas Tanjungpura. Vol. 4 (3):55-73
Permatasari,  G.  A.  A.  A.,  Besung,  I.  N.  K., Mahatmi,  H.  2013.  Daya  Hambat  Perasan Daun  Sirsak  Terhadap  Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli. Indonesia Medicus
Veterinus. 2 (2):  162 – 169
Priyanto  R.A,  2012.  Aktivitas  Antioksidan  Dan
Komponen  Bioaktif  Pada  Buah  Bakau ( Rhizophora mucronata Lamk.). Departemen  Teknologi  Hasil  Perairan
Fakultas  Perikanan  Dan  Ilmu  Kelautan Institut Pertanian Bogor. Skripsi, Bogor
Ravinder.  S.  C,  Nelson.  R,  Krishnan.  P.M,  dan Pargavi.  B.,  2011.  Identification  of  Volatile Constituents  From  Premna  serratifolia  L. Journal of PharmTech Research . ThroughGC-MS. Vol. 3
Simaremare,  Eva  Susanty.  2014.  Skrining Fitokimia  Ekstrak  Etanol  Daun  Gatal ( Laportea  decumana (Roxb.)  Wedd). Pharmacy, Vol.11.  Program Studi Farmasi, Jurusan Biologi, Fakultas MIPA Universitas Cenderawasih, Jayapura
Simaremare, dkk. 2014. Formulasi dan evaluasi daun  gatal  ( Laportea  decumana (Roxb.) Wedd) sebagai kandidat antinyeri,
Tanaman Obat Indonesia.
Soedarto,  2007. Sinopsis  Kedokteran  Tropis . Cetakan  ke-1.  Airlangga  University  Press, Surabaya
Suriawiria,  U.,  2005 Mikrobiologi  Dasar. Gramedia ,  Jakarta.  The  United  State Pharmacopeial  Convention.  30th  Edition. United States. Hal. 680
Tiwari, P., Kumar, B., Kaur, M., Kaur G., & Kaur
H.,  2011,  Phytochemical  Screening  and Extraction: A Review, International Pharmaceutica Sciencia , 1 (1): 98-106.
Vavidu,  R.  Suresh  AJ,  Girinath  K,  Kannan  PB, Vimala  R,  Kumar  NMS.  2009.  Evalution  of Hepatoprotective  and  In-vitro  Cytotoxic Activity  of  Leaves  of Premna  serratifolia Linn. Journal  of  Scientific  Research .  1  (1):
145- 152
Voight,  R.,  1994,  Buku  Pengantar  Teknologi Farmasi,  572-574,  diterjemahkan  oleh
Soedani, N., Edisi V, Yogyakarta, Universitas Gadjah Mada Press.
Widiyastuti,  Gita  dan  Martina  Restuati.,  2017.
Pengaruh Ekstrak Daun Buas-Buas
( Premna  pubescens Blume)  Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus Secara In  Vitro .  Jurnal  Biosain. Vol.3, No 1.