## UJI ANTIBAKTERI DARI  BAKTERI ASAM LAKTAT HASIL
FERMENTASI SELADA ROMAIN ( Lactuca sativa var. longifolia Lam.)
Acika M. Sumual 1) , Fatimawali 1) , Trina E. Tallei 2)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115
2) Jurusan Biologi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Lactic Acid Bacteria (LAB) are a group of Gram-positive bacteria that produce lactic acid as the major  metabolic  end  product.  They  are  cocci  or  rods,  nonsporulating  and  are  anaerobic  or  facultative anaerobes  bacteria.  Most  LABs  are  probiotics  that  are  known  to  have  good  benefits  to  health,  such  as inhibiting some pathogens. This study was aimed to examine the potential probiotics properties of LAB isolates  from  Romaine  lettuce  fermentation  which  is  included    antibacterial  activity  of  isolates.  The isolates  are  spread  on  MRS  agar    supplemented  with  1%  of  CaCO 3 and  then  purified  by  using  streak method  to  obtain  pure  isolates.  The  results  showed  that  there  are  4  isolates  from  Romaine  lettuce fermentation which have the potential to inhibits some pathogens.
Key words: Lactic acid bacteria, fermentation, Romain lettuce, potential probiotic

## ABSTRAK
Bakteri  Asam  Laktat  (BAL)  merupakan  sekelompok  bakteri  Gram  positif  yang  menghasilkan asam  laktat  sebagai  produk  akhir  metabolisme.  Berbentuk  kokus  atau  batang,  tidak  memiliki  spora  dan bersifat  anaerob  atau  fakultatif  anaerob.  Sebagian  besar  BAL  merupakan  probiotik  yang  diketahui memiliki  manfaat  baik  bagi  kesehatan,  seperti  memiliki  aktivitas  antibakteri.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  menguji  kemampuan  isolat  BAL  dari  hasil  fermentasi  selada  Romain  sebagai  probiotik  potensial yang  mencakup  aktivitas  antibakteri  isolat.  Isolat  bakteri  ditumbuhkan  pada  media  MRS  agar    yang ditambahkan  1%  CaCO 3 kemudian  dimurnikan  menggunakan  metode  gores  (streak)  sehingga  diperoleh isolat  murni  yang  kemudian  diuji.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ke  empat  isolat  yang  diperoleh dari hasil fermentasi selada romain yang berpotensi memiliki aktivitas penghambatan bakteri patogen
Kata kunci : Bakteri asam laktat, fermentasi, selada Romain, probiotik potensial

## PENDAHULUAN
Bakteri Asam Laktat (BAL) merupakan sekelompok bakteri Gram positif yang tidak menghasilkan spora dan memiliki metabolism homofermentatif dan heterofermentatif  serta  menghasilkan  asam laktat  yang  difermentasi  dari  karbohidrat (Salminen et al. , 2012).
Fermentasi  merupakan  salah  satu bentuk  pengolahan  makanan  yang  paling kuno  yang  masih  banyak  dipakai  untuk memperpanjang masa penyimpanan makanan  (Juodeikiene et  al .,  2012).  Pada proses fermentasi terjadi konversi karbohidrat  dan  makromolekul  lainnya menjadi asam organik menggunakan bakteri dalam  kondisi  anaerobik.  Makanan  yang difermentasi terbukti sebagai pangan fungsional  yang  dapat  memberikan  manfaat baik bagi tubuh yang mana dapat meminimalisir  risiko  penyakit  tertentu (Getahun et  al .,  2016)  seperti  penyakit irritable  bowel  syndrome , inflammatory bowel  diseases sampai  kanker  usus  besar (Kaur et al. , 2014; Lahtinen et al. , 2012).
Salah  satu  bahan  makanan  yang dapat  difermentasi  yaitu  selada.  Selada Romain  merupakan  salah  satu  varietas selada  yang  memiliki  daun  yang  panjang, runcing  dan    tegak.  Daun  selada  Romain lebih  kuat  dari  daun  selada  yang  lainnya (Fontenot et al ., 2014) yang membuat selada ini  tidak  mudah  rapuh  selama  proses fermentasi.
Sebagian  besar  BAL  merupakan
probiotik. Probiotik merupakan mikroorganisme hidup yang bila dikomsumsi dalam jumlah yang cukup dapat memberi  manfaat  baik  pada  inang.  Para professional  kesehatan  telah  membuktikan
manfaatnya,  seperti  dapat  menghasilkan senyawa antibakteri (Belicová et al ., 2013).
Oleh  karena  itu  isolasi  bakteri  asam laktat  dari  cairan  hasil  fermentasi  selada Romain  perlu  dilakukan  untuk  mengetahui kemampuan  antibakteri,  asimilasi  kolesterol dan tahan asam dari isolat.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Sampel dalam penelitian ini diperoleh  dari  Urban  Farming  Hidroponik Manado. Penelitian dilakukan di Laboratorium
Mikrobiologi Farmasi Program  Studi  Farmasi  dan  Laboratorium Bioteknologi  Jurusan  Biologi  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam Universitas  Sam  Ratulangi.  Penelitian  ini telah  di  laksanakan  pada  bulan  Oktober 2018  -  Desember  2018.  Jenis  Penelitian yang dilakukan yaitu Deskriptif Laboratorik.

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  antara  lain; Tabung  reaksi,  cawan  Petri,  jarum  Ose, mikropipet,  autoklaf, laminar  air  flow ,  labu Erlenmeyer,  gelas  ukur,  inkubator,  tabung Eppendorf , hotplate ,  pisau,  pinset,  pipet, mikropipet,  tips, Jar Fermentasi,  timbangan analitik,  mikroskop,  pengaduk, refrigerator , sentrifus,  bunshen,  masker,  sarung  tangan, kardus,  kantong  plastik  hitam,    kamera  dan gunting. Bahan yang digunakan yaitu selada Romain, MRS (de Man, Rogosa and Sharpe) agar,  nutrien  agar,  nutrien  broth,  alkohol, garam,  aquades,  antibiotic  Ciprofloxacin, CaCO 3 , bakteri uji Escherichia coli (Migula) Castellani  and  Chalmers  (ATCC ® 25922), Staphylococcus aureus subsp. aureus Rosenbach  (ATCC ® 25923),  natrium  asam
taurodeoksikolat, gliserol, spritus, alumunium foil.
Cara Kerja
Fermentasi Sebelum
difermentasi, selada Romain  dibersihkan  dan  dipotong-potong.
Setelah potongan selada dimasukkan kedalam jar fermentasi  yang  sudah  berisi larutan  garam  10%.  Selada  difermentasikan pada suhu ruang selama  4 hari di  dalam jar Fermentasi  yang  ditutup  rapat  dalam keadaan  gelap  yaitu  dengan  dibungkus menggunakan  kantong  plastik  hitam  dan ditutup  dengan  gardus  pada  suhu  kamar (Tallei  2018,  komunikasi  pribadi).  Cairan hasil  fermentasi  yang  mengandung  BAL kemudian digunakan dalam prosedur selanjutnya.

## Isolasi Bakteri
Cairan  hasil  fermentasi  diencerkan dengan  pengenceran  sampai  10 -5 .  Sebanyak 100  µl  cairan  dipipet  dari  masing-masing tabung  dan  ditumbuhkan  di  media  MRS agar.  Selanjutnya  diinkubasi  selama  48  jam dengan  suhu  37 o C  (Lawalata et  al .,  2011). Setelah  bakteri  tumbuh,  masing-masing koloni  yang  di  sekitarnya  berwarna  bening dimurnikan  pada  MRS  agar  yang  baru dengan  metode streak  plate yakni  dengan cara menggoreskan jarum Ose yang terdapat bakteri  pada  media  agar.  Setelah  itu,  isolat murni  di  pindahkan  ke  MRS  agar  miring untuk  ditumbuhkan  dan  digunakan  untuk prosedur selanjutnya.

## Skrining Aktivitas Antibakteri
BAL yang telah dimurnikan kemudian  diuji  aktivitas  antibakterinya terhadap
Escherichia coli dan
Staphylococcus aureus . Metode yang digunakan  yaitu agar  well  diffusion  method (Balouiri et  al .,  2015).  Sebelum  dilakukan pengujian, E.  coli dan S.  aureus diukur kekeruhannya  mengikuti  standar  kekeruhan McFarland.  Setelah  itu  sebanyak  500  μl bakteri dipipet dan dimasukan ke dalam labu Erlenmeyer  yang  telah  berisi  berisi  50  mL nutrien agar.
Sebanyak  10  mL  nutrien  agar dituang  ke  dalam  cawan  petri  yang  telah diberi 4 pencadang ( stainless-steel cylinder ) untuk  membuat  sumuran.  Setelah  media memadat,  ditambahkan  lagi  10  mL  nutrien agar yang telah dicampur dengan bakteri uji ( E.  coli atau S.  aureus ).  Selanjutnya  media dibiarkan  sampai  mengeras  dan  pencadang dikeluarkan  kembali  sehingga  terbentuk sumuran.
Bakteri uji terlebih dahulu
ditumbuhkan  pada Eppendorf yang  berisi nutrien  broth  dan  di  inkubasi  pada  suhu 37 o C  selama  24  jam.  Setelah  inkubasi, bakteri  uji  di heatkill dengan  suhu  60 o C selama  2  jam  di  termoblok.  Masing-masing isolat  bakteri  yang  telah  di heatkill disisihkan,  sebagian  divortex  dan  bagian lainnya  tidak  di  vortex.  Selanjutnya  semua tabung  yang  berisi  isolat  disentrifugasi dengan kecepatan 6000 rpm selama 2 menit untuk memperoleh supernatan.
Setelah  itu,  sebanyak  100  μl supernatan  dimasukkan  kedalam  sumuran. Kontrol positif yang digunakan yaitu 50 μg/ 50  mL  ciprofloxacin  dan  untuk  kontrol negatif  digunakan  H 2 O  steril.  Cawan  petri kemudian  diinkubasikan  pada  suhu  37 o C selama  3  hari  untuk  melihat  diameter  zona hambat yang dihasilkan oleh BAL. Diameter zona hambat diukur setiap hari
menggunakan penggaris dan dihitung berdasarkan  metode  yang  dikembangkan oleh Adam et al . (2014).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Isolasi Bakteri Asam Laktat
Bakteri Asam Laktat (BAL)
diperoleh  dari  hasil  fermentasi  selada Romain yang dilakukan secara anaerob pada konsentrasi  garam  10%  selama  4  hari. Selama  proses  fermentasi,  terjadi  konversi karbohidrat menjadi asam laktat, dihari yang pertama  dan  kedua  adalah  waktu  proses pertumbuhan  BAL  juga  pada  hari  yang ketiga  asam  laktat  mengeluarkan  asam organik  dan  pada  proses  fermentasi  hari keempat  asam  laktat  yang  berperan  sebagai antibakterinya.  Cairan  hasil  fermentasi diencerkan  sampai  pengenceran  10 -5 dan kemudian  ditebar  pada  MRS  agar  yang mengandung  CaCO 3 1  %  lalu  di  inkubasi.
Dari  hasil  inkubasi  terlihat  koloni-koloni bakteri  yang berbeda secara morfologi  yang menandakan  bahwa  koloni  tersebut  mampu bertahan  pada  konsentrasi  garam  tinggi,  hal ini sesuai dengan karakteristik BAL (Gomes et al. , 2010).
Koloni bakteri yang tumbuh memiliki  zona  bening  di  sekitarnya,  zona bening  ini  adalah  kalsium  laktat  yang merupakan  produk  akhir  dari  reaksi  antara asam laktat yang diproduksi oleh bakteri dan CaCO 3 yang  ada  pada  media.  Hal  ini merupakan  salah  satu  indikator  yang menjadi  penentu  dalam  pemilihan  koloni yang  kemudian  dimurnikan.  Koloni  yang dimurnikan  diambil  dari  pengenceran  10 -4 dan  10 -5 menggunakan  metode streak  plate yang  kemudian  didapat  4  isolat  murni  yang diberi nama AS1, AS2, AS3 dan AS4.

## Uji Antibakteri
Uji antibakteri dilakukan guna untuk melihat  apakah  ke  empat  isolat  memiliki kemampuan  dalam  menghambat  bakteri patogen seperti E. coli dan S. aureus. Dalam pengujian  ini  digunakan  kontrol  positif Ciprofloxacin  50  μg/50mL  dan  kontrol negatif H 2 O steril.
Pada  uji  efektivitas  BAL  sebagai antibakteri  terhadap Staphylococcus  aureus dilakukan  dengan  mengukur  diameter  zona hambat yang dihasilkan selama 3 hari waktu inkubasi  pada  suhu  37˚C  dan  dibandingkan dengan zona hambat kontrol positifnya.
Gambar 1. Aktivitas    antibakteri   terhadap bakteri   patogen S. aureus (A) isolat  AS1,  (B) isolat AS2,  (C) isolat  AS3  dan  (D)  isolat  AS4 dengan  a = Aquades  steril   (+), b = Antibiotik Ciprofloxacin (+), c = Isolat yang tidak divortex dan d = Isolat yang divortex Seperti yang terlihat pada Gambar 1, isolat AS1 tidak memiki aktivitas antibakteri terhadap S.  aureus karena  tidak  terdapat zona  bening  disekitar  sumuran,  sedangkan isolat AS2, AS3 dan AS4 memiliki aktivitas antibakteri terhadap S. aureus yang ditunjukkan  dengan  terbentuknya  zona
A B B C D a b c d a a a b b b c c c d d d
bening disekitar sumuran. Besarnya diameter  zona  bening  yang  dihasilkan berbeda-beda  pada  setiap  isolat.  Zona bening yang dihasilkan dari setiap isolat dan kontrol  positif  yang  di  beri  kedalam sumuran  diukur  besar  zona  hambatnya setiap hari selama 3 hari pengamatan.
Tabel 1. Diameter zona  hambat  (mm)  pada pengamatan   1 x 24-78   jam  isolat AS1,  AS2,  AS3 dan  AS4 terhadap bakteri  patogen S. aureus
Isolat Diameter zona hambat (mm) Daya hambat Hari 1 Hari 2 Hari 3 Rerata AS1 Isolat Kuinolon (+) Aquades (-) - - - - - - - - - - - - AS2 Isolat Kuinolon (+) Aquades (-) 9.5 38 0 9 36.5 0 9.25 40.5 0 9.25 38.33
0 AS3 Isolat Kuinolon (+) Aquades (-) 12 37.5 0 11 37.5 0
11 38.5
0 11.33 37.83 0 AS4 Isolat Kuinolon (+) Aquades (-) 9 39.5 0 7.5 39.5 0 8.5 43 0 8.33 40.67 0
Gambar 2. Zona     hambat     BAL      hasil fermentasi       selada      Romain terhadap  pertumbuhan  bakteri S. aureus
Terlihat  dari  hasil  yang  diperoleh bahwa  isolat  yang  memiliki  aktivitas antibakteri  terbesar  adalah  AS3  yaitu sebesar 11.33 mm. Kontrol positif menunjukkan daya hambat  yang besar  yaitu dengan  rerata  38.94  mm  sedangkan  kontrol
negatif  tidak  memperlihatkan  adanya  zona hambat  disekitar  sumuran,  ada  yang  pada bagian yang di vortex. Hal ini membuktikan bahwa  isolat  AS2,  AS3  dan  AS4  memiliki senyawa  antibakteri  seperti  bakteriosin, bakteriosin  merupakan  suatu  protein  yang berada  di  dalam  sel  bakteri  sehingga  salah satu  cara  untuk  memperolehnya  adalah dengan membuat sel bakteri lisis. Faktor lain yang  mungkin  membuat  ketiga  isolat memiliki  daya  hambat  terhadap  bakteri S. aureus yaitu  pH  media  yang  turun  karena asam laktat dan asam asetat yang diproduksinya,  senyawa  asam  ini  membuat bakteri  patogen  tidak  mampu  bertahan. Selain  itu  terdapat  hidrogen  peroksida  yang merupakan  senyawa  toksik  yang  dapat membuat  bakteri  patogen  seperti S.  aureus mengalami apoptosis.
Gambar 3. Aktivitas    antibakteri    terhadap bakteri  patogen E. coli (A) isolat AS1, (B)  isolat  AS2,  (C) isolat AS3 dan (D) isolat AS4. Dengan a   =    Aquades   steril  (+),  b= Antibiotik    Ciprofloxacin   (+), c = Isolat  yang  tidak  di vortex dan  d =  Isolat   yang  di  vortex Pengujian  efektivitas  BAL  sebagai antibakteri terhadap Escherichia coli A B D C a a a a b b b b c c c c d d d d
dilakukan sama seperti pengujian antibakteri pada Staphylococcus aureus . Pada Gambar 3 terlihat  bahwa  isolat  AS1,  AS3  dan  AS4 memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap bakteri  patogen E.  coli. Hal  ini  terlihat  dari zona  bening  yang  terbentuk  disekitar sumuran,  sedangkan  isolat  AS2  tidak memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap E. coli yang ditunjukkan dengan tidak terbentuknya zona bening disekitar sumuran. Pengamatan  dilakukan  selama  3  hari  dan setiap  hari  diukur  besar  zona  hambat  yang terbentuk.    Hasil  pengukuran  dapat  dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Diameter zona hambat (mm) pada pengamatan 1x24-78 jam isolat AS1 terhadap bakteri patogen E. coli.
Isolat Diameter zona hambat (mm) Daya hambat Hari 1 Hari 2 Hari 3 Rerata AS1 Isolat Kuinolon (+) Aquades (-) 11.45 40.5 0 11 41 0 11 41 0
11.17 40.83 0 AS2 Isolat Kuinolon (+) Aquades (-) - - - - - - - - - - - - AS3 Isolat Kuinolon (+) Aquades (-) 11.5 42 0 11 42 0 11 42.5 0
11.17 42.17 0 AS4 Isolat Kuinolon (+) Aquades (-) 12 41 0 11.5 40 0 11.5 40 0 11.67 40.33
0
Gambar  7.  Zona  hambat  BAL  hasil fermentasi  selada  Romain terhadap pertumbuhan bakteri E. coli
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh, isolat AS1, AS3 dan AS4 memiliki aktivitas antibakteri rerata yang paling besar terhadap E.  coli ,  yaitu  sebesar  11.67  mm.  Kontrol positif  menunjukkan  rerata  daya  hambat sebesar  41.11  mm,  sedangkan  kontrol negatif  tidak  memperlihatkan  adanya  zona hambat disekitar sumuran.
Berdasarkan hasil pengujian antibakteri  isolat  AS1  terhadap S.  aureus dan isolat AS2 terhadap E. coli menunjukkan  bahwa  kedua  isolat  ini  tidak memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap bakteri  uji.  Hal  ini  dikarenakan  beberapa faktor  yang dapat mempengaruhi efektivitas antibakteri  yaitu  jenis,  jumlah,  umur  dan latar  belakang  kehidupan  bakteri  juga temperatur  (Frazier dan Westof, 1998).
Luas lingkaran daya hambat terhadap E. coli dan S. aureus dihitung menggunakan rumus  π  x  r 2 sehingga  hasil  diperoleh, dimana r merupakan jari-jari yang diperoleh dari Diameter dibagi dua. Dengan π= 3.14.
Tabel  3.  Luas  lingkaran  daya  hambat  isolat AS1,  AS2,  AS3,  AS4  dan  AS5 terhadap S. aureus dan E. coli
Isolat S. aureus                   E. coli Kuinolon Kuinolon AS1 - - 17.5369 64.1031 AS2 14.5225 60.1781 - - AS3 17.7881 59.3931 17.5369 66.2026 AS4 13.0781 63.8519 18.3219 63.3181 Dari  hasil  tersebut  dapat  dilihat
perbandingan  efektivitas  isolat  AS1,  AS2, AS3  dan  AS4  terhadap  antibiotik  kuinolon 50  μg/50mL  dalam  menghambat  bakteri patogen E.  coli dan S.  aureus .  Didapat  dari hasil  hitungan  V1:M1=  V2:M2,  dimana  V
merupakan  luas  zona  bening  dan  M merupakan  konsentrasi  supernatan  dan antibiotik yang digunakan.
Tabel 4. Perbandingan efektivitas BAL hasil fermentasi  selada  Romain  dengan antibiotik  ciprofloxacin50μg/50mL dalam       menghambat       bakteri patogen S. aureus dan E. coli
Isolat S. aureus                     E. coli
M 1 (μg/mL) M 1 (μg/mL) AS1 - 1.368 AS2 1.206 - AS3 1.505 1.324 AS4 1.024 1.447 Dengan demikian, hasil
perbandingan  efektivitas  isolat  BAL  hasil fermentasi selada Romain yang menghambat pertumbuhan bateri patogen S. aureus dan E. coli masing-masing  isolat  AS1,  AS2,  AS3 dan AS4 dengan rerata diameter pada Tabel 1  dan  Tabel  2  setara  dengan  antibiotik kuinolon Tabel 4 yaitu pada isolat AS1 yang bisa  menghambat  pertumbuhan E.  coli diameter  11.17  setara  dengan  konsentrasi antibiotik  kuinolon  1.368  yang  mampu menghambat  mikroorganisme.  Begitu  juga isolat AS2 yang bisa menghambat pertumbuhan S. aureus diameter 9.25 setara dengan  konsentrasi  antibiotik  kuinolon 1.206   yang  mampu  untuk  menghambat mikroorganisme. Isolat AS3  yang juga bisa menghambat  pertumbuhan S.  aureus dan E. coli masing-masing  rerata  11.33  dan  11.17 setara dengan konsentrasi antibiotik kuinolon  1.324  dan  1.505  yang  mampu menghambat  mikroorganisme  dan  isolat AS4 yang bisa menghambat pertumbuhan S. aureus dan E.  coli masing-masing  rerata
8.33  dan  11.67  setara  dengan  konsentrasi antibiotik  kuinolon  1.505  dan  1.324  yang mampu untuk menghambat mikroorganisme.
Gambar 8. Perbandingan    efektivitas   BAL hasil  fermentasi  selada Romain terhadap Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli Menurut  Adam et  al .  Semakin besar  zona  hambat  menunjukkan  bahwa senyawa  bioaktif  tersebut  semakin  efektif dalam menghambat pertumbuhan mikroorganisme.  Walaupun  demikian,  zona hambat  yang  kecil  tidak  menunjukkan bahwa senyawa aktif tersebut kurang efektif, akan  tetapi  konsentrasinya  yang  belum mencapai  konsentrasi  yang  efektif  untuk menghambat pertumbuhan mikroorganisme.
Senyawa  antibakteri  dari  BAL menunjukkan  zona  bening  yang  jelas disebabkan  adanya  aktivitas  bakteriosin yang  memiliki single  inactivation yang artinya  satu  molekul  bakteriosin  akan membunuh  satu  sel  bakteri  indikator. Bakteriosin juga mencegah sintesis peptidoglikan  yang  utuh,  sehingga  dinding sel  bakteri  akan  melemah  dan  akibatnya bakteri  mengalami  lisis.  Adanya  akumulasi metabolit  primer  berupa  asam  laktat,  etanol dan karbondioksida ataupun karena metabolit sekunder berupa senyawa
hydrogen peroksida dan bakteriosin memungkinkan terjadinya aktivitas penghambatan.  Menurut  Morales et  al . (2003), aktivitas zona hambat dikelompokkan menjadi empat kategori yaiu aktivitas lemah (<5 mm), sedang (5-10 mm), kuat  (>10-20  mm)  dan  sangat  kuat  (>20-30 mm).  Dari  hasil  yang  diperoleh  dapat dikategorikan  aktivitas  zona  hambat  ada dikategori  sedang  sampai  kuat  dalam aktivitas  penghambatan  bakteri  patogen. Bakteriosin yang merupakan senyawa protein  yang  dieksresikan  oleh  bakteri  yang bersifat  menghambat  pertumbuhan  bakteri lain  yaitu  bakteri  patogen  yang  pada umumnya  tidak  stabil  dan  tidak  bisa bertahan  pada  kondisi  media  pertumbuhan tertentu termasuk di dalamnya untuk bakteri S.  aureus dan E.  coli sehingga  sangat  tepat dalam proses penghambatan karena bakteriosin  fleksibel  dan  stabil  terhadap  pH dan  suhu  yang  cukup  luas  Penggunaan bakteriosin  fleksibel  dan  stabil  terhadap  pH dan  suhu  yang  cukup  luas  (Rohman,  2017). Aktivitas  antibakteri  dari E.  faecium salah satunya  bersumber  dari  bakteriosin  yang diproduksinya  yaitu  enteriosin.  Spesies Enterococci sendiri merupakan spesies yang paling  banyak  memproduksi  bakteriosin (Gani et  al .,  2018)  efektif  untuk  menangani penyakit.

## KESIMPULAN
Isolat  BAL  hasil  fermentasi  selada Romain  dapat  menghambat  pertumbuhan E. coli dan S.  aureus yaitu    isolat  AS2,  AS3 dan  AS4  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri S.  aureus dan  isolat  AS1,  AS3  dan AS4 dapat menghambat pertumbuhan bakteri E.  coli dengan  kategori  aktivitas
penghambatan sedang dan kategori aktivitas penghambatan kuat.

## SARAN
Perlu di lakukan pemurnian bakteriosin yang diproduksi oleh isolat yang memiliki aktivitas antibakteri.

## DAFTAR PUSTAKA
Adam,  A.  A.,  Posangi,  J.,  Tumewu,  E.,
Tallei, T.E. 2014. Aktivitas antibakteri ekstrakkasar  tunikata Polycarpa aurata terhadap Streptococcus mutans . Dentire
Journal . 3(2) : 118-122.
Balouiri, M., Saad, M.S., Ibnsouda, K. 2015. Methods for in vitro   evaluating antimicrobial  activity:  A  review. J.
Pharm. Anal . 6(2) :71-79. Belicová,  A.,  Mikulášová,  M.,  and Dušinský, R. 2013. Probiotic potential and   safetyproperties of Lactobacillus plantarum from Slovak  Bryndza  Cheese. BioMed Res.Int. Volume 2013.
Fontenot., Morgan,  A.L., Johnson., Charles, E.,  Afton.,  William.,  Williams., Robert,  C.,  Ivey,  L.,  Melani.  2014.
Lettuce . LSU Collage Of Agriculture, USA. Getahun,  A.,  Tesfaye,  A.,  Muleta,  D.  2016. Investigation of the Potential Benefits and Risks of  Probiotics  and Prebiotics  and  their  Synergy  in Fermented Foods. Singapore Journal of Chemical Biology . 6(1) : 1-16.
Juodeikiene et  al .,  2012.  Fermentation Processes Using Lactic Acid Bacteria  Producing  Bacteriocins  for Preservation and Improving
Functional Properties of Food Products. Advances in Applied
Biotechnology .  ISBN:  978-953-307- 820.
Kaur,  A.,  Aurora,M.,  Pandove,G.  2014. Probiotics  and  Its  Health  Benefits. Journal  of  Global  Biosciences . 3(3) : 686-693.
Salminen,  S.,  Wright,  A.  V.,  Lahtinen,  S., Ouwehand,  A.  C.,  2012. Lactic  Acid Bacteria:Microbiological and Functional  Aspects .  Fourth  Edition.
CRC Press, United States.