## UJI SENSITIVITAS BAKTERI PENYEBAB INFEKSI NOSOKOMIAL SALURAN KEMIH AKIBAT PENGGUNAAN KATETER TERHADAP ANTIBIOTIK AMPICILLIN, AMOXICILLIN DAN CIPROFLOXACIN di RSUP Prof. dr. R.D Kandou MANADO
Silfhani Cristin Rambiko 1) , Fatimawali 1) , Widdhi Bodhi 1)
1) Program Studi Farmasi Fakultas MIPA UNSRAT Manado

## ABSTRACT
One of the infections diseases are the cause of the increasing number of pain and death in hospitals is the disease of nosocomial infections. The purpose of this research was to identify bacteria in the urine of  the  patients  sufferers  of  nosocomial  infections  and  to  know  the  limits  of  sensitivity  of  bacteria against antibiotics Ampicillin, Amoxicillin, and Ciprofloxacin. From the results of this research show the  antibiotics  Ampicillin  and  Amoxicillin  resistant  100%  against  bacteria,  while  the  antibiotics Ciprofloxacin  showed  results  of  intermediate  40%  without  any  resistance  but  has  an  inhibitory sensitiv  60%.  So  it  can  be  concluded  that  antibiotics  with  the  highest  sensitivity  level  and  sensitive against  bacteria  Escherichia  fergusonii,  Vagococcus,  and  Klebsiella  oxytoca  is  the  antibiotic Ciprofloxacin by 60%.
Key words : sensitivity, nosocomial infections, measurement of the inhibitory zones

## ABSTRAK
Salah satu penyakit infeksi yang merupakan penyebab meningkatnya angka kesakitan dan kematian di rumah  sakit  ialah  penyakit  infeksi  nosokomial.  Tujuan  penelitian  ini  mengidentifikasi  bakteri  pada urin  dari  pasien  penderita  infeksi  nosokomial  dan  mengetahui  batas  sensitivitas  bakteri  terhadap antibiotik  Ampicillin,  Amoxicillin,  dan  Ciprofloxacin.  Dari  hasil  penelitian  ini  menunjukkan antibiotik  Ampicillin  dan  Amoxicillin  resisten  100%  terhadap  bakteri,  sedangan  antibiotik Ciprofloxacin  menunjukkan  hasil  intermediet  40%  tanpa  adanya  resistensi  tetapi  memiliki  angka penghambatan yang sensitiv 60%. Jadi dapat disimpulkan bahwa antibiotik dengan tingkat kepekaan yang  tertinggi  dan  sensitiv  terhadap  bakteri Escherichia  fergusonii,  Vagococcus, dan Klebsiella oxytoca adalah antibiotik Ciprofloxacin sebesar 60%.
Kata kunci : sensitivitas, infeksi nosokomial, pengukuran zona hambat

## PENDAHULUAN
Penyakit  infeksi  merupakan  salah satu  masalah  dalam  dunia  kesehatan,  dan hampir  setiap  negara  mengalami  masalah dengan  penyakit  infeksi.  Penyakit  infeksi merupakan penyakit yang disebabkan oleh mikroba  patogen  dan  bersifat  sangat dinamis.  Salah  satu  penyakit  infeksi  yang merupakan penyebab meningkatnya angka kesakitan  ( morbidity )  dan  angka  kematian ( mortality )  di  rumah  sakit  ialah  infeksi nosokomial.  Infeksi  nosokomial  dikenal pertama  kali  pada  tahun  1847  oleh Semmelweis  dan  sekarang  tetap  menjadi masalah  yang  cukup  menjadi  perhatian. Infeksi adalah terdapatnya organisme pada jaringan  atau  cairan  tubuh  yang  disertai suatu  gejala  klinis  baik  lokal  maupun sistemik (Darmadi, 2008).
Nosokomial  berasal  dari  bahasa Yunani,  dari  kata nosos yang  artinya penyakit dan komeo yang artinya merawat. Nosokomion berarti tempat untuk merawat atau  rumah  sakit.  Jadi  infeksi  nosokomial dapat diartikan sebagai infeksi yang terjadi dirumah  sakit  dan  menyerang  penderita- penderita  yang  sedang  dalam  proses asuhan  keperawatan.  Infeksi  nosokomial terjadi  lebih  dari  48  jam  setelah  masuk rumah  sakit  (Ahmad,  2002).  Infeksi nosokomial  yang  terjadi  di  rumah  sakit disebabkan  oleh  dua  faktor,  yaitu  faktor internal  dan  eksternal.  Faktor  internal meliputi  flora  normal  dari  pasien  itu sendiri  dan  faktor  eksternal  meliputi lingkungan  rumah  sakit,  makanan,  udara, pemakaian infus, pemakaian kateter dalam waktu  lama  dan  tidak  diganti-ganti,  serta benda  dan  bahan-bahan  yang  tidak  steril (Kowalski, 2007).
Menurut penelitian, bakteri patogen penyebab  infeksi  nosokomial  yang  paling umum ialah Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter spp, dan Klebsiella pneumonia . Kemampuan
antibiotika dalam menghambat pertumbuhan  bakteri  inipun  berbeda-beda,
ada  yang  dalam  konsentrasi  rendah  dapat menghambat bakteri dalam jumlah banyak, ada  pula  yang  diperlukan  konsentrasi tinggi untuk mampu menghambat pertumbuhan  suatu  bakteri.  Sensitivitas suatu  bakteri  yang  satu  akan  berbeda dengan yang lain terhadap suatu antibiotik, ada  yang  sangat  sensitiv  dan  ada    juga yang  resisten  serta  intermediet  terhadap antibiotika yang akan digunakan (Djunaedi, 2000).

## METODOLOGI PENELITIAN
Alat yang digunakan dalam penelitian ialah cawan petri ( Normax ), pot urin,  lampu  bunsen,  inkubator  ( Incucell ), tabung reaksi ( Pyrex ), kaca objek, mikroskop ( Olympus ), jarum ӧse, erlenmeyer  ( Approx ),  gelas  ukur  ( Pyrex ), gelas  kimia  ( Approx ),  rak  tabung  reaksi, plastik wrap ,  aluminium  foil,  kapas,  kasa, timbangan analitik ( Kern ), pinset,
laminarairflow ( Biotek ), termometer, autoklaf  (ALP),  mikropipet  ( Ecopipette ), L-Glass ,  vortex  ( Benchmark ),  mistar berskala  dan  alat  fotografi.  Sampel  yang digunakan  adalah  urin.  Bahan  kimia  yang digunakan ialah lugol, alkohol 96%, kristal violet,  aquades,  safranin,  NaCl  0,9%,
H 2 SO 4 dan  BaCl 2. Antibiotik  yang digunakan  ialah  Ampicilin  10µg  ( Oxoid ),
Amoxicillin 15µg ( Oxoid ) dan Ciprofloxacin  5µg  ( Oxoid )  dalam  bentuk cakram.  Media  yang  digunakan  ialah Nutrient  Agar,  Luria  Bertani  Agar dan yeast  extract ( Oxoid ) ,  Simmon’s  Citrate Agar ( Oxoid ), Lysine  Iron  Agar ( Oxoid ),
Triple Sugar Iron Agar ( Oxoid ).

## Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian  dilakukan  menggunakan metode  deskriptif  eksploratif  dengan pendekatan  studi  prospektif.  Pengambilan sampel  dilakukan  secara  total  sampling dari  pasien  penderita  infeksi  nosokomial yang  menjalani  rawat  inap  di  RSUP  Prof. dr. R. D. Kandou Manado pada bulan Juli 2015.

## Persiapan Sampel
Pada  pengambilan  sampel  urin terlebih  dahulu  dijelaskan  kepada  pasien mengenai  pentingnya  memperoleh  bahan pemeriksaan yang baik. Penderita dijelaskan  bahwa  urin  yang  akan  diambil berasal dari kateter pada pasien yang sudah dirawat  lebih  dari  3  hari  dan  diambil menggunakan jarum suntik lalu dimasukkan  ke  dalam  pot  urin  steril  yang telah  disediakan,  kemudian  di  tutup  rapat dan  diberi  label  identitas  pasien.  Setelah itu di bawah ke laboratorium mikrobiologi untuk diperiksa (WHO, 1995).

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  yang  akan  digunakan disterilkan terlebih dahulu sebelum penelitian. Sterilisasi alat dilakukan menggunakan  autoklaf  dengan  cara  alat- alat  gelas  yang  akan  digunakan  dalam penelitian dibungkus menggunakan aluminium  foil  kemudian  dimasukkan kedalam autoklaf pada suhu 121 0 C selama 15 menit, sedangkan jarum ӧse, pinset dan L-Glass dipijarkan  dengan  pembakaran menggunakan  lampu  bunsen.  Alat-alat yang sudah disterilkan kemudian dibiarkan sebentar  sehingga  mencapai  suhu  kamar dan  sudah  kering  setelah  itu  siap digunakan (Lay dan Hastowo, 1992)..
Pembuatan Media a. Pembuatan Media Nutrient Agar (NA)
Nutrient  Agar (NA)  sebanyak  3,2  gram dilarutkan dalam 160 ml aquades menggunakan  erlenmeyer,  setelah  itu dihomogenkan. Media yang sudah homogen  ini  disterilkan  dalam  autoklaf pada  suhu  121 0 C  selama  15  menit, kemudian  didinginkan  sampai  suhu 45- 50 0 C. Media ini digunakan untuk inokulasi bakteri dan uji kepekaan terhadap antibiotik.
b. Pembuatan  Media Nutrient  Agar (NA)
Miring
Nutrient  Agar (NA)  sebanyak  3,2  gram dilarutkan dalam 160 ml aquades menggunakan  erlenmeyer,  setelah  itu
dihomogenkan. Media yang sudah homogen  ini  disterilkan  dalam  autoklaf pada  suhu  121 o C  selama  15  menit, kemudian dituangkan pada masing-masing tabung  reaksi  sebanyak  5ml  lalu  ditutup menggunakan  kapas  yang  telah  dibungkus dengan  kain  kasa  dan  didinginkan  sampai memadat pada kemiringan 30 o .

## Inokulasi Bakteri Pada Media
Diambil urin sebanyak 1 ml kemudian  dimasukkan  pada  tabung  reaksi yang  telah  berisi  9ml  NaCl  0,9%  dan divortex.  Selanjutnya  dipipet  sebanyak 1000µL  suspense  bakteri  dan  dituangkan keatas  media Nutrient  Agar yang  sudah memadat. Selanjutnya di Seal Cawan petri dengan Plastik Wrap.
Urin  yang  mengandung  bakteri  yang telah  ditanamkan  pada  media Nutrient Agar selanjutnya diinkubasi dalam inkubator  pada  suhu  35-36 o C.  Diamati setelah  inkubasi  selama  minimal  18  jam, tetapi  reinkubasi  tambahan  selama  24  jam diindikasikan  jika  pada  pertumbuhannya kurang dari yang perkiraan atau jika hanya terdapat  sedikit  koloni  (Vandepitte et  al, 2010).

## Isolasi Bakteri
Setiap  koloni  yang  timbul  pada media Nutrient Agar diambil
menggunakan jarum ӧse untuk dipindahkan  ke  media  agar  miring  untuk mendapatkan  isolat  bakteri,  selanjutnya diinkubasi  dalam  inkubator  pada  suhu  35- 36 o C selama ±18–24 jam (Vandepitte et al, 2010).

## Identifikasi Bakteri
a. Uji Biokimia Identifikasi  bakteri  secara  uji biokimia menggunakan  uji  indol,  uji katalase,  uji H2S,    uji    fermentasi  karbohidrat,    uji lysine,  uji  sitrat,  dan uji motilitas.
b. Pewarnaan Gram
Kaca  objek  dibersikan  dengan  kapas yang  telah  diberi  alkohol  lalu  diberi  label. Biakan  bakteri  pada  agar  miring  di  ambil
dengan menggunakan jarum ӧse , kemudian di totolkan pada bagian tengah kaca objek sampai merata dan ditambahkan satu tetes NaCl  0,9%.  Preparat  selanjutnya  difiksasi di  atas  lampu  Bunsen  (Staf  Pengajar Bagian Mikrobiologi FKUI, 2002).
Sediaan yang sudah direkatkan diwarnai  dengan  kristal  violet  selama  1 menit. Kemudian Kristal violet dicuci pada air  mengalir  dan  diganti  dengan  larutan lugol  (larutan  J2+KJ)  dibiarkan  selama  1 menit.  Larutan  lugol  dicuci  pada  air mengalir  dan  sediaan  dicuci  dengan alkohol  96%  selama  1  menit.  Selanjutnya sediaan  dicuci  dengan  air  dan  diwarnai dengan  safranin  selama  1  menit.  Sediaan dicuci pada air yang mengalir, dikeringkan dan  diperiksa  di  mikroskop  dengan menambahkan  minyak  imersen  (FKUI, 2002).
Uji Kepekaan Bakteri
Terhadap
Antibiotik
a. Pembuatan Larutan Mc Farland 0,5
Larutan  H 2 SO 4 1%  sebanyak  99,5  ml dicampurkan  dengan  larutan  BaCl 2 1,175 %  sebanyak  0,5  ml  dalam  Erlenmeyer. Kemudian  dikocok  sampai  terbentuk larutan  yang keruh. Kekeruhan ini dipakai sebagai standar kekeruhan suspense bakteri uji (Bresson dan Borges, 2004).
b. Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Bakteri  uji  yang  telah  diinokulasi diambil  dengan  jarum  ӧse  steril  lalu disuspensikan ke dalam tabung yang berisi 5  ml  larutan  NaCl  0,9%  hingga  diperoleh kekeruhan  yang  sama  dengan  standar kekeruhan  larutan Mc.  Farland 0,5.
Perlakuan  yang  sama  dilakukan  pada setiap  jenis  bakteri  uji  (Davis  and  Stout, 1971).
c. Penanaman Cakram Antibiotik
Dipipet  suspensi  bakteri  uji  sebanyak
200µL dan dituangkan ke seluruh permukaan media Nutrient Agar selanjutnya  diratakan  menggunakan L-
Glass dan  didiamkan  selama  5  menit.
Tempatkan cakram Ampicilin10µg, Amoxicillin15µg  dan  Ciprofloxacin5µg serta  gram  negatif  pada  permukaan  media Nutrient  Agar. Cakram  Antibiotik  ditekan menggunakan pinset agar dapat memempel secara sempurna dipermukaan agar. Selanjutnya  diinkubasi  pada  suhu  37 o C selama  18-24  jam.  Dibuat  tiga  kali pengulangan  pada  cawan  petri  yang berbeda (Kumala et al, 2010).
d. Pengukuran dan Penetapan Zona Hambat Setelah inkubasi, d iamati zona pertumbuhan  bakteri  di  sekitar  cakram Antibiotik. Koloni  bakteri  yang  sensitif terhadap
antibiotik Ampicilin, Amoxicillin,  dan  Ciprofloxaci n  dilihat dengan adanya zona hambat berupa daerah bening di sekitar cakram antibiotik. Daerah hambatan antibiotik terhadap pertumbuhan bakteri diukur menggunakan mistar berskala atau jangka sorong dengan satuan mm.  Kemudian  zona  hambat  tersebut dikategorikan kekuatan daya antibakterinya  berdasarkan  penggolongan yang dapat dilihat pada tabel berikut:
Tabel. 1 Jarak Kepekaan Antibiotik Resisten,  Intermediet,  Sensitiv      (WHO,
1977) Ampicillin Resisten  Intermediet  Sensitiv < 13 mm 14 - 16 mm > 17 mm Amoxicillin Resisten  Intermediet  Sensitiv < 14 mm 15 - 16 mm > 17 mm Ciprofloxacin Resisten  Intermediet  Sensitiv < 15 16 - 19 mm > 20 mm

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Isolasi  bakteri  dari  4  sampel urin pasien  yang  terdiagnosa  penyakit infeksi nosokomial    yang    menjalani    rawat    inap di  RSUP    Prof.    dr.    R.    D.    Kandou
Manado diperoleh  5  isolat  bakteri.  Isolat bakteri  yang    diperoleh    diidentifikasi secara  pewarnaan    Gram    dan    uji biokimia  sehingga    diperoleh  3  jenis bakeri  yang dapat dilihat dalam Tabel 2.
Tabel.2 Bakteri yang diisolasi dari urin
Nama Bakteri Gram Jumlah  Presentase (%) Escherichia fergusonii Negatif (Basil) 1 20 Vagococcus Kokus (Positif)  1 20 Klebsiella oxytoca Negatif (Basil) 3 60 Jumlah 5 100
Dari  Tabel.2  dapat  dilihat  bahwa presentase  bakteri  yang  berhasil  diisolasi dari  urin  penderita  infeksi  nosokomial adalah Vagococcus (20%) dan Escherichia fergusonii sebesar (20%), sedangkan untuk Klebsiella  oxytoca jumlah  presentasenya lebih besar yaitu (60%).
Sensitivitas    bakteri    terhadap antibiotik  diperoleh  melalui  pengukuran diameter  zona  hambatan  yang  terbentuk
setelah    proses    penempelan cakram  antibiotik.  Hasil  pengukuran  zona hambat  selanjutnya    dibandingkan  dengan standar  diameter    zona    hambatan berdasarkan pedoman  CLSI  (Clinical  and Laboratory Standards  Institute).  Pada  uji kepekaan  digunakan    3    jenis    cakram antibiotik,  yaitu  Amoxicillin,  Ampicillin dan  Ciprofloxacin.  Berikut    merupakan distribusi    frekuensi    pola    sensitivitas bakteri   terhadap  Amoxicillin,  Ampicillin dan  Ciprofloxacin  yang  dapat  dilihat  pada Tabel  3,  Tabel  4  dan  Tabel  5  :

## Tabel.3  Distribusi Frekuensi Pola Sensitivitas Bakteri Terhadap Ampicilin
Kuman penyebab Ampicilin Sensitif Intermediet Resisten Escherichia fergusonii 0 0 1 Vagococcus 0 0 1 Klebsiella oxytoca 0 0 3 Total 0 (0%) 0 (0%) 5 (100%) Pada Tabel.3 menunjukkan bahwa
Ampicilin  resisten  sebesar  100%  terhadap semua jenis bakteri yang berhasil diisolasi
dari  urin  pasien  infeksi  nosokomial. Selanjutnya untuk distribusi frekuensi pola sensitivitas  bakteri  terhadap  Amoxicillin dapat dilihat pada tabel berikut:
Tabel.4  Distribusi Frekuensi Pola Sensitivitas Bakteri Terhadap Amoxicillin
Kuman penyebab Amoxicillin Sensitif  Intermediet  Resisten Escherichia fergusonii 0 0 1 Vagococcus 0 0 1 Klebsiella oxytoca 0 0 3 Total 0 (0%) 0 (0%) 5 (100%) Pada Tabel.4 menunjukkan bahwa Amoxicillin  resisten  sebesar  100%  namun tidak  menunjukan  intermediet  dan  sensitif terhadap semua jenis bakteri yang berhasil diisolasi dari urin pasien infeksi
nosokomial.  Selanjutnya  untuk  distribusi frekuensi pola sensitivitas bakteri terhadap Ciprofloxacin  dapat  dilihat  pada  tabel berikut:

## Tabel.5  Distribusi Frekuensi Pola Sensitivitas Bakteri Terhadap Ciprofloxacin
Kuman penyebab Ciprofloxacin Sensitive intermediet Resisten Escherichia fergusonii 1 0 0 Vagococcus 1 0 0 Klebsiella oxytoca 1 2 0 Total 3 (60%) 2 (40%) 0 (0%)
Pada Tabel.5 menunjukkan bahwa Ciprofloxacin  memiliki  angka  sensitivitas yaitu sebesar 60% dan intermediet sebesar 40%  serta  tidak  menunjukan  angka  yang resisten terhadap semua jenis bakteri  yang berhasil  diisolasi  dari  urin  pasien  infeksi nosokomial.
Berdasarkan  distribusi  frekuensi pola  kepekaan  bakteri  terhadap  antibiotik Ampicilin,  Amoxicilin  dan  Ciprofloxacin, hasil penelitian menunjukan bahwa antibiotik  dengan  sensitifitas/kepekaan yang  tertinggi  ialah  Ciprofloxacin  sebesar 60%  dan  intermediet  sebesar  40%. Sedangkan  angka  resistensi  tertinggi  yaitu sebesar  100%  adalah  Ampicilin  dan Amoxicilin  keduanya  memiliki  angka resisten  yang  sama  dan  mencakup  bakteri Escherichia  fergusonii,  Vagococcus, dan
Klebsiella  oxytoca .  Hal  ini  menunjukan bahwa  antibiotic  Ciprofloxacin  masih dapat digunakan sebagai terapi pengobatan Infeksi  Nosokomial dengan tetap selalu di dasarkan pada uji kepekaan dan pemeriksaan  kultur  bakteri.  Sedangkan untuk penggunaan Ampicillin dan Amoxicilin  perlu  diperhatikan  dengan cermat karena kedua antibiotik ini menunjukan hasil yang resisten.
Ketiga  bakteri  yang  didapat  dari hasil penelitian ini yaitu bakteri Escherichia  fergusonii,  Vagococcus dan Klebsiella  oxytoca ditemukan  di  saluran cerna sehingga mengakibatkan diare, dapat menyebabkan  gejala  klinis  penyakit  paru dan  penyakit  infeksi  pada  saluran  kemih. Tingkat  kepekaan  sangat  dipengaruhi  oleh
3  faktor,  yaitu  faktor  bakteri,  dokter  dan pasien sendiri.

## KESIMPULAN
Terdapat  3  jenis  bakteri  penyebab infeksi, yaitu Escherichia fergusonii berjumlah 1 , Vagococcus berjumlah 1 , dan Klebsiella  oxytoca berjumlah  3.  Jadi jumlah  keseluruhannya  ditemukan  5  isolat bakteri.
Jadi berdasarkan penelitian, antibiotik  dengan  tingkat  kepekaan  yang tertinggi  dan  sensitiv  terhadap  bakteri adalah Ciprofloxacin sebesar 60%, sedangkan  angka  resistensi  tertinggi  yaitu sebesar  100%  adalah  antibiotik  Ampicilin dan  Amoxicilin  keduanya  memiliki  angka resisten yang sama.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmad.  2002. Kunci  pengendalian  infeksi nosokomial . Angkasa Raya. Padang
Azwar,  Azrul.  1996. Menjaga  mutu pelayanan kesehatan . Sinar
Harapan. Jakarta
Babb JR. Liffe,AJ. 1995. Pocket Reference to  Hospital  Acquired  infection . Science  Press  limited  Cleveland
Street. London
Badaruddin.  M.A,  2006. Nosocomial infections in public sector hospital : urgent  need  for  structured  and toherent  approach  to  the  problem
Islamabad. Medical Association
Bernard  L.  Kowalski.  2007. Bakteriologi Medik .  Bayu  Media  Publishing.
Jakarta
Djunaedi  D.  2000. Jenis  bakteri  dan antibiotika yang sesuai pada kasus infeksi nosokomial . Konas VI Petri.
Denpasar, Bali
Lay BW., Hastowo 1992. Analisis Mikroba di Laboratorium . Rajawali Pers. Jakarta
Odonkor  S.T.,  Addo  K.K.  2011. Bacteria Resistance  to  Antibiotics  :  Recent Trends and Challenges . International  Journal  of  Biological
& Medical Research
Tjay,  T.H.,  dan  K.  Rahardja.  2007. Obat- obat penting khasiat, penggunaan, dan efek samping . Edisi ke VI. PT Elex Media Komputindo. Jakarta
WHO.  1977. Antibiotic  Usage  and Antimicrobial Resistance in
Indonesia .  Airlangga  University Press. Surabaya