Agensia Penyebab Vibriosis Pada Udang Vaname ( Litopenaus gariepinus ) yang Dibudidayakan Secara Intensif Di Kendal

## Sarjito, M. Apriliani, D.Afriani,  dan A.H. Condro Haditomo
Jurusan Perikanan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Diponegoro Jl. Prof. Soedarto, SH. Kampus UNDIP Tembalang, Semarang 50275 Email : sarjito_msdp@yahoo.com

## Abstract
Budidaya  udang  vaname  ( Litopenaus  gariepinus )  secara  intensif    telah  dilakukan  di kabupaten  Kendal,  sebagai  upaya  peningkatan  produksi.    Salah  satu  kendala  yang  sering terjadi  pada  budidaya  udang  intensif  adalah  serangan  penyakit  bakteri,  termasuk  pula vibriosis.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengkaji  keanekaragaman  bakteri  yang  berasosiasi dengan  udang  yang  terserang  vibriosis  secara  intensif  beserta  gejala  klinisnya. Udangvaname  yang  menunjukkan  gejala  vibriosis  diperoleh  dari  pertambakan    intensif  di kabupaten  Demak.  Sebanyak  22    isolat  bakteri  (SMC  01  –  SSD  10)  berhasil  diisolasi  dari hepatopacreas  udangvaname  pada  medium Thiosulfate  Citrate  Bile  Salts  Sucrose (TCBS). Berdasarkan perfomance morphologi dari keua puluh dua isolat (bentuk, warna dan karakter koloni) dipilih  5 isolat ( SMC 01,SMC 04, SSD 01, SSD 03, dan SSD 07) untuk uji selanjutnya yaitu karakterisasi  secara  morfologi  dan  uji  biokimia  .  Uji  sensitivitas  terhadap  antibiotik  yang beredar hanya dilakukan  pada  3 isolat terpilih(SMC 01, SMC 04, dan SSD 03). Gejala klinis udang yang terserang vibriosis adalah :  tubuh  (carapace) memerah,  melanosis pada kulit, nekrosis  pada  ekor,  kaki  renang  dan  kaki  jalan  memerah  serta  hepatopankreas  yang memerah cenderung gelap.  Hasil karakterisasi dengan pendekatan  secara morfologi dan biokimia  diperoleh    pula  bahwa  bakteri  yang  berasosiasi  dengan  udangvaname  ( L. gariepinus )  dari  tambak  intensif  kabupaten  Kendal  adalah Vibrio  vulnificus (SMC  01) ,  V. mimicus (SMC  04) ,  V.damsella (SSD  01) ,  V.  parahaemolytics (  SSD  03) ,  V.  fluvialis (SSD  07). Hasil  Uji  sensitivitas  menunjukkan  bahwa  ketiga  isolat  terpilih  (SMC  01,  SMC  04,  dan  SSD  03) tidak sensitif terhadap beberapa antibiotik..
Kata kunci : vibriosis, sensitifitas, salinitas, udangvaname.

## PENDAHULUAN
Udangvaname,
Litopenaus
vannamei , merupakan salah satu komoditas  unggulan  perikanan.  Produksi total  udang  nasional  pada  tahun  2014 mencapai  592.219  ton,  dengan  komoditas udang vaname sebesar 70%, udang windu 21%  dan  udang  jenis  lain  9%.  (KKP,  2014). Permintaan  yang  terus  meningkat,  baik pasar lokal dan domestik, maka mendorong  pembudidaya  udanguntuk meningkatkan produksi dengan menerapkan teknologi intensifikasi.
Budidayaudang  secara  intensif  telah dilakukan  di  beberapa  spot  pertambakan pantai  utara  Jawa  Tengah,  antara  lain: pertambakan  Kabupaten  Kendal.  Akan tetapi,  pengaplikasian  budidaya  intensif
secara  tidak  tepat  dan  bijaksana  akan dapat  menimbulkan  dampak  negatif, seperti    munculnya  serangan  penyakit. Serangan  penyakit  ini  dapat  terjadi, karena  interaksi  yang  tidak  serasi  antara lingkungan,  biota  dan  agensia  penyebab penyakit  (Irianto,  2005).    Penyakit  pada udang  disebabkan  oleh  parasit,  virus  dan bakteri  (Lighter,  1997).  Salah  satu  penyakit bakteri pada udang adalah vibriosis (Austin dan  Austin,  2007;  Sarjito et  al., 2012). Penyakit  ini  disebabkan  oleh  serangan bakteri Genus  Vibrio (Austin  and  Austin, 200).Penyakit  ini    telah  menjadi  masalah dalam  kegiatan  budidaya  udang  laut,  air payau  (Irianto,  2005)  dan  air  tawar  (Austin dan  Austin,  2007;  Sharma  dan  Chaturvedi, 2007). Vibriosis pernah  dilaporkan  telah menyerang  kerapu  (Sarjito et  al. ,  2007;
Sarjito et al. , 2009); udang windu (Sarjito et al .,  2012),  dn  akibat  dari  serangan penyakit  in  menyebabkan kematian organisme  yang  dibudidayakan  (Smith, 2006; Austin dan Austin, 2007).
Berbagai  agensia  penyebab  vibriosis pada  udang/ikan  telah  dilaporkan  oleh Austin  dan  Austin  (2007);  Noorlis et  al., (2011);  Sarjito et  al., (2009);    Sarjito et al .(2012).  Menurut Austin dan Austin (2007), agensia penyebab vibriosis pada udang/invertebrate
adalah Vibrio
alginolyticus, V.
damsela,
V. charchariae,V.anguilarum, V. ordalli, V.cholerae,  V.  salmonicida,  V.  vulnificus,V. parahaemolyticus, V. pelagia,V. splendida, V. fischeri dan V.harveyi (Austin dan Austin, 2007). V. alginolyticus dilaporkan menginfeksi udang kakap merah (Noorlis et al. (2011). V.  anguillarum menginfeksi sidat, udang, dan rainbow trout (Schaperclaus,  1992). V.  parahaemolyticus dan V.  harveyi ditemukan  pada  ikan kerapu (Sarjito et al., 2009 ) .
Agensia  penyebab  vibriosisdapat bersifat  pathogen,  menyebar  dengan cepat  pada  budidaya  sistem  intensif, sehingga mampu menyebabkan mortalitas hingga mencapai 85 % Guzma et al . (2001) Oleh  karena  itu,  serangan  penyakit  ini merupakan  permasalahan    yang  cukup serius  bagi  udang  di  tambak  intensif  Untuk itu, dalam penelitian ini, selain menentukan bakteri  agensiapenyebab  vibriosis  pada udangudang  yang  dibudidayakan  secara intensif dan jugamenentukan sensitivitasselektif agensia penyebab vibriosis terhadap antibiotik yang diperbolehkan yang beredar.

## MATERI DAN METODE
Metode yang dilakukan pada penelitian ini adalah
eksploratif konfirmatory  (Nazir,  1999).  Sebanyak  20 sampel udangsakit diperoleh dari pertambakan intensif di kabupaten Kendal. Udang sampel  dipilih secara selektif, dilihat dari  gejala  klinis  yang  terlihat  mengacu pada  Sarjito et  al .  (2012).    Isolasi  dan purifikasi  bakteri  dilakukan  denganmetode streak pada mediaTCBS (Brock
danMadigan , 1991;  Sarjito et  al., 2007) di Laboratorium Terpadu universitas Diponegoro.  Dua  puluh  duaisolat  murni (SMC 01 –
SDC10)diperoleh dari hepatopankreas  udang sampel, kemudian disimpan  pada  media  Nutrien  Agar  Trisalt (NA, Merck) miring.Berdasarkan perfomance  morphologi  ((bentuk,  warna dan  karakter  koloni)  dari  kedua  puluh duaisolat  terpilih  lima  isolat  SMC  01,  SMC 04,  SSD  01,  SSD  03,  dan  SSD  07  untuk karakterisasi. Sedangkan untuk uji sensitivitas hanya dilakukan pada tiga isolat yaitu  isolat  SMC  01,  SMC  04,  dan  SSD 03.Kelima isolat terpilih dikultur pada media cair  Zobelt    (Sarjito,    2010).  Karakterisasi kelima  isolat  terpilih  dilakukan  secara morfologi  dan  biokimia    mengacu  pada Macfaddin  (1980)  dan  Sarjito et  al. (2007). Selanjutnyaidentifikasi  bakteri  dilakukan berdasarkan Bergey’s
Manual
of Determinative  Bacteriology  (Holt et  al . 1998) dan Bacterial Fish Pathogens: Disease in  Farmed  and  Wild  Fish  (Austin  dan  Austin 2007). Test ini dilakukan di Stasiun Karantina Ikan,  Pengendalian  Mutu  dan  Keamanan Hasil Perikanan  (SKIPM), Kelas I Yogyakarta.
Uji  sensitivitas  tiga  selektif  isolat  (SMC 01;  SMC  03  dan  SSD  03)  terhadap tigaantibiotik  (eritromisin,  enrofloksasin  dan oksitetrasiklin)  dilakukan  secara  in  vitro, menggunakan  petri  dish  sesuai  dengan metoda Holstrom et al. (2003).  Dosis yang digunakan untuk uji sensitvitas ini adalah 6µ 8 µ dan 10 µ untuk obat  A ™ , dan  2,5 µ, 5 µ dan  7,5  µ  untuk  antibiotikeritromisin, enrofloksasin dan oksitetrasiklin. Pengukuran zona  hambat  menggunakan  jangka sorong  di  sekitar  kertas  cakram  setiap  24 jam,    sampai  zona  bening  tersebut ditumbuhi  bakteri.Inkubasi  dilakukan  pada suhu  ruangan  selama  48  jam.    Hasil sensitivitas  ini  mengacu  pada  ketentuan National Commitee for Clinical Laboratorium Standard (NCCLS) (2001).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Gejala  klinis  yang  terdeteksi  pada udang  sampel  yang  terserangvibriosis adalah  tubuh    (carapace)  memerah, melanosis  pada  kulit,  nekrosis  pada  ekor, kaki  renang  dan  kaki  jalan  memerah  serta
hepatopankreas yang memerah
cenderung gelap.Hasil isolasi
dari ketigapuluhudang  sampel  diperoleh  22 isolat bakteri (Tabel 1.)
Berdasarkan
karakter morfologi(bentuk,  warna  dan  karakter koloni)dari  22  isolat,dipilih  5  isolat  untuk dilakukan uji selanjutnya  (Tabel 2).
Hasil  karakterisasi  secara  morfologi dan  biokimia  dari  kelima  bakteri  agensia penyebab  vibriosis  pada  udangvaname
yang  dibudidayakan  secara  intensif  dari kabupaten Kendal disajikan pada Tabel 4.
Hasil  karekterisasi  kelima  bakteri yang  berasosiasi  dengan  udang  yang terserang  vibriosis  adalah Vibrio  vulnificus (SMC 01) , V. mimicus (SMC 04) , V.damsella (SSD  01) ,  V.  parahaemolytics (  SSD  03) ,  V. fluvialis (SSD  07).Hasil  uji  sensitivitasketiga selektif  agensia  penyebab  vibriosis    (SMC 01, SMC 04 dan SSD 03) terhadap berbagai antibiotik  eritromisin,  enrofloksasin  dan oksitetrasiklindisajikan pada Tabel 5.
Tabel 1. Karakter Isolat Berdasarkan Kode Isolat, Asal Isolat, Warna Koloni, Bentuk Koloni, serta Karakteristik pada Media TCBS
No Kode Asal Isolat Warna Koloni Bentuk Koloni Karakteristik Koloni 1. SMC01 Hepatopankreas Kuning Bulat Halus Cekung 2.. SMC 02 Hepatopankreas Hijau Bulat Halus Cembung 3. SMC03 Hepatopankreas Putih Bulat Halus Datar 4. SMC04 Hepatopankreas Putih Bulat Halus Datar 5. SMC05 Hepatopankreas Kuning Bulat Halus Cekung 6. SMC06 Hepatopankreas Hijau Bulat Halus Cembung 7. SMC 07 Hepatopankreas Hijau Bulat Halus Cembung 8. SMC08 Hepatopankreas Hijau Bulat Halus Cembung 9. SMC09 Hepatopankreas Hijau Bulat Halus Cembung 10 SMC 10 Hepatopankreas Hijau Bulat Halus Cembung 11 SMC 11 Hepatopankreas Putih Bulat Halus Cembung 12. SMC 12 Hepatopankreas Hijau Bulat Halus Cembung 13. SSD 01 Hepatopankreas hitam Bulat Halus Cembung 14. SSD 02 Hepatopankreas hijau Bulat Halus Cembung 15. SSD 03 Hepatopankreas hijau Bulat Halus Cembung 16. SSD 04 Hepatopankreas hijau Bulat Halus Cembung 17. SSD05 Hepatopankreas Hijau Bulat Halus Cembung 18. SSD 06 Hepatopankreas kuning Bulat Halus Cembung 19. SSD 07 Hepatopankreas kuning Bulat Halus Cembung 20. SSD 08 Hepatopankreas kuning Bulat Halus Cembung 21. SSD 09 Hepatopankreas kuning Bulat Halus Cembung 22. SSD 10 Hepatopankreas kuning Bulat Halus Cembung Tabel 2. LimaIsolat Terpilih Berdasarkan Asal  dan Perfomance Morfology No. Kode isolat Asal Isolat Warna Koloni Bentuk Koloni Bentuk Tepi Karakteristik Koloni 1. SCM 01 Hepatopankreas  Kuning Bulat Halus Cekung 2. SMC 04 Hepatopankreas  Putih Bulat Halus Datar 3. SSD 01 hepatopankreas  hitam bulat Halus Cembung 4. SSD03 hepatopankreas  hijau bulat Halus Cekung 5. SSD 07 hepatopankreas  kuning bulat Halus Cembung
Tabel 4. Hasil Uji Morfologi dan Biokimia  Isolat  SMC 01, SMC 04, SSD 01, SSD 03 dan SSD 07
Uji Bio Kimia Kode Isolat bakteri SMC 01 SMC 04 SSD 01 SSD 03 SSD 07 Vibrio vulnivicus Vibrio mimicus Vibrio damsela Vibrio parahaemolyticus Vibrio fluvialis Morfologi bentuk Bentuk koloni Circular Circular Circular Circular Circular Bentuk elevasi Convex Even Concave Convex Concave Bentuk tepi Entrie Entrie Entrie Entrie Rough Warna Kuning Kuning Putih Putih Kuning Media/warna TCBS/ Kuning TCBS/ Putih TCBS/ Hitam TCBS/ Putih TCBS/ Kuning Morfologi sel Gram - - - - - Bentuk Batang Batang Batang Batang Batang 0 %NaCl + + + + +
5 %NaCl
+ + + + + Sifat  fisiologis  dan biokimia O/F F F F F F Motility + + + + +
Produksi :
Katalase + + + + + Oksidase + + + + + H 2 S - + - + - Lisin dekarboksilase + + V + - Ornithin dekarboksilase + + - + - TSIA A/A A/K A/A A/K A/A Tumbuh pada 30°C + + + + + Indole + + - + + Metyl-red + + + + - Voges-proskaeur - - - - + Simon citrat A/A A/A + - +S
Pemecahan gelatin
+ + + + + Urea - - - - + Hidrolisis dari : Aesculin + + + - - Produksi asam dari : Glukosa, acid + + + - - Lactos, acid + - - - + Sukrosa, acid + - - - + Xylose - - - - - Keterangan :   + : 90% lebih strain positif - : 90% lebih strain negatif ND
: not determine
d : 11-89% positif
v : variabel
Tabel 5. Uji  Sensitivitas  Antibiotik Eritromisin,  Enrofloksasin,  dan  Oksitetrasiklin  Pada    Ketiga Selektif Agensia Penyebab Vibriosis pada Udang Vaname Kode Isolat Antibiotik (A)
Antibiotik (B) Antibiotik (C) Waktu (Jam) 24 48 24 48 24 48 Dosis (µl) 6  8  10  6 8 10  2,5  5  7,5  2,5  5  7,5  2,5  5  7,5  2,5  5 SMC 01 R  R R  R R
R R R R R R R R R R R R SMC 04 R  R R  R R
R R R R R R R R R R R R SSD  03 R  R R  R R
R R R R R R R R R R R R
Keterangan : R : Resisten
Hasil uji sensitivitas (Tabel 5)
mengindikasikanbahwa ketigaselektif agensia  vibriosis(SMC 01, SMC 04, dan SSD 03)    resisten  terhadap  antibiotikeritromisin, enrofloksasin dan oksitetrasiklin.
Gejala  klinis  yang  ditunjukkan  oleh sampel udang vaname ( L. vannamei ) yang berasal dari tambak intensif Desa Wonorejo,  Kabupaten  Kendal  adalah uropoda  berwarna  kemerahan,  perepoda berwarna kemerahan, pleopoda berwarna kemerahan, antennal  scale berwarna kemerahan  dan  mengalami  nekrosis, hepatopankreas  berwarna  kecoklatan serta melanosis pada abdomen. Austin dan Austin  (2007)    menjelaskan  bahwa  gejala klinis  yang  terdeteksi  pada  udang  sampel tersebut  mengindikasikan  adanya  infeksi bakteri  genus vibrio. Gejala  klinis  yang serupa  juga telah dilaporkan pada udang yang  terserang  vibriosis  (Lavilla-Pitogo et al., 2000), Soto-Rodriguez et al. , 2010; Sarjito et al., 2012; Huang et al., 2013). Hasil  karakterisasi  secara  morfologi dan biokimia diperoleh bahwa lima bakteri agensia  penyebab    vibriosis  pada udangvanameyang dibudidayakan secara intensifdari Kabupaten Kendaladalah Vibrio vulnificus (SMC  01) ,  V.  mimicus (SMC  04) , V.damsella (SSD  01) ,  V.  parahaemolytics ( SSD  03) ,  V.  fluvialis (SSD  07).Bakteri Genus Vibrio telah  dilaporkan  pada  beberapa jenisikan/udang  air  payau  (Austin,  2011; Red  dan  Davar,  2010,  Hoel et  al .,  1998; Randangan et  al. ,  2012). Vibrio  vulnificus sering ditemukan pada berbagai ekosistem perairan  dan  paling  banyak  ditemukan pada  organisme  yang  hidup  di  salinitas rendah  (Kaysner et al., 1987 ; Lersen et al.,
1997 ). Bakteri  ini  juga  telah  diketemukan pada ikan kerapu  (Sarjito et al ., 2007);  sea cat fish , Arius felis , (De Paola et al., 1993); udang  galah  (Mishra et  al., 2010),    sidat dan    rainbow  trout  (Scharperlaus,  199; Tanrikul  ,2007). V.  vulnificus ,  menurut  Austin dan  Austin  (2007)  merupakan  causative agent vibriosis pada ikan dan udang yang dibudidayakan di air payau dan laut.
V.  mimicus bisa  diketemukan  di lingkungan  air  tawar  dan  estuarin,  dan merupakan bakteri yang hidup bebas atau berasosiasi dengan zooplankton, crustacea,  moluska,  penyu,  dan  ikan (Mizuno et al ., 2009). V, mimicus dilaporkan sebagai  agensia  penyebab  vibriosis  pada udang windu, P. Monodon , (Srinivasan dan Ramasamy,  2009);    lobster, P.  Homarus , (Raissy et  al., 2011)  dan    ikan  belanak, M. Cephalus ,  (Abdellrazaq  dan  Khaliel,  2014). V.  fluvialis ditemukan  menyerang  ikan kerapu  tikus  ( C.  altivelis )  di  Lampung  dan Situbondo  (Desrina et  al .,  2006),  udang windu  ( P.  Monodon )  (Srinivasan  dan Ramasamy,  2009),  ikan  kerapu  macan  ( E. fuscoguttatus )  di  Karamba  Jaring  Apung Teluk  Hurun  Lampung  (Hastari et  al .,  2014), ikan  belanak  ( M.  cephalus )  di  Mesir (Abdellrazaq  dan  Khaliel,  2014).Bakteri V. parahaemolyticus dilaporkan  menyerang kegiatan  penggemukkan  kepiting  bakau ( S.  serrata )  di  Pemalang  (Feriandika et  al., 2014),  udang  windu  ( P.  Monodon )  (Felix et al., 2011; Tran et al., 2013; dan Duan et al.,
2015), kerang dan tiram di Sao Paulo, Brazil (Rojas et al. , 2011), dan udang vaname ( L. vannamei ) (Tran et al., 2013).
Uji  sensitivitas  menunjukkan  bahwa ketiga  selektif  agensia  penyebab  vibriosis
(SMC  01;  SMC  04  dan  SSD  03)    resisten terhadaperitromisin, enrofloksasin, dan oksitetrasiklin.  Hal  ini  dibuktikan  dengan tidak  terbentuknya  zona  bening  disekitar kertas  cakram  pada  ketiga  bakteri tersebut.  Bakteri  dikatakan  resisten,  karena memiliki  besaran  zona  hambat  0  –  10  m (NCCLS, 2001).  Resisten ini terjadi berkaitan dengan  penggunaan  antibiotik  yang  terus menerus  dengan  dosis  yang  tidak  tepat (Sarjito et  al., 2013)  dan  pemakaian  yang meluas  dan  irrasional  (Kemenkes  RI,  2011), serta  kandungan  antibiotik  yang  ada  di obat  tersebut.  Sukenda et  al. (2008) menjelaskan selain mencemari lingkungan, penggunaan antibiotikyang tidak terkontrol dan secara terus menerus dapat mengakibatkan  munculnya  strain  –  strain bakteri  resisten  (Sukenda, et  al .,  2008). Menurut    Sharma et  al. ,  (2009)  resistensi dapat  terjadi  ketika  bakteri  bermutasi dalam  satu  atau  lain  hal,  sehingga menyebabkan  turun  atau  hilangnya efektivitas  obat,  senyawa  kimia  atau bahan  lainnya  untuk  mencegah  atau mengobati infeksi.
Selanjutnya, resistensi pada bakteridapat  ditularkan  melalui  kelompok gen resisten antibotik diantara genes locus yang sama  dengan  agen seperti plasmid, transposons,  dan  integrons    ke  bakteri lainnya  (White  dan  McDermott,  2001). Pada  genus Vibrio resistensi  dapat ditularkan    melalui  plasmid    dan  intergrons serta  transport  elemen,  antara  lain  SXT (Amita et  al .,  2003).    Oleh  karena  itu, mekanisme  bakteri  yang  resisten  terhadap ketiga  antibiotik  tersebut  juga  berkaitan adanya  mutasi  target  antibiotik  yang terdapat  pada  obat  atau  bakteri  memiliki plasmid  yang  memiliki  gen  pembawa resisten  terhadap  antibiotik.  Resistensi bakteri  dapat  terjadi  karena  mutasi  dan seleksi  muatan  secara  acak  dan  antibiotik berperan  sebagai  agen  seleksi,  sehingga dimungkinkan terjadinya multiplikasi kelompok  bakteri  resisten  dan  menekan pertumbuhan  bakteri  yang  memiliki  sifat sensitif terhadap antibiotik (Atlas, 1995)

## KESIMPULAN
Kesimpulan  yang  diperoleh  dari penelitian  ini  yaitu  gejala  klinis  tubuh
(carapace)  memerah,    melanosis  pada kulit,  nekrosis  pada  ekor,  kaki  renang  dan kaki  jalan  memerah  serta  hepatopankreas yang  memerah  cenderung  gelap  dari teridentifikasi  sebagai Vibrio  vulnificus (SMC 01) , V. mimicus (SMC 04) , V.damsella (SSD  01) ,  V.  parahaemolytics (  SSD  03) ,  V. fluvialis (SSD  07).  Ketiga  selektif  agensia penyebab  vibriosis  yaitu Vibrio  vulnificus (SMC  01) ,  V.  mimicus (SMC  04) ,  V. parahaemolytics resisten terhadap beberapa obat yang beredar.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terimakasih  disampaikan  Kepala  UPT Laboratorium Terpadu, Universitas Diponegorodan  Kepala  SKIPM  Kelas  I, Yogyakarta  atas  kerjasama  dan  bantuan fasilitas  dalam  pelaksanaan  penelitian  ini. Disampaudang pula terimakasih kepadayang  telah  membantu  sampling dan pelaksanaan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Amita, S., Chowdhary, R., Tungapathra, M., Ramamurthy,  T.,  Nair,  G.B.,  Ghosh,  A., 2003. Class I Integrons and SXT elemen in  El  Tor  strains  Isolated  before  and After  1992 Vibrio  cholerae )139  out break    Calcuta  ,  India.    Emerge.  Inf. Dis., 9 : 500 – 502
Abdellrazaq,  G.  S  dan  S.  A.  Khaliel.  2014. Molecular Characterization and Antimicrobial  Susceptibility  of Vibrios Isolated  from  Healthy  and  Diseased Auacultured  Freshwater  Fishes.,  Global Veterinaria., 13(3): 397-407.
Aguire-Guzman,  A; J. G. Sanchez-Martinez; A.  I.  Campa-Cardova;  A.  Luna- Gonzales;  F.  Ascencio.  2009.  Penaeid Shrimp  Immune  System.  Thailand Journal Vetenary Medicine., 39(3): 205- 215.
Atlas, R. M. 1995. Principles of Microbiology. Mosby-Year Book, Inc., Missouri. 374 pp. Austin B. dan D.A.Austin. 2007. Bacterial Fish Pathogens.  Disease  in  Farmed  and Wild  Fish.Fourth  edition.  Ellis  Horword limited, Chichester..
Austin,    B.  2011.  Taxonomy  of  Bacterial  Fish Pathogens.  Austin  Veterinary  Research 2011, 42:20
Brock, T.D. and M.T. Madigan, 1991. Biology of  Microorganisms.  Prentice  Hall, Englewood Cliffs, New Jersey.
DePaola,  A.,  Gesa  M.  Capers.,  Donita Alexander.  1993.  Densities  of Vibrio vulnificus in  The  Intestine  of  Fish  from The  U.S  Gulf  Coast.  American  Society for Microbiology, .7 : 984 – 988.
Hasan,  N.A;  C.  J.  Grim;  B.  J.  Hley;  J.  C.  M. Alam; E. Taviani; M. Hog; A. C. Munk; E. Saunders; T. S. Brettin; D. C. Bruce; J. F. Challacombe;  J.  C.  Detter;  C.  S.  Han; G. Xie; G. B. Nair; A. Hug; R. R. Colwell. 2010.  Comparative  Genomics  of Clinical and Enviromental Vibrio mimicus .  Proc  Natl  Acad  Sci  USA, 107(49): 21134-21139.
Hastari,  I.  F;  Sarjito;  S.  B.  Prayitno.  2014. Karakterisasi
Agensia Penyebab Vibriosis  dan  Gambaran  Histologi  Ikan Kerapu Macan ( Epinephelus fuscoguttatus )  dari  Karamba  Jaring Apung  Teluk  Hurun  Lampung. Journal of  Aquaculture  Management  and Technology ., 3(3): 86-94.
Holmstrom,  K.,  2003.  Antibiotic  Use  in Shrimps  Farming  and  Implications  for Enviromental  Impacts  and  Human Health. J Food Sci. And Tech., 38 : 255 – 262
Holt,  J.G.,  N.R.  Kreig,  P.H.A.  Sneath,  J.T. Staley, and S.T. Williams. 1998. Bergey’s Manual of Determinative Microbiology.
9 th ed.  The  Williams  &  WiLKJTins  Co, Baltimore.
Huys,  G.  2002.  Standard  Operating Procedur:
Antibiotic Susceptibility
Testing of Aquacultur-Associated Bacteria  with  The  Disc  Diffusion Meyhod.  Laboratory  of  Microbiology Universiteit Gent, Belgium, 10p.
Irianto,  A.  2005.  Patologi  Ikan  Telestoi.
Gajah
Mada University
Press.Yogyakarta.
Jayasree,  L;  P.  Janakiram;  R.  Madhavi.
2006.  Characterization  of Vibrio spp.
Associated  with  Diseased  Shrimp  from Culture  Ponds  of  Andhra  Pradesh (India).
Journal of The World
Aquaculture Society ., 37(4): 523-532.
Kamiso  H.N.,  Triyanto  dan  Sri  Hartati.  1994.
Karakteristik
Aeromonas hydophila pada  IkanLele  ( Clarias sp.)Di
Daerah  Istimewa  Yogyakarta  Dan Jawa  Tengah  Selatan.  Agric.  Sci.,    4  : 741-750.
Kaysner,  C.  A.,  C.  J.  Abeyta,  M.  M.  Wekell, A. DePaola, R. F. Stott, and J. M. Leitch. 1987.  Virulent  strains  of Vibrio  vulnificus isolated  from  estuaries  of  the  United States  west  coast.  Appl.  Environ. Microbiol. 53:1349–1351.
Kementrian  Kesehatan  Republik  Indonesia.
2011.  Buku  Panduan  Hari  Kesehatan Sedunia. Kemenkes. Jakarta.
Larsen,  J.  L.,  I.  Dalsgaard.,  dan  A. Dalsgaard.  1997.  Occurence  of Vibrio vulnificus Biotype  in  Danish  Marine Environments.  American  Society  for
Microbiology.
Applied and Environmental Microbiology, .9 :. 7 -13.
Mac Faddin, J. F., 1980. Biochemical Test for Identification  of  Medical  Bacteria, Second  Edition.  Williams  &  Wilkins. Baltimore.
Mishra, P., Samanata, Mohanty, and Maity., 2010. Characterization of Vibrio
Species  Isolated  From  Fesh  Water Fishesby Ribotypng. Indian J. Microbiol,
50 (1) : 101 - 103
National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). 2001. Performance standards for antimicrobial disk susceptibility
testing. Approved standard M100-S11. Wayne, Pa: NCCLS.
Nazir, M., 1999.  Metode Penelitian.  Ghalia Indonesia. Jakarta.
Noorlis, A., Ghazali, F. M., Cheah, Y. K., Tuan Zainazor,  T.  C.,  Ponniah,  J.,  Tunung,  R., Tang,  J.  Y.  H.,  Nishibuchi,  M., Nakaguchi,  Y.  and  Son,  R.  2011. Prevalence and quantification of Vibrio species and Vibrio parahaemolyticus in freshwater  fish  at  hypermarket  level. International  Food  Research  Journal, 18: 689-69.
Peggy  A.  Reed  and  Ruth  Francis-Floyd. 1996. Vibrio Infections of Fish. University of Florida. Florida.
Rad,  M.  And  Davar.S.,    2010.  Isolation  and Characterization  of Vibrio ( Listonella ) anguillarum from Cat fish. J. Vet. Antm. Sci., 34 (4) : 413 – 415.
Sarjito,  2010.Aplikasi  Biomolekuler  Untuk Deteksi  Agensia  Penyebab  Vibriosis Pada  Ikan  Kerapu  danPotensi  Bakteri Sponge Sebagai Anti
Vibriosis.[Disertasi]. Program Pasca Sarjana, Universitas
Diponegoro, Semarang.
Sarjito, Ningrum, N.E.W., Radjasa, O.K., dan Prayitno,  S.B.,    2012.  Appication  of Repetitive  Sequence Base PCR on The Richness  of  Vibrio  on  The  Tiger  Shrimps ( Penaeus  monodon F.)  .  Jurnal  of Coastal  Development,  15  (3)  :  304  – 310
Sarjito,  Prayitno,  S.B.  dan  Haditomo,  A.H.C. 2013 a .  Pengantar  Parasit  dan  Penyakit Ikan. UNDIP Press. Semarang.
Sarjito,  Prayitno,  S.B.,  Radjasa  O.K  dan Hutabarat,  S.  2007.  Causative  Agent
Vibriosis pada Kerapu Bebek
( Cromileptes Altivelis ) dari Karimunjawa
1.  Pathogenisitasnya  terhadap  Ikan Kerapu
Macan ( Epinephelus fuscoguttatus ).  Jurnal  Ilmu  Kelautan, 12(3) : 173 – 180
Sarjito,  Radjasa  O.K,  Hutabarat,  S  dan Prayitno  S  B.,  2009.  Phylogenetik Diversity of Causative Agent of Vibriosis Associated  with  Groupers  Fish  from Karimunjawa  Island,  Indonesia.  Curr. Res. of Microbiol., 2 (1) : 14-21..
Schaperclaus.  W.,  1992.  Fish  Disease  Vol  1. A.A. Balkema, Rotterdam.
Sharma  A.  and  Chaturvedi,  A.N.,  ,  2007. Population  dynamic  of Vibrio sp.  in  the river  Narmahada  at  Jabalpur.    J. Enviroment. Biol., 28 : 747 - 751
Sharma, A.,  C.R., Bora,C.R., Chaurasia, R.K., and  Sahu,  V.,    2009.  Antibiotic Suspectibility  and  Genetic  Analysisi  of Vibrio  species  Isolated  from  Reverine Enviroent. Curr. Res. Bacteriol., 19: 1 - 13
Smith P, 2006.  Break Points for Disc Diffusion Susceptibility
Testing of Bacteria Associated with Fish Diseases, A Review Of  Current  Practice.    Aquaculture, 261:1113–1121 Sukenda, L. Jamal,D. Wahyuningrum dan A. Hasan.  2008.  Penggunaan  Kitosan Untuk  Pencegahan  Infeksi Aeromonas hydrophila Pada  Ikan  Lele  Dumbo Clarias sp.  Jurnal Akuakultur Indonesia,
7(2) : 159-169.
Tanrikul.,  TT.,  2007.  Vibriosis  an  a  Epizootic
Diseases of Rainbow Trout
( Onchorynchuss mykiss ) in Turkey.  J. Of Bio. Sci., 10(10) : 1733 – 1737
Tatsuya  N.,  Emi  I.,  Nakao  N.,  Nobuhiko  N., and Masatoshi M. 2006. Comparison of
Vibrio harveyi strains isolatedfromshrimpfarms and fromculture collection intermsof toxicityandantibiotic resistance.
Graduate
School
of Life and Environmental  Sciences,  University  of Tsukuba, Tsukuba, Ibaraki, Japan.
White  D.G.,  and  McDermott,  P.F.,  2001. Biocides, drug resistence and Microbial evolution. Curr. Opin.Microbiol., 4 : 313 – 317