Jurnal Pharmascience, Vol 2, No. 1, Februari 2015, hal: 10 – 18 ISSN : 2355 – 5386
Research Article
Aktivitas Antidiabetes dari Fraksi Air Lingzhi ( Ganoderma lucidum (Curtis) P. Karst)) pada Tikus Diabetes dengan Induksi Aloksan
Dwi Ningsih
Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi, Surakarta Email: dwiee_nink@yahoo.co.id
Abstrak
Penelitian  ini  dirancang  untuk  mengetahui  pengaruh  fraksi  air  G. lucidum dalam menurunkan  kadar  glukosa  darah  dan  ekspresi  p53  pada  jaringan  pankreas  tikus  diabetes  yang diinduksi  aloksan.  Tiga  puluh  enam  tikus  dibagi  menjadi  enam  kelompok  yaitu  normal,  diabetes, glibenklamid  dan  tiga  dosis  fraksi  air  pengobatan  kelompok  G. lucidum (225,  450,  dan  675  mg  / KgBB).  Tikus  diabetes  diinduksi  aloksan  intraperitoneal  pada  dosis  150  mg  /  KgBB.  Keadaan diabetes  terjadi  pada  hari  ke-3  setelah  pemberian  aloksan  dan  menunjukkan  peningkatan  kadar darah  sampai  274,00  ±  15,11  mg  /  dL.  Pemberian  oral  fraksi  air  G. lucidum dan  glibenklamid selama 9 hari setelah kondisi diabetes secara signifikan mengurangi kadar glukosa darah (P <0,05). Pada  hari  ke-10  setelah  pengobatan,  tikus  yang  dimatikan  dan  jaringan  pankreas  diambil  untuk pengujian  Haematoxyllin  eosin.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  fraksi  air  G. lucidum menghambat  apoptosis  sel  β.  Perubahan  morfologi  jaringan  pankreas  dalam  keadaan  diabetes secara  signifikan  menurun  dan  berubah  menjadi  keadaan  normal  setelah  pemberian  berulang fraksi air G. lucidum .
Kata kunci: fraksi air  G. lucidum , Aloksan monohidrat, Diabetes melitus

## Abstract
The  present  study  was  designed  to  investigate  the  influence  of  water  fraction  of  G.  lucidum toward  lowering  blood  glucose  level  and  p53  expression  in  pancreatic  tissues  in  alloxan-induced diabetic rat.  Thirty six  rats  were divided into six groups i.e. normal, diabetic, glibenclamide and three dosage of treatment water fraction of G. lucidum groups (225, 450, and 675 mg/KgBW).  Diabetic rats were  induced  by  alloxan  monohidrate  intra  peritoneally  at  the  dose  of  150  mg/KgBW.  Diabetic  state occurred  on  the  3rd  day  after  alloxan  administration  and  it  was  showed  increasing  blood  level  until 274.00 ± 15.11 mg/dL. Orraly administrations of water fraction of G. Lucidum and glibenclamide for 9 days after diabetic condition  were significantly reduce of blood glucose level (P<0.05). At the day 10th after treatment, rats were sacrified and the pancreatic tissues were harvested for Haematoxyllin eosin. The  results  showed  that  water  fraction  of  G. lucidum  inhibit  the  β  cell  apoptotic.  The morphological change of pancreas tissue in a diabetic state was significantly decreased and turned into normal state after repeated administration of water fraction of G. Lucidum.
Keywords   : Water fraction of G. Lucidum,  Alloxan Monohidrat, Diabetes Mellitus

## I. PENDAHULUAN
Diabetes  mellitus  (DM)  merupakan  suatu gangguan  metabolisme  yang  ditandai  dengan tingginya  kadar  gula  darah  sebagai  akibat insufisiensi  fungsi  insulin.  Insufisiensi  fungsi insulin dapat disebabkan oleh defisiensi relatif  atau absolut  produksi  insulin  oleh  sel  beta  langerhans kelenjar  pankreas,  atau  disebabkan  oleh  kurang responsifnya  reseptor  insulin  pada  jaringan  target terhadap  insulin  (Price  &  Wilson,  1994).  Penyakit ini dapat menimbulkan komplikasi baik makrovaskuler    maupun    mikrovaskuler,  neuropati dan mudahnya timbul ulkus atau  infeksi (Waspadji, 2006; Green, 1997).
Berdasarkan    etiologinya,  DM  diklasifikasikan menjadi 2 kelompok yaitu DM tipe 1 dan DM tipe 2. Pada  DM  tipe  I,  pankreas  tidak    mampu menghasilkan  insulin,  sehingga  terjadi  defisiensi insulin  secara  total.  Pada  DM  tipe  II,  pankreas mampu  menghasilkan  insulin,  tetapi  menunjukkan defisiensi insulin relatif, sehingga tubuh kehilangan kemampuan  untuk  memanfaatkan  insulin  tersebut secara efektif (Price & Wilson, 1994; Golan, 2008). Lebih  dari  90%  penderita  adalah  DM  tipe  2 (Underwood, 2000).
Secara  fisiologis  di  dalam  tubuh  terdapat pengaturan  yang  konstan  terhadap  sintesis  dan sekresi  insulin  untuk  mengatur  kadar  gula  darah. Terjadinya  kelainan  pada  salah  satu  mekanisme, yakni  sintesis  insulin,  sekresi  insulin,  atau perubahan  jumlah  dari  sel  β  akan  menyebabkan
defisiensi insulin yang kemudian dapat berkembang menjadi diabetes (Rane & Reddy, 2000).
Pankreas  merupakan  bagian  dari  sistem pencernaan  berupa  kelenjar  yang  memegang peranan penting dalam kaitannya dengan DM. Ada 4 jenis sel utama dalam pankreas yakni sel α, β, δ, dan  sel  F.  Sel  β  merupakan  penghasil  insulin  dan menempati  kurang  lebih  60  –  80%  pulau Langerhans. Pada DM tipe 1, sel β hanya berjumlah kurang dari 10%  (Tjokropawiro, 2002). Sedangkan pada DM tipe 2 terjadi kehilangan 50 – 65%  masa sel β, yang dikarenakan meningkatnya apoptosis sel β pankreas (Guerra et al ., 2005).
Sel β seperti semua sel yang lain di dalam tubuh, diatur  oleh  suatu  siklus  sel  yang  terdiri  dari  empat fase  yakni  G1,  S,  G2,  dan  M.  Pada  siklus  inilah akan ditentukan apakah suatu sel akan berproliferasi dan tumbuh atau mengalami apoptosis.  Terjadinya  perubahan  skiklus  sel  akan mempengaruhi  kecepatan  proliferasi  dan  tumbuh suatu sel (Rane & Reddy, 2002).
Proses  apoptosis  pada  sel  dapat  terjadi  melalui proses fisiologis maupun patologis. Proses apoptosis  secara  fisiologis  melibatkan  peran  dan fungsi  telomer,  sedangkan  proses  apoptosis  yang bersifat  patologis  dapat  terjadi  melalui  aktivias protein  kinase  C  (PKC).  PKC  akan  mengaktivasi protein  p53  yang  ada  didalam  inti  sel.  Protein  p53 kemudian akan mengaktivasi Bax. Protein Bax akan merangsang  mitokondria  untuk  memproduksi enzim  sitokrom  c  dan  mengeluarkannya  ke  sitosol. Di  dalam  sitosol,  sitokrom  c  dengan  Apoptosis
Protease  Activating  Factor-1  (APAF1)  dan  pro- caspase  9  membentuk  caspase  9,  komplek  yang terjadi disebut apoptosome. Terbentuknya caspase 9 akan  mengaktifkan  caspase  eksekusioner,  yaitu caspase  3,  6  dan  7  sehingga  dapat  menyebabkan apoptosis (Yalon et al ., 2004).
G. lucidum merupakan    jamur  basidiomycotina berkayu, masuk dalam famili Ganodermataceae dari polyporales.    G. lucidum sering  disebut  sebagai "Lingzhi  ''  di  Cina.  G. lucidum adalah  jamur berbentuk  gelang  yang  tumbuh  di  berbagai  pohon- pohon  mati.  Di  Indonesia  G. lucidum dikenal sebagai  jamur  kayu  atau  jamur  merah.  G. lucidum digunakan    pada  pengobatan  tradisional  untuk terapi beberapa penyakit, seperti hepatitis, hipertensi,  bronkitis  kronis,  asma  bronkial,  dan kanker.  Dekokta  G. lucidum dalam  air  digunakan sebagai  pengobatan    DM  (Li et  al .,  2011).    G. lucidum mengandung  elemen  aktif  diantaranya triterpen (ganoderic acid), polisakarida (β-1-3, β -1- 6  homo  D-glucans,  acidic  glucan  dan  polyglican, protein  bound  heteroglucan,  arabinoxyoglucan, heteroglican, dan peptidoglicans), nukleotida (adenosine  dan  5-deoxy-50  methylsulfinylad- Nosine),  ergosterol,    asam  lemak,  dan  protein (AHP, 2006; Wasser, 2005).
Zhang et  al .  (2003)  menyatakan  bahwa pretreatment dengan polisakarida Lingzhi ditemukan untuk menghasilkan efek antihiperglikemik  pada  tikus  hiperglikemik  dengan induksi  aloksan.  Fraksi  air  G. lucidum dosis  500 mg/Kg  dan  1000mg/Kg  secara  oral    mempunyai
aktivitas  hipoglikemik  pada  tikus  normal  dan antihiperglikemik  pada  tikus  diabetes  dengan induksi  aloksan    (Mohammed et.al ,  2007). Polisakarida  G. lucidum mampu  melindungi  pulau pankreas  dari  kerusakan  radikal  bebas  yang disebabkan  oleh  aloksan  baik in  vivo maupun  in vitro  (Zhang et  al .,  2004).  Cao et  al .  (2010) melaporkan  bahwa  polisakarida  G. lucidum dapat mengurangi  dan  menunda  absorpsi  glukosa  pada tikus.
Melihat  potensi  polisakarida  G. lucidum terutama dalam  melindungi  sel-sel  pankreas  dari  kerusakan yang  disebabkan  karena  radikal  bebas,  maka memungkinkan  bahan  obat  tersebut  digunakan sebagai  obat  alternatif  pada  pengobatan  diabetes terutama  DM tipe 2.
Pada  penelitian  ini  akan  dikaji  aktivitas antidiabetes  dari  pemberian  fraksi  air    G. lucidum secara  oral  pada  tikus  putih  jantan  galur  wistar diabetes.    Efek  antidiabetes  G. lucidum dapat diketahui  dengan  melihat  turunnya  kadar  glukosa dan pengaruhnya terhadap perlindungan sel-sel beta pankreas  tikus  diabetes.    G. lucidum difraksinasi dengan  air  panas  kemudian  dipresipitasi  dengan etanol  untuk  mendapatkan  senyawa  polisakarida yang mempunyai aktivitas antidiabetes. Dosis  yang digunakan pada penelitian ini setara dengan  jamur segar  225  mg/KgBB,    450  mg/KgBB,  dan  675 mg/KgBB.    Aktivitas  hipoglikemik  fraksi  air    G. lucidum akan  diteliti  melalui  pengujian in  vivo menggunakan tikus diabetes yang diinduksi aloksan.
Dilakukan pengujian histopatologi terhadap jaringan beta pankreas.
Hasil  penelitian  diharapkan  mampu  menjelaskan efek G. lucidum terhadap kuantitas dan kualitas sel beta pankreas, yang lebih lanjut dapat dikembangkan sebagai alternatif dalam terapi DM.

## II. METODE PENELITIAN

## A. Bahan dan Alat
Jamur G. lucidum yang diperoleh petani jamur di Sukoharjo,  Jawa  Tengah.    Air  suling, water  for injection , tablet glibenklamid, Na CMC ( suspending agent ), Larutan garam fisiologis, dapar formalin,  bahan  penginduksi  DM  (aloksan  dari Sigma Aldrich), standar glukosa, NaOH 0,3 N, HCl 1  N,  bufer  Na 2 HPO 4 -NaOH  (pH  11,5  mengandung NaCl  0,5  M), normal  saline , neutral  buffered formalin 10%,  bahan  untuk  pewarnaan  jaringan pankreas (Haematoxylin-Eosin dari Baxter).
Alat  yang  digunakan  adalah  sonde  tikus,  alat gelas,  mortir  dan  stamper,  seperangkat  alat  bedah, mikroskop dengan camera digital , kaca obyek, kaca penutup,  botol  kecil  tempat  jaringan,  kertas  label, alat  tulis,  spekrofotometer  UV-Vis, disposable syringe 1  ml,  jarum  suntik  26G,  timbangan  teknik, timbangan  analitik, easy  touch  glucometer , rotary evaporator , water bath , microtome , peralatan untuk pembuatan  dan  pengamatan  sediaan  hispatologis, pewarnaan imunohistokimia.

## B. Cara Kerja
1. Penyiapan Hewan Uji
Hewan  uji  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  tikus  putih  ( Rattus  norvegicus )  yang diperoleh  dari  Fakultas  Kedokteran  Universitas Gadjah  Mada  Yogjakarta.  Hewan  yang  akan digunakan  merupakan  tikus  jantan  albino,  berasal dari  satu  galur  (galur  Wistar),  sehat  (tidak  ada kelainan  bawaan  dan  kadar  glukosa  darah  acak normal),  jenis  kelamin  jantan    (usia  2-3  minggu, berat badan 200 gram), dan diadaptasikan selama 1 minggu sebelum digunakan untuk percobaan. Tikus sejumlah  30  ekor  dibagi  dalam  6  kelompok, masing-masing 5 ekor tikus.

## 2. Pembuatan Sampel Uji
Pengambilan sampel jamur G. lucidum dilakukan secara  acak  pada  jamur  yang  dipanen  sekitar  umur 4-5  bulan,  diambil  dari  daerah  Sukoharjo,  Jawa Tengah.  G. lucidum yang  sudah  diperoleh, selanjutnya  dibersihkan  dari  kotoran,  dikeringkan dengan  cara  dipanaskan  di  bawah  sinar  matahari, setelah  kering  dihaluskan,  serbuk  yang  diperoleh selanjutnya digunakan untuk penelitian.

## 3. Pembuatan Fraksi Air G. lucidum
Serbuk  Lingzhi  500  g  dibersihkan  dari polifenol dan monosakarida dicampur dengan 2,5 L etanol  80%  pada  suhu  30°C  selama  24  jam  sambil setiap  kali  dikocok,  kemudian  disaring.    Residu dikering  anginkan,  setelah  kering  difraksi  dengan air panas 100°C (1:20CC w/v).
Filtrat dikentalkan dengan evaporator kemudian  dipresipitasi  dengan  etanol  95%  pada suhu  4 o C  selama  24  jam.  Hasil  presipitasi  di sentrifuse (5000 rpm, 10 menit) dan presipitat yang di  dapat  di  vakum freeze  dried hingga  didapatkan “ crude beta glucan ” (Yang et al ., 2010).
4. Protokol Penelitian
a. Pemerikasaan  kadar  glukosa  darah  acak sebelum dilakukan pengujian.
b. Pada  hari  pertama,  kelompok  hewan  coba
(kecuali  kontrol  normal)  diinduksi    aloksan monohidrat dengan  dosis 150 mg/kg BB secara intraperitoneal,  sebanyak  sekali  injeksi  untuk menginduksi  terjadinya  DM.  Perkembangan hiperglikemia  tikus  diperiksa  pada  hari  ke-  3.
Sampel  darah  diambil  melalui  vena  caudalis  di ekor tikus dengan cara mengiris tipis ekor tikus. Apabila  setelah  3  (tiga)  hari  kadar  glukosa darah  tikus  >  200  mg/dl  maka  tikus  telah menjadi diabetes.
c. Hewan yang diabetes dikelompokkan menjadi 5 kelompok  secara  random  (kontrol  diabetes, pembanding,  dan  3  kelompok  perlakuan  fraksi air  G.  lucidum).  Hewan  tanpa  induksi  aloksan digunakan  sebagai  kelompok  kontrol  normal. Masing-masing  kelompok  terdiri  dari  6  ekor tikus.
•  kelompok  kontrol  tikus  normal  (Na  CMC 0,5 %)
•  kelompok  kontrol  tikus  diabetes  (Na  CMC
0,5%)
•  kelompok  fraksi  air  G. lucidum dosis  225
mg /KgBB
•  kelompok  fraksi  air  G. lucidum dosis    450 mg / KgBB
•  kelompok  fraksi  air  G. lucidum dosis  675
mg / KgBB
• kelompok  pembanding  glibenklamid  0,45 mg/KgBB
Pemberian  sediaan  uji  dilakukan  pada  hewan coba  dengan  metode  kuratif  selama  7  hari  secara oral  pada  pagi  hari  setelah  induksi  aloksan.  Kadar glukosa  darah  diukur  hari  pada  hari  ke-0,  3,  5,  7, dan  10.  Sampel  darah  diambil  dari  ekor  dengan cara  melukai  ekor  hewan  coba.  Kadar  glukosa darah  diukur  dengan  menggunakan easy  touch glucometer .
d. Pada  hari  ke-10,  setelah  pengukuran  glukosa darah, tikus dikorbankan dan dilakukan pembedahan serta pemotongan jaringan pankreas  tiap  kelompok  dengan  mikrotom.
Jaringan kemudian dipreparasi dengan melakukan fiksasi menggunakan neutral buffered formalin  10%,  setelah  itu  pemotongan dan  pewarnaan  secara  histokimia  dengan pewarnaan  menggunakan Hematoxylin  eosin (HE)  dan  imunohistokimia  akan  dilakukan  di laboratorium instalasi patologi anatomi RSU Dr. Sutomo Surabaya.
e. Tahap  pengujian  histologi  dilakukan  dengan pemotongan  dan  pewarnaan  jaringan  sampel dengan HE

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. Hasil Pengamatan Makroskopis G. lucidum
Berdasarkan  pengamatan  makroskopis  Lingzhi dari Sukoharjo diperoleh bahwa karakteristik Badan buah bertangkai panjang yang tumbuh lurus ke atas, berbentuk  setengah  lingkaran,  diameter  10-35  cm. Pada  badan  buah  terdapat  garis-garis  melingkar yang  merupakan  batas  periode  pertumbuhan,  tepi berombak  atau  berlekuk,  pada  sisi  atas  terdapat lipatan-lipatan radier, warna coklat merah keunguan, mengkilap, konsistensinya keras dan liat (gambar 1).
Gambar 1. Makroskopik G. lucidum

## B. Hasil Pengamatan Kadar Glukosa Darah
Kadar glukosa darah tikus yang diinduksi dengan aloksan  monohidrat  pada  hari  ke-3  mengalami kenaikan  yang  bermakna  dari  118,00±8,35  mg/dL menjadi 274,00±15,11 mg/dL. Setelah diuji statistik diperoleh  p  <  0,0001  yang  artinya  bahwa  injeksi aloksan mampu meningkatkan kadar glukosa darah secara  bermakna  dibandingkan  kelompok  normal pada hari ke-3. Kadar glukosa darah tikus pada hari ke-3  setelah  mendapatkan  injeksi  aloksan  dapat dilihat pada tabel I.
Tabel  I. Kadar Glukosa Darah hewan uji hari ke-3 setelah injeksi aloksan
Karakteristik  kadar  glukosa  darah  setelah mendapatkan  perlakuan selama 9 hari dapat dilihat pada tabel II dan gambar 2.
Tabel  II .  Karakteristik  Kadar  Glukosa  Darah hewan uji sampai hari ke-12
Gambar  2. Perkembangan  kondisi  diabetes  pada tikus dengan parameter kadar gula darah
Kelompok  diabetes  berbeda  secara  nyata  dengan kelompok normal, pembanding (glibenklamid), dan fraksi  air  G. lucidum (p<0,005).  Hal  ini  dapat disimpulkan bahwa fraksi air G.lucidum mempunyai  efek  menurunkan  kadar  glukosa  darah secara  nyata.  Terdapat  efek  penurunan  kadar glukosa  darah  yang  sama  kuat  antara    fraksi  air G. lucidum dosis  225,  450,  dan  675  mg/KgBB,  dan glibenklamid.
Hasil  ini  dapat  diliat  dari  hasil  analisa post  hoc test kadar  gula darah antara fraksi     air  G. lucidum dosis 225, 450, dan 675 mg/KgBB dan pembanding (glibenklamid) pada hari ke-12 tidak berbeda secara nyata  (p  >0,05).  Dari  hasil  pengukuran  kadar glukosa  darah  hewan  uji  setelah  treatment dilakukan  perhitungan  persentase  penurunan  kadar glukosa darah (tabel III).
Tabel  III.  Persentase  penurunan  kadar  glukosa darah hewan uji setelah treatment

## C. Hasil Pengujian
Histokimia Jaringan

## Pankreas Hewan Uji
Pada  gambar  3  tampak  perbedaan  gambaran histologi  antara  pankreas  tikus  normal  dengan pankreas tikus DM. Pada pankreas tikus normal (A, B,  C)  bentuk  pulau  Langerhans  utuh,  sel-.selnya tersusun  rapi,  batas  antar  satu  sel  dengan  sel  yang lain jelas  kromatin tajam dan warnanya jelas. Pada tikus  DM  (D,E,F),  terjadi  perubahan  morfologi pada  pulau  Langerhans.  Bentuk  pulau  Langerhans mulai  rusak,  ukurannya  lebih  kecil  dibandingkan kelompok  normal,  susunan  sel-selnya  tidak  teratur, ukuran inti sel tidak sebesar pada kelompok normal, jarak  antar  sel  melebar  serta  terdapat  sel  yang mengalami apoptosis.
Gambar 3. Penampang  melintang  jaringan pankreas dengan pewarnaan hematoxylin-eosin tikus  Normal (A,B,C) dan diabetes (D,E,F)
Hasil  pengamatan  histokimia  setelah  treatment fraksi air G. lucidum dosis setara dengan 225, 450, dan  675  mg/KgBB  G.  lucidum  segar  sehari  sekali selama  9  hari  menunjukkan  terjadi  perbaikan morfologi dari pulau Langerhans (gambar 4).
Gambar 4. Penampang  melintang  jaringan pankreas  (perbesaran  1000x    dengan pewarnaan  hematoxylin-eosin  tikus diabetes  (A),  diabetes+fraksi  air  G. lucidum  (FAGl)  dosis  225  mg/KgBB (B),  diabetes  +  fraksi  air  G.  lucidum dosis  450  mg/KgBB  (C),  diabetes  + fraksi  air  G.  lucidum  dosis  675 mg/KgBB (D), diabetes + glibenclamid 0,45 mg/KgBB (E)
Pada  penelitian  ini  juga  dilakukan  pengukuran diameter pulau Langerhans dan perhitungan jumlah
sel  β  pankreas  untuk  melihat  perubahan  morfologi karena diabetes. Pada kondisi diabetes ukuran Pulau Langerhans  lebih  kecil  dan  jumlah  sel  β  pankreas lebih  sedikit  dibandingkan  normal.  Pengukuran dilakukan dengan mikroskop dilengkapi mikrometer  pada  perbesaran  400x.    Hasil pengukuran  diameter  pulau  Langerhans  dan perhitungan  jumlah  sel  beta  tampak  pada  tabel  IV. Pada  kondisi  diabetes,  rata-rata  diameter  pulau Langerhans  dan  jumlah  sel  β  pankreas  lebih  kecil dibandingkan kelompok normal. Setelah mendapatkan  treatment    dengan  fraksi  air  G. lucidum ,  maka  ukuran  diameter  pulau  Langerhans semakin  meningkat.  Pada  pemberian  fraksi  air  G. lucidum  dengan  dosis  setara  dengan  225,  450,  dan 675 mg/KgBB G. lucidum segar diperoleh diameter pulau
Langerhans
secara berturut-turut
105,92±17,55;  166,11±111,08;  dan  131,11±30,38 μm.
Tabel  IV. Hasil  pengukuran  diameter  pulau Langerhans  dan  perhitungan  jumlah  sel beta pankreas
Hasil  analisa  statistik  t-test  menunjukkan  adanya perbedaan  yang bermakna antara kelompok normal dan  kelompok  diabetes  dilihat  dari  diameter  Pulau Langerhans dan jumlah sel β-nya (p<0,0001) . Hasil
analisa  varian  satu  arah  data  diameter  pulau langerhans  menunjukkan  bahwa  tidak  ada  beda bermakna pada diameter pulau Langerhans diantara kelompok  perlakuan  (p  =  0,065).  Sedangkan  hasil analisa varian satu arah  data jumlah sel  β pankreas menyatakan  bahwa  terdapat  perbedaan  bermakna diantara  kelompok  perlakuan  (p  =  0,03).  Karena terdapat  perbedaan  maka  dilanjutkan  analisis  post hoc test untuk mengetahui letak perbedaan tersebut, didapatkan  hasil  bahwa  bahwa  tidak  terdapat perbedaan  bermakna  antara  kelompok  diabetes dengan  treatment  fraksi  air  G. lucidum dosis  450 dan  675  mg/KgBB.  Kedua  kelompok  berbeda bermakna  dengan  kelompok  diabetes,    diabetes dengan  treatment  fraksi  air  G. lucidum dosis  250 mg/KgBB dan glibenklamid.

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dari  analisa  efek antidiabetes  fraksi  air    G. lucidum pada  tikus diabetes  yang  diinduksi  aloksan,  maka  dapat diambil  kesimpulan  bahwa  pemberian  fraksi  air  G. lucidum dosis 225, 450, dan 675 mg/KgBB mampu melindungi  dan  meningkatkan  proliferasi  sel  β pankreas hewan uji, ditunjukkan dengan kemampuan fraksi air G. lucidum untuk:
1. Menurunkan ekspresi protein p53 dan pada sel- sel β pankreas hewan uji.
2. Meningkatkan jumlah sel-sel β pankreas hewan uji.
3. Dosis  225  mg/KgBB  menghasilkan  penurunan gula  darah,  perbaikan  gambaran  histokimia,
yang  lebih  kecil  dibanding  dosis  450  dan  675 mg/KgBB.  Peningkatan  dosis  dari  450  ke    675 mg/KgBB tidak memberikan peningkatan efek.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahuja,  S  &  H.  Rasmussen.  2007. HPLC  Method Development  for  Pharmaceuticals:  Volume  8  of Separation  Science  and  Technology -  Elsevier Academic Press. United Kingdom.
Ariburnu,  E.,  M.  F.  Uludag,  H.  Yalcinkaya  &  E. Yesilada.  2012.  Comparative  Determination  of Sibutramine as an Adulterant in Natural Slimming Products  by  HPLC  and  HPTLC  Densitometry.
Journal  of  Pharmaceutical  and  Biomedical Analysis . 65: 77-81.
Firdaus,  M.  I.  &  P.  I.  Utami.  2009.  Analisis Kualiatif Paracetamol Pada Sediaan Jamu Serbuk Pegal  Linu  yang  Beredar  Di  Porwokerto.
Pharmacy . 06: 1 González  B.  G.,  M.  Á.Herrador,  A.  &  G.  Asuero. 2010.  Intra-laboratory  Assessment  of  Method Accuracy  (Trueness  and  Precision)  by  Using Validation Standards. Talanta . 82: 1995-1008. Jung, J., M. H. Clausen., & W.W. Weinmann. 2006. Anoretic Sibutramin Detected in a Chinese Herbal Drug  for  Weight  Loss. Forensic  Science International . 161 : 211-222.30
Kamil,  M.  &  M.A.  Naji.  2009.  Determination  of Undeclared  Chemicals  in  Herbal  Slimming Medicines using HPTLC. VIVECHAN-IJR .02: 14- 17.
Permata,  D.  2012.  Optimasi  Metode  Identifikasi Antalgin  dan Klofeniramin  Maleat  Secara KCKT Photoidiode  Array  setelah  Pemisahan  dengan Solid Phase Extraction pada Sediaan Serbuk Obat Tradisional. Skripsi  Program  S-1 ,  Universitas Indonesia, Depok.
Permenkes RI, 2012. Permenkes RI : No.007 Tahun 2012  Tentang  Registrasi  Obat  Tradisional . Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta.
Radhakrishna,  T.,  Ch.  L.  Narayana,  D.  S.  Rao.,  K.
Vyas  &  G.  O.  Reddy.  2000.  LC  Method  for  The Determination of Assay And Purity Of Sibutramine  Hydrochloride  And  Its  Enantiomers
by Chiral Chromatography. Journal of Pharmaceutical  and  Biomedical  Analyisis .  22: 627-639.
Singh,  R.  2013.  HPLC  Method  Development  and Validation-  an  Overview. Journal  Pharmacy Education Research . 4: 26-33.
Suneetha,  D  &  A.  L.  Rao.  2011.  A  Stability Indication  HPLC  Method  for  The  Determination of  Sibutramine  Hydrochloride  in  Bulk  and Commercial  Formulations. International  Journal of Research in Pharmacy and Chem . 01: 1-6. Suthar,  A.P.,  S.  A.  Dubey  &  S.  R.  Patel.  2009.  A Validated  Spesific  Reverse  Phase  HPLC  for Estimation of Sibutramine Hidrochloride Monohydrate  in  Bulk  Drug  and  Capsule  Dosage Forms.  International Journal  of  ChemTech Research . 01: 793-801.