Potensi dan Karakteristik Larutan Mikroorganisme Lokal (MOL) Berbasis Limbah Sayur sebagai Bioaktivator dalam Fermentasi
Potency and Characteristics of Vegetable Waste-Based Lokal Microorganisms Solution (MOL) as Bioaktivator in Fermentation
Yunilas 1 , Ameilia Zuliyanti Siregar 1 , Edhy Mirwhandhono 1 , Adnan Purba 1 , Nelzi Fati 2 , Toni Malvin 2
1 Departemen Peternakan, Fakultas Pertanian, Universitas Sumatera Utara, Medan yunilas1@usu.ac.id
2 Program Studi Teknologi Produksi Ternak, Politeknik Pertanian Negeri Payakumbuh
Diterima : 29 Juni 2022 Diterbitkan : 19 Agustus 2022 Online : 31 Agustus 2022
Abstrak: Larutan  Mikroorganisme  Lokal  (MOL)  adalah  larutan  hasil  proses  fermentasi  berbagai  bahan  organik yang  berasal  dari  lingkungan.  Larutan  MOL  mengandung  beragam  Mikroorganisme  Lokal yang  potensial  untuk digunakan sebagai bioaktivator dalam fermentasi.  Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui potensi dan karakteristik larutan MOL yang berasal dari limbah sayur (sawi hijau, kol, dan daun kembang kol). Penelitian ini menggunakan  rancangan  acak  lengkap  (RAL)  4  perlakuan  dan  3  ulangan  sehingga  diperoleh  12  unit  percobaan. Perlakuan meliputi berbagai lama fermentasi (inkubasi) MOL berbasis limbah sayur yaitu: T1 = fermentasi 7 hari, T2  =  fermentasi  14  hari,  T3  =  fermentasi  21  hari,  dan  T4  =  fermentasi  28  hari.  Variabel  yang  diamati  adalah karakteristik  fisik  (warna  dan  aroma),  biologis  (total  mikroba),  dan  kimiawi  (pH,  asam  laktat,  asam  asetat, glukosa,  dan  suhu).  Hasil  penelitian  menunjukkan  lama  fermentasi  dapat  menyebabkan  perubahan  warna  dan aroma  larutan  MOL.  Lama  fermentasi  berpengaruh  nyata  (P<0,05)  terhadap  pH,  berpengaruh  sangat  nyata (P<0,01) terhadap total mikroba, suhu, glukosa, dan tidak berpengaruh nyata (P>0,05) terhadap total asam laktat dan  asam  asetat  larutan  MOL.  Kesimpulannya  adalah  larutan  MOL  berbasis  limbah  sayur  berpotensi  sebagai bioaktivator dalam  fermentasi.  Karakteristik  larutan  MOL  berbasis  limbah  sayur  dipengaruhi  oleh  lama fermentasi. MOL terbaik dihasilkan pada hari ke-14 fermentasi dengan populasi mikroba sebesar 2,24 X 10^6.
Kata Kunci: Lama fermentasi, limbah sayur, mikroorganisme lokal,
Abstract: Lokal  Microorganism Solution  (MOL)  is a solution resulting from the fermentation process of  various organik materials originating from the environment. MOL solution contains a variety of lokal microorganisms that have  the  potential  to  be  used  as  bio  activators  in  fermentation.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the potency  and  characteristics  of  the  MOL  solution  (lokal  microorganisms)  derived  from  vegetable  waste  (green mustard,  cabbage,  and  cauliflower  leaves).  This  study  used  a  completely  randomized  design  (CRD)  with  4 treatments and 3 replications so that 12 experimental units are obtained . The treatments included various lengths of fermentation  (incubation)  of  MOL  based  on  vegetable  waste,  namely:  T1  =  7  days  fermentation,  T2  =  14  days fermentation,  T3  =  21  days  fermentation,  and  T4  =  28  days  fermentation.  The  variables  observed  were:  physical characteristics (color and aroma), biological (total microbes), and chemical characteristics (pH, lactic acid, acetic acid, glucose, temperature). The results showed that the length of fermentation caused a change in the color and aroma  of  the  MOL  solution.  Fermentation  time  had  a  significant  effect  (P  <  0.05)  on  pH,  had  a  very  significant effect (P < 0.01) on total microbes, temperature, glucose, and had no significant effect (P > 0.05) on total lactic acid and  acetic  acid  MOL  solution.  Conclusion:  MOL  solution  based  on  vegetable  waste  has  the  potential  as  a  bio activator  in  fermentation.  The  characteristics  of  the  vegetable  waste-based  MOL  solution  were  influenced  by  the length of fermentation. The best MOL was produced on day 14 of fermentation with a microbial population of 2.24 X 10^6.
Keywords: Fermentation time, lokal microorganism, vegetable waste

## 1. Pendahuluan
Limbah sayur  merupakan  biomasa organik yang cukup  berlimpah.  Limbah  sayur-sayuran  terdapat berlimpah  di  pasar-pasar.    Limbah  ini  jika  dibiarkan begitu saja dapat menyebabkan pencemaran lingkungan  karena  menghasilkan  bau  tidak  sedap, sumber  penyakit,  dan  menghasilkan  gas  metana. Proses  pembusukan  dapat  terjadi  karena  penguraian bahan  organik  yang  tidak  terkontrol  oleh  mikroba pembusuk.
Salah  satu  upaya  yang  dapat  dilakukan  agar limbah  ini  tidak  terbuang  begitu  saja  dan  tidak mencemari lingkungan adalah mengolahnya menjadi larutan mikroorganisme lokal (MOL) yang mengandung  beragam  mikroorganisme.  Larutan tersebut  bermanfaat  dalam  membantu  proses pengguraian (dekomposisi) bahan-bahan organik.
Mikroorganisme  lokal  adalah  larutan  hasil fermentasi  yang  mengandung  bakteri,  fungi  maupun yeast yang  hidup  secara  bersama  dan  saling bersinergis.  Mikroorganisme  dapat  dieksploitasi  dari lingkungan  sekitar  (tumbuhan,  hewan,  tanah,  air, lumpur, dan lainnya)[1]  dan [2].
Berbagai  jenis  bahan  organik  termasuk  limbah sayur  dapat  dijadikan  bahan  baku  untuk  pembuatan MOL. Selain dapat mengurangi jumlah limbah, MOL mengandung  mikroorganisme  baik,  enzim,  unsur hara makro, mikro yang bermanfaat bagi produktifitas  tanaman  dan  ternak.  MOL  berperan sebagai  bioaktivator  atau  dekomposer  dalam  proses fermentasi  bahan  pakan,  pupuk  organik,  dan perombakan  bahan  organik  lainnya.  Penambahan bioaktivator  dapat  mempercepat  proses  fermentasi karena  keberadaan  mikroorganisme  dapat  memacu pertumbuhan mikroba menguntungkan dan menekan pertumbuhan mikroba pembusuk. Fermentasi  merupakan  proses  perubahan  bahan kimia  suatu  substrat  (bahan  organik)  melalui aktivitas enzimatis yang dihasilkan oleh mikroorganisme.
Fermentasi  merupakan  proses  perombakan bahan  organik  melalui  aktivitas  mikroorganisme dengan mengubah senyawa-senyawa kompleks menjadi senyawa-senyawa sederhana. Produk fermentasi  dapat  meningkatkan  kualitas  bahan organik, menambah rasa, aroma, serta meningkatkan nilai  kecernaan  [3]. Mikroorganisme  yang  tumbuh dan berkembang pada suatu bahan dapat menyebabkan berbagai perubahan pada fisik maupun komposisi  kimia,  seperti  adanya  perubahan  warna, pembentukan  endapan,  kekeruhan,  pembentukan gas, dan bau asam [4] .
Bahan  baku  pembuat  MOL  terdiri  atas  1) substrat organik sebagai sumber mikroba yaitu buah- buahan,  sayur-sayuran,  isi  usus  hewan,  kotoran hewan, akar tanaman, dedaunan, bonggol pisang, dan lainnya,  2)  glukosa  sebagai  sumber  energi  mudah
larut yaitu molases, gula merah, gula putih, gula aren, dan air kelapa, 3) karbohidrat sebagai sumber energi yaitu cucian beras, nasi, singkong, dan gandum.
MOL  berasal  dari  bonggol  pisang  di  dalamnya terdapat  berbagai  jenis  mikrobia  antara  lain Bacillus sp., Aeromonas sp.,  dan Aspergillus  nigger [5].  MOL pelepah  daun  sawit,  bungkil  inti  sawit,  dan  lumpur sawit terdapat beragam bakteri potensial pendegradasi  serat  salah  satunya Bacillus  sp [1]. Limbah nanas yaitu limbah buah dan kulitnya sangat potensial  dijadikan  sebagai  bahan  baku  untuk pembuatan  MOL.  Nanas  ( Ananas comosus (L.) mengandung  bromelin  yang  dapat  melunakkan selulosa  sehingga  kulit  nanas  dapat  digunakan sebagai EM-organik [6] .
Nampak  perbedaan  sumber  bahan  organik sebagai  substrat  (media)  dalam  pembuatan  MOL menghasilkan  MOL  yang  berbeda  karakteristik maupun kandungan mikrobanya. Berdasarkan pemaparan  di  atas  penulis  tertarik  untuk  meneliti karakteristik MOL yang dihasilkan dari limbah sayur- sayuran dan diharapkan dapat dijadikan sebagai agen bioaktivator dalam fermentasi bahan organik.

## 2. Materi dan Metode

## 2.1. Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  timbangan  analitik,  fermentor  (erlenmeyer), gelas  ukur,  tabung  reaksi,  pipet,  pH  meter,  spatula, aquades,  pipet  tetes,  plastic,  buret, beaker  glass ,  alat titrasi,  mikroskop, hemocytometer ,  aluminium  foil, autoclave.
Bahan  yang  dipergunakan  adalah  bahan-bahan untuk  pembuatan  MOL,  antara  lain  limbah  sayur (kol,  daun  kembang  kol,  sawi  hijau),  dedak  padi halus, molases, air kelapa, air cucian beras, dan air.

## 2.2. Metode Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  rancangan  acak lengkap (RAL), 4 perlakuan dan 3 ulangan. Perlakuan meliputi  berbagai  lama  fermentasi  (inkubasi)  secara anaerob yaitu:
T1 = limbah sayur difermentasi 7 hari, T2 = limbah sayur difermentasi 14 hari, T3 = limbah sayur difermentasi 21 hari, T4 = limbah sayur difermentasi 28 hari.
2.3. Prosedur penelitian
1. Menyiapkan  semua  bahan  dan  alat  yang dibutuhkan.
2. Limbah sayur daun kol, daun kembang kol, sawi (1 :  1  :  1)  ditimbang  80  g,  dihaluskan  menggunakan blender, lalu masukkan ke dalam botol (fermentor) ukuran 500 ml.
3. Dedak ditimbang sebanyak 8 g, dan molasses 28 g, lalu masukkan kedalam fermentor 500 ml.
4. Air  kelapa,  air  cucian  beras,  dan  air  (1  :  1  :  1)
dimasukkan ke dalam fermentor sebanyak 284 ml air.
5. Semua bahan diaduk sampai tercampur merata.
6. Menginkubasi sesuai perlakuan yaitu 7, 14, 21 dan 28 hari.
7. Mengamati hasil inkubasi sesuai perlakuan.

## 2.4. Variabel
Variabel  yang  diamati  adalah  aroma,  warna, total  mikroba,  suhu,  glukosa,  pH,  total  asam  laktat, dan total asam asetat.

## 2.4.1. Aroma dan warna
Mengklasifikasikan aroma  produk  fermentasi pada  tiga  kriteria  yaitu  non-asam,  sedikit  asam,  dan asam. Warna produk fermentasi diklasifikasikan pada tiga  kriteria  yaitu  coklat  tua,  coklat,  dan  coklat muda [7].

## 2.4.2. pH
Cara menghitung pH  dengan  menggunakan pHmeter adalah;
1. Mengambil  sampel  yang  mau  di  ukur  kadar pHnya.
2. Menyalakan  pH  meter  dengan  menekan tombol on.
3. Memasukan pH meter ke dalam sampel yang akan di uji.
4. Mencelupkan  pH  ke  dalam  sampel,  skala angka akan bergerak acak.
5. Menunggu  hingga  angka  tersebut  berhenti dan tidak berubah-ubah.
6. Hasil  pengamatan  akan  terlihat  di  display digital.

## 2.4.3. Total populasi mikroorganisme
Populasi mikroba dihitung dengan menggunakan hemositometer dengan metode:
1. Mengambil  1  ml  sampel  (larutan  MOL)  lalu larutkan dengan 9 ml aquades steril di dalam tabung reaksi dan dihomogenkan.
2. Melakukan  teknik  dilusi  (pengenceran) sampai 10^6
3. Memipet  1  tetes  larutan  ke  atas  counting chamber dan ditutup dengan kaca penutup.
4. Mengamati dibawah mikroskop dan menghitung total sel mikroba

## 2.4.4. Total asam
Sampel  diambil  10  g  dan  larutkan  dengan  air sampai tanda tera  250  ml  lalu  direndam  selama  30 menit. Setelah itu saring (filtrat). Filtrat diambil 10 ml lalu  diteteskan  3  tetes  larutan  fenolftalein  (1%  w/v dalam  etanol)  dan  campuran  dititrasi  dengan  NaOH 0,1  M  sampai  warnanya  berubah  menjadi  merah muda.  Keasaman  titrasi  dihitung  dengan  rumus persamaan sebagai berikut:
Toal asam (%) = ml NaOH x N.NaOH x BM x FP X 100% Sampel x 1000

## 3. Hasil dan Pembahasan
Karakteristik MOL  sebagai  bioaktivator  dalam fermentasi  dapat  dipengaruhi  berbagai  faktor  seperti substrat yang digunakan serta lama proses fermentasi.  Pengamatan  karakteristik  MOL  meliputi aroma, warna, total mikroba, suhu, glukosa, pH, asam laktat, dan asam asetat ( Tabel 1 ).
Tabel 1. Karakteristik  larutan  MOL  berbasis  limbah sayur  pada  berbagai  lama  fermentasi (inkubasi)
No Variabel Lama Fermentasi (T) T1 T2 T3 T4 1 Warna Coklat muda Coklat tua Coklat tua Coklat tua 2 Aroma Sedikit asam Sedikit asam Asam Asam 3 Total mikroba (sel/mL) 1,08 x 10^6 2,24 x 10^6 2,03 x 10^6 1,63 x 10^6 4 Total mikroba (Log X, sel/mL) 6,0350 C 6,3510 A 6,2995 AB 6,2127 B 5 Suhu ( 0 C) 31,33 A 31,33 A 29,00 B 29,00 B 6 Glukosa (%) 5,33 B 6,00 A 6,00 A 5,00 B 7 pH 6,83 A 6,00 B 5,50 B 5,37 B 8 Total asam laktat (%) 2,63 2,10 3,08 2,55 9 Total asam asetat (%) 1,75 1,40 2,05 1,70
Keterangan:  Superskrip huruf besar yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan berbeda sangat nyata (P<0.01).

## 3.1. Karakteristik Fisik Larutan MOL

## 3.1.1. Aroma larutan MOL
Substrat limbah sayur yang difermentasi dengan berbagai  lama  fermentasi  mengalami  perubahan aroma.  Perubahan  aroma  setelah  7  hari  dan  14  hari menjadi  sedikit  asam,  namun  setelah  21  hari  aroma menjadi  asam.  Perubahan  aroma  terjadi  karena aktivitas mikroorganisme menghidrolisis karbohidrat menghasilkan asam-asam organik berupa asam laktat ataupun  alkohol.  Aroma  asam  berasal  dari  produk akhir berupa asam-asam organik tersebut.
Fermentasi bahan-bahan organik dengan bantuan mikroba pengurai, menghasilkan aroma tape yang  khas  dan  mampu  merombak  karbohidrat menjadi  asam  laktat  sehingga  menghasilkan  rasa asam  yang  unik  [2].  Nampak  semakin  lama  proses fermentasi  berlangsung  maka  aroma  semakin  asam. Aroma asam yang dihasilkan dapat berasal dari asam alkohol ataupun  asam  laktat.    Aroma  asam  seperti asam  alkohol  atau  permen  menunjukkan  proses fermentasi berjalan dengan baik [8]. Fermentasi yang baik memiliki aroma asam segar karena mengandung asam laktat [9].

## 3.1.2. Warna larutan MOL
Limbah  sayur  sebagai  penyusun  substrat  dalam pembuatan larutan mikroorganisme lokal mengandung  berbagai  senyawa  komplit  seperti karbohidrat,  protein,  vitamin,  mineral,  dan  air. Senyawa komplit dipecah menjadi sederhana dengan adanya  aktivitas  mikroorganisme.  Hasil  hidrolisis karbohidrat  berupa  glukosa,  asam  organik,  dan  ATP (energi).
Hasil  fermentasi  limbah  sayur  menunjukkan terjadinya perubahan warna larutan MOL dari warna coklat  muda  sampai  ke  coklat  tua.  Semakin  lama proses fermentasi berlangsung akan terjadi perubahan warna semakin tua (gelap). Hal ini terjadi karena  proses  pengcoklatan  secara  enzimatis.  Proses fermentasi  menyebabkan  terurainya  karbohidrat  dan menghasilkan  gula  sederhana,  asam-asam  organik, karbondioksida,  air  (uap  air),  dan  energi  (panas). Panas  yang  dihasilkan  menyebabkan  terjadinya proses  pengcoklatan  dari  sel  tumbuhan  (bahan organik) yang ada sehingga menyebabkan perubahan dari warna media yang difermentasi [10] .
Pada  7  hari  fermentasi  (T1)  dihasilkan  warna larutan  MOL  coklat  muda  namun semakin bertambah  waktu  fermentasi  maka  warna  larutan MOL semakin coklat tua (14, 21, dan 28 hari). Hal ini terjadi  karena  proses  respirasi  dari  sel-sel  jaringan substrat  (media  limbah  sayur)  dalam  larutan  MOL. Pada awal fermentasi, proses aerob berlangsung cepat maka  dengan  sendirinya  perombakan  karbohidrat menjadi  gula  dapat  ditekan  sehingga  oksidasi  gula menjadi CO2 dan airpun menjadi sedikit. Kondisi ini dapat  menekan  peningkatan  temperatur  yang mengakibatkan  perubahan  warna larutan MOL tidak berbeda  jauh  dengan  warna  sebelumnya.  Namun, semakin  lama  waktu  fermentasi  (14,  21,  dan  28  hari) kondisi  semakin  anaerob.  Hal  ini  mempercepat terjadinya  hidrolisis  karbohidrat  dan  menghasil produk berupa glukosa, asam  organik, CO 2 , dan ATP (energi).  Energi  panas  yang  dihasilkan  dapat meningkatkan temperatur substrat MOL. Temperatur yang  tidak  terkendali  akan  menyebabkan  larutan MOL berubah menjadi semakin tua (gelap).

## 3.2. Karakteristik Biologis dan Kimiawi Larutan MOL

## 3.2.1. Total mikroba larutan MOL
Nampak  pada Tabel  1 dan Gambar  1 ,  lama fermentasi  memengaruhi  total  mikroba  (populasi mikroba)  yang  terdapat  pada  substrat  organik berbasis  limbah  sayur.  Total  mikroba  larutan  MOL yang difermentasi sampai 28 hari berkisar 1,08 X 10^6 sampai 2,24 X 10^6.
Gambar 1 . Perubahan total mikroba larutan MOL selama fermentasi
Hasil  analisis  statistik  menunjukkan  fermentasi substrat organik berbasis limbah sayur sampai 28 hari berpengaruh  sangat  nyata  (P<0.01)  terhadap  total populasi mikroba.
Pada  awal  fermentasi  (7  hari  fermentasi) populasi  mikroba  baru  mencapai  1,08  X  10^6. Populasi  mikroba  ini  lebih  rendah  dibanding perlakuan  lainnya.  Hal  ini  disebabkan  karena mikroba baru memasuki fase adaptasi (lag fase). Pada fase  lag,  peningkatan  jumlah  mikroba  berlangsung lambat.  Hal  ini  disebabkan  mikroba  sedang melakukan  proses  aklimatasi  terhadap  kondisi lingkungan  (pH,  suhu,  dan  nutrisi).  Fase  adaptasi yang lambat memungkinkan terjadinya laju pertumbuhan mikroba rendah.
Panjang  atau  pendeknya  fase  adaptasi  sangat ditentukan  oleh  jumlah  sel  yang  diinokulasikan, kondisi  fisiologis,  dan  morfologis  yang  sesuai  serta populasi mikroba yang dibutuhkan [11].
Hasil  penelitian  menunjukkan  pada  14  hari fermentasi total populasi mikroba tertinggi dibandingkan  dengan  fermentasi  7  hari,  21  hari  dan 28 hari. Populasi mikroba meningkat mengambarkan bahwa aktivitas enzim yang dihasilkan mikroba terus meningkat  untuk  menghidrolisis  senyawa  komplit menjadi sederhana. Produk hasil fermentasi dimanfaatkan  mikroba  untuk  pertumbuhan  dan perkembangannya.
Total populasi mikroba menurun pada fermentasi  21  hari.  Ini  terjadi  karena  aktivitas  yang mulai menurun disebabkan sumber nutrisi (karbohidrat)  untuk  dihidrolisis  sudah  berkurang. Mikroba memasuki fase statisioner yaitu jumlah yang hidup sama dengan jumlah yang mati.
Pada  28  hari  fermentasi  populasi  mikroba  terus menurun.  Kandungan  nutrisi  media  (substrat)  mulai berkurang.  Kondisi  nutrisi  yang  kritis  dapat menyebabkan mikroba banyak yang mati (memasuki fase  kematian).  Beberapa  Bakteri  Asam  Laktat  (BAL) mampu  bertahan  hidup  pada  pH  rendah  dengan kondisi  dorman  dan  dapat  aktif  kembali  jika ditambahkan nutrien pada media cair (larutan MOL) seperti penambahan gula mudah larut (molases, gula merah atau gula putih). Penurunan populasi mikroba
1,08 2,24 2,03 1,63 0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 T1 T2 T3 T4 To tal mi kr o b a ( x 1 0 ^6 s el /mL) Lama Fermentasi
juga dapat terjadi karena akumulasi produk metabolit yang menghambat pertumbuhan dan nutrien penting dalam medium habis. Semakin lama fermentasi maka semakin meningkat akumulasi metabolisme sekunder,  semakin  berkurang  ketersedian  nutrisi sehingga  viabilitas  (ketahanan  hidup  mikroba)  dan pertumbuhan mikroba semakin menurun.
Pertumbuhan
dan kelangsungan hidup organisme berkurang karena adanya suplai makanan/nutrisi  yang  membatasi.  Di  bawah  kondisi makanan yang terbatas maka jumlah mikroorganisme dapat  menurun  dengan  cepat,  selain  itu  penurunan pertumbuhan  disebabkan  karena  mikroba  menjadi mati  lebih  cepat  dari  pada  terbentuknya  sel-sel  baru [12].
Jika pada suatu media terdapat beberapa macam mikroba  termasuk  bakteri,  maka  akan  terjadi interaksi  atau  saling  memengaruhi  antara  mikroba satu  dengan  mikroba  lainya  [13].  Interaksi  diantara populasi  mikroba  dapat  bersifat  positif  artinya mendorong  pertumbuhan  pada  satu  atau  dua populasi,  dapat  juga  bersifat  negatif  yang  dapat merugikan  salah  satu  populasi,  dan  dapat  bersifat netral  yang  berarti  kehadiran  suatu  bakteri  dalam suatu  media  tidak  berpengaruh  terhadap  mikroba lainnya[12].
Kompetisi  merupakan  salah  satu  faktor  penting dalam  menentukan  jumlah  suatu  organisme.  Jadi kombinasi  atau  campuran  mikroba  dalam  suatu media akan berpengaruh terhadap pertumbuhan dan ketahanan hidup (viabilitas) mikroba [12]

## 3.2.2. Suhu Larutan MOL
Tabel  1 dan Gambar  2 menunjukkan  suhu larutan  hasil  fermentasi  limbah  organik  sayur berkisar 29-31,3 0 C. Hasil analisis keragaman menunjukkan  bahwa  fermentasi  sampai  28  hari memberi  pengaruh  sangat  nyata  (P<0,01)  terhadap suhu larutan MOL.
Gambar 2 . Perubahan suhu larutan MOL selama fermentasi
Pada  awal  fermentasi  terjadi  peningkatan  suhu karena pada awal fermentasi proses  respirasi aerobik berlangsung  selama  persediaan  oksigen  masih  ada, sampai  gula  dalam  media  (sumber  carbon)  habis. Gula  akan  teroksidasi  menjadi  CO2,  air,  dan  panas.
Panas  yang  dihasilkan  pada  proses  ini  yang menyebabkan terjadinya kenaikan temperatur.
Pada hari ke-21 aktivitas mikroba menghidrolisis karbohidrat menjadi glukosa mulai berkurang seiring dengan  semakin  berkurangnya  ketersedian  nutrisi yang  ada  (karbohidrat)  sehingga  proses  glikolisis glukosa  menghasilkan  piruvat  serta  CO2,  air,  dan panas  menurun.  Hal  inilah  yang  menyebabkan  suhu larutan MOL menurun pada perlakuan 21 dan 28 hari. suhu merupakan salah satu faktor yang memengaruhi fermentasi selain pH, oksigen, mikroba, dan substrat [14].

## 3.2.3. Glukosa larutan MOL
Tabel 1 dan Gambar 3 menunjukkan kandungan  gula  larutan  MOL  berfluktuasi  yaitu berkisar  5  -  6  %.  Perlakuan  lama  fermentasi  limbah sayur  berpengaruh  sangat  nyata  (P  <  0.01)  terhadap kandungan glukosa dalam larutan MOL. Fermentasi 7 hari  berbeda  sangat  nyata  dengan  14  dan  21  hari, namun tidak berbeda nyata dengan 28 hari.
Gambar 3 . Perubahan kadar glukosa larutan MOL selama fermentasi
Pada 7 hari fermentasi (T1) kadar glukosa larutan MOL rendah. Hal ini disebabkan aktivitas enzim yang dihasilkan  mikroba  untuk  menghidrolisis  zat-zat nutrisi  seperti  karbohidrat  menjadi  glukosa  masih rendah.  Mikroba  pada  awal  fermentasi  baru memasuki  fase  adaptasi  sehingga  populasi  mikroba rendah  dan  produksi  enzim  yang  rendah  berkorelasi positif  terhadap  aktivitas  menghidolisis  senyawa komplit menjadi sederhana.
Pada  14  hari  fermentasi  (T2)  dan  21  hari fermentasi  (T3)  terjadi  peningkatan  kadar  glukosa dalam  larutan  MOL.  Ini  mengindikasikan  terjadinya peningkatan  proses  hidrolisis  karbohidrat.  Populasi mikroba  yang  tinggi  diikuti  produksi  dan  aktivitas enzim  yang  dihasilkan  menyebabkan  produksi glukosa tinggi. Namun pada fermentasi 21 hari terjadi penurunan  kandungan  glukosa  dalam  larutan  MOL. Hal ini terjadi karena ketersediaan karbohidrat untuk dihidrolisis  sudah  berkurang  sehingga  menyebabkan penurunan kadar glukosa dalam larutan MOL.
27,00 28,00 29,00 30,00 31,00 32,00 T1 T2 T3 T4 Suh u Fe rm ent as i ( o C ) 4,50 5,00 5,50 6,00 6,50 T1 T2 T3 T4 G lu ko sa (% )
Lama fermentasi

## 3.2.4. pH Larutan MOL
Tabel  1 menunjukkan  fermentasi  substrat organik  berasal  dari  limbah  sayur  berkisar  5,37-6,83. Nampak  semakin  lama  fermentasi  berlangsung  pH substrat larutan  MOL semakin turun. Penurunan pH terjadi  karena  aktivitas  mikroba  menghidrolisis karbohidrat  dan  menghasilkan  asam-asam  organik. Semakin  tinggi  aktivitas  mikroba  menghidrolisis karbohidrat  maka  produksi  asam-asam  organik  akan meningkat  sehingga  pH  semakin  turun.  Akumulasi produk  asam-asam  organik  ini  menyebabkan penurunan pH hasil fermentasi.
Nilai  pH  terendah  dicapai  pada  21  hari fermentasi.  Hal  ini  dimungkinkan  karena  aktivitas mikroba  optimum  dalam  menghidrolisis  karbohidrat sehingga terjadi peningkatan produksi asam  organik. Namun  pada  28  hari  fermentasi  terjadi  peningkatan pH.  Hal  ini  mengindikasikan  karbohidrat  yang  akan dihidrolisis  mikroba  semakin  berkurang  sehingga aktivitasnyapun  menurun  dan  ini  ditunjukkan dengan  produksi  asam  organik  yang  berkurang. Walaupun  demikian,  secara  statistik  perlakuan berbagai  lama  fermentasi  (inkubasi)  tidak  memberi pengaruh yang nyata terhadap nilai pH fermentasi.

## 3.2.5. Total Asam Laktat dan Asam Asetat Larutan MOL
Total  asam  laktat  dan  asam  asetat  larutan  MOL dapat dilihat  pada Gambar 4 dan Gambar 5 . Proses fermentasi  secara  anaerob  memacu  pertumbuhan kelompok  BAL.  BAL  dibedakan  2  kelompok berdasarkan  hasil  fermentasinya  yaitu  1)  bakteri homofermentatif  yang  menghasilkan  asam  laktat sebagai produk utamanya dan 2) bakteri heterofermentatif  yang  menghasilkan  di  samping asam  laktat  juga  senyawa-senyawa  lain  seperti  asam asetat, etanol, dan CO2.
Gambar 4 . Total asam laktat selama fermentasi
Gambar 5 . Total asam asetat selama fermentasi
Nampak  pada  larutan  MOL,  mikroba  BAL mampu  memproduksi  asam  laktat  dan  juga  asam asetat.  Hal  ini  mengindikasikan  bahwa  fermentasi anaerob  ini  mampu  memacu  pertumbuhan  BAL  dari kelompok heterofermentatif ( Tabel 1 ).
Fermentasi  substrat  organik  berbasis  limbah sayur  pada  berbagai  lama  fermentasi  (inkubasi) menghasilkan  asam  laktat  berkisar  2,10-3,08%  dan asam  asetat  1,40-2,05%.  Nampak  hasil  fermentasi asam  laktat  dan  asetat  berfluktuasi  dari  fermentasi  7 hari sampai 28 hari.
Pada fermentasi 7 hari (T1) inkubasi menunjukkan  total  asam  laktat  dan  asam  asetat tinggi.  Hal  ini  mengindikasikan  aktivitas  mikroba tinggi  untuk  menghidrolisis  karbohidrat  menjadi asam-asam  organik,  namun  setelah  itu  aktivitasnya turun. Aktivitas mikroba naik kembali pada hari ke 21 fermentasi  dan  setelah  itu  terjadi  penurunan. Penurunan  aktivitas  mikroba  secara  tidak  langsung akan menurunkan produk berupa asam-asam organik tersebut.  Penurunan  dapat  terjadi  karena  semakin berkurangnya  kandungan  zat-zat  nutrisi  dalam substrat  terutama  karbohidrat.  Namun,  secara statistik  fermentasi  sampai  28  hari  tidak  memberi pengaruh  nyata  (P>0,05)  terhadap  total  asam  laktat dan total asam asetat.

## 4. Kesimpulan
Karakteristik larutan MOL berbasis limbah sayur secara  fisik,  kimiawi,  dan  biologis  dipengaruhi  oleh lama fermentasi. Semakin lama fermentasi maka total mikroba,  glukosa,  asam  laktat,  dan  asam  asetat semakin  meningkat  sampai  titik  tertentu  mengalami penurunan.  Suhu  dan  pH  mengalami  penurunan seiring  dengan  peningkatan  aktivitas  mikroba  dalam proses  degradasi  bahan  organik.  Lama  fermentasi memengaruhi  warna  dan  aroma  larutan  MOL. Produksi Larutan MOL berbasis limbah sayur terbaik sebagai  bioaktivator  dihasilkan  pada  14  hari fermentasi dengan  populasi mikroba  tertinggi 2,24 X 10^6.

## Referensi
[1]
Yunilas,  L.  Warli,  Y.  Marlida,  and  I.  Riyanto,
0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 T1 T2 T3 T4 To tal as am lakt at Lama Fermentasi 0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 T ota l a sa m a se ta ta ( % ) Lama Fermentasi T1 T2 T3 T4
e-ISSN 2655-2159
“Potency of indigenous bacteria from oil palm waste  in  degrades  lignocellulose  as  a  sources of  inoculum  fermented  to  high  fibre  feed,” Pakistan  J.  Nutr. ,  vol.  12,  no.  9,  pp.  851 – 853, 2013, doi: 10.3923/pjn.2013.851.853.
[2] Y.  Yunilas,  L.  Warly,  Y.  Marlida,  and  I. Riyanto,  “Evaluation  of  Fiber  Content  Based on  Palm  Plantation  which  Has  Fermentation with  Probiotic  MOIYL,” Variabel ,  vol.  1,  no.  1, p. 18, 2018, doi: 10.26737/var.v1i1.513.
[3] S.  Simanjuntak,  Yunilas,  and  M.  Tafsin, “Fermentasi  hasil  samping  industri  dan perkebunan  kelapa  sawit  dengan  probiotik lokal terhadap performans domba,” J. Peternak.  Intergratif ,  vol.  4,  no.  1,  pp.  83 – 95,
2015.
[4] N.  hidayat, Mikrobiologi  industri .  Yogyakarta: Andi Offset, 2006.
[5] A.  Suhastyo,  A.  Iswandi,  A.  S.  Dwi,  and  L. Yulin,  “Studi  mikrobiologi  dan  sifat  kimia mikroorganisme lokal (MOL) yang digunakan pada  budidaya  padi  metode  SRI  (System  of Rice  Intensificat ion),” Sainteks ,  vol.  10,  no.  2,
2013.
[6] E .  Sulistiono,  “Buah  Nanas  (Ananas  comosus (L.)  Merr.)  sebagai  Sebagai  Em-Organik Untuk  Meningkatkan  Produktifitas  Tambak,” J.  Enviscience ,  vol.  1,  no.  1,  p.  4,  2017,  doi: 10.30736/jev.v1i1.89.
[7] M.  Ellhiney, Feedmanufacturing  Industry ,  4th Ed.  American  Feed  Industry  Association  Inc. Arlington, 1994.
[8] A. Mujahid, Amin, Hariyadi, and M. R. Fahmi, “Biokonversi  tandan  kosong  kelapa  sawit menggunakan  Trichoderma  Sp  dan  Larva
Black Soldier fly menjadi bahan pakan unggas .,” Ilmu  Produksi  dan  Teknol.  Has.  Peternak. ,
2017.
[9] M.  Lamid,  Ismudiono,  S.  Koesnoto,  S. Chusniati,  N.  Hidayatik,  and  E.  V.  F.  Vina, “ Karakteristik  silase  pucuk  tebu  ( Saccharum officinarum , Linn ),” Agroveteriner , vol. 1, no.
1, pp. 5 – 10, 2012.
[10] Y.  Yunilas,  N.  Ginting,  T.  H.  Wahyuni,  M. Zahoor,  N.  Fati,  and  A.  Wahyudi,  “Effect  of Various  Doses  of  Local  Microorganism Additives  on  Silage  Physical  Quality  of  Corn (Zea  mays  L.)  Waste,” Sarhad  J.  Agric. ,  2021, doi: 10.17582/journal.sja/2022.37.s1.197.206.
[11] S.  Fardiaz, Mikrobiologi  Pangan .  Pangan  dan Gizi IPB, Bogor: PAU. 1992.
[12] N. W. Marsiningsih, A. A. N. G. Suwastika, and N.  W.  S.  Sutari.  Analisis  Kualitas  Larutan  Mol (Mikroorganisme Lokal) Berbasis Ampas Tahu. E-Jurnal Agroekoteknolog , vol. 4, no. 3, pp. 180 – 190, 2015, [Online]. Available: http://ojs.unud.ac.id/index.php/JAT [13] L.  Waluyo, Mikrobiologi  Umum .  Malang: Universitas Muhamadiyah, 2004.
[14] U. Kunaepah, “Pengaruh lama fermentasi dan konsentrasi glukosa terhadap aktivitas antibakteri,  polifenol  total  dan  mutu  kimia kefir  susu  kacang  merah,” Univ.  Diponegoro , pp. 1 – 90, 2008.