Pengaruh Beragam Zat Pengatur Tumbuh Terhadap Induksi Kalus Organogenik Dari Ubi Kayu ( Manihot esculenta Crantz) Genotipe Gajah dan Kuning
Influence of Various Growth Regulators on Induction Organogenic Callus from Gajah and Kuning Cassava Genotype ( Manihot esculenta Crantz)
Nurhamidar Rahman¹ *) , Hani Fitriani¹, Nurhaidar Rahman², N. Sri Hartati¹
1 Pusat Penelitian Bioteknologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia, Cibinong 16911, Indonesia
2 Pusat Penelitian Teknologi Tepat Guna, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia, Subang 41213, Indonesia
* E-mail: nurhamidarr@yahoo.com

## ABSTRACT
Kuning and Gajah genotypes are two collections of cassava in the Biotechnology Research Center for  Germplasm,  LIPI  with  the  advantages  of  each  genotype  are  high  beta  carotene  and  high production. The multiplication in in vitro culture can be done one of them through organogenesis. The aim of this study was to evaluate the effect of using 2,4-D; NAA and Kinetin are used singly for the  formation of organogenesis of cassava in the Kuning Cassava and Gajah  genotypes. This research  was  conducted  at  the  Laboratory  of  Molecular  Genetics  and  Modification  of  Plant Biosynthetic Pathways, Biteknologi Research Center, LIPI, Bogor since January  - February 2018. The source of explants were young leaves and petiols from cassava plant culture in vitro genotypes of  Gajah  and  Kuning  yam  which  were  three  months  old.  in  culture.  The  basic  media  used  as  a planting  medium  were Murashige and Skoog (MS)  media  with the addition of  growth regulators (ZPT)  singly,  2,4-D,  NAA  and  Kinetin  with  two  concentrations  of  ZPT  each,  8  and  10 mg  L-  1 This research was arranged based on a completely randomized design factorial pattern consisting of  2  factors.  All  data  obtained  were  analyzed  using  ANOVA  and  if  there  is  an  influence  then proceed  with  the  DMRT  test  with  an  error  rate  of  5%  using  the  SPSS  program.  The  highest number of Kuning genotype cassava organogenic callus that developed into shoots on the medium added by ZPT was 2.4 D and kinetin with the same concentration of 8 mg L-1. Formation of the best  organogenic  callus  in  petiol  explants  in  the  media  with  the  addition  of  a  single  2,4-D  and Kinetin with the same concentration of 8 mg L-1.
Keywords: Cassava, growth regulators, organogenic.

## PENDAHULUAN
Ubi  kayu  termasuk  tanaman  hasil  introduksi yang  berasal  dari  negara  Brazil.  Ubi  kayu termasuk  tanaman  perdu  kaya  karbohidrat  dari keluarga  Euphorbiaceae  yang  dikenal  luas pemanfaatannya  mulai  dari  daun  sebagai sayuran  dan  umbinya  dapat  dijadikan  bahan pangan,  pakan,  dan  industri  (Widaningsih, 2015).  Seleksi  terhadap  107  koleksi  ubi  kayu milik Kebun Plasma Nutfah–Puslit Bioteknologi,  LIPI  menunjukkan  adanya  sifat- sifat  unggul.  Dua  genotipe  ubi  kayu  yang unggul tersebut diantaranya adalah Kuning dan
Gajah. Keunggulan dari masing-masing genotipe  Kuning  dan  Gajah  adalah  kandungan beta  karoten  dan  produksi  yang  tinggi.  Beta karoten  merupakan  prekursor  vitamin  A  yang berfungsi  untuk  imunitas,  kesehatan  mata  dan kulit.  Kandungan  Vitamin  A  dalam  ubi  kayu genotipe  Kuning  sebanyak  385  IU  (Kuswara,
2015)  dengan  produksinya  sekitar  5,6  ton  per hektar  (Hartati  &  Hartati,  2019).  Ubi  kayu genotipe  Gajah  memiliki  produktivitas  antara 100 ton – 140 ton per hektar (Anggraini, 2014). Secara  umum    kandungan  vitamin  A  pada  ubi kayu adalah  sekitar A 13 IU < (USDA, 2017). Selain  memiliki  umbi  yang  berukuran  besar apabila dibandingkan dengan yang lainnya, ubi kayu  Gajah  memiliki  rasa  yang  enak,  lebih gurih,  tekstur  umbinya  lebih  lunak  dan  lebih tahan  terhadap  serangan  hama  (Kuswara, 2015).
Pemenuhan bibit ubi kayu unggul kaya beta karoten  dapat  dicapai  melalui  teknik  kultur jaringan.  Teknik  perbanyakan  bibit  ubi  kayu melalui  teknik in  vitro ini  memiliki  kelebihan dibanding  perbanyakan  secara  konvensional. Bibit hasil kultur jaringan memiliki keunggulan dibandingkan tanaman konvensional antara lain dapat  mengatasi  inkompatibilitas,  sifatnya
sama  dengan  induknya,  jumlah  tanaman  yang dihasilkan banyak, hemat tempat, hemat biaya, dan  ketersediaan  sepanjang  musim.  Menurut Conger  (1980),  keuntungan  kultur  jaringan pada  tanaman  dapat  menghasilkan  tanaman dalam  jumlah  banyak  dan  relatif  seragam. Teknik  kultur  jaringan  tanaman  ini  telah dimanfaatkan  secara  luas  untuk  berbagai kepentingan  seperti  multiplikasi  tanaman- tanaman  unik,  eksplorasi  tanaman  langka, rekayasa  genetik  tanaman  dan  metabolisme senyawa  kimia  tertentu,  dan  sistem  model dalam  fisiologi  sel  tanaman  (Loyola-Vargas  & Vázquez-Flota 2006).
Salah  satu  teknik  penggandaan  biakan tanaman  secara  kultur  jaringan  adalah  dengan cara embriogenesis somatik dan organogenesis (Purnamaningsih, 2003). Organogenesis merupakan proses pembentukan organ tanaman dari dalam sel-sel kalus, sedangkan embriogenesis  somatik  merupakan  proses pembentukan  tanaman  lengkap  dari  sel-sel somatik melalui tahapan perkembangan embrio yang  spesifik  (Pardal,  2003).  Penelitian mengenai  pembentukan  tunas  baru  pada  ubi kayu (multiplikasi tunas) maupun pembentukan kalus  embriogenik  secara  bioteknologi  telah banyak  dilakukan  antara  lain  oleh  Hankoua et al ., 2006; Onuoch  & Onwubiku, 2007; Feitosa et al ., 2007; Rossin & Rey, 2011; Wongtiem et al. ,  2011;  Mapayi et  al .,  2013;  dan  Hartati et al. , 2013. Penelitian terkait organogenesis pada ubi  kayu  telah  dipelajari  pada  beberapa genotipe  dan  dengan  menggunakan  berbagai komposisi  media  dan  eksplan  sudah  banyak dilakukan  baik  oleh  para  peneliti  Indonesia maupun mancanegara, antara
lain Sudarmonowati et  al., 2002;  Sukmadjaja  & Widhiastuti,  2011;  Nugroho,  2011;  Khumaida &  Fauzi,  2013;  Mushiyimana et  al .,  2011; Ogero et  al. ,  2012;  Cacai et  al. ,  2013;  dan Mapayi et al., 2013. Salah satu penelitian yang dilakukan  oleh  Nugroho  (2017)  pada  ubi  kayu Gajah  menyatakan  bahwa  munculnya  kalus pada  eksplan  dimungkinkan  karena  pemberian ZPT  jenis  sitokinin  dengan  konsentrasi  yang cukup  besar  yaitu  5  mg  L-1  dan  pemberian auksin jenis NAA sebesar 0,1 mg L-1.
Beberapa faktor yang menentukan keberhasilan organogenesis antara lain genotipe,  jenis  eksplan,  dan  komposisi  media. Penambahan  zat  pengatur  tumbuh  (ZPT)  yang tepat  untuk  organogenesis  ke  dalam  media tumbuh  berpengaruh  terhadap  pertumbuhan dan perkembangan eksplan  yang optimal.  ZPT
adalah  salah  satu  komponen  dalam  media tumbuh yang menjadi stimulus untuk pertumbuhan morfogenesis dalam kultur jaringan  tanaman  (Gunawan,  1987).  Harjadi (2009)  mengemukakan  jika  ZPT  berperan dalam pertumbuhan dan perkembangan tanaman.    Efektifitas  ZPT  dipengaruhi  oleh beberapapa  faktor  yaitu  jenis  ZPT  yang digunakan,  konsentrasi,  urutan  penggunaan, dan  lamanya  induksi  dalam  kultur  tertentu. Gunawan (1995) menyatakan bahwa pemilihan ZPT  seperti  jenis  auksin  dan  konsentrasi tergantung  dari  tipe  pertumbuhan yang dikehendaki, level auksin endogen,
kemampuan  jaringan  mensintesis  auksin,  dan golongan ZPT lain yang ditambahkan. Wattimena  (1992)  membagi  ZPT  tanaman dalam  lima  kelompok  yaitu  auksin,  giberelin, etilen, sitokinin dan asam absisat (ABA). Akan tetapi,  ZPT  yang  umum  digunakan  dalam kultur  jaringan  tanaman  adalah  auksin  dan sitokinin.  Konsentrasi  auksin  yang  umum digunakan  berkisar  antara  0,01  -  10  ppm (Mardhiyetti et al ., 2015).
Auksin  berpengaruh  terhadap  pembelahan sel, perpanjangan sel, pembesaran jaringan dan pembentukan akar.  Pada   konsentrasi   tinggi akan  merangsang  pertumbuhan  kalus,  tetapi menghambat  pertumbuhan  tunas  dan  akar. Sedangkan sitokinin berfungsi sebagai stimulus untuk  pertumbuhan  sel  dalam  jaringan  dan tunas  daun  (Wetherell,  1982).    Dalam penelitian  ini,  auksin  yang  digunakan  adalah 2,4-Dichloro  phenoxy  acetic  acid  (2,4-D)  dan naphthalene acetic acid (NAA). Hendaryono & Wijayani (1994) berpendapat bahwa 2,4-D dan NAA  termasuk  golongan  auksin  sintesis memiliki  sifat  yang  stabil  karena  tidak  mudah terurai.  Untuk  penelitian  ini  sitokinin  yang digunakan  adalah  kinetin  (6-furfuryl  amino purine). Penggunaan pada konsentrasi sitokinin tinggi  dengan  kisaran  1  -  10  mg  L-1  dapat mendorong  pertumbuhan  tunas,  namun  dapat menghambat pertumbuhan akar. Jika konsentrasi  sitokinin  lebih  tinggi  dari  auksin dapat  mendorong  pembentukan  tunas  menjadi lebih  cepat,  sedangkan  jika  konsentrasi  auksin dan sitokinin sama akan cenderung membentuk kalus  (Dinarti et  al., 2010).  Dengan  demikian, jenis dan konsentrasi ZPT sangat mempengaruhi pertumbuhan dan perkembangan tanaman kultur terutama respon terhadap organogenesis pada ubi kayu genotipe Kuning dan Gajah .

## METODE
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium
Genetika Molekuler dan Modifikasi Jalur Biosintesa
Tanaman, Pusat Penelitian Biteknologi, LIPI, Bogor sejak bulan Januari - Februari 2018.
Material sebagai sumber eksplan yang digunakan  untuk  penelitian  adalah  daun  muda  dan petiol  dari  tanaman  ubi  kayu in  vitro  g enotip  Gajah dan  Kuning yang telah berumur tiga bulan di kultur. Media perlakuan untuk pembentukan organogenesis yaitu  media  dasar  (MS0)  yang  ditambahkan  2,4-D, NAA dan Kinetin secara tunggal dengan konsentrasi masing-masing    8  dan  10  mg  L-1,  sukrosa  2%,  dan mikro agar 0,8%. pH media diatur hingga mencapai 5,8 dengan penambahan HCl atau NaOH.
Penelitian  ini  disusun  berdasarkan  rancangan acak lengkap pola faktorial yang terdiri atas 2 faktor. Faktor  pertama  adalah  faktor  jenis  ubi  kayu  dan kedua  faktor  variasi  zat  pengatur  tumbuh  (ZPT). Masing-masing  ZPT  tersebut  digunakan  secara tunggal  sehingga  terdapat  enam  jenis  media perlakuan dan satu media kontrol, MS0 (media dasar tanpa penambahan ZPT) (Tabel 1). Setiap perlakuan dilakukan  pada  3  unit  percobaan  yang  masing- masing  terdiri  lima  ulangan.  Penanaman  dilakukan di  Laminar  Air  Flow  (LAF).  Kultur  diinkubasi  di dalam  ruang  kultur  dengan  suhu  ±  25 0 C,  tanpa penerangan dan diamati setiap 2 hari sekali selama 4 minggu.  Parameter  yang  diamati  adalah  jumlah eksplan  yang  berhasil  membentuk  organ  karena eksplan  mengalami  organogenesis.  Selanjutnya, seluruh  data  yang  diperoleh  dianalisis  dengan menggunakan ANOVA dan jika ada pengaruh maka dilanjutkan  dengan  uji  DMRT  dengan  tingkat kesalahan 5% menggunakan program SPSS.
Tabel  1.    Komposisi  media  perlakuan  untuk organogenesis ubi kayu

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Eksplan  petiol  dan  daun  muda  dari  genotipe ubi  kayu  Gajah  dan  Kuning  yang  dikulturkan pada  berbagai  media  MS  dengan  penambahan ZPT  secara  tunggal  (kinetin,  NAA  dan  2,4-D) pada  dua  konsentrasi  yang  berbeda  (8  dan  10 mg  L-1)  ataupun  tanpa  ZPT  selama  penelitian berlangsung  30  hari  ternyata  memberikan respon  perkembangan  organogenesis  yang beragam.
Pada  Tabel  2  terlihat  bahwa  pembentukan kalus  terjadi  di  semua  jenis  media  perlakuan termasuk kontrol, meskipun jumlah kalus yang dihasilkan  berbeda-beda  pada  setiap  eksplan. Rata-rata  jumlah  kalus  yang  terbentuk  lebih banyak  pada  media  dasar  denga  penambahan ZPT  dibanding  pada  media  kontrol.  Hal  ini menunjukkan bahwa terbentuknya kalus sangat dipengaruhi  oleh  keberadaan  ZPT.  Adanya hormon endogen dalam eksplan dapat mendorong  terbentuk  kalus  pada  media kontrol.  Hormon  endogen  tersebut  memacu pembelahan  sel  dan  mengatur  pertumbuhan serta perkembangan tanaman.
Pembentukan kalus pada ubi kayu genotipe Kuning  dari  kedua  jenis  eksplan  lebih  banyak dibanding  dengan  genotipe  Gajah  pada berbagai  media  perlakuan  termasuk  kontrol. Penambahan  ZPT  2,4-D  dapat  meningkatkan pembentukan  kalus  pada  genotipe  Kuning  dan Gajah  paling  tinggi  dibanding  ZPT  lainnya (Tabel  2).  Rahayu et  al .  (2003)  menyatakan bahwa  adanya  2,4-D  dalam  media  kultur  akan mendorong terjadinya pembelahan dan perbesaran  sel  pada  eksplan.  Akibatnya  terjadi peningkatan  senyawa  kimia  alami  seperti flavonoid  serta  memacu  pembentukan  dan pertumbuhan kalus.
Pemberian  2,4-D  dalam  media  kultur menyebabkan terjadinya pelunakan dinding sel dengan  cara  mengaktivasi  pompa  proton  (ion H+) pada membran plasma. Hal ini berdampak terhadap  derajat  keasamaan  (pH)  pada  bagian dinding  sel  mendekati  pH  membran  plasma (sekitar  pH  4,5).  Hal  ini  seperti  yang  terjadi pada  tanaman  Melati  ketika  ZPT  2,4-D ditambahkan  dalam  media  kulturnya  maka akan  terjadi  pemutusan  ikatan  Hidrogen  di antara  mikrofibil  selulosa  dinding  sel  akibat aktifnya  pompa  proton.  Putusnya  ikatan hidrogen  menyebabkan  jarak  antar  dinding  sel merenggang dan berpengaruh terhadap penurunan  tekanan  dinding  sel  pada  tanaman Melati.  Hal  ini  berdampak  pada  sel  dari tanaman Melati menjadi lentur. Untuk menguji pengaruh  jenis  ZPT  dan  variasi  konsentrasi pada  genotip    Kuning  dan  Gajah,  hasil  dari rerata  kemudian  diuji  lanjut  DMRT  yang disajikan  pada  Tabel    3.  Selain  2,4-D,  NAA juga  memberikan  jumlah  kalus  tertinggi  kedua setelah 2,4-D. Hal ini memperjelas bahwa 2,4- D  dan  NAA  termasuk  auksin  yang  mampu menghambat  terjadinya  pembentukan  tunas, tetapi dapat
meningkatkan proses embriogenesis somatik (Nugroho, 2014). No. Kode media ZPT Konsentrasi (mg L-1) 1 Kontrol (MS0) - - 2 2,4-D 1 2,4D 10 3 2,4-D 2 2,4D 8 4 NAA 1 NAA 10 5 NAA 2 NAA 8 6 Kin 1 KIN 10 7 Kin 2 KIN 8
Tabel  2. Rata-rata  jumlah  eksplan  daun  muda  dan  petiol  yang  membentuk  kalus  pada  ubi  kayu Gajah dan Kuning
Keterangan:
2,4D 1 = 2,4D 10 mg L-1, 2,4D 2 = 2,4D 8 mg L-1, NAA 1  =  NAA 10 mg L-1,  NAA 2 = NAA 8 mg L-1,
KIN 1 = Kinetin 10 mg L-1, dan KIN 2 = Kinetin 8 mg L-1 Sedangkan  kinetin  termasuk  sitokinin  yang berperan  dalam  proses  pembelahan  sel  dan pembentukan  tunas  (Sari,  2013)  sehingga jumlah  kalus  yang terbentuk  pada eksplan dari kedua genotip ubi kayu tergolong rendah.
Jenis  eksplan  juga  berpengaruh  terhadap respon  pembentukan  kalus  dari  genotip  ubi kayu yang diuji. Jenis eksplan petiol memberikan  rata-rata  pembentukan  kalus paling  tinggi  dibanding  daun  muda  pada sebagian besar jenis dan konsentrasi ZPT.
Pembentukan  kalus  tertinggi  pada  genotipe Kuning  dan  Gajah  hampir  sebagian  besar berasal  dari  eksplan  petiol  yang  dikulturkan  di media  dengan  penambahan  2,4-D  pada konsentrasi  8  dan  10  mg  L-1.  Pada  eksplan daun muda, perlakuan 2,4-D dengan konsentrasi  8  mg  L-1  dapat  meningkatkan jumlah  kalus  lebih  banyak  dibandingkan konsentrasi  10  mg  L-1  ataupun  penggunaan ZPT  lainnya.  Hal  ini  mengindikasikan  bahwa untuk  induksi  kalus  dibutuhkan  konsentrasi auksin  yang tidak terlalu tinggi. Fletcher et al. (2011)  mengemukakan  bahwa  penggunaan eksplan  daun  yang  dikulturkan  dalam  media yang  mengandung    8  mg  L-1  2.4-D menghasilkan  persentase  kalus  tertinggi  pada semua kultivar ubi kayu yang dicobakan.  Hasil yang berbeda dengan induksi kalus embriogenik  pada  pepaya,  penambahan  2,4-D sebesar 20 ppm adalah media perlakuan terbaik (Hutami et al., 2001).
Proses  pembentukan  organogenesis  pada eksplan  ubi  kayu  secara in  vitro dapat  terjadi secara langsung ataupun tidak langsung. Proses organogenesis pada kultur in vitro dari eksplan daun ubi kayu tidak diawali dengan pembentukan  kalus  tapi  langsung  membentuk organ  tanaman  berupa  tunas  atau  akar selanjutnya  menjadi  tanaman  lengkap  (Zhang &  Lemaux,  2004;  Hartmann et  al., 1990). Proses  organogenesis  tersebut  dikendalikan oleh  keberadaan  ZPT  yang  mempengaruhi
terhadap pembelahan sel dan proses diferensiasinya.
Setelah 3 MST, pada genotip  Kuning kalus berkembang  menjadi  tunas  pada  semua  media yang  dicoba  dengan  jumlah  yang  bervariasi (Tabel  3).  Sedangkan  pada  genotipe  Gajah, hingga 4 MST belum menunjukkan pembentukan  organogenik.  Perbedaan  ini diduga  kebutuhan  genotipe  Gajah  akan  ZPT untuk membentuk tunas sangat tinggi, sehingga pada konsentrasi 8  maupun 10   mg  L-1 belum dapat membentuk tunas. Selain itu, kemungkinan  kandungan  hormon  endogen pada  genotipe  Gajah  berbeda  dengan  genotipe Kuning  yang  ditanam  pada  media  kultur  yang sama  akan  tetap mempengaruhi  respon terhadap  pemberian  ZPT.  Menurut  Abidin (1990), pada konsentrasi ZPT tertentu pertumbuhan  dan  perkembangan  sel  akan terganggu karena aktivitas hormon endogennya terhambat .
Tabel  3 . Rata-rata  jumlah  eksplan  daun  muda dan  petiol  ubi  kayu  dari  genotipe Kuning yang membentuk kalus organogenik Perlakuan Eksplan daun muda Eksplan petiol Kontrol 0,04 a 0,12 a NAA 2 0,12 a 0,04 a NAA 1 0,04 a 0,04 a Kin 2 0,16 a 0,20 a Kin 1 0,04 a 0,04 a 2,4 D 2 0,12 a 0,20 a 2,4 D 1 0,16 a 0,04 a Keterangan: 1) 2,4D 1 = 2,4D 10 mg L-1, 2,4D 2 = 2,4D 8 mg L-
1, NAA 1  =  NAA 10 mg L-1,   NAA 2 = NAA 8 mg L-1, KIN 1 = Kinetin 10 mg L-1, dan KIN 2 = Kinetin 8 mg L-1.
2)  Angka-angka  yang  diikuti  huruf  yang  sama  pada kolom yang sama di tiap eksplan menunjukkan tidak berbeda  nyata  berdasarkan  DMRT  pada  taraf  5% .
Perlakuan Genotipe Ubi Kuning Genotipe Gajah Eksplan daun muda Eksplan petiol Eksplan daun muda Eksplan petiol Kontrol 2,4 5,28 0,56 3,36 NAA 2 3,72 3,72 3,12 4,12 NAA 1 4,56 5,04 4,12 4,12 Kin 2 4,16 3,12 3,68 5,32 Kin 1 4,20 4,96 2,68 3,00 2,4 D 2 4,68 5,60 4,20 5,40 2,4 D 1 5 5,32 3,64 4,48b
Gambar  1 . Pembentukan  kalus  ubi  kayu  genotipe  Kuning  dari  eksplan  daun  muda  pada  semua perlakuan pada 3 MST
Gambar 2 . Pembentukan organogenesis ubi kayu genotipe Kuning
Berdasarkan  Gambar  2,  dari  eksplan  daun langsung  muncul  organ  berupa  akar  yang diduga  berasal  dari  sel-sel  prokambial  yang terinduksi  karena  adanya  penambahan  ZPT auksin  dan  sitokinin  pada  konsentrasi  tertentu (Rose et  al .,  2006).  Selaras  dengan  hasil penelitian organogenesis pada tanaman pamelo yang  menunjukkan  bahwa  eksplan  daun pamelo  tersebut  langsung  membentuk  akar adventif  saat  diinduksi  pada  media  MS0.  Hal ini  kemungkinan  kandungan  auksin  endogen pada  eksplan  daun  tersebut  cukup  tinggi  yang memicu terjadi pembentukan akar. Sebagaimana  diketahui,  daun  termasuk  salah satu  bagian  pada  tanaman  yang  memproduksi auksin  (Davies,  2004)  dan  berperan  dalam inisiasi akar (Srivastava, 2002).
Berdasarkan Tabel 3, penambahan berbagai ZPT dengan konsentrasi berbeda menunjukkan respon  tunas  yang  terbentuk  dari  kalus organogenik tidak berbeda nyata pada ubi kayu genotipe  Kuning  asal  eksplan  daun  muda maupun  petiol.  Semua  jenis  eksplan  tersebut dapat  membentuk  organogenik  pada  dua  jenis konsentrasi  di  semua  ZPT  yang  dicoba. Pembentukan  kalus  organogenik  pada  eksplan petiol  di  media  dengan  penambahan  secara tunggal  2,4-D  dan  Kinetin  dengan  konsentrasi yang  sama  yaitu  8  mg  L-1  merupakan  yang paling  optimal  dibanding  konsentrasi  yang
lebih  tinggi  (Gambar  2).  Wattimena et  al. (1992)  menyatakan  bahwa  proliferasi  pada tunas aksilar membutuhkan konsentrasi sitokinin  yang  tinggi  tanpa  auksin  atau  auksin dalam konsentrasi rendah sekali.  Induksi tunas secara  optimal  terjadi  jika  ke  dalam  media kultur  ditambahkan  auksin  2,4-D  dengan konsentrasi  rendah.  Hasil  ini  sama  seperti penelitian  yang  telah  dilakukan  oleh  Indah  & Ermavitalini (2013) bahwa penambahan auksin pada  konsentrasi  rendah  selain  media  dan konsentrasi  ZPT  yang  tepat  dapat  memacu pembentukan kalus.
Hasil  penelitian  Suyitno et  al. (2011) melaporkan bahwa dalam medium yang cocok, penambahan  hormon  2,4-D  pada  eksplan batang  maupun  daun  Ngukilo  sudah  dapat terinduksi  membentuk  kalus.  Induksi  kalus terjadi  pada  semua  konsentrasi  2,4-D  yang diberikan  dan  sebagian  besar  ada  yang  diikuti organogenesis  yakni  pembentukan  akar  atau tunas.  Waktu  pembentukan  organogenik  lebih cepat  pada  eksplan  petiol  dibanding  daun muda.  Rahayu  (2003)  menyatakan  bahwa keberhasilan  pembentukan  kalus  ditentukan salah  satunya  oleh  ketersediaan  kandungan kambium  yang  ada  pada  eksplan,  jika  eksplan memiliki  kambium  akan  lebih  mudah  untuk menginduksi kalus  seperti pada petiol, embrio muda,  hipokotil  dan  batang  muda.  Hal  ini
diduga menjadi faktor yang dapat mempercepat waktu pembentukan kalus pada petiol dibanding pada eksplan daun.

## KESIMPULAN
Konsentrasi zat pengatur tumbuh 2,4-D sebesar 8  mg  L-1  pada  dua  jenis  eksplan  yaitu  daun muda dan petiol dari ubi kayu genotipe Kuning dan  Gajah  dapat  menginduksi  kalus  paling banyak dibanding zat pengatur tumbuh lainnya. Namun demikian, kalus pada ubi kayu genotipe Kuning  mengalami  organogenesis  hingga membentuk tunas baru Pembentukan organogenik  ubi  kayu  genotipe  Kuning terbanyak    pada  media  yang  mengandung  zat pengatur  tumbuh  secara  tunggal  2,4  D  dan kinetin dengan konsentrasi yang sama 8 mg L- 1.  Jenis  eksplan  juga  berperan  terhadap kecepatan  terbentuknya  kalus  organogenik. Eksplan  petiol  lebih  cepat  membentuk  kalus organogenik dibanding eksplan daun muda.

## DAFTAR PUSTAKA
Anggraini  I.  2014.  Pengaruh  BAP  dan  GA3 terhadap  Multiplikasi  Tunas  Tanaman Singkong Gajah ( Manihot esculenta Crantz)
Melalui  Kultur  Meristem.  Skripsi.  Fakultas Pertanian, Universitas Jember, Jember. Abidin RR. 1990. Parenting Stress Index (PSI).
Charlottesville,  VA:  Pediatric  Psychology Press. Cacai GHT, Adoukonou-Sagbadja H, Kumulugui  BS,  Ovono  PO,  Houngue  J  &
Ahanhanzo C. 2013. Eradication of Cassava ( Manihot  esculenta )  Mosaic  Symptoms Through  Thermotherapy  and  Meristems Cultured  in  Vitro. International  Journal  of Agronomy and Plant Production. 4 (Special Issue): 3697-3701.
Conger  BV.  1980.  Cloning  Agricultural  Plants via  In  Vitro  Technique.  CRC  Press  Inc. Florida. 11-22 p.
Dinarti DU, Sayekti & Alitalia A. 2010. Kultur Jaringan Kantong Semar ( Nepenthes mirabilis ). J. Hort. Indonesia. 1 (2): 59 - 65. Feitosa  T,  Bastos  JLP,  Ponte  LFA.  Juca  TL.
Campos FAP. 2007. Somatic Embryogenesis  in  Cassava  Genotypes  from The  Northeast  of  Brazil. Braz  Arch  Biol Technol. 50 (2): 201-206.
Fletcher  EKA,  Amoako  TNE,  Twumasi  P. 2011.  Effect  of  2.4-D,  Explants  Type  and Cultivar on The Callogenesis Expression of Cassava  ( Manihot  esculenta Crantz.)  in Ghana. Afr  J  Biotechnol . 10 (46):  9396-
9401.
Gunawan  LW.  1987.  Teknik  Kultur  Jaringan. Laboratorium  Kultur  Jaringan  Tanaman. PAU Bioteknologi. IPB Bogor.
Gunawan  LW.  1995. Teknik  Kultur  In  Vitro dalam  Hortikultura .  Penebar  Swadaya. Jakarta.
Hankoua  BB,  Taylor  NJ,  Ng  SYC,  Fawole  I, Puonti-Kaerlas  J,  Padmanabhan  C,  ...  &
Fondong VN. 2006. Production of The First Transgenic  Cassava  in  Africa  via  Direct Shoot Organogenesis from Friable Embryogenic  Calli  and  Germination  of Maturing Somatic Embryos. African Journal of Biotechnology . 5 (19). Harjadi  SS.  2009. Zat  Pengatur  Tumbuh . Penebar Swadaya. Jakarta.
Hartati  NS,  Rahman  N,  Fitriani  H  & Sudarmonowati  E.  2013.  Koleksi  Kultur In Vitro Ubi Kayu ( Manihot esculenta Crantz.) Sebagai  Material  Perakitan  Bibit  Unggul. Dalam Sutanto RUMS, Soedjanaatmadja U, Supriatman  T,  &  Panji  ( Eds .).  Seminar
Nasional  Riset  Pangan,  Obat-obatan,  dan Lingkungan  untuk  Kesehatan.  Bogor  27-28 Juni 2013. 389-398.
Hartati & Hartati NS. 2019. Potential of Yields and  Starch  Production  from  Several  Local Cassava  Genotypes. Bioscience . 3 (1):  31- 39.
Hartmann  HT, Kester DE &  Davies FT. 1990. Plant  Propagation  Principles  and  Practices. Prentice-Hall,  Inc.  Englewood  Cliff.  New Jersey.
Hendaryono  IDPS  &  Wijayani  IA.  1994.
Teknik  kultur  jaringan,  pengenalan  dan Petunjuk  Perbanyakan  Tanaman  secara Vegetatif-Modern. Kanisius. Hutami  S,  Mariska  I,  Purnamaningsih  R, Herman  M,  Damayanti  D  &  Utami  IR. 2001.  Regeneration  of  Papaya  ( Carica papaya L.) through Somatic Embryogenesis. Proc of the 2nd. Indonesian Biotechnology Conference. Indonesian Biotechnology Concortium.
Indah  PN  &  Ermavitalini  D.  2013  Induksi Kalus  Daun  Nyamplung  ( Calophylullum inophyllum Linn) pada Beberapa Kombinasi Konsentrasi  6-Benzeyla  minopurine  (BAP) dan  2,4-Dichloro-phenoxyacetic  Acid  (2,4- D). Jurnal Sains dan Seni Pomits . 2 :16. Sari PK. 2013. Pengaruh Zat Pengatur Tumbuh 2,4-D (2,4-Dichlorophenoxyacetic acid) dan
Kinetin (6-Furfurylaminopurine) untuk Pertumbuhan Tunas Eksplan Pucuk
Tanaman  Jabon  ( Anthocephalus  cadamba Miq. ex Roxb.) secara In Vitro . LenteraBio . 2 (1): 75-80.
Khumaida  N  &  Fauzi  A.R.  2013.  Induksi Tunas  Ubi  Kayu  ( Manihot  esculenta Crantz.) var. Adira 2 Secara In vitro . Jurnal Agronomi Indonesia (Indonesian Journal of Agronomy) . 41 (2).
Kuswara  S.  2015.  Teknik  Pengelolaan  Umbi- Umbian  bagian  6:  Pengelolaan  Singkong.
Southeast  Asian  Food  and  Agricutural Science  and  Technology  (SEAFAST). Bogor Agricultural University.
Loyola-Vargas  VM  &  Vasques-Flota  F.  2006. Plant  cell  culture  protocols.  In:  Loyola- Vargas,    V.M.  and  Vázques-lota,  F.  (Eds). 2ndMethods  in  Molecular  Biology  318. Humana press Inc. New Jersey: 3-8.
Mardhiyetti  ZS,  Jamarun  N  &  Suliansyah  I. 2015. Pengaruh BAP (Benzil Adenin Purin) Dan Naa (Naphthalen Acetic Acid)
Terhadap  Eksplan Tanaman Turi ( Sesbania grandiflora )  dalam  Media  Multiplikasi In Vitro. Pasture. 5 (1): 35-38.
Mapayi EF, Ojo DK, Oduwaye OA & Porbeni JBO.  2013.  Optimization  of  In  Vitro Propagation  of  Cassava  ( Manihot  esculenta Crantz.)  Genotypes. J  Agric  Sci . 5 (3):  261- 269.
Mushiyimana  I,  Hakizimana  E,  Gashaka  G, Sallah PYK, Kalisa S, Gatunzi F,  Asiimwe T,  Kahia  J  &  Gahakwa  D.  2011.  Micro- Propagation  of  Disease  resistant  Cassava Variety in Rwanda. Rwanda J . 24 : 49-57 Nugroho  CC.  2011. Penambahan  Kinetin  dan Ca-P  terhadap  Multiplikasi  Tanaman  Ubi Kayu  (Manihot  esculenta  Crantz.)  Varietas Adira 2 dan Adira 4 secara In Vitro. skripsi. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor. Nugroho  CC.  2014. Studi  embriogenesis  dan organogenesis serta respon beberapa genotipe  ubi  kayu  terhadap  AlCl3. Tesis.
Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor. Nugroho CC. 2017. Induksi Kalus Embriogenik  Beberapa  Genotipe  Ubi  Kayu ( Manihot esculenta Crantz.). Jurnal Magrobis . 17 (1): 1-15.
Ogero  KO,  Gitonga  NM,  Mwangi  M,  Ombori O  &  Ngugi  M.  2012.  Cost-Effective Nutrient  Source  for  Tissue  Culture  of Cassava ( Manihot esculenta Crantz.). Afr. J. Biotechnol . 11 : 12964-12973. Onuoch CI & Onwubiku  NIC.  2007. Micropropagation  of  Cassava  ( Mannihot esculenta Crantz) Using Different
Concentrations  of  Benzyl  Amino  Purine (BAP). J. Eng. Appl. Sci . 2 : 1229-1231. Pardal  SJ.  2003.  Perkembangan  Penelitian Regenerasi dan Transformasi Pada Tanaman  Kedelai. Bul.  Agrobio . 5 (2):  37- 44. Purnamaningsih R. 2003. Regenerasi Tanaman melalui Embryogenesis Somatic dan Beberapa  Gen  yang  Mengendalikannya.
Bul. Agrobio. 5 (2): 51-58. Rahayu  B,  Solichatun  &  Anggarawulan  E. 2003. Pengaruh Asam 2,4- Diklorofenoksiasetat (2,4-D) terhadap Pembentukan  dan  Pertumbuhan  Kalus  serta Kandungan Flavonoid Kultur Kalus Acalypha indica L. Biofarmasi . 1 (1): 1-6. Rossin  CB  &  Rey  MEC.  2011.  Effect  of
Explants  Source  and  Auxins  on  Somatic Embryogenesis of Selected Cassava
( Manihot esculenta Crantz) cultivar. S Afr J Bot. 77 : 59-65.
Sudarmonowati  E,  Hartati  S  &  Taryana  T. 2002.  Produksi  Tunas,  Regenerasi  dan Evaluasi Hasil Ubi Kayu ( Manihot
esculenta )  Indonesia  Asal  Kultur  Jaringan di Lapang. Natur Indonesia . 4 (2): 96-108 Sukmadjaja  D  &  Widhiastuti  H.  2011.  Effects of  Plant  Growth  Regulators  on  Shoot Multiplication  and  Root  Induction  of
Cassava Varieties Culture In Vitro.
BIOTROPIA-The  Southeast  Asian  Journal of Tropical Biology . 18 (1).
Suyitno  A  &  Henuhili  V.  2010.  Induksi  Kalus dan  OrganogenesisTtanaman    Ngukilo
( Gynura procumbens (Lour.) Merr.)
dengan  2,4  D  dan  Kombinasi    NAA  -  Air Kelapa    secara  I n  Vitro .  Prosiding  Seminar Nasional “Biology and Local Wisdom: Past, Present And Future”: 56-67.  Yogyakarta, 2
Juli 2011.
USDA  National  Nutrient  Data  Base  2017.
(Online), (http://www.nutrition-andyou. com/cassava.html.,  diakses  22  Agustus 2017).
Wattimena  GA,  Gunawan  LW,  Mattjik  NA,
Syamsudin E, Wiendi NMA & Ernawati A. 1992. Bioteknologi  Tanaman .  Bogor  :
Institut Pertanian  Bogor  Press.
Widaningsih  R.  2015.  Outlook  Komoditas Pertanian Tanaman Pangan. Pusat Data dan Sistem  Informasi  Pertanian.  Kementerian Pertanian.
Wongtiem P, Courtois D, Florin B, Juchaux M,
Peltier  D,  Broun  P  &  Ducos,  JP.  2011. Effects of Cytokinins on Secondary Somatic
Embryogenesis of Selected Clone Rayong 9 of Manihot  esculenta Crantz  for  Ethanol Production. African Journal of Biotechnology . 10 (9): 1600–1608.
Zhang SP &  Lemaux. 2004.  Molecular Aspect of  in  Vitro  Shoot  Organogenesis  in  Plant Development  and  Biotechnology.  CRC Press. New York.