## UJI POTENSI  PROBIOTIK Lactobacillus plantarium SECARA IN-VITRO
Anik  Maunatin 1 , Khanifa 2
UIN  Maulana Malik  Ibrahim  Malang Jurusan Kimia,  Fakultas Sains dan Teknologi, 1
2 Jurusan Biologi Fakultas Sains dan Teknologi UIN  Maliki  Malang

## ABSTRACT
Probiotic is a product containing non-pathogenic microbes live, which was given to animals or humans to  fix  the  rate  of  growth,  efficiency,  and  increase  conversion  ration  of  animal  or  human  health  by  affecting positively  the  balance  of  the  gut  microbes  and   microbial  pathogen  control  in  the  digestive  tract.  In  order  to potentially lactic  acid bacteria as probiotic candidates must pass the test selection among others such as probiotic test  resistance  to  acid  pH,  the  bile  salts,  against  pathogenic  bacteria .  This  experimental  research  methods  for descriptive  use  that  aim  to  provide  information  about  the  probiotic  potential    of  Lactobacillus  plantarum  was isolated from the small intestine Mojosari duck ( Anas plathyrinchos ) with the tests in vitro i.e. the resistance of Lactobacillus  plantarum on  the  condition  of  the  acidic  pH  (2,  3,  and 4), bile salt concentration of 0.3% (b/v), inhibition  of  pathogenic  bacteria  ( Escherichia  coli,  Staphylococcus aureus and Salmonella typhi ) The results showed  that  on  pH  2  the  number of cells of bacteria that lives  was 4.3. 10 7 CFU/ml, pH 3 was  3.8. 10 9 CFU/ml and  pH  4  was  2.7.  10 10 CFU/ml,  the  resistance  of Lactobacillus  plantarum on bile salt showed the number of cells of bacteria that lives was 1.2. 10 9 CFU/ml. inhibition of the pathogenic bacteria showed that Lactobacillus plantarum could inhibited strong on Escherichia coli and Staphylococcus aureus with diameter of zone was 12.7 mm  and 13.3  mm  but not Salmonella typhi with diameter of zone was 9.3  mm.
Key  words : probiotic, in vitro, lactobacillus plantarum

## ABSTRAK
Probiotik merupakan suatu produk yang mengandung mikroba hidup non -patogen, yang diberikan pada hewan  atau  manusia  untuk  memperbaiki  laju  pertumbuhan,  efisiensi  konversi  ransum,  dan  meningkatkan kesehatan  hewan  atau  manusia  dengan  cara  mempengaruhi  secara  positif  keseimbangan  mikroba  usus  dan mengendalikan  mikroba  patogen  dalam  saluran  pencernaan.  Penelitian  ini  mengunakan  metode  eksperimen secara  deskriptif  yang  bertujuan  untuk  memberikan  informasi  tentang  potensi  probiotik  dari Lactobacillus plantarum yang  diisolasi  dari  usus  halus  itik  Mojosari  ( Anas  plathyrinchos ) dengan pengujian secara in vitro yaitu  ketahanan  terhadap  kondisi  pH  asam  (pH  2, 3, dan 4), garam empedu dengan konsentrasi 0,3% (b/v) dan penghambatan  terhadap  bakteri  patogen yaitu Escherichia coli, Staphylococcus aureus dan Salmonella typhi . Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  uji  ketahanan Lactobacillus  plantarum terhadap  pH 2 dengan jumlah sel bakteri yang hidup sebesar 4,3. 10 7 CFU/ml, pada pH 3 sebesar 3,8. 10 9 CFU/ml dan pada pH 4 sebesar 2,7. 10 10 CFU/ml.  Uji  ketahanan Lactobacillus  plantarum terhadap  garam  bile  menunjukkan  jumlah  sel  bakteri  yang hidup  sebesar  1,2.  10 9 CFU/ml.  Uji  ketahanan Lactobacillus plantarum terhadap bakteri patogen menunjukkan bahwa Lactobacillus  plantarum kuat dalam menghambat Escherichia coli dan Staphylococcus aureus dengan diameter  zona  hambat  yang  dibentuk  sebesar  12,7  mm  dan  13,3  mm  namun  sedang  dalam  menghambat Salmonella typhi dengan diameter zona hambat sebesar 9,3 mm.
Kata  kunci : probiotik , in vitro, lactobacillus plantarum

## I. PENDAHULUAN
Kebutuhan masyarakat terhadap protein hewani mengalami peningkatan seiring dengan bertambahnya jumlah penduduk  dari  tahun  ke  tahun.  Hasil penelitian  Setiawan  (2006),  menunjukkan bahwa,  rata-rata  laju  konsumsi  protein antara  tahun  1999  -  2004  sebesar    3,34%
pertahun  dan    laju  kebutuhan  protein sebesar  0,20%  pertahun.  Berkenaan  dengan hal  tersebut,  maka  produktivitas  ternak khususnya  unggas  perlu  ditingkatkan  untuk memenuhi kebutuhan masyarakat akan protein  hewani.
Abun (2008), yang menyatakan bahwa probiotik dalam penerapannya
sebagai  produk  bioteknologi  terdiri  atas  tiga jenis produk yaitu probiotik yang mengandung  kultur  bakteri,  kultur  khamir, dan kultur molds (kapang) serta kombinasinya.  Di  dalam  bidang  peternakan, arti  probiotik  cukup  penting  karena  saat  ini peternak  percaya  bahwa  makanan  berlemak tinggi  seperti  dalam  produk  pakan  ternak banyak  mengandung  kolesterol.  Probiotik yang  terdapat  dalam  saluran  pencernan mampu  menetralisir  toksin  yang  dihasilkan bakteri  patogen,  menghambat  pertumbuhan bakteri patogen dengan mencegah kolonisasinya di dinding usus halus, mempengaruhi aktivitas enzim di usus halus, asimilasi kolesterol dan meningkatkan pertumbuhan serta
performan  ternak.
Berdasarkan dari berbagai hasil penelitian,  Bakteri  Asam  Laktat  (BAL) memiliki  banyak  manfaat  bagi  kehidupan tidak  hanya  pada  manusia  namun  pada kehidupan  hewan  ternak.  Beberapa  spesies BAL  setelah  diteliti  mempunyai  potensi sebagai probiotik. Menurut Khuzaemah (2005), probiotik merupakan pakan imbuhan berupa mikroorganisme yang dapat hidup di saluran pencernaan, bersimbiosis  dengan  mikroorganisme  yang ada, bersifat menguntungkan, dapat
meningkatkan  pertumbuhan  dan  efisiensi pakan  tanpa  mengalami  proses  penyerapan. Probiotik menyeimbangkan populasi
mikrobia pada saluran pencernaan, mengendalikan mikroorganisme patogen pada  tubuh  inang  dan  lingkungan,  dan menstimulasi  imunitas  inang.  Gildberg et al. (1997),  menyatakan  bahwa  dalam saluran  pencernaan  tumbuh  normal  dalam jalur  intestin  suatu  bakteri  asam  laktat  yang memberikan efek positif yang penting terhadap  kesehatan  tubuh,  yaitu  melalui kemampuannya menekan pertumbuhan bakteri  patogen  intestin  penyebab  diare, serta  menstimulasi  sistem  kekebalan  tubuh (imun). Keseimbangan mikroorganisme dalam saluran pencernaan  harus  tetap terjaga  yaitu  antara  bakteri  patogen  dan non-patogen,  karena  jika  terjaga  akan memberikan  efek  positif  terhadap  kesehatan
tubuh.  Adanya  keseimbangan  yang  terjaga akan  memberikan  dampak  yang  bernilai positif,  sesuai  dengan  firman  Allah  SWT dalam  surat  al-Mulk  ayat  3  -  4  yang berbunyi:
“Yang  Telah  menciptakan  tujuh langit  berlapis-lapis. kamu sekali-kali tidak melihat  pada  ciptaan  Tuhan  yang  Maha Pemurah  sesuatu  yang  tidak  seimbang. Maka  Lihatlah  berulang-ulang,  Adakah kamu  lihat  sesuatu  yang  tidak  seimbang? Kemudian  pandanglah  sekali  lagi  niscaya penglihatanmu  akan  kembali  kepadamu dengan tidak menemukan sesuatu cacat dan penglihatanmu  itupun  dalam  keadaan payah” (QS. al-Mulk  67:  3-4).
Khuzaemah (2005), menyatakan bahwa  level  serat  kasar  yang  tinggi  dalam ransum sering menyebabkan kecernaan menurun  dan  pemanfaatan  nutrien  ransum menjadi  menurun  serta  penurunan  bobot badan. Guna mengatasi penurunan kecernaan  dan  penurunan  bobot  badan akibat  penggunaan  serat  kasar  yang  tinggi dalam ransum maka penelitian ini melakukan pengujian potensi probiotik L.plantarum hasil  isolasi  dari  usus  halus  itik Mojosari ( Anas plathyrichos ) secara in vitro yang  nantinya  akan  dimanfaatkan  untuk pembuatan  pakan itik  probiotik.

## II. METODE PENELITIAN
Bahan-bahan  yang  digunakan  antara lain  biakan  murni Lactobacillus  plantarum yang  diisolasi  dari  usus  halus  itik  Mojosari ( Anas  plathyrinchos ),  MRSA  ( deMan- Rogosa-Sharpe  Agar )  dan  MRSB  ( deMan- Rogosa-  Sharpe  Broth )  ( Merck ),  NA ( Nutrient Agar ) dan NB ( Nutrient Broth )( Merck ),  Oxgall  ( Merck )  0,3%  (b/v), Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus, Salmonella  typhi,  Lactobacillus  paracasei , alkohol 70%,  etanol  (Merck),  NaOH
(Merck), HCl,  aquadest,  kapas dan spritus.
Metode  penelitian  yang  digunakan adalah metode eksperimen dengan penulisan secara
deskriptif untuk
memberikan  informasi  untuk  memberikan informasi  tentang  potensi  probiotik  dari L. plantarum yang  diisolasi  dari  usus  halus
itik  Mojosari  ( Anas Plathyrinchos )  dengan pengujian  secara in  vitro yaitu  ketahanan L.plantarum terhadap  kondisi  pH  rendah, garam empedu dan kemampuan penghambatan  terhadap  bakteri  patogen
2.1  Prosedur  Penelitian Preparasi  kultur Sebelum dilakukan penelitian,
terlebih dahulu dilakukan konfirmasi mengenai  kemurnian  kutur  dengan  cara plating  pada  medium  agar,  pewarnaan gram, uji katalase dan pengujian mikroskopis.
Uji  Ketahanan L.plantarum Terhadap Asam (Zavaglia et al ., 1998) Kultur  stok  cair L.plantarum yang berumur  24  jam  diinokulasikan  sebanyak  2 ml  kedalam  20  ml  MRS  broth  dan diinkubasi  pada  suhu  30 0 C  selama  18  jam. Diambil  1  ml  kultur  dan  dimasukkan  pada  9 ml  MRS  broth  yang  pH  sudah  diatur menjadi  2,  3,  dan  4  dengan  HCl  1N  dan diinkubasi  pada  suhu  30 0 C  selama  24  jam. Jumlah  koloni  yang  tumbuh  diamati  dengan melakukan  teknik  penanaman  secara pour plate pada MRS agar.
Uji  Ketahanan L.plantarum Terhadap Garam  Bile (Rashid, at.al , 2007)
Kultur  stok  cair L.plantarum yang berumur  24  jam  diinokulasikan  sebanyak  2 ml  kedalam  20  ml  MRS  broth  dan diinkubasi  pada  suhu  30 0 C  selama  18  jam. Diambil  1  ml  kultur  dan  dimasukkan  pada  9 ml  MRS  broth  yang  mengandung  Oxgall 0,3%  (b/v)  dan  sebagai  kontrol  digunakan MRS  broth  tanpa  Oxgall,  teknik  isolasi dilakukan  dengan  metode pour  plate pada MRS  agar,  Kemudian  diinkubasi  pada  30 0 C selama  24  jam.  Jumlah  koloni  yang  tumbuh diamati dengan melakukan
teknik penanaman  secara pour  plate pada  MRS
agar.
Uji Penghambatan L.plantarum
Terhadap  Bakteri  Patogen  (Schillinger dan  Lucke, 1989)
Bakteri patogen  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah Escherichia coli, Staphylococcus
aureus, dan Salmonella  typhi .  Prosedur  pengujiannya dilakukan  dengan  metode  difusi  agar.  Satu ose  kultur  bakteri  uji  ( Escherichia  coli, Staphylococcus  aureus,  Salmonella  typhi, dan Listeria monocytogenes ) masing- masing  diinokulasikan  kedalam  media  NB ( Nutrient  Broth )  20  ml  dan  diinkubasi  pada suhu  30 0 C  selama  18  jam  sedangkan  kultur stok  cair L.plantarum yang  berumur  24  jam diambil 1 ml kemudian dimasukkan kedalam  10  ml  MRS  broth  dan  diinkubasi pada  suhu  30 0 C  selama  18  jam.  Masing- masing  bakteri  uji  diinokulasikan  sebanyak 25  µl  kedalam  NA  ( Nutrient  Agar )  secara pour  plate dan  dibiarkan  mengeras.  Media NA  yang  telah  mengeras  kemudian  dibuat sumuran  dengan  alat  bor  yang  steril  di bagian  tengah  cawan  petri,  Sumuran  yang telah  dibuat  di  media  NA  diisi  dengan media  MRSB  yang  telah  berisi  kultur bakteri L.plantarum sebanyak 50 µl sebanyak  50  µl,  Kemudian  diinkubasi  pada 30 0 C  selama  24  jam.  Diameter  zona  bening yang  terbentuk  disekitar  sumuran  diukur sebagai  zona  penghambatan L.plantarum terhadap  bakteri  patogen.

## Analisa  Data
Pengolahan  data  dilakukan  dengan mengggunakan metode deskriptif. Data hasil  penelitian  disusun  dalam  tabel-tabel, diklasifikasikan  sehingga  merupakan  suatu susunan  urutan  data  dan  dimuat  dalam grafik untuk kemudian diinterpretasikan sesuai  dengan  hasil  pengamatan  yang  ada.

## III. HASIL  DAN PEMBAHASAN
3.1  Ketahanan L.plantarum Terhadap
Asam BAL merupakan mikroorganisme
yang  dapat  hidup  pada  kisaran  pH  yang luas.  Salah  satu  faktor  penting  dalam pertumbuhan bakteri adalah nilai pH.
Bakteri  memerlukan  suatu  pH  optimum (6,5  –  7,5)  untuk  tumbuh  optimal.  Nilai  pH minimum dan maksimum untuk
pertumbuhan  kebanyakan  spesies  bakteri adalah  4  dan  9.  Pengaruh  pH  terhadap pertumbuhan  bakteri  ini  berkaitan  dengan aktivitas  enzim.  Enzim  dibutuhkan  oleh bakteri untuk mengkatalis reaksi-reaksi yang berhubungan dengan pertumbuhan bakteri.  Apabila  pH  dalam  suatu  medium atau  lingkungan  tidak  optimal,  maka  akan mengganggu  kerja  enzim-enzim  tersebut, yang  pada  akhirnya  akan  mempengaruhi pertumbuhan  bakteri  itu  sendiri    (Pelczar dan Chan,  1986).
Kondisi keasaman
lambung berfungsi  sebagai  pintu  gerbang  pertama untuk  melakukan  seleksi  bakteri  sebelum masuk  ke  usus.  Toleransi  terhadap  pH  asam merupakan  salah  satu  syarat  penting  suatu BAL  untuk  dapat  menjadi  probiotik.  Hal tersebut disebabkan bila L.plantarum masuk  ke  dalam  saluran  pencernaan  hewan ternak  unggas,  maka L.plantarum harus mampu  bertahan  dari  pH  asam  lambung dan  perut  yang  mempunyai  pH  sangat rendah  antara  2-4.
Saat  kondisi  puasa  (kosong  tanpa adanya  makanan),  pH  lambung  berkisar antara  1,0  –  2,0  (Wahyudi  dan  Samsundari, 2008).  Pernyataan  tersebut  ditunjang  oleh Mallory et  al. (1973),  ketahanan  terhadap asam lambung, berkaitan dengan  sifat probiotik  yang  penting  untuk  bertahan hidup  di  dalam  lambung.  Supaya  probiotik dapat  bekerja  secara  efektif,  perlu  seleksi strain  yang  mampu  bertahan  pada  kondisi asam.  Penelitian  ini  menguji Lactobacillus plantarum yang  diisolasi  dari  usus  halus itik  petelur  Mojosari  mampu  hidup  dalam usus  yang  mengandung  konsentrasi  garam empedu  0,3%  (b/v)  dengan  lama  inkubasi 24  jam.  Ketahanan Lactobacillus plantarum terhadap  garam  empedu  merupakan  syarat penting untuk probiotik  seperti  halnya ketahanan terhadap asam. Konsentrasi garam empedu 0,3% merupakan
konsentrasi  yang  kritikal  nilai  yang  cukup tinggi  untuk  menyeleksi  galur  yang  resisten terhadap  garam  empedu  (Gilliland et  al., 1984). Penelitian ini menggunakan konsentrasi  garam  empedu  0,3%  (b/v).
Uji  ketahanan L.plantarum terhadap
asam  dalam  penelitian  ini  dilakukan  pada pH  2,  3,  dan  4.  Hasil  uji  ketahanan L.plantarum terhadap  asam  disajikan  dalam Tabel  1.
Tabel  1.  Ketahanan L.plantarum Terhadap
Asam pH Rerata jumlah sel bakteri (CFU/ml) 2 4,3. 10 7 3 3,8. 10 9 4 2,7. 10 10 Tabel 1 menunjukkan bahwa semakin  besar  nilai  pH  media  maka  jumlah bakteri  asam  laktat  yang  hidup  semakin meningkat.  Adapun  jumlah  inokulum  awal yang  ditambahkan  pada  jam  ke  nol  adalah 10 9 CFU/ml.  menurut  Raccach et  al., (1979) dalam  Rostini  (2007),  starter  bakteri  asam laktat  yang  digunakan  untuk  uji  probiotik sebanyak  10 8 sampai  10 9 CFU/ml. Menurut  Kimoto et  al. (1999) paparan  pada  kondisi  yang  sangat  asam dapat  mengakibatkan  kerusakan  membran dan lepasnya komponen intraseluler hilangnya
komponen-komponen intraseluler  seperti  Mg,  K  dan  lemak  dari sel,  yang  mampu  menyebabkan  kematian bakteri  yang  tidak  tahan  asam.  Sedangkan bakteri  tahan  asam  memiliki  ketahanan yang lebih besar terhadap kerusakan membran  akibat  terjadinya  penurunan  pH ekstraseluler  dibandingkan  dengan  bakteri yang  tidak  tahan  terhadap  asam.  Menurut Bender  dan  Marquis  (1987),  ketahanan Lactobacilli pada  pH  rendah  terjadi  karena (1)  kemampuannya  dalam  mempertahankan pH  internal  lebih  alkali  dari  pada  pH eksternal,  (2)  mempunyai  membran  sel yang  lebih  tahan  terhadap  kebocoran  sel akibat  terpapar  pH rendah
Hasil pengamatan menunjukkan bahwa  pada  pH  2  jumlah  sel  bakteri L.plantarum yang hidup mengalami penurunan  2  log  (penurunan  sebesar  10 2 ), pada  pH  3  tidak  mengalami  penurunan  dari jumlah  sel  bakteri  yang  hidup  dan  pada  pH 4  jumlah  sel  bakteri L.plantarum yang
hidup  mengalami  kenaikan  sebesar  1  log (10 1 ).  Menurut  Triyana  dan  Nurhidayati (2007),  dalam  keadaan  asam Lactobacillus mampu  mempertahankan  kadar  keasaman sitoplasmanya  sehingga  protein  dan  enzim yang  berada  di  dalam  sel  tetap  dapat bekerja  secara  optimal.  Karakter  inilah  yang menyebabkan Lactobacillus sangat  ideal sebagai  probiotik  saluran  pencernaan.
Berdasarkan hasil pengujian
ketahanan  terhadap  pH  asam  menunjukkan bahwa L.plantarum yang  diisolasi  dari  usus halus  itik  Mojosari  berpotensi  sebagai kandidat  probiotik  karena  mampu  tumbuh pada  kisaran  pH  asam  dan  sesuai  dengan pernyataan  Kimoto et  al. (1999),  bakteri probiotik akan mempunyai efek  pada lingkungan  usus  apabila  jumlah  populasi dari  bakteri  tersebut  mencapai  minimal  10 6 - 10 8 CFU/ml.
3.2  Ketahanan L.plantarum Terhadap

## Garam  Bile
Menurut Ganong  (1983),  garam
empedu  merupakan  garam  natrium    seperti taurochlorate dan glycholate yang berfungsi dalam  emulsi  lemak  menjadi misel  sehingga  mudah  diserap  oleh  mukosa usus.  Beberapa  jenis  BAL  mampu  bertahan pada  konsentrasi  garam  empedu  yang  lebih tinggi  dari  0,3%.  Garam  empedu  mulai disekresi  dari  pH  4  karena  pada  pH  tersebut mulai terjadi pencernaan lemak di duodenum  dengan  enzim  lipase    yang diemulsikan    dengan    garam    empedu    dan lesitin.
Cairan empedu
merupakan campuran  dari  asam  empedu,  kolesterol,
asam lemak,
fosfolipid dan pigmen
empedu. Sekresi pankreas juga mengandung serangkaian enzim
pencernaan.  Kombinasi  tersebut  bersifat bakterisidal bagi mikroorganisme dalam tubuh  manusia  dan  hewan  kecuali  beberapa genus  penghuni  usus  yang  tahan  terhadap garam  empedu.  Ketahanan  terhadap  garam empedu  merupakan  prasyarat  suatu  isolat BAL  untuk  dapat  membentuk  koloni  dan melakukan aktivitas metabolisme pada inang  (Havenaar et al., 1992).
Usus  halus  dan  kolon  mengandung konsentrasi  asam  empedu  yang  relatif  tinggi dan  dapat  menghambat  pertumbuhan  atau bahkan  membunuh  sebagian  besar  bakteri. Bakteri  asam  laktat  yang  akan  diuji  potensi probiotik  harus  mampu  tumbuh  pada  0,3% – 0,5% agar bile (Wahyudi dan
Samsundari,  2008).  Ketahanan L.plantarum terhadap  garam  empedu  merupakan  syarat penting untuk probiotik  seperti  halnya ketahanan terhadap asam. Konsentrasi
garam empedu 0,3% merupakan
konsentrasi  yang  kritikal  nilai  yang  cukup tinggi  untuk  menyeleksi  galur  yang  resisten terhadap  garam  empedu  (Gilliland et  al., 1984).  Penelitian  ini  menguji Lactobacillus plantarum yang  diisolasi  dari  usus  halus itik  petelur  Mojosari  mampu  hidup  dalam usus  yang  mengandung  konsentrasi  garam empedu  0,3%  (b/v)  dengan  lama  inkubasi 24  jam.  Ketahanan Lactobacillus plantarum terhadap  garam  empedu  merupakan  syarat penting untuk probiotik  seperti  halnya ketahanan terhadap asam. Konsentrasi
garam empedu 0,3%
merupakan konsentrasi  yang  kritikal  nilai  yang  cukup tinggi  untuk  menyeleksi  galur  yang  resisten terhadap  garam  empedu  (Gilliland et  al., 1984). Penelitian ini menggunakan konsentrasi  garam  empedu  0,3% (b/v).
Tabel  2.  Ketahanan L.plantarum Terhadap
Garam Bile Perlakuan Rerata  jumlah  sel bakteri  (CFU/ml) Garam Bile 0,3% (b/v) 1,2.10 9 Tanpa Garam Bile 1,4.10 9 Tabel 2 menunjukkan jumlah bakteri  yang  hidup  pada  media  dengan penambahan  oxgall  0,3%  (b/v)  sebesar  1,2. 10 9 CFU/ml  dan  mengalami  kenaikan  1  log karena jumlah inokulum awal yang ditambahkan  pada  jam  ke  nol  adalah  10 8
CFU/ml.  Jumlah Lactobacillus  plantarum yang  hidup  pada  garam  empedu  0,3%  (b/v) setelah  inkubasi  24  jam  hampir  sama dengan  jumlah  sel  bakteri  yang  hidup  pada
MRS  broth  sebagai  kontrol  yaitu  1,4.  10 9 CFU/ml. Menurut Bezkorovainy (2006),
halangan  yang  paling  serius  bagi  ketahanan probiotik  pada  usus  halus  adalah  garam empedu.  Studi  resistensi  probiotik  pada garam  empedu  secara in  vitro dapat  dibagi menjadi  dua  tipe  yaitu  studi  ketahanan  dan pertumbuhan. Studi ketahanan pada Lactobacillus dan Bifidobacterium dengan konsentrasi  0  -  1,5%  selama  kurang  dari  3 jam,  karena Lactobacillus kebanyakan  lebih tahan dari pada Bifidobacterium , konsentrasi yang digunakan untuk Lactobacillus lebih  tinggi  sekitar  0,3% Oxgall.  Menurut  Du  Toit et  al. (1999), ketahanan    bakteri  asam  laktat  terhadap garam  empedu  berkaitan  dengan  enzim bile salt  hidrolase (BSH)  yang  membantu menghidrolisa  garam  empedu  terkonjugasi, sehingga  mengurangi  efek  racun  bagi  sel. Adanya  toleransi  terhadap  garam  empedu tersebut  diduga  disebabkan  oleh  peranan polisakarida  sebagai  salah  satu  komponen penyusun  dinding  sel  bakteri  gram  positif (Astuti  dan  Rahmawati,  2010).  Karena  sel bakteri L.plantarum pada  penelitian  ini mampu  tumbuh  dalam  garam  bile  sehingga bakteri  tersebut  berpotensi  sebagai  kandidat probiotik.

## 3.3 Penghambatan L. plantarum Terhadap  Bakteri Patogen Beberapa  senyawa  yang  dihasilkan
oleh BAL yang bersifat antimikroba diantaranya adalah asam-asam organik, hidrogen  peroksida  dan  senyawa  protein atau  komplek  protein  spesifik  yang  disebut bakteriosin.  Kemampuan  mikroba  probiotik bakteri asam laktat untuk menekan pertumbuhan  bakteri  patogen  disebabkan karena  kemampuannya  untuk  memproduksi senyawa  antimikroba  seperti  asam  laktat dan  asam  asetat,  hidrogen  peroksida  yang cukup  besar  dan  bakteriosin.  Akumulasi senyawa  tersebut  di  dalam  sel  terjadi  karena bakteri  asam  laktat  tidak  menghasilkan enzim  katalase.  (Salminen  dan  Wright, 1993).
Salah satu kriteria yang harus dimiliki  oleh  BAL  yang  berpotensi  sebagai probiotik adalah kemampuannya untuk menghambat  bakteri  patogen  dan  mampu berkompetisi  dengan  bakteri  patogen  untuk mempertahankan  keseimbangan  mikroflora usus (Gildberg, 1997). Pengujian ini menggunakan  3  jenis  bakteri  patogen,  yaitu Escherichia  coli , Staphylococcus  aureus , dan Salmonella  typhi .  Ketiga  bakteri patogen  tersebut  sering  kita  ketahui  sebagai bakteri  yang  sering  menginfeksi  timbulnya penyakit yang menyerang saluran pencernaan  baik  pada  manusia  maupun pada hewan. Hasil uji penghambatan Lactobacillus  plantarum terhadap  ketiga bakteri  patogen  dapat  dilihat  pada  Gambar 1 dan Tabel  3.
(a) (b) (c) Gambar 1. Penghambatan L.plantarum
terhadap  (a) Escherichia  coli (b) Staphylococcus  aureus dan (c) Salmonella typhi
Tabel 3. Penghambatan L.plantarum Terhadap Bakteri Patogen Bakteri patogen Rerata diameter zona hambat (mm) Escherichia coli 12,7 Staphylococcus aureus 13,3 Salmonella typhi 9,3 Tabel 3 menunjukkan zona penghambatan L.plantarum
terhadap
Escherichia coli adalah 12,7 mm,
Staphylococcus  aureus sebesar  13,3  mm dan Salmonella  typhi sebesar  9,3  mm. Menurut  Davis  dan  Stout  (1971)  dalam Dewi  (2010),  bahwa  penentuan  kekuatan daya  suatu  antibakteri  adalah  jika  daerah hambatan  20  mm  atau  lebih  berarti  sangat kuat,  daerah  hambatan  10  –  20  mm  berarti kuat,  daerah  hambatan  5  –  10  mm  berarti sedang  dan  daerah  dengan  hambatan  5  mm atau kurang berarti lemah. Segingga aktivitas  antibakteri  yang  dibentuk  oleh L.plantarum terhadap  bakteri Escherichia coli adalah kuat, terhadap bakteri Staphylococcus  aureus adalah  kuat  dan terhadap  bakteri Salmonella  typhi adalah sedang.  Jumlah  sel  bakteri  patogen  yang dipakai untuk Escherichia coli 10 10 CFU/ml,  untuk Staphylococcus  aureus dan Salmonella  typhi adalah  10 9 CFU/ml, sedangkan  jumlah  sel L.plantarum adalah 10 10 CFU/ml.
Menurut McKane dan Kandel
(1985), bakteri Gram positif ( Staphylococcus aureus ) memiliki satu lapisan tebal peptidoglikan, dan  asam teikoat  sedangkan  bakteri  Gram  negatif ( Escherichia  coli dan Salmonella  typhi ) terdiri dari tiga lapisan peptidoglikan.
Sensitivitas  suatu  bakteri  terhadap  substrat antimikroba    dipengaruhi    oleh    lapisan peptidoglikan  yang  menyusun  dinding  sel. Lapisan  peptidoglikan  pada    bakteri  Gram negatif  lebih  tipis  dibandingkan  dengan bakteri  Gram  positif.    Peptidoglikan  bakteri Gram  negatif  hanya  1%  hingga  2%  dari berat  kering  sel    sedangkan  bakteri  Gram positif  mencapai  20%  dari  berat  kering  sel. Membran  luar  dari  Gram  negatif  tersusun atas  lipoprotein  30%,  fosfolipid  20  –  25%,
protein    40  –  45%  yang  berfungsi  sebagai pertahanan terhadap lingkungan luar
terhadap  aksi  antibiotik  sehingga  penisilin lebih  sulit  untuk  mencapai  target  kerja.
Pratiwi  (2008),  menyatakan  bahwa dinding  sel  bakteri  Gram  negatif  tidak mengandung  asam  teikoat  (berbeda  dengan Gram  positif  yang  memiliki  2  asam  teikoat yaitu  asam  lipoteikoat  dan  asam  teikoat dinding)  dan  karena  hanya  mengandung sejumlah  kecil  peptidoglikan,  maka  dinding sel  bakteri  Gram  negatif  relatif  lebih  tahan terhadap  kerusakan  mekanis.  Sehingga  dari hasil pengamatan menunjukkkan bahwa Staphylococcus  aureus (Gram  positif)  lebih mudah  dihambat  oleh  aktivitas  antibakteri
Lactobacillus plantarum
daripada
Escherichia  coli dan Salmonella  typhi
(Gram  negatif)
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa
L.plantarum efektif dalam
menghambat  pertumbuhan  bakteri  pathogen yang sering kita ketahui dapat menimbulkan infeksi pada saluran pencernaan  baik  pada  manusia  atau  hewan,
L.plantarum yang paling efektif menghambat adalah pada bakteri Staphylococcus aureus
kemudian Escherichia  coli. sesuai  dengan  kriteria besarnya  daya  hambat,  maka L.plantarum lebih  kuat  dalam  menghambat  bakteri  Gram positif  ( Staphylococcus  aureus )  dan  bakteri
Gram negatif ( Escherichia coli ). Berdasarkan kemampuan menghambat bakteri  patogen  tersebut  maka L.plantarum berpotensi  sebagai  kandidat  probiotik.

## IV. KESIMPULAN
1. Ketahanan L.plantarum terhadap  asam menunjukkan rata-rata jumlah sel bakteri  yang  hidup  pada  pH  2  sebesar 4,3.  10 7 CFU/ml,  pH 3 sebesar 3,8. 10 9 CFU/ml,  dan  pH  4  sebesar  2,7.  10 10

## CFU/ml.
2. Ketahanan L.plantarum terhadap  garam bile  0,3%  (b/v)  menunjukkan  bahwa jumlah  sel  bakteri  yang  tumbuh  adalah 1,2. 10 9 CFU/ml.
3. Penghambatan L.plantarum terhadap bakteri  patogen  menunjukkan  bahwa L.plantarum kuat  dalam  menghambat
Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus dengan rata-rata diameter penghambatan terhadap Escherichia coli sebesar  12,7  mm, Staphylococcus aureus sebesar  13,3  mm,  dan  sedang menghambat Salmonella  typhi dengan rata-rata  diameter  zona  hambat  sebesar 9,3 mm.

## V. SARAN
Penelitian  selanjutnya  untuk  lebih mengetahui potensi L.plantarum  sebagai probiotik  adalah  pengujian  secara  in  vivo yaitu  kemampuan  menempel  pada  sel  epitel usus  halus  saluran  pencernaan  itik  dan pengujian  dengan  hewan  coba  agar  aplikasi L.plantarum  dalam  produk  probiotik  lebih optimal.

## VI. DAFTAR PUSTAKA
Astuti,  dan  A.  Rahmawati.  2010.  Asimilasi Kolesterol  dan  Dekonjugasi  Garam Empedu  oleh  Bakteri  Asam  Laktat (BAL)  dari  Limbah  Kotoran  Ayam Secara  In  Vitro . Prosiding  Seminar Nasional Penelitian,  Pendidikan
dan Penerapan  MIPA .  Jurusan Pendidikan Pendidikan Biologi FMIPA UNY. Bezkorovainy, A. 2006. Probiotics: Determinants of Survival and
Growth  in  The  Gut. American  J.  Of Clin. Nut . 72(2): 399 - 405.
Dewi,  Fajar  Kusuma.  2010.  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Buah Mengkudu  ( Morinda citrifolia L.) Terhadap  Bakteri  Pembusuk  Daging Segar.  Surakarta: Skripsi Jurusan Biologi  Fakultas  Matematika  dan Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas  Sebelas  Maret.
Dewi,  Fajar  Kusuma.  2010.  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Buah
Mengkudu  ( Morinda citrifolia L.) Terhadap  Bakteri  Pembusuk  Daging Segar.  Surakarta: Skripsi Jurusan Biologi  Fakultas  Matematika  dan Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas  Sebelas  Maret. Gildberg,  A.  Mikkelsen,  Sandaker,  E.  and Ring,  E.  1997.  Probiotic  Effect  of Lactid  Acid  Bacteria  in  The  Feed  on Growth  and  Survival  of  Fry  of Atlantic Cod ( Gadus morhua ) Hydrobiologia. Appl,  Microbiology . 352: 279-285.
Gilliland  SE,  TE  Staley  and  LJ  Bush. 1984.  Importance  of  Bile  Tolerance of Lactobacillus  acidophilus Used as  A  Dietary  Adjunct. J.  Dairy
Science 67: 3045-3051. Harimurti, Sri. Endang Sutriswati,
Nasroedin,  dan  Kurniasih.  2007.
Bakteri  Asam  Laktat  dari  Intestin
Ayam  Sebagai  Agensia  Probiotik. Animal  Production .  Vol.  9.  No.  2. Hal.  82-91. ISSN 1411-2027. Khuzaemah,  S.  2005.  Pengaruh  Aras  Serat Kasar  Ransum  terhadap  Kecernaan Serat  kasar,  Protein  kasar  dan Energi  Metabolis  pada  Itik  Tegal Jantan.  Semarang: Skripsi Fakultas Peternakan  Universitas  Diponegoro. Kimoto  H,  J  Kurisaki,  N.M  Tsuji,  S Ohmomo  and  T  Okamoto.  1999. Lactococci as  Probiotic  Strains: Adhesion  to  Human  Enterocyte-like Caco-2  Cells  and  Tolerance  to  Low pH and Bile. Lett. In  Appl. Microbiol. Vol.  29:  313-316.
McKane, L.  and  J.  Kandel.  1985. Microbiology: Essential and
Application .  New  York:  McGraw- Hill  Book Company.
Pratiwi,  Sylvia  T.  2008. Mikrobiologi Farmasi. Jakarta:  Erlangga.
Rostini,  Iis.  2007.  Peranan  Bakteri  Asam Laktat  ( Lactobacillus plantarum ) Terhadap  Masa  Simpan  Filet  Nila Merah pada Suhu Rendah. Bandung: Makalah Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan. Universitas  Padjadjaran.
Salminen,  S.,  Ouwehand,  A.,  Benno,  Y.  & Lee  Y.K.  1999.  Probiotics:  How Should  Be  Defined? Trends  in  Food Science  and  Technology .  Vol.10:
107 – 110.
Schillinger    U,  and  Lucke    F.  1989. Antbacterial activity of
Lactobacillus  sake isolated  from
meat .  Appl  Environ  Microbiol .  55:
1901 – 1906.
Setiawan,    N.    2006.    Perkembangan
Konsumsi    Protein    Hewani    di Indonesia  (Analisis    Hasil    Susenas 1999-2004). Pengkajian .    Tidak diterbitkan. Padjadjaran: Fakultas Peternakan  Univ  Padjadjaran.
Setiawan,    N.    2006.    Perkembangan Konsumsi    Protein    Hewani    di Indonesia  (Analisis    Hasil    Susenas 1999-2004). Pengkajian .    Tidak diterbitkan. Padjadjaran: Fakultas Peternakan  Univ  Padjadjaran. Wahyudi,  Ahmad  dan  Sri  Samsundari. 2008. Bugar Dengan Susu Fermentasi.  Rahasia  Hidup  Sehat Panjang  Umur. Malang:  UMM
Press.
Zavaglia  AG,  Kociubinski  G,  Perez  P, Antoni  GD.  1998.  Isolation  and Characterization  of Bifidobacterium Strains  of  Probiotik  formulation. J. Food Protect . 61(7) 865-873 .