Potensi Penambahan Probiotik (Lactobacillus pentosus K50) untuk Meningkatkan Kualitas Pakan Ikan Air Tawar
Helena Daten 1) , Tri Ardyati 1)*
1) Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Brawijaya
*) Alamat korespondensi: tri_ardyati@yahoo.com

## ABSTRAK
Pakan  merupakan  sumber  nutrisi  bagi  ikan  yang  dapat  diproses  dengan  penambahan  probiotik. Probiotik  merupakan  mikroba  yang  berperan  untuk  meningkatkan  kesehatan  inang  dan  kualitas  pakan. Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengetahui viabilitas bakteri asam laktat  (BAL),  jumlah bakteri Salmonella dan coliform ,  kapang,  serta  kandungan  nutrisi  pakan  yang  difermentasi.  Perlakuan  fermentasi  terdiri  dari tanpa  penambahan  BAL  (kontrol),  penambahan  BAL  Sp.  1,  probiotik  ( Lactobacillus  pentosus K50),  dan bakteri konsorsium ( Lactobacillus pentosus K50 dan BAL Sp. 1). Jumlah BAL, Salmonella dan coliform serta kapang dideteksi dengan metode Total Plate Count. Kandungan protein diuji menggunakan metode Kjedahl, karbohidrat  dengan  metode total  carbohydrate  by  difference ,  dan  lemak,  abu,  serta  air  dengan  metode gravimetri.  Viabilitas  BAL  pada  perlakuan  penambahan  BAL  Sp.1  mengalami  penurunan  dari  hari  ke-0 sampai 20, sedangkan perlakuan dengan penambahan Lactobacillus pentosus K50 dan konsorsium meningkat dari hari ke- 0 sampai 20 berturut-turut 12,6 x 10 8 cfu/g menjadi 17,4 x 10 8 cfu/g dan 11,2 x 10 8 cfu/g menjadi 14,9  x  10 8 cfu/g.  Bakteri Salmonella tidak  tumbuh  dalam  pakan  kontrol  dan  fermentasi.  Jumlah  bakteri coliform dan  kapang  dalam  pakan  terfermentasi  dengan  perlakuan  probiotik  dan  bakteri  konsorsium mengalami penurunan hari ke-5 sampai 20. Jumlah kapang pada perlakuan dengan penambahan BAL Sp. 1 mengalami  fluktuasi  disebabkan  meningkatnya  kadar  air  selama  fermentasi.  Kandungan  protein  relatif stabil,  sedangkan  kandungan  lemak,  karbohidrat,  dan  abu  mengalami  penurunan  selama  fermentasi. Penambahan  probiotik  dalam  pakan  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri coliform dan  kapang,  serta menjaga stabilitas nutrisi pakan.
Kata kunci: fermentasi, pakan ikan, probiotik, protein, viabilitas BAL
Potency of Probiotic ( Lactobacillus pentosus K50) Application to Improve Feed Quality of Freshwater Fish
Helena Daten 1) , Tri Ardyati 1)*
1) Biology Department, Faculty of Mathematics and Natural Sciences, Brawijaya University
*) Email: tri_ardyati@yahoo.com

## ABSTRACT
Feed  is  the  nutrition  sources  for  fish  which  could  be  processed  by  applying  probiotic.  Probiotic  is microbe applied to improve the health of host and feed quality. The objective of this study was to observe the viability of lactic acid bacteria (LAB), number of Salmonella , coliform and mold also nutritional contents of fermented feed. Fermentation treatment consisted of feed without application of LAB (control), application of LAB  Sp. 1,  probiotic ( Lactobacillus pentosus K50)  and consortium  bacteria ( Lactobacillus pentosus K50 and LAB  Sp.  1).  The  density  of  LAB, Salmonella , coliform ,  and  mold  was  counted  using  Total  Plate  Count method.  Protein  content  was  assayed  using  Kjedahl  method;  carbohydrate  content  was  assayed  using total carbohydrate  by  difference method;  and  fat,  ash  also  water  content were  assayed  using  gravimetric  method. Viability  of  LAB  in  the  feed  treated  with  LAB  Sp.  1  decreased  from  0  to  20  days,  while  application  of Lactobacillus pentosus K50 and consortium bacteria increased the viability 0 to 20 days from 12.6 x 10 8 cfu/g to 17.4 x 10 8 cfu/g and 11.2 x 10 8 cfu/g to 1.9 x 10 8 cfu/g, respectively. Salmonella bacteria was not detected in all  fermented  feeds.  The  number  of  coliform  and  mold  in  fermented  feeds  treated  of  probiotic  as  well  as consortium bacteria decreased from 5 to 20 days. The number of  mold in feeds treated with LAB Sp. 1 was fluctuated  due  to  the  increasing  of  water  content  during  fermentation.  However,  protein  content  was relatively  stable.  While  fat,  carbohydrate,  and  ash  content  decreased  during  fermentation.  Application  of probiotic inhibited coliform  and mold growth, also maintained the stability of feed nutrition.
Keywords: fermentation, fish feeds, probiotic, protein, viability of LAB

## PENDAHULUAN
Berkembangnya  perikanan  air  tawar perlu  didukung  oleh  tersedianya  pakan. Kondisi  ini  kurang  menguntungkan  bagi peternak  ikan  skala  kecil  karena  biaya  untuk membeli  pakan  sangat  besar  yang  berimbas pada  rendahnya  keuntungan  yang  diterima. Situasi  ini  diperparah  dengan  lokasi  peternak ikan  yang  jauh  dari  pabrik  pakan  sehingga dibutuhkan banyak biaya [1].
Probiotik  menurut  WHO  [2])  adalah mikroba hidup dalam jumlah yang cukup dapat memberikan  manfaat  kesehatan  inangnya. Jumlah  yang  cukup  dimaksud  oleh  WHO adalah  10 6 -10 8 cfu/g  dan  dapat  berkembang menjadi 10 12 cfu/g di dalam kolon. Mekanisme kerja  probiotik  dengan  menekan  populasi mikroba patogen melalui kompetisi memproduksi  senyawa-senyawa  antimikroba atau kompetisi nutrisi dan merubah metabolisme  mikrobial  dengan  meningkatkan atau  menurunkan  aktivitas  enzim  pengurai. Selain  itu,  probiotik  juga  menstimulasi imunitas  melalui  peningkatan  kadar  antibodi organisme  akuatik  atau  aktivitas  makrofag. Salah  satu  bakteri  yang  berpotensi  sebagai probiotik  adalah Lactobacillus  pentosus K50. Bakteri  ini  dapat  menghambat  pertumbuhan mikroba  patogen  seperti E.  coli dengan  luas zona bening 73,25 mm 2 , Salmonella thypimurium dan Helicobacter  pylori dengan luas  zona  bening  berturut-turut  160,91  mm 2 dan  353,48  mm 2 .  Bakteri  ini  hidup  pada  pH  5 dan  7,5  serta  konsentrasi  garam  empedu  0-0,3 %  [3].  Kualitas  pakan  ikan  yang  baik  tidak mengandung Salmonella , coliform maksimum 3 koloni/g, kapang maksimum 50 koloni/g, dan aflatoksin  maksimum  50  koloni/g  [4].  Oleh karena  itu,  tujuan  dari  penelitian  adalah mengetahui  viabilitas  bakteri  asam  laktat (BAL),  jumlah  bakteri Salmonella dan coliform ,  kapang,  serta  kandungan  nutrisi pakan yang difermentasi.

## METODE PENELITIAN
Komposisi  dan  Proses  Pembuatan Pakan  Ikan .  Komposisi  pakan  ikan  adalah tepung ikan 55 kg, tepung tapioka 5 kg, dedak 17,5 kg, pollard 5 kg, CGF 12,5 kg, vitamin 2 kg,  dan feed  addictive 3  kg  (molase  2  kg  + minyak  ikan  1  kg)  serta  ditambahkan  0,5  kg minyak  sayur.  Bahan-bahan  yang  berbentuk cair  dicampurkan  dengan  tepung  tapioka
menggunakan vertical  mixer .  Setelah  itu,  semua bahan  dicampur  menggunakan horizontal  mixer selama 30 menit.
Isolasi  BAL  dan  Uji  Sinergisme. Isolasi BAL dari pakan ikan menggunakan media de Man Rogosa  Sharpe (MRS)  agar  yang  mengandung CaCO 3 1  %  dan  diinkubasi  pada  suhu  37 selama 48 jam. Isolat murni hasil isolasi dilakukan cat  Gram  dan  uji  katalase.  Uji  sinergisme dilakukan dengan digores silang antar  isolat  BAL dengan L. pentosus K50 dan diinkubasi pada suhu 37 o C  selama  48  jam.  Sinergisme  terjadi  apabila kedua  isolat  dapat  tumbuh  tanpa  menghasilkan zona hambat.
Fermentasi  Pakan. Jumlah  sel  BAL  yang ditambahkan  dalam  fermentasi  adalah  10 9 cfu/g. Kontrol  adalah  pakan  yang  tidak  ditambahkan BAL  Sp.  1,  probiotik,  dan  bakteri  konsorsium. Perlakuan  fermentasi  terdiri  dari    penambahan BAL  Sp.  1, Lactobacillus  pentosus K50,  dan bakteri konsorsium (BAL Sp. 1 dan Lactobacillus pentosus K50)  10 %  dalam  200  g  masing-masing pakan.  Uji  viabilitas  BAL,  deteksi  bakteri Salmonella , coliform ,  kapang  dan  kandungan nutrisi  serta  pH  diukur  pada  hari  ke-0,  5,  10,  15, dan 20.
Uji  Viabilitas  BAL  dan  Kandungan Mikroba  Pencermar .  Uji  viabilitas  BAL  dan jumlah mikroba pencemar dalam pakan menggunakan  metode Total  Plate  Count .  Uji viabilitas  BAL  menggunakan  media  MRS  agar yang  mengandung  CaCO 3 1  %  dan  diinkubasi pada  suhu  37 o C  selama  48  jam.  Isolasi  kapang menggunakan media Potato Dextrose Agar (PDA) yang  mengandung  50  ppm  streptomycin  dan diinkubasi  pada  suhu  30 selama  48  jam, sedangkan bakteri Salmonella dan coliform dalam media xylose lysine deoxycholate (XLD) agar dan diinkubasi pada suhu 37 o C selama 48 jam.
Penentuan Kadar Protein dengan Metode Kjeldahl, kadar Lemak, Air, Abu, dan Karbohidrat. Prinsip  kerja  uji  protein  adalah destruksi,  destilasi  dan  titrasi  [5].  Kandungan lemak  dihitung  secara  gravimetri  [6];  kandungan air dihitung secara gravimetri  [7];  kandungan abu dihitung  secara  gravimetri  [8];  dan  analisis karbohidrat menggunakan metode total carbohydrate by difference [9].
Analisis  Data. Analisis  data  dengan one way ANOVA  menggunakan  SPSS  16.0.  Analisis
ini  bertujuan  untuk  mengetahui  perbedaan viabilitas  BAL,  bakteri Salmonella , coliform , kapang,  dan  kandungan  nutrisi  dalam  pakan selama  fermentasi  pada  berbagai  perlakuan. Masing-masing perlakuan diuji statistik dengan tingkat kepercayan 95 % (α= 0,05).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Bakteri  asam  laktat  yang  diperoleh  dari pakan  ikan  sebanyak  tujuh  isolat.  Ketujuh isolat tersebut adalah isolat Sp. 1, Sp. 2, Sp. 3, Sp.  4,  Sp.  5,  Sp.  6,  dan  Sp.  7.  Semua  isolat mempunyai  bentuk  bulat,  Gram  positif  dan ukuran  sel  ±1μm,  serta  katalase  negatif.  Isolat yang  menunjukkan  tidak  ada  antagonisme dengan L.  pentosus K50  hanya  isolat  BAL Sp.1
Viabilitas Bakteri Asam Laktat dalam Pakan  Ikan. Jumlah  sel  BAL  Sp.  1  yang ditambahkan dalam fermentasi pakan sebanyak 1,01  x  10 9 cfu/g.  Peningkatan  jumlah  BAL dalam  pakan  kontrol  tidak  drastis  sehingga perubahan pH juga relatif stabil pada hari ke-0 sampai  20.  Penurunan  jumlah  BAL  setelah ditambahkan  BAL  Sp.  1  terjadi  pada  hari  ke- 10 sampai 20 (Gambar 1).
Gambar 1. Viabilitas BAL dan perubahan pH selama fermentasi pakan
Jumlah  sel L.  pentosus K50  yang ditambahkan dalam fermentasi sebanyak 1,089 x  10 9 cfu/g.  Jumlah  BAL  mengalami penurunan pada hari ke-10 sampai 15 berturut- turut  sebanyak  8,9  x  10 8 cfu/g  menjadi  8,4  x 10 8 cfu/g (Gambar 1). Penurunan jumlah BAL diikuti  dengan    penurunan  pH  4,01  menjadi 3,92.  Bakteri L.  pentosus K50  dapat  hidup pada  pH  4-7  [3],  sedangkan  BAL  umumnya dapat tumbuh pada kisaran pH 3-7. Selain  itu, penurunan jumlah  BAL  disebabkan  akumulasi asam laktat yang semakin banyak mengakibatkan  tidak  terjadi  transport  unsur
hara  ke  dalam  sel  [10].  Peningkatan  BAL  terjadi kembali pada fermentasi hari ke-20. Hal ini terjadi karena  pada  hari  ke-20  kandungan  air  meningkat dan  protein  relatif  stabil  (Gambar  4)  sehingga digunakan sebagai nutirisi untuk tumbuh.
Jumlah  sel  bakteri  konsorsium  masing- masing  yang  ditambahkan  dalam  fermentasi sebanyak 1,085 x 10 9 cfu/g (BAL Sp. 1) dan 1,012 x  10 9 cfu/g  ( L.  pentosus K50).  Viabilitas  BAL setelah ditambahkan bakteri konsorsium mengalami  penurunan  jumlah  selama  fermentasi hari ke-5 sampai ke-15. Peningkatan jumlah BAL terjadi pada hari ke-20 sebanyak 14,9 x 10 8 cfu/g. Meningkatnya  jumlah  BAL  selama  fermentasi disebabkan  aktivitas  proteolitik  BAL  dalam memecah protein menjadi asam amino dan peptida yang  digunakan  sebagai  sumber  nitrogen  untuk pertumbuhan dan perbanyakan sel [10].
Jumlah Bakteri Salmonella dan Coliform dalam Pakan Ikan. Bakteri yang dideteksi dalam pakan  sebagai  kontrol  kualitas  adalah Salmonella dan coliform .  Bakteri Salmonella tidak  tumbuh dalam  pakan  kontrol  dan  pakan  fermentasi. Jumlah bakteri coliform dalam pakan kontrol  hari ke-0 menurun sampai hari ke-20 (Gambar 2).
Gambar  2 .  Jumlah  bakteri coliform selama fermentasi pakan
Jumlah  bakteri coliform menurun  selama fermentasi  dengan  penambahan  BAL  Sp.  1  yaitu pada hari ke-0 sebanyak 8,2 x 10 5 cfu/g dan pada hari  ke-5  sebanyak  1,6  x  10 5 cfu/g.  penambahan BAL  Sp.  1  dengan  jumlah coliform berkorelasi lemah  karena  jumlah  BAL  selama  fermentasi mengalami  penurunan  yang  drastis  (Gambar  2). Jumlah coliform yang  tumbuh  dalam  pakan fermentasi  dengan  penambahan L.  pentosus K50 pada hari ke-0 sebanyak 12,5 x 10 5 cfu/g dan tidak tumbuh  sampai  hari  ke-  20.  Kandungan  bakteri coliform setelah  ditambahkan  bakteri  konsorsium pada  hari  ke-0  sebanyak  9  x  10 7 cfu/g  dan  masih terdapat coliform yang  tumbuh  pada  hari  ke-5 karena  wadah  dan  proses  pengadukan  saat fermentasi  kurang  steril  sehingga  terkontaminasi
dengan  mikroba  patogen.  Penurunan  jumlah coliform terjadi  karena  penumpukan  asam laktat  menyebabkan  kebocoran  nutrien  dan menghambat kerja enzim intraseluler sehingga menghambat proses metabolisme sel [10].

## Jumlah  Kapang  dalam  Pakan  Ikan.
Jumlah kapang dalam pakan kontrol meningkat dari  hari  ke-0  sampai  hari  ke-20.  Jumlah kapang dalam pakan yang difermentasi dengan penambahan  BAL  Sp.  1  mengalami  fluktuasi (Gambar  3).  Kapang  dengan  kadar  air berkorelasi  kuat  karena  semakin  tinggi  kadar air  maka  jumlah  kapang  semakin  banyak. Jumlah  kapang  yang  meningkat  disebabkan komposisi  pakan  yang  berasal  dari  biji-bijian yang mengandung  air,  karbohidrat,  protein, mineral,  lemak,  dan  vitamin  yang  merupakan nutrisi pendukung tumbuhnya kapang.
Gambar 3 . Jumlah kapang selama fermentasi pakan
Jumlah  kapang  dalam  pakan  fermentasi yang  ditambahkan L.  pentosus K50 tidak tumbuh selama fermentasi hari ke-5 sampai 20. Hal ini terjadi karena hasil metabolisme berupa asam  laktat  bekerja  menghambat  mikroba patogen  dengan  melepaskan  proton  dari  grup karboksilik yang mengakibatkan penurunan pH lingkungan, untuk menyeimbangkan pH internal maka sel mengeluarkan banyak energi menyebabkan sel kehilangan viabilitas.
Penambahan L.  pentosus K50 berkorelasi negatif  dengan  jumlah  kapang  yaitu  semakin banyak  L .  pentosus K50 yang  ditambahkan maka semakin sedikit jumlah kapang.
Jumlah  kapang  dalam  pakan  yang difermentasi  dengan  penambahan  bakteri konsorsium mengalami penurunan jumlah pada hari  ke-5,  tetapi  tumbuh  pada  hari  ke-20 (Gambar  3),  karena  BAL  bekerja  tidak maksimal sehingga asam laktat yang dihasilkan tidak melawan pertumbuhan kapang.      Menurut  Damayanti  dkk  [11]  dalam kondisi  ekstrim  asam  laktat  tidak  bersifat
sebagai  penghambat,  tetapi  sebagai  faktor pendukung  pertumbuhan  kapang  dan  dapat bersifat  sebagai  kofaktor  dalam  pembentukan aflatoksin. Mekanisme ini didasarkan teori bahwa pada  suatu  substrat  yang  mempunyai  konsentrasi asam laktat yang berlebih maka sel berusaha untuk mengoksidasi  kembali  asam  laktat  tersebut menjadi  piruvat  untuk  mendapatkan  energi  dan mekanisme  proteksi  terhadap  lingkungan  yang ekstrim.
Kandungan  Nutrisi  dalam  Pakan  Ikan . Kandungan  nutrisi  pakan  terdiri  dari  protein, lemak,  air,  abu,  dan  karbohidrat.  Kandungan karbohidrat  pakan  kontrol  dan  pakan  yang difermentasi  dengan  penambahan  BAL  Sp.  1, L. pentosus K50, dan bakteri konsorsium mengalami penurunan  pada  hari  ke-0  sampai  hari  ke-20. Kadar air setelah fermentasi mengalami peningkatan  menjadi  lebih  dari  12  %.  Air  yang dihasilkan  merupakan  air  bebas  yang  akan menguap  saat  pengeringan  menggunakan  cahaya matahari atau oven.
Gambar  4 .  Kandungan  protein,  lemak,  dan  abu dalam pakan
Kandungan  protein,  lemak,  dan  abu  dalam pakan  kontrol  dan  penambahan  BAL  Sp.  1 mengalami  penurunan  pada  hari  ke-0  sampai  20. Kandungan protein dalam pakan yang difermentasi L.  pentosus K50  dan  bakteri konsorsium relatif stabil pada hari ke-0 sampai 20 berturut-turut sebanyak 24,71 % menjadi 24,05 % dan  24,4  %  menjadi  24,66  %  (Gambar  4). Penurunannya  disebabkan  aktivitas  proteolitik BAL  dalam  memecah  protein  menjadi  asam amino  dan  peptida  yang  digunakan  sebagai sumber  nitrogen  untuk  pertumbuhannya  [12]. Berdasarkan kandungan protein dalam pakan yang difermentasi dengan BAL Sp. 1, L. pentosus K50, dan  bakteri  konsorsium  maka  protein  tersebut cocok  untuk  jenis  ikan  Patin  usia  pembesaran karena  protein  yang  dibutuhkan  ikan  patin  usia pembesaran  adalah  25  %  [13].  Penurunan  jumlah lemak  karena  BAL  memiliki  aktivitas  lipolitik
sekunder  yang  dapat  memecah  lemak  menjadi senyawa kimia yang lebih sederhana.
Penurunan  jumlah  abu  terjadi  karena  mikroba menggunakan  mineral  untuk  mempertahankan hidupnya meskipun dalam jumlah yang sedikit. Berdasarkan  ketiga  perlakuan  tersebut  dapat disimpulkan bahwa fermentasi dengan penambahan L. pentosus K50 dapat meningkatkan kualitas pakan ikan karena tidak menurunkan  jumlah  nutrisi  pakan  dan  dapat menghambat pertumbuhan mikroba pencemar.

## KESIMPULAN
Kesimpulan yang didapatkan dari penelitian  adalah  viabilitas  BAL  dalam  tiga perlakuan  fermentasi  pakan  pada  hari  ke-0 sampai  20  relatif  stabil  sebanyak  10 8 cfu/g. Bakteri Salmonella tidak tumbuh dalam pakan kontrol dan fermentasi. Pakan dengan penambahan  BAL  Sp.  1  dapat  menghambat pertumbuhan
coliform
tetapi tidak menghambat  pertumbuhan  kapang.  Bakteri L.
pentosus K50 dan konsorsium dapat menurunkan  jumlah coliform dan  kapang.
Kandungan  protein  relatif  stabil  pada  pakan yang  difermentasi  dengan  penambahan  BAL, probiotik  dan  bakteri  konsorsium.  Kandungan lemak,  abu,  dan  karbohidrat  mengalami penurunan tidak drastis, sedangkan air semakin meningkat selama proses fermentasi.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih kepada Balai Besar Perikanan  Budidaya  Air  Tawar,  Sukabumi, Jawa  Barat  yang  sudah  mensuplai  pakan  ikan dan  Ibu  Dra.  Nanik  Dwi  Rahayu  selaku laboran  Mikrobiologi,  Fakultas  Matematika dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas Brawijaya.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Sarry,  I.  R.  2013. Produksi  pakan buatan ,  Kementrian  Pendidikan  dan Kebudayaan, Jakarta.
[2] WHO.  2001.  Health  and  nutritional properties of probiotics in food including powder  milk  with  live  lactic  acid bacteria, FAO  Food  and  Nutrition Paper. 2-18.
[3]  Karim, A. 2016. Uji potensi bakteri asam laktat  dari  susu  Kuda  Sumbawa  ( Equus ferus caballus ) sebagai probiotik.
Jurusan  Biologi,  Fakultas  Matematika  dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Brawijaya. Malang, Skripsi .
[4] SNI.  2009a.  Pakan  buatan  untuk  ikan gurami  ( Osphronemus  goramy ,  Lac.), SNI 65.120-7548.
[5] Magomya,  A.M.,  D.  Kubmarawa.,  J.  A.
Ndahi & G.G. Yebpella. 2014.
Determination  of  Plant  Protein  Via  The Kjeldahl Method and Amino Acid Analysis: A Comparative Study. International Journal of Scieentific & Technology Research . 3 (4): 2277-8616.
[6] SNI. 2006a. Cara uji kimia penentuan kadar lemak total pada produk perikanan, SNI 01- 2354.3.
[7] SNI. 2006b. Cara uji kimia penentuan kadar air pada produk perikanan, SNI 01-2354.2.
[8] LU-BBPBATS.  2015.  Metode  pengujian kadar abu, LU-BBPBATS -III,5.4.1.23.
[9] SNI. 1992. Cara uji makanan dan minuman, SNI 01-2891.
[10]  Al-rawi,  A.  A.  M.  M  &    A.  T.  Al-mola. 2009.  Antimicrobial  activity  of  lactic  acid bacteria  isolated  from  minced  beef  meat against  some  patogenic  bacteria. Iraqi Journal of  Veterinary Science . 23 (1): 115- 117.
[11]  Damayanti,  E.,  A.  E.  Suryani.,  A.  Sofyan, M. F. Karimy &  H. Julendra. 2015. Seleksi bakteri  asam  laktat  dengan  aktivitas  anti jamur  yang  diisolasi  dari  silase  dan  saluran cerna ternak. Journal of Agritechnology . 35 (2): 164-169.
[12]  Nisa,  A.  K  &  A.  K.  Wardani.  2016. Pengaruh  lama  pengasapan  dan  lama fermentasi  terhadap  sosis  fermentasi  ikan Lele  ( Clarias  gariepinus ). Jurnal  Pangan dan Agroindustri . 4 (1): 367-376.
[13]  SNI.  2009b.  Pakan  buatan  untuk  ikan  Patin ( Pangasius sp .), SNI 65.120-7548 .