## AQUASAINS (Jurnal Ilmu Perikanan dan Sumberdaya Perairan)
DESKRIPSI RESPON IMUN NON SPESIFIK KAKAP PUTIH ( Lates calcarifer ) YANG DIBERI JINTAN HITAM ( Nigella sativa ) DAN UJI
TANTANG DENGAN VIRAL NERVOUS NECROSIS
Aulia Sonida 1 · Esti Harpeni 2 · Tarsim 2
Ringkasan Asian seabass (Lates calcari- fer) is one of the fish has a high economic value and widely cultivated in Indonesia. However, Asian seabass cultured constrains by infectious diseases such as Viral Nervo- us Necrosis (VNN). Application of antibi- otics during cultured cause resistance and residues in the body of fish. Disease preven- tion method by use immunostimulant deve- lop to enhances non-specific responses. The purposes of this research were to know the best dose of black cumin (Nigella sativa) that can increase the non-specific immune response of Asian seabass after injected by VNN. This research used four treatments (0 g black cumin/kg of feed, 25 g black cu- min /kg of feed, 50 g black cumin/kg of feed and 75 g black cumin/kg of feed). Total le- ucocyte and differential leucocyte analyzed descriptively. The results showed that dose of 75 g black cumin/kg of feed is the best for increase the non-specific immune response of Asian seabass which had been seen from the highest total leucocyte. However, the- re was no effect of administrated of black cumin to Asian seabass after injected with VNN which had been seen from the RPS.
1 )Alumni Jurusan Budidaya Perairan Universitas Lampung 2 ) Jurusan Budidaya Perairan Universitas Lam- pung Alamat: Jl.Prof.Sumantri Brodjonegoro No.1 Gedong Meneng Bandar Lampung 35141 E-mail: esti.harpeni@fp.unila.ac.id
Keywords barramundi, black cumin, im- munostimulatory, leucocyte, betanodavirus
Received: 4 Mei 2014 Accepted: 15 Juli 2014

## PENDAHULUAN
Kakap putih ( Lates calcarifer ) merupak- an ikan yang banyak dibudidayakan di In- donesia karena mempunyai nilai ekonomis yang tinggi [1] dan kisaran toleransi fisio- logis yang cukup luas [2], fekunditas tinggi dan pertumbuhan yang cukup cepat. Na- mun, usaha budidaya ikan kakap putih ti- dak terlepas dari berbagai masalah seper- ti serangan penyakit infeksi. Salah satunya disebabkan oleh virus, yaitu Viral Nervous Necrosis (VNN). VNN dapat menyebabk- an mortalitas tinggi pada larva dan juve- nil kakap putih [3]. Selama ini cara yang sering dilakukan oleh pembudidaya untuk menanggulangi penyakit VNN adalah de- ngan menggunakan antibiotik yang dapat menyebabkan penyakit menjadi resisten dan adanya residu pada ikan.
Metode pencegahan penyakit dinilai lebih aman dengan menggunakan imunostimul- an yang lebih ramah lingkungan dan da- pat menciptakan budidaya perikanan yang berkelanjutan. Imunostimulan merupakan bahan yang mampu meningkatkan meka- nisme respon imun non spesifik ikan. Jint-
Aulia Sonida 1 et al. an hitam merupakan tanaman herbal yang berasal dari famili Ranunculacea. Biji jint- an hitam banyak dimanfaatkan masyara- kat dalam bidang kesehatan [4]. Bahkan saat ini banyak laporan yang mengatakan bahwa jintan hitam diindikasi dapat me- ningkatkan sistem imun dan daya tahan tubuh. Selain itu jintan hitam merupakan salah satu imunostimulan yang berpoten- si sebagai ekstrak anti-viral [5]. Diharapk- an pemberian ekstrak jintan hitam mampu meningkatkan sistem imun pada ikan ka- kap putih yang terinfeksi virus VNN.

## MATERI DAN METODE
Penelitian dilaksanakan pada September sam- pai Oktober 2013 di Laboratorium Kese- hatan Ikan dan Lingkungan Balai Besar Pengembangan Budidaya Laut (BBPBL) Lampung dan Laboratorium Budidaya Per- ikanan, Fakultas Pertanian, Universitas Lam- pung. Bahan-bahan yang digunakan antara lain kakap putih berukuran ±10 cm, ser- buk jintan hitam (HPATM) dan inokulum VNN. Penelitian ini menggunakan 4 per- lakuan yaitu perlakuan A (0 g jintan hi- tam/kg pakan), perlakuan B (25 g jintan hitam /kg pakan), perlakuan C (50 g jint- an hitam /kg pakan) perlakuan D (75 g jintan hitam /kg pakan).
Pembuatan inokulum VNN mengacu pada dalam [6], dengan menggerus organ yang diambil dari ikan yang positif VNN dan ditambahkan larutan PBS steril. Air ha- sil penyaringan disuntikan secara intrape- ritoneal (i.p) dengan dosis 0,1 ml pada ik- an uji. Metode pencampuran pakan dengan serbuk jintan hitam mengacu pada modifi- kasi metode [7]. Pakan diberikan selama 2 kali sehari dengan feeding rate 4% [2]. Uji tantang dilakukan pada hari ke-38 dengan metode menyuntikkan virus VNN ke da- lam tubuh ikan secara intraperitoneal (i.p) dengan dosis 0,1 ml/ikan.
Pengambilan sampel darah mengacu pa- da metode [8] dilakukan pada hari ke-0, 7, 14, 21, 45. Sebelum digunakan jarum sun- tik dan microtube dibilas dengan larutan EDTA 10% untuk mencegah penggumpal- an darah. Selanjutnya darah diambil mela-
lui vena caudalis menggunakan jarum sun- tik 1ml 26G. Lalu darah dimasukan ke da- lam microtube.
Pengamatan hematologi dilakukan dengan menghitung total leukosit dan diferensial leukosit. Total leukosit dihitung berdasark- an [7], sampel darah dihisap dengan pi- pet berskala sampai 0,5 dilanjutkan dengan menghisap larutan turk sampai skala 11 (pengenceran 1:20), dimasukkan ke dalam haemocytometer dan dibiarkan selama 3 menit agar leukosit mengendap dalam bi- lik hitung, penghitungan dilakukan pada 4 kotak besar haemocytometer di bawah mikroskop dengan perbesaran 40x.
T otal leukosit/mm 3 = L t x P (1)
dimana :
L t : Jumlah sel leukosit terhitung
P : Pengenceran
Pengamatan diferensial leukosit dilakukan mengacu pada [8]. Preparat digenangi de- ngan metanol secukupnya selama 5-10 me- nit, selanjutnya digenangi dengan giemsa selama 25 menit, dibilas dengan aquades dan dikering anginkan, minyak imersi di- teteskan pada bagian sediaan yang leuko- sitnya tidak saling menumpuk, diamati de- ngan perbesaran 1000x, macam-macam ben- tuk leukosit dihitung sepanjang sediaan apus darah, perhitungan dihentikan bila jumlah- nya telah mencapai 100 sel leukosit, hasil- nya dihitung dalam persen (%). Data hasil pengamatan dari parameter hematologi di- analisis secara deskriptif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil perhitungan total leukosit menunjukk- an bahwa kakap putih yang diberikan do- sis 75 g jintan hitam/kg pakan memiliki respon imun non spesifik yang lebih baik dibandingkan dengan dosis yang lainnya. Hal ini dapat dilihat dari peningkatan total leukosit tertinggi yang terdapat pada per- lakuan D hari ke-45 yaitu sebesar 85.700
sel/mm 3 (Gambar 1a). Meningkatnya to- tal leukosit pada ikan yang diberi imunos- timulan memperlihatkan bahwa imunosti- mulan yang masuk kedalam tubuh membe- rikan efek yang positif terhadap peningkat- an total leukosit di dalam darah. Terjadi- nya peningkatan total leukosit diduga ka- rena adanya respon perlawanan tubuh ter- hadap patogen, berupa meningkatnya ak- tifitas sel-sel fagosit yang berfungsi untuk menghancurkan benda asing yang masuk ke dalam tubuh ikan. Fagositosis merupak- an tahap awal dalam mekanisme pertahan- an tubuh [9].
Jenis leukosit yang sering dijumpai di pere- daran darah kakap putih adalah sel mono- sit, limfosit dan neutrofil. Persentase mo- nosit pada perlakuan A, B, C dan D jum- lahnya berkisar antara 7-11% (Gambar 1b). Persentase monosit menunjukkan pening- katan pada hari ke-0 hingga hari ke-45 pa- da semua perlakuan dan peningkatan ter- tinggi terjadi pada perlakuan B dan C pa- da hari ke-45 dengan persentase yang sa- ma yaitu sebesar 11%, hal tersebut menun- jukkan bahwa pemberian dosis jintan hi- tam yang berbeda tidak terlalu berpenga- ruh terhadap peningkatan persentase mo- nosit terlihat dari perlakuan A dengan do- sis 0 g jintan hitam/kg pakan juga meng- alami peningkatan pada hari ke-45 dengan persentase 10%. Adanya infeksi setelah uji tantang juga dapat menyebabkan terjadi- nya peningkatan sistem imun non spesifik pada ikan. Hal ini sesuai dengan penda- pat [10] yang mengatakan bahwa persenta- se monosit akan meningkat jumlahnya da- lam waktu yang singkat setelah adanya in- feksi dengan benda asing untuk melakukan proses fagositosis.
Limfosit merupakan jenis sel leukosit yang paling dominan di dalam populasi leuko- sit pada ikan. Persentase limfosit terlihat terjadi peningkatan pada semua perlakuan yang diberikan dosis jintan hitam diban- dingkan dengan perlakuan A yang tidak diberikan dosis jintan hitam (Gambar 1c). Peningkatan persentase limfosit tertinggi terjadi pada perlakuan C hari ke-45 yai- tu sebesar 86% (Gambar 1c). Peningkat- an sel limfosit ini diduga karena sel limfo-
sit teraktifasi oleh pemberian imunostimul- an secara langsung. Pada perlakuan C do- sis imunostimulan jintan hitam yang dibe- rikan terbukti dapat meningkatkan jumlah persentase limfosit yang sangat berperan dalam sistem pertahanan tubuh ikan seba- gai salah satu sel fagosit yang dapat mem- bunuh benda asing yang masuk ke dalam tubuh ikan [11]. Hal ini juga menguatkan penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh [12] menunjukan pemberian ekstrak jintan hitam sebagai imunostimulan mampu me- ningkatkan persentase limfosit secara sig- nifikan.
Persentase neutrofil mengalami penurun- an pada semua perlakuan dan persentase terendah terdapat pada perlakuan C yai- tu sebesar 5%. Jumlah neutrofil yang ren- dah di dalam sirkulasi darah akan diim- bangi dengan jumlah limfosit dan monosit yang tinggi. Faktor lain yang menyebabk- an rendahnya persentase neutrofil di dalam sirkulasi darah adalah jumlahnya yang me- mang sedikit sesuai dengan pendapat [9] yang mengatakan bahwa sel neutrofil sa- ngat jarang dijumpai pada ikan karena su- lit menyerap zat warna yang biasa digu- nakan. Penurunan persenatse neutrofil ju- ga terjadi pada penelitian yang dilakukan oleh [12] persentase neutrofil yang diamati mengalami penurunan pada semua perla- kuan baik kontrol maupun yang diberikan dosis jintan hitam. Hal ini mengindikasikan bahwa imunostimulan dari ekstrak jintan hitam tidak efektif dalam proses pening- katan persentase neutrofil dalam sirkulasi darah kakap putih.

## Pustaka
1. Maeno,Y., L.D.De La Peña and E.R. Cruz- Lacierda. 2004. Mass Mortalities Associated with Viral Nervous Necrosis in Hatchery- Reared Sea Bass Lates calcarifer in the Phi- lippines. JARQ 38: 69–73.
2. Philipose, K. K., Sharma, S.R.K., Sadhu, N., Vaidya, N.G. and Rao, G. S.. 2010. Some aspe- cts of nursery rearing of the Asian seabass ( La- tes calcarifer , Bloch) in indoor cement tanks. Indian J. Fish . 57: 61-64.
3. Chi, S. C. Wu, Y. C., Cheng, T. M. 2005. Per- sistent infection of betanodavirus in a novel cell line derived from the brain tissue of bar- ramundi Lates calcarifer . Dis Aquat Org . 65: 91–98.
Aulia Sonida 1 et al.
Gambar 1 Nilai parameter hematologi kakap putih ( Lates calcarifer ) a) total leukosit; b) monosit; c) limfosit; d) neutrofil dengan berbagai perlakuan: A: 0 g jintan hitam/kg pakan, B: 25 g jintan hitam/kg pakan; C: 50 g jintan hitam /kg pakan; D: 75 g jintan hitam /kg pakan.
Gambar 2 Diferensial Leuksoit: (E) eritrosit, (M) monosit, (L) limfosit, (N) neutrofil perbesaran 1000x
4. Matthaus, B. and Özcan, M.M. 2011. Fatty Acids, Tocopherol, and Sterol Contents of So- me Nigella Species Seed Oil. Czech J. Food Sci . 29: 145–150.
5. Salem, M.L. 2005. Immunomodulatory And Therapeutic Properties Of The Nigella sativa L. Seed. International Immunopharmacology
5:1749–1770
6. Johnny, F., Mahardika, K., Giri I.N.A. dan Roza, D. 2007. Penambahan Vitamin C dalam Pakan Untuk Meningkatkan Imunitas Benih Ikan Kerapu Macan, Epinephelus fuscogutta- tus terhadap Infeksi Viral Nervous Necrosis. Jurnal Akuakultur Indonesia 6: 43–53.
7. Septiarini, Harpeni, E. dan Wardiyanto. 2012.
Pengaruh Waktu Pemberian Probiotik Yang Berbeda Terhadap Respon Imun Non-Spesifik Ikan Mas ( Cyprinus carpio L .) yang Diuji Tantang Dengan Bakteri Aeromonas salmo- nicida . e-JRTBP 1: 39-46. 8. Tavares-Dias, M., Affonso, E.G., Oliveira, S.R., Marcon, J.L. and Egami, M. I. 2008. Comparative study on hematological parame- ters of farmed matrinxã, Brycon amazonicus Spix and Agassiz, 1829 (Characidae: Bryco- ninae) with others Bryconinae species. Acta Amazonica 38: 799-806 9. Harikrishnan, R., Rani, M. N. and Balasunda- ram, C. 2011. Impact of plant products on in-
nate and adaptive immune system of cultured finfish and shellfish. Aquaculture 317: 1–15. 10. Clauss, T.M., A.D.M. Dove, J.E. Arnold. 2008. Hematologic Disorders of Fish. Vet Clin Exot Anim . 11: 445–462. 11. Wintoko, F., Setyawan, A., Hudaidah, S dan Mahrus, A. 2013. Imunogenisitas Heat Killed Vaksin Inaktif Aeromonas salmonicida pada Ikan Mas ( Cyprinus carpio ). e-JRTBP 2: 205- 210 12. Saad, T.T., El-Geit, A., Hammady, E.N. E., A. K. I. and Zaki, M. S.. 2013. Effect of Black Cumin Seeds ( Nigella Sativa ) and / or Turme- ric ( Curcumin ) On Hematological, Biochemi- caland Immunological Parameters of Sea Bass Vaccinated with Pseudomonas Fluorescence Bacterin. Life Science Journal 10: 1292-1303.
Aulia Sonida 1 et al