Jurnal Nukleus Peternakan (Juni 2014), Volume 1, No. 1: 37 - 43                                         ISSN : 2355-9942

## SEPARASI SPERMATOZOA X DAN Y MENGGUNAKAN LEVEL ALBUMIN YANG BERBEDA SEBAGAI MEDIA PEMISAH SPERMATOZOA BABI

## (SEPARATION X AND Y BOAR’S SPERM USING DIFFERENT LEVELS OF ALBUMIN)
I Made A. Sudarma, W. Marlene Nalley, Henderiana L.L. Belli, Aloysius Marawali
Fakultas Peternakan, Universitas Nusa Cendana Jl.Adisucipto, Penfui, Kupang. 8500, (0380) 881084 E-mail: adi_dharma17@yahoo.com

## ABSTRAK
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mempelajari pengaruh penggunaan albumin dengan tingkat yang berbeda untuk memisahkan spermatozoa X dan Y sebagai media  untuk memisahkan sperma babi  jantan.  Sperma  dipisahkan  menggunakan  tingkat  yang  berbeda  dari  albumin  dengan  4 perlakuan: rasio antara fraksi atas dan fraksi bawah: 10 dan 30%, 10 dan 40%, 10 dan 50%, 10 dan 60% selama 1 jam. Hasil penelitian menunjukkan bahwa proporsi terbaik sperma X oleh fraksi di semua  pelakuan,  dan  juga  proporsi  terbaik  dari  sperma  Y  oleh  fraksi  bawah  pada  semua  lokasi. Proporsi X:Y dari semen segar (51,68: 48,32 ± 2,66) berbeda (P <0,05) dibandingkan dengan setiap perlakuan sampai fraksi atas (T1 – 74,02: 25,98 ± 5 , 65); T2 – 64,14: 35,86 ± 3,41); T3 – 62,29: 37,71 ± 3,98), dan T4 – 59,26: 40,74 ± 4,33)) dan juga fraksi bawah (T1 – 38,13: 61,87 ± 7,69); T2 – 35,48: 64,52 ± 6,11); T3 – 30,37: 69,63 ± 4,93); dan T4 – 26,41: 73,59 ± 4,54)). Viabilitas dan kelainan  sperma  setelah  dipisahkan  tidak  berbeda  dalam  setiap  perlakuan.  Konsentrasi  sperma setelah  perpisahan  di  fraksi  atas  lebih  dari  fraksi  bawah  di  semua  perlakuan.  Sperma  babi  tidak terpisah  selama  serangkaian  perlakuan  dari  proses  pencucian  hingga  proses  pemisahan  dalam media albumin yang mengakibatkan penurunan motilitas sperma dari 73 ± 3% menjadi 6,5 ± 0,58% pada fraksi atas pada perlakuan pertama sampai 3 ± 0,82% di fraksi bawah pada perlakuan keempat di  akhir  pemisahan.  Disimpulkan  bahwa  perlakuan  terbaik  untuk  mendapatkan  sperma  X  oleh konsentrat  10  dan  30%  sedangkan  sperma  Y  yang  oleh  konsentrat  10  dan  60%,  sperma  setelah perpisahan baik fraksi atas maupun fraksi bawah memiliki motilitas yang sangat rendah.
Kata kunci : sperma babi jantan, pemisahan, albumin, motilitas

## ABSTRACT
The aim of this research  was to study the effect of using  albumin  with different level to  separate spermatozoa X and Y as medium to separate boar’s sperm. Sperm separated using different level of albumin  with  4  treatments:  ratio  between  up  fraction  and  bottom  fraction:  10  and  30%  ,  10  and 40%, 10  and  50%,  10  and  60%  during  1  hour.  The  results  showed  that  the  best  proportion  of    X sperm  were  by  up  fraction  in  all  treatments,  and  also  the  best  proportion  of  Y  sperm  were  by bottom fraction in all treatments.  The proportion of X : Y from fresh semen  (51,68 : 48,32±2,66) were different (P < 0,05) compared to each treatment of up fraction (T 1 – 74,02: 25,98±5,65); T 2 – 64,14  :  35,86±3,41);  T 3 –  62,29  :  37,71±3,98);  and  T 4 –  59,26  :  40,74±4,33))  and  also  bottom fraction  (T 1 –  38,13  :  61,87±7,69);  T 2 –  35,48  :  64,52±6,11);  T 3 –  30,37  :  69,63±4,93);  and  T 4 – 26,41  :  73,59±4,54)). Viability  and  abnormality  of  sperm  after  separated  had  no  different  in  each treatment. The sperm concentration after separation at up fraction was more than bottom fraction in all  treatment.  The  boar  sperm  was  not  defend  to  a  series  of  treatment  from  washing  process  until separation  process  within  albumin  medium  that  resulted  in  decreasing  the  sperm  motility  from 73±3%  to 6,5±0,58%  in  up  fraction  at  first  treatment  up  to  3±0,82%  in  bottom  fraction  at  fourth treatment in the end of separation.  It  can be  concluded that the best treatment to get the  X sperm were  by  concentrate  10  and  30%  where  as    the  Y  sperm  were  by  concentrate  10  and  60%,  the sperm after separation in either up or bottom fraction had  very low motility.
Key words : boar’s sperm, separation, albumin, motility
Sudarma et al : Separasi Spermatozoa x dan y menggunakan level albumin pada spermatozoa babi

## PENDAHULUAN
Ternak  babi  merupakan  jenis  ternak  yang cukup  penting  bagi  para  peternak  kecil  di Provinsi  Nusa  Tenggara  Timur  (NTT).  Secara tradisional  ternak  babi  memainkan  peran penting  dalam  berbagai  kegiatan  sosial, budaya,  keagamaan  dan  sebagai  sumber protein  dalam  kehidupan  masyarakat  NTT khususnya  di  daratan  Sumba.  Pemanfaatan faktor-faktor  produksi  termasuk  penerapan bioteknologi  secara  efisien  dan  efektif  sangat diperlukan dalam usaha peternakan babi. Salah satu  penerapan  bioteknologi  dalam  bidang reproduksi yang sudah cukup banyak dimanfaatkan adalah teknologi separasi (pemisahan) spermatozoa.
Separasi  spermatozoa  X  dan  Y  yang digunakan  dalam  menentukan  jenis  kelamin ternak  sebelum  dilahirkan  didasarkan  atas adanya  keuntungan  ekonomis  dan  efisiensi. Sekarang ini, penggunaan separasi spermatozoa  yang  mudah  dan  ekonomis  sudah banyak  digunakan,  sudah  lebih  dari  50  kelinci dilahirkan  dengan  jenis  kelamin  yang  sudah ditentukan  dan  diperkirakan  sekitar  30.000 hewan  telah  dilahirkan  menggunakan  sperma hasil separasi (Hamano, 2007).
Separasi  spermatozoa  adalah  suatu  metoda yang  digunakan  untuk  mengubah  proporsi perolehan  spermatozoa  yang  berkromosom sejenis  (X  atau  Y)  dengan  metode  tertentu, sehingga  berubah  dari  proporsi  normal  (rasio alamiah),  50%  banding  50%  (Henri,  1992). Dengan  adanya  bioteknologi  reproduksi  ini, para  peternak  pada  pembibitan  ternak  babi dapat  menentukan  jenis  kelamin  anak  untuk memenuhi  permintaan  konsumen.  Selain  itu, peternak juga biasanya lebih berharap memperoleh  jumlah  ternak  babi  betina  yang lebih banyak dibandingkan ternak jantan untuk
dapat diseleksi dan digunakan sebagai pengganti induk betina yang akan diafkir. Separasi  spermatozoa  didasarkan  pada perbedaan  luas  kepala  sperma,  panjang  kepala dan kandungan DNA serta gerakan spermatozoa. Dimana spermatozoa Y memiliki luas  kepala  yang  lebih  kecil  dan  ringan dibanding  spermatozoa  X,  ukuran  panjang kepala  spermatozoa  Y  lebih  pendek  dengan kandungan  DNA  yang  lebih  rendah  dan gerakan yang lebih cepat dibanding spermatozoa X (Saili, 1999).
Metode  separasi  spermatozoa  yang  sudah banyak diteliti dan berhasil dilakukakan adalah metode  albumin  column  menggunakan  larutan BSA  ( Bovine  Serum  Albumin ),  namun  karena harga  BSA  yang  kurang  ekonomis,  maka dalam penelitian ini diganti dengan penggunaan  albumin  telur  sebagai  media pemisah spermatozoa. Hafez (2000) menyatakan  bahwa  pemisahan  spermatozoa  X dan  Y  dengan  menggunakan  metode  kolom yang  mengandung  larutan  BSA  didasarkan pada perbedaan motilitas (kecepatan pergerakan)  antara  spermatozoa  X  dan  Y dalam  menembus  larutan  yang  mengandung albumin.  Penggunaan  putih  telur  secara  umum tanpa membedakan bagiannya (albumin) sebagai medium pemisahan spermatozoa dianggap cukup layak (Saili et al ., 2000).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui pengaruh  perbandingan  albumin  dengan  level yang  berbeda  sebagai  media  pemisah  dalam separasi spermatozoa X dan Y pada ternak babi serta untuk mengetahui motilitas, viabilitas dan abnormalitas  spermatozoa  babi  yang  telah mengalami proses pemisahan dengan menggunakan medium albumin.

## MATERI DAN METODA
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Biologi  Reproduksi  dan  Kesehatan  Hewan Fakultas Peternakan Undana.
Bahan  dan  alat  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah semen babi VDL, albumin telur,  eosin  2.0%,  eosin-negrosin,  aquabidest,
alkohol  70%,  medium  BO  ( Bracket  Oliphant ), botol penampung, corong gelas, saringan, gelas ukur,  kertas  lakmus,  pipet,  objek  glass,  cover glass, pipet  haemocytometer dan kamar  hitung Neubauer, pemanas, counter , inferted mikroskop, timbangan analitik, spatula,
magnetic  stirrer ,  tabung  erlenmeyer,  cawan petri, pipet berskala, tabung reaksi, rak tabung, centrifuge , gelas beaker , mikro pipet dan spoit.

## Prosedur penelitian

## Persiapan alat dan bahan
Alat  dan  bahan  yang  diperlukan  untuk evaluasi  semen  dan  separasi  spermatozoa disiapkan sehari sebelum pelaksanaan penelitian.  Pembuatan  medium  BO  dilakukan 12  jam  sebelum  digunakan  dalam  proses separasi.  Pembuatan  konsentrasi  albumin dengan level yang berbeda dilakukan pada saat pencucian semen.

## Penyiapan semen
Semen  ditampung  pada  pagi  hari  kemudian dibawa  ke  laboratorium  untuk  dievaluasi secara  makroskopis  (volume,  konsistensi, warna,  pH  dan  bau)  dan  mikroskopis  (gerakan massa, persentase motilitas, konsentrasi,
persentasi
viabilitas dan persentase abnormalitas).

## Separasi spermatozoa
Metode  pemisahan  spermatozoa  dilakukan menurut  Saili  (1999)  dengan  prosedur  sebagai berikut:  semen  ejakulat  dicuci  dengan  cara penambahan  medium  BO  dan  disentrifugasi dengan  kecepatan  2.500  rpm  selama  10  menit. Endapan spermatozoa yang diperoleh diencerkan dengan menambahkan medium BO hingga konsentrasi 100 juta sel motil/mL. Satu milliliter  sampel  spermatozoa  dimasukkan kedalam  masing-masing  tabung  yang  telah berisi  kolom  albumin  bertingkat  sesuai perlakuan,  kemudian  dibiarkan  pada  suhu ruang selama satu jam. Sisa sperma yang tidak turun  pada  bagian  atas  dikeluarkan  dan  fraksi semen bagian atas dipisahkan dari fraksi semen bagian  bawah  dengan  cara  menyedot  masing- masing fraksi menggunakan spoid dan ditampung  dalam  tabung centrifuge ,  kemudian dicuci  menggunakan  medium  BO  dengan sentrifugasi  pada  kecepatan  2.500  rpm  selama 10 menit.

## Evaluasi spermatozoa secara morfometrik
Preparat  ulas  sperma  dibuat  dari  masing- masing  fraksi  semen  dengan  pewarnaan menggunakan eosin-negrosin. Pengukuran luas
kepala sperma dilakukan menggunakan inferted mikroskop pembesaran 40x. Pengukuran  ini  dilakukan  menggunakan tools pengukuran  luas  ( outline )  dengan  jalan melingkari  luas  pinggir  kepala  sperma  yang sudah  diperbesar  menggunakan  bantuan tools navigator dengan  pembesaran  500%.  Jumlah sperma  yang  dihitung  dari  masing-masing fraksi  minimal  100  sel  sperma  dengan  kontrol sebanyak  minimal  200  sperma.  Sel  sperma dikategorikan  sebagai  sperma  X  jika  luas ukuran  kepala  lebih  besar  dari  kontrol sedangkan  bila  berukuran  lebih  kecil  dari kontrol dikategorikan sebagai sperma Y (Saili, 1999).

## Variabel yang diukur
Variabel  utama:  (1)  persentase  motilitas spermatozoa  hasil  separasi  yang  diamati  pada setiap  fraksi  terhadap  spermatozoa  yang bergerak  progresif  yang  ditentukan  secara subjektif  pada  sepuluh  lapang  pandang berbeda.  (2)  viabilitas  dan  abnormalitas spermatozoa hasil separasi dilakukan menggunakan  preparat  ulas  dengan  pewarnaan eosin-negrosin. Viabilitas spermatozoa diketahui  dengan  jalan  mengamati  kepala spermatozoa  dimana  spermatozoa  hidup  tidak menyerap  warna,  sedangkan  spermatozoa  mati menyerap warna (kepala spermatozoa berwarna  merah).    Abnormalitas  spermatozoa diamati  terhadap  bentuk  morfologi  sperma- tozoa  yang  tidak  normal  baik  abnormalitas primer  maupun  sekunder.  (3)  Persentasi spermatozoa  X  dan  Y  baik  sebelum  maupun sesudah  separasi  dilakukan  dengan  teknik pengukuran  secara  morfometrik  terhadap  luas kepala spermatozoa minimal 200 sperma untuk sperma kontrol dan minimal 100 sperma untuk sperma hasil separasi.
Variabel pendukung: (1) pemeriksaan makroskopis  (volume,  warna,  konsistensi,  pH, dan  bau  semen)  terhadap  semen  ejakulat;  (2) pemeriksaan  mikroskopis  (gerakan  massa, motilitas, konsentrasi, viabilitas dan abnormalitas  spermatozoa)  terhadap  semen ejakulat;  (3)  konsentrasi  spermatozoa  hasil separasi; dan (4) motilitas  spermatozoa  setelah sentrifugasi.

## Rancangan percobaan dan analisis data
Rancangan  percobaan  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  Rancangan  Acak Lengkap  (RAL)  yang  terdiri  dari  5  perlakuan
dan 4 ulangan. Data yang terkumpul dianalisis dengan  menggunakan Analisis  Of  Variance (ANOVA), dan dilanjutkan dengan uji Fisher’s LSD (Steel and Torrie,  l995).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Karakteristik Semen Segar
Evaluasi  terhadap  semen  baik  secara makroskopis  maupun  mikroskopis  dilakukan segera  setelah  proses  penampungan  semen. Hasil  evaluasi    menunjukkan  bahwa  semen yang  diperoleh  dari  4  kali  penampungan mempunyai kualitas yang cukup baik, sehingga layak untuk digunakan dalam proses pemisahan spermatozoa.  Hasil  rataan  dari   4 kali  penampungan semen babi VDL (Tabel 1).

## Proses separasi
Semen yang layak untuk digunakan kemudian dicuci dengan menggunakan medium  BO  dan  disentrifuse.  Selama  proses sentrifugasi  dilakukan  pembuatan  konsentrasi albumin  dengan  level  yang  berbeda.  Sperma hasil pengenceran dengan medium BO di amati persentase  motilitasnya  dan  jika  motilitas >60% maka dapat dilanjutkan ketahap separasi, yakni  sperma  dimasukkan  kedalam  masing- masing tabung konsentrasi albumin.
Pada  15  menit  pertama  separasi,  sperma pada setiap konsentrasi albumin mulai menembusi lapisan 10% yang terdapat dibawahnya.  Pada  menit  ke-30,  sperma  pada konsentrasi  10  dan  30%  sudah  banyak
menembusi  lapisan  30%  dan  pada  konsentrasi 10  dan  40%  masih  sedikit  sperma  yang menembusi lapisan 40% sedangkan konsentrasi 10  dan  50%  serta  10  dan  60%  masih  belum ditembusi  sperma  pada  lapisan  bawah  50  dan 60%.  Pengamatan  separasi  pada  menit  ke-45 memperlihatkan  dimana  sudah  banyak  sperma yang  menembusi  lapisan  bawah  30  dan  40% namun  masih  sedikit  sperma  yang  menembusi lapisan  bawah  50  dan  60%.  Pada  akhir separasi, masing-masing konsentrasi membentuk  3  lapisan  yakni  lapisan  encer bagian  paling  atas  (sperma  sisa),  lapisan  padat sperma  bagian  tengah  (lapisan  10%)  dan lapisan sperma padat hingga encer pada bagian bawah (lapisan 30,40,50 dan 60%).
Hasil  ini  sesuai  dengan  pernyataan  Ningsih (2007) bahwa banyak sperma Y yang memiliki motilitas  lebih  tinggi  akan  lebih  dahulu menembusi  lapisan  yang  lebih  kental  pada awal  separasi  sedangkan  dengan  berjalannya waktu  inkubasi,  konsentrasi  sperma  Y  akan berkurang karena mulai masuknya spermatozoa  X  pada  konsentrasi  tersebut, namun  semakin  tinggi  konsentrasi  albumin akan  semakin  sukar  bagi  sperma  untuk menembusinya.
Tabel 1. Nilai karakteristik semen segar babi
Karakteristik semen Nilai rataan Hasil penelitian lain Nilai Peneliti Volume (ml) 108,75±15,48 100 - 500 Rozeboom (2000) pH 6,88±0,15 7,4 ± 0,2 Gadea (2003) Motilitas (%) 73±3 50-80% Hafez (2000) Konsentrasi (10 6 sel/ml) 527,5±23,63 200-600 Cole dan Cupps (1997) Viabilitas (%) 87,87±1,07 87,70±6,34 Sumardani (2007) Abnormalitas (%) 17,83±2,01 < 20% Toelihere (1993)
Keterangan: SS: Semen segar (kontrol); S1: Semen setelah dicuci dengan cara sentrifugasi; A30: Semen fraksi atas 10:30%; B30: Semen fraksi bawah 10:30%; A40: Semen fraksi atas 10:40%; B40: Semen fraksi bawah 10:40%; A50: Semen fraksi atas 10:50%; B50: Semen fraksi bawah 10:50%; A60: Semen fraksi atas 10:60%; B60: Semen fraksi bawah 10:60%.
Sperma  hasil  separasi  dipisahkan  masing- masing menurut lapisan konsentrasi albuminnya,  kemudian  dicuci  menggunakan medium  BO  dan  disentrifugasi.  Setelah sentrifugasi  larutan  supernatan  dibuang  dan ditambahkan  lagi  medium  BO  selanjutnya dilakukan  pengujian  kualitas  dan  perhitungan luas kepala sperma.

## Motilitas spermatozoa hasil separasi
Motilitas  adalah  kemampuan  spermatozoa untuk  bergerak  maju  (progresif).  Daya  gerak progresif sangat menentukan kualitas spermatozoa  dalam  hubungannya  dengan kemampuan  fertilisasi  spermatozoa.  Energi yang digunakan untuk pergerakan spermatozoa tersimpan  dalam  bentuk  ATP.  Senyawa  ini akan  dihidrolisis  oleh  suatu  molekul  protein besar, dynein yang  terdapat  pada  mikrotubul bagian  luar.  Hidrolisis  ATP  oleh dynein akan menghasilkan  energi  bagi  gerakan  mekanik meluncur  atau  melilit  mikrotubul.  Mikrotubul bagian dalam atau pusat  berfungsi sebagai alat pacu gerakan silia (Saili, 1999).
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa motilitas spermatozoa setelah separasi mengalami  penurunan  yang  sangat  nyata  (P  < 0,01)  terlihat  pada  semua  perlakuan.  Fraksi atas pada semua perlakuan tidak berbeda nyata P 1 (6,50±0,58); P 2 (6,25±0,96); P 3 (6,00±0,82); P 4 (5,75±0,50),  demikian  juga  terjadi  pada  P 1 (4,75±0,50)  dan  P 2 (4,00±0,82)  pada  fraksi bawah, namun berbeda sangat nyata dibanding P 3 (3,25±0,50) dan P 4 (3,00±0,82; Tabel 3). Persentase  motilitas  spermatozoa  pada semen  segar  setelah  pencucian  mengalami sedikit  penurunan.  Penurunan  nilai  persentase motilitas ini masih wajar walaupun permatozoa telah  mengalami  perlakuan  pencucian  dengan cara  disentrifugasi  dan  plasma  semen  diganti dengan  medium  BO.  Proses  pencucian  yang berakibat pada pengurangan konsentrasi plasma  semen  dan  menggantinya  dengan medium BO merupakan faktor yang menyebabkan  menurunnya  nilai  motilitas spermatozoa, bila dihubungkan dengan ketersediaan  sumber  energi  bagi  spermatozoa, walaupun  di  dalam  medium  BO  itu  sendiri terdapat glukosa (Saili et al ., 2000).
Harrison et  al .  (1978)  melaporkan  bahwa motilitas  spermatozoa  akan  menurun,  jika plasma semennya diganti dengan medium lain. Selain  itu,  kerusakan  membran  plasma  akan berpengaruh  langsung  terhadap  ketersediaan sumber  energi  bagi  pergerakan  spermatozoa yang pada akhirnya akan menurunkan persentase spermatozoa motil. Motilitas spermatozoa  pada  penelitian  ini  menurun  dari 73±3%  menjadi  65±4,08%  setelah  dibiarkan selama  2  jam  dengan  suhu  yang  sama  pada proses  pemisahan.  Hal  ini  sejalan  dengan penelitian  Saili  (1999)  dimana  penurunan motilitas  spermatozoa  dengan  medium  BO tanpa  mengalami  proses  pemisahan  menurun dari 75 % menjadi 65%.
Persentase  motilitas  spermatozoa  setelah pemisahan mengalami penurunan drastis dimana  kebanyakan  spermatozoa  bergerak ditempat  (vibra).  Hal  ini  diduga  disebabkan oleh  daya  gerak  dan  jarak  yang  ditempuh spermatozoa untuk menembusi lapisan albumin yang berhubungan erat dengan jumlah penggunaan  energi.  Spermatozoa  yang  banyak menggunakan energi akan menurunkan motilitas  sampai  tidak  bergerak  walaupun spermatozoa tersebut belum mati (Saili, 1999). Penurunan  persentase  motilitas  spermatozoa setelah  pemisahan  juga  diduga  karena  sperma babi  tidak  tahan  terhadap  medium  albumin, waktu  separasi  yang  panjang  (satu  jam) didalam  lapisan  albumin,  kecepatan  dan  lama sentrifugasi yang mengakibatkan sperma kehilangan banyak energi sehingga
menurunkan  tingkat  motilitas  spermatozoa tersebut.

## Viabilitas spermatozoa hasil separasi
Persentase  viabilitas  spermatozoa  babi  hasil separasi dapat dinilai dengan menggunakan zat pewarna
eosin-negrosin. Permukaan
spermatozoa  dibungkus  oleh  suatu  membran lipoprotein  yang  mana  bila  spermatozoa  mati akan meningkatkan permeabilitas membrannya terutama  di  daerah  pangkal  kepala  (Feradis, 2010).  Hal  ini  merupakan  dasar  pewarnaan semen  dimana  spermatozoa  yang  hidup  tidak akan  menyerap  zat  warna,  sehingga  tetap bening.  Sedangkan,  spermatozoa  yang  mati
akan  menyerap  warna,  sehingga  berwarna merah.
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa viabilitas  spermatozoa  setelah  separasi  baik fraksi atas maupun bawah mengalami penurunan  dibanding  spermatozoa  sebelum separasi namun viabilitas spermatozoa sebelum separasi tidak berbeda nyata dengan fraksi atas dan  bawah  pada  semua  perlakuan  kecuali fraksi  bawah  pada  perlakuan  kedua  (Tabel  2). Hasil  penelitian  ini  tidak  jauh  berbeda  dengan hasil  yang  dilaporkan  Enok  (2006)  bahwa  ada penurunan  viabilitas  spermatozoa  ejakulat dengan  spermatozoa  hasil  separasi  baik  fraksi atas maupun bawah berturut-turut 90,38; 84,31 dan  82,25%.  Hal  ini  diduga  disebabkan  oleh sejumlah  perlakuan  pemisahan  dan  jarak  yang harus  ditempuh  oleh  spermatozoa  sehingga banyak  energi  yang  dikeluarkan  dan  membuat sperma kehilangan tenaga bahkan mati.

## Abnormalitas  spermatozoa  hasil
separasi
Dalam penelitian ini ditemukan abnormalitas spermatozoa berupa macrocephalic ,  kepala  menyempit,  kepala melebar,  ekor melipat,  kepala tanpa  ekor,  ekor tanpa kepala dan sitoplasmic droplet . Abnormalitas  spermatozoa  setelah  separasi mengalami  penurunan  dibandingkan  dengan abnormalitas sebelum separasi namun penurunan  kualitas  ini  tidak  menunjukkan
perbedaan  nyata  baik  pada  fraksi  atas  maupun bawah pada semua perlakuan (Tabel 2).
Hasil penelitian ini sedikit berbeda dengan hasil yang dilaporkan  Afiati  (2004) bahwa ada penurunan  persentase  abnormalitas  sperma yang  tidak  dipisahkan  (2,17%)  lebih  rendah dibanding  persentase  abnormalitas  sperma  X (6,32%) dan sperma Y (7,91%).  Hal ini diduga dikarenakan medium albumin tidak berpengaruh terhadap morfologi sperma sedangkan penurunan kualitas ini dimungkinkan  karena  adanya  perlakuan  pada saat  penampungan  hingga  evaluasi  sperma hasil separasi.
Hasil evaluasi spermatozoa secara morfometrik
Untuk  membedakan  sperma  yang  diprediksi sebagai sperma X dan Y, maka nilai dari setiap luas  kepala  sperma  pada  setiap  perlakuan dibandingkan dengan nilai rata-rata luas kepala sperma kontrol. Nilai yang lebih kecil dari rata- rata  luas  kepala  sperma  kontrol  digolongkan sperma  Y  sedangkan  yang  lebih  besar digolongkan sperma X (Saili, 1999).
Berdasarkan  hasil  perhitungan  diketahui bahwa  rata-rata  spermatozoa  dengan  ukuran luas  kepala  <34,445µm 2 termasuk  spermatozoa Y,  sedangkan  spermatozoa  dengan  ukuran  luas kepala  >34,445µm 2 termasuk  spermatozoa  X (Tabel 3).
Tabel 2.  Rataan konsentrasi dan persentase motilitas spermatozoa berbagai fraksi dari beberapa kombinasi konsentrasi medium pemisahan. Perlakuan Fraksi Semen Konsentrasi (juta/ml) Motilitas (%) Viabilitas (%) Abnormalitas (%) Kontrol (P 0 ) SS 527,50±23,63 73,00±3,00 87,87±01,07 x 17,83±02,01 z S1 132,50±5,00 65,00±4,08 a P 1 A30 62,50±5,00 6,50±0,58 b 87,13±04,67 x 22,27±08,52 z B30 52,50±5,00 4,75±0,50 bcd 82,29±04,48 xy 21,91±12,03 z P 2 A40 75,00±5,77 6,25±0,96 b 78,77±04,29 xy 24,61±10,06 z B40 45,00±5,77 4,00±0,82 bcde 77,61±04,74 y 22,63±07,25 z P 3 A50 85,00±5,77 6,00±0,82 b 79,87±03,89 xy 22,93±05,02 z B50 35,00±5,77 3,25±0,50 cde 79,38±04,32 xy 21,99±09,46 z P 4 A60 82,50±15,00 5,75±0,50 bc 82,97±06,02 xy 23,65±09,72 z B60 25,00±5,77 3,00±0,82 de 81,84±11,60 xy 20,54±10,52 z
Sudarma et al : Separasi Spermatozoa x dan y menggunakan level albumin pada spermatozoa babi
Tabel 3.  Persentase spermatozoa didalam berbagai fraksi semen yang diprediksi membawa kromosom X dan Y sesuai luas kepalanya.
Perlakuan Fraksi semen Luas kepala spermatozoa (rataan ± sd, µm) Persentase jenis spermatozoa X Y P 0 S1 34,445±0,274 51,68±2,66 a 48,32±2,66 a P 1 A30 36,163±0,502 74,02±5,65 b 25,98±5,65 c B30 33,607±0,350 38,13±7,69 c 61,87±7,69 d P 2 A40 35,429±0,347 64,14±3,41 d 35,86±3,41 b B40 33,508±0,386 35,48±6,11 c 64,52±6,11 d P 3 A50 35,034±0,111 62,29±3,98 d 37,71±3,98 b B50 33,399±0,408 30,37±4,93 ce 69,63±4,93 df P 4 A60 35,342±0,380 59,26±4,33 d 40,74±4,33 b B60 33,035±0,132 26,41±4,54 e 73,59±4,54 f
Keterangan: a,b,c,d,e,f superskrip berbeda dalam kolom yang sama menunjukkan berbeda nyata (P < 0,05).
Hasil  analisis  menunjukkan  bahwa  baik medium  dengan  konsentrasi  albumin  30,  40, 50  maupun  60%  mampu  mengubah  proporsi perolehan  spermatozoa  dari  kondisi  normal (kontrol).  Hasil  uji  statistik  menunjukkan bahwa  ada  perbedaan  nyata  (P<0,05)  proporsi spermatozoa  X  :  Y  pada  kontrol  P 0 (51,68  : 48,32±2,66)  dengan  semua  perlakuan  baik pada fraksi atas P 1 (74,02 : 25,98±5,65); P 2 (64,14:  35,86±3,41);  P 3 (62,29:  37,71±3,98); dan P 4 (59,26: 40,74±4,33) dan fraksi bawah P 1 (38,13:  61,87±7,69);  P 2 (35,48  :  64,52±6,11); P3(30,37: 69,63±4,93); dan P 4 (26,41:
73,59±4,54). Hasil penelitian ini juga menunjukkan    bahwa  fraksi  semen  dengan konsentrasi  spermatozoa  Y  yang  tertinggi terdapat  pada  B60  dengan  nilai  73,59% sedangkan  fraksi  semen  dengan  konsentrasi spermatozoa  X  yang  tertinggi  terdapat  pada A30 dengan nilai 74,02%.
Hasil  penelitian  ini  sejalan  dengan  hasil penelitian  Afiati  (2004)  yang  melaporkan adanya  perbedaan  nyata  proporsi  spermatozoa X:Y pada sperma kontrol (43:57) dengan fraksi atas  kolom  albumin  30%  (80,88:19,21)  dan fraksi  bawah  (41,80:58,82).  Saili  (1999)
melaporkan bahwa penggunaan albumin sebagai  media  pemisah  spermatozoa  mampu mengubah  proporsi  perolehan  spermatozoa  X  : Y  dari  (50,50:49,50)  menjadi  (71:29)  pada fraksi atas dan (26,50:73,50) pada fraksi bawah kolom albumin 50%.
Hal  ini  terjadi  karena  dengan  tingginya konsentrasi  albumin  pada  B60  menyebabkan hanya  spermatozoa  dengan  motilitas  tinggi  dan luas  kepala  yang  lebih  kecil  yang  mampu menembusinya.  Sebaliknya,  dengan  rendahnya perbandingan  konsentrasi  albumin  pada  A30 menyebabkan  banyak  spermatozoa  motil  yang dapat  menembusinya  sehingga  hanya  sedikit spermatozoa  dengan  motilitas  tinggi  dan  luas kepala  lebih  kecil  yang  tertahan  di  lapisan tersebut. Goodal dan Roberts (1976)
menyatakan  bahwa  spermatozoa  Y  lebih  motil dibanding  spermatozoa  X.  Selain  itu,  hasil penelitian Ke-Hui dan Matthew (1993) menunjukkan  bahwa  ukuran  luas  kepala spermatozoa  X  6  %  lebih  besar  dibanding spermatozoa  Y.  Dengan  adanya  perbedaan  ini, maka  dapat  diperkirakan  bahwa  berat  dan kecepatan geraknya juga akan berbeda.

## SIMPULAN
Motilitas  spermatozoa  hasil  separasi  tidak berada  pada  kisaran  kualitas  spermatozoa untuk tujuan inseminasi secara invivo. Viabilitas  dan  abnormalitas  spermatozoa  babi tidak  mengalami  penurunan  kualitas  yang nyata  setelah  separasi  dengan  media  albumin. Penggunaan  albumin  sebagai  media  pemisah spermatozoa babi cukup efektif untuk
mengubah  rasio  perolehan  sperma  normal  X  : Y (51,68:48,32) pada semua perlakuan dengan konsentrasi  albumin  bertingkat  10:30;  40;  50; dan  60%  dimana  sperma  X  tertinggi  terdapat pada fraksi atas kolom albumin 30% (74,02%) dan  sperma  Y  tertinggi  terdapat  pada  fraksi bawah kolom albumin 60% (73,59%).

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  yang  sebesar-besarnya kami  sampaiakn  ke  DP2M  Dikti  yang  telah
membiayai penelitian ini melalui Hibah Stategi Nasional Bacth II tahun 2009.

## DAFTAR PUSTAKA
Afiati  F.  2004.  Proporsi  dan  Karakteristik Spermatozoa  X  dan  Y  Hasil  Separasi Kolom  Albumin. Media  Peternakan 27 (1): 16-20.
Enok  M.  2006.  Pemisahan  sperma  pembawa kromosom  X  dan  Y  Sapi  dengan  Kolom Media  Pemisah  Albumin.  Prosiding  temu Teknis Nasional Tenaga Fungsional Pertanian. pp: 225-231.
Feradis.  2010.  Reproduksi  Ternak.  Edisi
Pertama. Alfabeta, Bandung.
Goodall  H.  and      Roberts  AM.    1976. Difference in   motility  of  human  X and Y  bearing  spermatozoa. J  Rep  Fert 48:433-436.
Hafez  ESE.  2000. Reproduction  in  farm animals .  7 th Ed.  Lea  and  Febiger,
Philadelphia.
Hamano  K.I.  2007.  Sex  preselection  in  bovine by  separation  of  X-  and  Y-  chromosome bearing  spermatozoa. J  Rep    De v  53  (1): 27-38.
Henri.  1992.  Usaha  mengubah  rasio  sperma  X & Y dengan metode kolom menggunakan larutan    BSA  dan  penilaian  angka kebuntingan    serta    perbandingan    jenis
kelamin      anak      pada  kambing. Thesis . Fakultas  Pasca  Sarjana,  Institut  Pertanian Bogor, Bogor.
Ke-hui  C.  1997.  Size  differences  between human  X  and  Y  spermatozoa  and prefertilization diagnosis. Molecular
Human Reproduction 3(1): 61-67.
Ningsih  Z.  2007.  Proporsi  spermatozoa  X  dan Y kambing Peranakan Etawa (PE) dengan konsentrasi putih  telur dan lama  inkubasi. Skripsi . Universitas  Islam Negeri Malang, Malang.
Saili  T.  1999. Efektivitas  penggunaan  albumin sebagai  medium  separasi  dalam  upaya mengubah  rasio  alamiah  spermatozoa pembawa  kromosom  X  dan  Y  pada  sapi. Thesis .  Fakultas  Pasca  Sarjana,  Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Saili  T,  Toelihere  MR,  Boediono  A,  Tappa  B.
2000. Effectivity of albumin as separation media    for  X  and  Y  chromosome-bearing bovine  spermatozoa. Journal  Hayati 7(4):106-109.
Toelihere  MR.  1993. Inseminasi  Buatan  Pada Ternak . Angkasa, Bandung.