Jurnal Hasil Penelitian Bidang Ilmu Akuakultur ISSN 2503-4766 (Print) ISSN 2597-8837 (Online) DOI 10.33087/akuakultur.v9i1.191
Publisher by : Program Studi Budidaya Perairan Fakultas Pertanian Universitas Batanghari
Identifikasi kandungan serbuk simplisia Eleutherine bulbosa dan potensinya terhadap probiotik Pro-Kj secara in-vitro untuk akuakultur
*1 Waode Munaeni, 1 Aras Syazili, dan 2 Disnawati
1 Program Studi Akuakultur, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Khairun, Ternate, Indonesia, 97711
2 Program Studi Manajemen Sumberdaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Khairun, Ternate, Indonesia, 97711
*1 e-mail korespondensi: waode.munaeni@unkhair.ac.id; unalaspan@yahoo.co.id
Abstract. The use of herbal medicines and probiotics in cultivation has now been widely used and proven to be able to improve growth  performance  and  disease  resistance,  such  as  in  herbal  plants  from  Eleutherine  bulbosa.  However,  there  is  no information  about  E.  bulbosa  simplicia  powder  and  its  potential  if  fermented  together  with  Pro-KJ  probiotics.  This  research aims to determine the phytochemical content and other compounds of the herbal medicine forest onion as well as its prebiotic potential  for  Pro-KJ  probiotics  in  vitro.  The  parameters  observed  in  this  study  were  qualitative  phytochemical  identification using  the  color  visualization  method,  proximate  detection  using  the  gravimerti  method,  and  total  bacteria  detection  using  the Total  Plate  Count  (TPC)  method.  Three  levels  of  simplicia  powder  doses  were  tested  using  the  Pro-KJ  probiotic  co-culture method,  namely  doses  of  0.625%,  1.25%,  and  2.5%,  as  well  as  control  or  without  the  addition  of  E.  bulbosa.  The  research results  showed  that  the  phytochemical  screening  of  simplicia  powder  from  E.  bulbosa  was  positive  for  containing  flavonoids, saponins,  and  steroids,  while  other  compounds  such  as  protein  (11.33%),  water  content  (9.59%),  ash  content  (4.66%),  fat content  (2.51%), and  crude fiber  (1.75%). The results of  the joint culture of  simplicia powder with  pro-KJ probiotics showed that E. bulbosa simplicia powder did not inhibit the growth of pro-KJ probiotics. The best dose that can increase the growth of Pro-KJ probiotics is 1.25%. Thus, E. bulbosa simplicia powder can be used with Pro-KJ probiotics for aquaculture organisms.
Keywords : Aquaculture, Eleutherine bulbosa, phytochemicals, prebiotics, probiotics.
Abstrak. Penggunaan  obat  herbal  dan  probiotik  pada  budidaya  saat  ini  telah  banyak  digunakan  dan  terbukti  mampu meningkatkan  kinerja  pertumbuhan  dan  resistan  terhadap  penyakit  seperti  tumbuhan  herbal  dari  bawang  hutan  ( Eleutherine bulbosa ). Akan tetapi, belum ada informasi serbuk simplisia bawang hutan serta potensi jika difermentasikan bersama dengan probiotik  Pro-KJ.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  kandungan  fitokimia  dan  senyawa  lain  dari  obat  herbal  bawang hutan serta potensi prebiotiknya terhadap pertumbuhan probiotik Pro-KJ secara in-vitro. Parameter yang diamati pada penelitian ini  adalah  identifikasi  fitokimia  secara  kualitatif  dengan  metode  visualisasi  warna,  proksimat  dengan  metode  gravimerti,  dan total bakteri probiotik dengan metode Total Plate Count (TPC). Tiga level dosis serbuk simplisia yang diujikan dengan metode kultur bersama probiotik Pro-KJ yaitu dosis 0.625%, 1.25% dan 2.5%, serta kontrol atau tanpa penambahan bawang hutan. Hasil penelitian  menunjukkan  skrining  fitokimia  serbuk  simplisia  dari  bawang  hutan  positif  mengandung  flavonoid,  saponin,  dan steroid sedangkan senyawa lain seperti protein (11.33%), kadar air (9.59%), kadar abu (4.66%), kadar lemak (2.51%), dan serat kasar  (1.75%).  Hasil  kultur  bersama  serbuk  simplisia  dengan  probiotik  pro-KJ  menunjukkan  serbuk  simplisia  bawang  hutan tidak  menghambat  pertumbuhan  probioik  pro-KJ.  Dosis  terbaik  yang  mampu  meningkatkan  pertumbuhan  probiotik  Pro-KJ adalah  1.25%.  Dengan  demikian,  serbuk  simplisia E.  bulbosa dapat  digunakan  bersama  probiotik  Pro-KJ  untuk  organisme akuakultur.
Kata kunci :  Akuakultur, Eleutherine bulbosa, fitokimia, prebiotik, probiotik.

## PENDAHULUAN
Penggunaan  herbal  dan  probiotik  saat  ini  telah  banyak  digunakan  pada  kegiatan  akuakultur  dan  terbukti mampu meningkatkan pertumbuhan dan kekebalan tubuh sehingga resistan terhadap infeksi patogen (Van Hai et al . 2015;  Pu et  al .  2017  Munaeni et  al .  2020a;  2020b).  Salah  satu  obat  herbal  yang  potensial  untuk  budidaya  adalah Eleutherine bulbosa yang mampu meningkatakan pertumbuhan dan kelangsungan hidup udang vaname serta resistan terhadap bakteri pathogen Vibrio parahaemolyticus . E. bulbosa juga mengandung prebiotik dan dapat meningkatkan microflora  dalam  usus  udang  (Munaeni et  al .  2019;  2020b).  Salah  satu  upaya  untuk  meningkatkan  pemanfaatan penggunaan  obat  herbal  pada  akuakultur  adalah  dengan  penggunaan  bersama  probiotik  melalui  fermentasi. Kemampuan  kultur  herbal  yang  difermentasi  dengan  probiotik  dapat  meningkatkan  kekebalan  tubuh organisme akuatik sehingga resistan terhadap serangan pathogen (Wang et al . 2022). Kandungan senyawa kompleks yang ada pada herbal kemudian di fermentasi dengan probiotik dapat menyeimbangkan microbiota yang ada pada usus hewan dan  meningkatkan  penyerapan  dan  metabolisme  komponen  obat  herbal  disaluran  pencernaan ( Yi-Han et  al .  2023) . Penggunaan obat herbal yang di fermentasi dengan probiotik dapat mengubah molekul besar seperti polisakarida dan protein yang ada pada obat herbal menjadi molekul-molekul yang lebih kecil sehingga dapat langsung diserap oleh mikroflora dalam usus (Gao et al. 2022).
Waode  Munaeni,  Aras  Syazili,  dan  Disnawati. Identifikasi kandungan serbuk simplisia  Eleutherine bulbosa dan potensinya terhadap probiotik Pro-Kj secara in-vitro untuk akuakultur
Probiotik  pro-KJ  merupakan  probiotik  yang  bisa  digunakan  pada  air  budidaya  (Munaeni et  al. 2023)  dan juga  melalui  pakan. Jenis  bakteri  pada  probiotik  ini  seperti Pseudomonas sp. dan Bacillus sp. (Thalib et  al. 2023). Penelitian  sebelumnya  menunjukan  bahwa  ekstrak  bawang  hutan  yang  dikultur  bersama  probiotik  mampu meningkatkan  pertumbuhan  bakteri  probiotik  dan  menghambat  pertumbuhan  bakteri  patogen Vibrio parahaemolyticus (Muneni et  al .  2020b).  Penelitian  Wang et  al. (2022)  menunjukkan  bahwa  obat  herbal Sanguisorba officinalis yang difermentasi dengan Lactobacillus rhamnosus dapat menghambat pembentukan biofilm Aeromonas  hydrophila ,  namun  tidak  menghambat  pertumbuhan  dari  probiotik.  Probiotik  memiliki  karakteristik imunomodulator  dan  pemeliharaan  flora  usus  sehingga  dapat  potensial  digunakan  untuk  fermentasi  obat  herbal. Kemampuan  kultur  herbal  yang  di  fermentasi  probiotik  mampu  meningkatkan  kekebalan  tubuh  sehingga  mampu melawan patogen.
Selain  itu,  aplikasi  penggunaan  obat  herbal  dan  probiotik  di  lapangan  juga  diberikaan  bersamaan  di  pakan dengan  cara  fermentasi.  Sehingga  perlu  dilakukan  penelitian  pengguaan  sebuk  simplisia E.  bulbosa dan  probiotik Pro-KJ secara bersamaan  melalui pakan. Namun, sebelum  mengamati ke pakan perlu dilakukan uji kultur bersama secara in-vitro untuk memastikan pertumbuhan probiotik pro-KJ setelah dicampur bersama dengan serbuk simplisia bawang hutan. Hal ini didasarkan pada penelitian sebelumnya yang menunjukkan bahwa dari tiga level dosis ekstrak E. bulbosa yaitu 0,625%, 1,25%, dan 2,5%, dimana dosis tertinggi ( 2,5%) mampu menekan pertumbuhan probiotik Pseudomonas piscicida 1Ub dan Bacillus sp. (Munaeni et al . 2020).

## BAHAN DAN METODE Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  selama  5  bulan,  mulai  dari  Juli  sampai  dengan  November  2023, bertempat  di Laboratorium sistem dan teknologi (sistek), Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Khairun.

## Pembuatan Serbuk Simplisia E. bulbosa
Sumber dan metode pembuatan serbuk serbuk simplisia E. bulbosa yang digunakan pada penelitian ini sama seperti  penelitian  sebelumnya  (Munaeni et  al. 2019). Uji  fitokimia  serbuk  simplisia  dan  uji  kadar  air,  kadar  abu, kadar lemak serta serat kasar dilakukan di Laboratorium Pusat Studi Biofarmaka Institut Pertanian Bogor (IPB, No. sertifikat  405.044/LPSB  IPB/VIII/23)  sedangkan  kadar  protein  dilakukan  di  Laboratorium  Unit  Produktivitas  dan Lingkungan Perairan Universitas Halu Oleo (Hasil Analisa No. 5884/UN29.12.1.2/PG/2023).
Parameter yang diamati pada penelitian ini adalah identifikasi fitokimia kualitatif dengan metode visualisasi warna,  deteksi  proksimat  dengan  metode  gravimerti,  dan  deteksi  total  bakteri  dengan  metode  Total  Plate  Count (TPC).  Tiga  taraf  dosis  serbuk  simplisia  yang  diuji  dengan  metode  kultur  bersama  dengan  probiotik  Pro-KJ  yaitu dosis 0,625%, 1,25%, dan 2,5%, serta kontrol atau tanpa penambahan serbuk simplisia E. bulbosa .
Kultur Bersama Probiotik Pro-KJ dan Serbuk Simplisia E. bulbosa
Metode  kultur  Bersama  pada  uji  aktivitas  serbuk  simplisia  bawang  hutan  terhadap  stimulasi  pertumbuhan probiotik dengan memodifikasi metode penelitin sebelumnya (Munaeni et al . 2019). Serbuk simplisia dicampurkan bersama dengan probiotik pro-KJ sesuai dosis perlakuan dalam tube yang berukuran 2 mL dengan volume probiotik sebanyak  1  mL,  masing-masing  terdiri  dari  3  ulangan.  Larutan  kemudian  di  vortex  agar  homogen  dan  diinkubasi pada suhu ruang (27-29 o C) selama 24 jam kemudian diambil sebanyak 100 µl ditumbuhkan pada media triptic soy agar (TSA) dengan metode pengenceran berseri. Larutan pengencer menggunakan PBS ( phosphate buffer saline : 8 g NaCl,  1.5  g  Na2HPO4,  0.2  g  KCL,  0.2  g  KH2PO4,  1000  mL  akuades).  Selanjutnya  diinkubasi  selama  24  jam, kemudian dilakukan perhitungan bakteri yang tumbuh pada media agar cawan.

## Analisis data
Kandungan  serbuk  simplisia  dianalisis  secara  deskriptif  kemudian  ditampilkan  Dalam  bentuk  tabel, sedangkan data total bakteri ditabulasi dengan Microsoft excel 2010, kemudian dilakukan dengan uji anova dan jika berpengaruh  nyata  (P<0,05)  dilanjutkan  dengan  uji  lanjut  Duncan  dengan  software Statistical  Package  for  Social Sciences 16 (SPSS 16).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil Penelitian
Hasil  identifikasi  fitokimia  menunjukkan  bahwa  serbuk  simplisia E.  bulbosa positif  mengandung  flavonoid, saponin, dan steroid (Tabel 1).
Waode  Munaeni,  Aras  Syazili,  dan  Disnawati. Identifikasi kandungan serbuk simplisia  Eleutherine bulbosa dan potensinya terhadap probiotik Pro-Kj secara in-vitro untuk akuakultur
Tabel 1. Hasil identifikasi fitokimia serbuk simplisia
Parameter Serbuk Ekstrak (Munaeni et al. 2019) Flavonoid + + Alkaloid Wagner - - Mayer - - Dragendorf - - Tanin - + Saponin + + Quinon - + Steroid + + Triterpenoid - +
Keterangan : Positif (+), Negatif (-)
Hasil proksimat dari serbuk simplisia E. bulbosa yaitu protein sebesar 11.33%, kadar air 9.59%, kadar abu 4.66%, kadar lemak 2.51%, dan serat kasar sebesar 1.75% (Tabel 2).
Tabel 2. Hasil analisis proksimat serbuk simplisia E. bulbosa (%) Parameter Hasil Penelitian Referensi* Protein 11.33 3,45 Kadar Air 9.59 6,88 Kadar Abu 4.66 2,35 Kadar Lemak 2.51 - Serat Kasar 1.75 5,65
*Penelitian Naibaho dkk. (2021), pengeringan serbuk simplisia pada suhu 60 o C
Hasil  uji  TPC  dari  kultur  bersama  probiotik  dengan  serbuk  simplisia  pda  Gambar  1  menunjukkan  bahwa serbuk  simplisia  yang  dikultur  bersama  dengan  probiotik  Pro-KJ  mampu  meningkatkan  pertumbuhan  probiotik. Dosis  yang  mampu  meningkatkan  pertumbuhan  total  bakteri  Po-KJ  adalah  1.25%  dan  2.5%,  namun  dosis  terbaik pada 1.25% yang secara signifikan berbeda nyata (P<0,05) dengan perlakuan lainnya.
Gambar 1. Pertumbuhan probiotik Pro-KJ yang dikultur bersama dengan serbuk simplisia E. bulbosa. Dosis serbuk simplisia terdiri dari tiga level berbeda yaitu : 0,625% (A), 1,25% (B), dan 2,5% (C), serta kontrol atau tanpa penambahan serbuk simplisia E. bulbosa (D).

## Pembahasan
Hasil  penelitian  ini  menunjukan  bahwa  beberapa  senyawa  seperti  flavonoid,  saponin  dan  steroid  masih terdeteksi, namun ada beberapa senyawa seperti tanin, quinon, dan triterpenoid tidak terdeteksi dibandingkan dengan ekstrak dari hasil penelitian sebelumnya. Hal ini diduga konsentrasi senyawa ini rendah sehingga pada sampel bubuk tidak terdeteksi. Terlihat dari penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa hasil analisis kuantitatif pada ekstrak untuk senyawa flavonoid lebih tinggi dibandingkan senyawa lainnya yaitu sebesar 6.61 mg QE/g ekstrak, sedangkan total fenol sebesar 2.50 mg GAE/g ekstrak, dan tanin sebesar 0.03% (Munaeni et al., 2017).
Hasil proksimat dari serbuk simplisia E. bulbosa yaitu protein sebesar 11.33%, kadar air 9.59%, kadar abu 4.66%,  kadar  lemak  2.51%,  dan  serat  kasar  sebesar  1.75%  (Tabel  2).  Hasil  ini  menujukkan  bahwa  dengan
10,52 ab 11,39 c
10,64 b 10,48 a 0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00 12,00 A B C D Total B ac te rial Coun t (Log CF U/m L)
Waode  Munaeni,  Aras  Syazili,  dan  Disnawati. Identifikasi kandungan serbuk simplisia  Eleutherine bulbosa dan potensinya terhadap probiotik Pro-Kj secara in-vitro untuk akuakultur
kandungan  protein  sebesar  11.33%  sangat  potensial  untuk  organisme  budidaya  menambah  nilai  kandungan  pada pakan.  Nilai  protein  ini  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  penelitian  Naibaho  dkk.  (2021),  dimana  pengeringan serbuk  simplisia  pada suhu  60 o C  sama  seperti  yang  dilakukan  pada  penelitian ini.  Menurut  Damanik  et  al.  (2023), penggunaan  metode  fermentasi  menjadi  alternatif  untuk  meningkatkan  kandungan  protein  dan  menurunkan kandungan serat kasar dari bahan yang difermentasi.
Hasil uji TPC dari kultur bersama probiotik dengan serbuk simplisia menunjukkan bahwa penggunaan serbuk simplisia juga mampu meningkatkan pertumbuhan probiotik (Gambar 1). Diduga kandungan yang ada pada serbuk simplisia  mampu  digunakan  oleh  bakteri-bakteri  yang  ada  pada  probiotik  Pro-KJ.  Hasil  penelitian  sebelumnya menunjukkan  bahwa  ekstrak  dari E.  bulbosa dapat  meningkatkan  pertumbuhan  probiotik  serta  resistan  terhadap asam  lambung  (Munaeni  et  al.,  2020).  Penggunaan E.  bulbosa baik  bentuk  ekstrak  maupun  serbuk  simplisia  yang diberikan  melalui  pakan  juga  mampu  meningkatkan  kinerja  pertumbuhan,  kecernaaan,  efisiensi  pakan  pada  udang vaname  serta  mampu  resistan  terhadap  penyakit  vibriosis  (Munaeni  et  al.,  2019;  2020).  Hasil  ini  menunjukkan serbuk simplisia dari E. bulbosa potensial untuk digunakan bersama dengan probiotik Pro-KJ sehingga diharapkan mampu  meningkatkan  pertumbuhan  organisme  akuakultur.  Penelitian  lain  juga  menunjukkan  bahwa S.  officinalis yang difermentasi dengan L. rhamnosus tidak menghambat probiotik (Wang et al. 2022). Dengan demikian, bubuk simplisia E.  bulbosa dapat  digunakan  bersamaan  dengan  probiotik  Pro-KJ  menggunakan  metode  fermentasi  pada organisme akuakultur. Selain itu, penggunaan herbal juga dapat meningkatkan sistem imun pada ikan (Maryani dkk. 2021) dan maampu resistan terhadap infeksi bakteri patogen (Saputra dkk. 2020).
Dengan demikian, penggunaan probiotik secara bersama dengan obat herbal dapat  menjadi solusi terhadap pemanfaatan  kandungan  potensial  dari  obat  herbal  untuk  akuakultur.  Dengan  metode  fermentasi,  senyawa oligosakarida  potensial  yang  ada  pada  obat  herbal  dapat  diubah  menjadi  komponen  lebih  kecil  oleh  probiotik sehingga penyerapan akan pakan akan lebih mudah. Hal ini dikemukakkan oleh Gao et al. (2022) bahwa p enggunaan obat herbal yang di fermentasi dengan probiotik dapat mengubah molekul besar seperti polisakarida dan protein yang ada  pada  obat  herbal  menjadi  molekul-molekul  yang  lebih  kecil  sehingga  dapat  langsung  diserap  oleh  mikroflora dalam usus.

## KESIMPULAN
Hasil penelitian menunjukkan kandungan fitokimia dari serbuk simplisia E. bulbosa mengandung flavonoid, saponin,  dan  steroid,  sedangkan  senyawa  lain  seperti  protein  sebesar  11.33%,  kadar  air  9.59%,  kadar  abu  4.66%, kadar lemak 2.51%, dan serat kasar sebesar 1.75%. Hasil kultur bersama serbuk simplisia dengan probiotik pro-KJ menunjukkan  bahwa  serbuk  simplisia E.  bulbosa tidak  menghambat  pertumbuhan  probioik  pro-KJ.  Dosis  terbaik yang  mampu  meningkatkan  pertumbuhan  probiotik  Pro-KJ  adalah  1.25%.  Dengan  demikian,  serbuk  simplisia E. bulbosa dapat  digunakan  bersama  probiotik  Pro-KJ  sehingga  diharapkan  mampu  meningkatkan  pertumbuhan organisme akuakultur.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terimakasih  kepada  Direktorat  Jenderal  Pendidikan  Tinggi,  Riset,  dan  Teknologi  yang  telah  mendanai kegiatan  ini  melalui  pendanaan  Matching  Fund  2023  program  Kedaireka  Kerjasama  Insan  Perguruan  Tinggi (Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan  Universitas  Khairun)  dengan  Dunia  Usaha  dan  Dunia  Industri  (Koperasi Santo  Alvin  Pratama).  Terimakasih  untuk  Nurul  Safitri  dan  Zumair  Rahman  sebagai  mahasiswa  yang  telah  aktif membantu di laboratorium.

## DAFTAR PUSTAKA
Damanik, H., Kusdianto, H., Hardi, E.H., Pagoray, H., Isriansyah.  (2023). Pengaruh penambahan bungkil inti sawit fermentasi dengan lama waktu berbeda terhadap konversi pakan dan pertumbuhan ikan kelabau ( Osteochilus melanopleurus ). Jurnal Akuakultur Sungai dan Danau, 8(2):125-134.
Gao,  J.,  Wang,  R.,  Liu,  J.,  Wang,  W.,  Chen,  Y.,  Cai,  W.  (2022).  Effects  of  novel  microecologics  combined  with traditional Chinese medicine and probiotics on growth performance and health of  broilers. Poultry Science, 101(2):101412. https://doi.org/10.1016/j.psj.2021.101412 Maryani, M., Rozik, M., Nursiah, N., Pudjirahaju, A. (2021). Gambaran aktivasi sistem imun ikan nila ( Oreochromis niloticus )  terhadap  pemberian  daun  sangkareho  ( Callicarpa  longifolia Lam.)  melalui  pakan.  Sungai  dan Danau, 6(2):74-81.
Munaeni, W., Yuhana, M., Setiawati, M., Wahyudi, A.T. (2019). Phytochemical analysis and antibacterial activities of Eleutherine bulbosa (Mill.) Urb. extract against Vibrio parahaemolyticus . Asian Pac J Trop Biomed 2019; 9(9):397-404.
Waode  Munaeni,  Aras  Syazili,  dan  Disnawati. Identifikasi kandungan serbuk simplisia  Eleutherine bulbosa dan potensinya terhadap probiotik Pro-Kj secara in-vitro untuk akuakultur
Munaeni, W., Widanarni, W., Yuhana, M., Setiawati, M., Wahyudi, A.T. (2020a). Impact of dietary supplementation with  Eleutherine  bulbosa  (Mill.)  Urb.  on  intestinal  microbiota  diversity  and  growth  of  white  shrimp, Litopenaeus vannamei. Aquaculture 528, 735466
Munaeni,  W.,  Widanarni,  W.,  Yuhana,  M.,  Setiawati,  M.,  Wahyudi,  A.T.  (2020b).  Effect  in  white  shrimp Litopenaeus  vannamei of Eleutherine  bulbosa (Mill.)  Urb.  Powder  on  immune  genes  expression  and resistance against Vibrio parahaemolyticus infection. Fish & shellfish immunology. 102: 218-227. Munaeni,  W.,  Syazili,  A.,  Disnawati.  (2023).  Pelatihan  pembuatan  bioflok  menggunakan  probiotik  Pro-KJ  untuk budidaya  udang  vaname Litopenaeus  vannamei .  Jurnal  Pengabdian  kepada  Masyarakat  Nusantara  4  (4), 4699-4702.
Naibaho, N.M., Anwar, R., Lisnawati, A., Ariyani, F., Popang, E.G., Rudito, R., Hamka, H. (2021). Pengaruh Suhu Pengeringan Berbeda terhadap Sifat Kimia Tepung Bawang Tiwai ( Eleutherine palmifolio (L) Merr). Buletin LOUPE. 17(2): 80-88.
Thalib, Y.M., Munaeni, W., Syazili, A. 2023. Kinerja pertumbuhan, respon imun dan kelimpahan bakteri pada usus ikan nila ( Oreochromis niloticus ) sistem bioflok yang diberikan probiotik melalui pakan. Jurnal Marikultur, 5(1): 41-56.
Pu,  H.,  Li,  X.,  Du,  Q.,  Cui,  H.,  Xu,  Y.  2017.  Research  progress  in  the  application  of  chinese  herbal  medicines  in aquaculture. Engineering. 3:731-737.
Saputra, Y., Syahrizal., S., Safratilofa, S., Kholidin, E.B. (2020). Pemberian Tepung Daun Kelor ( Moringa oleifera L)  Melalui  Pakan  Sebagai  PencegahanTerhadap  Infeksi  Bakteri  Edwarsiella  Ictaluri  Pada  Ikan  Patin ( Pangasius hypopthalmus ). Sungai dan Danau, 5(2):55-62.
Van Hai, N. 2015. The use of medicinal plants as immunostimulants in aquaculture: A review. Aquaculture. 446:88- 96
Wang  et  al.  (2022).  Dietary  supplementation  of  probiotics  fermented  Chinese  herbal  medicine Sanguisorba officinalis cultures  enhanced  immune  response  and  disease  resistance  of  crucian  carp  ( Carassius  auratus ) against Aeromonas hydrophila . Yi-Han, M., Yu-Di, S., Di, Z et al., 2023. Acanthopanax senticosus cultures fermented by Lactobacillus rhamnosus enhanced  immune  response  through  improvement  of  antioxidant  activity  and  inflammation  in  crucian  carp ( Carassius auratus ). http://dx.doi.org/10.2139/ssrn.4614104