Accredited by Ministry of Research, Technology                                 DOI: https://doi.org/10.35799/jis.v21i2.35777 and Higher Education No: 28/E/KPT/2019                Available online at https://ejournal.unsrat.ac.id/index.php/jis

## Senyawa Katekin (Flavonoid) dari Kulit Batang Chisocheton balancae C.DC (Meliaceae)
Dewa G. Katja 1) , Sisilia A. Mantiri 1) ,Max R.J. Runtuwene 1) , Unang Supratman 2,3) , Erina Hilmayanti 2)
1) Program Studi Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Samratulangi, Manado, 95115, Indonesia
2) Departemen Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Padjadjaran, Jatinangor 45363, Jawa Barat, Indonesia
3) Laboratorium Sentral, Universitas Padjadjaran, Jatinangor, 45363, Jawa Barat, Indonesia e-mail: dewakatja@unsrat.ac.id

## ABSTRAK
Senyawa  katekin  (flavonoid)  dengan  rumus  molekul  C 15 H 14 O 6 telah  diisolasi  dari  kulit  batang chisocheton  balancae C.DC (Meliacea).  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mendapatkan  senyawa katekin  (flavonoid).  Sampel  dimaserasi  dengan  metanol  dan  dipartisi  dengan  pelarut  etil  asetat. Hasil partisi etil asetat dipisahkan dengan teknik kromatografi dan dihasilkan isolat murni berupa kristal  berwarna  putih  (5,5  mg)  dengan  titik  leleh  175-177 0 C  dengan  serapan  maksimum  pada panjang  gelombang  280,30  nm.  Struktur  kimia  senyawa  katekin    diidentifikasi  dari    data-data spektroskopi  meliputi 1 H-NMR, 13 C-NMR  dan  DEPT  135 0 ,  serta  perbandingan  dengan  data spektroskopi yang diperoleh dari literatur. Hasilnya menunjukkan bahwa kulit batang Chisocheton balancae C.DC (Meliaceae) merupakan senyawa katekin (flavonoid).
Kata kunci: Chisocheton balancae C.DC ; katekin ; meliaceae
Catechin Compound (Flavonoid) from Chisocheton balancae C.DC (Meliaceae) Bark

## ABSTRACT
A  catechin  compound  (flavonoid)  with  the  molecular  formula  C 15 H 14 O 6 has  been  isolated  from Chisocheton balancae C.DC (Meliacee) bark. This study aims to determine the chemical structure of catechins (flavonoids).  The sample is macerated with methanol and partitioned with ehtyl acetate as  solvent.  The  results  of  the  partitioning  of  ethyl  acetate  were  separated  by  chromatographic techniques and pure isolates were produced in the form of white crystals (as much as 5,5 mg) with a melting point of 175-177 0 C and maximum absorption at a wavelength of 280,30 nm. The chemical structure  of  catechin  compound  was  identified  on  the  basis  of  spectroscopic  data  including 1 H- NMR, 13 C-NMR and DEFT 135 0 as well as comparison with spectroscopic data obtained from the literature. The results shows that the bark of Chisocheton balancae C.DC (Meliaceae) contained catechin compound.
Keywords: Catechin; meliaceae; Chisocheton balancae C.DC
(Article History: Received 10-09-2021; Accepted 18-10-2021; Published 20-10-2021)

## PENDAHULUAN
Indonesia merupakan Negara
kepulauan  yang  terletak  di  garis  khatulistiwa dan mempuyai hutan terbesar kedua di dunia. Berdasarkan hal tersebut, Indonesia kaya akan sumber  daya  alam  hayati  yang  melimpah, karena memiliki curah hujan, kelembaban dan sinar matahari yang cukup (Heyne, 1987).
Tumbuhan Chisocheton balancae
C.DC adalah  salah  satu  spesies  dari  genus Chisocheton yang  terdistribusi  secara  luas  di
daerah  tropis  dan  subtropis  seperti  Nepal, India, Bhutan, Myanmar, Indo-China, Thailand, Malaysia dan Papua Nugini (Vossen & Umali, 2002). Chisocheton pada umumnya sering  ditemukan  di  dataran  rendah  hutan hujan  tropis  dan  beberapa  spesies  tumbuhan ini secara tradisional telah digunakan sebagai racun  untuk  penangkapan  ikan,  obat  pencuci perut, dan memiliki sifat berbau khas (tengik) serta susah dikeringkan  (Lim, 2008).
162 Jurnal Ilmiah Sains Vol. 21 No. 2, Oktober 2021
Katekin (flavonoid) merupakan senyawa  polifenol  yang  memiliki  15  atom karbon yang tersusun dengan konfigurasi C 6 - C 3 -C 6 dan kerangka karbonnya terdiri dari dua gugus  C 6 (cincin  benzena  tersubstitusi)  dan disambungan dengan tiga atom karbon alifatik (Wang et al ., 2018). Studi fitokimia tumbuhan genus chisocheton memiliki  kandungan senyawa metabolit sekunder seperti seskuiterpenoid  (Phongmaykin et  al .,  2008), triterpenoisd  (Supratman et  al .,  2019), limonoid  (Muhamad et  al .,  2009),  steroid (Katja et al ., 2017) dan fenolik (Nurlelasari et al ., 2014; Katja et al ., 2015).
Berdasarkan  penulusuran  jurnal  genus tumbuhan chisocheton ,  telah  dilaporkan  dan menghasilkan  senyawa  aktif  yang  bersifat antikanker, sitotoksik, antitumor, antiinflamasi, antimalaria, antimikroba, antilipid  dan  apoptosisi  (Wong et  al .,2011; Mohamad et  al .,  2008;  Yang et  al .,  2009; Awang et al ., 2012; Najmuldeen et al ., 2012).
Senyawa  aktif  yang  diisolasi  dari  genus Chsocheton adalah  ceramicin  A,  merupakan golongan  limonoid  baru  yang  diisolasi  dari kulit  batang C.  ceramicus ,  beraktivitas sitotoksik terhadap sel murin leukemia P-388 (Mohammad et al ., 2008). Senyawa triterpenoid  yang  diisolasi  dari  daun C. macrophyllus memiliki  aktivitas    antitumor EBV-EA  (Inada et  al .,  1993).  Ceramicin  B merupakan  senyawa  limonoid  yang  diisolasi dari  kulit  batang C.  ceramicus memiliki aktivitas  antilipid  (Wong et  al .,  2014). Senyawa  malayanin  A  dan  malayanin  B, merupakan  senyawa  limonoid  yang  diisolasi dari  kulit  batang C.  erytrocarpus Hiern, mempunyai aktivitas antimalaria dan insektisida (Awang et al ., 2012). Senyawa 7α- hidroksi-β-sitosterol,  diisolasi  dari  kulit batang C.  tomentosus yang  beraktivitas apoptosis (Najmuldeen et al ., 2012). Penelitian  ini  bertujuan  mengisolasi  dan identifikasi  struktur  senyawa  katekin  (suatu flavonoid) dengan rumus molekul C 15 H 14 O 6 .

## METODE PENELITIAN

## Umum
Peralatan titik leleh Fisher-John, rotary evaporator  R-200  Buchii  dengan  pompa vacum Vac V-500 Buchii, penangas air B-490 Buchii, kolom kromatografi terbuka berbagai ukuran, lampu UV Vilbert loumart (λ 254 nm dan  λ  365  nm)  spektrofotometer  FTIR  One
Perkin Elmer pada KBr. Spektra 1 H-NMR dan 13 C-NMR  dengan  spektrometer  JEOL  JNM ECA-500.  Silika  gel  G 60 (70-230  mesh  dan 200-400 mesh, Merk), silika gel GF 254 (Merk, 0,25  mm)  untuk  kromatografi  lapis  tipis, pereaksi  penampak  noda  10%  H 2 SO 4 dalam etanol.

## Bahan tumbuhan
Kulit  batang  tumbuhan Chisocheton balancae C.DC diperoleh  dari  Gunung Soputan  Noongan  Tiga,  Langowan  Barat,
Kabupaten Minahasa, Sulawesi Utara. Tumbuhan  ini dideterminasi di Laboratorium Taksonomi  Tumbuhan,  Departemen  Biologi Universitas Padjadjaran Bandung.
Ekstraksi dan Isolasi.
Kulit  batang  tumbuhan Chisocheton balancae C.DC (1,5  kg)  kering  dilahaluskan, diekstraksi  mengunakan  metode  maserasi (ekstrak  padat-cair)  dengan  pelarut  metanol pada suhu ruangan. Fraksi metanol dipekatkan dengan  rotary  evaporator  sehingga  diperoleh ekstrak pekat metanol (157,5 g). Ekstrak pekat metanol ini selanjutnya dilarutkan dalam 450 mL  aquades  lalu  dipartisi  dengan  pelarut n - heksan,  etil  asetat  dan n -butanol.  Ekstrak pekat  hasil  partisi  etil  asetat  (45,4  gram) selanjutnya dipisahkan dengan metode kromatografi cair vakum (KCV)
menggunakan fasa diam silika gel G 60 (2300- 400 mesh) dan fasa gerak campuran pelarut n - heksana-etil  asetat  (bergradien  20%)  dan  etil asetat-metanol  yang  dielusikan  bertahap secara  bergradien  10%  sehingga  diperoleh  6 fraksi  (A-F).  Fraksi  C  (5,82  g)  dipisahkan dengan  kromatografi  kolom  pada  silika  gel G 60 (230-400 mesh) dengan sistem pelarut n - heksana-etil asetat-metanol bergradien (bergradien 5%) sehingga diperoleh 14 fraksi gabungan  (C1-C14).  Selanjutnya  fraksi  C9 (334  mg)  dipisahkan  dengan  kromatografi kolom  pada  silika  gel  G 60 (230-400  mesh) dengan sistem pelarut n -heksana- diklorometana-aseton (6:2:2) dan diperoleh 7 fraksi  gabungan  (C9A-C9G).  Selanjutnya fraksi  C9D  (95,5  mg)  dipisahkan  dengan kromatografi kolom pada silika gel G 60 (230- 400  mesh)  dengan  sistem  pelarut  kloroform- metanol  (9:1)  dan  dihasilkan  isolat 1 berbentuk padatan, selanjutnya direksistalisasi dengan  metanol  diperoleh  isolat  berbentuk kristal  berwarna  putih  kekuningan  sebanyak 5,5  mg.  Setiap  tahapan  pemisahan  dipantau dengan kromatografi lapis tipis dibawah sinar
UV  (λ  254  nm  dan  λ  365  nm).  Isolat  murni tersebut  diidentifiksi  strukturnya  berdsarakan data-data  spektroskopi 1 H-NMR, 13 C-NMR, Distortionless  Enhancement  by  Polarization Transfer (DEPT) 135 0 dan ditetapkan sebagai senyawa katekin.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Karakterisasi  dengan  Spekstroskopi Hydrogen  Magnetic  Resonance atau Proton Nuclear  Magnetic  Resonance (1H-NMR), Carbon  Nuclear  Magnetic  Resonance (13C-
NMR), Distortionless Enhancement by Polarization Transfer (DEPT 135 o ).
Gambar 1 . 1 H-NMR Spectrum (500 MHz, Acetone-d 6 )
Spektrum 1 H-NMR  isolat  Gambar  1 menunjukkan    adanya  sinyal  δ  4,54(1H,  d, J =7,5 Hz), 3,99 (1H, dd, J = 7.9, dan 4,5), 2,52 (1H,dd, J = (5,0 dan 16,0 ), 2,90 (1H,dd, J = 8,0  dan  16,0)  yang  merupakan  karakteristik suatu  flavan-3-ol.  Masing-masing  unutuk resonansi  proton  H-2,  H-3,  H-4α  dan  H-4. Spektrum 1 H-NMR juga menunjukkan adanya dua  sinyal  δ  5,87  (1H,d, J =  2,0)  dan  6,88 (1H,d, J =  2,0)  yang  masing-masing  untuk proton  H-6  dan  proton  H-8  pada  cincin  A, yang berorientasi- meta. Selain itu spektum ini juga  menujukkan  tiga  sinyal  pada  δ  6,78 (1H,d, J = 1,5),  6,79  (1H,d, J = 8,0),  dan 6,74 (1H,d, J =  1,5)  yang  masing-masing  untuk proton  aromatik  H-2’,  H-5’  dan  H-6’  pada cincin B.
Gambar 2. 13 C-NMR Spektrum (125 MHz, Acetone-d 6 ) dan Spektrum DEPT 135 o
Berdasarkan  Gambar  2,  spektrum 13 C- NMR dengan diperinci DEPT 135 o menunjukkan  adanya  15  atom  karbon  yang terdiri  dari  satu    metilen,    dua  karbon  sp 3 teroksigenasi,  lima  karbon  sp 2 ,  dua  karbon kuartener  sp 2 ,  lima  carbon  kuartener  sp 2 teroksigenasi  yang  yang  diduga  merupakan gugus  hidroksil.  Satu  sinyal  metilen  pada  δc 28,9 (C-4). Dua sinyal karbon sp 3 teroksigenasi pada δc 82,5 (C-2) dan 68,3 (C-
3). Lima sinyal karbon metin sp 2 pada δc 96,1 (C-6), 95,4 (C-8), 115,2 (C-2’), 115,7 (C-5’), dan 120,1 (C-6’). Dua sinyal karbon kuartener sp 2 pada  δc  100,6  (C-10)  dan  132,1  (C-1’). Terdeteksi  ada  lima  sinyal  karbon  kuartener sp 2 yang  diduga  terikat  dengan  gugus hidroksil,  yaitu  δc  156,9  (C-5),  156,3  (C-7), 157,7 (C-9), 145,7(C-3’), dan 145,6 (C-4’).
Pada  Spektrum 13 C-NMR  dengan diperinci DEPT 135 0 memperlihatkan ketiga atom  karbon  sp 3 yang  beresonansi  pada  δc 82,5  ,  68,3  ,dan  28,9  yang  masing-masing adalah C-2(-CH-O-), C-3 (-CH-O-), dan C-4(-
CH 2 -)  yang  menunjukkan  suatu  struktur flavan-3-ol. Untuk 12 carbon sp 2 menunjukkan  adanya  geseran  untuk  senyawa aromatik. Kajian literatur dilakukan untuk memperkuat dugaan struktur senyawa dengan cara membandingkan data spektroskopi isolat
1 dengan flavonoid yang memiliki pergeseran kimia relatif serupa. Pergeseran kimia Isolat 1 memiliki kemiripan dengan pergeseran kimia senyawa  katekin  yang  berhasil  diisolasi  dari spesies  yang  sama yaitu Chisocheton pentandrus (Supriatno et  al., 2017)  yang dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Perbandingan data NMR Isolat 1 dengan Epikatekin (Supriatno et al .,
2017) O A B C OH OH OH OH HO
Gambar 3. Struktur kimia senyawa katekin
Hasil interpretasi spektrum 1 H-NMR, 13 C-NMR dan data-data pembanding Gambar 3 , memiliki  kemiripan  pergeseran  kimia dengan senyawa katekin.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil analisis spektrum 1 H- NMR, 13 C-NMR  dan  data-data  pembanding, isolasi dari  kulit batang Chisocheton balacae
C.DC merupakan senyawa katekin
(flavonoid).

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terimakasih kami sampaikan Prof. Dr. M.  Hanafi  beserta  staf  pada  Pusat  Penelitian
Kimia Lembaga  Ilmu Pengetahuan  Indonesia (LIPI) Serpong yang telah mebantu pengukuran  NMR.  Terimakasih  juga  kami sampaikan  kepada  Kepala  Laboratorium Sentral    Prof.  Dr.  Unang  Supratman,  MS beserta  staf  Departemen  Kimia  FMIPA Universitas  Padjadjaran  Bandung  yang  telah mengijinkan  bekerja  untuk  isolasi  senyawa katekin.

## DAFTAR PUSTAKA
Awang,  K.,  Chong,  L.,  Marthi,  M.T., Mokhtar, R.M., Chan, G., Litaudon, M.,
Gueritte,  F.,  &    Mohamad,  K.  2012. Malayanines  A  and  B,  two  novel limonoids from Chisocheton erythrocarpus Hiern, Tetrahedron Letters, 53 : 5355-5359. Heyne.  1987.  Tumbuhan  Berguna  Indonesia Jilid  II.  Terjemahan  Badan  Litbang Kehutanan  Jakarta.  Yayasan  Sarana Warna Jaya, Jakarta. Inada,  A.,  Sukemawa,  M.,  Murata,  H., Nakanishi, T., Tokuda, H., Nishino, H., Iwashima, Darnaedi, D., & Murata, J. 1993. Phytochemical studies on  Maleaceous  Plant.  Part  VII. Structures  and  Inhibitory  Effects  on Epstein-Barr Virus Activation of Triterpenoida from leaves of Chisocheton macrophyllus King. Chem. Pharm. Bull. 41(3): 617-619.
Katja,  D.G.,  Sonda,  A.A.,  Harneti,  D.,
Mayanti, T., & Supratman, U. 2015. 7-
Hidroksi-6-Metoksi Kumarin (Skopoletin) dari Kulit Batang Chisocheton celebius (Meliaceae).
Jurnal Kimia , 9: 1-4.
Katja,  D.G.,  Farabi,  K.,  Nurlelasari,  Harneti,
D., Mayanti, T., Supratman, U., Awang, K., & Hayashi, H. 2017. Cytototoxic  constituents  from  the  bark of Chisocheton
cumingianus (Meliaceae). Journal of Asian Natural Products Research , 19: 194–200.
Lim,  C.S.  2008.  Chemical  Constituents  of
Chisocheton erythrocarpus hiern.
Department of Chemistry Faculty of Science University, Malaya.
4
Mohammad, K., Hirasawa, Y., Litaudon, M., Awang,  K.,  Hadi,  A.H.A.,  Takeya,  K.
Ekasari, K., Widyawaruyanti,  A.,
Zaini,  N.C.,  &  Morita,  H.  2009. Ceramicines  B-D  new  antiplasmodium limonoids from Chisocheton ceramicus. Bioorganic  and  Medicinal  Chemistry , 17: 727-730.
Mohamad,  K.,  Hirasawa,  Y.,  Lim,  C.S., Awang,  K.,  Hamid,  A.,  Hadi,  A., Takeya, K., & Morita, H. 2008.
Ceramicines A and walsogyne A, novel limonoids from two species of Meliaceae. Tetrahedron  Letters , 49: 4276-4278.
Najmuldeen,  I.A.,  Ibrahim,  A.,  Tasyriq,  M., Lionel,  L.A.I.,  Mohamad,  K.,  Awang, K.,  & Hasima, N. 2012. 7α-hidroxy-β- sitosterol from Chisocheton tomentosus Induces   Apoptosis  via  Dysregulation of  Cellular  Bax/Bcl-2  Ratio  and  Cell Cycle Arrest by Downregulating ERK1/2  Activation. Volume  2012 . Article  ID  765316,  12  pages.  DOI:
10.1155/2012/765316. Nurlelasari,  Muflihah  L.F.,  Wardoyo  M.M.,
Harneti D., & Awang K. 2014. Senyawa 7-Hidroksi-6-Metoksi  Kumarin  yang bersifat  Sitotoksik  dari  kulit  batang Chisocheton macrophyllus . Bionatural- Jurnal Ilmu-ilmu Hayati dan Fisik , 16: 69-72. Phongmaykin, Kumamoto, Ishikawa, Suttisri,
&  Saifah.  2008.  A  new  sesquiterpene and  other  terpenoid  constituents  of Chisocheton penduliflorus. Archives of pharmacal research , 31: 21–27. Supratman,  U.,  Naibaho,  W.,  Salam,  S., Maharani,  L.,  Hidayat,  A.C.,  Harneti, D.,  Nurlelasari,  &  Shiono,  Y.  2019. Cytotoxic triterpenoids from the bark of Chisocheton patens Blume (Meliaceae). Phytochemistry Letters, 30: 81-87.
Supriatno, Hidayat, A.T., Farabi, K., Abdullah, F.F., Nurlelasari, Herlina, T.,
Supratman, U., & Awang,  K.  2017. Flavonoid  from  the  stembark  of
Chisocheton  pentandrus (Meliaceae). Jurnal Kimia Valensi , 3: 122-126. Vossen, V.D.H.A.M., & Umali, B.E. (Editors).  2002.  Plant  resources  of south-east  Asia  No.  14  vegetable  oils and  fats,  Prosea  Foundation,  Bogor,
Indonesia. 150.
Wang,  T.Y.,  Li,  Q.,  &  Bi,  K.S.    2018. Bioactive  Flavonoids  in  Medicinal Plants: Structure, activity and biological fate. Asian  Journal  of  Pharmaceutical Sciences, 13 :12-23.
Wong,  C.P.,  Shimada,  M.,  Nagakura,  Y.,
Nugroho,  A.E.,  Hirasawa,  Y.,  Kaneda, T., Awang, K.,   Hamid, A., Hadi, A., Mohamad,  K.,  Shio,  M.,  &  Morita,  H. 2011. Ceramicines E-I,   New imonoids from Chisocheton ceramicus . Chem. Frm Bull, 59: 407-411.
Wong, C.P., Kaneda, T., Hamid, A., Hadi, A., &  Morita,  H.  2014.  Ceramicine  B.  a limonoid with anti-lipid droplets accumulation activity from Chisocheton  ceramicus. J.  Nat  Med .,
68(1) :22-30.  DOI:  10.1007/s11418- 013-0755-2.
Yang,  M.H.,  Wang,  J.S.,  Luo,  J.G.,  Wang,
X.B., and Kong, L.Y. 2009.
Tetranortriterpenoids from Chisocheton paniculatus . J. Prod., 72: 2014-2018.