PENGHAMBATAN ENZIM TIROSINASE dan AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK BUNGATELANG PUTIH ( Clitoria ternatea ) MENGGUNAKAN METODE

## DPPH
Bayu Febram Prasetyo*, Amrozi, Nur Anisa BS
Sekolah Kedokteran Hewan dan Biomedis, Institut Pertanian Bogor, Bogor, Indonesia *Penulis Korepondensi : bayupr@apps.ipb.ac.id

## Abstrak
Clitoria  ternatea atau  yang  dikenal  dengan  nama  bunga  telang  putih  banyak  dimanfaatkan  dalam bidang  kesehatan  karena  berbagai  khasiatnya,  antara  lain  sebagai  antidiabetes,  anti  inflamasi,  anti mikroba, antikanker, analgesik, antipiretik, dan antioksidan. Penelitian ini bertujuan mengkaji aktivitas antioksidan  dan  inhibitor  tirosinase  ekstrak  etanol  bunga  telang  putih  serta  mengidentifikasi kandungan fitokimianya.  Aktivitas  antioksidan ditentukan dengan metode DPPH. Hasil penelitian ini menunjukkan  ekstrak  bunga  telang  putih    memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  sangat  lemah  dengan nilai  IC 50 lebih  dari  200  ppm.  Hasil  aktivitas  inhibitor  tirosinase  menunjukkan  bahwa  ekstrak  bunga telang  putih  tidak  menghambat  enzim  tirosinase.  Berdasarkan  uji  penapisan  fitokimia,  komponen kimia yang terkandung dalam ekstrak bunga telang putih adalah flavonoid, tanin, saponin, dan steroid. Ekstrak bunga telang putih memiliki aktivitas antioksidan yang sangat lemah dan pengujian inhibitor tirosinase  menunjukkan  ekstrak  bunga  antioksidan  dengan  metode  DPPH.  Hasil  pengujian  inhibitor tirosinase  menunjukkan  ekstrak  Bungatelang  putih  tidak  memiliki  aktivitas  menghambat  enzim tyrosinase.
Kata kunci: Antioksidan, Clitoria ternatea , DPPH, Fitokimia, Tirosinase

## Abstract
Clitoria ternatea or known as the butterfly pea is widely used in the health sector due to its efficacy as antidiabetic, anti-inflammatory, antimicrobial, anticancer, analgesic, antipyretic, and antioxidants. The purpose of this research  is  to examine  the antioxidants  and  tyrosinase inhibitor activities  of butterfly pea  ethanol  extract  as  well  as  to  identify  the  phytochemical  content.  Antioxidants  activities  are determined by the DPPH method. The results of this study indicates that butterfly pea extract has very weak  antioxidant  activities  with  an  IC50  value  more  than  200  ppm.  The  results  of  the  tyrosinase inhibitor activities  showed that the butterfly  pea extract did not inhibit the tyrosinase enzyme. Based on the screening phytochemical tests, the chemical components contained in butterfly pea  extract are flavonoids,  tannins,  saponins,  and  steroids. Bunga  telang  flower  extract  has  very  weak  antioxidant activity  and  tyrosinase  inhibitor  testing  showed  antioxidant  flower  extract  by  DPPH  method. Tyrosinase  inhibitor  assay  results  showed  white  Bungatelang  extract  has  no  activity  to  inhibit tyrosinase enzyme.
Keywords: Antioxidants, Clitoria ternatea , DPPH, Phytochemicals, Tyrosinase.

## PENDAHULUAN
Pengaruh  lingkungan  seperti  paparan  sinar ultraviolet (UV), polutan, dan temperatur diketahui menimbulkan efek pada kesehatan karena menyebabkan  pembentukan  radikal  bebas  yang salah  satu  dampaknya  adalah  penuaan  dini (Winarsi,  2007).  Sinar  UV  juga  dapat  memicu tubuh  menghasilkan  pigmen  melanin  sehingga
menyebabkan kulit menjadi semakin gelap (Batubara & Adfa, 2013; Kusumawati et al., 2021). Proses  sintesis  melanin  melibatkan  peran  enzim tirosinase (Chang, 2009).
Efek samping dari paparan sinar UV ini dapat dikurangi dengan aktivitas antioksidan dan inhibitor tirosinase. Antioksidan memiliki kemampuan  untuk  menangkap  radikal  bebas
(Hidayah  et  al.,  2023).  Dalam  perkembangannya, antioksidan  dari  bahan  alami  dan  sintetik  dalam bentuk  sediaan  topikal  diketahui  mampu  melawan radikal bebas yang disebabkan sinar UV (Hanani et al .,  2005;  Farhamzah  et  al.,  2022).  Sementara  itu, inhibitor  tirosinase  dapat  menghambat  produksi melanin berlebih akibat sinar UV. Saat ini, berbagai studi  menunjukkan  senyawa  aktif  dalam  tanaman dapat  menghambat  aktivitas  tirosinase  yang digunakan  dalam  sediaan  pemutih  kulit  seperti ekstrak  licorice,  mulberi,  teh  hijau  dan  lain-lain (Chang,  2009).  Kombinasi  antioksidan  dan inhibitor  tirosinase  dapat  ditemukan  baik  pada bahan  alami maupun  sintetik.  Namun,  penggunaan bahan  pengawet,  antioksidan,  dan  inhibitor tirosinase  sintetik  tidak  direkomendasikan  karena diduga  dapat  memicu  kanker  (karsinogenik) (Winarsi, 2007).
Berbagai  jenis  tanaman  berpotensi  sebagai sumber  antioksidan  dan  inhibitor  tirosinase,  salah satunya  yaitu  Bungatelang  putih.  Tanaman  ini terkenal dengan ciri khas kelopak tunggal berwarna ungu.  Selain  sebagai  tanaman  hias,  tumbuhan  ini dipercaya  oleh  masyarakat  sebagai  obat  mata  dan banyak  digunakan  sebagai  pewarna  biru  pada makanan (Mukherjee et al ., 2003). Beragam khasiat Bungatelang  putih  juga  telah  dilaporkan,  seperti antibakteri,  antikanker,  antidiabetes,  antiinflamasi, dan  analgesik  (Uma et  al .,  2009;  Shyamkumar  & Ishwar,  2012).  Bunga  telang  putih  telah  banyak dieksplorasi  potensi  sifat  antioksidasinya  untuk menggantikan senyawa antioksidan sintetik. Meskipun  demikian,  belum  banyak  penelitian mengenai  inhibitor  tirosinase  pada  Bungatelang putih.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji aktivitas  antioksidan  dan  inhibitor  tirosinase  serta
mengidentifikasi  senyawa  fitokimia  yang  terdapat pada ekstrak Bungatelang putih.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  Agustus 2022  di  Laboratorium  Farmasi,  Departemen Farmasi,  Fakultas  Kedokteran  Hewan,  Institut Pertanian  Bogor.  Proses  evaporasi  dilakukan  di Laboratorium  Pusat  Antar  Universitas,  Institut Pertanian  Bogor.  Pengujian  antioksidan  dan inhibitor  tirosinase  dilakukan  di  Pusat  Studi Biofarmaka Tropika, Institut Pertanian Bogor.
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah timbangan digital, blender , peralatan metode maserasi, evaporator , waterbath, desikator, vortex, microplate,  micropipette ,  inkubator,  dan  ELISA microplate  reader .  Bahan-bahan  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  ekstrak  Bungatelang putih, vitamin C, asam kojat, etanol 96%, akuades, enzim  tirosinase,  dimetil  sulfoksida  (DMSO),  L- 3,4-dihidroksifenilalanin  (L-DOPA),  reagen  uji fitokimia dan (2,2-difenil-1-pikrihidrasil) DPPH
Pembuatan ekstrak Bungatelang putih dilakukan  dengan  metode  maserasi  menggunakan pelarut  etanol  96%.  Simplisia  bunga  telang ditimbang dengan perbandingan bunga telang putih dan pelarut etanol 96% sebesar 1:10.  Bunga telang putih  dimasukkan  ke  dalam  wadah  yang  berisi pelarut etanol 96%, lalu dimaserasi selama 24 jam. Setelah  24  jam,  bahan  tersebut  disaring  untuk mendapatkan ekstraknya. Proses maserasi dilakukan  selama  3  kali.  Filtrat  hasil  proses maserasi  dievaporasi  di  PAU  Bioteknologi  IPB menjadi  ekstrak  kental  Bungatelang  putih  dan disimpan  dalam  wadah  tertutup.  Selanjutnya, ekstrak  Bungatelang  putih  digunakan  dalam
pengujian  antioksidan,  inhibitor  tirosinase,  dan penapisan fitokimia.
Uji  antioksidan  metode  DPPH  (Salazar- Aranda et al ., 2011). Stok DPPH 125 μM disiapkan dengan cara 2.5 mg DPPH dilarutkan dengan etanol dalam labu ukur dan ditera hingga  volume 50 mL, labu ukur kemudian dilapisi dengan aluminium foil. Preparasi  sampel  dan  vitamin  C  dilakukan  dengan cara  masing-masing  ditimbang  sebanyak  10  mg. Sampel  dan  vitamin  C  dilarutkan  dengan  DMSO sebanyak  1  ml.  Campuran  disonikasi  hingga  larut dan  selanjutnya  divorteks.  Sampel  dibuat  dengan konsentrasi 50, 100, 150, 200, dan 250 ppm.
Sebanyak  100  μL  sampel  dan  vitamin  C dimasukkan  ke  dalam microplate .  Sampel  ulangan satu dan dua ditambahkan DPPH sebanyak 100 μL. Khusus  kontrol  negatif  hanya  ditambahkan  etanol sebanyak 100 μL. Microplate diinkubasi pada suhu ruang  dalam  kondisi  gelap  selama  30  menit. Setelah  diinkubasi,  dilakukan  pengukuran  dengan ELISA microplate reader dengan panjang gelombang  517  nm.  Penentuan  persentase  inhibisi dihitung dengan menggunakan rumus :
Menurut  Wijaya  (2014),  hasil  perhitungan dimasukkan  ke  dalam  persamaan  regresi  dengan konsentrasi  sampel  sebagai  absis  (sumbu  x)  dan nilai  persen  inhibisi  antioksidan  sebagai  ordinat (sumbu y). Persamaan regresi linier yang diperoleh dalam bentuk y = a(x)+b digunakan untuk mencari Inbition  Concentration 50%  (IC 50 )  dari  masing- masing  sampel  dengan  menyatakan  nilai y  sebesar 50  dan  nilai  x  yang  akan  diperoleh  sebagai  IC 50 . Nilai IC 50 menyatakan besarnya konsentrasi larutan
sampel  yang  dibutuhkan  untuk  mereduksi  radikal bebas DPPH sebesar 50%.
Uji antioksidan penapisan fitokimia (Modifikasi  Harborne,  1987)  identifikasi  alkaloid. Beberapa  tetes  ammonia  ditambahkan  ke  1  gram sampel  lalu  dihaluskan.  Selanjutnya,  sebanyak  5 mL kloroform ditambahkan dan disaring. Kemudian, filtrat ditambahkan dengan asam sulfat. Lapisan  asam  tersebut  dibagi  3  bagian.  Bagian  1 ditambahkan  reagen  Dragendrof,  apabila  warna jingga maka bereaksi positif. Bagian 2 ditambahkan reagen  Mayer,  apabila  berwarna  putih  maka bereaksi  positif.  Bagian  3  ditambahkan  reagen Wagner,  apabila  berwarna  coklat  maka  bereaksi positif.
Identifikasi  Flavonoid.  Sebanyak  5  gram sampel ditambahkan akuades kemudian dipanaskan selama  5  menit  dan  disaring.  Hasil  saringan ditambahkan serbuk magnesium, asam klorida:etanol  (1:1),  dan  amil  alkohol.  Apabila muncul  warna  jingga,  maka  reaksi  dinyatakan positif.
Identifikasi  Tanin.  Sebanyak  5  gram  sampel ditambahkan aquades kemudian dipanaskan selama 5 menit dan disaring. Hasil saringan ditambahkan 3 tetes besi (III) klorida 10%. Apabila muncul warna hitam kehijauan, maka reaksi dinyatakan positif.
Identifikasi  Saponin.  Sebanyak  5  gram sampel ditambahkan aquades kemudian dipanaskan selama  5  menit  dan  disaring.  Hasil  saringan kemudian  dikocok.  Apabila  menghasilkan  buih stabil, maka reaksi dinyatakan positif.
Identifikasi Triterpenoid dan Steroid. Sebanyak 1 gram sampel ditambahkan etanol panas kemudian  disaring.  Hasil  saringan  dipanaskan hingga  kering  kemudian  ditambahkan  1  mL  dietil eter  dan  dihomogenkan,  kemudian  ditambahkan  1
tetes  asam  sulfat  pekat  dan  1  tetes  asetat  anhidrat. Jika  positif  mengan  dung  triterpenoid,  maka  akan muncul  warna  merah/ungu.  Jika  positif  steroid, maka akan muncul warna hijau/biru.
Uji  inhibitor  tirosinase.    Pengujian  aktivitas inhibitor  tirosinase  mengacu  pada  metode  yang dilakukan  oleh  Batubara et  al .  (2010).  Pembuatan larutan ekstrak pada berbagai konsentrasi dilakukan dengan  melarutkan  2  mg  ekstrak  padat  bunga telang putih menggunakan DMSO hingga mendapat  konsentrasi  sebesar  2000  ppm.  Ekstrak ini merupakan stok yang kemudian akan diencerkan dalam buffer natrium fosfat (50μM dan pH  6.5).  Konsentrasi  ekstrak  yang  digunakan  pada pengujian  ini  adalah  31.25  –  2000  ppm. Pengujian ini menggunakan asam kojat sebagai kontrol positif dan  diuji  pada  konsentrasi  7,8125  –  500  ppm. Asam  kojat  dipilih  karena  merupakan  inhibitor tirosinase  yang  memiliki  daya  hambat  dan kestabilan  yang  paling  tinggi  (Miyazawa et  al ., 2006).
Pengujian  ini  menggunakan microplate dengan  96  sumur.  Pada  lubang-lubang  sumur tersebut dimasukkan ekstrak dari berbagai konsentrasi  sebanyak  70  µL  lalu  ditambahkan dengan 30 µL tirosinase. Masing-masing konsentrasi  dilakukan  dengan  tiga  kali  ulangan. Setelah itu, plate disimpan diinkubasi pada suhu 37 °C  selama  5  menit.  Selanjutnya,  ditambahkan substrat  (2  μM  L-tirosin  dan  12  μM  L-DOPA) sebanyak  110  µL  ke  dalam  setiap  lubang  sumur,
microplate tersebut  diinkubasi  kembali  selama  30 menit.
Panjang  optik  dari  setiap  sumur  ditentukan menggunakan  ELISA microplate  reader pada panjang gelombang 492 nm. Selanjutnya, konsentrasi dari masing-masing ekstrak yang dapat
menghambat  setengah  dari  aktivitas  tirosinase (IC 50 )  ditentukan  dengan  cara  membandingkan absorbans  sampel  tanpa  penambahan  ekstrak dengan penambahan ekstrak pada panjang gelombang 492 nm.
Perhitungan  nilai  absorbansi  pada  kedua reaksi tersebut dihitung menggunakan rumus:
Nilai  IC 50 diperoleh  dari  persamaan  regresi linier  antara  %  inhibisi  (sumbu  y)  dan  konsentrasi ekstrak  (sumbu  x),  persamaan  regresi  linier  dapat dirumuskan sebagai berikut:
Y = a+bx Keterangan:
Y:  variabel  dependen,  a  :  konstanta,  b  :  koefisien regresi, x : variabel independen
Data  penelitian  dianalisis  secara  kuantitatif menggunakan Microsoft Excel 2016.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji penapisan fitokimia dilakukan sebagai uji pendahuluan yang bertujuan memberikan gambaran golongan  senyawa  metabolit  sekunder  yang terkandung  dalam  suatu  tanaman.  Hasil  dari  uji penapisan  fitokimia  bersifat  kualitatif  (Kristianti, 2008). Hasil pengujian penapisan fitokimia ekstrak Bungatelang putih dengan metode analisis menggunakan  fitokimia  warna  dapat  dilihat  pada Tabel 1.
Tabel  1  Kandungan  senyawa  fitokimia  ekstrak
Bungatelang putih Parameter Hasil Flavonoid Positif Alkaloid Negatif
Tanin Positif Saponin Positif Quinon Negatif Steroid Positif Triterpenoid Negatif Keterangan:
-Positif  : Sampel mengandung senyawa antioksidan terkait -Negatif : Sampel tidak mengandung senyawa antioksidan terkait
Berdasarkan  penelitian  ini,  hasil  pengujian kandungan  fitokimia  ekstrak  bunga  telang  putih menunjukkan sampel mengandung senyawa flavonoid, tanin, saponin, dan steroid.
Penentuan  aktivitas  antioksidan  dilakukan dengan menggunakan metode DPPH yang mengacu pada  Salazar-Aranda et  al .  (2011).  Metode  DPPH digunakan dengan tujuan untuk mengukur aktivitas penghambatan  radikal  bebas  suatu  senyawa. Mekanisme  penghambatan  aktivitas  radikal  bebas DPPH oleh antioksidan adalah dengan mendonorkan  atom  hidrogen  dari  sebagian  gugus hidroksilnya  ke  senyawa  radikal  bebas  DPPH sehingga membentuk senyawa radikal bebas DPPH yang  lebih  stabil  (DPPH-H).  Metode  DPPH  dapat digunakan  untuk  sampel  yang  berupa  padatan maupun  cairan  (Prakash et  al .,  2001).  Sampel Bungatelang  putih  yang  digunakan  dalam  uji  ini berbentuk  padatan.  Vitamin  C  digunakan  sebagai kontrol positif. Hasil uji aktivitas antioksidan dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2 Hasil uji aktivitas antioksidan Sampel
IC 50 (ppm) Ekstrak Bunga Telang 356,651795 Vitamin C 4,741763
Berdasarkan  hasil,  sampel  uji  ekstrak Bungatelang  putih  mempunyai  IC 50 sebesar 356,651795  ppm.  Hasil  ini  dinilai  lemah  apabila mengacu pada penelitian Phongpaichit et al. (2007) yang menyatakan suatu senyawa dikatakan sebagai antioksidan  sangat  kuat  apabila  nilai  IC 50 <  10 ppm,  kuat  apabila  nilai  IC 50 berkisar  antara  10-50 ppm,  lemah  apabila  IC 50 berkisar  antara  100-250 ppm,  dan  sangat  lemah  apabila  IC 50 diatas  250 ppm.  Vitamin  C  yang  digunakan  sebagai  kontrol positif  memiliki  nilai  IC 50 yang  secara  signifikan lebih  rendah  yaitu  sebesar  4,741763.  Hal  ini membuktikan  bahwa  vitamin  C  mempunyai antioksidan  yang  lebih  kuat  jika  dibandingkan dengan  ekstrak  bunga  telang  putih  .  Dalam  proses ekstraksi suatu bahan tanaman, banyak faktor yang dapat  mempengaruhi  kandungan  senyawa  hasil ekstraksi,  di  antaranya  jenis  pelarut,  konsentrasi pelarut, metode ekstraksi dan suhu yang digunakan untuk ekstraksi (Rima et al ., 2014).
Kandungan antosianin pada ekstrak Bungatelang  putih  merupakan  senyawa  flavonoid yang  memiliki  kemampuan  sebagai  antioksidan (Santoso,  2006).  Perubahan  pH  sampel  setelah sampel  diekstraksi  dapat  menyebabkan  kapasitas antioksidan  berubah  karena  mempengaruhi  kadar antosianin (Sakanaka et al . 2005). Semakin rendah nilai  pH,  maka  antosianin  akan  semakin  stabil (Widjanarko,  2008).  Jenis  pelarut  yang  digunakan dalam  proses  maserasi  juga  memberi  pengaruh terhadap  rendaman  sehingga  akan  memengaruhi jumlah  senyawa  aktif  yang  terlarut  dalam  proses ekstraksi Bungatelang putih.
Kapasitas  antioksidan  juga  dipengaruhi  oleh jenis  sampel  yang  digunakan  untuk  menjadi ekstrak. Penggunaan bunga telang putih segar lebih baik  berbanding  bunga  telang  putih  kering  karena
proses  pemanasan  dalam  pembuatan  simplisia menyebabkan  antosianin  pada  Bungatelang  putih terdegradasi (Kusrini et al ., 2017).
Pengujian  aktivitas  inhibitor  tirosinase  ini mengacu  pada  metode  yang  telah  dilakukan  oleh Batubara et al . (2010). Pengujian ini menggunakan asam kojat sebagai kontrol positif. Hasil pengujian aktivitas inhibitor dapat dilihat dari nilai IC50 pada Tabel 3.

## Tabel 3 Hasil uji aktivitas inhibitor tirosinase
Sampel Enzim Tirosinase IC50 (ppm) Diphenolase Monophenolase Ekstrak Bungatelang putih 4113,628069 5345,720677 Asam kojat 33,16 78,74
Hasil  uji  aktivitas  inhibitor  tirosinase menunjukkan  ekstrak  Bungatelang  putih  memiliki nilai  IC50  yang  tinggi  pada  kedua  reaksi  uji  yaitu sebesar  4113,628069  pada  diphenolase  dan 5345,720677  pada  monophenolase  yang  nilainya secara  signifikan  lebih  besar  dibandingkan  dengan asam  kojat,  yaitu  IC 50 sebesar  33,16  pada diphenolase  dan  78,74  pada  monophenolase. Penggolongan aktivitas inhibitor tirosinase tergolong  tidak  aktif  apabila  IC 50 >  1000  ppm (Miyazawa et  al .  2006).  Hal  ini  menunjukkan ekstrak  Bungatelang  putih  tidak  memiliki  aktivitas penghambatan terhadap enzim tirosinase. Onanong & Watcharee (2014) melaporkan ekstrak Bungatelang  putih  mempunyai  kandungan  fenolik yang  tinggi,  kadar  antosianin  yang  tinggi, menghambat  radikal  bebas  dengan  sederhana; namun  sebaliknya  mempunyai  proses  inhibitor tirosinase yang sangat lemah.

## KESIMPULAN
Hasil  pengujian  pada  penapisan  fitokimia menunjukkan ekstrak bunga telang putih mengandung  senyawa  flavonoid,  tanin,  saponin, dan  steroid  yang  berperan  sebagai  antioksidan. Ekstrak  Bungatelang  putih  memiliki  aktivitas antioksidan  yang  sangat  lemah  yaitu  dengan  IC 50 356,651795  ppm  berdasarkan  hasil  pengujian aktivitas  antioksidan  dengan  metode  DPPH.  Hasil pengujian inhibitor tirosinase menunjukkan ekstrak Bungatelang putih tidak memiliki aktivitas menghambat enzim tirosinase karena memiliki nilai IC 50 yang  tinggi yaitu  4113,628069  pada diphenolase dan 5345,720677
pada monophenolase.  Pengujian  antioksidan  dengan Bungatelang  putih  segar  perlu  diuji  agar  dapat diperoleh kadar antioksidan yang lebih tinggi.

## DAFTAR PUSTAKA
Batubara, I., & Adfa, M. (2013). Potensi tumbuhan sebagai  penghambat  kerja  enzim  tirosinase. Jurnal Sains & Matematika , 1(2), 52–56. Batubara,  Darusman,  Mitsunaga,  Rahminiwati,
Djauhari. (2010). Potency of medicinal plants as  tyrosinase  inhibitor  and antioxidant agent. Journal  of  Biological  Sciences ,  10(2),  138– 144.
Chang, T.S. (2009). An update review of tyrosinase inhibitors. International Journal of Molecular Sciences . 10, 2440–2475.
Farhamzah,  Kusumawati  AH.,  Alkandahri  MY, Hidayah H, Sujana D, Gunarti NS, et al . Sun Protection Factor Activity of Black Glutinous Rice  Emulgel  Extract  ( Oryza  sativa var glutinosa). Indian Journal of Pharmaceutical Education  and  Research .  2022;  56(1):  302- 310.
Hanani,  Mun’im,  Sekarini.  (2005).  Identifikasi senyawa antioksidan dalam spons Callyspongia sp  dari  Kepulauan  Seribu. Majalah Ilmu Kefarmasian , 2(3), 127–133.
Harborne, Jeffrey. (1987). Metode Fitokimia . Edisi ke-2. Bandung: ITB-Press.
Hidayah  H,  Amal  S,  Yuniarsih  N,  Farhamzah,
Kusumawati  AH,  Gunarti  NS,  et  al.  Sun
Protection  Factor  Activity  of  Jamblang Leaves Serum Extract ( Syzygium
cumini ). Pharmacognosy  Journal .  2023; 15(1): 134-140.
Kristianti,  Aminah,  Tanjung,  Kurniadi.  (2008).
Buku  Ajar  Fitokimia .  Surabaya:  FMIPA Universitas.
Kusrini,  Tristantini,  Izza.  (2017).  Uji  aktivitas ekstrak  Bungatelang  putih  putih  (Clitoria ternatea)  sebagai  agen  anti-katarak. Jurnal Jamu Indonesia , 2(1), 30–36.
Kusumawati  AH,  Farhamzah  F,  Alkandahri  MY,
Sadino A, Agustina LS, Apriana SD.
Antioxidant  Activity  and  Sun Protection Factor of Black Glutinous Rice ( Oryza sativa var. glutinosa). Tropical  Journal  of  Natural Product Research . 2021; 5(11): 1958-1961. Miyazawa,  M.,  &  Tamura,  N.  (2006).  Inhibitory compound  of  tyrosinase  activity  from  the sprout of Polygonum hydropiper L.
Biological  and  Pharmaceutical  Bulletin , 30(3), 595–597.
Mukherjee,  Kumar,  Kumar,  Heinrich.  (2003).  The ayurvedic  medicine Clitoria  ternatea from traditional  use  to  scientific  assessment.
Journal of Ethnopharmacology , 120(3), 291– 301.
Onanong,  R.,  &  Watcharee,  K.  (2014).  The comparative  study  in  bioactivities  of  Rang jeud,  Butterfly  pea  and  Red  grape  peel.
Pharmaceutical  Chemistry  and  Natural Products , 12(1), 61–69.
Phongpaichit,  Nikom,  Rungjindamai,  Sakayaroj, Hutadilok, Rukachaisirikul, Kirtikara. (2007). Biological activities of extracts from endophytic  fungi  isolated  from  garciana plants. FEMS  Immunology  and  Medical Microbiology , 51(3), 515–525.
Prakash,  Rigelhof,  Miller.  (2001).  Antioxidant activity. Medallions Labs , 19(2), 1–4.
Rima, Elisa, Akhmad, Erna. (2014). The comparasion  of  extraction  method  and solvent  variation  on  yield  and  antioxidant activity of Brassica oleracea L. var. capitata f. ruvra  Extract. Traditional  Medicine  Journal , 19(1), 43–48.
Sakanaka,  Tachibana,  Okada.  (2005).  Preparation and  antioxidant  properties  of  extracts  of Japanese  persimmon  leaf  tea  (Kakinocha- cha). Food Chemistry , 89(4), 569–575. Salazar-Aranda, Perez-Lopez, Lopez-Arroyo,
Alanis-Garza,  Waksman  de  Torres.  (2011). Antimicrobial  and  antioxidant  activities  of plants  from  Northeast  of  Mexico. Evidence-
Based Complementary and Altenative Medicine , 1(1), 1–6. Santoso,  Umar.  (2006). Antioksidan .  Yogyakarta:
Sekolah  Pasca  Sarjana  Universitas  Gadjah Mada. Shyamkumar, & Ishwar B. (2012). Antiinflammatory, analgesic and
phytochemical  studies  of  Clitoria  ternatea flower extract. International Research
Journal of Pharmacy , 3(3), 208–210.
Uma, Prabhakar, Rajendran. (2009). Phytochemical analysis and antimicrobial activity of Clitoria ternatea  against  extended  spectrum  beta lactamase  producing  enteric  and  urinary pathogens. Asian  Journal  of  Phamaceutical and Clinic Research , (4), 94–96. Vinolina,  NS.  (2014). Peningkatan  Produksi Centellosida dan Pegagan (Centella asiatica) Melalui  Pemberian Fosfor dan  Metil
Jasmonat dengan Umur Panen yang Berbeda .  Disertasi.  Universitas  Sumatera Utara.
Widjanarko,  Simon.  (2008). Efek  Pengolahan Terhadap  Komposisi  Kimia  dan  Fisik  Ubi Jalar Ungu dan Kuning . Yogyakarta: Liberti. Wijaya,  Paendong,  Abidjul.  (2014)).  Skrining fitokimia  dan  uji  aktivitas  antioksidan  dari daun  nasi  (Phrynium  capitatum)  dengan metode  DPPH  (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil). Jurnal  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam  Universitas  Sam  Ratulangi  Online , 3(1), 11–15.
Winarsi  Hery.  (2007). Antioksidan  Alami  dan Radikal  Bebas  Potensial  dan  Aplikasinya dalam Kesehatan . Yogyakarta: Kanisius.