Abstrak — Perbanyakan  tanaman  Moringa  oleifera  secara generatif cukup sulit dilakukan karena kemampuan perkecambahan  bijinya  rendah  kelangsungan  hidupnya  rendah, pertumbuhan  membutuhkan  waktu  yang  lama  dan  kurangnya metode perbanyakan secara vegetatif. Salah satu alternatif untuk mengatasi kendala tersebut adalah dengan melakukan perbanyakan  tanaman  secara  vegetatif  melalui  pendekatan bioteknologi yaitu teknik  kultur in  Vitro  dan teknik  enkapsulasi yang  dapat  menghasilkan  benih  sintetik.  Tujuan  dari  penelitian ini  mengetahui  tahapan  yang  dilakukan  pada  proses  produksi benih  sintetik  tanaman  Moringa  oleifera.  Tahapan  yang dilakukan  pada  penelitian  ini  adalah  induksi  kalus  embriogenik dalam medium MS + NAA 1 mg/L + Kinetin 1 mg/L. Kemudian kalus  embriogenik    yang  didapatkan  akan  dipindahkan  ke medium  maturasi  BAP  3  mg/L.  Pada  tahap  maturasi  terjadi perkembangan  kalus  embriogenik  menjadi  embrio  somatik. Embrio somatik yang didapatkan akan dienkapsulasi menggunakan Alginat dengan konsentrasi 4% dan diletakkan di CaCl2  konsentrasi  75  mM,  saat  benih  sudah  mengeras  dibilas menggunakan  aquades.  Benih  yang  dhasilkan  memiliki  warna bening dan embrio berwarna putih kekuningan dengan diameter berkisar  5,2 – 5,7  mm  dan  memiliki  berat  basah  berkisar  90 – 280 miligram.
Kata  Kunci — Benih  sintetik,  in  Vitro,  Kalus  embriogenik, Moringa oleifera.

## I. PENDAHULUAN
ELOR Moringa  oleifera L.  merupakan  tumbuhan  dari suku Moringaceae. Daunnya berbentuk bulat lonjong dan ukurannya  yang  kecil  tersusun  rapi  pada  sebuah  tangkai, biasanya dimasak  sebagai sayur, untuk pengobatan dan  untuk menjaga  kesehatan.  Daun M.  oleifera mengandung  potasium tiga  kali  lipat  daripada  pisang,  mengandung  kalsium  empat kali  lipat  lebih  banyak  daripada  susu,  memiliki  vitamin  C tujuh  kali  lipat  daripada  jeruk  dan  mengandung  vitamin  A empat  kali  lipat  daripada  wortel  [1]. M.  oleifera digunakan untuk menjaga kesehatan karena ekstrak daunnya menunjukkan  aktivitas  antimikroba  dan  antifungal  serta aktivitas antikanker [2].
Pemanfaatan M. oleifera yang luas menyebabkan kebutuhan tanaman  kelor  semakin  meningkat.  Pemenuhan  kebutuhan akan  kelor  mengalami  kendala  salah  satunya  perbanyakan tanaman M. oleifera yang  masih  dilakukan  secara konvensional  yaitu  melalui  biji  (generatif).  Perbanyakan tanaman M.  oleifera secara  generatif  cukup  sulit  untuk dilakukan  karena  kemampuan  perkecambahan  (viabilitas) bijinya  rendah,  kelangsungan  hidupnya  rendah,  pertumbuhan membutuhkan  waktu  yang  lama  dan  kurangnya  metode perbanyakan secara vegetatif [2].
Salah  satu  alternatif  untuk  mengatasi  kendala  tersebut adalah  dengan  melakukan  perbanyakan  tanaman  secara
vegetatif  melalui  pendekatan  bioteknologi  yaitu  teknik  kultur in  Vitro [3].  Tahap  penelitian  kultur in  Vitro mulai  dari eksplanting , pembentukan kalus sampai pada perkecambahan. Sel – sel  kalus  akan  berkembang  menjadi  embrio  melalui tahap – tahap  morfologi  yang  khas  tanpa  melalui  fase  gamet. Perkembangan  embrio  somatik  melalui  tahap  embrio  disebut embriogenesis somatik [4].
Kalus  dan  embriogenesis  somatik  yang  terbentuk  masih rentan  terhadap  kontaminasi  apabila  disimpan  dalam  waktu yang  relatif  lama.  Oleh  karena  itu,  upaya  perlindungan dilakukan  dengan  menggunakan  teknik  enkapsulasi  yang dapat  menghasilkan  benih  sintetik.  Benih  sintetik  dapat memberi  keuntungan  antara  lain  penyimpanan  yang  tahan lama,  mempermudah  distribusi  atau  penyebaran,  serta  dapat melindungi benih dari penyakit [5].
Teknologi  Benih  sintetik  telah  diterapkan  pada  berbagai macam  bahan  tanaman  seperti  kalus,  embrio  somatik,  akar bermbut  ( hairy  roots) ,  pucuk  tunas,  tunas  aksiler,  dan  benih biasa  dari  banyak  jenis  tanaman  [6].  Ekplan  pada  benih sintetik  akan  berada  di  dalam  mantel  (kapsul),  sehingga sifatnya mirip dengan benih zigotik.  Mantel tersebut berperan sebagai  endosperma  yang  mengandung  sumber  karbon, nutrisi, dan zat pengatur tumbuh (ZPT) [7].
Benih  sintetik  dibuat  dengan  pendekatan  enkapsulasi (alginasi)  dengan  cara  membungkus  embrio  somatik  dengan natrium alginat yaitu sejenis gel yang dapat diperkaya dengan hara,  zat  pengatur  tumbuh,  mikroorganisme  yang  bersifat simbiosis.  Alginat  adalah  polisakarda  yang  banyak  terdapat pada  dinding  sel  dari  spesies  ganggang  coklat.  Alginat  juga berfungsi sebagai bahan antibakteri, hal ini sesuai dengan hasil penelitian  yang  dilakukan  oleh  [8]  bahwa  bakteri  tidak  dapat tumbuh pada membrane alginat dengan adanya daerah zonasi- daerah zona bening di sekitar membrane alginate.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  tahapan  yang dilakukan  pada  proses  produksi  benih  sintetik  tanaman Moringa oleifera .

## II. METODOLOGI
Sterilisasi Eksplan Daun A.
Eksplan yang digunakan adalah daun M. oleifera . Sterilisasi dilakukan dalam dua tahapan, yaitu sterilisasi diluar LAF dan sterilisasi  didalam  LAF.  Sterilisasi  diluar  LAF,  daun  dicuci dengan  air  mengalir  selama  10  menit,  daun  direndam  pada larutan  surfaktan  selama  10  menit,  daun  dicuci  dengan  air mengalir  selama  5  menit.  Sterilisasi  di  dalam  LAF,  daun direndam pada larautan antifungal (Propinap 70%) selama  10 menit,  daun  direndam  pada  larutan  NaOCl  selama  2  menit, daun direndam dalam alkohol 96% selama 3 menit, kemudian daun direndam dengan aquades steril selama 2 x 5 menit.

## Produksi Benih Sintetik Tanaman Moringa oleifera
Chusnul Eka Safitri Himayani dan Wirdhatul Muslihatin Departemen Biologi, Fakultas Ilmu Alam, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS)
e-mail : w_muslih@bio.its.ac.id
K
Gambar.  1.  Kalus M.  oleifera berwarna  putih  kekuningan  (Dokumentasi pribadi, 2017).
Gambar.  2. Benih sintetik M.oleifera (Dokumentasi Pribadi, 2017).

## Induksi Kalus Embriogenik
B.
Medium  yang  digunakan  untuk  menginduksi  pertumbuhan kalus adalah medium Murashinge and Skoog (MS) ditambah 1 mg/L  NAA  dan  1mg/L  kinetin  [9]  dengan  penambahan sukrosa  30%.  Medium  dikondisikan  dalam  pH  5,8  dengan menambahkan  1N  NaOH  atau  1N  HCl,  kemudian  medium disterilisasi  menggunakan  autoclave  pada  suhu  121°C  selama 20  menit  dengan  tekanan  1,2  atm.  Eksplan  diinokulasi  ke medium di ruang  LAF dalam keadaan steril. Kultur disimpan pada  ruang  dengan  suhu  20-25°C  sampai  terbentuk  kalus embriogenik.

## Maturasi Embriosomatik
C.
Kalus embrogenik yang terbentuk disubkultur pada medium MS dengan penambahan BAP sebanyak 3mg.L, disiman pada ruang  dengan  suhu  20  -  25°C.  Pada  tahap  ini  mulai  diamati perkembangan embrio somatik dan akan dienkapsulasi

## Teknik Enkapsulasi
D.
Sodium alginat 4% ditambah dengan 0,3 mg/L NAA dan 3 mg/L  BAP  pada  medium  MS  cair  bebas  kalsium  yang mengandung  3%  sukrosa.  Enkapsulasi  dilakukan  dengan pencampuran yang lembut embrio pada gel sodium alginat dan MS.  Potongan  kalus  dimasukkan  ke  dalam  campuran  sodium alginat  dan  MS  cair  lalu  diambil  menggunakan  pipet  plastik steril sekali pakai dengan posisi semua bagian embrio tertutupi oleh  sodium  alginat  kemudia  dimasukkan  kedalam  larutan 75mM CaCl 2 selama 15 hingga 20 menit, kemudian butiran – butiran tersebut direndam dalam aquades untuk menghilangkan residu kalsium klorida.

## III. PEMBAHASAN
Eksplan  yang  digunakan  untuk  pembentukan  kalus embriogenik  adalah  daun  muda.  Kalus  akan  tumbuh  pada bagian  eksplan daun yang terpotong dan telah disterilkan, hal ini  dikarenakan  rangsangan  luka  yang  mampu  menyebabkan kesetimbangan  pada  dinding  sel  berubah  arah,  sebagian protoplas  mengalir  keluar  sehingga  mulai  terbentuk  kalus embriogenik  [10].  Kalus  embriogenik  yang  terbentuk  secara visual  menampilkan  warna  yang  hampir  sama  yaitu  putih kekuningan dengan struktur kalus yang remah ( friable ).
Kalus  embriogenik  yang  terbentuk  kemudian  akan dipindahkan kedalam medium maturasi. Maturasi adalah tahap perkembangan  kalus  embriogenik  menjadi  embrio  somatik
[11].  Tahap  perkembangan  kalus  embriogenik  ini  merupakan tahap perkembangan dari fase globular, fase hati, fase torpedo dan  fase  kotiledon.  Embrio  somatik  yang  dihasilkan  akan dienkapsulasi  menggunakan  alginat  dengan  konsentrasi  4%. Alginat  merupakan  salah  satu  hidrogel  yang  paling  tepat dalam  pembuatan  benih  sintetik  karena  diperkaya  hara,  zat pengatur  tumbuh,  mempunyai  daya  toksisitas  rendah,  biaya rendah,  tidak  terlalu  lengket,  cepat  menggumpal  dan mempunyai  sifat  biokompatibilitas  [12].  Alginat  dengan konsentrasi  4%  merupakan  konsentrasi  yang  paling  tepat untuk  perkecambahan  benih  sintetik.  Alginat  yang  memiliki konsentrasi  terlalu  tinggi  akan  menyebabkan  benih  yang dihasilkan  terlalu  keras,  sehingga  menghambat  kemampuan embrio  untuk  berkecambah.  Sesuai  dengan  pernyataan  [13] bahwa  kondisi  benih  yang  sangat  padat  mempengaruhi  daya hidup  embrio  dalam  benih  karena  kondisi  tersebut  tidak mendukung pertumbuhan dan perkembangan embrio selanjutnya.  Kekerasan  yang  tinggi  dalam  benih  diduga  akan menyebabkan lingkungan menjadi anaerobik, selanjutnya akan menghambat  respirasi,  dan  terhambatnya  laju  respirasi  akan menghambat proses perkecambahan benih.
Proses pembuatan benih sintetik diawali dengan pengambilan  larutan  alginat  4%  menggunakan  pipet  tetes, kemudian  bulb  pada  pipet  ditekan  secara  perlahan.  Ketika larutan  alginte  keluar  dari  ujung  pipet  segera  bagian  kalus embrio  somatik  yang  akan  dienkapsulasi  dimasukkan  ke dalam  tetesan  alginate  pada  ujung  pipet  menggunakan  pinset secara  cepat  dan  tepat  hingga  seluruh  bagian  eksplan terbungkus.  Kemudian  bulb  pipet  ditekan  kembali  secara perlahan  hingga  alginate  pada  ujung  pipet  menetes  dan  jatuh pada  larutan  75mM  CaCl 2 .  Selanjutnya  benih  sintetik  yang telah  mengalami  pengerasan  dikeluarkan  darilarutan  75mM CaCl 2 dan  direndam  kedalam  aquades.  Proses  pengerasan disebabkan  karena  terjadinya  pertukaran  ion  Na + dari  Na- alginat  dengan  Ca + ketika  diteteskan  ke  dalam  larutan  CaCl 2 membentuk  Ca  alginate.  Banyaknya  ion  Na+  yang  bertukar dengan ion Ca + menentukan tingkat kekerasan kapsul. Kapsul yang  terbentuk  diharapkan  cukup  padat  agar  tidak  mudah terjadi kebocoran [14].
2Na Alg (aq) + Ca 2+ (aq) Ca (Alg)2 (s) + 2Na + (aq) [15].
Karakteristik  benih  sintetik  yang  dihasilkan  adalah  benih mempunyai  diameter  berkisar  5,2 – 5,7  mm  dengan  warna bening dan tampak warna embrio putih kekuningan.
Benih  sintetik  yang  sudah  diukur  diameternya  kemudian ditimbang  untuk  mengetahui  berat  basah  awal  benih.  Benih yang  sudah  dihasilkan  mampu  untuk  disimpan  dalam  jangka waktu 1 tahun tanpa mengurangi viabilitas dan vigoritas benih. Selain itu  benih dapat ditanam pada medium perkecambahan dengan komposisi ZPT yang sesuai. Selanjutnya setelah benih mampu  berkecambah  maka  selanjutnya  akan  dipindahkan  ke medium  aklimatisasi  supaya  mampu  untuk  tumbuh  dan berkembang dengan baik. Berat basah awal benih berkisar 90 – 280 miligram.

## IV. KESIMPULAN
Kesimpulan  penelitian  ini  adalah  tahapan  yang  dilakukan untuk  proses  produksi  benih  sintetik  adalah  induksi  kalus embriogenik  dengan  menggunakan  medium  NAA  1  ppm  dan kinetin 1 ppm. Kemudian kalus embriogenik yang didapatkan
akan dipindah ke  medium  maturasi untuk  membentuk embrio somatik.  Embrio  somatik  yang  didapatkan  akan  dilakukan teknik enkapsulasi atau pembungkusan eksplan  menggunakan alginat  konsentrasi 4% dan  kemudian diletakkan pada larutan CaCl2  konsentrasi  75Mm  selama  15 – 20  menit.  Benih  akan mengeras  dan  direndam  kedalam  aquades.  Benih  yang  sudah dihasilkan mampu disimpan dalam jangka waktu 1 tahun.
.

## DAFTAR PUSTAKA
[1]  F.  Anwar,  L.  Said,  and  M.  Gilani., “ Moringa  oleifera  a  Food  Plant  with Multiple Medicinal Uses, ” Phyther. Res. , vol. 21, pp. 17 – 25, 2017.
[2]  B.  N.  Devendra,  P.  Talluri,  and  N.  Srinivas, “ Callus  Induction  and
Somatic Embryogenesis of Moringa oleifera Lam an anti-radiation Plant, ” J. Agric. Technol. , vol. 8, no. 6, pp. 1953 – 1963.
[3]  D.  F.  Wetherell, Plant  Tissue  Culture  Series .  New  Jersey:  Publishing Group Inc, 2008.