## UJI EFEKTIVITAS SEDIAAN SALEP EKSTRAK DAUN MIANA
( Coleus scutellarioides [L] Benth.) UNTUK PENGOBATAN LUKA YANG TERINFEKSI BAKTERI Staphylococcus aureus PADA KELINCI
( Oryctolagus cuniculus )
Prataya N. S. Marpaung 1) , Adeanne C. Wullur 1) , dan Paulina V. Y. Yamlean 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Miana  leaf  ( Coleus  scutellarioides [L]  Benth.)  contained  flavonoids,  tannins,  triterpenoids, steroids and essential oils are able to provide an antibacterial effect. The purpose of the study was to made a balm extract from Miana leaf ( Coleus scutellarioides [L] Benth.) and test the effectivenen against scar infected bacteria in rabbit skin. Proces of balm extract from Miana leaf has qualified the standard and tested on rabbit with 5 treatment groups, is injuries without negative control, positive control, Miana leaf ointment 20%, 40% and 80%. All the rabbit cut for  1,5  cm  and  given  0,2  mL  of  bacteria Staphylococcus  aureus .  The  wounds  were  applied with  ointment  three  times  daily.  Observation  was  conducted  everyday  for  8  days.  All  data was  tested  statistically  using  ANOVA  ( Analysis  Of  Variant )  followed  bay  LSD  ( Least Significant  Difference )  test.  The  result  shows  differences  that  the  Miana  leaf  formulation meets  the  ointment  test  requirement  according  to  Farmakope  Indonesia  Edition  III,  wounds were narrowed, scabs were formed and then wounds were closed. Statistical test showed that there were significant effects on wound healing in rabbit, F count > F table (37,167 > 5,19).
Key words : ointment, Coleus scutellarioides [L] Benth, Staphylococcus aureus , rabbit

## ABSTRAK
Daun  Miana  ( Coleus  scutellarioides [L]  Benth)  memiliki  kandungan  flavonoid,  tanin, triterpenoid, steroid dan minyak atsiri  yang mampu memberikan efek antibakteri. Penelitian ini  bertujuan  untuk  membuat  salep  dari  ekstrak  daun  Miana  ( Coleus  scutellarioides [L] Benth.)  dan  uji  efektivitas  sediaan  salep  terhadap  pengobatan  luka  yang  terinfeksi Staphylococcus  aureus pada  kulit  kelinci.  Pembuatan  salep  ekstrak  daun  Miana  yang  telah memenuhi  syarat  dan  diujikan  pada  hewan  uji  kelinci  sebanyak  5  ekor  dengan  perlakuan, dasar salep berlemak (kontrol negatif), Gentamicin salep (kontrol positif), salep daun Miana 20%,  40%  dan  80%.  Semua  kelinci  disayat  sepanjang  1,5  cm  dan  diberikan  bakteri Staphylococcus  aureus sebanyak  0,2  mL.  Luka  diolesi  tiga  kali  sehari  dengan  salep  yang diuji. Pengamatan luka dilakukan setiap hari selama 8 hari. Semua data diuji secara statistik menggunakan  ANOVA  ( Analysis  Of  Variant )  dan  dilanjutkan  dengan  uji  LSD  ( Least Significant  Different ).  Hasil  penelitian  menunjukkan  formulasi  salep  ekstrak  daun  Miana memenuhi  persyaratan  uji  salep  menurut  Farmakope  Indonesia  edisi  III.  Luka  sayat  yang dioleskan salep ekstrak daun Miana mengalami penyempitan luka, membentuk keropeng dan menutup luka mulai hari ke-3 (tiga). Hasil uji statistik menunjukkan efek signifikan terhadap penyembuhan luka pada kelinci, yaitu F hitung > F tabel (37,167 > 5,19).
Kata kunci : Salep, Coleus scutellarioides [L] Benth, Staphylococcus aureus , kelinci

## PENDAHULUAN
Luka  merupakan  proses  hilang  atau rusaknya  sebagian  jaringan  tubuh  atau rusaknya  kesatuan/komponen  jaringan, dimana  secara  spesifik  terdapat  substansi jaringan yang rusak atau hilang (Kaplan & Hentz,  1992).  Beragam  faktor  yang mempengaruhi penyembuhan luka membuat peneliti di seluruh dunia berusaha  untuk  menemukan  bahan-bahan atau  formula  obat  yang  dapat  membantu mempercepat  proses  kesembuhan  luka (Sugianti, 2005).
Salah  satu  tanaman  obat  yang  sering digunakan  masyarakat  untuk  pengobatan ialah  Miana  ( Coleus  scutellarioides [L] Benth).  Tanaman  Miana  mengandung senyawa-senyawa  yang  berkhasiat  sebagai antibakteri,  diare,  bisul,  infeksi  telinga, wasir  maupun  sebagai  penambah  nafsu makan  (Syamsuhidayat  dan  Hutapea, 1991).
Penelitian  tentang  khasiat  daun Miana  sebagai  antibakteri  telah  dilakukan oleh  Deby  A.  Mpila  (2012)  yaitu  ekstrak etanol  daun  Miana  ( Coleus  scutellarioides [L]  Benth)  memiliki  aktivitas  sebagai antibakteri terhadap
Staphylococcus
aureus , Eschericia  coli dan Pseudomonas aeruginosa .  Konsentrasi  ekstrak  20%, 40%  dan  80%  merupakan  konsentrasi efektif untuk menghambat bakteri Staphylococcus  aureus .  Konsentrasi  10%, 20%, 40% dan 80% merupakan konsentrasi  efektif  untuk  menghambat bakteri Eschericia coli . Sedangkan ekstrak 40%  dan  80%  merupakan  konsentrasi efektif untuk menghambat bakteri Pseudomonas aeruginosa .
Berdasarkan  aktivitas  antibakteri yang  dimiliki  daun  Miana,  maka  perlu dikembangkan suatu sediaan farmasi untuk mempermudah penggunaannya. Salah satu sediaan  farmasi  yang  dapat  memudahkan penggunaannya ialah salep.

## METODOLOGI PENELITIAN Bahan dan Alat
Bahan  yang  digunakan  ialah  daun Miana,  etanol  95%,  adeps  lanae,  vaselin
album, aquades, Gentamicin Salep, pH stik universal, larutan H 2 SO 4 , larutan BaCl 2 .2H 2 O,  larutan  NaCl  0,9%,  alkohol 70%, Nutrient Agar (NA), bakteri Staphylococcus  aureus ,  aluminium  foil, kapas,  kertas  label  dan  hewan  uji  yang digunakan ialah kelinci.
Alat  yang  digunakan  yaitu  batang pengaduk,  blender,  Erlenmeyer,  gelas ukur,  kandang,  lumpang  &  alu,  penangas air,  pencukur  bulu,  penggaris, surgical blade sterile , pot salep, rotary evaporator , timbangan  analitik,  sarung  tangan,  pisau, oven,  kertas  saring,  kamera,  pinset, hot plate , water bath , cawan petri, laminar air flow ,  autoklaf,  jarum  ose,  inkubator, mortar dan sudip .

## Prosedur Kerja

## Pembuatan Salep Ekstrak Daun Miana
Formulasi  dasar  salep  menurut  Agoes,  G. (2006) ialah :
R/ Adeps Lanae 15 g Vaselin album 85 g m.f. unguenta 100 g
Sediaan  salep  yang  akan  dibuat dalam  penelitian  ini  memiliki  konsentrasi ekstrak  daun  Miana  yang  berbeda-beda, yaitu 20%, 40%, 80% sebanyak 20 g untuk
3  kali  pemakaian  dalam  sehari  selama  8 hari pengamatan.
1. Cara pembuatan salep yang mengandung ekstrak daun Miana 20% R/ Ekstrak daun Miana  4 g Adeps Lanae 2,4 g Vaselin album 13,6 g m.f. unguenta 20 g 2. Cara pembuatan salep yang mengandung ekstrak daun Miana 40% R/ Ekstrak daun Miana  8 g Adeps Lanae 1,8 g Vaselin Album 10,2 g m.f. unguenta 20 g 3. Cara pembuatan salep yang mengandung ekstrak daun Miana 80% R/ Ekstrak daun Miana  16 g Adeps Lanae 0,6 g Vaselin album 3,4 g m.f. unguenta 20 g

## Jenis dan Rancangan Penelitian
Jenis  penelitian  ini  ialah  eksperimen laboratorium, dengan menggunakan Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  yaitu  5 (lima)  perlakuan  dan  masing-masing perlakuan  diulangi  sebanyak  2  (dua)  kali. Dengan  demikian  jumlah  kelinci  yang digunakan yaitu sebanyak 5 ekor kelinci.

## Penyiapan  Hewan  Uji  dan  Pembuatan Luka
Hewan  uji  yang  digunakan  dalam penelitian ini ialah kelinci sebanyak 5 ekor dengan  berat  badan  2,5-3  kg.  Sebelum perlakuan  kelinci  diaklimatisasi  dengan lingkungan  tempat  penelitian  selama  5 (lima) hari.
Sehari  sebelum  pembuatan  luka sayat, hewan uji dicukur bulunya di daerah punggung  sampai  licin.  Pada  saat  dibuat luka,  terlebih  dahulu  punggung  dan sekitarnya  dibersihkan  dengan  alkohol 70%.  Selanjutnya  dibuat  luka  sayatan dengan  ukuran  panjang  1,5  cm  pada bagian  punggung  kelinci  menggunakan Surgical  blade  sterile (pisau  bedah)
sampai  bagian  subkutan  dan  diberikan suspensi  bakteri Staphylococcus  aureus sebanyak  0,2  mL  pada  masing-masing lokasi.  Kulit  kelinci  yang  telah  terinfeksi bakteri Staphylococcus  aureus diberikan perlakuan  dengan  mengoleskan  0,3  g sediaan salep ekstrak daun Miana.
Perlakuan dan Pengamatan atau Pengumpulan Data
Perlakuan  dan  pengamatan  atau pengumpulan data pada penelitian ini ialah sebagai berikut:
a. Sebelum perlakuan, ditentukan kelinci dengan  cara  pengacakan.    Setelah  itu kelinci diberi tanda menurut perlakuan dengan menggunakan spidol. Misalnya  untuk  perlakuan  A  ulangan pertama  diberi  tanda  A 1 ,  untuk ulangan kedua diberi tanda A 2 .  Untuk perlakuan  B  ulangan  pertama  diberi tanda  B 1 ,  demikian  seterusnya  untuk perlakuan  lain  prinsip  pemberian tanda adalah seperti contoh tersebut.
b. Setelah  kelinci  dibuat  luka,  kemudian disuntikkan  bakteri Staphylococcus aureus di daerah sekitar luka.
c. Masing-masing kelinci diberi
perlakuan sebagai berikut : Perlakuan A :   Luka diberi dasar salep (Kontrol Negatif) Perlakuan B :  Luka diberi Gentamicin salep (Kontrol Positif) Perlakuan C :  Luka diberi salep ekstrak  daun  Miana 20% Perlakuan D :  Luka diberi salep ekstrak  daun  Miana 40% Perlakuan E :  Luka diberi salep ekstrak  daun  Miana
80%
d. Kemudian dilakukan pengamatan setiap  hari  selama  8  hari,  ukur diameter penutupan luka.
e. Sediaan  salep  diberikan  dengan  cara mengoleskan  secara  merata  pada daerah luka tiga kali sehari
f. Pengamatan  pada  luka  dilakukan sebelum  pemberian  dan  sesudah perlakuan sampai menunjukkan adanya tanda-tanda
kesembuhan dengan  cara  mengukur  diameter  luka menggunakan penggaris skala cm.

## Analisis Data
Untuk mengetahui adanya perbedaan efek  penyembuhan  luka  data  dianalisis dengan  metode  ANOVA  ( Analysis  Of Variant ).    Jika  ada  perbedaan  yang signifikan  maka  dilanjutkan  dengan  uji
LSD  ( Least  Significant  Different )  untuk meilhat perlakuan mana yang memberikan efek yang berbeda.

## HASIL DAN PEMBAHASAN HASIL
Hasil  pengukuran  panjang  luka terhadap proses penyembuhan luka terinfeksi  pada  kelinci  dapat  dilihat  pada tabel 1.
Tabel  1.    Hasil  Pengukuran  Panjang  Luka Terinfeksi pada Kulit Kelinci selama 8 hari
Keterangan: SEDM : Salep Ekstrak Daun Miana
Untuk  membandingkan  presentase penyembuhan  luka  antar  perlakuan,  maka panjang setiap luka dipresentasekan terhadap  panjang  luka  sebelum  perlakuan (hari ke 0) dianggap 0,00%.

## PEMBAHASAN
Pengukuran  panjang  luka  pada  tabel 1  untuk  semua  kelompok  perlakuan  pada hari  ke-0  sampai  hari  ke-8  mengalami perubahan  panjang  luka  atau  mengalami penyembuhan.  Dimana  pada  hari  pertama luka  untuk  semua  kelompok  perlakuan masih terbuka dan pada hari ke-4 tepi luka untuk  semua  perlakuan  mulai  menyempit. Perubahan  paling  signifikan  dilihat  pada hari  ke-6  dimana  luka  tertutup  sempurna
diperoleh  pada  SEDM  80%,  sedangkan pada  Gentamicin  salep,  SEDM  20%  dan SEDM  40%  belum  tertutup  sempurna. Tetapi,  untuk  luka  yang  diberi  dasar  salep sampai  hari  ke-8  belum  terjadi  penutupan luka secara sempurna pada kelinci. Artinya didalam salep ekstrak daun Miana mengandung  zat  aktif  yang  mampu meningkatkan  aliran  darah  ke  daerah  luka dan  juga  dapat  menstimulasi  fibroblast sebagai  respon  untuk  penyembuhan  luka. Sebaliknya daya penyembuhan luka terinfeksi  pada  kelinci  paling  rendah terdapat pada luka yang diberi dasar salep. Hal ini disebabkan karena kelompok luka  yang  diberi  dasar  salep  tidak mengandung  bahan/zat  yang  berkhasiat
Kelompok
Perlakuan Pengulanga n Panjang Luka Terinfeksi Staphylococcus aureus (cm) Hari Ke 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Kontrol Negatif 1 1.5 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 1 0.8 0.6 (Dasar Salep) 2 1.5 1.5 1.4 1.4 1.3 1.2 1 0.7 0.5 Kontrol Positif 1 1.5 1.4 1.1 0.9 0.7 0.6 0.5 0.4 0.2 (Gentamicin Salep) 2 1.5 1.4 1.1 0.9 0.8 0.6 0.5 0.4 0.3 SEDM 20% 1 1.5 1.4 1.3 1.1 1 0.8 0.4 0.2 0 2 1.5 1.4 1.2 1 0.9 0.8 0.6 0.5 0.1 SEDM 40% 1 1.5 1.3 1 0.7 0.5 0.4 0.2 0 0 2 1.5 1.3 1 0.8 0.6 0.5 0.3 0.1 0 SEDM 80% 1 1.5 1.3 1.1 0.6 0.4 0.3 0 0 0 2 1.5 1.3 1 0.7 0.5 0.4 0.1 0 0
untuk  menutupi  luka  dan  kelompok  ini juga  mengalami  penyembuhan  luka  yang ditandai dengan mengecilnya panjang luka pada  kelinci  itu  artinya  tubuh  yang  sehat mempunyai  kemampuan  alami  untuk
melindungi dan memulihkan dirinya (Klokke, 1980).
Hasil  pengujian  ANOVA  dengan menggunakan  uji  F  menunjukkan  nilai  F hitung  sebesar  37,167  dan  sig.  0,001.
Jika  dibandingkan  penggunaan  F tabel, perhitungan V1 menggunakan jumlah  varian  (perlakuan)  dikurangkan  1, memperoleh  nilai  4  dan  nilai  V2  dengan menggunakan jumlah sampel (10) dikurangkan  jumlah  varian  (5),  sehingga diperoleh  nilai  5.  Pada  titik  inilah diperoleh  F  tabel  bernilai  5,19.  Sehingga, F hitung lebih besar dari F tabel (37,167 > 5,19)  dan  dapat  disimpulkan  rata-rata perlakuan  untuk  panjang  luka  terinfeksi hari ke-0 sampai ke-8 (cm) ada perbedaan yang  signifikan  dan  terbukti  secara sistematik. Hasil pengujian LSD menunjukkan  pasangan  kelompok  kontrol negatif  &  SEDM  20%,  kontrol  negatif  & SEDM  40%,  kontrol  negatif  &  SEDM 80%,  kontrol  positif  &  SEDM  20%, kontrol  positif  &  SEDM  40%,  kontrol positif & SEDM 80% mengalami perbedaan dilihat pada lampiran 5 hasil uji LSD dengan taraf kepercayaan 95%.
Persentase  penyembuhan  luka  pada tabel  1,  dapat  dilihat  bahwa  luka  yang diberi  dasar  salep  sampai  hari  ke-8  jauh berada  dibawah  dibandingkan  dengan kelompok  perlakuan  lainnya,  hal  ini disebabkan  karena  dasar  salep  belum memberikan  efek  penyembuhan  yang berarti karena tidak mengandung bahan/zat aktif  yang  mempunyai  fungsi  sebagai
penutupan  luka  terinfeksi  dan  hanya mampu  memberikan  reaksi  perlawanan untuk sekedar menutupi luka.  Gentamicin salep berada lebih tinggi penyembuhannya dibandingkan  dengan  luka  yang  diberi dasar  salep.  Hal  ini  disebabkan  karena Gentamicin salep mengandung bahan aktif Gentamisina sulfat.
Gentamisina
merupakan  suatu  antibiotika  golongan aminoglikosida yang efektif untuk menghambat bakteri penyebab infeksi kulit primer maupun sekunder seperti Staphylococcus  aureus .  SEDM  20%,  40% dan 80% mampu melebihi tingkat penyembuhan  dari  Gentamicin  salep sebagai  kontrol  positif.  Artinya,  SEDM dapat  menyembuhkan  luka  terinfeksi  pada kelinci karena terdapat kandungan zat aktif yaitu flavonoid,  tanin, triterpenoid,  steroid dan  minyak  atsiri  yang  sama-sama berperan  dalam  menghambat bakteri penyebab  infeksi  kulit.  Sedangkan  urutan paling  atas  dari  gambar    diperoleh  SEDM 80% memberikan efek penyembuhan yang lebih  besar  dibandingkan  dengan  salep daun  Miana  20%  dan  40%.  Hal  ini disebabkan  karena  semakin  bertambahnya konsentrasi  ekstrak  daun  Miana,  maka semakin  cepat  waktu  yang  diperlukan untuk penyembuhan luka.

## ANOVA

## Panjang Luka
Sum of Squares Df Mean Square F Sig. Between Groups .446 4 .112  37.167  .001 Within Groups .015 5 .003 Total .461 9
Waktu kontak sediaan dengan permukaan  kulit  juga  berpengaruh  pada absorbsi obat melalui kulit. Semakin besar waktu  kontak  obat  pada  kulit  maka konsentrasi obat yang diabsorbsi oleh kulit juga  meningkat.  Dasar  salep  berlemak memiliki  waktu  kontak  yang  lebih  lama karena  sifat  dari  dasar  salep  berlemak sebagai penutup yang baik pada kulit. Dan juga  dasar  salep  berlemak  yaitu  campuran vaselin album dan adeps lanae  yang dapat menarik  lebih  banyak  air  sehingga  luka cepat kering,  tidak  membusuk  dan menutupi luka (Anief, 1997).
Dengan demikian, dapat disimpulkan bawha ekstrak daun Miana dapat diformulasikan  dalam  bentuk  sediaan salep, mempunyai efek sebagai penyembuhan  luka  terinfeksi  pada  kulit kelinci.

## PENUTUP Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  dan  pembahasan tentang  uji  efektivitas  sediaan  salep ekstrak daun Miana ( Coleus scutellarioides [L] Benth) untuk
pengobatan  luka  yang  terinfeksi  bakteri Staphylococcus  aureus pada kelinci,  maka dapat disimpulkan sebagai berikut:
1. Pembuatan  salep  ekstrak  daun  Miana menggunakan  dasar  salep  berlemak menghasilkan  sediaan  salep  yang memenuhi  syarat  salep  yaitu  uji organoleptik,  uji  homogenitas,  uji  pH dan uji daya sebar.
2. Salep  ekstrak  daun  Miana  dengan konsentrasi  20%,  40%  dan  80% memberikan  efek  penyembuhan  luka terinfeksi pada kulit kelinci.

## Saran
Saran  yang  dapat  diberikan  pada penelitian  ini  ialah  perlu  dilakukan penelitian  lebih  lanjut  untuk  membuat jenis  sediaan  lain  seperti  krim  dan  gel untuk pemakaian pada luka yang terinfeksi.

## DAFTAR PUSTAKA
Agoes,  G.  2006. Pengembangan  Sediaan Farmasi . ITB-Press, Bandung. Anief,  1997. Ilmu  Meracik  Obat .  Gadjah Mada University Press: Yogyakarta.
Kaplan  NE,  Hentz  VR.  1992. Emergency Management  of  Skin  and  Soft Tissue  Wounds,  An  Illustrated
Guide,  Little  Brown .  Boston: USA. Klokke. 1980. Pedoman Untuk Pengobatan  Luar  Penyakit  Kulit . PT. Gramedia : Jakarta.
Mpila D. A. 2012. Uji Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun Miana  ( Coleus  atropurpureus [L] Benth)  Terhadap Staphylococcus aureus , Escherichia  coli dan Pseudomonas  aeruginosa Secara In-Vitro. Pharmacon. 1(1): 15-20.
Sugianti B. 2005. Pemanfaatan Tumbuhan Obat Tradisional Dalam Pengendalian Penyakit Ikan. Institut Pertanian. Bogor. Syamsuhidayat  SS.,  Hutapea  JR.  1991. Inventaris Tanaman Obat Indonesia .  Departemen  Kesehatan RI,
Jakarta.