Hasil Skrining Aktivitas Sitotoksik Ekstrak Etanol Daun Kelengkeng ( Dimocarpus Longan ), Daun Kersen ( Muntingia Calabura ), dan Daun Alpukat ( Persea Americana ) terhadap Sel T47D Dan WiDr
Cytotoxic Activity Screening of Ethanolic Extract of Longan Leaves ( Dimocarpus longan ), Jamaican Cherry Leaves ( Muntingia calabura ), and Avocado Leaves ( Persea americana ) against T47D dan WiDr Cells
Ratna Yuliani * , Broto Santoso, Bella Permatasani, dan Diah Mukti Sari Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta, Indonesia *E-mail: ratna.yuliani@ums.ac.id
Received: 16 Oktober 2019; Accepted: 26 Desember 2019; Published: 27 Desember 2019

## Abstrak
Pengobatan kanker biasanya menimbulkan efek yang tidak diinginkan. Oleh karena itu obat antikanker yang aman  sangat diperlukan  dalam  pengobatan  kanker.  Salah  satu  sumber  obat  yang  dapat dieksplorasi  adalah tanaman.  Ekstrak  daun  kelengkeng  ( Dimocarpus  longan ),  daun  kersen  ( Muntingia  calabura ),  dan  daun alpukat ( Persea americana ) telah diteliti aktivitas sitotoksiknya terhadap beberapa sel kanker. Penelitian ini bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  sitotoksik  ekstrak  etanol  daun  kelengkeng,  daun  kersen,  dan  daun alpukat terhadap sel kanker payudara T47D dan sel kanker kolon WiDr serta mengetahui golongan senyawa yang terkandung dalam ekstrak yang mempunyai aktivitas tertinggi. Ekstrak etanol daun kelengkeng, daun kersen,  dan  daun  alpukat  diuji  aktivitas  sitotoksiknya  menggunakan  metode  3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5- difeniltetrazolium  bromida  (MTT).  Identifikasi  golongan  senyawa  di  dalam  ekstrak  etanol  daun  alpukat dilakukan  dengan  metode  kromatografi  lapis  tipis  menggunakan  silika  gel  GF 254 sebagai  fase  diam  dan campuran  n-heksan  dan  aseton  (6:4)  sebagai  fase  gerak.  Hasil  uji  sitotoksik  menunjukkan  bahwa  ekstrak etanol daun kelengkeng dan daun kersen sampai konsentrasi 1600 µg/mL tidak mampu menurunkan sel T47D dan WiDr hidup hingga 50%. Ekstrak daun alpukat dapat menurunkan persentase sel T47D dan WiDr hidup dengan  nilai  IC 50 berturut-turut  sebesar  790,679  µg/mL  dan  1072,2  µg/mL.  Ekstrak  etanol  daun  alpukat mengandung  senyawa  golongan  flavonoid,  fenolik,  dan  terpenoid.  Ekstrak  etanol  daun  kelengkeng,  daun kersen, dan daun alpukat tidak mempunyai aktivitas sitotoksik terhadap sel kanker payudara T47D dan sel kanker kolon WiDr.
Kata Kunci : antikanker, ekstrak, kelengkeng, kersen, alpukat

## Abstract
Cancer treatments usually cause adverse drug reactions. Therefore, safe anticancer drugs are needed in the treatment  of  cancer.  One  source  of  medicine  that  can  be  explored  is  plant.  Extracts  of  longan  leaves (Dimocarpus longan), jamaican cherry leaves (Muntingia calabura), and avocado leaves (Persea americana) have  been  tested  for  cytotoxic  activity  against  several  cancer  cell  lines.  This  study  aims  to  determine  the cytotoxic activity of ethanolic extract of longan leaves , jamaican cherry leaves , and avocado leaves against T47D and WiDr cells and to identify secondary metabolites in the extracts which have the highest activity. Ethanolic extract of longan leaves, jamaican cherry leaves, and avocado leaves were tested for their cytotoxic activity using the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) method. Identification of  secondary  metabolites  in  the  ethanolic  extract  of  avocado  leaves  was  carried  out  by  thin  layer chromatography method using silica gel GF 254 as the stationary phase and a mixture of n-hexane and acetone (6:4) as the mobile phase. Cytotoxic test results show that ethanolic extract of longan leaves and cherry leaves with concentration of up to 1600 μg/mL do not reduce the T47D and WiDr living cells to 50%. Avocado leaf extract  decreases  the  percentage  of  living  T47D  cells  and  WiDr  with  IC 50 values  of    790.679  µg/mL  and 1072.2  µg/mL,  respectively.  The  ethanolic  extract  of  avocado  leaves  contains  flavonoid,  phenolic,  and terpenoid. Ethanolic extract of longan leaves, cherry leaves and avocado leaves do not have cytotoxic activity against T47D and WiDr cells.
Keywords : anticancer, extract, longan, jamaican cherry, avocado

## PENDAHULUAN
Kanker  payudara  berada  pada  peringkat atas  di  antara  kanker  lain  yang  diderita  oleh perempuan. Kanker  payudara  pada  wanita  di dunia  menduduki  peringkat  pertama  dengan prevalensi sebesar 6.875.099 (30,1%) (Globocan, 2018a) sedangkan angka kematian yang  disebabkan  oleh  kanker  tersebut sebanyak 626.060 (15%) (Globocan, 2018b). Angka  kejadian  kanker  payudara  terus meningkat secara global (WHO, 2017). Pada tahun  2013,  penderita  kanker  payudara  di Indonesia  sebanyak  61.682  (Kemenkes  RI, 2015).  Di  Rumah  Sakit  Dharmais,  dalam rentang  tahun 2010-2013  terjadi  peningkatan kasus  baru  kanker  payudara  dari  711  kasus menjadi  819  kasus  dan  kematian  dari  93 menjadi  217  orang  (Kementerian  Kesehatan RI,  2015).  Selain  kanker  payudara,  kanker kolorektal juga menyebabkan banyak kematian.
Prevalensi kanker kolorektal dan kematian  akibat  kanker  tersebut  berada  pada posisi  ke-2  di  antara  kanker  lain  di  dunia. Prevalensi kanker kolorektal pada tahun 2018 di  seluruh  dunia  sebesar  4.789.635  (10,9%) (Globocan, 2018c) sedangkan angka kematiannya sebesar 880.792 (9,2%) (Globocan, 2018d). Di Rumah Sakit Dharmais angka  kejadian  dan  kematian  akibat  kanker kolon  meningkat  dalam  periode  2010-2013. Angka  kejadian  kanker  kolon  naik  sebanyak 54  kasus  sedangkan  angka  kematian  naik sebanyak 21 kematian (Kementerian Kesehatan RI, 2015).
Kanker  dapat  diobati  dengan  beberapa cara  diantaranya  kemoterapi.  Pemberian kemoterapi  merupakan  satu  pendekatan manajemen  pasien  kanker  dan  hal  ini  untuk memastikan  adanya  peningkatan  kualitas hidup  pasien.  Namun  kemoterapi  dapat menyebabkan adverse drug reactions (ADRs). Beberapa ADRs yang dirasakan oleh pasien  kanker  di  antaranya  alopesia  (rambut rontok), muntah, konstipasi, anoreksia, merasa  lemah,  anemia,  dan  sakit  pada persendian (Wahlang et al ., 2017). Efek obat yang tidak diinginkan sebaiknya
diminimalkan. Salah satu cara untuk mengatasi masalah tersebut adalah mengeksplorasi  senyawa  alam  pada  tanaman untuk mendapatkan senyawa dengan aktivitas antikanker yang tinggi tetapi mempunyai efek samping yang rendah.
Aktivitas sitotoksik ekstrak daun kelengkeng telah diteliti terhadap larva udang dan  sel  kanker.  Ekstrak  petroleum  eter, kloroform,  dan  etil  asetat  daun  kelengkeng telah  diuji  aktivitas  sitotoksiknya  terhadap larva  udang  ( Artemia  salina ).  Ketiga  ekstrak tersebut  mempunyai  kemampuan  untuk membunuh larva udang dengan konsentrasi < 13 µg/mL. Ekstrak etil asetat mempunyai nilai LC 50 yang  hanya  lebih  rendah  3  µg/mL  dari nilai  LC 50 vinkristin  sulfat  sebagai  kontrol positif (Ripa et al ., 2010). Ekstrak etanol daun kelengkeng
mempunyai aktivitas antiproliferatif  terhadap  sel  WEHI-164  dan THP-1 (Puspita et al ., 2019).
Ekstrak dan isolat daun kersen juga telah diuji aktivitas sitotoksiknya terhadap beberapa sel  kanker.  Nasir et  al .,  (2017)  melaporkan bahwa ekstrak metanol daun kersen mempunyai aktivitas antikarsinogenesis yang signifikan  terhadap  sel  kanker  kolon  tikus. Ekstrak  metanol  daun  kersen  juga  memiliki antivitas antiproliferatif terhadap beberapa sel dengan  IC 50 berkisar  antara  22  sampai 46  µg/mL  (Zakaria et  al .,  2011).  Senyawa 2’,4’-dihidroksikalkon  dan  5-hidroksi-3,7- dimetoksiflavon  yang  diisolasi  dari  daun kersen  mempunyai  aktivitas  sitotoksik  yang kuat terhadap sel HL60 (Sufian et al ., 2013). Ekstrak  etanol  daun  alpukat  yang mengandung  senyawa  golongan  flavonoid, alkaloid,  dan  saponin  mempunyai  aktivitas sitotoksik lemah terhadap sel HeLa (Mardiyaningsih dan Ismiyati, 2014).
Berdasarkan  kemampuan  ekstrak  untuk menghambat  beberapa  sel  kanker,  penelitian ini menguji aktivitas sitotoksik ekstrak etanol daun  kelengkeng,  daun  kersen,  dan  daun alpukat  terhadap  sel  kanker  payudara  T47D dan sel kanker kolon WiDr serta mengidentifikasi  golongan  senyawa  yang
terkandung di dalam ekstrak dengan aktivitas paling tinggi.

## METODE PENELITIAN Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah autoklaf (Hirayama), oven (Memmert), cytoculture  cabinet (ESCO),  inkubator  CO 2 (Binder),  mikroskop  (Olympus),  sonikator (Branson  2510), ELISA  reader (BioTek), mikropipet  (Socorex),  hemasitometer,  lampu UV 254 nm, dan 366 nm.

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  ekstrak  etanol  daun  kelengkeng, daun alpukat, dan daun kersen yang diperoleh dari  ekstraksi  serbuk  daun  menggunakan etanol  70%,  akuades, culture  flask , conical tube ,  kertas  filter,  media  Roswell  Park
Memorial Institute (RPMI), penisilin- streptomisin, fetal  bovine  serum (FBS), tripsin-EDTA, phosphate  buffered  saline (PBS),  dimetil  sulfoksida  (DMSO),  reagen MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5 difeniltetrazolium  bromida),  sodium  dodesil sulfat  (SDS)  10%  dalam  0,01  N  HCl,  etanol 70%, 96-well  plate , microcentrifuge  tube , sitroborat,  FeCl 3 ,  anisaldehid-asam  sulfat,  n- heksan p.a., aseton p.a., dan silika gel GF 254 . Uji Sitotoksik
Sel  yang  dibutuhkan  untuk  uji  MTT berjumlah  10 4 /sumuran.  Sel  dimasukkan  ke dalam tiap sumuran pada 96-well plate dengan volume  100  µL.  Tiga  sumuran  digunakan untuk  kontrol  media  sehingga  tidak  diisi  sel. Distribusi sel diamati di bawah mikroskop dan hasil  pengamatan  didokumentasikan.  Sel diinkubasi di dalam inkubator CO 2 pada suhu 37°C  sampai  sel  kembali  normal.  Setelah inkubasi,  media  dibuang  menggunakan  pipet Pasteur. Sebanyak  100  L  PBS  dimasukkan ke dalam  sumuran  yang  berisi sel, kemudian PBS  dibuang  menggunakan  pipet  Pasteur. Ekstrak  dalam  5  konsentrasi  dimasukkan  ke dalam sumuran (triplo). Sel diinkubasi dalam inkubator CO 2 pada suhu 37°C selama 24 jam. Pada  akhir  waktu  inkubasi,  sel  diamati dan didokumentasikan. Media dibuang
menggunakan pipet Pasteur lalu reagen MTT (0,5 mg/mL) sebanyak 100 µL dimasukkan ke dalam  tiap sumuran  termasuk  kontrol  media. Sel  diinkubasi  selama  4  jam  di  dalam inkubator  CO 2 pada  suhu  37  C.  Kondisi  sel diamati  menggunakan  mikroskop.  Ketika formazan telah terbentuk dengan jelas, 100 µL reagen stopper (SDS 10% dalam 0,01 N HCl) ditambahkan  ke  dalam  tiap  sumuran. Plate dibungkus  alumunium  foil  dan  diinkubasi  di tempat  gelap  pada  suhu  kamar  selama semalam.  Alumunium  foil  dan  tutup plate dibuka lalu plate dimasukkan ke dalam ELISA reader untuk dibaca serapannya pada panjang gelombang 550.
Serapan  kontrol  pelarut  lebih  rendah daripada  serapan  kontrol  sel  sehingga persentase  sel  hidup  dihitung  dengan persamaan 1.
Persentase sel hidup= abs perlakuan-abs kontrol media abs kontrol pelarut-abs kontrol media x100%……(1)
Grafik  log  konsentrasi  vs  persentase  sel hidup  dibuat  dan  persamaan  regresi  linier dihitung.  Nilai  IC 50 dihitung  menggunakan persamaan  tersebut.  Nilai  y  dimasukkan  = 50%  lalu  nilai  x  dihitung.  Jika  nilai  x  sudah diperoleh, dicari nilai antilognya. Nilai antilog = nilai IC 50 (Putri, 2013).

## Kromatografi Lapis Tipis
Kromatografi lapis tipis dilakukan untuk mengetahui golongan senyawa yang terkandung  di  dalam  ekstrak  daun  yang mempunyai  aktivitas  sitotoksik  tertinggi (ekstrak daun alpukat). Larutan ekstrak dalam etanol ditotolkan pada plat silika gel GF 254 lalu dielusi dengan fase gerak campuran n-heksan dan  aseton  (6:4).  Bercak-bercak  hasil pemisahan  pada  plat  diamati  di  bawah  sinar tampak, UV 254 nm, dan UV 366 nm. Bercak- bercak  tersebut  disemprot  reagen  sitroborat, FeCl 3 ,  dan  anisaldehid-asam  sulfat  untuk mengidentifikasi golongan senyawa pada tiap bercak.  Setelah  disemprot  dengan  sitroborat dan  dipanaskan  pada  suhu  105  C  selama  5
menit,  plat  diamati  di  bawah  UV  366  nm sedangkan  plat  lain  diamati  di  bawah  sinar tampak setelah penyemprotan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  uji  sitotoksik  ekstrak  terhadap  sel T47D  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol daun  kelengkeng,  daun  kersen,  dan  daun alpukat pada konsentrasi 1600  g/mL mampu menurunkan  persentase  sel  hidup  dengan kisaran 31-77% (Tabel 1). Ekstrak etanol daun alpukat pada konsentrasi 1600  g/mL mampu menurunkan  persentase  sel  hidup  sebanyak 77% sedangkan ekstrak etanol daun kelengkeng  dan  daun  kersen  menyebabkan penurunan  persentase  sel  hidup  kurang  dari 50%.  Hal  tersebut  mengindikasikan  bahwa ekstrak etanol daun alpukat memiliki aktivitas yang  paling  tinggi  dibandingkan  dua  ekstrak yang lain. Nilai IC 50 ekstrak daun kelengkeng dan  daun  kersen  secara  pasti  tidak  dapat dihitung  karena  pada  konsentrasi  tertinggi yang diujikan ekstrak belum dapat menurunkan persentase sel hidup hingga 50%. Ekstrak  etanol  daun  alpukat  memiliki  nilai IC 50 sebesar  790,679  µg/mL.  Srisawat et  al . (2013)  mengkategorikan  aktivitas  sitotoksik menjadi  4  yaitu  IC 50  20  g/mL  tergolong sangat aktif, IC 50 antara 21 sampai 200  g/mL tergolong sedang, IC 50 antara 201 sampai 500  g/mL tergolong lemah, dan IC 50 >500  g/mL tergolong  tidak  aktif.  Berdasarkan  kategori tersebut, ekstrak etanol daun alpukat tergolong  tidak  aktif  atau  tidak  mempunyai aktivitas  sitotoksik  terhadap  sel  T47D. Doksorubisin  yang  diujikan  pada  sel  T47D
sebagai  kontrol  positif  mempunyai  aktivitas sitotoksik  terhadap  dengan  nilai  IC 50 sebesar 57,677 µg/mL (Tabel 2).
Hasil  uji  sitotoksik  ekstrak  etanol  daun kelengkeng,  daun  kersen,  dan  daun  alpukat terhadap  sel  WiDr  menunjukkan  bahwa  tiap ekstrak  menunjukkan  aktivitas  yang  tidak sama. Ekstrak daun kelengkeng, daun kersen, dan  daun  alpukat  dengan  konsentrasi  1600 µg/mL  mampu  menurunkan  persentase  sel hidup berturut-turut sebesar 6,603%, 23,450%,  dan  70,877%  (Tabel  3).  Hasil tersebut  menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun alpukat  mempunyai  aktivitas  yang  paling tinggi dibandingkan ekstrak daun kelengkeng dan  kersen.  Nilai  IC 50 ekstrak  daun  alpukat terhadap  sel  WiDr  sebesar  1072,2  µg/mL sedangkan nilai IC 50 ekstrak daun kelengkeng dan kersen tidak dihitung karena ekstrak tidak mampu  menghambat  pertumbuhan  sel  WiDr hingga  50%.  Ekstrak  etanol  daun  alpukat tergolong tidak aktif karena mempunyai nilai IC 50 lebih  dari  500  g/mL.  Doksorubisin sebagai  kontrol  positif  mempunyai  aktivitas sitotoksik  yang  kuat  terhadap  sel  WiDr
Tabel 1. Hasil uji sitotoksik ekstrak etanol daun kelengkeng, daun kersen, dan daun alpukat terhadap sel T47D
Konsentrasi (  g/mL) Sel T47D hidup (%) Ekstrak etanol daun kelengkeng Ekstrak etanol daun kersen Ekstrak etanol daun alpukat 100 104,748 112,134 105,516 200 103,070 102,974 107,002 400 104,988 95,300 104,029 800 110,264 58,513 30,504 1600 68,825 50,935 22,398 IC 50 = - IC 50 = - IC 50 = 790,679 µg/mL
Tabel 2. Hasil uji sitotoksik doksorubisin terhadap sel T47D
Konsentrasi (  g/mL) Sel T47D hidup (%) IC 50 (µg/mL) 6,25 58,657 12,5 54,197 25 56,115 57,677 50 48,489 100 48,393
dengan nilai IC 50 sebesar 2,29 µg/mL (Tabel 4).
Nilai  IC 50 yang  sangat  jauh  berbeda antara ekstrak dan doksorubisin baik pada uji terhadap sel T47D maupun WiDr menunjukkan  perbedaan  sitotoksisitas  di antara  kedua  bahan.  Nilai  IC 50 menunjukkan konsentrasi yang dapat menurunkan persentase sel  hidup sebanyak 50% sehingga semakin kecil nilai IC 50 semakin toksik suatu bahan  terhadap  sel.  Dalam  penelitian  ini, doksorubin  mempunyai  aktivitas  sitotoksik yang  jauh  lebih  tinggi  dibandingkan  ekstrak karena  doksorubisin  merupakan  senyawa tunggal yang telah terbukti aktivitas sitotoksiknya sedangkan ekstrak masih mengandung banyak senyawa yang kemungkinan  tidak  semuanya  mempunyai aktivitas sitotoksik. Menurut National Cancer Institute  (n.d.b),  doksorubisin  merupakan antibiotik antrasiklin yang mempunyai aktivitas antineoplastik dengan cara menyisip di antara pasangan DNA sehingga mencegah replikasi  DNA.  Senyawa  tersebut  juga menghambat enzim topoisomerase II sehingga
penggabungan  untai  nukleotida  tidak  terjadi. Selain mekanisme aksi tersebut, doksorubisin dapat membentuk radikal bebas oksigen yang menghasilkan efek sitotoksik sekunder terhadap peroksidasi lipid di membran sel.
Hasil  uji  sitotoksik  ekstrak  etanol  daun kelengkeng,  daun  kersen,  dan  daun  alpukat menunjukkan bahwa ekstrak tidak mempunyai  potensi  sitotoksik  terhadap  sel T47D  dan  WiDr.  Penelitian  lain  mampu menemukan  ekstrak  yang  sangat  toksik terhadap sel kanker. Ekstrak metanol seluruh bagian tanaman Elephantopus mollis dan daun Kalanchoe crenata mempunyai aktivitas yang tinggi  terhadap  sel  kanker  payudara  MCF-7 dengan nilai IC 50 berturut-turut sebesar 3,97  0,48  g/mL dan 19,31  0,79  g/mL (Kuete et al .,  2017).  Ekstrak  metanol  dan  aseton kotiledon  buah Vatica  diospyroides tipe  LS bersifat  sangat  toksik  terhadap  sel  kanker payudara  MDA-MB-468  dengan  nilai  IC 50 sebesar  3,1  g/mL  sedangkan  ekstrak diklorometan  perikarpnya  mempunyai  IC 50 sebesar  18,2  g/mL  terhadap  sel  MCF-7 (Srisawat et  al .,  2013).  Alima  dan  Demayo (2018) menyatakan bahwa ekstrak etanol daun Canarium  ovatum dan Pangium  edule mempunyai  aktivitas  sitotoksik  yang  tinggi terhadap  sel  karsinoma  kolon  dengan  nilai IC 50 berturut-turut sebesar 4,39  0,59  g/mL dan 5,40  1,56  g/mL.
Hasil  penelitian  ini  berbeda  dengan penelitian lain yang menyatakan bahwa daun kelengkeng,  daun  kersen,  dan  daun  alpukat mempunyai  potensi  sitotoksik  terhadap beberapa sel kanker. Hasil uji sitotoksik daun
Tabel 3. Hasil uji sitotoksik ekstrak etanol daun kelengkeng, daun kersen, dan daun alpukat terhadap sel WiDr
Konsentrasi (  g/mL) Sel WiDr hidup (%) Ekstrak etanol daun kelengkeng Ekstrak etanol daun kersen Ekstrak etanol daun alpukat 100 101,377 108,453 110,020 200 106,693 106,693 111,347 400 102,303 97,870 85,193 800 99,870 96,543 63,473 1600 93,397 76,550 29,123 IC 50 = - IC 50 = - IC 50 = 1072,2 µg/mL
Tabel 4. Hasil uji sitotoksik doksorubisin terhadap sel WiDr Konsentrasi
(  g/mL) Sel WiDr hidup (%) IC 50 (µg/mL) 0,78125 56,427 1,5625 49,333 3,125 46,277 2,29 6,25 51,103 12,5 39,890
kelengkeng  yang  berbeda  teramati  pada penelitian lain. Ekstrak etanol daun kelengkeng  pada  konsentrasi  400  g/mL mampu  menghambat  proliferasi  sel  WEHI- 164  dan  THP-1  sebesar  39,13%  dan  51,06% (Puspita et  al .,  2019).    Jika  hasil  tersebut dibandingkan  dengan  hasil  penelitian  ini, ekstrak  daun  kelengkeng  dengan  konsentrasi yang  sama  tidak  mampu  menurunkan persentase  sel  T47D  dan  WiDr  hidup. Perbedaan hasil tersebut kemungkinan disebabkan oleh perbedaan sel yang digunakan  untuk  uji.  Sel  yang  berbeda kemungkinan  mempunyai  sensitivitas  yang berbeda  sehingga  ketahanan  untuk  dihambat oleh  ekstrak  juga  berbeda.  Dalam  hal  ini  sel WEHI-164  dan  THP-1  kemungkinan  lebih sensitif  terhadap  ekstrak  daun  kelengkeng daripada sel T47D dan WiDr.
Uji sitotoksik daun kersen dari beberapa penelitian juga menunjukkan hasil yang tidak sama. Pada penelitian ini ekstrak daun kersen tidak menunjukkan aktivitas sitotoksik terhadap  sel  T47D  dan  WiDr  tetapi  pada penelitian  lain  daun  kersen  terbukti  aktif sebagai  antikanker.  Ekstrak  metanol  daun kersen  dari  Malaysia  mempunyai  aktivitas antikarsinogenesis  pada  kanker  kolon  tikus yang  diinduksi  azoksimetan  (Nasir et  al ., 2017). Zakaria et al . (2011) juga melaporkan aktivitas antiproliferatif ekstrak metanol daun kersen  terhadap  sel  MCF-7,  HeLa,  HT-29, HL-60,  dan  K-562.  Senyawa  krisin  dan  5,7- dihidroksi-8-metoksiflavonol  yang  diisolasi dari  daun  kersen  berpotensi  sitotoksik terhadap beberapa sel kanker manusia dengan nilai ED 50 < 20  g/mL (Nshimo et al ., 1993). Perbedaan  sel,  tempat  tumbuh  tanaman,  dan bahan  yang  diuji  diduga  menyebabkan perbedaan  hasil  di  antara  penelitian  tersebut. Sel  yang  berbeda  kemungkinan  mempunyai perbedaan  sensivititas  terhadap  bahan  uji. Perbedaan  tempat  tumbuh  tanaman  dapat menyebabkan  perbedaan  senyawa  metabolit sekunder yang diproduksi (Juane et al ., 2011) sehingga aktivitas farmakologinya tidak sama. Senyawa  yang digunakan oleh Nshimo et al . (1993)  merupakan  senyawa  tunggal  hasil
isolasi  sehingga  aktivitasnya  lebih  tinggi dibandingkan ekstrak yang masih mengandung campuran senyawa.
Hasil  penelitian  ekstrak  daun  alpukat terhadap sel T47D dan WiDr berbeda dengan hasil  uji  terhadap  sel  lain.  Ekstrak  metanol daun alpukat mempunyai sifat sitotoksik yang sedang  terhadap  sel  HepG-2,  HT-29,  dan MCF-7  dengan  penghambatan  berturut-turut sebesar 73,6%, 64,5%, dan 51,2% (Khalifa et al .,  2013).  Mardiyaningsih  dan  Ismiyati (2014) melaporkan bahwa ekstrak etanol daun alpukat mampu menghambat pertumbuhan sel HeLa  dengan  nilai  IC 50 sebesar  360  µg/mL. Perbedaan  hasil  uji  sitotoksik  dari  beberapa penelitian  kemungkinan  besar  disebabkan oleh  perbedaan  sel  yang  digunakan  karena setiap  sel  mempunyai  kepekaan  yang  tidak sama terhadap zat yang diujikan.
Hasil  uji  sitotoksik menunjukkan  bahwa ekstrak etanol daun alpukat memiliki aktivitas sitotoksik paling tinggi di antara ekstrak yang diuji. Oleh karena itu, kandungan senyawa di dalam ekstrak etanol daun alpukat diidentifikasi dengan metode KLT menggunakan  reagen  semprot  sitroborat, anisaldehid-asam sulfat, dan FeCl 3 . Sitroborat digunakan  untuk  mengidentifikasi  adanya flavonoid  di  dalam  ekstrak  yang  ditandai dengan  fluoresensi  bercak  yang  berwarna kuning kehijauan di bawah UV 366 nm setelah disemprot  dan  dipanaskan  dalam  oven. Anisaldehid-asam sulfat dapat mengidentifikasi  senyawa  terpenoid  yang berwarna  ungu  setelah  penyemprotan.  FeCl 3 dapat digunakan untuk mendeteksi fenol yang ditandai  salah  satunya  dengan  terbentuknya warna  hitam  pada  bercak.  Hasil  uji  KLT menunjukkan bercak-bercak hasil elusi memberikan  reaksi  positif  terhadap  reagen semprot  sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa ekstrak daun alpukat mengandung  flavonoid, terpenoid, dan fenolik (Gambar 1).
Hasil identifikasi senyawa yang terkandung dalam daun alpukat pada penelitian  ini  tidak  sama  dengan  hasil penelitian  lain.  Mardiyaningsih  dan  Ismiyati (2014)  melaporkan  bahwa  ekstrak  etanolik
daun alpukat mengandung alkaloid, flavonoid, dan  saponin.  Dalam  penelitian  tersebut alkaloid dan saponin terdeteksi dalam ekstrak etanol  daun  alpukat  tetapi  tidak  terdeteksi pada  penelitian  ini.  Perbedaan  tersebut kemungkinan  disebabkan  oleh  perbedaan reagen semprot yang digunakan. Penelitian ini tidak  menggunakan  reagen  Dragendorff  dan vanilin-asam  sulfat  ini  sehingga  senyawa alkaloid dan saponin tidak teridentifikasi.
Walaupun ekstrak daun alpukat mengandung  metabolit  sekunder  flavonoid, terpenoid,  dan  fenolik  tetapi  ekstrak  tidak mempunyai  aktivitas  sitotoksik  terhadap  sel T47D dan sel WiDr. Kemungkinan senyawa- senyawa  yang  terkandung  di  dalam  ekstrak
tidak mempunyai target aksi pada sel atau sel yang  digunakan  tidak  sensitif  terhadap senyawa-senyawa  yang  terkandung  di  dalam ekstrak  sehingga  ekstrak  tidak  mampu menghambat  pertumbuhan  sel  T47D  dan WiDr.

## KESIMPULAN
Dari hasil penelitian ini dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun kelengkeng,  daun  kersen,  dan  daun  alpukat tidak bersifat sitotoksik terhadap sel T47D dan WiDr. Ekstrak etanol daun alpukat mengandung flavonoid, fenolik, dan terpenoid.

## Daftar Pustaka
Alima,  Z.  dan  Demayo,  C.G.,  2018.  Antioxidant and  Cytotoxic  Activities  of  Selected  Plant Extracts Against Human Non-Small Cell Lung Adenocarcinoma (A549), Human Colon Carcinoma  Cells  (HCT116)  and  Chinese  Hamster  Normal  Ovary  Cells  (AA8). International Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, 9(11), pp. 4562-4571.
Globocan,  2018a.  Estimated  Number  of  Prevalent  Cases  (5-year)  in  2018,  Worldwide,  All Cancers, Females, All Ages, [online], Terdapat di: http://gco.iarc.fr/today/online-analysis- pie?v=2018&mode=cancer&mode_population=continents&population=900&population s=900&key=total&sex=2&cancer=39&type=2&statistic=5&prevalence=1&population_ group=0&ages_group%5B%5D=0&ages_group%5B%5D=17&nb_items=7&group_can cer=1&include_nmsc=1&include_nmsc_other=1&half_pie=0&donut=0&population_gr
Gambar 1. Hasil kromatografi lapis tipis ekstrak etanol daun alpukat dengan fase diam silika gel GF254 dan fase gerak campuran n-heksan dan aseton dengan perbandingan 6:4
oup_globocan_id = (diakses pada 15 Agustus 2019).
Globocan, 2018b. Estimated Number of Deaths in 2018 Worldwide, All Cancesr, Females, All Ages, [online], Terdapat di: http://gco.iarc.fr/today/online-analysis- pie?v=2018&mode=cancer&mode_population=continents&population=900&population s=900&key=total&sex=2&cancer=39&type=1&statistic=5&prevalence=0&population_ group=0&ages_group%5B%5D=0&ages_group%5B%5D=17&nb_items=7&group_can cer=1&include_nmsc=1&include_nmsc_other=1&half_pie=0&donut=0&population_gr oup_globocan_id = (diakses pada 15 Agustus 2019).
Globocan,  2018c.  Estimated  Number  of  Prevalent  Cases  (5-year)  in  2018,  Worldwide,  All Cancers,  Both  Sexes,  All  Ages,  [online],  Terdapat  di: http://gco.iarc.fr/today/online- analysis- pie?v=2018&mode=cancer&mode_population=continents&population=900&population s=900&key=total&sex=0&cancer=39&type=2&statistic=5&prevalence=1&population_ group=0&ages_group%5B%5D=0&ages_group%5B%5D=17&nb_items=7&group_can cer=1&include_nmsc=1&include_nmsc_other=1&half_pie=0&donut=0&population_gr oup_globocan_id = (diakses pada 16 Agustus 2019).
Globocan, 2018d. Estimated Number of Death in 2018, Worldwide, All Cancers, Both Sexes, All Ages, [online], Terdapat di: http://gco.iarc.fr/today/online-analysis- pie?v=2018&mode=cancer&mode_population=continents&population=900&population s=900&key=total&sex=0&cancer=39&type=1&statistic=5&prevalence=0&population_ group=0&ages_group%5B%5D=0&ages_group%5B%5D=17&nb_items=7&group_can cer=1&include_nmsc=1&include_nmsc_other=1&half_pie=0&donut=0&population_gr oup_globocan_id = (diakses pada 16 Agustus 2019).
Juane, D., Xihan, M., Qin, W., Shaobing, P., Shechao, Z., 2011. Effects of Growing Location on the Contents of Secondary Metabolites in the Leaves of Four Selected Superior Clones of Eucommia ulmoides . Industrial Crops and Products, 34(3), pp. 1607-1614.
Kementerian Kesehatan RI, 2015. Stop Kanker. InfoDATIN, pp. 1-6.
Khalifa, N.S., El-Hallouty, S.M., Barakat, H.S., dan Salim, D.M., 2013. In Vitro Cytotoxic and Antioxidant Activities of Some Plant Extract on Different Human Cancer Cell Lines. The Egyptian Journal of Experimental Biology (Botany), 9(1), pp. 137-144.
Kuete, V., Fokou, F.W., Karaosmanoglu, O., Beng, V.P., dan Sivas, H., 2017. Cytotoxicity of the  Methanol  Extracts  of Elephantopus  mollis , Kalanchoe  crenata and  4  Other Cameroonian Medicinal Plants Towards Human Carcinoma Cells. BMC Complementary and Alternative Medicine, 17(280), pp. 1-9.
Mardiyaningsih, A. dan Ismiyati, N., 2014. Aktivitas Sitotoksik Ekstrak Etanolik Daun Alpukat ( Persea  americana Mill.)  pada  Sel  Kanker  Leher  Rahim  HeLa,  Traditional  Medicine Journal, 19(1), pp. 24-28.
Nasir, N.L.Md.,  Kamsani, N.E., Mohtarrudin, N., Othman, F., Tohid, S.F.Md., dan Zakaria, Z.A., 2017. Anticarcinogenic Activity of Muntingia calabura Leaves Methanol Extract Against The Azoxymethane-induced Colon Cancer in Rats Involved Modulation of The Colonic  Antioxidant  System  Partly  by  Flavonoids.  Pharmaceutical  Biology,  55(1),  pp. 2102-2109.
National  Cancer  Institute,  n.d.b.  Doxorubicin  (Code  C456),  (online),  Terdapat  di: https://ncit.nci.nih.gov/ncitbrowser/ConceptReport.jsp?dictionary=NCI_Thesaurus&ns=
NCI_Thesaurus&code=C456 [diakses pada 16 Agustus 2019).
Nshimo,  C.M.,  Pezzuto,  J.M.,  Kinghorn,  A.D.,  dan  Farnsworth,  N.R.,  1993.  Cytotoxic Constituent of Muntingia calabura Leaves and Stems Collected in Thailand. International Journal of Pharmacognosy, 31, pp. 77-81.
Puspita, R., Bintang, M., dan Priosoeryanto, B.P., 2019. Antiproliferative Activity of Longan ( Dimocarpus  longan Lour.)  Leaf  Extracts,  Journal  of  Applied  Pharmaceutical  Science, 9(05), pp. 102-106.
Putri,  H.,  2013.  Protokol:  Uji  Sitotoksik  Metode  MTT,  Cancer  Chemoprevention  Research Center, Fakultas Farmasi, UGM.
Ripa, F.A., Haque, M., dan Bulbul, I.J., 2010. In Vitro Antibacterial, Cytotoxic and Antioxidant Activities of Plant Nephelium longan . Pakistan Journal of Biological Sciences, 13(1), pp. 22-27.
Srisawat, T., Chumkaew, P., Heed-Chim, W., Sukpondma, Y., dan Kanokwiroon, K., 2013. Phytochemical  Screening  and  Cytotoxicity  of  Crude  Extracts  of Vatica diospyroides Symingron Type LS. Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 12(1), pp. 71-76.
Sufian, A.S., Ramasamy, K., Ahmat, N, Zakaria, Z.A., dan Yusof, M.I.M., 2013. Isolation and Identification of Antibacterial and Cytotoxic Compounds from The Leaves of Muntingia calabura L.. Journal of Ethnopharmacology, 146, pp. 198-204.
Wahlang,  J.B.,  Lashram,  P.D.,  Brahma,  D.K.,  Sarkar,  C.,  Lahon,  J.,  dan  Nongkynrih,  B.S., 2017. Adverse Drug Reactions Due to Cancer Chemotherapy in A Tertiary Care Teaching Hospital. Therapeutic Advances in Drug Safety, 8(2), pp. 61-66.
WHO,  2017.  Breast  Cancer,  Terdapat  di  http://www.who.int/cancer/prevention/diagnosis- screening/breast-cancer/en/ [diakses pada 1 November 2017].
Zakaria, Z.A., Mohamed, A.M., Jamil, N.S.M., Rofiee, M.S., Hussain, M.K., Sulaiman, M.R., The, L.K., dan Salleh, M.Z., 2011. In Vitro Antiproliferative and Antioxidant Activities of the Extracts of Muntingia calabura Leaves. American Journal of Chinese Medicine, 39(1), pp. 183-200.