## Jenis – jenis tumbuhan paku (Pteridofita) dari Hutan Universitas Riau, Provinsi Riaudan Pola Pita DNA berdasarkan Penanda DNA M13Primer
Ferns (Pteridohyte) of University of Riau Forest, Riau Province and their DNA band pattern based on the M13 DNA marker

## Nery Sofiyanti, Mayta Novaliza Isda
Jurusan Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Riau Kampus Bina Widya Jl. Pekanbaru Bangkinang KM 12.5, Panam, Pekanbaru, Riau. 28295.
Email : nery.sofiyanti@lecturer.unri.ac.id
Abstract. University of Riau  Forest, Riau Province is one of distribution area of ferns (Pteridophytes). This study aimed to identify fern species at University of Riau Forest and examined the DNA band pattern based on M13 DNA marker. Samples were collected from the field using exploration method and were then identified. DNA isolation was carried out using DNAeasy Plant Mini Kit (Qiagen), and amplified based on PCR method using DreamT aq Green PCR  Master  Mix  (2X)  (Thermo Scientific) with M13 DNA Marker. The inventorisation result showed a total of 26 fern species belong to 8 families were identified in this study. The electrophoresis result of PCR product gave the variaous DNA band pattern ranged from 200 to 2000 bp. DNA band pattern using M13 primer can be used to support the taxonomical data of fern taxa.
Key words : DNA, fern, M13 marker
Abstrak. Kawasan hutan di Universitas Riau, Provinsi Riau merupakan salah satu daerah distribusi tumbuhan paku (Pteridofita).  Kajian  ini  bertujuan  mengidentifikasi  jenis-jenis  tumbuhan  paku  di  Hutan  Universitas  Riau  dan mengetahui  pola  pita  DNA  menggunakan  penanda  DNA  universal  M13.  Sampel  dikoleksi    dari  lapangan menggunakan  metode  eksplorasi  dan  kemudian  diidentifikasi.  Isolasi  DNA  menggunakan  DNeasy  Plant  Mini  Kit (Qiagen), dan diamplifikasi berdasarkan metode PCR menggunakan DreamT aq  Green  PCR  Master  Mix  (2X) (Thermo Scientific) denganpenanda DNA M13 ( GAGGGTGGCGGTTCT), . Hasil inventarisasi menunjukan 26 jenis paku dari 8 famili telah diidentifikasi pada kajian ini. Hasilelektroforesis PCR menunjukanbahwa pola pita DNA yang dihasilkan bervariasi dengan ukuran berkisar antara 200 bp sampai 2000 bp. Pola pita DNA menggunakan penanda universal M13 dapat dijadikan data pendukung dalam taksonomi tumbuhan paku.
Kata kunci : DNA, paku, penanda M13,

## PENDAHULUAN
Hutan di Kawasan Universitas Riau merupakan  salah  satu  daerah  distribusi tumbuhan paku. Tumbuhan paku merupakan golongan  tumbuhan  yang  menasilkan  spora namun  sudah  mempunyai  berkas  pengankut sederhana.  Tujuan  kajian  ini  adalah  untuk menginventarisasi jenis-jenis tumbuhan paku yang berada di kawasan tersebut, serta untuk mengetahui pola pita DNA dengan menggunakan penanda  DNA M13.  Penanda ini merupakan penanda DNA yang universal dan  sudah  banyak  digunakan  oleh  para taksonomist  untuk  mengetahui  hubungan
kekerabatan baik  hewan, tumbuhan maupun mikroorganisme, karena memberikan variasi pola pita yang beragam (Garcia-Lopez et al. 2015)

## METODE PENELITIAN

## Pengambilan sampel dan identifikasi
Spesimen yang digunakan adalah jenis- jenis  tumbuhan  paku  yang  dikoleksi  dari Hutan  Universitas  Riau,  Provinsi  Riau. Setiap spesiemen yang dikoleksi didokumentasikan,
dibuat herbarium, dikarakterisasi dan diidentifikasi berdasarkan Piggot (1998) dan Sofiyanti et al. (2015).

## Isolasi DNA
Bahan  isolasi  DNA  adalah  100  mg daun  segar  atau  20  mg  daun  kering.  Isolasi DNA dilakukan berdasarkan protocol
DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen). Pengecekan DNA total hasil isolasi mengacu pada Seng et al . (2014)

## Polymerase Chain Reaction (PCR)
Campuran  untuk  PCR  mengacu  pada protokol  DreamTaq  Green  PCR  Master Mix  (2X)  dengan  komposisi  sebagai berikut : Dream Taq Green PCR master mix (x) 12,5 µl, DNA 1 µl, M13 markr 2 µl, ddH2O  9,5  µl.  Urutan  basa  penanda  DNA M13  universal  ( GAGGGTGGCGGTTCT), siklus  PCR  dan  pengecekan  hasil  PCR dilakukan  berdasarkan  Meyer  &  Mitchell (1995).    Untuk  memperjelas  pola  pita  DNA yang dihasilkan maka dilakukan reamplifikasi dengan melakukan PCR kedua. Komponen  PCR    kedua  sama  dengan  PCR pertama  namun  DNA  diganti  dengan  hasil produk PCR pertama (Ivo & Dana 2003).

## Analisa data
Data  hasil  identifikasi  ditabulasikan dan  dianalsis  secara  deskriptif.  Sedangan pola pita DNA dibuat penskoran, 1 untuk pita yang  ditemukan  dan  0  untuk  pita  yang ditemukan. Hasil penskoran akan dilanjutkan denggan pembuatan dendrogram menggunakan  metode Unweighted  Pair- Group  Method  with  Arithmetical  Averages (UPGMA)  Sneath  and  Sokal  (1973)  dengan program NTsyst (Rohfl 1998).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Jenis jenis paku di Hutan Universitas Riau Hasil inventarisasi jenis-jenis tumbuhan paku diperoleh 26 jenis tumbuhan paku dari lokasi kajian. Tabel 1 menyajikan jenis-jenis  paku  yang  diidentifikasi.Tabel  1 menunjukan bahwa pada kajian ini dijumpai 2  kelompok  paku,  yaitu  eusporangiate  dan leptosporangiate.
Kelompok
paku
eusporangiate  merupakan  kelompok  paku yang mempunyai sporangium yang berkembang  dari  beberapa  sel,  sehingga membentuk kumpulan sporangia  yang besar (Andrew  2008;  Sofiyanti et  al. 2015). Sedangkan  pada  paku  leptosporangiate, sporangia berkembang dari satu sel sehingga mempunyai  ukuran  lebih  kecil  (Pryer et  al . 2004). Pada penelitian ini hanya 1 famili dari kelompok paku Eusporangiate yang ditemukan  yaitu  famili  Lypodiaceae.  Famili ini  mempunyai  karakteristik  daun  mikrofil dan tulang daun tidak bercabang (Pryer et al . 2004;  Sofiyanti et  al .  201).  Jenis  yang ditemukan  adalah Lycopodiella  cernua atau yang dikenal dengan nama lokal Paku Kawat (Sofiyanti et al. 2015). Paku ini mempunyai daun  menyerupai  sisik  yang  menyelubungi batang dan cabangnya dan sporangia tersusun pada ujung cabang membentuk strobilus.
Pada umumnya, kelompok paku Leptosporangiate  mempunyai  jumlah  jenis yang lebih banyak dibandingkan Eusporangiate. Paku leptosporangiate mempunyai daun yang lebih besar dibandingkan golongan Eusporangiate,
dengan  bentuk  daun  dan  pertulangan  dauan yang beragam. Selain itu jenis-jenis leptosporangiate mempunyai sporangia yang membentuk sorus yang ukurannya lebih kecil dari strobilus.  Pada penelitian ini ditemukan 8  famili  yaitu  Pada  umumnya  klasifikasi tumbuhan  paku  pada  tingkat  famili  lebih menekankan pada karakter bentuk dan posisi sorus,  dibandingkan  karakter  lain  seperti akar,  rhizom  dan  daun.  Oleh  Karena  itu sering  dijumpai  anggota  dalam  1  famili memiliki  perbedaan  morfologi  yang  tinggi pada  karakter  akar,  rhizome  dan  daun. Seperti  yang  dijumpai  pada  penelitian  ini yaitu pada famili Aspleniaceae, Blechnaceae, Polypodiaceae  dan  Pteridaceae.  Gambar  1 menyajikan  contoh  paku  jenis  dari  famili yang  sama  tetapi  mempunyai  perbedaan morfologi yang cukup besar.
Tabel 1 . Daftar jenis tumbuhan paku hasil inventarisasi
Kelompok - famili Jenis KODE PCR* Eusporangiate 1. Lycopodiaceae 1 Lycopodiellacernua (L.) Pic. Serm. 17 Leptosporangiate 1. Aspleniaceae 2 Asplenium nidus L. 5 3 Asplenium serratum L. 10 4 Asplenium longissimum Blume. 3 2. Blechnaceae 5 Blechnum finlaysonianum Wall. 9 6 Blechnum occidentale L. 2 7 Blechnum orientale L. 25 8 Stenochlaena palustris (Burm. f.) Bedd. 23 3. Cyatheaceae 9 Cyathea latebrosa (Wall. Ex Hook) Copel. 1 10 Cyathea contaminans (Wall. ex Hook.) Copel. 4 4. Davalliaceae 11 Davallia denticulata (Burm. f.) Mett. ex Kuhn 8 12 Davvalia sp2. 18 13 Davallia sp1. 7 5. Gleicheniaceae 14 Dicranopteris linearis (Burm.f.) Underw. 21 6. Neprolepidaceae 15 Nephrolepis biserrata (Sw.) Schott 9 7. Polypodiaceae 16 Drynaria sparsisora* (Desv.) T. Moore - 17 Pyrrosia longifolia (Burm. f.) CV. Morton 6 18 Pyrrosia piloselloides (L.) M.G. Price 15 19 Phymatosorus scolopendria (Burm. f.) Pic. Serm. 16 20 Microsorum punctatum (L.) Copel 22 8. Pteridaceae 21 Adiantum latifolium Lam. 11 22 Pronephrium menisciicarpon (Blume) Holttum 13 23 Pronephrium sp. 20 24 Taenitis blechnoides (Willd.) Sw. 24 25 Vittaria elongata SW. 14 26 Vittaria ensiformis Sw. 12 Keterangan : * tidakdigunakanuntuk analysis DNA karenakendalapengambilansampel
Jenis-jenis  Aspleniaceae  yang  ditemukan pada  penelitian  ini  mempunyai  variasi  daun yang cukup besar, yaitu daun tunggal berbentuk roset  dan  daun  majemuk  ganda  tersebar sepanjang rhizom. Hal ini juga dilaporkan oleh Lin  &  Viane  (2013).  Namun  semua  jenis Aspleniaceae  mempunyai  karakteristik  yang serupa pada bentuk sorus yang menyerupai garis dan  berada  pada  kanan  kiri  tulang  daun  atau anak  daun  (Piggot  1998,  Lin  &  Viane  2013; Sofiyanti et  al. 2015)  dengan  indusium  semu (Lashim  2012).  Bentuk  rhizome  dan  daun Asplenium  nidus dan Asplenium  serratum mempunyai  kemiripan  karena  sama-sama mempunyai  rhizoma  pendek  merayap  dengan
daun  tunggal  yang  menyerupai  roset.  Namun daun Asplenium  nidus (Gambar  1a)  berukuran lebih  besar  dan  kaku  dibandingkan Asplenium serratum . Sedangkan pada Asplenium longissimum (Gambar 1b) mempunyai rhizoma agak tegak dan berdaun majemuk ganda. Secara morfologi, Asplenium  longissimum sangat  jauh berbeda  dibandingkan Asplenium  nidus dan Asplenium serratum, namun karena mempunyai karakter  sorus  membentuk  garis  dan  berada  di kanan kiri tulang anak daun maka digolongkan pada  famili  yang  sama.  Pada Asplenium  nidus dan Asplenium  serratum, sori  berbentuk  garis lurus yang tersusun rapat disepanjang kanan kiri tulang  dauan  sedangkan  pada Asplenium
Sofiyanti dan Isda Jenis – jenis tumbuhan paku (Pteridofita) dari Hutan Universitas Riau, Provinsi Riaudan Pola Pita DNA berdasarkan Penanda DNA M13Primer
longissimum sori  berbentuk  garis  pendek  yang terletak pada kanan kiri tulang anak daun
.
Gambar  1 .  Contoh  tumbuhan  paku  yang  ditemukan.  a-b.  Aspleniaceae  (a. Asplenium  nidus ,  b. Aspleniumserratum ), c-e. Blechnaceae (c. Blechnumfinlaysonianum , d. Blechnumorientale, e. Stenochlaenapalustris ), f-i. Polypodiaceae (f. Drynariasparsisora , g. Microsorumpunctatum , h. Phymatosorusscolopendria ,  i. Pyrrosialongifolia ),  j-l.  Pteridaceae  (j. Adiantum  latifolium ,  k. Taenitis blechnoides , i. Vittariaelongata )
Anggota famili Blechnaceae yang
ditemukan pada penelitian ini juga menunjukan
karakter  morfologi  yang  bervariasi.  Menurut Wang  et  al.  (2013),  jenis-jenis  Blechnaceae
merupakan  jenis  paku  terestrial  yang  kadang menyerupai  pohon  kecil  dan  jarang  yang merambat,  rhizome  tegak  atau  merambat, bersisik dan mempunyai tipe daun dimorfik atau monomorfik.  Selain  itu  daunnya  merupakan daun  majemuk  atau  majemuk  ganda  danjarang yang  berdaun  tunggal  dengan  sori  memanjang dikanan  kiri  tulang  daun  (Piggot  1998).  Pada kajian  ini,  dijumpai  2  genera  dari  famili Blechnaceae  yaitu Blechum (3  jenis)  dan Stenochlaena (1  jenis).Anggota Blechnum dan Stenochlaena memiliki  perbedaan  yang  cukup jelas.  Ketiga  jensi Blechnum yang  dijumpai ( Blechnum finlaysonianum (Gambar 1c) , Blechnum occidentale dan Blechunum orientale (Gambar 1d))mempunyai rhizome pendek dan tegak dan habitus menyerupai pohon palem  dengan daun monomorfik yang tersusun spiral membentuk roset batang dengan sori yang melekat sepanjang kanan kiri tulang anak daun. Karakter  ini  juga  ditemukan  pada  jenis Blechnum lainnya  (Piggot  1998;  Palacios-Rios &  Hernandes  2001;  Wang  et  al.  2013). Sedangkan  jenis Stenoclaena yang  ditemukan ( Stenochlaena palustris , Gambar 1e)
mempunyai  rhizom  menjalar  dengan  daun majemuk dimorfik.Pada umumnya jenis Stenochlaena mempunyai sori akrostikoid, yaitu sori  yang berada disepanjang  kanan kiri tulang anak  daun  dan  menutupi  seluruh  permukaan bawah anak daun (Sofiyanti et al. 2015).
Anggota Polypodiaceae merupakan dengan jumlah jenis yang tinggi (Almeida et al. 2017)  yan  gpada  umumnya  epifit  atau  epilitik, dan  jarang  yang  terestrial,  dengan  rhizome pendek  atau  panjang  menjalar  dan  diselubungi sisik  (Zhang  et  al.  2013),  daun    tunggal  atau majemuk  dengan  tipe  daun  monomorfik  atau dimorfik  (Piggot  1998;  Sofiyanti et  al .  2015) serta  mempunyai  sori  yang  abaxial  berbentuk membulat, oval dan kadang memanjang (Zhang et  al .  2013).Genera  yang  termasuk  dalam Polypodiaceae  yang ditemukan pada penelitian ini  adalah Drynaria (1  jenis), Microsorum (1 jenis), Phymatosorus (1  jenis)  dan Pyrrosia (2 jenis).  Morfologi  setiap  jenis  dari  4  genera tersebut  sangat  bervariasi. Drynaria sparsisora (Gambar  1f)  mempunyai  tipe  daun  dimorfik,
demikian juga Pyrrosia longifolia dan Pyrrosia pilloseloides (Gambar  1i).  Selain  itu Drynaria juga mempunyai daun steril yang tersusun rapat pada  bagian  bawah  sehingga  menyerupai sarang, dengan tepi daun berlekuk. Sedangakan anggota Pyrrosia mempunyai daun steril tunggal dan  berdaging.  Pada Microsorum  punctatum mempunyai  daun  tunggal  memanjang  dan tersusun  rapat  pada  rhizom  (Gambar  1g). Sedangkan Phymatosorus scolopendria merupakan jenis Polypodiaceae yang mempunyai  polimorfisme  pada  karakter  daun, karena  pada  satu  individu  dapat  ditemukan variasi  daun  seperti  daun  tunggal,  berlekuk  3, berlekuk  5  ataupun  berlekuk  banyak  (Gambar 1h).
Perbedaan  morfologi  yang  cukup  tigggi juga dijumpai pada anggota Pteridaceae.  Famili ini  mempunyai  habitat  yang  beragam  seperti terestrial,  epifit,  epilitik  dan  akuatik  (Zhang et al. 2013).  Karakter  daun  juga  mempunyai variasi  yang  tinggi,  yaitu  daun  tunggal, majemuk  maupun  majemuk  ganda  dengan  tepi daun rata, berlekuk atau  bergelombang (Piggot 1998, Sofiyanti et  al . 2015). Posisi  dan bentuk sori  juga  sangat  beragam.  Pada  penelitian  ini dijumpai  variasi  karakter  pada  rhizome  seperti pendek ( Vittaria elongata dan Vittaria ensiformis ),  agak  tegak  ( Adiantum  latifolium ) dan
Taenitis blechnoides ), menjalar ( Phroneprium  mersinicarpon ).  Tipe  daun anggota  Pteridaceae  juga  berbeda,  yaitu  tipe daun  tunggal  tersusun  roset  pada Vittaria elongata (Gambar  1l)  dan Vittaria  ensiformis , serta  tipe  dua  majemuk  pada Adiantum latifolium (Gambar 1j) , Phroneprium mersinicarpon dan Taenitis blechnoides (Gambar  1k) . Menurut  Zahang et  al (2013), walaupun  jenis-jenis  Pteridaceae  mempunyai variasi morfologi yang tinggi namun dikarakteristikan  dengan  adanya  sori  yang manyatu sepanjang pertulangan daun atau pada tepi  daun,  dan  kadang  kadang  berada  pada lekukan pada ujung tulang daun atau tepi daun dengan indusium semu.
Berbeda dengan anggota jenis dari famili- famili  di  atas,  maka  anggota  pada  famili Davalliaceae mempunyai karakteristik
Sofiyanti dan Isda Jenis – jenis tumbuhan paku (Pteridofita) dari Hutan Universitas Riau, Provinsi Riaudan Pola Pita DNA berdasarkan Penanda DNA M13Primer
morfologi  khas  yang  dijumpai  pada  setiap jenisnya,  yaitu  rhizoma  panjang  merambat  dan bersisik,  daun  majemuk  ganda  4  dengan  sori terletak  pada  setiap  lekukan  anak  daun  dan berindusium seperti cawan (Piggot 1998). Untuk famili Lycopodiaceae,Gleicheniaceae dan Neprolepidaceae  hanya  diidentifikasi  1  jenis saja. Namun anggota famili tersebut mempunyai karakter  khas  yang  menyatukan  dalam  family yang sama.

## Pola pita DNA berdasarkan penanda universal M13
Hasil  amplifikasi  PCR  menggunakan penanda  universal  M13  menunjukan  pola  pita yang  bervariasi  pada  setiap  jenis  yang diteliti.Ukuran  pita  DNA  yang  diperoleh  pada penelitian ini sekitar 200 – 2.000 bp. Gambar 2 adalahelektroforegram PCR produk yang menunjukan  pola  pita  DNA  yang  diperoleh. Jumlah  pita  yang  diperoleh  adalah  42  pita, dengan  11  pita  monomorfik    (26.19%)  dan  31 pita  polimorfik  (73.81%).  Pada  umumnya,
Penanda  M13  memberikan  pola  pita  yang bervariasi  pada  taksa  yang  dikaji,  seperti  yang dilaporkan oleh Garcia-Lopez et al. (2015) pada paku Hymenophyllaceae. M13 juga merupakan penanda  universal  yang  dapat  digunakan  pada tumbuhan selain paku, manusia dan mikroorganisme  (Abd-Elsalam et  al. 2010) karena  memberikan  variasi  pita  yang  tinggi (Ryskov et  al .  1988).  Jumlah  pita  yang dihasilkan oleh penanda M13 pada semua taksa tumbuhan pada umumnya lebih tinggi dibandingkan dengan penanda DNA lain seperti RAPD (Sembiring et al . 2015) yang digunakan pada  Andaliman.  Jumlah  pita  yang  diperoleh pada  penelitian  jauh  lebih  tinggi  dibandingkan denganpenanda  ISSR  yang  dilaporkan  pada jenis  Andaliman( Zanthoxylum  acanthopodium DC) dengan  rata-rata  setiap  penanda  hanya  5 pita.  Gambar  3  merupakan  dendrogram  hasil pengelompokan menggunakan
Program NTSyst.
Gambar 2 . Elektrforegram produk PCR tumbuhan paku berdasarkan penanda universal M13
Dendrogram  hasil  pengelompokan  pada gambar 3 menunjukan bahwa semua jenis paku yang  diteliti  mengelompok  pada  koefisian kemiripan 0.81. Dendrogram terbagi menjadi 2 kelompok,  yaitu  Kelompok  I  (1  jenis)  dan kelompok II (24 jenis). Kelompok I hanya terdiri dari  jenis Lycopodiella  cernua. Paku  ini merupakan  satu  satunya  paku  Eusporangiate
yang ditemukan pada penelitian ini.  Sebanyak 4 pita  DNA  yang  ditemukan  pada  semua  jenis paku  leptosporangiate  tidak  di  temukan  pada jenis  ini,  sehingga Lycopodiella  cernua ini memisah dari paku lain dan membentuk cabang tersendiri.  Hal  ini  mendukung  pengelompokan secara  morfologi,  yang  memisahkan  paku berdaun  mikrofil  dan  berstrobilus  (paku  yang
tergolong  dalam  Eusporangiate)  dengan  paku berdaun  megafil  dan  bersori  (Boonkerd et  al. 2014). Genus Lycopodiella , bersama Huperzia,
Phlegmariurus, Lycopodiastrusm, dan
Lycopodium, tergolong dalam famili Lypodiaceae (Zhang &Iwatsuki . 2013).
Gambar 3 . Dendrogram tumbuhan paku berdasarkan profil pola pita DNA menggunakan penanda universal M13.
Kelompok II terdiri dari semua jenis paku Eusporangiate  yang  berdaun  megafil  dan sporangia mengelompok membentuk sori, yaitu sebanyak  24  jenis.  Kelompok  II  mengelompok pada koefisien 0.868 dan terbagi menjadi 2 sub kelompok  yaitu  IIA  (3  jenis)  dan  IIB (21).Anggota  sub  kelompok  IIA  adalah  semua jenis Blechnum ( Blechnum  finlaysonianum,  B. occidentale  dan  B.  orientale )  yang  tergolong dalam  family  Blechnaceae.  Anggota  famili  ini yang  tidak  membentuk  kelompok  yang  sama adalah Stenochlaena  palustris .Demikian  juga untuk jenis Asplenium longissimum juga memisah  dari Asplenium  nidus dan Asplenium serratum, karena  ada  pita  DNA  yang  berbeda dari kedua jenis tersebut.
Namun secara umum, dendrogram berdasarkan  pola  pita  DNA  menggunakan Penanda  M13  menunjukan  bahwa  jenis-jenis yang  berada  genus  yang  sama  membentuk kelompok yang sama. Oleh karena itu, penanda M13  ini  dapat  digunakan  untuk  mendukung klasifikasi jenis-jenis yang dikaji.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada KEMNRISTEK  DIKTI  atas  hibah  Penelitian Berbasis Kompetensi (HIKOM).

## DAFTAR PUSTAKA
Abd-Elsalam K, Almohimeed I, Moslem MA. & Bahkali  AH.  2010.  M13-microsatellite PCR  and  rDNA  sequence  markers  for
Sofiyanti dan Isda Jenis – jenis tumbuhan paku (Pteridofita) dari Hutan Universitas Riau, Provinsi Riaudan Pola Pita DNA berdasarkan Penanda DNA M13Primer
identification of Trichoderma
(Hypocreaceae)  species  in  Saudi  Arabian soil.  Genet. Mol. Res. 9 (4): 2016-2024.
Almeida T, Alexandre S, Jean-Yves D& Sabine H.2017. Adetogramma (Polypodiaceae), a new  monotypic  fern  genus  segregated from Polypodium. PhytoKey 78: 109-131.
Andrew  M.2008.  A  taxonomic  revision  of  the eusporangiate  fern  family  Marattiaceae, with  description  of  a  new  genus  Ptisana. Taxon. 57. 737-755.
Boonkerd T, Parinyanoot K & Rossarin P. 2014. Taxonomic  revision  of  the  Lycopodiaceae in Thailand.  The  6th Asian  Fern Symposium.
García-López DM,  Schuler SB,  López-Flores
I,  Nieto-Lugilde  M.,  Terrón-Camero  L, Aguilera IM & Suárez-Santiago FN. 2015. Development of polymorphic microsatellite  markers  for  the  Killarney Fern (Vandenboschia speciosa, Hymenophyllaceae).  Applications  in  Plant Sciences 3(11): 1-3
Lashin  GMA.  2012.  Palynological  Studies  of
Some Species of Aspleniaceae- Pteridophyta  American  Journal  of  Plant Sciences 3: 397-402. http://dx.doi.org/10.4236/ajps.2012.33048
Lin  YX  &  Viane  R.2013.  Aspleniaceae.  Pp.
267–316 in Z. Y. Wu, P. H. Raven & D. Y. Hong,  eds.,  Flora  of  China,  Vol.  2–3
(Pteridophytes). Beijing: Science Press; St. Louis: Missouri Botanical Garden Press.
Meyer W . & Mitchell TG. 1995. Polymerase chain reaction fingerprinting in fungi using single primers specific to minisatellites and simple repetitive DNA sequences:
strain variation in Cryptococcus neoformans. Electrophoresis.16(9):1648- 56.
Palacios-Rios  M  &  Hernández  V.  2001. Blechnaceae.  Flora  Del  Bajío  Y  De Regiones Adyacentes Fascículo 95: 1 – 13.
Piggott  AG.  1998.  Fern  of  Malaysia  in  Color. Tropical Press Sdn.Bhd., Malaysia.
Pryer KM, Schuetrpelz E, Wolf PG, Schneider H, Smith AR& Cranfill R. 2004. Phylogeny And  Evolution  Of  Ferns  (Monilophytes) With A Focus On The Early
Leptosporangiate Divergences 1 American Journal Of Botany 91(10): 1582-1598.
Ryskov  AP,  Jincharadze  AG,  Prosnyak  MI, Ivanov  PL  &  Limborska  SA.  1988.  Ml3 phage  DNA  as  a  universal  marker  for DNA fingerprinting of animals, plants and microorganisms  Federation  of  European Biochemical Societies 233(2): 388-392.
Sembiring IMS, Putri LAP & Setiado H. 2015. Aplikasi Penand lima Primer RAPD untuk Analsis Keragaman Genetik Andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC) Suamtera Utara. Jurnal Agrokoteknologi 4(1): 1748 – 1755.
Sofiyanti  N,  Iriani  D,  Roza  AA.  2015a. Morfologi  tumbuhan  Paku  di  Taman Hutan  Raya  Sultan  Syarif  Hasyim,  Riau.
Unri Press, Pekanbaru. Sofiyanti  N,  Iriani  D,  Fitmawati,  Roza  AA. 2015b. Stenochlaena riauensis (Blechnaceae),  A  new  fern  species  from
Riau,  Indonesia.  Bangladesh  Journal  of Plant  Taxonomy  22(2):  137-14.  DOI http://dx.doi.org/10.3329/bjpt.v22i2.2607 5.
Sofiyanti N, Iriani D, Fitmawati, and Marpaung,
A.A.  2017a.    A  Note  on  the  Fern (Pteridophyte)  Diversity  from  Riau. Applied Science and Technology 1(1): 478 – 481.
Sofiyanti N, Iriani D, Fitmawati, Marpaung AA.
2017b. Karakteritik dan Metode
Pembuatan  Preparat  Spora  Pteridoflora. UNRI Press, Pekanbaru.
Sofiyanti N, Iriani D, Fitmawati.2017c. Analisis Potensi Tumbuhan Paku di daerah gambut di  Riau  sebagai  agen  terapeutik.  Laporan PTUPT (tidak dipublikasikan).
Wang FG, Xing FW,Dong S & Kato M. 2013. Blechnaceae. Pp. 411–417 in Z. Y. Wu, P. H. Raven & D. Y. Hong, eds., Flora of China, Vol. 2–3 (Pteridophytes). Beijing: Science Press; St. Louis: Missouri Botanical Garden Press.
Wesner I& Dana W.2003. Insertion of a reamplification round into the ISSR-PCR protocol gives new flax fingerprinting patterns. Cellular & Molecular Biology
Letters 8: 743-8.
Zhang LB& Iwatsuki K. 2013. Lycopodiaceae. Pp. 13–34 in Z. Y. Wu, P. H. Raven & D. Y.  Hong,  eds.,  Flora  of  China,  Vol.  2–3
(Pteridophytes).  Beijing:  Science  Press; St.  Louis:  Missouri  Botanical  Garden Press.
Zhang GM, Liao WB,Ding W, Lin YX, Wu ZH, Zhang  XC,  Dong  SY,  Prado,  Gilbert  MG, Yatskievych  G,Ranker  TA,  Hooper  EA, Alverson  ER,  Metzgar  JS,  Funston  AM, Masuyama S & Kato M. 2013. Pteridaceae. Pp. 169–256 in Z. Y. Wu, P. H. Raven & D. Y.  Hong,  eds.,  Flora  of  China,  Vol.  2–3
(Pteridophytes). Beijing: Science Press; St.
Louis: Missouri Botanical Garden press.
Zhang  XC,Lu  SG,  Lin  YX,  Qi  SP,  Moore  S,
Xing  FW,  Wang  FG,  Hovenkamp  PH,
Gilbert  MG,    Nooteboom  HP,  Parris  BS,
Haufler  C,  Kato  M&Smith  AR.2013. Polypodiaceae.  Pp.  758–850  in  Z.  Y.  Wu, P. H. Raven & D. Y. Hong, eds.,  Flora of China,  Vol.  2–3  (Pteridophytes).  Beijing:
Science Press; St. Louis: Missouri Botanical Garden Press.