Vol.1 (1), Juni 2018, pp. 37-44

## belantika Pendidikan
Potensi Genistein pada Sistem Reproduksi Mencit sebagai Penyusunan Bahan Ajar Fisiologi Reproduksi
Cicilia Novi Primiani
Pendidikan Biologi-Universitas Negeri Malang

## INFO ARTIKEL

## ABSTRAK
Riwayat Artikel: Diterima: 17 Januari 2018 Disetujui: 9 Mei 2018 Abstract: This study aims to genistein’s performance examination on male mice (Mus musculus)  reproductive system.  This  research  is expected  to  be used as preparation of instructional media on physiology subject in college. This study employs quantitative experimental and the design of this study follows random sampling technique. The independent variable of this study is genistein dosage as big as 0 mg/g, 0.0035 mg/g, 0.0042 mg/g, and 0.0049
mg/g. The result of this study shows that there is a genistein effect in mice (Mus  musculus)  reproduction.  Genistein  given  with  0.0035  dosage  mg/g; 0.0042  mg/g;  and  0.0049  mg/g  affect  the  amount  of  germinal  cells, morphology and spermatozoa viability.
Abstrak: Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  pengaruh  genistein terhadap sistem reproduksi mencit jantan (Mus musculus) . Memanfaatkan hasil  penelitian  pengaruh  genistein  terhadap  sistem  reproduksi  mencit jantan (Mus  musculus) sebagai  bahan  untuk  menyusun  bahan  ajar  mata kuliah  fisiologi.  Penelitian  ini  menggunakan  pendekatan  kuantitatif eksperimental,  yang rancangannya mengikuti  Rancangan  Acak Kelompok. Variabel bebas adalah dosis genistein 0 mg/g, 0,0035 mg/g, 0,0042 mg/g, dan 0,0049 mg/g. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ada pengaruh genistein pada  sistem  reproduksi  mencit (Mus  musculus).  Genistein yang  diberikan dengan  dosis  0,0035  mg/g;  0,0042  mg/g;  dan  0,0049  mg/g  berpengaruh terhadap  jumlah  sel germinal dalam tubulus  seminiferus testis,  morfologi dan viabilitas spermatozoa .
Kata kunci:
Genisetin Sistem reproduksi Kuantitatif eksperimental Rancangan acak kelompok
Alamat Korespondensi:
Cicilia Novi Primiani Pendidikan Biologi Pascasarjana Universitas Negeri Malang Jalan Semarang 5, Malang 65145 E-mail: primianibiomipa@yahoo.co.id
Keikutsertaan  pria  dalam  program  Keluarga  Berencana  (KB)  masih  relatif  rendah  apabila  dibandingkan dengan  wanita.  Data  Badan  Koordinasi  Keluarga  Berencana  Nasional  pada  tahun  2009  menunjukkan keikutsertaan pria dalam KB hanya 2,8%. Keterbatasan dalam pilihan metode kontrasepsi merupakan salah satu  alasan  utama  rendahnya  peran  serta  pria  dalam  KB.  Sampai  saat  ini  metode  kontrasepsi  pria  masih terbatas  penggunaan  kondom  dan vasektomi .  Permasalahan  tersebut  merupakan  landasan  bahwa  teknologi kontrasepsi pria perlu lebih dikembangkan.
Pengembangan metode kontrasepsi pria terus menerus dilakukan antara  lain dengan pemberian preparat hormonal dan imunokontrasepsi tetapi  sampai  saat  ini  belum  dapat  diterapkan  pada  masyarakat  karena aplikasinya  tidak  mudah  yaitu  dengan  cara  diinjeksikan.  Selain  itu  usaha  untuk  mendapatkan  sarana kontrasepsi pria telah banyak dilakukan pula dengan memanfaatkan bahan alami yang berasal dari tanaman (Depkes,  2006)  tetapi  hasilnya  belum  memuaskan,  sehingga  penerapannya  sebagai  kontrasepsi  pria  masih diragukan.
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  oleh    (Cardoso,  Mondadori,  Bianchini,  &  Báo,  2007; Delmonte  &  Rader,  2006)  ditemukan  bahwa  senyawa  isoflavon  yang  terdapat  pada  tanaman  famili Leguminoceae mengandung  derivat  senyawa daidzein ,  genistein  dan  glycitein,  Menurut  hasil  penelitian (Barlow,  Johnson,  &  Scofield,  2007)  kandungan isoflavon pada  biji  kedelai  berkisar  9,4  mg/g  yang    diduga
memiliki kemampuan antifertilitas. Sejumlah  penelitian terkait dengan hal ini antara lain, penelitian yang telah  dilakukan  oleh  (Setchell,  Zimmer-Nechemias,  Cai,  &  Heubi,  1998)  menyatakan  bahwa  isoflavon menginduksi  abnormalitas  sistem  reproduksi  jantan.  (Chavarro,  Toth,  Sadio,  &  Hauser,  2008)  dalam  hasil penelitiannya menyatakan bahwa isoflavon yang diberikan secara per oral pada manusia dapat menurunkan konsentrasi  sperma.  Penelitian  yang  telah  dilakukan  oleh  (Kuntana,  2009)  menjelaskan  bahwa  pemberian ekstrak kedelai dapat menurunkan kualitas sperma pada kelinci (Oryctolagus cuniculus). Genistein sebagai  salah  satu  senyawa derivat  isoflavon mempuyai  struktur  kimia  mirip  dengan  17β- estradiol yang  bersifat  seperti  hormon steroid  estrogen ,  yang  diduga  sebagai  senyawa  antifertilitas.  Sampai saat  ini  penelitian-penelitian  pengaruh genistein terhadap  sistem  reproduksi  khususnya  sistem  reproduksi jantan  masih  terus  dilakukan,  Sebenarnya  genistein  sebagai  senyawa  sintetis  sudah  banyak  dipasarkan  di masyarakat,  tetapi  manfaat  senyawa  tersebut  sebagai  anti  fertilitas  belum  banyak  dikenal.  Sejumlah penelitian tentang genistein sebagai senyawa antifertilitas yang terkait dengan sistem reproduksi jantan telah dilakukan oleh (Lee et al., 2004b) menjelaskan bahwa pemberian genistein pada tikus jantan dewasa dengan dosis  2,5  mg/kg    menyebabkan  terjadinya  hiperplasia  sel-sel  epitelium  kelenjar  prostat.  (Lee  et  al.,  2004a) menjelaskan  bahwa  pemberian genistein pada  tikus  jantan  masa  pubertas  sedikit  menurunkan  jumlah sperma  dalam  testis  dan epididimis ,  serta  menyebabkan hiperplasia sel Leydig dan  meningkatkan  fibroblas interstisial dalam epididimis . Penelitian yang telah dilakukan oleh (Opalka, Kaminska, Ciereszko, & Dusza, 2004)  menjelaskan  bahwa  pemberian genistein pada  ayam  dapat  menurunkan  sekresi  hormon testosteron . Pemberian genistein mampu menghambat aktivitas protein tirosin kinase pada saat kapasitasi dan motilitas spermatozoa  (Bajpai,  Asin,  &  Doncel,  2003).  (Shibayama  et  al.,  2001)  menjelaskan  bahwa  genistein  yang diberikan pada tikus dengan dosis 10 µg, 100 µg, dan 1000 µg mampu menurunkan tingkat reseptor estrogen di dalam sel Leydig, menurunkan berat testis,  dan menurunkan motilitas spermatozoa.
(Kuiper  et  al.,  1998)  menjelaskan  bahwa genistein mempunyai  afinitas  terhadap  reseptor  estrogen  dalam testis dan epididimis, sehingga mempunyai mekanisme kerja seperti hormon estrogen. (Handelsman, Wishart, &  Conway,  2000)  menjelaskan  bahwa  keberadaan estradio l  dapat  meningkatkan  hambatan  pada  proses spermatogenesis.  Aktivitas  genistein  yang  menyerupai  hormon  estrogen  mampu  menurunkan  sekresi Luteinizing  Hormone (LH)  dan Follicle  Stimulating  Hormone (FSH)  sehingga  dapat  menghambat spermatogensis.  Hal  tersbut  juga  akan  mempengaruhi  proses  maturasi  spermatozoa  dalam  epididimis, sehingga  dapat  menurunkan  motilitas  dan  viabilitas  spermatozoa.  Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  oleh  (Akiyama  et  al.,  1987;  Alexandrakis  et  al.,  2003)  bahwa  pemberian  genistein  secara in vitro, mampu menghambat aktivitas protein tirosin kinase pada saat proliferasi sel dalam tubulus testis.
Berdasarkan  kenyataan  bahwa  genistein  sebagai  salah  satu  sanyawa  antifertilitas  yang  mampu  bekerja pada  sistem  reproduksi  jantan,  maka  dipandang  perlu  untuk  meneliti  potensi genistein terhadap  sistem reproduksi  jantan.  Oleh  sebab  itu,  tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  menguji  potensi  genistein  pada sistem reproduksi hewan coba mencit jantan (Mus musculus).
Hasil penelitian ini dapat digunakan dalam pengembangan bahan ajar untuk mahasiswa S1 di Perguruan Tinggi yang berupa modul pada mata kuliah Fisiologi pokok bahasan sistem reproduksi.  Penyusunan modul yang berupa hasil penelitian ini merupakan salah satu pengembangan bahan ajar yang bersifat kontekstual. Hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  oleh  (Primiani  &  Susianingsih,  2010)  menyatakan  bahwa  materi pembelajaran yang dikemas secara kontekstual dapat meningkatkan prestasi belajar.
Kompetensi  dasar  mata  kuliah  fisiologi  hewan  pada  pokok  bahasan  sistem  reproduksi  di  IKIP  PGRI Madiun  adalah  memahami  konsep  dan  prinsip  fisiologi  reproduksi.  Mahasiswa  sering  mengalami  kesulitan dalam pemahaman konsep, karena pengembangan materi belum secara kontekstual. Tidak banyak bahan ajar yang  berupa  modul  sebagai  salah  satu  sumber  belajar  bagi  mahasiswa  yang  disusun  secara  kontekstual berdasarkan hasil-hasil penelitian.
Pengembangan  produk  bahan  ajar  ini  dipilih  salah  satu  model  yaitu  rancangan  Dick  dan  Carey  dengan alasan:  1)  memiliki  format  pembelajaran  terprogram,  sehingga  dapat  digunakan  untuk  keperluan  belajar perorangan (individualized instruction) ; 2) dapat digunakan dalam mengembangkan bahan pembelajaran; 3) dapat  digunakan  untuk  pembelajaran  pada  ranah  belajar  keterampilan  intelektual  yang  didalamnya  berisi konsep,  prinsip,  kaidah  dan  pemecahan  masalah;  dan  4)  dapat  digunakan  dalam  belajar  kognitif,  5)  model Dick dan Carey merupakan rancangan pengembangan yang lengkap.
Melalui pengembangan bahan ajar yang berupa modul berdasarkan hasil penelitian ini diharapkan dapat meningkatkan  pemahaman  konsep  sistem  reproduksi.  Referensi  yang  diperoleh  dari  hasil  penelitian  yang
digunakan  dalam  dalam  penyusunan  modul  ini  dapat  membantu  mahasiswa  belajar  secara  mandiri  dalam memecahkan  permasalahan  khususnya  permasalahan-permasalahan  sistem  reproduksi  yang  dapat menggambarkan sesuatu konsep yang bersifat abstrak, sehingga mampu dipahami oleh mahasiswa.

## METODE

## Hewan percobaan
Hewan coba yang digunakan dalam penelitian ini adalah mencit (Mus musculus) galur Balb/c jantan, dalam kondisi sehat, berumur 9 minggu, yang berjumlah 24 ekor. Semua mencit yang digunakan mempunyai bobot badan minimal 20 gram, yang dipelihara dalam kandang mencit Jurusan Biologi FMIPA Universitas Negeri Malang.

## Pemeliharan mencit dan pembuatan bahan uji
Mencit  ditempatkan  dalam  kandang  mencit,  dengan  diberi  makan  dan  air  secara ad  libitum dan diaklimatisasi  selama  14  hari  sebelum  perlakuan  induksi.  Mencit  dipelihara  pada  suhu  ruang  ( ± 27 o C), kelembaban  relatif  antara  50-60%  dan  siklus  pencahayaan  12  jam.  Setiap  hari  mencit  ditimbang,  sebagai dasar untuk menentukan volume larutan genistein .
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan oleh (Lee et al., 2004a) yang mengujikan genistein pada tikus  jantan  dengan  dosis  2,5  mg/kg.  Berdasarkan  konversi  dosis  menurut  (Harmita,  2005),  maka  dosis genistein yang  diberikan  pada  mencit  jantan  adalah  0  mg/g  sebagai  perlakuan  kontrol  sebagai  perlakuan  1 (P1)  dosis  0.035  mg/g  sebagai  perlakuan  2  (P2),  dosis  0,042  mg/g  sebagai  perlakuan  3  (P3),  dan  dosis  0,049 mg/g sebagai perlakuan 4 (P4). Setelah menentukan dosis genistein , maka perlu dilakukan uji Lethal Dosis 50 (LD 50 ) pada dosis tertinggi.
Selanjutnya  menentukan  banyaknya  genistein  dan  banyaknya  pelarut  (dalam  hal  ini  minyak  jagung) dengan  langkah-langkah  yaitu:  misalnya  bobot  mencit  adalah  26  gram,  maka  genistein  yang  diperlukan adalah  0,0035  mg/g  x  26  gram  =  0,091  mg.  Volume  minyak  jagung yang  adalah  0,091  mg  x  0,0025    =    V  x 0,0035  mg/g.  Maka  volume  pelarut  yang  dibutuhkan  adalah  1,24  ml.  Mencampurkan  genistein  ke  dalam minyak jagung.  Larutan genistein yang di- gavage- kan pada mencit sejumlah  0,025 mg x 26 gram = 0,65 ml. Berdasarkan  asumsi  bahwa  pemberian  volume  pelarut  standar  pada  bobot  mencit  standar  (20  g)  adalah 0,0025 ml.

## Pemberian larutan genistein, penentuan rerata jumlah sel-sel germinal dalam tubulus seminiferus testis, morfologi, viabilitas spermatozoa, dan kadar hormon testosteron
Pemberian genistein dilakukan dengan cara induksi langsung ke dalam lambung dengan menggunakan alat sonde (gavage  tube) sebanyak  satu  kali  dalam  sehari  selama  36  hari,  mengingat  hal  ini  karena spermatogenesis mencit jantan berlangsung selama 36 hari. Setelah hari ke-36, mencit didislokasi, kemudian dibedah  dan  dilakukan  pengambilan  organ  testis  dan vas  deferens .  Pembuatan  preparat  histologi  testis dengan  metode  parafin  untuk  menentukan  rerata  jumlah  sel-sel germinal (spermatogonia,  spermatosit primer, spermatosit sekunder, spermatid dan  spermatozoa)  dalam tubulus  seminiferus testis.  Pembuatan preparat  apus  sperma  dengan  pewarnaan  eosin-nigrosin,  untuk  menentukan  morfologi  dan  viabilitas spermatozoa .
Pengambilan darah langsung dari jantung. Darah mencit kemudian dipisahkan antara serum dan plasma melalui sentrifugasi pada 3000 rpm selama 15 menit pada suhu ruang. Penentuan kadar hormon testosteron menggunakan metode Enzym Linked Immunosorbent Assay (ELISA).

## Analisis Data
Data  sel-sel germinal ( spermatogonia , spermatosit primer, spermatosit sekunder,  spermatid  dan spermatozoa)  dalam tubulus  seminiferus testis  dan  kadar  hormon  testosteron  dianalisis  menggunakan  One Way ANOVA (α = 5%).  Sebelum dilakukan uji ANOVA, data sel-sel germinal dalam tubulus seminiferus testis dan  data  kadar  hormon testosteron terlebih  dulu  diuji  normalitas  distribusinya  menggunakan One  Sample Kolmogorov-Smirnov Test (α = 5%), dan homogenitasnya menggunakan Levene’s Homogeneity of Variance Test (α  =  5%),    Setelah  persyaratan  normalitas  dan  homogenitas  terpenuhi,  data  dapat  dianalisis  menggunakan ANOVA  satu  jalan,  kemudian  dilakukan  uji post-hoc menggunakan Least  Significant  Difference (LSD)  (α  = 5%).  Semua  uji  statistik  yang  dipakai  mulai  dari  uji  normalitas  sampi  uji post-hoc menggunakan  bantuan
software SPSS versi  15  (Widiyanto,  2010).  Data  morfologi  dan  viabilitas  spermatozoa  dinyatakan  dalam prosentase.

## Pengembangan Penyusunan Bahan Ajar

## Model Pengembangan
Model  pengembangan  modul  menggunakan  model  Dick  dan  Carey,  berdasarkan  pada  hasil  penelitian merupakan bahan ajar kontekstual yang dapat mengembangkan ranah kognitif, afektif dan psikomotor bagi mahasiswa.

## Pengumpulan Data
Data utama yang digunakan merupakan hasil ekperimen dari penelitian ini. Data tambahan berasal dari data hasil tinjauan pustaka yang relefan sesuai topik/judul buku.

## Produk Pengembangan
Bahan  ajar  yang  dikembangkan  dari  penelitian  ini  berupa  bahan  ajar  bagi  mahasiswa  jenjang  Strata  1 pada mata kuliah Fisiologi Hewan pokok bahasan sistem reproduksi.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Sel-Sel Germinal dalam Tubulus Seminiferus Testis
Tabel 1 disajikan hasil uji analisis varians jatu jalan terhadap rerata jumlah sel-sel germinal dalam tubulus seminiferus testis  diperoleh  nilai  F  hitung  sebesar  47,270  dan  nilai  signifikan  0,000.  Nilai  signifikan  lebih kecil dari nilai α 0,05 berarti bahwa ada pengaruh signifikan pemberian genistein terhadap rerata jumlah sel- sel germinal dalam tubulus seminiferus testis.
Tabel 1. Uji ANOVA Perlakuan Genistein (Kontrol, Dosis 0,0035 mg/g, Dosis 0,0042 mg/g, dan Dosis 0,0049 mg/g) Terhadap Rerata Jumlah Sel-Sel Germinal
Sum of Squares df Mean Square F Sig. Between Goups 187690,758 3 62563,586 47,270  0,000 Within Groups 153531,033 116 1323,543 Total 341221,792 119
Adapun  hasil  uji  LSD  menunjukkan  bahwa  pada  perlakuan  P1,  P2,  P3,  dan  P4  merupakan  dosis  yang berbeda sangat nyata terhadap rerata jumlah sel-sel germinal dalam tubulus seminiferus testis. Hasil analisis statistik deskriptif pemberian genistein terhadap rerata jumlah sel-sel germinal terdapat pada Gbr 1.
Gambar 1. Rerata Jumlah Sel-sel Germinal pada Pemberian Genistein dengan Dosis Kontrol (P1) 0,0035 mg/g (P2), 0,0042 mg/g (P3), 0,0049 mg/g (P4)
Berdasarkan hasil pengamatan terhadap struktur jaringan tubulus seminiferus testis, maka diperoleh hasil bahwa pada perlakuan kontrol (P1) struktur jaringan tubulus seminiferus testis tidak mengalami perubahan (Gbr  2a).  Penampang  melintang tubulus  seminiferus testis  dengan  pewarnaan Hematoksilin-Eosin  (HE) menunjukkan  bahwa tubulus  seminiferus dikelilingi  oleh  jaringan  ikat  kolagen  yang  terdapat  pada permukaan posterior testis yaitu tunika albuginea . Tubulus seminiferus dikelilingi oleh membran basal. Sel- sel germinal yang tidak mengalami perubahan, dan jajaran sel germinal berkembang penuh.
Hasil  pengamatan  terhadap  histologi  tubulus  seminiferus  testis,  maka  diperoleh  hasil  pada  perlakuan pemberian genistein dosis  0,0035  mg/g  (P2)  tubulus  seminiferus  testis  mengalami  perubahan. Spermatogenesis  tidak  dapat  berkembang  normal, spermatogoni a  mempunyai  karakteristik  sama  dengan s permatogonia perlakuan  kontrol.  Fase  proliferasi  masih  dapat  dijumpai,  karena spermatogonium masih tampak  jelas  (Gbr  2b).  Kondisi  terhadap  sel-sel  germinal  dalam tubulus  seminiferus testis  pada  perlakuan pemberian genistein dosis 0,0035 mg/g (P2) sama seperti perlakuan pemberian genistein dosis 0,0042 mg/g (P3) dan dosis 0,0049 mg/g (P4), seperti terdapat pada Gbr 2c & 2d.
Gambar 2. Tubulus Seminiferus Testis Mencit (Mus musculus) dengan Pewarnaan HE, Perbesaran 1000X
(Sumber: Primiani, 2011)
Keterangan:   a. Kontrol (P1) b. Dosis 0,0035 mg/g (P2) c. Dosis 0,0042 mg/g (P3) d. Dosis 0,0049 mg/g (P4)

## Morfologi Spermatozoa
Pengamatan  morfologi  dilakukan  terhadap  adanya  perubahan-perubahan  bentuk  yang  terdapat  pada kepala, badan, dan ekor. Jumlah spermatozoa normal dan abnormal dihitung dari pemeriksaan terhadap 100 sel  spermatozoa  dan  dinyatakan  dalam  prosentase.  Perlakuan  kontrol  (P1)  memberikan  hasil  morfologi spermatozoa  normal  sebesar  68,66%.  Pemberian  genistein  dosis  0,0035  mg/g  (P2)  morfologi  spermatozoa normal  sebesar  34,66%.  Dosis  0,0042  mg/g  (P3)  morfologi  spermatozoa  normal  sebesar  31,66%.    Pemberian genistein dosis 0,0049 mg/g (P4), morfologi spermatozoa normal sebesar 19,83%, hal ini menunjukkan terjadi penurunan prosentase morfologi spermatozoa normal.

## Viabilitas Spermatozoa
Viabilitas  merupakan  kemampuan  spermatozoa  untuk  bertahan  hidup  setelah  keluar  dari  organ reproduksi. Pengamatan dilakukan pada preparat apus sperma, selanjutnya penghitungan spermatozoa hidup dan spermatozoa mati terhadap 100 sel spermatozoa, dan dinyatakan dalam prosentase.  Perlakuan kontrol (P1)  spermatozoa  hidup  sebesar  91,83%.  Pemberian  genistein  dosis  0,0035  mg/g  (P2)  spermatozoa  hidup sebesar  15,66%.  Pemberian  genistein  dosis  0  0042  mg/g  (P3)  spermatozoa  hidup  sebesar  8,83%.  Pemberian genistein dosis 0,0049 mg/g (P4), spermatozoa hidup sebesar 5,50%. Hal ini menunjukkan terjadi penurunan prosentase spermatozoa hidup.

## Kadar Hormon Testosteron
Tabel 3 disajikan hasil uji Analisis Varians Satu Jalan terhadap kadar hormon testosteron.
Tabel 3.  Hasil Uji ANOVA terhadap Kadar Hormon Testosteron Sum of Squares  df  Mean Square F Sig. Between Goups 2,327 3 0,776 4,767  0,012 Within Groups 3,254 20 0,163 Total 5,581 23
Hasil uji analisis varians satu jalan diperoleh nilai F hitung sebesar 4,767 dan nilai signifikan 0,012. Nilai signifikan  yang  teramati  lebih  kecil  dari  nilai  α  0,05  sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa  ada  pengaruh pemberian genistein terhadap  kadar  hormon testosteron .  Berdasarkan  kesimpulan  hasil  uji  maka  perlu dilakukan uji lanjut Least Significant Difference (LSD) dengan α = 5% dapat disimpulkan bahwa pada dosis 0,0049 mg/g (P4) merupakan dosis yang berbeda nyata terhadap kadar hormon testosteron . Berdasarkan  struktur  kimianya  yang  mirip  dengan  estrogen,  maka genistein mampu  berikatan  dengan reseptor  estrogen  sehingga  memberikan  aktivitas  fisiologis  sebagai  hormon estrogen (Barlow  et  al.,  2007; Delmonte  &  Rader,  2006; Gruber,  Tschugguel,  Schneeberger,  & Huber,  2002;  Shibayama  et  al.,  2001).  Oleh karena  itu  dikatakan  bahwa genistein mempunyai kemampuan estrogenik,  artinya  bahwa genistein mampu berikatan  dengan  reseptor  estrogen  dalam  sel  Leydig  (Kuiper  et  al.,  1998).  Menurut  hasil  penelitian  yang telah dilakukan oleh (Abney & Myers, 1991), kondisi tersebut menyebabkan hambatan terhadap enzim P450 17α hidroksilase , akibatnya terjadi penghambatan pada proses steroidogenesis. Berdasarkan kondisi tersebut maka  pengubahan  progestron  menjadi  17  α hydroksi  progesteron yang  memerlukan  enzim  P450  17α hidroksilase tidak  terjadi.  Hal  tersebut  menyebabkan  penghambatan  terbentuknya androstenedion ,  yang berakibat testosteron tidak terbentuk.
Penurunan kadar hormon testosteron berakibat terganggunya proses maturasi sperma di dalam epididimis. Menurut  hasil  penelitian  yang  dilakukan  oleh  (Sirivaidyapong  &  Uthai,  2003)  menjelaskan  bahwa  proses maturasi  sperma  membutuhkan  senyawa-senyawa fruktosa,  sorbitol ,  dan glicerylphosphorylcholine (GPC). Oleh karena terjadi penurunan kadar hormon testosteron maka berakibat sekresi senyawa-senyawa tersebut juga  menurun,  hal  ini  berakibat  penurunan  viabilitas  sperma  pada  pemberian  genistein  dosis  0,0035  mg/g (P2), dosis 0,0042 mg/g (P3), dan dosis 0,0049 mg/g (P4).
Proses maturasi merupakan serangkaian proses yang meliputi terjadinya perubahan struktural kepala dan ekor spermatozoa yang disertai dengan peningkatan motilitas sperma yang progresif. Sesuai hasil penelitian (Visconti  &  Kopf,  1998)  menjelaskan  bahwa  spermatozoa  yang  berada  dalam  epididimis  juga  mengalami proses kapasitasi yang pada akhirnya mampu melakukan fertilisasi.
Turunnya  kadar  hormon testosteron juga  mengakibatkan  terjadinya  gangguan  pada  proses spermatogenesis,  yang  diindikasikan  dengan  penurunan  jumlah  sel-sel germinal dalam tubulus  seminiferus testis.  Berdasarkan hasil  analisis  statistik  deskriptif  perlakuan  pemberian genistein dosis  0,0035  mg/g  (P2), 0,0042 mg/g (P3), dan dosis 0,0049 mg/g (P4) mengalami penurunan terhadap rerata jumlah sel-sel germinal dalam tubulus seminiferus testis menunjukkan bahwa rerata jumlah sel-sel germinal . Kondisi ini sesuai yang dijelaskan  oleh  (Akiyama  et  al.,  1987;  Alexandrakis  et  al.,  2003)  bahwa  genistein  mampu  menghambat proliferasi sel-sel germinal dalam tubulus  seminiferus testis.  Menurut  (Matsukawa  et  al.,  1993)  genistein mampu  menahan  siklus  sel  pada  fase  G2-M  serta  hambatan  enzim tirosin  kinase yang  terlibat  dalam meregulas  terhadap  proliferasi  dan  deferensiasi  sel,  siklus  sel,  migrasi  sel,  keberlangsungan  hidup  sel,  dan modulasi pada metabolisme seluler.

## SIMPULAN

## Simpulan
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ada  pengaruh  pemberian  genistein  terhadap  sistem  reproduksi mencit (Mus musculus) jantan, pada sel-sel germinal dalam tubulus seminiferus testis, morfologi spermatozoa , viabilitas spermatozoa, dan kadar hormon testosteron . Berdasarkan hasil penelitian yang didapat, diperlukan sosialisai pada masyarakat mengenai genistein sebagai antifertilitas serta pengemasannya secara efektif dan efisien sehingga mudah dikonsumsi.

## Saran
Menindaklanjuti  kebutuhan  tersebut,  maka  perlu  pengkajian  tingkat  molekuler  pada  sel-sel  germinal dalam  tubulus  seminiferus,  Sehingga  penggunaan genistein sebagai  senyawa  antifertilitas  dapat dipertanggungjawabkan keefektifitasannya.

## DAFTAR RUJUKAN
Abney, T. O., & Myers, R. B. (1991). 17β ‐ Estradiol Inhibition of Leydig Cell Regeneration in the Ethane Dimethylsulfonate ‐ Treated Mature Rat. Journal of Andrology , 12 (5), 295–304.
Akiyama, T., Ishida, J., Nakagawa, S., Ogawara, H., Watanabe, S. I., Itoh, N., & Fukami, Y. (1987). Genistein, a specific inhibitor of tyrosine-specific protein kinases. Journal of Biological Chemistry , 262 (12), 5592–5595. Alexandrakis, M. G., Kyriakou, D. S., Kempuraj, D., Huang, M., Boucher, W., Seretakis, D., & Theoharides, T. C. (2003). The  isoflavone  genistein  inhibits  proliferation  and  increases  histamine  content  in  human  leukemic  mast  cells. Allergy and Asthma Proceedings , 24 (5), 373. OceanSide Publications.
Bajpai, M., Asin, S., & Doncel, G. F. (2003). Effect of tyrosine kinase inhibitors on tyrosine phosphorylation and motility parameters in human sperm. Archives of Andrology , 49 (3), 229–246.
Barlow, J., Johnson, J. A., & Scofield, L. (2007). Fact sheet on the phytoestrogen genistein. In NIEHS/NCI Environment Research Centers,(Online), http://cerhr. niehs. nih. gov/chemicals/genistein (Vol. 8).
Cardoso,  J.  R.,  Mondadori,  R.  G.,  Bianchini,  E.,  &  Báo,  S.  N.  (2007). Effects  of  chronic  treatment  with  soy  derived isoflavones on reproductive health of male rabbits .
Chavarro, J. E., Toth, T. L., Sadio, S. M., & Hauser, R. (2008). Soy food and isoflavone intake in relation to semen quality parameters among men from an infertility clinic. Human Reproduction , 23 (11), 2584–2590.
Delmonte,  P.,  &  Rader,  J.  I.  (2006).  Analysis  of  isoflavones  in  foods  and  dietary  supplements. Journal  of  AOAC International , 89 (4), 1138–1146.
Gruber, C. J., Tschugguel, W., Schneeberger, C., & Huber, J. C. (2002). Production and actions of estrogens. New England Journal of Medicine , 346 (5), 340–352.
Handelsman, D. J., Wishart, S., & Conway, A. J. (2000). Oestradiol enhances testosterone-induced suppression of human spermatogenesis. Human Reproduction , 15 (3), 672–679. Harmita, R. M. (2005). Analisis hayati. Jakarta: Percetakan Ari Cipta , 51 , 55. Kuiper, G. G., Lemmen, J. G., Carlsson, B. O., Corton, J. C., Safe, S. H., Van Der Saag, P. T., & Gustafsson, J. A. (1998). Interaction of estrogenic chemicals and phytoestrogens with estrogen receptor β. Endocrinology , 139 (10), 4252–4263.
Kuntana, Y. P. (2009). Pengaruh Pemberian Phytoestrogen Terhadap Kualitas Spermatozoa, Spermatogenesis dan Luas Jaringan Interstitial pada Kelinci (Oryctolagus cuniculus). Jurnal Bionatura , 11 (1), 47–58.
Lee,  B.  J.,  Kang,  J.  K.,  Jung,  E.  Y.,  Yun,  Y.  W.,  Baek,  I.  J.,  Yon,  J.  M.,  &  Nam,  S.  Y.  (2004a).  Effects  of  exposure  to genistein  during  pubertal  development  on  the  reproductive  system  of  male  mice. Journal  of  Reproduction  and Development , 50 (4), 399–409.
Lee, B. J., Kang, J. K., Jung, E. Y., Yun, Y. W., Baek, I. J., Yon, J. M., & Nam, S. Y. (2004b). Exposure to genistein does not adversely  affect  the  reproductive  system  in  adult  male  mice  adapted  to  a  soy-based  commercial  diet. Journal  of Veterinary Science , 5 (3), 227–234.
Matsukawa, Y., Marui, N., Sakai, T., Satomi, Y., Yoshida, M., Matsumoto, K., & Aoike, A. (1993). Genistein arrests cell cycle progression at G2-M. Cancer Research , 53 (6), 1328–1331.
Opalka,  M., Kaminska,  B.,  Ciereszko,  R.,  & Dusza,  L.  (2004). Genistein  affects  testosterone  secretion  by  Leydig  cells  in roosters (Gallus gallus domesticus). Reproductive Biology , 4 (2), 185–193.
Primiani,  C.  N., &  Susianingsih,  M. D. (2010). Meningkatkan  aktivitas dan  prestasi  belajar  biologi melalui  pendekatan kontekstual dengan media herbarium dan insektarium. Paedagogia , 13 (1).
Setchell,  K.  D.,  Zimmer-Nechemias,  L.,  Cai,  J.,  &  Heubi,  J.  E.  (1998).  Isoflavone  content  of  infant  formulas  and  the metabolic fate of these phytoestrogens in early life. The American Journal of Clinical Nutrition , 68 (6), 1453S-1461S.
Shibayama,  T.,  Fukata, H.,  Sakurai, K.,  Adachi,  T., Komiyama, M.,  Iguchi,  T.,  &  Mori,  C. (2001). Neonatal  exposure to genistein  reduces expression  of estrogen  receptor  alpha and  androgen receptor  in testes of  adult  mice. Endocrine Journal , 48 (6), 655–663.
Sirivaidyapong, S., & Uthai, S. (2003). Effect of Collection Time and Collection Temperature on Motility and Viability of Canine  Epididymal  Sperm. International  Symposium  of  The  World  Association  of  Veterinary  Laboratory Diagnosticians and OIE Seminar on Biotechnology , 9–13.
Visconti,  P.  E.,  &  Kopf,  G.  S.  (1998).  Regulation  of  protein  phosphorylation  during  sperm  capacitation. Biology  of Reproduction , 59 (1), 1–6.
Widiyanto, J. (2010). SPSS For Windows untuk analisis data statistik dan penelitian. Surakarta: BP-FKIP UMS .