## AKTIVITAS ANTIOKSIDAN SENYAWA FLAVONOID DARI KULIT BATANG LEGUNG (Vitex pinnate Tour ex Linn) DENGAN METODA TIOSIANAT
Musyirna Rahmah Nasution 1) , Dasni Syafril 2) , Yuharmen 3)
1) Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau, 2,3) Universitas Riau

## ABSTRAK
Antioxidant  are  the  compounds  capable  to  inhibit  free  radical  reactions  in  the  human body.This  research  was  aimed  to  identify  the  antioxidant  potency  of  flavonoid  compound  of extract  metanol  of  legung  bark  (Vitex  pinnate  Tour  ex  Linn)  by  using  linoleic-tyocyanate methods.The  result  suggested,  that  isolated  flavonoid  of  methanol  extract  was  produced  five fraction and most of fraction conducted antioxidant activity more less than α -tokoferol. But, Two Fraction which is recristalization was the higer than α -tokoferol and vitamin C

## Key word: flavonoid, antioxidant, linoleic-tyocyanate methods

## PENDAHULUAN
Di  Indonesia  tumbuhan  famili  Verbenaceae tumbuh  di  daerah  pantai  atau  berpasir  pada ketinggian  1-800  diatas  permukaan  laut. Tumbuhan  ini  termasuk  tumbuhan  liar  dan menyukai  tempat-tempat  terbuka  seperti pinggir  jalan,  tanah  kosong  bekas  garapan dan  juga  dikatakan  tumbuhan  semak (Sugiarto,
1996). Berdasarkan kandungannya tumbuhan Verbenaceae
banyak mengandung flavonoid dan diterpenoid.
Tahun 1995, Alphaljit
menemukan  senyawa  diterpenoid  dengan kerangka dasar Labdane
seperti limunidilakton dari spesies Vitex limonifloia dan  Subramaniem  dan  Misra  berhasil mengisolasi senyawa 6-C-Glikosil-5,7- dihidroksil- 8,3’,4’,5’ tetrahidroflavonoid dari  spesies  Vitex  negundo.  Sebahagian besar  tanaman  dari  famili  ini  penhasil  obat- obatan antara lain Vitex trifolia Linn sebagai obat  setelah  melahirkan,  flu,  radang  selaput hidung, sakit kepala, demam dan insektisida), Vitex rotundifolia L (Obat sakit kepala,  flu  dan  sakit  mata)  dan  Vitex pubecen,  Vahl  sebagai  obat  sakit  perut,
demam, sawan, dan menambah nafsu makan (Perry, 1980).
Vitex pinnate Tour ex Linn merupakan  salah  satu  spesies  dari  famili Verbenaceae. Tumbuhan ini banyak ditemukan dihutan daerah Riau dan masyarakat menyebutnya Laban atau Legung.  Tanaman  ini  sering  dipergunakan sebagai  bahan  obat-obatan  seperti  obat  luka membengkak, pelancar haid, demam, penyakit kuning, busung lapar dan sakit gigi (Heyne, 1987). Setelah dilakukan pemeriksaan  pendahuluan  ternyata  tanaman ini mengandung senyawa golongan terpenoid  dan  flavonoid.  Beberapa  senyawa flavonoid  dapat  bersifat  antioksidan  dengan tingkat  aktivitas  yang  beragam  (Torel  et  al 1986). Senyawa falvonoid banyak terkandung  pada  bagian  tumbuhan  seperti kulit batang, bunga dan daun.
Akhir-akhir ini penelitian antioksidan  alami  khususnya  asal  tumbuhan semakin  diminati  karena  dinilai  mempunyai tingkat keamanan yang lebih baik dibandingkan  dengan  antioksidan  sintetik dan  manfaat  antioksidan  yang  luas  dalam
bidang  makanan,  kesehatan  dan  kosmetik. Penggunaan antioksidan sintetik sperti t-butil- 4-hidroksianisol (BHA) dan t-butil-4-hidroksi toluene  (BHT)  sebagai  aditif  makanan  telah dibatasi  disejumlah  negara,  kerrena  senyawa ini  dapat  menimbulkan  gangguan  pada enzim-enzim  hati  dan  paru-paru  (Inatani, Nakatani  dan  Fuwa,  1983)  Oleh  karena  itu penelitian  pengembangan  antioksidan  alami perlu  ditngkatkan  mengingat  Indonesia  kaya dengan sumber daya alam hayati.

## METODOLOGI PENELITIAN

## HASIL DAN PEMBAHASAN A. Isolasi senyawa flavonoid
Hasil  perkolasi  serbuk  kulit  batang  legung (Vitex pinnate Tour ex Linn) dengan metanol diperoleh  ekstrak  total  yang  berwarna  coklat kehitaman sebesar 11,12%, kemudian setelah diekstraksi  beberapa  kali  dengan  heksan menghasilkan ekstrak hijau kehitaman sebanyak  5,8879  g  (Tabel  1).  Hal  ini menujukkan  bahwa  ekstrak  metanol  telah dibebaskan  dari  senyawa  yang  kepolarannya rendah seperti lemak, terpen, xantofil sebesar 0,47%.

## Tabel 1. Hasil perkolasi dengan metanol
1.25 kg serbuk kulit batang legung Berat ekstrak (g) % Berat Keterangan Ekstrak metanol 139,044 11,12 Berwarna coklat kehitaman Ekstrak heksan 5,8879 0,47 Berwarna hijau kehitaman
Untuk memastikan golongan senyawa yang terkandung di dalam Tabel 2. Hasil uji shinoda ekstrak metanol Ekstrak metanol Uji shinoda Keterangan 4 mg EtOH + pita Mg + HCLp Larutan warna merah lembayung

## Ekstrak
Tabel 3. Hasil  uji  KLT  terhadap  ektrak metanol No Eluen Keterangan 1 Etil asetat (100%) Noda tidak terpisah 2 Etil asetat : Metanol (9:1) Noda  terpisah  kurang baik, terdapat dua noda 3 Etil asetat : Metanol (8:2) Noda terpisah baik, terdapat empat noda Tabel 4. Hasil  pemisahan  kromatogafi kolom No Fraksi No Tabung Keterangan 1 1 – 16 Fraksi  berupa  padatan  kuning, memberikan  satu  noda  dengan Rf = 0,68 2 17 – 28 Fraksi  berupa  padatan  kuning, memberikan  satu  noda  dengan Rf = 0,58 3 29 – 40 Fraksi  berupa  cairan  kuning  tua, memberikan  dua  noda  yang memanjang dan berimpit 4 41 – 52 Fraksi  berupa  cairan  coklat muda,  memberikan  noda  yang memanjang dan berekor 5 53 – 70 Fraksi  berupa  cairan  coklat  tua, memberikan noda yang

## memanjang dan berekor
Pada  pemisahan  dengan  kromatogafi kolom  (Tabel  4)  didapat  70  buah  fial.  Eluen yang  digunakan  dimulai  dari  etil  asetat sampai  metanol  yang  tingkat  kepolarannya dinaikkan  secara  bergadien.  Hasil  fraksinasi tersebut  setelah  dilakukan  uji  kromatogafi lapis  tipis  memberikan  harga  Rf  yang bervariasi.  Tiap-tiap  fial  yang  menujukan harga  Rf  yang  sama  digabungkan  sehingga
diperoleh lima fraksi. Dari data uji KLT hasil fraksinasi dapat diketahui bahwa ada beberapa  fraksi  yang  pemisahannya  kurang baik sehingga harga Rf sulit untuk ditentukan. Fraksi 1 dan fraksi 2 menghasilkan  satu  noda  dengan  Rf  masing- masing 0,68 dan 0,58.
Tabel 5. Hasil  uji  KLT  kristal  murni fraksi 2
No Perbandingan eluen Nilai Rf 1 Etil asetat (100%) Noda tidak naik 2 Etil asetat : Metanol (9 : 1) 0,32 3 Etil asetat : Metanol (8 : 2) 0,58 Tabel 6. Hasil  rekristalisasi  fraksi  2  dan uji shinoda
Berat kristal murni (g) Uji shinoda 0,1065 Larutan merah lembayung
Untuk mendapatkan hasil yang sangat murni  kristal yang diperoleh harus dilakukan rekristalisasi.  Akan  tetapi  untuk  fraksi  satu jumlah  kristalnya  sangat  sedikit  dan  setelah dilakukan uji aktivitas antioksidan, fraksi satu menujukkan aktivitas yang terkecil dibanding kelima fraksi sehingga hanya fraksi  dua yang direkrisalisasi  mengingat  aktivitasnya  yang terbesar  Hasil rekristalisasi fraksi dua berupa kristal    berwarna  kuning  dan  setelah dilakukan uji KLT (Tabel 5) telah
menunjukkan  satu  noda  dengan  berbagai eluen  Rf  dari  fraksi  2  (Fr.2)  dengan  eluen EtOAc  :  MeOH  (9:1)  =  0,32  dan  EtOAc  : MeOH  (  8:2)  =  0,58  .  Kristal  murni  yang diperoleh  dilakukan  uji  shinoda  terbentuk larutan  berwarna  merah  lembayung,  ini menunjukkan  bahwa  kristal  ini  merupakan senyawa golongan flavonoid.
B. Uji aktivitas Antioksidan
Sumber radikal dalam metode linoleat-tiosianat  ini  adalah  asam  linoleat yang  merupakan  asam  lemak  tidak  jenuh. Radikal merupakan senyawa oksidator. Proses  oksidasi  lemak  menghasilkan  produk pirmer  peroksida  (Munim,  et  al,  2003). Radikal  ini  akan  mengoksidasi  ion  Fe +2 menjadi  Fe +3 .  Selanjutnya  Fe +3 dengan  ion CNS  membentuk  komplek  yang  berwarna merah  yang  dapat  diukur  intensitasnya  pada panjang  gelombang  500  nm.  Reaksi  yang terjadi adalah sebagai berikut:
Ekstrak  metanol  kulit  batang  legung mempunyai  daya  antioksidan  yang  ditandai dengan menurunya absorbansi ekstrak metanol  kulit  batang  legung  dibanding dengan  kontrol,  dengan  urutan  sebagai berikut α -tokoferol  >  Fr.2  >  Fr.4  >  Fr  ..3  > Fr..5 > Fr.1
Pengujian  aktivitas  antioksidan  dari kelima  fraksi  dengan  menggunakan  metoda tiosianat,  serapannya  diukur  pada  panjang gelombang  optimum  (  opt )  480  nm  (Gambar 1).
0.168 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12 0.14 0.16 0.18 430 440 450 460 470 480 490 500 510 520 530 Panjang Gelombang A b so rb a n si
Gambar 1.  Hasil penentuan  opt larutan
 - tokoferol
Hasil  pengukuran  daya  antioksidan  senyawa flavonoid dari lima fraksi hasil isolasi dengan menggunakan metode sistem lineleat- tiosianat  selama  5  hari  yang  ditandai  dengan
menurunya absorbansi kontrol serta
menggunakan vitamin E sebagai pembanding
(Lihat  Gambar  2).  Pengaruh  penambahan  - tokoferol,  dan  kelima  fraksi  dalam  proses oksidasi  asam  linoleat  yang  disimpan  di dalam  tabung  reaksi  yang  tertutup  pada  suhu 40  C.  Dari  gafik  tersebut  terlihat    bahwa semua  senyawa  menghambat  proses  oksidasi asam linoleat dimana aktivitas kelima
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1 0 1 2 3 4 5 Hari A bs or ba ns i Kontrol Alfa Tokoferol Fr.1 Fr.2 Fr.3 Fr.4 Fr.5
Gambar 2. Uji Aktivitas Antioksidan Ke-5

## Fraksi
Fraksi  ekstrak  metanol  lebih  rendah jika dibandingkan dengan  -tokoferol.
Berikut  urutan  aktivitas  antioksidan  masing- masing fraksi:
 -tokoferol  Fr.2  Fr.4  Fr.3  Fr.5  Fr.1
Berdasarkan nilai absorbansi fraksi dua (Fr.2) memiliki  aktivitas  yang  terkuat  diantara sampel  uji  sedangkan    aktivitas  fraksi  empat (Fr.4)  sebanding  dengan  Fr.2  begitu  juga dengan  fraksi  tiga  (Fr.3)  dan  fraksi  lima (Fr.5)  aktivitas  kedua  fraksi  hampir  sama. Kecuali    Fr  1  menunjukan  aktivitas  yang terlemah.
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Hari A b sor ba ns i Kont rol Al fa Tokoferol As am Askorbat Fr.2

## Gambar 3. Uji aktivitas Antioksidan Fraksi 2 setelah direkristalisasi
Setelah  fraksi  2  dilakukan  rekristalisasi  dan dilakukan  kembali  uji  aktivitas  antioksidan dengan  pembanding  -tokoferol  dan  asam askorbat  terlihat  bahwa  selama  8  hari aktivitas  senyawa  murni    Fr.2  lebih  stabil sebagai  antioksidan  (Gambar  3).  Ini  dapat disimpulkan bahwa Aktivitas senyawa flavonoid  pada  Fr.2  lebih  baik  dibandingkan  -tokoferol dan asam askorbat.
Fr 2 > asam askorbat >  -tokoferol
Aktivitas  antioksidan  senyawa  murni Fr.2 dapat dikatakan lagi lebih baik dari Fr.2 sebelum  dimurnikan,  dilihat  dari  aktivitas dalam  menghambat  proses  oksidasi  asam linoleat  bila  dibandingkan  terhadap  - tokoferol.  Hal  ini  tentunya  disebabkan  oleh adanya  zat  pengotor  yang  melekat  pada kristal  Fr.2  sebelum  dimurnikan  sehingga akan mempengaruhi aktivitasnya.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan dapat diambil kesimpulan bahwa: 1.Aktivitas  antioksidan senyawa  flavonoid dari  ke  lima  fraksi  hasil  isolasi  senyawa flavonoid  ekstrak  metanol  kulit  batang legung berturut- turut  sebagai  berikut:  α - tokoferol  >  Fr.2  >  Fr.4  >  Fr  ..3  >  Fr..5  > Fr.1.
2.Fraksi dua  (Fr.2)  ekstrak  metanol  hasil rekristalisasi mempunyai aktivitas
antioksidan lebih besar dari α -tokoferol dan asam askorbat.

## SARAN
Perlu  dilakukan  pengujian  aktivitas  lain  dari kulit  batang,  daun,  bunga  dari  tanaman Legung (Vitex pinnate Tour ex Linn).

## DAFTAR PUSTAKA
Alphajit,  S.,  1995.  Isolation  and  structure  of limonidilactone-a  Labdane  diterpen  from
Vitex
limonifolia, Australia J.Chem,48:133-137
Badami, S., Prakash, O., Donge, SH., Suresh,
B., 2005, In vitro antioxidant properties of Solanum  pseudocapsicum  leaf  ekstraks, Indian J Pharmacol., 37:251-252 Da Silva,  lB.,  Da  Silve,  ULL,  mahenran,  M
and Jennings, RC,1980, 4’ -hidroksi- 3,5,6,7,3’,5’ -heks-metoksi flavon,
Phytochemistry, 19,2794.
Esteban,  A.,  Zapata,  L.,  Casano,M.,  Martin and  Sabater.,  2000,  Peroxidase  activity  in Aloe  vera  barbadebsis  commercial  Gel:
Probable  role  in  skin  protection,  Planta Medica, 66: 724-727
Godjevac,  D.,  Vajs,  V.,  Menkov,  N.,  Telev,
V.,  Kov,  P.,  Milosvljev,  S.,  2004, Flavonoid  from  flowers  of  Chepalaria ppastricenis  and  Their  antiradical  activity, J. Serb.Chem, Soc.69:883-886.
Inatani, Nakatani dan Fuwa, 1983.
Antioxidative  effect  of  some  Ginger constituen  of  (Rosmarinus  oficinalis  L) and  Their  Derivatives,.  Agic  .J.Biol. Chem.(3), 2081-2085
Perry,  LM  and  Metzger,  J.,1980,  Medicine plants  of  east  and  southest  Asia:  The Attributed properties  and  sees.  The  MIT Press. Cambridge, Massachusetts.
Pokorni,J., Yanishlieva,N and Gordon,
M.,2001,  Antioxidant  isolated  from  leaf Wax of Eucalyptus leaves,
J.Agic.Biol.Chem,45,735-739. Torel,  J.,  dan  Cilard.,  1986.  Antioxidant activity  of  flavonoid  and  reactivity with
peroxy radical.
Phytochemistry.Pergamon
Press,2(25),283-38
.