Aktivitas Antifeedant Ekstrak Daun Aglaia ganggo Miq pada Spodoptera litura
Antifeedant Activity from Leaves Extract of
Aglaia ganggo Miq on Spodoptera litura
Purwatiningsih 1*) and I Nyoman Adi Winata 2) 1 Jurusan Biologi, FMIPA, Universitas Jember
2 Jurusan Kimia, FMIPA, Universitas Jember
*) Email: purwatiningsih2000@gmail.com

## ABSTRACT
The different fraction extracts (viz methanol, dichlorometana, n- hexane, ethylacetate, and aceton) obtained  from  leaves  of Aglaia  ganggo Miq  were  investigated  for  antifeedant  activity  against Spodoptera litura . All extract fractions showed antifeedant activity with aceton fraction exhibited the  highest  antifeedant  activity  at  1  ppm  concentration.  Only  hexane  fraction  showed  a  dose dependent concentration while the other fractions exhibited the opposite respond.
Keywords : Antifeedant, Aglaia ganggo , extract, fraction

## PENDAHULUAN
Aglaia  merupakan  salah  satu  genus  tumbuhan dalam  famili  Meliaceae  yang  relatif  besar.  Di dunia diperkirakan terdapat 105 spesies Aglaia, dimana  65  di  antaranya  terdapat  di  Indonesia (Pannel,1992). Beberapa penelitian melaporkan bahwa,  Aglaia  sangat  potensial  dijadikan sumber senyawa bioaktif. Nugroho (1999) dan Chaidir (1999) menemukan senyawa rocaglamida yang bersifat insektisidal terhadap Spodoptera littura . Mohamad (1999)
melaporkan adanya senyawa aktif terhadap sel tumor  manusia  (KB  sel)  yang  cukup  potensial dengan  kemampuan  inhibisi  69  %  pada konsentrasi  10 µ g/ml.  Sementara,  Saifah (1999)  melaporkan  adanya  senyawa  turunan bisamida yang bersifat anti-virus.
Aglaia  ganggo Miq.  merupakan  salah  satu spesies  dalam  genus  Aglaia.  Tumbuh  pada ketinggian  150  m  dari  permukaan  laut.  Pohon ini bisa memiliki tinggi 25 m dengan diameter batang  70  cm.  Memiliki  kayu  yang  kuat berwarna  coklat  kemerahan.  Kayunya  tahan terhadap  perubahan  cuaca,  tidak  mudah  belah, dan  tahan  terhadap  serangan  serangga, sehingga  banyak  digunakan  sebagai  tiang bangunan, balok dan papan (Heyne, 1987). Dari  penelusuran  literatur  yang  kami lakukan  menunjukkan  belum  ada  penelitian mengenai senyawa bioaktif dari tumbuhan ini.
Skrening  fitokimia  yang  dilakukan  oleh Sihotang (1996), melaporkan bahwa pada akar, kulit  batang,  dan  daun A.  ganggo Miq. mengandung  alkaloid,  steroid  atau  terpenoid. Pada  daunnya  juga  diperkirakan  terdapat senyawa flavonoid.
Berdasarkan  uraian  di  atas,  maka  perlu dilakukan  penelitian  untuk  mengisolasi  dan mengidentifikasi senyawa bioaktif dari daun A. ganggo Miq.  yang  bersifat  antifeedant (penghambat makan) terhadap serangga.

## METODE

## Bahan
Daun A. ganggo Miq yang diambil dari Taman Nasional  Meru  Betiri,  Jember,  Jawa  Timur. Larva S.  littura dibiakkan  sendiri  di Laboratorium Zoologi, Jurusan Biologi FMIPA Universitas Jember. Metanol, diklorometana, n- heksana,  etilasetat,  dan  aseton. n- butanol, isopropanol, silika gel 60 GF 254 (Merck), silika gel G 60 (70-230 mesh ), silika gel G 60 (230-400 mesh),  dan  pelat  KLT  Kieselgel  60  F 254 0,25 mm  (merck),  Sephadex  LH-20,  dan  pereaksi semprot untuk KLT (p-anisaldehid).
Alat Kromatografi
kolom vakum (KVC),
kromatografi  kolom  tekan  (KKT),  mikropipet 50-1000 µ L,  timbangan  analitik Ohaus , spektroskopi FTIR

## Ekstraksi dan Isolasi
Prosedur  awal  ekstraksi  dan  isolasi  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  diadopsi  dari Nugroho  (1999).  Sebanyak  2  kg  daun A. ganggo Miq.  yang  telah  dikeringkan,  digerus sampai  halus,  dan  diekstraksi  dengan  teknik maserasi  menggunakan  5  L  MeOH  selama  24 jam.  Ekstraksi  dilakukan  sebanyak  tiga  kali dengan  jumlah  pelarut  yang  sama.  Semua ekstrak  yang  diperoleh,  dikumpulkan  lalu dikeringkan  dengan  cara  evaporasi.  Ekstrak dipartisi berturut-turut dengan MeOH/heksana, H 2 O/CH 2 Cl 2 ,  dan  H 2 O/EtOAc.  Setiap  fraksi yang diperoleh diuji aktifitasnya terhadap larva S.  littura .  Fraksi  yang  aktif  difraksinasi  lebih lanjut dengan teknik kromatografi (kromatografi  kolom  vakum,  kromatografi kolom  tekan,  kromatografi  permeasi  gel) menggunakan  Silika  Gel  60  F  for  coloum chromatography, Silika Gel 60 (70-230 mesh), dan  Sephadex  LH-20,  dengan  eluen  campuran MeOH, CH 2 Cl 2 , EtOAc, aseton, n-butanol, dan isopropanol.  Perbandingan  jumlah  eluen campuran  yang  digunakan  dalam  fraksinasi ditelusuri  dengan  kromatografi  lapis  tipis. Kromatografi  lapis  tipis  juga  digunakan  untuk monitoring  hasil  fraksinasi  dengan  pereaksi anisaldehid  sebagai  penampak  noda.  Setiap fraksi  hasil  pemisahan  diuji  aktifitasnya terhadap larva S. littura .
Persiapan dan Pemeliharaan S. littura Larva S.  littura yang  dipakai  sebagai  induk dikumpulkan  dari  kebun  tembakau  rakyat  di Jember.  Larva  yang  diperoleh,  dipelihara  di laboratorium  sehingga  diperoleh  keturunan (F1) yang digunakan sebagai serangga uji. Larva  S .  littura dipelihara  dalam  wadah plastik dan diberi makan daun tembakau segar. Setiap  hari  makanan  diganti  dan  wadah dibersihkan.  Pupa  yang  terbentuk  dipisahkan antara  jantan  dan  betina,  selanjutnya  pupa dimasukkan  dalam  kandang  perkawinan dengan  ukuran  25  x  25  x  50  cm  dengan perbandingan  jantan  dan  betina  1:2.  Pada kandang  perkawinan  diletakan  larutan  madu  5 %  yang  ditempatkan  dalam  botol  berukuran kecil. Pada bagian atas kandang diletakkan kain putih  sebagai  tempat  peletakkan  telur.    Kain yang  berisi  telur  disimpan  pada  wadah  plastik yang  berpori  sampai  telur  menetas  menjadi larva.

## Uji Antifeedant dengan Metode Pemilihan Pakan
Penentuan Aliquot Daun Dibuat cakram daun tembakau dengan diameter 4.5  cm.  Setiap  cakram  daun  tersebut dicelupkan  dalam  pelarut  aseton  selama  10 detik,  kemudian  dikering  anginkan  selama  15 menit, lalu ditimbang sehingga diperoleh berat awalnya  (X1).  Enam  jam  kemudian  cakram daun  ditimbang  lagi  sehingga  diperoleh penyusutan beratnya (X2). Berat aliquot adalah selisih X1 dan X2.

## Uji antifeedant
Cakram    daun  tembakau  perlakuan  dengan diameter  4,5  cm  dicelupkan  selama  10  detik pada  masing-masing  larutan  uji  dengan konsentrasi  0,01;  0,10;  0,25;  0,50;  0,75;  1,0; 2,0;  4,0;  6,0;  8,0;  10,0;  15,0;  20,0;  25,0;  dan 30,0  ppm,  kemudian  dikeringanginkan  selama 15  menit.    Untuk  kontrol  cakram  daun dicelupkan dalam pelarut aseton.
Pada  masing-masing  wadah  plastik  tempat uji  dimasukkan  2  cakram  daun  yaitu  cakram daun  kontrol  dan  perlakuan.  Kemudian dimasukkan  satu  ekor  larva  yang  telah dipuasakan  selama  12  jam.  Setelah  6  jam pemberian  pakan  dihentikan.  Kemudian  berat cakram  daun  kontrol  dan  perlakuan  yang tersisa  ditimbang.  Setiap  perlakuan  dibuat dalam  3  kali  ulangan  (n  =  3).  Hitung  selisih masing-masing  cakram  daun  kontrol  dan perlakuan  terhadap  aliquot  .  Data  yang diperoleh dimasukkan dalam persamaan (Koul, 1983) berikut:
C =  berat daun kontrol yang dimakan T =  berat daun perlakuan yang dimakan

## HASIL PENELITIAN
Ekstraksi dan Fraksinasi Senyawa Bioaktif dari Daun Aglaia ganggo Sampel  daun A.ganggo dikumpulkan  dari Taman  Nasional  Meru  Betiri,  Jember  pada bulan  Juli  2006.  Spesimen  diidentifikasi  dan disimpan  di  laboratorium  Botani  Jurusan Biologi,  FMIPA  Universitas  Jember.  Setelah dikering-anginkan selama seminggu, selanjutnya  digiling  sampai  halus.  Sebanyak 3,5  kg  sampel  diekstraksi  dengan  teknik
maserasi  menggunakan  15  L  metanol  selama 24 jam. Setelah disaring, residu dimaserasi lagi dengan  metanol,  kemudian  disaring  setelah  24 jam.  Filtrat  hasil  maserasi  digabung  terus dipekatkan  dengan  evaporator.  Ekstrak  yang diperoleh  berupa  slurry  (padatan  lengket) berwarna  coklat  gelap  sebanyak  85  gram. Ekstrak yang diperoleh selanjutnya difraksinasi dengan teknik kromatografi.
Sebanyak  75  gram  ekstrak A.ganggo difraksinasi  dengan  cara  kromatografi    kolom vakum  menggunakan  silika  gel  G 60 for  TLC sebagai  fase  diam  dan  heksana,  50  %  aseton- heksana,  aseton,  dan  metanol  sebagai  fase gerak.  Hasil  fraksinasi  dimonitor  dengan kromatografi  lapis  tipis  menggunakan  pelat Kieselgel  60  F 254 0,25  mm sebagai  fase  diam dan  50  %  aseton-heksana  sebagai  fase  gerak. Untuk penampak noda digunakan uap iodum.
Kromatogram  yang  diperoleh  ditampilkan pada  gambar  1.  Setiap  fraksi  yang  diperoleh, dipekatkan  dengan  evaporator,  kemudian ditimbang.  Hasil  yang  diperoleh  untuk  fraksi heksana,  50%  aseton-heksana,  aseton,  dan metanol  berturut-turut  adalah  0,34;  10,85; 17,23; dan 15,53 gram.
(a) (b) (c)
Gambar  1.  Kromatogram  hasil  fraksinasi  ekstrak daun A.ganggo Miq.  Pada  kromatogram (a)  dan  (b)  ada  5  noda  yaitu  ekstrak awal,  Fraksi  heksana,  50%  aseton- heksana, aseton, dan methanol. Kromatogram  (c)  hasil  pencarian  fase gerak untuk fraksinasi Tabel 1. Hasil uji antifeedant masing-masing fraksi ekstrak daun A. ganggo Konsentrasi (ppm) Ulangan (n) Fraksi Heksana Fraksi 50% Aseton/Heksan Fraksi Aseton Fraksi Metanol 1 3 29,2 ± 18,3 abc 71,8 ± 162,5 a 764,7 ± 1563 a 0,7 ± 4,8 ab 2 3 3,9 ± 10,6 abc -19,0 ± 24,5 a -11,8 ± 78,9 a -75,8 ± 102 a 4 3 -19,0 ± 8,0 ab -7,8 ± 12,9 a -11,1 ± 214 a -24,4 ± 25,1 ab 6 3 -20,0 ± 20,5 ab -8,5 ± 21,7 a -261,4 ± 207 a 7,7 ± 74,1 ab 8 3 -7,8 ± 54,6 abc -7,7 ± 58,1 a -60,9 ± 228 a 72,4 ± 80,6 b 10 3 -35,2 ± 6,3 a 7,5 ± 12,8 a -125,4 ± 348 a 1,6 ± 45,7 ab 15 3 17,8 ± 59,1 abc -4,1 ± 13,3 a 16,4 ± 9,5 a -29,4 ± 22,8 a 20 3 8,7 ± 9,8 abc -17,4 ± 27,9 a -59,6 ± 41,6 a 17,9 ± 20,6 ab 25 3 3,0 ± 22,3 abc -16,1 ± 76,2 a -1,6 ± 53,7 a 16,2 ± 10,6 ab 30 3 50,7 ± 45,1 c -28,3 ± 4,5 a -72,8 ± 56,2 a -2,4 ± 21,9 ab
Uji Aktifitas Terhadap Larva S.ra litura Setiap  fraksi  yang  diperoleh  diuji  aktifitas antifeedant-nya  terhadap  Larva S.  litura Data hasil  uji  antifeedant  (hambatan  makan) dianalisis  menggunakan  analisis  varian  yang dilanjutkan  dengan  uji  Duncan  pada  taraf kepercayaan  95%.  Hasil  yang  diperoleh ditampilkan pada Tabel 1.
Berdasarkan  hasil  analisis  yang  dilakukan, diketahui  bahwa  fraksi  aseton  memiliki aktifitas  antifeedant  tertinggi,  yaitu  764,7  %. Bila  hasil  ini  dihubungkan  dengan  hasil  uji kromatografi  lapis  tipis,  menunjukkan  bahwa senyawa  antifeedant  dari  daun A.  ganggo memiliki tingkat kepolaran sedang seperti yang diperoleh pada spesies Aglaia yang lain.

## KESIMPULAN
Fraksi aseton dari ekstrak daun Aglaia ganggo Miq.  memiliki  aktifitas  antifeedant  tertinggi terhadap  larva Spodoptera  litura ,  yaitu  764,7 %.  Selain  fraksi  heksana,  aktifitas  antifeedant masing-masing  fraksi  dari  ekstrak  daun A. ganggo Miq.  secara  umum  mengalami penurunan seiring dengan kenaikan konsentrasi larutan uji.

## DAFTAR PUSTAKA
Chaidir,  Hiort,  J.,  Nugroho,  B.W.,    Bohnenstengel, F.I., Wray, V., Witte, L., Hung, P.D., Kiet, L.C., Sumaryono,  W.,  Proksch,  P.,  1999,  New Insectisidal  Rocaglamide  Derivatives  from flowers  of Aglaia  duperreana (Meliaceae), Phytochemistry , 52, 837-842
Chairul,  S.M.,  Simanjuntak,  P.,  Kosela,  S.,  2004, Isolasi  dan  Elusidasi  Struktur  Kimia  Senyawa Insektisida  dari  Fraksi  Etilasetat  Kulit  Batang Aglaia  angustifolia , Bull.of  The  Indonesian Soc.Nat.Prod.Chem , 4, 63-66 Heyne,  K., Tumbuhan  Berguna  Indonesia ,  Jilid  II, cetakan ke-1, Badan Litbang Kehutanan, Jakarta, 1987, 1129 Koul,  O., Plant  Allelochemical  and  Insect  Control on Antiffedant Approach in Chemical Ecology of Phytophagus  Insect ,  T.N.  Ananthakhrisnan  and A.  Raman  (eds).,  Oxpord  and  Hill  Publishing Co. Ltd. New Dehli. 1993 Mohamad, K., Sevenet, T., Dumontet, V., Pais, M., Tri,  M.V.,  Hadi,  H.,  Awang,  K.,  Martin,  M.T., 1999,  Dammarane  Triterpenes  and  Pregnane Steroids  from
Aglaia  lawii and Aglaia tomentosa , Phytochemistry , 51, 1031-1037 Nugroho,  B.W.,  Edrada,  R.A.,  Wray,  V.,  Witte,  L.,
Bringmann, G., Gehling, M., Proksch, P., 1999, An  Insectisidal  Rocaglamide  Derivatives  and related  Compounds  from Aglaia  odorata (Meliaceae), Phytochemistry , 51, 367-376 Pannell,  C.M., A  Taxonomic  Monograph  of  the Genus Aglaia  Lour (Meliaceae) ,  Kew  Bulletin Additional  Series  XVI,  Royal  Boyanic  Garden, Kew. London, 1992 Saifah, E., Suttisri, R., Shamsub, S., Pengsuparp, T., Lipipun,  V.,  1999,  Bismaides  from Aglaia edulis , Phytocemistry , 52,1085-1088 Sihotang,  P., Potensi  Tumbuhan  Obat  di  Daerah Penangan  hingga  Kebon  Segoro,  Bandealit, Taman  Nasional  Meru  Betiri,  Jawa  Timur , Skripsi, IPB,