## INDUKSI AKAR PADA EKSPLAN TUNAS ANGGREK
Grammatophylum scriptum var. citrinum SECARA IN VITRO PADA MEDIA MS DENGAN PENAMBAHAN NAA DAN BAP

## Mayta Novaliza Isda* dan Siti Fatonah
Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Riau
*Corresponding author: maytaisda@yahoo.com

## Abstract
Grammatophyllum  scriptum  var.  citrinum  is  one  variant  of  endangered  from  habitat  destruction due  to  logging  and  forest  fires  and  hunts  by  orchid  collectors.  The  aim  of  this  study  was  to determine the effect of BAP and NAA concentration in the root orchid propagation G. scriptum var. citrinum. The results showed that the application of BAP and NAA significant effect on the time of formation appeared roots (19 days), the best root number in the treatment of BAP 0.5 mg/l + 1.0 mg/l NAA for (5 pieces) and root length was obtained NAA 1 mg/l and a combination of 1.0 mg/l BAP + 0.5 mg/l NAA respectively 6.66 cm and 7.40 cm.
Keywords: Grammatophyllum scriptu var citrinum, in vitro, BAP, NAA

## PENDAHULUAN
Indonesia  mempunyai  banyak  jenis tumbuhan  termasuk  tumbuhan  epifit.    Salah satunya  adalah  jenis  anggrek  yang  diper- kirakan  jumlah  anggrek  spesies  lebih  dari 5000  spesies.  Indonesia  yang  kaya  dengan tanaman  anggrek  sangat  menguntungkan karena  ditunjang  oleh  kecocokan  iklim  dan banyaknya  jenis  anggrek  yang  potensial. Indonesia  merupakan  negara  dengan  tingkat kekayaan  plasma  nutfah  anggrek  terbesar kedua setelah Brasil. Banyak di antara spesies anggrek itu yang merupakan anggrek endemik Indonesia.
Potensi  Indonesia  dalam  tanaman anggrek  mempunyai  harapan  baik,  karena ditunjang  oleh  kecocokan  iklim  dan  banyak- nya  jenis  anggrek  bermutu  sudah  terbukti, anggrek  Indonesia  merupakan  bahan  induk yang  berpotensi  (Darmono,  2003).  Anggrek dalam  penggolongan  taksonomi  termasuk Orchidaceae.  Famili ini terdiri dari 800 genus yang  beberapa  diantaranya  hampir  punah. Salah satu anggrek yang hampir punah adalah dari genus Grammatophyllum . Jenis Grammatophyllum yang  ada  di  Indonesia termasuk    Riau  adalah  anggrek  tebu  ( G. speciosum ), anggrek sendu ( G. stapeliaeflorum ),
anggrek macan ( G.
scriptum )  dan  beberapa  varian  yang  ada  di alam.
Grammatophyllum  scriptum merupakan anggrek  yang  hampir  punah  dan  langka. G. scriptum menghadapi  ancaman  serius  dari perburuan  tanaman  anggrek  dan  kerusakan habitat. G. scriptum terkenal  sebagai  anggrek macan.  Hal  ini  dikarenakan  mempunyai warna  dasar  hijau  dengan  totol–totol  coklat yang  mirip  warna  macan.  Anggrek  ini mempunyai  keunggulan  yaitu  habitusnya yang  tegap  dan  kuat,  jumlah  bunga  yang sangat  banyak  yaitu  25-50  dan  waktu berbunga  cukup  lama,  bunga  tahan  lama  dan tidak mudah layu (Wijayani et al ., 2007).  Di antara varietas dari G. scriptum yang ditemu- kan  adalah G.  scriptum var. tigrinum dan G. scriptum var. citrinum . Pada G. scriptum var. tigrinum mempunyai  sepal  dan  petal  bercak- bercak  besar  dan  rapat  serta  tidak  teratur berwarna  coklat. G.  scriptum var. citrinum panjang  bunga  dapat  mencapai  22  meter dengan  ukuran  bunga  5-8  cm  dengan  petal dan  sepal  bewarna  hijau.  Sampai  saat  ini  di Indonesia  termasuk  Riau  belum  banyak laporan  atau  penelitian  tentang  anggrek macan ini terutama Grammatophyllum scriptum var. citrinum .
Menurut  Metusala  (2007),  meskipun penyebaran G.  scriptum cukup  luas  justru menghadapi  ancaman  serius  dari  perburuan tak  terkendali  serta  kerusakan  habitat. Perkembanganbiakan alami di  habitat  dengan biji  sangat  sulit  karena  lambatnya  laju pertumbuhan  biji  dari  fase  biji  hingga mencapai tanaman dewasa yang siap berbunga.  Perbanyakan  secara  konvensional sangat  sulit  untuk  memenuhi  kebutuhan  bibit yag sangat banyak dengan waktu relatif cepat. Mungkin  hal  inilah  yang  mendasari  spesies anggrek ini menjadi  salah satu  plasma nutfah yang  dilindungi.  Selain  itu  informasi  dan laporan hasil penelitian mengenai spesies dan varian  anggrek Grammatophyllum masih jarang  sehingga  perlu  penelitian  lebih  lanjut. Oleh  karena  itu,  salah  satu  alternatif  untuk pemecahan  masalah  itu  adalah  dengan menggunakan  metode  kultur in  vitro yang dikenal  dengan  metode  kultur  jaringan sehingga pemenuhan kebutuhan bibit tanaman anggrek akan dapat dihasilkan dengan jumlah banyak.
Kegunaan  utama  dari  kultur  jaringan adalah  mendapatkan  tanaman  baru  dalam jumlah  banyak,  waktu  yang  relatif  singkat, mempunyai  sifat  fisiologis  dan  morfologi sama  persis  dengan  tanaman  induknya.  Dari teknik in vitro ini diharapkan dapat diperoleh tanaman baru yang bersifat unggul (Hendaryono  &  Wijayani,  1994).  Kultur jaringan merupakan salah satu alternatif untuk mendapatkan  tanaman  anggrek Grammato- phyllum scriptum var. citrinum dalam jumlah yang banyak.  Pengakaran merupakan tahapan yang  sangat  penting  dalam  pembentukan planlet  untuk  mikropropagasi  secara in  vitro . Media  MS  (Murashige  and  Skoog)  merupa- kan  media  yang  banyak  digunakan  dalam kultur in  vitro . Tujuan  penelitian  ini  adalah mempelajari  pengaruh  NAA  dan  BAP  pada berbagai  konsentrasi  terhadap  kemampuan induksi  akar  dari  eksplan Grammatophyllum scriptum var. citrinum .

## MATERIAL DAN METODE
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah media MS merk Phyto Technology
Laboratorie ,  agar-agar  (Fision),  Zat  Pengatur Tumbuh (ZPT) berupa BAP, eksplan tunas in vitro Grammatophyllum scriptum var. citrinum, sukrosa,  akuades,  alkohol  70%  dan 96%, HCl 1N serta NaOH 1 N.
Alat-alat yang digunakan adalah Laminar  Air  Flow  Cabinet (LAFC)  (Lab Tech),  autoklaf  (All  Americana  tipe  25X-2), oven (Pselecta  tipe  2001244),  timbangan analitik  (Kern  tipe  ABJ  120-4M), hot  plate (Pselecta  tipe  048432),  erlenmeyer,  botol kultur,  gelas  ukur,  kertas  pH,  pinset,  pipet tetes,  spatula,  cawan  petri, scapel (kater), lampu bunsen, botol sprayer , aluminium foil, kertas saring, tissue , karet gelang dan plastik. Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimen  menggunakan  Rancangan  Acak Kelompok  (RAK).  Konsentrasi  ZPT  terdiri dari  5  taraf,  yaitu:  0,5  mg/l  NAA,  1  mg/l NAA,  0,5  mg/l  BAP  +  0,5  NAA;  0,5  BAP mg/l  +  1,0  mg/l  NAA,  1,0  mg/l  BAP  +  0,5 mg/l  NAA,  masing-masing  perlakuan  terdiri dari  5  ulangan  dengan  demikian  terdapat  25 unit percobaan.
Sterilisasi Alat Dilakukan sterilisasi menggunakan autoklaf  pada  suhu  121  C  tekanan  1,5  atm selama  20  menit,  setelah  itu  semua  alat  dan bahan  di  masukkan  ke Laminair  Air Flow (LAF)  yang  sudah  disemprot  dengan  alkohol 70%.

## Pembuatan Media Kultur
Larutan  stok,  sukrosa,  agar  dan  zat pengatur  tumbuh  dituang  ke  dalam  gelas Beaker dan ditambahkan zat pengatur tumbuh sesuai  dengan  perlakuan.  Larutan  media ditambah  akuades  hingga  mencapai  volume 1L. pH diatur 5,8 dengan penambahan NaOH atau  HCl.  Media  dipanaskan  di  atas  api hingga  mendidih.  Media  dituang  ke  dalam botol  ±20  ml,  dilanjutkan  disterilisasi menggunakan  autoklaf  pada  suhu  121  C  dan tekanan  1,5  atm  selama  20  menit.  Setelah suhu autoklaf turun, media dikeluarkan dan di uji kontaminasi selama ± 1 minggu.
Bagian tanaman yang digunakan sebagian  eksplan  adalah  tunas in  vitro anggrek Ggrammatophyllum  scriptum var. citrinum berumur  ±7  bulan.  Tunas  dikeluar-
kan dari botol dan dicuci dengan air mengalir lalu direndam dengan larutan deterjen selama 20  menit  sambil  digoyang.  Setelah  itu,  tunas dibilas  dengan  air  mengalir  selama  10  menit. Selanjutnya  dibilas  kembali  dengan  akuades steril.  Tunas  kemudian  direndam  dalam  2  g/l fungisida selama 10 menit, dibilas sebanyak 3 kali dengan akuades steril, dilanjutkan peren- daman  dengan  2  g/l  bakterisida  selama  10 menit  dan  dibilas  sebanyak  3  kali  dengan akuades  steril.  Selanjutnya,  tunas  direndam dengan larutan 20% natrium hipoklorit selama 7  menit,  kemudian  tunas  dicuci  dengan  aku- ades  steril  sebanyak  3  kali.  Tunas  direndam kembali dengan larutan alkohol 70% selama 3 menit  dan  dibilas  kembali  dengan  akuades steril  sebanyak  3  kali.  Sterilisasi  eksplan dilakukan dalam Laminar Air Flow Cabinet Penanaman  eksplan  dilakukan  dalam Laminar  Air  Flow  Cabinet (LAFC)  yang sebelumnya  telah  disterilkan  menggunakan alkohol  70%.  Sebelum  penanaman  eksplan dilakukan,  LAFC dibiarkan  menyala  selama 30 menit. Sebelum peralatan tanam yang akan digunakan  dimasukkan  ke  dalam  LAFC , peralatan  disemprot  terlebih  dahulu  meng- gunakan  alkohol  70%.  Penanaman  eksplan dilakukan  dengan  cara  menanam  tunas  pada medium kultur. Tunas diletakkan pada cawan petri  dengan  akuades  steril  menggunakan pinset.  Pinset  dan scalpel yang  akan digunakan  disterilkan  terlebih  dahulu.  Tunas dipotong  dengan  ukuran  panjang  ±2  cm. Kemudian eksplan tunas ditanam  pada media perlakuan.
Pengamatan  dilakukan  setiap  hari  hing- ga  kultur  berumur  50  hari.  Parameter  yang diamati  meliputi  eksplan  hidup  (%),  waktu muncul  akar  (hari),  jumlah  akar  (buah)  dan panjang akar (cm).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan respon eksplan tunas terhadap  pemberian Benzil  Amino  Purine (BAP)  dan Naphthalene  Acetic  Acid (NAA) dalam  induksi  akar  anggrek  secara in  vitro dapat  dilihat  pada  Tabel  1.  Berdasarkan analisis  ragam,  pemberian  BAP  dan  NAA memberikan  pengaruh  yang  nyata  (P<0,05)
terhadap  waktu  terbentuknya  muncul  akar, jumlah akar dan panjang akar.
Persentase  eksplan  yang  hidup  hingga minggu ke delapan setelah tanam  pada setiap perlakuan  adalah  100%  (Tabel  1).  Persentase hidup  eksplan  yang  tinggi  disebabkan  nutrisi pada  media  pertumbuhan  tersedia  cukup hingga minggu ke delapan. Medium MS yang digunakan  dalam  penelitian  ini  mengandung unsur  hara  makro,  mikro,  vitamin  dan  asam amino  yang  diperlukan  untuk  pertumbuhan tunas.  Razdan  (2003)  menyatakan  bahwa medium  MS  umum  digunakan  untuk  induksi tunas  dan  mengandung  nutrisi  yang  sesuai untuk  menunjang  pertumbuhan  optimal  dari tanaman secara in  vitro .  Keistimewaan medi- um  MS adalah kandungan nitrat,  kalium,  dan amonium  yang  tinggi  sehingga  sangat  efektif untuk  partumbuhan  beberapa  varietas  tanam- an  dikotil  dan  monokotil  (Wetter  & Constabel, 1991).
Metode sterilisasi memberikan pengaruh penting  bagi  keberhasilan  hidup  eksplan secara in  vitro .  Diduga  sterilisasi  yang dilakukan  pada  penelitian  ini  tidak  meng- akibatkan  kematian  eksplan.  Yusnita  (2004) menyatakan  pengulangan  sterilisasi  eksplan dalam  larutan  Na-hipoklorit  dengan  konsen- trasi  yang  lebih  rendah  dapat  mengurangi tingkat  kontaminan  dari  bagian  permukaan eksplan. Zulkarnain (2009) melaporkan bahwa  larutan  hipoklorit  (natrium  maupun kalsium)  terbukti  efektif  untuk  sterilisasi sebagian  tanaman.  Roostika et  al .  (2005) melakukan  sterilisasi  eksplan  biji  manggis menggunakan  alkohol  70%  selama  5  menit, Na-hipoklorit  30%  selama  10  menit  dan  Na- hipoklorit  20%  selama  5  menit  berhasil menumbuhkan  tunas  hingga  100%  dengan penambahan NAA ataupun yang ditambahkan BAP.  Menurut  Hartmann et  al .  (2002) penambahan zat pengatur tumbuh yang sesuai dapat  meningkatkan  aktivitas  pembelahan  sel dalam  proses  morfogenesis  dan  organogene- sis.  Selain  itu  pada  penelitian  ini  media  yang digunakan adalah media MS yang bila ditam- bahkan  dengan  zat  yang  sesuai  maka  akan meningkatkan pertumbuhan dari eksplan.
Tabel 1. Rata-rata penambahan BAP dan NAA terhadap induksi akar G.  var. citrinum Perlakuan Eksplan Hidup (%) Waktu muncul akar (hst) Jumlah akar (buah) Panjang akar (cm) 0,5 mg/l NAA 100 21,67 c 3,33 ab 5,26 a 1 mg/l NAA 100 20,67 bc 3,33 ab 6,66 ab 0,5 mg/l BAP + 0,5 NAA 100 19,00 ab 2,33 a 5,60 a 0,5 BAP mg/l + 1,0 mg/l NAA 100 34,00 d 5,00 b 5,10 a 1,0 mg/l BAP + 0,5 mg/l NAA 100 23,67 d 4,00 ab 7,40 ab
Keterangan: Angka yang diikuti oleh huruf yang sama pada kolom yang sama menunjukkan tidak  berbeda  nyata  pada  uji  DMRT    taraf  5%.Pada  tabel  terlihat  waktu munculnya  akar  pada  perlakuan  pemberian  0,5  mg/l  BAP  +  0,5  NAA menghasilkan  waktu  yang  paling  rendah  pada  pembentukan  akar  terlihat  rata- rata  hari  pembentukan  akar  sebesar  19  hari.    Hal  ini  berarti  bahwa  perlakuan yang dikombinasikan antara NAA dan BAP sebesar 0,5 mg/l BAP + 0,5 NAA mampu  memper-cepat  waktu  munculnya  akar.  Akar  baru  yang  muncul berwarna putih kehijauan.
Penggunaan  arang aktif  pada percobaan ini  bukan  sebagai  perlakuan,  namun  mem- pengaruhi  peningkatan  jumlah  akar.  Menurut Goerge &  Sherrington  (1984),  bahwa pengaruh arang aktif dalam media yaitu untuk mengabsorbsi  senyawa-senyawa  toxik  yang dapat  menghambat  pertumbuhan  kultur, mendorong  morfogenesis  dan  untuk  mendo- rong  pembentukan  akar.  Pada  penelitian  ini jumlah  akar  tertinggi  terdapat  pada  0,5  BAP mg/l + 1,0 mg/l NAA yaitu sebesar 5,00 buah. Hal  ini  diduga  penggunaan  BAP  dan  NAA sudah  membuat  keseimbangan  di  dalam tanaman  sehingga  BAP  yang  tinggi  yang digabungkan  dengan  konsentrasi  NAA  yang tinggi  pada  penelitian  menghasilkan  rata-rata jumlah  akar  yang  tinggi.  Penggunaan  NAA untuk  memacu  pembentukan  akar  juga  telah banyak  dilaporkan  antara  lain,  induksi  akar terbaik Citrus  jambhiri L.  dihasilkan  pada pemberian  0,5  mg/l  NAA  (Savita et  al ., 2010).
Pemberian  NAA  pada  konsentrasi  1 mg/l  secara  tunggal  atau  kombinasi  dengan BAP  memiliki  jumlah  akar  yang  tinggi, namun  akar  yang  dihasilkan  lebih  panjang pada  pemberian  NAA  1  mg/l  daripada perlakuan yang diberikan  0,5 BAP mg/l + 1,0
mg/l  NAA.    Hal  ini  diduga  pemberian  NAA secara tunggal dengan konsentrasi  yang lebih tinggi  akan  memberikan  panjang  akar  yang lebih  tinggi.  Penelitian  yang  dilakukan Mukhtar et  al. (2005),  bahwa  konsentrasi  2 mg/l NAA memberikan hasil terbaik terhadap panjang  akar Citrus  reticulate .  Hal  ini menunjukkan  bahwa  konsentrasi  NAA  yang optimum  dalam  induksi  dan  pemanjangan akar  setiap  tanaman  berbeda-beda  dan dipengaruhi  keseimbangan  antara  hormon endogen (IAA) dan eksogen.

## KESIMPULAN
1. Pemberian  BAP    dan  NAA  memberikan pengaruh  yang  nyata  terhadap  waktu terbentuknya  muncul  akar,  jumlah  akar dan panjang akar.
2. Waktu  munculnya  akar  yang  paling  baik pada  pemberian  0,5  mg/l  BAP  +  0,5 NAA  (19  hari),  jumlah  akar  terbanyak pada perlakuan 0,5 BAP mg/l + 1,0 mg/l NAA  sebesar  5  buah  dan  panjang  akar terpanjang  terdapat  pemberian  NAA secara  tunggal  1  mg/l  dan  kombinasi  1,0 mg/l BAP + 0,5 mg/l NAA berturut-turut sebesar 6,66 cm dan 7,40 cm.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penelitian ini merupakan bagian dari Penelitian  Fundamental  tahun  2014  yang dibiayai oleh DP2M DIKTI.

## DAFTAR PUSTAKA
Darmono,  D.  W.  (2003). Menghasilkan Anggrek  Silangan .  Jakarta:  Penebar Swadaya.
Hartmann, H. T., Kester, D. E., Davies, F. T.,
&  Geneve  R.  L.  (2002). Plant Propagation  Principal  and  Practice. Upper  Saddle  River,  New  Jersey: Pearson Education Inc.
Hendaryono,  D.  &  Wijayani,  A.  (1994).
Teknik  Kultur  Jaringan,  Pengenalan dan  Petunjuk  Perbanyakan  Tanaman secara  Vegetatif-Modern. Yogyakarta: Kansius.
Metusala, D. (2007). Pohon Anggrek Terbesar  dan  Terberat  di  Dunia.  (2013, April 15). Retrieved from http://www.geocities.com Mukhtar, R., Khan, M., Rafiq, R., Shahid, A.,
&  Khan,  F.  A.  (2005). In  vitro
Regeneration and Multiple Shoot
Induction  in Citrus  reticulate (Blanco). International Journal of Agriculture and Biology, 7(3), 414-416.
Razdan,  M.  K.  (2003). Introduction  Plant Tissue  Culture  (2sd  ed.) .  USA:  Science
Publisher. Roostika,  I.,  N.  Sunarlim,  &  I.  Mariska. (2005). Mikropropagasi Tanaman Manggis  ( Garcinia  mangostana L). Jurnal Agrobiogen, 1(1), 20-25.
Savita, V., Virk, G.  S.,  & Nagpal,  A. (2010).
Effect  of  Explants  Type  and  Different Plant  Growth  Regulator  on  Callus Induction  and  Planlet  Regeneration  in Citrus  jambhiri Lush. Enviroment  and We  an  International  Journal  of  Science and Technology, 5, 97-106.
Wetter, L. R. & Constabel, F. (1991). Metode Kultur  Jaringan  Tanaman.  Mathilda  B. Widianto,  Penerjemah.  Bandung:  ITB. Terjemahan  dari Plant  Tissue  Culture Methods .
Wijayanti,  Y.,  Solochatun,  &  Widya,  M. (2007). Pertumbuhan Tunas dan Struktur Anatomi Protocorm  Like Body Anggrek Grammatophyllum  scriptum (Lindl.)  Bl.  dengan  Pemberian  Kinetin dan  NAA. Jurnal  Bioteknologi, 4  (2), 33-40.
Zulkarnain,  H.  (2009). Solusi  Perbanyakan Tanaman  Budidaya  Kultur  Jaringan Tanaman . Jakarta: Bumi Aksara.