## UJI SITOTOKSISITAS EKSTRAK METANOL UMBI BIT
( Beta vulgaris L. var . rubra L . ) TERHADAP CELL LINE T47D
Elya Zulfa 1) , Sri Susilowati 1) ,  Aqnes Budiarti 1)
1) Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang

## INTISARI
Kegagalan terapi kanker payudara akibat resistensi sel telah mendorong usaha pengembangan obat  anti  kanker  termasuk  dari  bahan  alam.  Beberapa  penelitian  menyimpulkan  tentang  adanya aktivitas antioksidan dan antikanker dari umbi bit ( Beta vulgaris L. var . rubra L.) terkait dengan kandungan betasianin dan betasantin yang merupakan golongan senyawa flavonoid. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek sitotoksik ekstrak metanol umbi bit ( Beta vulgaris L. var . rubra L.) pada cell line T47D yang merupakan salah satu jenis sel kanker payudara. Penelitian  dilakukan  dalam  beberapa  tahap  uji,  yaitu  determinasi  tanaman,  pembuatan ekstraksi  metanol,  preparasi  sel,  panen  sel,  dan  uji  sitotoksisitas.  Ekstraksi  umbi  bit  dilakukan dengan  metode  maserasi  menggunakan  metanol  70%.  Uji  sitotoksisitas  pada cell  line T47D dilakukan  dengan  MTT assay menggunakan  lima peringkat kadar  yaitu  500, 250, 125, 62,5, dan 31,25 µg/ml. Analisis data menggunakan analisis probit. . Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  metanol  umbi  bit  tidak  memiliki  aktivitas sitotoksik  terhadap cell  line T47D.  Hal  ini  ditunjukkan  bahwa  pada  5  seri  konsentrasi  ekstrak metanol umbi bit yang diujikan memiliki % kehidupan sel lebih dari 100%.
Kata kunci : Umbi bit, Beta vulgaris L. var. rubra L , Cell line T47D, Sitotoksisitas, Flavonoid.

## ABSTRACT
Therapy  failure  of  breast  cancer  as  a  consequence  of  cell  resistention  has  encouraged  the effort to develop a cancer medicine including herbal medicine. Based on some research, it can be concluded that there is antioxydant and anticancer activity from beetroot involved with betasianin and betasantin substance that belong to flavonoid compound. The purpose of this research was to find the effect cytotoxic of methanolic extract of beetroot ( Beta vulgaris L. var . rubra L.)  on cell line T47D which was a breast cancer cell.
This  research  was  conducted  on  several  experiment  step  namely  plant  determination,  cell preparation,  cell  harvest,  methanolic  extraction,  and  cytotoxic  test.  The  extraction  of  beetroot  is conducted  by    maceration  method  using  methanol  70  %.  Cytotoxic  test  on cell  line T47D  is conducted  by  MTT  assay  using  five  concentration  ceries  were  500,  250,  125,  62,5  and  31,25 ug/ml. Data analysis uses probit analysis.
Research result shows that methanolic extract of beetroot there was no cytotoxic activity on cell  line T47D.  It  shows  that  five  consentration  series  methanolic  extraction  of  beetroot  have  % cell viability more than 100%.
Keyword : Beetroot, Beta vulgaris L. var. rubra L , Cell line T47D, Cytotoxic, Flavonoid.

## PENDAHULUAN
Kanker    payudara  merupakan  salah satu kanker yang menyerang wanita Indonesia.  Meningkatnya  angka  kejadian kanker  di  Indonesia  sesuai  dengan  laporan World  Health  Organization (WHO)  yang memperlihatkan  bahwa  kanker  payudara
masih  menduduki  peringkat  kedua  setelah kanker  leher  rahim  dan  menyebabkan  ± 502.000 kematian per tahun (Riyasa, 2001). Pembedahan,  kemoterapi,  radioterapi,
terapi  dengan  hormon  atau  dengan  terapi antibodi monoklonal merupakan cara pengobatan  kanker  yang  telah  dilakukan (Dolinsky,  2002).  Namun  pengobatan  yang telah ada tidak selalu berhasil dan cenderung menimbulkan  efek  samping  toksik  pada jaringan  normal  serta  resistensi  sel  kanker (Tyagi et  al., 2004).  Eksplorasi  tanaman
obat merupakan usaha pengembangan alternatif pengobatan kanker untuk menghindari  efek  samping  dari  berbagai cara pengobatan yang telah ada. Beberapa  penelitian  menyimpulkan tentang  adanya  aktivitas  antioksidan  dan antikanker  dari  umbi  bit  terkait  dengan kandungan  betasianin  dan  betasantin  yang merupakan  pigmen  utama  dari  umbi  bit ( Beta  vulgaris L.  var .  rubra L.)  (Winkler et al ., 2005). Kapadia et al (1996)
menyebutkan  bahwa Beta  vulgaris var. rubra memiliki  efek  penghambatan  secara signifikan  pada  teradinya  kanker  kulit  dan kanker paru-paru. Penelitian tentang aktivitas  antikanker  umbi  bit  belum  pernah dilakukan  pada  kanker  payudara.  Oleh karena itu perlu dilakukan penelitian tentang uji  sitotoksisitas  ekstrak  metanol  umbi  bit terhadap cell  line T47D  yang  merupakan salah satu jenis sel kanker payudara.

## METODOLOGI PENELITIAN Bahan
Umbi  bit  (daerah  Jurug  Rt  07/  Rw  01,
Kelurahan  Wates,  Kecamatan  Getasan, Kabupaten  Semarang),  metanol  70  % (berderajat teknis), Cell line T47D ( Chemoprevention  Research  Center UGM), medium  RPMI  1640,  medium  penumbuh mengandung growth factor 10% FBS (Fetal Bovine Serum) (GIBCO) – 0,5% fungison –
2%  antibiotik  penisilin  dan  streptomisin (GIPCO), DMSO (E.Merck), tripsin (Sigma), Phospat  Buffered  Saline (PBS) (Sigma),  larutan  MTT  (3-(4,5-dimetiltiazol- 2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromida) 5 mg/mL PBS, larutan sodium dodecyl sulphat (SDS) 10% dalam HCl 0,01 N, doksorubisin.

## Alat
Pembuatan senyawa uji : blender (Maspion),
ayakan  mesh  40,  alat-alat  gelas,  timbangan elektrik (Ohaus), botol warna  gelap, thermostatic waterbath (Memmert), viskosimeter  (Rion  VT-04E).  kultur  sel  : tangki  nitrogen  cair,  mikropipet  (Gilson), conical  tube (Nunclon), tissue  culture  flask (nunclon), Laminar  Air  Flow  Cabinet (Gelman Sciences), stiker label, sentrifugator  (Sarvall  MC12V),  mikroskop fase  contras  (Zeiss  MC  80),  CO 2 Incubator (Heraeus).  Pemanenan  sel:  pipet  pasteur
steril,  mikropipet  1  ml  dan  200  µl  (Gilson), white  tip steril, conical  tube (Nunclon), mikroskop  fase  kontras  (Zeiss  MC  80), haemocytometer (Neubauer), counter, kamera digital (Canon Power Shoot A80,4,0 mega  pixels).  Uji  sitotoksisitas  :  mikropipet 1  ml  dan  200  µl  (Gilson),  tabung  reaksi kecil,  rak  tabung  reaksi  kecil,  timbangan elektrik (Sartorius), 96-well plate (Nunclon) , conical  tube (Nunclon), yellow  tip dan blue tip, ELISA reader (SLT 240 ATC).

## Jalannya Penelitian
a. Pembuatan Ekstrak Metanolik
Maserasi  dilakukan  dengan  cara serbuk  kering  umbi  bit  sebanyak 546,7163  gram  direndam  dengan  pelarut metanol  sebanyak  5,5  liter.  Proses maserasi  dilakukan  dalam  dua  tahap, yaitu tahap pertama dengan menggunakan  metanol  sebanyak  4  liter, kemudian  ditutup  dan  terlindung  dari cahaya  sambil  berulang-ulang  diaduk.
Setelah  3  hari  campuran  tersebut diserkai, diperas, dipisahkan filtrat dengan ampasnya.  dan pada tahap kedua yaitu  remaserasi  dengan  menggunakan metanol  sebanyak  1,5  liter  kemudian ditutup dan terlindung dari cahaya sambil berulang-ulang  diaduk.  Setelah  3  hari campuran  tersebut  diserkai,  diperas, dipisahkan  filtrat  dengan  ampasnya. Filtrat (1) dan (2) dicampur.
Filtrat  yang  diperoleh  dipekatkan pada thermostatic  waterbath diperoleh ekstrak  kental  umbi  bit  sebanyak 25,6450 gram sehingga rendemen ekstraksi pada penelitian ini sebesar 4,69 %.  Ekstrak  kental  yang  diperoleh kemudian diukur
kekentalannya menggunakan  viskosimeter  dengan  hasil pengukuran  sebesar  900  dPas  atau  90 cPas.
b. Pembuatan Larutan Uji
Larutan  uji  dibuat  dari  ekstrak metanol  umbi  bit.  Larutan  uji  tersebut kemudian  diencerkan  menjadi  5  seri larutan konsentrasi dengan menggunakan pelarut  dimetil  sulfoksida  (DMSO). Angka kelipatan seri konsentrasi
diperoleh menggunakan rumus :
f= 𝑫𝒕
𝑫𝒓 𝒏−𝟏
keterangan : f   = Angka kelipatan seri konsentrasi n   = Banyaknya seri konsentrasi Dt = Konsentrasi tertinggi Dr = Konsentrasi terendah (CCRC,  2010).
Pada  penelitian  ini,  konsentrasi  tertinggi yang  digunakan  sebesar  500  μg/ml  dan konsentrasi  terendah  sebesar  31,25  μg/ml dengan  angka  kelipatan  seri  konsentrasi  2.
Seri  konsentrasi  yang  digunakan  adalah 31,25; 62,5; 125; 250 dan 500 μg/ml. Preparasi Sel
Sel yang inaktif dalam wadah ampul diambil dari  tangki  nitrogen  cair  dan  segera dicairkan  pada  suhu  37 o C  kemudian  ampul disemprot  etanol  70%.  Ampul  dibuka  dan sel  dipindahkan  ke  dalam  tabung conical steril  yang  berisi  medium  RPMI  1640. Suspensi sel disentrifuge 3000 rpm selama 5 menit, kemudian bagian supernatan dibuang, pellet  ditambah  1  ml  medium  penumbuh yang mengandung 10% FBS lalu disuspensikan  hingga  homogen,  selanjutnya sel  ditumbuhkan  dalam  beberapa  tissue culture flask kecil (3-4 umbi), diinkubasikan dalam inkubator suhu 37 o C CO 2 5%. Setelah 24 jam, medium diganti dan sel ditumbuhkan  lagi  hingga  konfluen  dan jumlahnya  cukup  untuk  penelitian  (CCRC,
2010).
Pemanenan Sel Setelah  jumlah  sel  cukup,  medium dibuang  dan  sel  dicuci  koloninya  dengan cara  ditambah  larutan  PBS  dan  jika  perlu diresuspensikan  perlahan,  larutan  tersebut dibuang,  sel  ditambah  larutan  tripsin  2,5% sebanyak 1 ml, agar merata ditambah larutan PBS  3  ml,  didiamkan  selama  sekitar  3-5 menit  agar  tripsin  bekerja  dengan  baik.  Sel dipindah  ke  dalam  tabung conical steril dan ditambah  PBS  sampai  volume  10  ml  dan disentrifuge  3000  rpm  selama  3  menit.  Sel dicuci  dua  kali  medium  yang  sama  dan dihitung jumlah selnya menggunakan haemocytometer. Suspensi  sel  ditambah
dengan  sejumlah  medium  kultur  sehingga diperoleh  konsentrasi  sel  sebesar  yang diperlukan (CCRC, 2010). Uji Sitotoksisitas Suspensi  sel  dalam  medium  PRF  RPMI 1640  sebanyak  100  μl  (kepadatan  1,5  x  10 4 sel/sumuran) dimasukkan ke dalam plate 96 sumuran  berbeda  dan plate diinkubasi selama  24  jam  dalam  inkubator  CO 2 5%. Kemudian  ditambahkan  larutan  uji  dalam berbagai  seri  konsentrasi  sebanyak  3 replikasi  selanjutnya  plate  diinkubasi  dalam inkubator CO 2 5% selama 24 jam pada suhu 37 o C.  Pada  akhir  inkubasi,  medium  pada masing-masing  sumuran  dibuang  dan  dicuci dengan  PBS  kemudian  ditambahkan  100  μl medium  baru  dan  10  μl  MTT  0,5%  dalam PBS. Plate diinkubasi  lagi  selama  2,5  jam pada  suhu  37 o C.  Sel  hidup  akan  bereaksi dengan  MTT  membentuk  formazan  yang berwarna  ungu.  Formazan  dilarutkan  dalam larutan  SDS,  lalu  diinkubasi  selama  12  jam pada  suhu  kamar.  Serapan  dibaca  dengan ELISA reader gelombang  595  nm  (CCRC, 2010).

## Analisis Data
Data  hasil  pembacaan  ELISA reader berupa  absorbansi  masing-masing  sumuran dikonversikan  dalam  persentase  kehidupan sel.  Perhitungan  persentase  sel  hidup menggunakan rumus sebagai berikut :
Persentase kehidupan sel = Absorbansi  sel  dengan  perlakuan −absorbansi  kontrol  media Absorbansi  kontrol  pelarut −absorbansi  kontrol  media x 100% Penggunaan rumus perhitungan persentase  kehidupan  sel  tersebut  karena absorbansi  kontrol  pelarut  lebih  rendah  dari absorbansi  kontrol  sel.  Data  persentase kehidupan cell  line T47D  yang  didapat
digunakan untuk menghitung nilai IC 50 yang merupakan  potensi  kettoksikan  ekstrak methanol  umbi  bit  terhadap cell  line T47D dengan menggunakan analisis probit.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji  sitotoksisitas  dilakukan  dengan tujuan  untuk  mengetahui  efek  sitotoksik dari ekstrak metanol umbi bit terhadap cell line T47D  dengan  parameter  IC 50. Uji sitotoksisitas  secara in  vitro merupakan model  yang  biasa  digunakan  sebagai  dasar untuk mempelajari efek molekul antikanker suatu  tanaman  obat  (Wozniak  and  Keely, 2005).
Uji  sitotoksik  dilakukan  dengan  MTT assay .  MTT assay [ 3-(4,5-dimethylthiazol-
2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide ], merupakan sistem pengujian secara kolorimetri  dengan  mengukur  jumlah reduksi garam MTT yang berwarna kuning menjadi formazan yang berwarna ungu oleh reduktase suksinat tetrazolium yang
termasuk dalam rantai respirasi di mitokondria  sel  hidup  (Mosmann,  1983), dan  diukur  pada  panjang  gelombang  595 nm. Intensitas warna yang terbentuk secara langsung sebanding jumlah sel kanker yang hidup.  Oleh  karena  itu,  harga  absorban
yang  diperoleh  dapat  dikonversi  ke  dalam persentase sel hidup.
Pengujian dilakukan dengan membuat berbagai tingkat konsentrasi dari larutan uji sebagai  berikut  :  500,  250,  125,  62,5,  dan 31,25 µg/ml. Kontrol negatif yang digunakan adalah DMSO (dimetil sulfoksid) karena merupakan pelarut
larutan  uji.  Kontrol  negatif  ini  berfungsi untuk  mengetahui  apakah  pelarut  yang digunakan  memiliki  pengaruh  terhadap aktivitas sitotoksik terhadap cell line T47D. Kontrol  positif  yang  digunakan  adalah doksorubisin  karena cell  line T47D merupakan  sel  yang  sensitif  terhadap doksorubisin ( Zampieri et al., 2002). Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa ekstrak  metanol  umbi  bit  tidak  memiliki aktivitas  sitotoksisitas  terhadap cell  line T47D  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini (Tabel  1).  Hasil  uji  sitotoksik  ekstrak metanol  umbi  bit  terhadap cell  line T47D dengan  metode  MTT assay dapat  dilihat pada Gambar 3.
Gambar 3.  Efek Perlakuan Ekstrak Metanol Umbi Bit ( Beta vulgaris L. var . rubra L . ) Terhadap Cell Line T47D dibandingkan dengan kontrol positif dan kontrol negatif a. Cell Line T47D pada perlakuan larutan uji ekstrak metanol umbi bit konsentrasi 500 µg/ml setelah inkubasi 24 jam
b. Cell Line T47D pada perlakuan dengan doksorubisin dosis 100 µg/ml
c. Cell Line T47D tanpa perlakuan (kontrol sel)
Gambar  3a  menunjukkan  bahwa adanya  perlakuan  ekstrak  metanol  umbi  bit terhadap cell  line T47D  tidak  dapat menginduksi  adanya  kematian  sel.  Hal  ini ditandai  bentuk  sel  yang  terlihat  sama dengan  kontrol  sel  yaitu  memanjang  seperti daun  yang  merupakan  ciri  dari cell  line T47D  yang  hidup,  sedangkan  sel  pada kontrol  positif  doksorubisin  berbentuk  bulat yang  merupakan  ciri  dari cell  line T47D yang  mati.    Hal  ini  menggambarkan  bahwa pada  masing-masing  perlakuan  dengan ekstrak metanol umbi bit dengan konsentrasi 500-31,25 (µg/ml) tidak ada sel yang mati.
Tabel  I  menunjukkan  bahwa  adanya perlakuan ekstrak metanol umbi bit terhadap cell  line T47D  tidak  dapat  menginduksi adanya kematian sel. Hal ini ditandai dengan %  kehidupan  sel  pada  berbagai  seri konsentrasi  yang  diujikan  yaitu  500-31,25 µg/ml  memiliki  rata-rata  nilai  yang  lebih dari  100%  yang  menggambarkan  bahwa pada  masing-masing  perlakuan  dengan berbagai  seri  konsentrasi  ekstrak  metanol umbi bit tidak ada sel yang mati.
3a 3b 3C
Tabel I. Hasil Uji Sitotoksisitas Ekstrak Metanol Umbi Bit Terhadap Cell Line T47D No Konsentrasi zat aktif ekstrak  metanol umbi bit (µg/ml) % Kehidupan sel T47D 1 500 115,91 2 250 119,75 3 125 117,95 4 62,5 108,23 5 31,25 120,69 Hasil  yang  sangat  berbeda  terlihat pada data hasil uji sitotoksisitas berbagai seri konsentrasi  doksorubisin  (100-6,25  µg/ml )
terhadap cell  line T47D  (Tabel  II)  yang
menunjukkan bahwa perlakuan doksorubisin
terhadap cell  line T47D  dapat  menginduksi adanya kematian sel. Hal ini ditandai dengan
%  kehidupan  sel  pada  berbagai  seri konsentrasi  doksorubisin  memiliki  rata-rata nilai yang kurang dari 100%.
Tabel II. Hasil Uji Sitotoksisitas Doksorubisin Terhadap Cell Line T47D No Konsentrasi doksorubisin (µg/ml) % Kehidupan sel T47D 1 100 35,21 2 50 46,01 3 25 47,42 4 12,5 48,59 5 6,25 48,59 Gambar 4 merupakan grafik hubungan  antara  log  konsentrasi  zat  aktif ekstrak  metanol  umbi  bit  vs  persentase kehidupan sel yang bertujuan untuk mendapatkan  persamaan  regresi  linier  yang
digunakan  untuk  mencari  nilai  IC 50 .  Pada penelitian uji sitotoksisitas ini nilai IC 50 tidak dapat  dihitung  dengan  analisa  probit  karena nilai  persentase  kehidupan  sel  T47D  dari berbagai seri konsentrasi melebihi 100%.
Gambar  4.  Grafik  Efek  Perlakuan  Ekstrak  Metanol  Umbi  Bit  ( Beta  vulgaris L.  var .  rubra L . ) terhadap Cell Line T47D.
Secara  spesifik  Escribano et  al (1998) menyebutkan  bahwa  aktivitas  antioksidan dan  antikanker  umbi  bit  terkait  dengan kandungan  betasianin  dan  betasantin  yang merupakan  pigmen  utama  dari  umbi  bit ( Beta  vulgaris L. var .  rubra L.).  Betasianin dan betasantin merupakan senyawa golongan  flavonoid  yang  terikat  pada  gula sehingga bersifat polar dan dapat diekstraksi dengan  pelarut  metanol  (Andersen  and Markham, 2006). Namun hasil penelitian ini
menunjukkan  bahwa  ekstrak  metanol  umbi bit  tidak  memiliki  efek  sitotoksisitas terhadap cell line T47D. Hal ini kemungkinan disebabkan oleh beberapa hal, diantaranya  :  (1)  adanya  komponen  zat-zat lain  yang  dapat  mengganggu  aktivitas sitotoksik  dari  flavonoid  tersebut  karena komponen  di  dalam  ekstrak  metanol  masih kompleks.  (2)  Perlu  diketahui  bahwa  proses maserasi  memiliki  kelemahan  yaitu  tidak dapat  menyari  dengan  sempurna,  sehingga
y = 0.650x + 115.1 R² = 0.003 105 110 115 120 125 0 1 2 3 Persen tase Sel hid up log konsentrasi zat aktif ekstrak metanol …
bisa dimungkinkan bahwa kandungan flavonoid yang tersari hanya sedikit sehingga kandungan flavonoid yang
jumlahnya  sedikit  khasiatnya  akan  tertutup oleh  kandungan  senyawa  lain  senyawa  lain yang ada di ekstrak metanol umbi bit.

## KESIMPULAN
Ekstrak  metanol  umbi  bit  tidak  memiliki aktivitas  sitotoksik  terhadap cell  line T47D yang ditandai dengan nilai %  kehidupan sel pada berbagai seri konsentrasi yang diujikan memiliki  rata-rata  nilai  100%. Ekstrak metanol  umbi  bit  tidak  mempunyai  potensi sitotoksik  terhadap cell  line T47D  sehingga tidak  dapat  dihitung  nilai  IC 50 . Hasil  uji pendahuluan  dan  uji  KLT  menunjukkan bahwa ekstrak metanol umbi bit mengandung senyawa golongan flavonoid.

## DAFTAR PUSTAKA
Andersen, Q.M., and Markham, K.R., 2006,
Flavonoid;  Chemistry,  Biochemistry and Applications , CRC Press, USA, 2-
11.
Astawan,  M.,  and  Kasih,  A.L.,  2008,
Khasiat Warna Warni Makanan , Gramedia Pustaka Utama, Jakarta, 212- 214. CCRC, 2010, Standard Operating
Procedure, Cancer  Chemoprevention
Research  Center  Fakultas  Farmasi Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Davidoff,  A.  M.,  Humphrey,  P.  A.,  and
Iglehart, J. D.,  1990, Genetic Basis for p53  Overexpression  in  Human  Breest
Cancer, Proc Natl Acad . Sci ,  USA, 87 :51-55.
Dolinsky,  C.,  2002,  Breast  Cancer : The Basics, http :/www.onkolonk.org/ types
/ article.cfm , diakses 15 Mei 2010. Escribano,  J.,  Pedreno,  M.A.,  Carmona, F.G., and Munoz, R., 1998, Characterization  of  the  antiradical activity of betalains from Beta vulgaris L.var. rubra L.  roots, Phytochemical Analysis , 9 :3, 124-127.
Kapadia,  G.J.,  Tokuda,  T.,  Konoshima  and
Nishino, H., 1996, Chemoprevention of Lung and Skin Cancer by Beta vulgaris (Beet) Root Extract. Cancer Lett ., 100 : 211-214. Maryani,  H  and  Laksmiarti,  T.,  2003, Yang
Perlu Diperhatikan Tentang Kesehatan
Wanita , Pusat Penelitian
dan
Pengembangan Pelayanan dan Teknologi Kesehatan, Surabaya. Mosmann,  T.,  1983,  Rapid  Colorimetric Assay for Cellular Growth & Survival: Application to Proliferation & Cytotoxicity Assays, Journal of Immunological Method , 65 :59-65. Riyasa,  K.  T.  2001,  Hubungan  Tingkat Depresi pada Penderita Kanker Mammae  yang  Menjalani  Pengobatan dengan Operasi dan Kombinasi (Operasi  dan  Radioterapi), Laporan Tahunan Pusat Penelitian Pengembangan Pemberantasan Penyakit , ITB-Bandung. Schafer,  J.M.,  Lee,  E.S.,  O’Reg    an,  R.M., Yao, K., and Jordan, V.C., 2000, Rapid Development  of  Tamoxifen-stimulated Mutant  p53  Breast  Tumors  (T47D)  in Athymic Mice, Clinical Cancer Research , 6 : 4373-4380. Schick, Y.K., 2009, Beet, http//Wikipedia.org, Diakses tanggal 11 Januari 2010.
Sunarjono,  H.,  2009., Bertanam  30  Jenis Sayur , Swadaya, Jakarta, 106.
Tyagi,  A.K.,  Agarwal,  C.,  Chan,  D.C.F  and
Agarwal,  R.,  2004,  Synergistic  Anti Cancer  Effects  of  Silibinin    with Conventional Cytotoxic Agents Doxorubicin, Cisplatin dan Carboplatin against  Human  Breast  dan  MDA-MB
468 Cells , Oncology Report, 13 :1-11. Winkler, C., Wirleitner, B., Schroecksnadel, K.,  Schennach,  H.,  dan  Fuchs,  D., 2005,  In  vitro  Effects  of  Beet  Root Juice  on  Stimulated  and  Unstimulated Peripheral  Blood  Mononuclear  Cells, American  Journal of  Biochemistry  and Biotechnology , 1 : 180-185.
Wozniak, M. A., Keely,  P. J., 2005, ‘Use of Three-Dimensional Collagen Gels To Study  Mechanotransduction  in  T47D Breast  Epithelial  Cell’, Biol . Proced . Online 7 :144-161.
Zampieri,  L.,  Bianchi,  P.,  Ruff,  P.,  and Arbuthnot,  P.,  2002,  Differential modulation  by  estradiol  of  P- glycoprotein  drug  resistance  protein expression  in  cultured  MCF7  and T47D  breast  cancer  cells,  Anticancer Res., 22 (4):2253-9.