## EFEK PEMBERIAN EKSTRAK BIJI JINTAN HITAM (NIGELLA SATIVA)

## TERHADAP KONSENTRASI GLUT-4 PADA TIKUS PUTIH ( RATTUS NORVEGICUS) STRAIN WISTAR MODEL DIABETES MELITUS TIPE 2
Effect of Black Seed (Nigella sativa) Extract for GLUT-4 Concentration on Wistar Strain of Albino Rat (Rattus norvegicus) as a Diabetes Mellitus Type 2 Model
Efta Triastusi, M.Farm.Klin., Apt.*,Meutia Tamimi Auli 1 , Ema Pristi Yunita, M.Farm.Klin., Apt.*
* Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya Malang

## ABSTRACT
Diabetes  Mellitus  (DM)  is  a  common  problem  in  developing  countries,  including  in Indonesia. Type 2 diabetes is characterized by insulin resistance that occursbecause of GLUT- 4 synthesis and translocation to cell surface reduction, it is caused by obstacle AMPK activity in  muscle  tissue  because  of  excessive  production  of  proinflammatory  cytokines.  Black  seed contain  thymoquinone  which  has  antiinflammatory  activity.The  aim  of  this  study  was  to determine the effects of black seed extract to the concentration of GLUT-4 in muscle tissue. True experimental design was used in this study, 25 male Wistar rats model type 2 DM were divided into 5 groups: negative control (10% tween 80), positive control (metformin 75 mg/kg), 3 groups received black seed extract in different dosages (24 mg/kg, 48 mg/kg, and 96 mg/kg). Induction of type 2 diabetes was conducted for 2 months using high energy diet containing 10% lard and 20% sucrose combined with STZ injection 30 mg/kg, followed by 1 month therapy. GLUT-4 concentration was measured by ELISA method, the result of this study indicate that there  was  nostatistically  different  concentration  of  GLUT-4  between  each  group  (ANOVA, p>0,05).
Keywords: Diabetes Mellitus type 2 (type 2 DM), high energy diet, STZ 30 mg/kg, black seed extract, GLUT-4 concentration.

## ABSTRAK
Diabetes Melitus (DM) merupakan masalah yang banyak terjadi di negara berkembang, salah satunya adalah di Indonesia.DM tipe 2 ditandai dengan keadaan resistensi insulin yang dapat terjadi karena penurunan sintesis dan translokasi GLUT-4 ke permukaan sel, hal tersebut disebabkan  oleh  hambatan  aktivitas  AMPK  di  jaringan  otot  karena  produksi  TNF-α  yang berlebihan.  Biji  jintan  hitam  mengandung thymoquinone yang  memiliki  aktivitas  sebagai antiinflamasi. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek ekstrak biji jintan hitam terhadap konsentrasi  GLUT-4  di  jaringan  otot.  Desain  penelitian  ini  adalah true  experimental dengan sampel  25  ekor  tikus  putih  jantan  strain  Wistar  model  DM  tipe  2  yang  dibagi  ke  dalam  5 kelompok  yaitu kontrol negatif (10% tween 80), kontrol positif (metformin 75 mg/kgBB), 3 kelompok  mendapat  ekstrak  biji  jintan  hitam  dengan  dosis  yang  berbeda  (24  mg/kgBB,  48 mg/kgBB,  dan  96  mg/kgBB).  Induksi  DM  tipe  2  dilakukan  selama  2  bulan  dengan menggunakan pakan tinggi kalori yang mengandung 10% lemak babi dan 20% sukrosa serta injeksi STZ 30 mg/kgBB, lalu dilakukan terapi selama 1 bulan. Konsentrasi GLUT-4 diukur dengan  menggunakan  ELISA,  hasilnya  tidak  terdapat  perbedaan  konsentrasi  GLUT-4  yang signifikan antar kelompok (ANOVA, p > 0,05).
Kata kunci: Diabetes Melitus tipe 2 (DM tipe 2), pakan tinggi kalori, STZ 30mg/kgBB, ekstrak biji jintan hitam, konsentrasi GLUT-4.

## PENDAHULUAN
Diabetes  Melitus  (DM)  merupakan masalah  yang  banyak  terjadi  di  negara berkembang,  salah  satunya  adalah  di Indonesia.  DM  adalah  penyakit  yang ditandai  dengan  tingginya  kadar  glukosa dalam  darah  yang  diakibatkan  oleh ketidakmampuan tubuh untuk menghasilkan dan/atau menggunakan insulin 4 .  Dua  bentuk  DM  yang  paling umum adalah DM tipe 1 dan DM tipe 2 20 . DM  tipe  2  adalah  kasus  yang  dominan setidaknya  pada  90%  dari  kasus  DM.  DM tipe  2  ditandai  dengan  keadaan  resistensi insulin  dan  kekurangan  sekresi  insulin. Resistensi  insulin  merupakan  suatukondisi yang berhubungan dengan kegagalan organ target  untuk  merespon  aktivitas  hormon insulin.  Resistensi  insulin  ditandai  dengan penurunan sintesis dan translokasi GLUT-4 ke  membran  sel,  GLUT-4  terdapat  di beberapa jaringan, namun terutama terdapat di jaringan otot dan adiposa 18 . Obesitas berhubungan dengan peningkatan  jumlah  dan/atau  ukuran  sel jaringan  adiposa,  sel  ini  memproduksi sitokin  proinflamasi  secara  berlebihan seperti  TNF-α 23 .  TNF-α  menghambat aktivitas  AMPK  (AMP- activated  protein kinase )  yang  mengakibatkan  resistensi insulin  di  jaringan  otot 22 .  Penghambatan
aktivitas AMPK mengakibatkan penurunkan sintesis dan translokasi GLUT- 4  di  jaringan  otot  yang  berkontribusi terhadap kondisi hiperglikemia 5,14 . Biji  jintan  hitam  ( Nigella  sativa ) digunakan  untuk  mengobati  DM  karena memiliki  efek  menurunkan  kadar  glukosa darah,  menstimulasi  sel  β  pankreas  untuk mensekresi  insulin,  dan  menghambat glukoneogenesis 12 . Essential oil merupakan salah satu komponen dari biji jintan hitam dengan kandungan utamanya adalah thymoquinone yang diketahui dapat berperan  sebagai  antiinflamasi,  dimana inflamasi  merupakan  salahsatu  penyebab terjadinya resistensi insulin 13 . Penelitian ini bertujuan  untuk  mengetahui  perbedaan konsentrasi  GLUT-4  pada  jaringan  otot tikus model DM tipe 2  yang mendapatkan terapi ekstrak biji jintan hitam, metformin, dan  tanpa  terapi  dan  mengetahui  dosis optimum ekstrak biji jintan hitam.

## METODE Desain Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  desain true experimental, metode yang digunakan adalah posttest-only  controlled  design. Sampel  berupa  25  ekor  tikus  strain Wistar jantan  yang  dibagi  menjadi  5  kelompok perlakuan,  yaitu  kontrol  postif  (metformin
75  mg/kgBB/hari),  kelompok  ekstrak  biji jintan hitam dengan berbagai dosis (24, 48, dan  96  mg/kgBB/hari),  kontrol  negatif (10% tween 80).

## Ekstraksi
Tahap  ekstraksi  biji  jintan  hitam merujuk dari jurnal Andaloussi tahun 2011 tentangefek  ekstrak  biji  jintan  hitam terhadap glukosa darah pada tikus DM tipe 2.  Serbuk  biji  jintan  hitam  sebanyak  300 gram dimaserasi dengan Etanol
80%sebanyak 900ml dengan perbandingan simplisia  dan  pelarut  1  :  3  selama  24  jam. Dilakukan  pengadukan  selama  30  menit dengan  kecepatan  1000  rpm.  Remaserasi dilakukan  sebanyak  2  kali.  Hasil  maserasi dipekatkan menggunakan rotatory evaporator pada  suhu  <  40°C  hingga pelarut  menguap,  lalu  dioven  pada  suhu  < 40°C hingga didapatkan ekstrak kental.

## Uji Fitokimia
Prosedur uji fitokimia merujuk dari jurnal  yang  ditulis  oleh  Soerya  Dewi Marliana  tahun  (2005)  dan  Depkes  (1989) minyak  atsiri  diuji  dengan  sudan  III,  hasil positif  ditunjukkan  dengan  perubahan warna  ekstrak  menjadi  merah.  Alkaloid diuji  dengan  menggunakan  2  reagen  yaitu reagen  Mayer  dan  Wagner,  hasil  positif dengan  reagen  Mayer  ditunjukkan  dengan adanya endapan kuning dan endapan merah pada  ekstrak  yang  diberi  reagen  Wagner. Uji saponin dilakukan dengan pengocokan selama  1  menit,  hasil  positif  ditunjukkan dengan  terbentuknya  busa  di  permukaan ekstrak dengan ketinggian 1-10 cm selama 10 menit.

## Induksi DM Tipe 2
Induksi  DM  tipe  2  merujuk  dari penelitian Wang tahun 2007,  yaitu dengan pemberian  pakan  tinggi  kalori  yang mengandung 20% sukrosa dan 10% lemak babi  selama  2  bulan,  lalu  dilanjutkan dengan injeksi STZ 30  mg/kgBB satu kali sebagai dosis tunggal.
Pengorbanan hewan coba dilakukan dengan dislokasi lehar pada tikus lalu jaringan otot diambil dari area paha.
Isolasi Protein
Jaringan  otot  sebanyak  100  mg ditambah 1 ml larutan buffer lisis (tabel 1), lalu  digerus.  Diinkubasi  pada  suhu  4 0 C selama 30 menit, lalu disentrifugasi selama 10 menit dengan kecepatan 6000 rpm pada suhu  4 0 C.  Supernatan  dipisahkan  untuk dianalisa.
Tabel 1. Resep Buffer Lisis No. Bahan Jumlah Fungsi 1. Tris base (pH 8.0) 0,121 g Mengatur pH antara 7-9 agar protein tidak rusak. 2. NaCl 0,877 g Mengendapkan protein. 3. Nonidet P-40 0,125 mL Detergen non ionik untuk melarutkan protein membran. 4. EDTA 0,007 g Melindungi protein dari ion logam. 5. PMSF 0,009 g Penghambat protease untuk trypsin, chymotrypsin, thrombin, dan papain. 6. Protease inhibitor cocktail 50 µl Menghambat enzim protease yang menyebabkan denaturasi protein. Pengukuran Kadar GLUT-4

## Menggunakan ELISA
Larutan  standar  yang  berfungsi untuk  membentuk  kurva  baku  dibuat dengan berbagai konsentrasi (96, 48, 24. 12, 6,  3,  0  µg/L).  Larutan  standar  dan  sampel dimasukkan  ke  dalam  sumur  ELISA, piringan ELISA diinkubasi selama 30 menit pada suhu 37 0 C, lalu dicuci selama 30 detik dan  diulangi  5  kali  dengan  200  µl wash solution .  Ditambahkan  50  µl HRP- Conjugate  reagent ,  lalu  diinkubasi  dan dicuci  kembali.  Ditambahkan  masing- masing sebanyak 50 µl Chromogen solution A dan B ,  lalu  diinkubasi  selama  30  menit pada  suhu  37 0 C  dan  ditambahkan stop solution sebanyak 50 µl. Kemudian, Sampel dibaca  absorbansinya  yang  diatur  pada panjang  gelombang  450  nm.Konsentrasi GLUT-4 sampel diperoleh dengan memasukkan  nilai  absorbansi  GLUT-4  ke dalam persamaan kurva baku.
Analisa Data
Hasilpengukuran konsentrasi GLUT-4  di  jaringan  otot  kelompok kontroldanperlakuandianalisasecarastatisti k dengan menggunakan uji bedatingkatsignifikansi  0,05  ( p =  0,05) dantarafkepercayaan  95%  (α  =  0,05) Langkah-langkahujihipotesisbeda adalahsebagaiberikut:uji  normalitas  data, ujihomogenitasvarian, uji One way ANOVA, dan uji Post hoc .

## HASIL PENELITIAN
Hasil Uji Fitokimia Tabel 2. Hasil Uji Fitokimia
No. Jenis Uji Fitokimia  Pereaksi Hasil Keterangan 1. Uji minyak atsiri Sudan III Perubahan warna ekstrak dari hijau Ekstrak mengandung minyak atsiri kecoklatan menjadi merah tua
2. Uji saponin -
Terdapat busa di permukaan ekstrak Ekstrak mengandung saponin setinggi < 1 cm selama 10 menit
3. Uji alkaloid Mayer Terdapat endapan berwarna kuning Eksrak mengandung alkaloid Wagner Terdapat endapan berwarna merah kecoklatan

## Hasil Pengukuran Glukosa Darah Puasa
Pada  nilai  GDP  (mg/dL)  dilakukan uji korelasi dengan pakan tinggi kalori yang dikonsumsi hewan coba (kkal). Uji korelasi Pearson menunjukkan  nilai  signifikansi 0,01  ( p <  0,05)  dengan  koefisien  korelasi 0,506. Sehingga dapat diambil kesimpulan terdapat  korelasi  yang  signifikan  antara pakan tinggi kalori yang dikonsumsi hewan coba dan nilai GDP dengan korelasi positif dan kekuatan korelasi sedang.
Gambar  1.  Grafik  Pengaruh  Pakan Tinggi  Kalori  terhadap  Nilai  Glukosa Darah Puasa Hewan Coba.
Tabel 3. Rerata Penurunan Nilai

## Glukosa Darah Puasa
Kelompok Perlakuan N Rerata Penurunan GDP (mg/dL)) ± SD Pn 2 82,50  ± 126,57 P1 3 298,00  ±  175,60 P2 2 107,00  ±  42,43 P3 3 170,67  ±  129,31 Pp 2 236,50  ±  68,59 P n :  hewan  coba  model  DM  Tipe  2  tanpa terapi; P 1 :  hewan coba model DM tipe 2 + terapi  ekstrak  biji  jintan  hitam  24 mg/kgBB/hari; P 2 : hewan coba model DM tipe  2  +  terapi  ekstrak  biji  jintan  hitam  48 mg/kgBB/hari; P 3 : hewan coba model DM tipe  2  +  terapi  ekstrak  biji  jintan  hitam  96 mg/kgBB/hari; Pp: hewan coba model DM tipe 2 + terapi metformin 75 mg/kgBB/hari; tanda  minus  (-)  menunjukkan  terjadinya penurunan nilai GDP.
Kelompok  perlakuan  yang  diberi  ekstrak biji  jintan  hitam  24  mg/kgBB/hari  (P 1 ) memiliki  penurunan  GDP  paling  besar, kemudian  diikuti  oleh  kontrol  positif  (P p ) yang  diberi  metformin  75  mg/kgBB/hari, kelompok  esktrak  biji  jintan  hitam  96 mg/kgBB/hari (P 3 ), esktrak biji jintan hitam 48  mg/kgBB/hari  (P 2 ),  dan  kontrol  negatif (P n ) yang diberi 10% tween 80.
Hasil Pengukuran Berat Badan
Gambar  2.  Grafik  Rerata  Berat  Badan Hewan  Coba  dari  Minggu  ke-0  hingga Minggu  ke-12. Data  ditampilkan  dalam rerata  ±  standar  deviasi.  Kelompok perlakuan yang mengalami peningkatan BB terbesar adalah kelompok P 2 dengan rerata peningkatan  BB  sebanyak  129,15  ±  51,41 gram.  Namun,  setelah  dilakukan  injeksi STZ  (minggu  ke-8)  terjadi  penurunan  BB pada hewan coba bahkan hingga akhir masa terapi, kelompok perlakuan yang mengalami  penurunan  BB  terbesar  adalah kelompok  P 1 dengan  rerata  penurunan  BB sebanyak 214,01 ± 83,57 gram.
Hasil  Pengukuran  Konsentrasi  GLUT-4 di Jaringan Otot
Pengukuran  konsentrasi  GLUT-4 dilakukan menggunakan ELISA kit . Konsentrasi  GLUT-4  diperoleh  dengan memasukkan  nilai  absorbansi  GLUT-4  ke dalam  persamaan  kurva  baku  sebagai berikut:
Y = 0,0101x – 0,0432 R² = 0,994 keterangan :  y = absorbansi x = konsentrasi Tabel  4.  Rerata  Konsentrasi  GLUT-4 Jaringan Otot Kelompok Perlakuan Rerata Konsentrasi GLUT-4 (µg/dL)) ± SD Pn 14,72 ± 0,88 P1 15,40 ± 2,42 P2 16,56 ± 0,77 P3 17,44 ± 3,97 Pp 17,56 ± 3,38
Gambar  3.  Grafik  Rerata  Konsentrasi GLUT-4 di Jaringan Otot . Data ditampilkan dalam rerata ± standar deviasi.
Konsentrasi GLUT-4 terendah pada kelompok kontrol negatif dan yang tertinggi pada  kelompok  kontrol  positif.  tidak terdapat  perbedaan  konsentrasi  GLUT-4 jaringan otot yang signifikan antar kelompok (ANOVA, p = 0,371).

## PEMBAHASAN Ekstraksi Serbuk Biji Jintan Hitam
Ekstrak  biji  jintan  hitam  yang diperoleh  dari  proses  ekstraksi  maserasi adalah  ekstrak  dengan  2  fase  yaitu  fase padat  dan  minyak.  Hasil  ekstraksi  yang diperoleh telah sesuai dengan literatur yang dirujuk yaitu jurnal Andaloussi tahun 2011, dimana  dari  hasil  ekstraksi  diperoleh ekstrak dengan 2 fase  yaitu fase padat dan minyak  dengan  komposisi  30%  berupa padatan dan 70% berupa minyak. Proporsi tersebut  berbeda  dengan  yang  diperoleh pada  penelitian  ini,  dari  hasil  ekstraksi diperoleh  fase  padat  yang  lebih  banyak dibandingkan  fase  minyak.  Hal  ini  dapat disebabkan  oleh  perbandingan  jumlah antara  serbuk  biji  jintan  hitam  dengan pelarut etanol yang berbeda, pada penelitian Andaloussi  tahun  2011  tidak  disebutkan perbandingan jumlah serbuk dengan pelarut yang  digunakan.  Peneliti  menggunakan perbandingan 1 : 3 karena merupakan hasil optimasi  dari  penelitian  sebelumnya  dan merujuk  pada  proses  ekstraksi  serbuk  biji jintan  hitam  dengan  pelarut  etanol  yang dilakukan oleh Laboratorium Penelitian dan Pengujian  Terpadu  Universitas  Gadjah Mada (LPPT UGM).
Uji fitokimia Hasil positif pada uji minyak atisiri menunjukkan kemungkinan adanya
thymoquinone yang  terkandung  di  dalam ekstrak  biji  jintan  hitam  yang  digunakan untuk terapi hewan coba dengan DM tipe 2, sehingga menghasilkan perbedaan konsentrasi  GLUT-4  jaringan  otot  antar kelompok.  Uji  alkaloid  dilakukan  dengan pereaksi Mayer ( Potassiomercuric Iodide ) dan  Wagner  ( Iodo-potassium iodide ).  Hasil  positif  pada  uji  Mayer ditunjukkan  dengan  terbentuknya  endapan berwarna kuning. Endapan tersebut merupakan  kompleks  yang  terbentuk  dari kalium dan alkaloid. Alkaloid mengandung nitrogen  yang  memiliki  pasangan  elektron bebas  sehingga  dapat  digunakan  untuk membentuk  ikatan  kovalen  koordinat dengan  ion  logam,  nitrogen  tersebut  akan bereaksi  dengan  ion  logam  kalium  dari kalium  tetraiodomerkurat  sehingga  akan terbentuk  kompleks  kalium-alkaloid  yang mengendap 16 . Hasil positif terdapat alkaloid dengan  menggunakan  pereaksi  Wagner ditandai  dengan  terbentuknya  endapan berwarna  merah  kecoklatan.  Endapan tersebut  adalah  kompleks  kalium-alkaloid, ion  logam  kalium  akan  membentuk  ikatan kovalen  koordinat  dengan  nitrogen  pada alkaloid  sehingga  membentuk  kompleks yang mengendap 16 .
Pada  uji  saponin  yang  dilakukan menunjukkan  ekstrak  biji  jintan  hitam positif  mengandung  saponin.  Timbulnya busa pada uji saponin menunjukkan adanya glikosida  yang  memiliki  kemampuan membentuk buih dalam air yang terhidrolisis  menjadi  glukosa  dan  senyawa lainnya 16 .
Efek  Pemberian  Pakan  Tinggi  Kalori dan  Injeksi  STZ  terhadap  Kadar Glukosa Darah Puasa
Induksi  pakan  tinggi  kalori  selama dua  bulan  mengakibatkan  peningkatan  BB dan  nilai  GDP.  Peningkatan  BB  terjadi karena  konsumsi  pakan  yang  kaya  akan energi  yaitu  dalam  bentuk  lemak  jenuh (lemak babi) dan lemak tersebut terdeposisi di berbagai bantalan lemak tubuh.
Konsumsi  pakan  tinggi  kalori mengakibatkan peningkatan
kadar
trigliserida (TG) karena asupan lemak yang berlebihan,  hal  ini  merupakan  sumber
peningkatan  ketersediaan  asam  lemak 21 . Peningkatan  ketersediaan  asam  lemak  di sirkulasi akan menurunkan proses glikolisis akibatnya  terjadi  peningkatan  konsentrasi glukosa intraseluler dan penurunan ambilan glukosa  oleh  otot 7 .  Oleh  karena  itu, pemberian  pakan  tinggi  kalori  dapat meningkatan  kadar  GDP  hewan  coba namun tidak semua hewan coba mengalami hiperglikemia  ringan  yaitu  dengan  kadar glukosa  darah  117-144  mg/dL 11 .  Hal tersebut  terjadi  karena  durasi  pemberian konsumsi  pakan  tinggi  kalori  kurang  lama sehingga  pemberian  pakan  selama  dua bulan masih belum cukup untuk mengakibatkan hiperglikemia ringan.
Berdasarkan penelitian Wang (2007),  pemberian  pakan  tinggi  kalori selama  satu  bulan  belum  mengakibatkan hiperglikemia  ringan,  namun  telah  terjadi perubahan  ekspresi  gen  yang  mengarah pada  kondisi  resistensi  insulin  seperti penurunan  kadar  mRNA  ADIPOR1  dan ADIPOR2  pada  liver.  ADIPOR1  dan ADIPOR2  merupakan  reseptor  untuk adiponektin, penurunan kadar atau gangguan  fungsi  pada  ADIPOR1  dan ADIPOR2 mengakibatkan terjadinya resistensi insulin di jaringan perifer 25 .
Kemudian  induksi  DM  tipe  2 dilanjutkan  dengan  injeksi  STZ  30 mg/kgBB  yang  mengakibatkan  penurunan berat  badan  pada  hewan  coba,  hal  ini dikarenakan proses proteolisis yaitu pemecahan  protein  menjadi  asam  amino karena  tubuh  tidak  mampu  mengambil glukosa  sebagai  sumber  energi,  selain  itu penurunan berat badan terjadi karena proses lipolisis dan glikogenolisis 3 . STZ memiliki struktur  yang  mirip  dengan  glukosa,  STZ masuk  ke  dalam  sel  β  pankreas  melalui transporter  GLUT-2  yang  mengakibatkan kerusakan DNA dan mengakibatkan kematian sel, sehingga kehilangan fungsinya  untuk  menghasilkan  insulin 24 . Setelah  dilakukan  Injeksi  STZ  diperoleh nilai GDP ≥ 200 mg/dL pada seluruh hewan coba,  sehingga  seluruh  hewan  coba  telah mengalami DM tipe 2.
Efek  Pemberian  Ekstrak  Biji  Jintan Hitam  terhadap  Perbedaan  Konsentrasi GLUT-4 di Jaringan Otot
Hasil  absorbansi  sampel  yang diperoleh  dibawah  rentang  normal  yaitu 0,2-0,8  sehingga  konsentrasi  GLUT-4 jaringan  otot  yang  diperoleh  kecil  pula. Namun, konsentrasi yang diperoleh berada dalam rentang deteksi ELISA yaitu 2 µg/L- 48 µg/L.
Injeksi STZ menginduksi
penurunan ekspresi mRNA GLUT-4 19 . Hal ini  mengakibatkan  ambilan  glukosa  ke dalam  jaringan  otot  menurun  sehingga terjadi  peningkatan  kadar  glukosa  dalam darah.  Kelompok  hewan  coba  yang  diberi terapi  metformin  memiliki  konsentrasi GLUT-4  di  jaringan  otot  paling  besar diantara  kelompok  lainnya  (gambar  3). Metformin  merupakan  obat  yang  efektif untuk  menurunkan  kadar  glukosa  darah dengan cara menurunkan produksi glukosa hepatik  dan  meningkatkan  penyimpanan glukosa  di  otot  polos  dengan  cara meningkatkan aktivitas
AMPK 17 . Peningkatan aktivitas AMPK tersebut dapat mengakibatkan terjadinya peningkatan sintesis dan translokasi GLUT-4 di jaringan otot. Namun tidak ada perbedaan konsentrasi GLUT-4 yang signifikan antara kelompok kontrol postif dengan kelompok lainnya,  hal  ini  dapat  terjadi  karena  durasi terapi yang kurang lama, karena berdasarkan  jurnal  Musi  tahun  2002, metformin dapat menginduksi peningkatan aktivitas  AMPK  di  jaringan  otot  secara signifikan dengan lama terapi 10 minggu 17 . Nilai  rerata  konsentrasi  GLUT-4 pada  kelompok  tikus  yang  diberi  ekstrak biji jintan hitam, baik dengan dosis 24, 48, atau 96 mg/kgBB/hariberada diatas kelompok  kontrol  negatif,  namun  tidak signifikan.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak biji jintan hitam dapat meningkatkan  sintesis  GLUT-4  pada jaringan otot. Hasil tersebut sesuai dengan jurnal  Andaloussi  tahun  2011,  dimana dengan pemberian ekstrak biji jintan hitam selama  satu  bulan  dapat  meningkatkan konsentrasi  total  GLUT-4  di  jaringan  otot tikus.  Komponen  utama  ekstrak  biji  jintan hitam yang berperan dalam sintesis GLUT-
4  di  jaringan  otot  adalah thymoquinone yang  termasuk  dalam  golongan  minyak atsiri, dimana zat tersebut berfungsi sebagai antiinflamasi. Thymoquinone tidak  bekerja langsung  pada  aktivitas  AMPK  yang berperan  dalam  sintesis  dan  translokasi GLUT-4 sehingga konsentrasi total GLUT- 4  di  jaringan  otot  yang  diperoleh  setelah dilakukan terapi selama  satu bulan dengan ekstrak  biji  jintan  hitam  tidak  berbeda signifikan  dengan  kelompok  perlakuan lainnya.

## Efek  Pemberian  Ekstrak  Biji  Jintan Hitam  terhadap  Perbedaan  Kadar
Glukosa Darah Puasa
Ekstrak  biji  jintan  hitam  dapat menurunkan kadar GDP (tabel 3), pemberian dosis ekstrak biji jintan hitam 24 mg/kgBB/hari memberikan penurunan GDP  yang  paling  besar.  Pada  jurnal Alimohammadi  tahun  2013  tentang  efek ekstrak biji jintan hitam terhadap konsentrasi glukosa darah, terdapat beberapa  mekanisme  jintan  hitam  dalam memperbaiki  glukosa  darah  diantaranya adalah  peningkatan  sensitivitas  insulin, penurunan  stress  oksidatif  sehingga  dapat menjaga sel β pankreas yang mengakibatkan  peningkatan  kadar  insulin, selain itu dapat meregenerasi sebagian sel- sel islet yang disebabkan oleh injeksi STZ. STZ  menginduksi  terjadinya  degenerasi pankreas  dengan  menurunkan  ukuran  dan jumah islet Langerhans, karena kemampuan jintan hitam dalam menjaga dan meregenerasi  sel  islet  tersebut  sehingga dapat  menurunkan  GDP  lebih  besar dibandingkan kelompok kontrol yang diberi metformin. Metformin tidak dapat
mengakibatkan  pelepasan  insulin  dari pankreas,  cara  kerja  metformin  dalam menurunkan  kadar  glukosa  darah  adalah dengan  meningkatkan  ambilan  glukosa perifer,  menurunkan  pelepasan  glukosa hepatik, dan mengganggu absorbsi glukosa di  usus 6 .  Penurunan  GDP  paling  besar terjadi pada kelompok P 1 hal ini dikarenakan semakin besar dosis thymoquinone yang  diberikan,  maka  akan terjadi  penurunan glutathione (GSH)  yang
merupakan  antioksidan  utama  yang  dapat mengikat radikal bebas. Berdasarkan jurnal Mansour tahun 2001, thymoquinone sebanyak  2  g/kg  BB  dan  3  g/kg  BB  yang diberikan secara oral dapat mengakibatkan penurunan GSH 15 .
Pada  penelitian  ini  dosis  terbesar yang  diberikan  adalah  96  mg/kgBB/hari ekstrak biji jintan hitam, sehingga jauh dari dosis  yang  dapat  menurunkan  kadar  GSH. Oleh  karena  itu,  ketidaksesuaian  ini  dapat dikarenakan oleh berbagai faktor, yaitu:
1. Tingkat stress yang dialami masing- masing  hewan  coba  berbeda-beda, dimana stress dapat  meningkatkan kadar glukosa darah.
2. Perbedaan  aktivitas  dari  masing- masing hewan coba. Semakin tinggi aktivitas  maka  dapat  menurunkan kadar glukosa darah lebih banyak.
3. Perbedaan genetik yang mempengaruhi respon tikus, akibatnya terdapat variasi nilai GDP meskipun berada dalam satu kelompok perlakuan yang sama. Pada kelompok P n terdapat dua tikus yang  masih  hidup  hingga  akhir  perlakuan, satu  tikus  mengalami  peningkatan  GDP sedangkan tikus lainnya mengalami penurunan GDP. Berdasarkan studi pustaka tidak ditemukan adanya efek 10% tween 80 dalam  menurunkan  kadar  glukosa  darah, satu tikus mengalami penurunan kadar GDP meskipun  tidak  diberi  terapi  kemungkinan karena  respon  kompensasi  dari  tubuh hewan  coba  tersebut  untuk  menurunkan kadar  glukosa  darah  misalnya  dengan meningkatkan sekresi
insulin,
meningkatkan  penyimpanan  glukosa  baik pada  otot  maupun  liver,  atau  karena aktivitas  yang  berbeda  dengan  tikus lainnya.

## KESIMPULAN
1. Terdapat perbedaan konsentrasi
GLUT-4,  namun  tidak  signifikan secara  statistik,  di  jaringan  otot  tikus putihstrain  Wistarmodel  DM  tipe  2 yang  mendapatkan  terapi  ekstrak  biji jintan  hitam,  metformin,  dan  tanpa terapi.
2. Pada  kelompok  terapi  ekstrak  biji jintan hitam, kelompok yang memiliki rerata konsentrasi GLUT-4 di jaringan otot  tertinggi  adalah  tikus  putihstrain Wistarmodel DM tipe 2 yang mendapatkan  terapi  ekstrak  biji  jintan hitam  96  mg/kg  BB  meskipun  tidak berbeda  signifikan  secara  statistik dengan kelompok dosis lainnya.

## SARAN
Dibutuhkan  penelitian  lebih  lanjut mengenai prosedur induksi DM tipe 2 yang meliputi  pemberian  pakan  tinggi  kalori yang  mengakibatkan  resistensi  insulin  dan injeksi STZ sehingga dihasilkan nilai GDP ≥ 200 mg/dL dengan tingkat kematian yang rendah pada usia tikus 12 bulan. Selain itu, perlu dilakukan pengukuran thymoquinone secara kuantitatif, sehingga dapat mengetahui  kadar thymoquinone yang mengakibatkan adynamic ileus .

## DAFTAR PUSTAKA
Abukhader  MM.  The  Effect  of  Route  of Administration  in  Thymoquinone Toxicity in Male and Female Rats. Indian J Pharm Sci , 2012; 74 (3):
195-200.
Alimohammadi  S,  Rahim  H,  Javad  J, Danial  K,  Reza  M,  Maryam  T, Farshid K, and Hamid A.
Protective and  antidiabetic effects of  extract  from  Nigella  sativa  on blood glucose concentrations against streptozotocin (STZ)-
induced  diabetic  in  rats:  an experimental study with histopathological evaluation.
Diagnostic pathology , 2013; 8(1): 137.
Almeida  DATD,  Camila  PB,  Ethel  LBN, and Ana AHF. Evaluation of Lipid Profile  and  Oxidative  Stress  in STZ-  Induced  Rats  Treated  with Antioxidant  Vitamin. Braz.  Arch. Biol.  Technol ,  2012;  55  (4):  527- 536.
American  Diabetes  Association  (ADA),
2013.  Diabetes  Basics,  (Online), (http://www.diabetes.org/diabetes
-basics/type-2/?loc=db-slabnavi, diakses 21 November 2013).
Andaloussi AB, Louis M, Tri V,  Bouchra
M,  Padma  M,  Abdellatif  S,  and
Pierre SH. The In Vivo Antidiabetic  Activity  of  Nigella sativa Is Mediated through Activation of the AMPK Pathway and  Increased  Muscle  GLUT4 Content. eCAM , 2011; 2011: 1-9.
Bastaki,  S.  Review  Diabetes  Mellitus  and Its  Treatment. Int  J  Diabetes  &
Metabolism , 2005; 13: 111 -134.
Cahová  MH,  Vavrínková,  and  Kazdová. Glucose-fatty  acid  interaction  in skeletal muscle and adipose tissue in  insulin  resistance. Physiol  res , 2007; 56 (1): 1-15.
Cook, Christopher L., John T. Johnson, and William E. Wade. 2008. Pharmacotherapy:  Principles  and
Practice ,  Edited  by  Marie  AC, Barbara  GW,  Terry,  LS,  Patrick MM,  Jill  MK,  John  CR,  Joseph TD, The McGraw-Hill Companies,  Inc.,  USA,  p.  643- 666. Debas HT. 2004. Gastrointestinal Surgery: Pathophysiology and Management . Springer-Verlag New York, Inc., USA, p. 250. Departemen Kesehatan Republik Indonesia.  1989.  Materia  Medika Indonesia, Jilid V. Menteri
Kesehatan. Jakarta.
Gauguier  D,  Bihoreau  MT,  Picon  L,  and Ktorza A. Insulin secretion in adult rats  after  intrauterine  exposure  to mild  hyperglycemia  during  late gestation. Diabetes ,  1991,  40  (2):
109-114.
Gilani  AH,  Khan  MAU.  A  Review  of Medicinal Uses and Pharmacological Activities of
Nigella  sativa. Pak.  J.  Biol.  Sci , 2004; 7 (4): 441-451.
Harzallah HJ, Rahma G, Wafa K, Aya M, Mohamed  H  and  Touhami  M. Thymoquinone, the Nigella sativa bioactive compound, prevents circulatory oxidative stress caused by 1,2-dimethylhydrazine in
erythrocyte during colon
postinitiation carcinogenesis. Oxid Med Cell  Longev , 2012; 2012: 1- 6.
Kola B, Ashley BG, and Márta K. The Role of AMP-Activated Protein Kinase in Obesity. Front Horm Res , 2008; 36: 198-211.
Mansour  MA,  OT  Ginawi,  T  El-Hadiyah, AS  El-Khatib,  and  OA  Al-
Shabanah, HA Al-Sawaf. Effect of Volatile Oil Constituents of Nigella Sativa on Carbon Tetrachloride-Induced Hepatotoxicity  in  Mice:  Evidence for Antioxidant Effects of
Thymoquinone. Res.  Commun. Mol. Pathol . Pharmacol, 2001; 110 (3&4): 239-251.
Marliana  SD,  Venty  S,  and  Suyono.
Screening  Fitokimia  dan  Analisis Kromatografi Lapis Tipis Komponen  Kimia  Buah  Labu Siam  (Sechium  edule  Jacq  .
Swartz.)  dalam  Ekstrak  Etanol. Biofarmasi, 2005; 3 (1): 26-31. Musi  N,  Michael  FH,  Jonas  N,  Monika  S, Peter  B,  Olav  R,  Gaochao  Z, Joanne  MW,  Olle  L,  Suad  E, David EM, Anders T, and Laurie J Goodyear.    Metformin  Increases AMP-Activated  Protein  Kinase Activity  in  Skeletal  Muscle  of Subjects  With  Type  2  Diabetes. Diabetes , 2002; 51: 2074-2081. Nikzamir  A,  Alireza  P,  Alireza  K,  and Hashemi T. Expression of Glucose
Transporter 4 (GLUT4) is
Increased  by  Cinnamaldehyde  in C2C12 Mouse Muscle Cells. Iran Red Crescent Med J , 2014; 16 (2):
10-14.
Olson  AL.  Regulation  of  GLUT4  and Insulin-Dependent  Glucose  Flux. Molecular Biology , 2012; 2012.
Rehman  AU,  Muhammad  AS,  Suhel  A.
Effect  of  Exercise  and  Muscle Contraction  on  Insulin  Action, Transportation and Sensitivity and Muscle  Fibres  in  type  II  Diabetes Mellitus. Am  J  Med  Sci ,  2012;
2(6): 131-135.
Srinivasan  K,  B  Viswanad,  Lydia  A,  CL
Kaul, and P Ramarao. Combination  of  high-fat  diet-fed and low-dose streptozotocin-
treated  rat:  a  model  for  type  2 diabetes and pharmacological
screening.
Pharmacological research: the official journal of the Italian  Pharmacological  Society , 2005; 52 (4):313-20. Steinberg  GR,  Belinda  JM,  Bryce  JWVD, Matthew JW, Andrew LC, Barbara CF,  Sofianos  A,  Joseph  P,  Cem ZG,  David  C,  Gökhan  SH,  Mark AF,  Thomas  WK,  and  Bruce  EK. Tumor  necrosis  factora-induced skeletal  muscle  insulin  resistance involves  suppression  of  AMP- kinase signaling. Cell Metabolism , 2006; 4, 465–474. Thévenod  F. Pathophysiology  of  Diabetes Mellitus Type 2 : Roles of Obesity,
Insulin  Resistance  and  β-Cell Dysfunction. Diabetes and Cancer. Epidemiological  Evidence  and Molecular Links, 2008; 19: 1–18. Ventura-Sobrevilla J, VD Boone-Villa, CN
Aguilar,  R  Román-Ramos,  E Vega-Avila, E Campos- Sepúlveda, and F Alarcón-Aguilar. Effect  of  Proceedings  of  the Western Pharmacology Societydose and Administration of Streptozotocin  on  Blood  Sugar  in Male  CD1  Mice. Proc.  West.
Pharmacol. Soc. , 2011; 54: 5-9.
Wang HJ, Yuan XJ, Wan S, Jing N, Tao W,
Yong  JL,  and  Zheng  WF.  Low dose streptozocin (STZ) combined with  high  energy  intake  can effectively  induce  type  2  diabetes through  altering  the  related  gene expression. Asia  Pac  J  Clin  Nutr ,
2007; 16 (1): 412-417.