p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
SKRINING FITOKIMIA DAN UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAUN RACUN AYAM ( Brucea javanica [L.] Merr.) ASAL KALIMANTAN SELATAN
Sutomo 1 *, Fahriah 1 , Arnida 2
1 Program Studi Farmasi Fakultas MIPA Universitas Lambung Mangkurat 2 Pusat Studi Obat Berbasis Bahan Alam Universitas Lambung Mangkurat *Email: sutomo01@ulm.ac.id
Artikel diterima: 29 September 2020; Disetujui: 16 Maret 2021 DOI: https://doi.org/10.36387/jiis.v6i1.607

## ABSTRAK
Tumbuhan  racun  ayam  adalah  salah  satu  tumbuhan  yang  buahnya  memiliki beberapa aktivitas salah satunya adalah sebagai antibakteri. Penelitian ini bertujuan untuk menetapkan aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun racun ayam. Ekstraksi dilakukan  dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol.  Uji  aktivitas antibakteri dilakukan terhadap bakteri S. aureus, E. coli , dan P. aeruginosa dengan metode  difusi  cakram  pada  konsentrasi  80,  100,  dan  120  ppm.  Hasil  penelitian diperoleh ekstrak etanol daun B. javanica memiliki zona hambat paling besar pada E. coli dengan nilai diameter zona hambat pada 80, 100, 120 ppm  yaitu 11,7mm, 14,5  mm  dan  19,67  mm.  Zona  hambat  pada S.  aureus hanya  terlihat  pada konsentrasi 100 dan 120 ppm dengan diameter zona hambat 1,17 mm dan 2,17 mm, sedangkan  pada P.  aeruginosa tidak  memiliki  nilai  zona  hambat.  Hasil  analisis statistik yaitu menunjukkan signifikansi nilai diameter zona hambat pada bakteri E. coli mulai 80 ppm dengan nilai sig 0,034 karena sig <0,05 maka berbeda signifikan dengan kontrol negatif. Bakteri S. aureus yang memiliki nilai sig <0,05 hanya pada 100 ppm dan 120 ppm. Bakteri P. aeruginosa memiliki nilai sig >0,05 yaitu tidak berbeda signifikan terhadap semua konsentrasi.
Kata kunci: Cakar ayam ; Brucea javanica ; Skrining; Ekstrak; antibakteri

## ABSTRACT
Racun  ayam is  one  of  the  plants  which  has  several  activities  in  its  fruits,  one  of which is an antibacterial. This study aims to determine the antibacterial activity of ethanol  extract  of  racun  ayam  leaves.  The  extraction  was  done  by  maceration method using ethanol as a solvent. Antibacterial activity assay was carried out on S.  aureus,  E.  coli,  and  P.  aeruginosa  bacteria  by  disk  diffusion  method  at  the concentrations of 80, 100, and 120 ppm. The results showed that the ethanol extract of B. javanica leaves had the greatest inhibition zone on E. coli with inhibition zone diameter values at 80, 100, and 120 ppm were 11.7 mm, 14.5 mm and 19.67 mm respectively. Inhibition zones in S. aureus could only be seen at 100 and 120 ppm which had inhibition zone diameters at 1.17 mm and 2.17 mm respectively, whereas in  P.  aeruginosa  they  did  not  have  any  inhibitory  zone  values.  The  results  of
statistical analysis showed a significance of the inhibition zone diameter values of E. coli bacteria starting at 80 ppm with a sig value of 0.034. Due to a sig value was <0.05, it was categorized as significantly different from the negative control. The bacteria of  S. aureus which had <0.05 for sig values only found on 100 ppm and 120 ppm. Bacteria P. aeruginosa which had sig value >0.05 was not significantly different at all concentrations.
Keywords : Cakar ayam; Brucea javanica; screening; extract; antibacterial

## PENDAHULUAN
Racun  ayam  ( Brucea  javanica [L.]  Merr.)  merupakan  salah  satu tumbuhan  obat  tradisional  dalam pengobatan  penyakit  infeksi.  Buah masak B.  javanica yang  telah dikeringkan  banyak digunakan untuk mengobati  penyakit  infeksi  pada saluran  pencernaan  dan  lainnya (WHO, 1999). Daun dari B. javanica secara  empiris  telah  digunakan  suku Dayak  Meratus  untuk  mengobati penyakit kulit seperti kurap dan gatal- gatal. Aktivitas  antibakteri  dari  sari buah  tumbuhan  ini  juga  telah dibuktikan  pada  beberapa  bakteri seperti Salmonella,  Shigella, dan Vibriocholerae spp  (Sornwatana et al ., 2013).
Penyakit  infeksi  merupakan jenis  penyakit  yang  paling  banyak dialami  oleh  penduduk  Indonesia. Penyebab dari infeksi tersebut adalah mikroba  pathogen  seperti  bakteri (Radji, 2011). Bakteri adalah
mikroorganisme bersel tunggal dengan  ukuran  panjang  0,5-10  μm dan lebar 0,5-2,5 μm (Arisandi et al ., 2017).  Jenis  bakteri  patogen  yang sering  menyebabkan  infeksi  yaitu bakteri Staphylococcus aureus, Escherichia  coli, dan Pseudomonas aeruginosa (Gibson,  1996  ;  Djide  & Sartini,  2008).  Bakteri S.  aureus adalah gram positif berbentuk kokus, sedangkan bakteri P. aeruginosa dan bakteri E.  coli merupakan  gram negatif (Kayser et al ., 2005;
Melliawati,  2009;  Pelcjar,  2008). S. aureus dapat  menyebabkan  infeksi pada  kulit  dan  jaringan  lunak  seperti pneumonia , osteomielitis, meningitis, dan endocarditis . E.  coli merupakan flora normal pada saluran pencernaan tubuh manusia namun dapat menjadi patogen  apabila  berpindah  dari habitat  normalnya  (Bartlett et  al ., 2010  ;  Melliawati,  2009). S.  aureus diketahui  telah  resisten  terhadap beberapa antibiotik antara lain
golongan β  laktamase,  metisilin, nafsilin,  oksasilin ,  dan vankomisin , sedangkan P.  aeruginosa resisten paling  tidak  terhadap  3-antimikroba yaitu  kelas β -laktam,  carbapenem, dan aminoglikosida (Sari,  2012;
Jawetz et al ., 2008).
Banyaknya  resistensi  bakteri terhadap  antibiotik  memacu  peneliti untuk  menemukan  obat  baru  dari bahan  alam.  Seperti  yang  telah diketahui tumbuhan B. javanica telah banyak  digunakan  sebagai  obat tradisional untuk penyakit infeksi dan penyakit  lainnya.  Telah  banyak penelitian  mengenai  buah  dan  biji dari tumbuhan tersebut namun masih terbatas  untuk  bagian  daunnya. Peneliti  tertarik  untuk  melakukan skrining  fitokimia  dan  uji  aktivitas antibakteri  ekstrak  daun B.  javanica terhadap  penghambatan  bakteri S. aureus, E. coli, dan P. aeruginosa .

## METODE PENELITIAN Tempat Penelitian
Penelitian dilaksanakan di
Laboratorium
Farmakognosi-
Fitokimia  Program  Studi  Farmasi Fakultas MIPA Universitas Lambung Mangkurat  Banjarbaru  serta  Balai
Riset  dan  Standardisasi  Industri (Baristan) Banjarbaru.

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  pada penelitian  ini  meliputi autoclave Tomy (sx-500), alat-alat gelas (Pyrex, Iwaki),  bejana  maserasi,  bunsen, cawan petri, cawan porselin, inkubator  (Memmert), laminary  air flow (Daihan  Labtech),  lemari  steril (Ellitech), oven (Thermoline), timbangan  analitik  (AND  GF  3000), lemari  pengering  (Lokal),  pinset, propipet, rak tabung, stamper, jangka sorong, waterbath (Memmert).
Bahan-bahan  yang  digunakan dalam  penelitian  yaitu  daun B. javanica .,  aquades,  etanol  96%, kertas  saring  Whatman  42,  pereaksi Dragendorff , Mayer , Liebermann- Buchard, HCl, kloroform, asam asetat glasial,  gelatin,  asam  sulfat,  barium klorida, Nutrient Agar (NA), siprofloksasin,  biakan  bakteri S.
aureus ATCC 25923 ,  E. coli ATCC 25929 dan P. aeruginosa ATCC 9027 koleksi Laboratorium Baristan.
Determinasi Tumbuhan
Tumbuhan B. javanica dilakukan determinasi di Kebun Raya Banua (KRB) Banjarbaru.
Pengambilan dan Pengolahan Sampel Preparasi dimulai dari pengumpulan  sampel  yang  diambil dari KRB Banjarbaru berupa daun B.
Javanica yang sudah dewasa,
dilakukan  sortasi  basah  dengan memilih bagian daun yang segar dan tidak  rusak.  Daun  dicuci  dengan menggunakan  air  mengalir  dan dikeringkan  dalam  lemari  pengering suhu  50°C.  Dilakukan  sortasi  kering dan  diperkecil  ukurannya  menjadi serbuk kasar (mesh 14).
Pembuatan  Ekstrak  Etanol    daun Brucea javanica
Sampel
dimaserasi menggunakan  pelarut  etanol  96%. Sebanyak  750  gram  serbuk  daun B. javanica ditimbang dan ditambahkan etanol 96% (Perbandingan 1 : 17 b/v) dan dilakukan 3 kali replikasi. Setiap 1 x 24 jam cairan penyari disaring dan diganti  dengan  yang  baru.  Ekstrak diuapkan dengan menggunakan rotary evaporator dengan suhu 60 0 C.
Ekstrak
tersebut kemudian dikentalkan di atas waterbath dengan suhu  60 0 C hingga  didapatkan  bobot tetap.  Rendemen  yang  diperoleh dihitung menggunakan rumus:
bobot ekstrak (g) bobot sampel kering(g) 𝑥 100%
Uji kualitatif pelarut pada ekstrak Ekstrak  etanol  ditimbang  1 gram,  kemudian  dimasukkan  ke dalam  tabung  reaksi,  ditambahkan  1 mL larutan KMnO 4 dan 5 tetes H 2 SO 4 2 N. Tidak munculnya warna kuning kecoklatan pada sampel menandakan tidak adanya kandungan alkohol pada sampel (Kemenkes RI, 2014).
Skrining fitokimia
1. Uji  flavonoid,  alkaloid,  tanin,
dan fenolik
Ekstrak kental yang telah dilarutkan  dalam  etanol pa ditambahkan serbuk Mg dan HCl pekat untuk uji flavonoid, pereaksi  Mayer  dan  Dragendorf untuk uji alkaloid, larutan gelatin 5 mL 1% untuk uji tanin, 3 tetes FeCl 3 2%  untuk  uji  fenolik. Terbentuknya warna  orange, merah,  atau  kuning  dinyatakan postif  mengandung  flavanoid (Depkes  RI,  2008).  Pereaksi Mayer memberikan  endapan putih  dan  pereaksi  Dragendorff memberikan  endapan  berwarna jingga menunjukkan adanya alkaloid (Prameswari &
Widjanarko, 2014). Adanya
endapan putih menunjukkan adanya tanin. Terbentuknya
warna menjadi hijau, merah, biru atau biru tua menunjukan adanya senyawa fenolik (Harborne,
1987)
2. Uji saponin
Uji  saponin  dilakukan  dengan menimbang ekstrak 5 mg ditambahkan aquades 10 mL dan dikocok kuat-kuat. Terbentuknya busa  yang  stabil  menunjukkan adanya senyawa saponin
(Savithramma et al ., 2011).
3. Uji steroid/triterpenoid Ekstrak kental yang telah dilarutkan dalam kloroform ditambahkan  2  mL  asam  asetat anhidrat  dan  2  mL  H 2 SO 4 pekat melalui dinding tabung. Terbentuknya  warna  biru  atau hijau menunjukkan adanya steroid  dan  jika  terbentuk  warna ungu-merah  adanya  triterpenoid (Harborne, 1987).
Pembuatan  standar  kekeruhan larutan (larutan Mc Farland)
Larutan H 2 SO 4 0,36 N
sebanyak  99,5  mL  dicampurkan dengan  larutan  BaCl 2 .2H 2 O  1,175%
sebanyak 0,5 mL. Campuran dikocok sampai terbentuk larutan yang keruh. Kekeruhan ini dipakai sebagai standar kekeruhan  suspensi  bakteri  uji  dan digunakan  tidak  lebih  dari  15  menit (Victor, 1980).

## Pembuatan suspensi bakteri uji
Bakteri uji yang telah diinokulasi diambil dengan ose steril lalu  disuspensikan  ke  dalam  tabung yang berisi 2 mL larutan NaCl 0,9% hingga  di  peroleh  kekeruhan  yang sama  dengan  standar  kekeruhan larutan  Mc.  Farland.  Perlakuan  yang sama  dilakukan  pada  setiap  jenis bakteri uji (Mpila et al ., 2018).
Pembuatan larutan Na-CMC
Larutan  Na-CMC  0,5%  dibuat dengan  cara  menimbang    500  mg serbuk  Na-CMC  dan  melarutkan dengan  aquades  panas  suhu  70°C. Serbuk Na-CMC dimasukkan sedikit demi  sedikit  sambil  diaduk  sampai larutan  berwarna  bening.  Larutan diencerkan  dengan  aquadest  dalam labu  ukur  hingga  100  mL    (Mpila et al ., 2018).
Pembuatan larutan kontrol positif
Kontrol positif dibuat
menggunakan  tablet  Ciprofloxacin 500  mg.  Tablet  digerus  dan  dibuat
larutan  100  ppm  dengan  cara melarutkan  1  mg  ciprofloxacin  dan dilarutkan  dalam  larutan  Na-CMC 0,5%  10  mL.  Larutan  diencerkan menjadi  50  ppm  dengan  cara mengambil 5 mL larutan 100 ppm dan ditambahkan  Na-CMC  0,5%  hingga 10 mL (Prasdiyanti, 2018).

## Pembuatan larutan uji
Larutan stok dengan
konsentrasi  120  ppm  dibuat  dengan cara  menimbang  12  mg  ekstrak  dan dilarutkan  dalam  100  mL  Na-CMC 0,5%.  Dari  larutan  stok  tersebut dilakukan pengenceran untuk mendapatkan larutan uji 100 ppm dan 80  ppm (Mpila et al ., 2018).
Pembuatan media uji
Media uji dibuat dengan menimbang  1,8  gram Nutrient  Agar (NA),  lalu  dilarutkan  dalam  90  mL aquades  (20  g/1000  mL).  Media dihomogenkan  dengan  stirer  di  atas penangas air sampai mendidih. Media disterilkan  dalam autoclave pada suhu  121°C  selama  15  menit, kemudian didinginkan sampai suhu ± 45-50°C.  Media  dimasukkan  ke dalam  cawan  petri  sebanyak  15  mL per cawan (Mpila et al ., 2018).
Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak etanol daun Brucea javanica
Uji aktivitas antibakteri dilakukan  dengan  difusi  cakram menggunakan  media  agar  yang diolesi  suspensi  bakteri  uji  dan diletakkan kertas cakram yang sudah dicelupkan  larutan  ektrak.  Ekstrak etanol  daun B.  javanica konsentrasi 80  ppm,  100  ppm,  120  ppm,  kontrol positif  dan  kontrol  negatif  ppm dimasukkan pada cawan petri pertama,  kedua  dan  ketiga  dengan  4 titik  melingkar dan  1 titik di bagian tengah. Setelah itu diinkubasi selama 24  jam.  Pengamatan  penghambatan dilakukan  setelah  1  x  24  jam  masa inkubasi (Vandepitte et al , 2005).
Analisis Data
Apabila konsentrasi yang diberikan memiliki daya hambat yang besar maka akan menimbulkan angka diameter  zona  hambat  yang  besar pula  (Davis  &  Stout,  1971).  Adapun rumus untuk menghitung zona hambat yaitu :
Zona hambat = d1+d2 2 − X
Keterangan :
d1  =  Diameter vertikal zona bening pada media (mm)
d2  =  diameter horizontal zona bening pada media (mm) X   =  Diameter cakram (6 mm)
Kategori hasil luas zona hambat yaitu  >20  mm  dikategorikan  sangat kuat,  11-20  mm  dikategorikan  kuat, 6-10  mm  dikategorikan  sedang  dan <5 mm dikategorikan lemah (Susanto et  al .,  2012).  Analisis  deskriptif dilakukan  untuk  mengetahui  nilai rata-rata  zona  hambat  dan  analisis program  SPSS  untuk  mengetahui signifikasi pada masing-masing perlakuan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi
Dari  750  g  serbuk  simplisia yang  diekstraksi  didapatkan  ekstrak kental  sebanyak  237,15  g  (31,62%). Ekstrak  berwarna  hijau  tua  dengan rasa agak pahit.
Tabel 1 . Hasil skrining fitokimia ekstrak etanol 96% daun B. javanica No Uji Hasil 1. Alkaloid (-) 2. Flavonoid (+) 3. Tannin (-) 4. Fenolik (+) 5. Steroid (+) 6. Triterpenoid (-) 7. Saponin (+) Keterangan
(+): Mengandung senyawa uji (-) : Tidak mengandung senyawa uji

## Skrinning Fitokimia
Skrining  fitokimia  dilakukan untuk  mengidentifikasi  kandungan metabolit  sekunder  dalam  ekstrak etanol  daun B.  javanica, dimana beberapa metabolit sekunder berpotensi  sebagai  antibakteri.  Hasil skrining  fitokimia  disajikan  pada
Tabel 1.
Tabel 2. Hasil diameter rata-rata zona hambat dan standar deviasi ekstrak etanol 96% daun B. javanica terhadap bakteri S. aureus, E. coli , dan P. aeruginosa
Bakteri Diameter Zona Hambat (mm) (x ± SD) 80 ppm 100 ppm 120 ppm K(+) K(-) S. aureus 0 ± 0 1,17 ± 0,28 2,17 ± 1,25 24,67 ± 1,15 0 ± 0 E.coli 11,17 ± 0,57 14,5 ± 1,32 19,67 ± 1,60 27,5 ± 1,73 0 ± 0 P. aeruginosa 0 ± 0 0 ± 0 0 ± 0 26,67 ± 0,57 0 ± 0 Penentuan Diameter Zona Hambat Hasil yang didapat menunjukkan bahwa dengan konsentrasi yang sama diameter zona
hambat  paling  besar  terdapat  pada bakteri E. coli (kategori kuat), diikuti
bakteri S.  aureus (kategori  lemah), dan pada bakteri P. aeruginosa tidak memiliki  zona  hambat  konsentrasi. Hasil diameter rata-rata zona hambat terhadap  bakteri  uji,  kontrol  positif, dan kontrol negatif dapat dilihat pada
Gambar 1 . Hasil diameter rata-rata zona hambat ekstrak etanol 96% daun B. javanica terhadap bakteri S. aureus, E. coli , dan P. aeruginosa

## Analisis dengan Uji SPSS
Analisis statistik terhadap ketiga  bakteri  uji  yaitu  analisis statistik  meliputi  uji  normalitas  dan uji  homogenitas  serta  uji  lanjutan dengan  uji  Mann  Whitney.  Pada bakteri S.  aureus pada  konsentrasi 100  ppm  dengan  nilai  rata-rata  1,17 mm  memiliki  nilai  sig  0,043  dengan kontrol  positif.  Dapat  disimpulkan bahwa  konsentrasi  daya  hambat minimum  untuk  uji    aktivitas antibakteri  ekstrak  etanol  daun B. javanica terhadap  bakteri S.  aureus yaitu pada 100 ppm dengan nilai rata- rata  1,17  mm  berbeda  signifikan terhadap  kontrol  positif  jauh  lebih lemah  dimana  pada  konsentrasi    20 ppm  menghasilkan  diameter  zona hambat  24,67  mm.  Pada  bakteri E. coli pemberian  sampel  pada konsentrasi  100  dan  120  ppm memiliki  aktivitas  yang  signifikan
terhadap  kontrol  negatif,  sedangkan pada  konsentrasi  80  ppm  belum signifikan.  Namun  hasil  aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri E.  coli hingga  konsentrasi  120  ppm  masih belum  sebanding  dengan  kontrol positif  konsentrasi  20  ppm.  Untuk bakteri P. aeruginosa yang diberikan pada  konsentrasi  80,  100,  dan  120 ppm tidak berbeda signifikan dengan kontrol negatif dan berbeda signifikan dengan  kontrol  positif.  Berdasarkan hasil analisis tersebut dapat disimpulkan  bahwa  eksrak  etanol daun B.  javanica tidak  memiliki aktivitas terhadap bakteri P. aeruginosa.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  ini  dapat diambil kesimpulan yaitu :
1. Hasil  skrinning  fitokimia  yaitu ekstrak  etanol  daun  racun  ayam
memiliki kandungan saponin,
fenolik, steroid, dan flavonoid.
2. Hasil  penelitian  diperoleh  ekstrak etanol  daun B.  javanica memiliki zona  hambat  paling  besar  pada E. coli dengan  nilai  diameter  zona hambat pada 80, 100, 120 ppm  yaitu 11,7mm,  14,5  mm  &  19.67  mm. Zona  hambat  pada S.  aureus hanya terlihat  pada  konsentrasi  100  dan 120  ppm  dengan  diameter  zona hambat  1,17  mm  dan  2,17  mm, sedangkan pada P. aeruginosa tidak memiliki nilai zona hambat.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terimakasih  kepada  LPPM ULM  dan  Kebun  Raya  Banua  atas semua  Suport  dalam  penelitian, laboratorium  farmasi  ULM  serta Balai Riset dan Standardisasi Industri Banjarbaru  sehingga  penelitian  ini dapat diselesaikan.

## DAFTAR PUSTAKA
Arisandi, A., B. Tamam & R. Yulian. 2017.  Jumlah  Koloni  pada Media  Kultur    Bakteri  yang
Berasal  dari    Thallus    dan Perairan Sentra Budidaya Kappaphycus    di  Sumenep Alvarezii. Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan . 9 : 57- 64.
Bartlett.,  Allison.,  Hulten  &  G.
Kristina. 2010. Staphylococcus aureus Pathogenesis  Secretion
Systems, Adhesins, and Invasins. The Pediatric Infectious Disease. 9 : 860-861. Davis, W.W & Stout, T.R. 1971. Disc Plate Methods of Microbiological Antibiotic Assay. Microbiology. 4 :  659-
665.
Depkes RI. 2008. Farmakope Herbal Indonesia Edisi Pertama . Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta. Djide  &  Sartini.  2008. Dasar-Dasar Mikrobiologi Farmasi . Lephas,
Makasar.
Gibson, J. M. 1996. Mikrobiologi dan Patologi Modern Untuk Perawat . EGC, Jakarta. Harborne,  J.  B.  1987. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan .  Terbitan  Kedua. Penerbit ITB, Bandung
Jawetz,  E.,  J.  L.  Melnick  &  E.  A. Adelberg.  2008.    Mikrobiologi Kedokteran, Edisi Ke-23. EGC,
Jakarta.
Kayser, F., K. Bienz., J. Eckert & R.
Zinkernagel. 2005. Color Atlas of  Medical  Microbiology ,  New York.
Kemenkes  RI.  2014. Farmakope Herbal  Indonesia  Edisi  I . Kementerian
Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta. Melliawati, R. 2009. Escherichia coli dalam  Kehidupan  Manusia. Biotrends. 4 : 10-14.
Mpila,  D.,  F.  Fatimawali  &  W. Wiyono.  2018.  Uji  Aktivitas
Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Mayana ( Coleus
Atropurpureus [L] Benth) Terhadap Staphylococcus aureus,  Escherichia  Coli Dan Pseudomonas Aeruginosa
Secara In-Vitro. Pharmacon . Pelczar. Michael J. and Chan. E.C.S. 2008. Dasar-Dasar Mikrobiologi, Terjemahan oleh Hadioetomo,  Ratna  sari  dkk .
Universitas Indonesia: Jakarta.
Prameswari,  O.  M  &  S.  B. Widjanarko.  2014.  Uji  Efek Ekstrak  Air  Daun  Pandan Wangi  terhadap  Penurunan Kadar  Glukosa  Darah  dan Histopatologi  Tikus  Diabetes Mellitus. Jurnal  Pangan  dan Agroindustri . 2 : 16-27.
Prasdiyanti, N. C. 2018. Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi dari Ekstrak Kloroform Daun Piper crocatum Ruiz & Pav. terhadap
Staphylococcus aureus Resisten Ampicillin .  Skripsi  Fakultas
Farmasi  Universitas  Sanata
Dharma, Yogyakarta.
Radji,  M.  2011. Mikrobiologi .  Buku Kedokteran ECG, Jakarta.
Sari,  N.  I.  2012. Pseudomonas aeruginosa,  Penyebab  Infeksi Nosokomial . Fakultas Sains dan
Teknologi UAI Savithramma,  N.,  M.  L.  Rao  &  D. Suhrulatha. 2011. Screening of Medicinal Plants for Secondary Metabolites. Middle-East Journal  of  Scientific  Research.
8 : 79-584.
Susanto,  D.,  Sudrajat  &  R.  Ruga.
2012.  Studi  Kandungan  Bahan
Aktif Tumbuhan Meranti Merah  ( Shorea  leprosula Miq)
sebagai Sumber Senyawa Antibakteri. 2 : 1-5. Sornwatana, T., Roytrakul, S., Wetprasit,  N  &  Ratanapo,  S. 2013.  Brucin,  an  antibacterial peptide  derived  from  fruit protein  of  fructus  Bruceae, Brucea javanica (L.) Merr. Soc Appl Microbiol . 2 :129–36. Vandepitte. 2005. Prosedur Laboratorium Dasar untuk Bakteriologis  Klinis.  Edisi  2 . Buku Kedokteran EGC, Jakarta.
Victor,  L.  1980. Antibiotics  in Laboratory Test . The Williams and Wilkins Company, USA.
World  Health  Organization.  1999.
WHO  monographs  on  selected medicinal
plants Radixglycyrrhizae. Essent Med Heal Prod Inf Portal . 1:183–94.