## PRODUKSI DAN KARAKTERISASI ANTIBODI ANTI Fim-C
Salmonella typhimurium PADA MENCIT DDY Dea Apriyani 1
1 Anggota Peneliti Muda Madya Kelompok Peneliti Muda Universitas Negeri Jakarta Email: deaapriyani@gmail.com

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mendapatkan  hasil  produksi  dan karakterisasi antibodi anti Fim-C  S.typhimurium pada mencit DDY menggunakan metode ELISA dan Western  Blot.  Metode  yang  digunakan  adalah  eksperimen dan  eksplorasi dikelompokkan  menjadi  empat,  yaitu  :  Kelompok  perlakuan  I  (  protein  Fim C S.typhimurium + Adjuvant ) , Kelompok perlakuan 2 ( protein Fim  C S.typhimurium ), kelompok kontrol 1  ( FCA ). Penelitian ini menyimpulkan bahwa produksi antibodi anti Fim-C  Salmonellatyphimurium  telah  berhasil  dilakukan    dengan  dibuktikan  melalui karakterisasi menggunakan teknik ELISA dan Western Immunoblotting. FIA adjuvant ), kelompok  kontrol  2  (PBS1x).  Protein  Fim-C  Salmonellatyphimurium  dari  penelitian sebelumnya  digunakan  sebagai  antigen,  disuntikan sebanyak  empat  kali  pada  mencit dengan 20   g, 40 g, 60 g, dan 4 g. Hasil karakterisasi menggunakan teknik ELISA menunjukan  adanya  kenaikan  titer    antibodi  dari  bleed  0 bleed  4  pada  kelompok eksperimen.  Hasil  karakterisasi  menggunakan  teknik  Western  Immunoblotting menunjukan adanya interaksi antibodi anti Fim-C Salmonella  typhimurium  dan antigen Fim-C Salmonella  typhimurium secara spesifik.
KataKunci: Salmonella typhimurium. Protein Fim- C Salmonella typhimurium. Antibodi anti Fim- C Salmonellatyphimuriu. ELISA.Western Immuno blotting.

## ABSTRACT
This research aims to get the production and characterization of anti Fim-C S.typhi murium DDY mice using ELISA and Western Blot. The method use disexperimental and exploratory  grouped  into four,  namely,  the  first  treatment  group  (Fim-C  protein  of S.typhi murium + Adjuvant ), treatment group 2 (Fim-C protein S.typhi murium), control group 1 (FCA).This study concluded  that the production of antiFim-C Salmonella typhi murium  has  been  successfully  performed  with  proven  through  characterization  using ELISA  and  Western  Immuno  blotting  techniques.  FIA  adjuvant),  control  group  2 (PBS1x).  Fim-C  protein  of  Salmonella  typhi  murium  from  previous  studies  used  as antigen,  injected  fourtimes  in mice  with  20 mg,  40mg,  60mg,  and  40 mg. Characterization results using ELISA technique showe dan increase in antibody titer of the bleed  0 bleed  4  in  the  experimental  group.  Results  characterization  using techniques  Western  Immuno  blotting  showed  the  interaction  of  anti  Fim-C  antigen Salmonella typhi murium and Salmonella typhi murium Fim-C specifically.
Keywords : Salmonella typhi murium. Fim-C protein of Salmonella typhimurium. Fim- C anti bodies Salmonella typhi murium. ELISA Western Immunoblotting.

## Pendahuluan
Demam  tifoid  merupakan  infeksi sistemik  yang  cukup  serius  yang diakibatkan  oleh  bakteri Salmonella enterica Serovar  Typhi  yang  menjadi masalah kesehatan di negaradi wilayah Asia  Tengah,  Asia  Tenggara,  Afrika dan  AmerikaLatin  (Cui et  al .,  2010).
Terhitung  bahwa  telah  terjadi  22  juta kasus demam tifoid dan 200.000 kasus mengalami  kematian  pertahun.  Gejala klinis  yang  ditimbulkan  biasanya berupa  demam,  dangan  gangguan pencernaan,  serta  gejala  lain  berupa sakit  kepala,  berkeringat,    pusing, sembelit,  dan  gejala  lainnya (Fraser et al ., 2009). Salmonella enterica Serovar Typhi murium merupakan bakteri gram negatif berbentuk batang, tidak membentuk  spora,  memiliki  diameter 0,7-1,5  m  Panjang  2  - 5  m,    dan flagella  disekelililng  tubuhnya  dan merupakan jenis bakteri anaerob fakultatif  (Lancelloti et  al .,  2012).
Salmonella    typhi  murium merupakan bakteri  yang  menyebabkan  penyakit tifus  pada  mencit  dan  gangangguan infeksi  usus  seperti  penderita  peyakit tifus  pada  umum  nya(Zhang et  al ., 2003).
Bakteri  ini  memiliki  kesamaan dengan Salmonella typhi yang merupakan  agen  penyebab  demam tifoid.    Hal  ini  menunjukan  bahwa mencit yang terinfeksi oleh Salmonella typhimurium dapat  dijadikan  sebagai model  percobaan  untuk  mempelajari penyakit tifus pada manusia. Berdasarkan Keputusan Menteri Kesehatan nomor 365 / Menkes / SK / v
/    2006  menyatakan  bahwa  dari  telaah kasus  di  rumah  sakit  besar  Indonesia, kasus demam tifoid  menunjukan kecenderungan  meningkat  dari  tahun ketahun dengan rata-rata kesakitan 500- 100.000  penduduk  dengan  kematian antara0,6-5%. Oleh karenaitu
dibutuhkan  suatu  tinjauan  klinis  untuk mengatasi kasus demam tifoid. Proses patogenesis dari Salmonella typhimurium dalam mencit yaitu  berawal  dari  proses  masuknya bakteri dari lingkungan melalui membran mukosa, kulit,  maupun organ dalam  yang  kemudian  bakteri  akan melakukan proses invasi dan adhesi dan berkoloni  di  organ  usus.  Adhesi  yang spesifik membutuhkan interaksi antaramolekul  permukaan  bakteri  dan inang. Protein rambut seperti fim briae disekitar  permukaan  terlibat  dalam  hal ini.
Dalam beberapa studi
menyebutkan bahwa komponen ekstraseluler  seperti fimbriae dapat menginduksi respon imunitas dan dapat dijadikan kandidat antigen (Barat et al ., 2012).
Fim-C adalah protein yang memiliki  prediksi  homologi  terhad ap fimbriae yang  terdapat  pada  outer membrane. Salah satu penelitian menyebutkan  bahwa  protein  Fim-C ditemukan  sebagai  salah  satu  protein potensial  dalam  proses  patogenesis (Muktiningsih et  al. ,  2009).  Selama infeksi berlangsung, makrofag melakukan  proses  fagosit  dan  akan merangsang respon imun.  Respon dari makrofag  dapat  dipicu  oleh  lipopo lisakarida, porin, membran luarprotein, protein  fimbrial,  flagella,  lipoprotein, glikoprotein, dan 10 peptidoglikan yang merupakan  komponen  dari  bakteri (Rosenberger et al ., 2000).
Proses imunitas ini juga dijelaskan dalam vaksinasi, yaitu proses melibatkan antigen yang dapat menginduksi  sistem  imun.    Masuknya antigen  sebagai  bahan  asing  yang berada dalam tubuh akan menghasilkan respon  imun  untuk  mempertahankan kekebalannya.  Saat  ini S.  typhimurium sedang dipelajari dalam pengembangan vaksin  untuk  penyakit  demam  tifoid pada  manusia.  Penggunaan  model
patogenesis  pada  hewan  uji  seperti mencit  dapat  digunakan  sebagai  uji potensial  penggunaan  vaksin  (Song et al .,  2010). Penggunaan  vaksin  sangat diperhitungkan dalam upaya
penanganan  kasus  demam  tifoid. Vaksin yang telah berkembang sampai saat ini adalah vaksin oral Ty 2 1a dan vaksin  Vi  polisakarida.  Efek  yang ditimbulkan  dari  penggunaan  vaksin tersebut  masih  merugikan.  Suatu  cara untuk mengatasi hal ini adalah dengan penggunaan vaksin rekombinan.
Vaksin rekombinan yang sedang dikembangkankan  oleh  tim  peneliti adalah vaksin rekombinan protein Fim- C S. typhi dan vaksin rekombinan Fim-
C S.  typhimurium .  Protein  Fim-C  atau fimbriae adalah  protein  permukaan S. typhi yang digunakan untuk
menempelkan  dirinya  pada  sel  inang dan  beberapa  objek  lainnya.  Protein Fim-C  ditemukan  sebagai    salah  satu molekul  bioaktif    karena  merupakan protein potensial dalam proses patogenesis (Muktiningsih et al .,2011).
Dalam  beberapa  studi  menyebutkan bahwa komponen ekstra seluler seperti fimbriae dapat  menginduksi  respon imunitas  dan  dapat  dijadikan  kandidat antigen (Barat et al ., 2012).
Metode karakterisasi antibodi dalam  penelitian  ini  menggunakan teknik ELISA dan Western Immunoblotting. Tahapan metode
ELISA adalah proses absorbsi, interaksi antigen-antibodi,  pencucian,  proses enzimatik,  dan  proses  pembacaan sinyal  menggunakan  teknik  spektro fotometri.  Metode  ini  menunjukan karakteristik  pembentukan  antibodi secara kuantitatif dengan adanya peningkatan  respon  antibodi  pada setiap bleed.
Sedangkan, Western immunoblotting digunakan dalam mengidentifikasi protein yang dipisahkan berdasarkan berat
molekulnya menggunakan
elektroforesis gel.
Metode ini menunjukan bahwa adanya antigen Fim-C S.  Typhi murium dapat berinteraksi dengan antibodi
spesifikanti  Fim-C S.typhi  murium . Antibodi yang terikatakan dan terdeteksi.  Ketebalan  pita  menunjukan jumlah protein yang ada (Mahmood dan Yang, 2012).

## Metodologi Penelitian
Penelitian  ini  bertujuan  untuk menghasilkan dan mengetahui karakteristik serum darah yang mengandung  antibodi  anti  Fim-C S. Typhi  murium spesifik  sebagai  respon dari penyuntikan protein Fim-C. Metode yang dilakukan dalam penelitian  ini  adaah  metode eksplorasi dan  eksperimen  yang  terdiri  dari beberapa  tahap  meliputi  :  Produksi antibodi  anti  Fim-C S.  Typhi  murium , Analisis  titer antibodi  dengan  ELISA, Analisis  spesifikasi  antibodi  dengan Western immunoblotting , Alat-alat yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  tabung  mikro  sentri  fuge  steril, falcon,  Kulkas  (SHARP), Freezer (SHARP), Inkubator (Memmert ) , Microcentri fuge (Hettich Zentrifugen ) , alat-alat  kaca  bermerk  Pyrex  (tabung reaksi,  cawan  petri,  corong,  gelas kimia,  gelas  ukur,erlenmeyer,  labu ukur), spatula, batang pengaduk, kawat ose,  pinset,  masker,  sarung  tangan, pipet  tetes,  mikropipet  (Labnet;  Bio- Rad),  tabung  mikrosentri  fuge,  tip untuk  mikropipet, syringe, magnetik stirrer (stuart),  pH  meter  (Eutech), kertas saring,  timbangan analitik (Wiggen Hauser), shaker (New Brusn wick Scientific),  ELISA reader (BIO- TEK),  ELISA plat (IWAKI),  satu  set alat  elektroforesis (Bio-Rad),  satu  set alat Western  immuno  blotting (Bio- Rad).  Bahan  utama  dan  bahan  kimia yang mendukung penelitian ini, protein Fim-C Salmonella  typh  imurium,
Fruend e/Incomplete Adjuvant (Sigma;  Thermo  Scientific), Buffer PBS (Thermo Scientific),
MgCl2,  Tween  20,    susu  skim (Tropicana Slim non Fat ) , Pierce Goat Anti-Mouse  ig  G,(H+L)  Peroxidase Conjugate (Thermo Scientific), larutan substrat  Tetra  Metil  Benzidine (TMB) (Thermo  Scientific),  aquades  (Harum Kimia),  Tris-HCl  (BIO-RAD),  glisin, SDS (Biogen Scientific), N, N, N N - tetra-etilen-diamin, amonium persulfat, akrilamid,  bis  akrilamid, staining solution, destaining solution, SDS PAGE standard (BIORAD), sample buffer (Thermo Scientific) NaOH, HCl 37%, 2-mercaptoetanol, bromphenolblue, NaCl,Na3PO4, Bovine Serum Albumin, Tris Base(Biogen),  H2O2,  metanol,  etanol 96%,  Substrat  3,3 -diaminobenzidine
(DAB) (Thermo Scientific).
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Penelitian Kimia FMIPA UNJ , Laboratory  for  Development  of Technology Industry  for  Agryculture and  Biomedic  (LAPTIAB)  BPPT PUSPIPTEK  Serpong,  laboratorium
Biokimia FMIPA UNJ. Waktu penelitian dilakukan padabulan Oktober 2012 Mei 2013. Prosedur  penelitian  ini  meliputi Produksi antibodi antiFim-C S.Typhimurium, Analisis perkembangan  pembentukan  antibodi anti  Fim-C S.Typhimurium dengan teknik  ELISA,  Analisis  spesifikasi antibody  antiprotein  Fim-C  dengan Western  immuno  blotting. Untuk  uji Karakterisasi  dilakukan  dengan  dua kelompok  besar, yaitu  kelompok perlakuan (KP), dan kelompok kontrol (KS).  KP  1,  mencampurkan  protein Fim-C  dan Freund    complete  / Incomplete Adjuvant. KP 2, menambahkan protein. KS 1,
menambahkan Freund  Complete  / Incomplete Adjuvant . KS 2, disuntikan
oleh Phosphate Buffer Saline atau PBS. Semua  perlakuan  diuji  pada  8  ekor mencit. Proses Imunasi dengan menambahkan  Antigen,  yang  berasal dari  campuran  Fim-C  dan adjuvant yaitu  sebanyak  20  g  (dosis  1),  40  g ( an  40  g
(dosis 4) protein Fim-C S . typhi muria. Pada analisis  jumlah  pembentukan antibodi sebagai  antibodi  antiFim-C S. typhimurium dengan  teknik  ELISA dengan  pengaruh  pada  penambahan antibodi  anti  protein  Fim-C S.  Typhi murium mulai  pada  sampel.  Pengujian serologis terhadap antibodi hasil respon imun  dari  antigen  Fim-C  dapat dilakukan  dengan  metode Western immuno blotting . dengan mem- variasikan  konsentrasi  protein  Fim-C yaitu 0,5  g - 3  g.

## Hasil danPembahasan
Penelitian  ini  bertujuan  untuk menghasilkan  antibodi  anti  Fim-C S. typhimurium pada mencit  DDY dan diuji  secara  serologis dengan  metode ELISA  dan Western  immunoblotting dalam  upaya  pengembangan  model vaksin rekombinan  pada  penyakit demam  tifoid.  Produksi  antibodi  anti Fim-C S. Typhimurium Analisis perkembangan pada Mencit DDY yang telah dikelompokan (KP 1, KP 2, KS 1, KS  2)  dikondisikan  selama1  minggu dipelihara dalam kandang pada ruangan 20-25 iberi  makan  dan  minum  dan dipantau berat badan serta kematian dan aktivitasnya.  Pada  hari  pemindahan mencit ke laboratorium mencit ditimbang  berat  badannya  dan  hasil berat badan mencit mengalami penurunan  pada  hari  ke-3  dikarenakan mencit  diduga  stress  karena  masih proses  adaptasi  namun  pada  hari  ke-5 dan  selanjutnya mengalami  kenaikan yang  menunjukan    mencit  telah  dapat beradaptasi dengan lingkungan laboratorium.  Intramuscular  (pangkal
paha)  dan  intraperitonial  (abdomen). Penyuntikan  ke-1  dengan  dosis  20  g dan,  ke-2  dengan  dosis  40  g,  ke-3 dengan  dosis  60  g  dan  ke-4  dengan dosis  40 .  Peningkatan  dosis  ini diharapkan dapat meningkatkan respon imunncit telah dapat beradaptasi dengan lingkungan laboratorium.
Pengukuran  dengan  teknik  ELISA dilakukan dengan membandingkan setiap bleed ( bleed 0  - 4)  dalam  satu plate  ELISA.  Tabel  4  dan  Gambar  16 menunjukan jumlah titer antibodi yang dihasikan  pada setiap bleed pada kelompok perlakuan dan  kelompok kontrol.  Pada  kelompok perlakuan  1 (KP 1) dan kelompok perlakuan 2 (KP 2)  terjadi  kenaikan  titer  antibodi  yang dihasikan  pada setiap bleed yang menunjukan adanya peningkatan respon antibodi terhadap jumlah antigen yang diberikan.
Kenaikan jumah antigen Fim-C S. typhimurium yang diberikan pada
mencit  menghasikan  kenaikan  jumah antibodi  spesifik  anti  Fim-C S. typhimurium .  Hal  ini  terjadi  akibat adanya  peran  sel  B  memori  spesifik yang telah teraktivasi oleh antigen anti Fim-C S. Typhimurium yang lebih siap membentuk  antibodi  terhadap  antigen yang  masuk  secara  berulang  sehingga produksi  antibodi  dalam  tubuh  akan meningkat. Titer antibodi pada kelompok  kontrol  1  (KS  1)  yang diberikan adjuvant dan  kelompok kontrol  2(KS  2)  yang  diberikan  PBS tidak mengalami  kenaikan  respon antibodi dengan diberikannya adjuvant dan  PBS  masing  masing  secara berulang.  Hal  ini  menunjukan  bahwa pada  kelompok  kontrol  tidak  terjadi respon  antibodi  terhadap adjuvant dan PBS  yang  masuk  kedalam  tubuh dikarenakan  kedua  larutan  tersebut tidak mempunyai sifat antigensi sebagai benda  asing  yang  dapat  merangsang pembentukan antibodi.
Hal
ini
menunjukan  bahwa  pada kelompok perlakuan dapat menghasilkan kenaikan  antibodi  spesfikanti  Fim-C sebagai  respon  adanya  penyuntikan antigen  Fim-C  berulang.  Sedangkan kelompok  kontrol  tidak menghasilkan kenaikan respon antibodi spesifik.
Pada hasil titer antibodi pada bleed ke2 4  menunjukan  perbedaan nilai absorbansi dimana kelompok perlakuan menunjukan  kenaikan  titer  antibodi dengan kelompok perlakuan 1
menunjukan  kenaikan  antibodi  lebih besar dibandingkan kelompok
perlakuan  2.  Kenaikan  titer  antibodi kelompok  perlakuan  1  yang  diberikan campuran antigen Fim-C S. Typhimurium lebih besar dibandingkan kelompok  perlakuan  2  yang  hanya diberikan antigen
Fim-C S.
typhimurium .  Hal  ini  membuktikan a djuvant dapat merangsang pembentukan  antibodi  dan  menjaga protein  antigen  dari  katabolisme  yang berlangsung  begitu  cepat, sehingga protein dapat merangsang pembentukan antibodi spesifik yang diinginkan. Hasil pengukuran absorbansi antibodi dengan ELISA menunjukan  bahwa  rata- rata jumlah antibodi mengalami peningkatan  dari bleed ke  0  - 4  dari jumlah antigen yang digunakan yaitu100  ng  dan  300 ng  keduanya mengalami  kenaikan  nilai  absorbansi yang  menunjukan  kenaikan  jumlah antibodi yang mengikat antigen tersebut.  Kenaikan  ini  menunjukan bahwa protein
Fim-C dapat menimbulkan  respon  imun dengan peningkatan  jumlah  antibodi  pada setiap bleed nya.  Jumlah  antibodi mengalami  kenaikan  yang  lebih baik dengan jumlah antigen 300ng
dibandingkan jumlah antigen.
Pengujian
serologis terhadap antibodi  hasil  responimun dari  antigen Fim-C dapat dilakukan dengan metode Western  immunoblotting .  Hasil  uji deteksi  antigen  anti  Fim-C  terhadap antibodi  yang  dihasilkan  menunjukan adanya interaksi keduanya yang
ditandai  dengan  terbentuknya  pita warna coklat  yang  merupakan  produk adanya  aktivitas  oksidasi  H2O2  yang dikatalis oleh  enzim  horse  radish peroksidase  dimana  enzim  ini  akan merubah DAB menjadi produk berwarna coklat. Reaksi disajikan pada gambar  1.  Reaksi  yang  melibatkan enzimdan substrat menghasilkan
produk  yang  berwarna  coklat.  HRP akan mengkatalis reaksioksidasi
hidrogen  peroksida  dalam  larutan substrat  dimana  DAB  dibutuhkan dalam  proses  transfer  elektron  oleh HRP ketika mengkatalisa reaksi oksidasi  H2O2  sehingga  dihasilkan produk berwarna coklat yang tidak larut (Thermo  Fisher  Scientific  Inc.  2011). Terjadinya reaksi tersebut menunjukan adanya interaksi antigen pada membran nitro  selulosa  dengan  antibodi  primer dan  interaksi  antibodi  primer  dengan antibodi  sekunder  yang  mengandung enzim  HRP  sehingga substrat  dapat menghasilkan  produk  berwarna  coklat selama proses Western immunoblotting.
Hasil Western  immunoblotting pada membran nitro selulosa
menunjukan  Sensitifitas  antibodi  pada kelompo  kesperimen  1(KP  1)  dapat mendeteksi protein Fim-C S. Typhimurium minimal hingga
konsentras sebagai antigen yang
ditunjukan dengan adanya pita berwarna coklat  pada  membran  nitro selulosa yang masih bisa dilihat dengan jelas. Gambar  hasil  SDS  PAGE  dan Western immunoblotting pada kelompok perlakuan 1 (KP 1) disajikan pada gambar 2. Hasil menunjukan bahwa
kelompok perlakuan
1 dapat menghasilkan pita lebih sensitif hingga
sedangkan  pada  kelompok
perlakuan  2  pita  mendeteksi  minimal hingg
dikarenakan konsentrasi  antibodi  yang  dihasilkan pada  kelompok  perlakuan  2  lebih rendah dibandingkan konsentrasi antibodi  pada kelompok  perlakuan  1 dimana  pada kelompok perlakuan  1 diberikan adjuvant yang  bertujuan untuk  membantu  antigen  merangsang terbentuknya antibodi.
Selanjutnya  pengujian Western immunoblotting dilakukan pada kelompok  perlakuan  dan  kelompok control. Hasil menunjukan bahwa pada kelompok  perlakuan1  dan  2 keduanya menunjukan  adanya  respon  antibodi terhadap  antigen  yang  berada  pada membran nitro selulosa dengan dihasilkannya  pita  berwarna coklat. Sedangkan  pada kelompok  kontrol  1 dan 2 keduanya tidak menghasilkan pita berwarna coklat. Gambar perbandingan hasil Western  immunoblotting antar kelompok disajikan pada gambar 3. Hal ini menunjukan bahwa antibodi kelompok perlakuan yang  disuntikan antigen  Fim-C  dapat  membentuk
respon  antibodi  anti  Fim-C  spesifik terhadap antigen Fim-C
yang dibuktikan  dengan  adanya  pita  coklat pada membran nitro selulosa dan dapat disimpulkan  bahwa  protein  Fim-C S. Typhimurium dapat  menjadi  model kandidat vaksin demam tifoid.

## Kesimpulan
Antigen  Fim-C S.  Typhimurium dapat  menginduksi  terjadinya  antibodi anti Fim-C S. Typhimurium pada hewan uji.  Hal  ini  di  buktikan  dengan karakterisasi melalui teknik ELISA dan teknik Western  immunoblotting. Pada Metode  ELISA  menunjukkan  bahwa perlakuan1 memberikan respon
imunitas yang lebih tinggi
dibandingkan  kelompok  perlakuan2, hal tersebut akibat pemberian adjuvant.
Uji  sirologis  menggunakan  teknik Western    immunoblotting menunjukan bahwa Adanya antigen Fim-C S. Typhimurium dapat  berinteraksi  dengan  antibodi spesifik  anti  Fim-C S.  typhimurium.
Konsentrasi  deteksi  minimal  antibodi kelompok  perlakuan  1  menunjukan pada  konsntrasi  antigen  0,
Kedua pengujian  ini  menunjukan  bahwa antigen  Fim-C S.  Typhimurium dapat menghasilkan dan meningkatkan immuno genistas sehingga dapat dijadikan model kandidat vaksin demam tifoid.

## DaftarPustaka
Barat, M., Willer, Y., Rizos, K., Claudi, B.,  Maze,A.,  Schemmer, A. K.,Kirchhoff,  D.,  Schmidt,  A., Burton,N.,  Bumann,  D.  2012. Immunity to Intracellular Salmonella Depends on Surface-associated Antigens. Plos Pathogens 8(10). Fraser,  A.,  Goldberg,  E.,Acosta,  C.  J., Paul,  M.,  Leibovici,L.  2009. Vaccines For Preventing Typhoid  Fever. The  Cochrane Collaboration :Issue 3. Lancellotti, M.,Izidoro,M. S., Varela, J. N., Alves, D. A., Pereira, R. F. C., Brocchi, M., dan Hollanda,L.  M.2012.  Effects Of Salmonella enteritidis Serovar Typhimurium Infection  In  Adenocarcinomic Human Alveolar Basal Epithelial Cells A549 In Vitro : Bacteria  Induce  Apoptosis  In Adenocarcinomic Cell. J Bacteriol Parasitol 3(9): 1-6.
Mahmood, T dan Yang,P. C. 2012. Western immuno blotting :
Technique, Theory, and Trouble Shooting. North American  Journal  Medical Science 4(9): 429 434.
Menteri Kesehatan Republik Indonesia.
2006. Keputusan Menteri Kesehatan Republik Indonesia Nomor 364 / menkes /sk / v / 2006 tentang Pedoman Pengendalian Demam Tifoid Menteri Kesehatan Republik Indonesia . Jakarta:  Menteri  Kesehatan Republik Indonesia.
Muktiningih, Rachman,A., dan Kartika,
I.  R.  2011.  Pengembangan Potensi Molekul Bioaktif Fim- C  Salmonella  typhi Sebagai Kandidat  Vaksin  Rekombinan Dalam  Mencegah  Penyakit
Typhus  Pada  Manusia. Jakarta : Lembaga Penelitian UNJ. Muktiningsih, Dewi, F.K., Sukmawati,
D.  S.,  Sandra,  R.  N.,  dan Wulansari, F. 2009. Pengembangan Metode Deteksi Bakteri Penyebab Penyakit Typhus pada Manusia dengan Polymerase Chain Reaction . Jakarta:Lembaga
PenelitianUNJ.
Rosenberger, C.M., Scott, M.G., Gold, M.R.,  Hancock,  R.E.W.,  dan Finlay2, B.B. 2000. Salmonella typhimurium Infection and Lipo polysaccharide Stimulation  Induce  Similar Changes  in  Macrophage  Gene Expression. J Immunol
164:5894 - 5904. Song,  J.,  Willinger,  T.,  Rongvaux,  A., Eynon, E.E., Stevens, S., Manz, M.G.,  Flavell,  R.  A.,  dan
Galán,  J.  E.  2010.  A  Mouse Model For The Human Pathogen Salmonella  typhi .
CellHost  Microbe 8(4):  369
376.
Thermo  Fisher  Scientific  Inc.  2001. Piercegoat  Anti-Mouse  Ig  G,
(H+L)  Peroxidase  Conjugate: 31430. Thermo Scientific Product  Data  Sheet:United States of America.