## EFEKTIVITAS KOMBINASI EKSTRAK DAUN SIRIH MERAH (Piper Crocatum)
DAN EKSTRAK BIJI ALPUKAT (Persea americana)

## DALAM MENGHAMBAT PERTUMBUHAN Candida albicans

## Vini Anggraini, Masfufatun Masfufatun *
Fakultas Kedokteran Universitas Wijaya Kusuma Surabaya *email: masfufahhabibah@gmail.com
Received 19 Oktober 2017
Accepted 28 Nopember 2017

## Abstrak
Tujuan penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  efektivitas  kombinasi daun sirih  merah (Piper crocatum) dan ekstrak biji alpukat (Persea americana) dalam menghambat pertumbuhan Candida albicans . Penelitian bersifat eksperimental laboratorium (true experiment) dengan pendekatan post  test  control  group  design  only .  Daun  sirih  merah  dan  biji  alpukat  diekstraksi  secara maserasi  menggunakan  pelarut  etanol. Pada  masing-masing  ekstrak  etanol  dilakukan  uji pendahuluan untuk mengetahui konsentrasi optimum ektrak dalam memnghambat pertumbuhan C. albicans . Daya Hambat pertumbuhan C. albicans diuji menggunakan metode difusi. Hasil penelitian menunjukkan  bahwa  konsentrasi  terendah  ekstraks  daun  sirih  merah  dan  biji  alpukat  yang  dapat menghambat  pertumbuhaan C.  albicans masing-masing  adalah  10%. Kombinasi  ekstrak  daun sirih  merah  dan  ekstrak  biji  alpukat  memiliki  daya  hambat  yang  signifikan  terhadap pertumbuhan Candida albicans dibandingakan kontrol negatif, kontrol positif dan ekstrak daun  sirih  merah . Dengan  demikian  kombinasi  ekstrak  daun  sirih  dan  biji alpukat  etanol berpotensi  sebagai  antifungi  dalam  menghambat  pertumbuhan C. albicans sehingga diharapkan bisa mengurangi prevalensi kandidiasis.
Katakunci : daun sirih merah,  biji alpukat, Candida albicans ,

## Abstract
The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  effectiveness  of  red  betel  leaf  (Piper crocatum)  and  avocado  seed  extract  (Persea  americana)  combination  in  inhibiting  the growth of C. albicans . Research is experimental laboratory (true experiment) with post test approach  control  group  design  only.  Red  betel  leaf  and  avocado  seeds  are  extracted  by maceration using ethanol solvent. In each ethanol extract, a preliminary test was performed to find out the optimum concentration of extract in inhibiting the growth of C. albicans . C. albicans growth retardant was tested using diffusion method. The results showed that the extract of red betel leaf and avocado seeds each had the greatest inhibitory concentration at 10%. The combination of red betel leaf extract and avocado seed extract have significant inhibitory effect on C. albicans growth compared to negative control, positive control and red betel leaf extract. Thus, the combination of betel leaf extract and ethanol  seed has the potential as an antifungal in inhibiting the growth of C. albicans so it is expected to reduce the prevalence of candidiasis.
Keywords: red betel leaf, avocado seed , Candida albicans,

## Pendahuluan
Kandidiasis  merupakan  penyakit  yang disebabkan  oleh  jamur,  seperti Candida albicans . Insidens
kandidiasis vulvovaginal di Indonesia pada tahun 1979 sebanyak  14%,  dan  terus  mengalami peningkatan  menjadi  46%  pada  tahun 1997,  dan  pada  tahun  2004,  hampir  70% wanita  di  Indonesia  pernah  mengalami keputihan setidaknya sekali dalam hidupnya  (Endang,  2003,  Prasetyowati, 2009). Dari tahun ke tahun angka kejadian
Kandidiasis vulvovaginal semakin meningkat.
Infeksi Candida albicans dapat diterapi dengan penggunaan obat atau sediaan yang fungsinya sebagai anti fungi yang efektif. Golongan obat yang saat ini tersedia untuk pengobatan  mikosis  meliputi  poliena,  ß usitosin, azol, dan griseofulvin. Kenyataan menunjukkan bahwa jenis antifungi relatif lebih  sedikit  dibandingkan  antimikroba lain,  selain  itu  obat  kimia  sering menimbulkan  efek  samping  yang  cukup berat  dan  harganya  mahal,  dengan demikian  diperlukan  penggalian  obat alternatif  dari  tanaman  obat  tradisional yang secara empiris sudah sering digunakan oleh masyarakat (Rahajeng dan Annisaul, 2014).
Di  Indonesia  terdapat  berbagai  jenis tanaman  obat  tradisional,  salah  satu  jenis obat tradisional adalah sirih merah (Piper crocatum) . Tanaman ini memiliki
kandungan  senyawa  kimia  seperti  ß avonoid,  alkaloid,  saponin,  tanin,  dan minyak atsiri. Minyak atsiri dari daun sirih mengandung
minyak terbang
(betlephenol),  sesquiterpen,  pati,  diatase,
gula  dan  zat  samak  dan  chavicol  yang memiliki daya mematikan kuman,
antioksidasi  dan  fungisida,  anti  jamur sehingga secara empiris berkhasiat mengurangi sekresi pada liang vagina dan keputihan  akut  (Rahajeng  dan  Annisaul, 2014).  Ekstrak  daun  sirih  merah  mampu mematikan  jamur Candida  albicans penyebab  keputihan  akut,  dan  gatal-gatal pada alat kelamin (Wina dkk, 2015).
Tanaman  lain  yang  memiliki  efek antimikroba  yaitu  biji  alpukat  ( Persea americana ).  Tanaman  ini  terbukti  efektif menghambat pertumbuhan Candida albicans , Cryptococcus  neoformans dan Malassezia  pachydermatis melalui  teknik mikrodilusi. Hasil Skrining fitokimia yang dilakukan  oleh  Zuhrotun  (2007)  terhadap simplisia  dan  ekstrak  etanol  biji  alpukat menunjukkan bahwa biji alpukat mengandung polifenol, flavonoid, triterpenoid,  kuinon,  saponin,  tanin  dan monoterpenoid dan seskuiterpenoid (Dewi dan Sulistyowati, 2013).
Pada  penelitian  Atika  (2010),  minyak atsiri  kulit  batang  kayu  putih  memiliki kemampuan  menghambat  pertumbuhan Candida  albicans yang  lebih  baik  setelah dikombinasikan dengan ekstrak biji jinten hitam  (Nigella  sativa).  Oleh  karena  itu dalam  penelitian  ini  kami  akan  menguji efektivitas  daun sirih  merah (Piper crocatum) dalam
menghambat pertumbuhan C.albicans setelah
dikombinasi  dengan  ekstrak  etanol  biji alpukat (Persea americana) .

## Metode Penelitian

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini adalah cawan petri, jarun Ose, autoklaf, inkubator, pipet ukur, pipet mikro, bunsen, spektrofotometer,  laminary  flow,  tabung reaksi dan blue tips.
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah daun sirih merah dan biji  alpukat,  media Saboroud  Dextrose Agar  (SDA), biakan Candida  albican ,
Etanol 96%, Flukonazol, Kapsul kloramfenikol, DMSO

## Prosedur Penelitian Ekstraksi daun sirih merah dan biji alpukat
Ekstrak  daun  sirih  merah  diperoleh dengan  cara  maserasi.  Daun  sirih  merah segar  dicuci  dengan  air  sampai  bersih, dipotong-potong,  ditiriskan,  dikeringkan, kemudian sampel diblender sampai halus. Direndam  selama  24  jam  dengan  Etanol
96%.  Setelah disaring, filtrate dipekatkan dengan  evaporator pada suhu 50°C sampai diperoleh ekstrak yang kental
Ekstrak  biji  alpukat  diperoleh  dengan cara  maserasi.  Biji  alpukat  dicuci  dan disikat  lembut  untuk  membersihkan  kulit biji  yang  melekat.  Biji  dipotong-potong kecil dan tipis kemudian diangin-anginkan di  tempat  terbuka  yang  terlindung  dari cahaya  matahari  langsung.  Selanjutnya dikeringkan dalam oven dengan suhu 50˚C selama  2x24  jam.  Setelah  kering,  biji dihaluskan  dengan  mesin grinding  mesh 20 sampai menjadi serbuk halus, kemudian direndam dalam etanol 96% selama 24 jam sambil  diaduk-aduk.  Maserasi  dilakukan berulang  kali  hingga  diperoleh  larutan jernih. Setelah disaring,  filtrat dipekatkan dengan evaporator.

## Uji pendahuluan
Uji  pendahuluan  ini  dilakukan  untuk mengetahui  konsentrasi  optimum  ekstrak daun  sirih  merah  dan  biji  alpukat  dalam menghambat  pertumbuhan C.  albicans . Biakan  subkultur C.  albicans diambil dengan  mengunakan  ose  steril  ke  dalam larutan  NaCl  0,9%  sampai  mencapai kekeruhan yang ekuivalen dengan OD 0,5. Kemudian  0,2  ml  suspensi C.  albicans dioleskan merata di atas permukaan media agar  SDA  pada  5  cawan  petri.  Pada masing-masing  cawan  petri  diletakkan  5 kertas cakram sebagai replika dan ditetesi 0.05  mL  ekstrak  daun  sirih  merah  dalam pelarut  DMSO  dengan  konsentrasi  yang berbeda  10,  20,  40,  80,  dan  100%. Selanjutnya  disiapkan  5  cawan  petri  lagi untuk  diisi  dengan  ekstrak  biji  alpukat dengan  konsentrasi  10,  20,  40,  80  dan 100%.  Cawan-cawan  petri  yang  sudah ditetesi  dengan  ekstrak,  kontrol  negatif maupun positif diinkubasi pada suhu 37 o C selama  24  jam.  Deameter  zona  bening yang  terbentuk  pada  sekeliling  kertas cakram pada setiap kelompok diukur.
Uji  efektivitas  kombinasi  ekstrak  daun sirih  merah  dengan  biji  alpukat  dalam menghambat pertumbuhan C. albicans
Kombinasi  ektrak  diperoleh  dengan cara  mencampurkan  ekstrak  daun  sirih merah  dan  biji  alpukat  konsentrasi optimum dengan perbandingan 1:1.
Selanjutnya disiapkan 5 cawan petri yang berisi media agar SDA.  Kemudian 0,2 ml suspensi C. albicans dioleskan merata di atas  permukaan  media  agar  SDA  pada masing-masing cawan petri dan selanjutnya  diletakkan  5  kertas  cakram setiap  cawan.    0,05  ml  DMSO  sebagai kontrol negatif, 0,05 ml ekstrak daun sirih merah  50%,  0,05  ml  ekstrak  biji  alpukat 50%,  0,05  ml  larutan  kombinasi  ekstrak daun sirih merah dan ekstrak biji alpukat, dan  0,05  ml  larutan  flukonazol  25µg sebagai  kontrol  positif  diteteskan  di  atas kertas cakram pada masing-masing cawan petri. Semua cawan diinkubasi pada suhu 37 o C  selama  24  jam.  Deameter  zona bening  yang  terbentuk  pada  sekeliling kertas  cakram  pada  setiap  kelompok diukur dengan jangka sorong.

## Analisis data
Penelitian ini diuji dengan menggunakan uji non parametrik Kruskal Wallis kemudian  dilanjutkan  dengan  uji Mann Whitney. Data diolah dengan SPSS 16.0 for Window.

## Hasil dan Pembahasan

## Proses pembuatan ekstrak
Pembuatan  ekstrak  daun  sirih  merah dan ekstrak biji alpukat dilakukan dengan menggunakan  metode  maserasi  yang merupakan  proses  ekstraksi  cara  dingin dengan menggunakan pelarut etanol 96%. Metode  ini  dipilih  karena  merupakan metode  yang  paling  mudah  dilakukan, tidak membutuhkan banyak pelarut, proses terbentuknya  ekstrak  kental  lebih  cepat. Pada ekstraksi 156,77 gram serbuk kering daun  sirih  kering  diperoleh  ektrak  kental 11  gram  (rendamannya  sebesar  7%).
Sedangkan  pada  ekstraksi  512,63  gram serbuk  biji  alpukat,    diperoleh  ekstrak
kental  etanol  biji  alpukat  sebanyak  16 gram (rendamannya sebesar 3.12%).

## Uji pendahuluan
Sebelum  dilakukan  uji  efektifitas kombinasi  ekstrak  daun  sirih  merah  dan biji  alpukat,  dilakukan  uji  pendahuluan dengan  tujuan  untuk  mencari  konsentrasi dari ekstrak daun sirih merah dan ekstrak biji alpukat yang optimal dalam menghambat  pertumbuhan C.  albicans . Pada  uji  pendahuluan  konsentrasi  ekstrak daun  sirih  merah  dan  ekstrak  biji  alpukat masing-masing  dibuat  dalam  5  seri konsentrasi,  yaitu  10%,  20%,  40%,  80%, dan 100%.  Diameter zona hambat dalam dilihat pada Tabel 1.
Berdasarkan data uji pendahuluan pada
Tabel  I,  konsentrasi  ekstrak  daun  sirih merah  dan  ekstrak  biji  alpukat  yang optimum dalam menghambat pertumbuhan C.  albicans adalah  10%. Semakin tinggi konsentrasi ekstrak ternyata  daya  hambatnya  semakin  kecil. Hal  ini  diduga  adanya  faktor  kejenuhan. Pada  saat  membran/cakram  sudah  jenuh dengan  larutan  ekstrak  pada  konsentrasi tertentu  maka  membran  tidak  bisa  lagi mengabsorbsi  zat  aktif  dari  ekstrak. Disamping itu, diduga adanya sifat toksik dari  pelarut  DMSO  (Dimetil  Sulfoksida). Sehingga  adanya  pelarut  tersebut  dapat meningkatkan  daya  hambat  ekstrak  biji Alpukat maupun daun sirih merah
Tabel 1. Diameter Zona Hambat Ekstrak Biji Alpukat dan Ekstrak Daun Sirih Merah terhadap Pertumbuhan C. albicans
Konsentrasi  optimum  ekstrak  biji Alpukat maupun daun sirih merah berbeda dengan  penelitian  sebelumnya.  Pada penelitian sebelumnya konsentrasi ekstrak daun  sirih  merah  dan  biji  alpukat  yang paling optimal untuk menghambat pertumbuhan Candida  albican masing- masing konsentrasi 40% dan 80% (Astuti, 2012;  Dewi,  2013).  Terdapat  beberapa faktor  lain  yang  bisa  menyebabkan  hasil penelitian ini tidak sama dengan penelitian yang  sebelumnya.  Faktor-faktor  tersebut antara  lain  kemungkinan  karena  faktor kandungan  zat  aktif  yang  ada  ditanaman tersebut  tidak  adekuat  akibat  pengaruh perbedaan  geografis,  serta  kemungkinan Candida albicans yang sudah resisten.
Kemampuan ekstrak biji alpukat untuk menghambat
Candida
albicans disebabkan oleh adanya kandungan senyawa polifenol, flavonoid, triterpenoid, kuinon,  tanin dan monoterpenoid dan seskuiterpenoid (Dewi  dan  Sulistyowati, 2013).  Kemampuan daya hambat esktrak biji  alpukat  lebih  besar  dibandingkan esktrak daun sirih kemungkinan disebabkan  oleh  senyawa-senyaa  yang terkandung  di  dalam  biji  alpukat  tersebut lebih  adekuat.  Pada  daun  sirih  juga menunjukkana  adanya  diameter  zona hambat, namun tidak sebesar jika menggunakan  biji  alpukat.  Terbentuknya daya antifungi daun ini mungkin disebabkan oleh adanya alkaloid, flavonoid, tanin , dan minyak atsiri. Secara
Konsetrasi
N Rata-rata deameter zona bening (mm) ekstrak biji alpukat ekstrak daun sirih merah 10% 5 2 1.2 20% 5 1,6 1 40% 5 0,8 0.2 80% 5 1.2 0.2 100% 5 0.6 0.4
biologi  alkaloid  menyebabkan  kerusakan membran  sel  jamur.  Alkaloid  akan berikatan kuat dengan ergosterol membentuk lubang sehingga membran sel bocor  dan  kehilangan  beberapa  bahan intrasel seperti elektrolit (terutama kalium) dan  molekul-molekul  kecil.  Hal  ini mengakibatkan kerusakan yang tetap pada sel  dan  kematian  sel  jamur.  Flavonoid dilaporkan  berperan  sebagai  antivirus, antibakteri,  antifungi,  antiradang,  dan antialergi. Flavonoid mempunyai senyawa genestein berfungsi menghambat pembelahan  atau  proliferasi  sel  jamur. Senyawa ini mengikat protein mikrotubulus  dalam  sel  dan  mengganggu fungsi mitosis gelendong sehingga
menimbulkan penghambatan pertumbuhan jamur (Astuti, 2012).
Uji  efektivitas  kombinasi  ekstrak  daun sirih  merah  dengan  biji  alpukat  dalam menghambat pertumbuhan C. Albicans
Pada  penelitian  ini  digunakan  5 kelompok  yang  terdiri  dari  2  kelompok kontrol  (positif  dan  negative)  dan  3 kelompok  perlakuan  (ekstrak  biji  alpukat dengan konsentrasi 10%, daun sirih merah konsentrasi  10%,  kombinasi  ekstrak  biji alpukat  dan  daun  sirih  merah).  Daya hambat  masing-masing  kelompok  dapat dilihat  pada  Grafik  1.  Kontrol  Positif menggunakan  larutan  Flukonazol  0.025% dan  kontrol  negatifnya  menggunakan pelarut DMSO tanpa pengenceran
.
Gambar 1. Diagram Rata – Rata Diameter Zona Hambatan
Tabel 2. Uji Post-Hoc Mann Whitney
Keterangan:  Superscript  a,b,c,d,e  dengan  huruf  yang  sama  pada  kolom  variabel  berarti  tidak  terdapat perbedaan yang bermakna (p > 0,05).
Berdasarkan uji normalitas
Kolmogorov-Smirnov ,  data  pengukuran diameter  zona  hambat  tiap  kelompok
perlakuan  berdistribusi  normal  karena memiliki nilai p > α.  Sedangkan hasil uji
Levene untuk  diameter  zona  hambat Kelompok Perlakuan DZH (mm) Kontrol Negatif 1,90 ± 0,38 a Kontrol Positif 0,45 ± 0,53 b Ekstrak Biji Alpukat 4,00 ± 0,00 c Ekstrak Daun Sirih Merah 2,25 ± 0,50 a Kombinasi 3,95 ± 0,30 c 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 alpukat 10% daun sirih 10% kontrol positif kontrol negatif kombinasi R at a -R at a Zon a H am ba t (m m ) Kelompok Perlakuan
mempunyai nilai p = 0,009. Hal ini berarti varians  data  diameter  zona  hambat  tidak homogen  (p  <  0,05).  Sehingga  untuk mengetahui  ada  tidaknya  perbedaan  antar kelompok perlakuan digunakan uji Kruskal  Wallis .  Berdasarkann  hasil  uji Kruskal Wallis, data diameter zona hambat menunjukkan  ada  perbedaan  bermakna antar  kelompok  perlakuan  dengan  sig. 0,002  (sig.  <  0,05).  Perbandingan  zona hambat  pada  masing-masing  kelompok dapat  dilihat  pada  Uji Post  Hoc ( Mann Whitney ), dapat dilihat pada Tabel 2.
Kelompok  perlakuan  5  (kombinasi ekstrak  daun  sirih  merah  dan  ekstrak  biji alpukat) menunjukkan hasil yang berbeda secara signifikan dengan kelompok ekstrak  daun  sirih  merah  10%,  kontrol positif dan kontrol negatif. DMSO sebagai kontrol negatif memiliki daya hambat yang lebih  tinggi  dibandingkan  kontrol  positif dan  berbeda  secara  signifikan.  Hal  ini memperkuat dugaan pada uji pendahuluan bahwa  pelarut  DMSO  yang  digunakan pada penelitian ini bersifat toksik. Hal ini terjadi  karena  konsentrasi  DMSO  yang digunakan terlalu tinggi. Sehingga disarankan  perlu  adanya  pengenceran DMSO terlebih dahulu sebelum digunakan sebagai  pelarut.  Pelarut  DMSO  10% merupakan  pelarut  organik  dan  tidak bersifat bakterisidal (Reynolds, 1996)
Adanya  penambahan  ekstrak  biji alpukat  pada  ekstrak  daun  sirih  merah ternyata  dapat  menaikkan  daya  hambat
ekstrak  daun  sirih  merah  terhadap pertumbuhan C. albicans secara signifikan.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa terjadi  aktivitas  yang  sinergis  antara senyawa aktif pada kedua ekstrak tersebut. Namun  hasil  daya  hambat  kombinasi masih  sedikit  dibawah  daya  hambat ekstrak  biji  alpukat  10%  .  untuk manaikkan daya hambat kombinasi ekstrak terhadap pertumbuhan C. albicans perlu  dilakukan optimasi  komposisi perbandingan  jumlah  ekstrak  daun  sirih dan biji alpukat.
Mekanisme antijamur flukonazol sebagai  obat  antifungi  lebih  dahulu diketahui  dan  dipahami,  yakni  melalui penghambatan  enzim  yang  bergantung pada sitokrom P-450 yang akan mencegah konversi lanosterol ke ergosterol sehingga jumlah  ergosterol  yang  terbentuk  akan berkurang.  Pengurangan  ergosterol  yang merupakan komponen utama membran sel jamur  akan  menyebabkan  kerusakan membran sel (Atika, 2010). Pada penelitian  ini kelompok Flukonazol sebagai  kontrol  positif  memiliki  daya hambat  paling  rendah  dibandingkan kelompok yang lain. Hal ini diduga karena konsentrasi  larutan  flukonazol yang digunakan  terlalu  rendah  sehingga  sifat daya hambatnya lebih rendah dari pelarut DMSO.  Disamping  itu  diduga  biakan C. albicans pada penelitian ini menunjukkan gejala resistensi terhadap flukonazol.

## Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian dapat diperoleh kesimpulan bahwa penambahan ekstrak etanol alpukat mampu menaikkan kemampuan  ekstrak  etanol  daun  sirih dalam memhambat pertumbuhan Candida albicans .  Kombinasi  ekstrak  daun  sirih merah  dan  ekstrak  biji  alpukat  memiliki daya hambat yang lebih efektivitas dalam menghambat pertumbuhan
Candida
albicans dibandingkan flukonazol.
Saran 1. Pengembangan penelitian serupa dapat dilakukan dengan
membandingkan efektifitas daya hambat  ekstrak  Biji  Alpukat  dengan antifungi yang lain.
2. Penelitian  dengan  mempertimbangan “ dose effect relationship ”  pada ekstrak Biji Alpukat untuk mendapatkan  gambaran  pengaruh pemberian  ekstrak  Biji  Alpukat  pada berbagai  variasi  dosis,  sekaligus mengkaji toksisitasnya.
3. Pelarut DMSO yang digunakan dalam penelitian diharapkan diencerkan terlebih dahulu.

## DAFTAR PUSTAKA
Astuti,  O.  R.  2012.  Uji  Daya  Antifungi Ekstrak  Etanol  Daun  Sirih  Merah (Piper  crocatum  Ruiz  &  Pav)
Terhadap Candida  albicans ATCC 10231  Secara IN  VITRO. Fakultas
Kedokteran, Universitas
Muhammadiyah Surakarta.
Atika  Nur  Windi.  2010.  Efek  Kombinasi
Tea Tree Oil (Melaleuca Alternifolia) Dengan  Ekstrak  Biji  Jinten  Hitam (Nigella  sativa) Terhadap Candida albican In Vitro. Fakultas Kedokteran Sebelas Maret Surakarta.
Dewi,  S.  R.  dan  Sulistyowati.  2013.
Penggunaan Ekstrak Biji Buah Alpukat (Persea  americana  Mill.)
Sebagai Antibakteri Proteus mirabilis dan Aerobacter  aerogenes .  Stigma. Vol. 6. No.2. 2013:31-34.
Herliyanti,  Endang,  Darmani.  (2003). Hubungan  Antara  Pemakaian  Akdr Dengan Kandidiasis Vagina di RSUP
Dr.  Pirngadi  Medan.  Bagian  Ilmu
Penyakit Kulit Dan Kelamin Kedokteran  Universitas  Sumatera
Utara.
Khawaja  Tahir  Mahmood,  Mashal  Anees dan  Ayesha  Asghar.  Valvular  Heart Diseases – Review. J Biomed Sci and Res., Vol 3 (1), 2011, 315-321 Made,  Dewa.  2014. Kandidiasis  vagina
Yang  Mendapat  Terapi  Sistemik  dan Topikal: Sebuah Laporan Kasus. vol 3 no 6 (2014):e-jurnal medika udayana.
Prasetyowati.  (2009).  Hubungan  personal hygiene dengan  kejadian  keputihan pada  siswi  SMU  Muhammadiyah Metro  tahun  2009.  Medan.  Skripsi tidak Dipublikasikan Rahajeng Putriningrum, Annisaul Khoiriyah.  2014.  Analisis  Tingkat Pengetahuan Pada Ibu Hamil Trimester Iii Menuju Proses Menyusui. Jurnal Kesehatan  Kusuma Husada (Jurnal KesMaDaSka) STIKes Kusuma Husada Surakarta.
Reynolds, J. E. F. 1996. Martindale, The Extra Pharmacopeia 31 th Edition. The Royal Pharmaceutical Society Press. London. p : 114 – 117.
Rochani,  Nita.  2009.  Uji  Aktivitas Antijamur  Ekstrak  Daun  Binahong (Anredera  cordifolia  (Tenore)  Steen) terhadap Candida  albicans Serta
Skrining Fitokimianya. Fakultas
Farmasi  Universitas  Muhammadiyah
Surakarta, Surakarta.
Wina,  Arniputri,  B.  Retna.  2015  . Identifikasi Komponen Utama Minyak Atsiri  Sirih  Merah. Biodiversitas Vol.8, No.2. Hal. 136-137.
Zuhrotun, A. 2007. Aktivitas Antidiabetes Ekstrak  Etanol  Biji  Buah  Alpukat (Persea  americana  Mill.)  Bentuk Bulat.  Fakultas  Farmasi,  Universitas Padjadjaran. Jatinang