Jurnal Pharmascience, Vol. 08, No.01, Februari 2021, hal: 75-82 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460 – 9560 https://ppjp.ulm.ac.id/journal/index.php/pharmascience Research Article

## Uji Aktivitas Antioksidan Menggunakan Metode
DPPH ( 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil ) Terhadap Ekstrak Etanol Kulit Buah Durian ( Durio zibethinnus L.) dari Desa Alasmalang Kabupaten Banyumas
Eko Prasetyo , Naelaz Zukhruf Wakhidatul Kharomah * , Titi Pudji Rahayu
Program Studi Farmasi Porgram Sarjana, Stikes Muhammadiyah Gombong, Kebumen, Jawa Tengah, Indonesia
Email: naela.zukhruf18@stikesmuhgombong.ac.id

## ABSTRAK
Kulit durian merupakan bagian tanaman yang pernah diteliti sebelumnya dan mempunyai  aktivitas  farmakologi  sebagai  antioksidan.  Kulit  durian  mengandung metabolit  sekunder  yaitu  flavonoid,  tanin  dan  alkaloid.  Kulit  durian  diekstrak menggunakan  pelarut  etanol  70%  dengan  metode  sokletasi.    Pengujian  aktivitas antioksidan  menggunakan  metode  pengukuran  penangkapan  radikal  bebas  oleh  1,1- difenil-2-pikrilhidrazil  (DPPH).  Vitamin  C  digunakan  sebagai  kontrol  positif  dengan nilai IC 50 5,63 ppm dan ekstrak etanol sebesar 204,33 ppm. Penelitian ini menunjukkan bahwa  ekstrak  etanol  kulit  durian  tidak  memiliki  aktivitas  antioksidan  menggunakan metode DPPH.
Kata Kunci: Durian, Sokletasi, DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil), antioksidan, IC 50

## ABSTRACT
Durian  fruit  peels  (Durion  zibethinus  Murr.)  have    been  studied  previously  and reported  to  have  phramacological  activity  that  has  the  potential  to  be  antioxidant.  The durian fruits peels, contained secondary metabolite, namely flavonoids, tannin and alkaloid. Durian  fruit  peels  (Durion  zibethinus  Murr.)  were  extracted  with  ethanol  70%  with soxletation  method.  The  antioxidant  activity  of  extracts  were  evaluated  by  1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl  (DPPH)  free  radical  scavenging  activity  assay.  Vitamin  C  was  used  as standard with IC 50 5,63 ppm and the ethanol eztracts showed IC 50 204,33 ppm. This study provided that Durian fruit peels (Durion zibethinus Murr.) cannot inhibit free radical usimg the DPPH method.
Keywords: Durian, Soxhletation, DPPH (2,2-diphenyl-1-picrilhidrazil), antioxidant , IC 50

## I. PENDAHULUAN
Radikal  bebas  merupakan  suatu molekul  yang  memiliki  satu  atau  lebih elektron  tidak  berpasangan.  Penyakit kanker,  stroke,  jantung,  dan  penuaan  dini disebabkan  adanya  radikal  bebas  dalam tubuh (Rahman, Malik, and Ahmad 2016). Senyawa  yang  dapat  menangkal  radikal bebas dinamakan antioksidan.
Antioksidan  merupakan  senyawa yang  dapat  menghambat  dan  mencegah terjadinya  proses  oksidasi  (Simanjuntak 2012).  Cara  kerjanya  yaitu  menghentikan reaksi  radikal  bebas  dari  metabolisme  di dalam  tubuh  ataupun  dari  lingkungan (Meigaria,  Mudianta,  and  Martiningsih 2016).  Antioksidan  berasal  dari  sintetik dan  alam,  di  Indonesia  yang  memiliki iklim  tropis  terdapat  berbagai  macam tumbuhan  salah  satunya  tanaman  durian. Tanaman  durian  tersebar  di  seluruh provinsi  dengan  berbagai  varietas  yang berbeda. Buah durian yang dikenal sebagai The  king  of  fruit memiliki  khasiat  yang terdapat  dalam  kulitnya,  di  berbagai wilayah tertentu kulit buah durian
dimanfaatkan  sebagai  pengobatan  alami ruam  pada  kulit,  sembelit,  dan  sebagai antimikroba  (Rammy  Azmi  Saputra,  Kiki Mulkiya  Y  2017).  Kulit  buah  durian mengandung  alkaloid,  flavonoid,  steroid, terpenoid,  tannin,  dan  saponin  (Agustina, Setyowati, and Damayanti 2014). Penelitian  oleh  Saputra et  al ,  tahun  2017
(Rammy  Azmi  Saputra,  Kiki  Mulkiya  Y 2017)  memperkuat  bahwa  kulit  buah durian  memiliki  senyawa  flavonoid  yang bersifat  sebagai  antioksidan  dengan  kadar total  sebesar  5,1%  ekstrak  diperoleh  dari refluks dan 4,6% dari ekstrak soxhlet.
Senyawa flavonoid dapat menghambat  enzim  dalam  suatu  reaksi produksi anion superoksid dan menghambat kerja sikloolsigenase (Anonim 2011). Berdasarkan sumber yang telah  disebutkan,  peneliti  bermaksud meneliti  hubungan  antioksidan  dengan aktivitas yang terkandung dalam kulit buah durian  ( Durio  zibethinnus L.)  lokal  dari desa Alasmalang, Kabupaten Banyumas.

## II. METODE
Kulit buah durian ( Durio zibethinnus L.) diambil di desa Alasmalang,  Kabupaten  Banyumas  yang kemudian    di  determinasi  tanaman  di laboratorium  Biologi,  Fakultas  Sains  dan Teknologi  Terapan,  Universitas  Ahmad Dahlan Yogyakarta.

## A. Ekstraksi
Sebanyak  2000  gram  kulit  buah durian  ( Durio  zibethinnus L.)  disortasi basah  untuk  memisahkan  sampel  dari  zat pengotor.  Kemudian  dilakukan  proses perajangan  untuk  memudahkan  proses pengeringan yang dilakukan menggunakan panas  matahari  tidak  langsung.  Sampel
yang  sudah  kering  kemudian  dipisahkan kembali  dari  zat  pengotor  yang  masih  ada setelah proses pengeringan berlangsung.
Simplisia  kulit  buah  durian  ( Durio zibethinnus L.) yang telah kering dihancurkan menggunakan blender sampai menjadi  serbuk  halus.  Mengayak  serbuk yang telah diblender menggunakan ayakan dengan  ukuran  mesh  40,  serbuk  yang masih  kasar  akan  diblender  kembali  dan kemudian  diayak  hingga  mendapatkan serbuk  dengan  tingkat  kehalusan  yang diinginkan.  Proses  ekstraksi  dilakukan menggunakan  metode  soxhlet.  Serbuk halus  ditimbang  sebanyak  150  gram diekstrak  menggunakan  pelarut  etanol sebanyak 1500 ml pada suhu 80 o C sampai pelarut yang membawa komponen zat aktif berwarna  bening.  Hasil  ekstrak  cair didestilasi  vakum  dan  dipekatkan  dengan bantuan rotary evaporator pada suhu 70 o C sampai diperoleh ekstrak kental.

## B. Uji Kualitatif
Ekstrak  kulit  buah  durian  ( Durio zibethinnus L.)  dimasukan  ke  dalam tabung reaksi kemudian dilarutkan dengan etanol, lalu ditetesi larutan FeCl 3 lalu amati, jika  hasil  mengandung  senyawa  flavonoid maka  akan  menunjukan  warna  ungu,  biru, hitam,  hijau,  dan  merah  (Setyowati  and Damayanti 2014).
C. Uji kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Ambil  dan  larutkan  ekstrak  kulit buah durian ( Durio zibethinnus L.) dengan pelarut etanol kemudian sampel ditotolkan pada  plat  KLT  bersamaan  dengan  larutan kuarsetin  sebagai  pembanding,  kemudian masukan ke dalam bejana yang di isi eluen n-butanol:asam  asetat:air (3:1:1)  yang telah  dijenuhkan.  Plat  KLT  didiamkan hingga eluen naik sampai tanda batas yang telah  ditentukan,  jika  telah  selesai  plat dikering anginkan lalu disinar menggunakan  lampu  ultraviolet  dengan panjang  gelombang  254  nm  (Kiswandono 2011).

## D. Uji Aktivitas Antioksidan

## 1. Pembuatan larutan DPPH
Serbuk  DPPH  ditimbang  sebanyak
0,007  gram  kemudian  dilarutkan  dengan 50  mL  etanol,  divortex  sampai  larut. Selanjutnya  larutan  DPPH  diambil  1  mL kemudian  ditambahkan    etanol  sampai  5 mL dan diamkan selama 30 menit.
2. Penentuan panjang gelombang serapan maksimum DPPH
Larutan diambil menggunakan pipet sebanyak 1 mL kemudian ditambahkan  5  mL  larutan  etanol  dan dibiarkan  selama  30  menit  ditempat  gelap dan  diukur  serapannya  pada  panjang gelombang 517 nm.
3. Pemeriksaan konsentrasi antioksidan kulit  buah  durian  ( Durio  zibethinnus L.).
Larutan  uji  ekstrak  kulit  buah durian  ( Durio  zibethinnus L.)  dengan berbagai konsentrasi (20 ppm, 40 ppm, 60 ppm, 80 ppm, 100ppm) didiamkan selama 30  menit  kemudian  dibaca  panjang gelombang  maksimal  517  nm,  dengan larutan pembanding vitamin C konsentrasi (2  ppm,  4  ppm,  6  ppm,  8,  ppm,  dan  10 ppm) dengan perlakuan yang sama.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Kulit buah durian ( Durio zibethinnus L.) yang digunakan merupakan jenis durian lokal  yang terdapat  pada desa Alasmalang, Kabupaten
Banyumas.
Pembuatan  simplisia  dilakukan  sesuai dengan prosedur dimana pembuatan dimulai  dengan  sortasi  basah  untuk memisahkan  zat  pengotor  dari  bahan
sampel.  Setelah  dilakukan  sortasi  basah sampel  dikeringkan  dengan  menggunakan sinar  matahari  tidak  langsung,  hali  ini ditujukan  agar  tidak  merubah  kandungan kimia  yang  terdapat  pada  sampel.  Setelah itu  sampel  kemudian  dihaluskan  agar memudahkan  proses  ekstraksi.  Ekstraksi bertujuan  untuk  melarutkan  semua  zat yang terkandung pada simplisia menggunakan pelarut yang sesuai sehingga  mendapat  ekstrak  kental.  Proses ekstraksi dilakukan dengan metode sokletasi  menggunakan  pelarut  etanol. Pelarut  etanol  96%  digunakan  karena memiliki sifat polar yang dimana senyawa flavonoid  juga  bersifat  polar  (Sakinah 2017).
Ekstraksi  simplisia  ekstrak  etanol kulit  buah  durian  ( Durio  zibethinnus L.) dengan  menggunakan  metode  sokletasi didapat  nilai  randemen  pada  Tabel  I.
Tabel I. Hasil randemen simplisisa ekstrak etanol kulit buah durian ( Durio zibethinnus L.)
Bobot simplisia kulit buah durian Karakteristi ekstrak Berat ekstrak Randemen Bentuk, warna, dan aroma 125 gram 3,18 gram 2,544 % Ekstrak kental berwarna coklat dan bau khas durian
Karakterisasi  kandungan  senyawa yang  terdapat  pada  ekstrak  etanol  kulit buah  durian  ( Durio  zibethinus L.)  perlu dilakukan  identifikasi  untuk  menentukan adanya  aktivitas  antioksidan.  Deteksi kandungan  aktif  ekstrak  etanol  kulit  buah durian  ( Durio  zibethinus L.)  meliputi  uji flavonoid. Hasil deteksi kandungan
senyawa  aktif  kulit  buah  durian  ( Durio zibethinus L.)  yang  dilakukan  terdapat senyawa flavonoid seperti pada Gambar 1.
Uji kualitatif menggunakan kromatografi  lapis  tipis  dilakukan  dengan sinar spektrofotometri pada panjang gelombang 254 nm dan 366 nm. Pengujian digunakan  fase  gerak n-butanol:asam
asetat:air (3:1:1)  dan  fase  diam  silica  gel FG 254 .  Menurut  penelitian  Ulfah et  al, tahun 2015 (Permatasari, Krismariono, and Ulfah  2018)  penggunaan  eluen  ini  cukup baik  untuk  menarik  senyawa  flavonoid. Hasil  kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  yang menghasilkan  nilai  Rf  sampel  ekstrak  dan larutan  pembanding  kuarsetin  sebesar 0,625 dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar  1. Hasil  uji  tabung  ekstrak  kulit durian  ( Durio  zibethinnus L.). (a) Ekstrak etanol kulit  durian. (b) ekstrak yang telah direaksikan dengan FeCl 3.
Gambar  2. Hasil  uji  senyawa  flavonoid uji  KLT  ekstrak  etanol  kulit buah durian ( Durio zibethinnus L.)  pada  panjang gelombang  254  nm  (a)  dan 366 nm (b). (i) ekstrak etanol kulit  buah  durian  dan  (ii) kuarsetin.
Uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan dengan  cara  kuantitatif  menggunakan
metode DPPH ( 2,2-difenil-1- pikrilhidrazyl ). Panjang gelombang diukur untuk  membuat  kurva  standar  yang didasari  oleh  hukum  ” Lambert-beer ” dimana grafik konsentrasi dengan absorbansi membentuk garis lurus (Anonim 2019). Metode DPPH merupakan metode  yang  dapat  mengukur  aktivitas antioksidan  secara  cepat,  sederhana,  dan tidak  membutuhkan  biaya  yang  mahal.
DPPH ( 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil ) merupakan uji untuk menentukan aktivitas antioksidan dengan kemampuannya menangkal radikal bebas.
Larutan  ekstrak  etanol  kulit  buah durian  ( Durio  zibethinnus L.)  dibaca panjang  gelombang  517.0  nm.  Aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol kulit durian dinyatakan  dalam  persentase  inhibisi ekstrak  terhadap  radikal  bebas  DPPH. Perbedaan  serapan  antara  absorban  DPPH dengan  absorban  sampel  yang  diukur dengan spektrofotometer UV-Vis
merupakan cara untuk mendapatkan persen inhibisi ekstrak  etanol kulit  durian. Besarnya  aktivitas  antioksidan  ditandai dengan nilai  IC 50 yaitu konsentrasi larutan sampel yang dibutuhkan untuk menghambat 50% radikal bebas DPPH.
Hasil  uji  aktivitas  antioksidan ekstrak  etanol  kulit  durian  dapat  dilihat pada  Tabel  II  menunjukkan  bahwa  nilai IC 50 sebesar  204,33  ppm.  Pada  Tabel  II menunjukkan  bahwa  ekstrak  kulit  durian
a b
menggunakan  pelarut  etanol  70%  dengan metode sokletasi tidak mempunyai aktivitas  antioksidan.  Hasil  persamaan regresi  linier  dapat  dilihat  pada  Gambar  3 menunjukkan  bahwa  persamaan  regresi antara  %  inhibisi  dengan  konsentrasi ekstrak  dan  diperoleh  persamaan  kurva baku  f(x)  =  bx+a  dimana  f(x)  0,3113x- 13,608; R 2 = 0,736.
Gambar  3. Regresi  linier  uji  antioksidan ekstrak  etanol  kulit  buah durian ( Durio zibethinnus L.)
Tabel II. Hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak kulit buah durian ( Durio zibethinnus L.)

## Keterangan: Abs = absorbansi
Hasil  uji  antioksidan  vitamin  C menunjukkan  nilai  IC 50 sebesar  5,63  ppm seperti  pada  tabel  III  dengan  persamaan regresi linier rumus f(x) = 80,341 -5,391x , R 2 = 0,773 seperti pada Gambar 4.
Gambar  4 .  Regresi  linier  uji  antioksidan larutan  pembanding  vitamin C
Tabel III. Hasil uji aktivitas larutan pembanding vitamin C Konsentrasi (ppm) Absorbansi rata - rata % inhibisi Nilai IC 50 2 ppm 0,192 67,35 5,63 ppm 4 ppm 0,255 56,63 6 ppm 0,226 61,56 8 ppm 0,439 25,34 10 ppm 0,417 29,08 Blanko DPPH 0,587 0,0 Hasil  uji  aktivitas  antioksidan ekstrak etanol kulit durian apabila dibandingkan  dengan  larutan  pembanding yaitu  vitamin  C  menunjukkan  bahwa ekstrak  etanol  kulit  durian  mempunyai aktivitas antioksidan lebih rendah dibandingkan dengan pembanding.
Konsentrasi (ppm)
Abs 1  Abs 2  Abs 3   Rata-rata % inhibisi Nilai IC 50 20 0,668 0,668 0,667 0,668 -13,60 204,33 ppm 40
0,567 0,563 0,564 0,565 03,91 60 0,518 0,515 0,515 0,516 12,24 80 0,555 0,550 0,543 0,549 06,63 100 0,492 0,493 0,494 0,493 16,17 Blanko DPPH 0,589 0,589 0,588 0,588 0,0 -
Penelitian-penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh  Setyowati et al (2014) menunjukan  bahwa  aktivitas  antioksidan yang  terdapat  pada  ekstrak  metanol  kulit buah  durian  ( Durio  zibethinnus L.) memiliki nilai IC 50 sebesar 54,32 ppm. Hal ini  menunjukkan  bahwa  penggunaan pelarut  yang  berbeda  akan  mempengaruhi hasil  uji  aktivitas  antioksidan.  Hasil  uji aktivitas  antioksidan  secara  kuantitatif terhadap  ekstrak  etanol  kulit  buah  durian ( Durio zibethinnus L.) memiliki hubungan dengan  adanya  suatu  senyawa  flavonoid sebagai  metabolit  sekunder  sehingga dibutuhkan  pelarut  yang  tepat  untuk menarik senyawa aktif pada kulit durian.

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang diperoleh  maka  dapat  disimpulkan  bahwa ekstrak  etanol  kulit  buah  durian  ( Durio zibethinnus L.)  metode  sokletasi  tidak memiliki  aktivitas  antioksidan  terhadap senywa radikal bebas DPPH ( 2,2-difenil-1- pikrilhidrazil ) dengan nilai 204,33 ppm .

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  sangat  berterimakasih  kepada Allah  SWT  yang  telah  memberikan karunianya  dalam  mengerjakan  penelitian ini  dan  tak  lupa  kepada  orang  tua,  yang telah  senantiasa    memberi  dukungan  dan masukan  sehingga  dapat  menyelesaikan penelitian dengan baik

## DAFTAR PUSTAKA
Agustina,  Widiastuti,  Eko  Setyowati,  and
Dhika Rizqi Damayanti. 2014. “Pengaruh Metode Ekstrasi Terhadap Aktivitas  Antioksidan  Kulit  Buah
Durian  (  Durio  Zibethinus  Murr  )
Varietas Petruk.”
Anonim.
2011. “Tinjauan Pustaka Deskripsi  Dan  Klasifikasi  Api-Api (Avicennia Marina (Forks.)Vierh.).” : 3–17. ———. 2019. “Spektrofotometri.” Journal of Chemical Information and
Modeling 53(9): 1689–99.
Harlan,  Johan.  2018.  53  Journal  of Chemical  Information  and  Modeling
Analisis Regresi Linear .
Kiswandono, Agung Abadi. 2011.
“Perbandingan  Dua  Ekstraksi  Yang Berbeda  Pada  Daun  Kelor  (Moringa Oleifera,  Lamk)  Terhadap  Rendemen Ekstrak  Dan  Senyawa  Bioaktif  Yang Dihasilkan.” Sains  Natural:  Jurnal
Ilmiah  Ilmu-Ilmu  Biologi  dan  Kimia 1(1): 45–51.
Meigaria,  Komang  Mirah,  I  Wayan
Mudianta, and Ni Wayan Martiningsih. 2016. “Skrining Fitokimia Dan Uji Aktivitas
Antioksidan  Ekstrak  Aseton  Daun Kelor  (Moringa  Oleifera).” Jurnal Wahana Matematika dan Sains 10(2):
1–11. Permatasari, Ryza Indah, Agung
Krismariono,  and  Noer  Ulfah.  2018. “Daya  Hambat  Ekstrak  Kulit  Durian ( Durio Zibethinus Murray ) Terhadap Plak Supragingiva Inhibition Activity of  Durio  Zibethinus  Murray  Rind Extract  On  Bacterial  Plaque  Daya Hambat Ekstrak Kulit Durian ( Durio Zibethinus  Murray  )  Terhadap  Plak Supragingiva.” (July 2015).
Pratama,  Mamat,  Muzakkir  Baits,  and Rizky  Nurul  Yaqin.  2016.  “Uji AKtivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun  Tomat  Buah  (Lycopersicon Esculentum Mill, Var. Pyriforme Alef) Dan
Daun Tomat Sayur (Lycopersicon  Esculentum  Mill,  Var.
Commune  Bailey)  Dengan  Metode Dpph (1,1-Diphenyl-2-Picryl Hydrazil).” Jurnal Fitofarmaka Indonesia 2(1): 76–82.
Rahayu, Siti, Nunung Kurniasih, and Vina
Amalia.  2015.  “Ekstraksi  Dan Identifikasi  Senyawa  Flavonoid  Dari
Limbah Kulit Bawang Merah Sebagai Antioksidan  Alami.” al-Kimiya 2(1): 1–8.
Rahman,  Arif,  Abd  Malik,  and  Aktsar Roskiana  Ahmad.  2016.  “Skrining Fitokimia Dan Uji Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Etanolik  Buah Buni (Antidesma Bunius (L.) Spreng).” Jurnal Fitofarmaka Indonesia 3(2): 159–63. Rammy  Azmi  Saputra,  Kiki  Mulkiya  Y,
Undang  A.  Dasuki.  2017.  “Pengaruh Metode Ekstraksi Refluks Dan Ekstraksi Sinambung Terhadap Aktivitas Antioksidan Dan Penetapan
Total Fenol Dan Flavonoid Dari Kulit Buah  Durian  (  Durio  Zibethinus
Murray ).” : 85–93.
Sakinah,  Fajriyatus.  2017.  “Uji  Aktivitas
Antioksidan Kombinasi Ekstrak Rimpang  Kunyit  Putih  (Curcuma Longa  L.)  Dan  Rumput  Bambu (Lophatherum Gracile B.) Menggunakan  Metode  DPPH  Serta Identifikasi Golongan Senyawa
Aktifnya.”  :  1–92.  http://etheses.uin- malang.ac.id/10843/1/13630113.pdf. Setyowati,  Widiastuti  Agustina  Eko,  and
Dhika Rizqi Damayanti. 2014. “Pengaruh Metode Ekstrasi Terhadap
Aktivitas  Antioksidan  Kulit  Buah Durian  (  Durio  Zibethinus  Murr  ) Varietas Petruk.”
Simanjuntak,  Kristina.  2012.  “Peran
Antioksidan Flavonoid Dalam Meningkatkan  Kesehatan.” FK  UPN Veteran Jakarta 3.