## Aktivitas Antikanker Nanokapsul Ekstrak Mengkudu (Morinda citrifolia L.) dengan Pengujian in Vivo pada Fibrosarkoma

## Mencit Jantan Balb/c
In Vivo Anticancer Activity of Nanoencapsulated Noni (Morinda citrifolia L) Extract on Fibrosarcoma of Balb/c Male Mice
Nur Aisyah 1) , Lulus Kartika Ningtias 1) , Ancah Caesarina Novi Marchianti 2) , Bambang Piluharto 3) , Deltaningtyas Tri Cahyaningrum 4) , Naning Retnowati 4) ,
Nurud Diniyah 1) , Iswahyono 5) , Riska Rian Fauziah 1) *
1) Program Studi Teknologi Hasil Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Jember, Jember
2) Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran, Universitas Jember
3) Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pendidikan Alam, Universitas Jember
4) Program Studi Manajemen Agroindustri, Politeknik Negeri Jember
5) Program Studi Keteknikan Pertanian, Politeknik Negeri Jember
1,2,3) Jalan Kalimantan No. 37 Kampus Tegal Boto, Sumbersari, Jember, Jawa Timur, Indonesia
4,5) Jalan Mastrip Kotak Pos 164 Jember, Jawa Timur, Indonesia
* Korespondensi Penulis: riska_rf.ftp@unej.ac.id
Submisi: 14 Mei 2022, Review : 23 September 2022, Diterima ( Accepted ): 28 Desember 2022

## ABSTRACT
Noni  (Morinda  citrifolia  L.)  is  one  of  the  many  herbs  which  known  as  anticancer  agent. Nanoencapsulated  form  of  noni  extracts  could  help  the  body  absorption  and  able  to  inhibit  the proliferation of cancer cells in vitro. This study was conducted to examine the anticancer activity of nanoencapsulated noni extracts in vivo as the anti-proliferation agent of cancer cells. Noni extract was obtained by maceration method using water as a solvent. The nanocapsule of noni extracts was made using ionic gelation method by magnetic stirrer with speed of 1500 rpm. In vivo anticancer activity test was conducted in Balb/c male mice by comparing the treatment of nanoencapsulated noni extracts and non encapsulated extracts. The result showed that the nanoencapsulated noni extracts has a particle size of 27-59 nm. Percent of inhibition of nanocapsule on cancer cells (specifically on fibrosarcoma of Balb/c male mice) were equal to 54.75% (P2), while non-encapsulated is 49.72% (P1). Nanocapsule of noni extracts has anticancer activity better than non-encapsulated form on fibrosarcoma of Balb/c male mice.

## Keywords: anticancer, nanoencapsulation, noni extract

## PENDAHULUAN
Kanker merupakan sel yang berkembang secara abnormal dan cenderung  bersifat  ganas,  sel  ini  bersifat merugikan  karena  akan  mengambil  nutrisi
dan oksigen dari host (Ferlay et al. , 2021). Nugroho  (2020)  menambahkan  bahwa kanker  merupakan  sebuah  sel  abnormal yang mengalami pertumbuhan progresif di dalam  tubuh  manusia  dan  cenderung
DOI: https://doi.org/10.19184/j-agt.v16i02.31182
Jurnal Agroteknologi Vol. 16 No. 02 (2022)
menyerang  organ  tubuh lain.  Pada umumnya gejala awal munculnya penyakit ini  relatif  ringan  dan  seringkali  diabaikan oleh pasien sehingga tak jarang kanker baru teridentifikasi pada stadium lanjut (Scheiber, 2006). Berdasarkan data Global Burden of Cancer Study dari World Health Organization (WHO),  sepanjang  tahun
2020 jumlah penderita kanker di Indonesia hampir  mencapai  angka  kasus  400  ribu dengan  rincian  total  kematian  sebesar 234.511  kasus  (Sung et  al .,  2021).  Hal tersebut  menjadikan  Indonesia  menduduki peringkat  ke-8  dunia  dengan  penderita kanker terbanyak.
Indonesia  kaya  akan  berbagai  jenis tumbuhan  yang  bermanfaat,  khususnya bagi  kesehatan.  Salah  satu  tanaman  obat mendapat  perhatian  besar  dari  masyarakat adalah  mengkudu  ( Morinda  citrifolia L.) (Wang et  al., 2002).  Sebelumnya,  telah dilaporkan bahwa ekstrak buah mengkudu memiliki  aktivitas  sebagai  antikanker, antitumor,  antidiabetes,  antibakteri,  dan juga  antikaries  (Hiraizumi  &  Furusawa, 1999).  Menurut  Waha  (2001),  senyawa aktif  yang  terkandung  dalam  ekstrak  buah mengkudu adalah rutin (golongan flavonoid)  dan  scopoletin  (turunan  dari coumarin) yang memiliki aktivitas antioksidan.  Berdasarkan  penelitian  yang dilakukan  oleh  Solomon  pada  tahun  1994 dengan 8000 orang yang mengonsumsi sari buah mengkudu, ternyata dapat menyembuhkan  berbagai  penyakit  seperti mengobati  penderita  kanker  sebesar  67%, diabetes sebesar 83%, tekanan darah tinggi sebesar  87%,  artritis  80%,  dan  penyakit lainnya (Pohan & Antara, 2011). Mengkudu  memiliki  banyak  manfaat  bagi kesehatan,  akan  tetapi  masyarakat  kurang menyukai baunya yang tidak
menyenangkan  (Nelson,  2006).  Upaya yang  dapat  dilakukan  untuk  mengurangi bau  tersebut  dan  mempertahankan  ekstrak mengkudu  adalah  nanokapsulasi  (Sugita,
2006) menggunakan bahan penyalut
( coating agent ). Upaya ini dapat melindungi ekstrak mengkudu dari pengaruh suhu, cahaya, kondisi lingkungan,  dan  menghilangkan  bau  yang tidak  sedap.  Bahan  yang  dapat  digunakan sebagai penyalut adalah kitosan (Kencana, 2009).
Penelitian aktivitas antikanker nanokapsul ekstrak mengkudu telah dilakukan  secara  in  vitro.  Hasil  yang diperoleh menunjukkan bahwa nanokapsul mengkudu  secara  efektif  dapat  menekan pertumbuhan  sel-sel  kanker  paru-paru A549 (Citrawani, 2012). Efektivitas nanokapsul  ekstrak  mengkudu  belum pernah  dilaporkan  dengan  pengujian  in vivo pada  hewan  coba  sehingga  perlu dilakukan  pengembangan  penelitian  uji aktivitas  antikanker  nanokapsul  ekstrak mengkudu secara in vivo sebagai salah satu anti  proliferasi  sel  kanker.  Hipotesis  dari penelitian  ini  adalah  nanokapsul  ekstrak mengkudu  dapat  menghambat  proliferasi sel  kanker  (fibrosarkoma)  pada  mencit jantan  secara  in  vivo.  Manfaat  dari penelitian  ini  yaitu  sebagai  informasi tentang  nanokapsul  ekstrak  mengkudu menghambat  proliferasi  sel  kanker  dan meningkatkan  nilai  ekonomis  mengkudu serta  kitosan  sebagai  alternatif  sediaan nutraceutical .

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  terdiri  dari  alat  yang
digunakan untuk ekstraksi mengkudu yaitu gelas  pengaduk,  pemanas  air,  erlenmeyer, magnetik  stirer.  Alat-alat  yang  digunakan untuk pembuatan nanopartikel yaitu kertas saring ( Whattman ), neraca digital (Ohaus), vacuum  evaporator , spray  dryer (Buchi), DelsaTM Nano  Submicron  Particle  size analyzer  (Beckam  Coulter ),  dan  alat  gelas ( glassware ).  Peralatan  yang  digunakan untuk  mengetahui  ukuran  partikel  yaitu instrumen  TEM  ( transmission  electron microscopic merk  Jeol  type  JEM  1400). Peralatan  untuk  pengujian  in  vivo  terdiri dari  sonde,  jarum  suntik,  kandang  mencit, pisau,  mikroskop,  timbangan  analitik, beaker glass , pipet ukur, dan kaliper digital. Bahan yang digunakan dalam penelitian  meliputi  simplisia  mengkudu yang  dibuat  dari  buah  mengkudu  dengan kematangan  sedang,  kitosan,  asam  asetat 1%.  Bahan  yang  digunakan  dalam pengujian  in  vivo  adalah  mencit  jantan strain Balb/c berumur 2-3 bulan, benzo(a)pirena,  minyak  zaitun, tween 80, dan larutan biologis NaCl.

## Tahapan Penelitian
Pembuatan  Ekstrak  Mengkudu  (Rohman, 2006)
Ekstrak  mengkudu  dibuat  dengan cara maserasi dengan menggunakan pelarut air. Buah mengkudu sebanyak 3 kg dicuci bersih  kemudian  ditiriskan  dan  dipotong- potong  tipis.  Potongan  buah  selanjutnya dikeringkan pada oven dengan suhu 50 o C. Pengeringan  dilakukan  selama  3  hari, sampai  potongan  buah  benar-benar  kering berbentuk  kepingan,  selanjutnya  dibuat serbuk  kering  (simplisia)  dengan  cara dihancurkan menggunakan blender. Serbuk kering buah mengkudu dimasukkan dalam maserator,  sebanyak  50  gram  mengkudu
kering  dilarutkan  dalam  500  mL  akuades, direndam selama 6 jam sambil sekali-sekali diaduk.  Campuran  larutan kemudian didiamkan  sampai  24  jam.  Maserat dipisahkan  dan  proses  diulangi  2  kali dengan jenis dan jumlah pelarut yang sama. Semua maserat dikumpulkan dan diuapkan dengan  penguap  vakum  hingga  diperoleh ekstrak  kental.  Rendemen  yang  diperoleh ditimbang dan dicatat.

## Pembuatan Nanokapsul (Citrawani, 2012)
Pembuatan  gel  kitosan  dilakukan dengan  melarutkan  kitosan  sebanyak  1,5 gram  dalam  100  mL  asam  asetat  1%. Pengecilan  ukuran  ( sizing ) dilakukan melalui  metode  homogenisasi  dengan menggunakan magnetic  stirrer. Masing- masing  100  mL  larutan  kitosan  dilakukan metode pengecilan ukuran selama 60 menit, sampai  terlihat  larutan  jernih.  Pembuatan nanokapsul ekstrak  mengkudu  dilakukan melalui tahap emulsifikasi dengan penambahan 50 mikroliter tween 80 0,1%. Campuran  emulsi  (ekstrak  mengkudu  dan tween ) tersebut diproses lebih lanjut dengan menggunakan pengeringan dengan metode spray  drying yang  dikombinasi  dengan sizing menggunakan homogenizer dengan kecepatan 1500 rpm.
Analisis Ukuran Partikel (Kim et al., 2006) Larutan  mengkudu  sebanyak  2-3 tetes  dianalisis  menggunakan  instrumen TEM  ( transmission  electron  microscopic ) untuk mengetahui distribusi ukuran partikel. Difraksi sinar laser untuk partikel dari  ukuran  submikron  sampai  dengan milimeter, counter principle untuk mengukur  dan  menghitung  partikel  yang berukuran mikron sampai dengan milimeter dan  penghamburan  sinar  untuk  mengukur
Jurnal Agroteknologi Vol. 16 No. 02 (2022)
partikel  yang  berukuran  mikron  sampai dengan nanometer.

## Pembuatan  Sediaan  Bahan  Uji  (Taskin  et al., 2009)
Sediaan bahan uji dibuat dengan cara mensuspensikan  nanokapsul  mengkudu dengan 2% larutan tween 80 dalam larutan fisiologi  NaCl  0,9%.  Dosis  ekstrak mengkudu dan nanokapsul yang diberikan masing-masing  yaitu  0,4%  dari  total pelarut. Kontrol yang digunakan adalah 2% larutan tween 80  dalam  larutan  fisiologis NaCl  0,9%  tanpa  nanokapsul  mengkudu. Sediaan yang disondekan baik uji maupun kontrol  disesuaikan  dengan  berat  badan mencit sehingga dosis mencapai 250 mg/kg BB  selama  10  hari.  Pembuatan  sediaan bahan  uji  dan  kontrol  dilakukan  pada  saat akan digunakan.

## Perlakuan Hewan Uji (Smeltzer, 1996 yang Dimodifikasi)
Hewan  coba  berupa  mencit  jantan strain  Balb/c berumur  2-3  bulan  dengan berat badan 20–30 gram sebanyak 20 ekor dibagi 4 kelompok. Masing-masing kelompok  terdiri  dari  5  ekor  yang  dipilih secara acak. Sebelum diberikan perlakuan, mencit  diadaptasi  selama  1  minggu  agar dapat menyesuaikan diri dengan lingkungan yang baru. Modifikasi perlakuan  diberikan  pada  pemberian  dosis yang  disesuaikan  dengan  sampel  yang digunakan  yaitu  nanokapsul  mengkudu. Tiga kelompok mencit perlakuan diinduksi dengan  0,1  mL  benzo(a)pirena  0,3%  b/v sebanyak 10× setiap 2 hari sekali secara sub kutan. Setelah itu mencit dibiarkan kurang lebih  3  bulan  hingga  mencit  menderita kanker  yang  ditandai  dengan  munculnya benjolan.  Berikutnya  diberi  sediaan  bahan
uji  maupun  kontrol  setiap  hari  selama  10 hari dengan dosis 250 mg/kg BB. Perlakuan terhadap  mencit  merupakan  modifikasi disesuaikan dengan sampel yang digunakan, yaitu terdiri dari kontrol negatif: CMC-Na  1%  (K-);  kontrol  positif: benzo(a)pirene  (K+);  benzo(a)pirene  dan ekstrak  mengkudu  250  mg/kg  BB  (P1); Benzo(a)pirene dan nanokapsul 250 mg/kg BB (P2).
Pada hari berikutnya, mencit dikorbankan dengan larutan ether. Jaringan kanker  diukur  diameternya  dan  diambil untuk dibuat sediaan histopatologi, selanjutnya perubahan gambaran histopatologi  fibrosarkoma  mencit  jantan tersebut  dibaca  secara  deskriptif  dan dianalisis.  Jaringan  kanker  dibuat  preparat histologi  dengan  metode  parafin  dan dilakukan pengamatan histologi.

## Metode Analisis
Pada  penelitian  aktivitas  antikanker nanokapsul  mengkudu  secara  in  vivo terhadap fibrosarkoma pada mencit jantan, analisis  dilakukan  secara  klinis  dengan mengukur  diameter  sel  kanker  dan  secara definitif  berdasarkan  perubahan  gambaran sediaan  histopatologi.  Analisis  dilakukan dengan  mengukur  diameter  kanker  yang timbul  pada  tubuh  mencit  sebelum  dan sesudah  pemberian  sediaan  uji  berupa ekstrak mengkudu dan nanokapsul masing- masing  dosis  adalah  250  mg/kg  BB  yang diberikan setiap hari selama 15 hari. Mencit yang  sudah  menderita  kanker  mulai diberikan sediaan uji.
Pada  akhir  perlakuan,  diameter kanker  pada  mencit  diukur  dengan  kaliper digital dengan mengukur panjang dan lebar tumor kembali kemudian mencit dikorbankan untuk dilakukan pembedahan.
Jaringan kanker dipisahkan dengan jaringan lain dan dibuat preparat histopatologi.  Hasil  pengukuran  diameter kanker  sebelum  dan  sesudah  pemberian sediaan  uji  dikumpulkan  dan  dianalisis sehingga  diperoleh  nilai relative  tumor volume (RTV)  dan tumor  volume (TV) yang  dihitung  berdasarkan  persamaan berikut:

## RTV = Vt (volume setelah perlakuan) Vo (volume sebelum perlakuan)
TV    = 0,52 × A × B2
Keterangan:  A = diameter terpanjang B = diameter terpendek
Nilai  RTV  selanjutnya  digunakan  untuk memperoleh  nilai relative  tumor  growth ratio T/C  (%)  pada  kelompok  perlakuan dosis  60  mg/kg  BB  dan  120  mg/kg  BB sebagai  indeks  evaluasi  dari  aktivitas antikanker (Guo et al ., 2004).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil ekstraksi dari mengkudu ( Morinda  citrifolia L. )  diperoleh  larutan kental berwarna cokelat. Rendemen nanokapsul sebanyak 3% dari berat ekstrak. Hal  ini  karena  konsentrasi  penyalut  yakni kitosan  hanya  1,5%  sehingga  berpengaruh terhadap  rendemen  akhir  yang  dihasilkan. Jumlah bahan penyalut sangat berpengaruh terhadap rendemen yang dihasilkan.
Semakin  tinggi  jumlah  konsentrasi  bahan penyalut  maka  semakin  tinggi  rendemen yang  dihasilkan,  dan  sebaliknya  semakin rendah  konsentrasi  bahan  penyalut  maka semakin rendah rendemen yang dihasilkan (Lucas et al. , 2020).

## Ukuran  Partikel  Nanokapsul  Ekstrak Mengkudu
Suatu  partikel  dinyatakan  sebagai nano  dengan  ukuran  sekitar  10-1000  nm (Mohanraj, 2006). Ukuran partikel nanokapsul  ekstrak  mengkudu  dengan menggunakan  TEM  ( transmision  electron microscopy )  sebesar  27-59  nm.  Hal  ini membuktikan  bahwa  nanokapsul  ekstrak mengkudu  dalam  penelitian  ini  memiliki ukuran nano. Nanokapsul ekstrak megkudu tersaji  pada Gambar  1 .  Ukuran  partikel nanokapsul  memiliki range yang  sempit berkisar antara 27-59 nm ( Gambar 1 ). Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak mengkudu dan  bahan  penyalut  dapat  berinteraksi dengan  baik  dan  proses sizing dengan homogenizer dapat berjalan optimal. Selain itu,  penambahan tween 80  yang  berperan sebagai surfaktan juga mampu menstabilkan pecahan partikel yang terbentuk (Kim , 2006).
Gambar  1 .  Ukuran  partikel  nanokapsul  ekstrak mengkudu berkisar  antara  27-59  nm menggunakan TEM ( transmision electron  microscopy )  ditunjukkan dengan skala yang tertera
Aktivitas Antikanker
Nanokapsul
Ekstrak Mengkudu secara in Vivo Berdasarkan  pengamatan  histologi,
kanker  pada  mencit  adalah  fibrosarkoma,
ditunjukkan  dengan  penebalan  lapisan dermis, nekrosis, sel mitosis, dan polimorfisme  inti  sel.  Pada  penelitian aktivitas antikanker nanokapsul mengkudu secara in vivo terhadap fibrosarkoma pada mencit  jantan,  analisis  dilakukan  secara klinis berdasarkan ukuran kanker (benjolan yang  ditimbulkan).  Berdasarkan  aktivitas antikanker  pada  hewan  uji  (mencit  jantan strain Balb/c), setelah diberi perlakuan pada hewan uji menunjukkan bahwa nilai persen hambatan pada hewan uji terinfeksi kanker yang  diberi  perlakuan  dengan  ekstrak mengkudu (P1) sebesar 49,72% ( Tabel 1 ).
Persen  hambatan  pada  penelitian  ini  lebih tinggi dibandingkan dengan hasil penelitian Taskin et al. (2009) yaitu persen hambatan sel  tumor  pada  tikus  betina  sebesar  40%. Namun  jika  dibandingkan  dengan  persen hambatan  nanokapsul  ekstrak  mengkudu
pada  sel  kanker,  nilainya  lebih  tinggi daripada  ekstrak  mengkudu  yakni  sebesar 54,75%  (P2).  Hal ini menunjukkan bahwa ukuran  nano  partikel  dapat  meningkatkan daya absorbsi bahan aktif oleh sel kanker.
Tabel  1 .  Nilai  persen  hambatan  pada  kanker fibrosarkoma Kelompok RTV % Hambatan K- - - K+ 1,001 0% P1 0,972 49,72% P2 0,955 54,75%
Keterangan:  K- = kontrol negatif : CMC-Na 1% K+ = kontrol positif : benzo(a)pirene; P1 = benzo(a)pirene dan ekstrak mengkudu 250 mg/kg BB
P2 =  benzo(a)pirene dan nanokapsul 250 mg/kg BB RTV = relative tumor volume
Gambar 2 . Gambaran histologi jaringan kulit mencit: sel fibroblas (a) dan serat kolagen (b) pada perbesaran 400x  perlakuan  kontrol  negatif  (K-);  kontrol  positif  (K+);  benzo(a)pirene  dan  ekstrak  mengkudu 250 mg/kg BB (P1); benzo(a)pirene dan nanokapsul ekstrak mengkudu 250 mg/kg BB (P2)
Ukuran nano memiliki luas permukaan  yang  lebih  besar  sehingga proses  pelepasan  bahan  aktif  lebih  cepat dan terkendali selama pengangkutan dan di tempat  lokalisasi  (Mohanraj et  al. ,  2006).
Selain  itu,  nanopartikel  biodegradabel mampu  berpenetrasi  di  antara  kapiler maupun sel tubuh kecil sehingga terakumulasinya obat pada lokasi sasaran di dalam tubuh (Hartig et al. , 2007).
Pengamatan efek antikanker berdasarkan  irisan  anatomi  histopatologi dari  jaringan  fibrosarkoma  mencit  yang diinduksi  dengan  benzo(a)pyren  (K+) berbeda dengan jaringan kulit mencit tanpa perlakuan  (K-). Gambar  2 menunjukkan bahwa  pemberian  ekstrak  mengkudu berpengaruh terhadap penurunan jumlah sel fibroblas mencit bila dibandingkan dengan gambaran  histopatologi  dari  kelompok kontrol negatif dan kontrol positif menunjukkan terjadinya perubahan gambaran histopatologi yang cukup berbeda. Pada pengamatan preparat histopatologi  pada  positif  lebih  banyak dijumpai  sel  nekrosis.  Perlakuan  dengan ekstrak mengkudu diketahui dapat memperbaiki  serat  kolagen  pada  jaringan kulit  mencit.  Berdasarkan Gambar  2 , mencit dengan perlakuan
P2 [benzo(a)pirene  dan  nanokapsul  ekstrak mengkudu  250  mg/kg  BB]  diketahui memiliki aktivitas perbaikan serat kolagen yang  lebih  baik  dibandingkan  dengan  P1 [benzo(a)pirene dan ekstrak mengkudu 250 mg/kg  BB].  Hal  tersebut  artinya  ekstrak mengkudu dalam  bentuk  nanokapsul  lebih baik  dalam  menghambat  pertumbuhan  sel kanker.  Menurut  Chuan et  al. (2017),
komponen  aktif  bahan  alam  dalam  bentuk nanopartikel  memiliki  bioaktivitas  yang lebih  baik  karena  dalam  bentuk  nano
memiliki  stabilitas  yang  lebih  baik, meningkatnya indeks absorbsi dan bioavailabilitas.

## KESIMPULAN
Sediaan nanokapsul ekstrak
mengkudu yang dihasilkan dalam penelitian  ini  yaitu  27-59  nm . Bentuk sediaan  nanokapsul    sangat  berpotensi dalam  pengembangan  senyawa  antikanker karena  memiliki  efektivitas  antikanker yang lebih tinggi jika dibandingkan bentuk ekstrak biasa. Penggunaan dosis nanokapsul  ekstrak  mengkudu  250  mg/kg BB  (P2)  dapat menghambat  proliferasi  sel kanker fibrosarkoma sebesar 54,75%.

## DAFTAR PUSTAKA
Chuan, L., Jia, Z., Jiao, Z.Y., Fang, N.S., Jun, C., Qian, W., Ping, N.S., Yuan, D.Z., & Shu,  W.  (2017).  Biocompatible  and biodegradable nanoparticles for enhancement of anti-cancer activities of phytochemicals. China Journal of Natural  Medicine , 13 (9),  641 – 652. DOI: 10.1016/S1875-5364(15)30061-3
Citrawani,  E.  (2012).  "Antiprolifersi  Sel Kanker  dan  Karakterisasi  Nanokapsul Ekstrak  Mengkudu  ( Morinda  citrifolia L)".  Skripsi.  Fakultas  Matematika  dan
Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Ferlay,  J.,  Ervik,  M.,  Lam,  F.,  Colombet,  M., Mery, L., & Piñeros, M. (2021). Cancer statistics for the year 2020: An overview. International Journal of Cancer , pp. 1 – 12. DOI: 10.1002/ijc.33588
Hartig,  S.M.,  Greene,  R.R.,  DasGupta,  J.,  & Carlesso,  C.  (2007).  Multifunction nanoparticulate polyelectrolyte complexe. Pharmaceutical  Resources, 24 (12), 2353 – 2369. DOI: 10.1007/s11095-007-9459-1
Hiraizumi,  A.,  &  Furusawa,  E.  (1999).  An immune-modulatory polysaccharide-rich substance from the fruit juice of Morinda citrifolia (noni)  with  antitumor  activity.
Phytotherapy  Resources,  13 (5),  380 – 387. DOI: 10.1002/(sici)1099- 1573(199908/09)13:5<380::aid- ptr463>3.0.co;2-m
Kencana,  R.  (2009).  "Perlakuan  Sonikasi Terhadap  Kitosan  Viskositas  dan  Bobot Molekul". Skripsi. Matematika dan Ilmu Pengetahuan  Alam,  Institut  Pertanian Bogor, Bogor.
Kim,  D.G. (2006). Retinol-encapsulated  low molecular water-soluble chitosan nanoparticles. International  Journal  of Pharmaceutics, 319 (1-2), 130 – 138.
DOI: 10.1016/j.ijpharm.2006.03.040
Lucas,  J.,  Ralaivo,  M.,  Estevinho,  B.N.,  & Rocha, F. (2020). A new approach for the microencapsulation  of  curcumin  by  a spray  drying  method,  in  order  to  value food products. Powder Technology, 362 ,
428 – 435. DOI: 10.1016/j.powtec.2019.11.095
Mohanraj,  V.J.  (2006).  Nanoparticles  -  A
review. Tropical Journal of
Pharmaceutical  Research,  5 (1),  561 –
573. DOI: 10.4314/tjpr.v5i1.14634
Nelson,  W.  (2006). Morinda  citrifolia (Noni).
Species  Profiles  for  Pasific  Island Agroforestry. [terhubung berkala].
(www. traditional.org). [Diakses tanggal 10 September 2014].
Nugroho,  K.D.  (2020).  Studi  fenomenologi:
Pengabaian
gejala awal
kanker mengakibatkan  respon  negatif bagi klien dan keluarga. Jurnal Keperawatan  Malang , 5 (1),  46–54. https://doi.org/10.36916/jkm.v5i1.105
Pohan, H.G., & Antara, N.T. (2011). Pengaruh penambahan  madu  dan  asam  sitrat terhadap karakteristik minuman
fungsional  dari  sari  buah  mengkudu.
Forum Komunikasi IHP, 4 , 11 – 20.
Rohman,  L . (2006).  Aktivitas  antioksidan, kandungan  fenolik  total  ekstrak  etil asetat  buah  mengkudu  serta  fraksi- fraksinya. Majalah  Farmasi  Indonesia, 17 , 136 – 142.
Schreiber, D. (2007). Hidup bebas kanker . Rani Ekawati,  penerjemah.  Bandung:  Mizan
Media Utama. Terjemahan dari:
Anticancer: A New Way of Life .
Smeltzer, S.C. (1996). Buku ajar keperawatan Medikal-bedah  Brunner  &  Suddarth. Vol. 1 Edisi 8. Alih Bahasa oleh Agung Waluyo dkk 2001. Jakarta: EGC Press.
Solomon,  N.  (1998). Noni. Nature’s  amazing healer . Woodland Publ. Pleasant Grove,
Utah, USA.
Sugita,  S.  (2006).  "Pengaruh  Kadar  PEG  600 Terhadap  Mutu  Fisik  Tablet  Ekstrak Mengkudu dalam Dispersi Padat Ekstrak Mengkudu PEG 600 yang Dibuat secara
Cetak  Langsung".  Skripsi.  Fakultas Farmasi, Universitas Airlangga, Surabaya.
Sung,  H.,  Ferlay,  J.,  Siegel,  R.L.,  Lavarsanne,
M.,  Soerjomataram,  I.,  Jemal,  A.,  &
Bray, F. (2021). Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN Estimates of incidence  and  mortality  worldwide  for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J. Clin ., 71 , 209–249. DOI:
10.3322/caac.21660
Taskin, E.I., Dar, K.A., Kapucu, A., Osanc, E.,
Dogruman,  H.,  Eraltan,  H.,  &  Ulukaya, E. (2009).  Apoptosis-inducing  effect  of Morinda  citrifolia and  doxorubicin  on the  ehrlich  ascites  tumor  in  BALB-c mice. Cell Biochemical Function, 27 (8), 542 – 546. DOI: 10.1002/cbf.1604
Wang, M.Y., Brest, B.J., Jensen, C.J., Nowicki,
D.,  Su,  C.,  Palu,  A.K.,  &  Andersen,  G. (2002). Morinda  citrifolia (noni):  A
Jurnal Agroteknologi Vol. 16 No. 02 (2022)
literature review and recent advances in noni  research. Acta  Pharmacology ,
23 (12),
1.127 – 1.141.
https://doi.org/10.1016/j.arabjc.2015.06. 018
Waha,  M.G.  (2001). Sehat  dengan  mengkudu .
Jakarta: MSF Group.