## ANALISA IN SILICO KUNYIT (CURCUMA LONGA) SEBAGAI INHIBITOR MURINE DOUBLE MINUTE 2 PROTEIN UNTUK TERAPI GLIOBLASTOMA MULTIFORME
Benny Iswanto Pantoro 1 , Nancy Margarita Rehatta 2 , Siti Khaerunnisa 3 , Anna Surgean Veterini 2 , Yuani Setiawati 4
1 Dokter Muda, Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga Surabaya,
2 Departemen Anestesiologi dan Reanimasi, RSUD Dr. Soetomo – Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga Surabaya,
3 Departemen Biokimia Kedokteran Fakultas Kedokteran
Universitas Airlangga Surabaya.
4 Departemen Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga Surabaya
Corresponding author : st.khaerunnisa@fk.unair.ac.id , Telp 081233118194

## ABSTRACT
Brain tumor consists of tumor which grows primarily from cells in the brain (primary brain tumor) or systemic tumor which metastasized into the brain (secondary brain tumor). From all types of primary brain tumor, Glioblastoma Multiforme is the most common and the  most  malignant  tumor.  In  85%  of  Glioblastoma  Multiforme  cases  are  found  a molecular alteration of the tumor suppresor gene p53 pathway, which promotes current studies to focus on this pathway. One of  the pathway  that  can be used as therapeutic model is through inhibiting the murine double minute 2 protein (MDM2), which in itself is a  p53  inhibitor.  Turmeric  (curcuma  longa)  is  one  of  the  traditional  plants  which  is commonly  used  as  herbs  and  its  extracts  has  been  studied  to  have  an  anti-cancer properties.
This  study  is  an  in  silico  study  which  evaluate  the  potential  efficacy  of  turmeric extract as a murine double minute 2 protein inhibitor using AutoDock 4.2 based on the Lamarckian  genetic  algorithm  principle.  Docking  result  shows  binding  energy  ranging from -4.81 kcal/mol to -2.34 kcal/mol, with curcumenol having the lowest binding energy and curcumin having the highest binding energy. This study may be used as a base in further  study  (consists  of  in  vivo  and  in  vitro)  of  turmeric  extract  and  its  effect  as  the therapeutic regiments for Glioblastoma Multiforme.

## Keywords: Glioblastoma Multiforme, curcuma longa, MDM2, AutoDock 4.2

## ABSTRAK
Tumor otak meliputi berbagai kanker yang tumbuh dari sel otak (tumor otak primer) ataupun  berasal  dari  tumor  sistemik  yang  mengalami  metastasis  ke  otak  (tumor  otak sekunder).  Dari  seluruh  tipe  tumor  otak  primer,  Glioblastoma  Multiforme  merupakan tumor  otak  yang  paling  sering  dijumpai  dan merupakan  salah  satu  yang  paling  ganas. Pada 85% kasus Glioblastoma Multiforme, umumnya ditemukan kaitan dengan adanya gangguan  tingkat  molekuler  pada  jalur  tumor  suppresor  gene  p53,  sehingga  semakin banyak terapi yang dikembangkan dengan berfokus pada jalur ini. Salah satu jalur yang dapat dipakai sebagai model terapi adalah menginhibisi protein murine double minute 2 yang merupakan inhibitor dari p53.  Kunyit ( curcuma longa ) adalah salah satu tanaman
tradisional yang sudah sangat sering digunakan dalam dunia medis dan berbagai ekstrak nya telah diteliti mempunyai efek anti-kanker.
Penelitian ini adalah sebuah studi in silico yang meneliti potensi berbagai bahan kimia  aktif  dari  kunyit  sebagai  inhibitor  pada  protein  murine  double  minute  2 menggunakan  AutoDock  4.2  dan  berdasarkan  prinsip  algoritma  genetik  Lamarckian. Hasil docking menunjukkan binding energy berkisar dari rentang -4.81 kcal/mol sampai - 2.34 kcal/mol, dengan senyawa curcumenol mempunyai binding energy yang paling kecil dan curcumin mempunyai binding energy yang paling besar. Studi ini dapat digunakan sebagai dasar untuk melakukan penelitian lebih lanjut ( in vivo dan in vitro ) terkait bahan kimia aktif kunyit dan efek nya sebagai terapi Glioblastoma Multiforme.
Kata kunci: Glioblastoma Multiforme, curcuma longa, MDM2, AutoDock 4.2

## PENDAHULUAN
Tumor otak mengacu pada berbagai macam tipe kanker yang tumbuh dari sel-sel otak (tumor otak primer) ataupun berasal dari tumor sistemik yang mengalami metastasis ke otak (tumor otak sekunder). Tumor otak sendiri memiliki prevalensi sebesar 2% dari seluruh kanker, dan memiliki angka insidensi sebesar 20 dari 100.000 orang (Butowski, 2015).  Tumor  otak  primer  dapat  dibedakan  menjadi  tumor  Glioma  dan  Non-Glioma, dengan tumor Glioma adalah yang banyak dari seluruh jenis tumor otak primer  (Brust, 2012).  Glioblastoma  Multiforme  (GBM)  adalah  subtipe  dari  Glioma  yang  paling  sering dijumpai,  dan  juga  merupakan  subtipe  tumor  otak  yang  paling  ganas.  Berdasarkan klasifikasi  WHO,  GBM  diklasifikasikan  sebagai  tumor  astrositik  grade  IV,  yang  dapat tumbuh  secara de  novo (GBM  primer)  atau  melalui  progresifitas  malignansi  dari  Low-
Grade Astrocytoma (GBM sekunder) (Forte et al ., 2019).
Regimen terapi untuk GBM sampai saat ini masih meliputi reseksi  pembedahan diikuti dengan radioterapi beserta kemoterapi dengan temozolomide. Namun, terapi ini kurang efektif karena hampir semua pasien mengalami rekurensi dan prognosis nya tetap buruk,  oleh  karena  itu  perlu  dikembangkan  terapi  yang  terbaru  (Forte et  al .,  2019).
Inaktivasi  dari  protein tumor  suppresor  gene p53  adalah  salah  satu  jalur  yang  sering terjadi  pada  GBM.  Berdasarkan  studi  yang  dilakukan,  diketahui  bahwa  protein  p53 mengalami  deregulasi  pada  hampir  85%  kasus  GBM  (Zhang et  al .,  2018).  Deregulasi pada protein p53 dapat berupa mutasi pada gene TP53 sendiri atau defek pada jalur lain seperti amplikasi pada protein murine double minute 2 (MDM2) yang merupakan inhibitor dari  p53  (Forte et  al .,  2019).  P53  mempunyai  peranan  utama  untuk  mempertahankan homeostasis  seluler,  p53  dapat  mengintegrasikan  sinyal  dari  stresor  dan  menginduksi penghentian siklus sel dan apoptosis untuk mencegah sel yang terkena untuk menyebar.
Oleh karena itu, mengembalikan fungsi dari p53 dapat menjadi sebuah alternatif terapi yang menjanjikan pada kasus GBM (Zhang et al ., 2018). Salah satu cara untuk ini adalah dengan menginhibisi MDM2 yang merupakan inhibitor dari p53.
Kunyit  ( Curcuma  longa )  adalah  sebuah  tanaman  tradisional  yang  sudah  sering digunakan untuk pengobatan medis.  Berdasarkan data, kunyit bubuk sudah digunakan dalam  berbagai  obat,  kosmetik,  dan  pewarna  pakaian  selama  lebih  dari  2000  tahun (Klinger  and  Mittal,  2016). Salah  satu  bahan  kimia  aktif  yang  terkandung  dalam  kunyit yang  sering  digunakan  adalah  curcumin.  Curcumin  telah  diteliti  untuk  mempunyai berbagai  khasiat  medis,  seperti  pada  penyakit  infeksi,  penyakit  hepar,  penyakit  kulit, perawatan luka, mengurangi keradangan, penyakit degeneratif, penyakit jantung, serta kanker  (Klinger  and  Mittal,  2016).  Khasiat  anti-kanker  dari  curcumin  telah  diteliti  di berbagai  kasus  kanker,  seperti  kanker  kolon,  kanker  payudara,  metastasis  paru,  dan tumor  otak  (Wang et  al .,  2012).  Selain  curcumin,  kunyit  juga  masih  memiliki  banyak senyawa  yang  diteliti  mempunyai  berbagai  aktivitas  biologis  yang  masih  relatif  lebih jarang diteliti (Kocaadam and Sanlier, 2015). Oleh karena itu,  studi ini bertujuan untuk
menganalisa potensi berbagai bahan kimia aktif yang terkandung dalam kunyit beserta peranannya sebagai inhibitor protein MDM2 untuk terapi pada GBM secara in silico .

## METODE

## Konfigurasi sistem
Studi  ini  dilakukan  menggunakan  laptop  dengan  Windows  10  Pro  OS  64bit.
Spesifikasi hardware yang digunakan adalah processor Intel Core i5-5200 CPU dengan RAM 4GB. Software utama yang digunakan adalah AutoDock 4.2 (Hari, 2019).

## Pengambilan struktur makromolekul
Struktur  protein  MDM2-PDB  ID:  4XXB  diambil  dari  Protein  Data  Bank  (PDB)
(Huang et al ., 2015). PDB adalah sebuah database yang mengandung berbagai struktur eksperimental  dari  protein  dan  asam  nukleat.  Struktur  dari  MDM2  adalah  heterodimer (rantai  A:  ribosomal  protein  L11  dan  rantai  B:  protein  MDM2).  Hanya  rantai  B  yang digunakan  untuk docking .  Rantai  lain  beserta  dengan  molekul  air  dihilangkan menggunakan  AutoDock  4.2.  AutoDock  4.2 adalah  sebuah  software  gratis  yang  dapat digunakan mempersiapkan dan melakukan docking (Hari, 2019).

## Pengambilan struktur ligan
Ligan  yang  digunakan  adalah  bahan  kimia  aktif  dari  kunyit  yang  dicari menggunakan Dr. Duke’s Phytochemical and Ethnobotanical Databases
(https://phytochem.nal.usda.gov/phytochem/search).  Diambil  5  bahan  kimia  aktif:  ar- turmerone  (PubChem  CID:  160512),  curcumin  (PubChem  CID:  969516),  zingiberene (PubChem CID: 92776), curcumenol (PubChem CID: 167812), dan
bisdemethoxycurcumin (PubChem CID: 5315472) yang mana bahan tersebut terkandung dalam  jumlah  besar  pada  kunyit.  Struktur  molekuler  dari  ligan  diambil  dari  Pubchem.
Pubchem adalah sebuah database yang mengandung berbagai informasi terkait suatu senyawa  kimia  (Kim et  al .,  2015).  Struktur  yang  diambil  adalah  konformasi  3D  dalam format SDF dan diubah menjadi format MOL2 menggunakan Avogadro. Avogadro adalah sebuah software gratis yang dapat digunakan untuk visualisasi dan penyuntingan sebuah molekul (Sulfahri et al ., 2019).

## Pemeriksaan obat / Drug Scanning
Semua ligan yang digunakan diuji potensi obat nya berdasarkan Lipinski’s rule of five menggunakan SwissADME (Daina et al ., 2017). SwissADME adalah situs yang dapat digunakan  untuk  menilai  farmakokinetik  dan  keserupaan  dengan  obat  suatu  senyawa.
Aturan  Lipinski  meninjau  pada  sifat  molekuler  seperti  berat  molekul,  logP,  jumlah akseptor  ikatan  hidrogen,  dan  jumlah  donor ikatan  hidrogen.  Ligan  yang  menunjukkan pelanggaran terhadap 2 atau lebih aturan Lipinski tidak digunakan pada studi ini (Lipinski et al ., 2001).

## Penentuan active site
Asam  amino  yang  terlibat  dalam  pembentukan active  site ditentukan menggunakan  Computed  Atlas  for  Surface  Topography  of  Proteins  (CASTp).  CASTp adalah situs yang dapat digunakan untuk menentukan topologi dan posisi active site pada suatu  protein  (Dundas et  al .,  2006).  Penentuan active  site ini  digunakan  untuk menentukan posisi grid box sebelum docking .

## Docking dan visualisasi
Docking dari ligan ke protein pada studi ini menggunakan software AutoDock 4.2.
Molekul  protein  yang  digunakan  dipreparasi  terlebih  dahulu  dengan  penambahan hidrogen  kemudian  dilakukan  penggabungan  hidrogen  non-polar.  Molekul  ligan
dipreparasi  dengan  penambahan  hidrogen  polar.  Pada  AutoDock  4.2, target  site disiapkan  dengan  menggunakan  bantuan grid  box .  Dimensi  X,  Y,  dan  Z  dari grid  box diubah menjadi 20*20*20, sedangkan pusat X, Y, dan Z disesuaikan berdasarkan active site dari  protein  (Adejoro et  al .,  2016).  Luaran  dari  konformasi  ligan  dianalisa menggunakan algoritma genetik Lamarckian (Morris et al ., 1998). Hasil ∆G yang paling negatif  menunjukkan  ikatan  yang  kuat  antara  ligan  dan  protein  (Afriza et  al .,  2018).
Visualisasi 3D dari struktur yang telah di docking dilakukan menggunakan PyMol. PyMol adalah sebuah software yang dapat digunakan untuk menggambarkan grafik molekuler (Hari, 2019).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Studi  ini  menggunakan  protein  MDM2,  sebuah  protein  yang  berperan  dalam menginhibisi  protein  p53  yang  merupakan  tumor  suppresor  gene,  yang  strukturnya diambil dari PDB. Protein tersebut mempunyai struktur homodimer (rantai A dan B), yang mana hanya rantai B yang digunakan pada studi ini (Gambar 1). Ligan yang akan diuji cobakan  berasal  dari  bahan  kimia  aktif  dari  kunyit  yang  dicari  lewat  Dr.  Duke  dan strukturnya diambil dari pubchem (Tabel 1).
Gambar 1 Struktur Rantai B dari MDM2 (PDB-ID: 4XXB) dilihat menggunakan PyMol (sumber: data hasil penelitian)
Tabel 1 Struktur ligan dari bahan kimia aktif kunyit (sumber: data hasil penelitian) No Senyawa Rumus molekul Struktur molekul PubChem CID 1 Ar-turmerone C 15 H 20 O 160512 2 Bisdemethoxycurcumin C 19 H 16 O 4 5315472
3 Curcumenol
C 15 H 22 O 2 167812 4 Curcumin C 21 H 20 O 6 969516
5 Zingiberene
C 15 H 24 92776
Sebelum dilakukan studi lebih lanjut, seluruh ligan yang akan digunakan dievaluasi berdasarkan Lipinski’s  rule  of  five terlebih  dahulu  untuk  menentukan  apakah  ligan tersebut dapat digunakan sebagai obat atau tidak. Parameter yang dievaluasi antara lain adalah  berat  molekul,  logP,  jumlah  akseptor  ikatan  hidrogen,  dan  jumlah  donor  ikatan hidrogen.  Dari  kelima  ligan  yang  digunakan,  4  senyawa  tidak  terdapat  pelanggaran terhadap aturan Lipinski, hanya zingiberene, yang terdapat pelanggaran pada 1 aturan, namun masih tetap dapat diikutsertakan dalam proses studi docking ini (Tabel 2).
Tabel 2 Lipinski’s rule of five dari ligan dianalisa menggunakan swissADME
(sumber: data hasil penelitian) No Senyawa Berat molekul (<500 Da) LogP (<4.15) Jumlah donor ikatan hidrogen (<5) Jumlah akseptor ikatan hidrogen (<10) Jumlah pelanggaran 1 Ar-turmerone 216.32 3.84 0 1 0 2 Bisdemethoxycurcumin 308.33 2.83 2 4 0 3 Curcumenol 234.33 2.91 1 2 0 4 Curcumin 368.38 3.03 2 6 0 5 Zingiberene 204.35 4.47 0 0 1
Selanjutnya  adalah  penentuan active  site dari  protein  MDM2  yang  dilakukan dengan bantuan website CASTp (Gambar 2). Dari CASTp, asam amino yang menempati posisi active site dari MDM2 dicatat dan akan digunakan sebagai acuan penempatan grid box pada AutoDock 4.2 (Tabel 3).
Gambar 2 Asam amino yang terlibat pada active site dari protein MDM2, warna biru menandakan active site
(sumber: data hasil penelitian) Tabel 3 Daftar asam amino pada active site protein MDM2 (sumber: data hasil penelitian) Asam amino Posisi Glutamat 293 Aspartat 294 Isoleusin 297 Tyrosin 302 Prolin 313 Prolin 314 Leusin 315 Prolin 316 Histidin 318 Asparagin 320 Tyrptopan 323
Berdasarkan hasil docking antara ligan dan protein menggunakan AutoDock 4.2, didapatkan  binding  energy  berkisar  dari  rentang  -4.81kcal/mol  sampai  -2.34kcal/mol.
Curcumenol mempunyai binding energy paling kecil yaitu sebesar -4.81 kcal/mol dengan konstanta inhibitorik sebesar 298.81 µM (Tabel 4). Curcumenol membentuk ikatan van der waals dengan ILE297, PRO313, PRO314, dan LEU315 (Gambar 3A). Hasil 3D ikatan antara curcumenol dengan MDM2 ditampilkan pada Gambar 4A. Curcumenol telah diteliti mempunyai berbagai efek medis seperti neuroprotektif, anti-inflamasi, anti-kanker, dan hepatoprotektif melalui berbagai jalur lain seperti inhibisi pada NF- κB (Lo et al ., 2015).
Ar-turmerone  mempunyai  binding  energy  sebesar  -3.70  kcal/mol  dengan  konstanta inhibitorik  sebesar  1.95  mM  (Tabel  4).  Ar-turmerone  membentuk  ikatan  van  der  waals dengan ILE297, TYR302, PRO314, dan LEU315 (Gambar 3B). Hasil 3D ikatan antara ar- turmerone  dengan  MDM2  ditampilkan  pada  Gambar  4B.  Ar-turmerone  telah  diteliti mempunyai efek  neuroprotektif dan  anti-inflamasi pada  berbagai  penyakit neurodegeneratif  (Park et  al .,  2012).  Ar-turmerone  juga  diteliti  dapat  menginduksi proliferasi neural stem cell sehingga bagus untuk regenerasi pada penyakit neurologis (Hucklenbroich et  al .,  2014).  Pada  studi  ini,  zingiberene  dan  bisdemethoxycurcumin memiliki binding  energy yang  hampir  sama  yaitu  sebesar  -3.40  kcal/mol  dan  -3.39 kcal/mol secara berurutan. Zingiberene memiliki konstanta inhibitorik sebesar 3.24 mM, sedangkan bisdemethoxycurcumin memiliki konstanta inhibitorik sebesar 3.28 mM (Tabel 4).  Zingiberene  membentuk  ikatan  van  der  waals  dengan  GLU293,  ASP294,  ILE297, PRO314,  dan  LEU315  (Gambar  3C),  sedangkan  bisdemethoxycurcumin  membentuk ikatan van der waals dengan PRO313, PRO314, LEU315, ASN320 (Gambar 3D). Hasil 3D ikatan antara zingibere dan bisdemethoxycurcumin dengan MDM2 ditampilkan pada
Gambar  4C  dan  Gambar  4D  secara  berurutan.  Zingiberene  telah  diteliti  menunjukkan potensi  sebagai  bahan  anti-kanker  karena dapat  menekan  proliferasi  sel  (Togar et  al .,
2014). Bisdemethoxycurumin telah diteliti mempunyai khasiat sebagai anti-oksidatif, anti- inflamasi,  dan  anti-kanker  melalui  inhibisi  pada  NF- κB  (Guo et  al .,  2008).  Curcumin menunjukkan binding  energy yang  paling  besar  yaitu  -2.34  kcal/mol  dan  mempunyai konstanta inhibitorik sebesar 19.26 mM (Tabel 4). Curcumin membentuk ikatan van der waals dengan ASP294, ILE297, LEU315, PRO316, SER317, dan TRP329 (Gambar 3E).
Hasil 3D ikatan antara curcumin dengan MDM2 ditampilkan pada Gambar 4E. Curcumin merupakan  bahan  kimia  aktif  dari  kunyit  yang  paling  banyak  diteliti  dan  telah  diteliti mempunyai  banyak  khasiat  pada  berbagai  penyakit,  seperti  penyakit  infeksi,  penyakit hepar,  penyakit  kulit,  perawatan  luka,  penyakti  jantung,  diabetes,  penyakit  Alzheimer, penyakit Parkinson, dan berbagai macam kanker termasuk tumor otak (Klinger and Mittal, 2016; Wang et al ., 2012).
Tabel 4 Molecular docking ligan dengan protein MDM2 (sumber: data hasil penelitian) No Senyawa Binding energy (kcal/mol) Konstanta inhibitorik Ikatan Van Der Waals Cluster RMSD 1 Ar-turmerone -3.70 1.95 mM ILE297, TYR302, PRO314, LEU315 0.0 2 Bisdemethoxycurcumin -3.39 3.28 mM PRO313, PRO314, LEU315, ASN320 0.0 3 Curcumenol -4.81 298.81 µM ILE297, PRO313, PRO314, LEU315 0.0 4 Curcumin -2.34 19.26 mM ASP294, ILE297, LEU315, PRO316, SER317, TRP329 0.0 5 Zingiberene -3.40 3.24mM GLU293, ASP294, ILE297, PRO314, LEU315 0.0
Gambar 3 Ikatan van der waals MDM2 dengan (A) Curcumenol, (B) Ar-turmerone, (C) Zingiberene, (D) Bisdemethoxycurcumin, (E) Curcumin (sumber: data hasil penelitian)
Gambar 4 Struktur 3D ikatan MDM2 dengan (A) Curcumenol, (B) Ar-turmerone, (C) Zingiberene, (D) Bisdemethoxycurcumin, (E) Curcumin (sumber: data hasil penelitian)

## KESIMPULAN DAN SARAN
Sampai saat ini, regimen terapi yang ada untuk GBM dinilai kurang memuaskan, padahal GBM merupakan tumor otak yang paling banyak dan paling  mematikan. Oleh karena  itu,  diperlukan  pengembangan  terapi  yang  baru,  salah  1  alternatif  terapi  yang berpotensial  adalah  melalui  inhibisi  pada  protein  MDM2  yang  merupakan  inhibitor dari tumor  suppresor  gene p53.  Kunyit  merupakan  tanaman  tradisional  yang  mengandung banyak bahan kimia aktif yang mempunyai beragam khasiat medis. Pada studi in silico ini  menunjukkan  bahwa  berbagai  bahan  kimia  aktif  yang  terdapat  dalam  kunyit mempunyai  potensi  yang  bagus  sebagai  inhibitor  MDM2.  Sehingga  diharapkan  untuk kedepannya lebih banyak dilakukan studi in vivo dan in  vitro terhadap berbagai bahan kimia  aktif  yang  terkandung  pada  kunyit  sebagai  terobosan  terapi  yang  terbaru  pada kasus GBM.

## DAFTAR PUSTAKA
Adejoro,  I., Waheed,  S.  and  Adeboye,  O.  (2016).  Molecular  Docking  Studies  of Lonchocarpus  cyanescens  Triterpenoids  as  Inhibitors  for  Malaria. Journal  of  Physical Chemistry & Biophysics , 6(2).
Afriza,  D.,  Suriyah,  W.  and  Ichwan,  S.  (2018).  In  silicoanalysis  of  molecular interactions  between  the  anti-apoptotic  protein  survivin  and  dentatin,  nordentatin,  and quercetin. Journal of Physics: Conference Series , 1073, p.032001. Brust, J., 2012. Current Diagnosis & Treatment Neurology. 2nd ed.
Butowski, N. (2015). Epidemiology and Diagnosis of Brain Tumors. CONTINUUM: Lifelong Learning in Neurology , 21, pp.301-313.
Daina,  A.,  Michielin,  O.  and  Zoete,  V.  (2017).  SwissADME:  a  free  web  tool  to evaluate pharmacokinetics, drug-likeness and medicinal chemistry friendliness of small molecules. Scientific Reports , 7(1).
Dundas, J., Ouyang, Z., Tseng, J., Binkowski, A., Turpaz, Y. and Liang, J. (2006). CASTp:  computed  atlas  of  surface  topography  of  proteins  with  structural  and topographical  mapping  of  functionally  annotated  residues. Nucleic  Acids  Research , 34(Web Server), pp.W116-W118.
Forte, I., Indovina, P., Iannuzzi, C., Cirillo, D., Di Marzo, D., Barone, D., Capone, F., Pentimalli, F. and Giordano, A. (2019). Targeted therapy based on p53 reactivation
reduces  both  glioblastoma  cell  growth  and  resistance  to  temozolomide. International Journal of Oncology .
Guo, L., Cai, X., Lee, J., Kang, S., Shin, E., Zhou, H., Jung, J. and Kim, Y. (2008). Comparison  of  suppressive  effects  of  demethoxycurcumin  and  bisdemethoxycurcumin on  expressions  of  inflammatory  mediators  In  Vitro  and  In  Vivo. Archives  of  Pharmacal Research , 31(4), pp.490-496.
Hari,  S.  (2019).  In  silico  molecular  docking  and  ADME/T  analysis  of  plant compounds  against  IL17A  and  IL18  targets  in  gouty  arthritis. Journal  of  Applied Pharmaceutical Science , 9(7), pp.18-26.
Huang, Y., Rose, P. and Hsu, C. (2015). Citing a Data Repository: A Case Study of the Protein Data Bank. PLOS ONE , 10(8), p.e0136631.
Hucklenbroich, J., Klein, R., Neumaier, B., Graf, R., Fink, G., Schroeter, M. and Rueger, M. (2014). Aromatic-turmerone induces neural stem cell proliferation in vitro and in vivo. Stem Cell Research & Therapy , 5(4), p.100.
Kim, S., Thiessen, P., Bolton, E., Chen, J., Fu, G., Gindulyte, A., Han, L., He, J., He,  S.,  Shoemaker,  B.,  Wang,  J.,  Yu,  B.,  Zhang,  J.  and  Bryant,  S.  (2015).  PubChem Substance  and  Compound  databases. Nucleic  Acids  Research ,  44(D1),  pp.D1202- D1213.
Klinger,  N.  and  Mittal,  S.  (2016).  Therapeutic  Potential  of  Curcumin  for  the Treatment of Brain Tumors. Oxidative Medicine and Cellular Longevity , 2016, pp.1-14. Kocaadam , B. and Şanlier, N. (2015). Curcumin, an active component of turmeric (Curcuma longa), and its effects on health. Critical Reviews in Food Science and Nutrition , 57(13), pp.2889-2895.
Lipinski, C., Lombardo, F., Dominy, B. and Feeney, P. (2001). Experimental and computational approaches to estimate solubility and permeability in drug discovery and development  settings  1PII  of  original  article:  S0169-409X(96)00423-1.  The  article  was originally  published  in  Advanced  Drug  Delivery  Reviews  23  (1997)  3 –25.  1. Advanced Drug Delivery Reviews , 46(1-3), pp.3-26.
Lo,  J., Kamarudin, M., Hamdi, O.,  Awang,  K.  and Kadir,  H. (2015). Curcumenol isolated  from  Curcuma  zedoaria  suppresses  Akt-mediated  NF- κB  activation  and  p38 MAPK signaling pathway in LPS-stimulated BV-2 microglial cells. Food & Function , 6(11), pp.3550-3559.
Morris, G., Goodsell, D., Halliday, R., Huey, R., Hart, W., Belew, R. and Olson, A. (1998).  Automated  docking  using  a  Lamarckian  genetic  algorithm  and  an  empirical binding free energy function. Journal of Computational Chemistry , 19(14), pp.1639-1662. Park, S., Jin, M., Kim, Y., Kim, Y. and Lee, S. (2012). Anti-inflammatory effects of aromatic-turmerone through blocking of NF- κB, JNK, and p38 MAPK signaling pathways in amyloid β-stimulated microglia. International Immunopharmacology , 14(1), pp.13-20. Sulfahri,  Arif,  A.,  Iskandar,  I.  and  Wardhani,  R.  (2019).  In  silico  approach  of antidiabetic  compounds  from  Caesalpinia  crista  seed  through  docking  analysis  and ADMET predictions. Journal of Physics: Conference Series , 1341, p.022001.
Togar,  B.,  Turkez,  H.,  Tatar,  A.,  Hacimuftuoglu,  A.  and  Geyikoglu,  F.  (2014). Cytotoxicity  and  genotoxicity  of  zingiberene  on  different  neuron  cell  lines  in vitro. Cytotechnology , 67(6), pp.939-946.
Wang,  H., Oo Khor, T., Shu, L., Su, Z.,  Fuentes,  F., Lee, J. and Tony Kong,  A. (2012).  Plants  vs.  Cancer:  A  Review  on  Natural  Phytochemicals  in  Preventing  and
Treating  Cancers  and  Their  Druggability. Anti-Cancer  Agents  in  Medicinal  Chemistry , 12(10), pp.1281-1305.
Zhang, Y., Dube, C., Gibert, M., Cruickshanks, N., Wang, B., Coughlan, M., Yang, Y., Setiady, I., Deveau, C., Saoud, K., Grello, C., Oxford, M., Yuan, F. and Abounader, R. (2018). The p53 Pathway in Glioblastoma. Cancers , 10(9), p.297.