Peningkatan Respon Imun Udang Vaname (Litopenaeus vannamei)… Linuwih Aluh Prastiti  et al. Jurnal Ilmu-ilmu Perikanan dan Budidaya Perairan, Vol. 18 (1). Juni  2023: 14-24

## PENINGKATAN RESPON IMUN UDANG VANAME (Litopenaeus vannamei) MELALUI KOMBINASI VITAMIN D3, MINERAL Ca DAN Mg PADA PAKAN
Enhancement of Vaname Shrimp (Litopenaeus vannamei) Immune Responses Through the Combination of Vitamin D3, Mineral Ca and Mg in Feed
Linuwih Aluh Prastiti 1 , Aldi Huda Verdian 1 *, Adni Oktaviana 1 , Nurul Fatimah 2 , Kurnia Fathurohman 2 , Qorie Astria 2 , Arif Faisal Siburian 3
1 Program Studi Budidaya Perikanan, Politeknik Negeri Lampung, Indonesia
2 Program Studi Teknologi Pembenihan Ikan, Politeknik Negeri Lampung, Indonesia
3 Behn Meyer Chemicals, Indonesia
* Corresponding author : aldihudaverdian@polinela.ac.id

## ABSTRAK
Udang  vaname  merupakan  biota  perikanan  yang  tidak  memiliki  kekebalan  tubuh spesifik.  Sehingga  dalam  teknis  pembudidayaan  udang  lebih  menerapkan  prinsip pencegahan terhadap serangan penyakit. Penelitian ini bertujuan untuk melihat peningkatan respon  imun  udang  vaname  melalui  penghitungan  jumlah  total  hemosit  dan  pengamatan perbedaan  jenis  hemosit  yang  dipelihara  selama  60  hari.  Pengujian  dilakukan  dengan perlakuan  kombinasi  vitamin  D3,  mineral  Ca  dan  Mg  (Hyperol)  pada  pakan  antara  lain kontrol (pemeliharaan udang tanpa suplementasi Hyperol) dan pemeliharaan udang dengan penambahan suplementasi Hyperol pada pakan sebanyak 0,25 mL/kg pakan (A); 0,5 mL/kg pakan (B); 0,75 mL/kg pakan (C); dan 1 mL/kg pakan (D). Hasil terbaik yang didapatkan adalah perlakuan dengan penambahan suplementasi Hyperol 1 mL/kg pakan dengan jumlah total hemosit 65,41±1,90 x 10 6 sel/mL. Hal ini menunjukkan penggunaan Hyperol 1 mL/kg pakan dapat meningkatkan respon imun pada udang vaname.
Kata Kunci: udang vaname, mineral, respon imun

## ABSTRACT
Vannamei shrimp is fisheries commodity who doesn’t have specific immunity in their body, so principle of prevent against disease was the most important thing to be applied in shrimp  farming techniques.  The  aims  of  this  study  is  to  see  an  increase  in  the  immune response of vannamei shrimp through counting the total number of hemocytes and observing the  different  types  of  hemocytes  maintained  for  60  days.  Tests  were  carried  out  with  a combination treatment of vitamin D3, minerals Ca and Mg (Hyperol) on the feed, including controls  (raising  shrimp  without  Hyperol  supplementation)  and  rearing  shrimp  with  the addition of Hyperol supplementation to feed as much as 0.25 mL/kg feed (A); 0.5 mL/kg feed (B); 0.75 mL/kg feed (C); and 1 mL/kg feed (D). The best results obtained were treatment with the addition of 1 mL/kg Hyperol supplementation with a total hemocyte count of 65.41 ± 1.90 x 106 cells/mL. This shows that the use of Hyperol 1 mL/kg of feed can increase the immune response in vannamei shrimp.
Keywords: vannamei shrimp, mineral, immune response
PENDAHULUAN Udang vaname
merupakan komoditas  unggulan  perikanan  budidaya yang produktivitas dan permintaan pasarnya cenderung terus meningkat baik skala nasional maupun internasional. Data statistik produksi udang vaname menurut Kementerian  Kelautan  dan  Perikanan (KKP)  tahun  2020  adalah  sebanyak 378.475,72 ton dan menargetkan produksi pada tahun 2024 sebesar 2 juta ton/tahun dengan  program  intensifikasi  budidaya udang (KKP, 2021).
Intensifikasi budidaya adalah menerapkan  sistem  budidaya  dengan padat  tebar  tinggi  dan  input  pakan  yang optimal  untuk  meningkatkan  produksi. Namun  dengan  kegiatan  budidaya  yang semakin  intensif  akan  menurunkan kapasitas  daya  tampung  lingkungan seperti degradasi lahan dan meningkatnya potensi serangan patogen.
Udang  vaname  merupakan  biota perikanan yang tidak memiliki kekebalan tubuh  spesifik.  Sehingga  dalam  teknis pembudidayaan  udang  lebih  menerapkan prinsip  pencegahan  terhadap  serangan penyakit. Salah satunya dengan meningkatkan  status  kesehatan  udang vaname  seperti  dengan  menambahkan prebiotik  (Prastiti et  al., 2018)  dan probiotik  (dapus)  ataupun  penambahan bahan  tertentu  dalam  pakan  seperti vitamin  dan  mineral  (Madhana et  al., 2021)
Hyperol  (dari Intracare  B.V,  The Netherlands )  adalah  campuran  kalsium, magnesium, dan vitamin D3 yang mudah diabsorbsi.  Hyperol  memiliki  pH  netral sehingga  dapat  dipastikan  vitamin  D3 tetap  stabil.  Salah  satu  peran  paling penting  dari  vitamin  D3  adalah  untuk menjaga  keseimbangan  kalsium  dengan mempromosikan  absorbsi  kalsium  dalam usus.  Kalsium  dan  vitamin  D3  dalam Hyperol  memiliki  peran  sinergis  untuk memastikan  keseimbangan  kalsium  yang optimal dalam tubuh udang vaname.
Pertumbuhan udang vaname terdiri dari  serangkaian  proses  moulting  secara periodik,  khususnya  pada  tahap  post moult  untuk  proses  pengerasan  kulit melalui  pengendapan  kalsium  pada  kulit udang. Ketersediaan kalsium yang optimal  dalam  tubuh  udang  harus  selalu terpenuhi,  jika  keberadaan  kalsium  tidak mencukupi maka proses pengerasan kulit udang  yang  baru  akan  berjalan  lambat yang  mana  akan  berpengaruh  terhadap pertumbuhan  udang  atau  bahkan  udang yang kulit barunya belum sempurna akan mudah diserang oleh udang lain. Kalsium juga  membantu  mekanisme  absorbsi vitamin B12 dari saluran pencernaan dan absorbsi  vitamin  pada  membran  sel. Kalsium membantu menyalurkan rangsangan-rangsangan  syaraf  dari  satu sel  ke  sel  lainnya  dengan  cara  mengatur pembentukan asetilkolin, salah satu jenis neurotransmitter  (zat  kimia  penghantar rangsangan syaraf) (Piliang, 2000)
Magnesium adalah mineral penting yang  dibutuhkan  oleh  krustasea  untuk pertumbuhan  dan  perkembangan  normal (Davis  &  Lawrence, 1997),  serta berfungsi sebagai kofaktor dalam banyak reaksi  enzimatik  dan  terlibat  dalam osmoregulasi, sintesis protein, dan pertumbuhan  (Furriel et  al., 2000).
Reseptor  vitamin  D3  telah  terbukti meningkatkan  aktivitas  fagositosis,  yang merupakan  salah  satu  komponen  sistem imun  nonspesifik  pada  udang  untuk membunuh  dan  mencerna  patogen  yang dikenali sebagai benda asing. Yang et al.,
(2021)  mengungkapkan  bahwa  vitamin D3  terindikasi  turut  berpartisipasi  dalam respon imun melawan bakteri pathogen.

## METODE PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan  Juni  -  Agustus  2022  berlokasi  di kolam dan laboratorium Budidaya Perikanan  Politeknik  Negeri  Lampung, Bandar Lampung.
Alat dan Bahan
Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah  akuarium, syringe 1 ml, microtube , micro pipet dan slide glass DO  meter,  timbangan,  thermometer,  pH meter.  Bahan  yang  digunakan  pada penelitian  ini  antara  lain  adalah  benur udang  vaname,  antikoagulan  Na-sitrat 3,8%, metanol, pewarna giemsa, Hyperol (dari Intracare B.V, The Netherlands ) dan pakan buatan.

## Desain Penelitian
Rancangan percobaan yang digunakan adalah rancangan acak lengkap
(RAL).  Penelitian  ini  terdiri  dari  empat perlakuan dengan tiga ulangan. Perlakuan yang dilakukan adalah sebagai berikut:
1. Perlakuan  K:  Pemeliharaan  udang tanpa suplementasi Hyperol.
2. Perlakuan  A:  Pemeliharaan  udang dengan penambahan suplementasi Hyperol sebanyak 0,25 mL/kg pakan.
3. Perlakuan  B:  Pemeliharaan  udang dengan penambahan suplementasi Hyperol sebanyak 0,5 mL/kg pakan.
4. Perlakuan  C:  Pemeliharaan  udang dengan  penambahan  suplementasi Hyperol sebanyak 0,75 mL/kg pakan.
5. Perlakuan  D:  Pemeliharaan  udang dengan  penambahan  suplementasi Hyperol sebanyak 1 mL/kg pakan.

## Persiapan  Hewan  Uji  dan  Media Pemeliharaan
Hewan  uji  yang  digunakan  pada penelitian ini adalah Benur udang vaname berukuran  PL  15,  yang  berasal  dari hatchery daerah  kalianda.  Sebelum digunakan  benur  dipelihara  terlebih dahulu selama kurang lebih 5 hari. Hal ini bertujuan  untuk  mengadaptasikan  benur pada  media  akuarium.  Wadah  yang digunakan  berupa  akuarium  berukuran 40x25x30  cm  sebanyak  15  buah.  Padat tebar yang digunakan adalah 100 ekor/m 2 . Pemeliharaan
Pemeliharaan udang dilakukan selama  60  hari.  Selama  pemeliharaan dilakukan  pengontrolan  dan  pengecekan kualitas  air.  Pembersihan  akuarium dilakukan setiap pagi hari yang bertujuan untuk membersihkan sisa pakan dan feses yang  berada  didasar  akuarium.  Selama pemeliharaan  udang  vaname  diberikan pakan  uji  dengan  frekuensi  pemberian pakan  sebanyak  4  kali  sehari  yaitu  pada pukul 08.00; 11.00; 14.00 dan 19.00 WIB. Tingkat  pemberian  pakan  (FR)  sebesar 5%  pakan  uji  yang  digunakan  pada penelitian ini berupa pellet tenggelam.

## Parameter yang diamati

## Respon imun udang
Respon imun udang dapat diketahui dengan mengamati total haemocyte count (THC) serta Differential haemocyte count (DHC)  pada  udang  yang  dilakukan dengan  pengambilan  hemolim  yang dilakukan  pada  hari  ke  60  dan  100  hari pemeliharaan.  Parameter  penelitian  yang diamati  dan  diukur  dalam  penelitian  ini antara lain total haemocyte count (THC), Differential haemocyte count (DHC) dan kualitas air.
Total haemocyte count (THC)
Penghitungan  THC  mengacu  pada metode  Brock  &  Madigan  (1991). Hemolim  diambil  sebanyak  0,1  mL  dari pangkal  kaki  renang  pertama  dengan menggunakan  syringe  1  mL  yang  sudah berisi  0,3  mL  antikoagulan  Na-sitrat 3,8%. Jumlah sel hemosit per mL dihitung menggunakan mikroskop pada perbesaran 400 kali.
Differential haemocyte count (DHC) Penghitungan  DHC  mengacu  pada metode Mix  & Sparks, (1980). Hemolim yang telah didapatkan kemudian difiksasi yang  dilakukan  dengan  cara  meneteskan sedikit  darah  pada  gelas  obyek  bersih  di bagian  sebelah  kanan,  dan  gelas  obyek lain  diletakkan  di  sebelah  kiri  tetesan
hemolim membentuk sudut 30°.
Kemudian  gelas  obyek  ditarik  ke  kanan sampai  menyentuh  hemolim  tersebut. Setelah darah menyebar di sepanjang tepi gelas  obyek  kedua  dorong  gelas  obyek kedua  tersebut  ke  kiri  dengan  tetap membentuk  sudut  30°  agar  didapatkan preparat darah yang cukup tipis sehingga mudah  diamati.  Setelah  itu  ulasan dikeringudarakan kemudian fiksasi dalam larutan  methanol  selama  5-10  menit. Preparat  ulas  direndam  pada  larutan giemsa  yang  telah  diencerkan  (1:20) selama  15-20  menit  dan  di  bilas menggunakan akuades untuk dikeringkan dan ditutup dengan gelas penutup setelah itu  amati  di  bawah  mikroskop  pada perbesaran 400 kali.

## Kualitas Air
Pengamatan  kualitas  air  yang diamati  meliputi  suhu,  pH,  dan  oksigen terlarut  yang  diukur  setiap  hari  selama penelitian,  serta  salinitas,  alkalinitas,  Ca air, dan Mg air yang diukur setiap 10 hari selama penelitian.

## Analisis statistik
Data  yang  diperoleh  ditabulasi menggunakan Microsoft Excel dan dianalisis  dengan menggunakan  program SPSS.  Data  dianalisis  dengan  analisis ragam  pada  selang  kepercayaan  95% untuk  menentukan  apakah  perlakuan memberikan pengaruh signifikan terhadap  kinerja  pertumbuhan.  Apabila perlakuan  berpengaruh  signifikan  maka dilanjutkan  dengan  uji  Duncan  untuk menentukan  perlakuan  yang  terbaik. Apabila  perlakuan  tidak  berpengaruh signifikan, maka dilakukan analisis secara deskriptif.  Analisis  deskriptif  secara langsung juga digunakan untuk menjelaskan parameter kualitas air.
Pada dasarnya bagian ini menjelaskan  bagaimana  penelitian  itu dilakukan.  Materi  pokok  bagian  ini adalah:  (1)  Waktu  dan  Tempat;  (2)  Alat
dan Bahan yang digunakan (3) Rancangan Penelitian;  (4)  Populasi  dan  sampel (sasaran penelitian); (5) Teknik pengumpulan  data  dan  pengembangan instrumen; (6) dan teknik analisis data.
Pada  penelitian  lapangan,  perlu juga ditampilkan peta lokasi pengambilan sampling, termasuk spesifikasi penggunakan  alat  dan  bahan.  Untuk penelitian  kualitatif  seperti  penelitian tindakan  kelas,  etnografi,  fenomenologi, studi kasus, dan lain-lain, perlu ditambahkan  kehadiran  peneliti,  subyek penelitian, informan yang ikut membantu beserta  cara-cara  menggali  data-data penelitian,  lokasi  dan  lama  penelitian serta uraian mengenai pengecekan keabsahan hasil penelitian.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Total Haemocyte Count (THC) Nilai total haemocyte count setelah pemberian  pakan  dengan  penambahan suplementasi  hyperol  pada  perlakuan  K, A,  B,  C  dan  D.  Nilai  THC  cenderung mengalami  peningkatan  dengan  nilai lebih  tinggi  (p<0,05)  pada  pemberian pakan dengan suplementasi Hyperol (hari ke-60). Nilai THC perlakuan D mendapatkan  nilai  yang  paling  tinggi yaitu  sebesar  65,41±1,90 x 10 6 sel mL -1 jika  dibandingkan  dengan  perlakuan  K sebesar  11.38±1,33  x  10 6 sel  mL -1 .  Nilai THC pada hari ke 60 pada perlakuan A, B dan  C  secara  berturut  –  turut  yakni 22,77±2,3x10 6 sel  mL -1 ,  27,22±1,04x10 6 sel  mL -1 dan  49,16±1,9x10 6 sel  mL -1 . Nilai  THC  mengalami  peningkatan  pada hari ke 100 pengambilan sampel, dengan nilai lebih tinggi (p<0,05) pada perlakuan D  (130,41±  3,01  x  10 6 sel  mL -1 )  jika dibandingkan dengan perlakuan K (28,61± 1,04 x 10 6 sel mL -1 ). Pada akhir penelitian  (hari  ke-100),  nilai  THC  pada perlakuan A, B dan C secara berturut-turut yakni  55,97±1,47  x  10 6 sel  mL -1 , 63,75±1,47 x 10 6 sel mL -1 dan 50,17±1,76
x 10 6 sel mL -1 . Nilai THC pada hari ke 60 dan 100 dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1 . Total Haemocyte Count (THC) pada udang vaname ( L. vannamei )  hari ke-60 dan  hari  ke-100,  setelah  pemberian  pakan  dengan  suplementasi  hyperol . Keterangan:  K  (Kontrol),  A  (hyperol  dosis  0,25),  B  (hyperol  dosis  0,5),  C (hyperol dosis  0,75) dan D (hyperol dosis 1). Huruf di atas bar yang berbeda pada periode pengamatan yang sama menunjukkan perbedaan yang signifikan (p<0,05) antar perlakuan
Secara umum, kelompok krustasea memiliki  sistem  kekebalan  non-spesifik karena tidak memiliki kemampuan untuk mengingat  antigen.  Kutikula  udang  yang keras merupakan pertahanan fisik pertama yang  menghambat  masuknya  patogen. jika terjadi infeksi baik bakteri, virus atau jamur, Jika patogen melewati pertahanan eksternal  ini,  pertahanan  internal  tubuh udang  menjadi  pertahanan  kedua  yang dilakukan  oleh  respons  seluler  dan humoralnya (Van de Braak, 2002)
Sistem  kekebalan  pada  udang berbeda dengan vertebrata. Yang berperan  dalam  sistem  imunitas  udang adalah  mekanisme  pertahanan  melalui hemosit  dan  protein  plasma  (Vergas- Albores,1996).  Hemosit  adalah  sel  yang memiliki  perangkat  fungsional  seperti makrofag,  granulosit,  dan  sel  pembunuh alami  (sel  NK)  pada  hewan  vertebrata
(Raa,  2000).  Hemosit  memainkan  peran penting  dalam  sistem  kekebalan  tubuh krustasea  dengan  mengeluarkan  partikel asing  melalui  fagositosis,  enkapsulasi, dan  agregasi  nodular  (Rodriguez,  2000). Parameter penanda untuk evaluasi sistem pertahanan  udang  meliputi  imunitas humerus  dan  seluler,  yang  meliputi jumlah  hemosit  (Le  Moullac,  1998), enzim  prophenoloksidase  (proPO)  dan aktivitas  enzim  fenoloksidase  (PO)  (Le Moullac,  1998  dan  Hernandez et  al., 1996).  Udang  memiliki  3  jenis  hemosit yaitu  hyalin  yang  berperan  dalam  proses fagositosis  dan  sel  granular  dan  semi granular  yang  penting  dalam  proses aktivasi  fenoloksidase  (Mahasri et  al., 2018).
Hemosit  memiliki  peran  penting dalam  sistem  pertahanan  tubuh  udang. Faktanya  total  hemosit  serta  DHC
a b c d e a b c d e 0 20 40 60 80 100 120 140 160 K A B C D T o ta l h em o cy te c o u n t (x 1 0 6 se l m L -1 ) Hari ke - 60 Hari ke - 100
merupakan  cara  yang  efektif  untuk menganalisis  kondisi  kesehatan  hewan. Populasi hemosit yang bersirkulasi berbeda  berdasarkan  spesies  hewan tersebut. Sebagian variasi dapat disebabkan oleh penggumpalan sel (Stewart et al., 1967) atau terkait dengan kondisi  fisiologis  hewan  yang  berbeda (Siddiqui & Al-Khalifa, 2014).
Hasil  pengamatan  THC  pada perlakuan  D  hari  ke  60  ke  hari  100 menunjukkan  peningkatan  terbesar,  hal ini mengindikasikan bahwa suplementasi hyperol  yang  mengandung  campuran kalsium,  magnesium,  dan  vitamin  D3 memiliki efektifitas yang lebih baik dalam meningkatkan  imunitas  udang  vaname jika dibandingkan dengan perlakuan lain. Kandungan  kalsium  dan  magnesium sangat  dibutuhkan  oleh  udang  untuk melakukan proses molting. Secara umum, kalsium  dan  magnesium  merupakan faktor  penting  yang  mempengaruhi aktivitas biologis dan fisiologis krustasea. Pada  sebagian  besar  spesies  krustasea akuatik,  ion  ini  tersedia  di  lingkungan akuatik  dan  diserap,  sesuai  kebutuhan, untuk  menggantikan  garam  yang  hilang
selama  molting  (Fieber  &Lutz,  1985). Kandungan  vitamin  D3  yang  terdapat dalam  hyperol  juga  berperan  penting dalam  meningkatkan  system  kekebalan tubuh  udang  vaname.  Hal  ini  sesuai dengan  pernyataan  Bora et  al., (2018) yang menyatakan bahwa salah satu fungsi non-klasik  vitamin  D  adalah  partisipasi dalam sistem kekebalan tubuh. Beberapa bukti  menunjukkan  bahwa  vitamin  D3 melindungi  inang  dari  infeksi  patogen. 1,25-dihidroksivitamin  D3,  bentuk  aktif vitamin  D,  memediasi  reaksi  imun bawaan  dengan  meningkatkan  aktivitas antimikroba sel imun.

## Differential Haemocyte Count (DHC)
Differential Haemocyte Count pada P.  vannamei (Tabel  1  dan  Gambar  2) menunjukkan bahwa hemosit adalah yang paling banyak ditemukan pada hari ke 10 adalah pada populasi sel hyaline berkisar antara  24,2%  –  39,3%.  sel  semi  granula mencatat persentase 11,42 pada perlakuan K hingga 28,83 pada perlakuan A dan sel granula  berkisar  antara  30,95%  pada perlakuan  K  hingga  40,13%  pada perlakuan B.
Tabel 1 . Differential Haemocyte Count (DHC) udang vaname hari ke 60 dan 100
Pelakuan Tipe Sel Rata-Rata (%) Hari ke-60 Hari ke-100 K Hyaline Semi Granule Granule 24,28±9,09 11,42±4,04 30,95±5,05 49,75±18,14 19,46±9,25 30,78±11,86 A Hyaline Semi Granule Granule 36,45±18,33 28,83±18,75 34,70±18,55 48,65±7,57 20,56±4,30 28,31±6,89 B Hyaline Semi Granule Granule 39,32±7,19 20,54±11,13 50,13±6,44 41,57±1,77 19,67±2,30 32,89±0,97 C Hyaline Semi Granule Granule 35,65±5,91 24,77±2,16 39,57±6,50 51,12±1,55 19,08±1,11 33,15±1,62 D Hyaline Semi Granule Granule 33,00±9,84 32,00±6,08 35,00±13,22 50,20±1,00 27,79±1,50 33,09±2,47
Peningkatan sel hemosit pada udang vaname  terlihat  pada  hari  ke  100 pengambilan  sampel  hemolim  udang, dimana sel hyaline 49,75% pada perlakuan K dan sel hyaline tertinggi pada perlakuan D sebesar 50,20%. Populasi sel
semi  granula  pada  perlakuan  K  19,46% dan  perlakuan  D  sebesar  27,79%. Sedangkan pada sel granula perlakuan K sebesar  30,78%,  dan  tertinggi  pada perlakuan C sebesar 33,15%.
Gambar 2 . Differential Haemocyte Count (DHC) pada udang vaname ( L. vannamei ) hari ke-60 dan hari ke-100, setelah pemberian pakan dengan suplementasi hyperol . Keterangan: K (Kontrol), A (hyperol dosis 0,25 mL/kg), B (hyperol dosis 0,5 mL/kg), C (hyperol dosis 0,75 mL/kg) dan D (hyperol dosis 1 mL/kg).
Pengamatan  DHC  pada  tabel  1 dan gambar 2 menunjukkan respon imun udang  vaname  yang  meningkat  yang ditandai  dengan  meningkatnya  populasi sel  hemosit  berupa  hyaline  pada  semua perlakuan,  namun  terjadi  penurunan  sel hemosit berupa semi granula dan granula pada  beberapa  perlakuan.  Meskipun penurunan  yang  terjadi  tidak  signifikan. Menurut  Maftuch  (2013),  menyatakan bahwa penurunan persentase sel semigranular  dan  granular  dikompensasi oleh  peningkatan  proporsional  dalam persentase  populasi  hialin.  Aladaileh et al., (2007),  mengungkapkan  bahwa peningkatan  persentase  jenis  hemosit tertentu  disebabkan  oleh  proliferasi seluler yang diinduksi, rekrutmen sel dari kompartemen hemolim yang tidak
bersirkulasi, atau diferensiasi seluler yang cepat sebagai respons terhadap tantangan antigenik.

## Kualitas Air
Kualitas  air  merupakan  hal  yang memiliki peranan penting dalam mendukung kehidupan, pertumbuhan dan status  kesehatan  udang  vaname.  Hasil pengamatan  selama  60  hari  dengan perlakuan  penambahan  vitamin  D3, mineral  Ca  dan  Mg  dapat  dilihat  pada tabel 2. yang meliputi suhu, pH, DO, serta salinitas. Hail yang didapatkan menunjukkan  hasil  pengamatan  kualitas air yang masih pada batas toleransi aman untuk pemeliharaan udang vaname berdasarkan standar SNI.
0 10 20 30 40 50 60 Hyaline hari ke - 60 Hyaline hari ke - 100
Granule hari ke - 60 Granule hari ke - 100 Semi granule - 60 Semi granule -
100 D if fe re n ti a l h e m o c yt e c o u n t (% ) K A B C D

## Tabel 2. Hasil pengukuran kualitas air
Parameter kualitas air Kisaran kualitas air Kisaran Nilai SNI K (0 ml/kg) A (0,25 ml/kg) B (0,5 ml/kg) C (0,75 ml/kg) D 1 ml/kg Suhu (ºC) 27,5 - 33,5 27,7-33,7 28,0 - 33,2 27,7 - 33,7 28,2 - 33,1 28 - 33 pH 6,8 - 7,5 6,9 - 8,5 7,0 - 8,2 6,7 - 8,1 6,4 - 8,4 7,5 - 8,5 DO (ppm) 5,5 - 6,0 5,8 - 6,2 5,2-6,1 5,2-6,2 5,6-6,4 >4,0 Salinitas (ppt) 18 - 35 20 - 35 18 - 34 15 - 35 15 - 35 30 - 33 Suhu air pada wadah
pemeliharaan berkisar antara 27°C-33°C. Suprapto (2005) menyatakan bahwa suhu untuk  budidaya  udang  vaname  berkisar antara  27  –  32°C.  Suhu  air  memiliki peranan  penting  dalam  mengatur  proses alamiah  udang  di  lingkungan  air  serta proses  fisiologi  pada  udang  seperti  laju respirasi, metabolisme, pertumbuhan dan reproduksi  (Varatharajan et  al., 2021; Saputra et  al., 2021).  Kualitas  air  yang diukur  selanjutnya  adalah  pH  dan  DO yang  mendapatkan  nilai  yang  masih dalam  kisaran  optimal  yaitu  6,7-8,5  dan DO 5,2-6,4. Menurut (Varatharajan et al ., 2021),  menyatakan  bahwa  nilai  pH  yang optimal pada budidaya udang adalah 7,5- 8,5  dan  untuk  konsentrasi  DO  optimal adalah  5  ppm  pada  area  tropis.  Hasil pengukuran  yang  terakhir  merupakan salinitas yang berkisar antara 30 – 35 ppt, hasil  pengukuran  tersebut  masih  dalam batas optimal untuk pertumbuhan udang. Sejalan  dengan  Supono et  al .,  (2022), yang  menyatakan  bahwa  secara  umum udang  vaname  menunjukkan  performa pertumbuhan  yang  baik  pada  wadah budidaya  dengan  salinitas  15  ppt.  Hasil pengukuran kualitas air tersebut didapatkan hasil yang optimal baik suhum pH, DO dan salinitas, dengan kualitas air yang  baik  akan  membuat  patogen  tidak akan mudah untuk tumbuh dan menyebabkan  serangan  penyakit  pada udang,  sehingga  status  kesehatan  udang juga akan tetap optimal.

## KESIMPULAN
Penambahan  kombinasi  vitamin D3, mineral Ca dan Mg pada pakan dapat meningkatkan respon imun udang vaname melalui penghitungan jumlah total hemosit dan pengamatan perbedaan jenis hemosit yang dipelihara selama 60 hari.

## SARAN
kegiatan  budidaya  udang  dapat menggunakan  suplementasi  kombinasi vitamin  D3,  mineral  Ca  dan  Mg  dengan dosis 1 mL/kg pakan untuk meningkatkan ststus kesehatan udang vaname.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terimakasih penulis sampaikan  kepada  PT. Behn  Meyer Chemicals yang telah memberikan kesempatan  kepada  penulis  untuk  dapat melakukan  dan  berpatisipasi  dalam penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Aladaileh S, Nair VS, Birch D, Raftos AD
. 2007.  Sydney  rock  oyster ( Saccostrea
glomerata ) haemocytes. Morphology and function.  J  Invertebr  Pathol  96:48– 63
Bora,  S.A.,  Kennett,  M.J.,  Smith,  P.B., Patterson,  A.D.,  Cantorna,  M.T., 2018. The gut microbiota regulates endocrine  vitamin  D  metabolism through fibroblast growth factor 23. Front. Immunol. 9.
Brock,TD. & Madigan,MT. 1991.
Biology  of  Microorganisms .  Sixth ed. Prentice- Hall International,Inc Davis,  D.A.,  Lawrence,  A.L.  &  Gatlin, D.M., III (1992) Mineral requirements of Penaeus vannamei: a  preliminary  examination  of the dietary  essentiality  for  thirteen minerals.  J.  World  Aquacult.  Soc., 23, 8–14.
Fieber, L.A., Lutz, P.L., 1985. Magnesium and calcium metabolism  during  molting  in  the freshwater  prawn Macrobrachium rosenbergii. Canadian  Journal  of Zoology 63, 1120–1124.
Furriel,  R.P.M.,  McNamara,  J.C.  & Leone,  F.A.  (2000)  Character- ization of (Na+, K+)-ATPase in gill microsome of the freshwater shrimp Macrobrachium  olfersia.  Comp. Biochem. Physiol., 126B, 303–315.
Greenaway,  P.,  1993.  Calcium  and magnesium balance during molting in land crabs. Journal of Crustacean Biology 13, 191–197.
Hernández-López J, Gollas-Galván T and V argas-Albores F 1996 Activation of  the  prophenoloxidase  system  of the brown shrimp Penaeus californiensis Holmes. Comparative
Biochemistry and Physiology 113C:
61-66.
Johansson MW, Keyser P, Sritunyalucksana  K,  Söderhäll  K. 2000.  Crustacean  hemocytes  and haematopoiesis.  Aquaculture  191:
45-52.
Jones  JC  (1977).  The  circulatory  system of insects. Springfield, IL: Thomas Spring Field. pp. 1–175.
Le  Moullac,  G  Soyez,  C  Saulnier,  D Ansquer,  D  Avarre,  J  C  Levy  P. 1998. Fish  Shellfish  Immunol 8: 621–629.
Ling  E,  Yu  XQ.  2006.  Hemocytes  from the  tobacco  hornworn, Menduca exta have  distinct  functions  in phagocytosis  of  foreign  particles and  self-dead  cell.  Developmental and Comparative Immunology, 30:301–309. Madhana S, Kanimozhi G, Panneerselvam A. 2021. Chapter 20 – Probiotics in Shrimp Aquaculture. Advances in Probiotics Microorganisms in Food and Health. 309-325 pp.
Maftuch,  E  Prasetio,  A  Sudianto,  M Rozik,  R  Nurdiyani,  E  Sanusi,  H Nursyam, F Fariedah, Marsoedi dan Murachman. 2013. Improvement of innate  immune  responses  and defense  activity  in  tiger  shrimp ( Penaeus monodon Fab.) by intramuscular administration of the outer  membrane  protein Vibrio alginolyticus. SpringerPlus 2013, 2:432 .
Mahasri,  G.,  Sari  P.D.W.,  and  Prayogo.
2018. Immune response and parasitic  infestation  on  Pacific white shrimp ( Lithopenaeus vannamei ) in immuno-probio circulation  system  (SI-PBR)  in ponds. IOP Conf. Series: Earth and Environmental Science. 137 (2018) 012024.
Mix MC, Sparks AK (1980). Haemocyte classification and differential counts in  the  Dungness  crab,  Cancer magister.  Journal  of  Invertebrate Pathology. 35:134-143.
Vargas-Albores 1996 Dev Comp Immunol
20 299-306.
Vazquez  L,  Juan  A,  Guadalupe  M, Concepcion  A,  Ali  Pereyra  M,
Edgar Z. 2009. Immunity Mechanism  in  Crustaceans.  Sage
Publications. 15(3) (2009) 179–188.
Perazzolo  LM,  Gargioni  R,  Ogliari  P, Barracco  MAA  (2002).  Evaluation of some hematoimmunological
parameters in the shrimp Farfantepenaeus paulensis submitted  to  environmental  and physiological  stress.  Aquaculture
214:19–33.
Piliang,  W.G.  2000.  Nutrisi  mineral. Institut Pertanian Bogor. Edisi ke-3. p. 13-38.
Prastiti  L  A,  Munti  Y,  Widanarni.  2018. Effectivity  of  prebiotic  mannan oligosaccharides  as  the  immunity enhancer  and  growth  response  on whiteleg shrimp Litopenaeus vannamei against white spot disease. Jurnal Akuakultur Indonesia. 17(1), 81-86 (2018).
Raa J 2000 The use of immunostimulant in fish and shellfish feeds , In : LE Cruz
Suarez,  D  Richie-Marie,  M  Tapia-
Salazar,  MA  Olver-Novoa,  R Civera-Cerecedo (Eds) Avences en Nutricion Acuicola, Merid, Yucatan, Mexico : 47-54. Rodrıguez J, Le Moullac G 2000 Aquacult 19  109-119.  Le  Moullac,  G  Soyez, C Saulnier, D Ansquer, D Avarre, J
C  Levy  P  1998 Fish  Shellfish
Immunol 8 621–629 .
Saputra  HK,  Hamka  MS,  Susanti  L,
Mulyani  R,  Dwiarti  A,  Alam  HS.
2021. Aplikasi teknologi aerasi dan bioekonomi pada transportasi benur udang vaname Litopenaeus vannamei  jarak  pendek  dengan kepadatan  berbeda.  Jurnal  Sains Terapan. 11 (1): 9-19. https://doi.org/10.29244/jstsv.11.1. 9-19 . Siddiqui  MI,  Al-Khalifa  MS  (2014).
Review of haemocyte count, response
to chemicals,
phagocytosis,  encapsulation  and metamorphosis  in  insects.  Italian
Journal of Zoology, 81(1): 2-15.
Stewart  JE,  Cornick  JW,  Dingle  JR (1967).  An  electronic  method  for counting lobster ( Homarus americanus )  hemocytes  and  the influence  of  diet  on  haemocyte numbers and haemolymph proteins.
Canadian  Journal  of  Zoology,  45: 291-304.
Suprapto. 2005. Petunjuk Teknis Budidaya Udang Vannamei (Litopenaeus vannamei). CV.Biotirta. Bandar Lampung.
Supono,  Rehulina  T.  P,  dan  Sarida  M.
2022.  The  Growth  Performance  of the Pacific White Shrimp
(Litopenaeus vannamei) Cultured at Various  Salinity  Conditions  Using
Single  Step  Acclimation.  AACL Bioflux 15(2):1061-1066.
Varatharajan,  D.,  P.  Yuvarajan  dan  M.
Alagappan.  2021.  Importance  of Water  Quality  Management  in Whiteleg
Shrimp (Penaeus
vannamei)  Farming.  AgriCos  e-
Newsletter 02(09): 17-20.
Wilder,  M.N.,  Houng,  D.T.T.,  Jasmani, S.,  Jayasankar,  V.,  Kaneko,  T., Aida,  K.,  Hatta,  T.,  Nemoto,  S.,
Wigginton,  A.,  2009.  Hemolymph osmolality,  ion  concentrations  and calcium in the structural
organization  of  the  cuticle  of  the giant freshwater prawn Macrobrachium rosenbergii: Changes with molt cycle.
Aquaculture 292, 104–110.
Yang  M  C,  Jin  X  Wa,  Xiu  Z  S.  2021. Vitamin D3 identified from metabolomic  analysis  of  intestinal contents  promotes  an  antibacterial response in shrimp intestinal immunity.  Aquaculture  530  (2021) 735951.