## EFEK KEMOPREVENTIF DAN ANTIHEMATOTOKSIK MINYAK BIJI JINTEN HITAM (MBJH)

## CHEMOPREVENTIVE AND ANTIHEMATOTOXICITY EFFECT OF BLACK CUMINE SEED OIL (BCSO)
Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta Email: akmaa_uad@yahoo.co.id
ABSTRAK
tepi.  Biji  jinten  hitam  (BJH)  secara  empiris  telah  digunakan  sebagai  komponen jamu  dengan  berbagai  macam  indikasi,  namun  mekanisme  kerja  kandungan  zat
induksi 10x20 mg/kgbb DMBA terhadap persentase monosit & netrofil darah tepi
(kontrol normal) diberi akuabides  dan  makanan  standar,  kelompok  II  ,  III  dan  IV sebagai  kelompok  perlakuan  dengan  pemberian  MBJH  0.25,  2.5  dan  5 ml/kgbb/hari dan diinduksi DMBA. Kelompok V dan VI  sebagai  kontrol  positif  I (diberi  timokuinon  50  mg/kgBB)  dan  sebagai  kontrol  II  (diberi  tamoksifen).
kelompok  kontrol  pelarut,  hewan  uji  mendapatkan  makan  minum  standar  dan
jumlah  monosit,  netrofil  dan  limfosit  lebih  tinggi  dari  kelompok  DMBA.
DMBA.
Kata kunci : immunoprotective;kemopreventif;limfosit; monosit; netrofil, maserat heksan biji jinten hitam.
Efek Kemopreventif Dan Antihematotoksik
Akrom , dkk
56
1 Akrom , Mustofa, Marstyawan, Mubarika 2 1 2 Fakultas Farmasi Universitas Ahmad Dahlan, Yogyak arta , 2 2 hoc dengan tingkat kepercayaan p<0,05 untuk persentase komponen lekosit. Hasil analisis  statistik  perbedaan  rata-rata  antar  kelompok  dengan  ANAVA  dan  post hematoprotektor. Pada kelompok yang mendapatkan MHBJH memiliki per sentase larutan minyak jagung yang  diberikan sebagaimana pemberian DMBA   Dilakukan mg/kgBB  DMBA,  2x/pekan  selama  lima  pekan.  Kelompok  VIII  sebagai Kelompok  VII  sebagai  kelompok  sakit  hanya  diinduksi  DMBA  10x20mg/kgbb selama 5 pekan. Pada  minggu ketiga kelompok I - VII mulai di induksi  dengan  20 tikus Sprague dauley. Pada  penelitian ini  digunakan  80  ekor  tikus  SD.  Hewan  uji dibagi  dalam  8  kelompok  yang  masing -masing  terdiri  dari  10  ekor.  Kelompok  I aktif  BJH  belum  semua  diketahui.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui sehingga  diduga  dapat  menurunkan  jumlah  netrofil,  monosit  dan  limfosit  darah karsinogenik  juga  terbukti  menekan  aktivitas  sumsum  tulang  dan spleenosit Senyawa  7,12-DMBA-3,4-diol-1,2  epoksida  (DMBA-DE)  disamping  bersifat
kelompok  timokuinon (p>0,05). Dapat disimpulkan bahwa MBJH terbukti bersifat Persentase  limfosit,  netrofil,  dan  monosit  kelompok  MBJH  setara  dengan kemopreventif  dan  dapat  berlaku  sebagai  hematoprotektor  terhadap  karsinogen penelitian menunjukkan bahwa MBJH bersifat kemopreventif dan
pengaruh  pemberian  0,25,  2,5  dan  5  ml/kgbb/hari  MBJH  selama  dan  sebelum

## ABSTRACT
Compound           7.12-DMBA-3,4-diol-1,2-epoxide (DMBA-DE) has been shown to suppress the activity of the bone marrow and spleenosit, supposedly to be able to  reduce  production  and  cell  activity  of  peripheral  blood  monocytes  and neutrophils.  This  study  aimed  to  determine  the  effects  of  0.25,  2.5  and  5  ml/kg BW/day  black  cumin  seeds  oil  (BCSO)  during  and  prior  to  percentage  of monocyte  and  neutrophil  blood  Sprague  dauley  rats.  In  this  study  used  80 Sprague dauley rats. Animals used in these tests were divided into 8 groups, each consisting  of  10  individuals.  Group  I  (normal  control)  was  given  aquabides  and food  standards,  group  II,  III  and  IV  as  the  treatment  group  were  given  MHBJH 0.25, 2.5 and 5 ml/kg bw/ day and induced DMBA. Group V and VI as a positive control  I  (given  timokuinon  50  mg  /  kg  BW)  and  positive  control  II  (tamoxifen). Group VII were used negative control group, was induced DMBA 10x20mg/kgBW for 5 weeks. In the third week,  I – VII groups started induced with 20 mg/kg BW DMBA, 2x/weeks for five weeks. Group VIII was as the solvent control group, the test animals just get standard fed and drink and given corn oil solution as DMBA administration.  Mean  difference  between  groups  of  monocytes,  neutrophils  and lymphocytes  percentage  were  analyzed  with  ANOVA  and  post  hoc.  The  results showed that BCSO been chemopreventive and hematoprotector. The percentages of monocytes, neutrophils and lymphocytes in the BCSO groups were higher than in the DMBA group. The percentage of lymphocytes, neutrophils, and monocytes in the BCSO groups were equivalent with the thimoquinone group (p> 0.05). The scientific evidence of  BSCO as chemopreventive and hematoprotector effects had been  clearer.  It  could  be  concluded  that  the  BCSO  be  chemopreventive antihematotoxic agent.
Keywords: immunoprotective;  chemopreventive;  lymphocytes;  monocytes; neutrophils, maserat hexane black cumin seeds.

## PENDAHULUAN
Kanker payudara merupakan masalah kesehatan masyarakat, dengan  morbiditas  dan  mortalias yang semakin meningkat (Tjindarbumi  and  Mangunkusumo,
2002).    Salah  satu  faktor  yang terlibat  dalam  peningkatan  insidensi kanker  payudara  di  Indonesia  adalah tingginya  tingkat  polusi  udara  oleh berbagai  bahan  karsinogen,  antara lain  asap  kendaraan  bermotor,  asap dari  industri,  asap  rumah  tangga maupun  dari  rokok  (Purnamasari et
al .,  2005).  Asap  rokok,  asap  dapur dan asap kendaraan bermotor banyak mengandung senyawa polisiklik aromatik  hidrokarbon  yang  bersifat karsinogenik,  salah  satunya  adalah 7,12 dimethylbenzanthracena (DMBA)  (Hodgson et  al .,  2001). Selain bersifat genotoksik karsinogen DMBA juga terbukti bersifat imunotoksik  dan  hematotoksik  (Gao et  al. ,  2005;  Melendez-colon et  al ., 1999; 2000).
57 Media Farmasi, Vol 10 No.2 September 2013 : 56-70
Kelemahan sistem imun merupakan  salah  satu  faktor  yang mempercepat perkembangan neoplasma  menjadi  kanker  (Roit, 2006;  Gibbs,  2000).  Salah  satu komponen  imunitas  seluler  adalah monosit, netrofil dan limfosit (Abbas, 2004; Kresno, 2001). Dalam tubuh  DMBA  dimetabolisir  oleh enzim sitokrom dan epoksid
hidrolase  mikrosomal  (Kubatka et al ., 2002) menjadi karsinogen ultimat 7,12-dimetilbenzantrasen-3,4-diol- 1,2, diepoksida (DMBA-DE) (Shimada et  al .,  2001;  2006)  yang bersifat  genotoksik  dan  imunotoksik (Gao et al., 2005;2007; 2008; Bajak,
2005).  Karsinogen  ultimat  DMBA- DE disamping menginisiasi karsinogenesis  pada  jaringan  mamae (Miyata et al ., 1999;
Pitot et  al .,  2001)  terbukti  juga
menekan  aktivitas sistem imun termasuk  aktifitas  sumsum  tulang dan  limpa  (Gao et  al .,  2005;  2007; 2008) sehingga menghambat eritropoesis dan pembentukan limfosit,  monosit  dan  netrofil.  Page et  al. (2003)  membuktikan  bahwa ketoksikan  DMBA  pada  sumsum tulang bergantung p53. Berkurangnya jumlah monosit, netrofil  dan  limfosit  akibat  paparan DMBA-DE memperlaju proses
karsinogenesis  pada  hewan  uji  yang terpapar  DMBA  (Abbas,  2004; Baratawidjaya, 2004). Usaha penyembuhan kanker yang sangat sulit mendorong ditemukannya senyawa kemopreventif maupun agen imunomodulator yang dapat digunakan  untuk  menghambat  atau menolak karsinogenesis akibat paparan  karsinogen    (Surh et  al .,
2003; Singletary et al , 2003; el Azizi,
2005). Secara empiris dan laboratorik  biji  jinten  hita  (BJH) bersifat  kemoprefentif  (Muhtasib  et al.,  2006;  Randhawa  and  Ghomdi, 2002) maupun sebagai imunomodulator (Akrom, 2011; Akrom et  a l.,  2008;  Hidayati  & Akrom,  2006).  Orang  Arab,  Afrika utara,  asia  tengah  dan  Turki  secara turun-temurun  memanfaatkan  biji jinten  hitam  untuk  meningkatkan daya  tahan  tubuh  dan  perbaikan stamina  (Badary et  al. ,  2007;  Farrah et.al ., 2004;  Al  Ghamdi et  al., 2001:
Sangat,  2000,  el  Kadi,  1985). Pemberian ekstrak etanol BJH terbukti  meningkatkan    aktifitas fagositosis  makrofag  pada  hewan  uji mencit yang diinfeksi Lysteria monocytogenes (Akrom et al ., 2007). Respon imun hospes terhadap karsinogenesis merupakan mekanisme yang komplek dan sayangnya  sampai  saat  ini  belum banyak  dikaji,  terlebih  bila  dikaitkan dengan imunogen dari tanaman yang mempunyai potensi sebagai imunomodulator  dan  juga  sebagai antikanker (Abbas, 2004; Baratawidjaya,  2004).  Bagaimana pengaruh pemberian MBJH terhadap jumlah limfosit, monosit dan netrofil serta  karsinogenesis  pada  tikus  SD yang diinduksi DMBA belum
Efek Kemopreventif Dan Antihematotoksik Akrom , dkk 58
dilakukan. Mengingat bahwa minyak yang  merupakan  zat  aktif  utama MBJH merupakan senyawa potensial sebagai  kemoprefentif  antioksidan dan imunomodulator yang berpengaruh  langsung  pada  sistem pembentukan sel darah dan karsinogenesis  maka  penelitian  ini sangat penting untuk dilakukan.

## METODE PENELITIAN
Rancangan  penelitian  ini  adalah eksperimental acak dengan kelompok  kontrol    pada  hewan  uji tikus  Sprague  dauley  betina  yang berumur  3-4  minggu  dengan  berat berkisar  100  –  140  gram  diperoleh dari  laboratorium  Ilmu  Hayati  UGM (Akrom et al. , 2008).  Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah minyak biji jinten hitam yang dibuat di laboratorium Biologi Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Ahmad Dahlan, timokuinon  (Sigma)  dan  medium tumbuh. Alat  yang  digunakan  dalam penelitian ini inkubator CO 2, sentrifuge, microplate reader , inverted  microscope ,  seperangkat alat  narkose, laminar  air  flow  hood , timbangan, dan satu set alat hematology analyzer untuk menghitung  jumlah  netrofil,  monosit dan limfosit.
Prosedur kerja penelitian adalah sbb:
1. Standarisasi sediaan MBJH Standarisasi minyak N.sativa dengan timokuinon dilakukan dengan  metode  KLT-densitometri (Akrom et al ., 2007). Parameter yang diukur  pada  standarisasi  minyak N.sativa adalah  persen  berat  kadar timokuinon/ml  minyak.    Prosedur standarisasi  minyak N.sativa sebagai kemopreventif  adalah  sebagaimana dijelaskan peneliti sebelumnya (Meiyanto, 2004b).
2. Uji  efek  kemoprefentif  MBJH pada tikus terinduksi DMBA
Persiapan dan pengelompokan subyek uji Selama penelitian tikus ditimbang  setiap  minggunya  untuk mengetahui perkembangan berat badan.  Hewan  uji  setelah  berumur tiga  minggu  secara  acak  dibagi menjadi  8  kelompok,  masing-masing kelompok  10    ekor.  Kelompok  I sebagai kelompok normal,  hewan uji pada  kelompok  ini  mendapatkan makan  minum  standar  selama  dalam pengujian.    Kelompok  II,  III  dan  IV merupakan kelompok perlakuan, disamping  mendapatkan  diet  standar +induksi DMBA, hewan uji mendapatkan  tambahan  pemberian sediaan  MBJH  terstandart  dosis 0,25, 2,5 dan 5 ml/kgBB/hari selama 14  hari  sebelum  diinduksi  dan selama  diinduksi  DMBA.  Kelompok V sebagai kontrol positif 1 (timokinon),  hewan  uji  disamping mendapatkan  diet  standar+induksi 59 Media Farmasi, Vol 10 No.2 September 2013 : 56-70
lemak  tak  jenuh  dan  timokuinon
dengan timokuinon.
DMBA, juga mendapatkan tambahan timokuinon  50  mg/kgbb.  Kelompok VI  sebagai  kelompok  kontrol  positif 2  (tamoksifen),  hewan  uji  disamping mendapatkan  diet  standar  +  induksi DMBA, juga mendapatkan tambahan pemberian tamoksifen 1x60 mg/kgbb/hari per oral sebelum diinduksi  dan  selama  diinduksi DMBA. Kelompok VII dan kelompok VIII, merupakan kelompok kontrol negatif dan
kelompok  kontrol  pelarut,  hewan  uji mendapatkan  diet  standar  +  induksi
DMBA  untuk  kelompok  VII  dan
DMBA  dan  tambahan  pemberian minyak jagung. Induksi 10x20 mg/kgbb  DMBA  diberikan  selama  5 minggu, 2x/minggu per oral.
b. Pembuatan model kanker payudara pada tikus. Tikus      berumur    6  minggu    diberi larutan
DMBA dalam minyak jagung dengan dosis  20  mg/kgBB  secara  peroral. Inisiasi  DMBA  diulang  sebanyak  10 kali  dengan  frekuensi  pemberian  2 kali  setiap  minggu.  (Kubatka et  al., 2002). Pemeriksaan terhadap insidensi  terbentuknya  nodul  tumor pada  payudara  dilakukan  secara palpasi  sejak  pemberian  induksi DMBA  terakhir,  yaitu  hewan  uji berumur  10  minggu  dan  dilanjutkan sampai  hewan  uji  berumur  16 minggu.      Terabanya  nodul  tumor pada kelenjar pertama kali pemeriksaan dianggap sebagai insidensi nodul formation.
Disamping  dilakukan  pemeriksaan terhadap  insidensi  nodul  formation juga  dilakukan  pemeriksaan nodul multiplication yaitu banyaknya nodul yang  terbentuk  pada  tiap  hewan  uji. Insidensi  adalah  prosentase  dari jumlah  tikus  yang  mengandung tumor  pada  satu  kelompok.  Adapun tumour  multiplicity adalah  rerata jumlah nodul tumor pada setiap tikus dalam  satu  kelompok  (Akrom et  al ., 2008).
3.  Pemeriksaan  darah  tepi,  Jumlah dan persentase limfosit, Monosit dan Netrofil lekosit dilakukan secara spektroskopi dengan menggunakan alat hematology analyzer dengan prosedur sesuai yang disarankan dari industri pembuat, sebagaimana
dilakukan  oleh  peneliti  sebelumnya (Akrom et  al. ,  2008;  Akrom,  2004). Operasionalisasi  alat  dilakukan  oleh tenaga  terlatih  di  LPPT  Universitas Gadjah Mada Yogyakarta.
4. Analisis data
Analisis  hasil  penelitian    secara statistik  digunakan  metode  yang berbeda  untuk  jenis  data  yang berbeda.  Data  jumlah    tikus  yang mengandung tumor payudara (insidensi)  dianalisa  dengan  metode survival analisis Kaplan Meier (Program  GraphPad  Prism  ver  4), data  perkembangan  berat  badan dianalisa  dengan  Anava  dilanjutkan uji  Tukey,  sedangkan  jumlah  nodul masing masing tikus ( tumour multiplicity ) antar kelompok
Efek Kemopreventif Dan Antihematotoksik Akrom , dkk       60 mendapatkan  diet standar  +  induksi Perhitungan  jumlah  dan  jenis
dianalisis  dengan  uji  statistik  Non Parametrik  Kruskal  Wallis  dengan taraf  kepercayaan  95%  dilanjutkan dengan Man Whitney Test. Perbedaan rata-rata persentase jumlah limfosit, monosit dan netrofil antar  dan  inter  kelompok  ditetapkan dengan  uji  anava  dilanjutkan  uji LSD.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  standarisasi  MBJH  dengan timokuinone
Determinasi  BJH  dilakukan  di Lab.  Biologi  Farmasi  UGM  oleh tenaga ahli dengan sertifikat hasil uji terlampir. Hasil maserasi BJH dengan pelarut heksan yang dilanjutkan  destilasi  uap  diperoleh minyak  berwarna  kuning  bening
dengan  viskositas  agak    encer      dan bau    khas  minyak      atsiri  BJH. Minyak  kasar  ( crued  oil) BJH yang dibeli  dari  penjual  obat  tradisional berwarna kuning tua-kecoklatan, dengan viskositas agak encer dan bau harum  yang  khas  minyak  atsiri  BJH. Tabel I menyajikan hasil standarisasi kandungan  MBJH  dimana  hasil tersebut  sesuai  dengan  penelitian yang  telah  dilaporkan  oleh  Nickavar et al . (2003). Hasil pemeriksaan darah tepi Tabel II menyajikan hasil pemeriksaan  darah  tepi  dari  hewan uji  tikus  SD  yang  diinduksi  DMBA setelah  mendapatkan  MBJH.  Rata- rata  kadar  Hb  dan  Hmt  kelompok perlakuan    MBJH    berbagai   dosis
Tabel I. Kandungan timokuinon dan asam lemak ekstrak dan MBJH yang ditetapkan dengan TLC
Jenis zat aktif BJH Kandungan (%) Timokuinon 2,72±0,02 Asam lemak 69,33±1,16 Asam kaproat 0,21±0,01 Asam kaprat 0,06±0,08 Asam laurat 0,04±0,05 Asam miristat 0,18±0,01 Palmitat 12,28±0,01 Palmitoleat 0,29±0,01 Stearat 79,98±0,02 Oleat 0,07±0,00 Linoleat 2,86±0,02 61 Media Farmasi, Vol 10 No.2 September 2013 : 56-70
untuk timokuinon dan GCMS untuk minyak lemak tak jenuh.
lebih  tinggi  dari  rata-rata  kadar  Hb dan  Hmt  kelompok  DMBA.  Hasil penelitian  membuktikan  bahwa  rata- rata  kadar  Hb    dan  Hmt  kelompok DMBA  (6,60±2,07  dan  24,80±0,45) lebih  rendah  dari  rata-rata  kadar  Hb dan Hmt kelompok normal (14,67±0,52 dan 43,33±2,73) (p<0,05),  kelompok  kontrol  pelarut (15,67±0,52 dan 46,00±0,00) (p<0,05), kelompok timokuinon (13,34±0,74 dan 36,74±3,85) (p<0,05), kelompok tamoksifen (13,83±2,99 dan 41,17±8,70) (p<0,05). Diantara  kelompok  perlakuan kadar  Hb  dan  Hmt  kelompok
tinggi  dari  kadar  Hb  dan  Hmt kelompok  DMBA  (p<0,05).  Kadar
berbeda  dengan  kadar  Hb  dan  Hmt kelompok normal (p>0,05)
sedangkan  kadar  Hb  dan  Hmt kelompok timokuinon dan
tamoksifen  lebih  rendah  dari  kadar Hb dan Hmt normal (p<0,05).
Induksi DMBA juga berpengaruh terhadap  penurunan  kadar  MCV  dan MCH  tikus  SD.    Dari  pemeriksaan MCV dan MHC menunjukkan bahwa tikus SD kelompok DMBA cenderung mengalami anemia mikroskopik hipokromik. Rata – rata kadar  MCV  dan  MCH  kelompok DMBA lebih rendah (54,40±1,52 dan
16,33±0,52)  dari  rata-rata  kadar MCV  dan    MCH  kelompok  normal (58,33±1,37 dan 20,00±0,89) (p<0,05),  kelompok  kontrol  pelarut Diantara  kelompok  perlakuan,  kadar MCV  dan  MCH  kelompok  MST6,8
Tabel II. Hasil Pemeriksaan darah tepi, jumlah lek osit, eritroit dan trombosit darah rutin tikus SD yang diinduksi DMBA pada minggu ke-21 percobaan.
Kelompok Uji n Jumlah lekosit (x10 3 /µL) (mean±SD) Jumlah eritrosit (x10 6 /µL) (mean±SD) Jumlah trombosit (x10 3 /µL) (mean±SD) Normal 6 6,33±1,37* 8,32±0,40* 981,33±95,37* MBJH0,25 7 9,86±0,90* 7,87±0,27* 668,71±50,91* MBJH2,5 7 6,29±0,49* 7,35±0,28* 724,71±181,25* MBJH5 8 7,00±0,93* 7,65±0,14* 802,00±106,23* Timokuinon 7 6,86±0,90* 6,53±0,94* 734,29±151,14* Tamoksifen 6 7,00±2,68* 6,59±0,21* 889,17±387,24* DMBA 5 2,80±1,10 4,18±0,94 255,00±70,31 Pelarut 6 6,67±1,03* 9,14±0,42* 108,.00±120,10* Reference** Nb: *=p<0.05 terhadap kelompok DMBA; **= (Giknis, 2008) SD=standar deviasi Efek Kemopreventif Dan Antihematotoksik Akrom , dkk 62 7,67±1,62 8,20±0,55 836,00±132,00 MBJH0,25 (14,74±0,24 dan (56,67±1,37 & 19,33±0,52) (p<0,05), Hb  dan  Hmt  kelompok  MBJH  tidak (56,86±0,89 & 18,71±0,49), MST68 44,86±1,46),  MBJH2,5  (14,44±0,80 timokuinon (57,33±1,63 & dan 43,14±1,95) dan MBJH5 21,17±1,21)  (p<0,05),  tamoksifen (14,59±0,85 dan 43,50±2,07) lebih (57,33±1,63 & 19,67±0,52) (p<0,05).
lebih  tinggi  dari  kadar  MCV  dan MCH  kelompok  DMBA  (p<0,05). Dari  hasil  penelitian  dibuktikan bahwa  kelompok  DMBA  memiliki rata-rata kadar MCV dan MCH lebih rendah dari rata-rata MCV dan MCH darah  kelompok  normal  (p<0,05) maupun  kelompok    kontrol  pelarut (p>0,05). Dari hasil penelitian dibuktikan  bahwa  induksi  DMBA menurunkan kadar Hb atau menyebabkan terjadinya anemia. Anemia  akibat  paparan  DMBA cenderung bersifat mikrositik hipokromik  yang  dicirikan  dengan penurunan  kadar  MCV  dan  MCH. Pemberian MBJH menghambat
penurunan kadar Hb, Hmt, MCV dan
MCH.
Hasil  penelitian  membuktikan bahwa induksi DMBA pada tikus SD betina menurunkan jumlah sel darah. Tabel  3  menyajikan  hasil  penelitian gambaran  darah  tepi  tikus  SD,  rata- rata  jumlah  lekosit,  eritrosit  dan trombosit  pada  kelompok  DMBA (AL=2,80±1,10;  AE=4,18±0,94  dan AT=255,00±70,31) lebih rendah dari kelompok  normal  (AL=6,33±1,37;
AE=8,32±0,40 dan AT=981,33±95,37) (p<0,05) maupun kontrol pelarut (AL=6,67±1,03; AE=9,14±0,42 dan AT=1085,00±120,10) (p<0,05). Hasil penelitian (Tabel II) membuktikan bahwa pemberian MBJH,  timokuinon  dan  tamoksifen dua  minggu  sebelum  dan  lima
sel  darah  tepi.  Rata-rata  jumlah lekosit, eritrosit dan trombosit kelompok  yang  diberi  MBJH  lebih tinggi  dari  jumlah  lekosit,  eritrosit dan  trombosit  kelompok  DMBA (p<0,05).  Rata-rata  jumlah  lekosit, eritrosit dan trombosit darah kelompok  timokuinon  lebih  tinggi dari  rata-rata  jumlah  lekosit,  eritrosit dan  trombosit  kelompok  DMBA (p<0,05).  Rata-rata  jumlah  lekosit, eritrosit dan trombosit darah kelompok  tamoksifen  lebih  tinggi dari  rata-rata  jumlah  lekosit,  eritrosit dan  trombosit  kelompok  DMBA (p<0,05).    Dari  hasil  penelitian  ini membuktikan  bahwa induksi DMBA dapat  menurunkan  jumlah  lekosit, eritrosit dan trombosit pada tikus SD. Pemberian  MBJH  selama  2  minggu sebelum  dan  lima  minggu  selama diinduksi DMBA dapat  menghambat penurunan  jumlah  lekosit,  eritrosit dan trombosit.
Hasil  penelitian  pada  Tabel  III menunjukkan bahwa persentase hitung jenis lekosit kelompok normal berbeda bermakna dengan persentase hitung jenis lekosit kelompok DMBA (p<0,05). Dari hasil
penelitian dibuktikan bahwa rata-rata jumlah  lekosit  kelompok  DMBA lebih  rendah  dari  rata-rata  jumlah lekosit  kelompok  normal  (p<0,05) maupun  kontrol  pelarut  (p<0,05). Dari hasil penelitian ini menunjukkan  bahwa  induksi  DMBA 10x20mg/kgBB dapat menurunkan 63 Media Farmasi, Vol 10 No.2 September 2013 : 56-70 (59,29±0,49  &  19,29±0,49)  dan minggu  selama  induksi  DMBA  pada MST136  (59,38±0,52  &19,38±0,52) tikus  SD  betina  menaikkan  jumlah
Tabel  III. Hasil Pemeriksaan jumlah lekosit darah rutin tikus SD yang diinduksi DMBA   pada minggu ke-27
Kelompok Uji n   Jumlah lekosit (x10 3 /µL) (mean±SD) Rata-rata netrofil (mean±SD) Rata-rata limfosit (mean±SD) Rata-rata monosit (mean±SD) Rata-rata eosinofil (mean±SD) Normal MHBJH0,25 MHBJH2,5 MHBJH5 Timokuinon Tamoksifen DMBA Pelarut Referensi** Nb: *=p<0.05 terhadap kelompok DMBA; **=(Giknis, 2008)
SD= standar deviasi
jumlah  lekosit  pada  tikus  SD.  Rata- rata jumlah lekosit kelompok MBJH0,25,  MBJH2,5  dan  MBJH5 lebih tinggi dari jumlah lekosit darah kelompok DMBA (p<0,05). Rata-rata  jumlah  lekosit  darah kelompok yang mendapatkan
timokuinon  dan  tamoksifen  lebih tinggi  dari  rata-rata  jumlah  lekosit darah  kelompok  yang  diinduksi DMBA  (p<0,05).  Pemberian  MBJH berbagai  dosis  dan  timokinon  50 mg/kgBB  serta  tamoksifen  selama  2 minggu  sebelum  dan  lima  minggu selama  diinduksi  DMBA  terbukti menghambat penurunan jumlah lekosit pada tikus SD yang diinduksi DMBA.
Berdasarkan  hasil  uji  yang disajikan  pada  Tabel  III,  jumlah netrofil  mengalami  kenaikan  secara bermakna  dari  nilai  normal  yang ditunjukkan dalam literature (Giknis, 2008).  Kelompok  DMBA  memiliki
persentase  netrofil  tertinggi,  lebih tinggi dari kelompok normal maupun kontrol  pelarut  (p<0,05),  kemudian diikuti  oleh  kelompok  tamoksifen (p<0,05),  kelompok  MHBJH0,25 (p<0,05).  Induksi DMBA pada tikus SD terbukti meningkatkan persentase neutrofil. Pemberian MBJH, timokuinon dan tamoksifen menurunkan persentase neutrofil pada  tikus  SD  yang  diinduksi DMBA.
Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa  rata-rata  jumlah  limfosit dalam penelitian ini kurang dari nilai limfosit  normal  literature  (Giknis, 2008).  Induksi  DMBA  menurunkan jumlah  limfosit,  hasil  penelitian membuktikan  bahwa  jumlah  limfosit kelompok  DMBA  lebih  rendah  dari kelompok  normal  maupun  kontrol pelarut  (p<0,05).  Pemberian  MBJH dan timokuinon meningkatkan
jumlah  limfosit  tikus  SD  yang
Efek Kemopreventif Dan Antihematotoksik Akrom , dkk 64 6 6,33±1,37* 30,67±4,23* 61,67±3,61* 6,33±0,52* 1,33±0,52 7 6,29±0,49* 27,14±3,63* 65,14±3,58* 6,14±0,89* 1,57±0,53 8 7,00±0,93* 27,75±1,67* 65,13±0,83* 5,75±1,04* 1,38±0,52 7 6,86±0,90* 28,14±1,68* 64,71±1,11* 5,71±0,95* 1,43±0,53 6 7,00±2,68* 35,53±8,64* 57,50±7,12* 5,67±1,86* 1,33±0,52 5 2,80±1,10 50,80±5,54 44,40±2,51 3,20±1,64 1,60±1,52 6 6,67±1,03* 30,67±4,23* 61,67±3,72* 6,33±0,52* 1,33±0,52 7 9,86±0,90* 33,57±0,98* 53,71±1,80* 10,86±1,07* 1,86±1,07 7,67±1,62 19,3± 8,5% 75,8 ± 9,1% 2,3±0,7% 1,9 ± 1,2%
diinduksi  DMBA,  hasil  penelitian membuktikan  bahwa  jumlah  limfosit kelompok  MBJH0,25,  MBJH2,5, MBJH5  dan  timokuinon  lebih  tinggi dari jumlah limfosit kelompok
DMBA  (p<0,05).  Jumlah  limfosit kelompok  tamoksifen  lebih  tinggi dari jumlah limfosit kelompok DMBA  tetapi  lebih  rendah  dari jumlah limfosit kelompok timokuinon (p<0,05).
Dari  hasil  penelitian  diketahui bahwa  rata-rata  jumlah  monosit semua  kelompok  pada  penelitian  ini lebih  tinggi  dari  nilai  normal literature  (Giknis,  2008).  Induksi DMBA  menurunkan  jumlah  monosit tikus SD, hasil penelitian membuktikan bahwa rata-rata jumlah monosit  kelompok  DMBA  lebih rendah dari jumlah monosit kelompok  normal  maupun  control pelarut  (p<0,05).  Pemberian  MST dan timokuinon meningkatkan persentase  monosit  tikus  SD  yang diinduksi DMBA. Persentase monosit MBJH0,25, MBJH2,5, MBJH5  dan  timokuinon  lebih  tinggi dari  persentase  monosit  kelompok DMBA (p<0,05). Persentase monosit kelompok  tamoksifen  sama  dengan persentase monosit kelompok timokuinon (p>0,05) dan lebih tinggi dari  persentase  monosit  kelompok DMBA (p<0,05). Persentase monosit tertinggi  terdapat  pada  kelompok MST6,8  lebih  tinggi  dari  kelompok normal  maupun  kelompok  yang mendapat timokuinon (p<0,05).
Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa persentase eosinofil kelompok uji  cenderung  lebih  tinggi  dari  nilai normal  literature  (Giknis,  2008).
Persentase eosinofil kelompok DMBA  sama  dengan  persentase eosinofil  kelompok  normal,  control pelarut, timokuinon, tamoksifen serta MBJH.  Induksi  DMBA  pada  tikus
SD  tidak  berpengaruh  terhadap persentase eosinofil. Diantara kelompok  uji,  kelompok  MBJH0,25 memiliki rata-rata persentase eosinofil  paling  tinggi  (1,86±1,07), tetapi tidak bermakna (p>0,05). Hasil penelitian  ini  memperkuat  penelitian sebelumnya tentang efek imunotoksik atau imunosupresif DMBA-DE  terutama  pada  aktifitas sumsum tulang dan limpa (Gao et al ., 2005;  2007;  2008).  Hasil  penelitian ini  juga  memberikan  bukti  ilmiah bahwa  kandungan  MBJH  bersifat imunomodulator melalui antihemaotoksik  dan  peningkatan aktifitas sumsum tulang sesuai dengan  praktek  empiris  selama  ini (El-Kadi et  al .,  1986;  Haq et  al .,
1999)
Melalui  reseptor  AhR  paparan DMBA secara langsung meningkatkan aktivitas gen CYP1B1/1A1 sehingga produk enzim CYP1B1/1A1  ditingkatkan  (Miyata et  al .,  1999)  melalui  aktivasi  factor transkripsi  XRE  dan  secara  tidak langsung juga meningkatkan aktivitas Nrf2 sehingga terjadi peningkatan  produksi  enzim  GST melalui aktivasi antioxidative
65 Media Farmasi, Vol 10 No.2 September 2013 : 56-70
responsive  elemen (ARE)  (Shimada et al., 2003; 2006; Arora et al ., 2004;
Pitot et  al .,  2001).  Peningkatan jumlah  DMBA-DE  dalam  tubuh seiring  dengan  peningkatan  jumlah dan  aktivitas  CYP1B1/1A1  dan berkurangnya  enzim  GST,  diikuti stress  oksidatif  dan dna  adduct (stress genotoksik) yang menyebabkan  terjadinya  aktifasi  dan mutasi  pada  p53  (Tullo et  al .,  2002;
sehingga memungkinkan inisiasi karsinogenesis, pembentukan
neoplasma  dan  jaringan  kanker disatu sisi dan menekan system imun disisi  lain  (Gao et  al .,  2005;  2007; 2008;  Page et  al .,  2003).  Beberapa kandungan  bahan  alam  yang  banyak mengandung polifenol atau flavonoid yang terdapat  pada  sayur-mayur  atau jamu bersifat antioksidan dan imunomodulator,  mampu  mencegah karsinogenesis  dan  efek  imunotoksik dari  metabolit  senobiotik  polisiklik aromatic  hidrokarbon  (Jones,  2000; Surh et  al .,  1999;  2000;  2003;
Singletary et al ., 1998; 2003).

## KESIMPULAN
Dapat disimpulkan bahwa pemberian  MBJH  7  minggu,  dua minggu  sebelum  dan  lima  minggu selama  induksi  DMBA  pada  tikus SD diinduksi DMBA bersifat kemopreventif dan antihematotoksiksisitas. Efek
kemopreventif  MBJH  0,25  setara dengan 2,5 ml/kgBB.

## DAFTAR PUSTAKA
Abbas,  A.K.,  Lichtman,  A.  H.,  and Pober,  J.  S,  2004, Celluler  and Molecular  Immunology ,  Second
Ed. Philadelphia : W.B. Sounders Company Akrom,  2011,  Pengaruh  Pemberian Minyak Biji Jinten Hitam Terhadap  Jumlah  Limfosit  T Sitolitik  (Ctl)    Pada  Tikus  Sd Yang Diinduksi Dmba ( Dimethylbenzantracene ), LPP UAD, Laporan Penelitian, Yogyakarta Akrom,  Nurani,  L.N.,  Hidayati,  T., 2008, Kajian aktivitas imunomodulator agen kemopreventif isolate aktif ekstrak N.sativa pada  kanker payudara  akibat  paparan  DMBA pada  tikus    putih, Laporan Penelitian , LPP UAD, Yogyakarta Akrom,  2004,  Efek  ekstrak  etanol HERBA MENIRAN ( Phyllanthus  niruri L ) Terhadap Respon  Imun  Seluler  Mencit Galur  SWISS  Jantan  Selama Diinfeksi Plasmodium  Berghei :
Studi  imunomodular  fitokimia, Tesis , Pasca Sarjana UGM, Yogyakarta Akrom,  Khoiri,  N.,  Suhana,  Y., Mustofa, 2007. Pengaruh pemberian  ekstrak  etanol  biji Jinten  hitam  ( N.sativa Lour)
terhadap  aktivitas  fagositosis  dan
Efek Kemopreventif Dan Antihematotoksik Akrom , dkk 66
jantan  galur  Balb  C  secara in sekresi  ROI  makrofag  mencit
Tanaman vitro , Seminar       Nasional
Obat      dan      obat tradisional ,          Balai         Besar Tanaman Penelitian     dan     Pengembangan Badan Obat     dan     Obat Departemen Kesehatan RI, Solo, 10-11 Juli 2007 Litbang Kesehatan,
Akrom,  Wijaya,  A.,    Djannah,  S.N., 2007,  Effect  of  the  ethanolic extract  of Nigella  sativa on phagocytosis activity of macrophage  male  swiss  mice during infection of Listeria monocytogenes, The 4th International Eijkman Conference , Bali, 15-18 November 2007 Al Ghamdi MS, 2001. The antiinflamator,  analgesic  and antipyretic  activity  of  Nigella sativa, 55 : 379-382. Departemen of  Pharmacology  King  Faisal University  Collage  of  Medicine.
2002 Arora,  A,  Siddiqui,  I.A.,  Shukla,  Y., 2004. Modulation of p53 in 7,12- dimethylbenz[a]anthracene- induced  skin  tumors  by  diallyl sulfide in Swiss albino mice, Mol
Cancer Ther .,3(11):1459-66.
activity  of  thymoquinone  against benzo(a)pyrene  in  mice, Food Chem Toxicol , 45(1):88-92 Bajak, E.Z., 2005. Genotoxic stress:novel biomarkers and detection  methods  uncovering RNAs  role  in  epigenetics  of carcinogenesis, Dissertation , Karolinska University Press, Sweden Baratawidjaja, K.G. 2004. Imunologi
Dasar. Jakarta  :  Balai  Penerbit
Fakultas  Kedokteran  Universitas Indonesia El-Kadi A, Kandil O. 1986 , Effect of
th
Islamic  Medicine,  Kuwait. Bull Islamic Med; 4 : 344-8 . Farrah,  K.M.,  2001.  Mechanisms  of the hypoglycaemic and immunopotentiating  effects  of Nigella sativa L. oil in streptozotocin-induced diabetic hamsters
Gao  J,  Lauer  FT,  Dunaway  S, Burchiel SW., 2005. Cytochrome P450  1B1  is  required  for  7,12- dimethylbenz(a)-anthracene
(DMBA)  induced  spleen  cell immunotoxicity. Toxicol Sci. 86(1):68-74
Gao,  J.,  Lauer,  F.T.,  Mitchell,  L.A.,
Microsomal  expoxide  hydrolase is required for 7,12- dimethylbenz[a]anthracene (DMBA)-induced immunotoxicity  in  mice. Toxicol Sc i. 98(1):137-44 Gao,  J.,  Mitchell,  L.A.,  Lauer,F.T.,
Induced    Immunosuppression, Mol Pharmacol . 73:  1 Gibbs,J.B.,  2000,  Mechanism-based Target  Identification  and  Drug Discovery in  Cancer  Research,
Science vol 287, 1969-1973 Giknis,  M.L.A., and Clifford,  C.B., 2008. Clinical laboratory parameters  for  Crl:WI  (Han) Sprague  Dawley  Rat ,  Charles River Laboratory, Montreal,
Quebec, Canada
Harborne J.B., 1987, Metode
67
Media Farmasi, Vol 10 No.2 September 2013 : 56-70
www.elseiver.com. Desember Burchiel, S.W., 2007. Badary  OA,  Abd-Ellah  MF,  El- Burchiel,  S.W.,  2008.  p53  and Mahdy MA, Salama SA, Hamada ATM /ATR Regulate 7,12- FM, 2007. Anticlastogenic Dimethylbenz[ a ]  anthracene  - Fitokimia,        Penuntun      Cara Modern                    Menganalisis
Nigella sativa (the black seed) on Tumbuhan ,   diterjemahkan   oleh immunity.  Proceeding  of  the  4 Kosasih  Padmawinata dan Imam International Conference on Sudiro,    Edisi    kedua,  Penerbit
Haq,  A.,  Lobo,  P.I.,  Al  Tufail,  M., Rama,  N.,  R.,  Al  Sedairy,  S.,  T.,
1999.  Immunomodulatory  effect of Nigella sativa proteins fractionated  by  ion  exchange chromatography, Int. J. Immunopharmacol ., 21(4):283- 95 Hidayati, T., Akrom, 2006. Pengaruh ekstrak etanol jinten hitam terhadap aktivitas fagositosis makrofag  mencit  Swiss  yang diinfeksi  P.berghei  secara  in vitro, Prosiding seminar nasional farmakoterapi ,  Program  Profesi
Apoteker Fakultas Farmasi UAD, Yogyakarta: 14  Januari 2006 phase I metabolism of xenobiotics  I:  pesticides  and Jones,  CLA.,2000.  Herbal  Aids  For Cancer. Nutrition  Science  News dalam Chiro.org. www.
King,  R.J.B.,  2000, Cancer  Biology ,
nd
Kresno,  S.B.,  2001. Imunologi  : Dignosis dan Prosedur Laboratorium . Ed. Keempat. Jakarta  :  Fakultas  Kedokteran Kubatka, P., Ahlersova E., Ahlers I., Bojkova B., Kalicka K., Adamekova  E.,  Markova  M., Chamilova  M.  and  Cermakova M., 2002, Variability of Mammary Carsinogenesis Induction  in  Female  Sprague- Dawley  and  Wista:  Han  Rats  : the  Effect  of  Season  and  Age,
Physiol. Res . , 51,633-640
Meiyanto,E.,Susilowati,Sitarina,Arifi n,I.,  2004a,  Efek  Antimutagenik ekstrak  etanolik  daun Gynura procumbens (Lour.)  Merr.  pada kanker  payudara  tikus  terinduksi
DMBA  melalui  induksi  enzim GST hepar dalam Seminar “ Perhimpunan Biokimia dan
Biologi  Molekuler  Indonesia”
Yogyakarta.
Meiyanto,  E.,  Sugiyanto,  and  R.
Murwanti,  2004b.  Efek  Anti Karsinogenesis  Ekstrak  Etanol Tanaman  Daun  Dewa  ( Gynura procumbens (Luor)  Merr)  pada Kanker  Payudara  Tikus  yang diinduksi dengan (DMBA). Penelitian Hibah Bersaing , 6-12 activation of bay and fjord region polycyclic aromatic hydrocarbons  in  human  cell 13(1),10-17
Cancer  initiation  by  polycyclic aromatic  hydrocarbons  results from  formation  of  stable  DNA adducts rather than apurinic sites,
1891 Miyata, M., Kudo, G., Lee, Y., Yang,
T.J.,  Gelboin,  H.V.,  Gonzalez,
F.J.,  1999,  Targeted  Disruption of  the  Microsomal  Epoxide Hydrolase  Gene, J.  Biol.  Chem. , 274, 23963-23968.
Nickavar B., Mojab, F., Javidnia, K.,
Amoli,  M.,A.,  2003. Chemical composition  of  the  fixed  and Efek Kemopreventif Dan Antihematotoksik Akrom , dkk 68 Hodgson  E.,  2001.  In  vitro  human Dimetilbenz(a)antrazena September 2001., J Biochem Mol Formation of stable DNA adducts Toxicol . , 15(6), 296-299 and apurinic sites upon metabolic related chemicals used in Melendez-Colon,  V.J.,  Luch,  A., agriculture  and  public  health, Seidel,  A.,  Baird,  W.M..,  2000. Chiro.org. cultures, Chem  Res  Toxicol. , 2   edition,  Pearson  Education Melendez-Colon,  V.J.,  Luch,  A., Ltd., London Seidel,  A.,  Baird,  W.M.,  1999. Universitas Indonesia Carcinogenesis. 20(10),1885-
volatile  oils  of  Nigella  sativa  L. from  Iran, J.  Naturforsch ,  58(9-
10):629-31
Page, T.J., O’Brien, S., Holstone, K.,
William,  P.S.,  Jefcoat,  C.R., 2003. 7,12- dimethylbenz[a]anthracene- Induced Bone Marrow ToxicityIs p53-Dependent, Toxicol Sci. 74:85–92 Pitot, H.C., and Dragan, Y., P., 2001, Chemical Carcinogenesis , in Curtis  D  Klaasen,  Casarett  &
th
Graw  Hill.  Medical  Publishing Division, New York, p. 241-280. Purnomosari,  D.,  Paramita,  D.K.,
Aryandono,  T.,  Pals,  G.,  Van Diest,  P.J.,  2005.  A  novel BRCA2 mutation in an Indonesian  family  found  with  a
mutation  detection  method  based
493-499 Randhawa,  M.A.,  Al-Ghamdi,MS.,
therapeutic  effects  of Nigella sativa, Pakistan  J.  Med.  Res. Vol.41,  No.2
Roitt,  I.,  2006, Roitt`s  Essential Immunologi , Ninth Edition, Blackwell  Science  Ltd,  London,
380-385
Sangat,  H.M.,    Zuhud,  E.A.M.  dan
Damayanti,E.K.  2000. Kamus Penyakit  dan  Tumbuhan  Obat
Idonesia .  Jakarta:  Yayasan  Obor Indonesia Shimada,  T.,  2006.  Xenobiotic  –
metabolizing  enzymes  .involved in activation and detoxification of carcinogenic  polycyclic  aromatic
hydrocarbon, Drug. Metab Pharmacocinet , 27(4), 257-276
Shimada,  T.,  Oda,  Y.,  Gillam, E.M.J., Guencerich, P., Inoue, K., 2001,  Metabolic  activation  of polycyclic  aromatic  hydrocarbon and other carcinogen by cytochromes P450 1A1 and P450 1B1allelic  variants  and  other human cytochromes P450in salmonella  typimutium  NM2009, Drug Metabolism and Dispotition , 29 (9), 1176-1181 1998. Effect of the beta- diketones diferuloylmethane (curcumin) and dibenzoylmethane on rat mammary  DNA  adducts  and tumors induced by 7,12-
dimethylbenz[a]anthracene,
1043.
rat  mammary  tumorigenesis  by concord  grape  juice  constituents,
7280-7286. Surh, Y., 1999, Molecular Mechanism  of  Chemopreventive Effect  of  Selected  Dietary  and Medicinal  Phenolic  Substances, Mut Res, 428, 305-327 Surh, Y., 2002, Anti-tumor promoting potential of selected of spice ingredients with antioxidative and anti- inflammatory  activities  :  a  short review, Food and Chem. Tox . 40 ,1091-1097 Surh, Y., 2003. Cancer Chemoprevention  With  Dietary 69 Media Farmasi, Vol 10 No.2 September 2013 : 56-70 Doull’s: Toxicology,  The  Basic Singletary K, MacDonald C, Science  of    Poisons ,  6   ed,  Mc. Iovinelli  M,  Fisher  C,  Wallig  M. new,  rapid,  and    sensitive Carcinogenesis , 19(6), 1039- on pooled denaturing gradient gel Singletary KW, Stansbury MJ, Giusti electrophoresis and targeted M, Van  Breemen  RB,  Wallig  M, sequencing, J.Clin.Pathol ,  58, Rimando  A,  2003.  Inhibition  of 2002 , A review of the pharmaco- J  Agric  Food  Chem ;  3;51(25),
Phytochemicals. Nature  Revs.3 .  ; 768-80 Tjindarbumi,D, dan Mangunkusumo,R., 2002, Cancer  in  Indonesia,  Present  and Future, Jpn  J  Clin  Oncol ;  32 (Supplement 1) ,17-21 Tullo,  A.,  and  E.  Sbisa.  2002. Molecular  characterization  of p53  mutations  in  primary  and secondary liver tumors. Diagnostic and Therapeutic perspectives . Moleculer Biotechnology , 21, 265-278. Efek Kemopreventif Dan Antihematotoksik Akrom , dkk      70