## AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI TERIPANG LAUT
Holothuria atra TERHADAP BAKTERI Escherichia coli DAN Staphylococcus aureus
Pasia MitraTryhilami Umboh 1) , Defny Silvia Wewengkang 1) , Paulina V. Y Yamlean 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRAK
Indonesia  merupakan  negara  tropis,  yang  mempunyai  keanekaragaman  hayati  berlimpah  salah satunya ialah teripang laut. Penelitian ini bertujuan untuk menguji aktivitas antibakteri fraksi teripang laut ( Holothuria atra )  terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus . Ekstraksi menggunakan metode maserasi dengan pelarut etanol dan fraksinasi menggunakan pelarut n-heksan, kloroform, metanol dan  air.  Pengujian  antibakteri  menggunakan    metode  difusi  agar.  Hasil  penelitian  menunjukkan  ekstrak dan  fraksi  uji  memiliki  aktivitas  sebagai  antibakteri.Berdasarkan  hasil  penelitian,  disimpulkan  bahwa fraksi  teripang  laut  ( Holothuria  atra )  efektif  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli serta bakteri Staphylococcus aureus dengan  kategori sedang  dan kuat.Daya hambat terbesar ditunjukkan oleh fraksi kloroform.
Kata Kunci : Holothuria atra , daya hambat , Escherichia coli , Staphylococcus aureus , fraksinasi, difusi agar.

## ABSTRACT
Indonesia  is  a  tropical  country,  which  has  abundant  biodiversity  and  one  of  them  is  sea cucumber.  This  study  aims  to  examine  the  antibacterial  activity  of  sea  cucumber  (Holothuria  atra) fraction    against  Escherichia  coli  and  Staphylococcus  aureus  bacteria.  Extraction  uses  a  maceration method  with  ethanol  and  fractionation  using  solvent  of  n-hexane,  chloroform,  methanol  and  water solvents.  Antibacterial  testing  using  agar  diffusion  method.  The  results  showed  that  the  extract  and fraction of the test had activity as antibacterial. Based on the results of the study, it was  concluded that the fraction of sea cucumber (Holothuria atra) was effective in inhibiting the growth of Escherichia coli bacteria  and  Staphylococcus  aureus  bacteria  with  medium  and  strong  category.  The  largest  inhibitory factor is shown by the chloroform fraction.
Keywords : Holothuria atra, inhibitory factor, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, fractionation, agar diffusion.

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  salah  satu negara  yang  memiliki  potensi  sumber  daya laut  yang  tinggi  karena  sebagian  besar kawasannya  berupa  perairan.Laut  Indonesia mempunyai  kontribusi  yang  besar  dalam penyediaan pangan bagi masyarakat Indonesia.Salah satu hasil laut yang mempunyai  nilai  ekonomis  penting  tersebut adalah timun laut dan umumnya yang masuk kedalam  perdagangan  disebut  “teripang” (Darsono, 2007).
Teripang atau ketimun laut digolongkan  kedalam  filum  Echinodermata pada
kelas Holothuridae.Teripang merupakan  salah  satu  sumber  daya  hayati laut  yang  mempunyai  nilai  ekonomis  yang penting.  Biota  ini  merupakan  salah  satu produk  perikanan  yang  mampu  menambah devisa negara (Subowo, 2009).
Teripang  merupakan  salah  satu komoditas  perikanan  yang  mempunyai prospek  cukup  baik  dan  bernilai  ekonomis tinggi,  baik  dipasaran  domestik  maupun internasional  (Darsono,  2007).Pemanfaatan teripang  diIndonesia  sebagai  bahan  pangan dibandingkan  produk  perikanan  lainnya tergolong  rendah  dan  kurang  popular (Darsono  et  al.  1998).  Radjab  dan  Darsono (2004)  menjelaskan  bahwa  dibeberapa negara  seperti  Hongkong,  Taiwan,  dan Singapura telah  memiliki teknik pengolahan teripang  yang  lebih  maju  sehingga  teripang telah  menjadi  salah  satu  komponen  pangan yang sangat digemari.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan  Agustus  2017  –  Desember  2017  di Laboratorium  Mikrobiologi,  Laboratorium
Fitokimia  Dan  Farmakognosi,  Program Studi  Farmasi,  Fakultas  Matematika  dan Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas  Sam Ratulangi.
Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  antara  lain  yaitu  masker, shorkel,  fins ,  tabung  oksigen, cool  box, alat fotografi,  pisau,  botol  plastik,  botol  kaca steril, timbangan analitik, gelas ukur 100 mL dan  250  mL,  pipet  tetes,  corong  gelas, corong  pisah,  kertas  saring,  gelas  beaker 1800  mL, rotary  evaporator,  isonicater, vortex, cawan  petri,  spatula,  kertas  label, lemari  pendingin,  erlenmeyer  250  mL, autoklaf, pinset, magnetic  stirer, batang pengaduk,  mikropipet,  tabung  reaksi,  kertas aluminium,  rak  tabung  reaksi,  inkubator, laminar  air  flow, oven,  sarung  tangan, kapas, tissue, mistar berskala.
Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini antara  lain  yaitu teripang  laut, bakteri  uji Staphylococcus  aureus  dan Escherichia  coli ,  ekstrak  daging  (beef extract), aquades, etanol, kloroform, metanol,  n-heksan,  kapsul  kloramfenikol 250  mg, nutrient  agar, pepton,  natrium klorida, paper  disc ukuran  6  mm,  kertas label.

## PENGAMBILAN SAMPEL
Pada  penelitian  ini  sampel  teripang laut dikoleksi dari perairan pantai Malalayang kota Manado, dengan menggunakan  alat  bantu  (masker,  fins,  dan shorkel).  Sampel  yang  telah  diperoleh dimasukkan  ke  dalam  kantong  plastik  tahan panas,  selanjutnya  ditempatkan  dalam cool box kemudian langsung dibawa ke laboratorium  Fitokimia  dan  Farmakognosi Program Studi Farmasi Fakultas Matematika Dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas
Sam  Ratulangi.  Sebelumnya  sampel  difoto, kemudian dibersihkan dari pengotor selanjutnya  sampel  dipotong  kecil-kecil ditimbang dan diberi label serta nomor pada sampel.

## Ekstraksi Bahan Aktif Sampel
Ekstraksi teripang laut menggunakan metode maserasi dengan pelarut etanol 96%. Pertama-tama  teripang  laut  yang  telah dipotong  kecil-kecil  ditimbang  sampel sekitar  332,4  dimasukkan  kedalam  botol kaca,  setelah  itu  sampel  direndam  kedalam larutan  etanol  96%  sebanyak  664  mL dengan  perbandingan  1:2  (b/v)  ditutup dengan aluminium  foil selama  selang  waktu 24 jam pada suhu kamar. Kemudian sampel tersebut  disaring  sehingga  menghasilkan filtrat  1  dan  debris  1.  Debris  pertama  (1) kemudian  ditambahkan  dengan  larutan etanol  dengan  perbandingan  yang  sama yaitu  1:2  (b/v)  ditutup  dengan aluminium foil dan  dibiarkan  selama  selang  waktu  24 jam.  Kemudian  sampel  tersebut  disaring sehingga  menghasilkan  filtrat kedua (2) dan debris  kedua  (2).  Debris  kedua  kemudian ditambahkan  dengan  larutan  etanol  dengan perbandingan  1:2  (b/v),  ditutup  dengan aluminium foil dan dibiarkan selama 24 jam selanjutnya sampel tersebut disaring menghasilkan  filtrat  (3)  dan  debris  (3). Filtrat 1, 2, dan 3 dicampurkan menjadi satu kemudian disaring dan selanjutnya dievaporasi menggunakan rotary evaporator pada  temperatur  suhu  40 0 C  sampai  etanol menguap.  Selanjutnya  ekstrak  dikeringkan dengan  cara  diangin-anginkan  sehingga diperoleh  ekstrak  kasar  dan  ditimbang menggunakan timbangan analitik, ditempatkan  dalam  botol  kecil  kemudian disimpan  dalam  lemari  pendingin  untuk
selanjutnya  diuji  aktivitas  bakterinya  ( Khopkar, 2003).

## Fraksinasi Sampel
Ekstrak kasar teripang  laut sebanyak 1  g  dimasukkan  kedalam  corong  pemisah, kemudian  dilarutkan  dalam  metanol:air sebanyak  100  mL  dengan  perbandingan  9:1 (v/v)  selanjutnya  ditambahkan  dengan  n- heksan 100 mL. Kemudian dikocok berulangkali sampai homogen, dan dibiarkan  hingga terbentuk  lapisan  metanol- air  dan  lapisan  n-heksan.Masing-masing lapisan ditampung ke dalam wadah erlenmeyer  yang  berbeda.Lapisan  n-heksan selanjutnya dievaporasi menggunakan rotary evaporator sampai lapisan mengering dan menghasilkan fraksi n-heksan kemudian hasil  tersebut  ditimbang.Selanjutnya  lapisan metanol-air  ditambahkan  air  sebanyak  100 mL dengan perbandingan 1:1 (v/v) kemudian dipartisi dengan pelarut kloroform sebanyak  200  mL.Setelah  itu  dikocok berulang  kali  sampai  homogen,  dibiarkan hingga  terbentuk  lapisan  metanol-air  dan lapisan  kloroform.Masing-masing  lapisan ditampung kedalam wadah erlenmeyer  yang berbeda.Lapisan kloroform kemudian dievaporasi menggunakan rotary evaporator hingga lapisan mengering dan menghasilkan fraksi kloroform lalu fraksi tersebut ditimbang.Selanjutnya  lapisan  metanol-air ditampung  pada  wadah  erlenmeyer  yang berbeda,  kemudian  diuapkan  dengan rotary evaporator hingga kering dan  menghasilkan fraksi  metanol-air,  kemudian  ditimbang ketiga fraksi tersebut selanjutnya ditempatkan dalam botol kecil dan disimpan dalam  lemari  pendingin  untuk  selanjutnya digunakan pada pengujian antibakteri (Harborne, 1987).
Sterilisasi Alat Alat yang digunakan dalam penelitian aktivitas antibakteri ini distrerilkan  terlebih  dahulu.  Alat  gelas disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121˚C selama  15  menit,  pinset  dibakar  dengan pembakaran  diatas  api  langsung  dan  media disterilkan  diautoklaf  pada  suhu  121˚C selama 15 menit (Lay dan Hastowo, 1992).

## Pembuatan media cair B1
Pepton  0,5  g,  ekstrak  daging  ( beef extract )  0,3  g,  natrium  klorida  0,3  g,  dan aquades sebanyak 100 mL diambil kemudian  dicampurkan  dalam  erlenmeyer lalu  diaduk  sampai  merata  menggunakan magnetic stirrer selanjutnya diautoklaf pada suhu  121˚C  selama  15  menit,  kemudian didinginkan.  Setelah  dingin  dipipet  1  mL media cair B1, dimasukkan kedalam tabung reaksi  dan  ditutup  dengan aluminium  foil , dan  media  cair  B1  siap  digunakan  sebagai media kultur bakteri (Ortez, 2005).

## Kultur Bakteri
Media cair B1  yang sudah disiapkan sebelumnya  ditambahkan  dengan  bakteri- bakteri  yang  akan  dikultur  dalam  hal  ini bakteri yang akan dikulturkan yaitu Staphylococcus aureus dan Escherichia coli sebanyak  100  µL  kedalam  wadah  tabung reaksi  yang  berbeda.  Kemudian  ditutup dengan  kertas  aluminium  foil  ditiap  tabung reaksi  label  dan  dimasukkan  kedalam inkubator selama 1x24 jam pada suhu 37 ˚C (Ortez, 2005).

## Pembuatan Larutan Kontrol
Kontrol  negatif  yang  digunakan dalam penelitian ini yaitu dengan menggunakan metanol, dengan cara membuat  larutan  stok  metanol  dengan mengambil sebanyak 5 mL metanol
kemudian  dimasukkan  kedalam  tabung reaksi,  ditutup  dengan aluminium  foil . Kontrol negatif digunakan sebagai pembanding  dan  pelarut  untuk  pembuatan larutan  kontrol  positif  dan  pembuatan larutan uji.
Kontrol  positif  yang  digunakan dalam penelitian ini yaitu dibuat dari sediaan obat  kapsul  kloramfenikol  250  mg.  Satu kapsul  kloramfenikol  dibuka  cangkang kapsulnya  kemudian  timbang  serbuk  dalam kapsul  sebanyak  30  mg.  Kemudian  serbuk dimasukkan  kedalam  wadah  botol  kaca  dan dilarutkan  dengan  metanol  5  mL  untuk memperoleh  larutan  stok  kloramfenikol dengan konsentrasi 250 µg/50 µL.

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  metode  difusi  agar  (disc diffusion  Kirby  and  Bauer).Pada  pengujian aktivitas antibakteri ini, cakram ( paper disc ) yang  digunakan  berukuran  6  mm  dengan daya  serap  50  µL  tiap  cakram.  Kosentrasi yang  digunakan  pada  pengujian  ini  hanya satu  kosentrasi    yaitu  250  µg/50  µL  pada setiap sampel yang terdiri dari ekstrak kasar, fraksi  n-heksan,  fraksi  kloroform,  fraksi MeOH-air,  kontrol  positif  dan  kontrol negatif.  Sampel  yang  telah  ditentukan kosentrasinya  (250  µg/50  µL)  ditotolkan pada masing-masing cakram dengan menggunakan  mikropipet.Untuk  media  agar B1  yang  sudah  diautoklaf  pada  suhu  121˚C selama  15  menit,  kemudian  didinginkan sampai  suhu  40˚C.  Dituangkan  media  agar B1 ke dalam cawan petri, diambil sebanyak 100  µL  bakteri  yang  telah  di  kultur  dalam tabung  reaksi,  dipipet  dan  diinokulasi  pada media  agar  B1  dan  ditunggu  sampai  media agar B1 mengeras. Diletakkan kertas cakram
yang  telah  ditotolkan  sampel  uji  dengan pinset kemudian masing-masing cawan petri diberi  label  dan  nomor  sampel  yang  sesuai selanjutnya  cawan  petri  lalu  diinkubasi selama 1x24 jam (Ortez, 2005).

## Pengamatan dan Pengukuran
Pengamatan  dapat  dilakukan  setelah 1x24  jam  masa  inkubasi.  Daerah  pada sekitaran  cakram  menunjukkan  kepekaan bakteri  terhadap  antibiotik  atau  bahan antibakteri  yang  digunakan  sebagai  bahan uji  yang  dinyatakan  dengan  diameter  zona hambat.  Diameter  zona  hambat  diukur dalam satuan millimeter (mm) menggunakan mistar berskala dengan cara diukur diameter total  zona  bening  cakram.  Kemudian diameter zona hambat tersebut dikategorikan kekuatan  daya  antibakterinya  berdasarkan penggolongan (Davis and Stoud, 1971).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi Sampel
Sampel yang telah dilarutkan kemudian  diekstraksi.  Proses  ekstraksi dalam  penelitian  ini  menggunakan  metode maserasi, metode ini sangat menguntungkan dalam  isolasi  senyawa  bahan  alam  maupun bahan  laut,  karena  dengan  perendaman sampel  akan  terjadi  pemecahan  dinding  sel dan  membran  sel  karena  perbedaan  tekanan antara  didalam  dan  diluar  sel,  sehingga metabolit  sekunder  akan  terlarut  dalam pelarut  organik  dan  ekstraksi  senyawa  akan sempurna karena dapat diatur lama perendaman  yang  dilakukan.  Selain  itu pelarut  etanol  mempunyai  sifat  selektif, dapat  bercampur  dengan  air  dengan  segala perbandingan, ekonomis, mampu mengekstrak  sebagian  besar  senyawa  kimia yang  terkandung  dalam  simplisia  seperti
alkaloida, minyak atsiri, kurkumin, kumarin, antrakinon,  flavonoid,  steroid,  damar  dan klorofil.  Sedangkan  lemak,  tanin  dan saponin,  hanya  sedikit  larut  (Depkes  RI, 1986).  Hasil  ekstraksi  menggunakan  pelarut etanol 96 % didapati filtrat berwarna cokelat pekat  dengan  berat  332,4  g,  filtrat  tersebut kemudian disaring kembali untuk memisahkan  garam  dari  ekstrak  dengan tujuan,  agar  dalam  pengujian  antibakteri garam  tidak  mengganggu  penghambatan bakteri. Filtrat selanjutnya diuapkan menggunakan rotary  evaporator untuk memisahkan  pelarut  dan  ekstrak  sehingga didapati  ekstrak  kasar  etanol  berwarna cokelat  kehitaman  dengan  berat  4,25  g  dan rendemen berkisar 1,2%.

## Fraksinasi Sampel
Fraksinasi  cair-cair  menggunakan corong pisah ini bertujuan untuk memisahkan senyawa yang memiliki kepolaran  berbeda  yang  terkandung  dalam ekstrak  kasar.  Fraksinasi  dilakukan  sebagai berikut  :  Ekstrak  kasar  sebanyak  1  g dilarutkan ke dalam  metanol dan air dengan perbandingan  9:1  sebanyak  100  mL. Selanjutnya  dimasukkan  kedalam  corong pisah,  kemudian  ditambahkan  100  mL  n- heksan  dengan  perbandingan  1:1  dikocok secara  perlahan-lahan.Setelah  didiamkan terjadi pemisahan antara fraksi n-heksan dan metanol-air.Fraksi  n-heksan  menghasilkan larutan berwarna kuning, selanjutnya larutan tersebut  dipisahkan.  Fraksi  metanol-air kemudian ditambahkan dengan air sebanyak 100  mL  dengan  perbandingan  1:1,  hal tersebut  dilakukan  untuk  menarik  senyawa polar  yang  cenderung  tidak  tertarik  dalam pelarut  metanol  akan  tetapi  dapat  tertarik dalam  pelarut  air.  Fraksi  metanol  air
kemudian dipartisi dengan pelarut kloroform sebanyak  100  mL  dengan  perbandingan  1:1
dikocok kembali secara perlahan- lahan.Setelah  didiamkan  terjadi  pemisahan antara fraksi metanol-air dan kloroform.Fraksi  metanol-air  menghasilkan larutan  berwarna  kuning  bening  sedangkan
fraksi  kloroform  menghasilkan  larutan berwarna orange.
Fraksinasi dan rendemen fraksi Holothuria atra dapat dilihat pada Tabel 1.Rendemen fraksi menandakan banyaknya senyawa polar, semi polar, dan non polar yang tertarik. Tabel 1. Hasil Fraksinasi dan Rendemen Fraksi Sampel Berat Fraksi (g) Rendemen (%) Warna FH 0,22 22 Hijau FK 0,37 37 Coklat Kehitaman FMA 0,24 24 Cokelat Keterangan : FH = Fraksi Heksan FK = Fraksi Kloroform FMA  = Fraksi Metanol-Air
Berdasarkan tabel diatas, partisi menggunakan  pelarut  n-heksan,  didapati fraksi  n-heksan  berwana  hijau  dengan  berat 0,22  g  dan  rendemen  berkisar  22%,  untuk pelarut  kloroform  didapati  fraksi  berwarna cokelat  kehitaman  dengan  berat  0,37  g  dan rendemen  berkisar  37%  dan  metanol didapati fraksi berwarna coklat dengan berat 0,24 g, serta rendemen berkisar 24%. Ketiga rendemen  menunjukkan  perbedaan  yang nyata seperti rendemen yang dihasilkan oleh
fraksi  kloroform  lebih  besar  dibanding dengan  rendemen  metanol-air  dan  n-heksan hal  ini  disebabkan  oleh  karena  adanya perbedaan kelarutan komponen dalam sampel.
Hasil  pengukuran  diameter  zona hambat fraksi MeOH-ekstrak, fraksi MeOH- air,  fraksi  kloroform  dan  fraksin-heksan teripang  laut  (Holothuria  atra)  terhadap bakteri Escherichia coli.
Tabel 2 . Diameter Zona Hambat (mm) terhadap bakteri uji Escherichia coli Ulangan Fraksi etanol ekstrak Fraksi metanol air Fraksi kloroform Fraksi n-heksan Kontrol positif (+) Kontrol negatif (-) 1 12,5 7,25 12,75 5,75 21,75 0 2 11,75 7,75 20,75 6,75 23,75 0 3 8,75 8,75 21,75 7,75 24,25 0 Rata-rata 11 7,91 18,41 6,75 23,25 0
Berdasarkan  hasil  penelitian  uji aktivitas  antibakteri  pada  tabel  2,  didapati bahwa ekstrak dan fraksiuji mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri  gram negatif yaitu bakteri Escherichia coli .
Hasil  pengukuran  diameter  zona hambat  fraksi  metanol  ekstrak,  fraksi MeOH-air,  fraksi  kloroform  dan  fraksi  n- heksan teripang laut (Holothuria atra)
terhadap bakteri Staphylococcus aureus.
Tabel 3 .Diameter Zona Hambat (mm) terhadap bakteri uji Staphylococcus aureus Ulangan Fraksi etanol ekstrak Fraksi metanol air Fraksi kloroform Fraksi n-heksan Kontrol positif (+) Kontrol negatif (-) 1 13,75 7,75 13,5 6,75 20,5 0 2 10,75 8,75 22,5 7,5 21,75 0 3 12,75 9,75 23,5 8,5 23,25 0 Rata-rata 12,41 8,75 19,83 7,58 21,83 0 Daya  hambat  antibakteri  berbeda- beda.Antibakteri dapat
dibedakan berdasarkan  mekanisme  kerjanya,  yaitu antibakteri  yang  menghambat  pertumbuhan dinding sel, antibakteri yang mengakibatkan perubahan  permeabilitas  membrane  sel  atau menghambat  pengangkutan  aktif  melalui membran  sel,  antibakteri  yang  menghambat sintesis  protein  dan  antibakteri yang menghambat sintesis asam nukleat sel(Brooks et al , 2005).
Hasil penelitian uji aktivitas antibakteri pada tabel 3 diatas, menunjukkan bahwa,  ekstrak  dan  fraksi  uji  mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri  gram positif  yaitu  bakteri Staphylococus  aureus . Hal  ini  ditunjukkan    dengan  adanya  daya hambat  yang  terbentuk  pada  fraksi  metanol ekstrak  sebesar  12,41  mm  serta  fraksi kloroform yaitu sebesar 19,83 mm dikategorikan  kuat,  sedangkan  untuk  fraksi metanol-air menunjukan daya hambat dengan  kategori  sedang  yaitu  8,75  mm  dan pada fraksi n-heksan sebesar 7,58 mm.
Dari hasil pengamatan yang dilakukan  didapati  bahwa  metanol  ekstrak mampu  menghambat  bakteri  gram  positif dan  bakteri  gram  negatif  lebih  besar dibanding  dengan  fraksi  metanol-air  dan fraksi  n-heksan.  Perbedaan  nyata  yang  juga ditunjukkan  oleh  metanol  ekstrak  terhadap bakteri Eschericihia coli dan Staphylococcus aureus terjadi  karena,  bakteri  gram  negatif memiliki  struktur  dinding  sel  yang  berbeda dengan  bakteri  gram  positif  sehingga metanol ekstrak mampu menghambat pertumbuhan  lebih  baik  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dibanding  dengan bakteri Escherichia coli.
Sedangkan  untuk  sifat  n-heksan terhadap  pertumbuhan  bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus didapati perbedaan  yang  sangat  nyata  dengan  fraksi yang  lainnya.  Hal  ini  mungkin  disebabkan oleh  karena  terjadinya  penguraian  senyawa bioaktif  pasa    saat  penguapan  pelarutnya, sehingga  senyawa  bioaktif  yang  terkandung didalam  fraksi  n-heksan  hanya  sedikit,
sehingga  daya  hambat  antibakteri  yang ditimbulkan cenderung lebih kecil dibanding fraksi lainnya.
Kontrol negatif menunjukkan perbedaan  yang  nyata  terhadap  kontrol positif,  ekstrak  maupun  fraksi  bahan uji.Kontrol  negatif  yang  digunakan  yaitu metanol,  menunjukkan  tidak  adanya  zona hambat  pada  pengujian  terhadap  bakteri gram  positif Staphylococcus  aureus maupun gram  negatif Escherichia  coli .Hal  ini mengindikasikan bahwa kontrol yang digunakan  tidak  berpengaruh  pada  uji aktivitas  antibakteri,  sehingga  daya  hambat yang  terbentuk  tidak  dipengaruhi  oleh pelarut  melainkan  karena  aktivitas  senyawa yang  ada  pada  teripang  laut  ( Holothuria atra). Penggunaan  metanol  sebagai  kontrol diperkuat  dengan  penelitian  sebelumnya oleh  Ginting  (2010),  yang  menyatakan bahwa  kontrol  metanol  pada  uji  antibakteri tidak menunjukkan adanya aktivitas sehingga  dapat  dipastikan  bahwa  metanol tidak  berpengaruh  terhadap  aktivitas  yang terbentuk.
Kontrol positif menunjukkan perbedaan  yang nyata, karena  menghasilkan aktivitas  antibakteri  yang  paling  besar terhadap  bakteri  uji  dibanding  kontrol negatif  ekstrak  ataupun  fraksi  bahan  uji. Untuk  pengujian  ini,  kontrol  positif  berupa antibiotik yang digunakan yaitu kloramfenikol.
Berdasarkan  hasil  pengamatan  dapat diketahui  bahwa  aktivitas  yang  ditunjukkan oleh  ekstrak  dan  fraksi  berbeda  disebabkan oleh senyawa bioaktif yang terkandung pada ekstrak  maupun  fraksi  uji  memiliki  sifat kepolaran  berbeda-beda  sehingga  daya hambat yang ditunjukkan juga berbeda-beda
dalam  menghambat  pertumbuhan  kedua bakteri  uji,  dan  juga  kemampuan  setiap bakteri  dalam  melawan  aktivitas  antibakteri bergantung  pada  ketebalan  dan  komposisi dinding  selnya.  Dinding  sel  bakteri  gram negatif  lebih  tipis  dibanding  bakteri  gram positif.Struktur bakteri gram negatif memiliki  membran  lapisan  luar  yang menyelimuti  lapisan  tipis  peptidoglikan, struktur luar peptidoglikan ini adalah lapisan ganda  yang  mengandung  fosfolipid,  protein dan lipopolisakarida.Lipopolisakarida terletak  pada  lapisan  luar  dan  merupakan karakteristik bakteri gram negatif.Sementara sel bakteri gram positif memiliki dinding sel yang  terdiri  atas  lapisan  peptidoglikan  yang tebal.Selain itu kekeruhan perairan mungkin juga berpengaruh dalam karakteristik senyawa bioaktifnya.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa fraksi  teripang  laut  ( Holothuria  atra) memiliki aktivitas sebagai antibakteri terhadap bakteri Escherichia coli dan bakteri Staphylococcus  aureus. Fraksi  teripang  laut ( Holothuria atra ) memiliki senyawa bioaktif dengan  spektrum  yang  luas  yang  efektif dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri Escherichia coli dan bakteri Staphylococcus aureus. Masing-masing fraksi memiliki perbedaan  daya  hambat  terhadap  bakteri
Escherichia coli serta
bakteri Staphylococcus  aureus. Daya  hambat  yang paling besar ditunjukkan oleh fraksi kloroform.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  untuk  mengetahui  kosentrasi  hambat
minimum maupun kosentrasi bunuh minimum  pada  fraksi  kloroform  dan  juga untuk  mengetahui  senyawa  bioaktif  apa yang  terkandung  dalam  fraksi  kloroform yang mampu menghambat bakteri Staphylococcus  aureus  maupun  Escherichia coli.

## DAFTAR PUSTAKA
Brooks,  G.  F.  J.  S.  Butel,  And    L.  N.
Ornston.  1995.  A.  Review  of Medical  Microbiology. Journal  of Microbiology. 4 : 197--202.
Christami, G. 2014. Aktivitas Antioksidan  & Tabir  Surya  Ekstrak  Fenolik    Dari Cortex    Umbi  Kayu  (Manihot Esculenta)  Dari  Kota  Melonguane. [Skripsi]  Program  Studi  Farmasi Fakultas  Matematika  Dan  Ilmu Pengetahuan  Alam,  Universitas  Sam
Ratulangi, Manado. Cowan,  M.  1999.  Plant  Product  as Antimicrobial Agent. Clinical
Microbiology  Reviews. 12  :  564--
582.
Darsono, P., A. Aznam, dan Djamali. 1998.
Kepadatan stok teripang pada beberapa  lokasi  di  Indonesia. J.
Torani, 14 : 264--272.
Darsono,  P.  2007.  Teripang  (Holothuridae):
kekayaan alam dalam keanekaragaman biota laut. J.
Oseana, 2 : 1--10.
Davis,  W.W.  And  Stoud,  T.  R.  1971.  Disc Plate  Methods  Of  Microbiological. Antibiotic Assay. Journal Of Microbiology . 22 : 659--665.
Depkes RI, 1986, Sediaan  Galenik, 2 & 10,
Departemen Kesehatan RI, Jakarta.
Dewi,  F.  K.  2010.  Aktivitas  Antibakteri Ejstrak  Etanol  Buah  Mengkudu
(Morinda Citrifolia, Linnaeus)
Terhadap  Bakteri  Pembusuk  Daging
Segar.  [Skripsi].  Universitas  Sebelas Maret, Surakarta. Ginting,  E.  L.  2010.  Aktivitas  Antibakteri Dari  Ekstrak  Kasar  Bakteri  Yang Berasosiasi Dengan Sponge Acanthostrongylophora  Sp.  [Skripsi] Fakultas Perikanan Dan Ilmu Kelautan Universitas Sam Ratulangi, Manado. Harborne,  J.  B  1987. Metode  Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan. Edisi Ke-2. Diterjemahkan Oleh K. Padmawinata Dan  Iwang  Soedira.  ITB  Press. Bandung.
I,  Made.  D.  Defny,  S.  W.  Frenly,  W.  2014. Aktivitas Antibakteri Dan Karakterisasi  Senyawa  Fraksi  Spons Lamellodysidea Herbacea Yang Diperoleh  Dari  Teluk  Manado. Pharmacon  Jurnal  Ilmiah  Farmasi.
4 : 2302--2493.
Ismail,  J.  Runtuwene,  M.  R.  J.  Fatima,  F.
2012. Penentuan Total Fenolik & Uji Aktivitas  Antioksidan  Pada  Biji  dan Kulit  Buah  Pinang  Yaki  (Areca Vestiara  Giseke). Jurnal  Ilmiah Sains. 12 : 84--88.
Karnila,  R.,  M.  Astawan,  Sukarno,  dan  T.
Wresdiyati. 2011. Karakteristik konsentrat  protein  teripang  pasir (Holothuria  scabra)  dengan  bahan pengekstrak aseton. J. Perikanan dan
Kelautan. 16 : 64--69.
Katzung,  B.  G.  2004. Farmakologi  Dasar dan Klinik. Edisi Ke-13 Farmakologi
Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga, Jakarta.
Khopkar,  S.  M.  2003. Konsep  Dasar  Kimia
Analitik. Ui-Press, Jakarta.
Kimball,  J.  Soetarmi,  S.  Sugiri.  N.  1983.
Biologi Jilid 3. Edisi Ke-5. Erlangga, Jakarta.
Kordi  MG.  2010.  A  to  Z  Budidaya  Biota Akuatik  untuk  Pangan,  Kosmetik, dan  Obat-obatan.  Yogyakarta  :  Lili Publisher.
Kristanti, A. N. Aminah, N. S. Tanjung, M. Dan  Kurniadi,  B.  2008.  Buku  Ajar Fitokimia. Unair Press, Surabaya.
Lay, B. W. Dan Hastowo, S. 1992.Mikrobiologi . IPB, Bogor.
Masduki,  I.  1996.  Efek  Antibakteri  Ekstrak
Biji Pinang (Areca Cathecu) Terhadap  S.  Aureus  Dan  E.  Coli  In Vitro. Jurnal Cermin Dunia Kedokteran. 109 : 21--24. Ortez, J. H. 2005. Disk Diffusion Testing. In Manual Of Antimicrobial Susceptibility  Testing  Marine  B. Coyle  Coord  Ed. American  Society
For Microbiology . 6 : 39--52.
Pelczar,  M.  J.  And  Chan,  E.  C.  S.  2005.
Dasar-Dasar  Mikrobiologi .  Edisi Ke-2 Diterjemahkan oleh Hadioetomo, R. S. Imas, T. Tjitrosomo,  S.  S.  Angka,  S.I.  Ui-
Press, Jakarta.
Radjab,  A.  W.  Dan  P.  Darsono.  2004.
Penyebaran  dan  kepadatan  teripang (Holothuroidea) di
perairan
Kepulauan  Natuna  bagian  barat, Riau. J. Ilmu Kelautan dan
Perikanan, 14 : 64--69. Renhoran,  W.  2012. Aktivitas  Antioksidan Dan Mikrobiologi Ekstrak
Sargassum Polycytum. [Skripsi] Departemen Teknologi Hasil Perairan  Fakultas  Perikanan  Dan Ilmu Kelautan. IPB, Bogor. Sembiring,  B.  B,  Mamun.  Ginting,  E.  I. 2006.  Pengaruh  Kehalusan  Bahan Dan  Lama  Ekstraksi  Terhadap  Mutu Ekstrak Temulawak (Curcuma Xanthoriza Roxb). Bulletin Littro. 17
: 53--58.
Subowo.  2009.  Histologi  Umum.  Ed.  Ke-2, cet. Ke-1. Sagung Seto, Jakarta.
Sukmiati.  M.,  S.  Salma,  S.  Ibrahim,  D.
Handayani,  dan  P.  Purwati.  2012.
Keanekaragaman teripang (Holothuroidea)  di  perairan  bagian timur pantai Natuna Kepulauan Riau, J. Natur Indonesia, 14 : 131--137. Suryanto  E.  2012. Fitokimia  Antioksidan. Putra Media Nusantara, Surabaya. Titis  M.  B.  M.  Fachriyah,  E.  Dan  Kusrini,
D.  2013.  Isolasi,  Identifikasi,  Dan Uji  Aktifitas  Senyawa  Alkaloid
Daun Binahong (Anredera Cordifolia Tenore Steenis). Journal Of Chemical Information And Modeling
1 : 196--201.