Majalah Farmaseutik Vol. 13 No. 2: 88-94
ISSN-p : 1410-590x
ISSN-e : 2614-0063
Perbedaan Aktivitas Larvisida Antara Ekstrak Metanol, Etil Asetat  dan  Kloroform  Rimpang Zingiber  zerumbet (L) Smith pada Aedes aegypti (Diptera: Culicidae)
Comparison of Methanol, Ethyl Acetates and Chloroform Extracts of Zingiber zerumbet (L)  Smith  in  Larvisidal  Activities  on Aedes  aegypti (Diptera: Culicidee) Larvae
Tri Murini 1* , Mae Sri Hartati Wahyuningsih 1 , Tri Baskoro T.Satoto 2
1. Departemen Farmakologi dan Terapi
2. Departemen  Parasitologi,  Fakultas  Kedokteran  Kesehatan  Masyarakat  dan Keperawatan, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta
Corresponding author: Tri Murini: Email:  murini28@yahoo.co.id
ABSTRAK
Akhir-akhir  ini  banyak  ditemukan  bahwa  larva  nyamuk  telah  resisten  terhadap larvisida  konvensional.  Oleh  karena  itu,  perlu  dikembangkan  larvisida  baru  dari  bahan alam.  Salah  satu  bahan  alam  yang  dapat  digunakan  sebagai  larvisida  adalah  rimpang Z. zerumbet ,  yang  pada  penelitian  sebelumnya  berpotensi  sebagai  larvisida  pada Artemia salina  Leach dan Anopheles  nunestovary .  Penggunaan  beberapa  solven  untuk  melihat aktivitas  larvisida  terbaik  pada Z.  zerumbet belum  pernah  diteliti.  Tujuan  penelitian  ini untuk  mengkaji  aktivitas  larvisida  ekstrak  methanol,  etil  asetat  dan  kloroform  pada A. aegypti .    Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksplorasi  laboratories  dengan  rancangan posttest-only  control  group.  Penelitian  dilakukan  pada  tiga  macam  ekstrak Z.  zerumbet dengan perbedaan solven yaitu methanol, etil asetat dan kloroform. Dua puluh lima larva instar  III-IV Ae.aegypti dipejankan  dengan  tujuh  konsentrasi  yang  berbeda  dari  ketiga ekstrak  rimpang Z.  zerumbet .  Tingkat  kematian  larva  dihitung  dan  kemudian  dianalisis menggunakan regresi analisa probit untuk mendapatkan nilai LC 50 dan LC 90 . Nilai LC 50 dan LC 90 ketiga ekstrak methanol; etil asetat dan kloroform adalah; 153,57;  185,80; 3542,03 ppm dan; 226,59 ; 274,70 ; 5567,24 ppm. Ekstrak methanol rimpang Z. zerumbet memiliki aktivitas larvisida yang kuat terhadap larva instar III-IV Ae.aegypti dibandingkan dengan ekstrak lainnya.
Kata kunci: Ekstrak, Z.zerumbet ,  larvisida, Ae.aegypti , LC 50

## ABSTRACT
The resistance of mosquito larvae to conventional larvicides has been increased in the recent years. Therefore, it is necessary to develop new larvacides from natural materials. Previous  studies  showed  that Zingiber  zerumbet (L.)  Smith  has  a  potential  ability  as  a larvicide  in Artemia  salina Leach  and Anopheles  nunestovary .  Nevertheless,  the  use  of different solvents to observe the best larvicidal activity has not been known. This study aims to assess the larvicidal activity of methanol extract, ethyl acetate, and chloroform in Aedes aegypti larvae. This is an exploratory laboratory study with the posttest-only control group. The extraction solvents used were methanol, ethyl acetate,  and chloroform. Twenty-five instar larvae (III-IV) of Ae.aegypti were treated with seven different concentrations of the three Z. rhizome extracts. The mortality rate of the larvae was calculated and analyzed using probit analysis regression to obtain LC 50 and LC 90 values. The LC 50 of the methanol, ethyl
acetate,  and  chloroform  extracts  are  153.57,  185.80,  3542.03  ppm;  while  the  LC 90 are 226.59,  274.70,  and  5567.24  ppm,  respectively.  The  study  suggested  that  the  methanol extract of Z. zerumbet rhizome has the most robust larvicidal activity against third-fourth instar larvae of Ae. aegypti among other extracts.
Key words: Extract, Z.zerumbet ,  larvisidal, Ae.aegypti , LC 50
PENDAHULUAN Nyamuk Aedes  aegypti merupakan vektor  utama  penyebab  demam  berdarah dengue di Indonesia.  Untuk mengantisipasi penyebarannya sebaiknya diberantas pada waktu  masih  dalam  bentuk  larva. Pemberantasan  larva  nyamuk  dengan larvisida  hingga  kini  masih  menggunakan temefos  (Abate).  Pemakaian  insektisida secara  terus  menerus  dalam  waktu  lama dapat mengakibatkan resistensi organisme sasaran.  Resistensi  larva Ae.  agypti terhadap  temefos  telah      dilaporkan  di Indonesia, didaerah   Surabaya (Mulyatno et al.,  2012)  dan  di  Jakarta  (Prasetyowati  et al.,2016)  sementara  di  luar  negeri  juga terjadi di Colombia dan Brazil (Grizales et al., 2013;  Diniz  et  al.,  2014). Insektisida  yang aman terhadap lingkungan adalah insektisida  yang  secara  selektif  toksik terhadap  serangga  sasaran,  dan  mudah mengalami  biodegradasi  di  alam  sehingga dapat digunakan pada manajemen program pengendalian  serangga  sasaran  (Rattan, 2010).  Penggunaan  produk  bioaktif  alami dengan potensi larvisida perlu dikembangkan sebagai alternatif pencegahan berkembangnya larva Lempuyang gajah ( Zingiber zerumbet
(L)  J.E.Smith),  merupakan  tanaman  obat yang  sering  digunakan  sebagai  campuran jamu  dalam  industri  obat  tradisional. Kandungan  kimia  lempuyang  gajah  antara lain senyawa golongan terpenoid (zerumbon,  zederon),  alkaloid,  fenol termasuk  flavonoid  (derivat  kaempferol) dan komponen aromatik (P- hidroksibezaldehid,  vanilin)  serta  saponin
(Dae et al., 2004; Chien et al ., 2008; Hashemi et  al., 2008).  Skrining  pendahuluan  pada beberapa  tanaman  sebagai  larvisida  te
rhadap larva Ae aegypti menunjukan bahwa ekstrak  metanol  rimpang Z.zerumbet mempunyai  aktivitas  larvisida  terbaik dengan nilai LC 50 : 153,57ppm (Murini et al ., 2014)

## METODOLOGI

## Bahan dan alat
Bahan  tanaman  yang  digunakan adalah  rimpang Z.zerumbet diperoleh  dari desa  Jatimulyo,  Kulon  Progo  yang  diambil bulan  Mei  2014  dan  telah  diterminasi  di Bagian Biologi Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada (BF/284/Ident/Det/VI/2014) metanol standart teknis, kloroform standart teknis, etil acetat standart teknis , wash  benzen  standart  teknis, silika  gel GF 254 , larva instar III-IV nyamuk Ae. aegypti Lampu UV (254 dan 366 nm), reagen penyemprot  (Cerium  Sulfat  ),  sentrifuge (Hitachi  18PR/5, Automatic  high  speed refrigerated ), vakum evaporator (Heidolf vv 2000, Germany) ,oven (Memert, Germany), plate silica gel GF 254, gelas volume 250 ml , air suling.

## Cara penelitian
Preparasi  ekstrak  metanol,  etil  asetat dan kloroform rimpang Z.zerumbet Masing-masing  500  gram  serbuk kering rimpang lempuyang gajah diekstraksi  dengan  cara  maserasi  disertai pengadukan  selama  24  jam  pada  suhu kamar menggunakan 1 liter metanol; 1 liter ethyl  asetak  dan  1  liter  kloroform. Penyaringan dilakukan menggunakan corong buchner dan  ampasnya  dimaserasi kembali  dengan  cara  yang  sama  sebanyak dua  kali  kemudian  disaring.  Filtrat  yang didapat  digabung  pada  masing-masing solven  dan  diuapkan,  sehingga  diperoleh
ekstrak  metanol,  ekstrak  etil  asetat  dan ekstrak  kloroform  dalam  konsistensi kental, kemudian ditimbang untuk mengetahui  rendemennya.  Keberhasilan masing-masing  ekstraksi  dipantau  dengan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT).
Kolonisasi larva Aedes agypti Proses  kolonisasi  larva  nyamuk Ae. aegypti dilakukan di Laboratorium Parasitologi Fakultas Kedokteran Kesehatan  Masyarakat  dan  Keperawatan Universitas  Gadjah  Mada  dengan  metode sesuai  prosedur  yang  ada  menurut    WHO (2005  ).    Nyamuk Ae.aegypti dewasa dipindahkan  ke  sangkar  nyamuk dengan menggunakan  aspirator.  Didalam  sangkar disediakan mangkok yang berisi air leding sebagai tempat bertelur nyamuk. Selanjutnya telur Ae.aegypti dimasukkan dalam baki yang berisi 1500 ml air sumur dan  ditunggu  1-2  hari  sampai menetas menjadi  larva.  Selama  proses  kolonisasi, diberikan hati ayam sebagai makanan larva. Identifikasi larva  instar  III-IV Ae.aegypti dilakukan  7  hari  setelah  menetas,  secara makroskopis  dengan  menggunakan  lensa pembesar.

## Uji aktifitas larvisida
Penelitian  ini  menggunakan    tujuh konsentrasi untuk  ekstrak metanol dan etil asetat  (125; 135; 145,80; 157,46; 170,06; 183,67 dan 200 ppm),  sedangkan ekstrak kloroform  (2500;  2800; 3136;  3933,85;
4495,85 dan  5000  ppm).  Masing-masing konsentrasi  ekstrak disuspensikan dengan tween 80 beberapa tetes, kemudian diberi air    hingga  100  ml  dimasukkan  dalam wadah plastik yang bervolume 200 ml.  Tiap wadah berisi 25 ekor larva instar  III- IV Ae. aegypti. Perhitungan  larva  yang  mati dilakukan  24  jam  setelah  pemberian ekstrak.  Larva  dinyatakan  mati  apabila tenggelam  atau  tidak  bergerak  setelah diganggu atau disentuh dengan pipet pada sifon  atau  daerah  toraks  (WHO,2005). Pengujian diulang sebanyak tiga (3) kali.

## Analisa data
Aktivitas  larvisida  digambarkan dengan nilai LC 50 dan LC 90 yang ditetapkan dengan regresi analisis probit menggunakan  program  A.Woods  U.N.S.W. versi 1.1.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  Preparasi  ekstrak  metanol,  etil asetat  dan  kloroform  rimpang Z. zerumbet
Rimpang Z.zerumbet yang  telah dibuat  serbuk  dan  dilakukan  dengan metode maserasi karena rimpang Z.zerumbet mengandung  minyak  mudah menguap.  Maserasi  dilakukan  dengan menggunakan  solven  yang  berbeda kepolarannya  yaitu  metanol  (polar),  etill asetat (semi polar) maupun kloroform (non polar)  masing-masing  selama  3  hari.  Hasil ekstraksi  dari  beberapa  solven  yang berbeda  kepolarannya  dari  rimpang Z.zerumbet disajikan  pada  (Tabel  1).  Hasil ekstraksi dengan solven metanol, etil asetat dan  kloroform  dari  serbuk  rimpang Z.zerumbet secara  masera  menghasilkan rendemen  0,75%,  1,26%  dan  7,25%.  Pada (Tabel  1)  terlihat  bahwa  ekstraksi  dengan pelarut  metanol  pada  rimpang Z.zerumbet menghasilkan  rendemen  paling  kecil dibandingkan dengan pelarut etil asetat dan kloroform.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa kandungan  kimia  yang  terdapat  pada pelarut    polar  paling  kecil  dibandingkan dengan  pelarut  semi  polar  maupun  non polar.
Hasil  Kromatogram  ekstrak  metanol, etil asetat dan kloroform
Profil kromatogram pada KLT terlihat adanya  spot  yang  tebal  pada  ekstrak metanol  (I)  yang  menunjukkan  bahwa senyawa  yang  tersari  pada  ekstrak methanol       lebih     banyak    dibandingkan Dengan  ekstrak  etil  asetat  maupun kloroform  (Gambar  1).  Dapat  diartikan bahwa  senyawa  yang  terkandung  dalam solven  metanol  yang  bersifat  polar  lebih
besar  dibandingkan  dengan  solven  semi polar maupun non polar.
Ekstraksi rimpang Z.zerumbet dengan pelarut metanol bertujuan untuk mendapatkan  golongan  senyawa  yang bersifat polar, sedangkan pelarut etil asetat untuk  mendapatkan  golongan  senyawa yang  bersifat  semi  polar,  serta  kloroform untuk  mendapatkan  golongan  senyawa yang  bersifat  non  polar.  Dilihat  dari  profil KLT  ekstrak  dengan  pelarut  non  polar menunjukkan  spot  yang  tidak  tebal,  yang dapat  diartikan  bahwa  senyawa-senyawa yang terlarut pada solven bersifat non polar hanya  tersari  sedikit  atau  golongan senyawa  yang  bersifat  non  polar  hanya kecil.  Sementara  dengan  solven  etil  asetat memberikan  spot  yang  lebih  tebal
dibanding dengan solven kloroform. Dalam hal  ini  etil  asetat  merupakan  solven  semi polar yang mendekati polar.
Hasil Uji daya Larvisida ekstrak metanol, etil asetat dan kloroform Z.zerumbet Uji larvisidal secara in vivo pada larva Ae.aegypti terhadap  ekstrak  metanol,  etil asetat dan kloroform dengan tujuan untuk mengetahui  aktivitas  larvisida  dari  setiap ekstrak yang diperoleh. Untuk mengetahui aktivitas  larvisida,  masing-masing  ekstrak dipaparkan  pada  larva Ae.aegypti stadium III-IV selama 24 jam. Aktivitas larvisida dihitung berdasarkan  kematian  larva.  Hasil  uji aktivitas menunjukkan persentase
kenaikkan  kematian  larva Ae.aegypti pada
Tabel I. Hasil rendemen dari serbuk rimpang Z. zerumbet dengan metode maserasi Macam Bobot kering (kg) Rendemen % Ekstrak metanol 0,5 0,75 Ekstrak etil asetat 0,5 1,26 Ekstrak kloroform 0,5 7,25
Keterangan :  % Redemen diperoleh dari berat ekstrak dengan bobot tetap dibagi dengan berat serbuk
I II III
Gambar1:  Kromatogram  KLT  ekstrak  metanol  (I);  ekstrak  etil  asetat  (II)  dan  ekstrak kloroform  dari rimpang Z. zerumbet; Fase diam: silika gel GF254; fase gerak:
Etil asetat :WB = 1:3; Deteksi dengan sinar UV 254 nm
masing-masing kadar ekstrak (Tabel II).
Makin tinggi konsentrasi ekstrak uji maka % kematian larva makin besar. Pada Tabel  2  menunjukkan  konsentrasi  ekstra terkecil  pada  metanol  dan  etil  asetat  (125 ppm)  mampu  mematikan  larva Ae.aegypti sebesar 24,00 ± 1,89 dan 9,33±1,89 % . Pada konsentrasi  200  ppm  mampu  mematikan larva secara berturut-turut 80,00 ± 1,89 dan 85,33±3,77% . Sedangkan untuk solven non
polar  (kloroform)  konsentrasi  terendah (2500  ppm)  hanya  bisa  mematikan 18,67±1,86%.  Hasil  perbedaan  kelarutan senyawa aktif rimpang Z.zerumbet terhadap sifat  polaritas  solven  yang  diujikan  pada larva Ae.aegypti instar  III-IV  ternyata  juga mempengaruhi  nilai  LC 50 dan  LC 90 pada masing-masing solven. Senyawa yang larut dalam  solven  polar  yaitu  metanol memberikan hasil LC 50 dan  LC 90 lebih  kecil
Tabel II. Nilai LC 50 dan LC 90 pada ekstrak metanol, etil asetat dan kloroform
Nama ekstrak Konsentrasi a (ppm) Jumlah larva b Kematian (%) Slope (± SE) LC 50 (ppm) (95%CL) LC 90 (ppm) (95%CL) Metanol kontrol 25 0,00 ± 0,00 125,00 25 24,00 ± 1,89 135,00 25 33,33 ± 3,93 7,61 (± 0,23) 153,57 *(144,57- 163,13) 226,59 * (193,26- 269,07) 145,80 25 49,33 ± 2,88 157,46 25 48,67 ± 1,45 170,06 25 62,67 ± 2,18 183,67 25 70,67 ± 4,36 200,00 25 80,00 ± 1,89 Etil asetat kontrol 25 0,00 ± 0,00 125,00 25 9,33±1,89 135,00 25 13,33±1,89 7,57 (± 0,29) 185,80 *(170,69- 202,28) 274,70 *(218,05- 346,27) 145,80 25 21,33±1,89 157,46 25 33,33±3,27 170,06 25 44,00±3,27 183,67 25 49,33±1,89 200,00 25 54,67±4,99 Kloroform kontrol 25 0,00 ± 0,00 2500 25 18,67±1,86 2800 25 32,00±9,80 7,60 (±9,50) 3542,03 (3298,41- 3803,75) 5567,24 (4712,51- 6580,59) 3136 25 40,00±14,24 3512,32 25 52,00±6,53 3933,85 25 64,00±5,66 4495,85 25 77,33±3,77 5000 25 a ppm  :  konsentrasi  ekstrak  rimpang Z.zerumbet ; b nilai  rata-rata  tiga  kali    replikasi;
* confidencelimit 95 % (LCL= Lower Confidence Limit ; UCL = Under Confidence Limit )
dibandingkan   dengan   solven   semi   polar ( etil asetat ) dan non polar ( kloroform ), yaitu 153,57;  185,80;  3542,03  ppm  dan  226,59; 274,70  dan  5567,24ppm.  Hal  ini  dapat diartikan  bahwa  nilai  LC 50 dan  LC 90 memberikan  hasil  yang  lebih  poten terhadap  larva Ae.aegypti dibandingkan nilai LC 50 dan LC 90 yang besar.
Hasil  yang  sama  pada  beberapa penelitian  yang  dilakukan  pada  daun Morinda  citrifolia ; Azadirachta  indica ; Delonix  elata ; Mirabilis  jalapa ; Tridax procumbens (Kovendan et  al .,  2012; Maragathavalli et al ., 2012; Gavindarajan et al ., 2014; Begum et al ., 2014) dengan solven polar (metanol) memberikan hasil LC 50 dan LC 90 lebih kecil dibanding solven semi polar (etil asetat) maupun non polar (kloroform, heksan,  benzen).  Hal  ini  dapat  diartikan bahwa zat aktif yang terdapat pada rimpang Z.zerumbet mempunyai  khasiat  sebagai larvisida pada larva Ae.aegypti merupakan senyawa  aktif  yang  larut  dalam  solven polar.

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  ini  mengungkapkan bahwa  solven  dengan  perbedaan  polaritas yang  digunakan  untuk  ekstraksi  juga berdampak  pada  jumlah  kematian  larva. Nilai LC 50 dan LC 90 ketiga ekstrak metanol; etil  asetat  dan  kloroform  berturut-turut adalah; 153,57; 185,80; 3542,03 ppm dan; 226,59;  274,70;  5567,24  ppm.    Ekstrak metanol  rimpang Z.zerumbet memiliki aktivitas larvisida yang kuat terhadap larva instar  III-IV Ae.aegypti dibandingkan dengan ekstrak lainnya.

## DAFTAR PUSTAKA
Begum, S.M.I., Durga A., Mary R.R., Vithiya,
B.S.M.,  Elumalai  K.,  2014  Evaluation of    Larvicidal  Activity  of Tridax procumbens (Asteraceae) Leaf Extract Against  the  Dengue  vector Aedes aegypti and Bancroftian  Filariasis vector, Culex quinquivasciatus . Indian
Journal of applied Research 4 (8) 664- 666. Chien,  T.Y.,  Chen,  L.G.,  Lee,  C.J.,  and  Wang, C.C., 2008. Anti-inflamatory constituens  of Zingiber  zerumbet, Food Chemistry , vol 11 (3) 584-589. Dae,  S.J.,  Han,  A.R.,  Park,G.,  Jhon,  G.J.,  and Seo,  E.K.,  2004.  Flavonoids  and aromatic  compounds  from  the rhizomes  of Zingiber  zerumbet ,
Archives  of  Pharmacal.  Reseach, vol 27(4) 386-389. Diniz, M.M.C.S.L., Henriques, A.D.S., Leandro, R.S., Aguiar, D.L., and Beserr, E.B.  2014.  Resistance  Of  Aedes Aegypti  To  Temephos  And  Adaptive Disadvantages. Rev  Saúde  Pública .;
vol.48(5):775-782 .
Finney,  D.J.,  1971. Probit  Analysis;  A Statistical  treatment  of  sigmoid response curve , Cambridge, 67-79. Govindarajan, M., Ramya, A and Sivakumar, R., 2014. Mosquito larvicidal properties of Mirabilis jalapa (Nyctaginaceae)  against Anopheles stepheni,  Aedes  aegypti,  &  Culex quinfasciatus (Diptera  :  Culicidae)
Indian J.Med.Res .438-440. Grisales,  N.,  Poupardin,  R.,,  Gomez,  S.,,
Fonseca-Gonzalez,  I.,  Ranson,  H.,
2013. Temephos Resistance in Aedes aegypti  in  Colombia  Compromises DengueVector Control . PLoS Negleted Tropical Diseases .; vol.7(9): e2438 1- 10. Hashemi, S.R., Zulkifli, I., Bejo, M.H., Farida A.,  and  Somchit,  M.N.,2008,  Acute toxicity  study  and  phytochemical screening of selected herbal aqueous extract in broiler chicken, International Journal of Pharmacology , vol. 4(5) 352-360. Kovendan, K., Murugan, K.,Vincent, S., 2012. Evaluation  of  larvicidal  activity  of
Acalypha  alnifolia Klein  ex  Willd. ( Euphorbiaceae )  leaf  extract  against the     malarial      vector, Anopheles
stephensi ,            dengue        vector, Aedesaegypti and Bancroftian filariasis vector, Culex quinquefasciatus (Diptera : Culicidae ), Parasitol. Res . 110 (2): 571-81. Marathagavalli, S., Brindha, S., Kaviyarasi.,N.S., Annadurai, B.,Gangwar,  S.K.,  2012.  Mosquitoes larvicidal  activity  of  leaf  extract  of neem  ( Azadirachta  indica ),  I.J.A.B.R., vol.2(1) 138-142.
Marimuthu,  G.,  Rajamohan,  S.,  Mohan,  R.,
Krisnamoorthy,  Y.,  2012.  Larvicidal and  ovicidal  properties  of  leaf  and seed  extracts  of Delonix  elata
(L)Gamble (family : Fabaceae ) against malaria  ( Anopheles  stephensi Liston)
and  dengue  ( Aedes  aegypti (linn) (Diptera : Culicidae ) vector mosquitoes., Parasitol  Res. 111  (1) 65-77.
Mulyatno,  K.C.,  Yamanaka,  A.,  Ngadino,
Konish, E., 2012. Resistance Of Aedes Aegypti (L.) Larvae  To  Temephos   In
Surabaya, Indonesia. Southeast Asian Journal  Tropical    Medical  Public
Health. 2012;  43( 1), 29-33.
Murini,  T.,  Satoto,  T.B.,  Wahyuningsih M.S.H.,  2014  Eksplorasi  beberapa tanaman  yang  berpotensi  sebagai larvisida Aedes  aegypti (Dipterae  : Culicidae).,  dalam Prosiding  Peluang dan  tantangan  Obat  Tradisional dalam  Pelayanan  Kesehatan  Formal , Yogyakarta, 305-309, ISBN : 978-602- 70191-0-2. Prasetyowati,  H.,  Hendri,  J.,  Wahono,  T., 2016. Status Resistensi Aedes aegypti (Linn.) terhadap Organofosfat di Tiga Kotamadya DKI Jakarta. BALABA .; 12 (1): 23-30. World Health Organization, 2005. Guidelines  forLaboratory  and  Field Testing  of  Mosqiuto  Larvicides . Dikutip. dari :http://whqlibdoc.who.int/hq/2005 /  WHO  CDS  WHO  PES  GC DPP 2005.13.pdf. 10 September 2011 .