# Korespondensi:  Balai  Besar  Riset  Perikanan  Budidaya  Laut  dan Penyuluh  Perikanan.  Jl.  Br.  Gondol  Ds.  Penyabangan
Kec.  Gerokgak  Kab.  Buleleng,  Kotak  Pos  140,  Singaraja,  Bali 81155,  Indonesia Tel.:  +  362  92272 E-mail:  ornamental_research@yahoo.co.id
Tersedia  online  di:  http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/ma
APLIKASI  ASTAXANTHIN  DARI  HAEMATOCOCCUS  PADA  BENIH  KERAPU  SUNU (Plectropomus leopardus) TERHADAP TOTAL KAROTENOID DAN PROFIL DARAH
Daniar  Kusumawati # ,  Ketut  Mahardika,  dan  Ketut  Maha  Setiawati
Balai Besar Riset Perikanan Budidaya Laut dan Penyuluh Perikanan Jl. Br. Gondol Ds. Penyabangan Kec. Gerokgak Kab. Buleleng, Kotak Pos 140, Singaraja, Bali 81155
(Naskah diterima: 26 Februari 2019; Revisi final: 8 Agustus 2019; Disetujui publikasi: 8 Agustus 2019)

## ABSTRAK
Haematococcus merupakan alga yang kaya karotenoid dari jenis astaxanthin yang tidak hanya berpotensi sebagai sumber pigmen merah tetapi juga sebagai antioksidan. Aplikasi haematococcus telah dilakukan pada larva kerapu sunu dan menunjukkan adanya perbaikan peformansi warna merah yang cukup signifikan. Tujuan dari penelitian ini adalah mengetahui pengaruh haematococcus sebagai sumber astaxanthin terhadap pertumbuhan, total karotenoid, dan profil darah (hematokrit dan haemoglobin) pada juvenil ikan kerapu sunu. Benih kerapu sunu ukuran panjang rata-rata 14,07 ± 0,07 cm dan bobot rata-rata 45,92 ± 6,35 g dipelihara dalam jarring berukuran  0,5 m x 0,5 m x 1 m yang diletakkan dalam bak beton ukuran 3 m x 1,2 m x 1,2 m. Kepadatan ikan tiap jaring adalah lima ekor. Perlakuan yang diujicobakan adalah penambahan haematococcus ke dalam pakan buatan dengan dosis dan kompisisi sebagai berikut: A) 1% dari berat pakan, B)  1%  dari  berat  pakan  +  10%  minyak  ikan,  dan  C)  0%  (kontrol).  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa penambahan haematococcus ke dalam pakan tidak memberikan perbedaan nyata terhadap pertumbuhan mutlak  panjang  dan  bobot,  serta  laju  pertambahan  panjang  dan  bobot  (P value  >  0,05).  Penambahan haematococcus memberikan perbedaan nyata (P value < 0,05) terhadap konversi pakan di mana perlakuan A (1,99 ± 0,09); B (2,12 ± 0,14); dan C (2,28 ± 0,09). Penambahan haematococcus memberikan peningkatan terhadap akumulasi kandungan total karoten, hematocrit, dan haemoglobin darah.
KATA KUNCI: kerapu sunu; haematococcus; total karoten; profil darah
ABSTRACT: The application effects of astaxanthin from haematococcus on total carotenoid and blood profile of coral trout grouper seed. By: Daniar Kusumawati, Ketut Mahardika, and Ketut Maha Setiawati
Haematococcus, an alga rich in carotenoids of the astaxanthin type, not only has the potential as a source of red pigment but also as an antioxidant. The purpose of this study was to determine the effects of hematococcus as astaxanthin source on the growth, total carotenoids, and blood profile (hematocrit and hemoglobin) of coral trout grouper juvenile. Coral trout grouper seed with an average length of 14.07± 0.07 cm and an average weight of 45.92 ± 6.35 g were maintained in a net cage measuring 0.5 m x 0.5 m x 1 m placed in a 3 m x 1.2 m x 1.2 m concrete tank. Fish density per net was five fish. The treatment tested was the addition of haematococcus into the artificial feed with the following dosages and compositions: A) 1% of the weight feed, B) 1% of the weight feed + 10% fish oil, C) 0% (control). The results showed that the addition of haematococcus to the feed did not give a significant difference to the absolute growth of length and weight and also specific growth and length rate (P-value > 0.05). The addition of haematococcus gave a significant difference (P-value < 0.05) to feed conversion ratio between treatment A, B and C with the values of 1.99 ± 0.09, 2.12 ± 0.14, and 2.28 ± 0.09, respectively. The addition of haematococcus also increased the levels of total carotene content, hematocrit, and hemoglobin. This study suggests that the application of haematococcus could significantly improve the red color performance of trout grouper larvae.
KEYWORDS: coral trout; haematococcus; total carotene; blood profile

## PENDAHULUAN
Carotenoid merupakan sekelompok pigmen alami yang di  sintesis dari  tanaman tingkat  tinggi, lumut, alga,  bakteria,  dan  fungi  (Goodwin,  1980),  yang bertanggung jawab terhadap pigmen merah, jingga, dan kuning (Britton et al., 2012). Terdapat lebih dari 400 jenis senyawa carotenoid yang ada di alam, namun hanya  beberapa  senyawa  saja  yang  dimanfaatkan secara  komersial  antara  lain  -carotene  (Olaizola, 2003),  astaxanthin,  lutein,  lycopene,  canthaxanthin zeaxanthin, dan bixin (Tay-Agbozo et al., 2018). Caro- tenoid secara komersial dimanfaatkan sebagai pewarna alami pada makanan (Arimboor et al., 2015), sebagai bahan aditif pada makanan ternak (McInerney et al., 2016) dan ikan (AbdelsameeGoda et al., 2018); sebagai suplemen makanan (Graham & Roser, 2000; Hussein et al., 2016), obat (Nolan et al., 2018), dan kosmetik (Kim et al., 2009). Selain sebagai sumber pigmen alami, carotenoid juga memiliki aktivitas antioksidan (Fiedor & Burda, 2014).
Haematococcus  pluvialis  merupakan  mikroalga  air tawar yang kaya akan karotenoid dari jenis astaxanthin (Shah  et  al.,  2016).  Haematococcus  mampu menghasilkan  astaxanthin  sebanyak  1,5%-3%  berat kering  lebih  tinggi  3,75-7,5  kali  dari  phafia  yeast (Lorenz & Cysewski, 2000). Astaxanthin memiliki dua chiral center dan terdapat dalam tiga bentuk stereoi- somer (3S, 32  S); (3R, 32  S), dan (3R, 3 2 R) (Yang et al.,  2013).  Astaxanthin  pada  haematococcus didominasi dalam bentuk 3S, 3’S yang memiliki fungsi aktif sebagai sumber pigmen merah sekaligus memiliki aktivitas antioksidan lebih besar daripada vitamin E (  tocopherol),  carotene,  lutein  (Naguib,  2000). Antioksidan  merupakan  senyawa  yang  dapat memperlambat atau menghambat terjadinya kerusakan sel akibat radikal bebas melalui peredaman aktivitas radikal bebas atau memutus rantai reaksi oksidasi yang disebabkan oleh radikal bebas. Penggunaan senyawa antioksidan sintetik saat ini mendapat perhatian serius karena bersifat merugikan dan karsinogen (Sultana et al.,  2007).  Oleh  karena  itu,  haematococcus  dapat digunakan sebagai kandidat senyawa antioksidan dan agen  pigmentasi  yang  alami  dan  aman  untuk diaplikasikan pada ikan.
Pemanfaatan carotenoid dari haematococcus telah dilakukan  untuk  tujuan  perbaikan  peforma  warna merah  pada  larva  kerapu  sunu  (Kusumawati  & Setiawati,  2017).  Peforma  warna  merah  pada  ikan kerapu  sunu  hasil  budidaya  cenderung  mengalami pemudaran jika dibandingkan performa asli di alam. Perlakuan pemberian bahan berkaroten dari raw ma- terial jenis Haematococcus pluvialis (NatuRose) terbukti mampu memperbaiki pigmentasi warna merah pada
kerapu  sunu  stadia  larva.  Tujuan  dari  penelitian  ini adalah mengetahui pengaruh haematococcus sebagai sumber  astaxanthin  terhadap  pertumbuhan,  total karotenoid, dan profil darah (hematokrit dan hemo- globin) pada juvenil ikan kerapu sunu.

## BAHAN DAN METODE

## Ikan Uji
Ikan yang digunakan dalam penelitian ini adalah ikan kerapu sunu ukuran panjang rata-rata 14,07 ± 0,07 cm dengan bobot rata-rata 45,92 ± 6,35 g yang merupakan  hasil  perbenihan di  hatcheri  Balai  Besar Riset  Budidaya  Laut  dan  Penyuluhan  Perikanan (BBRBLPP). Sebanyak 45 ekor benih ikan kerapu sunu diaklitimasi dalam bak persegi panjang berukuran 3 m  x  1,2  m  x  1,2  m  selama  satu  minggu  sebelum digunakan.

## Pakan Uji
Pakan uji yang digunakan adalah pakan komersial dari brand otohime. Selanjutnya, pakan uji ditambahkan karoten  dari  jenis  Haematococcus  pluvialis  komersil (NatuRose TM ).  Kandungan  astaxanthin  dalam haematococcus berkisar 1,5% dengan persentase to- tal karotenoid terdiri dari 70% monoester astaxanthin, 10% diester astaxanthin, 5% free astaxanthin, dan 15% mengandung  campuran  â  carotene,  canthaxanthin, lutein, dan  jenis carotenoid  lain. Selain  karotenoid, haematococcus (NatuRose TM ) juga mengandung pro- tein, lemak, karbohidrat, dan berbagai jenis vitamin (Tabel 1, 2). Penambahan haematococcus sesuai dosis dilakukan dengan cara mencampur bahan dengan telur hingga  membentuk  emulsi.  Emulsi  yang  terbentuk dicampurkan ke dalam pakan pelet hingga tercampur rata  kemudian  pakan  dikeringanginkan  pada  suhu ruang.  Pakan  kontrol  hanya  diberikan  telur  sebagai binder.

## Perlakuan
Perlakuan yang diujicobakan adalah penambahan bahan karoten komersial dengan dosis sebagai berikut: A) 1% dari berat pakan, B) 1% dari berat pakan + 10% minyak  ikan,  dan  C)  0%  (kontrol).  Masing-masing perlakuan terdiri atas tiga ulangan. Pakan diberikan dua  kali  sehari  sekenyangnya,  dan  dilakukan penghitungan  pakan  yang  dikonsumsi  pada  tiap harinya. Ikan dipelihara pada jaring berukuran 0,5 m x 0,50 m x 1 m dengan kepadatan lima ekor per jaring. Jaring ditempatkan dalam bak beton berukuran 3 m x 1,2 m x 1,2 m. Penelitian dilakukan selama tiga bulan di dalam gedung pemeliharaan (indoor). Pemeliharaan dilakukan dengan sistem air mengalir dalam kondisi salinitas air laut normal 33-34 ppt.
Tabel 1. Kandungan  nutrisi  pada  haematococcus  (NatuRose TM )  (Sumber: www.ruscom.com)
Table 1. Nutrition content of haematococcus (NatuRose TM ) (Courtesy: www.ruscom.com) Minimun Maksimum Maximum Rata-rata Mean Protein 17.30 27.16 23.62 Karbohidrat (Carbohydrates ) 36.9 40.0 38.0 Lemak (Fat ) 7.14 21.22 13.80 Besi/Iron  (%) 0.14 1.0 0.73 Air/Moisture 3.0 9.00 6.0 Magnesium (%) 0.85 1.4 1.14 Kalsium/Calcium  (%) 0.93 3.3 1.58 Biotin (mg/Lb) 0.108 0.665 0.337 L-carnitine (ug/g) 7.0 12 7.5 Folic acid (mg/100g) 0.936 1.48 1.30 Niacin (mg/Lb) 20.2 35.2 29.8 Pantothenic acid (mg/Lb) 2.80 10.57 6.14 Vitamin B1 (mg/Lb) < 0.050 4.81 2.17 Vitamin B2 (mg/Lb) 5.17 9.36 7.67 Vitamin B6 (mg/Lb) 0.659 4.5 1.63 Vitamin B12 (mg/Lb) 0.381 0.912 0.549 Vitamin C (mg/Lb) 6.42 82.7 38.86 Vitamin E (mg/Lb) 58.4 333 186.1 Abu (Ash ) 11.07 24.47 17.71 Soluble dietary fiber  (%) - - 1.2 Insoluble dietary fiber  (%) - - 16.7
Minimun Minimun value Maksimum Maximum value Rata-rata Mean Tryptophan 0.05 0.56 0.31 Aspartic acid 1.37 2.31 1.89 Threonine 0.78 1.24 1.04 Serine 0.73 1.06 0.94 Glutamic acid 1.70 2.39 2.19 Proline 0.69 1.00 0.89 Glycine 0.84 1.32 1.17 Alanine 1.30 1.92 1.73 Cysteine 0.16 0.21 0.19 Valine 0.83 1.94 1.36 Methionine 0.32 0.43 0.40 Isoleucine 0.55 0.97 0.79 Leucine 1.21 1.84 1.67 Tyrosine 0.40 0.63 0.52 Phenylalanine 0.61 1.05 0.90 Histidine 0.48 0.76 0.61 Lysine 0.75 1.32 1.13 Arganine 0.81 1.34 1.07
Tabel 2. Kandungan asam amino haematococcus (NatuRose TM )
Table 2. Amino acid content of haematococcus (NatuRose TM )

## Pertumbuhan  Ikan
Sampling pertumbuhan ikan dilakukan setiap bulan pada seluruh populasi yang dipelihara. Parameter yang diamati  antara  lain  panjang  dan  bobot  benih  yang kemudian diestimasikan dalam bentuk pertumbuhan mutlak dan laju pertambahan panjang dan bobotnya. Pertumbuhan  mutlak  panjang  (L)  dan  bobot  (W) dirumuskan sebagai berikut:
di mana: L 0 =  panjang awal,
L t =  panjang pada hari t
t =  waktu
di mana: W 0 =  bobot awal
W t =  bobot pada waktu t
t =  waktu
Laju pertambahan panjang (SLR) dan bobot (SGR) dirumuskan sebagai berikut:
di mana:
Lt = panjang rata-rata pada waktu t L0 = panjang rata-rata pada awal penelitian
di mana: Wt = bobot rata-rata pada waktu t W0 = bobot rata-rata pada awal penelitian

## Profil  Darah
Profil darah yang diamati meliputi hematokrit dan haemoglobin  yang  dilakukan  pada  akhir  penelitian. Pengambilan  sampel  darah  dilakukan  pada  akhir penelitian dengan jumlah sampel tiga individu pada masing-masing perlakuan. Darah dilakukan pada bagian pangkal ekor dengan syringe 1 mL yang sebelumnya telah  dibilas  dengan  larutan  heparin  sebagai antikoagulan.  Sampel  darah  yang  terkumpul ditempatkan ke dalam microtube (2 mL). Pengukuran hematokrit darah dilakukan dengan menggunakan cap- illary tube yaitu sampel darah dimasukkan ke dalam capillary  tube  hingga  batas  warna  merah  kemudian ditekan untuk menutup lubang tube. Sampel darah pada capillary tube disetrifus (setrifuge H-1.200 m) dengan
kecepatan 12.000 rpm selama lima menit. Persentase hematokrit diukur dengan menggunakan sliding cur- sor.  Sedangkan,  pengukuran  hemoglobin  dilakukan dengan menggunakan alat pengukur Hb HemoCue Hb 201 + (Angelholm Sweden). Korelasi nilai haematokrit dan haemoglobin dihitung dan disajikan dalam bentuk grafik.

## Total  karotenoid
Analisis total karotenoid dilakukan di Laboratoriun Pusat Studi  Pangan dan Gizi  di Gedung  Pusat Antar Universitas (PAU) Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta dengan  metode  Spektrofotometer.

## HASIL DAN BAHASAN
Pertumbuhan  mutlak  kerapu  sunu  menunjukkan garis linear positif di mana dengan bertambahnya umur maka akan semakin meningkat panjang (Gambar 1A) dan bobot ikan (Gambar 1C). Pertumbuhan panjang dan bobot mutlak kerapu sunu pada masing-masing perlakuan  mulai  awal  pemeliharaan  hingga  akhir pemeliharaan  tidak  menunjukkan  perbedaan  yang signifikan,  namun  demikian,  pada  perlakuan  C menunjukkan adanya peningkatan bobot mutlak yang lebih tinggi dibandingkan dengan perlakuan A dan B (Gambar 1C).
Berdasarkan  pertumbuhan  mutlak  panjang  dan bobot  ikan,  laju  pertambahan  panjang  (Gambar  1B) dan bobot (Gambar 1D) pada masing-masing perlakuan menunjukkan laju pertambahan yang semakin lambat terlihat dari grafik yang cenderung makin menurun. Pada perlakuan A menunjukkan perbedaan pada bulan kedua pemeliharaan di mana laju pertambahan panjang maupun  bobot  mengalami  peningkatan  kemudian mengalami penurunan secara drastis di bulan ketiga.
Pada masing-masing perlakuan tidak menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan (P>0,05) terhadap pertumbuhan mutlak panjang (L) dan bobot (W), serta laju pertambahan panjang (SLR) dan bobot (SGR). Akan tetapi, perlakuan A menunjukkan efisiensi pakan (FCR) yang  paling  baik  (P<0,05)  dibandingkan  dengan perlakuan B dan C (Tabel 3). Berdasarkan hasil analisis total  karoten,  hematokrit,  dan  hemoglobin menunjukkan bahwa perlakuan A menunjukkan nilai yang paling tinggi diikuti dengan perlakuan B dan C (Gambar 2).
Pertumbuhan  bobot  maupun  panjang  pada  ikan selalu  mengikuti  grafik  eksponensial  positif  yaitu pertumbuhan akan semakin meningkat namun pada suatu titik tertentu (fase dewasa) pertumbuhan akan stabil dengan garis grafik mendatar (Effendie, 1997). Sementara itu, laju pertambahan bobot dan panjang menunjukkan  kecepatan  suatu  organisme  untuk
t Lo Lt L   t Wo Wt W   100% x t Lo Lt SLR   t Wo In Wt In SGR  
Gambar 1. Tren pertumbuhan panjang (A) dan bobot mutlak (C), serta laju pertambahan panjang (B) dan bobot (D) pada setiap bulan.
Figure 1. Trend of total length growth (A) and total weight growth (C), and spesific length rate (B) and spesific growth rate (D).
Tabel 3. Pertumbuhan panjang (L) dan bobot mutlak (W), laju pertambahan panjang (SLR) dan bobot (SGR), dan konversi pakan rata-rata (FCR) selama penelitian
Table 3. Total length growth and weight growth, specific length rate and growth rate, and average feed conversion during the study
Keterangan: Notasi dengan huruf yang sama pada masing-masing baris menunjukkan tidak berbeda nyata (P>0,05)
Note:
The  same  letter  notation in  each  in  shows no  significantly different  (P.0.05)
Rata-rata Mean Standar deviasi Deviation standard Rata-rata Mean Standar deviasi Deviation standard Rata-rata Mean Standar deviasi Deviation standard Panjang Length  (cm) 4.48 a 0.64 5.10 a 0.57 5.31 a 0.46 Laju pertambahan panjang (%/hari) Specific length rate/SLR (%/day) 4.98 a 0.71 5.67 a 0.63 5.90 a 0.51 Bobot Weight  (g) 20.69 a 1.81 24.60 a 3.83 24.50 a 1.41 Bobot mutlak (%/hari) Specific growth rate/SGR (%/day) 1.05 a 0.07 1.12 a 0.05 1.18 a 0.06 Konversi pakan Feed conversion ratio (FCR) 1.99 b 0.09 2.12 ab 0.14 2.28 a 0.09 C A B 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 0 1 2 3 Pe rt u m b u h an m u tl ak p an ja n g T ot al le ng ht g ro w th (cm ) Bulan (Months) A B C 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 1 2 3 La ju p er ta m b ah an p an ja n g ( % /h ar i)
Sp es if ic le ng ht r at e (% /d ay) Bulan (Months) A B C 0 20 40 60 80 100 120 140 160 0 1 2 3 Pe rt u m b u h an b o o b t m u tl ak
T ot al w ei gh t gr ow th (g ) Bulan (Months) A B C 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 1 2 3 La ju p er ta m b ah an b o b o t (% /h ar i) Sp es if ic g ro w th r at e (% /d ay) Bulan (Months) A B C A B C D
tumbuh  baik  panjang  maupun  bobot  dalam  satuan waktu tertentu. Pola grafik pertumbuhan dengan laju pertumbuhan  berbanding  tebalik  dengan pertumbuhan,  di  mana  pola  grafik  akan  semakin menurun  (eksponensial  negatif)  hingga  pada  fase dewasa laju pertambahan akan stabil (tidak mengalami pertambahan). Pernyataan tersebut tergambar dalam penelitian ini di mana pertumbuhan bobot dan panjang semakin meningkat, namun laju pertambahan bobot dan panjang akan semakin menurun. Perlakuan A yaitu perlakuan  penambahan  haematococcus  pada  pakan menunjukkan pola grafik yang berbeda dari perlakuan yang  lain,  di  mana  pada  bulan  kedua  pemeliharaan menunjukkan  reaksi  positif  yaitu  laju  pertumbuhan panjang  maupun  bobot  makin  meningkat  dan memasuki bulan ketiga menunjukkan penurunan sama halnya  dengan  perlakuan  yang  lain.  Penambahan haematococcus  pada  awal  hingga  bulan  kedua pemeliharaan menunjukkan respons yang positif. Hal
ini menunjukkan bahwa nutrisi yang terkandung dalam haematococcus  (Tabel 1  dan  2) mampu  mendorong percepatan peningkatan laju pertambahan panjang dan bobot pada awal pemeliharaan.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  pemberian haematococcus  tidak  memberikan  pengaruh  nyata terhadap pertumbuhan mutlak dan laju pertambahan panjang maupun bobot. Namun demikian, pemberian haematococcus tanpa penambahan minyak ikan 10% (perlakuan A) memberikan nilai efisiensi pakan yang paling  baik  dibandingkan  dengan  ikan  yang  diberi perlakuan  penambahan haematococcus  dan  minyak ikan (perlakuan B) dan kontrol (perlakuan C). Hal ini menunjukkan penambahan haematococcus ke dalam ransum pakan ikan kerapu sunu memberikan pengaruh positif.  Haematococcus  tidak  hanya  mengandung astaxanthin namun juga memiliki kandungan nutrisi esensial lain yang diperlukan oleh tubuh ikan seperti
Gambar 2. Total  karoten,  kadar  hematokrit,  dan  haemoglobin  pada  benih  ikan  kerapu  sunu (n= 3 ind.).
Figure 2. Total carotene, hematocrit, and hemoglobin levels in coral trout grouper seed at the end of study (n=  3  ind.).
6.75 4.6 3.8 0 1 2 3 4 5 6 7 8 A B C H em o g lo b in H ae m og lob in e (g /d L) Perlakuan (Treatments) 35 25 16 0 5 10 15 20 25 30 35 40 A B C H em at o kr it H ae m at oc ri te (% ) Perlakuan (Treatments) 25.43 23.77 17.25 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 A B C T o tal k ar o te n e T ot al c ar ot en e con te nt ( µ /g ) Perlakuan (Treatments)
protein,  lemak,  berbagai  vitamin,  dan  mineral (NatuRose TM ).  Kebutuhan  untuk  pertumbuhan  ikan memerlukan kombinasi asam amino, asam lemak, vi- tamin,  dan  mineral  yang  sesuai  untuk  mendukung pertumbuhan ikan (Pangkey, 2011).
Perlakuan A juga memberikan hasil yang jauh lebih baik dengan meningkatkan sebesar 1,07x dan 1,47x akumulasi kandungan total karoten lebih tinggi dalam tubuh ikan dibandingkan dengan perlakuan B dan C. Berdasarkan data tersebut, nampaknya penambahan minyak  ikan  sebanyak  10%  dari  bobot  pakan  justru menghambat penyerapan karotenoid ke dalam tubuh ikan. Sesungguhnya karotenoid merupakan jenis bahan yang  bersifat  hidrofobik  atau  sulit  terlarut  dalam lingkungan air, namun mudah terlarut dalam lemak. Berdasarkan  hal  tersebut,  dapat  diketahui  bahwa tingkat  lipid  atau  lemak  dalam  pakan  dapat memberikan pengaruh positif dalam pelarutan karoten sehingga  memudahkan  penyerapan  dalam  tubuh seperti halnya percobaan dengan menggunakan level lipid yang berbeda akan memberikan pengaruh linear positif  terhadap  penyerapan  karotenoid  pada  ikan raibow trout (Nickell & Bromage, 1998; Yi et al., 2014). Perbedaan  respons  yang  terjadi  dapat  dikarenakan adanya  proses  pembuatan  pakan,  di  mana  pada penelitian ini penggunaan minyak ikan sebagai sumber lipid dilakukan dengan melapisi pelet komersial yang telah  ada  kemudian  ditambahkan  dengan haematococcus. Sementara pada penelitian yang telah dilakukan oleh Nickell & Bromage (1998), pembuatan pakan dilakukan dengan menambahkan minyak ikan ke dalam campuran pakan formulasi yang kemudian dibentuk  menjadi  pelet.  Terkait  dengan  metode pembuatan pakan ini, nampaknya haematococcus yang diberi  minyak  ikan  akan  mudah  lepas  ke  dalam  air mengingat metode pengkayaan yang dilakukan hanya dengan cara  dicampurkan di  permukaan pakan.  Hal inilah yang menyebabkan efek yang minyak ikan dalam penelitian ini kurang memberikan pengaruh yang op- timal  terhadap  peningkatan  total  karotenoid  pada benih kerapu sunu.
Penambahan  haematococcus  ke  dalam  pakan terbukti  mampu  memberikan  pengaruh  pada  profil darah yaitu haematokrit dan haemoglobin pada ikan kerapu sunu. Perlakuan A memberikan peningkatan nilai haematokrit sebesar 1,4x dan 2,19x lebih tinggi, serta  haemoglobin  sebesar  1,47x  dan  1,78x  lebih tinggi dibandingkan dengan perlakuan B dan C. Kisaran normal  haematokrit  dan  haemaglobin  pada  kerapu sunu  belum  diteliti  secara  pasti,  dan  setiap  spesies ikan  memiliki  kisaran  normal  haematokrit  dan haemaglobin yang berbeda-beda. Kisaran normal nilai haematokrit  pada  ikan  mas  yang  dipelihara  dalam
kondisi  lingkungan  standar  adalah  28%-35% (Munkittrick & Leatherland, 1983), sementara itu, pada ikan  salmon  Atlantic  (Salmo  salar)  berkisar  44%-49% (Sandnes et al., 1988), dan pada ikan kerapu sunu yang dipelihara dalam salinitas 34 ppt berkisar 31 ± 1,41% (Setiawati  et  al.,  2017).  Berdasarkan  informasi tersebut  membuktikan  bahwa  pemberian haematococcus  mampu  mempertahankan  kondisi normal haematokrit darah kerapu sunu di mana pada perlakuan  tanpa  haematococcus  level  haematocrit sangat rendah yaitu 16%. Kisaran normal haemoglo- bin pada darah ikan tawar yaitu ikan mas, nila, kowan, dan lele dumbo berkisar 5,05-8,33 g/dL pada jantan dan 5,22-7,03 g/dL pada betina (Salasia et al., 2001); sementara itu,  pada ikan kerapu sunu  pada kondisi salinitas 34 ppt memiliki kisaran normal haemoglo- bin  7,4  ± 0,57  g/dL  (Setiawati  et  al.,  2017).  Hal  ini bersesuaian dengan pernyataan Hrubec & Smith (2000) bahwa kadar normal hemoglobin pada ikan akuatik umumnya 5-10 g/dL. Berdasarkan info tersebut dapat diketahui bahwa penambahan haematococcus tanpa minyak mampu mempertahankan kadar haemoglobin ikan  kerapu  sunu  pada  kondisi  yang  normal  secara umum yaitu 6,75 g/dL; sementara itu, pada perlakuan haematococcus yang dicampur minyak ikan dan kontrol memiliki kadar haemoglobin yang rendah yaitu masing- masing 4,6 g/dL dan 3,8 g/dL.
Pengukuran  nilai  haematokrit  dan  haemoglobin (haematology) merupakan salah satu metode untuk mengukur  stres  respons  oleh  karena  perubahan lingkungan  (Davis  &  Parker,  1990)  dan  serangan penyakit (Jones & Grutter, 2005) terhadap kesehatan ikan.  Hematokrit  menggambarkan  persentase  sel darah merah terhadap total volume darah (Meyer et al., 1992). Nilai hematokrit dipengaruhi oleh ukuran dan jumlah eritrosit. Hemoglobin merupakan protein yang mengandung senyawa besi hemin. Hemoglobin merupakan bagian dari sel darah merah yang mengikat oksigen  dari  insang  untuk  dihantarkan  ke  seluruh jaringan tubuh (Fánge, 1992). Kadar hemoglobin (Hb) dalam darah ikan berkaitan dengan jumlah eritrosit. Hal  ini  tergambar  pada  nilai  hematokrit  dan  hemo- globin pada ikan kerapu sunu di mana berkorelasi lin- ear positif (Gambar 3) di mana pada nilai hematokrit tinggi kadar hemoglobin juga tinggi dan sebaliknya. Hal  ini  dinyatakan  pula  oleh  Fujaya  (2004)  yang meyatakan bahwa terdapat korelasi yang erat antara haematokrit dan hemoglobin di mana semakin rendah jumlah sel-sel darah merah maka semakin rendah pula kandungan  hemoglobin  dalam  darah.  Pernyataan tersebut diperkuat oleh pernyataan Fakharzadeh et al. (2011),  yang  membuktikan  bahwa  nilai  hematokrit ikut  berpotensi  dalam  membawa  oksigen  dan
meningkatkan  aktivitas  aerobik  pada  tingkat  sel. Haematococcus selain berperan dalam sumber pigmen juga  berperan  sebagai  antioksidan  yang  mampu mempertahankan persentase sel darah merah dan hae- moglobin. Pengaruh pemberian antioksidan dari daun jeruju terbukti meningkatkan jumlah eritrosit (Agung et al., 2013) dan pada penelitian Chattopadhyay et al. (2004) tentang penggunaan kunyit yang juga memiliki aktivitas  antioksidan  terbukti  mampu  mencegah lisisnya sel darah merah.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian menunjukkan bahwa penambahan  haematococcus  sebagai  sumber astaxanthin  mampu  mengakumulasi  total  karoten dalam tubuh benih dan sebagai antioksidan mampu mempertahankan  profil  darah  kerapu  sunu  baik hematokrit maupun hemoglobin dalam kondisi nor- mal.  Pemberian  haematococcus  tanpa  campuran minyak  mampu  meningkatkan  kandungan  total karoten  sebesar  1,47x  lebih  besar  dari  kontrol  dan mampu meningkatkan nilai hematokrit dan hemoglo- bin masing-masing sebesar 2,19x dan 1,78x lebih besar dari kontrol.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  dapat  terselenggara  berdasarkan anggaran APBN tahun 2016. Ucapan terima kasih kami ucapkan  kepada  para  tim  teknisi  kerapu  sunu  yang ikut membantu dalam pelaksanaan kegiatan penelitian ini.

## DAFTAR  ACUAN
AbdelsameeGooda,  A.,  Sallam,  A.E.,  &  Srour,  T.M.
(2018). Evaluation of natural and synthetic caro-
tenoid supplementation on growth, survival, to- tal  carotenoid  content,  fatty  acids  profile  and stress  resistance  of  European  Seabass, Dicentrarchus labrax, fry. Aquaculture Studies, 18(1),
27-39.
Agung, L.A., Prayitno, S.B., & Sarjito. (2013). Pengaruh pemberian ekstrak daun jeruju (Acanthus ilicifolius) terhadap  profil  darah  ikan  kerapu  macan (Epinephelus  fuscoguttatus).  Journal  of  Aquaculture Management and Technology, 2(1), 87-101.
Arimboor,  R.,  Natarajan,  R.B.,  Menon,  K.R.,
Chandrasekhar,  L.P.,  & Moorkoth,  V.  (2015).  Red pepper (Capsicum annuum) carotenoids as a source of  natural  food  colors:  Analysis  and  stability  (a review). Journal of Food Science and Technology, 52(3), 1258-1271.
Britton,  G.,  Liaaen-Jensen,  S.,  &  Pfander,  H.  (2012). Carotenoids: Handbook. (Eds.). Washington D.C.: Birkhäuser Verlag.
Chattopadhyay,  I., Biswas,  K.,  Bandyopadhyay, U.,  & Banerjee, R.K. (2004). Turmeric and curcumin: Bio- logical actions and medicinal applications. Current Science-Bangalore, 87, 44-53.
Davis, K.B. & Parker, N.C. (1990). Physiological stress in striped bass: Effect of acclimation temperature. Aquaculture, 91(3-4), 349-358.
Effendie, M.I. (1997). Biologi perikanan. Yogyakarta: Yayasan Pustaka Nusatama.
Fakharzadeh,  S.M.E.,  Farhangi,  M.,  Amiri,  B.M., Ahmadi, M., & Maloumi, N. (2011). The Effect of hydrocortisone  treatment  by  bathing  and daphnia  enrichment  on  the  salinity  stress  in Persian  sturheon  Acipenser  percius  juvenille. International Aquatic Research, 3, 125-133.
Gambar 3. Korelasi nilai haematokrit dan haemoglobin.
Figure 3. Correlation between haematocrite and haemoglobin.
y = 3.6305x + 10.666 R² = 0.9896 0 5 10 15 20 25 30 35 40 0 2 4 6 8 H em at o kr it (H ae m at oc ri te ) ( % )
Hemoglobin (Haemoglobine) (g/dL)
Fánge,  R.  (1992).  Fish  blood  cells.  In  Hoar,  W.S., Randall,  D.J., &  Farrell,  A.P.  Academic Press. Fish physiology, 12, 1-54.
Fiedor, J.  & Burda,  K. (2014).  Potential role  of caro- tenoids  as  antioxidants  in  human  health  and disease. Nutrients, 6(2), 466-488.
Fujaya, Y. (2004). Fisiologi ikan: Dasar pengembangan teknik perikanan. Jakarta: Rineka Cipta.
Goodwin, T.W. (1980). Nature and distribution of caro- tenoids. Food Chemistry, 5(1), 3-13.
Graham,  R.D.  &  Rosser,  J.M.  (2000).  Carotenoids  in staple foods:  Their potential to  improve human nutrition.  Food  and  Nutrition  Bulletin,  21(4), 404-409.
Hrubec, T.C. & Smith, S.A. (2000). Hematology of fish. In  Feldman,  B.F.,  Zinkl,  J.G.,  &  Jain,  N.C.  Willey Blackwell: Schalm’s Veterinary Hematology Fifth. Hussein,  G., Sankawa,  U.,  Goto,  H., Matsumoto,  K., & Watanabe, H. (2006). Astaxanthin, a carotenoid with  potential  in  human  health  and  nutrition. Journal of natural products, 69(3), 443-449.
Jones, C.M. & Grutter, A.S. (2005). Parasitic isopods (Gnathia  sp.)  reduce  haematocrit  in  captive blackeye thicklip (Labridae) on the Great Barrier reef. Journal of Fish Biology, 66(3), 860-864.
Kim,  Y.G.,  Lee,  Y.H.,  Kang,  M.K.,  Lee,  B.H.,  Yun,  J.K., Kim,  S.B.,  &  Kim,  C.J.  (2009).  Preparation  of functional cosmetics containing $\beta $-carotene derived  from  recombinant  Escherichia  coli  and evaluation  of  anti-wrinkle  efficacy  by  clinical testing. Microbiology and Biotechnology Letters, 37(4), 399-404.
Kusumawati, D. & Setiawati, K.M. (2017). The use of carotene materials as the source of red color pig- mentation on leopard grouper larvae (Plectropomus leopardus). Aquacultura Indonesiana, 17(2), 35-45. Lorenz,  R.T.  &  Cysewski,  G.R.  (2000).  Commercial potential for haematococcus microalgae as a natu- ral source of astaxanthin. Trends in Biotechnology, 18(4), 160-167.
McInerney,  E.P., Silla,  A.J.,  &  Byrne, P.G.  (2016).  The influence  of  carotenoid  supplementation  at different life-stages on the foraging performance of  the  Southern  Corroboree  frog  (Pseudophryne corroboree):  A  test  of  the  silver  spoon  and  envi- ronmental  matching  hypotheses.  Behavioural Processes, 125, 26-33.
Meyer,  D.J.,  Coles,  E.H.,  &  Rich,  L.J.  (1992).  Veteri- nary  laboratory  medicine  interpretation  and diagnosis. Philadelphia: W.B. Saundres Company.
Munkittrick,  K.R.  &  Leatherland,  J.F.  (1983).
Haematocrit  values  in  feral  goldfish,  Camssius auratus L., as indicators of the health of the popu- lation. Journal of Fish Biology, 23(2), 153-161.
Naguib,  Y.M.  (2000).  Antioxidant  activities  of astaxanthin  and  related  carotenoids.  Journal  of Agricultural and Food Chemistry, 48(4), 1150-1154. Nickell,  D.C.  &  Bromage,  N.R.  (1998).  The  effect  of lipid  level  on  variation  of  flesh  pigmentation  in rainbow  trout  Oncorhynchus  mykiss.  Aquaculture, 161, 237-251.
Nolan,  J.M.,  Mulcahy,  R.,  Power,  R.,  Moran,  R.,  & Howard, A.N. (2018). Nutritional intervention to prevent alzheimer’s disease: Potential benefits of xanthophyll carotenoids and omega-3 fatty acids combined.  Journal  of  Alzheimer’s  Disease,  64(2), 367-378.
Olaizola,  M.  (2003).  Commercial  development  of microalgal biotechnology: from the test tube to the  market  place.  Biomolecular  engineering, 20(4-6), 459-466.
Pangkey, H.  (2011). Kebutuhan asam  lemak esensial pada ikan laut. Jurnal Perikanan dan Kelautan Tropis, 7(2), 93-102.
Salasia,  S.I.O.,  Sulanjari,  D.,  &  Ratnawati,  A.  (2001). Studi  hematologi  ikan  air  tawar.  Berkala  Ilmiah Biologi, 2(12), 710-723.
Sandnes,  K.,  Lie,  Ø.,  &  Waagbø,  R.  (1988).  Normal ranges  of  some  blood  chemistry  parameters  in adult farmed Atlantic salmon, Salmo salar. Journal of Fish Biology, 32(1), 129-136.
Setiawati, K.M., Mahardika, K., Alit, A.K., Kusumawati, D., & Mastuti, I. (2017). Pertumbuhan dan profil darah  benih  ikan  kerapu  sunu  Plectropomus Leopardus dipelihara pada salinitas berbeda. Jurnal Ilmu dan Teknologi Kelautan Tropis, 9(2), 557-568.
Shah, M., Mahfuzur, R., Liang, Y., Cheng, J.J., & Daroch, M. (2016). Astaxanthin-producing green microalga Haematococcus  pluvialis:  from  single  cell  to  high value  commercial  products.  Frontiers  in  plant science, 7(531), 1-29.
Sultana,  B.,  Anwar,  F.,  &  Przybylski,  R.  (2007).  Anti- oxidant potential of corncob extracts for stabili- zation of corn oil subjected to microwave  heating. Food Chemistry, 104(3), 997-1005.
Tay-Agbozo,  S.,  Street,  S.,  &  Kispert,  L.  (2018).  The carotenoid  Bixin  found  to  exhibit  the  highest measured carotenoid oxidation potential to date consistent  with  its  practical  protective  use  in cosmetics,  drugs  and  food.  Journal  of
Photochemistry  and  Photobiology  B:  Biology,  186, 1-8.
Yang, Y., Kim, B., & Lee, J.Y. (2013). Astaxanthin struc- ture,  metabolism,  and  health  benefits.  Jounal  of Human and Nutrition Food Science, 1(1003), 1-1003.
Packer, L. (1992). Carotenoids. Part A. chemistry, sepa- ration, quantitation, and autoxidation. San Diego: Academic Press. Meth. Enzymol., 213.
Yi, X.,  Zhang, F., Xu,  W., Li, J.,  Zhang, W., &  Mai, K. (2014). Effects of dietary lipid content on growth, body composition and pigmentation of large yel- low croaker (Larimichthys croceus). Aquaculture, 434, 355-361.