## ABSTRAK
Global  Diabetes  Statistic  melaporkan  bahwa  pada  tahun  2003  terdapat  194  juta  jiwa  di  dunia menderita DM dan akan meningkat menjadi 333 juta jiwa pada tahun 2025. Keadaan hiperglikemi juga terlibat dalam prose pembetukan radikal bebas yang di tandai dengan adanya kenaikan kadar Lipid Peroksida (LPO) dan penurunan Glutathion (GSH). Pengobatan Diabetes dapat diatasi dengan antioksidan,  senyawa  antioksidan  sintetik  maupun  alami  mampu  mengontrol  kadar  glukosa  dalam darah dan mencegah timbulnya komplikasi diabetes. Stevia mempunyai nilai IC 50 sebesar 8,02 µg/ml dan sambiloto mempunya nilai IC 50 sebesar 6,5 µg/ml. Penelitian dilakukan untuk mengetahui efektifitas optimal kombinasi ekstrak etanol daun stevia dan daun sambiloto terhadap stress oksidatifpada tikus diabetes melitus dibandingkan dalam bentuk tunggal. Metode penelitian menggunakan uji praklinis dengan menginduksi aloksan pada tikus putih jantan Penelitian menggunakan 40 tikus putih jantan yang dibagi secara acak menjadi 8 kelompok. Kelompok I sebagai kontrol normal diberi aquadest, kelompok II sebagai kontrol negatif diberi CMC Na 0.5%, kelompok III sebagai kontrol positif diberi glibenklamid dosis 1,26 mg/KgBB, kelompok IV sampai V diberi dosis tunggal ekstrak etanol daun stevia 100% dan sambiloto 100%, dan untuk kelompok VI - VIII berturut-turut diberi kombinasi perbandingan STSA 75:25, STSA 50:50, STSA 25: 75 (dalam persen). Kemudian dilakukan analisis penentuan parameter stress oksidatif dengan pengukuran kadar LPO dan kadar GSH. Pemberian kombinasi ekstrak etanol daun stevia dan daun sambiloto mampu menurunkan kadar LPO (Lipid Peroxidation) dan meningkatkan kadar GSH pada tikus Diabetes Melitus yang diinduksi Aloksan secara signifikan dengan nilai (P<0,05). Dosis optimal ekstrak etanol daun stevia dan ekstrak etanol daun sambiloto yang mampu menurunkan kadar LPO pada tikus Diabetes Melitus yang diinduksi adalah dosis STSA 75% : 25% yaitu 75 mg/kg BB stevia : 5,12 mg/ kg BB sambiloto.
Kata Kunci : LPO, Stevia, Sambiloto, IC50, Diabetes Melitus

## ABSTRACT
Global Diabetes Statistic reports that in 2003 there were 194 million people in the world suffering from DM and would increase to 333 million by 2025. The hyperglycemic state is also involved in the free radical free radical process which is marked by elevated levels of lipid peroxide (LPO) and decreased Glutathion  (GSH).  Treatment  Diabetes  can  be  overcome  with  antioxidants,  synthetic  or  natural antioxidant compounds (from various plants) are able to control blood glucose levels and prevent the occurrence of diabetes complications. Stevia has IC50 value of 8.02 ìg / ml and sambiloto has IC50 value of 6.5 ìg / ml. This study was conducted to determine the optimal effectiveness of ethanol extract combination of stevia leaves and bitter leaves of oxidative stress in diabetic melitus rats compared in

## PENGARUH KOMBINASI DAUN STEVIA ( Stevia rebaudiana Best ) DAN EKSTRAK ETANOL DAUN SAMBILOTO ( Andrographidis folium ) TERHADAP STRESS OKSIDATIF PADA TIKUS DIABETES MILITUS YANG DIINDUKSI ALOXAN
Petrus Rizky P 1) , Sepgiarno Ambar Pradini 2) , Farah Ayu Dian 3)
1,2,3 Prodi D-III Farmasi STIKes Nasional Surakarta petruzzrizky@gmail.com
single form.The method used in this study was by conducting preclinical testing by inducing alloxan in male white rats. The study used 40 male white rats divided randomly into 8 groups. Group I as a normal control was given aquadest, group II as negative control was given CMC Na 0.5%, group III as positive control was given glibenclamide dose 1.26 mg / KgBB, group IV to V were given single dose of 100% stevia ethanol extract and 100 %, And for groups VI - VIII were given a combination of STSA 75:25, STSA 50:50, STSA 25: 75 (in percent), respectively. Then the analysis determines the parameters of oxidative stress with measurement of levels of LPO and GSH levels. The combination of ethanol extract of stevia leaf and bitter leaf was able to decrease LPO (Lipid Peroxidation) and increase GSH level in Aloksan-induced Diabetes Melitus mice significantly with value (P <0,05). The optimal dose of ethanol extract of stevia leaf and ethanol extract of bitter leaf that can decrease LPO level in mouse Diabetes Mellitus induced is 75%: 25% STSA dose ie 75 mg / kg BW stevia: 5.12 mg / kg BB sambiloto.
Keywords: LPO, Stevia, Sambiloto, IC50, Diabetes Mellitus

## 1.  PENDAHULUAN
Diabetes  Militus  (DM)  atau  dikalangan masyarakat  dikenal  sebagai  kencing  manis adalah suatu penyakit metabolik yang memiliki karakteristik  hiperglikemia  yang  terjadi  karena adanya  kelainan  sekresi  insulin,  kerja  insulin, ataupun  keduanya.  Keluhan  awal  berupa peningkatan  rasa  haus  ( polidipsia )  dan  lapar ( polifagia )  yang  disertai  pertambahan  volume atau  frekuensi  berkemih  ( poliuria ).  DM ditetapkan dengan pemeriksaan kadar gula darah sewaktu  mencapai  200  mg/dl  atau  pemeriksaan kadar  gula  darah  sewaktu  puasa  mencapai 126  mg/dl  (Soegondo,  2010).  Terdapat  2  jenis penyakit DM, yaitu DM tipe 1 ( insulin-dependent diabetes melitus ) yaitu kondisi dimana defisiensi produksi insulin oleh pankreas, kondisi ini hanya dapat  diobati  dengan  pemberian  insulin.  DM tipe  2  ( non  insulin  dependent  diabetes  melitus ) yang terjadi akibat ketidakmampuan tubuh untuk berespon dengan wajar terhadap aktivitas insulin yang  dihasilkan  pankreas  (resistensi  insulin), sehingga  tidak  tercapai  kadar  glukosa  normal dalam  darah  (Maulana,  2008). Global  Diabetes Statistic melaporkan  bahwa  pada  tahun  2003 terdapat  194  juta  jiwa  di  dunia  menderita  DM dan akan meningkat menjadi 333 juta jiwa pada tahun 2025.
Pengobatan  dan  pemeliharaan  DM mengeluarkan  biaya  yang  cukup  banyak  setiap tahunnya.Semakin  banyak  obat  paten  yang harus  di  konsumsi  oleh  penderita  diabetes, biaya  pengobatannya  pun  semakin  besar  dan tidak  terjangkau  bagi  masyarakat  kecil  (Tobing et  al.,  2008).  Terapi  modern  untuk  DM  mulai
dari  modifikasi  diet  kemudian  berlanjut  ke antidiabetik oral dan insulin. Penggunaan terapi seperti  sulfoniliurea  dan  biguanid  terbatas farmakokinetiknya  dan  efek  samping.  Komisi diabetes  dunia,  merekomendasikan  penelitian lebih lanjut pengobatan DM menggunakan metode tradisional. Bahan alam dengan efek hipoglikemia dapat  memberikan  efek  Hiperglikemia  juga terlibat dalam proses pembentukan radikal bebas. Radikal  bebas  dapat  menjadi  faktor  penyebab berbagai  macam  penyakit  misalnya,  kanker, jantung  koroner,  arterosklerosis,  dan  penuaan dini.  Tingginya  kadar  glukosa  di  dalam  tubuh juga menjadi faktor meningkatnya radikal bebas yang dapat ditunjukkan dengan tingginya kadar Lipid  Peroksidase  (LPO)  dan  rendahnya  kadar Glutathion  (GSH)  didalam  tubuh.  Tingginya kadar glukosa di dalam tubuh serta adanya proses auto oksidasi pada hiperglikemia menjadi faktor meningkatnya radikal bebas.
Daun  stevia  ( Stevia  rebaudiana  Bertoni ) merupakan tanaman yang akhir akhir ini banyak digunakan.  Banyak  kalangan  menggunakannya sebagai  pemanis  alami.  Rasa  manis  yang  di peroleh  daun  stevia  dari  zat  diterpen  glikosida yang  di  sebut  steviol  yang  terdapat  dari  daun stevia (Bondarev et al ., 2010). Terpen merupakan zat alami yang di hasilkan oleh tumbuhan Stevia rabaudiana yang  mempunyai  beberapa  efek seperti  antihiperglikemia  (Paduch et  al .,  2007). Pengobatan  Diabetes  dapat  dilakukan  dengan menggunakan antioksidan, dalam penelitian yang dilakukan Widowati (2008) senyawa antioksidan sintetik  maupun  alami  (dari  berbagai  tanaman) mampu  mengontrol  kadar  glukosa  dalam  darah

## Jurnal Kesehatan Kusuma Husada - Juli 2017
dan  mencegah  timbulnya  komplikasi  diabetes. Selain  itu  adanya  penelitian  terkait  efektifitas antidiabetes  ekstrak  etanol  daun  stevia  pernah dilakukan oleh Siti Fatimah (2010) bahwa ekstrak etanol daun stevia pada dosis 20 mg/ 200 g BB mempunyai efektivitas terhadap penurunan kadar glukosa dalam darah.
Daun  sambiloto  ( Andrographidis  folium ) merupakan salah satu tanaman yang di gunakan sebagi  obat  tradisional.  Bagian  daun  sambiloto ini mempunyai khasiat bagi pengobatan, khasiat itu  meliputi  antiradang,  anti-inflamasi,  dan antipiretik  (Hariana,  2006).  Adanya  penelitian terkait efektivitas antioksidan ekstrak etanol daun sambiloto  oleh  Saranay et.al (2010)  dibuktikan bahwa ekstrak etanol daun sambiloto mempunya nilai IC 50 sebesar 6,5 µg/ml yang mana ekstrak etanol  daun  sambiloto  ini  mempunyai  efek antioksidan yang baik hal ini di perkuat dengan adanya analisis LPO pada tikus yang dilakukan oleh  (Pérez et  al .,  2007)  yang  mana  ekstrak etanol daun sambiloto dapat menurunkan kadar lipid peroxidas. Adanya penelitian terkait dengan efek  ekstrak  etanol  daun  sambiloto  terhadap penurunan  kadar  glukosa  darah  yang  pernah  di lakukan  oleh  Rosnaini  (2010)  menunjukkan yang mana bahwa ekstrak etanol daun sambiloto dosis 29,25 mg/kg BB mempunyai efek terhadap penurunan kadar glukosa darah pada mencit yang di induksi aloksan yang potensinya sama dengan glibenklamid.
Tujuan  penelitian  untuk  mengetahui pengaruh  pemberian  kombinasi  ekstrak  etanol daun  stevia  dan  daun  sambiloto  terhadap parameter  stress  oksidatif  pada  tikus  diabetes melitus yang diinduksi aloxan.

## 2.   METODE PENELITIAN
Alat dan Bahan
Spuit  oral,  labu  ukur,  mortir,  stamfer, mikrometer  pipet,  tabung  reaksi,  inkubator, bluetip, yellowtip, allumunium foil, spektrofotometer,  ekstrak  etanol  daun  stevia dan ekstrak etanol daun sambiloto, Tikus jantan, Alloksan,  Glibenclamide  (kontrol  positif),  dan CMC-Na  (kontrol  negatif),  Analisis  parameter stress oksidatif: buffer (pH 7,4), Sodium dodecyl sulfate(SDS) 8,1 %, asam asetat 20 %, TBA 0,8
%, aquadest, TCA 10 %, Reagen ellman, Sodium Citrat, Na 2 HPO 4,

## Cara Kerja

## A.   Preparasi Sampel
Daun Stevia dan daun Sambiloto di haluskan terlebih  dahulu  untuk  membuat  daun  menjadi serbuk.  Maserasi  daun  sambiloto  dan  daun stevia  menggunakan  etanol  70  %  untuk  untuk mendapatkan ekstrak etanol.

## B .   Uji Farmakologi
Metode menggunakan uji efek antidiabetes tipe  II  yang  diinduksi  aloksan  pada  tikus putih  jantan  galur  wistar  (100-200  gram) yang  berumur  2-3  bulan  sebanyak  50  ekor dibagi  dalam  8  kelompok.Sebelum  perlakuan, semua  tikus  dipuasakan  lebih  kurang  12-18 jam  kemudian  diperlakukan  sesuai  kelompok masing-masing.  Kelompok  I  (Kontrol  normal) hanya  diberikan  aquadest  secara  per  oral; kelompok  II  (Kontrol  negatif)  diberikan  CMC- Na 0,5% secara per oral; kelompok III (kontrol Positif)  diberikan  glibenklamid  dosis  1,26  mg/ kgBB secara per oral; kelompok IV (ST 100%) diberi ekstrak etanol daun stevia dosis 100 mg/ kg  BB;  kelompok  V  (SA  100%)  diberi  ekstrak etanol  daun  sambiloto  dosis  29,25  mg/  kg  BB; kelompok  VI  (STSA  75%  :  25%)  diberi  dosis kombinasi  stevia  :  sambiloto  perbandingan  75 mg  /kg  BB  :5,12  mg  /  kg  BB;  kelompok  VII (STSA 50% : 50%) diberi dosis kombinasi stevia :  sambiloto  dengan  perban-dingan  50  mg  /  Kg BB : 10,24 mg / kg BB; kelompok VIII (STSA 25%  :  75%)  diberi  dosis  kombinasi  stevia  : sambiloto dengan perbandingan 25 mg / kg BB : 15,36 mg/ kg BB. Semua kelompok hewan uji dinduksi  dengan  alloksan  175mg/kgBB  dengan stock 1,4 % (Yunita, 2013) kecuali kelompok 1 (kontrol normal) secara intraperitoneal pada hari ke-0,  dilanjutkan  perlakuan  hewan  uji  dari  hari ke-1 hingga sampai hari ke-14. Pada hari ke-14 tikus dikorbankan dan diambil organ hati untuk dianalisa efek antioksidan.

## C.   Analisa Parameter Stress Oksidatif LPO
(Lipid Peroksidase) &GSH Glutathion) Analisis  kadar  LPO  berdasarkan  metode yang  dikembangkan  oleh  Ohkawa et  all.,
(1979).  Jaringan  liver  dihomogenkan  dalam 0,1  M  buffer  (Ph  7,4).  Kadar  lipid  peroksidase dalam  campuran  ini  ditentukan  berdasarkan jumlah  terbentuknya  malondialdehyde  (MDA).
Sejumlah 0,2 ml liver yang telah dihomogenkan ditambah  0,2  ml Sodium  dodecyl  sulfate  (SDS) 8,1  %,  1,5  ml  asam  asetat  20%  dan  1,5ml TBA  0,8%.  Campuran  sejumlah  4ml  ditambah aquadest, dan dihangatkan suhu 95RC selama 60 menit.  Setelah  diinkubasi,  selanjutnya  diamkan dalam  suhu  kamar.  Dengan  volume  yang  sama tambahkan  TCA  10%  selanjutnya  dilakukan sentrifugasi selama 10 menit 3000 rpm. Lapisan atas  yang  terbentuk  diambil  dan  diukur  nilai OD  pada  panjang  gelombang  532  nm  terhadap blanko  yang  tidak  diberikan  sampel.  Jumlah lipid  peroksidation  (LPO)  dinyatakan  sejumlah mol  thiobarbituric  acid  reaktive  subtance (TBARS)/mg  protein  dengan  menggunakan koefisien  ekstingsi  1,56  x  10 -5 M -1 cm -1 (Bose  et al., 2007). Pengukuran kadar GSH dalam sampel mengacu  metode  Ellman  dkk.,  (1959).  Untuk mengkur jumlah glutathione(GSH) jaringan hati dihomogenkan  dalam  0,1  M  phosphate  buffer (pH  7,4).  Campuran  yang  telah  dihomogenkan ditambah  TCA  10  %;  dan  disentrifugasi  3000 rpm selama 10 menit. Ambil 500 µl supernatant dan ditambah 2 ml disodium hydrogen phospat 0,3  M,  ditambahkan  sejumlah  200  µl  reagen Ellman’s  (5,  5’-dithiobis-2-nitrobenzoic  acid) (0,4 mg/mL dalam sodium citrate 1 %). Larutan diukur pada 412 nm yang dibandingkan dengan blanko (Bose dkk., 2007).

## 3.   HASIL DAN PEMBAHASAN
Lipid peroxidation atau lipid hidroperoksida merupakan suatu molekul yang stabil pada suhu fisiologis.  Kadar  lipid  peroxidation  diukur  de- ngan metode asam tiobarbiturat (TBA)yang men- gukur adanya MDA.TBA akan bereaksi dengan gugus  karbonil  dari  MDA,  yaitu  satu  molekul MDA akan berikatan dengan dua molekul TBA sehingga membentuk senyawa kompleks berwar- na merah (Halliwel and Gutteridge, 1999). Ter- bentuknya warna merah diukur serapannya den- gan  spektrofotometer  pada  panjang  gelombang 532 nm yang sebanding dengan tingkat oksidasi lipid. Pada reaksi ini ada sejumlah senyawa lain yang juga bereaksi dengan TBA, namun karena
jumlahnya kecil maka bisa diabaikan. Senyawa- senyawa itu diantaranya adalah glukosa <0.4 mg (2.2 ìmol) dan sukrosa <8.56 mg (25.0 ìmol Oh- kawa dkk., 1979). nm  terhadap  blanko  yang  tidak  diberikan sampel.    Jumlah  lipid  peroksidation  (LPO) dinyatakan  sejumlah  mol  thiobarbituric  acid reaktive  subtance  (TBARS)/mg  protein dengan menggunakan koefisien ekstingsi 1,56 x 10 -5 M -1 cm -1 (Bose et al., 2007). Pengukuran kadar  GSH  dalam  sampel  mengacu  metode Ellman  dkk.,  (1959).  Untuk  mengkur  jumlah glutathione(GSH) jaringan hati dihomogenkan dalam  0,1  M  phosphate  buffer  (pH  7,4). Campuran yang telah dihomogenkan ditambah TCA 10 %; dan disentrifugasi 3000 rpm  selama  10  menit.  Ambil  500  µl supernatant  dan  ditambah  2  ml  disodium hydrogen  phospat  0,3  M,  ditambahkan sejumlah  200  µl  reagen  Ellman’s  (5,  5’- dithiobis-2-nitrobenzoic  acid)  (0,4  mg/mL dalam    sodium  citrate  1  %).  Larutan  diukur pada  412  nm  yang  dibandingkan  dengan blanko (Bose dkk., 2007). 3.  HASIL DAN PEMBAHASAN Lipid peroxidation atau lipid hidroperoksida merupakan suatu molekul yang stabil  pada  suhu  fisiologis.  Kadar  lipid peroxidation  diukur  dengan  metode  asam tiobarbiturat  (TBA)yang  mengukur  adanya
MDA.TBA  akan  bereaksi  dengan  gugus karbonil dari MDA, yaitu satu molekul MDA akan  berikatan  dengan  dua  molekul  TBA sehingga  membentuk  senyawa  kompleks berwarna  merah  (Halliwel  and  Gutteridge, 1999).  Terbentuknya  warna  merah  diukur serapannya  dengan  spektrofotometer  pada panjang  gelombang  532  nm  yang  sebanding dengan  tingkat  oksidasi  lipid.  Pada  reaksi  ini ada sejumlah senyawa lain yang juga bereaksi dengan  TBA,  namun  karena  jumlahnya  kecil maka  bisa  diabaikan.  Senyawa-senyawa  itu diantaranya  adalah  glukosa  <0.4  mg  (2.2 μ mol)  dan  sukrosa  <8.56  mg  (25.0 μ mol Ohkawa dkk., 1979). Pada  gambar  1  terlihat  bahwa  pada kontrol  negatif  atau  pada  tikus  yang  hanya diinduksikan aloksan mempunyai grafik kadar
MDA  yang  paling  tinggi.  Pada  penelitian  ini kontrol  positif  mempunyai  kadar  MDA  yang mendekati  kontrol  normal  yang  menunjukan bahwa pada kontrol positif dapat mempengaruh  penurunan  kadar  MDA  pada tikus  yang  Diabetes  melitus  yang  diinduksi aloksan.  Pada  sampel  terlihat  dari  grafik maupun  tabel  bahwa  nilai  yang  mendekati kontrol  positif  adalah  pada  kombinasi  1  yang mana pada sampel ini mempunyai nilai MDA yang  paling  kecil  di  bandingkan  sampel kombinasi  dengan  perbandingan  lain  maupun dengan  dosis  tunggalnya.  Dari  tabel  inilah dapat  terlihat  bawa  kombinasi  ekstrak  etanol daun  stevia  dan  ekstrak  etanol  daun  sambilto dapat  menurukan  kadar  lipid  peroksida  pada tikus  diabetes  melitus  yang  diinduksikan aloksan.  Dari  perlakuan  dosis  stevia  100%, sambiloto  100%,  STSA  75%  :  25%  ,  STSA 50%  :  50%,  STSA  25%  :  75%  didapat  kadar lipid  peroksidase  (LPO)  terendah  pada  STSA 75% : 25% (0.215 µM), kemudian meningkat pada STSA 50% : 50% (0.223 µM), kemudian meningkat  pada  stevia  100  %  (0.236  µM), kemudian  meningkat  pada  sambiloto  100% (0.306  µM),  dan  untuk  kadar  tertinggi  pada STSA  25%  :  75%  (0.330  µM),.  Pada  setiap perlakuan  dosis  pada  dasarnya  mengalami suatu penurunan karena kadar LPO pada setiap dosis  berada  di  bawah  kadar  LPO  kelompok negatif. Untuk  memperkuat  hasil  analisa  selain di lihat dari tabel dan grafik kadar MDA maka Kadar  MDA  (µM)  selanjutnya  dianalisis normalitas  dengan  metode Test  of  normality. Pada  test  ini  memperoleh  hasil  P<0,05  yang artinya terdapat data tidak terdistribusi normal. Kemudian  dilanjutkan  kepada  analisa Nonparametrik  menggunakan  analisa  Man  – Whitney. Di mana dari anilisa Man – Whitney didapatkan hasil bahwa antara kontrol negatif dengan kontrol positif mempunyai nilai < 0,05 yang  mana  menunjukan  bahwa  terdapat perbedaan  yang  signifikan  antara  kontrol negatif  dengan  kontrol  positif.  Lalu dibandingkan  juga  antara  kontrol  negatif dengan  kelompok  IV  –  VIII  dan  didapatkan hasil  niali  <0,05  yang  mana  menunjukkan adanya  perbedaan  yang  bermakna  antara kontrol negatif dengan kelompok IV – VIII. Keterangan: (a) berbeda signifikan dibandingkan de- ngan kelompok normal, (*) berbeda signifikan dengan kelompok negatif
Gambar 1 Data Kadar Nilai LPO masing- masing kelompok setelah dilakukan perlakuan
Pada gambar 1 terlihat bahwa pada kontrol negatif atau pada tikus yang hanya diinduksikan aloksan  mempunyai  grafik  kadar  MDA  yang paling tinggi. Pada penelitian ini kontrol positif mempunyai kadar MDA yang mendekati kontrol normal  yang  menunjukan  bahwa  pada  kontrol positif  dapat  mempengaruh  penurunan  kadar MDA  pada  tikus  yang  Diabetes  melitus  yang diinduksi aloksan. Pada sampel terlihat dari grafik maupun tabel bahwa nilai yang mendekati kontrol positif  adalah  pada  kombinasi  1  yang  mana pada  sampel  ini  mempunyai  nilai  MDA  yang paling  kecil  di  bandingkan  sampel  kombinasi dengan  perbandingan  lain  maupun  dengan dosis tunggalnya. Dari tabel inilah dapat terlihat bawa kombinasi ekstrak etanol daun stevia dan ekstrak  etanol  daun  sambilto  dapat  menurukan kadar lipid peroksida pada tikus diabetes melitus yang  diinduksikan  aloksan.  Dari  perlakuan dosis  stevia  100%,  sambiloto  100%,  STSA 75%: 25%, STSA 50% : 50%, STSA 25% : 75% didapat kadar lipid peroksidase (LPO) terendah pada  STSA  75%  :  25%  (0.215  µM),  kemudian meningkat pada STSA 50% : 50% (0.223 µM), kemudian meningkat pada stevia 100 % (0.236 µM), kemudian meningkat pada sambiloto 100% (0.306 µM), dan untuk kadar tertinggi pada STSA 25% : 75% (0.330 µM),. Pada setiap perlakuan dosis pada dasarnya mengalami suatu penurunan
Jurnal Kesehatan Kusuma Husada - Juli 2017
karena  kadar  LPO  pada  setiap  dosis  berada  di bawah kadar LPO kelompok negatif.
Untuk  memperkuat  hasil  analisa  selain  di lihat dari tabel dan grafik kadar MDA maka Kadar MDA  (µM)  selanjutnya  dianalisis  normalitas dengan  metode Test  of  normality. Pada  test  ini memperoleh hasil P<0,05 yang artinya terdapat data tidak terdistribusi normal. Kemudian dilanjut- kan kepada analisa Nonparametrik menggunakan analisa Man – Whitney. Di mana dari anilisa Man – Whitney didapatkan hasil bahwa antara kontrol negatif  dengan  kontrol  positif  mempunyai  nilai <  0,05  yang  mana  menunjukan  bahwa  terdapat perbedaan yang signifikan antara kontrol negatif dengan  kontrol  positif.  Lalu  dibandingkan  juga antara  kontrol  negatif  dengan  kelompok  IV  – VIII dan didapatkan hasil niali <0,05 yang mana menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna antara  kontrol  negatif  dengan  kelompok  IV  – VIII.
Pengukuran kadar glutathione menggunakan metode  Ellman’s  (5,  5’-dithiobis-2-nitrobenzoic acid).  Prinsip  dari  pengukuran  yaitu  reaksi antara 5, 5’-dithiobis-2-nitrobenzoic acidan GSH menghasilkan senyawa dianion tionitro benzoate yang berwarna kuning (Widowatidkk , 2004),
Pada analisa GSH didaapatkan hasil sebagai berikut : Pengukuran kadar glutathione menggunakan  metode  Ellman’s  (5,  5’- dithiobis-2-nitrobenzoic  acid).  Prinsip  dari pengukuran yaitu reaksi antara 5, 5’-dithiobis- 2-nitrobenzoic  acidan  GSH  menghasilkan senyawa  dianion  tionitro  benzoate  yang berwarna kuning (Widowatidkk , 2004),
Pada  analisa  GSH  didaapatkan  hasil sebagai berikut :

## Gambar 2. Grafik Hasil kadar GSH
Dari  gambar  2  dapat  dilihat  bahwa  pada kelompok  kontrol  negatif  mempunyai  kadar GSH  yang  paling  kecil  dibandingkan  dengan kelompok yang lainnya. Hal ini menunjukkan bahwa  kelompok  kontrol  negatif  mempunyai kemampuan  menaikkan  kadar  GSH  paling rendah jika dibandingkan semua kelompok.
Semua  perlakuan  menunjukkan  mampu digunakan sebagai antidiabetes dan antioksidan terbukti dengan mampu menurunkan kadar glukosa darah, menurunkan kadar LPO dan menaikkan kadar GSH secara signifikan  (p<0,05).  Bila  dilihat  dari  semua dosis kombinasi yang mempunyai efek sebagai antidiabetes  dan  antioksidan  yang  mendekati dengan kelompok positif yaitu pada kelompok STSA 75:25.
Ekstrak  etanol  daun  stevia  mempunyai kandungan  kimia  steviosida  dan  daun sambiloto  mempunyai  kandungan  kimia andrografolid yang pada penelitian sebelumnya dengan pemberian secara tunggal dapat  digunakan  sebagai  antidiabetes  dan antioksidan.  Mekanisme  kerja  dari  dari  daun stevia  dengan  zat  yang  disebut  diterpen glikosida  steviosida  dan  steviol  dapat menstimulasi  sekresi  insulin  melalui  aksi langsung  pada  sel  beta  pankreas  dan  dapat memperbaiki kerusakan pada sel beta pankreas yang  apabila  tidak  diperbaiki  dapat memberikan efek penurunan insulin yang lebih jauh (Subroto, 2006).
4. KESIMPULAN
a.  Pemberian  kombinasi  ekstrak  etanol  daun stevia  dan  ekstrak  etanol  daun  sambiloto mampu  menurunkan  kadar  LPO  (Lipid Peroxidation)  dan  meningkatkan  kadar GSH  (Glutathion)  pada  tikus  Diabetes Melitus yang diinduksi Aloksan.
b.  Dosis  optimal  kombinasi  ekstrak  etanol daun  stevia    dan  ekstrak  etanol  daun sambiloto yang mampu menurunkan kadar LPO  pada  tikus  Diabetes  Melitus  yang diinduksi adalah dosis 75 mg/ kg BB : 5,12 mg/  kg  BB  dan  dosis  untuk  manusia sebesar 840 mg : 57, 3 mg
UCAPAN TRIMAKASIH Pelaksanaan Program Kreatif Mahasiswa yang didanai oleh DIKTI pada Tahun 2016
5. REFERENSI
Aziza,  R.Z.,  2010, Gambaran  Histomorfologi hati,  usus  halus,  dan  limpa  pada  tikus hiperglikemia  yang  diberi  Ekstrak Sambiloto ,  Fakultas  Kedokteran  Hewan Institut Pertanian Bogor
Borhanuddin,  M.,  Shamsuzzoh,  M.,  Hussain, A.H.  (1994),  Hypoglycaemis  effects  of Andrographis  paniculata  Nees  on  non- diabetic  rabbits, Bangladesh  Medical Research Council Bulletin , 20 (1), 24-26.
Chao, P. M., Chao, C. Y., Lin, F. J., Huang, C. J.  2001.  Oxidized  Frying  Oil  Upregulates Hepatic Acyl-CoA Oxidase and Cytochrome P450  4  A1  GenesinRats  and Activates  PPAR α .  J.  Nutr .,  131:3166- 3174.
Dalimartha,  Setiawan,  2000, Ramuan Tradisional  Untuk  Pengobatan  Diabetes Mellitus , Penebar Swadaya : Jakarta
Demple,  B.  Dan  L.  Harrison,  1994. Anual Review Biochemistry. 63: 915-948.
Depkes RI, 2005, Pharmaceutical Care untuk Penyakit  Diabetes  Melitus, Departemen Kesehatan RI : Jakarta
Donne.,et  al,  2006. Biomarker  of  Oxidative Damage in Human Disease. Clinc  Chem. 1-23
Gambar 2. Grafik Hasil kadar GSH
Dari  gambar  2  dapat  dilihat  bahwa  pada kelompok  kontrol  negatif  mempunyai  kadar GSH  yang  paling  kecil  dibandingkan  dengan kelompok  yang  lainnya.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  kelompok  kontrol  negatif  mempunyai kemampuan  menaikkan  kadar  GSH  paling rendah jika dibandingkan semua kelompok.
Semua  perlakuan  menunjukkan  mampu digunakan  sebagai  antidiabetes  dan  antioksidan
terbukti  dengan  mampu  menurunkan  kadar glukosa  darah,  menurunkan  kadar  LPO  dan menaikkan  kadar  GSH  secara  signifikan (p<0,05). Bila dilihat dari semua dosis kombinasi yang  mempunyai  efek  sebagai  antidiabetes  dan antioksidan  yang  mendekati  dengan  kelompok positif yaitu pada kelompok STSA 75:25.
Ekstrak etanol daun stevia mempunyai kan- dungan  kimia  steviosida  dan  daun  sam biloto mempunyai kandungan kimia andrografolid yang pada  penelitian  sebelumnya  dengan  pem berian secara  tunggal  dapat  digunakan  sebagai  anti- diabetes dan antioksidan. Mekanisme kerja dari dari daun stevia dengan zat yang disebut diterpen glikosida steviosida dan steviol dapat menstimu- lasi sekresi insulin melalui aksi langsung pada sel beta pankreas dan dapat memperbaiki kerusakan pada sel beta pankreas yang apabila tidak diper- baiki dapat memberikan efek penurunan insulin yang lebih jauh (Subroto, 2006).

## 4.   KESIMPULAN
a.   Pemberian  kombinasi  ekstrak  etanol  daun stevia  dan  ekstrak  etanol  daun  sambiloto mampu menurunkan kadar LPO (Lipid Per- oxidation)  dan  meningkatkan  kadar  GSH (Glutathion)  pada  tikus  Diabetes  Melitus yang diinduksi Aloksan.
b.   Dosis optimal kombinasi ekstrak etanol daun stevia  dan  ekstrak  etanol  daun  sambiloto yang mampu menurunkan kadar LPO pada tikus Diabetes Melitus yang diinduksi adalah dosis 75 mg/ kg BB : 5,12 mg/ kg BB dan dosis untuk manusia sebesar 840 mg : 57, 3 mg
UCAPAN TRIMAKASIH Pelaksanaan  Program  Kreatif  Mahasiswa yang didanai oleh DIKTI pada Tahun 2016
5.   REFERENSI Aziza,  R.Z.,  2010, Gambaran  Histomorfologi hati,  usus  halus,  dan  limpa  pada  tikus hiperglikemia yang diberi Ekstrak Sambiloto ,  Fakultas  Kedokteran  Hewan Institut Pertanian Bogor
Borhanuddin,  M.,  Shamsuzzoh,  M.,  Hussain, A.H.  (1994),  Hypoglycaemis  effects  of Andrographis  paniculata  Nees  on  non-
diabetic  rabbits, Bangladesh  Medical Research Council Bulletin , 20 (1), 24-26.
Chao, P. M., Chao, C. Y., Lin, F. J., Huang, C.
J.  2001.  Oxidized  Frying  Oil  Upregulates
Hepatic Acyl-CoA Oxidase and Cytochrome P450  4  A1  GenesinRats  and  Activates PPARá. J. Nutr ., 131:3166-3174. Dalimartha, Setiawan, 2000, Ramuan Tradisional Untuk  Pengobatan  Diabetes  Mellitus , Penebar Swadaya : Jakarta
Demple, B. Dan L. Harrison, 1994. Anual Review Biochemistry. 63: 915-948. Depkes  RI,  2005, Pharmaceutical  Care  untuk Penyakit  Diabetes  Melitus, Departemen
Kesehatan RI : Jakarta
Donne.,et  al,  2006. Biomarker  of  Oxidative Damage  in  Human  Disease. Clinc  Chem.
1-23
Pérez ,Y.Y., Jiménez-Ferrer, E. and Zamilpa, A.
2007.  Effect  of  a  polyphenol-rich  extract from  Aloe  vera  gel  on  experimentally
induced insulin resistance in mice . American
Journal of Clinical Medicine 35: 1037-1046. Retno,  T.  2012.  Pengaruh  Pemberian  Isoflavon terhadap Peroksidasi Lipid pada Hati Tikus Normal. Indonesia Medicus Veterinus1 (4) :
483-491. ISSN : 2301-784
Rosnaeni,  dkk,  2010, Efek  Ekstrak  Etanol Daun  Sambiloto  ( Andrographidis  folium ) Terhadap  kadar  Glukosa  Darah  Mencit
Jantan  Swiss  Webster  yang  Diinduksi Aloksan dan Perbandingan Terhadap Jamu
D , Fakultas Kedokteran Universitas Kristen Maranatha, Bandung
Siti  Fatimah,  2012  , Perberdaan  Efek  Ekstrak Etanol  Daun  Stevia  (Stevia  rebaudiana Bertoni)  Dibandingka  Madu  Terhadap Perubahan  Kadar  Glukosa  Darah  Tikus Wistar  Model  Diabetes,  Skrips i,  Fakultas Kedokteran  Universitas  Sebelas  Maret, Surakarta
-oo0oo-

## Jurnal Kesehatan Kusuma Husada
- Juli 2017