## Uji  Aktivitas  Antioksidan  Kombinasi  Ekstrak  Etanol Daun Teh dan Kulit Jeruk Mandarin
Antioxidant Activity of Combination Extract Tea Leaves and Mandarin’s Orange Peel
Siska Febdian Nitami 1 , Rifki Febriansah 1 *, Muhamad Salman Fareza 2
1 Department of Pharmacy, Faculty of Medicine and Health Sciences, Universitas Muhammadiyah Yogyakarta. Jalan Brawijaya, Tamantirto, Kasihan, Bantul, Yogyakarta, Indonesia 55183
2 Department of Pharmacy, Faculty of Health Sciences, Universitas Jenderal Soedirman Purwokerto, Indonesia 53122
E-mail : rifki.febriansah@umy.ac.id 2018

## Abstrak
Senyawa antioksidan berperan penting terhadap kesehatan dan dapat mengurangi resiko terjadinya  penyakit  kronis.  Kemampuan  utama  dari  senyawa  antioksidan  adalah kemampuannya dalan menangkap suatu radikal bebas. Daun teh dan kulit jeruk memiliki potensi  sebagai  antioksidan  alami.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  sifat antioksidan  dari  kombinasi  ekstrak  daun  teh  dan  kulit  jeruk  mandarin  dengan  metode DPPH.  Kombinasi  ekstrak  etanolik  kulit  jeruk  mandarin  dan  daun  teh  terbukti  memiliki aktivitas sebagai antioksidan yang kuat dengan nilai IC 50 83,00 µg/mL .
Kata kunci: antioksidan, kombinasi ekstrak, daun teh, kulit jeruk mandarin

## Abstract
Antioxidant compounds play an important role in health and can reduce the risk of chronic disease. The main ability of antioxidant compounds is their ability to capture a free radical. Tea leaves  and  orange  peel have potential  as natural  antioxidants.  This  study  aims to determine the antioxidant properties of a combination of tea leaves extract and orange peel with  the  DPPH  method. The  combination  of ethanolic  extract  of mandarin  orange peel and tea leaves has been shown to have a strong antioxidant activity with an IC50 value of 83.00 µg/mL.
Keywords: antioxidant, extracts combination, tea leaves, orange peel

## PENDAHULUAN
Senyawa  antioksidan  merupakan  kelompok  senyawa  yang  berperan  penting  terhadap kesehatan.  Hal  ini  disebabkan  senyawa  antioksidan  dapat  berperan  dalam  megurangi risiko  penyakit  kronis.  Kemampuan  utama  dari  senyawa  antioksidan  adalah kemampuannya  dalan  menangkap  suatu  radikal  bebas  (Kuntorini  dan  Astuti,  2010). Senyawa  antioksidan  seringkali  digunakan  sebagai  bahan  tambahan  pangan  seperti penambahan  antioksidan  sintetik  BHA  (buthylated  hydroxy  toluene),  TBHQ  (tertiary

## Artikel Penelitian
butyl  hydroquinone),  dan  PG  (propyl  gallate).  Penggunaan  antioksidan  sintetik berdasarkan hasil penelitian dapat menyebabkan penyakit kerusakan hati serta memiliki efek toksik dan karsinogenik pada tubuh manusia (Puspitasari dan Sumantri, 2019). Oleh karena itu, diperlukan suatu alternatif antioksidan lainnya yang lebih aman bagi kesehatan yang  salah  satunya  bersumber  dari  alam.  Bahan  alam  yang  memiliki  potensi  untuk dikembangkan  sebagai  antioksidan  yaitu  teh  (Camellia  sinensis)  dan  jeruk  mandarin (Citrus reticulata).
Daun  teh  banyak  mengandung  senyawa  polifenol  dan  flavonoid  yang  memiliki  sifat antioksidan  seperti  katekin,  (-)epigallokatekin,  (-)epigallokatekin  galat,  (-)epikatekin galat, epikatekin, dan katekin (Pereira et al., 2014). Selain itu, konsumsi teh juga telah diketahui memiliki korelasi dapat menurunkan kejadian terjadinya penyakit kronis seperti kardiovaskular dan kanker (Tang et al., 2015). Selain itu, penelitian sebelumnya juga telah melaporkan kombinasi dari ekstrak daun teh dengan zat aktif lainnya dapat meningkatkan bioaktivitasnya.  Kombinasi  ektrak  daun  the  dengan  asam  askorbat  diketahui  dapat mencegah  proses  melanosis  (titik  hitam)  yang  merupakan  fenomena  fenol  akan teroksidasi  menjadi  kuinon  secara  mekanisme  biokimia  oleh  enzim  polifenoloksidse (Nirmal  dan  Benjakul,  2010).  Simonetti  et  al  (2004)  melaporkan  bahwa  kombinasi ekstrak glikolik daun teh hijau dengan BHA dapat meningkatkan kemampuan antibakteri dari  ekstrak  daun  teh.  Selain  daun  teh,  salah  satu  bahan  alam  lainnya  yang  kaya  akan kandungan zat antioksidan adalah jeruk mandarin ( Citrus reticulata).
Jeruk mandarin ( Citrus reticulata) merupakan buah hasil pertanian yang sering digunakan oleh industri makanan yang pada umumnya dibuat sebagai minuman atau jus segar. Kulit jeruk kering menurut dalam Chinese Pharmacopeia sering digunakan secara tradisional sebagai penambah  energi (Tumbas et  al., 2010).  Kulit jeruk, yang jumlahnya  setengah massa dari buah jeruk,  seringkali tidak termanfaatkan dan menjadi limbah  pada proses tersebut. Hal tersebut sangat disayangkan melihat potensi dari kulit jeruk yang memiliki kandungan  bioaktif  sebagai  antioksidan  alami  seperti  asam  fenolik  dan  flavonoid (Tumbas et al., 2010). Secara umum kandungan antioksidan alami pada kulit jeruk lebih banyak  dibandingkan  pada  buahnya  (Awad  et  al.,  2001).  Penelitian  terkait  kombinasi ekstrak  daun  teh  dan  kulit jeruk  khususnya  sebagai  antioksidan  hingga  kini  belum  ada yang  melaporkan.  Oleh  karena  itu,  penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  sifat antioksidan  dari  kombinasi  ekstrak  daun  teh  dengan  kulit  jeruk.  Sifat  antioksidan ditentukan dengan metode penangkapan radikal bebas DPPH.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan
Daun teh (Camellia sinensis) yang diperoleh dari daerah Merapi Kaliurang Yogyakarta dan kulit jeruk mandarin (Citrus reticulata) dari daerah Bantul Yogyakarta. Etanol 70% (Bratachem®), aquadest (Bratachem®), DPPH, lempeng KLT silika gel GF 254, amoniak (Bratachem®),  butanol  (Bratachem®),  kontrol  rutin  Vitamin  C  (Bratachem®),  heksan (Bratachem®).
Ekstraksi dengan metode maserasi
Kulit jeruk mandarin dan daun teh dicuci, dikeringkan, kemudian digiling halus. Massa serbuk yang digunakan yaitu 309,03 gram serbuk simplisia dau teh dan 500 gram kulit jeruk mandarin. Masing-masing serbuk simplisia dimaserasi menggunakan etanol 70% selama 5 hari dan diremaserasi selama 2 hari dalam etanol 70%. Berikutnya yaitu tahap penyaringan  menggunakan  kain  disusul  penyaringan  menggunakan  kertas  saring  dan didapatkan ekstrak cair. Ekstrak dipekatkan dengan rotary evaporator pada suhu 50 o C
dengan  kecepatan  putaran  60  rpm,  lalu  ditimbang  untuk  dihitung  rendemen  masing- masing ekstrak.
Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Analisis kandungan kimia metode KLT dengan fase gerak berupa butanol:asam asetat:air dengan perbandingan 7:2:1. Sampel ekstrak etanolik kulit jeruk mandarin dan daun teh dilarutkan,  kemudian  ditotolkan  5-8  kali  pada  fase  diam  silika  gel  GF 254. Pembanding yang digunakan yaitu senyawa rutin. Fase gerak butanol, asetat dan air  dimasukkan ke dalam chamber dan tunggu beberapa saat sampai jenuh. Plat KLT dimasukkan ke dalam chamber  dan  ditunggu  hingga  fase  gerak  terelusi  sempurna.  Setelah  proses  elusi,  plat dikeringkan lalu diamati dibawah sinar  tampak, UV 254, dan UV 366 nm. Untuk reaksi warna, uji identifikasi flavonoid dilanjutkan dengan diberi uap amoniak, tunggu hingga 15 menit. Diamati perubahan warna bercak pada KLT.

## Uji antioksidan metode DPPH
Larutan  DPPH  0,4  mM  dibuat  dengan  melarutkan  15,8  mg  serbuk  DPPH  ke  100  mL metanol  p.a  dalam  labu  takar.  Larutan  di  vortex  selama  30  detik  kemudian  dibungkus menggunakan alumunium foil. Sebanyak 20  mg kombinasi  ekstrak  etanolik kulit jeruk mandarin dan daun teh (1:1) ditambahkan dengan 2 mL metanol p.a sehingga didapatkan konsentrasi 1000 µg/mL. Dari larutan induk tersebut dibuat seri kadar 5 ; 7,5 ; 10 ; 15 ; 20 ; 30 µg/mL. Aktivitas antioksidan ekstrak dibandingkan dengan antioksidan vitamin C.  Sebanyak  5  mg  vitamin  C  pro  analisis  dimasukkan  ke  dalam  labu  takar  50  ml, kemudian ditambahkan metanol p.a hingga tanda batas sebagai larutan induk. Kemudian dibuat seri kadar vitamin C 0,5 ; 1 ; 5 ; 10 ; 20 ; 30 µg/mL.
Larutan uji kemudian dipipet sebanyak 0,2 mL kemudian ditambahkan 3,8 larutan DPPH 0,05 mM dalam metanol. Campuran kemudian dihomogenkan dan dibiarkan selama 30 menit dalam ruang  gelap.  Serapan kemudian diukur dengan alat spektrofotometer UV- tampak pada panjang gelombang 515 nm. Sebagai kontrol positif digunakan larutan uji vitamin C dengan perlakuan yang sama dengan sampel uji.
Analisis data
Perhitungan IC 50 dilakukan dengan cara mengonversi absorbansi sampel menjadi bentuk persen  antioksidan.  Nilai  IC 50 bisa  diperoleh  dengan  memasukkan  nilai  IC 50 sebagai  y dalam  persamaan  regresi  linier  yang  diperoleh  dari  hubungan  x  =  kadar,  dan  y  =  % antioksidan.

## HASIL
Ekstraksi dan uji kromatografi lapis tipis
Ekstraksi  yang digunakan pada penelitian yaitu metode  maserasi. Ekstrak kental yang di dapat dari penelitian ini sebanyak 27,3 gram ekstrak teh (rendemen 5,46%) dan 26,4 gram ekstrak kulit jeruk (rendemen 5,28%). Secara makroskopis kedua ekstrak bewarna hitam dengan bau yang khas.
Pemisahan untuk mengetahui senyawa flavonoid dalam ekstrak dilakukan menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT). Lempeng  KLT yang digunakan adalah silika gel GF 254 dengan  fase  gerak  yang  butanol:asam  asetat:air  (perbandingan  7:2:1).  Pembanding senyawa  flavonoid  yaitu  senyawa  rutin.  Bercak pada  plat KLT  diamati  di  bawah sinar tampak, lampu UV 254, dan UV 366 nm.
Gambar  1.  Hasil  KLT  ekstrak  dauh  the  (EDT),  ekstrak  kulit  jeruk  (EKJ),  dan  standar  rutin (flavonoid)
Tabel 1. Nilai Rf hasil KLT
Nomor Bercak Rf Sebelum di Uap Amoniak Tampak UV 254 nm UV 366 nm 1 0,62 Kuning Meredam Ungu Tua 2 0,65 Kuning Meredam - 3 0,87 Kuning Meredam Ungu Tua Nomor Bercak Rf Sesudah di Uap Amoniak Tampak UV 254 nm UV 366 nm 1 0,62 Kuning Meredam Ungu Tua 2 0,65 Kuning Meredam - 3 0,87 Kuning Meredam Ungu Muda
Gambar 2. Aktivitas antioksidan senyawa uji. (A) kombinasi ekstrak daun teh (EDT) dan ekstrak kulit jeruk mandarin (EKJ), (B) vitamin C. Grafik hasil uji aktivitas antioksidan kombinasi EDT dan EKJ terhadap DPPH menghasilkan persamaan y= 0,6427x - 3,3458 dengan R 2 = 0,9698 dan nilai IC 50 83  µg/mL.  Grafik  hasil  uji  aktivitas  antioksidan  vitamin  C  terhadap  DPPH  menghasilkan persamaan y= y= 2,9913x + 7,5319 dengan R 2 = 0,9859 dan nilai IC 50 14,2 µg/mL.
Hasil pengamatan pada sinar tampak menunjukkan adanya bercak berwarna kuning terang pada plat rutin (plat 1). Pengamatan pada sinar UV 254 nm, sampel rutin dan ekstrak kulit jeruk meredam pendaran silika  GF254,  sedangkan  pengamatan  pada  sinar  UV 366  nm terlihat warna ungu tua.
Kromatogram sampel menunjukkan nilai Rf  pada bercak sampel ekstrak dauh teh (EDT) yaitu 0,65, dan untuk senyawa rutin yaitu 0,62. Dari hasil tersebut menunjukkan bahwa sampel  EDT  mengandung  senyawa  flavonoid.  Pada  sampel  ekstrak  kulit  jeruk  (EKJ) menunjukkan  nilai  Rf  0,87,  sedangkan  pembanding  senyawa  rutin  memiliki  Rf  0,62. Sampek EKJ juga mengandung flavonoid karena nilai Rf masih  berkisar  antara   0,1 – 0,99.  Hasil  KLT  pada  kedua  ekstrak dengan  nilai  Rf  dapat  dilihat  pada  Gambar  1  dan Tabel 1.

## Uji antioksidan kombinasi ekstrak
Aktivitas  antioksidan  pada  ekstrak  etanolik  kulit  jeruk  dan  daun  teh  dilakukan  dengan penangkapan  radikal  bebas  DPPH  dengan  menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis.
(10.00) 0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 60.00 0.0 20.0 40.0 60.0 80.0 100.0 % Inhibisi Konsentrasi  (µg/ml) 0.00 20.00 40.00 60.00 80.00 100.00 120.00 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 % Inhib isi Konsentrasi (µg/ml) Kombinasi ekstrak Vitamin C A. B.
Pembanding  yang  dipilih  dalam  uji  ini  yaitu  vitamin  C.  Panjang  serapan  dibaca  pada panjang gelombang maksimum larutan DPPH dan hasil panjang gelombang maksimum yang  didapat  adalah  514  nm.  Berdasarkan  hasil  yang  didapat    dapat  diketahui  bahwa semakin besar konsentrasi larutan uji dan kontrol positif, maka penangkapan suatu radikal bebas  DPPH  akan  semakin  besar.  Hasil  perhitungan  menunjukkan  nilai  IC 50 untuk kombinasi  ekstrak etanolik  kulit jeruk dan daun  teh yaitu IC 50 83,00 µg/mL  sedangkan untuk vitamin C yaitu 14,2 µg/mL (Gambar 2).

## PEMBAHASAN
Pemisahan dengan kromatografi lapis tipis dan uji warna menunjukkan ekstrak daun teh dan ekstrak kulit jeruk mandarin mengandung senyawa flavonoid. Nilai Rf pada ekstrak kulit jeruk mandarin berbeda 0,25 dari Rf rutin, tetapi ini masih dalam rentang 0,1-0,99 yang dapat  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor  seperti  pelarut, suhu, struktur  kimia, dan senyawa-senyawa  lain  yang  sedang  dipisahkan, serta  sifat  dari  penyerapan dan  derajat aktivitasnya,  jumlah    cuplikan    yang    digunakan    serta    teknik    yang    digunakan (Sastrohamidjojo, 2007).
Penentuan  aktivitas  antioksidan  pada  penelitian  ini  menggunakan  metode  DPPH. Pengujian  dengan  metode  DPPH  karena  metode  ini  adalah  metode  sederhana,  cepat, mudah  dan  peka  serta  hanya  memerlukan  sedikit  sampel  untuk  digunakan  sebagai evaluasi aktivitas antioksidan. Nilai IC 50 untuk  kombinasi ekstrak etanolik kulit jeruk dan daun  teh  yaitu  IC 50 83,00  µg/mL.  Hasil  nilai  IC 50 memperlihatkan  bahwa  kombinasi ekstrak daun teh dengan kulit jeruk termasuk dalam rentang kategori kuat yaitu 50-100 ppm (Kartikasari et al., 2018). Aktivitas antioksidan kuat ini diduga disebabkan adanya kandungan senyawa flavonoid pada ekstrak tersebut.

## KESIMPULAN
Kombinasi ekstrak etanolik kulit jeruk mandarin dan daun teh memiliki aktivitas sebagai antioksidan yang kuat dengan nilai IC 50 83,00 µg/mL.

## REFERENSI
Agoes, G., 2007, Teknologi Bahan Alam, Penerbitt ITB, Bandung.
Awad, M. A., de Jagar, A., van der Plas, L. H., et al., 2001, Flavonoid and Chlorogenic Acid Changes In Peel of  ‘Elstar’  and  ‘Jonagold’  Apples  During  Development  and  Ripening,  Sci.  Hortic.,  90:69-83.  doi: 10.1016/S0304-4238(00)00255-7
Harborne, J. B., 1996, Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan. Terbitan kedua. penerbit ITB, Bandung.
Kartikasari, D., Hairunisa, Ropiqa, M., 2018, Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Buah Senggani (Melastoma malabathricum L.) Metode DPPH (2,2-Diphenyl-1-picrylhidrazyl) Serta Aplikasinya Pada Krim Antioksidan, Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 3(2): 205-214. doi: 10.36387/jiis.v3i2.169
Kuntorini, E.V. dan Astuti, M. D., 2010, Penentuan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Bulbus Bawang Dayak (Eleutherine americana Merr.), Sains dan Terapan Kimia, 4(1):15-22. doi: 10.20527/jstk.v4i1.2043
Nirmal, N. P dan Benjakul, S., 2010, Effect of Green Tea Extract in Combination with Ascorbic Acid on the Retardation  of  Melanosis  and  Quality  Changes  of  Pasific  White  Shrimp  During  Iced  Storage,  Food. Bioprocess Technol, 5:2941-2951. doi: 10.1007/s11947-010-0483-5
Pereira,  V.  P.,  Knor,  F.  J.,  Vellosa,  J.  C.  R.,  et  al.,  2014,  Determination  of  Phenolic  Compounds  and Antioxidant Activity of Green, Black, and White Teas of Camellia sinensis (L.) Kuntze, Theaceae, Rev Bras Pl Med, 16(3):490-498. doi: 10.1590/1983-084X/13_061
Puspitasari A. D. dan Sumantri, 2019, Aktivitas Antioksidan Perasan Jeruk Manis (Citrus sinensis) dan Jeruk Purut (Citrus hystrix) Menggunakan Metode ABTS, Majalah Farmasi dan Farmakognosi, 23(2):48-51. Doi: 10.20956/mff.v23i2.6978
Sastrohamidjojo, H,  2007, Kromatografi Edisi II Cetakan Keempat, Yogyakarta: Liberty .
Simonetti, G. Simonetti, N., Villa, A., 2004, Increased Microbial Activity of Green Tea (Camellia sinensis) in Combination with Butylated Hydroxyanisole, J Chemother, 16(2):122-127. doi: 10.1179/joc.2004.16.2.122
Tang, J., Zheng, J. S., Fang, L., et al., 2015, Tea Consumption and Mortality of All Cancers, CVD and All Causes:  A  Meta-analysis  of  Eighteen  Prospective  Cohort  Studies,  Br  J  Nutr,  114:673-683.  doi: 10.1017/S0007114515002329
Tumbas,  V.  T.,  Cetkovic,  G.  S.,  Djilas,  S.  M.,  et  al.,  2010,  Antioxidant  Activity  of  Mandarin  (Citrus reticulata) Peel, APTEFF, 40:195-203. doi: 10.2298/APT1041195T
Akses  Terbuka  Artikel  ini  dilisensikan  di  bawah  Creative  Commons  Lisensi Internasional Attribution 4.0, yang memungkinkan penggunaan, berbagi, adaptasi, distribusi, dan reproduksi dalam  media  atau  format  apa  pun,  selama  Anda  memberikan  kredit  yang  sesuai  kepada  penulis  asli  dan sumbernya,  memberikan  tautan  ke  lisensi  Creative  Commons,  dan  menerangkan  jika  perubahan  telah dilakukan.  Gambar  atau  materi  pihak  ketiga  lainnya  dalam  artikel  ini  termasuk  dalam  lisensi  Creative Commons artikel, kecuali dinyatakan sebaliknya dalam batas kredit untuk materi tersebut. Jika materi tidak termasuk  dalam lisensi Creative  Commons  artikel  dan  penggunaan  yang Anda maksudkan  tidak  diizinkan oleh peraturan perundang-undangan atau melebihi penggunaan yang diizinkan, Anda harus mendapatkan izin langsung dari pemegang hak cipta. Untuk melihat salinan lisensi ini, kunjungi https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/deed.id .
© The Author(s) 2020