Ekologia : Jurnal Ilmiah Ilmu Dasar dan Lingkungan Hidup
https://journal.unpak.ac.id/index.php/ekologia

## UJI ANTAGONIS Trichoderma sp. TERHADAP FUNGI PATOGEN Pestalotiopsis sp. PENYEBAB PENYAKIT HAWAR DAUN PADA TANAMAN Eucalyptus
Nuraliefah Khaerani 1* , Tri Saptari Haryani 1 , Neo Endra Lelana 2
1 Program Studi Biologi, FMIPA, Universitas Pakuan, Bogor, Indonesia
2 Laboratorium Hama dan Penyakit Tanaman Hutan Pusat Standardisasi Instrument Pengelolaan Hutan Berkelanjutan. Kementerian Lingkungan Hidup dan Kehutanan. BRIN Jl. Gunung Batu No. 5. Bogor, Indonesia *e-mail: efahkhaerani9@gmail.com
diterima: 18 April 20234 direvisi: 3 Mei 2024; disetujui: 10 Mei 2024

## ABSTRAK
Penyakit hawar daun menjadi salah satu penyakit penting pada tanaman hutan Eucalyptus spp. Penyakit  ini  dapat  menyebabkan  gangguan  pertumbuhan  tanaman  bahkan  kematian  pada tanaman. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi kemampuan antagonistik beberapa isolat Trichoderma terhadap fungi Pestalotiopsis yang berasosiasi dengan penyakit hawar daun  pada tanaman Eucalyptus. Penelitian  dilakukan  menggunakan  metode  biakan  ganda  ( dual  culture ) yaitu dengan menumbuhkan isolat Trichoderma dan patogen pada cawan petri yang sama. Data yang diperoleh dianalisis dengan ANOVA pada taraf uji 5% dan dilanjutkan dengan Uji Duncan jika ada beda nyata. Hasil analisis BLAST patogen penyebab hawar daun mempunyai kemiripan tertinggi dengan Pestalotiopsis uvicola, yaitu sebesar 99,82%. Hasil uji antagonis menunjukkan persentase  penghambatan Trichoderma terhadap  isolat  patogen Pestalotiopsis terbesar ditunjukkan oleh isolat T.L.122 yaitu sebesar 65,33%, diikuti dengan isolat T.L.411 dan  isolat T.L.631 yaitu berturut-turut sebesar 54,49% dan 49,33%. Isolat T.L.122 dinyatakan paling efektif berpotensi  sebagai  fungi  antagonis  terhadap  patogen Pestalotiopsis penyebab  penyakit  hawar daun pada tanaman Eucalyptus .
Kata Kunci: Dual culture, penghambatan, Pestalotiopsis uvicola.

## ANTAGONIST TEST OF Trichoderma sp. AGAINST Pestalotiopsis sp. A PATHOGENIC FUNGUS CAUSES LEAF BLIGHT ON Eucalyptus

## ABSTRACT
Leaf blight disease has become one of the significant ailments in Eucalyptus spp. forest plants. This disease can lead to plant growth disruption and even plant mortality. This research aims to evaluate the antagonistic abilities of several  Trichoderma isolates against Pestalotiopsis fungi associated with Eucalyptus leaf blight disease. The research was conducted using the dual culture method, wherein both Trichoderma isolates and the pathogen were cultivated on the same petri dish. The obtained data were analyzed using ANOVA at a 5% significance level, followed by the Duncan test in case of significant differences. The results of BLAST analysis of pathogens causing leaf blight have the highest similarity with Pestalotiopsis uvicola, which is equal to 99.82%. The Results  test  antagonist  show  percentage  inhibition  Trichoderma  to  pathogen  Pestalotiopsis biggest  showed  by  isolate  TL122  ie  of  65.333%,  followed  with  isolates  TL411  and  TL631  ie consecutive by 54.49% and 49.33%. The T.L.122 isolate was declared to be the most effective as a  potential  antagonist  fungus  against  the  Pestalotiopsis  pathogen  which  causes  leaf  blight  in Eucalyptus plants.
Keywords: Dual culture, inhibition, Pestalotiopsis uvicola.

## PENDAHULUAN
Eucalyptus merupakan  jenis  tanaman yang  termasuk  dalam  famili  Myrtaceae. Sebaran alami Eucalyptus banyak terdapat di Australia,  Tasmania,  dan  beberapa  spesies merupakan spesies asli Indonesia. Daun dan minyak  atsirinya  sering  digunakan  dalam kehidupan  sehari-hari  karena  memiliki  sifat antiseptik,  anti-inflamasi  dan  antipiretik (Sabo  dan  Knezevic,  2019).  Pertumbuhan Eucalyptus sering terkendala akibat pengelolaannya yang belum optimal sehingga  mempengaruhi  hasil  produksi. Organisme  penganggu  tanaman  (OPT) adalah  faktor  utama  pembatas  produksi tanaman  (Mainahmunah,  2013)  termasuk pengganggu pertumbuhan Eucalyptus . Salah  satu  penyakit  yang  banyak ditemukan  pada Eucalyptus adalah  penyakit hawar  daun  yang  salah  satunya  disebabkan oleh Pestalotiopsis spp..  Penyakit  ini dianggap  sangat  penting  terutama  pada tanaman  dewasa  (Carvalho, et  al .  2019; Morales-Rodriguez et al. 2019; Suwannarach et  al .  2014).  Gejala  awal  pada  tanaman Eucalyptus yang terkena hawar daun berupa perubahan  warna  pada  pemukaaan  daun adanya bercak-bercak pada daun yaitu bercak berwarna  coklat  kemerahan  dan  bercak keabu-abuan (Siallagan, dkk., 2015).
Pestalotiopsis spp. telah dilaporkan bertanggung  jawab  atas  lesi  pada  kulit tanaman E.  globulus ,  sebagai  jamur  endofit dan  epifit  pada  daun E.  citriodora ,  dan menyebabkan  bercak  daun  pada  daun E. citriodora , E.  camaldulensis,  E.  globulus, dan E.  botryoides (Carvalho, et  al .  2019;
Morales-Rodriguez et al. 2019; Suwannarach, et al . 2014).
Pemanfaatan
mikroorganisme
antagonis  merupakan  pilihan  alternatif sebagai  pengendali  penyakit  hawar  daun karena  dapat  meminimalkan  gangguan terhadap  keseimbangan  biologis  disamping menurunkan biaya pengendalian (Herliyana, dkk., 2013). Trichoderma adalah  salah  satu fungi  antagonis  yang  banyak  dimanfaatkan dalam  pengendalian  penyakit  tanaman. Secara  alami, Trichoderma merupakan saprofit tanah yang secara alami menyerang
banyak  jenis  fungi  penyebab  penyakit tanaman  (Muksin,  dkk., 2013).  Fungi Trichoderma dapat  juga  digolongkoan sebagai  fungi  endofit  karena  kemampuan hidupnya  di  dalam  jaringan  tanaman,  baik secara  mutualisme  maupun  komensalistik dengan inangnya (Jia et al ., 2016).
Mikroorganisme  yang  bersifat  antagonis dapat menghambat aktivitas mikrooganisme lain  yang  berada  ditempat  yang  berdekatan (Alfizar,  2013).  Menurut  Dendang  (2015), Trichoderma menghasilkan  enzim  ß  –  (1-3) glukanase  dan  kitinase  yang  menyebabkan eksolisis pada patogen sehingga menyebabkan  hancurnya  dinding  sel  fungi patogen.  Pengamatan in  Vitro dari  isolat Trichoderma setelah patogen mati, menunjukkan bahwa fungi antagonis tumbuh terus  menutupi  permukaan  koloni  fungi patogen (Dendang, 2015). Hal ini membuktikan bahwa fungi antagonis Trichoderma dapat  melakukan  penekanan jumlah  inokulum  atau  aktivitas  patogen (Huda et  al ., 2019).  Pada  penelitian  ini, beberapa isolat Trichoderma diuji kemampuan antagonistiknya terhadap
patogen Pestalotipsis sp.

## BAHAN DAN METODE Isolat patogen Pestalotiopsis
Isolat Pestalotiopsis yang  digunakan dalam  uji  merupakan  kole l ksi  Laboratorium Hama  dan  Pe l nyakit  Tanaman  Hutan,  Pusat Standardisasi Instrument Pengelolaan Hutan Berkelanjutan,  Kementerian  Lingkungan Hidup  dan  Kehutanan . Patogen  ini  diisolasi dari  sampel  daun Eucalyptus  camaldulensis yang bergejala penyakit hawar daun.
Isolasi  Fungi Trichoderma dengan  Metode Cawan Pengenceran
Isolat Trichoderma yang  digunakan merupakan  isolat  yang  diisolasi  dari  daerah rhizosfer bambu yang dikoleksi dari berbagai lokasi  di  Bogor  menggunakan  me l dia Trichoderma  selective  medium (TSM). Identifikasi spesies berdasarkan ciri makroskopis  dilakukan  dengan  melihat secara  langsung  berdasarkan  penampakan fisik (Ristiari, dkk., 2018).

## Identifikasi Molekuler Ekstraksi DNA
Miselia  fungi  ditumbuk  dalam  mortar menggunakan  900  μl  CTAB  2%.  Suspensi dipindahkan  ke  dalam  microtube  2  ml  dan diinkubasi  pada  suhu  65ºC  selama  2  jam. Larutan  chloroform: isoamyl  alkohol (CI) sebanyak  800  μl  ditambahkan  ke  dalam tabung  dan  divortex  hingga  tercampur  rata. Tabung  selanjutnya  disentrifugasi  pada 12.000  rpm  dengan  suhu  15°C  selama  15 menit.  Supernatan  diambil  seluruhnya  min 400 μl dan ditambah 1/10 volume NaOAc + 2x volume ethanol absolut. Tabung diinkubasi semalaman dalam suhu -20°C dan sentrifugasi  kembali  10.000  rpm  dengan 15°C  selama  20  menit.  Setelah  itu  cairan dibuang dan pellet dicuci dengan etanol 70% sebanyak 1000 μl. Tabung dikeringkan pada suhu  kamar  dan  selanjutnya  ditambahkan ddH2O  sebanyak  50  μl  dan  kemudian disimpan dalam suhu -20°C.

## Reaksi PCR (Polymerase Chain Reaction) dan sekuensing
Reaksi  PCR  dilakukan  menggunakan primer
ITS 1 (Forward) (5’- TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’) dan ITS 4 (Re l ve l rse l ) (5’TCCTCCGCTTA TTGATATGC-3’)  (White, et  al .  1990). Reaksi  PCR  dilakukan  menggunakan  1x MyTaq (Bioline) sesuai rekomendasi perusahaan.  Kondisi  reaksi  PCR  yaitu denaturasi  awal  selama  5  menit  pada  94°C, dilanjutkan  sebanyak  30  siklus  melalui  tiga tahapan yang meliputi denaturasi selama 45 detik  menit  pada  94°C,  annealing  selama  1 menit pada 58°C, dan polimerisasi selama 1 menit 30 detik menit pada 72°C, pada tahap akhir  ditambah  10  menit  pada  72°C.  Hasil PCR  selanjutnya  dikirim  ke  1st  BASE Singapura untuk dilakukan sekuensing.

## Analisis Homologi
Analisis  homologi  dilakukan  untuk membandingkan  sekuen  nukleotida  yang dihasilkan terhadap organisme pada database di GenBank .
Analisis dilakukan
menggunakan program BLAST ( Basic Local
Alignment Search Tools ) (https://blast.ncbi.nlm.nih.gow/Blast.cgi).
Uji  antagonis  in  vitro  dengan  metode biakan ganda (dual culture)
Metode biakan ganda dilakukan untuk pengujian  aktivitas  antagonis Trichoderma dengan  menempatkan  potongan  miselium fungi antagonis dan fungi patogen berdiameter  5  mm  umur  7  hari  pada  media PDA dalam satu cawan. Pengamatan luas dan diameter  koloni Trichoderma fungi  patogen dilakukan  pada  umur  1  HSI  (hari  setelah inokulasi) sampai 7 HSI. Inokulum diletakkan  Pada  cawan  petri  berdiameter  9 cm.  Untuk  masing-masing  pengujian  dibuat garis tengah dan diberi dua titik. Jarak antara keduanya  dari  tepi  cawan  yaitu  3  cm.  Cara peletakan  inokulum  dapat  dilihat  pada Gambar (Alfizar, dkk., 2013).
Gambar 1. Peletakan inokulum (Muksin, et al ., 2013).
Pengamatan dilakukan setiap hari dari saat  kontrol  ditanam  dengan  mengukur persentase  daya  hambat  dengan  rumus (Huda, dkk., 2019): I = r1-r2/r1 x 100% Keterangan: I  = Persentase hambatan
r1= Jari-jari fungi patogen pada cawan petri kontrol.
r2= Jari-jari fungi patogen pada cawan petri perlakuan.
Kriteria  persentase  hambatan  pertumbuhan (%)  yaitu  persentase  hambat  tinggi:  70- 100%;  persentase  hambat  sedang:  40-69%; persentase hambat rendah: 0-39 % (Hidayat, dkk., 2021).

## Analisis Data
Hasil dari uji antagonis terhadap setiap perlakuan  dianalisis  menggunakan  Analisis Varian (ANOVA) dengan taraf kepercayaan
95%  (p<0,05).  perlakuan  yang  menunjukan perbedaan  yang  signifikan,  maka  dilakukan uji  lanjut  Duncan  5%  untuk  mengetahui perbedaan antar perlakuan (Izzatinnisa, et al ., 2020).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Identifikasi Fungi Pestalotiopsis
Secara makroskopis miselium
Pestalotiopsis berwarna putih, tekstur seperti kapas,  bentuk  tidak  teratur  (Gambar  2a). Secara  mikroskopis  hifa  terlohat  bersekat, bercabang dan berwarna gelap, serta terdapat konidia  berbentuk  lonjong  agak  meruncing dengan  dua  atau  lebih  hialin,  pada  kedua ujungnya yang salah satu ujungnya terdapat bulu cambuk (Gambar 2b) . Berdasarkan hasil identifikasi  molekuler,  patogen  hawar  daun E. camaldulensis memiliki persentase kemiripan tertinggi dengan sekuen “ Pestalotiopsis  uvicola ”  pada  database GenBank , yaitu sebesar 99,82%, Query cover = 100, e value = 0) (Tabel. 1).
Beberapa laporan menunjukkan bahwa Pestalotiopsis menyebabkan penyakit hawar daun pada beberapa jenis Eucalyptus , termasuk E. camaldulensis (Carvalho, et a l. 2019;  Morales-Rodriguez, et  al .  2019;
Suwannarach, et  al .  2014).  Pada  studi  ini, Pestalotiopsis uvicola menyebabkan penyakit  hawar  daun  pada  bibi  tanaman E. camaldulensis .  Pada  laporan  sebelumnya,
Pada P. uvicola dilaporkan hanya menyerang daun muda pada E. globulus (Marquez, et al . 2011).
(a)
(b)
Gambar 2. (a) Biakan Pestalotiopsis pada media PDA (b) Spora Pestalotiopsis .
Tabel 1. Analisis BLAST Sekuen Nukleotida Patogen Hawar Daun Pestalotiopsis .
Deskripsi Query Cover Per.Ident Accession Pestalotiopsis uvicola isolate SZT2 100% 99.82% OK639011.1 Pestalotiopsis pini isolate MEAN 1167 100% 99.46% MT374689.1 Pestalotiopsis disseminata isolate MEAN 1166 100% 99.46% MT374688.1 Pestalotiopsis microspora isolate BQ 100% 99.28% KR909210.1 Fusarium solani strain RM2 100% 99.28% JN887340.1 Pestalotiopsis biciliata isolate MEAN 1168 100% 99.28% MT374690.1 Pestalotiopsis neglecta strain LK29 100% 99.28% DQ000992.1 Pestalotiopsis adusta strain HEV120Z 100% 99.10% MT470669.1 Pestalotiopsis pini isolate MEAN 1092 99% 99.46% MT374680.1 Pestalotiopsis kandelicola strain ZHKUCC_22_0023 99% 99.46% ON180779.1 Pestalotiopsis parva voucher UMAS P5 99% 99.46% KT337386.1
Ekologia : Jurnal Ilmiah Ilmu Dasar dan Lingkungan Hidup
https://journal.unpak.ac.id/index.php/ekologia

## Uji Antagonis Trichoderma
1)

## Aktivitas Penghambatan
Uji  antagonis  telah  dilakukan  pada beberapa  isolat Trichoderma terhadap patogen
Pestalotiopsis . Hasil uji menunjukkan  bahwa  isolat T.L.122  secara signifikan menunjukkan daya hambat terbesar yaitu 65,333%. Hasil ini mempunyai aktivitas  yang  lebih  tinggi  dibanding penelitian  sebelumnya.  Widyaningsih  and Triasih  (2020)  melaporkan  daya  hambat tertinggi T.  harzianum pada Pestalotiopsis adalah  sebesar  32%  dan  Kumhar, et  al . (2016)  melaporkan T.  asperellum dapat menghambat  pertumbuhan P.  theae sebesar 62,5%. Menurut Hidayat et al . (2021), daya hambat dengan presentase 40-69% termasuk kategori  sedang  (Hidayat, et  al .,  2021).
Namun  demikian,  perbandingan  secara langsung hasil tersebut memang  tidak dapat dilakukan  karena  banyaknya  faktor  yang mempengaruhi,  seperti  isolat  patogen, komposisi  media,  dan  metode  pengujian yang digunakan (Lelana, dkk . 2015).
Genus Trichoderma merupakan genus yang banyak dipelajari sifat antagonisnya terhadap berbagai jenis pathogen. Trichoderma memiliki  aktivitas antimikroba yang tinggi karena kemampuannya  dalam  memproduksi  β- glukanase dan kitinase yang berperan penting sebagai  enzim  hidrolitik  mendegradasi dinding sel patogen (Kubicek, et. al., 2019).
Tabel 2. Persentase daya hambat
Trichoderma terhadap Pestalotiosis Isolat Daya hambat (%) T.L.121 45,33bc T.L.122 65,33d T.L.131 45,33bc T.L.411 54,67c T.L.412 38,67b T.L.421 42,67b T.L.422 37,33b T.L.611 46,67bc T.L.612 40,00b T.L.631 49,33bc
Ket:  Angka  yang  diikuti  huruf  yang  sama pada  kolom  yang  sama  menunjukkan  tidak beda nyata pada taraf <5%
Fungi  patogen Pestalotiopsis setelah dilakukan uji antagonis dengan Trichoderma menunjukkan  bahwa  pada  metode dual culture penampakan morfologi hifa patogen miselium  pada  perlakuan  sebagian  besar lebih  tipis  dari  pada  kontrol,  ini  merupakan salah  satu  indikasi  adanya  kompetisi  yang terjadi  antara  fungi  patogen  dan  antagonis. Kompetisi terjadi ketika dua mikroorganisme membutuhkan  nutrisi  dan  ruang  yang jumlahnya  terbatas.  Pada  mekanisme  ini, fungi  antagonis  akan  mendapatkan  nutrisi lebih  banyak  dibandingkan  dengan  fungi patogen,  dengan  demikian  pertumbuhan patogen  akan  terhambat  (Zivkovic  et  al., 2010).
Isolat  T.L.122  menunjukkan  pertumbuhan yang  cepat  dalam  menekan Pestalotiopsis (Gambar  3).  Pertumbuhan  yang  cepat  ini menguntungkan  bagi Trichoderma dalam berkompetisi dengan fungi fitopatogen untuk memperoleh  ruang  dan  nutrisi,  bahkan sebelum  aksi  mikotoksin  yang  dimilikinya (Zivkovic, et al ., 2010). Terdapat perubahan struktur hifa pada area kontak dengan fungi antagonis (Zivkovic, e t al. , 2010). Perubahan struktur  pada  hifa  fungi  menjadi  indikasi adanya  aktivitas  dari  senyawa-senyawa antibiotik. Senyawa metabolit sekunder yang bersifat  antibiotik  akan masuk  ke  dalam sel fungi dan akan menyebabkan mikolisis yaitu hilangnya protoplasma pada struktur dinding sel  sehingga  enzim tidak  larut  pada  dinding sel  fungi.  Mikolisis  ini  menyebabkan sejumlah  gejala,  seperti  pembengkakan, pemendekan,  dan  lisisnya  dinding  sel  serta mengakibatkan pertumbuhan abnormal pada hifa (Ismail & Andi, 2011).
Gambar 3. Mekanime penghambatan Trichoderma pada Pestalotiopsis
Pada  Gambar  3  terjadi  antibiotis, dimana terbentuk zona kosong diantara fungi patogen  dan  fungi  antagonis  terdapat perubahan  bentuk  hifa  patogen  serta dihasilkan  pigmen  dipermukaan  bawah koloni  fungi  antagonis.  Antibiosis  adalah suatu kondisi dimana organisme mengeluarkan satu atau lebih metabolit yang memiliki  efek  negatif  pada  organisme  lain. Mekanisme ini melepaskan senyawa antibiotik yang dapat menghambat pertumbuhan  fungi  pathogen  (Muhibbudin, et al ., 2021) hal tersebut membuat terjadinya lisis  sel  hifa  dan  spora  (El-Debaiky,  2017). Pada  Gambar  3  terjadi  parasitisasi,  dimana koloni  fungi  antagonis  menutupi  koloni patogen  dan  hifa  fungi  antagonis  tumbuh diatas  hifa  fungi  patogen  (Amaria,  dkk., 2016). Parasitisme adalah interaksi kompetitif langsung antara dua organisme di mana  satu  organisme  mendapatkan  nutrisi dari yang lain (Kohl et al. , 2019). Mekanisme ini  ditandai  dengan  adanya  hifa  fungi antagonis  yang  menembus  dinding  sel  dan masuk ke dalam sel untuk mengambil nutrisi serta terjadi penggulungan dan penetrasi hifa (El-Debaiky,  2017)  hal  ini  melisiskan  fungi pathogen  hingga  fungi  patogen  mati (Cornejo, dkk., 2016).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan dapat disimpulkan isolat Trichoderma pada  rizosfer  tanah  tanaman bambu  berpotensi  sebagai  fungi  antagonis terhadap  patogen  penyebab  penyakit  hawar daun  pada  tanaman Eucalyptus .  Isolat T.L.122 efektif menghambat patogen Pestalotiopsis sebesar 65,333%.
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  mengenai  uji  antagonis Trichoderma terhadap patogen penyebab hawar daun pada tanaman Eucalyptus menggunakan  berbagai spesies  fungi  penyebab  hawar  daun  yang lainnya  dan  juga  dilakukan  pada  lahan terbuka  langsung  agar  lebih  diketahui pemanfaatan  agen  antagonis  tersebut  sesuai kejadian di lapangan.
Trichoderma pada  rizosfer  tanah tanaman  bambu  berpotensi  sebagai  fungi
antagonis terhadap patogen penyebab penyakit hawar daun pada tanaman Eucalyptus .
Trichoderma efektif menghambat patogen dengan nilai persentasi penghambatan  terbesar  yaitu  isolat T.L.122 sebesar 65,33%.
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai uji antagonis Trichoderma terhadap patogen penyebab hawar daun pada tanaman Eucalyptus menggunakan  berbagai spesies  fungi  penyebab  hawar  daun  yang lainnya  dan  juga  dilakukan  pada  lahan terbuka  langsung  agar  lebih  diketahui pemanfaatan  agen  antagonis  tersebut  sesuai kejadian di lapangan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  disampaikan kepada  staf  Laboratorium  Hama  dan Penyakit Tanaman Hutan, Pusat Standardisasi Instrument Pengelolaan Hutan Berkelanjutan,  Kementerian  Lingkungan Hidup dan Kehutanan yang telah membantu dalam kegiatan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Alfizar,  Marlina,  Susanti,  F. (2013). Kemampuan Antagonis Trichoderma Terhadap Beberapa Fungi Patogen In Vitro. Prodi  Agroteknologi  Fakultas Pertanian,  Universitas  Syiah  Kuala, Darussalam.
Amaria, W., Soesanthy, F., Ferry, Y. (2016).
Keefektifan Biofungisida
Trichoderma sp.  Dengan  Tiga  Jenis Bahan  Pembawa  Terhadap  Jamur Akar Putih Rigidoporus Microporus. J. TIDP 3 (1), 37–44 . Balai Penelitian Tanaman Industri dan Penyegar.
Carvalho, D.D.C., Oliveira, R.M., Marques,
M.G. (2019) . Molecular,
morphophysiological and pathogenic characterization of eucalypt Pestalotiopsis grandis- urophylla isolates, a new
species. Trop.  plant  pathol. 44,  132– 139.  https://doi.org/10.1007/s40858- 019-00277-0
Cornejo, H.A.C. Iguez, L.M.ias, Val. E. del,
& Larsen, J. (2016). Fungsi ekologis
Trichoderma sp. Ekologi Mikrobiologi , 92(1), 1-17
Dendang,  B.  (2015).  Uji  Antagonisme Trichoderma
spp. terhadap Ganoderma sp.  yang  Menyerang Tanaman  Sengon  Secara in-vitro .
Penelitian Kehutanan Wallace, Vol 4 (2).
El-Debaiky, SA. (2017). Antagonistic studies and  hyphal  interactions  of  the  new antagonist Aspergillus piperis against some  phytopathogenic  fungi  in  vitro in  comparison  with Trichoderma harzianum.  Microbial  Pathogenesis,
Vol.  113  Pages  135-143.  Tanta University, Egypt.
Herliyana  EN.,  Jamilah  R,  Taniwiryono  D,
Firmansyah MA. (2013).  Uji In-vitro Pengendalian Hayati oleh Trichoderma spp. terhadap Ganoderma yang Menyerang Sengon. Silvikulltur Tropika , Vol 4 (3)
Hidayat, N., Rajab, A., Mudi, L. (2021). Uji Invitro  Daya  Hambat  Fungi  Endofit Asal  Tanaman  Rambusa  ( Passiflora foetida )  Sebagai  Agens  Pengendali Hayati  Penyakit  Layu  Fusarium . Jurnal  Agrotech, Vol  11  (2)  64-70. Politeknik
Pertanian Negeri Samarinda. Huda  N,  Imaningsih  W,  Hakim  SS.  (2019). Uji  Antagonisme  Fungi  Endofit Tanaman Galam ( Melaleuca cajuputi ) terhadap Calonectria truncatum. Jurnal
Mikologi Indonesia , Vol 3 No (2). Universitas Lambung  Mangkurat,  Banjarbaru, Kalimantan Selatan.
Ismail,  N.,  &  Andi  Tenrirawe.  (2011).
Potensi  Agen  Hayati  Trichoderma harzianum Sebagai Agens Pengendali Hayati. Seminar Regional Inovasi Teknologi Pertanian. Sulawesi Utara.
Izzatinnisa’, Utami U, Mujahidin A. (2020).
Uji  Antagonisme  Beberapa  Fungi Endofit  pada  Tanaman  Kentang terhadap Fusarium oxysporum secara In  Vitro . Jurnal  Riset  Biologi  dan
Aplikasinya ,  Vol  2  (1).  Universitas
Islam Negeri Malang.
Jia M, Chen L, Xin HL, Zheng, C-J. Han T,
Qin LP. (2016) . Friendly
Relationship  between  Endophytic Fungi  and  Medicinal  Plants: A
Systematic  Review.  Frontiers  in Microbiology (7): 1-4. doi: 10.3389/fmicb.2016.00906
Kohl, J., Kolnaar, R., and Ravensberg, W.J.
(2019).  Mode  of  action  of  microbial biological control agents against plant diseases: Relevance beyond efficacy. Frontiers in Plant Science , 10(July): 1-19. https//doi.org/10.3389/fpls.2019.008
4559
Kubicek, Christian P. (2019). Evolution and comparative  genomics  of  the  most common Trichoderma species. Research  Article  BMC  Genomic . 20(1), 1–24.
Lelana,  EN.,  Anggraeni,  I.,  Mindawati,  N.
(2015). Uji Antagonis Aspergillus sp.
Dan  Trichoderma  spp.  Terhadap Fusarium sp.,  Penyebab  Penyakit Rebah  Kecambah  Pada  Sengon. Jurnal  Penelitian  Hutan  Tanaman Vol. 12 No. 1, 23-28.
Maimunah,  RAK.  (2013).  Hama  Tanaman Pertanian. Agricultural  Crop  Pests , Buku Ajar, No. 4. Universitas Medan Area.
Márquez,  S.  S.,  Bills,  G.  F.,  and Zabalgogeazcoa,  I.  (2011).  Fungal species diversity in juvenile and adult leaves  of Eucalyptus  globulus from plantations
affected by
Mycosphaerella leaf  disease.  Ann. Appl.  Biol.  158,  177–187. doi: 10.1111/j.1744-7348. 2010.00449. x Morales-Rodríguez,  C.,  Dalla  Valle,  M., Aleandri, M.P. & Vannini, A. (2019). Pestalotiopsis  biciliata ,  a  new  leaf pathogen of Eucalyptus , spp. recorded  in  Italy. Forest  Pathology . 49: 1–7. DOI: 10.1111/efp.12492 .
Muhibbudin, A., Setiyowati, EM., Sektiono,
AW. (2021). Mechanism Antagonism
Of Trichoderma Viride  Against Several  Types  Of  Pathogens  And Production Of Secondary Metabolites.  Universitas  Brawijaya. Malang. Journal  of  Agricultural
Sciences , Vol. 4 (1).
Muksin, R., Rosmini,  Panggeso,  J.  (2013).
Uji Antagonisme Trichoderma Terhadap  Fungi  Patogen Alternaria porri Penyebab  Penyakit  Bercak Ungu Pada Bawang Merah Secara In- Vitro. Agrotekbis , Vol 1 (2). Untad.
Ristiari,  NPN.,  Julyasih,  KSM.,  Suryanti,
KAP. (2018). Isolasi dan Identifikasi Fungi  Mikroskopis  pada  Rizosfer Tanaman  Jeruk  Siam  ( Citrus  nobilis lour .)  Dikecamatan  Kintamani,  Bali. Jurnal Pendidikan Biologi Undiksha,
Vol.  6  (1). Universitas  Pendidikan
Ganesha. Singaraja.
Sabo,  VA  and  Knezevic,  V.  (2019). Antimicrobial  activity  of Eucalyptus camaldulensis Dehn.  plant  extracts and essential oils: A review.
Industrial Crops & Products ,
Vol.132  (413–429). University  of Novi Sad, Trg Dositeja Obradovica 2, Novi Sad, Vojvodina, Serbia. Siallagan,  BR.,  Anna,  N.,  Siregar,  EBM. (2015).  Uji  Infeksi Cylindrocladium sp.,  Terhadap  Klon  Hibrida  Turunan Eucalyptus  grandis x Eucalyptus
urophylla . Peronema
Forestry
Science ,  Vol  4  (3).  Universitas Sumatera Utara. Medan.
Suwannarach  N,  Kumla  J,  Bussaban  B  & Lumyong  S.  (2012).  New  report  of leaf  blight  disease  on  eucalyptus ( Eucalyptus  camaldulensis )  caused by Pestalotiopsis virgatula in Thailand, Canadian Journal of Plant Pathology, 34:2,  306-309,  DOI:
10.1080/07060661.2012.680501. White,  TJ.,  Bruns,  T.,  Lee,  S.,  Taylor,  JW.
(1990). Amplification  and  direct sequencing of fungal ribosomal RNA genes  for  phylogenetics. In:  Innis, MA.,  Gelfand,  DH.,  Sninsky,  JJ., White, TJ., editor. PCR Protocols: A Guide  to  Methods  and  Applications.
New  York:  Academic  Press  Inc; 1990. Pp. 315–322.
Widyaningsih,  S  and  Triasih,  U.  (2020). Biological  Control  of  Strawberry Crown  Rot  Disease  (Pestalotiopsis sp.)  using Trichoderma  harzianum and  Endophytic  Bacteria.  IOP  Conf. Series: Earth  and  Environmental Science 752 (2021) 012052.
Zivkovic,  S.,  Stojanovic,  S.,  Ivanovic,  Z., Gavrilovic, V., Popovic, T., & Balaz, J.  (2010).  Screening  of  Antagonistic Ativity  of  Microorganism  Against Colletotrichum acutatum and Colletotrichum gloeosporoides . Arch. Boil. Sci. Belgrade , (3): 611-62