## IDENTIFIKASI SENYAWA KIMIA PADA EKSTRAK BASA
BUAH LEUNCA ( Solanum nigrum Linn) DENGAN

## TEKNIK KHROMATOGRAFI
Mamay Maslahat * , Dani Ramdani dan RTM Sutamihardja Universitas Nusa Bangsa Jl. K. H. Sholeh Iskandar, Cimanggu, Tanah Sareal-Bogor 16166 *e-mail : maykulsum@yahoo.co.id

## ABSTRACT
Identification of Chemical Compounds at the Leuncas Fruits Base Extracts with Chromatography Methodes
By. Mamay Maslahat, Dani Ramdani and RTM Sutamihardja
Secondary methabolites contain in the plant was a alkaloids, flavonoids, terphenoids, steroids that use for medicinal, biopestiside, etc. Taksonomy principle of Leunca (Solanum nigrum Linn) is clasified to Solanaceae family,  and  prediction  contains  alkaloids.  The  leunca  fruits  base  extracts  qualitative  tested  with  Dragendorf reagents  and  indetified  with  thin  layer  chromatography  (TLC),  coloumn  chromatography  (CC),  and  gass chromatography mass-spectra (GC-MS). Optimation of eluens as mobile fase for  TLC and CC used three eluens, there are methanol:NH 4 OH (200:3), chloroform:methanol (17:3), and chloroform:ethanol (4:1). Dragendorf test showed  extract  contains  alkaloids  compounds.  Eluens  optimum  was  chloroform:methanol  (17:3)  with  trhree fraction      ,and  GC-MS  identification  showed  that  extract  contains  chemical  compounds  as  carbocilic  acid, thiourea, nicotinic acid, and glicerol.
Keyword s: Alkaloids compounds, leunca, chromatography

## ABSTRAK
Metabolit sekunder yang terkandung pada tanaman dapat berupa senyawaan kimia alkaloid, flavonoid, terpenoid, dan steroid . Senyawaan kimia ini dapat berfungsi sebagai obat, biopestisida, dan sebagainya.  Leunca ( Solanum nigrum Linn) berdasarkan ilmu taksonomi   diklasifikasikan ke  dalam famili Solanaceae (labu-labuan), dan diduga banyak mengandung senyawaan alkaloid yang berkhasiat sebagai obat. Ekstrak basa buah lenca diuji dengan  pereaksi  Draggendorf  dan  diidentifikasi  dengan  menggunakan  teknik  kromatografi  lapis  tipis  (KLT), kromatografi kolom, dan instrumen kromatografi gas-spektra massa (GC-MS). Optimasi eluen sebagai fase gerak pada KLT dan kromatografi kolom dilakukan terhadap 3 jenis dan komposisi eluen yang berbeda yaitu Metanol : NH 4 OH (200:3), Kloroform:Metanol (17:3), dan Kloroform:Etanol (4:1). Hasil uji Dragendorf  mengindikasikan bahwa ekstrak basa buah lenca mengandung senyawaan alkaloid. Hasil optimasi eluen menunjukkan bahwa eluen yang optimum adalah Kloroform:Metanol (17:3) dengan memberikan 3 fraksi pemisahan. Nilai Rf  ketiga fraksi tersebut  adalah  0,21;  0,31  dan  0,60.  Berdasarkan  analisis  dengan  GC-MS  diketahui  bahwa  ekstrak  basa  buah lenca mengandung  senyawaan kimia karboksilat, tiourea, asam nikotinat, dan gliserol.
Kata kunci : Senyawa alkaloid, leunca, kromatografi

## PENDAHULUAN
Leunca  dalam  ilmu  taksonomi dikenal sebagai Solanum nigrum Linn dan digolongkan  dalam  keluarga Solanaceae (labu-labuan).  Kandungan  kimia  yang terkandung dalam tanaman leunca (bagian daun)  diketahui  antara  lain  Glikoalkaloid solanin, Solasonin , Solamargin , Solasodin , Solanidin , Diosgenin , Tigogenin , Atropin , Saponin ,  Zat  samak, Minyak lemak, Kalsium, Fosfor, Zat besi, Vitamin A dan C (Anonim, 2006). Metabolit sekunder (senyawa aktif)  dapat  diisolasi,  difraksinasi  dan kemudian  diidentifikasi  menggunakan metode  kromatografi  (Gritter,  1996).
Metabolit sekunder ini diketahui terkandung pada bagian daunnya,
sementara  informasi  mengenai  metabolit sekunder  yang  terkandung  dalam  buah leunca masih terbatas. Hal ini menjadikan
perlunya  identifikasi  secara  ilmiah  akan kandungan metabolit sekunder, khususnya senyawa alkaloid dalam buah leunca.

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan Alat
Bahan - bahan yang dipergunakan adalah  buah  leunca  muda,  metanol, aquades, asam sulfat,
Pereaksi Dragendorff,  kloroform,  dan  amonia. Peralatan  yang  digunakan  terdiri  dari peralatan  gelas,  kertas  saring,  kertas  pH, alumunium  foil,  penangas  air,  pelat Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT)  dengan adsorben silikagel, chamber kromatografi, lampu  UV scanner ,  kolom  kromatografi, neraca  analitik  dan Gas  Chromatography
Mass  Spectrometry (GC-MS)  dengan spesifikasi sebagai berikut : Merk :  J&W Scientific Kolom : Polysiloxane polymers ;  panjang  30 m  dan  diameter  0,32 mm. Suhu :  - 60 0 C sampai 325 0 C
Waktu alir :  25 menit Gas pembawa  :  Helium (He)

## Cara Kerja
1. Ekstraksi Buah  leunca  muda  sebanyak  200  g dicacah  dan  dihomogenkan  dalam
Metanol:H 2 O  (4:1)  selama  5  menit. Campuran  disaring,  filtrat  yang dihasilkan  diuapkan  pada  suhu  40 0 C sampai  volume  sepersepuluh  dari volume  awal.  Campuran  diasamkan dengan H 2 SO 4 1M, kemudian diekstrak dengan kloroform sebanyak 3 kali. Setelah terbentuk dua lapisan, pada  lapisan  air-asam  ditambahkan NH 4 OH  hingga  pH  larutan  10. Larutan ini diekstraksi dengan campuran  kloroform:metanol  (1:3) sebanyak  2  kali  dan  diteruskan dengan  kloroform  sebanyak  1  kali.
Ekstrak kloroform-metanol
dipisahkan sebagai ekstrak basa yang mengandung  kebanyakan  senyawa
alkaloid.  Ekstrak  ini  diuapkan  untuk pemekatan.
2. Pemeriksaan Alkaloid Ekstrak  basa  buah  leunca  diteteskan beberapa tetes pada kertas saring dan disemprot dengan pereaksi Dragendorff.  Pembentukan  warna merah  atau  jingga  pada  kertas menunjukkan adanya senyawa alkaloid.
3. Optimasi Fasa Gerak Ekstrak  leunca  ditotolkan  plat  KLT dan  dieluasi  dengan  variasi  fasa gerak yaitu Metanol : NH 4 OH (200 : 3), Kloroform : Metanol (3 : 17), dan Kloroform : Etanol (4 : 1) (Harborne, 1987;  Ningsih,  2006).  Fasa  gerak yang  optimum  dalam  memisahkan ekstrak  alkaloid  digunakan  sebagai fasa  gerak  pada  fraksinasi  dengan kromatografi kolom.
4. Fraksinasi dengan Kromatografi Kolom Ekstrak  leunca  sebanyak  10  –  15  ml dimasukan  ke  dalam  kolom  yang berisi  fasa  diam  silikagel  60.  Fasa gerak  dialirkan  ke  dalam  kolom kromatografi untuk memisahkan sampel  menjadi  beberapa  fraksi. Fraksi-fraksi yang dihasilkan ditampung berdasarkan volume dalam  tabung  reaksi,  masing  masing tabung berisi 5 ml fraksi.
5. Pemeriksaan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Setiap fraksi yang dihasilkan ditotolkan pada plat KLT dan dielusi dengan fasa gerak optimum.
6. Identifikasi Senyawa Kimia Fraksi-fraksi yang menunjukkan
adanya spot noda pada KLT diidentifikasi dengan Gas Chromatography  Mass  Spectrometry
(GCMS).
N R''' R'' R' [H + ]
R' R''
R'''
N H + [BiI 4 ] - + H N R''' R'' R' [BiI 4 ] -

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi Buah leunca segar untuk penelitian  ini diperoleh dari  pasar tradisional  di    Bogor.  Buah  leunca  yang digunakan  merupakan  buah  leunca  muda segar  yang  dicirikan  dengan  warna  buah hijau. Dua  ratus  gram  buah  leunca  muda segar  yang  telah  dicacah  dan  diekstraksi dengan  metode  ekstraksi  Harborne  1987 menghasilkan ekstrak basa sebanyak 30ml berwarna  kuning  kehijauan.  Keberhasilan ekstraksi dengan alkohol untuk mengisolasi  senyawa  (termasuk  alkaloid) dari tumbuhan berkaitan langsung dengan seberapa jauh klorofil tertarik oleh pelarut tersebut (Harborne, 1987). Untuk
selanjutnya  alkaloid  dipisahkan  dari klorofil  dan  senyawa  lain  dengan  reaksi penggaraman  menggunakan  asam  encer, sehingga  alkaloid  dalam  bentuk  garam tertahan pada lapisan air (polar).

## Pemeriksaan Alkaloid
Pemeriksaan awal kandungan senyawa  alkaloid  dalam  ekstrak  basa dengan menggunakan pereaksi Dragendorff    menunjukkan  hasil  uji positif yang ditunjukkan
dengan timbulnya  warna  jingga  pada  kertas  yang telah diteteskan ekstrak basa.
Adanya kandungan alkaloid dalam  suatu  cuplikan  ditunjukkan  dari adanya  reaksi  antara  alkaloid  dengan kompleks kaliumtetraiodobismutat (Goddel,  2005),  seperti  reaksi  di  bawah ini :
Gambar 1.  Mekanisme  Reaksi  Alkaloid dengan Pereaksi Dragendorff
Identifikasi Senyawa Kimia Optimasi fasa gerak dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Ekstrak  basa  dianalisis  dengan KLT  menggunakan  fasa  gerak  yang bervariasi diantaranya, Metanol : NH 4 OH (200  :  3),  Kloroform  :  Metanol  (17  :  3), dan  Kloroform  :  Etanol  (4  :  1).  Untuk mengidentifikasi hasil pemisahan digunakan lampu UV Scanner . Berikut ini merupakan  gambar  pemisahan  ekstrak basa  menggunakan  fasa  gerak  Metanol  : NH 4 OH (200:3) dengan tiga kali pengulangan. Gambar 2.  Pemisahan Ekstrak Basa dengan Fasa Gerak Metanol : NH 4 OH (200 : 3)
Spot  noda  yang  terpisah  pada Gambar  2  memiliki  nilai  Rf  0,49  dan 0,60.  Berdasarkan  jenis  fasa  diam  dan fasa  gerak  yang  digunakan  maka  spot noda  dengan  nilai  Rf  0,49  diduga merupakan  senyawa  alkaloid  solanin, sedangkan spot noda dengan nilai Rf  0,60 diduga  merupakan  senyawa  alkaloid nikotin (Harborne, 1987).
Fasa  gerak  lain  yang  digunakan untuk optimasi pemisahan adalah Kloroform  :  Metanol  (17  :  3).  Hasil pemisahan  menunjukan  adanya  tiga  spot noda dengan nilai Rf 0,21; 0,31; dan 0,60.
Gambar 3.  Pemisahan Ekstrak Basa dengan Fasa Gerak Kloroform : Metanol (17 : 3) Fasa  gerak  Kloroform:Metanol (17:3)  merupakan  fasa  gerak  yang digunakan  untuk  memisahkan  senyawa alkaloid khusus yang  terdapat  pada
tembakau  (Harborne,  1987).    Fasa  gerak ini  dipilih  pula  untuk  memisahkan senyawa  alkaloid  leunca  dengan  asumsi leunca  dan  tembakau  termasuk  suku tumbuhan solanaceace .
Fasa  gerak  berikutnya  untuk pemisahan  ekstrak  basa  dengan  metode KLT  adalah  Kloroform  :  Etanol  (4  :  1). Fasa gerak ini merupkan fasa gerak untuk zat  pahit  pada  tumbuhan  (Anonim, 2005b).  Rasa  pahit  pada  daun  atau  buah segar mengindikasikan adanya kandungan alkaloid  (Harborne,  1987).Adapun  hasil pemisahan  dengan  fasa  gerak  ini  terlihat pada Gambar 4. Hasil pemisahan menunjukkan  adanya  dua  spot  noda  yang terpisahkan  dari  ekstrak  basa.  Spot  noda tesebut memiliki nilai Rf 0,33 dan 0,52. Gambar 4.  Pemisahan Ekstrak Basa dengan Fasa Gerak Kloroform : Etanol (4 : 1) Hasil  KLT  dari  berbagai  fasa gerak  yang  digunakan  disajikan  pada
Tabel 1.
Tabel  1  menunjukan  bahwa  fasa gerak  Kloroform  :  Metanol  (17  :  3) merupakan  fasa  gerak  yang  memberikan pemisahan  optimum  dengan  3  spot  noda hasil pemisahan. Fasa gerak
Kloroform:Metanol  (17  :  3)  ini  yang selanjutnya  digunakan  sebagai  fasa  gerak dalam  fraksinasi  dengan  kromatografi kolom.

## Fraksinasi dengan kromatografi kolom
Ekstrak  basa  yang  diperoleh dimurnikan  dengan  cara  difraksinasi menggunakan fasa gerak optimum Kloroform:Metanol  (17  :  3).  Ekstrak difraksinasi  menggunakan  kromatografi kolom  dengan  panjang  30  cm  dan diameter  12  mm.  Fraksi  yang  diperoleh ditampung  dalam  tabung  reaksi,  tiap  – tiap tabung berisi 5 ml eluat. Ekstrak basa yang masuk ke dalam kromatografi kolom sebanyak  15  ml  dengan  fasa  gerak sebanyak 20 ml sehingga diperoleh sekitar
8  fraksi.  Secara  fisik  setiap  fraksi memberikan warna larutan yang sama.

## Pemeriksaan  KLT  Hasil  Pemisahan Kromatografi Kolom
Setiap  fraksi  yang  diperoleh selanjutnya  diuji  kembali  secara  KLT dengan menggunakan fasa gerak Kloroform  :  Metanol  (17  :  3).  Analisis KLT  fraksi  7  menghasilkan  bercak tunggal  dengan  nilai  Rf  0,62  sedangkan pada  fraksi  8  terdapat  2  bercak  dengan nilai  Rf  masing-masing  0,29  dan  0,62.
Fraksi  yang  menunjukkan  adanya  spot noda  selanjunya  dianalisis  dengan Gas Chromatography Mass Spectrometry (GCMS).
Tabel 1. Hasil Kromatografi Lapis Tipis Ekstrak Basa Buah Leunca Muda
Fasa gerak Jarak Alir (cm) Warna pada UV Rf Pelarut Noda 254 nm 366 nm A 8,5 4,2 - Merah muda lemah 0,49 5,1 Merah muda kuat 0,60 B 8,6 1,8 - Kuning kehijauan 0,21 2,7 Ungu 0,31 5,2 Kuning kehijauan 0,60 C 7,0 2,3 - Ungu 0,33 3,7 Ungu lemah 0,52 Keterangan : A  :  Metanol : NH 4 OH (200:3) B  :  Kloroform : Metanol (17:3)
C  :  Kloroform : Etanol (4:1)
Tabel 2. Hasil Analisis Ekstrak Basa dengan Gas Chromatography Mass Spectrometry
No. Retention time (menit) Senyawa kimia 1. 0,923 Etanol 2. 1,071 Kloroform 3. 1,397 Asetaldehid 4. 1,643 Asam Butanoat, Asam Pentanoat 5. 1,790 Asam Butanoat 6. 2,598 Asam Butanoat 7. 2,981 Propanedioic acid 8. 3,815 Tiourea 9. 4,477 Benzen asetaldehid , Oxirane 10. 5,830 Metil nikotinat 11. 7,066 Asam Heksanoat 12. 8,693 Gliserol
C O O C H 3 N
Identifikasi  Fraksi  dan  Ekstrak  Basa dengan Gas  Chromatography  Mass
Spectrometry (GCMS)
a. Analisis  GCMS  Hasil  Fraksinasi Kromatografi Kolom Hasil analisis dengan Gas Chromatography Mass Spectrometry (GCMS)  untuk  fraksi  7  menunjukkan adanya  tiga  puncak  yaitu  pada retention
time 2,580 menit; 3,771 menit dan 17,339 menit.  Berdasarkan  informasi database , diketahui  puncak  pada retention  time 2,580  menit  merupakan  asam  butirat sementara  puncak  pada retention  time 3,771  menit  merupakan  asam  pentanoat dan    puncak  pada retention  time 17,339 menit  diketahui  sebagai  asam  stearat  atau asam  oktadekanoat.  Ketiga  senyawa  ini merupakan  asam  karboksilat.  Rumus ketiga  senyawa  tersebut  disajikan  pada Gambar 5.
Hasil analisis GCMS untuk fraksi 8  menunjukkan  adanya  satu  puncak  yaitu pada retention time 9,163 menit.
Berdasarkan database ,  diketahui  puncak pada retention time 9,163 menit merupakan Butanedioic  acid atau  asam Suksinat.
b. Analisis GCMS
Ekstrak Basa Sebelum Fraksinasi Analisis  GC-MS  untuk  kedua fraksi tidak menunjukkan adanya kandungan  alkaloid,  maka  untuk  lebih meyakinkan hasil pembacaan ini dilakukan  juga  pembacaan  terhadap ekstrak basa sebelum
dilakukan fraksinasi.  Hasilnya  terdapat  12  puncak, disajikan pada Tabel 2.
Diantara senyawa yang diperoleh, terdapat  Metil  nikotinat  yang  merupakan vitamin  B 3 atau  biasa  disebut  niasin.
Struktur  senyawa  kimia  niasin  disajikan pada Gambar 6. Asam nikotinat sendiri merupakan  derivat  asam  karboksilat  dari piridin. Niasin aktif merupakan komponen penting  dalam  lintasan  metabolik  yang melibatkan metabolisme karbohidrat, lipid, serta asam amino (Hawab, 2006).
Telah  disebutkan  bahwa  alkaloid khas  pada  suku  tumbuhan Solanaceae adalah Solanin. Hasil penelitian menunjukkan tidak teridentifikasinya
senyawa  alkaloid  Solanin  dalam  ekstrak basa  buah  leunca.  Hal  ini  mungkin dikarenakan buah leunca yang diekstraksi masih  muda  sehingga  alkaloid  solanin belum  sempuna  disintesis  dalam  sistem metabolisme  tumbuhan  tersebut.  Selain itu,  penggunaan  jenis  dan  komposisi  fasa gerak  yang  belum  tepat  untuk  analisis Solanin  dengan  metode  Kromatografi Lapis  Tipis  (KLT)  dan  Kromatografi Kolom.
H 3 C—CH 2 —CH 2 —COOH Asam Butirat H 3 C—CH 2 —CH 2 —CH 2 —COOH Asam Pentanoat
Asam Stearat
Gambar 5.  Senyawa Kimia yang Terkandung  Pada  Fraksi  7 dan 8
Gambar 6. Rumus Kimia Metil nikotinat

## KESIMPULAN
Berdasarkan  uji  dengan  pereaksi Dragendorff,  ekstrak  basa  buah  leunca mengandung  senyawaan  alkaloid.  Hasil optimasi eluen menunjukkan bahwa eluen yang optimum adalah Kloroform:Metanol
(17  :  3)  dengan  memberikan  3  fraksi pemisahan. Nilai Rf  ketiga fraksi tersebut adalah  0,21;  0,31  dan  0,60.  Berdasarkan analisis  dengan  GC-MS  diketahui  bahwa ekstrak  basa  buah  lenca  mengandung senyawaan  kimia  karboksilat,  tiourea, asam nikotinat, dan gliserol.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim,  2005a. Gas  Chromatography Mass Spectrometry . http://www.infolab- online.com/v1/index.php?infola
b=detail&detail=125, diakses
tanggal 12 maret 2007.
Anonim,  2005b. Pusat  Penelitian  Obat Tradisional . http://72.14.235.104/search?q=c ache:HIXa6qfHu4kJ:lppm.wim a.ac.id/ppot/ABSTRAK-PEN- PPOT-WEB-
mikro.html+kloroform:etanol+- +alkaloid&hl=id&ct=clnk&cd= 1&gl=id,  diakses  tanggal  6 maret 2007.
Anonim,  2006. Leunca .  http://www. ningharmanto.com/in-to/ leunca.htm,  diakses  tanggal  16 maret 2007. Anonim, 2007. Solanum nigrum .
http://en.wikipedia.org/wiki/Sol anine,  diakses  tanggal  28  April 2007. Day,  R.  A.  dan  A.  L.  Underwood.  1989. Analisis Kimia Kuantitatif . Edisi  V.  Penerbit  Erlangga. Jakarta. Goddel, Bjorne B. 2005. Chromotropsaure Reaktion, Liebermann-Burchard Reaktion, Nacweise mit Dragendorrf Reagenz . http://www.uni-saarland.de/ student/fspharma/downloads/fil es/seminare/eab/ws_05/Chromo tropsaeure%20Liebermann- Burchard%20Dragendorff.pdf, diakses tanggal 23 Juli 2007. Gritter,  R.  J.,  J.  M.  Bobitt.  dan  A.  E. Schwarting.,  1996. Pengantar
Kromatografi , ITB. Bandung.
Harborne,  J.  B.  1987. Metode  Fitokimia . Penerbit ITB. Bandung.
Hawab,  H.  M.  2006. Biokimia  Umum . Universitas Nusa Bangsa. Bogor. Heyne,  K.  1987. Tumbuhan  Berguna Indonesia  III .  Badan  Penelitian dan  Pengembangan  Kehutanan, Departemen Kehutanan. Jakarta.
Merck  &  Co.,  Inc. The  Merck  Index . 11 th edition. Editor: Susan Budavari. New York. USA.
Minarti.  2004. Isolasi  dan  Identifikasi Senyawa  Bioaktivitas  Alkaloida dari Daun Johar (Cassia siamea Lmk) . Skripsi . Universitas Nusa Bangsa. Bogor. Ningsih,  D.  R.,  Warsinah,  dan  Suwandri. 2006. Fraksinasi Ekstrak Metanol Kulit Batang Rhizophora  mucronata  dan  Uji Daya Hambatnya terhadap Bakteri Eschericia  coli . Jurnal Ilmiah  Molekul .  Vol.  1.  No.  1. Jurusan Kimia FMIPA. Universitas Sudirman. Purwokerto. Voigt, R. 1984. Buku Pelajaran Teknologi Farmasi .  Universitas  Gadjah Mada. Yogyakarta. Sumber internet. Yusuf,  Gunawan.  2005. Leunca,  Bisa Jinakkan Kanker . http://www.mail-archive.com/ urangsunda@yahoogroups.com/ ms926223.html,  diakses  pada tanggal 9 Agustus 2007.