## VALIDASI METODE ANALISIS FORMALIN

## DALAM DAGING PAHA AYAM DI KOTA MANADO
Silvana Chichilia Umbingo 1) , Sri Sudewi 1) , Defny Silvia Wewengkang 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Formaldehyde  is  food  additive  thus  requiring  the  routine  analysis  with  the  incrase  in consumption  of  chicken  thigh  meat.  The  study  aimed  to  determine  whether  there  is  any formaldehyde  content  in  chicken  thighs.  This  research  using  Spectrophotometric  UV-Vis method and Nash reagent with a validity value the validation  parameters that can be accepted by  the  correlation  coefficient  0,995,  the  average  recovery  100,247  %  and  the  coefficient variation  of  a  function  is    1,201%.  The  chicken  thigh  meat  in  Manado  city  by  this  method was not detected formaldehyde.
Keywords : Formaldehyde, Validation, Chicken thigh meat, Manado.

## ABSTRAK
Formalin  merupakan  bahan  tambahan  pangan  yang  dilarang  sehingga  diperlukan  analisis rutin seiring dengan peningkatan konsumtif daging paha ayam. penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  hasil  validasi  metode  penentuan  formalin  pada  daging  paha  ayam  serta menentukan ada tidaknya kandungan formalin dalam daging paha ayam. Pada penelitian ini, digunakan  alat  spektrofotometri  UV-Vis  dengan  pereaksi  Nash.  Metode  ini  memiliki  nilai validitas  yang  memenuhi  parameter  validasi  sehingga  dapat  diterima  dengan  nilai  koefisien korelasi  0,995,  rata  –  rata  perolehan  kembali  adalah  100,247%  dan  nilai  koefisien  variasi fungsi sebesar 1,201%. Sampel yang diteliti tidak terdeteksi formalin.
Kata kunci : Formalin, Validasi, Daging paha ayam, Manado.

## PENDAHULUAN
Di Indonesia daging ayam merupakan  daging  favorit  karena  hampir semua  orang  gemar  mengkonsumsinya (Tamalludin,2014). Daging ayam merupakan  salah  satu  sumber  protein hewani  yang  baik  karena  mengandung asam amino esensial  yang lengkap dengan perbandingan  yang  cukup  serta  serat  – serat  dagingnya  yang  pendek  dan  lunak sehingga lebih mudah dicerna (Departemen  Peternakan,  2004).  Adapun daging ayam yang tinggi peminatnya ialah ayam  ras  pedaging  (broiler),  hal  tersebut dapat  dilihat  dari  tingkat  konsumsi masyarakat pada tahun 2011 dari
5,5kg/kapita/tahun maka 65%
(3,65kg/kapita/tahun)  adalah  daging  ayam broiler  (Tammalludin,  2004)  sedangkan berdasarkan  pola  konsumsi  maka  bagian paha  lebih  disukai  dibandingkan  bagian dada ayam (Simatupang dkk, 2004).
Salah satu bahan tambahan pangan pada  daging  ayam  yaitu  formalin    yang digunakan  agar  ayam  menjadi  berwarna putih  bersih,  tekstur  daging  lebih  kenyal, tidak  dihinggapi  lalat  dan  tidak  mudah busuk  (Suryadi et  al .,  2008).  Berbagai bahaya  serius  yang  akan  dihadapi  jika formalin  masuk  ke  dalam  tubuh  manusia diantaranya yaitu akan menekan fungsi sel, menyebabkan kematian sel, dan menyebabkan  keracunan  (Khomsan  dan Anwar, 2008).
Validasi  metode  analisis  adalah suatu  proses  penilaian  terhadap  metode analisis  tertentu  berdasarkan  percobaan laboratorium  untuk  membuktikan  bahwa metode  tersebut  memenuhi  persyaratan untuk digunakan (Harmita, 2004).
Oleh karena tingginya peminat paha daging ayam serta penggunaan  formalin  sebagai  pengawet sangat  berbahaya  maka  dirasa  perlu dilakukannya  validasi  dan  penentuan  ada tidaknya  kandungan  formalin  dan  penulis tertarik untuk menggunakan metode spektrofotometri  UV-Vis  karena  metode lainnya  seperti  titrasi  volumetri  memiliki
selektivitas  dan  sesitivitas  yang  kurang optimal  sedangkan  untuk  metode  KCKT dan  KG  menggunakan  instrumen  dan derivat  yang  mahal  sehingga  tidak  cocok dijadikan analisis rutin selanjutnya penggunaan pereaksi Nash dapat memberikan  konsistensi  warna  sehingga menunjang  metode  spektrofotometri  UV- Vis  yang  memerlukan  suatu  derivatisasi untuk membentuk gugus kromofor.

## BAHAN DAN CARA KERJA Alat
Alat-  alat  yang  digunakan  adalah Destilator,  Oven  (Ecocell)  ,  Blender (Waring),  Mikropipet (Ecopippet), Neraca analitik, Alumunium foil, Blue tip, Yellow tip,  Sarung  tangan  disposable,  Masker, Alat-alat  gelas,  Spektrofotometri  UV-Vis (Shimadzu).

## Bahan
Bahan yang digunakan untuk
penelitian adalah Formalin 37%
(MERCK),  Ammonium  asetat,  Asam Asetat  glacial  (Emsure),  Asetil  aseton, Asam  Fosfat  10%  (MERCK)  ,  Aquadest, Daging paha ayam.

## Prosedur Penelitian

## Pengambilan dan Penyiapan Sampel
Sampel diambil dari beberapa pasar tradisional  terbagi  atas  Pasar  A,  Pasar  B, Pasar C dan Supermarket A, B dan C yang tersebar di Kota Manado dimana tiap pasar dan supermarket diambil satu  bagian paha ayam  dan  selanjutnya  sampel  dianalisis  di Laboratorium  Analisis  Program  Studi Farmasi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam, Universitas  Sam Ratulangi Manado.

## Penentuan Metode Analisis
Berdasarkan metode Susanti (2010) :
a. Penyiapan Larutan Uji dan Pereaksi Pembuatan Larutan Nash
Ditimbang  150  gram  ammonium asetat  dilarutkan  dalam  700  mL  air. Ditambahkan 3 mL asam asetat glacial dan 2 mL asetil aseton. Ditambahkan aquadest hingga volume tepat 1000 mL.
Pembuatan Larutan Baku Induk
Formalin 6 mg/mL Dipipet formalin (mengandung 37% formalin dalam air) sebanyak 1,1 mL kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 200  mL  kemudian  dicukupkan  dengan aquadest hingga garis tanda.
Pembuatan  Larutan  Baku  Formalin konsentrasi 100 – 300 ppm
Dari larutan baku induk formalindibuat  menjadi  100,  150,  200, 2500  dan  300ppm  dan  digunakan  labu ukur 100 mL untuk pembuatannya.

## Pembuatan Larutan Asam Fosfat 10%
Diukur  asam  fosfat  (85%)  11,8  mL dilarutkan  dengan  aquades  sampai  larut dan  dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  100 mL,  ditambahkan  aquadest  sampai  garis tanda.
b. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Dipipet  1  mL  larutan  formalin konsentrasi150 ppm dimasukkan k
C  selama  30 menit. Setelah dingin dipindahkan kedalam  labu  ukur  25  mL  secara kuantitatif  dan  ditepatkan  volumenya menggunakan air, dikocok hingga homogen. Diamati serapannya pada panjang  gelombang  400-500  nm  dengan alat  spektrofotometri  UV-Vis  hingga didapat panjang gelombang maksimum.
c. Validasi Metode
Pembuatan Kurva Kalibrasi dan
Penentuan Linearitas
Dipipet  1  mL  larutan  formalin konsentrasi 100 ppm dimasukkan ke dalam tabung  reaksi  bertutup.  Ditambahkan  air hingga  divolumenya  10  mL  dan  5  mL
pereaksi  Nash  lalu  dipanaskan  air  pada suhu 37 o C selama 30 menit. Dipindahkan kedalam  labu  ukur  secara  kuantitatif setelah  dingin  dan  ditepatkan  volumenya menggunakan air, dikocok hingga homogen. Diamati serapannya pada panjang  gelombang  400-500  nm  dengan alat  spektrofotometri  uv-vis.    Dilakukan cara  yang  sama  untuk  konsentrasi  150, 200, 250, 300 ppm kemudian dibuat kurva kalibrasi  hingga  didapat  persamaan  linier y=a+bx.  Linieritas  dari  kurva  kalibrasi dilihat  dnegan  menghitung  koefisien korelasi (r) dari persamaan garis linier.
Penentuan  Batas  Deteksi/  Limit  Of Detection  (LOD)  dan  Batas  Kuantitasi/ Limit Of Quantitation (LOQ)
LOD  dan    LOQ  dihitung  melalui persamaan garis linier dari kurva kalibrasi, dengan rumus :
Q =
Akurasi (Ketepatan)

## Penyiapan Sampel Uji Simulasi
Ditimbang  sampel  sebanyak  10 gram, dihancurkan dalam lumpang kemudian
ditambahkan formalin konsentrasi  125  ppm  dan  dimasukkan kedalam  labu  destilasi.  Ditambahkan  100 mL  air  dan  10  mL  asam  fosfat  10% kemudian dilakukan destilasi uap menggunakan  alat  destilasi  uap.  Destilat ditampung  kedalam  erlenmeyer  100mL yang telah berisi air (ujung pendingin/pipa destilat dicelup kedalam uap) dan dilakukan destilasi hingga diperoleh destilat sampai tanda batas, ditutup dengan alumunium foil dan kocok sampai homogen. Dilakukan cara yang sama pada sampel  yang  dicampur  formalin  dengan kadar  175  ppm  dan  225  ppm  kemudian dihitung nilai konsentrasi sehingga diperoleh 9 destilat dan diukur serapannya menggunakan spektrofotometer UV-Vis.

## Perhitungan Nilai UPK
Nilai  perolehan  kembali  dihitung dengan  cara  membandingkan  konsentrasi yang diperoleh dari hasil formalin ekstraksi  yang  ditambahkan  pada  daging paha ayam simulasi dan dikalikan 100%.

## Presisi (Ketepatan)
Selisih  dari  nilai  UPK  rata  –  rata ketiga konsentrasi formalin sampel simulasi  dikurangi  nilai  UPK  rata  –  rata perkonsentrasi.  Kemudian  dihitung  nilai simpangan baku (SD) dan nilai simpangan baku  relatif  atau  Koefisien  Variasi  (KV) masing – masing konsentrasi.
Standar  deviasi  dan  koefisien variasi  dapat  dihitung  dengan  mengikuti persamaan ekuivalen :
%KV =

## Analisa Sampel secara Kuantitatif

## Ekstraksi dan Pengukuran Sampel
Ditimbang  sampel  sebanyak  10 gram  dan  dimasukkan  ke  dalam  labu destilasi. Ditambahkan 100 mL air dan 10 mL  asam  fosfat  10%  kemudian  dilakukan kedalam  labu  ukur  100  mL  yang  telah berisi  air  (ujung  pendingin  dicelup)  dan dilakukan  destilasi  hingga  destilat  sampai tanda  batas,  kocok  sampai  homogen. Dipipet  1  mL  destilat  dan  dimasukkan  ke dalam tabung reaksi bertutup.
Ditambahkan air hingga volumenya 10 mL dan  5  mL  pereaksi  Nash  lalu  dipanaskan dalam  penangas  air  pada  suhu  37 o C selama  30  menit.  Dipindahkan  kedalam labu ukur 25 mL secara kuantitatif setelah dingin dan ditepatkan volumenya menggunakan air. Diukur serapannya.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Pengambilan dan Penyiapan Sampel
Pada  penelitian  ini  digunakan daging  paha  ayam  sebagai  sampel.  Proses pengambilan  sampel  digunakan  metode judgemental sampling/ purposive sampling yakni  pengambilan  sampel  berdasarkan pertimbangan  atau  tujuan  tertentu  seperti pengalaman  berbagai  pihak  (Saryono, 2013).  Pengalaman  yang  dimaksudkan adalah  sampel  dengan  pembeli  terbanyak sehingga  adanya  tingkat  kepercayaan masyarakat pada penjual tersebut.

## Penyiapan Larutan Uji dan Pereaksi
Pembuatan  larutan  uji  dan  pereaksi dilakukan secara seksama dan teliti, hal ini dilakukan  untuk  menghindari  kesalahan yang  fatal  akibat  pembuatan  larutan  pada tahap  awal.  Pembuatan  larutan  Nash  akan memberikan spektrum serapan warna pada formalin ketika dianalisis dengan
Spektrofotometri Uv-Vis.
Selanjutnya pembuatan larutan baku  induk  formalin  6  mg/mL  kemudian dari  larutan  baku  induk  tersebut  dibuat kembali larutan baku formalin dengan seri konsentrasi  100  ppm,  150  ppm,  200  ppm, 250  ppm  dan  300  ppm  yang  akan digunakan untuk penentuan panjang gelombang maksimum. Pada saat pengukuran,  absorbansi  yang  didapatkan terlalu tinggi. Hal ini akibat semakin tinggi konsentrasi yang berpengaruh pada tingginya  absorbansi  pada  larutan  yang diukur  sehingga  dibuat  larutan  baku formalin  kembali  dengan  seri  konsentrasi kembali  yakni  25  ppm,  50  ppm,  75  ppm, 100 ppm dan 125 ppm.
Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Panjang Gelombang Maksimum dilakukan dengan menggunakan spektrofotometri ultraviolet-visibel dengan seri konsentrasi 100 ppm, 150 ppm, 200 ppm, 250 ppm dan 300 ppm diperoleh serapan maksimum formalin pada panjang gelombang 412,50
nm dan konsentrasi yang optimum yaitu pada konsentrasi 100 ppm. Konsentrasi ini dipilih karena peak pada konsentrasi ini menunjukkan hasil yang baik dan sesuai dengan literatur.
Tabel 1. Panjang Gelombang Maksimum
Tujuan penentuan panjang gelombang  maksimum  agar  mengetahui daerah  serapan  yang  dapat  dihasilkan berupa  nilai  absorbansi  dari  larutan formalin  yang  dilarutkan  dengan  aquades dan  pereaksi  Nash  yang  kemudian  diukur serapannya menggunakan alat spektrofotometer  UV-Vis  pada  rentang panjang  gelombang  400-500  nm.  Setelah dilakukan pengukuran, panjang gelombang maksimum  berada  pada  412,50  nm  dan hasil  yang  diperoleh  terjadi  pergeseran panjang  gelombang  dari  literatur  Susanti (2010)  yakni  412,75  nm  namun  masih dalam  kisaran  daerah  serapan  optimum formalin pada 412-415 nm sehingga dapat dikatakan hasil pengukuran yang dilakukan memenuhi syarat  penggunaanya untuk  analisis.

## Optimasi  Waktu  Kestabilan  (Operating Time)
Pada  optimasi  waktu  kestabilan dengan  menggunakan  panjang  gelombang terpilih  yaitu    412,50  nm  dengan konsentrasi 100 ppm dengan waktu 0 – 10 menit menunjukkan absorbansi yang stabil yaitu  1,570  dan  pada  tabel  dapat  dilihat bahwa  setelah dilakukannya  optimasi waktu  maka  dalam  10  menit  sejak  detik
pertama  dilakukan  pengukuran  masih merupakan waktu optimal.

## Validasi Metode

## Kurva Kalibrasi dan Uji Linearitas
Validasi  metode  diawali  dengan pembuatan  kurva  kalibrasi  dan  linearitas. Kurva  Kalibrasi  didapati  dengan  cara membuat  seri  konsentrasi  100  ppm,  150 ppm, 200 ppm, 250 ppm dan 300 ppm dari larutan  formalin,  aquades  dan  pereaksi Nash.  Penambahan  pereaksi  Nash  akan mengubah  larutan  menjadi  berwarna kuning  akibat  terhidrolisis  ke  bentuk  enol setelah  pemanasan    dan  untuk  memenuhi syarat  agar  dapat  diukur  serapannya dengan alat spektrofotometri UV-Vis maka pada  proses  pengukuran  larutan  formalin yang  merupakan  larutan  tidak  berwarna dilakukan  penambahan  pereaksi  Nash sehingga  memberikan  spektrum  serapan berwarna pada formalin sehingga membentuk  gugus  kromofor  yakni  gugus fungsional yang tidak jenuh yang memberikan serapan pada daerah ultraviolet atau cahaya tampak serta warna yang terbentuk akan semakin intens sejajar dengan  semakin  tingginya  konsentrasi karena jumlah analit yang semakin banyak dalam larutan.
Persamaan  kurva  kalibrasi  yang merupakan  hubungan  antara  sumbu  x  dan y.  Konsentrasi  yang  diperoleh  dari  hasil pengukuran  dinyatakan  sebagai  sumbu  x sedangkan  serapan  yang  diperoleh  dari hasil  pengukuran  dinyatakan  sebagai sumbu  y dan persamaan regresi  linier dari kurva  kalibrasi  yang  diperoleh  adalah  y  = 0,0158x  +  0,0284  dengan  koefisien korelasi    r  =  0,995.  Harga  koefisien korelasi (r)  yang mendekati 1 menyatakan hubungan  yang  linier  antara  konsentrasi dengan  serapan  yang  dihasilkan  dengan arti  peningkatan  nilai  absorbansi  analit berbanding  lurus  dan  signifikan  dengan peningkatan  konsentrasinya  sesuai  dengan syarat nilai koefisien korelasi (r) yang baik ≥  ,99
Konsentrasi (ppm) Panjang Gelombang (nm) 100 412,50 150 412,25 200 412,25 250 412,00 300 412,00
Gambar 1. Reaksi perubahan warna setelah penambahan pereaksi Nash
Tabel 3. Penentuan linieritas dari beberapa konsentrasi

## Batas Uji dan Batas Deteksi
Setelah  mendapatkan  kurva  kalibrasi  yang memenuhi persyaratan analisis, selanjutnya  data  yang  diperoleh  dari konsentrasi  tiap  analit  yang  memberikan absorbansi  berbeda  untuk  diolah  untuk
menentukan batas deteksi (LOD) dan batas kuantitas (LOQ). Batas deteksi merupakan konsentrasi  analit  terendah  dalam  sampel yang  masih  dapat  dideteksi  (Harmita, 2006)  dan  batas  deteksi  yang  diperoleh adalah  11,514  ppm  sedangkan  batas kuantitas  merupakan  kuantitas  terkecil dalam  analit  yang  masih  dapat  ditentukan dengan  metode  yang  digunakan  dan  batas kuantitas  yang  diperoleh  adalah  38,380 ppm.
Tabel 4. Nilai LOD dan LOQ
∑( - ’) 2 0,038 S(y- ’) 2 0,012 S(y/x) 0,113 LOD(ppm) 11,514 LOQ (ppm) 38,380

## Akurasi    dan  Perolehan  Kembali (Recovery)
Pada parameter selanjutnya yakni  akurasi  yang  dinyatakan  sebagai persen perolehan kembali ( recovery ) analit yang  ditambahkan.  akurasi  hasil  analisis sangat  tergantung  kepada  sebaran  galat sistematik  didalam  keseluruhan  analisis. Akurasi  ditentukan  dengan  dua  cara  yaitu metode penambahan baku ( standart addition  method )  atau  metode  simulasi ( spiked-placebo  recovery )  seperti  yang digunakan  pada  penelitian  ini.  Dalam metode simulasi, sejumlah analit ditambahkan kedalam  campuran pembawa lalu  dianalisis  dan  hasilnya  dibandingkan dengan  kadar  analit  yang  ditambahkan (kadar  yang  sebenarnya).  Penambahan pereaksi  Nash  digunakan  untuk  mengikat formalin agar terlepas dari sampel sedangkan asam fosfat untuk mempercepat proses  pelepasan  formalin  dari  sampel (Hastuti,  2010)  dan  setelah  perhitungan maka  nilai  uji  perolehan  kembali  (UPK) yang diperoleh dengan nilai rata-rata UPK seluruh  konsentrasi  sebesar  100,247%. Adapun syarat nilai UPK yang baik adalah
y = 0,0158x + 0,0284 r² = 0,9909 0 0.5 1 1.5 2 2.5 0 50 100 150 A b sor b an si Konsentrasi (ppm) Kurva Kalibrasi Formalin 25- 125 ppm Konsentrasi (ppm)
Absorbansi 25 0,492 50 0,748 75 1,211 100 1,570 125 2,061
98%-102%  (Gandjar  dan  Abdul,  2007) sehingga    hasil  yang  diperoleh  telah memenuhi syarat uji akurasi.
Tabel 5. Hasil uji perolehan kembali formalin pada sampel simulasi
Konsentrasi (ppm) Rata – rata UPK (%) 125 100,467 175 100,071 225 100,204 100,247

## Presisi
Selanjutnya untuk
parameter presisi yang    menunjukkan  derajat kesesuaian  antara  hasil  uji  yang  diukur melalui  penyebaran  hasil  dari  rata  –  rata secara  berulang.  Presisi  diukur  sebagai simpangan  baku  atau  simpangan  baku relatif  (koefisien  variasi)  berdasarkan penelitian yang dilakukan terhadap replikasi  sampel  yang  diambil  dari campuran yang homogen (Harmita, 2004). Adapun hasil perhitungan simpangan baku (SD) dari data yang diperoleh dari tiga kali replikasi  dengan  tiga  konsentrasi  berbeda dimana nilai yang diperoleh sesuai dengan syarat  uji  presisi  dengan  nilai  yang ≤2%  (G   j         A    , 2007).
Tabel 6. Hasil uji presisi pada sampel simulasi

## Analisa Sampel
Setelah  dianalisis  dengan  metode yang telah divalidasi dan memplotkan nilai absorbansi pada kurva baku y = 0,0158x + 0,0284 maka diperoleh hasil yang bervariasi  yaitu  kadar  formalin  tertinggi terdapat pada sampel 5 sebesar 5,375 ppm dan  yang terendah terdapat  pada sampel 1 sebesar  0,375  ppm  sehingga  kadar  yang diperoleh  diklasifikasikan  tidak  terdeteksi formalin karena konsentrasi yang diperoleh  lebih  kecil  dari  LOD  yaitu 11,514 ppm.
Gambar 7. Diagram hasil analisis daging paha ayam

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
1. Metode  yang  digunakan  sesuai  dengan parameter validasi yang telah ditetapkan  sehingga  memiliki  nilai validitas yang dapat diterima.
2. Tidak  terdapat  kandungan  formalin pada  sampel  daging  paha  ayam  yang beredar di Kota Manado.

## DAFTAR PUSTAKA
Dir.Jend.POM.
2003. Formalin.
Departemen Kesehatan RI . Hal : 3-
20, Jakarta.
0,375 ± 0,009 0,375 ± 0,003 3,033 ± 0,009   2,611 ± 0,002 5,375 ± 0,010 4,531 ± 0,004 0 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 K ad ar (p p m ) Sampel Data kadar sampel yang beredar di Kota Manado
C (ppm)
Absorbansi (A) SD RSD (%) 125 0,775 0,779 0,779 0,576 0,400 175 1,147 1,168 1,189 1,865 1,000 225 1,553 1,579 1,596 2,563 1,100
Gandjar,  Ibnu Gholib dan Abdul Rohman.
2009. Kimia  Farmasi  Analisis
Pustaka Pelajar, Yogyakarta.
Gandjar,  G.I.,  Rohman,  A.  2007. Kimia
Farmasi  Analisis .  Pustaka  Pelajar,
Yogyakarta
Harmita,  2004.  Petunjuk  Pelaksanaan
Validasi metode dan Cara Perhitungannya. Departemen Farmasi  FMIPA-UI. Majalah  Ilmu Kefarmasian ,  Vol.  I,  No. 3:117- 135. Harmita.  2006. Buku  Ajar  Analisis
Fitokimia .  Depok  :  Departemen Farmasi FMIPA Universitas Indonesia ; 144-162. Hastuti,  S.  2010.  Analisis  Kualitatif Formaldehid  pada  Ikan  Asin  di Madura.
Madura : Fakultas Pertanian, Universitas Trunojoyo.
Khomsan,  A.,  dan  Faisal  Anwar.  2008.
Sehat  Itu  Mudah .  Mizan  Publika, Jakarta. Susanti,  S.  2010.  Penetapan  Kadar Formaldehid  pada  Tahu  yang Dijual  di  Pasar  Ciputat  dengan Metode  Spektrofotometri  Uv-Vis disertai  Kolorimetri  Menggunakan Pereaksi  Nash.    [Skripsi].  UIN Syarif Hidayatullah, Jakarta.