## PENGGUNAAN BAP DAN TDZ UNTUK PERBANYAKAN TANAMAN GAHARU
( Aquilaria malaccensis Lamk.)
(The Use of BAP and TDZ for Propagation of Agarwood (Aquilaria malaccensis Lamk .))
A ZWIN 1 , I SKANDAR Z. S IREGAR 2 DAN S UPRIYANTO 2
1 Fakultas Kehutanan Univ. Lancang Kuning Pekanbaru
2 Fakultas Kehutanan Institut Pertanian Bogor
Diterima 20 Juli 2006 / Disetujui 25 Oktober 2006

## ABSTRACT
Agarwood  (A.  malaccensis  Lamk.)  is  one  of  the  important  tropical  forest  trees,  which  produces  a  high  economically  valuable  fragrant  resinous wood.  The  increase of agarwood demand  from  year  to  year  leads  to  uncontrolled  illegal  harvest of  this  plant  from  its natural  habitat.  To  encounter  this problem,  there  is  an  urgent  need  to  develop  agarwood  plantation.  Tissue  culture  is  an  alternative  method  to  provide  genetically  good  seedlings  for plantation in the future due to its short period and mass quantity of planlet production. In addition, through this method, its might also provide homogenous plant, and free pest and diseases. The objectives of the study were (1) to find out the optimal concentration of BAP or TDZ for inducing shoot multiplication of agarwood in in vitro conditions. MS (Murashige And Skoog, 1962), was used as basal media. The experimental design of the research was  completely randomized design (RAL) with treatment of BAP concentration (control; 0,50 ppm; 0,75 ppm; 1,0 ppm) or TDZ concentration (control; 0,25 ppm; 0,50 ppm; 0,75  ppm),  in  3  units,  of  replicate  every  units  consist  of  4  bottles,  every  bottle  containing  one  explants  coming  from  axillaries  and  adventitious  shoot explants. Results indicated that two types of agarwood explants grown in vitro in MS basal media containing BAP 0,50 ppm or TDZ 0,25 ppm produced the highest number of shoots and leaves of agarwood plantlets, as well as its plantlet shoot length.
Keywords :  BAP , TDZ , Agarwood, In Vitro.

## PENDAHULUAN
Tumbuhan  gaharu  ( Aquilaria  malaccensis Lamk.) merupakan  salah  satu  jenis  tanaman  hutan  tropis  penghasil resin  atau  produk  damar  yang  bernilai  ekonomi  tinggi. Permintaan  dunia  akan  produk  gaharu  setiap  tahunnya mengalami  peningkatan  (Sumarna,  2002),  namun  dibatasi oleh  kuota.  Kuota  untuk  Indonesia  pada  tahun  2000  untuk jenis A. filaria sebanyak 200 ton dan untuk A. malaccensis sebanyak  225  ton,  tetapi  pada  tahun  2005  kuota  Indonesia anjlok masing-masing menjadi 125 ton dan 50 ton (Wiguna, 2006).
Memperhatikan  permintaan  pasar  atas  komoditas gaharu  yang  terus  meningkat,  maka  budidaya  gaharu menjadi  penting  di  masa  yang  akan  datang  karena  telah masuk  Appendix  II  dalam  CITES  ( Convention  on International Trade of Endangered Species Wild Flora and Fauna ) dan dalam rangka  mempersiapkan era perdagangan bebas. Gubal gaharu dengan  kualitas  super dapat  mencapai harga Rp. 10 – Rp. 15 juta/kg. Kayu gaharu diperdagangkan sebagai komoditas mewah untuk keperluan industri parfum, kosmetik, dupa/kemenyan, pengawet berbagai jenis asesoris dan  obat-obatan  (Sumarna,  2002)  serta  acara  ritual keagamaan,  karena  aroma  harum  yang  dihasilkannya (Barden et al. 2000).
Meningkatnya  kebutuhan  gaharu  dari  tahun  ke  tahun dan  tingginya harga  jual, menyebabkan  intensitas pemungutan  liar  yang  berasal  dari  hutan  alam  semakin tinggi dan tidak terkendali, khususnya terhadap jenis gaharu berkualitas  tinggi.  Menurut  Sumarna  (2002),  tanaman gaharu  ( A.  malaccensis Lamk.)  yang  ada  di  Indonesia termasuk spesies tanaman yang mulai langka, hal ini terjadi akibat  perburuan  liar  yang  tidak  terkendali  dan  tidak mengindahkan  faktor-faktor  kelestariannya.  Kurangnya pengetahuan  dalam  membedakan  pohon  berisi  dan  tidak berisi  gaharu  mengakibatkan  masyarakat  pemungut  gaharu menebang  pohon  secara  spekulatif.  Apabila  pada  akhirnya pohon  tersebut  tidak  mengandung  gaharu  setelah  dikupas dan dicacah,  maka pohon tersebut ditinggalkan begitu  saja. Cara  perburuan  tersebut  terus  berlangsung  sehingga populasi  tumbuhan A.  malacensis berada  di  ambang kelangkaan.  Sehingga  pada  tahun  1994 Convention  on International Trade of Endangered Species Wild Flora and Fauna (CITES)  IX  di  Florida,  mencantumkan  tanaman gaharu  ( A.  malaccensis Lamk.)  dalam Appendix  II karena berstatus  sebagai  plasma  nutfah  yang  terancam  punah (Barden et  al. 2000).  Menindaklanjuti  hal  tersebut, Departemen  Kehutanan  melalui  Balai  Konservasi  Sumber Daya  Alam  (BKSDA)  membatasi  penjualan  gaharu  alam bukan budidaya, di dalam maupun luar negeri.
Media Konservasi Vol. XI, No. 3 Desember 2006 :  98 – 104
Teknik kultur jaringan memberikan alternatif terhadap usaha  perbanyakan  tanaman  secara  vegetatif  dalam  skala yang lebih besar dalam upaya konservasi dan pengembangan  tanaman  gaharu  dimasa  yang  akan  datang. Ada  beberapa  kelebihan  yang  diperoleh  dari  perbanyakan tanaman  dengan  teknik  kultur  jaringan  diantaranya  adalah dapat  menghasilkan  tanaman  yang  homogen,  berkualitas tinggi,  jumlah  yang  tidak  terbatas,  bebas  hama  dan penyakit,  menghasilkan  klon  yang  lebih  unggul,  dapat diperbanyak dalam waktu yang relatif singkat, tidak dibatasi oleh waktu, tetapi membutuhkan keahlian khusus. Selain itu menurut  Yusnita  (2003),  manfaat  utama  perbanyakan tanaman  secara  kultur  jaringan  adalah  untuk  perbanyakan vegetatif  tanaman  yang  permintaan  tinggi  tetapi  pasokan rendah,  karena  laju  perbanyakan  secara  konvensional dianggap lambat. Dengan demikian, penelitian ini dilakukan dengan tujuan untuk mendapatkan konsentrasi Benzyl amino purine (BAP) dan Thidiazuron (TDZ) yang optimum untuk induksi dan multiplikasi tunas gaharu.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian Kultur Jaringan dilaksanakan di Unit Kultur Jaringan  Laboratorium  Konservasi  Tumbuhan  Departemen Konservasi  Sumberdaya  Hutan  dan  Ekowisata,  Fakultas Kehutanan Institut Pertanian Bogor. Penelitian dilaksanakan dari bulan Pebruari sampai dengan Nopember 2006.
Bahan  tanaman  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah bibit gaharu berumur 4 bulan yang ditanam di rumah kaca  Konservasi  Sumberdaya  Hutan  Fakultas  Kehutanan IPB  (Tunas  Aksilar)  dan  planlet  gaharu  yang  berumur  14 minggu  hasil  kultur in  vitro dari  Laboratorium  Kultur Jaringan Konservasi Sumberdaya Hutan Fakultas Kehutanan IPB (Tunas Adventif). Alat-alat yang digunakan dalam  kultur  jaringan  gaharu  yaitu  pinset,  gunting,  scalpel, mikroskop  binokuler  dengan  lampu,  cawan  petri,  kertas tissue, laminar air flow cabinet , kamera digital dan alat-alat tulis.
Bahan  sterilisasi  eksplan  yang  digunakan  meliputi: detergen,  HgCl 2 0,01%,  NaOCl,  Alkohol  70%,  dan Betadine.
Rancangan  percobaan  yang  digunakan  adalah  ran- cangan  acak  lengkap  (RAL)  dengan  perlakuan  konsentrasi BAP  (kontrol;  0,50  ppm;  0,75  ppm;  1,0  ppm)  atau  TDZ (kontrol; 0,25 ppm; 0,50 ppm; 0,75 ppm), dengan ulangan 3 unit, setiap unit terdiri dari 4 botol, setiap botol ditanam satu eksplan  yang  berasal  dari  tunas  aksilar  atau  tunas  adventif. Data yang diperoleh dianalisis sidik ragam dan uji Duncan. Pengolahan  data  menggunakan  program SPSS  13.0  for windows.
Media  dasar  yang  digunakan  adalah  Media  MS (Murashige  &  Skoog,  1962),  sedangkan  zat  pengatur tumbuh  yang  digunakan  adalah  BAP  dan  TDZ  berbentuk
bubuk. Sebelum ditanam, eksplan disterilisasi dengan HgCl 2 0,01% selama 7 menit, NaOCl 10%, 7,5% dan 5% masing- masing  15-20  menit  kemudian  dibilas  tiga  kali  dengan aquades  steril,  direndam  dalam  larutan  Betadine  2  ml/100 ml  selama  10  menit.  Bagian  tanaman  yang  ditanam  adalah jaringan  meristem  pucuk  dari  dengan  satu  primordia  daun. Kemudian  dilakukan  subkultur  sebanyak  dua  kali. Parameter  yang  diamati  adalah  Persentase  pencokelatan, persentase terkontaminasi, visualisasi perkembangan eksplan,  jumlah  tunas  per  eksplan,  panjang  tunas  per eksplan, dan jumlah daun per eksplan, dilakukan selama 12 minggu.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Persentase  Pencokelatan,  Terkontaminasi  dan  Jumlah Eksplan yang Tumbuh
Tabel  1.  Persentase  Pencokelatan,  Terkontaminasi,  Tidak Tumbuh  dan  Tumbuh  dengan  Sumber  Eksplan dari Tunas Aksilar dan Tunas Adventif Parameter Eksplan Aksilar (n=84) Eksplan Adventif (n=84) Pencokelatan Terkontaminasi Tidak tumbuh Tumbuh 6 (7,14%) 18 (21.42%) 11 (13.09%) 49 (58.33%) 0 (0%) 11 (13.09%) 8 (9.52%) 65 (77.38%)
Pada  Tabel  1  di  atas  terlihat  bahwa  pencokelatan hanya  terjadi  pada  eksplan  yang  berasal  dari  tunas  aksilar yaitu sebanyak 7,14%, sedangkan eksplan yang berasal dari tunas  adventif  tidak  mengalami  pencokelatan.  Selanjutnya jumlah terkontaminasi dan tidak tumbuh lebih tinggi terjadi pada  eksplan  yang  berasal  dari  tunas  aksilar  dibanding eksplan  yang  berasal  dari  tunas  adventif.  Tetapi  jumlah eksplan yang tumbuh lebih tinggi pada eksplan yang berasal dari  tunas  adventif  (77,38%)  dibanding  eksplan  yang berasal dari tunas aksilar (58,33%).
Tingginya  jumlah  terkontaminasi  pada  eksplan  tunas aksilar  ini  diduga  eksplan  berasal  dari  rumah  kaca  banyak membawa  mikroorganisme  sumber  kontaminan.  Meskipun sudah  dilakukan  sterilisasi  dengan  baik,  namun  mikro- organisme  masih  sering  terbawa  oleh  eksplan.  Hutchinson et al . (1995), menyatakan bahwa tanaman yang berasal dari lapangan  memiliki  mikroflora  yang  dapat  mematikan eksplan  sebelum  kultur  berkembang.  Kesalahan  dan  tidak berhasilnya  sterilisasi  dapat  menyebabkan  eksplan  100% terkontaminasi,  salah  satu  cara  untuk  mengurangi kontaminasi  adalah  dengan  menumbuhkan  tanaman  di rumah  kaca,  perlakuan  tanaman  dengan  fungisida  dan insektisida sebelum dikultur.
Pengaruh  Zat  Pengatur  Tumbuh  BAP  dan  TDZ Terhadap  Pertumbuhan  Eksplan  Tunas  Aksilar  dan Adventif

## 1. Jumlah Tunas
Hasil  sidik  ragam  menujukkan  bahwa  baik  eksplan yang berasal dari tunas aksilar maupun tunas adventif yang ditanam  pada  media  dasar  MS  dengan  penambahan  zat pengatur  tumbuh  BAP  atau  TDZ  berpengaruh  sangat  nyata terhadap  jumlah  tunas  yang  dihasilkan  selama  12  MST. Rata-rata jumlah tunas akibat pengaruh zat pengatur tumbuh BAP atau TDZ pada eksplan yang berasal dari tunas aksilar dan  adventif  serta  uji  Duncan  dapat  dilihat  pada  Gambar  1 dan 2.
Hasil  pengamatan  menunjukkan  bahwa  jumlah  tunas planlet  gaharu  selama  12  MST  eksplan  yang  berasal  dari tunas  aksilar  yang  diberi  perlakuan  zat  pengatur  tumbuh
BAP  0,25  ppm  atau  TDZ  0,25  ppm  memberikan  respons yang terbaik terhadap proses induksi tunas dan menghasilkan rata-rata jumlah tunas tertinggi yaitu 5,67 dan 5,28 tunas. Eksplan dari tunas adventif pada perlakuan yang sama  rata-rata  jumlah  tunas  tertinggi  yaitu  6,11  dan  5,61, sedangkan  yang  terendah  pada  kontrol.  Tetapi  pada perlakuan  yang  lain  terjadi  penurunan  rata-rata  jumlah tunas.
Berdasarkan  hasil  uji  lanjut  Duncan,  eksplan  yang berasal dari tunas aksilar  yang ditanam pada  media dengan perlakuan  BAP  0,50  ppm  tidak  berbeda  nyata  dengan perlakuan  BAP  0,75  ppm  tetapi  berbeda  nyata  dengan perlakuan  BAP  1,0  ppm  dan  kontrol  dalam  menghasilkan jumlah tunas (Gambar 1). Pada media yang diberi perlakuan TDZ  menunjukkan  bahwa  perlakuan  TDZ  0,25  ppm berbeda nyata dengan perlakuan TDZ 0,50 ppm, TDZ 0,75 ppm dan kontrol (Gambar 1).
Gambar  1.    Grafik  Pengaruh  BAP  (a)  dan  TDZ  (b)  terhadap  Rerata  Jumlah  Tunas,  dengan  Sumber  Eksplan  dari  Tunas Aksilar
Keterangan: Angka-angka di atas bar yang diikuti oleh huruf kecil yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata pada taraf  0,01 DMRT.
Hasil uji lanjut Duncan menunjukkan bahwa perlakuan BAP 0,50 ppm tidak berbeda nyata dengan perlakuan BAP 0,75  atau  BAP  1,0  tetapi  berbeda  nyata  dengan  kontrol (Gambar  2).  Media  yang  diberi  perlakuan  TDZ  0,25  ppm
berbeda  nyata  dengan  perlakuan  TDZ  0,50  dan  kontrol, tetapi perlakuan TDZ 0,50 ppm tidak berbeda nyata dengan perlakuan TDZ 0,75 ppm (Gambar 2).
Gambar  2.    Grafik  Pengaruh  BAP  (a)  dan  TDZ  (b)  terhadap  Rerata  Jumlah  Tunas,  dengan  Sumber  Eksplan  dari  Tunas Adventif
Keterangan: Angka-angka di atas bar yang diikuti oleh huruf kecil yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata pada taraf  0,01 DMRT.
(a)
(b)
(a) (b) 2.67 c 5.67 a 5.33 a 4.44 b 0 1 2 3 4 5 6 0 0,5 0,75 1,0 Konsentrasi BAP J um la h T unas 2.67 c 5.28 a 4.39 b 3.17 c 0 1 2 3 4 5 6 0 0,25 0,50 0,75 Konsentrasi TDZ J um la h T unas 2.61 c 6.11 a 5.22 ab 4.55 b 0 2 4 6 8 0 0,5 0,75 1,0 Konsentrasi BAP J um la h T unas 2.61 c 5.61 a 3.89 b 3.33 b 0 1 2 3 4 5 6 0 0,25 0,50 0,75 Konsentrasi TDZ J um la h T unas
Media Konservasi Vol. XI, No. 3 Desember 2006 :  98 – 104
Gambar  1  dan  2  terlihat  bahwa  baik  pada  eksplan tunas aksilar maupun tunas adventif dengan perlakuan BAP 0,5 ppm atau TDZ 0,25 ppm adalah perlakuan yang terbaik dan optimum dalam menghasilkan jumlah tunas, sedangkan pada perlakuan lainnya terjadi penurunan dalam menghasilkan  jumlah  tunas.  Jumlah  tunas  yang  terendah dihasilkan  oleh  kontrol.  Hal  ini  berarti  bahwa  konsentrasi BAP 0,5 ppm atau TDZ 0,25 ppm  adalah  konsentrasi  yang optimum dan  dapat meningkatkan jumlah tunas, sedangkan pada perlakuan lainnya terjadi penurunan jumlah tunas. Hal ini  didukung  oleh  pernyataan  Tiwari et  al. (2000)  bahwa konsentrasi  sitokinin  yang  tinggi  dapat  menyebabkan jumlah tunas berkurang, dan  BAP melebihi kadar optimum yang dibutuhkan tanaman umumnya menyebabkan perkembangan tajuk atau tunas terhambat.
Khawar et  al .  (2004),  juga  melaporkan  bahwa penggunaan TDZ pada konsentrasi tinggi dapat menurunkan regenerasi  tunas,  regenerasi  tunas  tertinggi  dihasilkan  pada media  MS  dengan  konsentrasi  TDZ  0,25  ppm.  Hasil penelitian Gajdosova et al . (2006), juga melaporkan bahwa penggunaan TDZ pada kosentrasi tinggi dapat menghambat regenerasi  tunas  dan  menyebabkan  pencokelatan  (nekrosis) pada eksplan.

## 2. Panjang Tunas
Hasil  sidik  ragam  menunjukkan  bahwa  baik  eksplan yang berasal dari tunas aksilar maupun tunas adventif yang ditanam  pada  media  dasar  MS  dengan  penambahan  zat pengatur  tumbuh  BAP  atau  TDZ  berpengaruh  sangat  nyata terhadap panjang tunas planlet gaharu.
Hasil  pengamatan  pada  panjang  tunas  menunjukkan bahwa eksplan yang berasal dari tunas aksilar yang ditanam pada media yang diberi perlakuan BAP 0,50 ppm atau TDZ 0,25 ppm  menghasilkan jumlah tunas  yang terbanyak  yaitu secara  berturut-turut  3,15  cm  dan  2,88  cm  (Gambar  3). Hasil  uji  lanjut  Duncan  menunjukkan  bahwa  eksplan  tunas aksilar yang diberi perlakuan BAP 0,50 ppm berbeda nyata dengan  perlakuan  BAP  0,75  ppm  dan  kontrol,  tetapi perlakuan BAP 0,75 ppm tidak berbeda nyata dengan BAP 1,0  ppm  (Gambar  3).  Berbeda  dengan  media  yang  diberi perlakuan  TDZ,  media  yang  diberi  perlakuan  dengan  TDZ 0,25  ppm  berbeda  nyata  dengan  perlakuan  TDZ  0,50  ppm, TDZ 0,75 ppm dan kontrol (Gambar 3).
Pada  eksplan  tunas  adventif,  media  yang  diberi perlakuan  dengan  zat  pengatur  tumbuh  BAP  0,5  ppm  atau TDZ  0,25  ppm  menunjukkan  rata-rata  panjang  tunas  yang terpanjang  yaitu  secara berturut-turut  2,79 cm dan  2,67 cm (Gambar 4). Pada perlakuan lainnya juga terjadi penurunan panjang tunas.
Gambar  3.    Grafik  Pengaruh  BAP  (a)  dan  TDZ  (b)  terhadap  Rerata  Panjang  Tunas,  dengan  Sumber  Eksplan  dari  Tunas Aksilar.
Keterangan: Angka-angka di atas bar yang diikuti oleh huruf kecil yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata pada taraf  0,01 DMRT.
Gambar  4.    Grafik  Pengaruh  BAP  (a)  dan  TDZ  (b)  terhadap  Rerata  Panjang  Tunas,  dengan  Sumber  Eksplan  dari  Tunas Adventif.
Keterangan: Angka-angka di atas bar yang diikuti oleh huruf kecil yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata pada taraf  0,01 DMRT.
1.63 c 3.15 a 2.5 b 2.5 b 0 1 2 3 4 0 0,5 0,75 1,0 Konsentrasi BAP (a) P a nj a n g T unas ( c m ) 1.63 d 2.88 a 2.7 b 2.12 c 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 0 0,25 0,50 0,75 Konsentrasi TDZ (b) P a nj a n g T unas ( c m ) 1.6 b 2.79 a 1.94 b 1.79 b 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 0 0,5 0,75 1,0 Konsentrasi BAP (a) P a nj a n g T unas ( c m ) 1.6 b 2.67 a 1.63 b 1.6 b 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 0 0,25 0,50 0,75 Konsentrasi TDZ (b) P a nj a n g T unas ( c m )
Semakin  tinggi  konsentrasi  BAP,  maka  panjang tanaman  semakin  pendek.  Keadaan  ini  diduga  akibat periode inkubasi eksplan yang terlalu lama pada media yang mengandung  sitokini,  sehingga  perpanjangan  batang terhambat. Hal ini sesuai dengan pernyataan (Moncalean et al. 2001 dalam Damayanti,  2004)  bahwa  konsentrasi  BAP yang  tinggi  dapat menyebabkan  panjang  tanaman terhambat. Damayanti (2004) juga menyatakan bahwa BAP tidak memperpanjang tunas tanaman Dianthus caryophillus , bahkan  sebaliknya  menyebabkan  tanaman  terlihat  lebih pendek dan kerdil. Menurut Lu (1993) pemberian TDZ pada konsentrasi  tertentu  akan  menghambat  pertumbuhan meninggi tanaman.

## 3. Jumlah Daun
Berdasarkan  hasil  sidik  ragam  menunjukkan  bahwa media  yang  diberi  perlakuan  BAP  atau  TDZ  berpengaruh sangat nyata terhadap rata-rata jumlah daun yang dihasilkan selama 12 MST baik eksplan yang berasal dari tunas aksilar maupun  yang  berasal  dari  tunas  adventif.  Rata-rata  jumlah daun dapat dilihat pada Gambar 5 dan 6.
Hasil pengamatan  menunjukkan bahwa planlet  gaharu untuk  eksplan  yang  berasal  dari  tunas  aksilar  yang  diberi perlakuan  BAP  0,5  ppm  atau  TDZ  0,25  ppm  merupakan konsentrasi  yang  optimum  dalam  menghasilkan  rata-rata jumlah  daun  planlet  gaharu,  hal  ini  dapat  dilihat  dari  rata- rata jumlah daun yang dihasilkan yaitu secara berturut-turut 6,5  dan  6,28  (Gambar  5).  Pada  perlakuan  lainnya  terjadi penurunan  jumlah  daun,  jumlah  daun  yang  paling  sedikit dihasilkan oleh kontrol yaitu 4,33.
Gambar  5.    Grafik  Pengaruh  BAP  (a)  dan  TDZ  (b)  terhadap  Rerata  Jumlah  Daun,  dengan  Sumber  Eksplan  dari  Tunas Aksilar.
Keterangan: Angka di atas bar yang diikuti oleh huruf kecil yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata pada taraf  0,01 DMRT.
Gambar  6.    Grafik  Pengaruh  BAP  (a)  dan  TDZ  (b)  terhadap  Rerata  Jumlah  Daun,  dengan  Sumber  Eksplan  dari  Tunas Aksilar.
Keterangan: Angka di atas bar yang diikuti oleh huruf kecil yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata pada taraf  0,01 DMRT.
4.33 d 6.5 a 6 b 5.39 c 0 1 2 3 4 5 6 7 0 0,5 0,75 1,0 Konsentrasi BAP (a) J um la h D a un 4.33 c 6.28 a 6 a 5.28 b 0 2 4 6 8 0 0,25 0,50 0,75 Konsentrasi TDZ (b) J um la h D a un 4.5 b 7.22 a 6.11 a 4.66 b 0 2 4 6 8 0 0,5 0,75 1,0 Konsentrasi BAP (a) J um la h D a un 4.5 c 6.78 a 5.22 b 4.78 bc 0 2 4 6 8 0 0,25 0,50 0,75 Konsentrasi TDZ (b) J um la h D a un
Media Konservasi Vol. XI, No. 3 Desember 2006 :  98 – 104
Hasil  uji  lanjut  Duncan  menunjukkan  bahwa  eksplan tunas aksilar yang diberi perlakuan BAP 0,50 ppm berbeda nyata  dengan  perlakuan  BAP  0,75  ppm,  BAP  1,0  ppm  dan kontrol,  sedangkan  media  yang  diberi  perlakuan  TDZ  0,25 ppm  tidak  berbeda  nyata  dengan  TDZ  0,50  ppm,  tetapi berbeda nyata dengan perlakuan TDZ 0,75 ppm dan kontrol (Gambar  5).  Pada  eksplan  tunas  adventif  perlakuan  BAP 0,50  ppm  tidak  berbeda  nyata  dengan  perlakuan  BAP  0,75 ppm,  perlakuan  BAP  1,0  ppm  tidak  berbeda  nyata  dengan kontrol  (Gambar  18).  Perlakuan  TDZ  0,25  ppm  berbeda nyata  dengan  perlakuan  TDZ  0,50  ppm,  tetapi  perlakuan TDZ 0,50 ppm tidak berbeda nyata dengan perlakuan TDZ 0,75 ppm dan kontrol (Gambar 6).
Suryowinoto  (1996)  menyatakan  bahwa untuk meningkatkan  jumlah  daun  dalam  kultur  jaringan  sering diperlukan zat pengatur tumbuh, karena akan mempengaruhi  pertumbuhan  termasuk  pembelahan  dan pembesaran  sel,  penambahan  plasma  dan  diferensiasi  sel untuk kemudian membentuk organ-organ lain seperti tunas, akar,  daun  dan  sebagainya.  Menurut  Strabala et  al. (1996) auksin  dan  sitokinin  berperan  dalam  perkembangan primordia  daun,  dan  posisi  inisiasi  primordia  daun  juga dipengaruhi oleh transport auksin. Hasil penelitian Herawan dan  Hardi  (2005)  pada  tanaman  murbei,  menunjukkan bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  zat  pengatur  tumbuh BAP  yang  diberikan  maka  jumlah  daun  murbei  yang dihasilkan semakin sedikit.

## Visualisasi Perkembangan Eksplan
Pada  setiap  eksplan  yang  ditanam,  baik  pada  media yang  diberi  perlakuan  zat  pengatur  tumbuh  BAP  maupun TDZ,  terlihat  proses  perkembangan  eksplan  yang  berbeda-
beda,  hal  ini  disebabkan  oleh  eksplan  yang  digunakan memiliki  tingkat  juvenilitas  dan  meristematik  sel  yang berbeda  satu  dengan  yang  lainnya,  terutama  eksplan  yang berasal  dari  tunas  aksilar.  Oleh  karena  itu  tahap  awal perkembangan eksplan terlihat lebih bervariasi dalam proses pembentukan  tunas.  Hasil    pengamatan  menunjukkan bahwa eksplan  yang berasal  dari tunas aksilar lebih lambat dalam  induksi  atau  pembentukan  tunas  dibandingkan eksplan  yang  berasal  dari  tunas  adventif.  Tunas  pertama terbentuk pada minggu ke 5 pada eksplan yang berasal dari tunas  aksilar  dan  minggu  ke  3  pada  eksplan  yang  berasal dari  tunas  adventif.  Lambatnya  proses  pembentukan  tunas pada  eksplan  yang  berasal  dari  tunas  aksilar  diduga  karena eksplan  berasal  dari  bibit  yang  diambil  dari  rumah  kaca, kemudian  dilakukan  sterilisasi  dengan  bahan  sterilan, menyebabkan  eksplan  tercekam  akibat  perlakuan  mekanik sebelum  inokulasi  sehingga  membutuhkan  waktu  untuk beradaptasi  pada  kondisi  dan  lingkungan  yang  baru.  Selain itu  eksplan  yang  berasal  dari  lapangan  yang  awalnya  pada lingkungan  autotrof  menjadi  heterotrof.  Berbeda  dengan eksplan  yang  berasal  dari  tunas  adventif.  Pada  awalnya sudah  berasal  dari  dalam  botol  atau  lingkungan  aseptik, sehingga  apabila  dipindahkan  pada  lingkungan  baru  tidak terlalu  stress  dan  tidak  membutuhkan  waktu  yang  cukup lama  untuk  beradaptasi.  Kondisi  ini  akan  terjadi  apabila eksplan yang ditanam tidak terkontaminasi.
Secara  visual  proses  perkembangan  eksplan  sampai menjadi  planlet  antara  eksplan  yang  berasal  dari  tunas aksilar dan tunas adventif terlihat ada perbedaan. Perbedaan ini  terlihat  dari  bentuk  bonggol,  jumlah  tunas,  panjang tunas, jumlah daun, dan bentuk daun (Tabel 4).
Tabel 4.  Perbedaan visualisasi perkembangan eksplan hingga 12 MST.
No. Bagian yang diamati Eksplan Tunas Aksilar Tunas Adventif 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. Jumlah terkontaminasi Pencokelatan
Bentuk eksplan umur 6 HST
Bentuk bonggol
Muncul tunas
Jumlah tunas
Panjang tunas
Jumlah daun Bantuk daun Bakal tunas / mata tunas Warna planlet 21.42 % ada melengkung lebih besar
minggu ke 5 banyak lebih panjang banyak lebar dan panjang lebih sedikit hijau
13.09 % tidak ada memanjang besar
minggu ke 3 lebih banyak panjang lebih banyak kecil dan panjang lebih banyak hijau

## KESIMPULAN
1. Perlakuan  dengan  zat  pengatur  tumbuh  BAP  0,5  ppm atau  TDZ  0,25  ppm    merupakan  konsentrasi  yang optimum  dan  terbaik  dalam  menghasilkan  jumlah tunas,  panjang  tunas  dan  jumlah  daun  planlet  gaharu, baik  eksplan  yang  berasal  dari    tunas  aksilar  (bibit) maupun yang berasal dari tunas adventif (planlet).
2. Penggunaan  zat  pengatur  tumbuh  BAP  atau  TDZ  dan dua  jenis  sumber  eksplan  menghasilkan  jumlah  tunas, panjang tunas dan jumlah daun yang berbeda.

## DAFTAR PUSTAKA
Barden A, Awang Anak, N Mulliken T & Song M. (2000).
Heart  of  the  Matter:  Agarwood  Use  and  Trade,  and CITES  Implementation  for Aquilaria  malaccensis . TRAFFIC International.
Damayanti  L.  2004.  Kombinasi  konsentrasi  Auksin  dan sitokinin  terhadap  pertumbuhan  anyelir  ( Dianthus caryophillus )  dalam  kultur  in  vitro.  [Skripsi].  Bogor. Institut Pertanian Bogor. FMIPA.
Gajdosova A, MG Ostrolucka, G Libiakova, E Ondruskova,
D  Simala.  2006.    Microclonal  Propagation  Of Vaccinium Sp.  and Rubus Sp.  And  Detection  Of Genetik  Variability  In  Culture In  Vitro .  Slovak Republic.  Journal  of  Fruit  and  Ornamental  Plant Research Vol. 14 (Suppl. 1)
Herawan  T  &  T  Hardi  TW.  2005.  Kultur  jaringan  Tiga Spesies Murbei Hasil Persilangan. Wana Benih. Vol. 6 No. 1.
Hutchinson JF & M Barlass Knoxfield. 1995. Fundamentals of  plant  propagation  by  tissue  culture.  State  of
Victoria.  Department  of  Primary  Industries.  ISSN 1329-8062.
Khawar K M, C Sancak, S Uranbey, & S Zcan. 2004. Effect of  Thidiazuron  on  Shoot  Regeneration  from  Different Explants  of  Lentil  ( Lens  culinaris  Medik .)  via Organogenesis.  Turkey.  Department  of  Field  Crops, Faculty  of  Agriculture,  University  of  Ankara,  06110, DÝßkapÝ, Ankara
Lu  CY.  1993.  The  use  of  thidiazuron  in  tissue  culture.  In vitro. Cell Dev. Biol. 29:92-96.
Murashige T & F Skoog. 1962. A revised medium for rapid growth  and  bioassays  with  tobacco  tissue.  Physiol. Plant. 15:473 – 497.
Strabala  TJ,  Yan  HW  &  Yi  L.  1996.  Combined  effect  of auxin  transport  inhibitor  and  cytokinin:  alterations  of organ  development  in  tobacco.  Plant  Cell  Physiol. 37(8): 1177-1182.
Sumarna  Y.  2002.  Budi  Daya  Gaharu.  Seri  Agribisnis. Jakarta. Penebar Swadaya..
Suryowinoto M. 1996. Pemuliaan Tanaman Secara In Vitro. Penerbit Kanisius. Yogyakarta.
Tiwari  V,  Tiwari  KN  &  Singh  BD.  2000.  Comparative studies  of  cytokinins  on  in  vitro  propagation  of Bacopa  monniera .  Plant  Cell,  Tissue  and  Organ Culture. Annu. Rev. Plant Physiol. 17:435-459
Wiguna  I.  2006.  Tinggi  Permintaan  Terganjal  Pasokan. Trubus Edisi No. 438 – Mei 2006.
Yusnita.  2003.  Kultur  Jaringan.  Cara  Memperbanyak Tanaman Secara Efisien. Jakarta. Agromedia Pustaka.