p–ISSN: 2723 - 6609  e-ISSN : 2745-5254 Vol. 4, No. 4, April 2023 http://jist.publikasiindonesia.id/

## ANALISIS ASPARTAM DENGAN METODE SPEKTROFOTOMETRI UV-VISIBLE SERTA OPTIMASI KONSENTRASI NINHIDRIN DAN APLIKASINYA UNTUK PENENTUAN KANDUNGAN DALAM MINUMAN ENERGI
Zimon Pereiz 1 *, Chuchita 2 , Meiyanti Ratna Kumalasari 3 , Zahrotun Nafisah 4
Universitas Palangka Raya, Indonesia Email: zimonpereiz@mipa.upr.ac.id *Correspondence INFO ARTIKEL ABSTRAK Diterima  : 27-04-2023 Direvisi : 29-04-2023 Disetujui  : 30-04-2023 Optimasi  konsentrasi  ninhidrin  dan  validasi  metode  analisis  aspartam dilakukan  dengan  metode  spektrofotometri  UV-Visible.  Penelitian  ini diaplikasikan  untuk  menentukan  kandungan  aspartam  dalam  produk minuman  energi.  Aspek-aspek  yang  dilakukan  optimalisasi  meliputi panjang  gelombang dan konsentrasi  ninhidrin, serta dilakukan  validasi metode  analisis  yang  terdiri  dari  penentuan  sensitivitas,  linearitas, presisi, limit kuantifikasi, dan limit deteksi. Penelitian ini menghasilkan data  bahwa  konsentrasi  ninhidrin  optimum  sebesar  0,084  M  untuk  2 mL  sebanding  dengan    0,168  mmol  untuk  setiap  mol  aspartam. Hubungan  yang  linear  antara  absorbansi  dengan  konsentrasi  berada pada  rentang  0  –  19  mM  dengan  nilai  koefisien  regresi  0,997. Sensitivitas  serta  presisi  yang  dihasilkan  cukup    tinggi,  dengan  limit kuantifikasi sebesar 6,10x10 -3 mol/L dan limit deteksi sebesar 1,83x10 -3
mol/L.  Kandungan  aspartam  yang  dianalisis  dalam  minuman  energi dengan  metode  yang  telah  dioptimasi  dan  divalidasi  memperlihatkan kandungan  untuk  sampel  cair  sebesar  11,69  mg/mL  sampel  dan  untuk sampel serbuk sebesar 618,05 mg/g sampel.

## ABSTRACT
Optimization  of  ninhydrin  concentrations  and  validation  of  the aspartame  analysis  method  were  carried  out  using  the  UV-Visible spectrophotometry method. This research was applied to determine the aspartame  content  in  energy  drink  products.  The  aspects  that  were optimized included wavelength and ninhydrin concentration, as well as validation  of  the  analytical  method  which  consisted  of  determining sensitivity,  linearity,  precision,  limit  of  quantification,  and  limit  of detection.  This  study  yielded  data  that  the  optimum  ninhydrin concentration of 0.084 M for 2 mL is equivalent to 0.168 mmol for each mole  of  aspartame.  The  linear  relationship  between  absorbance  and concentration is in the range of 0 – 19 mM with a regression coefficient of 0.997. The resulting sensitivity and precision are quite high, with a quantification limit of 6.10x10 -3 mol/L and a detection limit of 1.83x10 -3
mol/L.  The  content  of  aspartame  analyzed  in  energy  drinks  using  the optimized  and  validated  method  showed  that  the  content  for  liquid samples was 11.69 mg/mL sample and for powder samples was 618.05 mg/g sample. Kata kunci : aspartam;
ninhidrin; spektrofotometri; minuman energi.
Keywords: aspartame; ninhydri;  spectrophotometric; energy drinks.

## Attribution-ShareAlike 4.0 International

## Pendahuluan
Minuman    energi  dikonsumsi  masyarakat  semakin  meningkat  sejak diluncurkannya produk  minuman Red Bull pada tahun 1997 (Kodrat, 2021). Sebanyak lebih  dari  500  merk  minuman  energi  diperkenalkan  diseluruh  dunia  pada  tahun  2006
sampai  saat  ini.  Peningkatan  konsumsi  minuman  energi  sebesar  14%  pada  tahun  2011 yang  setara  dengan  4,8  juta  Liter.  Selama  5  tahun  terakhir,  pertumbuhan  rata-rata mencapai 10% pertahun (Briawan & Aries, 2011).
Minuman  energi  berfungsi  untuk  meningkatkan  energi  karena  mengandung berbagai  zat  stimultan  seperti  kafein,  gingseng,  vitamin  B,  ekstrak  herbal  termasuk guarana,  gliko  biloba,  dan  asam  amino  seperti  taurin.  Kafein  yang  terkandung  dalam minuman  energi  juga  menjadi  pemicu  terjadinya  efek  peningkatan  energi  (PURBA, 2018).
Selain  mengandung  zat  aditif  untuk  meningkatkan  energi,  sering  kali  pemanis buatan  Aspartam  ditambahkan  ke  dalam  minuman  energi  (Mayasari,  Af’idah,  & Manasikana, 2021). Pemanis buatan tersebut ditambahkan sebagai pemanis tunggal atau kombinasi dengan pemanis buatan lain seperti siklamat, asesulfam dan lain sebagainya. Pemanis  buatan  aspartam  ditambahkan  dikarenakan  aspartam  memberikan  rasa  manis sampai 200 kali lebih manis apabila dibandingkan dengan sukrosa (gula) (Praja, 2015).
Lebih dari 6.000 produk makanan dan minuman memiliki kandungan aspartame. Sampai  saat  ini  lebih  dari  200  juta  orang  di  seluruh  dunia  telah  mengkonsumsi aspartame.  Pada  tahun  2004,  Badan  Pengawas  Obat  dan  Makanan  Republik  Indonesia mengeluarkan Peraturan Teknis Penggunaan Bahan Tambahan Pangan Pemanis Buatan dalam Produk Pangan, didalamnya menginformasikan beberapa kategori minuman non alkohol  yang  diijinkan  menggunakan  pemanis  buatan  seperti  Sakarin,  Aspartam, Asesulfam-K,  Sukralosa,  Siklamat,  Alitam,  dan  Neotam  dengan  jumlah  yang  dibatasi (Cahyadi, 2023).
Batas aman mengkonsumsi aspartam menurut WHO adalah 40 mg/kg berat badan. Kandungan aspartam di dalam produk makanan atau minuman yang beredar di pasaran yaitu  20-38  mg/kemasan  dan  ini  dimungkinkan  berbahaya  apabila  dikonsumsi  setiap harinya (Erni Sumartini, 2015).
Dalam  jumlah  yang  besar  dan  intensitas  yang  tinggi,  aspartam  yang  dikonsumsi dapat  memberikan  efek  negatif  terhadap  tubuh.  Aspartam  akan  termetabolisme  dalam tubuh  makhluk  hidup  menjadi  fenilalanin,  asam  aspartat,  dan  metanol  (La  Kariadin, Yuniarty,  &  Fauzi,  2020).  Senyawa-senyawa  tersebut  dapat  memicu    gangguan  pada sistem  saraf  seperti  gejala  vertigo,  depresi,  kaburnya  penglihatan,  bahkan  hilangnya memori.  Beberapa  laporan  juga  menyebutkan,  mengkonsumsi  aspartam  dapat menyebabkan gangguan pada syaraf seperti sakit kepala, insomnia dan kejang.
Pada minuman energi, informasi mengenai kandungan pemanis buatan Aspartam tertera  secara  tidak  lengkap  (LO,  2023).  Meskipun  penggunaan  pemanis  buatan Aspartam diijinkan, namun dalam hal ini perlu untuk dimonitor. Penentuan kandungan aspartam  penting  untuk  dilakukan,  karena  bahaya  yang  ditimbulkan  bagi  kesehatan ketika mengkonsumsi aspartam berlebihan.
Berbagai  macam  metode  telah  dan  masih  dikembangkan  untuk  penentuan kandungan  aspartam  seperti  dalam  obat-obatan,  minuman,  coklat,  permen,  produk kacang  kedelai,  makanan  pencuci  mulut,  pemanis,  minuman  ringan,  minuman berkarbonasi  dan  minuman  susu  fermentasi.  Analisis  aspartam  dalam  minuman  ringan telah  dilakukan  menggunakan  Spektrofotometri  UV,  kromatografi  cair,  dan
elektroforesis  kapiler,  di  dalam  minuman  berkarbonasi  menggunakan  Electrospray Ionization-Mass  Spectrometry,  pemanis  kemasan  menggunakan  High  Pressure  Liquid Chromatography (HPLC) dengan prakolom derivatisasi 2,4-dinitrobenzen.
Metode Spektrofotometri UV-Vis digunakan karena memiliki berbagai kelebihan- kelebihan  dibandingkan  dengan  metode  yang  lainnya.  Kelebihan  dari  metode  tersebut antara  lain  yaitu  memiliki  sensitivitas  yang  baik,  relatif  murah,  dan  menggunakan instrumen  yang  sederhana  (Irawan,  2006).  Sedangkan  untuk  metode  yang  lainnya seperti HPLC, meskipun memiliki sensitivitas yang baik metode ini memerlukan biaya yang cukup mahal dan memiliki prosedur derivatisasi yang panjang dan rumit.
Keberhasilan  analisis  aspartam  dengan  menggunakan  metode  Spektrofotometri UV-Vis  dipengaruhi  oleh  konsentrasi  ninhidrin,  pH  larutan,  waktu  pemanasan,  dan waktu  kestabilan  larutan  hasil.  Didasarkan  fakta  tersebut,  maka  perlu  dilakukan  uji optimasi  dengan mengacu pada validasi  metode.  Penelitian ini sendiri pada prinsipnya merupakan  reaksi  antara  aspartam  dengan  reagen  ninhidrin  yang  akan  menghasilkan senyawa  berwarna  ungu,  dimana  hasil  akan  menunjukkan  dua  panjang  gelombang maksimum 406 dan 557 nm (Thohir, 2015).
Aspartam  pertama  kali  ditemukan  oleh  James  Schulter  pada  tahun  1965,  ketika mensintesis  obat-obat  untuk  bisul  dan  borok.  Penggunaan  aspartam  telah  diizinkan  di berbagai industri makanan dan minuman sejak tahun 1981. Aspartam atau L-aspartil-L- alanin-metilester,  dengan  rumus  molekul  C14H16N2O5,  merupakan  senyawa  yang tidak  berbau,  berbentuk  kristal  dan  berwarna  putih.  Aspartam  mempunyai  kelarutan dalam air 1,0% pada 25˚C dan sukar larut dalam  alkohol, pada pH  yang lebih  rendah kelarutan aspartam meningkat, memiliki pKa 3,0 dan 7,0, dan ε = 5,2 x 104 M-1 Cm-1 (195 nm) (air).
Identifikasi  kandungan  aspartam  dalam  produk  makanan  dan  minuman  yang beredar  di  pasaran  dapat  dilakukan  dengan  cara  analisis  kimia.  Salah  satu  metode analisis  yang  telah  digunakan  yaitu  Spektrofotometri  UV-Visible.  Dalam  metode  ini, digunakan  larutan  ninhidrin  sebagai  pereaksi  yang  menghasilkan  senyawa  berwarna ungu yang disebut reaksi kolorimetri (Sulfiana, Fauzi, & Orno, 2022).
Manfaat  yang diharapkan dari penelitian ini adalah diperolehnya metode  analisis aspartam dengan keakuratan yang sangat baik serta suatu konsep penentuan kandungan aspartam yang aman, efisien dan ekonomis. Bagi ilmu pengetahuan, penelitian ini dapat dijadikan  sebagai  konsep  baru  dalam  melakukan  analisis  pemanis  buatan  aspartam dalam  produk  makanan  dan  minuman  yang  baik  melalui  cara  yang  ekonomis.  Metode analisis aspartam ini diharapkan dapat digunakan dalam pengujian standar mutu bahan makanan dan minuman.

## Metode Penelitian
Alat dan Bahan Penelitian
1. Alat
Peralatan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  peralatan  gelas laboratorium,  timbangan  analitik  merk  (Mettler  AE  200),  pH-meter  merk  (HM-5B
TOA), Spectrofotometer UV-Visible merk GBC Cintra seri 2020, penangas air, kompor pemanas, yang semuanya tersedia di Jurusan Kimia FMIPA UGM.

## 2. Bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini meliputi: aspartam Pro Analisis (p.a) merk Sigma Aldrich, aspartam teknis, ninhidrin Pro Analisis (p.a) merk (E-merck), etanol teknis (96%), asam asetat glasial, garam natrium asetat, dan akuades.
3. Prosedur Penelitian
a. Pembuatan larutan standar
Larutan  standar  aspartam  0,034  M  dibuat  dengan  cara  melarutkan  0,5  gram aspartam dalam 20 mL akuades, kemudian ditambahkan etanol 96% hingga volume 50 mL.  Larutan  aspartam  tersebut  dikocok  hingga  homogen.  Dari  larutan  tersebut  dibuat seri larutan standar aspartam yaitu 0,013; 0,015; 0,017; dan 0,019 M melalui beberapa tahap pengenceran untuk pembuatan kurva kalibrasi standar aspartam.
b. Optimasi konsentrasi ninhidrin
Larutan  aspartam  0,023  M  dibuat  dengan  cara  melarutkan  0,07  gram  aspartam dalam  4  mL  akuades,  kemudian  ditambahkan  etanol  96%  hingga  volume  10  mL. Larutan  aspartam  tersebut  dikocok  hingga  homogen.  Dari  larutan  tersebut  diambil masing-masing  1  mL  ke  dalam  4  labu  berbeda  yang  berukuran  10  mL,  kemudian dilakukan  penambahan  larutan  ninhidrin  dengan  variasi  volume  yaitu  0,5;  1;  2  dan  3 mL. Pereaksi ninhidrin 0,084 M dibuat dengan melarutkan 0,375 gram ninhidrin dalam 5 mL larutan asam asetat glasial, kemudian ditambahkan etanol 95% hingga volume 25 mL.  Larutan  ninhidrin  tersebut  dikocok  sampai  homogen.  Larutan  blangko  dibuat dengan cara mereaksikan sebanyak 2 mL larutan ninhidrin dan 1 mL larutan buffer pH 3,5 ke dalam labu 10 mL. Kemudian, kelima larutan tersebut dipanaskan dalam water bath  selama  5  menit.  Setelah  pemanasan  selama  5  menit,  ditambahkan  etanol  96% hingga volume 10 mL. Selanjutnya, larutan tersebut didiamkan selama 330 menit dan dilanjutkan dengan penentuan absorbansi  larutan menggunakan spektrofotometer UV- Visible pada panjang gelombang 570 nm.
c. enentuan kurva standar
Larutan  standar  aspartam  dengan  konsentrasi  0,013;  0,015;  0,017;  dan  0,019  M diambil  masing-masing  1  mL  dan  dimasukkan  ke  dalam  labu  10  mL,  kemudian ditambahkan dengan 1 mL buffer asetat pH 5 dan direaksikan dengan 2 mL ninhidrin. Selanjutnya,  larutan  tersebut  dipanaskan  dalam  water  bath  selama  5  menit.  Setelah pemanasan  selama  5  menit,  ditambahkan  etanol  96%  pada  larutan  tersebut  hingga volume  10  mL.  Larutan  tersebut  didiamkan  selama  330  menit  dan  dilanjutkan  dengan penentuan absorbansi larutan menggunakan spektrofotometer UV-Visible pada panjang gelombang 570 nm.
d. Penentuan kandungan aspartam dalam sampel minuman energi
Dalam  penentuan  kandungan  aspartam  digunakan  sampel  minuman  energi  padat dan  cair.  Untuk  analisis  sampel  padat  dilakukan  dengan  mereaksikan  1  gram  sampel serbuk  yang  dilarutkan  dalam  4  mL  akuades,  kemudian  ditambahkan  etanol  96% hingga volume 10 mL. Dari larutan tersebut diambil 1 mL untuk ditambahkan dengan 1 mL  buffer  asetat  pH  5  dan  direaksikan  dengan  2  mL  ninhidrin.  Selanjutnya,  larutan
tersebut  dipanaskan  dalam  water  bath  selama  5  menit.  Setelah  pemanasan  selama  5 menit,  ditambahkan  etanol  96%  hingga  volume  10  mL.  Larutan  tersebut  didiamkan selama 330 menit dan dilanjutkan dengan penentuan absorbansi larutan menggunakan spektrofotometer UV-Visible pada panjang gelombang 570 nm.
Untuk analisis sampel cair dilakukan dengan mereaksikan sebanyak 1 mL sampel dengan 4 mL akuades, kemudian ditambahkan etanol 96% hingga volume 10 mL. Dari larutan tersebut diambil 1 mL untuk ditambahkan dengan 1 mL buffer asetat pH 5 dan direaksikan  dengan  2  mL  ninhidrin.  Selanjutnya,  larutan  tersebut  dipanaskan  dalam water  bath  selama  5  menit.  Setelah  pemanasan  selama  5  menit,  ditambahkan  etanol 96%  hingga  volume  10  mL.  Larutan  tersebut  didiamkan  selama  330  menit  dan dilanjutkan dengan penentuan absorbansi  larutan menggunakan spektrofotometer UV- Visible pada panjang gelombang 570 nm.
Untuk  mengetahui  konsentrasi  aspartam  dalam  sampel,  digunakan  metode  kurva standar  dimana  terdapat  hubungan  antara  absorbansi  dengan  konsentrasi  aspartam standar. Selanjutnya, absorbansi sampel yang terukur diintrapolasikan ke kurva standar menggunakan program regresi linear.

## Hasil dan Pembahasan
1. Analisis  Aspartam  dengan  Ninhidrin  dengan  Metode  Spektrofotometri  UV- Visible
Analisis  aspartam  dilakukan  dengan  cara  mereaksikan  aspartam  yang  dilarutkan dalam  campuran  etanol  dan  air,  dengan  ninhidrin  pada  pH  5,  kemudian  dipanaskan pada suhu sekitar 85 °C selama 5 menit. Campuran tersebut didiamkan selama 5,5 jam sehingga terbentuk senyawa kompleks berwarna ungu.

## Gambar 1

## Larutan berwarna hasil reaksi aspartam dan ninhidrin
Senyawa  kompleks  yang  terbentuk  diukur  absorbansinya  dengan  menggunakan spektrofotometer  UV-Visibel  pada  panjang  gelombang  dari  300  sampai  600  nm.  Pada penentuan  ini  dilakukan  pengulangan  pengukuran  sebanyak  tiga  kali.  Dalam  proses
pelarutan  aspartam  digunakan  etanol.  Hal  ini  dimaksudkan  untuk  meningkatkan kelarutan  aspartam  dalam  air,  karena  aspartam  hanya  larut  sebagian  dalam  air. Pengompleksan dilakukan pada pH 5, karena aspartam stabil pada pH 4-5. Pemanasan dimaksudkan  untuk  mempercepat  reaksi  antara  aspartam  dengan  ninhidrin  sehingga terbentuk  kompleks  berwarna  ungu.  Pemanasan  tidak  dilakukan  secara  langsung melainkan menggunakan penangas air karena aspartam mudah terurai pada suhu tinggi. Pemanasan dilakukan selama 5 menit karena jika terlalu lama senyawa kompleks yang terbentuk  dapat  mengalami  kerusakan.  Senyawa  kompleks  yang  terbentuk  kemudian dianalisis  dengan  menggunakan  spektrofotometer  UV-Visibel.  Dalam  kajian  ini  telah dilakukan  optimasi  panjang  gelombang  serapan  maksimum,  konsentrasi  ninhidrin,  dan penentuan kandungan pada minuman energi.

## 2. Penentuan panjang gelombang serapan maksimum
Dalam  penentuan  panjang  gelombang  serapan  maksimum  diukur  absorbansi pada  berbagai  panjang  gelombang,  sehingga  diperoleh  absorbansi  tertinggi,  yang merupakan  panjang  gelombang  yang  paling  optimal.  Untuk  itu,  telah  dilakukan pengukuran  absorbansi  pada  berbagai  panjang  gelombang  untuk  mendeteksi  panjang gelombang maksimum dan hasil pengukuran tersebut disajikan dalam Gambar 2.

## Gambar 2

## Spektra absorpsi senyawa hasil reaksi aspartam-ninhidrin
Dari  Gambar  5.2  dapat  diketahui  bahwa  larutan  dari  senyawa  hasil  reaksi aspartam  dengan  ninhidrin  memberikan  puncak  serapan  pada  2  panjang  gelombang yaitu  406  nm  dan  570  nm.  Absorbansi  warna  ungu  secara  umum  muncul  di  daerah panjang gelombang 500-600 nm (Meyer, 1957). Jadi, serapan di daerah 406 nm bukan merupakan  serapan  dari  senyawa  kompleks  aspartam  dengan  ninhidrin  yang  berwarna ungu, melainkan berasal dari aspartam atau ninhidrin yang ada di dalam larutan. Untuk membuktikan  hal  tersebut,  telah  dilakukan  pengukuran  absorbansi  terhadap  larutan aspartam  dan  ninhidrin  pada  panjang  gelombang  350-600  nm  dan  hasil  pengukuran tersebut disajikan dalam Gambar 3.

## Gambar 3
0 0,2 0,4 0,6 0,8 350 400 450 500 550 600 Abso rb an si Panjang Gelombang (nm)

## Spektra absorbansi aspartam dan ninhidrin
Gambar  3  menunjukkan  bahwa  larutan  ninhidrin  memberikan  absorbansi  yang maksimum  pada  panjang  gelombang  406  nm,  sedangkan  aspartam  tidak  memberikan absorbansi  pada  panjang  gelombang  350-600  nm.  Jadi,  dapat  disimpulkan  bahwa serapan  pada  panjang  gelombang  406  nm  adalah  serapan  dari  senyawa  ninhidrin. Dengan  demikian,  puncak  serapan  yang  muncul  pada  panjang  gelombang  570  nm merupakan serapan dari senyawa hasil reaksi antara aspartam dengan ninhidrin. Serapan pada panjang gelombang 570 nm menggambarkan terjadinya perpindahan elektron n → π*  akibat  adanya  gugus  C=O  dan  –N=  (Pecsok,  1968).  Kedua  gugus  tersebut merupakan  gugus  fungsi  yang  ada  di  dalam  senyawa  hasil  aspartam-ninhidrin,  seperti yang ditunjukkan pada Gambar 4.

## Gambar 4 Senyawa hasil reaksi aspartam-ninhidrin

## 3. Optimasi jumlah mol ninhidrin
Pada penelitian ini telah dilakukan kajian pengaruh jumlah mol ninhidrin terhadap pembentukkan  senyawa  kompleks  aspartam  dengan  ninhidrin.  Aspartam  0,023  mol/L dalam  larutan  direaksikan  dengan  ninhidrin  0,084  mol/L  yang  volumenya  bervariasi yaitu 0,5; 1; 2; 3 mL. Setiap variasi volume tersebut memberikan jumlah mol ninhidrin sebesar  0,042;  0,084;  0,168;  0,252  mmol.  Hasil  pengukuran  absorbansi  senyawa
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 350 400 450 500 550 A bs or ban si Panjang Gelombang (nm) ninhidrin aspartam
kompleks  dari  hasil  reaksi  aspartam  dengan  ninhidrin  dengan  jumlah  mol  yang bervariasi ditampilkan pada gambar 5.

## Gambar 5
Pengaruh jumlah mol ninhidrin terhadap absorbansi larutan aspartam-ninhidrin
Gambar  5.5  memperlihatkan  adanya  kenaikan  absorbansi  seiring  bertambahnya jumlah mol ninhidrin dalam larutan, kemudian terlihat absorbansi tetap. Namun dengan jumlah  mol  ninhidrin  yang  lebih  besar  terjadi  kenaikan  absorbansi.  Pada  penggunaan ninhidrin  dengan  konsentrasi  0,042  mmol  dihasilkan  absorbansi  yang  relatif  rendah, yang menunjukkan jumlah kompleks yang terbentuk masih sedikit. Karena jumlah mol ninhidrin  ini  masih  lebih  sedikit  daripada  yang  diperlukan  oleh  aspartam.  Dengan jumlah mol ninhidrin yang lebih besar yaitu 0,084 - 0,168 mmol, absorbansi meningkat tetapi  relatif  tetap.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  aspartam  telah  habis  bereaksi  dengan ninhidrin.  Pada  jumlah  mol  yang  lebih  besar,  tidak  terjadi  pembentukan  senyawa kompleks  aspartam  dengan  ninhidrin  lagi.  Namun  penambahan  ninhidrin  ini memberikan  peningkatan  absorbansi.  Peningkatan  absorbansi  tersebut  bukan  dari senyawa kompleks namun dari reagen ninhidrin sisa yang juga berwarna ungu, sehingga menaikkan nilai absorbansi.
Hasil  reaksi  antara  aspartam  dengan  ninhidrin  juga  dapat  dilihat  berdasarkan perubahan  intensitas  warna  ungu  dalam  larutan  yang  ditunjukkan  oleh  Gambar  5.6. Pada Gambar 6 terlihat terjadinya kenaikan intensitas warna ungu dengan penambahan volume  ninhidrin  dari  0,5  mL  sampai  pada  volume  3  mL.  Pemekatan  warna  larutan tersebut menunjukkan semakin banyaknya senyawa kompleks yang terbentuk di dalam larutan.

## Gambar 6
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 0,042 0,084 0,168 0,252 Abso rb an si Jumlah mol ninhidrin (mmol)
Perubahan intensitas warna larutan dalam volume ninhidrin yang bervariasi
Berdasarkan  ulasan  yang  telah  dikemukakan,  dapat  diketahui  bahwa  reaksi kolorimetri  antara  aspartam  dengan  ninhidrin  berlangsung  efektif  ketika  menggunakan ninhidrin dengan jumlah mol 0,168 mmol dan volume sebesar 2 mL. Perbandingan mol ninhidrin dengan aspartam yaitu 2:1, sesuai dengan reaksi pada Gambar 7.
Reaksi  pembentukan  senyawa  kompleks  antara  aspartam  dengan  ninhidrin ditunjukkan pada Gambar 7.
Gambar 7 Reaksi aspartam dengan ninhidrin 0,5 mL 1 mL
2 mL 3 mL
Gambar  7  menunjukkan  bahwa  pada  reaksi  (1),  ninhidrin  berikatan  dengan aspartam  disertai  dengan  pelepasan  H2O  untuk  membentuk  senyawa  intermediet karbinolamina.  Selanjutnya  terjadi  pelapasan  molekul  H2O  pada  senyawa karbinolamina (2) dan menghasilkan basa Schiff. Reaksi berlanjut hingga menghasilkan
senyawa 2-amino-indanadion  oleh kehadiran H2O. Senyawa 2-amino-indanadion  yang terbentuk  bereaksi  dengan  ninhidrin  sehingga  menghasilkan  senyawa  kompleks berwarna ungu.

## 4. Validasi Metode Analisis
Validasi terhadap metode juga telah dilakukan pada penelitian analisis aspartam dengan  metode  spektrofotometri  UV-Visibel  serta  menggunakan  pereaksi  ninhidrin. Validasi metode ini dilakukan dengan tujuan untuk memastikan bahwa prosedur analisis memberikan  hasil  analisis  yang  dapat  diterima,  sehingga  prosedur  analisis  ini  dapat diaplikasikan dan memberikan hasil yang akurat. Parameter yang divalidasi antara lain: sensitivitas,  linearitas,  presisi,  limit  kuantifikasi  (LOQ)  dan  limit  deteksi  (LOD). Parameter  analisis  diperoleh  dari  hasil  perhitungan  secara  statistik  menggunakan Ms.Excel  dari  data  kurva  larutan  standar  yang  ditunjukkan  pada  Gambar  8  dan  data hasil perhitungan disajikan dalam Tabel 1.

## Gambar 8
Kurva kalibrasi larutan standar aspartam

## Tabel 1
Data hasil analisis aspartam-ninhidrin
Persamaan garis kurva standar          y = 20,3390x – 0,0041 Slope (b)                                            20,339 Intersep                                              0,0041 R 2 0,9965 Koefisien korelasi ( √𝑅 2 )                   0,9982 Standar deviasi regresi (Sr)               0,0104 Standar deviasi slope (Sb)                 0,6942
Banyaknya data (n)                            5 Banyaknya pengulangan (m)             3
y = 20,3390x - 0,0041 R² = 0,9965 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45 0 0,005 0,01 0,015 0,02 Konsentrasi (M) A bsorba nsi

## 5. Sensitivitas
Sensitivitas metode analisis dapat ditunjukkan dengan dua cara, yaitu sensitivitas kalibrasi  dan  sensitivitas  analitik.  Sensitivitas  kalibrasi  (SENScal)  memperlihatkan adanya  hubungan  antara  sinyal  yang  dimunculkan  instrumen  dengan  besarnya konsentrasi  pada  analit.  Sensitivitas  analisis  (SENSanal)  memperlihatkan  besarnya konsentrasi terendah yang dapat membedakan metode analisis yang satu dengan metode analisis lainnya. Nilai sensitivitas dapat dinyatakan dengan.
SENS cal = b unit absorbansi
mmol/L
SENS anal = 𝑆𝑟 𝑏
b merupakan  slope  dan  Sr  merupakan  standar  deviasi  regresi.  Berdasarkan  data  dan hasil perhitungan, diperoleh sensitivitas kalibrasi sebesar 20,34 (unit absorbansi)/(mmol/L).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  setiap  kenaikan  1  mmol/L konsentrasi aspartam dapat memberikan kenaikan sinyal absorbansi sebesar 20,34 unit.
Hasil perhitungan sensitivitas analisis memberikan nilai sebesar 0,511 mmol/L, yang  menunjukkan  bahwa  metode  analisis  dapat  memberikan  perbedaan  pada perubahan konsentrasi aspartam sebesar 0,511 mmol/L.

## 6. Presisi
Presisi  mengukur  ketidakpastian  dari  suatu  hasil  analisis.  Presisi  menunjukkan persebaran  data  dari  hasil  analisis  ketika  dilakukan  pengulangan  dalam  pengukuran. Metode yang digunakan dalam analisis memiliki presisi yang baik apabila semakin kecil persebaran  data  yang  dihasilkan.  Uji  presisi  dilakukan  dengan  tujuan  untuk  melihat sejauh  mana  kedekatan  yang  terjadi  antara  hasil  uji  secara  berulang.  Metode pengulangan  dilakukan  dalam  tahap  pengujian,  sehingga  dapat  diperoleh  hasil  yang tepat serta memberikan respon baik terhadap analit yang terdeteksi (Miller, 2010). Nilai presisi digambarkan dengan simbol Sc. Nilai Sc diperoleh dari data kalibrasi.
Sc = √( 𝑆𝑟 𝑏 ) 2 ( 1 𝑛 + 1 𝑚 ) + ( 𝑆𝑏 𝑏 ) 2 (𝐶 − 𝐶 − ).
n adalah  jumlah  data, m jumlah  replikasi, C konsentrasi  aspartam,  C┴-  konsentrasi aspartam rata-rata, dan Sb adalah standar deviasi slope. Nilai presisi diperlihatkan pada Tabel 2.

## Tabel 2 Data statistik uji presisi
Konsentrasi Absorbansi Sc 0 0 - 0,013 0,247 0,000612 0,015 0,303 0,001647 0,017 0,338 0,002248
0,019 0,393 0,002718
Tabel  2  memberikan  nilai  presisi  yang  mendekati  nol.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  persebaran  data  hasil  analisis  relatif  sangat  kecil,  sehingga  apabila  dilakukan beberapa kali pengukuran pada konsentrasi aspartam yang sama memberikan nilai yang relatif sama. Jadi, dapat disimpulkan bahwa metode ini memiliki presisi yang tinggi.

## 7. Linearitas
Pengujian  linearitas  dilakukan  untuk  mengetahui  hubungan  linear  antara absorbansi  dengan  konsentrasi  aspartam  dalam  metode  yang  digunakan.  Linearitas memperlihatkan  bahwa  metode  analisis  aspartam  mampu  untuk  memberikan  sebuah respon  yang  proporsional  dengan  nilai  konsentrasi  aspartam.  Hasil  uji  linearitas  dapat diperoleh dari persamaan berikut ini.

## LIN (%) = 100 (1 - Sb b )
Sb  merupakan  standar  deviasi  slope  dan  b  adalah  slope.  Dalam  uji  linearitas, apabila nilai linearitas semakin mendekati 100%, maka data tersebut memiliki linearitas yang  baik.  Dari  hasil  perhitungan,  diperoleh  LIN  (%)  sebesar  96,58%  untuk  setiap kenaikan  konsentrasi  aspartam  dari  konsentrasi  0  sampai  0,019  mol/L.  Nilai  linearitas tersebut  menunjukkan  bahwa  metode  ini  memberikan  korelasi  yang  linear  dari konsentrasi 0,013 sampai 0,019 mol/L.

## 8. Limit Deteksi
Limit deteksi  (LOD) merupakan jumlah terkecil  dari analit dalam sampel  yang dapat dideteksi dan masih memberikan respon signifikan dibandingkan dengan blangko. Limit deteksi dapat dihitung dengan cara sebagai berikut
LOD = 3 · Sco ( 𝑚𝑜𝑙 𝐿 )
Dimana Sco merupakan nilai presisi (Sc) terendah dalam analisis yaitu 0,000612. Dari  hasil  perhitungan,  diperoleh  nilai  LOD  sebesar  0,001831  mol/L.  Hal  ini menunjukkan bahwa besarnya konsentrasi terendah dari aspartam yang dapat terdeteksi yaitu  sebesar  0,001831  mol/L.  Untuk  sampel  dengan  kandungan  aspartam  yang  lebih rendah dari LOD maka tidak dapat terdeteksi melalui metode ini.

## 9. Limit Kuantifikasi
Limit kuantifikasi (LOQ) merupakan nilai konsentrasi terkecil dari sebuah analit secara  kuantitatif  dengan  menggunakan  metode  analisis.  LOQ  dapat  dihitung  dengan cara sebagai berikut.

## LOQ = 10 · Sco ( 𝑚𝑜𝑙 𝐿 )
Jika  nilai  LOQ  lebih  kecil  dari  konsentrasi  analit  yang  digunakan,  maka konsentrasi analit dapat dinyatakan secara kuantitatif. Dari hasil perhitungan, diperoleh nilai  LOQ  sebesar  0,006104  mol/L.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  konsentrasi  dari
masing-masing  aspartam  yang  digunakan  yaitu  0,013;  0,015;  0,017;  dan  0,019  mol/L dapat dinyatakan secara kuantitatif.

## 10. Penentuan Konsentrasi Aspartam dalam Sampel Minuman Energi
Prosedur  analisis  aspartam  yang  telah  dioptimasi  dan  divalidasi,  kemudian diaplikasikan  pada  sampel  minuman  energi  yang  beredar  di  pasaran,  baik  minuman serbuk  maupun  cair.  Berdasarkan  hasil  uji  warna,  diketahui  bahwa  hasil  uji  sampel serbuk  dan  cair  memberikan  warna  ungu,  yang  menunjukkan  bahwa  sampel  minuman yang dianalisis mengandung aspartam. Hasil uji warna sampel disajikan pada Gambar 9 dan 10.

## Gambar 9 Hasil uji warna sampel serbuk
Gambar 10 Hasil uji warna sampel cair
Larutan  yang  berwarna  tersebut  memberikan  absorbansi  seperti  yang  disajikan  pada Tabel 3.

## Tabel 3
Data absorbansi sampel Pengulangan ke - Absorbansi sampel serbuk Absorbansi sampel cair 1 0,4235 0,2998 2 0,4217 0,2976 3 0,4211 0,2984 Rata-rata 0,4221 0,2986
Penentuan kandungan aspartam dalam sampel minuman energi, dilakukan dengan menggunakan  metode  kurva  standar  yang  merupakan  hubungan  antara  absorbansi (sampel) dengan konsentrasi larutan aspartam standar. Konsentrasi larutan standar yang digunakan adalah sebesar 0; 0,013; 0,015; 0,017; dan 0,019 mol/L. Kurva standar yang diperoleh ditunjukkan oleh Gambar 11.

## Gambar 11

## Kurva standar aspartam
Absorbansi  sampel  yang  terukur  selanjutnya  diintrapolasikan  ke  kurva  standar menggunakan  program  regresi  linear.  Nilai  absorbansi  sampel  diplotkan  dalam  kurva standar dan memberikan informasi kandungan aspartam dalam minuman energi sebesar 618,051 mg/g sampel untuk sampel serbuk dan 11,69 mg/mL sampel untuk sampel cair. Dari  data  ini  dapat  disimpulkan  bahwa  konsentrasi  aspartam  dalam  sampel  minuman energi relatif tinggi. Sampel ini dapat menimbulkan efek negatif jika dikonsumsi rutin,
y = 20,3390x - 0,0041 R² = 0,9965 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45 0 0,005 0,01 0,015 0,02 Konsentrasi (M) Abso rb an si
karena  aspartam  yang  dikonsumsi  dapat  terakumulasi  dalam  tubuh  dan  dapat menimbulkan  berbagai  penyakit.  Penyakit  yang  ditimbulkan  antara  lain,  mengganggu sistem saraf, menyebabkan kanker, dan dapat mengganggu fungsi kerja beberapa enzim.
Dalam  sampel  yang  dianalisis  tertera  kandungan  zat-zat  lain  seperti  sukralosa, sorbitol,  maltodekstrin  dan  sukrosa.  Struktur  keempat  zat  tersebut  diperlihatkan  dalam tabel 4.

## Tabel 4

## Komposisi sampel dan struktur kimianya
Komposisi sampel Struktur kimia Sukralosa Sorbitol Maltodekstrin
Sukrosa
Dalam  Tabel  4  terlihat  keempat  bahan  tersebut  tidak  memiliki  gugus  alfa  amino bebas, sehingga tidak bereaksi dengan ninhidrin membentuk senyawa kompleks. Untuk
lebih  memastikan,  keempat  bahan  tersebut  diuji  dengan  menggunakan  pereaksi ninhidrin. Hasil reaksi menunjukkan tidak terbentuk larutan berwarna ungu, yang berarti tidak  terbentuk  senyawa  kompleks  dengan  ninhidrin.  Dengan  demikian,  dapat disimpulkan  bahwa  adanya  bahan-bahan  tersebut  dalam  produk  minuman  energi  tidak mengganggu analisis aspartam  secara spektrofotometri UV-Vis menggunakan pereaksi ninhidrin.

## Kesimpulan
1. Senyawa  kompleks  hasil  reaksi  antara  aspartam  dengan  ninhidrin  mempunyai absorbansi maksimum pada panjang gelombang 570 nm.
2. Dalam  analisis  aspartam,  semakin  besar  jumlah mol  ninhidrin,  senyawa  kompleks yang  terbentuk  semakin  banyak  dan  jumlah  mol  ninhidrin  yang  efektif  dapat dibereaksi maksimal dengan aspartam sebesar 0,168 mmol.
3. Korelasi yang linear ditunjukkan antara absorbansi dan konsentrasi dari konsentrasi 0 sampai 0,019 mol/L, dan  metode ini  memiliki  nilai  sensitivitas  dan presisi  yang cukup tinggi.
4. Hasil  kandungan  aspartam  dalam  minuman  energi  sebesar  618,05  mg/g  untuk sampel serbuk dan 11,69 mg/mL untuk sampel cair.
5. Adanya  pemanis  lain  seperti  sukralosa,  sorbitol,  maltodekstrin,  sukrosa  dalam produk  minuman  energi  tidak  menimbulkan  gangguan  dalam  analisis  aspartam secara spektrofotometri menggunakan pereaksi ninhidrin.

## Bibliografi
Briawan,  Dodik,  &  Aries,  M.  (2011).  Konsumsi  minuman  dan  preferensinya  pada remaja di Jakarta dan Bandung. Gizi Indonesia , 34 (1).
Cahyadi, Ir Wisnu. (2023). Analisis & aspek kesehatan bahan tambahan pangan . Bumi Aksara.
Erni Sumartini, Imas. (2015). Studi Paparan Pemanis Buatan Aspartam Padaminuman Ringan  Pada  Minuman  Yang  Dikonsumsi  Siswa/i  SMP  Negeri  1  Cimaung Kabupaten Bandung Dengan Menggunakan Metode Food Frequency
Questionnaire . Falkultas MIPA Universitas Islam Bandung (UNISBA).
Irawan, Eka Deddy. (2006). Studi In Vitrohubungan Logaritma Koefisien Partisi dengan Ikatan  Protein  Plasma  Dariantidiabet  Turunan  Sulfonil  Urea  sebagai  Bahan Pembelajaran  Mata  Kuliah  Farmasifisik. Jurnal  Pengembangan  Pendidikan , 3 (1), 210209.
Kodrat,  David  Sukardi.  (2021). Strategi  Mendominasi  Benak  Konsumen  Dan  Pasar Melalui Stv (Strategi-Taktik-Value) Triangle (Studi Pada Industri Minuman Energi Di Indonesia) .
La  Kariadin,  Penulis,  Yuniarty,  Tuty,  &  Fauzi,  Ahmad  Zil.  (2020). Studi  Literatur Analisis Kadar Aspartam Pada Jajanan Minuman . Poltekkes Kemenkes Kendari.
LO,  Anastasia  Giovanna  Redenta  Tangano.  (2023). Review  Penggunaan  Siklamat Dalam Produk Minuman Dan Analisis Paparannya .
Mayasari, Andhika, Af’idah, Noer, & Manasikana, Oktaffi Arinna. (2021). Edu Krisza (Kriteria  Jajanan  Sehat  Bebas  Zat  Aditif)  Kuliner  Lokal  Kue  Banjar. Abidumasy Jurnal Pengabdian Kepada Masyarakat , 2 (1), 40–46. Https://Doi.Org/10.33752/Abidumasy.V2i1.1324
Praja,  Denny  Indra.  (2015). Zat  Aditif  Makanan:  Manfaat  dan  Bahayanya . Garudhawaca.
Purba, Septiana M. (2018). Efek Pemberian Minuman Energi Yang Mengandung Kafein Dan  Taurin  Terhadap  Daya  Tahan  Dan  Kadar  Asam  Laktat  Saat  Melakukan Aktifitas Fisik Pada Mahasiswa Ilmu Keolahragaan Stambuk 2016 . Unimed.
Sulfiana, Sri, Fauzi, Ahmad Zil, & Orno, Theosobia Grace. (2022). Identifikasi Pemanis Buatan  Natrium  Siklamat  Pada  Minuman  Thai  Tea  Yang  Dijual  Di  Kecamatan Kambu Kota Kendari Sulawesi Tenggara . Poltekkes Kemenkes Kendari.
Thohir,  Muhammad  Bakhru.  (2015). Pembuatan  sensor  kimia  sederhana  untuk mendeteksi  aspartam  pada  minuman  kemasan  dengan  Reagen  Ninhidrin . Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim.