## ANTIBACTERIAL ACTIVITIES TEST OF EXTRACT AND FRACTIONS SPONS OF SPONGE
Leucetta chagosensis FROM MANTEHAGE ISLANDS WATERS, NORTH SULAWESI AGAINTS

## THE GROWTH OF Staphylococcus aureus AND Escherichia coli BACTERIA
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI  EKSTRAK DAN FRAKSI SPONS Leucetta chagosensis DARI PERAIRAN PULAU MANTEHAGE SULAWESI UTARA
TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI Staphylococcus aureus DAN Escherichia coli
Eunike Pelealu 1)* , Defny Wewengkang 1) , Surya Sumantri 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115 *eunikepelealuyh@gmail.com

## ABSTRACT
Sponges are one of the biota components that make up coral reefs which are quite widely distributed. The metabolite content in the sponge can ward off and inhibit the  pathogenic bacteria that interfere with it. This study aims to determine the activity of inhibiting bacterial growth from the extract and fraction of Leucetta  chagosensis  sponge  against  the  growth  of  Gram-positive  Staphylococcus  aureus  and  Gram- negative  Escherichia  coli bacteria.  The  samples  were  extracted  using the  maceration  method  with 95% ethanol solvent and then fractionated using 3 solvents with different polarity levels, namely methanol, n- hexane and chloroform. Activity test using the disk diffusion agar method of Kirby and Bauer. Only the MeOH fraction was able to inhibit the growth of E. coli bacteria with an average inhibition zone of 6.88 mm. Whereas for S.aureus bacteria extracts and all fractions showed activity to inhibit bacterial growth with an average inhibition zone of EtOH (6.61 mm), CHCI 3 (6.68 mm), n-hexane (7.83 mm) and MeOH (8.00 mm), respectively. All activities that are shown are categorized as weak (weak).
Keywords: Antibacterial, Leucetta chagosensis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli

## ABSTRAK
Spons merupakan salah satu komponen biota penyusun terumbu karang yang penyebarannya cukup luas. Kandungan  metabolit  yang  ada  di  dalam  spons  dapat  menangkal  dan  menghambat  bakteri  patogen pengganggunya.  Penelitian ini bertujuan untuk melihat aktivitas menghambat pertumbuhan bakteri dari ekstrak  dan  fraksi  spons Leucetta  chagosensis .  terhadap  pertumbuhan  bakteri  Gram  positif Staphylococcus  aureus dan  Gram  negatif Escherichia  coli .  Sampel  di  ekstraksi  menggunakan  metode maserasi  dengan  pelarut  etanol  95%  lalu  di  fraksinasi  dengan  menggunakan  3  pelarut  dengan  tingkat kepolaran yang berbeda yaitu metanol, n-heksan dan kloroform. Uji aktivitas menggunakan metode disk diffusion  agar Kirby  dan  Bauer.    Hanya  fraksi  MeOH  yang  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri E.coli dengan  zona  hambat  rata-rata  6,88  mm.  Sedangkan  terhadap  bakteri S.aureus ekstrak  dan semua fraksi  menunjukan  aktifitas  menghambat  pertumbuhan  bakteri  dengan  rata-rata  zona  hambat  masing- masing  EtOH  (6,61  mm),  CHCl 3 (6,68  mm),  n-Heksan  (7,83  mm),  dan  MeOH  (8,00  mm).  Semua aktivitas yang ditunjukan dikategorikan lemah (weak).
Kata kunci : Antibakteri, Leucetta chagosensis, Staphylococcus aureus,  Escherichia coli

## PENDAHULUAN
Menurut  Arini  (2017)  Indonesia  adalah negara kepulauan dengan dua pertiga wilayahnya  adalah  lautan.    Indonesia  diberikan gelar  sebagai  negara  bahari,  dengan  posisinya yang  strategis  yaitu  wilayah  tropis  menjadikan Indonesia  dikenal  dengan    negara  yang  kaya akan keragaman hayati.
Berbagai penelitian  yang  dilakukan  oleh Ismet  (2017),  menunjukan  bahwa  biota  laut memiliki  potensi  yang  sangat  besar  dalam menghasilkan  senyawa-senyawa  aktif  yang dapat digunakan sebagai bahan baku obat. Sejak tahun  1980-an,  perhatian  dunia  pengobatan mulai terarah ke biota laut yang diketahui dapat menghasilkan senyawa aktif.
Sumber  alternatif  dalam  penemuan antibiotika  yaitu  bahan  alam  baik  dari  tanaman maupun  biota  laut. Indonesia  mempunyai sumber  daya  alam  bahari  yang  besar.  Terdapat beraneka  ragam  sumberdaya  alam  hayati  laut yang  meliputi  300  jenis  karang,  lebih  dari  200 jenis ikan serta beberapa jenis spons (Mokodompit dkk., 2015).
Spons  merupakan  salah  satu  komponen biota penyusun terumbu karang yang penyebarannya  cukup  luas.  Terdapat  15.000 spesies  spons  di  seluruh  dunia  dan  sekitar  45% senyawa bioaktif ditemukan pada spons (Denning, 2006).
Kandungan metabolit yang ada di dalam spons dapat menangkal dan menghambat bakteri patogen pengganggunya. Hal ini membuat spons menjadi  salah  satu  hewan  laut  yang  menarik untuk  diteliti  karena  berpotensi  besar  untuk dikembangkan  dalam  bidang  pengobatan  yaitu sebagai  antibakteri  (Abubakar et  al., 2006; Suparno, 2005). Antibakteri merupakan zat yang menghambat pertumbuhan bakteri dan digunakan  secara  khusus  untuk  mengobati infeksi.  Mekanisme  kerja  antibakteri  dapat terjadi  melalui  beberapa  cara  yaitu  kerusakan pada  dinding  sel,  perubahan  permeabilitas  sel, dan  menghambat  sintesis  protein  dan  asam nukleat.  Terdapat  beberapa  faktor  dan  keadaan yang  dapat  mempengaruhi  kerja  antibakteri, antara  lain  konsentrasi  antibakteri,  jumlah bakteri,  spesies  bakteri,  adanya  bahan  organik, suhu, dan pH lingkungan (Fajrina, dkk 2008).

## METODOLOGI PENELITIAN Tempat dan Waktu Penelitian
Pengambilan sampel dilakukan di Perairan  Pulau  Mantehage  Sulawesi  Utara. Sedangkan  untuk  pengamatan  dan  analisis  data penelitian  ini  akan  dilakukan  di  Penelitian Farmasi  Program  Studi  Farmasi  Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, dan di Laboratorium  Hama  dan  Penyakit  Tumbuhan Fakultas  Pertanian  Universitas  Sam  Ratulangi pada bulan Oktober 2020 – Maret 2021.

## Bentuk Penelitian
Bentuk  penelitian  yaitu  eksperimen laboratorium dengan rancangan penelitian dimana  sampel  spons Leucetta  chagosensis disiapkan  dan  diekstraksi  dengan  metode maserasi menggunakan pelarut etanol kemudian akan dilanjutkan dengan uji aktivitas antibakteri

## Alat Dan Bahan Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini yaitu masker, sarung tangan, gunting, tabung oksigen, snorkel, fins, zipper lock bag, botol 600 ml,  talenan,  cool  box,  pisau,  Erlenmeyer (Pyrex),  corong,  rotary  evaporator,  timbangan analitik,  corong  pisah,  gelas  ukur,  gelas  kimia (Pyrex), cawan petri, autoklaf, pinset, pembakar spritus, magnetic stirrer, pipet tetes, micro tubes, hot  plate,  batang  pengaduk,  Laminar  air  flow, rak  tabung  reaksi,  tabung  reaksi,  lemari pendingin,  inkubator,  cakram  (paper  disc), mikropipet,  mistar  berskala,  kertas  label,  spidol permanen.

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu spons Leucetta chagosensis bakteri uji Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli etanol,  akuades,  metanol,  n-heksan,  kloroform, pepton,  natrium  klorida,  media  agar  B1  (beef extract),  agar,  kloramfenikol,  paper  disc,  tissue, aluminium foil, kertas saring

## Pengambilan Sampel dan Preparasi Sampel
Sampel  spons Leucetta  chagosensis diperoleh  dari  perairan  Pulau  Mantehage Sulawesi Utara. Sampel diambil dengan menggunakan  alat  bantu  (masker,  snorkel,  fins,
tabung  oksigen,  ziplok  dan  pisau),  kemudian dimasukkan  dalam  ziplok  dan  diberikan  label. Sampel yang telah didapat langsung dibersihkan dari  pengotor,  lalu  dipotong  kecil-kecil  dan langsung dimasukkan kedalam botol yang berisi pelarut  etanol  95%.  Botol  sampel  dimasukkan kedalam  kotak  dingin  (cool  box)  yang  berisi  es batu dan tidak terkena matahari secara langsung. Di Laboratorium Farmakognosi Fitokimia sampel tersebut diekstraksi menggunakan metode maserasi.
Ekstraksi dengan Metode Maserasi Sampel Sponge
L. chagosensis direndam  dengan  menggunakan  larutan  etanol 95%.  Metode  ekstraksi  dilakukan  dengan  cara merendam  sampel  dengan  pelarut  selama  3  kali 24  jam  pada  temperatur  kamar  yang  dilindungi dari  cahaya  dan  sesekali  dikocok.  Kemudian diambil  filtratnya  dan  residu  dibuang  dan menghasilkan 3 filtrat yang  kemudian dicampur menjadi  satu.  Lalu  dievaporasi  menggunakan rotary  evaporator  hingga  kering  yang  terbentuk ekstrak  kasar  selanjutnya  ditimbang  dengan timbangan  analitik.    Kemudian  ekstrak  kasar dari spons L. chagosensis difraksinasi.

## Fraksinasi Sampel
Ekstrak kasar spons L. chagosensis yang diperoleh  dimasukkan  ke  dalam  erlenmeyer, kemudian  dilarutkan  dengan  metanol  80% sebanyak 100 mL.  Setelah larut, dimasukkan ke dalam  corong  pisah  dan  ditambahkan  pelarut  n- heksan  sebanyak  100  mL  setelah  itu  dikocok dalam corong pisah sampai homogen.  Dibiarkan sampai terbentuk lapisan metanol dan lapisan n- heksan, kemudian masing-masing lapisan ditampung  dalam  wadah  yang  berbeda.  Lapisan n-heksan  kemudian  dievaporasi  menggunakan rotary  evaporator  hingga  kering,  lalu  ditimbang dan  diperoleh  fraksi  n-heksan.  Selanjutnya, lapisan  metanol  ditambahkan  akuades  sebanyak 100  mL  kemudian  dipartisi  dengan  pelarut kloroform  dengan  perbandingan  1:1  v/v  dalam corong  pisah,  setelah  itu  dikocok  kembali sampai  homogen.  Dibiarkan  sampai  tebentuk dua lapisan yaitu lapisan metanol dan kloroform, kemudian  masing-masing  lapisan  ditampung dalam  wadah  yang  berbeda.  Lapisan  kloroform selanjutnya  dievaporasi  menggunakan  rotary evaporator  hingga  kering  lalu  ditimbang  berat
sampel dan diperoleh fraksi kloroform.  Lapisan metanol  kemudian  dievaporasi  menggunakan rotary  evaporator  hingga  kering,  lalu  ditimbang dan diperoleh fraksi metanol. Ketiga fraksi yang diperoleh  akan  digunakan  dalam  pengujian antibakteri.

## Sterilisasi
Alat-alat  gelas  yang  digunakan  dalam penelitian  aktivitas  antimikroba  ini  disterilkan terlebih  dahulu  dengan  menggunakan  autoklaf pada  suhu  121  ºC  selama  15  menit,  pinset dibakar dengan pembakaran di atas api langsung dan media disterilkan di autoklaf pada suhu 121 ºC selama 15 menit (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Cair B1
Pepton  0,5  g,  ekstrak  daging  (meat  extract)  0,3 g,  natrium  klorida  0,3  g,  dan  aquades  sebanyak 100  mL  diaduk  sampai  rata  kemudian  dibuat homogen  menggunakan  magnetic  stirrer  lalu diautoklaf  pada  suhu  121  ˚C  selama  15  menit, ukur  pH  dengan  menggunakan  kertas  pH. Dipipet  1  mL  media  cair  B1,  kemudian masukkan dalam tabung reaksi dan tutup dengan alminium  foil.  Media  cair  B1  siap  digunakan sebagai media kultur bakteri (Ortez, 2005).

## Pembuatan Kontrol Negatif
Kontrol  negatif  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  menggunakan  metanol, dengan  cara  membuat  larutan  stok  metanol dengan  mengambil  sebanyak  5  mL  metanol kemudian  dimasukkan  dalam  tabung  reaksi, tutup  dengan  alminium  foil.  Kontrol  negatif digunakan  sebagai  pembanding  dan  pelarut untuk  pembuatan  larutan  kontrol  positif  dan pembuatan larutan uji.

## Pembuatan Kontrol Positif
Kontrol positif dalam pengujian antibakteri  ini  menggunakan  kloramfenikol paper  disc.    Kontrol  negatif  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  yaitu  menggunakan  pelarut metanol,  dengan  cara  membuat  larutan  stok metanol  dengan  mengambil  sebanyak  200  µL metanol  kemudian  ditotolkan  pada  kertas cakram.

## Kultur Bakteri Uji
Media  cair  B1  yang  sudah  disiapkan sebelumnya,  ditambahkan  dengan  masing-
masing bakteri yang sudah dikultur ( Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli ) dipipet sebanyak 100 µL kedalam tabung reaksi yang berbeda. Tutup dengan aluminium foil tiap tabung reaksi dan dimasukkan kedalam inkubator selama 1x24 jam pada suhu 37 ˚C.

## Pembuatan Larutan Uji
Dalam  pembuatan  larutan  uji  hasil ekstraksi dan fraksinasi spons Leucetta chagosensis. dengan  kosentrasi  250  µg/50  µL yaitu dengan membuat larutan stok, dengan cara ditimbang  0,0250  g  ekstrak  kasar  etanol, kemudian  dilarutkan  dalam  5  mL  metanol. Perlakuan  yang  sama  dilakukan  untuk  fraksi heksan, fraksi kloroform dan fraksi metanol.

## Pembuatan Media Agar B1
Pepton  0,5  g,  ekstrak  daging  (meat extract) 0,3 g, natrium klorida 0,3 g,  agar 1,5 g dan  aquades  sebanyak  100  mL  diaduk  sampai rata  kemudian  dibuat  homogen  menggunakan magnetic stirrer lalu diautoklaf pada suhu 121 ˚C selama 15 menit. Lakukan pengujian pH dengan kertas pH. Media agar B1 siap digunakan untuk uji aktivitas antibakteri.

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode  yang  akan  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  metode  difusi  agar  (disc diffusion  Kirby  and  Bauer).  Pada  pengujian aktivitas  antibakteri  ini,  cakram  (paper  disc) yang  digunakan  berukuran  6  mm  dengan  daya serap  50  µL  tiap  cakram.  Sampel  yang  telah ditentukan  kosentrasinya  (250  µg/50  µL) ditotolkan  pada  masing-masing  cakram  dengan menggunakan mikropipet. Untuk media agar B1 yang sudah diautoklaf pada suhu 121 ˚C selama 15  menit,  kemudian  dinginkan  sampai  suhu  40 ˚C.  Tuangkan  media  agar  B1  ke  cawan  petri, Ambil  sebanyak  100  µL  bakteri  yang  telah  di kultur  dalam  tabung  reaksi,  dipipet  dan diinokulasi  pada  media  agar  B1  dan  tunggu sampai  media  agar  B1  mengeras.  Masing- masing  cawan  petri  diberi  label  dan  nomor sampel  yang  sesuai.  Letakkan  kertas  cakram yang telah ditotolkan sampel uji spons Leucetta chagosensis dengan  pinset kedalam  cawan  petri lalu diinkubasi selama 1x24 jam.

## Pengamatan dan Pengukuran
Pengamatan  dapat  dilakukan  setelah 1x24 jam  masa  inkubasi. Daerah  pada sekitaran cakram menunjukkan kepekaan bakteri terhadap antibiotik atau bahan antibakteri yang digunakan sebagai  bahan  uji  yang  dinyatakan  dengan diameter  zona  hambat.  Diameter  zona  hambat diukur dalam satuan millimeter (mm) menggunakkan  mistar  berskala  dengan  cara diukur  diameter  total  zona  bening  cakram. Kemudian  diameter  zona  hambat  tersebut dikategorikan kekuatan daya antibakterinya.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi dan Fraksinasi
Proses  ekstraksi  dengan  maserasi  spons L. chagosensis , dimaksudkan untuk memisahkan atau  menyari  senyawa  aktif  yang  ada  dalam spons.    Ekstraksi  sendiri  dimaksudkan  untuk memisahkan  dua  atau  lebih  komponen  yang diinginkan  dengan  menambahkan  pelarut  untuk melarutkan komponen tersebut. (Suryanto 2012).
Dalam  proses  ekstraksi  pelarut  yang digunakan adalah Etanol.  Etanol dipilih sebagai pelarut  dalam  proses  ekstraksi,    karena mempunyai  sifat  yang  selektif,  ekonomis,  dan mampu  mengekstrak  sebagian  besar  senyawa kimia  yang  terkandung  dalam  sampel.    Pelarut etanol  juga  menyari  hampir  keseluruhan kandungan  simplisia,  baik  polar,  semi  polar, maupun  non  polar.  Setelah  diekstraksi  sampel L.chagosensis dievoporasi  dan  menghasilkan ektrak  kasar  spons L.  chagosensis sebanyak 28,85 gram (Aditya dkk., 2018).
Fraksinasi dari ekstrak spons L. chagosensis mampu  mengoptimalkan  potensi dan memperluas spektrum aktivitasnya. Pemilihan pelarut fraksi didasarkan pada tingkat kepolaran,  yaitu  pelarut  MeOH  yang  paling polar,  pelarut  kloroform  untuk  semi  polar  dan pelarut  heksan  untuk  fraksi  non  polar. Penggunaan  bermacam  pelarut  yang  memiliki tingkat kepolaran berbeda ini dimaksudkan agar senyawa  aktif  yang  ada  pada  ekstrak  etanol dapat  dikelompokkan  lagi  menjadi  lebih spesifik. (Mujipradhana, 2018).
Pada  proses  fraksinasi,  ekstrak  kasar etanol  diambil  sebanyak  5,00  gram.  Hasil randemen  ekstrak  dan  fraksi  dapat  dilihat  pada Tabel 1.
Tabel 1. Randemen Ekstrak Fraksi  Spons
Leucetta chagosensis No Sampel Berat (g) Randeme n (%) Warna 1 Ekstrak Etanol 250,0 0 11,54 Coklat kehitama n 2 Fraksi n-Heksan 0,38 7,60 Coklat bening 3 Fraksi Kloroform 0,30 6,00 Krem pekat 4 Fraksi Metanol 1,40 28,00 Orens muda
Evaporasi  sampel  menghabiskan  waktu yang  cukup  panjang,  khususnya  pada  fraksi metanol,  dimana  konsentrasi  pelarut  fraksi metanol mengandung paling banyak air.  Karena suhu  yang  digunakan  pada  proses  evaporasi hanya 40°C, menyebabkan fraksi yang mengandung  banyak  air  cukup  sulit  untuk menguap. Ketiga fraksi menunjukkan perbedaan yang  nyata,  seperti  rendemen  yang  dihasilkan oleh  fraksi  metanol  lebih  besar  dibanding dengan rendemen kloroform dan n-heksan.  Hal ini  disebabkan  oleh  karena  adanya  perbedaan kelarutan komponen dalam sampel.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  kasar, fraksi  metanol,  fraksi  heksan,  dan  fraksi kloroform spons L. chagosensis terhadap bakteri S.  aureus dan E.  coli, menggunakan  metode difusi  agar  (difusi  Kirby  dan  Bauer  yang dimodifikasi).    Metode  difusi  agar,  menjadi pilihan untuk tujuan klinis yang mempertimbangkan kesederhanaan teknik, ketelitian, metode serbaguna bagi semua bakteri patogen  yang  tumbuh  cepat  dan  sering digunakan  dalam  uji  kepekaan  antibiotik  dalam program pengendalian mutu (Mpila, 2012).
Pengujian  aktivitas  antibakteri  spons L. chagosensis diperoleh melalui pengamatan yang dilakukan  selama  1x24  jam  masa  inkubasi dengan 3 kali pengulangan untuk masing-masing bakteri.  Adanya  aktivitas  antibakteri  ditunjukan dengan  terbentuknya  zona  hambat  (daerah bening)  di  sekeliling  cakram  terhadap  bahan
antibakteri  maupun  antibiotik  yang  digunakan sebagai kontrol positif (Fridly, dkk. 2014).
Setelah dilakukan uji antibakteri ekstrak dan  fraksi  spons  Leucetta  chagosensis  terhadap bakteri Escherichia  coli dan Stapphylococcus aureus diadapati  hasil  yang  dapat  dilihat  pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil pengukuran diameter zona bening ekstrak dan fraksi Leucetta chagosensis terhadap Escherichia coli dan
Stapphylococcus aureus
EK FK
FH FM c+ c- Ec - - - 7,38 - - - 7,08 21,7 - - - - 6,18 ∑ - - - 20,64 Rata -rata - - - 6,88 Sa 6,64 6,78 7,84 8,15 6,34 6,85 8,01 8,03 18,96 - 6,86 6,41 7,65 7,82 ∑ 19,84 20,04  23.50  24,00 Rata -rata 6,61 6,68 7,83 8,00
Keterangan:
EK  : Ekstrak Etanol       FM  : Fraksi Metanol FK  : Fraksi Kloroform   C+: Control Positive FH  : Fraksi Heksan        C- : Control Negative
Gambar 1. Aktivitas antibakteri ekstrak dan fraksi kasar pada media bakteri E.coli
Gambar 2. Aktivitas antibakteri ekstrak dan fraksi kasar pada media bakteri S.aureus
Diameter yang dihasilkan, diukur menggunakan jangka sorong. Pada bakteri E.coli memperlihatkan  aktivitas/zona  hambat  (zona bening)  pada  fraksi  metanol  dengan  diameter untuk pengulangan pertama 7,38 mm, pengulangan  kedua  7.08  mm  dan  pengulangan terakhir  6.18  mm.  Dalam  pengujian  ini,  fraksi metanol adalah yang paling efektif untuk bakteri E.  coli .    Hasil  penelitian  Renhoran  (2012)  yang menyatakan,  bahwa  gram  negatif  cenderung bersifat  sensitif  terhadap  antibakteri  yang bersifat polar. Pada  bakteri S.  aureus semua fraksi memiliki aktivitas antibakteri/zona hambat  (daerah  bening)  di  sekeliling  cakram. Kelompok  bakteri  gram  positif  lebih  peka terhadap  senyawa  yang  memiliki  aktivitas antibakteri  dibanding  dengan  gram  negatif. Perbedaan  sensitifitas  bakteri  gram  positif  dan bakteri  gram  negatif  dapat  disebabkan  oleh perbedaan  struktur  dinding  sel  yang  dimiliki oleh  masing-masing  bakteri.    Dibandingkan dengan  antibiotik  pembanding  ekstrak  spons L. chagosensis ,  mempunyai  aktivitas  zona  hambat yang lebih rendah, sehingga senyawa antibakteri yang  terdapat  dalam  ekstrak  ini  digolongkan sebagai  senyawa/ekstrak  yang  bersifat  lemah ( weak )  menurut  kriteria  David  and  Stout (Aditya dkk., 2018).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan,  maka  dapat  disimpulkan  bahwa ekstrak  dan  fraksi  etanol  sponge Leucetta chagosensis memiliki  aktivitas  menghambat bakteri Escherichia  coli pada  fraksi  methanol, sedangkan  pada  bakteri Staphylococcus  aureus, semua  ekstrak  dan  fraksi  memiliki  aktivitas menghambat  bakteri.    Semua  aktivitas  yang
ditunjukan dikategorikan lemah ( weak ) menurut David and Stout.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut pada  spons L.  chagosensis tentang  uji  aktivitas antioksidan.

## DAFTAR PUSTAKA
Abubakar,  H.,  Wahyudi,  A.T.,  Yuhana,  M. 2011. Skrining Bakteri yang Berasosiasi dengan  Spons Jaspis  sp .  Sebagai Penghasil  Senyawa  Antimikroba.  Jurnal Ilmu Kelautan. 16(1): 35-40. Arini,  D.  2017. Potensi  Terumbu  Karang Indonesia; Tantangan dan Upaya Konservasinya . Info BPK Manado.
Denning,  D.  2006  . Branches  on  the  Tree  of Life: Sponges . From http://ebiomedia.com/prod/BOspo nges.html.  [diakses  pada  10  Oktober 2020]
Fajrina  H,  Djamaludin  AM,  Habibie  MS, Haratanti,  Sari  RF.  2008. Potensi Kitosan  Sebagai  Bahan  Antibakteri. Laporan Akhir  PKM,  Institut  Pertanian Bogor.
Ismet, M. S. 2017.  Penapisan Senyawa Bioaktif Spons Petrosia  sp. dari  Lokasi  yang berbeda.  [Tesis].  Institut  Pertanian Bogor, Bogor. Hal 20-21
Manawan  F  ,  Wewengkang  D,  Wehantouw  F. 2014 . Aktivitas Antibakteri Dan
Karakterisasi Senyawa Spons Haliclona sp. yang Diperoleh Dari Teluk Manado . Jurnal  Ilmiah.  PHARMACON.  Farmasi UNSRAT. 3(4) : 46-49 Mokodompit, A., Boekoesoe, L. & Mustapa, M. A.  (2015).  Uji  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Etanol  Spons  Laut (Porifera: Demospongiae) terhadap Bakteri Staphylococcusaureus dan Escherichia coli .  Laporan  penelitian;  Universitas Negeri Gorontalo, Gorontalo.
Mpila,  D.A.  2012.  Uji  aktivitas  antibakteri ekstrak  etanol  daun  mayana (Coleus atropurpureus benth) terhadap Staphylococcus  aureus,  echerichia  coli dan  pseudomonas  aeruginosa secara invitro. [Skripsi] Program Studi Farmasi
Fakultas MIPA Universitas Sam Ratulangi Manado.
Mujipradana,  V.N.,  D.  S.  Wewengkang.,E.
Suryanto.  2018.  Aktivitas  Antimikroba dari Ekstrak Ascidian Herdmania momus pada Mikroba Patogen Manusia. Pharmacon. 7(3): 338-347. Ortez,  J.  H.  2005. Disk  Diffusion  testing  in manual  of  antimicrobial  susceptibility testing.  Marie  B.  Coyle (Coord.  Ed). American society  for  Microbiology, America. Pasodung A, Losung F, Angkouw E, Lintang R, Mantiri  D,  Sumilat  D.  2018.  Uji Aktivitas  Antibakteri  Spons Plakortis sp. Yang  Dikoleksi  Dari  Perairan Bunaken. Jurnal Pesisir dan Laut Tropis. Program Studi Ilmu Kelautan UNSRAT. Vol.1 No (1) Suryanto, E. 2012. Fitokimia Antioksidan . Putra Media Nusantara, Surabaya. Hal 22