Jurnal Farmasi Galenika ( Galenika Journal of Pharmacy ) 2017; 2 (2): 118 – 125 ISSN : 2442-8744 (electronic) http://jurnal.untad.ac.id/jurnal/index.php/Galenika/index DOI : 10.22487/j24428744.2017.v3.i2.8771
Isolasi  dan  Identifikasi  Senyawa  Flavonoid  Ekstrak  Etanol  Buah  Naga Merah ( Hylocereus polyrhizus (F.A.C.Weber)Briton & Rose)
(Isolation  and  Identification  of  Flavonoid  Compounds  from  Ethanol  Extract  of  Red Dragon Fruits (Hylocereus polyrhizus (F.A.C.Weber) Briton & Rose )

## Siti Nuari, Syariful Anam, Akhmad Khumaidi
Jurusan Farmasi, Fakultas MIPA, Universitas Tadulako, Palu, 94118
Article Info: Received: 08April 2017 in revised form: 22 April 2017 Accepted: 30 Mei 2017
Available Online: 01Oktober 2017

## ABSTRACT
The  isolation  and  identification  of  flavonoid  compounds  from  ethanol extract  of  red  dragon  fruit  ( Hylocereus  polyrhizus (F.A.C.Weber) Briton  & Rose) have been done. Red dragon fruit extract was obtained by maceration of  dragon  fruit  powder  with  96%  ethanol.  The  ethanol  extract  was  then partitioned  by  liquid-liquid  partition  method  using  n-hexane,  ethyl  acetate and  water,  respectively.  Ethyl  acetate  extract  was  separated  by  vacuum liquid chromatography, while the water extract was first hydrolyzed by HCl and then partitioned with ethyl acetate (ethyl acetate fraction). The results of the purification of the ethyl acetate extract by  preparative  TLC yielded five isolates.  However,  only  the  third  isolates  were  positive  flavonoid compounds. The UV-Vis spectral data of three isolates showed a peak at 330 nm  (band  I)  and  280  nm  (band  II),  and  the  addition  of  the  diagnostic reagents did not show bathochromic and hipsochromic shifting. Based on the obtained data, the third isolate was suspected flavanones compound.
Keywords :
Hylocereu s polyrhizus , isolation, flavanones
Corresponding Author: Siti Nuari Jurusan Farmasi, Fakultas MIPA, Universitas Tadulako, 94118, Palu, Indonesia
Phone :+62-8524-2696-488 Email: shetinuari@yahoo.co.id
Copyright © 2017 JFG-UNTAD
This open access article is distributed under a Creative Commons Attribution (CC-BY-NC-SA) 4.0 International license.

## How to cite (APA 6th Style):
Nuari  S.,  Anam  S.,  Khumaidi  A.  (2017).  Isolasi  dan  Identifikasi  Senyawa  Flavonoid  Ekstrak  Etanol  Buah  Naga  Merah ( Hylocereus polyrhizus (F.A.C.Weber)Briton & Rose). Jurnal Farmasi Galenika : Galenika Journal of Pharmacy, 3 (2), 118- 125. doi:10.22487/j24428744.2017.v3.i2.

## ABSTRAK
Telah dilakukan penelitian mengenai isolasi dan identifikasi senyawa flavonoid dari ekstrak etanol  buah  naga  merah  ( Hylocereus  polyrhizus ( F.A.C.Weber)  Briton  &  Rose).    Ekstrak  buah  naga merah diperoleh melalui maserasi serbuk buah naga merah dengan pelarut etanol 96%. Ekstrak etanol yang  diperoleh  di  partisi  dengan  metode  partisi  cair-cair  menggunakan  pelarut n -heksana,  etil  asetat dan air. Hasil partisi ekstrak etil asetat  kemudian dilakukan pemisahan dengan Kromatografi vakum cair,  sedangkan  ekstrak  air  dihidrolisis  terlebih  dahulu  dengan  HCl  lalu  dipartisi  dengan  etil  asetat (fraksi etil asetat). Berdasarkan  hasi pemurnian ekstrak etil asetat dan fraksi etil asetat dengan KLT Preparatif diperoleh 5 isolat tetapi hanya isolat 3 yang positif senyawa flavonoid. Hasil spektroskopi UV-Vis  isolat  3  menghasilkan  puncak  pada  330  nm  (pita  I)  dan  280  nm  (pita  II),  sedangkan  pada penambahan  pereaksi  geser  tidak  mengalami  pergeseran  batokromik  dan  hipsokromik.  Berdasarkan data-data yang diperoleh isolat 3 diduga merupakan golongan senyawa flavanon.
Kata Kunci  : Hylocereu s polyrhizus ( F.A.C.Weber) Briton & Rose, isolasi, flavanon.

## PENDAHULUAN
Penggunaan  tanaman  sebagai  bahan  obat tradisional  memerlukan    penelitian  ilmiah  untuk mengetahui  kebenaran  khasiatnya.  Penggunaan tanaman  sebagai  obat  dapat  dijamin  kebenarannya dengan  didapatkannya  data  yang  meyakinkan  secara ilmiah.  Contoh  tanaman  yang  digunakan  sebagai tanaman  obat  yaitu  tanaman  jenis  kaktus,  salah  satu jenis kaktus yang saat ini sudah dikenal di Indonesia adalah buah naga ( Dragon fruits ). Sejak diperkenalkan pertama kali dalam expo “ Agriteec ” di Tokyo    tahun  1999,  buah  naga  kian  popular  dan banyak diminati orang karena memiliki rasa enak dan banyak  khasiat.  Adapun  jenis  buah  naga  yang  telah dibudidayakan ada empat yaitu buah naga berdaging putih  ( Hylocereus  undatus) ,  buah  naga  berdaging merah (H.  polyrhizus ),  buah  naga  berdaging  super merah  ( H.  costaricensis ),  dan  buah  naga  berkulit kuning dengan daging putih ( Selenicereus megalanthu s) (Winarsih, 2007).
Buah  naga  memiliki  berbagai  khasiat  antara lain dapat menurunkan kadar kolesterol, menyeimbangkan  kadar  gula  darah,  mencegah terjadinya  kanker  usus,  menguatkan  daya  kerja  otot serta  dapat  menghaluskan  kulit.  Secara  umum  buah ini bermanfaat untuk kesehatan dan dapat memenuhi kebutuhan  tubuh  akan  zat gizi  sehari-hari (Winarsih, 2007).  Buah  naga  memiliki  kandungan  kimia flavonoid,  fenolik,  polifenol  (Jaafar et  al ,  2009). Flavonoid  adalah  kelompok  senyawa  fenolik  alam yang mempunyai bioaktifitas sebagai obat. Flavonoid terdapat dalam semua tumbuhan hijau dan merupakan  metabolit  sekunder  yang  menunjukkan berbagai khasiat farmakologi (Rohyami, 2008).
Hasil  penelitian  Feranose  (2009),  flavonoid pada  buah  naga  merah  diketahui  dapat  menurunkan kadar  glukosa  darah.  Senyawa  flavonoid  seperti isoflavon    berkhasiat  dapat  mencegah  timbulnya kanker  prostat,  menurunkan  resiko  terkena  penyakit jantung,  diabetes,  ginjal  dan  osteoporosis  (Asih, 2012).  Senyawa  flavonoid  lain  dalam  golongan flavanolol berkhasiat sebagai antiinflamasi, antioksidan  dan  juga  antikanker  serta  senyawa flavanon  berkhasiat  sebagai  antibakteri  (Patni et  al , 2008).
Berdasarkan  hal  tersebut  perlu  dilakukan pengkajian  lebih  lanjut  untuk  mengetahui  jenis senyawa  flavonoid  dengan  melakukan  isolasi  dan identifikasi  ekstrak  buah  naga  merah,  sehingga pemanfaatan buah naga merah untuk kesehatan dapat dijelaskan secara ilmiah .

## METODE PENELITIAN Alat Penelitian
Alat-alat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini yaitu  gelas  ukur  ( IWAKI  PIREX ® ),  gelas  kimia ( IWAKI  PIREX ® ),blender,  pipa  kapiler,  corong  kaca ( IWAKI PIREX ® ), erlenmeyer ( IWAKI PIREX ® ), labu takar  ( IWAKI  PIREX ® ),  bejana  maserasi,  kertas saring, chamber KLT, timbangan analitik ( OHAUS ® ), hot  plate  (VENDILLE ® ) , vacuum  rotary  evaporator (EYELA ® ), cawan  porselen,  oven  (SHELLAB ® ), sentrifuge (CENTURION ® ), oven vacum, lampu UV 245  nm  dan  366  nm,  dan  spektrofotometer  UV-Vis (UNICO)

## Bahan Penelitian
Bahan-bahan  digunakan  pada  penelitian  adalah plat  KLT  dan  serbuk  silika  gel  60  GF 254 dan  PF 254 serta  bahan  berderajat  tekhnis  yaitu  etanol  96    %, aquadest,  etil  asetat, n -heksana,  yang  berderajat  Pa (Pro.Analysis) yaitu metanol,
AlCl 3 ,CHCl 3 (Kloroform), n- butanol,  natrium  metoksida, natrium  asetat,  H 3 BO 3 (asam  Borat),  asam  asetat glasial.

## Bahan Uji
Bahan uji yang  digunakan pada penelitian ini adalah buah naga merah yang sebelumnnya telah diidentifikasi  Unit  Pelaksana  Teknis  (UPT)  Sumber Daya  Hayati  Sulawesi  Universitas  Tadulako  dengan no. 788/UN.28 UPT-SDH/I.K/2015

## Cara Kerja Pengambilan dan Pengolahan sampel
Sampel buah naga merah ( Hylocereu s polyrhizus ( F.A.C.Weber)  Briton  &  Rose)  diambil  di  Desa Sidera,  Kecamatan  Sigi  Biromaru,  Kabupaten  Sigi Provinsi  Sulawesi  Tengah.  Sebanyak  10  kg  Sampel buah  naga  merah  segardikupas  menggunakan  pisau (stainless),  diambil  bagian  dagingnya,  dicuci  dengan air  mengalir  kemudian  ditiriskan  lalu  diblender  dan dikeringkan  dalam  oven  vacum  selama  6  hari  pada suhu 50 0 C.

## Maserasi Buah Naga Merah
Serbuk  sebanyak  588,1  gram  diekstraksi secara maserasi dengan menggunakan pelarut  etanol 96% sebanyak 3 liter. Perendaman dilakukan selama 3  x  24  jam,  dimana  tiap  1  x  24  jam  dilakukan pengadukan  kemudian  di  uapkan  menggunakan vacuum  rotary  evaporator pada  suhu  pemanasan 70 o C sampai didapatkan ekstrak kental.

## Partisi
Sebanyak  20  gram  ekstrak  etanol  buah  naga merah  dilarutkan  dalam  air  sebanyak  100  ml. Selanjutnya  dimasukkan  ke  dalam  labu  pisah  lalu ditambahkan  100  ml n -heksana,  dikocok  secara pelahan-lahan selama 5 menit, setelah itu didiamkan hingga terjadi pemisahan antara ekstrak n - heksana  dan  air.  ekstrak n -heksana  dipisahkan dengan  lapisan  air  kemudian  dipartisi  kembali hingga 6 kali sampai larutan berwarna bening. Partisi dilanjutkan  menggunakan  etil  asetat  dengan  proses yang  sama  dengan n -heksana.  Ekstrak n -heksana cair, ekstrak etil asetat cair dan ekstrak air diuapkan sehingga diperoleh ekstrak kental.

## Hidrolisis Ekstrak Air
Sebanyak  25  mg  ekstrak  air  dilarutkan  dalam 125  ml  campuran  metanol:  HCl  2  N  (1:1)  dalam gelas  kimia  pada  penangas  air  selama  60  menit. Kemudian  dipartisi  dengan  menggunakan  etil  asetat sebanyak 25 ml sehingga didapatkan fraksi etil asetat hasil hidrolisis.

## Identifikasi  Flavonoid  Ekstrak  Etil  Asetat  dan Fraksi Etil  Asetat Hasil Hidrolisis
Ekstrak  etil  asetat  dan  fraksi  etil  asetat  hasil hidrolisis dari ekstrak air ditotolkan pada plat dengan ukuran 2 cm x 10 cm pada jarak 1 cm dari tepi bawah plat menggunakan pipa kapiler. Kemudian dikeringkan dan dielusi dengan eluen n -butanol : asam asetat glasial : air (BAA)  dengan perbandingan 4:1:5.  Pemisahan  ekstrak  etil  asetat  dilanjutkan dengan  metode  kromatografi  vakum  cair  sedangkan untuk  fraksi  etil  asetat  hasil  hidrolisis  ekstrak  air langsung dikromatografi lapis tipis preparatif.
Pemisahan Senyawa
Flavonoid Secara

## Kromatografi  Cair Vakum
Sebanyak 4 gram ekstrak etil asetat dilarutkan dengan  metanol  dan  ditambahkan  silika  gel secukupnya,  diaduk  hingga  homogen  dan  menjadi serbuk  kering.  Kemudian  fase  gerak  dimasukkan pada kolom yang telah dimampatkan sebelumnya (20 g) dengan tingkat kepolarannya secara gradien, yaitu n -heksana  100%  (2  kali), n -heksana:etil  asetat  (8:2), (6:4), (4:6), (2:8) etil asetat 100%, etil asetat:metanol (1:1), metanol 100% masing-masing sebanyak 25 ml (sekali).

## Pemurnian  Menggunakan  Kromatografi  Lapis Tipis Preparatif (KLTP)
Fraksi  yang  positif  mengandung  flavonoid selanjutnya  dipreparatif.  Eluen  yang  digunakan n - butanol:asam  asetat  glasial:  air  (4:1:5).  Pita    hasil KLT-P  dikerok  dan  dilarutkan  dalam  pelarut metanol, kemudian disentrifuge untuk mengendapkan silikanya sehingga diperoleh supernatan lalu dikeringkan (isolat).

## Pemastian  Kemurnian  isolat  dengan  KLT  Multi Eluen
Isolat  yang  diduga  mengandung  flavonoid  dielusi menggunakan  tiga  macam  fase  gerak  dengan perbandingan  yang  berbeda  dengan  kepolaran  tiap eluen  berbeda  yaitu BAA (7:0,5:0,5),  etil  asetat  : Butanol : Asam asetat ( 4:3:1), Butanol : Asam asetat galsial  :  Etanol  (6:1:0,5).  Bercak  tunggal  yang
dihasilkan  menandakan  bahwa  isolat  yang  diperoleh merupakan  senyawa  tunggal  atau  murni  (Mathias et al , 1987)

## Spektroskopi Isolat
Isolat    dianalisis  secara  spektrofotometri  UV- Vis dengan penambahan perekasi geser  NaOH 2 M, AlCl3 5%, AlCl3/HCl, NaOAc, NaOAc/H 3 BO 3

## Analisa Data
Data  yang  diperoleh  dianalisis  dengan  cara membandingkan  data-data  kromatografi  dan  pola umum  spektrum  hasil  spektroskopi  UV-Vis  dengan literatur yang telah ada

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Ekstrak Etanol Buah Naga Merah
Hasil  ekstrak  etanol  buah  naga  merah  dari maserasi  serbuk  seberat  588,1  gram  menggunakan pelarut etanol 96% sebanyak 1500 ml selama 3 x 24 jam  yaitu  209,92  gram,  dengan  persen  rendemen sebesar 35,69%
Hasil Partisi Ekstrak buah Naga Merah dengan n -

## Heksana, Etil Asetat dan Air
Hasil  partisi  dengan  metode  partisi  cair-cair dari ekstrak kental etanol buah  naga merah sebanyak 20  g  diperoleh  ekstrak  kental  2,83  gram n -heksana dengan  persen  rendemen  yaitu  14,15%,  ekstrak kental etil asetat 3,60 gram dengan persen rendemen 18,00  %  dan  ektrak  air  yaitu    9,63  gram  dengan persen rendemen yaitu 48,15%

## Identifikasi  flavonoid dengan KLT
Identifikasi senyawa flavonoid dalam ekstrak buah  naga  merah  dilakukan  dengan  metode Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT).  Tujuannya  adalah untuk  mengetahui  pemisahan  senyawa  (flavonoid) dengan eluen n- butanol-asam asetat glasial-air (BAA) 4:1:5    (Markham,  1988).  Pemisahan  ekstrak  etil asetat  dan  fraksi  etil  asetat  dari  hasil  hidrolisis ekstrak air dideteksi di bawah lampu UV 254nm dan 366  nm  kemudian  dilakukan  penampakan  bercak menggunakan  uap  amonia.  Dari  hasil  KLT  ekstrak etil  asetat  (gambar  1)  diperoleh  2  bercak  berwarna biru  muda  (setelah  diberi  uap  amonia  dan  dibawah lampu  UV  366  nm) . Berdasarkan  perubahan  warna yang  terjadi  pada  hasil  KLT  fraksi  etil  asetat,  fraksi tersebut  diduga  mengandung  senyawa  flavonoid flavon  atau  flavanon  (Markham,  1988).  Fraksi  etil asetat dari hasil hidrolisis ekstrak air menghasilkan 3 bercak  yaitu  bercak  berwarna  kuning,  ungu  gelap, dan  biru  (setelah  diberi  uap  amonia  dan  dibawah lampu  UV  366  nm).    Dari  perubahan  warna  yang terjadi  pada  fraksi  etil  asetat  hasil  hidrolisis  ekstrak air,  fraksi  tersebut  diduga  mengandung  senyawa flavonoid  yaitu  auron,  flavon,  dan  isoflavon (Markham,1988).Pada pemisahan dengan KLT, eluen yang  digunakan  yaitu  BAA  (4:1:5).  Hal  ini  karena sampel  yang  digunakan  relatif  polar  sehingga kesamaan  sifat  antara  fase  gerak  dan  sampel  dapat memberikan  pemisahan  yang  baik.  Pemisahan ekstrak  etil  asetat  dilanjutkan  dengan  metode kromatografi  vakum  cair  sedangkan  untuk  fraksi etil asetat hasil hidrolisis ekstrak air langsung di KLTP. Hasil penampakan noda ekstrak etil asetat dan fraksi etil  asetat  (hasil  hidrolisis  dari  ekstrak  air,  dapat dilihat pada gambar 1.
Gambar  1.  Profil  KLT  analitik,  meggunakan  fase  diam  silika  gel  60,  eluen  BAA  (4:1:5),  jarak  elusi  8  cm.  A:  Profil  KLT ekstrak etil asetat sebelum uap amonia pada lampu UV 366, B: Profil KLT ekstrak etil asetat sebelum uap amonia lampu UV 254, C: Profil KLT ekstrak etil asetat setelah uap amonia pada lampu UV 366, D: Profil KLT ekstrak etil asetat setelah uap amonia pada lampu UV 254, E: Profil KLT fraksi etil asetat sebelum uap amonia pada lampu UV 366, F: Profil KLT fraksi etil asetat sebelum uap amonia pada lampu UV 254, G: Profil KLT fraksi etil asetat setelah uap amonia pada lampu UV 366, H: Profil KLT fraksi etil asetat setelah uap amonia pada lampu UV 254

## Hasil  Fraksinasi  Ekstrak  Etil  Asetat  dengan Kromatografi Vakum Cair
Pemisahan  senyawa  ekstrak  etil  asetat dilanjutkan dengan menggunakan metode kromatografi  vakum  cair.  pelarut  yang  digunakan merupakan pelarut organik yang tingkat kepolarannya  secara  gradien  meningkat,  yaitu n - heksana  100%, n -heksana:etil  asetat  (8:2),  (6:4), (4:6), (2:8) etil asetat 100%, etil asetat:metanol (1:1), metanol  100%  dengan  masing-masing  sebanyak  25 ml  sehingga  dihasilkan  8  fraksi.  Lempeng  KLT ditotolkan  8  fraksi  dengan  penambahan  ekstrak  etil asetat  sebagai  pembanding,  kemudian  dielusi menggunakan  eluen n -butanol:asam  asetat  glasial:air
(4:1:5)  sebanyak  40  ml.  Setelah  dielusi  plat  KLT dikeringkan  kemudian  diidentifikasi  dengan  uap amonia  dan  pereaksi  AlCl 3 .  Berdasarkan  hasil pengamatan terdapat bercak yang berwarna biru yang diduga  sebagai  senyawa  flavonoid.  Berdasarkan profil  kromatogram  dari  hasil  KLT  8  fraksi  tersebut terdapat  persamaan  dalam  profil  kromatogram sehingga dilakukan penggabungan fraksi dari 8 fraksi menjadi  3  fraksi.  Hasil  penampakan  noda  semua fraksi  dibawah  lampu  UV  254  dan  366    nm  dapat dilihat  pada  gambar  2,  sedangkan  fraksi  gabungan hasil  fraksinasi  ekstrak  etil  asetat  buah  naga  merah dapat dilihat pada tabel 1.
Gambar2.  Profil  kromatogram  hasil  fraksinasi  ekstrak  etil  asetat,  menggunakan  fase  diam  silika  gel  GF 254 dengan  eluen BAA (4:1:5), jarak elusi 8 cm. A : Profil KLT fraksi etil asetat  pada lampu UV 254 nm, B : Profil KLT fraksi etil asetat pada lampu UV 366 nm
Tabel 1. Fraksi gabungan hasil fraksinasi ekstrak etil asetat buah naga merah
Fraksi ke- Perbandingan eluen Bobot fraksi (gram) 1 n -heksana 100% n- heksana : etil asetat (8:2) 0,3 2 n -heksana : etil asetat (6:4) 0,2 3 n -heksana : etil asetat (4:6) n -heksana : etil asetat (2:8) etil asetat 100% etil asetat : metanol metanol 100% 2,9 Persen recovery 3,47 = (86,75%)
Hasil  Isolasi  dengan  Kromatografi  Lapis  Tipis Preparatif
Fraksi  1,2,3,    (gabungan  fraksi  hasil  KVC) yang  telah  diperoleh  dari  proses  KVC  dan  fraksi  4 (fraksi  etil  asetat  dari  hasil  hidrolisis  ekstrak  air) kemudian  dilakukan  pemisahan  dengan  KLT preparatif.  Plat  yang  digunakan  adalah  plat  KLT
silika  gel  60  PF  254  dengan  ukuran  20  x  20  cm. Setelah  dilakukan  proses  elusi  pada  hasil  gabungan fraksi   dalam  chamber,  plat  KLTP diamati  di bawah lampu  UV    366  nm.  Pada  fraksi  1  menghasilkan    1 pita,  fraksi  2  menghasilkan  1  pita,  fraksi  3 menghasilkan  2  pita  dengan  semua  pita  (fraksi  1,  2, 3)  berfluoresensi    biru  muda  sedangkan  fraksi  4
menghasilkan  pita  warna  kuning.  Pita-pita  yang dihasilkan kemudian dikerok dan dilarutkan dalampelarut  metanol.  Kemudian  disentrifuge  untuk mengendapkan silika gel atau memisahkan silika gel
dan  supernatan  yang  didapatkan  sehingga  di  peroleh isolat.  Isolasi  dengan  kromatografi  lapis  tipis preparatif  fraksi  3  (gabungan  F4,5,6,7)  dapat  dilihat pada gambar 3.

## (A)                                                                (B)
Gambar 3. Foto hasil isolasi dengan kromatografi lapis tipis preparatif  menggunakan fase diam silika gel PF 254 , eluen yang digunakan BAA (4:1:5). A: Visualisasi KLTP pada lampu UV 254, B: Visualisasi KLTP pada lampu UV 366.

## Uji Kemurnian dengan Kromatografi Lapis Tipis Multi Eluen
Isolat  yang  diperoleh  selanjutnya  diuji kemurniaannya  dengan  metode  elusi  sistem  multi eluen.  Tujuan  dari  metode  ini  adalah  untuk  melihat kemurnian  isolat  yang  diperoleh  dari  hasil  isolasi. Isolat    ditotolkan  pada  lempeng  KLT,  selanjutnya dielusi  menggunakan  tiga  macam  fase  gerak  antara lain  BAA  (7:0,5:0,5)  etil  asetat:butanol:  asam  asetat (4:3:1), butanol:asam asetat:etanol (6:1:5). Pemilihan
eluen  ini  didasarkan  pada  perbedaan  kepolaran  dari masing-masing  eluen  yang  akan  memberikan  profil yang berbeda pada lempeng KLT. Hasil elusi dengan ketiga  eluen  tersebut  menghasilkan  hanya  satu bercak.  Berdasarkan  hal  tersebut  isolat  dapat dikatakan  murni  secara  KLT.  Kemurnian  dengan KLT multi eluen dengan menggunakan 3 perbandingan eluen dengan kepolaran berbeda, dapat dilihat pada gambar 4.
Gambar 4. Profil KLT multi Eluen meggunakan fase diam silika gel 60. A: Penampakan KLT multi eluen BAA (7:0,5:0,5) pada lampu UV 254, B: Penampakan KLT  multi eluen BAA (7:0,5:0,5)  pada lampu UV 366, C: Penampakan KLT multi eluen etil asetat:butanol: asam asetat (4:1:3) pada lampu UV 366, D: Penampakan KLT multi etil asetat: butanol : asam asetat (4:1:3)  pada lampu UV 366, E: Penampakan KLT multi eluen butanol: asam asetat glasial: etanol (6:1:0,5) pada lampu UV 254 nm,  F: Penampakan KLT multi eluen butanol: asam asetat glasial: etanol (6:1:0,5) pada lampu UV 366 nm
Identifikasi Dengan
Spektrofotometer

## Ultraviolet UV-Vis
Berdasarkan  hasil  spektroskopi  UV-Vis isolat  1,  2,  4,  dan  5  tidak  menunjukkan  pola  umum spektrum  senyawa  flavonoid,  sedangkan  isolat  3 memberikan  serapan  maksimum  pada  panjang gelombang  330  nm  (pita  I)  dan  280  nm  (pita  II). Menurut  Markham  (1988),  senyawa  flavonoid dengan  serapan  maksimum  pita  I  pada  panjang
gelombang 300-330 nm dan pita II pada 275- 295 nm termasuk dalam golongan flavanon atau dihidroflavonol, sehingga dugaan senyawa dari isolat 3  adalah  golongan  flavanon  atau  dihidroflavonol. Hasil  analisis  spektrofotometri  UV-Vis  dengan melakukan scan panjang gelombang 200-600 nm dapat dilihat pada gambar 5.
Gambar 5. Hasil spektroskopi UV-Vis isolat 3, pelarut metanol.
Hasil  spektrofotometri  UV-Vis  isolat  dengan penambahan  pereaksi  geser  NaOH  2  M,  AlCl 3 5%, AlCl 3 /HCl, NaOAc, NaOAc/H3BO3 dapat dilihat pada tabel 2. Tujuan penambahan pereaksi geser  adalah  untuk  menentukan  kedudukan gugus  hidroksi  pada  inti  flavonoid  (markham, 1988). Pada  penambahan  pereaksi  NaOH  tidak menunjukkan pergeseran batokromik dan hipsokromik pada pita I dan II. Hal ini menunjukkan tidak  terdapat  gugus  orto  hidroksi  pada  cincin  A. Pada  penambahan  pereaksi  geser  AlCl 3 dan  AlCl 3 yang  ditambahkan  HCl  juga  tidak  menunjukkan pergeseran batokromik dan hipsokromik.
Berdasarkan  hal  tersebut  pula  menggambarkan  tidak
adanya  gugus  orto  dihidroksi  pada  C-4’,  C-5’  dan tidak adanya  gugus hidroksi pada atom C- 3 dan C-5 yang  dapat  membentuk  kompleks  apabila  berikatan dengan  gugus  keto  dengan  bantuan  AlCl 3. Tidak adanya  gugus  hidroksi  pada  atom  C-3  dan  C-5 menandakan  bahwa  isolat  3  bukan  merupakan golongan  dihidroflavonol,  namun  menunjukkan  ciri dari senyawa flavonoid golongan flavanon (Setiawan, 2008).  Pada  penambahan  pereaksi  NaOAc  dan H 3 BO 3, hasil  spektroskopinya  menghasilkan  tidak adanya  pergeseran  apapun  dan  hal  tersebut menunjukkan  tidak  terdapatnya  gugus  orto  hidroksi. Berdasarkan  hal  tersebut  isolat  3  diduga  merupakan golongan senyawa flavonoid dengan inti flavanon.
Tabel 2. Panjang gelombang maksimum dari isolat setelah penambahan pereaksi geser

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kepada  Ramadanil  Pitopang (Professor  Botani)  dan  Kanda  Sahlan  yang  telah membantu mengidentifikasi tumbuhan yang dilakukan dalam penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
Asih,  A.R,  Ratnasaari  K,  Swardana      B.I.  (2012).
Isolasi  dan  identifikasi  senyawa  golongan flavonoid  dari  madu  kelengkeng  (Nephelium longata L), (Skripsi) Universitas Udayana.
Feranose, P. (2009). Pengaruh pemberian buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) terhadap kadar glukosa  darah  tikus  putih  yang  diinduksikan aloksan, (Skripsi) Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta.
Jaafar  A.R,  Ridwan.  A,  Mahmod.  C.Z.  (2009).
Proximate analysis of dragon fruit (Hylecereus  polyhizus) Universitas  Putra Malaysia, Selanggor, Malaysia Isolat Panjang gelombang maksimum (nm) dengan penambahan pereaksi geser MeOH MeOH + NaOH MeOH + AlCl 3 MeOH + AlCl 3 /HCl MeOH + NaOAc MeOH + NaOAc/H 3 BO 3 1 - - - - - - 2 - - - - - - 3 330 - - - - - 280 280 280 280 280 280 4 - - - - - - 5 325 - - - - -
Markham  K.R,  (1988), Cara  Mengidentifikasi Flavonoid ,  Padmawinata  K,  penerjemah, Penerbit ITB, Bandung.
Mathias, O., Hamburger, and Geoffrey, A.C. (1987). A  direct  bioautographic  assay  for  compounds possessing  antibacterial  activity, Journal  of Natural Products , Vol. 50(1): 19 – 22
Patni.  V,  Meena.  C,  Mahesh.  (2008). Isolation  and identification  of  flavonoid  quercetin  from Citrullus colocynthis (Linn.) Schrad ,
University of Rajasthan, India. Rohyami,  Y.  (2008), Penentuan  kandungan flavonoid  dari    ekstrak  metanol  daging  buah Mahkota Dewa  (Phaleria macrocarpa Scheff Boerl) , (Skripsi) Universitas  Islam Indonesia,
Yogyakarta .
Setiawan adi. MI, Asih Astiti R.A.I. (2008). Senyawa golongan  flavonoid  pada  ekstrak  n-butanol kulit  batang  bungur ( Lagerstroemia  speciosa Pers.),  (Skripsi)  Jurusan  Kimia  FMIPA Universitas Udayana, Bukit Jimbaran
Winarsih.  (2007). Mengenal  dan  membudidayakan buah naga . CV Aneka  Ilmu, Semarang.