ANALISIS TOTAL FENOLIK DAUN GEDI HIJAU ( Abelmoschus manihot L. ) DENGAN MENGGUNAKAN SPEKTROSKOPI FTIR DAN KEMOMETRIK
Jhon David Rumoro , Sri Sudew , Jainer Pasca Siamp
Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Natural phenolic compounds, including organic compounds, is the natural substances that produced by organisms. This study aims to determine the total phenol content and optimization using the FTIR method  for  rapid  phenols  analysis.  Gallic  acid  was  used  as  a  comparison  standard  to  measure  the total  phenol  content  using  a  UV-Vis  spectrophotometer.  The  calorimetric  method  was  used  to determine the  total  Phenolic  content  of  the  Green  Gedi  Leaf  extracts  in  8  samples  of  growing  sites, namely Minahasa 855.8 µg GEA / g extract ± 0.033, Southeast Minahasa 283.7 µg GEA / g extract ± 0.006, Manado 580.2 µg GEA / g extract ± 0.012, North Minahasa 716.2 µg GEA / g extract ± 0.091, Kotamobagu  793  µg  GEA  /  g  extract  ±  0.03,  Minahasa  Selatan  290.6  µg  GEA  /  g  extract  ±  0.027, Bitung 365.6 µg GEA / g extract ± 0.035, Tomohon as much as 546.5 µg GEA / g extract ± 0.003. This result involves a combination of variables x (FTIR measurement results) and y variables (data from the  analysis  of  Folin-Ciocalteu).  Error  value  (standard  error  calibration  (SEC  =  0.003),  standard error of prediction (SEP = 0.042)) and calibration r value 0.999 and r validation 0.98.
Keywords :  Green  Gedi  Leaves,  UV-Vis  Spectrophotometer,  Kemometrics,  Phenol  Total,  FTIR Spectrophotometry.

## ABSTRAK
Senyawa  fenolik  alam  termasuk  senyawa  organik  bahan  alam  yang  dihasilkan  oleh  organisme. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  kandungan  fenol  total  Daun  Gedi  Hijau  dan  optimasi menggunakan  metode  FTIR  untuk  analisis  fenolsecara  cepat.  Asam    galat  digunakan  standar pembanding dalam mengukur kandungan total fenol menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Metode kemometrik  digunakan  untuk  mengetahui  kandungan  Total  Fenolik  pada  ekstrak  Daun  Gedi  Hijau pada 8 sampel tempat tumbuh yaitu Minahasa 855,8 µg GEA/g  ekstrak ± 0,033, Minahasa Tenggara 283,7 µg GEA/g  ektrak ± 0,006, Manado 580,2 µg GEA/g  ekstrak ± 0,012, Minahasa Utara 716,2 µg GEA/g    ekstrak  ±  0,091,  Kotamobagu  793  µg  GEA/g    ekstrak  ±  0,03,  Minahasa  Selatan  290,6  µg GEA/g  ekstrak ± 0,027, Bitung 365,6 µg GEA/g  ekstrak ± 0.035, Tomohon sebesar 546,5 µg GEA/g ekstrak  ±  0,003.  Hasil  ini  melibatkan  kombinasi  variable  x  (hasil  pengukuran  FTIR)  dan  variable  y (data  hasil  analisis  Folin-Ciocalteu).  Nilai  kesalahan  ( standard  error  calibration (SEC  =  0.003), standard error of prediction (SEP = 0.042)) dan nilai r kalibrasi 0,999 serta r validasi 0,98.
Kata  Kunci: Daun  Gedi  Hijau,  Spektrofotometer  UV-Vis,  Kemometrik,  Total  Fenol, Spektrofotometri FTIR.

## PENDAHULUAN
Daun  Gedi  Hijau  ( Abelmoschus manihot L. ) adalah tumbuhan yang berasal dari  suku  Malvaceae.  Daun  gedi  mudah tumbuh  dengan  cara  stek  batang  pada tanah  gembur.  Didaerah  Sulawesi  utara masyarakat mengenal dua jenis Abelmoschus  manihot  L. yaitu  gedi  merah dan  gedi  hijau.  Daun  gedi  hijau  dapat dimanfaatkan  oeh  masyarakat  Manado sebagai  bahan  makanan  yeng  dikenal sebagai Bubur Manado (Tinutuan), sedangkan untuk daun gedi merah digunakan  masyarakat  untuk  pengobatan penyakit (Mamahit dan Soekarno, 2010).
Senyawa  fenolik  adalah  senyawa yang  memiliki  gugus  hidroksil  yang menempel  di  cincin  aromatik  (Vermerris dan  Nicholson,  2006).  Senyawa  fenolik alam  termasuk  senyawa  organik  bahan alam  yang  dihasilkan  oleh  organisme melalui  metabolit  sekunder,  paling  banyak tersebar  dan  ditemukan  pada  jaringan tumbuhan, sebagai respon terhadap berbagai  kondisi  seperti  infeksi,  radiasi UV,  dan  lain  sebagainya.  Penetapan  kadar fenol  total  dalam  ekstrak  dapat  dilakukan dengan pereaksi Folin Ciocalteu (Ravangpai, 2011). Metode Folin-
Ciocalteu  merupakan  metode  yang  umum digunakan  sebagai  standar  penentuan kandungan total fenolik karena merupakan metode  yang  cepat  dan  sederhana  yang dinyatakan  sebagai  masa  ekuivalen  asam galat  tiap  mg  sampel  (Fu  dkk. , 2011). Asam  galat  digunakan  sebagai  standar yang direkomendasikan
untuk
mendapatkan  hasil  yang  reliabel  karena mempunyai  reaktivitas  yang  cukup  tinggi terhadap  reagen  Folin-Ciocalteu  (Prior dkk. , 2005).
Spektrofotometri Sinar Visible
(UV-Vis) adalah pengukuran energi cahaya  oleh  suatu  sistem  kimia  pada panjang  gelombang  tertentu  (Day  dkk. , 2002).  Sinar  ultraviolet  (UV)  mempunyai panjang  gelombang  antara  200-400  nm, dan  sinar  tampak  (visible)  mempunyai panjang gelombang 400-750 nm. Pengukuran spektrofotometri
menggunakan  alat  spektrofotometer  yang melibatkan  energi  elektronik  yang  cukup besar  pada  molekul  yang  dianalisis, sehingga spektrofotometer UV-Vis dipakai untuk tujuan analisis kuantitatif dibandingkan  kualitatif.  Spektrum  UV-Vis sangat  berguna  untuk  pengukuran  secara kuantitatif. Konsentrasi dari analit di dalam larutan  bisa  ditentukan  dengan  mengukur absorban pada panjang gelombang tertentu dengan  menggunakan  hukum  Lambert- Beer (Rohman, 2007).
Penggunaan
Spektrofometer Fourier transformed infrared (FTIR)  yang dikombinasikan dengan kalibrasi multivariat  untuk  analisis  suatu  komponen dalam tumbuhan telah banyak dikembangkan. Spektrofometer FTIR yang dikombinasikan dengan kalibrasi multivariat  dapat  mengukur  sampel  secara cepat tanpa merusak dan mampu menganalisis  beberapa  komponen  secara serentak (Rohaeti dkk., 2011). Penggunaan spektrofotometer  FTIR  dalam  analisis tumbuhan  masih  terbatas  karena  matriks dan  spektrum  yang  dihasilkan  cukup kompleks. Kombinasi  dengan  kemometrik dapat  memperluas  potensi  spektroskopi FTIR  sebagai  metode  alternatif  untuk menganalisis  komponen  dalam  tumbuhan. Metode  analisis  ini  dikembangkan  dengan memanfaatkan  informasi  pola  sidik  jari yang  bersifat  khas  (Wold  dkk.,  2001).
Kemometrik memanfaatkan ciri serapan IR yang  khas  dari  setiap  molekul  untuk
mengklasifikasi sampel
atau untuk membuat  model  kalibrasi  multivariat (dengan  melibatkan  data  referensi)  yang dapat  digunakan  dalam  prediksi  hasil pengukuran  suatu  sampel  (Naes  dkk., 2002).
Berdasarkan  hal-hal  diatas  maka mendorong  penulis  melakukan  penelitian yang intensif untuk mengetahui kadar total fenolik Albelmoschus manihot L. menggunakan Spektrofotometer inframerah  tertransformasi  Fourer  karena metode  ini  merupakan  suatu  metode  yang dapat  mengukur  secara  cepat  tanpa merusak dan mampu menganalisis beberapa  komponen  secara  serentak,  yang dikombinasikan  dengan  kemometrik  yang digunakan  untuk  menemukan  korelasi statistika  antara  data  spektrum dan informasi yang telah diketahui dari sampel, yang  dalam  hal  ini  berupa  total  fenolik. Usulan  penelitian  ini  akan  ditentukan kandungan total fenol Abelmoscus manihot L yang  berasal  dari  daerah  di  Sulawesi Utara  yaitu  Minahasa,  Minahasa  Utara, Minahasa  Selatan,  Minahasa  Tenggara,
Manado, Bitung, Tomohon
dan Kotamobagu.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  akan    dilaksanakan pada  bulan  Februari  -  Juli  2019  di Laboratorium  Kimia  Farmasi  Program Studi  Farmasi  Fakultas  Matematika  dan Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas  Sam Ratulangi.

## Alat dan Bahan
a. Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu:  spektrofotometer  UV- Vis ( 00780),  Komputer pengolah  data  ( ),  timbangan  analitik ( ), alat-alat gelas ( ), Blender ( ), corong pisah, Vortex ( ), Rotary Evaporator ( ), Rotary shaker ( ),  dan  Mikropipet ( ), software minitab .
b. Bahan
Bahan-bahan yang digunakan yaitu: simplisia  kering  daun  gedi  hijau  Kota Manado, Bitung, Tomohon, Kota Mobagu, Minahasa,  Minahasa  Tenggara,  Minahasa Selatan, Minahasa Utara, Asam Galat (p.a), reagen Folin-Ciocalteu  (p.a), Etanol  teknis 96  %,  Natrium  Karbonat  (Na 2 CO 3 )  dan akuades.

## Pengambilan Sampel
Sampel Abelmoschus  manihot L . diambil dari  daerah  Kota  Manado,  Bitung, Tomohon, Kotamobagu, Kabupaten
Minahasa,  Minahasa  Tenggara,  Minahasa Selatan,  Minahasa  Utara.  Selanjutnya setiap  sampel Abelmoschus  manihot L . dibuat simplisia.

## Ekstraksi
Sebanyak  250  gram  simplisia  daun gedi  hijau  dari  masing-masing  daerah dimasukkan  ke  dalam  labu  alas  bulat, selanjutnya  ditambahkan  etanol  96  %. Ekstraksi  dilakukan  dengan  cara  maserasi selama  3  hari  dengan  menggunakan maserator.
Ekstrak hasil maserasi
kemudian  difiltrasai,  filtratnya  diuapkan
dengan rotary evaporator hingga terbentuk ekstrak kental.
Penentuan  Kandungan  Totsl  Fenolik Ekstrsk Abelmoschus manihot L.

## a. Penentuan Operating Time
Sebanyak  300  µL  larutan  asam galat  konsentrasi  30  µg/mL  ditambah  1,5 mL  reagen  Folin  Ciocalteu  25  %, kemudian digojog dan didiamkan selama 3 menit. Ke dalam larutan tersebut ditambahkan  1,2  mL  larutan  Natrium Karbonat  (Na 2 CO 3 )  5    %,  digojog homogen, dan diukur absorbansinya dengan  menggunakan  spektrofotometer UV-Vis  dalam  rentang  waktu  0-90  menit pada panjang gelombang 750 nm
(Thesalonika dkk, 2018). b. Penentuan Panjang Gelombang Absorbansi Maksimum
Sebanyak  300  µL  larutan  asam galat  konsentrasi  30  µg/mL  ditambah  1,5 mL  reagen  Folin-Ciocalteau  25  %, kemudian digojog dan didiamkan selama 3 menit. Ke dalam larutan tersebut ditambah 1,2  mL  larutan  Natrium  karbonat  5  %, digojog  homogen,  dan  didiamkan  pada suhu  kamar  pada  range operating  time, kemudian  absorbansinya  diukur  dengan menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis pada panjang gelombang 700-800 nm.
c. Pembuatan Kurva Baku Asam Galat
Sebanyak  300  µL  larutan  asam galat  konsentrasi  20,  30,  40,  50,  dan  60 µg/mL  masing-masing  dimasukkan  ke dalam tabung, kemudian ditambah 1,5 mL reagen Folin Ciocalteau 25 % dan digojog. Setelah  didiamkan  selama  3  menit, masing-masing  larutan  ditambah  1,2  mL
larutan  Natrium  Karbonat  5  %,  digojog homogen  dan  didiamkan  pada  range operating  time pada  suhu  kamar.  Semua larutan diukur absorbansinya pada panjang gelombang absorbansi maksimum,
kemudian di buat kurva kalibrasi hubungan antara  konsentrasi  asam  galat  (µg/mL) dengan absorbansi.
d. Penentuan kandungan ekstrak daun gedi hijau
Sebanyak  10,0  mg  ekstrak  dari masing-masing  ekstrak  daun  gedi  hijau dilarutkan  sampai  volume  10,0  mL akuades.  Larutan  ekstrak  yang  diperoleh dipipet  sebanyak  300  µL,  dan  ditambah reagen  1,5  mL  Folin-Ciocalteau  25  %  dan digojog,  didiamkan  selama  3  menit, ditambah 1,2 mL pelarut Natrium Karbonat  (Na 2 CO 3 )  5  %  dan  didiamkan lagi  pada  range operating  time pada  suhu kamar.  Absorbansi  ekstrak  diukur  pada panjang gelombang maksimum. Perhitungan kandungan total fenolik menggunakan rumus berikut:
TPC =
Keterangan:
c = konsentrasi fenolik (nilai x) v = volume ekstrak yang digunakan (mL) fp = faktor pengenceran g = berat sampel yang digunakan

## Pembuatan spektrum FTIR
Sebanyak 0.5 mg serbuk  daun gedi hijau ( Abelmoschus manihot L.) dicampurkan  dengan  180  mg  KBr, dihomogenisasi. Pengukuran spektrum FTIR  dilakukan  pada  daerah  IR  tengah
(4000-  400 )  dengan  melibatkan pengontrol kerja berupa personal komputer yang  dilengkapi  perangkat  lunak  OPUS
versi  4.2.  Spektrum  dihasilkan  dengan kecepatan  32  detik  dan  resolusi  4 . Tampilan data spektrum akan
menampilkan jumlah titik serapan kemudian  diubah  ke  dalam  format  DPT ( data point table ) untuk keperluan pengolahan  data.  Data  ini  dapat  dibuka dengan program Microsoft Excel .
Selanjutnya data jumlah titik serapan  yang ditampilkan  (telah  dihilangkan  serapan CO2-nya  pada  2399-2252  cm-1)  diolah dengan program Minitab (CAMO,
Norwegia)  yang  dijalankan  dengan  sistem operasi Microsoft Windows 10 . Selain data spektrum  asli, dihasilkan pula data dengan perlakuan  pendahuluan  berupa  koreksi garis  dasar,  normalisasi  (nilai  serapan diatur  sehingga  serapan  tertinggi  bernilai satu  dan  serapan  terendah  bernilai  nol), derivatisasi, dan penghalusan hasil derivatisasi dengan metode Savitsky-Golay (Rohaeti dkk, 2011).

## Analisis Data
Model  kalibrasi  multivariat  dibuat dengan  program  Mini  Tab  menggunakan metode  regresi  PLS.  Pembentukan  model prediksi  total  fenolik  dilakukan  oleh  PLS dengan  melibatkan  variabel  x  (hasil pengukuran  FTIR)  dan  variabel  y  (data hasil  analisis  Asam  Galat).  Kalibrasi  dan validasi  model  diolah  dengan  teknik validasi  silang.  Keakuratan  model  dapat dilihat  pada  nilai  korelasi  atau  koefisien determinasi  dan  nilai  kesalahan  yang dihasilkan.  Model  dapat  digunakan  bila memiliki  nilai  kesalahan  ( standar  error calibration  SEC,  standar  error  of  cross validation  SECV  atau  standard  error  of prediction  SEP )  rendah  dan  nilai  korelasi atau koefisien determinasinya tinggi .

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Ekstrak
Berdasarkan  hasil  ekstraksi  250 gram  daun  gedi  hijau  maka  diperoleh jumlah hasil rendemen dari masing-masing ekstrak adalah, kota Bitung sebesar 5,50%,
Minahasa
Selatan sebesar 5,80%, Kotamobagu  sebesar  5,25%,  Minahasa Utara  sebesar  5,34%,  Manado  sebesar 6,59%, Minahasa Tenggara sebesar 7,23%,
Minahasa sebesar 7,34% dan Kota Tomohon sebesar 5,63%.

## Operating Time
Berdasarkan hasil pengukuran yang diperoleh,  absorbansi  yang  stabil  di  menit ke-30 sehingga dapat disimpulkan Operating time untuk penetapan kandungan  total  fenolik  ekstrak  daun  gedi hijau adalah 30 menit. Penetapan operating time bertujuan  untuk  mendapatkan  waktu pengukuran pada saat  reaksi  telah berjalan optimal yang ditandai dari absorbansi yang stabil,  sehingga  dapat  memaksimalkan pengukuran  (Pangestuty, 2016). Data hasil operating  time yang  diukur  absorbansinya pada  spektrofotometer  UV-Vis  dalam rentang waktu 0-90 menit dengan mereaksikan  asam  galat  dengan  reagen Folin-Ciocalteu dan pelarut Natrium karbonat. Kenaikan absorbansi secara terus menerus  dari  menit  ke  menit  tidak  dapat dijadikan  sebagai operating  time karena perubahan absorbansi masih terus berjalan, sehingga pengukuran menjadi tidak maksimal  jika  dilakukan  pada  waktu tersebut.  Sebaliknya  ketika  absorbansi sudah  mulai  stabil  merupakan  waktu  yang tepat  dijadikan  sebagai operating  time (Pangestuty, 2016).
Panjang Gelombang Maksimum Hasil panjang gelombang maksimum  pada  konsentrasi  30  µg/mL asam  galat  diperoleh  panjang  gelombang maksimum 750 nm dengan hasil
absorbansi 0,443. Gambar 1. Panjang Gelombang Maksimum

## Penentuan Kurva Baku dan Linearitas
Gambar 2. Kurva Baku dan Linearitas
Hasil pengukuran persamaan regresi  linear  dari  kurva  kalibrasi  yang diperoleh  adalah  y  =  0,0086x  +  0,1615 dengan  koefisien  korelasi  R²  =  0,995. Persamaan  kurva  kalibrasi  merupakan hubungan  antara  sumbu  x  dan  sumbu  y. Sumbu  x  dinyatakan  dengan  konsntrasi yang  diperoleh  sedangkan  sumbu  y merupakan  absorbansi  atau  serapan  yang diperoleh. Harga koefisien korelasi menyatakan  hubungan  yang  linear  antara konsentrasi dengan serapan yang dihasilkan.  Berdasarkan  hasil  R²  yang
diperoleh bahwa koefisien korelasi memberikan  hasil  yang  linear  karena memenuhi  kriteria  yangdapat  diterima yaitu 0,99 (Miller dan Miller, 2010).
Penentuan  Kandungan  Total  Fenolik Daun Gedi Hijau Perhitungan Kandungan Total Fenolik  Ekstrak  Daun  Gedi  Hijau  dengan menggunakan  perhitungan    Persamaan Regresi  Linear  Kurva  Baku  y  =  ax  +  b menghasilkan kandungan fenolik pada kota Tomohon sebesar 546,5 µg GEA/g  ekstrak ± 0,003, Bitung 365,6 µg GEA/g  ekstrak ±
0.035,  Minahasa  Selatan  290,6  µg  GEA/g ekstrak  ±  0,027,  Kotamobagu  793  µg GEA/g    ekstrak  ±  0,03,  Minahasa  Utara 716,2 µg GEA/g  ekstrak ± 0,091, Manado 580,2  µg  GEA/g    ekstrak  ±  0,012, Minahasa  Tenggara  283,7  µg  GEA/g ektrak ± 0,006, Minahasa 855,8 µg GEA/g ekstrak  ±  0,033.  Dari  data  diatas menunjukan bahwa kandunganTotal
Fenolik  tertinggi  berasal  dari  daerah Minahasa  (Dataran  Tinggi)  dengan  nilai kandungan  fenolik  sebesar  855,8  µg GEA/g  ekstrak. Pada daerah dataran tinggi yang  meliputi  dataran  yang  luas  dan letaknya di  daerah tinggi atau pegunungan yang  tingginya  berkisar  700  m  di  atas permukaan  laut,  secara  geografis  tanah  di daerah  ini  merupakan  Tanah  Alluvial, tanah  alluvial  merupakan  jenis  tanah  yang terbentuk  dari  hasil  erosi  dan  sedimentasi sehingga cukup mendukung untuk bercocok  tanam  karena  tanahnya  yang subur (Kasenda dkk, 2014).

## Pembuatan Spektrum FTIR
Fourier Transformed Iinfrared (FTIR)  adalah  suatu  metode  yang  dapat mengukur  secara  cepat  contoh  tanpa
y = 0.0086x + 0.1615 R² = 0.995 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 0 50 100 A b sor b an si konsentrasi (µg/mL)
(a) (b) (c) (d) (e) (f) (g) (h)
merusak dan mampu menganalisis beberapa komponen secara serentak (Wold dkk , 2001).
Gambar 3. Spektra FTIR Daun Gedi Hijau (a)  Bitung,  (b)  Minahasa  Selatan,(c) Kotamobagu,  (d)  Minahasa  Utara,  (e) Manado,  (f)  Minahasa  Tenggara,  (g) Minahasa, (h) Tomohon
Hasil  pengujian  dari  ke  8  sampel
diatas  dengan  menggunakan  spectrum FTIR,  diperoleh  puncak  absorbansi  pada panjang  gelombang  3580,05 – 3649,76 menunjukan  gugus  OH (alcohol), pada panjang gelombang 3392,69 – 3496,99 menunjukan adanya gugus NH (Amina Sekunder). Pada ikatan  C=O  (Keton)  pada  1675  –  1725 , C=O (Asam karboksilat) pada 1700 –  1725
.  Adanya  ikatan  C=C
(Alkena)  pada  panjang  gelombang  1620  – 1680 .  Selain  itu  pada  1550  –  1570 terdapat –C- (Nitro). Serapan di daerah  1400  –  1500 menunjukan
adanya C-C aromatic.

## Analisis Data
Bentuk  kalibrasi  multivariat  dibuat dengan  menggunakan  program  Mini  Tab dengan menggunakan metode regresi PLS. Kalibrasi  multivariat  dengan  metode  PLS ( Partial  Least  Squaer  Regression) secara otomatis  akan  memberikan  informasi spektrum  yang khusus  dan relevan dengan suatu sifat kimia dari model kalibrasi pada bilangan  gelombang  tertentu  (Van  Der Vort  dkk , 1992).  Melibatkan  variabel  x (hasil  pengukuran  FTIR)  dan  Variabel  y (data hasil analisis Folin-Ciocalteu).
Kalibrasi dan validasi model diolah dengan Teknik  validasi  silang.  Model  dapat digunakan  bila  memiliki  nilai  kesalahan ( standar  error  calibration (SEC), standar error  of  cross  validation (SECV)  atau standar  error  of  prediction (SEP))  rendah dan  nilai  dari  korelasi  atau  koefisien determinasinya  tinggi  (Miller  dan  Miller, 2010).
Gambar  4.  Plot  Regresi  PLS  Daun  Gedi Hijau
Hasil  prediksi  PLS  menunjukan nilai  korelasi  ( r )  kalibrasi  =  0,999,  nilai korelasi ( r ) validasi  = 0,985 dan nilai SEP =  0,042  dan  SEC  =  0,003.  Hasil  ini
AmE8_a 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14 0.16 0.18 0.20 0.22 0.24 0.26 0.28 0.30 0.32 0.34 0.36 0.38 A b so rb a n ce 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 Wavenumbers (cm-1) AMEc_1 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 0.08 0.09 0.10 0.11 0.12 0.13 0.14 0.15 0.16 0.17 0.18 A b so rb a n ce 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 Wavenumbers (cm-1) AmE7_a 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14 0.16 0.18 0.20 0.22 0.24 0.26 A b so rb a n ce 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 Wavenumbers (cm-1) AMEb_1 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14 0.16 0.18 0.20 0.22 0.24 A b so rb a n ce 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 Wavenumbers (cm-1) AMEa_1 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14 0.16 0.18 0.20 0.22 0.24 0.26 0.28 A b so rb a n ce 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 Wavenumbers (cm-1) AmE5_a 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14 0.16 0.18 0.20 0.22 0.24 0.26 0.28 A b so rb a n ce 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 Wavenumbers (cm-1) AmE6_a 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14 0.16 0.18 0.20 0.22 0.24 0.26 A b so rb a n ce 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 Wavenumbers (cm-1) AMEd_1 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14 0.16 0.18 0.20 0.22 0.24 0.26 A b so rb a n ce 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 Wavenumbers (cm-1)
menunjukan model kalibrasi dapat diterima karena  memenuhi  syarat  dengan  nilai koefisien determinasi yang tinggi dan galat yang rendah (Miller dan Miller, 2010).

## KESIMPULAN
1.  Kandungan total fenolik ekstrak Abelmoschus  manihot  L. memperoleh hasil untuk kota Tomohon sebesar 546,5 µg  GEA/g    ekstrak  ± 0,003,  Bitung 365,6  µg  GEA/g    ekstrak  ±  0.035, Minahasa  Selatan  290,6  µg  GEA/g ekstrak  ±  0,027,  Kotamobagu  793  µg GEA/g  ekstrak ± 0,03, Minahasa Utara 716,2  µg  GEA/g    ekstrak  ±  0,091, Manado  580,2  µg  GEA/g    ekstrak  ± 0,012,  Minahasa  Tenggara  283,7  µg GEA/g  ektrak ± 0,006, Minahasa 855,8 µg GEA/g  ekstrak ± 0,033.
2. Hasil korelasi total fenol dengan metode standar  nilai  korelasi  ( r )  kalibrasi  = 0,999, nilai korelasi ( r ) validasi = 0,985 dan nilai SEP = 0,042 dan SEC = 0,003. Hasil  ini  menunjukan  model  kalibrasi dapat  diterima  karena  memenuhi  syarat dengan nilai koefisien determinasi  yang tinggi dan galat yang rendah.
3. Korelasi  yang diperoleh sebesar 0,999 ( r )  kalibrasi  dan  0,985  ( r )  validasi.
Perhitungan total fenol dengan menggunakan  metode  standar  memiliki korelasi  dengan  perhitungan  total  fenol dengan metode FTIR yang dikalibrasikan dengan kemometrik. SARAN
Disarankan  agar  dalam  penentuan kandungan total fenol menggunakan spektrofotometer FTIR dan dapat menggunakan  metode  kemometrik  yang lain.

## DAFTAR PUSTAKA
Day,  R.A.,  dan  Underwood,  A.L.  2002.
Analisis  Kimia  Kuantitatif Edisi Keenam. Erlangga, Jakarta.
Fu,L.,  Xu,  B.T.,  Gan,  R.Y.,  Zhang,  Y. 2011.  Total  Phenolic  Contents  and Antioxidant  Capacities  o  Herbal  and Tea  Infusion. International  Journal of  Molecular  Sciences. 12:  2112- 2124.
Kasenda, Ivanny, M.Sylviah., H.Wungouw.  2014.  Perbandingan
Denyut  Nadi  antara  Penduduk  ysng Tinggsl  di  Dataran  Tinggi  dan Dataran  Rendah. E-  Biomedik, 2(2): 1-6.
Mamahit  L.P.,Soekarno,N.H.,  2010.  Satu senyawa  organic  yang  diisolasi  dari daun  gedi  ( Albemoschus  manihot  L. Medik )  Asal  Sulawesi  Utara. Jurnal of  Agricultural  and Food Chemistry , 49:3106-3112.
Miller,  J.N.,  Miller,  J.C.  2010. Statistics and  Chemometrics  for  Analytical Chemistry  Sixth  edition .  Pearson Education Limited, England.
Naes,  T.,  Isaksson,  T.,  Fearn,  T.,  Davies,
T., 2002, A  User    Friendly  Guide to  Multivariate    Calibration    and Classification ,    NIR    Publication,
Chichester.
Pangestuty, A. 2016. Uji aktivitas Antioksidan  dan  Penetapan  Kadar Fenolik  Total  Fraksi  Etil  Asetat Ekstrak  Buah  Buni  dengan  Metode
2,2-Difenil-1-Pikrilhidrazil (DPPH) dan Metode Folin-Ciocalteu
[skripsi]. Fakultas
Farmasi,
Yogyakarta.
Ravangpai,  W.  2011.  Limonoids  from seeds of Thai
Xylocarpus moluccenci.  Bioorganic  &  Medical
Chemistry Letters. 21: 4485-4489.
Rohaeti,  E.,  Heryanto,  R.,  Rafi,  M., Kurniasari, I., Darusman, L. K. 2011.
Prediksi kadar flavonoid total
tempuyung  ( sonchus  arvensis l.) Menggunakan kombinasi spektroskopi ir dengan regresi kuadrat terkecil parsial. Jurnal Kimia
5 (2) : 101-108.
Rohman, A. 2007. Kimia Farmasi Analisis.
Pustaka pelajar, Yogyakarta.
Thesalonika, G. A., Sudewi, S., Rorong, J.
A.  2018.  Optimasi  dan  Validasi
Metode  Analisis  dalam  Penentuan Kandungan  Total  Fenolik  pada Ekstrak Daun Gedi Hijau ( Albemuschos  manihot  L. )  yang
Diukur dengan Spektrofotometer
UV-Vis. Jurnal Ilmiah Farmasi . 7 (3)
: 14-21
Vermerris,  W,  Nicholson,  R.  2006.
Phenolic  Compound  Biochemistry.
Spinger, Dordrecth.
Wold, S., Sjostrom, M., Eriksson, L., 2001, PLS-Regression: a    Basic    Tool    of Chemometrics , Chemom. Intell. Lab. Syst., 58 :p 109-130