## UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA DARI JAMUR LAUT YANG BERASOSIASI DENGAN ORGANISME LAUT KARANG LUNAK Lobophytum sp.
Yuni Irianty Katili 1) , Defny S. Wewengkang 1) , Henki Rotinsulu 1)
Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Soft coral (Octocorallia alcyonacea) is an animal were member of Coelenterata that live in tropical and subtropical shallow marine waters. Soft corals have considerable potentially in producing active compounds that can be used in the pharmaceutical world. This study aims to  determine  the  antimicrobial  activity  of  marine  mushrooms  associated  with  soft  coral Lobophyton  sp.,  against  Staphylococcus aureus,  Eschericia  coli and Candida  albicans. The results of  this  study indicate that extracts  from fungi  associated with soft coral Lobophyton sp.,  have  activity  only  in  Staphylococcus  aureus  and  Candida  albicans,  whereas  for Eschericia coli have no antimicrobial activity.
Keywords : Antimicrobial, Sea Mushroom, Lobophyton sp.

## ABSTRAK
Karang Lunak (Octocorallia alcyonacea) merupakan hewan anggota Coelenterata yang hidup di  perairan dangkal  tropis  dan subtropis. Karang  lunak memiliki potensi cukup besar dalam menghasilkan  senyawa  aktif  yang  dapat  digunakan  dalam  dunia  farmasi.  Penelitian  ini bertujuan untuk menentukan adanya Aktivitas Antimikroba dari Jamur Laut Yang Berasosiasi dengan  Karang  Lunak Lobophytum  sp terhadap  bakteri  bakteri Staphylococcus  aureus, Eschericia coli dan jamur Candida Albicans . Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa ekstrak dari Jamur yang berasosiasi dengan Karang Lunak Lobophytum sp memiliki Aktivitas hanya pada  bakteri Staphylococcus  aureus dan  jamur Candida  albicans ,  sedangkan  untuk  bakteri Eschericia coli tidak memiliki Aktivita Antimikroba
Kata kunci : Antimikroba, Jamur Laut, Lobophytum

## PENDAHULUAN
Indonesia  memiliki  sumber  daya  alam hayati laut yang besar, salah satu sumber daya alam  tersebut  adalah  ekosistem  terumbuh karang. Ekosistem terumbuh karang merupakan  bagian  dari  ekosistem  laut  yang menjadi sumber kehidupan bagi beranekaragam biota laut. Di dalam ekosistem terumbuh  karang  bisa  hidup  lebih  dari  300 jenis  karang,  lebih  dari  200  jenis  ikan  dan berpuluh-puluh jenis, sponge, algae, dan biota lainnya (Arsita,2015).
Karang Lunak ( Octocorallia alcyonacea ) merupakan hewan anggota Coelenterata  yang  hidup  di  perairan  dangkal tropis dan subtropis. Keberadaannya diketahui berlimpah  di  samudera  hindia  mulai  dari  laut india (van, 2000).
Karang lunak merupakan sumber yang kaya  akan  senyawa  bioaktif  contohnya seperti,  alkaloid,  dan    flavonoid.  Hasil penelitian  terakhir  menyebutkan    bahwa sekitar 50% ekstrak karang lunak menunjukan sifat  racun  pada  ikan,  selain  itu  banyak metabolit  sekunder  yang    dihasilkan    oleh karang  lunak  memiliki  aktifitas  biologi, seperti Antifungi, dan Antimikroba (Andi,2015).
Mikroba  patogen  merupakan  salah satu  penyebab  penyakit  pada  manusia  dan makhluk  hidup  lainnya.  Banyak  usaha  yang telah dilakukan untuk mengantisipasi pengaruh  mikroba  patogen  tersebut  yaitu dengan  menemukan  senyawa  kimia  yang dapat menghambat pertumbuhan dan membunuh bakteri (Juariah, 2014).
Mikroba sangat berperan dalam kehidupan  sehari-hari,  terdapat  di  udara, makanan,  permukaan  kulit,  tangan,  mulut, usus, dan pada seluruh permukaan tubuh yang terbuka  dan  dianggap  sebagai  flora  normal. Mikroba terdiri dari bakteri, jamur, dan virus. Secara  umum,  tiap  mikroba  mempunyai
morfologi  dan struktur  anatomi  yang berbeda (Waluyo, 2004).
Jamur  merupakan  jasad  eukariot.  yang memiliki  sel  tunggal.  Jamur  tidak  memiliki sel  yang berklofil, dinding sel jamur tersusun dari  kitin,  dan  belum  ada  diferensiasi jaringan.  Habitat  jamur  terdapat  pada  air  dan tanah.  Jamur  bisa  hidup  pada  organisme  laut seperti  pada  spons  atau  karang  lunak (Wahyu,2010).

## METODOLOGI PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Mei  2019  sampai  bulan  September  2019  di Laboratorium Farmasi Lanjut Fakultas Matematika   dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi. Alat dan Bahan
a. Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu  masker,  sarung  tangan,  gunting, scuba diving ,  kantong  plastik,  kamera  bawah  laut, wadah  kaca,  pisau,  erlenmeyer  ( pyrex ), corong, rotary evaporator, timbangan digital, gelas ukur ( pyrex ), gelas kimia ( pyrex ), cawan petri,  corong  pisah  ( pyrex ),  autoklaf,  pinset, spatula,  pembakar  spritus, magnetic  stirrer , pipet  tetes,  mikro  tub,  batang  pengaduk, laminar  air  flow, rak  tabung  reaksi,  tabung reaksi,  lemari  pendingin,  inkubator,  cakram ( paper disc) , mikropipet, vial, jangka sorong, jarum ose.
b. Bahan
Bahan  yang  digunakan  yaitu  bakteri  uji Staphylococcus aureus ATCC 25923,
Escherichia  coli ATCC  25922,  jamur  uji Candida  albicans ATCC  1231 , etanol, aquadest,  etil  asetat,  aseton, Potato  Dextro Agar , NutrientAgar ,GlukosaPolypeptone,MgS O 4 .7H 2 O, Yeast  Extract ,  KH 2 PO 4 ,  Sukrosa, Starch,  Malt  Extract,  Ebios, larutan  H 2 SO 4 1%,  larutan  NaCl  0,9%,  kloramfenikol
paperdisc ,  label,  spidol  permanen, tissue, aluminium foil , kertas saring, kapas.
Pengambilan Sampel dan Persiapan Sampel
Sampel  Karang  Lunak Lobophytum sp diambil dari perairan desa Tumbak kecamatan Pusomaen Minahasa Tenggara Sulawesi Utara menggunakan  alat  bantu (Scuba  Diving), diambil  kemudian  dimasukan  ke  dalam ziper bag dan disimpan dalam cooling box berisi es batu untuk dibawah ke Laboratorium Farmasi Lanjut  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan
Alam Universitas Sam Ratulangi.
Isolasi dan purifikasi jamur yang berasosiasi dengan karang lunak
Isolasi  jamur  dilakukan  dengan  cara sampel dibersihkan dengan aquades kemudian  dipotong  kecil-kecil  menggunakan gunting dan pinset  dan dimasukkan ke dalam media  PDA  yang  telah  disiapkan.  Sampel ditanam  di  atas  media  PDA  dengan  tiga  titik pusat  yang  berbentuk  segitiga.  Cawan  petri yang  berisi  sampel  ditutup  dan  direkatkan menggunakan  parafilm,  kemudian  diinkubasi pada  suhu  ruangan  selama  7x24  jam.  Setelah didapatkan isolat jamur, dilakukan pemurnian dengan  cara  isolat  jamur  diinokulasikan  ke media  PDA  yang  baru,  kemudian  diinkubasi pada  suhu  ruangan  selama  14x24  jam. Selanjutnya  diidentifikasi  morfologi  secara makroskopik untuk menghasilkan isolat jamur murni.

## Ekstraksi
Ekstraksi dilakukan   pada  campuran miselium jamur dan broth dengan menggunakan  200  mL  aseton.  Ekstraksi dilakukan dengan  menggunakan shaker pada suhu ruangan dengan kecepatan 150 rpm selama 5 menit. Selanjutnya dipisahkan antara fase  air  dan  aseton  menggunakan  corong pisah  dan  kertas  saring.  Setelah  didaptkan
filtrat  dari  hasil  penyaringan  kemudian diuapkan dengan rotary evaporator.

## Fraksinasi
Ekstrak  cair  dari  hasil  evaporasi, dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah  dan ditambahkan  pelarut  etil  asetat  sebanyak  200 mL  setelah  itu  dikocok  dalam  corong pisah   sampai  homogen.  Dibiarkan  sampai terbentuk dua lapisan. Masing-masing lapisan ditampung pada wadah yang berbeda. Lapisan H 2 O(air) kemudian difraksinasi lagi menggunakan pelarut etil asetat sebanyak 200 mL.  Hal  ini  dilakukan  sebanyak  tiga  kali. Selanjutnya  fraksi  etil  asetat  dikumpulkan kemudian  pelarut  diuapkan  menggunakan rotary  evaporator sampai  diperoleh  ekstrak kasar yang akan digunakan untuk uji aktivitas antimikroba.

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  yang  akan  digunakan  dalam penelitian  uji  aktivitas  antimikroba  harus disterilkan  terlebih  dahulu.  Alat-alat  gelas disterilkan  menggunakan  autoklaf  pada  suhu 121˚C selama ± 15 menit pinset, gunting, dan jarum  ose  direndam  dengan  alkhohol  dan dibakar  dengan  pembakaran  di  api  langsung dan  media  disterilkan  menggunakan  autoklaf pada suhu 121˚C selama 15 menit.

## Pembuatan Media
1. Media Potato Dextros Agar (PDA)
Sebanyak  4,2  gram Potato  Dextros  Agar (PDA) ditambahkan  air  laut  sampai  100 mL  diaduk  sampai  homogen.  Media tersebut  disterilkan  di  dalam  autoklaf pada  suhu  121˚C  selama  15  menit, kemudian  dipindahkan  pada  cawan  petri dan didinginkan. Media tersebut digunakan sebagai media isolasi jamur.
2. Media Nutrien Agar (NA)
Sebanyak  3,36  gram Nutrien  Agar ditambahkan  aquades  sampai  120  mL diaduk  sampai  homogen.  Media  tersebut
disterilkan  di  dalam  autoklaf  pada  suhu 121˚C    selama  15  menit,  kemudian dipindahkan  pada  cawan  petri  dan didinginkan (Nuraina, 2015).

## 3. Media Agar Miring
Nutrien  agar (NA)  sebanyak  0,784  gram dilarutkan  dalam  28  ml  aquades  dan Potato  Dextros  Agar (PDA)  sebanyak 0,588  gram  dilarutkan  dalam  14  mL aquades  menggunakan  erlenmeyer  dan diaduk  sampai  homogen.  Media  tersebut disterilkan  di  dalam  autoklaf  pada  suhu 121˚C    selama  15  menit,  kemudian dibiarkan  pada  suhu  ruangan  sampai media  memadat  pada  kemiringan  300. Media  agar  miring  digunakan  untuk inokulasi mikroba (Lay, 1994).

## 4.  Media Kultur Cair
1. Sebanyak  2  gram  glukosa,  0,5  gram polypeptone ,  0,05  gram  MgSO 4 .7H 2 O, 0,2  gram yeast  extract ,  0,1  gram KH 2 PO 4 ,  0,1  gram  agar  dilarutkan dalam  100  mL  aquades  menggunakan erlenmeyer dan diaduk sampai homogen  dan  disterilkan.  Kemudian isolat  jamur  murni  diinokulasikan  ke dalam media pembenihan dan dishaker di dalam inkubator shaker selama 3x24 jam (Yamazaki et al., 2012).
2. Sebanyak  4,5  gram  sukrosa,  4,5  gram starch ,  1,5  gram extract  malt ,  0,45 gram ebios ,  0,75  KH 2 PO 4 ,  0,075  gram MgSO 4 dilarutkan  dalam  150  mL aquades  menggunakan  erlenmeyer  dan diaduk sampai homogen dan disterilkan.  Kemudian  diinokulasikan bibit kultur dari media pembenihan dan dishaker di  dalam  inkubator shaker selama  7x24  jam  (Yamazaki et  al., 2012).
Pembuatan Suspensi Mikroba Uji
Mikroba yang telah diinokulasi diambil  dengan  jarum  ose  steril  kemudian disuspensikan  ke  dalam  tabung  reaksi  yang berisi  7  mL  larutan  NaCl  0.9%,  setelah  itu divortex hingga  diperoleh  kekeruhan  yang sama  dengan  larutan Mc . Farland Perlakuan yang sama dilakukan pada jamur uji (Dwyana, 2012).

## Pembuatan  Kontrol  Positif  dan  Kontrol Negatif
Kontrol  positif  yang  digunakan  yaitu antibiotik kloramfenikol. Kontrol negatif yang digunakan dalam penelitian ini yaitu menggunakan metanol, dengan cara membuat larutan  stok  metanol  dengan  mengambil sebanyak 200 μl metanol kemudian ditotolkan pada paper disc.

## Pembuatan Larutan Uji
Dibuat larutan uji dengan cara ditimbang  ekstrak  kasar  jamur  dari  spons Callyspongia aerizusa. sebanyak  1  mg, kemudian dilarutkan dalam  200ml methanol sehingga menghasilkan konsentrasi  larutan  uji  sebesar  250  μg/50  μl (Ortez, 2005).

## Pengujian Aktivitas Antimikroba
Metode yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  metode  kertas  cakram ( cara Kirby and Bauer ). Aktivitas penghambatannya diuji
terhadap
Staphylococcus  aureus ATCC  25923  (bakteri Gram  positif), Eschrichia  coli ATCC  25922 (bakteri  Gram  negatif)  dan Candida  albicans ATCC 1231 (jamur), yang digunakan sebagai mikroorganisme  uji.  Pada  pengujian  aktivitas antimikroba  ini,  cakram  ( paper  disc) yang digunakan  berukuran  6  mm.  Suspensi mikroba  kemudian  diinokulasikan  ke  dalam media  dan  dihomogenkan.  Kemudian  media yang telah diinokulasi mikroba dituangkan ke dalam  cawan  petri  dan  tunggu  sampai  media
memadat.  Masingmasing  cawan  petri  diberi label  dan  nomor  sampel  yang  sesuai.  Sampel yang telah ditentukkan konsentrasinya (250μg/50μL) ditotolkan pada masing-masing cakram  dengan  menggunakan  mikropipet. Letakkan kertas  cakram  yang telah ditotolkan sampel uji dengan pinset kedalam cawan petri lalu  diinkubasi  selama  1  x  24  jam  (Ortez, 2005).

## Pengamatan dan Pengukuran Zona Bening
Pengamatan  dilakukan  setelah  1x24 jam  masa  inkubasi.  Zona  bening  merupakan petunjuk  kepekaan  mikroba  terhadap  bahan antimikroba yang digunakan sebagai bahan uji yang  dinyatakan  dengan  lebar  diameter  zona hambat.  Diameter  zona  hambat  diukur kemudian dikategorikan kekuatan daya antimikrobanya  berdasarkan  penggolongan (Vandepite, 2005).
HASIL  DAN  PEMBAHASAN  Isolasi  dan Purifikasi  Jamur  yang  Berasosiasi  dengan Karang lunak
Koloni  jamur  yang  yang  tumbuh diamati perbedaan karakteristik secara mikroskopik.  Dalam  penelitian  ini  setelah 3x24  jam,  isolat  jamur  yang  tumbuh  terlihat seperti  benang-benang  halus  yang  berwarna putih.  Selanjutnya  isolat  jamur  yang  tumbuh dilakukan  dengan  cara  diinokulasikan  ke media  PDA  yang  baru  dan  diinokulasikan selama 14x24 jam pada suhu ruangan. Hal ini bertujuan  untuk  dapat  memisahkan  koloni- koloni  jamur  agar  dapat  menghasilkan  isolat jamur  yang  karakteristik  secara  mikroskopik yang  mempunyai  morfologi  yang  sama  agar dapat disebut isolat  jamur murni.

## Kultur Cair
Dalam  penelitian  ini  isolat  jamur dikultivasi  sebanyak  dua  kali  dengan  periode yang  berbeda.  Kultivasi  yang  pertama dilakukan selama 3x24 jam untuk menghasilakn  bibit  kultur.  Kultivasi  yang
kedua  dilakukan  selama  14x24  jam  untuk menghasilkan  senyawa  dari  bibit  kultur. Kultivasi  dilakukan  dengan  menggunakan metode shaker pada  suhu  27 0 C  dengan kecepatan  150  rpm,  hal  ini  bertujuan  agar semua nutrisi yang dikandung dalam medium dapat  digunakan  oleh  jamur  secara  optimal sebagai bahan untuk metabolismenya sehingga senyawa antimikroba dapat dihasilkan dengan optimal.

## Ekstraksi dan Fraksinasi
Setelah  didapatkan  hasil  produksi  dari kultur  cair,  tahap  selanjutnya  yang  dilakukan adalah  ektraksi.  Hasil  dari  kultur  cair diekstraksi  dengan  menggunakan  pelarut aseton. Proses ekstraksi yang bertujuan untuk memisahkan atau menyari senyawa aktif yang ada  di  dalam  sampel,  sehingga  adanya  suatu proses  pemisahan  dua  atau  lebih  komponen yang  terkandung  dalam  sampel,  oleh  suatu pelarut (Suryanto, 2012).
Tujuan  pemilihan  metode  maserasi karena  merupakan  metode  yang  paling sederhana dan sangat banyak digunakan. Cara ini  sesuai,  baik  untuk  skala  kecil  maupun skala industri. Sampel diekstraksi dengan cara sampel  direndam  dengan  pelarut  aseton  dan diaduk  menggunakan  alat shaker pada  suhu ruangan selam ± 5 menit. Kemudian aseton di uapkan sehingga di peroleh fraksi air.

## Uji Aktivitas Antimikroba
Dalam penelitian ini pengujian aktivitas  antimikroba  dari  jamur  yang berasosiasi dengan Karang lunak Lobophytum sp . Diuji pada Staphylococcus aureus ATCC 25923 untuk mewakili bakteri golongan Gram positif, Eschrichia  coli ATCC  25922  untuk mewakili  bakteri  golongan  Gram  negatif  dan Candida  albicans ATCC  1231  mewakili golongan  jamur.  Penggunaan  mikroba  uji  ini untuk  mengetahui  apakah  ekstrak  kasar  dari jamur  berasosiasi  memiliki  aktivitas  sebagai
antimikroba serta apakah mempunyai spektrum  diperluas  yaitu  dapat  membunuh bakteri Gram positif, Gram negatif dan jamur atau mempunyai spektrum sempit yaitu hanya dapat membunuh salah satu dari bakteri Gram positif, Gram negatif atau jamur.
Pada  pengujian  ini  menggunakan metode  difusi  agar.  Metode  difusi  dilakukan dengan  cara disc  diffusion (difusi  cakram) yaitu  kertas  yang  berisi  agen  antimikroba untuk  menentukan  aktivitas  antimikroba. Metode difusi cakram dipilih karena memiliki kelebihan  dapat  digunakan  untuk  senyawa non  polar,  cepat,  mudah  dan  sederhana (Valgas et al ., 2007).
Kertas  cakram  yang  berisi  agen antimikroba  diletakkan  dipermukaan  media agar yang sudah diinokulasikan mikroorganisme  uji.  Agen  antimikroba  akan berdifusi dari kertas  cakram menuju ke media agar  dan  melakukan  penghambatan  pada pertumbuhan mikroorganisme yang diuji. Area jernih  mengindikasikan  adanya  hambatan pertumbuhan  mikroorganisme  oleh  agen antimikroba    pada  permukaan  media  agar. Hasil  pengukuran  diameter  zona  hambat  dari ekstrak jamur yang diisolasi dari karang lunak Lobophytum  sp dilakukan  hanya  pada  satu konsentrasi  yaitu  konsentrasi  250μg.  Dalam pengujian  ini  digunakan  kontrol  positif  dan negatif.  Penggunaan  kontrol  positif  berfungsi sebagai kontrol dari zat uji, dengan membandingkan diameter daerah hambat yang terbentuk (Dwijendra, 2014).
Tujuan  penggunaan  kontrol  negatif agar dapat mengetahui ada tidaknya pengaruh pelarut  terhadap  pertumbuhan  mikroba  uji, sehingga  dapat  dipastiikan  bahwa  aktivitas yang  ditunjukkan  oleh  ekstrak  ialah  senyawa yang terkandung dalam sampel bukan berasal dari pelarut yang digunakan. Dalam penelitian ini, pelarut metanol digunakan sebagai kontrol negatif.
Dari  hasil  yang  diperoleh  bahwa menunjukkan  bahwa  kontrol  negatif  tidak terbentuk  zona  hambat.  Diameter  zona hambat  diukur  secara  horizontal  dan  vertikal menggunakan  jangka  sorong.  Rata-rata  hasil pengukuran  diameter  zona  hambat  disajikan pada Table 1.
Tabel  1. Pengukuran  zona  hambat  ekstrak Lobophytum sp
perlakuan Rata-rata diameter zona hambat (mm) SA              EC               CA Ekstrak Etil asetat 6,33 0,00 10.66 kontrol positif 26 21 19 kontrol negatif 0,00 0,00 0,00
Penilaian  zona  hambat  di  golongkan berdasarkan kategori diameter zona hambat di mana  diameter  5  mm  berarti  daya hambatnya  lemah,  jika  6-10  mm  berarti kekuatan  daya  hambatnya  sedang,jika  11-20 mm  berarti  daya  hambatnya  kuat,  dan  jika  di atas  21  mm  berarti  daya  hambatnya  sangat kuat (susanto,2012).
Dari  hasil  fraksi  etil  asetat  ,  zona bening  yang  terbentuk  di  kategorikan  sedang pada  jamur Candida  albicans dengan  hasil 10,66  mm  sendangkan  pada Staphylococcus aureus hasilnya 6,33 mm  yang bisa dikatakan sedang,  dan  pada Escherichia  coli tidak  ada aktivitas  apa-apa  hanya  terbentuk  kertas cakram saja. Jadi ini menujukan bahwa jamur yang  berasosiasi  dengan  karang  lunak lobophytum  sp hanya  memiliki    aktifitas antimikroba  pada Staphylococcus  aureus dan Candida  albicans tetapi  memiliki  aktivitas yang sedang.
Dari    hasil  menunjukkan    diameter zona  hambat  dari  kontrol  positif  pada  bakteri Staphylococcus  aureus yang  di  kategori  kuat yaitu  26  mm, Escherichia  coli 21  mm termasuk  kategori  kuat,  dan  untuk  jamur Candida  albicans yaitu  19  mm  termasuk kategori kuat Kontrol positif yang di gunakan adalah antibiotik kloramfenikol.
Kloramfenikol  di  gunakan  untuk  melawan infeksi yang di sebabkan  oleh beberapa jenis bakteri  gram  positif  dan  gram  negatif. Kloramfenikol  mempunyai  khasiat  bakterisid (Sumardjo,2009).
Dari hasil yang diperoleh menunjukkan  bahwa  ekstrak  dari  karang lunak  dan  fraksi  etil  menghasilkan  zona bening  berdiameter  sedang  yang  mampu menghambat pertumbuhan mikroba uji Staphylococcus  aureus, dan    jamur Candida albican s. Sedangkan  untuk Escherichia  coli tidak  adanya  kepekaan  aktivitas  antimikroba untuk itu tidak terdapat zona bening pada saat pengujian.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak Karang  lunak Lobophytum hanya  memiliki aktivitas antimikroba pada bakteri Staphylococcus  aureus dan  jamur Candida albicans tergolong  aktivitas  yang  sedang. Sedangkan  untuk Escherichia  coli tidak adanya  kepekaan  aktivitas  antimikroba  untuk itu  tidak  terdapat  zona  bening  pada  saat pengujian di lakukan .

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut terhadap  Karang  lunak Lobophytum  sp dengan  metode  pengujian  yang  berbeda  dan uji  aktivitas  lainnya  agar  dapat  mengetahui manfaat lain selain aktivitas antimikroba.

## DAFTAR PUSTAKA
Arsita,A,.2015.Uji efektifitas Antibakteri ekstrak etanol spons laut (porifera: Demospongie ) terhadap bakteri  staphylococcus  aureus dan escherchia coli .jurnal UGD. 2(3 ) Andifatmawati.2015.Uji aktifitas ekstrak karang  lunak sareophyton  sp terhadap staphylococcusaureus .Jurnal analis. 12(13 )
Dwijendra,  I.  M.  2014. Aktivitas  Antibakteri dan Karakterisasi Senyawa  Fraksi Spons Lamellodysidea herbacea yang  Diperoleh  dari  Teluk  Manado [skripsi].  Program  Studi  Farmasi FMIPA  Universitas  Sam  Ratulangi, Manado.
Dwyana,  Z  dan  Johanes  E.  2012. Uji
Efektivitas Ekstrak Kasar Alga Merah  Eucheuma  Cottoni  Sebagai Antibakteri Terhadap Bakteri Patogen .  [Skripsi].  Program  Studi Biologi Universitas Hasanudin,
Makassar.
Juariah,  S.,  Suryanto,  D.,  dan  Jamilah,  I. 2014.  Aktivitas  Antibakteri  Spesies Asterias  Forbesii  terhadap  Beberapa Jenis Bakteri Patogen. Jurnal Berkala Perikanan Terubuk . 42 ( 2 ) : 37 - 50.
Khairani,  M.  2009.  Pengaruh  Sediaan  Teh  ( Camellia sinensis (L) O. Kuntze ) dan Madu  Terhadap  Bakteri Salmonella typhi  Schroeter dan Staphylococcus aureus Rosenbach . [Skripsi].
Universita s Andalas. Padang
Ortez,  J.  H.  2005. Disk  Diffusion  testing  in manual of antimicrobial susceptibility testing.  Marie  B.  Coyle (Coord.  Ed).
American  society  for  Microbiology, America.
Suryanto,  E.  2012. Fitokimia  Antioksidan . Putra Media Nusantara, Surabaya.
Venn  AA,  Loram  JE,  Douglas  AE.  2008.
Photosynthetic symbioses  in  animals. Journal  of  Experimental  Botany 59 : 1069-1080.