## ALCHEMY : JOURNAL OF CHEMISTRY

## Artikel Penelitian
Aktivitas Antioksidan Kombinasi Madu Monoflora dengan Ekstrak Daun Namnam ( Cynometra cauliflora L.)

## La Ode Sumarlin*, Melina Hadera, Sri Yadial Chalid, Dede Sukandar
Program Studi Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta, Tangerang Selatan, Indonesia, 1542
INFO ARTIKEL ABSTRAK

## Riwayat Artikel
Direvisi 8 Nomber 2018 Diterima 15 November 2018
Tersedia online 21 November 2018
* Email penulis korespondensi: sumarlin@uinjkt.ac.id
Honey  and  namnam  leaves  ( Cynometra  cauliflora L.)  have  been  shown  to  have antioxidant activity. Combination of both materials potent to be used as functional food. In this  study,  antioxidant  activity  of  samples  was  measured  by  the  DPPH  method  (1,1- diphenyl-2-picrylhydrazyl) (IC 50 ) while total phenolic, total flavonoids,  and vitamin C were determinated  by  UV-Vis  spectrophotometry.  Honey  samples  used  were  commercial packaging  rambutan  honey  (MR),  commercial  packaging  rubber  honey  (MK),  and commercial  unpackaging  rambutan  honey  (MR2).  The  combination  ratio  of  honey  and namnam leaves extract was 1:1, 1:2 and 2:1 (b/b). The highest value of total phenolic, total flavonoids, vitamin C and antioxidant activity in namnam leaves extract (N) was 267.690 mg GAE/g, 12.284 mg QE/g, 203.500 mg AA/g and IC 50 0.004 mg/mL, respectively. The highest  value  of total phenolic was 0.588 mg GAE/g in MR2, while the highest  value  of total flavonoids and antioxidant activity (IC 50 ) were 0.027 mg QE/g and 21.576 mg/mL in in MR,  respectively.  Combination  MR  and  MR2  with  namnam  leaves  extract  (MR-N  and MR2-N)  with  ratio  1:2  gave  the  highest  antioxidant  activity  with  IC 50 value  0.005±0.000 mg/mL in both samples. The highest value of total phenolic, total flavonoid, and vitamin C in  MR-N  and  MR2-N  was  266.027  mg  GAE/g,  9.790  mg  QE/g,  and  100.33  mg  AA/g, respectively. Therefore, the combination is potential as a functional food.
Keywords: Antioxidant, Cynometra cauliflora L., Honey, Total Phenolic, Vitamin C
Madu  dan  daun  namnam  ( Cynometra  cauliflora )  telah  terbukti  memiliki  aktivitas antioksidan. Kombinasi kedua bahan ini akan sangat potensial digunakan sebagai pangan fungsional.  Pada  penelitian  ini,  antioksidan  diukur  dengan  metode  DPPH  (1,1-difenil-2- pikrilhidrazil)  (IC 50 ),  sedangkan  total  fenolik,  total  flavonoid,  vitamin  C  menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Sampel madu yang digunakan adalah madu rambutan kemasan komersial  (MR),  madu  karet  kemasan  komersial  (MK),  dan  madu  rambutan  tanpa kemasan  komersial  (MR2).  Perbandingan  kombinasi  madu  dan  ekstrak  daun  namnam masing-masing 1:1, 1:2 dan 2:1 (b/b). Hasil analisis menunjukkan bahwa total fenolik, total flavonoid,  vitamin  C  dan  aktivitas  antioksidan  tertinggi  terdapat  pada  ekstrak  daun namnam (N) masing-masing sebesar 267,690 mg GAE/g, 12,284 mg QE/g, 203,500 mg AA/g dan IC 50 0,004 mg/mL. Kandungan total fenolik tertinggi pada sampel madu adalah MR2  sebesar  0,588  mg  GAE/g,  sedangkan  total  flavonoid  dan  aktivitas  antioksidan tertinggi  pada  MR  yaitu  0,027  mg  QE/g  dan  IC 50 21,576  mg/mL.  Sampel  MR  dan  MR2 kombinasi dengan ekstrak daun namnam (MR-N dan MR2-N) dengan perbandingan 1:2 memberikan aktivitas antioksidan tertinggi dengan nilai IC 50 sebesar 0,005 ± 0,000 mg/mL. Total fenolik, total flavonoid, dan vitamin C tertinggi   pada kombinasi MR-N dan MR2-N masing-masing sebesar 266,027 mg GAE/g, 9,790 mg QE/g, dan 100,33 mg AA/g. Oleh karena itu, kombinasi tersebut potensial sebagai pangan fungsional.
Kata Kunci: Antioksidan, Cynometra cauliflora L., Madu, Total Fenolik, Vitamin C

## 1. Pendahuluan
Dampak dari kemajuan teknologi dan informasi menuntut pola hidup instan sehingga menyebabkan perubahan pola konsumsi  masyarakat Indonesia  terutama  masyarakat  perkotaan.  Konsumsi makanan  cepat  saji  merupakan junk  food yang mengandung nilai nutrisi, serat, vitamin C, vitamin A, kalsium, folat yang rendah dan tinggi kalori, lemak tidak jenuh yang berdampak buruk bagi kesehatan [1]. Tingginya kandungan lemak tidak jenuh dapat memicu terbentuknya radikal bebas.  Radikal  bebas  tersebut  dapat  merusak  lipid,  protein,  asam  nukleat  dan  menginisiasi  timbulnya  penyakit degeneratif  [2,  3].  Antioksidan  merupakan  komponen  yang  memiliki  kemampuan  untuk  menangkal  serangan  radikal bebas.  Salah  satu  sumber  antioksidan  alami  yang  dapat  dimanfaatkan  adalah  madu  dan  daun  namnam  ( Cynometra cauliflora L.).
Madu  dikenal  memiliki  banyak  manfaat  karena  dapat  digunakan  untuk  berbagai  kepentingan.  Hasil  penelitian sebelumnya telah menunjukkan bahwa beberapa sampel madu yang diambil dari wilayah lokal Indonesia memiliki fungsi sebagai  antioksidan.  Madu  yang  memiliki  antioksidan  tersebut  antara  lain  madu  trigona  [4],  madu  klengkeng  dan rambutan  [5]  serta  madu  Papua  [6].    Kemampuan  antioksidan  madu  juga  ditunjukkan  pada  madu  Slovenia  [7],  madu Portugis  [8]  dan  madu  Brazil  [9].  Menurut  Alvarez-Suarez  dkk.[10],  aktivitas  antioksidan  madu  sangat  bervariasi tergantung pada sumber bunga.
Bahan alam lain yang juga potensial sebagai sumber antioksidan adalah daun namnam. Pemilihan daun namnam pada penelitian ini karena namnam merupakan tanaman obat yang mengandung antioksidan tinggi terutama pada bagian daun  [11].  Analisis  terhadap  aktivitas  antioksidan  menunjukkan  bahwa  ekstrak  metanol  daun  namnam  memberikan aktivitas tertinggi (IC 50 0,0048±0,000 mg/mL) [4].  Ado dkk. [12] menyebutkan 18 komponen yang teridentifkasi sebagai fraksi bioaktif pada tanaman ini yaitu prosianidin trimer, prosianidin tetramer, prosianidin heksamer, taksifolin pentosida, katekin, viteksin, isoviteksin, kaempferol heksosida, kuersetin pentosida, kuersetin heksosida, apigenin ‐ 6 ‐ C ‐ glukosida ‐ 8 ‐ C ‐ glukosida, kaempferol–koumaril heksosida dan isorhamnetin heksosida.
Penelitian  mengenai  kombinasi  madu  sebagai  antioksidan  telah  banyak  dilakukan,  diantaranya  kombinasi  madu seperti kombinasi madu dan Nigella sativa [13], kombinasi madu dan Garcinia Kola [14], kombinasi madu alam dan benih Peganum harmala  [15],  serta  kombinasi  madu  dan  tepung  kentang  [16].  Kombinasi-kombinasi  tersebut  menghasilkan efek  sinergis  sehingga  meningkatkan  aktivitas  antioksidannya.  Sumarlin  dkk.  [4]  menyatakan  bahwa  kemampuan antioksidan  kombinasi  EMDN  (Ekstrak  Metanol  Daun  Namnam)  dan  Madu  Trigona  (IC 50 0,0085±0,000  mg/mL)  lebih tinggi dibandingkan komposisi tunggal Madu Trigona (IC 50 3,736±0,112 mg/mL). Oleh karena itu, kombinasi dari madu monoflora dengan ekstrak daun namnam berpotensi untuk dikembangkan sebagai pangan fungsional.

## 2. Bahan dan Metode

## 2.1. Bahan
Sampel  yang  digunakan  adalah  madu  lokal  kemasan  komersial  madu  rambutan  (MR),  madu  perternakan  lebah madu  rambutan  tanpa  kemasan  komersial  (MR2),  dan  madu  karet  (MK)  dan  daun  namnam  ( Cynometra  cauliflora L.) dengan  pelarut  metanol  pro  analysis  (Merck).  Uji  fitokimia  menggunakan  beberapa  bahan yaitu  H 2 SO 4 pekat  (Merck), pereaksi  Dragendorff,  pereaksi  Bourchardat, serbuk  magnesium  (Merck),  asam  klorida  pekat  (Merck),  besi  (III)  klorida (Merck),  NaOH  10%  (Merck)  dan  kloroform-amonia.  Bahan  lain  yang  digunakan  yaitu  reagen  Folin-Ciocalteu  (Merck), natrium  karbonat,  akuades,  asam  galat  (Sigma-Aldrich),  alumunium  klorida (Merck),  kuersetin  (Sigma-Aldrich),  asam metafosforik  (Merck),  asam  askorbat  (Merck),  2,6-dichlorophenolindophenol  (DCPIP)  (Merck),  2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (Sigma-Aldrich), dan kertas Whatman.

## 2.2. Preparasi Sampel dan Ekstraksi Daun Namnam
Daun namnam dikeringkan selama 3 hari di bawah sinar matahari langsung kemudian diserbukkan dengan blender selama 3 menit. Seratus gram serbuk halus daun namnam dimaserasi menggunakan metanol sebanyak 500 mL selama 24 jam. Campuran disaring dengan kertas saring Whatman no.1 sehingga diperoleh filtrat pertama. Residu daun namnam dimaserasi kembali dengan metanol selama 9 jam sehingga diperoleh filtrat kedua. Proses ini dilakukan sebanyak 5 kali ekstraksi.  Filtrat  yang  diperoleh  dikumpulkan  kemudian  dipekatkan  menggunakan rotary  evaporator hingga  diperoleh ekstrak pekat daun namnam (N).
Sampel madu yang digunakan adalah madu dengan kemasan komersial yang terdiri dari madu rambutan (MR) yang diperoleh dari Pondok Lebah Bekasi dan madu karet (MK) dari Cibubur, madu rambutan tanpa kemasan komersial (MR2) dari perternakan lebah madu Bogor. Madu yang digunakan tidak dilakukan proses ekstraksi seperti pada daun namnam. Kombinasi madu dengan ekstrak daun namnam (N) diberi kode MR-N untuk kombinasi madu rambutan dengan ekstrak daun  namnam, MK-N  untuk  kombinasi  madu  karet  dengan  ekstrak  daun  namnam,  dan  MR2-N  untuk  kombinasi  madu rambutan  tanpa  kemasan  komersial  dengan  ekstrak  daun  namnam. Masing-masing  kombinasi  antara  madu  dengan
ekstrak daun namnam dibuat perbandingan 1:1; 2:1 dan 1:2 (b/b). Pada penelitian ini digunakan 13 jumlah sampel yang terdiri dari 4 sampel tunggal (N, MR, MR2, dan MK) dan 9 sampel kombinasi dengan berbagai perbandingan.

## 2.3. Uji Fitokimia
Prosedur pengujian fitokimia didasarkan pada Harborne [17].

## 2.3.1. Identifikasi Golongan Senyawa Alkaloid
Sampel sebanyak 0,5 g ditambah 10 mL kloroform-amonia dan diaduk dan disaring. Filtrat ditambahkan 3-5 tetes H 2 SO 4 2 M, kemudian dikocok hingga terbentuk dua lapisan. Lapisan asam (terdapat pada bagian atas) dipipet dalam dua tabung reaksi lain, lalu ditambahkan beberapa tetes pereaksi Dragendorff pada tabung A dan pereaksi Bourchardat pada tabung B. Adanya alkaloid ditunjukkan dengan terbentuknya endapan jingga sampai merah coklat.

## 2.3.2. Identifikasi Golongan Senyawa Tanin/Fenolik
Sampel sebanyak 0,5 g ditambah 10 tetes FeCl 3 1%. Sampel positif mengandung tanin/fenol apabila menghasilkan warna hijau, merah, ungu, biru atau hitam pekat.

## 2.3.3. Identifikasi Golongan Senyawa Flavonoid
Sampel sebanyak 0,5 g ditambah dengan 10 mL air panas, dan didihkan selama 5 menit, kemudian disaring. Filtrat sebanyak  5  mL  ditambahkan  HCl  pekat  dan  0,05  mg  serbuk  Mg,  kemudian  dikocok  kuat-kuat.  Uji  positif  ditunjukkan dengan terbentuknya warna merah, kuning, atau jingga.

## 2.3.4. Identifikasi Golongan Senyawa Triterpenoid dan Steroid
Sampel  sebanyak  0,5  g  ditambah  dengan  20  mL  n-heksana  dan  didiamkan  selama  2  jam.  Kemudian,  sampel disaring dan ditambahkan 2 tetes H 2 SO 4 pekat. Steroid memberikan warna biru atau hijau, sedangkan untuk triterpenoid memberikan warna merah atau ungu.

## 2.3.5. Identifikasi Golongan Senyawa Saponin
Sampel sebanyak 0,5 g ditambah air panas sebanyak 5 mL dalam tabung reaksi dan dikocok. Sampel dinyatakan positif mengandung saponin apabila terbentuk busa dengan ketinggian 1-3 cm yang bertahan selama 15 menit.

## 2.3.6. Identifikasi Golongan Senyawa Kuinon
Sampel  sebanyak  0,5  g  ditambah  etanol  95%  sebanyak  2  mL,  lalu  ditambahkan  NaOH  10%.  Jika  terjadi pembentukan warna kuning, jingga, coklat, atau merah menunjukkan adanya fenol hidrokuinon.

## 2.4. Uji Kadar Total Fenolik, Flavonoid dan Vitamin C
Masing-masing sampel ditimbang sebanyak 100 mg dan dilarutkan dalam 10 mL akuades. Selanjutnya, campuran diambil  sebanyak  0,5 mL  dan  ditambahkan dengan 0,3  mL  Folin  Ciocalteu,  2 mL  Na 2 CO 3 15%  dan 2,2  mL  akuades. Larutan  dihomogenkan  dan  diinkubasi  selama  2  jam  dalam  ruang  gelap  lalu  diukur  serapannya  menggunakan spektrofotometer UV-Vis (Perkin Elmer Precisely) pada panjang gelombang 750 nm dengan akuades sebagai blanko [9]. Asam  galat  (0-100  ppm)  digunakan  untuk  menentukan  kurva  kalibrasi.  Pengukuran  dilakukan  sebanyak  3  kali  dan kandungan fenolik dinyatakan sebagai jumlah mg Gallic Acid Equivalent (GAE)/g sampel.
Masing-masing  sampel  sebanyak  0,2  g  dilarutkan  dalam  10  mL  metanol  pada  tabung  reaksi.  Setelah  itu,  5  mL campuran ditambahkan pereaksi AlCl 3 2% (b/v) sebanyak 5 mL. Larutan dihomogenkan dan diinkubasi selama 10 menit lalu  diukur  serapannya  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang  415  nm  dengan  metanol sebagai blanko [18]. Kuersetin (0-50 ppm) digunakan untuk menentukan kurva kalibrasi. Pengukuran dilakukan sebanyak 3 kali dan kandungan flavonoid dianggap sebagai jumlah mg Quercetin Equivalent (QE)/g sampel.
Masing-masing  sampel sebanyak  0,1  g  dilarutkan  dalam  10  mL  asam metafosforik  1% lalu  diinkubasi selama  45 menit. Larutan disaring menggunakan Whatman No. 41, kemudian 1 mL filtrat yang diperoleh ditambahkan 9 mL DCPIP. Larutan  diinkubasi  selama  30  menit  pada  suhu  ruang  lalu  diukur  serapannya  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis pada  panjang  gelombang  519  nm  [8].  Asam  askorbat  (0-200  ppm)  digunakan  untuk  menentukan  kurva  kalibrasi. Pengukuran  dilakukan sebanyak  3 kali  dan  kandungan vitamin  C  dinyatakan sebagai  jumlah  mg Ascorbic  Acid (AA)/g sampel.

## 2.5. Uji Aktivitas Antioksidan
Masing-masing madu monoflora dibuat berbagai konsentrasi yaitu 1000, 2000, 4000, 8000, 16000, 32000, 64000 dan 128000 mg/L. Adapun ekstrak daun namnam (N) dan kombinasi madu dengan ekstrak daun namnam (MR, MR2, MK) dibuat deret konsentrasi 0,5; 1; 2; 4 dan 8 mg/L. Selanjutnya, masing-masing variasi konsentrasi diambil sebanyak 2 mL dan ditambahkan dengan 2 mL DPPH 0,002%. Larutan kemudian dihomogenkan menggunakan vortex dan diinkubasi selama  30  menit  dalam  ruang  gelap.  Selanjutnya,  dilakukan  pengukuran  terhadap  serapan  larutan  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang  517  nm.  Pengukuran  dilakukan  sebanyak  3  kali.  Asam  askorbat (0,125-4 ppm) digunakan sebagai kontrol positif.
Aktivitas antioksidan sampel ditentukan persen inhibisi (% inhibisi) ditentukan berdasarkan Persamaan 1. Selain itu, ditentukan pula aktivitas antioksidan berdasarkan nilai IC 50. [12].
% Inhibisi = o   n i kon  ol - o   n i   mpel o   n i kon  ol x 100% (1)

## 3. Hasil dan Pembahasan

## 3.1. Hasil Uji Fitokimia
Tanaman mempunyai kemampuan untuk memproduksi berbagai macam metabolit sekunder seperti saponin, tanin, fenol, triterpenoid dan fitosterol [19]. Hal ini dapat dilihat bahwa ekstrak daun namnam (N) menunjukkan hasil positif pada uji kualitatif ( Tabel 1 ). Hasil ini sesuai dengan penelitian Aziz & Iqbal [11] yang menyatakan bahwa ekstrak daun namnam (N) mengandung senyawa metabolit sekunder seperti tanin, saponin, flavonoid, terpenoid dan glikosida. Hasil yang sama juga  ditunjukkan  pada  kombinasi  madu  dengan  ekstrak  daun  namnam.  Hal  ini  mengindikasikan  bahwa  golongan senyawa  saponin,  fenolik,  flavonoid,  kuinon,  terpenoid  dan  steroid  berasal  dari  ekstrak  daun  namnam  (N).  Pada  uji golongan senyawa kuinon dan saponin, kedua bahan sampel dalam bentuk tunggal menghasilkan kandungan positif. Hal ini menandakan adanya kontribusi dari madu dan ekstrak daun namnam (N) sehingga sampel kombinasi menghasilkan uji positif pada uji golongan.

## Tabel 1 . Hasil Pengujian Fitokimia
MR = Madu Rambutan Kemasan Komersial; MR2 = Madu Rambutan Tanpa Kemasan Komersial; MK = Madu Karet; N = Ekstrak Daun Namnam. T nd  “ + “ menunjukk n  e de ek i me   oli   ekudene ,  ed ngk n   nd  ” - “ menunjukk n  id k  e de ek i me   oli   ekunde .
Madu  banyak  menunjukkan  hasil  negatif  pada  uji  kualitatif  golongan  senyawa.  Hal  ini  dapat  disebabkan  karena kandungan  senyawa  metabolit  sekunder  rendah.  Hasil  kuantitatif  fenolik  dan  flavonoid  ( Tabel  2 )  menunjukkan  bahwa madu mengandung total fenolik yang rendah (0,298-0,588 mg GAE/g) sehingga tidak terdeteksi pada uji kualitatif . Selain itu,  nektar  bunga dapat  mempengaruhi  kandungan nutrisi  madu. Jenis  bunga yang  digunakan sebagai  sumber  nektar oleh lebah dapat mempengaruhi komposisi dari madu yang dihasilkan [20, 21].
Senyawa metabolit sekunder mempunyai  beberapa aktivitas biologi. Fenolik dilaporkan sebagai agen antioksidan [22]. Flavonoid mempunyai aktivitas antiproliferatif terhadap sel kanker [23], melindungi membran lipid dari oksidasi [24]. Golongan  senyawa  saponin  memiliki  potensi  sebagai  antihiperglikemia,  antidiabetes  dan  hipokolesterolemik  [25]. Golongan  alkaloid  mempunyai  fungsi  sebagai  anti  analgesik,  meningkatkan  dan  menurunkan  tekanan  darah  [26]. Sementara itu, golongan senyawa terpenoid dapat berperan penting dalam menyembuhkan bekas luka [27] .

## 3.2. Komposisi Senyawa Antioksidan
Analisis  komponen  kimia  antioksidan  meliputi  pengujian  kandungan  total  fenolik,  total  flavonoid  dan  vitamin  C terhadap  madu,  ekstrak  daun  namnam  dan  kombinasi  madu  dengan  ekstrak  daun  namnam  ( Tabel  2 ).  Pengujian  ini dilakukan untuk melihat pengaruh komponen penyusun sampel uji.
Golongan Senyawa MR MR2 MK N Kombinasi Madu-Ekstrak Daun Namnam Alkaloid - - - - - Fenolik - - - + + Flavonoid - - - + + Saponin + + + + + Kuinon - + - + + Terpenoid dan Steroid - - - + +
Tabel 2 . Kandungan Total Fenolik, Total Flavonoid dan Vitamin C
Sampel Status Total Fenolik (mg GAE/g) * Total Flavonoid (mg QE/g) * Vitamin C (mg AA/g) * N Tunggal 267,690±7,271 12,284±0,168 203,500±15,000 MK Tunggal 0,298±0,076 0,012±0,003 37,197±3,472 MR2 Tunggal 0,588±0,083 0,020±0,004 30,917±2,887 MR Tunggal 0,508±0,015 0,027±0,005 15,917±3,819 MK-N (1:1) Kombinasi 133,489 a ±4,990 5,904 c ±0,024 44,625 b ±2,165 MR2-N (1:1) Kombinasi 160,285 b,c ±6,253 6,411 d ±0,087 28,375 b,a ±1,250 MR-N (1:1) Kombinasi 145,014 a,b ±0,083 6,565 d ±0,161 26,708 a ±2,602 MK-N (1:2) Kombinasi 165,759 c ±6,545 9,019 e ±0,143 223,667 f ±5,774 MR2-N (1:2) Kombinasi 266,027 e ±3,992 9,069 e ±0,155 100,333 e ±11,547 MR-N (1:2) Kombinasi 227,768 d ±10,797 9,790 f ±0,069 70,917 c ±7,638 MK-N (2:1) Kombinasi 140,087 a ±13,194 4,852 a ±0,033 96,750 d,e ±2,500 MR2-N (2:1) Kombinasi 143,837 a,b ±12,976 4,870 a ±0,022 87,583 d ±1,443 MR-N (2:1) Kombinasi 143,725 a,b ±10,932 5,070 c ±0,077 25,917 a ±3,819
* (dinyatakan dalam mean ± SD). Angka yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf uji lanjut Duncan 5% taraf signifikansi 95% (P<0,05); N (Ekstrak Daun Namnam); MR (Madu Rambutan Kemasan Komersial); MR2 (Madu Rambutan Tanpa Kemasan Komersial); MK (Madu  Karet);  MR-N  (Kombinasi  MR  dengan  Ekstrak  Daun  Namnam);  MR2-N  (Kombinasi  MR2  dengan  Ekstrak  Daun  Namnam);  MK-N (Kombinasi MK dengan Ekstrak Daun Namnam)
Berdasarkan Tabel 2 dapat dilihat bahwa ekstrak daun namnam (N) memiliki kandungan total fenolik, total flavonoid dan  vitamin  C  tertinggi.  Hasil  penelitian  ini  berbeda  dengan  penelitian  Ado  dkk.  [12]  dan  Aziz  &  Iqbal  [11]  dimana kandungan  total  fenolik  dan  total  flavonoid  daun  namnam  yaitu  sebesar  214,370  mg  GAE/g  dan  33,63  mg  CAE/g, berturut-turut. Komposisi suatu tanaman dipengaruhi oleh faktor geografis, kondisi iklim, sumber tanaman, jenis varietas, kultivar, faktor genetik, perlakuan setelah panen dan kondisi penyimpanan bahan [28, 29, 30].
Sampel MR, MR2 dan MK memiliki kandungan total fenolik, total flavonoid dan vitamin C yang berbeda. Hal ini juga terjadi pada penelitian Meda dkk. [18] yang menunjukkan bahwa kandungan total fenolik dan flavonoid pada 27 sampel madu dari Burkina Faso, Afrika berkisar antara 32,59-114,75 mg GAE/100 g dan 0,17-8,35 mg QE/100 g. Kishore dkk. [2] menyebutkan  bahwa  kandungan  madu Tualang , Gelam , Indian  Forest dan Pineapple memiliki  kandungan  vitamin  C berkisar 14,64-36,09 mg AAE/100 g. Hal ini menunjukkan bahwa daerah asal dari madu mempengaruhi komposisi kimia madu tersebut.
Perbedaan kandungan komposisi dari madu juga dipengaruhi oleh sumber nektar [31] dan faktor eksternal seperti musim, faktor lingkungan, pengolahan dan penyimpanan. Rendahnya kandungan total fenolik, total flavonoid dan vitamin C dapat disebabkan karena faktor penyimpanan madu dari waktu produksi sampai madu dilakukan analisis. Hal ini sesuai dengan  penelitian  Saric  dkk.  [32]  yang  menyebutkan  bahwa  kandungan  total  fenolik  dan  total  flavonoid  pada  madu akasia yang disimpan selama 6 bulan mengalami penurunan dari 82,26 menjadi 28,94 mg GAE/kg. Meskipun demikian, kandungan total fenolik  pada  penelitian  ini masih  lebih  besar  dibandingkan  penelitian  Liu  dkk. [23]  dimana  kandungan madu D. iongan , L. chinensis dan C. maxima mengandung total fenolik berkisar 0,307–0,489 mg GAE/g.
Berdasarkan hasil uji statistik menggunakan One Way ANOVA diperoleh bahwa terdapat perbedaan yang signifikan kandungan total fenolik, total flavonoid dan vitamin C akibat adanya perlakuan kombinasi.  Pada taraf uji lanjut Duncan menunjukkan kombinasi madu dengan ekstrak daun namnam pada perbandingan 1:2 memiliki kandungan total fenolik, total  flavonoid  dan  vitamin  C  tertinggi.  Hal  ini  disebabkan  karena  jumlah  ekstrak  daun  namnam  lebih  dominan dibandingkan madu sehingga komponen yang terkandung dalam sampel lebih besar dibandingkan dengan kombinasi 1:1 dan  2:1.  Hal  ini  dapat  dilihat  dari  hasil  uji  ekstrak  daun  namnam  memiliki  kandungan total  fenolik,  total  flavonoid  dan vitamin  C  yang  lebih  besar  dibandingkan  sampel  madu.  Semakin  banyak  jumlah  ekstrak  daun  namnam  pada  sampel kombinasi maka kadar total fenolik, total flavonoid dan vitamin C yang terkandung juga semakin tinggi.
Adanya  kombinasi  madu  dengan  ekstrak  daun  namnam  dapat  mempengaruhi  kandungan  total  senyawa  fenolik, total flavonoid dan vitamin C. Hal ini menunjukkan bahwa komposisi suatu bahan alam dapat mempengaruhi kandungan senyawa  di  dalam  bahan  tersebut.  Pada  penelitian  ini,  kombinasi  madu  dengan  ekstrak  daun  namnam  pada perbandingan 1:2 merupakan kombinasi terbaik.

## 3.3. Aktivitas Antioksidan Sampel
Berdasarkan Tabel  3 diketahui  bahwa  nilai  IC 50 seluruh  sampel  berkisar  antara  0,004-117,793  mg/mL dengan  aktivitas  antioksidan  tergolong  sedang  hingga  tidak  aktif.  Aktivitas  antioksidan  dengan  nilai  IC 50 terendah terdapat pada ekstrak daun namnam (N) sebesar 0,004 mg/mL. Ini menunjukkan bahwa ekstrak daun namnam (N) memiliki aktivitas antioksidan tertinggi pada yang dapat menghambat 50% radikal DPPH sehingga dapat dikatakan bahwa N memiliki aktivitas antioksidan sangat kuat. Kuatnya aktivitas antioksidan ekstrak daun namnam  (N)  dapat  disebabkan  karena  tingginya  komponen-komponen  antioksidan  seperti  kandungan  total fenolik,  total  flavonoid  dan  vitamin  C  ( Tabel  2 ).  Aktivitas  antioksidan  N  hasil  penelitian  ini  lebih  kuat dibandingkan  penelitian  Ado  dkk.  [12]  yang  menyebutkan  nilai  IC 50 ekstrak  metanol  daun  namnam  sebesar 0,048 mg/mL.
Tabel 3 . Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Sampel Status Nilai IC 50 (mg/mL) * Vit. C - 0,003±0,000 MR Tunggal 21,576±0,794 MR2 Tunggal 36,502±0,824 MK Tunggal 117,793±1,867 N Tunggal 0,004±0,000 MR-N (1:1) Kombinasi 0,008 c ±0,000 MR2-N (1:1) Kombinasi 0,009 c ±0,000 MK-N (1:1) Kombinasi 0,027 f ±0,001 MR-N (1:2) Kombinasi 0,005 a ±0,000 MR2-N (1:2) Kombinasi 0,005 a ±0,000 MK-N (1:2) Kombinasi 0,010 d ±0,000 MR-N (2:1) Kombinasi 0,006 b ±0,000 MR2-N (2:1) Kombinasi 0,011 d ±0,000 MK-N (2:1) Kombinasi 0,015 e ±0,000
* (dinyatakan dalam mean ± SD). Angka yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf uji lanjut Duncan 5% taraf signifikansi 95% (P<0,05); N (Ekstrak Daun Namnam); MR (Madu Rambutan Kemasan Komersial);  MR2  (Madu  Rambutan  Tanpa  Kemasan  Komersial);  MK  (Madu  Karet);  MR-N  (Kombinasi  MR dengan Ekstrak Daun Namnam); MR2-N (Kombinasi MR2 dengan Ekstrak Daun Namnam); MK-N (Kombinasi MK dengan Ekstrak Daun Namnam).
Berdasarkan Tabel 3 diketahui nilai IC 50 pada MR, MR2 dan MK sangat besar. Tingginya nilai IC 50 dapat disebabkan oleh sampel madu yang diuji berupa madu utuh tanpa dilakukan  proses pemisahan atau fraksinasi senyawa sehingga belum mendapatkan senyawa murni. da Silva dkk. [35] menyebutkan bahwa IC 50 aktivitas antioksidan fraksi etil asetat madu lebih kuat (11,1±0,1 μg/mL) dibandingkan madu utuh (87,8±0,9 μg/mL). Oleh karena itu, daya inhibisi ketiga madu tersebut terhadap DPPH sangat lemah. Faktor penyimpanan madu dapat menyebabkan penurunan aktivitas antioksidan. Penelitian Saric dkk. [32] menyebutkan bahwa madu akasia yang disimpan selama 6 bulan mengalami peningkatan nilai IC 50 dari 44,54 menjadi 53,55 mg/mL.
Sampel MR, MK dan MR2 memiliki nilai IC 50 yang berbeda. Adanya perbedaan aktivitas antioksidan yang dimiliki masing-masing  madu  dipengaruhi  oleh  spesies  tanaman,  nektar  bunga, faktor  eksternal  dan  produk metabolisme  asal lebah [31]. Nilai IC 50 MR yang dihasilkan lebih rendah dibandingkan MR2, hal ini menandakan bahwa pengolahan madu tidak  mempengaruhi  aktivitas  antioksidan  madu.  Penelitian  Estenvinho  dkk.  [34]  menyebutkan  bahwa  EC 50 madu Portugal sebesar 27,24 mg/mL dan 68,17 mg/mL. Hal ini menunjukkan bahwa MR dan MR2 memiliki aktivitas antioksidan yang lebih kuat dibandingkan madu Portugal ( Tabel 3 ).
Pengaruh pencampuran masing-masing madu dengan ekstrak daun namnam dapat diketahui melalui uji antioksidan terhadap kombinasi kedua bahan tersebut. Hasil uji statistik diketahui bahwa terdapat perbedaan secara nyata aktivitas antioksidan  pada  sampel  uji  akibat  adanya  kombinasi.  Hasil  analisis  terhadap  pengaruh  kombinasi  madu  dan  ekstrak daun namnam terhadap aktivitas antioksidan menunjukkan hasil yang kuat dimana nilai IC 50 yang dihasilkan kurang dari 0,05  mg/mL.  Sampel  MR-N  dan  MR2-N  dengan  perbandingan  1:2  merupakan  kombinasi  yang  paling  kuat  dalam meredam radikal DPPH dengan nilai IC 50 sebesar 0,005 mg/mL. Kombinasi yang paling kuat ini terjadi ketika komposisi ekstrak daun namnam lebih besar. Hal ini diduga bahwa aktivitas antioksidan berasal dari ekstrak daun namnam. Hasil tersebut terlihat pada uji tunggal aktivitas antioksidan ekstrak daun namnam lebih tinggi dibandingkan dengan madu.
Adapun aktivitas antioksidan setelah pencampuran menurut perbandingan 1:1; 1:2; 2:1 dari madu dan ekstrak daun namnam, ternyata tidak jauh menurunkan nilai IC 50 dari ekstrak daun namnam. Efek pencampuran yang dilakukan hanya mampu  meningkatkan  aktivitas  antioksidan  madu,  dimana  nilai  IC 50 masing-masing  madu  tunggal  jauh  lebih  tinggi dibandingkan ekstrak daun namnam. Ketiga formulasi kombinasi menunjukkan sifat antioksidan yang sangat kuat sama seperti aktivitas antioksidan ekstrak daun namnam, dimana nilai IC 50 yang dihasilkan lebih kecil dari 0,05 mg/mL. Aktivitas antioksidan  kombinasi  madu  dan  ekstrak  daun  namnam  masih  lebih  kecil  dibandingakan  aktivitas  antioksidan  ekstrak daun namnam.
Aktivitas antioksidan seluruh sampel juga diuji korelasinya terhadap kadar total fenolik dan vitamin C. Berdasarkan hasil yang  diperoleh  diketahui  bahwa terdapat  korelasi yang kuat  dan  sedang  antara  kedua  senyawa tersebut  dengan aktivitas  antioksidan.  Hal  tersebut  berdasarkan  nilai  koefisien  korelasi  sebesar  -0,664  (P<0,01)  untuk  kadar  fenolik, sedangkan untuk kadar vitamin C nilai koefisien korelasinya sebesar -0,280 (P<0,01). Hal ini menunjukkan bahwa 28% kapasitas  antioksidan  pada  sampel  uji  dipengaruhi  oleh  adanya  senyawa  vitamin  C,  sedangkan  senyawa  fenolik berpengaruh  sebesar  66,4%.  Kemungkinan  besar  senyawa-senyawa  lain  yang  juga  berkontribusi  terhadap  aktivitas antioksidan berasal dari senyaw   epe  i   nin,  okofe ol, β-karoten dan asam-asam organik yang diketahui terkandung dalam sampel madu dan ekstrak daun namnam.

## 4. Kesimpulan
Aktivitas  antioksidan  ketiga  jenis  madu  relatif  rendah  jika  dibandingkan  ekstrak  daun  namnam.  Namun,  aktivitas antioksidan hasil kombinasi madu dengan ekstrak daun namnam meningkat dan aktivitas antioksidan tertinggi diperoleh pada  kombinasi  madu  rambutan  kemasan  komersial  (MR)  dan  bukan  kemasan  komersial  (MR2)  dan  ekstrak  daun namnam.  Perbandingan  masing-masing  madu  dan  ekstrak  namnam  tertinggi  terdapat  pada  perbandingan  1:2  dengan nilai IC 50 0,005±0,000 mg/mL. Peningkatan aktivitas antioksidan tersebut sangat dipengaruhi oleh kandungan senyawa fenolik, flavonoid dan vitamin C yang berkorelasi positif terhadap peningkatan aktivitas antioksidan.

## Daftar Pustaka
[1] R.  M.  Muliany,  “Daftar  Kandungan  Zat  Gizi,  Serat  dan  Indeks  Glikemik  dalam  Penukar  Berbagai  Hidangan Indonesia dan Makanan Siap Santap Barat un uk P  ien Di  e e  Meli u ,” thesis, Jurusan Ilmu Gizi, Universitas Dipenogoro, Semarang, 2005.
[2] R. K. Kishore, A. S. Halim, M. S. N. Syazana, & K. N. S. Sirajudeen, “Tualang Honey has Higher Phenolic Content and Greater Radical Scavenging Activity Compared with Other Honey Sources,” Nutrition Research, vol. 31, no.4 pp. 322-325, 2011.
[3] Rohmatussolihat, “Antioksidan, Penyelamat Sel-Sel Tubuh Manusia,” BioTrends , vol. 4, no. 1, pp. 5-9, 2009.
[4] L. Sumarlin, A. Suprayogi, M. Rahminiwati, A. Tjachja, & D. Sukandar, “Bioactivity of Methanol Extract of Namnam Leaves in Combination with Trigona Honey,” Jurnal Teknologi dan Industri Pangan , vol. 26, no.2, pp. 144-154, 2015.
[5] L. Sumarlin, A. Tjachja, R. Octavia, & N. Ernita, “Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Madu Cair dan Madu Bubuk Lokal Indonesia,” Al-Kimia , vol. 6, no. 1, pp. 10-23, 2018.
[6] L.  Sumarlin,  A. Muawanah,  P. Wardhani,  &  Masitoh,  “Anticancer  and  Antioxidant  Activity  of  Honey  in  the Market Local Indonesia,” Jurnal Ilmu Pertanian Indonesia , vol. 19, no.3, pp. 136–144, 2014.
[7] J.  Bertoncelj,  U.  Do e šek,  M.  Jamnik,  &  T.  Golob,  “Evaluation  of  the  Phenolic  Content,  Antioxidant  Activity  and Colour of Slovenian Honey,” Food Chemistry , vol. 105, no. 2, pp.822–828, 2007.
[8] I.  C.  F.  R.  Ferreira,  E.  Aires,  J.  C.  M.  Barreira,  &  L.  M.  Estevinho,  “Antioxidant  Activity  of  Portuguese  Honey Samples:  Different  Contributions  of the  En i e  Honey   nd  Phenolic  Ex   c ,” Food Chemistry , vol. 114,  no.  4,  pp. 1438-1443, 2009.
[9] J. E. Pontis, L. A. M. A. Costa, S. J. R. Silva, & A. Flach, “Color, Phenolic and Flavonoid Content, and Antioxidant Activity of Honey from Roraima, Brazil,” Food Science and Technology , vol. 34, no.1, pp. 69-73, 2014.
[10] J. M. Alvarez-Suarez et al. , “Antioxidant and Antimicrobial Capacity of Several Monofloral Cuban Honeys and Their Correlation with Color, Polyphenol and Other Chemical Compounds,” Food and Chemical Toxicology, vol. 48, no.8-9, pp. 2490-2499, 2010.
[11] A. F. A. A. Aziz & M. Iqbal, “Antioxidant Activity and Phytochemical Composition of Cynometra cauliflora ,” Journal of Experimental and Integrative Medicine , vol. 3, no. 4, pp. 337-341, 2013.
[12] M.  A.  Ado,  F.  Abas,  I.  S.  Ismail,  H.  M.  Ghazali,  &  K.  Shaari,  “Chemical  Profile  and  Antiacetylcholinesterase, Antityrosinase, Antioxidant and α-Glucosidase Inhibitory Activity of Cynometra cauliflora L. Le ve ,” Journal of the Science of Food and Agriculture, vol. 95, no.3, pp. 635-642, 2014.
[13] A. Meslem, M. Ahmed, N. Djebli, & S. Aissat, “ n i  c e i l  c ivi y of Honey  lone  nd in Com in  ion wi h Nigella sativa Seeds against Pseudomonas aeruginosa Infection,” Asian Pacific Journal of Tropical Disease , vol. 2, no. 1, pp. S248-S430, 2012.
[14] F. I.  Akinnibosun  &  E. Itedjere,  “Evaluation  of the  Antibacterial  Properties  and  Synergistic  Effect  of Garcinia  kola Heckel (Family: Guttiferae ) Seed Extract and Honey on Some Bacteria,” African Journal of Microbiology Research , vol. 7, no. 3, pp. 174-180, 2013.
[15] M.  Ahmed,  B.  Khiati,  N.  Djebli,  S.  S.  Aissat,  A.  Meslem,  &  S.  Bacha,  “Potent  Synergism  of  the  Combination  of Natural  Honey  and Peganum  harmala Seeds  against Candida  albicans ATCC  10231,” Open  Access  Scientific Reports , vol. 2, no. 4, 2013.
[16] M.  hmed, N. Dje li, S.  i    , S. B ch ,  . Me lem, & B. Khi  i, “Syne gi  ic Inhi i ion of N  u  l Honey  nd Po   o Starch and Their Correlation with Diastase Number and Sugar Content against Klebsiella pneumonia TCC 27736,” Natural Product Chemistry & Research , vol. 1, no. 1, 2012.
[17] J. R. Harborne, Metode fitokimia Pantunan Cara Metode Menganalisis Tumbuhan , Bandung: ITB Press, 1987.
[18] A. Meda, C. E. Lamien, M. Romito, J. Millogo, & O. G. Nacoulma, “Determination of the Total Phenolic, Flavonoid and Proline Contents in Burkin  F  o Honey,    well    Thei  R dic l Sc venging  c ivi y,” Food Chemistry , vol. 91, pp. 571-577, 2005.
[19] D. T. Patil, K. D. Gurav, A. S. Kadam, S. V. Thite, R. B. Thoke, & B. A. Kore, “Qualitative Analysis of Secondary Metaboli e  f om Some Filic le  Mem e  ,” International Journal of Reseacrch in Pharmacy and Chemistry , vol. 3, no. 2, pp. 300-302, 2013.
[20] C. Cimpoiu, A. Hosu, V. Miclaus, & A. Puscas, “Determination of the Floral Origin of Some Romanian Honeys on the Basis  of  Physical  and  Biochemical  P ope  ie ,” Spectrochimica  Acta  Part  A:  Molecular  and  Biomolecular Spectroscopy , vol. 100, pp. 149-154, 2013.
[21] J. R. Liu, Y. L. Ye, T. Y. Lin, Y. W. Wang, & C. C. Peng, “Effect of Floral Sources on the Antioxidant, Antimicrobial, and Anti-inflammatory  c ivi ie  of Honey  in T iw n,” Food Chemistry , vol. 139, no. 1-4, pp. 938-943, 2013.
[22] A. Wojdylo, J. Oszmianski, & R. Czemerys, “Antioxidant Activity and Phenolic Compounds in 32 Selected Herbs,” Food Chemistry , vol. 105, no. 3, pp. 940-949, 2007.
[23] J. A. Manthey & N. Guthrie, “ n ip olife   ive  c ivi ie  of Ci  u  Fl vonoid   g in   Six Hum n C nce  Cell Line ,” Journal of Agricultural and Food Chemistry , vol. 5, no. 21, pp. 5837-5843, 2002.
[24] C. G. Heijnen, G. R. Haenen, R. M. Oostveen, E. M. Stalpers, & A. Bast, “Protection of Flavonoids against Lipid Peroxidation:  The  Structure  Activity  Relationship  Revisited,” Free Radical  Research ,  vol.  36,  no.5,  pp.  575-581, 2002.
[25] M.  D.  Shah  &  M.  A.  Hossain,  “Total  Flavonoids  Content  and  Biochemical  Screening  of  the  Leaves  of  Tropical Endemic Medicinal Plant Merremia borneensis ,” Arabian Journal Chemistry , vol. 7, no. 6, pp. 1034-1038, 2014.
[26] V. E. Tyler, L. R. Brady, & J. E. Robbers, Pharmacognosy , 9th ed. Philadelphia: Lea and Febiger, 1988.
[27] B. S. Nayak, S. S. Raju, F. A. Orette, & A. V. C. Rao, “Effects of Hibiscus rosa sinensis L ( Malvaceae ) on Wound Healing Activity: A Preclinical Study in a Sprague Dawley Rat,” The International Journal Lower Extremity Wounds , vol. 6, no. 2, pp. 76-8, 2007.
[28] J. Lachman, M. Orsak, A. Hejtmankova, & E. Kovarova, “Evaluation of Antioxidant Activity and Total Phenolics of Selec ed Czech Honey ,” Food Science and Technology , vol. 43, no.1, pp. 52-58, 2010.
[29] S. Gorinstein et al. , “The Comparative Characteri  ic  of Sn ke  nd Kiwi F ui  ,” Food and Chemical Toxicology , vol. 47, no. 8, pp. 1884-1891, 2009.
[30] M.  I.  B.  Abdullah,  “Physicochemical  Profiling  and  Detection  of  Phenolic  Constituents  with  Antioxidant  and Antibacterial Activities of Myristica fragrans Houtt,” thesis, University Sains Malaysia, Penang, 2009.
[31] V. Baltrusaityte, P. R. Venskutonis, & V. Ceksteryte, “Radical Scavenging Activity of Different Floral Origin Honey nd Bee  e d Phenolic Ex   c  ,” Food Chemistry , vol. 101, no.2, pp. 502-514, 2007.
[32] G.  Saric et  al. ,  “Changes  of  Antioxidant  Activity  and  Phenolic  Content  in  Acacia  and  Multifloral  Honey  during Storage,” Food Technology and Biotechnology , vol. 50, no. 4, pp. 434-441, 2012.
[33] I. A. A. da Silva et al. , “Phenolic Profile, Antioxidant Activity and Palynological Analysis of Stingless Bee Honey From m zon  , No  he n B  zil,” Food Chemistry , vol. 141, no. 4, pp. 3552–3558,  2013.
[34] L. Estenvinho, A. P. Pereira, L. Moreira, L. G. Dias, & E. Pereira, “Antioxidant and Antimicrobial Effects of Phenolic Compounds Extracts of Northeast Portugal Honey,” Food and Chemical Toxicology , vol. 87, no. 6, pp. 1069-1075, 2008.