## TOTAL FLAVONOID LEVELS IN VARIOUS VARIETIES OF
SOYBEAN SEEDS ( Glycine max ) IN INDONESIA
Siti Uswatun Hasanah, Diki Prayugo W, Nitta Nurlita Sari

## Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia, Indonesia
Corresponding author: Siti Uswatun Hasanah (sitiuswatun1512@gmail.com)

## ARTICLE HISTORY
Received: 17 Mei 2019 Revised: 8 Juni 2019                     Accepted: 11 Juli 2019

## Abstract
Soybean  is  the  largest  food  crop  commodities  in  Indonesia  after  rice  and  corn.  It researches  shown  isoflavone  is  a  composition  in  soybean  changes  in  the  effect  on treatment  using  soy,  weighing  the  risk  of  prostate  cancer,  breast  cancer,  and  the development  of  colon  cancer.  This  study  aims  to  determine  of  total  flavonoids  in soybean seed varieties  and determine soybean  seed varieties  that  have  high quantity of flavonoids. This research was conducted on nine varieties of soybean seeds, which were extracted by heat. The resulting extract was analyzed using a spectrophotometer, and determined the quantity of flavonoids based on the calibration curve for quercetin. Difference  Quantity  of  flavonoid  in  nine  varieties  of  soybean  seeds.  The  greatest  of flavonoid content was obtained from Argomulyo varieties (0.354 mg /grams).
Key words : Soybeans, varieties, flavonoid

## KADAR TOTAL FLAVONOID PADA BERBAGAI VARIETAS BIJI KEDELAI ( Glycine max ) INDONESIA

## Abstrak
Kedelai merupakan salah satu komoditi tanaman pangan terbesar di  Indonesia setelah padi dan jagung. Beberapa penelitian menunjukkan kandungan flavonoid dalam kedelai memberikan  perubahan  efek  profilaktik  pada  pengobatan  menggunakan  kedelai, diantaranya  menurangi  resiko  kanker  prostat,  kanker  payudara,dan  perkembangan kanker usus besar. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kadar total flavonoid pada beberapa  varietas  biji  kedelai  serta  mengetahui  variaetas  biji  kedeai  yang  memiliki flavonoid  tinggi.  Penelitian  ini  dilakukan  terhadap  Sembilan  varietas  biji  kedelai,  yang diekstraksi  dengan  cara  panas.  Ekstrak  yang  dihasilkan  dianalisis  dengan menggunakan spektrofotometer, dan penentuan kadar total flavonoid didasarkan pada kurva  kalibrasi  kuersetin.  Kadar  total    flavonoid  pada  Sembilan  varietas  biji  kedelai bervriasi satu sama lain. Kadar total flavonoid tertinggi didapat dari biji kedelai varietas Argomulyo, yaitu 0,354 mg/gram biji kedeai kering.
Kata kunci : Kedelai, varietas, flavonoid

## Pendahuluan
Kedelai  ( Glycine  max )  merupakan  salah  satu  komoditi  tanaman  pangan terbesar  di  Indonesia  setelah  padi  dan  jagung.  Masyarakat  memanfatkan  kedelai sebagai sumber protein nabati. Disamping harga kedelai yang relatif murah, produk olahannya sangat baik untuk kesehatan tubuh karena  tidak mengandung kolesterol (Yuwono dkk, 1996). Sebagai sumber protein nabati, kedelai umumnya dikonsumsi dalam  bentuk  produk  olahan,  yaitu:  tahu  tempe,  kecap,  tauco,  susu  kedelai,  dan berbagai  bentuk  makanan  ringan  (Sudaryanto,  2006).  Berdasarkan  penelitian Himah dkk (2018) tepung kedelai terbukti memiliki aktifitas sebagai hepatoprotektor, dengan mencegah peningkatan kadar malondialdehid (MDA) hati tikus wistar jantan yang diinduksi diazinon.
Konsumsi  kedelai  menujukkan  efek  yang  baik  pada  metabolisme  glukosa  dan lemak.  Beberapa  penelitian  menunjukkan  perubahan  efek  profilaktik  pada pengobatan  menggunakan  kedelai,  diantaranya  menurangi  resiko  kanker  prostat (Severson  dkk,  1989),  kanker  payudara  (Adlercreutz  dkk,  1992),    dan perkembangan  kanker  usus  besar  (Watanabe  dan  Kessel,  1993).  Penelitian  lain menunjukkan  efek  kemopreventif  dari  kedelai  dan  makanan  yang  mengandung kedelai  terkait  dengan  aktivitas  estrogen  isoflavon  (Messina  dan  Barnes,  1991), isoflavon  memberikan  aktifitas  DNA  topoisomerase,  mensintesis  dan  melepaskan TGF3,  modulasi  apoptosis,  aktivitas  antioksidan  dan  memberikan  aktivitas penghambatan  kuat  pada  protein  tirosin  kinase  speifik  (Birt,  Hendrich  dan  Wang, 2001).  Telah  dibuktikan  bahwa  populasi  yang  mengkonsumsi  asupan  isoflavon tinggi  memiliki  resiko  rendah  terkena  penyakit  kardiovaskular,  osteoporosis, penyakit ginjal dan kanker (Hodgson et al. , 1996; Adlercreutz, 1995; Miller, 2017).
Pada  umunya  senyawa  isoflavon  banyak  ditemukan  pada  kedelai  (Zubik  dan Meydani,  2003).  Isoflavon  utama  pada  kedelai  adalah  genistein  dan  daidzein, turunan  β-gikosida  (genistin  dan  daidzin).  Ditemukan juga  sejumlah  kecil  senyawa isoflavon lain seperrti glisitein dan glikosidanya (Wang dan Murphy, 1994). Isoflavon termasuk dalam golongan flavonoid yang merupakan senyawa polifenolik.
Flavonoid  dan  isoflavonoid  menunjukan  banayak  aktifitas  biologi  diantaranya sebagai kemopreventif kanker  (Bravo, 1998; Kuo, 1996; Adlercreutz, 1995). Dalam beberapa  tahun  terakhir,  ditemukan  bahwa  flavonoid  dan  isoflavon  mampu menghambat  sikus  sel,  poliferasi  sel,  dan  stres  oksidatif,  serta  dapat  menginduksi enzim detoksifikasi, apoptosis dan system imun (Birt, Hendrich dan Wang, 2001).
Mengingat  kedelai  adalah  salah  satu  tanaman  pangan  terbesar  di  Indonesia, dan  sudah  banyaknya  varietas  yang  dihasilkan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  kadar  total  flavonoid  pada  beberapa  varietas  biji  kedelai  serta mengetahui variaetas biji kedeai yang memiliki kadar flavonoid tinggi.

## Metode Penelitian

## Bahan
Bahan  utama  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  biji  kedelai  lokal dengan  berbagai  varetas,  standar  kuersetin.  Varietas  kedelai  yang  digunakan adalah  Anjasmoro,  Argomulyo,  Burangrang,  Demas,  Dena,  Dering,  Detam,  Devon, dan  Gema.  Adapaun  bahan-bahan  untuk  analisis  meliputi  metanol  pa,  Alumunium klorida (AlCl 3 ), Na Asetat, aqua destilata, reagen skrining, dan kertas saring.

## Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah labu bulat 500 ml, kondensor, penangas  air,  timbangan  analitik,  spektrofotometer  UV-Vis  infinite  200  Pro  Nano Quant, mikropipet, dan alat gelas lainnya.

## Prosedur
Penelitian  ini  telah  dilaksanakan  di  Laboratorium  Biologi  Farmasi  dan Instrumen,  Sekolah  Tinggi  Farmasi  Indonesia.  Sembilan  varietas  biji  kedelai diperoleh  dari  Balai  Penelitian  Tanaman Aneka  Kacang  dan  Umbi  (BALITKABI)  Jl. Raya  Kendal  Payak,  Malang,  Jawa  Timur.  Biji  kedelai  tersebut  di  blender  kasar untuk kemudian dilakukan skrining fitokimia dan ekstraksi.
Skrining  fitokimia  dilakukan  terhadap  simplisia  biji  kedelai  untuk  menganalisis keberadaan  senyawa  metabolit  sekunder  yang  terkandung  dalam  biji  kedelai. Metabolit  sekunder  yang  akan  dianalisis  adalah  alkaloid,  tanin,  flavonoid, triterpenoid, steroid, kuinon, monoterpen dan seskuiterpen.
Metode  estraksi  yang  dipilih  adalah  cara  panas  (refluks).  Masing-masing varietas biji kedelai ditimbang sebanyak 10 gram dan ditambahkan pelarut metanol sebanyak  80  ml.  Filtrat  yang  didapat  diuapkan  dengan    penguap  putar  dan penangas air hingga didapat ekstrak kental metanol biji kedelai.
Tahap  penelitian  selanjutnya  adalah  pembuatan  kurva  kalibrasi  kuersetin  dan penetapan  kadar  total  senyawa  flavonoid.  Pembuatan  kurva  kalibrasi  kuersetin dilakukan  dengan  membuat  larutan  induk  dengan  konsentrasi  100  µg/ml,  keudian diencerkan secara bertingkat sehngga diperoleh beberapa seri konsentrasi, yaitu 15 µg/ml,  25  µg/ml,  30  µg/ml,  45  µg/ml,  dan  50  µg/ml.  Kelima  seri  konsentrasi, ditambahkan  metanol,  Alumunium  klorida  (AlCl 3 )  10%,  Na  Asetat  1M,  dan aquadestilata,  dan  dikubansi  selama  30  menit.  Larutan  hasil  inkubasi  dilakukan pengukuran  absorbansi  dengan  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  pada panjang  gelombang  429  nm.  Nilai  absorbansi  dibandingkan  terhadap  konsentrasi larutan  standar  kuersetin  dan  diadapatkan  persamaan  garis  y  =  0,0168x –  0,043 dan  koefisien  korelasi  (r)  sebesar  0,9971.  Kurva  kalibrasi  kuersetin  dapat  dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Kurva Kalibrasi Kuersetin
y = 0,0168x - 0,043 R² = 0,9971 0 0,5 1 0 20 40 60 A b so rb an si ( A ) Konsentrasi (µm/ml) Kurva Kalibrasi Kuersetin

## Hasil dan Pembahasan

## Temuan Penelitian
Hasil  skrining  fitokimia  simplisia  biji  kedelai  menunjukkan  biji  kedelai mengandung  metabolit  sekunder  favonoid,  fenol,  tannin,  steroid,  dan  terpenoid. Srining  fitokimia    pada  sembilan  varietas  biji  kedelai  tidak  menunjukkan  hasil  yang berbeda  dan  sesuai  dengan  pustaka  yang  menyebutkan  bahawa  biji  kedelai mengandung  flavonoid  dan  steroid/terpenoid  (Ndakidemi  &  Dakora,  2003).  Hasil Skrining Sembilan varietas biji kedelai dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil Skrining Fitokimia Biji Kedelai Varietas Biji Kedelai Golongan Senyawa Flavonoid Alkaloid Saponin Fenol Tanin Seroid/ Triterpnoid Kuinon Anjasmoro + - - + + + - Argomulyo + - - + + + - Burangrang + - - + + + - Demas + - - + + + - Dena + - - + + + - Dering + - - + + + - Detam + - - + + + - Devon + - - + + + - Gema + - - + + + -
Keterangan : ( + )    memberikan hasil positif ( - )     memberikan hasil negative
Ekstraksi biji kedelai menggunakan metode panas (refluks) dengan tujuan agar mendapatkan  metabolit  dalam  jumlah  banyak  dengan  waktu  yang  singkat,  jika dibandingkan ekstraksi menggunakan metode dingin. Selain itu, biji kedelai memiliki tekstur  yang  cukup  keras,  sehingga  untuk  dapat  melarutkan  banyak  metabolit dibutuhkan  bantuan  energi,  dalam  hal  ini  dibantu  energi  panas  dari  hasil pemanasan.  Pemillihan  metanol  sebagi  pelarut  ekstraksi  dikarenakan  biji  kedelai mengandung  flavonoid  (isoflavon)  dalam  jumlah  besar  (Dhaubhadel,  2011). Senyawa  isoflavon  dalam  kedelai  diantaranya  adalah  aglikon  (daidzein,  gycitein, genistein)  glikosida  (daidzin,  gycitin,  genistin),  bentuk  malonil  dan  asetil  dari glikosida  (Nakajima dkk., 2005). Kelarutan aglikon dan glikosida senyawa isoflavon tersebut tinggi pada pelarut metanol, etanol, propan-2-ol,  butanol dan etil aseat (Wu dkk.,  2010).  Tingginya  kelarutan  dalam  metanol  dikarenakan  memiliki  nilai  entalpi (ΔHd 25,67) dan entropi (ΔSd 31,44) yang lebih tinggi dibandingkan dengan pelarut yang  lain  dan  adanya  interaksi  antara  gugus  5-OH  yang  secara  signifikan mempengaruhi kelarutan dalam metanol (Nan dkk., 2014).
Hasil perhitungan rendeman ekstrak metanol pada sembilan varietas biji kedelai menunjukkan  perbedaan,  nilai  rendemen  tertinggi  ditunjukkan  oleh  biji  kedelai varietas  Dena.  Perbedaan  nilai  rendemen  dapat  dipengaruhi  oleh  perbedaan varietas,  dimana  setiap  varietas  memiliki  jumlah  komponen  yang  berbeda.  Hasil rendemen ektrak metanol biji kedelai dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil Rendemen Ekstrak Metanol Biji Kedelai No Varietas Kedelai Rendemen Ekstrak (%) 1 Anjasmoro 8,1 2 Argomulyo 8,3 3 Burangrang 7,7 4 Demas 7,7 5 Dena 9,4 6 Dering 7,9 7 Detam 8,8 8 Devon 9,2 9 Gema 8,2
Hasil pengukuran kadar flavonoid pada kesembilan ekstrak metanol biji kedelai, didapatkan variasi kadar (Tabel 3). Kadar total flavonoid tertinggi dihasilkan oleh biji kedelai  varietas  Argomulyo,  yaitu  0,354  mg/gram.  Teekachunhatean  dkk  dalam penelitiannya  menyatakan  bahwa  komponen  senyawa  dalam  tanaman  dipengaruhi oleh  faktor  genetik,  lingkungan  tempat  tumbuh,  waktu  penanaman,  dan  lokasi penanaman (Teekachunhatean dkk.,2013).
Hasi pengukuran kadar total flavonoid antara kedelai hitam (detam) dan kedelai kuning  (Demas),  menunjukkan  perbedaan,  dimana  kedelai  hitam  memiliki kandungan  flavonoid  yang  lebih  tinggi.  Pada  biji  kedelai  hitam  (Detam)  kadar  total flavonoid  (0,263  mg/gram),  sedangkan  pada  kedelai  kuning  (Demas)  kadar  total flavonoid  (0,187  mg/gram).  Hasil  ini  sama  dengan  penelitian  sebelumnya  yang menunjukkan  bahwa  kedelai  berbiji  hitam memiliki  kandungan  flavonoid  yang  lebih tinggi (Xu dan Chang, 2007). Dilakukan perbandingan kadar flavonoid terhadap biji kedelai  varietas  Detam  dan  Demas,  dikarenakan  kedua  varietas  tersebut  memiliki umur  panen  yang  sama  yaitu  84  hari  setelah  ditanam,  sedangkan  varietas  biji kedelai kuning yang lain memiliki umur panen yang bervariasi dari 73-83 hari (Balai Penelitian Tanaman Aneka Kacang dan Umbi, 2016).
Tabel 3. Kadar Total Flavonoid No Varietas Biji Kedelai Kadar total Flavonoid dalam 1 gram biji kedelai (mg) 1 Anjasmoro 0,060±0,005 2 Argomulyo 0,354±0,024 3 Burangrang 0,148±0,025 4 Demas 0,187±0,011 5 Dena 0,151±0,015 6 Dering 0,159±0,019 7 Detam 0,263±0,011 8 Devon 0,123±0,005 9 Gema 0,265±0,022
Keterangan: Pengujian dilakukan tiga kali (triplo)
Gambar 2. Diagram Kadara Total Flavonoid Biji Kedelai

## Penutup
Sembilan  varietas  biji  kedelai  memiliki  kandungan  flavonoid  berbeda. Kandungan  flavonoid  pada  sembilan  varietas  biji  kedelai  berturut-turut,  yaitu  0,060 mg/gram  (varietas  Anjasmoro);  0,354  mg/gram  (varietas  Argomulyo);  0,148 mg/gram  (varietas  Burangrang);  0,187  mg/gram  (varietas  Demas);  0,151  mg/gram (varietas Dena); 0,159 mg/gram (varietas Dering); 0,263 mg/gram (varietas Detam); 0,123 mg/gram (varietas Devon); 0,265 mg/gram (varietas Gema). Kedelai varietas Argomulyo  memiliki  kandungan  flavonoid  tertinggi  dibandingkan varietas  lain,  yaitu 0,354 mg/gram biji kedelai kering.

## Daftar Pustaka
1. Adlercreutz,  H.  (1995).  Phytoestrogens :  Epidemiology  and  a  Possible  Role  in Cancer Protection. Environmental Health Perspectives , 103(7), 103 –112.
2.  Adlercreutz,  H.,  Hamaainen,  E.,  Gorbach,  S.,  &  Goldin,  B.  (1992).  WOMEN  , AND  IN  AMERICAN  AND  FINNISH  OMNIVOROUS  menopause  in. Lancet , 339, 1233.
3.  Balai  Penelitian  Tanaman  Aneka  Kacang  dan  Umbi.  (2016).  Kedelai  1918  – 2016. In Deskripsi Varietas Unggul Aneka Kacang dan Umbi .
4.  Birt,  D.  F.,  Hendrich,  S.,  &  Wang,  W.  (2001).  Dietary  agents  in  cancer prevention :  flavonoids  and  isoflavonoids. Pharmacology  &  Therapeutics ,  90, 157 –177.
5. Bravo, L. (1998). Polyphenols : Chemistry , Dietary Sources , Metabolism , and Nutritional Significance. Nutrition Reviews , 56(11), 317 –333.
6.  Dhaubhadel,  S.  (2011).  Regulation  of  Isoflavonoid  Biosynthesis  in  Soybean Seeds. Southern Crop Protection and Food Research Center , 243 –258.
7.  Himah,  S.  A.,  Wisudanti,  D.  D.,  &  Fatmawati,  H.  (2018).  Pengaruh  Aktivitas Hepatoprotektor  Tepung  Kedelai  (Glycine  max  L.)  terhadap  Kadar  MDA  Hati Tikus  Wistar  Jantan  yang  Diinduksi  Diazinon. Journal  of  Agromedicine  and Medical Sciences , 4(1), 1 –6.
8.  Hodgson,  J.  M.,  Croft,  K.  D.,  Puddey,  I.  B.,  &  Mori,  A.  (1996).  Soybean isoflavonoids and their metabolic products inhibit in vitro lipoprotein oxidation in serum. Nutritional Biochemistry , 7, 664 –669.
9.  Kuo,  S.  M.  (1996).  Antiproliferative  potency  of  structurally  distinct  dietary flavonoids on human colon cancer cells. Cancer Letters 110, 41 –48.
10.  Messina, M., & Barnes, S. (1991). The Role of Soy Products in Reducing Risk of. COMMENTARY , 83(8), 541 –546.
11. Miller,  A.  B.  (2017).  Diet  and  Cancer :  A  review. Reviews  Acta  Oncologica ,  3,
87 –95. https://doi.org/10.3109/02841869009089996
12.  Nakajima, N., Nozaki, N., Ishihara, K., Ishikawa, A., & Tsuji, H. (2005). Analysis of Isoflavone Content in Tempeh , a Fermented Soybean , and Preparation of a New Isoflavone-Enriched Tempeh. Journal Of Bioscience and Bioenggineering , 100(6), 685 –687. https://doi.org/10.1263/jbb.100.685
13.  Nan,  G.,  Shi,  J.,  Huang,  Y.,  Sun,  J.,  Lv,  J.,  Yang,  G.,  &  Li,  Y.  (2014). Dissociation  Constants  and  Solubilities  of  Daidzein  and  Genistein  in  Different Solvents. Journal  of  Chemical  &  Engineering  Data ,  59(4),  1304 –1311. https://doi.org/10.1021/je4010905
14. Ndakidemi, P. ., & Dakora, F. D. (2003). Review : Legume seed flavonoids and nitrogenous  metabolites  as  signals  and  protectants  in  early  seedling development. Functional Pllant Biology , 30, 729 –745.
15.  Severson,  R.  K.,  Nomura,  A.  M.  Y.,  Grove,  J.  S.,  &  Stemmermann,  G.  N. (1989).  A  Prospective  Study  of  Demographics  ,  Diet  ,  and  Prostate  Cancer among  Men  of  Japanese  Ancestry  in  Hawaii1. Cancer  Research ,  (26),  1857 – 1860.
16.  Sudaryanto, T. (2006). Ekonomi Kedelai di Indonesia, (Bps), 1 –27. 17.  Teekachunhatean,  S.,  Hanprasertpong,  N.,  &  Teekachunhatean,  T.  (2013). Factors  affecting  isoflavone  content  in  soybean  seeds  grown  in  Thailand.
International Journal of Agronomy , 2013, 1 –11.
https://doi.org/10.1155/2013/163573
18.  Wang, H., & Murphy, P. A. (1994). Isoflavone Content in Commercial Soybean Foods. J. Agric. Food Chem , 42, 1666 –1673.
19. Watanabe,  S.,  &  Kessel,  S.  (1993).  Cancer :  An  Approach  from  Molecular Epidemiology Shaw Watanabe and Salma Koessel. Journal of Epidemiology , 2. 20.  Wu,  J.  G.,  Ge,  J.,  Zhang,  Y.  P.,  Yu,  Y.,  &  Zhang,  X.  Y.  (2010).  Solubility  of genistein in water, methanol, ethanol, propan-2-ol, 1-butanol, and ethyl acetate from (280 to 333) K. Journal of Chemical and Engineering Data , 55(11), 5286 – 5288. https://doi.org/10.1021/je100261w
21.  Yuwono,  Sudarminto  Setyo;  Hayati,  Kartika  Ken  dan  Narsito,  S.  (1996). Karakterisasi  Fisik,  Kimia  dan  Fraksi  Protein  7S  dan  11S  Sepuluh  Varietas Kedelai Produksi Indonesia. Jurnal Teknologi Pertanian, 4 (1), 84 –90.
22.  Zubik,  L.,  &  Meydani,  M.  (2003).  Bioavailability  of  soybean  isoflavones  from aglycone and glucoside. Am J Clin Nutr , 1 –7.