ISSN    : 1978-4163 E-ISSN : 2654 - 5292 ISOLASI DAN IDENTIFIKASI Rhizopus oligosporus ……... (Nurholipah dan Ayun)

## ISOLASI DAN IDENTIFIKASI Rhizopus oligosporus DAN Rhizopus oryzae
PADA TEMPE ASAL BEKASI
Isolation and Identification of Rhizopus oligosporus and Rhizopus oryzae In Tempeh from Bekasi
Nisa Nurholipah* dan Qurrota Ayun
Prodi Biologi, Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam As-Syafiíyah Jl Raya Jatiwaringin No 12 Pondok Gede 17411 *email:nisanurholipah@gmail.com

## ABSTRAK
Tempe yang berkualitas memiliki kandungan gizi tinggi seperti protein, lemak, karbohidrat, dan vitamin yang sangat  diperlukan  oleh  tubuh.  Dalam  proses  fermentasi  tempe  terdapat  kapang Rhizopus  sp. yang  paling dominan.  Adanya Rhizopus  sp. sebagai  agen  untuk  menghasilkan  berbagai  macam  enzim  yang  dapat mengurai  senyawa  kompleks  protein  menjadi  lebih  sederhana.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengisolasi kapang Rizhopus sp. dari beberapa tempe di Bekasi. Metode yang digunakan dengan cara tanam langsung pada  media  PDA.  Pengamatan  makroskopis  dilakukan  dengan  mengamati  warna  konidia  dan  miselium, sedangkan  pengamatan  mikroskopik  dilakukan  dengan  teknik slide  culture yaitu  mengamati  bentuk  Spora, kolumela, Sporangiospora dan hifa. Hasil penelitian menunjukkan terdapat  isolat kapang R. oligosporus dan R. oryzae . Inokulum tempe didominasi oleh kapang R. oligosporus .
Kata kunci: tempe, isolasi, identifikasi, R oligosporus, R. Oryzae

## ABSTRACT
Quality  tempeh  has  a  high  nutritional  content  such  as  protein,  fats,  carbohydrates,  and  vitamins  that  are indispensable  to  the  body.    In  the  process  of  fermentation  of  tempeh  there  is  a  Rhizopus  sp.  the  most dominant.   The presence of Rhizopus sp. As an agent to produce a wide range of enzymes that can break down protein complex compounds become simpler. This study aims to isolate the strains of Rizhopus sp. from some  tempeh  in  Bekasi.  The  method    is  used  by  planting  directly  on  the  PDA  media.  Macroscopic observations are carried out by observing the colors of conidia and mycelium, while microscopic observations are carried out with slide culture techniques that are observing the form of spores, columela, sproangiospora and  hyphae.    The  results  showed  that  there    are  isolates  of  R.  oligosporus  and  R.  oryzae.    The  tempeh inoculum is dominated by R. oligosporus type.
Keyword: Tempeh,  isolation, identification, R. oligosporus, R. oryzae

## PENDAHULUAN
Tempe merupakan produk olahan masyarakat  Indonesia  yang  berasal  dari  kedelai. Tempe  menjadi  sumber  protein  nabati  yang
populer  di  Indonesia.  Beberapa  faktor  pendukung dalam  proses  pembuatan  tempe  diantaranya
bahan baku yang dipakai (kedelai),
mikroorganisme  (kapang  tempe),  dan  keadaan
ISSN    : 1978-4163 E-ISSN : 2654 - 5292 ISOLASI DAN IDENTIFIKASI Rhizopus oligosporus ……... (Nurholipah dan Ayun)
lingkungan  tumbuh  (suhu,  pH,dan  kelembaban).
Tempe  di  Indonesia  pada  umumnya  terbuat  dari kedelai  yang  direbus  dan  difermentasi  dengan kapang Rhizopus sp. Hasil dari proses fermentasi kapang  mampu  menghasilkan  beberapa  enzim diantaranya  enzim  protease  yang  menguraikan protein  menjadi  peptida  dan  asam  amino  bebas, enzim  lipase  yang  menguraikan  lemak  menjadi asam-asam  lemak  dan  enzim  amilase  yang menguraikan  karbohidrat  kompleks  menjadi senyawa  yang  lebih  sederhana  (Radiati  &
Sumarto,  2016).  Selain,  menghasilkan  protein yang  tinggi,  tempe  juga  merupakan  sumber  serat pangan  yang  dapat  mencegah  berbagai  penyakit degeneratif  serta  mengandung  isoflavon  yang dapat  menangkal  radikal  bebas  (Li  &  Manfred,
2010; Utari et al ., 2010).
Ragi mengandung sediaan mikro- organisme hidup (kapang) yang merupakan bahan baku  penunjang  dalam  fermentasi  pembuatan tempe  yang  sering  disebut  sebagai  “ragi  tempe”.
Spesies  Kapang  yang  terlibat  diantaranya  adalah
Rhizopus  oligosporus,  R.  oryzae,  R.  stolonifer
(kapang  roti),  dan R.  arrhizus. Kapang  yang tumbuh  pada kedelai menyerupai benang-benang halus  berwarna  putih  (miselium)  yang  akan menghidrolisis senyawa kompleks menjadi senyawa  sederhana  yang  mudah  dicerna  oleh tubuh. Rhizopus merupakan kapang yang penting dalam  industri  makanan  sebagai  penghasil berbagai  macam  enzim  dan  dalam  fermentasi tempe  tidak  memproduksi  racun,  bahkan  kapang itu  melindungi  tempe  terhadap  kapang  penghasil
aflatoksin.  Selain  itu,  tempe  yang  ditambahkan ekstrak  etanol  dan  etil  asetat  bersifat  antibakteri terhadap Bacilus  sublitis dan Staphylococcus aureus (Mambang et al ., 2014).
Menurut  Hartanti  et  al.,  (2015)  tempe Indonesia mengandung kapang R. delemar dan R. microsporus .  Namun,  sering  dijumpai  adanya kapang  yang  berbeda  berdasarkan  asal  atau lokasi pembuatan tempe.   Penelitian ini bertujuan untuk  mengisolasi Rhizopus sp  serta  untuk mengetahui  jenis-jenis Rhizopus sp  pada  tempe yang berada di daerah Bekasi.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Pengambilan sampel
Sampel  tempe  diambil  dari  tiga  pasar  di Bekasi  Utara  yaitu  pasar  PCL,  SRJ,  dan  BKS. Tempe yang digunakan adalah yang masih segar. Penelitian  ini  dilakukan  di  laboratorium  Biologi Fakultas  Sains  dan  Teknologi  Universitas  Islam As-Syafi’iyah.

## Isolasi Kapang
Isolasi  kapang  dari  tempe  dilakukan dengan  cara  mengambil  secara  aseptik  miselium tempe  yang  diinolulasikan  pada  media potato dextrose  agar (PDA)  dan  diinkubasi  pada  suhu 37 ⁰ C  selama  5x24  jam.  Inokulasi  sampel dilakukan di atas cawan petri dan dilakukan duplo. Isolat  kapang  yang  menunjukan  karakteristik morfologi Rhizopus dipindahkan  media  PDA miring.
ISSN    : 1978-4163 E-ISSN : 2654 - 5292 ISOLASI DAN IDENTIFIKASI Rhizopus oligosporus ……... (Nurholipah dan Ayun)

## Identifikasi Kapang
Pengamatan  karakteristik  isolat  kapang dilakukan  dengan  cara  makroskopis  dimana diamati warna konidia dan miselium isolat kapang, sedangkan  pengamatan  mikroskopis  dilakukan dengan  cara  diambil  1  ose  isolat  kapang, digoreskan  di  atas object  glass yang  telah disterilkan,  selanjutnya  ditetesi  pewarna  safranin dan  ditutup  dengan cover  glass dan  diamati dengan  mikroskop  pada  perbesaran  100  kali. Pengamatan  mikroskopis  dilakukan  dengan
mengamati bentuk spora, kolumela,
sporangiospora  dan  hifa.  Isolat-isolat  yang diperoleh  dari  hasil  isolasi  dikarakterisasi  dan kemudian  diidentifikasi  menggunakan  buku identifikasi (Pitt & Hocking, 2009).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  isolasi  dan  identifikasi Rhizopus secara

## makroskopis
Hasil  isolasi  kapang  dari  ketiga  sampel tempe  setelah  dilakukan  pengamatan  selama  5 hari diperoleh 2 jenis Rhizopus . Berdasarkan hasil pengamatan  makroskopis,  karakter  ke-6  isolat tersebut  menunjukkan  4  isolat  dengan  miselium berwarna abu-abu kecoklatan dan 2 isolat lainnya putih  keabu-abuan  yang  menyerupai  koloni kapang R.  oligosporus dan R.  oryzae (Pitt  &
Hocking,  2009) . Dalam  penelitian  ini  ternyata
kapang R.  oligosporus yang  selalu  dijumpai  dari setiap inokulum tempe yang digunakan.
Tabel  1  menunjukkan  pertumbuhan miselia  dan  konidia R.oligosporus sangat  lebat
dibandingkan  dengan R.  oryzae .  Hal  ini disebabkan R.  oligosporus tumbuh  cepat  dengan
suhu optimum 37 0 C. Faktor lain yang mempengaruhi  pertumbuhan  kapang  karena adanya  nutrisi  yang  terkandung  di  dalam  media PDA. R.  oligosporus dilaporkan  Sine  &  Soetarto
(2018) tumbuh lebih awal dalam fermentasi tempe biji  gude  dan  yang  paling  dominan  dalam  proses fermentasi.
R. oligosporus dapat menghasilkan enzim protease  lebih  banyak  dibandingkan R.  oryzae .
Kapang R.  oligosporus dapat  digunakan  sebagai
kultur  tunggal  dalam  ragi  untuk  memproduksi tempe yang berkualitas karena mampu menghasilkan  antibiotik  dan  biosintesis  vitamin- vitamin  B  (Wipradnyadewi  et  al.,  2011).  Aktivitas protease  mempengaruhi  pembentukan  peptida bioaktif  karena  sebab  itu,  tempe  lebih  mudah dicerna  dan  zat  gizinya  mudah  terserap  oleh tubuh.  Sebaliknya R.  oryzae cenderung  lebih banyak  menghasilkan  enzim  amilase  dan dilaporkan  oleh  Retnoningtyas  et  al.,  (2013) bahwa R.  oryzae dapat  menghasilkan  metabolit primer yaitu asam laktat.
ISSN    : 1978-4163 E-ISSN : 2654 - 5292 ISOLASI DAN IDENTIFIKASI Rhizopus oligosporus ……... (Nurholipah dan Ayun)
Tabel 1. Hasil isolasi makroskopis Rhizopus Asal kode isolate Warna konidia Pengamatan pada media PDA Hasil identifikasi Miselia Konidia PCL TAU1 Abu-abu kecoklatan +++ +++ R. oligosporus TAU2 Putih keabu- abuan ++ ++ R. oryzae SRJ TBU1 Abu-abu kecoklatan +++ +++ R. oligosporus TBU2 Putih keabu- abuan ++ ++ R.oryzae BKS TCU1 Abu-abu kecoklatan +++ +++ R. oligosporus TCU2 Abu-abu kecoklatan +++ +++ R. oligosporus
Keterangan : +++ : sangat lebat (menutupi seluruh media PDA), ++ : lebat (menutupi ¾ media PDA)
Berdasarkan  Gambar  1. R.  oligosporus tumbuh  lebih  cepat  pada  lama  inkubasi 5x24 jam dibanding R.  oryzae .  Miselium R.  oligosporus pada  semua  sampel  terlihat  menutupi  seluruh permukaan  media  PDA  dan  konidia  berbentuk globose  (Pitt  &  Hocking,  2009).  Sebaliknya miselium R.  Oryzae tidak  seluruhnya  menutupi seluruh  permukaan  cawan  petri,  awalnya  koloni berwarna  putih  dengan  diameter  8  mm  kemudian
menjadi  keabu-abuan  dengan  bertambahnya  usia biakan  berwarna  hingga  coklat  kekuningan.  Pola pertumbuhan miselium yang semakin hari semakin besar,  cepat  dan  lebat  ini  berhubungan  dengan besarnya  aktivitas  protease.  Menurut  Gandjar  & Sjamsuridzal (2006) miselium Rhizopus terdiri dari dua  jenis,  satu  tertanam  dalam  lapisan  dan  yang lainnya seperti antena membentuk stolon.
ISSN    : 1978-4163 E-ISSN : 2654 - 5292 ISOLASI DAN IDENTIFIKASI Rhizopus oligosporus ……... (Nurholipah dan Ayun)
Identifikasi Rhizopus secara mikroskopis
Hasil identifikasi secara mikroskopis pada semua  isolat  menunjukkan  ciri-ciri Rhizopus , terlihat  adanya  stolon  dan  rhizoid  yang  warnanya gelap,  kolumela  agak  bulat  dan  apofisis  seperti payung,  sporangia  hitam  dan  besar  pada  ujung sporangiospora,  hifa  tidak  bersepta  dimana  ada dua  tipe  hifa,  yaitu  hifa  negatif  dapat  menetrasi substrat  dan  hifa  fertile  dapat  memproduksi sporangia.
Warna  sporangiospora R.  Oligosporus
hitam  kecoklatan  dengan  panjang  7-10  µm. bentuk  kolumela  globuse,  umumnya  memiliki rhizoid  yang  pendek,  panjang  sporangiosfor sekitar  150-400  µm  lebih  pendek  dari R.  oryzae dan  bertekstur  halus,  sporangium  dengan diameter  80-120  µm  dan  pada  saat  7  hari  akan
pecah sehingga spora keluar kolumela. R. oryzae memiliki  panjang  sporangiospora  lebih  dari  1500 µm,  diameter  sporangium  lebih  dari  150  µm, rizoid  berwarna  kecoklatan  dan  bercabang berlawanan arah dengan sporangiofor.
Sporangiofor  tunggal  dan  ada  yang  berkelompok hingga  5,  kadang-kadang  membentuk  struktur seperti  percabangan  garpu,  berdinding  halus, memiliki panjang 150-2000 µm dan berdiameter 6- 14  µm.  Sporangia  berbentuk  bulat,  dinding berduri,  berwarna  coklat  gelap  hingga  coklat kehitaman,  dan  berdiamter  50-200  µm.  Kolumela berbentuk  avoid.  khalmidiospora  berbentuk  bulat, berdiameter  10-35  µm  dan  kolumela  dengan diameter lebih dari 100 µm. Hal ini sesuai dengan pendapat (Gandjar & Sjamsuridzal, 2006).
a b c d e
f
Gambar 1. Hasil isolasi koloni Rhizopus pada permukaan media PDA : (a) R. oligosporus tempe PCL, (b) R. oryzae tempe PCL (c) R. oligosporus tempe SRJ (d) R. oryzae tempe SRJ (e) R. oryzae tempe BKS (f) R. oryzae tempe BKS
ISSN    : 1978-4163 E-ISSN : 2654 - 5292 ISOLASI DAN IDENTIFIKASI Rhizopus oligosporus ……... (Nurholipah dan Ayun)
Berdasarkan hasil penelitian ini
pembuatan  tempe  asal  Bekasi  umumnya menggunakan  inokulum R.  oligosporus dan R. oryzae dan  tidak  ditemukan  varian  spesies
Rhizopus lainnya. Umumnya R. oligosporus paling sering  ditemukan  pada  tempe  Indonesia. Penelitian  sebelumnya  melaporkan  bahwa R. oligosporus berhasil  diisolasi  dari  tempe  yang berasal  dari  kabupaten  Banyumas,  Bogor, Jember,  dan  Mataram    (Dewi  &  Aziz,  2011;
Prihatna & Suwanto, 2007). Hasil yang sama juga dilaporkan oleh (Hernawati & Meylani, 2019) yang mengisolasi R.  oligosporus dari  berbagai  macam
merk  ragi  tempe  yang  berasal  dari  kedelai  dan bungkil  kacang  tanah.  Hal  ini  sesuai  dengan penjelasan  Pitt  &  Hocking  (2009)  yang menyatakan bahwa R. oligosporus adalah kapang yang  umumnya  digunakan  untuk  membuat  tempe di Indonesia. Hal tersebut dimungkinkan karena R.
oligosporus memiliki  kemampuan  yang  baik sebagai  starter  dalam  proses  fermentasi  untuk menghasilkan tempe yang berkualitas.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dari  3  (tiga) sampel  tempe  diperoleh  isolat  kapang R. oligosporus dan R.  oryzae. Pertumbuhan R.
Oligosporus lebih  cepat  dan  sangat  lebat dibandingkan R.  Oryzae dan  merupakan  kapang
yang  dominan  dijumpai  pada  inokulum  tempe Bekasi. Pada penelitian ini tidak ditemukan variasi spesies  anggota  genus Rhizopus lainnya.  Untuk selanjutnya  perlu  dilakukan  identifikasi  secara molekuler  agar  dapat  diketahui  dengan  cepat spesies yang ada pada tempe.

## DAFTAR PUSTAKA
Dewi,  R.  S.,  &  Aziz,  S.  2011.  Isolasi Rhizopus oligosporus Pada  Beberapa  Inokulum Tempe  Di  Kabupaten  Banyumas. Molekul , 6 (2),
93–104. https://doi.org/10.20884/1.jm.2011.6.2.97.
Gandjar,  I.,  &  Sjamsuridzal,  W.  2006.  Mikologi Dasar  dan  Terapan.  Yayasan  Obor Indonesia, Jakarta.
Hartanti,  A.  T.,  Rahayu,  G.,  &  Hidayat,  I.  2015.
Rhizopus Species  from  Fresh  Tempeh Collected  from  Several  Regions  in Indonesia. HAYATI Journal of Biosciences ,
Kolumela sporangium sporangiofora Sporangiofora Sporangium b a
Gambar 2. Hasil identifikasi mikroskopis (a) R. oligosporus (b) R. oryzae
ISSN    : 1978-4163 E-ISSN : 2654 - 5292 ISOLASI DAN IDENTIFIKASI Rhizopus oligosporus ……... (Nurholipah dan Ayun)
22 (3), 136–142.
https://doi.org/10.1016/j.hjb.2015.10.004.
Hernawati,  D.,  &  Meylani,  V.  2019.  Variasi
Inokulum Rhizopus  sp. pada  Pembuatan Tempe  Berbahan  Dasar  Kedelai  dan Bungkil Kacang Tanah. J Bioma , 4 (1), 58– 67.
Li, Y.  D., & Manfred, P.  2010. The  Impact of Soy Oligosaccharides on digestion and intestinal  Health  in  Weaning  Piglets.
Livestock  Science , 134 (1–3),  187–189. https://doi.org/10.1016/j.livsci.2010.06.137.
Mambang,  D.  E.  P.,  Rosidah,  R.,  &  Suryanto,  D.
2014.  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Tempe Terhadap  Bakteri Bacillus  subtilis dan Staphylococcus  aureus . Jurnal  Teknologi Dan  Industri  Pangan , 25 (1),  115–118. https://doi.org/10.6066/jtip.2014.25.1.115
Pitt, J. I., & Hocking, A. D. 2009. Fungi and Food Spoilage.  In Springer (3rd  Edition,  Vol.  53,
Issue  9).  Springer  Dordrecht  Heidelberg. https://doi.org/10.1007/978-0-387-92207-2
Prihatna,  C.,  &  Suwanto,  A.  2007.  Phenotypic,
Metabolic,  and  Genetic  Diversity  of  the Indonesian Isolates of Rhizopus oligosporus . Microbiology  Indonesia , 1 (1),
27–32. https://doi.org/10.5454/mi.1.1.7.
Radiati,  A.,  &  Sumarto.  2016.  Analisis  Sifat  Fisik, Sifat  Organoleptik,  dan  Kandungan  Gizi pada  Produk  Tempe  dari  Kacang  Non- Kedelai. Jurnal  Aplikasi Teknologi Pangan , 5 (1), 2016. https://doi.org/10.17728/jatp.v5i1.32.
Retnoningtyas,  E.  S.,  Ayucitra,  A.,  Maramis,  F.,
Yong, O. W., Pribadi, F. W., & Tanti, N. K.
(2013).  Fermentasi  Substrat  Padat  dan Substrat  Cair  untuk  Produksi  Asam  Laktat dari  Kulit Pisang dengan Rhizopus  oryzae . Jurnal  Teknik  Kimia  Indonesia , 12 (1),  208. https://doi.org/10.5614/jtki.2013.12.1.5.
Sine,  Y.,  &  Soetarto,  E.  S.  2018.  Isolasi  dan Identifikasi  Kapang Rhizopus pada  Tempe Gude  ( Cajanus  cajan L.). Savana Cendana , 3 (4), 67–68. https://doi.org/10.32938/sc.v3i04.487.
Utari, D. M., Rimbawan, R., Riyadi, H., Muhilal, M., &  Purwantyastuti,  P.  2010.  Pengaruh Pengolahan  Kedelai  Menjadi  Tempe  dan pemasakan  Tempe  Terhadap  Kadar Isoflavon. Pgm , 33 (2), 148–153.
Wipradnyadewi,  P.  A.  S.,  Rahayu,  E.  S.,  & Raharjo,  S.  2011.  Isolasi  dan  Identifikasi Rhizopus  oligosporus pada  Beberapa Inokulum  Tempe. Jurnal  Agrotekno , 3 (2),
1–9.