## Selection of Functional Monomers on Diazepam Molecularly Imprinted Polymer (MIP) with Computational Techniques
Dang Soni 2 , Aliya Nur Hasanah 1 , Mutakin 1
1 Departemen Analisis Farmasi dan Kimia Medisinal Fakultas Farmasi Universitas Padjadjaran Jl. Raya Bandung Sumedang KM 21, Jatinangor 45363
2 Program Studi Farmasi FMIPA Universitas Garut Jl. Jati No. 42 B, (0262) 540007 Tarogong Garut
Corresponding author : Dang Soni (Dang17001@mail.unpad.ac.id)
ARTICLE HISTORY Received: 20 May 2018 Revised: 12 June 2018 Accepted: 15 July 2018

## Abstract
Appropriate  preparation  techniques  can  affect  the  results  of  the  analysis  so  that  the selection of the right sample preparation must be taken into account especially for the analysis  of  diazepam  in  complicated  sample  matrices  such  as  serum  and  urine. Molecularly  Imprinted  Polymers  (MIP)  is  an  effective  preparation  technique  for extracting  target  analytes  from  complex  matrices  before  analysis.  The  choice  of functional  monomers  is  the  most  important  thing  in  making  a  good  MIP,  so  the selection  is  in  accordance  with  the  physicochemical  properties  of  monomers  and diazepam  as  tamplate.  The  monomer  and  tamplate  interactions  that  provide  the  best binding  affinity  value  for  acid  monomers  are  p-vinylbenzoic  acid  of  -3.3  kcal/mol,  in base  monomers  it  is  5-[1-(2,3-dimethylphenyl)  ethenyl]-1H-imidazole  of  -3.8  kcal/mol and  in  neutral  monomers  is  ethylstyrene  of  -3.6  kcal/mol.  Of  all  the  monomers  tested for  either  acid,  base  or  neutral  monomers  which  produce  good  affinity  binding,  base monomers are 5-[1-(2,3-dimethylphenyl)  ethenyl] -1H-imidazole at -3,8 kcal/mol which means The diazepam template will interact well with the monomer.
Key  words :  Diazepam,  Molecular  Imprinting  Polymers  (MIP),  Selection  of  Functional Monomers
Pemilihan Monomer Fungsional pada Molecularly Imprinted Polymer (MIP) Diazepam dengan Teknik Komputasi

## Abstrak
Teknik  preparasi  yang  tepat  dapat  mempengaruhi  hasil  analisis  sehingga  pemilihan preparasi  sampel  yang  tepat  harus  diperhitungkan  terutama  untuk  analisis  diazepam dalam  matriks  sampel  yang  rumit  seperti  serum  dan  urin.  Molecularly  imprinted polymers (MIP) merupakan salah satu teknik preparasi yang efektif untuk mengekstrak analit  target  dari  matriks  kompleks  sebelum  analisis.  Pemilihan  monomer  fungsional merupakan  hal  terpenting  dalam  pembuatan  MIP  yang  baik,  sehingga  pemilihannya sesuai  dengan  sifat  fisikokimia  monomer  dan  diazepam  sebagai tamplate. Interaksi monomer  dan tamplate yang  memberikan  nilai binding  affinity yang  paling  baik  pada monomer asam adalah p-vinylbenzoic acid sebesar -3,3 kkal/mol, pada monomer basa adalah 5-[1-(2,3-dimethylphenyl)ethenyl]-1H-imidazole sebesar -3,8 kkal/mol dan pada
Vol. 9; No. 2 ; Juli 2018 Halaman 1-15
monomer netral adalah ethylstyrene sebesar -3,6 kkal/mol. Dari semua monomer yang diuji  baik  monomer  asam,basa  atau  netral  yang  menghasilkan binding  affinity yang baik  adalah  monomer  basa  yaitu  5-[1-(2,3-dimethylphenyl)ethenyl]-1H-imidazole sebesar -3,8 kkal/mol yang artinya template diazepam akan berinteraksi dengan baik dengan monomer tersebut.
Kata  kunci: Diazepam,  Molekular  Imprinting  Polimer  (MIP),  Pemilihan  Monomer Fungsional

## Pendahuluan
Obat  dari  golongan  benzodiazepine  dengan  nama  IUPAC  7-chloro-1-methyl-5- phenyl-3H-1,4-benzodiazepin-2-one  adalah  diazepam  yang  mana  aktivitasnnya  dapat mempengaruhi  sistem  saraf  pusat  dan  memberikan  efek  sebagai  penenang  dengan cara  mempengaruhi  neurotransmiter  yang  berfungsi  memancarkan  sinyal  ke  sel otak.Diazepam biasa digunakan untuk mengatasi gejala putus alkohol akut, gangguan kecemasan,  insomnia,  kejang-kejang.  Diazepam  merupakan  obat  golongan benzodiazepine  yang  sering  diresepkan  dan  disalahgunakan  dibeberapa  negara karena  murah,  efektif  dan  aman  serta  mudah  diperoleh.Penyalahgunaan  obat golongan benzodiazepine bertujuan untuk mengantikan obat illegal seperti opiate, obat penenang,  anti  depresan  dan  neuroleptik [1] .  Penyalahgunaan  diazepam  dapat  terus mengarah  pada  kecanduan  atau  ketergantungan.  Penggunaan  obat  golongan benzodiazepin juga dapat menyebabkan atau berkontribusi pada kematian mendadak jika  disalahgunakan.  Analisis  obat  ini  sangat  penting  dilakukan  agar  memudahkan dalam  pengawasan  baik  untuk  tujuan  monitoring  pada  saat  terapi,  pengawasan  dan identifikasi  penyalahgunaan  serta  dapat  menetapkan  penyebab  kematian [2] .  Obat dengan regulasi yang ketat biasanya berada dalam matriks sampel yang rumit seperti sampel  biologis,  sehingga  dibutuhkan  ekstraksi  yang  selektif  serta  metode  analisis yang  sensitif  agar  dapat  mendeteksi  dan  mengkuantifikasi  analit  yang  ada  dalam sampel  tersebut [3] .  Analisis  analit  dalam  sampel  yang  rumit  atau  kompleks  dapat  di analisis  dengan  kromatografi  cair  kinerja  tinggi  tandem  spektrometri  massa  atau kromatografi  gas  kinerja  tinggi  tandem  spektrometri  massa,  akan  tetapi  memiliki  nilai ekonomis yang tinggi dan tidak bias diselenggarakan disetiap laboratoriom.
Gambar 1. Template yang digunakan dalam MIP
MIP  atau Molecularly  imprinted  polymers menjadi  semakin  lebih  populer  untuk ekstraksi selektif terhadap matriks sampel yang kompleks. MIP pertama kali diusulkan oleh Wulff dan Sarhan dimana disintesis polimer dengan analit target sebagai templet
Vol. 9; No. 2 ; Juli 2018 Halaman 1-15
atau  cetakan  sehingga  setelah  cetakan  dielusi  maka  akan  terbentuk  ronggga,  dari rongga  yang  terbentuk  mampu  secara  selektif  mengikat  analit  yang  berada  didalam suatu sampel [4] .  MIP  merupakan  teknik  yang  efektif  dalam mendapatkan  analit  dalam matriks  sampel  yang  rumit  sebelum    analisis [1] .  MIP  merupakan  suatu  produk  hasil sintesis  yang  dirancang  sedemikian  rupa  agar  dapat  memiliki  selektivitas  terhadap analit  atau  target  molekuler  yang  ditentukan [5] .  Pra-polimerisasi  yang  terjadi  antara molekul target atau templet dan monomer fungsional dilarutkan dalam pelarut porogen yang  sesuai  kemudian  dilakukan  polimerisasi  dengan  bantuan  crosslinker,  setelah polimer  terbentuk  kemudian  templet  dihilangkan  atau  di  elusi  dengan  pelarut,  setelah templet  hilang  maka  akan  terbentuk  rongga  hasil  cetakan  dari  templet  atau  senyawa target,  yang  merupakan  penjerap  yang  selektif  untuk  senyawa  yang  sama [1] .  Teknik atau  metode  preparasi  sampel  dengan  menggunakan  ekstraksi  fase  padat  yang spesifik  dapat  dibetuk melalui Molecularly  imprinted  polymers (MIP),sehingga  dengan menggunakan metode preparasi ini diharapkan dapat mengurangi beberapa
Gambar 2. Konsep pembentukan sisi pengikat selektif secara skematik 1
kelemahan  dari  beberapa  metode  analisis  yang  telah  disebutkan  di  atas  sehingga dapat dilakukan analisis terhadap analit dalam matriks yang kompleks dengan hannya menggunakan alat instrument yang selalu tersedia dimanapun seperti HPLC

## Template
Dalam  semua  proses  MIP,  hal  yang  penting  adalah  organisasikelompok  fungsional yang  tergantung  pada  monomer  fungsional.  Akan  tetapi  tidak  semua template dapat melakukan templating .  Dalam  hal  kompatibilitas  dengan  polimerisasi  radikal  bebas, suatu template idealnyasecara  kimia  harus  inert  di  bawah  kondisi  polimerisasi, sehingga  harus  dicari  strategi  pencetakan  alternatif  jika template dapat  berpartisipasi dalam  reaksi  radikal  atau  tidak  stabil  di  bawah  kondisi  polimerisasi [13],[31]. Contoh template yang dapat diterapkan dalam MIP adalah senyawa diazepam.
Berikut beberapa hal yang dapatditannyakanmengenai template : 1.  Apakah template memiliki kelompok yang dapat dipolimerisasi,
2.  Apakah template dapat berpotensi menghambat atau memperlambat polimerisasi radikal bebas, misalnya sebuah kelompok thiolatau hidrokuinon [14],[30]
3.  Apakah template dapat  stabil  pada  suhu  sedikit  tinggi  (misalkan  sekitar60 ◦ C  jika AIBN digunakan sebagai inisiator kimiaatausetelah terpapar radiasi UV [16].[15]

## Monomer Fungsional
Monomer  fungsional  bertanggung  jawab  untuk  mengikat template dan  analit  dan memiliki  situs  pengikatan,  untukprotokol  MIP    non-kovalen  biasanya  digunakan berlebih  relatif  terhadap  jumlah  mol template untuk  mendukung  perakitan template- monomer  fungsional(rasio  umum  untuk  pencetakan  non-kovalen  adalah  1:4) [17],[29] .
Vol. 9; No. 2 ; Juli 2018 Halaman 1-15
Sehingga  sangat  penting  untuk  mencocokkan  fungsi template dengan  monomer fungsional  secara  komplementer  (misalnya  donor  proton  dengan  akseptor  proton) sehingga  pembentukan  kompleks  pencetakan  dapat  dimaksimalkan.  Monomer fungsional  dipilih  dengan  sangat  hati-hati  karena  merupakan  salah  satu  hal  yang terpenting  untuk  interaksi  antara template dan  komponen  polimerisasi  lainnya.  Untuk nonkovalen  imprinting,  rasio  optimal template atau  monomer  dapat  dicapai  secara empiris dengan evaluasi beberapa polimer yang dibuat dengan formulasi yang berbeda dengan meningkatnya template. Dari mekanisme secara umum pembentukan sisi ikat MIP,  monomer  fungsional  bertanggung  jawab  untuk  interaksi  ikatan  dalam  sisi  ikatan imprinted ,  dan  untuk  prosedur molecular  imprinting nonkovalen,  biasanya digunakanjumlahmol  yang  relative  berlebihan [18],[28]. Beberapa  monomer  yang  dapat digunakan dalam MIP dapat dilihat pada gambar 3.

## Monomer netral
Monomer asam
Vol. 9; No. 2 ; Juli 2018 Halaman 1-15

## Monomer basa
Gambar 3. Monomer yang biasa digunakan dalam polimerisasi pada MIP

## Metode

## Alat
Komputer  acer ® dengan  prosesor  intel ® celeron ® 1,60  GHz  dan  prosesor  4  GB serta  sistem  operasi  64-bit,  ChemBioDraw  Ultra  12.0,  ChemBio3D,  Pyrx,  AutoDock tools 1.5 Prosedur Interaksi monomer dan template pada MIP dapat diprediksi secara komputasi, dimana struktur kimia template dan monomer fungsional dibuat dengan menggunakan program ChemBioDraw Ultra 12.0, kemudian masing-masing struktur yang telah dibuat dipindahkan  kedalam  program  ChemBio3D  Ultra  dan  dilakukam minimize  energy kemudian disimpan dalam bentuk mol2. Nilai binding affinity monomer- template dapat diperoleh  dengan  bantuan  program  Pyrx,  dimana  monomer  berperan  sebagai mikromolekul dan template berperan sebagai makromolekul kemudian running dimulai dan  dihitung  nilai binding  affinity serta  jenis  ikatan  yang  terbentuk  dapat  dilihat menggunakan AutoDock tools 1.5
Vol. 9; No. 2 ; Juli 2018 Halaman 1-15

## Hasil
Tabel 1.
Interaksi Monomer- Template
Vol. 9; No. 2 ; Juli 2018 Halaman 1-15
Vol. 9; No. 2 ; Juli 2018 Halaman 1-15
Vol. 9; No. 2 ; Juli 2018 Halaman 1-15
Vol. 9; No. 2 ; Juli 2018 Halaman 1-15
Tabel 2. Interaksi Monomer Netral terhadap Template berdasarkan Nilai Binding No Monomer Template Binding Affinity (kkal/mol) 1 Methyl methacrylate (MMA) Diazepam -2,0 2 Acrilamide Diazepam -1,8 3 Methacrylamide Diazepam -2,2 4 2-hydroxyethyl methacrylate (2- HEMA) Diazepam -2,2 5 Trans-3-(3-pyridyl)-acrylic acid Diazepam -3,0 6 Acrylonitrile (AN) Diazepam -1,6 7 Styrene Diazepam -3,2 8 Ethylstyrene Diazepam -3,6
Gambar 4. Grafik  Interaksi  monomer  netral  terhadap  template  berdasarkan  nilai binding affinity
Tabel 2.
Interaksi Monomer Asam terhadap Template berdasarkan Nilai Binding Affinity
-2 -1.8 -2.2 -2.2 -3 -1.6 -3.2 -3.6 -4 -3.5 -3 -2.5 -2 -1.5 -1 -0.5 0
Vol. 9; No. 2 ; Juli 2018 Halaman 1-15
No Monomer Template Binding Affinity (kkal/mol) 1 2-Methylprop-2-enoic acid atau asam metakrilat/MAA Diazepam -2,1 2 4-ethenylbenzoic acid atau p- vinylbenzoic acid Diazepam -3,3 3 2-(triuoromethyl)-acrylic acid atau TFMAA Diazepam -2,6 4 2-methylidenebutanedioic acid atau Itaconic acid Diazepam -2,2 5 prop-2-enoic acid atau acrilic acid/AA Diazepam -1,8 6 acrylamido-(2-methyl)-propane sulfonic acid/AMPSA Diazepam -2,3
Gambar 5. Grafik  Interaksi  monomer  asam  terhadap  template  berdasarkan  nilai binding affinity
Tabel 4. Interaksi Monomer Basa dan Template berdasarkan Nilai Binding Affinity No Monomer Template Binding Affinity (kkal/mol) 1 4-ethenylpyridine atau 4- vinylpyridine (4-VP) Diazepam -2,8 2 2-ethenylpyridine atau 2- vinylpyridine (2VP) Diazepam -2,9 3 5-[1-(2,3-dimethylphenyl)ethenyl]- 1H-imidazole Diazepam -3,8 4 1-ethenylimidazole Diazepam -1,9 5 prop-2-en-1-amine atau allylamine Diazepam -1,6 6 N,N_-diethyl aminoethyl methacrylamide Diazepam -2,3 7 N-(2-Aminoethyl) methacrylamide Diazepam -2,4
-2.1 -3.3 -2.6 -2.2 -1.8 -2.3 -3.5 -3 -2.5 -2 -1.5 -1 -0.5 0
Vol. 9; No. 2 ; Juli 2018 Halaman 1-15
8 N,N_-diethyl-4-styrylamidine Diazepam -3,5 9 2-(Diethylamino)ethyl methacrylate Diazepam -2,4 10 N-vinylpyrrolidone Diazepam -2,2 11 urocanic ethyl ester Diazepam -2,5
Gambar 6. Grafik Interaksi monomer basa terhadap template berdasarkan nilai binding affinity
Pembahasan
Pemilihan monomer fungsional dapat dilakukan dengan dua cara yaitu dengan cara pengujian basah ( Wet lab ) dan pengujian kering/komputasi ( Dry lab ). Akan tetapi cara Dry  lab lebih  disukai  karena  lebih  efisien,  mudah,  murah  dan  mampu memprediksikan  ikatan  atau  interaksi  antara  monomer  dan tamplate meski  masih memeiliki  kekurangan  yaitu  kemungkinan  terjadinya  perbedaan  dengan  pengujian laboratorium  tetapi  pemilihan  monomer  fungsional  dengan  teknik  komputasi  dapat digunakan  sebagai  alternative  atau  sebagai  uji  pendahuluan  sebelum  dilakukan  uji labolatorium  basah.    Parameter  pengujian  dengan  teknik  komputasi  dapat  dilihat berdasarkan  nilai binding  affinity yang  dihasilkan  antaramonomer  dan template dimana  semakin    kecil binding  affinity maka  interaksi  monomer  dan template akan semakin baik. Berikut adalah hasil  prngujian Dry lab dengan teknik komputas dengan bantuan   software ChemBio2010 dan Fyrx sehinggadiperoleh data sebagai berikut:

## Kesimpulan
Interaksi  monomer  dan tamplate yang  memberikan  nilai binding  affinity yang paling  baik  pada  monomer  asam  adalah  p-vinylbenzoic  acid  sebesar  -3,3  kkal/mol, pada  monomer  basa  adalah  5-[1-(2,3-dimethylphenyl)ethenyl]-1H-imidazole  sebesar  - 3,8 kkal/mol dan pada monomer netral adalah ethylstyrene sebesar -3,6 kkal/mol. Dari semua monomer  yang diuji  baik  monomer  asam,basa  atau  netral  yang menghasilkan binding affinity yang baik adalah monomer basa yaitu 5-[1-(2,3- dimethylphenyl)ethenyl]-1H-imidazole  sebesar  -3,8  kkal/mol  yang  artinya template diazepam akan ber interaksi dengan baik dengan monomer tersebut

## Daftar Pustaka
1.  Anderson,  R.  A.,  Ariffin,  M.  M.,  Cormack,  P.  A.  G.,  &  Miller,  E.  I.  (2008). Comparison of molecularly imprinted solid-phase extraction (MISPE) with classical solid-phase extraction (SPE) for the detection of benzodiazepines in post-mortem hair samples.ForensicScience International, 174(1), 40 –46.
-2.8 -2.9 -3.8 -1.9 -1.6 -2.3 -2.4 -3.5 -2.4 -2.2 -2.5 -4 -3 -2 -1 0
Vol. 9; No. 2 ; Juli 2018 Halaman 1-15
2.  Ariffin,  M.  M.,  Miller,  E.  I.,  Cormack,  P.  A.  G.,  &  Anderson,  R.  A.  (1993). Molecularly  imprinted  polymer  for  solid-phase  extraction  of  diazepam  and  its metabolites from hair samples, 79(1), 256 –262.
3.  Augusto,  F.,  Carasek,  E.,  Silva,  R.  G.  C.,  Rivellino,  S.  R.,  Batista,  A.  D.,  & Martendal, E. (2010). New sorbents for extraction and microextraction techniques. Journal of Chromatography A.
4.  Bakavoli,  M.,  &  Kaykhaii,  M.  (2003).  Quantitative  determination  of  diazepam, nitrazepam  and  flunitrazepam  in  tablets  using  thin-layer  chromatography- densitometry  technique.  Journal  of  Pharmaceutical  and  Biomedical  Analysis, 31(6), 1185 –1189.
5.  Beltran,  A.,  Borrull,  F.,  &  Marce,  R.  M.  (2010).Molecularly-imprinted  polyme rs : useful sorbents for selective extractions, 29(11).
6.  Cabarcos, P., Tabernero, M. J., Álvarez, I., López, P., Fernández, P., & Bermejo, A.  M.  (2010).  Analysis  of  Six  Benzodiazepines  in  Vitreous  Humor  by HighPerformance Liquid Chromatography Photodiode-Array Detection,
34(December), 539 –542.
7.  Carvalho,  L.  M.  L.,  Linhares,  A.  X.,  &  Trigo,  J.  R.  (2001).  Determination  of  drug levels and the effect of diazepam on the growth of necrophagous flies of forensic importance  in  southeastern  Brazil.  Forensic  Science  International,  120(1 –2),140– 144.
8.  Cormack,  P.  A.  G.,  &  Elorza,  A.  Z.  (2004).  Molecularly  imprinted  polymers: Synthesis  and  characterisation.  Journal  of  Chromatography  B:  Analytical Technologies  in  the  Biomedical  and  Life  Sciences,  804(1),  173 –182. https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2004.02.013.
9.  de  Almeida,  C.  A.  A.,  Oliveira,  M.  S.,  Mallmann,  C.  A.,  &  Martins,  A.  F.  (2015). Determination of the psychoactive drugs carbamazepine and diazepam in hospital effluent and identification of their metabolites. Environmental Science and Pollution Research, 22(21), 17192 –17201.
10.  Figueiredo, E. C., Sparrapan, R., Sanvido, G. B., Santos, M. G., Zezzi Arruda, M. A., & Eberlin, M. N. (2011). Quantitation of drugs via molecularly imprinted polymer solid  phase  extraction  and  electrospray  ionization  mass  spectrometry: benzodiazepines in human plasma. The Analyst, 136(18), 3753.
11.  Haginaka,  J.  (2009).  Molecularly  imprinted  polymers  as  affinity-based  separation media for sample preparation. Journal of Separation Science.
12.  Jones, I. L. ., & Fiona, M. H. (1993). © 19 9 3 Nature Publishing Group. Letters to Nature, 366(2 December 1993), 461 –464.
13.  Kronstrand,  R.,  Nyström,  I.,  Josefsson,  M.,  &  Hodgins,  S.  (2002).  Segmental  ion spray  LC-MS-MS  analysis  of  benzodiazepines  in  hair  of  psychiatric  patients. Journal of Analytical Toxicology, 26(7), 479 –484. Lee, H.H., Lee, J. F., Lin, S. Y., Lin, Y. Y., Wu, C. F., Wu, M. T., & Chen, B. H. (2013). Simultaneous quantification of  urine  flunitrazepam,  nimetazepam  and  nitrazepam  by  using  liquid
Vol. 9; No. 2 ; Juli 2018 Halaman 1-15
chromatography  tandem  mass  spectrometry.  Clinica  Chimica  Acta;  International Journal of Clinical Chemistry, 420, 134 –9.
14.  Martín-Esteban,  A.  (2013).  Molecularly-imprinted  polymers  as  a  versatile,  highly selective tool in sample preparation. TrAC - Trends in Analytical Chemistry.
15.  Mohajeri,  S.  A.,  Karimi,  G.,  &  Khansari,  M.  R.  (2010).  Clozapine  imprinted polymers:  Synthesis,  characterization  and  application  for  drug  assay  in  human serum. Analytica Chimica Acta, 683(1), 143 –148.
https://doi.org/10.1016/j.aca.2010.10.023.
16.  Nakamura,  M.,  Ohmori,  T.,  Itoh,  Y.,  Terashita,  M.,  &  Hirano,  K.  (2009). Simultaneous  determination  of  benzodiazepines  and  their  metabolites  in  human serum  by  liquid  chromatography-tandem  mass  spectrometry  using  a  high- resolution  octadecyl  silica  column  compatible  with  aqueous  compounds. Biomedical Chromatography, 23(4), 357 –364.
17.  Nazario,  C.  E.  D.,  Fumes,  B.  H.,  da  Silva,  M.  R.,  &  Lanças,  F.  M.  (2017).  New materials  for  sample  preparation  techniques  in  bioanalysis.  Journal  of Chromatography  B:  Analytical  Technologies  in  the  Biomedical  and  Life  Sciences, 1043, 81 –95.
18.  Peltenburg, H., Graumans, M. H. F., Droge, S. T. J., Hermens, J. L. M., & Bosman, I.  J.  (2016).  Direct  tissue  sampling  of  diazepam  and  amitriptyline  using  mixed- mode SPME fibers: A feasibility study. Forensic Chemistry, 1, 51 –57.
19.  Persona,  K.,  Madej,  K.,  Knihnicki,  P.,  &  Piekoszewski,  W.  (2015).  Analytical methodologies  for  the  determination  of  benzodiazepines  in  biological  samples. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 113, 239 –264.
20.  Pyka,  A.,  Wiatr,  E.,  Kwiska,  K.,  &  Gurak,  D.  (2011).  Validation  thin  layer chromatography for the determination of naproxen in tablets and comparison with a  pharmacopeil  method.  Journal  of  Liquid  Chromatography  and  Related Technologies, 34(10 –11), 829–847.
21.  Salem, A. A., Barsoum, B. N., & Izake, E. L. (2003). Potentiometric determination of  diazepam,  bromazepam  and  clonazepam  using  solid  contact  ion-selective electrodes. Analytica Chimica Acta, 498(1 –2), 79–91.
22.  Sellergren, B. (1994). Direct Drug Determination by Selective Sample Enrichment on an Imprinted Polymer. Analytical Chemistry, 66(9), 1578 –1582.
23.  Su,  Q.,  Zeng,  C.,  Tang,  Y.,  Finlow,  D.  E.,  &  Cao,  M.  (2012).  Evaluation  of diazepam-molecularly imprinted microspheres for the separation of diazepam and its main metabolite from body fluid samples. Journal of Chromatographic Science, 50(7), 608 –614.
24.  Tang,  K.,  Gu,  X.,  Luo,  Q.,  Chen,  S.,  Wu,  L.,  &  Xiong,  J.  (2014).  Preparation  of molecularly  imprinted  polymer  for  use  as  SPE  adsorbent  for  the  simultaneous determination  of  five  sulphonylurea  herbicides  by  HPLC.  Food  Chemistry,  150, 106 –112.
Vol. 9; No. 2 ; Juli 2018 Halaman 1-15
25.  Thordarson,  P.  (2011).  Determining  association  constants  from  titration experiments in supramolecular chemistry. Chem. Soc. Rev., 40(3), 1305 –1323.
26.  Tyszczuk,  K.  (2010).  Determination  of  diazepam,  temazepam  and  oxazepam  at the  lead  film  electrode  by  adsorptive  cathodic  stripping  voltammetry. Electroanalysis, 22(17 –18), 1975–1984.
27.  Vasapollo, G., Sole, R. Del, Mergola, L., Lazzoi, M. R., Scardino, A., Scorrano, S., & Mele, G. (2011). Molecularly imprinted polymers: Present and future prospective. International Journal of Molecular Sciences.
28.  Yan,  H.,  &  Ho  Row,  K.  (2006).  Characteristic  and  Synthetic  Approach  of Molecularly Imprinted Polymer. Int. J. Mol. Sci, 7, 155 –178.
29.  Yan,  M.,  &  Ramström,  O.  (2005).  The  covalent  and  other  stoichiometric approaches. Molecularly Imprinted Materials: Science and Technology, 59 –92.
30. Yılmaz,  E.,  Garipcan,  B.,  Patra,  H.  K.,  &  Uzun,  L.  (2017).  Molecular  imprinting applications in forensic science. Sensors (Switzerland), 17(4), 1 –24.
31.  Yusof,  N.  A.,  Zakaria,  N.  D.,  Maamor,  N.  A.  M.,  Abdullah,  A.  H.,  &  Haron,  M.  J. (2013).  Synthesis  and  characterization  of  molecularly  imprinted  polymer membrane for the removal of 2,4-dinitrophenol. International Journal of  Molecular Sciences, 14(2), 3993 –4004.