Efikasi Vaksin Booster Streptococcus Agalactiae…… Dendi Hidayatullah  et al. Jurnal Ilmu-ilmu Perikanan dan Budidaya Perairan, Vol. 17 (2). Desember 2022: 102-114

## EFIKASI VAKSIN BOOSTER Streptococcus agalactiae PADA INDUK IKAN NILA TERHADAP IMUNITAS MATERNAL UNTUK PENCEGAHAN STREPTOCOCCOSIS
Efficacy of Streptococcus agalactiae Booster Vaccine on Tilapia Broodstock to Maternal Immunity in Preventing Streptococcosis
Dendi Hidayatullah 1 , Sukenda Sukenda 1 *, Sri Nuryati 1 , Rahma Mulyani 2 , Ardana Kirniaji 3
1 Departemen Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, IPB University, Indonesia
2 Program Studi Budi Daya Ikan, Universitas PGRI Palembang
3 Politeknik Kelautan dan Perikanan Bone, Indonesia
* corresponding author : sukenda@apps.ipb.ac.id

## ABSTRAK
Bakteri Streptococcus  agalactiae merupakan  patogen  utama  yang  menyerang  ikan  nila mulai fase benih hingga dewasa. Tujuan penelitian ini yaitu untuk menguji efikasi vaksin booster S.  agalactiae di  induk  ikan  nila  sebelum  pemijahan  kedua  terhadap  imunitas maternal untuk pencegahan streptococcosis. Vaksin gabungan sediaan sel utuh dan produk ekstraselular  (ECP) S.  agalactiae diinjeksi  sebanyak  0,4  mL/kg  induk  ikan  dengan perbandingan  50:50%  (v/v)  dari  dosis  penyuntikan,  sedangkan  kontrol  diinjeksi  dengan phosphate buffered  saline (PBS).  Vaksin  diberikan  ke  induk  ikan  pada  fase  tingkat kematangan gonad dua (TKG 2). Perlakuan penelitian yaitu induk diinjeksi PBS (K), induk diinjeksi  menggunakan  vaksin  sebanyak satu  kali  (A),  dan induk  diinjeksi  menggunakan vaksin booster setelah pemijahan pertama (B). Uji tantang benih dari setiap induk perlakuan dilakukan melalui perendaman S. agalactiae 10 7 CFU/mL selama 30 menit pada umur benih 5, 10, 15, dan 20 hari setelah menetas. Hasil penelitian menunjukkan terdapat perbedaan yang  signifikan  (P<0,05)  pada  total  leukosit  dan  aktivitas  fagositik  induk  ikan.  Level antibodi dan lisozim telur, benih, dan induk dari perlakuan B signifikan lebih tinggi (P<0,05) dibandingkan  terhadap  perlakuan  induk  lainnya.  Daya  tetas  telur  dari  perlakuan  induk  B (94,52%) signifikan lebih tinggi (P<0,05) dari pada perlakuan induk lainnya. Nilai Relative percent  Survival  benih  dari  perlakuan induk  B  tidak  berbeda  signifikan  (P>0,05) dengan perlakuan  benih  dari  induk  A  pada  pengamatan  hari  ke-5  tetapi,  signifikan  lebih  tinggi (P<0,05)  pada  hari  pengamatan  ke-10  hingga  20  pascatetas  (96,61-54,17%).  Pemberian vaksin booster di induk ikan nila sebelum pemijahan kedua dapat menstimulasi peningkatan imunitas dan transfer imunitas maternal ke anaknya untuk pencegahan streptococcosis.
Kata Kunci: imunitas maternal, induk, nila, transfer, vaksin booster .

## ABSTRACT
Streptococcus agalactiae is the main pathogen attacking tilapia during the fry-up to an adult phase. The purpose of the research was conducted to assess the efficacy of the S. agalactiae booster  vaccine in  tilapia  broodstock  before  second  spawning  on  the  maternal  immunity transfer to the fry in preventing streptococcosis. The combined whole cell and extracellular product vaccine of S. agalactiae were injected with 0.4 mL/kg of broodstock with a ratio of 50:50% (v/v) of the injection dose, while the control was injected with phosphate-buffered
Jurnal Ilmu-ilmu Perikanan dan Budidaya Perairan Volume 17, Nomor 2, Desember 2022: 102-114 https://jurnal.univpgri-palembang.ac.id/index.php/ikan
saline  (PBS).  Vaccinated  broodstock  at  gonad  developmental  stage  two.  The  research treatments  were  broodstock  injected  with  PBS  (K),  vaccinated  once  before  the  first spawning (A), and vaccinated with a booster vaccine after the first spawning (B). Challenge tests for fry produced on every broodstock were performed by immersion of 10 7 CFU/mL S. agalactiae  for  30  minutes  at  fry  ages  5,  10,  15,  and  20  days  after  hatching.  The  results showed that total leukocytes and phagocytic activity from broodstock B were significantly higher than the other broodstock. The antibody and lysozyme levels of broodstock, eggs, and  fry  from  treatment  B  were  significantly  higher  compared  to  other  treatments.  The hatchability of eggs from broodstock B treatment (94.52%) was significantly higher than the  other  broodstock.  The  relative  percentage  survival  of  fry  from  broodstock  B  was significantly  highest  on  days  10  to  20  post-hatching  (96.61-54.17%).  Giving  a  booster vaccine  in  tilapia  broodstock  before  the  second  spawning  can  stimulate  immunity enhancement and transfer immunity from broodstock to fry for streptococcosis prevention.
Keywords: booster vaccine, broodstock, maternal immunity, tilapia, transfer.

## PENDAHULUAN
Bakteri S.  agalactiae merupakan patogen  utama  di  ikan  nila.  Bakteri tersebut  menyebabkan  kematian  massal pada  budidaya  ikan  nila  di  beberapa negara  produsen  ikan  nila  seperti  China, Thailand, Malaysia dan Indonesia (Sheehan et  al . , 2009).  Bakteri  ini menimbulkan  penyakit  streptococcosis mulai fase benih hingga fase dewasa pada ikan  nila  (Jantrakajorn et  al., 2014). Infeksi Streptococcus pada budidaya ikan nila  intensif  dapat  menyebabkan  tingkat kematian  mencapai  90%  populasi  dan lebih dari 90% bakteri disebabkan oleh S. agalactiae (Chen et al., 2012). Streptococcosis pada ikan yang disebabkan oleh
S. agalactiae menyebabkan septicemia dan
meningoencephalitis  (Mian et  al., 2009). Hardi et  al., (2011)  melaporkan  bahwa ikan yang terserang patogen S. agalactiae memiliki  gejala  seperti  pembengkakan pada mata ( exopthalmia ), kekeruhan pada mata ( opacity ), mata memutih ( purulens ), perubahan    pola  renang  ( whirling ),  dan penjernihan
operkulum ( Clear operculum ).
Aspek yang berpengaruh terhadap keberhasilan  budidaya  ikan  nila  salah satunya adalah kualitas benih. Hal ini erat hubungannya dengan kualitas induk ikan.
Menurut  Swain  dan Nayak  (2009), kesehatan  dan  status  imun  induk  ikan sangat  penting  bukan  hanya  pada  saat pemijahan  tetapi  juga  untuk  kesehatan benih  yang  dihasilkan.  Adanya  imunitas maternal  yang  ditransfer  oleh  induk menjadi esensial pada fase awal pertumbuhan  benih.  Hal  ini  penting karena pada awal pertumbuhan, kemampuan embrio dan benih ikan masih belum  dapat  mengembangkan  respon imun  dengan  baik  (Magnadottir et  al., 2005; Zapata et al., 2006).
Vaksinasi  ikan  merupakan  salah satu  upaya  pencegahan  yang  dapat dilakukan  dalam  mengatasi  masalah penyakit dengan cara menginduksi kekebalan  spesifik  (Yi et  al., 2014). Beberapa penelitian menunjukkan bahwa pemberian vaksin dari sediaan antigen sel utuh dan produk ekstraselular S. agalactiae mampu merangsang terbentuknya antibodi spesifik dan memproteksi  ikan  nila  dari  infeksi S. aglactiae (Hardi et al., 2013; Amrullah et al., 2014; Dwinanti et al. , 2014). Vaksin gabungan  antara  sel  utuh  dan  produk ekstraselular S. agalactiae telah diketahui bersifat  lebih  imunogenik  dibandingkan jika diberikan secara tunggal (Hardi et al., 2013).  Akan  tetapi  vaksinasi  pada  stadia benih melalui perendaman belum
menghasilkan  perlindngan  yang  optimal terhadap  nilai  kelangsungan  hidup  yang relatif  masih  rendah  (Sukenda et  al., 2014).  Padahal  meningkatkan  kekebalan pada  ikan  sedini  mungkin  adalah pendekatan  yang  lebih  baik  karena memberi  proteksi  terhadap  serangan penyakit sedini mungkin (Bowden et al.,
2005; Magnadottir et al., 2005).
Rekayasa transfer kekebalan maternal yang dilakukan pada induk ikan merupakan  upaya  dalam  mencegah tingginya angka mortalitas anak ikan pada umur kurang dari satu bulan (Wang et al.,
2012; Mingming et al., 2014). Salah satu alternatif  yang  dapat  dilakukan  yaitu melalui  vaksinasi  induk  (Zhang et  al.,
2013;  Sukenda et  al., 2018).  Penelitian pada beberapa spesies ikan telah menunjukkan bahwa antibodi dan lisozim induk  ikan  ditransfer  dari  induk  ke
anaknya  dan  memberikan  proteksi  yang baik  (Wang et  al., 2012;  Mulyani et  al.,
2018).
Vaksinasi induk ikan nila sebelum memijah  pertama  telah  menunjukkan transfer  imunitas  maternal  yang  baik kepada  benih  di  pemijahan  pertama (Nisaa et al., 2016; Sukenda et al., 2018).
Namun  transfer  imunitas  maternal  pada pemijahan  kedua  dari  induk  yang  telah divaksin ke anaknya mengalami penurunan.  Hal  ini  disebakan  karena dalam  jangka  waktu  tertentu  keberadaan antibodi  dalam  tubuh  ikan  dan  tingkat proteksinya  semakin  menurun  (Sukenda et  al., 2015).  Oleh  karena  itu  perlu dilakukan  penelitian  terkait  pemberian vaksin  booster  di  induk  ikan  nila  pada pemijahan kedua dalam upaya meningkatkan  transfer  imunitas  maternal induk ke anak ikan nila.

## METODE PENELITIAN Penyiapan induk ikan dan bakteri uji
Induk  ikan  nila  yang  digunakan adalah  ikan  nila  strain  Nirwana  yang diperoleh dari Balai Pengembangan Benih Ikan  Air  Tawar,  Wanayasa,  Jawa  Barat. Bobot  induk  ikan  nila  yang  digunakan berukuran  200-300  gram.  Induk  ikan dipisahkan antara jantan dan betina. Induk ikan  dipelihara  dalam  bak  berukuran 3×2×1 m 3 pada temperatur air 24-30 °C; pH  6,58-7,76;  OD  4,5-6,7  ppm.  Induk ikan  diberi  pakan  dengan  kadar  protein 35-40%  sebanyak  dua  kali  dalam  sehari secara at  satiation dan  dilakukan pergantian air setiap tiga hari sekali.
Bakteri S.  agalactiae diperoleh
dari  koleksi  Laboratorium  Kesehatan
Ikan, Instalasi Penelitian dan Pengembangan  Pengendalian  Penyakit
Ikan BPPBAT Bogor. Bakteri S. agalactiae yang digunakan dalam penelitian  dilakukan  pemulihan  virulensi dengan cara difasase. Bakteri S. agalactiae hasil fasase kemudian
dikarakterisasi menggunakan  Kit  API  20 Strept.    Setelah  bakteri  dikarakterisasi ulang  kemudian  siap  digunakan  untuk pembuatan vaksin dan uji tantang.

## Rancangan percobaan
Penelitian  ini  dilakukan  dengan metode eksperimen menggunakan rancangan  acak  lengkap  (RAL)  dengan tiga perlakuan dan tiga ulangan.
Perlakuan  yang  diberikan  yaitu  K;  induk tanpa vaksinasi, A; induk divaksinasi satu kali  sebelum  pemijahan  pertama,  dan  B; induk divaksinasi booster setelah pemijahan pertama atau sebelum pemijahan kedua.

## Penyediaan vaksin uji
Vaksin  yang  digunakan  adalah vaksin  gabungan  antara  sel  utuh  dan produk ekstraselular (ECP) S. agalactiae .
Metode pembuatan vaksin mengacu pada Hardi et  al., (2013).  Preparasi  masing- masing vaksin dijelaskan sebagai berikut.
Preparasi  vaksin  sel  utuh:  Bakteri
dikultur dalam media brain heart infusion (BHI,  BD  Bacto TM )  cair  dengan  masa inkubasi  72  jam  pada  suhu  28-30  °C. Kepadatan akhir bakteri yang didapatkan yaitu  10 9 CFU/mL.  Media  yang  telah ditumbuhi  bakteri  ditambahkan  3% neutral  buffered  formalin dan  diinkubasi selama  24  jam.  Suspensi  kemudian disentrifugasi 7.000 rpm selama 30 menit pada  suhu  4  °C.  Endapan  bakteri  hasil sentrifugasi  dicuci  dengan phosphate buffered saline (PBS) sebanyak dua kali. Terakhir  ditambahkan  PBS  sebanyak volume awal biakan bakteri. Vaksin yang telah  jadi  diuji  viabilitasnya  dengan menggores  vaksin  pada  media  BHI  agar dalam  cawan  petri.  Jika  bakteri  tidak tumbuh dalam waktu 72 jam, maka vaksin dapat  digunakan  untuk  vaksinasi  induk ikan.
Preparasi vaksin produk ekstraselular  (ECP):  Bakteri  dikultur dalam  media brain heart  infusion (BHI, BD  Bacto TM )  cair  dengan  masa  inkubasi 72 jam pada suhu 28-30 °C. Media yang telah  ditumbuhi  bakteri  ditambahkan  3% neutral  buffered  formalin dan  diinkubasi selama  24  jam.  Kemudian  suspensi disentrifugasi 7.000 rpm selama 30 menit pada  suhu  4  °C.  Vaksin  ECP  diperoleh dengan  menyaring  supernatan  dengan filter  saring  0,22  µm.  Vaksin  ECP kemudian diuji keamanannya dengan cara menyuntik  vaksin  ECP  pada  lima  ekor ikan nila berukuran 10 gram sebanyak 0,1 mL/ekor.  Jika  hingga  jam  ke-72  tidak muncul kematian dan gejala streptococcosis  maka  vaksin  ECP  aman untuk digunakan.
Vaksinasi  dan  pemijahan  induk  ikan nila
Induk  yang  akan  divaksinasi diambil  sampel  untuk  dilihat  tingkat kematangan  gonadnya  dengan  metode kanulasi yaitu memasukkan selang kateter berdiameter  1  mm  ke  dalam  lubang genital sedalam 2 – 4 cm lalu dihisap dan
dicabut  secara  perlahan-lahan.  Vaksinasi induk  diberikan  pada  fase  tingkat kematangan  gonad  dua  (TKG2).  Vaksin diberikan  melalui  injeksi  intraperitoneal. Vaksin  diberikan  ke  induk  ikan  nila dengan dosis 0,4 mL/kg ikan. Vaksin sel utuh  diberikan  dengan  konsentrasi  10 9 CFU/mL. Kombinasi vaksin sel utuh dan ECP  adalah  50:50%  (v/v)  dari  dosis penyuntikan, sedangkan kontrol diinjeksi dengan  PBS.  Sebelum  divaksinasi  induk ikan dipingsankan terlebih dahulu dengan bius.  Interval  waktu  vaksinasi  pertama dan  kedua  yaitu  satu  bulan  atau  satu minggu  setelah  pemijahan  pertama. Pemijahan dilakukan dalam hapa berukuran
1×1×1 m 3
dengan perbandingan satu jantan dan tiga betina. Pemijahan  dilakukan  secara  alami.  Jarak antara  waktu  vaksinasi  dan  pemijahan yaitu tiga minggu.

## Penetasan  telur  dan  pemeliharaan benih
Ikan  yang  telah  memijah  dihitung fekunditas dan daya tetas telurnya. Telur yang  telah  dibuahi  diperoleh  dengan membuka mulut induk betina. Telur ikan nila  kemudian  ditetaskan  dalam  wadah akuarium  berukuran  60×35×30  cm 3 dan diberi  aerasi  yang  cukup.  Setelah  telur menetas benih diberi pakan alami berupa cacing  sutra s ecara ad  libitum yang dimulai  pada  hari  ke-7  (setelah  kuning telur  habis).  Suhu  pemeliharaan  benih dijaga  pada  temperatur  28-29  °C;  pH 6,85-7,68; dan OD 4,1-6,1 ppm. Pergantian air dilakukan setiap hari.

## Uji tantang benih
Uji  tantang  benih  dilakukan  dari induk  yang  sebelaumnya  telah  divaksin perlakuan dan kontrol melalui perendaman  menggunakan  konsentrasi bakteri  patogen S.  agalactiae 10 7
CFU/mL  selama  30  menit.  Uji  tantang dilakukan pada umur benih 5, 10, 15, dan 20  hari  setelah  menetas.  Selanjutnya
benih dipelihara dalam akuarium berukuran 20×20×20 cm 3 dengan kepadatan  30  ekor  setiap  akuarium. Kemudian  mortalitas  benih  diamati setelah uji tantang selama 10 hari.
Preparasi  sampel  serum  dari  induk, telur, dan benih
Induk dan benih ikan dipingsankan dahulu menggunakan
pembius ikan. Darah dari induk dikumpulkan  melalui  pembuluh  vena dipangkal  ekor.  Darah  disimpan  dalam suhu ruang selama 1 jam dan selanjutnya disimpan  semalaman  pada  suhu  4  °C. Serum dikumpulkan dengan cara disentrifugasi 5000 rpm selama 10 menit pada  suhu  4  °C.  Serum  kemudian dipisahkan  ke  dalam  tabung  mikro  dan disimpan  pada  suhu  -20  °C  untuk digunakan  pada  pengujian  antibodi  dan lisozim.
Telur  dikumpulkan  sesaat  setelah induk  memijah,  sedangkan  sampel  benih diambil pada hari ke-5, ke-10, ke-15, dan ke-20  setelah  menetas.  Telur  dan  benih yang  terkumpul  dihomogenkan  dalam larutan  PBS-T  (PBS+0,05%  Tween-20) dengan  perbandingan  1:4.  Selanjutnya disentrifugasi 5000 rpm selama 10 menit pada  suhu  4  °C.  Supernatan  kemudian dipisahkan  ke  dalam  tabung  mikro  dan disimpan  pada  suhu  -20  °C  untuk digunakan  pada  pengujian  antibodi  dan lisozim.

## Parameter penelitian
Parameter  yang  diamati  pada induk  yaitu level  antibodi  (Shelby et  al., 2001),  aktivitas  lisozim  (Ellis,  1990), gambaran  darah  (total  eritrosit  dan  total leukosit  (Blaxhall  dan  Daisley,  1973), hemoglobin  (Wedemeyer  dan  Yasutake 1977),  hematokrit,  aktivitas  fagositik (Anderson  dan  Siwicki,  1995))  serta fekunditas  telur.  Parameter  yang  diamati pada  telur  dan  benih  meliputi  daya  tetas telur,  level  antibodi,  aktivitas  lisozim,
mortalitas  benih  setelah  uji  tantang, relative percent survival (RPS) benih, dan patologi  anatomi  mikroskopis  jaringan otak benih ikan.

## Fekunditas dan daya tetas telur
Nilai fekunditas dilakukan dengan cara  menghitung  jumlah  telur  yang dihasilkan dari satu ekor induk ikan nila. Selanjutnya  daya  tetas  telur  dihitung berdasarkan rumus sebagai berikut.
Daya tetas telur (%) = Jumlah telur menetas Total jumlah telur × 100

## Tingkat mortalitas benih
Tingkat  mortalitas  benih  dihitung setelah  uji  tantang  dengan S.  agalactiae . Tingkat mortalitas benih dihitung menggunakan rumus sebagai berikut:
Mortalitas (%) = Jumlah ikan mati Jumlah populasi × 100
Relative percent survival (RPS) Relative  percent  survival benih dihitung untuk mengetahui efikasi transfer  kekebalan  maternal  dari  induk yang  divaksin  setelah  uji  tantang  dengan S.  agalactiae .  Nilai  RPS  dihitung  pada akhir  uji  tantang.  Berikut  merupakan rumus  perhitungan  RPS  menurut  Amend (1981):
RPS (%) = (1– Persentase mortalitas perlakauan Persentase mortalitas kontrol )×100

## Patologi anatomi mikroskopis
Pengamatan patologi anatomi mikroskopis yang diamati yaitu perubahan  jaringan  otak  benih  ikan  nila setelah uji tantang S. agalactiae . Pengamatan  dilakukan  dengan  membuat preparat histologi dari jaringan otak benih ikan  normal  dan  terserang S.  agalactiae .
Organ  otak  diambil  dan  difiksasi  dalam larutan neutral  buffered  formalin 10% selama 24 jam yang selanjutnya dipindahkan  dalam  alkohol  70%  sampai dilakukan  proses  pembuatan  preparat
histologi dengan menggunakan pewarnaan hematoxylin dan eosin (Geten et al., 2009).

## Analisis data
Penelitian akan dilakukan menggunakan  rancangan  acak  lengkap (RAL)  dengan  tiga  perlakuan  dan  tiga ulangan.  Data  yang  diperoleh  ditabulasi dengan menggunakan program MS. Office Exel 2007.  Data  dianalisis  dengan menggunakan  ANOVA  melalui  program Minitab  versi  16  dengan  tingkat  selang kepercayaan  95%,  jika  signifikan  maka akan  diuji  lanjut  dengan  uji  lanjut Tukey’s.  Histologi  jaringan  otak  benih ikan nila di analisis secara deskriptif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Gambaran Darah Induk Ikan Nila
Total  eritrosit,  hemoglobin,  dan hematokrit  tidak  berbeda  signifikan (P>0,05) antara semua perlakuan. Namun terdapat  perbedaa  (P<0,05)  pada  total leukosit  dan  aktivitas  fagositik.  Jumlah eritrosit  induk  ikan  berkisar  antara  2,03- 2,35 sel/mm 3 . Kadar hemoglobin berkisar antara  7,33-8,33  G%.  Kadar  persentase hematokrit berkisar antara 30,76-32,78%. Jumlah  leukosit  tertinggi  terdapat  pada perlakuan B (14,27x10 4 sel/mm 3 ). Aktivitas fagositik tertinggi terdapat pada perlakuan  B  (69,02%).  Jumlah  leukosit dan  aktivitas  fagositik  pada  perlakuan  B tidak berbeda signifikan (P<0,05) dengan perlakuan lainnya. Gambaran darah induk ikan nila disajikan pada Tabel 1.
Tabel 1. Gambaran darah induk ikan nila setelah vaksinasi: eritrosit, leukosit, hemoglobin (Hb), hematokrit (Hc), dan aktivitas fagositik (AF)
Perlakuan ∑ Eritrosit (x10 6 sel/mm 3 ) ∑ Leukosit (x10 4 sel/mm 3 ) Hb (G%) Hc (%) AF (%) K 2,03±0,27 a 7,97±0,86 c 7,33±0,81 a 30,76±3,45 a 24,51±2,02 c A 2,11±0,19 a 12,03±0,57 b 7,47±0,70 a 31,43±1,82 a 49,75±3,24 b B 2,35±0,08 a 14,27±0,55 a 8,33±0,40 a 32,78±1,26 a 69,02±1,53 a
Keterangan:  Huruf  superskrip  yang  berbeda  pada  kolom  yang  sama  menunjukkan  pengaruh perlakuan yang berbeda nyata (Uji Tukey’s; P<0,05).
Penelitian  vaksinasi  ikan  terkait total eritrosit, hemoglobin, dan hematokrit pada  ikan  nila  yang  divaksin  telah dilaporkan  juga  tidak  berbeda  signifikan (Sukenda et  al., 2014).  Namun,  terdapat perbedaan  gambaran  darah  total  leukosit dan aktivitas fagositik (Hardi et al., 2013).
Hardi et  al., (2013)  dan  Amrullah et  al.,
(2014)  melaporkan  terjadi  peningkatan total leukosit dan aktivitas fagositik pada ikan nila yang diberi vaksin. Sel leukosit seperti  neutrofil  dan  monosit  merupakan sel-sel fagosit yang aktif ketika ada benda asing yang masuk kedalam tubuh sebagai pertahanan  nonspesifik  (Katzenback  & Belosevic, 2009).

## Level antibodi induk, telur, dan benih
Level  antibodi  tertinggi  terdapat pada  pelakuan  induk  B  (OD:  0,20)  dan terendah terdapat pada perlakuan induk K (OD:  0,10).  Level  antibodi  perlakuan induk yaitu OD: 0,14. Level antibodi telur hasil  pemijahan  induk  yang  divaksin booster memiliki  nilai  yang  signifikan lebih tinggi (P<0,05) dari pada perlakuan lainnya  yaitu  OD:  0,23.  Level  antibodi benih  dari  semua  perlakuan  induk  yang divaksin  mengalami  penurunan  dari  hari ke-5  hingga  hari  ke-20.  Level  antibodi tertinggi dihari ke-5 terdapat pada benih
dari  perlakuan  induk  B  (OD:  0,20)  dan menurun  pada  hari  ke-20  (OD:  0,12).
Level antibodi dari induk, telur, dan benih ikan nila disajikan pada Tabel 2. Tabel 2. Level antibodi induk, telur dan benih ikan nila
Perla kuan OD Indirect-ELISA  pada ƛ=405 Induk Telur Benih 5 hari 10 hari 15 hari 20 hari K 0,100±0,005 c 0,111±0.007 c 0,087±0.015 c 0,09±0.009 c 0,086±0,006 c 0,87±0.005 b A 0,139±0,007 b 0,176±0.007 b 0,148±0.004 b 0,119±0.008 b 0,104±0,004 b 0,098±0.004 b B 0,202±0,009 a 0,226±0.010 a 0,196±0.005 a 0,149±0.007 a 0,124±0,004 a 0,117±0.007 a
Keterangan: Huruf superskrip yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan pengaruh perlakuan yang berbeda nyata (Uji Tukey’s; P<0,05).
Pemberian vaksin gabungan sel utuh dan ECP pada ikan nila mampu menginduksi tubuh  untuk  memproduksi  antibodi spesifik  (Hardi et  al., 2013) . Sukenda et al., (2018) melaporkan bahwa induk yang divaksin dengan sediaan vaksin gabungan sel  utuh  dan  ECP  mampu  meningkatkan level  antibodi  induk  dan  benih  yang dihasilkan.    Zhang et  al., (2014) menjelaskan  bahwa  level  antibodi  ikan meningkat ketika diberi vaksin booster . Antibodi ditemukan
dalam konsentrasi  yang  tinggi  pada  serum  ikan (Magnadottir, 2010). Antibodi dari induk ikan ditransfer bersama dengan vitelogenin  ke  dalam  telur  pada  proses vitelogenesis  (Swain  &  Nayak,  2009; Wang et  al., 2011).  Penelitian  pada beberapa  spesies  ikan  menunjukkan bahwa antibodi dapat ditransfer dari induk ke  anaknya  (Swain et  al., 2006).  Nilai level  antibodi  spesifik  terhadap S. agalactiae pada  benih  secara  perlahan mengalami penurunan hingga hingga hari ke-20  diseluruh  perlakuan.  Zhang et  al.,
(2013)  dan  Kurniaji et  al., (2018) menjelaskan bahwa antibodi spesifik yang ditransfer  oleh  induk  ikan  ke  anaknya
melalui  imunitas  maternal  secara  alami ikut  termetabolisme  bersama  dengan kuning  telur  sehingga  kadarnya  semakin menurun.

## Aktivitas  lisozim  induk,  telur,  dan benih ikan nila
Aktivitas  lisozim  tertinggi  terdapat pada  perlakuan  induk  B  (291,11  U/mL) dan  tidak  berbeda  signifikan  (P>0,05). Aktivitas lisozim telur perlakuan induk B berbeda  signifikan  lebih  tinggi  (P<0,05) dari  telur  perlakuan  induk  A  (93,78 U/mL)  dan  K  (63,56  U/mL).  Aktivitas lisozim benih dari perlakuan induk K, A, dan  B  menurun  dihari  ke-10  dan kemudian  meningkat  hingga  hari  ke-20. Aktivitas  lisozim  benih  dari  induk perlakuan  B  memiliki  aktivitas  lisozim yang  signifikan  (P<0,05)  lebih  tinggi dibandingkan  perlakuan  lainnya  hingga hari  ke-20    yaitu  100,44-228,71  U/mL. Aktivitas  lisozim  benih  dari  induk perlakuan  A  tidak  berbeda  signifikan (P>0,05)  dengan  perlakuan  K  mulai  hari ke-5 hingga hari ke-20. Aktivitas lisozim induk, telur, dan benih ikan nila disajikan pada Tabel 3.
Tabel 3. Aktivitas lisozim induk, telur, dan benih ikan nila
Perlakua n Aktivitas Lisozim (U/mL) Induk Telur Benih 5 hari 10 hari 15 hari 20 hari K 167,78±15,69 c 63,56±17,35 b 25,78±11,95 c 41,78±7.34 b 80,89±13,42 c 132,44±11,34 b A 235,67±23,14 b 93,78±16,07 b 84,44±6,01 b 57,78±5.55 b 107,11±7,34 b 150,67±8,11 b B 291,11±18,83 a 151,56±21,43 a 118,22±10,69 a 100,44±6.84 a 204,89±15,57 a 228,60±8,29 a
Keterangan: Huruf superskrip yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan pengaruh perlakuan yang berbeda nyata (Uji Tukey’s; P<0,05).
Beberapa  penelitian  menjelaskan bahwa  pemberian  vaksin  bukan  hanya meningkatkan respon imun spesifik tetapi juga  meningkatkan  respon  imun  non- spesifik  (Swain  dan  Nayak,  2009;  Wang et al., 2013). Enzim lisozim mengandung muramidase  yang  dapat  merusak  ikatan antara  asam  N-asetilglukosamin  dengan N-asetilmuramic  dalam  dinding  sel bakteri  gram  positif  (Marsh  dan  Rice, 2010).  Pada  tahap  awal,  lisozim  adalah salah  satu  protein  penting  yang  terlibat dalam pertahanan non-spesifik (Huttenhuis et al., 2006; Wang & Zhang, 2010). Lisozim muncul di awal pengembangan ikan, sebelum atau segera setelah  menetas  dan  keberadaannya sangat  penting  terhadap  kekebalan  benih ikan (Magnadottir , 2006).

## Fekunditas dan daya tetas telur
Fekunditas  telur  dari  semua  induk perlakuan tidak berbeda signifikan (P>0,05) pada semua perlakuan.
Fekunditas telur dari induk yang divaksin berkisar  antara  1362,67-1527,33  butir. Namun, terdapat perbedaan yang signifikan  (P<0,05)  terhadap  daya  tetas telur.  Perlakuan  induk  K  memiliki aktivitas  lisozim  yang  signifikan  lebih rendah  (P<0,05)  dibandingkan  perlakuan lainnya. Daya tetas telur tertinggi terdapat pada  perlakuan  induk  B  (94,52%). Namun,  daya  tetas  telur  dari  induk perlakuan  B  signifikan  lebih  tinggi (P<0,05)  dibandingkan  induk  A  dan  K. Daya  tetas  telur  perlakuan  induk  K berbeda  signifikan  dengan  perlakuan induk  A  (84,64%).  Fekunditas  dan  daya tetas telur disajikan pada Tabel 4. Tabel 4. Fekunditas dan daya tetas telur ikan nila Perlakuan Fekunditas Telur (Butir) Daya Tetas Telur (%) K 1362,67±123,84 a 73,72±6,38 c A 1372,33±148,50 a 84,64±4,58 b B 1527,33±80,16 a 94,52±1,98 a
Keterangan: Huruf superskrip yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan pengaruh perlakuan yang berbeda nyata (Uji Tukey’s; P<0,05).
Jika dibandingkan dengan
perlakuan  K,  telur  dari  induk  yang divaksin booster (B)  terjadi  peningkatan daya  tetas  telur,  namun  tidak  terjadi penurunan  pada  perlakuan  induk  A.  Hal ini  menunjukkan  komponen  lisozim  dan antibodi  yang  ditransfer  oleh induk  telah memberikan pertahanan antibakteri untuk telur  dan  meningkatkan  keberhasilan
penetasan  dan  sintasan  (Hanif et  al., 2005).

## Relative percent survival (RPS) benih
Benih dari perlakuan induk K + dan B tidak berbeda signifikan (P>0,05), dan memiliki nilai RPS lebih tinggi (P<0,05) dibandingkan  dengan  benih  perlakuan induk  A  pascauji  tantang S.  agalactiae . Nilai RPS benih hari ke-5 dari perlakuan
induk A dan B berturut-turut yaitu 85,60% dan  98,33%.  Nilai  RPS  benih  perlakuan induk A dan B menurun hingga hari ke-20
yaitu  berturut-turut  19,93%  dan  54,17%. Nilai RPS benih ikan nila disajikan pada Tabel 5.
Tabel 5. Tingkat mortalitas  setelah infeksi S. agalactiae dan relative percent  survival benih ikan nila pada pemijahan kedua dari perlakuan induk diinjeksi PBS (K), induk diinjeksi vaksin satu kali (A), dan induk diinjeksi vaksin booster dengan selang waktu satu bulan (B) Umur Benih (Hari) Mortalitas(%) RPS(%) K A B A B 5 61,11±5,09 a 8,89±3,33 b 1,11±1,92 b 85,60±7,75 a 98,33±2,89 a 10 70,00±3,33 a 22,22±5,09 b 6,67±3,33 c 68,43±5,88 b 90,61±4,32 a 15 76,67±3,33 a 37,78±6,94 b 17,78±5,09 c 50,86±7,84 b 81,20±1,80 a 20 77,78±5,09 a 62,22±3,85 b 35,56±5,09 c 19,93±6,18 b 54,17±7,53 a
Keterangan:  Huruf  superskrip  yang  berbeda  pada  umur  benih  dan  parameter  yang  sama    menunjukkan pengaruh perlakuan yang berbeda nyata (Uji Tukey’s; P<0,05).
Terjadi  penurunan  tingkat  proteksi benih  hasil  pemijahan  kedua  dari perlakuan  induk  A.  Benih  dari  induk perlakuan  B  memiliki  nilai  RPS  yang lebih tinggi dari benih perlakuan induk A. Pemberian  vaksin  pada  induk  ikan  telah diketahui  mampu  meningkatkan  proteksi benih  yang  dihasilkan  dari  serangan patogen  (Wang et  al., 2012;  Sukenda et al., 2017).
Tingginya  nilai  RPS benih  dari perlakuan  induk  B  disebabkan  oleh tingginya  antibodi  dan  lisozim  yang ditransfer  oleh  induk  ikan  nila.  Transfer antibodi maternal ke telur dan embrio juga dilaporkan dapat bertindak sebagai opsonin  yang  dapat  memfasilitasi  proses fagositosis  bakteri  oleh  sel  fagosit  serta mengaktifkan  komplemen  (Magnadottir
et al., 2005). Antibodi maternal dari induk ikan  dapat  mengurangi  resiko  kematian selama  masa  perkembangan  benih  ikan (Grindstaff, 2008; Nisaa et al., 2017). Hal ini menunjukkan bahwa antibodi spesifik memainkan peran penting dalam perlindungan ikan terhadap infeksi patogen.

## Patologi anatomi mikroskopis
Hasil  histologi  organ  otak  benih ikan  setelah  uji  tantang  menunjukkan adanya  perubahan  patologi  anatomi mikroskopis. Otak ikan yang terinfeksi S. agalactiae terlihat  mengalami  nekrosis dan degenersi, sedang tidak  terlihat pada otak ikan normal. Hasil histologi jaringan otak  benih  ikan  nila  disajikan  pada Gambar 1.
Gambar 1. Patologi anatomi mikroskopis pada jaringan otak benih ikan nila setelah infeksi S. agalactiae : A) Jaringan otak normal; B) Jaringan otak terserang S. agalactiae mengalami nekrosis (Ne) dan Degenerasi (De)
Nekrosis adalah
hilangnya jaringan  setelah  terjadinya  degenerasi jaringan,  degenerasi  jaringan  biasanya dapat  dilihat  pada  tepian  jaringan  yang mengalami kerusakan. Filho et al., (2009) melaporkan bahwa S. agalactiae menyerang  organ  otak,  hati,  mata,  dan ginjal ikan nila. Hardi et al., (2011) juga menjelaskan  bahwa  jaringan  otak  ikan nila  yang  terserang S.  agalactiae mengalami  degenerasi  dan  nekrosis sehingga  menyebabkan  ikan  mengalami perubahan pola renang ( whirling ).

## SIMPULAN
Pemberian  vaksin  booster S. agalactiae di  induk  ikan  nila  sebelum pemijahan  kedua  dapat  menstimulasi peningkatan imunitas  dan  transfer imunitas  maternal  ke  anaknya  untuk pencegahan streptococcosis.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Kami  mengucapkan  terima  kasih kepada Laboratorium
Kesehatan Organisme  Akuatik  FPIK  IPB  atas bantuan  fasilitas  yang  diberikan  selama penelitian  serta  Balai  Riset  Perikanan
Budidaya  Air  Tawar  dan  Penyuluhan Perikanan,  Bogor,  Jawa  Barat,  Indonesia atas bantuannya dalam penyediaan isolate Streptococcus agalactiae .
DAFTAR  PUSTAKA Amend,  D.F.
1981.  Potency  testing  of  fish vaccines.
Developments in biological standardization, 49: 447–454. Amrullah, Sukenda, Harris, E., Alimuddin,  &  Lusiastuti,  A.M. 2014.  Immunogenecity  of  the  89
kDa toxin protein from extracellular products of Streptococcu s in Oreochromis  niloticus.  Journal  of Fisheries  &  Aquatic  Science ,  9: 176-186.
Anderson,  D.P.,  &  Siwicki,  A.K.  1995.
Basic haematology and serology for fish health programs. Paper presented at the 2nd symposium on disease in Asia aquaculture. Aquatic animal health and the environment, Phuket, p 17.
Blaxhall,  P.C.,  &  Daisley,  K.W.  1973. Reutine  haemotologycal  methods for  use  with  fish  blood. Journal  of Fish Biology , 5: 577-581.
Bowden,  T.J.,  Cook,  P.,  Rombout, J.H.W.M.  2005.  Development  and function  of  the  thymus  in  teleosts. Fish  &  Shellfish  Immunology ,  19: 413-427.
Chen,  M.,  Li,  L.P.,  Wang,  R.,  Liang, W.W., Huang, Y., Li, J., Lei, A.Y., Huang,  W.Y.,  Gan,  X.  2012.  PCR detection  and  PFGE  genotype analyses  of  streptococcal  clinical isolates  from  tilapia  in  China. Veterinary Microbiology, 159: 526– 530.
Dwinanti, S.H., Sukenda, Yuhana. M., & Lusiastuti,  A.M.  2014.  Toksisitas dan imunogenisitas produk ekstraseluler Streptococcus agalactiae tipe  non-hemolitik  pada ikan  nila Oreochromis  niloticus . Jurnal Akuakultur Rawa Indonesia , 2: 105-116.
Ellis,
A. I. 1990. Lysozyme assays. Techniques in Fish
Immunology , 1: 101-103. Filho, C.I., Muller, E.E., Pretto-Giordano, L.G.,  &  Bracarense,  A.P.  2009. Histological finding of experimental Streptococcus agalactiae infection  in  Nile  tilapia
Oreochromis  niloticus. Brazilian
Journal of Veterinary Pathology , 2:
12-15.
Genten, F., Terwinghe, E., & Danguy, A.
2009.  Atlas  of  fish  histology.  New Hampshire US: Science Publishers.
Grindstaff, J.L. 2008. Maternal antibodies reduce costs of an immune response during  development. Journal  of Experimental  Biology ,  211:  654- 660.
Hanif, A., Bakopoulos, V., & Dimitriadis, G.J. 2005. The effect of sea bream
Sparus  aurata broodstock  and larval vaccination on the
susceptibility  by Photobacterium damsela subsp. piscicida and on the humoral  immune  parameters. Fish &  Shellfish  Immunology ,  19:  345- 361.
Hardi,  E.H.,  Sukenda,  Harris,  E.,  & Lusiastuti, A.M. 2011. Karakteristik dan  patogenisitas Streptococcus
agalactiae tipe  β-hemolitik  dan non-hemolitik  pada  ikan  nila. Jurnal Veteriner , 12: 151-164.
Hardi,  E.H.,  Sukenda,  Harris,  E.,  & Lusiastuti,  AM.  2013.  Kandidat
vaksin potensial Streptococcus agalactiae untuk pencegahan
penyakit  streptococcosis  pada  ikan nila Oreochromis  niloticus . Jurnal Veteriner , 14: 408-416.
Huttenhuis, H.B.T., Grou, C.P.O., Taverne-Thiele,  A.J.,  Taverne,  N.,
&  Rombout,  J.H.M.W.  2006.  Carp Cyprinus  carpio L.  innate  immune factors are present before hatching.
Fish  &  Shellfish  Immunology ,  20: 586-596.
Jantrakajorn, S., Maisak, H., & Wongtavatchai, J. 2014.
Comprehensive  investigation  of streptococcosis outbreaks in cultured  Nile  tilapia, Oreochromis niloticus , and red tilapia, Oreochromis sp.,  of  Thailand.
Journal  of  the  World  Aquaculture
Society , 45: 392-402.
Katzenback, B.A., & Belosevic, M. 2009. Isolation and functional characterization  of  neutrophil-like cells,  from  goldfish Carassius auratus L.  kidney. Developmental and  Comparative  Immunology ,  33: 601–611.
Magnadottir,
B., Lange, S.,
Gudmundsdottir, S., & Bogwald, J., Dalm,  RA.  2005.  Ontogeny  of humoral immune parameters in fish. Fish  &  Shellfish  Immunology ,  19: 429–439.
Magnadottir, B. 2006. Innate immunity of fish:  overview. Fish  &  Shellfish Immunolog, 20: 137-151.
Magnadottir,  B.  2010.  Immunological control  of  fish  diseases. Journal  of Marine  Biotechnology ,  12:  361–
379.
Marsh,  M.B.,  &  Rice,  C.D.  2010. Development, characterization, and technical  applications  of  a  fish lysozyme-specific monoclonal antibody (mAb M24-2). Comparative Immunology, Microbiology & Infectious
Diseases , 33: 15–23.
Mian,  G.F.,  Godoy,  D.T.,  Leal,  C.A.G., Yuhara,  T.Y.,  Costa,  G.M.,  & Figueiredo.  2009.  Aspect  of  the natural  history  and  virulence  of Streptococcus  agalactiae infection in Nile tilapia. Journal of
Veterinary Microbiology , 136: 180- 183.
Mingming, H., FuHong, D., Zhen, M., & Jilin,  L.  2014.  The  effect  of vaccinating  turbot  broodstocks  on the  maternal  immunity  transfer  to offspring immunity. Fish & Shellfish Immunology , 39: 118-124.
Mulyani,  R.,  Sukenda,  S.,  &  Nuryati  S.
2019. Efficacy of Aeromonas hydrophila formalin-killed  cells  and lipopolysaccharides vaccines in maternal immunity of tilapia broodstock and the offspring resistance.
Jurnal Akuakultur
Indonesia , 18: 141-151.
Nisaa,  K.,  Sukenda,  Junior,  M.Z., Lusiastuti,  A.M.,  &  Nuryati,  S. 2016. Resistance of tilapia Oreochrimis niloticus fry vaccinated  at  different  gonadal developmental stages toward
Streptococcus  agalactiae infection. Jurnal Veteriner , 17: 355−364.
Nisaa,  K.,  Sukenda,  Junior,  M.Z, Lusiastuti,  A.M.,  &  Nuryati,  S. 2017.  Fry  tilapia Oreochromis niloticus antibodi improvment
against Streptococcus  agalactiae trough broodstock vaccination. Pakistan Journal of Biotechnology , 14: 9−16.
Sukenda, Febriansyah, T.R., & Nuryati, S. 2014.  Efikasi  vaksin  sel  utuh Streptococcus agalactiae pada ikan nila Oreochromis  niloticus melalui perendaman. Jurnal  Akuakultur Indonesi , 13: 83-93.
Sukenda, Rusli, Nuryati, S., & Hidayatullah,  D.  2015.  Durasi proteksi vaksin Streptococcus
agalactiae untuk pencegahan
streptococcosis  pada  ikan  nila. Jurnal  Akuakultur  Indonesia ,  14:
192-201.
Sukenda,
Carman, O., Rahman,
Hidayatullah,  D.,  &  Yumaidawati,
N.S.  2017.  Vaccination  in  tilapia broodstock  with  whole  cell  and disease  resistance  in  its  offspring against Aeromonas hydrophila . Jurnal  Akuakultur  Indonesia ,  16:
268−276.
Sukenda, Rahman, Nisaa, K.,
Hidayatullah,  D.,  &  Vinasyiam,  A. 2018.  The  efficacy  of Streptococcus agalactiae vaccine preparations,
administered to tilapia broodstock, in preventing  streptococcosis  in  their offspring,  via  transfer  of  maternal immunity. Aquaculture International , 26: 785-798.
Swain,  P.,  Dash,  S.,  Bal,  J.,  Routray,  P., Sahoo, P.K., Sahoo, S.K., Saurabh, S.,  Gupta,  S.D.,  &  Meher,  P.K. 2006.  Passive  transfer  of  maternal antibodies  and  their  existence  in eggs, larvae and fry of Indian major carp, Labeo rohita . Fish & Shellfish Immunology , 20: 519-527.
Swain,  P.,  &  Nayak,  S.K.  2009.  Role  of maternally  derived  immunity  in fish.
Fish and Shellfish
immunology , 27: 89-99.
Wang, Z.P., & Zhang, S.C. 2010. The role of lysozyme and complement in the antibacterial  activity  of  zebrafish Danio  rerio egg  cytosol. Fish  & Shellfish Immunology , 29: 773-777.
Wang, S.H., Wang, Y., Ma, J., Ding, Y.C., Zhang, S.C.  2011. Phosvitin plays a  critical  role  in  the  immunity  of zebrafish  embryos  via  acting  as  a pattern recognition receptor and an
antimicrobial  effector. Journal  of Biological  Chemistry , 286:  22653–
22664.
Wang,  H.,  Ji,  D.,  Shao,  J.,  &  Zhang,  S. (2012).  Maternal  transfer  and protective  role  of  antibodies  in zebrafish  Danio  rerio. Molecular Immunology , 51: 332– 336.
Wang, N., Yang, Z., Zang, M., Liu, Y., & Lu,  C.  2013.  Identification  of
Omp38 by immunoproteomic
analysis  and  evaluation  as  a potential  vaccine  antigen  against Aeromonas  hydrophila in  Chinese breams. Fish & Shellfish Immunology , 34: 74-81.
Wedemeyer,  I.W.T.,  &  Yasutake,  W.T.
1977.  Clinical  methods  for  the assessment  of  the  effect  on environmental stress on fish health. Journal  Fish  Wildlife  Service ,  89: 1–17.
Yang,  W.,  &  Li,  A.  2009.  Isolation  and
characterization  of Streptococcus dysgalactiae from diseased
Acipenser  schrenckii.  Aquaculture , 294: 14-17.
Yi,T., Li, W.Y., Liu, L., Xiao, X.X., & Li, A.X. 2014. Protection of Nile tilapia Oreochromis  niloticus L.  against Streptococcus agalactiae following immunization  with  recombinant FbsA  and  α-enolase. Aquaculture , 428–429: 35–40.
Zapata,  A.,  Díez,  B.,  Cejalvo,  T., Gutiérrez-de,  C.F.,  &  Cortés,  A. 2006.  Ontogeny  of  the  immune system  of  fish. Fish  &  Shellfish Immunology , 20: 126–136.
Zhang,  S.,  Wang,  Z.,  & Wang,  H.  2013. Maternal immunity in fish: Review.
Developmental  &  Comparative Immunology , 39: 72–78.
Zhang, Z.H., Wu, H.Z., Xiao, J.F., Wang,
O.Y., Liu, Q., & Zhang, Y.X. 2014.
Booster  vaccination  with  live attenuated Vibrio anguillarum
elicits  strong  protection  despite weak specific antibody response in zebrafish. Journal  of Applied
Ichthyology , 30: 117–120.