## Jurnal Ilmu Farmasi dan Farmasi Klinik (JIFFK)
Vol. 16, No. 1, JUNI 2019, Hal. 36 – 42 ISSN: 1693 -7899
UJI AKTIVITAS PENINGKAT DAYA INGAT FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOL BUAH KEMUKUS ( Piper cubeba L. f) PADA MENCIT JANTAN GALUR BALB/C DENGAN METODE RADIAL ARM MAZE (RAM)
Junvidya Heroweti 1*) , Yance Anas 1) , Idress Muhammed Hama 2)
1) Bagian Farmakologi dan Farmasi Klinik Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim
2) Program Studi S1 Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Jl. Menoreh Tengah X/22 Sampangan, Semarang 50236 *Email: junvidyaheroweti@unwahas.ac.id

## INTISARI
Neurodegenerative sering  dikaitkan  dengan  proses  penuaan/ aging .  Proses  penuaan  akan mempengaruhi penurunan sel syaraf khususnya sel syaraf otak. Telah dilakukan penelitian aktivitas fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol  (FEAEE)  buah  kemukus  sebagai  peningkat  daya  ingat  dengan metode Morris  water  maze .  Salah  satu  kekurangan  metode Morris  water  maze (MWM)  adalah menyebabkan  stres  pada  hewan  uji,  sehingga  berpengaruh  terhdap  daya  ingatnya.  Penelitian bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  peningkat  daya  ingat  FEAEE  buah  kemukus  dengan metode radial arm maze .
Penelitian ini  dilakukan  dengan  rancangan pre  and  post  test  matched  control  group design ,menggunakan  25  ekor  mencit  jantan  galur  Balb/c  terbagi  dalam  5  kelompok.  Kelompok 1(kontrol  negatif)  diberi  larutan  CMC  Na  1%  17,5  mg/mL.  Kelompok  2,  3,  4,  5  diberi  FEAEE buah  kemukus  dengan  dosis  berturut-turut  63,  126, 252, dan  504  mg/kgBB.  Pemberian  bahan  uji secara per oral selama 21 hari. Pengamatan dilakukan terhadap frekuensi mencit melewati platform dengan  benar  dan  salah  dan  menghitung  skor  memori  menggunakan  metode radial  arm  maze (RAM) .  Perbedaan  skor  memori  diuji  dengan  uji Mann  Whitney .  Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa  FEAEE  buah  kemukus  mempunyai  aktivitas  peningkat  daya  ingat.  Aktivitas  daya  ingat ditunjukkan pada dosis 63 dan 252 mg/kgBB.
Kata kunci : Buah kemukus ( Piper cubeba, L. f), fraksi etil asetat, skor memori, radial arm maze

## ABSTRACT
Neurodegenerative is often associated with aging. The aging process will affect the decrease in nerve cells, especially brain nerve cells. Ethyl acetate fraction of kemukus fruit ethanol extract (FEAEE) of kemukus fruit has been investigated as a memory enhancer with the Morris water maze (MWM) method. One of the shortcomings of the Morris water maze method is that it causes stress in  test  animals,  thus  affecting  their  memory. This  study  aims  to determine  the  memory  enhancing activity of FEAEE of kemukus fruit with the radial arm maze method
This research is an experimental study  with  pre and posttest matched control group design using 25 male mice, Balb/c strains divided into 5 groups. Mice group 1 as a negative control group were  given  a  1%  CMC  Na  solution  of  17.5  mg/mL.  Group  mice  2  -  5  were  given  FEAEE  of kemukus  fruit  with  doses  of  63,  126,  252,  and  504  mg/kgBB,  respectively.  Test  material  is  given orally  for  21  days.  O bservations  were  made  on  the  frequency  of  mice  passing  the  platform correctly and incorrectly and calculating memory scores using the radial arm maze (RAM) method. Differences  in  memory  scores  were  analyzed  by  the  Mann  Whitney  test.  The  results  showed  that
FEAEE steamed fruit has memory enhancing activity. Memory activity was indicated at doses of 63 and 252 mg / kg.
Keywords: steamed fruit (Piper cubeba, L. f ), ethyl acetate fraction, memory score, radial arm maze
* Corresponding author: Junvidya Heroweti Bagian Farmakologi dan Farmasi Klinik Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Jl.Menoreh Tengah X/22 Sampangan-Semarang 50236 Email: junvidyaheroweti@unwahas.ac.id

## PENDAHULUAN
Penyakit neurodegenerative sering dikaitkan  dengan proses penuaan/ aging . Proses penuaan akan  mempengaruhi  penurunan  sel  syaraf  khususnya  sel  syaraf  otak.  Normalnya,  sel  yang  masih muda  memiliki  kemampuan  memperbaharui  diri,  mempertahankan  struktur  ,fungsi,  dan  mampu memperbaiki  kerusakan.  Salah  satu  akibat  menurunnya  sel  syaraf  adalah  menurunnya  kualitas memori,  atau  pembelajaran,  serta  meningkatnya  stress  oksidatif.  Tidak  berimbangnya  produksi radikal  bebas  dengan  antioksidan  menyebabkan  terjadinya  stres  oksidatif  yang  berperan  dalam rusaknya neuron, sehingga terjadi demensia (Pham-Huy dkk., 2008). Menurut National Institue on Aging (2010), terdapat banyak penyebab daya ingat seseorang menurun bahkan kehilangan ingatan, diantaranya  adalah  reaksi  buruk  terhadap  obat-obatan  tertentu,  depresi,  tidak  mengonsumsi makanan  sehat  yang  cukup,  konsumsi  alkohol,  terdapat  bekuan  darah  atau  tumor  di  otak,  cidera kepala,  serta  gangguan  tiroid,  ginjal,  dan  hati.  Selain  itu,  penyakit  neurodegeneratif  yang menyebabkan  penurunan  kualitas  memori  diantaranya  ialah  Alzheimer,  demensia  vaskuler, demensia dengan body lewy , dan demensia frontotemporal (Prince dkk., 2014).
Kandungan  flavonoid  pada  buah  kemukus,  selain  sebagai  antioksidan,  juga  dapat meningkatkan fungsi kognitif melalui aksinya sebagai neuroprotektif, meningkatkan fungsi neuron, dan  menstimulasi  neurogenesis.  Flavonoid  mempunyai  kemampuan  menembus  sawar  darah  otak dan  terdeteksi  pada  otak  tikus  di  bagian  pembelajaran  dan  daya  ingat,  sesaat  setelah  diberikan secara per oral. Flavonoid mencegah penurunan daya ingat yang berhubungan dengan penuaan dan juga  proses  neurodegeneratif.  Mekanisme  flavonoid  dalam  mengurangi  penurunan  kognitif diperkirakan melalui kemampuannya berinteraksi dengan jalur persinyalan neuron intraseluler yang memediasi neurodegenerasi dan neuroinflamasi (Macready dkk., 2009).
Long  term  potentiation (LTP)  adalah  peningkatan  respon  potensial  post-sinaptik,  bersifat menetap dan terbentuk secara cepat, setelah perangsangan di neuron sipnatik (Ganong, 2002). LTP merupakan salah satu dasar mekanisme seluler utama dalam pembelajaran dan memori. Prinsip dari LTP adalah jika sinyal yang diterima pre sinap kuat dan berulang, maka koneksi di pre sinap dan post sinap akan menguat. Informasi dalam bentuk sinyal diterima oleh kortek otak, kemudian akan ditransmisikan  ke  hipokamus.  Sinyal  akan  menyebabkan  terjadinya  pelepasan  glutamin  pada  pre sinap.  Reseptor  AMPA  dan  reseptor  NMDA  adalah  reseptor  pada  post  sinap.  Glutamin  yang dilepaskan  oleh  pre  sinap  akan  berikatan  dengan  reseptor  AMPA  dan  reseptor  NMDA. Berikatannya  glutamin  dengan  reseptor  AMPA  mengakibatkan  membukanya  celah  pada  reseptor AMPA  sehingga  ion  Na + masuk  ke  dalam  post  sinap.  Banyaknya  Na + yang  masuk  post  sinap bergantung  oleh  ikatan  glutamin  dengan  reseptor  AMPA.  ion  Ca 2+ akan  mengaktivasi  CaMKII. Fase  LTP  lebih  lanjut  adalah  sintesis cyclic  adenosine  monophosphate  response  element-binding protein (CREB) (Sherwood, 2013). CREB berperan dalam penguatan memori jangka pendek agar menjadi memori jangka panjang melalui proses LTP (Kida, 2012).
Salah satu metode yang dapat digunakan untuk mengetahui memori spasial hewan uji adalah Radial Arm Maze (RAM) . RAM merupakan alat untuk mengetahui memori spasial pada hewan uji dengan  cara  membuat  hewan  berenang  untuk  menemukan platform /labirin  (Prichett  dan  Mulder, 2003).  Memori  spasial  merupakan  kemampuan  untuk  mengingat  suatu  lokasi  subyek,  ruangan, tempat, atau arah (Chalfonte dkk., 1996; Guyton & Hall, 2001; Pinel, 2009). Dalam perlakuan ini
memori  spasial  mencit  merupahan  hasil  daya  ingat  mencit  menemukan platform dari  titik  awal hingga menemukan platform dalam sumur Radial Arm Maze (RAM) selama tiga menit. Kebenaran menemukan platform dan  semakin  cepat  waktu  yang  dipakai  untuk  menemukan platform , menunjukkan ingatan spasial semakin baik.
Fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol  (FEAEE)  buah  kemukus  yang  mempunyai  potensi  yang tinggi  sebagai  peningkat  daya  ingat  memberi  peluang  dikembangkannya  penelitian  ini. Pengembangan  dapat  dilakukan  dengan  cara  menggunakan  hewan  uji  yang  dibuat  mengalami penurunan daya ingat.

## METODE PENELITIAN Bahan Penelitian
Bahan  penelitian  adalah  buah  kemukus  yang  diperoleh  dari  Balai  Besar  Penelitian  dan Pengembangan  Tanaman  Obat  dan  Obat  Tradisional  (B2P2POOT)  Tawangmangu,  Karanganyar, Jawa  Tengah, etanol 70%, etil asetat, CMC-Na, aquadest dan pelet.

## Alat Penelitian
Seperangkat  alat  untuk  ekstraksi,  seperangkat  alat  uji radial  arm  maze (lokal),  spuit  oral,  alat gelas, corong pisah, timbangan hewan.

## Jalannya Penelitian
1. Pembuatan fraksi etil asetat ekstrak etanol buah kemukus
Fraksinasi  ekstrak  etanol  buah  kemukus  dengan  pelarut  campuran  air-etanol  70%  dengan perbandingan  9:1  dalam  corong  pisah  kemudian  digojog  hingga  campuran  memisah  menjadi  dua lapisan yaitu lapisan larutan ekstrak etanol buah  kemukus dan lapisan etil asetat. Fraksi etil asetat yang terkumpul diuapkan dengan rotary evaporator pada suhu 55 o C.

## 2. Pembuatan CMC-Na
CMC-Na  1%  dibuat  dengan  cara  menimbang  sebanyak  1  gram  kemudian  dikembangkan dalam  air  panas  sebanyak  20  mL.  Setelah  itu  di  larutkan  menggunakan  aquadest  hingga  100  mL. CMC-Na dibuat dalam kondisi baru setiap kali akan menggunakan.
3. Pembuatan suspensi fraksi etil asetat ekstrak etanol buah kemukus
Suspensi FEAEE buah kemukus dibuat dengan kadar 0,315; 0,63; 1,26; 2,52 % masing-masing sebanyak  10  mL.  Kemudian  FEAEE  buah  kemukus  disuspensikan  dengan  CMC-Na  1%  sampai dengan volume akhir 10 mL.
4. Penyiapan hewan uji
Sebanyak  25  hewan  uji  dibagi  dalam  5  kelompok.  Kelompok  1  sebagai  kontrol  negatif, diberikan  CMC-Na,  sementara  kelompok  2,  3,  4  dan  5  adalah  kelompok  perlakuan  pemberian FEAEE buah kemukus dengan dosis masing-masing 63, 126, 252, dan 504 mg/kgBB.

## 5. Pengukuran skor memori
Data  yang  diperoleh  pada  uji  aktivitas  peningkatan  daya  ingat  adalah  frekuensi  mencit memasuki lengan platform dengan benar (A) dan frekuensi mencit memasuki lengan platform yang salah  (B).  Skor  memori  tiap  mencit  pada  semua  kelompok  perlakuan  dihitung  dengan  rumus berikut ini (Richter dkk., 2013).
Skor memori =

## Analisis Data
Data  hasil  skor  memori  diuji  menggunakan  distribusi  normalitas, Shapiro  Wilk (p>0.05). Perbedaan  pada  skor  memori  sebelum  dan  setelah  perlakukan  dianalisis  menggunakan  uji  t berpasangan. FEAEE buah kemukus dinyatakan mempunyai aktivitas sebagai peningkat daya ingat bila  skor  memori  sesudah  perlakuan  memiliki  nilai  lebih  besar  secara  bermakna  dibandingkan dengan sebelum perlakuan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  ini  menggunakan  buah  kemukus  yang  didapatkan  dari  Pengembangan  Tanaman Obat  dan  Obat  Tradisional  (B2P2POOT)  Tawangmangu,  Karanganyar,  Jawa    Tengah.  Ekstraksi buah kemukus secara maserasi dengan etanol 70%. Fraksinasi ekstrak etanol buah kemukus dengan etil  asetat  dilakukan  pengulangan  sebanyak  3  kali.  Fase  etil  asetat  yang  terkumpul  selama  proses fraksinasi  sebanyak  1.65  L.  Kemudian  fase  etil  asetat  diuapkan  dengan rotary  evaporator dengansuhu 55  C.
Buah kemukus mengandung flavonoid. Flavonoid merupakan metabolit sekunder yang dapat terurai oleh pemanasan (Riyanto, 1990). Penggunaan rotary evaporator menghindarkan penguapan etil  asetat  pada  suhu  yang  tinggi  karena  penguapannya  tidak  hanya  menggunakan  panas,  namun juga  memanfaatkan  pengurangan  tekanan.  Pengurangan  tekanan  akan  menurunkan  titik  didih  etil asetat,  sehingga  meningkatkan  kecepatan  penguapan  (BPOM  RI,  2013).Hasil  penguapan  fase  etil asetat pada proses fraksinasi ekstrak etanol buah  kemukus adalah FEAEE buah kemukus. Ekstrak etanol buah kemukus sebanyak 50 g difraksinasi menghasilkan fraksi sebanyak 14,4 g. Rendemen fraksi dalam penelitian ini sebesar 28,8%.
Prosedur  pengujian  aktivitas  daya  ingat  mengacu  pada  Wenk  (2004)  dengan  modifikasi. Metode uji  yang digunakan untuk  uji  aktivitas peningkat daya ingat pada penelitian adalah radial arm maze (RAM) . Prinsip metode dengan mengukur skor memori terhadap frekuensi mencit yang memasuki platform secara  benar  atau  salah.  Mencit  dikatakan  memiliki  daya  ingat  tinggi  jika frekuensi  melewati platform dengan  benar  lebih  banyak  dibandingkan  frekuensi  kesalahan melewati platform . Semakin tinggi daya ingat mencit, maka skor memorinya juga semakin tinggi. Secara  teoritis,  senyawa  yang  dapat  meningkatkan  daya  ingat  yang  diberikan  pada  mencit  akan menghasilkan  skor  memori  yang  lebih  tinggi  secara  bermakna  dibandingkan  sebelum  diberikan senyawa  tersebut.  Rangkuman  skor  memori  tiap  kelompok  mulai  hari  pertama  hingga  hari  ke-21 dirata-rata.  Perbedaan  metode  RAM  dengan  metode MorrizWater  Maze (MWM)  adalah  pada metode  MWM  penggunaan  motivasi  penyelamatan  diri  untuk  belajar  dan  mengingat,  sedangkan pada  metode radial  arm  maze menggunakan  pencarian  makanan  sebagai  motivasinya.  Hewan  uji lebih mudah menyerah  ketika diuji pada Morriswater maze dibandingkan pada radial arm maze ( Vorhees dan Williams, 2014; Wenk, 2004; Hodges, 1996).
Mencit  dipuasakan  selama  12  jam  sebelum  dilakukan  fase  adaptasi.  Adaptasi  dilakukan selama  3  hari  dengan  memberikan  pelet  pada  ujung  lengan platform /labirin  dan  di  pintu  masuk lengan platform /labirin.  Fase latihan dilakukan satu kali sehari,  setiap hari selama 12 hari  dengan cara  meletakkan  pellet  pada  ujung  lengan  labirin  yang  tidak  terlihat  oleh  mencit  dari  pusat. Selanjutnya  adalah  fase  uji,  Mencit  pada  tiap  kelompok  1  diberi  larutan  CMC-Na  1%  sebanyak 17,5  mL/kgBB.  Mencit  pada  kelompok  2,  3,  4,  dan  5  diberi  fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol  buah kemukus  dengan  dosis  berturut-turut  63,  126,  252,  dan  504  mg/kgBB.  Pengamatan  meliputi frekuensi  mencit  memasuki  lengan  labirin  dengan  benar  dan  frekuensi  mencit  salah  memasuki lengan  platform/labirin.  Pengamatan  pada  hari  ke-1  menghasilkan  data  sebelum  perlakuan  ( pre- test ).  Sementara  pengamatan  pada  hari  ke-21  pemberian  larutan  uji  menghasilkan  data  sesudah perlakuan ( post-test ). Pengukuran  skor memori pada mencit jantan galur  Balb/c dilakukan  setelah pemberian  FEAEE selama 21 hari. Data yang diperoleh pada uji  aktivitas peningkatan daya ingat adalah  frekuensi  mencit  memasuki  lengan platform dengan  benar  (A)  dan  frekuensi  mencit memasuki  lengan platform yang  salah  (B).  Uji  dinyatakan  selesai  bila  mencit  telah  memasuki semua lengan atau 10 menit telah berlalu. Hasil pengamatan yang perlu dicatat adalah (A) jumlah pilihan  yang  benar  dalam  memasuki  setiap  lengan  di  setiap  sesi  (memasuki  lengan  yang  belum pernah  dikunjungi  sebelumnya  pada  sesi  tersebut),  dan  (B)  jumlah  kesalahan  dalam  setiap  sesi (memasuki  lengan  yang  telah  dikunjungi  sebelumnya  dan/atau  tidak  memasuki  satu  atau  lebih lengan dalam setiap sesi dihitung sebagai kesalahan).
Gambar 1 adalah kurva rata-rata skor memori tiap kelompok mulai hari pertama hingga hari ke-21 pengujian. Pada umumnya semua kelompok perlakuan mengalami peningkatan skor memori selama diberikan larutan uji, kecuali pada kelompok 1 yaitu kelompok kontrol negatif yang hanya diberikan larutan CMC-Na 1% sebagai bahan pembawa. Kurva rata-rata skor memori pada mencit kelompok  negatif  mengalami  kenaikan  dan  penurunan  selama  fase  pengujian,  namun  pada  akhir pengujian skor memorinya mengalami kenaikan.

## Gambar 1. Kurva rata-rata skor memori setiap kelompok

## Keterangan :
Kelompok 1  : kelompok kontrol negatif dengan CMC-Na 1% sebanyak 17,5 mL/kgBB Kelompok 2  : kelompok perlakuan yang diberi FEAEE buah kemukus dosis 63 mg/kgBB Kelompok 3  : kelompok perlakuan yang diberi FEAEE buah kemukus dosis 126 mg/kgBB Kelompok 4  : kelompok perlakuan yang diberi FEAEE buah kemukus dosis 252 mg/kgBB Kelompok 5  : kelompok perlakuan yang diberi FEAEE buah kemukus dosis 504 mg/kgBB FEAEE        : fraksi etil asetat ekstrak etanol
Gambar  2  menunjukkan  semua  kelompok  perlakuan  mengalami  kenaikan  skor  memori. Rata-rata  skor  memori  kelompok  kontrol  negatif  sebelum  diberikan  larutan  CMC-Na  1%  sebesar 0,196,  dan  setelah  diberikan  larutan  CMC-Na  skor  memori  mengalami  kenaikan  menjadi  0,304. Hasil  analisa  statistik  dengan  uji  t-berpasangan  menunjukkan  kenaikan  tersebut  tidak  bermakna (p>0,05). Larutan CMC-Na 1% sebagai larutan pembawa FEAEE buah kemukus tidak mempunyai aktivitas sebagai peningkat daya ingat.
Kelompok 2 dan  4  mengalami  kenaikan  skor  memori  setelah  diberi  FEAEE  buah  kemukus selama  21  hari.  Signifikansi  hasil  uji  t  berpasangan  pada  kedua  kelompok  tersebut  berturut-turut sebesar 0,025 dan 0,043 (p < 0,05). Berdasarkan nilai signifikansi tersebut dapat dinyatakan bahwa terjadi kenaikan skor memori yang bermakna setelah pemberian FEAEE buah kemukus. Pemberian FEAEE buah kemukus dosis 63 dan 252 mg/kgBB dapat meningkatkan daya ingat mencit.
Gambar 2. Diagram skor memori sebelum dan setelah diberikan perlakuan *: berbeda bermakna dibandingkan sebelum perlakuan
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1  2  3  4  5  6  7  8  9  10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 SK O R M EM O R I HARI
kelompok 1 kelompok 2 kelompok 3
kelompok 4 kelompok 5 0.196 ± 0.168
0.134 ± 0.104 0.164 ± 0.124 0.144 ± 0.131 0.172 ± 0.095 0.304 ± 0.042 0.617 ± 0.081 * 0.553 ± 0.168 0.612 ± 0.075 * 0.612 ±0.132 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 K 1 K 2 K 3 K 4
K 5
S k o r Me m o ri Kelompok perlakuan Pretest Posttest
Hasil  penelitian  menunjukkan  semua  kelompok  perlakuan  mengalami  peningkatan  skor memori  selama  diberikan  perlakuan  FEAEE  buah  kemukus  pada  berbagai  konsentrasi.  Pada kelompok kontrol negatif yang diberikan CMC-Na 1% skor memori tidak mengalami peningkatan secara signifikan. Kurva rata-rata skor memori pada mencit  kelompok kontrol negatif mengalami kenaikan  dan  penurunan  selama  fase  pengujian,  namun  pada  akhir  fase  pengujian  skor  memori mencit  kelompok  ini  mengalami  kenaikan.  Rata-rata  skor  memori  pada  kelompok  kontrol  negatif sebelum  diberikan  CMC-Na  1%  sebesar  0,196,  dan  mengalami  kenaikan  skor  memori  menjadi 0,304.  Hasil  tersebut  diuji  menggunakan  uji  t-berpasangan  dan  menunjukkan  kenaikan  tidak bermakna (p>0,05). Sehingga dapat dikatakan bahwa larutan CMC-Na 1%  tidak memiliki aktivitas sebagai peningkat daya ingat.
Pada kelompok perlakuan 2 dan 4, dengan pemberian FEAEE buah kemukus secara berturut- turut, 63mg/kg BB dan 252 mg/kgBB mengalami kenaikan skor memori dengan signifikansi hasil uji 0,025 dan 0,043 (p<0,05). Dengan hasil tersebut menyatakan pemberian FEAEE buah kemukus dosis  63  dan  252  mg/kgBB  dapat  meningkatkan  daya  ingat  mencit.  Pada  kelompok  3  dan  5, pemberian  FEAEE  buah  kemukus  dosis  126  mg/kgBB  dan  504  mg/kgBB  menunjukkan  bahwa FEAEE buah kemukus tidak mempunyai aktivitas sebagai peningkat daya ingat.

## KESIMPULAN
FEAEE buah kemukus memiliki efek sebagai peningkat daya ingat mencit pada dosis 63 dan 252 mg/kgBB.

## SARAN
a. Perlu  dilakukan  identifikasi  awal  kemampuan  mencit  sehingga  dapat  diketahui  kemampuan mengingat/daya memori masing-masing mencit.
b. Perlu ditambahkan kelompok kontrol positif dalam penelitian yang serupa dengan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
BPOM  RI,  2013, Pedoman  Teknologi  Formulasi  Sediaan  Berbasis  Ekstrak ,  Direktorat  Obat  Asli Indonesia, Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, Jakarta, 12 – 14
Chalfonte,  B.  L.,  Verfaellie,  M.,  Johnson,  M.  K.,  &  Reiss,  L.,  1996,  Spatial  location  memory  in amnesia:  Binding  item  and  location  information  under  incidental  and  intentional  encoding conditions. Memory , 4 , 591–614. doi: 10.1080/ 7419 40998 Ganong,  W.F.,  2002, Buku  Ajar  Fisiologi  Kedokteran ,  diterjemahkan  oleh  Djauhari Widjajakusumah,  Dewi  Irawati,  Minarma  Siagian,  Dangsima  Moeloek,  Brahm  U.  Pandit, Edisi 20, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, 258 – 263
Guyton, A. C. & Hall, J. E. (2001). Buku ajar fisiologi kedokteran . Jakarta: EGC
Hodges, H., 1996, Maze Procedure; The Radial Arm and Water Maze Compared, Brain Research Cognitive Brain Research , ( 3)3-4, 167-181
Kida,  S.,  2012,  A  Functional  Role  for  CREB  as  A  Positive  Regulator  of  Memory  Formation  and LTP, Experimental Neurobiology , 21(4) , 136 – 140
Macready,  A.L.,  Kennedy,  O.B.,  Ellis,  J.A.,  Williams,  C.M.,  Spencer,  J.P.E.,  and  Butler,  L.T., 2009,  Flavonoids  and  Cognitive  Function:  A  Review  of  Human  Randomized  Controlled Trial Studies and Recommendation for Future Studies, Genes and Nutrition , 4 , 227 – 242 National  Institute  of  Aging,  2010,  Understanding  Memory  Loss,  US  Departement  of  Health  and Human Services, 9
Pham-Huy,  L.A.,  He,  H.,  and  Pham-Huy,  C.,  2008,  Free  Radicals,  Antioxidants  in  Disease  and Health, International Journal of Biomedical Science , 4(2) , 89 – 96 Pinel,  J.  P.  J.  (2009). Stres  dan  kesehatan  dalam:  Biopsikologi  edisi  ke-7 .  Yogyakarta:  Pustaka Pelajar.
Prince, M., Albanese, E., Guerchet, M., and Prina, M., 2014, Nutrition And Dementia, Alzheimer’s Disease International, London
Prichett, K, and Mulder, G.B., 2003, T, Radial Arm, and Barnes Mazes, Contemporary Topics , 42 (3) , 53 – 55
Richter, S.H., Zeuch, B., Lankisch, K., Gass, P., Durstewitz, D., and Vollmayr, B., 2013, Where Have I Been? Where Should I Go? Spatial Working Memory on A Radial Arm Maze in A Rat Model of Depression, Plos One , 8(4) , 1 – 10 Riyanto,  S.,  1990,  Flavonoid,  dalam  Mursyidi,  A.,  (Ed), Analisis  Metabolit  Sekunder ,  Proyek Pengembangan  Pusat  Fasilitas  Bersama  Antar  Universitas  (Bank  Dunia  XVII)  –  PAU Bioteknologi Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, 171 – 175 Sherwood,  L.,  2013, Human  Physiology  from  Cells  to  System ,  8 th Edition,  Brooks/Cole  Cengage Learning, Belmont, 73 – 75
Vorhees,  C.V.  and  Williams,  M.T.,  2014,  Assessing  Spatial  Learning  and  Memory  in  Rodent,
Institute of Laboratory Animal Resource Journal , 55(2) , 310 – 332
Wenk,G.L.,2004, Assessment of Spatial Memory Using the Radial Arm Maze and Morris Water Maze,in  Gerfen  C.,Holmes,A.,Sibley  D.,Skolnick,  P.,Wray,S.,  (Eds.), Current  Protocols  in Neuroscience , Wiley & Sons,Inc., NewYork, 8.5A.1 – 8.5A.12