## CURRENT BIOCHEMISTRY
ISSN: 2355-7877 e-ISSN: 2355-7931 Journal homepage: http://journal.ipb.ac.id/index.php/cbj
Journal E-mail: current.biochemistry@gmail.com
Inhibitory Activity and Kinetics of α-Glucosidase by Toona sinensis Stem Bark Extracts
(Aktivitas Penghambatan dan Kinetika α-Glukosidase oleh Ekstrak Kulit Kayu Surian ( Toona sinensis ))
Melati Devina Gustini Wirastuti 1 , Syamsul Falah 1* , Syaefudin 1
1 Department of Biochemistry, IPB University, Bogor, 16680, Indonesia
Received: 23 February 2022  ; Accepted: 14 April 2022
Corresponding author : Syamsul Falah ; Departemen Biokimia IPB; e-mail: syamsulfa@apps.ipb.ac.id

## ABSTRACT
Research  on  the  potential  of  the  Surian  tree  (Toona  sinensis)  for  medicine  has  been  carried  out, especially for the leaves. However, the bark section has not been done much. This study aimed to determine the inhibitory activity of -glucosidase and IC 50 extract as well as the fraction of surian bark as antidiabetic in vitro.  The  reflux  method  with  water  at  90 o C  and  maceration  using  70%  ethanol  at  room  temperature  was carried  out  to  obtain  aqueous  and  ethanol  extracts.  Furthermore,  the  ethanol  extract  was  fractionated successively using n-hexane, diethyl ether, and ethyl acetate. Phytochemical screening test showed  that the aqueous  extract  contained  flavonoids,  saponins,  and  tannins.  Meanwhile,  the  70%  ethanol  extract  and  its fraction  showed  terpenoid  content,  in  addition  to  flavonoid  compounds,  saponins,  and  tannins.  The  best  - glucosidase inhibition was shown by 70% ethanol extract, which was 70.45 ppm followed by ethyl acetate fraction,  n-hexane  fraction,  diethyl  ether  fraction,  and  water  extract  of  surian  bark  with  values  of  81.96 g/mL, 98.76 g/mL, respectively. , 140.25 g/mL, and 242.85 g/mL. Kinetics of -glucosidase inhibition showed that  70%  ethanol  extract  of  surian  bark  inhibited  through  a  non-competitive  inhibition  mechanism, characterized by a decrease in Vmax from 8.29x10-3 mM/min to 1.65x10-3 mM/min and a decrease in Km from 0.17 mM to 0.03 mM.
Keywords: diabetes, α-glucosidase inhibition activity, enzyme kinetics, Toona sinensis

## ABSTRAK
Penelitian potensi pohon surian (Toona sinensis) untuk obat telah banyak dilakukan, terutama untuk bagian  daun.  Namun,  bagian  kulit  kayu  belum  banyak  dilakukan.  Penelitian  ini  bertujuan  menentukan aktivitas inhibisi α-glukosidase dan IC 50 ekstrak serta fraksi kulit kayu surian sebagai antidiabetes secara in vitro. Metode reflaksi dengan air pada suhu 90 o C dan maserasi menggunakan etanol 70% pada suhu ruang dilakukan  untuk  memperoleh  ekstrak  air  dan  etanol.  Selanjutnya  ekstrak  etanol  difraksionasi  bertingkat berturut-turut  menggunakan  n-heksana,  dietil  eter,  dan  etil  asetat.  Uji  penapisan  fitokimia  menunjukkan ekstrak  air  mengandung  flavonoid,  saponin,  dan  tanin.  Ekstrak  etanol  70%  dan  fraksinya  menunjukkan kandungan  terpenoid,  selain  senyawa  flavonoid,  saponin,  dan  tannin.  Inhibisi  α-glukosidase  terbaik ditunjukkan oleh ekstrak etanol 70% yaitu 70.45 ppm diikuti oleh fraksi etil asetat, fraksi n-heksana, fraksi
dietil eter, dan ekstrak air kulit kayu surian secara berturut-turut dengan nilai 81.96 µg/mL, 98.76 µg/mL, 140.25 µg/mL, dan 242.85 µg/mL. Kinetika penghambatn α-glukosidase menunjukkan bahwa ekstrak etanol 70% kulit kayu surian menghambat melalui mekanisme inhibisi non-kompetitif, dicirikan dengan penurunan Vmaks dari 8.29x10-3 mM/min menjadi 1.65x10-3 mM/min dan penurunan Km dari 0.17 mM menjadi 0.03 mM.
Kata kunci : aktivitas inhibisi, diabetes, α-glucosidase, kinetika enzim, penapisan fitokimia, Toona sinensis

## 1. PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  negara  dengan penderita  diabetes  melitus  (DM)  terbesar  ke-7 di  dunia  pada  tahun  2013  setelah  Rusia  dan Meksiko  (Cho et  al .  2013). World  Health Organization (WHO)  mencatat,  pada  tahun 2012  DM  dinyatakan  sebagai  penyebab kematian langsung terhadap 1.5 juta penduduk dunia.  Diabetes  termasuk  penyakit  kronis akibat ketidakmampuan pankreas menghasilkan  dan  memanfaatkan  insulin dengan  baik  (WHO  2015).  Produksi  insulin yang tidak cukup menyebabkan kadar glukosa darah  berlebih  (hiperglikemia),  sehingga glukosa  dalam  darah  akan  dikeluarkan  tubuh bersama urin. Ketiadaan insulin juga menyebabkan  penguraian  lemak  dalam  sel yang memicu pelepasan badan keton ke dalam darah,  sehingga  darah  bersifat  asam.  Kondisi ini  mengakibatkan  sakit  perut,  mual,  dan muntah,  bahkan  berujung  pada  kematian akibat ketoasidosis (Matsui et al. 2004; Nelson dan Cox 2008).
Menurut  Verna et  al. (2016),  DM merupakan  kelainan  metabolik  yang  ditandai dengan  kondisi  hiperglikemia,  diikuti  dengan komplikasi  seperti  aterosklerosis,  jantung koroner, dan penyakit mikro serta makrovaskular.  Tingginya  resiko  komplikasi tersebut mendorong dilakukan upaya pengobatan  terhadap  DM.  Pengobatan  DM umumnya  bertujuan  menjaga  kadar  glukosa darah  tetap  normal  dan  mencegah  terjadinya komplikasi. Salah satu upaya adalah penyuntikan  hormon  insulin,  namun  biaya yang  mahal  menjadikan  upaya  ini  sulit dilakukan  oleh  sebagian  kalangan  masyarakat
(Lee et al . 2007). Mekanisme pengobatan DM lainnya  adalah  dengan  menghambat  kerja  α- glukosidase,  yang  berperan  dalam  proses pencernaan  karbohidrat.  Enzim  α-glukosidase mengkatalisis  pencernaan  pati  dan  disakarida pada  proses  diet.  Inhibisi  enzim  menunda pemecahan  karbohidrat  dalam  usus  halus, sehingga  kadar  abnormal  glukosa  darah  akan menurun  pada  penderita  diabetes  (Kazeem et al. 2013).
Berbagai  obat  sintetik  yang  berperan menghambat  α-glukosidase  telah  beredar  di masyarakat, seperti akarbosa. Namun, pemberian  obat  tersebut  perlu  dibatasi  karena menimbulkan  efek  samping,  seperti:  mual, muntah,  serta  kejang  perut.  Beberapa  studi menunjukkan  penghambatan  aktivitas  α- glukosidase oleh produk herbal, seperti bagian tanaman,  sebagai  agen  hipoglikemik  alternatif untuk  pengobatan  tradisional  diabetes,  salah satunya adalah surian (Zhao et al. 2009). Daun  surian  ( Toona  sinensis )  sudah dimanfaatkan  oleh  masyarakat  Cina  dan Malaysia  sebagai  teh  herbal  selain  sebagai sayuran.  Hampir  seluruh  bagian  surian  dapat digunakan  sebagai  obat  mual,  muntah,  dan disentri  karena  kemampuan  antiinflamasi, antioksidan,  dan  detoksifikasi  yang  dimiliki. Daunnya mengandung sejumlah besar senyawa fitokimia, seperti alkaloid, flavonoid, terpen, dan antrakuinon yang mampu menghambat  kerja  α-glukosidase  (Zhao et  al. 2009).  Namun,  selain  daun,  kulit  batang T. sinensis belum  banyak  dilakukan  penelitian sebagai sumber obat. Penelitian yang dilakukan  Ichsan  (2011)  menunjukkan  bahwa ekstrak  kulit  surian  mengandung  senyawa
metabolit  sekunder  seperti  flavonoid,  fenolik, saponin, dan tanin.
Tujuan penelitian ini adalah menentukan daya  inhibisi  ekstrak  dan  fraksi  kulit  kayu surian terhadap α-glukosidase serta menentukan  IC 50 dari  masing-masing  sampel. Sampel dengan nilai IC 50 terbaik diuji kinetika inhibisinya  terhadap  enzim  untuk  menentukan parameter  kinetik  dan  mekanisme  inhibisinya. Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan  informasi  terkait  kemampuan ekstrak  dan  fraksi  kulit  kayu  surian  ( T. sinensis )  sebagai  senyawa  antidiabetes,  serta kemungkinan kearah komersialisasi.

## 2. METODOLOGI

## Preparasi Kulit Kayu Surian
Sampel  kulit  kayu  surian  yang  berasal dari  Sumedang  berumur  sekitar  15  tahun dikering-anginkan kemudian digiling menggunakan willey  mill .  Serbuk  yang diperoleh  diayak  sehingga  berukuran  40-60 mesh dan disimpan dalam wadah kering.

## Penentuan Kadar Air Kulit Kayu Surian
Sebanyak 3 g sampel kulit kayu surian dimasukkan  dalam  cawan  yang  telah  dioven pada  suhu  105 o C  selama  30  menit  dan didinginkan  dalam  desikator  dan  ditimbang menggunakan neraca analitik. Sampel didalam cawan  kemudian  dioven  pada  suhu  105 o C hingga konstan. Setelah dioven, sampel dalam cawan  disimpan  dalam  desikator  selama  30 menit, dan selanjutnya diukur beratnya dengan neraca analitik (AOAC 2006).

## Ekstraksi Kulit Surian
Simplisia  kulit  kayu  surian  sebanyak 30  g  dimasukkan  ke  dalam  labu  Erlenmeyer berukuran  500  mL.  Proses  maserasi  simplisia dilakukan  dengan  menambahkan  300  mL etanol 70% pada labu Erlenmeyer, dan diaduk dengan shaker pada  kecepatan  130  rpm  pada suhu  kamar  selama  24  jam.  Proses  maserasi diulang  dua  kali  menggunakan  pelarut  dan
kecepatan  yang  sama  selama  24  jam.  Maserat yang  diperoleh,  kemudian  disaring  sehingga diperoleh  filtrat  hasil  maserasi.  Filtrat  hasil maserasi  diuapkan  dengan rotary  evaporator pada  suhu  50°C  hingga  menjadi  padatan ekstrak, dan ditimbang bobotnya.
Ekstrak  air  kulit  kayu  surian  diperoleh dengan metode refluks. Simplisia sebanyak 30 gram  di  dalam  labu  Erlenmeyer  500  mL direfluks  menggunakan  300  mL  akuades  pada suhu  90°C  selama  1  jam.  Setelah  larutan ekstrak  disaring,  proses  refluks  diulang  dua kali  dengan  kondisi  yang  sama.  Filtrat  hasil ekstraksi  diuapkan  dengan rotary  evaporator pada  suhu  50°C  hingga  menjadi  padatan ekstrak,  dan  ditimbang  bobotnya.  Bobot ekstrak  etanol  70%  yang  diperoleh  sebesar 9.89  g,  sedangkan  bobot  ekstrak    air  sebesar 10.44  g  (Modifikasi  Lumempouw  et  al.  2012 dan  Padmasari et al. 2013).

## Fraksinasi Ekstrak Etanol 70%
Fraksinasi bertingkat dilakukan dengan melarutkan 1 g ekstrak etanol  75 mL akuades di  dalam  corong  pisah  Pyrex  250  mL. Sebanyak  75  mL  n-heksana  ditambahkan  dan digoyang  hingga  homogen.  Setelah  campuran didiamkan,  fraksi  n-heksana  yang  terbentuk dipisahkan  dari  fraksi  air.  Proses  fraksinasi dengan  n-heksan  dilakukan  dua  kali  ulangan. Selanjutnya  fraksi  air  difraksinasi  bertingkat dengan  75  mL  dietil  eter  untuk  memperoleh fraksi  dietil  eter.  Proses  fraksinasi  dengan dietil  eter  dilakukan  dua  kali.  Fraksi  air  yang tersisa  difraksinasi  bertingkat  dengan  75  mL etil asetat untuk memperoleh fraksi etil asetat. Proses  fraksinasi  dengan  etil  asetat  dilakukan dua  kali.  Ketiga  fraksi  yang  terbentuk dipekatkan dengan evaporator pada suhu 50 o C, sehingga  berbentuk  padatan  ekstrak  dengan rendemen masing-masing  adalah 2.83%  fraksi n-heksana, 1.62% fraksi dietil eter, dan 2.04% fraksi etil asetat. Fraksi disimpan dalam wadah tertutup pada suhu 4°C (Modifikasi Firdausi et al. 2015).

## Penapisan Senyawa Fitokimia
Penapisan senyawa fitokimia dilakukan  dengan  prosedur  Harborne  (2007) sesuai dengan senyawa yang ingin diuji, tanpa menggunakan standar atau kontrol.
Uji  flavonoid.    Ekstrak  dan  fraksi kulit  kayu  surian  sebanyak  50  mg  dilarutkan dalam  10  mL  akuades.  Larutan  dididihkan selama  5  menit,  lalu  disaring  dan  diambil filtratnya.  Filtrat  yang  diperoleh  ditambahkan dengan 0.5 g serbuk Mg, 5 tetes H 2 SO 4 pekat, dan  1  mL  amil  alkohol.  Campuran  dikocok dengan kuat. Keberadaan flavonoid ditunjukkan dengan terbentuknya warna merah,  kuning  atau  jingga  pada  lapisan  amil alkohol.
Uji  tanin.  Sebanyak  50  mg  ekstrak dan  fraksi  kulit  kayu  surian  ditambahkan  10 mL  akuades.  Kemudian,  larutan  dididihkan selama  5  menit,  lalu  disaring  dan  diambil filtratnya.  Filtrat  yang  diperoleh  ditambahkan dengan  3  tetes  FeCl 3 .  Keberadaan  tanin ditunjukkan  dengan  terbentuknya  warna  biru atau hijau kehitaman.
Uji alkaloid. Sebanyak 50 mg ekstrak dan  fraksi  kulit  kayu  surian  ditambahkan dengan  5  mL  kloroform  dan  3  tetes  amoniak lalu  di  vorteks.  Larutan  disaring  dan  diambil filtratnya.  Filtrat  yang  diperoleh  kemudian ditambahkan  dengan  H 2 SO 4 2M.  Selanjutnya, sebanyak  3  tetes  fraksi  H 2 SO 4 yang  diperoleh dipindahkan  ke  dalam plat  tetes  lalu ditambahkan  masing-masing  2  tetes  pereaksi Dragendorf,  Mayer  dan  Wagner.  Keberadaan alkaloid  ditunjukkan  dengan  terbentuknya endapan  putih  pada  pereaksi  Mayer,  endapan coklat  pada  pereaksi  Wagner,  dan  endapan merah pada pereaksi Dragendorf.
Uji saponin. Sebanyak 50 mg ekstrak dan  fraksi  kulit  kayu  surian  ditambahkan  10 mL  akuades,  kemudian  dididihkan  selama  5 menit,  lalu  disaring  dan  diambil  filtratnya. Filtrat  dikocok  secara  kuat  selama  10  detik. Keberadaan  busa  yang  stabil  selama  10  menit mengindikasikan adanya saponin.
Uji steroid dan triterpenoid. Sebanyak 50 mg ekstrak dan fraksi kulit kayu surian ditambahkan dengan 10 mL  etanol lalu diaduk  hingga  larut.  Kemudian,  larutan dipanaskan  selama  5  menit,  lalu  disaring  dan filtrat  yang  diperoleh  diuapkan  hingga  kering. Setelah  itu,  1  mL  dietil  eter  ditambahkan  ke dalam  tabung  reaksi.  Sebanyak  5  tetes  larutan dipindahkann  ke  dalam  cawan  porselin  dan ditambahkan  dengan  1  tetes  asam  asetat anhidrat  serta  1  tetes  asam  sulfat  pekat. Keberadaan steroid ditunjukkan dengan terbentuknya  warna  hijau,  sedangkan  warna merah menunjukkan adanya triterpenoid.

## Aktivitas Penghambatan α-Glukosidase
Sebanyak 300 µL α-glukosidase (0.1 U/mL) diinkubasi dengan 150 µL ekstrak pada beragam  konsentrasi  selama  10  menit  pada suhu  37 o C.  Kemudian,  ditambahkan  150  µL larutan  p-NPG  (3.0  mM)  dalam  20  mM  bufer fosfat (pH 6.9) untuk memulai reaksi. Inkubasi dilakukan  selama  20  menit  pada  suhu  37 o C. Reaksi dihentikan dengan menambahkan 6 mL Na 2 CO 3 0.1  M.  Inhibisi  α-glukosidase  dengan mengukur  absorbansi  warna  kuning  para- nitrofenol yang dibebaskan p-NPG menggunakan  spektrofotometer  UV-VIS  pada 405  nm.  Persentase  inhibisi  sampel  terhadap kerja  enzim  dihitung  seperti  pada  persamaan berikut:
Inhibisi (%) =   x 100% Keterangan: Ac = absorbansi kontrol Ae = absorbansi ekstrak
Kemampuan  inhibisi  α-glukosidase masing-masing  fraksi  dan  ekstrak  etanol  70% diukur  berdasarkan  persen  inhibisi.  Aktivitas inhibisi  antar  pelarut  dibandingkan  dengan nilai  IC 50 (Inhibition  Concentration  50%), yang diperoleh dengan membuat kurva regresi antara  konsentrasi  dengan  persen  inhibisi sampe.    Persamaan  regresi  logaritmik  dengan rumus  Y  =  a  ln  X  +  b, dimana  Y  adalah  nilai persen  inhibisi,  dan  X  adalah  konsentrasi sampel. Nilai IC 50 diperoleh dengan mengganti
Y  dengan  angka  50  pada  persamaan  regresi tersebut,  sehingga  nilai  konsentrasi  X  dapat ditentukan.  Nilai  IC 50 merupakan  nilai konsentrasi dari ekstrak yang dapat menghambat  reaksi  sebesar  50%,  dinyatakan dalam  mg/mL  (Modifikasi  Kazeem  et  al. 2013).

## Kinetika Penghambatan α-Glukosidase
Tahap  awal  pengukuran  kinetika penghambatan α-glukosidase adalah
pembuatan kurva standar. Sebanyak 600 µL p- nitrofenol pada beragam konsentrasi dicampurkan dengan 6 mL Na 2 CO 3 , kemudian diukur  menggunakan  spektrofotometer  UV- VIS pada 405 nm.
Sebanyak  150  µL  sampel  (IC 50 terbaik)  diinkubasi  dengan  300  µL  α- glukosidase  pada  satu  tabung  dan  150  µL bufer  fosfat  (pH  6.9)  diinkubasi  dengan  300 µL  α-glukosidase  (1.0  U/mL)  pada  tabung
lainnya.  Pra-inkubasi  dilakukan  selama  10 menit  pada  37ºC.  Kemudian,  150  µL  p-NPG pada  berbagai  konsentrasi  dimasukkan  ke dalam  kedua  set  campuran  reaksi  untuk memulai  reaksi.  Campuran  diinkubasi  selama 10 menit pada 37 o C. Reaksi dihentikan dengan menambahkan 6 mL Na 2 CO 3 ke dalam tabung. Warna  yang  terbentuk  diukur  menggunakan spektrofotometer  UV-VIS  pada  405  nm.  Tipe inhibisi  sampel  pada  aktivitas  α-glukosidase ditentukan berdasarkan pada kurva Lineweaver-Burk (Kazeem et al. 2013).

## 3. HASIL

## Kadar Air dan Rendemen
Penentuan  kadar  air  kulit  kayu  surian yang  dilakukan  secara  triplo  mendapatkan rerata  sebesar  8.15%.    Persen  rendemen ekstrak  akuades  (9.47%)  paling  tinggi, dibandingkan  ekstrak  pelarut  lain  yang digunakan. (Gambar 1).
Gambar 1 Rendemen ekstrak dan fraksi kulit kayu surian (T. sinensis ) 9.47 8.97 2.83 1.62 2.03 0 2 4 6 8 10 Ekstrak Akuades Ekstrak EtOH 70% Fraksi n-Heksana Fraksi Dietil Eter Fraksi Etil Asetat P e rs e n R e n d e m en ( % )

## Penapisan Senyawa Fitokimia
Hasil penapisan fitokimia (Tabel 1), menunjukkan  sampel  mengandung  senyawa flavonoid,  saponin,  dan  tanin,  namun  tidak
memiliki  alkaloid  dan  steroid.  Triterpenoid hanya  terdapat  dalam  ekstrak  etanol  70%  dan masing-masing fraksi.
Tabel 1 Penapisan fitokimia ekstrak dan fraksi kulit kayu surian (T. sinensis ) Uji Pelarut Akuades EtOH 70% n-Heksana Dietil Eter Etil Asetat Alkaloid Meyer - - - - - Dragendorf - - - - - Wagner - - - - - Flavonoid + + + + + Saponin + + + + + Tanin + + + + + Steroid - - - - - Triterpenoid - + + + +

## Aktivitas Penghambatan α-Glukosidase
Aktivitas  penghambatan  α-glukosidase oleh  ekstrak  dan  fraksi  kulit  kayu  surian dinyatakan  dengan  nilai  IC 50 ,  ekstrak  air memiliki nilai tertinggi (242.853 ppm), sedang etanol terendah (70.448 ppm) (Gambar2).
Kinetika Penghambatan α-Glukosidase Tipe dan parameter kinetik penghambatan  α-glukosidase  oleh  kulit  kayu surian ditentukan menggunakan sampel dengan daya penghambatan terbaik berdasarkan persamaan Lineweaver-Burk,
hasilnya  ditunjukkan  pada  Gambar  3,  dan Tabel  2.  Berdasarkan  grafik  yang  diperoleh, mekanisme  penghambatan  α-glukosidase  oleh ekstrak  etanol  70%  kulit  kayu  surian  non- kompetitif.
242.853 70.448 98.757 140.246 81.964 0 50 100 150 200 250 300 Akuades EtOH 70% n-Heksana Dietil Eter
Etil Asetat
Nilai IC 50 (p p m ) Jenis Pelarut
Gambar 2 Mekanisme penghambatan α-glukosidase oleh ekstrak etanol 70% kulit kayu surian (T. sinensis ) pada konsentrasi 70 ppm
Tabel 2 Nilai Vmaks dan Km berdasarkan persamaan Lineweaver-Burk
Reaksi a b R 2 Vmaks (x 10 -3 mM/min) Km (mM) Inhibisi 20.857 604.97 0.9913 1.65 0.03 Non inhibisi 20.757 120.64 0.9998 8.29 0.17

## 4. PEMBAHASAN
Komponen  fitokimia  ekstrak  air  kulit kayu  surian  adalah  flavonoid,  tanin,  dan saponin,  sedangkan  ekstrak  etanol  70% mengandung  flavonoid,  tanin,  saponin,  dan triterpenoid.  Melodita  (2011)  menyatakan, flavonoid termasuk golongan senyawa fitokimia  yang  bersifat  polar  karena  memiliki gugus  hidroksil  sehingga  flavonoid  larut  pada pelarut  polar  seperti  etanol,  metanol,  dan  air. Sampel  dan  fraksi  kulit  kayu  surian  juga mengandung  tanin.  Tanin  termasuk  kelompok senyawa  polifenol  yang  terdistribusi  secara luas  dalam  tumbuhan,  terutama  dalam  kulit pohon.  Amelia  (2015)  menyatakan  tanin memiliki  sifat  kelarutan  sangat  mudah  larut dalam  air,  alkohol,  aseton,  gliserol  hangat dengan perbandingan 1:1.
Terpenoid  juga  termasuk  salah  satu kelompok senyawa terbesar, ukurannya beragam  mulai  dari  linear  hingga  berbentuk polisiklik.  Semua  terpenoid  disintesis  melalui
kondensasi  unit  isoprena  dan  diklasifikasikan berdasarkan jumlah unit C5 dalam struktur inti (Irchhaiya et  al .  2015).  Tabel  1  menunjukkan keberadaan  triterpenoid  hanya  terdapat  pada ekstrak  etanol  dan  fraksinya  yang  bersifat nonpolar.  Penelitian  Balafif et  al .  (2013) membuktikan hasil penelitian bahwa triterpenoid  bersifat  nonpolar,  sehingga  hanya dapat larut dengan pelarut yang bersifat sama.
Senyawa  fitokimia  lainnya  adalah saponin  yang  terkandung  pada  semua  ekstrak dan  fraksi  kulit  kayu  surian,  ditandai  dengan keberadaan  busa  stabil.  Saponin  merupakan kelompok  metabolit  sekunder  yang  tersebar luas  pada  tumbuhan.  Bentuknya  berupa  busa stabil  pada  larutan  sehingga  menyerupai sabun.  Secara  struktur,  saponin  termasuk kelompok  triterpenoid,  steroid  terglikosilasi, dan  steroid  alkaloid.  Menurut  Suharto  (2012), saponin  paling  tepat  diekstraksi  dari  tanaman dengan pelarut etanol 70-95% atau metanol.
y = 20.857x + 604.97 R² = 0.9913 y = 20.757x + 120.64 R² = 0.9998 -1500 -1000 -500 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 -100 -50 0 50 100 150 200 1 /V 1/S inhibisi non inhibisi 1
V = Km Vmaks 1 S + 1 Vmaks (1 + 1 Ki ) 1 V = Km Vmaks 1 S + 1 Vmaks
Ekstrak etanol 70% memiliki nilai IC 50 terbaik  yaitu  sebesar  70.45  ppm,  sedangkan inhibisi paling rendah ditunjukkan oleh ekstrak akuades  dengan  IC 50 sebesar  242.85  ppm. Hasil  tersebut  sesuai  dengan  literatur  bahwa aktivitas  inhibisi  ekstrak  etanol  70%  lebih tinggi  dibandingkan  ekstrak  akuades  (Ichsan 2011). Selain itu, IC 50 ekstrak etanol 70% pada penelitian  ini  lebih  baik  daripada  penelitian sebelumnya,  yang  menunjukkan  bahwa  nilai IC 50 ekstrak etanol kulit batang surian sebesar 277.54  ppm  (Monisa  2016).  Perbedaan aktivitas  inhibisi  disebabkan  oleh  perbedaan pelarut  yang  digunakan,  sifat  kelarutan senyawa  metabolit  sekunder  yang  akan diisolasi, serta usia sampel yang digunakan.
Kemampuan  inhibisi  didukung  oleh kandungan  senyawa  fitokimia.  Negi et  al . (2011) menunjukkan sejumlah senyawa flavonoid,  alkaloid,  terpen,  dan  antrakuinon yang ditemukan dalam kelompok tumbuhan T. sinensis , dapat berperan sebagai agen hipoglikemik, antioksidan, antiinflamasi, antikanker,  serta  memberikan  efek  analgesik lainnya.  Diantara  senyawa  metabolit  sekunder yang  terdapat  dalam  sampel,  flavonoid dianggap memiliki pengaruh yang lebih besar. Senyawa  katekin  dan  turunannya  yang tergolong dalam kelompok senyawa flavonoid menunjukkan  inhibisi  yang  kuat  terhadap  α- glukosidase  (Zhao et  al .  2009;  Pereira et  al . 2011).  Flavonoid  berpotensi  sebagai  agen antidiabetes  karena  memiliki  kemampuan ganda, yakni hipoglikemik
(aksi insulinomimetik) dan antihiperglikemik (sekresi  insulin).  Selain  flavonoid,  saponin diduga mampu mereduksi glukosa darah puasa dan  meredakan  hiperglikemia  terkait  stres oksidatif pada DM tipe II (Zheng et al. 2012). Studi  efek  antidiabetes  tanin  yang  diekstrak dari  beberapa  jenis  leguminosa  menunjukkan kemampuan  inhibisi  kerja  α-amilase  dan  α- glukosidase (Kunyanga et al . 2011).
Reduksi  nilai  Vmaks  dan  Km  secara signifikan  serta  bentuk  kurva  yang  sejajar
merupakan  ciri-ciri  mekanisme  inhibitor  un- kompetitif.  Namun,  inhibisi  non-kompetitif tidak  sesuai  dengan  akarbosa  (inhibitor komersial  α-glukosidase)  yang  menginhibisi dengan mekanisme kompetitif (Wehmeier dan Piepersberg 2004). Meskipun kulit kayu surian mampu  menginhibisi  α-glukosidase,  namun sampel belum dapat digolongkan menjadi obat antidiabetes, dan dibutuhkan modifikasi terhadap sampel  agar mampu  menginhibisi α- glukosidase sebaik inhibitor komersialnya.
Semua  ekstrak  (akuades  dan  etanol 70%)  serta  fraksi  kulit  kayu  surian  ( T. sinensis )  memiliki  daya  inhibisi  terhadap  α- glukosidase.  Ekstrak  etanol  70%  memiliki daya  inhibisi  terbaik  dengan  IC 50 sebesar 70.448 ppm. Hasil studi kinetika mendapatkan ekstrak  etanol  70%  kulit  kayu  surian  ( T. sinensis )  menginhibisi  α-glukosidase  secara non-kompetitif dengan penurunan nilai Vmaks dari  8.29x10-3  mM/min  menjadi  1.65x10-3 mM/min  dan  Km  dari  0.17  mM  menjadi  0.03 mM.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan  terima  kasih  diberikan  kepada Direktorat Jendral Pendidiktan Tinggi (DIKTI) yang  telah  membiaya  penelitian  ini  melalui skema  Penelitian  Unggulan  Sesuai  Mandat Divisi dengan nomor kontrak nomor 079/SP2H/LT/DPRPM/II/2016.

## DAFTAR PUSTAKA
Amelia  FR.  2015.  Penentuan  jenis  tanin  dan penetapan  kadar  tanin  dari  buah  bungur muda  ( Lagerstroemia  speciosa Pers.) secara spektrofotometri dan permanganatometri. Calyptra .  4(2):  1- 20.
[AOAC]  Association  of  Official  Analytical Chemist.  2006.  Official  Methods  of Analysis  18  Ed.  Washington  DC: AOAC.
Balafif  ARA,  Andayani  Y,  Gunawan  ER.
2013. Analisis senyawa  triterpenoid  dari
hasil  fraksinasi  ekstrak  air  buah  buncis ( Phaseolus  vulgaris Linn). Chem  Prog . 6(2): 56-61.
Cho  NH,  Whiting  D,  Guariguata  L,  Montoya PA,  Farouhi  N,  Hambleton  I,  Li  R, Majeed  A,  Mbanya  JC, Motala  A, et  al .
2013.  IDF  Diabetes  Atlas.  Rio  De Janeiro (US): IDF.
[DEPKES]  Departemen  Kesehatan.  1995. Materia Medika Indonesia. Jakarta (ID): DepKes RI.
Firdausi  I,  Retnowati  R,  Sutrisno.  2015. Fraksinasi ekstrak metanol daun mangga kasturi  ( Mangifera  casturi Kosterm) dengan pelarut n-butanol. Kim Stud Jour . 1(1): 785-790.
Harbone  JB.  2007.  Phytochemical  Methods  :
A Guide to Modern Techniques of Plant Analysis.  London  (UK):  Chapman  and Hall.
Ichsan  SA.  2011.  Aktivitas  ekstrak  kulit  kayu suren  ( Toona sinensis Merr.)  sebagai antioksidan  dan  antidiabetes  secara in vitro [skripsi].  Bogor  (ID):  Institut Pertanian Bogor.
Irchhaiya  R,  Kumar  A,  Yadav  A,  Gupta  N, Kumar S, Gupta N, Kumar S, Yadav V,
Prakash  A,  Gurjar  H.  2015.  Metabolites in  plants  and  its  classification. World  J Pharm Sci . 4(1): 287-305.
Kazeem MI, Ogunbiyi JV, Ashafa AOT. 2013. In  vitro studies  on  the  inhibition  of  α- amylase  and  α-glucosidase  by  leaf extracts of Picralima nitida (Stapf). Trop J Pharm Res . 12(5): 719-725.
Kunyanga  CN,  Imungi  JK,  Okoth  M, Momanyi  C,  Biesalski  HK,  Vadivel  V. 2011.  Antioxidant  and  antidiabetic properties  of  condensed  tannins  in acetonic  extract  of  selected  raw  and processed  indigenous  food  ingredients from  Kenya. J  Food  Sci .  2011;  76(4): 560-567.
Lee SK, Hwang JY, Song JH, Jo JR, Kim MJ, Kim  ME,  Kim  JI.  2007.  Inhibitory activity  of Euonymus  alatus against
alpha-glucosidase in  vitro and in  vivo . Nutr Res Prac . 1(3): 184-188.
Lumempouw  LI,  Suryanto  E,  Paendong  JJE. 2012.  Aktivitas  anti  UV-B  ekstrak fenolik  dari  tongkol  jagung  ( Zea  mays L.). J MIPA Unsrat Onl : 1(1): 1-4.
Matsui  T,  Ebuchi  S,  Fukui  K,  Matsugano  K, Terahara  N,  Matsumoto  K.  2004. Caffeoylsophorose,  a  new  natural  alfa- glucosidase  inhibitor,  from  red  vinegar by  fermented  purple-fleshed  sweet potato. J  Biosci  Biotechnol  Biochem . 68(11): 2239-2246.
Melodita  R.  2011.  Identifikasi  pendahuluan senyawa  fitokimia  dan  uji  aktivitas antioksidan  ekstrak  daun  cincau  hitam dengan  perlakuan  jenis  pelarut  [skirpsi]. Malang (ID): Universitas Brawijaya.
Monisa  FS.  2016.  Jenis  tanin,  total  tanin  dan aktivitas  penghambatan  α-glukosidase dari ekstrak daun dan kulit batang surian ( Toona  sinensis Merr.)  [tesis].  Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.
Negi JS, Bisht VK, Bhandari AK, Bharti MK,
Sundriyal  RC.  2011.  Chemical  and pharmacological aspects of Toona (Meliaceae). Res  J  Phytochem .  5(1):14- 21.
Padmasari  PD,  Astuti  KW,  Warditiani  NK.
2013.  Skrining  fitokimia  ekstrak  etanol 70% rimpang bangle ( Zingiber purpureum Roxb.) J  Farm  Udayana .  1- 7.
Pereira DF, Cazarolli LH, Lavado C, Mengatto V,  Fiqueiredo  MS,  Guedes  A,  Pizzolatti MG,  Silva  FR.  2011.  Effects  of flavonoids  on  α-glucosidase  activity: potential targets for glucose homeostasis. Nutrition . 27(11):1161-1167. doi:
10.1016/j.nut.2011.01.008.
Suharto  MAP,  Edy  H,  Dumanau  JM.  2012.
Isolasi  dan  identifikasi  senyawa  saponin dari  ekstrak  metanol  batang  pisang ambon ( Musa paradisiaca var. sapientum L.)  [Internet].  Manado  (ID): Unsrat.  hlm  86-92;  [diunduh  2016  Sept 22]. Tersedia pada:
ejournal.unsrat.ac.id/index.php/pharmac on/article/download/914/727.
Verma  S,  Chandra  H,  Banerjee  M.  2016. Cyclooxygenase 1 (COX1) expression in the type 2 diabetes mellitus: a preliminary  study  from  north  India. Egypt J Med Hum Gene . 17(1): 41-45.
Wehmeier UF, Piepersberg W. 2004.
Biotechnology and molecular biology of the  α-glucosidase  inhibitor  acarbose.
Appl Microbiol Biotechnol . 63: 613-625.
[WHO]  World  Health  Organization.  2015. Diabetes
[internet].
http://www.who.int/mediacentre/factshe
ets/fs312/en/  (diakses  pada  14  Januari 2015).
Zhao  J,  Zhou  XW,  Chen  XB,  and  Wang  QX. 2009. α-Glucosidase
inhibitory constituents  from Toona  sinensis . Chem Nat Comp . 45(2): 244-246.
Zheng T, Shu G, Yang Z, Mo S, Zhao Y, Mei Z.  2012.  Antidiabetic  effect  of  total saponins  from Entada  phaseoloides (L.) in type 2 diabetic rats. J
Ethnopharmacol . 139(3):814-821.