Studi Kandungan Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Gambir Asal Aceh Tenggara Sebagai Anti Diabetes
Vera Viena 1 *, Muhammad Nizar 2
1,2 Staf Pengajar Prodi Teknik Lingkungan Fakultas Teknik Universitas Serambi Mekkah
Jl. Tgk Imum LuengBata Batoh Banda Aceh- Indonesia * Koresponden email : veraviena@serambimekkah.ac.id Masuk: 10 Desember 2017
Diterima: 16   Desember 2017
Abstract. Indonesia is one of tropical countries that rich in natural resources. It has more than a thousand of medicinal plants. This study focused on assessing the potential of phytochemical content gambir leaves from Southeast Aceh as an alternative of antidiabetes through inhibition of alpha amylase enzyme. Steps of research to be conducted consist of: (1) Making dry simplisia from gambir leaves; extraction of gambir leaves by maceration for 2x24 hours and screening done every 24 hours, and solvent evaporation to obtain the dry extract of gambir; (2) Analysis of phytochemical (phenolic, flavonoid and tannin) content of ethanol extract of gambir leaves; and (3) Analysis of chemical components using GC-MS. The results showed that the moisture content of powder gambir leaves was 3,017%, which is still below the national standard. The ethanol extract contained a rendement of 2,47 gr / gr of dry weight. The inhibition activity of alpha amylase enzyme was obtained at a sample concentration of 1000 ppm , e.i 88.22%. The more active a sample in inhibiting the action of the alpha-amylase enzyme, the less the 3-amino-5-nitrosalisilic acid formed in the second stage of enzyme activation. The results of phytochemicalanalysis of ethanol extract of gambir leaves from Southeast Aceh showed secondary metabolite content such as Total Phenolic, Total Flavonoid, and Tanin respectively of 71, 80; 32, 06 and 58.39%. The chemical components, e.i the total phenolics, flavonoids and tannins have been reported to have antidiabetic activity by lowering blood sugar levels after inhibition testing via the alpha amylase enzyme.
Keywords : ethanol extract of gambir leaves, rendement, alpha amilase inhibition, antidiabetes
Abstrak. Indonesia merupakan salah satu negara beriklim tropis yang kaya akan sumber daya alam, dan memiliki lebih dari seribu tanaman obat. Penelitian ini difokuskan untuk menilai potensi kandungan fitokimiadaun gambir asal Aceh Tenggara sebagai alternatif antidiabetes melalui inhibisi enzim alfa amilase. Tahapan penelitian yang akan dilakukan terdiri atas: (1) Pembuatan simplisia kering daun gambir; ekstraksi daun gambir secara maserasi selama 2x24 jam dan penyaringan dilakukan setiap 24 jam, serta penguapan pelarut untuk memperoleh ekstrak kering gambir; (2) Analisis kandungan fitokimia (fenolik, flavonoid dan tannin) dari ekstrak etanol daun gambir; dan (3) Analisis komponen kimia menggunakan GC-MS. Hasil uji menunjukkan kadar air serbuk daun gambir sebesar 3,017 %, yang masih dibawah standar nasional. Ekstrak etanol mengandung kadar rendemen sebesar 2,47 gr/gr berat kering.Presentase aktivitas inhibisi enzim alfa amilase diperoleh sebesar 88,22 % pada konsentrasi  sampel  1000  ppm.  Semakin  aktif  suatu  sampel  dalam  menghambat  kerja  enzim  alfa amilase,  semakin  sedikit  asam  3-amino-5-nitrosalisilat  yang  terbentuk  pada  tahap  kedua  aktivasi enzim. Hasil uji fitokimia ekstrak etanol daun gambir asal Aceh Tenggara menunjukkan kandungan metabolit  sekunder  seperti  Total  Fenolik,  Total  flavonoid,  dan  Tanin  secara  berturut-turut  sebesar 71, 80; 32, 06 dan 58,39 %. Ketiga komponen kimia, yaitu total fenolik, flavonoid dan tanin telah dilaporkan memiliki aktivitas antidiabetes dengan menurunkan kadar gula darah setelah dilakukan uji inhibisi melalui enzim alfa amilase.
Kata kunci : ekstrak etanol daun gambir, rendemen, inhibisi enzim alfa amilase, antidiabetes
Serambi Engineering, Volume III, No.1, Januari 2018

## Studi Kandungan Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Gambir Asal Aceh Tenggara Sebagai Anti Diabetes
Vera Viena 1 *, Muhammad Nizar 2
1,2 Staf Pengajar Prodi Teknik Lingkungan Fakultas Teknik Universitas Serambi Mekkah
Jl. Tgk Imum LuengBata Batoh Banda Aceh- Indonesia * Koresponden email : veraviena@serambimekkah.ac.id
Masuk: 10 Desember 2017
Diterima: 16   Desember 2017
Abstract. Indonesia is one of tropical countries that rich in natural resources. It has more than a thousand of medicinal plants. This study focused on assessing the potential of phytochemical content gambir leaves from Southeast Aceh as an alternative of antidiabetes through inhibition of alpha amylase enzyme. Steps of research to be conducted consist of: (1) Making dry simplisia from gambir leaves; extraction of gambir leaves by maceration for 2x24 hours and screening done every 24 hours, and solvent evaporation to obtain the dry extract of gambir; (2) Analysis of phytochemical (phenolic, flavonoid and tannin) content of ethanol extract of gambir leaves; and (3) Analysis of chemical components using GC-MS. The results showed that the moisture content of powder gambir leaves was 3,017%, which is still below the national standard. The ethanol extract contained a rendement of 2,47 gr / gr of dry weight. The inhibition activity of alpha amylase enzyme was obtained at a sample concentration of 1000 ppm , e.i 88.22%. The more active a sample in inhibiting the action of the alpha-amylase enzyme, the less the 3-amino-5-nitrosalisilic acid formed in the second stage of enzyme activation. The results of phytochemicalanalysis of ethanol extract of gambir leaves from Southeast Aceh showed secondary metabolite content such as Total Phenolic, Total Flavonoid, and Tanin respectively of 71, 80; 32, 06 and 58.39%. The chemical components, e.i the total phenolics, flavonoids and tannins have been reported to have antidiabetic activity by lowering blood sugar levels after inhibition testing via the alpha amylase enzyme.
Keywords : ethanol extract of gambir leaves, rendement, alpha amilase inhibition, antidiabetes
Abstrak. Indonesia merupakan salah satu negara beriklim tropis yang kaya akan sumber daya alam, dan memiliki lebih dari seribu tanaman obat. Penelitian ini difokuskan untuk menilai potensi kandungan fitokimiadaun gambir asal Aceh Tenggara sebagai alternatif antidiabetes melalui inhibisi enzim alfa amilase. Tahapan penelitian yang akan dilakukan terdiri atas: (1) Pembuatan simplisia kering daun gambir; ekstraksi daun gambir secara maserasi selama 2x24 jam dan penyaringan dilakukan setiap 24 jam, serta penguapan pelarut untuk memperoleh ekstrak kering gambir; (2) Analisis kandungan fitokimia (fenolik, flavonoid dan tannin) dari ekstrak etanol daun gambir; dan (3) Analisis komponen kimia menggunakan GC-MS. Hasil uji menunjukkan kadar air serbuk daun gambir sebesar 3,017 %, yang masih dibawah standar nasional. Ekstrak etanol mengandung kadar rendemen sebesar 2,47 gr/gr berat kering.Presentase aktivitas inhibisi enzim alfa amilase diperoleh sebesar 88,22 % pada konsentrasi  sampel  1000  ppm.  Semakin  aktif  suatu  sampel  dalam  menghambat  kerja  enzim  alfa amilase,  semakin  sedikit  asam  3-amino-5-nitrosalisilat  yang  terbentuk  pada  tahap  kedua  aktivasi enzim. Hasil uji fitokimia ekstrak etanol daun gambir asal Aceh Tenggara menunjukkan kandungan metabolit  sekunder  seperti  Total  Fenolik,  Total  flavonoid,  dan  Tanin  secara  berturut-turut  sebesar 71, 80; 32, 06 dan 58,39 %. Ketiga komponen kimia, yaitu total fenolik, flavonoid dan tanin telah dilaporkan memiliki aktivitas antidiabetes dengan menurunkan kadar gula darah setelah dilakukan uji inhibisi melalui enzim alfa amilase.
Kata kunci : ekstrak etanol daun gambir, rendemen, inhibisi enzim alfa amilase, antidiabetes
hal 240-247
1.  Pendahuluan Indonesia  merupakan  salah  satu  negara beriklim  tropis  yang  kaya  akan  sumber  daya alam,  dan  memiliki  lebih  dari  seribu  tanaman obat. Pemanfaatan sumber daya alam berupa tanaman  obat  sebagai  obat  tradisional  untuk menyembuhkan  berbagai  penyakit  telah dilakukan sejak ribuan tahun yang lalu. Saat ini, penggunaan tanaman obat (obat herbal) semakin meningkat. Beberapa obat herbal telah dibuktikan efektif  menyembuhkan  berbagai  penyakit  serta dapat  dijadikan  sebagai  obat  alternatif,  salah satunya sebagai antidiabetes (Kumar et al . 2011). Menurut  data  WHO,  Indonesia  menempati urutan  ke-4  terbesar  dalam  jumlah  penderita diabetes mellitus di dunia. Jumlah penderita ini terus meningkat setiap tahunnya (Diabetes Care, 2011).  Oleh  karena  itu,  penelitian-penelitian tentang pencarian sumber daya alam yang dapat dimanfaatkan  sebagai  alternatif  antidiabetes terus  dilakukan.  Salah  satunya  adalah  dengan memanfaatkan  gambir  ( Uncaria gambir Roxb) sebagai  antidiabetes  melalui  inhibisi  enzim α-glukosidase dan α-amilase.
Species Uncaria gambir Roxb.  merupakan salah satu tanaman tahunan penghasil getah penting yang banyak digunakan untuk keperluan Industri  maupun  farmasi.  Gambir  ( Uncaria gambir (Hunter)  Roxb.)  merupakan  tumbuhan yang  tumbuh  di  kawasan  tropis  dan  digunakan sebagai antidiare dan astringen di Asia (Anggraini et al ., 2011). Tumbuhan ini dikenal di Sumatera sebagai  gambee,  gani,  kacu,  sontang,  gambe, gambie,  gambu,  gimber,  pengilom,  dan  sepelet. Di  Jawa  dikenal  sebagai  santun  dan  ghambhir. Di Kalimantan dikenal sebagai gamelo, gambit, game, gambiri, gata dan gaber. Di Nusa Tenggara dikenal  sebagai  Tagambe,  gembele,  gamelo, gambit,  gambe,  gambiri,  gata  dan  gaber.  Di Maluku dikenal sebagai kampir, kambir, ngamir, gamer,  gabi,  tagabere,  gabere,gaber  dan  gambe (Aisman, 1999).
Di Indonesia tanaman gambir banyak terdapat diberbagai  wilayah,  diantaranya  Sumatra  Barat dan Riau, kedua wilayah ini meruapakan wilayah produksi  gambir  yang  telah  memasuki  pasaran ekspor,  sedangkan  wilayah  Sumatra  Utara, Bengkulu,  Sumatra  Selatan  dan  Aceh  jumlah produksinya  masih  hanya  untuk  memenuhi
kebutuhan pasar lokal saja. Khusus di daerah Aceh tanaman  gambir  sangat  sedikit,  kemungkinan hal  ini  terjadi  karena  keterbatasan  pengetahuan masyarakat tentang manfaat dan cara pengolahan tanaman gambir (Sabarni, 2015). Tanaman gambir di Aceh  terpusat  di  Kabupaten Aceh  Tenggara, kecamatan Darul Hasanah dengan luas areal lebih kurang  200  Ha.  Sentra  produksi  berada  di  desa Kute Panjang, Istiqamah dengan metode produksi cara basah.
Produk gambir dapat dihasilkan dari tanaman gambir dengan cara mengolah daun dan ranting muda menggunakan air panas, dilanjutkan dengan pengepresan, pengendapan cairan, dan pengeringan bagian endapan, hingga diperoleh produk gambir (Pambayun et al ., 2001). Kandungan kimia dari gambir adalah katekin, kuersetin, tannin, lendir, lemak  dan  malam.  Gambir  memiliki  sifat  khas pahit  dan  kelat  (Utami et al ,  2008).  Beberapa penelitian  telah  membuktikan  bahwa  gambir memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  sangat baik.  Senyawa  antioksidan  memiliki  potensi sebagai antidiabetes yang mampu mencegah terjadinya  oksidasi  glukosa  dalam  darah.  Trina et al. (2014) menyatakan bahwa tumbuhan yang kaya  akan  tanin  memiliki  aktivitas  antioksidan dan  antidiabetes  yang  baik.  Sampai  saat  ini, peneliti belum menemukan jurnal atau penelitian tentang potensi daun gambir sebagai antidiabetes, oleh  karena  itu,penelitian  ini  difokuskan  untuk menilai potensi kandungan fitokimiadaun gambir asal Aceh Tenggara sebagai alternatif antidiabetes melalui inhibisi enzim alfa amilase.

## 2. Bahan dan Metode
Sampel daun gambir berasal dari Kute Panjang, Istiqamah, Kec. Darul Hasanah, Aceh Tenggara; etanol p.a ;  aquadest;  aquabidest;  buffer  fospat, buffer natrium dan NaOH.
Adapun  alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah pisau stainless steel , sarung tangan,  blender Miyako ,  erlenmeyer Pyrex , corong pisah Owako ,  timbangan  digital Ohaus , Oven Memert , Filter Paper Whatman , rotary evaporator Eyela, microplate reader ,    GC-MS Shimadzu.
2.1  Persiapan Bahan Baku Daun segar gambir asal Aceh Tenggara dipilih
khusus yang tua, lalu dicuci dengan air mengalir dan  dikering  anginkan  selama  1  minggu. Selanjutnya  dikeringkan  dalam  oven  pada  suhu 40 o C,  kemudian  dihaluskan  (AOAC,  1984). Serbuk daun gambir kering selanjutnya dianalisa kandungan  air,  rendemen  dan  digunakan  untuk ekstraksi etanol.

## 2.2 Ekstraksi
Ekstraksi  sampel  dengan  teknik  maserasi dilakukan  menggunakan  metode  standar Kemenkes  RI  (2009).  Masing-masing  sampel ditimbang  sebanyak  500  gram,  ditambahkan pelarut etanol p.a 1:10,  didiamkan  2  x  24  jam, penyaringan  dilakukan  setiap  24  jam,  maserat direndam kembali dengan jumlah dan jenis pelarut yang  sama.  Filtrat  yang  diperoleh  dipekatkan dengan penguap putar, sehingga diperoleh ekstrak pekat atau kering.

## 2.3 Uji Aktivitas enzim alfa amilase
Larutan  enzim  α-amilase  yang  digunakan adalah  enzim porcine pancreatic amilase  1 unit/ml.  Reagen  yang  diperlukan  adalah  buffer natrium  fosfat  20  mM  dengan  pH  6,9.  substrat yang digunakan adalah larutan pati soluble 1%. Reagen warna yang digunakan adalah campuran larutan  natrium  kalium  tartarat  dengan  larutan asam 3,5-dinitrosalisilat 96 mM.
Campuran  reaksi  dibuat  dengan  melarutkan 125 µl larutan sampel dan 125 µl larutan enzim. Setelah  campuran  reaksi  diinkubasi  pada  suhu 37 o C selama 10 menit, larutan pati ditambahkan sebanyak  125  µl  dan  diinkubasi  kembali  pada suhu  37o  C  selama  10  menit.  Setelah  inkubasi kedua,  pereaksi  DNS  ditambahkan  sebanyak 500  µl  dan  diinkubasi  kembali  selama  5  menit pada  air  mendidih.  Setelah  itu,  5  ml  air  suling ditambahkan  dan  diukur  absorbansinya  pada panjang gelombang 540 nm. Kontrol positif yang digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  acarbose 0.5  mg/ml  yang  diperoleh  dari  pelarutan  1 tablet glukobay dalam 100 ml HCl 2 N. Tabel 1. menunjukkan  kombinasi  jumlah  sampel,  buffer 13 fosfat, dan enzim yang diberikan pada balnko, kontrol  A,  kontrol  B,  sampel  serta  acarbose sebagai kontrol positif.
Blanko  digunakan  untuk  mengukur  jumlah gula awal yang telah terdapat pada pati, sedangkan
kontrol  A  digunakan  untuk  mengukur  jumlah gula  yang  telah  terhidrolisis  pada  pati.  Kontrol B  digunakan  untuk  mengukur  jumlah  gula awal  pada  sampel  dan  pati,  sedangkan  sampel digunakan  untuk  menghitung  jumlah  gula  yang telah terhidrolisis pada sampel dan pati.
Setiap  pengujian  diulang  sebanyak  3  kali. Masing-masing  pengujian  daya  hambat  ekstrak terhadap aktivitas α-glukosidase dihitung dalam % inhibisi dengan rumus,
C adalah absorbans larutan tanpa adanya ekstrak (kontrol) dan S adalah absorbans larutan dengan  pemberian  ekstrak  dari  sampel.  Nilai IC 50 diperoleh  dengan  memplot  log  konsentrasi versus  persen  inhibisi  menggunakan  persamaan regresi. Nilai IC 50 adalah nilai konsentrasi yang menghambat 50% kerja enzim.

## 2.4Analisis fitokimia
2.4.1 Total Fenolik Sebanyak  0.2  mL  ekstrak  sampel  dengan konsentrasi  300  µg/mL,  2.5  mL  reagen  Folin- Ciocalteu  10%  v/v,  dan  2  mL  Na 2 CO 3 7.5% v/v  dicampurkan,  lalu  diinkubasi  selama  15 menit pada suhu 45 0 C. Absorban larutan diukur menggunakan  spektofotometer  pada  panjang gelombang 765 nm. Total fenolik ekstrak sampel dinyatakan  sebagai  miligram  (mg)  asam  galat ekuivalen per gram bobot ekstrak kering (mg/g). Sebagai  standar  digunakan  asam  galat  pada berbagai konsentrasi (0, 30, 50, 70, 90, 110, 130 µg/mL).
2.4.2 Total Flavonoid Sebanyak  5  mL  ekstrak  sampel  dengan konsentrasi  500  µg/mL,  0.3  mL  NaNO2  5% v/v,  dan  0.3  mL  AlCl3  10%  v/v  dicampurkan lalu  diinkubasi  selama  5  menit.  Kemudian ditambahkan 2 mL NaOH 1 M. Absorban larutan diukur pada panjang gelombang 510 nm dan total flavonoid  ekstrak  sampel  dinyatakan  sebagai milligram  (mg)  ekuivalen  katekin  per  gram ekstrak kering (mg/g). Sebagai standar digunakan katekin pada berbagai konsentrasi (0, 10, 20, 40, 60, 800, 100 µg/mL).

## 2.4.3 Total Tanin
Serambi Engineering, Volume III, No.1, Januari 2018
khusus yang tua, lalu dicuci dengan air mengalir dan  dikering  anginkan  selama  1  minggu. Selanjutnya  dikeringkan  dalam  oven  pada  suhu 40 o C,  kemudian  dihaluskan  (AOAC,  1984). Serbuk daun gambir kering selanjutnya dianalisa kandungan  air,  rendemen  dan  digunakan  untuk ekstraksi etanol.

## 2.2 Ekstraksi
Ekstraksi  sampel  dengan  teknik  maserasi dilakukan  menggunakan  metode  standar Kemenkes  RI  (2009).  Masing-masing  sampel ditimbang  sebanyak  500  gram,  ditambahkan pelarut etanol p.a 1:10,  didiamkan  2  x  24  jam, penyaringan  dilakukan  setiap  24  jam,  maserat direndam kembali dengan jumlah dan jenis pelarut yang  sama.  Filtrat  yang  diperoleh  dipekatkan dengan penguap putar, sehingga diperoleh ekstrak pekat atau kering.

## 2.3 Uji Aktivitas enzim alfa amilase
Larutan  enzim  α-amilase  yang  digunakan adalah  enzim porcine pancreatic amilase  1 unit/ml.  Reagen  yang  diperlukan  adalah  buffer natrium  fosfat  20  mM  dengan  pH  6,9.  substrat yang digunakan adalah larutan pati soluble 1%. Reagen warna yang digunakan adalah campuran larutan  natrium  kalium  tartarat  dengan  larutan asam 3,5-dinitrosalisilat 96 mM.
Campuran  reaksi  dibuat  dengan  melarutkan 125 µl larutan sampel dan 125 µl larutan enzim. Setelah  campuran  reaksi  diinkubasi  pada  suhu 37 o C selama 10 menit, larutan pati ditambahkan sebanyak  125  µl  dan  diinkubasi  kembali  pada suhu  37o  C  selama  10  menit.  Setelah  inkubasi kedua,  pereaksi  DNS  ditambahkan  sebanyak 500  µl  dan  diinkubasi  kembali  selama  5  menit pada  air  mendidih.  Setelah  itu,  5  ml  air  suling ditambahkan  dan  diukur  absorbansinya  pada panjang gelombang 540 nm. Kontrol positif yang digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  acarbose 0.5  mg/ml  yang  diperoleh  dari  pelarutan  1 tablet glukobay dalam 100 ml HCl 2 N. Tabel 1. menunjukkan  kombinasi  jumlah  sampel,  buffer 13 fosfat, dan enzim yang diberikan pada balnko, kontrol  A,  kontrol  B,  sampel  serta  acarbose sebagai kontrol positif.
Blanko  digunakan  untuk  mengukur  jumlah gula awal yang telah terdapat pada pati, sedangkan
kontrol  A  digunakan  untuk  mengukur  jumlah gula  yang  telah  terhidrolisis  pada  pati.  Kontrol B  digunakan  untuk  mengukur  jumlah  gula awal  pada  sampel  dan  pati,  sedangkan  sampel digunakan  untuk  menghitung  jumlah  gula  yang telah terhidrolisis pada sampel dan pati.
Setiap  pengujian  diulang  sebanyak  3  kali. Masing-masing  pengujian  daya  hambat  ekstrak terhadap aktivitas α-glukosidase dihitung dalam % inhibisi dengan rumus,
C adalah absorbans larutan tanpa adanya ekstrak (kontrol) dan S adalah absorbans larutan dengan  pemberian  ekstrak  dari  sampel.  Nilai IC 50 diperoleh  dengan  memplot  log  konsentrasi versus  persen  inhibisi  menggunakan  persamaan regresi. Nilai IC 50 adalah nilai konsentrasi yang menghambat 50% kerja enzim.

## 2.4Analisis fitokimia
2.4.1 Total Fenolik Sebanyak  0.2  mL  ekstrak  sampel  dengan konsentrasi  300  µg/mL,  2.5  mL  reagen  Folin- Ciocalteu  10%  v/v,  dan  2  mL  Na 2 CO 3 7.5% v/v  dicampurkan,  lalu  diinkubasi  selama  15 menit pada suhu 45 0 C. Absorban larutan diukur menggunakan  spektofotometer  pada  panjang gelombang 765 nm. Total fenolik ekstrak sampel dinyatakan  sebagai  miligram  (mg)  asam  galat ekuivalen per gram bobot ekstrak kering (mg/g). Sebagai  standar  digunakan  asam  galat  pada berbagai konsentrasi (0, 30, 50, 70, 90, 110, 130 µg/mL).
2.4.2 Total Flavonoid Sebanyak  5  mL  ekstrak  sampel  dengan konsentrasi  500  µg/mL,  0.3  mL  NaNO2  5% v/v,  dan  0.3  mL  AlCl3  10%  v/v  dicampurkan lalu  diinkubasi  selama  5  menit.  Kemudian ditambahkan 2 mL NaOH 1 M. Absorban larutan diukur pada panjang gelombang 510 nm dan total flavonoid  ekstrak  sampel  dinyatakan  sebagai milligram  (mg)  ekuivalen  katekin  per  gram ekstrak kering (mg/g). Sebagai standar digunakan katekin pada berbagai konsentrasi (0, 10, 20, 40, 60, 800, 100 µg/mL).

## 2.4.3 Total Tanin
Kandungan  total  tanin  ditentukan  dengan metode Chanwitheesuk et al. (2005) yang sedikit dimodifikasi. Sebanyak 0,5 g sampel diekstraksi dengan  10  mL  dietil  eter  selama  20  jam, kemudian  disaring  dan  residu  yang  diperoleh dididihkan  dengan  100  mL  akuades  selama  2 jam, kemudian didinginkan dan disaring. Ekstrak yang  diperoleh  ditambahkan  dengan  akuades hingga volume ekstrak 100 mL. Sebanyak 0,1 mL ekstrak ditambahkan dengan 0,1 mL reagen Folin Ciocalteu  dan  divortex,  ditambahkan  dengan  2 mL Na 2 CO 3 . Diukur Absorbansi pada λ 760 nm setelah  diinkubasi  selama  30  menit  pada  suhu kamar.  Hasil  yang  diperoleh  diplotkan  terhadap kurva  standar  asam  tanat  yang  dipersiapkan dengan  cara  yang  sama.  Kandungan  total  tanin dinyatakan dalam mg asam tanat/kg ektrak.
2.5. Analisis GC-MS
Ekstrak etanol sampel daun gambir dianalisis komponen organik didalamnya menggunakan Gas Chromatography-Mass Spectra (GC-MS).
3. Hasil dan Pembahasan
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengkaji kandungan fitokimia daun gambir dengan menilai efektivitas inhibitor α-amilase dari ekstrak etanol daun  tersebut.  Tahapan  penelitian  yang  akan dilakukan  terdiri  atas:  (1)  Pembuatan  simplisia kering  daun  gambir,  ekstraksi  daun  gambir secara  maserasi,  serta  penguapan  pelarut  untuk memperoleh ekstrak kering gambir; (2) Analisis kandungan  fitokimia  (fenolik,  flavonoid  dan tannin)  dari  ekstrak  etanol  daun  gambir;  dan(3) Analisis komponen kimia menggunakan GC-MS
3.1 Analisis kadar air
Analisis kadar air bertujuan untuk menghitung kandungan  air  yang  bebas  dan  terikat  dalam suatu  bahan,  dan  untuk  mengetahui  lama masa penyimpanan bahan terhadap daya tahan terhadap mikroba. Pada penelitian ini dilakukan analisa kadar air pada daun kering gambir yang telah dihancurkan menjadi serbuk. Pada Tabel 1 ditabulasikan hasil analisa kadar air serbuk daun gambir dengan nilai rerata diambil dari tiga kali pengulangan.
3.2 Analisis hasil ekstraksi Ekstraksi  serbuk  daun  gambir  dilakukan dengan metode ekstrak cair-cair dengan maserasi selama  2  x  24  jam.  Maserasi  merupakan matode  ekstraksi  dengancara  merendam  sampel menggunakan pelarut yang sesuai dalam jangka waktu  tertentu.  Metode  ini  dapat  berlaku  untuk ekstraksi kompenen bahan alam yang tidak tahan terhadap perubahan suhu tinggi atau terhadap pemanasan,  sehingga  dapat  menghindari kerusakan  komponen  kimianya.  Analisa hasil rendemen dihitung setelah proses rotari evaporator untuk menghilangkan kandungan zat pelarut  etanol.  Hasil  analisa  rendemen  ekstrak etanol gambir setelah proses pemekatan dengan rotari evaporator ditabulasikan dalam Tabel 2.
Rendemen  ekstrak  etanol  serbuk  gambir diperoleh  sebesar  2,847  gram  per  gram  berat kering daun gambir. Pelarut etanol yang digunakan dalam penelitian ini mampu mengekstrak seluruh komponen kimia, terutama tannin dan flavonoid didalam  bahan  karena  adanya  perbedaan konsentrasi larutan di dalam dan di luar jaringan. Berdasarkan  Harborne  (1987),  etanol  termasuk dalam  golongan  alkohol  yang  digunakan  untuk ekstraksi tanaman secara keseluruhan.
3.3 Inhibisi Enzim Alfa Amilase Kerja enzim α-amilase pada molekul amilosa meliputi  dua  tahap.  Pertama,  degradasi  amilosa menjadi  maltotriosa  yang  terjadi  secara  acak. Degradasi terjadi sangat cepat yang diikuti dengan penurunan viskositas yang cepat pula. Pada tahap akhir terjadi pembentukan glukosa dan maltosa. Proses ini berlangsung dengan sangat lambat dan terjadi  secara  tidak  acak.  Sedangkan  hidrolisa enzim α-amilase pada molekul amilopektin akan menghasilkan  glukosa,  maltosa,  dan  berbagai jenis  α-limit  dekstrin  yaitu  oligosakarida  yang terdiri dari empat atau lebih residu gula yang semuanya  mengandung  ikatan  α-1,6  (Winarno 1980).  Pada  Grafik  1.  Ditampilkan  hasil  uji aktivitas inhibisi enzim alfa amilase pada ekstrak etanol gambir asal Aceh Tenggara.
Ektrak  etanol  daun  gambir  menunjukkan
aktivitas  inhibisi  alfa  amilase  yang  tinggi dikarenakan kandungan kimia metabolit skunder fenolik  yang  berfungsi  sebagai  antioksidan tertinggi  yang  dapat  menghambat  enzim  alfa amilase.  Presentase  inhibisi  enzim  alfa  amilase diperoleh  sebesar  88,22  %  pada  konsentrasi sampel  1000  ppm.  Semakin  aktif  suatu  sampel dalam  menghambat  kerja  enzim  alfa  amilase, semakin  sedikit  asam  3-amino-5-nitrosalisilat yang terbentuk pada tahap kedua aktivasi enzim.
2.4 Analisis Fitokimia Hasil ekstraksi etanol daun gambir selanjutnya di uji kandungan fitokimia berupa total fenolik, flavonoid  dan  tanin,  seperti  yang  ditampilkan pada Tabel 3.
Menurut Isnawati et al (2012), ekstrak Gambir mengandung senyawa fungsional yang termasuk dalam golongan senyawa polifenol dan senyawa
Gambar 1. Aktivitas inhibisi alfa amilase ekstrak etanol daun gambir

## 3.3 Inhibisi Enzim Alfa Amilase
Kerja enzim α-amilase pada molekul amilosa meliputi  dua  tahap.  Pertama,  degradasi  amilosa menjadi  maltotriosa  yang  terjadi  secara  acak. Degradasi terjadi sangat cepat yang diikuti dengan penurunan viskositas yang cepat pula. Pada tahap akhir terjadi pembentukan glukosa dan maltosa. Proses ini berlangsung dengan sangat lambat dan terjadi  secara  tidak  acak.  Sedangkan  hidrolisa enzim α-amilase pada molekul amilopektin akan menghasilkan  glukosa,  maltosa,  dan  berbagai jenis  α-limit  dekstrin  yaitu  oligosakarida  yang terdiri dari empat atau lebih residu gula yang semuanya  mengandung  ikatan  α-1,6  (Winarno 1980).  Pada  Grafik  1.  Ditampilkan  hasil  uji aktivitas inhibisi enzim alfa amilase pada ekstrak etanol gambir asal Aceh Tenggara.
Ektrak  etanol  daun  gambir  menunjukkan
aktivitas  inhibisi  alfa  amilase  yang  tinggi dikarenakan kandungan kimia metabolit skunder fenolik  yang  berfungsi  sebagai  antioksidan tertinggi  yang  dapat  menghambat  enzim  alfa amilase.  Presentase  inhibisi  enzim  alfa  amilase diperoleh  sebesar  88,22  %  pada  konsentrasi sampel  1000  ppm.  Semakin  aktif  suatu  sampel dalam  menghambat  kerja  enzim  alfa  amilase, semakin  sedikit  asam  3-amino-5-nitrosalisilat yang terbentuk pada tahap kedua aktivasi enzim.

## 2.4 Analisis Fitokimia
Hasil ekstraksi etanol daun gambir selanjutnya di uji kandungan fitokimia berupa total fenolik, flavonoid  dan  tanin,  seperti  yang  ditampilkan pada Tabel 3.
Menurut Isnawati et al (2012), ekstrak Gambir mengandung senyawa fungsional yang termasuk dalam golongan senyawa polifenol dan senyawa
Gambar 1. Aktivitas inhibisi alfa amilase ekstrak etanol daun gambir
ini merupakan hasil metabolit sekunder tanaman yang menyusun golongan tanin. Salah satu yang  termasuk  dalam  senyawa  polifenol  adalah flavanoid. Katekin merupakan se-nyawa golongan tanin  oligomeric  procya-nidin  (OPC).  Secara farmakologi,  OPC  dan  monomernya  bersifat seperti  flavonoid  dan  seringkali  diklasifikasikan sebagai flavonoid.
Flavonoid mempunyai sifat sebagai antioksidan, bersifat  melindungi  timbulnya  penyakit  jantung dan  dapat  menurunkan  lipidperoksidase  serum. Hasil  penelitian  menyebutkan  bahwa  coklat yang  mengandung  flavonoid  turunan  katekin dan  epikatekin  dapat  menghambat  oksidasi
kolesterol  LDL  sebesar  75  %.  Dari  beberapa hasil penelitian, ekstrak Gambir juga mempunyai kemampuan atau berpotensi sebagai antibakteri, antinematoda,  tukak  lambung,  dan  hasil  infusa Gambir  mempunyai  efek  sebagai  perangsang susunan urat syaraf otonom pada hewan coba. Upaya melakukan penelitian karakteristik kualitas mutu  terhadap  ekstrak  tanaman  Gambir,yang merupakan tanaman spesifik lokal dan merupakan komoditi  ekspor  ditujukan  untuk  meningkatkan pemanfaatannya secara optimal sebagai bahan obat herbal.
Gambir  mengandung  senyawa  metabolit sekunder  yang  paling  dominan  yaitu  katekin
Gambar 2. Hasil GC MS ektrak etanol daun gambir.
dan  tanin.  Tanin  merupakan  senyawa  fenolik kompleks. Katekin merupakan senyawa turunan dari  tanin,  yang  berupa  flavan-3-ol.  Senyawa golongan tanin memiliki peran yang sangat baik sebagai antioksidan, sehingga dapat dimanfaatkan sebagai antidiabetes. Tanin dari beberapa tumbuhan  telah  diteliti  memiliki  aktivitas antidiabetes yang baik.
Hasil uji fitokimia ekstrak etanol daun gambir asal  Aceh  Tenggara  menunjukkan  kandungan metabolit  sekunder  seperti  Total  Fenolik,  Total flavonoid, dan Tanin secara berturut-turut sebesar 71,  80;  32,  06  dan  58,39  %.  Ketiga  komponen kimia,  yaitu  total  fenolik,  flavonoid  dan  tanin telah  dilaporkan  memiliki  aktivitas  antidiabetes dengan  menurunkan  kadar  gula  darah  setelah dilakukan uji inhibisi melalui enzim alfa amilase dan alfa glukosidase. Ketiga fraksi kimia teraktif tersebut  telah  berfungsi  dengan  baik  sebagai komponen utama antidiabetes alami.

## 3.5 Hasil GC MS ekstrak daun gambir
Untuk  mengetahui  kandungan  bahan  organik dalam ekstrak daun gambir asal Aceh Tenggara maka dianalisis komponen didalamnya menggunakan Gas Chromatography-Mass Spectra (GC-MS).  Pada Gambar  2  ditampilkan  hasil  GC  MS  kandungan ekstrak etanol daun gambir.
Analisa  GC-MS  menunjukkan  adanyan kandungan pentanon hidroksil, hidroperoxide dan propanetriol  yang  merupakan  komponen  bahan organik dalam ekstrak etanol gambir.
4. Kesimpulan dan Saran Ekstrak  etanol  mengandung  kadar  rendemen sebesar  2,47  gr/gr  berat  kering.  Presentase aktivitas  inhibisi  enzim  alfa  amilase  diperoleh sebesar  88,22  %  pada  konsentrasi  sampel  1000 ppm.  Hasil  uji  fitokimia  ekstrak  etanol  daun gambir  asal  Aceh  Tenggara  menunjukkan kandungan  metabolit  sekunder  seperti  Total Fenolik,  Total  flavonoid,  dan  Tanin  secara berturut-turut  sebesar  71,  80;  32,06;  dan  58,39 %.  Ketiga  fraksi  kimia  teraktif  tersebut  telah berfungsi dengan baik sebagai komponen utama antidiabetes alami, melalui uji inhibisi enzim alfa amilase yang dilakukan.
Penelitian  lanjutan  perlu  dilakukan  untuk menguji aktivitas inhibisi enzim alfa glukosidase
dan memurnikan senyawa aktif yang terkandung dalam  semua  komponen  daun  ,  ranting,  bunga dan  produk  gambir  asal  Aceh  Tenggara  agar diperoleh  aktivitas  antidiabetes  dalam  senyawa teraktif tersebut.

## 5. Daftar Pustaka
Aisman,  1999,  Kajian  Sosio-Tekno-Ekonomi Komoditi Gambir (Fak.Pertanian; UNAND, Sumatra Barat, Vol 18.
Anggraini  T,  Tai  A,  Yoshino  T,  Itani  T.  2011.
Antioxidative activity and catechin content of four kinds of Uncaria gambir extracts from West  Sumatera,  Indonesia. Afr JBiochem Res. 5:33-38.
AOAC.  1984.  Official  Methods  of  Analysis . Associat Official Anal Chemist . Washington D.C.
Chanwitheesuk A, Teerawutgulrag A, Rakariyatham N. 2005. Screening of antioxidant  activity and antioxidant compounds of some edible plants of Thailand. Food  Chemistry .  2005;92:491– 497.
Diabetes Care. 2011. Diagnosis and Clasification of Diabetes Mellitus. Diabetes car e.  34(1). doi: 10.2337/dc11-S062.
Isnawati  dkk.  2012.  Karakterisasi  Tiga  Jenis Ekstrak Gambir ( Uncaria gambir Roxb) dari Sumatera Barat. Bul. Penelit. Kesehatan. Vol 40. No 4. 201-208
Kemenkes  RI.  [FHI]  Farmakope  Herbal Indonesia.  2009.  Keputusan  Menteri Kesehatan  Republik  Indonesia  Nomor  261/ Menkes/SK/IV/2009  Tentang  Farmakope Herbal Edisi Pertama. Jakarta: MENKES RI. Kumar  R,  Arora  V,  Ram  V,  Bhandari  A,  Vyas P.  2011.  Hypoglicemic  and  hypolipidemic effect  of  allopolyherbal  formulation  in streptozotocin  induced  diabetes  mellitus  in rats. Int J Diabet Mell . Xxx: xxx-xxx Sabarni,  2015,  Teknik  Pembuatan  Gambir (Uncaria  gambir  Roxb)  Secara  Tradisional, Journal of Islamic Science and Technology, Vol 1, No.1, 105-112.
Pambayun, R., Hasmeda, M., Saputra, D., dan Suhel (2001).Peningkatan  produksi  dan  perbaikan kualitas  gambirToman,  Musi  Banyu  Asin. Laporan Kegiatan ProgramVucer Multi Years, Kerjasama DITBINLITABMASDIKTI melalui
dan  tanin.  Tanin  merupakan  senyawa  fenolik kompleks. Katekin merupakan senyawa turunan dari  tanin,  yang  berupa  flavan-3-ol.  Senyawa golongan tanin memiliki peran yang sangat baik sebagai antioksidan, sehingga dapat dimanfaatkan sebagai antidiabetes. Tanin dari beberapa tumbuhan  telah  diteliti  memiliki  aktivitas antidiabetes yang baik.
Hasil uji fitokimia ekstrak etanol daun gambir asal  Aceh  Tenggara  menunjukkan  kandungan metabolit  sekunder  seperti  Total  Fenolik,  Total flavonoid, dan Tanin secara berturut-turut sebesar 71,  80;  32,  06  dan  58,39  %.  Ketiga  komponen kimia,  yaitu  total  fenolik,  flavonoid  dan  tanin telah  dilaporkan  memiliki  aktivitas  antidiabetes dengan  menurunkan  kadar  gula  darah  setelah dilakukan uji inhibisi melalui enzim alfa amilase dan alfa glukosidase. Ketiga fraksi kimia teraktif tersebut  telah  berfungsi  dengan  baik  sebagai komponen utama antidiabetes alami.

## 3.5 Hasil GC MS ekstrak daun gambir
Untuk  mengetahui  kandungan  bahan  organik dalam ekstrak daun gambir asal Aceh Tenggara maka dianalisis komponen didalamnya menggunakan Gas Chromatography-Mass Spectra (GC-MS).  Pada Gambar  2  ditampilkan  hasil  GC  MS  kandungan ekstrak etanol daun gambir.
Analisa  GC-MS  menunjukkan  adanyan kandungan pentanon hidroksil, hidroperoxide dan propanetriol  yang  merupakan  komponen  bahan organik dalam ekstrak etanol gambir.

## 4. Kesimpulan dan Saran
Ekstrak  etanol  mengandung  kadar  rendemen sebesar  2,47  gr/gr  berat  kering.  Presentase aktivitas  inhibisi  enzim  alfa  amilase  diperoleh sebesar  88,22  %  pada  konsentrasi  sampel  1000 ppm.  Hasil  uji  fitokimia  ekstrak  etanol  daun gambir  asal  Aceh  Tenggara  menunjukkan kandungan  metabolit  sekunder  seperti  Total Fenolik,  Total  flavonoid,  dan  Tanin  secara berturut-turut  sebesar  71,  80;  32,06;  dan  58,39 %.  Ketiga  fraksi  kimia  teraktif  tersebut  telah berfungsi dengan baik sebagai komponen utama antidiabetes alami, melalui uji inhibisi enzim alfa amilase yang dilakukan.
Penelitian  lanjutan  perlu  dilakukan  untuk menguji aktivitas inhibisi enzim alfa glukosidase
dan memurnikan senyawa aktif yang terkandung dalam  semua  komponen  daun  ,  ranting,  bunga dan  produk  gambir  asal  Aceh  Tenggara  agar diperoleh  aktivitas  antidiabetes  dalam  senyawa teraktif tersebut.

## 5. Daftar Pustaka
Aisman,  1999,  Kajian  Sosio-Tekno-Ekonomi Komoditi Gambir (Fak.Pertanian; UNAND, Sumatra Barat, Vol 18. Anggraini  T,  Tai  A,  Yoshino  T,  Itani  T.  2011. Antioxidative activity and catechin content of four kinds of Uncaria gambir extracts from
West  Sumatera,  Indonesia. Afr JBiochem Res. 5:33-38. AOAC.  1984.  Official  Methods  of  Analysis . Associat Official Anal Chemist . Washington
D.C.
Chanwitheesuk A, Teerawutgulrag A, Rakariyatham N. 2005. Screening of antioxidant  activity and antioxidant compounds of some edible plants of Thailand. Food  Chemistry .  2005;92:491– 497. Diabetes Care. 2011. Diagnosis and Clasification of Diabetes Mellitus. Diabetes car e.  34(1). doi: 10.2337/dc11-S062. Isnawati  dkk.  2012.  Karakterisasi  Tiga  Jenis Ekstrak Gambir ( Uncaria gambir Roxb) dari Sumatera Barat. Bul. Penelit. Kesehatan. Vol 40. No 4. 201-208 Kemenkes  RI.  [FHI]  Farmakope  Herbal Indonesia.  2009.  Keputusan  Menteri Kesehatan  Republik  Indonesia  Nomor  261/ Menkes/SK/IV/2009  Tentang  Farmakope Herbal Edisi Pertama. Jakarta: MENKES RI. Kumar  R,  Arora  V,  Ram  V,  Bhandari  A,  Vyas P.  2011.  Hypoglicemic  and  hypolipidemic effect  of  allopolyherbal  formulation  in streptozotocin  induced  diabetes  mellitus  in rats. Int J Diabet Mell . Xxx: xxx-xxx Sabarni,  2015,  Teknik  Pembuatan  Gambir (Uncaria  gambir  Roxb)  Secara  Tradisional, Journal of Islamic Science and Technology, Vol 1, No.1, 105-112.
Pambayun, R., Hasmeda, M., Saputra, D., dan Suhel (2001).Peningkatan  produksi  dan  perbaikan kualitas  gambirToman,  Musi  Banyu  Asin. Laporan Kegiatan ProgramVucer Multi Years, Kerjasama DITBINLITABMASDIKTI melalui

## UNSRI  dengan  Pemda  Musi  Banyuasin,
Sumatera Selatan. Tidak Dipublikasikan. Harborne, J.B, 1987, Metode Fitokimia: Penuntun

## Cara Menganalisis Tumbuhan. Padmawinata
K. Soediro I, Penerjemah. Bandung; ITB Pr. Terjemahan dari: Phytochemical Methods. Trina,  Fitnawati,  Sofiyanti  N.  2014.  Identifikasi tumbuhan  antidiabetes  berdasarkan  analisis kuantitatif    asam  tanat. JOM FMIPA .  1(2): 409-416.
Utami, P., Novi, W., Nina, W., Devi, D., Agung,
S., Tinton, D.P., Hadi, I., Lukito, A.M., Ug’t dan  Iwan,  S.,  2008,  Buku  Pintar  Tanaman Obat 431 Jenis Tanaman Penggembpur Aneka Penyakit, Jakarta: PT. Agromedia Pustaka. Winarno  F.G,  1980,  Kimia  Pangan  dan  Gizi, Jakarta: Gramedia Pustaka Utama

## Ucapan Terima Kasih
Ucapan  terima  kasih  kepada  DRPM KEMENRISTEKDIKTI  yang  telah  membiayai penelitian  ini  melalui  Hibah  Dosen  Pemula (Kontrak no: 014/K13/A.K.PL/2017).