Isolasi dan Karakterisasi Bakteri Endofit Pada Tanaman Teh (Camellia Sinensis (L.) O.

## Kuntze) Produktif dan Belum Menghasilkan Klon GMB 7 Dataran Tinggi
Isolation and Characterization of Endophyt Bacteria on Highland Productif and Young Tea Plant (Camellia Sinensis (L.) O. Kuntze) GMB 7 Clone
Eko PRANOTO 1) , Gilang FAUZI 2) dan HINGDRI 2)
1) Pusat Penelitian Teh dan Kina Gambung
2) Mahasiswa Agroteknologi Fakultas Pertanian Universitas Padjadjaran, Bandung Email: ekounpad@gmail.com
Abstract. The  purpose  of  this  experiment  was  to  exploration  the  endophyte  bacteria  on  highland young  tea  plant  GMB  7  clone  in  Indonesia  Research  Institute  for  Tea  and  Cinchona,  Gambung. The experiment was conducted at Microbiology Laboratory of PPTK Gambung. The isolation was done by spread method and pour method. The isolate source  was taken from leaves, stems, and roots  of  tea  plant.  The  media  that  used  was  TSA  (Trypic  Soy  Agar)  media.  The  macroscopic morphology  observation  was  done  to  observed  the  morphology  of  endophyte  bacteria  colonies. The result obtained that total of endophyte bacteria isolate on young tea plant was 13 isolates, that were five isolates from leaves, four isolates from stems and roots. On productive tea plant obtained 11  isolates,  that  were  three  endophyte  bacteria  isolate  in  leaves  and  also  in  stems,  and  five isolates  in  roots.  The  result  showed  one  isolate  of  endophyte  bacteria  that  have  similar characteristic on every tissue of plant (leaves, stems, and roots). And the result also showed one endophyte bacteria isolate that have filaments around the colonies on the roots sample from young tea plant.
Keywords : young and productif tea plant, GMB 7 clone, endophyte bacteria, highlands.
Abstrak. Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengeksplorasi  bakteri  endofit  pada  tanaman  teh belum menghasilkan klon GMB 7 pada dataran tinggi di Pusat Penelitian Teh dan Kina, Gambung. Penelitian  dilaksanakan  di  Laboratorium  Mikrobiologi  PPTK  Gambung.  Isolasi  dilakukan  dengan cara metode  sebar  dan  metode tuang.  Sumber isolat diambil  dari  bagian  daun,  batang,  dan  akar tanaman.  Media  yang  digunakan  adalah  media  TSA  ( Trypic  Soy  Agar ).  Pengamatan  morfologi makroskopik  dilakukan  untuk  mengamati  bentuk  koloni  bakteri  endofitik  tersebut.  Dari  hasil penelitian  diperoleh  jumlah  isolat  bakteri  endofit  pada  TBM  sebanyak  13  isolat,  yaitu  isolat  pada bagian  daun  terdapat  lima  isolat,  empat  isolat  pada  bagian  batang  dan  bagian  akar.  Dari  hasil pengamatan  terdapat  satu  isolat  dengan  karakteristik  yang  hampir  sama  pada  setiap  jaringan (daun,  batang,  dan  akar)  tanaman.  Selain  itu  juga  terdapat  isolat  bakteri  yang  memiliki  filamen- filamen  di  sekitar  koloni  yaitu  isolat  yang  berasal  dari  bagian  akar  tanaman  teh  yang  belum menghasilkan.  Sedangkan  bakteri  endofit  pada  TM  sebanyak  11  isolat,  yaitu  pada  bagian  daun terdapat  tiga  isolat,  pada  bagian  batang  tiga  isolat  dan  pada  bagian  akar  lima  isolat.  Dari  hasil pengamatan  terdapat  satu  isolat  dengan  karakteristik  yang  hampir  sama  pada  setiap  jaringan (daun, batang, dan akar) tanaman. Dan juga terdapat isolat bakteri yang memiliki filamen-filamen di sekitar koloni yaitu isolat yang berasal dari bagian akar tanaman teh menghasilkan, sama halnya dengan tanaman teh belum menghasilkan.
Kata kunci : TBM dan TM teh, Klon GMB 7, bakteri endofit, dataran tinggi.

## PENDAHULUAN
Bakteri endofitik adalah bakteri yang seluruh atau sebagian dari siklus hidupnya menempati  jaringan  tanaman  hidup  dan tidak  menyebabkan  infeksi  penyakit  pada
tanaman (Sturz dan Nowak, 2000). Menurut Quadt-Hallmann, et  al., (1997),  mekanisme invasi  bakteri  endofitik  ke  dalam  jaringan tanaman  dapat  dilakukan  dengan  beberapa cara,  antara  lain  masuk  melalui  stomata, lentisel,  luka  alami,  trachoma  yang  rusak,
titik  tumbuh  akar  lateral,  radikula  yang sedang  tumbuh,  jaringan  akar  meristematik yang  tidak  terdiferrensiasi,  serangan  pada dinding  sel  rambut  akar,  melalui  enzimatik degradasi  ikatan  polisakarisa  dinding  sel. Jalan alternatif lainnya diduga bakteri masuk melalui  penyerapan  unsur  hara  tanaman secara pasif akibat transpirasi tanaman.
Usuki  dan  Narisawa  (2007)  menyatakan, mekanisme interaksi simbiosis antara tanaman  dengan  bakteri  endofitik  adalah terjadinya  pertukaran  nutrisi  dimana  bakteri memfiksasi  N 2 menjadi  tersedia  bagi tanaman  dalam  bentuk  NH 3 serta  meng- hasilkan  fitohormon  berupa  IAA,  Sitokinin, dan  berbagai  senyawa  lainnya.  Tanaman mentransferkan  karbon/gula  dan  asam amino,  jenis  gula  terutama  sukrosa  dan glukosa untuk bakteri endofitik.
Bakteri Endofitik memiliki beberapa manfaat antara  lain,  penambat  N 2 dari  udara, menghasilkan  fitohormon  seperti  asam asetat  indole-3  (IAA),  sitokinin,  memacu pertumbuhan  dan  lain-lain  (Setiawati,  dkk, 2009).  Bakteri Endofitik  Penambat  N 2 dapat meningkatkan  penambatan  nitrogen  dari udara.  Pada  tanaman  tebu  kultivar  tertentu di  Brazil  yang  dapat  mengurangi  setengah dari  kebutuhan  nitrogen  melalui  aktivitas penambatan N 2 , yaitu lebih dari 150 kg ha-1 tahun-1 N (Boddey et al., 1995). Peningkatan konsentrasi pupuk hayati bakteri  endofitik  penambat  N 2 cenderung meningkatkan  serapan  N  tanaman  secara nyata. (Mieke dkk., 2008).
Beberapa  bakteri  endofit  dapat  mengha- silkan  hormon  yang  dapat merangsang  per- tumbuhan  tanaman.  Salah  satu  hormon yang dihasilkan oleh mikroba endofit adalah IAA  ( Indole  Acetic  Acid )  atau  yang  lebih dikenal  dengan  sebutan  auksin.  Auksin berperan  sebagai  hormon  pemacu  tumbuh pada  tanaman  dan  biasanya  ditemukan pada  jaringan  meristem  (Spaepen et  al.,
2007).  Bakteri  endofitik  mempunyai  potensi untuk membantu  dalam meningkatkan  keta- hanan  tanaman  teh  dengan  menghasilkan fitohormon serta meningkatkan produktivitas tanaman teh dengan memfiksasi nitrogen di udara.
Tanaman  teh  telah  dibudidayakan  secara luas  di  lebih  dari  30  negara  dan  telah
memberikan  kontribusi  yang  tidak  sedikit bagi  perekonomian  negara-negara  tersebut. Negara-negara yang tercatat sebagai produ- sen  teh  terbesar  di  dunia  diantaranya: China,  India,  Srilanka,  Jepang,  Kenya, Bangladesh,  dan  Indonesia.  Perkembangan perkebunan  teh  yang  cepat  tidak  hanya mendorong  pemenuhan  kebutuhan  dalam negeri, tetapi mendorong usaha
peningkatan  ekspor  non  migas  sehingga diharapkan menjadi andalan utama penghasil devisa. Nilai ekspor teh Indonesia pada  tahun  2007  sebesar  125  juta  US  $ (Suwarto  dan  Octavianty,  2010).  Hasil tanaman teh yang digunakan untuk minuman  adalah  pucuk  daun.  Selain  untuk penyegar  minuman  teh  juga  memiliki kandungan  polifenol  dan  fluorida  manfaat untuk kesehatan seperti anti kanker dan gigi sehat (Pambudi, 2000).
Banyak  hal  yang  mempengaruhi  produk- tivitas tanaman teh seperti jenis tanah, iklim, unsur hara, serangan organisme penggangu tanaman
(OPT) dan budidaya tanaman/kultur  teknis.  Kemampuan  bakteri endofitik  memiliki  kelebihan  yaitu:  kese- luruhan  hasil  produk  berupa fitohormon  dan fiksasi  N  dapat  seluruhnya  digunakan  oleh tanaman  karena  bakteri  endofitik  berada didalam jaringan  tanaman.  Dengan  melaku- kan  penelitian  ini  kita  dapat  mengetahui karakteristik  bakteri  endofitik  yang  terdapat pada  tanaman  teh  belum  menghasilkan  di dataran tinggi, khususnya klon GMB 7.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  Laboratorium Mikrobiologi  PPTK  Gambung.  Klon  yang digunakan adalah klon GMB 7; tanaman F1 yang  diperoleh  dari  persilangan  antara  klon Malabar  2  sebagai  tetua  betina  dan  Pasir Sarongge 1 sebagai tetua jantan. Klon Mala- bar  2  merupakan  klon  anjuran  tahun  1955 yang  mempunyai  potensi  hasil  tinggi  (Han- dayani,  2005).  Bahan  tanaman  digunakan adalah  bagian  daun,  batang  dan  akar  ta- naman  teh  belum  menghasilkan  (TBM). Masing-masing  bagian  yang  diambil  meru- pakan jaringan muda dan sehat.
Metode  ekstraksi  tanaman  diawali  dengan mencuci  bahan  tanaman  yang  didapatkan dari  lapangan.  Setiap  bagian  tanaman
ditimbang  sebesar  satu  gram.  Bagian permukaan  bahan  tanaman  disterilkan  de- ngan menggunakan alkohol 70% selama 60 detik  kemudian  dibilas  sebanyak  dua  kali (2x)  dengan  menggunakan  air  aquadest steril. Bagian tanaman diekstrak mengguna- kan  mortar  steril  didalam  laminar  air  flow. Pengenceran  ekstrak  dilakukan  hingga 1.000 kali (10-3).
Media  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah Trypic Soy Agar (TSA) Merck. Media TSA  merupakan  media selektif yang digunakan untuk mengisolasi mikroba endo- fitik  yang  ada  pada  tanaman  teh.  Metode isolasi yang digunakan adalah metode sebar dan metode tuang.
Formula  Media  TSA  gr/liter  terdiri  dari  (i) Peptone Casein 15 gr, (ii) Peptone Soymeal 5.0 gr, (iii) Sodium Chloride 5.0 gr, (iv) Agar- agar 15  gr.    Media  dibuat  dengan  cara:  (i) Melarutkan  40  gram  campuran  media  ke dalam  1  liter  air  distilasi  (aquades);  (ii) Memanaskan  dengan  air  mendidih  atau aliran  uap  hingga  homogeny;  (iii)  Sterilisasi ke  dalam  autoklaf  selama  15  menit  pada
121 o C;  serta  (iv)  pH  dimodifikasi  dengan asam sulfat (H 2 SO 4 ) hingga 5.5 pada 25 o C.
Penelitian  ini  menggunakan  metode  eks- plorasi  untuk  mendapatkan  isolat  bakteri endofitik  yang  berasal  dari  tanaman  teh dataran  tinggi.  Parameter  pengamatan  da- lam penelitian ini berupa jumlah bakteri dan karakteristik  koloni.  Karakterisasi  bakteri yang  diamati  adalah  bentuk,  tepian  koloni, ukuran, elevasi, dan warna.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Populasi  bakteri  endofit  tumbuh  cepat  pada media  TSA  ( Trypic  Soy  Agar )  dan  berbagai jenis bakteri endofitik yang tumbuh menghasilkan  koloni  yang  khas  dalam penampilannya. Pengamatan morfologi makroskopik  koloni  bakteri  endofitik  dila- kukan  dengan  mengamati  karakteristik  ko- loni  (pengamatan  pada  plate  agar)  berupa: bentuk ( shape ), tepi ( edge ), ketinggian ( ele- vation ),  dan  warna  ( colour ).  Hasil  penga- matan morfologi bakteri endofit dicantumkan pada Tabel 1 dan 2 berikut.
Tabel 1. Karateristik morfologi koloni bakteri endoftik pada TBM Teh.
No. Isolat Bentuk (shape) Tepi (edge) Ketinggian (elevation) Warna (colour) Keterangan

## Metode sebar
1. Daun Isolat 1 Isolat 2 Isolat 3 Irregular Circular Circular Halus Halus Halus Datar Cembung Cembung Putih susu Putih susu Putih susu 3 isolat berlendir berlendir Tdk berlendir 2. Batang Isolat 4 Isolat 5 Irregular Circular Halus Halus Datar Datar Putih susu Putih susu 2 Isolat Tdk berlendir Tdk berlendir 3. Akar Isolat 6 Isolat 7 Irregular Irregular Halus Halus Datar Datar Putih susu Putih susu 2 isolat Tdk berlendir Tdk berlendir

## Metode tuang
4. Daun Isolat 8 Isolat 9 Irregular Irregular Undulate Undulate Datar Datar Putih susu Putih susu 2 isolat Tdk berlendir Tdk berlendir 5. Batang Isolat 10 Isolat 11 Irregular Irregular lobate Halus Datar Datar Putih susu Kuning 2 isolat Tdk berlendir berlendir 6. Akar Isolat 12 Isolat 13 Circular sproading Halus Berfilamen Datar Datar Putih susu Putih susu 2 isolat Tdk berlendir Tdk berlendir
Tabel 2. Karateristik morfologi koloni bakteri endoftik pada TM Teh.
No. Isolat Bentuk (shape) Tepi (edge) Ketinggian (elevation) Warna (colour) Keterangan Metode sebar 1. Daun Isolat 14 Isolat 15 Irregular Irregular Kasar Undulate Datar Datar Putih susu Putih susu 2 isolat Tdk berlendir berlendir 2. Batang Isolat 16 Irregular Kasar Datar Putih susu 1 Isolat Tdk berlendir 3. Akar Isolat 17 Isolat 18 Isolat 19 Irregular Irregular Circular Berfilamen Halus Halus Datar Datar Cembung Putih susu Putih susu Kekuningan 3 isolat Tdk berlendir Tdk berlendir Berlendir

## Metode tuang
4. Daun Isolat 20 Irregular Undulate Datar Putih susu 1 isolat Tdk berlendir 5. Batang Isolat 21 Isolat 22 Irregular Irregular Undulate Halus Datar Cembung Putih susu Kekuningan 2 isolat Tdk berlendir Tdk berlendir 6. Akar Isolat 23 Isolat 24 Irregular Irregular Halus Berfilamen Datar Datar Putih susu Putih susu 2 isolat Tdk berlendir Tdk berlendir
Jumlah  populasi  bakteri  endofit  yang  dapat diisolasi  pada  bagian  jaringan  hidup  bagian daun,  batang  dan  akar  tanaman  teh  belum mengasilkan  (TBM)  maupun  pada  tanaman menghasilkan  (TM)  tersebar merata  dimana setiap  bagian  jaringan  terdapat  3-4  isolat bakteri.  Hasil  penelitian  ini  menunjukan bahwa  bakteri  endofit  dapat  hidup  dalam setiap jaringan (daun, batang, akar) tanaman  teh  dataran  tinggi  baik  pada tanaman  teh  menghasilkan  (TM)  maupun tanaman  belum menghasilkan (TBM).
Isolat  pada  tanaman  teh  bagian  akar  baik TBM  maupun  TM  didapatkan  isolat  bakteri berfilamen.  Hal ini terlihat  dari  penampakan makroskopik koloni yang menunjukan
filament-filament  pada  sekitar  koloni.  Isolat tersebut adalah TBM Isolat 13 dari  akar, TM Isolat 17 dan 24 juga dari akar. Pengenceran ektrak yang dilakukan sebanyak 10 -3 memungkinkan isolat tersebut didapatkan dalam proses pengisolasian.
Total  jumlah  isolat  yang  didapatkan  dari hasil pengamatan sebanyak 13 isolat bakteri endofitik  pada  TBM  teh  dan  11  isolat  dari TM dengan secara umum memiliki karakteristik yang sama. Isolat yang didapatkan  kemudian  dipurifikasi  dengan tujuan  untuk  mendapatkan  isolat  murni suatu  mikroba.    Gambar  isolat  pada  setiap jaringan tanaman dapat dilihat pada Gambar 1 sampai 3 berikut.
TBM Daun TM Daun TBM Batang TM Batang TBM Akar TM Akar
Gambar 1. Isolat Bakteri Endofitik Metode Sebar
TBM Daun TM Daun TBM Batang TM Batang TBM Akar TM Akar
Gambar 2. Isolat Bakteri Endofitik Metode Tuang

## KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  diperoleh  jumlah  isolat bakteri  endofit  pada  tanaman  teh  belum menghasilkan  (TBM)  sebanyak  13,  yaitu isolat  pada  bagian  daun  terdapat  5  (lima) isolat,  4  (empat)  isolat  pada  bagian  batang
dan bagian akar. Dari pengamatan diperoleh bahwa terdapat satu isolat dengan karakteristik  yang  hampir  sama  pada  setiap jaringan (daun, batang, akar) tanaman. Dan juga  terdapat  isolat  bakteri  yang  memiliki filamen-filamen  disekitar  koloni  yaitu  isolat yang berasala dari bagian akar tanaman teh belum menghasilkan.

## DAFTAR PUSTAKA
Boddey  RM,  de  Oliveira  DC,  Urguiaga  S, Reis  VM,  de  Olivares  FL,  Baldani VLD,  and  Dobereiner  J. 1995. Biological nitrogen fixation associated with sugar cane and rice,
Contributions and prospect for improvement.  Plant  Soil  174:  195- 209.
Handayani  T. 2005  Pengaruh  Dosis Mikoriza Vesikular Arbuskular (MVA) terhadap  pertumbuhan  bibit  teh ( Camellia  sinensis L.  (O)  Kuntze) klon  gambung  7  dan  gambung  9. UNPAD. Jatinangor Bandung
Mieke  R,  Dedeh  HA,  Pujawati  S,  dan
Ridha H. 2008. Peningkatan
Populasi  Bakteri  Endofitik,  Bobot kering  Tanaman,  Serapan  N,  Bobot Gabah  Kering  PanenTanaman  Padi Akibat  Aplikasi  Pupuk  Cair  Hayati Bakteri Endofitik Penambat N 2 pada Tanaman  Padi.  Penelitian  Jurusan Ilmu  Tanah  Fakultas  Pertanian Universitas Padjadjaran. Bandung.
Pambudi,  J. 2000.  Potensi  Teh  Sebagai
Sumer Zat Gizi dan Perannya dalam Kesehatan. Dalam Prosiding Seminar Sehari Teh untuk Kesehatan  Bandung  17  Oktober
2000. PPTK Gambung.
Quadt-Hallmann  A,  Benhamou  N,  and Kloepper JW. 1997. Bacterial endo- phytes  in  cotton:  mechanisms  of entering  the  plant.Can.  J.  Microbiol. 43: 577-582.
Setiawati MR, Dedeh HA, Pujawati S, dan Ridha  H. 2009.  Formulasi  Pupuk Hayati  Bakteri  Endofitik  Penambat N2  dan  Aplikasinya  Untuk  Mening- katkan Hasil Tanaman Padi. Fakultas Pertanian UNPAD. Bandung.
Spaepen  S,  Vanderleyden  J  and  Remans R. 2007.  Indole-3-acetic  acid  in microbial  and  microorganism-plant signaling.  FEMS  Microbiol  Rev. 31(4): 425-448.
Sturz  AV,  and  Nowak  J. 2000.  Endophytic communities  of  rhizobacteria  and the  strategies  required  to  create yield  enhancing  associations  with
crops. Applied Soil Ecology 15: 183– 190.
Suwarto  dan  Ovtavianty  Y .  2010.  Budi
Daya  12  Tanaman  Perkebunan Unggulan. Penebar Swadaya. Jakarta.
Usuki  F  and  Narisawa  K. 2007.  A  mutu- alistic  symbiosis  between  a  dark septate endophytic fungus, Heteroconium  chaetospira,  and  a nonmycorhizal plant, Chinese
cabbage.  Mycologia,  99(2):  175– 184.