## CEMARAN BAKTERI ESCHERICIA COLI DALAM BEBERAPA MAKANAN LAUT YANG BEREDAR DI PASAR TRADISIONAL KOTA PONTIANAK
Rafika Sari, Pratiwi Apridamayanti Fakultas Kedokteran, Universitas Tanjungpura Email : rafikasari.untan@gmail.com

## ABSTRAK
Makanan  laut  merupakan  salah  satu  jenis  makanan  yang  banyak  dikonsumsi  oleh  masyarakat selain  sebagai  komoditi  ekspor.  Tingginya  kandungan  protein  dan  air  serta  pH-nya  yang mendekati  netral  menjadikannya  media  yang  cocok  untuk  pertumbuhan  bakteri  sehingga menyebabkan makanan laut cepat mengalami proses pembusukan. Mengkonsumsi makanan laut yang  telah  terkontaminasi  bakteri  hidup  atau  toksin  yang  dihasilkannya  dapat  menyebabkan keracunan makanan. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui adanya kontaminasi bakteri koliform E . coli sebagai  indikator  pencemaran  pada  makanan  laut  dan  memberikan  informasi kelayakan dan keamanan konsumsi dari makanan laut di dua pasar tradisional terbesar di daerah Pontianak.  Sampel yang digunakan adalah ikan, sotong dan udang. Penelitian terhadap sampel dilakukan  menggunakan  uji  Most  Probable  Number  (MPN)  yang  dilengkapi  dengan  uji biokimia  untuk  mengidentifikasi  jenis  bakteri  pada  sampel  melalui  penanaman  bakteri  pada media agar Lactose Broth (LB) dan Briliant Green Lactose Bile Broth (BGLB). Hasil penelitian menunjukkan  bakteri  koliform E.coli terdeteksi  pada  100%  sampel  dengan  nilai  MPN    yang tidak memenuhi  kriteria kelayakan konsumsi, yakni >3/g, dengan  nilai paling  terbesar dimiliki oleh  sampel  sotong  yang  dijual  di  kedua  pasar  tradisional,  yakni  220/g.  Hasil  uji  biokimia menunjukkan  sampel  positif  mengandung E.coli dengan  terbentuknya  cincin  berwarna  merah pada media uji.
Kata kunci :  Koliform, Uji MPN, Makanan Laut

## ABSTRACT
Marine food is one of the most consumed food by people besides as an export comodity. They contained high of protein and water, and its pH is near neutral making it is as suitable medium for  growth  of  bacteria  causing  marine  food  experiencing  rapid  decay  process.  Consuming marine food that contaminated by bacteria or its toxins can cause food poisoning.  The purpose of  this  study  was  to  determine  the  presence  of  coliform  bacteria E.coli contamination  as  an indicator  of  pollution  in  marine  food  and  provide  information  on  the  feasibility  and  safety  of seafood consumption in the two largest traditional market in the area of Pontianak. The samples used are fish, shrimp and cuttlefish. A study of the test sample using the Most Probable Number (MPN) methode which is equipped with biochemical test to identify the type of bacteria in the samples  through  cultivation  of  bacteria  on  an  agar  medium  Lactose  Broth  (LB)  and  Brilliant Green Lactose Bile Broth (BGLB) and biochemical tests. The results showed coliform bacteria E. coli was detected in 100% of samples had MPN values > 3 / g. It means that the value do not meet the eligibility criteria consumption. The largest value owned by cuttlefish samples is 220/g that  sold  in  both  traditional  markets.  Biochemical  test  results  showed  a  positive  sample containing E. coli with the formation of a red ring color on the test medium.
Keywords :  Coliform, MPN Test, Marine Food

## PENDAHULUAN
Makanan  laut  merupakan  makanan  yang tinggi  nutrient  mengandung  protein  kualitas
tinggi,  omega  3  dan  sejumlah  vitamin  dan mineral  yang  penting  bagi  tubuh.  Makanan laut  merupakan  sumber  diet  utama  EPA  dan DHA yang banyak dikonsumsi oleh
masyarakat Indonesia, khususnya masyarakat daerah  Pontianak.  Tingginya konsumsi makanan  laut  di  Indonesia,  termasuk  di Pontianak  disebabkan  bahwa  Indonesia merupakan  negara  maritim  yang  dikelilingi oleh  perairan,  sehingga  sebagian  besar masyarakatnya  menjadikan  makanan  laut merupakan lauk utama.
Penelitian  yang  dilakukan  lebih  dari  20 tahun yang lalu menyatakan bahwa
mengkonsumsi makanan laut dapat meningkatkan kesehatan, seperti peningkatan kesehatan  jantung  bagi  orang  dewasa  dan meningkatkan
aspek kognitif dan pengembangan  visual  terhadap  bayi  dan anak-anak.  Akan  tetapi,  makanan  laut  dapat menyebabkan  resiko  bagi  kesehatan  apabila telah  terpapar  patogen.  Makanan  laut merupakan  bahan  pangan  yang  mudah  rusak dan  busuk  bila  tidak  langsung  dikonsumsi, dalam  waktu  6-7  jam  setelah  penangkapan. Pembusukan  yang  terjadi  dapat  diakibatkan oleh bakteri yang menyerang jaringan hewan laut  atau  autolisis.  Daging  yang  tercemar bakteri patogen akan berbahaya bila
dikonsumsi karena akan menimbulkan penyakit. Menjamin keamanan pengkonsumsian makanan laut dapat dilakukan  dengan  uji  mikrobiologi  dengan indikator  adanya  bakteri  koliform  pada makanan laut tersebut (Anonim, 2014)
Koliform  merupakan  suatu  grup  bakteri yang  digunakan  sebagai  indikator  adanya polusi,  kotoran  dan  kondisi  sanitasi  yang tidak  baik  terhadap  air,  makanan,  susu  dan produk-produk susu (Buckle, 1987). Keberadaan  bakteri  koliform  ini  dapat dideteksi
dengan uji mikrobiologi
menggunakan  metode  MPN.  MPN  adalah suatu  metode  enumerasi  mikroorganisme yang menggunakan data dari hasil pertumbuhan  mikroorganisme  pada  medium cair spesifik dalam seri tabung yang ditanam dari  sampel  padat  atau  cair  yang  ditanam berdasarkan  jumlah  sampel  atau  diencerkan menurut  tingkat  seri  tabungnya  sehingga dihasilkan  kisaran  jumlah  mikroorganisme yang  diuji  dalam  nilai  MPN/satuan  volume atau  massa  sampel  (Aryanta,  2001).  Hal inilah  yang  melatarbelakangi  penelitian  ini dilakukan,  yakni  untuk  mengetahui  kualitas makanan  laut  yang  berderar  di  Pasar tradisional  di  Pontianak  dengan  indikator
nilai  MPN  cemaran  bakteri E.coli dan memberikan  informasi  kelayakan  konsumsi makanan  laut  kepada  masyarakat  Kota Pontianak.

## METODE
Bahan. Bahan-bahan yang akan
digunakan di dalam penelitian  ini  antara lain adalah  sampel  makanan  laut  berupa  ikan gembung,  sotong  dan  udang  segar  yang diperoleh  dari  pasar  tradisional  Flamboyan dan  Dahlia  di  Kota  Pontianak,  aquadest, medium Lactose  Broth (LB),  medium Briliant Green Lactose Broth (BGLB), Endo agar, Nutrient  Agar (NA),  larutan  kristal violet,  larutan  lugol,  safranin,  alkohol  95%, minyak imersi, alkohol 70%, aluminium foil, kertas  payung,  karet  tahan  panas  dan  kertas wrapping.
Alat. Alat  yang  akan  digunakan  dalam penelitian  ini  antara  lain  adalah  tabung reaksi,  tabung  durham,  inkubator,  cawan petri, erlenmeyer, gelas beker dan gelas ukur, pipet volume, mortir dan stamper, rak tabung reaksi,  lampu  spirtus,  autoklaf, object  glass , cover glass, mikroskop, mikro pipet, magnetik stirer, batang pengaduk, yellow tip , karet hisap, hot plate dan pipet tetes.
Metode Sampling. Metode yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah metode  deskriptif  kualitatif,  sedangkan penentuan  lokasi  dan  sampel  adalah  secara purposive sampling . Sampel berupa
makanan  laut  yang  diambil  dari  dua  pasar berbeda  yang  memiliki  kriteria  banyak dikunjungi  oleh  masyarakat  pontianak  yaitu pasar  Flamboyan  dan  pasar  Dahlia.  Sampel berupa ikan gembung segar, sotong segar dan udang segar.
Sterilisasi  Alat. Alat-alat  yang  akan digunakan  dicuci  dengan  detergen  lalu dibilas dengan aquades, kemudian dikeringkan.  Alat-alat  tersebut  dibungkus dengan  kertas  payung  dan  disterilkan  dalam autoklaf  pada  suhu  1210C  tekanan  2  atm selama 15 menit. Ose disterilkan dengan cara dipijarkan pada nyala api lampu spiritus.

## Pembuatan dan Sterilisasi Medium
1. Medium Nutrient Agar (NA)
Sebanyak  2,3  gram  medium  NA  kedalam 100  mL  aquadest,  kemudian  dipanaskan sampai  mendidih  dan  diaduk  sampai homogen.  Medium  kemudian  disterilkan dalam  autoklaf  pada  suhu  121 0 C  tekanan
2 atm selama 15 menit.
2. Medium Lactose Broth (LB) Sebanyak 13 gram medium LB dilarutkan dalam  1000  mL  akuades,  selanjutnya dipanaskan  semua  sampai  homogen sambil diaduk. Medium disterilkan  dalam autoklaf  pada  suhu  121 0 C  tekanan  2  atm selama 15 menit.
3. Medium Endo Agar Sebanyak  5  gram  medium Mac  Conkey dilarutkan  dalam  100  mL  akuades, dipanaskan  sampai  mendidih  dan  larut semua.  Medium  kemudian  disterilkan dalam autoklaf  pada suhu 121 0 C tekanan
2 atm selama 15 menit.
4. Medium Briliant  Green  Lactose  Bile Broth (BGLB)
Sebanyak  20  gram  medium  BGLB ditimbang,  kemudian  dilarutkan  dalam
500  mL  akuades.  Medium  dipanaskan sampai mendidih kemudian diaduk sampai  homogen.  Medium  kemudian disterilkan  dengan  autoklaf  pada  suhu 121 0 C tekanan 2 atm selama 15 menit.

## Metode Pengujian Mikrobiologi
1. Uji Penduga Satu mL sampel air diinokulasi kedalam 5 mL  tabung  yang  berisi  medium  LB, kemudian diinokulasi 0,1 mL air kedalam 1  tabung  medium  LB,  setelah  itu diinokulasi  0,01  mL  sampel  air  1  tabung medium    LB.  Semua  tabung  diinkubasi dalam inkubator dalam suhu 37 o C selama 24  jam.  Hasil  pengamatan  dicatat  jika pada  tabung  durham  terbentuk  gas  atau medium  berwarna  kuning  keruh  berarti positif.
2. Uji penegas Pada  uji  penegas  dilakukan  2  tahap pengujian yaitu:
a. Tahap I Satu  ose  biakan  dari  setiap  tabung  uji penduga  yang  positif  masing-masing diinokulasi  kedalam  7  tabung  yang berisi media BGLB, selanjutnya
diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  24 jam,  kemudian  diamati  adanya  asam dan gas yang terbentuk. Hasil pengamatan  yang  terjadi  dicatat,  jika pada  tabung  durham  berbentuk  gas atau  medium  berwarna  menjadi  hijau keruh berarti hasil positif. b. Tahap II Medium endo agar dicairkan, selanjutnya  dituang  kedalam  cawan petri  steril,  dan  didiamkan  sampai membeku. Satu ose biakan dari tabung
BGLB  yang  menunjukkan  reaksi positif  diinokulasi  kedalam  medium endo agar dengan cara menggoreskannya  diatas  permukaan medium.  Medium  diinkubasi  pada 37 o C selama 24 jam, kemudian diamati adanya  koloni  bakteri  spesifik  yang berwarna  hijau metalik
3. Pengujian Biokimia (Uji IMVIC)
a. Uji Indol Dari  biakan  NA  Miring  ditanam  1 sengkelit  biakan  kedalam tryptone broth .  Diinkubasi  selama  24  jam dengan  suhu  37ºC,  ditambahkan  0,2- 0,3  ml  pereaksi  indol  ke  dalam masing-masing  tabung,  kocok  dan didiamkan  selama  beberapa  menit. Warna  merah cherry pada  permukaan membentuk  cincin  menandakan  reaksi indol positif, warna jingga menunjukkan reaksi indol negatif. b. Uji Merah Metil
Dari  biakan  NA  miring  ditanam  1 sengkelit biakan ke dalam pembenihan MR-VP.  Diinkubasi  selama  24  jam dengan  suhu  37ºC.  Setelah  diinkubasi ditambahkan  5  tetes  merah  metil, dikocok dan didiamkan selama beberapa menit. warna kuning menunjukkan reaksi negatif dan warna merah menunjukkan reaksi positif.
c. Uji VP ( Voges Proskauer )
Dari  biakan  NA  miring  ditanam  1 sengkelit biakan ke dalam pembenihan MR-VP.  Diinkubasi  selama  24  jam dengan  suhu  37ºC.  Setelah  diinkubasi tambahkan  3  tetes  larutan alfa  naftol dan 2 tetes larutan KOH 40%, dikocok dan didiamkan selama beberapa menit. Warna  merah  muda  sampai  merah  tua menunjukkan  hasil  positif,  dan  jika
tidak berubah warna maka menunjukkan hasil negatif. d. Uji Sitrat Dari  biakan  NA  miring  ditanam  1 sengkelit biakan ke dalam pembenihan Simmons Citrat , lalu diinkubasi selama
24 jam dengan suhu 37ºC. Warna biru menunjukkan hasil positif, warna hijau menunjukkan  hasil  negatif  (Irianto, 2006).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji    penduga  ( Presumptive  Test ). Uji penduga  dilakukan  terhadap  6  sampel makanan laut meliputi ikan gembung, sotong serta  udang.  Uji  penduga  dilakukan  untuk menduga adanya kandungan cemaran koliform  dalam  tiap  sampel.  Sampel  yang digunakan  berasal  dari  tiga  jenis  pasar  yang berbeda  yaitu  pasar  dahlia  dan  pasar
flamboyan.  Adapun  pasar    tersebut  dipilih berdasarkan  lokasi  yang  strategis  yaitu berada  dipusat  kota  serta  terdapat  fasilitas- fasilitas  publik  yang  menunjang  seperti terminal  sehingga  diharapkan  masyarakat dapat  dengan  mudah  mengakses  lokasi tersebut.
Berdasarkan hasil uji menunjukkan bahwa hasil  tes  penduga  dinyatakan  positif  dengan terjadi  kekeruhan  dalam  media  dan  adanya gas  sebanyak  >10%  dari  volume  di  dalam tabung Durham. Terbentuknya gas
menunjukkan  terjadinya  proses  fermentasi laktosa yang menghasilkan CO 2 .
Tabung-tabung  yang  positif  pada  tes penduga  untuk  bakteri  Koliform E.  coli dibandingkan  dengan  tabel  MPN,  sehingga didapat nilai MPN E. coli seperti pada Tabel
1.
Tabel  1. Hasil Uji Penduga Lokasi Sampel Total Koliform (Jumlah mL/g) Interpretasi Pasar Flamboyan Ikan gembung 21 Tidak memenuhi syarat Pasar flamboyan Sotong 220 Tidak memenuhi syarat Pasar Flamboyan Udang 30 Tidak memenuhi syarat Pasar Dahlia Ikan gembung 25 Tidak memenuhi syarat Pasar Dahlia Sotong 220 Tidak memenuhi syarat Pasar Dahlia Udang 35 Tidak memenuhi syarat
Berikut reaksi yang terjadi pada uji penduga:
Laktosa                                  Glukosa                                        CO 2 + Asam Asetat (C 12 H 22 O 11. H 2 O)                 (C 6 H 12 O 6 )
Laktosa                                              Galaktosa   +   Glukosa (C 12 H 22 O 11. H 2 O)                               (C 6 H 12 O 6 )     (C 6 H 12 O 6 ) Bakteri Glukosa                                       Asam Laktat C 6 H 12 O 6 CO 2 +2CH 3 CHOOCOOH
Gambar 1. Reaksi uji penduga
Batas  maksimum  cemaran E.  coli untuk ikan segar, udang segar ( crustase ) dan sotong segar ( molusca ) berdasarkan tabel Standardisasi Nasional adalah <3/g. Berdasarkan tabel nilai MPN yang dikeluarkan  oleh  USDA  (United  States
Deapartment
of Agriculture),
yang
mempunyai  nilai  MPN  0-0-1  menggunakan kuantitas inokulum sebesar 0,1,    0,01  dan  0,001  adalah  sebesar  3/g.
Nilai  indeks  MPN  pada  tabel  menunjukkan bahwa  semua  sampel  uji  tidak  memenuhi syarat standar mutu cemaran E. coli .
Menurut  info  BPOM  (2008) E.coli merupakan indikator dari kontaminan dengan sumber/  bahan  fekal.  Cemaran  bakteri koliform pada makanan laut dapat disebabkan  beberapa  hal  seperti  kandungan protein  yang  tinggi  pada  makanan  laut  dan kondisi lingkungan  yang  sangat sesuai untuk pertumbuhan  mikrobia  pembusuk.  Adapun kondisi lingkungan tersebut seperti suhu, pH, oksigen, waktu simpan, dan kondisi kebersihan sarana prasarana. Koliform merupakan  bakteri  heterogen  dari  famili Enterobacteriaceae ,  dimana  pada  perlakuan tanpa  penyiangan  dengan  suhu  penyimpanan 0 o C  hari  ke  0  telah  terjadi  pertumbuhan bakteri Koliform sebesar 8x101 koloni/g dan pertumbuhan terus meningkat sampai hari ke 10  sebesar  2x108  koloni/g  (Arannilewa  dkk, 2005).  Uji  penduga  yang  positif  ditandai dengan terbentuknya gas tetapi hal ini belum dapat  dipastikan  adanya  koliform  didalam sampel,  hal  ini  dikarenakan lactosa  broth dapat  juga  difermentasi  oleh  bakteri  lain selain  koliform.  Namun,  terbentuknya  gas tersebut  dapat  digunakan  untuk  dasar pengujian berikutnya, yaitu uji penegas.
Uji Penegas ( Confirmative Test )
Uji  Penegas  Tahap  I. BGLB  berfungsi sebagai  penghambat  pertumbuhan  flora mikroba  yang  tidak  diharapkan.  Media BGLB merupakan media yang akan berwarna  hijau  metalik  jika  terdapat  reaksi fermen dengan media. Warna ini berasal dari adanya  koloni  koliform  yang  bereaksi dengan  BGLB. E.  coli merupakan  bakteri fermentasi,  seringkali  menghasilkan  warna hijau  metalik  mengkilap.  Bakteri  yang menfermentasi dengan lambat akan menghasilkan  koloni  berwarna  merah  muda (Depkes,1996).  Berdasarkan  hasil  penelitian, uji  penegas  tahap  I  memberikan  hasil  yang positif.
Uji  Penegas  Tahap  II. Media  Endo Agar  adalah  media  kultur  selektif  dan diferensial  untuk  mendeteksi  keberadaan bakteri  koliform  fekal  dan  mikroorganisme lainnya.    Selektivitas  media  endo  agar tersusun  atas  sodium  sulfate  atau  kombinasi basic  fuchsin ,  yang  menghasilkan  suspensi mikroorganisme gram positif. Bakteri koliform memfermentasi laktosa,
menghasilkan  koloni  berwarna  merah  muda hingga  warna  merah  seperti  bunga  mawar serta berbagai pewarnaan yang mirip. Koloni organisme yang tidak memfremnetasi laktosa tidak  berwarna  sehingga  tampak  kontras dengan  latar  media  yang  berwarna  merah muda  (BPOM,  2008).  Berdasarkan  hasil  uji, semua  sampel  positif  mengandung  bakteri koliform E.coli , ditunjukkan dengan terbentuknya  koloni  warna  merah  dengan kilap logam pada media uji.
Pengujian  Biokimia  (Uji  IMVIC). Prinsip dasarnya adalah enzim yang diproduksi  mikroba  akan  mendegradasi karbohidrat  dan  lemak,  dalam  hal  ini  hasil metabolit  dapat  dilihat  secara  visual  dengan adanya  tambahan  suatu  indikator  (BPOM, 2008).  Berdasarkan  Tabel  2,  semua  sampel memberikan hasil yang positif pada pengujian  Indol, cincin  merah cherry yang terbentuk disebabkan E.coli dapat memproduksi indole dari  pemecahan  asam amino trypthopan dengan menggunakan ezim tryptophanase. Produksi indole akan dideteksi  dengan  menggunakan  pereaksi Erlich atau  reagen  Kovak.  Indol  akan bereaksi  dengan  aldehyde  dalam  reagen  dan memberikan  warna  merah.  Sebuah  lapisan alkohol merah akan terbentuk sepeti cincin di bagian atas menandakan indol positif. Hal ini berarti  semua  sampel  positif  mengandung E.coli .  Sedangkan,  uji  Merah  Metil,  Uji  VP dan Uji Sitrat memberikan hasil negatif.
Tabel 2. Hasil Uji Biokimia Lokasi Sampel Uji Indol Uji MM Uji VP Uji Sitrat Pasar Flamboyan Ikan gembung + - - - Pasar flamboyan Sotong + - - - Pasar Flamboyan Udang + - - - Pasar Dahlia Ikan gembung + - - - Pasar Dahlia Sotong + - - - Pasar Dahlia Udang + - - -

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa semua  sampel  uji  yang  digunakan,  yakni ikan, sotong dan udang segar yang diperoleh dari  Pasar  Tradisional  Kota  Pontianak memiliki  hasil  yang  positif  ditandai  dengan terjadi  kekeruhan  dalam  media  dan  adanya gas  sebanyak  >10%  dari  volume  di  dalam tabung Durham pada tes penduga. Berdasarkan  nilai  MPN  yang  diperoleh, yakni  MPN  >3/g  yang  dibandingkan  dengan tabel  Standardisasi  Nasional  Indonesia,  nilai ini melebihi standar nilai keamanan konsumsi makanan kelompok, sehingga tidak layak  konsumsi.  Hal  ini  diperkuat  kembali dengan hasil uji penegas tahap I dan tahap II yang memberikan hasil yang positif cemaran bakteri  koliform E.coli .  Hasil  uji  biokimia pada  uji  indol  terbentuk  cincin  berwarna merah cherry yang  menandakan  bahwa semua  sampel  positif  mengandung E.coli . Berdasarkan  hasil  penelitian  tersebut  dapat ditarik  kesimpulan  bahwa  makanan  laut segar,  yakni  ikan,  sotong  dan  udang  yang diperoleh dari dua Pasar Tradisional terbesar di  Kota  Pontianak  memiliki  batas  keamanan cemaran  bakteri  koliform E.coli yang  tidak memenuhi  standar,  hal  ini  dapat  disebabkan oleh berbagai macam faktor, salah satu faktor terpentingnya  adalah  proses  penyimpanan. Proses  penyimpanan  makanan  laut  segar menjadi faktor penting yang akan mempengaruhi jumlah bakteri koliform yang terkandung  didalamnya,  karena  keadaan lingkungan  seperti  suhu  dan  pH  dapat mempengahuri  pertumbuhan  bakteri  tersebut yang  pada  akhirnya  akan  mempengaruhi batas  keamanan  konsumsi  makanan  laut tersebut (BPOM RI, 2008).

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian ini didanai oleh DIPA UNTAN 2012  surat  perjanjian  pelaksanaan  penelitian nomor : 2116/UN.22.9/LT.2012.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim. 2014. Seafood for Health Information  for  Healthcare  Providers .  A joint  project  of  Oregon  State  University,
Cornell  University,  and  the  Universities of  California,  Delaware,  Florida,and
Rhode Island http://seafoodhealthfacts.org. Aryanta,  N,  dkk,  2001, Penuntun  Praktikum Mikrobiologi , Institut Teknologi Bandung, Jurusan Biologi, FMIPA. Bandung. Arannilewa,  S.T.,  Salawu,  S.O.,  Sorungbe, A.A., and Olasalawu, B.B. 2005. Effect of Frozen Period on the Chemical, Microbiological  and  Sensory  Quality  of Frozen Tilapia Fish ( Sarotherodun galienus ), Journal  of  Biothecnology :
Vol.4(8).852-855.
Badan  POMRI.  2008.  InfoPOM  Badan Pengawas  Obat  dan  Makanan  Republik Indonesia. Vol.  9,  No.  2,  Maret.  ISSN 1829-9334.
Badan  Standardisasi  Nasional.  2009.  Batas maksimum  cemaran  mikroba  dalam pangan. Hal 12. SNI 7388:2009 .
Buckle,  dkk,  1987, Ilmu  Pangan ,  Jakarta  :
Iniversitas Indonesia Press.
Depkes.  1996.  Pedoman  Teknis  Sanitasi (Penyehatan)  Pengelolaan  Makanan  Di
Rumah Sakit. Direktorat Jenderal PPM & PLP. Jakarta. Irianto, K., 2006, Menguak Dunia Mikroorganisme ,  Jilid  2,  hal  17-20,  CV. Yrama Widya Margahayu Permai, Bandung.