## PEMBUATAN BIOETANOL DARI TEPUNG AMPAS TEBU MELALUI PROSES HIDROLISIS TERMAL DAN FERMENTASI: PENGARUH PH, JENIS RAGI DAN WAKTU FERMENTASI
Irvan, Popphy Prawati, Bambang Trisakti Departemen Teknik Kimia, FakultasTeknik,Universitas Sumatera Utara, Jl. Almamater Kampus USU Medan 20155, Indonesia
Email : poophy_here@yahoo.com

## Abstrak
Bioetanol  merupakan  etanol  yang  terbuat  dari  tanaman  yang  mengandung  pati,  gula  dan  tanaman berselulosa  lainnya.  Penelitian  ini  membuat  bioetanol  menggunakan  ampas  tebu  yang  mengandung selulosa  yang  cukup  tinggi  sebagai  bahan  baku,  dengan  melakukan  variasi  pH  fermentasi,  jenis  ragi dan  waktu  fermentasi.  Proses  utamanya  adalah  hidrolisis  termal  dengan  metode  liquid  hot  water (LHW),  fermentasi  dengan  menggunakan  Saccharomyces  cerevisiae,  dan  pemurnian  dengan  distilasi vakum.  Variabel  yang  digunakan  adalah  pH    4;  4,5;  dan  5;  jenis  ragi  roti  dan  tape;  dan  lama fermentasi  2,  4,  6,  8  dan  10  hari.  Dari  analisis  yang  dilakukan  terhadap  hasil  penelitian  didapat perolehan  bioetanol  yang  terbaik  sebesar  23  mL,  dengan  densitas  sebesar  0,95  g/ml  dan  nilai  kalor sebesar 161,59 kkal/kg, yaitu pada variasi pH 5 dengan waktu fermentasi 4 hari menggunakan ragi roti.
Kata kunci : ampas tebu, bioetanol, fermentasi, liquid hot water

## Abstract
Bioethanol is ethanol, which made from starch, glucose, or cellulose of plants. In this research, it has been made from cellulose of sugarcane baggase. This research was conducted to study about the effect of  pH,  yeast  type  and  the  duration  of  fermentation  to  yield’s  ethanol.  The  main  processes  in  this research  were  thermal  hydrolysis  by  liquid  hot  water  (LHW)  method,  fermentation  by  using Saccharomyces cerevisiae and purification by vacuum distillation. The variables in this research were pH  4;  4,5;  and  5;  baker’s  yeast  and  fermented  glutinous  cassava;  and  the  duration  of  fermentation were 2, 4, 6, 8 and 10 days. Based on the analysis of the yield, the volume of bioethanol is 23 mL with 0,95  g/ml  density and  161,59 kkal/kg  heat  value  as the  best yield, under the  condition  of   pH  5  and  4 days of the duration of fermentation using baker’s yeast
Keywords : bioethanol, fermentation, liquid hot water, sugarcane baggase
Pendahuluan
Energi sangat diperlukan dalam menjalankan  aktivitas  perekonomian  Indonesia, baik  untuk  kebutuhan  konsumsi  maupun  untuk aktivitas produksi berbagai sektor perekonomian. Sebagai  sumber  daya  alam,  energi  harus dimanfaatkan
sebesar-besarnya bagi
kemakmuran  masyarakat  dan  pengelolaannya harus mengacu pada asas pembangunan berkelanjutan.  Dari  aspek  penyediaan,  Indonesia merupakan negara yang kaya dengan sumberdaya  energi  baik  energi  yang  bersifat unrenewable  resources maupun  yang  bersifat renewable resources . Namun demikian, eksplorasi  sumberdaya  energi  lebih  banyak difokuskan  pada  energi  fosil  yang  bersifat unrenewable  resources sedangkan  energi  yang bersifat renewable relatif belum banyak dimanfaatkan. Kondisi ini menyebabkan ketersediaan  energi  fosil,  khususnya  minyak mentah,  semakin  langka  yang  menyebabkan Indonesia  saat  ini  menjadi  net  importir  minyak mentah dan produk-produk turunannya [6].
Selama  ini  ampas  tebu  digunakan  sebagai energi  utama  pabrik  gula  [7].  Umumnya  dalam
pengolahan  tebu,  dihasilkan  ampas  tebu  dalam skala besar (mencapai 240 kg bagas dengan 50% kelembapan  per  1  ton  tebu),  yang  sekarang dibakar  di  boiler untuk  pembangkitan  steam dan listrik.
Teknologi yang baik untuk membangkitkan  dan  mengoptimalisasi  proses produksi  etanol memberikan nilai  surplus  ampas yang  dapat  digunakan  sebagai  sumber  bahan bakar  untuk  pembangkitan  listrik  atau  bahan baku  bioetanol  dan  produk  berbasis  bio  lainnya [4].

## Teori
Bioetanol  (C 2 H 5 OH) merupakan  senyawa etanol  yang  didapatkan  dari  rekayasa  biomassa (tanaman)  yang  mengandung  komponen  gula, pati,  maupun  selulosa  melalui  proses  biologis (enzimatik  dan  fermentasi)  [5].  Tumbuhan  yang potensial  untuk  menghasilkan  bioetanol  antara lain  tanaman  yang  memiliki  kadar  karbohidrat tinggi, seperti tebu, nira, aren, sorgum, ubi kayu, jambu  mete  (limbah  jambu  mete),  garut,  batang pisang, ubi jalar, jagung, bonggol jagung, jerami, dan bagas (ampas tebu) [13].
Batang  tebu  digiling  untuk  menghasilkan air  tebu  yang  selanjutnya  digunakan  untuk produksi  gula  (sukrosa)  dan  alkohol  (etanol). Limbah  sisa  penggilingan  batang  tebu  disebut ampas/bagas  [2].  Ampas  tebu  mengandung substrat  lignoselulostik  potensial  untuk  produksi bioetanol,  karena  mengandung  kandungan  gula tinggi,  dapat  diperbaharui,  murah,  dan  banyak tersedia  [1].  Indonesia  memiliki  potensi  limbah biomassa  yang  sangat  melimpah  seperti  bagas. Setiap  tahunnya  Indonesia  menghasilkan  limbah bagas  tebu  sebesar  47  juta  ton.  Potensi  bagas  di Indonesia  menurut  Pusat  Penelitian  Perkebunan Gula  Indonesia  (P3GI)  tahun  2012,  cukup  besar dengan  komposisi  rata-rata  hasil  samping industri gula di Indonesia terdiri dari limbah cair 52,9  persen,  blotong  3,5  persen,  ampas  (bagas) 32 persen, tetes 4,5 persen, dan gula 7,05 persen serta abu 0,1 persen [18].
Dengan  tujuan  untuk  memproduksi  etanol dari bahan lignoselulosa, kita harus (a)membuka ikatan  lignoselulosa  untuk  mengakses  rantai polimer selulosa dan hemiselulosa dengan proses pendahuluan,  (b)menghidrolisis  polimer  untuk mencapai  monomer  larutan  gula,  (c)fermentasi gula  menjadi  larutan  etanol  (bubur)  dengan mikroorganisme,  dan  (d)memurnikan  etanol dengan distilasi [17].

## Metodologi Penelitian
Adapun  bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  ampas  tebu,  ragi  tape,  ragi roti,  asam  sulfat  (H 2 SO 4 ),  urea,  natrium hidroksida  (NaOH),  H 2 O  (Aquadest).  Alat  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  digester, beaker  glass ,  bunsen,  statif  dan  klem holder , labu  leher  tiga, hotplate, blender, rotary evaporator ,  termometer, shaker, neraca  analisis, toples  plastik,  oven,  gelas  ukur,  erlenmeyer, kertas saring, furnace, dan pH meter.
Tahap  preparasi  ampas  tebu  dilakukan dengan dikeringkan dalam oven pada suhu 105 o C selama  1  jam  dan  diblender  sampai  berbentuk serbuk.  Tepung ampas  tebu  akan  menjadi  bahan baku,  dan  disimpan  dalam  plastik  kedap  udara agar  tidak  mempengaruhi  kandungan  air  dan komposisi senyawa di dalamnya.
Serbuk  ampas  tebu  sebanyak  200  gram dimasukkan kedalam digester. Kemudian kedalam  digester  tersebut  dimasukkan  media hidrolisis berupa air sebanyak 4800 mL sehingga diperoleh  perbandingan  ampas  tebu  air  sebesar 4%  berdasarkan  persen  berat.  Selanjutnya digester yang berisi sampel dipanaskan selama 1 jam  dan  temperatur  150 o C.  Temperatur  aktual didalam  reaktor  dibaca  oleh thermocouple yang dipasang di digester.
Bubur  ampas  tebu  ditambahkan  ragi  roti/ tape  sebanyak  17,5  gram  dan  urea  sebanyak  1
gram.  Difermentasi  dalam  keadaan anaerob dengan variasi waktu 2 sampai 10 hari pada suhu 30  °C    dan  variasi  pH  4;  4,5;  5  lalu  didistilasi. Sisa  hasil  distilasi  yang  menunjukkan  kadar etanol terbaik kemudian difermentasi kembali.

## Hasil dan Pembahasan
Variabel  yang  divariasikan  adalah  pH fermentasi,  jenis  ragi  dan  waktu  fermentasi. Dengan  variabel  tetap  4%  berat  ampas  tebu selama hidrolisis.

## Hasil Analisis Bahan Baku
Dari hasil perhitungan menggunakan metode Chesson diperoleh  kadar  selulosa sebesar  30,5  %  dan  kadar  lignin  25,9  %. Komponen  utama  ampas  tebu  adalah  lignin (22%),  selulosa  (30%),  dan  hemiselulosa  (23%) [3]. Sehingga ampas tebu dapat digunakan untuk pembuatan  bioetanol  dengan  cara  hidrolisis  dan fermentasi

## Pengaruh  pH  Fermentasi  Terhadap  Kadar Bioetanol
Hubungan  antara  pH  terhadap  yield  etanol yang  dihasilkan  pada  waktu  fermentasi  antara  2 sampai  10  hari  dapat  dilihat  pada  gambar  1. Profil  perubahan  waktu  terhadap  kadar  etanol dievaluasi setiap 2 hari (berdasarkan pH) dengan menghitung kadar rata-rata dan error bar.

## Gambar  1.  Pengaruh  pH  Terhadap  Kadar Etanol
Dari  gambar  1  diperoleh  bahwa  kadar etanol  selama  rentang  waktu  2  sampai  10  hari mengalami  fluktuasi.  Secara  umum  mengalami peningkatan pada hari ke-4, penurunan pada hari ke-6,  peningkatan  kembali  pada  hari  ke-8  dan terakhir  penurunan  pada  hari  ke-10.  Derajat keasaman  (pH)  merupakan  salah  satu  faktor penting  yang  perlu  untuk  diperhatikan  pada proses  fermentasi.  pH  mempengaruhi  laju pertumbuhan Saccharomyces  cerevisae [11]. Pada  kondisi  pH  lingkungan  yang  sesuai Saccharomyces  cerevisiae mampu  memberikan pengaruh  yang  signifikan  pada  produksi  etanol
0 5 10 15 20 25 30 35 2 4 6 8 10 K ad ar Etan o l (% ) Hari pH 4,0 pH 4,5 pH 5,0
[11]. Dari penelitian ini diperoleh kondisi terbaik adalah  pH  5  dengan  waktu  fermentasi  4  hari memiliki yield etanol  yang  maksimum  sebesar 24,26%.  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian  yang telah  dilakukan  Liu  (2014)  menggunakan  beras Cina  dengan Saccharomyces  cerevisiae. Selama rentang  waktu  0  sampai  100  jam  (4  hari) mengalami peningkatan kadar etanol [10].
Pengaruh  Jenis  Ragi  Terhadap  Kadar Bioetanol Pada penelitian ini
dilakukan perbandingan  jenis  ragi  yang  digunakan  dalam proses  fermentasi.  Ragi  yang  digunakan  adalah ragi  roti  merk  Fermipan  dan  ragi  tape  yang diperoleh  dari  pasar  Pancur  Batu.  Gambar  2 menunjukkan perolehan kadar etanol berdasarkan kedua jenis ragi ini.
Gambar  2.  Pengaruh  Jenis  Ragi  Terhadap Kadar Etanol
Dari  rentang  waktu  2-6  hari  ragi  roti menghasilkan  kadar  etanol  yang  lebih  tinggi, namun  setelah  waktu  6  hari  kadar  etanol menggunakan ragi tape menghasilkan hasil yang lebih  baik.  Sesuai  dengan  pendapat  Pelczar  dan Chan  (1998),  yang  menyatakan  bahwa  ragi  roti merupakan khamir jenis Saccharomyces cerevisiae yang telah diseleksi sebelumnya untuk tujuan  komersil.  Saccharomyces  cerevisiae  yang dipilih  adalah  Saccharomyces  cerevisiae  yang memiliki  kemampuan  memfermentasi  gula dengan  baik  di  dalam adonan  dan dapat  tumbuh dengan cepat [12]. Sehingga dengan menggunakan  ragi  roti  lebih  optimal  dilakukan fermentasi dalam waktu singkat.
Sedangkan  dalam  ragi  tape  kurang optimal,  hal  tersebut  disebabkan  ragi  yang digunakan  bukanlah  biakan  murni,  melainkan merupakan campuran dari  genus- genus, memiliki spesies seperti Aspergilus, S. cerevisiae, Candida  dan  Hansenula,  serta  Acetobacter. Genus  tersebut  hidup  bersama-sama  secara sinergetik dan bekerja berkesinambungan. Dimana,  Aspergilus  dapat  menyederhanakan gula; S. cerevisiae, Candida dan Hansenula dapat menguraikan  gula  menjadi  alkohol;  sedangkan Acetobacter  menguraikan  alkohol  menjadi  asam
asetat  [9].  Jadi,  ketika  sudah  terbentuk  etanol, acetobacter  yang  terkandung  di  dalam  ragi  akan merubahnya menjadi asam asetat.
Penelitian  ini  tidak  sesuai  dengan  yang dilakukan  Johnprimen  (2012)  menggunakan  biji durian  dengan  ragi  roti  maupun  tape.  Hasil penelitian tersebut menunjukkan bahwa penggunaan ragi tape lebih  optimal  karena  lebih banyak  mikrorganisme  yang  dapat  menguraikan glukosa  menjadi  gula-gula  yang  lebih  sederhana dan  pada  waktu  fermentasi  mikroba  pada  tape lebih cepat beradaptasi dan tumbuh [8].
Pengaruh Waktu Fermentasi Terhadap Kadar Bioetanol Adapun hasil penelitian pembuatan bioetanol  dari  ampas  tebu  dengan  menggunakan hidrolisis termal dengan variasi waktu fermentasi dapat dilihat pada gambar 3.

## Gambar  3.  Pengaruh  Waktu  Fermentasi Terhadap Kadar Bioetanol
Dari  grafik  dapat  dilihat  bahwa  terjadi fluktuasi selama rentang waktu 2-10 hari. Secara umum  mengalami  peningkatan  pada  hari  ke-4, penurunan  pada  hari  ke-6,  peningkatan  kembali pada hari  ke-8  dan  terakhir  penurunan  pada hari ke-10. Kadar etanol terbaik diperoleh pada waktu 4 hari sebesar 22,63%.
Hal ini sesuai dengan teori yang menyatakan  bahwa,  semakin  lama  fermentasi berlangsung maka jumlah mikroba yang dibutuhkan  dalam  proses  tersebut  juga  akan semakin  bertambah,  sehingga  dengan  semakin meningkatnya  jumlah  mikroba  maka  semakin banyak  pula  karbohidrat  yang  terurai  menjadi alkohol,  sehingga  alkohol  yang  dihasilkan  juga semakin  banyak.  Proses  ini  akan  terhenti  jika kadar  alkohol  sudah  meningkat  sampai  tidak dapat ditolerir lagi oleh mikroba [15]. Disisi lain Sari  et  al  (2008),  menyatakan  bahwa  lama fermentasi  yang  paling  optimal  untuk  proses pembuatan  bioetanol  adalah  3  hari.  Jika fermentasi  dilakukan  lebih  dari  3  hari,  justru kadar alkoholnya dapat berkurang. Berkurangnya kadar  alkohol  disebabkan  telah  dikonversi menjadi senyawa lain misalnya ester [16]. Untuk membuat  analisa  perkembangan  yeast  dibuat
0 5 10 15 20 25 30 2 4 6 8 10 K ad ar Etan o l (% ) Hari Ragi Roti Ragi Tape 0 5 10 15 20 25 30 2 4 6 8 10 K ad ar Etan o l (% ) Hari Kadar alkohol setelah distilasi
variasi  waktu  etanol  selama  12  jam  diperoleh hasilnya seperti pada gambar 4.
Gambar  4.  Variabel  Pembanding  Waktu Fermentasi
Pertumbuhan dapat
diamati dari meningkatnya  kadar  etanol  yang  menunjukkan produktivitas  saccharomyces  cerevisiae.  Lama fermentasi  juga  berkaitan  dengan  pertumbuhan S.cerevisiae.  seperti  mikroorganisme  yang  lain, pertumbuhan dari S.cerevisiae dapat digambarkan  dengan  kurva  pertumbuhan  yang menunjukkan masing- masing fase pertumbuhan. Ada  4  fase  pertumbuhan  yang  meliputi  fase adaptasi,  fase  tumbuh  cepat,  fase  stationer,  dan fase kematian [11].

## Daur Ulang Vinnase
Pemanfaatan  sisa  distilasi  ampas  tebu hasil  distilasi  dilakukan  untuk  mengetahui  sisa kandungan etanol yang masih ada dalam substrat fermentasi. Gambar 5 menampilkan hasil recycle pada  media  dengan  variabel  pH  5  selama  2 hari fermentasi.

## Gambar  5.  Grafik  Hubungan  Antara  Daur Ulang  Proses  Fermentasi  Dengan  Kadar Etanol yang Dihasilkan
Dari gambar 5 berdasarkan hasil optimum kadar etanol diperoleh pada waktu 4 hari dengan pH  5  menggunakan  ragi  roti  digunakan selanjutnya  untuk  menganalisis  hasil  daur  ulang menggunakan  kondisi  yang  sama.  Pada  hasil daur  ulang  diperoleh  densitas  1,012  dan
viskositas  0,854  cP.  Apabila  dibandingkan dengan  kadar  etanol  pada  sampel  sebelum  daur ulang  jauh  lebih  tinggi  disebabkan  jumlah  gula yang  terkonsumsi  lebih  banyak  dan  didalam substrat  belum  terlalu  banyak  senyawa  inhibitor yang dapat menghambat pertumbuhan Saccharomyces cerevisiae [14].
Hasil  daur  ulang  menunjukkan  kadar etanol  yang  sangat  sedikit.  Hal ini menunjukkan daur ulang vinnase kurang memberikan pengaruh yang signifikan terhadap yield etanol.

## Kesimpulan
Jumlah  bioetanol  terbaik  yang  diperoleh pada penelitian ini menggunakan ragi roti dengan pH 5 dengan waktu fermentasi 4 hari , sebesar 23 ml  dengan  densitas  0,95  gr/ml. Kadar  bioetanol yang  diperoleh  sebesar  28,55  %  dengan  nilai kalor  optimum  sebesar  161,59  kkal/kg.  Untuk waktu  fermentasi  yang  cepat  menggunakan  ragi roti  lebih  optimal  dibandingkan  ragi  tape  dan pemanfaatan  sisa  distilasi  untuk  di  daur  ulang kurang mneguntungkan karena kadar etanol hasil daur ulang sangat rendah
Daftar Pusataka [1]   Amores, I, I. B, P. Manzanares, F. Sáez, G. Michelena, M. Ballesteros , Ethanol Production from Sugarcane Bagasse
Pretreated  by  Steam  Explosion,  Electronic Journal of Energy and Environment Vol. 1,
No. 1, April, ISSN: 0719-269 X, 2013.
[2]   Chanilha,L,  A.K  Chandel,  T.S.S  Milessi, F.A.F  Antunes,  W.L.C  Antunes,  W.L.C
Freitas, M.G.A Felipe, S.S Silva, Bioconversion  of  Sugarcane  Baggase  into Ethanol:  An  Overview  about  Composition, Pretreatment  Methods,  Detoxification  of Hydrolysates,  Enzymatic  Saccharification, and  Ethanol  Fermentation,  Journal  of
Biomedicine  and  Biotechnology  10.1155, 2012. [3]  Dawson,  L  dan  R.  Boopathy,  Cellulosic Ethanol Production From Sugarcane Baggase Without Enzymatic Saccharification,  BioResources  3(2):  452- 460, 2008.
[4]   Dias, O.S.M, A.V Ensinas, S.A Nebra, R.C Filho,  C.E.V  Rossell,  M.R.W  Maciel, Production  of  Bioethanol  and  Other  Bio- based  Materials  From  Sugarcane  Baggase: Integration  to  Conventional  Bioethanol Production  Process,  Chemical  Engineering Research and Design 87 1206-1216, 2009.
[5]   Effendi,  Wawan  W,  Bioetanol  Kulit  Buah Kakao;  Menuju  Indonesia  Mandiri  Bahan Bakar Nabati, 2012.
[6]   Elinur  et  al,  Perkembangan  Konsumsi  dan Penyediaan  Energi  Dalam  Perekonomian
0 5 10 15 20 25 12 24 36 48 60 K ad ar E tan o l (% ) Waktu Fermentasi
0 5 10 15 20 25 30 2 4 K ad ar Etan o l (% ) Waktu (Hari) Daur Ulang
Indonesia, Indonesian Journal of Agricultural  Economics.  ISSN  2087-409x.
Institut Pertanian Bogor, 2010.
[7]   Fauzi,  Ahmad,  Pemanfaatan  Ampas  Tebu (Baggase)  Untuk  Bahan  Baku  Pulp  dan Kertas  Masih  Hadapi  Kendala,  Kementrian Kehutanan Republik Indonesia, 2005.
[8]  Johnprimen,  H.S,  A.  Turnip,  M.H.Dahlan, Pengaruh  Massa  Ragi,  Jenis  Ragi  dan Waktu Fermentasi Pada Bioetanol Dari Biji Durian,  Jurusan  Teknik  Kimia,  Universitas Sriwijaya, Palembang, 2012.
[9]  Judoamidjoyo,  M,  Teknologi  Fermentasi, Jakarta, Raja wali press, 1992.
[10] Liu, Dengfeng, L.Xu, W.Xiong, H.T.Zhang, C.C.Lin.  L.Jiang,  and  B.Xu,  Fermentation Process Modelling With Leveberg- Marquardt  Algorithm  and  Runge-Kutta Method on Ethanol Production by Saccharomyces cerevisiae, Research article, China, 2014.
[11] Narendranath, Neelakantan V and R. Power, Relationship  Between  pH  and  Medium
Dissolved  Solids  in  Terms  of  Growth  and Metabolism of
Lactobacilli
and Saccharomyces  cerevisiae  During  Ethanol
Production,  Applied  and  Environmental
Microbiology. Vol 71 No. 5, 2004
[12]  Pelzar,  M.  dan  Chan,  Dasar-  Dasar Mikrobiologi,  Universitas  Indonesia  Press, Jakarta, 1998.
[13]  Pusat  Penelitian  dan  Pengembangan  Hasil Hutan, Prospek Bioetanol Sebagai
Pengganti  Minyak  Tanah.  Maret,  Gunung Batu, Bogor, 2010.
[14]  Rahman,  A.Gunardi,  H.  D.  Z.Arief,  dan  B. Anjasari,  Kajian  Efisiensi  Bahan  Baku Dalam  Produksi  Bioetanol  Dari  Ampas Tapioka  Melalui  Proses  Daur  Ulang (Recycling) Vinasse, Thesis, Jurusan Teknologi  Pangan,  Universitas  Pasundan, Bandung, 2014.
[15]  Rudy Sutanto, Harisman Jaya, Arif Mulyanto, Analisa Pengaruh Lama Fermentasi dan Temperatur Distilasi
terhadap  Sifat  Fisik  (Spesific  Gravity  dan Nilai  Kalor)  Bioetanol  Berbahan  Baku Nanas (Ananas Comosus), Dinamika Teknik  Mesin,  Vol  3  No.  2.  ISSN:  2008- 088, 2013.
[16]  Sari,  I.  M.,  Noverita  dan  Yulneriwarni, Pemanfaatan Jerami Padi dan Alang- Alang Dalam  Fermentasi  Etanol  Menggunkan Kapang  Trichoderma  viride  dan  Khamir Saccharomyces    cerevisiae,  Vis  Vitalis,
5(2): 55-62, 2008.
[17]  Taherzadeh, M. J. dan K. Karimi, Enzyme- Based  Hydrolysis  Processes  For  Ethanol From  Lignocellulostic  Materials  :  A
Review,  BioResources  2(4),  hal:  707-738,
2007. [18]  Yuwono,  T,  E.  Rolanda,  A.Widjaja  dan Soeprijanto, Fermentasi Hidrolisat Enzimatik Bagasse Tebu Menjadi Hidrogen, Jurnal Teknik POMITS  Vol 1. No.1 (1-5),
2012.