## PROTEIN DARI BIOTA LAUT  DAN POTENSINYA DALAM INDUSTRI YANG MENGGUNAKAN TEKNOLOGI NANO-SILIKA
Ekowati Chasanah *)

## ABSTRAK
Peran  protein  dalam  proses  pembentukan  biosilika  yang  terjadi  di  dalam  tubuh  beberapa biota  laut  telah  menginspirasi  peneliti  untuk  mempelajari  dan  meniru  teknologi  tersebut  untuk aplikasi  industri.  Dengan  proses  biologi  biasa,  protein  dari  spikula  spons  dan  dinding  sel  diatom dapat  berfungsi  menjadi  cetakan  dan  men direct proses  biosilika  berskala  nano.  Isolasi  dan identifikasi  protein  tersebut,  yang  dilanjutkan  dengan  uji  coba  proses  biosilika  secara in  vitro , memperlihatkan  potensi  protein  tersebut  sebagai  biokatalis/agen  biologi  dalam  sintesis  silika. Sintesis  silika  secara  kimia,  seperti  dalam  produksi  bahan  resin,  katalis,  dll,  selama  ini  dikenal merupakan  proses  yang  tidak  ramah  lingkungan  dan  boros  energi  (diperlukan  suhu,  pH  dan tekanan  tinggi).  Karena  itu,  eksplorasi  dan  riset  lebih  lanjut  mengenai  protein  ini  dirasa  sangat penting  mengingat  bahan  dasar  silika,  termasuk  didalamnya  teknologi  nano,  telah  dipergunakan dalam  berbagai  bidang  industri  termasuk  diantaranya  industri  pangan,  elektronika,  otomotif,  dan lain-lain.  Perkembangan  riset  tentang  protein  ini,  baik  yang  telah  dilakukan  oleh  peneliti  luar negeri  maupun yang  dilakukan  di  Indonesia, serta  aplikasi  teknologi  nano-silika akan  disampaikan pada  makalah  ini.
KATA KUNCI:   biosilika, biota laut, protein
*) Peneliti  pada Balai  Besar  Riset Pengolahan  Produk  dan  Bioteknologi  Kelautan dan  Perikanan

## PENDAHULUAN
Pembentukan material inorganik dibawah kontrol organisma atau biomineralisasi merupakan fenomena umum di alam. Silika merupakan biomineral nomor dua  paling  banyak  di  alam  dan  hanya  kalah  oleh biogenik  CaCO 3  . Biomineralisasi  silika  di  alam didominasi oleh biota akuatik sederhana termasuk diantaranya oleh organisme bersel tunggal ( Diatomae, Radiolaria dan Synurophyta )  dan  organism a multiselular (spons) (Sumper & Kroger, 2004). Biota akuatik  laut  tersebut  telah  dikenal  m em iliki kemampuan mengasimilasi materi inorganik seperti silikon  dari  lingkungan  perairan  dan  membentuk polimer  silika  dengan  berbagai  disain  unik  untuk memperkuat sel dalam tubuhnya ataupun sebagai bagian dari struktur tubuhnya.  Kemampuan alami biota ini telah menarik peneliti dan pemerhati industri silika  terutama  di  bidang  teknologi  nano,  seiring dengan perkembangan riset bidang biomimetics , yaitu riset  mengenai  teknologi  pembentukan  material dengan sistem biologi atau biomolekul.  Selama ini, pembuatan peralatan berskala nano dan berstruktur mikro seperti transistor untuk microchip merupakan pekerjaan  yang  mahal  dan demanding  process . Proses sintesis silika yang selama ini dilakukan di industri memerlukan kondisi proses yang boros energi dan  tidak  ramah  lingkungan seperti  suhu,  pH  dan tekanan tinggi serta  menggunakan surfaktan yang dapat  mencemari  lingkungan.  Karena  itu,  studi biosilika, pembentukan polimer silika pada makhluk
hidup, menjadi menarik dan sangat intensif dipelajari untuk  mengatasi pada  proses  sintesis  silika  untuk industri, terutama yang berskala nano.
Review ini akan mengulas perkembangan terakhir riset  biosilika  pada  diatom  dan  spons,  potensi pengembangan  dalam  industri serta hasil riset di Indonesia.

## Diatom dan Pembentukan Biosilika
Diatom adalah mikroalga yang dapat ditemukan pada lingkungan akuatik, dan pertama dikenal sejak lebih dari 180 juta tahun yang lalu. Menurut ahli biologi molekuler  tanaman  Chris  Bowler,  berdasar  studi filogenetik molekuler dan morfologi, diatom diduga berasal  dari  eukariot  yang  diserang  oleh  eukariot fotosintetik seperti alga merah (Bradbury, 2004).
Diatom merupakan alga bersel tunggal dengan ukuran mikro (1 – 500 mm) dengan dinding sel ( frustul ) kaku yang berisi silika. Mikroorganisma bersel tunggal ini membentuk struktur dinding sel dengan pola unik yang berukuran dari nano sampai mikrometer yang disebut  juga biosilica  nanopatterns ,  yang  sangat spesifik untuk tiap spesies. Karena itu, diduga proses biomineralisasi pada diatom tersebut dikontrol secara genetik, dengan perkiraan jumlah spesies lebih dari 100.000 jenis, sehingga pola nano yang unik untuk spesies-spesies  tersebut  menginspirasi  proses pembentukan silika secara biologis (biosilifikasi) pada diatom  untuk  pengembangan  teknologi  nano. Berdasar  kesimetrisan  dinding  sel,  maka    diatom

## E.  Chasanah
dibedakan  dalam  2 grup besar yaitu pennate dan centric diatom. Untuk keperluan struktur nano, maka tipe centric , yaitu diatom yang memiliki kesimetrisan secara radial yang sangat berpotensi (Parkinson & Gordon, 1999).
Biosilika    diatom    terutama    terdiri    dari    silika ( amorphous hydrated SiO 2 ) dengan sebagian kecil makromolekul organik yang sejak lama diduga ikut berperan  dalam  mengontrol  pembentukan  silika dengan pola  nanonya. Sintesis  silika pada diatom terjadi di dalam silica deposition vesicle (SDV) yang terdapat  pada organ  intra  sel  yang  dikelilingi  oleh membran silicalema .  Pembentukan  struktur  tiga dimensi gel silika di dalam SDV tersebut dipicu oleh pH rendah. Prekursor  pembentukan biosilika dalam SDV sampai dengan saat ini masih terus dipelajari, tetapi keberadaan asam monosilikat di lingkungan perairan, biasanya dalam kisaran 1 – 100µM, secara jelas merupakan sumber utama pembentukan silika. Asam  monosilikat ditransportasikan  ke dalam  sel diatom melalui protein transporter yang berfungsi jika ada Na + (disebut SIT), tetapi mekanisme penyimpanan asam silikat yang bersifat larut tersebut dan model tranportasinya ke dalam SDV belum diketahui.
Dari  diatom Cylindrotheca  fusiformis , 3 famili protein  dinding  sel  telah  berhasil  diisolasi  dan dikarakterisasi, yaitu frustulins ( Ca + binding protein ), pleuralins dan sillafins. Selain itu, poliamin berantai ekstrim panjang (LCPAs) dengan distribusi panjang rantai  yang  sangat  spesifik  pada  tiap  spesies ditemukan  sebagai  bagian penting pada biosilika diatom  tersebut.  Frustulin  dan  pleuralins  tidak berperan dalam pembentukan silika, namun hanya akan  berasosiasi dengan biosilika setelah terdeposit di permukaan sel, sedangkan sillafins dan poliamin berperan dalam polimerisasi silika secara in vitro dari larutan asam silika. Sillafins  terikat secara erat dalam biosilika, karena itu, sillafins hanya dapat dilarutkan setelah  dinding  sel  terlarutkan  dengan  hidrogen fluorida (HF).
Ketika C. fusiforis dilarutkan dalam anhidrous HF, 3 polipeptida yaitu sillafins – 2 (17 kDa), sillafins – 1B (8 kDa) dan sillafins – 1A (4 kDa) berhasil dideteksi bersama dengan materi non protein, poliamin, yang memiliki berat molekul <3 kDa.  Dari analisis sekuen protein, sillafins A merupakan campuran 2 peptida yang sangat mirip, yaitu sillafins – 1A 1 , – 1A 2 yang memiliki tingkat kemiripan tinggi dengan sillafins – 1B. Yang sangat menarik, 3 peptida tersebut berisi 4 (sillafins – 1A 1 , – 1A 2 ) dan 6 (sillafins – 1B) lisin yang dimodifikasi. Lisin-lisin hasil modifikasi kovalen yang dikandung dalam sillafins yang merupakan polikation peptida tersebut, adalah lisin pertama, berisi poliamin yang terdiri dari 6-11 ulangan unit N-metil-propilamin. Lisin
kedua  diidentifikasi  sebagai  –N-N-dimetil-lisin. Modifikasi ini akan berpengaruh terhadap aktivitas presipitasi silaffins (Sumper & Kroger, 2004).

## Spons dan Proses Biosilifikasi
Spons dari perairan laut memiliki struktur silikon dioksida berukuran nano pada spikulanya. Dari 4 klas Spons ( Phylum Porifera ), 2 klas diantaranya, yaitu klas Demospongiae dan Hexactinellida ,  memiliki spikula yang mengandung silika. Klas Demospongiae ditandai oleh adanya organisasi seluler dan spikula tipe monoaxonic atau tetraxonic ,  sedangkan  klas Hexactinellida ditandai oleh organisasi sincitial dan spikula  tipe hexaradiate .  Dua    jenis  spikula  yang diproduksi yaitu megascleres yang menyusun bentuk utama tulang spons, dan microscleres yang sangat bervariasi dalam bentuk dan ukuran dengan fungsi penyokong,  yaitu  t idak   seut am a/sepent ing megascleres . Bentuk/tipe, ukuran, dan pola  spikula dalam tubuh spons selama ini telah digunakan untuk identifikasi spons, karena diatur secara genetik. Tetapi ternyata,  kondisi  lingkungan  juga  mempengaruhi keberadaan tipe spikula, sehingga sering ditemukan variasi  jumlah, tipe dan  ukuran  spikula pada jenis spons yang sama (Hooper, 2000)
Pembentukan silika sebagai the building blocks of  the  skeleton dimulai  dengan  diekspresikannya enzim silicatein. Ketika Müller dan grupnya meneliti proses pembentukan spikula pada spons Suberites domuncula dengan  menggunakan  m ikroskop, pembentukan spikula disebutkan merupakan proses yang cepat. Spikula dapat tumbuh 5 micron per jam, yang didahului oleh pertumbuhan pada bagian dalam filamen aksial protein silicatein. Spikula ini diproduksi dalam sel  yang  bernama sclerocytes yang berisi filamen organik aksial, dimana silika secara periodik akan didepositkan sampai bentuk dan ukuran akhir dicapai.  Pada  beberapa  spesies,  filamen  aksial ditemukan bebas pada mesohyl dan keberadaannya dihubungkan  dengan  sekresi  ekstraseluler  spikula (Adamson et al ., 2004).
Secara umum, pertumbuhan spikula diasumsikan merupakan  proses  2  dimensi  yaitu  pertambahan panjang  dipengaruhi  oleh  perpanjangan  filamen, sedangkan  pertam bahan    lebar  ditandai  oleh penambahan silika. Pada klas Demospongia , filamen aksial  organik  yang  berfungsi  sebagai template (cetakan)  diperankan  oleh  protein  yang  disebut silicatein. Sampai dengan saat ini terdapat 3 jenis protein    silicatein    yang    berhasil    diisolasi    dari berbagai spons. Protein-protein ini memiliki kemiripan dengan  enzim cathepsin L (Shimizu et al ., 1998). Dari perbandingan   sekuens   antara   silicatein  dan cathepsin L,  ternyata pada cathepsin L terdapat 6
Gambar 1. Posisi relative  gusus samping Ser 26 dan  His 165 pada  struktur  3  dimensi  protein  silicatein  dari hasil  modeling  secara  teoritis.  Yang  disebut catalytic  triad dari  cathepsin  yang  dibentuk oleh residu Cys 26 , His 165 dan Asn 184 , pada pro- tein  silicatein,  2  dari  residu  ini  yaitu  His 165 dan Asn 184 dikonservasi,  sedangk an  Cys 26 menjadi Ser 26 (Sumber : Croce et  al .,  2004).
residu sistein yang dihubungkan dengan jembatan disulfide  yang  dikonservasi  juga  pada  silicatein sehingga  diduga  keduanya  memiliki  struktur  tiga dimensi yang serupa. Croce et al . (2004) memodelkan sisi  katalitik  silicatein  seperti  pada  Gambar  1. Gambaran  struktur  dasar  biosilika  pada  spons digambarkan  oleh  peneliti  Joanna Aizenberg  dari Lucent  Technologies  dalam  Morse,  (2006),  yang meliputi: struktur dasar dari bulatan-bulatan nano silika (Gambar  2A),  yang  selanjutnya  bulatan-bulatan seperti glas ( glassy ) ini disusun seputar serat protein dan diatur secara sentris, lapis demi lapis. Setiap la- pis silika dipisahkan dari lapisan silika lain oleh selapis tipis protein (Gambar 2B). Struktur ini disebut spikula. Spikula dibungkus secara bersama, lapis demi lapis (Gambar  2C).  Perekat  berbahan  silika  menahan satuan ini seperti terlihat pada Gambar 2D.
Hasil analisis FTIR  terhadap peristiwa biosilika ini secara jelas menunjukkan bahwa molekul protein pada filamen aksial berinteraksi dengan gugus Si-OH pada
matriks inorganik melalui ikatan hidrogen.   Kemiripan struktur antara silicatein dengan cathepsin L , lebih lanjut dapat dibuktikan dari prevalensi struktur β - sheet pada protein spikula yang dianalisis ( β - sheet adalah struktur  sekunder  protein,  selain α - heliks ).  Dari simulasi interaksi antara sisi aktif  silicatein dengan asam   ort hosil ikat  atau  dalam   bent uk  anion terdeprotonasi,  rotasi  gugus  samping  serin  dan histidin melalui ikatan hidrogen dapat membawa 2 unit asam orthosilikat secara bersama, dan pembentukan dimer  (OH) 3 Si-O-Si(OH)  dari  segi  energi  sangat dimungkinkan untuk terjadi (Croce et al ., 2004)

## Biosilika dan Potensi Aplikasinya dalam Industri
Apa yang telah dilakukan makhluk hidup seperti spons dan diatom dalam memperkuat struktur tubuh mereka  melalui  proses  biosilifikasi,  menginspirasi banyak peneliti. Telah diuraikan pada bagian terdahulu bahwa peneliti berhasil mengidentifikasi protein yang bertanggung  jawab  atas  konstruksi  pembentukan spikula  baik pada tingkat atom maupun molekular. Protein  ini  selanjutny a  berhasi l  diuji  pula kemampuannya  untuk  membentuk  polimer  silika secara in vitro dalam kondisi lingkungan yang sangat ringan seperti pada proses biologi biasa. Proses yang digunakan sangat jauh dari proses sintesa silika yang biasa  dilakukan,  dengan  melibatkan  suhu  sangat tinggi,  penggunaan  surfaktan  yang  tidak  ramah lingkungan serta boros energi.
Fabrikasi polimer silika berskala nano dibawah kendali  protein  silicatein  dapat  diarahkan  untuk menghasilkan beberapa jenis bahan semikonduktor, termasuk diantaranya titanium dioksida, yang dapat dilakukan prosesnya pada suhu kamar tanpa adanya bahan kimia berbahaya ( caustic ). Titanium dioksida sangat efisien dalam mengkonversi cahaya menjadi energi  dan  ini  telah  digunakan  dalam  berbagai
keperluan  elektronika.  Tentu  saja  apabila  proses pembentukan silika secara biologis (biosilifikasi) ini dapat  dilakukan  pada  skala  industri,  maka  akan
Gambar  2.  Strukur  dasar  biosilika  spons  (Sumber  :  Morse,  2006).
sangat menguntungkan, karena sampai dengan saat ini  sem ikonduktor  m asih  di produksi  dengan menggunakan suhu tinggi dan bahan kimia berbahaya.
Teknologi struktur nano ternyata telah ada dalam kehidupan kita sehari-hari. Ehrmann &  Kuzma (2005) melaporkan dalam bidang industri farmasi, teknologi nano telah banyak digunakan dalam berbagai produk pengantar obat sesuai target ( drug delivery system via patch ), kulit buatan manusia ( man made skin ), diabetic  insulin  biocapsules dan  terapi  kanker menggunakan targetted radioactive biocapsules . Pada bidang olah raga, berbagai produk bola seperti bola tenis yang lebih awet, bola golf yang melayang lebih lurus, bola bowling yang lebih keras dan raket tenis yang lebih kuat telah dihasilkan melalui teknologi nano dengan performansi yang lebih baik dari teknologi konvensional. Pada industri otomotif, teknologi nano telah digunakan untuk mengisi lubang-lubang yang sangat  kecil  secara  lebih  efektif  sehingga  mobil menjadi  lebih  mengkilat  catnya,  dan  lain-lain. Peralatan  yang  berhubungan  dengan  mata dan optical devices lain, melalui sentuhan teknologi nano, telah menghasilkan peralatan menjadi lebih bersih, lebih kering dan lebih kuat. Celana yang water proof , dan baju atau sepatu yang memberikan rasa dingin pada musim panas dan menghangatkan pada musim dingin,  serta  kaos  kaki  yang  tidak  bau,  juga  telah dihasilkan  melalui  teknologi  nano.  Dalam  bidang elektronik,  teknologi  nano  diaplikasikan  untuk membuat  komputer  yang  lebih  cepat  dan  lebih powerfull ,  juga  untuk flask drives , kamera digital, cell phone , LCD, LED, flexible electronics , dan lain- lain.
Dalam industri pangan, teknologi nano berbahan silika telah digunakan untuk menghasilkan kemasan aktif, penjernih/filter, antikoagulan, dan bahan dasar chip untuk  biosensor.  Pasar  produk  ini  sangat potensial dengan lonjakan penjualan produk  kemasan makanan dan minuman berstruktur nano yang sangat signifikan  sejak  tahun  2004.    Perusahaan  pangan raksasa seperti Kraft, Altria dan Unilever, sebagaimana dilaporkan oleh Lux Research , telah menggunakan smart packaging hasil teknologi nano silika karena lebih   bersifat inert ,  tahan  terhadap suhu tinggi dan oksigen,  mampu mencegah serangan  bakteri dan virus serta berpenampilan menarik (El Amin, 2005 dalam Trianawati, 2006).

## Riset tentang  Protein yang Berperan dalam Biosilika di Indonesia
Riset mengenai eksplorasi biota laut Indonesia untuk biosilika belum banyak dilakukan. Tiga riset dasar  tentang  eksplorasi  protein  yang  dapat mengkatalisis  polimerisasi  silika in  vitro serta karakterisasi  protein  tersebut  yang  diisolasi  dari
beberapa spons dan 1 jenis diatom dari Indonesia telah dilakukan. Dari spons asal Binuangen dan P. Nias, telah diperoleh protein dari spikula yang memiliki  berat molekul  sebesar  21,4 kDa.  Selain itu, beberapa protein dengan berat molekul 84 kDa; 37 kDa; 26,6 kDa; 18,1 kDa  dan 16 kDa juga  berhasil diisolasi. Protein tersebut memiliki panjang kurang lebih 0,1 mm dan berdiameter 10 µm. Protein yang diisolasi dari Binuangen dapat menginisiasi polimerisasi TEOS ( tetraethoxyorthosilicate ) sebanyak  15,9 µmol setelah 12 jam reaksi pada suhu ruang dan pH netral (Nurjanah, 2007).
Protein serupa silicatein  juga berhasil diisolasi dari spons yang berasal dari P. Nias dengan berat molekul    32 kDa; 27  kDa dan 23  kDa, sedangkan protein yang berperan dalam biosilika pada spons dari Mataram memiliki berat molekul 15,5 kDa dan 18 kDa. Dari  pengujian  protein  tersebut  terhadap  inhibitor spesifik  menggunakan Phenyl    Methyl   Sulfonyl Fluoride (PMSF), protein-protein  yang diisolasi  ini diduga memiliki  salah satu sisi aktif berupa  serin. Hasil isolasi protein dari kelima spons menunjukkan bahwa kemampuan melakukan polimerisasi tertinggi adalah sebesar 144 µmol/mL dengan lama reaksi 12 jam. Dari studi kinetika, protein tersebut mengikuti kinetika Michaelis-Menten dengan nilai Km sebesar 47,59  µmol/mL  dan  Vmax  sebesar  4,7µmol/jam (Trianawati, 2007).
Protein  seperti  sillafins  dari  dinding  sel  diatom Chaetoceros  gracilis telah  diisolasi  dan  diuji kemampuan melakukan polimerisasi silika dengan substrat TEOS. Dari pengujian tersebut diperoleh yield 0,34% atau 64µg/g  sampel dan didapatkan 4 pita protein dalam SDS-PAGE, masing-masing memiliki berat molekul 44,65 kDa; 42,18 kDa; 23,88 kDa dan 12,07  kDa.  Protein  tersebut  mampu  melakukan polimerisasi TEOS sebesar 239,74µmol/mL, TEOS monomer dalam waktu reaksi 24 jam (Manurung et al ., 2007).

## PENUTUP
Peranan protein dalam proses biosilifikasi menjadi semakin  penting  seiring  dengan potensi aplikasi protein tersebut dalam memproduksi berbagai produk berbahan baku silika yang bersifat ramah lingkungan. Protein tersebut bekerja seperti enzim dan menjadi cetakan, dengan pola/tipe yang spesifik, tergantung dari jenis  atau spesies biotanya, yaitu  diatom  dan spons tersebut (bersifat genetik). Temuan tersebut mengindikasikan bahwa, eksplorasi terhadap protein dari biota laut menjadi sangat penting untuk mendapat protein dengan kemampuan biosilifikasi skala nano dengan pola unik atau pola tertentu seperti yang kita kehendaki untuk aplikasi industri nantinya.
Hasil  riset tentang biosilifikasi pada spons dan diatom di Indonesia memang masih bersifat sangat awal  dan  jauh  untuk  aplikasi. Hasil ini dapat dijadikan pancingan  riset  selanjutnya,  mengingat  potensi aplikasi  biosilika  dalam  memenuhi kehidupan sehari- hari  cukup  besar.  Kekayaan  biota  laut  Indonesia dengan    megabiodiversitas  hayati  sangat  tinggi, sangat  berpotensi  dalam  menghasilkan berbagai protein  unik   yang  berperan  dalam   proses pembentukan biosilika skala nano.

## DAFTAR PUSTAKA
Adamson,  D.H.,    Dabbs,  D.M.,    Morse,  D.E. and Aksay,
I.A.  2004.    Non-peptide,  silicatein  á  inspired  silica condensation  catalyst. Polymeric  Materials:  Science &  Engineering , 90, 239
Bradburry,    J.    2004.      Nature’s      nanotechnologist    : Unveiling  the  secrets  of  diatoms. PLos  Biol. 2004. October, 2 (10) : 306
Croce,  G.,  Frache,  A.,    Milanesio,  M.,    Marchese,  L., Causà,  M.,    Viterbo,  D.,  Barbaglia,  A.,  Bolis,  V., Bavestrello, G., Cerrano, C.,  Benatti, U., Pozzolini, M., Giovine,  M. and  Amenitsch,  H. 2004. Structural char- ac terization  of  silic eous  spic ules  from  marine sponges. Biophys.  J . 86  (1)  : 526-534
Ehrmann,    B.      and      Kuzma,    T.    2005. Real    World Applic ation  of  Nanotec hnology. Center  for Nanotec hnology Education & Technology. Pensylvania  State  University.  Latest  úpdate  on  June 17,  2005
Hooper,    J.N.A.    2000.    Sponguide  :  Guide  to  sponge collection  and  identification  (version  August  2000). http://www.qmuseum.qld.gov.au
Manurung,  A.I.,  Suhartono,  M.T.,  Syah,  D. and Pratiwi, A.R. 2007.   Catalyzing  formation  of  silica  structure isolated  from  Indonesian    marine    diatom Chaetoceros  gracillis . Proceeding    of   International Seminar  and Workshop   Marine   Biodiversity   and Their  Potential for   Developing  Bio-Pharmaceutical Industry  in  Indonesia.
Morse,    D.E.  2006. Marine  Bio-nanotechnology  :  High Performance    Materials    from    Sponge    Silicatein. California    SeaGrant  College  Program.  Research profiles
Nurjanah,  S.,  Welson,  Suhartono,  M.T.  and  Chasanah,
E.  2007.    Preliminary      analysis      of      silicatein    like protein  from  the  Indonesian  sponge  catalyzing  silica polymerization in  vitro.  Proceeding  of  International Seminar    and    Workshop  Marine  Biodiversity  and Their Potential  for   Developing   Bio-Pharmaceutical Industry  in  Indonesia
Park inson,  J .  and  Gordon,  R.  1999.  Beyond micromachining : The potential of diatoms. TIBTECH , 17 : 190-196
Shimizu, K., Cha, J., Stucky, G.D. and Morse, D.E. 1998. Silicatein α :  Cathepsin  L-like  protein  in  sponge biosilica. Proc Natl Acad Sci, U S A. , May 26; 95(11): 6234–6238.
Sumper,    M.  and  Kroger  N.    2004.  Silica  formation  in diatoms :  The function of  long chain  polyamines and silaffins. J.  Mater.  Chem. ,  14  :  2059-2065
Trianawati,  L.  2007.  K arak teris as i  Protein  Serupa Silicatein  dari  Sponge  Asal  Perairan  Nias   dan Lombok .  Thesis  S2,  Sekolah  Pasca  Sarjana  IPB, Bogor.