Journal Syifa Sciences and Clinical Research (JSSCR)
Volume 5 Nomor 1, 2023
Journal Homepage: http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/jsscr , E-ISSN: 2656-9612 P-ISSN:2656-8187 DOI : https://doi.org/10.37311/jsscr.v4i3.16268

## Karakterisasi Metabolit Sekunder Daun Jarak
Cina (Jathropa Multifida Linn) Serta Efektifitasnya Penyembuhan Luka Insisi
Hamsidar Hasan 1* , Juliyanty Akuba 2 , Fatrio Setiawan Ismail 3
1,2,3 Jurusan Farmasi, Fakultas Olahraga dan Kesehatan, Universitas Negeri Gorontalo, Jl. Jenderal Sudirman No. 06 Kota Gorontalo 96128, Indonesia
* Penulis Korespondensi. Email: hamsidar.hasan@gmail.com

## ABSTRAK
Luka  insisi  adalah  hilang  atau  rusaknya  sebagian  jaringan  tubuh  yang  disebabkan  oleh kerusakan  benda  tajam.  Tanaman  Jarak  cina (Jathropa  multifida  linn) merupakan  salah  satu tanaman yang diketahui mengandung senyawa alkaloid, saponin, flavonid dan tanin. Zat-zat tersebut berperan penting dalam proses penyembuhan luka sebagai antibakterial, antioksidan, dan anti-inflamasi Penelitian ini bertujuan untuk mengkarakterisasi senyawa yang terkandung dalam  Jarak  Cina (Jathropa  multifida  linn) dan  untuk  mengetahui  efektifitasnya  terhadap penyembuhan  luka  insisi  pada  mencit (mus  muculus). Beberapa  metode  yang  dilakukan meliputi maserasi bertingkat, evaporasi, uji aktifitas ekstrak,skrining fitokimia, Kromatografi lapis  tipis,  Fraksinasi,  kromatografi  lapis  tipis  preparative,  uji  efktifitas  isolate  aktif  serta analisis  data  one  way  anova.  Hasil  elusidasi  senyawa  Spektrofotometri  UV-Vis  diperoleh panjang  gelombang  maksimum  isolate  aktif  pada  panjang  gelombang  425  nm  dengan absorbansi  0.071.  Hasil  Spektrofotometri  IR  diperoleh  gugus  fungsi  OH  pada  panjang gelombang 3448.72 cm -1 , C-H alifatik pada serapan 2954.95 cm -1 , 2920.23 cm -1, 2852,72 cm -1 yang didukung  dengan  adanya  CH 2 pada  serapan  1163.08  cm -1, C=O  Karbonil  terkonjugasi  pada serapan 1734.01 cm -1 , C=O pada serapan 1635.64 cm -1 , C=C  pada serapan 1463.97 cm -1 , serta C-O pada serapan 1379,10 cm -1 - 1290.38 cm -1 . Dari hasil identifikasi dan karakterisasi dapat disimpulkan isolat aktif  mengandung golongan senyawa flavonoid. Hasil Uji Efektifitas Isolat Aktif  menunjukkan  bahwa  terdapat  perbedaan  yang  signifikan  antara  Isolat  aktif  dengan variasi  konsentrasi  10%,  15%  dan  20%  terhadap  kelompok  lain.  Isolat  aktif  menunjukan penyembuhan  luka  yang  lebih  efektif  dibandingkan  kontrol  positif  dan  negative.  Namun perbedaan variasi tidak menunjukan signifikasi dalam penyembuhan luka insisi pada mencit (mus musculus).
Kata Kunci:
Jarak cina; Jathropa multifida linn ; Senyawa Kimia; Luka Insisi
Diterima: 18-12-2022 Disetujui: 25-02-2023 Online: 01-03-2023

## ABSTRACT
An incision wound is the loss or destruction of part of the body's tissue caused by sharp object. Iodine (Jathropa multifida linn) plant is one of the plants known to contain alkaloids, saponins, flavonoids, and tannins  where  these  substances  play  an  important  role  in  wound  healing  process  as  antibacterial, antioxidant, and anti inflammatory. The research aims to characterize compound in the Chinese jatropha and determine the effectiveness of healing incision wound in mice (mus muculus). The research applied several  methods,  including  multilevel  maceration,  evaporation,  extract  activity  test,  phytochemical screening,  thin  layer  chromatography,  fractionation,  preparative  thin  layer  chromatography,  active
isolate effectiveness test, and one way ANOVA data analysis. The result of the elucidation of UV-Vis Spectrophotometry compounds obtains the maximum wavelength of active isolate at a wavelength of 425 nm  with  an  absorbance  of  0.071.  Meanwhile,  the  result  of  IR  spectrophotometry  indicates  that  the functional group of OH at a wavelength of 3448.72 cm, aliphatic C-H at an absorption of 2954.95 cm, 2920.23  cm,  2852.72  cm"  supported  by  the  presence  of  CII,  at  an  absorption  of  1163.08  cm,  C-O Conjugated carbonyl at an absorption of 1734.01 cm, C=O at an absorption of 1635.64 cm, C-C at an absorption of 1463.97 cm, and C-O at an absorption of 1379.10 cm 1290.38 cm. In accordance with the results  of  identification  and  characterization,  it  can  be  concluded  that  the  active  isolate  contains flavonoids. Additionally, the results of Active Isolate Effectiveness Test show that there is a significant difference between the active isolate with varying concentrations of 10%, 15% and 20% against other groups.  The  active  isolate  signifies  more  effective  wound  healing  han  positive  and negative  controls. However, the difference in variation does noth how any significance in incision wound healing in mice (Mus musculus).
Copyright © 2023 Jsscr. All rights reserved.
Keywords:
Iodine; Jathropa multifida linn; Plant; Chemical Componound; incision
Received: 2022-12-18 Accepted: 2023-02-25 Online: 2023-03-01

## 1. Pendahuluan
Luka  digolongkan  menjadi  dua  golongan  yaitu  golongan  luka  tertutup  dan golongan luka insisi. Luka insisi merupakan kerusakan yang terjadi pada lapisan kulit yang disebabkan oleh benda tajam baik itu berupa goresan, insisian, tusukan dan lain sebagainya.  Dalam  merespon  luka  tersebut,  tubuh  memiliki  fungsi  fisiologis penyembuhan  luka.  Penyembuhan  luka  yang  normal  memiliki  3  fase  yaitu,  fase hemostasis ,fase inflamasi, dan fase proliferasi. Selain tiga di atas ada fase maturasi dan fase remodeling. Fase ini ada sejak terbentuknya luka hingga pengembalian integritas jaringan  yang  sempurna.  Untuk  memprecepat  penyembuhan  luka,  perawatan  luka berpengaruh besar terhadap tahap penyembuhan [1].
Perawatan  luka  dapat  dilakukan  dengan  menggunakan  terapi  pengobatan. Pemberian  obat  akan  membantu  dalam  menyembuhkan  luka.  Selain  itu,  zat  yang dikandung  juga  dapat  mempercepat  proses  penyembuhan  seperti  ekstrak  jaringan, vitamin maupun mineral. Salah satu terapi obat yang biasa digunakan yaitu  dengan menggunakan  obat  antiseptik  seperti  betadine.  Betadine  mengandung  10%  povidone iodine. Povidone iodine merupakan kombinasi molekul iodine dan polivinilpyrrolidone yang memiliki sifat sebagai antimikroba atau antiseptik dan bereaksi terhadap bakteri termasuk bakteri anaerob, jamur, dan protozoa [2]. Povidone iodine harus digunakan secara hati - hati pada penderita yang alergi terhadap iodine karena dapat menimbulkan komplikasi, sehingga dapat menghambat penyembuhan luka. Alergi povidone iodine dapat  menyebabkan  dermatitis,  bengkak,  gatal  dan  rangsangan  nyeri  pada  daerah sekitar luka [3].
Selain  penggunaan  obat  modern,  obat  tradisional  juga  sedang  mengalami perkembangan  yang  signifikan  terhadap  penyembuhan  luka.  Penggunaan  obat tradisional lebih disukai karena tidak menimbulkan efek samping seperti obat-obatan dari  bahan  kimia,  sehingga  perhatian  masyarakat  meningkat  dalam  menemukan ekstrak tanaman untuk pengobatan luka meskipun terdapat kemajuan yang luar biasa dalam  industri  obat  farmasi,  ketersediaan  obat  yang  mampu  merangsang  proses perbaikan luka masih terbatas. Pemanfaatan tanaman obat masih perlu terus digali dan dikembangkan berdasarkan penelitian dan pengkajian secara mendalam seiring dengan kemajuan  teknologi.  Salah  satu  tanaman  yang  secara  empiris  digunakan  oleh
masyarakat yang berpotensi dalam penyembuhan luka dan perlu eksplorasi lebih lanjut yaitu tanaman Jarak Cina ( Jatropha multifida linn ) [4].
Hasil uji fitokimia daun Jarak Cina mengandung senyawa kimia yaitu golongan senyawa  flavonoid  fenol  dan  tanin.  Tanin  berperan  menghambat  hipersekresi  cairan mukosa  dan  menetralisir  protein  inflamasi.  Senyawa  tanin  mengandung  senyawa antibakteri  dimana  senyawa  tersebut  membantu  mengkerutkan  dinding  sel  atau membran sel sehingga menghambat permeabilitas bakteri untuk berkembang. Selain itu senyawa  tanin  yang  juga  berperan  dalam  proses  penyembuhan  luka  insisi,  tanin bermanfaat sebagai astrigen dimana astrigen akan menyebabkan permeabilitas mukosa akan berkurang dan ikatan antara mukosa menjadi kuat sehingga mikroorganisme dan zat kimia iritan tidak dapa masuk ke dalam luka [5].
Flavonoid  merupakan  antimikroba  yang  mampu  membentuk  senyawa kompleks  dengan  protein  ekstraseluler  terlarut  serta  dinding  sel  mikroba.  Flavonoid bersifat  anti  inflamasi  sehingga  dapat  mengurangi  peradangan  serta  membantu mengurangi rasa sakit, bila terjadi pendarahan atau pembengkakan pada luka. Selain itu  flavonoid  bersifat  antibakteri  dan  antioksidan  serta  mampu  meningkatkan  kerja sistem imun, karena leukosit sebagai pemakan antigen lebih cepat menghasilkan dan sistem  limfoid  lebih  cepat  diaktifkan.  Senyawa  fenol  memiliki  kemampuan  untuk membentuk  senyawa  kompleks  dengan  protein  melalui  ikatan  hidrogen,  sehingga dapat merusak membran sel bakteri [5].
Berdasarkan  penelitian  oleh  Nurfiddin  Farid ekstrak  etanol  Jarak  Cina  ( Jatropha multifida linn ) efektif dalam penyembuhan luka insisi pada tikus jantan. Pada konsetrasi 15%,  ekstrak  Jarak  Cina  paling  efektif dalam  penyembuhan  luka  insisi dibandingkan dengan konsentrasi 5 % dan 10 % [11]. Namun pada penelitian tersebut tidak dilakukan karakterisasi  senyawa  apa  saja  yang  berperan  dalam  proses  penyembuhan  luka. Berdasarkan uraian diatas, serta keterbatasan penelitian terhadap tanaman Jarak Cina ( Jatropha  multifida  linn )  dalam  penyembuhan  luka  insisi,  maka  perlu  dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengkarakterisasi metabolit sekunder yang terdapat pada tanaman Jarak Cina serta bagaimana efektifitasnya dalam penyembuhan luka.

## 2.  Metode
Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental  laboratorium  untuk mengkarakterisasi kandungan  metabolit sekunder  pada  tanaman  Jarak  Cina (Jatropha multifida linn) dan melihat efektifitasnya dalam penyembuhan luka Insisi pada Mencit. Bahan
Bahan  -  bahan  yang  akan  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  Aquades, alkohol  swabs,  Amoniak,  etanol  70%,  etanol  96%,  etil  asetat,  FeCl 3 ,  HCl,  H 2 SO 4 , Klorofom, Lempeng KLT GF 254 , Metanol, n-Heksan, Sampel daun tanaman Jarak Cina (Jatropha  multifida  L) ,  Povidine  Iodine  10%,  Mencit  Putih (Mus  musculus) ,Pereaksi Dragendraf, Meyer dan Wagner, Serbuk Magnesium dan Silika Gel 60 dan GF 254.

## Pengolahan sampel
Bagian Tanaman yang diambil adalah bagian Daun Jarak Cina yang berumur 3 Tahun. Daun yang diambil adalah daun yang tua (bukan yang kuning), berwarna hijau segar dan tidak berjamur. Daun dipetik satu persatu secara manual pada pagi hari pukul 9  sampai  pukul  11.  Daun  dibuat  dalam  simplis  kering  kemudian  diserbukan  dan disimpan dalam wadah tertutup dan pada suhu ruang [5].

## Ekstraksi
Simplisa Daun jarak cina diekstraksi menggunakan metode maserasi bertingkat. Sampel  sejumlah  dimasukkan  dalam  bejana  kaca,  kemudian  dimaserasi  dahulu
menggunakan pelarut non-polar n-heksan. Proses maserasi dilakukan selama 3 x 24 jam sambil sesekali diaduk. Setelah itu disaring (menggunakan kertas saring Whatman No 42) untuk memisahkan filtrat dan residunya. Filtrat Kemudian disimpan dalam bejana kaca  dengan  label  ekstrak  n-heksan  Daun  Jarak  Cina.  Residu  di  maserasi  kembali menggunakan  pelarut  kedua  yang  bersifat  semi  polar  etil  asetat.  Kemudian  disaring hingga terpisah filtrat dan residu. Filtrat Kemudian disimpan dalam bejana kaca dengan label  ekstrak  etil  asetat  Daun  Jarak  Cina.  Residu  di  maserasi  kembali  menggunakan pelarut ketiga yang bersifat polar yaitu etanol 96 %. Kemudian disaring hingga terpisah filtrat dan residu. Filtrat Kemudian disimpan dalam bejana kaca dengan label ekstrak etanol Daun Jarak Cina. Setelah proses maserasi selesai, ketiga Filtrat dievaporasi satu persatu  menggunakan rotary evaporator sampai mendapatkan ekstrak kentalnya [4]. Uji aktifitas Ekstrak Kental n-Heksan, etil asetat dan methanol
Ekstrak kental diberikan pada punggung mencit yang telah diberikan luka insisi. Ekstrak kental dilarutkan dahulu pada Na-CMC. Esktrak diberikan sejumlah 2-3 tetes kemudian ditutup dengan kain kasa steril. Diberikan perlakuan setiap hari sampai luka sembuh. Kemudian diamati proses penyembuhan luka insisi pada mencit setiap hari sampai  luka  insisi  sembuh  atau  tertutup.  Ekstrak  yang  memiliki  aktifitas menyembuhkan yang lebih cepat dilakukan pengujian pada proses selanjutnya [5].

## Analisis Kromatografi Lapis Tipis
Ekstrak kental Jarak Cina (Jatropha multifida linn) dianalisis menggunakan KLT (Kromatografi Lapis Tipis). dengan fase diam silika gel dan fase gerak eluen yg sesuai. Kemudian lempeng diamati di bawah sinar UV 366 nm. Ekstrak yang di analisis dengan menggunakan  kromatografi  lapis  tipis  menggunakan  fase  diam  G60  F254  dengan ukuran 1 cm x 5 cm dan fase gerak dengan berbagai perbandingan eluen. Tujuan analisis menggunakan  KLT  (Kromatografi  Lapis  Tipis)  dengan  fase  diam  silika  gel  dan  fase gerak  dengan  beberapa  eluen  pada  berbagai  perbandingan  untuk  mengetahui  jenis pelarut dan perbandingan yang sesuai pada tahap selanjutnya di kromatografi kolom cair vakum [15].
Uji Skrining Fitokimia
1. Uji Flavonoid
Sampel dilarutkan ke dalam 2 ml etanol, kemudian ditambahkan serbuk Mg dan HCl  pekat  sebanyak  5  tetes.  Adanya  senyawa  flavonoid  ditunjukkan  dengan terentuknya biru, kuning ,Hijau, warna merah atau jingga [6] [16].

## 2. Uji Alkaloid
Ekstrak  diambil  sebanyak  0,1  gram  kemudian  dengan  3  tetes  HCL.  Selanjutnya ditambah pereaksi Dragendrof. Alkaloid pada sampel ditandai dengan adanya endapan putih  pada  pereaksi  meyer,  endapan  merah  pada  pereaksi  Dragendrof  dan  endapan coklat pada pereaksi Wagner [6] [16].

## 3. Uji terpenoid dan Steroid
Sebanyak  0,1  gram  sampel  dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi  lalu  Kemudian ditambahkan larutan etil asetat sebanyak 3 tetes dan larutan H 2 SO 4 pekat sebanyak 1 tetes. Adanya triterpenoid pada sampel ditunjukkan dengan adanya warna merah dan warna hijau untuk steroid [6] [16].
4. Uji Saponin
Sebanyak 1 gram ekstrak ditambah dengan etanol, kemudian dipanaskan selama beberapa menit. Larutan dituang ke dalam tabung reaksi dalam keadaan panas. Larutan diambil  sebanyak  10  ml,  kemudian  dikocok  kuat  secara  vertikal.  Adanya  saponin ditandai dengan terbentuknya busa dan tidak hilang pada saat ditambahkan dengan satu tetes HCl 2 N [6] [16].

## 5. Uji Fenolik/Tanin
Ekstrak  diambil  sebanyak  0,1  gram  dan  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi kemudian  ditambahkan  methanol/aquades  dan  dikocok  hingga  homogen.  Sampel ditambahkan  5  tetes  FeCl 3 1%  dan  dikocok.  Hasil  positif  yaitu  terbentuk  wana  hijau kehitaman [6] [16].

## Kromatografi Kolom Cair Vakum
Ekstrak aktif daun Jarak Cina (Jatropha multifida L) ditimbang sebanyak 2 gram kemudian  dicampurkan  dengan  fase  diam  silica  gel.  Proses  fraksinasi  menggunakan fase  diam  silika  gel  GF  254  dan  fase  geraknya  berupa  eluen  yang  ditingkatkan kepolarannya  secara  bergradien  dimulai  dari  n-heksan  100%, n -heksan  :  etil  asetat  ( perbandingan 45:5, 40:10, 35:15, 30:20, 25:25, 20:30, 15:35, 10:40, 5:45) dan etil asetat 100%. Fraksinasi  metode  kromatografi  cair  vakum  bertujuan  memisahkan  bagian  besar senyawa yang berasal ekstrak menjadi fraksi sederhana dengan bantuan pompa vakum sehingga pemisahan dapat dikerjakan secara cepat dan pemisahan yang berbeda-beda sesuai eluen kepolaran yang digunakan. Hasil Fraksi tersebut kemudian ditotolkan pada plat  KLT  dengan  fase gerak  eluen  dengan  perbandingan yang  telah  dioptimasi pada analisis kromatografi lapis tipis. Profil KLT diamati noda yang terbentuk pada sinar UV 366 nm dan 254 nm [4].

## Kromatografi Kolom Gravitasi
Fraksi – fraksi hasil fraksinasi sebelumnya digabung menjadi fraksi gabungan dengan  parameter  kesamaan  penampakan  profil  KLT  dan  warna  sampel.  Kemudian fraksi  gabungan  dievaporasi  untuk  menguapkan  pelarut.  Setelah  kering,  fraksi ditimbang  sejumlah  lalu    dicampurkan  dengan  silica  gel  60.  Prinsip  kerjanya  adalah didasarkan pada perbedaan afinitas absorbsi komponen-komponen campuran terhadap permukaan  fasa  diam.  Fase  gerak  yang  digunakan  sejumlah  300  ml  dengan perbandingan  eluen  yang  optimum.  hasil  fraksi  kemudian  ditotolkan  pada  plat  KLT untuk diamati penampakan bercak nodanya pada lampu UV 254 nm dan 366 nm [4].

## Analisis Kromatografi lapis tipis preparatif
Fraksi  aktif  yang  menunjukan  profil  KLT  yang  memuaskan  dilakukan pemisahan  lanjutan  dengan  analisis  KLT-preparatif.  Kromatografi  lapis  tipis preparative bertujuan untuk memudahkan proses isolasi senyawa serta memudahkan identifikasi    pada  Spektrofotometri  Uv-Vis  dan  IR.  Fraksi  ditotolkan  pada  lempeng KLTP  Ukuran  10  cm  x  20  cm  secara  garis  lurus  dengan  fase  diam  silica  gel  GF254. Lempeng  kemudian  dimasukkan  dalam  chamber  yang  berisi  fase  gerak  dengn perbandingan eluen yang optimum berdasarkan analisis kromatografi lapis tipis. Plat yang  telah  dielusi  kemudian  dikeluarkan  dari  dalam  chamber  lalu  dikeringkan.  Plat KLT selanjutnya diamati noda-noda menggunakan lampu UV 254 dan 366 nm. Noda yang  dihasilkan  kemudian  dikerok  dan  dimasukkan  kedalam  vial  dan  ditambahkan pelarut untuk kemudian digunakan pada Spektrofotometri Uv-Vis dan IR [15].

## Identifikasi dengan Spektrofotometer
Analisa  dengan  alat  Spektrofotometer  UV-Visible  dan  Ir  dilakukan  di Laboratorium Kimia dan Laboratorium terpadu Fakultas MIPA Universitas Hassanudin Makassar.

## Uji efektifitas Isolat aktif
Hewan uji yang telah dipilih dikelompokkan menjadi 5 kelompok, dimana kelompok 1 (kontrol negatif), kelompok 2 (kontrol positif), kelompok 3 (uji 1), kelompok 4 (uji 2), kelompok 5 (uji 3). Dan masing - masing kelompok terdiri dari 3 ekor mencit:
a. Kelompok Kontrol I (Negatif) Merupakan kelompok negatif, pada hari ke-1 hewan uji yang telah diinsisi bagian punggung, diberikan larutan Na-CMC sebanyak 2-3 tetes  kemudian  ditutup  dengan kain kasa  steril.  Diberikan  perlakuan  setiap  hari sampai  luka  sembuh.  Kemudian  diamati  proses  penyembuhan  luka  insisi  pada mencit setiap hari sampai luka insisi sembuh atau tertutup [5].
b. Kelompok Kontrol II (Positif) Merupakan kelompok positif, pada hari ke-1 hewan uji yang telah diinsisi bagian punggung, diberikan Povidine Iodine sebanyak 2-3 tetes  kemudian  ditutup  dengan kain kasa  steril.  Diberikan  perlakuan  setiap  hari sampai  luka  sembuh.  Kemudian  diamati  proses  penyembuhan  luka  insisi  pada mencit setiap hari sampai luka insisi sembuh atau tertutup [5].
c. Kelompok  Uji  I  Merupakan  kelompok  yang  diberikan  isolat  aktif  dengan konsentrasi  10%.  Pada  hari  ke-1  hewan  uji  yang  telah  diinsisi  bagian  punggung diberikan Isolat secara topikal kemudian ditutup dengan kain kasa steril. Diberikan perlakuan  setiap  hari  sampai  luka  sembuh.  Kemudian  diamati  proses penyembuhan luka insisi pada mencit setiap hari sampai luka insisi sembuh atau tertutup [5].
d. Kelompok  Uji  I  Merupakan  kelompok  yang  diberikan  isolat  aktif  dengan konsentrasi  15%.  Pada  hari  ke-1  hewan  uji  yang  telah  diinsisi  bagian  punggung diberikan Isolat secara topikal kemudian ditutup dengan kain kasa steril. Diberikan perlakuan  setiap  hari  sampai  luka  sembuh.  Kemudian  diamati  proses penyembuhan luka insisi pada mencit setiap hari sampai luka insisi sembuh atau tertutup [5].
e. Kelompok  Uji  I  Merupakan  kelompok  yang  diberikan  isolat  aktif  dengan konsentrasi  20%.  Pada  hari  ke-1  hewan  uji  yang  telah  diinsisi  bagian  punggung diberikan Isolat secara topikal kemudian ditutup dengan kain kasa steril. Diberikan perlakuan  setiap  hari  sampai  luka  sembuh.  Kemudian  diamati  proses penyembuhan luka insisi pada mencit setiap hari sampai luka insisi sembuh atau tertutup [5].

## Analisis Data
Data lama penyembuhan luka insisi dinyatakan sebagai rata-rata ± SD. Analisa data  dilakukan  menggunakan software SPSS  dengan  uji  statistik  One  Way  ANOVA. dengan tingkat kepercayaan 95 % [5].

## 3.  Hasil dan Pembahasan Ekstraksi
Simplsia  daun  Jarak  Cina (Jathropa  multifida  linn) sejumlah  400  g  dimaserasi menggunakan pelarut n-heksan sejumlah 2 liter mendapatkan ekstrak kental sejumlah 35 g dan residu sejumlah 360 g. Residu dimaserasi kembali menggunakan pelarut etil asetat sejumlah 2 liter mendapatkan ekstrak kental sejumlah 27 g dan residu sejumlah 300 g. Residu di maserasi kembali menggunakan pelarut methanol dan mendapatkan ekstrak kental sejumlah 35 g.
Tabel 1 . Hasil Perhitungan Ekstrak dan Rendamen yang Diperoleh Nama Pelarut Jumlah Pelarut (mL) Berat Sampel (g) Berat Ekstrak (g) Rendamen (%) n-heksan 2000 400 35 8,75 Etil asetat 2000 360 27 7,5 metanol 1500 300 35 11,76
Persen  rendamen  yang  baik  berkisar  antara  10-15  %  [7,8].  Ekstrak  methanol memnuhi syarat persen rendamen dibandingkan ekstrak lainnya. Adanya faktor suhu atau  pemanasan  pelarut  pada  tahap  ekstraksi  sehingga  dapat  meningkatkan perpindahan zat metabolit keluar konsentrasi rendah dengan lebih cepat. semakin tinggi suhu  ekstraksi  akan  menyebabkan  pergerakan  molekul  semakin  cepat  begitu  juga dengan adanya sirkulasi pelarut dapat meningkatkan laju perpindahan massa senyawa dari  sel  daun,  dengan  demikian  kontak  zat  dengan  pelarut  semakin  sering  sehingga diperoleh  ekstrak  yang  lebih  banyak  dan  diduga  ekstraksi  maserasi  menghasilkan ekstrak yang lebih sedikit dikarenakan proses maserasi tidak mengalami pemanasan [9].

## Analisis Kromatografi Lapis Tipis
Hasil pengamatan KLT ekstrak daun jarak cina pada sinar Uv 366 dapat dilihat dari gambar 2 berikut ini :
Keterangan : (1) Visualisasi ekstrak n-heksan pada sinar UV 366 dan 254 nm (2) Visualisasi ekstrak etil asetat pada sinar UV 366 dan 254 nm (3) Visualisasi ekstrak metanol pada sinar UV 366 dan 254 nm Gambar 1. Profil Kromatografi lapis tipis ekstrak daun jarak cina
Gambar 1 menunjukan hasil KLT ketiga ekstrak jarak cina dengan menggunakan eluen n-heksan : etil asetat pada perbandingan 8 :2. Pada ekstrak n-heksan didapatkan nilai Rf = 0,53 dan 0,45 dengan noda tampak berwarna merah. Pada ekstrak etil asetat didapatkan nilai Rf = 0,55 dan 0,36 dengan noda tampak berwarna merah. Pada ekstrak metanol didapatkan  nilai Rf  = 0,83 ;  0,73  ; 0,63  ;  0,46  dengan  noda  tampak  berwarna merah muda dan hijau.

## Skrining fitokimia
Pada  Uji  Skrining  fitokimia,  ekstrak  etil  asetat  dan  methanol  setelah ditambahkan  pereaksi  HCL  dan  serbuk  magnesium  menunjukan  perubahan  warna menjadi kuning yang diindikasikan mengandung flavonoid. Selanjutnya kedua ekstrak tersebut  mengandung  tannin,  ditunjukan  dengan  perubahan  warna  menjadi  hijau setelah  ditambahkan  FeCl 3 .  Ekstrak  etil  asetat  dan  methanol  juga  diindikasikan mengandung  steroid  dengan  terbentuknya  cincin  hijau  ketika ditambahkan  pereaksi. Ekstrak  n-heksan  dan  metanol  positif  mengandung  terpenoid  ditunjukan  dengan adanyan  endapan  berwarna  merah  setelah  ditambahkan  pereaksi.  Hasil  skrining Fitokimia ekstrak n-heksan, etil asetat, dan methanol dapat dilihat pada table 2 dibawah ini :
1 3 2 Rf = 0,55 Rf = 0,39 Rf = 0,53 Rf = 0,46
Rf = 0,73
Rf = 0,63 Rf = 0,46
1
Rf = 0,83 Rf = 0,96
Tabel 2. Hasil Uji Skrining Fitokimia
Uji Fitokimia Reagen Hasil Uji Ekstrak Daun Jarak Cina n-Heksan Etil asetat Metanol Flavonoid Magnesium dan HCl - + + Alkaloid HCl dan pereaksi Dragendroff - - - Saponin Air Hangat dan HCl - - - Tanin FeCl3 - + + Terpenoid Kloroform dan H2SO4 + + + Steroid Kloroform dan H2SO4 - - -

## Fraksinasi Kromatografi Kolom Cair Vakum
Ekstrak kental methanol sebanyak 2 gram dicampurkan dengan fase diam silica gel  G60.  Proses  fraksinasi  menggunakan  fase  diam  silika  gel  G60  dan  fase  geraknya berupa eluen yang ditingkatkan kepolarannya secara bergradien dimulai dari n-heksan 100%, n -heksan : etil asetat ( perbandingan 45:5, 40:10, 35:15, 30:20, 25:25, 20:30, 15:35, 10:40, 5:45) dan etil asetat 100%. Diperoleh Hasil KCV sejumlah 11 fraksi. Fraksi tersebut kemudian ditotolkan pada plat KLT yang kemudian diamati noda yang terbentuk pada sinar UV 366 nm dan 254 nm yang dapat dilihat pada gambar 2
Gambar 2 menunjukan visualisasi profil KLT dari Fraksi hasil fraksinasi KKCV dengan menggunakan fase gerak eluen n-heksan : etil asetat pada perbandingan (8 : 2). Fraksi menunjukan penampakan noda yang masih mengekor. penampakan spot noda yang masih saling menyambung “mengekor” disebabkan oleh pengaruh penggunaan sampel  yang terlalu banyak atau sampel yang masih terlalu pekat [9]. Maka dari itu 11 fraksi yang dihasilkan dicampur dan dievaporasi kembali untuk menghilangkan pelarut yang digunakan, kemudian difraksinasi lanjutan menggunakan metode Kromatografi Kolom Gravitasi.
Keterangan : (1) Visualisasi Fraksi Aktif pada sinar UV 254 nm (2) Visualisasi Fraksi Aktif pada sinar UV 366 nm
Gambar 2. Profil Kromatografi lapis tipis Fraksi Aktif 1 2 1   2    3    4     5    6     7     8    9   10  11 1    2    3     4     5     6     7     8    9    10  11
Fraksi  Aktif  dengan  profil  KLT  yang  sama  digabung  kemudian  di  fraksinasi kembali  menggunakan  metode  Kromatografi  Kolom  gravitasi  dengan  menggunakan silica gel 60 GF 254 sebagai fase diam dan perbandingan eluen sebagai fase gerak secara bergradien.  Kemudian  Hasil  dari  fraksinasi  kromatografi  dilihat  profil  KLT  yang diamati pada sinar UV 366 nm dan 256 nm dapat dilihat pada gambar dibawah ini :
Keterangan : (1) Visualisasi Hasil Fraksi Aktif KKG  pada sinar UV 256 nm (2) Visualisasi Hasil Fraksi Aktif KKG pada sinar UV 366 nm
Gambar 3. Profil Kromatografi lapis tipis Fraksi Aktif Hasil KKG
Pada  Gambar  3 Profil  KLT  yang  diamati  pada  sinar  uv  254  nm  dan  366  nm menunjukan pemisahan yang baik,  ditandai dengan penampakan noda yang tunggal dan tidak berekor pada F1 dan F2. F2 dipilih untuk dikarakterisasi dan diuji kemurnia menggunakan  KLTP  dan  instrument  spekto  UV-Vis  dan  IR  karena  spot  noda  ynag dihasilkan optimum dibandingkan F1.

## Pengujian Kromatografi Lapis Tipis Preparatif (KLT-P)
Hasil pengamatan KLTP Fraksi 2 pada sinar UV 366 nm dan 256 nm dapat dilihat pada gambar dibawah ini :

## Gambar 4. Visualisas Pengujian KLTP
Gambar 4 menunjukan spot noda tunggal dengan menggunakan eluen n-heksan : etil asetat pada perbandingan (8:2). Visualisasi noda yang didapatkan dari pengujian Kromatografi  Lapis  Tipis  Preparatif  dikerok  dan  kemudian  dilakukan  monitoring Kromatografi lapis tipis untuk melihat kemurnian isolat, yang diamati pada sinar UV 366  nm  dan  256  nm  dengan  fase  gerak  menggunakan  eluen  n-heksan  :  etil  asetat, klorofom : methanol dengan berbagai perbandingan. Hasil Monitoring KLT Isolat aktif dapat dilihat pada gambar dibawah ini :
1
2

## Keterangan :
(1) Visualisasi Isolat aktif pada perbandingan eluen n-heksan : etil asetat (8:2) (2) Visualisasi Isolat aktif pada perbandingan n-heksan : etil asetat (8:2) (3) Visualisasi Isolat aktif pada perbandingan eluen klorofom : methanol (7:3)

## Gambar 5. Visualisasi Monitoring KLT Isolat aktif
Hasil Elusidasi Struktur dengan Spektrofotometri UV-Visibel
Elusidasi  Struktur  Isolat  aktif  menggunakan  Spektrofotometri  UV- Visibeldilakukan untuk mengetahui panjang gelombang maksimum yang dapat dilohat pada gambar dibawah ini.
Gambar 6. Spektrum UV-Visibel isolat aktif
Dari  Hasil  identifikasi  senyawa  menggunakan  spektrofotometer  UV  Visibel menunjukan  bahwa  isolat  aktif  memberikan  serapan  maksimum  pada  panjang gelombang  425  nm  dengan  absorbansi  0.071.  Pada  penelitian  oleh  Roswita  (2022) Kuersetin sebagai standar baku  memiliki panjang gelombang maksimum yaitu 418 nm. Kuarsetin digunakan sebagai  larutan standar karena kuersetin merupakan flavonoid golongan  flavonol  yang  mempunyai  gugus  keton  pada  C-4  dan  memiliki  gugus hidroksil  pada  atom  C-3  atau  C-5  yang  bertetangga  dari  flavon  dan  flavonol. Berdasarkan hasil tersebut, isolate aktif diindikasikan merupakan golongan flavonoid Hasil Elusidasi Struktur dengan Spektrofotometri Spektrofotometri IR
Gambar 7. Spektrum UV-Visibel isolat aktif
2 1 425 nm : Abs 0.071 2 Rf = 0,60 Rf = 0,85 Rf = 0,68
Gambar  diatas  merupakan  hasil  interpretasi  spektrum  IR  dari  isolat  aktif berdasarkan peak (bentuk pita), frekuensi dan intensitasnya. Berdasarkan gugus fungsi dan  tipe  vibrasi  yang dihasilkan  isolat  aktif  diindikasikan  termasuk  dalam  golongan flavonoid. hasil analisis spektrofotometri Ir dapat dilihat pada tabel 3 dibawah ini :
Tabel 3. Interpretasi Spektrum IR Frequency (cm -1 ) Range Frekuensi Intensitas Type of vibration 3448.72 3000-3600 medium O-H (Fenol) 2954.95 - 2920.23 2800-2900 strong C-H (Alkana) alifatik 2852,72 1734.01 1740-1720 strong C=O (Karbonil) 1635.64 1540-1640 strong C=O (Keton) 1463.97 1470-1350 strong C=C (Aromatik) 1379,10-1290.38 1200-1300 strong C-O (Alkohol) 1163.08 1000-1200 strong CH 3
Sumber : Pavia [12]
Berdasarkan  Gugus  fungsi  dan  beberapa  tipe  vibrasi  yang  dihasilkan  pada karakterisasi spektrofotometri IR, isolate aktif merupakan senyawa yang termask dalam golongan flavonoid.

## Hasil Uji Efektifitas Isolat Aktif
Isolat  aktif  yang  telah  diuji  kemurnida  dilakukan  pengujian  efektifitasnya terhadap  penyembuhan  luka  insisi  pada  hewan  coba  dengan  menggunakan  kontol positif Povidine iodine 10%. Hasil uji efektifitas dapat dilihat pada table  4. Dari data yang  diperoleh,  dapat  dibandingkan  bahwa  penyembuhan  luka  insisi  yang  paling tercepat yaitu kelompok uji 3 (Isolat aktif 20%), urutan kedua yaitu kelompok uji 2 (Isolat aktif 15%), urutan ketiga yaitu kelompok uji 1 (Isolat aktif 10%)  selanjutnya Kelompok kontrol positif dengan lama penyembuhan 12 hari dan kontrol negatif Na CMC dengan lama  penyembuhan  13  hari.  Berdasarkan  Hasil  Karakterisasi  UV-Vis  dan  IR  isolate termasuk  dalam  golongan  flavonoid.  Proses  penyembuhan  luka  meliputi  beberapa proses  untuk  meregenerasi  jaringan  yang  telah  rusak.  Pada  saat  jaringan  epidermis mengalami insisi atau sayatan, mikroorganisme yang menempel sekitar area kerusakan akan  melakukan  invasi  ke  dalam  area  luka.  Respon  inflamasi  oleh  tubuh  akan melepaskan  mediator  inflamasi  diantaranya  sel  mast  yang  berukuran  besar  dan  sel leukosit untuk mengatasi invasi oleh mikroorganisme.
Tabel 4. Hasil Pengukuran Lama Penyembuhan Luka Insisi Isolat Aktif Replikasi Lama Penyembuhan Luka Insisi Kontrol Negatif (Na-CMC) Kontrol Positif (Povidine iodine 10%) Isolat aktif 10% 15% 20% 1 13 12 10 10 9 2 12 12 11 10 10 3 14 11 10 10 9 Rata- rata 13 12 10 10 9
Flavonoid  merupakan  antimikroba  yang  mampu  membentuk  senyawa kompleks  dengan  protein  ekstraseluler  terlarut  serta  dinding  sel  mikroba.  Flavonoid bersifat  anti  inflamasi  sehingga  dapat  mengurangi  peradangan  serta  membantu mengurangi rasa sakit, bila terjadi pendarahan atau pembengkakan pada luka. Selain itu  flavonoid  bersifat  antibakteri  dan  antioksidan  serta  mampu  meningkatkan  kerja sistem imun, karena leukosit sebagai pemakan antigen lebih cepat menghasilkan dan sistem  limfoid  lebih  cepat  diaktifkan.  Senyawa  fenol  memiliki  kemampuan  untuk membentuk  senyawa  kompleks  dengan  protein  melalui  ikatan  hidrogen,  sehingga dapat  merusak  membran  sel  bakteri  [5].  Pada  proses  inflamasi  terjadi  permeabilitas membran  sel  sehingga  terjadi  rubor  (kemerahan)  dan  juga  peradangan.  Proses  ini bertujuan agar sel darah putih dan trombosit membatasi kerusakan yang lebih serius juga  mempercepat  penyembuhan.  inflamasi  disebabkan  oleh  pelepasan  berbagai mediator yang berasal dari jaringan rusak, sel mast, leukosit dan komplemen. Mediator – mediator tersebut menyebabkan munculnya tanda – tanda inflamasi seperti kalor, dolor, rubor, tumor, dan fungsio laesa. Proses ini terjadi pada hari pertama sampai hari ke-5. Pada  proses  ini  aktivitas  antiinflamasi  flavonoid  berperan  secara  optimal  untuk membatasi  pelepasan  mediator  inflamasi  dengan  cara  menghambat  COX-2, lipooksigenase  dan  tirosin  kinase,  sehingga  terjadi  pembatasan  jumlah  sel  inflamasi yang bermigrasi ke jaringan luka. Selanjutnya reaksi inflamasi akan berlangsung lebih singkat dan kemampuan proliferatif dari TGF- β tidak terhambat, sehingga proliferasi segera  terjadi.  Menurut  Ponusha et,  al aktivitas  flavonoid  dalam  meningkatkan kontraksi  luka  juga  didukung  oleh  mekanisme  antioksidan  yang  menghambat peroksidasi lipid, melindungi kulit dari radikal bebas dan melindungi jaringan dari stres oksidatif  akibat  cedera.  Selain  itu  aktivitas  antioksidan  juga  berpengaruh  pada  fase penyembuhan dimana fibroblas berproliferasi dan memproduksi matriks kolagen untuk memperbaiki  jaringan  yang  rusak.  Produksi  matriks  kolagen  dapat  menurun dikarenakan  peningkatan  radikal  bebas  sehingga  diperlukan  adanya  antioksidan sebagai penetral radikal bebas.

## Hasil Analisis Data
Setelah  melakukan  uji  efektifitas,  selanjutnya  dianalisis  data yang  didapatkan untuk melihat bagaimana pengaruh efektifitasnya terhadap penyembuhan luka pada hewan coba dibandingkan kelompk control. Hasil analisis data menggunakan uji one way anova dapat dilihat pada gambar dibawah ini :
Tabel 6. Hasil Analisis Data Pada Uji Post Hoc ( Honestly Significant Difference) Kelompok Kontrol Negatif Kontrol Positif Isolat 10% Isolat 15% Isolat 20% Kontrol Negatif - 0.148 0.003 0.001 0.000 Kontrol Positif 0.148 - 0.148 0.055 0.008 Isolat 10% 0.003 0.148 - 0.964 0.359 Isolat 15% 0.001 0.055 0.964 - 0.702 Isolat 20% 0.000 0.008 0.359 0.702 -
Dari data diatas dapat disimpulkan bahwa antara kelompok yang memiliki nilai signifikansi kurang dari 0.05 menunjukkan adanya perbedaan secara signifikan dalam penyembuhan  luka  insisi  pada  mencit  jantan.  Sedangkan  antara  kelompok  yang memiliki  nilai  signifikansi  besar  dari  0.05  menunjukkan  tidak  ada  perbedaan  secara signifikan  dalam  penyembuhan  luka  insisi  pada  mencit  jantan.  Sehingga  dari  data tersebut kelompok kontrol positif berbeda secara signifikan terhadap semua kelompok uji ekstrak dan kelompok kontrol negatif. Sedangkan kelompok uji yang menggunakan isolat  dapat  mempercepat  proses  penyembuhan  luka  insisi  pada  mencit  jantan dibandingkan  kelompok  kontrol  positif  dan  negatif.  Namun  tidak  ada  perbedaan signifikan antara isolat dengan variasi konsentrasi, dimana dapat disimpulkan bahwa semakin konsentrasi tidak berpengaruh terhadap lama penyembuhan luka insisi pada mencit jantan.

## 4.  Kesimpulan
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa  isolate daun jarak cina mengandung senyawa golongan flavonoid  yang memiliki efektifitas dalam penyembuhan luka. Isolat aktif memiliki karakterisasi panjang gelomabng 425 nm  dengan  absorbansi  0,071. Gugus  fungsi  yang  diperoleh  diantaranya  O-H  (Fenol)  pada serapan 3448.72 cm-1, gugus C=O (Keton) sebagai ciri umum senyawa golongan flavonoid pada serapan  1635,64  cm-1 dan  molekul  alkana  (C-H)  alifatik  pada  serapan 2852,72  cm-1,  2920.23 cm-1 dan 2954.95 cm-1 serta C-O (Alkohol) pada serapan 1290.38 cm -1 Isolat aktif dari sampel Daun Jarak Cina (Jathropa multifida linn) dengan variasi konsentrasi 10%, 15% dan 20% memliki efektifitas penyembuhan luka lebih cepat dibandingkan kontrol positif dan negatif. Namun tidak menunjukan perbedaan signifikan dari masing – masing konsentrasi.

## Referensi
[1]   Purnama,  Handi.,  Sriwidodo.,  dan  Mita,  Soraya  Ratnawulan.  (2016). Review Sistematik: Proses Penyembuhan Dan Perawatan Luka. Farmaka. Bandung. 15(2): 251- 258.
[2]   Muhammad,  Iqbal; Masood,  Jawaid; Asif,  Qureshi; Sidra,  Iqbal.  (2015). Effect  of povidone-iodine  irrigation  on  post  appendectomy  wound  infection:  randomized  control trial .JPMI-Journal of Postgraduate Medical Institute. 2015; 29 (3): 160-164
[3]   Latifa,  Isma  Olivia.  (2015). Uji  Aktifitas  Lendir  Bekicot  (Achatina  Fulica)  Terhadap Tingkat Kesembuhan Luka Incisi Makroskopis dan  Mikroskopis Pada Ular Sanca Batik (Phyton Reticulatus). Skripsi. Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga:
Surabaya.
[4]   Ismail,  F.  (2022). Karakterisasi  metabolit  sekunder  ekstrak  daun  jarak  cina  (jathropa multifida  linn)  dan  efektifitasnya  terhadap  penyembuhan  luka  insisi  pada  mencit. Gorontalo : universitas negeri gorontalo
[5]  Yunita. Liana dan Yofa Anggriani Utama. (2018) . Efektivitas Pemberian Ekstrak Daun Betadine (Jatropha multifida) Terhadap Ketebalan Jaringan Granulasi dan Jarak Tepi Luka Sayat Tikus Putih (Rattus norvegicus). Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan. Bina Husada, Palembang
[6]  Harborne,  JB.  (1987). Phytochemical  Methods  :  A gide  to modern  techniques  pf  plant analysis 3 rd Edition. Chapman and Hall : London
[7]  Putri, R.R., R.F. Hakim, dan S. Rezeki.  (2017). Pengaruh Ekstrak Daun Tapak Dara (Catharanthus  roseus)  terhadap  Jumlah  Fibroblas  pada  Proses  Penyembuhan  Luka  di Mukosa Ora l. Journal Caninus Denstistry
[8]   Budiyanto, A. (2015). Potensi Antioksidan, Inhibitor Tirosinase dan Nilai Toksisitas dari Beberapa Spesies Tanaman Mangrove di Indonesia . Bogor: Institut Pertanian Bogor.
[9]  Nurhasnawati,  H.,  Sukarmi,  dan  Handayani,  F.  (2017). Perbandingan  Metode Ekstraksi Maserasi dan Sokhletasi Terhadap Aktivitas Antioksi dan Ekstrak Etanol Daun Jambu Bol (Syzygium malaccense L,). Jurnal Ilmiah Manuntung. Vol 3. No 1.
[10]  Rosamah, E. (2019). Kromatografi lapis tipis : Metode sederhana dalam analisis kimia tumbuhan berkayu . Mulawarman university presskalimantan timur samarinda [11]  Nurfiddin Farid, Ummu Kalsum, Juaella Yustisi, Resky Wahyuli . (2018). Formulasi sediaan  gel  basis  HPMC  ekstrak  etanol  daun  jarak  cina  (Jatropha  multifida)  sebagai penyembuhan  luka  sayat  pada  tikus  putih  (Rattus  norvegicus) Sasambo  Journal  of Pharmacy
[12]  Pavia, D.L, et al. (2008 ). Introduction to Spectroscopy, Fourth Edition . United. States of America: Brooks Cole.
[13]  Roswita L. Wusu , Antonius R. B. Ola, Mikhael F. Bitin Berek , Prisilia T. Dapa, Yohanes G. Lamak. (2022). Fraksinasi Dan Analisis Kromatografi Lapis Tipis Ekstrak Umbi Bunga Kelelawar Hitam (Tacca Chantrieri André) Universitas Nusa Cendana [14]  Ponnusha  BS,  Subramaniyam  S,  Pasupathi  P,  Subramaniyam  B  Virumandy  R. (2011) Antioxidant  and  Antimicrobial  Properties  of  Glycine  max .  A  review. International Journal of Current Biological and Medical Sciece. 2011; 1(2):49-62.
[15]  Mustapa.M., et al. (2021). Karakterisasi Senyawa Minyak Atsiri Ekstrak Etil Asetat Bawang  Putih  (Allium  sativum  L.)  Indonesian  Journal  of  Pharmaceutical  (e- journal), 1(3), 136-141
[16] Hamsidar  H. et  al. 2019. Determination  of  secondary  metabolites,  toxicity  and antioxidant activites of bark extracts of artocarpus lanceifolius Roxb, Int. res. J. Pharm