Jurnal Nukleus Peternakan (Desember  2021) Volume 8, No. 2:92-100                      pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Djita et al .: Pengaruh Penambahan Ekstrak Bawang Merah…..

## PENGARUH PENAMBAHAN EKSTRAK BAWANG MERAH (Allium cepa) DALAM PENGENCER TRIS - KUNING TELUR TERHADAP KUALITAS SPERMATOZOA SAPI BALI PADA PENYIMPANAN IN VITRO
(THE EFFECT OF ADDITIONAL ONION (Allium cepa) EXTRACT IN TRIS - EGG YOLK EXTENDER ON THE SPERM QUALITY OF BALI BULLS IN VITRO STORAGE)
Fian K. Djita * , Wilmientje M. Nalley, Thomas M. Hine, Aloysius Marawali Fakultas Peternakan, Universitas Nusa Cendana, Jln. Adisucipto Penfui, Kupang 850001
* Correspondent author, email: djitafian@gmail.com

## ABSTRAK
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  pengaruh  penambahaan  ekstrak  bawang  merah  (EBM) kedalam pengencer Tris-kuning telur (T-KT) terhadap kualitas  spermatozoa sapi bali. Sebanyak tiga ekor sapi bali  jantan  berumur  3-4  tahun  sebagai  sumber  semen,  ditampung  dua  kali  seminggu  menggunakan  metode vagina buatan. Semen yang berkualitas baik, motilitas 79%, viabilitas 84,63%, abnormalitas 2,93% diencerkan dengan  pengencer  T-KT  dengan  penambahan  EBM:  P0:  0%;  P1  1%;  P2:  2%;  P3:  3%;  P4:  4%;  dan  P5:  5%. Semen  yang  telah  diencerkan  dipeservasi  dalam  lemari  pendingin  bersuhu  3-5oC  dan  dilakukan  evaluasi terhadap  kualitas  spermatozoa  setiap  24  jam.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  penambahan  EBM  dalam pengencer T-KT berpengaruh positif terhadap kualitas spermatozoa sapi bali. Penambahan EBM 3% (P3) dalam pengencer  T-KT  menghasilkan  kualitas  spermatozoa  yang  lebih  tinggi  (P<0,05)  dari  pada  lima  perlakuan lainnya  yaitu  motilitas  mencapai  42,01%,  viabilitas  48,74%,  dan  abnormalitas  4,13%  selama  enam  hari preservasi. Disimpulkan bahwa penambahan ekstrak bawang merah ke dalam pengencer Tris-kuning telur dapat mempertahankan kualitas spermatozoa sapi bali, dengan level ekstrak bawang merah terbaik adalah 3%.
Kata-kata kunci : Tris, kuning telur, ekstrak bawang merah, spermatozoa, sapi bali

## ABSTRACT
The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  effect  of  adding  onion  extract  (OE)  to  Tris-egg  yolk  (T-EY) diluent  on  the  quality  of  bali  bulls  spermatozoa.  The  semen  of  three  bali  bulls  aged  3-4  years  were  collected twice  a  week  using  the  artificial  vaginal  method.  Semen  with  good  quality,  motility  79%,  viability  84.63%, abnormality 2.93% diluted  with T-EY diluent  with the addition of OE: T0: 0%; T1 1%; T2: 2%; T3: 3%; T4: 4%; and T5: 5%. The diluted semen was preserved in a refrigerator at 3-5 °C and evaluated for the quality of the spermatozoa every 24 hours. The results showed that the addition of OE in T-EY diluent had a positive effect on the  quality  of  bali  bulls  spermatozoa.  The  addition  3%  of  OE  (T3)  in  T-EY  diluent  resulted  in  higher spermatozoa  quality  (P  <0.05)  than  the  other  treatments,  namely  motility  42.01%,  viability  48.74%,  and abnormalities 4.13% on the sixth day of preservation. It was concluded that the addition of onion extract in Tris -  egg  yolk  diluents  could  improve  the  quality  of  bali  bulls  spermatozoa,    with  the  best  level  of  onion  extract being 3%.
Keywords: Tris, egg yolk, onion extract, spermatozoa, bali bulls

## PENDAHULUAN
Peningkatan  populasi  dan  mutu  genetik ternak sapi dapat diupayakan melalui penerapan teknologi  reproduksi  inseminasi  buatan  (IB). Keberhasilan  program  IB  dapat  dicapai  jika sejumlah  faktor  pendukung  dapat  dipenuhi secara  optimal,  diantaranya  adalah  kualitas semen  yang  dihasilkan  oleh  seekor  pejantan. Kualitas  semen  yang  baik  akan  meningkatkan peluang  terjadinya  pembuahan  sel  telur  oleh sperma  tersebut  yang  selanjutnya  sel  telur tersebut akan berkembang menjadi embrio.
Kualitas semen hanya dapat dipertahankan jika ditambahkan bahan pengencer  yang  di  dalamnya  terkandung berbagai  nutrisi,  antioksidan,  buffer,  anti  cold shock  serta  berbagai  bahan  lainnya  yang  secara keseluruhan dapat menunjang kehidupan sperma selama  berada dalam  lingkungan  in  vitro.  Salah satu  bahan  pengencer  yang  umum  digunakan untuk  preservasi  spermatozoa  sapi  adalah  tis- kuning telur. Pengencer T-KT menjaga motilitas spermatozoa karna pengencer T-KT
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember  2021) Volume 8, No. 2:92-100                      pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Djita et al .: Pengaruh Penambahan Ekstrak Bawang Merah…..
mengandung  nutrisi  berupa  lipoprotein  dan fosfolipid  seperti  fosfatidikolin  yang  dapat melindungi dan mencegah kerusakan membrane spermatozoa  akibat  cold  shock  dan  bersifat buffer.
Selama preservasi semen akan mengalami proses metabolisame, menghasilkan zat peroksida  lipid, apabila  bereaksi  dengan  radikal bebas,  dapat  menyebabkan  integritas  dan kehidupan sel terganggu sehingga mengakibatkan  kematian  pada  spermatozoa. Radikal  bebas  juga  dapat  menurunkan  fungsi spermatozoa  yaitu  mengoksidasi  membrane  sel yang terdiri dari lipid (lipid peroxidation) hal ini akan mempercepat kematian pada spermatozoa.
Untuk dapat mengurangi kematian spermatozoa  akibat  peroxidation  lipid  perlu
penambahan antioksidan pada pengencer semen. Bawang  merah  mengandung  antioksidan  alami berupa  senyawa  Quercetin  yang  cukup  tinggi. Penambahan  ekstrak  bawang  merah  (EBM) dalam  pengencer  ringer’s  dextrose  dapat mempertahankan daya hidup spermatozoa kambing  peranakan etawah  (PE)  yang  disimpan pada suhu ruang.
Dalam  penelitian  ini,  spermatozoa  sapi bali  dipreservasi  dalam  pengencer  T-KT  yang ditambahkan dengan berbagai konsentrasi EBM. Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  pengaruh  penambahan  EBM  ke dalam  pengencer  T-KT  terhadap  kualitas spermatozoa sapi bali.

## METODE PENELITIAN

## Materi Penilitian
Semen  ditampung  dari tiga  ekor  sapi  bali jantan, berumur 3-4 tahun dengan kondisi tubuh dan  organ  reproduksi  yang  normal.  Ternak tersebut dipelihara dalam kandang individu yang dilengkapi  dengan  tempat  makan  dan  minum. Pakan  hijauan  diberikan  pada  sapi  sebanyak 10%  dari  bobot  badan  ternak  serta  pemberian konsentrat sebanyak 0,5kg/ekor/hari dan pemberian air minum secara ad libitum.

## Penyiapan Larutan Tris
Timbang  3,634  gram  Tris    hydroxy aminomethane,  0,5  gram  fruktosa  dan  asam sitrat 1,99 gram ke dalam 100 mL aquades pada gelas erlenmeyer, kemudian dihomogenkan.

## Penyiapan Kuning Telur
Telur  ayam  dicuci  dengan  air  hingga bersih  dan  selanjutnya  disterilkan  dengan  kapas yang  beralkohol  70%.  Pecahkan  kulit  telur, pisahkan  kuning  telur  dan  putih  telur  kemudian letakan  pada  kertas  saring  lalu  dimiringkan sambil  diputar  agar  semua  putih  telur  terserap habis,  kemudian  pecahkan  membrane  vitellin pada  kuning  telur,  masukkan  kuning  telur  ke dalam gelas ukur.

## Pembuatan Ekstrak Bawang Merah
(a).  Memilih  bawang  merah  segar,  kupas dan  cuci  hingga  bersih,  (b).  Kemudian  potong kecil  bawang  merah  yang  telah  dibersihkan, dikeringkan  selama  24  jam  pada  suhu  105oC, (c).  Bawang  merah  yang  telah  dikeringkan diblender  hingga  halus,  timbang  200mg  dengan
menggunakan  timbangan  elektrik,  kemudian larutkan dengan 15mL aquabides, (d). Selanjutnya  cairan  bawang  merah  disentrifus selama  15  menit  dengan  kecepatan  3000  rpm, (e).  Supernatant  di  ambil  sebagai  ekstrak bawang merah (EBM).

## Pembuatan Pengencer Dasar
Pembuatan pengencer dasar menggunakan 80  mL  pengencer  Tris  dan  tambahkan  20  mL kuning  telur,  homogenkan  hingga  tercampur menggunakan  stirer,  selanjutnya  tambahkan antibiotic  dan  EBM  sesuai  perlakuan,  yaitu:  P0 =  T-KT  100%  +  EBM  0%,  P1  =  T-KT  99%  + EBM 1%, P2 = T-KT 98% + EBM 2%, P3 = T- KT  97%  +  EBM  3%,  P4  =  T-KT  96%  +  EBM 4%, P5 = T-KT 95% + EBM 5%.

## Penampungan dan Evaluasi Semen
Semen  di  tampung  menggunakan  metode vagina  buatan,  semen  segar  yang  diperoleh  di evaluasi  secara  makroskopis  meliputi  volume, warna, konsistensi dan pH dan secara mikroskopis  meliputi  gerakan  massa,  motilitas, konsentrasi, viabilitas dan abnormalitas.
Secara  makroskopis:  Volume  semen dibaca  secara  langsung,  dengan  melihat  pada tabung  penampung  berskala  dan  atau  dapat diukur menggunakan pipet berskala. Konsistensi atau  derajat  kekentalan  dapat  diketahui  dengan cara  memiringkan  tabung  yang  berisi  semen secara  perlahan-lahan  sambil  melihat  gerakan perpindahan  semen  ke  posisi  semula.  Jika pergerakan  semen  dalam  tabung  gerakannya lambat maka semen memiliki konsistensi kental,
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember  2021) Volume 8, No. 2:92-100                      pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Djita et al .: Pengaruh Penambahan Ekstrak Bawang Merah…..
dan  jika  gerakannya  agak  cepat  maka  semen memiliki konsistensi sedang, sedangkan gerakannya  sangat  cepat  maka  semen  memiliki konsistensi  encer.  Derajat  keasaman  semen dapat  diketahui  dengan  cara  meneteskan  semen diatas  kertas  indikator  pH  berskala  1-14. Perubahan  warna  pada  kertas  pH  tersebut disesuaikan  dengan  standar  warna  pada  kertas indikator pH.
Secara  mikroskopis:  Gerakkan  massa spermatozoa  dikategorikan  dalam  3  golongan, yaitu  gerakkan  cepat  berpindah,  seperti  awan tebal  dan  gelap,  celah  antara  gumpalan  awan satu  dengan  yang  lainnya  sedikit  atau  rapat (+++),  gerakan  cepat,  terbentuk  awan  tetapi agak  terang  gumpalannya  (++),  dan  terlihat gerakan  sperma  sendiri,  tidak  ada  gumpalan awan (+).
Motilitas  spermatozoa  ditentukan  melalui pengamatan  spermatozoa  di  bawah  mikroskop cahaya  dengan  pembesaran  lensa  objektif 40×10. Penilaian terhadap motilitas spermatozoa adalah  spermatozoa  yang  bergerak  progresif ditentukan secara  subjektif  pada  sepuluh  lapang pandang  yang  berbeda,  nilai  yang  diberikan berkisaran  antara  0%  dan  100%  dengan  skala 5%.
Konsentrasi  spermatozoa  menunjukan jumlah  sel  spermatozoa  tiap  satuan  valume semen  dengan  cara  diamati  dibawah  dengan pembesaran  40×10.  Konsentrasi  spermatozoa dihitung dengan menggunakan haemocytometer, dapat dihitung menggunakan rumus. Konsentrasi  SP  =  X  ×  Volume  semen  ×  106 sperma/ml.  X  =  Jumlah  spermatozoa  hasil perhitungan.
Viabilitas  spermatozoa  dilakukan  dengan cara  memaparkan  spermatozoa  pada  pewarnaan differensial eosin-nigrosin dengan dibuat preparat  ulas  tipis.  Spermatozoa  hidup  ditandai dengan  spermatozoa  tidak  menyerap  warna merah (bening atau putih), sedangkan spermatozoa  mati  akan  terlihat  penyerapan warna  merah  ungu.  Pengamatan  dilakukan menggunakan  mikroskop  dengan  pembesaran 40×10,  hitung  spermatozoa  dengan  total  200 spermatozoa atau pada 10 lapang pandang yang
berbeda.  Perhitungan  nilai  viabilitas  diperoleh sesuai  rumus:  Viabilitas=(Jumlah  spermatozoa hidup)/(Total spermatozoa) x 100 %.
Abnormalitas  spermatozoa  sama  dengan evaluasi  viabilitas  dapat  diketahui  dengan  cara semen diwarnai dengan melihat bentuk morfologi  spermatozoa  yang  tidak  normal  baik abnormalitas primer maupun sekunder. Abnormalitas=(Jumlah  spermatozoa  abnormal)/ (Total spermatozoa) x 100 %.

## Pengenceran dan Preservasi Semen
Semen yang digunakan, memiliki motilitas  >  70%,  konsentrasi  >  800×106,  dan abnormalitas  <  15%,  selanjutnya  diencerkan menggunakan pengencer T-KT yang disuplementasi  dengan  ekstrak  bawang  merah pada  berbagai  konsentrasi:  T-KT  100%  +  EBM 0%  (P0),  T-KT  99%  +  EBM  1%  (P1),  T-KT 98%  +  EBM  2%  (P2),  T-KT  97%  +  EBM  3% (P3), T-KT 96% + EBM 4% (P4), T-KT 95% + EBM  5%  (P5).  Setiap  perlakuan  diulang sebanyak lima kali. Penelitian dirancang dengan menggunakan  rancangan  acak  lengkap.  Semen yang telah diencerkan, dipreservasi pada suhu 3- 5oC  dan  evaluasi  dilakukan  setiap  24  jam terhadap motilitas, viabilitas, abnormalitas.

## Variabel Penelitian
Variabel  yang  diukur  dalam  penelitian adalah: (1) motilitas spermatozoa (%), ditentukan  melalui  pengamatan  spermatozoa  di bawah  mikroskop  cahaya  dengan  pembesaran 40x10. Penilaian terhadap persentase spermatozoa  motil  adalah  spermatozoa  yang bergerak  progresif  ditentukan  secara  subjektif pada  5  lapang  pandang  yang  berbeda;  (2) Viabilitas  spermatozoa  (%),  (3)  Abnormalitas spermatozoa (%).

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh    dihitung  rata-rata dan  standard  deviasi  dan  dianalisis  dengan ANOVA  dan  dilanjutkan  dengan  Uji  Duncan dengan  bantuan  softwere  SPSS  20.0  for windows.
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember  2021) Volume 8, No. 2:92-100                      pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Djita et al .: Pengaruh Penambahan Ekstrak Bawang Merah…..

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Karakteristik Semen Segar Sapi Bali
Karakteristik semen segar yang digunakan selama penelitian memiliki kualitas seperti yang ditampilkan pada Tabel 1.
Volume  semen  yang  diperoleh  4,52  ± 1,32  mL  dengan  kisaran  4  –  5  mL.  Hasil penelitian ini masih berada pada kisaran volume semen sapi yang ditampilkan oleh Hafez (2000) yaitu  1-15  mL.  Volume  semen  ini  hampir  sama dengan  hasil  penelitian  Prastowo et  al ,  (2018) pada sapi  bali  yaitu  4,83 ±  1,40  mL.  Susilawati et  al .  (1993)  menyatakan  bahwa  semen  yang berkualitas  dari  seekor  pejantan  unggul  dapat dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor,  antara  lain umur  pejantan,  sifat  genetika,  suhu,  musim,
frekuensi ejakulasi dan makanan. Hasil penelitian  Kelso et  al .  (1997)  menyatakan bahwa makin tua umur sapi maka makin rendah kualitas spermatozoa yang dihasilkan, selanjutnya  Susilawati et  al .  (1993)  melaporkan bahwa  pejantan  yang  berumur  2-7  tahun  dapat menghasilkan  semen  terbaik  dengan  angka kebuntingan  yang  tinggi  pada  betina  yang dikawini  dibanding  dengan  pejantan  umur  di luar  interval  tersebut.  Umur  juga  mempunyai hubungan  yang  signifikan  dengan  musim sehingga dapat mempengaruhi volume ejakulasi dan  presentase  motilitas  permatozoa  dan konsentrasi (Mathevon et al ., 1998).
Tabel 1. Karakteristik semen segar sapi bali Karakteristik semen Rerata ± standar deviasi Volume (mL) 4,52 ± 1,32 Warna Krem Konsistensi Sedang pH 6,58 ± 0,16 Gerakan Massa ++ - +++ Konsentrasi (x 10 6 sel/mL) 1.624,40 ± 105,35 Motilitas (%) 79 ± 2,23 Viabilitas (%) 84,63 ± 1,69 Abnormalitas (%) 2,93 ± 0,66
Warna  semen  sapi  bali  dari  hasil penelitian  adalah  krem,  hasil  ini  sesuai  dengan pendapat  Feradis  (2010)  yang  menyatakan bahwa  semen  sapi  bali  yang  normal  berwarna seperti  putih  susu,  krem,  keputih-putihan  dan keruh.  Di  perkirakan  10%  sapi  menghasilkan semen  yang  normal  dengan  warna  kekuning- kuningan yang disebabkan oleh adanya riboflavin yang dibawah oleh suatu gen autosom resesif dan tidak mempunyai pengaruh terhadap fertilisasi.  Volume  semen  yang  rendah  dan konsentrasi spermatozoa yang tinggi menyebabkan  warna  semen  menjadi  krem  atau putih  susu.  Hasil  ini  sesuai  dengan  laporan Nabilla et  al .  (2018)  dimana  semen  sapi  bali berwarna putih susu dan krem.
Konsistensi  semen  dari  hasil  penelitian termasuk  kategori  sedang,  hasil  ini  sesuai dengan  hasil  penelitian  Nabilla et  al .  (2018) pada sapi bali umur produktif dan non produktif yaitu  konsistensi  semen  sedang.  Suyadi et  al . (2012)  menyatakan  bahwa  warna  semen, konsistensi dan konsentrasi spermatozoa
mempunyai hubungan yang erat. Semen dengan konsentrasi sperma yang tinggi akan menghasilkan konsistensi yang kental dan warna semen  krem  atau  putih  susu,  demikian  juga sebaliknya.  Konsentrasi  sperma  pada  semen segar  dari  hasil  penelitian  ini  mencapai 1.624,406  ±  105,35  /mL.  Hasil  ini  masih termasuk  dalam  kisaran  normal  sesuai  dengan hasil  laporan  penelitian  Ismaya  (2014)  yang menjelaskan  bahwa  konsistensi  sedang  hingga kental  atau  warna  krem  maka  konsentrasi spermatozoa berkisar 1.000-2.000 juta spermatozoa/mL.
Derajat  keasaman  (pH)  semen  sapi  bali hasil  penelitian  yaitu  6,58  ±  0,16.  Hasil penelitian  ini  sama  dengan  laporan  prastowo et al ., (2018) yaitu 6,51±0,12 pada kelompok umur sapi bali yang berbeda. Butar (2009) menyatakan  bahwa  pH  semen  segar  berkisar antar 6,4-7,8.
Gerakan  massa  semen  segar  sapi  bali yang  diperoleh  dari  penelitian  ini  yaitu,  ++ hingga  +++.  Hasil  penelitian  ini  sedikit  lebih tinggi  dari  yang  dilaporkan  oleh  Anwar et  al .
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember  2021) Volume 8, No. 2:92-100                      pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Djita et al .: Pengaruh Penambahan Ekstrak Bawang Merah…..
(2014)  dengan  nilai  gerakan  massa  ++.  Hal  ini menunjukan  bahwa  semen  segar  sapi  bali memiliki gerakan yang aktif. Menurut Arifiantini et al (2006) gerakan massa pada sapi lokal  seperti  sapi  bali  diperoleh  rataan  sebesar 2,7  atau  setara  dengan  (++/+++).  Hafez,  (2000) menyatakan  bahwa  perbedaan  gerakan  massa bisa juga disebabkan oleh perbedaan bangsa dan umur ternak.
Presentase
motilitas progresif spermatozoa sapi bali hasil penelitian ini adalah 79 ± 2,23% dengan kisaran 75 – 80%. Hasil ini lebih  tinggi  dari  laporan  Anwar et  al .  (2014) dengan  nilai  motilitas  hanya  sebesar  62,50  ± 5,00%.  Menurut  Ratnawati  (2008),  motilitas individu spermatozoa sapi bali adalah 88,7%.
Rataan  presentase  viabilitas  spermatozoa sapi  bali  yang  diperoleh  yaitu  84,63  ±  1,69%. Hasil  ini  hampir  sama  dengan  Rhasil  penelitian Rizal  (2009)  dan  Ratnawati et  al .  (2017)  yakni
87 dan 85%.. Viabilitas spermatozoa yang layak untuk pembuatan semen encer atau semen beku adalah  minimal  60%  sampai  75%  spermatozoa hidup Hafes (2000).
Nilai  abnormalitas  spermatozoa  penelitan ini  adalah  sebesar  2,93  ±  0,66%.  Nilai  yang diperoleh  masih  berada  dalam  kisaran  normal sesuai  dengan  pernyataan  Hafez  (2000)  yaitu abnormalitas  spermatozoa  tidak  boleh  melebihi 20%.

## Pengaruh  Perlakuan  terhadap  Motilitas Spermatozoa
Motilitas  atau  daya  gerak  spermatozoa digunakan sebagai penilaian kemampuan spermatozoa untuk membuahi sel telur (Widiastuti, 2001).
Rataan motilitas spermatozoa  sapi  bali  berdasarkan  perlakuan dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Pengaruh perlakuan terhadap motilitas spermatozoa (%)
Hari Perlakuan P0 P1 P2 P3 P4 P5 0 79.20±2.18 a 79.30±2.04 a 79.22±2.27 a 79.43±2.21 a 79.30±2.17 a 79.2±2.25 a 1 69.94±2.92 c 70.42 ±2.25 c 72.62±2.13 bc 76.22±2.23 a 73.81±1.59 ab 72.24±2.34 bc 2 60.72±2.82 c 61.93±2.60 c 65.81±1.75 b 69.33±1.94 a 66.03±1.95 b 65.25±2.19 b 3 51.29±2.31 d 52.21±2.83 cd 55.02±1.94 bc 63.22±3.16 a 56.63±2.17 b 55.91±2.89 b 4 42.30±2.55 b 43.45±2.50 b 45.73±2.86 b 57.09±2.59 a 44.86±2.15 b 44.69±3.62 b 5 37.15±4.22 b 36.63±2.96 b 38.64±1.89 b 48.79±3.73 a 37.89±0.99 b 37.04±2.47 b 6 24.23±2.28 d 27.27±1.06 c 30.09±1.47 b 42.01±1.84 a 31.46±2.21 b 30.40±1.09 b a,b,c,d Superskrip yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaan yang nyata (P<0,05)
Hasil  analisis  statistik  terhadap  motilitas pasca  pengenceran  menunjukkan  perbedaan yang  tidak  nyata  (P>0,05)  antara  perlakuan, namun  setelah  penyimpanan  selama  1  -  6  hari menunjukkan  perbedaan  yang  nyata  antara perlakuaan (P<0,05). Selama enam hari preservasi,  motilitas  spermatozoa  tertinggi teramati  pada  P3  yaitu  42,01±1,84%  dan terendah pada perlakuan P0 yaitu 24,23±2,28%.
Angka  pada  Tabel  2  memperlihatkan terjadi  penurunan  motilitas  spermatozoa  selama enam  hari  preservasi.  Penurunan  motilitas  ini dapat  dikaitkan  dengan  produksi  asam  laktat yang  tinggi  menyebabkan  spermatozoa  mati. Sugiarti et  al (2004),  menyatakan  bahwa kualitas  spermatozoa  akan  menurun  selama penyimpanan  yang  lama  adanya  asam  laktat hasil  proses  metabolisme  sel,  sehingga  medium menjadi  semakin  asam.  Kondisi  ini  juga  dapat bersifat  racun  terhadap  spermatozoa  yang
akhirnya  dapat  menyebabkan  kematian  pada sperma.
Rataan  penurunan  motilitas  terendah teramati pada perlakuan P3: 6,24% dan tertinggi teramati  pada  perlakuan  P0:  9,11%  diikuti  oleh P1:  8,62%,  P2:  8,18%,  P4:  7,97%,  dan  P5: 8,13%  selama  penyimpanan,  fenomena  ini menyimpulkan bahwa penambahan EBM memberikan daya protektif terhadap spermatozoa  selama  penyimpanan.  Hal  ini sesuai laporan Jamshid (2012) bahwa penambahan EBM sebanyak 15 mg berpengaruh terhadap perubahan motilitas spermatozoa tikus. Diperkuat  oleh  pendapat  Khaki et  al .  (2010) yang menyatakan bahwa quercetin yang terdapat dalam  ekstrak  bawang  merah  memiliki  efek menguntungkan yang signifikan terhadap motilitas,viabilitas sperma, dan total testosterone yang  efektif  untuk  menjaga  parameter  sperma
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember  2021) Volume 8, No. 2:92-100                      pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Djita et al .: Pengaruh Penambahan Ekstrak Bawang Merah…..
yang  sehat  dan  fungsi  reproduksi  pada  tikus percobaan.
Bawang  merah  juga  sebagai  obat tradisional karna memiliki senyawa berupa aliin dan  alisin  yang  bersifat  bakterisida  (Rukman, 1994).  Menurut  (Rodrigues et  al ,  2003), kandungan  gizi  dari  bawang  merah  ialah karbohidrat  (11,0  g),  protein  (1,2  g),  serat  (0,6 g), lemak (0,30%) dan beberapa vitamin seperti vitamin  A  (0,012  mg),  vitamin  C  (11  mg), thiamin (0.08 mg), riboflavin (0,01 mg), niansin (0,2  mg)  dan  beberapa  mineral  seperti  fosfor, kalsium, sodium, besi dan kalium.
Motilitas merupakan salah satu parameter yang perlu diperhatikan terhadap kualitas semen yang akan diproses untuk keperluan IB. Dengan penambahan  ekstrak  bawang  merah  sebanyak 3% memberikan perbedaan yang sangat signifikan  dalam  mempertahankan  motilitas spermatozoa  selama  enam  hari  penyimpanan sebesar 42,01±1,84%, berbeda dengan penambahan 0%, 1%, 2%, 4%, dan 5%. Hasil ini menunjukkan  adanya  pengaruh  yang  baik setelah  penambahan  ekstrak  bawang  merah terhadap  motilitas  spermatozoa  selama  enam hari  penyimpanan.  Blegur et  al .  (2019)  dalam penelitiannya  melaporkan  bahwa  perlakuan  T- KT  –  VCO  mampu  mempertahankan  motilitas spermatozoa  sapi  bali  yaitu  43,10  ±  2,83% dengan lama penyimpanan selama enam hari.
Tingginya  motilitas  spermatozoa  pada perlakuan  P3  mungkin  ada  kaitannya  aktivitas antioksidan  yang  dihasilkan  oleh  senyawa quercetin  yang  terkandung  di  dalamnya  ekstrak bawang  merah. Khaki et al . (2010) menyatakan bahwa  quercetin  yang  terdapat  dalam  ekstrak bawang merah dapat mengurangi stress oksidatif pada spermatozoa tikus jantan.

## Pengaruh  Perlakuan  terhadap  Viabilitas Spermatozoa
Viabilitas merupakan salah satu parameter kualitas  semen  yang  perlu  diperhatikan  selain motilitas dan abnormalitas. Viabilitas spermatozoa merupakan indikator untuk menilai kualitas  semen,  semakin  tinggi  presentase viabilitas  maka  semakin  baik  kualitas  semen tersebut (Rizal dan Herdis, 2008).
Nilai  viabilitas  spermatozoa  dari  hasil penelitian dapat dilihat pada Tabel 3. Dari tabel tersebut  dapat  dilihat  adanya  penurunan  nilai presentase viabilitas spermatozoa, namun penurunan  tidak  sama  pada  masing-masing perlakuan. Rataan penurunan viabilitas terendah masih  terdapat  pada  perlakuan    P3:  5,98 %  dan tertinggi pada perlakuan P0: 9,32%, diikuti oleh P1:  8,29%,  P2:  7,94%,  P4:  7,60%,  dan P5:8,25% selama preservasi.
Tabel 3. Pengaruh perlakuan terhadap viabilitas spermatozoa (%)
Hari Perlakuan P0 P1 P2 P3 P4 P5 0 84.34±1.12 a 84.47±1.06 a 84.31±0.93 a 84.64±1.32 a 84.22±0.78 a 84.08±0.89 a 1 74.48±3.79 b 76.03±4.01 b 77.44±2.94 ab 81.31±1.26 a 78.00±1.92 ab 77.00±2.99 b 2 64.59±2.88 c 70.70±4.90 b 70.50±2.20 b 75.78±2.17 a 71.59±1.68 b 69.72±2.51 b 3 55.57±2.73 c 60.21±4.96 b 60.33±2.71 b 69.45±2.15 a 62.26±1.68 b 61.08±2.58 b 4 46.95±2.18 b 52.12±6.69 b 51.14±3.41 b 64.74±2.75 a 50.47±2.41 b 49.79±2.50 b 5 39.48±2.65 b 44.49±6.76 b 43.99±2.49 b 56.22±3.74 a 43.13±1.67 b 42.28±2.02 b 6 28.42±2.06 c 34.74±6.93 b 36.64±4.75 b 48.74±2.34 a 38.65±6.12 b 34.61±1.27 b a,b,c Superskrip yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaan yang nyata (P<0,05)
Hasil  analisis  statistik  terhadap  viabilitas pada  penyimpanan  hari  ke-1  sampai  hari  ke-6 menunjukkan  perbedaan  yang  nyata  (P<0,05) antara  perlakuan.  Menurut  Hidayahturrahmah (2007)  viabilitas  dapat  dipengaruhi  oleh  nutrisi. Nutrisi  akan  digunakan  oleh  spermatozoa  untuk dijadikan  energi  sehingga  apabila  kebutuhan nutrisi berkurang dapat mengakibatkan viabilitas spermatozoa menurun.
Viabilitas  spermatozoa  sapi  bali  dalam perlakuan  P3  lebih  tinggi  (P<0,05)  dari  kelima
perlakuan  lainnya,  hal  ini  membuktikan  bahwa penambahan  ekstrak  bawang  merah  dapat mempertahankan  viabilitas  spermatozoa  dengan menurunkan kadar radikal bebas.
Presentase  viabilitas  spermatozoa  sapi bali  dalam  penelitian  ini  adalah  berkisar  antara 48.74  ±  2.34%,  hasil  ini  hampir  sama  dengan laporan  Blegur et  al .  (2019)  dengan  perlakuan T-KT  –  VCO  yang  mampu  mempertahankan viabilitas  sebesar  48.68  ±  2.25%,  hingga  6  hari penyimpanan.
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember  2021) Volume 8, No. 2:92-100                      pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Djita et al .: Pengaruh Penambahan Ekstrak Bawang Merah…..
Pengaruh  Perlakuan  terhadap  Abnormalitas Spermatozoa
Abnormalitas merupakan salah satu indikator  penting  dalam  menentukan  kualitas spermatozoa karena sperma yang abnormal tidak dapat  membuahi  sel  telur.  Proses  fertilisasi  ikut dipengaruhi  oleh  bentuk  morfologi  dari  sel
spermatozoa,  jika  abnormalitas  sel  spermatozoa terlalu tinggi maka dapat menyebabkan menurunnya tingkat fertilisasi pada spermatozoa (Ax et al ., 2000). Nilai abnormalitas spermatozoa sapi bali selama penelitian disajikan pada Tabel 4.
Tabel 4. Pengaruh perlakuan terhadap abnormalitas spermatozoa (%)
Hari Perlakuan P0 P1 P2 P3 P4 P5 0 2.97±0.61 a 2.83±0.46 a 2.91±0.79 a 2.74±0.46 a 3.02±0.52 a 2.98±0.42 a 1 3.39±0.60 a 3.12±0.60 a 3.14±0.67 a 2.96±0.59 a 3.23±0.46 a 3.21±0.50 a 2 3.66±0.40 a 3.41±0.45 a 3.46±0.45 a 3.34±0.43 a 3.54±0.46 a 3.69±0.45 a 3 3.90±0.46 a 3.70±0.37 a 3.64±0.39 a 3.48±0.41 a 3.95±0.38 a 3.80±0.56 a 4 4.2±0.55 a 3.94±0.40 a 3.9±0.30 a 3.64±0.34 a 4.15±0.42 a 4.16±0.47 a 5 4.58±0.59 a 4.26±0.33 ab 4.22±0.31 ab 3.88±0.41 b 4.45±0.36 ab 4.54±0.39 a 6 5.14±0.62 a 4.46±0.26 bc 4.47±0.24 bc 4.13±0.52 c 4.66±0.29 abc 4.83±0.36 ab
a,b,c Superskrip yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaan yang nyata (P<0,05)
Hasil  penelitian  terhadadap  variabel abnormalitas  menunjukkan  perbedaan  yang tidak nyata (P>0,05), sejak hari ke-0 hingga ke-4 preservasi.  Namun  pada  hari  ke-5  dan  ke-6 preservasi,  abnormalitas  spermatozoa  pada perlakuan  P3  secara  signifikan  lebih  rendah (P<0,05) dari pada perlakuan P0 dan P5.
Namun  demikian,  angka  abromalitas spermatozoa pada penelitian ini masih tergolong normal.  Hafez  (2000)  menyatakan  bahwa abnormalitas  spermatozoa  di  bawah  20%  dapat digunakan  untuk  melakukan  inseminasi  buatan. Parera et  al .  (2009)  menyebutkan  bahwa  angka abnormal  8-10%  tidak  memberikan  pengaruh yang  cukup  berarti  bagi  fertilitas,  tetapi  jika abnormalitas  lebih  dari  25%  per  ejakulat  maka akan  terjadi  penurunan  daya  fertilitas.  Ihsan (2008) menjelaskan bahwa pendinginan menyebabkan  peningkatan  abnormalitas  dan kerusakan  sel  namun  masih  dapat  teratasi dengan  adanya  pengencer  yang  mengandung kuning  telur  yang  didalamnya  mengandung lesitin  dan  lipoprotein.  Kedua  zat  tersebut berfungsi  mempertahankan  integritas  selubung
lipoprotein  dari  sel  dan  mencegah  cekaman dingin.
Rataan
persentase abnormalitas spermatozoa  sapi  bali  dalam  penelitian  ini adalah  4.13±0.52%,  hasil  ini  berbeda  dengan penelitian Blegur et al . (2019) dengan perlakuan T-KT  –  VCO  yang  mampu  mempertahankan 5.29±0.90%.
Suyadi et  al .  (2012)  menjelaskan  bahwa peningkatan  angka  abnormalitas  dapat  terjadi pada saat pembuatan preparat sebelum dilakukan  pengamatan  dan  juga  disebabkan peroksidasi  lipid.  Menurut  Yuliantini,  (2006) abnormalitas spermatozoa dipengaruhi oleh fisik dan  dimana  saling  bergesekan  antara  satu  sama lain sehingga menyebabkan kematian. Solihati et al . (2008) bahwa abnormalitas dapat disebabkan karna  kejutan  dingin  dan  ketidak  seimbangan tekanan  osmotik  akibat  dari  proses  metabolik yang  terus  berlangsung  selama  penyimpanan suhu  4-5oC.  Selanjutnya  dilaporkan  bahwa semakin lama waktu preservasi, maka presentase abnormalitas akan semakin tinggi.

## SIMPULAN
Disimpulkan  bahwa  penambahan  ekstrak bawang  merah  ke  dalam  pengencer  Tris-kuning telur dapat mempertahankan kualitas
spermatozoa  sapi  bali,  dengan  level  ekstrak bawang merah terbaik adalah 3%.
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember  2021) Volume 8, No. 2:92-100                      pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Djita et al .: Pengaruh Penambahan Ekstrak Bawang Merah…..

## DAFTAR PUSTAKA
Anwar  P,  Ondho  YS,  Samsudewa  D.  2014. Pengaruh  pengencer  ekstrak  air  tebu dengan penambahan kuning telur terhadap kualitas  spermatozoa  sapi  bali. Jurnal Peternakan 11(2): 48-58.
Arifiantini  RI.,  Wresdiyati,  Retnani  EF.  2006. Kaji  banding  morfologi  spermatozoa  sapi bali  ( Bos  sondaicus )    menggunakan pewarnaan Williams, eosin, eosin nigrosin dan  formol-saline. Jurnal Sains  Veteriner 24(1): 65-70.
Ax  RL,  Dally  M,  Didion  BA,  Lenz  RW,  Love CC,  Varner  DD,  Hafez  B,  Bellin  ME. 2000.  Semen  evaluation.  In:  Hafez  ESE, Hafez  B  (ed).  Reproduction  in  Fram Animals.  7th  Ed.  Lippincott  Williams  & Wilkins : Baltimore, USA.
Blegur J, Nalley WM, Hine TM. 2020. Pengaruh penambahan  virgin  coconut  oil  dalam pengencer  tris-kuning  telur  terhadap kualitas  spermatozoa  sapi  bali  selama preservasi. Jurnal  Nukleus  Peternakan 7(2): 130-138.
Butar  E.  2009.  Efektifitas  frekuensi  exercise terhadap  peningkatan  kualitas  semen  sapi simmental.  http://repository.  usu.  ac. id/bitstream/1/09E00898. pdf Diakses pada tanggal 3 Agustus 2019.
Feradis,  2010.  Bioteknologi  Reproduksi  pada Ternak. Penerbit Alfabeta. Bandung.
Hafez  ESE.  2000.  Semen  evaluation.  In: Reproduction in farm  animal  7th  Edition. lippicott Williams and wilkins. Maryland. USA.
Hidayahturrahmah.  2007.  Waktu  motilitas  dan viabilitas spermatozoa ikan mas ( Cyprinus  carpio  L )  pada  beberapa konsentrasi larutan fruktosa. Jurnal Bioscientiae 4(1): 9-18.
Ihsan MN. 2008. Upaya peningkatan konsentrasi spermatozoa  hasil  pemisahan  dengan sentrifugasi  gradien  densitas  percoll  pada sapi  Friesian  Holstein  (FH). Disertasi . Program  Pascasarjana  Fakultas  Pertanian Universitas Brawijaya Malang.
Ismaya.  2014.  Bioteknologi  Insiminasi  Buatan Pada  Sapi  Dan  Kerbau.  Gadjah  Mada University Press. Yogyakarta.
Jamshid  GG.  2012.  Androgenic  effect  of  onion
( Allium  cepa.  linn )  aqueous  extract  on sperms  quantity  and  viability  compared with  Zn  sulfate  supplementation  in  the rats. Asian J.Exp.Biol.Sci. 3(3) : 506-509.
Kelso  KA,  Cerolini  S,  Speake  BK,  Cavalchini LG,  Noble  RC.  1997.  The  effects  of dietary  supplementation  with  α-linolenic acid  on  the  phospholipid  fatty  acid compasition  and  qality  of  spermatozoa  in the cockerel from 24 to 72 weeks of ade. Journal  of  Reproduction  and  Fertility 110: 53-59.
Khaki  A,  Fathiazad  F,  Nouri  M,  Khaki  AA, Maleki  NA,  khamnei  HJ.  Ahmadi  P. 2010.  Beneficial  effects  of  quercetin  on sperm  parameters  in  streptozotocin- induced  diabetic  male  rats Phytotherapy Research 24(9): 1285-1291.
Mathevon  M,  Buhr  M.  Dakkers  JCM.  1998.
Environmental,  management  and  genetic factors  affecting  semen  production  in holstein  bulls. J.  Dairy  Sci. 81:  3321- 3330.
Nabilla  A,  Arifiantini  RI,  Purwantara  B.  2018.
Kualitas  semen  segar  sapi  bali  umur produktif dan non-produktif serta penentuan konsentrasi krioproktektan dalam  pengencer  tris  kuning  telur. Jurnal Veteriner 19(2): 242-250.
Parera  FZ,  Prihatiny  DF,  Souloka,  Rizal  M. 2009.  Pemanfaatan  sari  wortel  sebagai pengencer alternatif spermatozoa epididimis sapi bali. J. Indon. Trop. Anim. Agric. 34(1): 50-56.
Prastowo S, Dharmawan P, Nugroho T, Bachtiar
A,  Lutojo,  Pramono  A.  2018.  Kualitas semen  segar  sapi  Bali  (Bos  javanicus) pada  kelompok  umur  yang  berbeda.
Jurnal ilmu ternak 18(1): 1-7.
Ratnawati.  2008.  Identifikasi  keragaman  Gen FSH  Sub-Unit  Beta,  Gen  FSH  Reseptor dan Gen GH pada sapi Bali jantan sebagai penanda kualitas sperma. Disertasi.
Fakultas Peternakan IPB: Bogor.
Ratnawati  D,  Isnaini  N,  Susilawati  T.  2017. Pemanfaatan casa dalam observasi motilitas  spermatozoa  semen  cair  sapi Madura  dalam  pengencer  yang  berbeda.
Jurnal  Ilmu-ilmu  Peternakan 27(1):  80- 95.
Rizal  M,  Herdis.  2008.  Insiminasi  Buatan  pada Domba. Penerbit Rineka Cipta.
Rizal  M.  2009.  Daya  hidup  spermatozoa epididimis  sapi  bali  yang  dipreservasi pada  suhu  3-5 o C  dalam  pengencer  tris dengan  konsentrasi  laktosa  yang  berbeda. JITV 14(2): 142-149.
Jurnal Nukleus Peternakan (Desember  2021) Volume 8, No. 2:92-100                      pISSN : 2355-9942,    eISSN:2656-792X Djita et al .: Pengaruh Penambahan Ekstrak Bawang Merah…..
Rodrigues  A,  Fogliano  V,  Grasiani  G,  Mendes S,  Vale  A,  Goncalves  C.  2003.  Nutrition value  of  onion  regional  varieties  in Northwest  Portugal. EJEAFChe 2(4): 519-524.
Rukman  Rahmat.  1994.  Bawang  Merah,
Budidaya  Dan  Pengolahan  Pasca  Panen. Kanisius, Yogyakarta.
Solihati  N,  Idi  R,  Darojah  SR,  Rizal  M,  dan Frianti  M.  2008.  Kualitas  spermatozoa cauda  epididimis  sapi  Peranakan  Ongol (PO)  dalam  pengencer  susu,  Tris  dan sitrat  kuning  telur  pada  penyimpanan  4- 5 o C. Animal Production 1(10): 22-29.
Sugiarti TE. Triwulaningsih  P,  Situmorang  RG, Sianturi,  Kusumaningrum  DA.  2004. Penggunaan  katalase  dalam  produksi semen  dingin  sapi. Prosiding  Nasional . Teknologi  Peternakan  dan  Veteriner, Bogor. Hal. 215-220
Susilawati  T,  Suyadi,  Nuryadi  N,  Isnaini, Wahyuningsih  S.  1993.  Kualitas  semen
sapi  fries  holland  dan  sapi  bali  pada bernagai  umur  dan  berat  badan. Laporan Penelitian . Fakultas Peternakan Universitas Brawijaya, Malang.
Suyadi  A,  Rachmawati,  Iswanto  N.  2012. Pengaruh  α-tocopherol  yang  berbeda dalam pengencer dasar tris aminomethane kuning  telur  terhadap  kualitas  semen kambing  boer  yang  disimpan  pada  suhu 5 o C. Jurnal  Ilmiah  Ilmu-ilmu  Peternakan
22(3): 1-8.
Widiastuti  E.  2001.  Kualitas  semen  beku  sapi FH  dengan  penambahan  antioksidan vitamin  C  dan  E. Skripsi .  Fakultas Peternakan, Institut Pertanian Bogor.
Yuliantini.  2006.  Pengaruh  beberapa  pengencer dengan  waktu  equilibrasi  yang  berbeda terhadap  kualitas  semen  kambing  boer sebelum  pembekuan. Skripsi. Fakultas Peternakan UB. Malamg.