Vol. 1, No. 2, Desember 2021, hal. 46-50
Uji Aktivitas Antioksidan pada Daun Teratai Biru ( Nymphaea stellata Wild) dengan Metode DPPH (1,1-Diphenyl-2-Picrylhydrazyl)
Test of Antioxidant Activity in Blue Lotus (Nymphaea stellata Wild) Leaves with DPPH Method (1,1-Diphenyl-2-Picrylhydrazyl)
Rakhmadani Gadis Aprilianti 1) , Beta Herilla Sekti 1)* , Bella Pratika Sari 1)
1 Program Studi DIII Farmasi ITSK RS. dr. Soepraoen, Sukun, Malang, Jawa Timur, Indonesia
* e-mail: betaherilla@gmail.com

## ABSTRAK
Antioksidan merupakan senyawa yang dapat menghambat laju oksidasi molekul lainnya atau dapat  menetralkan  radikal  bebas,  antioksidan  dapat  berupa  bentuk  sintetis  maupun  alami. Antioksidan alami  dapat  melindungi  tubuh  manusia dari kerusakan oksigen aktif  yang dapat menghambat  penyakit  degeneratif  dan  menghambat  produksi  lemak  dan  makanan. Antioksidan alami bisa didapatkan dari tumbuhan, salah satunya adalah tanaman teratai biru ( Nymphaea stellata Wild). Untuk memastikan adanya kandungan Antioksidan pada tanaman ini,  maka  dilakukan  pengujian  aktivitas  Antioksidan  dengan  menggunakan  metode  DPPH. Metode  DPPH  digunakan  untuk  mengetahui  adanya  aktifitas  penangkapan  radikal  bebas ekstrak  etanol  daun  teratai  biru  ( Nymphaea  stellata Wild).  Dalam  penelitian  ini  kontrol  (+) digunakan  Asam  Askorbat.  Nilai  IC 50 yang  didapatkan  untuk  pengujian  kandungan Antioksidan  daun  teratai  biru  adalah  78,405  ppm  ±  24,607  dan  dinyatakan  kuat.  Sedangkan Asam Askorbat 2,238 ppm dinyatakan sangat kuat.
Kata kunci: Antioksidan, Radikal Bebas, DPPH

## ABSTRACT
Antioxidants are compounds that can inhibit the rate of oxidation of other molecules or can neutralize  free  radicals,  antioxidants  can  be  in  the  form  of  synthetic  or  natural.  Natural antioxidants can protect the human body from the damage of active oxygen which can inhibit degenerative diseases and inhibit the production of fat and food. Natural antioxidants can be obtained  from  plants,  one  of  which  is  the  blue  lotus  plant  (Nymphaea  stellata  Wild).  To ensure the presence of antioxidants in this plant, the antioxidant activity was tested using the DPPH method. The DPPH method was used to determine the free radical scavenging activity of the ethanol extract of blue lotus leaf (Nymphaea stellate Wild). In this study the control (+) used Ascorbic Acid. The IC 50 value obtained for testing the antioxidant content of blue lotus leaf is 78.405 ppm ± 24.607 and is declared strong. Meanwhile, 2,238 ppm of ascorbic acid was stated to be very strong.

## Keywords : Antioxidant, Free radicals, DPPH

## PENDAHULUAN
Teratai  Biru  ( Nymphaea  stellata Wild)  merupakan  genus Nymphaea dalam  keluarga Nymphaceae .  Tanaman  ini  nyaris  seluruh  bagian  tumbuhannnya  memiliki  dampak  secara farmakologis.  Dampak  farmakologis  yang  dimiliki  tumbuhan  ini  antara  lain  bisa
menyembuhkan  penyakit  jantung,  muntah  darah  dan  disentri.  Akarnya  bisa  digunakan  pula selaku  obat  mimisan.  Daun  tanaman  ini  bisa  digunakan  selaku  Antidiabetes,  Antikolesterol, serta  Antioksidan.  Pada  bunganya  ditemui  sitotoksik  terhadap  karsinoma  servik  dan  bijinya berperan sebagai Antidiare serta Prebiotik (Ismuhajaroh G, 2016).
Antioksidan  merupakan  donor  elektron  ataupun  agen  pereduksi  dengan  menghindari pembentukan radikal bebas dimana senyawa tersebut bisa menonaktifkan pertumbuhan reaksi oksidasi.  Definisi  lain  dari  Antioksidan  merupakan  senyawa  yang  saat  dioksidasi  bersama dengan  substrat  konsentrasi  rendah  bisa  menunda  ataupun  membatasi  oksidasi  senyawa (Kuncahyo,  2007).  Mekanisme  kerja  antioksidan  dibedakan  jadi  2  jenis,  ialah  antioksidan preventif  serta  antioksidan  pemutusan  rantai  dimana  guna  penangkalan    antioksidan  sendiri merupakan  untuk  membatasi  pembuatan  spesies  oksigen  reaktif  (ROS)    semacam  enzim katalase,  peroksidase,  superoksida  dismutase  serta  transferin.  Antioksidan  chain-scission merupakan  senyawa  yang  menangkap  radikal  bebas  oksigen  dan  kemudian  memutus  rantai reaksi  radikal  bebas,  seperti  asam  askorbat,  tokoferol,  asam  urat,  bilirubin,  serta  polifenol. (Ou, 2002).  Radikal bebas merupakan atom ataupun molekul yang mempunyai electron baik satu  maupun  lebih  yang  tidak  berpasangan,  tidak  normal  serta  berusia  pendek  serta  sangat reaktif terhadap penyerapan elektron dari molekul lain di dalam tubuh. (Pawarta, 2016).
Daun  Teratai  Biru  ( Nymphaea  stellata Wild)  yang  umumnya  hanya  digunakan  selaku tanaman hias belum banyak diteliti sehingga menarik peneliti untuk melakukan riset terhadap ekstrak  daun  Teratai  Biru  ( Nymphaea  stellata Wild)  untuk  melakukan  analisis  aktivitas Antioksidan pada daun Teratai Biru ( Nymphaea stellata Wild) dengan menggunakan metode DPPH.

## METODE
Peneliti  memakai  metode  penelitian  eksperimental  laboratorium  dimana  populasinya adalah  tanaman  Teratai  Biru  dengan  sampel  yang  diambil  merupakan  ekstrak  etanol  daun Teratai Biru ( Nymphaea stellata Wild) dengan mempersiapkan 5 konsentrasi ialah 200, 400, 600,  800  ppm,  serta  yang  terakhir  merupakan  1000  ppm.  Metode  pengambilan  sampel  pada riset ini  memakai metode purposive sampling yang memiliki   kriteria daun segar.   Riset ini diawali dengan pembuatan ekstrak memakai metode soxhletasi, dan dicoba uji kualitatif untuk mencari tahu kandungan yang dimiliki oleh daun Teratai Biru. Berikutnya, penyiapan larutan uji  ekstrak  etanol  dengan  cara  menimbang  ekstrak  etanol  daun  teratai  biru  sebanyak  500mg masukkan  dalam  labu  50  ml  serta  tambahkan  etanol  70%  sedikit  demi  sedikit  sampai  tanda batas,  didapatkan larutan dengan konsentrasi 10.000 ppm. Konsentrasi tersebut dibagi jadi 5 konsentrasi yaitu 200 ppm, 400 ppm, 600 pm, 800 ppm, 1000 ppm. Setelah itu, menyiapkan larutan  DPPH  serta  larutan  pembanding  yaitu  asam  ascorbat,  menentukan  panjang gelombang,  mengukur  absorbansi,  dan  pada  tahap  terakhir  adalah  melakukan  analisis  data. Didalam  analisis  data  terdapat  perhitungan  persen  (%)  perendaman  yang  dilakukan  dengan rumus sebagai berikut: (Pawarta, 2016).
%Perendaman = (1 – ) x 100%
Daya  antioksidan  perendaman  radikal  bebas  DPPH  dinyatakan  dengan  %  peredaman ekstrak etanol daun Teratai Biru ( Nymphaea stellata Wild) serta asam askorbat, lalu dianalisis dan  dihitung  nilai  IC 50 keduanya  menggunakan  analisis  regresi  linier  untuk  mengetahui aktivitas antioksidannya (Azlim Almey, 2010).
y = ax + b
Keterangan  dari  rumus  di  atas  adalah:    y  merupakan  %  aktivitas  antioksidan,  x merupakan  konsentrasi  larutan  uji,  a  merupakan  tetapan  slope  dan  b  merupakan  tetapan intersep.  Hasil  analisis  regresi  linear  berupa  nilai  x,  yang  selanjutnya  dimasukkan  ke  dalam rumus IC 50 = antilog X serta ditentukan tingkat kekuatan antioksidannya.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Dari dua ratus gram serbuk simplisia Daun Teratai yang disoxhletasi dengan 1 L pelarut didapatkan ekstrak kental dengan berat 8,19 g dengan persen rendemen 4,09%. Uji Kualitatif dilakukan  dengan  menguji  adanya  kandungan  Flavonoid,  Tanin,  Polifenol,  Alkaloid,  dan Saponin. Hasil pengujian ini dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1.  Hasil Skrinning Fitokimia
No. Senyawa Gambar
1. Flavonoid 2. Tanin
3. Saponin 4. Polifenol 5. Alkaloid
Ekstrak etanol daun teratai menampilkan perubahan warna biru, berarti positif memiliki kandungan  flavonoid.  Adapula  kandungan  tanin  dengan  pergantian  warna  jadi  biru kehitaman, kemudian kandungan polifenol ditunjukkan dengan perubahan warna menjadi biru ataupun hijau kehitaman. Pada kandungan alkaloid ditunjukkan dengan terjadianya  endapan, dan  kandungan  saponin  ditandai  dengan  terbentuknya  busa  yang  stabil  selama  10  menit.
Pengujian  aktivitas  antioksidan  dengan  metode  DPPH,  prinsip  metode  tersebut  dengan lenyapnya  warna  ungu  akibat  adanya  reduksi  DPPH  oleh  antioksidan  tersebut.  Intensitas warna  ungu  yang  hilang  yang  akan  diukur  menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis  pada panjang  gelombang  520  nm  dengan  absorbansi  blanko  sebesar  0,027.  Panjang  gelombang pada penelitian ini sesuai dengan jangkauan panjang gelombang maksimum pada pegukuran dengan  metode  DPPH  antara  515  nm  sampai  dengan  520  nm  (Molyneux,  2004).  Pengujian dalam  penelitian  ini  terhadap  5  seri  konsentrasi  yaitu  200  ppm  hingga  1000  ppm  dengan kelipatan dua untuk direaksikan dengan radikal bebas DPPH dengan waktu perendaman pada masing-masing konsentrasi selama 30 menit.
Intensitas  warna  ungu  yang  berkurang  dari  larutan  DPPH  dikala  direaksikan menampilkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  Teratai  Biru  memiliki  kemampuan  antioksidan. Berkurangnya intensitas warna ungu menunjukkan bahwa terjadi reaksi antara molekul DPPH dengan  atom  hidrogen  yang  dilepaskan  oleh  molekul  senyawa  ekstrak  etanol  daun  Teratai Biru sehingga membentuk senyawa 1,1-difenil-2- pikrilhidrazil berwarna kuning. Konsentrasi yang  semakin  besar  maka  akan  menghasilkan  warna  kuning  yang  semakin  kuat  dan  secara kuantitatif  pengurangan  intensitas  warna  ungu  dari  larutan  DPPH  dapat  dihitung  dari berkurangnya absorbansi larutan tersebut, apabila dalam pengujian semakin besar konsentrasi larutan uji maka absorbansi yang dihasilkan akan semakin kecil dimana hal ini menunjukkan kemampuan  larutan  uji  dalam  merendam  radikal  DPPH  semakin  besar  (Rahmatia,  2018). Hasil pengujian aktifitas antioksidan ekstrak etanol daun Teratai Biru dapat dilihat pada tabel 2

## Tabel 2. Hasil Pengujian Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Teratai Biru terhadap DPPH
Dari  data  tersebut  diperoleh  persamaan  regresi  linear  y  =  37,211x  –  63,32  dengan koefisien  korelasi  0,9986.  Pada  persamaan  regresi  linear  nilai  R  pada  tabel  diatas  untuk mengetahui  arah  hubungan  antara  dua  variabel  dan  besarnya  koefisien  korelasi  antar  dua variabel  yaitu  nol  sampai  dengan  satu.  Apabila  terdapat  dua  variabel  memiliki  nilai  r  sama dengan nol, berarti antara dua buah variabel tersebut tidak ada hubungan. Sedangkan, apabila dua  variabel  memiliki  nilai  r  sama  dengan  kurang  lebih  satu  maka  dua  variabel  tersebut memiliki  hubungan  yang  sempurna  (Rahmatia,  2018).  Berdasarkan  hal  tersebut  nilai  r  pada persamaan diatas, dimana nilai r positif diketahui bahwa hubungan antara 2 variabel memiliki hubungan  yang  sempurna  yaitu  semakin  tinggi  konsentrasi  ekstak  etanol  daun  Teratai  Biru maka semakin besar pula perendamannya. Parameter konsentrasi yang ekuivalen memberikan hasil  50  persen  aktivitas  antioksidan  dengan  penangkapan  radikal  DPPH  adalah  nilai Inhibition  Concentration (IC 50 ).  Nilai  IC 50 didapatkan  dari  persamaan  regresi  linear  yang menunjukkan hubungan antara konsentrasi dengan persen perendamannya. semakin kecil nilai IC 50 maka semakin besar aktivitas antioksidan.
Tabel 3. Nilai IC 50 Ekstrak Etanol Daun Teratai Biru
Data  nilai  IC 50 ekstrak  etanol  daun  Teratai  Biru  adalah  78,405  ppm  ±  24,607.  Nilai tersebut  menyatakan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  teratai  biru  memiliki  aktivitas  antioksidan yang kuat karena nilai IC 50 nya berada diantara 50 sampai dengan 100 ppm.
Tabel 4. Perhitungan nilai IC50 Asam Askorbat
No. Konsentrasi (ppm) Log Konsentrasi (x) Persen perendaman (%) 1. 2 0,301 3,703 2. 4 0,602 14,814 3. 6 0,778 22,222 4. 8 0,903 29,629 5. 10 1,000 33,333
Persamaan garis lurus y=ax+b dapat diperoleh dengan analisis antara log konsentrasi (x) dan  persen  perendaman  (y),  serta  harga  IC 50 diperoleh  dari  persamaan  garis  lurus  tersebut dimana  y=  5  (persen  perendaman  50%).  Data  pada  tabel  4  menghasilkan  nilai  IC 50 asam ascorbat sebesar 2,238 ppm yang dinyatakan dengan sangat kuat karena nilainya kurang dari 50 ppm.

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  berdasarkan  tabel  di  atas,  dapat  disimpulkan bahwa  ekstrak  etanol  daun  Teratai  Biru  memiliki  aktivitas  antioksidan  kuat  terhadap  DPPH (1,1-  Diphenyl-2-Picrylhydrazyl)  yang  menunjukkan  nilai  IC 50 78,405  ppm  ±  24,607  dan Asam Askorbat juga memiliki aktivitas antioksidan sangat kuat dengan nilai 2,238 ppm.

## DAFTAR PUSTAKA
Azlim  Almey,  A..,  2010.  Total  Phenolic  Content  And  Primary  Antioxidant  Activity  Of Methanolic  And  Ethanolic  Extracts  Of  Aromatic  Plants’  Leaves. International  Food Research Journal, Volume 17, Pp. 1077-1084.
Kuncahyo,  I.  S.,  2007.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Belimbing  Wuluh  (Averrhoa Bilimbi,  L.)  Terhadap  1,1-Diphenyl-2-Picrylhidrazyl  (DPPH). Seminar  Nasional Teknologi, Volume 4, P. 14.
Ismuhajaroh  G  (2016)  ‘Perbandingan  Morfologi  Dan  Biologi  Bunga  Pada  Dua  Spesies Teratai  (Nymphaea)  Di  Kabupaten  Banjar,  Kalimantan  Selatan’,  in Perbandingan Morfologi Dan Biologi Bunga Pada Dua Spesies Teratai  (Nymphaea) Di Kabupaten Banjar, Kalimantan Selatan . Prosiding Seminar Nasional Lahan Basah, pp. 896–900. Molyneux, P., 2004. The Use of The Stable Free Radical Diphenylpicryl- Hydrazyl (DPPH) For Estimating Antioxidant Activity. Songklanakarin J. Sci. Technol, 26(2), Pp. 211- 219.
Ou,  B.  Huang.,  2002.  Analysis  Of  Antioxidant  Activities  Of  Common  Vegetables Employing  Oxygen  Radical  Absorbance  Capacity  (ORAC)  And  Ferric  Reducing Antioxidant Power (FRAP). A Comparative Study, J. Agric. Food Chem, Volume 50, Pp. 3122-3128.
Pawarta,., 2016. Antioksidan. Bali: Universitas Udayana.
Rahmatia,  A.  R.,  2018.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Daun  Sisik  Naga (Drymoglossum  Piloselloides  [L.]  Presl.)  Dengan  Metode  Dpph  (1,1-Diphenyl-2- Picrylhydrazyl). Volume 1, Pp. 1-69.