## POTENSI SENYAWA BULLATALISIN SEBAGAI INHIBITOR PROTEIN LEUKOTRIEN A4 HIDROLASE PADA KANKER KOLON SECARA IN SILICO
Harry Noviardi 1* , Fachrurrazie 2
1) Program Studi Farmasi, Sekolah Tinggi Teknologi Industri dan Farmasi Bogor
2) Program Keahlian Analisis Kimia Diploma, Institut Pertanian Bogor Email:harry.noviardi@gmail.com

## ABSTRAK
Kanker kolon merupakan jenis kanker yang dapat menyebabkan kematian. Salah satu penyebabnya adalah pertumbuhan Leukotrien A4 hidrolase yang tidak terkontrol. Leukotrien A4 hidrolase dapat dijadikan target terapi dalam menekan pertumbuhan sel kanker. Bullatalisin merupakan senyawa turunan asetogenin yang memiliki potensi inhibitor terhadap Leukotrien A4 hidrolase. Penelitian ini bertujuan menentukan potensi Bullatalisin sebagai inhibitor secara in silico berdasarkan energi bebas Gibbs (∆ G ), tetapan inhibisi, interaksi ikatan hidrogen serta Root Mean Deviation Square (RMSD). Penelitian dilakukan secara komputasi menggunakan metode molecular  docking .Berdasarkan  pada  hasil  analisis  visualisasi  interaksi docking , menunjukkan adanyainteraksi ikatan antara Bullatalisin dan residu asam amino dari kantung aktif Leukotrien A4 hidrolase. Selain itu nilai energi bebas Gibbs, tetapan inhibisi dan RMSD dari  Bullatalisin  tidak  berbeda  secara  signifikan  dibandingkan  dengan  ligan  standar.  Oleh karena itu, Bullatalisin diprediksi berpotensi sebagai inhibitor Leukotrien A4 hidrolase.
Kata kunci: bullatalisin, docking, in silico , kanker kolon, leukotrien A4 hidrolase

## THE POTENCY OF BULLATALICIN AS AN INHIBITOR OF LEUKOTRIENE A4 HYDROLASE PROTEIN IN COLON CANCER BY IN SILICO STUDY

## ABSTRACT
Colon cancer was a cancer type that could be death. One of the reason was the growth Leukotriene A4 hydrolase that were out of control. Leukotriene A4 hydrolase might be used as a therapeutic target in suppressing the growth of cancer cells. Bullatalicin asetogenin derivative was a compound that has the potential to inhibit Leukotriene A4 hydrolase. This study aims to determine the potential Bullatalicin as inhibitors in silico based on the Gibbs free energy (ΔG), inhibition constant, hydrogen bonding interactions and Root Mean Deviation Square (RMSD). The computationally study using molecular docking method. The results of docking interaction visualization, shows the bonding interactions between Bullatalicin and amino acid residues of the  catalytic  domain.  In  addition  the  value  of  Gibbs  free  energy,  constant  inhibition  of Bullatalicin  and  RMSD  not  significantly  different  than  the  standard  ligand.  Therefore, Bullatalicin could be predicted as potential Leukotriene A4 hydrolase inhibitor.
Keywords: Bullatalicin, colon cancer, docking, in silico, leukotriene A4 hydrolase

## PENDAHULUAN
Leukotrien  A4  hidrolase  (LTA4H) adalah enzim yang berperan sebagai epoksida hidrolase dan aminopeptidase. Enzim LTA4H tersebut  dapat  mengkatalisis  dari  hidrolisis Leukotrien A4 epoksida membentuk
leukotrien  B4,  yang  memiliki  peran  dalam aktivasi  inflamasi  sel  dan  kanker  pada manusia (Chen et al ., 2004 & Stsiapanava et al. ,2014).  Selain  itu  LTA4H  diekspresikan secara berlebih pada sel kanker dibandingkan dengan sel normal termasuk sel kanker kolon
(Chul et  al .,  2009).  Hal  ini  berdasarkan  pada penelitian Jeong et al. (2009) secara in vitro , menunjukkan enzim LTA4H dapat meningkatkan pertumbuhan sel kanker kolon HCT116.  Inhibisi  senyawa  kandidat  obat ( lead compound ) diharapkan dapat menurunkan  fungsi  enzim  Leukotrien  A4 hidrolase sehingga dapat menekan perkembangan sel  kanker (Chen et  al ., 2003 & Arguello et al. , 2006). Affinitas aminopeptidase  LTA4H  tertinggi  terhadap substrat  tripeptida  terletak  pada  N-terminal (Orning et al. , 1994& Tholander et al ., 2008). Pada  penelitian  Stsiapanava et  al. (2014), menunjukkan  bahwa  ikatan  subtrat  analog Pro-Gly-Pro pada sisi kantung aktif LTA4H, dapat  mempengaruhi  kinerja  enzim  tersebut sebagai epoksida hidrolase.
Kantung aktif dari LTA4H tersusun dari beberapa  asam  amino,  yaitu  Gln  134,  Gln 136, Tyr 267, Gly 268, Gly 269, Met 270, Glu 271, Val 292, Glu 296, Trp 311, Phe 314, Trp 315, Val 322, Phe 362, Val 367, Leu 369, Ile 372, Pro 374, Asp 375, Ala 377, Tyr 378, Tyr 383,  Lys  565,  Arg  563  (Marjolein et  al ., 2001). Inhibisi LTA4H dengan cara menutup sisi  lubang  pada  kantung  aktif  dengan inhibitor  dapat  menghambat  pembetukkan leukotrien  B4,  sehingga  proses  inflamasi terhambat  (Haeggström et  al .,  2011).  Oleh karena itu, LTA4H dapat menjadi target dari terapi pengobatan kanker (Chen et al ., 2004). Bullatalisin merupakan senyawa turunan asetogenin, yang memiliki dua cincin tetrahidrofuran dan diisolasi dari kulit Annona bullata . Senyawa ini bersifat selektif terhadap apoptosis  sel  kanker  dan  memiliki  aktivitas sitotoksik dengan nilai ED 50 kurang dari 10 -7 mcg/mL (Yu et al ., 1989& Liang et al ., 2009). Selain  itu  Bullatalisin  memiliki  bioaktifitas terhadap  antitumor  dalam  penghambatan pembentukkan  kompleks  mitokondria  dan NADH  oksidase  dari  membran  sel  tumor (Okun et  al .,  1999).  Bullatalisin  juga  dapat menurunkan  konsentrasi intracellular  cyclic AMP  (cAMP)  and cyclic GMP  (cGMP) sehingga  dapat  menginduksi  apoptosis  dari sel tumor (Chiu et al ., 2003). Oleh karena itu, Bullatalisin  diharapkan  memiliki  potensi
untuk  menjadi  senyawa  inhibitor  terhadap LTA4H.
Analisis  model  interaksi  antara  kristal LTA4H dan senyawa inhibitor secara in silico dapat  membantu  dalam  pengembangan  obat berbasis  struktur  (Thunnissen et  al .,  2001). Metode molecular docking merupakan langkah  awal  dalam  pengembangan  obat berbasis  struktur,  yang  memiliki  kelebihan, yaitu  sangat  cepat,  hemat  biaya  dan  akurat. Pada penelitian ini dilakukan secara in silico menggunakan  metode molecular  docking . Metode molecular docking merupakan metode  utama  komputasi  dalam  proses pencarian  dan  pengembangan  obat  (Rester, 2008).  Prinsip molecular  docking adalah dengan  mengikatkan  subtrat  atau  ligan  pada enzim  sehingga  membentuk  konformasi molekul  kompleks.  Selain  itu docking juga mempertimbangkan aspek kestabilan konformasi  antara  enzim  dan  ligan  yang terbentuk tersebut (Sousa et al ., 2006). Secara umum docking dapat  dilakukan  secara rigid body  docking dan  fleksibel docking .  Metode fleksibel docking lebih  baik  dibandingkan dengan rigid  docking ,  karena  pada docking secara rigid ,  ligan  mengalami  rotasi  dan translasi  yang  terbatas. Docking secara fleksibel  merupakan  metode  yang  umum dilakukan  karena  ikatan  kompleks  dan fleksibilitas  konformasi  antara  ligan  dan protein  menjadi  parameter  utama  dalam penilaian afinitas docking (Sousa et al ., 2006
&Gilson et al ., 2007).
Docking pada penelitian ini menggunakan  program  AutoDock.  Prinsip dari program AutoDock adalah mengevaluasi dari  energi  bebas,  torsional  bebas  dari konformasi  ikatan  yang  terbentuk  antara enzim dan ligan berdasarkan energi forcefield pada  algoritma,  serta  kekuatan  kompleks ligan-protein yang terbentuk secara kuantitatif  dengan  melihat  nilai  tetapan inhibisi.  Nilai  skor docking yang  semakin negatif  dan  kecil  menunjukkan  konformasi yang  terbentuk  antara  ligan  dan  enzim semakin stabil (Idrees et al ,. 2014).
Akurasi  hasil docking perlu  dilakukan untuk  mengukur  ketepatan  algoritma  dari program  untuk  menentukan  posisi  dari
konformasi antara enzim dan ligan. Parameter  dari  nilai  akurasi  tersebut  adalah Root  Mean  Deviation  Square (RMSD) (Hevener et  al .,  2009).  RMSD  ditentukan dengan  membandingkan  antara  posisi  atom- atom  ligan  secara  ekperimental  dan  posisi berdasarkan pada prediksi algoritma. Fleksibelitas  dari  ligan  tersebut  dapat mempengaruhi  ketepatan  posisi  kompleks yang  terbentuk  (Sousa et  al .,  2006).  Hasil Docking yang baik jika memiliki nilai RMSD kurang dari 2  Å (Purnomo, 2013 &  Santoyo et al ., 2013).
Penelitian  ini  bertujuan  menentukan potensi Bullatalisin sebagai inhibitor LTA4H secara in silico berdasarkan pada energi bebas Gibbs (∆ G ), tetapan inhibisi, interaksi ikatan hidrogen  antara  protein  dan  ligan  serta Root Mean  Deviation  Square (RMSD).  Penelitian dilakukan  secara  fleksibel docking dengan menggunakan program AutoDock.

## METODE PENELITIAN Bahan
Perangkat  lunak  AutoDock  Vina, AutoDock  Tools  1.5.6.,  Open  Babel  2.3.6., Pymol,  YASARA.  Program database  online yang digunakan PDB (Protein Data Bank)
Alat Seperangkat  komputer  dengan chip processor Core™ i5-3230M2 Cores, 4 Threads @2.6GHz,  4.00  GB  DDR3  1600 MHz random  access  memory ,2GB  DDR3 Radeon  HD  8670M video  graphics  array , ditunjang  dengan  akses  internet  untuk mengunduh data-data protein.

## Cara Kerja Preparasi Ligan dan Protein
Ligan  yang  digunakan  pada  penelitian ini dirancang dalam bentuk 3 dimensi dengan menggunakan  ACD  Labs  dengan  format .mdlmol.  Setelah  itu  format  ligan  dirubah dalam  bentuk  pdb  dengan  menggunakan Open Babel (Boyle et al ., 2011). Ligan yang digunakan  adalah  Bullatalisin  dan  ligan standar N-[3-(4-benzilfenoksi)propil]-N-
metil-beta-alanina (Niegowski et al ., 2012).
ProteinLeukotrien A4 hidrolase ditelusuri  pada  situs Protein  Data  Bank (http://www.rscb.org/pdb/) dengan menggunakan  komputer  yang  terhubung dengan  internet.  Protein  diunduh  dalam format  pdb.  Kode  protein  yang  digunakan adalah 3U9W, yang memiliki tingkat resolusi 1.25 Ǻ.
File  p rotein  dan  ligan  yang  telah diunduh, dibuka dengan menggunakan AutoDock Tools1.5.6. dalam format .pdbkemudian  dilakukan  preparasi  ligan  dan protein pada AutoDock Tool. Setelah itu file disimpan dalam bentuk .pdbqt ( Protein Data Bank, Partial Charge (Q), & Atom Type (T) ) Ukuran grid ditentukan  pada  protein dengan nilai sumbu x , y , dan z , dengan satuan angstrom  (Å). Grid dibuat  sebesar  mungkin sampai tepat menutupi seluruh kantung aktif permukaan  protein.  Format  file  penyimpan grid disimpan dalam bentuk grid.gpf.

## Docking
Preparasi file docking dilakukan optimasi geometri dan energi bebas Gibbs(∆G)  dari  struktur  3  dimensi  ligan dengan menggunakan AutoDock1.5.6. Algoritma yang digunakan adalah
Lamarckian Genetic. Proses docking
dilakukan  dengan  AutoDock  dan  AutoDock Vina,  dengan  memasukkan  nilai  parameter Autogrid  (Trott et  al .,  2010). File tersebut kemudian  disimpan  dalam  bentuk  kompleks untuk divisualisasikan menggunakan Pymol.

## Analisis Docking

## PenentuanNilai Energi Bebas Ikatan
Energi  bebas  ikatan  hasil docking dilihat  pada output dalam  AutoDock Tools1.5.6.  Konformasi  kompleks  protein- ligan  yang  dipilih  adalah  kompleks  yang memiliki  nilai  energi  bebas  ikatan  terkecil untuk  kemudian  dilakukan  analisis  lebih lanjut.

## Penentuan  Ikatan  Hidrogen  dan  Kontak Residu
Ikatan hidrogen dan kontak residu yang terjadi  pada  konformasikompleksprotein- ligan terbaik dari hasil docking
kemudiandiidentifikasikan dan dianalisis dalam media 3 dimensi dengan menggunakan Pymol.  Format  file  yang  digunakan  untuk identifikasi  dan  analisis  adalah  .pdb  dan .pdbqt.

## Penentuan RMSD
Evaluasi  hasil docking dilakukan dengan menggunakan hasil docking dari ligan standar  dan  protein.  Konformasi  kompleks protein-ligan yang memiliki nilai energi bebas ikatan  terendah  ditentukan  nilai  RMSD sebanyak 10 kali ulangan dengan menggunakan program YASARA (Purnomo, 2013).

## HASIL DAN PEMBAHASAN VisualisasiKantung Aktif Protein dan
Ligan
Struktur kristal Leukotrien A4
Hidrolase yang digunakan pada penelitian ini dengan kode 3U9W memiliki tingkat resolusi 1.25  Ǻ  (Niegowski et  al .,  2012).  Kristal tersusun dari asam amino penyusun proteinLeukotrien  A4  Hidrolase  yang  terdiri atas  608  asam  amino.  Protein  LTA4H tersusun  menjadi  3  bagian folding ,  yaitu  N- terminal, kantung aktif, dan C-terminal, yang membentuk flat  triangular dengan  dimensi 78.08 x 86.80 x 99.14Ǻ. Residu asam amino penyusun  protein  LTA4H  dapat  dilihat  pada Gambar 1.  Pada N-terminal LTA4H terdapat daerah  kantung  aktif  (Thunnissen et  al ., 2001).  Residu  kantung  aktif  terbentuk  pada daerah  asam  amino  130-385  dan  560-565 (Marjolein et al ., 2001).

## Docking
Docking terhadap  protein  Leukotrien A4 Hidrolase dilakukan pada daerah kantung aktif.  Penentuan  daerah  kantung  aktif dilakukan dengan autogrid yang terdapat pada AutoDock  Tools  1.5.6. Grid merupakan daerah  tempat  terjadinya  interaksi  ligan dengan  kantung  aktif  protein  pada  proses docking ,  yang  berbentuk  kubus  atau  balok dengan  sebuah  titik  pusat x , y , z dan  dimensi x , y , z. Nilai grid  box yang  diperoleh  pada penelitian  ini,  yaitu  x:29.679,  y:1.546, z:1.893  dengan  ukuran box 60  x  60  x  60  Ǻ (Gambar  2a).  Nilai grid  box tersebut ditentukan  berdasarkan  pada  posisi  letak senyawa  ligan  standar  pada  protein  3U9W yang  terdapat  pada  file Protein  Data  Bank (PDB).    Algoritma docking  Lamarckian Genetic pada AutoDock Tools akan menampilkan total konformasi terbaik sebanyak  10  interaksi  ligan  (Morris et  al ., 1998). File protein  diolah  menggunakan AutoDock Tools, kemudian protein dibersihkan  dari  molekul-molekul  air  dan dilakukan penambahan hidrogen.
Penambahan atom hidrogen dilakukan karena terdapat kemungkinan hilangnya atom hidrogen  pada  saat  kristalisasi  yang  dapat mempengaruhi  interaksi  (Seeliger et  al ., 2010). Visualisasi 3 dimensi lubang kantung aktif  protein  LTA4H  dapat  dilihat  pada Gambar  2b.  Lubang  kantung  aktif  terletak pada daerah domain katalitik N-terminal yang bersifat hidrofobik.
Gambar 1. Residu asam amino penyusun protein LTA4H (Niegowski et al ., 2012).
Gambar 2. Visualisasi 3D grid box dengan AutoDock Tools 1.5.6 (a) dan lubang kantung aktif protein Leukotrien A4 Hidrolase dengan program Pymol (b).
Analisis Docking Hasil docking yang  baik  dapat  dilihat dengan    membandingkan  nilai  energi  bebas Gibbs  (Δ G ),  tetapan  inhibisi,  dan  interaksi ikatan  hidrogen  antara  ligan  dan  protein. Berdasarkan pada nilai ∆G tersebut menggunakan  persamaan  Gibbs  maka  akan diperoleh nilai tetapan inhibisi ( Ki ) (Morris et al ., 1998).
𝐾 =   1 𝐾𝑖 ⁄ ……………..... [1] ∆𝐺 = −𝑅𝑇𝐿𝑛𝐾 ………... [2]
∆𝐺 =   −𝑅𝑇𝐿𝑛 1 𝐾𝑖 ⁄ ... ..          [1] dan [2]
∆𝐺 =  𝑅𝑇𝐿𝑛𝐾𝑖 …….......         [1] dan [2]
𝐾𝑖  = 𝑒 ∆𝐺 𝑅𝑇 …………......
[1] dan [2]
Tabel 1. Hasil simulasi docking protein Leukotrien A4 Hidrolase Ligan Bobot molekul (g/mol) logP Energi bebas Gibbs (kkal/mol) Ki (µM) Jumlah Ikatan Hidrogen Bullatalisin 638.48 6.70 -11.30 5.15x10 -3 4 Standar 326.18 3.85 -11.80 2.21x10 -3 2 a
b
Ikatan  pembentukan  kompleks  yang kuat  ditandai  dengan  nilai  Δ G yang  rendah, tetapan  inhibisi  rendah,  dan  banyaknya jumlah  interaksi  ikatan  hidrogen  (Tambunan et  al .,  2010).  Hasil  simulasi docking dapat dilihat pada Tabel 1. Energi bebas Gibbs dan nilai  konstanta inhibisi dari kompleks antara LTA4H-ligan  Bullatalisin  dan  LTA4H-ligan standar  berdasarkan  pada  hasil docking tampak  tidak  terlalu  berbeda.  Tanda  negatif pada  nilai  energi  bebas  Gibbs  serta  nilai konstanta  inhibisi  yang  semakin  kecil, menunjukkan  kompleks  yang  terbentuk antara ligan dan standar  sangat  kuat. Hal ini disebabkan oleh meningkatnya energi torsional  dari  kompleks  tersebut  sehingga
membuat kompleks enzim dan ligan menjadi stabil (Tambunan et al ., 2010).
Nilai  energi  bebas  Gibbs  tersebut merupakan kontribusi interaksi antara protein denganligan,  interaksi  tersebut  terjadi  secara intermolekul, yaitu Van der Waals atau ikatan hidrogen. Visualisasi interaksi antara protein dan  ligan  dapat  dilhat  dari  interaksi elektrostatik  dengan  menggunakan  Pymol (DeLano,  2002).Interaksi  antara  ligan  dan protein diharapkan untuk mengganggu stabilitas  dan  kinerja  enzim.  Jarak  interaksi ikatan  yang  dekat  serta  jumlah  ikatan hidrogen  yang  terbentuk  pada  interaksi protein Leukotrien A4 Hidrolase-Bullatalisin lebih  banyak  dibandingkan  dengan  protein Leukotrien A4 Hidrolase-standar (Gambar 3).
Gambar 3. Visualisasi 3 dimensi interaksi kontak residu ikatan antara protein Leukotrien A4 Hidrolase-liganstandar (a) dan ligan Bullatalisin (b) dengan program Pymol
a
b
Tabel  2  menunjukkan  kontak  residu asam amino antara protein LTA4H dan ligan. Residu asam amino bercetak tebal merupakan asam  amino  penyusun  kantung  aktif  dari protein  LTA4H.  Interaksi  ikatan  hidrogen dari  ligan  Bullatalisin  terjadi  pada  asam
amino Glu 271, Glu 325, Arg 326, sedangkan kontak  residu  asam  amino  dengan  standar terjadi pada asam amino Gln 136 dan Tyr 378. Interaksi  antara  ligan  dengan  asam  amino kantung  aktif  tersebut  diharapkan  dapat menghambat kinerja protein LTA4H.

## Tabel 2. Kontak residu asam amino protein Leukotrien A4 Hidrolase dan ligan
Ligan Residu Asam amino Jarak Interaksi (Å) Bullatalisin Glu 271 2.7 Glu 325 2.1 Glu 325 2.5 Arg 326 2.8 Standar Gln 136 3.3 Tyr 378 2.5
Evaluasi  presisi  hasil  posisi docking antara  protein  dan  ligan  dilakukan  dengan membandingkan  nilai  RMSD  dari  2  metode program docking , yaitu AutoDockdan AutoDock  Vina  sebanyak  10  kali  ulangan
(Tabel  3).  RMSD docking berdasarkan  pada hasil superimpose dari setiap ulangan.
Nilai rerata RMSD pada hasil AutoDock  Tools  (ADT)  lebih  dari  2,  hal  ini menunjukkan perbedaan letak posisi docking ikatan  antara  kompleks  ligan  standar-protein dan  ligan  Bullatalisin-protein  dalam  setiap ulangan.  Sedangkan  pada  AutoDock  Vina memiliki nilai rerata RMSD  mendekati satu, yang    menunjukkan  letak  posisi docking diantara  kedua  kompleks  ligan  tidak  terlalu berbeda  (Purnomo,  2013).  Nilai  RMSD kurang  dari  2  Å  menunjukkan  presisi  hasil konformasi docking yang baik (Santoyo et al ., 2013).
Table 3. Hasil validasi docking ligan standar AutoDock Tools dan AutoDock Vina
Ulangan 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 rerata RMSD (Å) Vina 1.0459  1.0390  1.0464  1.0351  1.0340  1.0302  1.0465  1.0349  1.0432  1.0460 1.0401 ADT   2.1952  2.5445  2.5408  2.8675  2.2064  2.4156  2.5663  2.5635  2.4920  2.1680 2.4560
Tabel 4. Hasil uji F energi bebas Gibbs antara ligan standar dan bullatalisin
Ulangan ∆G (kKal/mol) Standar Bullatalisin 1 -11.8 -11.4 2 -11.8 -11.3 3 -11.9 -11.3 4 -11.8 -11.3 5 -11.8 -11.3 6 -11.8 -11.4 7 -11.8 -11.3 8 -11.8 -11.3 9 -11.8 -11.3 10 -11.8 -11.4 rerata -11.8 -11.3 Sd 0.0316 0.0483 Varians 0.0010 0.0023 F Hitung 2.3333 Derajat Bebas 9 9 F (0.05,9,9) 4.0260
Berdasarkan pada hasil uji F didapatkan hasil  bahwa  tidak  berbeda  signifikan  dari hasil nilai ∆G antara standar dan Bullatalisin sebagai kandidat ligan hasil docking . Pada Uji signifikansi,  juga  dapat  dilihat  antara  hasil docking standar dan ligan hasil docking tidak berbeda  nyata.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa antara standar dengan Bullatalisin menghasilkan  nilai  ∆G  tidak  berbeda signifikan secara statistik (Tabel 4).

## SIMPULAN DAN SARAN Simpulan
Berdasarkan pada hasil analisis parameter docking ,  ligan  Bullatalisin  dan standar  dapat  menempati  alternatif  kantung aktif protein  LTA4H. Interaksi ligan dengan residu  asam  amino  penyusun  kantung  aktif diharapkan  dapat  mengganggu  aktivitas protein. Energi bebas Gibbs (∆ G ) kedua ligan tersebut  tidak  berbeda  nyata  secara  statisitik uji F.
Saran
Pada penelitian selanjutnya perlu dilakukan  modifikasi  Bullatalisin,  yang diharapkan  bisa  meningkatkan  nilai  energi bebas Gibbs, dan itu dapat menjadi obat jenis baru  yanglebih  baik  dari  standar.  Selain  itu perlu  dilakukan  analisis  penentuan  dari aktivitas proteinLTA4H terhadap inhibisi dari ligan obat.

## DAFTAR PUSTAKA
Arguello,  M.,  Paz,  S.,  Hernandez,  E., et  al . 2006.  Leukotriene  A4  hydrolase expression in PEL cells is regulated at the  transcriptional  level  and  leads  to increased  leukotriene  B4  production.
J Immunol . 176:7051-7061.
Boyle, N.M.O., Banck, M., James, C.A., et al . 2011. Open Babel: An open chemical toolbox. J. Cheminf . 3:33.
Chen,  X.,  Li,  N.,  Wang,  S., et  al .  2003.
Leukotriene  A4  hydrolase  in  rat  and human  esophageal  adenocarcinomas and  inhibitory  effects  of  bestatin. J Natl Cancer Inst . 95:1053-1061. Chen, X, Wang, S, Wu, N, Yang, C.S. 2004.
Leukotriene A4 hydrolase as  a target for  cancer  prevention  and  therapy.
Current  cancer  Drug  Target .  4:267- 283.
Chiu,  H.F.,  Chih,  T.T.,  Hsian,  Y.M.,  Tseng, C.H.,  Wu,  M.J.,  Wu,  Y.C.  2003.
Bullatacin, a potent antitumor Annonaceous  acetogenin,  induces apoptosis  through  a  reduction  of intracellular  cAMP  and  cGMP  levels in  human  hepatoma  2.2.15  cells.
Biochem Pharmacol . 65(3):319-327.
Chul, H.J., Ann, M.B., Angelo, P., et al . 2009.
[6]-Gingerol  suppresses  colon  cancer growth  by  targeting  leukotriene  A4 hydrolase. Cancer  Res .  69:  5584- 5591.
DeLano, W.L. 2002. The PyMOL molecular graphics
system. http://www.pymol.org.
Gilson, M.K., Zhou, H. X.  2007. Calculation of  protein-ligand  binding  affinities.
Annual  Review  of  Biophysics  and Biomolecular Structure . 36:21-42.
Haeggström, J.Z., Funk, CD. 2011. Lipoxygenase and leukotriene pathways: Biochemistry, biology, and roles in disease. Chem Rev . 111(10):5866-5898.
Hevener, K., Zhao, W., Ball, D., Babaoglu, K.,
Qi,  J.J.,  White,  S.,  Lee,  R.  2009.
Validation  of  molecular  docking programs for virtual screening against dihydropteroate synthase. J of Chemical  Information  and Modeling.
46(2):444-460.
Idrees, S., Ashfaq, U.A. 2014. Discovery and design  of  cyclic  peptides  as  dengue virus  inhibitors  through  structure- based molecular docking. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine .
7(7):513-516.
Liang, Y.J,  Zhang, X, Dai, C.L., et al . 2009. Bullatacin Triggered ABCB1- Overexpressing Cell Apoptosis via the Mitochondrial-Dependent  Pathway. Journal of Biomedicine and
Biotechnology .    2009,  Article  ID 867123:1-9.
Marjolein, M.G.M.T, Nordlund, P.,
Haeggström,J.Z.
2001.Crystal structure  of  human  leukotriene  A 4 hydrolase,  a  bifunctional  enzyme  in inflammation. Nature Structural
Biology . 8:131-135.
Morris, G.M., Goodsell, D.S., Halliday, R.S.,
Huey,  R.,  Hart,  W.E.,  Belew,  R.K., Olson, A.J. 1998. Automated docking using  a  lamarckian  genetic  algorithm and an empirical binding  free  energy function.
J Comput Chem . 19(14):1639-1662.
Niegowski,  D.,  Thunnissen,  M.,  Tholander,
F.,  Rinaldo-Matthis,  A.,  Muroya,  A., Haeggstrom,  J.Z.  2102. Structure  of human  Leukotriene  A4  hydrolase  in complex  with  inhibitor  sc57461A. http://www.rcsb.org/pdb/explore/expl ore.do?structureId=3U9W.
Okun,  J.G.,  Lummen,  P.,  Brandt,  U.  1999.
Three  classes  of  inhibitors  share  a common binding domain in
mitochondrial complex I (NADH:Ubiquinone  oxidoreductase. The Journal of Biological Chemistry . 274(5):2625-2630.
Orning,  L.,  Gierse,  J.K,  Fitzpatrick,  F.A. 1994. The bifunctional enzyme leukotriene-A4 hydrolase is an arginine  aminopeptidase  of  high efficiency  and  specificity. J  Biol Chem 269(15):11269-11273.
Purnomo,  H.  2013. Kimia  komputasi:
molecular docking plants penambatan molekul  plants  [protein-ligand-ant- system](“ilmu semut”) . Pustaka Pelajar. Yogyakarta. 62-63.
Rester,  U.  2008.  From  virtuality  to  reality  - virtual screening in lead discovery and lead optimization: a medicinal chemistry perspective. Current
Opinion  in  Drug  Discovery  & Development .11: 559-568.
Santoyo, A.H.,  Barajas,  A.Y.T., Altuzar, V.,
et  al .  2013.  Protein-Protein  and
Protein-Ligand Docking. In Tech . 64- 81.
Seeliger,  D.,  de  Groot,  B.L.  2010.  Ligand docking and binding site analysis with PyMOL  and  AutoDock/Vina. J Comput Aided Mol Des. 24:417-422.
Sousa,  S.F,  Fernandes,  P.A.,  Ramos,  M.J.
2006. Protein-ligand docking: current status and future challenges. Proteins . 65(1):15-26.
Stsiapanavaa,  A.,  Olssona,  U.,  Wana,  M., et al .  2014.  Binding  of  Pro-Gly-Pro  at
the  active  site  of  leukotriene  A4 hydrolase/aminopeptidase and development of an epoxide hydrolase selective inhibitor. PNAS .
111(11):4227-4232.
Tambunan,  U.S.F.,  Alamudi,  S.  2010. Designing  cyclic  peptide  inhibitor  of dengue  virus  NS3-NS2B  protease  by using  molecular  docking  approach. Bioinformation . 5(6):250-254. Tholander,  F., et  al .  2008.  Structure-based dissection of the active site chemistry of leukotriene A4 hydrolase: Implications for M1 aminopeptidases and  inhibitor  design. Chem  Biol .
15(9):920-929. Thunnissen, M.M., Nordlund, P.,
Haeggstrom, J.Z.  2001.  Crystal structure  of  human  leukotriene  A4 hydrolase, a bifunc- tional enzyme in inflammation. Nat Struct Biol . 8:131- 135.
Trott,  O.,  Olson,  A.  2010.  AutoDock  Vina: improving the speed and accuracy of docking with a new scoring function, efficient optimization and multithreading. J CompChem . 31:455-461.
Yu, H.H., Rupprecht, J.K.,, Anderson, J.E., et al .1989.Bullatalisin, a novel bioactive acetogenin  from  annona  bullata (annonaceae). Terrohedron .
45(22):6941-6948.