Aktivitas  Anti  Inflamasi  dan  Penyembuhan  Luka  dari  Ekstrak  Kulit Batang Murbei ( Morus alba L.)
( Anti-inflammatory  and  Wound  Healing  Activities  of  Mulberry  Barks  (Morus  alba  L.) Extract )
Subehan Lallo 1* , Besse Hardianti 2 , Halim Umar 2 , Widya Trisurani 2 , Andi Wahyuni 2 , Mauizatul Latifah 2
1* Fakultas Farmasi, Universitas Hasanuddin, Makassar, Indonesia.
2 Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Makassar, Indonesia. E-mail: subehan@unhas.ac.id
Article Info: Received: 9 Desember 2019 in revised form: 9 Desember 2019 Accepted: 1 9 Desember 2019
Available Online: 02 Maret 2020

## ABSTRACT
Mulberry  ( Morus  alba L.)  leaf  has  been  used  as  a  traditional  medicine  for treatment  of  some  tropical  diseases  and  also  popular  using  for  silkworm feed. On this research, anti-inflammatory and wound healing activities of the bark extract has been investigated in vivo. The bark was extracted with three organic solvent in a different polarity to carry out a group compounds in n- hexane  extract  (EH),  Eto-Ac  extract  (EE),  and  EtOH  extract  (EO).  Anti- inflammatory  was  investigated  on  inflammatory  mice  induced  by  1% carrageenan.  Among  the  extract  (200mg/kg  BW),  EE  showed  strongly decrease  inflammation  by  42%  than  the  other  extract  and  stronger  than  the positive  control,  Na-diclofenac.  Further  investigation  on  healing  effect  of wound and burn injury which was tested at concentration of 1% topically to each  extract.  All  the  extract  significantly  showed  healing  activity,  among them  EE  was  observed  as  the  stronger  one  while  slightly  less  than  the positive  control.  This  result  indicated  that  the  most  active  compounds  on anti-inflammatory and healing wounded was extracted with ethyl acetate that could be used for drug discovery.
Keywords : Mulberry Bark
Morus alba L. Wound healing Anti-inflammatory
Corresponding Author: Subehan Lallo Fakultas Farmasi Universitas Hasanuddin Jln. Perintis Kemerdekaan Km. 10
Makassar 90245
Indonesia Email: subehan@unhas.ac.id Copyright © 2019 JFG-UNTAD
This open access article is distributed under a Creative Commons Attribution (CC-BY-NC-SA) 4.0 International license.
How to cite (APA 6 th Style):
Lallo,  S.,  Hardianti,  B.,  Umar,  H.,  Trisurani,  W.,  Wahyuni,  A.,  dan  Latifah,  M.  (2020).  Aktivitas  Anti  Inflamasi  dan Penyembuhan  Luka  dari  Ekstrak  Kulit  Batang  Murbei  ( Morus  alba L.). Jurnal  Farmasi  Galenika  :Galenika  Journal  of Pharmacy (e-Journal), 6 (1), 26-36. doi:10.22487/j24428744.2020.v6.i1.14661
Jurnal Farmasi Galenika ( Galenika Journal of Pharmacy ) (e-Journal) 2020; 6 (1): 26 – 36 ISSN : 2442-8744 (electronic); 2442-7284 (printed) Journal Homepage: https://bestjournal.untad.ac.id/index.php/Galenika DOI: 10.22487/j24428744.2020.v6.i1.14661

## ABSTRAK
Daun  murbei  ( Morus  alba L.)  telah  digunakan  sebagai  obat  tradisional  untuk  pengobatan  beberapa  penyakit tropis  dan  juga  sebagai  pakan  ulat  sutra.  Pada  penelitian  ini  telah  dilakukan  uji  anti-inflamasi  dan  efek penyembuhan  luka  secara  in  vivo  dengan  menggunakan  ekstrak  klika  murbei.  Kulit  batang  diekstraksi  dengan tiga jenis pelarut yang berbeda tingkat kepolarannya yaitu n-hexan, etil asetat dan etanol. Aktifitas anti inflamasi diuji dengan  menginduksi inflamasi pada tikus  menggunakan keragenan 1%. Diantara ekstrak tersebut, ekstrak etil  asetat  (200mg/kkBB)  menunjukkan  efek  penurunan  inflamasi  sebesar  42%  dibandingkan  dengan  ekstrak lainnya  dan  juga  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  Na-diklofenak  (Kontrol  positif).  Penelitian  selanjutnya terhadap efek penyembuhan luka bakar dan luka iris dengan menggunakan ekstrak pada konsentrasi 1% secara topical.  Seluruh  ekstrak  menunjukkan  kemampuan  yang  signifikan  dalam  mengobati  luka  dan  diantara  ekstrak tersebut, ekstrak etil asetat menunjukkan aktivitas yang terbaik namun masih lemah dibandingkan dengan positif kontrol yang digunakan. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa ekstrak etil asetat mengandung senyawa aktif yang potensial untuk pengobatan inflamasi dan pengobatan luka.
Kata kunci: Kulit batang murbei; Morus alba L.; anti inflamasi; luka bakar; luka iris.

## PENDAHULUAN
Penggunaan  obat  tradisional  bagi  masyarakat  Indonesia  merupakan  suatu  hal  yang  sudah  melekat dalam  kehidupan  seharinya  terutama  dalam  menghadapi  segala  macam  masalah  kesehatannya. Langkah  utama  yang  dilakukan  dalam  pengobatan  tersebut  dengan  memanfaatkan  keaneragaman hayati yang tumbuh di sekitarnya. Penggunaan ini telah dilakukan sejak jaman dahulu dan hingga saat ini masih tetap digunakan baik untuk tujuan pencegahan, perawatan dan pengobatan. Pengelolaannya pun  juga  berkembang  menjadi  lebih  modern  menyesuaikan  dengan  perkembangan  jaman. Pengembangan  pengobatan  tradisional  sebagai  warisan  budaya  bangsa  terus  ditingkatkan  melalui penggalian, pengujian dan penemuan obat-obat baru.
Berbagai  penelitian  tentang  penggunaan  tanaman  untuk  pengobatan  berbagai  penyakit  telah  banyak dilaporkan, termasuk tanaman murbei yang dikenal dengan nama ilmiah sebagai Morus alba L., suku Moraceae.  Meskipun  tanaman  ini  banyak  dimanfaatkan  daunnya  sebagai  pakan  ulat  sutera,  namun juga telah digunakan secara empiris untuk pengobatan seperti flu, malaria, hipertensi, asma, diabetes, insomnia, vertigo, anemia, hepatitis dan obat luka. Tanaman murbei juga memiliki banyak khasiat lain diantaranya  menurunkan  kolesterol  darah  dan  hipertensi  (Mallaleng et  al. ,  2011).  Disamping penggunaannya  tersebut,  juga  secara  empiris  telah  digunakan  sebagai  obat  tradisional  untuk penyembuhan luka (Hariana, 2008).
Golongan senyawa bioaktif yang terkandung dalam tanaman  murbei ( Morus alba L.) sebagian besar merupakan zat polifenol, flavonoid, antosianin, lektin, oligosakarida, glikosida, zat anti-bakteri, asam lemak  tak  jenuh  yang  terdapat  pada  daun,  batang,  buah  dan  akar  (Lin  &  Lay,  2013).  Golongan kandungan kimia yang lain telah dilaporkan seperti tanin, steroid, saponin dan senyawa kimia lainnya (Kaushik et  al. ,  2013).  Bagian  batang  murbei  mengandung  senyawa  seperti  triterpenoid  (alfa-beta- amyrin,  sitosterol,  sitosterol-alfa-glucoside),  kumarin  (umbelliferone  dan  scopoletin)  dan  flavonoid (morusin,  siklomorusin  dan  oxyhidromorusin). Kulit akar  murbei  memiliki  beragam  komponen  aktif seperti  mulberosside  A,  oxyresveratrol,  mulberrofuran  G,  kuwanon  C,  kuwanon  G,  kuwanon  H  dan morusin.  Diantara  komponen  aktif  ini,  kuwanon  C  dan  kuwanon  G  memiliki  efek  anti  inflamasi (Cheon et  al. ,  2000;  Yang et  al. ,  2011).  Flavonoid  memiliki  aktivitas  farmakologi  sebagai  anti inflamasi  dengan  melalui  beberapa jalur  yaitu  dengan  penghambatan  aktivitas  enzim  siklooksiginase (COX)  dan  lipooksiginase,  penghambatan  akumulasi  leukosit,  penghambatan  degranulasi  neutrofil, penghambatan pelepasan histamin (Nijveltd et al. , 2001).
Pada  penelitian  sebelumnya  yang  dilakukan  oleh  Vincent  &  Puradisastra  (2007)  diperoleh  bahwa ekstrak  daun  murbei  ( Morus  alba L.)  berpengaruh  dalam  penyembuhan  luka  insisi  dan  mempunyai potensi lebih kuat dibanding dengan kontrol positif pada konsentrasi 1%. Penelitian mengenai zat yang
dapat mempercepat penyembuhan luka merupakan salah satu hal yang sedang berkembang dan banyak dilakukan  oleh  para  peneliti  dan  praktisi  tradisional  di  seluruh  dunia  khususnya  India  dan  Cina. Menurut World Health Organization (WHO), 80% populasi di Negara Asia dan Afrika menggunakan pengobatan  tradisional.  Pentingnya  penanganan  luka  secara  optimal  telah  mendorong  berkembang pesatnya ilmu tentang luka, penyembuhan, dan penanganan luka (Putri et al. , 2014).
Golongan  senyawa  yang  berasal  dari  tumbuhan  seperti  tanin  dapat  membantu  proses  penyembuhan luka karena berfungsi sebagai antioksidan dan antimikroba yang  mempengaruhi penyambungan luka juga mempercepat epitelisasi. Tanin dan saponin juga bersifat sebagai antiseptik pada luka permukaan dan bekerja sebagai bakteriostatik. Steroid bersifat sebagai anti inflamasi. Flavonoid mempunyai sifat antioksidan dengan mengurangi ROS yang berlebihan, antibakteri, dan dapat meningkatkan kontraksi luka dengan sifat antimikroba dan astringentnya (Kusumawardhani et al. , 2015).
Berdasarkan hal tersebut maka sangat penting untuk melakukan uji aktifitas kulit batang murbei untuk pengobatan inflamasi dan luka

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan adalah pletysmometer, maserator, jangka sorong, cawan petri, chamber , kompor listrik,  lampu  UV  254  nm  dan  366  nm,  lempeng  besi,  corong  pisah,  pisau  bedah,  pipa  kapiler,  pipet tetes,  plat  tetes,  seperangkat  alat  gelas  ( pyrex ) sedangkan  bahan  utama  yang  digunakan  dalam penelitian adalah asam asetat anhidrat, aquadest, etanol 70%, etil asetat,  FeCl 3, HCl 2N, HCl 1M,  n- heksan,  magnesium,  NaOH  1  M,  n-heksan,  pereaksi  Dragendorf,  pereaksi  Mayer,  pereaksi  Wagner, etil  asetat,  etanol  70%,  karagenan,  tikus jantan  ( Rattus  norvegicus ),  kelinci  ( Oryctolagus  cuniculus ), Na.  CMC,  Na.  diklofenak,  kulit  batang  murbei  ( Morus  alba L . )  dan  silika  gel,  visigel ® gel,  cinolon- N ® krim, bioplasenton ® .
Metode

## Pengambilan Sampel
Sampel  yang  digunakan  yaitu  klika  murbei  ( Morus  alba L.)  yang  diambil  di  daerah  Bili-Bili, Kecamatan Bontomaru, Kabupaten Gowa, Sulawesi Selatan.

## Penyiapan Sampel
Sampel  kulit  batang  murbei  yang  telah  dikumpulkan  kemudian  dibersihkan  dan  dicuci  dengan  air mengalir  hingga  bersih.  Kemudian  sampel  dirajang  dan  dikeringkan  dilemari  pengering  sampai diperoleh simplisia kering.
Pembuatan Ekstrak Klika Murbei ( Morus alba L.)
Proses ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol 70% sebanyak 1400 gram simplisia kering klika murbei dimasukkan ke dalam toples kaca yang bening, kemudian simplisia dilakukan  pembasahan  selama  30  menit.  Cairan  penyari  etanol  70%  digunakan  sebanyak  12  liter, proses  ekstraksi  dilakukan  selama  3  hari.  Setelah  dimaserasi  kemudian  dilakukan  penyaringan. Maserat  yang  diperoleh  dari  penyaringan  dikumpulkan  dan  kemudian  dievaporasikan,  hingga konsistensi terbentuk massa yang kental.

## Fraksinasi
Fraksinasi dilakukan menggunakan metode ekstraksi cair-cair. Ditimbang ekstrak klika murbei ( Morus alba L.)  sebanyak  30  gram  kemudian  ditambahkan  250  mL  etanol  70%  dan  dimasukkan  ke  dalam
corong  pisah,  selanjutnya  ditambahkan  N-heksan  sebanyak  250  mL,  dikocok  hingga  ekstrak  dapat terlarut.  Didiamkan  beberapa  saat  hingga  terbentuk  dua  lapisan,  lapisan  N-heksan  diambil  dan diuapkan. Dilanjutkan partisi dengan n-heksan hingga jenuh. Setelah itu, dilakukan partisi dengan etil asetat. Ditambahkan etil asetat sebanyak 250 mL, dilakukan partisi etil asetat hingga jenuh. Masing- masing fraksi diuapkan.

## Pembuatan Larutan Karagenan 1%
Larutan  karagenan  dibuat dengan  menimbang  0,1  g  karagenan  ,  kemudian  dilarutkan  dengan  larutan garam fisiologis (NaCl 0,9%) sebanyak 10 mL, sehingga didapatkan larutan karagenan 1%.

## Pembuatan Suspensi Na. CMC 0,5%
Sebanyak  0,5  g  Na.  CMC  ditaburkan  merata  ke  dalam  lumpang  yang  berisi  aquadest  yang  telah dipanaskan  sebanyak  50  mL,  kemudian  diaduk  hingga  diperoleh  massa  yang  transparan  kemudian diencerkan  dengan  sedikit  air  dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  100  mL  lalu  ditambahkan  aquadest sampai garis tanda.

## Pembuatan Sampel Uji
Pengujian aktivitas fraksi klika murbei ( Morus alba L.), masing-masing fraksi dibuat konsetrasi 1%. Fraksi diencerkan dengan penambahan gel untuk mendapatkan konsentrasi fraksi murbei ( Morus alba L.) 1%.

## Pembuatan Suspensi Natrium Diklofenak
Sebanyak  10  tablet  natrium  diklofenak  (setiap  tablet  mengandung  natrium  diklofenak  50  mg) ditimbang  kemudian digerus. Serbuk tablet natrium  diklofenak ditimbang sesuai dengan perhitungan dosis, kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 5 mL dan disuspensikan dalam Na-CMC 0,5% dan dicukupkan volumenya hingga 5 mL.

## Pengujian Anti Inflamasi
Hewan  coba  yang  digunakan  sebanyak  15  ekor  tikus  jantan  dibagi  menjadi  5  kelompok  percobaan. Hewan  coba diadaptasi  selama  1  minggu.  Hewan  coba  dipuasakan  selama  18 jam  tetapi tetap  diberi minum. Pada hari pengujian, hewan coba ditimbang dan dikelompokkan secara acak, yaitu kelompok kontrol  negatif,  kelompok  kontrol  positif  dan  kelompok  uji.  Masing-masing  kelompok  pengujian terdiri  dari  3  ekor.  Setiap  tikus  diberi  tanda  batas  pada  sendi  kaki  belakang  tikus  agar  pada  saat pengukuran  menggunakan  pletismometer  selalu  sama.  Sebelum  melakukan  perlakuan,  volume  kaki tikus diukur untuk mengetahui volume awal (Vo) dengan cara mencelupkan ke dalam pletysmometer . Kemudian  hewan  coba  diinduksi  dengan  karagenan  1%  sebanyak  0,2  mL.  Selanjutnya  diberi perlakuan  secara  peroral  menggunakan  sonde  pada  jam  ketiga  setelah  penginduksian.  Tikus  pada masing-masing  kelompok  diberi  perlakuan  sebagai  berikut:  Kelompok  1  (kontrol  positif)  diberikan natrium  diklofenak  13,5  mg/KgBB.  Kelompok  2  (kontrol  negatif)  diberikan  Na.  CMC  0,5%. Kelompok  3  diberikan  fraksi  N-heksan  200  mg/KgBB.  Kelompok  4  diberikan  fraksi  etil  asetat  200 mg/KgBB.  Kelompok  5  diberikan  fraksi  etanol  200  mg/KgBB.  Volume  udem  telapak  kaki  tikus diukur menggunakan pletysmometer setiap 1 jam selama 15 jam setelah diinduksi karagenan 1%.

## Pengujian Aktivitas Penyembuhan Luka Iris
Sebelum  dilakukan  pengujian,  bulu  disekitar  punggung  dicukur  bersih,  diukur  sepanjang  1,5  cm. Punggung kelinci yang telah dicukur kemudian dilukai menggunakan pisau skapel dengan kedalaman 0,5 cm (pisau skapel diberi tanda terlebih dahulu). Darah yang keluar dibersihkan menggunakan kasa steril kemudian setiap kelompok diberi perlakuan 5 masing-masing dengan kontrol positif cinolon-N ®
krim, control negatif vigel ® gel dan fraksi etil asetat, fraksi N-heksan dan fraksi etanol masing-masing dengan  konsentrasi  1%.  Masing-masing  perlakuan  diberikan  secara  topikal  sekali  tiap  luka. Pengamatan dilakukan setiap hari mulai dari hari pertama perlakuan sampai luka sembuh.

## Pengujian Aktivitas Penyembuhan Luka Bakar
Pengujian dilakukan dengan menggunakan kelinci sebanyak 3 ekor yang terlebih dahulu diadaptasikan dengan lingkungan baru selama 3 hari. Setelah diadaptasi kelinci siap digunakan sebagai hewan coba. Hewan coba kelinci dicukur pada bagian punggungnya sebanyak 5 bagian, sebelum diinduksi dengan alat  penginduksi  panas  berupa  lempeng  logam  berdiameter  3  cm  dipanaskan  selama  5  menit ditempelkan pada punggung kelinci selama 5 detik (Suratman et al. , 1996). Setiap hewan coba diberi 5 bagian luka, luka  I,  II,  III  (perlakuan), luka IV (kontrol negatif/tanpa perlakuan) dan luka V sebagai kontrol  positif.  Masing-masing  luka  bakar  diberikan  perlakuan  sesuai  kelompoknya  masing-masing dimana tiga bagian luka diberi perlakuan diolesi dengan konsentrasi fraksi klika murbei ( Morus alba L.) yaitu fraksi etanol, fraksi n-heksan dan fraksi etil asetat masing-masing 1%, serta luka bagian IV tidak diberi perlakuan apapun sebagai kontrol negatif dan luka V diberi bioplasenton ® sebagai kontrol positif. Pengolesan dilakukan dua kali sehari. Dilakukan pengamatan terhadap efek penyembuhan luka bakar setiap hari sampai luka bakar sembuh.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Klika  murbei  ( Morus  alba L.)  diperoleh  dari  tempat  pembudidayaan  tanaman  murbei  di  Bili-bili, Kecamatan  Bontomarannu,  Kabupaten  Gowa,  Sulawesi  Selatan.  Sampel  yang  telah  diperoleh kemudian  diolah  hingga  dihasilkan  simplisia  kering.  Metode  ekstraksi  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  maserasi.  Metode  maserasi  merupakan  salah  satu  metode  pemisahan  senyawa dengan  cara  perendaman  menggunakan  pelarut  organik  pada  temperatur  ruangan.  Larutan  penyari yang  digunakan  yaitu  etanol  70%.  Berbagai  kandungan  yang  terdapat  dalam  tanaman  murbei  yang diduga  sebagai  anti  inflamasi  adalah  flavanoid.  Hasil  ekstraksi  klika  batang  murbei  dengan  metode maserasi menggunakan pelarut etanol 70% dapat dilihat pada tabel 1 dan 2.
Tabel 1. Hasil Ekstraksi Klika Murbei ( Morus alba L.)
Sampel Berat Simplisia Larutan Penyari Berat Ekstrak % Rendamen Klika batang murbei ( Morus alba L.) 1400 g etanol 70% 91,2 gram 6,5
Tabel 2. Hasil Partisi Ekstrak Klika Murbei ( Morus alba L.) Berat ekstrak Pelarut Hasil Partisi (g) 60 gram ekstrak klika batang murbei ( Morus alba L.) Etanol 70% 19,7 Etil asetat 9,7 n-heksan 4,8
Hasil skrining fitokimia pada esktrak klika batang murbei ( Morus alba L.) dapat dilihat pada tabel 3 yang  menunjukkan  hasil  yang  positif  terhadap  golongan  senyawa  flavonoid,  tannin,  triterpenoid  dan alkaloid. Beberapa hasil penelitian menunjukkan tanaman ini mengandung metabolit sekunder seperti tanin,  fitosterol,  sitosterol,  saponin,  triterpenoid,  flavonoid,  derivat  benzofuran,  asam  morusimat, antosianin,  antraquinon,  glikosidan  dan  asam  oleanolik  (Chen et  al. ,  2005).  Analisis  fitokimia  pada ekstrak metanol daun murbei ( Morus alba L.) menunjukkan adanya golongan senyawa seperti steroid, glikosida, terpenoid, saponin, alkaloid, flavonoid, tannin, karbohidrat, protein dan asam amino (Aditya et al. , 2013).
Inflamasi  atau  peradangan  merupakan  respon  terhadap  jaringan  akibat  berbagai  gangguan  yang merugikan,  baik  rangsangan  kimia,  mekanis  maupun  infeksi  yang  menimbulkan  rasa  sakit  di  daerah sekitarnya, sehingga perlu adanya pencegahan ataupun pengobatan untuk mengurangi rasa sakit akibat pembengkakan. Dalam penelitian anti inflamasi ini metode yang digunakan adalah pembentukan udem buatan pada telapak kaki tikus dengan menggunakan karagenan sebagai penginduksi udem. Metode ini dipilih karena merupakan salah satu metode pengujian aktivitas anti inflamasi yang sederhana, mudah dilakukan dan sering digunakan. Karagenan sebagai senyawa iritan menginduksi terjadinya cedera sel melalui  pelepasan  mediator  yang  mengawali  proses  inflamasi.  Pada  saat  terjadi  pelepasan  mediator inflamasi terjadi udem maksimal dan bertahan beberapa jam. Inflamasi yang diinduksi oleh karagenan ditandai  dengan  peningkatan  rasa  sakit,  pembengkakan  dan  sintesis  prostglandin  hingga  4-5  kali. Udem  yang  disebabkan  induksi  karagenan  bertahan  selama  6  jam  dan  berangsur-angsur  berkurang dalam waktu 24 jam (Taufiq et al. , 2008, Utami et al. , 2011).
Tabel 3. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Klika Murbei ( Morus alba L.)
Pengujian Komponen Kimia Perubahan Warna Keterangan Alkaloid + Pereaksi Mayer Endapan Putih (+) Positif + Pereaksi Wagner Endapan Coklat (+) Positif + Pereaksi Dragendorf Tidak ada endapan (-) Negatif Flavonoid Orange-Merah (+) Positif Tanin Warna Hitam (+) Positif Saponin Tidak Berbusa (-) Negatif Steroid Merah Jingga (-) Negatif Triterpenoid Merah Jingga (+) Positif
Pada  penelitian  anti  inflamasi  ini  dibuat  udem  pada  telapak  kaki  tikus  dengan  cara  menginjeksikan karagenan 1% dengan volume 0,2 mL. Udem yang terbentuk akibat induksi karagenan akan mencapai maksimal 3-5 jam setelah diinduksi (Utami et al. , 2011). Pada induksi dengan karagenan 1% sebanyak 0,2 mL mulai tebentuk pada jam pertama dan mencapai maksimalnya pada jam ke tiga. Sedangkan 2% dengan pemberian 0,2 mL, udem maksimal terjadi pada jam kelima (Saputri & Zahara, 2016). Untuk penelitian ini dipilih karagenan 1% karena udem maksimum yang terbentuk relatif lebih cepat. Setelah disuntikkan  karagenan,  kaki  hewan  coba  tikus  terlihat  adanya  pembengkakan  dan  kemerahan  serta tikus tidak dapat berjalan lincah seperti sebelum injeksi. Selanjutnya diukur volume udem tiap 1 jam hingga  volume  kaki  tikus  kembali  normal.  Pengukuran  anti  inflamasi  dilakukan  menggunakan  alat pletysmometer . Hewan uji yang digunakan adalah tikus putih dengan berat 170-280 gram. Pemilihan jenis kelamin jantan pada tikus agar hasil uji tidak dipengaruhi oleh hormon estrogen.
Pemberian  fraksi  klika  murbei  ( Morus  alba L.)  dilakukan  pada  jam  ketiga  terhadap  hewan  coba. Adapun  dosis  yang  digunakan  adalah  200  mg/kg  BB,  dosis  tersebut  diperoleh  dari  hasil  penelitian sebelumnya  yang  menggunakan  daun  murbei  ( Morus  alba L.)  sebagai  anti  inflamasi  dan  analgetik terhadap tikus (Aditya et al. , 2013).
Positif kontrol menggunakan Na.Diklofenak yang merupakan golongan NSAID. Natrium Diklofenak memiliki  efek  sebagai  anti  inflamasi,  analgetik  dan  antipiretik.  Senyawa  ini  merupakan  inhibitor siklooksiginase  dan  merupakan  derivat  fenilasetat  yang  daya  radangnya  paling  kuat  dengan  efek samping yang kurang dibandingkan dengan obat lainnya (seperti indometasin, piroxicam, naproksen). Obat ini sering digunakan untuk segala macam nyeri (Tjay  & Rahardja, 2007; Hardman & Limbird, 2003; Katzung, 2006). Obat ini bekerja dengan penghambatan siklooksiginase yang relatif nonselektif dan kuat, juga mengurangi bioavailabilitas asam arakidonat (Tjay & Rahardja, 2007). Obat ini terikat 99% pada protein plasma  dan mengalami efek lintas pertama ( first-pass ) sebesar 40-50% (Wilmana, 1995)  natrium  diklofenak  memiliki  daya  absorpsi  yang  cepat,  dilihat  dari  waktu  paruh  natrium diklofenak 0,5-1 jam dalam tubuh (Sukandar et al. , 2008).
Data yang didapatkan dari pengamatan dimasukkan ke dalam suatu tabel, kemudian dihitung rata-rata volume udem setiap waktu pengamatan. Hasil tersebut dapat dilihat pada gambar 1.
Gambar  1. Penurunan  volume  udem  dengan  menggunakan  ekstrak  kulit  batang  murbei.  Keterangan:  Vo: volume awal, T1: pengamatan jam ke 1, dst.
Dari  grafik  tersebut  dapat  dilihat  positif  kontrol  lebih  cepat  mengalami  penurunanan  volume  udem. Selain  itu,  fraksi  etil  asetat  menunjukkan  efek  anti  inflamasi  yang  paling  baik  dibandingkan  dengan fraksi  etanol  dan  fraksi  n-heksan.  Pada  positif  kontrol  Na.  diklofenak  dengan  dosis  13,5  mg/Kg  BB terlihat  pada  jam  ke  6  sudah  dapat  memberikan  efek  penurunan  udem  pada  kaki  tikus.  Pada  negatif kontrol  Na.  CMC  0,5%  penurunan  udem  terlihat  pada  jam  ke  8.  Sedangkan  pada  fraksi  n-heksan dengan dosis 200 mg/Kg BB, penurunan udem terlihat pada jam ke 7. Pada fraksi etil asetat dengan dosis  200  mg/Kg  BB,  penurunan  udem  terlihat  pada  jam  ke  5.  Pada  fraksi  etanol  dengan  dosis  200 mg/Kg BB, penurunan udem terlihat pada jam ke 6. Dari ketiga fraksi yang paling cepat menurunkan udem yaitu fraksi etil asetat.
Hasil uji daya anti inflamasi menunjukkan bahwa fraksi etil asetat dari klika murbei dengan dosis 200 mg/kgBB memberikan efek anti inflamasi lebih baik dibandingkan dengan fraksi N-heksan dan fraksi etanol.  Kemampuan  suatu  bahan  dalam  mengurangi  radang  pada  kaki  hewan  uji  akibat  injeksi karagenan  dinyatakan  sebagai  daya  anti  inflamasi.  Persen  Daya  Anti  inflamasi  (%DAI)  pada kelompok natrium diklofenak yaitu 28,1%, pada fraksi N-heksan dari klika murbei yaitu 11,2%, pada fraksi etil asetat dari klika murbei yaitu 42,7% dan pada fraksi etanol dari klika murbei yaitu 25,497%. Terlihat pada data Persen Daya Anti inflamasi (%DAI) bahwa fraksi etil asetat memiliki persen daya anti inflamasi yang lebih besar dibandingkan dengan kontrol positif dan fraksi lainnya.
Senyawa  golongan  flavonoid  dilaporkan  memiliki  aktifitas  antioksidan  yang  mampu  menghambat oksidasi  asam  arakidonat  menjadi  endoperoksida  dan  menurunkan  aktivitas  enzim  lipooksiginase. Apabila oksidasi asam arakidonat dapat dihambat, maka tidak terbentuk oksigen reaktif dan mediator- mediator kimia yang dapat menyebabkan nyeri dan radang. Selain itu, antioksidan dapat menurunkan aktivitas  enzim  lipooksiginase  sehingga  tidak  menyebabkan  terbentuknya  leukotrien  yang  dapat menginaktivasi  leukosit  yang  memacu  terjadinya  peradangan  (Lieber  &  Leo,  1999).  Selain  itu
0.000 0.010 0.020 0.030 0.040 0.050 0.060 0.070 0.080 Vo  T1  T2  T3  T4  T5  T6  T7  T8  T9  T10 T11 T12 T13 T14 T15 V o lum e Udem ( m L ) Waktu (Jam) KONTROL + KONTROL - F.N-HEKSAN F.ETIL-ASETAT F.ETANOL
golongan  terpenoid  diketahui  mampu  menghambat  inflamasi  dengan  beberapa  mekanisme, diantaranya dengan menghambat aktivitas enzim lipooksiginase dan siklooksiginase.
Selain  pengujian  aktifitasnya  sebagai  anti  inflamasi,  tanaman  murbei  ( Morus  alba L.)  juga  diuji aktifitasnya  dalam  penyembuhan  luka  iris.  Secara  empiris,  tanaman  ini  juga  diberitakan  memiliki khasiat  dalam  menyembuhkan  luka.  Selanjutnya  ke  3  fraksi  yang  diperoleh  diuji  masing-masing dengan  konsentrasi  1%.  Pemilihan  konsentrasi  didasarkan  pada  acuan  penelitian  yang  dilakukan sebelumnya bahwa konsentrasi 1% berpengaruh dalam mempercepat waktu penyembuhan luka insisi dan  mempunyai  potensi  yang  lebih  kuat  dibandingkan  dengan  kontrol  pembanding  (Vincent  & Puradisastra, 2007).
Dalam  penelitian  luka  iris  ini  pengamatan  dilakukan  setiap  hari  mulai  dari  hari  pertama  perlakuan sampai luka tertutup. Parameter yang diamati adalah dihitung ukuran luka sampai luka sembuh. Luka iris dibuat dengan panjang 1,5 cm dan kedalaman 0,5 cm kemudian diberi fraksi n-heksan, etil asetat dan  etanol  yang  telah  diformulasikan  dalam  bentuk  gel.  Berdasarkan  kedalaman  dan  luasnya  luka termasuk  kelompok  luka  stadium  III  ( Full  thickness), yaitu  hilangnya  kulit  secara  keseluruhan meliputi  kerusakan  atau  nekrosis  jaringan  subkutan  yang  dapat  meluas  sampai  bawah  tetapi  tidak melewati  jaringan  yang  mendasarinya.  Lukanya  sampai  pada  lapisan  epidermis,  dermis  dan hipodermis  tetapi  tidak  mengenai  otot.  Perbedaan  panjang  luka  pada  saat  pemeriksaan  menandakan terjadinya  proses  penyembuhan  luka  dari  hari  ke  hari.  Pada  umumnya  keropeng  terbentuk menandakan proses penyembuhan luka telah dimulai. Pengujian menunjukkan bahwa pada kelompok perlakuan kontrol positif, fase penyembuhan berlangsung selama 13-14 hari, fraksi etil asetat selama 15-16 hari, fraksi n-heksan selama 17-18 hari, fraksi etanol 70% selama 17-18 hari dan kontrol negatif selama 18 hari.
Gambar 2. Rata-rata penyembuhan luka (cm) dengan penggunaan ekstrak klika murbei
Berdasarkan  hasil  penelitian,  didapatkan  bahwa  fraksi  etil  asetat  memiliki  aktivitas  dalam mempercepat  penyembuhan  luka  iris.  Senyawa  seperti  tanin  dapat  membantu  proses  penyembuhan luka karena berfungsi sebagai antioksidan dan antimikroba yang  mempengaruhi penyambungan luka juga mempercepat epitelisasi. Tanin juga bersifat sebagai antiseptik pada luka permukaan dan bekerja sebagai bakteriostatik. Steroid bersifat sebagai anti inflamasi. Flavonoid mempunyai sifat antioksidan dengan mengurangi ROS yang berlebihan, antibakteri, dan dapat meningkatkan kontraksi luka dengan sifat antimikroba dan astringentnya (Kusumawardhani et al ., 2015).
Setelah  diolah  dengan  SPSS  menggunakan  uji One  Way ANOVA  diperoleh  hasil  P  <  0,005  yang artinya  bahwa  rata-rata  kecepatan  penyembuhan  luka  iris  pada  kelinci  dengan  5  perlakuan  berbeda yang  diberikan  tidak  sama.  Nilai  kecepatan  penyembuhan  kontrol  positif  berbeda  signifikan  dengan kecepatan  penyembuhan  dengan  perlakuan  kontrol  negatif  dengan  signifikansi  sebesar  0,001  dan
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1 KELINCI 1 KELINCI 2 KELINCI 3 KONTROL + FRAKSI ETIL FRAKSI N-HEKSAN FRAKSI ETANOL KOTROL -
fraksi  etanol  dengan  signifikansi  0,004.  Selanjutnya  untuk  fraksi  etil  asetat  dan  n-heksan  cenderung memiliki kecepatan penyembuhan yang sama dengan perlakuan kontrol positif.
Pengujian selanjutnya dengan uji penyembuhan terhadap luka bakar. Fraksi etanol, n- heksan dan etil asetat  klika  Murbei  ( Morus  alba L.)  yang  diperoleh di  uji  aktivitasnya sebagai obat  luka  bakar  pada kelinci.  Konsentrasi  masing-masing  fraksi  yang  digunakan  yaitu  1%  dan  untuk  pembandingnya digunakan Bioplasenton ® gel sebagai kontrol positif dan tidak diberi perlakuan sebagai kontrol negatif.

## Gambar 3. Diameter penyembuhan luka
Hasil  pengujian  penyembuhan  luka  bakar  menunjukkan  bahwa  pada  kelompok  perlakuan  kontrol positif,  fase  penyembuhan  berlangsung  selama  18  hari.  Fase  inflamasi  ditandai  dengan  adanya eksudasi  cairan,  pembengkakan  dan  terbentuknya bullae .  Fase  poliferasi  terjadi  saat  terbentuknya kolagen  dan  fase  poliferasi  ini  secara  klinis  ditandai  dengan  terlepasnya  keropeng  dan  terbentuknya jaringan granulasi yang berwarna kemerahan dan mengalami proses penyudahan atau maturasi dimana fase penyudahan ini ditandai dengan tertutupnya luka oleh jaringan baru.
Pada kelompok kontrol negatif fase penyembuhan lebih lama yaitu 28 - 29 hari. Penyembuhan dimulai dengan  fase  inflamasi.  Lalu  fase  poliferasi  terjadi  pembentukan  kolagen  dan  mengalami  proses penyudahan atau maturasi, dimana fase ini ditandai dengan menutupnya luka oleh jaringan baru. Pada hasil pengujian aktivitas pada fraksi didapatkan fraksi etil asetat mempunyai kemampuan paling besar terhadap  penyembuhan  luka  bakar.  Fase  penyembuhan  luka  bakar  pada  fraksi  etil  stat  berlangsung selama  19  -  20  hari,  fase  penyembuhan  pada  fraksi n -heksan  berlangsung  selama  22  hari  dan  fase penyembuhan pada fraksi etanol 70% yaitu selama 24-25 hari.
Pada  kelompok  perlakuan  masing-masing  fraksi  klika  murbei  ( Morus  alba L.)  menunjukkan  bahwa fraksi  etil  asetat,  fraksi n- heksan  dan  fraksi  etanol  70%  memiliki  kemampuan  dalam  penyembuhan pada  luka  bakar.  Senyawa  flavonoid  dilaporankan  mempunyai  sifat  antioksidan  dengan  mengurangi ROS  yang  berlebihan  dan  dapat  meningkatkan  kontruksi  luka  dengan  sifat  antimikroba  dan astringentnya. Tanin dan saponin bersifat sebagai antiseptik pada luka permukaan dan bekerja sebagai bakteriostatik. Steroid bersifat sebagai anti inflamasi.

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  terhadap  aktifitas  anti  inflamasi  dari  kulit  batang  murbei  ( Morus  alba L.) menunjukkan bahwa Persen Daya Anti inflamasi (%DAI) pada kelompok Na-diklofenak yaitu 28,1%, fraksi  N-heksan  11,2%, fraksi  etil  asetat  sebesar  42,7%  dan fraksi etanol  yaitu 25,497%.  Sedangkan
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 3 6 9 18 21 24 29 Kontrol Positif Kontrol Negatif Fraksi Etanol Fraksi N-heksan Fraksi Etil Asetat Rata -R at a D ia me te r L u k a (c m) Waktu Penyembuhan Luka (Hari)
Fase penyembuhan luka bakar pada fraksi etil asetat berlangsung selama 19 - 20 hari, fraksi n -heksan berlangsung  selama  22  hari  dan fraksi  etanol  70%  yaitu selama  24-25  hari.  Efek  penyembuhan  luka iris  ditunjukkan  hasil  yang  terbaik  pada  ekstrak  etil  asetat  dengan  rata-rata  penyembuhan  0.74  cm namun masih kurang lebih baik dibandingkan dengan positif kontrol yang digunakan.

## DAFTAR PUSTAKA
Aditya,  R.  S.  J.,  Ramesh,  C.  K.,  Basavaraj,  P.,  &  Jamuna,  K.  S.  (2013).  Evaluation  of  Anti- Inflammatory  and  Analgesic  Activity  In  Three  Morus  Species. Research  Journal  of Pharmaceutical, Biological and Chemical Sciences, 4 (3), 822-830.
Chen,  C.  C.,  Liu,  L.  K.,  Hsu,  J.  D.,  Huang,  H.  P.,  Yang,  M.  Y.,  &  Wang,  C.  J.  (2005).  Mulberry Extract  Inhibits  The  Development  Of  Atherosclerosis  In  Cholesterol  Fed  Rabbit. Food Chemistry, 91, 601–607.
Cheon,  B.  S.,  Kim,  Y.  H.,  Son,  K.  S.,  Chang,  H.  W.,  Kang,  S.  S.,  &  Kim,  H.P.  (2000).  Effects  of prenylated  flavonoids  and  biflavonoids  on  lipopolysaccharide-induced  nitric  oxide  production from the mouse macrophage cell line RAW 264.7. Planta Medica, 66 (7), 596–600.
Hardman, J. G. & Limbird, L. E. (2003). Goodman and Gilman, Dasar Farmakologi Terapi Edisi 10 Vol. 1 . Jakarta: EGC.
Hariana, H. A . ( 2008). Tumbuhan Obat dan Khasiatnya Seri 1 . Jakarta: Penebar Swadaya.
Katzung, B. G. (2006). Farmakologi Dasar Dan Klinis Edisi 6 . Jakarta: EGC.
Kaushik, M., Kaushik, A., & Murti K. (2013). Exploration of Healing Promoting Potentials of Leaves of Morus Alba L. in Albino Rats . American Journal of Pharmacology and Toxicology , 95-101.
Kusumawardhani, A. D., Kalsum, U., & Rini, I. (2015). Pengaruh Sediaan Salep Ekstrak Daun Sirih ( Piper betle Linn.) terhadap Jumlah Fibroblas Luka Bakar Derajat IIa pada Tikus Putih ( Rattus Norvegicus ) Galur Wistar. Majalah Kesehatan FKUB, 2 (1), 16-28
Lieber,  C.  S.  &  Leo,  M.  A.  (1999).  Alcohol,  Vitamin  A  and  β-Carotene:  Adverse  Interactions, Including  Hepatotoxicity  and  Carcinogenicity. The  American  Journal  of  Clinical  Nutrition, 69 (6), 1071-1085.
Lin, C. Y., & Lay, H. L. (2013). Characteristics of fruit growth, component analysis and antioxidant activity of mulberry ( Morus spp.). Scientia Horticulturae, 162 , 285-292.
Mallaleng, H. R., Purwaningtyas, U., Hermawati, R., Solichah, N., & Syah, F.Z.N. (2011). Tanaman Obat untuk Penyakit Sindrom Metabolisme (Metabolic Syndrome Disease) . Malang: Universitas Negeri Malang (UM Press).
Nijveldt, R. J., Noord, E. V., Home, D. EC. V., Boelens, P. G., Norren, K. V., & Leeuwen, P. AM, V. (2001).  Flavonoids:  a  review  of  probable  mechanisme  of  action  and  potential  applications. American Journal of Clinical and Nutrition, 74 , 418-425.
Putri,  S.  A.,  Sutadipura,  N.,  &  Roekmantara,  T.  (2014). Efek  Ekstrak  Etanol  Daun  Cocor  Bebek (Kalanchoe  pinnata [Lam]Pers .)  terhadap  Waktu  Penyembuhan  Luka  Sayat  pada  Tikus  Putih Jantan Galur Wistar . Bandung: Repository Universitas Islam Bandung.
Saputri,  F.C.,  &  Zahara,  R.  (2016).  Uji  Aktivitas  Anti  inflamasi  Minyak  Atsiri  Daun  Kemangi ( Ocimum  americanum L.)  Pada  Tikus  Putih  Jantan  Yang  Diinduksi  Karagenan. Pharm.  Sci. Res., 3 (3), 107-119.
Sukandar, E. Y., Andrajati, R., Sigit, I. J., Adnyana, I. K., Setiadi, A. A., & Kusnandar. (2008). ISO Farmakoterapi . Jakarta: PT.ISFI.
Suratman, Sumiwi, S. A., & Gozali, D. (1996). Pengaruh Ekstrak Antanan Dalam Bentuk Salep Krim Dan Jelli Terhadap Penyembuhan Luka Bakar . Cermin Dunia Kedokteran, 31-36.
Taufiq, L. H., Wahyuningtyas, N., & Wahyni A. S. (2008). Efek anti inflamasi Ekstrak Patikan Kebo ( Euphorbia hirta L.) Pada Tikus Putih Jantan. Pharmacon, 9 , 1-5
Tjay,  T.  H.,  &  Rahardja,  K.  (2007). Obat-Obat  Penting:  Khasiat,  penggunaan  dan  efek-efek sampingnya Edisi keenam . Jakarta: PT Elexmedia Komputindo Kelompok Gramedia.
Utami,  E.  T.,  Kuncoro,  R.  A.,  Hutani,  I.  R.,  Sari,  F.  T.,  &  Handjani,  J.  (2011).  Efek  Anti  inflamasi Ekstrak  Daun  Sembukukan  ( Paderia  scndens )  pada  Tikus  Wistar. Majalah  Obat  Tradisional, 16 (2), 95-100.
Vincent,  T.,  &  Puradisastra  S.  (2007), Pengaruh  Ekstrak  Etanol  Daun  Murbei  (Morus  alba  L.) Terhadap  Durasi  Penyembuhan  Luka  Insisi  Pada  Mencit  Swiss  Webster, Bandung:  Fakultas Kedokteran Universitas Kristen Maranatha.
Wilmana, P. F. (1995). Farmakologi Dan Terapi Edisi V . Jakarta: Bagian Farmakologi FKUI.
Yang,  Z. G., Matsuzaki, K., Takamatsu, S., & Kitanaka, S. (2011). Inhibitory effects of constituents from Morus alba var. multicaulis on differentiation of 3 T3-L1 cells and nitric oxide production in RAW264.7 cells. Molecules , 16 (7), 6010–6022.