## ISSN 2615-3947
IAIN  KUDUS Tersedia online: http://journal.stainkudus.ac.id/index.php/jbe

## PEMBERIAN KOMBINASI 2,4-D DAN KINETIN TERHADAP INDUKSI PROTOCORM LIKE BODIES (PLB) ANGGREK Grammatophyllum scriptum SECARA IN VITRO

## Atika Okta Melisa
INSTITUT AGAMA ISLAM NEGERI KUDUS
Email: melisabio16@gmail.com

## ABSTRAK
Grammathopyllum scriptum merupakan salah satu anggrek yang mempunyai nilai ekonomis  tinggi.  Anggrek  ini  tersebar  di  wilayah  Papua  dan  Sulawesi.  Tanaman anggrek  sulit  untuk  dikembangbiakan  secara  alami,  termasuk G.  scriptum, sehingga  dibutuhkan  teknik  kultur  jaringan  untuk  membantu  pelestariannya.
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  pengaruh  pemberian  kombinasi hormon  2,4-D  dan  kinetin  terhadap  induksi protocorm  like  bodies  (plb) anggrek G. scriptum secara in  vitro . Metode penelitian  yang digunakan adalah rancangan acak lengkap (RAL) dengan satu faktor perlakuan yaitu kombinasi 2,4-D (2mg/L, 4 mg/L, 6 mg/L, 8 mg/L, 10 mg/L) dan kinetin (1 mg/L dan 2 mg/L) serta kontrol (MS0)  dengan  3  ulangan.  Data  yang  diambil  berupa  data  kualitatif  dengan mengamati  morfologi plb ,  dan  data  kuantitatif  dengan  menghitung  panjang plb. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa pemberian kombinasi hormon 2,4-D dan kinetin tidak berpengaruh nyata terhadap pertumbuhan panjang plb.42 ,5% eksplan membentuk plb . Plb terbentuk pada konsentrasi 2 mg/L 2,4-D dan 1 mg/L kinetin hingga konsentrasi 6 mg/L 2,4-D dan 1 mg/L kinetin.
Kata kunci : Grammathopyllum scriptum , 2,4-D, kinetin, protocorm like bodies .

## ABSTRACT
Grammathopyllum  scriptum  is  one  of  orchid  which  has  a  high  economic  value. This  orchid  has  spread  in  Papua  and  Sulawesi.  Orchid  is  difficult  to  bred naturally, included G. scriptum so tissue culture techniques are needed to help its preservation.  The  aims  of  this  research  are  to  study  the  adduction  of  the combination  of  2,4-D  and  kinetin  to  protocorm  like  bodies  (plb)  of Grammathopyllum  scriptum  explants  in  vitro.  The  method  used  completely randomized design (CRD) with two factors, the concentration of growth hormone treatment of 2,4-D (2 mg/L, 4 mg/L, 6 mg/L, 8 mg/L and 10 mg/L), kinetin (1 mg/L and  2  mg/L)  and  controls  (MS0)  with  3  replications.  This  research  used  a
Atika Okta Melisa, Journal of Biology Education Vol  1 No 1 (2018) hal.  34
qualitative  data  by  observing  the  morphology  of  plb  and  shoots  as  well  as quantitative data  by calculating  the percentage of  plb  and shoots. The results of this study showed that 42.5% explants forming PLB, 3.04% and 45.46% forming buds  forming  callus.  The  callus  was  formed  at  the  same  time.  Callus  began  to form in combination with a growth hormone concentration of 6 mg/L 2,4-D and 2 mg/L kinetin up to a concentration of 10 mg/L 2,4-D and 2 mg/L kinetin. PLB was formed at a concentration of 2 mg/L 2,4-D and 1 mg/L kinetin concentrations up to 6 mg/L 2,4-D and 1 mg/L kinetin. In the media treatment of 4 mg/L 2,4-D and 2 mg/L kinetin formed buds.
Key  words :  Grammathopyllum  scriptum,  2,4-D,  Kinetin,  protocorm  like  bodies, callus

## PENDAHULUAN
Indonesia merupakan negara yang memiliki keanekaragaman hayati terbesar di  dunia,  salah  satunya  adalah  keanekaragaman  anggrek.  Salah  satu  contohnya adalah Grammatophyllum scriptum , di Indonesia G. scriptum tersebar di wilayah Papua  dan  Sulawesi  (Sulistiarini,  2008).  Menurut  Sulistiarini  (2008)  anggrek G. scriptum dapat  berpotensi  sebagai  tanaman  hias  dan  induk  silangan. G.scriptum memiliki warna bunga  yang indah,  selain itu, juga  dapat  digunakan sebagai  obat pada  penyakit  beri-beri,  sariawan  dan  disentri.  Berdasarkan  manfaat  dan keindahan bunganya, G. scriptum banyak dicari dan diburu oleh aktivitas manusia yang  akhirnya  menyebabkan  kelangkaan G.scriptum .  Hal  ini  ditambah  dengan sulitnya  perkembangbiakan  secara  alami  di  alam,  oleh  karena  itu  dibutuhkan teknik kultur jaringan untuk membantu pelestariaannya.
Menurut  Zulkarnain  (2009)  kultur  jaringan  merupakan  suatu  metode  untuk mengisolasi  bagian  dari  tanaman  (protoplasma,  sel,  jaringan  dan  organ),  serta ditumbuhkan  dalam  kondisi  aseptik  sehingga  bagian-bagian  tersebut  dapat memperbanyak  diri  dan  beregenerasi  menjadi  tanaman  utuh  kembali.  Teknik kultur jaringan berkembang pesat setelah ditemukannya zat pengatur tumbuh yang berfungsi untuk membantu dan mempercepat pertumbuhan tanaman kultur. Arah perkembangan  kultur  ditentukan  oleh  interaksi  dan  perimbangan  antara  zat pengatur  tumbuh  endogen  dengan  zat  pengatur  tumbuh  eksogen.  Pemakaian  zat pengatur  tumbuh  asam  2,4-D  biasa  digunakan  dalam  waktu  yang  singkat,  antara
2-4  minggu  karena  merupakan  auksin  kuat,  artinya  auksin  ini  tidak  dapat diuraikan  di  dalam  tubuh  tanaman  (Fitrianti,  2006).  Kinetin  merupakan  zat pengatur  tumbuh  yang  mempunyai  aktivitas  tinggi  dalam  memacu  pembelahan sel. Pemakaian kombinasi zat pengatur tumbuh tersebut diharapkan dapat memicu perubahan terhadap eksplan pada kultur jaringan anggrek G. scriptum .
Penelitian  tentang  pengaruh  kombinasi  hormon  2,4-D  dan  kinetin  terhadap induksi protocorm like bodies (plb) G. Scriptum dalam media MS belum pernah dilakukan,  oleh  karena  itu,  penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh dari pemberian kombinasi hormon 2,4-D (auksin) dan kinetin (sitokinin) terhadap eksplan G. scriptum .

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  Laboratorium  Biologi  FMIPA  dan Laboratorium  Kultur  Jaringan  Sub  Lab  Biologi,  Laboratorium  Pusat  MIPA Universitas Sebelas Maret Surakarta. Penelitian ini dilaksanakan selama 7 bulan, Februari-September 2011.

## 1. Sterilisasi alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  botol  kultur,  pinset, scalpel ,  cawan  petri,  dan  pisau.  Alat  dicuci  menggunakan  sabun  sampai  bersih kemudian  dikeringkan,  setelah  itu  alat  disterilisasi  menggunakan  autoklaf  pada suhu 121 0 C dengan tekanan 1,5 atm selama 20 menit.

## 2. Pembuatan Larutan Stok
Pembuatan  larutan  stok  bertujuan  untuk  memudahkan  dalam  pembuatan media. Larutan stok yang dibuat adalah larutan stok zat pengatur tumbuh. Larutan stok  2,4-D  dibuat  20  mg/L  dan  kinetin  5  mg/L.  Zat  pengatur  tumbuh  2,4-D ditimbang sebanyak 20 mg dan dilarutkan dalam alkohol (beberapa tetes saja) dan diencerkan dengan aquades sebanyak 1 L. Kinetin ditimbang 5 mg dan dilarutkan dalam alkohol (beberapa tetes saja) dan diencerkan dengan aquades sebanyak 1 L. Penyimpanan larutan stok zat pengatur tumbuh disimpan di dalam lemari es untuk menjaga agar tidak rusak.
3. Pembuatan Media Dasar
Serbuk media MS (Coisson Labs) sebesar 4,43 g dilarutkan dengan aquades, selanjutnya ditambah gula 40 g dan dilarutkan dalam 1 liter air, kemudian diukur pH 5,8.  Selanjutnya ditambahkan agar 12 g.  Larutan kemudian dimasak sampai mendidih.  Larutan dimasukkan ke dalam botol kultur, ditutup dengan aluminium foil kemudian disterilisasi menggunakan autoclaf dengan suhu 121 0 C, tekanan 1,5 atm selama 20 menit, kemudian didinginkan.

## 4. Pembuatan Media Perlakuan
Pembuatan  media  perlakuan  dilakukan  dengan  cara  mencampurkan  media dasar  dengan  zat  pengatur  tumbuh  2,4-D  dan  kinetin.  Komposisi  dari  masing- masing senyawa ditentukan dengan menggunakan persamaan sebagai berikut :
N 1 x V 1 = N 2 x V 2
Keterangan :
- N 1 : Konsentrasi stok zat pengatur tumbuh
- V 1 : volume stok zat pengatur tumbuh
- N 2 : konsentrasi zat pengatur tumbuh yang akan dibuat
- V 2 : Volume total
5. Penanaman
Planlet G.  scriptum dipotong  pada  bagian  hipokotil,  kira-kira  2-3  cm. Pemotongan  dilakukan  dengan  menggunakan  scalpel  steril.  Eksplan  yang  akan ditanam  dalam  media  kultur,  diambil  dengan  menggunakan  pinset  dan  ditanam dalam media perlakuan. Perubahan yang terjadi, diamati selama 10 minggu.

## 6. Pengambilan Data
Pengambilan  data  dilakukan  setelah  10  minggu.  Data  yang  digunakan adalah  data  morfologi  dan  anatomi.  Data  morfologi  meliputi  warna plb , perubahan  yang terjadi pada eksplan serta  eksplan yang mampu membentuk plb . Data  anatomi  diamati  dengan  membuat  preparat  irisan plb ,  setelah  dilakukan pengamatan morfologi.
a. Pengambilan Data Morfologi
Pengamatan  morfologi  dilakukan  3  hari  sekali  selama  10  minggu. Pengamatan  dilakukan  dengan  menggunakan  kaca  pembesar,  mikroskop, timbangan dan kamera.
b. Pengambilan Data Anatomi
Pengambilan  data  anatomi  dengan  cara  membuat  preparat  anatomi menggunakan  teknik embedding  section dan  pewarnaan  menggunakan  safranin 1% . Tahapan  pembuatan  preparat  dengan embedding  section adalah  sebagai berikut  ini:  fiksasi  (FAA),  pencucian,  dehidrasi,  infiltrasi,  penyelubungan (parafin), pengirisan, perekatan, pewarnaan (safranin), penutupan dan pelabelan. Analisis Data
Data  kualitatif  dianalisis  secara  deskriptif,  peubah  yang  diamati  dalam penelitian ini meliputi, eksplan yang mampu membentuk plb dan warna dari plb .
Mulai  minggu  ke-berapa  mulai  terjadi  perubahan.  Data  kuantitatif  meliputi, prosentase  eksplan  membentuk plb dan  panjang plb .  Data  kuantitatif  panjang diuji dengan menggunakan One Way ANOVA.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ada  perubahan  terhadap  eksplan  yang  ditanam  baik  pada  kontrol  maupun pada  media  perlakuan  (Tabel.  1).  Setiap  eksplan  mengalami  perubahan  yang berbeda-beda,  setelah  10  minggu,  variasi  perubahan  eksplan  terlihat  jelas.  Ada sebagian yang tumbuh plb dan sebagian tumbuh tunas.
Perubahan  yang  terjadi  terhadap  eksplan  bervariasi,  untuk  MS0  perubahan terjadi  pada  minggu  ke-7  dan  pertumbuhan  paling  cepat  adalah  pada  media D2K1,D2K2,  D4K1,  D4K2  dan  D6K1  yaitu  pada  minggu  ke-3.  Media  D6K2, D8K1,  D8K2,  D10K1  dan  D10K2  mulai  ada  perubahan  pada  minggu  ke-8, pertumbuhan  yang  bervariasi  ini  dimungkinkan  karena  pengaruh  dari  kombinasi hormon eksogen yang diberikan dan hormon eksogen tersebut berinteraksi dengan hormon  endogen  yang  terdapat  di  dalam  eksplan.  Eksplan  yang  diambil merupakan batang hipokotil yang masih aktif membelah (meristematik).
Menurut  Dorusposari  (2003)  dalam  Wijayani,dkk  (2007)  pertumbuhan protocorm  like  body tanaman  anggrek  terbagi  menjadi  5  kategori,  yaitu  (1) plb berwarna  putih  kekuningan,  transparan,  kompak  dan  keras,  (2) plb berwarna kehijauan,  (3) plb dengan  primordia  daun  tunggal  dan  berwarna  hijau  muda,  (4) tunas  yaitu plb dengan  satu  atau  dua  calon  daun  dengan  lamina  yang  jelas,
berwarna hijau tua, (5) planlet. Penelitian ini menunjukkan sampai kategori ketiga yaitu tunas.
Tabel 1. Data Prosentase Pembentukan plb dan tunas Jenis Media Prosentase Pembentukan Mulai tumbuh plb putih plb Tunas MS0 - 100% - Minggu ke-7 D2K1 33,3% 66,7% - Minggu ke-3 D2K2 33,3% 66,7% - Minggu ke-3 D4K1 - 100% - Minggu ke-3 D4K2 - 66,7% 33,3% Minggu ke-3 D6K1 33,3% 33,3% - Minggu ke-3 D6K2 33,3% - - Minggu ke-8 D8K1 100% - - Minggu ke-8 D8K2 100% - - Minggu ke-8 D10K1 100% - - Minggu ke-8 D10K2 66,7% - - Minggu ke-8 Keterangan: MS0 : media tanpa penambahan hormon D2K1 : media dengan penambahan 2 mg/L 2,4-D dan 1 mg/L kinetin. D2K2 : media dengan penambahan 2 mg/L 2,4-D dan 2 mg/L kinetin.
D4K1 : media dengan penambahan 4 mg/L 2,4-D dan 1 mg/L kinetin.
D4K2 : media dengan penambahan 4 mg/L 2,4-D dan 2 mg/L kinetin. D6K1 : media dengan penambahan 6 mg/L 2,4-D dan 1 mg/L kinetin. D6K2 : media dengan penambahan 6 mg/L 2,4-D dan 2 mg/L kinetin. D8K1 : media dengan penambahan 8 mg/L 2,4-D dan 1 mg/L kinetin.
D8K2 : media dengan penambahan 8 mg/L 2,4-D dan 2 mg/L kinetin. D10K1  : media dengan penambahan 10 mg/L 2,4-D dan 1 mg/L kinetin. D10K2  : media dengan penambahan 10 mg/L 2,4-D dan 2 mg/L kinetin.

## A. Induksi Plb putih
Eksplan awalnya membentuk tonjolan kecil putih bening di bagian pelukaan mulai  pada  minggu  ke-8  dan  pada  minggu  ke-10  bertambah  banyak.  Ini disebabkan  terjadinya  autolisis  sel  dari  sel  yang  rusak  tersebut  akan  dihasilkan senyawa-senyawa  yang  akan  merangsang  pembelahan  sel  di  lapisan  berikutnya. Warna plb putih kekuningan, transparan, kompak dan keras. Pembelahan sel tidak terjadi  pada  semua  sel  eksplan,  tetapi  hanya  sel  perifer  yang  mengalami pembelahan  terus-menerus,  sedangkan  sel-sel  di  tengah  tetap.  Hal  ini dimungkinkan karena ketersediaan oksigen yang lebih tinggi, keluarnya gas CO 2 ,
ketersediaan hara yang lebih banyak, penghambat yang bersifat folatik lebih cepat menguap dan cahaya (Gunawan, 1988).
Gambar 1. Plb putih yang terbentuk pada media D6K2
Tabel  1.  menunjukkan  bahwa  untuk  induksi plb putih  pada  anggrek G. scriptum terjadi  pada  media  MS  dengan  penambahan  2,4-D  dengan  konsentrasi yang  jauh  lebih  tinggi  dibanding  konsentrasi  kinetin.  Diketahui  bahwa  eksplan yang  mulai  terbentuk plb putih  adalah  pada  media  dengan  penambahan  hormon 2,4-D  sebesar  6  mg/L  dan  kinetin  sebesar  2mg/L,  hingga  media  dengan penambahan 2,4-D sebesar 10 mg/L dan kinetin  sebesar 2 mg/L. Menurut Smith (1992)  konsentrasi  auksin  yang  rendah  akan  meningkatkan  pembentukan  tunas adventif,  sedangkan  auksin  dengan  konsentrasi  tinggi  akan  merangsang pembentukan kalus dan menekan morfogenesis.

## B. Induksi Protocorm Like Bodies ( plb )
Protocorm adalah  bentukan  bulat  yang  siap  membentuk  pucuk  dan  akar sebagai  awal  perkecambahan  pada  biji  yang  tidak  mempunyai  endosperm. Perkembangannya  di  alam  perlu  berasosiasi  dengan  mikoriza  (Gunawan,  1988). Protocorm  like  bodies ( plb )  adalah protocorm yang  sudah  tumbuh  tapi  masih belum  terdeferensiasi  dengan  sempurna.  Menurut  Zulkarnain  (2009), plb merupakan  bagian  vegetatif  dari  sejumlah  anggrek  di  dalam  kultur  yang membentuk struktur yang menyerupai protocorm berbentuk bulat dan mengkilap, yang  dapat  diperbanyak  secara  tak  terbatas  atau  dapat  diinduksi  untuk meregenerasikan tanaman lengkap.
a.
b.                                     c. Gambar 2. a. Plb b. Plb dengan inisiasi daun   c. Tunas
Tanda-tanda biji anggrek berkecambah ialah biji kelihatan berwarna kuning hijau  dan  membentuk  bulatan-bulatan  seperti  gelembung  yang  disebut  dengan protocorm  like  bodies  (plb ).  Pada  penelitian  Abbas et  al .,  (2007)  perkembangan protocorm diawali  dengan  perubahan  warna  benih,  biji  membengkak,  bentuk bulat,  dan protocorm sebelum  berdeferensiasi  menjadi  organ,  dan  selanjutnya membentuk protocorm dengan inisiasi daun.
Kalimuthu et  al. (2007),  menyatakan  bahwa  dalam  produksi  bibit  anggrek Oncidium spp., dari biji ada beberapa tahapan perkecambahan yaitu, terbentuknya protocorm ,  kulit  biji  (testa)  pecah  dan  akar  terbentuk  selanjutnya  tahap  inisial tunas  dan  pengembangan  bibit.  Pada  penelitian  ini,  eksplan  yang  digunakan adalah hipokotil, jadi tidak ada tahapan pecahnya testa, protocorm yang terbentuk disebut  dengan protocorm  like  body  (plb), selanjutnya  inisiasi  tunas  dan  inisiasi akar terbentuk. Pekembangan selanjutnya akan menjadi individu yang utuh.
Penelitian  ini  terdapat  eksplan  yang  tumbuh  menjadi plb ,  eksplan  anggrek G.scriptum tersebut  langsung  mengalami  proses  organogenesis.  Menurut Gunawan  (1988)  organogenesis  merupakan  proses  terbentuknya  organ-organ seperti pucuk dan akar. Protocorm like bodies ini mulai muncul pada minggu ke-3 pada media D2K1, D2K2, D4K1, D4K1 dan D6K1, serta minggu ke-7 pada media MS0.  Munculnya plb diawali  dengan  tonjolan  bulat  putih  kehijauan  yang  lama- kelamaan  akan  bertambah  besar  dan  setelah  10  minggu  mulai  memanjang membentuk  inisiasi  daun  dan  jika  pengamatan  dilakukan  lebih  lama  maka  lama kelamaan akan membentuk tunas dan inisisasi akar.

## C. Pertumbuhan Tunas
Tunas  terbentuk  jika  hormon  sitokinin  lebih  tinggi  dibanding  hormon auksin, meski dalam media perlakuan hormon eksogen yang diberikan lebih tinggi konsentrasi  hormon  auksin,  namun  dapat  terbentuk  tunas,  ini  mungkin dikarenakan  oleh  hormon  sitokinin  endogen  cukup  tinggi  sehingga  meski ditambah  hormon  auksin  eksogen  tinggi,  namun  masih  belum  mampu  untuk mengimbangi  hormon  sitokinin  endogen  dari G.  Sriptum. Smith  (1992) menyatakan bahwa kadar sitokinin endogen lebih tinggi  dibanding dengan kadar auksin akan menyebabkan terbentuknya tunas.
Media  yang  menghasilkan  tunas  hanya  pada  media  MS  dengan  pemberian 2,4-D  4  mg/L  +  kinetin  2  mg/L  (D4K2).  Ada  4  tunas  yang  terbentuk  (D4K2). Pertumbuhan  tunas  ini  adalah  pertumbuhan  lanjut  dari plb kemudian  setelah  10 minggu sudah terlihat tunas. Pada media D4K2 terbentuk lebih banyak tunas, ini dikarenakan media dengan penambahan hormon eksogen 2,4-D 4 mg/L + kinetin 2  mg/L  cocok  untuk  menginduksi  terbentuknya  tunas  melalui  organogenesis eksplan.
Awal  pertumbuhan  tunas  diawali  dengan  adanya  bulatan  kecil  putih kehijauan  pada  minggu  ke-3  dan  selanjutnya  bulatan  kecil  tersebut  bertambah besar  dan  membentuk plb . Plb mengalami  pemanjangan  dan  akhirnya  terbentuk tunas dan sudah mulai terlihat inisiasi akar.

## D. Pengamatan Anatomi
Pada  penampang  membujur plb terlihat  adanya  inisiasi  pucuk  dan  inisiasi daun,  terlihat  juga  benda-benda  ergastik  berupa  Ca-oksalat  berbentuk  jarum. Menurut Sutriyan (1992). Benda ergastik  dalam sel yang bersifat padat umumnya berbentuk  butiran  atau  kristal  yang  biasanya  terbentuk  sebagai  hasil  akhir  dari metabolisme dalam tumbuh-tumbuhan. Kristal  Ca-oksalat  termasuk dalam  benda ergastik  padat  dan  biasanya  terdapat  dalam  sel  korteks  namun  tidak  jarang ditemukan dalam sel parenkim floem dan parenkim xilem.
Gambar 3. Potongan membujur plb anggrek G.scriptum media  pada D2K2 umur 10 minggu dengan perbesaran 400X; a. Inti sel; b. Ca-oksalat
Kristal  Ca-oksalat  ada  beberapa  bentuk,  yang  ditemukan  dalam  anatomi hasil  penelitian  ini  berbentuk  jarum  dan  rafida  yang  merupakan  kristal  bentuk jarum yang letaknya sejajar satu sama lain. Kristal Ca-oksalat umumnya terdapat pada  sel  parenkim  tumbuhan  dari  jaringan-jaringan  lunak  yang  selnya mengandung lendir dan berdinding tipis, misalnya dalam tanaman monokotiledon.
Pada gambar 3 terlihat adanya Ca-oksalat pada preparat potongan membujur dari plb yang terbentuk pada media MS dengan penambahan 2 mg/L 2,4-D dan 2 mg/L  kinetin.  Kristal  Ca-oksalat  lebih  banyak  terlihat  pada  media  perlakuan terutama pada bagian inisiasi daun dan tunas.

## E. Pertumbuhan Panjang plb dan Tunas
Pemberian  hormon  eksogen  dapat  membantu  pertumbuhan  eksplan  yang awalnya  hanya  potongan  hipokotil,  dengan  pemberian  hormon  eksogen  yang berupa  auksin  2,4-D  dan  sitokinin  kinetin  dapat  tumbuh  menjadi plb dan  tunas. Perbedaan  pertumbuhan  sangat  tergantung  dengan  konsentrasi  hormon  eksogen yang diberikan ke dalam media. Hasil penelitian ini menunjukkan perbedaan yang terlihat  jelas  bahwa  pertumbuhan plb terbentuk  dari  MS0  sampai  2,4-D  6  mg/L
a b
dan  1  mg/L  kinetin.  Tunas  hanya  terbentuk  pada  hormon  2,4-D  dengan konsentrasi 4mg/L dan 2mg/L kinetin.
Tabel  3.  menunjukkan  data  pertumbuhan plb dan  tunas,  dan  dari  tabel  4. dapat  disimpulkan  bahwa  rata-rata  pertumbuhan  eksplan  paling  panjang  adalah pada  media  D6K1  dan  diikuti  oleh  media  D4K2.  Ini  berarti  bahwa  media  D6K1 dan  D4K2  memiliki  konsentrasi  hormon  yang  cocok  untuk  pertumbuhan  dan perkembangan eksplan. Kedua media ini menghasilkan plb dan sudah terlihat plb yang  tumbuh  dan  mulai  membentuk  calon  daun  dan  selanjutnya  akan berdeferensiasi menjadi tanaman baru. Hal ini berarti bahwa anggrek G. scriptum cenderung membentuk protocorm bila diberi  hormon  eksogen dalam konsentrasi rendah.
Seperti  yang disebutkan  pada penelitian Meyer et al., (2010), bahwa untuk regenerasi langsung dari plb menggunakan apex daun Oncidium flexuosum , dalam media hanya ditambah 1,5 µM TDZ  (thidiazuron), 80% eksplan beregenerasi  30 tanaman  tiap  eksplan.  Sebelum  berdeferensiasi Grammathopyllum  scriptum membentuk protocorm dan protocorm dengan inisiasi daun (Abbas et al ., 2011). Medium MS yang diberi zat tambahan (suplemen) dengan konsentrasi yang sesuai dari  zat  pengatur  tumbuh  yang  ditambahkan  akan  membantu  dalam  dalam germinasi biji, produksi plb , multipikasi tunas dan inisiasi akar (Kalimuthu et al. , 2007).

## Tabel 2. Data pertumbuhan panjang plb putih
Jenis Media Rata-rata (cm) D2K1 0,3 D2K2 0,15 D6K1 0,2 D6K2 0,2 D8K1 0,27 D8K2 0,4 D10K1 0,2 D10K2 0,35 Tabel 3. Data Pertumbuhan panjang plb Jenis Media Rata-rata (cm) MS0 0,33
D2K1 0,16 D2K2 0,32 D4K1 0,5 D4K2 0,8 D6K1 0,2 Tabel 4. Data Pertumbuhan tunas Jenis Media Rata-rata (cm) D4K2 1,1 Keterangan: MS0 : media tanpa penambahan hormon D2K1 : media dengan penambahan 2 mg/L 2,4-D dan 1 mg/L kinetin. D2K2 : media dengan penambahan 2 mg/L 2,4-D dan 2 mg/L kinetin.
D4K1 : media dengan penambahan 4 mg/L 2,4-D dan 1 mg/L kinetin. D4K2 : media dengan penambahan 4 mg/L 2,4-D dan 2 mg/L kinetin. D6K1 : media dengan penambahan 6 mg/L 2,4-D dan 1 mg/L kinetin. D6K2 : media dengan penambahan 6 mg/L 2,4-D dan 2 mg/L kinetin. D8K1 : media dengan penambahan 8 mg/L 2,4-D dan 1 mg/L kinetin. D8K2 : media dengan penambahan 8 mg/L 2,4-D dan 2 mg/L kinetin. D10K1  : media dengan penambahan 10 mg/L 2,4-D dan 1 mg/L kinetin. D10K2  : media dengan penambahan 10 mg/L 2,4-D dan 2 mg/L kinetin.
Ng,  Chuam-Yih el  al., (2010)  mengatakan  bahwa  pada Paphiopedilum rothschildianum (Orchidaceae) dapat membentuk tunas setelah 16 minggu kultur dalam  media  ½  MS.  Pada  anggrek Grammathopyllum  scriptum hanya membutuhkan  waktu  10  minggu  dengan  menggunakan  media  MS  dengan penambahan zat  pengatur tumbuh dengan konsentrasi  4 mg/L 2,4-D dan  2 mg/L kinetin.  Ini  dapat  dikatakan  bahwa  media  pertumbuhan  MS  dengan  penambahan zat pengatur tumbuh dapat mempercepat pertumbuhan tunas pada anggrek. Setiap spesies  tanaman  memiliki  konsentrasi  optimum  yang  berbeda,  baik  untuk  tunas maupun plb .
Tabel 5. Rata-rata pertumbuhan (cm)
MS0 D2K1 D2K2 D4K1 D4K2 D6K1 D6K2 D8K1 D8K2 D10K1 D10K2 0,33 0,2 0,3 0,5 0,75 0,62 0,067 0,3 0,4 0,2 0,23

## Tabel 6. Hasil Uji ANOVA
Panjang Sum of Squares df Mean Square F Sig . Between Groups 1.236 10 .124 1.775 .126 Within Groups 1.532 22 .070 Total 2.768 32
Berdasarkan hasil dari uji ANOVA pada tabel 5. untuk data pertumbuhan panjang  menunjukkan  angka  0.126  pada  nilai  signifikansinya.  Ini  berarti  nilai signifikansi  ≥  0,05  berarti  tidak  beda  nyata.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa perbedaan jenis media tidak berpengaruh nyata terhadap pertumbuhan panjang plb dan tunas yang terbentuk.

## KESIMPULAN
Pemberian  kombinasi  hormon  2,4-D  dan  kinetin  tidak  berpengaruh  nyata terhadap  pertumbuhan  panjang plb dan  tunas  yang  terbentuk.  Konsentrasi kombinasi zat pengatur tumbuh untuk pembentukan tunas adalah 4 mg/L 2,4-D + 2 mg/L kinetin.  Konsentrasi  kombinasi  zat  pengatur tumbuh  untuk  pembentukan plb adalah 0- 4 mg/L 2,4-D + 0-2 mg/L kinetin .

## DAFTAR PUSTAKA
Abbas, B., Listyorini, F.H., and Amriati, B. (2011). In vitro seeds germination and plantlets development of Grammatophyllum scriptum Lindl. (Orchidaceae). International Research Journal of Plant Science 2(5): 154- 159.
Abidin,  Z.  (1985). Dasar-dasar  Pengetahuan  tentang  Zat  Pengatur  Tumbuh. Bandung: CV. Angkasa.
Dorusposari,  B.  (2003).  Pengaruh  Zat  Pengatur  Tumbuh Kinetin dan Naphtalene Asetic  Acid  terhadap  Pembentukan  dan  Perkembangan  Meristem  Ujung Batang Tanaman Anggrek Hibrida Phalaeonopsis “Star of Rio” secara in vitro.Skripsi .Fakultas Biologi UGM Yogyakarta.
Fitrianti,  A.  (2006). Efektivitas  Asam  2,4-Diklorofenoksiasetat  (2,4-D)  dan Kinetin pada Medium MS dalam Induksi Kalus Sambiloto dengan Eksplan Potongan Daun . Semarang : UNNES.
Gunawan, L.W. (1988). Teknik Kultur Jaringan Tumbuhan . Bogor: Laboratorium Kultur  Jaringan  Tumbuhan  Pusat  Antar  Universitas  (PAU)  Bioteknologi IPB.
Kalimuthu,  K.,  R.  Senthilkumar,  and  S.  Vijayakumar.  (2007).  In  vitro Micropropagation of Orchid Oncidium sp. (Dancing Dolls). African Jurnal of Biotechnology 6(10): 1171-1174.
Meyer,  J.L.S.,  G.C.  Stancato  and  B.  Appezzato-Da-Gloria.  (2010).  Direct Regeneration  of  Protocorm-like  Bodies  (PLBs)  from  Leaf  Apices  of Oncidium  flexuosum Sims  (Orchidaceae). Plant  Cell  Tissue  Organ 103: 411-416.
Ng, C., N. M. Saleh and F.Q. Zaman.  (2010). In Vitro Multipication of the Rare and  Endangered  Slipper  Orchid, Paphiopedilum  rothschildianum (Orchidaceae). African Journal of Biotechnology . 9(14): 2062-2068
Smith, R.H. (1992). Plant Tissue Culture: Technique and experiments . New York: Academic Press Inc.
Sulistiarini,  D.  (2008).  Keanekaragaman  Jenis  Anggrek  Pulau  Wawonii. Berk. Penel. Hayati 14: 21-27.
Sutriyan,  Y.  (1992). Pengantar  Anatomi  Tumbuh-tumbuhan  tentang  Sel  dan Jaringan. Jakarta: PT Rineka Cipta.
Wijayani,  Y.,  Solichatun,  W.  Mudyantini.  (2007).  Pertumbuhan  Tunas  dan Struktur  Anatomi Protocorm  Like  Body Anggrek Grammatophyllum scriptum (Lindl.) Bl.  Dengan Pemberian  Kinetin dan NAA. Bioteknologi . 4(2): 33-40.
Zulkarnain. (2009). Kultur Jaringan Tanaman . Jakarta: Bumi Aksara.