## Livestock and Animal Research
Accredited by Directorate General of Strengthening for Research and Development No. 10/E/KPT/2019
Open Access Livest. Anim. Res. , November 2022, 20(3): 291-299
p-ISSN 2721-5326 e-ISSN 2721-7086 https://doi.org/10.20961/lar.v20i3.60598

## Original Article
Kekerabatan merpati hias ( Columba livia ) dilihat dari profil protein darah
Harmoko Harmoko 1,* , Umie Lestari 2
1 Program Studi Pendidikan Biologi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas PGRI Silampari, Kota Lubuklinggau, 31628 2 Program Studi Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Malang, Malang, 65145 * Correspondence: putroharmoko@gmail.com
Received: April 7 th , 2022; Accepted: November 11 th , 2022; Published online: November 22 th , 2022

## Abstrak
Tujuan: Tujuan  penelitian  ini  adalah  memprediksi  kekerabatan  burung  merpati  hias  berdasarkan protein darah.
Metode: Metode penelitian  yang digunakan, yaitu: deskriptif eksploratif dengan pendekatan  berbasis observasi  laboratorik.  Prosedur  Penelitian  meliputi:  Pengambilan  Sampel  Darah,  Isolasi  Protein Darah, Purifikasi, Pengukuran konsentrasi dengan nanodrop  spektrofotometer dan  Elektroforesis. Analisis Data meliputi: Profil Pita Protein dan Penentuan Berat Molekul Protein dengan rumus RF dan Hubungan Kekerabatan dengan program MVSP versi 3.22.
Hasil: Profil  protein  pada  plasma  dari  merpati  hias  memperlihatkan  perbedaan  antara  satu  jenis merpati  hias  dengan  yang  lainnya.  Sebagian  protein  muncul  di  jenis  merpati  hias  namun  tidak muncul  di  jenis  yang  lain.  Begitu  juga  dengan  protein  target  yang  akan  di  analisis,  ada  yang terekspresi dan ada juga yang tidak terekspresi pada jenis merpati hias. Berdasarkan hasil analisis profil protein dan dendogram dari keempat protein spesifik (hemoglobin, transferrin, post transferrin dan immunoglobulin) yang terdapat di dalam eritrosit dan plasma darah, maka dapat dilihat adanya dua kluster. Kluster 1 ditempati oleh varietas merpati hias Moven dan kluster 2 ditempati oleh varietas merpati hias Lahore, American fantail, Wina, Indian Fantail, King, Capucine, Gondok dan Modena. Kesimpulan: Hasil  prediksi  kekerabatan  merpati  hias  berdasarkan  protein  darah  menunjukkan setiap varietas memiliki hubungan kekerabatan yang berbeda-beda. Merpati hias jenis King, Capucine, Gondok dan Modena memiliki kekerabatan paling dekat, dan merpati jenis Moven memiliki kekerabatan paling jauh dari jenis merpati hias yang diteliti.
Kata Kunci: Merpati hias; Protein darah; Kekerabatan

## Abstract
Objective: The purpose of this study was to predict the kinship of ornamental pigeons based on blood proteins.
Methods: The  research  method  used  was  exploratory  descriptive  with  a  laboratory  observation- based  approach.  Research  procedures  include:  Blood  Sampling,  Blood  Protein  Isolation, Purification,  Measurement  of  concentration  with  a  nanodrop  spectrophotometer  and Electrophoresis.  Data  analysis  includes:  Protein  Band  Profile  and  Determination  of  Protein Molecular Weight with RF formula and Relationship with MVSP version 3.22 program.
Results: The  protein  profile  in  the  plasma  of  ornamental  pigeons  was  different  from  one  type  of pigeon to another. Some of the protein appeared in the ornamental pigeon species but did not appear
in other breeds. Likewise with the target protein to be analyzed, some were expressed and some were not  expressed  in  ornamental  pigeons.  Results  based  on  the  analysis  of  protein  profiles  and dendograms of the four specific proteins (hemoglobin, transferrin, posttransferrin, and immunoglobulin) contained in erythrocytes and blood plasma, it can be seen that there were two clusters. Cluster 1 was occupied  by  varieties  of  ornamental  pigeons  Moven  and  cluster  2  was  occupied  by  varieties  of ornamental pigeons Lahore, American fantail, Vienna, Indian Fantail, King, Capucine, Gondok and Modena.
Conclusions: The results of the ornamental pigeon kinship prediction based on blood protein showed that each variety had different kinship relationships. King, Capucine, Gondok and Modena pigeons have  the  closest  relationship,  and  Moven  pigeons  have  the  most  distant  relationship  from  the researched ornamental pigeons.
Keywords: Ornamental pigeons; Blood protein; Kinship

## PENDAHULUAN
Burung merpati hias merupakan burung merpati liar yang dibudidayakan dan dikawin silangkan antar varietas [1]. Jenis kawin silang yang  digunakan  pada  merpati  yaitu: inbreeding, out breeding, line breeding dan cross breeding [2].  Burung  merpati  hias  sendiri memiliki  banyak  jenis  berdasarkan  ukuran, bentuk, warna dan perilakunya yang khas [3]. Merpati ini seringkali ditampilkan di pameran merpati,  perlombaan  dan  pameran  hewan peliharaan  lainnya.  Berdasarkan  data EL-List of the Breeds of Fancy Pigeons [4], jenis burung merpati hias di dunia saat ini berjumlah 1106 jenis.  Di  Indonesia  sudah  ditemukan  lebih dari 30 jenis burung merpati hias, dan sudah dikembangbiakkan. Jenis burung merpati hias yang  ada  di  Indonesia,  diperoleh  dari  luar negeri dari importir burung merpati hias.
Morfologi  jenis  burung  merpati  hias memiliki  perbedaan,  namun  pada  dasarnya merpati tersebut berasal dari satu nenek moyang yaitu  burung  merpati  karang  ( Columba  livia ). Kegiatan penelitian mengenai burung merpati hias  belum  dilakukan,  khusunya  mengkaji kekerabatan  baik  secara  morfologi  (fenotip) maupun secara genotip. Hasil analisis kekerabatan ini bermanfaat untuk melihat dan memprediksi hubungan  kekerabatan  burung  merpati  hias yang nantinya dijadikan sebagai dasar untuk melakukan  konservasi  genetik.  Perkawinan dengan hubungan kekerabatan dekat ( inbreeding ) akan  menghasilkan  individu  yang  kurang baik  bahkan  bisa  menurunkan  kualitas  dari peranakan  merpati  hias  itu  sendiri  [5,6]. Harapannya dengan diketahuinya hubungan kekerabatan  burung  merpati  hias  peternak
merpati  hias  dapat  melakukan  perkawinan secara outbreeding dan menghindari perkawinan inbreeding [7].
Salah  cara  untuk  mengetahui  hubungan kekerabatan  adalah  dengan  profil  protein darah.  Hal  itu  dikarenakan  protein  dalam darah merupakan protein  fungsional produk dari ekspresi gen [8]. Sintesis protein yang m elibatkan  materi  genetik  baik  DNA  maupun RNA, merupakan proses penting dalam tubuh untuk  menghasilkan  protein.  Setiap  kodon berpasangan  dengan  antikodon  yang  sesuai yang  terdapat  pada  molekul  tRNA  [9].  Jika kode  genetik  sudah  diketahui,  maka  akan dapat ditentukan protein yang terbentuk bila urutan  nukleotida  DNA template diketahui. Sebaliknya, jika diketahui jenis protein tertentu maka  akan  diketahui  urutan  asam  amino sehingga dapat dicari urutan gen penyandinya. Protein yang terdapat pada darah antara lain pre-albumin, albumin, pretranferin, transferin dan  hemoglobin  [10].  Protein  spesifik  yang akan di analisis meliputi hemoglobin, transferin, post-transferin dan immunoglubulin.
Hemoglobin  adalah  protein  darah  yang terdapat pada sel darah merah, dan merupakan protein  globular  yang  mengandung  besi. Transferin  adalah  protein  yang  berasal  dari gugus ß globulin yang berfungsi mengangkut zat besi. Immunoglobulin membantu melawan virus dan agen-agen asing lain yang menyerang. Kegiatan  penelitian  yang  pernah  dilakukan dengan  menggunakan  protein  darah  untuk mengetahui keragaman genetik sudah dilakukan pada merpati familia Columbidae [11] dan tiga jenis burung merpati (pos, kipas dan pedaging) [12]. Berdasarkan hasil kajian, bahwa merpati columbidae dan 3 jenis burung merpati memiliki
kekerabatan  yang  bervariasi.  Teknik  yang digunakan  untuk  mengetahui  profil  protein darah adalah dengan elektroforesis SDS PAGE [13,14].  Masih  banyak  sekali  jenis  burung merpati, khususnya merpati hias yang belum dilakukan pengmatan dan penelitian, sehingga ini menjadi nilai tambah sendiri pada penelitian ini.
Hasil  dari  elektroforesis  protein  darah, nantinya  dapat  dipergunakan  untuk  melihat suatu  kekerabatan  antar  spesies  setelah dilakukan proses analisis. Analisis dilakukan berdasarkan pita-pita yang muncul pada sampel darah,  baik  plasma  darah  maupun  eritrosit. Elektroforesis  digunakan  karena  teknik  ini termasuk  teknik  yang  sederhana  dan  mudah untuk dilakukan [14].

## MATERI DAN METODE

## Jenis penelitian
Jenis  penelitian  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  penelitian  deskriptif eksploratif. Pendekatan yang digunakan adalah pendekatan  observasi  laboratorik,  yang membuat pencandraan mengenai kekerabatan burung  merpati  hias  melalui  protein  darah. Protein yang dianalisis meliputi  hemoglobin, transferin, post transferin dan immunoglobulin. Data  hasil  penelitian  ini  diharapkan  mampu untuk  mendeskripsikan  kekerabatan  burung merpati hias melalui profil protein darah.

## Objek penelitian
Objek  penelitian  dalam  penelitian  ini adalah  burung  merpati  hias,  dikarenakan keterbatasan anggaran dan waktu penelitian, maka  sampel  penelitian  terdiri  dari  9  jenis merpati hias. Merpati hias kurang lebih berumur satu tahun, Merpati hias diperoleh dari peternak burung  merpati  hias  yang  ada  di  daerah Gendengan,  Solo.  Jenis  burung  merpati  hias yang digunakan terdapat pada Gambar 1.

## Pengambilan sampel darah
Darah  burung  merpati  hias  diambil melalui vena  axillaris pada  sayap  burung merpati  hias  dengan  menggunakan  spuit. Luka ditekan dengan kapas yang mengandung  alkohol  sampai  darah  berhenti untuk menghentikan darah yang keluar pada vena axillaris . Darah dari spuit dipindahkan ke larutan ethylene diamine tetra-acetic acid dengan
perbandingan  5  ml  darah:1  ml  EDTA. Sampel pada darah kemudian diberi label kode jenis burung merpati hias. Selanjutnya dibawa ke laboratorium  biologi  molekuler  Universitas Negeri Malang untuk dilakukan isolasi darah, yang  bertujuan  untuk  memisahkan  plasma darah dan eritrosit.

## Isolasi protein darah
Sampel darah diambil sebanyak 1 ml dan dimasukkan ke tabung ependorf . Sampel darah yang diambil hanya yang cair sedangkan yang berupa gumpalan tidak diambil dan kemudian diberi label. Sampel disentrifuse dengan refriguled sentrifuse selama 10 menit dengan kecepatan 10.000  rpm  pada  suhu  4 ℃ .  Hasil  sentrifuse akan  menghasilkan  dua  lapisan,  lapisan  atas yaitu plasma darah dan lapisan bawah adalah eritrosit. Plasma darah diambil dan dipindahkan ke  tabung  ependorf  lain  dan  diberi  label kemudian disimpan di freezer pada suhu -20 ℃ . Hasil  sentrifuse  eritrosit  dicuci dengan menambahkan  larutan natrium  chloride 0,9% dengan perbandingan 1:1. Kemudian
disentrifuse dengan kecepatan 3500 rpm selama 5 menit pada suhu 4 ℃ dan dilakukan sebanyak tiga kali ulangan. Tujuan dari prosedur ini yaitu untuk menghilangkan lemak yang terkandung dalam sampel. Sampel eritrosit yang sudah dicuci kemudian  dapat  disimpan  dalam freezer pada suhu -20 ℃ sampai dilakukan proses selanjutnya.

## Purifikasi
Tahap purifikasi hanya dilakukan untuk plasma darah, yang bertujuan untuk memurnikan sampel. Langkah purifikasi yaitu sampel plasma darah diambil sebanyak 300 pl dan ditambahkan 300  l Sodium  Amonium  Sulfat 50%  dengan perbandingan (1:1) kemudian divortex. Sampel plasma darah disentrifuse dengan refrigerated sentrifuse dengan kecepatan 10.000 rpm selama 10 menit dengan suhu 4 ℃ . Hasil sentrifuse yaitu terdiri dari dua, yaitu: supernatan dan pellet. Supernatant (di atas) dibuang sedangkan pellet (di  bawah)  digunakan  untuk  prosedur selanjutnya. Pellet ditambahkan etanol absolute dengan perbandingan 1:1 dan diinkubasi dalam frezeer pada suhu -20 ℃ overnight. Selanjutnya sampel  disentrifuse  lagi  dengan  kecepatan 10.000 rpm selama 10 menit dengan suhu 4 ℃ yang menghasilkan supernatant (dibuang) dan pellet (dipakai). Selanjutnya, pellet dikeringkan
dengan  cara  mengangin-anginkan  sampai tidak tercium aroma etanol. Sampel kemudian ditambahkan  buffer  tris-CI  pH  6,8  dengan perbandingan  1:1,  kemudian  disimpan  pada frezeer dengan  suhu  -20 ℃ sampai  dilakukan prosedur selanjutnya.
Pengukuran  konsentrasi  dengan  nanodrop spektrofotometer
Menyiapkan  sampel  protein  darah,  baik plasma eritrosit burung merpati hias. Setelah alat  dihidupkan,  “ area  sampel ”  dibersihkan dengan aquadest dan kertas lensa. Alat dikalibrasi dengan  menggunakan  3µl  larutan  blanko ( buffer Tris-C1 ) yang diletakkan di bagian “ area sampel ” kemudian di klik blank lalu dibersihkan dengan kertas lensa. Sampel protein sebanyak 1µl  diletakkan  pada “ area  sampel ”  yang sudah di blank . Melakukan pengamatan hasil perhitungan  konsentrasi  isolat  protein  pada masing-masing  sampel.  Hasil  yang  didapatkan, kemudian dihitung serta dilakukan penambahan Tris-CI pH 6,8 pada sampel yang belum sesuai
konsentrasinya dengan perbandingan yang sama. Hal ini dilakukan sebagai langkah menyamakan konsentrasi protein pada sampel.

## Elektroforesis
Setelah sampel siap dan gel mengeras, plate dipasang  pada chamber  elektroforesis . Running buffer dituangkan pada chamber sampai batas yang sudah ditentukan (tergantung dari banyak plate yang akan dipasang) pada alat elektrotoresis. Sampel  sebanyak  20µl  dimasukkan  pada sumuran  dengan  menggunakan micropipet . Kemudian marker juga dimasukkan sebanyak 10µl  dalam  sumuran,  jika  masih  ada  sisa sumuran maka ditambakan RSB dalam sumuran tersebut. Alat elektroforesis dihubungkan dengan power  supply BIORAD  300  dengan  tegangan 130 V dan kuat arus 60 MA selama 90 menit sampai tracking  dye 0.5  cm  dari  dasar gel . Langkah  selanjutnya  yaitu  mematikan  alat elektroforesis  dan  mengangkat plate untuk dibuka.  Gel  kemudian  diangkat  dari plate untuk selanjutnya dilakukan proses pewarnaan.

## Analisis data
Perhitungan  berat  molekul  dari  masing- masing protein didasarkan pada marker yang tersedia.  Kemudian  dicari Retardation  Factor (RF) dengan menggunakan rumus [14]:

## RF = Jarak Pergerakan Pita dari Tempat Awal

## Jarak Pergerakan Warna dari Tempat Awal
Gambaran  profil  yang  didapat  dengan SDS  PAGE diubah  menjadi  data  biner  dan dianalisis dengan program Multivariate Statistical Package) (MVSP) versi 3.22.

## HASIL
Profil pita protein darah burung merpati hias dalam gel elektroforesis SDS PAGE
Hasil  penelitian  pada  burung  merpati hias  menunjukkan  perbedaan  pada  pita-pita protein yang muncul. Hasil elektroforesis SDS PAGE dan zimograf untuk plasma darah burung merpati  hias  terlihat  pada  Gambar  1  di halaman sebelumnya.
Gambaran  mengenai  distribusi  ekspresi protein  spesifik  pada  zimograf  ditunjukkan dengan  berat  molekul  yang  terekspresi  pada Gambar 1 poin b. Profil protein pada plasma dari merpati hias memperlihatkan perbedaan antara  satu  jenis  merpati  hias  dengan  yang lainnya. Sebagian protein muncul di jenis merpati hias  namun  tidak  muncul  di  jenis  yang  lain. Begitu  juga  dengan  protein  target  yang  akan di analisis, ada yang terekspresi dan ada juga
yang tidak terekspresi pada jenis merpati hias. Hasil  elektroforesis SDS  PAGE untuk  eritrosit burung merpati hias dapat dilihat pada Gambar 2 di bawah ini.
Gambar  2  memperlihatkan  hasil elektroforesis  untuk  sampel  eritrosit  burung merpati hias dari sembilan jenis. Secara umum memperlihatkan perbedaan antara satu sampel burung  merpati  hias  dengan  sampel  merpati hias  yang  lainnya.  Perbedaan  tersebut  dapat dilihat  dari  ketebalan  dan  jumlah  pita  yang terbentuk pada gel. Perhitungan berat molekul protein  plasma  darah  dan  eritrosit  burung merpati  hias  menggunakan  rumus  RF  dari pita-pita  protein  yang  muncul.  Protein  yang dianalisis meliputi hemoglobin (Hb), transferrin (Tf), Post transferrin (PTf) dan immunoglobin (Ig). Nilai RF didapatkan dengan membandingkan jarak  pergerakan  pita  dari  tempat  awal  (a) dengan  jarak  pergerakan  warna  dari  tempat awal (b). Perhitungan dilakukan secara manual dengan menggunakan penggaris dengan satuan centimeter (cm).
Cara  menentukan  protein  spesifik  yaitu dengan melihat berat molekul yang terkspresi pada  hasil  elektroforesis.  Hasil  elektroforesis berupa  pita-pita  protein  yang  kemudian dianalisis. Berdasarkan protein yang terkespresi dan mencocokkan dengan referensi,  maka  terpilih  empat  protein spesifik.  Protein  tersebut  yaitu:  Hemoglobin (Hb),  Transferrin  (Tf),  Post  Transferrin  (PTf) dan Immunoglobin (Ig). Berdasarkan sebaran
Gambar 2. a) Hasil elektroforesis SDS PAGE dan (b) Zimograf protein plasma darah merpati hias
1. Modena, 2. Indian Fantail, 3. American Fantail, 4. Gondok, 5. Lahore, M. Marker 6, Capucine, 7. King, 8.
Moven dan 9. Wina, Merah: Immunoglobulin, Kuning: Post-transferin dan Hijau: Transferin
berat  molekul  protein  spesifik  dapat  dilihat pada Tabel 1 di bawah ini.
Berdasarkan  Tabel  1  di  atas,  dapat diketahui  sebaran  masing-masing  protein spesifik yang telah ditentukan yaitu hemoglobin  (Hb),  transferrin  (Tf),  post transferrin (PTf) dan immunoglobin (Ig). Setiap jenis  merpati  hias  memiliki  perbedaan  dalam pengekspresian  protein  spesifik,  bahkan  ada yang tidak terekspresikan protein spesifiknya. Protein  spesifik  hemoglobin  (Hb),  terkspresi pada  jenis  merpati  Indian  Fantail  dan American  Fantail.  Protein  spesifik  transferrin (Tf),  terekpresi  pada  jenis  Moven.  Protein spesifik post transferrin (PTf) terekspresi pada jenis merpati Moven dan Wina. Protein spesifik immunoglobin  (Ig)  terekspresi  pada  jenis merpati American Fantail, Lahore dan Moven. Merpati Modena, Gondok, Capucine dan King tidak ada protein spesifik yang terekspresikan. Data  ini  kemudian  di  analisis  dan  dijadikan sebagai  data  dalam  penentuan  kekerabatan dalam bentuk dendogram berdasarkan protein spesifik.

## Hubungan kekerabatan burung merpati hias berdasarkan protein spesifik
Hubungan  kekerabatan  dapat  diketahui dengan  protein  darah,  baik  dengan  plasma darah  ataupun  dengan  eritrosit.  Analisis kekerabatan burung merpati hias menggunakan  empat  protein  spesifik  yaitu Hemoglobin  (Hb),  Transferrin  (Tf),  Post- Transferrin  (PTf),  dan  Immunoglobin  (Ig). Analisis  ini  dilakukan  dengan  program Multivariate Statistical Package  (MVSP) versi 3.22.  Hasilnya  akan  memprediksi  hubungan kekerabatan  sembilan  burung  merpati  hias dalam bentuk pohon filogeni atau dendogram. Hasil analisis hubungan kekerabatan  burung  merpati  hias  dapat dilihat pada Gambar 3.
Berdasarkan  hasil  analisis  profil  protein dan dendogram dari keempat protein spesifik (hemoglobin, transferrin, post transferrin dan immunoglobulin)  yang  terdapat  di  dalam eritrosit dan plasma darah, maka dapat dilihat adanya dua kluster.  Kluster 1 ditempati  oleh varietas  merpati  hias  Moven  dan  kluster  2
Gambar 3. (a) Hasil elektroforesis SDS PAGE dan (b) Zimograf protein eritrosit merpati hias 1. Modena, 2. Indian Fantail, 3. American Fantail, 4. Gondok, 5. Lahore, 6. Capucine, 6. King, 8.
Moven, 9. Wina, M. Marker, Merah: Hemoglobin
Tabel 1. Sebaran protein spesifik pada burung merpati hias
Jenis Hemoglobin 63-66 kDa Transferrin 76-81 kDa Post-transferrin 90-110 kDa Immunoglobin 144 kDa Modena ~ ~ ~ ~ Indian Fantail 66,9 ~ ~ ~ American Fantail 66,9 ~ ~ 144 Gondok ~ ~ ~ ~ Lahore ~ ~ ~ 144 Capucine ~ ~ ~ ~ King ~ ~ ~ ~ Moven ~ 80,6 110,1 144 Wina ~ ~ 105,3 ~
ditempati  oleh  varietas  merpati  hias  Lahore, American fantail, Wina, Indian Fantail, King, Capucine,  Gondok  dan  Modena.  Setiap individu yang berada pada satu kluster maka dianggap  memiliki  hubungan  kekerabatan yang  dekat.  Jauh  dekatnya  hubungan kekerabatan setiap individu, dapat ditunjukkan  dengan  indeks  similaritasnya. Langkah  untuk  membaca  hasil  dendogram untuk  menentukan  kekerabatan  adalah dengan  melihat  percabangannya  (nodus). Percabangan adalah terpisahnya garis menjadi  dua/lebih.  Hasil  dendogram  pada penelitian ini untuk percabangannya diberikan warna merah supaya lebih mudah. Terdapat enam percabangan pada dendogram tersebut. Dimulai dari individu yang memiliki nilai  similiaritas  tertinggi,  yakni  King, Capucine,  Gondok,  Modena  terletak  dalam satu  percabangan  yang  sama  dengan  nilai similiaritas  1  dan  termasuk  dalam  kategori berkerabat  dekat  antar  4  varietas  tersebut. Dilanjutkan dengan percabangan selanjutnya yaitu  Modena,  Gondok,  Capucine  dan  King memiliki  kekerabatan  dengan  Indian  fantail dengan nilai similiaritas 0,75.
Percabangan  berikutnya  yaitu  Modena, Gondok,  Capucine,  King,  Indian  fantail berkerabat  dengan  Wina  dengan  nilai similiaritas  0,70.  Percabangan  selanjutnya menunjukkan jenis Modena, Gondok,
Capucine, king, Indian fantail, wina berkerabat dengan  Lahore  dan  American  fantail  dengan nilai  similiaritas  0,583.  Percabangan  terakhir yaitu  Moven  yang  memiliki  kekerabatan  jauh dengan  delapan  jenis  burung  merpati  hias lainnya yaitu dengan nilai similiaritas 0,281.

## PEMBAHASAN
Penelitian yang dilakukan memperlihatkan banyak  sekali  jenis  protein  yang  dihasilkan dari  darah  dan  cairan  tubuh  yang  lain  pada burung merpati hias, termasuk antibodi, hormon dan enzim [15]. Berdasarkan penjabaran tersebut, untuk  mengetahui  kondisi  dan  menganalisis suatu individu dapat dilakukan melalui cairan tubuh termasuk darah. Sampel darah burung merpati hias yang terdiri dari sembilan jenis, yaitu: Modena, Indian Fantail, American Fantail, Gondok, Lahore, King, Capucine, Moven dan Wina menunjukkan protein yang beragam, baik pada  sampel  plasma  darah  maupun  sampel eritrosit.
Berdasarkan  persebaran  berat  molekul protein pada sampel plasma darah dan eritosit memperlihatkan perbedaan sebaran pita protein antar  jenis  burung  merpati  hias.  Perbedaan tersebut  telihat  dari  tebal  dan  tipisnya  pita protein  hasil  elektroforesis.  Beberapa  protein yang dikaji dan dijadikan sebagai protein spesifik pada  penelitian ini yaitu: hemoglobin, transferin, post-transferin dan immunoglobulin.
Tebal tipisnya pita protein terlihat pada sampel  eritrosit  burung  merpati  hias  yang memiliki  protein  utama  berupa hemoglobin . Protein hemoglobin memiliki  berat  molekul 63-66  kDa  [16].  Berdasarkan  berat  molekul protein hemoglobin tersebut,  pada  jenis burung merpati hias yang terekspresi adalah pada  jenis  American  Fantail  dan  Indian Fantail dengan berat molekul 65,6 kDa. Jenis burung merpati hias yang lain tidak terlihat atau  tidak  terekspresi.  Hal  ini  dikarenakan kandungan  hemoglobin  yang  ada  pada
Gambar 4. Dendogram pola pita empat protein spesifik pada darah burung merpati hias
eritrosit belum dapat keluar secara maksimal.  Jadi,  diperlukan  metode  lanjut untuk memecah membran sehingga hemoglobin dapat keluar dari eritrosit.
Transferin adalah salah satu jenis protein yang terdapat pada plasma darah, protein ini memiliki  berat  molekul  76-81  kDa  [17]  dan berkisar 79 kDa [18]. Jenis burung merpati hias yang mengekspresikan protein transferin adalah jenis  woven yaitu dengan  berat molekul 80,6 kDa. Post  transferin merupakan  salah  satu protein  plasma  yang  memiliki  berat  molekul berkisar antara 90-110 kDa [19]. Jenis burung merpati  hias  yang  mengekspresikan  protein post transferin adalah moven dan wina. Masing- masing  memiliki  berat  molekul  110,1  kDa untuk jenis moven dan 105,3 kDa untuk jenis wina, sedangkan immunoglobulin termasuk jenis protein globulin yang  berfungsi  sebagai  anti imun,  yang  memiliki  berat  molekul  berkisar 145 kDa [20]. Jenis burung merpati hias yang memiliki berat molekul tersebut adalah american fantail, lahore dan moven dengan berat molekul yang sama yaitu 144 kDa.
Berdasarkan  sebaran  protein  spesifik ( hemoglobin,  transferin,  post-transferin dan immunoglobulin ) pada burung merpati hias dapat digunakan sebagai bahan untuk memprediksi hubungan  kekerabatan.  Prediksi  tersebut menggunakan  program  MVSP.  Berdasarkan analisis  dengan  program  ini  diperoleh  hasil seperti  pada  Gambar  3,  memperlihatkan hubungan kekerabatan sembilan burung merpati hias yang disertai dengan percabangan (nodus) yang  berbeda-beda.  Percabangan-percabangan tersebut dikelompokkan menjadi dua kluster yaitu kluster 1 dan kluster 2. Kluster 1 ditempati oleh varietas merpati hias Moven dan kluster 2 ditempati oleh varietas merpati hias Lahore, American fantail, Wina, Indian Fantail, King, Capucine, Gondok dan Modena.
Berdasarkan  analisis  tersebut,  prediksi hubungan  kekerabatan  burung  merpati  hias adalah sebagai berikut: King, Capucine, Gondok, Modena terletak dalam satu percabangan yang sama dengan nilai similiaritas 1 dan termasuk dalam  kategori  berkerabat  dekat  antar  4 varietas tersebut. Modena, Gondok, Capucine dan  King  memiliki  kekerabatan  dengan  Indian fantail  dengan  nilai  similiaritas  0,75.  Jenis merpati Modena, Gondok, Capucine, King dan Indian fantail berkerabat dengan Wina dengan
nilai similiaritas 0,70. Modena, Gondok, Capucine, king, Indian fantail dan wina berkerabat dengan Lahore  dan  American  fantail  dengan  nilai similiaritas  0,583.  Moven  berkerabat  jauh dengan  delapan  jenis  burung  merpati  hias lainnya  yaitu  dengan  nilai  similiaritas  0,281. Nilai  similiaritas  dapat  digunakan  untuk menentukan  tingkat  kekerabatan  antar  jenis makhluk hidup. Rentang nilai similiaritas yang digunakan adalah dari angka 0 sampai 1. Jika nilai similiaritas mendekati atau sama dengan 1, maka individu yang dimaksud semakin mirip dan memiliki hubungan kekerabatan yang dekat. Begitu  juga  sebaliknya  jika  nilai  similiaritas mendekati atau sama dengan 0 berarti individu yang dimaksud memiliki hubungan kekerabatan yang jauh [21].
Berdasarkan prediksi hubungan kekerabatan yang telah diketahui antara jenis burung merpati hias, maka disarankan sistem perkawinan pada merpati hias tersebut dengan sistem perkawinan secara out breeding atau perkawinanan silang. Sistem perkawinan secara out breeding , dapat meningkatkan produktivitas dan variasi genetik hewan ternak [22]. Sistem perkawinan inbreeding tidak  disarankan  untuk  burung  merpati  hias yang  memiliki  hubungan  kekerabatan  dekat. Perkawinan secara inbreeding dapat menyebabkan  peningkatan  gen-gen  yang homozigot dan menurunkan proporsi heterozigositas  [15].  Adanya  peningkatan  gen- gen  yang  homozigot  menurunkan  kecepatan pertumbuhan, efisiensi reproduksi, dan menyebabkan keturunan generasi pertama (F1) bersifat letal [23].

## KESIMPULAN
Hasil  prediksi  kekerabatan  merpati  hias berdasarkan  protein  darah  menunjukkan  setiap varietas  memiliki  hubungan  kekerabatan  yang berbeda-beda. Merpati hias jenis King, Capucine, Gondok  dan  Modena  memiliki  kekerabatan paling dekat, dan merpati jenis Moven memiliki kekerabatan  paling  jauh  dari  jenis  merpati hias yang diteliti dengan nilai similiaritas 0,28.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Penulis  mendeklarasikan  bahwa  tidak ada  konflik  kepentingan  dengan  pihak  lain mengenai pendanaan dan obyek penelitian.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terimakasih atas bantuan Agus Salim (Solo) yang  telah  berkenan  memberikan  burung merpati hias pada penelitian ini serta M. Udin (Laboran) yang telah membantu penelitian di Laboratorium Biologi Universitas Negeri Malang.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Nurdiyanto, E. dan  H. N. S. Yanti. 2019. Pengetahuan ekologi masyarakat banyumas mengenai  penamaan  burung  merpati. Prosiding  Seminar  Nasional  dan  Call  for
Papers ”Pengembangan sumber daya pedesaan dan kearifan lokal berkelanjutan IX” . 9(1).
2. Kabir, A. 2019. Analyses on colour, structure, and  behaviour  of  fancy  pigeons.  EC  Vet. Sci. 5(1):1-4.
3. Szmukier, S. M., K. Andres, K. Piorkowska, and  R.  K.  Molik. 2021.  Low diversity  of mitochondrial  DNA  in  fancy  pigeons ( Columba  livia )  revealed  by  partial  Dloop sequencing.  Anim.  Genet.  52(3):382.  Doi: 10.1111/age.13066
4. ELFP. 2012. EE-List of The Breeds of Fancy Pigeons  [Internet].  [cited  2014  October  5]. Available from: www.entente-ee.com.
5. Hastarina,  R.  2016.  Keragaman  genetik burung  maleo  ( Macrocephalon  maleo ) berdasarkan polimorfisme protein darah. J. Agrisains. 17(2):92-100.
6. Dharmayanthi,  B.  A.,  A.  Muchsinin,  A. Pulungan, and A. S. M. Zein. 2021. Diversitas genetika dan identifikasi jenis kelamin burung pelikan  ( Pelecanus  conspicillatus Temminck, 1824)  di  Penangkaran  Taman  Margasatwa Ragunan  Jakarta.  Jurnal  Biologi  Indonesia. 17(2):105-114. Doi: 10.47349/jbi/ 17022021/105
7. Suci,  M.  D.,  U.  N.  Nuha,  and  Suryahadi. 2019.  Pemberian  ekstrak  daun  kemuning ( Murraya  paniculata (L.)  Jack)  dalam  air minum  terhadap  performa  dan  kualitas fisik  telur  puyuh  malon.  Jurnal  Ilmu Nutrisi  dan  Teknologi  Pakan.  17(3):73-77. Doi: doi.org/10.29244/jintp.17.3.73-77
8. Ismoyowati. 2008. Kajian deteksi produksi telur  itik  tegal  melalui  polimorfisme  protein darah. Anim. Prod. 10(2):122-128.
9. Yuwono. 2008. Biologi  molekuler. Jakarta: Erlangga.
10. Warwick,  E.  J.,  J.  M.  Astuti,  and  W. Hardosubroto.  1990.  Pemuliaan  Ternak. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press.
11. Rahayu,  S.  E.  1998.  Pengkajian  hubungan kekerabatan  tujuh  jenis  burung  merpati familia  columbidae  berdasarkan  protein plasma darah. Chimera. 3(5).
12. Rahayu, S. E., Susilowati, dan R. I. Sri. 2006. Kajian  profil  protein  plasma  darah  tiga jenis  burung  merpati  (Merpati  Pos,  Kipas dan  Pedaging)  dalam  rangka  konservasi variasi genetic. MIPA. 35(2).
13. Pratiwi. 2001. Mengenal metode elektroforesis. Oseana. 26(1):25-31.
14. Fatchiyah.,  L.  A.  Estri,  W.  Sri,  dan  R.  Sri. 2011.  Biologi  molekuler  prinsip  dasar analisis. Erlangga, Jakarta.
15. Sari,  M.  L.,  R.  N.  Ronny,  H.  Peni,  dan  N. Chairun. 2011. Polimorfiems protein darah itik  pegagan  dengan  metode  PAGE. Agripet. 11(2).
16. Chahal,  S.  M.  S.,  dan  B.  Rupinder.  2005. Haemoglobin  variants  in  North  Indian Populations.  Anthropologist.  7(1):1-6. Doi: 10.1080/09720073.2005.11890875
17. Mordacq,  J.  C.  and  Roberta,  W.  E.  1994.
Poly acrylamide gel electrophoresis (PAGE) of blood proteins. USA: Universitas Northwestern.
18. Arefanian, H. and M. Djalali. 2002. A new protocol  for  isolation  and  purification  of transferrin  from  human  serum.  Iran.  J. Public Health. 31(1-2):15-18.
19. Guyton, A. C., J. E. Hall. 2006. Textbook of medical physiology. 11th edition . Philadel phia: Elsevier Saunders.
20. Ross.  M.  H.  and  P.  M.  D.  Wojciech.  2011. Histology  a  text  and  atlas.  West  Camden Street Baltimore, USA.
21. Faruque, M. O. 2007. The genetic diversity of Bangladesh buffaloes. Ital. J. Anim. Sci. 6: 349-352. Doi: 10.4081/ijas.2007.s2.349
22. Caraviello, D. Z. 2004. Croosbreesing dairy cattle. Reproduction and Genetics . 610: 1-5.
23. Noor, R. R. 2008. Genetika Ternak. Penebar Swadaya, Jakarta.