## Perbandingan Hasil Pemeriksaan Morfologi Spermatozoa Manusia Menggunakan Metode Pewarnaan Papanicolaou, Diff Quik, Dan Safranin- Kristal Violet Pada Pasien Infertil di Klinik Telkomedika Ratulangi Makassar
Comparison of Human Spermatozoa Morphology Examination Results Using Papanicolaou, Diff Quik, and Safranin-Crystal Violet Staining Methods in Infertile patients at Telkomedika Ratulangi Clinic Makassar
Rahmawati Thamrin 1* , Hengky Lukas 2
* Email: rahmawati.thamrin@gmail.com
1 Program Studi Pendidikan Dokter Universitas Bosowa
2 Rumah Sakit Umum Daerah Sidoarjo Diterima: 03 Januari 2024/Disetujui: 30 April 2024

## ABSTRAK
Pemeriksaan  sperma  sangat  penting  dalam  mengetahui  masalah  kesuburan  pada  pria.  Dalam pemeriksaan sperma terdapat pemeriksaan utama yaitu konsentrasi, motilitas dan morfologi. Penelitian ini  adalah  untuk  mengetahui  perbedaan  metode  pemeriksaan  morfologi  pada  Analisa  sperma  yaitu motode  Papanicolaou,  Safranin,  dan  Diff  Quik  dalam  mengevaluasi  morfologi  sperma  untuk mendapatkan hasil terbaik dalam menilai infertilitas pria. Rancangan penelitian yang digunakan adalah penelitian  laboratorium  observasional  analitik  yang  dilakukan  pada  pasien  yang  datang  ke  Klinik Telkomedika pada bulan September 2019 – januari 2020. Penelitian meneliti morfologi spermatozoa dari pada pasien infertil dan diperiksa dengan 3 metode:  Papanicolaou, Saffranin dan Diffquik lalu bandingkan. Hasilnya, total pasien yang diperiksa morfologi spermanya dengan Saffranin dan Diffquik selama lima bulan di Klinik Telkomedika dari bulan September 2019 hingga Januari 2020 sebanyak 90  orang  diambil  spermanya  dan  diperiksa  morfologi  spermanya  dengan  Metode  Papanicolaou, Saffranin  dan  Diffquik.  Hasil  analisis  statistik  menemukan  bahwa  terdapat  signifikansi  antara  dua metode  yang  kami  uji.  Pada  kategori  panjang  dan  lebar  terdapat  perbedaan  bermakna  p  <  α  antara Diffquik-Saffranin  Crystal Violet  dan  Diffquik-Papanicolaou.  Hal  serupa juga  terjadi  pada  kategori vakula,  melintang,  bagian  tengah,  dan  ERC.  Pada  metode  ketiganya  menunjukkan  perbedaan  yang signifikan. Hasil studi menyarankan evaluasi morfologi spermatozoa yang paling tepat adalah dengan menggunakan Saffranin Crystal Violet.
Kata  Kunci: Spermatozoa,  Pewarnaan,  Papanicolaou,  Diff  Quik,  Safranin-Kristal  Violet,  Pasien Infertil

## ABSTRACT
Sperm examination is very important in finding out fertility problems in men. In sperm examination, there  are  main  examinations,  namely  concentration,  motility  and  morphology.  This  study  is  to determine  the  difference  in  morphological  examination  methods  in  sperm  analysis,  namely Papanicolaou, Safranin, and Diff Quik methods in evaluating sperm morphology to get the best results in  assessing  male  infertility.  The  research  design  used  was  analytical  observational  laboratory research  conducted  on  patients  who  came  to  the  Telkomedika  Clinic  in  September  2019  -  January 2020. The study examined the morphology of spermatozoa from infertile patients and examined with 3 methods:  Papanicolaou, Saffranin and Diffquik and then compared. As a result, a total of 90 patients who  were  examined  for  sperm  morphology  with  Saffranin  and  Diffquik  for  five  months  at  the Telkomedika Clinic from September 2019 to January 2020 had their sperm taken and examined for sperm morphology using the Papanicolaou, Saffranin and Diffquik methods. The results of statistical analysis found that there was significance between the two methods we tested.  In the length and width categories, there was a significant difference of p < α between Diffquik-Saffranin Crystal Violet and
Diffquik-Papanicolaou. The same was true for the vacuoles, transverse, central, and ERC categories. All three methods showed significant differences. The study results suggest that the most appropriate evaluation of spermatozoa morphology is by using Saffranin Crystal Violet.
Keywords : Spermatozoa, Staining, Papanicolaou, Diff Quik, Safranin-Crystal Violet, Infertile Patients
This work is licensed under Creative Commons Attribution License 4.0 CC-BY International license

## A. PENDAHULUAN
Semen  analisis  rutin  adalah  metode pemeriksaan pada infertilitas pria, dimana terdapat  beberapa  parameter  penting seperti konsentrasi, motilitas dan morfologi  yang  pada  umumnya  diakui sebagai  tiga parameter penting  yang akan dinilai  disamping  parameter  lainnya. Parameter  ini  dianggap  paling  berguna karena telah terbukti menunjukkan potensi kesuburan.  Dari semua parameter analisis semen rutin
tersebut, morfologi spermatozoa  menjadi  salah  satu  yang
indikator paling kuat dari potensi kesuburan  seorang  pria  (Gravance  et  al. 1998, WHO 1999, Henkel et al. 2007, van der Horst et al. 2009).
Morfologi spermatozoa penting untuk  mencapai  kesuksesan  fertilisasi (Kuster et al., 2004). Kriteria Kruger pada tahun  1986  dan  klasifikasi  WHO    bahwa morfologi berpengaruh sejak spermatozoa mengalami maturasi hingga melaksanakan fungsinya saat fertilisasi.  Morfologi yang normal biasanya pada kepala spermatozoa mengandung  nucleus  yang  terdiri  dari DNA  dan  RNA  juga  terdapat  lipid, mucoprotein,  magnesium  dan  garam
lainnya. Begitu pula pada leher serta ekor spermatozoa  yang  memiliki  komposisi lipid,  garam  kalium,  kalsium  dan  garam lainnya sebagai struktur penyusun spermatozoa  (moeloek,1983).  Morfologi normal  tersebut  pada  umumnya  didapati pada  pasien  fertil,  pada  pasien  infertil sering  dijumpai  morfologi  abnormal (Gravance  et  al.  1998).  Untuk  menilai normal atau tidaknya morfologi spermatozoa, pada laboratorium Andrologi menggunakan beberapa metode pewarnaan. Pewarnaan yang
baik akan menghasilkan interpretasi  morfologi  yang baik pula. Keakuratan penilaian morfologi sperma  tergantung  pada  persiapan  yang cermat,  fiksasi,  dan  pewarnaan  sperma (GARCI'a-Herreros  et  al.  2006),  karena prosedur ini dapat mempengaruhi dimensi sperma secara signifikan (Meschede et al. 1993, Gago dkk. 1998, Hidalgo et al. 2006, Lukaszewicz et al. 2008). Pada spermatozoa normal yang banyak dijumpai  pada  pasien  fertil  yang  dimana strukturnya  bagus  dengan  komposisi seperti  lipid,  mucoprotein,  garam-garam (Mg, Fe, Cu, K dan fosfat) yang utuh (van
dwye,  1954),  akan  memungkinkan  dapat terwarnai  dengan  sempurna  daripada spermatozoa abnormal yang terdapat pada pasien pria infertil yang kemungkinan ada kerusakan pada bentuk  spermatozoa  yang mengakibatkan  komposisi  tidak  lengkap. Ada banyak metode pewarnaan antara lain Papanicolaou, Diff-Quik, Safranin-Kristal Violet  untuk  pewarnaan  spermatozoa. Metode yang digunakan dalam pewarnaan dapat  menyebabkan  sedikit  perubahan dalam nilai-nilai pengukuran spermatozoa misalnya proses fiksatif dapat menyebabkan sel menyusut sedikit. Nilai- nilai ini berubah menjadi 5-6 µm (panjang) dan 2,5 µm - 3,5 µm (lebar) pada Metode pewarnaan  Diff-Quik.  (Irez  et  al.,  2007). Prosedur pada metode Diff-Quik memerlukan  kurang  dari  5  langkah sederhana dan hanya melibatkan 3 larutan, sedangkan  prosedur  metode  Safranin- Kristal Violet hanya memerlukan 4 larutan dengan 5 langkah sederhana. (Ross  1953,
Katz et al. 1986). Pada metode Diff-Quik, mengandung  fast  green  0,002  g/l  dalam methanol  sebagai  bahan  fixatif,  eosin  Y 1,22g/l dalam phospate buffer dengan pH 6,6 sebagai bahan pewarna yang biasanya akan mewarnai sitoplasma dengan sempurna dan 0,1% sodium azide sebagai preservative,  thiazine  dye  1,1g/l  didalam phospate  buffer  pH  6,6  yang  memiliki
kelebihan  dimana  lebih  sederhana  dan lebih  cepat  dalam  proses  pengerjaannya. Pada  metode  Safranin-Kristal  Violet, pewarna  safranin  digunakan  sebagai counterstain  dan  Kristal  violet  bereaksi dengan  cara  memisahkan  ion  dalam larutan air ke dalam Ion CV + dan klorida (Cl-).  Ion  ini  menembus  dinding  sel  dan membran  sel,  ion  CV  +  berinteraksi dengan  komponen  bermuatan  negatif sehingga  memberi  warna  ungu  pada  sel tersebut.  Counterstain,  yang  biasanya bermuatan positif (safranin) akan memberikan decolorized pink.
Sampai  saat  ini,  masih  kurang penelitian  yang  membandingkan  hasil penilaian
morfologi spermatozoa
menggunakan  metode  Diff-Quik  dan metode Safranin-kristal violet pada morfologi  normal  yang  pada  umumnya ditemukan  pada  pria  fertil  dan  morfologi abnormal yang pada umumnya ditemukan pada pasien pria infertil.
Penelitian bertujuan untuk mengetahui perbedaan metode pemeriksaan  morfologi  pada  Analisa
sperma yaitu motode
Papanicolaou, Safranin, dan Diff Quik dalam
mengevaluasi  morfologi  sperma  untuk mendapatkan  hasil  terbaik  dalam  menilai infertilitas pria.

## B. METODE PENELITIAN
Jenis penelitian ini adalah penelitian
observasional analytic laboratorium.
Rancangan  penelitian  ini  menggunakan metode Komparatif dengan menggunakan analisis  varian  atau  Anova.  Subyek dilakukan  untuk  membandingkan  metode papanicolaou, metode diffquik dan metode saffranin  kristal  violet  untuk  analisis morfologi spermatozoa.

## C. HASIL DAN PEMBAHASAN
Sampel yang telah terkumpul mempunyai  rentang  umur  antara  21  –  40 tahun.    Abstinensia  minimal  2  dan maksimal  7  hari.  Seluruh  sampel  sperma diperoleh  secara  masturbasi  dan  lengkap.
Sampel sperma pria fertil dan pasien pria infertil yang datang berobat ke Klinik klinik  Telkomedika,  Makassar  bulan September 2019 – januari 2020 didapatkan 45  sampel.  Hasil  analisis  sampel  sperma pasien  tersebut  didapatkan  konsentrasi sperma diatas 15 juta/ml.

## Data Kelompok Pasien Pria Infertil
Hasil  uji  deskriptif  panjang  kepala spermatozoa  pasien  infertil  menunjukkan bahwa  panjang  rata-rata  pada  kelompok infertil  menggunakan  metode  Diffquik adalah sekitar 4,32 - 5,51 µm. Sedangkan pada  Papanicolaou  adalah  sekitar  3,49- 5,00 µm, dan pada Saffranin adalah sekitar
3,84-5,06  µm.  Tampak  seperti  Tabel  1. dibawah ini.

## Tabel 1. Hasil uji deskriptif panjang kepala spermatozoa pasien pria infertile
Hasil  uji  deskriptif  lebar  kepala spermatozoa pasien pria infertil menunjukkan  bahwa  lebar  rata-rata  pada kelompok  infertil  menggunakan  metode Diffquik  adalah  sekitar  2,13-4,19  µm. Sedangkan  pada  Papanicolaou  adalah sekitar  1,98-3,48  µm,  dan  pada  Saffranin adalah sekitar 2,10-3,54 µm. Dapat dilihat pada Tabel 2. dibawah ini.
Tabel 2. Hasil uji deskriptif lebar kepala spermatozoa pasien pria infertile
Hasil  uji  deskriptif  ukuran  panjang dan  lebar  spermatozoa  pada  pasien  pria infertil  dibandingkan  dengan  kriteria Kruger  menunjukkan  bahwa  persentase ukuran panjang dan lebar pada sampel bila dibandingkan dengan kriteria Kruger maka didapati  kesamaan  76%  pada  metode Diffquik,
100% pada metode
Papanicolaou,  dan  80%  pada  metode Saffranin.  Dapat  dilihat  pada  Tabel  3. dibawah ini.
Metode n Mean Median Mode Standart Deviation Panjang rata-rata (minimum- maximum) Diffquik 45 5,0638 5,1400 5,25 0,27782 4,32-5,51 Papanicolaou 45 4,4344 4,4800 4,54 0,29797 3,49 – 5,00 Safranin 45 4,5353 4,5700 4,57 0,25274 3,84-5,06 Metode n Mean Median Mode Standart Deviation Lebar rata- rata (minimum- maximum) Diffquik 45 2,9709 3,0100 3,16 0,4566 2,13-4,19 Papanicolaou 45 2,5704 2,4400 2,43 0,35656 1,98-3,48 Safranin 45 2,5691 2,5400 2,54 0,32794 2,10-3,54
Tabel 3. Hasil uji deskriptif ukuran panjang dan lebar spermatozoa pada pasien pria infertil dibandingkan dengan kriteria Kruger.
Untuk menganalisis hasil uji statistik ukuran  kepala  sperma  spermatozoa  maka sebelum  dilakukan  analisis  data  terlebih dahulu  dilakukan  uji  distribusi  normal pada data yang telah terkumpul
menggunakan uji satu sampel Kolmogorov-Smirnov. Semua data
berdistribusi  normal  (p  >  0,05)  kecuali pada  lebar  rata-rata  antara  papanicolaou, dan saffranin. Hasil uji dapat dilihat pada

## Tabel 4.
Tabel 4. Hasil uji distribusi normal untuk ukuran kepala sperma pasien pria infertil menggunakan One-Sample Kolmogorov- Smirnov Test .
Pada  hasil  uji  beda  untuk  ukuran kepala  sperma  pasien  pria  infertil  dalam kategori  panjang  rata-rata,  lebar  rata-rata, % panjang normal, % lebar normal, dan % normal  didapati  hasil  distribusi  normal hanya  pada  %  lebar  normal  dimana  p  > 0,05.  Seperti  tampak  pada  tabel  dibawah ini.
Tabel 5. Hasil uji beda untuk ukuran kepala sperma pasien pria infertil menggunakan Anova, Least Siginificant Difference , Kruskal-Wallis, Mann Whitney, Brown- Forsythe, dan Games Howell
Pada  uji  beda  panjang  rata-rata ketiga  metode  berdistribusi  normal  dan homogen  maka  dilakukan  uji  analisis varian atau Anova. Pada panjang rata-rata setelah  diuji  Anova  ternyata  hasilnya  p  < 0,05  sehingga  dilakukan  uji  beda  dengan
menggunakan Least Siginificant
Difference (LSD) atau beda nyata terkecil (penentuan  beda  terkecil  tersebut  dilihat dari nilai mean pada Tabel 6 dan Tabel 7 dibawah ini).
Tabel 6. Hasil uji beda panjang rata-rata pasien pria infertil menggunakan Anova.
Metode N Mean Median Mode Standart Deviation % panjang dan lebar rata-rata
(minimum- maximum) Diffquik 45 38,27 36,00 30 14,620 0-76 Papanicolaou 45 50,40 48,00 64 20,682 12-100 Safranin 45 49,02 52,00 64 16,151 20-80 Uji distribusi normal
Infertil Diffquik Papanicolaou Saffranin Panjang rata-rata 0,470 0,157 0,646 Lebar rata-rata 0,102 0,023 0,018 % Panjang normal 0,593 0,271 0,307 % Lebar normal 0,428 0,434 0,250 % Normal 0,088 0,619 0,221
Uji beda
Normal
Infertil Diffquik Papanicolaou Saffranin Panjang rata-rata < 0,001 ( Anova) (LSD) (LSD) (LSD) Lebar rata-rata < 0,001 (Kruskal-Wallis ) (MW) (MW) (MW) %Panjang normal < 0,001
(Anova)
(LSD) (LSD) (LSD) % Lebar normal 0,132 ( Anova ) - - - % Normal 0,002 (Brown-Forsythe) (GH) (GH)
(GH)
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 5,0638 ± 0,27782 < 0,001 Papanicolaou 45 4,4344 ± 0,29797 Saffranin 45 4,5353 ± 0,2574
Tabel 7. Hasil uji beda panjang rata-rata pasien pria infertil menggunakan Least Siginificant Difference (LSD).
Pada lebar rata-rata pada pasien pria infertil antara pada ketiga metode karena p >  0,05  atau  berdistribusi  normal  maka dilakukan  uji  analisis  Kruskal-Wallis.
Pada lebar rata-rata setelah diuji Kruskal- Wallis  (KW)  ternyata  hasilnya  p  <  0,05 sehingga  dilakukan  uji  beda  dengan menggunakan  Mann  Whitney  (MW)  dan kemudian  didapati  hasil  seperti  Tabel  8. dan Tabel 9.  dibawah ini.
Tabel 8. Hasil uji beda lebar rata-rata pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Tabel 9. Hasil uji beda lebar rata-rata pasien pria infertil menggunakan Mann Whitney (MW).
Pada % panjang normal pada pasien pria  infertil  antara  pada  ketiga  metode karena p  > 0,05 atau berdistribusi  normal dan homogen maka dilakukan uji analisis varian atau Anova. Pada % panjang normal
setelah  diuji  Anova  ternyata  hasilnya  p  < 0,05  sehingga  dilakukan  uji  beda  dengan
menggunakan Least Siginificant
Difference (LSD) atau beda nyata terkecil dan kemudian didapati hasil seperti Tabel 10. dan Tabel 11. dibawah ini.
Tabel 10. Hasil uji beda % panjang normal pasien pria infertil menggunakan Anova.
Tabel 11. Hasil uji beda % panjang normal pasien pria infertil menggunakan Least Siginificant Difference (LSD).
Pada  %  lebar  normal  pada  pasien pria  infertil  antara  pada  ketiga  metode karena p  > 0,05 atau berdistribusi  normal dan homogen maka  dilakukan uji analisis varian  atau  Anova.  Pada  %  lebar  normal setelah  diuji  Anova  ternyata  hasilnya  p  > 0,05  sehingga  tidak  perlu  dilakukan  uji beda  karena  tidak  ada  perbedaan  antara ketiga metode.
Tabel 12. Hasil uji beda % lebar normal pasien pria infertil menggunakan Anova.
Pada  %  normal  pada  pasien  pria infertil antara pada ketiga metode karena p
Metode n p
Diffquik Papanicolaou 45 < 0,001
Saffranin 45 < 0,001 Papanicolaou Diffquik 45 < 0,001 Saffranin 45 0,086 Saffranin Diffquik 45 < 0,001
Papanicolaou 45 0,086
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 2,9709 ± 0,45566 < 0,001 Papanicolaou 45 2,5704 ± 0,35656 Saffranin 45 2,5691 ± 0,32794 Metode n p Diffquik-Papanicolaou 45 < 0,001 Diffquik-Saffranin 45 < 0,001 Papanicolaou-Saffranin 45 0,564
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 57,47 ± 15,483 < 0,001 Papanicolaou 45 79,78 ± 17,737 Saffranin 45 77,02 ± 12,458
Metode n p Diffquik
Papanicolaou 45 < 0,001
Saffranin 45 < 0,001 Papanicolaou Diffquik 45 < 0,001 Saffranin 45 0,397 Saffranin Diffquik 45 < 0,001 Papanicolaou 45 0,397
Metode
n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 66,93 ± 16,688 0,132 Papanicolaou 45 60,00 ± 19,859 Saffranin 45 60,36 ± 18,132
>  0,05  atau  berdistribusi  normal  dan heterogen  maka  dilakukan  uji  analisis Brown-Forsythe  (BF)  dan  hasilnya  tidak berdistribusi  normal  p  <  0,05,  maka dilakukan  uji  lanjutan  dengan  uji  statistik Games-Howwell  (GH)  dan  didapati  hasil seperti pada tabel dibawah ini.
Tabel 13. Hasil uji beda % normal pasien pria infertil menggunakan Brown Forsythe (BF).
Tabel 14. Hasil uji beda % normal pasien pria infertil menggunakan Games Howell (GH).
Pada  hasil  uji  distribusi  normal untuk bentuk kepala spermatozoa menggunakan  One-Sample  Kolmogorov- Smirnov  Test  pada  pasien  pria  infertil setelah  diuji  normal  maka  didapati perbedaan pada round, amorph, vacuoles > 2, LNV, PA, acrossom < 40%, acrosom > 70%, acrosom terwarnai sempurna,
acrosom terwarnai tidak sempurna, kepala terwarnai sempurna maupun tidak sempurna,  semua  terdapat  perbedaan  dan tidak berdistribusi normal dengan p < 0,05.
Tabel 15. Hasil uji distribusi normal untuk bentuk kepala spermatozoa pasien pria infertil menggunakan One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test.
Pada  hasil  uji  beda  untuk  bentuk
kepala sperma pasien pria infertil menggunakan  Anova, Least  Siginificant Difference ,
Kruskal-Wallis,
Mann
Whitney,  Brown-Forsythe,  dan  Games Howell didapatkan hasil distribusi normal p  >  0,05  pada  bentukan  tappered  infertil, pyri  pasien  infertil,  round,  amorph, acrosom < 40%.
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p
Diffquik 45 38,27 ± 14,62 0,002 Papanicolaou 45 50,40 ± 20,682 Saffranin 45 49,02 ± 16,151 Metode n p
Diffquik Papanicolaou 45 0,005 Saffranin 45 0,004 Papanicolaou Diffquik 45 0,005 Saffranin 45 0,934 Saffranin Diffquik 45 0,004 Papanicolaou 45 0,934
Uji distribusi normal head Infertil Diffquik Papanicolaou Saffranin Tapered 0,193 0,791 0,343 Pryi 0,728 0,684 0,772 Round 0,004 0,003 0,002 Amorph 0,295 0,037 0,074 Vacuoles->2 0,005 0,144 0,004 Vacuoles-LNV < 0,001 < 0,001 < 0,001 Vacuoles-PA < 0,001 < 0,001 < 0,001 Acrosom-<40% < 0,001 0,040 0,023 Acrosom->70% < 0,001 0,014 < 0,001 Acrosom -terwarnai sempurna 0,155 < 0,001 < 0,001 Acrosom -terwarnai tidak sempurna 0,121 < 0,001 < 0,001 Num (%) - - - Other - - - Head terwarnai sempurna < 0,001 < 0,001 < 0,001 Head terwarnai tidak sempurna < 0,001 < 0,001 < 0,001
Tabel 16. Hasil uji beda untuk bentuk kepala spermatozoa pasien pria infertil menggunakan Anova, Least Siginificant Difference , Kruskal-Wallis, Mann Whitney, Brown-
Forsythe, dan Games Howell.
Pada taperred pasien  pria  infertil
diuji  dengan Anova (p  >  0,05)  dan  tidak didapatkan  perbedaan,  hasilnya  seperti pada Tabel 17. dibawah ini.
Tabel 17. Hasil uji beda taperred pasien pria infertil menggunakan Anova.
Pada pyri pasien  pria  infertil dilakukan  uji  Anova  (p >  0,05)  dan  tidak didapatkan  perbedaan,  hasilnya  seperti pada Tabel 18. dibawah ini.
Tabel 18. Hasil uji beda pyri pasien pria infertil menggunakan Anova.
Pada  round  pasien  pria  infertil dilakukan  uji  Kruskal-Wallis  (KW)  (p  > 0,05)  dan  tidak  didapatkan  perbedaan, hasilnya  seperti  pada  Tabel  19.  dibawah ini.
Tabel 19. Hasil uji beda round pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Pada  amorph  pasien  pria  infertil dilakukan  uji  Kruskal-Wallis  (KW)  (p  > 0,05)  dan  tidak  didapatkan  perbedaan, hasilnya seperti pada Tabel 20 dibawah ini.
Tabel 20. Hasil uji beda amorph pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Pada vaculoes > 2 pasien pria infertil dilakukan  uji  Kruskal-Wallis  (KW)  (p  < 0,05)  dan  didapatkan  perbedaan,  lalu dilakukan uji beda Mann-Whitney (MW). Uji  beda  tidak  ada  beda  pada  diff-saff, disajikan pada Tabel 21. dan Tabel 22.
Uji beda head Infertil
Diffquik Papanicolaou Saffranin Form-Tapered
0,815 (Anova)
- - -
Form-Pryi 0,786 (Anova)
- - -
Form-Round 0,902 (KW) - - - Form-Amorph 0,233 (KW)
- - - Vacuoles->2 < 0,001
(KW)
(MW) (MW)
(MW) Vacuoles-LNV
0,015
(KW)
(MW) (MW)
(MW) Vacuoles-PA
0,012
(KW)
(MW) (MW)
(MW) Acrosom-<40% 0,676 (KW)
- - -
Acrosom->70% 0,012 (KW) (MW) (MW) (MW) Acrosom -terwarnai sempurna < 0,001 (KW) (MW)
(MW)
(MW) Acrosom -terwarnai tidak sempurna < 0,001 (KW) (MW)
(MW)
(MW) Num (%) 1,000 (KW)
- -
-
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 18,89 ± 10,050 0,815 Papanicolaou 45 17,82 ± 10,641 Saffranin 45 17,60 ± 9,960
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 17,87 ± 8,805 0,786 Papanicolaou 45 16,58 ± 9,454 Saffranin 45 17,20 ± 8,095
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 2,84 ± 3,825 0,902 Papanicolaou 45 3,24 ± 4,206 Saffranin 45 2,58 ± 3,732
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku P Diffquik 45 6,67 ± 5,800 0,233 Papanicolaou 45 9,02 ± 8,900 Saffranin 45 9,91 ± 9,591
Tabel 21. Hasil uji beda vacuoles > 2 pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Tabel 22. Hasil uji beda vacuoles > 2 pasien pria infertil menggunakan Mann Whitney (MW).
Pada  Vaculoes  LNV  pasien  pria infertil dilakukan uji Kruskal-Wallis (KW) dan didapatkan perbedaan (p < 0,05), lalu dilakukan uji beda Mann-Whitney (MW).
Uji beda disajikan pada tabel dibawah ini.
Tabel 23. Hasil uji beda vacuoles LNV pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Tabel 24. Hasil uji beda vacuoles LNV pasien pria infertil menggunakan Mann Whitney (MW).
Pada  Vaculoes  PA  pasien  pria infertil dilakukan uji Kruskal-Wallis (KW) dan didapatkan perbedaan (p < 0,05), lalu dilakukan uji beda Mann-Whitney (MW).
Uji beda disajikan pada tabel dibawah ini.
Tabel 25. Hasil uji beda vacuoles PA pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis
Tabel 26. Hasil uji beda vacuoles PA pasien pria infertil menggunakan Mann Whitney (MW).
Pada  akrosom  <  40%  pasien  pria infertil dilakukan uji Kruskal-Wallis (KW) dan tidak didapatkan perbedaan (p > 0,05), hasilnya seperti pada tabel dibawah ini.
Tabel 27. Hasil uji beda akrosom < 40% pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Pada  akrosom  >  70%  pasien  pria infertil dilakukan uji Kruskal-Wallis (KW) dan didapatkan perbedaan (p < 0,05), lalu dilakukan uji beda Mann-Whitney (MW). Uji beda disajikan pada tabel dibawah ini.
Tabel 28. Hasil uji beda akrosom > 70 % pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku P Diffquik 45 2,76 ± 4,206 < 0,001 Papanicolaou 45 12,44 ± 9,908
Saffranin
45 5,51 ± 7,933
Metode n p Diffquik-Papanicolaou
45 < 0,001 Diffquik-Saffranin 45 0,065
Papanicolaou-Saffranin
45 < 0,001 Metode
n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 0,18 ± 0,576 0,015 Papanicolaou 45 1,42 ± 2,472 Saffranin 45 0,98 ± 1,936 Metode n p Diffquik-Papanicolaou 45 0,004 Diffquik-Saffranin 45 0,020 Papanicolaou-Saffranin 45 0,505
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 0,22 ± 0,974 0,012 Papanicolaou 45 1,51 ± 3,050 Saffranin 45 0,40 ± 1,009
Metode n p
Diffquik-Papanicolaou
45 0,005 Diffquik-Saffranin 45 0,019 Papanicolaou-Saffranin 45 0,127
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 7,87 ± 13,235 0,676 Papanicolaou 45 8,00 ± 9,863 Saffranin 45 8,18 ± 9,666
Metode
n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 0,80 ± 1,878 0,002 Papanicolaou 45 3,78 ± 5,226 Saffranin 45 2,53 ± 4,143
Tabel 29. Hasil uji beda akrosom > 70 % pasien pria infertil menggunakan Mann Whitney (MW).
Pada  akrosom  terwarnai  sempurna pasien pria infertil  dilakukan uji Kruskal- Wallis (KW) dan didapatkan perbedaan (p <  0,05),  lalu  dilakukan  uji  beda  Mann Whitney  (MW).  Uji  beda  disajikan  pada tabel dibawah ini.
Tabel 30. Hasil uji beda akrosom terwarnai sempurna pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Tabel 31. Hasil uji beda akrosom terwarnai sempurna pasien pria infertil menggunakan
Kruskal Wallis (KW).
Pada akrosom tidak terwarnai sempurna pasien pria infertil dilakukan uji Kruskal-Wallis  (KW)  dan  didapatkan perbedaan  (p  <  0,05),  lalu  dilakukan  uji beda  Mann-Whitney  (MW).  Uji  beda disajikan  pada  Tabel  32  dan  Tabel  33 dibawah ini.
Tabel 32. Hasil uji beda akrosom terwarnai tidak sempurna pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Tabel 33. Hasil uji beda akrosom terwarnai tidak sempurna pasien pria infertil menggunakan Mann Whitney (MW).
Pada num (jumlah lebih dari 1) (%) pasien pria infertil  dilakukan uji Kruskal- Wallis  (KW)  dan  tidak  didapatkan perbedaan (p > 0,05), hasilnya seperti pada Tabel 34. dibawah ini.
Tabel 34. Hasil uji beda num % pasien infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Pada  other  pasien  pria  infertil dilakukan  uji  Kruskal-Wallis  (KW)  dan tidak  didapatkan  perbedaan  (p  >  0,05), hasilnya seperti pada Tabel 35 dibawah ini.
Tabel 35. Hasil uji beda other pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Pada  head  terwarnai  sempurna pasien  pria  infertil  dilakukan  uji  Kruskal Wallis (KW) dan didapatkan perbedaan (p <  0,05),  lalu  dilakukan  uji  beda  Mann-
Metode n p Diffquik-Papanicolaou 45 0,001 Diffquik-Saffranin 45 0,017 Papanicolaou-Saffranin 45 0,191
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 22,00 ± 18,434
< 0,001 Papanicolaou 45 2,13 ± 6,126 Saffranin 45 4,04 ± 8,888 Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 77,16 ± 19,105 < 0,001 Papanicolaou 45 96,89 ± 7,514 Saffranin 45 95,29 ± 9,818 Metode n p Diffquik-Papanicolaou 45 < 0,001 Diffquik-Saffranin 45 < 0,001 Papanicolaou-Saffranin 45 0,799
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 22,00 ± 18,434 < 0,001 Papanicolaou 45 2,13 ± 6,126 Saffranin 45 4,04 ± 8,888 Metode n p
Diffquik-Papanicolaou
45 < 0,001 Diffquik-Saffranin 45 < 0,001
Papanicolaou-Saffranin
45 0,487
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 0,001 ± 0,0001 1,000 Papanicolaou 45 0,001 ± 0,0001 Saffranin 45 0,001 ± 0,0001
Metode
n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 0,001 ± 0,0001 1,000 Papanicolaou 45 0,001 ± 0,0001 Saffranin 45 0,001 ± 0,0001
Whitney  (MW).  Uji  beda  disajikan  pada tabel dibawah ini
Tabel 36. Hasil uji beda head terwarnai sempurna pasien pria infertile menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Tabel 37. Hasil uji beda head terwarnai sempurna pasien pria infertil menggunakan Mann Whitney (MW).
Pada head terwarnai tidak sempurna pasien pria infertil  dilakukan uji Kruskal- Wallis (KW) dan didapatkan perbedaan (p
<  0,05),  lalu  dilakukan  uji  beda  Mann- Whitney  (MW).  Uji  beda  disajikan  pada tabel dibawah ini.
Tabel 38. Hasil uji beda head terwarnai tidak sempurna pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Tabel 39. Hasil uji beda head terwarnai tidak sempurna pasien pria infertil menggunakan
Mann Whitney (MW).
Pada  hasil  uji  distribusi  normal untuk mid  piece spermatozoa  pasien  pria infertil menggunakan
One-Sample
Kolmogorov-Smirnov  Test setelah  diuji
normal  maka  didapati  hasil  semua bentukan  mid  piece  tidak  berdistribusi normal dengan p < 0,05 kecuali bentukan thick  pada  pewarnaan  diffquik  dan saffranin berdistribusi normal dengan p > 0,05.
Tabel 40. Hasil uji distribusi normal untuk bentuk mid piece spermatozoa pasien pria infertil menggunakan One-Sample
Kolmogorov-Smirnov Test.
Pada  hasil  uji  beda  untuk  bentuk  I sperma  pasien  pria  infertil  menggunakan Anova,  Least  Siginificant  Difference ,
Kruskal-Wallis,  Mann  Whitney,  Brown- Forsythe,  dan  Games  Howell  didapatkan data pada umunya berdistribusi normal p > 0,05.  Data  dapat  dilihat  pada  Tabel  41. dibawah ini.
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 83,96 ± 32,332 0,010 Papanicolaou 45 88,36 ± 31,652 Saffranin 45 84,98 ± 34,138 Metode n p Diffquik-Papanicolaou 45 0,003 Diffquik-Saffranin 45 0,057 Papanicolaou-Saffranin 45 0,292 Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 2,13 ± 5,367 0,011 Papanicolaou 45 0,53 ± 1,878 Saffranin 45 0,53 ± 2,191 Metode n p Diffquik-Papanicolaou 45 0,013 Diffquik-Saffranin 45 0,200 Papanicolaou-Saffranin 45 0,786
Uji distribusi normal mid piece Infertil Diffquik Papanicolaou Saffranin Insertion < 0,001 < 0,001 0,007 Thick 0,168 0,014 0,369 Thin < 0,001 < 0,001 < 0,001 Irregular < 0,001 < 0,001 < 0,001 Bent 0,002 0,004 0,008 Terwarnai Sempurna < 0,001 < 0,001 < 0,001 Terwarnai tidak sempurna < 0,001 < 0,001 < 0,001
Tabel 41. Hasil uji beda untuk bentuk mid piece spermatozoa pasien pria infertil menggunakan Anova, Least Siginificant Difference , Kruskal-Wallis, Mann Whitney, Brown-Forsythe, dan Games Howell.
Pada insertion pasien  pria  infertil dilakukan  uji  Kruskal-Wallis  dan  tidak didapatkan  perbedaan,  hasilnya  seperti pada tabel dibawah ini.
Tabel 42. Hasil uji beda insertion pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Pada thick pasien  pria  infertil dilakukan  uji  Kruskal-Wallis  dan  tidak didapatkan  perbedaan,  hasilnya  seperti pada tabel dibawah ini.
Tabel 43. Hasil uji beda thick pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Pada  thin  pasien  pria  infertil dilakukan  uji  Kruskal-Wallis  dan  tidak didapatkan  perbedaan,  hasilnya  seperti pada tabel dibawah ini.
Tabel 44. Hasil uji beda thin pria pasien infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Pada irregular pasien  pria  infertil dilakukan  uji  Kruskal-Wallis  dan  tidak didapatkan  perbedaan,  hasilnya  seperti pada tabel dibawah ini dengan p>0,05.
Tabel 45. Hasil uji beda irregular pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Pada bent pasien  pria  infertil dilakukan  uji  Kruskal-Wallis  dan  tidak didapatkan  perbedaan,  hasilnya  seperti pada tabel dibawah ini.
Tabel 46. Hasil uji beda bent pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Pada mid  peice terwarnai  sempurna pasien pria infertil  dilakukan uji Kruskal- Wallis  dan  tidak  didapatkan  perbedaan, hasilnya seperti pada tabel dibawah ini.
Tabel 47. Hasil uji beda mid pice terwarnai sempurna pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Pada  mid  piece  terwarnai  tidak sempurna pasien pria infertil dilakukan uji
Uji beda mid piece Infertil Diffquik Papanicolaou Saffranin Insertion 0,096 (KW) Thick 0,399 (KW) Thin
0,502
(KW) Irregular
0,818
(KW) Bent
0,716
(KW) Terwarnai Sempurna 0,998 (KW) Terwarnai Tidak Sempurna 0,757 (KW)
Metode
n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 1,91 ± 3,789 0,096 Papanicolaou 45 2,22 ± 4,456 Saffranin 45 3,16 ± 4,700 Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 13,51 ± 12,542 0,399 Papanicolaou 45 11,42 ± 11,604 Saffranin 45 12,98 ± 7,800
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 0,44 ± 2,408 0,502 Papanicolaou 45 0,53 ± 1,618 Saffranin 45 0,62 ± 1,696
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 1,56 ± 3,997 0,818 Papanicolaou 45 1,87 ± 3,703 Saffranin 45 1,73 ± 3,991
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 3,64 ± 5,820 0,716 Papanicolaou 45 4,67 ± 7,274 Saffranin 45 4,36 ± 5,331
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 98,40 ± 4,505 0,998 Papanicolaou 45 98,13 ± 4,737 Saffranin 45 97,78 ± 6,371
Kruskal-Wallis  dan  tidak  didapatkan perbedaan,  hasilnya  seperti  pada  tabel dibawah ini.
Tabel 48. Hasil uji beda mid piece terwarnai tidak sempurna pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Pada  hasil  uji  distribusi  normal untuk bentuk principal piece spermatozoa menggunakan  One-Sample  Kolmogorov- Smirnov Test hanya pada bentukan coiled yang  memiliki  data  yang  berdistribusi normal p > 0,05.
Tabel 49. Hasil uji distribusi normal untuk bentuk principal piece spermatozoa pasien pria infertil menggunakan One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test.
Pada  hasil  uji  beda  untuk  bentuk principal piece sperma pasien pria infertil menggunakan  Anova, Least  Siginificant Difference , Kruskal-Wallis,
Mann
Whitney,  Brown-Forsythe,  dan  Games
Howell semua berdistribusi normal dengan p > 0,05.
Tabel 50. Hasil uji beda untuk bentuk principal piece spermatozoa pasien pria infertil menggunakan Anova, Least Siginificant Difference , Kruskal-Wallis, Mann Whitney, Brown-Forsythe, dan Games Howell.
Pada  short  pasien  pria  infertil dilakukan  uji  Kruskal-Wallis  dan  tidak didapatkan  perbedaan,  hasilnya  seperti pada tabel dibawah ini.
Tabel 51. Hasil uji beda short pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Pada  multiple  pasien  pria  infertil dilakukan  uji  Kruskal-Wallis  dan  tidak didapatkan  perbedaan,  hasilnya  seperti pada tabel dibawah ini.
Tabel 52. Hasil uji beda multiple pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Pada  broken  pasien  pria  infertil dilakukan  uji  Kruskal-Wallis  dan  tidak didapatkan  perbedaan,  hasilnya  seperti pada tabel dibawah ini.
Metode N Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 1,29 ± 4,267 0,757 Papanicolaou 45 1,07 ± 3,683 Saffranin 45 1,96 ± 5,916
Uji distribusi normal principal piece Infertil Diffquik Papanicolaou Saffranin Short < 0,001 < 0,001 - Multiple < 0,001 < 0,001 < 0,001 Broken < 0,001 < 0,001 < 0,001 Bent < 0,001 < 0,001 < 0,001 Irregular < 0,001 < 0,001 < 0,001 Looped 0,009 0,016 0,038 Coiled 0,078 0,184 0,159 Terwarnai Sempurna < 0,001 < 0,001 < 0,001
Terwarnai tidak sempurna < 0,001 < 0,001
< 0,001
Uji beda principal piece
Infertil
Diffquik Papanicolaou Saffranin Short 0,604 (KW) Multiple 0,900 (KW) Broken 0,131 (KW) Bent 0,792 (KW) Irregular 0,762 (KW) Looped 0,680 (KW) Coiled 0,284 (Anova) Terwarnai Sempurna 0,960 (KW) Terwarnai Tidak Sempurna 0,579 (KW)
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 0,31 ± 2,087 0,604 Papanicolaou 45 0,04 ± 0,298 Saffranin 45 0,001 ± 0,0001
Metode
n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 0,13 ± 0,505 0,900 Papanicolaou 45 0,18 ± 0,576 Saffranin 45 0,22 ± 0,765
Tabel 53. Hasil uji beda broken pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Pada bent pasien  pria  infertil dilakukan  uji  Kruskal-Wallis  dan  tidak didapatkan  perbedaan,  hasilnya  seperti pada tabel dibawah ini.
Tabel 54. Hasil uji beda bent pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Pada irregular pasien  pria  infertil dilakukan  uji  Kruskal-Wallis  dan  tidak didapatkan  perbedaan,  hasilnya  seperti pada tabel dibawah ini.
Tabel 55. Hasil uji beda irregular pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Pada looped pasien  pria  infertil dilakukan  uji  Kruskal-Wallis  dan  tidak didapatkan  perbedaan,  hasilnya  seperti pada tabel dibawah ini.
Tabel 56. Hasil uji beda looped pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Pada coiled pasien  pria  infertil dilakukan uji Anova dan tidak didapatkan
perbedaan,  hasilnya  seperti  pada  tabel dibawah ini.
Tabel 57. Hasil uji beda coiled pasien pria infertil menggunakan Anova.
Pada  principal  piece  terwarnai sempurna pasien pria infertil dilakukan uji Kruskal-Wallis  dan  tidak  didapatkan perbedaan,  hasilnya  seperti  pada  tabel dibawah ini.
Tabel 58. Hasil uji beda principal piece terwarnai sempurna pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Pada principal piece terwarnai tidak sempurna pasien pria infertil dilakukan uji Kruskal-Wallis  dan  tidak  didapatkan perbedaan,  hasilnya  seperti  pada  tabel dibawah ini.
Tabel 59. Hasil uji beda principal piece terwarnai tidak sempurna pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Pada  hasil  uji  distribusi  normal untuk  bentuk ERC sperma  pasien  pria infertile menggunakan
One-Sample
Kolmogorov-Smirnov  Test didapati  hasil uji distribusi normal p > 0,05 hanya pada uji ERC normal  pada  pewarnaan  diffquik
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 0,76 ± 1,921 0,131 Papanicolaou 45 0,49 ± 1,424 Saffranin 45 0,13 ± 0,661
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 1,33 ± 2,594 0,792 Papanicolaou 45 1,07 ± 2,199 Saffranin 45 1,11 ± 1,186
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 0,58 ± 1,252 0,762 Papanicolaou 45 0,84 ± 2,153 Saffranin 45 0,53 ± 1,440 Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 4,40 ± 4,721 0,680 Papanicolaou 45 3,87 ± 4,099 Saffranin 45 3,64 ± 4,518
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 6,49 ± 6,181 0,284 Papanicolaou 45 6,67 ± 6,782 Saffranin 45 4,84 ± 4,945
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 94,98 ± 19,696 0,960 Papanicolaou 45 98,80 ± 3,917 Saffranin 45 99,07 ± 2,973
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 0,67 ± 2,828 0,579 Papanicolaou 45 0,67 ± 3,104 Saffranin 45 0,80 ± 2,464
dan ERC tidak  normal  pada  pewarnaan papanicolaou dan saffranin.
Tabel 60. Hasil uji distribusi normal untuk bentuk ERC spermatozoa pasien pria infertil menggunakan One-Sample Kolmogorov- Smirnov Test .
Pada  hasil  uji  beda  untuk  bentuk ERC sperma pasien pria infertil
menggunakan Anova,  Least  Siginificant
Difference , Kruskal-Wallis,
Mann
Whitney,  Brown-Forsythe,  dan  Games Howell didapatkan data berdistribusi tidak normal p < 0,05 pada ERC yang terwarnai sempurna  dan  ERC  bentukan  normal maupun tidak normal, dan data berdistribusi normal dengan p > 0,05 pada ERC  terwarnai  tidak  sempurna.  Hasilnya dapat dilihat pada tabel dibawah ini.
Tabel 61. Hasil uji beda untuk bentuk ERC spermatozoa pasien pria infertil menggunakan Anova, Least Siginificant Difference , Kruskal-Wallis, Mann Whitney, Brown- Forsythe, dan Games Howell.
Pada ERC terwarnai  sempurna pasien pria infertil  dilakukan uji Kruskal- Wallis  dan  didapatkan  perbedaan,  lalu dilakukan  uji  beda  Mann-Whitney.  Uji beda disajikan pada tabel dibawah ini.
Tabel 62. Hasil uji beda ERC terwarnai sempurna pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Tabel 63. Hasil uji beda ERC terwarnai sempurna pasien pria infertil menggunakan Mann Whitney (MW).
Pada ERC terwarnai tidak sempurna pasien pria infertil  dilakukan uji Kruskal- Wallis  dan  tidak  didapatkan  perbedaan. Uji beda disajikan pada tabel dibawah ini.
Tabel 64. Hasil uji beda ERC terwarnai tidak sempurna pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Pada ERC normal pasien pria infertil
dilakukan
uji Kruskal-Wallis dan didapatkan  perbedaan,  lalu  dilakukan  uji beda  Mann-Whitney.  Uji  beda  disajikan pada tabel dibawah ini.
Uji distribusi normal ERC Infertil Diffquik Papanicolaou Saffranin Terwarnai sempurna < 0,001 < 0,001 < 0,001 Terwarnai  tidak  sem- purna < 0,001 < 0,001 < 0,001 Normal < 0,001 0,134 0,007 Tidak Normal < 0,001 0,179 0,324
Uji beda ERC Infertil Diffquik Papanicolaou Saffranin Terwarnai Sempurna
< 0,001 (KW)
(MW) (MW)
(MW) Terwarnai Tidak Sempurna 1,000 (KW) - - -
Normal < 0,001 (KW)
(MW) (MW) (MW)
Tidak Normal < 0,001
(KW)
(MW)
(MW)
(MW)
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 9,24 ± 28,694 < 0,001 Papanicolaou 45 86,93 ± 32,262 Saffranin 45 81,69 ± 37,518
Metode n p
Diffquik-Papanicolaou
45 < 0,001 Diffquik-Saffranin 45 < 0,001 Papanicolaou-Saffranin 45 0,420
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 0,04 ± 0,298 1,000 Papanicolaou 45 0,09 ± 0,596 Saffranin 45 0,04 ± 0,298
Tabel 65. Hasil uji beda ERC normal pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Tabel 66. Hasil uji beda ERC normal pasien pria infertil menggunakan Mann Whitney (MW).
Pada  ERC  tidak  normal  pasien  pria infertil  dilakukan  uji  Kruskal-Wallis  dan didapatkan  perbedaan,  lalu  dilakukan  uji beda  Mann-Whitney.  Uji  beda  disajikan pada tabel dibawah ini.
Tabel 67. Hasil uji beda ERC tidak normal pasien pria infertil menggunakan Kruskal Wallis (KW).
Tabel 68. Hasil uji beda ERC tidak normal pasien pria infertil menggunakan Mann Whitney (MW).
Analisis  sperma  terutama  pada evaluasi  morfologi  dengan  menggunakan ketiga  metode  pewarnaan  yang  berbeda ternyata menghasilkan ukuran panjang dan lebar  yang  berbeda  (p<0,05)  namun perbedaan tersebut tidak terlalu mencolok.
Seperti  kita  ketahui  menurut  kriteria Kruger  panjang  kepala  spermatozoa normal  adalah  4-5  µm  dan  lebar  2,5-3,5 µm.
Pada data analisis statistik ditemukan  pada  kelompok  pasien  pria infertil metode diffquik ditemukan panjang 4,32-5,51 µm dan lebar 2,13-4,19 µm,  metode  papanicolaou  ditemukan panjang 3,49-5,00 µm dan lebar 1,98-3,48 µm,  dan  pada  metode  saffranin-cv ditemukan panjang 3,84-5,06 µm dan lebar ditemukan  2,10-3,54  µm  seperti  pada Tabel  1  dan  Tabel  2  dimana  metode saffranin-cv  lebih  mendekati  ukuran kepala spermatozoa metode papanicolaou. Pada uji beda ukuran kepala spermatozoa kelompok pasien pria infertil antara ketiga metode  dibandingkan  dengan  kriteria Kruger  didapati  hasil  bahwa  metode saffranin-kristal  violet  lebih  mendekati hasil  metode  papanicolaou.  Pada  Tabel  3 perbandingan  antara  ketiga  metode  bila dibandingkan dengan kriteria Kruger maka didapati  perbedaan  antara  ketiga  metode pada  panjang  rata-rata,  lebar  rata-rata,  % panjang  normal,  dan  juga  %  normal dimana hasilnya adalah pada panjang rata- rata  metode  saffranin-cv  tidak  ada  beda dengan metode papanicolaou. Begitu pula pada lebar rata-rata, % panjang normal, % normal,  sedangkan  pada  %  lebar  normal
Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 17,42 ± 37,564 < 0,001 Papanicolaou 45 89,87 ± 7,959 Saffranin 45 86,31 ± 14,635 Metode n p Diffquik-Papanicolaou 45 < 0,001 Diffquik-Saffranin 45 < 0,001 Papanicolaou-Saffranin 45 0,093 Metode n Rata-rata ± Simpangan baku p Diffquik 45 2,44 ± 3,101 < 0,001 Papanicolaou 45 9,51 ± 7,724 Saffranin 45 11,24 ± 6,271 Metode n p Diffquik-Papanicolaou 45 < 0,001 Diffquik-Saffranin 45 < 0,001 Papanicolaou-Saffranin 45 0,090
pada  ketiga  metode  tidak  didapatkan perbedaan  (normalitas  ini  adalah  hasil setelah  dibandingkan  dengan  kriteria Kruger).
Pada  uji  beda  bentuk  kepala spermatozoa kelompok pasien pria infertil, bentukan taperred,  pyri,  round ,  amorph,
akrosom < 40% tidak didapatkan perbedaan pada ketiga metode seperti pada Tabel  16.  81.  Pada  bentukan  vakuola terdapat  perbedaan  pada  ketiga  metode dimana  metode  papanicoalou  lebih  bagus dalam  menganalisis  bentukan  vakuola seperti tampak pada Tabel 21., Tabel 23., Tabel  26.  Kemudian  pada  metode safranin-cv  juga  memiliki  nilai  statistik yang  mendekati  metode  papanicolaou. Pada  bentukan  akrosom,  metode  diffquik tampak kurang dapat menganalisis dengan baik  berbeda  dengan  metode  saffranin-cv dan  metode  papanicolaou  seperti  pada Tabel  28.  Metode  papanicolaou  dan metode  saffranin-cv  dapat  mewarnai kepala  spermatozoa  dengan  sempurna seperti pada Tabel 31.
Pada  uji  beda  bentuk midpeice dan bentuk principal  piece pada  kelompok pasien  pria  infertil  antara  ketiga  metode tidak  didapati  perbedaan  seperti  pada Tabel 41.
Pada uji beda bentuk ERC kelompok pasien  pria  infertil  didapati  hasil  bahwa
metode papanicolaou lebih bagus didalam mewarnai ERC dengan  rata-rata  dan simpangan baku seperti pada Tabel 62. dan metode  saffranin-cv  dengan  rata-rata  dan simpangan baku yang mendekati papanicolaou seperti pada tabel 65.
Dari data hasil penelitian didapatkan bahwa pada kelompok pasien pria infertil pada metode papanicolaou tampak ukuran panjang  dan  lebar  yang  relatif  lebih  kecil daripada  yang  lainnya.  Hal  ini  mungkin dikarenakan  pada  prosedur  pewarnaan papanicolaou harus melalui fiksasi bertingkat  (alkohol  95%,  80%,  70%  dan
50%). Sehingga
sel spermatozoa mengalami  sedikit  pengerutan  walaupun terdapat  proses  rehidrasi  sel.  Metode papanicolaou  juga  memiliki  keunggulan dalam  menganalisis  bentukan  vakuola, akrosom  maupun  ERC.  Hal  tersebut dikarenakan  pewarnaan  pada  nukleus sebagain  besar  dilakukan  oleh  zat pewarna: haematoxylin. Pada haematoxylin  didapati  garam  alumunium, besi,  dan  krom  serta  bahan  oksidasi dimana  akan  menambah  intensitas  warna dan membuat differensiasi warna menjadi bagus  (bahan  tersebut  biasa  disebut sebagai mordant) .  ( basic  staining  theory 2006).
Pada diffquik terdapat methylan blue (thiazin)  yang  sifatnya  basophilic  (ion
positif)  yang  dimana  akan  mengikat  ion protein  negatif  (pada  thiazin  tidak diperlukan  mordant)  dikatakan  karena pada pewarnaan diffquik, thiazin memiliki sifat  polichromatis  dan  telah  dicampur dengan  buffer  phospat  pada  larutan DiffQuik  II.  Mungkin  hal  ini  yang menyebabkan  diffquik  tampak  tebal  pada daerah  kepala.  Sehingga  Pada  metode pewarnaan diffquik pasien infertil tampak bahwa  ukuran  panjang  spermatozoa  lebih panjang  daripada  kedua  metode  yang lainnya, juga dikarenakan diffquik memiliki  teknik  fiksasi  yang  sederhana dimana hanya dilakukan satu step mungkin hal  tersebut  yang  menyebabkan  sehingga differensiasi warna tampak
tidak
sempurna.  Ternyata  hal  ini  juga  sesuai dengan penelitian sebelumnya ( James and
Collegues 1996).
Pada  metode  saffranin-cv  ukuran panjang spermatozoa pada kelompok pria pasien  infertil  tidak  setebal  ukuran diffquik.  Hal  ini  mungkin  dikarenakan pada  saffranin-kristal  violet  terdapat stabilisasi  pH  atau  keasaman  oleh  buffer phospat yang dilakukan sebanyak dua step dengan  pH  6,8  dimana  pospat  sendiri adalah  bahan accentuator mirip  seperti mordant  yang  mampu  mengikat  warna sekaligus  merehidarsi  sel  dengan  hasil differensiasi  warna  yang  baik.  Selain  itu
terdapat  zat  warna  saffranin  yang  dimana memiliki  kelebihan  sebagai  indikator warna  pada  pH  yang  seimbang  juga  ada bahan  metil  alkohol  sebagai  decolourizer dan  fiksatif  yang  dilakukan  pada  langkah awal  sebelum  pengecatan,  disamping larutan buffer phospat yang bisa menyeimbangkan pH sehingga
differensiasi warna menjadi makin bagus.
( basic staining theory 2006 )

## D. KESIMPULAN DAN SARAN
Hasil  penelitian  dapat  disimpulkan bahwa metode safranin-kristal violet layak digunakan  sebagai  metode  pewarnaan alternatif lain.  Dapat  dilakukan penelitian lebih lanjut untuk membandingkan kelompok  pasien  pria  infertil  dengan metode  papanicolaou,  metode  saffranin- kristal violet dan metode diffquik.

## DAFTAR PUSTAKA
S Pieters, Onny.1978, Kuliah Analysa Sperma Universitas Airlangga.pp13 Anonim,
1996. Journal of Clinical Microbiology.volume  34  No10;  [1 screen]. Available at: http //www. ncbi. nlm.  nih.  gov>articles>pdf  Assessment of  Spermatozoa  Morphology  under Light Microscopy with Different Histologic  Stains  and  Comparison  of Morphometric Measurements. Available at: http//www. scielo. cl/pdf/ijmorphol/v30n4/art45. pdf
Barroso G, Mercan R, Ozgur K, Morshedi M,
Kolm  P,  Coetzee  K,  et  al.  Intra-  and inter- laboratory  variability  in  the assessment  of  sperm  morphology  by strict criteria: impact of semen preparation,  staining  techniques  and
manual  versus  computerized  analysis. Hum Reprod 1999; 14:2036-40.
Moeloek,  N.1983,  Standarisasi  Analisis Semen  Manusia;  Per.Biok.  Ind.Jakarta. 1983.
Coetzee K, Kruger
TF, Lobard CJ, Shaughnessy D, Oehringer S, Özgür K,
et al.
Assessment of interlaboratory
and  intralaboratory  sperm  morphology readings  with  the  use  of  a  Hamilton Thorne  Research  integrated  visual optical system semen analyzer. Fertil Steril 1999; 71:80-4.
Henkel R, Schreiber G, Sturmhoefel A, Hipler UC,  Zermann  DH,  Menkveld  R. Comparison  of  three  staining  methods for  the  morphological  evaluation  of human   spermatozoa. Fertil Steril
2008; 89:449-55.
Kruger  TF,  Acosta  AA,  Simmons  KF, Swanson  RJ,  Matta  JF,  Oehringer  S.
Predictive value  of  abnormal
sperm morphology
in in vitro fertilization. Fertil Steril  1988; 49:112- 7.
Menkveld  R,  Stander  FSH,  Kotze  TJVW, Kruger TF, van Zyl JA. The evaluation of
morphological  characteristics
of  human  spermatozoa  according  to stricter   criteria.  Hum  Reprod  1990; 5:586-92.    World  Health  Organization. WHO  Laboratory  Manual  for  the Examination  of  Human  Semen  and
Semen-Cervical Mucus Interaction. 4th
edition. Cambridge: Cambridge
University Press; 1999. World Health Organization. WHO Laboratory
Manual for the Examination of Human Semen  and  Semen-Cervical  Mucus Interaction.  5th  edition.  Cambridge: Cambridge  University  Press;  2010. Anonim,  2006.  Staining  Theory.  pdf.,
pp 68-91. Alvailable
at:http//www.scribt.com>mobile>doc.