p-ISSN 2527-6751
Efek Amelioratif VCO terhadap Heterofil Ayam Broiler yang divaksinasi AI

## Ameliorative Effect of VCO on Heterophile of Broiler Chicken Vaccinated AI
Enny Yusuf Wachidah Yuniwarti
Departemen Biologi, Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Diponegoro Jl. Prof. Soedarto, SH, Tembalang, Semarang
Email : enny_yusuf@yahoo.co.id
Diterima 13 Juni 2017 / Disetujui 28 Agustus 2017

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  meningkatkan  jumlah  heterofil  sebagai  efek  baik  VCO  terhadap  pencegahan penyakit  avian  influenza  (AI)  pada  ayam  pedaging  melalui  peningkatan  daya  tahan  tubuh.  Penelitian  ini menggunakan 40 ekor ayam broiler umur satu hari. Desain penelitian yang digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap  dengan  kelompok  pertama,  kedua,  ketiga,  keempat,  kelima  merupakan  kelompok  ayam  yang divaksin AI dengan penambahan VCO masing-masing 0, 6, 12, 15 dan 18 mL/kg pakan, kelompok enm, tujuh, delapan,  sembilan  dan  sepuluh  merupakan    ayam  yang  tidak  divaksin  AI  dan  penambahan  VCO  masing- masing  0,  6,  12,  15  dan  18  mL/kg  pakan.  Ayam  broiler  dikelompokkan  dalam  10  kelompok  perlakuan  dan dilakukan  pengulangan  dalam  4  unit  percobaan.  Pakan  dan  minum  diberikan ad  libitum selama  4  minggu. Hasil penelitian menunjukkan bahwa jumlah heterofil tidak dipengaruhi oleh vaksinasi AI maupun pemberian VCO,  sehingga  dapat  disimpulkan  jika  peningkatan  derajad  kesehatan  ayam  setelah  pemberian  VCO  dan vaksinasi AI tidak melalui peningkatan jumlah heterofil.

## Kata kunci: avian influenza, ayam pedaging, VCO, heterofil

## ABSTRACT
This research aimed to increase number of heterophile as an effect ameliorative VCO to AI disease prevention through increase chicken immunity. This research used 40 one-day-old broiler chickens. The method applied was  Completely  Randomized  Design  in  which  the  first,  second,  third,  fourth,  fifth  groups  was  combine  of chicken  vaccination  AI  with  VCO  0,  6,  12,  15,  18  mL/kg  feed,  and  the  sixth,  seventh,  eight,  ninth,  tenth groups was combine of chicken without vaccination AI with VCO 0, 6, 12, 15, 18 mL/kg feed. Day Old Chick (DOC) were divided into ten treatment groups and repeated four times. Feed and water were given ad libitum for  four  weeks.  The  result  showed  that  the  number  of  heterophil  not  influenced  by  the  AI  vaccination  and feeding VCO.

## Keywords: Avian influenza, chicken, VCO, heterophile

## PENDAHULUAN
Profil  darah  merupakan  indeks  status kesehatan  yang  penting  bagi  hewan  maupun manusia.  Profil  heterofil  ayam  dapat  digunakan untuk  mengetahui  apakah  ayam  tersebut  shat  atau sakit (Khan dan Zafar, 2005). Heterofil merupakan leukosit  polimorfonuklear  utama  pada  ayam  yang berfungsi  memodulasi  respon  imun,  produksi oksigen  intermediate,  dan  pelepasan  enzim proteolitik (Swaggerty et al ., 2004). Heterofil pada ayam  setara  dengan  neutrofil  pada  mammalia,
sehingga  berperan  sebagai  sel  yang  mengawali mekanisme pemusnahan mikrobia. Produksi sitokin dari heterofil menunjukkan bahwa heterofil mampu berperan penting dalam  mengatur pro dan anti  inflamasi.  Heterofil  juga  berperan  sebagai imunoregulator  karena  heterofil  merupakan  sel yang  kontak  dan  berinteraksi  dengan  agen inflamasi. Kemampuan heterofil dalam mensintesis  dan  melepaskan  serangkaian  sitokin memberikan  bukti  bahwa  heterofil  mampu berperan  sebagai  imunoregulator  (Kogut et  al ., 2005).
Sistem  kekebalan  tubuh  ayam  dapat distimulasi  oleh  pemberian  vaksinasi,  khususnya vaksinasi AI yang diharapkan mampu memberikan proteksi terhadap virus Avian influenza.
Rangsangan  antigen  yang  sudah  diproses, akan menyebabkan sel-sel imun berproliferasi dan berdiferensiasi,  sehingga  menjadi  sel  yang memiliki  kompetensi  imunologik  dan  mampu bereaksi  dengan  antigen.  Pada  respon  primer  atau kontak  pertama,  antigen  dapat  dimusnahkan sehingga sel-sel sistem imun kemudian mengadakan  involusi  (Kaspers et  al .,  2008). Antigen  akan  mengikat  antibodi  secara  spesifik, ikatan  antigen-antibodi  akan  menginaktivasi  virus melalui blocking kemampuan virus untuk mengikat reseptor sel inang.
Ikatan  antibodi  juga  memediasi  patogen untuk  dihancurkan,  terutama  melalui  sel-sel fagositik  dari  sistem  imun  innate  (Albert et  al ., 2002).  Peningkatan  daya  tahan  tubuh  merupakan alternatif  pencegahan  penyakit avian  influenza (AI)  pada  ayam  pedaging karena  virus  H5N1 mempunyai sifat mudah mengalami mutasi (Peiris et  al, 2007)  dan  cenderung  dapat  menimbulkan penyakit yang terbatas pada suatu kawasan (Suarez and  Cherry,  2000).  Sifat  virus  AI  tersebut menyebabkan vaksinasi terhadap AI yang diberikan pada ayam tidak selalu dapat melindungi ayam dari serangan virus AI (Perkin and Swayne, 2003).
Virgin Coconut Oil (VCO) merupakan food supplement yang  dapat  diproduksi  di  Indonesia, mengandung  asam  laurat,  asam  miristat,  asam palmitat,  asam  kaprilat,  asam  kaprat,  asam  oleat, asam  stearat  dan  asam  kaproat.  Kandungan terbesar  adalah  asam  laurat  yang  terdapat  lebih dari  50  %.  Beberapa  penelitian  menunjukkan bahwa  pemberian  VCO  sebesar  10  ml  per  kg pakan mampu meningkatkan heterofil ayam broiler yang  divaksin  AI    (Yuniwarti et  al .,  2012), sedangkan  asam  lemak  dalam  VCO  juga berpotensi  sebagai  antivirus  (Bartolotta et al ., 2001).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui apakah  virgin  coconut  oil  mampu  memberikan efek amelioratif yaitu pengaruh yang baik, melalui peningkatan jumlah  heterofil  pada  ayam  pedaging yang divaksinasi maupun tidak divaksinasi AI.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  menggunakan  40  ekor  ayam broiler  umur  satu  hari  (DOC).  Kandang  yang digunakan  adalah  kandang  kolektif  untuk  10  ekor ayam  sampai  ayam  berumur  2  minggu,  kemudian dipindah  ke  kandang  individu  sampai  umur  5 minggu. Kandang dilengkapi dengan tempat pakan dan  tempat  air  minum.  Penempatan  ayam  pada masing-masing  kandang  dilakukan  secara  acak. Pakan  kontrol  yang  digunakan  adalah  pelet  BR1 buatan  pabrik,  sedangkan  pakan  perlakuan merupakan  pakan  kontrol  yang  dicampur  dengan VCO  secara manual sesuai dengan perlakuan yang diberikan yaitu masing-masing 6 ml, 12 ml, 15 ml dan  18  ml  VCO  per  kg  pakan. Virgn  coconut  oil yang  digunakan  didapatkan  dari  pabrik  sehingga konsistensi  kualitasnya  terjamin.  Pakan  dan minum diberikan ad libitum , vaksinasi AI sub type H5N1  diberikan  kepada  kelompok  ayam  yang divaksinasi  secara  intramuscular  sebesar  0,5  ml. Peubah  yang  diamati  adalah  jumlah  heterofil ayam. Darah ayam dikoleksi pada akhir perlakuan, diambil  dari  vena  sayap  dan  ditampung  pada tabung 2 ml untuk penentuan leukosit, selanjutnya dibuat  preparat  apus  darah  yang  diamati  dibawah mikroskop  dan  dihitung    persentase  heterofil  nya menggunakan differential count . Persentase heterofil  yang  didapat  selanjutnya  dikalikan dengan  jumlah  leukosit,  sehingga  didapat  jumlah heterofil.
Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan Acak  Lengkap  (RAL)  dengan  10  perlakuan  dan  4 ulangan. Ayam dikelompokkan dalam 10 kelompok perlakuan yaitu kelompok 1 merupakan kelompok ayam yang divaksin AI tanpa pemberian VCO,  kelompok  2  merupakan  kelompok  ayam yang divaksin AI dengan pemberian VCO 6 ml per kg pakan, kelompok 3 merupakan kelompok ayam yang  divaksin  AI  dengan  pemberian  VCO  12  ml per  kg  pakan,  kelompok  4  merupakan  merupakan kelompok  ayam  yang  divaksin  AI  dengan pemberian  VCO  15  ml  per  kg  pakan,  kelmpok  5 merupakan  kelompok  ayam  yang  divaksin  AI dengan  pemberian  VCO  18  ml  per  kg  pakan, kelompok  6  merupakan  kelompok  ayam  yang tidak  divaksin  AI  tanpa  pemberian  VCO, kelompok  7  merupakan  kelompok  ayam  yang
tidak divaksin AI dengan pemberian VCO 6 ml per kg pakan, kelompok 8 merupakan kelompok ayam yang tidak divaksin AI dengan pemberian VCO 12 ml  per  kg  pakan,  kelompok  9  merupakan kelompok  ayam  yang  tidak  divaksin  AI  dengan pemberian VCO 15 ml per kg pakan, kelompok 10 merupakan kelompok ayam yang tidak divaksin AI dengan pemberian VCO 18 ml per kg pakan. Tiap perlakuan  diulang  dalam  4  unit  percobaan. Perlakuan selama 4 minggu dan pada minggu ke 5 dilakukan koleksi sampel untuk pengambilan data. Data  yang  didapat  selanjutnya  dianalisis  dengan ANOVA (Gomes and Gomes, 1984).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan
hasil analisis data menggunakan  ANOVA  dengan  rancangan  dasar acak  lengkap,  sepuluh  perlakuan  dengan  empat ulangan,  menunjukkan  tidak  ada  beda  nyata  antar perlakuan  terhadap jumlah heterofil ayam broiler, sehingga  jumlah  heterofil  tersebut  tidak  dapat ditingkatkan  jumlahnya,  baik  diberi  vco  maupun tidak diberi vco, juga divaksinasi AI maupun tidak
divaksinasi AI, sebagaimana nampak pada gambar 1.
Vaksinasi terhadap AI akan menstimulasi sel B  untuk  menghasilkan  antibodi  sehingga  akan meningkatkan aktivitas fagositosis makrofag karena  antibodi  ini  berperan  sebagai  opsonin (Abbas et al. , 2007). Vaksinasi akan menyebabkan adanya  respon  antibodi  humoral  dengan  intensitas respon  antibodi  yang  berbeda-beda  pada  tiap spesies  aves.  Respon  antibodi  humoral  merupakan sumber  utama  perlindungan.  Antibodi  terhadap protein  hemagglutinin  (HA)  merupakan  antibodi yang  paling  penting  karena  dapat  menetralkan virus dan mencegah virus memulai infeksi.Netralisasi  meliputi  pemblokiran  ikatan virus  ke  sel  inang  dan  dapat  bekerja  pada  proses lain  yang  terlibat  dalam  masuknya  virus.  Antibodi terhadap  protein  neuraminidase  (NA)  memiliki beberapa efek perlindungan karena berperan untuk memperlambat  penyebaran  virus  (Hunt,  2009). Vaksinasi AI pada ayam juga terbukti meningkatkan  jumlah  limfosit  Th  (Gioia et  al ., 2008),  dan  virus  AI  juga  terbukti  meningkatkan aktivasi limfosit ayam (Holt, 1990).
Gambar 1. Jumlah heterofil ayam broiler setelah pemberian  berbagai dosis VCO dan vaksinasi AI
Perlakuan  vaksinasi  AI  pada  penelitian  ini, tidak  mampu  meningkatkan jumlah heterofil ayam broiler  karena  diperkirakan  terkait  dengan  fungsi heterofil  dalam  sistem  kekebalan  tubuh  secara
menyeluruh, karena vaksinasi dengan menggunakan  virus  avian  influenza  yang  sudah tidak  aktif  dapat  mengaktivasi  antigen  (  Holt, 1990) sehingga akan memicu respon imun bawaan
melalui  ekspresi  berbagai  reseptor  yang  terlibat dalam pathogenesis (Kogut et al ., 2003).
Heterophil  merupakan first  line pertahanan seluler terhadap invasi mikroba patogen, komponen utama leukosit, bergranula, dan merespon inflamasi akut melalui aktifitas fagositosis serta mempunyai aktivitas antimikrobia berspektrum luas (Harmon, 1998). Heterophil akan dengan  cepat  dibawa  ke  lokasi  infeksi  dan  terjadi proses  fagositosis.  Heterofil  pada  arteri  akan berinteraksi  dengan  reseptor  pada  endothelial melalui dinding arteri mengikuti gradiend kemotaksis  menuju  ke  tempat  terjadinya  sel  yang mengalami inflamasi.
Faktor kemotaksis didapatkan dari campuran serum  atau  plasma  dengan  bakteri.  Beta-defensin yang  ditemukan  pada  granula  heterofil  merupakan kelompok  peptida  kationik,  lysozym  dan  asam phosphatase.  Enzim  yang  didapatkan  di  dalam granula heterofil adalah enzim hidrolisis glukoronidase, cathepsin dan asam glukosidase, hal tersebut menunjukkan bahwa heterofil mempunyai kemampuan  fagositosis  (Hea et  al .,  2005). Kemampuan heterofil melakukan proses diapedesis tersebut  menyebabkan  jumlah  heterofil  di  darah pada  ayam  yang  divaksinasi  AI  menjadi  tidak berbeda nyata dengan ayam yang tidak divaksinasi AI.
Efek  amelioratif  VCO  terhadap  jumlah heterofil  ternyata  tidak  terjadi  karena  jumlah heterofil  tidak  berbeda  nyata  pada  semua perlakuan. Tambahan VCO dalam pakan diharapkan  mampu  memberikan  tambahan  energi yang  dihasilkan  oleh  VCO,  karenaVCO  dapat menghasilkan tambahan energi metabolisme dengan cara melakukan resirkulasi ke dalam hepar melalui  arteri  hepatika  (Enig,  2010).  Tambahan energi dari VCO tidak digunakan untuk diferensiasi  heterofil  karena  selain  energi  juga diperlukan  beberapa  sitokin  untuk  stimulasi diferensiasi heterofil.

## KESIMPULAN
Pemberian VCO dalam pakan dan vaksinasi AI  tidak  mampu  memberikan  efek  amelioratif terhadap sel heterofil ayam broiler.

## DAFTAR PUSTAKA
Abbas  A K, Lichtman AH,  Pillai  S,  2007. Cellular and Molecular Immunology, Saunders Elsevier.Philadelpia.
Alberts B, Johnson A, Lewis J, Raff M, Roberts K, Walter P, 2002. Mollecular  Biology  of  the Cell,  Garlandsciense.com.  Bartolotta  S, García  CC,  Candurra  NA,  Damonte  EB, 2001.  Effect  of  fatty  acids  on  arenavirus replication: inhibition of virus production by lauric acid. Arch. Virol. 146(4):777-90.
Bain B J and FRC Path. 2005. Diagnosis from the blood  smear. New  England  J.  Medicine . 353:498-507.
Bartolotta  S  and  CC  García.  2001.  Effect  of  fatty acids  on  Arenavirus  replication:  Inhibition of  virus  production  by  Lauric  Acid. Arch Virol. 146(4):777-790.
Enig  M,  2010.  Action  of  Fatty  Acid  in  Virgin Coconut Oil, www.Cocofat.Com
Gioia C, Castilletti C, Tempestilli M, Piacentini P,
Bordi L, Chiappini R, Agrati C, Squarcione S,  Ippolito  G,  Puro  V,.  Capobianchi  MR, and Poccia F, 2008. Cross-subtype
Immunity  against  Avian  Influenza  in Persons  Recently  Vaccinated  for  Influenza.
Emerg Infect Dis. 14(1): 121–128.
Gomez  KA  and  AA  Gomez.  1995.  Prosedur statistik  untuk  penelitian  pertanian.  Edisi kedua.  Translated by:  E  Sjamsuddin  and JS Baharsjah: Statistical procedure for agricultural research.  UI  Press, Jakarta,  698 pages.
Peiris MJS, MD de Jong and Y Guan. 2007. Avian influenza  virus  (H5N1):  a  threat  to  human health. Clinical  Microbiology  Reviews . 20(2):243-267.
Perkins  LEL  and  DE  Swayne.  2003.  Varied pathogenicity  of  a  hong  kong  origin  H5N1 avian  influenza  virus  in  four  passerine spesies and budgerigars. Veterinery
Pathology . 40:14-24.
Harmon  BG.  1998.  Avian  heterophiles  in inflammation  and  disease  resistance. Poult.
Sci . 77:972–977.
Hea  H,  VK  Lowryb,  PJ  Ferroc  and  MH  Koguta.
2005. CpG-oligodeoxynucleotide-stimulated chicken  heterophile  degranulation  is  serum cofactor and cell surface receptor dependent. Developmental
and Comparative
Immunology . 29:255–264. Holt  PS.  1990.  Enhancement  of  chicken lymphocyte  activation  and  lymphokine release by avian influenza virus. Developmental
and
Comparative Immunology . 14(4):447-455.
Kaspers  B,  Kothlow  S,  Butter  C,  2008.  Avian
Antigen Presenting Cells: in Avian
Immunology. Academic Press. Elsevier.
Khan  T.A  and  F.  Zafar.  2005.  Haematological Study  in  Response  to  Varying  Doses  of Estrogen  in  Broiler  Chicken. International Joutnal  of  Poultry  Science .  4  (10).  748-
751.2005. ISSN 1682-8356.
Kogut  MH,  L  Rothwell  and  P  Kaiser.  2003. Differential  regulation  of  cytokine  gene expression  by  avian  heterophiles  during receptor-mediated phagocytosis
of opsonized  and  nonopsonized Salmonella enteritidis.  J.  Interferon  and  Cy'fokine  Res .
23:319-327.
Koguta  Michael  H.,  Muhammad  Iqbalb,  Haiqi Hea,Victoria Philbinb, Pete Kaiserb, Adrian
Smith  Expression  and  function  of  Toll-like Receptors in Chicken Heterophils. Developmental and Comparative Immunology 29 (2005) 791–807
Suarez  DL  and  SS  Cherry.  2000.  Immunology  of avian  influenza  virus: Review.  J.  Dev.  and Comparative Immunology . 24(2-3):269-283.
Swaggerty  Christina  L.,  Pamela  J.  Ferro  b,1,  Igal Y.  Pevzner  c,  Michael  H.  Kogut.  2005. Heterophils Are Associated With Resistance
To Systemic Salmonella Enteritidis
Infections  In  Genetically  Distinct  Chicken Lines. FEMS  Immunology  and  Medical
Microbiology 43 (2005) 149–154
Yuniwarti  E.  Y.  W.,  W.  Asmara,  W.  T.  Artama and C. R. Tabbu. 2012. Virgin Coconut Oil Increases  the  Productivity  of  Broiler Chicken  Post  Avian  Influenza  Vaccination.
Animal Production 14(3):192-198, September 2012.