## Indonesian Journal of Pure and Applied Chemistry
journal homepage: http://jurnal.untan.ac.id/index.php/IJoPAC
DETEKSI KEBERADAAN BAKTERI RESISTEN LOGAM MERKURI (Hg) PADA PENAMBANGAN EMAS TANPA IZIN (PETI) DI SIMPI, SEKADAU, KALIMANTAN BARAT
Abdullah 1* , Luqmanul Hakim 1 , Edi fitriandi 1 , dan Rahmawati 1
1 Program Studi Biologi, Fakultas MIPA, Universitas Tanjungpura, Jl. Prof. Dr. H. Hadari Nawawi, Pontianak, Indonesia
* Corresponding author: abdullah.dullah13@student.untan.ac.id ARTICLE INFO

## ABSTRACT
Article history: Received 07 July 2018 Accepted 20 November 2018 Available online 30 December 2018 Keywords: Bacteria, Degradation, Mercury, NA-HgCl, Resistant The  purpose  of  this  research  is  to  know  the  existence  of mercury metal degradation bacteria in the activity of illegal gold mining (PETI) in  Simpi  Village,  Belitang  Hilir  sub-district,  Sekadau  District,  West Kalimantan.  The  samples  were  taken  from  one  location  with  three different sampling points. Isolation of bacteria by pour plate method in  NA-HgCl  medium.  Detection of bacteria  by  paper  disc  method based  on  inhibit  zone  resistant  of Mueller-Hinton Agar (MHA)  with mercury levels such as 10 mg/L, 20 mg/L and 30 mg/L . The results showed that it was found that one pure isolate (PP) showed the most resistant isolate to the mercury stress of 10 mg/L can be detected.
© 2018 IJoPAC. All rights reserved

## 1. Pendahuluan
Kelurahan  Simpi, kecamatan Belitang Hilir, Kabupaten Sekadau, Kalimantan Barat merupakan salah  satu  lokasi  yang  memiliki  potensi  penghasil  barang  tambang  berupa emas  yang  patut diperhitungkan  keberadaannya.  Kegiatan  pengolahan  emas  yang  dilakukan  di  Kelurahan  Simpi masih dilakukan secara tradisional dengan penggunaan merkuri (Hg) dalam proses pengolahannya. Penggunaan  merkuri  ini  sangat  dikhawatirkan  memberikan  dampak  buruk  baik  bagi  manusia, hewan, tumbuhan maupu makhluk hidup lainnya yang memiliki habitat di daerah tersebut.
Merkuri  merupakan  salah  satu  logam  berat  yang  paling  berbahaya  dan  berada  di  lingkungan dalam berbagai bentuk senyawa. Penggunaan merkuri (Hg) sebagai bahan pemisah antara biji emas dengan  bebatuan  (pemurni  emas)  dapat  memicu  kerusakan  lingkungan  hidup.  Senyawa  merkuri dalam  bentuk  Hg 2+ dapat  terikat  pada  residu  sistein  protein  manusia  sehingga  protein  akan kehilangan  aktivitasnya [1] . Senyawa  merkuri selain  Hg 2+ yang  paling  berbahaya  bagi  kesehatan manusia adalah senyawa merkuri organik, khususnya metil merkuri dan fenil merkuri. Senyawa ini sangat reaktif dan mempunyai mobilitas tinggi dibandingkan Hg 0 dan Hg 2+ , juga dapat menyerang saraf  manusia  melalui  peredaran  darah .  Selain  itu,  merkuri  yang  terakumulasi  didalam  jaringan tubuh  organisme  yang  hidup  dikawasan  tercemar  logam  berat  merkuri  ini  melalui  proses metabolisme.  Mikroorganisme  yang  dimanfaatkan  langsung  oleh  komunitas  yang  berada  di lingkungan  tersebut  secara  tidak  langsungakan  terus  menerus  sehingga  terciptanya  suatu  rantai makanan. Hal ini tentu saja akan menyebabkan semakin luasnya distribusi cemaran merkuri didalam tubuh organisme hidup [2] .
Upaya untuk mencegah bahaya yang ditimbulkan akibat pencemaran logam berat merkuri telah banyak  dilakukan  baik  secara  buatan  maupun  alami  dengan  menggunakan  bantuan  kinerja  dari aktivitas  metabolisme  mikroorganisme  berupa  bakteri  yang  dikembangkan  melalui  program mikrobiologi terapan dan biologi molekuler. Kedua cabang ilmu yang menjadi Pengagas utama dalam upaya  untuk  mengembangkan  teknologi  bioremediasi  menggunakan  agen  pengurai  limbah  logam berat  merkuri  menggunakan  bakteri.  Bioremediasi  merupakan  suatu  cara  untuk  memperbaiki kualitas  lingkungan  menjadi  lingkungan  yang  lebih  stabil  dan  memiliki  daya  dukung  dengan memanfaatkan  aktivitas  makhluk  hidup  pada  tingkat  seluler  sebagai  agen  untuk  mengubah komponen bahan pencemar lingkungan yangberbahaya menjadi bentuk yang tidak berbahaya [2]. Menurut [3][4] bahwa bakteri memiliki kemampuan yang dapat digunakan untuk mereduksi logam merkuri dengan cara mentransformasikan logam merkuri melalui proses oksidasi, reduksi, metilasi, dan  dimetilasi  yakni  dimulai  dari  sifat  ketahahan    terhadap  Hg 2+ yang  dapat diubah menhadi  Hg 0 dengan adanya enzim merkuri reduktase yang meampu melepaskan ion Hg 0 dari limbah yang telah tercemar.  Bakteri  dari  genus Bacillus,  Escherichia,  Klebsiella,  Micrococcus,  Pseudomonas,  Salmonella, Streptococcus, Staphylococcus, Shigella, and Sarcina yang diisolasi dari tambak ikan di Calcutta, India tergolong  dalam  bakteri  yang  memiliki  kemampuan  untuk  melakukan  mekanisme  degradasi terhadap logam merkuri [5] . Sedangkan hasil studi [6] menemukan 17 isolat bakteri tahan merkuri dari Kali Mas Surabaya dan berdasarkan karakter biokimia ke-17 isolat tersebut masuk ke dalam tujuh genus  yang  berbeda,  yaitu  ada  kecenderungan  merupakan  anggota genus Providencia , Neisseria , Shigella , Lampropedia , Serratia , Enterobacter dan Bacillus. Ketujuh belas isolat tersebut secara individu mampu hidup pada 10 ppm HgCl 2 dan mereduksi 43%-75% ion Hg 2+ menjadi ion Hg 0 . Kemampuan dari  17  isolat  ini  untuk  bertahan  dalam  cekaman merkuri  10  mg/L  dikarenakan  adannya peranan gen mer operon yang mampu mngatur siklus dan tahapan metabolisme seluler sel bakteri untuk tetap bertahan  hidup  dan berupaya  untuk  memanfaatkankan  sumber  tersebut  sebagai  cadangan  karbon ketika  kadar  karbon  pada  lingkungan  sekitar  tidak  bisa  atau tidak  cukup  untuk  diserap.  Sebagian besar bakteri ada yang memiliki kemampuan untuk memanfaatkan sumber cadangan karbon bebas dan ada yang hanya memiliki kemampuan untuk memanfaatkan karbon ketika sudah berada dalam bentuk berikatan dengan senyawa lain seperti logam berat.
Proses  pengubahan  merkuri  yang  bersifat  toksik  menjadi  bentuk  non  toksik  atau  yang  biasa dikenal  dengan  detoksifikasi  biasannya  dilakukan  oleh  bakteri  yang  memiliki  sifat  resistensi terhadap merkuri dengan adannya gen mer operon. Menurut pendapat [2] Struktur gen mer operon tersusun  atas  beberapa  sub  gen  didalamnya  yakni  salah  satunya  adalah  gen  merkuri  reduktase (merA)    dan  organomerkuriase  liase  (merB).  Gen  merkuri  reduktase  (merA)  berfungsi  sebagai katalisisreduksi  Hg2+  menjadi  bentuk  Hg0  (non  toksik)  yang  selanjutnya  berpindah  secara  difusi keluar  dari  sel.  Gen  organomerkuri  liase  (merB) berperan  sebagai  pemutus  ikatan merkuri-karbon sehingga menghasilkan senyawa organikdan ion Hg berbetuk garam tiol..

## 2. Bahan dan Metode

## 2.1.Bahan
Bahan  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah    medium Nutrient  Agar (NA) merk  Oxoid, medium Mueller Hinton Agar (MHA) merk Oxoid, alkohol 90 % (v/v), alkohol 96 %, raksa (II) Klorida (HgCl 2 ) (mg/L), spiritus, minyak imersi ( Imersi oil ), masker, sarung tangan lateks, kapas.

## 2.2.Metode Pengambilan Sampel
Sampel  diambil  dari  wilayah  lokasi  penambangan  emas tanpa  izin yang  di  wilayah  Kelurahan Simpi, kecamatan Belitang Hilir, Sekadau, Kalimantan Barat. Pengambilan sampel dilakukan secara sampling bebas dikarenakan struktur lingkunagn yangrelatif homogen (hampir sama ) yakni berupa
tanah lapang dengan kawah-kawah hasilpenambangan emas didalamnya. Sampel diambil pada dua titik lokasi yakni pada bagian tepian danau dan tengah dengan kedalaman 0 m, kurang dari 1 meter dan lebih dari 1 meter berupa sampel air. Selain itu, juga diambil sampel berupa sedimen. Sampel diambil pada 3 waktu, yakni pagi (06:00 WIB-07:00 WIB), siang (11:30 WIB-12:30 WIB) dan malam (20:00WIB-21:00WIB). Masing-masing sampel diambil sebanyak 500 mL kemudian dimasukkan ke dalam botol reagen gelap.

## Isolasi Bakteri
Proses  isolasi  bakteri  resisten  merkuri  dilakukan  menggunakan  metode  pengenceran berdasarkan  seri  tabung  yakni  sampel  air  dan  tanah  yang  terdapat  di  dalam  botol  reagen  gelap, dikocok  terlebih  dahulu  agar  homogen    lalu diambil masing-masing  sebanyak 1  mL, kemudian dimasukkan  ke dalam  tabung  reaksi  lalu  ditambahkan  sebanyak  9  mL  akuades  steril  lalu dihomogenkan menggunakan vortex selama 30 detik, kemudian diberi label tabung dengan seri 10 -1 . Hal  yang  sama  dilakukan  dari  seri  pengenceran  bertahap  10 -2 ,  10 -3 dan  10 -4 .  Kemudian  dipipet sebanyak 1 mL sampel hasil pengenceran 10 -4 kemudian dimasukkan ke dalam medium Nutrient Agar (NA) yang telah diperkaya dengan campuran HgCl 2 sebanyak 0,2 mg (1 mg/L) dengan metode tuang ( Pour  plate  method )  yakni  dengan  menuangkan  terlebih  dahulu  sampel  yang  akan  ditumbuhkan kemudian diikuti dengan penuangan medium pertumbuhan diatasnya. Selanjutnya masing-masing sampel  diinkubasi  di dalam  inkubator  selama  1x24  jam  dengan  suhu  37 ᵒ C. Sebanyak  1  ose  dari koloni bakteri yang telah tumbuh kemudian di inokulasi ke dalam medium Nutrient Agar (NA) yang telah  diperkaya  dengan  campuran  HgCl 2 sebanyak  1  mg/L  dengan  menggunakan  metode  goresan ( streak method ). Selanjutnya diinkubasi didalam inkubator selama 2x24 jam pada suhu 37 ᵒ C. Setelah dilakukan isolasi, selanjutnya isolat yang telah tumbuh dimurnikan lagi dengan tujuan untuk  mendapatkan  biakan  bakteri  yang  seragam.  Pemurnian  dilakukan  dengan  mengambil sebanyak  1  ose  dari  koloni  bakteri  yang  telah  tumbuh  kemudian  di  inokulasi  kedalam  medium Nutrient  Agar (NA)  yang  telah  diperkayak  dengan  campuran  HgCl2  sebanyak  1  mg/L  dengan menggunakan  metode  goresan  ( streak  method )  yakni  dengan  menggoreskan  isolat  yang  akan dimurnikan  dengan  cara  membuat  garis-garis  zig-zag  yang  salingberhubungan  pada  permukaan medium NA . Selanjutnya diinkubasi didalam inkubator selama 2x24 jam pada suhu 37 ᵒ C.

## Deteksi Bakteri Resistensi Merkuri
Deteksi bakteri resisten merkuri dilakukan dengan metode cakram ( disc diffusion ) menggunakan kertas  saring Whatman nomor  1.  Terlebih  dahulu  kertas  saring  Whatman  di  potong  dengan  cara melubanginya  menggunakan  alat  pembolong  kertas  dengan  diameter  2,06  mm  yang  kemudian direndam di dalam larutan dengan berbagai macam variasi konsentrasi merkuri 10 mg/L, 20 mg/L dan    30 mg/L.  Isolat murni  diambil menggunakan kapas  steril kemudian  diinokulasikan  ke  dalam cawan petri yang berisi 20 mL medium Mueller Hinton Agar (MHA) steril baru yang telah memadat dengan metode swabbing di bagian permukaannya. Selanjutnya, cakram ( disc ) yang telah direndam ke  dalam  larutan  pada  berbagai  variasi  konsentrasi  HgCl 2 yakni  10  mg/L,  20  mg/L  dan    30  mg/L diletakkan  secara  aseptis  pada  permukaan  medium  yang  telah  berisi  inokulum  tersebut diinkubasikan selama 1x24 jam pada suhu 37⁰C, kemudian diukur zona bening yang yang terbentuk menggunakan jangka sorong digital agar hasil pengukuran lebih spesifik dan presisi dengan tingkat kesalahan ( human error )  yang relatif lebih kecil [7] .

## 3. Hasil dan Diskusi

## 3.1. Hasil
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan,  maka  didapat  hasil yang  menunjukkan  bahwa semua isolat berpotensi sebagai bakteri pendegradasi merkuri yang dibuktikan dengan kemampuan tumbuh pada perlakuan dengan kadar konsentrasi merkuri sebesar 1 mg/L, namun isolat yang paling resisten terhadap cekaman merkuri yaitu isolat PP karena pada media dengan konsentrasi Merkuri
(II) Klorida (HgCl 2 ) 10 (mg/L) tidak terdapat zona bening (0 mm) (Tabel 1 dan Gambar 1). Isolat PP diperoleh dari sampel berupa air yang diambil pada pukul 06:00 pagi.
Tabel 1. Hasil Pengukuran Diameter Zona Bening (mm) sebagai Indikator Bakteri Resisten Merkuri
Gambar 1. Deteksi Kemampuan Isolat PP Resisten Merkuri pada media Mueller Hinton Agar (MHA) dengan konsentrasi Merkuri (II) Klorida (HgCl 2 ) 10 (mg/L), 20 (mg/L), dan 30 (mg/L)

## 3.2. Pembahasan
Hasil  pengukuran  terhadap  diameter  daya  hambat  bakteri  pendegradasi  merkuri  dengan perlakuan pada beberapa tingkat konsentrasi merkuri yakni 10 mg/L, 20 mg/L dan 30 mg/L  dengan menggunakan  metode  difusi  cakram.  Tingkat  resistensi  bakteri  terhadap  cekaman merkuri didapatkan  dengan  cara  mengukur  diameter  zona  bening  yang  terbentuk  disekitar paper  disc yang telah direndam terlebih dahulu di dalam larutan HgCl 2 . Hasil pengukuran diameter hambatan pada beberapa  variasi  konsentrasi  cekaman  merkuri  terhadap  pengujian  bakteri  pendegradasi  merkuri menunjukkan  bahwa  isolat dengan  kode MT, MP,  MD  dan  PD  terhambat pertumbuhannya  yang ditunjukkan dengan adanya zona bening (tidak ada bakteri yang tumbuh) di sekitar kertas cakram pada media MHA sedangkan isolat PP menunjukkan sifat atau ketahanan terhadap cekaman merkuri yang lebih tinggi dibandingkan dengan ke empat isolat lainnya.
Isolat PP memperlihatkan bakteri mampu tumbuh pada cekaman konsentrasi merkuri hingga 10 mg/L, akan tetapi pada konsentrasi 20 mg/L dan 30 mg/L pertumbuhan bakteri mulai terhambat. Menurut [7] suatu jenis bakteri bisa dikatakan resisten terhadap logam berat terutama merkuri jika hasil pengukuran zona hambat pada pengujian metode difusi cakram sebesar ≤1 mm. Isolat bakteri MT,MP,  MD  dan  PD  memperlihatkan  kemampuan  mendegradasi  merkuri  yang  lebih  rendah dibandingkan  dengan isolat bakteri  PP  yang  dibuktikan  dengan  zona  bening  yang  terbentuk melebihi ukuran diameter >1 mm.. Hal ini menunjukkan bahwa kemampuan masing-masing isolat berbeda dalam menghadapi cekaman merkuri. Bakteri pendegradasi logam merkuri dengan tingkat ketahanan  rendah  terhadap  merkuri  pada  dasarnya  cenderung  hanya  proses  mekanisme metabolisme sel saja yang terhambat, sehingga lama kelamaan kemampuan ini akan berkurang yang menyebabkan  partikel  toksik  merkuri  ikut berdifusi  bersama  dengan  cairan  yang  masuk  ke  dalam
No Kode Isolat Diameter zona bening (mm) Kontrol 10 (mg/L) 20 (mg/L) 30 (mg/L) 1 MT 0 3,38 20,48 21,30 2 MP 0 4,21 5,01 9,49 3 MD 0 3,42 7,19 7,75 4 PD 0 4,41 8,21 8,49 5 PP 0 0 3,38 3,89
sel, sehingga  menyebabkan  proses  metabolisme  yang  berada  di dalam  sel  terganggu,  dan sel-sel bakteri tidak mampu lagi mengadakan pertumbuhan atau mengalami fase kematian [8] .
Isolat  PP  diduga  merupakan  isolat  yang  paling  resisten  terhadap  cekaman  merkuri. Isolat bakteri PP memiliki kemampuan yang  lebih tahan terhadap merkuri dibandingkan ke empat isolat lainnya hingga pada tingkatan konsentrasi merkuri 10 mg/L (Tabel 1). Isolat ini mampu bertahan karena adanya keberadaan gen resistensi merkuri. Menurut [3][4] bahwa bakteri memiliki kemampuan bertahan terhadap cekaman logam merkuri dengan cara mentransformasikan logam merkuri melalui proses oksidasi, reduksi, metilasi, dan dimetilasi yakni mulai dari sifat ketahahan gennya terhadap Hg 2+ yang memiliki kemampuan dapat diubah menjadi Hg 0 dengan adanya enzim merkuri reduktase yang mampu melepaskan ion Hg 0 dari limbah pencemar. Keberadaan gen ini tentu saja dipengaruhi oleh aktivitas respon berupa adaptasi terhadap lingkungan pertambangan yang baik sehingga sifat unggul dari gen ini terekspresikan dalam wujud aktivitas seluler yang dilakukan oleh sel bakteri. Gen ini  diekspresikan  setelah  bakteri  menerima  suatu  ancaman  bagi  kehidupannya  di  habitat  aslinya berupa  cekaman  logam  merkuri  sehingga  dengan  adaptasi  yang  maksimal  maka  gen  sebagai  alat untuk  mendegradasi  senyawa  merkuri  yang  semulanya  bersifat  toksik  berupa  merkuri  organik menjadi bentuk yang tidak toksik atau yang biasa dikenal dengan merkuri anorganik [8] . Studi serupa juga  pernah  dilakukan  oleh [6] yang  menemukan 17  isolat  bakteri  tahan  merkuri  dari  Kali  Mas Surabaya dan berdasarkan karakter biokimia ke-17 isolat tersebut masuk ke dalam tujuh genus yang berbeda,  yaitu  ada  kecenderungan  merupakan  anggota  genus Providencia , Neisseria , Shigella , Lampropedia , Serratia , Enterobacter dan Bacillus . Ketujuh belas isolat tersebut secara individu mampu hidup pada 10 ppm HgCl2 dan mereduksi 43%-75% ion Hg 2+ menjadi ion Hg 0 . Menurut pendapat [10] bahwa terdapat 2 macam mekanisme resistensi bakteri terhadap habitat dengan cekaman  logam  berat  yakni  bioabsorbsi  dan  bioakumulasi. Bioabsorbsi  merupakan  suatu mekanisme  yang  berkaitan  dengan  penggunaan  eksopolisakarida  yang  terdapat  pada  dinding  sel bakteri guna melekatkan logam berat pada permukaan sel. Dinding sel bakteri memiliki sifat sifat anionik  dari  peptidoglikan  yang  merupakan  salah  satu  komponen  penyusun  dinding  sel    yaitu  N- asetilmuramik yang kaya akan komponen karboksil sebagai tempat terjadinya reaksi dalam proses penyerapan logam sedangkan bioakumulasi merupakan suatu mekanisme yang berhubungan dengan adanya peran dari gen mer operon yang bersesuaian dengan logam yang diakumulasi. Melalui kedua mekanisme  ini,  bakteri  pendegradasi  logam  merkuri  memiliki  sifat  dan  ketahanan  yang  unggul sehingga  mampu  untuk  menguraikan  senyawa  merkuri  organik  yang  dalam  hal  ini  berupa  Hg 2+ didalam bentuk HgCl 2 [11].

## 4. Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan,  maka  berhasil  diperoleh  satu  isolat  murni dengan  kode PP yang  menunjukkan  paling  tahan  terhadap  cekaman merkuri dan diduga  memiliki kemampuan untuk mendegradasi logam merkuri.

## Ucapan Terima Kasih
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Kementerian Riset, Teknologi dan Pendidikan Tinggi Republik  Indonesia  yang  telah  membantu  mendanai  penelitian  ini  sehingga  dapat  diselesaikan dengan baik.

## Referensi
[1]. Fatimawali., Badaruddin, F., Yusuf, I. (2011). Isolasi Dan Identifikasi Bakteri Resisten Merkuri Dari Muara Sungai Sario Yang Dapat Digunakan Untuk Detoksifikasi Limbah Merkuri, Jurnal Ilmiah Sains , 11, 283.
[2]. Rasmussen, L. D. C., Zawadsky, S. J., Binnerup, G. O. S. J., Sorensen., Kroer, N. (2008). Cultivation of Hard-To-Culture Subsurface Mercury-Resistant Bacteria and Discovery of New merA Gene Sequences, Department of Environmental Chemistry and Microbiology, National Environmental Research Institute, University of Aarhus, Frederiksborgvej 399, 4000 Roskilde,
Denmark, Institute of Biology, University of Copenhagen, Solvgade 83H, 1307 Copenhagen K, Denmark. App. Environ. Microbiol , 12, 3795-3803.
[3]. Gadd,  G.  M.  (1992).  Metals  and  Microorganisms:  A  Problem  of  Definition. FEMS Microbiol Lett , 100, 197-204.
[4]. Priyadarshini,  S.  (2011). Isolation,  Identification  and  biochemical  analysis  of  Mercury Resistant Bacteria (MRB) from the effluent water of Rourkela Steel Plant, Orissa. Department of Life Science
[5]. Nakamura,  K.  M.,  Sakamoto,  F.,  Uchiyama.,  Yagi,  O.  (1990).  Organomercurial  Volating Bacteria in the Mercury-Polluted Sediment of Minamata Bay, Japan. Appl. Environ Microbiol , 56, 304-311.
[6]. Shovitri,  M.,  Zulaika,  E.,  Koentjoro,  M.  P.  (2010).  Bakteri  Tahan  Merkuri  dari  Kali  Mas Surabaya Berpotensi sebagai Agen Bioremediasi Merkuri. Jurnal Berkala Penelitian Hayati Ed. Khusus 4F . 1-6.
[7]. Ulfa,  A.,  Suarsini,  E., Muhdhar,  M.  H.  I. (2016). Isolasi  dan  Uji  Sensitivitas  Merkuri  pada Bakteri  dari  Limbah  Penambangan  Emas  di  Sekotong  B,  arat  Kabupaten  Lombok  Barat: Penelitian Pendahuluan, Proceeding Biology Education Conference, 3, 398-399.
[8]. Smit, E., Wolters, A., Elsa, J. D. V. (1998). Self-Transmissible  Mercury,  Resistance  Plasmid with  Gene  Mobilizing  Capacity  in  Soil  Bacterial  Population,  Influence  of  Wheat  Roots  and Mercury Addition, Appl. Environ. Microbiol, 64, 1210-1219.
[9]. Pemerintah  Republik  Indonesia. Peraturan  Pemerintah  Nomor  82  tahun  2001  Tentang Pengelolaan Kualitas Air dan Pengendalian Pencemaran Air, Jakarta. 2001
[10]. Nithya, C., Gnanalakshmi, B,. Pandian, S. S. (2011). Assessment and characterization of Heavy Metal Resistant in Palk Bay Sediment Bacteria, Marine Environmental Research , 71, 283-294.
[11] Silver, S. (1996). Bacterial Resistances to Toxic Metal Ion –a review 1, gene , 179, 9-19.