## New zealand Rabbit Spermatozoa Concentration after Giving of
Beluntas Leaf Tannin Extract ( Pluchea indica )
Konsentrasi Spermatozoa Kelinci New zealand setelah Pemberian Ekstrak Tanin Daun Beluntas ( Pluchea indica )
Eko Susetyarini(*), Endrik Nurrohman
Program Studi Pendidikan Biologi, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan, Universitas Muhammadiyah Malang, Jl. Raya Tlogomas 246 Malang, Jawa Timur 65144, Indonesia, Coresponding author: susetyorini@umm.ac.id
Diterima 03 Februari 2022 dan disetujui 02 Maret 2022

## Abstrak
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  konsentrasi  spermatozoa  kelinci New  zealand setelah pemberian berbagai jenis ekstrak tanin daun beluntas. Jenis Penelitian ini adalah penelitian eksperimen. Desain penelitian adalah one-group post-test design. Sampel kelinci sebanyak 16 ekor. Teknik  sampling  yang  digunakan  adalah pusposive  random  sampling. Penelitian  dilakukan  di Laboratorium teknik kimia politeknik negeri Malang, Laboratorium Kesimma medica Malang, Laboratorium  Terpadu,  dan  Laboratorium  Biologi  Universitas  Muhammadiyah  Malang. Penelitian  dilakukan  pada  bulan  Agustus  sampai  September  2019.  Rancangan  penelitian menggunakan Rancangan  Acak  Lengkap (RAL)  dengan  4  perlakuan  yaitu  ekstrak  tanin  daun beluntas terhidrolisis, terkondensasi, dan tanin murni  dan kelompok kontrol diberi aquades secara sonde oral dengan dosis 3 ml/kgbb jumlah ulangan 4 kali pengulangan. Prosedur penelitian ini 1) Pembuatan ekstrak tanin daun beluntas, 2) Uji fitokimia sediaan ekstrak, 3) Perlakuan pada kelinci sebagai  hewan  coba,  4)  Pembedahan  dan  pengambilan  spermatozoa  kelinci,  5)  Pengamatan spermatozoa  menggunakan  mikroskop,  6)  Menghitung  konsentrasi  spermatozoa.  Metode pengumpulan data dengan cara menghitung konsentrasi spermatozoa masing-masing perlakuan menggunakan hemocytometer dan  kamar  hitung Neubauer menggunakan  mikroskop  binokuler. Analisis data dengan uji Anova satu jalur dan Duncan 5%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian  dosis  3ml/  kgbb  berbagai  jenis  ekstrak  tanin  daun  beluntas  bepengaruh  terhadap konsentrasi spermatozoa kelinci New zealand (sig<0,05). Hasil uji duncan perlakuan ekstrak tanin terkondensasi  berbeda  secara  signifikan  dengan  perlakuan  tanin  terhidrolisis,  tanin  murni,  dan perlakuan  kontrol.  Temuan  penelitian  ini  adalah  perlakuan  terbaik  yang  dapat  menurunkan jumlah spermatozoa kelinci New zealand adalah ekstrak tanin daun beluntas terkondensasi.
Kata Kunci: daun beluntas, kelinci New Zealand, spermatozoa

## Abstract
The purpose of this study was to determine the concentration of spermatozoa in New Zealand rabbits after giving of various types of beluntas leaf tannin extract. This type of research is experimental research. The research design is a one-group post-test design. A sample of 16 rabbits. The sampling technique  used  is  purposive  random  sampling.  The  research  was  conducted  at  the  Chemical Engineering Laboratory of the State Polytechnic of Malang, the Laboratory of Kesimma Medica Malang,  the  Integrated  Laboratory,  and  the  Biology  Laboratory  of  the  University  of Muhammadiyah Malang. The study was carried out from August to September 2019. The study design  used  a  completely  randomized  design  (CRD)  with  4  treatments,  namely  hydrolyzed, condensed, and pure tannin extract of beluntas leaves and the control group was given aquades orally with  a  dose  of  3  ml/kgbb  with  4 replications.  repetition times.  The  procedure  of  this  research 1) Preparation  of  extract  of  beluntas  leaf  tannins,  2)  Phytochemical  test  of  extract  preparations,  3) Treatment of rabbits as experimental animals, 4) Surgery and collection of rabbit spermatozoa, 5)
Observation of spermatozoa using a microscope, 6) Calculating the concentration of spermatozoa. The method of data collection was by calculating the concentration of spermatozoa in each treatment using  a  hemocytometer  and  a  Neubauer  counting  chamber  using  a  binocular  microscope.  Data analysis with one-way Anova test and Duncan 5%. The results showed that the dosage of 3ml/kgbb of various types of beluntas leaf tannin extract had an effect on the spermatozoa concentration of New Zealand rabbits (sig<0.05). The findings of this study are that the best treatment that can reduce the number of spermatozoa in New Zealand rabbits is the condensed tannin extract of Beluntas leaves. Keywords: Beluntas leaves, New Zealand rabbits, spermatozoa
Jurnal Pembelajaran dan Biologi Nukleus is Licensed Under a CC BY SA Creative Commons Attribution-Share a like 4.0 International License . https://doi.org/10.36987/jpbn.v8i1.2453.

## PENDAHULUAN
Program Keluarga Berencana (KB) telah dicanangkan oleh pemerintah sebagai program nasional (Prabowo  &  Anggoro,  2020;  Purwaningsih  et  al.,  2015; Putri  et  al., 2019) . Salah satu kegiatannya adalah penyediaan sarana kontrasepsi (Desvianto et al., 2014; Saputra et al., 2019) . Penggunaan alat kontrasepsi sampai saat ini masih dominan oleh  perempuan  (BKKBN,  2014).  Terbatasnya  metode  kontrasepsi  pada  pria menyebabkan proses KB pada pria masih sangat sedikit diminati (Wilopo, 2006) . Metode kontrasepsi pria yang ada saat ini antara lain adalah pantang berkala, kondom, senggama terputus,  dan  vasektomi (Sumaryati,  2004;  Priastini,  2010) .  Kehilangan/berkurangnya kejantanan setalah menjalani visektomi menjadi salah satu kekhawatiran yang dialami oleh  pria,  alasan  lainya  adalah  rasa  takut  terjadi  impotensi  sehingga  pria  enggan menjalani vasektomi (Ernawati, 2016) .
Dewasa ini,  organisasi  kesehatan  dunia/ World  Health  Organization (WHO)  dan bidang  kedokteran  dan  farmasi  merekomendasikan  bahan  alam  sebagai  altenatif pengobatan dan terapi (Susetyarini et al., 2021) . Penggunaan obat herbal pada saat ini lebih diminati oleh masyarakat. Hal ini disebabkan masyarakat yang lebih memilih ingin sehat  dengan  biaya  yang  relatif  murah  dan  aman.  Selain  itu  efek  samping  dari  obat tradisional  ini  diyakini  lebih  kecil  dan  bahkan  tidak  ada  jika  dibandingkan  dengan penggunaan  bahan-bahan  kimia (Susetyarini,  2013) .  Sudah  sejak  lama  pakar  dan ilmuwan telah berusaha untuk mencari cara yang aman untuk menyediakan kontrasepsi para  pria (Plana,  2017;  C.  Wang  et  al.,  2016) ,  salah  satu  cara  adalah  beralih  dengan pemanfaatan senyawa aktif yang terkandung dalam tumbuhan untuk aktifertilitas  yang dapat menghambat spermatogenesis (Ernawati, 2016) .
Proses  spermatogenesis  terjadi  dalam  testis  tepatnya  pada  tubulus  seminiferus, pada keadaan normal proses ini dapat terjadi setiap saat. Spermatogenesis terjadi melalui beberapa  tahapan  yaitu  spermatositogenesis  yaitu  tahapan  pembentukan  sel,  dan spermiogenesis yaitu proses pematangan sel spermatozoa. Pada tahapan spermiogenesis terjadi pembentukan akrosomdan flagella bertujuan untuk membentuk morfologi normal spermatozoa yang terdiri dari kepala, leher dan ekor yang normal (Nita et al., 2019) . Pada  kenyataannya  obat  tradisional  antifertilitas  pria  belum  banyak  dilakukan penelitian  terutama  antifertilitas  peroral.  Penggalian  potensi  bahan  alam  untuk
antifertilitas sangat penting untuk dikaji secara mendalam (Ajayi et al., 2016; Bhatt & Deshpande,  2021;  Dias  et  al.,  2014) .  Tanaman  beluntas  merupakan  salah  satu  yang dikembangkan  sebagai  obat  tradisional  antifertilitas  pria (Susetyarini,  2018) .  Beluntas mengandung  bermacam  senyawa  aktif,  pada  daun  terkandung  senyawa  aktif  yaitu alkaloid,  flavonoid,  tanin (Susetyarini  et  al.,  2011;  Febrianta,  2015) .  Tanin  yang terkandung dalam daun beluntas berpotensi sebagai antifertilitas karena mempengaruhi aktivitas sistem hormonal dalam proses permatogenesis (Susetyarini, 2018) . Hasil  penelitian  terdahulu  daun  beluntas  mengandung  tanin,  alkaloid  dan flavonoid (Susetyarini,  2009a,  2009b) yang  berpengaruh  pada  proses  spermatogenesis tikus (Susetyarini,  2005) ,  kadar  testosteron  tikus  putih (Susetyarini,  2003) dan  jumlah anakan tikus putih betina (Susetyarini, 2004) . Tanin daun beluntas dapat menurunkan potensi fertilitas spermatozoa tikus (Susetyarini, 2010) dan tidak berpengaruh pada libido tikus  putih  jantan (Susetyarini,  2016) .  Menurut  teori,  jumlah  spermatozoa  yang dihasilkan  testis  hanya  menjadi  salah  satu  indikator  untuk  mendiagnosis  fertil  atau infertilnya  seseorang (Ernawati,  2016) ,  tetapi  juga  dibutuhkan  parameter-parameter tertentu  untuk  mendapatkan  data  yang  mendukung  diagnosis  fertilitas  atau  infertilitas dalam suatu kajian dan penelitian secara preklinik.
Beberapa  parameter  yang  dapat  digunakan  untuk  menentukan  kesuburan  dan fertilitas diantaranya adalah (1) bobot organ reproduksi, (2) abnormalitas spermatozoa, (3) jumlah sel spermatogenik, (4) morfologi spermatozoa, (5) motilitas spermatozoa, dan (6) konsentrasi spermatozoa (Muslichah & Wiratmo, 2015) . Penelitian ini akan berfokus pada salah satu parameter di atas yaitu konsentrasi spermatozoa, pemilihan parameter konsentrasi  spermatozoa  atas  dasar  konsentrasi  spermatozoa  merupakan  data  primer sebagai  indikator  yang  dapat  menggambarkan  kualitas  spermatozoa  dan  fertilitas. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui konsentrasi spermatozoa kelinci New zealand setelah diberikan perlakuan dosis berbagai jenis ekstrak tanin daun beluntas.

## METODE
Jenis  Penelitian  ini  adalah  penelitian  eksperimen.  Desain  penelitian  adalah one- group post-test design . Sampel kelinci sebanyak 16 ekor. Teknik sampling yang digunakan adalah pusposive random sampling. Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Teknik Kimia Politeknik  Negeri  Malang  untuk  kegiatan  pembuatan  ektrak  tanin  daun  beluntas. Laboratorium Terpadu untuk pemeliharaan dan pemberian perlakuan ekstrak tanin, dan Laboratorium  Biologi  Universitas  Muhammadiyah  Malang  untuk  pembedahan, pemeriksaan mikroskopis, dan pengamatan spermatozoa. Penelitian dilaksanakan pada bulan Agustus sampai September 2019 . Rancangan penelitian menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 4 perlakuan dan 4 kali pengulangan. Tanin untuk perlakuan terdapat 3 macam yaitu tanin terhidrolisis, tanin terkondensasi, dan tanin murni. Enam belas  kelinci New  zealand jantan  umur  14  minggu  yang  dikelompokkan  secara  acak menjadi  4  unit  perlakuan,  diberi  perlakuan  ekstrak  tanin  daun  beluntas  terhidrolisis, terkondensasi,  tanin  murni    dan  kelompok  kontrol  diberi  aquades  secara  sonde  oral dengan dosis 3 ml/kgbb, pemberian dosis atas dasar penelitian terdahulu oleh Susetyarini (2018) dan Susetyarini et al., (2020) . Prosedur penelitian ini meliputi:
1. Pembuatan Ekstrak Berbagai Jenis Tanin Dari Daun Beluntas.
Langkah-langkah  pembuatan  ekstrak  yaitu  diawali  dengan  pemilihan  daun beluntas sebagai bahan pembuatan ekstrak. Daun beluntas didapatkan dari Laboratorium Herbal Materia Medika Kota Batu. Pembuatan ekstrak dilakukan di Laboratorium Kimia Politeknik  Negeri  Malang  dengan  langkah-langkah  menurut Nainggolan  et  al.,  (2019) sebagai  berikut:  a)  membuat  simplisia  dengan  cara  mengeringkan  daun  untuk mengurangi kadar air, b) menghaluskan simplisia sehingga menjadi serbuk, c) melakukan perendaman  atau  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  90%,  d)  melakukan  proses evaporasi  menggunakan  alat  evaporator  spesifik  untuk  mendapatkan  ekstrak  tanin terkondensasi, terhidrolisis, dan tanin murni.
2. Pengujian Fitokimia Ekstrak Tanin Daun Beluntas. Pengujian ekstrak tanin daun beluntas dilakukan di Laboratorium Kimia Farmasi Universitas Muhammadiyah Malang. Prosedur pengujian mengacu pada Endarini (2016) dengan langkah sebagai berikut: a) menimbang serbuk sebanyak 0,1 gram, b) melarutkan dengan aquades panas dan menjadi menjadi 2 bagian, bagian pertama dikocok selama 10 detik sehingga terbentuk buih stabil selama 30 menit, bagian kedua ditambahkan dengan 5 tetes NaCl 10% dan disaring, c) masing-masing sediaan dibagi menadi 3 bagian, bagian pertama  sebagai  blanko,  ekstrak  kedua  ditambahkan  FeCl 3 dan  sediaan  ketiga ditambahkan5 tetes gelatin, d)mengamati perubahan warna yang ada pada sediaan, hasil positif jika terjadi perubahan warna dan muncul endapan putih.
3. Pemilihan, Adaptasi, Dan Pembedahan Hewan Coba Pemilihan,  adaptasi,  dan  pembedahan  hewan  coba,  sebelum  diberi  perlakuan hewan  coba  diaklimatisasi  selama  satu  minggu  dalam  kondisi  laboratorium  dan dilakukan adaptasi selama dua minggu, selama penelitian dan percobaan pakan dan air minum  diberikan  secara  rutin  dan  terkontrol  jumlah  dan  jenis  pakanya,  setelah  tiga minggu perlakuan ekstrak tanin daun beluntas sebanyak 3 ml pada kelinci sebagai hewan coba. Setelah 2 bulan kelinci diberi perlakuan selanjutnya dilakukan pembedahan dan dikoleksi organ testisnya untuk diambil spermatozoanya untuk pengamatan konsentrasi spermatozoa,  prosedur  tersebut  sudah  sesuai  dengan  pengajuan  etik  penelitian  yang diajukan pada komisi etik penelitian dan layak etik penelitian di Fakultas  Kedokteran Universitas Muhammadiyah Malang.
4. Metode Pengumpulan Data Konsentrasi Spermatozoa
Pengumpulan  data  konsentrasi  spermatozoa  mengacu  pada Susetyarini  (2011) yaitu menggunakan alat hitung hemocytometer dan kamar hitung Neubauer dengan dengan merk asistent Germanylist. Spermatozoa yang telah diencerkan dengan cairan NS atau Infus  0,5  ml  diambil  10-15 μ l  dan  diencerkan  menggunakan  NaCl  0,9%  dengan pengenceran  200  kali.  Prosedur  dan  ketentuan  pengamatannya  yaitu  (1)  Menyiapkan hemocytometer dan kamar hitung Neubauer dan diletakkan di atas meja mikroskop pada posisi mendatar, (2) Menyuntikkan atau mengalirkan spermatozoa yang telah diencerkan pada  celah  pinggir  sebelah  kiri  dan  kanan  kamar  hitung,  (3)  Mengamati  spermatozoa pada  kamar  Neubauer  menggunakan  mikroskop  binokuler  merk  olympus  tipe  CX21 LED..  (4)  Mengubah  pembesaran  mikroskop  menjadi  400  kali,  setelah  bidang  hitung sudah nampak jelas, (5) Memiilih lima kotak, yaitu kotak yang berada di setiap sudut (kiri atas, kanan atas, kiri bawah, kanan bawah, dan tengah) (Susetyarini, 2011a) , dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1 .  A) Kamar Hitung Neubeur (Susetyarini et al., 2010b) . B) Pengamatan Spermatozoa Kelinci (Susetyarini et al., 2019)
Spermatozoa di dalam kamar dihitung menurut arah diagonal, karena setiap kamar mempunyai 16 ruangan kecil maka di dalam 5 kamar terdapat 80 ruangan kecil. Seluruh kaca gelas haemocytometer memiliki 400 ruangan kecil dan volume setiap ruangan kecil 0,1 mm 3 . Spermatozoa yang tersebar dalam setiap kotak dihitung sesuai dengan kotak yang dipilih dan dijumlahkan. Apabila di dalam 5 kamar atau 80 ruangan kecil terdapat X  spermatozoa,  X  x  0,01  juta  spermatozoa/  mm 3 atau  X  x  10  juta  spermatozoa/  ml ( Susetyarini, 2011a ). Analisis data menggunakan uji analisis varian (ANAVA) tunggal dan uji lanjut Duncan dengan taraf kepercayaan 95% dengan bantuan aplikasi SPSS 21.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Uji Fitokimia Berbagai Ekstrak Tanin Daun Beluntas.
Hasil  pengujian  fitokimia  berbagai  ekstrak  bertujuan  untuk  memastikan  bahwa memang  benar  adanya  pada  esktrak  terdapat  senyawa  tanin.  Uji  fitokimia  dilakukan secara kualitatif menggunakan berbagai reagen analisa dengan prinsip pengujian melihat indikator  perubahan  warna  pada  sediaan  berbagai  macam  ekstrak  setelah  diberikan reagen  analisa.  Hasil  pengujian  (fitokimia  disajikan  pada  Tabel  1)  didapatkan  bahwa secara  garis  besar  semua  sediaan  ekstrak  mengandung  senyawa  metabolit  sekunder kelompok  tanin.  Hal  tersebut  dapat  dilihat  pada  masing-masing  prosedur  pengujian, sediaan ekstrak tanin terhidrolisis dari empat prosedur pengujian terdapat tiga yang positif menandakan terdapat senyawa tanin begitu pula dengan sediaan ekstrak tanin murni dan sediaan ekstrak tanin terkondensasi.
Tabel 1. Hasil Uji Fitokima Berbagai Sediaan Ekstrak Tanin Daun Beluntas
Prosedur Uji Jenis Sediaan Esktrak Tanin Terhidrolisis Terkondensasi Murni Ekstrak + FeCl3 + + + Ekstrak + HCl (Pemanasan) + - + Ekstrak + Asam Asetat + PbAc + + + Ekstrak + KBr - + -
A B

## Hasil Uji Dosis Ekstrak Tanin Daun Beluntas terhadap Konsentrasi Spermatozoa
Hasil penelitian pemberian tanin daun beluntas terhadap konsentrasi spermatozoa kelinci New  zealand jantan,  disajikan  dalam  bahasan  data  tentang  konsentrasi spermatozoa setelah diberikan berbagai ekstrak tanin daun beluntas (tanin murni, tanin terkondensasi, dan tanin terhidrolisis). Hasil penelitian disajikan pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil Anava Ekstrak Tanin terhadap Konsentrasi Spermatozoa
Sum of Squares df Mean Square F ig. Between Groups 111276.500 3 37092.167 176.454 .000 Within Groups 2522.500 12 210.208 Total 113799.000 15
Berdasarkan Tabel 2 dapat dilihat bahwa harga F hitung sebesar 176,454 dengan sig = 0,000. Oleh karena nilai sig < 0,05 maka Ho ditolak sehingga dapat disimpulkan ada  perbedaan  rata-rata  spermatozoa  kelinci  antara  perlakuan  tanin  murni,  tanin kondensasi, tanin terhidrolisis dan kontrol. Hasil analisis dilanjutkan dengan uji lanjut Duncan menunjukkan bahwa perlakukan ektrak tanin yang dapat menurunkan jumlah dan  konsentrasi  spermatozoa  kelinci  secara  signifikan  adalah  perlakuan  ekstrak  tanin terkondensasi. Perlakuan ekstrak tanin terkondensasi berbeda secara signifikan dengan perlakuan  yang  lainnya  yaitu  tanin  terhidrolisis,  tanin  murni,  dan  perlakuan  kontrol. (Gambar 2).
Gambar 2. Hasil Uji Duncan Ekstrak Tanin terhadap Konsentrasi Spermatozoa

## Pembahasan
Senyawa  yang  dapat  menghambat  atau  mengganggu  mekanisme  reproduksi dikatakan sebagai antifertilitas. Metode dalam menghambat mekanisme reproduksi dapat dilakukan secara kimiwai yaitu dengan memasukkan senyawa tertentu ke dalam tubuh. Beberapa  senyawa  yang  dapat  dijadikan  sebagai  antifertilitas,  khususnya  antifertilitas
a b c d 0 50 100 150 200 250 300 Terkondensasi Terhidrolisis Murni Kontrol K o ns ent ra si Sperm a to zo a ( sel/ m l) Macam-macam Ekstrak Tanin
pada kelamin pria, yaitu golongan alkaloid, flavonoid, minyak atsiri, dan tanin (Ghasani, 2016) .  Aktivitas  ekstrak  tanin  diduga  dapat  menurunkan  jumlah  dan  konsentrasi spermatozoa  kelinci  melalui  mekanisme  kerja  senyawa  metabolit  sekunder  dari tumbuhan dengan cara efek kerja sistem hormonal. Mekanisme kerja senyawa metabolit sekunder sebagai obat bekerja dengan 2 cara, yaitu melalui efek sitotoksik dan melalui efek  hormonal  yang  menghambat  laju  metabolisme  sel  spermiogenesis  dengan  cara mengganggu keseimbangan sistem hormone (Herdiningrat, 2002) . Efek sitotoksik bekerja dengan  mengganggu  motilitas  sel (Alhothali  et  al.,  2019;  Hu  et  al.,  2017; Klongkumnuankarn et al., 2015; Morein et al., 2020; X. Wang et al., 2019) . Tanin pada ekstrak  beluntas  dapat  menyebabkan  penggumpalan  spermatozoa  dan  menurunkan motilitas dan daya hidup spermatozoa (Susetyarini, 2003) .
Proses  kontrasepsi  dapat  dilakukan  secara  target  hormonal  atau  non-hormonal. Berdasarkan Handayani  et  al.  (2018) dapat  dituliskan  bahwa,  mekanisme  senyawa antifertilitas bekerja melalui dua langkah yakni melalui efek sitotoksik dengan mematikan sel-sel hidup  dan  secara hormonal  yaitu  senyawa terikat  di  reseptor  organ reproduksi. Cara kerja antifertilitas yaitu secara umpan balik dengan target hormonal sehingga dapat menghambat  spermatogenesis  sehingga  konsentrasi  sperma  yang  dihasilkan  menurun (Cahaya et al., 2017) . Adapun menurut Oktavia et al (2018) menyatakan bahwa metabolit sekunder yang mampu sebagai antifertilitas, seperti terpenoid, saponin, dan tanin bekerja secara hormonal dengan target aksis hipotalamus, hipofisis, dan kelenjar seks yang akan berpengaruh pada konsentrasi hormone gonadotropin. Mayoritas senyawa bioaktif atau metabolit sekunder yang mampu menghambat proses reproduksi ditemukan dalam organ tanaman.
Senyawa metabolit sekunder kelompok tanin yang ada pada daun beluntas sebagai antifertilitas ini diduga mengganggu aktivitas hormonal yang ada pada hewan coba. Hal tersebut  didukung  dengan  penelitian  terdahulu  bahwa  tanin  memiliki  struktur  mirip dengan steroid Susetyarini et al (2015) , steroid merupakan struktur dasar dari hormon tetosteron.  Menurut Robinson  (2003) yang  menyatakan  bahwa  tanin  pada  kulit  kayu durian digunakan sebagai bahan baku untuk sintesis hormon steroid. Mekanisme kerja senyawa  aktif  masuk  melalui  biosintesis  steroid  terutama  testosteron  sehingga  akan dihasilkan bahan yang strukturnya mirip testosteron (Nurliani et al., 2005) . Akibatnya testosteron mempunyai efek umpan balik negatif pada kelenjar hipofisis anterior, sebagai penguat pada umpan balik hipofisis anterior terhadap hypothalamus. Umpan balik ini secara khusus diduga menghambat sintesis dan sekresi Luteinizing Hormon (LH) dan akan menurunkan sekresi testosteron (Susetyarini & Wahyuni, 2008) . Penurunan sintesis LH akan  memicu  turunnya  sintesis  hormon  testosteron  oleh  sel-sel  Leydig  di  dalam  testis (Pranadya  et  al.,  2019) .  Menurunnya  sintesis Follicle  Stimulating  Hormon (FSH)  akan mempengaruhi kinerja sel sertoli sebagai sel penyedia nutrisi bagi sel-sel spermatogenik. Berdasarkan  hal  tersebut  maka,  terganggunya  sekresi  sel  sertoli  dan  sel  leydig  akan mengganggu spermatogenesis (Bashandy, 2006) .
Daun beluntas (P. Indica) telah teruji secara klinis mampu mengatasi permasalahan dalam  dunia  kesehatan  dikarenakan  kandungan  senyawa  bioaktif  di  dalamnya (Donowarti & Dayang Diah, 2020) . Silalahi (2019) menyatakan bahwa P. indica mampu menghambat proses pembentukan sperma karena adanya tanin dan flavonoid. Senyawa tersebut  mampu  menghambat  pembentukan  enzim  aromatase  sehingga  konsentrasi
testosterone  tinggi.  Selain  mengandung  flavonoid,  daun  beluntas  juga  mengandung senyawa aktif, seperti alkaloid, tanin, dan minyak esensisal (Muchtaromah et al. , 2018) . Salah  satu  senyawa  aktif  pada  daun  beluntas  yang  berpotensi  menjadi  pengontrol spermatogenesis adalah tanin. Hasil penelitian Setiawan et al. (2021) , tanin memiliki efek sitotoksik  pada  sel  sehingga  memengaruhi  jumlah  sel  hidup  yang  menyusun  testis sehingga tanin dapat digunakan sebagai anti-spermatogenesis dan antifertilitas. Senyawa tanin  mengganggu permeabilitas membrane menyebabkan ukuran sel menyusut karena kebutuhan nutrisi terganggu sehingga kematian sperma terjadi (Nugraha et al. , 2022) . Hal tersebut dikuatkan oleh penelitian Pranadya et al., (2019) terdapat pengaruh penurunan jumlah sel-sel spermatogenik testis mencit ( Mus musculus L.) dengan susunan sel-sel spermatogenik yang semakin tidak teratur, renggang, dan lumen yang tidak terisi penuh  spermatozoa  setelah  diberikan  ekstrak  tanin  daun  kaliandra.  Konsentrasi spermatozoa yang menurun akibat perlakuan jenis senyawa aktif (tanin) terjadi pada saat spermatogenesis (Kapsul, 2007) , karena terjadi penghambatan pembelahan sel. Senyawa tanin  dalam  bentuk  asam  tanat  diketahui  dapat  menghambat  aktivitas  akrosin spermatozoa dan aktivator plasminogen yang merupakan suatu mekanisme antifertilitas (Pranadya et al., 2019) .
Aktivitas  tanin  juga memberikan  efek  antifertilitas  pada  morfologi  spermatozoa. Struktur  morfologi  dan  abnormalitas  adalah  salah  satu  indikator  antifertilitas  pada spermatozoa (Muslichah & Wiratmo, 2015) . Ekstrak tanin daun beluntas memberikan efek  antifertilitas  pada  struktur  spermatozoa  kelinci New zealand pada  dosis  3ml/kgbb, spermatozoa  mengalami  abnormalitas  pada  bawah  bagian  leher  besar  dibandingkan dengan  spermatozoa  yang  normal,  terlihat  benjolan  dibagian  leher  spermatozoa ( pseudodroplet ) dan ekor melilit ( dag defeet ) (Susetyarini et al., 2020) .

## KESIMPULAN
Kesimpulan  penelitian  ini  adalah  pemberian  dosis  3  ml/kgbb  berbagai  jenis ekstrak tanin daun beluntas bepengaruh terhadap konsentrasi spermatozoa kelinci New zealand .  Perlakuan  ekstrak  tanin  terkondensasi  berbeda  secara  signifikan  dengan perlakuan tanin terhidrolisis, tanin murni, dan perlakuan kontrol. Temuan penelitian ini adalah  perlakuan  terbaik  yang  dapat  menurunkan  jumlah  spermatozoa  kelinci New zealand adalah ekstrak tanin daun beluntas terkondensasi.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kami  sampaikan  kepada  Kementrian  Riset  dan  Teknologi Pendidikan  Tinggi  Republik  Indonesia  (KEMENRISTEKDIKTI  RI)  yang  telah mendukung  kegiatan  penelitian  ini  melalui  pendanaan  Penelitian  Dasar  Unggulan Perguruan Tinggi (PDUPT) Tahun 2019. Penulis juga mengucapkan terimakasih kepada Direktorat Penelitian dan Pengabdian Masyarakat (DPPM) Universitas Muhammadiyah Malang yang telah membantu kegiatan penelitian baik secara moral maupun materil.

## DAFTAR PUSTAKA
Ajayi,  A.  I.,  Nwokocha,  E.  E.,  Akpan,  W.,  &  Adeniyi,  O.  V.  (2016).  Use  of  Non- emergency  Contraceptive  Pills  and  Concoctions  as  Emergency  Contraception
Among Nigerian University Students: Results of a Qualitative Study. BMC Public Health , 16 (1), 1–8. https://doi.org/10.1186/s12889-016-3707-4 Alhothali,  M.,  Mathew,  M.,  Iyer,  G.,  Lawrence,  H.  R.,  Yang,  S.,  Chellappan,  S.,  & Padmanabhan, J. (2019). Fendiline Enhances the Cytotoxic Effects of Therapeutic Agents  on  PDAC  Cells  by  Inhibiting  Tumor-Promoting  Signaling  Events:  A Potential  Strategy  to  Combat  PDAC. International  Journal  of  Molecular  Sciences ,
20 (10), 1–21. https://doi.org/10.3390/ijms20102423
Bashandy,  A.  E.  S.  (2006).  Effect  of  The  Fixed  oil Nigella  sativ a  on  Male  Fertility  in Normal and Hiperglipidemic. Intl. J. Pharmacol , 2 (1), 104–109.
Bhatt,  N.,  &  Deshpande,  M.  (2021).  A  Critical  Review  and  Scientific  Prospective  on Contraceptive  Therapeutics  from  Ayurveda  and  Allied  Ancient  Knowledge. Frontiers in Pharmacology , 12 (June). https://doi.org/10.3389/fphar.2021.629591 BKKBN.  (2014). Peningkatan  Partisipasi  Pria  dalam  ber-KB  dan  Kesehatan  Reproduksi. BKKBN .
Cahaya, N., Sholihin, M. A., & Nurlely, N. (2017). Pakan Banyu ( Croton argyratus Blume) Stembark Ethanol Extract Effectiveness to Total Spermatogenic Cells of White Male Rats ( Rattus norvegicus ). Pharmaciana , 7 (2), 185.
https://doi.org/10.12928/pharmaciana.v7i2.6842 Desvianto,  S.,  Komunikasi,  P.  I.,  Kristen,  U.,  Surabaya,  P.,  &  Maryam,  S.  (2014).
Analisis  Persepsi  Ibu  tentang  Program  Keluarga  Berencana  (Kb)  dengan Penggunaan  Kontrasepsi  di  Desa  Sumberdadi  Kecamatan  Sumbergempol Kabupaten  Tulungagung  Tahun  2014  Mother  of  Perception  Analysis  of  Family Planning Program ( Kb ) the Use of Contracepti. E-Komunikasi , 1 (2), 104–114. Dias, T. R., Alves, M. G., Oliveira, P. F., & Silva, B. M. (2014). Natural Products as
Modulators  of  Spermatogenesis:  The  Search  for  a  Male    Contraceptive. Current Molecular Pharmacology , 7 (2), 154–166. https://doi.org/10.2174/1874467208666150126155912
Donowarti,  I.,  &  Dayang  Diah,  F.  (2020).  Pengamatan  Hasil  Olahan  Daun  Beluntas ( Pluchea  indica L.)  terhadap  Sifat  Fisika  dan  Kimianya. Teknologi  Pangan :  Media Informasi  Dan  Komunikasi  Ilmiah  Teknologi  Pertanian , 11 (2),  118–134. https://doi.org/10.35891/tp.v11i2.2166 Endarini,  Lully  Hanni.  (2016). Farmakologis  dan  Fitokimia. Modul  Bahan  Ajar  Cetak. Pusat  Pendidikan  Sumber  Daya  Manusia  Kesehatan.  Kementria  Kesehatan Republik Indonesia.
Ernawati, S. (2016). Faktor yang Mempengaruhi Keluarga Berencana (KB) Pria dengan Partisipasi pria dalam Keluarga Berencana. JNKI , 4 (2), 109–116. Febrianta.  (2015).  Effects  of Pluchea  indica Less  leaf  Extract  and  Chlorine  to Hematological Profiles  of  Broiler  Chickens. International Journal  of Poultry  Science , 14 (10), 584–588.
Ghasani, A. A. (2016). Uji Aktivitas Ekstrak Etanol 90% Daun Kelor ( Moringa oleifera Lam) Terhadap Konsentrasi Spermatozoa Morfologi Spermatozoa, dan Diameter Tubulus Seminiferus Pada Tikus Jantan Galur Sprague-Dawley. In Analisa , 4 (2).
Handayani,  N.,  Gofur,  A.,  &  Maslikah,  S.  I.  (2018).  Potensi  Daun  Pulutan  Sebagai Bahan Antifertilitas Manusia. MS Open , 5 , 173–182.
Herdiningrat,  S.  (2002).  Efek  Pemberian  Infusa  Buah  Manggis  Muda  ( Garcinia mangostana Linn.) terhadap Spermatozoa Mencit (Mus musculus). Majalah Andrologi Indonesia , 128–137.
Hu,  T.,  Yang,  C.,  Fu,  M.,  Yang,  J.,  Du,  R.,  Ran,  X.,  Yin,  T.,  &  Wang,  G.  (2017). Cytotoxic Effects of Docetaxel as a Candidate Drug of Drug-eluting Stent on Human Umbilical  Vein  Endothelial  Cells  and  The  Signaling  Pathway  of  Cell  Migration Inhibition, Adhesion Delay and Shape Change. Regenerative Biomaterials , 4 (3), 167–
178. https://doi.org/10.1093/rb/rbx010 Ilham  Saptia  Nugraha,  Wibisono,  D.  S.,  Saraswati,  I.,  &  Juniarto,  A.  Z.  (2022).  The Effect Of Moringa Leaf Extract ( Moringa Oleifera L) Against Motility of Spermatozoa Mice Exposed to Monosodium Glutamate. Indonesian Journal of Urology , 29 (1), 41– 46. https://doi.org/10.32421/juri.v29i1.731
Kapsul.  (2007).  Kadar  Testosteron  Tikus  Putih  Jantan  Setelah  Mengkonsumsi  Buah Terong Tukak ( Solanum sp). Bioscientiae , 4 (1), 1–8.
Klongkumnuankarn,  P.,  Busaranon,  K.,  Chanvorachote,  P.,  Sritularak,  B., Jongbunprasert, V., & Likhitwitayawuid, K. (2015). Cytotoxic and Antimigratory Activities  of  Phenolic  Compounds  from Dendrobium  brymerianum . Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine , 2015 . https://doi.org/10.1155/2015/350410 Morein,  D.,  Erlichman,  N.,  &  Ben-Baruch,  A.  (2020).  Beyond  Cell  Motility:  The Expanding Roles of Chemokines and Their Receptors in Malignancy. Frontiers in Immunology , 11 (June). https://doi.org/10.3389/fimmu.2020.00952
Muchtaromah,  B.,  Amita,  H.,  & Nasiroh, I.  S. (2018).  Combination  Effect  of Centella asiatica (L.) Urban and Pluchea indica (L.) Urban on Uterus Weight and Uterus and Oviduct  Histological  Profiles  of  Rattus  Norwegicus. AIP  Conference  Proceedings , 2019 (1), 1–8. https://doi.org/10.1063/1.5061907
Muslichah,  S.,  &  Wiratmo.  (2015).  Efek  Antifertilitas  Fraksi  N-Heksana,  Fraksi Kloroform,  Dan  Fraksi  Metanol  Biji  Pepaya  ( Carica  papaya L.)  terhadap  Tikus Jantan Galur Wistar. Jurnal Farmasi Sains Dan Terapan , 2 (2), 10–14. Nita, S., Hayati, L., & Subandrate, S. (2019). Mekanisme Antifertilitas Fraksi Biji Pepaya pada  Tikus  Jantan. Sriwijaya  Journal  of  Medicine , 2 (1),  268–274. https://doi.org/10.32539/sjm.v2i1.54
Nurliani, A., Rusmiati., S., & Budi, H. (2005). Perkembangan Sel Spermatogenik Mencit ( Mus  musculus L.)  setelah  Pemberian  Ekstrak  Kulit  Kayu Durian ( Durio zibethinus Murr.). Berkala Penelitian Hayati , 11 (1), 77–79.
Oktavia,  S.,  Ifora,  I.,  &  Putri,  A.  D.  (2018).  Uji  Toksisitas  Akut  Ekstrak Daun  Waru
( Hibiscus tiliaceus L.) pada Mencit Putih Jantan. Jurnal Farmasi , 10 (1), 41–48.
Plana,  O.  (2017).  Male  Contraception:  Research,  New  Methods,  and  Implications  for Marginalized  Populations. American  Journal  of  Men’s  Health , 11 (4),  1182–1189. https://doi.org/10.1177/1557988315596361
Prabowo, W., & Anggoro, O. B. (2020). Implementasi Program Pembangunan Keluarga Berencana  Dalam  Meningkatkan  Kesejahteraan  Dan  Kualitas  Keluarga  Di Kecamatan  Kranggan,  Temanggung. Jurnal  Ekonomi,  Sosial  &  Humaniora , 02 (04), 72–77.
Pranadya,  N.  M.  E.,  Setyawati,  I.,  &  Yulihastuti,  D.  A.  (2019).  Jumlah  Sel-Sel Spermatogenik  Dan  Histologis  Testis  Mencit  ( Mus  musculus L.)  pasca  Pemberian Ekstrak  Daun Aliandra Merah  ( Calliandra  calothyrsus Meissn.)  dengan  Dosis  Dan Interval Waktu Yang Berbeda. Jurnal Biologi Udayana , 23 (1), 34–41.
Priastini, R. (2010). Tanaman Obat Alami Indonesia sebagai Alternatif Antifertilitas Laki-Laki . Artikel Penelitian. Bagian Biologi FK UKRIDA.
Purwaningsih, E., Sumarmi, & Saputra, D. L. H. (2015). Hubungan Frekuensi Menyusui Dengan Keberhasilan Metode Mal Di Kelurahan Ringin Putih Karangdowo Klaten. Kebidanan , 5 (10), 19–20.
Putri, P. K. D., Hubeis, A. V., & Sarwoprasodjo, S. (2019). Kelembagaan Dan Capaian Program Keluarga Berencana (Kb): Dari Era Sentralisasi Ke Desentralisasi. Jurnal Kependudukan Indonesia , 14 (1), 1. https://doi.org/10.14203/jki.v14i1.335 Robinson. (2003). Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi . ITB.
Saputra, Y. W., Lukas, L., Titin, A., & Rindantya, R. S. (2019). Implementasi Program Kampung  Keluarga  Berencana  (Kb)  di  Kota  samarinda. Jurnal  Georafflesia , 4 (2),
186–200. https://ejournal.stikku.ac.id/index.php/stikku/article/view/64
Setiawan, H., Wulandari, S. W., & Agustina, E. D. (2021). Antispermatogenic Activity of  Ethanolic  Extract  Of  Calina  Papaya  Leaves  On  Seminiferous  Tubules  Wistar Rats. Jurnal Kedokteran Hewan-Indonesian Journal of Veterinary Sciences , 15 (1), 21–26. https://doi.org/10.21157/j.ked.hewan.v15i1.18435
Silalahi, M. (2019). Pemanfaatan Beluntas ( Pluchea indica (L.) Less) dan Bioaktivitasnya (kajian  lanjutan  pemanfaatan  tumbuhan  dari  pengabdian  kepada  masyarakat  di Desa Sindang Jaya, Kabupaten Cianjur). VIVABIO: Jurnal Pengabdian Multidisiplin ,
1 (1), 8–18. https://doi.org/10.35799/vivabio.1.1.2019.24744 Susetyarini, E. (2003). Kadar Testosteron Pada Tikus Putih Jantan (Ratus norwegicus) yang Diberi Dekok Daun Beluntas . Unpublished Laporan Penelitian. Lemlit UMM. Susetyarini, E. (2004). Jumlah anakan tikus putih betina (Ratus norwegicus) yang dikawinkan dengan tikus putih jantan (Ratus norwegicus) yang diberi dekok daun beluntas . Susetyarini,  E.  (2005). Antispermatogenik  Dekok  Daun  Beluntas  Pada  Tikus  Putih  Jantan (Ratus norwegicus . Unpublished Laporan Penelitian. Lemlit UMM. Susetyarini, E. (2009a). Kadar senyawa aktif pada simplisia dan ekstrak daun beluntas (Pluchea indica). Jurnal Bioedukasi , 7 (1), 14–22.
Susetyarini,  E.  (2009b).  Karakteristik  dan  Kandungan  Senyawa  Aktif  Daun  Beluntas
( Pluchea indica ). Jurnal Berkala Penelitian Hayati, Edisi Khusus , 3A , 107–110.
Susetyarini, E. (2010). Uji Aktivitas Tanin Daun Beluntas (Pluchea indica) terhadap Potensi Fertilisasi Spermatozoa Tikus Putih Jantan . Unpublished Laporan Penelitian. Lemlit UMM.
Susetyarini,  E.  (2011a). Aktivitas  dan  Keamanan  Senyawa  Aktif  Daun  Beluntas  sebagai Antifertilitas serta Pemanfaatannya sebagai Buku Antifertilitas . Susetyarini, E. (2011b). Khasiat Beluntas sebagai Antifertilitas (Uji pre- klinis) . UMM Press. Malang.
Susetyarini,  E.  (2013).  Aktivitas  Tanin  Daun  Beluntas  Terhadap  Konsentrasi Spermatozoa Tikus Putih Jantan. Jurnal Gamma , 8 (2), 14–20. Susetyarini,  E.  (2016). Libido  Tikus  Putih  Jantan  yang  diberi  Tanin  Daun  Beluntas . Unpublished Laporan Penelitian. Lemit. UMM.
Susetyarini, E. (2018). Struktur Spermatozoa Tikus Putih Jantan yang Diberi Tanin Daun Beluntas (Pluchea Indica). Biology Education Conference , 15 (1), 693–696. Susetyarini, E., Corebima, D., Usilawati, T., & Amin, M. (2011). Motilitas Spermatozoa Tikus Putih Jantan (Ratus Norwegicus) Yang Diberi Senyawa Aktif Daun Beluntas Dengan Berbagai Dosis. Berkala Penelitian Hayati Edisi Khusus , 6D , 9–13.
Susetyarini,  E.,  Fatmawati,  D.,  &  Miharja,  F.  J.  (2015).  The  Correlation  Between Testosteron and Spermatogenic Cell on Male Wistar Rats ( Ratus norwegicus ) after The Treatment of Active Compount of Pluchea indica. AENSI , 9 (23), 261–266.
Susetyarini, E., Nurrohman, E., & Fauzi, A. (2021). Sel Spermatogenik Kelinci New zealand Setelah Pemberian Ekstrak Tanin Daun Beluntas (Pluchea indica . ICOLIST. Susetyarini, E., Wahyono, P., Latifa, R., & Nurrohman, E. (2020). New zealand Rabbit’s Spermatozoa after the Treatment of Tannin Extraction of Pluchea indica. Bioedukasi :
Jurnal Biologi Dan Pembelajarannya , 18 (2), 59–68. Susetyarini, E., & Wahyuni, S. (2008). Pengembangan Senyawa Aktif Daun Beluntas untuk Kontrasepsi Per-Oral sebagai Upaya Pengembangan Bahan Antifertilitas . Wang, C., Festin, M. P. R., & Swerdloff, R. S. (2016). Male Hormonal Contraception: Where  Are  We  Now? Current  Obstetrics  and  Gynecology  Reports , 5 (1),  38–47. https://doi.org/10.1007/s13669-016-0140-8
Wang, X., Decker, C. C., Zechner, L., Krstin, S., & Wink, M. (2019). In Vitro Wound Healing  of  Tumor  Cells:  Inhibition  of  Cell  Migration  by  Selected  Cytotoxic Alkaloids. BMC Pharmacology and Toxicology , 20 (1), 1–12.
https://doi.org/10.1186/s40360-018-0284-4 Wilopo, S. A. (2006). Perkembangan Teknologi Kontrasepsi Pria Terkini, Gema Pria .
Sitasi APA style :
Sustyarini,  E.,  Nurrohman  E.  (2022). Newzealand Rabbit  Spermatozoa Concentration  after  Giving  of  Beluntas  Lewaf  Tannin  Extract  ( Pluchea indicia ), Jurnal  Pembelajaran  dan  Biologi  Nukleus ,  8(1),  41-52. https://doi.org/10.36987/jpbn.v8i1.2473.