## RESEARCH ARTICLE

## Journal of Islamic Pharmacy. Online ISSN: 2527-6123
Volume 8 (2) 2023; p56-61 DOI: 10.18860/jip.v8i2.21066

## Penetapan Kadar Fenolik Total Ekstrak Etil Asetat
Buah Okra Hijau ( Abelmoschus esculentus L.) Determination of Total Phenolic in Ethyl Acetate Ectract of Green

## Okra Fruit (Abelmoschus esculentus L.)
Putri Indah Sayakti, Muhammad Hidayatullah*, Aditya Noviadi Rakhmatullah, Rahmi Muthia, Syawaliyah
Universitas Borneo Lestari, Banjar Baru, Kalimantan Selatan, Indonesia
*E-mail: muhammadhidayatullag422@gmail.com

## ABSTRAK
Senyawa fenolik merupakan senyawa yang mampu bertindak sebagai antioksidan, mencegah penyakit jantung, mengurangi peradangan, dan diabetes. Salah satu tanaman yang memiliki kandungan senyawa fenolik yaitu buah okra ( Abelmoschus esculentus L.). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kandungan fenolik total yang terdapat pada ekstrak etil asetat A. esculentus secara  kualitatif  dengan  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT)  dan  secara  kuantitaif  dengan Follin-Ciocalteu menggunakan metode Spektrofotometri UV-Vis. Metode ekstraksi A. esculentus yang digunakan adalah metode maserasi dengan pelarut etil asetat. Uji KLT  pada ekstrak etil asetat A. esculentus menghasilkan 2 noda pada plat KLT dengan nilai Rf 0,23 dan 0,38 dan perubahan noda setelah disemprot dengan FeCl 3 10% menghasilkan perubahan warna menjadi hijau. Pengujian secara kuantitatif dengan mengukur absorbansi sampel uji menggunakan Spektrofotometer UV-Vis. Hasil uji kualitatif ekstrak etil asetat A. esculentus menggunakan KLT menunjukkan adanya senyawa fenol dengan ditandai perubahan warna bercak noda menjadi hijau setelah disemprot dengan FeCl 3 10%. Hasil uji kuantitatif didapatkan kadar fenolik total ekstrak etil asetat A. esculentus sebesar 11,16 mg GAE/gram.
Kata Kunci: Abelmoschus esculentus L., okra, ekstrak etil asetat, fenolik, KLT

## AB STRACT
Phenolic compounds are compounds that can act as antioxidants, prevent heart disease, reduce inflammation, and diabetes. One of the plants that contain phenolic compounds is Okra fruit (Abelmoschus esculentus L.). This study aims to determine the total phenolic content contained in the ethyl acetate extract of A. esculentus qualitatively by Thin Layer Chromatography (TLC) and quantitatively by Follin-Ciocalteu using the UV-Vis Spectrophotometry method. The A. esculentus extraction method used is the maceration method with ethyl acetate as a solvent. The thin layer chromatography test on the ethyl acetate extract of A. esculentus produced 2 spot on the TLC plate with Rf values of 0.23 and 0.38 and changes in spots after being sprayed with 10% FeCl 3 resulted in a change in color to green. Quantitative testing by measuring the absorbance of the test sample using a UV-Vis Spectrophotometer. The qualitative test results of the ethyl acetate extract of A. esculentus using TLC showed the presence of phenolic compounds with marked changes in the color of the spots to green after being sprayed with 10% FeCl 3 . The quantitative test results showed that the total phenolic content of the ethyl acetate extract of green A. esculentus was 11.16 mg GAE/gram.
Keywords: Abelmoschus esculentus L., ethyl acetate extract, okra; phenolic, TLC
Submitted: May 17 th 2023 | 1 st Revision: June 16 th 2023  | Accepted: August 22 nd 2023  | Published: December 31 st 2023
[1]. Senyawa fenolik mampu bertindak sebagai antioksidan, mencegah penyakit jantung, mengurangi peradangan, dan diabetes [2].
Salah satu tanaman yang memiliki kandungan senyawa fenolik yaitu okra. Okra ( Abelmoschus esculentus L.) merupakan salah satu jenis sayuran fungsional yang termasuk dalam famili Malvaceae , memiliki banyak manfaat bagi  kesehatan  [3]. A. esculentus secara empiris digunakan untuk pengobatan penyakit jantung dan diabetes melitus [4]. A. esculentus memiliki banyak manfaat, hal ini karena mengandung beberapa komponen metabolit sekunder seperti alkaloid, flavonoid, fenolik, triterpenoid, polifenol, tanin, dan saponin [5].

## Pendahuluan
Indonesia merupakan negara tropis, yang mempunyai banyak tumbuhan yang dimanfaatkan untuk pengobatan. Penggunaan obat dari tanaman semakin banyak digunakan oleh masyarakat sebagai terapi alternatif penyembuhan berbagai penyakit hal tersebut dikarenakan obat-obat yang berasal dari tanaman mudah didapatkan dan juga mempunyai efek samping yang relatif kecil dari obat berbahan sintesis. Bahan alam yang dapat digunakan sebagai obat karena umumnya mengandung senyawa metabolit sekunder. Senyawa yang tergolong ke dalam metabolit sekunder dan mayoritas terkandung dalam jaringan tanaman  salah  satunya  yaitu  senyawa  fenolik  dan  flavonoid
©2023 Journal of Islamic Pharmacy http://ejournal.uin-malang.ac.id/index.php/index/index . This is Open Access article under the CC-BY-SA License (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/ ).
A. esculentus memiliki kandungan fenolik dan flavonoid serta memiliki aktivitas antioksidan. Hasil analisis kandungan flavonoid dan fenolik total yang terdapat di dalam ekstrak etanol buah  okra  yaitu  51595.21±12.90  mg/g/QE  dan  25.83±5.30 mg/g/GAE [6]. Penelitian [7] menunjukkan ekstrak etanol 70%  buah  okra  hijau  mengandung  polifenol  dengan  kadar 34,21±0,216 mg asam tanat/5g simplisia.
Metode penelitian yang akan dilakukan pada penelitian ini berbeda dengan yang dilakukan oleh penelitian [7] mengenai kandungan polifenol buah okra yaitu pada menggunakan pelarut etanol 70%, sedangkan pada penelitian ini akan menggunakan ekstrak etil asetat pada penetapan kadar fenolik total A. esculentus dengan metode ekstraksi yaitu maserasi. Pemilihan pelarut etil asetat pada penelitian ini adalah karena etil asetat merupakan pelarut semi polar yang mampu menarik senyawa- senyawa dengan rentang polaritas luas dari polar hingga non polar [8]. Menurut penelitian [9] etil asetat merupakan pelarut yang dapat digunakan untuk ekstraksi kulit buah manggis karena  dapat  menarik  senyawa  golongan  alkaloid,  flavonoid, saponin, tanin, polifenol, dan triterpenoid.
Belum ada laporan terhadap kadar fenolik total dari ekstrak etil asetat A. esculentus . Berdasarkan uraian di atas maka perlu dilakukan penetapan kadar fenolik total dari ekstrak etil asetat A. esculentus karna mengingat pentingnya fungsi senyawa fenolik untuk kesehatan. Adapun tujuan penelitian untuk mengetahui kandungan metabolit sekunder dan kadar fenolik total ekstrak etil asetat dari A. esculentus .

## Bahan dan Metode
Alat dan Bahan Bahan yang digunakan pada penelitian ini yaitu buah okra ( Abelmoschus esculentus L.), etil asetat teknis ( Pandu Medikal ), metanol p.a ( Merck ), reagen Follin-Ciocalteu
( Merck ), asam galat ( Merck ), Na 2 CO 3 ( Merck ), FeCl 3 ( Merck ), silika gel GF 254 ( Merck ), dragendorff ( Nitra Kimia ), serbuk Mg ( Merck ), HCl 2 N ( Merck ), gelatin ( Merck ), asam asetat anhidrat ( Merck ), dan kloroform ( Merck ). Pada penelitian ini alat yang digunakan adalah alat-alat gelas ( Pyrex ), blender, kuvet ( Hellma ), lampu UV 254 dan 366,  mikropipet  ( Dragonlab ), neraca analitik ( Ohaus ), oven ( Memmert UN55 ),  seperangkat  alat  KLT,  seperangkat  alat maserasi, rotary evaporator ( IKRF10 ® ), Spektrofotometer UV- Vis ( T60 ® ), dan waterbath ( Memmert ® )

## Pengambilan dan Determinasi A. esculentus
Pengambilan sampel dilakukan dengan mengumpulkan buah okra segar dari petani di wilayah Palangkaraya, Kalimantan  Tengah  pada  bulan  Desember  2022.  Bagian tumbuhan yang digunakan dalam penelitian ini adalah bagian buah okra hijau yang masih segar, dan masih muda dan tidak rusak.  Determinasi  okra  dilakukan  di  Laboratorium  FMIPA Universitas Lambung Mangkurat Banjarbaru.

## Pengolahan Simplisia A. esculentus
Buah okra dikumpulkan sebanyak 5 kg, kemudian disortasi basah yang bertujuan untuk membersihkan dan menghilangkan kotoran yang menempel pada buah. Selanjutnya buah okra dicuci dengan air mengalir, lalu dilakukan perajangan pada buah agar dapat mempercepat proses pengeringan simplisia. Simplisia dikeringkan di bawah sinar matahari dengan ditutupi kain hitam. Setelah kering dilakukan sortasi kering, lalu
simplisia diserbuk menggunakan blender . Serbuk simplisia kemudian diayak dengan mesh 40 setelah itu disimpan dalam toples, terlindung dari cahaya dan disimpan pada suhu ruang [8]. Adapun perhitungan rendemen simplisia dihitung dengan menggunakan rumus:

## Pembuatan Ekstrak Etil Asetat A. esculentus
Metode ekstraksi buah okra yang digunakan adalah maserasi  dengan  memasukkan  sebanyak  300  gram  serbuk simplisia A. esculentus ke dalam bejana maserasi. Setelah itu, pelarut etil asetat ditambahkan dengan perbandingan 1:5 kemudian direndam selama 6 jam pertama sambil sesekali diaduk, dan diamkan selama 18 jam. Maserasi dilakukan selama 1 x 24 jam. Selanjutnya hasil maserasi disaring menggunakan kertas saring dan dilakukan remaserasi sebanyak 2 kali. Kemudian hasil maserasi disaring dengan kertas saring lalu diperoleh filtrat. Selanjutnya filtrat dikumpulkan dan diuapkan dengan rotary evaporator [10]. Adapun suhu yang digunakan pada rotary evaporator <  60 o C [11]. Kemudian digunakan waterbath dengan suhu 50 o C sehingga diperoleh ekstrak kental dengan menghitung bobot tetapnya.

## Identifikasi  Senyawa  Fenolik  Ekstrak  Etil  Asetat  A. esculentus dengan Kromatografi Lapis Tipis
Plat KLT disiapkan dengan memotong plat silika GF 254 dengan  ukuran  1,5  x  8  cm,  kemudian  plat  ditandai  dengan pensil pada jarak 1 cm dari tepi bawah dan 0,5 cm dari tepi atas [12].  Selanjutnya  plat  KLT  diaktifkan  dengan  memanaskan plat  di  dalam  oven  pada  suhu  110 o C selama 5 menit untuk menghilangkan air yang terdapat pada plat [13]. Kemudian 10 mg ekstrak etil asetat A. esculentus dilarutkan dalam pelarut etil  asetat  pada  labu  ukur  10  mL,  lalu  ditotolkan  pada  plat KLT silika gel. Kemudian plat KLT dielusikan dengan eluen n-heksana:etil asetat (8:2) hingga fase geraknya mencapai 0,5 cm dari batas tepi atas plat [1], kemudian plat KLT disemprot dengan reagen FeCL 3 10% dan diamati di bawah sinar UV pada panjang gelombang 254 nm. Jika noda pada plat berwarna hitam setelah disemprot FeCl 3 maka positif mengandung fenolik [14, 15]. Setelah itu dilakukan pengukuran pada plat untuk mengetahui  nilai  Rf-nya.  Adapun  rumus  untuk  menghitung nilai Rf yaitu [30]:
Penetapan  Kadar  Fenolik  Total  Ekstrak  Etil  Asetat  A. esculentus
1. Pembuatan Larutan Induk Asam Galat Asam  galat  ditimbang  sebanyak  10  mg,  kemudian dilarutkan dengan metanol p.a sampai tanda batas pada labu ukur 10 mL. Dengan demikian diperoleh konsentrasi 1000 ppm sebagai larutan induk asam galat [15].

## 2. Pembuatan Larutan Ekstrak
Ekstrak etil asetat A. esculentus ditimbang sebanyak 50 mg,  dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  10  mL,  dan  dilarutkan dengan  metanol  p.a  sampai  tanda  batas.  Didapatkan  larutan induk ekstrak etil asetat A. esculentus 5000 ppm [16].
Journal of Islamic Pharmacy. Online ISSN: 2527-6123
3.  Penentuan  Panjang  Gelombang  Maksimum  Asam Galat Sebanyak  0,5  mL  larutan  asam  galat  50  ppm  diambil, ditambahkan 5 mL reagen Follin-Ciocalteu (sebelumnya sudah diencerkan  dengan  akuades  1:10)  diamkan  selama  5  menit. Kemudian ditambahkan 4 mL Na 2 CO 3 1M campur hingga homogen dan diamkan pada suhu kamar dalam kondisi gelap selama 30 menit. Absorbansi diukur dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 600-800 nm [17, 18].

## 4. Penentuan Kurva Standar Asam Galat
Larutan induk 1000 ppm diambil sebanyak 0,3; 0,4; 0,5; 0,6;  dan  0,7  mL,  masing-masing  dimasukkan  ke  dalam  labu ukur 10 mL lalu ditambahkan metanol p.a sampai tanda batas, didapatkan larutan baku standar 30, 40, 50, 60, dan 70 ppm. Kemudian diambil 0,5 mL dari masing-masing larutan standar, masukkan ke dalam vial lalu tambahkan 5 mL reagen Follin- Ciocalteu (sebelumnya sudah diencerkan dengan akuades 1:10) diamkan selama 5 menit. Kemudian ditambahkan 4 mL Na 2 CO 3 1M campur hingga homogen dan diamkan pada suhu kamar dalam kondisi gelap selama 30 menit. Selanjutnya seri kadar diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimum yang didapatkan [17, 18].
5.  Penetapan  Kadar  Fenolik  Total  dalam  Ekstrak  Etil Asetat Buah Okra (Abelmoschus esculentus L.) dengan Metode Spektrofotometri UV-Vis
Larutan  ekstrak  1000  ppm  diambil  sebanyak  0,5  mL lalu dimasukkan ke dalam tabung reaksi lalu tambahkan 5 mL reagen Follin-Ciocalteu (sebelumnya sudah diencerkan dengan akuades 1:10) diamkan selama 5 menit. Kemudian ditambahkan 4 mL Na2CO3 1M campur hingga homogen dan diamkan pada suhu kamar dalam kondisi gelap selama 30 menit. Absorbansi diukur pada panjang gelombang maksimum yang didapatkan [17].

## 6. Analisis Data
Analisis data dilakukan dengan persamaan regresi linear menggunakan program Microsoft Excel . Kadar fenolik total didapat dengan cara memasukkan nilai absorbansi larutan uji ke dalam regresi linier y= bx+a larutan standar asam galat, dimana y merupakan absorbansi larutan uji dan x konsentrasi total fenol yang tekandung di dalam ekstrak etil asetat A. esculentus . Kadar fenolik total ditunjukkan dengan mikrogram asam galat ekuivalen per miligram (µgGAE/mg) [19]. Kadar fenolik total menurut [20] dapat dihitung menggunakan rumus sebagai berikut:
Keterangan: C = Konsentrasi asam galat (nilai x) V = Volume ekstrak yang digunakan (mL) M = Berat sampel yang digunakan (mg)

## Hasil dan Pembahasan
Simplisia Buah Okra (Abelmoschus esculentus L.) Bagian tanaman A. esculentus yang digunakan pada penelitian adalah bagian buah.  Sampel yang telah dikumpulkan terlebih dahulu disortasi basah yang bertujuan untuk menghilangkan serta membersihkan kotoran yang menempel,
kemudian buah dicuci dengan air yang mengalir, lalu dilakukan perajangan untuk mempercepat proses pengeringan. Pengeringan simplisia dilakukan dengan menggunakan sinar matahari langsung dari jam 08.00-11.00 yang ditutupi dengan kain hitam. Adapun fungsi dari kain hitam yang digunakan untuk mencegah simplisia terkena panas secara langsung. Tujuan utama pengeringan yaitu untuk mengurangi kadar air dari bahan sehingga dapat menghambat pertumbuhan mikroba yang tidak diinginkan [21].
Setelah proses pengeringan selanjutnya simplisia disortasi kering yang bertujuan untuk memisahkan benda-benda asing seperti bagian tanaman yang tidak dinginkan atau pengotor- pengotor yang masih ada atau tertinggal pada simplisia kering [22]. Kemudian simplisia dihaluskan untuk memperluas kontak permukaan partikel simplisa sehingga semakin besar kontak dengan perlarut dan mempermudah penetrasi pelarut ke dalam sampel sehingga dapat menarik senyawa-senyawa dari simplisia lebih banyak [23]. Data rendemen simplisia A. esculentus dapat dilihat pada Tabel 1 .
Tabel 1. Data rendemen simplisia A. esculentus Bagian Tum- buhan Bobot Buah (g) Bobot Serbuk (g) Rendemen (%) Buah Okra 5.000 375 7,52 %
Ekstrak Etil Asetat A. esculentus Ekstraksi yang digunakan pada penelitian ini adalah maserasi. Penggunaan pelarut etil asetat sebagai pelarut bertujuan untuk menarik senyawa yang bersifat semi polar seperti senyawa fenol dan flavonoid [24]. Hasil dari maserasi kemudian disaring menggunakan kertas saring dan diambil filtratnya.  Kemudian  filtrat  dipisahkan  dengan  pelarutnya menggunakan rotary evaporator pada suhu 50 o C. Tujuan dari penggunaan alat tersebut untuk memisahkan senyawa dari pelarut yang digunakan. Sedangkan pemilihan suhu 50 o C yaitu karena senyawa fenol memiliki sistem konjugasi yang dapat rusak pada suhu tinggi yang terlalu lama [25].
Ekstrak yang sudah diuapkan selanjutnya dipekatkan menggunakan  waterbath  pada  suhu  50 o C hinga didapatkan bobot  tetap  sebesar  6  gram  dengan  rendemen  sebesar  2%. Adapun faktor-faktor yang mempengaruhi hasil rendemen pada ekstrak adalah suhu, waktu, pengadukan, dan pelarut. Ukuran sampel juga dapat mempengaruhi hasil rendemen karena semakin kecil luas permukaan sampel akan semakin memperluas kontak dan meningkatkan interaksi dengan pelarut [26]. Tujuan perhitungan rendemen adalah untuk mengetahui banyaknya ekstrak yang diperoleh selama ekstraksi [27]. Data rendemen ekstrak etil asetat A. esculentus dapat dilihat pada Tabel 2 .
Tabel 2. Data rendemen ekstrak etil asetat A. esculentus Bahan Berat Serbuk (g) Bobot Ekstrak (g) Rendemen (%) Buah Okra 300 6 2 %
Identifikasi  Senyawa  Fenol  Ekstrak  Etil  Asetat  Buah Okra  (Abelmoschus  esculentus  L.)  dengan  Metode Kromatografi Lapis Tipis Ekstrak etil asetat A. esculentus yang diperoleh kemudian dilakukan  identifikasi  senyawa  fenol  dengan  uji  KLT  untuk
lebih menegaskan hasil yang didapat dari skrining fitokimia. Pada uji Kromatografi Lapis Tipis digunakan silica gel G F254 sebagai fase diam. Plat silika gel GF 254 dibuat dengan ukuran panjang 8 cm dan lebar 1,5 cm diberi tanda batas atas 0,5 cm dan batas bawah 1 cm [28]. Sampel sebanyak 50 mg ditimbang lalu dilarutkan dengan 1 ml etil asetat.
Fase gerak yang digunakan berupa eluen hasil optimasi yaitu n-heksana:etil asetat (6:4). Eluen dijenuhkan terlebih dahulu dalam chamber dengan kertas saring. Eluen jenuh ditandai dengan terbasahinya kertas saring hingga ujung. Setelah itu sampel ditotolkan pada plat KLT aktif menggunakan pipa kapiler pada batas bawah yang telah dibuat, kemudian dibiarkan beberapa saat hingga totolan noda mengering. Lalu plat KLT dimasukkan ke dalam chamber tertutup yang berisi eluen yang sudah dijenuhkan. Eluen dibiarkan terelusi pada plat hingga mencapai batas atas plat yang sudah ditandai.
Plat  KLT  kemudian  dikeluarkan  dari chamber lalu ditunggu hingga mengering. Terdapat 2 noda dengan nilai Rf pada noda 1 0,23 dan noda 2 0,38. Adapun deteksi bercak yang digunakan yaitu sinar UV 254 dan 366 nm serta penyemprot noda FeCl 3 . Pada paparan sinar UV 254 nm, lempeng akan berfluoresensi  dan  sampel  akan  tampak  berwarna  gelap, sedangkan pada sinar 366 nm noda yang akan berfluoresensi dan  lempeng  tampak  berwarna  gelap  [29].  Data  identifikasi kromatografi  lapis  tipis  senyawa  fenol  ekstrak  etil  asetat A. esculentus dapat dilihat pada Tabel 3 .
Tabel 3. Data Kromatografi Lapis Tipis
Penetapan  Kadar  Fenolik  Total  Ekstrak  Etil  Asetat  A. esculentus
Penentuan kadar fenolik total ekstrak etil asetat A. esculentus dilakukan menggunakan metode Folin-Ciocalteu. Prinsip dari metode ini adalah reduksi fosfomolibdat- fosfotungstat oleh inti aromatis senyawa fenolik sehingga terbentuk kompleks molibdenum tungsten yang berwarna biru  yang  dapat  dideteksi  dengan  spektrofotomater  [30]. Standar yang digunakan adalah asam galat, karena asam galat merupakan salah satu fenolik alami dan tergolong ke dalam senyawa fenolik yang sederhana [31].
Larutan asam galat direaksikan dengan reagen Follin- Ciocalteu yang menghasilkan larutan berwarna kuning kemudian ditambahkan dengan Na 2 CO 3 .  Reaksi  antara reagen Folin-Ciocalteu dan senyawa fenolik hanya dapat terjadi pada suasana basa, sehingga diperlukan Na 2 CO 3 untuk membuat lingkungannya menjadi basa. Suasana basa ini dapat mendisosiasi proton pada senyawa fenolik menjadi ion fenolat [32].
Panjang Gelombang Maksimum Asam Galat Panjang  gelombang  asam  galat  dengan  konsentrasi  50 ppm diukur menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada rentang panjang gelombang 600-800 nm dan didapatkan nilai panjang gelombang maksimum sebesar 770 nm. Dokumentasi hasil penelitian panjang gelombang maksimum dapat dilihat pada Gambar 2 .
Hasil Pengamatan
Noda ke Rf Visual UV 254 nm Visual setelah disem- prot FeCl 3 UV 254 nm setelah disem- prot FeCl 3 UV 366 nm setelah disem- prot FeCl 3 1 0,23 Hijau Tua Hitam Hijau Hitam - 2 0,38 Hijau Tua Hitam Hijau Hitam - (a) (b) ( c ) ( d ) ( e ) Gambar 1 . Hasil identifikasi senyawa fenolik (a) Pengamatan secara visual (b) Pengamatan pada sinar UV 254 nm (c) Pengamatan secara visual setelah disemprot FeCl 3 (d) Pengamatan sinar UV 254 nm setelah disemprot FeCl 3 (e) Pengamatan  sinar  UV  366  nm  setelah  disemprot  FeCl 3 pada ekstrak etil asetat buah A. esculentus menggunakan KLT
Gambar 2 . Grafik panjang gelombang maksimum asam galat Hasil pengukuran panjang gelombang maksimum asam galat yang diperoleh yaitu sebesar 770 nm dengan nilai absorbansi  0,509.  Hasil  ini  sesuai  dengan  penelitian  yang dilakukan  [33]  menunjukkan  panjang  gelombang  maksimum asam  galat  adalah  770  nm.  Penetapan  panjang  gelombang maksimum bertujuan untuk mengetahui besar panjang gelombang yang dibutuhkan larutan asam galat untuk mencapai serapan maksimum [34].
Penentuan Kurva Baku Asam Galat Penentuan kurva baku asam galat dilakukan dengan pembuatan larutan induk 1000 ppm kemudian dibuat larutan seri  kadar  30,  40,  50,  60,  dan  70  ppm.  Berdasarakan  hasil rata-rata absorbansi dari setiap kosentrasi dapat dilihat pada Gambar 3 .
Journal of Islamic Pharmacy. Online ISSN: 2527-6123

## Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan maka dapat disimpulkan bahwa kadar fenolik total ekstrak etil asetat A. esculentus sebesar 11,16 mg GAE/gram.

## Referensi
[1]  Amania HN. Pengaruh Ekstrak Flavonoid Daun Tembakau Kasturi Terhadap Kadar Inducible Nitric Oxide Synthase pada Human Peripheral Blood Mononuclear Cell yang Dipapar  Lipopolisakarida  Porphromonas  Gingivalis. Skripsi.  2018.  Fakultas  Kedokteran  Gigi  Universitas Jember.
[2]  Khoddami  A,  Wilkes  MS,  Robberts  T  H.  Techniques for Anaylis Of Plant Phenolic Coumpunds. Molecules. 2013;18(2):2328-75.
[3]  Manik AES, Melati M, Kurniawati A, Faridah DN. Hasil Dan  Kualitas  Okra  (Abelmochus  esculentus  L.Moench,) Merah dan Okra Hijau Dengan Jenis Pupuk yang Berbeda. Jurnal Agron Indonesia. 2019;47(1):68-75.
[4]  Prabhune A, Sharma M, Ojha B. Abelmoschus Esculentus (Okra) Potential Natural Compund for Prevention and  Management  of  Diabetes  and  Diabetic  Induced Hyperglicemia. International J of Herb Med. 2017;5(2):65- 8.
[5]  Utami  IK,  Febrianti A,  Tandi  J.  Uji  Efektivitas  Ekstrak Buah Okra Terhadap Gambaran Diinduksi Streptozotocin Diabetes Melitus Adalah Kelainan. Farmako J. 2021;18(1).
[6]  Ahiakpa  JK,  Quartey  EK,  Amoatey  HM,  Klu  GYP, Achel  DG, Achoribo  E, Agbenyegah  S. Total  flavonoid, phenolic contents and antioxidant scavenging activity in 25 accessions of okra (Abelmoschus spp L.). African J of Food Sci and Tech. 2013;4(5):129-35.
[7]  Syam  AK,  Riyanti  S,  Armypa  UW.  Penetapan  Kadar Flavonoid dan Polifenol Buah Okra Merah dan Okra Hijau (Abelmoschus  esculentus  (L)  Moench).  2019.  Fakultas Farmasi Unjani.
[8]  Putri  WS,  Warditiani  NK,  Laeasanty  LPF.  Skrining Fitokimia Ekstrak Etil Asetat Kulit Buah Manggis (Garcinia mangostana L.). J Farm Udayana. 2013;2(4).
[9]  Indrasuari  AAA,  Wjayanti  NP  AD,  Dewantara  IGNA. Standarisasi Mutu Simplisia Kulit Buah Manggis (Garcinia mangostana L.). J Farm Udayana. 2014;3(1).
[10] Kementerian Kesehatan RI. Farmakope Herbal Indonesia Edisi II. 2017. Jakarta: Kementerian Kesehatan RI.
[11] Tandi  J,  Niswatulfahriyati,  Nurmadinah,  Handayani TW. Uji Ekstrak Etanol Daun Kemangi Terhadap Kadar Glukosa  Darah,  dan  Gambaran  Histopatologi  Pankreas Tikus yang Diinduksi Streptozotocin. J Man Pharm Indo. 2019;5(2).
[12] Aisyah LS, Jasmansyah, Sari P, Temi R. Isolasi dan Uji Aktivtas Snatibakteri Senyawa Fenol Ekstrak Etil Asetat Rimpang Jahe Merah (Zinger officinale Roscoe var. sunti). J Kartika Kim. 2019;2(1):44-50.
[13] Yuda, Putu EKS, Erna C. Skrining Fitokimia dan Analisis Kromatografi Lapis Tipis Ekstrak Tanaman Patikan Kebo (Euphobia hirta L.). J Ilm Medu. 2017;5(2).
[14] Marlina LA, Naimah, Roni. Penetapan Kadar Fenolat Total dan  Flavonoid Total  Ekstrak  Etanol  Daun,  Kulit  Batang Dan  Kulit  Buah  Kasturi  (Mangifera  casturi).  Proceed  of
Gambar 3 . Hasil kurva baku asam galat
Pengukuran kurva baku yang bertujuan untuk mengetahui persamaan regresi linier yang digunakan dalam penetapan kadar fenolik total pada sampel. Hasil pengukuran absorbansi larutan standar dengan seri konsentrasi kurva baku yaitu 30, 40,  50,  60,  dan  70  ppm  dengan  waktu  inkubasi  30  menit. Menurut penelitian [35], [36], [37], dan [38] yang menyatakan bahwa absorbansi stabil pada menit ke-30, maka pengukuran absorbansi dilakukan pada menit ke-30.
Persamaan regresi linier yang diperoleh dari kurva baku  asam  galat  yaitu  y  =  0,0073x  +  0,0956  dengan  nilai koefisien  korelasi  r  yaitu  0,9997.  Nilai  (r)  koefisien  korelasi yang diperoleh yaitu mendekati angka 1 yang menunjukkan bahwa persamaan regresi tersebut adalah linier, sehingga dapat dikatakan bahwa absorbansi dan konsentrasi memiliki korelasi yang sangat kuat [39].
Kadar Fenolik Total Ekstrak Etil Asetat A. esculentus Penetapan kadar fenolik total ekstrak etil asetat A. esculentus yang  dibuat  dengan  konsentrasi  5000  ppm  (50 mg/10  ml)  dengan  3  kali  replikasi.  Hasil  kadar  fenolik  total yang didapatkan dari ekstrak etil asetat A. esculentus dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4. Hasil kadar fenolik total ekstrak etil asetat A. esculentus Sampel Absorbansi Sampel GAE (% b/b) GAE (% b/b ± SD) Ekstrak etil asetat buah okra 5000 ppm 0,425 9,02 11,16 ± 0,23 0,592 13,60 0,492 10,86
Tahap terakhir pada penetapan kadar fenolik total ekstrak etil asetat A. esculentus yaitu dengan membuat larutan sampel ekstrak konsentrasi 5000 ppm dan dilakukan 3 kali replikasi bertujuan untuk memperoleh data yang akurat. Nilai absorbansi berturut-turut yang didapatkan pada ekstrak etil asetat A. esculentus sebesar 0,425; 0,592; dan 0,492. Untuk menghitung kadar total fenolik, absorbansi sampel yang dibuat replikasi dihitung rata-ratanya. Kemudian hasil rata-rata sampel yang telah didapat dimasukkan ke dalam persamaan garis linier y= 0,0073x + 0,0956 sehingga diperoleh kadar total fenolik ekstrak etil A. esculentus sebesar 11,16 mg GAE/gram dengan standar deviasi (SD) sebesar 0,23. Pada umumnya, nilai keseksamaan dihitung menggunakan standar deviasi (simpangan baku). Standar  deviasi  (SD)  digunakan  untuk  membandingkan ketepatan suatu hasil. Semakin kecil nilai SD dari serangkaian pengukuran, maka metode yang digunakan semakin tepat [40].
Mulawarman Pharm Conf. 2016;3(1): 275-81.
[15] Shofa SA. Skrining Fitokimia Dan Identifikasi Metabolit Sekunder  Secara  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT)  Pada Nanopartikel Kitosan Ekstrak Bawang Putih (Allium sativum  Liin.),  Jeringau  (Acorus  calamus  L.),  Temu Mannga (Curcuma mangga Val.), dan Kombinasinya. Skripsi. 2020. Fakultas Sains dan Teknologi: Univeristas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim.
[16] Anna KS, Noverda A. Penetapan Kadar Fenolik Total dan Flavonoid  Total  Ekstrak  Beras  Hitam  (Oryza  sativa  L.) dari Kalimantan Selatan. J Ilm Ibn Sina. 2017;2:327-35
[17] Ulya  R.  Penetapan  Kadar  Total  Fenolik  dan  Flavonoid Fraksi  Etil  Asetat  dari  Ekstrak  Metanol  Daun  Binjau (Mangifera Caesia jack. Ex. Wall) Menggunakan Spektrofotometri  UV-Vis.  Skripsi.  2020.  Program  Studi S1 Farmasi: STIKES Borneo Lestari.
[18] Ramadhan H, Forestryana D. 2021.The Effect of Different Extraction  Methods  On  the  Total  Phenolic  Content  and Antioxidant Activity in Galam Sawdust (Melaleuca leucadendron Linn). Trop J of Natur Prod Res. 2021;5(5): 805-8.
[19] Ready  AK.  Kandungan  Fenolik  dan  Flavonoid  Total serta Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Durian (Toona sinensis).  Skripsi.  2016.  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam: Institut Pertanian Bogor [20] Salmia.  Analisis  Kadar  Flavonoid  Total  Ekstrak  Kulit Batang  Kedondong  Bangkok  (Spondias  Dulcis)  Dengan Metode Spektrofotometri Uv-Vis. Skripsi. 2016. Jurusan Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan: Universitas Islam Negeri Alauddin Makassar.
[21] Ayu DF, Yamin M, Hamzah F. 2017. Lama Pengeringan Terhadap Aktivtas Antioksidan dan Mutu Teh Herbal Daun Ketepang Cina (Cassua alata L.) Jom Faperta. 2017;4(2):9- 12.
[22] Melinda.  Aktivitas  Antibakteri  Daun  Pacar  (Lowsonia inermis  L),  Skripsi.  2014.  Universitas  Muhammadiyah Surakarta: Surakarta.
[23] Husni E, Suharti N, Atma APT. Karakterisasi simplisia dan ekstrak daun pacar kuku (Lawsonia inermis Linn) serta penentuan kadar fenolat total dan uji aktivitas antioksidan. J Sains Farm & Klin. 2018;5(1):12-6.
[24] Mahardika RG, Roanisca O, Sari FIP. Fenolik Total Fraksi Etil  Asetat  Daun  Pelawan  (Tristaniopsis  merguensis Grifft.). J Sains dan Edu Sains. 2020;3(1):8-14.
[25] Ningsih N, Yasni S, Yuliani S. Sintesis nanopartikel ekstrak kulit manggis merah dan kajian sifat fungsional produk enkapsulasinya. J Tekno dan Indus Pangan. 2017;28(1):27- 35.
[26] Febriana N, Prasetya F, Ibrahim A. Aktivitas Antimikroba Ekstrak Daun Bungur (Langerstroemia speciosa (L.) Pers). J Sains Kes . 2015;1(2):45-50.
[27] Hasnaeni H, Wisdawati W. Pengaruh metode ekstraksi terhadap rendemen dan kadar fenolik ekstrak tanaman Kayu Beta-beta (Lunasia amara Blanco). J Farma Galenika. 2019;5(2):175-82.
[28] Dewi  NLA,  Adnyani  LPS,  Pratama  RBR,  Yanti  NND, Manibuy JI, Warditiani NK. Pemisahan, Isolasi, dan Identifikasi  Senyawa  Saponin  dari  Herba  Pegagan (Centella asiatica L. Urban). Jurnal Farmasi Udayana.
2018;7(2):68-76.
[29] Ih H, Fajriaty I, Rahmawani SP, Abdurrachman. Skrining
Fitokimia  dan  Analisis  Kromatografi  Lapis  Tipis  dari Ekstrak Etanol Herba Pacar Air (Impatiens balsamina Linn.).  Sem  Nas  Pend  MIPA  dan  Tekno  IKIP  PGRI Pontianak. 2017:403–14.
[30] Senet MRM, Raharja IGMAP, Darma  IKT, Prastakarini KT,  Dewi  NMA,  Parwata  IMOA.  Penentuan  kandungan total flavonoid dan total fenol dari akar kersen (Mutingia calabura) serta aktivitasnya sebagai antioksidan. J Kim. 2018;12(1):13-8.
[31] Ahmad AR,  Juwita  J,  Ratulangi  SAD.  Penetapan  kadar fenolik dan flavonoid total ekstrak metanol buah dan daun patikala (Etlingera elatior (Jack) RM SM). Pharma Sci and Res, 2015;2(1).
[32] Dewantara  LAR,  Ananto  AD,  Andayani  Y.  Penetapan Kadar  Fenolik  Total  Ekstrak  Kacang  Panjang  (Vigna unguiculata) dengan Metode Spektrofotometri UV-Visible. Lumbung Farmasi: J Ilm Kefarma. 2021;2(1): 13-9.
[33] Rawar EA, Atmaja SP, Kurniawati AY. Penetapan Kadar Flavonoid Total, Fenolik Total, Dan Alkaloid Total Dalam Ekstrak  Etanol  Herba Akar  Wangi  (Vetiveria  zizanoides L.). Duta Pharma J. 2022;2(1).
[34] Supriningrum  R,  Nurhasnawati  H,  Faisah  S.  Penetapan Kadar  Fenolik  Total  Ekstrak  Etanol  Daun  Serunai (Chromolaena odorata L.) dengan Metode Spektrofotometri UV-Vis. Al-Ulum: J Sains dan Tekno. 2020;5(2):54-7.
[35] Kambey B, Sudewi S, Jayanto I. Analisis Korelasi Antara Kandungan  Fenol  Total  Dengan  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Dan  Fraksi  Abelmoschus  Manihot  L.  Terhadap Escherichia coli. Pharmacon. 2019;8(2):472-9.
[36] Dona R, Furi M, Suryani F. Penentuan Kadar Total Fenolik, Total Flavonoid Danuji Aktivitas Antioksidan Dari Ekstrak Dan  Fraksi  daun  Karamunting  (Rhodomyrtus  tomentosa (Aiton) Hassk). J Pen Farma Indonesia. 2020;9(2):71-8. [37] Paramita  NLPV,  Andari  NPTW,  Andani  NMD,  Susanti NMP. Penetapan kadar fenol total dan katekin daun teh hitam dan ekstrak aseton teh hitam dari tanaman Camellia sinensis var. Assamica. Jurnal Kimia. 2020;14(1):43-50.
[38] Wismayani  L,  Roni  A,  Minarsih  T.  Penentuan  Kadar Fenolik  dan  Flavonoid  Total  Ekstrak  Daun  Renggak (Amomum dealbatum Roxb.) dari Berbagai Pelarut Secara Spektrofotometri Uv-Vis. Indo J of Pharm and Nat Prod. 2022;5(2):142-51.
[39] Asmorowati H, Lindawati NY. Penetapan kadar flavonoid total buah alpukat biasa (Persea americana Mill.) dan alpukat mentega (Persea americana Mill.) dengan metode spektrofotometri UV-Vis. Jurnal Ilmiah Farmas.
2019;15(2):51-63.
[40] Trinovita  Y,  Mundriyastutik  Y,  Fanani  Z,  Fitriyani AN.  Evaluasi  Kadar  Flavonoid  Total  Pada  Ekstrak Etanol  Daun  Sangketan  (Achyranthes  Aspera)  Dengan Spektrofotometri. Indonesia Jurnal Farmasi. 2019;4(1):12-
8.