Biogas Starter Aplikasi Indigenous Air Limbah Cucian Garam Pada Substrat Kotoran Sapi Dan Tongkol Jagung Varietas Madura
Abdus Salam Junaedi*(1),  Haryo Triajie(2),  Harfa Chandra Puspita Sari(3),  Nur Hamidah Laili(4)
1Program Studi Manajemen Sumberdaya Periaran, Fakultas Pertanian, Universitas Trunojoyo Madura,  Jln. Raya Telang, Po Box 2 Kamal Bangkalan Madura. 69162
abdus.salamj@trunojoyo.ac.id (1), haryotriajie@trunojoyo.ac.id (2), harfatiac@gmail.com (3), hamidalaili06@gmail.com (4)

## ABSTRAK
Biogas  merupakan  campuran  beberapa  gas  yang  dapat  digunakan  sebagai  sumber  energi  alternatif.  Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui keanekaragaman spesies bakteri  indigenous yang dapat diisolasi dari air limbah cucian garam dan aktivitas selulotiknya, pengaruh pemberian biogas starter dengan kombinasi perbandingan substrat kotoran sapi dan tongkol jagung varietas Madura serta lama waktu fermentasi terhadap produksi  biogas;  dan  persentase  gas  metana  (CH 4 )  yang  dihasilkan  di  akhir  proses  fermentasi  biogas. Rancangan  penelitian  yang  digunakan  adalah  Acak  Faktorial  (RAF),  dengan  memberikan  perbandingan komposisi  substrat  kotoran  sapi  dan  tongkol  jagung  varietas  Madura,  yaitu  1:0,  1;1,  1:2.  Selain  itu,  juga dilakukan perbandingan lama waktu fermentasi, yaitu 1, 2, 3, dan 4 minggu. Prosedur kerja dalam penelitian ini meliputi isolasi, identifikasi, skrining, peremajaan dan pembuatan kultur stok isolat bakteri indigenous air limbah cucian garam, pembuatan biogas starter, preparasi substrat, inokulasi biogas starter dan fementasinya pada substrat, serta analisis karakteristik gas pada produk biogas yang dihasilkan di akhir proses fermentasi. Hasil  akhir  kegiatan  penelitian  ini  adalah  terdapat  9  jenis  bakteri  indigenous  dari  air  limbah  cucian  garam yang berhasil diisolasi, dikarakterisasi, dipurifikasi, dan 7 jenis bakteri yang mempunyai kemampuan dalam menghidrolisis  komponen  selulase  dalam  media  uji  Carboxy  Methyl  Cellulose  Agar.  Pemberian  biogas starter dengan kombinasi perbandingan substrat kotoran sapi dan tongkol jagung varietas Madura serta lama waktu  fermentasi  terhadap  produksi  biogas.  Persentase  gas  metana  (CH 4 )  yang  dihasilkan  di  akhir  proses fermentasi berkisar antara 50-65% dengan hasil terbaik yang diperoleh dari perbandingan variasi pemberian substrat kotoran sapi dan tongkol jagung sebesar 1:1 pada waktu fermentasi 3 minggu.
Kata Kunci : Biogas Starter, Bakteri Indigenous, Limbah Cucian Garam

## ABSTRACT
Biogas  is  a  mixture  of  several  gases  that  can  be  used  as  an  alternative  energy  source.  The  purpose  of  this study  is  to  determine  the  diversity  of  indigenous  bacterial  species  that  can  be  isolated  from  salt  washing wastewater and their cellulotic activity, the effect of biogas starter with a combination of cow dung and corn cobs, Madura variety. as well as the length of time of fermentation on biogas production; and the percentage of methane gas (CH4) produced at the end of the biogas fermentation process. The research design used was factorial randomized (RAF), by providing a comparison of the substrate composition of cow dung and corn cobs Madura varieties, namely 1: 0, 1; 1, 1: 2. In addition, a comparison of the length of fermentation time was  also  carried  out,  namely  1,  2,  3,  and  4  weeks.  The  work  procedure  in  this  research  includes  isolation, identification, screening, rejuvenation and culture of indigenous bacterial isolates of salt washing wastewater, making biogas starter, substrate preparation, inoculating biogas starter and its cementation on the substrate, as  well  as  analyzing  the  gas  characteristics  of  the  biogas  products  produced  in  end  of  the  fermentation process.  The  end  result  of  this  research  activity  is  that  there  are  9  types  of  indigenous  bacteria  from  salt washing  wastewater  that  have  been  isolated,  characterized,  purified,  and  7  types  of  bacteria  that  have  the ability  to  hydrolyze  cellulase  components  in  the  Carboxy  Methyl  Cellulose  Agar  test  media.  Provision  of starter  biogas  with  a  combination  of  cow  dung  substrate  ratio  and  Madura  variety  of  corn  cobs  and fermentation  time  to  biogas  production.  The  percentage  of  methane  gas  (CH4)  produced  at  the  end  of  the fermentation  process  ranges  from  50-65%  with  the  best  results  obtained  from  the  ratio  of  variations  in  the substrate of cow dung and corn cobs of 1: 1 at 3 weeks fermentation.
Keywords : Biogas Starter, Indigenous Bacteria, Salt Washing Waste
Salam Junaedi A, Triajie H, Chandra Puspita H, Hamidah Laili N : Biogas Starter Aplikasi Indigenous Air  Limbah  Cucian  Garam  Pada  Substrat  Kotoran  Sapi  Dan  Tongkol  Jagung Varietas Madura

## I. PENDAHULUAN

## 1. Latar Belakang
Saat  ini  kebutuhan  energi  yang  bersifat  primer  semakin  meningkat  seiring  dengan pertumbuhan  ekonomi.  Hal  ini  menandakan  bahwa  pemenuhan  kebutuhan  energi  oleh suatu negara di era modern ini merupakan hal yang mutlak dan penting untuk mendukung setiap kegiatan ekonomi (Ula dan Affandi, 2019) Keterbatasan sumberdaya energi nasional (minyak  dan  gas  bumi)  ternyata  menimbulkan  dampak  pada  berbagai  bidang  kehidupan masyarakat, tanpa terkecuali masyarakat yang terdapat di Pulau Madura. Hal ini menuntut pengembangan  sumber  energi  alternatif  lain  yang  jumlahnya  cukup  melimpah  dan  ramah lingkungan  (Dewi  dan  Kholik  2018),  tentunya  dengan  mengedepankan  kekayaan sumberdaya dan nilai-nilai kearifan lokal yang terdapat di Pulau madura. Oleh karena itu, diperlukan sumber energi yang dapat diperbarui yang berasal dari komponen hayati seperti biogas untuk pemenuhan sumberdaya energi nasional gas secara mandiri di Pulau Madura. Biogas  merupakan  campuran  beberapa  gas  yang  dapat  digunakan  sebagai  sumber  energi alternatif  yang dapat diperbarui dan dihasilkan melalui proses fermentasi anaerob. Biogas memiliki  keunggulan  yang  komparatif  dibandingkan  dengan  bentuk  energi  lain. Keunggulan  tersebut  antara  lain  sebagai  bahan  bakar  mesin,  sebagai  pembangkit  tenaga listrik,  maupun  bahan  bakar  untuk  keperluan  memasak  yang  ramah  lingkungan  (Efriza, 2009).  Oktavia  (2016)  menambahkan  bahwa  hasil  samping  biogas  dapat  diolah  menjadi pupuk  organik  baik  dalam  bentuk  padatan  maupun  cairan  yang  dapat  dimanfaatkan  oleh tanaman. Palallo et  al .  (2018)  menyatakan  bahwa  pembuatan  biogas  dapat  berasal  dari kotoran hewan, limbah cair, dan limbah padatan. Salah satu hewan ruminansia yang dapat menghasilkan  kotoran  dalam  jumlah  melimpah  adalah  sapi.  Berdasarkan  data  statistik tahun  2019,  Indonesia  memiliki  sapi  potong  sebanyak  17.119.000  ekor  sapi  potong  dan 51.000  ekor  sapi  perah  (Direktorat  Jenderal  Peternakan  dan  Kesehatan  Hewan Kementerian Pertanian, 2019). Apabila setiap ekor sapi dalam setiap harinya menghasilkan rata-rata  7  kg  kotoran,  maka  kotoran  yang  dihasilkan  di  Indonesia  dari  dua  jenis  sapi tersebut  adalah  120,190  ton  kotoran  sapi  kering  per  hari  (Budiyanto,  2011).  Sayangnya, kebanyakan  kotoran  sapi  di  beberapa  daerah  di  Pulau  Madura  hanya  ditumpuk  sebagai limbah  atau  sebatas  digunakan  sebagai  pupuk  kandang  di  lahan  pertanian  oleh  peternak konvensional.  Padahal,  kotoran  sapi  yang  melimpah  tersebut  memiliki  kandungan  unsur hara  yang  tinggi  dan  energinya  berpotensi  untuk  dijadikan  sebagai  bahan  baku  penghasil biogas. Hal ini dikarenakan dalam proses pembuangannya, kotoran sapi sering bercampur dengan urin dan gas seperti CH4 dan NH3 (Sucipto, 2009). Di samping itu, salah satu jenis komponen  limbah  organik  yang  saat  ini  jumlahnya  melimpah  dan  belum  termanfaatkan secara maksimal di Pulau Madura adalah limbah tongkol jagung. Hal ini disebabkan oleh sekitar  30%  luasan  areal  jagung  di  Jawa  Timur  berada  di  Pulau  Madura  (Amzeri,  2018). Kebanyakan  petani  jagung  di  Pulau  Madura  hanya  menggunakannya  sebagai  campuran pakan ternak dan pembuatan pupuk organik. Beberapa petani bahkan hanya menimbunnya di  pinggir  sawah  dan  dibakar  (Departemen  Pertanian,  2011).  Hal  inilah  yang  menjadi agenda rutin sehingga menjadi tradisi yang susah sekali dihilangkan, terutama di kalangan petani  jagung  di  Pulau  Madura.  Kecenderungan  ini  disebabkan  oleh  minimnya pengetahuan dan informasi yang diterima, sehingga petani jagung di Pulau Madura belum mengetahui  fungsi  dan  peruntukan  tongkol  jagung  sebagai  salah  satu  penghasil  energi alternatif  biogas  masa  depan. Selain  dikenal  sebagai  penghasil  limbah  kotoran  sapi  dan tongkol  jagungnya,  Pulau  Madura  juga  dikenal  dengan  sebutan  pulau  garam.  Hadi  dan Ahied  (2017)  menegaskan  bahwa  Pulau  Madura  identik  dengan  produksi  garam  dalam skala  regional  Jawa  Timur  maupun  secara  nasional.  Madura  merupakan  produsen  garam terbesar se-Jawa Timur dan nasional. Ratusan ton garam yang diproduksi oleh masyarakat
Salam Junaedi A, Triajie H, Chandra Puspita H, Hamidah Laili N : Biogas Starter Aplikasi Indigenous Air  Limbah  Cucian  Garam  Pada  Substrat  Kotoran  Sapi  Dan  Tongkol  Jagung Varietas Madura
dan  beberapa  home  industry  atau  perusahaan  setiap  harinya,  menjadikan  Pulau  Madura sebagai  produsen  aktif,  pengekspor,  dan  pengolah  garam  baik  di  wilayah  Jawa  Timur maupun  nasional.  Adanya  kepentingan  untuk  dapat  memanfaatkan  limbah  cucian  garam yang melimpah dari aktivitas  produksi garam  yang terdapat  di  Pulau Madura menjadikan hal  yang  menarik  untuk  dikaji.  Sebab  dalam  proses  pembuatan  biogas,  umumnya dilakukan  penambahan  mikroba  yang  dapat  mempercepat  proses  penguraian  komponen limbah  yang  digunakan  sebagai  bahan  baku. Produk  yang  sering  kali  digunakan  adalah produk  EM4  (produk  pertanian)  yang  dipercaya  dapat  membantu  proses  penguraian komponen  organik  dari  substrat  atau  limbah  yang  digunakan.  Penelitian  terbaru,  yang dilakukan oleh  Insani  (2018) menunjukkan tentang penggunaan Effective Microorganime EM-5  sebagai  starter  penghasil  biogas  pada  limbah  tongkol  jagung  yang  merupakan campuran mikroorganisme perombak yang terdiri dari bakteri, Actinomycetes, kapang, dan khamir.  Penelitian  ini  masih  terdapat  kekurangan,  karena  tidak  mengungkapkan  secara jelas  asal  dari  mikroorganisme  yang  disebut  sebagai  EM-5  dan  juga  tidak  menyatakan secara detail spesies mikroorganisme yang dimaksud. Berdasarkan latar belakang tersebut, maka  inovasi  yang  ditawarkan  adalah  aplikasi  biogas  starter  berbahan  dasar  bakteri indigenous  dari  sampel  air  limbah  cucian  garam  sebagai  agen  penghidrolisis  komponen organik  atau  substrat  berupa  kotoran  sapi  dan  tongkol  jagung  varietas  Madura,  sekaligus sebagai  media  pelarut  substrat  untuk  proses  produksi  biogas.  Beberapa  penelitian sebelumnya, masih menggunakan komponen air biasa sebagai bahan pelarutnya. Pelarut air yang  berasal  dari  limbah  cucian  garam  ini  dijadikan  sebagai  acuan  untuk  menghasilkan kuantitas  biogas  yang  melimpah  dalam  waktu  yang  relatif  lebih  cepat  bila  dibandingkan dengan menggunakan air biasa. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui keanekaragaman spesies  bakteri  indigenous  yang  diisolasi  dari  air  limbah  cucian  garam;  pengaruh pemberian biogas starter dengan kombinasi perbandingan substrat kotoran sapi dan tongkol jagung  varietas  Madura  serta  lama  waktu  fermentasi  yang  digunakan;  dan  persentase  gas metana  (CH4)  yang  dihasilkan  di  akhir  proses  fermentasi.  Penelitian  ini  penting  untuk dilakukan karena kedua limbah yang digunakan memiliki rasio C/N yang rendah sehingga menyebabkan biogas yang dihasilkan lebih besar dengan total solid dari kotoran sapi yang dapat  menghasilkan  58-68%  gas  metana.  Adapun  sisa  residu  yang  dihasilkan  dari  proses produk biogas tersebut lebih sedikit. Pemanfaatan kotoran sapi dan tongkol jagung varietas Madura  menjadi  biogas  dapat  mengurangi  kapasitas  limbah  organik  yang  jumlahnya semakin banyak serta dapat menjadi energi alternatif baru masa depan.
2. Perumusan Masalah
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  jenis  bakteri indigenous yang  berasal  dari  air limbah cucian garam yang berhasil di isolasi, dikarakterisasi serta dipurifikasi; mengetahui jenis  bakteri  yang  mempunyai  kemampuan  dalam  menghidrolisis  komponen  selulase dalam  media  uji Carboxy  Methyl  Cellulose  Agar ;  mengetahui  pengaruh  dari  pemberian biogas  starter dengan  kombinasi  perbandingan  substrat  kotoran  sapi  dan  tongkol  jagung serta kombinasi formulasi yang terbaik dari perlakuan tersebut.
3. Tujuan Penelitian
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  keanekaragaman  spesies  bakteri  indigenous yang  diisolasi  dari  air  limbah  cucian  garam;  pengaruh  pemberian biogas  starter dengan kombinasi  perbandingan substrat  kotoran sapi  dan tongkol  jagung varietas Madura serta lama  waktu  fermentasi  yang  digunakan;  dan  persentase  gas  metana  (CH4)  yang dihasilkan di akhir proses fermentasi.
4. Manfaat Penelitian
Manfaat  dari  pelaksanaan  kegiatan  penelitian  ini  yaitu  guna  memanfaatkan  kotoran  sapi dan  tongkol  jagung  varietas  Madura  menjadi  biogas  dapat  mengurangi  kapasitas  limbah
Salam Junaedi A, Triajie H, Chandra Puspita H, Hamidah Laili N : Biogas Starter Aplikasi Indigenous Air  Limbah  Cucian  Garam  Pada  Substrat  Kotoran  Sapi  Dan  Tongkol  Jagung Varietas Madura
organik  yang  jumlahnya  semakin  banyak  serta  dapat  menjadi  energi  alternatif  baru  masa depan.

## II. METODE

## Tempat dan Waktu
Penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Jurusan  Kelautan  dan  Perikanan  meliputi Laboratorium Bioteknologi Kelautan dan Perikanan sebagai tempat kegiatan isolasi bakteri indigenous air  limbah  cucian  garam dan  pembuatan biogas  starter serta  Laboratorium Pengelolaan  Sumberdaya  Perikanan  sebagai  tempat  skrining,  peremajaan,  perbanyakan isolat  bakeri indigenous air  limbah  cucian  garam;  preparasi  dan  pengujian biogas  starter pada substrat kotoran sapi dan tongkol jagung varietas madura. Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Juli-Desember tahun 2020.

## Rancangan penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  RAF  (Rancangan  Acak  Faktorial)  4x3,  yaitu  4  perlakuan untuk lama waktu fermentasi (1, 2, 3, dan 4 minggu) dan 3 perlakuan untuk perbandingan substrat kotoran sapi dan tongkol jagung (1:0, 1:1, dan 1:2).

## Bahan dan Peralatan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  antara  lain  bioreaktor  anaerobik  skala laboratorium  volume  5  L  berbahan  kaca,  pipa,  penjepit,  penampung  gas,  barometer, gas chromatography ,  botol  kultur,  neraca  analitik  (SHIMADZU),  cawan  Petri,  spatula, pipet volume , pipetor ,  gelas  Beaker  (IWAKI  PYREX®),  gelas  ukur  100  mL  (HERMA)  dan 1000  mL,  jarum  ose,  bunsen,  tabung  reaksi,  rak  tabung  reaksi,  kapas, aluminium  foil , selotip, cling  wrap ,  kertas  coklat,  kertas  label,  koran  bekas, Erlenmeyer (IWAKI PYREX®),  autoklaf (OSK  6500  AUTOCLAVE  OGAWA  SEIKI  CO.,  LTD),  kompor listrik (Rommeisbacher), magnetic stirrer , water bath (Julabo TW8), Incubator (Heraeus), vortex , Laminar  Air  Flow  (LAF) (ESCO®),  UV-Vis spectrophotometer , cufet , colony counter (GALAXY 230). Bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain air limbah cucian  garam,  kotoran  sapi  varietas  Madura,  tongkol  jagung  varietas  Madura,  media Nutrient  Broth (NB),  media Nutrient  Agar (NA),  akuades,  alkohol  70%,  spirtus,  isolat muni bakteri indigenous air limbah cucian garam.

## III. HASIL PENELITIAN

## Isolasi bakteri indigenous dari air limbah cucian garam
Terdapat  dua  macam  hasil  pewarnaan  Gram  bakteri  indigenous  dari  air  limbah  cucian garam  (bittern),  yaitu  bakteri  Gram  positif  yang  ditandai  dengan  warna  ungu  pada  sel bakteri  dan  Gram  negatif  yang  ditandai  dengan  warna  pink  atau  merah  pada  sel  bakteri setelah  ditetesi  dengan  larutan  tandingan  atau  safranin  pada  serangkaian  uji  pewarnaan Gram. Selain dilakukan uji pewarnaan Gram juga dilakukan pengamatan terhadap bentuk dan  ukuran  sel  mikroskopis  koloni  bakteri  indigenous  dari  air  limbah  cucian  garam (bittern). Bentuk dan ukuran sel mikroskopis yang ditemukan berkisar antara bentuk bulat dan batang dengan variasi besaran ukuran yang bermacam-macam. Berikut disajikan hasil pewarnaan  Gram  dan  pengamatan  sel  mikroskopis  koloni  bakteri  indigenous  dari  air limbah cucian garam (bittern) pada Tabel 2.
Tabel 2 . Hasil pewarnaan Gram dan pengamatan mikroskopis koloni bakteri indigenous dari air limbah cucian garam ( bittern )
No. Jenis Bakteri Gram Bentuk Ukuran (µm) 1 BB1 Negatif Coccus 1,4 2 BB2 Positif Bacil 1,5 3 BB3 Positif Bacil 2,6
Salam Junaedi A, Triajie H, Chandra Puspita H, Hamidah Laili N : Biogas Starter Aplikasi Indigenous Air  Limbah  Cucian  Garam  Pada  Substrat  Kotoran  Sapi  Dan  Tongkol  Jagung Varietas Madura
4 BB4 Negatif Coccus 3,5 5 BB5 Positif Bacil 1,6 6 BB6 Positif Coccus 2,3 7 BB7 Negatif Coccus 4,2 8 BB8 Positif Bacil 2,1 9 BB9 Negatif Bacil 1,6 Skrining bakteri indigenous air limbah cucian garam
Sebelum dilakukan pengujian pengaruh pemberian biogas starter terhadap substrat kotoran sapi  dan  tongkol  jagung,  dilakukan  kegiatan  skrining  terhadap  kemampuan  pelarutan bahan  organik  menggunakan  media  CMC  Agar  ( Carboxy  Methyl  Cellulose ).  Skrining bakteri  selulolitik  dilakukan  dengan  cara  menuangkan  congo  red  0,1%  ke  dalam  cawan petri  yang  berisi  seluruh  koloni  bakeri indigenous dari  air  limbah  cucian  garam  ( bittern ), kemudian didiamkan selama 10 menit dan dibilas dengan menggunakan NaCl 1 M. Isolat bernilai positif bila mampu mendegradasi selulosa yang ditunjukkan dengan terbentuknya zona  bening  di  sekeliling  koloni  bakteri.  Menurut  Anand et  al. (2009), congo  red akan berikan  secara  nonkovalen  dengan  polisakarida  yang  memiliki  ikata  beta-1,4  glikosida, dalam  hal  ini  polisakarida  yang  terkandung  dalam  media  CMC  Agar.  Produk  degradasi tersebut  berupa  gula  sederhana  monosakarida  dan  tidak  terjadi  ikatan  kompleks  dengan congo  red .  Sedangkan  warna  merah  menunjukkan  sisa  selulosa  yang  tidak  terdegradasi sehingga  terjadi  pembentukan  selulosa  congo  red.  Zona  bening  yang  terbentuk  dapat dilihat  dengan  cara  melalkukan  pencucian  menggunakan  NaCl  1  M.  Larutan Congo  red merupakan  garam  natrium  dari  benzidinediazo-bis-1-naphtylamine-4  asam  sulfonan (C 32 H 22 N 6 Na 2 O 6 S 2 )  sehingga  pewarna  ini  akan  larut  dan  tercuci  oleh  NaCl.  Dengan demikian,  zona  bening  yang  terbentuk  akan  tampak  jelas.  Zona  bening  yang  terbentuk kemudian  diukur,  selanjutnya  dilakuan  perhitungan  nilai  indeks  selulolitik  (IS)  dengan membandingkan nilai diameter zona bening dan nilai diameter koloni bakteri (Shajahan et al. , 2017). Hasil skrining disajikan pada Gambar 1 dan Tabel 3.
Gambar 1 . Diameter zona bening pada jenis bakteri 2 (foto kiri: tampak) dan jenis koloni bakteri 9 (foto kanan: tidak tampak)
Tabel 3 . Hasil pengukuran zona bening bakteri indigenous dari air limbah cucian garam ( bittern ) (1 ose bakteri diinokulasikan pada media CMC Agar)
Jenis bakteri Ulangan Diameter zona bening Diameter bakteri Indeks selulolitik Bakteri jenis 1 1 1,7 0,9 0,88 2 1,9 0,7 1,71 3 1,8 0,8 1,25 Kontrol 1,8 1,1 0,63 Bakteri jenis 2 1 2,1 1,2 0,75 2 1,8 1,2 0,5 3 2 1,1 0,81 Kontrol 1,8 1,3 0,38
Salam Junaedi A, Triajie H, Chandra Puspita H, Hamidah Laili N : Biogas Starter Aplikasi Indigenous Air  Limbah  Cucian  Garam  Pada  Substrat  Kotoran  Sapi  Dan  Tongkol  Jagung Varietas Madura
Bakteri jenis 3 1 1,8 1,1 0,63 2 1,7 1,1 0,54 3 1,5 0,5 2 Kontrol - - - Bakteri jenis 4 1 - 0,3 0 2 - 0,2 0 3 - 0,3 0 Kontrol 1,8 0,9 1 Bakteri jenis 5 1 1,6 0,6 1,66 2 0,8 0,3 1,66 3 0,7 0,5 0,4 Kontrol 1,9 1,2 0,58 Bakteri jenis 6 1 1,6 1,3 0,23 2 1,9 1,3 0,46 3 2,1 1,3 0,61 Kontrol 1,6 1 0,6 Bakteri jenis 7 1 2,2 1 1,2 2 2,3 1 1,3 3 - - - Kontrol 1,9 1,3 0,46 Bakteri jenis 8 1 2,8 1,3 1,15 2 2,2 1,4 0,57 3 2 0,9 1,22 Kontrol 2,1 0,3 6 Bakteri jenis 9 1 - 0,7 0 2 - 0,7 0 3 - 0,5 0 Kontrol 2,2 1,7 0,29
Berdasarkan  Tabel  3  dapat  diketahui  bahwa  masing-masing  bakteri indigenous dari  air limbah cucian garam ( bittern ) mempunyai indeks selulolitik yang berbeda. Skrining  yang dilakukan menggunakan metode inokulasi bakteri indigenous dari air limbah cucian garam ( bittern ) secara langsung pada media CMC Agar sehingga diketahui bahwa koloni bakteri indigenous jenis  1  merupakan  koloni  bakteri  yang  potensial  dalam  melakukan  aktivitas selulolitik  dibandingkan  dengan  jenis  koloni  bakteri indigenous yang  lainnya.  Adapun koloni  bakteri indigenous jenis  4  dan  9  tidak  mampu  menghasilkan  aktivitas  selulotik. Besarnya  zona  bening  di  sekitar  koloni  pada  media  padat  dengan  kemampuan  organisme tersebut dalam mendegradasi selulosa kristalin pada media cair berbeda disebabkan karena perbedaan  kecepatan  pertumbuah  setiap  isolate  pada  media  padat  dan  cair.  Selain  itu, setiap  bakteri  selulolitik  menghasilkan  kompleks  enzim  selulase  yang  berbeda-beda tergantung dari gen yang dimiliki dan sumber karbon yang digunakan (Meryandini, 2009).

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dan pembahasan maka dapat diperoleh simpulan bahwa :
1. Terdapat  9  bakteri  indigenous  yang  berhasil  diisolasi,  dikarakterisasi,  dan dipurifikasi pada media pertumbuhan Nutrient Agar (NA).
2. 2.  Terdapat  7  bakteri  indigenous  yang  berhasil  diketahui  kemampuan  aktivitas selulolitiknya.
3. 3.  Pemberian  biogas  starter  dengan  kombinasi  perbandingan  substrat  kotoran  sapi dan tongkol  jagung varietas Madura serta lama  waktu  fermentasi terhadap produksi biogas  berpengaruh  terhadap  produksi  biogas  dengan  persentase  gas  metana  (CH4) yang dihasilkan di akhir proses fermentasi berkisar antara 50-65%.

## DAFTAR PUSTAKA
Amzeri,  A.  2018.  Tinjauan  perkembangan  pertanian  jagung  di  Madura  dan  alternatif pengolahan menjadi biomaterial. Jurnal Ilmiah Rekayasa, 11 (1): 74-86.
Antriana,  N.  2014.  Isolasi  bakteri  asal  saluran  pencernaan  rayap  pekerja  ( Macrotermes spp.), Saintifika , 16 (1): 18-28.
Bharathiraja,  B.,  Sudharsana,  T.,  Jayamuthunagai,  J., Praveenkumar,  R.,  Chozhavendhan, S.,  Iyyappan,  J.  2018.  Biogas  production-A  review  on  composition,  fuel  properties, feed stock and principle of anaerobic digestion. Renewable and Sustainable Energy Reviews , 90: 570-582.
Dewi, G. S. dan Purnomoadi, A. 2014. Produksi dan laju produksi gas methan pada biogas dari  feses  sapi  Madura  Jantan  yang  mendapatkan  pakan  untuk  produksi  yang berbeda. Animal Agriculture Journal , 3 (4): 538-543.
Dewi,  R.  P.  dan  Kholik.  M.  2018.  Kajian  potensi  pemanfaatan  biogas  sebagai  salah  satu sumber  energi  alternatif  di  wilayah  Magelang. Journal  of  Mechanil  Engineering 2 (1): 08-14.
Direktorat  Jenderal  Peternakan  dan  Kesehatan  Hewan  Kementerian  Pertanian.  2019. Statistik  Peternakan  dan  Kesehatan  Hewan,  Livestock  and  Animal  Health  Statistics 2019.  Jakarta:  Direktorat  Jenderal  Peternakan  dan  Kesehatan  Hewan  Kementerian Pertanianan RI.
Hadi, W. P. dan Ahied, M. 2017. Kajian ilmiah produksi garam di Madura sebagai sumber belajar kimia. Jurnal Pembelajaran Kimia , 2 (2): 1-8.
Insani,  M.  D.  2018.  Degradasi  Anaerob  Sampah  Organik  dengan  Bioaktivator  Effective Microorganism-5  (EM-5)  untuk  Menghasilkan  Biogas. Tesis .  Pendidikan  Biologi, Pascasarjana Universitas Negeri Malang, Malang.
Junaedi,  A.S.  2017.  Isolasi  dan  Identifikasi  Bakteri  Endofit  Diazotrof  Pelarut  Fosfat Penghasil  Hormon  Pertumbuhan  Indole  Acetic  Acid  (IAA)  dari  Akar  Tanaman Tomat  ( Lycopersicon  esculentum Miller  var.  tymoti).  Tesis.  Universitas  Airlangga, Surabaya.
Oktavia, I. dan Firmansya, A. 2016. Pemanfaatan teknologi biogas sebagai sumber bahan bakar alternatif di sekitar wilayah operasional PT. Pertamina EP asset 2 Prabumulih Field. Jurnal Resolusi Konflik, CSR, dan pemberdayaan , 1 (1): 32-36. Palallo, F., Ardi, M., dan Yusuf, G. 2018. The potency of livestock waste into renewable energy (biogas) in palipu district tana toraja regency. Journal of Physics: Conference Series 1028 (012010).
Santosa,  I.  2014.  Pembuatan  garam  menggunakan  kolam  kedap  air  berukuran  sama. Spektrum Industri , 12 (1): 1-112.
Shajahan, S., Moorthy I.G., Sivakumar, N., dan Selvakumar, G. 2017. Statistical modeling and  optimization  of  cellulose  production  by  Bacillus  licheniformis  NCIM  5556 isolate from the hot spring, Maharashtra, India. Journal of King Saud University , 29: 302-310.
Ula,  T.  dan  Affandi.  2019.  Dampak  konsumsi  energi  terbarukan  terhadap  pertumbuhan ekonomi: studi di Asia Tenggara. Journal of Economics Science , 5 (2): 26-34 Zahidah, D. dan Shovitri, M. 2013. Isolasi, karakterisasi, dan potensi bakteri aerob sebagai pendegradasi limbah organik. Jurnal Sains dan Seni Pomits , 2 (1): 2337-3520. Accepted Date Revised Date Decided Date Accepted to Publish 23 Desember 2023 03 Januari 2024 18 Februari 2024 Ya