## UJI STABILITAS SEDIAAN AMPISILLIN SULBAKTAM SETELAH REKONSTITUSI
I Gede Edy Sagitha 1* , Suharjono 2 , Yulistiani 2 , Isnaeni 3
1 Prodi Farmasi Klinis dan Komunitas, Institut Teknologi dan Kesehatan Bali, Denpasar, Indonesia
2 Departemen  Farmasi  Klinik,  Fakultas  Farmasi,  Universitas  Airlangga,  Surabaya, Indonesia
3 Departemen  Kimia  Farmasi,  Fakultas  Farmasi,  Universitas  Airlangga,  Surabaya, Indonesia *Penulis Korespondensi: edysagitha8@gmail.com

## ABSTRAK
Penggunaan  berulang  pada  sediaan  ampisilin  sulbaktam  setelah  rekonstitusi,  sehingga  dalam penyimpanan  terdapat  berbagai  macam  faktor  yang  dapat  mempengaruhi  kestabilannya  antara lain jenis pelarut yang digunakan, suhu penyimpanan dan lama penyimpanan. Tujuan penelitian adalah  menganalisis  stabilitas  kimia  sediaan  ampisilin  sulbaktam  pada  penggunaan  berulang dengan  parameter  pembeda  pelarut  dan  suhu  penyimpanan.  Produk  sampel  ditimbang  dan direkonstitusi  menggunakan  pelarut  Water  for  Injection  (WFI)  and  Normal  Saline  (NS), diencerkan  ad  20  ppm  dan  dimasukkan  kedalam  vial  steril.  Kemudian  disimpan  dalam  suhu kamar  (25-30°C)  dan  suhu  refrigerator  (4-8°C).  Penyimpanan  dilakukan  selama  24  jam  yang terbagi  dalam  4  time  series  yaitu  jam  ke-0,  1,  4  dan  24.  Ditiap  time  series  dilakukan  uji mikrobiologi  dan  diinkubasi  selama  18  jam  diamati  zona  hambatnya  dan  diukur  diameternya menggunakan  jangka  sorong.  Hasil  penelitian  adalah  pada  jam  ke-0  menunjukkan  adanya perbedaan  aktifitas pada  pelarut  yang  berbeda. Terlihat  bahwa  sampel  yang  dilarutkan  dengan pelarut  NS  memiliki  zona  hambat  yang  lebih  besar  dibandingkan  dengan  yang  dilarutkan menggunakan WFI. Hal ini terjadi karena adanya kemungkinan terjadi primary salt effect yaitu dengan  adanya  penambahan  elektrolit  (garam)  atau  variasi  dari  ionic  strength    dapat mempengaruhi  koefisien  aktifitasnya  sehingga  mempengaruhi  laju  reaksinya.  Dari  analisis statistika  pada  jam  ke-1  dan  ke  -4,  suhu  penyimpanan  yang  memberikan  pengaruh  bermakna, penyimpanan  dalam  refrigerator  menunjukkan  hasil  yang  lebih  baik  dibandingkan  dengan penyimpanan dalam suhu kamar ( p value:0,000 dan 0,023) . Pada jam ke-24 suhu dan pelarut sudah tidak memberikan pengaruh yang bermakna pada kestabilan sampel ampisilin sulbaktam (p<0,05).  Sehingga  didapat  kesimpulan  pelarut  NS  memberikan  hasil  yang  lebih  baik dibandingkan pelarut WFI. Sampel lebih stabil jika disimpan dalam refrigerator. Setelah 4 jam berdasarkan  penelitian  diatas  sampel  tidak  lagi  memenuhi  persyaratan  Farmakope  Indonesia edisi V.
Kata Kunci: Ampisilin sulbaktam, Rekonstitusi, Penyimpanan, Stabilitas

## ABSTRACT
Repeated use of antibiotic ampicillin sulbactam after reconstitution, therefore in storage various many factor can affect it stability such as type of solvent used, storage temperature and storage time. Objective of study is to analyze the chemical stability product of ampicillin sulbactam in repeated use with the parameters of the solvent and storage temperature. Sample products were weighed  and  reconstituted  using  Water  for  Injection  (WFI)  and  Normal  Saline  (NS)  solvents, diluted ad 20 ppm and put into sterile vials. Then stored at room temperature (25-30 ° C) and refrigerator  temperature  (4-8  °  C).  Storage  is  carried  out  for  24  hours  which  is  divided  into
4 -time series, namely 0, 1, 4 and 24 hours. Each time series is microbiological tested and after 18  hours  of  incubation  the  inhibition  zone  is  observed  and  its  diameter  is  measured  using calipers.  The  result  of  the  study  at  the  0th  hour  showed  a  significant  difference  in  different solvents.  Samples  dissolved  with  NS  solvents  have  a  greater  inhibition  zone  than  those dissolved  using  WFI.  This  happens  because  there  is  a  primary  salt  effect  that  occurs  with  the influence of electrolytes (salt) or variations in the strength of ions can affect the coefficient of activity that affects the reaction rate. From the statistical analysis at the 1st and 4th hours, the storage  temperature  provides  significant  results,  storage  in  the  refrigerator  produces  better results  compared  to  storage  at  room  temperature  ( p value:0,000  dan  0,023).  At  24  hours  the temperature  and  solvent  did  not  give  a  significant  result  on  the  stability  of  the  sulbactam ampicillin  sample  ( p <0,05).  The  conclusion  is  NS  solvents  give  better  results  than  WFI solvents. Samples are more stable if stored in a refrigerator. After 4 hours based on the above study, the sample no longer meets the requirements of Indonesian Pharmacopoeia 5th edition.
Keywords: Ampicillin Sulbactam; reconstitution; storage; stability

## PENDAHULUAN
Stabilitas merupakan keadaan suatu  obat  tetap  berada  pada  batas spesifikasi  yang  telah  ditentukan,  diuji pada penyimpanan dalam periode tertentu  dan  dapat  ditentukan  umur penggunaannya ( shelf life ), sifat kareteristik  fisika  kimia  obat  tersebut tetap seperti saat diproduksi. Sedangkan waktu  kadaluarsa  didefinisikan  sebagai satuan  waktu  suatu  produk  yang  dapat dipertahankan  atau  tetap  memiliki  sifat dan karakteristik yang sama dengan saat pembuatannya  (dalam  batas  waktu tertentu)  selama  periode  penyimpanan hingga  digunakan.  Tanggal  kaduluarsa dapat  dibedakan  menjadi  dua  yaitu expiration  date (ED)  atau best  before date dan beyond  use  date (BUD).  ED adalah tanggal yang ditetapkan berdasarkan  waktu  kadaluarsa  yang dihitung sejak produk dibuat
( manufactured  date ),  sedangkan  BUD sejak wadah dibuka (USP, 2016). Salah satu  sediaan  steril  parenteral  yang sering  digunakan  di  rumah  sakit  adalah injeksi  antibiotika.    Antibiotika  adalah senyawa  kimia  yang  dihasilkan  oleh mikroorganisme  (khususnya  dihasilkan oleh  fungi)  atau  dihasilkan  secara sintetik  yang  dapat  membunuh  atau menghambat perkembangan bakteri dan organisme  lain.  Secara  garis  besar antibiotika  dibagi  menjadi  dua  jenis yaitu yang membunuh kuman (bakterisidal) dan yang hanya menghambat pertumbuhan kuman
(bakteriostatik) (Utami, 2011).
Injeksi ampisilin sulbaktam adalah  salah  satu  dari  sekian  banyak sediaan  parenteral  antibiotik.  Ampisilin sulbaktam  dipilih  untuk  penelitian  ini karena ampisilin sulbaktam lazim digunakan  kembali  ( re-use )  sisanya
terutama  untuk  pasien  di  ruang  NICU yang menggunakan dosis kecil sedangkan  harga  relatif  mahal  sehingga saat  penyimpanan  rentan  terjadinya ketidakstabilan  pada  sediaan  yang mungkin akan berpengaruh pada potensinya  (Fitriani,  2011).  Ampisilin sulbaktam merupakan kombinasi antibiotik  ampisilin  dan  sulbaktam, ampisilin merupakan golongan penisilin sedangkan sulbaktam merupakan golongan  penghambat  beta  laktamase. Penggunaannya  untuk  infeksi  tulang dan persendian, infeksi intra abdominal, infeksi  ginekologi,  infeksi  saluran pernafasan, infeksi kulit, infeksi gonorea, meningitis dan sebagai antibiotika profilaksis preoperatif (McEvoy,  2011). Ampisilin  sulbaktam berbentuk  serbuk  berwarna  putih  yang dikemas dalam vial. Ampisilin sulbaktam dikemas dalam bentuk serbuk  karena  tidak  stabil  dalam  air. Kerusakan  penisilin  biasanya  terjadi karena  hidrolisis  dan  proses  ini  sangat dipengaruhi  oleh  pH  larutan.  Dalam suasan  basa  ion  OHˉ  atau  air menyebabkan  serangan  nukleofil  pada gugus  karbonil  cincin  β-  lactam, terbentuk  asam  penisiloat  yang  tidak aktif  dan  relatif  stabil  dalam  suasana basa  atau  netral  (Siswandono,  2016).
Sediaan  ampisilin  sulbaktam  juga  tidak mengandung pengawet. Sediaan ampisilin sulbaktam biasanya dilarutkan dalam  normal  saline.  Dosis  0-1,5  gram dilarutkan dalam 50 ml sedangkan lebih dari  1,5  gram  dilarutkan  dalam  100  ml. Sediaan  ampisilin  sulbaktam  dapat diberikan melalui intravena (IV) maupun  intramuskular  (IM).  Untuk  IV, dosis  dapat  diberikan  dengan  injeksi intravena  lambat  selama  10-15  menit atau dapat diberikan dalam larutan yang lebih besar yaitu 50-100 ml pelarut yang sesuai  sebagai  infusi  IV  selama  15-30 menit (McAuley, 2017), hal ini dikarenakan  pH  ampisilin  sulbaktam yang  basa  yaitu  8-10  (Cobaugh et  al .,
2021) Sehingga  cara  dan  waktu penyuntikan ampisilin sulbaktam berkaitan  dengan  dosis  dan  besar volume pelarutnya.
Sterile  water  for  injection (WFI), normal  saline ,  5%  dextrosa,  ringer laktat,  5%  dextrosa  dalam  0,45%  salin adalah  pelarut  yang  stabil  untuk ampisilin  sulbaktam  dalam  periode waktu  tertentu.  Dalam normal  saline atau  WFI    konsentrasi  maksimum  45 mg/ml stabil dalam 8 jam pada 25ºC, 48 jam  pada  4  ºC  dan  konsentrasi maksimum  30  mg/ml  stabil  dalam  72 jam  pada  4  ºC.  Dalam  dextrosa  5%,
konsentrasi  maksimum  yang  dapat digunakan  adalah  30  mg/ml  dan  stabil dalam  2  jam  pada  25ºC,  4  jam  pada  4 ºC.  Dalam  ringer  laktat  konsentrasi maksimum 45 mg/ml stabil dalam 8 jam pada 25ºC, 24 jam pada 4 ºC (McAuley, 2017).  Kedua  pelarut  ini  dipilih  karena dibandingkan  pelarut  lainnya  memiliki stabilitas  dan  kompatibilitas  yang  lebih baik  setelah  rekonstitusi  (Cobaugh et al ., 2021).
Extended  stability dari  ampisilin sulbaktam  dalam  berbagai  wadah, konsentrasi, pelarut dan suhu penyimpanan  sangat  beragam,  antara lain  dalam  wadah polyvinyl  chloride (PVC)  pada  konsentrasi  20  mg/ml dalam  pelarut  NS  ampisilin  sulbaktam stabil  pada  suhu  ruang  selama  32  jam, sedangkan  pada  suhu  refrigerator  stabil selama  62  jam.  Pada  wadah syringe
plastik pada konsentrasi 8,3; 16,7; 33,33 mg/ml  pada  pelarut  NS  ampisillin sulbaktam  stabil  pada  suhu  ruang selama 2 jam, dan pada suhu refrigerator  selama  4  jam.  Sedangkan dalam  wadah  kaca  pada  konsentrasi  30 mg/ml ampisilin sulbaktam stabil dalam suhu ruang selama 8 jam dan pada suhu refrigator  selama  48  jam  (Bing  and Nowobilski-Vasilios, 2017). Pada penelitian  ini  sampel  akan  disimpan
pada  vial  kaca  dengan  konsentrasi  20 ppm  dan  disimpan  dalam  suhu  ruang dan  refrigerator  dalam  24  jam  yang terbagi menjadi 4 time series . Penggunaan  ampisilin  sulbaktam  untuk neonatus  yang  memerlukan  dosis  kecil, harganya yang relatif mahal dan sediaan hasil  rekonstitusi  yang  tidak  stabil dalam  waktu  lama  pada  suhu  kamar memunculkan permasalahan akan stabilitas dan potensi obat yang mungkin turun.

## METODE PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Tempat  penelitian  dilakukan  di Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas Farmasi  Universitas  Airlangga  dan penelitian dilakukan pada bulan Agustus-September 2018.

## Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  studi eksperimental dengan desain berdasarkan  time  series  yaitu  uji aktivitas  antimikroba sediaan parenteral ampisillin sulbactam.

## Sampel Penelitian
Sampel penelitian yang digunakan adalah  sediaan  ampisilin  sulbaktam  1,5 g  yang  telah  direkonstitusi  dengan  WFI
dan  NS  lalu  disimpan  pada  suhu  kamar (25ºC)  dan  refrigerator  (4ºC).  Sampel memenuhi  5  titik  time  series.  Sampel dihitung  menggunakan  rumus  Federer, replikasi penelitian diperkirakan dengan rumus sebagai berikut:
Keterangan: n : banyaknya replikasi tiap kelompok yang dicari k : banyaknya kelompok perlakuan
Banyaknya  kelompok  perlakuan yaitu  16  kelompok,  dengan  masing- masing  kelompok  terdapat  total  5 subkelompok.  Total  kelompok  yang digunakan
menggunakan total subkelompok yaitu 20. Maka, berdasarkan hasil perhitungan
didapatkan  1,18  replikasi,  dibulatkan menjadi  1  tiap  subkelompok.  Dengan kriteria drop  out 10%,  maka  banyak replikasi yang digunakan menjadi 2 tiap subkelompok.  Replikasi adalah repetisi (pengulangan) independen pada eksperimen  dasar.  Replikasi  dalam suatu penelitian diperlukan untuk menjamin terhadap hasil penelitian yang aberrant, mengestimasi variansi experimental  error, dan  meningkatkan
presisi pada estimasi rata-rata treatment. Variansi experimental error tidak  dapat diestimasi  dengan  hanya  satu  replikasi, minimal diperlukan 3 kali replikasi.

## Prosedur Pengambilan Sampel
Pengambilan  sampel  dan  uji mikrobiologi  mengacu  pada  (Arret  and Kirshbaum,  1971)  yang  dimodifikasi.
Pertama sampel ditimbang menggunakan timbangan analitik sebanyak  100  mg  dan  dibagi  menjadi  2 grup  yaitu  grup  yang dilarutkan dengan pelarut  WFI  dan  grup  yang  dilarutkan dengan pelarut NS kemudian diencerkan  menjadi  20  ppm  dan disimpan pada vial steril.

## Tahapan Uji Mikrobilogi Antibiotika
Uji  potensi  senyawa  antibiotik ampisilin  sulbktam  dilakukan  dengan metode  difusi  disk.  Adapun  tahapan kerja uji potensi dengan metode difusi disk sebagai berikut:
1. Penyiapan Alat dan Bahan
a. Alat-alat:  Petridisk, pinset,  pipet volume  steril.  Seluruh  alat  yang akan  digunakan  dicuci  bersih, dikeringkan, dan dibungkus dengan  kertas  lalu  disterilisasi dalam autoclave selama  15 menit  pada  suhu  sebesar  121°C
(n-1) (k-1) = 15 (n-1) (16-1) = 15 n    =  1
dengan  mengatur  tekanan  udara sebesar 1,5 atm. Sterilisasi untuk LAF  dengan  cara  menyalakan sinar  UV  selama  15  menit kemudian di swab dengan alkohol
b. Kultur murni bakteri uji Staphylococcus  aureus ATCC
25923  dalam  media Mueller Hinton  Agar (MHA)  umur  24
jam
c. Disk blank
d. Sampel berupa antibiotik ampisillin sulbaktam 20 ppm
e. Media Mueller  Hinton  Agar
(MHA)
f. WFI  dan  NS  sebagai  pelarut senyawa uji
g. Alkohol 70%
2. Pengujian Potensi Antibiotik secara difusi disk
a. Setelah semua sampel siap untuk diuji,  sampe  dibagi  kembali menjadi 2 grup.yaitu grup disimpan  pada  suhu  kamar  dan grup disimpan pada suhu refrigerator yang masing masing terdiri  dari  2  sampel  (sampel yang  dilarutkan  dengan  pelarut WFI dan sampel yang dilarutkan dengan pelarut NS)
b. Sampel  diteteskan  sebanyak  1 tetes  pada disk  blank pada  jam ke-0, 1, 4 dan 24
c. Secara  Aseptik,  dipipet  10  µl menggunakan  mikropipet  dan teteskan  pada paper  disk yang telah  disusun  sebelumnya  di media MHA
d. Inkubasi  selama  16-18  jam. Amati  zona  keruh  dan  jernih  di tiap petri
e. Amati, foto pertumbuhannya
f. dan  ukur  diameter  zona  jernih yang  terbentuk  di  sekitar  paper disk dengan jangka sorong
g. Dimasukkan ke dalam tabel data

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil pengukuran zona  hambat dan prosentase  penurunan  daya  hambat untuk pengujian potensi antibiotik dapat dilihat pada Tabel 1 dan Tabel 2 secara berurutan.
Tabel 1. Rata – rata dan Standar Deviasi Zona Hambat  (mm)
Pelarut Suhu Penyimpanan Lama Penyimpanan (Jam) 0 1 4 24
WFI Suhu Kamar
Rata- Rata 16.55 17.50 15.28 15.58 St Dev 0.21 2.26 0.88 0.53 Suhu Refrigerator Rata- Rata 17.18 17.20 16.83 15.85 St Dev 0.39 0.85 0.46 0.07
NS
Suhu Kamar Rata- Rata 19.98 16.00 14.70 15.48 St Dev 1.10 0.07 0.42 0.04 Suhu Refrigerator Rata- Rata 20.83 16.70 15.95 15.93 St Dev 1.03 0.07 0.21 0.04
Tabel 2. Prosentase Penurunan Daya Hambat (%)
Pelarut Suhu Lama Penyimpanan (Jam) 0 1 4 24 WFI Suhu Kamar 100.00 105.74 92.30 94.11 Suhu Refrigerator 100.00 100.12 97.93 92.26 NS Suhu Kamar 100.00 80.08 73.57 77.45 Suhu Refrigerator 100.00 80.17 76.57 76.45 Analisis Hasil Penelitian Uji Stabilitas Sediaan Ampisililin Sulbaktam A.  Analisa  Sampel  Terhadap  Pelarut dan Suhu Penyimpanan yang

## Berbeda
Dari data hasil Tabel 1 agar dapat dibandingkan dengan lebih mudah maka
dibuat grafik zona hambat versus waktu dengan  pelarut  dan  suhu  penyimpanan yang berbeda dapat dilihat pada Gambar 1,  dan  Tabel  2  dapat  dibuat  grafik persentase  penurunan  konsentrasi  dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar  1. Grafik  Zona  Hambat  Versus  Waktu  Dengan  Pelarut  Dan  Suhu Penyimpanan yang Berbeda.
Gambar  2. Grafik  Persentase  Penurunan  Zona  Hambat  Versus  Waktu  Dengan Pelarut dan Suhu Penyimpanan yang Berbeda.
Dari  grafik  zona  hambat  (Gambar  1) dapat  dilihat  bahwa  pada  jam  ke  0
(belum terdapat penyimpanan) sampel ampisilin sulbaktam sudah menunjukkan adanya perbedaan aktifitas  pada  pelarut  yang  berbeda. Terlihat bahwa sampel yang
dilarutkan dengan pelarut NS
memiliki  zona  hambat  yang  lebih besar  dibandingkan  dengan  yang dilarutkan menggunakan WFI
sedangkan pada jam 1,4  dan 24 besar
zona  hambat  antar  pelarut  tidak  jauh berbeda sehingga pada grafik persentase  penurunan  zona  hambat (gambar  2)  terlihat  perbedaaan  yang sangat  mencolok  karena  zona  hambat jam ke-0  yang dianggap 100% terlalu jauh  berbeda.  Hal  ini  terjadi  karena adanya  kemungkinan  terjadi primary salt  effect yaitu  dengan  adanya penambahan  elektrolit  (garam)  atau variasi  dari ionic  strength dapat mempengaruhi  koefisien  aktifitasnya
12.00 13.00 14.00 15.00 16.00 17.00 18.00 19.00 20.00 21.00 22.00 0 1 4 24 ZO N A H A M B A T (m m ) JAM KE- WFI-SUHU KAMAR WFI-SUHU REFRIG NS-SUHU KAMAR NS-SUHU REFRIG 70.00 80.00 90.00 100.00 110.00 0 1 4 24 PRO SE N TA SE PEN U R U N AN (%) JAM KE- WFI-SUHU KAMAR WFI-SUHU REFRIG NS-SUHU KAMAR NS-SUHU REFRIG
sehingga mempengaruhi laju reaksinya (Bakshi, 2018). Penambahan ampisilin sulbaktam pada  cairan  elektrolit  mempercepat laju  penguraian  ampisilin  sulbaktm menjadi bentuk yang tidak aktif.

## B.  Analisa  Penurunan  Persentase

## Zona Hambat
Berdasarkan Tabel 2 dapat
disimpulkan  pada  jam  ke  4  sampel produk ampisilin sulbaktam yang menggunakan  pelarut  NS  tidak  lagi memenuhi  persyaratan  FI  edisi  V sehingga tidak layak untuk diberikan ke pasien.

## C.  Analisa  Zona  Hambat  Dengan

## Metode Statistika
Berdasarkan  Tabel  1  dianalisa secara  statistika  menggunakan  tes Two  Way  Anova. Tes  ini  digunakan karena  data  memiliki  1  variabel tergantung  (zona  hambat)  dan  lebih dari  1  variabel  bebas  (pelarut  dan suhu  penyimpanan).  Mengikuti  tes normalitas  sebelumnya  tes  ini  juga dibagi  berdasarkan  waktu  yaitu  jam ke-0,  1,  4  dan  24.    Tes  Two  Way Anova  menghasilkan  tabel  efek  antar subjek  (Tabel  3).  Signifikasi  <0.05 dapat  diinterprestasikan  bahwa terjadi
pengaruh yang signifikan atau bermakna,  dan  dari  masing-masing variabel  yang  memberikan  pengaruh yang  bermakna  di  tiap  waktu  maka dapat  ditentukan  grup  yang  terbaik melalui  hasil mean (rata-rata)  yang terbesar  yang  dapat  dilihat  dalam Tabel 4.
Tabel 3. Uji Efek Antar Subjek Jam Ke- Signifikasi Suhu Pelarut 0 0.253 0.003* 1 0.000* 0.417 4 0.023* 0.137 24 0.129 0.951 *signifikan Tabel  4. Grup  Terbaik  Tiap  Waktu dan Variabel yang Signifikan Jam Ke- Variabel yang Grup Mean Signifikan 0 Pelarut WFI 16.86 NS 20.40 1 Suhu Kamar 16.50 Refrigerator 16.70 4 Suhu Kamar 14.98 Refrigerator 16.38 24 - - Berdasarkan  data  Tabel  4  dapat disimpulkan  pada  jam  ke-0  pelarut yang memberikan pengaruh bermakna,  sampel  yang  dilarutkan menggunakan  NS  memberikan  zona hambat  lebih  baik  dibandingkan dengan  pelarut  WFI  sedangkan  untuk
suhu  menunjukkan  pengaruh  yang tidak  signifikan  karena  jam  ke-0
sampel belum dilakukan
penyimpanan. Pada jam ke-1 dan ke -
4, suhu penyimpanan yang
memberikan pengaruh bermakna, penyimpanan dalam refrigerator menunjukkan  hasil  yang  lebih  baik dibandingkan  dengan  penyimpanan dalam  suhu  kamar  sedangkan  pelarut sudah tidak lagi menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna.
Hasil ini sesuai karena stabilitas larutan  injeksi  ampisilin  sulbaktam setelah  direkonstitusi  dengan  NaCl 0,9%  oleh  staf  perawat  di  ruangan NICU RSU Haji Surabaya mengalami penurunan dan bisa digunakan hingga 18  jam  (Avi,  2018). Pada  jam  ke-24 suhu penyimpanan dan pelarut masing masing  tidak  memberikan  pengaruh yang bermakna pada kestabilan sampel ampisilin sulbaktam. Stabilitas obat dapat dicerminkan oleh
expiration  date  yaitu  waktu  yang tertera pada kemasan yang menunjukkan batas waktu diperbolehkannya obat tersebut dikonsumsi  karena  diharapan  masih memenuhi spesifikasi
yang ditetapkan.  Sedangkan  waktu  simpan ( shelf-life ) adalah periode penggunaan
dan penyimpanan yaitu waktu dimana suatu produk tetap memenuhi spesifikasinya  jika  disimpan  dalam wadahnya  sesuai  dengan  kondisi penjualan  di  pasaran  (Carstensen  and Rhodes,  2000).  Akan  tetapi  dalam penelitian  ini  lebih  fokus  pada  BUD ( Beyond  use  date )  yaitu  tanggal  yang ditetapkan  pada  produk  steril  yang telah  dibuka  dimana  kondisi  produk tersebut  masih  dalam  rentang  stabil dan  dapat  diberikan  kepada  pasien. BUD  dipengaruhi  oleh  stabilitas masing-masing  produk  steril  tersebut. Terdapat  lima  macam  stabilitas  yang umum diketahui yaitu stabilitas kimia, fisika,  mikrobiologi,  terapetik,  dan toksikologi.  Stabilitas  mikrobiologi harus  mempertahankan  sterilitas  atau resistensi terhadap pertumbuhan mikroba  yang  dapat  dipertahankan hingga batas persyaratan waktu tertentu.  Bahan-bahan  antimikroba yang  ada  di  dalamnya  tetap  efektif dalam  batas-batas  yang  ditentukan. Penurunan  stabilitas  akibat  adanya degradasi,  pada  antibiotik  β-laktam yang  mempunyai  rantai  siklik  amida atau laktam dapat mengalami
hidrolisis sehingga mengalami
pembukaan  cincin  cepat  (Yoshioka, 2002).
BUD dihasilkan karena terjadinya proses rekonstitusi. Rekonstitusi sediaan parenteral merupakan salah satu pelayanan farmasi klinik yang ada di rumah sakit. Sediaan  parenteral  harus  memenuhi persyaratan  antara  lain  adalah  steril, bebas dari kontaminasi pirogen (endotoxin),  larutan  jernih  dan  bebas dari partikel. Larutan sedapat mungkin dibuat  isotonis  dengan  plasma  darah, stabil secara kimia, fisika, dan mikrobiologi  (USP,  2016).  Salah  satu sediaan parenteral yang banyak digunakan  di  rumah  sakit  adalah antibiotik. Rekonstitusi antibiotik perlu memperhatikan aspek stabilitas, kondisi  apeptis,  dan  kompatibilitas (Kemenkes RI, 2011).
Pengujian  stabilitas  melibatkan berbagai  faktor  yang  mempengaruhi stabilitas produk farmasi. Faktor-faktor yang  berpengaruh  terhadap  stabilitas produk  farmasi  antara  lain  stabilitas bahan aktif, interaksi antara bahan aktif dan  eksipien,  proses  manufaktur,  jenis bentuk sediaan, sistem wadah/penutupan yang digunakan untuk  pengemasan,  cahaya,  panas  dan kondisi  kelembaban  yang  ditemui selama  pengiriman,  penyimpanan  dan penanganan. Selain itu, reaksi
degradasi  seperti  oksidasi,  reduksi, hidrolisis  atau  rasemisasi,  yang  dapat memainkan peran penting dalam stabilitas produk farmasi, juga tergantung pada kondisi seperti konsentrasi  reaktan,  pH,  radiasi,    dan katalis,  serta  bahan  baku  digunakan dan  lamanya  waktu  antara  pembuatan dan  penggunaan  produk  (Bajaj et  al ., 2012).
Setiap  sampel  diuji  mikrobiologi pada  jam  ke  0,  1,  4  dan  24.  Hasil  uji stabilitas  antimikroba  dari  masing- masing  perlakuan  dapat  dilihat  setelah diinkubasi  selama  17-18  jam  di inkubator  dengan  suhu  37°C.  Hasil pengamatan  berupa  diameter  zona hambat,  yaitu  zona  bening  di  sekitar lingkaran. Setelahnya data zona hambat  dikumpulkan  dan  dianalisa. Pertama  dibuat  grafik  antara  zona hambat  versus  waktu  pada  tiap  pelarut dan  suhu  penyimpanan  lalu  dicari persentase penurunan konsentrasi yang didapat  dari  rata  –  rata  zona  hambat dengan asumsi  bahwa jam  ke-0 adalah 100%  kemudian  dibuat  grafik  dan diinterprestasikan.  Berdasarkan  grafik, pada  pelarut  WFI  dan  penyimpanan suhu  kamar  dapat  terlihat  grafik  zona hambat  dan  persentase  terlihat  identik karena  pada  jam  ke-0  zona  hambat
relatif  pada  titik  yang  berdekatan. Dengan pelarut WFI dan pada penyimpanan  suhu  kamar  tidak  ada sampel  yang  berada  dibawah  80%. Pada  penyimpanan  suhu  refrigerator dapat  terlihat  tidak  ada  sampel  dari yang  berada  dibawah  90%  dan  grafik sampel  dan  baku  menunjukkan  slope yang lebih landai hal ini terjadi karena pengaruh  suhu  yang  menyebabkan antibiotik lebih lambat untuk terdegradasi.
Berikutnya dengan menggunakan pelarut  NS  pada  penyimpanan  suhu kamar  dapat  terlihat  grafik  zona hambat  dan  persentase  tidak  terlihat identik  karena  pada  jam  ke-0  zona hambat tidak pada titik yang berdekatan. Hal ini terjadi kemungkinan karena formulasi, kesalahan peneliti atau variable pengganggu  lainnya,  perlu  dilakukan penelitian lebih lanjut dan lebih banyak replikasi.
Sedangkan
dengan menggunakan pelarut NS pada penyimpanan  suhu  refrigerator  tidak terjadi terlalu banyak perbedaan dengan  pelarut  WFI.  Untuk  persentase penurunan  zona  hambat  karena  dalam konteks ini disetarakan dengan persentase penurunan potensi
antibiotika    maka  merujuk  FI  edisi  V
Injeksi  ampisilin  sulbaktam  harus mengandung ampisilin,
C16H19N3O4S, dan sulbaktam, C8H11NO5S,  setara  dengan  tidak kurang dari 90,0% dan tidak lebih dari 115,0%  dari  jumlah  yang  tertera  pada etiket.  Pada  jam  ke  4  sampel  produk ampisilin sulbaktam tidak lagi memenuhi  persyaratan  FI  edisi  V sehingga tidak layak untuk diadministrasikan ke pasien.
Tes normalitas kolmagorov- smirnov  digunakan  untuk  mengetahui data  penelitian  terdistribusi  normal atau  tidak.  Data  penelitian  dibagi berdasarkan  waktu  yaitu  jam  ke0,  1,  4 dan  24  kemudian  masing-masing  dites normalitas.  Dengan  syarat  signifikasi >0,05 maka dapat interprestasikan data berdistribusi  normal,  data  jam  ke-0 sampai  jam  ke-24  menghasilkan  data yang  berdistribusi  tidak  normal.  Akan tetapi berdasarkan pengalaman empiris ahli  statistika  data  yang  banyak sampelnya melebihi 30 (n  > 30) sudah dapat diasumsikan bahwa data berdistribusi  normal  karena  terdolong sampel besar (Cahyono, 2018). Karena data  sudah  tergolong  data  yang berdistribusi normal maka dapat dilanjutkan  menggunakan  tes  Two Way Anova. Tes ini digunakan karena
data  memiliki  1  variabel  tergantung (zona hambat) dan lebih dari 1 variabel bebas (pelarut dan suhu penyimpanan). Mengikuti  tes  normalitas  sebelumnya tes  ini  juga  dibagi  berdasarkan  waktu yaitu  jam  ke-0,  1,  4  dan  24.  Hasilnya dapat  disimpulkan  pada  jam  ke-0 sampel  dan  pelarut  yang  memberikan pengaruh  bermakna,.  Pada  jam  ke-1 seluruh sampel memberikan hasil yang sama  dengan  jam  ke-0.  Pada  jam  ke-4 sampel  dan  suhu  penyimpanan  yang memberikan  pengaruh  bermakna,  pada suhu  penyimpanan  refrigerator.  Pada jam  ke-24  sampel,  suhu  penyimpanan dan  pelarut  memberikan  pengaruh yang  bermakna.  Hasil  yang  tidak konsisten  kemungkinan  disebabkan tidak  dilakukan  dalam  satu  petri sehingga  hasilnya  lebih  bias  atau  ada faktor  lain  yang  tidak  diketahui  ikut memberikan andil pada hasil penelitian. Replikasi diperbanyak sehingga menghasilkan data yang lebih valid.

## KESIMPULAN
Pada  awal  proses  rekonstitusi pemilihan pelarut sangat mempengaruhi kestabilan  sampel  ampisilin  sulbaktam. Pelarut NS memberikan hasil yang lebih baik  dibandingkan  pelarut  WFI.  Dalam
masa  penyimpanan  suhu  memberikan andil yang signifikan akan tetapi setelah 24  jam  suhu  tidak  lagi  memberikan pengaruh.  Ampisilin  subaktam  lebih stabil  jika  disimpan  dalam  refrigerator. Setelah  4  jam  berdasarkan  data  tabel  2 sampel  produk  ampisilin  sulbaktam tidak  lagi  memenuhi  persyaratan  FI edisi  V  sehingga  tidak  layak  untuk diadministrasikan  ke  pasien.  Adanya perbedaan  antara  hasil  penelitian  dan brosur  dari  sampel  ampisilin  sulbaktam akan kestabilannya perlu dilakukan lagi penelitian lebih lanjut seperti menggunakan  metode  lain  contohnya HPLC.

## DAFTAR PUSTAKA
Arret, B., Johnson, D.P., and Kirshbaum,  A.  Outline  of  details for  microbiological  assays  of antibiotics: second revision. Journal of
pharmaceutical  sciences .  1971,
60(11): 1689-1694.
Avi.  2018. Stabilitas  mikrobiologi ampisilin sulbaktam setelah direkonstitusi . Universitas Airlangga. Surabaya. Bajaj,  S.,  Singla,  D.,  and  Sakhuja, N. Pengujian  stabilitas  produk farmasi. Jurnal Ilmu farmasi Terapan. 2012, 2(3): 129-138.
Bakshi,  A.K.  Physical  Chemistry-II (Statistical, Thermodynamics, Chemical Dynamics.
Electrochemistry and Macromolecules, New Delhi: SGTB Khalsa Collage, University of New Delhi. 2018.
Bing,  C.D  and  Nowobilski-Vasilios,  A. Extended  stability  or  parenteral drugs  six  edition .  Maryland:
American  Society  of  Health System Pharmacist. 2017.
Cahyono,  T.  2018. Statistika  Terapan dan Indikator Kesehatan .
Yogyakarta: Deepublish.
Carstensen,  J.T  and  Rhodes,  C.T.  Drug stability  principles  and  practice. Marcel  Dekker.Inc,  New  York, USA. 2000.
Cobaugh, D.,  Lisa, M and  Elizabeth, P.
ASHP injectable drug information . ASHP.
Bethesda:USA. 2021.
Fitriani, V.Y. Studi penggunaan antibiotika  pada  neonatus  di NICU  Dr  Ramelan  Surabaya. J. Trop.  Pharm.  Chem . 2011,  1(2):
158-164.
Kemenkes
RI. 2011. Pedoman pelayanan kefarmasian untuk terapi antibiotik . Jakarta:
Kemenkes RI.
McAuley,  David.  2017.  Unasyn  -
Ampicillin Sulbactam. https://globalrph.com/dilution/una
syn-ampicillin-sulbactam/  diakses tanggal 16 Agustus 2018.
McEvoy,  K.G.  AHFS  Drug  Essentials- Ampicillin  Sulbactame.  Bethesda, Maryland:  American  Society  of Health-System Pharmacists. 2011.
Siswandono,  E. Kimia  Medisinal  1 Edisi  2 .  Airlangga  University Press. 2016. Halaman 133.
USP.  The  United  States  Pharmacopeia 39th  Edition,  Rockville:  United States Pharmacopeial Convention. 2016, Inc Page  2214-2215.
Utami, E. R. Antibiotika, Resistensi dan
Rasional  Terapi. El-Hayah .  2011, 1(4): 191-198.
Yoshioka,  S.,  and  Stella,  V.J.  2000.
Stability  of  drugs  and  dosage forms .  Springer  Science  and Business Media.