EFEK  PEMBERIAN  EKSTRAK  ETANOL  RUMPUT  KEBAR  ( Bhiophytum petersianum Klotzsch)  TERHADAP  PENINGKATAN  JUMLAH  FOLIKEL PADA OVARIUM TIKUS Rattus norvegicus TERPAPAR ASAP ROKOK
The  Effect  of  Administration  Ethanol  Extract  Kebar’s  Grass  ( Biophytum  petersianum Klotzsch)  on  Increase  The  Number  of  Follices  In  Ovaries  of  Rats  That  Exposed  To Cigarette Smoke
Fernanda Clara Talakua 1) , Adrien Jems Akiles Unitly 2*)
1,2* Jurusan Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Pattimura, Ambon
2* Corresponding Author e-mail : adebiologi@yahoo.co.id
Informasi Abstrak. Kata kunci . Asap rokok,
folikel ovarium, rumput kebar ( Biophytum petersianum K.), tikus
Merokok merupakan yang sangat mengganggu kesehatan karena dalam asap rokok mengandung 4000 senyawa yang membahayakan tubuh perokok maupun  orang di sekitarnya. Bagian tubuh  yang sering terganggu akibat paparan asap rokok adalah reproduksi wanita Rumput kebar merupakan salah satu tumbuhan yang merupakan obat tradisional penyubur kandungan di Papua yang memiliki kandungan fitokimia seperti triterpenoid, saponin, flavonoid, vitamin A, vitamin E yang di duga mampu meningkatkan  fungsi  ovarium  wanita  akibat  terpapar  asap  rokok.  Penelitian  ini bertujuan  untuk  mengetahui  efek  pemberian  ekstrak  etanol  rumput  kebar ( Biophytum  petersianum Klotzsch)  terhadap  peningkatan  folikel  ovarium  tikus Rattus  norvegicus yang  terpapar  asap  rokok.  Penelitian  mengggunakan  metode eksperimental  laboratorik dengan  rancangan acak lengkap (RAL)  yang terdiri dari empat  perlakuan  yang  masing-masing  diulang  tiga  kali,  yaitu  (-):  Kelompok kontrol  negatif  yaitu  tikus  yang  tidak  diberi  perlakuan,  (+):  Kelompok  kontrol positif yaitu tikus dipaparkan asap rokok selama 28 hari, (0.067): Kelompok tikus yang  dipapar  asap  rokok  selama  28  hari  kemudian  diberi  ekstrak  etanol  rumput kebar dengan dosis 0.067mg/ekor/hari selama 28 hari, dan (0.135): Kelompok tikus yang  dipapar  asap  rokok  selama  28  hari  kemudian  diberi  ekstrak  etanol  rumput kebar  dengan  dosis  0.135mg/ekor/hari  selama  28  hari.  Berdasarkan  hasil penelitian,  diperoleh  kesimpulan  bahwa  ekstrak  etanol  rumput  kebar  ( Biophytum petersianum Klotzsch)    dengan  dosis  0.067mg/ekor/hari  dan  0.135mg/ekor/hari berpengaruh terhadap perkembangan dan peningkatan jumlah total folikel ovarium tikus Rattus  norvegicus yang  terpapar  asap  rokok  selama  28  hari,  dimana  dosis yang efektif adalah 0.135mg.
Received: 15 Juli 2020 Accepted: 29 Oktober 2020 © 2020 Jurusan Biologi FMIPA Unpatti, IAIFI Cab. Ambon

## A. PENDAHULUAN
Gangguan  pada  ovarium  dewasa  ini  diakibatkan  oleh  senyawa-senyawa  kimia  baik  dari makanan atau udara yang terkena polusi baik dari asap kendaraan maupun asap rokok. Merokok merupakan aktivitas  yang mengganggu kesehatan karena asap rokok mengandung kurang lebih 4000  senyawa  kimia  yang  berbahaya.  Asap  rokok  merupakan  polutan  bagi  manusia  dan lingkungan  sekitarnya.  Kenyataan  ini  tidak  dapat  dipungkiri  karena  banyak  temuan  penyakit yang didiaknosa secara medis diakibatkan oleh asap rokok, baik secara langsung (perokok aktif) maupun tidak langsung (perokok pasif) Sianturi, 2003 dalam Kirana, 2009). Asap rokok sangat
banyak mengandung campuran racun yang kompleks dan apabila terhirup dapat mengakibatkan penurunan  fungsi  reproduksi  yang  menyebabkan  gangguan  kehamilan,  sulit  mempunyai  anak, gangguan  haid,  gangguan  perkembangan  janin  dan early  menopause (Febriyeni,  2010).  Asap rokok  yang  mengandung  radikal  bebas  merupakan  oksidan  yang  berbahaya  karena  memiliki elektron molekul lain, akibatnya dapat merusak komponen molekul dari sel (struktur dan fungsi membran  sel)  antara  lain  mengakibatkan  sel  mati  serta  berpengaruh  pada  produksi  hormon (Fitria et  al. ,  2013).  Nikotin,  Karbonmonoksida,  tar,  nikotin  dalam  asap  rokok  mempengaruhi sel-sel saraf di otak menghambambat sekresi hormon estradiol (Demartoto, 2013), menyebabkan gangguan pematangan ovum (sel telur).
Rumput  Kebar  ( Biophytum  petersianum Klotzsch)  merupakan  jenis  tumbuhan  herbal yang tumbuh di alam secara liar (Sembiring and Darwati, 2013). Secara visual rumput kebar asal Papua memiliki warna daun hijau muda dan bunga berwarna kuning. Rumput Kebar termasuk ke dalam  kelas  Dycotiledonrae,  Family  Oxalidaceae,  Genus  Biophytum  dan  Spesies Biophytum petersianum Klotzsch,  termasuk  dalam  tanaman  berumah  dua  (Veldkamp,  1976 dalam Unitly 2013).  Penyebaran  rumput  kebar  terdapat  di  Distrik  Kebar  Manokwari,  Provinsi  Papua  Barat. Rumput  kebar  dinamakan Banondit yang  artinya  banyak  anak  oleh  masyarakat  setempat (Mulyono,  2010 dalam Sembiring  and  Darwati,  2013).  Menurut  Pengalaman  orang  Papua khususnya para ibu, rumput kebar dapat digunakan sebagai penyubur kandungan.
Kandungan fitokimia rumput kebar berupa zat aktif seperti antioksidan, nutrisi dan asam amino di duga berperan dalam memperbaiki fungsi reproduksi. Pemberian ekstrak rumput kebar dapat meningkatkan perkembangan folikel karena mengandung saponin  yang merupakan  bahan dasar  untuk  sintesis  hormon-hormon  steroid  (Wajo,  2005).  Steroid  di  dalam  tubuh  sangat berperan  dalam  sintesis  protein  di  dalam sel  target,  dimana  organ-organ  reproduksi  merupakan salah  satu  sasaran  dari  hormon  steroid.  Organ  reproduksi  yang  paling  utama  adalah  ovarium yang fungsinya menghasilkan sel telur. Ovarium tersusun dari medulla dan kortek. Pada kortek terdapat  folikel  yang  merupakan  tempat  berkembangnya  sel  telur,  perkembangan  sel  telur diawali  dari  berkembangnya  folikel  primer  menjadi  folikel  de  graf,  sehingga  terjadi  ovulasi. Adapun  kesuburan  pada  wanita  ditandai  dengan  percepatan  ovulasi  (pecahnya  folikel  de  Graf) pada ovarium.
Secara  elektroforesis  diketahui  rumput  kebar  memiliki  dua  jenis  protein  yang  berat molekulnya  (BM)  hampir  sama  dengan  BM  Hormon Pregran  More  Serum  Gonadotropin (PMSG),  yaitu  pada  BM  17.556,583  dan  52.033,136  Dalton,  telah  diketahui  bahwa  PMSG mengandung Follicle  Stimulating  Hormone (FSH)  dan Luteinizing  Hormone (LH) (Sadsoeitoeboen 2005). Partodiharjo (1992), menyatakan bahwa FSH dan LH memiliki BM yang berkisar antara 30.000 sampai 67.000 dalton.  Hormon  FSH dan  LH  dapat mencegah terjadinya folikel atresia. Bahan aktif triterpenoid telah terbukti mampu memperbaiki kerusakan sel dengan merangsang  pembentukan  kolagen  lebih  cepat.  Bahan  aktif  tersebut  juga  diduga  mampu memperbaiki kerusakan sel-sel granulosa pada folikel ovarium. Sel-sel granulosa penting untuk menjaga  kelangsungan  hidup  folikel,  karena  reseptor  gonadotropin  hanya  terdapat  pada  sel-sel
granulose (Suheimi, 2007). Selain itu, sel-sel granulose mengandung sejumlah protein bcl-2 yang berperan sebagai faktor antiapoptosis (Satriowati, 2008).
Berdasarkan  uraian  di  atas  maka  di  duga  bahwa  kandungan  bahan  kimia  dalam  rumput kebar  seperti  triterpenoid,  saponin,  steroid,  flavonoid,  Vitamin  A  dan  vitamin  E  dapat berpengaruh  terhadap  perkembangan  folikel  ovarium  tikus  betina  yang  terpapar  asap  rokok. Untuk  membuktikan  hal  tersebut  maka  perlu  dilakukan  penelitian  yang  bertujuan  untuk mengetahui  efek  pemberian  ekstrak  etanol  rumput  kebar  ( Biophytum  petersianum Klotzsch) terhadap peningkatan folikel ovarium tikus Rattus norvegicus yang terpapar asap rokok.

## B. METODE
Penelitian  dilakukan  pada  bulan  Oktober  2017  hingga  Januari  2018,  di  Laboratorium Zoologi  Jurusan  Biologi  FMIPA  Universitas  Pattimura  dengan  menggunakan  metode eksperimental  laboratorik  dengan  rancangan  acak  lengkap  (RAL)  yang  terdiri  dari  empat perlakuan yang masing-masing diulang tiga kali. Adapun tahapan penelitiannya sebagai berikut :
Tahap  Persiapan. Dua  belas  ekor  tikus  yang  dibagi  dalam  empat  kelompok  perlakuan ditempatkan pada kandang kotak plastik yang ditutupi kawat ram dengan sekam sebagai alas dan diberi  pakan  berupa  pellet  dan  air  minum.  Lingkungan  kandang  dibuat  agar  tidak  lembab. Masing-masing  tikus  ditempatkan  dalam kandang  per  kelompok  perlakuan.  Sebelum  perlakuan hewandiadaptasikan pada suasana kandang selama 1 minggu.
Tahap Pemaparan Asap Rokok. Tikus yang telah ditempatkan dalam kandang hewan, dipindahkan  ke  dalam smoking  chamber kemudian  dipapar  asap  rokok. Smoking  chamber merupakan  kotak  yang  di  dalamnya  terdapat  teruji  pembatas  untuk  memisahkan  hewan  coba dengan ujung rokok yang terbakar, sehingga hewan coba dapat secara langsung terkena paparan asap rokok tersebut. Kotak perlakuan memiliki lubang yang berfungsi untuk memasukan selang berisi  asap  rokok  yang  terlebih  dahulu  ditampung  dalam  vakum.  Pemaparan  asap  rokok  10 batang per hari pada tikus betina dilakukan pada pukul 09.00 dan 15.00 WIT (Unitly, 2013 dan Unitly et al ., 2014) selama 28 hari.
Tahap Pembuatan Ekstrak Etanol Rumput Kebar . Rumput Kebar diambil sebanyak 1 kg  dan  dikeringanginkan  kemudian  dihaluskan  dengan    menggunakan  blender.  Setelah didapatkan  serbuk  rumput  kebar  kemudian  dilanjutkan  dengan  proses  ekstraksi  dengan menggunakan metode maserasi. Prosedur pembuatan sebagai berikut :
1)   Ditimbang sebanyak 250g serbuk rumput kebar dan dimasukkan kedalam erlenmeyer.
2)   Setelah itu, ditambahkan 1 liter etanol 70% dan didiamkan selama 24 jam.
3)   Setelah  24  jam,  disaring  menggunakan  kertas  saring  Whatman  0.2  sehingga  diperoleh ekstrak cair rumput kebar. Residu ekstraksi diulang sebanyak 3x.
4)   Ekstrak  cair  dari  rumput  kebar  yang  telah  diperoleh,  kemudian  dipekatkan  dengan rotary evaporator .
5)   Hasil pemekatan tersebut, diperoleh ekstrak etanol pekat rumput kebar.
Tahap Pemberian Dosis Ekstrak Etanol Rumput Kebar . Pemberian dosis I sebanyak 0.0675mg/ekor/hari, dan dosis II sebanyak 0.135mg/ekor/hari. Pemberian ekstrak etanol rumput
kebar  dilakukan  pada  tikus  yang  telah  terpapar  asap  rokok,  untuk  melihat  perbedaan  dosis ekstrak etanol rumput kebar yang diberikan pada tikus model :
(-) :  Kelompok kontrol negatif yaitu tikus yang tidak diberi perlakuan
(+) :  Kelompok kontrol positif yaitu tikus dipaparkan asap rokok selama 28 hari
0.067  :  Kelompok  tikus  yang  dipapar  asap  rokok  selama  28  hari  kemudian  diberi  ekstrak etanol rumput kebar dosis 0.067mg/ekor/hari selama 28 hari
0.135  :  Kelompok  tikus  yang  dipapar  asap  rokok  selama  28  hari  kemudian  diberi  ekstrak etanol rumput kebar dosis 0.135mg/ekor/hari selama 28 hari
Pembuatan  Preparat  Histologi  Ovarium. Preparasi  Organ  Ovarium  menggunakan pewarnaan Hematoxilin Eosin (HE) yang dilakukan sebagai berikut :
1. Ovarium  yang  telah  difiksasi  dengan  formalin  4%  dicuci  dengan  aquades  selama  5  menit, dehidrasi dalam alkohol bertingkat mulai dari 30%, 50%, 70%, 80%, 90%, 100%, masing- masing selama 30 menit.
2. Sisa alkohol dibersihkan dengan proses clearing, Ovarium direndam dalam xylol I, xylol II masing-masing selama 1 jam
3. Proses  infiltrasi,  organ  dimasukan  dalam  parafin  I,  parafin  II,  parafin  III  60 0 c,  masing- masing selama 1 jam
4. Proses  embedding  atau  penanaman,  Ovarium  dimasukan  kedalam  kotak  parafin  selama  24 jam. Kemudian dilakukan sectioning atau pengirisan melalui pendiaman dalam blok parafin selama beberapa saat kemudian dipotong dengan mikrotom dengan ketebalan 6 mikron
5. Setelah  pengambilan  hasil  pengirisan,  gelas  objek  diolesi  dengan  albunin  gliserin  agar  hasil pengirisan  dapat  dapat  menempel  pada  gelas  objek  kemudian  diletakan  pada  hot  plate dengan  suhu  40°c  yang  bertujuan  untuk  merentangkan  hasil  irisan  dan  melelehkan  parafin pada gelas ukur.
6. Proses staning / pewarnaan dengan proses preparat direndam pada xylol I, xylol II, masing- masing  selama  15-30  menit,  selanjutnya  masukan  preparat  kedalam    alkohol  100%,  90%, 80%, 70%, dan 30%, masing-masing selama 3 menit.
7. Preparat direndam dalam hematoxilin 1% dalam aquades selama 2-10 menit, cuci dengan air selama  3  menit  kemudian  preprat  direndam  dalam  eosin  I  alkohol  50%,  eosin  II  alkohol 100%, masing-masing selama 3 menit.
8. Preparat direndam dalam xylol I, xylol II masing-masing selama 3 menit, kemudian preparat dikeringkan, selanjutnya ditutup dengan entelan lalu ditutup dengan kaca gelas.
9. Dilakukan Penghitungan jumlah folikel pimer, folikel sekunder, folikel tersier, dan folikel de graaf  dan  pengamatan  struktur  ovarium  dengan  pembesaran  100x  dan  400x  menggunakan mikroskop.
Tahap  Analisis  Data. Data  kuantitatif  yang  diperoleh  yaitu  data  jumlah  folikel-folikel ovarium  yang  diperoleh  di  uji  dengan  analisis  sidik  ragam Analysis  of  Variance (ANOVA), selanjutnya  dilakukan  pengujian  lebih  lanjut  menggunakan  Uji  Duncan  dengan  selang kepercayaan 95% (α = 0.05) dengan menggunakan perangkat lunak SPSS.

## C. HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil
Berdasarkan  hasil  penelitian,  paparan  asap  rokok  dapat  menghambat  perkembangan folikel  ovarium  dan  ekstrak  etanol  rumput  kebar  dapat  memperbaiki  perkembangan  folikel ovarium. Dalam penelitian ini diamati  empat jenis folikel ovarium yaitu folikel primer, folikel sekunder,  folikel  tersier  dan  folikel  De  graaf  yang  telah  dihitung  total  dari  setiap  fase perkembangan  folikel  dengan  membandingkan  kontrol  dan  tiga  perlakuan.  Hasil  pengamatan terhadap total jumlah folikel ovarium tikus selama penelitian dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1.  Rata  -  rata  Jumlah  Folikel  Ovarium  Tikus  yang  diberi  Ekstrak  Etanol  Rumput  kebar ( Biophytum petersianum Klotzsch).
Perlakuan (mg/ekor/hari)
Total Folikel Ovarium Tikus Putih ( Rattus norvegicus ) ±  SD ( - ) 5.83 ± 0.62 c ( + ) 1.33 ± 0.14 a 0.067 3.00 ± 0.50 b 0.135 5.08 ± 0.62 c Rata-Rata 3.81± 1.89
Keterangan : Superskrip dengan huruf yang sama tidak berbeda nyata (P > 0,05).
Tabel 1, menunjukan bahwa pemaparan asap rokok yang dilakukan terhadap tikus putih selama  28  hari  dapat  berpengaruh  terhadap  total  perkembangan  folikel  ovarium,  dimana perkembangan  folikel  pada  setiap  perlakuan  berbeda  nyata  dan  ketika  diberikan  ekstrak  etanol rumput  kebar  dosis  0.135mg  total  folikel  ovarium  mengalami  perkembangan  yang  sangat  baik. Pada  kelompok  kontrol  negatif  total  folikel  ovarium  sebanyak  5.83.  Pada  kelompok  tikus  yang diberi paparan asap rokok selama 28 hari (kontrol +) total folikel ovarium sebanyak 1.33. Pada kelompok tikus yang diberi paparan asap rokok selama 28 hari dan kemudian diberikan ekstrak etanol  rumput  kebar  dosis  0.067mg/ekor/hari  total  folikel  ovarium  3.00.  Pada  kelompok  tikus yang  diberi  paparan  asap  rokok  selama  28  hari  dan  kemudian  diberikan  ekstrak  etanol  rumput Kebar dengan dosis 0.135mg/ekor/hari total folikel ovarium sebanyak 5.08.
Hasil Analisis  of  Varian (ANOVA)  satu  jalur  dengan  menggunakan  program  SPSS menunjukkan bahwa sig<0.05 yang berarti bahwa ada pengaruh perlakuan ekstrak etanol rumput kebar  terhadap  total  folikel  ovarium.  Hasil  uji  lanjut  dengan  menggunakan  Uji  Beda  Nyata Terkecil  (BNT)  menunjukkan  bahwa  pada  kelompok  kontrol  negatif  (-)  total  folikel  ovarium berbeda  nyata  dengan  kelompok  tikus  yang  dipapar  asap  rokok  selama  28  hari  (kontrol  +)  dan kelompok  tikus  yang  diberikan  ekstrak  etanol  rumput  kebar  dosis  0.067mg/ekor/hari,  namun tidak  berbeda  nyata  dengan  kelompok  tikus  yang  diberikan  ekstrak  etanol  rumput  Kebar  dosis 0.135mg/ekor/hari.  Pada  kelompok  tikus  yang  dipapar  asap  rokok  (kontrol  +)  total  folikel ovarium  berbeda  nyata  dengan  kelompok  tikus  kontrol  negatif  (-)  dan  kelompok  tikus  yang diberikan  ekstrak  etanol  rumput  kebar  dosis  0.135mg/ekor/hari,  juga  berbeda  nyata  dengan kelompok  tikus  yang  berikan  ektrak  etanol  rumput  kebar  dosis  0.067mg/ekor/hari.  Pada kelompok  tikus  yang  dipapar  asap  rokok  dan  diberikan  ektrak  etanol  rumput  kebar  dosis
0.067mg/ekor/hari  total  folikel  ovarium  berbeda  nyata  dengan  kelompok  kontrol  negatif  (-), kelompok tikus yang dipapar asap rokok (Kontrol +) dan kelompok tikus yang diberikan ekstrak etanol  rumput  Kebar  dengan  dosis  0.135mg/ekor/hari.  Pada  kelompok  tikus  yang  diberikan ektrak etanol rumput kebar  dosis 0.135mg/ekor/hari total folikel ovarium berbeda nyata dengan kelompok  tikus  yang  dipapar  asap  rokok  (kontrol  +)  dan  kelompok  tikus  yang  diberi  ektrak etanol  rumput  Kebar  dengan  dosis  0.067mg/ekor/hari,  tetapi  tidak  berbeda  nyata  dengan kelompok tikus kontrol negatif (-). Gambaran histologis folikel primer, folikel sekunder, folikel tersier dan folikel de graaf dapat dilihat pada gambar 1.
Gambar 1.   Fotomikrograf   Folikel Ovarium tikus perbesaran 400x. (A) Folikel Primer, (B) Folikel Sekunder, (C) Folikel Tersier dan (D) Folikel De Graaf, (1). Oosit, (2) Sel-sel granulosa, (3) Antrum, (4) sel kumulus
1 3 3 A C B D 4 2 2 3 1 2 2 4
Gambar 2. Fotomikrograf ovarium kelompok kontrol perbesaran 100x, (1) Folikel primer: terdapat satu lapis sel granulosa,  (2)  Folikel  sekunder;  mulai  terbentuk  antrum  berisi  cairan  folikel,  (4)  folikel  De  graaf; ukuran folikel lebih besar dan Oosit dikelilingi sel kumulus dan terletak di tepi atau dekat membran
Tabel 2.  Perkembangan  Folikel  Ovarium  setelah  diberi  Ekstrak  Etanol  Rumput  Kebar ( Biophytum petersianum Klotzsch) No Folikel Ovarium Uraian 1. Folikel Primer Sel – sel granulosa mulai terbentuk dan dikelilingi oleh membran basal dan  terletak  dibagian  luar  korteks  di  bawah  epitel  permukaan.  Atrium mulai mengalami perkembangan tahap selanjutnya. 2. Folikel Sekunder
Folikel  mengalami  perbanyakan  sel,  inti  sel  ini  terlihat  dikelilingi  oleh ruangan yang tidak teratur yang merupakan hasil diferensiasi sel stroma dari ovarium. Bagian atrium mengalami atropi. 3. Folikel Tersier
Terbentuknya  antrum  folikuli  yang  dikelilingi  oleh  lapisan  sel-sel granulosa, dan letak folikel tersier sudah lebih jauh dari folikel sekunder dari korteks ovarium. 4 Folikel de Graaf
Sel granulosa dalam  jumlah  banyak dan terbentuk sel kumulus. Folikel de  graaf  akan  berkembangan  terus  dan  diikuti  oleh  perkembangan  inti dan sitoplasma ovum untuk terjadi proses ovulasi.

## Pembahasan
Pemaparan asap rokok selama 28 hari yang dilakukan terhadap tikus  dapat berpengaruh terhadap perkembangan folikel ovarium dan  pemberian ektrak etanol rumput kebar dengan dua dosis yang berbeda dapat mengembalikan atau memperbaiki perkembangan folikel pada ovarium tikus  yang  diberi  perlakuan  dari  dua  dosis  berbeda  ini  yakni  0.067mg/ekor/hari  dan 0.135mg/ekor/hari,  menunjukan  hasil  yang  baik  dan  dapat  kembali  berkembang  setelah mengalami  gangguan  akibat  paparan  asap  rokok  yang  dilakukan  selama  28  hari.  Pada  hasil penelitian  ini  dosis  yang  paling  baik  digunakan  untuk  mengatasi  gangguan  dari  asap  rokok terhadap tikus putih ialah dosis kedua yaitu 0.135mg/ekor/hari, karena dosis rumput Kebar yang pertama  yaitu  0.067mg/ekor/hari  belum  terlalu  baik  untuk  dapat  mengembalikan  dan memperbaiki perkembangan folikel ovarium.  Hal ini dapat dilihat pada kelompok kontrol, total folikel  ovarium  sangat  berbeda  nyata  dengan  total  folikel  ovarium  pada  kelompok  tikus  yang
2 4 1
terpapar  asap  rokok.  Jumlah  folikel  pada  tikus  yang  dipapar  asap  rokok  mengalami  penurunan yang  sangat  signifikan  dibanding  dengan  kelompok  kontrol.  Hal  ini  diduga  karena  senyawa- senyawa kimia berbahaya  yang terdapat dalam asap rokok yang merusak perkembangan folikel ovarium  tikus,  salah  satunya  ialah  nikotin  yang  dapat  mempengaruhi  implantasi  dengan  cara menekan  kadar  estrogen  yang  berpengaruh  terhadap  penurunan  fertilitas  ovarium  (Oktovianus, 2011).
Asap  rokok  juga  mengandung  racun  yang  sangat  kompleks  yaitu  radikal  bebas, karbonmonoksida,  tar,  nikotin  yang  mempengaruhi  sel-sel  saraf  di  otak,  dan  sel-sel  saraf  ini dapat  mempengaruhi  sekresi  hormon  estradiol  bersamaan  hormon  FSH  yang  memicu pematangan folikel sampai perkembangan menjadi folikel De Graaf dan terjadi pula peningkatan sintesis estrogen, namun sintesis yang dikeluarkan menurun akibat gangguan dari senyawa dalam asap  rokok,  sementara  estrogen  yang  tinggi  ini  dibutuhkan  untuk  merangsang  LH  untuk terjadinya ovulasi. Pemaparan asap rokok juga menyebabkan stres oksidatif dalam folikel. Stres oksidatif  menyebabkan  kerusakan  mitokondria  sel-sel  granulosa  akibat  kegagalan  mekanisme perbaikan diri mitokondria, kerusakan mitokondria memicu proses autofagi yang terus menerus dalam  sel,  dan  berakhir  dengan  kematian  sel  granulosa,  semakin  banyak  sel  granulosa  yang mengalami kematian, menyebabkan jumlah folikel berkurang (Gannon, 2013).
Pada  kelompok  kontrol  positif  (+)  total  folikel  ovarium  menurun  disebabkan  karena naiknya  estrogen  dalam  darah  sebagai  akibat  penekanan  kadar  FSH  yang  dapat  mengakibatkan terhambatnya  perkembangan  folikel.  Selain  itu,  kurangnya  rangsangan  dari  FSH  pada  folikel dapat  mengakibatkan  folikel-folikel  berhenti  berkembangan  dan  akhirnya  mengalami  inovulasi atau degenerasi (Guyton and Hall, 1997). Berbagai macam gangguan yang terjadi akibat paparan asap  rokok  yang  dapat  menghambat  perkembangan  folikel,  dapat  di  atasi  dengan  pemberian ekstrak etanol rumput kebar sesuai dengan dosis yang tepat hal ini dapat dilihat pada kelompok tikus  yang  diberi  dosis  0.067mg/ekor/hari  menunjukan  bahwa  jumlah  folikel  dapat  bertambah setelah  dipapar  asap  rokok  namun  belum  terlalu  baik,  kelompok  tikus  yang  diberikan  ekstrak etanol  rumput  kebar  dengan  dosis  0.135mg/ekor/hari  total  folikel  ovarium  dapat  meningkat dengan baik, total folikel ovarium yang normal dengan  total folikel ovarium pada tikus dengan dosis  rumput  kebar  0.135mg/ekor/hari  menunjukkan  hasil  yang  tidak  berbeda  nyata  itu  artinya ekstrak  etanol  rumput  Kebar  dapat  bekerja  dengan  baik  untuk  memperbaiki  perkembangan folikel.  Hal  ini  dapat  diperkuat  dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Wajo  (2005)  hasil penelitiannya  membuktikan  pemberian  ekstrak  air  rumput  kebar  dapat  meningkatkan perkembangan  folikel  karena  mengandung  saponin  yang  merupakan  bahan  dasar untuk  sintesis hormon steroid yang dapat memperbaiki kinerja sistem reproduksi.
Folikel De graaf merupakan folikel yang telah matang dan siap untuk diovulasikan dalam penelitian ini sesuai data yang didapat jumlah folikel De graaf  ketika diberi paparan asap rokok selama 28 hari perkembangan folikel De graaf terganggu sehingga mengakibatkan jumlah folikel De  graaf  menjadi  menurun,  sama  halnya  dengan  penelitian  ini  penelitian  sebelumnya  oleh Marhaeni  (2009),  dijelaskan  bahwa  paparan  asap  rokok  selama  7  minggu  dapat  menurunkan
jumlah  folikel  De  graaf  ini  membuktikan  bahwa  kandungan  kimia  seperti  nikotin  sangat berpengaruh terhadap perkembangan folikel ovarium.
Pemberian ekstrak etanol rumput kebar dengan dosis 0.135mg/ekor/hari berpengaruh baik terhadap  perkembangan  folikel  ovarium  tikus  dibandingkan  dengan  dosis  0.067mg.  Pada kelompok tikus yang diberi dosis 0.135 total folikel ovarium ini sangat meningkat dan mendekati banyaknya total folikel ovarium pada tikus kontrol. Hal ini diduga karena kandungan flavonoid pada rumput kebar merupakan fitoestrogen yang mampu berikatan dengan reseptor estrogen alfa sehingga  menyebabkan  perbaikan  penampilan  reproduksi  (Sadsoeitoeboen,  2005)  dan  tikus betina  (Azlina,  2009).  Selain  itu,  rumput  kebar  yang  mengandung  steroid  umumnya  bersifat estrogenik  sehingga  mempengaruhi  siklus  mensturasi  dan  perkembangan  folikel  ovarium (Franswoth et  al .,  1975).    Rumput  kebar  juga  mengandung  vitamin  E  yang  dapat  membantu untuk melawan radikal bebas yang masuk secara berlebihan karena vitamin E berfungsi sebagai perangsang  proses  steroidogenesis  dan  merangsang  kelenjar  pituitari  anterior  untuk mensekresikan  hormon  steroid  serta  menginisiasi  kejadian  folikulogenesis  pada  ovarium. Penambahan senyawa fitoestrogen (estrogen eksogenik) dan steroid yang bersifat estrogenik dari rumput  kebar  ke  dalam  tubuh  tikus  di  duga  mampu  meningkatkan  jumlah  estrogen.  Menurut Setiawan (2010), peningkatan estrogen ini akan menyebabkan peningkatan Luteinizing Hormone (LH) yang dapat menyebabkan terjadinya ovulasi, sesaat sebelum ovulasi folikel membesar dan ovum yang ada di dalamnya mengalami pematangan.
Penelitian ini membuktikan bahwa asap rokok dapat berpengaruh terhadap penghambatan perkembangan  total  folikel  ovarium,  namun  pemberian  ekstrak  etanol  rumput  kebar memperlihatkan perkembangan folikel. Hal ini tentunya berdampak baik bagi kesuburan wanita ketika  jumlah  folikel  terus  meningkat  maka  sel-sel  granulosa  juga  ikut  bertambah  banyak  dan akan  mensekresikan  hormon  estrogen.  Hormon  estrogen  yang  tinggi  ini  akan  merangsang hormon LH untuk masuk pada tahapan selanjutnya yaitu tahapan ovulasi.

## D. KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Berdasarkan hasil  penelitian, diperoleh kesimpulan  bahwa ekstrak etanol rumput kebar ( Biophytum  petersianum Klotzsch)    dengan  dosis  0.067mg/ekor/hari  dan  0.135mg/ekor/hari berpengaruh terhadap  perkembangan dan peningkatan jumlah  total folikel ovarium tikus Rattus norvegicus yang terpapar asap rokok selama 28 hari, dimana dosis yang efektif adalah 0.135mg.

## Saran
1. Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  mengenai  efek  ekstrak  etanol  rumput  Kebar ( Biophytum  petersianum Klotzsch)  dengan  peningkatan  satu  dosis  lagi  untuk  melihat pengaruhnya terhadap total folikel ovarium.
2. Paparan asap rokok sangat berbahaya dan dapat menyebabkan terhambatnya perkembangan folikel  ovarium.  Untuk  itu,  dihimbau  kepada  masyarakat  terkhususnya  wanita  untuk  tidak mengkonsumsi rokok dan menjauh dari paparan asap rokok.

## E. DAFTAR PUSTAKA
Azlina.  2009.  Pengaruh  Pemberian    Ekstrak  Rumput  Kebar  ( Biophytum  petersianum Klotzsch) Terhadap  Fertilitas  Tikus  Jantan  ( Rattus  norvegicus L)  [Tesis].  Bogor:  Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.
Dermatoto  A,  Y  Lestari.  2013.  Perempuan  dan  Rokok  (kajian  sosiologi  kesehatan  terhadap perilaku  kesehatan  reproduksi  perempuan  perokok  di  kota  Surakarta.  Surakarta: Universitas Sebelas Maret
Febriyeni.  2010.  Pengaruh  asap  rokok  terhadap  kadar  hormon  estradiol  dan  progesteron  pada tikus putih ( Rattus norvegicus ) [Tesis]. Padang: Universitas Andalas Fitria,  Triandhini  R,  Mangimbulude  JC,  FF  Karwur.  2013.  Merokok  dan  oksidasi  DNA.  Sains Medika 5(2):120-127.
Fransworth  NR,  Binel  AS,  Cordel  GA,  HS  Fong.  1975.  Potensial  of  Plant  as  Sources  of  New Antifertility Agent. I. J  Pharma Sci, 63:4-10.
Gannon  AM.  2013.  Expossure  to  cigaratte  smoke  and  its  impact  on  the  ovarian  fillicle population: mechanisms of follicle loss [Thesis]. Canada: Mc Master University Guyton AC, JE Hall. 1997. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Edisi keempat. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press. 699-703.
Kirana  R.  2009.  Pengaruh  Pemberian  Teh  Hijau  ( Cammelia  sinensis )  terhadap  Kerusakan Struktur  Histologis  Alveolus  Paru  Mencit  yang  Dipapar  Asap  Rokok  [Skripsi]. Surakarta: Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret
Marhaeni GA. 2009. Paparan Asapa Rokok Menghambat Folikulogenesis Dan Perilaku Seksual Mencit [Tesis]. Denpasar: Universitas Udayana
Oktovianus.  2011.  Efek  pemberian  asap  rokok  terhadap  kehamilan  tikus  putih  ( Rattus norvegicus )  [Tesis].  Padang:  Program  Studi  Ilmu  Biomedis  Program  Pascasarjana Universitas Andalas
Partodiharjdo  S.  1992. Ilmu  reproduksi  hewan .  Bogor:  Fakultas  Kedokteran  Hewan,  Institut Pertanian Bogor
Sadsoeitoeboen  PD.  2005.  Manfaat  Ekstrak  Rumput  Kebar  ( Biophytum  petersianum Klotzsch) Terhadap  Penampilan  Reproduksi  Mencit  Putih  Betina  [Tesis].  Bogor:  Fakultas Kedokteran Hewan, Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian Bogor
Satriowati  DT.  2008.  Efek  Pemberian  Senyawa  Diethylstilbestrol  (DES)  Terhadap Perkembangan  dan  Ekspresi  Protein  Bcl-2  pada  Folikel  Ovarium  Mencit (Mus musculus) strain Balb-C [Skripsi]. Jember: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Jember.
Sembiring  B,  I  Darwati.  2013.  Rumput  Kebar  ( Biophytum  petersianum )  sebagai  peningkat fertilitas. Warta Puslitbangbun , 19(2):15-18
Setiawan. 2010. Aktivitas Ekstrak Metanol   Buah  Adas  ( Foeniculum  vulgare Mill)  Terhadap Lama  Siklus  Estrus  Serta  Bobot  Uterus  Dan  Ovarium  Tikus  Putih  [Skripsi].  Bogor: Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor
Suheimi  K.  2007. Fisiologi  Folikulogenesis  dan  Ovulasi .  Dalam  makalah  pada  symposium pertemuan ilmiah.
Unitly AJA. 2013. Potensi ekstrak rumput Kebar ( Biophytum Petersianum Klotzsch) pada fungsi reproduksi  tikus  jantan  yang  terpapar  asap  rokok  [Disertasi].  Bogor:  Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor
Unitly AJA, Kusumorini N, Agungpriyono S, Satyaningtijas AS, A Boediono. 2014. Perubahan Kualitas  Spermatozoa  dan  Jumlah  Sel-sel  Spermatogenik  Tikus  Yang  Terpapar  Asap Rokok. ISSN : 1978-225X. Jurnal Kedokteran Hewan, 8(2):116-119. Wajo MJ. 2005. Pengaruh Pemberian Ekstrak Rumput Kebar ( Biophytum petersianum Klotzsch) Melalui  Air  Minum  terhadap  Fertilitas  Ayam  Buras  [Laporan  penelitian].  Manokwari: Fakultas Peternakan Perikanan dan Ilmu kelautan, Universitas Negeri Papua.