Standardisasi dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Bahan Alam Propolis untuk Terapi Infeksi SARS-CoV2

## (Standardization and Antioxidant Activity of Propolis Extract for SARS-CoV2 Infection Therapy)
DIAH KARTIKA PRATAMI 1 *, YESI DESMIATY 1 , EVITA MARIA SIMORANGKIR 1 , DEBY FARAHDILA 1
Fakultas Farmasi Universitas Pancasila, Jakarta Selatan, 12640, Indonesia
Diterima 21 Januari 2021, Disetujui 19 September 2021
Vol. 19, No. 2 JURNAL ILMU KEFARMASIAN  INDONESIA, Oktober 2021,  hlm. 272-280 ISSN 1693-1831, E-ISSN 2614-6495
*Penulis korespondensi e-mail: d.kartika@univpancasila.ac.id
Abstract: Natural ingredients with immunomodulatory, anti-inﬂ ammatory, and antioxidant activities can be used as supportive therapy for SARS-CoV2 infection. The aims were standardized the quality and safety of propolis and determined the antioxidant activity of propolis. There are two types of propolis powder samples: microencapsulated propolis powder containing wax (SMPW) and non-waxed (SMP). Standardization includes speciﬁ c and non-speciﬁ c parameters. Antioxidant activity test using FRAP and ABTS methods. The total ﬂ avonoids of SMPW and SMP were 0.31% and 1.59%. The total phenolic of SMPW and SMP were 83.9082 and 98.0821 mg GAE/g. The losses on drying of SMPW and SMP were 3.65% and 3.88%. The water content of SMPW and SMP were 5.12% and 5.11%. The total ash content of SMPW and SMP were 0.80% and 0.65%. Heavy metal propolis powder negative. ALT and AKK values  <  10  CFU/g,  microbiology  contamination  was  negative. Antioxidant  activity  of  SMPW  with IC 50 ABTS 2.4177 ppm and EC 50 FRAP 26.41 g/mL. Meanwhile, the antioxidant activity of SMP with IC 50 ABTS 2.213 ppm and EC 50 FRAP 32.10 g/mL. It was concluded that the extract of propolis met the requirements of the standard for extracts of natural ingredients and had strong antioxidant activity. Propolis powder can be developed for supportive therapy for SARS-CoV2 infection.
Keywords: Covid-19, encapsulation, powdered propolis microcapsules, supportive therapy.
Abstrak: Bahan alam dengan aktivitas imunomodulator, antiinﬂ amasi, dan antioksidan dapat digunakan sebagai terapi suportif infeksi SARS-CoV2. Tujuan penelitian standardisasi mutu dan keamanan propolis sebagai  bahan  baku  obat  terapi  suportif  Covid-19  serta  uji  aktivitas  propolis  sebagai  antioksidan. Sampel  serbuk  propolis  terdiri  dari  dua  jenis:  serbuk  mikroenkapsulasi  propolis  mengandung  wax (SMPW) dan non wax (SMP). Standardisasi meliputi parameter spesiﬁ k dan non spesiﬁ k. Uji aktivitas antioksidan menggunakan metode FRAP dan ABTS. Kadar total ﬂ avonoid SMPW dan SMP sebesar 0,31%  dan  1,59%.  Kadar  total  fenolik  SMPW  dan  SMP  sebesar  83,9082  dan  98,0821  mg  GAE/g. Susut pengeringan SMPW dan SMP sebesar 3,65% dan 3,88%. Kadar air SMPW dan  SMP sebesar 5,12% dan 5,11%. Kadar abu total SMPW dan SMP sebesar 0,80% dan 0,65%. Logam berat serbuk propolis negatif. Nilai ALT dan AKK < 10 CFU/g, cemaran E. Coli, S. aureus, Salmonella spp dan P. aeruginusa negatif. Aktivitas antioksidan SMPW dengan IC 50 ABTS 2,4177 bpj dan EC 50 FRAP 26,41 μg/mL. Sedangkan, aktivitas antioksidan SMP dengan IC 50 ABTS 2,213 bpj dan EC 50 FRAP 32,10 μg/ mL. Disimpulkan ekstrak bahan alam propolis memenuhi persyaratan standard ekstrak bahan alam dan memiliki aktivitas antioksidan yang kuat. Serbuk EBA propolis dapat dikembangkan menjadi bahan baku untuk OHT terapi suportif infeksi SARS-CoV2.
Kata kunci: Covid-19, enkapsulasi, mikrokapsul propolis serbuk, terapi suportif.
273  PRATAMI ET AL.

## Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
PT.  RIN  Biotek  Indonesia  (Tangerang  Selatan, Banten, Indonesia). Serbuk mikroenkapsul propolis diperoleh  dari  PT.  Phytochemindo  Reksa  (Bogor, Jawa  Barat,  Indonesia).  Maltodekstrin,  gom  arab, alkohol,  asam  galat,  kuersetin,  NaOH,  NH 4 OH, natrium  asetat,  kloroform,  HCl,  amilalkohol,  besi (III)  klorida,  eter,  asam  asetat  anhidrat,  H 2 SO 4 , lempeng  Mg,  aquadest,  propilenglikol,  dibeli  dari PT.  Brataco  Chemical  Indonesia.  Pereaksi  mayer, pereaksi dragendorﬀ , pereaksi stiasny, petroleum eter, larutan  heksametilentetramin,  aluminium  klorida, pereaksi  Folin-Ciocalteu,  natrium  karbonat,  TPTZ ( 2,4,6-tripyridyl-s-triazine) ,  FeCl 3 .6H 2 O,  Trolox diperoleh  dari  Q-Lab  Fakultas  Farmasi  Universitas Pancasila.
ALAT. Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain spektrofotometer ultraviolet – cahaya tampak  (Shimadzu  UV  1800), rotary  vacuum evaporator (BUCHI  R-220),  timbangan  analitik, maserator (IKA), kertas saring, lumpang alu, pengayak No.14,  pengayak  No.18, magnetic  stirrer (IKA C-MAG  HS7),  alat-alat  gelas  (Pyrex), spraydyer , pemanas air (water bath),
METODE. Ekstraksi propolis. Proses ekstraksi propolis menggunakan invensi yang dikembangkan oleh  Muhammad  Sahlan  (2013) (17) .  Sebanyak  2  kg sarang lebah dimaserasi kinetik dengan 10 liter etanol 96% selama 8 jam. Kemudian disaring menggunakan vakum  ﬁ lter  untuk  memisahkan  lumpur  propolis. Selanjutnya  ditambah  aquadest  hingga  konsentrasi alkohol  menjadi  70%.  Pada  tahap  ini  terbentuk endapan berupa wax propolis. Larutan ekstrak etanol propolis 70% didiamkan pada suhu 50 o C selama 30 menit,  lalu  dibiarkan  pada  suhu  ruang  selama  15 menit, kemudian disimpan ke dalam lemari pendingin selama  24  jam.  Pada  filtrat  dibagi  menjadi  dua. Filtrat pertama dilakukan pemisahan endapan berupa wax  yang  timbul  dengan  ﬁ ltrasi  pada  suhu  ruang, sehingga diperoleh ﬁ ltrat ekstrak etanol propolis free wax. Sedangkan bagian yang kedua tidak dilakukan perlakuan sehingga diperoleh ekstrak etanol propolis mengandung wax.
Enkapsulasi  Propolis. Metode  enkapsulasi propolis sesuai dengan metode yang dilakukan oleh Pratami 2018 (15,16) . Disiapkan 30 gram maltodekstrin dan  3  gram  gom  arab,  perbandingan  1:10.  Kedua enkapsulator  dicampur  dalam  300  ml  aquadest. Selanjutnya, campuran dihomogenisasi menggunakan homogenizer  selama  sekitar  15.000  rpm  dalam  2 menit. Kemudian, sebanyak 900 ml propolis dalam bentuk  ekstrak  etanol  propolis  (EEP).  Campuran bahan  penyalut  dengan  propolis  dihomogenisasi dengan homogenizer , kemudian dimasukkan ke spray drying. Kondisi operasional spray drying dengan suhu

## PENDAHULUAN
OBAT herbal yang memiliki efek imunomodulator, antiinflamasi,  dan  antioksidan  dapat  digunakan sebagai  terapi  suportif  terapi  infeksi  SARS-CoV2. Pada  pasien  yang  terinfeksi  SARS-CoV-2,  anti- inﬂ amasi dapat berguna dalam hal mengatasi lonjakan kadar sitokin proinﬂ amasi (IL-6,IL-10 dan TNF-α (1–4) . Bahan imunomodulator berguna untuk meningkatkan sistem daya tahan tubuh, secara spesiﬁ k maupun non- spesiﬁ k pada pasien Covid-19 yang merupakan self- limiting disease . Bahan antioksidan dapat menurunkan peningkatan reactive  oxygen  species (ROS)  yang terjadi pada infeksi virus (5–8) .
Propolis  adalah  bahan  perekat  resin  yang dikumpulkan  oleh  lebah  dari  tunas,  kulit  kayu dan  bagian  tanaman  lainnya (9) .  Propolis  memiliki berbagai  aktivitas  biologi,  seperti  antimikroba, antivirus, anti-inﬂ amasi, antitumor, dan antioksidan (10) . Penelitian mengenai propolis untuk mendukung terapi suportif  pada  infeksi  SARS-CoV-2  yaitu  aktivitas antioksidan (11,12) , anti-inﬂ amasi (13) , imunomodulator (14) , dan  memiliki  aktivitas  antioksidan  pada  bentuk mikrokapsul (15,16) .  Dengan  demikian,  propolis memiliki potensi yang besar dalam pemanfaatan dan pengembangannya sebagai terapi suportif pada pasien yang terinfeksi SAR-CoV-2.
Metode mikroenkapsulasi propolis dengan metode spray  drying yang  dilakukan  dengan  maltodextrin dan  gum  arab  telah  dilakukan  untuk  mengatasi permasalahan  sifat  fisik  propolis  dengan  tetap mempertahankan  kandungan  substansi  aktif  kimia. Pada penelitian ini dilakukan produksi ekstrak bahan alam  (EBA)  propolis  untuk    pengembangan  obat herbal terstandar (OHT).
Untuk  pengembangan  OHT  propolis,  perlu dilakukan  penetapan  standard  mutu  dan  keamanan sesuai  persyaratan  obat  bahan  alam  Perka  BPOM No.  32  Tahun  2019.  Pada  riset  ini  dilakukan  uji parameter  mutu  untuk  standardisasi  propolis  agar memiliki  spesiﬁ kasi  dan  memenuhi  standar  bahan baku ekstrak bahan alam dan uji aktivitas antioksidan. Target output riset  diperoleh  produk  EBA  propolis serbuk yang dipersiapkan yang memenuhi standard mutu dan keamanan sesuai syarat obat bahan alam, dan siap dikomersialisasi untuk sediaan OHT untuk imunomudulator  dan  antiinflamasi  pada  terapi Covid-19.
.

## BAHAN DAN METODE
BAHAN. Ekstrak  etanol  propolis  yang  berasal dari  Lebah Tetragonula  sapiens didapatkan  dari
Vol 19, 2021 Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia 274
inlet 110 o C, ﬂ ow  rate 10  mL  /  menit,  suhu outlet adalah  65-75 o C.  Serbuk  propolis  yang  kemudian disimpan dalam wadah aluminium foil.
Penetapan Parameter Mutu Spesiﬁ k Ekstrak. Metode  yang  dilakukan  sesuai  yang  ditetapkan Kementrian Kesehatan RI (2000) mengenai parameter standar  ekstrak  tumbuhan  obat (22) .  Pemeriksaan organoleptik dilakukan dengan pengamatan terhadap konsistensi, warna, bau dan rasa dari serbuk propolis. Kemudian  dilakukan  penetapan  senyawa  terlarut dalam air. Kadar sari yang larut dalam air dihitung dalam persen senyawa yang larut dalam air, dihitung terhadap  ekstrak  awal.  Untuk  penetapan  kada  sari larut  dalam  etanol  dihitung  dalam  persen  senyawa yang  larut  dalam  etanol,  dihitung  terhadap  berat ekstrak awal.
Pemeriksaan  Parameter  Non-Spesifik. Parameter  yang  dikur  meliputi  penetapan  susut pengeringan, kadar air, kadar abu total, abu tak larut asam,  abu  tak  larut  air, dan  sisa  pelarut  ekstrak (22) .
Susut  pengeringan  ditetapkan  berdasarkan  prinsip gravimetri.  Penetapan  kadar  air  dilakukan  dengan metode  Karl  Fischer.  Penetapan  kadar  abu  total dengan menggunakan 2 gram ekstrak yang dipijarkan pada  suhu  450 0 C.  Sedangkan  kadar abu  tidak  larut asam dilakukan dengan menghitung kadar abu yang tidak larut dalam 25 mL asam klorida encer P yang dididihkan selama 5 menit. Untuk kadar abu tidak larut air berdasarkan kadar abu yang tidak larut dalam 25 mL air mendidih selama 5 menit. Sisa pelarut ekstrak ditetapkan menggunakan kromatograﬁ  gas Shimadzu 17A  (Shimadzu,  Kyoto  Prefecture,  Japan).  Kondisi operasional menggunakan kolom kaca 30 cm x 0,32 mm  berisi  fase  diam  dialirkan  TR-WAX  dengan ukuran partikel 100 - 200 mesh, nitrogen P sebagai gas pembawa, laju  alir gas pembawa 20 mL/menit, suhu injektor 200 0 C dan suhu detektor 160 0 C. Uji Cemaran Logam Berat. Kandungan logam berat  di  dalam  ekstrak  dianalisis  menggunakan spektrofotometri  serapan  atom  Shimadzu AA-6300 (Shimadzu,  Kyoto  Prefecture,  Japan).  Penetapan logam berat yang diperiksa meliputi kadar timbal dan cadmium (23) .
Uji  Cemaran  Mikroba. Analisis  cemaran mikroba pada ekstrak dilakukan dengan metode Angka Lempeng  Total  (ALT)  dan Angka  Kapang  Khamir (AKK) (23) .  Untuk  menentukan ALT  sejumlah  1,0  g ekstrak  ditambahkan  dapar  fosfat  (pH  7,2)  hingga 10  mL.  Kemudian  dilakukan  pengenceran  hingga 10 -6 . Dari setiap pengenceran dipipet 1 mL ke dalam cawan  petri  steril  dan  dibuat  triplo.  Ke  dalam  tiap cawan petri dituangkan 15-20 mL media perbenihan NA (45±10C). ALT dinyatakan berdasarkan jumlah koloni  yang  tumbuh  pada  inkubasi  cawan  petri
dengan posisi terbalik selama 24 jam suhu 35-370C. Untuk penentuan AKK dilakukan prosedur yang sama dengan pengerjaan ALT dengan menggunakan media perbenihan Potato Dextrose Agar ( PDA). Penapisan  Fitokimia. Identifikasi  golongan senyawa kimia dari simplisia dan ekstrak buah okra dilakukan menurut metode Phytochemical Screening Farnsworth, meliputi identiﬁ kasi alkaloid, ﬂ avonoid, saponin,  tannin,  kuinon,  steroid/terpenoid,  kumarin dan minyak atsiri (20,21) .
Penetapan  Kadar  Flavonoid  Total  Secara Spektrofotometri UV-Vis. Penetapan kadar ﬂ avonoid menggunakan  metode  yang  dilakukan  oleh  Djamil 2017 (22) . Sejumlah 50 mg sampel dimasukkan kedalam labu  alas  bulat,  ditambahkan  berturut-turut  1  mL HMT, 20 mL aseton P dan 2 mL larutan asam klorida P,  reﬂ uks  selama  30  menit.  Saring  menggunakan kapas, ﬁ ltrat dimasukkan kedalam labu tentukur 100 mL. Residu direﬂ uks kembali dengan 20 mL aseton P  selama  30  menit,  saring  dan  campur  filtrat  ke dalam labu tentukur 100 mL. Ditambahkan aseton P sampai tanda. Dipipet 20 mL ke dalam corong pisah, ditambahkan 20 mL air dan ekstraksi 3 kali, tiap kali menggunakan 15 mL etil asetat P. Masukkan fase etil asetat ke dalam labu tentukur 50 mL, ditambahkan etil asetat P sampai tanda.
Dipipet 10 mL larutan uji ke dalam labu tentukur 25  mL,  ditambahkan  larutan  asam  asetat  glasial 5%  v/v  dalam  metanol  P  sampai  tanda.  Dipipet 10  mL  larutan  uji  kedalam  labu  tentukur  25  mL, ditambahkan  1  mL  larutan  aluminium  klorida  dan larutan asam asetat glasial 5% v/v dalam metanol P sampai tanda. Pengukuran dilakukan 30 menit setelah penambahan larutan aluminium klorida menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang maksimum  yang  diperoleh  yaitu  427  nm.  Hitung kadar ﬂ avonoid total sebagai ﬂ avonoid pembanding dengan rumus:
% = Cp (Au-Abu) x 1,25 x 100 (1) (Ap-Abp) Berat sampel
%    =  Kadar ﬂ avonoid total dihitung sebagai ﬂ avonoid pembanding Cp   =  Konsentrasi larutan pembanding Au   =  Serapan larutan uji dengan AlCl 3 Abu =   Serapan larutan uji tanpa AlCl 3 Ap   =  Serapan lar pembanding dengan AlCl 3 Abp =  Serapan lar pembanding tanpa AlC l3 1,25 =  Faktor konstanta
Penetapan  Kadar  Polifenol  Total  Secara Spektrofotometri UV-Vis. Penetapan kadar polifenol menggunakan metode yang dilakukan oleh Pratami
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
275 PRATAMI ET AL.
yang digunakan oleh Djamil 2021 (23) . Pereaksi FRAP dibuat dengan campuran 300 mmol/iter dapar asetat pH  3,6;  10  mmol/iter  TPTZ  (2,4,6-trypyridyl-s- triazine) dalam 40 mmol/liter HCl; dan 20 mmol/iter FeCl 3 6H 2 O  dengan  perbandingan  10:1:1.  Larutan blanko dibuat dengan campuran 100 uL etanol, 300 uL aquadest ditambahkan hingga 3 mL pereaksi FRAP diinkubasi 25 menit pada suhu kamar (25 o C-30 o C).
Larutan  trolox  dibuat  seri  konsentrasi  4,  8,  16, 32,  64  mg/L.  Larutan  mikrokapsul  propolis  dibuat seri  konsentrasi  50,  100,  150  mg/L.  Sebanyak  100 µL  dari  masing-masing  konsentrasi  larutan  baku maupun  sampel  ditambahkan  300  µL  aquadest kemudian ditambahkan hingga 3 mL pereaksi FRAP dihomogenkan.  Diinkubasi  selama  25  menit  pada suhu  kamar.  Kemudian  diukur  serapannya  dengan spektrofotometer UV-Vis pada λ 595 nm. Lalu dibuat kurva  kalibrasinya  hubungan  antara  konsentrasi sampel  (mg/L)  dengan  absorban.  Kandungan antioksidan dari  ekstrak  propolis dinyatakan  dalam kesetaraan mg trolox/g ekstrak (mg TE/g ekstrak).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pemeriksaan Organoleptik. Hasil pemeriksaan organoleptik EBA propolis dapat dilihat pada Tabel 1. Penetapan organoleptik termasuk ke dalam parameter spesiﬁ k yang dapat ditentukkan dengan menggunakan panca indera untuk mendeskripsikan bentuk, warna, bau dan rasa. Penetapan ini bertujuan untuk pengenalan awal  terhadap  ekstrak  yang  bersifat  subjektif  dan menandakan ciri khas terhadap EBA propolis. Hasil pemeriksaan organoleptik menunjukkan bahwa EBA propolis berbentuk serbuk coklat muda dengan bau dan rasa yang khas propolis.
Penetapan  Kadar  Sari  Larut Air  dan  Larut Etanol. Nilai penetapan kadar sari larut air dan larut etanol  seperti  pada  Tabel  1  dan  persyaratannya. Penentuan  kadar  sari  larut  air  dan  etanol  adalah metode kuantitatif untuk jumlah kandungan senyawa dalam  ekstrak  yang  mampu  tertarik  oleh  pelarut. Kedua cara yang hampir sama tersebut didasarkan ada kelarutan senyawa yang terkandung dalam ekstrak.
Persentase Susut Pengeringan dan Kadar Air. Hasil persentase Susut pengeringan dan Kadar air EBA propolis dapat dilihat pada Tabel 1 dan persyaratannya. Susut  pengeringan  dilakukan  untuk  mengetahui senyawa  yang  menguap  dalam  ekstrak  setelah dilakukan  proses  pengeringan  didalam  oven  pada suhu 105 0 C dengan menggunakan metode gravimetri, adapun  senyawa-senyawa  yang  dimaksud  yaitu senyawa  volatil,  senyawa  termolabil  dan  senyawa air. Sedangkan kadar air dilakukan untuk mengetahui besarnya  jumlah  kandungan  air  di  dalam  ekstrak
2018 dengan sedikit modiﬁ kasi (12) . Penentuan kadar polifenol total menggunakan metode Folin-Ciocalteu dengan  menggunakan  asam  galat  sebagai  standar. Larutan baku asam galat atau sampel dibuat dalam konsentrasi 100 bpj. Sebanyak 0,5 mL larutan induk ditambahkan  0,4  mL  pereaksi  Folin  Ciocalteu, diamkan selama 8 menit, ditambahkan 4 mL natrium karbonat 7,5% lalu dicukupkan volume sampai 10,0 mL dengan aquadest.  Pengujian dilakukan sebanyak 3 kali (triplo). Inkubasi selama 85 menit pada suhu kamar. Serapan diukur menggunakan spektrofotometri UV-Vis  pada  panjang  gelombang  758,5  nm.  Kadar fenolik  total  dari  sampel propolis  hingga  diperoleh hasil yang dinyatakan kesetaraannya terhadap asam galat yaitu dengan nilai mg Galic Acid Equivalen t/ gram ekstrak (mg GAE/g) dengan rumus berikut:
Kadar fenol = C ekstrak x FP (2) C awal C ekstrak     = Konsentrasi ekstrak C awal = Konsentrasi awal FP
= Faktor pengenceran
Uji Aktivitas Antioksidan  dengan  Metode ABTS. Uji aktivitas antioksidan ABTS menggunakan metode yang digunakan oleh Djamil 2021 (23) . Larutan stok ABTS dibuat dari campuran 40 mg ABTS dalam 5 mL aquadest. Dengan 33 mg K 2 S 2 O 8 , dilarutkan dalam 25 mL aquadest. Pencampuran di dalam botol gelap selama 16 jam, dan dalam ruang gelap. Larutan baku kuersetin dibuat dalam konsentrasi 1,2; 1,6; 2; 2,4; dan 2,8 bpj. Diinkubasi selama 6 menit. Kemudian diukur serapan dengan spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelobang 670,5 nm.
Larutan  sampel  mikroenkapsul  propolis  dibuat seri konsentrasi 0,5; 0,8; 1; 1,5; 2 dan 3 bpj kemudian ditambah 1 mL larutan ABTS dan ditambah sampai etanol 5 mL. Diinkubasi selama 6 menit. Kemudian diukur serapan dengan spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelobang 670,5 nm.
Cara  perhitungan  persentase  inhibisi  dihitung dengan rumus sebagai berikut :
% Hambatan (inhibisi) = Ab-Au x 100%  (3) Ab
Ab  = Absorbansi blanko Au   = Absorbansi larutan uji Kemudian  dihitung  nilai  IC 50 ( Inhibition Concentration 50)  yang  merupakan  konsentrasi antioksidan  (bpj)  yang  mampu  menghambat  50% aktivitas radikal bebas.
Uji Aktivitas Antioksidan  metode  FRAP. Uji aktivitas  antioksidan  FRAP  menggunakan  metode
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia  276
setelah dilakukan uji kadar air dengan metode Karl Fischer, hal ini dilakukan untuk menjamin kestabilan ekstrak dalam jangka waktu panjang, semakin besar kadar  air  maka  kemungkinan  tumbuhnya  mikroba dalam  ekstrak  akan  semakin  besar  karena  air merupakan media terbaik tumbuhnya mikroba.
Pada penetapan susut pengeringan dan kadar air didapat hasil yang memenuhi persyaratan yang tertera pada standar mutu bahan alam obat tradisional BPOM RI bahwa ekstrak bahan alam propolis mengandung sedikit air dan senyawa-senyawa volatil serta senyawa termolabil. Nilai susut pengeringan ekstrak lebih besar dibanding kadar air yang menyatakan dalam ekstrak selain terdapat air yang dapat menguap kemungkinan juga  terdapat  senyawa  volatil  lain  atau  senyawa termolabil yang mudah menguap.
Persentase Kadar Abu. Hasil persentase kadar abu  total,  abu  larut  air  dan  tidak  larut  asam  dapat dilihat  pada  Tabel  1.  Kadar Abu  Total  dilakukan untuk  menunjukkan  jumlah  abu  ﬁ siologis  dan  abu nonfisiologis  setelah  dilakukan  proses  pemijaran selama 1 jam pada suhu 450 0 C hingga didapat bobot tetap  dengan  metode  gravimetri.  Kadar  abu  larut dalam air merupakan abu ﬁ siologis, yaitu abu yang berasal dari bagian tanaman atau jaringan tumbuhan seperti kalsium oksalat, logam-logam golongan alkali
dan alkali tanah. Sedangkan, abu tak larut asam adalah abu  nonﬁ siologis  merupakan abu  yang berasal  dari luar tanaman seperti silika dan logam-logam berat.
Jumlah Cemaran Logam Berat. Hasil Cemaran Logam  EBA  propolis  dapat  dilihat  pada  Tabel  2. Cemaran  Logam  dilakukan  untuk  menunjukkan jumlah  logam  berat  yang  terdapat  pada  ekstrak, adapun logam berat yang ditetapkan adalah Pb dan Cd,  penetapan  cemaran  logam  berat  ini  dilakukan dengan  menggunakan  spektrofotometri  serapan atom. Pada penetapan cemaran logam didapat kadar logam berat Pb, Cd, As dan Hg negatif. Hal tersebut memenuhi persyaratan ekstrak bahan alam sehingga dapat digunakan sebagai bahan sediaan karena aman bagi tubuh.
Analisis  Jumlah  Cemaran  Mikroba. Hasil Cemaran Mikroba ekstrak bahan alam propolis dapat dilihat pada Tabel 3. Uji cemaran mikroba dilakukan untuk  menunjukkan  berapa  banyak  mikroba  yang terdapat pada EBA propolis. Pada penetapan cemaran mikroba didapat hasil Angka Lempeng Total ≤ 1 x 10 CFU/g  dimana  persyaratan  suatu  cawan  pada ALT yang dapat dihitung yaitu 30-300 koloni. Sedangkan, hasil Angka Kapang Khamir yaitu ≤ 1 x 10 CFU/g dimana  persyaratan  suatu  cawan  pada AKK  yang dapat  dihitung  yaitu  25-250  koloni.  Hasil  tersebut
Tabel 1. Hasil Penetapan Parameter Spesiﬁ k dan Non Spesiﬁ k.
Pemeriksaan Hasil Pengamatan Standard EBA propolis mengandung wax EBA propolis non wax Penetapan Parameter Mutu Spesifik Bentuk Serbuk Serbuk Serbuk Warna Coklat muda Coklat muda Coklat muda Bau Bau khas propolis Bau khas propolis Bau khas propolis Rasa Rasa khas propolis Rasa khas propolis Rasa khas propolis Kadar sari larut etanol (%) 78.76 ± 0,04 63,99 ± 0,03 > 16 Kadar sari larut air (%) 88.52 ± 0,07 71,92 ± 0,05 > 4 Penetapan Parameter Mutu Non Spesifik Susut pengeringan (%) 3,65 ± 0,03 3,88 ± 0,02 < 10 Kadar air (%) 5,12 ± 0,02 5,11 ± 0,01 < 10 Kadar abu total  (%) 0,80 0,65 < 10 Kadar abu larut dalam air (%) 0,74 0,59 < 4 Kadar abu tidak larut asam (%) 0,0 0,06 < 0,1 Sisa pelarut (%) Negatif Negatif < 0,1 Jenis Penetapan Mikrokapsul propolis tanpa wax Mikrokapsul propolis mengandung wax Persyaratan (BPOM) Cemaran Logam Pb Negatif Negatif < 10 mg/kg Cemaran Logam Cd Negatif Negatif < 0,3 mg/kg Cemaran Logam As Negatif Negatif < 5 mg/kg Cemaran Logam Hg Negatif Negatif < 0,5 mg/kg Tabel 2. Hasil Cemaran Logam.
memenuhi persyaratan yang terdapat pada monograﬁ sehingga  ekstrak  yang  digunakan  dapat digunakan untuk  bahan  sediaan karena  EBA  propolis  tersebut bukan media pertumbuhan mikroba yang baik. Ekstrak propolis juga negative tidak terdapat E. Coli, S. aureus, Salmonella spp dan P. aeruginosa.
Penapisan  Fitokimia. Penapisan  fitokimia dilakukan untuk mengidentiﬁ kasi senyawa metabolit yang  terkandung  dalam  serbuk  mikroenkapsulasi propolis  pada  Tabel  4.  Dari  penapisan  fitokimia yang  telah  dilakukan  diketahui  bahwa  serbuk mikroenkapsulasi propolis dengan wax dan tanpa wax mengandung senyawa polifenol, ﬂ avonoid, saponin, kuinon,  steroid,  triterpenoid,  minyak  atsiri  dan kumarin. Hal ini sama dengan enelitian terdaulu pada skrining ﬁ tokimia yang dilakukan pada propolis (12) . Penetapan Kadar Flavonoid Total. Nilai kadar ﬂ avonoid dapat dilihat pada Tabel 5. Hasil penetapan kadar  ﬂ avonoid  total  dari  serbuk  mikroenkapsulasi propolis  dengan  wax  sebesar  0,31  ±  0,0058%  dan tanpa wax sebesar 1,59 ± 0,0058%. Berdasarkan hasil tersebut  dapat  dilihat  bahwa  kadar  ﬂ avonoid  total terbesar yaitu pada sampel serbuk mikroenkapsulasi propolis tanpa wax.
Penetapan  kadar  ﬂ avonoid  total  menggunakan spektrofotometri  UV-Vis  karena  flavonoid
mengandung  sistem  aromatik  yang  terkonjugasi sehingga menunjukkan pita serapan kuat pada daerah spektrum sinar ultraviolet dan spektrum sinar tampak.
Pengukuran  serapan  panjang  gelombang maksimum dilakukan dari panjang gelombang 200- 600  nm.  Hasil  menunjukkan  panjang  gelombang maksimum  standar  baku  kuersetin  berada  pada panjang  gelombang  427  nm.  Panjang  gelombang maksimum  tersebut  digunakan  untuk  mengukur serapan dari sampel serbuk mikroenkapsulasi propolis dengan wax dan tanpa wax.
Baku  pembanding  yang  digunakan  dalam penetapan kadar ﬂ avonoid total yaitu kuersetin yang merupakan ﬂ avonoid golongan ﬂ avon dan ﬂ avonol, dimana  akan  terjadi  pembentukan  kompleks  antara AlCl 3 dengan gugus keto pada atom C-4 dan gugus hidroksil pada atom C-3 atau C-5 dari golongan ﬂ avon dan ﬂ avonol.
Digunakan AlCl 3 untuk  melihat  pergeseran panjang  gelombang  ke  arah  visible  (tampak). Perlakuan  inkubasi  selama  30  menit  sebelum pengukuran bertujuan agar reaksi berjalan sempurna. Larutan  heksametilentetramin  (HMT)  digunakan sebagai  pereduksi  ﬂ avonoid  menjadi  aglikon  atau glikon.
Penetapan  Kadar  Polifenol  Total. Penetapan kadar  fenol  total  dilakukan  untuk  mengetahui kadar  polifenol  yang  terkandung  didalam  serbuk mikroenkapsulasi  propolis  dengan  wax  dan  tanpa wax.  Senyawa  fenolik  diketahui  memiliki  berbagai aktivitas sebagai antioksidan, melindungi struktur sel, antiinﬂ amasi dan sebagai antiseptik.
Baku pembanding yang digunakan adalah asam galat,  karena  merupakan  senyawa  fenolik  turunan asam  hidroksibenzoat  yang  tergolong  asam  fenol sederhana, stabil, murni dan relatif murah. Penetapan kadar  polfenol  total  menggunakan  reagen  Folin Ciocalteu  yang  akan  mengoksidasi  fenolat  (garam alkali)  dan  gugus  fenolik-hidroksi  mereduksi  asam heteropoli  (fosfomolibdat-fosfotungsat)  menjadi suatu kompleks molibdenum-tungsten yang berwarna biru.  Reaksi  ini  membutuhkan  suasana  basa,  maka ditambahkan  larutan  Na 2 CO 3 agar  terjadi  disosiasi proton  pada  senyawa  fenolik  menjadi  ion  fenolat,
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia 277 PRATAMI ET AL.
Tabel 3. Hasil Cemaran Mikroba. Jenis Penetapan EBA propolis tanpa wax EBA propolis mengandung wax Persyaratan (BPOM) Angka Lempeng Total ≤ 1 x 10 CFU/g ≤ 1 x 10 CFU/g ≤ 1 x 10 4 CFU/g Angka Kapang Khamir ≤ 1 x 10 CFU/g ≤ 1 x 10 CFU/g ≤ 1 x 10 3 CFU/g E. Coli ≤ 1 x 10 CFU/g ≤ 1 x 10 CFU/g ≤ 1 x 10 CFU/g S. aureus Negatif Negatif Negatif Salmonella spp Negatif Negatif Negatif P. aeruginosa Negatif Negatif Negatif Tabel 4. Hasil Penapisan Fitokimia. Tabel 5. Kadar Flavonoid Total. Nama senyawa Hasil pengamatan SMPW SMP Polifenol + + Alkaloid - - Flavonoid + + Saponin + + Tanin - - Kuinon + + Steroid/Triterpenoid +/+ +/+ Kumarin + + Minyak Atsiri + + Sampel Kadar flavonoid total (%) Serbuk propolis dengan wax 0,31 ± 0,0058 Serbuk propolis tanpa wax 1,59 ± 0,0058
tetapi  pereaksi  ini  dan  produknya  tidak  stabil  pada kondisi basa. Semakin besar senyawa fenolik maka semakin banyak ion fenolat yang akan mereduksi asam heteropoli sehingga warna biru yang dihasilkan akan semakin pekat.
Pengukuran  panjang  gelombang  serapan maksimum  dilakukan  untuk  mengetahui  panjang gelombang yang memiliki serapan tertinggi. Larutan baku  asam  galat  100  bpj  dilakukan  pengukuran panjang gelombang serapan maksimum pada rentang panjang gelombang 400-850 nm menggunakan alat spektrofotmeter UV-Vis dan diperoleh hasil serapan maksimum pada panjang gelombang 758,5 nm yaitu 0,2562.
Pengukuran  waktu  inkubasi  bertujuan  untuk mengetahui  waktu  yang  dibutuhkan  suatu  senyawa bereaksi dengan senyawa lainnya sampai terbentuk produk  yang  stabil.  Larutan  baku  asam  galat memberikan nilai serapan yang stabil yaitu pada waktu 85 menit (Gambar 1).
Kurva  baku  asam  galat  diukur  dengan  variasi konsentrasi berbeda. Nilai absorbansi yang diperoleh pada  masing-masing  konsentrasi  digunakan  untuk mendapatkan persamaan garis linear yang nantinya digunakan untuk penetapan kadar polifenol total pada sampel.
Persamaan  regresi  linear  yang  diperoleh y=0,0780+0,0069x  dan  nilai  koeﬁ sien  korelasi  (r) sebesar  0,9981  menunjukan  hubungan  yang  linear
antara  absorbansi  dengan  konsentrasi.  Hubungan linear yang ideal dicapai jika nilai b = 0 dan nilai r = 1 atau mendekati 1.
Kadar  polifenol  total  dalam  sampel  serbuk mikroenkapsulasi propolis dengan wax dan tanpa wax dihitung berdasarkan persamaan regresi kurva baku asam galat. Hasil dapat dilihat pada Tabel 6.
Pada  pengukuran  senyawa fenol  dilakukan  tiga kali  berturut-turut  untuk  keperluan  akurasi  data. Sehingga dari hasil penelitian diperoleh kadar fenolik total serbuk mikroenkapsulasi propolis dengan wax sebesar 83,9082 + 0,0442 mg GAE/g dan tanpa wax sebesar 98,0821 + ± 0,0465 mg GAE/g, berdasarkan hasil  tersebut dapat  dilihat bahwa kadar fenol total terbesar yaitu pada sampel serbuk mikroenkapsulasi propolis tanpa wax.
Uji Aktivitas  Antioksidan  Metode ABTS. Pengujian  aktivitas  antioksidan  menggunakan metode  peredaman  radikal  bebas  ABTS  secara spektrofotometri  UV-VIS  pada  panjang  gelombang 670,5  nm  dengan  waktu  inkubasi  yaitu  6  menit. Aktivitas  antioksidan  diketahui  dari  nilai  serapan beberapa  konsentrasi  sampel  setelah  direaksikan dengan  larutan  radikal  bebas ABTS,  kemudian dihitung  nilai  inhibisi  untuk  mengetahui  kekuatan sampel dalam  meredam  radikal  bebas ABTS.  Nilai IC50  hasil  pengujian  aktivitas  antioksidan  BP kuersetin dan serbuk mikroenkapsulasi propolis dapat dilihat pada Tabel 7.
Larutan Sampel Serapan (A) Konsentrasi (mg/L) Kadar fenol (mg GAE/g) Rata-rata kadar (mg GAE/g) Serbuk mikroenkapsulasi propolis dengan wax 1 0,6573 83,9565 83,9565 83,9082 ± 0,0442 2 0,6569 83,8986 83,8986 3 0,6567 83,8696 83,8696 Serbuk mikroenkapsulasi propolis tanpa wax 1 0,7550 98,1159 98,1159 98,0821 ± 0,0465 2 0,7549 98,1014 98,1014 3 0,7544 98,0290 98,0290
Tabel 6. Hasil penetapan kadar polifenol total serbuk mikroenkapsulasi propolis.
Data disajikan dalam kadar ± SD, n=3
Gambar 1. Graﬁ k penentuan waktu stabil larutan baku asam galat.
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia  278
Vol 19, 2021
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
279 PRATAMI ET AL.
Semakin  kecil  serapan  sampel  berarti  semakin kuat aktivitas antioksidannya. Aktivitas antioksidan dinyatakan dalam IC 50 yang menunjukkan konsentrasi sampel (bpj) yang dapat menghambat 50% aktivitas radikal  bebas.  Semakin  kecil  nilai  IC 50 maka  akan semakin kuat aktivitas antioksidan dari sampel. Dari hasil nilai IC 50 yang didapat serbuk mikroenkapsulasi propolis dengan wax dan tanpa wax memiliki nilai IC 50 dibawah  50  bpj  yang  berarti  masuk  kategori antioksidan sangat kuat.
Uji Aktivitas Antioksidan Metode FRAP. Uji aktivitas  antioksidan  menggunakan  metode  FRAP dipilih karena mudah dilakukan, eﬁ siensi biaya, dan membutuhkan waktu yang relatif cepat dibandingkan metode lainnya. Potensi antioksidan kapasitas reduksi FRAP  dinyatakan  dalam  nilai  EC 50 (µg/mL).  Uji aktivitas  antioksidan  EBA  propolis  dilakukan  pada dua sampel. Nilai EC 50 Kapasitas FRAP sampel EBA propolis  dengan  wax  memiliki  nilai  sebesar  26,41 μg/mL.  Sedangkan  pada  serbuk  mikroenkapsulasi propolis tanpa wax memiliki nilai FRAP EC 50 sebesar 32,10 μg/mL.
Kekuatan  reduksi  kapasitas  FRAP  dinyatakan dalam  nilai  EC 50 .  Semakin  rendah  nilai  kosentrasi yang dapat direduksi oleh reagen FRAP maka semakin kuat aktivitas antioksidannya. Nilai kapasitas kekuatan reduksi  FRAP  yang  paling  rendah  terdapat  pada propolis karang, dibandingkan dengan kedua sampel propolis  lainnya.  Propolis  padatan  memperlihatkan kapasitas kekuatan reduksi FRAP yang paling baik ditunjukkan dengan nilai EC 50 paling rendah dibanding kedua sampel lainnya. Nilai EC50 FRAP EBA propolis yang dianalisis dari EEP lebih rendah daripada ekstrak Garcinia porrecta Laness yang dilaporkan oleh Shinta Marlin dengan nilai antara 1,33 s.d. 19,96 μg/mL (24) .
Pengujian antioksidan dari EBA propolis dengan metode  FRAP,  berdasarkan  kemampuan  senyawa antioksidan  dalam  mereduksi  senyawa  besi(III)- tripiridil-triazin  menjadi  besi(II)-  tripiridil  triazin. Reduksi ion Fe +3 menjadi ion Fe +2 , karena terjadi kelat antara  ion  Fe +3 dengan  cincin  aromatis  nukleoﬁ lik yang terdapat pada senyawa polifenol. Peningkatan nilai  absorbansi  pada  panjang  gelombang  593  nm menandakan  tingginya  kapasitas  kekuatan  reduksi FRAP (25) .

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  disampaikan  untuk  Laboratorium Penelitian  Dosen  Fakultas  Farmasi  Universitas Pancasila  dan  dukungan  dana  hibah  internal  dari Fakultas  Farmasi  Universitas  Pancasila  (No.  001/ FF-UP/NPJ/PPI/VII/2020).

## SIMPULAN
Serbuk  mikroenkapsulasi  propolis  dari  lebah Tetragonula sapiens memenuhi persyaratan standard ekstrak bahan alam menurut PERKA BPOM No 32. Tahun 2019 dan memiliki aktivitas antioksidan yang kuat.  Serbuk  EBA  propolis  dapat  dikembangkan menjadi bahan baku untuk OHT terapi suportif terapi infeksi SARS-CoV2.

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Sahlan M, Mahira KF, Pratami DK, Rizal R, Ansari MJ, Al-Anazi  KM,  et  al.  The  cytotoxic  and  anti- inflammatory  potential  of Tetragonula  sapiens propolis from Sulawesi on raw 264.7 cell lines. J King Saud Univ - Sci. 2021;33(2):101314.
2.   Sahlan  M,  Irdiani  R,  Flamandita  D, Aditama  R, Alfarraj  S, Ansari  MJ,  et  al.  Molecular  interaction analysis  of  Sulawesi  propolis  compounds  with SARS-CoV-2  main  protease  as  preliminary  study for  COVID-19  drug  discovery.  J  King  Saud  Univ. 2021;33(1):101234.
3.   Flamandita  D,  Lischer  K,  Pratami  DK, Aditama R,  Sahlan  M.  Molecular  docking  analysis  of podophyllotoxin  derivatives  in  Sulawesi  propolis as  potent  inhibitors  of  protein  kinases.  In: AIP Conference Proceedings. AIP Publishing LLC; 2020. p. 20010.
4.   Flamandita  D,  Sahlan  M,  Lischer  K,  Pratami  DK. Molecular  Docking  Study  of Anti-Inflammatory Biomarkers in Sulawesi Propolis as Potent Inhibitors of  Cyclooxygenase-2.  In:  2019  IEEE  International Conference on Innovative Research and Development (ICIRD). IEEE; 2019. p. 1–4.
5.   Ripari  N,  Sartori AA,  da  Silva  Honorio  M,  Conte FL, Tasca KI, Santiago KB, et al. Propolis antiviral and  immunomodulatory  activity:  a  review  and perspectives  for  COVID-19  treatment.  J  Pharm Pharmacol. 2021;73(3):281–99.
6.  Yosri N, El-Wahed A, Aida A, Ghonaim R, Khattab OM, Sabry A, et al. Anti-Viral and Immunomodulatory Properties  of  Propolis:  Chemical  Diversity, Pharmacological Properties, Preclinical and Clinical Applications, and In Silico Potential against SARS- CoV-2. Foods. 2021;10(8):1776.
7.  Maaroufi  H.  LxxIxE-like  motif  in  spike  protein of  SARS-CoV-2  that  is  known  to  recruit  the  host
Tabel 7. Hasil nilai IC 50 uji aktivitas antioksidan ABTS.
Sampel Nilai IC 50 (bpj) + SD BP Kuersetin 2,1322 ± 0,0343 Serbuk mikroenkapsulasi propolis dengan wax 2,4177 ± 0,0136 Serbuk  mikroenkapsulasi propolis tanpa wax 2,213 ± 0,0389
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia  280
Vol 19, 2021
PP2A-B56  phosphatase  mimics Artepillin  C ,  an immunomodulator,  of  Brazilian  green  propolis. bioRxiv. 2020;
8.  Santos  LA,  Rosalen  PL,  Dias  NA,  Grisolia  JC, Gomes BJN, Blosfeld-Lopes L, et al. Brazilian Red Propolis  shows  antifungal  and  immunomodulatory activities  against Paracoccidioides  brasiliensis .  J Ethnopharmacol. 2021;277:114181.
9.  Kuropatnicki AK,  Szliszka  E,  Krol  W.  Historical aspects  of  propolis  research  in  modern  times.  Evid Based Complement Alternat Med. 2013;2013:964149.
10.  Toreti VC, Sato HH, Pastore GM, Park YK. Recent progress of propolis for its biological and chemical compositions and its botanical origin. Evidence-based Complement Altern Med. 2013;2013.
11.  Hasan AEZ, Mangunwidjaja D, Sunarti TC, Suparno O,  Setiyono A.  Investigating  the  antioxidant  and anticytotoxic  activities  of  propolis  collected  from ﬁ ve regions of Indonesia and their abilities to induce apoptosis. Emirates J Food Agric. 2014;26(5):390–8.
12.  Pratami DK, Mun A, Sundowo A, Sahlan M, Pratami DK, Mun A. Phytochemical Proﬁ le and Antioxidant Activity of Propolis Ethanolic Extract from Tetragonula Bee. Pharmacogn J. 2018;10(1):73–80.
13.  Sahlan  M,  Devina A,  Pratami  DK,  Situmorang  H, Farida S, Munim A, et al. Anti-inﬂ ammatory activity of Tetragronula species from Indonesia. Saudi J Biol Sci. 2019;26(7).
14.  Kalsum N, Sulaeman A, Setiawan B, Wibawan IWT. Preliminary studies of the immunomodulator eﬀ ect of the propolis Trigona spp. extract in a mouse model.
IOSR J Agric Vet Sci. 2017;10:75–80.
15.  Pratami  DK,  Mun’im A,  Hermansyah  H,  Gozan M,  Sahlan  M.  Microencapsulation  optimization  of propolis ethanolic extract from Tetragonula spp using response  surface  methodology.  Int  J App  Pharm. 2020;12(1).
16.  Pratami DK, Mun’Im A, Yohda M, Hermansyah H, Gozan  M,  Putri YRP,  et  al.  Total  phenolic  content and antioxidant activity of spray-dried microcapsules propolis from Tetragonula species. In: AIP Conference Proceedings. 2019.
17.  Sahlan  M,  Supardi  T.  Encapsulation  of  Indonesian propolis  by  Casein  micelle.  Int  J  Pharma  Bio  Sci. 2013;4(1):297–305.
18.  Djoko  W,  Taurhesia  S,  Djamil  R,  Simanjuntak  P. Standardisasi Ekstrak Etanol Herba Pegagan ( Centella asiatica ). Sainstech Farma. 2020;13(2):118–23.
19.  Wulandari A,  Farida Y,  Taurhesia  S.  Perbandingan Aktivitas  Ekstrak Daun Kelor Dan Teh Hijau  Serta Kombinasi Sebagai Antibakteri Penyebab Jerawat. J Fitofarmaka Indones. 2020;7(2):23–9.
20.  Djamil R, Anelia T. Penapisan ﬁ tokimia,  uji BSLT, dan  uji  antioksidan  ekstrak  metanol  beberapa spesies Papilionaceae. J Ilmu Kefarmasian Indones. 2009;7(2):65–71.
21.  Farnsworth  NR.  Biological  and  phytochemical screening of plants. J Pharm Sci. 1966;55(3):225–76. 22.  Djamil R, Zaidan S. Isolasi Senyawa Flavonoid dari Ekstrak Metanol Daun Katuk ( Sauropus androgynus (L.)  Merr),  Euphorbiaceae.  J  Ilmu  Kefarmasian Indones. 2017;14(1):57–61.
23.  Djamil  R,  Pratami  DK,  Putri  FA,  Octavia  TB. Determination  of  Quality  Parameters  and  Test Antioxidant Activities  of  70%  Ethanol  Extract  of Seroja Leaves ( Nelumbo nucifera Gaertn.). Int J Appl Pharm. 2021 Feb;13(2 SE-):30–3.
24.  Marlin  S,  Elya  B.  Antioxidant  Activity  and Lipoxygenase  Enzyme  Inhibition Assay  with Total Flavonoid Content from Garcinia hombroniana Pierre Leaves. Pharmacogn J. 2017;9(2):257–66.
25.   Mouhoubi-Taﬁ nine  Z,  Ouchemoukh  S,  Tamendjari A. Antioxidant activity of some Algerian honey and propolis. Ind Crops Prod. 2016;88:85–90.