Volume 4, Nomor 2, Desember 2021 e-ISSN: 2598-7453 DOI: https://doi.org/10.31539/bioedusains.v4i2.2630
POLIMORFISME GEN VEGF-A (rs2010963) PADA TURUNAN PERTAMA PENDERITA PENYAKIT JANTUNG KORONER (PJK)
Aurora Fajria Anwari 1 , Novriantika Lestari 2 , Marisadonna Asteria 3 , Sipriyadi 4 , Ismir Fahri 5 , Elvira Yunita 6
Universitas Bengkulu 1,2,3,4,6 RSUD dr. M. Yunus Bengkulu 5
elvirayunita@unib.ac.id 6

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengidentifikasi  polimorfisme  gen  VEGF-A (rs2010963) pada turunan pertama penderita penyakit jantung koroner (PJK) dan non-PJK  di  Kota  Bengkulu.  Metode  yang  digunakan  yaitu  analisis  molekuler polimorfisme  melalui Polymerase  Chain  Reaction  Restriction  Fragment  Length Polimorfism (PCR-RFLP).  Jenis  penelitian  ini  adalah  observasional  deskriptif dengan desain penelitian cross-sectional. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa frekuensi genotipe polimorfisme gen VEGF-A (rs2010963) pada turunan pertama penderita PJK adalah genotipe CC = 11 (52,4 %), GG = 7 (33,3 %) dan CG = 3 (14,3 %). Sebaran genotipe VEGF-A (rs2010963) pada turunan pertama non PJK yaitu  GG  =  9  (42,9  %),  CC  =  7  (33,3  %)  dan  GC  =  5  (23,8  %).  Hasil  analisis statistik memperlihatkan bahwa nilai p yang diperoleh adalah sebesar 0,460 untuk genotipe  polimorfisme  gen  VEGF-A  (rs2010963)  pada  sampel  turunan  pertama PJK  dan  Non-PJK.  Simpulan,  tidak  terdapat  perbedaan  bermakna  polimorfisme gen  VEGF-A  pada  turunan  pertama  kelompok  PJK  dan  non-PJK  di  Kota Bengkulu.
Kata Kunci: PCR-RFLP, Penyakit Jantung Koroner, Polimorfisme Gen, VEGF-A

## ABSTRACT
This  study  aims  to  identify  the  VEGF-A  gene  polymorphism  (rs2010963)  in  the first generation of  patients  with coronary heart  disease  (CHD) and non-CHD in Bengkulu  City. The  method used is  molecular  analysis  of  polymorphism through Polymerase  Chain  Reaction  Restriction  Fragment  Length  Polymorphism  (PCR- RFLP).  This  type  of  research  is  descriptive  observational  with  a  cross-sectional research design. The results of this study indicate that the genotype frequency of the  VEGF-A  gene  polymorphism  (rs2010963)  in  the  first  generation  of  patients with CHD is genotype CC = 11 (52.4 %), GG = 7 (33.3%) and CG = 3 (14.3%). ).  The  distribution  of  the  VEGF-A  genotype  (rs2010963)  in  the  first  non-CHD offspring,  namely  GG  =  9  (42.9%),  CC  =  7  (33.3%)  and  GC  =  5  (23.8%).  The statistical  analysis  results  showed  that  the  p-value  obtained  was  0.460  for  the VEGF-A  gene  polymorphism  genotype  (rs2010963)  in  the  first  CHD  and  Non- CHD  derived  samples.  In  conclusion,  there  was  no  significant  difference  in  the VEGF-A gene polymorphism in the first generation of CHD and non-CHD groups in Bengkulu City.
Keywords: PCR-RFLP, Coronary Heart Disease, Gene Polymorphism, VEGF-A

## PENDAHULUAN
Penyakit Tidak Menular (PTM) merupakan penyebab kematian tertinggi di dunia,  yaitu  71%  atau  41  juta  dari  57  juta  kematian  didunia.  Penyumbang kematian  terbesar  dari  PTM  adalah  penyakit  kardiovaskular  yaitu  17,9  juta kematian  atau  31%  dari  seluruh  penyebab  kematian  di  dunia  (WHO,  2018). Kejadian  PTM  di  Indonesia  menyumbang  kematian  sebesar  73%  dan  35% diantaranya  disebabkan  karena  penyakit  kardiovaskular.  Hasil  Riset  Kesehatan Dasar  (Riskesdas)  pada  tahun  2018  menyatakan  bahwa  prevalensi  penyakit jantung  di  Indonesia  tertinggi  terjadi  di  provinsi  Kalimantan  Utara  sebesar  2,2% kemudian diikuti oleh provinsi DI Yogyakarta dan Gorontalo dengan 2,0%, DKI Jakarta,  Kalimantan  Timur  dan  Sulawesi  Tengah  dengan  1,9%.  Kementrian kesehatan Indonesia mencatat, angka kejadian penyakit jantung koroner (PJK) di provinsi  Bengkulu  pada  tahun  2010  adalah  sebanyak  236  kasus,  tahun  2011 tercatat  271  kasus,  tahun  2012  tercatat  283  kasus  dan  pada  tahun  2015  tercatat lebih  dari  1000  kasus.  Hal  ini  menandakan  terjadinya  peningkatan  kasus  PJK  di provinsi Bengkulu (Kementerian Kesehatan RI, 2018).
Penyakit  Jantung  Koroner  (PJK)  atau  yang  biasa  disebut  Penyakit  Arteri Koroner  merupakan  penyakit  kardiovaskular  yang  terkait  dengan  arterosklerosis (Ma  et  al.,  2018).  Secara  garis  besar,  faktor  risiko  Penyakit  Jantung  Koroner (PJK)  dibagi  menjadi  dua,  yaitu  faktor  risiko  yang  tidak  dapat  dimodifikasi  dan dapat  dimodifikasi  dimana  faktor-faktor  tersebut  saling  berkaitan.  Faktor  risiko yang  tidak  dapat  dimodifikasi  meliputi  jenis  kelamin,  genetik  dan  usia,  serta faktor  risiko  yang  dapat  dimodifikasi,  antara  lain  merokok,  konsumsi  alkohol, hipertensi dan diabetes (Hajar, 2017).
Studi  sebelumnya  mengungkapkan  bahwa  beberapa  variasi  genetik  gen dengan  fungsi  angiogenesis  memainkan  peran  penting  dalam  pengembangan aterosklerosis.  Salah  satunya  yaitu  Vascular  Endhotelial  Growth  Factor  (VEGF) yang  memiliki  sifat  angiogenik  dan  proaterosklerotik.  Interaksi  antara  faktor risiko  genetik  dan  nongenetik  mungkin  memiliki  dampak  signifikan  pada pengembangan PJK (Ma et al., 2018).
Penelitian yang dilakukan oleh  Moradzadegan et  al., (2015) pada pasien di populasi  Iran  menunjukkan  adanya  interaksi  sinergis  antara  polimorfisme  VEGF (+405  G/C)  dan  varian  ACE  yang  mengindikasikan  signifikansi  patofisiologis VEGF  dalam  perkembangan  aterosklerosis  oleh  pengaruh  pada  proses pertumbuhan  dinding  pembuluh  darah.  Selain  itu,  tiga  SNP  dari  VEGF-A (rs699947),  (rs3025039)  dan  (rs2010963)  secara  ekstensif  memperlihatkan hubungannya  dengan  PJK  (Lin  et  al.,  2010).  Hasil  penelitian  Ma  et  al.,  (2018) menemukan bahwa meta-analisis yang melibatkan 29 studi yang memenuhi syarat mendukung keberadaan hubungan antara polimorfisme gen VEGF dan kerentanan terhadap  PJK.  Pada  temuan  ini  juga  dijelaskan  bahwa  polimorfisme  (rs699947) dan (rs2010963) memiliki efek yang lebih mendalam pada angiogenesis, sehingga meningkatkan kerentanan terhadap PJK daripada SNP lain.
Sejauh ini belum ada data polimorfisme gen VEGF-A pada turunan pertama di  Provinsi  Bengkulu.  Identifikasi  terhadap  polimorfisme  gen  tersebut  dapat menjadi  salah  satu  langkah  deteksi  dini  pada  kejadian  PJK,  sehingga  dapat dilaksanakan  tindakan  preventif.  Oleh  karena  itu,  penelitian  ini  dilaksanakan untuk  mengidentifikasi  polimorfisme  gen  VEGF-A  (rs2010963)  pada  turunan pertama penderita PJK dan non-PJK di Kota Bengkulu.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  merupakan  penelitian  observasional  deskriptif  dengan  desain penelitian cross sectional, dilakukan dalam kurun waktu November 2020 – Maret 2021. Sampel pada penelitian ini merupakan turunan pertama penderita PJK dan non  PJK  di  Kota  Bengkulu.  Pengambilan  sampel  darah  dilakukan  di  kota Bengkulu  dan  pengelolaan  data  primer  dilakukan  di  laboratorium  Fakultas Kedokteran  dan  Ilmu  Kesehatan  Universitas  Bengkulu  menggunakan  metode PCR-RFLP.
Kriteria  inklusi  pada  penelitian  ini  yaitu  turunan  pertama  pasien  penderita PJK  di  Kota  Bengkulu,  turunan  pertama  pada  non-PJK  di  Kota  Bengkulu  dan bersedia  menjadi  subjek  penelitian  dan  menyetujui informed  consent .  Kriteria eksklusi pada penelitian ini  yaitu subjek memiliki riwayat gangguan jiwa, subjek mengalami buta huruf dan tuli serta menolak menjadi subjek penelitian.
Teknik  pengambilan  sampel  penelitian  ini  dilakukan  dengan  cara simple random  sampling sehingga  seluruh  populasi  memiliki  kesempatan  yang  sama untuk  menjadi  sampel  dalam  penelitian.  Sampel  penelitian  turunan  pertama penderita  PJK  didapatkan  dengan  rekam  medik  dari  RSUD  dr.  M.  Yunus  Kota Bengkulu.  Pemilihan  calon  sampel  turunan  pertama  non-PJK  pada  penelitian  ini dengan mengisi kuesioner WHO Rose Angina melalui formulir elektronik berbasis online yaitu  dengan  aplikasi Google-form yang  telah  disiapkan  oleh  peneliti. Responden  yang  telah  mengisi Google-form dan  memenuhi  kriteria  kemudian akan  dihubungi  untuk  pengambilan  sampel  darah  dan  mengisi  lembar informed consent .
Sampel  darah  yang  telah  diperoleh  kemudian  diisolasi  material  genetic berupa  DNA  dan  dianalisis  polimorfisme  gen  VEGF-A  dengan  teknik  PCR- RFLP.  Jumlah  sampel  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  sebanyak  42  subjek. Analisis  data  kemurnian  dan  konsentrasi  DNA  diuji  dengan  uji  analisis saphiro- wilk .  Analisis  hubungan  dua  variabel  pada  penelitian  ini  dengan  uji  korelasi ANOVA  dan  uji t-test  independent .  Data  diolhh  menggunakan  perangkat  lunak program statistik Statistical Product and Service Solutions (SPSS).

## HASIL PENELITIAN Karakteristik Subjek Penelitian
Distribusi  data  karakteristik  subjek  penelitian  meliputi  usia,  jenis  kelamin dan riwayat penyakit PJK pada orang tua (tabel 1).
Tabel 1. Karakteristik Subjek Penelitian Karakteristik n % Usia <20 3 7,1 20 – 30 34 81 30 – 40 3 7,1 >40 2 4,8 Jenis Kelamin Laki-laki 14 33,3 Perempuan 28 66,7 Riwayat Penyakit pada Orang Tua PJK 21 50 Non-PJK 21 50
Data tabel 1 menunjukkan bahwa subjek penelitian sebagian besar memiliki karakteristik dengan rentang usia 20–30 tahun (81%) dan didapatkan lebih banyak perempuan (66,7%) dibandingkan dengan laki – laki (33,3 %). Penelitian ini juga menemukan bahwa orang tua subjek dengan riwayat  PJK dan tanpa riwayat PJK memiliki persentase yang sama yaitu 50%.

## Optimasi Suhu Annealing dan Amplifikasi Gen VEGF-A (rs2010963)
Setelah nilai kemurnian sampel DNA yang akan digunakan dianalisis, suhu annealing yang  tepat  untuk  proses  pengerjaan  PCR  juga  dianalisis.  Suhu annealing yang digunakan disesuaikan dengan suhu leleh dari primer dan panjang dari primer (Tm). Nilai Tm dihitung dengan menggunakan rumus derta dianalisis juga  melalui  primer  BLAS  pada  laman National  Center  for  Biotechnology Information (NCBI).  Nilai  Tm  dari  primer forward dan reverse adalah  66 o C, dihitung menggunakan rumus Tm = [2(A+T) + 4(C+G)]. Suhu Tm juga dihitung menggunakan  Primer-BLAST  ( Basic  Local  Alignment  Search  Tool )  dari  NCBI. Analisis  tersebut  menunjukkan  nilai  Tm  primer forward 63,8 o C  dan  primer reverse  62,77 o C,  sehingga  suhu  Tm  yang  digunakan  adalah  62 o C  (Tabel  2). Berdasarkan  protokol  pada  primer,  suhu  Tm  primer forward dan reverse adalah 64,6 o C diturunkan 5 o C menjadi 59,6 o C, sehingga suhu Tm yang digunakan antara 59 o C  dan  66 o C.  Optimasi  suhu  yang  digunakan  diantaranya  59 o C,  60 o C,  61 o C, 62 o C dan 66 o C.
Tabel 2. Urutan Sekuens Nukleotida pada Primer forward dan reverse Sequence (5’-3”) Jumlah Nukleotida Tm GC % Self Complementarity Forward CGACGGCTTGGGGAGATTGC 20 63.80 65 2.00 Reverse GGGCGGTGTCTGTCTGTCTG 20 62.77 65 1.00
Hasil  amplifikasi  PCR  dengan  suhu annealing 60 o C  dan  66 o C  dengan menggunakan  template  DNA  sebanyak  2μl  dan  8μl  yang  dianalisis  dengan elektroforesis  tidak  memunculkan  pita  (Gambar  4  A  dan  B).  Hasil  tersebut  juga terlihat pada suhu 59 o C dengan template DNA sebanyak 2μl (Gambar 4 C). Suhu annealing pada 60 o C dan 61 o C dengan meningkatkan jumlah template DNA yang digunakan  menjadi  9μl  juga  tidak  menunjukan  adanya  pita.  Optimasi  pada  suhu 62 o C  menunjukkan  2  pita  tipis  di  bawah  250  bp,  sehingga  suhu  annealing  yang digunakan adalah 62 o C (Gambar 5).
Gambar 1. Optimasi Suhu Annealing ; Suhu Annealing 66 o C (A); 60 o C (B);
59 o C (C); 60 o C dan 61 o C (D)
Gambar 2. Suhu annealing 62 o C
Amplifikasi  gen  VEGF-A  (rs2010963)  menggunakan  primer  5′- CGACGGCTTGGGGAGATTGC-3′ sebagai forward primer dan 5′
GGGCGGTGTCTGTCTGTCTG  3′  sebagai reverse  primer .  Amplifikasi dilakukan  menggunakan  mesin PCR  Agilent  Technologies  SureCycler  8800 menggunakan  kit Thermo  ScientificTM  DreamTaq  Green  PCR .  Kondisi  PCR yang digunakan disesuaikan dengan hasil dari optimasi suhu yang telah dilakukan, yaitu  denaturasi  awal  95 o C  selama  3  menit,  denaturasi  95 o C  30  detik,  annealing 62 o C 30 detik, ekstensi 72 o C 1 menit dan ekstensi akhir pada suhu 72 o C selama 10 menit.  Hasil  produk  PCR  dilihat  dengan  metode  elektroforesis.  Gambar  6 menunjukkan  hasil  amplifikasi  gen  VEGF-A  (rs2010963)  sebelum  dilakukan pemotongan  dengan  enzim  restriksi,  dianalisis  menggunakan  elektroforesis  dan menunjukkan pita tebal pada lebih dari 300 bp.
A B C D 250 bp
Gambar 3. Hasil Elektroforesis Produk PCR Gen VEGF-A (rs2010963)
Metode Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) Produk  PCR  tersebut  selanjutnya  didigesti  dengan  enzim  restriksi  BsmFI ( New England Biolabs , USA) gambaran elektroforesis memperlihatkan pita pada 469 bp (alel C) dan 195 bp dan 274 bp (alel G) (Farhangi et al., 2020). Campuran yang  digunakan  untuk  polimorfisme  gen  VEGF-A  (rs2010963)  adalah  5  µl  10X NEBuffer,  0,75  µl  enzim  BsmFI  (1-2  U),  10  µl  produk  PCR,  serta  penambahan nuclease free water sampai dengan total volume reaksi 50 µl. Reaksi ini kemudian di inkubasi pada suhu 65 o C selama 1 – 2 jam dan dilakukan inaktivasi enzim pada suhu 80 o C selama 20 menit. Hasil inkubasi dilakukan elektroforesis menggunkan gel agarose 1% selama 60 menit dengan voltase 50 volt. Hasil pemotongan enzim restriksi dapat dilihat pada gambar 7, 8 dan 9.
Gambar 4. Elektroforesis Hasil PCR-RFLP Sampel Turunan Pertama PJK
Gambar 5. Elektroforesis Hasil PCR-RFLP Sampel Turunan Pertama Non-PJK
Gambar 6. Elektoforesis Hasil PCR-RFLP Sampel Turunan Pertama Non-PJK
Persentase  genotipe  polimorfisme  gen  VEGF-A  (rs2010963)  pada  turunan pertama  penderita  Penyakit  Jantung  Koroner  (PJK)  dan  Non-PJK  ditunjukkan pada  Tabel  3.  Berdasarkan  tabel  tersebut,  didapatkan  sebaran  genotipe  VEGF-A (rs2010963) pada turunan pertama penderita PJK adalah genotipe CC = 11 (26, 2 %), GG = 7 (16,7 %) dan GC = 3 (7,1 %). Sebaran genotipe VEGF-A (rs2010963) pada turunan pertama non PJK adalah GG = 9 (21,4 %), CC = 7 (16,7 %) dan GC =  5  (11,9%).  Sebaran  genotipe  VEGF-A  (rs2010963)  secara  keseluruhan  adalah CC = 18 (42,9%), GG = 16 (38,1%) dan GC = 8 (19%).
Penelitian  ini  mendapatkan  hasil  genotipe  GG,  CG  dan  CC  dari polimorfisme  gen  VEGF-A  (rs2010963)  menunjukkan  bahwa  tidak  adanya perbedaan bermakna  antara turunan pertama penderita PJK dan non  PJK dengan uji Chi-Square dengan nilai p =0,525, p =0,432 dan p=0,212. Hasil penelitian ini dikatakan tidak bermakna secara statistik. Didapatkan nilai  p pada uji perbedaan kemaknaan  ANOVA  adalah  0,460  dapat  diartikan  bahwa  genotipe  polimorfisme
gen VEGF-A (rs2010963) pada sampel turunan pertama PJK dan Non-PJK tidak berbeda signifikan secara statistik.
Tabel 3. Distribusi Genotipe VEGF-A (rs2010963) pada Turunan Pertama PJK
dan Non-PJK Variabel Genotipe VEGF-A (rs2010963) GG (%) CG (%) CC (%) Turunan Pertama PJK 7 (16,7) 3 (7,1) 11 (26,2) Turunan Pertama non PJK 9 (21,4) 5 (11,9) 7 (16,7) Total 16 (38,1) 8 (19) 18 (42,9)

## PEMBAHASAN Karakteristik Subjek Penelitian
Penelitian  ini  terdapat  42  subjek  penelitian  yang  telah  memenuhi  krireria inklusi dengan karakteristik subjek, yaitu usia, jenis kelamin dan riwayat penyakit jantung koroner (PJK) pada orang tua. Berdasarkan hasil penelitian ini didapatkan bahwa rentang usia tertinggi adalah 20 – 30 tahun (71,4%) dengan jenis kelamin subjek  terbanyak  adalah  perempuan  sebanyak  25  orang  (59,5%).  Berdasarkan laporan  profil  PTM  kelompok  usia  tertinggi  kasus  Penyakit  Jantung  Koroner (PJK) adalah 45 – 64 tahun dan lebih banyak terjadi pada laki-laki (32.314 kasus) dibanding perempuan (18.846 kasus) (Kementerian Kesehatan RI, 2018). Namun, berdasarkan  RISKESDAS  2018,  jenis  kelamin  terbanyak  pada  kejadian  penyakit jantung adalah perempuan.
Hasil  yang  sama  pada  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Woodward  (2019) bahwa  kejadian  PJK  lebih  tinggi  pada  perempuan  dibanding  laki-laki.  Penelitian tersebut  menunjukkan  bahwa  setelah  memperhitungkan  faktor  lain,  perempuan beresiko  1,61  kali  (95%  CI  1,43  –  1,81,  P  0,0001)  dibanding  laki  –  laki (Woodward, 2019). Perempuan yang belum mengalami menopause risiko terkena PJK  lebih  kecil  dibanding  laki  –  laki.  Seiring  dengan  meningkatnya  usia  dan menopause  kadar  estrogen  akan  menurun,  sehingga  risiko  terkena  penyakit jantung meningkat (El Khoudary et al., 2020).
Data  subjek  penelitian  ini  didapatkan  subjek  dengan  riwayat  penyakit jantung  koroner  pada  orang  tua  yaitu  50%.  Analisis  data  dalam  suatu  penelitian, menunjukkan  bahwa  riwayat  keluarga  yang  PJK  mempercepat  proses aterosklerotik karena diatesis genetik menyebabkan subjek menjadi aterosklerosis pada  usia  yang  lebih  muda.  Riwayat  keluarga  yang  PJK  juga  merupakan  faktor risiko independen yang kuat untuk pengembangan aterosklerosis, meskipun tidak berkorelasi  dengan  tingkat  keparahan  dari  lesi  aterosklerotik  (Jeemon  et  al., 2019).

## Optimasi Suhu Annealing, Amplifikasi Gen VEGF-A (rs2010963) dan RFLP
Penelitian  ini  menghitung  Tm  menggunakan  rumus  berdasarkan  panjang dari primer didapatkan suhu 66 o C, namun hasil elektroforesis tidak menunjukkan adanya  pita.  Berdasarkan  protokol  pada  primer forward dan reverse didapatkan suhu  64,6 o C  diturunkan  5 o C  sehingga  suhu annealing yang  didapat  59 o C,  60 o C dan 61 o C, namun juga tidak menunjukkan adanya pita. Hal ini disebabkan karena suhu annealing yang  digunakan  belum  optimum  untuk  mengidentifikasi  gen VGEF-A  (rs2010963)  (Nurjayadi  et  al.,  2020).  Perhitungan  suhu  Tm  yang
dihitung menggunakan primer BLAST NCBI  yaitu 62 o C dari hasil elektroforesis menunjukkan  adanya  pita.  Suhu  62 o C  merupakan  suhu  yang  paling  optimum dalam  mengidentifikasi  gen  VEGF-A  (rs2010963).  Suhu  denaturasi  yang digunakan  untuk  DNA  cetakan  adalah  95 o C  disesuaikan  dengan  panjang  DNA template dan  fragmen  DNA  target.  Tahap  ekstensi  primer  pada  proses  PCR dilakukan  selalu  pada  suhu  72 o C  karena  merupakan  suhu  yang  paling  optimum polimerase DNA yang digunakan dalam proses PCR (Kartika, 2018).
Penelitian  ini  mendapatkan  hasil  menunjukkan  bahwa  tidak  adanya perbedaan  bermakna  pada  genotipe  dari  polimorfisme  gen  VEGF  rs2010963 antara  turunan  pertama  penderita  PJK  dan  non  PJK,  hal  ini  didukung  oleh  hasil studi meta analisis yang dilakukan Wang, et al (2017) yang menggunakan 8 studi, perbandingan  genotipe  secara  keseluruhan  dari  polimorfisme  gen  VEGF (rs2010963)  baik  dari  perbandingan  alel  maupun  homozigot  (p=0,182,  p=0,160) menunjukkan  tidak  bermakna  secara  statistik.  Dalam  analisis  subkelompok menurut  jenis  PJK,  polimorfisme  gen  VEGF-A  (rs2010963)  dikaitkan  dengan risiko  infark  miokardium  (CC  vs.  GG  P  =  0.029;  CC  vs.  CG  +  GG  P  =  0,047) (Wang et al., 2017). Begitu juga pada hasil penelitian ini untuk genotipe CG sama dengan  penelitian  Nia  et  al.,  (2017)  yang  menyatakan  tidak  ada  hubungan signifikan  yang  ditemukan  antara  heterozigot  CG  dari  polimorfisme  VEGF (rs2010963) dan risiko PJK ( P = 0,175).
Hasil penelitian ini juga selaras dengan penelitian yang dilakukan Ma, et al (2018)  yang  menggunakan  sampel  penelitian  dengan  ukuran  yang  kecil, didapatkan  hubungan  antara  genotipe  CC  +  GC  vs  GG  dan  GC  vs  GG  dari polimorfisme  gen  VEGF  rs2010963  dengan  kerentanan  terhadap  PJK  tidak bermakna secara statistik dengan nilai P=0,150 dan P=0,290 (Ma et al., 2018). Hasil  penelitian  Nia  (2017)  dengan  jumlah  sampel  sebanyak  520  subjek dengan  347  subjek  pasien  dengan  positif  PJK  juga  mendapat  hasil  serupa  yaitu memiliki  hubungan  yang  kuat  antara  genotipe  CC  dari  polimorfisme  VEGF (rs2010963) dan PJK (P = 0,003). Analisis statistik menunjukkan perbedaan yang signifikan  dari  distribusi  genotipe  di  situs  polimorfik  VEGF  rs2010963  antara  2 kelompok.  Individu  dengan  genotipe  CC  lebih  rentan  terhadap  perkembangan gagal  jantung  setelah  IMA.  Risiko  ditemukan  menjadi  7  kali  lebih  besar  jika dibandingkan  dengan  pasien  dengan  genotipe  CG  (p  =  0,016)  dan  5  kali  lebih besar daripada pasien dengan genotipe GG (p = 0,05).
Hasil  yang  berbeda  ini  dapat  disebabkan  karena  perbedaan  jumlah  sampel. Penelitian  ini  menggunakan  sampel  dengan  ukuran  yang  kecil,  sedangkan penelitian-penelitian sebelumnya mengunakan sampel dengan jumlah yang besar, dikarenakan  jumlah  sampel  dari  kedua  kelompok  sampel  saat  ini  terbatas diperlukan  studi  lebih  lanjut  yang  dirancang  dengan  baik  dengan  ukuran  sampel yang lebih besar. Dengan demikian, ekspresi genotipe CC dari polimorfisme gen VEGF-A  (rs2010963)  pada  turunan  pertama  penderita  PJK  tinggi  dibanding genotipe lain, meskipun tidak terdapat hubungan yang bermakna secara statistik.

## SIMPULAN
Genotipe dari polimorfisme gen VEGF-A (rs2010963) yang telah dianalisis tidak  memiliki  perbedaan  yang  bermakna  pada  turunan  pertama  penderita  PJK dan  non  PJK.  Meskipun  demikian,  penelitian  ini  mengidentifikasi  adanya peningkatan  ekspresi  genotipe  CC  dari  polimorfisme  gen  VEGF-A  (rs2010963) pada  turunan  pertama  penderita  PJK.  Genotipe  tersebut  merupakan  tipe polimorfisme yang dikaitkan dengan kejadian PJK.

## DAFTAR PUSTAKA
El  Khoudary,  S.  R.,  Aggarwal,  B.,  Beckie,  T.  M.,  Hodis,  H.  N.,  Johnson,  A.  E., Langer, R. D., Limacher, M. C., Manson, J. E., Stefanick, M. L., & Allison, M.  A.  (2020).  Menopause  Transition  and  Cardiovascular  Disease  Risk: Implications  for  Timing  of  Early  Prevention:  A  Scientific  Statement  from the  American  Heart  Association. Circulation , 142 (25),  506–532. https://doi.org/10.1161/CIR.0000000000000912
Farhangi,  M.  A.,  Vajdi,  M.,  Nikniaz,  L.,  &  Nikniaz,  Z.  (2020).  Interaction between  Vascular  Endothelial  Growth  Factor-A  (rs2010963)  Gene Polymorphisms and Dietary Diversity Score on Cardiovascular Risk Factors in  Patients  with  Metabolic  Syndrome. Lifestyle  Genomics , 13 (1),  1–10. https://doi.org/10.1159/000503789
Hajar,  R.  (2017).  Risk  Factors  for  Coronary  Artery  Disease:  Historical Perspectives. Heart Views , 18 (2), 109–114. https://dx.doi.org/10.4103%2FHEARTVIEWS.HEARTVIEWS_106_17
Jeemon, P., Chacko, M., Sarma, P. S., Harikrishnan, S., & Zachariah, G. (2019). Family History of Cardiovascular Disease and Risk of Premature Coronary Heart  Disease:  A  Matched  Case-Control  Study. F1000Research , 8 ,  1–14. https://doi.org/10.12688/wellcomeopenres.15829.1
Kartika,  A.  I.  (2018).  Optimasi  Annealing  Temperature  Primer  mRNA  RECK dengan  Metode  One  Step  qRT-PCR. Jurnal  Labora  Medika  2 (1),  22–33. https://jurnal.unimus.ac.id/index.php/JLabMed/article/view/3348/pdf Kementerian  Kesehatan  RI.  (2018). Laporan  Hasil  Riset  Kesehatan  Dasar (RISKESDAS) Indonesia Tahun 2018 . https://www.litbang.kemkes.go.id/laporan-riset-kesehatan-dasar-riskesdas/ Lin, T. H., Su, H. M., Wang, C. L., Voon, W. C., Shin, S. J., Lai, W. Ter, & Sheu,
S.  H.  (2010).  Vascular  Endothelial  Growth  Factor  Polymorphisms  and Extent  of  Coronary  Atherosclerosis  in  Chinese  Population  with  Advanced Coronary  Artery  Disease. American  Journal  of  Hypertension , 23 (9),  960– 966. https://doi.org/10.1038/ajh.2010.104
Ma, W. Q., Wang, Y., Han, X.  Q., Zhu, Y., &  Liu,  N. F. (2018). Association of Genetic  Polymorphisms  in  Vascular  Endothelial  Growth  Factor  with Susceptibility to Coronary Artery Disease: A Meta-Analysis. BMC Medical Genetics , 19 (1), 1–12. https://doi.org/10.1186/s12881-018-0628-3
Moradzadegan,  A.,  Vaisi-Raygani,  A.,  Nikzamir,  A.,  &  Rahimi,  Z.  (2015). Angiotensin  Converting  Enzyme  Insertion/Deletion  (I/D)  (rs4646994)  and VEGF Polymorphism (+405G/C; Rs2010963) in Type  II Diabetic Patients:
Association with The Risk of Coronary Artery Disease. JRAAS - Journal of the Renin-Angiotensin-Aldosterone
System , 16 (3), 672–680. https://doi.org/10.1177/1470320313497819
Nia, S.,  Ziaee, S., Boroumand, M. A.,  Anvari, M. S., Pourgholi,  L.,  & Jalali,  A. (2017).  The  Impact  of  Vascular  Endothelial  Growth  Factor  +405  C/G Polymorphism  on  Long-Term  Outcome  and  Severity  of  Coronary  Artery Disease. Journal  of  Clinical  Laboratory  Analysis , 31 (4),  1–7. https://doi.org/10.1002/jcla.22066
Nurjayadi, M., Efrianti, U. R., Azizah, N., Julio, E., Nastassya, L., & Saamia, V. (2020).  Optimum  Temperature  of  the  Amplification  of  the  fljB  Gene  of Salmonella typhimurium . Empowering Science and Mathematics for Global Competitiveness , 53–58. https://doi.org/10.1201/9780429461903-9.
Wang, Y., Huang, Q., Liu, J., Wang, Y., Zheng, G., Lin, L., Yu, H., Tang, W., & Huang,  Z.  (2017).  Vascular  Endothelial  Growth  Factor  A  Polymorphisms are  Associated  with  Increased  Risk  of  Coronary  Heart  Disease:  A  Meta- Analysis. Oncotarget , 8 (18), 30539–30551. https://doi.org/10.18632/oncotarget.15546
World Health Organization (WHO). (2018). Noncommunicable Diseases Country Profiles 2018 . https://apps.who.int/iris/handle/10665/274512 Woodward,  M.  (2019).  Cardiovascular  Disease  and  the  Female  Disadvantage. International Journal of Environmental Research and Public Health , 16 (7), 1-13. https://doi.org/10.3390/ijerph16071165