Jurnal Pharmascience, Vol. 10, No.1, Februari 2023, hal: 165-174 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 https://ppjp.ulm.ac.id/journal/index.php/pharmascience Research Article

## Penurunan Produksi Reactive Oxygen Species (ROS) Fibroblas dengan Nano Kitosan Kumbang Tanduk (Xylotrupes gideon)
Komariah 1 *, Cynthia Priscilla 2 , Rahman Wahyudi 3 , Pretty Trisfilha 3 , Didi Nugroho 4 ,
1 Program Studi Pendidikan Dokter Gigi, Fakultas Kedokteran Gigi sub-divisi Histologi, Universitas Trisakti, Jakarta Barat, DKI Jakarta, Indonesia
2 Program Studi Profesi Dokter Gigi, Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Trisakti, Jakarta Barat, DKI Jakarta, Indonesia
3 Program Studi Pendidikan Dokter Gigi, Fakultas Kedokteran Gigi sub-divisi Patologi, Universitas Trisakti, Jakarta Barat, DKI Jakarta, Indonesia
4 Program Studi Pendidikan Dokter Gigi, Fakultas Kedokteran Gigi sub-divisi Farmakologi, Universitas Trisakti, Jakarta Barat, DKI Jakarta, Indonesia
Email: komariah@trisakti.ac.id

## ABSTRAK
Fibroblas  berperan  dalam  proses  penyembuhan  luka  dengan  pembentukan pembuluh  darah,  penggerakan  serta  proliferasi,  deposit  matriks  ekstraseluler  dan remodeling jaringan. Pada penyembuhan luka, netrofil dan makrofag akan mengalami peningkatan penggunaan oksigen sehingga memproduksi ROS, peningkatan produk ini akan  menyebabkan  stres  oksidatif  pada  fibroblas  yang  akan  mempengaruhi  proses migrasi  dan  proliferasi  selama  proses  penyembuhan  luka.  Kandungan  gugus  amino  (- NH2) dan gugus hidroksil (-OH) pada nano kitosan mampu mengurangi stres oksidatif fibroblas.  Penelitian  bertujuan  untuk mengetahui  kemampuan nano kitosan  X.  gideon dalam menurunkan produksi ROS fibroblas. Penelitian terbagi menjadi enam kelompok terdiri  dari  kontrol  negatif  (H 2 O 2 ),  kontrol  pembanding,  kontrol  asam  askorbat,  nano kitosan konsentrasi 200, 400, dan 600 µg/mL. Produksi ROS dilihat menggunakan probe 2′,7′-Dichlorodihydrofluorescein diacetate (H2DCF-DA). Produksi fibroblas diperlihatkan  dengan  intensitas  fibroblas  terflouresen  hijau  dihitung  menggunakan software image J. Rerata produksi ROS pada kelompok nano kitosan 200, 400, dan 600 µg/mL  berbeda  signifikan  dengan  kontrol  negatif  (p<0,05),  sedangkan  yang  diberikan asam askorbat tidak  signifikan (p > 0,05) dengan perlakuan 200 dan 600 µg/mL, namun signifikan dengan nano kitosan 400 µg/mL. Nano kitosan X. gideon mampu menurunkan produksi ROS fibroblas pada konsentrasi 400 µg/mL.
Kata Kunci: Nano Kitosan, X. gideon, ROS, Fibroblas, Fluoresen

## ABSTRACT
Fibroblasts play a role in wound healing by forming blood vessels, mobilizing and proliferation,  depositing  extracellular  matrix  and  tissue  remodelling.  In  wound  healing, neutrophils and macrophages will experience an increase in oxygen use, resulting in ROS production. An increase in these products will cause oxidative stress in fibroblasts, affecting the migration and proliferation processes during the wound healing process. The content of amino groups (-NH2) and hydroxyl groups (-OH) in nano chitosan can reduce fibroblast oxidative  stress.  This  study  aimed  to  determine  the  ability  of  X.  gideon  nano  chitosan  to reduce fibroblast ROS production. The study was divided into six groups: negative control (H2O2),  control  control,  ascorbic  acid  control,  and  nano  chitosan  concentrations  of  200, 400 and 600 µg/mL. ROS production observes using the 2′,7′-Dichlorodihydrofluorescein diacetate (H2DCF-DA) probe. The intensity of greenfluorescent fibroblasts calculated using Image J software showed the production of fibroblasts. The mean ROS production in the 200, 400, and 600 µg/mL nano-chitosan groups was significantly different from the negative control  (p<0.05),  whereas  those  given  ascorbic  acid  were  insignificant. (p>0.05)  with  200 and 600 µg/mL treatments, but significant with 400 µg/mL nano chitosan. X. gideon nano chitosan reduced fibroblast ROS production at 400 µg/mL concentration.
Keywords: Nano Chitosan, X. gideon, ROS, Fibroblasts, Fluorescent

## I. PENDAHULUAN
Fibroblas  merupakan  sel  yang umum  ditemukan  dalam  jaringan  ikat (Gabbott  dan  Sun,  2018),  serta  memiliki kemampuan untuk memproduksi substansi protein  serat  dan  substansi  dasar  yang penting  dalam  proses  penyembuhan  luka (Kurniawati et al ., 2015). Selama penyembuhan  luka,  fibroblas  berperan dalam proses fibroplasia, yang  melibatkan pembentukan pembuluh darah baru, migrasi  dan  proliferasi  fibroblas,  deposisi matriks  ekstraseluler,  serta  organisasi jaringan  fibrous  (Masir et  al .,  2012).
Fibroblas bertanggung jawab dalam memproduksi  matriks  ekstraseluler  yang membentuk  jaringan  ikat  dan  berperan penting  pada  proses  penyembuhan  luka (Gabbott dan Sun, 2018).
Luka  terjadi  akibat  terputusnya kontinuitas  jaringan  baik  oleh  trauma akibat benda,  suhu, bahan  kimia, ledakan, aliran  listrik  ataupun  gigitan  hewan (Yuslianti et  al .,  2015;  Gonzales et  al ., 2016).  Pada  bidang  kedokteran  gigi,  luka dapat  terjadi  akibat  tindakan  seperti pencabutan, pembedahan, dan pembersihan  karang  gigi  (Ekmekcioglu dan Unur, 2017). Selain itu, luka dapat pula ditimbulkan  akibat  adanya  perubahan patologis,  seperti  ulkus  dekubitalis,  ulkus traumatikus,  periodontitis,  dan  gingivitis (Anura,  2014).  Sebagai  respon  terhadap luka, tubuh mengalami proses penyembuhan (Gonzales et al ., 2016).
Ada empat fase dalam penyembuhan luka yaitu, fase  hemostasis, inflamasi,  proliferasi,  dan maturation
(Patil  dan  Leipzig,  2018).  Fase  inflamasi terjadi  hampir  bersamaan  dengan  fase hemostasis,  terjadi  proses  pembekuan darah  dan  infiltrasi  sel-sel  inflamasi.  Fase proliferatif ditandai dengan proliferasi dari fibroblas, granulasi, kontraksi, dan epitelisasi.  Fase  terakhir  adalah  fase maturasi  atau  pemulihan  jaringan  yang diakhiri dengan terbentuknya jaringan parut (Gonzales et al ., 2016).
Selama  proses  penyembuhan  luka, sel-sel inflamasi akan mengalami peningkatan  pada  penggunaan  oksigen sehingga  akan  memproduksi  ROS  yaitu superoksida dan hidrogen, yang mempunyai  peran  sebagai  bakterisidal untuk membantu membunuh patogen serta pensinyalan intraseluler seperti menginduksi vascular  endothelial  growth factor (VEGF) dalam meningkatkan proses angiogenesis peroksida (Arief dan Widodo, 2018).  Pada  jumlah  yang  rendah,  ROS memiliki  efek  menguntungkan  terhadap beberapa  proses  fisiologis  tubuh  seperti dalam proses penyembuhan luka, meregulasi  reaksi  reduksi-oksidasi,  serta dapat  melawan  patogen  yang  menginvasi tubuh (Bhattacharyya et al ., 2014). Namun,
ROS dalam kadar yang terlalu tinggi dapat menyebabkan  prooksidan  meningkat  dan dapat  mengarahkan  sel  untuk  mengalami stres  oksidatif,  yaitu  suatu  kondisi  saat terjadinya  kelebihan  produksi  ROS  dan defisiensi  dari  antioksidan  enzimatik,
menyebabkan  ketidakseimbangan  antara jumlah  prooksidan  dan  antioksidan  pada sel (Phaniendra et al ., 2015). Keadaan ini, dapat  mengganggu  fungsi  komunikasi antar  sel  dan  menyebabkan  terjadinya kerusakan pada jaringan sehingga mengganggu  proses  penyembuhan  luka, seperti memperpanjang fase inflamasi dan juga  menghambat  proses  proliferasi  serta pembentukan  kolagen  oleh  fibroblas (Pisoschi dan Pop, 2015).
Kitosan  merupakan  turunan  kitin yang memiliki aplikasi yang luas (Sudha et al .,  2015).  Kitosan  merupakan  amina polisakarida  yang  dihasilkan  melalui proses deasetilasi kitin. Kitosan mempunyai sifat non-toksik, biodegradable , biokompatibel , dan bioaktif sehingga  aman  untuk  diaplikasikan  dalam berbagai  bidang  kehidupan  (Sudha et  al ., 2015),  serta  aplikasi  kitosan  secara biomedis sangat bermanfaat sebagai pengantar  obat,  agen  antibakteri,  dan antioksidan (Cheung et al., 2015).
Kitosan  dapat  diperoleh  dari  hasil pengolahan  limbah  cangkang  udang, kepiting, kapang, dan serangga (Komariah et  al .,  2017),  seperti  kumbang  tanduk ( Xylotrupes gideon ), yaitu serangga merugikan  yang  dapat  dimanfaatkan menjadi  produk  ekonomis  seperti  kitosan (Komariah  dan  Astuti,  2012).  Tujuan penelitian  ini  untuk  mengetahui  efek
pemberian  nano  kitosan X.  gideon dalam menurunkan produksi ROS fibroblas.

## II. METODE

## A. Alat dan Bahan
X.  gideon diperoleh  dari  daerah Cangkurawok,  Damaga,  Balumbang  Jaya, Bogor  Jawa  Barat. X.  gideon dikeringkan dengan  dijemur  selama  lima  hari  hingga kering, setelah X. gideon kering dilakukan proses  demineralisasi  menggunakan  HCL 1N  (v/v)  (Cat  No.  1.00317.2500, Merck , Jerman),  deproteinisasi  dengan  NaOH  3N (b/v),  (Cat  No.  106498.0500, Merck ® , Jerman), dekolorisasi NaOCl 4 % (v/v) (Cat No. 105614, Frankfurter ® ), dan deasetilasi NaOH  50%  (b/v)  (Cat  No.  106498.0500, Merck ® , Jerman) (Komariah, 2013).
Pembuatan nano kitosan dengan menggunkan  asam  asetat  1-2%  v/v  (CAS 64-19-7, Merck ® , Jerman), tween 80 0,1% v/v  (CAS  9005-65-6, Merck ® ,  Prancis), sodium  tripolifosfat  (CAS  7758-29-4, Sigma-aldrich ® , USA). Pewarnaan flourensensi  hijau  ROS  menggunkan 2,7- Dichlorofluorescin  Diacetate (H2DCF- DA,  CAS  4091-99-0, Santa  cruz ® ,  USA), dulbecco′s  Modified  Eagle′s  Medium-high glucose (DMEM,  D5796, Sigma-aldrich ® , Jerman), phosphate  Buffer  Saline (PBS, Gibco™ 10010023,  Swedia), fetal  bovine serum (FBS, Gibco™ 16000044, Swedia), hidrogen peroksida (H 2 O 2 , CAS 7722-84-1,
Merck ® ,  Jerman).  Penelitian  dilakukan  di
Laboratorium  Terpadu  Yarsi  dengan standar ISO 17025.

## B. Pembuatan Nano Kitosan
Gelasi  ionik  merupakan  metode yang  digunakan  untuk  membuat  nano kitosan  menggunakan magnetic  stirrer ( IKA ™  RH  Basic  2,  Jerman).  Kitosan berupa serpihan ditimbang sebanyak 1,5 g, kemudian  dilarutkan  dalam  asam  asetat 1,5%  sebanyak  50-100  ml.  Tambahkan aqua  bidestilata  hingga  500  mL  dan masukkan magnetic  bar (3  cm),  lakukan pengadukan selama 2 jam lalu dimasukkan tween  80  (0,1%)  sebanyak  0,1  ml,  aduk kembali  selama  30  menit,  setelah  itu dimasukkan  STPP  0,1% sebanyak  100  ml tetes  demi  tetes,  aduk  larutan  selama  30 jam (Komariah, 2020).
Proses terakhir dilakukan netralisasi  menggunakan  NaOH  10%, hingga  pH  netral.  Pengenceran  dilakukan dari  larutan  stok  serum  nano  kitosan dengan  konsentrasi  3000  µg/mL  yang diencerkan menjadi larutan uji. Pembuatan dari  kitin  hingga  menjadi  serum  nano kitosan dapat dilihat pada Gambar 1.
Fibroblas  yang  digunakan  berasal dari  kulit  manusia  yang  diperoleh  dari Biorepositori  Pusat  Penelitian  Sel  Punca, Universitas Yarsi, Indonesia. Fibroblas dari biorepositori  ditanam dan diinkubasi pada suhu 37°C dengan 5% CO 2 selama 24 jam. Setelah  24  jam,  media  pertumbuhan
fibroblas  digantikan  dengan  media  yang mengandung  DMEM,  10%  FBS,  dan antibiotik antimikotik.
Gambar  1. Proses  pembuatan  kitin X. gideon menjadi nano kitosan
Pada  uji  ROS kelompok  penelitian terbagi  menjadi  6  kelompok  yaitu, kelompok  tanpa  H 2 O 2 (sebagai  kelompok pembanding),  kelompok  dengan  H 2 O 2 tanpa perlakuan (kontrol negatif), kelompok dengan antioksidan non enzimatik  asam  askorbat  (kontrol  positif) dan  kelompok  perlakuan  yang  diberikan nano  kitosan X gideon konsentrasi 200,
400, dan 600µg/mL.
Uji produksi ROS dilakukan dengan  penanaman  fibroblas  sebanyak 10.000  sel/well  dan  diinkubasi  selama  24 pada suhu 37℃ serta  5%  CO 2 . Setelah 24 jam, media pertumbuhan fibroblas digantikan dengan media yang mengandung  DMEM,  10%  FBS,  dan  1% Penicillin.  Lima  kelompok  diberikan  stres oksidatif  menggunakan  H 2 O 2 dengan konsentrasi 100 𝜇 M dan diinkubasi kembali selama  1  jam.  Kelompok  yang  telah diberikan stressor diberikan asam askorbat
(vitamin  C),  kelompok  negatif  tanpa diberikan nano kitosan, sedangkan kelompok perlakuan diberikan nano kitosan  dengan  konsentrasi  200,  400,  dan 600 µg/mL, lalu  diinkubasi selama 3 jam. Dilakukan pencucian dengan 1X PBS satu kali,  setelah  itu  H2DCF-DA  ditambahkan ke  masing-masing  media  kultur  dengan konsentrasi  10  μM  dilanjutkan  dengan inkubasi  37℃  selama  30  menit  dalam gelap.  Kemudian  pencucian  kembali dengan  1X  PBS  dan  dilihat  dengan mikroskop fluoresens (mikroskop fluoresens Zeiss  Observer Z.1,  Jerman).
Foto  hasil  pengamtan    dianalisis  untuk menghitung  fraksi  keseluruhan  dari  sel terflouresensi hijau menggunakan Image J Software (Veronica et al ., 2021). Persentase  sel  penghasil  ROS  adalah  sel dengan  intensitas  flouresen  warna  hijau dibagi  dengan  jumlah  total  sel  dikalikan 100 (Gouzos et al ., 2020).

## C. Analisis Data
Data  pengamatan  dengan Image  J dilakukan  uji  normalitas,  jika  p>0,05 dilanjut  dengan  uji  parametrik ONEWAY ANOVA ,  jika  ada  perbedaan  signifikan dilakukan uji post hoc Tukey.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil uji memperlihatkan kelompok fibroblas yang diberikan stressor sebagai  kontrol  negatif  dengan
kelompok  pembanding  tanpa  stressor (p<0,05) terjadi peningkatan intensitas sel yang  terflouresen  hijau  (produksi  ROS) sebesar  53,53%.  Sel  secara  alami  akan membentuk  radikal  bebas  sebagai  akibat dari  reaksi  enzimatis  dan  nonenzimatik (Nita  dan  Grzybowski,  2016).  Produksi ROS  pada  kondisi  normal,  terbentuk dalam  jumlah  sedikit  dibandingkan  pada saat  mengalami  stres  oksidatif,  hal  ini dikarenakan produksi ROS dalam jumlah normal hanya digunakan sebagai bakterisida  dan  fungisida  serta  berperan dalam mengatur pertumbuhan sel (Juan et al ., 2021).
Hasil  induksi  H 2 O 2 pada  fibroblas terbukti
mampu
meningkatkan pembentukan ROS dengan tingkat intensitas  sel  terflouresen  hijau  yang tinggi. H 2 O 2 merupakan molekul menembus dinding sel dan bersifat reaktif dalam  menghasilkan  radikal  hidroksil melalui reaksi Fenton akan mengubah Fe 2+
atau  Cu + menjadi  OH  (Tsuneda  dan Fenton,  2020).  Stres  oksidatif  akibat peningkatan  produksi  ROS  memberikan efek  pada  fibroblas  seperti  terganggunya migrasi,  proliferasi,  dan  sintesis  dari matriks ekstraseluler (Deng et al ., 2021).
Kelompok  yang  diberikan  asam askorbat  menunjukkan  nilai  p<0,05 dengan  kelompok  yang  hanya  diberikan stressor , pemberian asam askorbat mampu menurunkan  intensitas  sel  terflouresen
hijau    sebesar  39.56%.  Asam  askorbat adalah  antioksidan  non  enzimatik  yang dapat mendonasi elektron serta mencegah suatu  senyawa  berikatan  dengan  radikal bebas  (Wibawaa et  al .,  2020),  sehingga mampu  menurunkan  produksi  ROS dengan  intensitas  sel  terflouresen  hijau yang menurun.
Kelompok  yang  diberikan  nano kitosan  pada  konsentrasi  200,  400,  dan 600  µg/mL  berbeda  signifikan  dengan kelompok  yang  diberikan stressor tanpa pemberian nano kitosan, pemberian nano kitosan mampu menurunkan intensitas sel terflouresen  hijau  berturut-turut  sebesar 17,41%, 52,59% dan 37,47%. Kelompok nano kitosan konsentrasi 400  µg/mL  dan konsentrasi 600 µg/mL tidak memperlihatkan  perbedaan  signifikan p=0,219,  namun  konsentrasi  400  µg/mL mampu menurunkan intensitas sel terflouresen hijau sebesar 10,99% dibandingkan  dengan  kelompok  nano kitosan 600 µg/mL.
Kelompok  kontrol  positif  yang diberikan asam askorbat tidak menunjukan tidak ada perbedaan signifikan  p=1,000  dengan  kelompok yang  diberikan  nano  kitosan  konsentrasi 400  µg/mL,  namun  pemberian  nano kitosan 400 µg/mL menunjukkan peningkatan  intensitas  sel  terflouresen hijau sebesar 8.44% dibandingkan dengan kelompok  yang  diberikan  asam  askorbat
(Tabel I).
Kitosan  merupakan  bahan  alam yang dapat diperoleh dari beberapa hewan laut dan serangga seperti kumbang tanduk. Bentuk  kitosan  dapat  dimodifikasi  secara fisik  dengan  metode  gelasi  ionik  menjadi partikel  nano  dengan  ukuran  berkisar antara  296.75-302.75  nm  (Komariah, 2020).  Pengecilan  partikel  mempermudah kitosan  untuk  berdifusi  dalam  mengantar suatu bahan aktif ke dalam sel.
Kemampuan  kitosan  dalam  menurunkan produksi  ROS  melalui  dua  gugus  reaktif amino (-NH2) dan hidroksil (-OH) sebagai gugus  fungsional  antioksidan,  sehingga mampu  menurunkan  aktivitas  H 2 O 2 ,  O2-, dan  OH-  melalui  pengikatan  ion  radikal bebas (Ilina dan Varlomov, 2016). Gambar 2  memperlihatkan  hasil  pengamatan intensitas  flouresen  hijau  pada  fibroblas menggunakan  mikroskop  fluoresens Zeiss Observer Z.1.
Peningkatan  produksi  ROS  yang terlalu tinggi dapat menyebabkan
terhambatnya fibroblas dalam membentuk matriks ekstraseluler yang mengakibatkan proses  penyembuhan  luka  terganggu. Fibroblas pada proses penyembuhan luka berperan  dalam  membentuk  protein berupa serat kolagen, elastin, dan retikulin serta  beberapa  substansi  dasar  seperti glikosaminoglikan dan proteoglikan yang menyusun  suatu  matriks  ekstraseluler (Irawan,  2018).  Ketidakutuhan  dari matriks yang terbentuk akan menghambat terjadinya  proses  penyembuhan  luka (Wells dan Nuschke, 2016).
Hasil  penelitian  memperlihatkan pemberian nano kitosan kumbang tanduk dapat  menurunkan  produksi  ROS  pada, konsentrasi efektif 400 µg/mL dibandingan dengan konsentrasi tertinggi (600  µg/mL).  Konsentrasi  zat  yang terabsorbsi terlalu tinggi maka permukaan pori  adsorben  akan  menjadi  jenuh sehingga zat yang belum terabsorbsi akan terus  berdifusi  keluar  pori  (Padayatty et al. , 2022).
Tabel I. Intensitas sel terflouresen hijau Kelompok Jumlah sampel (n) Rerata Intensitas sel (%) p value Kontrol negatif 7 26.32 ± 1,90 p < 0,05 Kontrol pembanding 7 56.64 ± 1,04 Kontrol positif 7 34.24 ± 4,57 NK 200 µg/ml 7 46.78 ± 4,39 NK 400 µg/ml 7 37.12 ± 1,88 NK 600 µg/ml 7 41.20 ± 3,14
Gambar  2. Pengaruh  pemberian  nano  kitosan  pada  produksi  ROS  fibroblas,  diukur menggunakan  probe  H2DCF-DA  (hijau).  Panah  merah  ROS  fibroblas  dengan intensitas flouresensi sel berwarna hijau; A. kelompok tanpa pemberian stressor; B.  Kelompok  yang  diberikan  stressor;  C.  Kelompok  kontrol  positif;  D. Kelompok dengan nano kitosan 200; E.  400; F  600 µg/mL. Pengamatan pada pembesaran 100X

## IV. KESIMPULAN
Nano  kitosan X .  g ideon dapat menurunkan  produksi  ROS  fibroblas setelah diinduksi stressor hidrogen peroksida,  pada  konsentrasi  efektif  400 µg/ml.  Penelitian  merupakan  penelitian mandiri.

## KONFLIK KEPETINGAN
Seluruh penulis menyatakan bahwa tidak  ada  konflik  kepentingan  dalam penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Anura, A. (2014). Traumatic oral mucosal lesions:  a  mini  review  and  clinical update.  Oral  Health  and  Dental Management, 13(2), 254-9.
Arief,  H.,  &  Widodo,  M.A.  (2018).  Rules of oxidative stress in wound healing.
Jurnal Ilmu Kedokt Wijaya Kusuma, 5(2), 22-29.
Bhattacharyya,  A.,  Chattopadhyay,  R., Mitra,  S.,  &  Crowe,  S.E.  (2014). Oxidative  stress:  An  essential  factor in the pathogenesis of gastrointestinal mucosal diseases. Physiological Reviews, 94(2),329–354.
Cheung,  R.C.F.,  Ng,  T.B.,  Wong,  J.H.,  &
Chan,  W.Y.  (2015).  Chitosan:  an update  on  potential  biomedical  and pharmaceutical  applications.  Marine Drugs,13, 5156-5186.
Deng, L., Du, C., Song, P., Chen, T., Rui,
S., Armstrong, D.G, et al. (2021). The Role  of  Oxidative  Stress  and Antioxidants  in  Diabetic  Wound Healing.  Oxidative  Medicine  and Cellular Longevity. 2021.
Ekmekcioglu, H., & Unur, M. (2017). Eye- related  trauma  and  infection  in dentistry. Journal of Istanbul
University
Faculty of Dentistry,51(3),55-63. Gabbott,  C.M.,  &  Sun,  T.  (2018).
Comparison of human dermal fibroblasts  and  HaCat  cells  cultured
in medium with or without serum via a generic tissue engineering research platform.  International  Journal  of Molecular Sciences,19(2), 388-405.
Gonzales, A.C., Costa, T.F., Andrade, Z.A.,
& Medrado, A.R.A.P. (2016). Wound healing:  literature  review.  Anais Brasileiros de Dermatologia, 91(5),614-620.
Gouzos, M., Ramenzanpour, M., Bassiouni A.,  Psaltis,  A.J.,  Wormald,  P.J.,
Vreugde, S. (2020). Antibiotics affect ROS  production  and  fibroblast migration  in  an  in-vitro  model  of sinonasal  wound  healing.    Frontiers in Cellular and Infection Microbiology,19(10),110. Ilina,  A.V.,  &  Varlamov,  V.P.  (2016).
Neutralization  of  reactive  oxygen species by chitosan and its derivatives  in  vitro/in  vivo:  review. Applied Biochemistry and Microbiology, 52(1), 1-14. Irawan, C. (2018). The effect of adsorbate concentration on the effectiveness of decreasing  Fe  using  fly  ash  as adsorben. Seminastika, 291-293.
Juan,  C.A.,  Lastra,  J.M.P.,  Plou,  F.J.,  & Pérez-Lebeña, E. (2021). The Chemistry  of  Reactive  Oxygen Species  (ROS)  Revisited:  Outlining Their Role in Biological Macromolecules  (DNA,  Lipids  and Proteins)  and  Induced  Pathologies.
International  Journal  of  Molecular,
22(9), 4642
Komariah,  A.,  Laksono,  W.A.,  Bustami, D.A.,  &  Trenggono,  B.S.  (2017). Effects chitosan and calcium nanoparticles mouthwash from Xylotrophes  gideon  in  the  liver  and kidney  rat.  Res  J  Pharmaceutical, Biological  and  Chemical  Sciences, 8(1), 1-9.
Komariah,  K.,  &  Astuti,  L.  (2012).
Preparasi dan karakterisasi kitin yang terkandung dalam eksoskeleton kumbang  tanduk  Rhinoceros  Beetle (Xylotrupes  gideon)  dan  kutu  beras
(Sitophilus  Oryzae  L).  Seminar
Nasional  IX  Pendidikan  Biologi FKIP UNS 2012 (SEMBIO).
Komariah,  K.  (2013).  Karakterisasi  kitin dan  kitosan  yang  terkandung  dalam eksoskeleton  kutu  beras  (Sitophilus oryzae). Seminar Nasional IX Pendidikan Biologi FKIP UNS 2013 (SEMBIO).
Komariah,  K.  (2020).  Proses  pembuatan nano  kitosan  dari  rhinoceros  beetle dan  komposisinya  sebagai  obat kumur antiseptik [Paten]. P00201507360. 12 Mei 2020.
Kurniawati,  Y.,  Adi,  S.,  Achadiyani,
Suwarsa, O., Erlangga, D., & Putri, T. (2015).  Kultur  primer  fibroblas: penelitian pendahuluan. Majalah Kedokteran Andalas, 38(1), 33-40.
Masir, O., Manjas, M., Putra, A.E., & Agus,
S.  (2012).  Pengaruh  cairan  cultur filtrate  fibroblast  (CFF)  terhadap penyembuhan luka: penelitian eksperimental  pada  rattus  novegicus galur wistar. Jurnal Kesehatan Andalas, (3),112-117.
Nita,  M.,  &  Grzybowski,  A.  (2016).    The Role of the Reactive Oxygen Species and Oxidative Stress in the
Pathomechanism of the  Age-Related
Ocular Diseases and Other
Pathologies  of  the  Anterior  and Posterior  Eye  Segments  in  Adults.
Oxidative  Medicine  and  Cellular Longevity, 1-23.
Padayatty, S.J., Katz, A., Wang, Y., Eck, P.,
Kwon,  O.,  Lee,  J.H, et  al .  (2014).
Vitamin  C  as  an  antioxidant: evaluation  of  its  role  in  disease prevention.  Journal  of  the  American Nutrition Association, 22(1),18-35.
Patil,  P.S.,  &  Leipzig,  N.D.  (2018).
Fluorinated methacrylamide chitosan sequesters reactive oxygen species to relieve oxidative stress while delivering oxygen. Journal of Biomedical Materials Research,
105(8), 2368-2374.
Phaniendra, A., Jestadi, D.B., & Periyasamy, L. (2015). Free Radicals: Properties,  Sources,  Targets,  and
Their Implication in Various Diseases.  Indian  Journal  of  Clinical Biochemistry,30(1),11–26.
Pisoschi, A.M., & Pop, A. (2015). The role of  antioxidants  in  the  chemistry  of oxidative stress: A review. European Journal of Medicinal Chemistry,97:55–74.
Sudha,  P.N.,  Gomathi,  T.,  &  Aisverya,  S. (2015).  Recent  research  in  the applications  of  chitin,  chitosan  and oligosaccharides.  Green  Polymers and Environmental Pollution Control,
Chapter 10, Department of Chemistry,  D.K.M.  College  for Women,  Thiruvalluvar  University,
Vellore, Tamilnadu, India 303-333.
Tsuneda,T. (2020). Fenton reaction mechanism generating no OH radicals in Nafon membrane decomposition. Scientifc Reports,10:18144. Veronica, G., Komariah, K., & Maria, G.C.
(2021). Microencapsulation of Lemongrass Leaves Effect on
Reactive  Oxygen  Species  (ROS)
Fibroblasts. International Conference on Health, Instrumentation & Measurement,  and  Natural  Sciences (InHeNce). DOI: 10.1109/InHeNce52833.2021.95372 19. Wells,  A.,  Nuschke,  A.,  &  Yates,  C.C.
(2016).  Skin  tissue  repair:  matrix microenvironmental influences. Matrix Biology, 49, 1-20.
Wibawaa, J.C., Arifin, M.Z., & Herawatia,
L.  (2020).  Mekanisme  Vitamin  C Menurunkan  Stres  Oksidatif  Setelah Aktivitas  Fisik.  Journal  of  Sport Science and Education,5(1),57-63.
Yuslianti,  E.R.,  Bachtiar,  B.M.,  Suniarti, D.F.,  Sutjiatmo,  A.B.  (2015).  Effect of topical rambutan honey pharmaceutical grade on oral mucosa wound healing based on tissue wound closure  and  fibroblasts  proliferation in  vivo.  International  Journal  of Pharmacology,11(7),864-869.