## ISOLASI DAN UJI ANTIFUNGAL EKSTRAK METANOL, ETIL ASETAT
DAN N-HEKSANA BAKTERI ENDOFIT DARI AKAR TUMBUHAN MENTIGI ( Vaccinium varingaefolium )
ISOLATION AND ANTIFUNGAL TEST OF METHANOL EXTRACT, ETIL ASETAT AND N-HEXANE OF ENDOPHYTE BACTERIA FROM ROOT of MENTIGI PLANT ( Vaccinium varingaefolium )
Widya Lestari, Dwi Suryanto, Erman Munir
Departemen Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sumatera Utara, Medan, Indonesia 20155
E-mail: widya.chubby@yahoo.co.id

## ABSTRACT
Many  study  that  endophytic  bacteria  useful  for  plant  by  protection  mechanism  to  parasitic  disease  and recovery plant morphology using metabolite producing. Many plants such as mentigi grow at extreme area in volcanic  mount.  This  plant  can  be able  to  has  specific metabolite  producing  endophytic  bacteria. Research about plant endophytic at extreme area are still limited. The aim of this research to know plant endophytic frommentigi root in inhibiting pathogen fungi growing. plantendophytic bacteria isolation from mentigi root was done by root surface sterilization, cutting and cultivating on nutrient agar medium. Cell extraction was done using methanol, etil-asetat and n-heksana for two isolates. Antagonis test isolates and cell extract was done  to  some  plant  and  fish  pathogen  fungus  such  as  Fusarium  oxysporum,  Ganoderma  boninense, Rigidoporus microporusand Saprolegniasp. on potatoes dextrose agar contain 1% yeast extract. Isolates AW5 and  AW6  have  high  potential  in  inhibiting  plant  pathogen  fungi  growing.Essay  result  extraction  to  plant pathogen fungi showed that methanol extract of isolate AW5 and AW6 have biggest potential in inhibiting pathogen fungi growing.
Keywords  :  Endophytic  bacteria,  Vaccinium  varingaefolium,  Fusarium  oxysporum,  Ganoderma boninense, Rigidoporus microporus, Saprolegnia sp.
Pendahuluan Salah  satu  masalah  utama  dari  budidaya tanaman  pertanian  di  Indonesia  ialah  adanya serangan fungi patogen terhadap berbagai tanaman antara lain tanaman cabai, kacang kacangan, coklat, karet  dan  kelapa  sawit.  Serangan  fungi  patogen tersebut  mengakibatkan kerugian yang sangat besar bagi  para  petani.  Untuk  itu  diperlukannya  suatu penanggulangan  yang  efektif.  Selama  ini  telah banyak dilakukan pengendalian fungi patogen pada tanaman  secara  kimiawi,  akan  tetapi  menimbulkan efek  negatif  terhadap  lingkungan.  Untuk  itu  perlu diupayakan  suatu  alternatif  pengendalian  secara biologi  dengan  menggunakan  mikroba    antagonis atau  menggunakan  metabolit  antimikroba  yang dihasilkan.
Menurut  Cook  dan  Baker  (1983),  usaha penanggulangan  penyakit  tanaman  secara  biologis
mempunyai  peluang  yang  cukup  besar  karena organismenya  telah  tersedia  di  alam  dan aktivitasnya dapat distimulasi dengan memodifikasi lingkungan  maupun  tanaman  inang.  Keuntungan dalam  menggunakan  mikroorganisme  antagonis sebagai  pengendalian  biologis  antara  lain:  aman terhadap  lingkungan,  tidak  ada  efek  residu, aplikasinya  bersifat  berkelanjutan  karena  yang digunakan organisme hidup yang dapat memperbanyak  diri  sehingga  dapat  mengurangi aplikasi yang berulang-ulang.
Penelitian  bakteri  endofit  telah  dilakukan lebih dari 20 tahun yang lalu. Hampir setiap bagian tanaman ditemukan adanya jamur endofit, baik pada daun,  akar  maupun  batang.  Dalam  beberapa  tahun terakhir,  pengaplikasian  mikroba  endofit  sebagai pengendali  biologis  telah  menjadi  alternatif  untuk menggantikan  peran  pengendali  kimia  seperti
pestisida. Penggunaan agen biologis ini secara alami mampu mengendalikan
populasi hama, meningkatkan  produksi  tanaman  dan  merupakan pilihan  yang  baik  bagi  resistensi  penyakit  dan  juga ramah lingkungan (Procopio et al ., 2009).
Tanaman  tingkat  tinggi  mengandung beberapa  mikroba  endofit  yang  menghasilkan metabolit  sekunder  sebagai  bentuk  pertahanan terhadap  mikroba  patogen  (Radji,  2005).  Mentigi ( Vaccinium  varingaefolium )  merupakan  tumbuhan yang  dapat  hidup  pada  kondisi  lingkungan  yang ekstrim  seperti  kadar  belerang  yang  tinggi, temperatur yang tinggi dan pH yang rendah. Lingga (2013)  telah  mengisolasi  jamur  endofit  dari tumbuhan  mentigi.  Telaah  lebih  lanjut  diperlukan untuk mengetahui manfaat bakteri endofit yang ada pada  tanaman  tersebut  seperti  untuk  mengetahui pengendalian hayati.

## Bahan Dan Metode
Isolasi  Bakteri  Endofit  Dari  Akar  Tumbuhan Mentigi
Isolasi  bakteri  endofit  dari  akar  dan  daun dilakukan  dengan  metode  sterilisasi  permukaan menurut  metode  Radu  and  Kqueen  (2002).  Sampel yang  diambil  dari  lokasi    dimasukkan  ke  dalam plastik  diletakkan  di  dalam  termos  yang  berisi  es batu,  kemudian  sampel    dibawa  ke  laboratorium mikrobiologi  untuk  isolasi  bakteri  endofit.  Tahap awal yang dilakukan adalah mencuci akar dengan air mengalir  selama  20  menit.  Sterilisasi  bagian permukaan akar dilakukan dengan cara merendamnya  di  dalam  larutan  secara  berturut- turut:  etanol  75%  selama  2  menit,  larutan  sodium hipoklorit  5,3%  selama  5  menit  dan  etanol  75% selam  30  detik.  Selanjutnya  akar  dibilas  dengan aquadest steril, setelah kering bagian ujung kiri dan kanan akar dipotong 1 cm, kemudian masing-masing akar  dipotong  membujur  dan  diletakkan  di permukaan  media  NA  yang  telah  dicampur  dengan antibiotik  ketokonazole  (0,3  g/100  ml)  dengan posisi  bekas  potongan  ke  arah  media,  kemudian diinkubasi  pada  suhu  ruang  selama  5  hari.  Koloni yang  muncul  disubkultur  ke  media  NA  yang  baru untuk dimurnikan.

## Karakterisasi Bakteri Endofit Akar Tumbuhan
Mentigi
Isolat  bakteri  yang  diperoleh  dari  akar dikarakterisasi  secara  morfologi  meliputi  bentuk,
warna,  elevasi  dan  tepi  koloni,  uji  biokimia mencakup  uji  sitrat,  uji  katabolisme  gula,  uji motilitas, uji gelatin, uji katalase.
Uji Antifungal Bakteri Endofit Akar Tumbuhan Mentigi
Uji  antagonis  dilakukan  untuk  melihat kemampuan  bakteri  endofit  dalam  menghambat pertumbuhan fungi patogen seperti F. oxysporum, G. boninense , Saprolegnia sp. dan R. microporus . Biakan kultur  jamur  patogen  yang  sudah  diremajakan diambil dengan cork borer , lalu diinokulasikan pada bagian  tengah  media  modifikasi  PDA  +  YE  1% dengan  jarak  3,5  cm  dari cakram  tempat  inokulum isolat bakteri lalu biakan tersebut diinkubasi selama 72  jam  pada  suhu  ruang.  Pengujian  daya  hambat isolat  bakteri  endofit  terhadap  jamur  patogen, menggunakan  metode  difusi  cakram  kertas  sesuai dengan  metode  Kirby-Baur  (Mishra et  al .,  2006; Kulsuntiwong et al ., 2008). Sebanyak 10 μl suspensi isolat bakteri endofit dengan kerapatan ≈10 8 CFU/ml, diteteskan pada kertas cakram (Oxoid) yang  berdiameter  0,6  cm. Selanjutnya  uji antagonis dilakukan dengan cara meletakkan cakram tersebut pada 2 titik di tepi media PDA + YE 1 %, kemudian diinkubasi  pada  suhu  ruang  selama  7  hari.  Isolat bakteri  endofit  yang  berpotensi  antagonis ditunjukkan  dengan  adanya  zona  hambatan terhadap  pertumbuhan  miselium  beberapa  fungi patogen.
Ekstraksi Bahan Antifungal dari Isolat Bakteri Endofit Ekstraksi  metabolit  sekunder  bakteri endofit  tanaman V. varingaefolium yang  memiliki aktivitas  antifungal  dilakukan  berdasarkan  metode yang  pernah  dilakukan  oleh  Nofiani et  al ., (2009) dan Suryanto et al ., (2012) yang dimodifikasi. Isolat bakteri antifungal  yang  paling  potensial  disebarkan pada media NA dan diinkubasi selama 5 hari. Media padat selanjutnya dipotong kecil-kecil dan direndam dengan  metanol  dalam  erlenmeyer  selama  72  jam dan  dibungkus  dengan  kertas  aluminium  untuk mengindari  kerusakan  karena  cahaya.  Maserat diambil  dengan  cara  disaring.  Perendaman dilakukan  sebanyak  3  kali.  Semua  maserat  yang terkumpul  disentrifugasi  dengan  kecepatan  3000 rpm  selama  15  menit.  Supernatan  dipekatkan dengan  menggunakan  rotavorator  dengan  suhu tidak  lebih  dari  50 o C  untuk  memperoleh  ekstrak yang  siap  untuk  digunakan.  Metode  yang  sama
dilakukan  terhadap  pelarut  n-heksana  dan  etil asetat.
Uji Antifungal Ekstrak Bakteri Endofit Berbagai Pelarut
Uji  antibiotik  ekstrak  metanol,  n-heksana, etil asetat bakteri endofit tanaman V. varingaefolium
digunakan media PDA + YE 1%. Biakan kultur jamur patogen  berupa F.  oxysporum , G.  boninense , Saprolegnia sp.  dan R.  microporus diambil  dengan cork  borer ,  lalu  diinokulasikan  di  bagian  tengah media modifikasi PDA + YE 1% dengan jarak 3,5 cm dari  cakram  tempat  inokulum  bakteri,  lalu diinkubasi pada suhu ruang selam 72 jam.
Gambar 1. Metode pengukuran zona hambat bakteri endofit terhadap koloni jamur; A. Koloni jamur, B. Zona hambat bakteri endofit terhadap koloni jamur, C. Titik tengah jamur diletakkan, D. Koloni bakteri endofit , X. Diameter koloni jamur yang terhambat pertumbuhannya, Y. Diameter koloni jamur normal (Suryanto, 2006).
Pengamatan Struktur Hifa Abnormal Pengamatan  secara  mikroskopis  dilakukan dengan cara mengamati ujung miselium pada daerah zona hambat jamur. Ujung miselium  jamur patogen yang tumbuh pada permukaan media PDA dipotong berbentuk  bujur  sangkar,  diletakkan  pada  gelas objektif  dan  diamati  di  bawah  mikroskop abnormalitas pertumbuhan miselium jamur patogen. Deteksi  Kandungan  Ekstrak  Metanol,  N-Hexana Dan Etil Asetat Isolat Bakteri Endofit Potensial Akar Tumbuhan Mentigi
Untuk  mendeteksi  kandungan  senyawa  kimia  dari ekstrak  metanol,  n-hexana,  dan  etil  asetat  isolat bakteri  endofit  dari  akar V. varingaefolium ,  maka dilakukan  analisis  skrining  fitokimia  meliputi pemeriksaan kandungan senyawa alkaloida, flavanoida,  terpenoid/steroida,  tanin  dan  saponin menurut  prosedur  yang  telah  dilaporkan  Harbone (1996).  Ekstrak  metanol,  etil  asetat  dan  n-heksana yang  telah  diperoleh  dari  prosedur  sebelumnya dideteksi  dengan  menggunakan  metode  fitokimia untuk  uji  pendahuluan  agar  diketahui  kandungan senyawa  pada  ekstrak  bakteri  endofit  yang  dibuat, misalnya  alkaloid,  terpenoid,  fenolik,  flavonoid, steroid atau saponin.
Tabel 1. Metode Skrining Fitokimia menurut Harbone, 1987. NO UJI PEREAKSI HASIL PERUBAHAN WARNA 1. Fenolik FeCl 3 1% Positif Terbentuk larutan warna hijau, biru, hitam 2. Flavanoid Mg-HCl Positif Merah jambu 3. Alkaloid Wagner, Mayer dan Dragendroff. Positif Terbentuk endapan 4. Steroid H 2 SO 4(p) dan pereaksi LB (Lieberman_Burchad). Positif Terbentuk warna hijau kebiruan 5. Saponin Akuades Positif Terbentuk busa 6. Tanin FeCl 3 Positif Terbentuk warna hijau kebiruan, dan terbentuk endapan

## Hasil Dan Pembahasan
Dari  hasil  isolasi  dari  sampel  akar tumbuhan  mentigi  ( V.  varingaefolium ) diperoleh  6 isolat  bakteri:  AW1,  AW2,  AW3,  AW5,  AW6,  AW7 yang  memiliki  potensi  menghambat  pertumbuhan jamur.  Kemampuan  menghambat  isolat  bakteri ditunjukkan  dengan  terhambatnya  pertumbuhan jamur  yang  ada  di  sekitar  koloni  yang  merupakan
suatu interaksi antagonis di antara mikroorganisme yang terdapat pada suatu lingkungan.
Karakterisasi  yang  dilakukan  pada  isolat bakteri meliputi bentuk morfologi sel, bentuk koloni dan  penataannya  serta  beberapa  uji  biokimia sederhana.  Hasil  pengamatan  morfologi  dan  uji biokimia  sederhana  terhadap  isolat  dapat  dilihat pada Tabel  di bawah ini:
Tabel 2. Karakterisasi Morfologi Koloni dan Sel Isolat Bakteri Endofit Isolat Morfologi Koloni Morfologi Sel Gram Warna Bentuk Tepi Elevasi Bentuk  Penataa n AW1 Krem Tidak beraturan Berbelah cekung Batang Mono + AW2 Krem Bulat Rata Datar Kokus Rantai + AW3 Putih Tidak beraturan Berbelah Datar Batang Rantai + AW5 Krem Serupa akar Berbelah Datar Batang Rantai - AW6 Kuning Serupa akar Berbelah cekung Batang Mono - AW7 Krem Tidak beraturan Berbelah Datar Batang Rantai +
Kemampuan Antagonis Bakteri Endofit terhadap Fungi patogen Tanaman Isolat bakteri yang berpotensi menghambat jamur  pada  tahapan  isolasi,  selanjutnya  digunakan pada asai antagonis,  untuk  melihat  kemampuannya
dalam    menghambat  pertumbuhan  jamur.  Jamur patogen  yang  digunakan  yaitu: F.  oxysporum , G. boninense , R.  microporus dan Saprolegnia sp . Dasar pemilihan  sampel  yaitu  mewakili  beberapa  jamur patogen penyebab penyakit pada tanaman.
Gambar  2. Kemampuan  antagonis  isolat  bakteri  endofit  (a)  Isolat  AW5  terhadap R.  microporus (b).  Isolat AW6 terhadap R. microporus (c). Isolat AW5 terhadap Saprolegnia sp. (d). Isolat AW5 terhadap F. oxysporum .
Dari  gambar  di  atas  dapat  dilihat  bahwa  zona hambat  dari  hasil  uji  antagonis  antara  bakteri endofit dengan jamur patogen berbeda beda. Hal ini mungkin  disebabkan  karena  bakteri  endofit menghasilkan senyawa metabolit sekunder berbeda ,selain itu konsentrasi zat bioaktif dan  jenis zat yang dihasilkan    oleh  bakteri  berbeda  beda  pula  dalam menghambat pertumbuhan jamur patogen.
Mikroba  khususnya  bakteri  memiliki kemampuan  menghambat  pertumbuhan  mikroba lain disebabkan karena bakteri dapat menghasilkan senyawa  metabolit  sekunder  seperti  senyawa antimikroba,  antibiotik  (Wright et  al .,  2001),  enzim pelisis  (Zhang  &  Yuen  2000;  Kim et  al .,  2008), antivirus,  antiparasit  dan  protein  penghambat  lain (Berdy  2005;  Borodina et  al .,  2005;  Lestari  2001; Price et al., 1999). Pembentukan senyawa metabolit a b c d
sekunder ini dikode oleh sejumlah gen yang terdapat pada  DNA  kromosom  atau  DNA  plasmid  (Demain, 1998).
Isolat  bakteri  yang  diujikan  menunjukkan kemampuan  menghambat  jamur  patogen R. microporus,  Saprolegnia sp.  dan F.  oxysporum yang lebih  besar  dibandingkan  dengan G.  boninense. Hal ini mungkin disebabkan karena pegaruh media yang digunakan dan perbedaan dinding sel penyusun dari jamur  yang  digunakan  dalam  uji  antagonis.  Ketika nutrisi mulai berkurang bakteri akan memasuki fase stasioner  dan  pada  fase  ini  diduga  terjadi
pembentukan  senyawa  metabolit  sekunder  yang bersifat antifungi.
Bakteri  yang  memiliki  kemampuan  paling baik  adalah  bakteri  AW5  dan  AW6  yang  dapat menghambat  semua  jamur  patogen  uji,  sedangkan isolat  AW1,  AW2,  AW3  dan  AW7  hanya  mampu menghambat pertumbuhan jamur F . oxysporum dan R . microporus. Menurut  Bakri  (2009),  Isolat  bakteri tersebut  memiliki  kemampuan  antagonistik  yang ditandai  dengan  adanya  penghambatan  miselium jamur  patogen  tanaman  dan  pada  akhirnya pertumbuhan  hifa  menipis,  mengering  dan mengalami abnormalitas (Tabel 3).
Tabel 3. Deskripsi Gejala Antagonis Yang Terjadi Antara Isolat Fungi
Mekanisme  penghambatan  agen  hayati  dalam menekan  pertumbuhan  patogen  adalah  melalui mekanisme  mikoparasitisme.  Proses  mikoparasitik terdiri  atas  empat  tahap  yaitu  pertumbuhan kemotropis,  pengenalan  (rekognisi),  pelekatan  dan pelilitan, dan lisis (Soesanto et al ., 2008).
Asai Ekstraks dengan Pelarut Metanol, N-hexana dan Etil Asetat Dua  isolat  AW5  dan  AW6  yang  memiliki kemampuan  menghambat  paling  besar  selanjutnya digunakan  untuk  uji  lanjut  berupa  ekstrak  sel bakteri  dengan  3  jenis  pelarut  yang  berbeda.
Ekstraksi  dilakukan  dengan  menggunakan  pelarut metanol,  etil  asetat,  dan  n-heksana.  Semua  ekstrak bakteri menunjukkan kemampuan dalam menghambat pertumbuhan jamur patogen uji.
Salah satu bentuk respon yang ditunjukkan bakteri  adalah  membentuk  senyawa  metabolit sekunder  sebagai  bentuk  pertahanan  terhadap serangan mikroba lain (Nofiani et al ., 2009). Ekstrak sel  dari  isolat  AW5  dan  AW6  ini  memiliki kemampuan  dalam  menghambat  pertumbuhan jamur R.   microporus , Saprolegnia sp., F.  oxysforum dan G. boninense dengan zona hambat yang berbeda beda dapat dilihat pada Gambar di bawah ini:
Kode Isolat Fungi patogen yang dihambat Gejala Antagonis AW1 R. microporus Pertumbuhan fungi patogen terhambat, hifa bengkok AW2 F. oxysporum Pertumbuhan fungi patogen terhambat, kering, dan menipis AW3 R. microporus Pertumbuhan fungi patogen terhambat AW5 F. oxysporum R. microporus G. boninense Saprolegnia sp. Pertumbuhan fungi patogen terhambat, hifa lisis, bengkok. AW6 F. oxysporum R. microporus G. boninense Saprolegnia sp. Pertumbuhan fungi patogen terhambat, hifa bengkok, menggulung dan lisis. AW7 F. oxysporum Pertumbuhan fungi patogen terhambat, hifa bengkok, dan lisis.
Gambar 3. Kemampuan Ekstrak metanol dalam menghambat pertumbuhan (a). Kontrol negatif G. Boninense dengan DMSO (b). R. Microporus (c) Kontrol Positif Saprolegnia sp. dengan nistatin (d). F. oxysporum.
Tabel 4. Asai Ekstrak dengan Pelarut Metanol, N-hexana dan Etil Asetat Jamur uji Konsentrasi Ekstrak (%) Zona Hambat ekstrak (mm) Metanol Etil asetat N-Hexana AW5 AW6 AW5 AW6 AW5 AW6 Rigidoporus microporus 0 40 60 80 100 0 8.20 20.10 26.3 0 14.21 0 11.00 4.31 14.00 12.30 0 9.21 3.03 3.53 8.21 0 1.10 1.53 1.72 2.31 0 3.52 5.31 0.73 0.72 0 5.20 13.10 14.60 5.10 Saprolegnia sp. 0 40 60 80 100 0 2.60 3.50 7.50 6.20 0 16.10 21.2 1 5.60 4.10 0 11.20 10.63 11.10 12.30 0 5.20 13.1 0 14.6 0 5.10 0 11.40 15.13 10.20 7.10 0 14.34 19.71 13.21 6.63 Fusarium oxysporum 0 40 60 80 100 0 7.00 12.00 5.52 7.62 0 0.40 0.70 0.50 0.60 0 0.67 1.52 3.10 3.72 0 0 1.60 2.10 1.73 0 0 1.60 2.10 1.73 0 0.82 3.31 3.81 4.75 Ganoderma boninense 0 40 60 80 100 0 13.5 9 2.11 11.12 4.53 0 11.70 21.0 0 11.31 10.00 0 1.70 2.80 4.30 3.50 0 2.67 4.80 8.71 4.52 0 4.41 5.32 8.31 1,2 0 4.83 8.91 10.83 7.21
Dari  tabel  di  atas  dapat  dilihat  bahwa ekstrak bakteri AW5 dan AW6 memiliki kemampuan dalam  menghambat  pertumbuhan  fungi  patogen tanaman.  Kemampuan  ekstrak  bakteri  bervariasi
dalam membentuk zona hambat dari masing masing jamur  patogen.  Ekstrak  metanol  dari  bakteri  AW5 mampu  menghambat R.  microporus sebesar  26.30 mm  pada  konsentrasi  80%  dan G.  boninense 13.59
c . d . b . a .
mm  pada  konsentrasi  40%.    Ekstrak  metanol  dari bakteri  AW6  mampu  menghambat Saprolegnia sp. sebesar  21.21  mm  pada  konsentrasi  60%  dan G. boninense sebesar 21.00 mm. Ekstrak  etil  asetat  dari  bakteri  AW5 memiliki kemampuan dalam menghambat pertumbuhan  jamur Saprolegnia sp . sebesar  12.30 mm  pada  konsentrasi  100%  dan  11.20  mm  pada konsentrasi  40%.  Ekstrak  etil  asetat  bakteri  AW6 memiliki kemampuan menghambat jamur Saprolegnia sp. sebesar 13.10 mm pada konsentrasi 60% dan 14.60 mm pada konsentrasi 80%.
Ekstrak  n-  heksana    bakteri  AW5  mampu menghambat Saprolegnia sp. sebesar 15.13 mm dan 10.20 mm  pada konsentrasi 60% dan 80%. Ekstrak n-heksana  bakteri  AW6  memilki  kemampuan menghambat  jamur Saprolegnia sp.  sebesar  19.71 mm  pada  konsentrasi  60%  dan R.  microporus sebesar 14.60 mm pada konsentrasi 80%.
Koloni R. microporus mengalami penghambatan  pertumbuhan  yang  ditandai  dengan adanya  cekungan  di  bagian  tengah  koloni  jamur. Ekstrak  metanol  dari  AW5  memiliki  kemampuan yang  besar  dalam  menghambat  pertumbuhan R. microporus , Saprolegnia  s p., F.  oxysporum dan G. boninense dengan  zona  hambat  terbesar  berturut- turut  26,30  mm,  13,77  mm,  12  mm  dan  13,59  mm. Hal  ini  mungkin  karena  pelarut  metanol  dapat melarutkan  senyawa  polar  dan  non  polar  yang merupakan metabolit sekunder dari bakteri tersebut sehinga  rendemen  yan  paling  besar  jika dibandingkan  dengan  pelarut  etil  asetat  dan  n- heksana.  Hal  ini  dikarenakan    kelarutan  zat  pada suatu  pelarut  sangat  ditentukan  oleh  kemampuan zat tersebut membentuk ikatan.
Koloni G.
boninense mengalami   penghambatan  pertumbuhan  di  sekitar cakram  yang  berisi  ekstrak  metanol  fungi  yang mengakibatkan koloni G. boninense bentuknya tidak bulat  lagi  seperti  bentuk  normal.  Penghambatan pertumbuhan juga terjadi pada koloni F. oxysporum di sekitar cakram yang berisi ekstrak metanol fungi yang  mengakibatkan  bentuk  koloni F.  oxysporum berbentuk  segi  empat.  Interaksi  bakteri  dengan F. oxysporum  menyebabkan  abnormalitas  pada  hifa jamur  dibandingkan  dengan  hifa  jamur  yamg normal, seperti membengkok dan melilit. Abnormalitas  ini  disebabkan  karena  bakteri antijamur  menghasilkan  senyawa  yang  dapat menghambat atau merusak struktur dari dinding sel hifa jamur sehingga akan mempengaruhi
pertumbuhan  fungi  patogen  secara  keseluruhan. Kondisi  yang  abnormal  pada  hifa F.  oxysporum seperti hifa memiliki septa yang pendek, mengalami pembengkakan,  percabangan,  hifa  yang  transparan dan ada pembengkakan hifa yang tidak merata serta ujung  hifa  yang  meruncing  karena  nekrosis  karena terjadi kematian (Adriansyah 2002).
Besarnya  zona  hambat  melebihi  kontrol positif  dengan  antibiotik  nistatin  yang  merupakan antibiotik  yang  komersil  menunjukkan  adanya potensi dari isolat untuk diteliti dan dikembangkan lebih  lanjut  untuk  diisolasi  senyawa  metabolit sekunder  berupa  antimikroba  atau  mungkin antibiotik  yang  dihasilkan  sehingga  diharapkan dapat  memberikan  solusi  untuk masalah  resistensi. Adanya  variasi  besar  zona  hambat  yang  diperoleh mungkin  disebabkan  oleh  perbedaan  sifat  yang dimiliki  bakteri  uji  yang  digunakan  baik  secara morfologi  dan  fisiologi.  Selain  itu,  juga  disebabkan oleh  senyawa  metabolit  sekunder  yang  dihasilkan oleh  masing-masing  isolat  memiliki  struktur  kimia, komposisi dan kandungan/konsentrasi yang berbeda  dengan  antibiotik  kontrol  (Dharmawan et al. 2009).
Dari  hasil  pengujian  terhadap  perlakuan pelarut,  isolat  dan  konsentrasi  dapat  dilihat  bahwa dari ketiga jenis ekstrak memiliki kemampuan yang berbeda  beda  dalam  menghambat  pertumbuhan fungi  patogen.  Semua  pengujian  menggunakan ekstrak, metanol menunjukkan spektrum yang lebih luas  dalam  menghambat  jamur  uji  dibandingakan etil  asetat  dan  n-heksana.  Dari  semua  mikroba  uji yang  digunakan, R.  microporus merupakan  jamur yang  paling  peka  terhadap  semua  jenis  ekstrak. Perbedaan  efektifitas  ekstrak  dalam  menghambat mikroba  uji  kemungkinan  disebabkan  oleh perbedaan kelarutan senyawa aktif yang terkandung terhadap  ketiga  jenis  pelarut.  Adanya  perbedaan polaritas  antara  senyawa  aktif  yang  terkandung dengan pelarut yang digunakan untuk mengekstrak senyawa tersebut menyebabkan perbedaan efektisitas  ekstrak  yang  dihasilkan.  Berdasarkan penelitian  lain  disebutkan  bahwa  metanol merupakan  pelarut  yang  baik  digunakan  dalam metode  ekstraksi  suatu  bahan,  metanol  juga menghasilkan rendemen yang lebih besar jumlahnya dibandingkan  pelarut  lain  (Ahameethunisa  & Hopper  2010;  Khyade  &  Vaikos  2009).  Di  samping itu,  penambahan  atau  penggunaan  metanol  pada saat  maserasi  akan  menyebabkan  pH  ekstra  sel menurun  dan  akan  meningkatkan  konsentrasi
proton di dalam sel (Purwoko, 2007). Konsekuensinya  terjadi  akumulasi  proton  di  dalam sel  yang  dapat  menyebabkan  lisisnya  sel  sehingga senyawa metabolit yang ada berdifusi ke pelarut dan memperbesar kemungkinan ekstrak yang diperoleh lebih banyak.

## Pengamatan Mikroskopik Hifa Abnormal Fungi
Patogen Tanaman
Pengaruh ekstrak bakteri terhadap pertumbuhan  hifa  jamur G. boninense , F.oxysporum , R. microporus dan Saprolegnia sp. diamati di bawah mikroskop  dengan  perbesaran  40x10.  Hasil
pengamatan  menunjukkan  adanya  abnormalitas bentuk hifa yaitu hifa menjadi bengkok, menggulung, pendek dan lisis. Berdasarkan penelitian sebelumnya  yang  mengujikan  bakteri  dan  jamur endofit  terhadap G.  boninense dan F.  oxysporum menunjukkan  bahwa  pengaruh  antagonis  isolat potensial  terhadap  jamur  patogen  mengakibatkan abnormalitas  terhadap  hifa  jamur  tersebut. Abnormalitas  hifa  yang  terjadi  bisa  dalam  bentuk penyusutan, memendek, lisis, jumlah cabang terlalu banyak  (Getha  &  Vikineswary,  2002),  dan penurunan  produksi  spora  (Bivi et  al .,  2010;  Bakri 2009).
Gambar. Hifa  abnormal  jamur R.  microporus (a).  Hifa  lisis,  (b).  Hifa  menggulung.  Hifa  abnormal  jamur G. Boninense, (c). Hifa bengkok, (d). Hifa menggulung. Hifa abnormal jamur F. oxysporum , (E). Hifa lisis, (f). Hifa bengkok. Hifa jamur Saprolegnia sp., (h). Hifa mengecil dan  (i). Hifa lisis.
Dari Gambar di atas dapat dilihat perubahan hifa R.  microporus, G.  boninense dan F.  oxysporum dan Saprolegnia sp.  yang  terjadi  akibat  interaksi antara  ekstrak  bakteri  dengan  jamur  patogen. Adanya    aktivitas  antagonisme  yang  kuat  dari ekstrak bakteri dengan mekanisme hiperparasitisme dan  antibiotik  sehingga  efektif  menghambat pertumbuhan  jamur  patogen  tanaman  dengan mendegradasi  dinding  selnya.  Hifa  fungi  patogen mengalami lisis, menggulung, mengecil dan bengok. Lisis pada hifa menunjukkan bahwa ekstrak bakteri mampu menghidrolisis dinding sel R. microporus , F. Oxysporum  dan  Saprolegnia sp. (Simbolon,  2008).
Hifa  fungi  patogen  yang  mengalami  mengecil  dan menggulung diduga sebagai mekanisme pertahanan dari patogen terhadap serangan isolat.

## Kesimpulan
Dari  penelitian  yang  telah  dilakukan  dapat disimpulkan 1. Diperoleh sedikitnya 6 isolat bakteri endofit dari tumbuhan  Mentigi  ( Vaccinium  varingaefolium ) yang  memiliki  potensi  dalam  menghambat  4 jenis jamur patogen tanaman.
2. Isolat AW5 dan AW6 memiliki kemampuan yang paling  besar  dalam  menghambat  pertumbuhan
a b c d e h g f i
jamur R.  microporus , Saprolegnia sp.  dan F. oxysporum.
3. Eksrak  metanol  dari  bakteri  AW5  dan  AW6 memiliki kemampuan yang lebih besar dan juga memiliki  kisaran yang  luas  dalam  menghambat jamur  patogen    dibandingkan  estrak  etil  asetat dan n-heksana.

## Daftar Pustaka
Adriansyah  A.  2002.  Uji  Metabolit  Sekunder Trichoderma sp.  sebagai  Antimikrobia Patogen  Tanaman  ( Fusarium  oxysporum ) secara In Vitro. Skripsi . ITB. Bandung.
Ahameethunisa  AR,  Hopper  W.  2010.  Antibacterial activity  of Artemisia  nilagirica leaf extracts against clinical and phytopathogenic bacteria. Research Article. BMC Complementary and Alternative Medicine, 10:6
Akbar,  J.  2008.  Pemanfaatan  Ekstrak  Bunga
Kecombrang  ( Nicolaia  spesiosa Horan)
Terhadap  Penyembuhan  Infeksi  Jamur Saprolegnia sp.  Pada  Ikan  Nila  Merah.
2008. Kalimantan Scientiae . 71: 26.
Aniszewski T. 2007. Alkaloids- secret of life alkaloid chemistry,  biological      significance, Apllications  and  Ecological  Role .  Ist  Ed. Elseveir. UK. 155-156p.
Athman, S.Y. 2006. Host endophyte pest interactions of  Endophytic Fusarium Oxysporum Antagonistic  to Radopholus  similis in Banana ( Musa spp.). University of Pretoria
: South Africa.
Baker KF & Cook RJ. 1974. The Nature dan Practice of  Biological  Control  of  Plant  Pathogens. 3rd Edition: The American Phytopathological Society. Bakri,  M.  2009.  Isolasi  dan  uji  kemampuan antifungal  fungi  endofit  dari  tanaman Andaliman  ( Zanthoxylum  acanthopodium DC.)  terhadap  fungi  perusak  makanan. Skripsi. USU. Medan.
Berdy  J.  2005.  Bioactive  microbial  metabolites. Riview Article. J Antibiot 58(1): 1-26.
Bivi  MR,  Farhana  MSN,  Khairulmazmi  A,  Idris  A. 2010.  Control  of Ganoderma  boninense :  A causal agent of basal stem rot disease in oil palm with endophyte bacteria in vitro . Int J Agric  Biol 12(6): 833-839.
Borodina I, Krabben P, Nielsen J. 2005. Genome-scale analysis  of Streptomyces  coelicolor A3(2)
metabolism .  Genome  Research. 15:  820- 829.
Cheng,  F.R.,  Peter,  F.  S.  2009. Vaccinium .  Flora  of China  Vol.  14.  Published  by  Science  Press (Beijing)  and  Missouri  Botanical  Garden Press. 476p.
Cook,  R.J.  and  Baker,  K.F.  1983.  The  Nature  of
Practice  of  Biological  Control  of  Plant
Pathogens.  The  APS  Press,  St.  Paul, Minnesota. 53 p.
Dharmawan IWE, Kawuri R, Parwanayoni MS. 2009. Isolasi Streptomyces  spp. pada  kawasan hutan  Provinsi  Bali  serta  uji  daya hambatnya terhadap lima strain diarrheagenic Escherichia coli . Jurnal Biologi 13: (1): 1-6.
Demain AL. 1998. Induction of Microbial Secondary Metabolism. Review Article. Int
Microbiol 1: 259-264.
Drew  WL,  Barry  AL,  O’Tool  R,  Sherris  JC.  1971. Reliability of the Kirby-Bauer disc diffusion  method  for  detecting  methicillin- resistant strains of Staphylococcus aureus . Appl Microbiol 24(2): 240-247. Faure,  D.  2002.  The  family-3  glycoside  hydrolises: from  housekeeping  function  to        host- microbe  interction. Appl  and  Environ Microbiol 64(4):1485-1490.
Getha K, Vikineswary S. 2002. Antagonistic effects of Streptomyces violaceusniger strain G10 on Fusarium  oxysporum f.sp. cubense race  4: indirect evidence for the role of antibiosis in the antagonistic process. J Ind Microbiol Biotechnol 28: 303–310.
Harbone, J.B. 1987. Metode Fitokimia. Terjemahan K, Padmawinata.,  I,  Soediro.,  S,  Niksolihin. Bandung: ITB.
Harborne, J. 1996. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern  Menganalisis  Tumbuhan.  Cetakan kedua.  Penerjemah:  Padmawinata,  K.  dan I. Soediro. Bandung: Penerbit ITB.
Hastuti  AE.  2000.  Sebaran  penyakit  akar  putih ( Rigidoporus  microporus (Swatz)  Van  Ov.) pada tanaman teh ( Camellia sinensis (L) O. Kuntze)  di  lapangan  dan  eksplorasi beberapa  cendawan  antagonis. Skripsi . IPB.  Jurusan  hama  dan  penyakit tumbuhan.
Khyade  MS,  Vaikos  NP.  2009.  Phytochemical  and antibacterial properties of leaves of
Alstonia  sholaris R.  Br. Afr  J    Biotechnol 8(22): 6434-6436.
Kim YC, Jung H, KIM KY, Park SK. 2008. An effective biocontrol bioformulation against Phytophthora blight of pepper using growth mixtures  of  combined  chitinolytic  bacteria under different field conditions. Eur J Plant Pathol 120:373–382. Kloepper,  J.W.,  Rodriguez-Kabana.  Zehnder,  R., Murphy, G.W., Sikora, J. and Fernandez, C. 1999.  Plant  root  -bacterial  interactions  in biological  control  of  soilborne  diseases and  potential  extension  to  systemic  and foliar diseases. Austral Plant Pathol 28: 27- 33.
Kulsuntiwong,  P.,  Chomvarin,  C.,  Chaicumpar,  K., Namwat,W.,  Kaewkes, W.,  Mairiang,P.  and Sangchan, A. 2008. Antimicrobial Susceptibility  Of  Helicobacter  Pylori Isolated  From  Gastric  Biopsies  In Dyspeptic Patients. Southeast Asian J Trop Med Public Health . 39 (6) : 1102-1109. Kurniawati,  dkk.  2006.  Perbandingan  Potensi
Antibakteri  Ekstrak  Air  dengan  Ekstrak Etanol  Daun  Kelor (Moringa  oleifera) terhadap Pertumbuhan Bakteri Pseudomonas aeruginosa NN-1-PKH secara In Vitro. http://pskh.ub.ac.id/wrp- con/uploads/2012/10/0811313018 SitiKurniawati.pdf.  Diakses  tanggal  26  juli
2013.
Lechevalier,  A.  2000.  Screening  for  new    antibiotic procedures: The  selection of wild strains. In  The    future  of    antibiotherapy  and antibiotic    research.  Ed.  Academic  Press. Sydney. Hlm. 88-375.
Lingga,  R.  2013.  Keragaman  Jamur  Endofit  Pada Mentigi  ( Vaccinium  varingaefolium )  Di Kawah Gunung  Sinabung  Sumatera  Utara. Tesis Megister Biologi Departemen Biologi FMIPA USU. Medan.
Lorito, M., Harman, G. E., Hayes, C. K., Broadway, R. M., Tronsmo, A., Woo, S. L. and de Pietro, A.
1992.  Chitinolytic  enzymes  produced  by Trichoderma harzianum antifungal activity of purified endochitinase and chitobiosidase. Phytopath . 83: 302-307.
Mishra, K.K., Srivastava, S., Garg, A., and Ayyagari, A. 2006. Antibiotic susceptibility of
Helicobacter    pylori    clinical    isolates: Comparative  evaluation of  disk-diffusion
and E-test methods. Cur Microbiol 53: 329- 334.
Nasir,  A.,  Muhammad,  P.,  Sudjino.,  and  Purnomo. 1994. Pengaruh gas belerang dari kawah- kawah  di  Dataran  Tinggi  Dieng  terhadap struktur  vegetasi  dan  fisiologi  tumbuhan dominan  di  sekitar  kawah.  E-  Journal. Universitas Gadjah Mada.
Nofiani, R., Nurbetty, S., and Sapar, A. 2009. Aktifitas Antimikroba  Ekstrak  Metanol  Bakteri Berasosiasi  Spons  dari  Pulau  Lemukutan, Kalimantan Barat. E-Journal dan Teknologi kelautan Tropis. 1(2) : 33-41.
Poeloengan,  Masniari.,  Praptiwi.  2010.  Uji  Aktivitas
Antibakteri  Ekstrak  Kulit  Buah  Manggis ( Garnicia mangostana Linn), (http://digilib.litbang.depkes .go.id /files/disk1/74/jkpkbppk-gdl-grey-2011- masniaripo-3692-manggism-i.pdf), diakses 26 Juli 2013.
Price  B,  Adamidis  T,  Kong  R,  Champness  W.  1999. Streptomyces  coelicolor antibiotic regulatory  gene, absB ,  encodes  an  RNase III homolog. J Bacteriol 181: 6142–6151. Procopio,  R.E.L.,  Araujo,  W.,  Maccheroni  Jr,  and Azevedo,  J.L.  2009.  Characterization  of  an endophytic bacterial community
associated with Eucalyptus spp. Genet Mol
Res 8 (4): 1408-1422. Prasetyoputri,  A.,  I.  Atmosukarto.  2006.  Mikroba endofit. Bio  Trends : Pusat  penelitian Bioteknologi – LIPI. Cibinong . 1(2): 13-15. Radji,  M.  2005.  Peranan  bioteknologi  dan  mikroba endofit  dalam  pengembangan  obat  herbal. Majalah Ilmu Kefarmasian. 2 (3): 118-121. Radu,  S.  and  Kqueen,  C.Y.  2002.  Preliminary screening  of  endophytic  fungi  from medicinal plants  in malaysia for antimicrobial  and  antitumor  activity. Malaysian Journal of Medical Science, 9 (2): 23-33. Robinson  T.1995. Kandungan  Organik  Tumbuhan Tinggi . Penerjemah: K. Padmawinata. Edisi
IV. Bandung: ITB Press. Schlegel GH. 1993. General Microbiology . Cambridge University Press. England.
Simbolon, D.N. 2008. Kemampuan Antifungi Bakteri Endofit  Kelapa  Sawit  ( Elaeis  guineensis jacq.)  Terhadap Ganoderma  boninenese pat. Skripsi. Departemen  Biologi  FMIPA USU. Medan.
Strobel,  G.A. and  Daisy,  B.  2003. Bioprospecting  for microbial  endophytes  and  their  natural products. Microbiol  and  Mol    Biol Review.
491-502. Sudhanta,  I.  M.,  A.  L.  Abadi.  2007.  Uji  Efektivitas Beberapa Isolat Jamur Endofit Antagonistik Dalam Meningkatkan Ketahanan  Induksi  Beberapa  Klon  Vanili Terhadap Penyakit Busuk Batang. Diakses tanggal 1 Agustus 2013. http://ntb.litbang.deptan.go.id/2007/TPH /ujiefektifivitas.doc Suryanto,  D.,  Siti  K.N.  and  Erman  M.  2012. Antimicrobial  Activity  of  Some  Bacterial Isolates natural Recreational Park of North Sumatera, Indonesia. Bulletin of Environment,  Pharmacology  and  Life Sciences. 1(11). 1-7. Suryanto,  D.  and  Munir,  E.  2006.  Potensi  isolat bakteri kitinolitik lokal untuk pengendalian  hayati  jamur.  Prosiding seminar  hasil-hasil  penelitian  USU  2006. Medan : 15-25. Soesanto, L, Rokhlani, dan Nur Prihatiningsih. 2008.
Beberapa mikroorganisme antagonis
terhadap  penyakit  layu fusarium  gladiol . Agrivita. 30(1):76-83.
Susanna. 2000. Analisis keefektifan mikroorganisme antagonis dalam mengendalikan Fusarium oxysporum f.sp. cubense pada pisang ( Musa sapientum L.). [Tesis]. Program Pascasarjana. Bogor: IPB. Susanto,  A.,  Sudharto,  P.S.  and  Purba,  R.Y.  2005. Enhancing biological control of basal stem rot  disease  ( Ganoderma  boninense )  in  oil palm  plantations. Mycopathologia 159: 153-157.
Tan, R.X. and Zou, W.X. 2001. Endophytes: A rich of functional metabolites. Nat Prod  Rep . 18: 448-459.
Wright  S.A, Zumoff CH, Schneider  L, Beer  SV.  2001.
Pantoea  agglomerans strainn  Eh318 produces  two  antibiotics  that  inhibit Erwinia  amylovora  in  vitro . Appl Environ Microbiol 67: 284-292.
Zhang Z, Yuen GY. 2000. Effects of culture fluids and preinduction of chitinase    production on biocontrol  of  bipolaris  leaf  spot  by Stenotrophomonas  maltophilia C3. Biol Contr 18: 277–286.