## AKTIVITAS ANTIMIKROBA EKSTRAK ETIL ASETAT JAMUR LAUT YANG DIISOLASI DARI ORGANISME LAUT SPONS Phylospongioa lamellosa YANG DIAMBIL DARI PERAIRAN DESA TUMBAK, KECAMATAN PUSOMAEN, KABUPATEN MINAHASA TENGGARA TERHADAP MIKROBA
Staphylococcus aureus, Escherichia coli , dan Candida albicans
Priscilia Irene Tumiwa 1) , Adithya Yudistira 1) , Defny S. Wewengkang 1)

## 1)Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Sponges are multi-cell marine invertebrates whose tissue and organ functions are very simple which  live  in  coral  reef  ecosystems.  Sponges  are  known  to  produce  bioactive  compounds because of their symbiotic relationships with microorganisms so that they have the potential to be  developed  in  the  field  of  medicine  including  as  an  antimicrobial.  This  study  aims  to determine whether the fungus associated with Phyllospongia lamellose sponge taken from the waters  of,  Southeast  Minahasa  Regency  has  antimicrobial  activity.  This  research  includes sampling,  isolation  and  fungal  inoculation,  fermentation,  extraction  with  acetone  and  then fractionated with ethyl acetate solvent,dried until it gets crude extracts and is carried out as well as antimicrobial testing against Staphylococcus  aureus, Escherichia coli, and Candida albicans. Antimicrobial activity was obtained from inhibitory zones formed around the paper disk  against  the  test  microbes.  From  the  results  of  the  study  concluded  that  the  fungus associated  with  the  Phyllospongia  lamellose  sponge  has  antimicrobial  activity  against  the bacteria Staphylococcus aureus, Escherichia coli, and Candida albicans.
Keywords : Phyllospongia lamellose sponge, Antimicrobial, Stapylococcus aureu, Escherichia coli, Candida albicans.

## ABSTRAK
Spons  merupakan  invertebrata  laut  multi  sel  yang  fungsi  jaringan  dan  organnya  sangat sederhana yang hidup pada ekosistem terumbu karang. Spons diketahui menghasilkan senyawa bioaktif  karena  adanya  hubungan  simbiotik  dengan  mikro  organisme  sehingga  berpotensi untuk dikembangkan dalam bidang pengobatan diantaranya sebagi antimikroba. Penelitian ini bertujuan  untuk  mengetahui  apakah  jamur  yang  berasosiasi  dengan  spons Phyllospongia lamellose yang  diambil  dari  perairan  Desa  Tumbak,  Kecamatan  Posumaen,  Kabupaten Minahasa  Tenggara  memiliki  aktivitas  antimikroba.  Penelitian  ini  meliputi  kegiatan pengambilan  sampel  spons Phyllospongia  lamellose ,  isolasi  dan  inokulasi  jamur  yang berasosiasi  dengan  spons,  fermentasi,  ektraksi  dengan  aseton  kemudian  difraksinasi  dengan pelarut etil asetat, dikeringkan hingga mendapat ekstrak kasar dan dilakukan serta pengujian antimikroba  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus,  Es cher i chia  coli, dan  jamur Candida albicans .  Aktivitas  antimikroba  didapatkan  dari  zona  hambat  yang  terbentuk  disekitaran cakram  kertas  terhadap  mikroba  uji.  Dari  hasil  penelitian  disimpulkan  bahwa  jamur  yang berasosiasi  dengan  spons Phyllospongia  lamellose memiliki  aktivitas  antimikroba  terhadap bakteri Staphylococcus aureus, Es cher i chia coli, dan jamur Candida albicans .
Kata Kunci : Spons Phyllospongia lamellose , Antimikroba, Stapylococcus aureu, Es cher i chia coli, Candida albicans .

## PENDAHULUAN
Antimikroba  merupakan  senyawa alami, semi sintetik yang menghalangi atau menghambat  organisme  bersifat  komensal atau  patogenik.  Dengan  sedikit  atau  tidak ada  kerugian  pada  inangnya.  Antimikroba diklasifikasikan  berdasarkan  spektrumnya, mekanisme  aksi,  strain  penghasil,  cara biosintesis,  maupun  struktur  biokimianya. Menurut  Nikham  dan  Taty  (2012), mekanisme  kerja  antimikroba  adalah menghambat biosintesis dinding sel, meningkatkan  permeabilitas  membran  sel, dan  mengganggu  sintesis  protein  sel, sehingga  menghambat  pertumbuhan  atau menyebabkan kematian sel bakteri.
Spons laut memiliki potensi bioaktif  yang  sangat  besar  (Bara,  2007). Kemampuan  spons  dalam  menghasilkan senyawa bioaktif karena adanya hubungan simbiotik  dengan  mikro  organisme.  Jamur dan bakteri yang bersimbiosis dengan spons memiliki  potensi  yang  besar  dan  diduga kuat berperan menghasilkan senyawasenyawa  bioaktif  yang  selama  ini diisolasi dari spons (Lee et al, 2001). Reddy et  al.  (2011),  jumlah  metabolit  sekunder yang  diisolasi  dari  jamur  laut  yang bersimbiosis dengan alga, sponge, avertebrata  lainnya  dan  sedimen  sebagai antibakteri,  antijamur  dan  sitotoksik  rata- rata  75%  memiliki  aktivitas  biologis. Samuel et al. (2011), tahun 2002-2004, dari jamur  laut  telah  ditemukan  272  produk alami  baru,  hal  ini  membuktikan  bahwa jamur laut memiliki potensi farmakologis.
Jamur  laut  diketahui  memiliki kontribusi  yang  penting.  Banyak  jenis jamur  laut  yang  telah  diisolasi  dan diketahui  menghasilkan  sejumlah senyawa antimikroba,  seperti  alkaloid,  makrolid, terpenoid,  derivat  peptida,  dan  struktur lainnya  yang  kini  menjadi  pilihan  baru untuk  melawan  penyakit  infeksius.  Jamur laut  memiliki  kelimpahannya  yang  tinggi, namun  yang  sudah  diteliti  masih  kurang dari  5%.  Jamur  mampu  menghasilkan senyawa  yang  berpotensi  diaplikasikan dalam dunia kesehatan dan telah dibuktikan memiliki banyak sumber metabolit
sekunder  aktif  yang  unik  secara  struktur (Bugni, 2004). Jamur tersebut dapat bersifat obligat,  yaitu  tumbuh  bersporulasi  di  laut, atau  bersifat  fakultatif,  yaitu  berasal  dari lingkungan  air  tawar  atau  darat  yang mampu  tumbuh  dan  juga  bersporulasi  di lingkungan laut (Kohlmeyer 1979).
Sekarang  ini  perkembangan  resistensi terhadap  antimikroba  dan  munculnya patogen multiresisten telah membangkitkan kepedulian kalangan medis di dunia. Hal ini telah  menjadi  permasalahan  yang  sangat penting untuk diselesaikan. Bakteri multidrug  resistant  adalah  bakteri  yang telah  resisten  terhadap  dua  atau  lebih golongan antibiotik. Infeksi yang disebabkan  oleh  bakteri  resisten  dikaitkan dengan angka perawatan rumah sakit yang lebih  tinggi,  masa  perawatan  rumah  sakit yang lebih lama, serta tingkat kesakitan dan kematian  yang  lebih  tinggi  (Sastroasmoro, 2005).

## METODOLOGI PENELITIAN Bentuk Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan
menggunakan metode eksperimental laboratorium  yang  akan  menguji  aktivitas antimikroba mikroorganisme yang diisolasi dari spons

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  telah  dilaksanakan pada bulan Maret sampai bulan September 2019  di  Laboratorium  Farmasi  Lanjut Fakultas Matematika dan Imu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi.

## Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu masker, sarung tangan, gunting,  scuba  diving,kantong  plastik, kamera  bawah  laut,  wadah  kaca,  pisau, Erlenmeyer (pyrex), corong, rotary evaporator,  timbangan  digital,  gelas  ukur (pyrex),  gelas  kimia  (pyrex),  cawan  petri, corong  pisah  (pyrex),  autoklaf,  pinset, spatula, pembakar spritus, magnetic stirrer, pipet tetes, mikro tub, batang  pengaduk,
Laminar air flow,rak tabung reaksi, tabung reaksi, lemari pendingin, inkubator, cakram (paper  disc),  mikropipet,  vial,  jangka sorong, jarum ose, jas lab.

## Bahan
Bahan-bahan yang digunakan yaitu spons,  bakteri  uji  Staphylococcus  aureus ATCC  25923,  Escherichia  coli  ATCC 25922, Jamur Uji Candida albicans ATCC 1231,  etanol,  aquadest,  etil  asetat,  aseton,
Potato  Dextros  Agar,  Nutrient  Agar, Glukosa, Polypeptone, MgSO4.7H2O,
Yeast  Extract,  KH2PO4,  Sukrosa,  Starch, Malt Extract, Ebios, label, spidol permanen,  tissue,  aluminium  foil,  kertas saring, kapas.

## Pengambilan Sampel
Sampel  spons  diambil  di  Desa
Tumbak,
Kecamatan Posumaen, Kabupaten Minahasa Tenggara.
menggunakan  alat  bantu  (Scuba  Diving). Sampel  difoto  dengan  kamera  bawah  laut dan  diambil  lalu  dimasukkan  ke  dalam ziper bag dan disimpan dalam cooling box berisi es batu untuk dibawa ke Laboratorium  Lanjutan  Program  Studi Farmasi  Fakultas  Matematika  dan  Imu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi.

## Isolasi dan Purifikasi Jamur yang Berasosiasi dengan Spons
Isolasi  jamur  dilakukan  dengan cara  sampel  dibersihkan  dengan  aquades kemudian dipotong kecil-kecil menggunakan  gunting  dan  pinset  dan dimasukkan  ke  dalam  media  PDA  yang telah  disiapkan.  Sampel  ditanam  di  atas media  PDA  dengan  tiga  titik  pusat  yang berbentuk segitiga. Cawan petri yang berisi sampel ditutup dan direkatkan menggunakan parafilm, kemudian diinkubasi pada suhu ruangan selama 7x24 jam.  Setelah  didapatkan  isolat  jamur, dilakukan  pemurnian  dengan  cara  isolat jamur  diinokulasikan  ke  media  PDA  yang baru,  kemudian  diinkubasi  pada  suhu ruangan selama 14x24 jam. Selanjutnya
diidentifikasi morfologi secara makroskopik  untuk  menghasilkan  isolat jamur murni.

## Kultur Cair
Kultur  cair  dilakukan  dengan  cara biakan  jamur  murni  yang  telah  diperoleh diinokulasikan  ke  dalam  labu  erlenmeyer yang  berisi  (2  gram  glukosa,  0,5  gram polypeptone, 0,05 gram MgSO4.7H2O, 0,2 gram yeast extract, 0,1 gram KH2PO4, dan 0,1  gram  agar  ditambahkan  100  ml aquades).  Labu  tersebut  kemudian  diaduk menggunakan  alat  shaker  pada  suhu  270C dengan  kecepatan  120  rpm  selama  3x24 jam untuk memperoleh bibit kultur. Setelah didapatkan bibit kultur, kemudian dipindahkan  sebanyak  3  ml  ke  media produksi yang berisi (4,5 gram sukrosa, 4,5 gram  starch,  1,5  gram  ekstrak  malt,  0,45 Ebios,  0,75  gram  KH2PO4,  dan  0,075 MgSO4.7H2O  dalam  150  ml  aquades). Labu tersebut kemudian diaduk menggunakan  alat  shaker  pada  suhu  270C dengan  kecepatan  120  rpm  selama  7x24 jam.

## Ekstraksi dan Fraksinasi
Pada akhir hari ketujuh setelah proses fermentasi, dilakukan ekstraksi pada campuran  miselium  jamur  dan  broth dengan  menggunakan  200  mL  aseton. Dilakukan Ekstraksi pada campuran miselium jamur dan broth dengan menggunakan  aseton.  Ekstraksi  dilakukan dengan  menggunakan shaker pada  suhu ruangan dengan kecepatan 150 rpm selama 5 menit. Selanjutnya dipisahkan antara fase air  dan  aseton  menggunakan  corong  pisah dan  kertas  saring.  Setelah  didaptkan  filtrat dari hasil penyaringan kemudian diuapkan dengan rotary evaporator. Setelah didapatkan  ekstrak  kental  dari  hasil evaporasi,  dimasukkan  ke  dalam  corong pisah  dan  ditambahkan  pelarut  etil  asetat sebanyak 200 mL setelah itu dikocok dalam corong  pisah  sampai  homogen.  Dibiarkan sampai  terbentuk  dua  lapisan.  Masing- masing lapisan ditampung pada wadah
yang  berbeda.  Lapisan  H 2 O  kemudian difraksinasi  lagi  menggunakan  pelarut  etil asetat  sebanyak  200  ml.  Hal  ini  dilakukan sebanyak  tiga  kali.  Selanjutnya  fraksi  etil asetat  dikumpulkan  kemudian  pelarut diuapkan  menggunakan rotary  evaporator sampai  diperoleh  ekstrak  kasar  etil  asetat yang  akan  digunakan  untuk  uji  aktivitas antimikroba.

## Pengujian aktivitas antimikroba
Metode  yang  digunakan  dalam penelitian ini yaitu metode difusi agar ( disc diffusion  Kirby  and  Bauer ).  Aktivitas penghambatannya diuji terhadap Staphylococcus  aureus ATCC  25923 (bakteri  Gram  positif), Eschrichia  coli ATCC  25922  (bakteri  Gram  negatif)  dan Candida  albicans ATCC  1231  (jamur), yang  digunakan  sebagai  mikroorganisme uji.  Pada  pengujian  aktivitas  antimikroba ini,  cakram  ( paper  disc) yang  digunakan berukuran  6  mm.  Suspensi  mikroba kemudian  diinokulasikan  ke  dalam  media dan dihomogenkan. Kemudian media yang telah  diinokulasi  mikroba  dituangkan  ke dalam  cawan  petri  dan  tunggu  sampai media  memadat.  Masing-masing  cawan petri  diberi  label  dan  nomor  sampel  yang sesuai.  Sampel  yang  telah  ditentukkan konsentrasinya  (250μg/50μl)  ditotolkan pada masing-masing cakram dengan menggunakan mikropipet.  Letakkan kertas cakram  yang  telah  ditotolkan  sampel  uji dengan  pinset  kedalam  cawan  petri  lalu diinkubasi selama 1 x 24 jam (Ortez, 2005).

## Pengamatan dan Pengukuran Zona Hambat
Pengamatan  dilakukan  setelah  1x24 jam masa inkubasi. Zona bening merupakan  petunjuk  kepekaan  mikroba terhadap bahan antimikroba yang digunakan sebagai bahan uji yang dinyatakan  dengan  lebar  diameter  zona hambat  (Vandepite,  2005).  Diameter  zona hambat diukur kemudian dikategorikan
kekuatan daya antimikrobanya berdasarkan penggolongan Davis dan Stout (1971).

## Pengolahan dan Analisis Data
Teknik  pengolahan  data  dilakukan dengan  model  penyajian  dalam  bentuk tabel  dan  gambar.  Aktivitas  antibakteri diukur dengan menggunakan jangka sorong skla  millimeter  berdasarkan  zona  hambat yang  terbentuk,kemudian  di  rata-ratakan dari tiga kali pengujian.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi Spons
Determinasi spons dilakukan dilakukan di Laboratorium Lanjut Program Studi  Farmasi  Universitas  Sam  Ratulangi Manado. Tujuan dilakukannya determinasi untuk  mengetahui  sampel  yang  diambil ialah tepat sehingga terhindar dari kesalahan  penggunaan  sampel  dalam penelitian.  Hasil  dari  identifikasi  sampel menunjukkan  bahwa  jenis  spons  yang hendak diteliti adalah spons Phyllospongia lamellosa

## Isolasi dan Fermentasi
Sampel yang telah disiapkan kemudian  dibersihkan  dengan  aquades untuk menghilangkan kotoran dan mikroorganisme  epifit,  sehingga  koloni yang tumbuh pada media isolasi merupakan koloni  simbion  (Arnold et  al .,  2000). Selanjutnya penanaman jamur yang berasosiasi  dengan  spons Phyllospongia lamellose dilakukan  dengan  cara  dipotong berukuran  kecil  kemudian  ditanam  di  atas media  PDA . Dalam  penelitian  ini,  isolat jamur dikultivasi sebanyak dua kali dengan periode  yang  berbeda.  Kultivasi  pertama dilakukan selama 3x24 jam untuk memperoleh  bibit  kultur.  Setelah  hari ketiga  dari  kultivasi  pertama,  selanjutnya kultivasi  kedua  dilakukan  selama  14x24 jam untuk memproduksi senyawa dari bibit kultur. Kultivasi dilakukan pada media cair dengan  metode shaker pada  suhu  27 0 C dengan kecepatan 150 rpm, dan dipantau
setiap  hari  untuk  memeriksa  pertumbuhan mikroorganisme koloni dari spons Phyllospongia  lamellose .  Diamati  hasil isolat  jamur  yang  pertumbuhan  koloninya paling  dominan  kemudian  diinokulasikan ke  media  PDA  baru  untuk  dilakukan pemurnian. Pemurnian isolat jamur bertujuan untuk memisahkan hasil inokulasi  yang  terdiri  dari  banyak  koloni yang  berlainan  jenis  sehingga  didapat koloni  murni  pada  setiap  cawan  petri (Hadioetomo,  1990).  Setelah  dilakukan pemurnian selama 14 x 24 jam didapatkan isolat  jamur  murni  yaitu  isolat  yang mengandung satu bentuk morfologi koloni yang  sama.  Isolat  jamur  murni  kemudian difermentasi dengan tujuan untuk memperbanyak mikroorganisme.
Fermentasi  isolat  jamur  murni  dilakukan dengan  fermentasi  cair.  Media  fermentasi terdiri dari glukosa, polypeptone, MgSO 4 .7H 2 O, yeast extract, KH 2 PO 4 , pati, extract  Malt,  ebios  dimana  semuanya merupakan sumber nutrisi untuk pertumbuhan  jamur.  Hal  ini  diperkuat dengan pernyataan oleh Hadietomo (1990), nutrien  dalam  media  pembenihan  harus mengandung  seluruh  elemen  yang  penting untuk  sintesis  biologik  organisme  baru. Proses  fermentasi  dilakukan  pada  media cair dengan metode shaker pada suhu 27 0 C dengan  kecepatan  150  rpm,  hal  ini bertujuan  agar  media  pembenihan  dan media  produksi  tetap  homogen  dan  dapat digunakan  oleh  jamur  secara  optimal sebagai bahan untuk proses metabolismenya sehingga senyawa antimikroba  dapat  dihasilkan  dengan optimal.

## Ekstraksi dan Fraksinasi
Ekstraksi  isolat  jamur  dari  spons Phyllospongia lamellose dimaksudkan untuk memisahkan atau menyaring senyawa  aktif  yang  ada  dalam  bahan.  Hal ini  sesuai  dengan  prinsip  ekstraksi  pelarut yaitu  dengan  memisahkan  dua  komponen atau lebih berdasarkan perbedaan kelarutan komponen  tersebut  (Suryanto,  2012). Ekstraksi yang dilakukan adalah dengan
metode  maserasi,  proses  maserasi  ini dilakukan dengan cara perendaman miselium dan broth jamur dengan menggunkan  pelarut  aseton.  Penggunaan pelarut  aseton  ini  dikarenakan  aseton merupakan  pelarut  polar  dan  mudah menguap.  Aseton  yang  bersifat  polar  akan menarik  senyawa  yang  bersifat  polar sampai  non  polar  (Sarastani et  al .,  2002). Setalah  dimaserasi  selama  6  jam,  disaring untuk  memisahkan  miselium  dan  filtrat. Filtrat  yang  didapat  kemudian  diuapkan menggunakan rotary evaporator.
Penggunaan  alat  ini  bertujuan  untuk menguapkan  pelarut  dan  memperoleh senyawa  hasil  ektraksi  yang  diinginkan. Hasil  dari  proses  ini  adalah  ekstrak  kental yang berminyak yang kemudian ditambahkan  pelarut  etil  asetat  untuk difraksinasi.  Tujuan  dilakukan  fraksinasi yaitu untuk memisahkan senyawa berdasarkan perbedaan keloparan.
Fraksinasi  dilakukan  sebanyak  tiga  kali agar  semuanya  senyawa  yang  terkandung dalam  sampel  dapat  diambil  dengan sempurna.  Pelarut  etil  asetat  digunakan untuk menarik senyawa yang bersifat semi polar,  seperti  fenol,  flavonoid,  terpenoid, dan steroid  yang memiliki sifat antibakteri tertinggi  (Pambayun  et  al.,  2007;  Reskika, 2011).  Dalam  penelitian  ini,  fraksinasi dilakukan dengan metode FCC (Fraksinasi Cair-Cair).  Hal  ini  bertujuan  untuk memisahkan  dan  memurnikan  kandungan tertentu  yang  terdapat  dalam  sampel berdasarkan perbedaan kepolaran
(Departemen Kesehatan Republik Indonesia,  2000).  Dalam  fraksinasi  cair- cair terjadi perpindahan solut dari satu fasa ke fasa yang lain. Pada fraksinasi cair-cair, fasa yang digunakan adalah dua cairan yang tidak saling bercampur, biasanya digunakan air dan pelarut organik (Harborne, 1987).
Fraksinasi  dilakukan  menggunakan corong  pisah  dengan  cara  ekstrak  cair dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah  dan dicampur dengan pelarut etil asetat , setelah itu  dikocok.  Setelah  dikocok,  didiamkan beberapa menit sehingga terbentuk  dua
fraksi secara terpisah. Fraksi etil asetat berada di lapisan atas dan fraksi H2O (air)
berada  di  lapisan  bawah.  hal  ini disebabkan  karena  massa  jenis  air  lebih tinggi  dari  pada  massa  jenis  etil  asetat. Selanjutnya,  fraksi  yang  sudah  terpisah ditampung  dalam  wadah  yang  berbeda diuapkan  dan  diperoleh  ekstrak  kasar  0,13 gram untuk pengujian aktivitas antimikroba.

## Uji Aktivitas Antimikroba
Uji aktivitas antimikroba dilakukan dengan  metode  difusi  agar.  Metode  difusi agar  dipilih  karena  memiliki  kelebihan yaitu  jumlah  zat  yang  digunakan  dapat diatur, cepat, mudah dan sederhana (Valgas et  al .,  2007).  Mikroba  uji  yang  digunakan adalah Staphylococus aureus ATCC 25923 mewakili  bakteri  Gram  positif, E.  coli ATCC  25922  mewakili  bakteri  Gram negatif, dan Candida albicans ATCC 1231 mewakili golongan jamur. Ketiga mikroba uji ini ada dalam tubuh manusia. S. aureus umumnya  ditemukan  pada  kulit, E.  coli umumnya  ditemukan  di  usus,  dan C. albicans ditemukan  di  mulut  dan  area kelamin. Pengujian antimikroba ini bertujuan untuk mengetahui apakah terdapat aktivitas antimikroba dari  jamur
bahwa  aktivitas  yang  ditunjukkan  oleh ekstrak  ialah  senyawa  yang  terkandung dalam  sampel  bukan  berasal  dari  pelarut yang  digunakan.  Dalam  penelitian  ini, pelarut metanol digunakan sebagai kontrol negatif.
Tabel  1.  Hasil  pengukuran  rata-rata diameter zona hambat antimikroba ekstrak jamur yang berasosiasi dengan alga Halimeda opuntia terhadap bakteri S. aureus ATCC  25923, E. coli ATCC 25922 dan  jamur C. albicans ATCC 1231.
laut  yang  berasosiasi  dengan  spons Phyllospongia lamellose.
Dalam  pengujian  ini,  hasil  yang diperoleh  yaitu  terbentuknya  zona  hambat disekeliling  cakram  yang  ditandai  dengan adanya  area  bening.  Hal  ini  menunjukkan bahwa adanya kepekaan  mikroba terhadap ekstrak  jamur  yang  diisolasi  dari  spons Phyllospongia lamellose. Dalam pengujian ini  digunakan  kontrol  positif  dan  negatif. Penggunaan  kontrol  positif  berfungsi sebagai  kontrol  dari  zat  uji,  dengan membandingkan  diameter  daerah  hambat yang terbentuk (Dwijendra, 2014).
Sedangkan  tujuan  penggunaan  kontrol negatif agar dapat mengetahui ada tidaknya pengaruh  pelarut  terhadap  pertumbuhan mikroba uji, sehingga dapat dipastikan Hasil yang didapatkan dari
penelitian  ini,  yaitu  adanya  zona  bening yang  terbentuk  disekitaran  kertas  cakram. Pengukuran  zona  hambat  dilakukan dengan cara mengukur jarak dari tepi kertas cakram ke batas lingkaran zona hambat menggunakan  jangka  sorong  (ketelitian 0,01 mm) pada beberapa sisi kertas cakram, lalu  dirata-ratakan.  Berdasarkan  kriteria Davis  and  Stout  (1971)  kategori  lemah kurang dari 5 mm, kategori  sedang 5 mm  - 10  mm,  kategori  kuat  10  mm  -  20  mm, kategori sangat kuat lebih dari 20 mm. Dari pengukuran rata-rata diameter zona hambatnya (Tabel 1.), maka daya antimikroba dari sampel spons Phyllospongia lamellose pada bakteri S.
Rata – Rata
Diameter Total (mm) Perla kuan Staphyl o cocus aureus Escheri chia coli Cand ida albic ans Ekstra k Etil Asetat 8 6 7 Kontrol Positif 26 19 16 Kontrol Negatif 0 0 0
aureus ATCC  25923  sebesar  8  mm termasuk  dalam  kategori  sedang,  untuk bakteri E. coli ATCC 25922 sebesar 6 mm termasuk dalam kategori sedang, dan untuk jamur C.  albicans ATCC  1231  sebesar  7 mm  termasuk  dalam  kategori  sedang. Pengamatan  pada  zona  hambat  dilakukan 24 jam masa inkubasi bakteri uji dan 48 jam masa  inkubasi  jamur.  Selanjutnya  peneliti melakukan  pencarian  mengenai  penelitian yang serupa untuk membandingkan dengan penelitian  ini,  berdasarkan  hasil  penelitian dari Payangan (2018) dan Ngantung (2016) sampel Phyllospongia  lamellose memiliki aktivitas  antimikroba  yang  berbeda-beda tergantung dari lokasi pengambilan sampel tersebut  dan  hal  ini  juga  dipengaruhi  oleh letak  posisi  yang  berbeda,suhu,pH,dan komposisi  mineral.Spesimen  yang  berada dilingkungan  terbuka  dan  berombak  besar cenderung  pendek  pertumbuhannya  atau juga  merambat,  sebaliknya  specimen  dari jenis  yang  sama  pada  lingkungan  yang terlindung  dari  perairan  yang  lebih  dalam dan  berarus  tenang,  pertumbuhannya cenderung tegak dan tinggi (de Voogd,2005)  sehingga  hal  ini  juga  yang dapat mempengaruhi sehingga hasil yang di dapat berbeda-beda.
Kekuatan  senyawa  bioaktif  yang terkandung dalam ekstrak spons laut dapat dilihat dengan menggunakan lebar diameter zona hambat sebagai parameternya. Semakin lebar diameter zona hambat yang terbentuk  menandakan  semakin  kuatnya senyawa  bioaktif  tersebut  menghambat pertumbuhan  bakteri.  Kontrol  positifnya digunakan antibiotik kloramfenikol. Kloramfenikol  digunakan  untuk  melawan infeksi yang disebabkan oleh beberapa jenis bakteri  Gram  positif  dan  bakteri  Gram negatif. Kloramfenikol mempunyai khasiat bakterisid  (Sumardjo,  2009) . Penggunaan kontrol  positif  berfungsi  sebagai  kontrol dari  zat  uji,  dengan  membandingkan diameter hambat yang terbentuk. Dari hasil menunjukan  diameter  zona  hambat  dari kontrol  positif  pada  bakteri S.  aureus ATCC 2592 23 mm termasuk dalam sangat kuat, E. coli ATCC 25922 13 mm termasuk
dalam  kategori  kuat,  dan  untuk  jamur C. albicans ATCC  1231  16  mm  termasuk dalam kategori sangat kuat. Kontrol negatif yang digunakan yaitu metanol, menunjukkan  tidak  adanya  zona  hambat pada  pengujian  terhadap  bakteri S.  aureus ATCC 2592, E. coli ATCC 25922,  dan jamur C.  albicans ATCC  1231.  Hal  ini mengindikasikan  bahwa  kontrol  yang digunakan  tidak  berpengaruh  pada  uji antimikroba,  sehingga  daya  hambat  yang terbentuk  tidak  dipengaruhi  oleh  pelarut melainkan  karena  aktivitas  senyawa  yang ada  pada  spons Phylospongia  lamellose . Penggunaan  metanol  sebagai  kontrol negatif  diperkuat  dengan  penelitian  oleh Ginting  (2010),  yang  menyatakan  bahwa kontrol  metanol  pada  uji  antibakteri  tidak menunjukan  adanya  aktivitas  sehingga dapat  dipastikan  bahwa  metanol  tidak berpengaruh terhadap aktivitas yang terbentuk.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa, jamur  laut  yang  berasosiasi  dengan  spons Phylospongia  lamellose yang  diperoleh dari Desa Tumbak, Kecamatan Pusomaen, Kabupaten  Minahasa  Tenggara  memiliki aktivitas  antimikroba  terhadap  bakteri Staphylococus  aureus,  Escherichia  coli , dan jamur Candida albicans .

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  untuk mengetahui  kandungan  antioksidan  sampel Phylospongia lamellose.

## DAFTAR PUSTAKA
Coley,  P.  D.,  Kursat,  T.  A.  2000.  Are
Tropycal Fungal Endophytes Hyperdiverse. Ecology Latters . 3(3) :267- 274.
Bara,  R.  2007.  Study  metabolic  rate  and metabolism  in  the  spons  Haliclona oculata  using  different  13C  labeled substrates. Thesis. Wageningen University. The Netherlands.
Bugni, T. S., Ireland, C. M. 2004. Marine- derived fungi: A Chemically.
Davis, W. W., Stout, T. R. 1971. Disc Plate Method  of  Microbiological  Assay. Journal  of  Microbiology . 22 :659-
665. Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2000. Parameter Standard Umum Ekstrak Tanamn Obat . Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta.
De  Voogd  NJ.2005.  Indonesian  Sponges:
Biodiversity and Mariculture Potential.Netherlands:  University  of Amsterdam Dwijendra, I. M. 2014. Aktivitas Antibakteri dan Karakterisasi Senyawa Fraksi Spons Lamellodysidea herbacea yang Diperoleh dari Teluk Manado [skripsi].  Program  Studi  Farmasi
FMIPA  Universitas  Sam  Ratulangi, Manado.
Ginting, E. L., Warouw, V., Suleman, R. W.  2010. Aktivitas  Antibakteri  Dari Ekstrak Kasar Bakteri Yang Berasosiasi Dengan Sponge Acanthostrongylophora  sp. [skripsi] .
Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Sam Ratulangi, Manado.
Harborne,  J.  B.  1987. Metode  Fitokimia . Edisi ke-2. ITB. Bandung.
Kohlmeyer J, Kohlmeyer E . 1979. Marine mycology: The Higher Fungi. Academic Press, New York.
Lee,   Y.K.,   Lee,   J.H.,   Lee,   H.K.   2001.
Microbial symbiosis in Marine
Sponss. Pdf.
Ngantung,  A.,Sumilat,  D.,  Bara,  R.  Uji aktivitas antibakteri dari spons dictyonella funicularis dan phyllospongia lamellosa
yang diambil pada perairan bunaken. Jurnal Pesisir dan Laut. 2 (1).
Nikham  dan  Taty  E.B.  2012.  Uji  Baku
Antibakteri  dari  Buah  Mahkota Dewa (Phaleria Macrocarpa (SCHEFF)  Boerl.)  Hasil  Iradasi Gamma  dan  Antibiotik  Terhadap Bakteri Patogen. Prosiding Pertemuan Ilmiah Ilmu Pengetahuan  dan  Teknologi  Bahan . Serpong,pp. 168-174.
Payangan,  G.,  Fatimawali,  Rotinsulu,  H. Uji  aktivitas antimikroba jamur laut yang  berasosiasi  dengan  spons phyllospongia  lamellose .  Phamacon Jurnal  Ilmiah  Farmasi  UNSRAT. 7 (3).
Reddy,  D.R.S.,  Audipudi,  A.V.,  Reddy, G.D.,  and  Bhaskar,  C.V.S.  2011. Antioxidant,
AntiInflammator y and Antifungal Activity of Marine
Sponge
Subergargoria
suberosaDerived  Natural  Products. Interna-tional  Journal  of  Pharm Tech Research.Vol.3,No.1, pp. 342- 348.
Sarastani D, Soekarto ST, Muhchtadi TR, Fardiaz  D,  Apriyantono  A.  2002.
Aktivitas  antioksidan  ekstrak  dan fraksi ekstrak biji antung
(Parinarium  glaberrimum). Jurnal
Teknologi  dan  Industri  Pangan .
13( 2 ).
Sastroasmoro, S. 2005. Using Cyprofloxantin in Indonesia.
Indonesia HTA. 1-28 hlm.
Sumardjo,Damin. 2009. Pengantar Kimia . Buku Kedokteran EGC. Jakarta.
Suryanto, E. 2012. Fitokimia Antioksidan. Penerbit  Putra  Media  Nusantara. Surabaya.
Valgas,  C.,  Souza,  S.M.D.,  Smania,  E.F.A, and Artu, S. 2007. Screening methods to  determine  antibacterial  activity  of natural products. Brazilian Journal of
Microbiology , 38, p. 369-38 .