## PENDAHULUAN
Sumber pembentuk senyawa radikal bebas berasal dari makanan  yang  digoreng,  dibakar,  paparan  matahari yang  berlebihan,  racun  dan  polusi,  asap  rokok,  obat- obatan  tertentu  dan  banyak  ditemui  dalam  kehidupan
sehari-hari (Pietta, 2000). Radikal bebas ini merupakan salah  satu  penyebab  kerusakan  dan  kematian  sel (Majewska  et  al.,  2011).  Atom  atau  molekul  radikal bebas sangat tidak stabil dan reaktif. Orbital terluarnya tidak  mempunyai  pasangan  elektron  sehingga  akan bereaksi  dengan  molekul  di  sekitarnya  dan
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN KOMBINASI INFUSA DAUN SIRIH ( Piper Betle L) , EKSTRAK ETANOLIK TANAMAN BUNDUNG ( Actinuscirpus Grossus ) DAN KULIT JERUK NIPIS ( Citrus Aurantifolia )
Antioxidant Activity Combination Of Piper Betle Leaf Infusion, Ethanolic Extract Of Bundung (Actinuscirpus Grossus) And Citrus Fruit Peel Of Citrus Aurantifolia
Kunti Nastiti 1
Noval 2
Darini Kurniawati 3
*1 Universitas Sari Mulia, Banjamasin, Kalimantan Selatan, Indonesia
2 Universitas Sari Mulia, Banjamasin, Kalimantan Selatan, Indonesia
3 Universitas Sari Mulia, Banjamasin, Kalimantan Selatan,
Indonesia
*email: kuntinastiti86@gmail.com

## Abstrak
Daun sirih ( piper betle L ) merupakan tanaman yang paling sering digunakan untuk pengobatan dan telah terbukti secara ilmiah memiliki aktivitas sebagai antibakteri. Tanaman  Bundung  ( actinuscirpus  grossus ) banyak  ditemukan  di  Kalimantan  dan berkhasiat sebagai antimikroba. Kulit Jeruk nipis ( citrus aurantifolia) memiliki efek antioksidan  dan  kandungan  senyawa  kimia  yang  berkhasiat  dalam  pengobatan. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui pengaruh aktivitas antioksidan kombinasi infusa  daun  sirih  ( piper  betle  l) ,  ekstrak  etanolik  tanaman  bundung  ( actinuscirpus grossus )  dan  kulit  jeruk  nipis  ( citrus  aurantifolia ).  Metode  penelitian  adalah eksperimental dengan  cara  daun  sirih  dibuat  infusa  dengan  pelarut  air.  Serbuk simplisia tanaman bundung dan Kulit jeruk nipis diekstraksi dengan cara maserasi dengan  pelarut  etanol  95%.  Kombinasi  ketiga  tanaman  tersebut  kemudian  diuji antioksidan dengan metode DPPH. Quersetin digunakan sebagai kontrol positif. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kombinasi ketiga tanaman tersebut memiliki aktivitas  antioksidan  sedang  (IC50  128  µg/mL),  akan  tetapi  aktivitas  antiokidan tersebut  lebih  kecil  daripada  quersetin  (IC50  16,88  µg/mL).  Kombinasi  infusa daun sirih ( piper betle l) , ekstrak etanolik tanaman bundung ( actinuscirpus grossus ) dan kulit jeruk nipis ( citrus aurantifolia ) mempunyai kategori antioksidan sedang.

## Kata Kunci:
Antibodi Ieguler Identifikasi antibodi Multitransfusi
Keywords : Iregular antibody Antibody Identification Multitransfusion

## Abstract
Piper  betle  L .,  leaf  is  the  plant  most  often  used  for  treatment  and  has  been scientifically  proven  to  have  antibacterial  activity. Actinuscirpus  grossus plant  are commonly found in Kalimantan and have antimicrobial properties. Citrus aurantifolia peel  has  antioxidant  effects  and  nutritious  chemical  compounds  in  medicine.  The purpose  of  this  study  was  to  determine  the  effect  of  antioxidant  activity  in  a combination  of  in Piper  betle  L .,  leaf  infusion,  ethanolic  extract  of Actinuscirpus grossus plant and Citrus aurantifolia peel. The research method was experimental by making Piper  betle  L .,    leaves  infused  with  water  solvent.  Simplisia  powder  of Actinuscirpus grossus plants and Citrus aurantifolia peel extracted by maceration with 95%  ethanol  solvent.  The  combination  of  the  three  plants  was  then  tested  for antioxidants  by  the  DPPH  method.  Quersetin  is  used  as  a  positive  control.  The results showed that the combination of the three plants had moderate antioxidant activity (IC 50 128 ppm), but the antioxidant activity was smaller than quersetin (IC 50 16.88  ppm).  The  combination  of Piper  betle  L .,  leaf  infusion,  ethanolic  extract  of Actinuscirpus  grossus plant    and Citrus  aurantifolia peel  has  moderate  antioxidant category.
©  year  The  Authors.  Published  by  Institute  for  Research  and  Community  Services  Universitas  Muhammadiyah Palangkaraya.  This  is  Open  Access  article  under  the  CC-BY-SA  License  (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/). DOI: https://doi.org/10.33084/jsm.vxix.xxx .
menimbulkan  kerusakan  sel  maupun  gangguan metabolisme. Senyawa antioksidan merupakan substansi yang dapat menangkal radikal bebas sehingga dapat  mencegah  kerusakan  yang  terjadi  akibat  radikal bebas (Winarsi, H., 2007).
Salah  satu  sumber  antioksidan  di  bumi  ini  adalah berasal dari tanaman. Penelitian yang berkaitan dengan antioksidan  terus  menerus  dikembangkan  untuk mendapatkan antioksidan yang potensial bahkan sampai ke  tahap  formulasi  untuk  mendapatkan  suatu  produk farmasi  (Haryono  et  al.,  2021)  yang  bermanfaat  di tengah  masyarakat  (Noval  et  al.,  2020).  Beberapa tanaman yang telah diuji aktivitas antioksidannya adalah Kulit jeruk dan daun sirih. Daun sirih yang sudah cukup dikenal  masyarakat  adalah  sebagai  obat  tradisional dalam  mengatasi  beragam  penyakit  (Kurniawati  et  al., 2020).  Daun  sirih  mengandung  banyak  komponen kimia  seperti  minyak  atsiri,  flavonoid,  alkaloid,  tanin, dan  senyawa  polifenolat  (Serlahwaty  et  al.,  2011). Komponen - komponen ini diketahui memiliki potensi kuat  dalam  anti-jamur,  sifat  anti-bakteri.  Beberapa penelitian menyebutkan daun sirih sebagai antihistamin (Hazare  et  al.,  2011)  antifungi,  antibacterial  (Datta  et al., 2011), antiproliferasi pada sel kanker payudara dan antioksidan  (Pietta,  2000).  Senyawa  flavonoid  paling banyak  terkandung  dalam  jeruk  nipis  dibandingkan dengan  spesies  jeruk  lainnya.  Kulit  jeruk  nipis  ( citrus aurantifolia) telah  diteliti  mempunyai  aktivitas antioksidan  (Khasanah  et  al.,  2014).  Senyawa  yang berperan  dalam  antioksidan  adalah  flavonoid.  Bagian dari  jeruk  nipis  yang  memiliki  flavonoid  paling  besar adalah terletak pada kulit buahnya (Okwu, 2008). Tanaman  Bundung  ( Actinuscirpus  Grossus )  banyak ditemukan  di  Kalimantan  dan  secara  empiris masyarakat  menggunakannya  sebagai  antimikroba. Berdasarkan  penelitian  (Noval  et  al.,  2019)  tanaman bundung  memiliki  kandungan  senyawa  metabolit sekunder  yaitu  flavonoid,  tannin,  saponin,  fenolik, steroid  dan  terpenoid.  Tanaman  bundung  memiliki aktivitas  antimikroba  sehingga  dapat  dikembangkan
menjadi  produk  antiseptik  mulut  (Noval  et  al.,  2020). Antioksidan  adalah  senyawa  yang  dapat  mereduksi radikal  bebas  sehingga  dapat  melindungi  tubuh  dari kerusakan  akibat  oksidasi  yang  berlebihan.  Pengujian aktivitas  antioksidan  dapat  menggunakan  metode DPPH  (2,2-diphenyl-1-  picrilhidrazyl).  Penangkapan radikal bebas DPPH dapat diamati dengan pengukuran absorbansi.  Penurunan  absorbansi  adalah  salah  satu tanda  reaksi  penangkapan  radikal  bebas.  Selain  itu perubahan  warna  DPPH  dari  biru  ke  kuning  adalah tanda  adanya  reduksi  radikal  oleh  antioksidan  atau reaksi antara senyawa radikal lainnya.
Tujuan penelitian ini untuk mengetahui seberapa besar kekuatan antioksidan dengan mengkombinasikan ketiga tanaman tersebut.

## METODOLOGI
Bahan  uji  yang  digunakan  adalah  Daun  sirih  ( piper betle  L ),  kulit  jeruk  nipis  ( citrus  aurantifolia )  dan tanaman  bundung  ( actinuscirpus  grossus ).  Alat  dan bahan  kimia  yang  digunakan  DPPH  (2,2-diphenyl-1- picrilhidrazyl),  quersetin,  alat-alat  gelas  (Pyrex Iwaki®),  sitroborat,  metanol  p.a  (E.  merck),  asam asetat  glasial  (E.merck),  aquadest,  rotary  evaporator (Heldolph®),  blender  simplisia  (Miyako®),  oven (Memmert UP400®), butanol (E. merck), etanol 96% (E.  merck),  FeCl3  (E.  merck),  seperangkat  alat maserasi, timbangan analitik (Precisa®).
Buah  jeruk  nipis  ( Citrus  aurantifolia )  diambil  kulitnya dan  tanaman  bundung  ( Actinuscirpus  Grossus) dikeringkan  dengan  cara  dijemur  secara  tidak langsung  selama  3  hari.  Simplisia  kering  diblender sampai  halus  dan  diayak  sehingga  diperoleh  serbuk yang  homogen.  Masing-masing  serbuk  simplisia  kulit jeruk nipis dan tanaman bundung ditimbang ditimbang 400g  dan  250g.  Serbuk  simplisisa  kemudian diekstraksi  dengan  metode  maserasi  menggunakan pelarut etanol 96 % dengan perbandingan 1:10. Hasil ekstraksi  diambil  lalu  dipekatkan  menggunakan rotary
evaporator 40  rpm,  50°C  sehingga  diperoleh  ekstrak kental kemudian ditimbang.
Daun  sirih  ( Piper  bitle L)  segar  50g  diekstraksi menggunakan  metode  infundasi  dengan  cara  di  stem didalam panci infusa selama 15 menit.
Pengujian aktifitas antioksidan secara kualitatif Senyawa antioksidan diperiksa menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dengan fase gerak silika gel  GF  254    dan  fase  gerak  butanol  :  asam  asetat  : aquadest  (4:1:5).  Lempeng  plat  KLT  kemudian  ditotol dan  dielusi.  Selanjutnya  lempeng  tersebut  disemprot menggunakan  larutan  DPPH.  Setelah  disemprot, didiamkan beberapa menit. Amati bercak yang muncul.

## Pengukuran daya antioksidan Pembuatan larutan induk DPPH
Larutkan  DPPH  yang  akan  digunakan  dibuat  dengan cara  menimbang  seksama  lebih  kurang  10  mg  DPPH ditimbang  dan  dilarutkan  dengan  methanol  p.a  dalam labu ukur 100,0 ml dan ditambahkan dengan methanol p.a  hingga  tanda  batas,  kocok  sampai  homogen sehingga  didapatkan  larutan  DPPH  100  ppm.  Larutan DPPH  disimpan  dalam  wadah  yang  dilindungi  dari cahaya  dengan  cara  melapisi  menggunakan  aluminium foil  dan  disimpan  pada  suhu  rendah  untuk  segera digunakan.

## Optimasi panjang gelombang maksimal
Larutan  DPPH  100  ppm  ditentukan  spectrum serapannya  menggunakan  spektrofotometer  UV  pada panjang  gelombang  ( λ )  200  nm  hingga  800  nm  serta ditentukan  Lamda  maksimumnya  (Brand-Williams  et al.,  1995).  Pengukuran  selanjutnya  dilakukan  pada panjang gelombang maksimum tersebut.

## Operating time
Penentuan larutan pembanding (kuersetin) dibuat 1000 ppm  dengan  menimbang  seksama  10  mg  kuersetin kemudian dilarutkan  dalam metanol hingga volume 10 mL.  Dari  larutan  tersebut  diambil  1  mL  dan  lalu ditambahkan  metanol  sampai  tanda  batas  pada  labu ukur 10 mL, didapat larutan 100 ppm. Dari larutan 100 ppm  diambil  0,2  ml,  selanjutnya  dimasukkan  ke  dalam
labu ukur 10 mL dan masing-masing ditambah metanol hingga  tanda  batas  dan  didapat  konsentrasi  20  ppm. Diambil 2 ml dari larutan tersebut, kemudian ditambah 1ml  larutan  DPPH  100  ppm  lalu  ditambahkan  dengan metanol  1ml.  Kemudian  larutan  didiamkan  ditempat gelap selama 10 menit, 20 menit, 30 menit, 40 menit, 50  menit,  60  menit  dicari  menit  dengan  absorbansi konstan.

## Pembuatan larutan pembanding kuersetin
Penentuan larutan pembanding (kuersetin) dibuat 1000 ppm  dengan  menimbang  seksama  10  mg  kuersetin kemudian dilarutkan  dalam metanol hingga volume 10 mL.  Dari  larutan  tersebut  diambil  1  mL  dan  lalu ditambahkan  metanol  sampai  tanda  batas  pada  labu ukur 10 mL, didapat larutan 100 ppm. Dari larutan 100 ppm  diambil  masing-masing  0,2;  0,3;  0,4;  0,5;  dan  0,6 mL selanjutnya dimasukkan ke dalam labu ukur 10 mL dan  masing-masing  ditambah  metanol  hingga  tanda batas dan didapat konsentrasi 30, 40, 50,  dan 60 ppm. Diambil 2 ml dari larutan tersebut, kemudian ditambah 1ml larutan DPPH  lalu ditambahkan dengan metanol 1 ml. Kemudian larutan didiamkan ditempat gelap selama operating  time yang  ditentukan.  Kemudian  dibaca absorbansinya  pada  panjang  gelombang  maksimal  yang telah ditentukan. 4 Dilakukan replikasi sebanyak 3 kali.
Pengukuran  aktivitas  antioksidan  kombinasi Infusa  daun  sirih,  ekstrak  kulit  jeruk  nipis  dan ekstrak bundung
Pada  penentuan  larutan  kombinasi  (1:1:1)  dibuat dengan  cara  menimbang  seksama  5  mg masing-masing ekstrak yang  dilarutkan  dalam  metanol  hingga  volume 10  mL sebagai larutan induk kemudian dibuat bebagai seri konsentrasi yaitu 50, 100 dan 250 ppm selanjutnya dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  sebanyak  2,0  ml, dalam  tiap  tabung  reaksi  ditambahkan  1,0  mL  larutan DPPH dalam 1,0 ml metanol kemudian diinkubasi pada suhu  ruang  selama operating  time .  Larutan  dibaca absorbansi  pada  spektrofotometer  UV. 4 Dilakukan replikasi sebanyak 3 kali.
Analisis data
Absorbansi  dari  kombinasi  ekstrak  yang  diperoleh dibandingkan  dengan  absorbansi  DPPH  sehingga diperoleh  %  aktivitas  antioksidannya.  Perhitungan persentase  aktivitas  antioksidan  dapat  menggunakan rumus :
Keterangan : A c = Nilai absorbansi DPPH
A = Nilai absorbansi sampel
Data  hasil  penentuan  aktivitas  antioksidan  dengan metode  DPPH  dihitung  nilai  IC50  ( Inhibitory Concentration ) dengan menggunakan persamaan regresi linier. Nilai IC50 unttuk menentukan kategori kekuatan antioksidan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Antioksidan merupakan senyawa yang berfungsi untuk mencegah kerusakan oksidatif akibat radikal bebas yang masuk ke dalam tubuh. Pencegahan terhadap berbagai macam  penyakit  dapat  diatasi  dengan  senyawa antioksidan  ini.  Penelitian  ini  menggunakan  ketiga bahan  alami  yaitu  daun  sirih  ( Pipper  betle ),  kulit  jeruk nipis  (Citrus  aurantifolia)  dan  tanaman  bundung (A ctinuscirpus grossus ).

## Pengujian senyawa kimia tumbuhan
Pengujian dilakukan  dengan  kromatografi  lapis  tipis.
Profil  Kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  digunakan  untuk melihat  pola  kromatogram  dari  masing-masuing ekstrak pada penelitian. Mekanisme identifikasi dengan menggunakan  KLT  terjadi  karena  adanya  pemisahan senyawa  kimia  pada  sampel  berdasarkan  perbedaan kepolaran  antara  sampel  dengan  pelarut/eluen  yang digunakan.  Pelarut  yang  digunakan  adalah  campuran dari  butanol  :  asam  asetat  :  aquadest  dengan perbandingan  (4:1:5).  Selanjutnya,  plat  KLT  diamati  di bawah  sinar  UV  254  dan  366  nm.  Pada  UV  254  nm lempeng  KLT  akan  berflouresensi  sedangkan  sampel akan tampak berwarna gelap, sedangkan pada UV 366 nm  noda  yang  akan  berflouresensi  dan  lempeng
tampak  berwarna  gelap.  Pereaksi  penyemprot  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  adalah  FeCl 3 , Sitroborat dam H 2 SO 4 .
Untuk  mengidentifikasi  senyawa  polifenol  digunakan pereaksi  semprot  FeCl 3 .  Hasil  elusi  KLT  disemprot menggunakan  FeCl 3 ,  dimana  senyawa  golongan fenolik akan berubah menjadi berwarna biru. Hasil KLT dapat dilihat pada Gambar 1 .
(I)
(II)                        (III)
Gambar 1. Hasil uji penyemprotan plat menggunakan pereaksi  FeCl 3 (I)  pada  sinar  tampak  (II)  pada  sinar UV254 (III) pada sinar UV366
Sedangkan  untuk  mengidentifikasi  senyawa  flavonoid digunakan  pereaksi  semprot  sitroborat,  terlihat  pada Gambar  2 .  Pereaksi  sitroborat  menghasilkan  warna kuning  lebih  jelas    setelah  disemprot  menggunakan sitroborat.  Hal  ini  menunjukkan  adanya  senyawa flavonoid.
Gambar 2 . Hasil uji penyemprotan KLT menggunakan pereaksi sitroborat pada sinar tampak.
Pengujian  selanjutnya  dengan  menggunakan  pereaksi H 2 SO 4 menunjukkan  adanya  senyawa  organik,  dapat dilihat  pada Gambar  3 .  Penyemprotan  menggunakan H 2 SO 4 menghasilkan  spot  yang  lebih  terlihat  setelah dilakukan  pemanasan  pada  plat  KLT.  Spot  kehitaman
A  B C  D A  B C  D
A B C  D A  B C  D A  B  C  D
itu  menunjukkan  banyaknya  senyawa-senyawa  organik didalam tanaman.
I II
Gambar  3. Hasil  uji  setelah  disemprot  H 2 SO 4 10% pada  sinar  tampak  (I)  sebelum  disemprot  (II)  sesudah disemprot.
Keterangan  gambar  A  (Ekstrak  Bundung),  B  (Ekstrak Kulit  jeruk  nipis),  C  (Ekstrak  Daun  sirih),  dan  D (Quersetin).

## Pengujian antioksidan secara kualitatif
Pengujian  antioksidan  secara  kualitatif  adalah  dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT). Masing-masing ekstrak ditotolkan  dan  senyawa  pembanding  quersetin.  Eluen yang digunakan butanol : asam asetat : aquades dengan perbandingan  4:1:5  yang  biasa  digunakan  untuk identifikasi  flavonoid.  Menggunakan  plat  silika  gel  GF 254.  Bercak  akan  memberikan  perubahan  warna kuning  setelah  disemprot  dengan  DPPH.  Hal  ini diartikan  bahwa  masing-masing  ekstrak  tersebut memiliki  aktivitas  antioksidan.  Senyawa  antioksidan pada  masing-masing  ekstrak  tersebut  akan  bereaksi dengan radikal DPPH melalui mekanisme donasi atom nitrogen sehingga menyebabkan perubahan warna dari ungu ke kuning.  Hasil uji kualitatif senyawa mempunyai aktivitas  antioksidan  ditunjukkan  pada Gambar  4.
Keterangan  gambar  A  (Ekstrak  Bundung),  B  (Ekstrak Kulit  jeruk  nipis),  C  (Ekstrak  Daun  sirih),  dan  D (Quersetin).
Gambar  4 .  Hasil  Uji  aktivitas  antioksidan  setelah disemprot DPPH pada sinar tampak.

## Pengujian antioksidan kuantitatif
Berdasarkan  hasil  pengujian  antioksidan  kombinasi ekstrak,  nilai  rata-rata  IC 50 yang  diperoleh  untuk quersetin  adalah  sebesar  16,88  ppm.  Sedangkan kombinasi  ekstrak  mempunyai  IC 50 128  ppm.  Hasil pengujian  antioksidan  untuk  quersetin  dan  kombinasi ekstrak disajikan pada Tabel 1 dan II.
Tabel  1. Hasil  pengukuran  aktivitas  antioksidan quersetin dengan metode DPPH
Konsentrasi (ppm) % Inhibisi (%) IC 50 (ppm) Kategori antioksidan 30 62,8 16,88 <50 ppm atau sangat kuat 40 68,4 50 84,0 60 88,3
Tabel  II. Hasil  pengukuran  aktivitas  antioksidan sampel uji dengan metode DPPH
Konsentrasi (ppm) % Inhibisi (%) IC 50 (ppm) Kategori antioksidan 50 30,15 128 100-150 ppm atau sedang 100 34,30 250 90,68
Pengujian  aktivitas  antioksidan  secara  kuantitatif dilakukan dengan metode DPPH dengan merujuk pada prosedur Brand-Wiliams et al ., 1995 dengan beberapa modofikasi. Pemilihan menggunakan metode DPPH ini dikarenakan  merupakan  metode  yang  sederhana, mudah diaplikasikan, cepat dan peka serta sampel yang digunakan  hanya  sedikit.  Pengukuran  aktivitas antioksidan  secara  kuantitatif  menggunakan  metode DPPH mempunyai prinsip adanya perubahan intensitas warna ungu DPPH yang sebanding dengan konsentrasi larutan  DPPH  tersebut.  Elektron  yang  tidak
A B C D A B C D A B C D
berpasangan  pada  radikal  bebas  DPPH  yang memberikan  warna  ungu.  Perubahan  warna  ungu  ke warna  kuning  saat  elektron  dari  DPPH  tersebut berpasangan.  Perubahan  ini  terjadi  karena  adanya peredaman  radikal  bebas  yang  dihasilkan  oleh bereaksinya  molekul  DPPH  dengan  atom  hidrogen yang  dilepaskan  oleh  molekul  senyawa  sampel, sehingga  terbentuk  senyawa difenil  pikril  hidrazin dan menyebabkan  terjadinya  perubahan  warna  DPPH  dari ungu  menjadi  kuning.  Perubahan  warna  ini mengakibatkan  perubahan  absorbansi  pada  panjang gelombang maksimum DPPH menggunakan spektrofotometer UV-Vis sehingga akan diketahui nilai aktivitas  peredaman  radikal  bebas  yang  dinyatakan dengan nilai Inhibitory Concentration (IC 50 ).
Nilai  IC 50 didefinisikan  sebagai  besarnya  konsentrasi senyawa  uji  yang  dapat  meredam  radikal  bebas sebanyak  50%.  Semakin  kecil  nilai  IC 50 maka  aktivitas antioksidan  semakin  tinggi.  Nilai  IC 50 diperoleh  dari persamaan  regresi  linier  yang  menyatakan  hubungan antara  konsentrasi  sampel  uji  sebagai  sumbu  x  dan  % penangkapan  radikal  sebagai  sumbu  y.  Suatu  senyawa dikatakan sebagai antioksidan sangat kuat jika nilai IC 50 kurang  dari  50ppm,  kuat  (50-100ppm),  sedang  (100- 150ppm), dan lemah (151-200ppm). Semakin kecil nilai semakin  tinggi  aktivitas  antioksidan  (Tristantini  et  al., 2016).
Pengujian  aktivitas  antioksidan  secara  kuantitatif  pada kombinasi  ekstrak  yang  berisi  daun  sirih,  tanaman bundung dan kulit jeruk nipis serta untuk pembanding menggunakan quersetin dilakukan dengan berbagai seri konsentrasi  menggunakan  metode  DPPH  yang selanjutnya  absorbansinya  diukur  dengan  spektro  UV- Vis.
Absorbansi  sampel  produk  dengan  DPPH  diukur dengan  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis terlebih  dahulu  ditentukan  panjang  gelombang maksimum  dari  DPPH.  Panjang  gelombang  maksimum DPPH  yang  digunakan  517  nm.    Panjang  gelombang maksimal  ini  memberikan  serapan  maksimal  dari
larutan  uji  dan  kepekaan  yang  paling  besar.  Besarnya aktivitas  antioksidan  dari  sampel  produk  dan  kontrol pembanding  yang  digunakan  diukur  pada  panjang gelombang maksimum.
Pembanding  yang  digunakan  adalah  quersetin  yang diketahui  memiliki  aktivitas  antioksidan  karena memiliki  gugus  –OH  fenolat  dalam  strukturnya  yang bertanggung  jawab  terhadap  aktivitas  antioksidan karena mampu menjadi donor hidrogen atau elektron. Pengukuran aktivitas antioksidan sample uji dan larutan pembanding  dengan  metode  DPPH  dilakukan  tiga  kali replikasi.  Hasil  pengukuran  menunjukkan  bahwa semakin  konsentrasi  meningkat,  nilai  absorbansi  yang dihasilkan akan semakin menurun. Hal ini dikarenakan, semakin besar konsentrasi larutan maka akan semakin banyak  senyawa  antioksidan  yang  menjadi  donor hidrogen  atu  elektron  pada  DPPH  sehingga  terjadi perubahan warna DPPH. Warna Ungu dari DPPH akan berubah  menjadi  kuning  seiring  dengan  meningkatnya konsentrasi  dan  menyebabkan  absorbansi  yang dihasilkan semakin kecil.
Nilai  absorbansi  yang  didapat  maka  dapat  dihitung persentase  penghambatan  radikal  DPPH  (%inhibisi). Selanjutnya  diperoleh  kurva  regresi  linear  dan persamaannya dengan konsentrasi sebagai sumbu x dan absorbansi  sebagai  sumbu  y.  Nilai  IC 50 dapat  dihitung dari  persamaan  regresi  linear  yang  diperoleh  dengan mengganti  y  dengan  50  pada  persamaan  tersebut. Semakin  kecil  nilai  IC 50 menunjukkan  semakin  tinggi aktivitas antioksidannya.
Berdasarkan  hasil  penelitian,  senyawa  yang  memiliki potensi  sebagai  antioksidan  pada  ekstrak  kulit  jeruk, tanaman  bundung  dan  daun  sirih  adalah  flavonoid, alkaloid  dan  saponin.  Flavonoid  yang  merupakan senyawa  polifenol  dapat  berinteraksi  dengan  radikal bebas melalui reaksi netralisasi atau penghentian reaksi berantai yang terjadi. Senyawa alkaloid dapat bertindak sebagai  peredam  radikal  bebas.  Sedangkan  saponin merupakan  senyawa  kimia  tumbuhan  yang  dapat membentuk  intermediet  hidroperoksida  dan  mampu
meredam superoksida sehingga
kerusakan biomolekuler  akibat  radikal  bebas  dapat  dicegah (yuhernita, et al., 2011).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa kombinasi  ketiga  ekstrak  mempunyai  aktivitas antioksidan kategori sedang dengan nilai IC 50 128 ppm.
Hasil  penapisan  kromatografi  lapis  tipis masing-masing ekstrak  mengandung  senyawa  flavonoid,  senyawa polifenol dan senyawa kimia lainnya.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terimakasih  yang  sebesar-besarnya  kami  ucapkan kepada  Rektorat  Universitas  Sari  Mulia  beserta jajarannya  yang  telah  mendanai  dan  memberikan arahan terkait penelitian ini. Serta ucapan terima kasih kepada  LPPM  Universitas  Sari  Mulia  yang  banyak membantu  dalam  proses  perizinan  dan  penelitian hingga kepada penyusunan akhir laporan ini.

## REFERENSI
1. Pietta,  P.-G.  (2000).  Flavonoids  as  Antioxidants. Journal  of  Natural  Products , 63 (7),  1035–1042. https://doi.org/10.1021/np9904509
2. Majewska,  M.,  Skrzycki,  M.,  Podsiad,  M.,  & Czeczot,  H.  (2011).  Evaluation  of  antioxidant potential  of  flavonoids:  an  in  vitro  study. Acta Poloniae Pharmaceutica , 68 (4), 611–615.
3. Haryono,  I.  A.,  Noval,  N.,  &  Nugraha,  B.  (2021). Formulasi  Buah  Tampoi  (Baccaurea  macrocarpa) dalam Sediaan Masker Gel sebagai Antiaging. Jurnal Surya Medika (JSM) , 6 (2), 102-110.
https://doi.org/10.33084/jsm.v6i2.2126
4. Noval, Noval, Melviani Melviani, Novia Novia, and Dahlia  Syahrina.  2020.  “Formulasi  Dan  Evaluasi Sediaan  Obat  Kumur  (Mouthwash)  Dari  Ekstrak Etanol Tanaman Bundung (Actinoscirpus Grossus)
Sebagai  Antiseptik  Mulut”. Jurnal  Surya  Medika (JSM) 6 (1), 112-20. https://doi.org/10.33084/jsm.v6i1.1626 . 5. Kurniawati,  Darini,  Noval  Noval,  and  Kunti Nastiti. 2020. “POTENSI ANTISEPTIK POLIHERBAL DAUN SIRIH (Piper Betle), KULIT JERUK  NIPIS (Citrus  Aurantifolia)  DAN TANAMAN BUNDUNG (Actinuscirpus Grossus) PADA TINDAKAN  KEPERAWATAN  DAN KEBIDANAN.” Dinamika Kesehatan: Jurnal Kebidanan Dan Keperawatan 11(1): 420–31.
6. Noval, N., Nastiti, K., Nugraha, D., Rahmadani, R., &  Alawiyah,  T.  (2020).  PRODUK  INOVASI HAND  SANITIZER  DARI  AKAR  BAJAKAH SEBAGAI  UPAYA  PENCEGAHAN  DI  MASA PANDEMI  COVID-19. LOGISTA  -  Jurnal  Ilmiah Pengabdian  Kepada  Masyarakat,  4 (2),  305-312. doi:10.25077/logista.4.2.305-312.2020.
7. Serlahwaty,  D.,  Sugiastuti,  S.,  &  Ningrum,  R.  C. (2011).  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Air  dan Etanol  70%  Daun  Sirih  Hijau  (Piper  betle  L.)  dan Sirih  Merah  (Piper  cf.  fragile  Benth.)  dengan Metode  Perendaman  Radikal  Bebas  DPPH. Jurnal Ilmu Kefarmsian Indonesia , 9 (2), 143–146.
8. Hazare, R., Darvhekar, V., Shewale, A., & Patil, V. (2011).  Evaluation  of  antihistaminic  activity  of Piper  betel  leaf  in  guinea  pig.  In African  Journal  of Pharmacy and Pharmacology (Vol. 5).
9. Datta,  A.,  Ghoshdastidar,  S.,  &  Singh,  M.  (2011). Antimicrobial Property of Piper betel Leaf against Clinical Isolates of Bacteria. International Journal of Pharma Sciences and Research , 2 (3), 104–109.
10. Okwu, D. E. (2008). Citrus fruits: A rich source of phytochemicals  and  their  roles  in  human  health. International Journal of Chemical Sciences , 6 (2), 451– 471.
http://www.sadgurupublications.com/ContentPape r/2008/1_6(2)2008.pdf
11. Noval,  N.,  Yuwindry,  I.,  &  Syahrina,  D.  (2019). Phytochemical  Screening  and  Antimicrobial Activity  of  Bundung  Plants  Extract  by  Dilution Method. Jurnal Surya Medika .
https://doi.org/10.33084/jsm.v5i1.954.
12. Brand-Williams, W., Cuvelier, M. E., & Berset, C. (1995).  Use  of  a  free  radical  method  to  evaluate antioxidant  activity. LWT  -  Food  Science  and
Technology , 28 (1), 25–30.
https://doi.org/https://doi.org/10.1016/S0023- 6438(95)80008-5
13. Tristantini,  D.,  Ismawati,  A.,  Pradana,  B.  T.,  & Gabriel, J. (2016). Pengujian Aktivitas Antioksidan Menggunakan Metode DPPH pada Daun Tanjung ( Mimusops elengi L ). Universitas Indonesia , 2.
14. Ismiyyatun  Khasanah,  Ulfah,  M.,  &  Sumantri,  S. (2014). UJI AKTIVITAS
ANTIOKSIDAN EKSTRAK  ETANOLIK  KULIT  BUAH  JERUK NIPIS  (Citrus  aurantifolia)  DENGAN  METODE DPPH  (1,1-difenil-2-  pikrilhidrazil). E-Publikasi Fakultas Farmasi , 11 (2), 9–17.
https://publikasiilmiah.unwahas.ac.id/index.php/Far masi/article/view/1363 .
15. yuhernita,  Juniarti.  (2011).  Analisis  Senyawa Metabolit  Sekunder  Dari  Ekstrak  Metanol  Daun Surian  Yang  Berpotensi  Sebagai  Antioksidan.
MAKARA of Science Series , 15 (1), 48–52.