# Korespondensi:  Loka  Penelitian  dan  Pengembangan  Budidaya Rumput  Laut.  Jl.  Pelabuhan  Etalase  Perikanan,  Desa  Tabulo Selatan,  Kec.  Mananggu,  Kab.  Boalemo  96265,  Gorontalo, Indonesia. E-mail:    lppbrl@yahoo.com
Tersedia  online  di:  http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/ma

## PROPAGASI BIBIT RUMPUT LAUT Gracilaria gigas PADA TAHAP KULTUR JARINGAN, AKLIMATISASI,  DAN  PEMBESARAN
Siti Fadilah # dan Dhini  Arum Pratiwi
Loka Penelitian dan Pengembangan Budidaya Rumput Laut

## ABSTRAK
Ketersediaan bibit rumput laut secara berkesinambungan diperlukan untuk meningkatkan produktivitas budidayanya. Kultur jaringan adalah salah satu metode yang digunakan untuk memenuhi kebutuhan bibit tersebut. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi performansi pertumbuhan dan sintasan bibit rumput laut Gracilaria gigas pada tiga tahap  propagasi bibit rumput laut. Propagasi bibit  rumput laut dilakukan melalui tahap kultur jaringan, kemudian dilanjutkan dengan aklimatisasi dan pembesaran bibit. Pada tahap kultur, eksplan dengan panjang awal ± 2 cm dikultur dalam 2 L media air laut yang diperkaya pupuk PES 20 mL/L. Kepadatan eksplan adalah 500, 750, 1.000, dan 1.250 per L. Eksplan dipelihara selama delapan minggu dengan pembaruan media setiap minggu. Pada tahap aklimatisasi bibit, perlakuan yang dicobakan adalah penambahan pupuk organik dengan dosis 0,025; 0,05; dan 0,1 mL/L. Aklimatisasi dilakukan dengan menggunakan  kontainer  plastik  dengan  20  L  media  air  laut  selama  delapan  minggu.  Pembesaran  bibit dilakukan di kotak hapa berukuran 50 cm x 50 cm x 50 cm di laut selama tujuh minggu. Hasil menunjukkan bahwa tidak ada beda nyata (P>0,05) sintasan antar kepadatan eksplan. Sintasan eksplan pada tahap kultur di atas 95%. Pada tahap aklimatisasi, dosis pupuk organik 0,05 mL/L cenderung memberikan pertumbuhan bibit  yang  lebih  baik  daripada  dosis  lainnya.  Pertumbuhan  bibit  rumput  laut  pada  pembesaran  di  laut setelah tujuh minggu mengikuti persamaan y= 17,09x + 27,8 dengan rata-rata LPH sebesar 3,57%/hari.
KATA KUNCI: aklimatisasi; Gracilaria gigas; kultur jaringan; pembesaran; propagasi
ABSTRACT: Propagation of seaweed seedling Gracilaria gigas during tissue culture, acclimatization and rearing stages. By: Siti Fadilah and Dhini Arum Pratiwi
Sustainability supply of seaweed seedlings is needed to improve its productivity. Tissue culture is one of the methods applied to fulfill the seedlings demands. This study aims to evaluate the growth performance and survival rate of seaweed seedlings Gracilaria gigas at three stages of seedling propagation. Seedling propagation was carried out by three stages namely, tissue culture acclimatization and seedlings rearing. For the stage of tissue culture, explants with the initial length of ± 2 cm were cultured in 2 L of media seawater enriched with 20 mL/L of PES fertilizer. The density of explant used were 500; 750; 1,000; and 1,250 explant/L media, respectively. The explants were maintained for eight weeks and media was weekly renewed. For the seedlings acclimatization stage, the explants were treated with different doses of organic fertilizer of 0.025, 0.05, and 0.1 mL/L. The acclimatization of seaweed seedling was done by using a plastic container filled with 20 L sea water and the trial lasted after eight weeks. The seedling were reared in the sea using net boxes with size of 50 cm x 50 cm x 50 cm for seven weeks. The results showed that there was no any significant difference (P>0.05) of the survival rate among the density of the explants. Survival rate of the explants at tissue culture stage was above 95%. At the acclimatization stage, organic fertilizer with the dose of 0.05 mL/L tended to produce higher growth than the other doses. The growth of seaweed seedlings after seven weeks of rearing in the sea was based on the equation y= 17.09x + 27.8 with an average DGR of 3.57%/day.
KEYWORDS: acclimatization; Gracilaria gigas; propagation; rearing; tissue culture

## PENDAHULUAN
Rumput laut adalah komoditas andalan penghasil devisa bagi negara Indonesia.  Produksi rumput laut di Indonesia dari tahun ke tahun semakin meningkat. Berdasarkan  data  statistik  sementara  tahun  2015, produksi rumput laut nasional mencapai 9,9 juta ton atau  mengalami  kenaikan  18,84%  per  tahun dibandingkan tahun 2011 yang produksinya mencapai 5,2  juta ton  (DJPB,  2015).  Peningkatan produksi  ini harus  diimbangi  dengan  ketersediaan  bibit  secara berkesinambungan.
Upaya  penyediaan  bibit  secara  sistematis diperlukan  untuk  menjaga  ketersediaan  bibit. Kebutuhan bibit selama ini umumnya dipenuhi dengan cara fragmentasi sebagian hasil panen pembudidaya. Perkembangbiakan  secara  vegetatif  seperti  ini memudahkan pembudidaya untuk mendapatkan bibit, tetapi penggunaan bibit hasil fragmentasi secara terus- menerus  menurunkan  kandungan  karaginan  pada rumput laut dan meningkatkan kerentanan terhadap penyakit (Hurtado & Cheney, 2003).
Salah satu teknik yang telah dikembangkan untuk mendapatkan bibit rumput laut yang lebih berkualitas adalah melalui kultur jaringan (Sulistiani & Yani, 2014). Propagasi  (perbanyakan)  bibit  rumput  laut  melalui teknik  ini  diharapkan  mampu  menghasilkan  bibit berkualitas  dalam  skala  massal  dengan  waktu  yang relatif  singkat  tanpa  dibatasi  siklus  musim. Perbanyakan  bibit  melalui  kultur  jaringan  memiliki beberapa keunggulan karena karakter tanaman sama dengan induknya (seragam) dan perbanyakan anakan dapat dilakukan dalam jumlah banyak (Akin-Idowu et al., 2009).
Rumput  laut  Gracilaria  termasuk  dalam  kelas Rhodophyceae (alga merah) yang memiliki lebih dari 150 spesies di mana sekitar 45 spesies di antaranya berasal  dari  Asia  Tenggara.  Rumput  laut  Gracilaria hidup pada suhu 15°C-30°C dan kandidat ideal untuk budidaya karena mudah tumbuh di perairan hangat, mudah  diperbanyak,  mempunyai  kecepatan pertumbuhan  yang  relatif  tinggi,  toleran  terhadap kondisi lingkungan dan bernilai komersial (FAO, 1990; Prudhomme  van  Reine,  2001;  Yarish  et  al.,  2012). Berdasarkan  penelitian  Widyartini  et  al.  (2012), pertumbuhan  rumput  laut  G.  gigas  yang  dipelihara dengan metode jaring apung  di laut adalah sebesar 4,25  g/hari;  sehingga  rumput  laut  ini  mempunyai potensi untuk dikembangkan.
Beberapa penelitian kultur jaringan Gracilaria telah dilakukan pada beberapa spesies di antaranya Gracilaria sp. (Mulyaningrum et al., 2014), G. tenuistipitata dan G. perplexa (Yokoya  et  al., 2004),  G.  tikvahiae  (Yarish
et al., 2012), dan G. edulis (Jayasankar & Ramamoorthy, 1997). Sementara perbanyakan bibit Gracilaria gigas melalui kultur jaringan belum dilakukan.
Propagasi bibit rumput laut melalui kultur jaringan, aklimatisasi  sampai  perbanyakan  di  tambak  telah dilakukan  pada  rumput  laut  Gracilaria  sp. (Mulyaningrum et al., 2014). Teknik propagasi tersebut menjadi  acuan  dalam  penelitian  ini  dengan  sedikit modifikasi. Perbanyakan bibit rumput laut dilakukan melalui  tahap  kultur  jaringan,  dilanjutkan  dengan aklimatisasi dan pembesaran untuk perbanyakan bibit di laut. Bibit yang diperbanyak dengan kultur jaringan sebaiknya  adalah  bibit  hasil  seleksi,  bibit  dari  alam yang  potensial  atau  bibit  hasil  rekayasa  genetika. Aklimatisasi bibit dilakukan untuk tahap penyesuaian kondisi  bibit  dengan  lingkungan  budidayanya. Pembesaran  untuk  perbanyakan  dilakukan  untuk menghasilkan bibit yang akan dibudidayakan secara massal. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi performa pertumbuhan dan sintasan bibit rumput laut Gracilaria gigas pada tahap kultur jaringan, aklimatisasi, dan pembesaran bibit rumput laut.

## BAHAN DAN METODE

## Kultur  Jaringan
Penyediaan  bibit  diawali  dengan  tahap  kultur jaringan.  Kultur  jaringan  rumput  laut  terdiri  atas beberapa  tipe  kultur.  Tipe  kultur  jaringan  yang dilakukan dalam penelitian ini adalah kultur eksplan berupa talus (kultur talus). Jaringan yang digunakan adalah  berupa  talus  muda  rumput  laut  berukuran panjang ± 2 cm dalam kultur media cair.
Stok  bibit  rumput  laut  G.  gigas  adalah  hasil budidaya yang didapatkan dari pembudidaya laut di Kabupaten  Takalar,  Sulawesi  Selatan,  pada  bulan Februari 2015. Bibit diseleksi dari tanaman yang sehat, segar,  bebas  penyakit,  dan  bebas  epifit  kemudian dipotong menjadi eksplan berukuran ± 2 cm. Eksplan dicuci dengan larutan betadine 1% (v/v) dan antibiotik spektrum luas 0,1% (w/v) berturut-turut selama sekitar 30  detik  untuk  sterilisasi  permukaan  eksplan. Antibiotik terdiri atas streptomycin, kanamycin, penicilin, dan rifampicin. Selanjutnya eksplan dibilas dengan air laut. Eksplan diinokulasi dalam 2 L media kultur berupa air laut bersalinitas 32-34 ppt yang diperkaya dengan pupuk  Provasoli’s  Enriched  Seawater  (PES)  dengan konsentrasi  20  mL/L  (Provasoli,  1968).  Wadah pemeliharaan kultur berupa toples kaca berkapasitas 3 L yang berisi media kultur sebanyak 2 L. Perlakuan yang dicobakan adalah jumlah eksplan yang berbeda yaitu  500,  750,  1.000,  dan  1.250  eksplan/L  dengan ulangan sebanyak tiga kali (Gambar 1).
Aerasi  diatur  kuat  untuk  meningkatkan  difusi nutrisi  media  ke  jaringan  rumput  laut.  Kultur  talus diinkubasi di rak kultur selama delapan minggu pada suhu  sekitar  25°C  dengan  intensitas  cahaya  sekitar 1.500 lux,  serta fotoperiodik 12  jam terang  dan 12 jam gelap. Penggantian media kultur dilakukan setiap minggu  dan  pada  saat  yang  sama  dilakukan penghitungan  jumlah  eksplan  yang  hidup.  Eksplan hidup adalah eksplan yang berwarna hijau atau cokelat cerah dan tidak mengalami pemutihan (ice-ice). Data sintasan yang diperoleh diolah dengan analisis ragam dengan  taraf  kepercayaan  95%  dan  uji  lanjut  jarak berganda Duncan.

## Aklimatisasi
Bibit  hasil  kultur  jaringan  yang  diperoleh  pada tahap  tersebut  di  atas  selanjutnya  diaklimatisasi  di Laboratorium Aklimatisasi. Aklimatisasi menggunakan wadah plastik berkapasitas 25 L tembus cahaya berisi air laut bersalinitas 32-34 ppt sebanyak 20 L dan diberi aerasi kuat (Gambar 2). Pada tahap ini, perlakuan adalah tiga  dosis pupuk  organik cair  (Tabel  1) yaitu  0,025; 0,05; dan 0,1 mL/L dengan ulangan sebanyak dua kali. Bobot awal eksplan yang diinokulasi adalah 50 g per wadah.  Penggantian  media  aklimatisasi  dilakukan setiap  minggu  dan  pada  saat  itu  dilakukan  pula
penimbangan  bobot  rumput  laut.  Pemeliharaan dilakukan selama delapan minggu. Data pertumbuhan diolah secara deskriptif.

## Pembesaran Bibit di Laut
Bibit yang diperoleh dari tahap aklimatisasi di atas selanjutnya  dibesarkan  di  laut.  Pembesaran  bibit dilakukan  dalam  kotak  besi  tertutup  hapa  yang berukuran 50 cm x 50 cm x 50 cm (Gambar 3). Bibit diikat  pada  tali  mini-line  (tali  polietilen  berdiameter 1,5  mm)  yang  diikat  di  dalam  kotak  hapa.  Satu  tali mini-line memuat lima tali rumpun yang masing-masing terdiri  atas  lima  bibit  eksplan.  Bobot  eksplan  yang ditebar sekitar 0,05 g. Satu  kotak hapa memuat 20 tali mini-line, sehingga bobot awal eksplan dalam satu kotak hapa sekitar 25 g. Kotak hapa diletakkan di laut dengan cara digantung dan setiap sudut kotak diberi bola pelampung. Penimbangan dan pembersihan bibit dari  biofouling  dilakukan  setiap  minggu.  Data  yang diperoleh dianalisis secara deskriptif.

## HASIL DAN BAHASAN

## Kultur  Jaringan
Perbanyakan  bibit  G.  gigas  pada  penelitian  ini menggunakan metode kultur talus karena waktu yang
Gambar 1. Kultur talus Gracilaria gigas
Figure 1. Thallus culture of Gracilaria gigas
Gambar 2. Aklimatisasi Gracilaria gigas
Figure 2. Acclimatization of Gracilaria gigas
dibutuhkan lebih cepat dibandingkan jika dilakukan dengan  kultur  spora  dan  embriogenesis  somatik. Metode  ini  telah  digunakan  pada  rumput  laut G. verrucosa dengan waktu perbanyakan bibit hingga siap digunakan dalam kegiatan budidaya adalah enam bulan  (Mulyaningrum  et  al.,  2014).  Kultur  spora Gracilaria  selama  4,5  bulan  pemeliharaan  masih memerlukan pemeliharaan lebih lanjut untuk anakan yang  dihasilkan  hingga  mencapai  ukuran  siap aklimatisasi (Suryati et al., 2009). Selanjutnya, anakan berupa  propagul  K.  alvarezii  yang  dihasilkan  dari embriogenesis  somatik  membutuhkan  ±  12  bulan pemeliharaan di laboratorium dan rumah kaca sebelum siap diperbanyak di laut (Sulistiani & Yani, 2014).
Sintasan eksplan selama delapan minggu kultur talus memperlihatkan  sintasan  yang  tinggi  pada  semua kepadatan yaitu di atas 95% (Gambar 4). Hasil analisis ragam  menunjukkan  bahwa  perbedaan  kepadatan eksplan dari 500-1.250 eksplan/L tidak berpengaruh nyata (P>0,05) terhadap sintasan. Hal ini menunjukkan bahwa penebaran eksplan rumput laut G. gigas sampai dengan 1.250 eksplan/L media kultur dapat dilakukan melalui kultur jaringan dalam upaya penyediaan bibit.
Hasil  yang  berbeda  didapatkan  pada  kultur  talus G. verrucosa, di mana kepadatan 750 eksplan/L media menghasilkan sintasan tertinggi 45,4% dibandingkan dengan  kepadatan  500  dan  1.000  eksplan (Mulyaningrum et al., 2014).
Sintasan  G.  verrucosa  lebih  rendah  dibandingkan G. gigas pada kepadatan dan media yang sama diduga disebabkan  oleh  kondisi  sumber  eksplan  yang menurun.  Menurut  Sulistiani &  Yani  (2014),  kondisi sumber  eksplan  menjadi  salah  satu  faktor  penentu keberhasilan kultur. Sumber eksplan yang digunakan untuk kultur sebaiknya adalah rumput laut dari hasil seleksi dengan karakter pertumbuhan rumpun yang subur, bebas penyakit, dan bebas epifit. Eksplan yang digunakan dalam kultur jaringan rumput laut adalah jaringan muda yang sedang aktif tumbuh dan membelah diri (jaringan meristematik). Jaringan muda mempunyai daya  regenerasi  yang  lebih  tinggi  sehingga  respons pertumbuhan kultur cepat.
Berdasarkan  pengamatan,  kultur  talus  G.  gigas dengan menggunakan media cair dalam penelitian ini cenderung mengarah pada organogenesis langsung.
Tabel 1. Kandungan senyawa/unsur dalam pupuk organik cair Table1. Compounds/elements in liquid organic fertilizer
Gambar 3. Pembesaran bibit Gracilaria gigas
Figure 3. Rearing of Gracilaria gigas seedling Senyawa/unsur Compound/element Jumlah Amount  (%) Senyawa/unsur Compound/element Jumlah Amount N total 0.72 Zn 16 mg/L P 2 O 5 0.15 Pb 54 mg/L K 2 O 0.49 Fe 160 mg/L C organik (C organic ) 4.7 Mn 46 mg/L Ca 0.73 Na 0.83% Mg 0.1 S 0.03% pH 4.3
Pembentukan organ berupa tunas talus rumput laut tidak melalui tahap pembentukan kalus (massa sel). Tunas  yang  tumbuh  dari  fragmen  eksplan  teramati muncul  bukan  saja  dari  permukaan  eksplan  yang terluka tapi juga dari samping eksplan. Titik tumbuh tunas tersebut mulai muncul di minggu ke-2 kultur. Jaringan terluka yang terinduksi media kultur menutup dan  membentuk  jaringan  tunas-tunas  baru. Berdasarkan penelitian Yokoya & Handro (2002), me- dia kultur padat cenderung menginduksi pembentukan filamen, sedangkan media cair membentuk cabang pada kultur Solieria filiformis.
Menurut Azanza-Corrales & Dawes (1989), proses penyembuhan luka dari fragmen rumput laut Eucheuma alvarezii  yang  terjadi  dalam  media  kultur  terbagi menjadi  empat  tahap  perubahan  histologi.  Tahap pertama  terjadi  setelah  2-4  hari  perlukaan  di  mana bahan bersifat protein dan fenol terkumpul di lubang sel yang berbatasan dengan permukaan luka. Tahap kedua  terjadi  pada  hari  ke-6,  pemanjangan  seluler dihasilkan dari lubang sel-sel medula dan korteks dari lapisan pengganti luka. Tahap ketiga ditemukan pada hari ke-8, pemanjangan seluler terjadi berkali-kali dan memanjang  ke  arah  permukaan.  Korteks  baru terbentuk pada tahap ke-4 yang mulai terjadi pada hari ke-12. Jaringan luka terus ditumbuhi dengan korteks selama tiga bulan.
Menurut Muraoka et al. (1998), pada permukaan jaringan rumput laut Gracilaria chorda yang terpotong, sel-sel yang terluka kehilangan sitoplasma dan yang tersisa  hanya  dinding  sel.  Inti  sel  dan  sitoplasma
beberapa sel bagian dalam medula bergerak menuju sel-sel terluka dalam waktu 24 jam setelah perlukaan. Dua hari setelah perlukaan, sitokinesis pertama terjadi di  sel bagian  dalam dan  membentuk  sel-sel baru  di permukaan  yang  terpotong.  Dinding  sel  antara  sel terluka dan sel baru menjadi lebih tebal dan dipisahkan oleh lubang penghubung. Sel-sel baru ini membelah lebih lanjut untuk menutup jaringan luka dengan lebih dari  tiga  lapisan  yang  pada  akhirnya  berkembang menjadi jaringan korteks.
Proses  kultur  talus  selain  memperlihatkan pertumbuhan tunas talus, juga memperlihatkan adanya kematian.  Kematian  biasanya  terjadi  bila  ada penumpukan eksplan di dinding toples. Hal ini dapat mengakibatkan  permukaan  jaringan  eksplan  tidak mendapatkan nutrisi dari media. Eksplan yang tidak mendapat cukup nutrisi mengalami kehilangan warna (discoloration) dan berlanjut pada kematian. Menurut Luning (1990), tanaman akuatik mempunyai lapisan pembatas  di  permukaannya.  Kecepatan  transpor tergantung pada ketebalan lapisan pembatas ini dan dapat  menjadi  lebih  lambat  daripada  kecepatan potensial pengambilan pada tanaman. Ketebalan lapisan ini ditentukan oleh gerakan putaran pencampuran dan pergerakan air di sekitar tanaman. Kecepatan difusi ion dan gas 10.000 kali lebih lemah dalam air daripada udara,  sehingga  pergerakan  air  sangat  dibutuhkan. Pemberian  aerasi  pada  kultur  rumput  laut  dapat meningkatkan  pengambilan  nutrien.  Peningkatan pergerakan air dapat memfasilitasi pertukaran ion dan gas pada talus (Luning, 1990).
Gambar 4. Sintasan  eksplan  Gracilaria  gigas  pada  kepadatan  eksplan  yang berbeda (eksplan/L) selama tahap kultur talus
Figure 4. Survival rate of Gracilaria gigas at different densities (explant/L)  during thallus culture 90 92 94 96 98 100 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Si n tas an (S ur vi va l r at e ) (% ) Minggu (Weeks) 500 eksplan/L (500 explan/L) 750 eksplan/L (750 explan/L) 1.000 eksplan/L (1,000 explan/L)
1.250 eksplan/L (1,250 explan/L)

## Aklimatisasi
Tahap  aklimatisasi  merupakan  tahapan  penting dalam  propagasi  bibit  rumput  laut  karena  proses pemindahan  dari  kondisi  kultur  yang  terkontrol  ke kondisi lapang yang tidak terkontrol membutuhkan penyesuaian  diri.  Pada  tahap  kultur  talus,  eksplan hidup dalam kondisi heterotrof di mana eksplan diberi input nutrisi secara berkala, sedangkan pada kondisi lapang, tanaman harus hidup dalam kondisi autotrof atau mampu memenuhi sendiri kebutuhan nutrisinya (Razdan, 2003).
Pada percobaan ini, aklimatisasi dilakukan melalui penambahan nutrien berupa pupuk organik ke dalam media. Penambahan pupuk pada tahap ini dilakukan agar pertumbuhan tanaman dapat optimal (Sulistiani & Yani, 2014). Hasil pengamatan menunjukkan bahwa penambahan pupuk organik dengan dosis 0,05 mL/L lebih  baik  dalam  menjaga  pertumbuhan  eksplan dibandingkan  dua  dosis  lainnya  (Gambar  5).  Hal  ini diduga karena pada dosis tersebut kebutuhan nutrien jaringan rumput laut seperti nitrogen dan fosfor telah tercukupi.  Nitrogen  dibutuhkan  sebagai  komponen protein  dan  ditemukan  di  banyak  senyawa  biologi (Rezael  &  Samimi,  2013).  Sementara  fosfor  adalah komponen esensial pada asam nukleat dan metabolit perantara, seperti pada gula fosfat dan adenosin fosfat (Correll, 1998).
Penggunaan pupuk adalah salah satu usaha dalam meningkatkan  pertumbuhan.  Pupuk  organik  dapat mengurangi penggunaan pupuk kimia anorganik, serta menyediakan  unsur  hara  makro  dan  mikro  yang dibutuhkan  oleh tanaman  (Parnata, 2004).  Berbagai
penelitian mengenai penambahan pupuk organik untuk pertumbuhan  rumput  laut  menunjukkan  bahwa pemberian pupuk organik harus memperhatikan dosis yang diaplikasikan. Pertumbuhan rumput laut Eucheuma sp.  terbaik  didapatkan  dengan  perendaman  dalam pupuk  bionik  cair  selama  enam  jam  dengan konsentrasi  150  mL/L  (Silea  &  Masitha,  2004). Sementara itu, pertumbuhan rumput laut Kappaphycus alvarezii  tertinggi  terjadi  pada  penambahan  pupuk organik cair dengan konsentrasi 10 mL/L (Fadilah & Suryati, 2012).
LPH  eksplan  mengalami  penurunan  di  minggu ke-2 pada semua dosis pupuk disebabkan alga epifit yang menempel pada eksplan (Gambar 5). Berdasarkan pengamatan ada dua jenis alga epifit yang dominan menyerang talus. Morfologi kedua jenis alga berupa filamen, berwarna hijau, dan coklat kemerahan. Alga epifit  ini  tidak  hanya  menempel  pada  permukaan talus, namun juga tumbuh menembus sampai ke dalam jaringan  talus  rumput  laut.  Alga  epifit  ini  diduga menyerap unsur nutrisi dari talus eksplan rumput laut. Eksplan  yang  ditempeli  oleh  alga  epifit  tersebut mengalami  bleaching  (pemutihan)  atau  necrosis (kematian  jaringan)  kemudian  mati.  Karena  bentuk simbiosisnya  yang  merugikan  tersebut,  maka  alga epifit diduga bersifat parasit (Gambar 6). Eksplan yang sudah  diserang  alga  epifit  harus  segera  dieliminasi karena dapat menginfeksi eksplan lainnya.
Menurut Tisera & Naguit (2009), permukaan talus rumput  laut  mudah  ditempeli  epifit.  Penempelan biofouling ini dapat menjadi media bagi patogen untuk berkembang.  Patogen  memasuki  lapisan  jaringan
Gambar 5. Laju pertumbuhan harian (LPH) eksplan Gracilaria gigas selama tahap aklimatisasi dengan penambahan dosis pupuk organik yang berbeda
Figure 5. Daily growth rate (DGR) of Gracilaria gigas explant during acclimati- zation at the different doses of organic fertilizer
-0.5 0 0.5 1 1.5 2 2.5 1 2 3 4 5 6 7 8 La ju p er tu m b u h an h ar ia n ( % /h ar i)
D ai ly g ro w th r at e (% /d ay ) Minggu ke- (Week) 0.025 mL/L 0.05 mL/L 0.1 mL/L
korteks dan medula dari talus rumput laut sehingga talus menjadi lemah. Talus yang lemah akan mudah mengalami infeksi bakteri.
Pang et al. (2011) menyatakan bahwa epifit utama K.  alvarezii  di  Cina  adalah  Neosiphonia  savatieri. Sementara  itu,  di  Filipina,  Indonesia,  Malaysia,  dan Tanzania  alga  epifit  berfilamen  yang  teridentifikasi menginfeksi karaginofit adalah N. apiculata (Vairappan et al., 2009). Penelitian Martin et al. (2013) menemukan ada  29  spesies  alga  epifit  yang  menyerang  agarofit Gracilaria  gracilis,  di  antaranya  adalah  Calothrix confervicola,  Ceramium  rubrum,  dan  Polysiphonia abscissa.
Gambar 6. Epifit  yang  menyerang  eksplan  Gracilaria  gigas  selama pemeliharaan aklimatisasi (Tanda panah menunjukkan dua jenis epifit)
Figure 6. Epiphytes attacking Gracilaria gigas explant during the acclima- tization (Arrows show two species of epiphyte)

## Pembesaran
Tahap lanjutan  setelah tahap  aklimatisasi adalah tahap  pembesaran  bibit.  Selama  tahap  pembesaran bibit ini, pertambahan bobot terus meningkat seiring dengan  pertambahan  waktu  mengikuti  persamaan regresi linier  y= 17,09x +  27,81 (Gambar  7). Rata- rata LPH  selama tujuh  minggu pemeliharaan  adalah 3,57%/hari.  Menurut  Anggadiredja  et  al.  (2011), pertumbuhan rumput laut dikategorikan baik jika laju pertumbuhan harian lebih dari 3%. Pembesaran bibit ini membutuhkan waktu lanjutan sehingga bibit dapat diperbanyak menggunakan tali long-line.
0 20 40 60 80 100 120 140 160 0 1 2 3 4 5 6 7 B o b o t (W ei gh t) ( g) Minggu (Week) y = 17.09x + 27.81 R 2 = 0.9895
Gambar 7. Hubungan  antara  pertambahan  bobot  dan  waktu permbesaran bibit selama tujuh minggu
Figure 7. The relationship between weight gain and the rearing time of seedlings for seven weeks

## KESIMPULAN
Penyediaan bibit rumput laut Gracilaria gigas dengan cara kultur talus menghasilkan sintasan di atas 95% pada semua kepadatan. Aplikasi dosis pupuk organik 0,05  mL/L  pada  tahap  aklimatisasi  cenderung memberikan  pertumbuhan  bibit  yang  lebih  baik daripada dosis lainnya. Pada tahap pembesaran di laut, pertambahan bobot G. gigas meningkat seiring dengan pertambahan  waktu  mengikuti  persamaan  regresi linier y=  17,09x + 27,81  dan rata-rata  LPH selama tujuh minggu pemeliharaan adalah 3,57%/hari.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian ini didanai oleh DIPA APBN 2015. Penulis mengucapkan  terima  kasih  pada  Risal  Lapulalang, Stevisal Simson Palayukan, dan Restu Randing selaku teknisi  yang  telah  membantu  pelaksanaan  kegiatan penelitian ini

## DAFTAR  ACUAN
Akin-Idowu, P.E.,  Ibitoye, D.O.,  & Ademoyegun,  O.T.
(2009). Tissue culture as aplant production tech- nique for horticultural crops. African Journal of Bio- technology, 8(16), 3782-3788.
Anggadiredja, J.T., Zatnika, A., Purwoto, H., & Istini, S.  (2011).  Rumput  laut:  pembudidayaan, pengolahan, dan pemasaran komoditas perikanan potensial. Penebar Swadaya. Jakarta, 39 hlm.
Azanza-Corrales,  R.,  &  Dawes,  C.J.  (1989).  Wound healing  in  cultured  Eucheuma  alvarezii  Var. Tambalang Doty. Botanica Marina, 32, 229-234.
Correll,  D.L.  (1998).  The  role  of  phosphorus  in  the eutrophication of receiving waters: A review. Jour- nal of Environmental Quality, 27(2), 261-266.
DJPB.  (2015).  KKP  dorong  industri  rumput  laut  di Natuna.  www.djpb.kkp.go.id.
Fadilah, S., & Suryati, E. (2012). Perbaikan performansi rumput  laut  Kappaphycus  alvarezii  pada  bak penampungan induk untuk kultur jaringan melalui penambahan pupuk organik. Seminar Indoaqua-Fo- rum  Inovasi  Teknologi  Akuakultur  di  Makassar. Direktorat Jenderal Perikanan Budidaya dan Pusat Penelitian dan Pengembangan Perikanan Budidaya, Kementerian Kelautan dan Perikanan. Jakarta, hlm. 1083-1088.
FAO. (1990). Training manual on Gracilaria culture and seaweed  processing in  China.  www.fao.org.
Hurtado, N.S., & Cheney, W. (2003). Effects of plant growth  regulators and  culture  medium on  mor- phogenesis of Solieria filiformis (Rhodophyta) cul- tured  in  vitro.  Journal  of  Applied  Phycology,  14, 97-102.
Jayasankar, R., &  Ramamoorthy. (1997). Propagation of Gracilaria edulis (Gmelin) silva by reproductive method. Indian J. Fish, 44(4), 353-360.
Luning, K. (1990). Seaweeds: Their environment, bio- geography and ecophysiology. John Wiley and Sons Inc., p. 344-345.
Martin, L.A., Boraso, A.L., Miravalles, A.B., Rodriguez, M.C.,  &  Leonardi,  P.I.  (2013).  Epiphytism  in  a subtidal natural bed of Gracilaria gracilis of South- western Atlantic Coast (Chubut, Argentina). Jour- nal of Applied Phycology, 25(5), 1319-1329.
Mulyaningrum, S.R.H., Daud, R., & Badraeni. (2014). Propagasi  vegetatif  rumput  laut  Gracilaria  sp. melalui  kultur  jaringan.  J.  Ris.  Akuakultur,  9(2), 203-214.
Muraoka,  D.,  Yamamoto,  H.,  Yasui,  H.,  &  Terada,  R. (1998).  Formation  of  wound  tissue  of  Gracilaria chorda Holmes (Gracilariaceae) in culture. Bulletin Faculty  of  Fisheries  Hokkaido  University,  49(1), 31-39.
Pang, T., Liu, J., Liu, Q., & Lin, W. (2011). Changes of photosynthetic behaviors in Kappaphycus alvarezii infected by epiphyte. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, doi: 10.1155/2011/658906.
Parnata, A.S. (2004). Pupuk organik cair: aplikasi dan manfaatnya.  Agromedia  Pustaka.  Jakarta,  hlm. 30-45.
Provasoli, L. (1968). Media and prospects for the cul- tivation  of  marine  algae.  In  Watanabe,  A.,  & Hattori, A. (Eds.). Cultures and collections of algae, p. 63-75. Proceedings of the U.S.-Japan Conference. Japanese Society of Plant Physiology, Hakone.
Prudhomme  van  Reine,  W.F.  (2001).  Gracilaria  Grev.
In Prudhomme van Reine, W.F., & Trono, Jr. (Eds.). Prosea (Plant Resources of South-East Asia) 15: Cryp- togams  (algae).  Blackhuys  Publishers.  Leiden, p. 167-176.
Razdan, M.K. (2003). Introduction to plant tissue cul- ture.  Science  Publisher,  Inc.  Enfield.  US, p. 130-131.
Reddy,  C.R.K.,  Kumar,  G.R.K.,  Shiddhanta,  A.K.,  & Tewari, A. (2003). In vitro somatic embryogenesis and  regeneration  of  somatic  embryos  from  pig- mented callus of Kappaphycus alvarezii (Doty) Doty (Rhodophyta,  Gigartinales).  Journal  of  Phycology, 39, 610-616.
Rezael, R., & Samimi, A. (2013). Effects of phospho- rus  and  nitrate  in  wastewater  whahinshahr  city use for oil refinery. International Journal of Innova- tion and Applied Studies, 2(3), 250-258.
Silea, J.L.M., & Masitha, L. (2004). Penggunaan pupuk bionik pada tanaman rumput laut (Eucheuma sp.).
Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Unidayan. Bau-bau.
Sulistiani,  E.,  &  Yani,  S.A.  (2014).  Kultur  jaringan rumput laut kotoni (Kappaphycus alvarezii) SEAMEO BIOTROP. Bogor, hlm. 1-76.
Suryati,  E.,  Rachmansyah,  &  Mulyaningrum,  S.R.H. (2009). Pertumbuhan spora rumput laut Gracilaria verrucosa  secara  in  vitro  dengan  penambahan hormon pengatur pertumbuhan pada tanaman. J. Ris. Akuakultur, 4(2), 307-312.
Tisera, W.L., & Naguit, M.R.A. (2009). Ice-ice disease occurrence in seaweed farms in Bais Bay, Negros Oriental  and  Zamboanga  Del  Norte.  The  Thresh- old, 4, 1-16.
Vairappan, C.S., Chung, C.S., Hurtado, A.Q., Soya, F.E., Lhonneur,  G.B.,  &  Critchley,  A.  (2009).  Distribu- tion and symptoms of epiphyte infection in ma- jor carrageenophyte-producing farms. Nineteenth International  Seaweed  Symposium  Developments  in Applied Phycology, 2, 27-33.
Widyartini,  D.S.,  Insan,  I.AH.,  &  Warsinah.  (2012).
Meningkatkan pertumbuhan dan produksi rumput laut  Gracilaria  gigas  dengan  modifikasi  metode budidaya dan sistem jaring. Jurnal Penelitian Saintek, 1, 63-75.
Yarish, C., Redmond, S., & Kim, J.K. (2012). Gracilaria culture  handbook  for  new  England.  Wrack  line. Paper  72.  http://digitalcommons.uconn.edu/ wracklines/72.
Yokoya,  N.S.,  &  Handro,  W.  (2002).  Effects  of  plant growth  regulators and  culture  medium on  mor- phogenesis of Solieria filiformis (Rhodophyta) cul- tured in vitro. J. Appl. Phycol., 14, 97-102.
Yokoya, N.S., West, J.A., & Luchi, A.E. (2004). Effects of  plant  growth  regulators  on  callus  formation, growth and regeneration in axenic tissue cultures of  Gracilaria  tenuistipitata  and  Gracilaria  perplexa (Gracilariales, Rhodophyta). Phycological Research, 52, 244-254.