Identifikasi Keberadaan Bakteri Leptospira di Daerah Endemis Leptospirosis (Studi di Dukuh Kalitengah Kecamatan Wedi Kabupaten Klaten)
Ratnaningsih * , Retno Hestiningsih * , Dwi Sutiningsih **
* Bagian Epidemiologi dan Penyakit Tropik, Fakultas Kesehatan Masyarakat, Universitas Diponegoro
**Magister Epidemiologi, Sekolah Pascasarjana, Universitas Diponegoro

## ABSTRACT
Background: Several  regions  in  Indonesia  are  classified  as  leptospirosis  endemic  including Klaten  Regency,  which  ranked  2 nd highest  case  of  leptospirosis  in  Central  Java  in  2018. Leptospirosis in human was transmitted by animals infected by the Leptospira bacteria, which rat  was  the  main  reservoir.  This  study  aimed  to  identify  rat  reservoir  to  the  existence  of Leptospira bacteria in endemic areas.
Methods: This study was an observational survey  with cross sectional approach. The sample was  rats  caught  by  traps  installed  for  6  days  in  Dukuh  Kalitengah,  Kalitengah  Village,  Wedi Subdistrict, Klaten Regency  in July 2019. The rats were  identified and dissected to take their kidneys  for laboratory testing using the Polymerase Chain  Reaction (PCR) test to  identity the existence of Leptospira bacteria.
Result: The result showed that there were 17 rats and 6 Suncus murinus caught in 6 days and their  species  were Mus  musculus (23.5%), Rattus  tanezumi (41.2%), Rattus  norvegicus (35.3%).  The  results  of  PCR  test  found  2  positive  samples  of Leptospira bacteria  in Rattus tanezumi. Rattus tanezumi's habitat was close with humans in settlement areas where it can be a source of Leptospira infection and can spread to humans and other environments.
Conclusion : The  people  in  Dukuh  Kalitengah  are  recommended  to  maintain  the  hygiene  of their  environment  and  improve  their  house’s  sanitation  so  it  not  become  nest  and  breeding grounds and also reduce the existence of rats.
Keywords: Leptospira hardjo ; Rattus tanezumi ; Polymerase Chain Reaction (PCR)

## JEKK

## Jurnal Epidemiologi Kesehatan Komunitas
8 (1), 2023, 56-60

## Pendahuluan
Leptospirosis  merupakan  penyakit menular yang menjadi permasalahan kesehatan masyarakat  yang  dapat  menyebabkan  angka kematian  tinggi. 1 Penularan  leptospirosis  pada manusia ditularkan oleh  hewan  yang terinfeksi bakteri Leptospira seperti  kelompok  hewan pengerat,  anjing,  kucing,  dan  hewan  ternak lainnya. 2 Penularan  ini    terjadi  dengan  cara kontak langsung melalui hewan yang terinfeksi atau  secara  tidak  langsung  melalui  air  dan tanah yang telah terkontaminasi oleh urin yang telah  terinfeksi Leptospira . 3 Faktor  –  faktor lain  dari  lingkungan  yang  ikut  berpengaruh terhadap  perkembangan Leptospira beberapa faktor  seperti  derajat  pH tanah,  derajat  pH  air, kelembaban  udara,  suhu,  dan  intensitas cahaya. 4
Kabupaten  Klaten  merupakan  daerah endemis  kejadian  leptospirosis  dan  menempati peringkat kedua kasus tertinggi leptospirosis di Jawa  Tengah. 5 Kasus  tertinggi  leptospirosis tahun  2018  ditemukan  di  Kecamatan  Wedi sebanyak 9 kasus  yang  mayoritas penderitanya merupakan petani dan buruh tani. 6
Desa  Kalitengah  dikelilingi  oleh  area persawahan yang berdampingan dengan permukiman sehingga berpotensi adanya populasi  tikus  yang  tinggi.  Penangkapan  tikus sebagai  upaya  pengendalian  juga  mengetahui kepadatan  populasi  tikus  serta  mencegah kejadian leptospirosis belum pernah dilakukan, Oleh karena itu tujuan dari penelitian ini adalah untuk  mengidentifikasi  bakteri Leptospira di Desa Kalitengah, Kecamatan Wedi, Kabupaten Klaten.  Penelitian  ini  juga  sebagai  bentuk  dari penanggulangan nyata lewat bentuk penangkapan  di  lapangan  serta  identifikasi tikus yang terinfeksi Leptospira lewat berbagai macam  uji  yang  dilakukan.  Pada  akhirnya apabila  hasil  penelitian  terkait  kepadatan populasi  yang  tinggi  sudah  diketahui  serta ditemukan  positif Leptospira pada  sampel maka  hasilnya  bisa  langsung  ditindaklanjuti oleh pihak Puskesmas terkait.

## Metode
Jenis penelitian yang dilakukan adalah penelitian  deskriptif,  teknik  penelitian  berupa
survei  dengan  melakukan  pendekatan cross sectional .

## Penangkapan Tikus dan Identifikasi Tikus
Sampel pada penelitian ini adalah seluruh tikus  dan  cecurut  yang  berhasil  ditangkap  di Desa  Kalitengah  menggunakan  perangkap hidup (live  trap) selama  6  hari  berturut-turut. Pemilihan  sampel  tikus  dilakukan  dengan menggunakan teknik accidental sampling yaitu pengambil  sampel  yang  kebetulan  terdapat tikus  yang  tertangkap.  Tikus  yang  tertangkap kemudian  di  identifikasi  agar  mempermudah penentuan jenis dan spesies tikus.

## Pemeriksaan Laboratorium
Pemeriksaan  bakteri Leptospira diawali dengan  isolasi  DNA.  Sampel  pemeriksaan berupa  ginjal  yang  diisolasi  untuk  dihasilkan DNA  dan  dilanjutkan  dengan  pemeriksaan PCR  untuk  mengetahui  keberadaan  bakteri Leptospira.

## Hasil

## Identifikasi Tikus
Hasil  penangkapan  tikus,  didapatkan  total tikus  yang  tertangkap  sebanyak  17  ekor  tikus dan  6  ekor  cecurut (Suncus  murinus) .  Tikus yang  didapatkan  terdapat  3  spesies  yaitu Mus musculus, Rattus tanezumi dan Rattus norvegicus. Tikus  yang  tertangkap  kemudian dilakukan  anestesi,  identifikasi  spesies,  dan dilakukan  pembedahan  untuk  pengambilan organ  ginjal.  Identifikasi  spesies  dilakukan dengan  menggunakan  kunci  identifikasi  tikus. Sampel  ginjal  disimpan  di  botol  vial  yang sudah diberi alkohol 70%.
Tabel  1.  Hasil  penangkapan  tikus  berdasarkan spesies Spesies Tikus f (%) Mus musculus 4 14,3 Rattus tanezumi 7 25,0 Rattus norvegicus 6 21,4 Suncus murinus 11 39,3 Total 28 100
Tabel  1  menunjukkan  hasil  penangkapan tikus  dengan  menggunakan single  live  trap diperoleh  17  ekor  tikus  dengan  3  spesies.
Spesies  paling  banyak  tertangkap  yaitu Rattus tanezumi (25%).  Didapatkan  jenis  hewan insektivora  yaitu Suncus  murinus sebanyak  11 ekor.  Berdasarkan  lokasi  penangkapan Mus musculus dan Rattus  tanezumi tertangkap  di dalam  rumah,  sedangkan Rattus  norvegicus tertangkap di luar rumah.
Total  angka  keberhasilan  penangkapan  tikus ( Trap  success) selama  6  hari  adalah  4,7%. Hasil  tersebut  lebih  besar  dari  nilai  baku  mutu yang  ditetapkan  pada  Permenkes  nomor  50 tahun 2017 yaitu (<1). 7
Hasil Pemeriksaan Polymerase Chain Reaction (PCR)
Pemeriksaan sampel ginjal dilakukan melalui  beberapa  tahap  berupa  isolasi  DNA, amplifikasi  gen  dan  elektroforesis. 8 Hasil isolasi  kemudian  dijadikan template DNA untuk  proses  amplifikasi  DNA  melalui  reaksi PCR.  Deteksi Leptospira dilakukan  dengan menggunakan  pasangan  primer left primer sebagai forward primer dengan rantai DNA 5’- CGA  CGG  TTC  ACA  CAT  TCG  TA  -3’  dan right primer  sebagai reverse primer  dengan rantai  DNA  5’-  TGG  TTT  CCC  AAA  GTT GTT  CC  -3’(Paten  No.  IDS000003379). Primer ini mengamplifikasi produk sebesar 248 bp.  Total  kandungan  reaksi  untuk  amplifikasi DNA  sebesar  25  μl  dengan  masing-masing kandungan : master mix 12,5 μl, DNA template 4  μl,  DDH 2 O  6,5  μl, forward  primer 1  μl, reverse  primer 1  μl  (konsentrasi  primer  10 pmol). Amplifikasi DNA dilakukan menggunakan  mesin thermal  cycler dengan suhu  pre-denaturasi  95˚C  selama  5  menit; Denaturasi  94˚C  selama  30  detik; Annealing 58˚C  selama  30  detik;  ekstensi  72˚C  selama  1 menit; dan post  ekstensi 72˚C selama 7  menit. Reaksi  berlangsung  selama  35  siklus.  Hasil PCR di elektroforesis dalam gel 1,2%.
Sampel  ginjal yang diperiksa berjumlah 23 sampel.  Pengujian  ini  menggunakan  kontrol positif Leptospira dengan serovar hardjo . Hasil pengujian ditemukan 6 sampel yang ditemukan munculnya  beberapa  pita  DNA  terlihat  samar terang  seperti  kontrol  positif  sehingga  dari  6 sampel  tersebut  kemudian  dilakukan re- PCR dengan  menggunakan amplicon sampel  yang sama.  Hasil re- PCR  menunjukkan  hanya terdapat  2  sampel  diduga  positif Leptospira
dibuktikan  dengan  hasilnya  sejajar  dengan kontrol  positif  dengan  serovar hardjo pada spesies Rattus tanezumi.

## Gambar 1. Pita DNA pada gel agarose

## Pembahasan
Keberhasilan  penangkapan  tikus  dapat disebabkan oleh beberapa faktor. Pada penelitian  ini  jenis  perangkap  yang  digunakan berupa  perangkap single  live  trap alat  tersebut hanya dapat menangkap satu ekor tikus saja. 8 Pada  penelitian  ini  jenis  umpan  yang dipasang  setiap  hari  bervariatif  berupa  tahu bakso,  kelapa  bakar,  ikan  pindang  dan  bakso. 9 Jenis  umpan  terbanyak  yang  termakan  yaitu tahu  bakso  dan  kelapa  bakar.  Kedua  umpan tersebut  memiliki  aroma  yang  menyengat sehingga mampu menarik perhatian tikus untuk memakannya.  Kelapa  bakar  mampu  bertahan dalam  keadaan  waktu  yang  cukup  lama  dan tidak mudah rusak apabila terkena hujan. 10
Jenis  tikus  yang  tertangkap  pada  penelitian ini terdiri dari 3  spesies  yaitu Rattus tanezumi, Rattus  norvegicus dan Mus  musculus. Selain  3 spesies  tersebut  terdapat Suncus  murinus yang tertangkap. Tikus jenis ini merupakan kelompok  tikus  domestik  yang  aktivitas  hidup tikus ini mencari makan, berlindung, bersarang dan berkembang biak di rumah. 11
Infeksi Leptospira pada tikus dapat dipengaruhi  oleh  spesies. Rattus  tanezumi dapat  menjadi  sumber  infeksi Leptospira dan bisa  menyebar  ke  manusia  dan  lingkungan yang  terpapar  oleh Rattus  tanezumi yang habitatnya  bisa  ditemui  di  daerah  pemukiman penduduk. 11
Adanya  reservoir  tikus  yang  terdeteksi positif Leptospira merupakan  salah  satu  faktor risiko terjadinya leptospirosis.
Bakteri
248 bp 100 bp 200 bp 300 bp
Leptospira yang  terdeteksi  pada  penelitian  ini bersarang di dalam  saluran tubulus ginjal tikus dan  dikeluarkan  bersama  dengan  urin.  Bakteri ini  menular  langsung  melalui  urin  dan  cairan tubuh hewan yang terinfeksi atau kontak secara tidak  langsung  melalui  air  atau  tanah  yang terkontaminasi oleh bakteri Leptospira. 12 Tikus dapat  mengeluarkan  bakteri Leptospira secara terus-menerus  melalui  urin  selama  hidupnya sehingga  dapat  menjadi  sumber  penularan leptospirosis terutama pada manusia.
Leptospira dapat  mencemari  air  dan  makanan dengan  resiko  mengakibatkan  infeksi  dan penyakit pada manusia. 13

## Kesimpulan
Hasil  penangkapan  tikus  yang  dilakukan  di Dukuh Kalitengah Desa Kalitengah Kecamatan Wedi  Kabupaten  Klaten  selama  6  hari berjumlah  17  ekor  tikus  dan  6  cecurut  dan didapatkan  hasil total trap success 4,7%. Hasil uji PCR pada  sampel ginjal tikus didapatkan 2 sampel  positif  terinfeksi Leptospira dengan serovar hardjo. Ditemukannya  hasil  2  sampel ginjal  yang  positif Leptospira menunjukkan bahwa  keberadaan  reservoir  tikus  merupakan salah  satu  faktor  risiko terjadinya  leptospirosis di  Dukuh  Kalitengah,  Desa  Kalitengah, Kecamatan Wedi, Kabupaten Klaten.

## Ucapan Terima Kasih
Terimakasih yang sebesar-besarnya kepada  Pihak  Laboratorium  Biokimia  FK UGM,  Laboratorium  Biokimia  FKH  UGM, Balai  Besar  Penelitian  dan  Pengembangan Vektor  dan  Reservoir  Penyakit  Salatiga (B2P2VRP)  yang  sudah  memberikan  bantuan bimbingan  dan  telah  menyediakan  tempat untuk melakukan pemeriksaan laboratorium.

## Daftar Pustaka
1.   World  Health  Organization.  Leptospirosis Burden  Epidemiology  Reference  Group (LERG)  [Internet].  2010  [cited  2019  Mar 30].
2.   Kusmiyati,  Noor  S  S.  2005.  Leptospirosis
Pada  Hewan  dan  Manusia  di  Indonesia. Wartazoa:  213–220 p.
3.   Susan  K,  Noor  M.  1986.  Leptospirosis pada hewan dan manusia di indonesia.
4.   Arumsari  W,  Sutiningsih  D,  Hestiningsih R.  2012.  Analisis  Faktor  Lingkungan Abiotik  yang  Mempengaruhi  Keberadaan Leptospirosis  pada  Tikus  di  Kelurahan Sambiroto,  Kecamatan  Tembalang,  Kota Semarang.  Jurnal  Kesehatan  Masyarakat [Internet]. 1(2):514–24.
5.   Dinas  Kesehatan  Provinsi  Jawa  Tengah. 2018. Buku Saku Kesehatan Provinsi Jawa Tengah [Internet]. Semarang:  54 p.
6.   Dinas  Kesehatan  Kabupaten  Klaten.  2019. Laporan Kasus Leptospirosis. Klaten: 20.
7.   Kementerian  Kesehatan  RI.  2017.  Standar Baku  Mutu  Kesehatan  Lingkungan  dan Persyaratan  Kesehatan  Untuk  Vektor  dan Binatang Pembawa Penyakit Serta Pengendaliannya. Peraturan Menteri Kesehatan  RI  Nomor  50  Tahun  2017. Jakarta: 32–3.
8.   Dermawansyah A.  2008.  Rancang Bangun Perangkap  untuk  Pengendalian  Tikus Rumah. Institut Pertanian Bogor: 20-3.
9.   Mulyana AN. 2017. Keberhasilan Pemerangkapan  Tikus  dengan  Tiga  Jenis Umpan  pada  Habitat  Luar  Rumah  di Dramaga, Bogor. Institut Pertanian Bogor: 17. 10.  Junianto  SD,  Siwiendrayanti  A.  2016. Perbandingan Jumlah Tikus Yang Tertangkap  Antara  Perangkap  Dengan Umpan  Kelapa  Bakar,  Ikan  Teri  Dengan Perangkap  Tanpa  Umpan  (Studi  Kasus  Di Wilayah  Kerja  Puskesmas  Pandanaran) Tahun  2015.  Unnes  Jurnal  Public  Health. 5(1):67.
11.  Dina  SAU.  2013.  Spesies  Tikus,  Cecurut dan  Pinjal  yang  Ditemukan  di  Pasar  Kota Banjarnegara,  Kabupaten  Banjarnegara Tahun  2013.  Balaba  Jurnal  Litbang Pengendali  Penyakit  Bersumber  Binatang Banjarnegara. 9(02):39–46.
12.  Mursalim MF, Hatta M. 2017.  Identifikasi DNA Leptospira sp  Pada  Sampel  Air  dan
Tanah  di  Kota  Makassar.  As-Syifaa. 10(01):37–43.
13.  Samekto  M,  Hadisaputro  S,  Adi  MS, Suhartono S, Widjanarko B, 2019. Faktor- Faktor yang Berpengaruh Terhadap Kejadian Leptospirosis (Studi Kasus
Kontrol  di Kabupaten  Pati).  Jurnal
Epidemiologi Kesehatan Komunitas, 4 (1): 27-34.