## ASTAKSANTIN DARI BAKTERI LAUT: BIOSINTESIS, MANFAAT, DAN POTENSI PRODUKSI MASSAL
Naely Kurnia Wusqy *) dan Ferry Fredy Karwur **)

## ABSTRAK
Astaksantin  (3,3’-dihydroxy-β,  β-carotene-4,4’-dione)  adalah  ksantofil  berwarna  merah  oranye yang  tersusun  atas  40  atom  karbon  terhubung  dengan  ikatan  tunggal  dan  rangkap  membentuk rantai  fitoen  yang  seluruh  isomer  trans-nya  ditemukan  di  alam  bersama  sejumlah  kecil  isomer  9- cis  dan  13-cis.  Rantai  fitoen  pada  astaksantin  diawali  dan  diakhiri  cincin  ionon.  Astaksantin termasuk  dalam  golongan  ksantofil  karena  memiliki  oksigen  pada  cincin  ionon.  Beberapa  bakteri laut  yang  dilaporkan  memproduksi  astaksantin  di  antaranya  adalah  Brevundimonas,  Paracoccus hundaenensis,  Alcaligenes,  dan  Agrobacterium  aurantiacum.  Kajian  ilmiah  ini  memaparkan produksi  astaksantin  di  dalam  sel  bakteri  laut  mencakup  biosintesisnya  dari  konversi  β-karoten menj adi  astak santin  dan  enzim  yang  berperan  di  dalamnya,  maupun  produk si  massal astaksantin  untuk  keperluan  komersial.  Selain  itu  kajian  ilmiah  ini  akan  membahas  mengenai manfaat  astaksantin  dalam  bidang  pangan  dan  kesehatan.
ABSTRACT: Astaxanthin    produced    by    marine  bacteria:  biosynthesis,  uses,  and  the potency of mass production. By: Naely Kurnia Wusqy and Ferry Fredy Karwur
Astaxanthin (3,3‘-dihydroxy-β, β-carotene-4, 4’-dione) is  an orange-red xanthophylls  that con- tains  40  carbon  atoms  which  is  connected  by  single  and  double  bonds  to  form  fitoen  chains  in which  their  all-trans  isomer are  found  in  nature  together  with  a  small  amount  of  9-cis  and  13-cis isomers. Fitoen chains of astaxanthin begin and end by ionon chains. Astaxanthin belongs to the xanthophylls  group  because it  has  oxygen  rings. Some  marine  bacteria  are  reported  to  produce astaxanthin i.e Brevundimonas, Paracoccus hundaenensis,  Alcaligenes and  Agrobacterium aurantiacum. This  paper describes  astaxanthin  production  in  marine  bacterial  cells  including  its biosynthesis  from  β-carotene  conversion  and  enzyme  taking  a  role  in  this    biosynthesis,  and  its mass  production  for  commercial  purposes.  This  review  also  describes  about  their  uses  for  food and  health  purposes.
KEYWORDS: astaxanthin, marine bacteria, Paracoccus sp.
*) Department  of  Bioscience  Kwansei  Gakuin  University,  Japan;  Email:  naely_wusqy@yahoo.com
**) Magister  Biologi  Universitas  Kristen  Satya  W acana,  Salatiga

## PENDAHULUAN
Karotenoid  yang  terdapat  di  sebagian  besar sayuran, buah-buahan, ikan, dan  kerang-kerangan, sangat menarik perhatian kita terutama manfaatnya di bidang kesehatan. Manfaat tersebut di antaranya berfungsi dalam pencegahan penyakit kronis seperti penyakit jantung, kanker, dan degradasi umur (Fraser &  B ram ley,  2004).   Karotenoi d  juga  telah dikembangkan untuk aplikasi industri, yakni sebagai agen  pewarna  pada  budidaya  ikan  dan  kerang- kerangan (Johnson &  An, 1991). Karotenoid memiliki nilai  potensial  baik  untuk    farmasi  maupun  untuk industri  makanan.  Beberapa  penelitian  tentang karotenoid  menyatakan  bahwa  masing-masing karotenoid    m em iliki  karakteristiknya  sendiri (Mannisto et al., 2004).
Berdasarkan  unsur  kimia  yang  terkandung, karotenoid terbagi menjadi dua kelompok yaitu karoten dan ksantofil. Karoten merupakan senyawa karotenoid
yang  mengandung  unsur  hidrogen  dan  karbon, sedangkan ksantofil merupakan senyawa karotenoid yang selain mengandung hidrogen dan karbon, juga mengandung oksigen (Britton et al., 1995).
Astaksantin  (3,3’-dihydroxy-β,β-carotene-4,4’- dione)  adalah  ksantofil  berwarna  merah  oranye (Yokoyama et al., 1994) yang tersusun atas 40 atom karbon terhubung dengan ikatan tunggal dan rangkap membentuk rantai fitoen yang seluruh isomer trans- nya ditemukan di alam bersama sejumlah kecil iso- mer 9-cis dan 13-cis (Visser et al., 2003). Rantai fitoen pada  astaksantin  diawali dan  diakhiri  cincin  ionon (Gambar 1). Astaksantin termasuk dalam golongan ksantofil karena memiliki oksigen pada cincin ionon (Jyonouchi et al., 1995).
Beberapa  bak teri   laut   yang  dil apor kan memproduksi  astaksantin  di  antaranya  adalah Brevundimonas  sp.  (Yokoyam a  et  al.,1996), Paracoccus  hundaenensis  (Lee et al., 2004), Alcali- genes,  dan  Agrobacterium  aurantiacum  yang
sekarang dimasukkan dalam kelompok Paracoccus N81106 (Yokoyama et al.,1994).

## LINTASAN UMUM BIOSINTESIS ASTAKSANTIN
Jalur   biosintesis   karotenoid   pada   umumnya sama  dengan  semua  jenis  isoprenoid, yakni  diawali dengan isomerasi IPP (isopentenil   pirofosfat) yang selanjutnya  digunakan  dalam  sintesis  2  molekul GGPP (Geranylgeranyl pyrophosphate) yang memiliki 20 karbon. Pembentukan 2 molekul GGPP menjadi 15,15'-cis fitoen terjadi melalui reaksi kondensasi, dilanjutkan    dengan    reaksi    desaturasi  yang mengubah 15,15'-cis fitoen menjadi all-trans likopen dan  reaksi  siklikasi  yang  mengubah  all-trans likopen menjadi all-trans β-karoten. Selanjutnya pada lintasan biosintesis astaksantin dari β karoten (Gambar 2), mengalami  2  reaksi  kimia  yaitu  hidroksilasi  dan oksidasi (Misawa et al., 1995).
Ada  2  jalur  pembentukan  astaksantin,  yang pertama  yaitu  peningkatan  jumlah  adoniksantin
O OH O O H Gambar 1. Struktur astaksantin (Britton et al., 1995) .
dan zeaksantin, sedangkan jalur yang kedua yaitu melalui  peningkatan    jumlah    kantaksantin  dan foenikoksantin sehingga  menghasilkan  astaksantin sebagai  produk akhir.
Enzim  yang  Terlibat  dalam  Biosintesis Astaksantin
Dua enzim yang berperan dalam mengubah β- karoten menjadi astaksantin adalah 4-4’ oksigenase (CrtW) dan 3-3’ hidroksilase (CrtZ). Enzim CrtW dan CrtZ  bakteri  laut  memiliki  2 fungsi  pada  aktivitasnya (Fraser et al., 1997). Enzim ini terlihat spesifik pada reaksi    kimia    tetapi  tidak  spesifik  untuk  substrat. CrtZ dan CrtW mampu menggunakan substrat dengan perbedaan    polaritas    yang    besar,  sehingga  6 kelompok  ketokarotenoid  dapat  disintesis  hanya dengan 2 jenis enzim ini  (Misawa et al., 1995).
β karoten C-4 ketolase (CrtW) menggabungkan 2 gugus keto pada C-4 dan C-4’ pada molekul β karoten. Subtrat CrtW menggunakan β-ionone dan cincin 3-
Gambar  2.  Skema lintasan  biosintesis astaksantin  pada bakteri  laut    (Misawa et  al., 1995).
hidroksi-β-ionone. Enzim ini mengkatalisis konversi langsung gugus metilen (pada gugus posisi 4-4’ β karoten)  yang  memproduksi  echinenone  dan kantaksantin. Enzim ini ditemukan pada bakteri laut Paracoccus sp. (Misawa et al., 1995). Sedangkan ß karoten hydroxylase (CrtZ) memiliki 2 gugus hydroxyl pada C-3 dan C-3’(An et al., 1999). Subtrat CrtZ adalah cincin β-ionone dan 4-keto-β-ionon. Secara umum, enzim  ini    memasukkan  satu  atom  oksigen  dari molekul  oksigen  ke  substratnya  dan  memerlukan sebuah  donor  elektron  untuk  mengurangi  atom oksigen ke dua ke dalam air. Dua kelompok besar ß karoten hidroksilase yang kita kenal adalah  non heme di iron (NH-di-iron) hidroksilase yang dihubungkan dengan desaturasi asam lemak dan sitokrom P-450 monooksigenase (Martin et al., 2008). Tipe NH di-iron dari ß karoten hidroksilase ini memerlukan molekul oksigen, zat besi (iron),  feredoksin dan feredoksin oksido reduktase  untuk aktivitasnya.  Hal  ini  sama dengan motif histidin yang memerlukan ikatan iron dan penting untuk aktivitas enzimnya (Bouvier et al., 1994)
Selain CrtW dan CrtZ, ada beberapa enzim lain yang  terlibat  dalam  biosintesis  astaksantin,  di antaranya  enzim  kamfor hidroksilase, abietadiena dan abietadienol hidroksilase yang terdapat hanya sekitar 10–20% atau 1% dari kapasitas in vivo-nya (Funk & Croteau, 1994).
Gen   yang   Terl ibat  dalam  Bio sintesis Astaksantin
Dalam  mensintesis  astaksantin,  bakteri  laut m em iliki  5  gen  Crt  yang  secara  f isik  saling berhubungan,  dan  memiliki  gen  yang  berfungsi sebagai promotor tunggal yang bertanggung jawab pada  ekspresi seluruh gen karotenoid (Misawa et al.,  1995).  Gen  yang  berperan  dalam  biosintesis astaksantin  adalah crtE (Lodato et al., 2004), crtI, crtW, crtY, dan crtZ. Struktur organisasi  kelompok gen  yang    bertanggung  jawab    pada    biosintesis karotenoid Agrobacterium  aurantiacum dapat dilihat pada Gambar 3.
Gen  crtE  mengkode  sintesis  Geranylgeranyl pyrophosphate sintase (GGPP). Gen crtB mengkode
Gambar 3.  Kelompok gen yang bertanggung jawab pada biosintesis karotenoid Agrobacterium aurantiacum (Misawa et al., 1995).
crtY crtI crtB Plac        crtW       crtZ
pAK32
sintesis fitoen yang  mengkatalisis  reaksi  kondensasi dari 2 molekul GGPP untuk memproduksi 15,15'-cis fitoen. Gen crtI mengkode desaturasi  fitoen, yang bertanggung  jawab  pada  konservasi 15,15'-cis fitoen ke seluruh likopen trans. Gen crtY mengkode siklikasi likopen,  di  mana    gen    ini    mengkatalisis    reaksi siklikasi    terminal    dari    seluruh  likopen  trans  ke seluruh    ß-karoten  trans.  Gen  crtZ  mengkode  β- karoten  hidroksilase  yang  mengkatalisis  reaksi hidroksilasi  dari  β-karoten  menjadi  (3R,3R’)- zeaksantin  melalui  β-kriptoksantin  (Misawa  et  al., 1995). Gen crtW mengkode ß-karoten ketolase (ß- karoten  oksigenase),  yang  mengkatalisis  metilen m enjadi    gugus    keto    untuk     m ensintesis kantaksantin dari ß-karoten melalui ekinenon (Lotan & Hirschberg, 1995). Gen crtW juga memiliki 2 fungsi yaitu tidak hanya mengubah cincin ß-ionon tetapi juga cincin 3-hidroksi-ß-ionon menjadi  cincin 4-keto-ß- ionon dan menjadi cincin 3-hidroksi-4-keto-ß-ionon.
Faktor-Faktor yang Mempengaruhi Biosintesis Astaksantin pada Sel
Faktor-faktor yang berpengaruh pada biosintesis astaksantin di antaranya adalah oksigen, intensitas cahaya, keberadaan Fe dan adanya faktor kinetik. Keberadaaan  oksigen  sangat  penting pada  saat hidroksilasi  karotenoid  dan  oksigenasi.  Oksigen terlibat    dalam    seluruh    reaksi    enzim    yang melibatkan CrtZ dan CrtW pada bakteri laut. Gen- gen    biosintesis    karotenoid    sangat    responsif terhadap intensitas cahaya. Pada intensitas cahaya tinggi, jumlah mRNAs pada gen-gen crt (crtB, crtI) menunjukkan peningkatan dibanding pada intensitas cahaya  rendah  (Zhu  &  Hearst,  1986).    Meskipun beberapa  faktor lingkungan laut berperan penting dalam pembentukan  astaksantin  yang  ada  pada bakteri laut, biokimia  dasar enzim juga merupakan f ak tor  y ang    berpengar uh  pada  biosintesis astaksantin.  Ketidakadaan  spesifitas  substrat m enunjuk kan  enzim   pada  jalur  biosintesis menghasilkan formasi produk yang  berbeda  yang dapat menjadi fitur umum di antara kelas terpenoid yang lain (Pogson et al., 2003).

## MANFAAT DAN PRODUKSI ASTAKSANTIN
Astaksantin  dan  Manfaatnya  di  Bidang Kesehatan
Dalam berbagai penelitian, astaksantin terbukti merupakan  antioksidan  potensial  yang  dapat membantu mempertahankan kesehatan tubuh (Lorenz, 2000). Beberapa peneliti telah membuktikan bahwa astaksantin  mencegah  penyakit  kardiovaskular dengan mekanisme antioksidan. Iwamoto et al. (2000) membuktikan bahwa konsumsi mikroorganisme yang menghasilkan  astaksantin  dapat  menghambat oksidasi LDL dan mencegah arteriosklerosis. Selain itu Hussein et al. (2005) pertama kali menemukan bahwa astaksantin bermanfaat dalam perlindungan terhadap  hipertensi  dan  stroke.  Astaksantin  juga dilaporkan  meningkatkan  respon  imun  antitumor dengan menghambat peroksidasi lipid yang dinduksi oleh stres oksidatif (Kurihara et al., 2002).
Selain  fungsi-fungsi  di  atas,  astaksantin  juga memiliki banyak fungsi yang lain, di antaranya sebagai fotoprotektor, meningkatkan daya penglihatan dan juga  dapat  digunakan  untuk  menangani  berbagai penyakit neurodegeneratif (Pratiwi & Limantara, 2008)
Astaksantin dan Manfaatnya di Bidang Pangan
Banyaknya  manfaat  dan  aktivitas  astaksantin tersebut mendorong dilakukannya berbagai penelitian terhadap  produksi  karotenoid  untuk  aplikasinya
Gambar 4. Daging salmon setelah pigmentasi dengan astaksantin (www.basf.com).
sebagai zat aditif pada makanan dan pakan (Peto et al., 1981 dalam Bhosale, 2001). Astaksantin sudah banyak diaplikasikan dalam makanan, misalnya pada daging salmon (Gambar 4).
Penelitian pada skala laboratorium menunjukkan bahwa  pemberian  Paracoccus  dalam  pakan  ikan kakap  merah  dapat  meningkatkan  kandungan karotenoid pada kulit berturut-turut sebesar 7,7 dan 2,0 kali lipat dibanding ikan yang diberi pakan komersil dan pakan yang mengandung astaksantin buatan. Adapun kandungan astaksantin pada kulit ikan kakap merah yang diberi pakan Paracoccus masing-masing lebih tinggi 6,2 dan 1,6 kali dibanding ikan yang diberi pakan yang tidak mengandung astaksantin dan yang diberi astaksantin buatan (Kurnia, 2007).

## Produksi Massal Astaksantin
Berbagai  macam  sumber  astaksantin  untuk produksi massal telah banyak dilaporkan, di antaranya buah merah Irian, daun alfalfa, kulit buah tomat, wortel dan lain-lain. Namun produksi massal dari  berbagai jenis  bakteri  laut  belum  banyak  dilakukan.  Hal  ini merupakan  prospek  yang  sangat  menarik  bagi industriawan maupun peneliti di Indonesia. Berbagai jenis bakteri laut  dilaporkan mampu memproduksi astaksantin maupun jenis pigmen yang lain (Wusqy &  Lim ant ara,  2009) .  Salah  satuny a  adalah Paracoccus sp. yang merupakan sumber pigmen baru yang dapat dijadikan sebagai bahan pewarna dalam pakan ikan baik dalam skala budidaya maupun untuk pemeliharaan ikan hias. Selain itu Brevundimonas sp.
Gambar 5.  Perbedaan warna ikan kakap yang tidak diberi astaksantin (control) dan yang diberi astaksantin dalam pakannya (treatment).
(Nishida,  2005)  dan  Agrobacterium  aurantiacum (Yokoyama et al., 1994) juga telah diteliti sebelumnya mengandung astaksantin  dan  juga  beberapa jenis pigmen yang lain. Namun sebagai bahan temuan baru, banyak kendala yang masih menjadi pertimbangan untuk produksi dan pemasaran dalam skala besar.
Agus Kurnia (2007) berhasil menggagas usaha dan mewujudkannya dengan membuat bakteri dengan gen termodifikasi  (gene  modified  bacteria)  atau  lebih dik enal  sebagai  bakteri   astaksant in  untuk memproduksi astaksantin dalam jumlah lebih banyak dan murah. Bakteri ini dihasilkan dengan menyuntikkan gen  pewarna  ke  bakteri  Escherichia  coli  yang selanjutnya berkembangbiak dalam waktu singkat dan m enghasilkan  bakteri  penghasil  astaksantin. Selanjutnya  seperti  pada  bahan  pewarna  lainnya, bakteri ini dibuat tepung dan dicampurkan ke dalam pakan.  Meskipun  secara  teknis  produksi  bakteri astaksantin ini sudah berhasil ia lakukan dan harga yang  murah  juga  sudah  dapat  tercapai,  namun keraguan masyarakat awam  untuk  mengkonsumsi segala jenis produk pertanian yang berasal dari gen termodifikasi juga harus dipertimbangkan.
Melihat banyaknya potensi kekayaan ragam hayati yang dimiliki laut kita bukan hal yang tidak mungkin bagi  kita  untuk  mendapatkan  sum ber-sumber astaksantin  baru  ataupun  merekayasanya  untuk memproduksi bahan pewarna ikan yang lebih murah. Kemampuan bakteri laut untuk menghasilkan  pigmen alami telah memungkinkan penggunaan organisme tersebut  sebagai  salah  satu  alternatif  sumber astaksantin  alami  dari  laut,  khususnya  dalam penyediaan alternatif  baik astaksantin maupun jenis pigmen  alami  lain  yang  berkelanjutan  dan  ramah lingkungan. Dalam hal produksi pigmen menggunakan mikroorganisme, sel mikroorganisme dapat dianggap sebagai “mesin biologi” penghasil pigmen (Wusqy & Limantara, 2009). Jika mikroorganisme telah berhasil dimurnikan  dan  dikultur  dalam  bentuk  tunggal (monokultur) maka tidak perlu mengoleksinya lagi dari alam.  Pertumbuhan  mikroorganisme  yang  sangat cepat dapat menghemat waktu dan proses produksinya dapat  berlangsung  secara  kontinu.  Dibandingkan
dengan  tumbuhan  dan  hewan,  produksi  dengan mikroorganisme  lebih  fleksibel  dan  dapat  dengan mudah dikontrol. Hingga saat ini terdapat beberapa jenis  bakteri   laut   yang  m asi h  dal am   tahap pengembangan dan penelitian untuk dimanfaatkan sebagai  sumber  astaksantin.  Pengembangan  dan produksinya  dalam  skala  industri  pun  merupakan prospek yang sangat menjanjikan. Kendatipun jika dilirik  dari  segi  biaya  yang  sangat  besar  untuk mengeksplorasi  dan  merekayasa  genetikanya, namun jika dibandingkan dengan hasil dan manfaat yang akan diperoleh, hal tersebut tidaklah menjadi kendala.

## PENUTUP
Beberapa  bakteri  laut  yang  dilaporkan  dapat memproduksi  astaksantin  di  antaranya  adalah Brevundimonas, Paracoccus hundaenensis, Alcali- genes, dan Agrobacterium aurantiacum. Gen-gen yang terlibat dalam seluruh proses biosintesis astaksantin di antaranya adalah gen crtE, crtW, crtZ, crtY, dan crtI. Sedangkan dua jenis enzim yang berperan dalam mengubah β-karoten menjadi astaksantin  di antaranya adalah ketolase yang menggabungkan 2 gugus keto pada C-4 dan C-4’pada molekul β karoten (CrtW) dan hidroksilase yang memiliki 2 gugus hidroksil pada C- 3 dan C-3’ (CrtZ). Faktor-faktor yang berpengaruh pada biosintesis astaksantin di antaranya adalah oksigen, intensitas cahaya, keberadaan Fe dan adanya faktor kinetik. Di bidang kesehatan, astaksantin  memiliki banyak fungsi di antaranya sebagai antioksidan, anti kanker, fotoprotektor, meningkatkan daya penglihatan dan juga dapat digunakan untuk menangani berbagai penyakit neurodegeneratif. Adapun di bidang pangan, astaksantin dapat dijadikan sebagai bahan pewarna m ak anan.  Kem am puan  bakter i  laut  untuk menghasilkan  pigmen alami telah memungkinkan penggunaan organisme tersebut sebagai salah satu alternatif sumber astaksantin alami dari laut. Hingga saat  ini  terdapat  beberapa  jenis  bakteri  laut  yang masih dalam tahap pengembangan dan penelitian untuk  dimanfaatkan  sebagai  sumber  astaksantin. Pengembangan  dan  produksinya  dalam  skala
Gambar 6.  Bakteri laut (Paracoccus sp.) (Kurnia, 2007).
industripun    m erupakan  prospek  yang  sangat menjanjikan.

## DAFTAR PUSTAKA
An, G.H., Cho, M.H. and Johnson, E.A. 1999. Monocyclic carotenoid  biosynthetic  pathway  in  the  yeast  Phaffia rhodozyma  (Xanthophyllomyces  dendrorhous).  J Biosci. Bioeng. 88:  189–193.
Anonymous.  2010. Astaxanthin  gives  farmed  salmon  its characteristic  color.  www.basf.com. Accessed  on  Mei 9,  2010.
Bhosale  and  Prak ash,  B.  2001.  Studies   on  Yeas t
Rhodotorula,  its  carotenoids  and  their  applications. Thesis  submitted  to  the  University  of  Pune,  India (February    2001)      for    the    Degree    of    Doctor  of Philosophy  in  Microbiology.
Bouvier,  F.,  Hugueney,  P.,   d’Harlingue,  A., Kuntz, M., and  Camara,  B.  1994.  Xanthophyll    biosynthesis    in chromoplasts:  isolation  and  molecular  cloning  of  an enzyme  c atalyzing  the  c onversion  of  5,6- epoxycarotenoid  into  ketocarotenoid.  Plant  J.  6:  45– 54.
Britton,  G.,    Jensen,  L.,  Land,  H.,    and  Pfander.  1995. Carotenoid,  Birkäuser  Verlag,  Basel,  Boston,  Berlin. Fraser,  P.  D.,    Miura,  Y.,  and  Misawa,  N.  1997.  In  vitro characterization  of  astaxanthin  biosynthetic  enzymes, J.  Biol.  Chem.  272,  6128–6135.
Fraser,  P.D.  and  Bramley,  P.M.  2004.  The  biosynthesis and  nutritional  uses  of  carotenoids.  Prog.  Lipid  Res. 43:  228–265
Funk, C. and Croteau, R. 1994. Arch. Biochem. Biophys. 308,  258–266
Hussein, G., Nakamura, M., Zhao, Q., Iguchi, T., Goto, H.,
Sankawa,U.,  and  Watanabe,  H.  2005. Antihyperten- sive and    neuroprotective  effects  of  astaxanthin  in experimental  animals.  Biol  Pharm  Bull.  28  (1):  47– 52.
Iwamoto,  T.,  Hosoda,  K.,  Hirano,  R.,  Kurata,  H., Matsumoto,  A.,  Miki  W.,  Kamiyama  M.,  Itakura,  H., Yamamoto, S. and Kondo, K. 2000. Inhibition of low- density  lipoprotein  oxidation  by  astaxanthin.  J . Atheroscler  Thromb.;  7  (4):  216–22.
Johnson, E.A. and  An, G.H. 1991.  Astaxanthin from mi- crobial  sources.  Crit.  Rev.  Biotechnol.  11:  297–326. Jyonouchi,  H.,  Sun,  M. and Gross. 1995. Effect  of caro- tenoids  on  in  vitro  immunoglobulin  production  by human  peripheral  blood  mononuc lear  c ells: astaxanthin,  a  carotenoid  without  vitamin  A  activity, enhances    in  vitro  immunoglobulin    production  in  re- sponse to a T-dependent stimulant and antigen. Nutr. Cancer  23,  171–183.
Kurihara, H., Koda, H., Asami, S., Kiso, Y. and Tanaka, T.
2002. Contribution of the    antioxidative    property    of astaxanthin to its protective effect on    the   promotion of   cancer metastasis  in   mice  treated with restraint stress.  Life  Sci.,  70  (21):  2509–20.
Kurnia, A. 2007. Lebih jauh tentang bahan pewarna ikan. www.beritaiptek.com.  Diakses  pada  tanggal  9  Mei 2010.
Lee, J. H.,  Kim, Y.S.,  Choi, T.J.,  Lee,  W.J. and  Kim, Y.T. 2004.  Paracoccus  haeundaensis  sp.  nov.,  a  Gram n e g a t i v e , h a l o p h i l i c , a s t a x a n t h i n - p r o d u c i n g bacterium.Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 54: 1699–1702.
Lodato,  P.,  Alcaino,  J.,  Barahona,  S.,  Retamales,  P., Jiménez, A.  and  Cifuentes, V. 2004.  Study  of the ex- pression  of  carotenoid  biosynthesis  genes  in  wild- type  and  deregulated  strains  of  Xanthophyllomyces dendrorhous  (Ex.:  Phaffia  rhodozyma).  Biol.  Res. 2004. 37: 83–93
Lorenz, R. Todd. 2000. Astaxanthin, Nature’s Super Caro- tenoid.  BioAstinTM  Technical  Bulletin:  062.
Lotan, T.  and  Hirschberg,  J.  1995.  Cloning  and  expres- sion in  Escherichia  coli  of  the gene  encoding  β-C-4- oxygenase,  that  c onverts  β-c arotene  to  the ketocarotenoid  canthaxanthin  in  Haematococcus pluvialis. FEBS  Lett 1995. 364: 125-128
Mannisto,  S.,  Smith-W arner,  S.A.,  Sp iegelman,  D., Albanes,  K.,  Anderson,  Brandt,  P.A.,  Cerhan,  J.R., Colditz,  G.,  Fesk anic h,  D.,  Freudenheim  J .L., Giovannucci,  E.,  Gohldbohm,  R.A.  and  Graham,  S. 2004.  Dietary  carotenoids  and  risk  of lung  cancer  in a  pooled  analysis  of  seven  cohort  studies.  Cancer Epidemiol.  Biomarkers  Prev.  13:  40–48
Martín, J.F., Gudiña, E. and Barredo, J.L. 2008. Conver- sion  of  β-carotene  into  astaxanthin:  Two  separate enzymes  or  a  bifunctional  hydroxylase-ketolase  pro- tein.  Microbial  Cell  Factories.  4286–4296
Misawa, N., Satomi, Y., Kondo, K., Yokoyama, A., Kajiwara, S., Saito, Ohtani, T., and Miki, W. 1995. Structure and functional  analysis  of  a  marine  bacterial  carotenoid biosyn thesis  gene  cluster  at  the  gene  level.  J . Bacteriol.  177,  6575–6584.
Nishida, Y., Adachi, K., Kasai, H.,  Shizuri, Y., Shindo, K., Sawabe, A., Komemushi, S., Miki, W., and Misawa, N. 2005.  Elucidation  of  a  carotenoid  biosynthesis  gene cluster  encoding  a  novel  enzyme,  2,2’-β  –hydroxy- lase, from brevundimonas sp. strain SD212 and com- binatorial  biosynthesis  of  new  or  rare  xanthophyll. App. Env. Micr. 71(8): 4286–4296
Pogson,   B.,    McDonald,  K.A.,   Truong, M.,    Britton,  G., and  Della,  P.  2003. Arabidopsis  carotenoid  mutants demonstrate  that  lutein  is,  not  essential  for  photo- synthesis  in  higher-plants.  Plant  Cell  8.  1627–1639.
Pratiwi,  R.  and  Limantara,  L.  2008.  Astaxanthin  dan
Kesehatan  Manusia.  Prosiding  Seminar  Nasional Pigmen 2008  MB UKSW.  Salatiga. ISBN:  979-1098- 16-4
Visser,  H.,  van  Ooyen, A.J.J.,  and  Verdoes,  J.C.  2003. Metabolic  engineering of the  astaxanthin-biosynthetic pathway  of  Xanthophyllomyces  dendrorhous.  FEMS Yeast Res 2003, 4:  221–231.
Wusqy,  N.  and  Limantara,  L.  2009.  Bakteri  Laut:  Mesin Biologi Penghasil Pigmen. TROBOS Edisi  Desember 2009.
Yokoyama, A., Izumida, H., and Miki, W. 1994. Production of  astaxanthin  and  4-ketozeaksantin  by  the  marine bacterium,  Agrobac terium  aurantiacum.  Bios ci. Biotechnol.  Biochem.  58,  184221844.
Yokoyama, A., Miki, W., Izumida, H., and Shizuri, Y. 1996. New  trihydroxyketo-carotenoids  isolated  from  an astaxanthin-producing  marine  bacterium.  Biosci. Biotech.  Biochem.  60:  200–203.
Zhu,Y.S.  and  Hearst,  J.E.  1986.  Regulation  of  expres- sion  of  genes  for  light  harvesting  antenna  proteins LH-1  and  LH-II;  reaction  center  polypeptides  RC-L, RC-M and  RC-H and enzymes  of  bacteriochlorophyll and  c arotenoid  biosynthesis  in  Rhodobacter capsulatus  by  light  and  oxygen.  Biochemistry.83: 7613–7617.