Tersedia  online  di:  http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/jra
# Korespondensi:  Program  Studi  Ilmu  Akuakultur  FPIK  IPB. Jl.  Lingkar  Kampus  IPB  Dramaga,  Bogor,  16680,  Indonesia, E-mail:  sukenda@apps.ipb.ac.id

## POTENSI ANTI OKSIDAN DAN ANTI BAKTERI Chromolaena odorata TERHADAP Vibrio harveyi  PENYEBAB PENYAKIT  BLACK  BODY  SYNDROME PADA KAKAP PUTIH (Lates calcarifer)
Nurbariah *)**) ,  Sukenda *)# ,  Muhammad  Zairin  Junior *) ,  Sri  Nuryati *) ,  dan  Dinamella  Wahjuningrum *)
*) Program Studi Ilmu Akuakultur, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor Jl. Lingkar Kampus IPB,  Dramaga,  Bogor 16680
**) Balai Perikanan Budidaya Air Payau Ujung Batee Jl. Laksamana Malahayati Km.16, Ujung Batee, Aceh Besar, Nanggroe Aceh Darussalam
(Naskah diterima: 22 Februari 2021; Revisi final: 27 Mei 2021; Disetujui publikasi: 27 Mei 2021)

## ABSTRAK
Kandungan bahan bioaktif pada tanaman memiliki beragam potensi aktivitas biologis dan dimanfaatkan dalam  budidaya  ikan  sebagai  alternatif  untuk  pencegahan  dan  pengobatan  penyakit  ikan.  Serapoh (Chromolaena  odorata)  diketahui  memiliki  bahan  bioaktif  namun  penerapan  untuk  pencegahan  dan pengobatan penyakit pada kakap putih belum pernah diteliti. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi potensi antioksidan dan antibakteri daun serapoh secara in vitro terhadap Vibrio harveyi penyebab penyakit black body syndrome pada benih kakap putih. Penelitian secara in vitro melingkupi analisis fitokimia, uji antioksidan dan antibakteri. Hasil uji menunjukkan bahwa ekstrak daun serapoh mengandung flavonoid, tannin, saponin, dan steroid. Rendemen dari hasil maserasi dengan pelarut akuades, etanol, etil asetat, dan n-heksan berturut-turut adalah 11,34%;  9,13%; 4,21%; dan 1,48%. Ekstrak etil  asetat memiliki kandungan total  fenol  yang  tertinggi  (212,8  mg/g)  dibanding  ekstrak  yang  lain.  Kandungan  total  flavonoid  yang tertinggi terdapat pada ekstrak etanol (195,5 mg/g) diikuti dengan ekstrak etil asetat (20,2 mg/g), n-heksan (10,6 mg/g), dan akuades (8,1 mg/g). Nilai potensi antioksidan ekstrak etanol lebih tinggi (86,59%) dibanding ekstrak yang lain namun potensi antioksidan ekstrak etanol, etil asetat, dan akuades tidak berbeda nyata dengan asam askorbat sebagai pembanding. Ekstrak etanol, etil asetat, dan n-heksan dapat menghambat pertumbuhan V. harveyi. Ekstrak etanol bersifat bakteriostatik (1,25  mg/mL) dan bakterisidal (5 mg/mL), serta menyebabkan kerusakan sel sehingga metabolit seluler seperti asam nukleat dan protein dapat keluar dari  sel.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  serapoh  memiliki  potensi  antioksidan  dan antibakteri terhadap  V.  harveyi  sehingga  dapat  digunakan untuk  pencegahan  dan  pengobatan  penyakit black body syndrome pada benih kakap putih.
KATA KUNCI: antioksidan; antibakteri; Chromolaena odorata; black body syndrome; Vibrio harveyi
ABSTRACT: Antioxidant and antibacterial potential of Chromolaena odorata against Vibrio harveyi causing black body syndrome disease in asian seabass. By: Nurbariah, Sukenda, Muhammad Zairin Junior, Sri Nuryati, and Dinamella Wahjuningrum
Bioactive compounds in plants have various potential biological activities and are commonly used in fish farming as alternatives to prevent and treat fish diseases. Serapoh (Chromolaena odorata) is known to have bioactive compounds, yet its application to prevent disease in Asian seabass has not been studied. This study aimed to evaluate the antioxidant and antibacterial potential of serapoh leaves in vitro against Vibrio harveyi, causing black body syndrome disease in Asian seabass. The performed tests in this study consisted of phytochemical analysis, antioxidant, and antibacterial tests. The results showed that serapoh leaf extract contains flavonoids, tannins, saponins, and steroids. The yields obtained from maceration with aquadest, ethanol, ethyl acetate, and n-hexane solvents were 11.34%; 9.13%; 4.21%; and 1.48%, respectively. Ethyl acetate extract had the highest total phenol content (212.8 mg/g) compared to the other extracts. Ethanol extract has the highest total flavonoid content (195.5 mg/g) followed by ethyl acetate (20.2 mg/g),
n-hexane  (10.6  mg/g),  and  aquadest  (8.1  mg/g).  The  highest  antioxidant  potential  value  was  shown  by ethanol extract  (85.59%), but the  antioxidant potentials of ethanol,  ethyl acetate, and  aquadest extracts were  not  significantly  different  from  ascorbic  acid.  Ethanol,  ethyl  acetate,  and  n-hexane  extracts  can inhibit the growth of V. harveyi. Ethanol extract has bacteriostatic (1.25 mg/mL) and bactericidal (5 mg/mL) properties.  The  exposure  of  V.  harveyi  to  ethanol  extract  resulted  in  cellular  damage  that  can  release cellular metabolites such as nucleic acids and proteins. In conclusion, serapoh leaf extract had antioxidant and antibacterial potential against V. harveyi and could be used to prevent or treat black body syndrome in Asian seabass.
KEYWORDS: antioxidant; antibacterial; Chromolaena odorata; black body syndrome; Vibrio harveyi
in  vivo  atau  aplikasi  pada  komoditas  budidaya. Tanaman  serapoh  Chromolaena  odorata  (L.)  adalah salah satu tanaman yang memiliki aktivitas biologis sebagai antioksidan dan antibakteri yang telah lama digunakan  dalam  pengobatan  tradisional  manusia. Beberapa  penelitian  (Rao  et  al.,  2010;  Boudjeko  et al., 2015; Pitakpawasutthi et al., 2016) membuktikan bahwa  tanaman  serapoh  memiliki  potensi  sebagai antioksidan.  Potensi  tanaman  serapoh  sebagai antibakteri  terbukti  mampu  menghambat  beberapa jenis  bakteri  seperti  Vibrio  harveyi  (Harlina  et  al., 2015),  Enterococcus  faecalis,  dan  Staphylococcus aureus (Omokhua et al., 2017). Jenis tanaman, pelarut, dan  metode  ekstraksi  merupakan  hal  yang  penting dipertimbangkan dalam penelitian tanaman obat untuk budidaya  ikan.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk mengevaluasi  potensi  tanaman  serapoh  terhadap bakteri penyebab penyakit black body syndrome pada benih  kakap  putih  dengan  pengamatan  aktivitas antioksidan dan antibakteri secara in vitro.

## BAHAN DAN METODE
Daun  serapoh  C.  odorata  (L.)  yang  digunakan berasal  dari  Desa  Meunasah  Mon  (5°35’29.0”N: 95°31’25.0”E),  Kecamatan  Mesjid  Raya,  Kabupaten Aceh Besar, Nanggroe Aceh Darussalam. Determinasi tanaman  dilakukan  di  Pusat  Penelitian  Biologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Alam Indonesia, Cibinong, Bogor. Isolat Vibrio harveyi penyebab penyakit black body  syndrome  (BBS)  adalah  koleksi  Laboratorium Kesehatan  Ikan,  Departemen  Budidaya  Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Institut Pertanian Bogor.

## Pembuatan  Ekstrak  dan  Analisis  Fitokimia
Daun serapoh yang digunakan adalah daun segar berwarna  hijau,  pengambilan  di  mulai  pada  daun keempat dari ujung batang. Daun serapoh dibersihkan dengan  air,  ditiriskan,  dan  dikeringanginkan. Pengeringan dilanjutkan  pada suhu  50°C selama  20 jam kemudian dihaluskan untuk memperoleh serbuk daun.  Proses  ekstraksi  menggunakan  metode maserasi (1:5 b/v) selama 24 jam dengan empat jenis pelarut yang berbeda (akuades, etanol, etil asetat, dan

## PENDAHULUAN
Pemanfaatan khasiat tanaman telah lama digunakan dalam pengobatan tradisional manusia karena tanaman mengandung  beragam  senyawa  aktif  dan  aktivitas biologis  (Wink,  2015).  Penggunaan  tanaman  obat dalam budidaya ikan juga dilakukan oleh pembudidaya berdasarkan  khasiat  yang  telah  terbukti  pada pengobatan manusia (Caruso et al., 2013). Tanaman dapat  berperan  sebagai  antioksidan,  antibakteri, antiparasit,  antihelmintik,  imunostimulan, meningkatkan  pertumbuhan,  dan  sintasan  ikan (Citarasu, 2010; Vaseeharan & Thaya, 2013; Reverter et al., 2014). Pemanfaatan tanaman obat pada budidaya ikan antara lain sebagai sumber bahan yang murah, mudah  dalam  pembuatan,  tidak  berbahaya,  serta mudah terurai sehingga tidak mencemari lingkungan (Harikrishnan et al., 2011; Hai, 2015).
Penyakit infeksius merupakan faktor penghambat dalam  budidaya  ikan  yang  dapat  menyebabkan kegagalan  produksi  dan  kerugian  ekonomi.  Bakteri sebagai agen infeksius dapat menyebabkan penyakit pada  ikan.  Salah  satu  penyakit  bakterial  yang menyerang benih kakap putih (1-3 cm) adalah penyakit black body syndrome ditemukan di wilayah Lampung. Kematian  benih  yang  disebabkan  oleh  penyakit  ini dapat mencapai 80% dengan gejala klinis perubahan warna  tubuh  menjadi  hitam,  tidak  aktif  berenang, kehilangan  nafsu  makan,  hemoragi,  dan  luka  pada tubuh. Beberapa jenis bakteri (Pseudomonas stutzeri; Vibrio harveyi; Bacillus cereus; Salinococcus roseus) ditemukan  dari  hasil  identifikasi  benih  kakap  putih yang terserang penyakit black body syndrome dan hasil infeksi  buatan  memperlihatkan  bahwa  bakteri  V. harveyi lebih virulen, serta menunjukkan gejala klinis penyakit black body syndrome pada ikan uji (Izwar et al., 2020).
Pemanfaatan tanaman obat yang memiliki aktivitas antioksidan dan antibakteri dapat menjadi alternatif untuk  mengatasi  serangan  penyakit  ikan  sebagai langkah pencegahan dan pengobatan dalam manajemen kesehatan ikan. Pencarian potensi tanaman obat yang memiliki aktivitas antioksidan dan antibakteri dapat dilakukan secara in vitro sebelum melakukan pengujian
n-heksan).  Hasil  maserasi  disaring  (Whatman  filter paper no. 1) dan sisa penyaringan dimaserasi sebanyak dua kali dengan prosedur yang sama. Hasil maserasi dievaporasi pada suhu 50°C hingga diperoleh ekstrak kental dan dihitung rendemen yang diperoleh. Analisis fitokimia  dilakukan  untuk  mengetahui  kandungan senyawa aktif dari ekstrak kasar daun serapoh. Analisis kualitatif fitokimia menggunakan metode visualisasi warna sedangkan analisis kuantitatif fitokimia meliputi total fenol dan flavonoid.

## Analisis  Potensi  Ekstrak  sebagai  Antioksidan
Potensi  antioksidan  ekstrak  ditentukan  dengan mengukur  aktivitas  penangkal  radikal  bebas 1,1diphenyl2picryl  hydrazyl  (DPPH)  mengacu  pada Mohamad et al. (2009). Sebanyak 50 µL ekstrak (10 mg/mL)  dicampur  dengan  1,95  mL  DPPH  (0,1  mM) kemudian diinkubasi pada suhu ruang selama 30 menit. Nilai absorbansi diukur menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 517 nm. Asam  askorbat  digunakan  sebagai  pembanding perlakuan  dan  DPPH  tanpa  pencampuran  dengan ekstrak sebagai kontrol. Aktivitas penangkal radikal bebas dinyatakan sebagai persentase penghambatan radikal  bebas  pada  sampel  dan  pengukuran menggunakan rumus sebagai berikut:
di mana: A 0 : absorbansi kontrol A t : absorbansi ekstrak

## Aktivitas Antibakteri Ekstrak
Analisis sensitivitas bakteri uji V. harveyi terhadap empat jenis ekstrak menggunakan metode disc diffu- sion agar mengacu pada Harlina et al. (2015) dengan modifikasi.  Kertas  cakram  steril  (diameter  6  mm) ditetesi 20 µL ekstrak serapoh (10 mg/mL) kemudian ditempel pada media tryptone soya agar (TSA) yang diberi 2%  NaCl dan  telah disebar  100 µL  bakteri uji (0,5 McFarland), selanjutnya diinkubasi selama 24 jam, 30°C. Kontrol negatif menggunakan akuades steril dan Chloramphenicol (1 mg/mL)  sebagai kontrol positif. Sensitivitas bakteri uji terhadap empat jenis ekstrak diketahui dengan mengukur zona hambat.
Analisis minimum inhibitory concentration (MIC) dan minimum bactericidal concentration (MBC) dari ekstrak terpilih mengacu pada Atindehou et al. (2013) dengan modifikasi. Ekstrak (20 mg/mL) sebanyak 100 µL  dimasukkan  pada  96-well  plate  dan  dibuat pengenceran bertingkat (10; 5; 2,5; 1,25; 0,625; 0,313; 0,156  mg/mL)  dengan  tryptone  soya  broth  (TSB)  + 2%  NaCl  kemudian  ditambahkan  100  µL  suspensi
bakteri  (10 6 CFU/mL).  Kontrol  perlakuan  adalah kontrol bakteri tanpa penambahan ekstrak; kontrol media;  dan  kontrol  bakteri  dengan  penambahan antibiotik Chloramphenicol (1 mg/mL). Inkubasi selama 24 jam, 30°C, 150 rpm kemudian ditambahkan 40 µL iodonitrotetrazolium  chloride  (INT)  0,2  mg/mL  dan diinkubasi  kembali  selama  30  menit.  Pertumbuhan bakteri diindikasikan  dengan perubahan warna larutan menjadi  kemerahan dan  nilai  MIC ditunjukkan  oleh konsentrasi terkecil larutan yang tidak menunjukkan perubahan warna. Untuk mengetahui nilai MBC sama seperti  prosedur  di  atas,  50  µL  ekstrak  yang  tidak menunjukkan pertumbuhan bakteri ditambahkan ke 150 µL media TSB + 2% NaCl dan diinkubasi kembali selama 24 jam.

## Kebocoran  dan  Kerusakan  Sel  Bakteri
Analisis  kebocoran  sel  mengacu  pada  Lin  et  al. (2000)  dengan  modifikasi.  Bakteri  uji  ditumbuhkan (24 jam) pada media TSB + 2% NaCl. Suspensi bakteri 10 mL disentrifugasi (4.500 rpm, 15 menit), endapan bakteri  diberi  larutan  phosphate  buffer  saline  (PBS) perbandingan  1:1  kemudian  disentrifugasi  kembali (4.500  rpm,  15  menit)  dan  prosedur  pencucian dilakukan dua kali. Endapan bakteri disuspensi dalam PBS  sehingga  diperoleh  kepadatan  10 8 CFU/mL  (0,5 McFarland). Ekstrak sebanyak 90 µL (pada konsentrasi 0,5xMIC; MIC; 2xMIC) dicampur dengan 10 µL suspensi bakteri,  kontrol  perlakuan  adalah  suspensi  bakteri tanpa  penambahan  ekstrak  dan  masing-masing perlakuan diulang sebanyak tiga kali. Campuran bakteri dan ekstrak diinkubasi selama 24 jam (30°C, 150 rpm) kemudian  disentrifugasi  (4.500  rpm,  15  menit)  dan supernatan disaring dengan filter 0,22 µm. Pengamatan kebocoran sel bakteri menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 260 nm (asam nukleat) dan 280 nm (protein).
Perubahan  morfologi  atau  kerusakan  sel  bakteri uji  akibat  pemberian  ekstrak  diamati  dengan  scan- ning electron microscope (SEM). Suspensi bakteri 10 µL (10 8 CFU/mL) dicampur dengan 90 µL ekstrak (10 mg/mL) dan diinkubasi selama 24 jam (30°C, 150 rpm). Pengujian terdiri atas tiga perlakuan yaitu ekstrak (10 mg/mL), kontrol  bakteri tanpa  penambahan ekstrak dan kontrol bakteri dengan Chloramphenicol (1 mg/ mL).  Setelah  24  jam  inkubasi,  suspensi  campuran disentrifugasi  selama  20  menit  (3.500  rpm).  Pelet dicuci dengan buffer fosfat sebanyak dua kali, direndam dengan  larutan  glutaraldehida  2%  selama  24  jam kemudian direndam dengan caccodylate buffer selama 20  menit  selanjutnya  disentrifugasi  dan  supernatan dipisahkan.  Endapan  direndam  dalam  osmium tetraoksida  1%  selama  satu  jam  dilanjutkan  dengan dehidrasi pada alkohol bertingkat 70%, 80%, 95%, dan
  100 x A A A an penghambat % 0 t 0  
alkohol  absolut  masing-masing  selama  20  menit. Endapan  disuspensi  dengan  butanol  kemudian diletakkan  di  atas  cover  slip  yang  telah  kering  dan dilapisi emas melalui proses vakum selama 20 menit. Preparat diamati dan didokumentasi dengan Scanning Electron Microscope (JSM-5310LV, Japan).

## Analisis  Data
Data yang diperoleh akan ditabulasi dengan pro- gram  Microsoft  Office  Excel  dan  dianalisis  dengan Analysis of Varians (ANOVA) pada selang kepercayaan 95%, jika terdapat perbedaan akan diuji lanjut dengan uji Duncan.

## HASIL DAN BAHASAN

## Hasil  Ekstraksi  dan  Analisis  Fitokimia
Dari  hasil  ekstrasi  daun  serapoh  dengan  empat jenis  pelarut,  persentase  rendemen  yang  tertinggi berturut-turut diperoleh dari ekstrak dengan pelarut akuades,  etanol,  etil  asetat,  dan  n-heksan  (11,34%; 9,13%; 4,21%; dan 1,48%). Pelarut n-heksan memberikan hasil  persentase  rendemen  yang  terendah  dalam penelitian ini, hal ini sejalan dengan Hanphakphoom et al. (2016) yang mendapatkan persentase rendemen terendah menggunakan pelarut n-heksan dari bagian daun,  akar,  dan  batang  jika  dibandingkan  dengan pelarut lain yaitu akuades, etanol, dan metanol. Hasil uji  fitokimia  kualitatif  menunjukkan  bahwa  ekstrak daun serapoh mengandung flavonoid, tannin, sapo- nin,  dan  steroid  (Tabel  1).  Dari  keempat  ekstrak tersebut terdapat perbedaan kandungan senyawa aktif yang  diperoleh,  hal  ini  mungkin  disebabkan  oleh perbedaan  polaritas  dari  masing-masing  pelarut ekstrak seperti yang dinyatakan oleh Salar & Seasotiya (2011) bahwa perbedaan pelarut dan metode ekstraksi akan  melepaskan  kandungan  senyawa  aktif  yang berbeda.
Pengujian fitokimia ekstrak daun serapoh secara kuantitatif  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etil  asetat
memiliki kandungan total fenol yang lebih tinggi (212,8 mg/g) dibanding ekstrak dengan pelarut yang lain (Tabel 2). Putri & Fatmawati (2019) juga melaporkan hal yang sama bahwa kandungan total fenol yang lebih tinggi diperoleh dari ekstrak etil asetat dibandingkan pelarut lain  yaitu  diklorometan,  metanol,  akuades,  dan  n- heksan. Total flavonoid yang diperoleh dari keempat ekstrak bervariasi dari 8,1 mg/g sampai 195,5 mg/g. Di  antara  keempat ekstrak  tersebut,  ekstrak  etanol memiliki kandungan total flavonoid yang lebih tinggi (195,5 mg/g) diikuti dengan ekstrak etil asetat (20,2 mg/g), n-heksan (10,6 mg/g), dan akuades (8,1 mg/g).

## Potensi  Antioksidan  Ekstrak
Hasil pengamatan potensi antioksidan ekstrak daun serapoh dengan metode DPPH ditampilkan pada Tabel 3. Ekstrak etanol memiliki nilai potensi antioksidan lebih  tinggi  (86,59%)  dibanding  ekstrak  yang  lain namun potensi antioksidan ekstrak etanol, etil asetat, dan akuades tidak berbeda nyata dengan asam askorbat sebagai pembanding. Potensi antioksidan ketiga jenis ekstrak  ini  berbeda  nyata  dengan  ekstrak  n-heksan dan perlakuan kontrol.
Ekstrak daun serapoh mengandung sejumlah total fenol  dan  flavonoid  (Tabel  2)  dan  senyawa  aktif  ini berhubungan dengan kemampuan aktivitas antioksidan dari ekstrak tanaman (Rao et al., 2010; Perez-Cano & Castell, 2016). Potensi antioksidan ekstrak n-heksan lebih  rendah  (Tabel  3)  jika  dibandingkan  dengan ekstrak  etil  asetat,  etanol,  dan  akuades,  hal  ini berhubungan dengan jumlah kandungan total fenol dan flavonoid  ekstrak  n-heksan  yang  lebih  rendah  dari ketiga  jenis  ekstrak  tersebut.  Menurut  Salar  & Seasotiya  (2011),  jenis  pelarut  yang  digunakan memengaruhi kandungan total fenol yang dihasilkan dan  semakin  tinggi  kandungan  total  fenol  akan meningkatkan aktivitas antioksidan ekstrak tanaman. Komponen antioksidan dapat mencegah atau menunda kerusakan oksidatif yang berperan dalam patogenesis penyakit  (Awad  &  Awaad,  2017)  dan  penelitian  ini

## Tabel 1. Hasil pengujian fitokimia ekstrak daun serapoh
Table 1. Result of phytochemical test for serapoh leaf extract
Flavonoid Alkaloid Tannin Saponin Quinon Steroid Triterpenoid Etanol (Ethanol ) + - + - - + - Etil asetat (Ethyl acetate ) + - + - - - - Akuades (Aquadest ) + - + + - + - n-heksan (n-hexane ) - - - - - + - Ekstrak (Extract ) Pengujian (Test )
Keterangan (Description):(+) : teridentifikasi (identified); (-) : tidak teridentifikasi (not identified)
menunjukkan bahwa ekstrak daun serapoh memiliki potensi antioksidan sehingga dapat digunakan untuk mengatasi penyakit bakterial pada benih kakap putih.

## Aktivitas Antibakteri Ekstrak
Hasil  uji  sensitivitas ekstrak  terhadap  V.  harveyi penyebab  penyakit  black  body  syndrome  (Tabel  4) menunjukkan bahwa ekstrak etanol, etil asetat, dan
n-heksan dapat menghambat pertumbuhan bakteri uji. Zona  hambat  yang  terbentuk  menunjukkan kemampuan ekstrak untuk menghambat pertumbuhan bakteri.  Zona  hambat  pada  ekstrak  etanol  dan  etil asetat  tidak  berbeda  nyata  satu  sama  lain  namun berbeda nyata dengan perlakuan kontrol positif dan ekstrak  dengan  pelarut  lainnya.  Perbedaan  jenis pelarut  ekstrak  menunjukkan  kemampuan
Tabel 2. Total fenol dan flavonoid ekstrak daun serapoh Table 2. Total phenol and flavonoid of serapoh leaf extract
Tabel 3. Potensi antioksidan ekstrak daun serapoh

## Table 3. Antioxidant potential of serapoh leaf extract
Keterangan: Huruf superskrip yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan berbeda nyata pada taraf  uji 5% Description: Different superscript letters in the same column show significantly different at 5% level test
Keterangan: Huruf superskrip yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan berbeda nyata pada taraf  uji 5% Description: Different superscript letters in the same column show significantly different at 5% level test
Jenis ekstrak
Type of extract Total fenol Total phenol  (mg/g) Total flavonoid Total flavonoid  (mg/g) n-heksan (n-hexane ) 31.3 ± 0.1 a 10.6 ± 0.0 a Akuades (Aquadest ) 34.7 ± 0.1 b 8.1 ± 0.0 a Etil asetat (Ethyl acetate ) 212.8 ± 0.0 d 20.2 ± 0.1 b Etanol (Ethanol ) 204.8 ± 0.0 c 195.5 ± 0.1 c
Ekstrak
Extract  (10 mg/mL) Absorbansi Absorbance  (517 nm) Potensi antioksidan Antioxidant potential  (%) Asam askorbat (Ascorbic Acid ) 0.01 ± 0.00 96.45 a Etanol (Ethanol ) 0.02 ± 0.00 86.59 a Etil asetat (Ethyl acetate ) 0.03 ± 0.00 85.40 a Akuades (Aquadest ) 0.04 ± 0.01 75.74 a n-heksan (n-hexane ) 0.13 ± 0.02 21.30 b Kontrol (Control ) 0.17 ± 0.00 0.0 c
keterangan: Huruf superskrip yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan berbeda nyata pada taraf  uji 5%; *) termasuk diameter cakram)
Description: Different superscript letters in the same column show significant differences at 5% level test; *) including disc  diameter)
Jenis ekstrak (Type of extract ) (10 mg/mL) Zona hambat (Inhibitor zone ) (mm)* Kontrol negatif (Negative control ) 6.0 ± 0.0 a Akuades (Aquadest ) 6.0 ± 0.0 a n-heksan (n-hexane ) 9.5 ± 0.7 b Etanol (Ethanol ) 13.0 ± 0.0 c Etil asetat (Ethyl acetate ) 13.5 ± 0.7 c Kontrol positif (Positive control ) 16.5 ± 0.7 d
Tabel 4. Uji sensitivitas bakteri terhadap ekstrak Table 4. Bacterial sensitivity test against extract
penghambatan  yang  berbeda  terhadap  bakteri  uji. Kemampuan  ekstrak  tanaman  menghambat pertumbuhan bakteri menunjukkan bahwa kandungan bahan  alami  tanaman  memiliki  kemampuan antibakterial (Nafiqoh et al., 2019).
Hasil uji MIC ekstrak etanol daun serapoh terhadap bakteri uji menunjukkan bahwa konsentrasi 1,25 mg/ mL masih mampu menghambat pertumbuhan bakteri uji  dengan  indikasi  tidak  menunjukkan  perubahan warna  kemerahan  setelah  pemberian  INT  sebagai indikator  pertumbuhan  bakteri  (Gambar  1).  Semua konsentrasi yang tidak menunjukkan perubahan warna pada  uji  MIC  dilanjutkan  dengan  uji  MBC.  Hasil  uji MBC menunjukkan bahwa pada konsentrasi 5 mg/mL ekstrak  etanol  daun  serapoh  mampu  bersifat bakterisidal  terhadap  bakteri  uji.  Berdasarkan pengujian  aktivitas  antibakteri  pada  penelitian  ini menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  serapoh  dapat menghambat pertumbuhan bakteri V. harveyi seperti dilaporkan  sebelumnya  oleh  Harlina  et  al.  (2015) sehingga ekstrak daun serapoh memiliki potensi untuk digunakan  sebagai  antibakteri  dalam  mengontrol mikroorganisme patogen yang menyebabkan penyakit pada kakap putih.

## Kebocoran  dan  Kerusakan  Sel  Bakteri
Hasil  pengamatan  kebocoran  metabolit  seluler bakteri  uji  setelah  24  jam  inkubasi  dengan  ekstrak etanol daun serapoh ditampilkan pada Tabel 5. Nilai absorbansi  yang  diperoleh  semakin  tinggi  seiring dengan  semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak,  hal  ini menunjukkan bahwa tingkat kebocoran sel semakin tinggi.  Pelepasan  komponen  seperti  asam  nukleat,
serta protein pada penelitian ini menandakan adanya kerusakan pada membran sel bakteri uji.
Morfologi  bakteri  uji  setelah  inkubasi  24  jam dengan  ekstrak  etanol  daun  serapoh  (10  mg/mL) berdasarkan hasil pengamatan dengan scanning elec- tron microscope (SEM) dapat dilihat pada Gambar 2. Terdapat  kerusakan  sel  bakteri  dengan  pemberian ekstrak etanol daun serapoh. Bakteri yang diuji dengan ekstrak  etanol daun  serapoh mengalami  perubahan morfologi  dibandingkan  dengan  bakteri  pada perlakuan kontrol tanpa penambahan ekstrak etanol daun serapoh. Kandungan flavonoid yang terdapat pada ekstrak  etanol  daun  serapoh  dapat  menyebabkan kerusakan dan  pelepasan komponen  seluler seperti yang dilaporkan oleh He et al. (2014) bahwa flavonoid memiliki  aktivitas  antibakteri  melalui  mekanisme penghambatan  sintesis  asam  nukleat  bakteri  dan kerusakan membran sel bakteri.

## KESIMPULAN
Ekstrak  daun  serapoh  memiliki  potensi antioksidan  dengan  nilai  potensi  tertinggi  pada ekstrak  etanol  (86,59%)  dibanding  ekstrak  dengan pelarut lain dan tidak berbeda nyata dengan potensi antioksidan asam askorbat. Kemampuan daya hambat terhadap  pertumbuhan  V.  harveyi  menunjukkan potensi  ekstrak  daun  serapoh  sebagai  antibakteri. Ekstrak etanol daun  serapoh bersifat bakteriostatik dan bakterisidal serta mampu merusak sel V. harveyi sehingga  dengan  potensi  antioksidan  dan antibakterinya,  ekstrak  etanol  daun  serapoh  dapat digunakan untuk pencegahan dan pengobatan penyakit black  body  syndrome  pada  benih  kakap  putih.
Gambar 1. Uji MIC dan MBC ekstrak etanol daun serapoh; (A) MIC, (B) MBC. Figure  1. MIC and MBC tests of ethanol extract of serapoh leaf; (A) MIC, (B) MBC. A B 10 5 2.5 1.25 0.62 0.31 0.15 K+ CL K-

## Tabel 5. Kebocoran sel bakteri
Table 5. Bacterial cell leakage
Asam nukleat (Nucleic acid ) (260 nm) Protein (Protein ) (280 nm) Kontrol (Control ) 2.11 ± 0.01 1.61 ± 0.07 0,625 1.52 ± 0.00 1.49 ± 0.01 1,25 1.56 ± 0.02 1.53 ± 0.01 2,5 1.59 ± 0.01 1.56 ± 0.01 Nilai absorbansi (Absorbance value )
Ekstrak etanol
Ethanol extract  (mg/mL)
Diperlukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui efektivitas ekstrak etanol daun serapoh in vivo pada benih kakap putih.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  disampaikan  kepada Kementerian Kelautan dan Perikanan Republik Indo- nesia yang telah mendanai pendidikan melalui skema beasiswa.

## DAFTAR  ACUAN
Atindehou, M.,  Lagnika,  L., Guerold,  B.,  Strub,  J.M., Zhao,  M.,  Van  Dorsselaer,  A.,  Marchioni,  E., Prevost, G., Haikel, Y., & Taddei, C. (2013). Isola- tion and identification of two antibacterial agents from Chromolaena odorata L. active against four diarrheal strains. Advanced Microbiology, 3, 115- 121. DOI: 10.4236/aim.2013.31018.
Awad, E. & Awaad, A. (2017). Role of medicinal plants on  growth  performance  and  immune  status  in fish. Fish and Shellfish Immunology. DOI: 10.1016/ j.fsi.2017.05.034.
Boudjeko,  T.,  Megnekou,  R.,  Woguia,  A.L.,  Kegne, F.M.,  Ngomoyogoli,  J.E.K.,  Tchapoum,  C.D.N.,  & Koum, O. (2015). Antioxidant and immunomodulatory properties of polysaccharides from Allanblackia floribunda Oliv stem bark and Chromolaena  odorata  (L.)  King  and  H.E.  Robins leaves.  BMC  Res  Notes,  8,  759.  DOI:  10.1186/ s13104-015-1703-x.
Caruso, D., Lusiastuti, A.M., Taukhid, Slembrouck, J., Komarudin, O., & Legendre, M. (2013). Traditional pharmacopeia in small scale freshwater fish farms in  West  Java,  Indonesia:  An  ethnoveterinary  ap- proach.  Aquaculture,  416-417,  334-345.  DOI: 10.1016/j.aquaculture.2013.09.048.
Citarasu, T.  (2010). Herbal  biomedicines: a  new  op- portunity for aquaculture industry. Aquaculture In- ternational, 18, 403-414. DOI: 10.1007/s10499-009- 9253-7.
Gambar 2. Hasil  scanning  electron  microscope;  (A)  perlakuan  ekstrak,  (B) kontrol, (C) perlakuan antibiotik.
Figure  2. Scanning  electron  microscope  result  of  (A)  extract  treatment, (B) control, (C) antibiotic treatment.
A B C
He, M., Wu, T., Pan, S., & Xu, X. (2014). Antimicrobial mechanism of flavonoids against Escherichia coli ATCC 25922 by model membrane study. Applied Surface  Science,  305,  515-521.  DOI:  10.1016/ j.apsusc.2014.03.125.
Hai,  V.N.  (2015).  The  use  of  medicinal  plants  as immunostimulants  in  aquaculture:  A  review.
Aquaculture. DOI: 10.1016/ j.aquaculture.2015.03.014.
Hanphakphoom, S., Thophon, S., Waranusantigul, P., Kangwanrangsan,  N.,  &  Krajangsang,  S.  (2016). Antimicrobial activity of Chromolaena odorata ex- tracts  against  bacterial  human  skin  infections. Modern Applied Science, 10(2), 159-171.
Harikrishnan,  R.,  Balasundaram,  C.,  &  Heo,  M.S.
(2011).  Review: Impact  of plant  products on  in- nate and adaptive immune system of cultured fin- fish  and  shellfish.  Aquaculture,  317,  1-15.  DOI: 10.1016/j.aquaculture.2011.03.039.
Harlina,  Prajitno,  A.,  Suprayitno,  E.,  Nursyam,  H.,  & Rosmiati.  (2015).  Potential  study  of  Kopasanda (Chromolaena odorata L.) leaves as antibacterial against Vibrio harveyi, disease causative agent of tiger  shrimp  (Penaeus  monodon  Fabricius)  post larvae.  Journal  Aquaculture  Research  Develop- ment, 6, 10. DOI: 10.4172/2155-9546.1000372.
Izwar,  A.,  Nur yati,  S.,  Sukenda,  Rahman,  & Purnomowati, R. (2020). Isolation, identification, and  pathogenicity  tests  of  pathogenic  bacterial associated  with  black  body  syndrome  in  white barramundi Lates calcarifer  B. Jurnal  Akuakultur Indonesia, 19(1), 39-49.
Lin, C.M., Preston, J.F., & Wei, C.I. (2000). Antibacte- rial mechanism of allyl isothiocyanate. Journal of Food Protection, 63(6), 727-734.
Mohamad, H., Rashid, Z.M., Shaari, K., Latip, J., Lajis, M.N.H., & Ali, A.M. (2009). Antibacterial and DPPH free  radical-scavenging  activities  of  methanolic extracts of Aaptos sp. (marine sponges). Pertanika Journal Tropical Agriculture Science, 32(1), 43-50.
Nafiqoh,  N.,  Sukenda,  Zairin,  Jr.M.,  Alimuddin,
Lusiastuti, A.M., Sarter, S., Caruso, D., & Avarre, J.C.  (2019).  Antimicrobial  properties  against Aeromonas hydrophila and immunostimulant ef- fect on Clarias gariepinus of Piper betle, Psidium guajava, and Tithonia diversifolia plants. Aquacul- ture  International.  DOI:  10.1007/s10499-019- 00439-6.
Omokhua,  A.G.,  McGaw,  L.J.,  Chukwujekwu,  J.C.,
Finnie,  J.F.,  &  Van,  S.J.  (2017).  A  comparison  of the  antimicrobial  activity  and  toxicity  of  a  me- dicinally useful biotype of invasive Chromolaena odorata (Asteraceae) with a biotype not used in traditional  medicine.  South  African  Journal  of Botani,  108,  200-208.  DOI:  10.1016/ j.sajb.2016.10.017.
Perez-Cano, F.J. & Castell, M. (2016). Flavonoids, in- flammation and immune system. Nutrients, 8, 659. DOI: 10.3390/nu8100659.
Pitakpawasutthi, Y., Thitikornpong, W., Palanuvej, C.,
& Ruangrungsi, N. (2016). Chlorogenic acid con- tent, essential oil composition and in vitro anti- oxidant activities of Chromolaena odorata leaves. Journal of Advanced Pharmaceutical Technology & Research,  7,  37-42.  DOI:  10.4103/2231- 4040.177200.
Putri, D.A. & Fatmawati, S. (2019). A new flavanone as  a  potent  antioxidant  isolated  from
Chromolaena  odorata  L.  leaves.  Evidence-Based Complementary  and  Alternative  Medicine.  DOI: 10.1155/2019/1453612.
Rao, K.S., Chaudhury, P.K., & Pradhan, A. (2010). Evalu- ation of antioxidant activities and total phenolic content  of  Chromolaena  odorata.  Food  and Chemical Toxicology, 48, 729-732. DOI: 10.1016/ j.fct.2009.12.005.
Reverter, M., Bontemps, N., Lecchini, D., Banaigs, B., &  Sasal,  P.  (2014).  Use  of  plant  extracts  in  fish aquaculture  as  an  alternative  to  chemotherapy: Current status and future perspectives. Aquacul- ture,
433, 50-61. DOI: 10.1016/ j.aquaculture.2014.05.048.
Salar,  R.K.  &  Seasotiya,  L.  (2011).  Free  radical  scav- enging activity, phenolic contents and phytochemi- cal evaluation of different extracts of stem bark of  Butea  monosperma  (Lam.)  Kuntze.  Frontiers in  Life  Science,  5(3-4),  107-116.  DOI:  10.1080/ 21553769.2011.635813.
Vaseeharan,  B.  &  Thaya,  R.  (2013).  Medicinal  plant derivatives  as  immunostimulants:  an  alternative to chemotherapeutics and antibiotics in aquacul- ture.  Aquaculture  International.  DOI:  10.1007/ s10499-013-9729-3.
Wink,  M.  (2015).  Modes  of  action  of  herbal  medi- cines and plant secondary metabolites. Medicines, 2, 251-286. DOI: 10.3390/medicines2030251.