Uji Sensitivitas Antibiotik Terhadap Staphylococcus Aureus Yang Terdeteksi Dalam Sputum Pasien Dengan Pneumonia Yang Dirawat Di Rumah Sakit
Antibiotic Sensitivity Test on Staphylococcus Aureus Detected in Sputum of Patients with Pneumonia Treated in Hospitals
Dini Agustina 1 , Diana Chusna Mufida 1 , Hanifa Riski A.S 2 , Dion Khrismashogi 3
1 Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Jember
2 Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran Universitas Jember
3 Laboratorium Anatomi Fakultas Kedokteran Universitas Jember Jalan Kalimantan No.37, Jember, Indonesia, 68121 e-mail korespondensi: dini_agustina@unej.ac.id

## Abstrak
Pneumonia merupakan penyakit infeksi akut saluran pernafasan yang menyerang parenkim paru. Penyakit ini dapat disebabkan oleh bakteri salah satunya adalah Staphylococcus aureus . Antibiotik memiliki peran penting untuk  mengurangi  angka  morbiditas  dan  mortalitas  kejadian  pneumonia,  akan  tetapi  saat  ini  angka  kejadian resistensi terhadap antibiotik meningkat. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui sensitivitas antibiotik Staphylococcus aureus yang terdeteksi dalam sputum pasien pneumonia. Desain penelitian ini adalah deskriptif observasional, dengan menggunakan sampel sputum dari pasien pneumonia di rumah sakit Subandi dan Paru Jember  pada  bulan  Nopember  sampai  Desember  tahun  2018.    Identifikasi  bakteri  pada  sputum  dilanjutkan dengan uji sensitivitas bakteri terhadap antibiotik. Antibiotik yang digunakan adalah klorampenicol, gentamisin, amikasin, levofloksasin, ampisilin-sulbaktam, kotrimoksasol, dan siprofloksasin. Data yang diperoleh ditampilkan dalam  Tabel  distribusi  frekuensi.  Dari  sepuluh  sputum  yang  berhasil  dikultur  didapatkan  empat  bakteri  basil Gram negatif dan enam bakteri kokus Gram positif. Hasil identifikasi enam bakteri kokus Gram positif terdeteksi sebagai Staphylococcus aureus . Resistensi antibiotik Staphylococcus aureus terhadap ampisilin-sulbaktam tinggi.
Kata kunci: sensitivitas antibiotik, Staphylococcus aureus , pneumonia

## Abstract
Pneumonia is a respiratory tract infection that attacks the pulmonary parenchyma. This disease can be caused by bacteria, one of which is Staphylococcus aureus. Antibiotics have an important role to play in reducing the morbidity  and  mortality  incidence  of  pneumonia,  but  currently,  the  incidence  of  resistance  antibiotics  is increased.  The  purpose  of  this  study  was  to determine  the  sensitivity  of  antibiotics  Staphylococcus  aureus  in pneumatic sputum patients. The design of this study was observational descriptive, using sputum samples from pneumonia patients in Subandi and Paru Jember hospitals in November to December 2018. The identification of bacteria in sputum was continued by testing the sensitivity of bacteria to antibiotics. The antibiotics used in this study  were  chloramphenicol,  gentamicin,  amikacin,  levofloxacin,  ampicillin-sulbactam,  cotrimoxazole,  and ciprofloxacin — data  obtained  in  the  frequency  distribution  table.  Of  the  ten  sputum  that  was  successfully cultured, four Gram-negative bacilli bacteria and six Gram-positive coccus bacteria were obtained. The results approved the six Gram-positive coccus bacteria, detected as Staphylococcus aureus. The antibiotic resistance of Staphylococcus aureus to ampicillin-sulbactam was high.
Keywords : antibiotic sensitivity, bacteria, pneumonia

## Pendahuluan
Pneumonia  adalah  suatu  penyakit  infeksi  akut saluran pernafasan yang menyerang parenkim paru (Patty et al, 2016). Prevalensi kejadian pneumonia di  Indonesia  mengalami  kenaikan  dari  2,1%  pada tahun  2007  menjadi  2,7%  pada  tahun  2013 (Kementerian  Kesehatan  RI,  2013).  Bahkan diperkiraan pada tahun 2050 akan terjadi lonjakan angka  kematian  sampai  10  juta  jiwa  akibat pneumonia  yang  disebabkan  oleh  bakteri  tidak dapat  diatasi  (Kementerian  Kesehatan  RI,  2016). Pada  tahun  2012  di  Rumah  Sakit  Paru  Jember, pneumonia menjadi 10 besar penyakit yang sering terjadi  pada  pasien  rawat  jalan,  sedangkan  pada pasien  rawat  inap  terdapat  2.343  kasus.    Angka tersebut  terus  bertambah  tiap  tahunnya  tahun, hingga  mencapai  3.856  kasus  pada  tahun  2014 (Nurul et al, 2016).
Pneumonia  disebabkan  oleh  bakteri,  virus,  jamur, atau  parasit,  dengan  prevalensi  kejadian  tertinggi diakibatkan  oleh  bakteri  (Tong,  2013).  Bakteri penyebab  pneumonia  yang  paling  sering  yaitu Streptococcus pneumonia, Haemophilus influenzae, Staphylococcus  aureus,  Klebsiella  pneumoniae, Legionella  sp.,  Pseudomonas  aeruginosa ,  dan Acinobacter sp. (Kementerian Kesehatan RI, 2016).
Patogen  tersebut  mudah  sekali  menular  melalui kontak  langsung  dengan  sputum  dan  melalui droplet yang berasal dari batuk atau bersin pasien pneumonia (WHO, 2014).
Staphylococcus aureus ( S. aureus ) merupakan salah satu  bakteri  Gram  positif  yang  seringkali  menjadi penyebab pneumonia. Pada penelitian oleh Jinghua et al. 2017 S. aureus menduduki peringkat pertama penyebab  pneumonia  yaitu  sebesar  51  dari  119 sampel  yang  terdeteksi  sebagai  Gram  positif.  Dari 51  strain  tersebut  memiliki  resistensi  tinggi terhadap  penisilin,  eritromisin,  tetrasiklin  dan klindamisin (Jinghua et al, 2017). Ini menunjukkan telah terjadi resistensi antibiotik pada S. aureus .
Tingginya Angka resistensi antibiotik menimbulkan sebuah  permasalahan  yaitu  kematian,    yang dilaporkan mencapai 700.000 kasus per tahun pada tahun  2014  (Kementerian  Kesehatan  RI,  2016). Kejadian  resistensi  antibotik  dapat  diminimalkan dengan  pemberikan  obat  kombinasi,  peresepan obat yang rasional, mengontrol kepatuhan pasien, mekanisme  regulasi  yang  tegas,  dan  sistem pendidikan  serta  pengawasan  obat  yang  efisien. Pemberian  resep  antibiotik  secara  rasional  dapat didasarkan  pada  pengalaman  empiris,    spesies bakteri  penyebab  pneumonia  dan  pola  kepekaan bakteri  tersebut terhadap antibiotik (Kementerian Kesehatan  RI,  2016;  WHO,  2016).  Dengan  adanya data  hasil  uji  sensitivitas  bakteri  penyebab
pneumonia  terhadap  antibiotik  diharapkan  dapat meminimalisir terjadinya kasus resistensi antibiotik.

## Metode Penelitian

## Desain penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  desain  penelitian deskriptif  observasional.  Penelitian  dilakukan  di laboratorium  mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran Universitas  Jember  pada  bulan  Nopember  sampai Desember  2018.  Teknik  pengambilan  sampling pada  penelitian  ini  adalah  total  sampling  dengan bahan pemeriksaan berupa sputum (Notoatmodjo, 2012). Sampel  sputum  diperoleh  dari  pasien pneumonia  di  rumah  sakit  Subandi  dan  Paru Jember.

## Bahan dan Reagen
Disk antibiotik klorampenicol, gentamisin, amikasin, levofloksasin,  ampisilin-sulbaktam,  kotrimoksasol, dan siprofloksasin . Darah domba untuk pembuatan media Blood Agar Plate (BAP), Nutrient agar (NA), Nutrient  Broth , Mueller  Hinton  Broth,  Mueller Hinton  Agar,  Eosin  Methylen  Blue (EMB), Mac Conkey ,  media  untuk  IMVIC,  TSIA,  bahan pengecatan Gram, aquades steril, H 2 O 2 , larutan Mc Farland,  minyak  emersi  dan Mannitol  Salt  Agar (MSA).

## Alat
Tabung  reaksi,  cawan  petri,  obyek glass , cover glass ,  mikroskop,  inkubator, beaker  glass, refrigerator, kompor listrik, erlen meyer, ose bulat, ose  lurus,  pipet,  mikropipet,  bunsen,  pinset  dan spuit

## Kultur Bakteri
Sputum  pasien  pneumonia  yang  telah  masuk kriteria inklusi akan diambil menggunakan ose dan ditanam  pada  media  BAP  dengan  cara streaking (pengoresan)  untuk mendapatkan koloni terpisah. Hasil  inokulasi  tersebut  kemudian  diinkubasi selama  24  jam  dengan  suhu  37°C  (Novel  et  al, 2010).

## Pewarnaan Gram
Koloni  terpisah  yang  tumbuh  pada  media  BAP dibuat  preparasi  untuk  pewarnaan  Gram  dan diidentifikasi  di  bawah  mikroskop  dengan perbesaran  1000x.  Hasil  dari  pewarnaan  Gram  ini menjadi  dasar  untuk  menentukan  media  selektif yang  digunakan  untuk  tiap  koloni  terpisah  yang ditemukan  (Novel  et  al,  2010).  Bakteri  dengan morfologi kokus Gram positif dilakukan uji katalase
Uji Katalase
Pada  penelitian  ini,  dilakukan  uji  katalase  dengan metode slide  test .  Berikut  langkahnya,  buat preparat  bakteri  pada  objek  kaca  lalu  teteskan dengan  larutan  H2O2  3%  dan  amati  munculnya gelembung. Jika gelembung muncul maka hasil uji katalase positif menunjukkan bakteri Staphylococcus apabila  tidak  muncul  gelembung maka hasil uji katalase negatif menunjukkan bakteri Streptococcus spp (Reiner, 2013).

## Penanaman pada MSA
Penanaman  bakteri  pada  media  ini  menggunakan teknik goresan T. Proses penanaman dilaksanakan di  dalam  alat laminar  air  flow .  Hasil  penanaman dinkubasi dengan suhu 37°C selama 24 jam. Setelah melakukan inkubasi, lakukan pengamatan dan catat perubahan yang terjadi pada media tersebut (Novel et al, 2010).

## Uji sensitivitas antibiotik
Media  penanaman  menggunakan Mueller  Hinton Agar (MH)  dengan  metode  difusi kirby-Bauer . Antibiotik yang digunakan klorampenicol, gentamisin,  amikasin,  levofloksasin,  ampisilin- sulbaktam, kotrimoksasol, dan siprofloksasin.

## Hasil Penelitian

## Identifikasi patogen penyebab pneumonia
Dari 10 sampel sputum yang diperoleh dua sampel berasal dari RS subandi dan delapan sampel dari RS Paru. Empat sampel teridentifikasi sebagai bakteri batang  Gram  negatif  dan  enam  sampel teridentifikasi  sebagai  bakteri  kokus  Gram  positif (Tabel 1)
Tabel 1. Distribusi bakteri patogen pada sputum pasien pneumonia
Bakteri patogen Jumlah (%) Bakteri Gram + Staphylococcus aureus 6 60 Bakteri Gram - Klebsiella pneumoniae 1 10 Serratia marcescens 1 10 Escherichia coli 1 10 Enterobacter cloacae 1 10 Total 10 100
Bakteri  kokus  Gram  positif  yang  sudah  terdeteksi sebelumnya  diuji  katalase.  Hasil  uji  katalase menunjukkan  adanya  gelembung  pada  preparat,
sehingga  dapat  disimpulkan  enam  isolat  tersebut adalah Staphylococcus  ssp .  Untuk  mengetahui spesies dari isolat tersebut, dilanjutkan penanaman pada  media  MSA,  dengan  hasil  perubahan  warna media  dari  merah  menjadi  kuning  yang  artinya keenam  isolat  tersebut  merupakan  bakteri S. aureus (Gambar 1).
Gambar 1. Hasil identifikasi isolat kokus Gram positif. (a) pewarnaan  Gram  (mikroskop  perbesaran  1000x);  (b) penanaman pada media MSA; (c) uji katalase (+)

## Uji sensitivitas S. aureus terhadap antibiotik
Hasil uji ini menunjukkan resistensi yang tinggi dari bakteri S.  aureus terhadap  antibiotik  ampisilin sulbactam, sedikit resisten terhadap kloramfenikol, kotrimoksasol dan siprofloksasin, dan sensitif tinggi terhadap  gentamisin,  amikasin  dan  levofloksasin (Tabel 2).
Tabel  2.  Resistensi  antibiotik  dari S.  aureus (diameter zona hambat (mm)

## Keterangan: R=Resisten, S=Sensitif

## Pembahasan
Pneumonia merupakan infeksi saluran pernapasan yang  seringkali  disebabkan  oleh  bakteri.  Bakteri penyebab pneumonia tersebut merupakan bakteri
(a) (b) (c)
Gram positif dan Gram negatif. Pada penelitian ini didapatkan sebanyak 60 % bakteri Gram positif dan 40  %  Gram  negatif.  Hasil  yang  sama  juga ditunjukkan pada penelitian oleh Jinghua et al. Dari 269 sampel sputum didapatkan bakteri Gram positif sebanyak  119  dan  117  sisanya  terdeteksi  sebagai Gram  negatif  (Jinghua  et  al,  2017;  Kementrian Kesehatan RI. 2016). Bakteri penyebab pneumonia juga bisa berbeda  berdasarkan keadaan klinis  dan epidemiologi yaitu Community-Acquired Pneumonia (CAP), Hospital  Acquired  Pneumonia (HAP), dan Ventilator Associated Pneumonia (VAP) (Dahlan, 2015).
Penyebab Community Acquired Pneumonia tersering adalah Streptococcus pneumonia . Penyebab  lainnya  yaitu Haemophillus  influenzae , Staphylococcus  aureus,  Klebsiella  pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Legionella pneumophila , dan Moraxella catarrhalis . Sedangkan HAP banyak disebabkan  oleh  bakteri  Gram  negatif  seperti Klebsiella  spp.,  Escherichia  coli,  Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, dan Haemophilus  influenzae ,  meskipun  dapat  juga disebabkan  oleh  bakteri  Gram  positif  seperti Streptococcus  pneumonia dan Staphylococcus aureus. Pernyataan  tersebut  juga  didukung  hasil penelitian terhadap anak-anak dengan CAP di tahun 2015-2017  di  Cina  menunjukkan  angka  tertinggi disebabkan oleh bakteri Gram positif. Berdasarkan hal  tersebut  kemungkinan  sampel  yang  diambil pada  penelitian  ini  adalah  pasien  dengan  CAP (Loscalzo,  2010;  Cilloniz  et  al,  2016;  Patty  et  al, 2016).
Dari 10 sampel pada penelitian ini, 6 sampel yang terdeteksi  sebagai  Gram  positif  termasuk  dalam spesies S. aureus . Staphylococcus aureus merupakan  spesies  dari staphylococcus  ssp. yang patogen  terhadap  manusia  dan  berpotensi mengancam  nyawa  terutama  pada  infeksi pneumonia.  Strain  bakteri  yang  seringkali  sulit dieradikasi adalah methylen resistence staphylococcus  aureus (MRSA).  Pasien  dengan MRSA  ini  memiliki  gejala  klinis  yang  lebih  parah daripada  pasien  dengan  CAP  pneumokokus, termasuk  penerimaan  unit  perawatan  intensif (86,7% vs 34,8%) dan mortalitas rawat inap (13,3% vs 4,4%) (Ragle et al, 2010; Wesley et al 2016).
Hasil uji sensitivitas pada penelitian ini menunjukkan  resistensi S.  aureus yang  tinggi terhadap  ampisilin-sulbactam,  Sedangkan  pada gentamisin  dan  levofloksasin  masih  sensitif. Ampsilin-sulbactam  adalah  kombinasi  antibiotik golongan  β - laktam  dan  penghambat  β -laktamase.
Kombinasi  obat  ini  digunakan  untuk  berbagai penyakit termasuk pneumonia. Pada infeksi saluran
nafas  bawah  ampisilin-sulbactam  memiliki  efikasi yang  lebih  tinggi  dibandingkan  sefalosporin generasi  dua  dan  generasi  tiga  serta  imipenem meskipun tida signifikan hasilnya secara klinis. Lain halnya  pada  kasus  pneumonia  aspirasi  tingkat kesembuhan  dari  obat  ini  sebanding  dengan klindamisin  dan  imipenem  (Kadowaki  et  al,  2005; Yanagihara  et  al,  2006;  Ghoi  and  Jauregui,  2018). Pernyataan  tersebut  tidak  sesuai  dengan  hasil penelitian  ini,  mungkin  karena  beberapa  alasan berikut;  pertama Staphylococcus  aureus adalah bakteri patogen utama penyebab supuratif infeksi, yang  dapat  memproduksi    β -laktamase,  sehingga dengan  mudah  dapat  resisten  terhadap  golongan antibiotik β -laktam seperti penisilin (Katzung et al,
2013;  Boyd,  2017).  Selain  itu,  dalam  beberapa tahun  terakhir,  karena  manajemen  penggunaan antibiotik tidak standar dan tidak rasional, S. aureus juga  berangsur-angsur  menuju  golongan  bakteri yang  resisten  terhadap  beberapa  antibiotik. Resistensi  pada  bakteri  tersebut  terjadi  karena kehadiran  gen  resisten  ErmC,  membuat  dalam subunit 50s dari 23s rRNA metilasi (Stojkovic et al, 2016).

## Kesimpulan
Pada  penelitian  didapatkan  penyebab  terbanyak pneumonia yaitu S. aureus yang berdasarkan hasil uji  sensitivitas  mengalami  resistensi  terhadap ampisilin-sulbactam

## Daftar Pustaka
Boyd  K.  2017. Back  to  the  basics:  community- acquired pneumonia in children . Pediatr Ann. 46: 257-261.
Cilloniz  C, et  al .  2016. Microbial  etiology  of pneumonia:  epidemiology,  diagnosis,  and resistance  patterns .  International  Journal  of Molecular Sciences. 17 (12): 1-18.
Dahlan, Z. 2015. Ilmu Penyakit Dalam Jilid 2. Edisi 6 . Jakarta: Interna Publishing.
Ghooi  and  Jauregui  dalam  Gupta  M.  2018. Ampicillin/Sulbactam. StatPearls  Publishing
LLC. USA https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK52 6117/ (diakses 20 desember 2018)
Jinghua,  M.,  Gaizhuang,  L  dan  Qiaoli  C.  2017. Pathogens and atibiotic resistance of children with community-acquired penumoniae . Biomedical Research; 28(20): 8839-8843
Kadowaki M, et al . 2005. Reappraisal of clindamycin IV  monotherapy  for  treatment  of  mild-to- moderate  aspiration  pneumonia  in  elderly patients . Chest. 127(4):1276-82.
Katzung BG, Masters SB, dan Trevor AJ. 2013. Basic &  Clinical  Pharmacology.  Edisi  12 .  The McGraw-Hill  Companies,  Inc.  B.  U.  Pendit. Farmakologi Dasar  & Klinik. Edisi 12. Jakarta: EGC.
Kementrian  Kesehatan  Republik  Indonesia.  2013. Riset  Kesehatan  Dasar;  RISKESDAS .  Jakarta:
Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan RI.
Kementrian  Kesehatan  RI.  2016. Profil  Kesehatan Kabupaten  Jember .  Jakarta:  Kementrian Kesehatan RI.
Loscalzo, J. 2010. Harrison’s Pulmonary And Critical Care Medicine . United State.: The McGraw-Hill Companies
Notoatmodjo,  S.  2012.  Metodologi  Penelitian Kesehatan. Jakarta: Rineka Cipta
Novel  SS,    Wulandari  AP  dan  Safitri  R.  2010. Praktikum  Mikrobiologi  Dasar .  Jakarta:  CV. Trans Info Media.
Nurul  R,  Hikmah  F,  dan  Pertiwi  DA.  2016. Analisis faktor  penyebab  kejadian  Hospital-Acquired Pneumonia (HAP) pada pasien instalasi rawat inap  kelas  III  Rs  Paru  Jember  tahun  2015 . Jurnal Kesehatan. 4 (3): 1-16.
Patty  RF,  Fatimawali,  dan  Wewengkang  DS.  2016.
Identifikasi  dan  Uji  Sensitifitas  Bakteri  yang
Diisolasi dari Sputum Penderita Pneumonia di
Rsup Prof. Dr. R. D. Kandou-Manado terhadap Antibiotik Ampisillin, Cefixime, dan Siprofloksasin . Pharmacon. 5 (1): 125-134
Ragle BE, et al . 2010. Prevention and Treatment of Staphylococcus  aureus  Pneumonia  with  a  β - Cyclodextrin  Derivative .  Antimicrob  Agents Chemother. 54(1): 298 – 304
Reiner,  K.  2010. Catalase  Test  Protocol . http://www.asmscience.org/content/educati on/protocol/protocol.3226.  [Diakses  pada  31 Oktober 2018].
Stojkovic  V, et  al .  2016. Antibiotic  resistance evolved  via  inactivation  of  a  ribosomal  RNA methylating enzyme . Nucleic Acids  Research.
44(18): 8897 – 8907
Tong, N. 2013. Background Paper 6.22 Pneumonia. A Public Health Approach to Innovation . 1-55.
Wesley  H, et  al .  2016. Staphylococcus  aureus Community-acquired Pneumonia: Prevalence, Clinical Characteristics, and Outcomes . Clinical Infectious Diseases, 63(3): 300 – 309
WHO. 2014. Antimicrobial resistance global report on  surveillance .  Geneva:  World  Health Organization.
WHO.  2016. Pneumonia .  Geneva:  World  Health Organization
Yanagihara K, et al . 2006. Clinical comparative study of sulbactam/ampicillin
and
imipenem/cilastatin  in  elderly  patients  with community-acquired pneumonia . Intern. Med.
45(17)