ISSN-p : 1410-590x ISSN-e : 2614-0063
Aktivitas Antibakteri dan Uji Sifat Fisik Sediaan Gel Dekokta Sirih Hijau ( Piper betle L. ) Sebagai Alternatif Pengobatan Mastitis Sapi
Antibacterial Activity and Physical Evaluation of Piper betle L.  Decoction Gel as an Alternative Treatment for Mastitis
Iramie Duma Kencana Irianto 1* , Purwanto 2 , Marwan Triafrian Mardan 3 1 Prodi DIII Farmasi, Poltekkes Bhakti Setya Indonesia, Yogyakarta
2 Departemen Biologi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta 3 Mahasiswa sarjana, Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta Corresponding author: Iramie Duma Kencana Irianto: Email: iramie.d.k.i@poltekkes-bsi.ac.id
Submitted: 10-03-2020 Revised: 19-03-2020 Accepted: 11-05-2020
ABSTRAK Maastitis  adalah  radang  yang  terjadi  pada  ambing  susu  sapi  dan  dapat  menyebabkan penurunan produktivitas sapi perah secara drastis. Senyawa fenolik alam seperti flavonoid dan tanin diketahui  dapat  membunuh  bakteri S.  aureus dan E.  coli . Dekokta  daun  sirih  hijau  (DDSH)  yang mengandung senyawa fenolik pada konsentrasi 20% diketahui mampu membunuh bakteri S.aureus dan E. coli.  Sediaan  gel  adalah  sediaan  yang  bersifat  menyejukkan,  melembabkan,  mudah penggunaannya.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mencari  formula  terbaik  dengan  memperhatikan daya antibakteri dan sifat fisik gel dalam setiap formula. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa peningkatan konsentrasi DDSH menghasilkan gel dengan pH dan viskositas yang semakin rendah, namun  daya  antibakteri  yang  semakin  besar,  sedangkan  peningkatan  konsentrasi  karbopol menyebabkan  peningkatan  viskositas  gel.  Berdasarkan  daya  antibakteri  dan  sifat  fisik  gel  dalam setiap formula, maka formula 4 (terdiri dari 62,5% DDSH dan 0,875% karbopol) merupakan formula yang optimal dalam penelitian ini.
Kata kunci: gel; dekokta; sirih hijau; anti bakteri
ABSTRACT
Mastitis is inflammation in mammae tissue of pet including cow and able to cause a drastic decrease in cow productivity. Natural phenolic compound such flavonoid and tannin has been known as antibacterial  against  S.aureus  and  E.coli . Piper  betle  decoction  (PBD)  which  contains  phenolic compounds  at  the  concentration  of  20%  was  reported  able  to  eradicate  S.aureus  and  E.coli . Gel  is pharmaceutical dosage form that are soothing, moisturizing, and easy to use . This study aimed to find the best formula which concerned to the antibacterial activity and physical properties of the gel in each formula. This result showed that increasing of PBD concentration resulted a gels with lower pH and viscosity,  but  greater  antibacterial  activity  while  increasing  of  carbopol  concentration  causes  an increase in gel viscosity. Based on the antibacterial activity and physical properties of the gel in each formula, formula 4 (consists of 62,5% PBD and 0,875% carbopol) is the optimal formula in this study. Keywords : gel; decoction; Piper betle; antibacterial
PENDAHULUAN Indonesia  merupakan  negara  dengan kekayaan alam yang melimpah, baik dari sektor peternakan  dan  obat  tradisional.  Pada  sektor peternakan,  sapi  perah  merupakan  jenis  sapi yang  menghasilkan  susu  dalam  jumlah  besar dan  termasuk  salah  satu  ternak  unggulan Indonesia  (Surjowardojo,  2011).  Pada  sektor obat  tradisional,  Indonesia  memanfaatkan bahan  nabati,  hewani,  galenik  yang  telah digunakan  secara  turun  temurun  untuk mengobati  penyakit,  seperti  daun  sirih  hijau
yang  merupakan  tanaman  asli  Indonesia (DepKes RI, 2012).
Pada  pemeliharaan  sapi  perah  sering ditemukan permasalahan kesehatan,
diantaranya  penyakit  mastitis,  yaitu  suatu reaksi  di  dalam  ambing  yang  timbul  akibat infeksi oleh  bakteri, zat kimia, luka bakar atau luka mekanis, yang ditandai dengan peradangan.  Selain  perubahan  patologi  dalam jaringan tersebut, mastitis ini dapat menyebabkan  perubahan  fisik,  kimia  dan bakteriologi  dalam  susu  yang  dihasilkan
(Verbree  dkk.,  2017).  Hasil  penelitian membuktikan bahwa penurunan produksi susu akibat  mastitis  dapat  mencapai  70%  dan menyebabkan  peningkatan  kematian  sapi  per tahun.  Hal  ini  tentu  dapat  berdampak  buruk pada  biaya  perawatan  dan  pengobatan  sapi perah  (Agustinus,  2015;  Marsono  dkk.,  2017). Penyebab  utama  mastitis  adalah  bakteri  Gram positif genus Staphylococcus
sp. dan Streptococcus sp.  serta  bakteri  Gram  negatif seperti Escherichia  coli .  Bakteri  tersebut menyerang secara lokal maupun sistemik pada kelenjar susu sapi perah saat fase nifas hingga awal  menyusui  (Cazoto  dkk.,  2011;  Nurhayati dan  Martindah,  2015),  dan  dapat  berpindah melalui  tangan  pemerah  atau  peralatan pembersih puting susu.
Penggunaan  antibiotik  seperti  penisilin, neomisin,  amoksisilin  dan  streptomisin  biasa digunakan  untuk  mengobati  mastitis.  Namun penggunaan  antibiotik  ini  tidak  selalu  berhasil karena dapat menimbulkan resistensi antibakteri  (Schmelcher  dkk.,  2012).  Obat tradisional  seperti  daun  sirih  mengandung berbagai  macam  senyawa  aktif  yang  bersifat komplementer.  Menurut  Marsono  dkk.  (2017), dekokta  daun  sirih  hijau  yang  dengan konsentrasi  20%  mampu  membunuh  bakteri S.aureus dan E.  coli karena  mengandung flavonoid,  tanin  dan  saponin.  Proses  ekstraksi daun  sirih  dengan  metode  dekokta  dapat mengoptimalkan  proses  ekstraksi  karena proses penyarian dilakukan dalam waktu yang lebih  lama  (90°C  selama  30  menit)  sehingga kandungan  senyawa  aktif  dapat  tersari  lebih banyak.  Untuk  memudahkan  aplikasi  obat secara topikal, dibutuhkan bentuk sediaan yang sesuai,  yang  salah  satunya  adalah  gel.  Sediaan ini mempunyai sifat menyejukkan, melembabkan,  dan  mudah  penggunaannya (Nikam, 2017). Dari dasar pengetahuan ini maka peneliti  tertarik  untuk  memformulasikan dekokta  sirih  hijau  dalam  sediaan  gel  serta
menguji  sifat-sifat  sediaan  termasuk  aktivitas antibakterinya  dalam  rangka  menemukan alternatif pencegahan mastitis pada sapi.

## METODOLOGI

## Bahan penelitian
Serbuk  daun  sirih  hijau  diambil  dari Ngupasan,  Gondomanan,  Yogyakarta;  akuades, karbopol,  metil  paraben,  dan  gliserin  dari  CV. General  Labora,  Yogyakarta;  NaOH,  media nutrient  broth dan nutrient  agar dari  Merck; bakteri S.aureus ATCC 25923 dan bakteri E.coli ATCC  25922  dari  Laboratorium  Mikrobiologi, Fakultas Farmasi UGM.

## Alat
Panci dekokta, seperangkat alat uji daya lekat, autoklaf, laminar air flow , neraca analitik (Ohaus),  inkubator  (Memmert),  mikropipet (Socorex), dan viskometer (Brookfield).

## Jalannya Penelitian
Preparasi Bahan Baku Serbuk  daun  sirih  hijau  sebanyak  100 gram diekstraksi menggunakan metode dekokta dalam  akuades  500  mL,  yaitu  dengan  akuades pada  suhu  90 o C  selama  30  menit.  Ekstrak  cair (dekokta)  yang  diperoleh  segera  digunakan untuk membuat sediaan gel.
Formulasi Gel Pembuatan sediaan gel dilakukan sesuai komposisi pada Tabel I. Karbopol dikembangkan dengan sebagian air panas, dan diaduk hingga homogen dalam mortar. Larutan NaOH ditambahkan ke dalam larutan karbopol dan  diaduk  hingga  membentuk  massa  yang kental, selanjutnya disebut dengan campuran 1. Metil paraben dicampurkan dengan gliserin dan DDSH  hingga  homogen.  Campuran  ini ditambahkan  sedikit  demi  sedikit  ke  dalam campuran  1  dan  diaduk  hingga  homogen.
Tabel I. Formula gel dekokta daun sirih hijau
Bahan Konsentrasi (%) F1 F2 F3 F4 F5 Dekokta daun sirih 10 27,5 45 62,5 80 Karbopol 2 1,625 1,25 0,875 0,5 NaOH 0,8 0,65 0,5 0,35 0,2 Metil paraben 15 15 15 15 15 Glliserin 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 Akuades Ad 100 Ad 100 Ad 100 Ad 100 Ad 100
Sisa akuades ditambahkan ke dalam campuran tersebut hingga mencapai 100%. Penyimpanan dilakukan  pada  wadah  tertutup  rapat, terlindung  cahaya  pada  suhu  ruang  (±25 o ). Dalam penelitian ini ingin diketahui formula uji yang paling baik diantara kelima formula dalam hal  efektivitas  antibakterinya  tetapi  tetap memenuhi  syarat  fisik  sebagai  sediaan  gel sebagaimana  uji  yang  dilakukan  dalam penelitian ini.
Uji Sifat Fisik Gel Organoleptik Uji  organoleptis  dilakukan  pada  hasil  sediaan gel DDSH yang meliputi pengamatan warna, bau, dan bentuk sediaan gel.
Homogenitas Sediaan  diambil  pada  3  titik sampling yang berbeda  dan  dioleskan  pada  kaca  transparan. Jika  tidak  ada  butiran  kasar  maka  sediaan  uji dinyatakan homogen (Nikam, 2017).
Nilai pH Uji pH sediaan gel diukur dengan menggunakan stik  pH  universal  dengan  cara  dicelupkan  ke dalam  sampel  gel.  Nilai  pH  sediaan  yang memenuhi  kriteria  pH  kulit  dan  tidak mengiritasi yaitu pH 4,5-6,5 (Okuma dkk., 2015; Nikam, 2017).
Daya Sebar Sebanyak  0,5  gram  sediaan  yang  diletakkan pada  bagian  tengah  kaca  bulat  berskala, kemudian  ditutup  dengan  kaca  bulat  lain. Pengukuran  diameter  penyebaran  sediaan secara  membujur  dan  melintang,  serta dilakukan  tiap  penambahan  beban  50  gram hingga  berat  total  150  gram.  Daya  sebar  yang memenuhi  syarat  yaitu  5-7  cm  (Yusuf  dkk., 2017).
Daya Lekat Uji daya lekat dilakukan dengan meletakkan 0,5 gram gel di atas kaca obyek kemudian ditutup dengan  kaca  obyek  lainnya,  dan  diberi  beban beban  1  kg  selama  3  menit.  Penentuan  daya lekat  berupa  waktu  yang  diperlukan  sampai kedua  kaca  obyek  terlepas.  Syarat  daya  lekat yaitu lebih dari 1 detik (Yusuf dkk., 2017).
Viskositas Uji viskositas dilakukan menggunakan viscometer  terhadap  100  mL  sediaan  gel.
Viskositas gel yang baik sebesar 2000 - 4000 cps (Ardana dkk., 2015).
Uji Aktivitas Antibakteri Gel Terhadap S.aureus dan E.coli Pembuatan suspensi bakteri Pembuatan  suspensi  bakteri  dilakukan dengan  melakukan  inokulasi  bakteri S.  aureus atau E.  coli ke  dalam  20  mL  media  NB,  lalu diinkubasi  pada  suhu  37 o C  pada shaker incubator dengan kecepatan 150 rpm diperoleh nilai OD 600 sebesar 0,35-0,4.
Uji difusi dengan sumuran Preparasi  uji  difusi  dilakukan  dengan mencampur 700 µL suspensi bakteri dengan 70 mL  NA  dalam  Erlenmeyer,  diaduk  hingga homogen, kemudian campuran tersebut dituang sebanyak 20 mL untuk tiap petri, tunggu hingga memadat. Tiap sumuran dengan diameter 6 mm diisi  dengan  50  mg  sediaan.  Lakukan  inkubasi pada  suhu  37 o C  selama  semalam.  Amati  zona hambat yang terbentuk dan ukur dengan jangka sorong.  Daya  hambat  ditunjukkan  dengan menghitung  selisih  antara  zona  hambat keseluruhan dengan diameter plug (6 mm).
Uji Stabilitas dengan Cycling Test Uji  stabilitas  viskositas  dan  aktivitas antibakteri  terhadap S.  aureus serta E.  coli dilakukan dengan metode cycling test selama 6 siklus. Pada tiap siklusnya, sediaan uji disimpan pada  suhu  4 o C  selama  24  jam  dilanjutkan penyimpanan  pada  suhu  40 o C  selama  24  jam (Dewi dkk., 2014).
Analisis Data Analisis  data  dilakukan  terhadap  stabilitas viskositas dan aktivitas antibakteri sebelum dan sesudah  penyimpanan  dengan  metode cycling test .  Analisis  data  dilakukan  menggunakan perangkat lunak SPSS versi 22 yaitu dengan uji normalitas  Kolmogorov-Smirnov  dilanjutkan dengan uji T dengan taraf kepercayaan 95%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Secara  teoritis,  peningkatan  konsentrasi zat  aktif  akan  meningkatkan  aktivitas antibakterinya.  Namun,  dengan  meningkatkan zat aktif belum  tentu  dapat menghasilkan sifat fisik  yang  memenuhi  syarat.  Oleh  karena  itu, pada penelitian ini dilakukan variasi konsentrasi dekokta daun sirih yang lebar, yaitu mulai  dari   10%   hingga  80%,   dengan   tujuan
untuk  mengetahui  pengaruh  konsentrasi tersebut  terhadap  aktivitas  dan  sifat  fisik  gel dengan lebih nyata.
Karbopol  merupakan gelling agent yang bersifat  asam  dan  dapat  efektif  membentuk konsistensi  yang  kental,  bersih  tanpa gelembung  udara,  membentuk  gel  yang transparan  pada  pH  netral,  sehingga  dalam pembuatan  gel  dengan  karbopol  diperlukan proses  netralisasi  agar  efektivitas  karbopol dalam  meningkatkan  viskositas  dapat  tercapai (Nikam,  2017),  yang  mana  dapat  dilakukan dengan menambahkan natrium hidroksida yang bersifat basa. Karbopol juga memiliki kelebihan yaitu tidak menimbulkan hipersensitivitas serta melekat  baik  pada  kulit  (Tambunan  dan Sulaiman, 2018). Penggunaan karbopol sebagai gelling  agent yaitu  berkisar  0,5-2%.  Karbopol merupakan gelling  agent yang  paling  baik dibanding  polimer  lain  yaitu  karboksimetil siloglukan,  karboksimetil  selulosa  natrium, metil selulosa, dan hidroksipropil metilselulosa. Sediaan  gel  menggunakan  polimer  karbopol memberikan  viskositas  yang  paling  tinggi namun  tetap  menghasilkan  daya  sebar  yang baik,  homogen  dan  memiliki  daya  lekat  yang baik pada kulit (Bhalekar dkk., 2015).
Zat  aktif  dan  karbopol  merupakan komposisi  penting  dalam  pembuatan  sediaan gel.  Selain  komponen  tersebut,  pengawet  dan humektan  juga  diperlukan  dalam  komposisi
sediaan gel. Pengawet berperan penting dalam mengontrol  pertumbuhan  mikroba  dan  jamur dalam
proses penyimpanan dan pendistribusian.  Metil  paraben  merupakan salah  satu  jenis  pengawet  yang  umum digunakan  dalam  sediaan  farmasi  yang  larut dalam  air  (Mirsonbol  dkk.,  2014).  Suatu humektan
dapat digunakan untuk mempertahankan  kelembaban  kulit  karena dapat menyimpan air di dalam lapisan stratum corneum kulit  sehingga  kulit  menjadi  lembab (kelembaban  70%).  Bahan  yang  dapat digunakan  sebagai  humektan  dan  mencegah kehilangan  air  dalam  lapisan stratum  corneum yaitu gliserin (Levi dkk., 2011).

## Evaluasi sifat fisik formula gel
Hasil  uji  organoleptis  lima  formula  gel dekokta daun sirih diperoleh aroma khas daun sirih. Konsentrasi dekokta 10% memiliki aroma yang lemah, sedangkan sediaan dengan dekokta 27,5%,  45%,  62,5%  dan  80%  memiliki  aroma yang kuat (Tabel II).
Kelima  formula  gel  yang  dibuat menghasilkan sediaan yang homogen, dibuktikan dengan tidak ada butiran kasar jika gel dioleskan pada kaca uji. Formula 2, 3, dan 4 menunjukkan  konsistensi  yang  lebih  homogen dibandingkan formula 1 dan 5. Pada formula 1, jumlah  akuades  dan  karbopol  yang  digunakan jauh  lebih  banyak,  sehingga  menghasilkan
Tabel II. Hasil uji pH, daya sebar, dan daya lekat gel dekokta daun sirih hijau Formula pH Daya sebar (cm) Daya lekat (detik) F1 6,50 3,20 ± 0,17 11,79 ± 0,96 F2 6,50 3,33 ± 0,08 6,21 ± 0,53 F3 6,00 4,38 ± 0,15 2,45 ± 0,14 F4 6,00 6,13 ± 0,49 0,27 ± 0,06 F5 5,50 Terlalu menyebar Tidak dapat melekat
Semakin  tinggi  konsentrasi  menghasilkan  warna  gel  yang  semakin  gelap,  seperti  tertera  pada Gambar 1.
F1 F2
F3
F4
F5
Gambar  1. Penampakan fisik gel dekokta daun sirih hijau kelima formula sebelum penyimpanan
dengan metode cycling test .
massa  yang  sangat  kental  sehingga  dapat meningkatkan kesulitan
dalam proses pencampuran.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa semakin  tinggi  konsentrasi  dekokta  daun  sirih maka  menghasilkan  pH  sediaan  yang  semakin rendah.  Hal ini dikarenakan daun sirih  banyak mengandung  senyawa  fenol  seperti  kavikol, eugenol, kavibetol, piperitol, timol, serta asam- asam  organik  seperti  asam  stearat,  asam prokatekuat,  dan  asam  galat  (Pradhan  dkk., 2013). Nilai pH kelima formula sediaan (Gambar 2)  memenuhi  kriteria  pH  sediaan  yang  tidak mengiritasi kulit yaitu pH 4,5-6,5 (Okuma dkk.,
2015; Nikam, 2017). Hasil tersebut menunjukkan  bawah  penambahan  natrium hidroksida yang digunakan sudah cukup untuk menyeimbangkan  pH  sediaan  sehingga  sesuai dengan  pH  kulit.  Nilai  pH  yang  lebih  rendah dapat menyebabkan iritasi  pada kulit sapi dan berdampak negatif bagi bayi sapi saat menyusui. Nilai pH yang terlalu tinggi dapat menyebabkan kekeringan  pada  kulit  dan  jika  terus  berlanjut dapat  menyebabkan  iritasi  kulit,  seperti  gatal, ruam,  memerah  dan  berisik  (Bhalekar  dkk., 2015).
Secara  teoritis,  daya  lekat  yang memenuhi syarat sediaan kosmetik yaitu lebih
dari  1  detik.  Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa  formula  dengan  konsentrasi  karbopol 1,25-2%  yang  memenuhi syarat uji daya lekat, yaitu  formula  1,  2,  dan  3,  yaitu  sebesar 2,45±0,14  detik,  6,21±0,53  detik,  dan 11,79±0,96 detik (Gambar 2). Jumlah karbopol sebagai gelling  agent yang  semakin  berkurang akan mengubah konsistensi sediaan gel menjadi lebih cair sehingga daya lekatnya berkurang. Uji daya  lekat  ini  menunjukkan  kemampuan sediaan dalam melekat pada tempat aplikasinya. Semakin  lama  sediaan  dapat  melekat  maka semakin  lama  zat  aktif  dapat  kontak  dengan tempat  aplikasi  sehingga  diharapkan  efek antibakterinya  dapat  lebih  optimal  (Ismarani dkk, 2014; Yusuf dkk., 2017) Hasil uji daya sebar menunjukkan bahwa semakin  tinggi  konsentrasi  dekokta  daun  sirih dan semakin rendah konsentrasi karbopol maka semakin  rendah  daya  sebarnya  (Gambar  2). Formula  dengan  dekokta  daun  sirih  80%  dan karbopol  0,5%  menghasilkan  sediaan  gel  yang sangat  encer  dan  saat  diuji  terlalu  menyebar pada seluruh permukaan alat uji sehingga tidak dapat  diukur  daya  sebarnya.  Uji  ini menunjukkan  kemampuan  sediaan  dalam menyebar  pada  permukaan  kulit  sehingga mempermudah  penggunaan  sediaan  saat
Gambar  2. Hasil uji sifat fisik gel dekokta daun sirih hijau sebelum penyimpanan dengan metode cycling test berupa uji pH (a), daya sebar (b), dan daya lekat (c).
diaplikasikan. Sediaan yang sulit menyebar atau terlalu  menyebar  akan  mengurangi  tingkat kenyamanan  penggunaan  dan  efektivitas penggunaan  sediaan,  sedangkan  sediaan  yang terlalu encer akan menyebabkan daya lekatnya berkurang  sehingga  waktu  kontak  zat  aktif dengan tempat aplikasi juga berkurang. Hanya formula  4  dengan  konsentrasi  dekokta  daun sirih  62,5%  dan  karbopol  0,875%  (Tabel  II) yang menghasilkan daya sebar yang baik, yaitu sebesar  6,13±0,49  cm  (Bhalekar  dkk.,  2015; Nikam, 2017; Yusuf dkk., 2017).

## Evaluasi viskositas formula gel
Viskositas  mempengaruhi  daya  sebar sediaan.  Semakin  tinggi  viskositas  maka  daya sebar  semakin  rendah,  dan  sebaliknya (Bhalekar  dkk.,  2015).  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  formula  4  yang  paling mendekati syarat viskositas yang baik menurut Ardana  dkk.  (2015),  yaitu  dengan  konsenrasi karbopol  sebesar  0,875%  (Tabel  III).  Formula dengan konsentrasi karbopol
1,25-2% menghasilkan gel dengan viskositas yang tinggi (kental)  yaitu  lebih  dari  30.000  cps  sehingga menghasilkan daya sebar yang rendah, di bawah 5 cm, sedangkan formula 5 dengan konsentrasi karbopol  0,5%  menghasilkan  gel  dengan viskositas  sangat  encer  sehingga  sulit  diamati daya  sebarnya  (Tabel  II  dan  III).  Hasil  pada Tabel  III  menunjukkan  bahwa  semakin  tinggi konsentrasi dekokta daun sirih maka viskositas gel yang dihasilkan menjadi lebih rendah. Hal ini disebabkan dekokta daun sirih hijau mengandung  senyawa  yang  memberikan kondisi asam pada sediaan. Kondisi asam dapat menurunkan efektivitas dari karbopol sehingga sediaan  yang  dihasilkan  akan  menjadi  lebih encer  (Mardikasari  dkk.,  2017;  Nikam,  2017; Pradhan dkk., 2013).
Dari Tabel III dapat dilihat bahwa setelah sediaan  disimpan  dalam  suhu  rendah  maka
akan terjadi pelepasan air dari sediaan. Namun jika gelling  agent dapat  bekerja  kembali  di bawah tekanan yang diinduksi oleh es sebelum koalesens terjadi maka sistem gel tersebut akan stabil atau tidak terjadi pemisahan (Dewi dkk., 2014).  Hasil  uji  normalitas  Kolmogorov- Smirnov  dengan  perangkat  lunak  SPSS menunjukkan  bahwa  data  telah  terdistribusi merata, sehingga dapat dilanjutkan uji  T. Hasil uji  statistik  ini  menunjukkan  bahwa  nilai viskositas  sebelum  dan  sesudah  penyimpanan seluruh  formula  tidak  stabil,  yaitu  mengalami perubahan secara signifikan (p < 0,05).
Formula  1-4  mengalami  penurunan viskositas yang signifikan, hingga hampir 50%. Namun,  hanya  formula  4  yang  masih  masuk dalam rentang viskositas gel yang baik menurut Ardana  dkk.  (2015).  Hal  ini  membuktikan sediaan  gel  yang  dihasilkan  tidak  tahan terhadap  penyimpanan  pada  perubahan  suhu ekstrim  sehingga  suhu  penyimpanan  sediaan perlu diperhatikan. Viskositas dipengaruhi oleh suhu,  yang  mana  suhu  yang  meningkat  akan mengurangi  gaya  antar  atom  dengan  cara memperbesar  jarak  antara  atom  sehingga viskositas sediaan menjadi menurun (Dewi dkk., 2014).  Fomula  5  setelah  penyimpanan  dengan metode cycling test menjadi lebih kental hingga 5 kali lipat. Pada proses penyimpanan tersebut memungkinkan  kandungan  air  dalam  gel berkurang  sehingga  menyebabkan  gel  lebih kental.  Kandungan  air  dengan  dekokta konsentrasi tinggi pada formula 5 lebih banyak dibanding  dengan  formula  yang  lain,  sehingga memungkinkan viskositas gel berubah menjadi lebih tinggi (Mardikasari dkk., 2017).
Karbopol  efektif  sebagai gelling agent pada pH netral, yaitu suatu kondisi dimana tidak ada muatan ion dalam larutan. Pada pH netral, konsentrasi  ikatan  polimer  yang  terbentuk dapat  meningkat.  Selain  itu,  afinitas  pelarut terhadap   polimer   maka   akan    meningkatkan
Tabel III. Hasil uji viskositas gel dekokta daun sirih hijau
Formula Viskositas (cps) Sebelum cycling test Setelah cycling test F1 54.587 ± 839 29.280 ± 480* F2 45.400 ± 3.683 26.733 ± 61* F3 30.773 ± 1.548 16.027 ± 441* F4 7.227 ± 1.092 4.040 ± 69* F5 278 ± 7 1.703 ± 55*
Tanda* menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan antara sebelum dan sesudah cycling test
pembentukan struktur jaringan pembentuk gel. Peningkatan struktur jaringan dan kemampuan mengembang  dari  polimer  tersebut  dapat meningkatkan  viskositas  sediaan.  Afinitas karbopol terhadap etanol lebih tinggi dibanding air sebagai pelarut (Nikam, 2017). Penggunaan air  sebagai  pelarut  dalam  penelitian  ini  dapat menjadi  penyebab  penurunan  efektivitas karbopol  dalam  meningkatkan  viskositas sediaan.

## Evaluasi aktivitas antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan menggunakan  metode  difusi  padat  dengan sumuran (Gambar 3). Metode ini dipilih karena mudah  dalam  melakukan sampling ,  aplikatif, serta mudah dalam pengamatan dan analisisnya. Bakteri S.  aureus yang  digunakan merupakan  bakteri  Gram  positif  yang  dapat menyerang  puting  sapi,  sedangkan  bakteri E. coli merupakan bakteri Gram negatif yang ikut andil dalam proses terjadinya penyakit mastitis pada sapi. Pemilihan kedua bakteri yang berasal dari  jenis  Gram  yang  berbeda  ini  diharapkan dapat  mewakili  bakteri-bakteri  yang  dapat menyebabkan mastitis pada sapi (Verbree dkk., 2017).
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  pada penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  pada konsentrasi dekokta daun sirih 10% dan 27,5% pada  sediaan  gel  belum  mampu  membunuh bakteri  uji.  Hal  ini  dapat  dilihat  dari  tidak adanya zona jernih di sekeliling sumuran yang berisi  gel  formula  1  dan  2  (Tabel  IV).  Faktor yang dapat menghambat aktivitas tersebut yaitu adanya zat aktif yang terjebak dalam sediaan gel sehingga  akan  mengalami  kesulitan  untuk
berdifusi  pasif  keluar  sediaan  menuju  lokasi target, yaitu media pertumbuhan bakteri.
Konsentrasi terendah dekokta daun sirih dalam  sediaan  gel  yang  masih  mampu membunuh  bakteri  uji  yaitu  sebesar  45%, dengan konsentrasi karbopol 1,25%.
Perbandingan  konsentrasi  zat  aktif  dengan gelling agent sudah  cukup  untuk  memberikan peluang  bagi  zat  aktif  berdifusi  pasif  keluar sediaan  menuju  media  kultur  dan  membunuh bakteri yang ada pada media tersebut. Hasil uji aktivitas  antibakteri  juga  menunjukkan  bahwa semakin  tinggi  konsentrasi  dekokta  daun  sirih maka akan semakin tinggi aktivitas antibakterinya  karena  semakin  banyak  pula kandungan  zat  aktif  yang  dapat  membunuh bakteri uji.
Senyawa  flavonoid  dapat  menurunkan permeabilitas dinding sel bakteri S. aureus dan E.  coli .  Senyawa  ini  memiliki  kemampuan melakukan  denaturasi  protein  sel  bakteri  dan merusak  membran  sel.  Sementara  itu,  saponin mampu  menurunkan  tegangan  permukaan dinding sel bakteri dan merusak permeabilitas membran.
Adanya
gangguan tegangan permukaan  dinding  sel  menyebabkan  zat antibakteri dengan mudah masuk ke dalam sel sehingga sel dapat mengalami kematian. Tanin merupakan
antibakteri dengan
cara menghambat
pembentukan dinding sel sehingga menyebabkan sel bakteri menjadi lisis. Adanya  ikatan  antara  tanin  dan  dinding  sel bakteri  menyebabkan  kemampuan  menempel bakteri  menjadi  inaktif  dan  menghambat pertumbuhannya (Marsono dkk., 2017).
Hasil  uji  stabilitas  aktivitas  terhadap bakteri S.  aureus (Tabel  IV)  dengan  metode cycling  test untuk  formula  3  tidak  mengalami
Gambar 3. Penampakan uji aktivitas antibakteri gel dekokta daun sirih hijau terhadap bakteri S.aureus (a) dan E.coli (b) sebelum penyimpanan dengan metode cycling test.
penurunan aktivitas yang signifikan (P < 0,05), sedangkan  untuk  formula  4  dan  formula  5 mengalami penurunan
aktivitas secara signifikan (P > 0,05). Hasil uji stabilitas aktivitas terhadap bakteri E. coli dengan metode cycling test untuk  formula  3  dan  4  tidak  mengalami penurunan aktivitas yang signifikan (P < 0,05), sedangkan  untuk  formula  5  mengalami penurunan aktivitas yang signifikan (P > 0,05). Hal  ini  mungkin  terjadi  karena  senyawa  aktif dari daun sirih hijau mengalami oksidasi karena pemanasan.  Senyawa  fenolik  dalam  daun  sirih hijau  seperti  eugenol,  piperitol,  α - terpineol,  β - sitosterol,  dan  kavikol  mudah  mengalami oksidasi  (Pradhan  dkk.,  2013).  Secara  garis besar,  aktivitas  gel  dekokta  daun  sirih  hijau terhadap  bakteri E.  coli (Gram  negatif)  lebih tinggi  dibanding  aktivitasnya  terhadap  bakteri S. aureus (Gram positif).

## KESIMPULAN
Semakin  besar  konsentrasi  dekokta, sediaan akan semakin encer, semakin asam dan semakin besar daya antibakterinya, sedangkan semakin besar konsentrasi karbopol, viskositas gel  akan  semakin  besar.  Dari  hasil  kombinasi data setiap formula, yaitu dengan memperhatikan daya antibakteri dan sifat fisik gel  dalam  setiap  formula,  maka  formula  4 merupakan formula yang paling optimal dalam penelitian ini.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  kepada  Yayasan Bhakti  Setya  Indonesia  selaku  pemberi  dana penelitian  ini,  serta  staf  Laboratorium Mikrobiologi  dan  Laboratorium  Teknologi Farmasi,  Fakultas  Farmasi,  Universitas  Gadjah Mada,  Yogyakarta,  yang  telah  membantu penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Agustinus,  L.,  2015,  Efektivitas  Antibakteri Eugenol  Minyak  Daun  Cengkeh  ( Clove Leaf  Oil )  terhadap  Bakteri  Penyebab Mastitis  Subklinis  Sapi  Perah, Disertasi , Universitas Brawijaya, Malang. Ardana,  M.,  Aeyni,  V.,  dan  Ibrahim,  A.,  2015, Formulasi dan Optimasi Basis Gel HPMC ( Hidroxy Propyl Methyl Cellulose ) dengan Berbagai  Variasi  Konsentrasi, J.  Trop. Pharm. Chem. , 3 (2):101-108. Bhalekar, M.R., Madgulkar, A.R., dan Kadam, G.J.,
2015,  Evaluation  of  Gelling  Agent  for Clindamycin  Phosphate  Gel, World  J.
Pharm.  Pharmaceutic.  Sci. , 4 (7):2022- 2033.
Cazoto, L.L., Martins, D., Ribeiro, M.G., Durán, N., dan  Nakazato,  G.,  2011,  Antibacterial Activity of Violacein Against
Staphylococcus  aureus isolated  from Bovine Mastitis, J. Antibiot. , 64 :395-397. DepKes RI, 2012, Peraturan Menteri Kesehatan Republik  Indonesia  Nomor  007  Tahun 2012 Tentang Registrasi Obat Tradisional, DepKes RI, Jakarta.
Dewi,  R.,  Anwar,  E.,  dan  Yunita,  K.S.,  2014,  Uji Stabilitas  Fisik  Formula  Krim  yang Mengandung  Ekstrak  Kacang  Kedelai ( Glycine max ), Pharm. Sci. Res. , 1 (3):194- 208.
Ismarani,  D.,  Pratiwi,  L.,  dan  Kusharyanti,  I.,
2014, Formulasi Gel Pacar Air ( Impatiens balsamina Linn.) terhadap Propionibacterium acnes dan
Staphylococcus  epidermidis , Pharm.  Sci. Res. , 1 (1):30-45.
Levi, K., Kwan, A., dan Rhines, A.S., 2011, Effect of Glycerin on Drying Stresses in Human Stratum  Corneum, J.  Dermatol.  Sci. , 61
(2):129-131.
Tabel IV. Hasil uji aktivitas gel dekokta daun sirih hijau terhadap bakteri S.aureus dan E.coli .
Formula Terhadap Bakteri S.aureus (mm) Terhadap Bakteri E.coli (mm) Sebelum cycling test Sesudah cycling test Sebelum cycling test Sesudah cycling test F1 0 0 0 0 F2 0 0 0 0 F3 1,77 ± 0,8 1,11 ± 0,57 3,13 ± 1,58 1,63 ± 0,29 F4 4,82 ± 0,7 0,71 ± 0,13* 3,85 ± 1,52 2,62 ± 0,23 F5 5,73 ± 0,3 0,70 ± 0,55* 7,00 ± 2,26 3,80 ± 0,20*
Tanda * menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan antara sebelum dan sesudah cycling test Hasil uji merupakan diameter zona hambat dikurangi dengan diameter plug (6 mm).
Mardikasari,  S.A.,  Mallarangeng,  A.N.T.A.,
Zubaydah,  W.O.S.,  dan  Juswita,  E.,  2017, Formulasi  dan  Uji  Stabilitas  Lotion  dari
Ekstrak Etanol Daun Jambu Biji ( Psidium guajava L.)  Sebagai  Antioksidan, Jurnal Farmasi,  Sains,  dan  Kesehatan , 3 (2):28- 32.
Marsono, O.S., Susilorini, T.E., dan Surjowardojo,
P.,  2017,  Pengaruh  Lama  Penyimpanan Dekok  Daun  Sirih  Hijau  ( Piper  Betle L.) terhadap Aktivitas Daya Hambat Bakteri Streptococcus agalactiae Penyebab
Matitis pada Sapi Perah, Jurnal Ilmu dan Teknologi Hasil Ternak , 12 (1):47-60. Mirsonbol,  A.Z.,  Issazadeh,  K.,  Pahlaviani, M.R.M.K.,  dan  Momeni,  N.,  2014,
Antimicrobial Efficacy of The Methylparaben  and  Benzoate  Sodium Against Selected Standard Microorganisms, Clinical and Environmental  Isolates  In  Vitro, Indian
Journal  of  Fundamental  and  Applied  Life Sciences , 4 (4):363-367.
Nikam,  S.,  2017,  Anti-acne  Gel  of  Isotretinoin: Formulation  and  Evaluation, Asian J. Pharm. Clin. Res. , 10 (11):257-266. Nurhayati,  I.S.,  dan  Martindah,  E.,  2015, Pengendalian  Mastitis  Subklinis  melalui Pemberian  Antibiotik  Saat  Periode Kering  pada  Sapi  Perah, WARTAZOA , 25 (2):65-74.
Okuma,  C.H.,  Andrade,  T.A.M.,  Caetano,  G.F., Finci, L.I., Maciel, N.R., Topan, J.F., Cefali, L.C.,  Polizello,  A.C.M.,  Carlo,  T.,  Rogerio, A.P., Sapadaro, A.C.C., Isaac, V.L.B., Frade,
M.A.C.,  dan  Rocha-Filho,  P.A.,  2015,
Development  of  lamellar  gel  phase
emulsion  containing  marigold oil ( Calendula  officinalis )  as  a  potential modern  wound  dressing, Eur.  J.    Pharm. Sci. , 71 :62-72.
Pradhan, D., Suri, Dr.K.A., Pradhan, Dr.D.K., dan Biswasroy, P., 2013, Golden Heart of the Nature: Piper  betle L., J.  Pharmacogn.
Phytochem. , 1 (6):147-167.
Schmelcher, M. Powell, A.N., Becker, S.C., Camp,
M.J.,  dan  Donovan,  D.M.,  2012,  Chimeric Phage  Lysins  Act  Synergistically  with Lysostaphin  To  Kill  Mastitis-Causing Staphylococcus  aureus  in  Murine Mammary Glands, Appl. Environ. Microbiol. , 78 (7):2297-2305. Surjowardojo,  P.  2011.  Tingkat  Kejadian Mastitis  Dengan  Whiteside  Test  Dan Produksi  Susu  Sapi  Perah  Friesien Holstein. J. Ternak Tropika. 12 (1): 46-55. Tambunan,  S.,  dan  Sulaiman,  T.N.S.,  2018, Formulasi  Gel  Minyak  Atsiri  Sereh dengan  Basis  HPMC  dan  Karbopol, Majalah Farmaseutik , 14 (2):87-95.
Verbree,  C.T.,  Dätwyler,  S.M.,  Meile,  S.,
Eichenseher, F., Donovan, D.M., Loessner, M.J.,  dan  Schmelcher,  2018,  Corrected and  Republished  from:  Identification  of Peptidoglycan Hydrolase Constructs with Synergistic  Staphylolytic  Activity  in Cow’s  Milk, Appl.  Environ.  Microbiol. , 84 (1):1-15.
Yusuf, A.L., Nurawaliah, E., dan Harun, N., 2017, Uji  Efektivitas  Gel  Ekstrak  Etanol  Daun Kelor  ( Moringa  oleifera L.)  sebagai Antijamur Malassezia  furfur , Kartika: Jurnal Ilmiah Farmasi , 5 (2):62-67.