## PERAN SENYAWA BUAH MENGKUDU (Morinda citrifolia) TERHADAP EKSPRESI CD62L PADA LIMPA MENCIT

## YANG DIBERI PAPARAN Staphylococcus aureus

## Dia Faroka, Sri Rahayu, Muhaimin Rifa’i
Progam Magister Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas Brawijaya, Malang vamazika@yahoo.com

## Abstrak
S.  aureus  dapat  menyebabkan  penyakit  toxic  shock  syndrome,  endokartitis,  osteomyelitis, pneumonia,  sepsis,  serta  penyakit  meningitis.  Superantigen  bakteri  ini  dapat mempengaruhi  sistem  imun  melalui  sekresi  sitokin  proinflamasi  secara  besar-besaran. Resistensi  S.  aureus  terhadap  vancomysin,  mendorong  masyarakat  untuk  mencari  obat alternatif  yang  berasal  dari  bahan  alam,  yaitu  tanaman  obat  tradisional.  Salah  satu tanaman  obat  tradisonal  yang  memiliki  potensi  sebagai  anti  mikroba,  anti  kanker,  anti inflamasi    dan  antioksidan  adalah  buah  mengkudu.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  peran  senyawa  dari  ekstrak  air  buah  mengkudu  terhadap  ekspresi CD4 + CD62L + (  sel  T  naif  )  dan  CD4 + CD62L - (  sel  T  memori  )  pada  limpa  mencit  yang diberi  paparan  S.  aureus.  Pada    penelitian  ini,    mencit  dibagi  menjadi  2  kelompok  yaitu infeksi  dan  non  infeksi.  Kedua  kelompok  tersebut  diberi  ekstrak  air  M.  citrifolia  dengan dosis  berturut-turut  25  mg/kgBB,  100  mg/kgBB,  dan  300  mg/kgBB  selama  20  hari kemudian  diinfeksi  S.  aureus  sebanyak  1  x  10 9 sel.  Pengamatan  jumlah  relatif  sel TCD4 + CD62L + dan CD4 + CD62L - dianalisis menggunakan flow cytometry melalui progam CellQuest  dan  dilakukan  uji  statistik  ANOVA  RAL  faktorial  dan  uji  BNJ  melalui  progam SPSS 16. Hasil penelitian menunjukkan bahwa, pada kelompok non infeksi pemberian dosis 25  mg/kgBB  dan  100  mg/kgBB  tidak  berbeda  nyata  dengan  kontrol  normal,  sedangkan dosis  300  mg/kgBB  terjadi  penurunan  sel  T  naif  (P<0.05).  Sel  T  naif  pada  kontol  infeksi mengalami penurunan dibandingkan kontrol normal (P<0.05). Sel T memori pada kontrol infeksi  mengalami  peningkatan  dibandingkan  kontrol  normal  (P<0.05)  Pada  kelompok infeksi dosis 100 mg/kgBB mampu menurunkan jumlah sel T memori (P<0.05).
Kata kunci : Morinda citrifolia, Staphylococcus aureus, CD4 + CD62L + , CD4 + CD62L - .

## Abstract
S.  aureus  can  cause  diseases  such  as  toxic  shock  syndrome,  endokartitis,  osteomyelitis, pneumonia,  sepsis,  and  meningitis.  The  bacterial  superantigen  can  affect  the  immune system through the secretion of proinflammatory cytokines massively. Resistance S. aureus against  vancomysin,  is  encouraged  people  to  seek  for  alternative  drugs  derived  from natural  materials,  namely  traditional  medicinal  plants.  One  of  the  traditional  medicinal plants that have potential as anti-microbial, anti-cancer, anti-inflammatory and antioxidant is noni fruit. The purpose of this research to determine the role of compound extract of noni juice on the expression of CD4 + CD62L + (naive T cells) and CD4 + CD62L - (memory T cells) in  the  spleen  of  mice  that  were  given  exposure  to  S.  aureus.  In  this  research,  mice  were divided into 2 groups: infectious and non-infectious. Both groups were given water extract M. citrifolia with successive doses of 25 mg/kgBW, 100 mg/kgBW, and 300 mg/kgBW for 20 days  and  then  infected  with  S.  aureus  as  many  as  1  x  10 9 cells.  Observations  relative number  TCD4 + CD62L + cells  and  CD4 + CD62L - analyzed  using  flow  cytometry  and CellQuest program, and statistical test CRD factorial ANOVA and HSD test through SPSS 16 program. The results showed that, in the group of non-infectious dose 25 mg/kgBW and 100  mg/kgBW  was  not  significantly  different  from  normal  controls,  whereas  doses  of  300 mg/kgBW  decreased  naive  T  cells  (P  <0.05).  Naive  T  cells  in  the  control  infection decreased  compared  to  normal  controls  (P  <0.05).  Memory  T  cells  on  infection  control increased  compared  to  normal  controls  (P  <0.05)  On  group  infection  dose  of  100 mg/kgBW can reduce the number of memory T cells (P <0.05)
Key words : Morinda citrifolia, Staphylococcus aureus, CD4 + CD62L + , CD4 + CD62L - .

## Pengantar
S.  aureus  merupakan  bakteri  gram positif,  bersifat  patogen  yang  bertempat didaerah  kulit,  saluran  pencernaan  dan  hidung (Lindberg  et  al.,  2004).  Bakteri  ini  juga menyebabkan  terjadinya  penyakit  pneumonia sebesar  2%  dan  10%  nosokomial  pneumonia, sedangkan  untuk  tingkat  kematian  nosokomial pneumonia  mencapai  30%-80%  (Kaye  et  al., 1990).  S.  aureus  juga  menyebabkan  berbagai macam  penyakit  seperti  selulitis,  keracunan makanan,  toxic  shock  syndrome,  endokartitis, osteomyelitis, sepsis (Lowy, 1998)
Faktor  virulen  S.  aureus  berupa leukocidin  yang  masuk  kedalam jaringan dapat mematikan  sel-sel  darah  putih    (Jawetz  et  al., 1996).  Sedangkan  Superantigen  S.  aureus merupakan  antigen  yang  bersifat  mitogen terhadap  kerja  sel  T  melalui  ikatan  yang spesifik  pada  bagian  V β dari  T  cell  reseptor (TCR)  (Llewelyn,  2002).  Ikatan  tersebut menyebabkan terjadinya sekresi sitokin proinflamasi  T  helper-1  (Th1)  secara  besar- besaran   seperti,  Tumor  necrosis factor (TNF)- α , Interleukin-6 (IL-6) dan Interferon- γ (IFN- γ ). Ketidakseimbangan aktivitas sitokin proinflamasi  bertanggung  jawab  terhadap fisiopatologi  dari  (STSS)  (McCormick  et  al., 2001;Steven, 1997).
Meningkatnya  resistensi  S.  aureus terhadap antibiotic seperti penicillin, methisilin, quinolone dan vancomysin, mendorong masyarakat  untuk  mencari  tanaman  obat. Tanaman  obat  memiliki  penting  terhadap perkembangan  obat  terbaru,  karena  lebih efektif, efek sampingnya lebih kecil, dan harga lebih  murah  dibandingkan  obat  sintetik  (Raj  et al.,  2011).  Salah satu tanaman  obat  yang  dapat digunakan  untuk  menjaga  kesehatan  adalah buah  mengkudu.  Buah  mengkudu  memiliki potensi  sebagai  anti  mikroba,  anti  kanker,  anti inflamasi  dan antioksidan (Wang et al., 2002). Senyawa  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  dan steroid  pada  buah  mengkudu  dengan  tingkat kematangan  yang  berbeda,  dapat  beperan sebagai  anti  bakteri  (Ramesh  et  al.,  2012). Scopoletin  buah  mengkudu  juga  berfungsi sebagai antibakteri (Duncan et al., 1998). Buah mengkudu dapat meningkatkan imunitas sel dan meningkatkan aktivitas makrofag untuk melawan  pertumbuhan  tumor  (Hirazumi  and Furusawa,  1999)  Sedangkan  juice  dari  buah mengkudu  dapat  bersifat  sebagai anti inflamasi (Su  et  al.,  2001).  Berdasarkan  latar  belakang tersebut, penelitian ini bertujuan untuk
mengetahui  peran  senyawa  buah  mengkudu terhadap  jumlah  relatif  dari  sel  TCD4 + CD62L + (sel  T  naif)  dan  sel  TCD4 + CD62L - (sel  T memori)  pada  limpa  mencit  yang  diinfeksi  S. aureus.

## Bahan dan Cara Kerja
Penelitian ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) Faktorial. Kriteria mencit yaitu,  strain  DDY,  betina,  berumur  6  minggu, sebanyak  32  ekor.  Hewan  coba  mencit  telah mendapatkan  sertifikat  kelaikan  etik  no.112- KEP-UB.  Mencit  diaklimasi  selama  1  minggu kemudian diberi perlakuan. Terdapat 2 kelompok, yaitu kelompok infeksi dan kelompok  non  infeksi.  Kedua  kelompok tersebut  diberi  perlakuan  ekstrak  air  buah mengkudu  selama  20  hari,  kemudian  diinfeksi S. aureus pada kelompok infeksi. Pada masing- masing kelompok terdapat 4 perlakuan, dengan 3  ulangan.  Kontrol  normal  kelompok  non- infeksi diberi aquades tanpa diinfeksi S. aureus, sedangkan  kontrol  positif  kelompok  infeksi diberi aquades dan diinfeksi dengan S. aureus.

## Pembuatan Ekstrak air buah Mengkudu.
Tumbuhan mengkudu berumur 2 tahun. daging buah di oven pada suhu 50 o C, selama 5 hari,  di  blender  menjadi  serbuk  halus,diayak sehingga  diperoleh  simplisia.  5  gram  simplicia dilarutkan  dengan  50  ml  aquades,  dipanaskan hingga mencapai suhu 80ºC, kemudian dipertahankan selama 15 menit (Arifiandari dan Condro,  2007).  Dilakukan  penyaringan  dengan kertas  saring,  hasil  penyaringan  merupakan crude ekstrak yang diberikan berdasarkan dosis yang ditentukan. Dosis ekstrak buah mengkudu yang  aman  untuk  manusia  500-1000  mg  per hari  (Murray,  2000)    dan  dikonversikan  pada mencit  dengan  cara  mengalikan  0.0026  (berat badan  mencit  20  mg).  Dosis  yang  digunakan, 25  mg/kgBB,  100  mg/kgBB,  300  mg/kgBB. Dosis  yang  diberikan  kepada  mencit  dihitung terlebih  dahulu  sesuai  dengan  berat  badan mencit.  Dosis  diberikan  sekali  setiap  hari, dicekokan  secara  oral  menggunakan  sonde lambung selama 20 hari.

## Infeksi S.aureus.
Menginokulasikan  4  ml  stok  kultur bakteri S. aureus didalam media nutrient Broth (NB)  sampai  40  ml  kemudian  di  shaker.  Pada jam ke-8 (fase log bakteri), diambil 1 ml kultur dimasukkan  kedalam  ependof  dan  disentrifuse dengan kecepatan 10.000 rpm selama 10  menit
dengan  suhu  25 º C.  Hasil  dari  sentrifuse, supernatan  dibuang,  pellet  ditambahkan  100  ul PBS  dan  diinfeksikan  kedalam  mencit.  Jumlah bakteri S. aureus yang diinfeksikan 1 x 10 9 sel. Infeksi  dilakukan  pada  hari  ke-21  setelah pemberian  ekstrak  air  buah  mengkudu.  Infeksi dilakukan  secara  Intraperitoneal  menggunakan syringe  dengan  ukuran  21  ½G.  Pembedahan mencit  dilakukan  setelah  5  hari  infeksi.  Proses imunitas  adaptif  pada  umumnya  bekerja  4-7 hari setelah terjadinya infeksi (Rifa’i, 2011).
Isolasi sel dan analisis flow cytometry.
Jumlah  relatif  CD4 + CD62L + (sel  T naif)  dan  CD4 + CD62L - (sel  T  memori) diperoleh  dari  isolasi  sel  limpa.  Untuk memperoleh  sel  dari  limpa,  yaitu  organ dipencet dengan pangkal spuit kemudian difilter menggunakan  wire.  Sel-sel  limfosit  dari  limpa dilarutkan  dalam  PBS  sampai  6  ml,  kemudian disentrifus  dengan  kecepatan  2500  rpm  pada suhu  4 ° C  selama  5  menit.  Supernatan  dibuang dan  pellet  diresuspensi  dengan  PBS  1  ml, dipipeting  untuk  mendapatkan  homogenat. Kemudian diambil 100 µ l homogenat, dimasukkan  ke  dalam  tabung  ependof  yang sudah  berisi  500 µ l  PBS.  Setelah  itu  dilakukan sentrifuse  dengan  kecepatan  2500  rpm,  suhu 4 ° C  selama  5  menit.  Pelet  yang  diperoleh ditambahkan  rat  anti-mouse  anti-CD4 + FITC conjugated,  dan  rat  anti-mouse  anti  CD62L + PE  conjugated  sebanyak  50  ul,  diinkubasi selama  30  menit  pada  suhu  4ºC  dalam  kondisi gelap.  Pelet  yang  diberi  antibodi  ditambah  300 µl  PBS  dipipeting  dan  dipindah  ke  dalam tabung flow cytometry. Mesin flow cytometry di setting  sesuai  pewarnaan  dan  sampel  yang diidentifikasi.

## Analisis  data  hasil  flow  cytometry  dan

## Analisis Statistik.
Data  hasil  analisis  flow  cytometry dengan menggunakan program CellQuest untuk Machintosh.  Data  yang  dihasilkan  berupa jumlah  relatif  CD4 + CD62L + (sel  T  naif)  dan CD4 + CD62L - (sel  T  memori).  Kemudian jumlah  relatif  sel  tersebut  dianalisa  secara statistik  menggunakan  uji  ANOVA  RAL Faktorial dan uji lanjut BNJ dengan menggunakan progam SPSS 16.
Uji  Konfirmasi  S.  aureus  di  dalam  darah mencit.
Uji  konfimasi  dilakukan  pada  hari  ke-22 setelah  setelah  injeksi  pada  hari  ke-21.  Darah diambil  melalui  ekor  mencit  sebanyak  ±  50  µl dan  diletakkan  didalam  eppendorf,  kemudian ditambah  dengan  450  µl  NaCl  fis  0.9%. Kemudian  darah  yang  sudah  tercampur  dengan NaCl-fis,  kemudian  diinokulasi  pada  4.5  ml media  NB  didalam  tabung  reaksi.  Kemudian dilakukan  inkubasi  pada  shaker  dengan  suhu 37ºC,  120  rpm  selama  36  jam.  Setelah dilakukan inkubasi, maka dilakukan penanaman pada media Mannitol salt agar (MSA). Diambil sebanyak ± 2 ml cairan hasil inkubasi pada suhu 37ºC selama  24 jam.  S.  aureus  merubah  warna media dari merah menjadi kuning.

## Hasil
Berdasarkan  hasil  uji  konfirmasi  S. aureus dengan media MSA, terjadinya perubahan  dari  warna  media  tersebut.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  mencit  telah  terinfeksi oleh  bakteri  S.  aureus.  Bakteri  tersebut  dapat tumbuh  pada  media  dan  terjadi  fermentasi Mannitol,  sehingga  warna  media  berubah  dari warna  merah  menjadi  kuning  (Beishir,  1991). Warna  koloni  yang  terbentuk  pada  S.  aureus dapat  bervariasi  antara  lain  putih,  kuning  dan oranye  dimana  hanya  strain  S.  aureus  yang berasal  dari  sapi  dan  manusia  yang  memiliki koloni  berwarna  kuning  keemasan  (Purnomo dkk., 2006) (Gambar.1)
Gambar  1.  Uji  S.  aureus  didalam  darah menggunakan  media  MSA  (  A  =  media  MSA tanpa inokulasi S. aureus dan B =  media MSA yang telah diinokulasi dengan S. aureus, terjadi perubahan dari merah menjadi kuning)
A
B
Jumlah  Relatif  Sel  T  Naif  (TCD4 + CD62L + ) dan  sel  T  memori  (TCD4 + CD62L - )    pada Limpa.
Sel  T  naif  (CD4 + CD62L + )  adalah  sel limfosit  matang  yang  meninggalkan  timus, belum  berdiferensiasi  dan  belum  terpapar dengan antigen. Sel T naif yang diaktifkan akan berdiferensiasi  menjadi  sel  efektor  dan  sel memori  yang  dapat  menetap  di  organ  limfoid atau bermigrasi ke kelenjar nonlimfoid (Baratawidjaja  dan  Rengganis,  2006).  Menurut Abbas  dan  Lichtman  (2005),  diferensiasi  dari sel  T  naif  pada  organ  limfoid  perifer  diikuti dengan  perubahan  beberapa  molekul  adhesi. CD62L atau L-selektin adalah molekul permukaan limfosit yang berperan pada homing limfosit.
Berdasarkan hasil analisis flow cytometry dengan progam CellQuest (Gambar 2), menunjukkan  bahwa  kelompok  non  infeksi, jumlah relatif sel TCD4 + CD62L + pada pemberian  dosis  25mg/kgBB,  100  mg/kgBB dan  300  mg/kgBB  sebesar  20.7%,  20.5%  dan 13.2%,  dibandingkan  dengan  kontrol  normal sebesar  21.6%.  Pada  kelompok  infeksi  terjadi penurunan  sel  T  naif  pada  kontrol  infeksi sebesar  5.7%,  kemudian  pemberian  dosis 25mg/kgBB  mengakibatkan  peningkatan  sel  T naif sebesar 7.1%. Pada kelompok infeksi, dosis 100  mg/kgBB  menurunkan  jumlah  sel  T memori sebesar 2.8%.
Gambar  2.  Persentase  rerata  jumlah  relatif CD4 + CD62L + dan  CD4 + CD62L - pada  setiap perlakuan, dianalisis menggunakan flow cytometry dengan progam CellQuest pada organ limpa (Analisis pada organ limpa menggunakan double  staining  memakai  antibodi  anti-CD4 + yang  dilabel  dengan  FITC  dan  antibodi  anti- CD62L + yang  dilabel  dengan  PE.  I  =  sel
limfosit T yang mengekspresikan CD4 + CD62L + (sel  T  naif),  II  =  sel  limfosit  yang mengekspresikan CD4 + CD62L - (sel T memori), A = Non Infeksi, B = Infeksi, K= Kontrol, D1= Dosis  25mg/kgBB,  D2=  Dosis  100  mg/kgBB, D3= Dosis 300 mg/kgBB).
Berdasarkan  hasil  analisis  statistik  uji Anova  dan  BNJ,  pada  perlakuan  non  infeksi jumlah  relatif  sel  T  naif  mengalami  penurunan secara  signifikan  (P<0.05)  sebesar  13.2%  pada dosis  300  mg/kgBB.  sedangkan  jumlah  relatif sel  T  naif  pada  dosis  25  mg/kgBB  dan  dosis 100  mg/kgBB  tidak  berbeda  nyata  dengan kontrol  normal,  pada  kontrol  infeksi  jumlah relative  sel  T  naif  mengalami  penurunan sebesar  5.7%  dibandingkan  dengan  kontrol normal  sebesar  21.6%  (P<0.05)  (Gambar  3). Hal  ini  menunjukkan  bahwa  molekul  sel TCD4 + CD62L + teraktivasi, sehingga jumlahnya semakin  menurun  dalam  kondisi  terinfeksi. Jumlah  relatif  sel  T  memori  kelompok  non infeksi  pada  pemberian  ketiga  dosis  tidak berbeda nyata, sedangkan jumlah relatif kontrol positif  mengalami  peningkatan  sebesar  11.6% dibandingkan kontrol normal (P<0.05). pemberian  dosis  100  mg/kgBB  pada  kelompok infeksi menurunkan sel T memori sebesar 2.8% (P<0.05) (Gambar 4.)
Gambar  3.  Rerata  jumlah  relatif  sel  T  naif (TCD4 + CD62L + )  pada  setiap  perlakuan  hasil analisis  statistik  uji  ANOVA  RAL  Faktorial dan  uji  BNJ  pada  organ  limpa  (  K=  Kontrol, D1=  Dosis  25mg/kgBB,  D2=  Dosis  100 mg/kgBB, D3= Dosis 300 mg/kgBB).
A
Gambar 4. Rerata jumlah relatif sel T memori pada  setiap  perlakuan  hasil  analisis  statistik  uji ANOVA RAL faktorial dan uji BNJ pada organ limpa  (  K=  Kontrol,  D1=  Dosis  25mg/kgBB, D2=  Dosis  100  mg/kgBB,  D3=  Dosis  300 mg/kgBB).
Peningkatan  dan  penurunan  sel  T  naif dan  sel  T  memori,  kemungkinan  disebabkan karena  ekstrak  air  buah  mengkudu  pada penelitian  ini  mengandung  berbagai  macam senyawa aktif. hasil screening fitokimia ekstrak air  buah  M.  citrifolia  terdapat  beberapa senyawa yaitu tannin, alkaloid, fenol, terpenoid, karbohidrat,  flavonoid,  saponin,  glikosida, lipids  (Nagalingam  et  al.,  2012).  Buah mengkudu  (Morinda  citrifolia  L.)  diduga memiliki  kandungan  skopoletin,  antrakuinon, acubin,  dan  alizarin  yang  merupakan  zat fitokimia  dan  antibakteria  (Djauhariya,  2003). Ekstraksi dan fraksi dari buah mengkudu dapat meningkatkan  proliferasi  dari  splenocyte,  yang merupakan  sumber  dari  sel  T  dan  sel  B (Kralovec  et  al.,  2007).  Alkaloid  dari mengkudu  berperan  sebagai  imunostimulant (Chan et al., 2006). Peningkatan sel T naif dan memori  pada  kelompok  infeksi  disebabkan adanya mitogen dari  ekstrak air buah mengkudu.  Mitogen  dari  tumbuhan  dapat menginduksi  sistem  imun  yaitu  proliferasi  dan diferensiasi sel T dan B (Folds et al., 2003).
Sel T naif merupakan sel T CD4 + yang mengekspresikan  molekul  CD62L + .  Ekspesi CD62L  pada  sel  T  naive  dibutuhkan  dalam proses  sirkulasi  didalam  darah  dan lymph  node (Steeber  et  al.,  1996).  CD62L  disebut  juga  L- selektin  yang  tersebar  pada  bagian  sel  B,  sel T monosit  dan  neutrofil  (Tibault  et  al.,  2007). CD62L  mendukung  leukosit  untuk  melakukan rolling  pada  endothelium  pembuluh  darah melalui  interaksi  dari  ligan  yang  terdapat  pada endothelium, termasuk CD34, E-selectin (Rosen,  2004;  sassetti,  1998).  CD62L + yaitu
molekul  permukaan  yang  dibutuhkan  dalam proses  rolling  leukosit  dan  proses  aktivasi (Kishimoto  et  al.,  1989).  Dalam  proses  rolling terjadi  adhesi  antara  CD62L  dengan  ligand yang diekspresikan pada permukaan sel endotel, sehingga  menurunkan  kecepatan  berjalan  dari sel limfosit (Warnock et al., 1996).
Berkurangnya  ekspresi  CD62L  pada permukaan  sel  T  naif  (TCD4 + CD62L + ), menunjukkan  bahwa  CD62L  diperlukan  oleh sel  T  untuk  melakukan  pelekatan  dan  rolling pada  sel  endotel  di  sepanjang  pembuluh  darah. CD62L  akan  terekspresi  sangat  tinggi  pada  sel T  naif  dan  akan  menurun  pada  sel  T  yang teraktivasi.  CD62L  ini  memediasi  migrasi  dari sel T naif menuju ke lymph nodes, pada daerah ini  terdapat  antigen  dan  terjadi  inisiasi  respon imun  (Rifai’I,  2011).  Ekspresi  dari  CD62L disebabkan  oleh  sel  TCD4 + yang  berproliferasi dan  merespon  adanya  stimulasi  dari  antigen (Hengel et al., 2003).
Pada kelompok infeksi sel T memori kontrol infeksi  mengalami  peningkatan  dibandingkan kontrol normal, hal ini menunjukkan bahwa sel T memori aktif ketika terjadi infeksi S. aureus. Kemudian terjadi penurunan sel T memori pada pemberian  ketiga  dosis  terutama  dosis  100 mg/kgBB,  hal  ini  dikarenakan  bahan  aktif antibakteria  dalam  buah  mengkudu  yaitu antrakuinon  dan  scopoletin  yang  bersifat lisozim  terhadap  sel  bakteri  (Irianto,  2006). Jumlah  bakteri  yang  menurun  mempengaruhi terhadap penurunan sel T memori. Berdasarkan penelitian  sebelumnya,  Sel  T  memori  tidak memproduksi sitokin atau membunuh sel tetapi dengan cepat mengenali antigen. Sel T memori menunggu  terjadinya  infeksi  kembali  (Abbas dan  Licthman,  2005).  Sel  T  memori  berkaitan dengan  dengan  sel  T  helper  2  (Th2)  di  dalam sistem imun (Nakagome et al., 2005).
Kesimpulan  pada  penelitian  ini  yaitu  pada kelompok  non  infeksi  pemberian  dosis  25 mg/kgBB  dan  100  mg/kgBB  tidak  berbeda nyata  dengan  kontrol  normal,  sedangkan  dosis 300  mg/kgBB  terjadi  penurunan  sel  T  naif (P<0.05).  Sel  T  naif  pada  kontol  infeksi mengalami  penurunan  dibandingkan  kontrol normal  (P<0.05).  Sel  T  memori  pada  kontrol infeksi  mengalami  peningkatan  dibandingkan kontrol normal (P<0.05) Pada kelompok infeksi dosis  100  mg/kgBB  mampu  menurunkan jumlah sel T memori (P<0.05).

## Kepustakaan
Abbas K., and Lichtman A., 2005. Cellular And Molecular Immunology. Fifth Edition. Philadelphia: Saunders Elsivier. 122-123. Arifiandari  dan  Condro  C.,  2007.  Pengaruh Pemberian Fraksi Air Buah Mengkudu  (Morinda  citifolia  L.) Terhadap  Kadar  Glutamat  Piruvat Transaminase-Serum  Pada  Mencit
BALB/C  Yang  Diinduksi  Vaksin Hepatitis  B.  Tesis  Pascasarjana. Jurusan  Biologi    Universitas  Gajah Mada. Yogyakarta, Indonesia. Baratawidjaja,  K.G.  &  I.  Rengganis.  2010.
Imunologi  Dasar.  Jakarta:  Balai Penerbit FKUI. 41-411.
Beishir  L.,  1991.  Microbiology  in  Practice:  A
Self-Instructional Laboratory Course. 5 th ed. HarperCollins Publishers  Inc.  New  York.  USA. 446 - 450.
Chan  BY.,  Vaillant  F.,  Perez  A.,  Reynes  M.,
Brillouet J., Brat P., 2006. The noni fruit  (Morinda  citrifolia  L.):  a review  of  agricultural  research, nutritional
and therapeutic
properties.  J  Food  Comp  Anal.  19: 645–654.
Djauhariya  E.,  2003.  Mengkudu  (Morinda
citrifolia L.) Tanaman Obat Potensial,  Balai  Penelitian  Tanaman Rempah dan Obat, J. Perkembangan Teknologi TROL. 15(1):21.
Duncan  SH.,  Flint  HJ.,  and  Stewart  CS.,  1998.
Inhibitory  activity  of  gut  bacteria against Escherichia coli O157 mediated by dietary plant metabolites.  FEMS  Microbiology Letters. 164: 258-283.
Folds  JD.,  Schmitz  JL.,  2003 . Clinical  and laboratory  assessment  of  immunity. J  Allergy  Clin  Immunol.  111:S702- 11.
Hengel  RL.,  Thaker  V.,  Pavlick  MV.,  Metcalf AJ., Dennis G., Yang J., Richard A., Lempicki.,  Sereti  I.,  and  Lane  H.C., 2003.  Cutting  Edge:  L-Selectin (CD62L)  Expression  Distinguishes Small  Resting  Memory  CD4 + T Cells That Preferentially Respond to Recall  Antigen.  J  Immunol.  170:28-
32.
Hirazumi A., Furusawa E., 1999. An immunomodulatory  polysaccharide-
rich substance from the fruit juice of Morinda citrifolia (noni) with antitumour  activity.  Phytother  Res. 13(5):380-7.
Irianto  K.,  2006.  Mikrobiologi,  Jilid  1. Bandung: YramaWidya. 36:77-78. Jawetz    E.,  Melnick  JL.,  Adelberg  EA,  Brooks GF.,  Butel  JS.,  Orston  LN.,  1996. Mikrobiologi  Kedokteran.  Edisi  20. Diterjemahkan  oleh  Nugroho  E,
Maulany RF. Jakarta: Buku Kedokteran EGC. 211-215. Kaye MG., Fox MJ., Bartlett JG., Braman SS., and  Glassroth  J.,  1990.  The  clinical spectrum  of  Staphylococcus  aureus pulmonary  infection.  Chest.  97: 788–92.
Kishimoto  TK.,  Jutila  MA.,  Berg  EL.,  and Buther EC., 1989. Neutrophil Mac-1 and  MEL-14  adhesion  proteins inversely  regulated  by  chemotactic factors. Science. 245: 1238–1241
Kralovec  J.,  Metera  K.,  Kumar  J.,  Watson  L., Girouard  G.,  Guan  Y.,  Carr  R., Barrow C., Ewart H., 2007. Immunostimulatory  principles  from Chlorella pyrenoidosa-Part 1:
Isolation  and  biological  assessment in vitro. Phytomedicine. 14:57–64.
Lindberg  E.,  Adlerberth  I.,  Hesselmar  B., Saalman  R.,  Strannegard  IL.,  Aberg N.,  Wold  AE.,  2004.  High  rate  of transfer  of  Staphylococcus  aureus from parental skin to infant gut flora. J. Clin. Microbiol. 42:530–534.
Llewelyn  M.,  Cohen  J.,  2002.  Superantigens: microbial agents that corrupt immunity. Lancet Infect Dis.  2:156– 62.
Lowy  FD.,  1998.  Staphylococcus  aureus infections. N. Engl. J. Med. 339:520–532.
McCormick JK., Yarwood JM., Schlievert PM.,
2005.  Toxic  shock  syndrome  and bacterial  superantigens:  an  update. Annu Rev Microbiol. 55:77–104.
Murray MT., 2000. Noni juice - the passing of another  panacea?.  Natural  Medicine Online. 3(2): 3.
Nagalingam  S.,  Sasikumar  CS.,  Cherian  KM.,
2012.  Extraction  and  preliminary
phytochemical  screening  of  active compounds  in  Morinda  citrifolia fruit.  Asian  J  Pharm  Clin  Res. 5(2):179-181.
Nakagome  K.,  Dohi  M.,  Okunishi  K.,  To  Y., Sato A., Komaqata Y., Nagatani K., Tanaka  R.,  Yamamoto  K.,  2005. Antigen  sensitized  CD4 + CD62L low memory/effector T helper 2 cells can induce  airway  hyperresponsiveness in  an  antigen  free  setting.  Respir Res. 6:46.
Purnomo  A.,  Hartatik.,  Khusnan.,  SIO.,
Salasia.,  dan  Soegiyono.,  2006. Isolasi dan Karakterisasi Staphylococcus  aureus  Asal  Susu
Kambing  Peternakan  Ettawa.  Media Kedokteran  Hewan.  22  (3):  142  - 147.
Raj  V.B.A.,  Murugamani  V.,  Mounika  P.,
Madhuri  B.,  2011.  Preliminary Phytochemical Investigation of Givotia Moluccana Stem. International Journal of Research in Pharmaceutical and Biomedical
Sciences. 2 (3):1307-1313.
Ramesh  S.,  Radhakrishnan  M.,  Anburaj  R.,
Elangomatavan  R.,  Patharajan  S., 2012. Physicochemical,
phytochemical  and  antimicrobial studies  on  Morinda  citrifolia  L. Fruits  at  different  maturity  stages.
Int  J  Pharm  Pharm  Sci.  4(5):  473- 476. Rifa’i, Muhaimin. 2011. Autoimun dan
Bioregulator.  Malang:  UB  Press. 28-29. Rosen  SD.,  2004.  Ligands  for  L-selectin: homing,  inflammation,  and  beyond. Annu Rev Immunol. 22:129–156. Sassetti  C.,  Tangemann  K.,  Singer  MS., Kershaw DB., and Rosen SD., 1998. Identification  of  podocalyxin-like protein  as  a  high  endothelial  venule ligand  for  L-selectin:  parallels  to CD34. J Exp Med 187, 1965–1975. Steeber  DA.,  Green  NE.,  Sato  S.,  Tedder  TF., 1996.  Lymphocyte  migrationin  L- selectin-deficientmice: altered
subsetmigration  and  aging  of  the immune system. J. Immunol. 157:1096. Stevens DL., 1996. The toxic shock syndromes. Infect  Dis  Clin  North  Am.  10:727–
46. Tibault  S.,  Tardif  MR.,  Gilbert  C.,  and Tremblay MJ., 2007. Virus- associated  host  CD62L  increases attachment of human
immunodeficiency  virus  type  1  to endothelial  cells  and  enhances  trans infection  of  CD4 + T  lymphocytes. Journal of General Virology.
88:2568–2573.
Wang  MY.,  West  B.,  Jensen  CJ.,  Nowicki  D.,
Su  C.,  Palu,  AK.,  Anderson  G.,
2002.  Morinda  citrifolia  (Noni):  a literature review and recent advances  in  Noni  research.  Acta Pharmacologica  Sinica.  23:1127-
1141.
Warnock  RA.,  Askari  EC.,  Butcher.,  and Andrian V., 1998. Molecular mechanisms  of  lymphocyte  homing to  peripheral  lymph  nodes.  J.
Exp.Med. 187:205