Mandala of Health : A Scientific Journal Vol.12, No.2, September 2019, Hal. 159-168 ISSN    : 0216-3098 E-ISSN : 2615-6954 DOI: 10.20884/1.mandala.2019.12.2.1642
PENGARUH EKSTRAK THYME ( Thymus vulgaris ) TERHADAP IL-6 DAN HITUNG KUMAN PADA HEPAR MENCIT Balb-c YANG DIINFEKSI
METHICILLIN RESISTANT Staphylococcus aureus (MRSA)
EFFECT OF Thymus vulgaris EXTRACT ON LEVEL IL-6 AND BACTERIAL COUNT IN LIVER IN Balb-c MICE INFECTED BY
METHICILLIN RESISTANT Staphylococcus aureus (MRSA)
Galuh Yulieta Nitihapsari 1 , Lisayani 2 , Helmia Farida 3 , Muchlis Achsan Udji Sofro 4 1 Departemen Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Soedirman. Jalan Dr. Gumbreg Nomor 1 Mersi Purwokerto
2 Rumah Sakit Pantiwilasa Dr. Cipto Semarang. Jalan Dr. Cipto Nomor 50 Semarang
3 Departemen Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro. Jalan Prof. Soedarto Tembalang Semarang
4 Departemen Ilmu Penyakit Dalam RS Dr. Kariadi Semarang-Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro.
Jalan Dr. Soetomo Nomor 16 Randusari Semarang

## ABSTRAK
Meningkatnya  fenomena  resistensi  bakteri,  yaitu  Metisilin-Resisten Staphylococcus aureus (MRSA), mendorong pentingnya penggalian bahan alam  yang memiliki efek antibakteri atau yang memodulasi respon imun. Thymus vulgaris (TV) atau herba timi diketahui memiliki efek antimikroba dan immunomodulator, sehingga diharapkan dapat mengatasi infeksi MRSA melalui peningkatan sitokin  IL-6.  Efek ekstrak Thymus vulgaris terhadap  IL-6 dan   hitung kuman pada hepar mencit balb-c yang diinfeksi MRSA diuji pada penelitian ini. Desain penelitian adalah post test  only control  group design . Populasi studi  menggunakan  30  ekor mencit balb-c  jantan  yang diinfeksi  MRSA  dan  dibagi  secara  acak  dalam  enam  kelompok.  Kelompok  penelitian  dibagi menjadi enam, yaitu kelompok K1 (mencit diinfeksi MRSA tanpa diterapi), P1 (mencit diterapi ekstrak Thymus  vulgaris, 7  hari  kemudian  diinfeksi  MRSA),  K2  (mencit  diinfeksi  dan  diterapi vankomisin), P2 (mencit diinfeksi dan diterapi ekstrak TV + vankomisin), K3 (mencit diinfeksi dan diterapi amoksisilin), dan  P3 (mencit diinfeksi dan diterapi ekstrak TV + amoksisilin). IL-6 diukur  dengan  ELISA,  hitung  kuman  dinilai  dengan  kultur  mikrobiologi.  Data  dianalisis  dan diolah  menggunakan  uji  hipotesis  dengan  uji t-test independent  program  SPSS  22.0.  Hasilnya ditemukan kadar IL-6 yang tidak bermakna antara kelompok K1-P1 ( p>0,05 ), K2-P2 ( p>0,05 ), dan K3-P3 ( p>0,05 ). Penurunan hitung kuman bermakna pada kelompok K1-P1 ( p<0,05 ), tidak bermakna pada K2-P2 ( p>0,05 ) dan K3-P3 ( p>0,05 ). Kadar IL-6 dengan penurunan hitung kuman MRSA di hepar memiliki korelasi positif yang sangat lemah  (r=0,086). Ekstrak Thymus vulgaris terbukti efektif dalam menurunkan hitung kuman MRSA pada kelompok yang tidak mendapatkan antibiotik tetapi tidak terbukti meningkatkan kadar IL-6.
Kata kunci : hitung kuman, IL-6, MRSA, Thymus vulgaris

## ABSTRACT
The  increasing  phenomenon  of  bacterial  resistance,  namely  Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus (MRSA), encourages the importance of extracting natural substances that have anti-bacterial effects or which modulate immune responses. Thymus vulgaris (TV) or herbal thyme  is  known  to  have  antimicrobial  and  immunomodulatory  effects,  so  it  is  expected  to overcome  MRSA  infection  through  increased  IL-6  cytokines.  The  effect  of Thymus  vulgaris extract on IL-6, and bacterial counts on the liver of balb-c mice infected by MRSA tested in this study. The study design was Post-test only control group design. The population of the study was used 30 male balb-c mice infected with MRSA and randomly divided into six groups. The study group divided into 6 groups ; K1 group (mice infected by MRSA without being treated), P1 (mice treated with Thymus vulgaris extract 7 days later infected with MRSA), K2 (mice infected and treated with vancomycin), P2 (mice infected and treated with TV + vancomycin extract), K3 (mice infected and treated with amoxicillin), and P3 (mice infected and treated with TV + amoxicillin extract).  IL-6  was  measured  by  ELISA,  the  bacterial  count  was  assessed  by  microbiological culture.  Data  were  analyzed  and  processed  using  hypothesis  testing  with  an  independent  t-test program SPSS 22.0. The results showed that IL-6 levels were not significant between groups K1- P1  ( p  >  0.05 ),  K2-P2  ( p  >0.05 ),  and  K3-P3  ( p>0.05 ).  The  decrease  in  bacterial  count  was significant in the K1-P1 group ( p< 0.05 ), not significant in K2-P2 ( p>0.05 ) and K3-P3 ( p>0.05 ). The level of IL-6 with a decrease in MRSA count in the liver has a very weak positive correlation (r = 0.086). Thymus vulgaris extract was proven to be effective in reducing MRSA counts in groups that did not get antibiotics but were not proven to increase IL-6 levels.
Keywords : bacterial count, IL-6, MRSA, Thymus vulgaris
Penulis Korespondensi:
Galuh Yulieta Nitihapsari
Departemen Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Jenderal Soedirman, Purwokerto Jalan Dr. Gumbreg Nomor 1 Mersi Purwokerto Email: galuh.nitihapsari@unsoed.ac.id

## PENDAHULUAN
Angka kejadian penyakit yang disebabkan Staphylococcus aureus mengalami peningkatan dalam beberapa tahun terakhir dan merupakan salah satu penyebab tingginya angka kematian di beberapa negara berkembang, termasuk Indonesia (Mufidah et al. 2013). Infeksi S. aureus menjadi masalah  yang  serius  saat  ini  karena  meningkatnya  resistensi  bakteri  terhadap  berbagai  jenis antibiotik  ( Multi  Drug  Resistance /MDR).  Penggunaan  antibiotik  secara  luas  dan  tidak  rasional menyebabkan  problem  resistensi.  Metisilin-Resisten Staphylococcus  aureus (MRSA)  dikenal sebagai  salah satu  bakteri  penyebab utama infeksi  nosokomial dengan prevalensi rata-rata 50% (Yuwono, 2009).
Fenomena  resistensi  bakteri  terhadap  antibiotik  saat  ini  insidensinya  cenderung meningkat di berbagai belahan dunia. Angka kejadian infeksi MRSA di sebagian besar rumah sakit di Asia pada awal tahun 2010 mengalami peningkatan, diantaranya di Hongkong dan di Indonesia
yaitu 28%, sedangkan di Korea jauh lebih tinggi yaitu 70% (Chen and Huang, 2014; Löffler, et al., 2010).
Sistem  kekebalan  tubuh  berperan  penting  dalam  mengatasi  infeksi  yang  disebabkan S. aureus . Peptidoglikan S. aureus sebagai antigen yang masuk ke dalam tubuh akan menstimulasi fagositosis oleh makrofag. Makrofag, sel dendritik, dan sel lain mengenali mikroba dan memberi respon dengan memproduksi sitokin, yaitu Tumor necrosis factor alfa (TNF α), Interleukin-1 (IL- 1), dan Interleukin-6 (IL-6). Sitokin-sitokin ini bekerja mengawali proses migrasi leukosit menuju jaringan  untuk  eliminasi  bakteri.  IL-6  menstimulasi  hepatosit  untuk  memproduksi C-Reactive Protein yang  berkontribusi  pada  proses  inflamasi  (Abousouh, et  al .,  2017;  Abbas, et  al., 2016; Mufidah, et al., 2013).
Strain  MRSA  telah  diketahui  resisten  terhadap  berbagai  antibiotik  semua  golongan betalaktam dan nonbetalaktam, yaitu makrolida (eritromisin), ampisilin, inhibitor sintesa protein (tetrasiklin, kloramfenikol), dan kuinolon. Antibiotik terpilih untuk terapi MRSA dalam beberapa tahun terakhir ini adalah vankomisin. Penggunaan antibiotik vankomisin masih  menjadi pilihan terapi infeksi MRSA (Kumar, et al., 2011; Yuwono, 2009).  Saat ini meluasnya resistensi bakteri terhadap  obat-obatan  yang  ada,  salah  satunya  mulai  ditemukan  strain  Vankomisin-Resistant Staphylococcus  aureus (VRSA)  pada  paramedis  RSUD  Ratu  Zulecha  Martapura  Kalimantan Selatan tahun 2014 (Dwiyanti, et al,. 2015), mendorong pentingnya penggalian sumber antibakteri dari bahan alam atau yang memodulasi respon imun (Mufidah, et al., 2013). Penelitian terhadap efektivitas anti bakteri MRSA dari bahan alam ( Althaea officinalis, Ziziphus  jujuba,  Cordia  latifolia ,  dan Thymus  vulgaris )  telah  dilakukan,  namun  hanya Thymus vulgaris yang mampu menurunkan hitung kuman di berbagai organ mencit. Menurut penelitian Arshad, et al., (2017), ekstrak herba timi ( Thymus vulgaris ) dapat menurunkan indikator infeksi secara hematologi dan menurunkan skoring gambaran lesi patologi anatomi, namun tidak diteliti respon  imun  dan  sitokin  yang  berperan  seperti  yang  dilakukan  pada  penelitian  ini.  Herba  timi sangat mudah ditemukan di Indonesia, salah satunya di perkebunan herbal Tawangmangu, Jawa Tengah.
Herba  timi  dipilih  karena  mengandung  thymol,  carvarcrol,  terpenoid,  flavonoid,  dan glikosida,  sehingga  memiliki  efek  antibakteri,  antivirus,  antioksidan,  dan  immunomodulator. Penelitian  Abousouh, et  al., (2017),  herba  timi  memiliki  efek  meningkatkan  sitokin  IL-12  dan menurunkan  hitung  kuman  pada  mencit  yang  diinfeksi  bakteri  intraseluler Salmonella  thyphi . Penelitian lain yang dilakukan Arshad dkk juga menunjukkan herba timi dapat menurunkan hitung kuman pada mencit yang diinfeksi bakteri MRSA, namun tidak diteliti peningkatan sitokin yang berperan (Arshad, et al., 2017).
Tujuan  penelitian ini adalah mengetahui efek ekstrak Thymus vulgaris terhadap kadar IL- 6 dan hitung kuman mencit balb-c yang diinfeksi MRSA.

## METODE Alat dan Bahan
Penelitian ini dilakukan di tiga tempat, selama delapan minggu (Juli 2018 – Agustus 2018). Simplisia daun timi didapatkan dari Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Tanaman Obat dan Obat Tradisional (B2P2TOOT) Tawangmangu. Proses pembuatan ekstrak daun timi dilakukan di Unit  Pelaksana  Teknik-Laboratorium  Terpadu  (UPT-LT)  Universitas  Diponegoro,  Semarang menggunakan metode maserasi dan vakum evaporator dengan pelarut metanol 96% (Arshad, et al., 2017);  proses  infeksi  MRSA,  perawatan,  dan  perlakuan  (termasuk  pengambilan  jaringan)
terhadap hewan coba dilakukan di  Laboratorium Parasitologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Diponegoro,  Semarang;  proses  pembuatan  dan  pembacaan  preparat  hitung  kuman  dilakukan  di Laboratorium  Mikrobiologi,  Fakultas  Kedokteran,  Universitas  Diponegoro,  Semarang. Pemeriksaan  kadar IL-6 dengan Enzyme-linked Immunosorbent assay (ELISA) dilakukan di The Center for Biomedical Research ( CEBIOR), Universitas Diponegoro, Semarang.

## Jalannya Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan desain “ Post test only control group design ”. Subyek penelitian adalah 30 ekor mencit Balb-c jantan yang dibagi secara acak menjadi enam kelompok yang diinfeksi MRSA American Type Culture Collection (ATCC) 43300 0,2 ml (10 7 cfu/ml) melalui injeksi intraperitoneal (Luthfita, 2015). Kelompok penelitian dibagi menjadi  enam,  yaitu  kelompok  kontrol  negatif  (K1)  yaitu  mencit  yang  diinfeksi  tidak  diterapi; perlakuan  1  (P1),  yaitu  mencit  diterapi  ekstrak  timi 7  hari,  kemudian  diinfeksi  MRSA;  kontrol positif 1 (K2), yaitu mencit diinfeksi MRSA dan diterapi vankomisin 5mg; perlakuan 2 (P2), yaitu mencit yang diinfeksi diterapi kombinasi ekstrak timi dan vankomisin; kontrol positif 2 (K3), yaitu mencit yang diinfeksi diterapi amoksisilin 1 mg; dan  perlakuan 3 (P3) yaitu mencit yang diinfeksi diterapi kombinasi ekstrak timi dan amoksisilin. Dosis ekstrak timi yang digunakan adalah 200 mg/kgbb/hari  per  oral  atau  0,3  ml  (Arshad, et  al., 2017).  Kriteria  inklusi  pada  penelitian  ini meliputi tikus jantan umur 2 bulan, strain  Balb-c yang diinfeksi MRSA, berat badan ± 20 – 30 gram  setelah  aklimatisasi  selama  seminggu  di  kandang  individual,  dan  tidak  ada  abnormalitas anatomis  yang  tampak.  Kriteria  eksklusi  pada  penelitian  ini  adalah  jika  mencit  tampak  sakit sebelum  diinfeksi  bakteri  MRSA,  sedangkan  kriteria drop-out adalah  jika  selama  induksi  dan perlakuan, tikus mati.
Variabel bebas adalah dosis ekstrak Thymus vulgaris . Variabel tergantung pada penelitian ini adalah kadar IL-6 dan hitung kuman. Mencit diterminasi pada hari ke 9 perlakuan atau 42 jam setelah diinfeksi MRSA untuk diambil sampel darah dan heparnya (Luthfita, 2015).

## Analisis Data
Data hasil penelitian diolah dan dianalisis menggunakan bantuan perangkat lunak dengan uji t-test independent . Analisis data yang dilakukan meliputi analisis deskriptif dan uji hipotesis. Data disajikan dalam bentuk tabel dan grafik, lalu dilakukan uji normalitas dengan uji Saphiro- Wilk dan  uji  homogenitas.  Uji  hipotesis  yang  digunakan  untuk  menguji  pengaruh  pemberian ekstrak Thyme  vulgaris terhadap  kadar  IL-6  adalah  uji t-test  independent .  Uji  hipotesis  yang digunakan pada hitung kuman di hepar mencit adalah uji Mann Whitney . Batas derajat kemaknaan adalah apabila didapatkan nilai p≤0,05.
Penelitian ini menggunakan hewan coba dengan menerapkan animal ethics , yang diperoleh dengan cara pengajuan persetujuan kepada Komisi Etik Penelitian Kesehatan Fakultas Kedokteran Universitas  Diponegoro,  Semarang,  sebelum  penelitian  dimulai  dengan  nomor  sertifikat 117/EC/H/FK-RSDK/X/2018.

## HASIL
Tiga puluh ekor mencit Balb-c diadaptasi selama 7 hari dan tidak didapatkan tikus sakit ataupun  mati,  kemudian  dilakukan  randomisasi  ke  dalam  6  kelompok.  Empat  puluh  dua  jam setelah diinfeksi MRSA, didapatkan 1 mencit mati pada kelompok K3.
Tabel 1 menunjukkan bahwa rerata kadar IL-6 pada kelompok yang mendapat tambahan terapi ekstrak timi ada yang lebih tinggi daripada pasangannya yang tidak mendapatkan ekstrak Thymus vulgaris (K2-P2) , dan ada yang lebih rendah dibandingkan pasangannya yaitu (K-P1) dan (K3-P3) . Perbedaan rerata IL-6 antara kelompok K dengan P1, K2 dengan P2, serta K3 dengan P3 tidak bermakna secara statistik ( p = > 0,0 ).
Tabel I. Hasil uji t-test independent  IL-6
Keterangan : § Independent t
Keterangan  :  K1=  Mencit  diinfeksi  MRSA  dan  tidak  diterapi,  P1=  mencit  diinfeksi  MRSA  dan  hanya diterapi ekstrak timi, K2= mencit diinfeksi MRSA dan diterapi vankomisin, P2= mencit diinfeksi MRSA dan diterapi kombinasi ekstrak timi, dan vankomisin, K3= mencit diinfeksi MRSA dan diterapi amoksisilin, dan P3= mencit diinfeksi MRSA dan diterapi kombinasi ekstrak timi, dan amoksisilin
Secara  umum  pada  tabel  II  dapat  dilihat  median  hitung  kuman  pada  kelompok  yang mendapat  ekstrak timi, lebih  rendah  dibandingkan  dengan  kelompok  pasangannya  yang  tidak mendapat ekstrak timi . Nilai median tertinggi didapatkan pada kelompok control, yaitu 36 x 10 6 cfu  dan  nilai  median  terendah  didapatkan  pada  kelompok  perlakuan  mencit  yang  diterapi kombinasi ekstrak timi, dan antibiotik baik vankomisin (P2) maupun amoksisilin (P3), yaitu 0 cfu. Tabel II menunjukkan adanya penurunan tajam hitung kuman dari kelompok kontrol yang tidak  mendapatkan  terapi,  dibandingkan  dengan  kelompok  yang  mendapat  ekstrak timi, baik sebagai preparat tunggal ataupun kombinasi dengan antibiotik.
Perlakuan Kelompok Mean ± SD p § 1. Kontrol (K) vs ekstrak timi (P1) K 687,9 ± 799,4 0,086 P1 113,4 ± 96,7 2. Vankomisin (K2) vs Vankomisin+ ekstrak timi (P2) K2 216,6 ± 111,6 0,138 P2 492,9 ± 474,9 3. Amoksisilin (K3) vs Amoksisilin+ ekstrak timi (P3) K3 402,7 ± 580,3 0,692 P3 214,8 ± 119,1
Tabel II. Hasil uji t-test independent hitung kuman di hepar `
Kelompok Mean ± SD Median (min – max) p ‡ 1. K dengan P1 K1 84580000 ± 87184242 36x10 6 (12x10 6 – 218x10 6 ) 0,016* P1 6585240 ± 9064428 1,6x10 6 (0 – 21x10 6 ) 2. K2 dengan P2 K2 34493200 ± 72442041 1,8x10 6 (0 – 164x10 6 ) 0,052 P2 3600 ± 5548 0 (0 – 0,013x10 6 ) 3. K3 dengan P3 K3 4717600 ± 8304445 0,051x10 6 (0 – 19,2x10 6 ) 0,196 P3 216000 ± 460956 0 (0 – 1x10 6 )
Keterangan : * Signifikan ( p < 0,05 ); ‡ Mann whitney
Keterangan  :  K1=  Mencit  diinfeksi  MRSA  dan  tidak  diterapi,  P1=  mencit  diinfeksi  MRSA  dan  hanya diterapi ekstrak timi,, K2= mencit diinfeksi MRSA dan diterapi vankomisin, P2= mencit diinfeksi MRSA dan diterapi kombinasi ekstrak timi, dan vankomisin, K3= mencit diinfeksi MRSA dan diterapi amoksisilin, dan P3= mencit diinfeksi MRSA dan diterapi kombinasi ekstrak timi, dan amoksisilin
Hasil  analisis  statistik  di  tabel  II  didapatkan  penurunan  jumlah  kuman  yang  bermakna antara  K  dengan  P1  (p=0,016).  Penurunan  jumlah  kuman  yang  lebih  besar  juga  terjadi  pada kelompok  perlakuan  mencit  yang  diterapi  kombinasi  ekstrak timi, dan  vankomisin  (P2)  bila dibandingkan dengan kelompok perlakuan yang hanya mendapatkan terapi vankomisin (K2). Hal yang sama juga ditemukan pada kelompok perlakuan mencit yang diterapi kombinasi ekstrak timi, dan amoksisilin (P3) dimana terdapat penurunan jumlah kuman yang lebih besar bila dibandingkan dengan  kelompok  perlakuan  yang  hanya  diterapi  amoksisilin  (K3)  walaupun  tidak  bermakna secara statistik.
Uji korelasi yang digunakan pada kadar IL-6dan hitung kuman MRSA adalah uji korelasi Spearman. Hasil  uji  korelasi Spearman antara  variabel  didapatkan  nilai  p  0,659  dan  r  0,086, sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa  terdapat  hubungan  positif  antara  IL-6  dan  hitung  kuman dengan kekuatan korelasi yang sangat lemah.

## PEMBAHASAN
Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan pengaruh pemberian ekstrak timi, pada kadar IL-6 dan penurunan  hitung kuman pada hepar mencit balb-c yang diinfeksi MRSA. Rerata kadar IL-6  pada  kelompok  yang  mendapat  ekstrak timi, ada  yang  lebih  tinggi  daripada  kelompok pasangannya  yang  tidak  mendapat  ekstrak timi, ,  tetapi  ada  juga  yang  lebih  rendah  daripada pasangannya.  Secara  statistik  tidak  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak timi dapat  meningkatkan kadar IL-6. Hal ini kemungkinan karena banyaknya jalur respon imun yang dapat diaktivasi oleh bakteri  ekstraseluler.  Selain  itu,  hal  yang  dapat  mempengaruhi  lainnya,  yaitu  lamanya  masa pemberian ekstrak timi dan antibiotik yang terlalu pendek dan adanya efek anti bakterial yang kuat dari ekstrak timi (Sienkiewicz, et al., 2011).
Penelitian ini  menunjukkan  bahwa pemberian ekstrak timi dosis  200 mg/kgbb/hari  per oral tidak meningkatkan sitokin pro inflamasi IL-6. Hal  ini sesuai  dengan penelitian lain yang
menyatakan bahwa ekstrak timi dapat bersifat sebagai anti inflamasi. Hasil penelitian Ocaña and Reglero. G, (2012), menemukan bahwa ekstrak timi dapat menurunkan sitokin pro inflamasi IL- 1, TNF α, dan IL-6, serta menaikkan sitokin anti inflamasi IL-10 pada percobaan in  vitro pada makrofag THP-1 yang teroksidasi LDL. Penelitian lain yang dilakukan Kucukgul mendukung hal ini dimana penurunan respon  imun terjadi pada kelompok ikan yang diinfeksi Yersinia ruckery dan diterapi minyak esensial thyme (Gulec. A.K, et al., 2013). Perbedaan sifat ekstrak Thymus vulgaris dalam penelitian ini dengan penelitian lainnya disebabkan oleh cara ekstraksi, komposisi kandungan zat aktif  dari setiap varian  tanaman timi, dosis ekstrak timi,  interaksi timi dengan antibiotik, dan pengaruh efek anti MRSA yang kuat dari ekstrak timi. Hal ini sesuai dengan penelitian lain yang menyatakan bahwa umur tanaman suatu tanaman  nilam  berpengaruh  nyata  terhadap  komponen  metabolit  aktif  dan  hasil  tanaman  nilam (Hariyani, et  al., 2015).  Penelitian  lain  menyatakan  pula  bahwa  minyak  esensial  tanaman  timi memiliki efek anti bakterial terhadap Staphylococcus secara in vitro (Sienkiewicz, et al., 2011). Penelitian  ini  ekstraksi  dilakukan  dengan  cara  maserasi  dengan  pelarut  metanol  96%, sedangkan pada penelitian lain menggunakan minyak essensial Thymus vulgaris yaitu thymol dan cavacrol  yang  didapatkan  dengan  cara  ekstraksi  dengan  distilasi  uap  konvensional  dan  SFE ( Supercritical Fluid Extraction). Komposisi  zat  aktif suatu  herbal  bisa bervariasi  menurut jenis varian tanaman, umur tanaman, media pertumbuhan tanaman dan cara ekstraksi. Pada penelitian pendahuluan,  efek  anti  MRSA  dari  timi  telah  diuji.  Hasil  yang  didapatkan  dari  uji  MBC,  yaitu tidak didapatkan pertumbuhan kuman MRSA pada 1x dan 2x konsentrasi ekstrak Thymus vulgaris yang diuji. Adanya efek anti MRSA yang kuat menyebabkan jumlah kuman dalam tubuh mencit berkurang,  sehingga  respon  inflamasi  menjadi  lebih  kecil.  Hal  tersebut  menjelaskan  mengapa kadar IL-6 pada kelompok yang tidak mendapat antibiotik dan tidak mendapat  ekstrak timi (K) lebih tinggi daripada kelompok yang mendapat antibiotik, baik diberikan secara tunggal ataupun dikombinasikan dengan ekstrak timi.
Penelitian ini menunjukkan bahwa penurunan median hitung kuman pada kelompok yang mendapat tambahan terapi ekstrak timi lebih besar dibandingkan dengan kelompok pasangan yang tidak  mendapat  terapi    ekstrak  timi.  Perbedaan  penurunan  hitung  kuman  ini  bermakna  pada pasangan kontrol  (K) dan P1 (p < 0,05) dan tidak bermakna pada pasangan K2 dan P2 (p > 0,052) serta pasangan K3 dan P3 (p > 0,196).   Temuan di atas mendukung adanya sifat antibakterial dari ekstrak timi, khususnya terlihat pada kelompok K (tidak diterapi) dan kelompok P1 (terapi ekstrak timi saja). Pada empat kelompok selebihnya juga tampak pengurangan hitung kuman yang lebih besar bila antibiotik dikombinasikan dengan ekstrak timi, walaupun perbedaannya secara statistik tidak bermakna. Hal ini mungkin karena jumlah replikasi sampel terlalu kecil untuk membuktikan perbedaan  tersebut  secara  statistik.  Faktor  lain  adalah  masa  pemberian  antibiotik  dan Thymus vulgaris yang terlalu pendek.
Analisis  korelasi  antara  kadar  IL-6  dengan  jumlah  kuman  MRSA  didapatkan  hubungan antara kadar IL-6 dengan hitung kuman MRSA pada organ hepar mencit balb-c namun korelasinya sangat  lemah.  Hal  ini  mungkin  karena  eliminasi  kuman  MRSA  terjadi  tidak  hanya  karena fagositosis  yang  diperantarai  IL-1,  IL-6  dan  TNF  α  tetapi  juga  oleh  karena  sifat  anti  bakterial Thymus vulgaris . Penelitian yang dilakukan oleh Sienkiewicz mendukung hal ini dimana minyak esensial Thymus vulgaris memiliki aktivitas anti mikroba terhadap Staphylococcus, Enterococcus, Escherichia secara in vitro (Sienkiewicz, et al., 2011).
Penelitian ini juga menunjukkan hasil bahwa ekstrak timi meningkatkan potensi antibiotik yang diketahui telah resisten sebelumnya. Pemberian kombinasi ekstrak timi dengan amoksisilin dapat  meningkatkan  efektivitas  kerja  antibiotik  amoksisilin  dalam  menghambat  pertumbuhan
bakteri  MRSA.  MRSA  telah  diketahui  resisten  terhadap  antibiotik  amoksisilin  (Kumar, et  al., 2011; Yuwono 2009). Hal ini terlihat dari rerata jumlah kuman MRSA kelompok perlakuan K3 pada organ hepar mencit balb-c. Jumlah kuman MRSA lebih sedikit ditemukan pada kelompok perlakuan  P3  dimana  ekstrak  timi  diberikan  bersama  antibiotik  amoksisilin.  Hal  ini  membuka cakrawala baru bahwa ekstrak timi dapat digunakan untuk melawan resistensi bakteri. Temuan ini mendukung  penelitian  lain  dimana  dilaporkan  carvacrol  bertindak  sendiri  ataupun  kombinasi dengan  eritromisin  dalam  menurunkan  jumlah  kuman Streptococcus  Grup  A yang  resisten eritromisin, sehingga berpotensi sebagai alat terapeutik baru (Magi, et al., 2015). Penelitian lain menyebutkan  berbagai  tanaman  herbal  dapat  memiliki  aktivitas  modifikasi  resistensi  antibiotik yang ditemukan pada bakteri (Yap et al., 2014). Contohnya, yaitu ekstrak Rosmarinus officinalis dalam melawan bakteri Staphylococcus aureus melalui inhibisi pompa efflux MDR ,(Oluwatuyi, et al., 2004)  ekstrak Momordica  charantia L.  dan  ekstrak Punica  granatum memiliki  aktivitas modifikasi resistensi antibiotik pada bakteri MRSA melalui penghambatan pompa efflux (Braga, et al., 2005; Coutinho, et al., 2010).
Konsentrasi  ekstrak  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  hanya  satu  macam  yaitu 200mg/kgbb/hari, sehingga tidak dapat membandingkan antara efek dosis bertingkat. Kurangnya sampel darah mencit pada penelitian ini tidak memungkinkan untuk dilakukan pemeriksaan darah tepi untuk menghitung jumlah  kuman dalam darah. Pada penelitian ini penulis juga menggunakan daun yang komersial dijual bebas, sehingga tidak dapat mengendalikan umur daun timi.s

## KESIMPULAN
Pada penelitian ini dapat disimpulkan bahwa ekstrak timi tidak dapat meningkatkan IL-6 pada  mencit  balb-c  yang  diinfeksi  MRSA.  Terdapat  penurunan    hitung  kuman  MRSA  yang bermakna  pada mencit balb-c yang diinfeksi MRSA dan diterapi Thymus vulgaris dibandingkan dengan yang tidak mendapatkan terapi Thymus vulgaris. Adanya korelasi yang sangat lemah antara kadar  IL-6  dengan  penurunan  jumlah  kuman  MRSA  pada  mencit  balb-c  yang  diinfeksi  bakteri ekstraseluler MRSA.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  kepada  Prof.  Dr.  Edi  Dharmana,  Sp.PK.,  M.Sc.,  Ph.D.  yang  telah membantu  terlaksananya  penelitian  ini,  serta  kepada  seluruh  staf  dan  teknisi  Laboratorium Mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran  Universitas  Diponegoro  dan  Laboratorium  GAKI  Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro, sehingga penelitian ini dapat terlaksana

## DAFTAR PUSTAKA
Abbas, A.K., Lichtman, A.H., Pillai, S. 2016. Basic Immunology : Functions and Disorders of the Immune System . 5 ed. W.B Saunders Company. Philadelphia.
Abousouh, S., Widjajanto, E., Sujuti, H. 2017. Effect of Thymus vulgaris extract on level of serum ,  Il12  and  bacterial  colonies  in  liver  in  mice  infected  by Salmonella  typhimurium . International Journal of ChemTech Research 10(9): 881-86.
Arshad,  N.,  Mehreen,  A.,  Liaqat,  I.,  Arshad,  M.,  Afrasiab,  H.  2017.  In  vivo  screening  and evaluation of four herbs against MRSA infections. BMC Complementary and Alternative Medicine 17: 1-7.
Braga, L.C., Leite, A.A., Xavier, K.G., Takahashi, J.A., Bemquerer, M.P., Chartone-Souza, E., et al.  2005.  Synergic  interaction  between  pomegranate  extract  and  antibiotics  against Staphylococcus aureus. Canadian Journal of Microbiology 51(7): 541-7.
Chen, C.J., Huang, Y.C. 2014.  New epidemiology of Staphylococcus aureus infection in Asia. (Themed  Section:  New  epidemiology  of Staphylococcus  aureus infections. ) . Clinical Microbiology and Infection 20(7): 605-23.
Coutinho, H.D., Costa, J.G., Falcao-Silva, V.S., Siqueira-Junior, J.P., Lima, E.O. 2010. Effect of Momordica  charantia L.  in  the  resistance  to  aminoglycosides  in  methicilin-resistant Staphylococcus aureus . Comparative immunology, microbiology and infectious diseases 33(6): 467-71.
Dwiyanti, R.D., Muhlisin, A., Muntaha, A. 2015. MRSA Dan VRSA pada paramedis RSUD Ratu Zalecha Martapura. Medical Laboratory Technology Journal 1(1):27-33.
Gulec, A.K, Kucukgul, A., Danabas. D., Ural, M., Seker, E., Arslan, A., et al. 2013. Therapeutic effects  of  thyme  (thymus  vulgaris  linneaus)  and  fennel  (foeniculum  vulgare  miller) essential oils in infected rainbrow trout, oncorhynchus mykiss (walbaum). Digest Journal of Nanomaterials and Biostructures 8(3): 1069-78.
Hariyani, Widaryanto, E.,  Herlina, E. 2015. Pengaruh umur panen terhadap rendemen dan kualitas minyak  atsiri  tanaman  Nilam  ( Pogostemon  cablin Benth.). Jurnal  Produksi  Tanaman. Universitas Brawijaya 3(3): 205 – 11.
Kumar,  R.,  Yadav,  B.R.,  Singh,  R.S.  2011.  Antibiotic  resistance  and  pathogenicity  factors  in Staphylococcus  aureus isolated  from  mastitic  Sahiwal  cattle. Journal  of  Biosciences 36(1): 175-88.
Löffler,  B.,  Hussain,  M.,  Grundmeier,  M.,  Brück,  M.,  Holzinger,  D.,  Varga,  G.,  et  al.  2010. Staphylococcus aureus panton-valentine leukocidin is a very potent cytotoxic factor for human neutrophils. PLoS Pathogens 6(1): 1-12.
Luthfita,  A.  2015.  Pengaruh  pemberian  minyak  Nigella  sativa  dan  kombinasinya  dengan seftriakson terhadap jumlah kuman MRSA pada  kultur hati mencit balb-c. Semarang : Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro.
Magi, G., Marini, E., Facinelli, B. 2015. Antimicrobial activity of essential oils and carvacrol, and synergy of carvacrol and erythromycin, against clinical, erythromycin-resistant Group A Streptococci . Frontiers in microbiology 6: 165.
Mufidah, Z., Rifa'i, M., Rahayu, S. 2013. Aktivitas Imunomodulator ekstrak buah Mengkudu pada mencit yang diinfeksi Staphylococcus aureus . Jurnal Veteriner 14(4): 501-10.
Ocaña, A., Reglero, G. 2012. Effects of Thyme extract oils (from Thymus vulgaris, Thymus zygis, and Thymus hyemalis ) on cytokine production and gene expression of oxldl-stimulated thp-1-macrophages. Journal of Obesity 2012:1-11.
Oluwatuyi, M., Kaatz, G.W., Gibbons, S. 2004. Antibacterial and resistance modifying activity of Rosmarinus officinalis. Phytochemistry 65(24): 3249-54.
Sienkiewicz, M., Lysakowska. M., Ciecwierz, J., Denys, P., Kowalczyk, E. 2011. "Antibacterial activity of thyme and lavender essential oils. Med Chem 7(6):674-689.
Yap,  P.S.,  Yiap,  B.C.,  Ping,  H.C.,  Lim,  S.H.  2014.  Essential  oils,  a  new  horizon  in  combating bacterial antibiotic resistance. The Open Microbiology Journal 8: 6-14.
Yuwono. 2009. Staphylococcus aureus dan Methicillin Resistant Staphylococcus aureus (MRSA). Departemen Mikrobiologi FK Unsri. Palembang.