Hasil Penelitian

## PENGARUH MINUMAN BEROKSIGEN TERHADAP  SISTEM IMUN, KADAR MALONALDEHIDA DAN PERFORMA RESPONDEN MAHASISWA OLAHRAGAWAN
[Effect of Oxygenated Water on Immune System, Malonaldehyde Content and Student-Athlete Performance]

## Cesar Welya Refdi, Fransiska Rungkat Zakaria* dan Puspo Edi Giriwono
Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor, Bogor
Diterima 23 Agustus 2013 / Disetujui 01 Juli 2014

## ABSTRACT
Exercise requires more oxygen input and cannot be fully obtained through breathing. The body has a homeostatic system, when more ATP is needed, the more oxygen is required by the body. Limited supply of oxygen such as those happens in athlete’s body automatically switches the respiration from aerobic into anaerobic. This situation results in building up of lactic acid which in turn lowers the energy for cellular metabolism as well asenergy for exercise. The purpose of this study was to assess the effects of short-term and long-term drinking of oxygenated water on lactic acid and energy expenditure (EE) in exercise performance; Cluster of Differentiation-4 (CD4), CD8, CD56, Interleukin-6 (IL-6) contents; and level of malonaldehyde.  During  short-term  intervention,  12  male  student  volunteers  drank  oxygenated  (50,  80  and  130  ppm)  water  and  normal  mineral water,  15  minutes  before  treadmill  and  after  treadmill  (10  Kmh).  The  lactic  acid  concentration  was  measured  before  and  after  treadmill,  and  5 minutes after the reconsumption of the oxygenated water. During long-term intervention, 17 male student volunteers drank oxygenated (100 ppm) water twice a day for 21 days. The blood plasma and lymphocyte sampled before and after intervention were analyzed for the same parameters. The  results  showed  that  oxygenated  water  had  no  effect  on  lactic  acid  accumulations  and  EE.  Similarlyt  he  long-term  study  showed  that oxygenated water did not affect CD4 and CD8, had no harmful effect on IL-6 and malonaldehyde, yet it significantly increased the CD56 content.
Keywords: exercise performance, immune system, malonaldehyde, oxygenated water

## ABSTRAK
Pada  saat  berolahraga,  tubuh  membutuhkan  oksigen  yang  lebih  banyak  dan  tidak  dapat  diperoleh  sepenuhnya  dari  pernafasan.  Tubuh memiliki  sistem  homeostatis;  semakin  banyak  jumlah  ATP  yang  dibutuhkan,  maka  semakin  banyak  oksigen  yang  dibutuhkan  oleh  tubuh. Keterbatasan oksigen pada tubuh olahragawan dapat mengakibatkan respirasi aerob beralih ke respirasi anaerob secara otomatis. Keadaan ini mengakibatkan penumpukan asam laktat, menurunkan energi untuk berolahraga, dan energi untuk metabolisme selular. Penelitian ini bertujuan untuk  mengkaji  pengaruh  konsumsi  minuman  beroksigen  dalam  jangka  pendek  dan  jangka  panjang  terhadap  kadar  asam  laktat  dan energy expenditure pada  saat  berolah  raga;  kadar  protein Cluster  of  Differentiation-4 (CD4),  CD8,  CD56,  dan  Interleukin-6  (IL-6);  serta  kadar malonaldehida.  Intervensi  jangka  pendek  diikuti  oleh  12  orang  responden  (mahasiswa,  laki-laki)  setiap  responden  mengonsumsi  minuman beroksigen berbagai konsentrasi (50, 80 dan 130 ppm) dan AMDK (Air Minum Dalam Kemasan) pada hari yang berbeda, 15 menit sebelum dan setelah treadmill (10  km/jam).  Pengukuran  kadar  asam  laktat  dilakukan  sebelum treadmill ,  setelah treadmill dan  5  menit  setelah  mengonsumsi minuman beroksigen setelah treadmill . Intervensi dalam jangka panjang diikuti 17 orang responden (mahasiswa, laki-laki) mengonsumsi minuman beroksigen  (100  ppm)  dua  kali  sehari  selama  21  hari.  Plasma  darah  dan  limfosit  yang  diambil  sebelum  dan  setelah  intervensi  dianalisa  untuk parameter yang sama. Hasil menunjukkan bahwa minuman beroksigen tidak mempengaruhi kadar  asam laktat dan EE dalam intervensi jangka pendek. Intervensi jangka panjang selama 21 hari menunjukkan bahwa minuman beroksigen tidak mempengaruhi kadar CD4 dan CD8, namun dapat dinyatakan aman berdasarkan kadar IL-6 dan malonaldehida, serta dapat meningkatkan kadar CD56 secara signifikan.
Kata kunci: sistem imun, malonaldehida, minuman beroksigen, performa berolahraga

## PENDAHULUAN
1
Oksigen merupakan zat yang essensial bagi hidup manusia, tersedia di udara dan dapat dinikmati secara bebas. Namun, be- berapa  kalangan  sering  mengalami  keterbatasan  dalam  mem- peroleh  oksigen  yang  cukup.  Olahragawan  dalam  akitivitas olahraganya  membutuhkan  oksigen  yang  lebih  banyak  dan tidak  dapat  sepenuhnya  diperoleh  dari  hirupan  udara
*Penulis Korespondensi: E-mail: fzakaria@ipb.ac.id
(pernafasan).  Tubuh  memiliki  sistem  homeostatis;  semakin banyak  jumlah  ATP  yang  dibutuhkan,  maka  semakin  banyak oksigen  yang  diperlukan  oleh  tubuh.  Konsumsi  oksigen  saat istirahat  pada  orang  dewasa  adalah  sekitar  250  mL/menit  dan meningkat hingga lebih dari 4000 mL/menit saat olah raga berat (Ward et al . 2007).
Keterbatasan  oksigen  dalam  tubuh  olahragawan  dapat mengakibatkan  respirasi  aerob  beralih  ke  respirasi  anaerob secara otomatis. Siklus Krebs dan rantai transport elektron tidak berlangsung,  sebaliknya  terjadi  fermentasi  asam  piruvat  yang menghasilkan asam  laktat (Campbell et al . 2000). Total energi
Hasil Penelitian
yang dihasilkan pada respirasi anaerob sangat kecil yaitu hanya 2 ATP dari proses glikolisis, dibandingkan dengan 38 ATP dari respirasi  aerob.  Energi  ini  tidak  cukup  untuk  menjalankan fungsi-fungsi  tubuh  dalam  jangka  waktu  lama.  Selain  itu, penumpukan  asam  laktat  di  otot  menyebabkan  kelelahan  dan lebih  lanjut  menurunkan  performa  dan  prestasi  olahragawan. Performa  olahraga  terkait  pada  prestasi  olahraga  yang mencakup  penampilan  fisik  seperti  stamina  dan  kekuatan  fisik (Santosa  dan  Dikdik,  2012).  Performa  olahraga  dapat  diukur berdasarkan  tingkat  kelelahan  (peningkatan  asam  laktat)  dan energi yang dikeluarkan (EE).
Kebutuhan  oksigen  ini  mendorong  para  ilmuwan  dan industri  untuk  menciptakan  alternatif  suplai  oksigen  di  dalam tubuh melalui air minum. Oksigen yang masuk melalui saluran pencernaan dapat berdifusi dalam darah dan diharapkan dapat meningkatkan  ketersediaan  oksigen  dalam  tubuh  serta  mem- berikan  efek  menguntungkan  bagi  kesehatan  konsumen. Namun, Piantadosi (2006) menyebutkan bahwa penyerapan air beroksigen  oleh  usus  secara  signifikan  tidak  memberikan pengaruh  pada  performa  seseorang  yang  berolahraga. Kelemahan dari penelitian Piantadosi hanya mengukur saturasi oksigen  yang  peningkatannya  tidak  dapat  dilihat  pada  orang yang  sehat,  terutama  pada  orang  sehat  yang  gemar  ber- olahraga.  Adanya  keraguan  penyerapan  oksigen  oleh  usus telah  dijawab  oleh  penelitian  Nestle et  al. (2004)  yang dibuktikan  menggunakan  metode  MRI.  Penelitian  Nestle et  al. membuktikan  bahwa  meminum  air  beroksigen  dengan kandungan  CO 2 yang  rendah,  dapat  meningkatkan  jumlah oksigen pada lumen oral cavity dan usus.
Oksigen  yang  cukup  juga  berperan  dalam  memperoleh metabolisme  sel  yang  normal,  termasuk  pada  sel-sel  imun.  Di dalam  sistem  imun  terdapat  berbagai  macam  sel  yang  secara terstruktur  menjaga  pertahanan  tubuh.  CD4  yang  merupakan protein  penanda  pada  sel T  helper (Th)  dan  berfungsi  untuk aktivasi  makrofag  dan  produksi  antibodi,  CD8  merupakan protein  penanda  pada  sel T  cytotoxyc (Tc)  yang    berfungsi untuk membunuh sel-sel termutasi (sel kanker dan tumor) dan sel yang terinfeksi oleh virus, CD56 merupakan protein penanda sel Natural Killer (NK) yang berfungsi membunuh sel tumor dan sel  terinfeksi  virus  secara  spesifik  atau  non  spesifik  (Orange dan  Ballas,  2006).  IL-6  mengalami  peningkatan  pada  saat terjadi  kontraksi  otot  selama  berolahraga  sekaligus  sebagai indikator terjadinya inflamasi (Whitham et al. 2012).
Selain  itu,  efek  negatif  yang  dikhawatirkan  adalah  pem- bentukan Reactive Oxygen Species (ROS). Radikal bebas dan senyawa  oksigen  reaktif  yang  diproduksi  dalam  jumlah  yang normal,  penting  untuk  fungsi  biologis,  seperti  sel  darah  putih yang  menghasilkan  H 2 O 2 untuk  membunuh  beberapa  jenis bakteri  dan  jamur  serta  pengaturan  pertumbuhan  sel,  namun tidak  menyerang  sasaran  spesifik,  sehingga  memungkinkan menyerang  asam  lemak  tidak  jenuh  ganda  dari  membran  sel, organel  sel,  atau  DNA,  selanjutnya  dapat  menyebabkan kerusakan  struktur  dan  fungsi  sel  (Heryani et  al. 2011). Perubahan  kadar  malonal  dehida  (MDA)  responden  diamati untuk  menjadi  indikator  keamanan  konsumsi  minuman  ber- oksigen pada ROS.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh konsumsi minuman beroksigen terhadap kadar asam laktat; EE;
kadar  protein  CD4,  CD8,  CD56  dan  IL-6.  Selain  itu,  penelitian juga ditujukan untuk melihat keamanan konsumsi minuman ber- oksigen  berdasarkan  kadar  malonaldehida.  Penelitian  ini diharapkan  dapat  menjadi  temuan  baru  bahwa  konsumsi minuman  beroksigen  dapat  meningkatkan  performa  olahraga dan  sistem  imun  serta  aman  untuk  dikonsumsi  secara  terus- menerus.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan
Bahan utama yang digunakan adalah sampel minuman ber- oksigen dengan konsentrasi oksigen 50, 80 dan 130 ppm  dan Air  Minum  Dalam  Kemasan  (AMDK)  sebagai  kontrol  untuk jangka  pendek,  serta  sampel  minuman  beroksigen  100  ppm untuk jangka panjang. Bahan pada isolasi limfosit adalah EDTA 1%,  cairan histopaque (Sigma-1077)  ( fycoll-hypaque ),  PBS (Sigma-P3563)  dan trifan  blue .  Bahan  kimia  yang  digunakan untuk  analisa  dengan  ELISA  adalah Phosphat  Buffer  Saline (PBS) (Sigma-P3563), skim milk 5%, antibodi Monoclonal anti- CD4 human produced in rabbit (sc-70665 Santa Cruz), antibodi Monoclonal  anti-CD8  human  produced  in  mouse (GTX83296 GeneTex),  antibodi Monoclonal  anti-CD56  human  produced  in mouse (GTX76336  Gene  Tex),  antibodi Monoclonal  anti-IL-6 human  produced  in  mouse (sc-28343  Santa  Cruz),  antibodi sekunder  anti- IgG  antimouse  (Horse  Radish  Peroxidase ) (GTX26789),  antibodi  sekunder  [anti- IgG  antirabbit ( Horse Radish  Peroxidase )  (SC-2030)] stop  solution (H 2 SO 4 1  M), substrat  3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine  (TMB)  (Sigma  T4444). Reagen  analisis    malonaldehida  adalah  thrichloroacetic  (TCA), thiobarbituric  acid  (TBA)  dan  butylated  hydroxytoluene  (BHT). Sebagai  standar  adalah  larutan  standar  tetraetoksipropana (TEP).

## Pemilihan responden, sosialisasi dan intervensi
Populasi subjek dipilih berjumlah 17 orang mahasiswa IPB yang secara rutin berolahraga minimal 30 menit perhari tiga kali perminggu  atau  setara  dengan  itu.  Responden  secara keseluruhan  hanya  terdiri  dari  pria  usia  antara  20-27  tahun. Semua  responden  bertempat  tinggal  di  sekitar  kampus  IPB Dramaga,  Bogor.  Responden  dipilih  berdasarkan  hasil pemeriksaan kesehatan oleh dokter di Klinik dr Katili, Dramaga, Bogor. Selanjutnya dilakukan sosialisasi. Saat sosialisasi diberi- kan  penjelasan  tentang  minuman  beroksigen,  manfaat,  cara konsumsi  yang  benar,  tahapan  penelitian  dan  penanda- tanganan informed  consent (surat  perjanjian)  bagi  responden yang  bersedia  mengikuti  penelitian  selama  21  hari.  Penelitian dengan menggunakan subjek mahasiswa ini telah mendapatkan persetujuan  etik  dari  Komisi  Etik  Penelitian  Kesehatan,  Balai Penelitian  dan  Pengembangan  Kesehatan,  Kementerian Kesehatan  RI  dengan  nomor ethical  approval KE.01.10/ EC/650/2012.
Pengujian  manfaat  minuman  beroksigen  dalam  intervensi jangka pendek
Sebelum  responden  (12  orang)  melakukan treadmill, responden mengonsumsi AMDK, air beroksigen 50, 80 dan 130
Hasil Penelitian
Terakreditasi Dikti: 80/DIKTI/Kep/2012
ppm,  masing-masing  diminum  pada  hari  yang  berbeda. Responden  berlari  sampai  kemampuan  maksimum  meng- gunakan treadmill (Woodway) dan cardiorespiratory fitness test “Fitmate”  (Cosmed)  dengan  protokol  lari  10  km/jam.  Alat  ter- sebut  dihubungkan  dengan  monitor  pemantau  EKG.  Setelah mengukur  kadar  asam  laktat  di  awal,  dilanjutkan  dengan meminum minuman beroksigen (sesuai konsentrasi perlakuan) dilanjutkan  dengan treadmill ,  pengukuran  kadar  asam  laktat setelah treadmill dan  5  menit  setelah  konsumsi  minuman beroksigen  (setelah treadmill )  menggunakan  alat Accutrend Lactat (Roche)  dengan  mengambil  darah  dari  jari  tangan responden.  EE  diukur  selama  responden  berada  di  atas treadmill secara otomatis pada alat.

## Pengujian  manfaat  minuman  beroksigen  dalam  intervensi jangka panjang
Pengambilan  darah  responden  (17  orang)  dilakukan sebelum  intervensi  dan  sesudah  intervensi  air  beroksigen selama  21  hari.  Konsumsi  dilakukan  dua  kali  sehari  (pagi  dan sore  hari)  sebanyak  385  mL.  Sebelum  dan  setelah  intervensi dilakukan analisa darah responden, juga dilakukan wawancara dengan  kuesioner.  Kehidupan  responden  dilakukan  seperti biasa dengan diiringi  monitoring terhadap kebiasaan olah raga dan istirahat, jenis dan jumlah makan, minum, serta perbaikan kesehatan dan komentar subyektif responden.
Pengambilan  darah  dilakukan  oleh  petugas  medis  dengan mengikuti  prosedur  standar  klinik.  Darah  yang  diambil  dari pembuluh  vena  porta  sebanyak  15  mL.  Pengambilan  darah dilakukan setelah responden menandatangani surat persetujuan ( informed consent ). Selanjutnya  dilakukan isolasi limfosit untuk mendapatkan  plasma  dan  limfosit,  kemudian  disimpan  dalam freezer -20°C untuk selanjutnya  dianalisis untuk profil biokimia darah. Parameter biokimia yang diuji yaitu: kadar Malonaldehida (MDA)  plasma,  analisis  kadar  CD56,  CD4,  CD8,  IL-6  (pada limfosit).
Analisa  kadar  malonaldehida  dengan  metode  TBA  (modi- fikasi Erniati et al . 2012)
Sebanyak  100  µL  plasma  darah  atau  standar tetraetoksipropane  (TEP)  ditambahkan  dengan  75  µL  larutan TCA  20%  (dalam  HCl  0.6  mol/L  HCl).  Setelah  itu  didinginkan dalam es selama 20 menit. Campuran tersebut disentrifus pada kecepatan  5.000  rpm  selama  20  menit.  Kemudian  100  µL larutan  hasil  sentrifus  ditambah  dengan  20  µL  pereaksi  TBA dan dididihkan selama 30 menit. Setelah didinginkan campuran tersebut  dimasukkan  dalam microplate 96 -well dan  absorbansi dibaca  menggunakan microplate  reader ( Labsystem  Multiscan EX)  pada  panjang  gelombang  540  nm.  Kurva  standar  dibuat dengan  memplotkan  nilai  absorbansi  larutan  standar  TEP  ter- hadap  konsentrasi.  Konsentrasi  MDA  dapat  dihitung  dengan menggunakan  persamaan  regresi  yang  diperoleh  dari  kurva standar sesuai dengan absorbansi sampel. Kurva standar yang diperoleh  memiliki  linearitas  dengan  koefisisen  determinasi (r 2 )=0.994.

## Isolasi limfosit (modifikasi Wahyuni, 2006)
Campuran  darah  dan  EDTA  disentrifus  pada  1.500  rpm selama  10  menit.  Plasma  dipindahkan  ke  dalam microtube
untuk  disimpan  pada  suhu  sekitar  -20°C  hingga  dilakukan analisis. Buffycoat dilewatkan  secara  perlahan-lahan  di  atas fycoll-hypaque melalui  dinding  tabung  kemudian  disentrifus pada  2.500  rpm  selama  30  menit.  Selanjutnya  dilakukan pencucian  limfosit  yang  bertujuan  untuk  menghilangkan monosit,  plasma  dan ficoll-hypaque yang  mengkontaminasi. Pencucian  dilakukan  dengan  cara  menambahkan  PBS kemudian disentrifugasi pada kecepatan 1.500 rpm selama  10 menit.  Setelah  itu,  larutan  dibuang  dan  pelet  limfosit  yang terdapat  pada  bagian  bawah  tabung  sentrifus  ditambah  PBS lagi. Perhitungan menggunakan  pewarna trifan blue, dilakukan dengan  alat  hemasitometer.  Jumlah  sel  disetarakan  hingga didapatkan populasi sel limfosit 10 6 sel/mL. Suspensi disimpan dalam freezer bersuhu  -20°C  sampai  siap  dilakukan  analisis selanjutnya.
Perhitungan kadar CD4, CD8, CD56 dan IL-6 dengan metode ELISA (modifikasi Anggraeni, 2012)
Suspensi  limfosit/plasma  100  µL  dimasukkan  dalam microplate 96 well , kemudian diinkubasi pada suhu 4°C selama semalam. Cairan dalam microplate dibuang dan dicuci dengan 300 µL PBST (larutan PBS dengan 0.05% Tween 20). Selanjut- nya  ditambahkan  100  µL skim  milk 3%  pada  masing-masing well dan diinkubasi pada suhu 37°C selama 2 jam. Cairan dalam microplate dibuang  dan  dicuci  dengan  PBST.  Kemudian ditambahkan  antibodi  primer  (monoclonal  anti  CD4/CD8/ CD56/IL-6) sebanyak 100 µL (sesuai dengan konsentrasi yang direkomendasikan)  dan  diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  1 jam. Cairan dalam microplate dibuang dan dicuci dengan PBST. Antibodi sekunder (antibodi HRP IgG Anti-mouse untuk antibodi primer CD8, CD56, IL-6 dan antibodi HRP IgG anti-rabbit untuk antibodi  primer  CD4)  ditambahkan  sebanyak  100  µL  dan diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  1  jam.  Cairan  dalam microplate dibuang dan dicuci dengan PBST. Lalu substrat TMB ditambahkan sebanyak 50 µL dan diinkubasi pada suhu ruang selama 15 menit dan ditambahkan stop solution . Penghitungan waktu  inkubasi  dimulai  sejak  penambahan  substrat  pada well terakhir.  Selanjutnya microplate dibaca  dengan microplate reader ( Labsystem Multiscan EX) pada panjang gelombang 450 nm.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Kadar asam laktat
Kadar  asam  asam  laktat  menjadi  salah  satu  variabel  yang sering  diukur  dan  digunakan  untuk  mengetahui  kinerja  atlet. Gambar  1  menunjukkan  peningkatan  kadar  asam  laktat sebelum  hingga  setelah treadmill .  Peningkatan  kadar  asam laktat  dengan  mengonsumsi  minuman  beroksigen  tidak  mem- berikan  efek  penghambatan  produksi  asam  laktat  jika  dikon- sumsi sebelum treadmill . Hal ini didukung penelitian Willmert et al .  (2002),  konsumsi  minuman  beroksigen  dengan  konsentrasi oksigen  yang  lebih  rendah  (13.5  mL/L)  sebelum treadmill juga tidak  memberikan  efek  nyata  terhadap  akumulasi  asam  laktat. Berbeda  jika  minuman  beroksigen  yang  dikonsumsi  pada  saat setelah treadmill (Gambar  1),  penurunan  kadar  asam  laktat paling  cepat  pada  kelompok  responden  minuman  beroksigen.
Hasil Penelitian
-6 -4 -2 0 2 4 6 8 10 12 14 AMDK 50 ppm 80 ppm 130 ppm Jk Panjang (100 ppm) Pe ru ba ha n Ka da r L ak ta t ( nm ol/ L) Konsentrasi Minuman Beroksigen - 2 4 6 8 10 12 Keseluruhan Responden (n=12) Responden VO2 max tinggi (n=7) Responden VO2 max rendah (n=5)
En er gy E xp en dit ur e (k ka l/ja m ) AO 0 ppm AO 50 ppm AO 80 ppm AO 130 ppm
AO Jk Panjang (100 ppm)
Hal  ini  menunjukkan  pengaruh  konsumsi  minuman  beroksigen khususnya  130  ppm  lebih  tinggi  pada  keadaan  kurang oksigen/hypoxia  (setelah treadmill )  sehingga  lebih  berfungsi pada  pemulihan  asam  laktat  (kelelahan).  Rataan  dan  standar deviasi  kadar  asam  laktat  masing-masing  perlakuan  pada perubahan  sebelum treadmill ke  setelah treadmill dan  setelah treadmill ke  5  menit  setelah  mengonsumsi  minuman  ber- oksigen  setelah treadmill ditunjukkan  pada  Tabel  1.  Ber- dasarkan analisis one way ANOVA, perbedaan antara konsumsi AMDK dan minuman beroksigen menunjukkan hasil yang tidak berbeda signifikan ( p >0.05).
Gambar 1.  Peningkatan kadar asam laktat sebelum-setelah treadmill (   ) dan penurunan kadar asam laktat setelah treadmill -5 menit diikuti konsumsi minuman beroksigen (     )
Tabel 1.  Nilai  rata-rata  perubahan  kadar  asam  laktat  responden
(n=12) Pengukuran Delta Asam Laktat Rerata ± SD (AMDK) (mmol/L) Rerata ± SD (AO 50 ppm) (mmol/L) Rerata ± SD (AO 80 ppm) (mmol/L) Rerata ± SD (AO 130 ppm) (mmol/L) Rerata ± SD (AO 100 ppm) (mmol/L) One way ANOVA
a Sebelum dan setelah treadmill 7.575± 2.407 7.642± 2.288 7.933± 2.622 8.800± 2.754 8.125± 2.444 p = 0.764
b Setelah treadmill dan 5 menit minum AO 1.992± 1.797 2.508± 1.326 2.392± 1.386 2.858± 1.632 2.575± 1.509 p = 0.733
ab p -value > α (0.05), tidak berbeda nyata
Energy expenditure (EE) Energy  expenditure yang  diamati  pada  penelitian  ini merupakan jumlah energi yang dikeluarkan atau digunakan oleh tubuh  saat  melakukan  uji  performa  ( treadmill )  pada  VO 2 max. VO 2 max  adalah  kemampuan  maksimal  seseorang  untuk memasukkan  oksigen  ketika  seseorang  melakukan  aktivitas sampai lelah. Hasil penelitian menunjukkan bahwa secara rata- rata  energi  yang  dapat  dimanfaatkan  oleh  responden  lebih besar  jika  mengonsumsi  minuman  beroksigen  (Gambar  2). Asupan  oksigen  dari  minuman  beroksigen  memungkinkan energi masih dapat dihasilkan. Namun hasil pengujian ANOVA secara  statistik  ( p =0.05)  dengan software  Minitab 14 menunjukkan pengaruh tidak berbeda nyata antara AMDK dan air minum beroksigen terhadap EE. Kategori performa mengacu Santosa dan Dikdik (2012) adalah sangat buruk: <37.1; buruk: 37.1–41.0;  sedang:  41.0–44.2;  baik:  44.2–48.2;  unggul:  48.2–
54.0;  dan  superior:  >54.0.  Jika  energi  yang  digunakan dikelompokkan  menurut  kategori  VO 2 max,  maka  responden yang memiliki VO 2 max tinggi (VO 2 max ≥44.2 tergolong kategori baik) meng-indikasikan bahwa minuman beroksigen cenderung dapat  meningkatkan  energi  jauh  lebih  tinggi  ketika  intervensi dilakukan  dalam  jangka  panjang  pada  tingkat  konsentrasi  100 ppm. Namun, berdasarkan analisis statistik ( one way ANOVA), perbandingan  ini  masih  tidak  signifikan.  Rata-rata  dan  standar deviasi ditampilkan pada Tabel 2.
Gambar 2.  Rataan  ±  SD energy  expenditure responden  pada  saat melakukan treadmill
Tabel 2.    Rata-rata ± SD energy expenditure responden
Responden Rerata ± SD (AMDK) (kkal/jam) Rerata ± SD (AO 50 ppm) (kkal/jam) Rerata ± SD (AO 80 ppm) (kkal/jam) Rerata ± SD (AO 130 ppm) (kkal/jam) Rerata ± SD (AO 100 ppm) (kkal/jam) One way ANOVA Seluruh responden (n=12) 819.4± 153.0 870.8± 156.4 857.5± 167.8 843.8 ± 157.2 860.6± 161.8 p = 0.945 VO2 max tinggi (n=7) 834.4± 182.2 859.0± 178.5 853.0± 200.4 848.9± 187.8 881.6± 192.0 p = 0.993 VO2 max rendah (n=5) 798.4± 116.8 887.2± 137.5 863.8± 130.9 836.8± 122.3 831.2± 121.8 p = 0.836
ab p -value > α (0.05), tidak berbeda nyata

## Kadar protein CD4, CD8 dan CD56 pada sel limfosit
Limfosit  adalah  salah  satu  jenis  sel  darah  putih  yang  ber- tanggungjawab pada sistem pertahanan tubuh. Sebanyak 20% dari semua leukosit dalam sirkulasi darah orang dewasa adalah limfosit, yang terdiri dari sel T dan sel B yang merupakan kunci pengontrol  sistem  imun  (Baratawidjaja,  2006).  CD4  adalah molekul permukaan sel T helper . Sel Th mengaktifkan makrofag untuk membunuh mikroba dan sel T cytotoxic yang membunuh sel terinfeksi mikroba dan mengeliminasi sumber infeksi. Jumlah CD4 yang tinggi tetapi masih dalam kisaran normal menunjuk- kan pertahanan spesifik yang baik.
Hasil  penelitian  menunjukkan  peningkatan  kadar  CD4  ber- dasarkan  rataan  nilai optical  density .  Namun,  secara  statisik peningkatan  kadar  protein  CD4  akibat  konsumsi  minuman beroksigen  ini  tidak  signifikan.  Rataan  dan  SD  nilai optical density CD4 dapat dilihat pada Tabel 3 dan Gambar 3.
Hasil Penelitian
0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 SEBELUM SESUDAH R at aa n ± SD O D P ro te in C D 4 0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 O pt ic al D en sit y P ro te in C D 4 Responden Sebelum Intervensi Sesudah Intervensi 0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 O pt ic al D en sit y P ro te in C D 8 Responden Sebelum Intervensi Setelah Intervensi 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 SEBELUM SESUDAH R at aa n ± SD O D P ro te in C D 8
Tabel 3.  Rata-rata ± SD nilai o ptical density protein CD4 responden
(n=17) sebelum dan setelah intervensi Parameter Statistik Sebelum Intervensi Setelah Intervensi Uji t- Berpasangan Rata-rata ± SD 0.160±0.082 0.175±0.066 p = 0.301 p - value 0.301> α (0.05), tidak terjadi peningkatan signifikan
Gambar 3.    Rataan nilai optical density CD4
Gambar  4  menunjukkan  bahwa  peningkatan  kadar  CD4 terjadi  setelah  intervensi  dengan  jumlah  responden  12  orang, namun terdapat 5 responden yang mengalami penurunan kadar protein CD4. Jumlah CD4 berkorelasi positif dengan keparahan penyakit,  seperti  temuan  Ray et  al. (2006)  yang  menunjukkan bahwa  subyek  yang  positif  HIV  mempunyai  CD4  yang  sangat rendah yaitu <200 sel/µL, sedangkan range normal CD4 adalah 410-1590 sel/µL.
Gambar 4.  Nilai optical density CD4 responden sebelum dan sesudah intervensi
CD8  adalah  molekul  permukaan  sel  T  limfosit,  terutama berfungsi sebagai sel T sitotoksik pada imunitas seluler spesifik. CD8 merupakan sel efektor utama yang berperan untuk meng- eliminasi  virus.  Berdasarkan  hasil  pembacaan  sampel  dengan ELISA Reader ,  diperoleh  informasi  bahwa  terjadi  peningkatan optical  density hanya  pada  8  responden  saja,  sedangkan responden  yang  mengalami  penurunan optical  density CD8 terdapat  8  orang  responden  (Gambar  5).  Secara  statistik  pun tidak menunjukkan perubahan yang signifikan pada CD8 (Tabel 4 dan Gambar 6). Tidak ditemukannya perubahan jumlah CD8 selama  suplementasi  kemungkinan  karena  tidak  ada  sel  yang terinfeksi  bakteri  dan  virus  sebab  sel  Tc  mempunyai  fungsi mengeliminasi sel yang terinfeksi. Proteksi utama respon imun spesifik  terhadap  bakteri  intera  seluler  adalah  dengan melisiskan sel terinfeksi oleh CD8 selain aktivasi makrofag oleh sel CD4 (Ernawati, 2009).
Gambar 5.  Nilai optical density CD8 responden sebelum dan sesudah intervensi
Gambar 6. Rataan nilai optical density CD8
Tabel 4.  Rata-rata ± SD nilai o ptical density protein CD8 responden
(n=17) sebelum dan setelah intervensi Parameter Statistik Sebelum Intervensi Setelah Intervensi Uji t- Berpasangan Rata-rata ±SD 0.821±0.265 0.841±0.306 p = 0.415
p-value 0.415> α (0.05), tidak terjadi peningkatan signifikan
Berbeda dari kadar CD4 dan CD8, kadar CD56 meningkat secara  signifikan.  Peningkatan  kadar  protein  CD56  ini  me- nunjukkan  peningkatan  kadar  sel  NK.  Peningkatan  o ptical density CD56  terjadi  pada  13  responden.  Rataan  ±  SD ditampilkan pada Tabel 5 dan Gambar 7.
Tabel  5.  Rata-rata ± SD nilai o ptical density protein CD56 responden
(n=17) sebelum dan setelah intervensi Parameter Statistik Sebelum Intervensi Setelah Intervensi Uji t- Berpasangan Rata-rata ± SD 0.274 ±0.052 0.316±0.101 p = 0.039*
*Karena p-value 0.039< α (0.05), maka terjadi peningkatan signifikan
Hasil pengamatan terhadap limfosit responden sebelum dan sesudah  intervensi  ditampilkan  pada  Gambar  8.  Sel  NK  ber- peran  penting  di  dalam  kesehatan  manusia.  Kadar  sel  NK rendah  merupakan  pertanda  buruk  seperti  infeksi  virus  papilla yang  menyebabkan cervical  carcinoma ,  sehingga  Anderson (2005)  menyatakan  bahwa  jumlah  sel  NK  yang  cukup  dapat melindungi  seseorang  dari  infeksi  yang  mematikan.  Penelitian metabolisme dan respirasi seluler yang dilakukan oleh Warburg dalam Mathis (2007) menemukan bahwa sel kanker dapat hidup dan tumbuh jika terjadi keterbatasan oksigen. Jadi, intervensi air beroksigen  pada  level  yang  diujikan  dapat  menstimulasi  kerja sel NK, yang diamati dari peningkatannya secara signifikan.
Hasil Penelitian
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 0.45 SEBELUM SESUDAH R at aa n ± S D O D P ro te in C D 56 * 0.00 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 0.60 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 O pt ic al D en sit y P ro te in C D 5 6 Responden Sebelum Intervensi Sesudah Intervensi -0.09 -0.08 -0.07 -0.06 -0.05 -0.04 -0.03 -0.02 -0.01 0.00 0.01
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17
Pe ru ba ha n O D IL -6 Responden 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 SEBELUM SESUDAH R at aa n ± SD O D In te rle uk in -6
McMahon  (2005)  menyimpulkan  tentang  mekanisme  hidup sel  kanker  bahwa  untuk  bertahan  hidup  sel-sel  kanker  harus berfungsi  secara  anaerobik  sehingga  secara  implisit  diperoleh pengertian  bahwa  sel  yang  menghasilkan  energi  melalui fermentasi  (metabolisme  anaerob)  dapat  berubah  kanker.  Hal ini  didukung  Huang et  al. (2004)  yang  menyatakan  bahwa  sel jantung  tidak  pernah  berkembang  menjadi  sel  kanker  karena tubuh dirancang sedemikian rupa sehingga jantung tidak dapat mempertahankan metabolisme anaerobik. Karena ketika sel-sel berfungsi secara anaerob, maka sel menghasilkan asam laktat dalam jaringan otot yang dapat menghentikan kerja otot sampai asam laktat dihapus atau dimetabolisme.
Gambar 7.    Rataan nilai optical density CD56
Gambar 8.  Nilai optical  density CD56  responden  sebelum  dan sesudah intervensi
Kadar IL-6
Kadar  IL-6  cenderung  meningkat  dengan  adanya  aktivitas olah  raga.  Pedersen et  al .  (2001)  telah  mendemonstrasikan secara baik konsentrasi plasma IL-6 meningkat hingga >100 kali selama  latihan  otot.  Temuan  dari  peningkatan  kadar  IL-6 setelah  latihan  konsisten,  namun  penampakan  IL-6  dalam sirkulasi bergantung pada beberapa faktor, termasuk intensitas, durasi,  dan  bentuk  latihan.  Minuman  beroksigen  diharapkan dapat  meningkatkan  durasi  kemampuan  melakukan  olah  raga. Namun,  kadar  IL-6  juga  merupakan  salah  satu  indikator terjadinya  inflamasi  layaknya  TNF-α  (Pedersen et  al .  2001). Oleh karena itu, peningkatan IL-6 dalam jumlah tinggi juga tidak diharapkan.
Kadar  IL-6  berdasarkan  rataan  nilai optical  density menunjukkan  penurunan  pada  penelitian  terhadap  responden gemar berolahraga. Gambar 9 menunjukkan bahwa tidak terjadi
peningkatan  kadar  IL-6  pada  16  responden  tetapi  terjadi peningkatan pada seorang responden. Namun, secara statistik perubahan  kadar  IL-6  ini  tidak  signifikan.  Nilai  rata-rata  ±  SD optical  density kadar  IL-6  dapat  dilihat  pada  Tabel  6  dan Gambar 10.
Gambar 9.  Perubahan  nilai optical  density IL-6  responden  sebelum dan sesudah intervensi
Tabel 6.  Rata-rata ± SD nilai optical density interleukin-6 responden (n=17) sebelum dan setelah intervensi Parameter Statistik Sebelum Intervensi Setelah Intervensi Uji t- Berpasangan Rata-rata ± SD 0.20224 ± 0.02016 0.22975 ± 0.01729 p = 1.00
Karena p -value 1.00> α (0.05), terjadi peningkatan signifikan
Gambar 10.  Rataan optical density interleukin 6 sebelum dan setelah intervensi
Produksi IL-6 lokal berhubungan dengan kontraksi otot dan bukan  karena  efek  sistemik  karena  IL-6  mRNA  meningkat hanya  pada  otot  dari  kaki  pada  saat  latihan  (bergerak)  bukan pada  kaki  yang  beristirahat  (Pedersen et  al .  2001).  Hal  ini mungkin yang menyebabkan responden dengan frekuensi olah raga  yang  cukup  tidak  menunjukkan  peningkatan  kadar  IL-6 secara  signifikan.  Secara  keseluruhan,  hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  di  antara  responden  hanya  seorang responden  mengalami  kenaikan  kadar  IL-6.  Berdasarkan pemeriksaan  kesehatan,  kuesioner  dan  hasil  wawancara, responden  tersebut  memiliki  riwayat  hepatitis  A  dan  hasil pemeriksaan  dokter  menunjukkan  adanya  gejala  bronkitis. Penelitian  Mariadi et  al .  (2008)  menunjukkan  penyakit  yang mendasari terjadinya proses inflamasi menghasilkan IL-6. Jadi, responden tersebut mengalami peningkatan IL-6 bukan karena tindakan intervensi.
Hasil Penelitian
0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 M D A (n m ol/ m L) Responden Sebelum Intervensi Setelah Intervensi

## Kadar malonaldehida
Pengujian  terhadap  kadar  malonaldehida  didasarkan  pada pentingnya  pengujian  keamanan  konsumsi  minuman  ber- oksigen.  Latihan  fisik  dapat  meningkatkan  konsumsi  oksigen sebesar 15 kali lipat dari konsumsi normal dalam aliran darah. Otot yang aktif dapat meningkatkan kebutuhan oksigen 100 kali lipat  dari  kondisi  pasif  (Helianti  dan  Hairrudin,  2011).  Proses pembentukan ATP memerlukan oksigen dan konsumsi oksigen pada  rantai  pernafasan  di  mitokondria  berpengaruh  terhadap peningkatan  produksi  radikal  bebas  (Cooper et  al .  2002). Mengingat manfaat yang diperoleh dari konsumsi air beroksigen adalah  untuk  meningkatkan  performa,  diharapkan  minuman beroksigen tidak meningkatkan radikal bebas yang ditunjukkan dengan kadar malonaldehida.
Hasil  pengukuran  terhadap  kadar  malonaldehida  plasma darah  menunjukkan  penurunan  sesudah  intervensi  minuman beroksigen  dari  0.864±0.182  nmol/mL  menjadi  0.772±0.185 nmol/mL. Perubahan kadar MDA ini tidak signifikan berdasarkan uji t-perbandingan. Hal ini sejalan dengan temuan Handajani et al .  (2009)  yang  menunjukkan  penurunan  kadar  MDA  pada subyek  diabetes  mellitus  setelah  mengonsumsi  air  minum beroksigen selama 45 hari.
Gambar 11.  Kadar  malonaldehida  responden  sebelum  dan  setelah intervensi
Gambar  11  menunjukkan  penurunan  kadar  malonaldehida terjadi pada 10 responden, sedangkan peningkatan terjadi pada 7  responden.  Peningkatan  kadar  MDA  dapat  disebabkan  oleh banyak faktor. Radikal bebas dapat terbentuk secara endogen maupun eksogen. Secara endogen radikal bebas terbentuk dari reaksi  biokimia  di  dalam  tubuh  sedangkan  secara  eksogen radikal  bebas  dapat  terbentuk  dari  luar  tubuh  seperti  terpapar polusi,  asap  rokok,  makanan,  obat-obatan,  ataupun  iradiasi yang  kemudian  bereaksi  di  dalam  tubuh.  Berdasarkan  analisis food  recall dan  wawancara  terlihat  bahwa  6  dari  7  responden tersebut  memiliki  kebiasaan  mengonsumsi  makanan  gorengan dan berminyak berlebihan sedangkan 1 dari 7 responden mem- perlihatkan  konsumsi  gorengan  yang  rendah.  Terjadinya  pe- ningkatan dimungkinkan karena berdasarkan hasil pemeriksaan kesehatan,  responden  ini  terdeteksi  gejala  bronkitis.  Berbagai penyakit  termasuk  bronkitis  disebabkan  oleh  oksidan  yang berasal  dari  ROS  seperti  radikal  bebas  yang  memproduksi malonaldehida selama produksi peroksida lipid (Mahanom et al. 2011).

## KESIMPULAN
Konsumsi  minuman  beroksigen  tidak  mempengaruhi parameter  performa  saat  berolahraga  seperti  EE dan  kadar asam  laktat,  namun  nilai  rataan  penurunan  kadar  asam  laktat lebih tinggi dibandingkan dengan data kadar asam laktat pada responden yang mengonsumsi AMDK dan nilai rataan EE lebih tinggi pada kelompok responden yang  mengonsumsi minuman beroksigen.  Penurunan  kadar  asam  laktat  dan  EE  yang  lebih tinggi  ini  cukup  mendukung  performa  dan  pemulihan  setelah berolah raga.
Konsumsi  minuman  beroksigen  juga  tidak  mempengaruhi kadar  CD4  dan  CD8  ( p >0.05)  sebagai  parameter  sistem  imun dalam  meningkatkan  antibodi,  membunuh  sel  yang  termutasi dan  terinfeksi  virus.  Akan  tetapi,  kadar  CD56  meningkat signifikan ( p >0.05). Protein CD56 sebagai protein penanda sel NK yang berfungsi membunuh sel tumor dan sel terinfeksi virus secara  langsung.  Selain  itu,  minuman  beroksigen  tidak  mem- berikan  dampak  negatif  terhadap  parameter  malonaldehida sebagai  parameter  stress  oksidatif,  dan  tidak  meningkatkan kadar IL-6 yang menjadi indikator inflamasi (peradangan).

## DAFTAR PUSTAKA
Anderson  SK.  2005.  Biology  of  natural  killer  cells:  what  is  the relationship between natural killer cells and cancer? will an increased number and/or function of natural killer cells result in lower cancer incidence? J Nutr 135: 2910S.
Anggraeni  M.  2012.  Konsumsi  Minyak  Sawit  Merah Meningkatkan  Jumlah  Sel  Natural  Killer  dan  Menurunkan Kadar Enzim Siklooksigenase 2 pada Ibu Rumah Tangga di Kecamatan  Dramaga  Bogor  [Tesis].  Bogor:  Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor.
Baratawidjaja.  2006.  Immunologi  Dasar.  Jakarta.  Fakultas Kedokteran, Universitas Indonesia, Jakarta.
Campbell  NA,  Mitchell  LG,  Reece  JB.  2000.  Biologi  Concept and Connection, 3 rd Edition. Addison Wesley Longman, Inc.,
San Fransisco, California.
Cooper  CE,  Vollaard  NB,  Choueiri  T,  Wilson  MT.  2002. Exercise, free radicals and oxidative stress. Biochem Soc T 30: 280-285.
Ernawati F. 2009. Pengaruh Suplementasi Multivitamin-Mineral terhadap  Imunitas  Humoral,  Selular  dan  Status  Zat  Gizi Antioksidan  [Tesis].  Bogor:  Fakultas  Teknologi  Pertanian, Institut Pertanian Bogor.
Erniati,  Fransiska  RZ,  Bambang  PP.  2012.  Efek  konsumsi minuman bubuk kakao ( Theobroma cacao L. ) bebas lemak terhadap  sifat  antioksidatif  limfosit  subyek  perempuan.  J Teknol dan Industri Pangan 23: 81-85.
Handajani YS, Tenggara R, Suyatna FD, Surjadi C, Widjaja NT. 2009.  The  effect  of  oxygenated  water  in  diabetes  mellitus. Med J Indones 18: 102-107 .
Helianti  D,  Hairrudin.  2011.  Efek  propolis  dalam  mencegah infertilitas  akibat  radikal  bebas  pada  tikus  putih  ( Rattus novergicus )  yang  diberi  stresor.  Jurnal  Bahan  Alam Indonesia 7: 239-243.
Hasil Penelitian
Terakreditasi Dikti: 80/DIKTI/Kep/2012
Heryani LGSS, Susari NNW, Kardena IM, Laksmi DNDI. 2011. Paparan  formalin  menghambat  proses  spermatogenesis pada mencit. J Veteriner 12: 214-220.
Huang  Y,  Hickey  RP,  Yeh  JL,  Liu  D,  Dadak  A,  Young  LH, Johnson RS, Giordano FJ. 2004. Cardiac myocyte-specific HIF-1alpha deletion altersvascularization, energy availability,  calcium  flux,  and  contractility  in  thenormoxic heart. FASEB J 18: 1138-1140.
Mariadi IK, Wibawa IDN. 2008. Hubungan antara interleukin- 6 dan  C-Reactive  Protein  pada  sirosis  hati  dengan perdarahan saluran makanan bagian atas. J Peny Dalam 9: 194-202.
Mahanom,  Azizah  HA,  Suhaila  M,  Nazamid  S,  Maznah  I,  Hair MB. 2011. Effect of Centella asiatica extract and powder on hydrogenperoxide-treated Sprague-Dawley rats.  J  Trop Agric Fd Sc 39: 1–10.
Mathis  TH.  2007.  Benefit  of  long-term  ingestion  of  oxygen enriched  water.  http://  http://www.oxygenorchard.com/wp- content/uploads/2011/04/Benefits-of-Long-Term- Ingestion.pdf [10 Juli 2012].
McMahon  MCR.  2005.  Cellular  Extraction  Therapy  (CET):  a possible treatment for cancer?. Gen Sci J: 1-5.
Nestle  N,  Wunderlich  A,  Nussle-Kugele  K.  2004. In  vivo observation  of  oxygen-supersaturated  water  in  human mouth and stomach. Magn Reson Imaging 22: 551-556.
Orange JS, Ballas ZK. 2006. Natural killer cells in human health and  disease.  Cl  Immunol  118:  1-10. DOI:  10.1016/j.clim. 2005.10.011.
Pedersen  BK,  Steensberg  A,  Schjerling  P.  2001.  Muscle- derived  interleukin-6:  possible  biological  effects.  J  Physiol 536: 329–337. DOI: 10.1111/j.1469-7793.2001.0329c.xd.
Piantadosi  CA.  2006.  Oxygenated  water  and  athletic performance. Brit J Sport Med  40: 740-741. DOI:  10.1136/ bjsm. 2006.028936.
Ray  K,  Gupta  SM,  Bala  M,  Muralidhar  S,  Kumar  J.  2006.
CD4/CD8  Lymphocytecounts  in  healthy,  HIV-positive individuals & AIDS patients. T Indian J Med Res 124: 319- 330.
Santosa  HYS,  Dikdik  ZS.  2012.  Fisiologi  Olahraga:  Fungsi Tubuh  Manusia  pada  Olahraga  untuk  Kesehatan  dan Prestasi. Remaja Rosdakarya, Bandung.
Wahyuni S. 2006. Aktivitas Kitooligomer Hasil Reaksi Enzimatik terhadap Proliferasi Sel Limfosit dan Sel Kanker [Disertasi]. Bogor:  Fakultas  Teknologi  Pertanian,  Institut  Pertanian Bogor.
Ward  JPT,  Clarke  RW,  Linden  RWA.  2007.  At  a  Glance Fisiologi.  Indah  Retno  Wardhani  (Penerjemah).  Erlangga, Jakarta.
Whitham  M,  Chan  MS,  Martin  P,  Matthews  VB,  Prelovsek  O,
Lunke  S,  El-Osta  A,  Broenneke  H,  Alber  J,  Brüning  JC, Wunderlich  FT,  Lancaster  GI,  Febbraio  MA . 2012. Contraction-induced  IL-6  gene  transcription  in  skeletal muscle  is  regulated  by  c-jun  terminalkinase/Activator protein-1. 287: 10771-10779 J Biol Chem DOI: 10.1074/jbc. M111.310581.
Willmert N, Porcari JP, Foster C, Doberstein S, Brice G. 2002. The  effects  of  oxygenated  water  on  exercise  physiology during  Incremental  exercise  and  recovery.  J  Exerc Physiolonline 5: 16-21.