## KATA PENGANTAR
Dengan  penuh  rasa  syukur  kehadirat  Allah  SWT,  setelah  tidak  terbit selama  2  tahun  karena  berbagai  sebab,  akhirnya  Media  Farmasi  dapat  terbit kembali.
Pada  edisi  ini,  Jurnal  Media  Farmasi  menyajikan  11  artikel    yang kesemuanya  merupakan  hasil  penelitian.  Sembilan  artikel  dari  luar  Fakultas Farmasi  UAD,  (1)  membahas  preparasi  4-asetamidofenil  benzoat  dan  uji aktifitasnya  (2) optimasi kombinasi sukrosa-manitol sebagai pengisi (3) ekstraksi gelatin  dari  tulang  ikan  tenggiri  (4)  pengaruh  pemberian  susu  curcuma  dan curcuma emulsi (5) uji aktivitas antikanker ekstrak n-heksana dan ekstrak metanol
blocker (ccb)(7)  penggunaan  obat  golongan  diuretik  pada  pasien  stroke  iskemik (8) kepatuhan pengobatan anti retro viral (9)Analisa penggunaan obat. Dua artikel dari  peneliti  fakultas  farmasi  UAD  yang  membahas  tentang:  (1)  meningkatkan kerja  fungsi  ginjal  dan  (2)  efek  kemopreventif  dan  antihematotoksik  minyak  biji jinten hitam
Harapan  kami,  jurnal  ini  dapat  bermanfaat  bagi  pembaca  atau  menjadi referensi  peneliti  lain.  Kritik  dan  saran  membangun,  senantiasa  kami  terima dengan tangan terbuka.
Dewan editor
herba pacar air ( I mpatiens balsamina linn) (6) studi penggunaan calcium channel
Preparasi 4-Asetamidofenil M. Artabah Muchlisin, dkk 1
PREPARASI 4-ASETAMIDOFENIL BENZOAT DAN UJI AKTIFITAS ANALGESIK PADA MENCIT ( Mus musculus )

## PREPARATION 4-ASETAMIDOPHENYL BENZOIC AND
ANALGESIC ACTIVITY IN MICE  ( Mus musculus )
M. Artabah Muchlisin 1 , Bambang Tri Purwanto 2 , Engrid Juni Astuti 1
Program Studi Farmasi Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Malang 1 Departemen Kimia Fakultas Farmasi Universitas Airlangga 2
Email: shinkaoju@gmail.com

## ABSTRAK
Untuk  mengembangkan  senyawa  turunan  acetaminophen  baru,  dilakukan preparasi    4-acetamidofenil  benzoat  senyawa.  Senyawa  ini  disintesis  dengan mereaksikan dari acetamidofenil dengan benzoil klorida dengan metode Schotten Baumann. Kemurnian senyawa  dibuktikan dengan kromatografi lapis tipis (KLT) dan titik lebur. Pada hasil KLT, senyawa yang disintesis memiliki 1 spot dengan tiga  eluen  yang  berbeda  dan  memiliki  rentang  titik  lebur  171,67-172,67  ºC. Sehingga dapat disimpulkan senyawa  hasil sintesis murni. Karakterisasi struktur senyawa hasil sintesis dianalisis dengan spektrofotometer UV-VIS, spektrofotometer IR, NMR. Hasil analisis struktural menunjukkan bahwa senyawa hasil sintesis adalah 4 - acetamidofenil benzoat. Uji aktivitas analgesik dilakukan pada tikus menggunakan metode penghambatan nyeri dengan asam asetat glasial 0,6 % sebagai agen penginduksi nyeri. Hasil  sintesis 4  - acetamidofenil benzoat memiliki  ED50  73,48  mg  /  kg  dan  acetaminofen  memiliki  ED50  68,30  mg  /  kg. Secara  statistik,  potensi  analgesik  4  -  acetamidofenil  benzoat  sebanding  dengan acetaminofen .
Kata Kunci : 4 - acetamidofenil benzoat, acetaminophen, analgesik, mencit

## ABSTRACT
To develop a new compound derived acetaminophen, then performed preparation 4-acetamidophenyl  benzoat  compound.  The  compound  was  synthesized  by reacting of acetamidophenyl with benzoyl chloride by schotten baumann method. Compound purity is evidence by Thin Layer Chromatography (TLC) and melting point.  On  TLC  test  compound  synthesized  have  single  spot  with  three  different eluents and have melting point range 171,67-172,67 ºC. With these results it can be  said  that  the  compound  was  pure.  Identification  of  the  compounds  structure were  analyzed  by  uv-vis  spectrophotometer,  infrared  spektrofotomeer  ir,  proton nuclear  magnetic  resonance  spectrometer.  The  result  of  structural  analysis indicate  that  the  compund  is  4-acetamidophenyl  benzoic.  Analgesic  activity  test
performed  in  mice  use  writhing  test  method  with  glacial  acetic  acid  0,6%  as inductor  pain.  The  result  that  4-acetamidophenyl  benzoat  has  ED 50 73,48  mg/kg and acetaminophen has ED 50 68,30 mg/kg. Statistically, the analgesic potential of 4-acetamidophenyl benzoic was comparable with acetaminophen.
Keywords : 4-acetamidophenyl benzoic, acetaminophen, analgesic activity, mice

## PENDAHULUAN
Setiap orang pasti pernah merasakan  nyeri.  Nyeri  bisa  berupa rasa  terbakar,  atau  nyeri  tumpul seperti terkena tekanan, atau mungkin  nyeri  tajam  seperti  teriris pisau.  Nyeri  dapat  merupakan  suatu pertanda  bahwa  ada  yang  tidak normal di dalam tubuh yang menyebabkan seseorang memerlukan pengatasan  dengan  obat  atau  harus berkonsultasi  ke  dokter  (Ikawati, 2011).  Saat  ini  nyeri  menjadi gangguan  yang  universal,  menyedot perhatian  dan  biaya  yang  besar,  dan menjadi  tantangan bagi keluarga dan tenaga kesehatan untuk dapat
memberikan dukungan terhadap
mereka yang menderita nyeri, apalagi  nyeri  yang  kronis  seperti nyeri kanker (Ikawati, 2011). Terapi  nyeri  dapat  dilakukan dengan cara non-obat (non
farmakologi) atau dengan obat
(farmakologi).  Atas  dasar  kerja farmakologisnya,  analgetika  dibagi dalam  dua  kelompok  besar,  yakni analgetika perifer (non-narkotik) dan analgetika narkotik (Tjay & Rahardja,  2002).  Salah  satu  obat golongan  analgesik  non  narkotik adalah  asetaminofen.  Asetaminofen
mempunyai aktifitas analgesik- antipiretik  sebanding  dengan  aspirin, tetapi tidak mempunyai efek antiradang dan antirematik (Purwanto  &  Susilowati,  2000).
Menurut  data  dari  Dinas  Kesehatan Propinsi  Jawa  Timur  tahun  2010 asetaminofen  adalah  obat  dengan kebutuhan paling banyak. Pada tahun 2010  Jawa  Timur  membutuhkan tablet asetaminofen 500 mg sebanyak 66.520.005  butir  tablet.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  asetaminofen adalah  obat  yang  paling  banyak digunakan untuk mengatasi nyeri.
Walaupun merupakan obat paling populer di masyarakat, tetapi asetaminofen  memilik  efek  samping methemoglobin  dan  hepatotoksik (Purwanto  dan  Susilowati,  2000). Untuk
meningkatkan efek farmakologis  dari  asetaminofen  dan mengurangi  efek  samping,  maka dibutuhkan  modifikasi  struktur  dari asetaminofen.  Modifikasi molekul merupakan  metode  yang  digunakan untuk mendapatkan obat baru dengan aktifitas  yang  dikehendaki,  antara lain  yaitu  meningkatkan  aktifitas obat, menurunkan efek samping atau toksisitas,  meningkatkan  selektifitas
Preparasi 4-Asetamidofenil M. Artabah Muchlisin, dkk 3
obat,  memperpanjang  masa  kerja obat, meningkatkan kenyamanan penggunaan  obat  dan  meningkatkan aspek  ekonomis  obat  (Siswandono, 2000). Secara teoritis penambahan gugus benzoil pada struktur asetaminofen  akan  meningkatkan parameter lipofilitas dari asetaminofen.  Dari  hasil  perhitungan teoritis menggunakan program komputer  ChemDraw  Ultra  versi 7.0.3, 4-asetamidofenil benzoat mempunyai  Log  P  =  2,4.  Sedangkan asetaminofen  sendiri  mempunyai Log  P  =  0,28.  Data  tersebut menunjukkan  terjadinya  peningkatan harga Log P 4-asetamidofenil benzoat  terhadap  asetaminofen  yang berarti adanya peningkatan parameter  lipofilitas.  Peningkatan lipofilitas ini mengakibatkan penembusan  membran  biologi  tubuh yang lebih baik.
Gambar 1. Struktur Senyawa Asetaminofen (a) dan 4-Asetamidofenil Benzoat (b) Untuk mendapatkan 4- asetamidofenil  benzoat  dilakukan reaksi esterifikasi dengan cara menempelkan  gugus  asil  ke  gugus hidroksi  pada  asetaminofen  dengan menggunakan reaksi Schotten- Baumann yang dimodifikasi. Uji kemurnian dari senyawa hasil preparasi dilakukan dengan penentuan titik lebur dan kromatografi  lapis  tipis,  sedangkan identifikasi struktur dilakukan dengan menggunakan spektrofotometer  ultraviolet  (UV- Vis)  dan  spektrofotometer  infra merah (IR) serta spektrometer resonansi magnet inti ( 1 H-NMR).
Untuk  menguji  aktifitas  analgesik senyawa  4-asetamidofenil  benzoat, dapat dilakukan dengan metode yang
menggunakan  zat  kimia  sebagai penginduksi  nyeri  (metode Writhing Test ).  Pemilihan  metode  pengujian aktifitas  analgesik  ini  tidak  hanya pengukuran  intensitas,  tetapi  juga lama  kerja  obat  untuk  menghindari kerusakan  permanen  suatu  jaringan akibat  observasi  berulang.  Hewan coba yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  mencit  ( Mus Musculus )  karena  mudah  diperoleh, relatif  murah,  mempunyai  sistem syaraf  yang  mirip  dengan  syaraf manusia  dan  sering  digunakan  untuk uji analgesik suatu senyawa
(Thompson, 1990). Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah mendapatkan senyawa 4- asetamidofenil benzoat yang
O O O NH O N H OH b a
memiliki  efek  analgesik  lebih  besar dari asetaminofen.

## METODE PENELITIAN
Bahan  yang  digunakan  pada penelitian  ini  asetaminofen,  benzoil klorida,  natrium  bikarbonat,  aseton, piridin, etanol, metanol, etil asetat, n- heksana,  kloroform,  asam  asetat glasial  0,6  %,  aqua  pro  injection, silika  gel  60  GF 254 ,  mencit  putih ( Mus musculus ) Swiss-Webster jantan  galur  BALB’C’  dengan  berat badan 20-30 gram.
Alat  yang  digunakan  Neraca analitik (Ohauss), Hot plate- magnetic stirrer, Chamber Kromatografi  Lapis  Tipis,  Lampu UV 254, Melting  Apparatus (Fisher John),  Spektrofotometer  UV-VIS (Shimadzu), Spektrofotometer FT-IR
(Shimadzu),  Spektrometer  resonansi magnet inti ( 1 H-NMR) (Jeoul Resonance), Timbangan mencit, Stop watch, Injection disposable syringe . Preparasi Senyawa 4- asetamidofenil  Benzoat  dilakukan dengan melarutkan asetaminofen dalam  aseton  dan  ditambah  piridin. Benzoil  klorida  dilarutkan  kedalam aseton  kemudian  diteteskan  secara konstan ke dalam larutan asetaminofen. Reaksi ini harus dijaga tetap  pada  suhu    0-5  °C.  Kemudian dilanjutkan dengan merefluks larutan dengan  suhu  60-70º  C  selama  5-6 jam.  Larutan  dievaporasi  untuk menghilangkan  pelarut,  kemudian ditambah  dengan  larutan  NaHCO 3
jenuh,  dibiarkan  semalam.  Endapan disaring dan dicuci dengan aquadest.
Padatan kemudian direkristalasi. Uji kemurnian senyawa dilakukan dengan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dan titik  lebur.  KLT  dilakukan  dengan menggunakan  fase  diam  lempeng silika  gel  60  GF 254 dan  tiga  macam eluen yaitu N-Hekasana : Etil Asetat (3  :  7),  Etil  Asetat  :  Aseton  (2  :  1), Kloroform  :  Etil  Asetat  (3  :  7)  serta penampak  noda  lampu  UV  254  nm.
Identifikasi Struktur Senyawa dilakukan  dengan  spektrofotometer UV-Vis  pada  panjang  gelombang 200-340, spektrofotometer inframerah, H-NMR. Uji aktifitas analgesik menggunakan  metode  penghambatan nyeri  terinduksi  secara  kimiawi ( Writhing  Test )  yang  dilakukan  pada hewan  mencit  ( Mus  Musculus ). Sebagai penginduksi nyeri digunakan larutan  asam  asetat  glacial  0,6  %. Sejumlah  mencit  berbobot  20-30 gram  dibagi  menjadi  3  kelompok, yaitu 3 kelompok uji 4-
asetamidofenil  benzoat  dengan  dosis masing-masing  100,  50,  dan  25 mg/kg  BB,  3  kelompok  pembanding asetaminofen  dengan  dosis  masing- masing  100,  50,  dan  25  mg/kg  BB, dan  1  kelompok  kontrol.  Masing- masing  kelompok  terdiri  dari  6  ekor mencit.
Pelaksanaan uji aktifitas
dilakukan          dengan          menimbang mencit,  dicatat  bobotnya,  dan  diberi
Preparasi 4-Asetamidofenil M. Artabah Muchlisin, dkk 5 tanda  dengan  nomor,  kemudian diberi  sediaan  dosis  tertentu  secara intraperitoneal. Duapuluh menit setelah  pemberian  sediaan,  mencit tersebut  disuntik  dengan  larutan asam  asetat   0,6%    sebanyak   3 ml secara intraperitoneal. Lima menit setelah  penyuntikan  dengan  larutan asam  asetat  0,6  %,  respon  nyeri  dari setiap  mencit  yang  berupa  frekuensi geliatan diamati selama 30 menit dan dicatat frekuensi geliat untuk kelompok  uji,  pembanding,  dan kontrol.  Adanya  aktifitas  analgetika dinyatakan  oleh  lebih  sedikit  terjadi jumlah  geliatan  nyeri  pada  mencit sebesar ≥50% dari kelompok kontrol.
Tiap-tiap  mencit  pada  masing- masing  kelompok  dilihat  respon geliatnya, kemudian dicatat frekuensi geliatnya.  Untuk  melihat  apakah  ada perbedaan  aktifitas  yang  bermakna antara  kelompok  uji,  pembanding dan kontrol, maka dilakukan uji One Way ANOVA pada α = 0,05.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada  penelitian  ini  telah dilakukan  preparasi  senyawa  4-
Asetamidofenil benzoat melalui
reaksi  esterifikasi  antara  senyawa asetaminofen dengan benzoil klorida. Reaksi  ini  mengikuti  kaidah  reaksi substitusi  nukleofilik  2,  yang  mana gugus  fenolik  pada  asetaminofen yang  bersifat  nukleofil  kuat  akan menyerang  gugus  karbonil  pada benzoil klorida yang bersifat elektrofil. Sehingga nantinya atom Cl pada  gugus  karbonil  akan  putus,
karena atom Cl memiliki nukleofilitas  yang  lebih  rendah  dari gugus  fenol  asetaminofen.  Senyawa yang dihasilkan berupa serbuk kristal berwarna putih dan tidak berbau.
Uji kemurnian senyawa dilakukan  dengan  kromatografi  lapis tipis dengan menggunakan fase diam lempeng silika gel 60 GF 254 dan tiga macam eluen yaitu N-Hekasana : Etil Asetat (3 : 7), Etil Asetat : Aseton (2 :  1),    Kloroform  :  Etil  Asetat  (3  :  7) serta penampak noda lampu UV 254 nm.  Hasil  KLT  diperoleh  Rf  untuk asetaminofen  adalah  0,33  (Rf 1 ),  0,59 (Rf 2 ),  dan  0,56  (Rf 3 )  sedangkan senyawa  hasil  0,50  (Rf 1 ),  0,69  (Rf 2 ), dan 0,62 (Rf 3 ). Pada penentuan jarak lebur  senyawa  hasil  didapatkan  titik lebur yang berbeda dengan asetaminofen.  Jarak  lebur  senyawa hasil  sintesis  adalah  171,67  -  172,67 ºC. Sedangan titik lebur asetaminofen  adalah  168  -  169 o C, sehingga  dapat  dinyatakan  bahwa senyawa  yang  dihasilkan  adalah murni  dan  berbeda  dengan  senyawa induknya  yaitu  asetaminofen  dan dapat dilanjutkan dengan  identifikasi struktur.
Identifikasi struktur dengan menggunakan  spektrofotometri  UV- Vis  senyawa  asetaminofen  diperoleh spektra  yang  memberikan  serapan dengan  panjang  gelombang  (λ)  249 nm.  Sedangkan  pada  senyawa  hasil dihasilkan  spektra  yang  memberikan serapan pada panjang gelombang (λ) 239 nm. Spektrum IR yang dihasilkan  senyawa  asetaminofen
memiliki karakteristik [bilangan gelombang  (cm -1 ),  gugus  fungsi]  :
[3325,  –OH  fenolat],  [3161,  N-H], dan  [1653,  C=O  keton].  Sedangkan senyawa  hasil  memiliki  karakteristik :  [3440,  N-H],  [1676,  C=O  keton], dan [1728, C=O keton]. Karakteristik spektrum 1 H-NMR senyawa asetaminofen adalah [s (ppm), multiplisitas,  jumlah  atom  H]  : [1,815-2,111,  multiplet,  3  atom  H gugus  CH 3 ],  [6,544-6,667,  multiplet,
2  atom  H  gugus  benzena],  [7,205- 7,307,  multiplet,  2  atom  H  gugus benzena],  9,020-9,122,  doublet,  1 atom  H  gugus  OH],  dan  [9,522- 9,624, doublet, 1 atom H gugus NH]. Sedangkan  karakteristik  spektrum 1 H-NMR  senyawa  hasil  adalah  :
[2,018,  singlet,  3  atom  H  gugus CH 3 ],  [7,156-7,179,  doublet,  2  atom
H  gugus  benzena],  [7,568-7,618, multiplet,  5  atom  H  gugus  benzena], [8,046-8,124,  doublet,  2  atom  H gugus  benzena],  dan  [9,976-10,035, singlet,  1  atom  H  gugus  NH].  Dari hasil  karakteristik  dapat  disimpulkan bahawa  senyawa  hasil  adalah  4- asetamidofenil benzoat.
Senyawa-senyawa
tersebut kemudian diuji aktifitas analgesiknya terhadap  mencit  ( Mus  musculus ) putih Swiss-Webster jantan galur BALB’C’  dengan  berat  badan  20-30 gram dengan metode writhing reflect test ,  yaitu  dengan  cara  mengamati frekuensi  geliat  pada  mencit  yang
telah diinduksi nyeri berupa rangsangan  kimiawi.  Induktor  nyeri yang  digunakan  adalah  larutan  asam asetat  glasial  0,6  %  (Gupta et  al , 2003).  Asam  asetat  glasial  dapat merusak  jaringan  sehingga  merusak membran  sel  dan  fosfolipid  yang akan merangsang munculnya mediator  nyeri  (Katzung.  1998).
Mencit dibagi menjadi tiga kelompok yaitu  kelompok  kontrol  negatif (CMC-Na), kontrol positif (asetaminofen), dan uji (4-
asetamidofenil  benzoat).  Kelompok kontrol  positif  dan  uji  dibagi  lagi menjadi  tiga  kelompok  dosis  yaitu 25,  50,  dan  100  mg/kg  BB.  Masing- masing  kelompok  menggunakan  6 ekor mencit.
Berdasarkan hasil pengamatan yang  telah  dilakukan,  jumlah  rata- rata  geliat  mencit  [kontrol  negatif; kontrol  positif;  uji]  untuk  dosis  25 mg/kg  BB  [59,33;  51;  51,83],  dosis 50  mg/kg  BB  [59,33;  37,17;  38,5], dan  dosis  100  mg/kg  BB  [59,33; 21,33;  22,83].  Hasil  uji  aktifitas analgesik terhadap mencit menunjukkan ada perbedaan bermakna antara senyawa asetaminofen  dengan  kontrol  negatif dan senyawa
4-asetamidofenil benzoat  dengan  kontrol  negatif, sedangkan tidak terdapat perbedaan yang  bermakna  antara  senyawa setaminofen  dengan  senyawa  4- asetamidofenil benzoat.
Preparasi 4-Asetamidofenil M. Artabah Muchlisin, dkk 7
Gambar  2. Perbandingan  Jumlah  Geliat  Kelompok  Kontrol,  Asetaminofen,  dan  Senyawa  Hasil Sintesis
Untuk menentukan aktifitas analgesic  masing-masing  senyawa maka dilakukan perhitungan persentase  hambatan  nyeri  dengan menggunakan  data  frekuensi  geliat. maka didapatkan ED 50 untuk asetaminofen  adalah  68,30  mg/kg BB, dan ED 50 untuk 4-asetamidofenil benzoat adalah 73,48 mg/kg BB. Dari  data  ED 50 dapat  disimpulkan
bahwa senyawa hasil sintesis memiliki  nilai  ED 50 lebih  besar  dari asetaminofen, tetapi secara perhitungan statistik tidak ada perbedaan yang bermakna diantara aktifitas kedua senyawa tersebut. Penambahan  gugus  ester  benzoat pada senyawa asetaminofen mengakibatkan  meningkatnya  sifat lipofilik  yang  dapat  meningkatkan proses penembusan membran
biologis  tubuh  sehingga  jumlah  obat yang mencapai reseptor akan semakin  meningkat.  Tetapi  adanya peningkatan  sifat  lipofilik  diduga sebanding dengan meningkatnya halangan  ruang  antara  senyawa  obat dengan  reseptor  sehingga  aktifitas yang  ditimbulkan  antara  senyawa asetaminofen dengan 4- asetamidofenil benzoate adalah sama secara statistic. Hasil  uji  aktifitas  biologis  yang telah  dilakukan  dapat  digunakan sebagai dasar pengembangan senyawa  4-asetamidofenil  benzoat sebagai calon obat analgesik. Tetapi, masih  perlu  dilakukan  penelitian lebih lanjut untuk memperoleh informasi  yang  lebih  lengkap,  baik dari  segi  farmakokinetik  maupun farmakodinamik senyawa tersebut.
59.33 59.3
59.3 51 37.17 21.33 51.83 38.5 22.83 0 20 40 60 80 25 mg 50 mg 100 mg Jumla h Gel ia t Dosis Kontrol Asetaminofen Hasil Sintesis
Gambar 3. Kurva Hubungan Antara Log Dosis dengan % Hambatan Nyeri Asetaminofen

## KESIMPULAN
Senyawa 4-asetamidofenil benzoat mempunyai aktifitas analgesik pada mencit ( Mus musculus ) yang sama dengan asetaminofen.  ED 50 4-asetamidofenil benzoat sebesar 73,48 mg/kg BB dan asetaminofen  memiliki  ED 50 68,30 mg/kg BB.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim,  2010, Profil  Kesehatan Propinsi  Jawa  Timur  2010, Surabaya:  Dinkes  Propinsi  Jawa Timur Fessenden, RJ., Fessenden, JS, 1999, Kimia  Organik, Jilid  I,  Edisi  3,
Jakarta: Binarupa Aksara Gupta,  S.,  Khadivar,  PV.  Mathur, KC, 2003, Topological Modelling  of  Analgesia.  Dalam: Janda, KD, Bioorganic & Medical Chemistry, Oxford: Elsivier 11 (8).
Ikawati,  Z.,  2011, Farmakoterapi
Penyakit  Sistem  Syaraf  Pusat,
Yogyakarta: Bursa Ilmu.
Katzung,  BG.,  1998, Farmakologi
Dasar dan Klinik . Jakarta: EGC.
Purwanto.,  Susilowati,  R,  2000, Hubungan Struktur-Aktivitas Obat Analgetika. Dalam: Siswandono., Soekardjo, B (Eds.) Kimia Medisinal Edisi 2, Surabaya:  Airlangga  University Press. Siswandono, 2000, Metode Modifikasi Struktur Molekul Obat Dalam: Siswandono., Soekardjo, B (Eds.), Kimia Medisinal  Edisi  1, Surabaya: Airlangga University Press. Thompson, EB, 1990, Drug Bioscreening,  Drug  Evaluation Technique in Pharmacology .
New York: VCH Publisher Inc. Tjay, TH., Rahardja, K., 2002, Obat- Obat Penting: Khasiat, Penggunaan, dan Efek Sampingnya, Edisi Kelima, Jakarta: PT. Elex Media Komputindo.
y = 83.04x - 102.6 R² = 0.998 0 20 40 60 80 0 0.5 1 1.5 2 2.5 % Hambat an N ye ri Log Dosis % Hambatan Nyeri Linear (% Hambatan Nyeri)