## PENAPISAN SENYAWA HEMAGGLUTININ DARI MAKROALGA ASAL PANTAI BINUANGEUN, BANTEN, INDONESIA
Screening of Hemagglutinins of Macroalgae Collected from Binuangeun Coast, Banten, Indonesia
Nurrahmi Dewi Fajarningsih 1* , Dhia Fauziah Yamin 2 , Idha Yunita 2 , Anisa Fahriza 3 , Danar Praseptiangga 4 , Prih Sarnianto 2 , dan Ekowati Chasanah 1
1 Balai  Besar  Penelitian  dan  Pengembangan  Pengolahan  Produk  dan  Bioteknologi  Kelautan  dan  Perikanan. Jl. K.S. Tubun  Petamburan  VI,  Jakarta Pusat, Indonesia
2 Fakultas  Farmasi,  Universitas  Pancasila,  Srengseng  Sawah,  Jagakarsa,  Jakarta  Selatan,  Indonesia
3 Departemen  Biologi,  Institut  Pertanian  Bogor,  Bogor,  Indonesia
4 Fakultas  Pertanian,  Universitas  Sebelas  Maret,  Jl.  Ir.  Sutami  36  A,  Surakarta,  Indonesia *  Korespondensi  Penulis:  nurrahmi.dewi@gmail.com
Diterima: 17 Februari 2015; Disetujui:  26 Mei 2015

## ABSTRAK
Sebagai  bagian  dari  penelitian  penapisan  lektin  dari  makroalga  Indonesia,  17  esktrak  protein makroalga  yang  dikoleksi  dari  Pantai  Binuangeun,  Banten  telah  diuji  aktivitas  hemagglutinasinya terhadap eritrosit  kelinci dan eritrosit manusia golongan A, B,  O, masing-masing  dengan perlakuan enzim  dan native. Ekstraksi  dilakukan  dengan  menggunakan  2  jenis  buffer,  yaitu Phosphate Buffer Saline (PBS) dan Tris Buffer  Saline (TBS) pH  7. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pada beberapa  sampel,  ekstrak  yang  dihasilkan  kedua  buffer,  menunjukkan  aktivitas  hemagglutinasi yang  berbeda  walaupun  kadar  total  protein  ekstrak  makroalga  yang  diekstraksi  dengan  PBS  dan TBS  tidak  berbeda.  Sebagian  besar  ekstrak  makroalga  yang  diuji  mampu  mengagglutinasi setidaknya  satu  jenis  sel  eritrosit  yang  digunakan.  Secara  umum,  kelompok  makroalga  hijau memperlihatkan  aktivitas  hemagglutinasi  yang  lebih  rendah  dibandingkan  kelompok  makroalga merah  dan  coklat.  Meskipun  ekstrak Padina  australis (makroalga  coklat)  memberikan  hasil hemagglutinasi  eritrosit  kelinci  negatif,  namun  ekstrak  tersebut  positif  menghemagglutinasi eritrosit golongan  darah B dan  O. Di antara 8  makroalga  hijau yang  diuji, hanya dua  sampel yang menunjukkan  aktivitas  hemagglutinasi,  yaitu Chaetomorpha  crassa dan Halimeda  macroloba . Keempat  ekstrak  makroalga  merah  yang  diuji  menunjukkan  aktivitas  hemagglutinasi  yang  kuat terhadap  eritrosit  kelinci.  Ekstrak  makroalga  merah Gracilaria lichenoides dan Gelidiella  acerosa aktif  terhadap  semua  jenis  eritrosit  uji.  Sementara  itu,  hanya  ekstrak Laurencia  tronoi yang menunjukkan  aktivitas  hemagglutinasi  terhadap  eritrosit  golongan  darah  A.
KATA KUNCI: makroalga, lektin, hemagglutinasi

## ABSTRACT
As  part  of  lectins  screening  project  from  Indonesia’s  macroalgae,  protein  extracts  from  17 macroalgae  s pec ies  c ollec ted  from  Binuangen  Coas t,  Banten  were  examined  for  their hemagglutinating activity using native and enzyme-treated rabbit and human erythrocytes (A,B,O). Extraction of the macroalgae hemagglutinins was conducted using 2 buffers, e.g Phosphat buffer saline (PBS) and Tris buffer saline (TBS) pH 7. The result showed that each buffer showed different hemagglutination activity  (case by  case  basis) eventhough  the total  protein content  extracted  by PBS and TBS were not difference. Most of marine algae extracts tested capabled of agglutinating at least one type of erythrocytes cells used. It was observed that extracts of green algae gave lower incidence of agglutination among  all three  groups  of  marine  algae  tested. Albeit  Padina  australis extract  negatively  hemagglutinated  rabbit  erythrocyte  but  it  showed  strong  hemagglutination activity toward human B and O erythrocyte. Among 8 green macroalgae tested, only two samples showed medium activity of hemagglutination, e.g. Chaetomorpha crassa and Halimeda macroloba. All  of  four  red  macroalgae  tested  showed  strong  hemagglutination  activity  to  rabbit  erytrocyte. Gracilaria  lichenoides  and  Gelidiella  acerosa  also  hemagglutinated  on  all  erythrocyte  tested. Meanwhile, among red macroalgae tested, Laurencia tronoi is the only extract that hemagglutinated human  A  erythrocyte.
KEYWORDS: macroalgae, lectins, hemagglutination

## PENDAHULUAN
Hemagglutinin, aglutinin atau lektin merupakan protein non imun alami yang mengikat karbohidrat secara reversible dan mempunyai kemampuan dalam mengaglutinasi sel atau mengikat polisakarida dan gliko­protein (Goldstein et al ., 1980; Le Hung et al ., 2012). Penekanan pada non-imun, dimaksudkan untuk membedakan lektin dari antibodi-karbohidrat tertentu, seperti  kinase,  glicosidase,  transferase  ataupun transporter (Goldstein et al., 1980 ) .
Kemampuan lektin  untuk mengikat karbohidrat secara spesifik pada permukaan sel (glikokonjugat), memungkinkan protein ini dapat dikembangkan untuk berbagai  tujuan,  termasuk  untuk  deteksi  dan identifikasi  kelompok  darah  dan  mikroorganisme, determinasi karbohidrat  dalam suatu  larutan, juga untuk pemurnian glikoprotein (Van Damme, 2014). Karena kemampuannya untuk mengikat karbohidrat di permukaan sel secara spesifik tersebut, lektin juga mempunyai banyak peran  penting dalam interaksi antara host-patogen, komunikasi sel-sel, mengenali dan  m engikat   karbohidrat  y ang  k em udian menghasilkan  efek  fungsional  untuk  menginduksi apoptosis,  berperan  sebagai  antibiotik, anti- inflammatory , anti-HIV serta anti agregasi platelet (Liao et al ., 2003; Dinh et al ., 2011; Sato et al ., 2011; Hamid et al ., 2013; Takebe et al ., 2013).
Secara  alami,  lektin  banyak  ditemukan  pada hampir  semua  makhluk  hidup:  tumbuhan,  jamur, bakteri, virus, hewan (vertebrata dan avertebrata). Namun  demikian,  lektin  yang  berasal  dari  alga memiliki beberapa kelebihan dibandingkan lektin dari sumber  lain,  yaitu:  memiliki  massa  molekul  lebih rendah  dibandingkan  lektin  yang  berasal  dari tumbuhan  dan  hewan,  memiliki  afinitas  spesifik terhadap oligosakarida kompleks dan glikoprotein, sebagian lektin alga juga tidak memerlukan kation divalen  untuk  aktivitas biologis  mereka,  dan  tidak mempunyai afinitas terhadap gula sederhana namun lebih spesifik untuk mengikat oligosakarida kompleks dan  atau  glikoprotein  (Rogers  &  Hori,  1993; Molchanova et al. , 2010).
Indonesia  memiliki  keanekaragaman  jenis  dan kelimpahan makroalga yang sangat tinggi. Walaupun berbagai  penelitian  untuk  mengungkap  potensi pemanfaatan  makroalga di  bidang farmasetikal  di Indonesia telah banyak dilaporkan (Fajarningsih et al ., 2008; Wikanta et al. , 2011; Nursid et al. , 2013a; Nursid et al. , 2013b; Setha et al. , 2013; Widowati et al. , 2014; Ahmad et al. , 2014), namun hingga saat ini penelitian untuk  mengeskplorasi  kandungan  lektin  pada berbagai  jenis makroalga  Indonesia  masih  sangat terbatas. Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan untuk menapis senyawa hemagglutinin (lektin) dari berbagai
jenis  m akroalga  yang  dikol eksi   dari   Pantai Binuangeun, Banten.

## BAHAN DAN METODE

## Pengambilan Sampel dan Identifikasi Jenis Makroalga
Tujuh belas jenis makroalga dikoleksi dari zona pasang surut Pantai Binuangeun, Banten. Makroalga yang dikoleksi kemudian dicuci dengan menggunakan air  tawar,  dibersihkan  dari  pengotor,  kemudian disimpan dalam cool box yang berisi es untuk menjaga kesegaran  makroalga.  Setiap  spesimen  sampel makroalga difoto untuk keperluan identifikasi jenis makroalganya. Diambil pula contoh spesimen untuk identifikasi jenis makroalga. Sampel-sampel tersebut kemudian disimpan dalam cold storage (suhu -20 o C) hingga sampel diekstraksi. Foto dan contoh spesimen setiap jenis rumput kemudian dikirimkan ke Pusat Penelitian Oseanografi Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) untuk diidentifikasi jenisnya.

## Ekstraksi Lektin
Ekstraksi  lektin  dilakukan  menurut  metode Praseptiangga et  al. (2012)  yang  dimodifikasi. Sebanyak  50  g thallus setiap  jenis  makroalga, dipotong-potong  menjadi  ukuran  kecil,  kemudian ditambahkan  nitrogen  cair  hingga thallus tersebut menjadi keras untuk kemudian digerus hingga menjadi bubuk.  Bubuk  m akroalga  diekstraksi  dengan menggunakan dua macam buffer, yaitu: Tris buffer saline (TBS) yang mengandung 0,02 M tris HCl, 150 mM NaCl, pH  7,0 dan buffer fosfat 0,02 M pH 7,0 yang mengandung 0,85% NaCl ( phosphat buffer saline /PBS).  Bubuk  makroalga  dihomogenisasi  dengan stirer  menggunakan  kedua  jenis  buffer  dengan perbandingan 1:2 (b/v), pada suhu 4 o C selama 8 jam, sebanyak dua ulangan untuk setiap buffer. Selanjutnya homogenat  makroalga disentrifuse  pada  15.302  g (Beckman, rotor JA 14) selama 30 menit pada suhu 4 o C. Supernatan kemudian dikoleksi dan disimpan pada suhu -20 o C hingga digunakan untuk uji.

## Uji Kadar Protein Terlarut
Kadar protein terlarut dalam setiap ekstrak kasar diukur dengan menggunakan BCA protein assay kit (Pierce-Thermo Scientific), mengikuti petunjuk yang diberikan.

## Uji Aktivitas Hemagglutinasi
Uji aktivitas  hemagglutinasi dilakukan  menurut metode Praseptiangga et al. (2012) yang dimodifikasi. Uji hemagglutinasi dilakukan dengan menggunakan
Gambar 1. Kadar total protein (µg/ml) ekstrak makroalga coklat, hijau, dan merah asal Pantai Binuangeun, Banten.
Figure 1. Total protein concentration (µg/ml) of brown, green and red macroalgae extracts collected from Binuangeun Coastal, Banten.
eritrosit  manusia  golongan  A,  B,  O,  dan  eritrosit kelinci . Eritrosit manusia diperoleh dari Palang Merah Indonesia (PMI) Jakarta, sementara eritrosit kelinci diambil dari intravena kelinci. Setiap sampel darah dicuci tiga hingga lima kali dengan larutan NaCl 0,85% dengan perbandingan 1/50 (v/v), setiap kali pencucian dilakukan sentrifugasi pada kecepatan 957 g ( Avanti, Beckman Coulter ), suhu 4 o C selama 5 menit untuk memisahkan eritrosit dari larutan pencuci. Setelah dicuci, disiapkan suspensi 2% eritrosit (v/v) dalam larutan  NaCl  0,85%.  Suspensi  eritrosit  tersebut digunakan  sebagai  eritrosit native dalam   uji hemagglutinasi.
Selain eritrosit native disiapkan pula eritrosit yang diberi perlakuan enzim tripsin dan papain. Setiap jenis sampel darah juga disiapkan dengan perlakuan enzim papain (Sigma) atau tripsin (Gibco). Enzim tripsin dan papain  (2%)  ditambahkan  ke  dalam  suspensi  2% eritrosit setiap sampel darah (eritrosit native ) dengan perbandingan  1/10  (v/v).  Selanjutnya  campuran tersebut diinkubasi pada suhu 37 o C selama 1,5 jam dan dilakukan resuspensi setiap 30 menit. Setelah diinkubasi, eritrosit kemudian dicuci tiga hingga lima kali dengan menggunakan 0,85% larutan NaCl, setiap kali pencucian dilakukan sentrifugasi pada kecepatan 957 g ( Avanti, Beckman Coulter ) , suhu 4 o C selama 5  menit  untuk  memisahkan  eritrosit  dari  larutan pencuci. Suspensi 2% eritrosit (v/v) dengan perlakuan enzim kemudian disiapkan dalam 0,85% larutan NaCl.
Uji  aktivitas  hemagglutinasi  dilakukan  dengan menggunakan mikroplat 96 sumuran, dengan dasar berbentuk  V.  Sebanyak  25  µl  ekstrak  kasar  lektin dimasukkan ke dalam sumuran mikroplat, kemudian diencerkan dua kali dengan larutan NaCl 0,85% secara serial  dalam  sumuran  mikroplat  hingga  10  kali pengenceran, sehingga pada pengenceran ke sepuluh ekstrak kasar telah terencerkan sebanyak 1024 kali. Ke  dalam   tiap  sum uran  ekst rak  k em udian ditambahkan  suspensi  eritrosit  2%,  selanjutnya campuran tersebut digoyang perlahan agar tercampur dengan baik, dan diinkubasi pada suhu ruang selama 1 jam. Uji hemagglutinasi dikerjakan dengan dua kali ulangan untuk setiap sampel. Aktivitas hemagglutinasi ditandai  positif  apabila  lebih  dari  50%  eritrosit teragl utinasi.  Hasil  negati f   ditandai  dengan terbentuknya  dot  eritrosit  (eritrosit  mengendap)  di dasar sumuran mikroplat karena tidak adanya lektin yang mengikat karbohidrat  di permukaan eritrosit. Aktivitas  hemagglutinasi  dinyatakan  sebagai  titer, yaitu  angka  pengenceran  tertinggi  yang  masih memberikan hasil positif hemagglutinasi.

## HASIL DAN BAHASAN
Tujuh  belas  sampel  makroalga  asal  Pantai Binuangeun,  Banten  yang terdiri dari  lima sampel makroalga coklat, delapan sampel makroalga hijau dan empat sampel makroalga merah telah diekstraksi
Kadar  Total  Protein/ Total  Protein  Concentration
µ g /ml D . d ic h o to m a S . d u p lic a tu m D . d e n ta ta S . p o ly c y s tu m P . a u s tr a lis C . m a c ro p h y s a C . c ra s s a C . s e rt u la io id e s C . p e lt a ta E . c la tr a ta U . re ti c u la ta H . m a c ro lo b a G . fo lii fe ra G . a c e ro s a L . tr o n o i
G . lic h e n o id e s H . m ic ro n e s ic a
Makroalga  Coklat/ Brown  Macroalgae
Makroalga  Hijau/ Green  Macroalgae Makroalga  Merah/ Red  Macroalgae
kandungan proteinnya untuk kemudian ditapis adanya kandungan lektin pada ekstrak tersebut.
Kadar  total  protein  ekstrak  makroalga  yang diesktraksi dengan kedua jenis buffer dapat dilihat pada Gambar 1. Berdasarkan hasil uji t, kadar protein ekstrak  makroalga yang diekstraksi dengan buffer TBS dan PBS tidak berbeda nyata (t(66)= -1,573 p  0,05). Dengan demikian, buffer TBS atau PBS dapat digunakan untuk mengekstraksi protein makroalga dengan hasil rata-rata rendemen yang sama.
Penapisan kandungan lektin ekstrak makroalga pada  penelitian  ini  dilakukan  dengan  metode  uji hemagglutinasi. Uji tersebut banyak digunakan karena merupakan uji yang cukup sensitif, relatif murah dan mudah untuk dikerjakan, walaupun sensitivitas uji ini masih lebih rendah dibandingkan uji enzyme-linked lectinsorbent, metode  lain  yang  dapat  digunakan untuk menapis senyawa lektin (Wang et al. , 2009). Aktivitas hemagglutinasi terjadi ketika lektin mengikat karbohidrat pada permukaan sel darah merah dan kemudian membentuk jaringan yang secara visual akan terlihat seperti karpet. Sementara jika diperoleh hasil negatif, sel darah merah akan mengendap di dasar sumuran mikroplat membentuk dot (Paiva et al. , 2010).
Aktivitas hemagglutinasi ekstrak makroalga asal Pantai Binuangen, Banten terhadap eritrosit manusia golongan A, B, dan O (native dan dengan perlakuan enzim) serta terhadap eritrosit kelinci dirangkum pada Tabel 1. Dapat dilihat pada Tabel tersebut, eritrosit kelinci  lebih  sensitif  untuk  mendeteksi  adanya aktivitas hemagglutinasi dibandingkan dengan eritrosit manusia. Berdasarkan penelitian Le Hung et al. (2012), eritrosit kelinci memiliki sensitivitas paling tinggi untuk mendeteksi aktivitas hemagglutinasi lektin makroalga, kemudian disusul oleh eritrosit domba, ayam, manusia (A,B,O)  dan  kuda.  Hasil  tersebut,  sedikit  berbeda dengan yang dilaporkan oleh Freitas et al. (1997) yang menunjukkan  bahwa  eritrosit  domba  justru  paling sensitif untuk mendeteksi aktivitas hemagglutinasi ekstrak alga yang dipelajari.
Aktivitas  hemagglutinasi  lektin  kadang-kadang tidak dapat terdeteksi karena adanya halangan sterik ( steric hindrance ) pada interaksi lektin-karbohidrat, sehingga diperlukan perlakuan enzim protease untuk mengatasinya (Paiva et al. , 2010). Enzim proteolitik dapat  digunakan  untuk  menghilangkan  fragmen glikoprotein  pada  membran  eritrosit  sehingga meningkatkan  kedekatan  antar  sel  eritrosit  dan meningkatkan  akses  antibodi  terhadap  antigen (Fernandes et al. , 2011). Dengan alasan tersebut, uji aktivitas hemagglutinasi lektin dikerjakan tidak hanya terhadap eritrosit native , namun juga terhadap eritrosit yang diberi perlakuan enzim tripsin dan papain.
Hasil  yang  di perol eh  pada  peneli tian  ini memperlihatkan hasil bervariasi. Beberapa ekstrak makroalga  meningkat  kem ampuannya  dalam menghemagglutinasi eritrosit dengan perlakuan enzim (ekstrak S.  duplicatum , C.  crassa , H.  macroloba ), nam un  beberapa  sam pel  just ru  m am pu menghemagglutinasi  eritrosit native lebih  baik dibandingkan  eritrosit  dengan  perlakuan  enzim. Sebagai contoh, keempat sampel ekstrak makroalga merah G.  foliifera,  G.  acerosa,  L.  tronoi dan G.  lichenoides m em per lihatkan  kem am puan menghemagglutinasi eritrosit golongan O native lebih baik dibandingkan eritrosit O yang diberi perlakuan enzim tripsin dan papain. Sebagian besar penelitian melaporkan aktivitas hemagglutinasi lektin makroalga terhadap eritrosit dengan perlakukan enzim lebih tinggi dibandingkan darah native (Ainouz et al. , 1995; Freitas et al. , 1997; Le Hung et al ., 2012) namun (Tsivileva & Nikitina,  2013;  Mangaiyarkarasi et  al. ,  2014) melaporkan lektin yang mereka uji justru tidak dapat mengaglutinasi eritrosit yang diberi perlakuan enzim tripsin. Hal tersebut kemungkinan disebabkan karena perlakuan enzim tripsin maupun papain pada eritrosit menyebabkan berubahnya struktur normal permukaan sel yang kemudian menyebabkan berubahnya binding site lektin pada sel darah merah tersebut. Akibatnya, seperti pada  beberapa kasus di atas, kemampuan lektin untuk mengenali binding site dan mengikat gula ataupun glikoprotein pada permukaan sel darah merah yang diberi perlakuan enzim protease justru menurun.

## Makroalga Coklat (Phaeophyceae)
Kel im a  sam pel  m ak roalga  yang  di uji memperlihatkan aktivitas hemagglutinasi pada salah satu  darah  yang  diujikan.  Di  antara  lima  sampel makroalga coklat yang diekstraksi dan diuji aktivitas hemagglutinasinya, hanya esktrak Padina asutralis yang  m em berik an  hasil negat if   dalam menghemagglutinasi eritrosit kelinci. Namun ekstrak P.  australis justru  m em perlihatkan  aktiv itas hemagglutinasi yang tinggi (titer hemagglutinasi 1024) terhadap eritrosit manusia golongan darah B dan O native. Neeta & Srisudha (2012) melaporkan ekstrak Padina  gymnospora m enunjukkan  aktiv i tas hemagglutinasi yang tinggi terhadap eritrosit manusia golongan A, B, dan O. Dilaporkan pula bahwa ekstrak tersebut mempunyai aktivitas antitumor terhadap sel tumor  hepar  (HepG2).  Sementara  itu,  ekstrak m ak roalga S.  poly cyst um selain  m am pu menghemagglutinasi eritrosit kelinci juga menunjukkan aktivitas hemagglutinasi yang tinggi terhadap eritrosit manusia golongan O native.
Menurut  Teixeira et  al. (2012),  hingga  saat  ini terdapat 31 lektin yang diisolasi dari makroalga merah dan 17 lektin yang diisolasi dari makroalga hijau, namun
Penapisan  Senyawa Hemagglutinin  dari  Mikroalga..........................................(Nurrahmi  Dewi Fajarningsih  et  al.)

## Tabel 1. Aktivitas hemagglutinasi ekstrak makroalga terhadap berbagai tipe eritrosit
Table 1. Hemagglutination activity of macroalgae extracts against different types of erythrocytes
Keterangan/ Note :  Aktivitas  hemagglutinasi  diekspresikan  sebagai  titer,  yaitu  angka  pengenceran  terkecil  yang masih  memperlihatkan  hemagglutinasi  positif/ Hemagglutination  activity  was  expressed  as  a  titer,  the  highest dilution  showing  positive  hemagglutination. TBS:  Tris Buffer  Saline; PBS: Phosphat  Buffer  Saline
N:  eritrosit native/native  erythrocyte ;  P:  eritrosit  dengan  perlakuan  enzim  papain/ papain-treated  erythrocyte ; T:  eritrosit  dengan  perlakuan  enzim  tripsin/ trypsin-treated  erythrocyte
belum ada lektin yang berhasil diisolasi dari makroalga coklat. Hal tersebut dikarenakan makroalga coklat kaya  akan  polifenol  yang  dapat  ikut  terekstrak. Sebagai  contoh,  quinones  merupakan  salah  satu produk  oksidasi  polifenol  yang  dapat  mengikat glikoprotein secara kuat sehingga menyebabkan hasil uji hemagglutinasi yang salah ( false positive ) .

## Makroalga Hijau (Chlorophyceae)
Dari  delapan  ekstrak  makroalga  hijau  yang diujikan,  hanya  satu  sampel  yang  tidak  dapat menghemagglutinasi eritrosit kelinci ( Caulerpa peltata ). Namun demikian, hanya dua sampel makroalga hijau yang juga mampu mengagglutinasi eritrosit manusia,
Makroalga/Macroalgae Buffer Titer Hemagglutinasi Ekstrak Makroalga/
Hemagglutination titer of Macroalgae Extracts
Eritrosit Manusia-A/ Human Erythrocyte- A Eritrosit Manusia-B/ Human Erythrocyte-B Eritrosit Manusia-O/ Human Erythrocyte-O Kelinci/Rabbit N P T N P T N P T N T Makroalga Coklat ( Phaeophyceae ) / Brown Macroalgae (Phaeophyceae) Dictyota dichotoma (BIN 1) TBS 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1024 0 PBS 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1024 0 Sargassum duplicatum (BIN 3) TBS 2 16 16 2 16 8 4 8 16 1024 516 PBS 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1024 68 Dictyota dentata (BIN 4) TBS 0 0 0 0 0 0 0 2 1 1024 0 PBS 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1024 0 Sargassum polycystum (BIN 11) TBS 0 2 2 0 2 2 1024 0 0 1024 192 PBS 0 0 2 0 2 2 1024 0 0 1024 80 Padina Australis (BIN 19) TBS 4 16 64 1024 16 32 1024 16 32 2 48 PBS 0 8 16 1024 16 8 1024 8 4 0 12 Makroalga Hijau ( Chlorophyceae ) / Green Macroalgae (Chlorophyceae) Caulerpa macrophysa (BIN 02) TBS 0 0 0 0 0 0 16 0 0 512 0 PBS 0 0 0 0 0 0 8 0 0 512 2 Chaetomorpha crassa (BIN 05) TBS 0 4 4 0 0 2 0 0 4 512 2 PBS 0 32 32 0 0 32 0 0 16 512 0 Caulerpa sertulaioides (BIN 06) TBS 0 0 0 0 0 0 2 0 0 512 0 PBS 0 0 0 0 0 0 0 0 0 512 0 Caulerpa peltata (BIN 07) TBS 0 0 0 0 0 0 0 0 0 8 4 PBS 0 0 0 0 0 0 0 0 0 8 4 Enteromorpha clatrata (BIN 13) TBS 0 0 0 16 0 0 0 0 0 512 128 PBS 0 0 0 0 0 0 0 0 0 512 64 Ulva reticulata (BIN 17) TBS 0 0 0 0 0 0 0 0 0 128 0 PBS 0 0 0 0 0 0 0 0 0 128 0 Halimeda micronesica (BIN 21) TBS 0 0 0 0 0 0 0 0 0 64 8 PBS 2 2 0 0 0 0 0 0 0 64 4 Halimeda macroloba (BIN 23) TBS 0 3 32 0 0 0 8 4 4 256 128 PBS 0 32 4 0 0 0 8 16 32 256 32 Makroalga Merah ( Rhodophyceae ) / Red Macroalgae (Rhodophyceae) Gracilaria foliifera (BIN 08) TBS 0 0 0 0 0 0 1024 0 0 1024 0 PBS 0 0 0 0 0 0 1024 0 0 1024 0 Gelidiella acerosa (BIN 12) TBS 16 32 64 32 32 32 1024 32 32 1024 16 PBS 32 32 64 16 32 64 1024 32 64 1024 16 Laurencia tronoi (BIN 16) TBS 128 0 0 0 0 0 1024 0 0 1024 4 PBS 32 0 0 0 0 0 1024 0 0 1024 4 Gracilaria lichenoides (BIN 20) TBS 8 128 64 1024 64 32 1024 64 64 1024 16 PBS 0 8 4 1024 4 2 1024 8 2 1024 8
yaitu Chaetomorpha  crassa dan H.  macroloba . Ekstrak PBS C. crassa dapat menghemagglutinasi eritrosit golongan A (papain-trypsin) dan B (trypsin) dengan titer hemagglutinasi sedang, di mana pada titer  pengenceran  32,  ekstrak  tersebut  dapat menghemagglutinasi eritrosit yang diujikan. Namun demikian, esktrak TBS C. crassa tidak menunjukkan aktivitas yang sama. Walaupun kedua buffer (PBS dan TBS) mampu mengekstraksi protein makroalga dengan hasil rata-rata rendemen yang sama, namun pada  beberapa  sampel  menghasilkan  aktiv itas hemagglutinasi yang berbeda. Hal ini kemungkinan disebabkan  karena  kadar  lektin  yang  terekstrak dengan kedua jenis buffer berbeda.

## Makroalga Merah (Rodhophyceae)
Pada kegiatan penapisan ini, hanya terdapat empat sampel makroalga merah yang berhasil dikoleksi dari Pantai  Binuangeun,  Banten.  Keempat  makroalga tersebut mampu menghemagglutinasi eritrosit kelinci dan eritrosit golongan darah O (native). Sementara itu, di antara keempat ekstrak makroalga merah yang diuji pada penelitian ini, hanya ekstrak L. tronoi yang mampu  menghemagglutinasi  golongan  darah  A (native).  Hasil  ini  sedikit  berbeda  dengan  yang dilaporkan Le Hung et al. (2012), di mana beberapa sampel makroalga dari genus Laurencia hanya aktif menghemagglutinasi eritrosit kelinci. Ekstrak  TBS Gracilaria  lichenoides dan  ekstrak  TBS  &  PBS Gelidiella acerosa dapat menghemagglutinasi semua eritrosit yang diujikan. Dalam penapisan lektin asal India  yang  dilaporkan  oleh  Mangaiyarkarasi et  al. (2014), beberapa genus Gracilaria ( G. crassa, G. edulis dan G. corticata ) positif menghemagglutinasi beberapa jenis eritrosit yang diujikan.
Lektin merupakan protein non imun alami yang m engikat  karbohidrat  secara reversible dan mempunyai kemampuan dalam mengagglutinasi sel atau mengikat polisakarida dan gliko­protein secara spesifik.  Ekstrak  lektin  makroalga  yang  dapat menghemagglutinasi golongan darah tertentu pada tahap penapisan ini dapat digunakan sebagai petunjuk awal sifat spesifisitasnya terhadap karbohidrat pada permukaan sel darah merah. Setiap golongan darah memiliki  jenis  karbohidrat  (oligosakarida)  yang berbeda di membrannya (Daniels & Bromilow, 2010). Pada  golongan  darah  O,  terdapat  antigen–lipid— glukosa—galaktosa—N  acety lgluc osam in— galaktos—fukosa. Sementara pada golongan darah A, terdapat penambahan antigen A pada antigen O dengan ikatan glikosidik, yaitu N-acetylgalactosamin (GalNAc).
Pengikatan lektin terhadap residu gula bersifat spesifik  seperti  halnya  pengenalan  antigen  oleh antibodi. Interaksi antara lektin dan karbohidrat pada
eritrosit yang bersifat spesifik tersebut salah satunya kemudian  dimanfaatkan  sebagai  marker  untuk pengelompokan darah (Khan et al ., 2002; Teixera et al ., 2012). Kelompok darah H (kelompok darah ABH) yang memiliki antigen Fuc  -(1,2)—Gal  -(1,3)-GlcNac  (1,3)  (1,4)—Gal  –  Fuc  -(1,2)  secara  spesifik dikenali  oleh  lektin  dari Sambucus  nigra (pohon elderberry) , Ulex europeus , dan Anguilla anguilla (Khan et  al. ,  2002).  Lektin S.nigra yang  secara  spesifik mengenali galaktosa, N-acetylgalaktosamin (GalNac) tersebut dilaporkan juga mampu mengenali antigen Tn carcinoma (Maveyraud et al ., 2009). Lebih lanjut, Shang et al. (2015) melaporkan bahwa lektin dari S. nigra mampu memicu kematian sel HeLa melalui jalur tambahan ribosom inactivating proteins (RIPs), protein yang menghambat translasi pada ribosom.
Berdasarkan hasil penapisan hemagglutinasi ini, beberapa sampel makroalga asal Pantai Binuangeun, Banten menunjukkan potensi sebagai sumber lektin. Data yang diperoleh pada penelitian ini selain sebagai informasi mengenai bioaktivitas lektin rumput laut asal perairan  Indonesia  yang  belum  pernah  dilaporkan sebelumnya, juga dapat dimanfaatkan sebagai data awal  untuk  mengisolasi  senyawa  lektin  baru  dari makroalga. Saat ini, isolasi dan studi karakterisasi lektin  dari  makroalga  yang  tergolong  aktif  pada penelitian ini sedang dikerjakan.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penapisan  hemagglutinin, beberapa sampel makroalga asal Pantai Binuangeun, Banten menunjukkan potensi sebagai sumber lektin. Sebagian besar ekstrak makroalga yang diuji mampu mengagglutinasi  setidaknya  satu  jenis  sel  eritrosit yang diujikan. Secara umum, kelompok makroalga hijau memperlihatkan aktivitas hemagglutinasi yang lebih rendah dibandingkan kelompok makroalga merah dan  coklat.  Beberapa  sampel  yang  menunjukkan aktivitas  hemagglutinasi  yang  kuat  di  antaranya makroalga  coklat P.  australis, makroalga  hijau C. crassa, H.  Macroloba dan  makroalga  merah G . lichenoides, G. acerosa , dan L. tronoi .

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmad,  A.,  Usman,  H.,  Natsir,  H.,  &  Karim,  A.  (2014). Isolation and characterization of bioactive protein from green  algae Halimeda  macrobola ac ting  as antioxidant  and  anticancer  agent. American  Journal of  Biomedical and  Life  Sciences,  2 (5),  134–140.
Ainouz, I., Sampaio, A., Freitas, A., Benevides, N.M.B., & Mapurunga,  S.  (1995).  Comparative  study  on hemagglutinins  from  the  red  marine  algae Bryothamnion  triquertrum and B  seaforthii . Rev Bras Fisiol Vegetal ., 7 (1): 15–19.
Penapisan  Senyawa Hemagglutinin  dari  Mikroalga..........................................(Nurrahmi  Dewi Fajarningsih  et  al.)
Daniels,  G.,  &  Bromilow,  I.  (2010). Essential  Guide  to Blood Groups (2nd  ed.). Melbourne:  Wiley-Blackwell. Dinh, L., Sato, Y., & Hori, K. (2011). Phytochemistry High- mannose  N-glycan-specific  lectin  from  the  red  alga Kappaphyc us striatum (Carrageenophyte). Phy tochemis try , 72 (9),  855–861. doi:10.1016/ j.phytochem.2011.  03.009.
Fajarningsih,  N.D.,  Nursid,  M.,  &  W ikanta,  T.  (2008). Bioaktivitas  ekstrak Turbinaria  decurrens sebagai antitumor  (HeLa  dan  T47D)  serta  efeknya  terhadap proliferasi  limfosit. J urnal  Pas c apanen  dan Bioteknologi  Kelautan  dan  Perikanan , 3 (1),  21–28. Fernandes,  H.P.,  Cesar,  C.L.,  &  Barjas-Castro,  M.D.L.
(2011).  Electrical  properties  of  the  red  blood  cell membrane  and  immunohematological  investigation. Revista  Brasileira  de  Hematologia  E  Hemoterapia , 33 (4),  297–301. doi:10.5581/1516-8484.20110080 Freitas, A. L. P., Teixeira, D. I. A., Costa, F. H. F., Farias, W. R. L., Lobato, A. S. C., Sampaio, A. H., & Benevides, N. M. B. (1997). A new survey of Brazilian marine algae for agglutinins. Journal of Applied Phycology , 9, 495– 501.
Goldstein, I.J., Hughes, R.C., Monsigny, M., Osawa, T., & Sharon,  N.  (1980).  W hat  should  be  called  a  lectin? Nature ,  285(66).
Hamid,  R.,  Masood,  A.,  Wani,  I.  H.,  &  Rafiq,  S.  (2013). Lectins/:  Proteins  with  diverse  applications. Journal of  Applied  Pharmaceutical  Science , 3 (4),  s93–s103. doi:10.7324/JAPS.2013.34.S18.
Khan, F., Khan, R.H.,  Sherwani, A.,  Sameena, M., Azfer, M.A.  (2002).  Lectins  as  markers  for  blood  grouping. Med. Sci. Monit., 8 (12), RA293–300.
Le Hung, D., Ly, B. M., Trang, V. T. D., Ngoc, N. T. D., Le Hoa, T.,  & Trinh, P. T. H. (2012). A new screening for hemagglutinins from Vietnamese marine macroalgae. Journal  of  Applied  Phycology , 24 (2), 227–235. doi:10.1007/s10811-011-9671-6. Liao, W.R., Lin, J.Y., Shieh, W.Y., Jeng, W.L., & Huang, R. (2003). Antibiotic  activity  of lectins  from  marine  algae against  marine  vibrios. J ournal  of  Indus trial Microbiology  and  Biotechnology , 30 (7),  433–439. doi:10.1007/s10295-003-0068-7.
Mangaiyark arasi,  R.,  Kannan,  L.,  Girija,  M.,  & Gnanamurthy,  S.  (2014).  Screening  of  Indian  marine macro  algae  (seaweeds)  for  haemagglutinin  activity. International  Journal  of  Advanced  Research , 2 (4), 43–52.
Maveyraud, L., Niwa, H., Guillet, V., Svergun, D.I., Konarev, P.V.,  Palmer,  R.A.,  Peumans,  W.J.,  Rouge,  P.,  Van Damme,  E.J.,  Reynolds,  C.D.,  Mourey,  L.  2009. Structural  basis  for  sugar  recognition,  including  the Tn  carcinoma  antigen,  by  the  lectin  SNA-II  from Sambucus  nigra . Proteins , 75 (1),  89–103.
Molchanova, V., Chernikov, O., Chikalovets, I., & Lukyanov, P.  (2010).  Purification  and  partial  characterization  of the  lectin  from  the  marine  red  alga Tichocarpus crinitus (Gmelin)  Rupr.  (Rhodophyta). Botanica Marina , 53 (1),  69–78. doi:10.1515/BOT.2010.001. Neeta,  V.  &  Srisudha,  S.  (2012).  Bioc hemic al characterization,  haemagglutinating  activitty  and cytotoxic  activity  of Padina  gymnospora (Kutzing)
Sonder. International  J ournal  of  Biologic al  & Pharmaceutical  Research ., 3 (8),  956–961.
Nursid, M., Fajarningsih, N. D., & Chasanah, E. (2013a). Cytotoxic activity and apoptosis induction of T47D cell lines  by Turbinaria  decurrens extract. Squalen , 8 (1), 23–28.
Nursid,  M.,  W ik anta,  T.,  &  Susilowati,  R.  (2013b). Kandungan fukosantin ekstrak rumput laut coklat dari pantai Binuangeun,  Banten. Jurnal Pascapanen  dan Bioteknologi  Kelautan  dan  Perikanan , 8 (1),  73–84. Paiva,  P.M.,  Gomes,  F.,  Napoleão,  T.,  Sa,  R.,  Correia, M.T., & Coelho, L.C.B. (2010). Antimicrobial activity of sec ondary  metabolites  and  lec tins  from  plants. Current Research, Technology and Education Topics in Applied Microbiology and Microbial Biotechnology , 396–406.
Praseptiangga,  D.,  Hirayama,  M.,  &  Hori,  K.  (2012). Purification,  characterization,  and  cDNA  cloning  of  a novel  lectin  from  the  green  alga, Codium  barbatum . Bioscience,  Biotechnology,  and  Biochemistry , 76 (4), 805–11. doi:10.1271/bbb.110944
Rogers, D.J. & Hori, K. (1993).  Marine algal  lectins: new developments. Hydrobiologia , 260-261 (1),  589–593. Retrieved  from http://link .s pringer.c om/article/ 10.1007/BF00049075
Sato,  Y.,  Morimoto,  K.,  Hirayama,  M.,  &  Hori,  K.  (2011).
Bioc hemic al and Biophysic al Researc h Communic ations  High  mannose-spec ific   lectin (KAA-2)  from  the  red  alga Kappaphycus  alvarezii potently  inhibits  influenza  virus  infection  in  a  strain- independent  manner. Biochemical  and  Biophysical Researc h  Communic ations , 405 (2),  291–296. doi:10.1016/j.bbrc.2011.01.031
Setha, B., Gaspersz, F.F., Idris, A.P.S.,  Rahman, S., and Mailoa,  M.N.  2013.  Potential  of  seaweed Padina sp. as  a  source  of  antioxidant. International  Journal  of Scientific &  Technology  Research ., 2 (6),  221–224. Shang, C., Chen, Q., Dell, A., Haslam, SM., De Vos, WH., &  Van  Damme,  E.J.M.  (2015).  The  cytotoxicity  of elderberry  ribosome-inactivating  proteins  is  not  solely determinded  by  their  protein  translation  inhibition activity. PloS  one. , 10 (7),  e0132389. doi:10.1371/ journal.pone.0132389.
Takebe, Y.,  Saucedo, C.  J., Lund,  G., Uenishi,  R., Hase, S.,  Tsuchiura,  T.,  Norman,  K.,  Tyrrell,  D.,  Shirakura, Wakita,  T.,  McMahon,  J.M.,  &  O’Keefe,  B.R.  (2013). Antiviral  lectins  from  red  and  blue-green  algae  show potent  in  vitro  and  in  vivo  activity  against  Hepatitis  C virus. PLoS  ONE ., 8 (5),  e64449. doi:10.1371/ journal.pone.0064449.
Teixeira,  E., Arruda,  F.V.,  Nascimento,  K.,  Carneiro,  A., Nagano, C., Silva, B., Sampaio, A.H., & Cavada, B.S. (2012).  Biological  applications  of  plants  and  algae lectins:  An  overview. In Chang,  C.F.  (ed.). Carbohy draetes -c omprehens ive s tudies on glyc obiology  and  gly cotec hnology .  InTec h. doi:10.5772/50632.
Tsivileva,  O.,  &  Nik itina,  V.  (2013). Trypsin-treated erythrocy tes   c ompetition  with  lec tin-s pec ific carbohydrates:  mushroom  lectins  select  a  winner. Nova  Science  Publishers.  Retrieved  from https:// w w w . n o v a p u b l i s h e r s . c o m / c a t a l o g /
produc t_info.php?produc ts_id=38393&os Cs id= 876f744b190e123c38f64f4b9e8adbbf.
Van Damme, E.J. (2014). History of plant lectin research.
In Hirabayashi, J. (ed.). Lectins Methods and Protocols
(Methods  in,  pp.  3–14).  Humana  Press,  New  York. Wang, T., Lee, M.,  & Su, N. (2009). Screening of lectins by  an  enzyme-link ed  adsorbent  assay. Food Chemistry , 113 (4),  1218–1225. doi:http://dx.doi.org/ 10.1016/j.foodchem.2008.08.024.
Widowati, I., Lubac, D., Puspita, M., & Bourgougnon,  N. (2014). Antibacterial  and  antioxidant properties  of the
red alga Gracilaria verrucosa from the north coast  of Java,  Semarang,  Indonesia. International  Journal  of Latest  Research  in  Science  and  Technology,  3 (3), 179–185.
Wikanta,  T.,  Handayani,  V.  F.,  Rahayu,  L.,  Pratitis, A.,  & Wuyung,  P.  (2011).  Pengaruh  pemberian  ekstrak  etil asetat Ulva  fasciata delile  dan Turbinaria  decurrens bory terhadap laju pertumbuhan. Jurnal Pascapanen dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan , 6 (1),  57– 68.