Efek Ekstrak Air  Daun  Insulin   ( Tithonia Diversifolia )  pada Status Darah Tikus ( Rattus Norvegicus L.) Hiperglikemik
Effect of Extract Insulin Leaves ( Tithonia Diversifolia ) to Blood Status of Hyperglicemic Rats ( Rattus Norvegicus L.)
Enny Yusuf Wachidah Yuniwarti*  dan Silvana Tana Departemen Biologi,  Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Diponegoro Jl. Prof. Soedarto SH, Tembalang, Semarang
*Email:  enny_yusuf@yahoo.co.id
Diterima 26 Desember 2018 / Disetujui  28 Januari 2019

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  melakukan  analisis  efek  ekstrak  air  daun  insulin  terhadap  status  darah  tikus hiperglikemik.  Kondisi  hiperglikemik  akan  meningkatkan  jumlah  radikal  bebas  yang  dapat  merusak  struktur membran  eritrosit  sehingga  menurunkan  jumlah  eritrosit,  persentase  hematokrit  dan  kadar  hemoglobin. Penelitian  ini  menggunakan  16  ekor  tikus  Wistar  jantan  yang  dikelompokkan  dalam  4  kelompok  perlakuan yaitu  P0  merupakan  kelompok  kontrol,  P1  kelompok  tikus  hiperglikemik  yang  diberi  glibenklamid  2  mg/BB, P2  dan  P3  kelompok  tikus  hiperglikemi  yang  diberi  ekstrak  air  daun  insulin  30  mg/BB/  hari  dan  60 mg/BB/hari.  Desain  penelitian  yang  digunakan  adalah  Rancangan  Acak  Lengkap  dengan 4 perlakuan dan 4 ulangan.Pakan  dan  minum  diberikan ad  libitum selama  4  minggu.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa jumlah  eritrosit  tidak  berbeda  nyata  pada  semua  perlakuan,  begitu  pula  persentase  hematokrit  dan  kadar hemoglobin  tidak  berbeda  nyata  antar  kelompok  perlakuan.  Kesimpulan  dari  penelitian  ini  adalah  bahwa ekstrak air daun insulin  mampu memperbaiki  status darah tikus hiperglikemi  setara dengan glibenklamid.

## Kata kunci: eritrosit, hemoglobin, hematokrit, daun insulin, tikus hiperglikemi

## ABSTRACT
This  study  aims  to  analyze the effect of insulin leaf  water extract on the blood status of hyperglycemic rats. Hyperglycemic  conditions  will  increase  the  number  of  free  radicals  that  can  damage  the  structure  of erythrocyte  membranes  thereby  reducing  the  number  of  erythrocytes,  the  percentage  of  hematocrit  and hemoglobin  levels.  This  study  used  16  male  Wistar  rats  grouped  in  4  treatment  groups  namely  P0  was  the control group,  P1 group hyperglycemic rat given glibenclamide 2 mg/BB, P2 and P3 groups of hyperglycemic mice  given  extract  insulin  leaf water 30  mg /BW/ day and 60 mg/BW/day. The research design used was a completely randomized design with 4 treatments and 4 replications. Feed and drink were given ad libitum for 4 weeks. The results showed that the number of erythrocytes was not significantly different in all treatments, so as the percentage of hematocrit and hemoglobin levels were  not significantly different between  all groups. The conclusion of this study was that insulin leaf water extract can improve the blood status of hyperglycemic mice equivalent  to glibenclamide.
Keywords : erythrocytes, hemoglobin, hematocrit, leaf insulin, hyperglycemic rat

## PENDAHULUAN
Status  darah  merupakan  faktor  penting dalam  menentukan  derajad  kesehatan  manusia melalui  hewan  model.  Salah  satu  cara  evaluasi status  darah  adalah  dengan  menentukan  julah eritrosit, persentase hematokrit dan kadar
hemoglobin  (Said  dan  Abiola,  2014).  Jumlah  sel darah  merupakan  indikator  terhadap  produksi  dan kualitas  sel  darah.  Jumlah  sel  darah  yang  kurang dari  normal  akan  menyebabkan  hewan  mudah terkena  penyakit,  sehingga  jumlah  sel  darah  dapat digunakan  untuk  diagnosis,  pengobatan  dan prognosis  suatu  penyakit  (Li et  al .,  2013).  Fungsi
Efek  Ek strak  Air Daun Insulin  (Tithonia Diversifolia )  pada Status Darah Tik us (Rattus Norvegicus L.) Hiperglik emik
eritrosit  secara  umum  berkaitan  dengan  fungsi hemoglobin  yaitu  berperan  dalam  pertukaran  gas dan  distribusi  oksigen  ke  dalam  sel,  yang diperlukan oleh sel untuk proses metabolisme. Dua dekade  terakhir,  beberapa  penelitian  menunjukkan bahwa  eritrosit  berperan  pula  dalam  fungsi kekebalan  tubuh  secara  menyeluruh,  yaitu  mulai dari  identifikasi,  adhesi  dan  pembunuhan  patogen sehingga  mampu  meregulasi  sistem  kekebalan tubuh (Tian et al ., 2013).
Kondisi  hiperglikemik  akan  menghasilkan radikal bebas yang selanjutnya  radikal bebas dapat menyebabkan gangguan fungsi  seluler  dan kerusakan oksidatif pada membran serta meningkatkan  kerentanan  terhadap  peroksidasi lipid.  Status  antioksidan  total  serum  berkurang pada  diabetes  tipe  I,  sedangkan    sel  darah  merah dan  sel  lain  dari  hewan  diabetes  meningkatkan konsentrasi  peroksidasi  lipid  dan  menurunkan konsentrasi glutathion (Andallua dan Varadacharyulub, 2003).
Komplikasi  yang  timbul  dari  kondisi hiperglikemik  seperti  nefropati,  retinopati,  dan penyakit  makrovaskular  berhubungan  dengan anemia.  Eriptosis,  istilah  yang  digunakan  untuk apoptosis  eritrosit,  dipicu  oleh  syok  osmotik,  stres oksidatif,  atau  berkurangnya  energi.  Eriptosis  juga ditandai  dengan  penyusutan  sel,  pembengkakan membran, membran fosfolipid, dan phosphatidylserin bergeser dari membran dalam ke luar dari eritrosit. Anemia pada kondisi hiperglikemik  didasari  oleh  eriptosis  yang  terkait dengan  cedera  mikrovaskuler,  adhesi  endotel  dan peningkatan agregasi eritrosit (Firat et al ., 2012).
Upaya  pemulihan  kondisi  hiperglikemi secara tradisional dapat dilakukan dengan mengkonsumsi  daun  atau  tanaman  yang  bersifat antidiabetik.  Salah  satu  bahan  yang  bersifat antidiabetik  terdapat  dalam  daun  insulin.  Daun insulin ( Tithonia diversifolia ) mengandung senyawa  flavonoid,  alkaloid,  terpenoid,  saponin, tanin,  polifenol,  seskuiterpen,  asam  klorogenik  dan turunan  asam  klorat  yang  bersifat  antidiabetik (Passoni et  al., 2013).  Pemulihan  kondisi hiperglikemik  dapat  mengurangi  penurunan  status darah,  sehingga  penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  apakah  ekstrak  air  daun  insulin
mampu  menghambat  kerusakan  sel  eitrosit, hemoglobin  dan nilai  hematokrit.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  menggunakan  tikus  putih ( Rattus  norvegicus )  hiperglikemik,    jantan berumur 2 bulan dengan berat badan sekitar 200 g sebanyak  20  ekor  yang  dibagi  dalam  4  perlakuan dengan  4  ulangan.  Perlakuan  0  adalah  perlakuan kontrol,  perlakuan  1  adalah  kelompok  tikus hiperglikemik  yang  diberi  glibenklamid  2  mg/BB tikus, perlakuan  2  adalah  kelompok  tikus hiperglikemik  yang  diberi  0,2  ml  larutan  stok  1, dan perlakuan 3 adalah kelompok tikus hiperglikemik  yang diberi  0,2 ml larutan stok 2,
Persiapan  pembuatan  larutan  stok  daun insulin  dengan  cara  menimbang  1000  g  daun insulin  yang  sudah  dihaluskan  dan  di  kering anginkan  kemudian  dimaserasi  dengan  2  liter akuades  selama  24  jam.  Hasil  maserasi  disaring dan diuapkan sehingga berbentuk pasta. Pasta yang didapat  diambil  30   mg dan 60 mg yang dilarutkan dalam  3  ml  akuades  sebagai  larutan  stok  1  dan larutan stok 2.
Peubah  yang  diamati  adalah  jumlah eritrosit dan kadar hemoglobin dan nilai hematokrit.  Darah  dikoleksi  pada  akhir  perlakuan, diambil  dari  jantung  setelah  tikus  dibius  dengan kloroform,  dan  ditampung  pada  tabung  2 ml untuk penentuan  jumlah  eritrosit  dan  kadar  hemoglobin dan  nilai  hematokrit.    Perlakuan  selama  4  minggu dan  pada  akhir  minggu  ke  4  dilakukan  koleksi sampel untuk pengambilan data. Data yang didapat selanjutnya dianalisis  dengan ANOVA.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan  hasil  analisis  data  jumlah eritrosit  tidak  menunjukkan  adanya  beda  nyata antar  perlakuan  begitu  pula  kadar  hemoglobin dan nilai  hematokrit    tidak  berbeda  nyata  antar kelompok perlakuan, seperti nampak pada Tabel 1. Jumlah  eritrosit  pada  semua  perlakuan  tikus hiperglikemik  tidak  berbeda  nyata  dengan  kontrol, baik  yang  diberi  ekstrak  air  daun  insulin  30 mg/BB/hari  60  mg/BB/hari  maupun  perlakuan dengan  glibenklamid.  Glibenklamid  merupakan
sulfonilurea  oral  yaitu  suatu  agen  hipoglikemik melalui  peningkatan  sekresi  insulin  dari  pankreas. Reseptor sulfonilurea pada pemukaan membran sel akan berinteraksi dengan sel beta atau mengganggu  saluran  potassium  ATP-sensitif  pada
sel  β  pankreas,  sehingga  terjadi  peningkatan sekresi  insulin.  Glibenklamid  juga  meningkatkan sensitivitas  reseptor  insulin  yang  ada,  sehingga digunakan sebagai pengobatan oral dalam manajemen hiperglikemik  (Papich, 2016).
Tabel 1. Hasil ANOVA rata-rata jumlah eritrosit,  nilai  hematokrit dan kadar  hemoglobin  tikus potih  ( Rattus norvegicus ) jantan hiperglikemik  setelah pemberian ekstrak air daun insulin  ( Tithonia diversifolia ) P0 P1 P2 P3 Jumlah eritrosit (juta/ml) 4,95 a ±0,13 4,90 a ±0,46 4,78a±0,24 4,93a±0,22 Kadar hemoglobin  (gram/dl) 14,83 a ±0,25 14,03 a ±0,69 14,58 a ±0,66 14,88 a ±0,66 Nilai  hematokrit (%) 44,50 a ±1,3 41,75 a ±2,22 43,25 a ±2,26 44,25 a ±2,22
Keterangan: superscript yang sama pada baris yang sama menunjukkan  tidak berbeda nyata.
Penelitian  ini  menggunakan  glibenklamid sebagai  pembanding  sehingga  tidak  adanya perbedaan yang nyata antara perlakuan ekstrak air daun  insulin,  baik  pada  dosis  30  mg  dan  60  mg dengan  perlakuan  glibenklamid,  diduga  karena ekstrak air daun insulin tersebut  mampu menangkal  radikal  bebas  yang  dihasilkan  pada kondisi hiperglikemik  sehingga  tidak  terjadi kerusakan  eritrosit  lebih  lanjut.  Komponen  yang terkandung  dalam  daun  insulin  adalah  flavonoid dan  seskuiterpen  lakton  yang  berperan  sebagai antidiabetik  (Sasmita  dkk.,  2017).  Flavonoid bekerja  melalui  pengikatan  radikal  bebas  sehingga menstabilkan  kompleks  transkripsi  gen  untuk regenerasi  sel  β  pankreas  (Qi et  al .,  2010). Flavonoid  juga  berperan  menekan  apoptosis  sel  β pankreas,  memperbaiki  sensitivitas  reseptor insulin sehingga  mampu  meningkatkan  absorpsi  glukosa (Sasmita dkk., 2017). Seskuiterpen lakton berperan sebagai  inhibitor  aktivasi  nuclear  faktor  kappa  B (Heinrich et  al .,  1998).  Nuclear  faktor  kappa  B yang  meningkat  akibat  stimulasi  peningkatan kadar  glukosa  dalam  darah  akan  menyebabkan peningkatan resistesi insulin, sehingga penghambatan  aktivasi  nuklear  faktor  kappa  B oleh  sesquiterpen    akan  meningkatkan  sensitivitas insulin  sehingga  mempermudah  glukosa  masuk  ke dalam  sel  dan  mengurangi  efek  hiperglikemik (Kumar et al ., 2004).
Beberapa  penelitian  juga    menunjukkan bahwa  eritrosit  dengan  hemoglobin  berperan penting  dalam  pertukaran  gas  dan  distribusi oksigen  ke  dalam  sel.  Eritrosit  juga  berperan
dalam  sistem  kekebalan  tubuh  secara  menyeluruh (Tian et  al., 2013).  Jumlah  eritrosit  merupakan indikator  produksi  dan  kualitas  sel  eritrosit, sehingga  jumlah  sel  eritrosit  digunakan  untuk diagnosis,  pengobatan  dan  prognosis.  Secara klinis,  penurunan  jumlah  eritrosit  akan  berakibat pada  penurunan  hemoglobin  dan  menyebabkan terjadinya  anemia  (Li et  al .,  2013).  Pernyataan tersebut  sesuai  dengan  hasil  penelitian  yang menunjukkan  tidak  ada  beda  nyata  pada  kadar hemoglobin  antar  semua  perlakuan,  karena  tidak terjadinya  perbedaan  yang  nyata  pada  jumlah eritrosit berkorelasi dengan kadar hemoglobin.
Hasil  penelitian  pada  nilai  hematokrit menunjukkan  tidak  berbeda  nyata  pada  semua perlakuan,  hal  ini  diduga  terkait  dengan  jumlah eritrosit  yang tidak berbeda nyata antar perlakuan. Hematokrit  merupakan  persentase  volume  darah yang  terisi  oleh  sel  darah  merah.  Nilai  hematokrit pada penderita diabetes dapat mengalami peningkatan  atau  penurunan. Kadar glukosa darah yang  tinggi  dapat  menyebabkan  keluarnya  air dari jaringan,  sehingga  terjadi  dehidrasi.  Dehidrasi merupakan  salah  satu  faktor  yang  mempengaruhi peningkatan nilai  hematokrit (Safitri  dkk., 2017).
Eritrosit  mampu  mengekspresikan  nitrit oksida  yang berperan dalam menghambat replikasi virus  (Stephenson,  2003).  Hemoglobin  akan mengurangi  nitrit  untuk  diubah  menjadi  nitrit oksida  sehingga  eritrosit-Hb  dianggap  sebagai sumber  nitrit  oksida  sintase  yang  menstimulasi pembentukan nitrit oksida. Nitrit oksida merupakan  molekul  signaling  yang  sangat  penting
Efek  Ek strak  Air Daun Insulin  (Tithonia Diversifolia )  pada Status Darah Tik us (Rattus Norvegicus L.) Hiperglik emik
(Petra et  al .,  2006),  dan  berperan  sebagai antioksidan  melalui  deaktivasi  radikal  bebas (Richard et  al .,  1998).  Jumlah  eritrosit  pada perlakuan  ekstrak  air  daun  insulin  yang  tidak berbeda  nyata  dengan  perlakuan  glibenklamid, karena  adanya  antioksidan  yang  terkandung  daun insulin,  juga  kemampuan  eritrosit  dalam  deaktivasi radikal bebas.

## KESIMPULAN
Kesimpulan  dari  penelitian  ini  adalah bahwa ekstrak air daun insulin mampu memperbaiki  status  darah  tikus  hiperglikemik setara dengan glibenklamid.

## DAFTAR PUSTAKA
Andallua B. and N.Ch. Varadacharyulub.
Antioxidant  role  of  mulberry  ( Morus
indica L.  cv.  Anantha)  leaves  in streptozotocin-diabetic rats. Clinica Chimica Acta 338 (2003) 3 –10
Fırat  U.,1  Savas¸  Kaya,  Abdullah  C¸  H
B¨uy¨ukbayram,1  O G¨okalp,M S Dal, and M.N Tamer. Increased Caspase-3 Immunoreactivity  of  Erythrocytes  in  STZ Diabetic  Rats.  Experimental  Diabetes Research  Volume  2012,  Article  ID 316384,  4 pages Heinrich M., Robles M., West J.E., De Montellano B.R., and E. Rodriguez. 1990. Ethnopharmacology of Mexican Asteraceae  (Compositae). Annual Review of Pharmacology Toxicology  38:539-565.
Kumar  A.,  Takada  Y.,  Boriek  A.M.,  and.B.  B. Aggarwal.,  Nuclear  factor-kB:  its  role  in health  and  disease.  J  Mol  Med  (2004) 82:434–448
Li  C.,  Yulong  Dong,  Haifeng  Hou,  Qian  Li, Ruihua  Zhang,  Ruiling  Qin,  Zhonghao  Li,
Yongzhan  Bao  and  Wanyu  Shi.  2013.
Effects  of  traditional  Chinese  herbal medicines  on  blood  cell  count  and immunity  in  chickens.  African  Journal  of Pharmacy  and  Pharmacology.  Vol.  7(29), pp.  2081-2086,  2013.  DOI  10.5897/ AJPP2013.3460 ISSN 1996-0816
Papich  M.G,  Glyburide.    Saunders  Handbook  of Veterinary Drugs (Fourth Edition),  2016
Passoni  F.D Oliveira R.B.,  Aparecida  D. Chagas-Paula Leonardo  Gobbo-Neto  and F.B Da Costa. Repeated-dose toxicological studies of Tithonia diversifolia (Hemsl.) A.
gray  and  identification  of  the  toxic compounds. Journal of Ethnopharmacology.  Volume  147,  Issue 2, 20 May 2013,  Pages 389-394
Petra  Kleinbongard,  Rainer  Schulz,  Tienush Rassaf,  Thomas  Lauer,  André  Dejam, Thomas  Jax,  Intan  Kumara,  Putrika Gharini, Svetlana Kabanova, Burcin Özüyaman,  Hans-Georg  Schnürch,  Axel Gödecke, Artur-A. Weber, Mirko Robenek,  Horst  Robenek,  Wilhelm  Bloch, Peter  Rösen,  and  Malte  Kelm.  2006. Red Blood Cell Express a Functional
Endothelial  Nitric  Oxide  Synthase.  Blood: 107 (7).
Richards  RS,  Roberts  TK,  McGregor  NR, Dunstan  RH,  Butt  HL:  The  role  of erythrocytes  in  the  inactivation  of  free radicals.  1998.  The  Role  Of  Erythrocytes In The Inactivation Of Free Radicals. Med Hypotheses 1998, 50 (5):363-367
Said  N.  and  O.  Abiola.  Haematological  profile shows  that  Inbred  Sprague  Dawley  rats have  exceptional  promise  for  use  in biomedical  and  pharmacological  studies. Asian Journal of Biomedical and
Pharmaceutical  Sciences; 4 (37) 2014, 33- 37
Safitri  S.  Razak  A.  dan R. Sumarmin. Pengaruh Varietas  Beras  Putih  Sumatera  Barat Terhadap  Nilai  Hematokrit  Darah  Mencit (Mus Musculus L. Swiss Webster) Jantan. Bioscience  Vol 1, No 1 (2017)
Sasmita  F.W.,  Susetyorini  E.,  dan Y. Pantiwati.. Efek  Ekstrak  Daun  Kembang  Bulan ( Tithonia  diversifolia )  Terhadap  Kadar Glukosa  Darah  Tikus  Wistar  Yang Diinduksi  Alloxan.  Biosfera  34  (1):  22-31 (2017)
Stephenson,  I., Wood, J.M., Nicholson, K.G. and Zambon, M.C. (2003), Sialic Acid
Receptor  Specificity  on  Erythrocytes
Affects  Detection  Of  Antibody  To  Avian Influenza  Haemagglutinin.  J.  Med.  Virol., 70: 391–398. doi:  10.1002/jmv.10408
Tian  W.X.,  N.  Sun,  G.B.  Ning,  D.J.  Zhang,  J. Feng,  T.X.  Lv,  Y.  Wang,  H.M.  Wang, X.H.  Wang  and  F.  Li.  2013.  Effects  of
Gallid  Herpesvirus  2  Marek's  Disease Challenge  Virus  and  Attenuated  Vaccine Virus CVI988/Rispens on Immune Adhesion  of  Erythrocytes  of  Chickens.
International Journal of Poultry Science 12 (4): 217-223,  2013. ISSN 1682-8356