Perkembangan sel T CD4 dan CD62L pada Organ Spleen Mencit yang diinfeksi Salmonella typhimurium setelah pemberian Ekstrak Ethanol Daun Polyscias obtusa dan

## Elephantopus scaber
Nida Asfi 1 , Moch. Sasmito Djati 1
1 Jurusan Biologi, Fakultas MIPA, Universitas Brawijaya, Malang
1) nida.asfi@gmail.com , 2) msdjati@yahoo.com

## ABSTRAK
Polyscias  obtusa  dan  Elephantopus  scaber  merupakan  tanaman  yang  memiliki  kemampuan Immunomodulator.  Penelitian  menggunakan  dua  tanaman  obat  ini  secara  bersama  diharapkan  dapat diketahui manfaat sinergis antara kedua tanaman obatini. Penelitian ini dilakukan menggunakan hewan coba mencit Balb/C Musmusculus yang diinfeksi dengan bakteri Salmonella typhi (dosis 10 8 ). Treatment diberikansecara  oral  dari  ekstrak  etanol  daun  Tapak  liman  dan  Kedondong  laut  dengan  perbandingan dosis antara kedua yaitu (0%:100%; dan50%:50%) dengan dosis awal Elephantopus scaber dan Polyscias obtuse sebesar 50mg/KgBB. Pembedahan dilakukan pada hari ke-14 dan ke-18 setelah dilakukan injeksi. Sel  limfosit  diisolasi  dari  organ  spleen,  dianalisa  dengan  flowcitometry  dan  dianalisa  hasil  dengan  one way  ANOVA  menggunakan  SPSS  16.0  dan  dilanjutkan  uji  Tukey.  Berdasarkan  hasil  yang  didapatkan bahwa perlakuan pemberian ekstrak etanol daun Kedondong laut dan Tapak liman menurunkan jumlah relative  sel  TCD4 + secara  signifikan  yaitu  sebesar  6,29%  dibandingkan  kontrol  positif  18,9%,  dan dibandingkan  dengan  pemberian  ekstrak  daun  tapak  liman  saja  tidak  menurun  secara  signifikan  yaitu sebesar 9.22% hal tersebut menunjukkan adanya efek imunosupresan dari Tapak liman dan Kedondong laut  yang  diberikan  bersamaan.  Jumlah  relative  sel  T  CD62L + menunjukkan  peningkatan  yang  cukup signifikan  pada  perlakuan  pemberian  ekstrak  etanol  daun  Kedondong  laut  dan  Tapak  liman  yaitu sebesar  14,19%  dibandingkan  kontrol  yaitu  5,35%,  dan  menurun  pada  perlakuan  pemberian  tapak liman saja, hal ini menunjukan bahwa pemberian ekstrak etanoldaun Kedondong laut dan Tapak liman mempengaruhi proliferasi sel naive
Kata kunci: Elephantopus scaber, Polyscias obtusa,Spleen

## ABSTRAC
Polyscias  obtusa  and  Elephantopus  scaber  is  a  plant  that  has  immunomodulators  effect.  This research using these two herbs are expected to know the benefits of synergy between these two medicinal plants.  This  research  was  conducted  using  experimental  animals  Balb  /  C  mice  Mus  musculus  infected with  the  bacterium  Salmonella  typhi  (108  doses).  Treatment  was  administered  orally  from  the  ethanol extract of the leaves Polyscias obtuse and Elephantopus scaber with dose (0%: 100% and 50%: 50%) with an initial dose of Elephantopus scaber and Polyscias obtusa by 50mg/KgBB. Surgery performed on the 14 th day  and  18 th after  injection.  Lymphocytes  isolated  from  the  spleen  organ,  analyzed  with  flowcytometry and analyzed the results with one way ANOVA using SPSS 16.0 and Tukey test continued. Based on the results obtained that the treatment of ethanol extract of leaves Polyscias obtuse and Elephantopus scabers showen the relative number of cells was lower significantly TCD4 + is equal to 6.29% compared to positive controls 18.9%, and compared with Elephantopus scaber leaf extract alone did not decrease significantly ie  at  9,22%  it  showed  immune  suppressive  effects  of  Polyscias  obtusa  and  Elephantopus  scaber  given simultaneously. Relative number of CD62L + T cells showed a significant increase in treatment of ethanol extract of leaves Kedondong laut and Tapak liman is equal to 14.19% compared to controls 5.35%, and decreased  in  treatment  just  Elephantopusscaber,  this  shows  that  the  ethanol  extract  of  leaves Plysciasobtusa and Elephantopus scaber makes cell proliferation naïve affect.
Kata kunci: Elephantopus scaber, Polyscias obtusa, Spleen,

## PENDAHULUAN
Penggunaan  antibiotik  dapat  menghambat perkembangan janin dan hingga dapat menyebab kelahiran  cacat.  Sehingga  dibutuhkan  alternatif yang dapat meminimalisir penggunaan antibiotik [1].  Beberapa  tanaman  obat  dapat  digunakan sebagai alternatif menimalisir penggunaan antibotik.  Kedondong  laut  (Polyscias  obtusa) merupakan tanaman yang mengandungan senyawa  dari  kelompok  asam  oleonic  saponin. Saponin merupakan senyawa yang penting untuk nutrisi  pada  hewan  dan  manusia.  Saponin  juga dapat  berperan  pada  permeabilitas  membrane, sebagai  imunostimulan,  agen  antikarsinogenik, dan  hypocholestrolaemic  [2].    Elephantopus scaber juga merupakan tumbuhan yang mengandung  zat  besi  besi  (Fe)  sebanyak  45,4% dan  30,2%  [3].  Zat  besi  ini  penting  dalam pembentukan  hemoglobin.  Kurangnya  zat  besi dapat  menyebabkan  terjadinya  anemis  dimana sel  eritrosit  tampak  kecil  dan  pucat.  Fe  dikenal sebagai agen eritropoietic [4].
Tubuh  Salmonella  thypimurium  dibagi menjadi  3  serovar  berdasarkan  antigen  utama yang dimiliki yaitu O (somatic), Vi (capsular/surface), dan H (Flagellar). Salmonella thyipimurium sebagai agen penyebab typhoid  yang  dikarenakan  antigen  Vi  yang dimilikinya  mampu  mereduksi  pengeluaran  IL-8 yang berperan untuk menginduksi PMN (neutrofil).  Secara  singkat  mekanisme  infeksi sistemik Salmonella thypimurium dapat digambarkan  dalam  beberapa  fase,  yang  pada akhirnya  dapat  diferensiasi  sel  T  CD4  yang berlebih  sehingga  mengakibatkan  terjadinya infeksi kronis [5].
Sistem  imun  berfungsi  mengenali  dan menyerang  antigen  asing  yang  masuk  dan menginfeksi  tubuh.  Sistem  imun  disusun  oleh beberapa organ yang yang terbagi menjadi organ limfoid  primer  dan  organ  limfoid  sekunder. Salah  satu  organ  lomfoid  sekuder  yang  mampu menangkap antigen lebih banyak dari pada organ limfoid  sekunder  lainnya  adalah  spleen.  Respon imun terhadap antigen diawali dengan diaktifkannya  beberapa  sel  limfosit  T  dan  B. Aktivasi  sel  limfosit  ditandai  diekspresikannya beberapa  subset  sel  limfosit  seperti  sel  T  CD4 dan  CD62L  [6].  Sehingga  dengan  dilakukan pengamatan  pada  organ  spleen  diharapkan  akan terlihat  peningkatan  sistem  imun  mencit  Mus musculus  BALB/C  bunting  setelah  diberikan suplemen imunomodulator.

## METODE 1. Persiapan rancangan percobaan.
Jenis  penelitian  yang  dilakukan  yaitu penelitian eksperimental menggunakan 7 kelompok  percobaan,  yaitu  2  kelompok  kontrol dan  2  kelompok  perlakuan.Penilaian  dilakukan setiap  hari  ke-14  dan  hari  ke-18  setelah  hewan coba diasumsikan bunting dengan membandingkan  hasil  observasi  pada  kelompok perlakuan  dan  kontrol,  serta  antar  kelompok perlakuan..  Sehingga  jumlah  total  sampel sebanyak  24  ekor.  Mencit  Balb/C  sebanyak  24 ekor dibagi menjadi 4 kelompok, masing-masing kelompokterdiri  atas  3  ekor.  Tiap  kelompok mencit  mendapatkan  pakan  standar  dan  minum yangsama secara ad libitum.

## 2. Proses perkawinan mencit.
Sebelum  dilakukan  proses  pembuntingan mencit  Balb/C  betina,  mencit  jantan  dan  menit betina  aklimatisasi  terlebih  dahulu  selama  satu minggu.  Selama  aklimatisasi  mencit  jantan  dan mencit  betina  dipisah  dalam  kandang  yang berbeda.  Pemisahan  mencit  jantan  dan  betina bertujuan  untuk  sinkronisasi  masa  estrus. Pembuntingan  mencit  dilakukan  secara  simultan setelah dipersiapkan sinkronisasi dengan pemanfaatan  fenomena  biologis  yaitu  Leeboot effect, Pheromone effect dan Whiten effect [7].

## 3.  Ekstraksi  daun  Kedondong  laut  (Polyscias obtusa).
Daun  Kedondong    laut  dipetik  dari  daun pertama  hingga  ke  lima  dari  pucuk  tanaman, dipilih  yang  segar,    tidak  rusak  dan  utuh. Kemudian  daun  dicuci  sampai  bersih,  dan dikering  anginkan.  Setelah  itu  daun  dimasukan ke dalam  oven pada suhu 50 0 C  sampai daunnya kering,  yaitu  selama  3  hari.  Daun  Kedondong laut  yang  sudah  kering  diekstraksi  dengan menggunakan pelarut ethanol steril.Daun Kedondong  laut  yang  telah  kering  tersebut ditimbang beratnya (13,8 gr), digerus/dihaluskan dengan  menggunakan  mortal  sampai  terbentuk serbuk  halus.  Kemudian  dilarutkan  dengan akuades  steril 100 ml, dan diaduk dengan stirer pada  suhu  50 0 C  selama  semalam.  Selanjutnya disaring dengan kertas saring.  Hasil ekstraksnya kemudian  dicari  kosentarsi  akhir,  dan  larutan ekstrak siap diujikan.

## 4.Ekstraksi daun Tapak Liman (Elephantopus
scaber).
Bahan  utama  yang  digunakan  dalam penelitian ini selain Daun Kedandong laut adalah Daun  Tapak  Liman.  Daun  dipetik  dari  daun pertama  hingga  ke  lima  dari  pucuk  tanaman, dipilih  yang  segar,    tidak  rusak  dan  utuh. Kemudian  daun  dicuci  sampai  bersih,  dan dikering  anginkan.  Setelah  itu  daun  dimasukan ke dalam  oven pada suhu 50 0 C  sampai daunnya kering,  yaitu  selama  3  hari.  Daun  Tapak  Liman yang sudah kering diekstraksi dengan menggunakan pelarut akuades steril. Daun tapak liman  yang  telah  kering  tersebut  ditimbang beratnya  (13,8  gr),  digerus/dihaluskan  dengan menggunakan  mortal  sampai  terbentuk  serbuk halus.  Kemudian  dilarutkan  dengan  akuades steril 100 ml, dan diaduk dengan stirer pada suhu 50 0 C  selama  semalam.  Selanjutnya  disaring dengan kertas saring. Hasil ekstraksnya kemudian  dicari  kosentarsi  akhir,  dan  larutan ekstrak siap diujikan.

## 5.  Pemberian  secara  oral  ekstrak  daun Kedondong  laut  dan  ekstrak  daun  Tapak liman.
Mencit  diberi  ekstrak  daun  Kedondong laut  dan  ekstrak  daun  Tapak  liman,  yang diberikan  secara  oral  menggunakan  sonde  pada mencit  sesuai  rancangan  percobaan.  Mencit disonde dengan campuran Kedondong dan Tapak liman  dengan  volume  total  setiap  kali  sonde yaitu  100  µl.  Sende  dilakukan  setiap  hari  pada waktu pagi hari sebelum diberi makan.Pemberian ekstrak  daun  tapak  liman  dan  kedondong  laut selama  14  dan  18hari  berturut-turut  sesuai rancangan  percobaan  dengan  pemberian  makan dan minum secara ad libitum
Injeksi  Salmonella  thypii  pada  mencit. Biakan Salmonella thypimuriumyang telah dikonfirmasi  dan  disimpan  dalam  medium  NA miring  ditumbuhkan  pada  mediumcair  NB  dan diinkubasi selama 1x 24 jam. Kemdian diambil 1 ml  dari  medium  cair  NB  yang  telah  diinkubasi selama  24  jam  dan  ditambahkan  9ml  medium NB  baru.  Pada  medium  NB  baru  tersebut dilakukan  perhitungan  jumlah  sel  bakteri  tiap  1 jam  untuk  mendaptkan  jumlah  sel  bakteri 10 8 sel/ml.  Perhitungan  sel  dilakukan  dengan Haemocytometer.  Biakan  yang  telah  difikasasi dengan formalin 4% dihitung dengan menggunakan haemocytimeter . Setelah diperoleh jam dengan jumlah sel 10 8 sel/ml maka dilakukan sentrifugasi dengan kecepatan 10.000rpm  selama  10  menit  pada  suhu  25 o C.
Pelet yang diperoleh diresuspensi dengan larutan garam  fisiologis  NaCl  90%.Suspensi  tersebut kemudian  diinjeksikan  pada  Mencit  yang  telah diberi  perlakuan  selama  tujuh  hari.Mencit  di injeksi  dengan  Salmonella  thypisecara  intera peritoneal.Injeksi  dilakukan  pada  mencit  sesuai rancangan  percobaan.  Injeksi  dilakukan  dengan cara mencit dipegang bagian tengkuk dengan ibu jari  dan  telunjuk  kiri.  Kemudian  tubuh  mencit dibalik  yaitu  bagian  ventral  menghadap  atas (tangan  kiri  tetap  memegang  tengkuk  mencit) dan  kaki  belakang  mencit  dipegang  dengan tangan  kanan.Bagian  ventral  diusap  dengan kapas  yang  dibasahi  alkohol  70%.  Kulit  bagian perut  mencit  dicubit,  lalu  spuit  yang  telah  diisi dengan    Salmonella  thypimurium  disuntikkan pelan-pelan  pada  bagian  area  kulit  yang terangkat.

## 6. Isolasi Sel dari organ Spleen.
Sel Limfosit yang akan dihitung populasinya  diisolasi  dari  spleen  yang  diambil dari  mencit  yang  telah  dibedah,  kemudian dipencet  dengan  ujung  spuid  dan  digerus  searah jarum  jam  dan  disuspensi  dengan  PBS. Selnjutnya  sel-sel  yang  diperoleh  difilter menggunakan  wore.  Kemudian  hasil  yang diperoleh disentrifus dengan kecepetan 3200 rpm dengan  suhu  20 o C,  selama  5  menit.Supernatan dibuang dan pelet diresuspensikan dengan PBS 1 ml. Selanjutnya dilakukan pipetinguntuk mendapatkan  homogenat.Homogenat  sebanyak 100 µ l  dipindahkan  pada  tabung  mikrosentrifus baru  dan  ditambahkan  500 µ l  PBS.Selanjutnya disentrifus  pada  3200  rpm  dengan  suhu  20 o C selama  5  menit.  Supernatan  dibuang  dan  pelet diresuspensi  dengan  1  ml  PBS  dan  sel  hasil isolasi siap untuk proses analisa selanjutnya.

## 7. Analisa Flowcytometry.
Analisa  flow  cytometry  dilakukan  untuk mendeteksi  populasi  sel  yang  mengekspresikan CD4  dan  CD62L.  Pada  penelitian  ini,  sel-sel yang diisolasi dari spleen diinkubasi dengan anti mouse  anti  CD4  dan  CD62L.  Selanjutnya dilakukan koneksi dengan computer dan flwocytometry  disetting  pada  keadaan  acquiring serta  dilakukan  setting  parameter  yang  akan dianalisa.  Setelah  diinkubasi  sampel  ditambah dengan 500 ml PBS dan dipindahkan pada kuvet flow  cytometry.  Selanjutnya  dipilih  acquire  dan flowcytometer akan menghitung jumlah sel total serta  jumlah  sel  yang  terdeteksi  oleh  label antibodi.  Hasil  yang  diperoleh  kemudian  diolah dengan BD cellquest Pro TM .

## 8. Analisa Data.
Setelah  didapatkan  data  dari  semua perlakuan  yang  dilakukan,  maka  hasil  yang didapat  diuji  normalitasnya.Setia perlakuan  diulang  3  kali,  rancangan  percobaan yang dilakukan yaitu Rancangan Acak Lengkap.Selanjutnya data yang didapatkan di uji dengan  ANOVA  dengan  SPSS  16.0  for windows,  kemudian  jika  diperoleh  hasil  yang signifikan maka dilanjutkan dengan uji Tukey

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## 1. Analisis Jumlah Sel T CD4
Berdasarkan  hasil  analisa pada  organ  spleen  (Gambar  4.1)  setelah dilakukan  infeksi  Salmonella  thypii intraperitoneal  pada  hari  ke-7  umur  kebuntingan dengan  diperlakuan  pemberian  formula  ekstrak etanol  daun  Tapak  liman  dan  Kedondong  laut sesuai  perlakukan  menunjukkan  hasil  yang berbeda  signifikan  (P>0,05)  terhadap  aktivitas sel  Limfosit  T  CD4 + .  Perlakuan  kontrol  negatif menunjukkan  jumlah  relatif  sel  CD4 4,16%  pada  pembedahan  hari  ke berbeda  nyata  pada  perlakuan  yang  sama  pada pembedahan  hari  ke-18  yaitu  10,44  %.  Jumlah sel  relatif  ini  berbeda  jauh  dengan  perlakuan kontrol  yang  diinfeksi  dengan  Salmonella thypimurium,  pada  kontrol  positif  jumlah  relatif sel  CD4 + pada  pembedahan  hari  ke 18,94%  namun  pada  pembedahan  hari  ke jumlah  relatif  sel  CD4 + turun  hingga  6.16%  hal ini  diduga  karena  adanya  antigen  yang  masuk dalam tubuh mencit.
Infeksi sistemik
Salmonella thipii menyebabkan  teraktivasinya  makrofag  yang meningkatkan killing sel (NK) yang memproduksi sitokin [5]. Sitokin yang disekresikan  antara  lain  TNF α yang  dibutuhkan untuk  produksi  IFN γ ,  dimana  IFN meningkatkan CMI dan menginduksi diferensiasi Th menjadi Th1 dan pada akhirnya menginduksi proliferasi sel T CD4. Setelah pemberian ekstrak etanol  daun  Tapak  liman  dan  kedongdong  laut terjadi penurunan jumlah sel T CD4
Gambar  4.1  Jumlah  relative  sel  CD4 perlakuan infeksi
Setelah  didapatkan  data  dari  semua perlakuan  yang  dilakukan,  maka  hasil  yang didapat  diuji  normalitasnya.Setiap  kelompok kali,  rancangan  percobaan yang dilakukan yaitu Rancangan Acak
Selanjutnya data yang didapatkan di uji dengan  ANOVA  dengan  SPSS  16.0  for diperoleh  hasil  yang
dilanjutkan dengan uji Tukey.

## DAN PEMBAHASAN
Analisis Jumlah Sel T CD4 + . Berdasarkan  hasil  analisa  flowcytometry pada  organ  spleen  (Gambar  4.1)  setelah
Salmonella  thypii  secara 7  umur  kebuntingan dengan  diperlakuan  pemberian  formula  ekstrak etanol  daun  Tapak  liman  dan  Kedondong  laut sesuai  perlakukan  menunjukkan  hasil  yang berbeda  signifikan  (P>0,05)  terhadap  aktivitas lakuan  kontrol  negatif menunjukkan  jumlah  relatif  sel  CD4 + sebanyak 4,16%  pada  pembedahan  hari  ke-14  dan  tidak berbeda  nyata  pada  perlakuan  yang  sama  pada 18  yaitu  10,44  %.  Jumlah sel  relatif  ini  berbeda  jauh  dengan  perlakuan g  diinfeksi  dengan  Salmonella thypimurium,  pada  kontrol  positif  jumlah  relatif pada  pembedahan  hari  ke-14  yaitu 18,94%  namun  pada  pembedahan  hari  ke-18 turun  hingga  6.16%  hal ini  diduga  karena  adanya  antigen  yang  masuk
Infeksi sistemik Salmonella thipii menyebabkan  teraktivasinya  makrofag  yang meningkatkan killing sel (NK) yang . Sitokin yang α yang  dibutuhkan ,  dimana  IFN γ mampu katkan CMI dan menginduksi diferensiasi Th menjadi Th1 dan pada akhirnya menginduksi proliferasi sel T CD4. Setelah pemberian ekstrak etanol  daun  Tapak  liman  dan  kedongdong  laut terjadi penurunan jumlah sel T CD4 + .
Gambar  4.2  Presentase  jumlah  relatif  Sel  T CD4 + CD62L - perlakuan setelah injeksi thipimurium etanol  Tapak  liman  dan  Kedongong laut.
Jumlah  relatif  sel  CD4 pemberian  formula  50%:50%  Tapak  liman  dan Kedondong  laut  turun  secara  signifikan  jika dibandingkan  dengan  kontrol  positif,  jumlah relatif sel CD4 + menjadi 6,29% pada pembedahan hari ke-14,dan pada perlakuan sama yang  dibedah  pada  hari  ke signifikan hingga 10,12%. Hal ini diduga karena senyawa aktif pada Tapak liman dan Kedondong laut memiliki kemampuan imunosupresan, sehingga  mampu  menurunkan  jumlah  sel  T CD4 + .Selain  itu  diduga  senyawa  aktif  pada Tapak  liman  dan  kedondong  laut bekerja secara sinergis untuk menjadi imunostimulan.  Demikian  juga  pada  perlakuan pemberian ekstrak etanol daun Tapak liman saja menunjukkan penurunan meskipun tidak berbeda signifikan  yaitu  jumlah  sel  limfosit  T  CD menjadi 9.22% pada pembeda menurun  hingga  7.38%  pada  pembedahan  hari ke-18 pada perlakuan yang sama.
Jumlah  relatif  sel  T  CD4 pada  perlakuan  yang  diberi  ekstrak  etanol  daun Tapak  liman  dan  Kedondong  laut  menunjukkan bahwa  kedua  tanaman  tersebut  memil imnosupresan terhadap sel T CD4 dapat  diperoleh  dari  flavonoid  dalam  ekstrak etanol pada kedua tanaman tersebut.
Th  hasil  dari  aktivasi  CD4 berperan  dalam  kekebalan  humoral  dengan menginduksi  keluarnya  sitokin  yang  merupakan alat komunikasi antar sel . Kemampuan interaksi ini akan menginduksi pematangan sel limfosit B menjadi  sel  plasma  yang  akan  me antibodi  [8].  Aksi  dari  flavonoid  sangat
Presentase  jumlah  relatif  Sel  T - pada  masing-masing perlakuan setelah injeksi Salmonella thipimurium  dan  pemberian  ekstrak etanol  Tapak  liman  dan  Kedongong
Jumlah  relatif  sel  CD4 + pada  perlakuan pemberian  formula  50%:50%  Tapak  liman  dan Kedondong  laut  turun  secara  signifikan  jika dibandingkan  dengan  kontrol  positif,  jumlah menjadi 6,29% pada 14,dan pada perlakuan sama yang  dibedah  pada  hari  ke-18  naik  tidak signifikan hingga 10,12%. Hal ini diduga karena senyawa aktif pada Tapak liman dan Kedondong laut memiliki kemampuan imunosupresan, sehingga  mampu  menurunkan  jumlah  sel  T .Selain  itu  diduga  senyawa  aktif  pada Tapak  liman  dan  kedondong  laut  tidak  dapat bekerja secara sinergis untuk menjadi imunostimulan.  Demikian  juga  pada  perlakuan pemberian ekstrak etanol daun Tapak liman saja menunjukkan penurunan meskipun tidak berbeda signifikan  yaitu  jumlah  sel  limfosit  T  CD + menjadi 9.22% pada pembedahan hari ke-14 dan menurun  hingga  7.38%  pada  pembedahan  hari 18 pada perlakuan yang sama.
Jumlah  relatif  sel  T  CD4 + yang  menurun pada  perlakuan  yang  diberi  ekstrak  etanol  daun Tapak  liman  dan  Kedondong  laut  menunjukkan bahwa  kedua  tanaman  tersebut  memiliki  efek imnosupresan terhadap sel T CD4 + .Efek tersebut dapat  diperoleh  dari  flavonoid  dalam  ekstrak etanol pada kedua tanaman tersebut. Interaksi sel hasil  dari  aktivasi  CD4 + dengan  APC  akan berperan  dalam  kekebalan  humoral  dengan sitokin  yang  merupakan . Kemampuan interaksi ini akan menginduksi pematangan sel limfosit B menjadi  sel  plasma  yang  akan  menghasilkan Aksi  dari  flavonoid  sangat
kompleks,  terkadang  sinergis  dan  terkadang antagonis  tergantung  pada  komponen  spesifik yang digunakan, tipe sel, konsentrasi, dan desain eksperimental.  Berdasarkan  hal  tersebut  dapat diketahui  bahwa  desain  eksperimental  yang dilakukan  pada  penelitian  ini  menunjukkan  aksi antagonis. Cara kerja imunosupresan berkebalikan dengan imunostimulan. Imunosupresan  cenderung  menghambat  proses transkripsi  dari  sitokin  sehingga  sitokin yag  berperan  dalam  aktivasi  sel  semakin  sedikit kadarnya. Imunosupressan menyebabkan penurunan  julah  IL-2  dn  IFN γ sehingga  dalam kondisi tersebut jumlah sel yang teraktivasi akan semakin sedikit [9].

## 2. Analisa Jumlah Total Sel T CD4
Berdasarkan  hasil  analisa sel T CD4 + CD62L + menunjukkan bahwa adanya peningkatan sel T  CD4 + naive pada mencit yang diinfeksi  Salmonella  thypimurium ektrak  etanol  daun  Kedondong  laut  dan  tapak liman  secara  signifkan  (P>0,05)yaitu  sebesar 3,86%  dibanding  kontrol  negative  dan  kontrol positif  yang  hanya  0,23%  dan  0,12%  pada pembedahan  hari  ke-14.  Peningkatan  juga terlihat  signifikan  pada  pembedahan  hari  ke yaitu  pada  mencit  yang  diberi  ekstrak  etanol daun  Tapak  liman  dan  kedondong  laut  yaitu sebesar  14,19%,  dibandingkan  kontrol  negative dan kontrol positif yang hanya 0,81% dan 5,35%. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  komponen  a dalam  ekstrak  etanol  daun  Tapak  liman  dan Kedondong  laut  dapat  meningkatan  jumlah relatif  sel  T  CD4 + pada  mencit  yang  terinfeksi Salmonella typhimurium.
Gambar 4.3 Jumlah relative sel CD4 perlakuan infeksi
typhipimurium  dan  pemberian  ekstrak etanol  Tapak  liman  dan  Kedon laut.
Pemberian  ekstrak  daun  Tapak  liman  dan Kedondong  laut  memiliki  jumlah  relative  sel  T CD4 naive lebih tinggi jika dibandingkan dengan mencit  yang  diinfeksi  Salmonella  thypimurium kemudian diberi ekstrak etanol daun Tapak liman
kompleks,  terkadang  sinergis  dan  terkadang ergantung  pada  komponen  spesifik yang digunakan, tipe sel, konsentrasi, dan desain Berdasarkan  hal  tersebut  dapat diketahui  bahwa  desain  eksperimental  yang dilakukan  pada  penelitian  ini  menunjukkan  aksi Cara kerja imunosupresan berkebalikan
dengan
imunostimulan.
Imunosupresan  cenderung  menghambat  proses transkripsi  dari  sitokin  sehingga  sitokin-sitokin yag  berperan  dalam  aktivasi  sel  semakin  sedikit kadarnya. Imunosupressan menyebabkan γ sehingga  dalam kondisi tersebut jumlah sel yang teraktivasi akan
al Sel T CD4 + CD62L + . Berdasarkan  hasil  analisa  Flow  Cytometri menunjukkan bahwa adanya naive pada mencit yang Salmonella  thypimurium  dan  diberi ektrak  etanol  daun  Kedondong  laut  dan  tapak liman  secara  signifkan  (P>0,05)yaitu  sebesar 3,86%  dibanding  kontrol  negative  dan  kontrol positif  yang  hanya  0,23%  dan  0,12%  pada 14.  Peningkatan  juga signifikan  pada  pembedahan  hari  ke-18 yaitu  pada  mencit  yang  diberi  ekstrak  etanol daun  Tapak  liman  dan  kedondong  laut  yaitu sebesar  14,19%,  dibandingkan  kontrol  negative dan kontrol positif yang hanya 0,81% dan 5,35%. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  komponen  aktif dalam  ekstrak  etanol  daun  Tapak  liman  dan Kedondong  laut  dapat  meningkatan  jumlah pada  mencit  yang  terinfeksi
Jumlah relative sel CD4 + CD62L + setelah perlakuan infeksi Salmonella dan  pemberian  ekstrak etanol  Tapak  liman  dan  Kedondong
Pemberian  ekstrak  daun  Tapak  liman  dan Kedondong  laut  memiliki  jumlah  relative  sel  T CD4 naive lebih tinggi jika dibandingkan dengan
Salmonella  thypimurium kemudian diberi ekstrak etanol daun Tapak liman
dan  Kedondong  laut  dibandinkan  mencit  yang diinfeksi  Salmonella  thypimurium diberi ekstrak etanol daun Tapak liman saja yaitu 5,583% pada pembedahan hari ke pada pembedahan hari ke menunjukkan  bahwa  senyawa  aktif  pada  Tapak liman tidak dapat menstiuli proliferasi sel TCD4 naive, hal itu ditunjang [10] stigmasterol pada Tapak liman memiliki kemampuan untuk menstimulus eritropoiesis.
Berdasarkan Tedder  (1 L  selektin  merupakan  molekul  adhesi  yang memiliki  fungsi  perlekatan  dan  rolling  pada  sel endotel  pembuluh  darah.  Molekul  tersebut mampu  diekspresikan  oleh  sel  T  naive CD4 + CD62L + .  Sel  T  naive  ini  akan  mengalami sirkulasi  di  dalam  darah,  na hinga  suatu  saat  bertemu  dengan  antigen.  Jika sudah bertemu dengan antigen maka sel T naive akan teraktivasi dan kehilangan molekul CD62L mampu  diekspresikan  oleh  sel  T  naive  dalam individu  normal  orang  sehat  lebih  dari  80%. Sedangkan  pada  individu  tdak  sehat  sel  T  naive akan  mengalami  penurunan  ekspresi  CD62L pada  organ  lymphnode  peripheral  dan  dan  sel  T akan  teraktivasi.  Selanjutnya  molekul  CD62L melakukan down regulated pada sel T yang akan menghalangi  masuk  ke  lymphnode  dalam  sel endotel. Hal ini untuk mencegah killing terhadap APC  sel  dendritik  karena  adanya  aktivasi  sel  T CD8 + dan  peningkatan  sel  T  untuk  melawan antigen yang masuk.
Gambar  4.4  Presentase  jumlah  relatif  Sel  T CD4 + CD62L + perlakuan  setelah  injeksi thipimurium  dan  pemberian  ekstrak etanol  Tapak  liman  dan  Kedongong laut pada hari ke kebuntingan .
dan  Kedondong  laut  dibandinkan  mencit  yang Salmonella  thypimurium  dan  hanya diberi ekstrak etanol daun Tapak liman saja yaitu 5,583% pada pembedahan hari ke-14 dan 5,59% pada pembedahan hari ke-18. Hal ini menunjukkan  bahwa  senyawa  aktif  pada  Tapak liman tidak dapat menstiuli proliferasi sel TCD4 ] bahwa senyawa aktif stigmasterol pada Tapak liman memiliki kemampuan untuk menstimulus eritropoiesis.
Berdasarkan Tedder  (1995), CD62L + atau L  selektin  merupakan  molekul  adhesi  yang memiliki  fungsi  perlekatan  dan  rolling  pada  sel endotel  pembuluh  darah.  Molekul  tersebut mampu  diekspresikan  oleh  sel  T  naive .  Sel  T  naive  ini  akan  mengalami sirkulasi  di  dalam  darah,  naïve,  dan  lymphnode hinga  suatu  saat  bertemu  dengan  antigen.  Jika sudah bertemu dengan antigen maka sel T naive akan teraktivasi dan kehilangan molekul CD62L + mampu  diekspresikan  oleh  sel  T  naive  dalam individu  normal  orang  sehat  lebih  dari  80%.
ada  individu  tdak  sehat  sel  T  naive akan  mengalami  penurunan  ekspresi  CD62L + pada  organ  lymphnode  peripheral  dan  dan  sel  T akan  teraktivasi.  Selanjutnya  molekul  CD62L + melakukan down regulated pada sel T yang akan menghalangi  masuk  ke  lymphnode  dalam  sel ndotel. Hal ini untuk mencegah killing terhadap APC  sel  dendritik  karena  adanya  aktivasi  sel  T dan  peningkatan  sel  T  untuk  melawan
resentase  jumlah  relatif  Sel  T pada  masing-masing perlakuan  setelah  injeksi  Salmonella dan  pemberian  ekstrak etanol  Tapak  liman  dan  Kedongong laut pada hari ke-14 masa

## KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan dapat disimpulkan bahwa :
1. Pemberian  ekstrak  etanol  daun  Tapak liman  dan  Kedondong  laut  pada  mencit yang  diinfeksi  Salmonella  thypimurium mampu memberikan efek imunosupresan dengan  formula  50%:50%  dari  dosis awal 50mg/KgBB
2. Formula  50%:50%  dari  dosis  awal 50mg/KgBB  ekstrak  etanol  daun  Tapak liman dan Kedondong laut yang diberikan mampu meningkatkan
proliferasi sel T CD4 + naive

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  Syukur  kepada  Allah  SWT  yang selalu penulis panjatkan, terimakasih kepada Bpk Dr.  Ir  Moch.  Sasmito  Djati  M.S  selaku  dosen pembimbing,  Mas  Bambang  serta  Mbak  Nanik sebagai  laboran  atas  bimbingannya  hingga penulis  dapat  menyelesaikan  artikel  ilimiah  ini dengan baik.

## DAFTAR PUSTAKA
[1]. Hollman,  P.  C.  H.,  M.  G.  L.  Hertog,  dan M.B.  Katan.  1996.  Analysis  and  Health Effects  of  Flavonoids.  Food  Chemistry  57
(1) : 43-46
[2]. Francis, G., Z. Karem, H.P.S. Makkar dan K. Becker.  2002  The  Biological  Action  of Saponin  in  Animal  System  :  S  review  J.
Nutr. British 88: 587-605
[3]. Juniarianto,  E.  1987.Penetapan  Kandungan Zat  Besi  pada  Akar  lekok  Akar  dan  DAun Tapak  Liman  (Elephantopus  scaber  L.)  FF
Unair. Surabaya
[4]. Guyton,  A.  C.  1990.  Fisiologi  Manusia  dan
Mekanisme Penyakit. Penerbit Buku
Kedokteran EGC. Jakarta
[5]. Sujudi.  2006.  Buku  Ajar  Edisi  Revisi Mikrobiologi  kedokeran.Bina  Rupa  Aksara.
Tangerang.
[6]. Rifa’i, M. , M. Y. Kawamoto, I.  Nakashima dan  H  Suzuki.  2004  Essensial  roles  of
CD8 + CD122 + regulatory  T  cells  in  the maintenance.The  journal  of  experimental medicine 2009 (9). 111231134
[7]. Sardjono,  T.  W.  2005.  Pengaruh  infeksi Toxoplasa  pada  Hasil  Kehamilan  melalui Interferon  Gamma  IFN  Caspase-3  dan Apoptosis  sel-sel  Plasenta.  Disertasi  Doktor Fakultas Kedokteran Airlangga. Surabaya.
[8]. Weir,  D.  M.  1990.Segi  praktis  Imunologi. [dalam bahasa Indonesia]. Yulius ES.Jakarta : Binarupa Aksara.
[9]. Rifa’i, M. 2010.Andrographolide Ameliorate Rheumatoid  Arthritis  by  Promoting  the Development  ofRegulatory  T  Cells.  Journal of Tropical Life Science. 1 (1) pp 5-8
[10]. Istiyawati,  A.  Soediro  S.  dan  Siti  K. 1994.  Telaah  Fitokimia  daun  kedondong
Laut (Polyscias rumphiana) http: //bahanalam.fa.itb.ac.id/detail.php?id=82  10
Desember 2013.