Universitas Kusuma Husada Surakarta
Uji Aktivitas Ekstrak Ganoderma lucidum sebagai Imunostimulan pada Tikus Putih (Rattus novergicus) pasca infeksi virus dengue 3 (DEN-3)
Dewi Sulistyawati 1) , Ifandari 2) , Ratna Herawati 3)
1,2,3 Universitas Setia Budi dewi.s@setiabudi.ac.id

## ABSTRAK
Kejadian  Demam  Berdarah  Dengue  sampai  saat  ini  masih  menjadi  masalah  di  negara- negara beriklim tropis dan sub tropis seperti Indonesia (Kemenkes RI, 2022). Tatalaksana pengobatan  yang  bisa  dilakukan  berupa  terapi  supportif  untuk  meningkatkan  system imun. Ganoderma  lucidum dapat  dipakai  sebagai    imunostimulan  karena  kandungan polisakaridanya  (Khatian  dan  Aslam,  2018).  Penelitian  ini  menguji  aktivitas  ekstrak G. lucidum sebagai  imunostimulan  pada  tikus  putih  pasca  infeksi  virus  Dengue  dengan pemeriksaan IgG anti Dengue. Penelitian dilakukan dengan menginfeksikan virus Dengue 3 . Jumlah  tikus  berjumlah  20  ekor  yang  dibagi  menjadi  5  kelompok  yaitu  3  kelompok dengan  dosis  0,8  g;  1,6  g;  3,2  g/0,2  KgBB,  dan  2  kelompok  kontrol.  Metode  sampling darah dilakukan selama 10 hari pasca infeksi dengan pengambilan darah yang pertama (I) pada  hari  ke-4  pasca  infeksi,  pengambilan  darah  kedua  (II)  hari  ke-10  pasca  infeksi. Pemeriksaan  IgG  anti-dengue  dilakukan  dengan  metode  ELISA.  Pengujian  statistik dengan one way anova membuktikan bahwa ada perbedaan signifikan rata-rata titer IgG anti  Dengue  pada  setiap  perlakuan  dengan    p value =  0.001  (  <  0,05),  dengan  kata  lain terdapat  perbedaan  titer  IgG  antara  kelompok  kontrol  positive,  kontrol  negative  dan kelompok  perlakuan. Perbedaan  signifikan  juga  terlihat  antara  titer  IgG  anti  Dengue pasca  infeksi  hari  ke-4  dengan  hari  ke-10  dengan p value =  0.000  (  <  0,05).  Hal  ini membuktikan bahwa ekstrak G. lucidum efektif sebagai imunostimulan pada infeksi virus Dengue 3 dan dosis ekstrak G. lucidum yang paling efektif adalah 0.8 g/KgBB .
Kata kunci : Ganoderma lucidum, imunostimulan, Dengue

## ABSTRACT
The incidence of Dengue Hemorrhagic Fever is still a problem in countries with tropical and sub-tropical climates such as Indonesia (Kemenkes RI, 2022). The treatment that can be  carried  out  is  in  the  form  of  supportive  therapy  to  improve  the  immune  system. Ganoderma  lucidum  can  be  used  as  an  immunostimulant  because  of  its  polysaccharide content (Khatian and Aslam, 2018). This study tested the activity of G. lucidum extract as an  immunostimulant  in  white  mice  after  Dengue  virus  infection  by  examining  anti- Dengue IgG. The research was carried out by infecting the Dengue 3 virus. There were 20  mice  divided  into  5  groups,  namely  3  groups  with  a  dose  of  0.8  g;  1.6g;  3.2  g/0.2 KgBW,  and  2  control  groups.  The  blood  sampling  method  is  carried  out  10  days  after infection with the first blood collection (I) on the 4th day post-infection, the second blood collection (II) on the 10th day post-infection. Anti-dengue IgG examination was carried out  using  the  ELISA  method.  Statistical  testing  using  one  way  anova  proved  that  there was a significant difference in the average anti-dengue IgG titer for each treatment with p value = 0.001 (<0.05), in other words there was a difference in IgG titer between the positive  control  group,  negative  control  group  and  the  treatment  group.  A  significant difference was also seen between anti-Dengue IgG titers after infection on day 4 and day 10  with  p  value  =  0.000 (<0.05).  This  proves that  G.  lucidum  extract  is  effective  as  an
ISSN: 2087 – 5002 | E-ISSN: 2549 – 371X
immunostimulant  in  Dengue  3  virus  infection  and  the  most  effective  dose  of  G. lucidum extract is 0.8 g/KgBW.
Keywords: Ganoderma lucidum, immunostimulant, Dengue

## 1. PENDAHULUAN
Infeksi dengue adalah infeksi virus yang ditularkan melalui arthropoda yang banyak  ditemukan  di  seluruh  dunia. Penyakit  ini  disebabkan  virus  Dengue yang  terdiri  dari  empat  serotipe  dan masing-masing serotipe ini dapat menyebabkan  penyakit.  Gejala  infeksi dengue  bervariasi  mulai  dari  hanya demam  disebut  demam  dengue  (DD), demam  berdarah  dengue  (DBD)  dan dengue  shock  syndrome (DSS)(Ariyati dan  Anggraini,  2022).  Kasus  Demam Berdarah Dengue (DBD) sulit diberantas dan  masih  menjadi  masalah  di  negara- negara  beriklim  tropis  dan  sub  tropis seperti Indonesia (Li-wang et.al ., 2020). Incidence  Rate DBD  di  Indonesia  pada tahun  2021  sebesar  27  per  100.000 penduduk. Jumlah kasus DBD cenderung  meningkat  dan  bertambah luas penyebarannya ke berbagai wilayah setiap  tahunnya,  bahkan  menjadi  salah satu  penyakit  endemis  hampir  di  setiap propinsi  di  Indonesia.  Data  Kementrian Kesehatan  Republik  Indonesia  (2022), menyatakan  sebanyak  143.184  kasus demam berdarah dengue, jumlah tersebut  meningkat  sebanyak  94,8% dibandingkan pada tahun 2021 sebanyak 73.518  kasus.  Kementrian  Kesehatan Republik Indonesia melaporkan kembali kasus  demam  berdarah  dengue  pada minggu  ke  22  tahun  2023  sebanyak 35.694 (Kemenkes  RI,  2023; Sissi et al . 2011).
Kasus  DBD  yang  tinggi  dengan angka  kematian  yang  cukup  tinggi merupakan  alasan  penting  dilakukannya penelitian secara intensif mengenai infeksi virus  dengue,  patogenitasnya  beserta pengembangan  vaksin  dan  antivirusnya. Sampai saat ini belum ada obat dan terapi yang  spesifik  untuk  infeksi  ini.  Prinsip utama pengobatannya adalah terapi
suportif  yang  adekuat  sehingga  angka kematian  dapat  diturunkan  (Sissi et  al . 2011).  Terapi  suportif  yang  banyak dilakukan  berupa  produk  obat  alami  yang mempunyai  efek  antivirus  dan  berperan sebagai imunostimulan ((Sissi et al . 2011). Produk  obat  alami  yang  diekstrak  dari tumbuhan dan jamur mempunyai kelebihan yaitu tidak beracun dan memiliki  efek  samping  yang  lebih  sedikit dibanding  obat  kimia.  Produk  obat  alami yang  belum  banyak  diteliti  sebagai antivirus  dengue  adalah Ganoderma lucidum.
Virus  dengue  dapat  mengakibatkan dua jenis infeksi yaitu infeksi primer dan infeksi sekunder. Infeksi primer merupakan  infeksi  yang  pertama  terjadi dan  mengakibatkan  demam  akut  atau disebut  demam  dengue  yang  akan dinetralisir  dalam  tujuh  hari  oleh  respon imun. Infeksi sekunder merupakan infeksi  yang  kedua  atau  lebih  dimana gejalanya  cenderung  lebih  berat  dan mengakibatkan  demam  berdarah  dengue (DBD)  atau  sindrom  renjatan  dengue (SRD) (Nugraheni et al ., 2023).
Virus  ini  terdiri  atas  empat serotipe utama, yaitu DEN-1, DEN-2, DEN-3,  dan  DEN-4.  Serotip  virus dengue memiliki masing-masing tingkatan,  DEN-1  merupakan  serotip yang  paling  mudah  ditularkan  karena sifatnya yang lebih kuat pada nyamuk maupun  pada  manusia,  DEN-2  dapat menyebabkan  kasus  dengan  gejala klinis  ringan  maupun  berat,  DEN-3 merupakan serotip yang dapat mengakibatkan infeksi paling berat di Indonesia,  DEN-4  serotip  ini  sedikit ditemukan  dan  tidak  ganas  (Arinjani et al., 2017).
Universitas Kusuma Husada Surakarta
Virus  Dengue  secara  morfologi adalah  partikel  berbentuk  bulat  dengan diameter  50  nm,  berisi  nukleokapsid berukuran 30  nm dikelilingi oleh selubung  lipid.  Dua  protein  struktural, envelope  (E),  dan  protein  membran  (M), terdapat dalam membran lipid. Glikoprotein  E  menjadi  penentu  sifat antigenik virus dan sangat penting dalam attachment  dan  entry  virus,  protein  ini terdiri  dari  tujuh  protein  non  struktural yaitu  NS1,  NS2a,  NS2b,  NS3,  NS4a, NS4b,  NS5.  Protein  M,  disintesis  dari. prekursor (prM), berfungsi sebagai chaperon  selama  pematangan  partikel virus.  Nukleokapsid  terdiri  dari  protein kapsid  (C),  protein  dasar  dengan  afinitas terhadap RNA yang berhubungan dengan genom (Ariyati dan Anggraini, 2022).
Genom  virus  dengue  terdiri  dari RNA dengan rantai tunggal dan dikelilingi dengan isometrik nukleokapsid  atau  ikosahedral,  ditutup envelope  dengan  komposisi  lemak. Genom  virus  RNA  dan  protein  kapsid bergabung  membentuk  nukleokapsid yang  aktif  di  retikulum  endoplasma (ER).  Nukleokapsid  yang  berhubungan dengan  prM  dan  E  membawa  lipid  dari inang untuk mengikat virion yang belum matang.  Virion  dengue  yang  belum matang  memiliki  permukaan  kasar masing-masing terdiri dari trimer E yang terkait  dengan  protein  prM.  Partikel virus  yang  belum  matang  sepenuhnya dikeluarkan  dari  vesikel  ke  dalam aparatus golgi selama proses pematangan. Virion mengalami glikosilasi  dalam  lingkungan  asam jaringan trans-Golgi (TGN), pembelahan prM dimediasi oleh furin di M. Struktur dimer yang belum matang E
mempertahankan  interaksi  dengan  pr dan  M  setelah  sel  mulai  terurai  melalui proses pH netral lingkungan ekstraseluler  memisahkan  E  dan  prM, membentuk  virion  matang  yang  dapat menyebabkan kerusakan sel baru
(Indriyani et al ., 2022) .
Nyamuk  Aedes  betina  menularkan virus  Dengue  melalui  gigitan.  Setelah masuk  ke  dalam  tubuh host, virus  dengue bereplikasi dalam sel dendritik Langerhans  dan  keratinosit.  Sel-sel  imun yang  terinfeksi  masuk  ke  dalam  sistem limfatik  dan  menyebabkan  sekresi  sitokin serta  mengaktivasi  sel-sel  imun  lain seperti  monosit  dan  makrofag.  Virus dengue berikutnya akan menyebar melalui peredaran darah dan  mengakibatkan viremia primer. Keadaan ini akan menstimulasi sistem imun untuk mengeliminasi  virus  dengue.  Sistem  imun yang  terlibat  antara  lain  makrofag,  sel pembunuh  alami,  sistem  komplemen,  sel T. Aktivasi sistem imun ini menyebabkan terbentuknya  IgM (imunoglobulin M)  dan IgG  (imunoglobulin  G).  Mekanisme sistem  imun  yang  berbeda-beda  akan menyebabkan  peningkatan  permeabilitas vaskular  karena  terjadinya  peningkatan produksi  sitokin  inflamasi.  Kejadian  ini dapat  mengakibatkan  kebocoran  plasma (Vina et al ., 2020).
Diagnosis  imunoserologi  demam dengue  dilakukan  antara  lain  dengan mengidentifikasi  antibodi  spesifik  virus Dengue  (IgM)  dan  (IgG)  serta  deteksi antigen NS1 (Erawati et al , 2023).
Ganoderma lucidum (Ling  Zhi  adalah obat  tradisional  Tiongkok  yang  populer, dan  orang-orang  memperhatikan  efek farmakologisnya yang sebenarnya. Beberapa  studi  sistematis  baru-baru  ini telah menetapkan potensi terapeutik
Ganoderma sebagai antitumor, hepatoprotektif, antiinflamasi,
imunomodulator, antioksidan dan antivirus (Pramudiarja,  2011;  Peng et  al .,  2022). Ganoderma merupakan  jamur  yang  sudah digunakan di China untuk berbagai macam penyakit infeksi maupun penyakit generatif. Ganoderma  lucidum juga banyak  ditemukan  di  hutan-hutan  di Indonesia  akan  tetapi  belum  banyak masyarakat yang mengenal dan memanfaatkan jamur ini sehingga terbuang sia-sia. Senyawa aktif Ganoderma antara lain triterpenoid,
ISSN: 2087 – 5002 | E-ISSN: 2549 – 371X
polisakarida,  sterol,  peptida  dan  lain  lain (Peng et al ., 2022)
Salah satu senyawa aktif
Ganoderma  adalah  triterpenoid  yang dapat  berperan  sebagai  agen  antivirus terhadap  berbagai  patogen virus  seperti Herpes  simplex  tipe  1  (HSV-1  dan HSV-2),  virus  influenza  a  (Flu  A), Human immunodeficiency virus (HIV)
tapi  belum  ada  laporan  mengenai aktivitas antivirus
triterpenoid
Ganoderma  lucidum terhadap  dengue (Ariyati,  2012; Bharadwaj et  al. ,
2019) ). Latar belakang tersebut membuat kami  tergerak  untuk  mengetahui  potensi dari ekstrak Ganoderma lucidum sebagai imunostimulan  pada  Tikus  Putih  ( Rattus novergicus )  pasca  infeksi virus  dengue  3 (DEN-3). Aktivitas imunostimulan ekstrak Ganoderma  lucidum diukur dengan  melihat  pembentukan  antibodi IgM  anti-dengue  menggunakan  metode ELISA.  Serotipe  virus  yang  digunakan adalah  DEN-3  yang  paling  banyak ditemukan  di  Indonesia  maupun  negara- negara Asia  Tenggara  dan  serotipe  ini paling  banyak  menimbulkan  kasus  berat disamping DEN-2 ((Sissi et al . 2011).
Penelitian  ini  menguji  aktivitas ekstrak
G. lucidum sebagai
imunostimulan  pada  tikus  putih  pasca infeksi virus Dengue dengan pemeriksaan IgG anti Dengue.

## 2. METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  menggunakan  desain eksperimen  laboratoris.  Penelitian  ini menggunakan tikus putih
Rattus
norvegicus sebagai  model  infeksi  dengue. Penelitian  dilakukan  di  laboratorium Prasitologi  FKKMK  UGM  Yogyakarta dan Laboratorium Imunoserologi Universitas  Setia  Budi  Surakarta  dari bulan  Agustus  sampai  Desember  2023.
Jumlah  tikus  putih Rattus  norvegicus jantan dengan berat ± 200 Gr sebanyak 20 ekor. Tikus putih Rattus norvegicus dibagi dalam  5  kelompok  perlakuan  yaitu  3
kelompok perlakuan pemberian ekstrak G. lucidum dengan  dosis  yang  bervariasi  0,8 g/0,2  KgBB;  1,6  g/0,2  KgBB;  3,2  g/0,2 KgBB dan 2 kelompok kontrol negatif dan positif.  Masing-masing  kelompok  terdiri dari  4  ekor  tikus.  Metode  sampling  darah dilakukan  selama  10 hari  pasca  infeksi dengan  pengambilan  darah  yang  pertama (I) pada hari ke-4 pasca infeksi, pengambilan  darah  kedua  (II)  hari  ke-10 pasca  infeksi,.  Pengambilan  darah  tikus diambil  melalui  mata  (sinus  orbital) minimal  1  ml.  Pemeriksaan  IgM  anti- dengue  dilakukan  dengan  metode  ELISA. Variabel  independent  dalam  penlitian  ini adalah  dosis  ekstrak Ganoderma  lucidum dan  variable  dependentnya  adalah  titer antibodi anti-dengue (Kao et al , 2005).
Bahan yang digunakan adalah serum tikus Rattus  novergicus dari  kelompok  kontrol dan  perlakuan,  Reagen  Dengue  Virus  IgG ELISA Demedetic DENG0120, Goat Anti-
Rat IgG
Peroxidase Conugated. Pengukuran titer IgG anti Dengue menggunakan  ELISA  Microplate  Reader Raytoo  RT-2100C  dengan  absorbansi 450/620 nm.
Prosedur penelitan :
1. Persiapan dan Aklimatisasi Tikus Putih ( Rattus novergicus )
Tikus    Putih  yang  digunakan  adalah tikus  jantan  dengan  berat  200-250 gram.  Tikus  diaklimatisasi  selama  7 hari.
2. Pembuatan  dosis  ekstrak Ganoderma
lucidum.
Variasi dosis ekstrak Ganoderma lucidum yang akan diinduksikan ke tikus putih  yaitu  0,8  gr;  1,6  gr;  3,2  gr/0,2 KgBB.Pemeliharaan Tikus Putih Persiapan  dan  pemilihan  Tikus  Putih yang memenuhi syarat Penelitian.
3. Perawatan dan pemeliharaan.
Pemeliharaan dan perawatan tikus putih akan dilakukan di Laboratorium Farmakologi  Universitas  Setia  Budi Surakarta.  Perlakuan  terhadap  Tikus Putih.
4. Aklimasi (selama 7 hari) Aklimasi  dilakukan  selama  7  hari bertujuan  untuk  menyeragamkan  dan mengamati keadaan tikus putih sebelum diberikan perlakuan.
5. Pengukuran  Suhu  Tubuh  Awal  (pasca aklimatisasi)
6. Infeksi virus dengue 3 (DEN-3). Supernatan  virus  DEN-3  yang berasal  dari  kultur  sel  C6/36  yang telah  diinfeksi  virus  DEN-3  dengan masa  inkubasi  7  hari,  digunakan sebagai  sumber  isolat  virus  DEN-3.
Virus DEN-3 diambil dengan syringe sebanyak 50 µl dan diinjeksikan  ke  dalam  vena  mencit perlahan-lahan.  Mencit  yang  sudah diinfeksi,  dikeluarkan  dari  tabung dan  dimasukkan  dalam  kandang pemeliharaan.
7. Pemberian  ekstrak G.  lucidum dengan  3  variasi  dosis  yaitu  0,8  gr; 1,6 gr; 3,2 gr/0,2 KgBB.
8. Pengukuran  Suhu  Tubuh  selama masa  inkubasi.
Suhu  tubuh  tikus  akan  dicek  secara berkala  selama  10  hari  setelah infeksi  virus  dengue  3  dengan menggunakan  termometer  rektal.
Pengukuran suhu dilakukan sebanyak  3  kali  yaitu  sebelum infeksi,  hari  ke-4  pasca  infeksi  dan hari ke-10 pasca infeksi.
9. Pengambilan darah Tikus Putih. Darah  tikus  diambil  dari  darah orbital menggunakan tabung hematokrit  sebanyak  1  ml.  Darah diambil  2  kali  yaitu  pada  hari  ke-4 pasca  infeksi  dan  hari  ke-10  pasca infeksi.
10. Pemisahan serum.
Serum  diambil  dengan  pipet  dan disimpan  pada  tabung  microtube. Serum  yang  digunakan  adalah serum  yang  tidak  lisis  dan  tidak lipemik.
11. Pemeriksaan IgM anti-dengue dengan Metode ELISA. Serum tikus putih ( Rattus
novergicus ) diperiksa  titer IgG  anti-
dengue  Tikus  Putih  pada  hari  ke-4 pasca  dan  hari  ke-10  pasca  infeksi. Pemeriksaan  menggunakan  metode ELISA  menggunakan  Microplate Reader RT-2100C. 12. Analisa Data.
Teknik  analisis  data  dilakukan  uji normalitas dan uji homogenitas. Data normal  dan  homogen  akan  di  uji dengan One  Way  Anova ( Analysis  of Variance ),  apabila  analisis  ragam menunjukkan perbedaan nyata (P<0,05). Interpretasi hasil : Cut Off 10 U Positif > 11 U Equivocal 9 -11 U Negatif < 9 U
(Product Information, 2022)

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  ini  menguji  tentang efektivitas ekstrak Ganoderma lucidum sebagai imunostimulan pada tikus putih Rattus  novergicus pasca  infeksi  virus Dengue  3  (DEN-3). Ganoderma lucidum (G. lucidum) merupakan jamur yang  dapat  dimanfaatkan  sebagai antitumor, hepatoprotektif, antiinflamasi, imunomodulator, antioksidan  dan  antivirus  (Li-wang, 2020).  Aktivitas  jamur  ini  sebagai imunomodulator  diantaranya  adalah dengan  mengaktifkan  sel-sel  imun seperti  Limfosit  T,  Limfosit  B,  sel dendritik,  makrofag  dan  sel  NK(Sissi et.  al. ,  2011).  Aktivitas  imunostimulan ekstrak Ganoderma  lucidum dapat diukur  dengan  melihat  pembentukan antibodi  IgM  ataupun  IgG  anti-dengue menggunakan  metode  ELISA.  Pada penelitian  ini  parameter  yang  diukur adalah  IgG  anti  Dengue  dengan pertimbangan  antibody  IgG  lebih  lama bertahan dalam peredaran darah. Serotipe  virus  yang  digunakan  adalah DEN-3  yang  paling  banyak  ditemukan di  Indonesia  maupun  negara-negara Asia  Tenggara  dan  serotipe  ini  paling
ISSN: 2087 – 5002 | E-ISSN: 2549 – 371X
banyak  menimbulkan  kasus  berat disamping DEN-2 (Pramudiarja, 2011).
Hewan  coba  yang  dipakai  adalah tikus putih Rattus novergicus yang dibagi menjadi  5  kelompok  perlakuan  yaitu  3 kelompok  perlakuan  ekstrak Ganoderma lucidum (dosis  0,8  g/0,2  KgBB;  1,6  g/0,2 KgBB;  3,2  g/0,2  KgBB)  dan  2  kelompok kontrol  (kontrol  potisif  dan  kontrol negatif).  Tikus  putih Rattus  novergicus yang  sudah  diaklimatisasi  dan  diinfeksi dengan  virus  Dengue  3  (DEN-3),  diambil darahnya  pada  hari  ke  4  dan  hari  ke  10 pasca  infeksi  dan  pemberian  ekstrak G. lucidum. Serum yang dikumpulkan diukur titer  IgG  anti  Dengue    menggunakan metode  Elisa  dengan  absorbansi  450/620 nm.
Hasil  perhitungan  rata-rata  titer  IgG  anti Dengue  3  pada  hari  ke  4  dan  ke  10  dapat dilihat pada table 1 dan 2 di bawah ini :
Tabel 1. Rata-rata titer IgG anti Dengue 3
pada hari ke-4 No. Perlakuan Rata-rata titer IgG anti Dengue (unit) 1  Kontrol Positif 34.46 2  Kontrol Negatif 17.10 3  Perlakuan 1 35.06 4  Perlakuan 2 34.80 5  Perlakuan 3 38.38
Grafik ke 1. Titer IgG anti Dengue pada hari ke-4 pasca infeksi virus Dengue 3
(DEN-3)
Tabel 2. Rata-rata titer IgG anti Dengue 3 pada hari ke-10 No. Perlakuan Rata-rata titer IgG anti Dengue (unit) 1 Kontrol Positif 48.53 2 Kontrol Negatif 22.68 3  Perlakuan 1 63.93 4  Perlakuan 2 64.60 5  Perlakuan 3 64.92
Grafik 2. Titer IgG anti Dengue pada hari ke-10 pasca infeksi virus Dengue 3 (DEN-
3)
Grafik 3. Peningkatan titer IgG anti
Dengue pada Rattus novergicus
Berdasarkan  hasil  pemeriksaan  Elisa  pada hari  ke-4  pasca  infeksi,  tikus  kelompok kontrol positive maupun kelompok perlakuan  mempunyai  rata-rata  titer    IgG anti  Dengue  di  atas  30  U.  Berdasarkan acuan  product  information  dengue  virus IgG  ELISA,  sampel  dikatakan  posisitve kalau titernya di atas 11 U, sehingga tikus kelompok  kontrol  positive  dan  ketiga kelompok perlakuan telah terpapar antigen
virus  Dengue  dan  telah  membentuk antibody  IgG.  Tikus  kelompok  kontrol negative  menunjukkan  hasil  yang  positive meskipun  titernya  sangat  rendah  yaitu rata-rata  titer  17  U,  padahal  kelompok  ini tidak  diinfeksi  dengan  virus  Dengue.  Hal ini  dimungkinkan  karena  adanya  reaksi silang  dengan  antigen  lain.  Reaksi  silang bisa  terjadi  apabila  sampel  terpapar dengan  anggota  Flavivirus  lain  atau Arbovirus (Product Information, 2022).
Hasil  pemeriksaan  Elisa  pada  hari  ke-10 pasca  infeksi,  tikus  kelompok  kontrol positive  mempunyai  rata-rata  titer    IgG anti  Dengue  sebesar  48.53  U,  sedangkan tikus  kelompok  perlakuan  1,  2  dan  3 masing-masing  mempunyai  rata-rata  titer IgG anti Dengue sebesar 63.93 U, 64.60 U dan  64.92  U.  Tikus  kelompok  kontrol positive  mengalami  peningkatan  titer  IgG sebesar  14.06  U,  ketiga  kelompok perlakuan  mengalami  peningkatan  titer antibodi IgG rata-rata 28.87 U, sedangkan tikus  kontrol  negative  hanya  mengalami sedikit  peningkatan  titer  sebesar  5.58  U. Peningkatan  titer  antibodi  IgG  Dengue pada hari ke 10 dibandingkan titer hari ke 4  disebabkan  adanya  aktivasi  komponen sel-sel imun terutama makrofag, limfosit T dan  limfosit  B.  Virus  yang  masuk  ke tubuh inang akan  berkembang biak dalam sistim  retikuloendotelial,  dengan  target utama sel-sel APC ( Antigen Presenting Cells )  yang  umumnya  berupa monosit  atau  makrofag.  Viremia  timbul pada saat menjelang gejala klinik hingga 5 -  7  hari  setelahnya  (Aryati,  2012). Limfosit T yang teraktivasi akan menghasilkan  sitokin  yang  selanjutnya akan  merangsang  sel  B  membentuk
antibodi.  Peningkatan  titer  yang  rendah pada  kelompok  negative  menguatkan alasan  adanya  reaksi  silang  dengan antigen lain.
Pengujian statistik dengan one way anova membuktikan bahwa ada perbedaan signifikan  rata-rata  titer  IgG  anti  Dengue pada  setiap  perlakuan  dengan    p value = 0.001  (  <  0,05), dengan  kata lain  terdapat perbedaan  titer  IgG  antara  kelompok
kontrol  positive,  kontrol  negative  dan kelompok perlakuan. Hal ini membuktikan  bahwa  ekstrak G.  lucidum terbukti mempunyai efek sebagai imunomodulator  dengan  meningkatkan titer  antibodi  IgG  anti  Dengue.  Aktivitas sebagai imunomodulator disebabkan adanya  kandungan  p olisakarida  dari G. lucidum yang  terdiri  dari  1,3-D-  glucans dan  Beta-1,6-D-  glucans  yang  dapat meningkatkan  respon  imun  tikus  dengan menstimulasi sel limfosit T, makrofag dan sel NK (Khatian dan Aslam, 2018).
Perbedaan  signifikan  juga  terlihat antara titer IgG anti Dengue pasca infeksi hari  ke-4  dengan  hari  ke-10  dengan p value = 0.000 ( < 0,05), dimana pada hari ke-4, tikus sudah terpapar virus tapi belum diberi ekstrak G. lucidum sedangkan pada hari  ke-10  tikus  sudah  diberikan  ekstrak G.  lucidum selama  7  hari.  Hasil  uji statistik  menunjukkan  bahwa  tidak  ada perbedaan signifikan pada dosis ekstrak G. lucidum pada  ke-3  kelompok  perlakuan dimana  tikus  diberikan  3  variasi  dosis yaitu 0.8 g; 1.6 g dan 3.2 g/KgBB dengan p value =  0.343  (  >  0,05).  Hal  ini membuktikan  bahwa  ekstrak G.  lucidum efektif sebagai imunostimulan pada infeksi  virus  Dengue  3  dan  dosis  ekstrak G.  lucidum yang  paling efektif adalah 0.8 g/KgBB.

## 4. KESIMPULAN
Ekstrak G.  lucidum efektif  sebagai imunostimulan pada infeksi virus Dengue  3  dengan  dosis  ekstrak G. lucidum yang  paling  efektif  adalah  0.8 g/KgBB.

## 5. SARAN
a. Perlu  dilanjutkan  penelitian  untuk menguji  efek  ekstrak G.  lucidum terhadap  komponen  sel-sel  imun dan sitokin yag dihasilkan.
b. Perlu  dilakukan  penelitian  untuk menguji  efek  ekstrak G.  lucidum terhadap keberadaan antigen virus.
6. UCAPAN TERIMA KASIH (BILA ADA) Ucapan terima kasih saya haturkan  kepada  LLDIKTI  yang  telah mendanai  penelitian  ini,  Universitas Setia  Budi  beserta  LPPM  yang  telah memberikan kesempatan melakukan penelitian ini.

## REFERENSI
Ariyati,  M  dan  Anggraini,  D.  (2022). Aspek  Klinis  dan  Pemeriksaan Laboratorium  untuk  Diagnosis Demam Berdarah Dengue. Scientific Journal. Retrieved from : http://journal.scientic.id/index.ph
p/sciena/issue/view/1 .
Aryati,  2012.  Diagnosis  Laboratoris
DBD  Terkini.  Pusat  Penelitian  & Pengabdian  Kepada  Masyarakat. Universitas Airlangga. Erawati, Kusumawardani, S dan Umaya, D.  (2023).  ‘Gambaran  Respon
Imun  IgGIgM  Dengue  dan  Kadar
Trombosit  Pada  Pasien  Suspek DBD  di  Kota  Kediri’. Jurnal Insan  Cendikia.  Vol.10,  No.2.
https://doi.org/10.35874/jic.v10i2. 1191 .
Kao,    C.L.,    King,    C.C.,    Chao,  D.Y.,
Wu,  H.L.,  and  Chang,  G.J.  2005. Laboratory  Diagnosis  of    Dengue Virus  Infection:  Current    and Future Perspectives in Clinical    Diagnosis    and    Public Health  in  Taiwan. J.  Microbiol. Immunol. Infect. 38(1).
Khatian,  M  dan  Aslam,  M.  2018.  A
Review  of  Ganoderma  lucidum (Reishi) : A Miraculous Medicinal
Mushrooms. Inventi  Spreading
Knowledge .
https://www.researcgate.net/publi cation/330988315 .
Li-Wang, Jie  Ging-Li,  Ji  Zang  dan  Zhi-
min  Li.  2020.  Traditional  uses,
chemical components and
pharmacological activities of the genus  Ganoderma. Available from: URL: https://pubs.rsc.org/en/content/arti clelanding/2020/ra/d0ra07219b# ! Nugraheni,  E.,  Rizqoh  .,  dan  Sundari,
M.  2023.  Manifestasi  Demam Berdarah  Dengue  (DBD). Jurnal Kedokteran dan Kesehatan Vol.10, No.3. https://ejournal.unsri.ac.id/index.p hp/jkk Pramudiarja,  A.N.U.,  2011. Indonesia Juara    Demam  Berdarah      di ASEAN [cited  2011  August  22]. Jakarta:    Detik.    Available    from: URL:    http://          detikhealth.com/ read/      2011/    02/    18/ 163159/1573796/  763/ indonesia- juara-demam-berdarah-di-Asean.
Product  Information  DENG0120.  2022.
Dengue Virus IgG ELISA, Demeditec Diagnostics. Lise- Meitner-Strasse 2. Germany. Sissi  Wachtel-Galor, John  Yuen, John A. Buswell, and Iris F. F. Benzie. 2011. Herbal Medicine: Biomolecular and Clinical Aspects, Ganoderma lucidum (Lingzhi  or  Reishi).  Available from: URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/ 22593926/ Vina,  PU.,  Latoconsina  dan  Raharawin, H. (2020). ‘Hubungan
Imunoglobulin  M  (IgM)  dan
Imunoglobulin  G  (IgG)  dengan Derajad Keparahan Pasien Infeksi Dengue  di  RSUD.  DR.  M. Haulussy  dan  RS.  Sumber  Hidup Ambon. Pattimura Medical Review. Vol.2, No.1. https://ojs3.unpatti.ac.id/index.ph p/pameri/