LUTJANUS p-ISSN: 0853 - 7658 e-IISN:
https://ppnp.e-journal.id/lutjanus_PPNP

## Validasi Metode dan Penetapan Kadar Kolesterol Ayam Broiler dengan Metode Lieberman- Burchard
Sahriawati 1 , Sumarlin 2 , Sri Wahyuni 3 1,2,3 Jurusan Teknologi Pengolahan Hasil Perikanan, Program Studi Teknologi Pengolahan Hasil Perikanan,
Politeknik Pertanian Negeri Pangkep, Indonesia Jl. Poros Makassar-Parepare, Sulawesi Selatan (Times New Roman, 10)
Article History: doi: …………….

## Keywords:
Akurasi, Ayam Broiler,  Linearitas, Presisi
*Corresponding Author: sahriawati@gmail.com Abstrak: Analisis  kadar  kolesterol  pada  daging  ayam  broiler merupakan  parameter  penting  yang  harus  dilakukan  karena kandungan  lemak  dan  kolesterol  dalam  daging  ayam  broiler  relatif tinggi  dapat  menimbulkan  masalah  kesehatan.  Metode  Liebermann- Burchard merupakan metode tidak baku dalam penentuan kolesterol. Untuk  menghindari  ketidaksesuaian  data  hasil  pengukuran  yang dapat  menyebabkan  adanya  kekeliruan,  maka  laboratorium  harus memvalidasi  metode  tidak  baku,  metode  yang  didesain  atau dikembangkan  laboratorium,  metode  baku  yang  digunakan  di  luar lingkup  yang    dimaksudkan,  dan  penegasan  serta  modifikasi  dari metode  baku  atau  dengan  kata  lain  validasi  metode  bertujuan  untuk membuktikan  bahwa  semua  cara  atau  prosedur  pengujian  yang digunakan  senantiasa    mencapai  hasil  yang  diinginkan  secara konsisten  atau  terus  menerus.  Dalam  validasi  metode  analisis, terdapat  beberapa  parameter  analisis  yang    harus  dipertimbangkan antara lain meliputi ketepatan (akurasi), ketelitian (presisi), spesifitas, linearitas,  batas  deteksi,  batas  kuantisasi.  Penelitian  ini  bertujuan untuk memvalidasi metode Liebermann-Burchard serta menganalisis kadar  kolesterol  ayam  broiler  berdasarkan  kriteria  hasil  validasi sehingga  data  yang  diperoleh  akurat.  Kadar  kolesterol  ayam  broiler dianalisis  pada  bagian  yang  berbeda  yaitu  daging  bagian  paha  dan daging  bagian  dada.  Analisis  dilakukan  deengan  spektrofotometer UV  visible  HACH  DR  5000,  diperoleh  panjang  gelombang maksimum 625 nm. Hasil validasi penetapan kadar kolesterol metode Lieberman-Burchard  diperoleh  adanya  hubungan  yang  linear  antara absorbansi  dengan  kadar  kolesterol  dengan  persamaan  y  =  0,009x  + 0,004  dengan  nilai  r2  =  0,998.  Hasil  penetapan  akurasi  diperoleh %PK  sebesar  97,037-108,519%  menunjukkan  metode  ini  memiliki ketepatan  dan  ketelitian  yang  baik.  Hasil  penetapan  presisi didapatkan  nilai  KV  sebesar  0,506  yang  menunjukkan  metode tersebut  memiliki  nilai  keterulangan  yang  baik.  Penetapan  batas deteksi  sebesar  0,511  ppm  dan  batas  kuantitas  sebesar  1,703  ppm. Kadar  kolesterol  daging  ayam  broiler  bagian  paha  atas  diperoleh.59 mg% dan bagian dada dengan kadar kolesterol 65 mg%.
Abstract: Analysis of cholesterol levels in broiler chicken meat is an important  parameter  that  must  be  done  because  of  the  fat  and cholesterol content in broiler chicken meat relatively high can cause health problems. The Liebermann-Burchard method is a non-standard method  for  determining  cholesterol.  To  avoid  mismatch  of measurement data that can cause errors, the laboratory must validate non-standard  methods,  methods  designed  or  laboratory  developed,
standard methods used outside the intended scope, and confirmation and  modification  of  standard  methods  or  in  other  words  Method validation  aims  to  prove  that  all  testing  methods  or  procedures  used consistently  achieve  the  desired  results  or  continously.  In  the validation  of  the  analytical  method,  there  are  several  parameters  of analysis  that  must  be  considered  including  the  accuracy  (accuracy), accuracy (precision), specificity, linearity, detection limit, quantization  limit.  This  study  aims  to  validate  the  Liebermann- Burchard  method  and  analyze  the  cholesterol  levels  of  broiler chickens based on the results of the validation criteria so that the data obtained is accurate. Broiler chicken cholesterol levels were analyzed in different parts, namely the meat of the thigh and breast meat. The analysis  was  carried  out  with  UV  visible  HACH  DR  5000 spectrophotometer, obtained a maximum wavelength of 625 nm. The results  of  the  content  determination  validation  Lieberman-Burchard cholesterol method obtained a linear relationship between absorbance with  cholesterol  levels  with  the  equation  y  =  0.009x  +  0.004,  with value of r2 = 0.998. The result of determining the accuracy obtained by  PK%  of  97.037-108.519%  shows  this  method  has  good  accuracy and accuracy. Determination results precision obtained a KV value of 0.506 which indicates that the method has a good repeatability value. Determination  of  the  detection  limit  of  0.511  ppm  and  the  quantity limit  of  1.703  ppm.  Cholesterol  levels  of  broiler  chicken  meat  were obtained.59 mg% and chest parts with cholesterol levels of 65 mg%.

## PENDAHULUAN
Analisis kadar kolesterol pada daging ayam broiler merupakan parameter penting yang  harus  dilakukan  karena  kandungan  lemak  dan  kolesterol  dalam  daging  ayam broiler  relatif  tinggi  dapat  menimbulkan  masalah  kesehatan  bagi  konsumen  seperti obesitas  dan  aterosklerosis.  Menurut  Jabatan  Dietetik  dan  Katering  CGH  (2005) kolesterol  merupakan  bahan  seperti  lemak,  berlilin  yang  ada  dalam  semua  sel  hewan termasuk  juga  sel  manusia.  Kolesterol  dibawa  di  dalam  tubuh  oleh  lipoprotein. Kolesterol  dibagi  menjadi  dua,  yaitu  low  density  lipoprotein  (LDL)  atau  disebut  juga dengan  kolesterol  jahat  dan  high  density  lipoprotein  (HDL)  atau  biasa  juga  disebut kolesterol baik. LDL dalam jumlah yang berlebihan dapat meningkatkan risiko serangan penyakit  jantung,  sedangkan  HDL  dalam  jumlah  yang  besar  dapat  mengurangi  risiko serangan  penyakit  jantung.  Kolesterol  dibutuhkan  oleh  tubuh  untuk  tumbuh  besar  dan memperbaiki  sel-sel  yang  rusak,  menghasilkan  asam  empedu  yang  membantu  dalam penyerapan lemak dan untuk menghasilkan hormon, umumnya semua jaringan terutama hati  menghasilkan  kolesterol.  Kolestrol  dalam  makan  perlu  kita  waspadai  mengingat tren  penyakit  jantung  cukup  tinggi  di  Indonesia.  Seiring  dengan  peningkatan  sumber daya Manusia,   masyarakat  mulai mengerti arti penting dari bahan pangan yang sehat, sehingga permintaan protein hewani yang berkualitas dan sehat juga semakin meningkat .
Seorang  peneliti  harus  menentukan  metode  analisis  yang  akan  digunakan. Penentuan  kadar  kolesterol  dalam  pangan  sangat  dipengaruhi  oleh  metode  yang digunakan  dalam  melakukan  analisis,  baik  pada  saat  ekstraksi  maupun  saat  penentuan kuantitatifnya.  Untuk  menghindari  ketidaksesuaian  data  hasil  pengukuran  yang  dapat menyebabkan  adanya  kekeliruan,  maka  laboratorium  harus  memvalidasi  metode  tidak baku,  metode  yang  didesain  atau  dikembangkan  laboratorium,  metode  baku  yang digunakan  di  luar  lingkup  yang    dimaksudkan,  dan  penegasan  serta  modifikasi  dari metode baku (Hadi 2007). Validasi metode adalah  suatu proses untuk mengkonfirmasi
bahwa prosedur analisis yang dilakukan untuk pengujian tertentu sesuai dengan  tujuan yang  diharapkan  (Huber  2001).  Penyimpangan  dari  hasil  metode  dapat  dihindari  pada kondisi  normal,  dapat  melakukan  analisis  dengan  tingkat  kepercayaan  yang  tinggi, mengevaluasi  unjuk  kerja  suatu  metode  analisis  pada  lingkup  parameter  tertentu,  dan melakukan  analisis  sesuai  dengan  persyaratan  metode  yang  baik  sehingga  dapat digunakan  untuk  analisis  rutin  atau  dengan  kata  lain    validasi  metode  bertujuan  untuk membuktikan  bahwa  semua  cara  atau  prosedur  pengujian  yang  digunakan  senantiasa mencapai hasil yang diinginkan secara konsisten atau terus menerus.
Beberapa parameter analisis yang  harus dipertimbangkan dalam validasi metode antara  lain  ketepatan  (akurasi),  ketelitian  (presisi),  spesifitas,  linearitas,  batas  deteksi, batas  kuantisasi,  ketangguhan  dan  rentang  .  Proses  ini  bukan  suatu  proses  tunggal, namun merupakan salah satu bagian dari prosedur analisis yang tidak dapat dipisahkan . Parameter yang akan ditentukan dalam penelitian ini meliputi linearitas, akurasi, presisi, limit deteksi (LOD), limit kuantitasi (LOQ).

## METODE
Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah ayam broiler umur 6 minggu. Bahan kimia yang digunakan adalah kolesterol(pa-Merck), n-heksan (pa-Merck), etanol (pa-Merck),  asam  sulfat  (pa-Merck),  asam  asetat  anhidrat  (pa-Merck),  kloroform  (pa- Merck).
Beberapa  peralatan  yang  dibutuhkan  adalah    Alat  yang  digunakan  pada penelitian ini adalah labu ukur 25 mL, labu ukur 10 mL, labu ukur 5 mL, pipet ukur 5 mL,  pipet  ukur  1  mL,  corong  pisah,  allumunium    foil,  corong,  gelas  ukur  1000  mL, gelas  ukur  100  mL,  kertas  saring,  kaca  arloji,  pipet  tetes,  blender,  magnetic  stirer, beaker  glass  1000  mL,  cawan  penguap,  ball  pipet,  timbangan  analitik  (Sartorius  TE 214S),  stopwatch,  kuvet  (Quartz  Square),  Spektrofotometer  UV-Visibel  (HACH  DR 5000).
Analisis  Kadar  Kolesterol  Secara  Kolorimetri  (Saptarini  dkk,  2016).  Pertama, larutan  pereaksi  Liebermann-Burchard.  Asam  asetat  anhidrat  didinginkan  selama  30 menit,  kemudian  asam  asetat    anhidrat  ditambahkan  dengan  asam  sulfat  pekat  dengan perbandingan 10:1. Pereaksi dibuat segar.
Kedua,  larutan  standar.  Sebanyak  10  mg  standar  kolesterol  powder    ditimbang dan  dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  10  ml.  Kemudian  dilarutkan  dengan  kloroform hingga tanda batas sehingga diperoleh larutan standar kolesterol 1000 ppm, digunakan sebagai larutan standar stok.
Penentuan    panjang    gelombang    maksimum  kolesterol    dengan  pereaksi Liebermann-Burchard. Sebanyak 0,375 mL standar 1000 ppm ditambah 2 mL pereaksi Liebermann-Burchard  dalam  labu  5  mL,  digenapkan  hingga    tanda  batas  dengan kloroform.  Campuran  diinkubasi  selama  5  menit.  Absorbansi  diukur  pada  rentang panjang gelombang 400-700 nm menggunakan spektrofotometer visibel dan dilakukan sebanyak tiga kali ulangan.
Penetapan   waktu   kestabilan  warna  yang  terbentuk  antara  kolesterol dengan pereaksi Liebermann-Burchard. Sebanyak 0,375 mL standar 1000 ppm ditambah 2 mL pereaksi  Liebermann-Burchard  dalam  labu  5  mL,  digenapkan  hingga    tanda  batas dengan  kloroform.  Absorbansi  diukur  pada  panjang  gelombang  maksimum  setiap  5 menit selama 60 menit dan dilakukan sebanyak tiga kali ulangan.
Validasi  metode.  Penentuan  linearitas.  Sebanyak  0,  075,  0,150,  0,225,  0,300, dan  0,375  mL  larutan  standar  1000  ppm,  masing-masing  ditambah  2  mL  pereaksi
Liebermann-Burchard  dalam  labu  5  mL,  digenapkan  hingga  tanda  batas  dengan kloroform.  Campuran  diinkubasi  selama  5  menit.  Absorbansi  diukur  pada  panjang gelombang  maksimum.  Masing-masing  konsentrasi  dibuat  sebanyak  tiga  kali  ulangan, kemudian  dibuat  persamaan  linearnya  dengan  metode  regresi  linier  (y  =  ax  +  b). Linearitas kurva kalibrasi dilihat dari nilai koefisien korelasi (r) (Gandjar dan Rohman, 2013).
Penentuan  akurasi.  Sebanyak  0,075,  0,225,  dan  0,375  mL  standar  1000  ppm, masing-masing  ditambah  2  mL  pereaksi  Liebermann-Burchard  dalam  labu  5  mL, digenapkan  hingga    tanda  batas  dengan  kloroform.  Campuran  diinkubasi  selama  5 menit.  Absorbansi  diukur  pada  panjang  gelombang  maksimum.  Masing-masing konsentrasi  dibuat  sebanyak  tiga  kali  ulangan.  Absorbansi  dimasukkan  ke  dalam persamaan  regresi  linear  dari  kurva  kalibrasi.  Konsentrasi  perolehan  kembali  (PK) dibandingkan dengan nilai yang seharusnya (Gandjar dan Rohman, 2012). PK (%) =      x 100% Keterangan: a = konsentrasi perolehan kembali b = konsentrasi standar
Penentuan  presisi.  Sebanyak  0,150  mL  standar  1000  ppm  ditambah  2  mL pereaksi  Liebermann-Burchard  dalam  labu  5  mL,  digenapkan  hingga  tanda  batas dengan  kloroform.  Campuran  diinkubasi  selama  5  menit.  Absorbansi  diukur  pada panjang  gelombang  maksimum.  Larutan  ini  dibuat  sebanyak  enam  kali  ulangan. Penentuan  presisi  dinyatakan  dengan  koefisien  variasi  atau  KV  (%)  (Gandjar  dan Rohman, 2013).                                                Keterangan:
KV = Koefisien variasi
S = Standar deviasi x = Rata-rata
Penentuan batas deteksi (BD) dan batas kuantitasi (BK) (Gandjar dan Rohman, 2013)
Penetapan Kadar Kolesterol Ayam Broiler dengan Metode Eksternal. Sebanyak 50  mg  ekstrak  daging  ayam  broiler  masing-masing  bagian  paha  dan  bagian  dada, dimasukkan  dalam  labu  25  mLdan  dilarutkan  dengan  klorofom  hingga  tanda  batas. Sebanyak 1 mL larutan   sampel ditambah 2 mL pereaksi Liebermann-Burchard dalam labu  5  mL,  digenapkan  hingga    tanda  batas  dengan  kloroform.  Masing-masing campuran    diinkubasi  selama  5  menit.  Absorbansi  diukur  pada  panjang  gelombang maksimum,  Larutan  dibuat  sebanyak  tiga  kali  ulangan.  Kadar  kolesterol  dihitung dengan rumus sebagai berikut:
Kadar kolesterol (mg%) =
x

## HASIL DAN PEMBAHASAN Panjang Gelombang Maksimum dan Operating Time
Panjang  gelombang  yang  digunakan  adalah  panjang  gelombang  yang  mempunyai absorbansi  maksimum.  Berdasarkan  hasil  penelitian  pengukuran  absorbansi  larutan kolesterol setelah direaksikan dengan pereaksi Lieberman Burchard  setelah lima menit yang  dilakukan  pada  rentang  panjang  gelombang  sinar  tampak  400-700  nm  yang dilakukan  sebanyak  minimal  tiga  kali,  diperoleh  panjang  gelombang  maksimum  (λ) 625,00 nm pada absorbansi rata-rata 0,448.
Gambar 1. Penetapan Panjang Gelombang Maksimum Prinsip  uji Lieberman  Burchard untuk  mengidentifikasi  senyawa  golongan steroid  salah  satunya  adalah  kolesterol.  Pereaksi Lieberman  Burchard merupakan campuran  antara  asam  setat  anhidrat  dan  asam  sulfat  pekat.  Asam  asetat  anhidrat digunakan  untuk  mengekstraksi  kolesterol,  memastikan  media  bebas  air  dan membentuk turunan asetil dari steroid, asam sulfat pekat ditetesi melewati dinding  akan menghasilkan  warna  hijau  untuk  senyawa  steroid  termasuk  kolesterol.  Penambahan kloroform  untuk  melarutkan  kolesterol,  karena  1  bagian  kolesterol    yang  bersifat  non polar  larut  dalam  pelarut  non  polar  yaitu  4,5  bagian  kloroform  sesuai  dengan  prinsip “like  dissolve  like”  maka  senyawa    non  polar  akan  larut  non  polar  (Lehninger  1988). Mekanisme  yang  terjadi  dalam  uji  ini  ketika  asam  sulfat  ditambahkan  ke  dalam campuran yang berisi kolesterol, maka molekul air berpindah dari gugus C3 kolesterol, kolesterol  kemudian  teroksidasi  membentuk  3,5-kolestadiena.  Produk  ini  dikonversi menjadi  polimer  yang  mengandung  kromofor  yang  menghasilkan  warna  hijau.  Warna ini  disebabkan  karena  adanya  gugus  hidroksi  (−OH)  dari  kolesterol  bereaksi  dengan pereaksi Lieberman Burchard dan meningkatkan konjugasi dari ikatan tak jenuh dalam cincin yang berdekatan. Warna hijau ini menandakan hasil yang positif.
Reaksi yang terjadi pada uji Lieberman Burchard ini adalah sebagai berikut :
Gambar 2. Reaksi Pembentukan Warna Hijau antara Kolesterol dengan Pereaksi Lieberman Burchard
Penetapan  waktu  kestabilan  warna  ( operating  time ),  merupakan  waktu  yang dibutuhkan suatu senyawa untuk bereaksi hingga terbentuk senyawa produk yang stabil. Pada penelitian ini waktu kestabilan warna diperoleh pada waktu 5 menit, pada menit ke 5 mulai terbentuk senyawa produk yang stabil yaitu dengan nilai absorbansi  0,446.
Gambar 4. Grafik Absorbansi Kolesterol Lieberman Burchard Terhadap Waktu Reaksi

## Validasi Metode
Validasi  metode  merupakan  suatu  cara  dalam    menguji  suatu  metode  analisis untuk  mengetahui  apakah  sesuai  dengan  tujuan  yang  diharapkan.  Tujuan  validasi metode  yaitu  membuktikan  bahwa  hasil  percobaan  yang  diperoleh  dapat  diterima  dan menunjukkan bahwa metode akan bekerja sebagaimana mestinya dibawah kondisi yang akan  digunakan.  Parameter  validasi  yang  diuji  adalah  linearitas,  akurasi,  presisi,  batas deteksi dan batas kuantitas.
Pertama,  hasil  penetapan  linearitas.  Hasil  persamaan  linear  yang  diperoleh berdasarkan  data  konsentrasi  larutan  standar  dengan  absorbansi  larutan  diperoleh  y  = 0,009x  +  0,004  dengan  nilai  r2  =  0,998.  Hasil  ini  menunjukkan  ada  hubungan  yang linear  antara  absorbansi  dengan  kadar  kolesterol,  sehingga  sesuai  dengan  hukum Lambert  Beer,  dan  sesuai  syarat  linearitas,  yaitu  lebih  besar  dari  0,990  (ICH,  1994). Persamaan  tersebut  nilai  b  positif,  hal  ini  menunjukkan  bahwa  semakin  tinggi konsentrasi, nilai absorbansi semakin naik.
Gambar 5. Grafik Linearitas Konsentrasi terhadap Absorbansi
Kedua,  hasil  penetapan  akurasi.  Uji  akurasi  ini  dilakukan  untuk  melihat ketelitian alat dan analisis dalam  membuat  konsentrasi  larutan  yang  sesuai  dengan kadar    yang    sebenarnya.  Pengujian  akurasi  dilakukan  dengan  metode  penambahan baku.   Parameter uji akurasi dilakukan dengan pengukuran 3 konsentrasi standar yaitu 15,  45  dan  75  ppm  dengan  3  kali  pengulangan.  Parameter  yang  dilihat  adalah      nilai perolehan  kembali  (%PK).  Hasil  penetapan  dan  perhitungan  akurasi  disajikan  pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil Pengukuran Parameter Akurasi konsentrasi (ppm) Absorban Konsentrasi perolehan kembali (%) % Perolehan kembali 15 0,135 14,5556 97,037 15 0,136 14,7778 98,519 15 0,137 14,8889 99,259 30 0,295 32,4444 108,148 30 0,292 32,1111 107,037 30 0,296 32,5556 108,519 45 0,425 46,8889 104,198 45 0,424 46,7778 103,951 45 0,427 47,1111 104,691 60 0,586 64,7778 107,963 60 0,585 64,6667 107,778 60 0,588 65,0000 108,333 75 0,716 79,2222 105,630 75 0,718 79,4444 105,926 75 0,715 79,1111 105,481
Dari data didapatkan %PK sebesar 97,037-108,519%, hasil ini memenuhi batas penerimaan  %PK    yaitu  80-110%  (ICH,  1994).  Hal  ini  menunjukan  metode  yang digunakan memiliki nilai ketepatan dan ketelitian yang baik.
Ketiga,  hasil  penetapan  presisi.  Presisi  adalah  ukuran  menunjukkan  derajat kesesuaian  antara  hasil  uji  individual,  diukur  melalu  hasil  individual  rata-rata  jika prosedur  ditetapkan  secara  berulang    pada    sampel    yang    diambil    pada    campuran homogen.    Parameter    uji  presisi    dilakukan    dengan    pengukuran    pada    satu konsentrasi    yaitu    30    ppm  sebanyak  6  kali  pengulangan.  Data  yang  diperoleh  dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil Pengukuran Parameter Presisi
No Absorbansi % Perolehan kembali 1 0,295 32,4444 2 0,292 32,1111 3 0,296 32,5556 4 0,295 32,4444
5 0,294 32,3333 6 0,293 32,2222 Ẋ 32,3519 SD 0,1636 KV 0,506
Didapatkan  nilai  KV  sebesar  0,506,  memenuhi  syarat  nilai  keseksamaan  yang diterima  adalah  <  2%  (Harmita,  2004).  Sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa  metode tersebut memiliki nilai keterulangan yang baik.
Keempat,  hasil  penetapan  batas  deteksi  dan  batas  kuantitasi.  Batas  deteksi menunjukkan  jumlah  terkecil  analit  dalam  sampel  yang  dapat  dideteksi  yang  masih memberikan  respon  signifikan  sedangkan  batas  kuantifikasi  menunjukkan  kuantitas terkecil analit dalam sampel yang masih dapat memenuhi kriteria cermat dan seksama ( ICH,  1994).  Hasil  perhitungan  didapatkan  Batas  deteksi  sebesar  0,511  ppm  dan  batas kuantitasi sebesar 1,703 ppm.
Tabel 3. Hasil Pengukuran Batas Deteksi dan Batas Kuantitas Parameter SD Slope Hasil Perhitungan Batas Deteksi (BD) 0,001533  0,009 0,511 Batas Kuantitas (BK) 0,001533  0,009 1,703

## Penetapan Kadar Kolesterol Ayam Broiler Metode Eksternal
Penetapan  kadar  kolesterol  daging  ayam  broiler  bagian  paha  atas  dan  dada dengan  penambahan  pereaksi  Lieberman-Burchard  menggunakan  spektrofotometri Visible  HACH  DR  5000  dengan  panjang  gelombang  625  nm  yang  telah  dilakukan optimasi  dan  validasi  sehingga  memenuhi  syarat  atau  kriteria  parameter-parameter validasi.
Kadar  kolesterol  daging  ayam  broiler  bagian  paha  atas  diperoleh.59  mg%  dan dada  dengan  kadar  kolesterol  65  mg%.  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian  Suharti  et  al (2008) bahwa perbandingan rataan bobot karkas bagian dada sebesar 24,01±.6,63 % dan bobot  karkas  bagian  paha  atas  ayam  broiler  dengan  umur  yang  sama  yaitu  5  minggu sebesar  17,84  ±1,02  %.  Salah  satu  faktor  yang  mempengaruhi  persentase  berat  karkas adalah  komposisi  lemak  tubuh.  Nuun  (2016)  mengemukakan  bahwa  kadar  kolesterol tertinggi  dari  daging  ayam  broiler  tanpa  perlakuan  berbanding  lurus  dengan  rataan lemak  abdominal,  diperoleh  kadar  kolesterol  sebesar  123,2  mg/dg  rataan  lemak abdominal sebesar 2,2%. Sutarpa (2005) menjelaskan lemak yang tinggi di dalam tubuh mengakibatkan  terjadinya  kenaikan  kadar  LDL  di  dalam  darah  yang  merupakan lipoprotein kaya akan kolesterol.

## KESIMPULAN
Hasil  validasi  penetapan  kadar  kolesterol  metode  Lieberman-Burchard  diperoleh adanya  hubungan  yang  linear  antara  absorbansi  dengan  kadar  kolesterol  dengan persamaan  y  =  0,009x  +  0,004,  dengan  nilai  r2  =  0,998.  Penetapan  akurasi  diperoleh %PK  sebesar  97,037-108,519%.  Penetapan  presisi  didapatkan  nilai  KV  sebesar  0,506, batas  deteksi  sebesar  0,511  ppm  dan  batas  kuantitas  sebesar  1,703  ppm.  Kadar kolesterol  daging  ayam  broiler  bagian  paha  atas  diperoleh.59  mg%  dan  dada  dengan kadar kolesterol 65 mg%.

## REFERENSI
Ansel,  H.C.,  1989,  Pengantar  Bentuk  Sediaan  Farmasi,  diterjemahkan  oleh  Farida Ibrahim, Asmanizar, Iis Aisyah, Edisi keempat, 255-271, 607-608, 700, Jakarta, UI Press
Arifin  MB.  2005.  Kandungan  Lemak,  Kolesterol  Daging  serta  Penampilan  Ayam Broiler  Umur  3  Minggu  sampai  8  Minggu  yang  diberi  Makan  Daun  Katuk ( Sauropus  androgynus )  dalam  Ransumnya  [skripsi].  Bogor:  Departemen  Ilmu Nutrisi dan Teknologi Pakan, Fakultas Peternakan, Institut Pertanian Bogor.
Bender AE., Bender DA. 2001. Food Tables & Labeling. London: Oxford. de Almeida JC,  Perassolo  MS,  Camargo  Jl,  Bragagnolo  N,  Gross  JL.  2006.  Fatty  acid comsition  and  cholesterol  content  of  beef  and  chicken  meat  in  southern  Brazil. Rev Bras Cienc Farm. 42(1): 109-117.
Departemen  Kesehatan,  2000,  Parameter  Standar  Umum  Ekstrak  Tumbuhan  Obat,
Cetakan I,10, 17-19, Jakarta, Dirjen POM, Depkes RI.
EMAThe European Agency for the Evaluation of Medical Products. 1995. ICH. Topic
2B. Validation of Analytical Procedures: Methodology . http://www . Pharmacontract.ch/support/pdf-support/Q2a.pdf [2 November 2010]
Freeman W. Mason & Junge Christine, 2008, Kolesterol Rendah Jantung Sehat. Bhuana Ilmu Populer, Jakarta.
Gandjar,  I.  G.  &  Rohman,  A.,  2012, Analisis  Obat  secara  Spektroskopi  dan Kromatografi , 315-317, Pustaka Pelajar, Yogyakarta.
Harborne,  J.B.  1987.  Metode  Fitokimia  Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis Tumbuhan. Penerbit ITB. Bandung.
Harmita.  2004.  Petunjuk  pelaksanaan  validasi  metode  dan  perhitungannya.  Majalah Ilmu Kefarmasian, 1(3): 117-135.
Heinrich,  et  al.  2004.  Fundamental  of  pharmacognosy  and  phytotherapi.  Hungary.
Elsevier.
Marliyati, Sri Anna, et al . 2005.  Ekstraksi dan Analisis  Fitosterol   Lembaga Gandum ( Tricticum sp.). Jurnal Teknol dan Industri Pangan, Vol.  XVI No. 1 Tahun 2005.
Murtidjo, B.A., 1987. Pedoman Beternak Ayam Broiler. Kanisius. Yogyakarta. Murtidjo, B. A. 1992. Pedoman Beternak Ayam Broiler. Kanisius. Yogyakarta. Osman  H.,  Chin  YK.  2006.  Comparative  Sensitivities  of  Cholesterol  Analysis  using GC,  HPLC  and  Spectrophotometric  Methods.  The  Malaysian  Journal  of Analytical Sciences, 10 (2): 205210.
Rasyaf, M . 1997. Beternak Ayam Petelur . Edisi ke X. Penebar Swadaya: Jakarta Schunack,  Walter;  Mayer,  Klaus  and  Haake;  Manfred.  1990. Senyawa  Obat,  Buku Pelajaran Kimia Farmasi. Edisi kedua. (Terjm. Joke R. Wattimena dan Sriwoelan Soebito). Yogyakarta : GMU-Press.
Sulistyowati,  Y.,  2006.  Pengaruh  Pemberian  Likopen  terhadap  Status  Antioksidan (Vitamin  C,  Vitamin  E  dan  Gluthathion  Peroksidase)  Tikus  (Rattus  norvegicus galur Sprague Dawley) Hiperkolesterolemik. Tesis. Program Studi Magister Ilmu Biomedik. Universitas Diponegoro. Semarang.
Wardiny,  Tuty  M.,  2006.  Kandungan  Vitamin  A,  C  dan  Kolesterol  Telur  Ayam  yang Diberi  Mengkudu  (Morinda  citrifolia)  Dalam  Ransum.  Institut  Pertanian  Bogor. Tesis.