UJI EFEKTIVITAS EKSTRAK KULIT APEL (Malussylvestris-mill) VAR. Rome Beauty TERHADAP KADAR ENZIM SGPT TIKUS (Rattusnorvegicus) GALUR WISTAR YANG DIINDUKSI CCL 4 (KARBONTETRAKLORIDA)
Vina Devi Octaviany 1 , Hany Yusmaini 2 , Kristina Simanjuntak 3
1 Fakultas Kedokteran UPN Veteran Jakarta
2 Departemen Farmakologi, Fakultas Kedokteran UPN “Veteran” Jakarta Email : hany.yusmaini@gmail.com
3 Departemen Biokimia Fakultas Kedokteran UPN “Veteran”Jakarta

## ABSTRAK
Hepar adalah organ terbesar yang paling sering menerima jejas karena merupakan    pintu utama bagi semua  bahan  yang  masuk  ke  dalam  tubuh  melalui  saluran  cerna.  Karbontetraklorida (CCl 4 )  adalah senyawa kimia yang dapat menginduksi kerusakan hati. Antioksidan yang berasal dari buah-buahan, misalnya  buah  apel  dapat  digunakan  sebagai  alternatif  pengobatan  alami  untuk  mengurangi kerusakan  hati.  Kulit  apel  mengandung  senyawa  flavonoid  lebih  banyak  daripada  daging  buahnya. Flavonoid  tersebut  menunjukkan  aktivitas  antioksidan  yang  dapat  menyebabkan  berkuranganya peroksida lipid akibat radikal bebas yang dibentuk oleh CCl 4 sehingga fungsi membran sel hati akan tetap  terlindungi.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  pengaruh  dari  ekstrak  kulit  buah  apel var. Rome  beauty terhadap  kadar  SGPT  tikus (Rattus  norvegicus )  yang  diinduksi  oleh  CCl 4 . Penelitian  ini  menggunakan  25  ekor  tikus  galur  wistar  yang  dibagi  menjadi  lima  kelompok  secara acak,  yaitu  kelompok  kontrol  positif,  kontrol  negatif,  ekstrak  kulit  apel  var. Rome  beauty dosis  I (0,12  mg/kg  BB),  dosis  II  (0,24  mg/kg  BB),  dan  dosis  III  (0,49  mg/kg  BB).  Uji  one  way  anova menandakan adanya perbedaan efektivitas yang bermakna antar kelompok (P<0,000). Hasil analisis uji post  hoc terdapat  perbedaan  yang  bermakna  antara  kelompok  kontrol  positif  dengan  kelompok perlakuan  ekstrak  kulit  apel  var. Rome  beauty dosis  I,  dosis  II  dan  dosis  III  (P<0,05)  yang menandakan bahwa ekstrak kulit apel var. Rome beauty dosis I, II dan III dapat menurunkan enzim SGPT tikus ( Rattus norvegicus ) yang diinduksi CCl 4 .
Kata Kunci: hepatoprotektif, radikal bebas, ekstrak kulit apel var. Rome beauty , CCl 4

## ABSTRACT
Liver  is  the  largest  organ  in  the  human  body  and  injured  very  often  due  to  the  way  of  all  the materials  into  the  body  through  the  gastrointestinal  tract.  Carbontetrachloride  (CCl 4 )  constitute  a chemical compound that can induce liver damage. Fruit-originated antioxidants, such as apples can be used as alternative natural substance to reduce liver damage. Apples peel contains more flavonoid compounds than the flesh. These flavonoids exhibit antioxidant activity that can cause lipid peroxide deficiency due to free radicals formed by CCl 4 so that the function of the liver cell membrane will
remain protected. This study was conducted to determine the effectiveness of apple peel extract var. rome beauty against to level of rat Rattus norvegicus SGPT induced by CCl 4 . This study used 25 rats ( Rattus  norvegicus )  Wistar  strain  that  were  divided  into  five  groups  randomly.  These  group  are positive  control,  negative  control,  apple  peel  extract  var. Rome  beauty first  dose  (0.12  mg/kg),  the second  dose  (0.24  mg/kg),  and  the  third  dose  (0.49  mg/kg). Based  on  thenalysis  of  data  from  the One-Way  ANOVA  test  showed  that there  are  significant  differences  in  effectiveness  between  the groups. Based on post hoc test, there are significant differences between the positive control group to the treatment group : apple peel extract var. Rome beauty first dose, second dose and third dose (P <0.05), this result showed that apple peel extract var. Rome beauty has effectiveness to reduce SGPT levels of CCl 4 induced rat.
Keywords: hepatoprotektif, free radicals, apple peel extract var. Rome beauty, CCl 4 _________________________________________________________________________________

## PENDAHULUAN
Pada  era  globalisasi  semakin  banyak bahan-bahan  yang  sangat  berbahaya  bagi tubuh seperti penggunaan pengawet makanan, asap  kendaraan  yang  merupakan  salah  satu sumber  radikal  bebas  di  sekeliling  kita. Diperkirakan  terjadi  10.000  serangan  radikal bebas  pada  setiap Deoxyribo  Nucleic  Acid (DNA)  sel  manusia  setiap  harinya. 1 Radikal bebas  adalah  senyawa  atau  molekul  yang memiliki  kandungan  satu  atau  lebih  elektron yang  tidak  berpasangan  pada  sumbu  luarnya. Elektron  yang  tidak  berpasangan  ini  dapat menyebabkan  senyawa  tersebut  sangat  reaktif sehingga  mencari  pasangan  dengan  cara mengikat  elektron  molekul  yang  berada  di sekitarnya.  Radikal  bebas  merupakan  pemicu terjadinya  beberapa  penyakit  seperti  jantung koroner,  kanker,  penuaan,  radang  sendi, katarak dan kemunduran saraf. 2
Banyak cara untuk mengurangi paparan  radikal  bebas  yang  masuk  ke  dalam tubuh, salah satunya adalah dengan mengkonsumsi buah-buahan dan sayuran yang kaya  akan  antioksidan.  Buah  yang  kaya antioksidan  salah  satunya  adalah  buah  apel, baik  daging  buah  ataupun  kulitnya.  Ketika memakan  buah  apel  beberapa  orang  memiliki kebiasaan  untuk  membuang  kulitnya,  padahal
kulit  apel  tersebut  memiliki  kandungan antioksidan  yang  lebih  tinggi  dibandingkan daging buahnya. 3
Hepar  adalah  organ  yang  sangat penting  dan  organ  terbesar  pada  tubuh, menyumbang sekitar 2% berat tubuh total atau sekitar  1,5  kg  pada  rata-rata  manusia  dewasa. Unit  fungsional  dari  hepar  adalah  lobulus. Hepar  manusia  mengandung  50.000  sampai 100.000  lobulus. 4 Hepar  merupakan  organ yang  paling  sering  menerima  jejas,  karena hepar  merupakan  pintu  utama  dari  semua bahan  yang  masuk  ke  dalam  tubuh  melalui saluran  cerna.  Setelah  zat  makanan  ataupun obat-obatan serta toksik yang masuk ke tubuh melalui  saluran  cerna  diserap  oleh  epitel  usus kemudian  akan  dibawa  oleh  vena  porta  ke hepar.  Hepar  menjadi  organ  yang  sangat potensial mengalami jejas dan keracunan lebih dahulu sebelum organ lain .5
Kerusakan organ hepar dapat disebabkan  oleh  virus,  bakteri,  zat-zat  toksik dan  radikal  bebas.  Zat  toksik  yang  dapat menyebabkan  radikal  bebas  salah  satunya CCl 4 . CCl 4 adalah cairan yang tidak berwarna, tidak  larut  dalam  air,  dan  digunakan  dalam industri  sebagai  pelarut  organik.  CCl 4 dapat diserap  melalui  membran  sel.  CCl 4 yang masuk  ke  dalam  tubuh  efek  toksiknya  terlihat
pada  hepar.  CCl 4 akan  bereaksi  dengan makromolekul  dalam  tubuh  seperti  lipid  pada membran  sel,  protein  dalam  jaringan  atau enzim, karbohidrat, dan DNA sehingga terjadi kerusakan oksidatif yang menyebabkan peroksidasi  lipid  yang  dapat  mengubah struktur  dan  fungsi  membran  sel,  selain  itu terjadi peningkatan permeabilitas membran sel yang  diikuti  oleh  influks  masif  kalsium  dan kematian sel. 5
Hepar  yang  rusak  dapat  mengganggu fungsi organ ataupun strukturnya. 3
Terganggunya  fungsi  ataupun  struktur  organ hepar  ditandai  dengan  peningkatan  enzim SGPT. 6 Enzim ini lebih spesifik dibandingkan dengan  ezim  lain  karena  konsentrasinya  lebih banyak  di  dalam  sitosol  sel  hati  dan  akan keluar  ke  pembuluh  darah  jika  terjadi kerusakan pada sel hati. 6
Berdasarkan  penelitian  sebelumnya ekstrak  kulit  apel (Malus  sylvestris-mill) var. Rome  beauty dapat  menghambat  kerusakan histologis  sel  hati  mencit  akibat  karbon tetraklorida.  Hal  ini  menunjukan  bahwa ekstrak  kulit  apel  dapat  menurunkan  tingkat kerusakan  sel  hati  mencit  akibat  karbon tetraklorida.
Kulit  apel  mengandung  total  senyawa phenol yang  lebih  kaya  daripada  daging buahnya. 7 Senyawa phenol dalam  100  g  kulit apel  var. rome  beauty sebesar  500,2  ±  13,7 mg. 8 Kelompok  senyawa phenol yang  paling penting adalah flavonoid . 9 Kulit apel mengandung senyawa-senyawa flavonoid seperti: Catechin,  procyanidin,  phloridzin, phloretin  glycoside,  caffeic  acid,chlorogenic acid , quercetin  glycosides  dan  cyanidin glycoside. 8 Flavonoid  tersebut  menunjukkan aktivitas antioksidan yang dapat menyebabkan berkuranganya  peroksida  lipid  akibat  radikal bebas  yang  dibentuk  oleh  CCl 4 sehingga fungsi membran sel hati akan tetap terlindungi. 10

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  bersifat  eksperimental murni  dengan  rancangan  penelitian posttest only  control  group  design. Subyek  penelitian, pada  rancangan  ini,  diberi  perlakuan  dan diobservasi  perubahan  yang  ada  akibat perlakuan  sebanyak  satu  kali.  Adapun  subyek yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah tikus  ( Rattus  norvegicus )  jantan  galur wistar sebanyak  25  ekor  berumur  2-3  bulan  dengan berat  badan  berat  badan  150-200  gram. Sampel  dibagi  dalam  lima  kelompok,  yaitu kontrol  negatif  (K1),  kontrol  positif  (K2), perlakuan  1  (P1),  perlakuan  2  (P2),  dan perlakuan  3  (P3)  masing-masing  kelompok terdiri  dari  lima  ekor  tikus.  Jumlah  ini ditentukan dengan menggunakan rumus federer yaitu (K-1) (n-1) > 15.
Tehnik yang digunakan untuk pengambilan sampel pada penelitian ini adalah probability  sampling .  Tehnik  pengambilan sampel berdasarkan probability sampling yang digunakan  adalah simple  random  sampling . Alat  dan  bahan  yang  digunakan  pada penelitian  ini  antara  lain  kandang  tikus  lima unit,  timbangan,  Gelas  ukur  dan  pengaduk, Sonde lambung, scalpel, tabung reaksi dan rak kecil, automatic chemistry analyzer (SF-1904C),  alat  sentrifugasi,  Spuit  5  cc, larutan carbon  tetrachloride (CCl 4 ),  ekstrak kulit  apel  var. rome  beauty ,  makanan  hewan percobaan (pelet 511 dan air PAM), aquadest , reagent R1  (TrissPh  7,15  140  mmol/L; L-Alanine 700 mmol/L; LDH (lactate dehydrogenase)  ≥  2300  U/L), reagent R2 (2-Oxoglutarate  85  mmol/L;  NADH  1 mmol/L), dan serum control .
Penelitian ini dimulai dengan melakukan  adaptasi  tikus  selama  tujuh  hari. Hari  ke–8  melakukan  penimbangan  untuk menentukan  dosis  dan  dilakukan  perlakuan. Seluruh  kelompok  (K2,  P1,  P2,  dan  P3) kecuali  kelompok  K1  di  berikan  CCl 4 dosis 1,0 ml/kgBB secara intraperitoneal, kemudian
dibiarkan  selama  24  jam.  Kelompok  K1  dan K2,  setelah  24  jam,  diberi  diet  standar  dan aquadest selama 10 hari.
Kelompok  P1  diberi  ekstrak  kulit  apel var. rome  beauty 0,12  mg/kgBB  dan  pakan standar  + aquadest .  Kelompok  P2  diberi ekstrak  kulit  apel  var. rome  beauty 0,24 mg/kgBB  dan  pakan  standar  + aquadest . Kelompok  P3  diberi  ekstrak  kulit  apel  var . rome beauty 0,49 mg/kgBB dan pakan standar + aquadest .  Perlakuan  diberikan  sekali  sehari mulai hari ke-1 sampai dengan hari ke-10.
Semua  hewan  percobaan,  pada  hari ke-11,  diambil  darahnya  sebanyak  5  ml dengan  cara  memotong  ekor  tikus  dan disimpan  pada  tabung  reaksi,  kemudian dilakukan sentrifugasi dengan kecepatan 3000 RPM  selama  60  menit  sehingga  di  dapatkan serum, untuk selanjutnya dilakukan pengukuran  kadar  enzim  SGPT  menggunakan automatic  chemistry  analyzer (SF-1904C).
Setelah  didapatkan  kadar  SGPT  kemudian dibandingkan  rata-rata  kadar  enzim  SGPT antar kelompok.
Data  yang  diperoleh  kemudian  diolah dengan Statistical  Product  and  Service Solution (SPSS) 17.0 for  Windows .  Data  ini dianalisis  dengan  analisis  uji  parametrik One Way Anova.  Apabila  ditemukan  hasil  yang berbeda  nyata,  kemudian  dilanjutkan  dengan uji Least Significant Difference (LSD) .

## HASIL PENELITIAN
Analisis ini dilakukan untuk mengetahui  perbedaan  yang  bermakna  antar kelompok.  Tabel  1.  menunjukkan  perbedaan kadar  rata-rata  enzim  SGPT  tikus  pada  setiap kelompok. Pada kelompok K1 yaitu kelompok kontrol negatif memiliki kadar rata-rata enzim SGPT  sebesar  74,20  ±  6,90  IU/L  nilai  ini merupakan  kadar  enzim  SGPT  normal  pada penelitian  ini.  Kelompok  K2  yaitu  kelompok kontrol  positif  memiliki kadar  rata-rata  enzim SGPT  sebesar  4038,60  ±  2341,61  IU/L,
merupakan  kadar  rata-rata  enzim  SGPT tertinggi dibandingkan dengan kelompok lain, hal  ini  menunjukkan  adanya  kerusakan  hati yang diakibatkan oleh pemberian hepatotoksik yaitu CCl 4 1 ml/kgBB tikus secara intraperitoneal.
Tabel 1. Hasil Pengukuran Kadar Enzim SGPT
Tikus Kelompok Kadar Enzim SGPT IU/L K 1 74,20 ± 6,90 K 2 4038,60 ± 2341,61 P 1 60,40 ± 2,30 P 2 89,60 ± 10,64 P 3 91,40 ± 9,81 Hasil uji one way anova menunjukkan perbedaan  (P<  0,05).  Uji pots  hoc dengan menggunakan Least  Significant  Difference (LSD) dilakukan untuk mengetahui perbedaan yang  bermakna  antara  kelompok  K1  dengan K2,  P1,  P2,  dan  P3;  K2  dengan  P1,  P2,  dan P3; P1 dengan P2 dan P3.

## PEMBAHASAN
Adanya  perbedaan  yang  bermakna antara  kelompok  kelompok  K1  dengan  K2 menunjukkan  bahwa  pemberian  CCl 4 dengan dosis  1  ml/kg  BB  tikus  secara  intraperitoneal dapat  mengakibatkan  kerusakan  hati  pada kelompok  K2  yaitu  didapatkan  hasil  rata-rata pengukuran  enzim  SGPT  sebesar  4038,60  ± 2341,61  IU/L,  nilai  ini  lebih  tinggi  bila dibandingkan  dengan  kelompok  K1  yaitu sebesar 74,20 ± 6,90 IU/L. Peningkatan kadar enzim  SGPT  ini  sesuai  dengan  teori  bahwa pemberian  CCl 4 dosis  1  ml/kg  BB  dapat mengakibatkan  kerusakan  hati  yang  ditandai dengan  peningkatan  kadar  enzim  SGPT  dua kali lipat lebih tinggi dibandingkan kontrol.
CCl 4 adalah cairan yang tidak berwarna, tidak larut dalam air, dan digunakan dalam  industri  sebagai  pelarut  organik.  CCl 4 dapat  diserap  melalui  membran  sel  dan  CCl 4 yang  masuk  ke  dalam  tubuh  akan  di distribusikan  ke  semua  organ,  tetapi  efek
toksiknya  terutama  terlihat  pada  hepar. Toksisitas  CCl 4 disebabkan  akibat  konversi molekul  CCl 4 menjadi  radikal  bebas  CCl 3 ˉ oleh  sitokrom  P-450. 5 Radikal  bebas  CCl 3 ˉ akan  bereaksi  dengan  oksigen  membentuk radikal triklorometil peroksida (CCl 3 O 2 ˉ) yang sangat  reaktif. 12 Pembentukan  radikal  bebas yang  berlebihan  akan  mengakibatkan  stress oksidatif sehingga dapat menimbulkan gangguan  pada  hati.  Stress  oksidatif  yang berlebihan  dalam  tubuh  perlu  tambahan antioksidan  dari  luar. 13 Tipe  toksisitas  dari CCL 4 terhadap hati adalah menyebabkan fatty liver atau  steatosis,  infiltrasi  lemak,  nekrosis sentrolobuler, hingga sirosis. 13
Kelompok  K2  yang  dibandingkan dengan  kelompok  P1,  P2,  dan  P3  memiliki perbedaan  yang  bermakna.  Perbedaan  yang bermakna antara kelompok K2 dengan P1, P2, dan P3 menunjukkan adanya efek hepatoprotektif  dari  ekstrak  kulit  apel  var. Rome beauty yang dibuktikan dengan penurunan  rata-rata  kadar  enzim  SGPT  yang signifikan  pada  kelompok  P1,  P2,  dan  P3 dibandingkan dengan kelompok K2. Penurunan  enzim  SGPT  pada  kelompok  P1 yang  diberikan  ekstrak  kulit  apel  var. Rome beauty dosis 0,12 mg/kg BB memberikan hasil yang terbaik yaitu kadar rata-rata enzim SGPT mencapai  nilai  normal  yaitu  60,40  ±  2,30 IU/L,  nilai  ini  sesuai  dengan  rujukan  nilai normal  enzim  SGPT  menurut  LPPT  UGM, yaitu  42,9-67,4  IU/L. 14 Hal  ini  menunjukkan bahwa pemberian ekstrak kulit apel var. Rome beauty dosis  0,12  mg/kg  BB  memperlihatkan efek  hepatoprotektor  yaitu  dapat  melindungi terhadap  kerusakan  jaringan  hati yang diinduksi dengan CCl 4 . Pada kelompok P2 dan P3  juga  terdapat  penurunan  kadar  rata-rata enzim  SGPT  yaitu  89,60  ±  10,64  IU/L  dan 91.40 ± 9.81 IU/L namun penurunan enzim ini belum  mencapai  keadaan  normal  yang  sesuai dengan nilai rujukan berdasarkan LPPT UGM. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  pemberian
ekstrak kulit apel var. Rome beauty dosis 0,24 mg/kg BB dan 0,49 mg/kg BB memperlihatkan  efek  hepatoprotektor  tetapi belum maksimal.
Penurunan enzim SGPT setelah pemberian ekstrak kulit apel var. rome beauty merupakan  salah  satu  tanda  adanya  perbaikan sel-sel  hati  yang  mengalami  kerusakan  akibat paparan  dari  CCl 4 .  Hal  ini  disebabkan  karena ekstrak  kulit  apel  mengandung  salah  satu fitokimia  yaitu  polifenol  dengan  komponen utama procyanidins oligomer . Menurut Yudhie,  2010  Polifenol  merupakan  jenis fitokimia  yang  bersifat  antioksidan  aktif dengan  kekuatan  100  kali  lebih  efektif dibandingkan  dengan  vitamin  C  dan  25  kali lebih  tinggi  dibanding  vitamin  E. 15 Aktivitas antioksidan  pada  varietas  apel Rome  beauty memiliki kadar tertinggi dibandingkan varietas apel  malang  yang  lainnya. 16 Selain  polifenol, kulit  apel  juga  mengandung quercetin . Quercetin merupakan  subkelas  flavonoid golongan  flavonol  yang  dibedakan  karena struktur kimia dan karakteristiknya . 17 Secara in vitro, quercetin memiliki aktivitas antioksidan yang lebih besar daripada vitamin A dan E. 17
Berdasarkan uji post hoc pada kelompok P1 dengan P2 dan P3 memiliki nilai signifikansi alpha kurang  dari  0,05  (P<0,05). Hal ini menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang signifikan antara kelompok P1 dengan  kelompok  P2  dan  P3.  Perbedaan  ini menunjukkan  bahwa  dosis  ekstrak  kulit  apel var. Rome  beauty pada  P1  dosis  0,12  mg/kg BB  memiliki  efek  hepatoprotektor  maupun hepatokurator yang paling efektif dibandingkan  dengan  kelompok  P2  dan  P3. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  pada  dosis  yang lebih  besar  aktivitas  hepatoprotektor  menjadi berkurang. 18 Hal  ini  tidak  sesuai  dengan  teori yang  mengatakan  bahwa  kenaikan  dosis  dan banyaknya konsentrasi zat aktif di dalam obat diikuti oleh kenaikan respon farmakologi. 19
Kulit apel memiliki kandungan flavonoid  tambahan  yang  tidak  terdapat  pada daging buah apel seperti quercetin glycosides dan cyanidin
glycoside . 8
Kandungan  flavonoid  yang  terdapat  di  dalam kulit  apel  ini  memiliki  aktivitas  antioksidan yang  dapat  meredam  radikal  bebas  akibat pemberian  CCl 4 .  Antioksidan  merupakan senyawa  yang  dapat  menghambat  reaksi oksidasi,  dengan  mengikat  radikal  bebas  dan molekul yang sangat reaktif sehingga kerusakan sel akan dihambat. 2 Di dalam hepar sendiri  terdapat  mekanisme  detoksifikasi bahan  berbahaya,  dan  hepar  mengandung antioksidan  dengan  berat  molekul  rendah, maka dari itu dengan dibantu oleh antioksidan yang  terdapat  pada  esktrak  kulit  apel  var. Rome  beauty dapat  menghambat  kerusakan hati akibat paparan CCl 4 . Aktivitas antioksidan dapat bekerja dengan mekanisme: menstimulasi  sistem  pertahanan  antioksidan seperti superoksida dismutase, katalase, glutation,  glutation  reduktase,  menstabilkan biomembran  dengan  mengurangi  peroksidasi lemak dan menangkap radikal bebas.
Menghambat  aktivitas  oksidan  baik  yang bersifat hidrofilik maupun lipofilik Memotong reaksi oksidasi berantai dari radikal bebas atau dengan menangkap radikal bebas. 19

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil analisis dan
pembahasan  terhadap  hasil  penelitian  yang diperoleh,  maka  dapat  diambil  kesimpulan sebagai berikut:
1. Pemberian  Ekstrak  kulit  apel  var. Rome beauty dosis  0,12  mg/kg  BB  dapat
menurunkan  enzim  SGPT  tikus  ( Rattus norvegicus) yang  diinduksi  CCl 4 sampai ke nilai normal.
2. Pemberian  ekstrak  kulit  apel  var. Rome beauty dosis  0,24  mg/kg  BB  dapat menurunkan  enzim  SGPT  tikus  ( Rattus
norvegicus) yang  diinduksi  CCl 4 namun tidak mencapai nilai normal.
3. Pemberian  ekstrak  kulit  apel  var. Rome beauty 0,49  mg/kg  BB  dapat  menurunkan enzim  SGPT  tikus  ( Rattus  norvegicus ) yang diinduksi CCl 4 namun tidak mencapai nilai normal.

## DAFTAR PUSTAKA
(1) Boyer J. & Liu R.H. Apple Phytochemicals and Their Health Benefit.  Nutrition  Journal.  2014;  3:  5. (Online) http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ pmc/articles/PMC442131 [diakses 9 Oktober 2015].
(2) Winarsi,  H.  Antioksidan  Alami  dan Radikal  Bebas:  Potensi  dan  Aplikasinya dalam  Kesehatan,  Yogyakarta:  Kanisius; 2007.
(3) Simamora,  A.,  Flavonoid  dalam  Apel dan  Aktivitas  Antioksidannya.  2008;
Mei-Agustus: 15: 40. (Online)
http://download.portalgaruda.org/article. php?article=199218&val=6570&title=Fl avonoid%20dalam%20Apel%20dan%20 Aktivitas%20Antioksidannya [diakses  5 November 2015].
(4) Guyton,  A.C.  &  Hall,  J.  E.  Fisiologi Kedokteran.  edisi  11.  Jakarta:  EGC;
2006. (5) Kumar, V., Cotran, R.S., & Robbins S.L. Buku Ajar Patologi. Jakarta: EGC; 2012.
(6) Giboney  P.T.  Mildly  elevated  liver transaminase  levels  in  the  asymptomatic patient,  Am  Fam  Physician,  2005:  71 (6); 1105-10.
(7) Chinici. Radical scavenging activities of peels  and  pulps  from  cv.  Golden Delicious  apples  as  related  to  their phenolic  composition.  J  Agric  Food Chem; 2004; 52(15): 4684-4689.
(8) Wolfe K.L., & Liu R. H. Apple Peels as a  Value-added  Food  Ingredient.  J  Agric Food Chem. 2003; 51: 1676–1683.
(9) Redha,  A.  Flavonoid:  Struktur,  Sifat Antioksidatif  dan  Peranannya  dalam Sistem  Biologis.  Jurnal  Berlian;  2010; 9(2): 196–202.
(10) Haki,  M.  Efek  Ekstrak  Daun  Talok
(Muntingia Calabura L.) Terhadap Aktivitas  Enzim  SGPT  pada  Mencit yang  Diinduksi  Karbon  Tetraklorida (Skripsi). Surakarta: Fakultas Kedokteran  Universitas  Sebelas  Maret;
2009.
(11) Hodgsons  E.  A  Text  Book  of  Modern Toxicology.  3 rd edition.  Canada:  John
Wiley & Sons Inc; 2004.
(12) Curtis D. and Klaassen, P. (ed.) Casarett and doull’s Toxicology the Basic Science of Poison. 6 th edition. Kansas:
McGraw-Hill; 2011.
(13) Sujono,  T.A.,  Wahyuni  A.S.,  Da’i,  M.,
Kusumowati, I.T.D., Suhendi, A.,
Munawaroh,  R.,  et.  al.  Pengaruh Pemberian  Ekstrak  Etanol  Meniran ( Phyllanthus  Niruni  L )  Selama  90  Hari Terhadap  Fungsi  Hati  Tikus.  University Research Colloquium; 2015: 136-142.
(14) Jauhary,  H.  Sehat  Tanpa  Obat  dengan Apel.  Rapha  Publishing.  Yogyakarta.
2016.
(15) Susanto,  W.  H.  dan  Bagus,  R.  Pengaruh varietas  apel  ( Malus  sylvestris )  dan Lama Fermentasi oleh Khamir Saccharomyces Cerivisiae sebagai Perlakuan Pra-pengolahan terhadap Karakteristik  Sirup,  Jurnal  Teknologi
Pertanian; 2011; 12(3): 135-142
(16) Persada,  N.I.  Pengaruh  Ekstrak  Kulit Apel  Rome  Beauty  dalam  Mengurangi Kerusakan  Histologis  Hati  Mencit  yang Diinduksi  CCl 4 (Skripsi).  Surakarta:
Fakultas Kedokteran. Universitas
Sebelas Maret; 2009.
(17) Nakagawa  K.  et.  al.  Differential  effects of  Flavonoid  Quercetin  on  Oxidative Damages  Induced  by  Hydrophilic  and Lipophilic Radical Generators in Hepatic Lysosomal Fractions of Mice. Journal of Health Science; 2000; 46(6): 509–512.