http://jurnal.farmasi.umi.ac.id/index.php/fitofarmakaindo/index

## Karakterisasi Senyawa Penghambat Polimerisasi Heme Dari Ekstrak Etanol Buah Pare (Momordica charantia L.)
Purwaning Nugroho Widiyati 1* , Syamsudin 1 , dan Partomuan Simanjuntak 1,2
1 Program Studi Magister Ilmu Kefarmasian, Fakultas Farmasi, Universitas Pancasila, Indonesia
2 Pusat Riset Bahan Baku Obat dan Obat Tradisional (BBO OT),  Badan Riset dan Inovasi Nasional (BRIN), Indonesia
Article info Abstrak History
Submission : 06-12-2022
Review : 31-05-2023 Accepted : 23-09-2023
* Email: aningnw1@gmail.com
DOI: 10.33096/jffi.v10i2.937
Kata Kunci: Momordica charantia L .; antimalaria; polimerisasi heme; fraksinasi;
identifikasi
Penyakit  malaria  yang  disebabkan  oleh  infeksi  parasit  dari  genus Plasmodium masih dilaporkan sebagai penyakit yang menyumbangkan angka  kematian  yang  cukup  tinggi  di  dunia.  Namun,  terdapat permasalahan  lain  yang  dihadapi  saat  ini,  yaitu  kejadian  resistensi penderita  terhadap  obat  antimalaria  yang  ada  di  pasaran,  sehingga menyebabkan  kebutuhan  mendesak  untuk  mengembangkan  obat antimalaria baru yang aman dan murah. Penelitian ekstrak etanol buah pare  ( Momordica  charantia L . )  ini  dilakukan  dengan  tujuan  dapat memberikan informasi sebagai alternatif obat antimalaria berdasarkan mekanisme penghambatan polimerisasi heme sesuai metode  Huy et. al  serta  mengidentifikasi  senyawa  isolat  fraksi  yang  diprediksi mempunyai  aktivitas  antimalaria  tersebut.  Ekstrak  etanol  buah  pare ( Momordica  charantia L.)  dibuat  dengan  metode  maserasi menggunakan  etanol  96  % pharmaceutical  grade ,  dipartisi menggunakan pelarut etil asetat dan aquades. Bagian partisi yang larut etil asetat difraksinasi dengan kromatografi kolom (SiO 2 ; i. n-heksan- etil asetat = 10 : 1 ~ 1 : 1; CH 2 Cl 2 -MeOH = 10 : 1 ~ 1 : 1  Hasil uji penghambatan  polimerisasi  heme  diperoleh  isolat  fraksi  8.5  yang mempunyai  aktivitas  tertinggi  yaitu  IC 50 302,78    ppm  dan  IC 50 (klorokuin  difosfat  sebagai  kontrol  positif  IC 50 218,71  ppm).  Hasil identifikasi    dengan  spektroskopi  LCMS/MS  menunjukkan  bahwa isolat  fraksi  8-5  mengandung  beberapa  senyawa  kimia  seperti momordicoside L; momordicoside I  dan momordicoside F2; dan quercetin .  Senyawa  kimia  yang  diprediksi  berperan  dalam menghambat polimerisasi Heme adalah senyawa quercetin . Abstract
Keywords: Momordica charantia L .; antimalarial; heme polymerization; fractionation; identification Malaria,  which  is  caused  by  a  parasitic  infection  of  the  genus Plasmodium,  is  still  reported  as  a  disease  that  contributes  a  high mortality  rate  in  the  world.  However,  there  is  another  problem currently  being  faced,  namely  the  incidence  of  patient  resistance  to antimalarial drugs on the market, causing an urgent need to develop new antimalarial drugs that are safe and inexpensive. Research on the ethanol extract of bitter melon (Momordica charantia L. ) was carried out  with  the  aim  of  providing  information  as  an  alternative antimalarial  drug  based  on  the  mechanism  of  heme  polymerization inhibition  according  to  the  method  of  Huy  et.  al and  to  identify  the compound isolate fraction which is predicted to have the antimalarial activity. The ethanol extract of bitter melon (Momordica charantia L. ) was prepared by maceration method using 96% pharmaceutical grade ethanol, partitioned using ethyl acetate and distilled water. Part of the partition  which  was  soluble  in  ethyl  acetate  was  fractionated  using column chromatography (SiO2; i. n-hexane-ethyl acetate = 10 : 1 ~ 1 : 1; CH2Cl2-MeOH = 10 : 1 ~ 1 : 1 The results of heme polymerization inhibition  test  obtained  isolate  fraction  8.5  which  had  the  highest activity, namely IC50 302.78 ppm and IC 50 (chloroquine diphosphate as a positive control IC50 218.71 ppm).The results of identification by LCMS/MS  spectroscopy  showed  that  isolate  fraction  8.5  contained
several  chemical  compounds  such  as  momordicoside  L; momordicoside I and momordicoside F2 and quercetin The chemical compound  that  is  predicted  to  play  a  role  in  inhibiting  Heme polymerization is quercetin.

## I. Pendahuluan
Malaria masih merupakan masalah kesehatan  masyarakat  dan  merupakan  salah  satu penyakit parasit yang paling mematikan di  seluruh dunia. Penyakit ini ditularkan oleh gigitan nyamuk Anopheles betina  dan  diinfeksi  oleh  parasit  dari genus Plasmodium . Pada tahun 2020, diperkirakan 241  juta  kasus  malaria  terjadi  secara  global  yang menyebabkan  sekitar  583.000  kasus  kematian (World Health Organization, 2021).
Di  Indonesia,  kasus  malaria  terbanyak disebabkan  oleh Plasmodium  falciparum sebanyak 56,7  %  dan Plasmodium  vivax sebanyak  34,5  %. Pada tahun 2019 jumlah pasien malaria yang tercatat sebanyak    250.644  orang  dan  49  kasus  kematian (Kesehatan et al., 2020).
Resistensi Plasmodium terhadap  semua obat  antimalaria  dan  resistensi  nyamuk  terhadap insektisida telah menjadi masalah untuk pencegahan malaria,  oleh  karena  itu  menyebabkan  kebutuhan mendesak  untuk  mengembangkan  obat  antimalaria baru yang aman dan terjangkau (Haldar et al., 2018; Pan et al., 2018).
Klorokuin sudah dikenal lama sebagai obat antimalaria.  Penelitian  Herraiz, et.al ,  2019, membuktikan  aktivitas  antimalaria  kloroquin melalui  penghambatan  pembentukan  polimerisasi heme (β-hematin)  oleh  klorokuin  dengan  cara meningkatkan  senyawa  hemin  bebas  yang melibatkan  reaksi  peroksidatif  dan  menghambat pembentukan  enzim cysteine  protease (reaksi proteolisis)  di  dalam  vakuola  pencernaan Plasmodium .  Enzim cysteine  protease merupakan zat yang penting untuk pertumbuhan dan ketahanan Plasmodium .    Sehingga  melalui  penelitian  ini mengindikasikan bahwa penghambatan pembentukan  polimerisasi heme (β-hematin) merupakan  target  yang  ideal  untuk  skrining  obat- obat antimalaria (Herraiz et al., 2019).
Momordica charantia L. (famili
Cucurbitaceae),  buahnya  sangat  populer  di Indonesia.  Berdasarkan  studi  etnofarmakologi sebelumnya, diperoleh informasi bahwa tanaman ini secara  empiris  banyak  digunakan  oleh  masyarakat untuk  pencegahan  dan  pengobatan  malaria  hingga sekarang (Abdillah et al., 2014; Slamet & Andarias, n.d.; Taek et al., 2018, 2019).
Beberapa  penelitian  telah  mengeksplorasi tentang potensi aktivitas buah pare ( M. charantia L .) sebagai  antimalaria,  di  antaranya  studi in-vitro ekstrak metanol M. charantia L. terhadap aktivitas penghambatan terhadap pertumbuhan parasit secara pengamatan mikroskopik kultur strain P. falcifarum 3D7 diperoleh nilai IC 50 = 0,39 µg/mL (Susilawati
& Hermansyah, 2014). Tujuan penelitian ini adalah untuk  menguji  aktivitas  antimalaria  melalui mekanisme  kerja  penghambatan  pembentukan polimerisasi heme secara in vitro terhadap senyawa aktif yang diisolasi dari buah M. charantia L .
II. Metode Penelitian II.1 Bahan
Bahan  penelitian  yang  digunakan  adalah seluruh bagian buah pare muda hijau ( M. charantia L . )  dari  perkebunan  di  Sukabumi,  Jawa  Barat  dan dideterminasi  di  Hebarium  Bogoriense,  Pusat Penelitian dan Pengembangan Biologi, Badan Riset dan Inovasi Nasional, Cibinong, Jawa Barat. Bahan  kimia  antara  lain  etanol  96% pharmaceutical  grade (Brataco,  Indonesia),  silika gel  GF60  (70-230  mesh)  (Merck,  Germany),  etil asetat (Brataco,  Indonesia), n -Heksana  (Brataco, Indonesia),  diklorometana  (Brataco,  Indonesia); metanol  (Merck,  Germany),  cairan  penyemprot KLT Serium sulfat (Merck, Germany), plat KLT GF 60/254  (Merck,  Germany),  cellite  545  (0,02  –  0,1 mm) (Merck-Germany), klorokuin difosfat (Sigma, USA),  hemin  klorida  (Sigma,  USA),  tween  20 (Merck  822184),  asam  asetat  (Merck,  Germany), natrium asetat (Merck, Germany),  DMSO (Merck, Germany), dan aquades.

## II.2 Alat
Alat  yang  digunakan  adalah  Rotary vacuum  evaporator  (Stuart),  timbangan  analitik (Precise 2A0A), inkubator (Memmert), Elisa reader (Thermo), Kromatografi kolom, Liquid
Chromatography  Mass  Spectroscopy - Mass Spectroscopy (LCMS/MS).
II.3  Ekstraksi,  Pemisahan,  Fraksinasi  dan Identifikasi Fraksi Buah Pare (M. Charantia L.)
Seluruh  bagian  buah  pare  hijau  segar  ( M. Charantia L . )  dipotong  kecil  dan  dimaserasi berulang sebanyak empat kali 24 jam dengan etanol 96  % pharmaceutical  grade pada  suhu  kamar, kemudian  ekstrak  dievaporasi    pada  suhu  <  40°C menggunakan rotary evaporator . Kemudian, ekstrak M. Charantia L  dipartisi dengan etil asetat dan  aquades  dengan  perbandingan  (1:1)  di  dalam corong  pisah.  Bagian  partisi  etil  asetat  difraksinasi lebih  lanjut  dalam  kromatografi  kolom  (SiO 2 ;  i.  n- heksan – etilasetat = 10:1 ~ 1 : 1; ii. CH 2 Cl 2 -MeOH =  10  :  1  ~  1  :  1  menghasilkan  9  fraksi  Aktivitas penghambatan polimerisasi heme paling besar (Fr. 8 )  difraksinasi  kembali  dengan  kromatografi  kolom (SiO 2 ; CH 2 Cl 2 -MeOH = 10 : 1 ~ 2 : 1. Isolat fraksi 8.5 yang memiliki aktivitas penghambatan polimerisasi  heme  paling  besar  diidentifikasi struktur kimianya dengan metode LCMS/MS.

## II.4 Analisa Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  terhadap  0,5  gram ekstrak  etanol  buah  pare  ( M.  Charantia L . ) dilakukan  menggunakan  metode  standar  untuk pengujian alkaloid, flavonoid, saponin, tannin, dan steroid/triterpenoid (Harborne, 1998).
II.5 Pengujian Aktivitas
Penghambatan

## Polimerisasi Heme
Pengujian  aktivitas  antimalaria  melalui penghambatan  polimerisasi  heme  dilakukan berdasarkan  metode  Huy  menggunakan  hemin klorida dan tween 20 yang dimodifikasi. Klorokuin difosfat digunakan sebagai kontrol positif.  Sampel diinkubasi  dalam  inkubator  bersuhu  37  °C  selama 250  menit  dan  dilanjutkan  dengan  pengukuran serapan sampel dalam microplate 96 sumuran pada panjang gelombang 405 dan 620 nm menggunakan Elisa  reader (12.  Persentase  penghambatan polimerisasi heme dihitung berdasarkan rumus (1).
f= ( serapan kontrol-serapan sampel )
(serapan kontrol-serapan min)
% penghambatan = (1-f) x 100 % (1)
Keterangan,  f  =  Fraksi;  Serapan kontrol = Serapan  hemin  klorida  sebagai  kontrol  negatif; Serapan sampel =  Serapan sampel ekstrak; Serapan min = Serapan campuran hemin klorida dan tween 20.

## II.6 Identifikasi Senyawa Aktif
Fraksi  dari  hasil  fraksinasi  kedua  yang memiliki  persentase  penghambatan  pembentukan polimerisasi  heme  tertinggi  dilakukan  identifikasi menggunakan spektroskopi LCMS/MS.
III. Hasil Dan Pembahasan III.1 Hasil Skrining Fitokimia Hasil skrining fitokimia sebagai identifikasi  awal  terhadap  senyawa  metabolit sekunder dalam buah pare ( M. charantia L . ) dengan metode  kualitatif  kandungan  senyawa  golongan alkaloid, flavonoid, saponin, dan triterpenoid (Tabel 1). Hasil uji skrining fitokimia terhadap sampel uji tergantung  pada  umur  panen  dari  sampel,  lokasi pengambilan  sampel,  larutan  pengektraksi, metode ekstraksi, dan lain-lain.
Tabel 1. Hasil uji skrining fitokimia ekstrak etanol buah pare
No. Uji Pengamatan Hasil 1 Alkaloid Pereaksi Dragendorff Endapan merah kecoklatan + 2 Flavonoid Pereaksi logam Mg + HCl + etanol + amil alkohol Terbentuk warna jingga hingga merah + 3 Saponin Pereaksi aquades dengan pengocokan Terbentuk busa + 4 Tanin Pereaksi aquades dan FeCl 3 10 % Tidak terbentuk warna hitam kehijauan - 5 Triterpenoid Pereaksi Liebermann Burchard Terbentuk warna hijau +
Keterangan: Tanda (+) menunjukkan hasil positif senyawa target; tanda (-) menunjukan hasil negatif senyawa target

## III.2. Hasil Pengujian Aktivitas Penghambatan Polimerisasi Heme
Hasil pengujian aktivitas penghambatan polimerisasi heme dari fraksinasi pertama dan kedua dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil aktivitas penghambatan polimerisasi heme oleh senyawa isolat fraksi
No. Sampel Konsentrasi (ppm) Penghambatan (%) 1 Fraksi 1 500 8,46 2 Fraksi 2 500 10,92 3 Fraksi 3 500 2,38 4 Fraksi 4 500 33,09 5 Fraksi 5 500 21,51 6 Fraksi 6 500 15,11 7 Fraksi 7 500 25,70 8 Fraksi 8 500 54,76 9 Fraksi 9 500 48,85 10 Fraksi 8.1 500 42,97
11 Fraksi 8.2 500 50,31 12 Fraksi 8.3 500 36,24 13 Fraksi 8.4 500 62,46 14 Fraksi 8.5 500 75,15
Hasil  pemisahan  lanjutan  dari  fraksi  8 menggunakan  kromatografi  kolom  (silika  gel  60), diklorometana - metanol 10:1 ~ 2:1)  menghasilkan 5 isolat fraksi (fraksi 8.1 ~ 8.5) dan dari pengujian aktivitas penghambatan polimerisasi heme didapatkan  hasil  isolat  fraksi  8.5  yang  memiliki penghambatan yang paling besar dari semua fraksi, yaitu sebesar 75,15 % (500 ppm).
Hasil  pengujian  terhadap  penghambatan polimerisasi  heme  oleh  isolat  fraksi  senyawa menunjukkan  bahwa  isolat  senyawa  yang  paling aktif dalam menghambat polimerisasi heme adalah Fraksi 8.5 dengan nilai IC 50 sebesar 302,78  ppm dan IC 50 Klorokuin difosfat sebesar 218,71 ppm (Tabel 3 dan Gambar 1). Dalam penelitian Baelmans dkk (2000),  jika  nilai  IC 50 terhadap  aktivitas penghambatan  polimerisasi  heme  suatu  senyawa lebih  dari  6  mg/ml  atau  3.095  ppm  (Klorokuin difosfat  6,0  mM),  dikategorikan  sebagai  senyawa
yang  tidak  memiliki  aktivitas  penghambatan pembentukan  polimerisasi  heme  (Baelmans  et  al., 2000).
Berdasarkan nilai IC 50 isolat fraksi 8.5 yang diperoleh, dibandingkan dengan penelitian sebelumnya  dari  Baelmans,  dkk  (2000)  tersebut  di atas,  maka  dapat  disimpulkan  bahwa  isolat  Fraksi 8.5  memiliki  aktivitas  penghambatan  polimerisasi heme,  karena  memiliki  nilai  IC 50 yang  lebih  kecil dari  hasil  tersebut.  Dalam  penelitian  ini,  nilai  IC 50 isolat  Fraksi  8.5  lebih  besar  dibandingkan  dengan nilai IC 50 Klorokuin difosfat (kontrol positif), hal ini dapat  disebabkan  oleh  karena  isolat  fraksi  8.5 bukanlah  senyawa  murni,  melainkan  gabungkan senyawa-senyawa yang dapat menurunkan kemampuan  aktivitas  penghambatan  polimerisasi heme  dibandingkan  dengan  senyawa  klorokuin difosfat  sebagai  kontrol  positif  yang  merupakan senyawa murni (13).
Tabel  3. Hasil  IC 50 aktivitas  penghambatan  polimerisasi  heme  oleh  senyawa  isolat  fraksi  8.5  dan  klorokuin difosfat
Sampel Konsentrasi (ppm) Penghambatan (%) IC 50 (ppm) Fraksi 8.5
100
200 300
400 500
19,04 27,81 58,69 67,96 74,50 302, 78 Klorokuin difosfat (Kontrol positif) 100 200 300 400 500 27,40 52,73
62,33 76,57
98,18 218,71
Gambar 1. Grafik persentase penghambatan polimerisasi heme

## III.3. Identifikasi Isolat Fraksi 8.5
Pengujian dengan metode/ instrumen LCMS/MS menggunakan eluen air : metanol : asetonitril : isopropanol = 1 : 1 : 1 : 1. Dari proses identifikasi isolat fraksi 8.5 memperlihatkan hasil 6 (enam) kromatogram LCMS/MS.
Gambar 2. Kromatogram Waktu Retensi LCMS/MS dari Isolat Fraksi 8.5
Senyawa  1,  spektrum  MS  pada  Rt  5,92 menit memberikan molecular ion peak pada m/z 657 dengan bobot molekul 634. Berdasarkan penelusuran pustaka senyawa ini telah diisolasi dari buah  pare  ( M.  charantia L.)  dan  diidentifikasi memberikan molecular  ion  peak pada m/z 657 dengan  bobot  molekul  634  yaitu  senyawa momordicoside L  yang  termasuk  dalam  golongan saponin dan dikaitkan dengan rasa pahit buah pare ( M. charantia L.) (Liu et al., 2020). Senyawa  2,  spektrum  MS  pada  Rt  6,60 menit  memberikan molecular  ion  peak pada m/z 310 dengan bobot molekul 309. Namun, senyawa ini tidak  diketahui,  karena  belum  ditemukan  data  dari penelitian sebelumnya yang mencantumkan informasi  tentang  senyawa  dari  ekstrak  buah  pare ( M. charantia L.) yang memiliki molecular ion peak pada m/z 310 dengan bobot molekul 309. Senyawa  3,  spektrum  MS  pada  Rt  6,85 menit memberikan molecular ion peak pada m/z 641 dengan bobot molekul 618. Berdasarkan penelusuran pustaka senyawa ini telah diisolasi dari buah  pare  ( M.  charantia L.)  yang  diidentifikasi sebagai  senyawa momordicoside I  dan  atau momordicoside F2  yang  juga  termasuk  dalam golongan  saponin  dan  dikaitkan  dengan  rasa  pahit buah pare ( M. charantia L.) Senyawa  4,  Spektrum  MS  untuk  Rt  7,32 menit memberikan molecular ion peak pada m/z 303 dengan  bobot  molekul  302.  Senyawa  ini  memiliki kemiripan  dengan  hasil  isolasi  dari  buah  pare  ( M. charantia L.)  yang  diidentifikasi  sebagai  senyawa flavonoid polifenol quercetin .
Senyawa quercetin ini  diprediksi  sebagai senyawa  yang  memiliki  aktivitas  penghambatan polimerisasi  heme.  Penelitian  Abu-Lavi et.  al (2020),  menunjukkan  data  bahwa  senyawa  murni standar quercetin mampu menghambat
pembentukan  polimerisasi  heme  (β-hematin) sebesar  83,4  %,  sementara amodiaquine sebagai kontrol  positif  sebesar  91,7  %.  (Abu-Lafi  et  al., 2020)
Mekanisme kerja dari quercetin diperkirakan  mirip  dengan  mekanisme  kerja kloroquin,  di  mana  penghambatan  pembentukan polimerisasi  heme  terjadi  melalui  pembentukan kompleks  yang  stabil  terdiri  dari  obat-obat  anti- malaria  dan ferriheme .  Pembentukan  kompleks flavonoid quercetin dan ferriheme terjadi    melalui interaksi zat FeIII pada ferriheme dengan salah satu gugus  karbonil  pada quercetin .  Selanjutnya,  pada sisi  cincin  gugus  karboksil  dari  heme  berinteraksi dengan salah  satu  gugus hidroksil pada quercetin . (Abu-Lafi et al., 2020) Senyawa  5, spektrum  MS  untuk  Rt  8,12 menit memberikan molecular ion peak pada dengan m/z 639 dengan    638. Penelusuran pustaka belum diketahui.
Senyawa  6,  spektrum  MS  untuk  Rt  8,16 menit memberikan molecular ion peak pada m/z 332 dengan  bobot  molekul  331.  Penelusuran  pustaka, belum diketahui.

## IV. Kesimpulan
Isolat Fraksi 8.5 hasil fraksinasi buah pare ( M.  charantia L.)  mempunyai  aktivitas  obat antimalaria melalui mekanisme kerja penghambatan pembentukan  polimerisasi  heme,  dengan  IC 50 sebesar 302,78  ppm (IC 50 klorokuin difosfat sebesar 218,71  ppm).  Berdasarkan  hasil  identifikasi terhadap  isolat  Fraksi  8.5  dalam  penelitian  ini dengan  metode  LCMS/MS  diprediksi  bahwa senyawa quercetin memberikan aktivitas penghambatan  pembentukan  polimerisasi  heme. Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  terhadap aktivitas  penghambatan  polimerisasi  heme  dari
senyawa murni momordicoside L, momordicoside I dan momordicoside F2.

## Daftar Pustaka
Abdillah,  S.,  Tambunan,  R.M.,  Sinaga,  Y.M.  and Farida, Y., 2014. Ethno-botanical survey of plants  used  in  the  traditional  treatment  of malaria in Sei Kepayang, Asahan of North Sumatera. Asian Pacific journal of tropical medicine , 7 , pp.S104-S107.
Abu-Lafi,  S.,  Akkawi,  M.,  Al-Rimawi,  F.,  Abu- Remeleh, Q. and Lutgen, P., 2020. Morin, quercetin, catechin and quercitrin as novel natural  antimalarial  candidates. Pharmacy &  Pharmacology  International  Journal ,
8 (3), pp. 184–190.
Baelmans, R., Deharo, E., Muñoz, V., Sauvain, M. and  Ginsburg,  H.,  2000.  Experimental conditions for testing the inhibitory activity of  chloroquine  on  the  formation  of  β- hematin. Experimental
Parasitology , 96 (4), pp.243-248.
Haldar, K., Bhattacharjee, S. and Safeukui, I., 2018. Drug  resistance  in  Plasmodium. Nature Reviews Microbiology , 16 (3), pp.156-170. Harborne,  A.J.,  1998. Phytochemical  methods  a guide  to  modern  techniques  of  plant analysis .  springer  science  &  business media. Herraiz,  T.,  Guillén,  H.,  González-Peña,  D.  and Arán,  V.J.,  2019.  Antimalarial  quinoline drugs  inhibit  β-hematin  and  increase  free hemin  catalyzing  peroxidative  reactions and
inhibition
of cysteine proteases. Scientific reports , 9 (1), p.15398. Huy,  N.T.,  Maeda,  A.,  Uyen,  D.T.,  Trang,  D.T., Sasai, M., Shiono, T., Oida, T., Harada, S. and Kamei, K., 2007. Alcohols induce beta- hematin  formation  via  the  dissociation  of aggregated  heme  and  reduction  in interfacial  tension  of  the  solution. Acta Tropica , 101 (2), pp.130-138.
Kementrian  Kesehatan  Republik  Indonesia  ,  2020. Laporan  Situasi  Terkini  Perkembangan Pengendalian  Malaria  di  Indonesia  Tahun 2019. pp. 1-19.
Liu, Y.J., Lai, Y.J., Wang, R., Lo, Y.C. and Chiu, C.H.,  2020.  The  Effect  of  Thermal Processing  on  the  Saponin  Profiles  of Momordica  charantia  L. Journal  of  Food
Quality , 2020 , p.1-7.
Pan,  W.H.,  Xu,  X.Y.,  Shi,  N.,  Tsang,  S.W.  and
Zhang, H.J., 2018. Antimalarial activity of plant metabolites. International Journal of
Molecular Sciences , 19 (5), p.1382. Slamet,  A.  and  Andarias,  S.H.,  2018.  Studi
Etnobotani  dan  Identifikasi  Tumbuhan Berkhasiat  ObatMasyarakat  Sub  Etnis
Wolio  Kota  Baubau  Sulawesi  Tenggara. In Proceeding Biology Education
Conference: Biology, Science, Enviromental, and Learning (Vol. 15, No. 1, pp. 721-732).
Susilawati,  S.  and  Hermansyah,  H.,  2014.  Uji Potensi  Antiplasmodium  Ekstrak  Buah Pare  (Momordica  charantia  L.)  Terhadap
Plasmodium falcifarum. Molekul , 9 (1), pp.13-17.
Taek,  M.M.,  Banilodu,  L.,  Neonbasu,  G.,  Watu, Y.V.,  EW,  B.P.  and  Agil,  M.,  2019. Ethnomedicine  of  Tetun  ethnic  people  in West  Timor  Indonesia:  Philosophy  and practice in the treatment of malaria. Integrative Medicine Research , 8 (3), pp.139-144.
Taek,  M.M.,  Bambang,  P.E.  and  Agil,  M.,  2018. Plants  used  in  traditional  medicine  for treatment of malaria by Tetun ethnic people in  West  Timor  Indonesia. Asian  Pacific Journal  of  Tropical  Medicine , 11 (11), pp.630-637.
World  Health  Organization,  2021. World  Malaria Report  2021 .  www.who.int/teams/global- malaria-programme