## Pengaruh Pemberian Ekstrak Air Buah Pepaya Muda (Carica papaya.L) terhadap Gambaran Histologi Ovarium Tikus Betina (Rattus norvegicus)
Okti Satria 1 , Yanwirasti 2 , Arni Amir 3
1 Ilmu Kebidanan, Fakultas Kedokteran, Universitas Andalas, Padang
2 Anatomi, Fakultas Kedokteran, Universitas Andalas, Padang
3 Biologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Andalas, Padang Email: user.chiot@gmail.com

## ABSTRACT
Papaya seed (Carica papaya L.) as antifertility has been known since 1970 can cause the quantity and quality  of  sperm  decreased.  This  antifertility  potency  is  reinforced  by  the  existence  of  research showing that inside papaya seeds contain antifertility compound that is saponin. In young papaya fruit (Carica papaya L.) also contains saponins, alkaloids, minerals, vitamins, and enzymes. The latex sap from  the  young  papaya  fruit  has  the  same  influence  as  oxytocin  on  the  uterus  of  both  pregnant  and non-pregnant rats (Gouado et al., 2007) this study was conducted to prove that in the water extract of young papaya fruit has antifertility effect. If this study is meaningful, it may be used as a reference for subsequent research on efforts to utilize bio-natural resources as a medicinal substance. The purpose of this study is to know the influence of young papaya fruit extract on overview of ovarium histology of female rat. This research is a quantitative research using post-test design only control group design. This  research  is  experimental  with  design.  The  research  has  been  conducted  from  November  to December 2017. This research was conducted at the Regional Center of Veterinary Investigation and Testing (RSVIT) II of Bukittinggi. The population in this study was female rats with a total number of female  rats  during  the  study  of  32  rats.  The  results  showed  that  Fresh  Papaya  Fruit  Extract significantly influenced the number of primary follicles and follicles of rat Atresia (Rattus novergicus) (p  =  0,000).  Young  Pepaya  Fruit  Water  Extract  can  be  considered  as  an  efficient  natural contraceptive and a few side effects.

## Keyword : Papaya Fruit Water Extract, Ovarian Histology of Female Rat

## PENDAHULUAN
Penggunaan  alat  kontrasepsi  di  Indonesia masih kurang. Berdasarkan data Survei Demografi  Kesehatan  Indonesia  (SDKI)  tahun 2012  penggunaan  non  Metode  Kontrasepsi Jangka  Panjang  (MKJP)  meningkat  dari  46,5  % menjadi  47,3  %,  sementara  penggunaan  Metode Kontrasepsi  Jangka  Panjang  (MKJP)  menurun dari  10,9  menjadi  10,6%  (Badan  Pusat  Statistik et  al. ,  2013).  Badan  Kependudukan  dan Keluarga  Berencana  Nasional  (BKKBN)  tahun 2016  melaporkan bahwa pemakaian alat kontrasepsi di Sumatera Barat secara total adalah sebanyak  129.899  peserta  atau  84,85  %  dari perkiraan permintaan masyarakat sebesar 107,125  peserta.  Kontrasepsi  merupakan  upaya untuk mencegah terjadinya kehamilan. Upaya itu dapat  bersifat  sementara,  dapat  pula  bersifat permanen. Baru-baru ini, upaya telah dikhususkan  untuk  mengidentifikasi  tanaman berbasis  formulasi  kontrasepsi  yang  seharusnya secara  lisan  bioaktif,  tidak  beracun  dan  lebih efektif  berdasarkan  biaya  pada  ethano  informasi medis (Zade and Dabhadkar, 2015)
Berbagai jenis tumbuhan dapat digunakan sebagai  obat  tradisional,  salah  satu  tumbuhan yang  penting  untuk  diteliti  adalah  tanaman pepaya  ( Carica  papaya  L ).  Kandungan  kimia yang terdapat pada pepaya mengandung spektrum yang luas dari phytochemical termasuk,  polisakarida,  vitamin,  mineral,  enzim, protein,  alkaloid,  glikosida,  lemak  dan  minyak, lektin,  saponin,  flavonoid,  sterol,  dan  lain-lain (Krishna, Paridhavi and Patel, 2008)
Biji  pepaya  ( Carica  pepaya )  sebagai antifertilitas  sudah  diketahui  sejak  tahun  1970 dapat  menyebabkan  kuantitas  dan  kualitas sperma  menurun.  Potensi  antifertilitas  ini diperkuat oleh adanya penelitian yang menunjukkan  bahwa  didalam  biji  pepaya terkandung  senyawa  antifertilitas  yaitu  saponin. Dalam  buah  pepaya  muda  ( Carica  papaya  L. ) juga  mengandung  saponin,  alkaloid,  mineral, vitamin,  dan  enzim.  Getah  (lateks)  dari  buah pepaya  muda  memiliki  efek  yang  sama  dengan oksitosin  pada  uterus  tikus  hamil  maupun  tidak hamil (Gouado et al. , 2007)
Bahan  aktif  pepaya  yaitu  triterpenoid saponin, alkaloid dan flavanoid yang merupakan
salah  satu  turunan  steroid,  bahan  aktif  steroid dan triterpenoid diduga sebagai bahan aktif yang bekerja sebagai faktor antifertilitas. Kedua bahan aktif  tersebut  diduga  mampu  mengakibatkan gangguan  pada  jalur  hipotalamus  hipofise  yang selanjutnya  mengakibatkan  gangguan  sekresi GnRH  yang  kemudian  akan  berpengaruh terhadap  pembentukan,  perkembangan  dan pematangan  folikel  (Plants,  Dhamija  and Aurangabad, 2015)
Bahan  antifertilitas  yang  bekerja  pada poros hipothalamus-hipofise-ovarium mempunyai  aktifitas  gonadotropin,  dengan mekanisme umpan balik negatif dari hipothalamus  yang  menyebabkan  penurunan produksi  GnRH.  Hal  ini  akan  berpengaruh  pada sekresi  FSH  dan  LH  dari  hipofise  anterior, sehingga  sekresi  FSH  dan  LH  rendah,  dimana kedua  hormon  ini  sangat  berpengaruh  dalam pembentukan,  perkembangan  dan  pematangan folikel  ovarium  serta  proses  ovulasi  (Gouado et al. , 2007)
Senyawa  saponin  dan  flavonoid  dapat disintesis  menjadi  antiestrogen  di  dalam  tubuh. Antiestrogen  menyebabkan  ovarium  inaktif, pertumbuhan  folikel  dan  sekresi  estrogen- endogen  terganggu  karena  itu  ovulasi  dapat terganggu. Pengaruh lain dari senyawa ini adalah kelenjar serviks menjadi sedikit dan lebih kental, keadaan ini akan mengganggu motilitas spermatozoa,  maka  tidak  terjadi  fertilisasi meskipun terjadi perkawinan. Efek lain antiestrogen  menyebabkan  atrofi  endometrium, sehingga  meskipun  terjadi  fertilisasi  proses implantasi  akan  terganggu  (Plants,  Dhamija  and Aurangabad, 2015)
Saponin  mempunyai  pengaruh  negatif terhadap  reproduksi  ternak  seperti  aborsi  atau kematian,  menyebabkan  steril  dan  penghentian proses  kebuntingan.  Saponin  berperan  besar dalam pengeluaran hormon Luteinizing . Saponin steroid  secara  langsung  menghambat  kerja  gen yang bertanggungjawab dalam proses steroidogenesis  dan  menekan  perkembangan  sel granula  yang  diatur  oleh  hormon  perangsang folikel dalam ovarium (Francis et al. , 2002) Bahan aktif saponin, steroid dan triterpenoid  pada  pepaya  diduga  sebagai  bahan aktif  yang  bekerja  sebagai  faktor  antifertilitas. Hal  tesebut  dikarenakan  ketiga  bahan  aktif
tersebut diduga mampu mengakibatkan gangguan  jalur  hipotalamus  hipofise  yang selanjutnya  mengakibatkan  gangguan  sekresi GnRH  yang  kemudian  akan  berpengaruh terhadap  pembentukan,  perkembangan  dan pematangan folikel (Susantoputro et al. , 2014) Perlu dilakukan penelitian tentang Pengaruh  Ekstrak  Air  Buah  Pepaya  Muda ( Carica papaya L.) terhadap Gambaran Histologi Ovarium Tikus Betina ( Rattus norvegicus ). Selanjutnya penelitian ini dilakukan untuk  membuktikan  bahwa  didalam  ekstrak  air buah pepaya muda mempunyai efek antifertilitas.  Jika  penelitian  ini  bermakna, kemungkinan  dapat  digunakan  sebagai  acuan penelitian berikutnya tentang upaya pendayagunaan sumber daya alam nabati sebagai bahan obat.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini bersifat eksperimental dengan  desain the  post  test  only  control  group design yaitu  rancangan  yang  digunakan  untuk melihat  pengaruh  perlakuan  pada  kelompok eksperimen  yang  menggunakan  rancangan  acak lengkap  (RAL)  dengan  cara  membandingkan kelompok  perlakuan  dengan  kelompok  kontrol. Subjek  penelitian  merupakan  Tikus  betina  yang terdapat  pada  Balai  Penyidikan  dan  Pengujian Veteriner  (BPPV)  Regional  II  Bukittinggi.  Uji statistik  yang  digunakan  yaitu  parametrik One Way ANOVA dengan  derajat  kepercayaan  95% dan  jika  terdapat  perbedaan  yang  bermakna maka  dilanjutkan  dengan  uji  statistik  Multiple Comparisons  ( Post  Hoc  Test )  jenis  Bonferroni untuk melihat signifikansi antar kelompok.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Untuk  mengetahui  apakah  pemberian Ekstrak  Air  Buah  Pepaya  Muda  antar  kelompok perlakuan  memberikan  pengaruh  maka  perlu dilakukan  analisis  perbandingan  masing-masing kelompok perlakuan .  Oleh  karena  itu  sebelum melakukan analisis tersebut, data yang diperoleh diuji  normalitas  terlebih  dahulu,  uji  normalitas yang  digunakan  adalah  uji  Shapiro  Wilk.  Hasil uji  normalitas  didapat  data  tidak  terdistribusi normal  dengan  nilai  p=0,006  (p≤  0,05), kemudian dilanjutkan dengan uji Kruskal-Wallis.
Tabel 1. Perbandingan Jumlah Foliker Primer Pada Kelompok Kontrol dan Ekstrak Air Buah Pepaya Muda Kelompok Subjek n Rata-rata Jumlah Folikel Primer ± SD p Kontrol Negatif 6 2,50 ± 0,837 0,001* Perlakuan 1 6 1,50 ± 0,548 Perlakuan 2 6 0,80 ± 0,408 Perlakuan 3 6 0,30 ± 0,516
Ket: * = berbeda signifikan
Berdasarkan  tabel  1  didapatkan    bahwa rata-rata  jumlah  folikel  primer  lebih  banyak ditemukan  pada  kelompok  kontrol  (2,50) dibandingkan  dengan kelompok  perlakuan Ekstrak  Air  Buah  Pepaya  Muda  (0,30),  oleh
karena  itu  dapat  diasumsikan  bahwa  semakin tinggi dosis pemberian Ekstrak Air Buah Pepaya Muda  pada  tikus  betina  semakin  berkurang  juga jumlah  folikel  primer  yang  ditemukan  pada struktur histologi ovarium tikus tersebut.
Tabel 2 Uji Multiple Comparison Dunn Jumlah Folikel Primer Pada Kelompok Kontrol dan Ekstrak Air Buah Pepaya Muda No Kelompok Kontrol P1 P2 P3 1 Kontrol - 0,820 0,022* 0,001* 2 P1 0,820 - 0,927 0,100 3 P2 0,022* 0,927 - 1,000 4 P3 0,001* 0,100 1,000 - Ket: * = berbeda signifikan
Berdasarkan  tabel  2  diketahui  bahwa perbedaan  yang  signifikan  terlihat  dengan membandingkan  jumlah  folikel  primer  pada kontrol  dengan  perlakuan  ke-2  p<0,22  dan  pada kontrol  dengan  perlakuan  ke-3  dengan  nilai p<0,001.
Gambar 1 Folikel Primer, a. Kelompok Kontrol,
b. Kelompok P2 (Perbesaran 40X, HE) Tabel  3 Perbandingan Jumlah Folikel Atresia pada Kelompok  Kontrol dan Ekstrak Air Buah Pepaya Muda Kelompok Subjek n Rata-rata Jumlah Folikel Atresia ± SD p Kontrol Negatif 6 15.00 ± 4,561 <0,000* Perlakuan 1 6 19,33 ± 6,439 Perlakuan 2 6 27,33 ± 7,633 Perlakuan 3 6 34,33 ± 6,501
Ket: * = berbeda signifikan
Tabel  3  menunjukkan  bahwa  rata-rata jumlah  folikel  yang  paling  banyak  ditemukan yaitu  pada  kelompok  perlakuan  P2  dan  P3
dengan  nilai  rata-rata  berturut-turut,  27,33  dan 34,33, sedangkan yang paling rendah ditemukan pada kelompok Kontrol dan P1.
Tabel  4 Uji Multiple Comparison Bonferroni Jumlah Folikel Atresia pada Kelompok Kontrol dan Ekstrak Air Buah Pepaya Muda No Kelompok Kontrol P1 P2 P3 1 Kontrol - 1,000 0,19 0,000* 2 P1 1,000 - 0,252 0,004* 3 P2 0,19 0,252 - 0,431 4 P3 0,000* 0,004* 0,431 -
Ket: * = berbeda signifikan
Uji  perbandingan  untuk  masing-masing kelompok  perlakuan  berdasarkan  tabel  5.4 diketahui  bahwa  kelompok  Kontrol  dan  P3 berbeda  signifikan  dengan  kelompok  P1  dan kelompok  P2    untuk  jumlah  folikel  atresia  yang ditemukan  pada  struktur  ovarium  tikus  pada penelitian ini.
Hal  ini  mengambarkan  bahwa  pemberian Ekstrak  Air  Buah  Pepaya  Muda  mempunyai pengaruh  terhadap  jumlah  folikel  atresia  yang ditemukan pada ovarium tikus pada dosis tinggi.

## Gambar 2 Tipe Folikel Atresia (FA) (Perbesaran 10X, 40X, HE)

## Pembahasan
Hasil analisis perbandingan jumlah folikel primer  dengan  uji Kruskal  Wallis menujukkan bahwa  terdapat  perbedaan  yang  signifikan terhadap  jumlah  folikel  primer  antara  kelompok kontrol  dan  perlakuan.  Pada  uji Multiple Comparasion Dunn dapat dilihat bahwa terdapat perbedaan yang bermakna kelompok perlakuan 2 (93 mg/200 gr BB) dan perlakuan 3 (189 mg/200 gr BB) dengan nilai p<0,05. Hal ini menunjukkan  bahwa  pada  dosis  93  mg/200  gr BB  sampai  189  mg/200  gr  BB  ekstrak  air  buah pepaya  muda  memberikan  pengaruh  terhadap
jumlah  folikel  primer  sehingga  mengganggu proses folikulogenesis pada ovarium.
Folikulogenesis dimulai dari folikel primordial  dalam  jumlah  banyak  yang  dijumpai pada  bagian  korteks  ovarium.  Perekrutan tersebut  diatur  oleh  tekanan  jaringan  dalam stroma pada korteks ovarium. Kepadatan stroma menurun  secara  bertahap  dari  korteks  hingga bagian  medula  (Woodruff  and  Shea,  2011). Folikulogenesis  dimulai  saat  folikel  primordial menuju  arah  medula  yang  lebih  lunak.  Hal tersebut  memicu  selesainya  istirahat  meiosis oosit  dalam  folikel  primordial  dan  berkembang menjadi folikel primer kemudian folikel sekunder (Ramadhani et al. , 2017)
Buah  pepaya  muda  ( Carica  papaya  L.) memiliki  senyawa  yang  merupakan  golongan saponin,  tanin,  flavonoid,  terpenoid,  alkaloid, sterol  dan  triterpenoid  dapat  menekan  tingkat fertilitas  dengan  cara  mengganggu  fungsi ovarium,  uterus  atau  vagina  (Sukabumi,  2009). Penurunan  jumlah  folikel  ini  diduga  karena adanya  bahan  aktif  dari  ekstrak  air  buah  pepaya muda yang mengandung saponin, tanin, triterpenoid, alkaloid dan flavanoid yang bersifat sitotoksik.
Berdasarkan  hasil  uji  analisis  ANOVA terdapat  perbedaan  yang  signifikan  antara kelompok  kontrol  dengan  perlakuan.  Setelah dilakukan  uji  lanjut  diketahui  bahwa  perbedaan tersebut  berada  pada  kelompok  perlakuan  2  (93 mg/200  gr  BB)  dan  perlakuan  3  (189mg/200gr BB) dibandingkan dengan kelompok kontrol dan perlakuan 1 (47 mg/200 gr BB). Hasil penelitian ini  menunjukkan  bahwa  semakin  tinggi  dosis Ekstrak  Air  Buah  Pepaya  Muda  yang  diberikan semakin  meningkat  jumlah  folikel  atresia  yang ditemukan  pada  ovarium  tikus  pada  penelitian ini.  Folikel  atresia  yang  diamati  pada  penelitian ini yaitu terdapat pada semua fase perkembangan folikel,  seperti  atresia  pada  saat  folikel  primer, sekunder, de  graaf dan  korpus  luteum.  Folikel atresia  merupakan  folikel  yang  mengalami perhentian  tahapan  perkembangan  folikel  yang dapat  terjadi  pada  semua  fase  perkembangan folikel.  Karakteristik  folikel  atresia  yaitu  sel
granulosa  mengalami  degenerasi,  disorganisasi, berfragmentasi,  dan  atropi,  selain  itu  sel  telur mengalami kehilangan inti sel sehingga menyebabkan  kematian  sel  (District  and  Nadu, 2015).  Folikel  atresia  atau  degenerasi  folikel sebelum  terjadi  ovulasi  diduga  terjadi  akibat berkurangnya  atau  tidak  adanya  hormon  yang berfungsi  untuk  pematangan  dan  differensiasi folikel.  Menurut  Wassarman  dan  Albertini  hal tersebut dikarenakan penurunan pituitari gonadotropin  FSH  yang  berperan  penting  dalam pertumbuhan dan perkembangan folikel. Penurunan FSH dapat dikarenakan adanya bahan antifertilitas yang bekerja pada poros hipothalamus-hipofise-ovarium
mempunyai aktifitas gonadotropin, dengan mekanisme umpan  balik  negatif  dari  hipothalamus  yang menyebabkan  penurunan  produksi  GnRH.  Hal ini  akan  berpengaruh  pada  sekresi  FSH  dan  LH dari hipofise anterior,  sehingga sekresi  FSH  dan LH  rendah,  dimana  kedua  hormon  ini  sangat berpengaruh dalam pembentukan, perkembangan dan  pematangan  folikel  ovarium  serta  proses ovulasi (Susantoputro et al. , 2014)
Hasil uji lanjutan antara keempat kelompok menggunakan uji Multiple Comparison  Bonferroni dapat  disimpulkan bahwa  terdapat  penagruh  yang  signifikan  antara jumlah  folikel  atresia  pada  kelompok  kontrol dengan  kelompok  perlakuan.  Kelompok  kontrol dengan  perlakuan  1  dan  kelompok  kontrol dengan  perlakuan  3,  sedangkan  kelompok  lain tidak  memperlihatkan  pengaruh  yang  signifikan (p≥0,05).
Penelitian  ini  diketahui  terdapat  pengaruh yang  signifikan  pemberian  ekstrak  air  buah pepaya  muda  terhadap  jumlah  folikel  atresia tikus  betina.  Nilai  rerata  jumlah  folikel  atresia pada  kelompok  kontrol  dengan  kelompok perlakuan mengalami peningkatan.

## SIMPULAN
Pemberian  Ekstrak  Air  Buah  Pepaya Muda  berpengaruh  secara  signifikan  terhadap jumlah  folikel  primer  tikus  ( Rattus  novergicus ). Dimana folikel primer pada kelompok perlakuan mengalami  penurunan  dari  kelompok  kontrol. Pemberian  Ekstrak  Air  Buah  Pepaya  Muda berpengaruh  secara  signifikan  terhadap  jumlah folikel  Atresia  tikus  ( Rattus  novergicus ).  Nilai rerata  jumlah  folikel  Atresia  pada  kelompok perlakuan mengalami peningkatan dari kelompok kontrol
DAFTAR PUSTAKA
Badan  Pusat  Statistik et  al. (2013)  ‘Survei Demografi  dan  Kesehatan  Indonesia 2012’, Sdki ,  p.  16.  doi:  10.1111/j.1471- 0528.2007.01580.x.
District,  T.  and  Nadu,  T.  (2015)  ‘Effect  of
Seeded  and  Seedless  Carica  Papaya  Fruit Extracts on the’.
Francis,  G. et  al. (2002)  ‘The  biological  action of  saponins  in  animal  systems:  a  review’,
British  Journal  of  Nutrition ,  88(06),  p.
587. doi: 10.1079/BJN2002725.
Gouado,  I. et  al. (2007)  ‘Systemic  levels  of carotenoids  from  mangoes  and  papaya consumed  in  three  forms  (juice,  fresh  and dry  slice)’, European  Journal  of  Clinical Nutrition ,  61(10),  pp.  1180–1188.  doi: 10.1038/sj.ejcn.1602841.
Krishna,  K.  L.,  Paridhavi,  M.  and  Patel,  J.  A. (2008)  ‘Review  on  nutritional,  medicinal and  pharmacological  properties  of  papaya (Carica  papaya  linn.)’, Indian  Journal  of Natural Products and Resources , 7(4), pp. 364–373. doi: 0975-6299.
Plants,  H.  M.,  Dhamija,  I.  and  Aurangabad,  S. (2015) ‘Antifertility Activity of Medicinal Plants on Male and Female’, Intrmational Journal  Pharmacutical ,  6(3),  p.  13040. doi:  10.13040/IJPSR.0975-8232.6(3).988- 01.
Ramadhani,  S.  A. et  al. (2017)  ‘Pengendalian
Folikulogenesis Ovarium dengan Pemberian Ekstrak Biji Kapas Folliculogenesis  Control  in  Ovarian  with the Cottonseed Extract’, 35(1).
Sudarmi,  O.  I.  (2015)  ‘Program  Kependudukan Keluarga  Berencana  Dan  Pembangunan Keluarga ( Kkbpk )’, (52).
Sukabumi,  S.  G.  (2009)  ‘3)  1,2,3)’,  (2004),  pp.
1–6.
Susantoputro,  S.  H. et  al. (2014)  ‘Media Kedokteran Hewan Vol. 30, No. 1, Januari 2014’, Potensi  Suplementasi  Potasium Klorida  dan  Sodium  Bikarbonat  Sebagai Thermotolerance  Agent  pada  Hepar Broiler yang Terpapar Heat Stress Kronis The  Potency  of  Potassium  Chloride  and Sodium  Bicarbonate  Suplementation  as Thermotolerance  Agent  on  Liver  of  Chro , 30(1), pp. 67–74.
Woodruff, T. K. and Shea, L. D. (2011) ‘A new hypothesis  regarding  ovarian  follicle development:  Ovarian  rigidity  as  a regulator of selection and health’, Journal of  Assisted  Reproduction  and  Genetics ,
28(1),  pp.  3–6.  doi:  10.1007/s10815-010-
9478-4. Zade, V. and Dabhadkar, D. (2015) ‘Antifertility Effect  of  Alcoholic  Extract  of  Moringa oleifera  Stem  Bark  on  Estrous  Cycle  and Estrogenic  Activity  of  Female  Albino Rat’, American Journal of Advanced Drug Delivery , 3(3), pp. 223–235.