## ARTIKEL REVIEW : UJI AKTIVITAS FARMAKOLOGI ROYAL JELLY
Dikdik Caesar Barkah, Dyanita Irene Susilo Putri, Fera Anggraeni*, Lutfiah Nur Fitria, Neni Sri Gunarti
Fakultas Farmasi, Universitas Buana Perjuangan, Karawang, Indonesia Corresponding author: fm19.feraanggraeni@mhs.ubpkarawang.ac.id

## Abstrak
Pemeliharaan  lebah  adalah  ilmu  dan  seni  memperpanjang  dan  mempertahanakan  kesehatan  dengan  menggunakan produk  yang  diperoleh  dari  sarang  madu,  seperti  madu,  roti  lebah,  bee  polen,  propolis,  dan  royal  jelly.  Saat  ini, banyak  penelitian  yang  ditujukan  untuk  menyelidiki  manfaat  kesehatan  yang  diarahkan  dan  sifat  fermakologis dari produk  lebah  karena  khasiatnya.  Salah  satu  penelitian  yang  dilakukan  merupakan  penelitian  tentang  royal  jelly. Royal  jelly  banyak  digunakan  sebagai  kompleks  nutrisi  makanan  untuk  membantu  memerangi  berbagai  kondisi kesehatan  kronis,  selain  itu,  ini  adalah  salah  satu  obat  yang  menguntungkan  bagi  manusia  baik  dalam  pengobatan tradisional maupun modern. Tujian penelitian ini yaitu, banyak aktivitas fermakologis seperti antibakteri, antitumor, antialergi,  antiinflamasi,  dan  efek  imunomodulator  dikaitkan  dengannya.  Royal  jelly  terdiri  dari  air  (50%-60%), protein  (18%),  karbonat  (15%),  ipid  (3%-6%),  garam  mineral  (1,5%),  dan  vitamin.  Berdasarkan  analisis spektrometri modern, sekitar 185 senyawa organic telah terdeteksi dalam royal jelly.
Kata kunci : Royal Jelly, Aktivitas Farmakologi

## Abstract
Beekeeping  is  the  science  and  art  of  prolonging  and  maintaining  health  by  using  products  obtained  from honeycombs, such as honey, bee bread, bee pollen, propolis, and royal jelly. Currently, many studies are devoted to investigating the directed health benefits and fermacological properties of bee products due to their properties. One of the studies conducted was research on royal jelly. Royal jelly is widely used as a dietary nutritional complex to help  combat  various  chronic  health  conditions,  besides,  it  is  one  of  the  beneficial  medicines  for  humans  in  both traditional  and  modern  medicine.  The  aim  of  this  research  is  that  many  fermacological  activities  such  as antibacterial,  antitumor,  antiallergic,  anti-inflammatory,  and  immunomodulatory  effects  are  associated  with  it. Royal jelly consists of water (50%-60%), protein (18%), carbonate (15%), ipid (3%-6%), mineral salts (1.5%), and vitamins. Based on modern spectrometric analysis, about 185 organic compounds have been detected in royal jelly. Keywords: Royal Jelly , Pharmacological activity

## PENDAHULUAN
Pemeliharaan  lebah  adalah  ilmu  dan  seni memperpanjang  dan  mempertahanakan  kesehatan dengan  menggunakan  produk  yang  diperoleh  dari sarang  madu,  seperti  madu,  roti  lebah,  bee  polen, propolis, dan royal jelly. Saat ini, banyak penelitian yang ditujukan untuk menyelidiki manfaat kesehatan  yang  diarahkan  dan  sifat  fermakologis dari  produk  lebah  karena  khasiatnya.  Salah  satu penelitian  yang  dilakukan  merupakan  penelitian tentang royal jelly (PC Molan. 1999).
Royal  jelly  dikenal  sebagai  “makanan  super” yang diproduksi oleh lebah pekerja untuk memberi
makan  larva  pekerja  muda  dan  ratu  lebah  (Knecth et  al., 1990;  Li et  al., 2010).  Royal  jelly  (RJ) merupakan secret kelenjar berwarna putih kekuningan  rasa  asam  kental  agar-agar,  dengan sedikit  bau  khas  fenol  (yang  memberikan  rasa khasnya) yang dihasilkan dari ludah hipofaring dan mendibula  lebah  perawat  muda  (lebah  berumur antara 5 dsampai 14 hari) (Chauvin, 1968; Fujita et al., 2013).
Makanan  super  inilah  yang  menjadi  alas  an utama  umur  panjang  ratu  lebah  dibandingkan dengan lebah lainnya. Royal jelly banyak digunakan sebagai kompleks nutrisi makanan untuk membantu
memerangi  berbagai  kondisi  kesehatan  kronis, selain  itu,  ini  adalah  salah  satu  obat  yang menguntungkan bagi manusia baik dalam pengobatan  tradisional  maupun  modern.  Banyak aktivitas fermakologis seperti antibakteri, antitumor,  antialergi,  antiinflamasi,  dan  efek imunomodulator  dikaitkan  dengannya  (Pasupuleti et al., 2017).
Royal  jelly  terdiri  dari  air  (50%-60%),  protein (18%),  karbonat  (15%),  ipid  (3%-6%),  garam mineral  (1,5%),  dan  vitamin.  Berdasarkan  analisis spektrometri  modern,  sekitar  185  senyawa  organic telah terdeteksi dalam royal jelly. Royalactin adalah protein  terpanjang  yang  ada  dalam  royal  jelly. Selain  itu,  royal  jelly    terdiri  dari  sejumlah  besar besar senyawa bioaktif, termasuk asam 10- hidroksi -
2- decenoat (HAD),  yang  memiliki  beberapa  sifat imunomodulator (Sugiyaman et al., 2012).

## METODE PENELITIAN
Metode  yang  digunakan  dalam  penulisan  ini yaitu literature  review  article (LRA)  dengan sumber  pustaka  yang  didapat  melalui  data  base seperti Google Scholar, Pubmed yang dipublikasikan  dari  tahun  2012  sampai  2022 dengan  topik  aktivitas  farmakologi  pada  Royal Jelly.  Pada  literatur  review  ini  menggunakan  kata kunci  antara  lain  berbagai  pengujian  aktivitas farmakologi  yang terdapat  pada Royal Jelly. Jurnal hasil dari pencarian tersebut mendapatkan sebanyak 774 jurnal kemudian yang termasuk inklusi yaitu 18 jurnal kemudian terseleksi dengan keterkaitan topik hanya terdapat 9 jurnal.
No.   Aktivitas farmakologi Metode Dosis/ IC50/ID50 Sitasi 1 Antidiabetes In vivo   pada Tikus yang diinduksi  Sterptozotocin secara Intraperitonial (IP) RJ  100  mg/Kg  BB per  oral  selama  42 hari Ghanbari et al., 2016 2 Antibakteri In Vitro menggunakan uji sensitifitas  metode  dilusi dengan  penentuan  MBC ( Minimal Bacteriacidal Concentration ) MBC konsentrasi pengenceran 6,25 % Dharmayanti et al., 2000 3 Antiinflamasi & antibakteri In  Vivo  pada  Marmut yang diabses steril buatan dan diinfkesi dengan isolat S. Aureus. ID 50 pada konsentrasi10 4 Salep dengan konsentrasi 6,25% Dharmayanti et al., 2000 4. Antioksidan In  vivo  pada  tikus  yang diinduksi oleh interferon: sel makrofag murine RAW264 RJ; 200 mg/kg dengan jarum gavage,  selama  14 hari Teixeria et al ,2017 5. Antialergi In  vivo  pada  tikus  yang injeksi  intraperitoneal  50 mg/kg azathioprine. RJ: 200 mg/kg secara  oral  selama 7 hari Ahmed et al., 2014 6. Antiaging In vivo pada tikus RJ  :  500  mg/kg secara  oral  selama percobaan Okumura et al., 2018
7. Antikanker In  vitro  pada  52  pasien kanker RJ  :  5  mL  dua  kali sehari selama  4 minggu Mofid dkk., 2016 8. Antitumor In  vivo  56  tikus  albino Swiss Betina RJ  :  200  dan  400 mg/kg per oral, sekali sehari selama 2 minggu Albawi  et al., 2022 9. Antiadipogenik Melakukan Uji antiadipogenik pada sel 3 T3- L1 RJ  diperlakukan  di bawah  konsentrasi masing-masing  200 g/mL,  300  g/mL dan 1 mg/ mL. Pandeya et al., 2019

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Antidiabetes
Berdasarkan Penelitian Ghanbari et al., 2016. Royal  Jelly  dapat  di  manfaakan  sebagai  obat antidiabetes  dimana  hasil  dari  penelitian  tersebut Pengobatan tikus diabetes dengan RJ mengembalikan  perubahan  parameter  di  atas  ke tingkat  normal  (P<0,05).  Dimana  penelitian  ini menggunakan  tiga  puluh  dua  ekor  tikus  Wistar. Diabetes diinduksi dengan injeksi STZ intraperitoneal  (IP)  tunggal  (60  mg/kg).  RJ  [100 mg/kg  berat  badan  (BB)  diberikan  secara  oral selama  42  hari.  Sampel  darah  digunakan  untuk menentukan  kadar  insulin  serum, high  density lipoprotein kolesterol  (HDL-c),  total  protein  (TP), albumin, alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase  (AST),  alkaline  phosphatase (ALP),  dan  darah  puasa.  glukosa  (FBG).  Juga, status  antioksidan  dievaluasi  dengan  menentukan kadar  malondialdehid  (MDA),  katalase  (CAT)  dan daya antioksidan pereduksi besi (FRAP) di hati dan pankreas.

## Antibakteri
Berdasarkan  penelitian  Dharmayanti et  al., 2000.  royal  jelly  sebagai  antibakterial  mampu menghambat  bakteri  Gram  negatif  maupun  bakteri
Gram  positif  karena  kandungan  asam  lemak  dan kadar gula yang tinggi menyebabkan cairan bakteri terserap  keluar.  dan  antiinflamasi  menurunkan kelembaban dan kandungan kolagen yang menunjukkan penghambatan eksudasi dan menurunkan permeabilitas kapiler. Dimana dilakukan  secara  in  vitro  menggunakan  uji sensitifitas  metode  dilusi  dengan  penentuan  MBC ( Minimal Bactericidal Concentration ) dengan dosis konsentrasi  pengenceran  6,25%.  dan  In  Vivo  pada Marmut  yang  diabses  steril  buatan  dan  diinfkesi dengan isolat S. Aureus.
Dengan  dosis  ID 50 pada  konsentrasi10 4 Salep dengan konsentrasi 6,25%, hasil yang didapat yaitu uji  aktivitas  royal  jelly  sebagai  antibakteri  dan antiinflamasi yaitu dengan metode in vitro, dimana royal jelly mempunyai efektifitas yang sama dalam menyembuhkan  abses  yang  disebabkan S.  aureus . Hal  ini  disebabkan  karena  royal  jelly  mempunyai khasiat  yaitu  sebagai  antibakterial  dan  anti inflamasi, yang sangat berguna dalam penyembuhan abses.

## Antioksidan
Selain  itu  royal  jelly  dapat  dimanfaatkan sebagai  antioksidan  berdasarkan  hasil  penelitian Teixeria et al., 2017. Di uji dengan metode In vivo
pada  tikus  yang  diinduksi  oleh  interferon:  sel makrofag  murine  RAW264  dengan  dosis  RJ;  200 mg/kg  dengan  jarum  gavage,  selama  14  hari. Suplementasi  RJ  meningkatkan  sistem  pertahanan antioksidan,  mengurangi  peroksidasi  lipid  dan membangun  kembali  sistem  glutathione  di  otak tikus yang stres, Tikus yang diberi RJ menurunkan kortikosteron,  mempertahankan  glikemia  dan menurunkan  peroksidasi  lipid  di  otak,  serebelum, serta striatum dan hippocampus, selain meningkatkan  sistem  pertahanan  glutathione  di korteks  serebral  dan  striatum  dan  hasil  yang  di peroleh yaitu RJ menurunkan tingkat kortikosteron yang  dapat  dikaitkan  dengan  peningkatan  sistem antioksidan  di  otak,  menunjukkan  RJ sebagai  agen anti-stres.

## Antialergi
Bahan  KimiaAzathioprine  (Imuran®)  dan Royal  jelly  diperoleh  dari  GlaxoSmithKline Company, Mesir. Perlakuan kepada tiga puluh ekor tikus  Wistar  Albino  jantan  dewasa  dengan  berat 150–200  g  diperoleh  dari  Egyptian Organization for  Biological  Product  and  Vaccine .  Mereka ditempatkan 5 tikus per kandang.
Setelah satu minggu aklimatisasi, tikus secara acak  dibagi  menjadi  tiga  kelompok  sama  besar masing-masing  10  ekor.  Kelompok  I  disimpan sebagai  kontrol  sedangkan  kelompok  II  disuntik secara  intraperitoneal  dengan  50  mg  AZA  sebagai dosis  tunggal.  Kelompok  III  menerima  RJ  (200 mg/kg BB) secara oral  selama 7 hari berturut-turut sebelum  dan  15  hari  berturut-turut  setelah  injeksi AZA 50 mg/kg intraperitoneal.
Pemberian royal  jelly secara oral (200 mg/kg BB) efisien dalam menangkal toksisitas
azathioprine  sedangkan  dapat  mengubah  kondisi anemia,  leukopenia  dan  trombositopenia  yang diinduksi oleh azathioprine. Royal jelly memberikan perlindungan yang signifikan terhadap kerusakan  hati  yang  disebabkan  oleh  azathioprine melalui  pengurangan  peningkatan  aktivitas  enzim hati  serum.  Selain  itu,  royal  jelly  memblok peroksidasi  lipid  yang  diinduksi  azathioprine melalui  penurunan  pembentukan  malondialdehid. Royal Jelly memiliki kemampuan untuk melemahkan toksisitas yang diinduksi azathioprine.

## Antiaging
Royal  Jelly  disiapkan  di  Yamada  Bee Company, Inc. (Okeama, Jepang). Diet eksperimental  disiapkan  dengan  mencampur  RJ terliofilisasi dengan bubuk MF (Ragi Oriental) pada konsentrasi  0,05%  (dosis  rendah)  atau  0,5%  (dosis tinggi)  (v/v).  Komposisi  masing-masing  diet dihitung dari informasi pembuatan diet bubuk MF, NRJ, dan ERJ. Mencit disapih pada umur 4 minggu kemudian  ditempatkan  dalam  kandang  plastik dengan  jumlah  5-6  ekor/kandang  di  bawah  siklus terang-gelap 12 jam pada suhu kamar. Tikus diberi akses  gratis  ke  air  dengan  plastik  botol  dan  diberi makan  pelet MF (Oriental Yeast Co., Ltd., Tokyo, Jepang).
Komposisi  umum  dan  total  kalori  dari  diet eksperimental  sebanding  di  antara  kelompok. Konsumsi  makanan  secara  bertahap  menurun seiring  bertambahnya  usia  pada  semua  kelompok, tetapi itu serupa di antara kelompok-kelompok pada usia  yang  sama.  Kami  menghitung  asupan  RJ  dari nilai konsumsi makanan.
Tikus  mengkonsumsi  RJ  sekitar  50  mg/kg berat badan/hari pada kelompok RJ rendah dan 500
mg/kg  berat  badan/hari  pada  kelompok  RJ  tinggi selama  percobaan.  RJ  mempengaruhi  perubahan histologis  dan  molekuler  yang  biasanya  terjadi dengan  usia  pada  otot,  menunjukkan  bahwa  RJ secara  istimewa  mempengaruhi  kualitas  otot daripada  kuantitas  otot.  Hasil  ini  menunjukkan bahwa  RJ  mungkin  berguna  untuk  meningkatkan kualitas  hidup  melalui  atenuasi  terkait  usia gangguan fungsi motorik.

## Antikanker
Lima puluh dua dari pasien yang mengunjungi klinik onkologi rumah sakit Shohada- e-Tajrish  di  Teheran  (Iran)  antara  Mei  2013  dan Agustus  2014  dipilih  dan  dibagi  menjadi  dua kelompok.  Kelompok  26  pasien  mendapat  madu olahan dan royal jelly, sedangkan kelompok kontrol mendapat madu murni. Kedua kelompok diinstruksikan untuk mengkonsumsi suplemen 5mL mereka dua kali sehari selama 4 minggu.
Kedua kelompok dinilai pada awal penelitian, setelah  2  minggu,  dan  kemudian  pada  akhir  4 minggu  pengobatan.  Kelelahan  diukur  dengan menggunakan  skala  kelelahan  analog  visual (VAFS)  dan  skala  keparahan  kelelahan  (FSS). Hasilnya dibandingkan antara dua lengan studi, dan kesetaraan distribusi probabilitas dinilai menggunakan uji Kolmogorov-Smirnov.
Usia  rata-rata  dari  52  pasien  adalah  54,84. Setelah  dua  dan  empat  minggu  perawatan  dengan madu olahan dan royal jelly, VAFS dan FSS karena pengobatan  lebih  baik  pada  kelompok  studi dibandingkan pada kelompok kontrol, dan perbedaan  signifikan  secara  statistik  (p<0,001, p<0,001, masing-masing).

## Antitumor
Untuk  memastikan  kemurnian  dan  keaslian relatif  dari  sumber  botani,  bahan  royal  jelly diperoleh  dari  Mei  2021  dari  sarang  Langstroth yang  mengandung  koloni  dari  A.  mellifera  yang tumbuh  di  Universitas  Shaqra,  Saudi  Arab.  ampel RJ dilarutkan dengan normal saline dan disaring di bawah  vakum  dengan  menggunakan  kertas  saring Whatman  untuk  mencapai  dosis  200  dan  400  mg/ kg.
Penghambatan  pertumbuhan  tumor,  tubuh berat  badan,  tingkat  serum  alfa-fetoprotein  (AFP) dan tumor antigen karsinoembrionik (CAE), enzim hati  dan  ginjal,  tumor  lipid  peroxidation  (LPO), nitric  oxide  (NO),  enzim  antioksidan  (glutathione peroxidase  (GPx),  enzim  katalase  (CAT),  dan aktivitas  enzim  superoksida  dismutase  (SOD)), tingkat  alfa  faktor  nekrosis  tumor  (TNF-α),  dan ekspresi  gen  regulator  apoptosis  dinilai  pada  tikus EST  yang  diobati  dengan  RJ  (200  dan  400  mg/kg per oral sekali sehari selama 2 minggu).
Hasil penelitian menunjukkan bahwa pengobatan mencit penderita EST dengan RJ dosis 200  dan  400  mg/kg  menyebabkan  pengurangan yang  signifikan  dalam  volume  tumor  dan  tingkat penghambatan,  berat  badan,  penanda  tumor  (AFP dan  CEA),  tingkat  serum  hati  dan  ginjal,  tingkat LPO  dan  NO,  TNF-α,  serta  tingkat  ekspresi  Bcl-2 dibandingkan  dengan  tikus  EST  yang  menerima garam biasa; sedangkan RJ pada dosis 200 dan 400 mg/kg/hari  meningkat  secara  bermakna  (p  <  0,05) kadar enzim antioksidan GPx, CAT, dan SOD dan tingkat ekspresi gen caspase-3 dan Bax.

## Antiadipogenik
Senyawa  anti-adipogenik aktif  diisolasi melalui  proses  isolasi  yang  dipandu  bioassay  oleh pengobatan  berturut-turut  RJ  dan  fraksi  aktifnya pada 3 garis sel T3-L1. (E)-10- Hydroxy- 2- decenoic Acid (10-HDA) diidentifikasi menggunakan spektroskopi  NMR  dan  ultra-performance  liquid chromatography (UPLC).
Seperti  yang  ditunjukkan  10-HDA  aktivitas anti-adipogenik  yang  signifikan  dengan  pewarnaan Oil  Red  O  dan  uji  kandungan  TG  pada  3  adiposit T3-L1,  lebih  lanjut  studi  dilakukan  di  tingkat molekuler  untuk ekspresi faktor  transkripsi adipogenik  seperti  PPARγ,  FABP4,  C/EBPα, SREBP-1c,  dan  Leptin.  Efek  10-HDA  pada molekul  awal  seperti  pAkt,  pERK,  C/EBPβ,  dan pCREB  dipelajari  pada  tahap  awal  adipogenesis. Efek  10-HDA  pada  spesies  oksigen  reaktif  (ROS) produksi dalam adiposit yang berdiferensiasi penuh diukur dengan uji nitro blue tetrazolium (NBT).
Hasil menunjukkan bahwa akumulasi triasilgliserol  dan  produksi  ROS  sangat  ditekan oleh  10-HDA.  Molekul  awal  seperti  pAkt,  pERK, pCERB,  dan  C/EBPβ  ditemukan  diregulasi  ke bawah oleh 10-HDA, yang menyebabkan penurunan  regulasi  faktor  transkripsi  adipogenik utama seperti PPARγ, FABP4, CEBPα, SREBP-1c, dan Leptin pada 3 adiposit T3-L1.

## PENUTUP
Berdasarkan literature review yang dilakukan bahwa  terdapat  9  aktivitas  farmakologi  yang terdapat  pada  Royal  Jelly  antara  lain  antibakteri, antidiabetes, antiinflamasi, antioksidan, antihistamin,  antiaging.  Dari  semua  kandungan aktivitas  farmakologi  tersebut  yang  mempunyai
aktivitas  farmakologi  sangat  kuat  yaitu  sebagai antioksidan.

## DAFTAR PUSTAKA
Albalawi,  A.  E.,  Althobaiti,  N.  A.,  Alrdahe,  S.  S.,
Alhasani,  R.  H.,  Alaryani,  F.  S.,  & BinMowyna,  M.  N.  (2022).  Antitumor Activity  of  Royal  Jelly  and  Its  Cellular Mechanisms  against  Ehrlich  Solid  Tumor  in Mice.  BioMed  research  international,  2022, 7233997.
https://doi.org/10.1155/2022/7233997 Celli  BR,  Macnee  W,  Agusti  A,  Anzueto  A,  Berg B, Buist AS, et al. Standards for the diagnosis and  Treatment  of  Patients  with  COPD:  a Summary  of  the  ATS/ERS  position  paper. Eur Respir J 2004; 23: h 932-46.
Dharmayanti, N. L. P., Sulistyowati, E., Tejolaksono,  M.  N.,  dan  Prasetya,  R.  2000. Efektifitas  Pemberian  Propolis  Lebah  dan Royal  Jelly  pada  Abses  yang  disebabkan Staphylococcus  Aureus.  Berita  Biologi.  Vol (5); 1.
Ghanbari,  E.,  Nejati,  V.,  dan  Khazaei,  M.  2016.
Efek  Antioksidan  Dan  Protektif  Royal  Jelly Pada  Perubahan  Histopatologi  Pada  Testis Tikus. Diabetes. Internasional Journal Reproduktif Biomedisin. Vol (14); 8.
Khoukaz  G,  Gross  NJ.  Effects  of  Salmeterol  on Arterial  Blood  Gases  in  Patients  with  Stable COPD,  Comparison  with  Albuterol  and Ipratropium.  Am  J  Respir  Crit  Care  Med 1999: 160; h 1028-30
Mofid, B.; Rezaeizadeh, H.; Termos, A.; Rakhsha, A.;  Mafi,  AR;  Taheripanah,  T.;  Ardakani, MM;  Taghavi,  UKM; Moravveji, SA; Kashi,
ASY  Efek  madu  olahan  dan  royal  jelly  pada kelelahan  terkait  kanker:  Uji  klinis  acak tersamar ganda. listrik. fisik. Wahyu 2016, 8, 2475–2482.
Okumura,  N.,  et  al.,  2018.  Royal  Jelly  Delays
Motor  Functional  Impairment  During  Aging in  Genetically  Heterogeneous  Male  Mice. Journal Nutrients. Vol 10: 1191.
Pandeya,  P.R.,  Lamicchane,  R.  Lee,  K.  Kim,  S.
Lee,  D,  Kyu,  H.  and  Jung,  H.  Bioassay- guided  isolation  of  active  antiadipogenic compound  from  royal  jelly  and  the  study  of possible  mechanisms.  BMC  Complementary and Alternative Medicine. 2019., 19:33.
Rodriguez-Roisin  R.  COPD  exacerbation.  5:
Management, Review Series. Thorax 2006: 6;
h 535–44
R.R.Teixeira,A.V.deSouza,L.G.Peixotoetal.,“Royal
jelly  decreases  corticosterone  levels  and improves  the  brain  antioxidant  system  in restraint and cold stressed rats,” Neuroscience Letters, vol. 655, pp. 179–185, 2017.
W. M. Ahmed, A. A. Khalaf, W. A. Moselhy, and
G.  M.  Safwat,  “Royal  jelly  attenuates azathioprine  induced  toxicity  in  rats,”
Environmental
Toxicology and
Pharmacology,  vol.  37,  no.  1,  pp.  431–437,
2014.