## AKTIVITAS ANTIFOTOOKSIDASI DAN PENGHAMBATAN PEMBENTUKKAN AGEs ( ADVANCED GLYCATION END PRODUCTS )
EKSTRAK KULIT BUAH PISANG GOROHO ( Musa acuminate )
Jane Beatrix Rety Kowaas 1) , Edi Suryanto 2) , Defny Silvia Wewengkang 3)
1) Program studi Farmasi FMIPA Unsrat Manado, 95115
2) Jurusan Kimia FMIPA Unsrat Manado, 95115

## ABSTRACT
This study aims to determine the activity of antiphotooxidation and inhibition of the formation of  AGEs  (Advanced  Glycation  End  Products)  of  Goroho  Banana  Fruit  Bark  Extract  (Musa acuminate). The research was started by extracting goroho banana peel using infusion method for 15 minutes  with  50%  ethanol,  100%  ethanol,  and  distilled  water  at  90 o C.  Then  determined  the  total phenolic  content,  free  radical  antidote  activity,  photooxidation  potential  against  linoleic  acid,  and determination of inhibition of the formation of AGEs (Advanced Glycation End Products) in vitro. The results  showed  that  100%  ethanol  extract  had  the  highest  total  phenolic  content  with  a  value  of 114.49  µg  /  g,  followed  by  distilled  water  extract  with  a  value  of  62.04  µg  /  g,  and  50%  ethanol extract  with  a  value  of  40.91 µg  /  g.  The  100%  ethanol  extract  also has the  highest  total  content  of free radical antidote compared to other extracts. In antiphotooxidation testing of linoleic acid, 100% ethanol  extract  also  showed  the  greatest  activity  in  counteracting  lipid  oxidation  and  has  an inhibition  of  the  formation  of  AGEs  (Advanced  Glycation  End  Products)  more  effectively  than  other extracts.  Based  on  this  study,  it  can  be  concluded  that  100%  ethanol  extract  can  act  as antipotooxidation and inhibitors of AGEs (Advanced Glycation End Products) formation better than other extracts.
Keywords: Antiphotoxidation, AGEs (Advanced Glycation End Products), Fruit Skin Goroho Banana (Musa acuminate)

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  aktivitas  antifotooksidasi  dan  penghambatan pembentukan  AGEs (Advanced  Glycation  End  Products )  Ekstrak  Kulit  Buah  Pisang  Goroho  ( Musa acuminate ).  Penelitian  dimulai  dengan  mengekstraksi  kulit  buah  pisang  goroho    menggunakan  cara infusa  selama  15  menit    dengan  pelarut  etanol  50%,  etanol  100%,  dan  aquades  pada  suhu  90 0 C. Kemudian ditentukan kandungan total fenolik, aktivitas penangkal radikal bebas, potensi fotooksidasi terhadap asam linoleat, dan penentuan penghambatan pembentukan  AGEs ( Advanced Glycation End Products )  secara in  vitro .  Hasilnya  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  100%  memiliki  kandungan total fenolik tertinggi dengan nilai 114,49 µg/g,  diikuti ekstrak aquades dengan nilai 62,04 µg/g, dan ekstrak  etanol  50%  dengan  nilai  40,91µg/g.  Ekstrak  etanol  100%  juga  memilki  kandungan  total aktivitas  penangkal  radikal  bebas  yang  tertinggi  dibandingkan  dengan  ekstrak  lain.  Pada  pengujian antifotooksidasi  terhadap  asam  linoleat,  ekstrak  etanol  100%  juga  menunjukkan  aktivitas  terbesar dalam  menangkal  oksidasi  lipid  dan  memiliki  penghambatan  pembentukan  AGEs  ( Advanced Glycation  End  Products )  lebih  efektif  dibandingkan  dengan  ekstrak  lainnya.  Berdasarkan  penelitian ini,  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  100%  dapat  berperan  sebagai  antifotooksidasi  dan penghambat pembentukan AGEs ( Advanced Glycation End Products) lebih baik dibandingkan dengan ekstrak lainnya.
Kata  kunci : Antifotoksidasi,  Penghambat  AGEs  ( Advanced  Glycation  End  Products ),  Kulit BuahPisang Goroho ( Musa acuminate )

## PENDAHULUAN
Tubuh manusia secara terus- menerus  mengalami  proses  oksidasi  yang menghasilkan  oksigen  aktif  dan  radikal bebas.  Radikal  bebas  merupakan  senyawa yang  mengandung  elektron  yang  tidak berpasangan  yang  bisa  bertindak  sebagai aseptor  elektron  dan  merupakan  derivat dari  oksigen  yang  disebut  sebagai  spesies oksigen  reaktif  (SOR).  Produksi  spesies oksigen  reaktif  (SOR)  yang  berlebihan dapat  menyebabkan  kerusakan  jaringan dan  kerusakan  akan  berantai  untuk menghasilkan  SOR  lagi  (Halliwel  dan Aruoma, 1997).
Spesies  oksigen  reaktif  (SOR) dapat  dengan  mudah  terbentuk  di  dalam
tubuh  dengan  adanya  bantuan  cahaya  atau reaksi fotooksidasi.
Fotooksidasi merupakan  oksidasi  yang  dipicu  oleh cahaya  dan  melibatkan  sensitizer  yang mengubah oksigen triplet  menjadi oksigen singlet yang lebih reaktif.  Efek dari reaksi fotooksidasi  dapat  menyebabkan  masalah kesehatan  seperti  pigmentasi,  katarak, penuaan  kulit,  dan  kanker  (Davies et  al .,
2001).  Stres  oksidatif  dapat  menyebabkan pembentukan  AGEs  ( Advanced  Glycation End-Products ) yang dapat memicu patogenesis  penyakit  diabetes,  alzheimer, stroke,  jantung  koroner,  osteoporosis, bahkan kanker (Ganeshan et al. , 2015).

## BAHAN DAN METODE
Alat dan Bahan Peralatan  yang  digunakan  dalam penelitian  yaitu alat-alat gelas pyrex Iwaki dan Schott Duran (tabung reaksi, erlenmeyer,  gelas  kimia,  gelas  ukur),  rak tabung, mikropipet, mikro buret, aluminium  foil,  botol  vial,  vortex,  cawan porselin,  spatula  stainless  stell,  timbangan analitik, rotary  evaporator ,  lampu  philips 45  watt,  kotak  cahaya  70  x  50  x  60  cm, oven Mammert, spektrofotometer UV-Vis.
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  yaitu  kulit  buah  pisang  goroho  ( Musa
acuminate ) yang diperoleh dari pasar lokal Bahu, Manado. Bahan kimia yang digunakan yaitu, etanol 50%, etanol 100%, aquades,  natrium  karbonat  2%  ,  Reagen Folin-Ciocalteu 50 %, 1,1-diphenyl-
2picrylhydrazyl (DPPH),  eritrosin,  tween 20,  asam  linoleat,  BSA  ( Bovine  Serum Albumine ), glukosa, natrium azida, larutan penyangga  phospate  pH  7,  larutan    4- dinitrofenilhidrazin (DNPH), larutan potasium hidroksida (KOH) 1N.

## Cara Kerja
Pisang  goroho  ( Musa  acuminate ) dari  pasar  Bahu  kota  Manado  diambil kemudian  dibawa  ke  UPT  Laboratorium
Terpadu  Universitas  Sam  Ratulangi  untuk
dipreparasi.  Kulit  pisang  goroho  diambil kemudian  dicuci  dengan  air  mengalir untuk menghilangkan pengotor.
Selanjutnya  dipotong  kecil-kecil  dan dikeringkan.

## Ekstraksi
Ditimbang sampel kulit buah pisang goroho ( Musa acuminate ) sebanyak 30  g,  diekstraksi  menggunakan  metode infus.  Sebanyak  30  g  sampel  kulit  buah pisang goroho ( Musa acuminate ) dimasukkan  ke  dalam  gelas  piala  500  mL dan  diekstraksi  menggunakan  pelarut etanol  50%,  etanol  100%,  dan  aquades sebanyak 250 mL diinfus selama 15 menit (dihitung  setelah  mendidih)  dengan  suhu 90 0 C. Kemudian disaring dengan menggunakan  kertas  saring  dan  diperoleh filtrat  serta  endapan.  Filtrat  dipekatkan menggunakan rotary evaporator .

## Penentuan Kandungan Total Fenolik
Kandungan total fenolik dari serbuk  biji  jagung  Manado  ditentukan menggunakan  metode  Jeong  et  al.  (2004). Sebanyak  0,1  mL  larutan  masing-masing ekstrak 1000 µg/mL dimasukkan ke dalam tabung  reaksi,  lalu  ditambahkan  0,1  mL reagen  Folin-Ciocalteu  50%  dalam  tabung reaksi  dan  kemudian  campuran  divortex selama  3  menit.  Setelah  interval  waktu  3 menit, ditambahkan 2 mL larutan Na2CO3
2%, kemudian campuran diinkubasi dalam ruang  gelap  selama    30    menit. Selanjutnya  dibaca  dibaca  absorbansinya pada  λ  750  nm  dengan  menggunakan spektrofotometer    UV-Vis.    Hasilnya diplotkan  terhadap  kurva  standar  asam galat  yang  dipersiapkan  dengan  cara  yang sama.

## Penentuan Penangkal Radikal Bebas
1,1-diphenyl-2-picryhydrazil (DPPH)
Penentuan  aktivitas  penangkal  radikal bebas 1,1-diphenyl-2-picryhydrazil (DPPH)  esktrak  kulit  buah  pisang  goroho ( Musa acuminate)  ditentukan  dengan metode Burda & Oleszeck (2001).
Sebanyak  0,5  mL  masing-masing  ekstrak ditambahkan  dengan  1,5  mL  larutan 1,1- diphenyl-2-picryhydrazil (DPPH) dan divortex  selama  2  menit.  Berubahnya warna  larutan  dari  ungu  ke  kuning menunjukan  efisiensi  penangkal  radikal bebas.  Selanjutnya  pada  5  menit  terakhir menjelang 30 menit inkubasi, absorbansinya diukur pada panjang gelombang  517  nm  dengan  menggunakan spektrofotometer UV-VIS.

## Penentuan  Aktivitas  Antifotooksidasi terhadap Asam Linoleat
Dibuat stok emulsi dari 1,5 g asam linoleat ditambah  6  mL  aquades,  distirer  selama  5 menit,  lalu  ditambah  2,5  gr tween 20 kemudian  distirer  kembali  selama  10 menit.  Diambil  1  g  dari  stok tersebut,  dan ditambah  5  mL  aquades  distirer  selama  2 menit, selanjutnya ditambah 5 mL aquades sebanyak  4  kali  penambahan  sehingga total  stirer  10  menit.  Pengaruh  masing- masing  ekstrak  terhadap  oksidasi  oksigen singlet  diuji  dalam  asam  linoleat  yang mengandung  5 𝜇 g/mL  eritrosin  dalam
emulsi  sebagai  sensitiser.  Efek  fraksi terhadap fotooksidasi asam linoleate menggunakan  konsentrasi  500 𝜇 g/mL. Sampel  dari  campuran  tersebut  diambil sebanyak  5  mL  dan  dimasukkan  ke  dalam botol  serum  berukuran  10  mL  yang dilengkapi  dengan  penutup  karet  dan aluminium foil. Analisis diena
terkonjugasi  dilakukan  selama  5  jam penyinaran.
Pengukuran
nilai hidroperoksida  diena  terkonjugasi  dimulai dengan  memipet  sampel  emulsi  30  μL. Sampel tersebut dimasukkan dalam tabung reaksi  yang  telah  berisi  3  mL  methanol absolut.  Absorbansi  diukur  pada  panjang gelmbang 234 nm.
Penentuan Aktivitas Penghambat Pembentukan AGEs ( Advanced Glycation End-Products ) secara
In Vitro
Diambil  sebanyak  1  mL  dari masing-masing larutan  BSA  ( Bovine Serum  Albumin ) ,  glukosa,  natrium  azida, dan  larutan  penyangga  phosphate  pH  7 untuk dijadikan sebagai kontrol. Sebanyak 1 mL dari setiap  ekstrak kulit buah pisang goroho  ( Musa  acuminate ) ditambahkan dengan  1  mL  dari  masing-masing  larutan BSA  ( Bovine  Serum  Albumin ),  glukosa, natrium  azida,  dan  larutan  penyangga fosfat  pH  7  untuk  diinkubasi  pada  suhu 37ºC selama 21 hari.
Sebelum dianalisis, dilakukan pengenceran  dengan  mengambil  sebanyak
0,1  masing-masing  sampel  dilarutkan  ke dalam 10 mL larutan penyangga phosphate pH  7.  Lalu,  dianalisis  menggunakan metode Lappin (1951). Sebanyak 0,25 mL masing-masing  sampel  ditambahkan  0,25 mL larutan
DNPH (2,4-
dinitrophenylhidrazine )  dan  1  tetes  HCl pekat.  Campuran  dipanaskan  selama  30 menit  pada  suhu  50ºC  dan  didinginkan. Selanjutnya  ditambahkan  2  mL  larutan KOH  1  N,  digojok  sampai  homogen  dan dibaca absorbansinya pada panjang gelombang 480 nm.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi
Sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian ini adalah kulit  buah pisang goroho ( Musa acuminate ).  Kulit  buah  pisang  goroho ( Musa acuminate)  dipotong  kecil-kecil untuk memperkecil ukuran sampel.
Semakin  kecil  ukuran  sampel,  semakin besar  luas  permukaan  sehingga  bisa mempengaruhi  interaksi  sampel  dengan pelarut  maka  proses  ekstraksi  berlangsung optimal  dan  menghasilkan  ekstrak  yang maksimal.  Penelitian  ini  menggunakan proses  ekstraksi  infus.  Sampel  30  g  dari kulit buah pisang goroho ( Musa acuminate )  ini  menggunakan  pelarut  yang menghasilkan rendemen (%) ekstrak aquades  sebanyak  3,616%,  etanol  50%
2,777%  ,  dan  etanol  100%  1,273% . Infus merupakan metode ekstraksi dengan bantuan  panas.  Metode  ini  dilakukan dengan waktu yang singkat yaitu hanya 15 menit,  namun  dari  segi  suhu  metode  ini menggunakan  penambahan  panas  dengan suhu 90°C yang dapat membantu mempercepat  terjadinya  proses  ekstraksi. Penggunaan  waktu  yang  singkat  bertujuan untuk  mencegah  terjadinya  kerusakan terhadap  senyawa  pada  sampel  akibat pemanasan  yang  terlalu  lama . .  Metode  ini juga  digunakan  sebagai  salah  satu  sarana dalam pembuatan ekstrak karena alat yang digunakan  sangat  sederhana  dan  harganya juga jauh lebih ekonomis.

## Kandungan Total Fenolik Ekstrak Pelarut
Penentuan kandungan total fenolik masing-masing ekstrak dinyatakan sebagai ekuivalen  asam  galat  atau Gallic  Acid Equivalent (GAE).    Ekuivalen  asam  galat
merupakan  acuan  umum  untuk  mengukur sejumlah  senyawa  fenolik  yang  terdapat dalam  suatu  bahan  (Mongkolsilp et  al ., 2004).
Berdasarkan  Tabel  2,  dapat  diketahui bahwa  kandungan  total  fenolik  tertinggi yaitu  hasil  ekstrak  etanol  100%  sebesar 114,49  µg/mL  diikuti  dengan  hasil aquades  62,04  µg/mL,  dan  hasil  ekstrak etanol  50%  (40,91%)  µg/mL.  Hal  ini dikarenakan  pelarut  etanol  100%  dapat
melarutkan  senyawa  fenolik  yang  lebih banyak  sehingga  menunjukkan  sebagian besar  senyawa  fenolik  yang  merupakan senyawa  bersifat  semipolar.  Pelarut  etanol 100%  sangat  cocok  untuk  mengekstraksi senyawa  fenolik  (  Rahman et  al., 2012).
Aktivitas  Penangkal  Radikal  Bebas 1,1- diphenyl-2-picryhydrazil (DPPH) Ekstrak Pelarut Pengukuran  aktivitas  antioksidan
kulit buah pisang goroho ( Musa
acuminate )  menggunakan  radikal  bebas
1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl
(DPPH)
sebagai media pengujian aktivitas
penangkal  radikal  bebas.  Metode 1,1-
diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)
merupakan metode yang sederhana, mudah untuk    aktivitas  penangkapan  radikal beberapa  senyawa,  efektif  dan  praktis (Molyneux, 2003).
Hasil  analisis  penangkal  radikal bebas  terhadap  ekstrak  etanol  100% menunjukkan  bahwa persentase penangkal radikal  bebas  pada kulit  buah  pisang goroho ( Musa acuminate ) memiliki aktivitas  antioksidan  yang  paling  tinggi etanol 100% (60,92%) apabila
dibandingkan  dengan  ekstrak  aquades (42,82%), dan ekstrak etanol 50%
(50,24%).  Hal  ini  membuktikan  bahwa
pelarut  etanol  100%  paling  efektif  dalam mengikat  senyawa  aktif  yang  berfungsi sebagai  antioksidan  yang  terdapat  pada ekstrak  kulit  buah  pisang  goroho  ( Musa acuminate )  .  Hasil  ini  juga  menunjukkan bahwa  tingginya  aktivitas  antioksidan berbanding lurus dengan kandungan fenolik  dari  hasil  masing-masing  ekstrak tersebut.

## Pengujian  Antifotooksidasi  terhadap Asam Linoleat
Kandungan diena terkonjugasi dalam  emulsi  dengan  ekstrak  kulit  buah pisang  goroho  ( Musa acuminate)  dengan
konsentrasi  500  μg/mL  pada  Gambar  4. Dari  gambar  4,  dapat  diketahui  bahwa kandungan  diena  terkonjugasi  terendah ditunjukkan oleh ekstrak etanol 100%.
Sampel
Total fenolik ( μ g/mL) Ekstrak Aquades 62,04±0 a Ekstrak Etanol 50% 40.91±0 a Ekstrak Etanol 100% 114,49±0,07 b
Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol  100%  mampu  melindungi  lipid
yang  terdapat  pada  sistem  emulsi.  Diikuti dengan ekstrak aquades, dan ekstrak etanol 50%.  Hal  ini  berarti  kemampuan  ekstrak etanol 100% lebih tinggi dalam melindungi  lipid  pada  sistem  emulsi  yang induksi dengan cahaya UV-B. Hal tersebut mengindikasikan  bahwa  kemampuan  hasil ekstrak  etanol  100%  kulit  buah  pisang goroho  ( Musa  acuminate )  berpotensi sebagai  penstabil  oksigen  singlet  yang lebih  kuat  dibandingkan  dengan  ekstrak yang  lain.  Rendahnya  kandungan  diena terkonjugasi  dari  ekstrak  etanol  100% tersebut berbanding lurus dengan kandungan  fenolik  dari  sampel  yang dimiliki. Aktivitas  Penghambat  Pembentukan AGEs ( Advanced Glycation End Products ) AGEs  ( Advanced  Glycation  End Products )  pertama  kali  diidentifikasi  pada makanan  yang  dimasak  sebagai  produk akhir dari reaksi non-enzimatik antara gula dan  protein  yang  disebut  reaksi  Maillard (Ganeshan et  al. ,  2015).  Reaksi  Maillard atau yang dikenal juga dengan glikasi yaitu glukosa bereaksi dengan kelompok protein amino (NH 2 ) akan membentuk basa Schiff.
Reaksi  ini  terjadi  cepat  dan  reversibel, tergantung pada konsentrasi subtrat (Basta et al. , 2004).
Beberapa  penelitian  sebelumnya menyatakan bahwa pisang goroho mengandung  senyawa  fenolik,  flavonoid dan  tannin  terkondensasi  dan  memiliki kemampuan sebagai antioksidan (Suryanto et  al, 2011;  Kiay et  al ,  2011).  Hal  ini dikarenakan  senyawa  yang  terdapat  pada kulit buah pisang goroho ( Musa acuminate )  memiliki  sistem  perlindungan terhadap  stres  oksidatif.  Stres  oksidatif dapat  membentuk  AGEs.  Pembentukan AGEs ( Advanced Glycation End-Products )
yang  meningkat  akan  memicu  beberapa penyakit  kronis  yaitu  diabetes  melitus  dan disfungsi  beberapa  organ  seperti  kulit, otak,  jantung,  mata,  saraf,  ginjal  (Ford et al ., 2004).
Gambar  5  menunjukkan  bahwa sampel  ekstrak  etanol  100%  memiliki aktivitas  penghambat  pembentukan  AGEs yang tertinggi. Hal ini dikarenakan adanya aktivitas  penangkal  radikal  bebas  (DPPH) atau  antioksidan  yang  tinggi  atau  sangat kuat. Sehingga dapat menghambat terjadinya  oksidasi  radikal  bebas  yang dapat memicu terjadinya stres oksidatif.
0 5 10 15 20 25 -1 1 3 5 A ng ka P er o ks ida (m m o l/ kg) Waktu/jam K1 K2 K 0 5 10 15 20 25 30 Aquades Etanol 50% Etanol 100% A kt iv it as P e n gh am b at an P em b e n tu ka n A G Es (% )

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  yang  didapatkan dari  penelitian  ini,  maka  dapat  dambil kesimpulan  bahwa  ekstrak  etanol  100% memiliki  kandungan  total  fenolik,  total 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), aktivitas  anti  fotooksidasi,  serta  memiliki aktivitas  penghambat  pembentukan  AGEs
( Advanced  Glycation  End-Products )  yang lebih  efektif  dibandingkan  dengan  ekstrak aquades dan etanol 50%.

## DAFTAR PUSTAKA
Halliwel,  B  &  J.M.C.  Gutteridge.  2001. Free  Radicals  in  Biology  and Medicine .  Oxford  University  Press,
London.
Davies,  K.J.  dan  Goldberg,  A.L.2001. Protein Damaged by Oxygen
Radicals  Are  Rapidly  Degraded  in
Extracts  of  Red  Blood  Cells. Journal  of  Biological  Chemistry . 262: 8227–8234.
Ganeshan,  S.,  A.Balasubramaniem.,  &  V, Perumal.  2015.  Pholotannins  From
Brown Algae : Inhibition Of Advanced  Glycation  End  Products Formation In High Glucose Induced Caenorhabditis  elegans .
Indian  Journal  of  Experimental Biology . 53 :371-379.
Jeong,  S.M.,  Kim,  S.Y.,  Kim,  D.R.,    Jo, S.C.,  Nam,  K.C.,  Ahn,  D.U.  dan Lee,  S.C.  2004.  Effect  of  Heat
Treatment  on  the  Antioxidant
Activity  of  Extracts  from  Citrus Peels. Journal  of  Agicultural  and Food Chemistry. 52: 3389-3393.
Burda,  S.,  dan  W.  Oleszek.  2001.
Antioxidant and antiradical activities  of  flavonoids. Journal Agiculture  Food  Chemistry. 49 : 2774-2779.
Rahman  MA,  A  Arshad,  K  Marimuthu,  R
Ara  and  SMN  Amin.  2012.  Inter- specifik Hybridization and Its Potential  for  Aquaculture  of  Pin Fishes. Asian  Journal  Of  Animal and  Veterinary  Advances . 8 :  139-
153
Ganeshan,  S.,  A.Balasubramaniem.,  &  V, Perumal.  2015.  Pholotannins  From
Brown Algae : Inhibition Of Advanced  Glycation  End  Products Formation In High Glucose
Induced Caenorhabditis  elegans . Indian  Journal  of  Experimental Biology . 53 :371-379.
Suryanto,  E.,  L.I.  Momuat.,  M.  Taroreh., F, Wehantouw. 2011. Potensi Senyawa Polifenol  Antioksidan  dari  Pisang Goroho ( Musa sapien sp.). Agritech. 31 : 289-296
Kiay,  N.,  E.  Suryanto  &  L.  Mamahit.
2011.  Efek  Lama  Perendaman Ekstrak Kalamansi ( Citrus Microcarpa ) terhadap Aktivitas
Antioksidan  Tepung  Pisang  Goroho ( Musa spp. ). Chem. Prog . 4: 27-33.