@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
POTENSI SIRIH HUTAN (Piper aduncum L.) SEBAGAI TUMBUHAN OBAT: PROSPEK PENGEMBANGAN DI PAPUA
(The Potential of Sirih Hutan [Piper aduncum L.] as a medicinal plant: Prospect for Development in Papua)
SUSILO BUDI HUSODO 1 , ENDRA GUNAWAN 1  , MUSTOFA RIZKI 1 , CHARLY B. WANGGAI 1 1 Fakultas Kehutanan Universitas Papua Manokwari, Jl. Gunung Salju Amban, Manokwari 98314
 Penulis Korespondensi: Email e.gunawan@unipa.ac.id Diterima: 10 Agust 2022 | Disetujui: 19 Des 2022
Abstrak. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  kandungan  fitokimia  dan  bioasai,  antioksidan, antibakteri  dan  sifat  toksisitas  ekstrak  metanol  dari  bagian  tanaman Piper  aduncum L.  Metode pengujian yang digunakan adalah pengujian fitokimia, pengujian antioksidan, pengujian antibakteri dan pengujian  toksisitas.  Hasil  pengujian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  fitokimia  daun Piper  aduncum L mengandung triterpenoid dan steroid. Akar mengandung alkaloid tanin dan flavonoid kumarin. batang mengandung flavonoid dan kumarin. Uji antioksidan menunjukkan bahwa konsentrasi 25, 50 dan 100 ppm  dalam  ekstrak  daun Piper  aduncum masing-masing  adalah  sekitar  28,98,  43,67  dan  65,45%. Pengujian  antibakteri  ekstrak  dari Piper  aduncum menunjukkan  hasil  positif  menghambat  zona perkembangan  bakteri  yang  memiliki  sifat  antibakteri.  Hasil  uji Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT) yang  dihitung  dalam  penelitian  ini  memperoleh  nilai  LC50  mencapai  465.212  μg/ml  yang  berarti berpotensi sebagai antikanker.
Kata kunci : Piper aduncum L, fitokimia, bioassay, antioksidan
Abstract. This  study  aims  to  determine  the  phytochemical  content  and  bioassay,  antioxidant, antibacterial,  and  toxicity  properties  of  methanol  extract  from  Piper  aduncum  L.  plant.  The  test methods used were phytochemical, antioxidant, antibacterial, and toxicity testing. The results showed that  the  phytochemical  extract  from  Piper  aduncum  leaves  contained  triterpenoids  and  steroids chemical  compounds.  While,  the  roots  contained  alkaloid  tannins  and  flavonoid  coumarins.  In addition,  the  stem  contained  flavonoids  and  coumarins.  The  antioxidant  test  founld  that  the concentrations  ranged  from  25,  50  and  100  ppm  in  Piper  aduncum  leaf  extract  were  around  28.98, 43.67,  and  65.45%,  respectively.  Antibacterial  testing  from  Piper  aduncum  extraction  indicated  a positive  result  in  inhibiting  the  development  zone  of  bacteria  that  had  antibacterial  properties.  In addition, the result of the Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) which has been  calculated in this study obtained an LC50 value of 465,212 μg/ml which means that it had the potential as an anticancer.
Keywords : Piper aduncum L, phytochemistry, bioassay, antioxidants
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA

## PENDAHULUAN
Hutan  kaya  akan  komoditas  biotik  dan abiotik yang secara langsung dan tidak langsung memberikan  manfaat  nyata  dalam  kehidupan manusia  (Wiyanto  2022).  Ketergantungan manusia  pada  tumbuhan  tidak  hanya  sebagai pemenuh  kebutuhan  langsung,  namun  juga banyak  kebutuhan  tidak  langsung  ( intangible needs )  yang  secara  esensi  diberikan  dari  hutan. Salah  satu  bentuk  ketegantungan  manusia dengan  komoditas  hutan  yakni  kebutuhan terhadap  suplai  bahan  obat  guna  menghindari manusia  dari  serangan  toksik,  penyakit  dan peningkatan daya tahan tubuh terhadap serangan dan infeksi (Siahaan dan Aryastami 2018).
Secara general tumbuhan mengandung banyak  komponen  kimiawi  yang  secara  tidak langausng  menyediakan  potensi  pemanfaatan sebagai  baa  baku  obat  (Nugroho  dan  Hartini 2020).  Tumbuhan  umumnya  mengandung fitokimia  dan  senyawa  aktif  dalam  bentuk metabolit  sekunder  seperti  alkaloid,  flavonoid, tanin,  saponin,  triterpenoid,  steroid,  dan kumarin. Tumbuhan sirih khususnya sirih hutan belum  diketahui  secara  detail  kandungan metabolit sekundernya.
Genus  piper  diperkirakan  lebih  dari  1000 jenis dan dikategorikan sebagai salah satu genus terbesar  dari  famili  piperaceae  dan  secra geografis  tersebar  diwilayah  tropis  dengan pertumbuhan dan perkembangbiakan merambat, sebagai Semak, herba maupun liana (Niwa dkk. 2013).  Salah  satu  jenis  genus  Piperaceae  yang tumbuh  dan  tersebar  di  wilayah  daratan  Papua adalah  jenis  Sirih  hutan  ( Piper  aduncum L.) yang secara habitat menempati hampir sebagian wilayah  hutan  sekunder  dan  tergolong  sebagai salah  satu  jenis  penciri  hutan  sekunder (Munawaroh  dan  Yuzammi  2017).  Genus  piper telah  lama  dimanfaatkan  sebagai  sumber pengobatan  alternatif  alami  di  berbagai  negara, seperti  di  China  dengan  sistem  pengobatan
tradisional,  di  Indian  yang  dikenal  dengan pengobatan sistem Ayurvedic hingga implementasi  pengobatan  rakyat  di  Amarika dengan  memamfaatan  komponen  tumbuhan genus  Piper.  Selain  itu,  terdapat  pemanfaatan dan  pengolaan  lainnya  seperti  bahan  rempah- rempah,  umpan  ikan,  racun  ikan,  bahan halusinogen,  minyak  dan  kompone  parfum (Dyer  dkk.  2004;  Ghosh  dkk.  2014).  Menurut masyarakat  Kampung  Nijh, Piper  aduncum telah  lama  dimanfaatkan  sebagai tanaman obat ( medicinal  plant ).  Hal  ini  diketahui  dari pengetahuan  lokal  masyarakat  kampung  Nijh yang  menggunakan  tumbuhan  sirih  hutan sebagai  obat  tradisional  yang  cukup  ampuh untuk  mengobati  berbagai  jenis  penyakit diantaranya  getah  batang Piper  aduncum. berkhasiat sebagai  obat  luka  dalam  dan  daun sirih hutan mempunyai khasiat dalam penyembuhan  luka,  menghentikan  muntah, mengurangi  mual,  melancarkan  pencernaan, sebagai antiseptik, membunuh bakteri dan jamur serta virus (Dewi dkk. 2014)
Dewasa  ini  perkembangan  teknologi  yang meningkat  membuat  sebagian  besar  masyarakat memilih  pengobatan  dokter  dalam  upaya pengobatan  penyakit  yang  mereka  derita. Disamping peralatan medis  yang canggih,  tidak dipungkiri pengobatan oleh dokter juga bergantung  kepada  pemakaian  obat-obatan medik  yang  jika  dikonsumsi  dalam  jangka waktu  yang  lama  akan  menimbulkan  efek samping  yang  berdampak  merusak  hati  dan ginjal (Ganiswarna 1995).
Berdasarkan  pengetahuan  lokal  masyarakat Kampung Nijh bahwa sirih hutan ( P. aduncum ) dapat  menyembuhkan  berbagai  jenis  penyakit, oleh karena itu perlu dikaji sebagai  fitofarmaka dan juga sebagai pembuktian bahwa Sirih hutan ( P. aduncum )
memang berkhasiat menyembuhkan  penyakit.  Dengan  demikian, maka tujuan kajian ini adalah untuk mengetahui
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
kandungan  fitokimia,  aktifitas  antioksidan, antibakteri  dan  jamur  serta  toksisitas  yang terkandung  dalam  tumbuhan  sirih  hutan.  Hasil yang  diharapkan  dari  penelitian  ini  adalah dokumentasi  secara  ilmiah  tanaman  sirih  hutan ( P. aduncum ) sehingga dapat menjadi dasar bagi penelitian fitofarmaka.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  akan  dilakukan  dengan menggunakan  metode  deskriptif  dengan  teknik analisis laboratorium.  Variabel  yang  diamati adalah  kandungan  fitokimia  yaitu  alkaloid, flavanoid,  tanin,  saponin,  triterpenoid,  steroid, dan kumarin. Serta mengukur aktivitas antioksidan,  antibakteri,  dan  toksisitas  dari tanaman sirih hutan.

## Prosedur penelitian
Pengumpulan  data  dilakukan  pada  kampung
Nijh
Distrik
Momi-Waren
Kabupaten Manokwari Selatan, melalui observasi langsung dan  wawancara  kepala  suku,  kepala  kampung, dan masyarakat setempat yang mengetahui obat tradisional.
Spesimen  yang  diambil  berupa  akar,  daun dan batang dikeringkan dan kemudian diblender. Berat contoh uji untuk setiap tanaman adalah 300gram dan kemudian dilarutkan dalam metanol  dengan  perbandingan  5:1.  Contoh  uji dimaserasi  selama  3  hari  dan  disaring  dengan corong  buchner .  Contoh  uji  dilarutkan  dalam metanol  sampai  didapatkan  filtrat  yang  bening. Hasil maserasi dievaporasikan sampai didapatkan ekstrak kasar, ekstrak kasar kemudian  diuji  fitokimia  untuk  mendapatkan komponen  kimianya.  Ekstrak  kental  metanol tersebut dilakukan uji Fitokimia, uji antioksidan, uji antibakteri, dan uji toksisitas.

## Rendemen
Rendemen  ekstrak  dapat  diketahui  dengan menghitung  kandungan  ekstrak  kering  yang dilakukan  dengan  mengeringkan  ekstrak  larut metanol dengan vacuum evaporator.

## Pengujian Fitokimia

## Fitokimia
Prosedur untuk pengujian fitokimia mengacu kepada  alkaloid,  flovanoid  dan  tanin  (Kokate 2001),  saponin,  triterpenoid  dan  steroid, kumarin (Harborne 1987).

## Pengujian Antioksidan

## Pembuatan Larutan DPPH (1,1-diphenyl-1- picrylhydrazyl)
DPPH  sebanyak  2,7  mg  ditambahkan  etanol sebanyak  100  ml  dan  dihomogenkan.  Apabila larutan  masih  berwarna  ungu  pekat,  tambahkan 10  ml  etanol  hingga  larutan  berwarna  ungu muda.

## Pengeceran sampel
Pada  pengujian  ini  digunakan  3  konsentrasi yaitu  100  ppm,  50  ppm,  dan  25  ppm.  Ekstrak sampel ditimbang sebanyak 3 mg ke dalam tube dan  dilarutkan  dalam  1000  µl  DMSO  sebagai konsentrasi 100 ppm. Kemudian diambil 500 µl dari  konsentrasi  100  ppm  menggunakan mikropipet  ke  dalam tube kedua,  selanjutnya ditambahkan 500 µl DMSO sebagai konsentrasi 50  ppm.  Langkah  berikut  yaitu  diambil  500  µl dari  50  ppm  ke  dalam tube ketiga  dan ditambahkan  dengan  500  µl  DMSO  sebagai konsentrasi 25 ppm.  Vitamin C ditimbang sebanyak  3  mg.  kemudian  dilarutkan  dalam 1000  µl  DMSO  dan  dianggap  sebagai  kontrol positif  dengan  pengenceran  disesuaikan  dengan sampel.  Sedangkan  untuk  kontrol  negatif digunakan pelarutnya yaitu DMSO.
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA

## Pengukuran antioksidan
Sampel  dimasukkan  ke  dalam cuvette sebanyak 33 µl, ditambahkan 467 µl etanol, dan 500 µl DPPH. Pencampuran dicukupkan apabila volume  sampel  telah  sampai  1000  µl  (1  ml). sampel  diinkubasi  selama  20  menit  dalam ruangan yang minim cahaya. Aktivitas antioksidan ditentukan melalui dekolorisasi dari DPPH  dengan  panjang  gelombang  515  nm dengan menggunakan alat spektrofotometer.
Keterangan: Abs.Kontrol = Nilai absorbansi tanpa ekstrak Abs.Sampel = Nilai absorbansi dengan ekstrak
Pengujian  aktivitas  antioksidan  dilakukan dengan  menggunakan  metode  perendaman radikal  bebas  DPPH  (Apak  dkk.  2007)  yang mendasarkan  prinsip  kerjanya  pada  sampel (mengandung  senyawa  bersifat  antioksidan) yang  dapat  merendam  radikal  bebas  (DPPH). Gunawan (2007) Jika nilai IC50 yang dihasilkan kurang  dari  50  ppm,  maka  senyawa  tersebut dapat  dikatakan  memiliki  aktivitas  antioksidan yang kuat.
Tabel 1. Aktivitas antioksidan berdasarkan IC50

## Uji Antibakteri

## Pembuatan media kultur bakteri
Jenis  mikroba  yang  digunakan  sebagai mikroorganisme uji yaitu bakteri Propionibacterium  acne,  Escherichia  coli, Streptococcus  sobrinus, dan  jamur Candida albican .  Bahan  utama  yang  digunakan  untuk pembuatan media pertumbuhan bakteri adalah nutrien agar (NA). Media pertumbuhan bakteri dibuat  dengan  cara  mencampur  20  g  bubuk agar,  8  g nutrient  broth ,  10  g  glukosa  dan aquades 1000 ml kedalam gelas piala 1000 ml kemudian  didihkan  hingga  melarut  sempurna dan  disterilisasi  dengan autoclave pada  suhu 121 ○ C  selama  15  menit  (Thiel  1999).  Bahan utama yang akan digunakan untuk pembuatan media  pertumbuhan  jamur  adalah sabouraud dextrose  agar (SDA).  Media  pertumbuhan jamur  dibuat  dengan  mencampur  20  g  bubuk agar, 25,5 g peptone (Merck, Darmstadt,
Germany), 10 g glukosa dan aquades 1000 ml kemudian didihkan hingga melarut sempurna, dimasukkan ke dalam botol untuk disterilisasi dengan autoclave pada suhu 121 ○ C selama 15 menit (Sabouraud 2009).

## Penyiapan ekstrak uji
Pengujian  dilakukan  terhadap  ekstrak tumbuhan  dengan  bagian  tumbuhan  daun, untuk  konsentrasi  stok  larutan,  ditimbang  25 mg  ekstrak  kemudian  dilarutkan  dalam  1  ml aseton. Pengujian dilakukan dengan konsentrasi  125  µg/well,  250  µg/well,  dan 500 µg/well.

## Pengujian aktivitas antibakteri
Pengujian  antimikroba  dilakukan  dengan menggunakan  metode  difusi  agar  sumuran yang  mengacu  pada  metode  Cappucino  dan Sherman  (2001)  dengan  modifikasi.  Dalam pengujian  ini  sebanyak  20  ml  media  NA  dan
Nilai EC50 Aktivitas antioksidan < 50 Sangat kuat 50 – 100 Kuat 100 – 150 Sedang 151 – 200 Lemah
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
SDA  dituangkan  ke  dalam petridish yang sudah  disterilkan  selama  15  menit  dengan temperatur  121 ○ C  dalam autoclave. Setelah itu pada keadaan aseptik (dalam laminar flow ) biarkan  media  mengeras,  kemudian  ditetesi bakteri  sebanyak  100  µl  diratakan  dengan menggunakan cottonbud dan biarkan mengering  selama  ±  30  menit.  Lubang sumuran  yang  dibuat  dengan cork  borer (bor sumuran)  pada  media  masing-masing  berisi 20 µL sampel dengan susunan aseton sebagai kontrol  negatif, chloramphenicol sebagai kontrol positif, dan ekstrak dengan
konsentrasi  125  µg/well,  250  µg/well,  dan 500  µg/well.  Adanya  daerah  zona  bening disekitar lubang sumuran menunjukkan adanya  aktivitas  penghambatan  antimikroba dari  ekstrak  tumbuhan.  Aktivitas  antimikroba ditentukan berdasarkan persentase daya hambat  relatif  terhadap  kontrol  positif menggunakan persamaan:
Pengklasifikasian  respon  penghambatan pertumbuhan  bakteri  dapat  dilihat  dari  tabel berikut:

## Tabel 2. Klasifikasi penghambatan bakteri
Diameter daerah hambatan (DDH) Respon penghambatan pertumbuhan … > 20 mm Sangat kuat 10-20 mm Kuat 5-10 mm Sedang ….< 5 mm Lemah Sumber (Davis dan Stout 1971).
Pengujian  toksisitas  udang  renik  (Brine shrimp lethality test)
Sejumlah 10 telur udang dimasukkan dalam gelas  piala 1000  ml  berisi  air  laut.  Membuat larutan induk, yaitu dengan menimbang 30 mg ekstrak kasar kemudian dilarutkan dalam 3 ml pelarut (etanol) dan dicampur hingga homogen sehingga  konsentrasi  awalnya  10.000  ppm. Pengujian  dilakukan  dengan  satu  konsentrasi dengan cara mengambil larutan induk sebanyak  500  µl  dan  ditambahkan  air  laut menjadi  5  ml  maka  konsentrasi  akhirnya adalah  1000  ppm  masing-masing  3  kali ulangan.  Kontrol  negatif  digunakan  air  laut dan Gallic acid sebagai kontrol positif.
Kemudian  pelarut  masing-masing  larutan dibiarkan menguap terlebih dahulu selama satu hari.  Sampel  yang  telah  dikeringkan,  masing- masing dilarutkan dengan 2 ml air laut, ekstrak yang sukar larut ditambahkan DMSO
maksimal 10% dari jumlah pelarut. Memasukkan Artemia  salina yang  berumur satu hari ( nauplii ) masing-masing vial 10 ekor. Kemudian  botol-botol  kecil  berisi  ekstrak  dan nauplii  disimpan  ditempat  yang  cukup  cahaya selama  24  jam.  Menghitung  jumlah artemia yang hidup dan yang mati. Senyawa dikatakan toxic bila  memiliki  LC 50 (konsentrasi  yang mampu  mematikan  50%  larva  udang).  Persen kematian nauplii dihitung dengan menggunakan rumus (Erma dkk. 2004).
Keterangan: A= ∑ nauplii yang mati B= ∑ nauplii yang digunakan

## Pengolahan Data
Hasil  penelitian  dituangkan  dalam  bentuk gambar, grafik maupun tabel untuk selanjutnya dianalisis.
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil Ekstraksi
Metode  ekstraksi  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  maserasi  dengan  (larutan
polar) pelarut methanol dengan tujuan menapatkan  bahan  aktif  dalam  bentuk  terlarut ( liquid ).  Hasil  ekstraksi  dari  sampel  tumbuhan sirih  hutan  (komponen  daun,  akar  dan  batang) dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Hasil maserasi dengan menggunakan pelarut metanol
No Nama lokal Nama latin Bagian pohon Berat sampel (g) Berat ekstrak (g) Rendemen (%) 1. Teita daun P. aduncum Daun 210,1380 24,0521 11,45 2. Teita akar P. aduncum Akar 300,2177 6,8112 2,27 3. Teita batang P. aduncum Batang 301,4569 7,1158 2,36
Berdasarkan  Tabel  3,  diperoleh  hasil  berat ekstrak  kental  dari  ketiga  bagian  sirih  hutan, dengan  rendemen  daun  11,45  %,  akar  2,27  %, dan batang 2,36 %. Nilai rendemen menunjukan presentasi  banyaknya  hasil  ekstrak  yang diperoleh dari proses maserasi. Tinggi rendemen tersebut bergantung kepada
letak/bagian  dari  pohon  dan  polarnya  larutan yang digunakan sebagai pelarut.

## Analisis Fitokimia
Analisis  fitokimia  telah  dilakukan  terhadap jenis  tumbuhan  sirih  hutan  ( Piper  aduncum ) dengan  menggunakan  pelarut  methanol.  Hasil pengujian dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4. Hasil pengujian fitokimia ekstrak metanol sirih hutan
No Nama Lokal Nama latin Bagian pohon Alk Flav Sap Tan Trit Ste Kum 1. Teita moub P. aduncum Daun - - - - + + - 2. Teita akar P. aduncum Akar + + - + - - + 3. Teita batang P. aduncum Batang - + - - - - +
Keterangan: Alk: alkaloid; Flav: flavanoid; Sap: saponin; Tan: tanin; Trit: triterpenoid; Ste: steroid; Kum: kumarin
Hasil  pengujian  alkaloid  sirih  hutan  bagian akar  positif  memiliki  kandungan  alkaloid. Sedangkan  daun  dan  batang  tidak  mengandung alkaloid.  Menurut  Astarina  dkk.  (2013), mengatakan bahwa senyawa alkaloid merupakan senyawa organik terbanyak ditemukan  di  alam.  Hampir  seluruh  alkaloid berasal  dari  tumbuhan  dan  ditemukan  dalam berbagai  bagian  tanaman.  Alkaloid  dapat meningkatkan  serapan  nutrisi  dan  melancarkan peredaran  darah,  mengurangi  rasa  sakit  dan menstimulasi sistem syaraf. Senyawa alkaloid
juga  dapat  digunakan  sebagai  anti  bakteri  dan anti jamur (Bribi 2018).
Hasil  pengujian  flavonoid  menunjukan  hasil positif  pada  jenis  tumbuhan  sirih  hutan  ( P. aduncum )  pada  bagian  akar  dan  batang. Flavonoid termasuk senyawa fenolik alam yang potensial  sebagai  antioksidan  dan  mempunyai bioaktifitas  sebagai  obat.  Flavonoid  dalam tubuh  manusia  berfungsi  sebagai  antioksidan sehingga sangat  baik  untuk pencegahan kanker. Manfaat  flavonoid  antara  lain  adalah  untuk melindungi struktur sel, meningkatan efektivitas
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
vitamin  C,  anti-inflamasi,  mencegah  keropos tulang dan sebagai antibiotik (Waji dkk. 2009).
Hasil  pengujian  senyawa  tanin  pada  sampel akar  sirih  hutan  memberikan  hasil  positif adanya  tanin.  Tanin  yang  tergolong  tanin terkondensasi,  banyak  terdapat  pada  buah- buahan,  biji-bijian  dan  tanaman  pangan, sementara  yang  tergolong  tanin  terhidrolisis terdapat  pada  bahan  non-pangan  (Makkar 1993).  Kadar  tanin  yang  tinggi  mempunyai  arti pertahanan bagi tanaman yaitu mengusir hewan pemangsa  tanaman.  Beberapa  tanin  terbukti mempunyai  aktivitas  antioksidan,  menghambat pertumbuhan  tumor (Robinson  1995).  Lebih lanjut  dikatakan  bahwa  dalam  dunia  kesehatan tanin  mempunyai  beberapa  manfaat  yaitu antibakteri, antioksidan alami, dan antidotum.
Senyawa  triterpenoid  dan  steroid  positif terkandung dalam hasil ekstrak metanol daun P. aduncum . Sedangkan  pada  batang  dan  akar tidak  mengandung  hasil  yang  positif.  Hal  ini sejalan  dengan  pendapat  Lenny  (2006)  yang menyebutkan bahwa triterpenoid adalah komponen-komponen tumbuhan yang mempunyai  bau  dan  dapat  diisolasi  dari  bahan nabati  dengan  penyulingan  disebut  minyak atsiri.  Dilihat  dari  Tabel  5  pada  aktivitas antibakteri  daun P.  aduncum berpotensi  besar sebagai  antibakteri  yang  dimana  pada  hasil fitokimia  (Tabel  4)  pengujian  triterpenoid  daun P.  aduncum memiliki  hasil  positif  yang  berarti triterpenoid  pada  daun  sirih  hutan  memiliki manfaat sebagai antibakteri.
Mbadianya  dkk. (2013)  melaporkan  bahwa steroid  adalah  senyawa  yang  memiliki  aktivitas antibakteri  dan  merupakan  senyawa  yang memiliki  peranan  penting  dalam  perkebangan hormon.  Steroid  juga  sebagai  bahan  baku pembuatan  pil  kontraseptik.  Steroid  anabolik dapat  mengakibatkan  sejumlah  efek  samping yang  berbahaya  seperti  menurunkan  rasio lipoprotein  densitas  tinggi,  yang  berguna  bagi
jantung,  stimulasi  tumor  prostat,  kelainan koagulasi  dan  gangguan  hati,  kebotakan  dan tumbuhnya jerawat (Lenny 2006).
Hasil  pengujian  kumarin  memberikan  hasil negatif  pada  bagian  daun,  sedangkan  bagian akar dan batang. Kumarin merupakan metabolit sekunder  yang  dapat  ditemukan  pada  tumbuh- tumbuhan.  Senyawa  ini  dikenal  memiliki aktivitas  biologi  yang  sangat  luas,  seperti antiinflamasi  (Al-Haiza  dkk.  2003),  analgesik, antibakteri, herbisida (Kusuma dkk. 2011).

## Pengujian Antioksidan
Pengujian  aktivitas  antioksidan  mengg- unakan  metode  DPPH,  hasil  masing-masing pengujian  yang  telah  dilakukan  dapat  dilihat pada  Tabel  5.  IC 50 apabila  Nilai  IC 50 yang dihasilkan < 50 maka termasuk dalam golongan sangat  kuat.  Oleh  karena  itu  dapat  dikatakan bahwa  senyawa  antioksidan  dalam  sampel ekstrak  tumbuhan  sirih  hutan  diatas  memiliki aktivitas  antioksidan  yang  sangat  kuat  oleh karena  itu  sirih  hutan  dapat  dimanfaatkan sebagai senyawa antioksidan alami.
Antioksidan sangat bermanfaat dalam pencegahan timbulnya berbagai penyakit. Peranan  antioksidan  sangat  penting  dalam menetralkan  dan  menghancurkan  radikal  bebas yang  dapat  menyebabkan  kerusakan  sel  dan juga merusak biomolekul, seperti DNA, protein, dan  lipoprotein  dalam  tubuh  yang  akhirnya dapat  memicu  penyakit  degeneratif  seperti kanker,  jantung,  artritis,  katarak,  diabetes  dan hati. Penyakit degeneratif ini disebabkan karena antioksidan  yang  ada  didalam  tubuh  tidak mampu  menetralisir  peningkatan  konsentrasi radikal  bebas,  untuk  menghindari  hal  tersebut dibutuhkan antioksidan tambahan dari luar  atau antioksidan eksogen, seperti vitamin E, vitamin C,  maupun  berbagai  jenis  sayuran  dan  buah- buahan (Simbala and Tallei 2010).
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA

## Pengujian Antibakteri
Pengujian  antibakteri  dilakukan  dengan menggunakan  metode  difusi  agar  sumuran dengan  hasil  seperti  pada  Tabel  5  yang menunjukan adanya aktivitas antibakteri ekstrak tumbuhan sirih hutan
terhadap Propionibacterium  acne. Ekstrak  daun  sirih
hutan  dengan  rata-rata  diameter  daerah  hambat terbesar  yaitu  15  mm  pada  konsentrasi  500 µg/well,  12  mm  pada  konsentrasi  250  µg/well, dan  11  mm  pada  konsentrasi  125  µg/well, bagian ekstrak sirih hutan yang lain memberikan hasil negatif.
Tabel  5.  Rataan  rendemen,  IC  50,  LC50,  daya  hambat  mikroba  dan  jamur  serta  toksisitas  pada tumbuhan Sirih hutan ( P. anduncum )
No Nama Llatin Bagia n pohon Ren dem en (%) I C 5 0 Baketri acne (mm) bakteri coli (mm) bakteri sobrinus (mm) jamur candida (mm) LC 50 1. P. anduncum Daun 11.4 5 5 1 12,8 18,63 6,85 15,30 - 2. P. anduncum Akar 2.27 3 1 0.00 10,19 0.00 0.00 461 3. P. anduncum Batang 2.36 9 1 0.00 0.00 0.00 8,15 -
Aktivitas  antibakteri  ekstrak  tumbuhan  sirih hutan terhadap Escherichia coli berupa terbentuknya daerah hambat bakteri Escherichia coli. Daun sirih hutan dengan rata-rata diameter daerah  hambat  terbesar  yaitu  20,67  mm  pada
konsentrasi  500  µg/well,  19,11  mm  pada konsentrasi  250  µg/well,  dan  16,11  mm  pada konsentrasi  125  µg/well.  Ekstrak  akar  sirih hutan  dengan  rata-rata  diameter  daerah  hambat yaitu  11,22  mm  pada  konsentrasi  500  µg/well,
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
10,11  mm  pada  konsentrasi  250  µg/well,  dan 9,22 mm pada konsentrasi 125 µg/well. Ekstrak batang sirih hutan memberikan hasil negatif.
Aktivitas  antibakteri  ekstrak  tumbuhan  sirih hutan  terhadap Streptoccocus  sobrinus, berupa terbentuknya daerah hambat bakteri Streptoccocus sobrinus pada konsentrasi ekstrak sirih  hutan  500,  250,  dan  125  µg/well.  Ekstrak daun  sirih  hutan  dengan  rata-rata  diameter daerah  hambat  terbesar  yaitu  8,33  mm  pada konsentrasi  500  µg/well,  7,11  mm  pada konsentrasi  250  µg/well,  dan  5,11  mm  pada konsentrasi  125  µg/well.  Bagian  ekstrak  sirih hutan yang lain memberikan hasil negatif.
Aktivitas  antibakteri  ekstrak  tumbuhan  sirih hutan terhadap Candida albican berupa terbentuknya daerah hambat bakteri C. albican.
Bagian  ekstrak  daun  sirih  hutan  adalah  dengan rata-rata  diameter  daerah  hambat  terbesar  yaitu 18,7  mm  pada  konsentrasi  500  µg/well,  15,7 mm pada konsentrasi 250 µg/well, dan 10,7 mm pada  konsentrasi  125  µg/well.  Bagian  ekstrak batang  sirih  hutan  dengan  rata-rata  diameter daerah  hambat  yaitu  9,7  mm  pada  konsentrasi 500  µg/well,  7,7  mm  pada  konsentrasi  250 µg/well,  dan  7,3  mm  pada  konsentrasi  125 µg/well.  Bagian  ekstrak  akar  sirih  hutan memberikan  hasil  negatif.  Hasil  pengujian diatas, zona bening ini terjadi karena antimikoba mengakibatkan  hambatan  di dalam area pertumbuhan  bakteri  yang  padat  sehingga  tidak ada bakteri yang tumbuh di dalam area tersebut. Kemampuan suatu  antibakteri dapat  dilihat dari seberapa  zona  bening  yang  terbentuk  akibat berdifusinya zat antibakteri tersebut.
Hasil pengujian antibakteri diatas menunjukan,  jika  diklasifikasikan  berdasarkan Tabel  2,  klasifikasi  penghambat  bakteri  ekstrak daun sirih hutan masuk kedalam kelas > 20 mm sangat  kuat  hingga  kelas  5-10  mm  sedang. Dilihat  dari  Tabel  5,  rata-rata  diameter  daerah hambat  terbesar  18,63  mm  berasal  dari  ekstrak
daun P.  aduncum dengan  kelas  sangat  kuat menghambat  bakteri Escherichia  coli. Perlu diketahui  bahwa E.  coli adalah  anggota  flora normal  usus  dan  menurut  Dewi  dkk.  (2014) bahwa  daun  sirih  hutan  mempunyai  khasiat dalam penyembuhan luka, menghentikan muntah, mengurangi mual, melancarkan pencernaan,  sebagai  antiseptik,  membunuh bakteri dan jamur serta virus. Rata-rata diameter daerah  hambat  terbesar  kedua  15  mm  juga berasal  dari  ekstrak  daun P.  aduncum dengan kelas kuat menghambat
bakteri Propionibacterium  acne. Menurut  Bojar  and Holland (2004) bahwa P. acne ikut serta dalam pathogenesis jerawat  dengan  menghasilkan lipase,  yang  memecahkan  asam  lemak  bebas dari  lipid  kulit.  Asam  lemak  ini  dapat menimbulkan radang jaringan dan ikut menyebabkan jerawat. Candida albican merupakan  bagian  dari  mikroba  flora  normal yang beradaptasi dengan baik untuk hidup pada tubuh  manusia,  terutama  pada  saluran  cerna, urogenital, dan kulit (Mutiawati 2016).

## Pengujian Toksisitas
Uji  BSLT  atau  uji Brine  Shrimp  Lethality Test menggunakan  hewan  uji A.  salina merupakan  uji  pendahuluan  yang  sederhana untuk  mengetahui  sitotoksisitas  keseluruhan suatu  senyawa,  dengan  cara  menentukan  nilai LC 50 dari  komponen  aktif  suatu  simplisia  atau ekstrak  tanaman.  Nilai  LC 50 ditentukan  dengan menggunakan  metode  analisis  probit  pada selang kepercayaan 95%. Nilai probit digunakan dalam  toksikologi  untuk  menentukan  toksisitas relatif  bahan  kimia  terhadap  organisme  hidup dengan  respon  berupa  kematian  organisme tersebut.  Apabila  nilai  LC 50 hasil  pengujian dibawah 1000 ppm, maka ekstrak yang diujikan memiliki  sifat  toksik  dan  berpotensi  sebagai antikanker (Meyer dkk. 1982).
Hasil  pengujian  toksisitas  ekstrak  metanol sirih hutan menunjukkan bahwa pada
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
konsentrasi 1000 μg/ml memberikan persentase kematian  sebesar  100%.  Oleh  karena  itu  dapat dikatakan bahwa kandungan komponen bioaktif yang terkandung pada ekstrak metanol akar sirih hutan  memiliki  daya  racun  yang  berpotensi merusak. Berdasarkan hasil pengujian nilai LC 50 dapat  diperoleh  dari  persaman  regresi Y = 0,0947x  +  5,9444 .  Berdasarkan  persamaan regresi  yang  diperoleh  maka  presentasi  tingkat kematian  hewan  uji  dipengaruhi  oleh  0,0947 dari  konsentrasi  ekstrak  daun  sirih  hutan  dan ditambahkan  dengan  faktor  koreksi  sebesar 5,9444. maka dapat diperoleh nilai EC 50 dengan mengganti  nilai  y  dengan  angka  50,  sehingga didapat nilai 465,212.
Maka
dengan demikian nilai dosis konsentrasi yang mematikan 50% organisme  uji  atau  LC 50 . Dari  ekstrak  metanol akar  sirih  hutan  mencapai  465,212  μg/ml. Berdasarkan  hasil  kajian  Meyer  dkk. (1982) dalam  Soemirat  (2003),  suatu  senyawa  uji dikatakan bersifat toksik dan berpotensi sebagai kandidat  antikanker  pada  pengujian  BSLT  jika memiliki nilai LC 50 lebih kecil dari 1000 μg/ml. Hasil  perhitungan  pada  penelitian  ini  diperoleh nilai  LC 50 mencapai  465,212  μg/ml  lebih  kecil dari  1000  μg/ml.  Berdasarkan  LC 50 yang diperoleh  ekstrak  akar  sirih  hutan  bersifat toksik.

## KESIMPULAN
Ekstrak  metanol  daun P.  aduncum positif mengandung triterpenoid dan steroid, sedangkan ekstrak  metanol  akar P.  aduncum positif mengandung  alkaloid,  flavonoid,  tanin,  dan kumarin,  dan  ekstrak  metanol  batang P. aduncum positif  mengandung  flavonoid  dan kumarin.  Tumbuhan P.  aduncum merupakan antioksidan  kuat  sampai  sangat  kuat.  Ekstrak metanol  daun P.  aduncum dapat  menghambat bakteri Propionibacterium acnes, Streptoccocus sobrinus,  Escherichia  coli dan  jamur Candida
albicans. Ekstrak  metanol  akar P.  aduncum dapat  menghambat  bakteri Escherichia  coli, sedangkan  tiga  bakteri  lain  menunjukan  hasil negatif.  Ekstrak  metanol  batang P.  aduncum dapat  menghambat  jamur Candida  albicans. sedangkan  tiga  bakteri  lain  menunjukan  hasil negatif.  Ekstrak  metanol  dari  akar P.  aduncum dengan  metode  BSLT  nilai  LC 50 mencapai 465,212  µg/ml,  berarti  bersifat  toksik  dan berpotensi sebagai kandidat antikanker.

## DAFTAR PUSTAKA
Al-Haiza  MA,  Mostafa  MS,  El-Kady  MY. 2003.  Synthesis  and  biological  evaluation  of some  new  coumarin  derivates. [Thesis]. Chemistry  Department  College  of  Science, King  Khalid  University.  Kingdom  of  Saudi Arabia.
Apak  RK,  Güçlü  B,  Demirata  M,  Özyürek  SE, Çelik  B,  Bektaşoğlu  KI,  Berker,  Özyurt  D. 2007.  Comparative  evaluation  of  various total  antioxidant  capacity  assays  applied  to phenolic  compounds  with  the  cuprac  assay. Molecules, 12: 1497-1547.
Astarina  NWG,  Astuti  KW,  Warditiani  NK. 2013.  SKrining  fitokimia  ekstrak  methanol rimpang bangle ( Zingiber Purpureum Roxb. ).
Jurnal Farmasi Udayana, 1-6.
Bribi  N.  2018.  Pharmacological  activity  of alkaloids: A review. Asian journal of botany, 1. doi:10.63019/ajb.v1i2.467.
Bojar  RA,  Holland  KT.  2004.  Ance  and propionibacterium  acnes . Clin.  Dermatol, 22(5): 375-9.
doi: 10.1016/j.clindermatol.2004.03.005. Cappuccino JG, Sherman N. 2001. Microbiology:  A  laboratory  manual.  6th edition, Benjamin Cummings, San Francisco. Davis WW, Stout TR. 1971. Disc plate method of microbiological antibiotic assay. Applied Microbiology, 22: 659-665.
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Dewi  RS,  Nugroho  WA,  Hendrawan  Y,  Nisa GK.  2014.  Karakterisasi  ekstrak  etanolik daun Sirih merah (Piper crocatum). [Skripsi]. Jurusan  Keteknikan  Pertanian,  Fakultas Teknologi  Pertanian,  Universitas  Brawijaya, Malang.
Dyer  LA,  Richards  J,  Dodson  CD.  2004. Isolation, synthesis, and evolutionary ecology  of Piper  amides .  Dalam  Dyer  LA, Palmer ADN (Editor). Piper: A model genus for  studies  of  phytochemistry,  Ecology,  and Evolution.  Hlm.  117–139.  New  York: Kluwer Academic/ Plenum Publishers.
Erma  NS,  Sundari  T,  Susanty  AI,  Palupi  DRO,
Isnaeni, Sukardiman.
2004. Kajian
pendahuluan uji toksisitas ekstrak air miselia dan  tubuh  buah  jamur  Shiitake  ( Lentinus edodes )  dengan  metode Brine  Shrimp Lethality  Test (BSLT).  Berk.  Penel.  Hayati, 10: 13-18.
Ghosh  R,  Darin  K,  Nath  P,  Deb  P.  2014. Review article: An overview of various piper species  for  their  biological  activities. International  Journal  of  Pharma  Research  & Review, 3(1): 67–75.
Ganiswarna  S.  1995.  Farmakologi  dan  terapi. Edisi  IV,  271-288  dan  800-810,  Bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta. Gunawan  SG.  2007.  Farmakologi  dan  terapi. Jakarta: Gaya Baru. Harborne JB. 1987. Metode fitokimia.
Terjemahan: Padmawinata, K dan Soediro, I. Institut Teknologi Bandung, Jawa Barat. Kokate  CK.  2001.  Pharmacohnosy . 16 th Ed. India: Nirali Prakasham.
Kusuma  IW,  Kuspradini  H,  Arung  ET,  Aryani F,  Min  YH,  Kim  JS,  Kim  YU.  2011. Biological activity and phytochemical analysis of three Indonesian medicinal plants, Murraya koenigii, Syzygium polyanthum and
Zingiber  purpurea. Journal  of  Acupuncture and Meridian Studies, 4,(1): 75-79.
Lenny S. 2006. Senyawa flavonoida, fenilpropanoida  dan  alkaloida.  Departemen Kimia.  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam.  Universitas  Sumatra Utara, Medan.
Makkar  HPS.  1993.  Antinutritional  factors  in foods  for  livestock.  Animal  production  in developing countries.
Occasional
Publication, 16. pp: 73. Mbadiyana  JI,  Echezona  BC,  Ugwuoke  KI, Wokocha RC. 2013. Phytochemical
constituents of some medical plants. International Jurnal of Science and Research, 2(4): 18-22.
Meyer  BN,  Ferrigni  NR,  Putnam  JE,  Jacobsen LB,  Nichols  DE,  McLaughlin  JL.  1982. Brineshrimp:  a  convenient  general  bioassay for  active  plant  constituent.  Planta  Medica, 45: 31-34. Munawaroh E, Yuzammi. 2017. Keanekaragaman Piper (Piperaceae)  dan konservasinya  di  Taman  Nasional  Bukit Barisan  Selatan,  Provinsi  Lampung.  Media Konservasi, 22(2): 118-128.
Mutiawati VK. 2016. Pemeriksaan mikrobiologi pada Candida  albicans . Jurnal  Kedokteran Syah Kuala, 16(1): 53-63.
Niwa AM, Marcarini JC, Sartori D, Maistro EL, Mantovani MS. 2013. Effects of (-)-Cubebin ( Piper cubeba ) on cytotoxicity, mutagenicity and  expression  of  p38  MAP  kinase  and GSTa2 in A Hepatoma Cell Line. Journal of Food Composition and Analysis, 30: 1–5. Nugroho  LH,  Hartini  YS.  2020.  Farmakognosi tumbuhan  obat.  Kajian  spesifik  genus  piper. Cetakan  Pertama,  Gadjah  Mada  University Press, Yogyakarta.
Robinson T. 1995. Kandungan organik tumbuhan  tinggi.  Cetakan  VI  (terjemahan). Penerbit ITB. Bandung.
@ Asosiasi Peneliti Biodiversitas Papuasia - Fakultas Kehutanan UNIPA
Sabouraud  R.  2009.  Les  teignes  1910.  Masson, Paris. Salemba Medika: Jakarta.
Siahaan S, Aryastami NK. 2018. Studi kebijakan pengembangan  tanaman  obat  di  Indonesia. Media Litbangkes, 28(3): 157-166.
Simbala  HEI,  Tallei  T.  2010. Ethnobotanical, proximate,  and  phytochemical  studies  of Areca  vestiaria Giseke  (Pinang  Yaki). International Conference on Medicinal Plant. Surabaya, 21-22 July 2010.
Soemirat  JS.  2005.  Epidemiologi  lingkungan.
Yogyakarta: Gajah Mada University Press.
Thiel  T.  1999.  Science  in  the  real  world.
Microbes  in  action.  Depertmen  of  Biology, University of Missouri. St. Louis.
Waji  AR,  Sugrani  A.  2009.  Makalah  kimia organik  bahan  alam  flavonoid  (Quercetin). Program S2 Kimia. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam.
Wiyanto A. 2022. Hutan manusia dan dinamika pengelolaanya.  Kementerian  Lingkungan Hidup  dan  Kehutanan,  Badan  Penyuluhan Dan  Pengembangan  Sumber  Daya  Manusia Pusat  Diklat  SDM  Lingkungan  Hidup  Dan Kehutanan Bogor, Jawa Barat.