## Artikel Penelitian

## Efek Hepatoprotektif Ekstrak Etanol Daun Sidaguri (Sida rhombifolia L.) terhadap Aktivitas Alkalin Fosfatase Serum Tikus yang diinduksi Karbon Tetraklorida
Hepatoprotective Activity of Ethanolic Extract of Sida rhombifolia L. Leaf in CCl 4 -induced Rats
Nisa Isneni Hanifa 1 *, Wahyu Widyaningsih 2
1 Program Studi Farmasi, Fakultas Kedokteran, Universitas Mataram, Jl Majapahit No.62, Kota Mataram, NTB 83115, Indonesia
2 Fakultas Farmasi, Universitas Ahmad Dahlan, Jl. Prof. DR. Soepomo, Kota Yogyakarta, DI Yogyakarta 55164, Indonesia
*E-mail: nisa.isneni.hanifa@unram.ac.id

## Abstrak
Hati  merupakan  organ  yang  berperan  dalam  sistem  pertahanan  dan metabolik  tubuh.  Hati  dapat  mengalami  penurunan  fungsi  fisiologi  dan bahkan  mengalami  kerusakan.  Penyebab  utama  kerusakan  jaringan  hati adalah stres oksidatif. Daun sidaguri (Sida rhombifolia L.) dilaporkan memiliki kandungan senyawa fenol dan flavonoid yang berperan sebagai antioksidan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek hepatoprotektif ekstrak etanol daun  sidaguri  terhadap  aktivitas  enzim  alkalin  fosfatase  (ALP)  serum  tikus yang  diinduksi  karbon  tetraklorida  (CCl4).  Metode  penelitian  yang digunakan  adalah  eksperimental  dengan  desain  kelompok  kontrol.  Empat kelompok tikus diberi perlakuan CMC-Na serta ekstrak daun sidaguri dosis 25,  50  dan 100 mg/kgBB  selama  21  hari,  lalu  diinduksi karbon tetraklorida (dosis  1  ml/kgBB)  i.p.  satu  jam  setelah  diberi  sampel  uji.  Terdapat  satu kelompok  kontrol  tanpa  induksi  karbon  tetraklorida.  Semua  tikus  pada kelompok  ditentukan  aktivitas  ALP  serum  pada  hari  22.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  ketiga  dosis  ekstrak  etanol  daun  sidaguri  dapat memproteksi hati dari senyawa toksik. Dari hasil tersebut dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol daun sidaguri dosis 25, 50, dan 100 mg/kgBB memiliki efek hepatoprotektif.
Kata kunci: hepatoprotektif, alkalin fosfatase, daun sidaguri

## Abstract
The liver is an organ that  plays a role in the body's defense and metabolic systems.  The  liver  can  experience  a  decline  in  physiological  function  and even experience damage. Oxidative stress is the main cause of liver damage. Sida  rhombifolia  L.  has  known  contain  phenol  and  flavonoid  compounds which  act  as  antioxidants.  The  aim  of  this  study  was  to  determine  the
hepatoprotective  effect  of  the  ethanol  extract  of  sidaguri  leaf  on  Alkaline Phosphatase  (ALP)  activity  of  rats  serum  has  been  induced  by  carbon tetrachloride  (CCl4).  This  is  an  experimental  study  with  a  control  group design.  Four  groups  of  rats  were  treated  with  CMC-Na  and  sidaguri  leaf extract  (25,  50  and  100  mg/kg  b.w  daily)  for  21  days,  then  induced  with CCl4  (dose  1  ml/kg  b.w)  i.p.  one  hour  after  being  given  the  test  sample. There is one control group without CCl4 induction. All rats in the group were determined for serum ALP activity on day 22. The test results show that three doses of the extract can protect the liver from toxic compounds. From these results, it can be concluded that ethanolic extract of Sida rhombifolia leaf at doses of 25, 50 and 100 mg/kg b.w. daily can protect the liver from oxidative stress.
Keywords: hepatoprotective, Alkaline phosphatase, Sida rhombifolia L.

## PENDAHULUAN
Hati  merupakan  organ  metabolik,  sekretorik,  dan  imunologik.  Semua substansi biologis, baik makanan, obat, toksin, dan zat yang diproduksi oleh tubuh dimetabolisme di hati. Bersama dengan ginjal, hati bertindak sebagai sistem  detoksifikasi  metabolik.  Namun,  organ  hati  dapat  berfungsi  secara optimal  jika  organ  tersebut  dalam  keadaan  baik  dan  cukup  nutrisi.  Ketika terdapat  banyak  toksin  dalam  tubuh,  organ  hati  dan  ginjal  tidak  dapat berfungsi secara optimal dan tubuh mulai menyimpan toksin dalam jaringan (Corwin, 2009).
Kerusakan  sel  hati  dapat  disebabkan  oleh  adanya  stress  oksidatif  dan inflamasi.  Faktor  stress  oksidatif  terjadi  karena  ketidakseimbangan  antara jumlah  radikal  bebas  dan  antioksidan  di  dalam  tubuh.  Salah  satu  model eksperimental  yang  sering  digunakan  untuk  menginduksi  kerusakan  hati adalah  pemberian  karbon  tetraklorida  (CCl 4 ).  Di  dalam  hati,  CCl 4 akan dimetabolisme  oleh  sitokrom  P450  membentuk  radikal  bebas  triklorometil dan reactive oxygen species (ROS). Metabolit ini akan memicu reaksi lipid peroksidasi pada membran plasma dan menyebabkan nekrosis pada sel hati (Wahid et al., 2016).
Adanya  aktivitas  enzim  hati  dalam  darah,  salah  satunya  Alkalin  fosfatase (ALP). Peningkatan aktivitas enzim ini dalam darah mengindikasikan adanya kebocoran seluler dan hilangnya fungsi integritas dari  membran plasma sel hati  (Shah et  al., 2010).  Sejauh  ini,  pilihan  terapi  obat  yang  tersedia untuk mencegah kerusakan liver dan membantu regenerasi sel hati masih terbatas, sehingga penelitian untuk menemukan agen hepatoprotektif dari bahan alam penting  untuk  dilakukan  (Gulati  et  al., 2018),  salah satunya  adalah  ekstrak tumbuhan. Potensi kekayaan flora di Indonesia perlu diungkap kemampuan dan efektivitasnya dalam memperbaiki fungsi hati.
Agen  hepatoprotektif  adalah  senyawa  yang  mampu  melindungi  bahkan memperbaiki kerusakan jaringan hati yang disebabkan oleh senyawa toksik. Beberapa  mekanisme  hepatoprotektor  antara  lain  dengan  mendetoksifikasi senyawa  toksik  menggunakan  antioksidan  baik  eksogen  dan  endogen, meningkatkan  regenerasi  sel  hati,  imunostimulan,  dan  antiinflamasi (Madrigal-santillán et al., 2014).
Herba sidaguri adalah salah satu tanaman obat yang memiliki banyak manfaat. Daun sidaguri diketahui mengandung senyawa fenolik, flavonoid, glikosida, alkaloid, dan tanin (Dhalwal et  al., 2007).  Kandungan senyawa fenolik dan flavonoid  dalam  ekstrak  tumbuhan  telah  diketahui  bertanggungjawab  pada aktivitasnya  sebagai  antioksidan  (Hanifa  et  al.,  2016).  Ekstrak  etanol  daun sidaguri  menunjukkan  aktivitas  antioksidan  pada  berbagai  uji  dengan pembanding asam askorbat, BHA, dan tokoferol asetat (Dhalwal et al., 2007; Narendhirakannan  dan  Limmy,  2010).  Selain  itu,  Dhalwal  et  al.,  (2006) menunjukkan  bahwa  ekstrak  air  akar  tanaman  sidaguri  memiliki  aktivitas hepatoprotektif  terhadap  tikus  yang  diinduksi  dengan  tioasetamid  dan  alil alkohol. Penelitian yang dilakukan Poojari et al., (2009) menunjukkan bahwa ekstrak  biji  sidaguri  memiliki  aktivitas  sebagai  hepatoprotektor.  Khasiat hepatoprotektor  dan  aktivitas  antioksidan  yang  dimiliki  sidaguri  ini diharapkan dapat menjadi alternatif antioksidan alami untuk melindungi hati dari kerusakan yang disebabkan oleh senyawa toksik. Penelitian ini bertujuan untuk  menguji  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  daun  sidaguri  dalam melindungi hati akibat pemberian CCl 4 yang dilihat dari aktivitas ALP serum tikus.

## BAHAN DAN METODE
Ekstraksi daun sidaguri
Daun sidaguri (Sida rhombifolia L.) diperoleh dari Merapi Farma, Sleman, Yogyakarta dan dideterminasi di Laboratorium Ilmu Alam Fakultas MIPA Universitas  Ahmad  Dahlan.  Sebanyak  3  kg  daun  sidaguri  dikeringkan  di bawah  sinar  matahari dengan ditutup kain  hitam.  Daun  kering dihaluskan hingga diperoleh 989 g serbuk kering. Tiap 350 g serbuk kering dimaserasi dengan 2 liter etanol 96% selama 2 hari. Maserat disaring dengan kain flanel kemudian  diuapkan  di  atas  penangas  air  hingga  diperoleh  ekstrak  etanol daun sidaguri.
Pembuatan larutan induksi CCl 4
Larutan  dibuat  dengan  mencampurkan  CCl 4 dan  minyak  zaitun  dengan perbandingan 1:1 (Ranawat et al., 2010).
Uji efek hepatoprotektif
Sebanyak 25 ekor tikus putih  galur SD (Sprague Dawley) umur 1,5 bulan dibagi  menjadi  lima  kelompok,  masing-masing  terdiri  dari  lima  ekor. Kelompok I (normal), hewan uji hanya diberi perlakuan makan dan minum dari  awal  sampai  akhir  percobaan  (hari  ke  1  sampai  21).  Kelompok  II (kontrol), hewan uji diberi suspensi CMC-Na 1% secara peroral dan CCl 4 dengan  dosis  1  ml/kgBB  secara  intra  peritoneal  1  jam  setelah  perlakuan terakhir.  Kelompok  III,  hewan  uji  diberi  suspensi  ekstrak  etanol  daun sidaguri dengan dosis 25 mg/kgBB secara peroral dan CCl 4 dosis 1 ml/kgBB secara  intra  peritoneal  1  jam  setelah  perlakuan  terakhir.  Kelompok  IV, hewan  uji  diberi  suspensi  ekstrak  etanol  daun  sidaguri  dengan  dosis  50 mg/kgBB secara peroral dan CCl 4 dosis 1 ml/kgBB secara intra peritoneal 1 jam  setelah  perlakuan  terakhir.  Kelompok  V,  hewan  uji  diberi  suspensi ekstrak etanol daun sidaguri dengan dosis 100 mg/kgBB secara peroral dan CCl 4 dosis  1  ml/kgBB  secara  intra  peritoneal  1  jam  setelah  perlakuan terakhir.
Semua kelompok diberi pakan BR II pellet (Japfa Comfeed Indonesia) dan minum ad libitum. Kelompok II, III, IV dan V diberi perlakuan selama 21 hari  pada  jam  yang  relatif  sama.  Pada  hari  ke  21,  semua  kelompok  tikus kecuali  kelompok  I,  diinduksi  CCl 4 dengan  dosis  1  ml/kgBB  secara  intra peritoneal  satu  jam  setelah  diberi  sampel  uji  untuk  mengetahui  efek kerusakan hatinya.
Dua  puluh  empat  jam  setelah  induksi  CCl 4 ,  tikus  dipuasakan,  kemudian dikorbankan dengan cara dislokasi tulang leher untuk dibedah dan diambil darahnya  di  vena  porta  hepatika.  Sampel  darah  didiamkan  30  menit kemudian disentrifugasi selama 10 menit dengan kecepatan 4000 rpm untuk mendapatkan serum.

## Penentuan aktivitas ALP
Aktivitas  ALP  ditetapkan  dari  serum  darah  berdasarkan  reaksi  enzimatik menggunakan reagen kit ALP (Sclavo Diagnostic International, Italia) yang dibaca  pada  panjang  gelombang  405  nm  dan  suhu  inkubasi  37˚C  dengan menggunakan  alat  Biochemistry  analyzer  (Caretium  NB-201,  Shenzhen Kaite Bio-Medical Electronics Technology).

## Analisis data
Hasil  diekspresikan  sebagai  rerata  ±  standar  deviasi  (SD).  Aktivitas  ALP dari  masing-masing  kelompok dianalisis statistik parametrik  yaitu  analisis varian (ANOVA) satu jalur yang kemudian dilanjutkan dengan uji Post Hoc- LSD. Nilai signifikansi kurang dari 0,05 dianggap berbeda secara signifikan (SPSS for Windows versi 15, IBM).

## HASIL

## Ekstraksi daun sidaguri
Proses  maserasi  989  g  serbuk  kering  daun  sidaguri  menghasilkan  ekstrak etanol daun sidaguri sebanyak 60,59 g. Nilai rendemen ekstrak etanol daun sidaguri yang diperoleh sebesar 6,13%.
Uji efek hepatoprotektif
Efek hepatoprotektif ekstrak etanol daun sidaguri dilihat dari nilai aktivitas ALP  serum  tikus  putih  galur  Sprague  Dawley  yang  telah  diinduksi  CCl 4 . Nilai  aktivitas  ALP  kelompok  normal  jika  dibandingkan  dengan  kontrol menunjukkan perbedaan yang signifikan. Hal ini membuktikan pemberian CCl 4 pada  tikus  mampu  meningkatkan  aktivitas  ALP  serum.  Tikus  yang diberi pra-perlakuan dengan ekstrak etanol daun sidaguri dosis 25, 50, dan 100 mg/kgBB menunjukkan penurunan signifikan aktivitas ALP serum dari kelompok kontrol (Gambar 1).
300 250 200 150 100 50
0 Normal Kontrol Dosis 25 Dosis 50 Dosis 100 Kelompok (mg/kgBB) Gambar 1. Perlakuan ekstrak etanol daun sidaguri menurunkan aktivitas ALP serum tikus  yang  diinduksi  CCl4.  Aktivitas  enzim  diukur  pada  hari  22  (pasca perlakuan)  dengan  Biochemistry  analyzer.  Nilai  aktivitas  ALP  disajikan dalam rerata ± SD (n=3). Tanda bintang menunjukkan nilai signifikansi uji Post-Hoc LSD, *p < 0,05 terhadap kelompok normal; **p < 0,005 terhadap kelompok kontrol.

## PEMBAHASAN
Kerusakan  hati  akibat  induksi  CCl 4 terlihat  dari  aktivitas  ALP  kelompok kontrol yang meningkat dan berbeda signifikan dibanding kelompok normal (p = 0,000). Pada ketiga kelompok pra-perlakuan dengan ekstrak etanol daun sidaguri, aktivitas ALP serum lebih rendah dan berbeda signifikan dibanding kelompok  kontrol  (p  =  0,000).  Aktivitas  enzim  SGPT  dan  SGOT  juga meningkat  setelah  induksi  CCl 4 pada  kelompok  kontrol,  dan  pemberian ekstrak etanol daun sidaguri menunjukkan aktivitas enzim SGPT dan SGOT yang  lebih  rendah  dibanding  kelompok  kontrol  (Irham  dan  Widyaningsih, 2017).  Ketiga  dosis  ekstrak  etanol  daun  sidaguri  memiliki  fungsi  preventif terhadap hepar dari adanya senyawa toksik yaitu karbon tetraklorida (CCl 4 ). Kemampuan ekstrak etanol daun sidaguri dalam menurunkan aktivitas ALP serum  tikus  semakin  meningkat  sebanding  dengan  semakin  besarnya  dosis pemberian suspensi ekstrak etanol daun sidaguri.
Model  hewan  tikus  yang  diinduksi  CCl 4 telah  sering  digunakan  untuk meneliti  mekanisme  kerusakan  hati  akut  dan  kronis,  tergantung  dosis  dan frekuensi injeksi yang digunakan. Berdasarkan efek kerusakan hepatoseluler CCl 4 ,  model  ini  juga  telah  banyak  digunakan  sebagai  model  terbaik  untuk mengidentifikasi  agen  hepatoprotektif.  Penelitian  oleh  Wahid  et  al.  (2016) berhasil meningkatkan aktivitas ALP dalam darah menggunakan CCl 4 dosis 0,8  ml/kgBB  i.p  2  kali  per  minggu  selama  9  minggu  untuk  menginduksi kerusakan  hati  kronis.  CCl 4 dimetabolisme  oleh  CYP2E1,  CYP2B,  dan CYP3A  untuk  membentuk  radikal  bebas  triklorometil  (CCl 3 * )  yang  dapat bereaksi dengan oksigen membentuk radikal triklorometil peroksi (CCl 3 OO * ), sebuah  spesies  yang  sangat  reaktif,  menghasilkan  kondisi  stres  oksidatif. CCl 3 OO * menginisiasi  terjadinya  reaksi  peroksidasi  lipid  menyebabkan kerusakan membran sel dan penyakit liver (Simeonova et al., 2014).
** Ak tivitas AL P (U/ L)
Aktivitas enzim hati pada serum digunakan sebagai biomarker penting dalam menilai keparahan kerusakan hepatoseluler. Peningkatan kadar enzim serum menunjukkan  hilangnya  integritas  struktural  sel  hati,  karena  secara  normal enzim  ini  berada  pada  sitoplasma  sel  hati  (Wahid  et  al.,  2016).  Serum glutamate  oxaloacetate  transaminase  (SGOT),  Serum  glutamate  pyruvate transaminase  (SGPT),  dan  serum  alkaline  phosphatase  (ALP)  adalah parameter  yang  umum  dianalisis  dari  serum  pada  semua  model hepatoprotektif.  Aktivitasnya  dalam  darah  akan  meningkat  pada  pasien dengan  akut  nekrosis  hepatik,  hepatitis,  dan  induksi  obat  maupun  CCl 4 (Delgado-Montemayor et al., 2015; Gulati et al., 2018).
Tubuh memiliki mekanisme untuk melawan stres oksidatif yang disebabkan oleh  CCl 4 dengan  bantuan  antioksidan  endogen  atau  antioksidan  eksogen. Salah  satu  sumber  antioksidan adalah  tanaman  yang  mengandung  senyawa polifenol dan flavonoid (Fernando dan Soysa, 2014), seperti sidaguri (Mah et al., 2017). Efek hepatoprotektif sidaguri telah dibuktikan oleh Dhalwal et al. (2006),  dimana  ekstrak  air  akar  sidaguri  dapat  melindungi  kerusakan  hati akibat  induksi  tioasetamid  dan  alil  alkohol.  Ramadoss  et  al.  (2012) membuktikan bahwa ekstrak etanol herba sidaguri dapat mencegah kerusakan hati.  Aktivitas  enzim  SGPT,  SGOT,  dan  ALP  yang  rendah  dan  berbeda signifikan  dengan  kelompok  kontrol  yang  diinduksi  parasetamol, menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  herba  sidaguri  dapat  memproteksi  hati dari  kerusakan.  Penelitian  kami  sebelumnya  membuktikan  bahwa  ekstrak etanol  daun  sidaguri  dapat  melindungi  hepar  berdasarkan  parameter  rasio berat hepar, dan aktivitas enzim SGPT serta SGOT (Irham & Widyaningsih, 2017).
Sidaguri  diketahui  memiliki  kandungan  senyawa  tanin,  fenolik,  kumarin (scopoletin,  scoporone),  alkaloid  indokuinolin  (quindolinone,  quindoline, cryptolepinone,  garam  cryptolepine),  glikosida  steroid  (sitosterol-3-O-β-D- glucopyranoside,  stigmasterol-3-O-β-D-glucopyranoside),  dan  flavonoid (acacetin,  kaempferol)  (Chaves  et  al.,  2013,  2017;  Dhalwal  et  al.,  2007). Normalisasi  aktivitas  enzim  hati  dalam  serum  mengindikasikan  stabilisasi membran  plasma oleh  adanya  aktivitas  antioksidan senyawa dalam  ekstrak etanol daun sidaguri yang memblokir efek metabolit radikal bebas yang dapat menyebabkan peroksidasi lipid dan kerusakan sel hati.

## SIMPULAN
Ekstrak  etanol  daun  sidaguri  dengan  dosis  25,  50,  dan  100  mg/kgBB menunjukkan  efek  hepatoprotektif  yang  potensial  dilihat  dari  penurunan aktivitas ALP serum tikus yang diinduksi CCl 4 . Kelemahan pada penelitian ini adalah belum melakukan uji kadar fenolik dan flavonoid total, serta uji aktivitas  antioksidan  untuk  menemukan  korelasi  antara  kadar  senyawa fenolik  dan  flavonoid  total  terhadap  aktivitas  antioksidan  dan  efek hepatoprotektifnya.

## REFERENSI
Chaves, O. S., Gomes, R. A., De Andrade Tomaz, A. C., Fernandes, M. G., Das Graças Mendes, L.,  De  Fátima  Agra,  M.,  &  De  Souza,  M.  D.  F.  V.,  2013.  Secondary  metabolites  from Sida  rhombifolia  L.  (Malvaceae)  and  the  vasorelaxant  activity  of  cryptolepinone. Molecules, 18(3), 2769–2777. https://doi.org/10.3390/molecules18032769 Chaves,  O.  S.,  Teles,  Y.  C.  F.,  De  Oliveira  Monteiro,  M.  M.,  Mendes  Junior,  L.  D.  G.,  De Fátima Agra, M., De Andrade Braga, V., & De Souza, M. D. F. V., 2017. Alkaloids
and  phenolic  compounds  from  Sida  rhombifolia  L.  (Malvaceae)  and  vasorelaxant activity of two
indoquinoline alkaloids. Molecules, 22(1).
https://doi.org/10.3390/molecules22010094
Corwin, E. J., 2009. Buku saku patofisiologi. (N. B. Subekti, E. K. Yudha, E. Wahyuningsih, D. Yulianti, & P. E. Karyuni, Eds.) (Ed.3). Jakarta: EGC.
Delgado-Montemayor,  C.,  Cordero-Pérez,  P.,  Salazar-Aranda,  R.,  &  Waksman-Minsky,  N.,
2015. Models of hepatoprotective activity assessment. Medicina Universitaria, 17(69), 222–228. https://doi.org/10.1016/j.rmu.2015.10.002
Dhalwal,  K.,  Deshpande,  Y.  S.,  &  Purohit,  A.  P.,  2007.  Evaluation  of  in  vitro  antioxidant activity of Sida rhombifolia (L.) Ssp. retusa (L.). Journal of Medicinal Food, 10(4), 683– 688. https://doi.org/10.1089/jmf.2006.129
Dhalwal, K., Shinde, V., Mahadik, K. R., & Kadam, S. S., 2006. Hepatoprotective activity of Sida rhombifolia ssp. retusa against thioacetamide and allyl alcohol intoxication in rats. Pharmacologyonline, 3, 259–266.
Fernando, C.  D., & Soysa, P., 2014.  Total phenolic, flavonoid contents, in-vitro antioxidant activities  and  hepatoprotective  effect  of  aqueous  leaf  extract  of  Atalantia  ceylanica.
BMC Complementary and Alternative Medicine, 14, 395. https://doi.org/10.1186/1472- 6882-14-395
Gulati,  K.,  Reshi,  M.  R.,  Rai,  N.,  &  Ray,  A., 2018.  Hepatotoxicity :  its  mechanisms, experimental evaluation and protective strategies. American Journal of Pharmacology, 1(1), 1–9.
Hanifa,  N.  I.,  Rumiyati,  R.,  Sismindari,  S.,  &  Fakhrudin,  N.,  2016.  Cytoprotective  and antioxidant effects of ethanolic extract of red dragon fruit (Hylocereus polyrhizus) and carrot  (Daucus  carota  L.).  In  AIP  Conference  Proceedings,  1755,  030004.  American Institute of Physics Inc. https://doi.org/10.1063/1.4958475 Irham,  L.  M.,  &  Widyaningsih,  W.,  2017.  Aktifitas  hepatoprotektif  ekstrak  etanol  daun sidaguri  (Sida  rhombifolia  L.)  dilihat  dari  rasio  berat  hepar,  nilai  SGPT-SGOT,  dan histopatologi  hepar  pada  tikus  Sprague  dawley  yang  diinduksi  CCl 4 .  Media  Farmasi, 14(1), 61–76. https://doi.org/10.12928/MF.V14I1.9826 Madrigal-santillán, E., Madrigal-bujaidar, E., Álvarez-gonzález, I., Sumaya-martínez, M. T., Gutiérrez-salinas, J., Bautista, M., & Morales-gonzález, J. A., 2014. Review of natural products  with  hepatoprotective  effects.  World  Journal  of  Gastroenterology,  20(40), 14787–14804. https://doi.org/10.3748/wjg.v20.i40.14787
Mah,  S.  H.,  Teh,  S.  S.,  &  Ee,  G.  C.  L.,  2017.  Anti-inflammatory,  anti-cholinergic  and cytotoxic  effects  of  Sida  rhombifolia.  Pharmaceutical  Biology,  55(1),  920–928. https://doi.org/10.1080/13880209.2017.1285322
Narendhirakannan,  R.  T.,  &  Limmy,  T.  P.,  2010.  In  vitro  antioxidant  studies  on  ethanolic extracts of leaf, stem and root of Sida rhombifolia L. International Journal of Pharma and Bio Sciences, 1(2). Retrieved from https://ijpbs.net/abstract.php?article=NTAz
Poojari, R., Gupta, S., Maru, G., Khade, B., & Bhagwat, S., 2009. Sida rhombifolia ssp. retusa seed  extract  inhibits  DEN  induced  murine  hepatic  preneoplasia  and  carbon tetrachloride hepatotoxicity. Asian Pacific Journal of Cancer Prevention, 10(6), 1107–
1112.
Ramadoss,  S.,  Kannan,  K.,  Balamurugan,  K.,  Jeganathan,  N.  S.,  &  Manavalan,  R.,  2012.
Evaluation  of  hepato-protective  activity  in  the  ethanolic  extract  of  Sida  rhombifolia Linn.  against  paracetamol-induced  hepatic  injury  in  albino  rats.  Research  Journal  of Pharmaceutical, Biological and Chemical Sciences, 3(1), 497–502.
Ranawat,  L.,  Bhatt,  J.,  &  Patel,  J.,  2010.  Hepatoprotective  activity  of  ethanolic  extracts  of bark of Zanthoxylum armatum DC in CCl 4 induced hepatic damage in rats. Journal of Ethnopharmacology, 127, 777–780. https://doi.org/10.1016/j.jep.2009.10.019 Shah,  V.  N.,  Shah,  M.  B.,  &  Bhatt,  P.  A.,  2010.  In  vivo  and  in  vitro  antioxidant  and hepatoprotective  effects  of  classical  ayurvedic  formulation  punarnavashtak  kwath against  ethanol  induced  hepatotoxicity.  Pharmacognosy  Journal,  2(16),  43–52.
https://doi.org/10.1016/S0975-3575(10)80049-5
Simeonova, R., Kondeva-Burdina, M., Vitcheva, V., & Mitcheva, M., 2014. Some in vitro/in vivo chemically-induced experimental models of liver oxidative stress in rats. BioMed
Research International, 2014, 1–6. https://doi.org/10.1155/2014/706302
Wahid,  A.,  Hamed,  A.  N.,  Eltahir,  H.  M.,  &  Abouzied,  M.  M.,  2016.  Hepatoprotective activity  of  ethanolic  extract  of  Salix  subserrata  against  CCl 4 -induced  chronic hepatotoxicity in rats. BMC Complementary and Alternative Medicine, 16(263), 1–10. https://doi.org/10.1186/s12906-016-1238-2

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terimakasih  kami  sampaikan  kepada  Direktorat  Penelitian  dan Pengabdian  kepada  Masyarakat,  Kementerian  Pendidikan  dan  Kebudayaan yang telah memberikan bantuan dana penelitian.

## KONTRIBUSI PENULIS
NIH  berperan  dalam  mengumpulkan  data,  membuat  naskah  dan  analisis statistik. WH berperan dalam membuat konsep dan rancangan. Semua penulis berkontribusi dalam merancang penelitian, interpretasi data dan menyetujui versi akhir naskah.
Akses Terbuka Artikel ini dilisensikan di bawah Creative Commons  Lisensi  Internasional  Attribution  4.0,  yang  memungkinkan penggunaan, berbagi, adaptasi, distribusi, dan reproduksi dalam media atau format apa pun, selama Anda memberikan kredit yang sesuai kepada penulis asli  dan sumbernya,  memberikan  tautan  ke  lisensi Creative Commons,  dan menerangkan  jika  perubahan  telah  dilakukan.  Gambar  atau  materi  pihak ketiga  lainnya  dalam artikel  ini termasuk dalam  lisensi  Creative Commons artikel,  kecuali  dinyatakan  sebaliknya  dalam  batas  kredit  untuk  materi tersebut. Jika materi tidak termasuk dalam lisensi Creative Commons artikel dan  penggunaan  yang  Anda  maksudkan  tidak  diizinkan  oleh  peraturan perundang-undangan atau melebihi penggunaan yang diizinkan, Anda harus mendapatkan izin langsung dari pemegang hak cipta. Untuk melihat salinan lisensi ini, kunjungi https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/deed.id .
.
© The Author(s) 2020