## PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL DAUN BAWANG MEKAH (Eleutherine Americana Merr.) TERHADAP KADAR MALONDIALDEHYDE TIKUS WISTAR (Rattus norvegicus)
JANTAN PASCA PAPARAN ASAP ROKOK
Melda Mery Andiriyani 1,*) , Eka Kartika Untari 2 , Sri Wahdaningsih 3 1. Program Studi Farmasi, Fakultas Kedokteran, Universitas Tanjungpura
2. Bagian Farmakologi Farmasi, Fakultas Kedokteran, Universitas Tanjungpura
3. Bagian Biologi Farmasi, Fakultas Kedokteran, Universitas Tanjungpura

## ABSTRACT
Malondialdehyde (MDA) is a biomarker of lipid peroxidation that is closely correlated with level of oxidative stress. The aim of this study was to know ethanol extract activities from E.americana leaves against blood plasma MDA in male  Wistar  rats  exposed  by  cigarette  smoke  using  tiobarbituric  acid  test.  The  simplicia  extracted  by  maseration using 70% ethanol. Twenty four rats were divided into six groups, i.e. : a normal group, an exposed cigarette smoke (negative) control group, a positive control group and three treatment groups. One normal group received carboxyl methyl  cellulose  and  another  groups  exposed  cigarette  smoke  during  14  days.  Positive  control  group  received vitamin  E  (18mg/kg  BW),  and  another  groups  received  ethanol  extract  of  E.americana  leaves  doses 180;  90; 45mg/kg BW, respectively. The MDA level was analysed by spectrophotometer UV-Visible in 532,2 nm. The MDA level statically analysis by Kruskal-Wallis test and following by Mann-Whitney test. The mean MDA levels of normal group,  negative  control  group,  positive  control  group  and  groups  received  ethanol  extract  of  E.americana  leaves doses 180; 90; 45mg/kg BW were 0,11±0,09; 13,74±2,84; 0,06±0,03; 10,88±2,19; 0,13±0,03; 0,03±0,02 ppm. The mean MDA levels of groups received ethanol extract of E.americana leaves doses at 180; 90mg/kg BW significantly (p<0,05)  lower  than  negative  control  group.  These  results  show  the  beneficial  effect  of  ethanol  extract  of E.americana leaves in the MDA level reducing on the rats that exposed by cigarette.

## Key words: Eleutherine americana, cigarette smoke, MDA

## I. PENDAHULUAN

## Latar Belakang
Indonesia  merupakan  negara  ketiga  yang memiliki  jumlah  perokok  aktif  terbanyak  di  dunia yaitu  61,4  juta  perokok  setelah  Cina  dan  India. Sebanyak  67  persen  pria  dan  4,5  persen wanita  di Indonesia adalah perokok. Tingginya jumlah perokok aktif  berbanding lurus dengan jumlah perokok pasif yang  terpapar  asap  rokok  (secondhand  smoke). Jumlah  penduduk  Indonesia  yang  menjadi  perokok pasif lebih dari 97 juta jiwa 1 .
Asap  rokok  merupakan  salah  satu  sumber radikal  bebas.  Radikal  bebas  dihasilkan  akibat pembakaran  tidak  sempurna 2 .  Paparan  rokok  dapat mengakibatkan  kardiomiopati  dan  reaksi  imun  di dalam  hati 3 .  Rokok  juga  dapat  mempengaruhi penurunan  antioksidan  pada  serum  yang  memicu terjadinya stres oksidatif 4 .
Salah  satu  indikator  yang  dipakai  untuk menentukan  stres  oksidatif  pada  manusia  adalah kadar  MDA  yang  merupakan  hasil  peroksidasi  lipid di  dalam  tubuh  akibat  radikal  bebas 5,6 .  Peningkatan kadar MDA dapat terjadi akibat adanya paparan asap rokok 7 . Terdapat  hubungan  antara  lama  pemaparan rokok kretek dengan peningkatan kadar MDA 8 .
Antioksidan  adalah  suatu  senyawa  yang  dapat digunakan  untuk  mengatasi  kerusakan  oksidatif akibat  radikal  bebas  atau  senyawa  oksigen  reaktif (Reactive  Oxygen  Species) 9 .  Tanaman E.americana yang  termasuk  famili Iridaceae memiliki  potensi antioksidan.  Ekstrak  etanol  bulbus E.americana memiliki  efek  antioksidan  terhadap  gambaran histopatologi  paru-paru  tikus  yang  terpapar  asap rokok 10 .  Hasil  penelitian  lain  menunjukkan  bahwa ekstrak  etanol  70%  daun E.americana yang  diuji menggunakan metode DPPH memiliki efek antioksidan  yang  sangat  aktif  dengan  nilai  IC 50 sebesar  31,97437µg/mL 11 .  Fraksi  etanol  70%  daun E.americana juga  memiliki  efek  antioksidan  setelah dilakukan  pengujian  secara in  vitro menggunakan metode DPPH dengan nilai IC 50 35,5468 μg/mL 12 .
Penjelasan  di  atas  menjadi  dasar  dilakukannya pengujian  aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak  etanol daun E.americana secara in  vivo pada  tikus  jantan. Pengujian  ini  dilakukan  dengan  pengukuran  kadar MDA tikus  wistar jantan setelah paparan asap rokok dan  pemberian  ekstrak  etanol  70  %  daun E. americana.

## II. METODOLOGI PENELITIAN A. Alat
Alat  yang  digunakan  adalah rotary  evaporator (Heodolph), oven (Memmert),  timbangan  analitik (Precisa),  desikator,  alat-alat  gelas (Pyrex  Iwaki), cawan  krusibel, bejana  maserasi,  botol  semprot, mikropipet  (Rainin E1019705K), blood  tube,  sonde oral, hot  plate  (Schott  Instrument®), blender, spot test, spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu MR 2500), Vortex  (Barnstead M37610), blue  tip, pisau scalpel, kandang  hewan  uji, vortex,  sentrifuge,  shaker, smoking  chamber berukuran  38,5x28,5x22,5  cm  dan spoit 3cc.

## B. Bahan
Bahan yang adalah simplisia daun E.americana, vitamin  E,  etanol  70%,  serbuk magnesium,  larutan  HCl  2  N,  HCl  pekat,  larutan FeCl 3 5%,  H 2 SO 4 2  N,  H 2 SO 4 pekat,  pereaksi Dragendorff,  pereaksi Wagner,  pereaksi Mayer, akuades,  aluminium    foil,  kertas  saring, CMC (carboxy  methyl  cellulose),  TBA  (thiobarbituric acid) reagent, TCA  (tri  chloro  acetate),  TMP (tetramethoxypropane),  asam  asetat  glasial,  asam asetat anhidrat.

## C. Hewan Uji
24 ekor tikus Wistar jantan.

## D. Tahap Penelitian

## 1. Determinasi Tanaman
Determinasi tanaman E.americana dilakukan di Laboratorium Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Tanjungpura. Sampel yang diserahkan berupa tanaman utuh dariakar, daun dan umbi.

## 2. Pembuatan Ekstrak
Metode  ekstraksi  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  ekstraksi  maserasi.  Proses ekstraksi dilakukan terhadap daun E.americana yang telah  dikeringkan  (simplisia).  Ekstraksi  dilakukan selama 6x24 jam menggunakan pelarut etanol 70%.

## 3. Penetapan Susut Pengeringan
Penetapan susut pengeringan adalah pengukuran  sisa  zat  setelah  pengeringan  pada temperatur  105 o C  selama  30  menit  atau  sampai berat  konstan  yaitu  tidak  terjadi  lagi  perubahan bobot  (tidak  lebih  dari  5%).  Penetapan  susut pengeringan  dilakukan  secara triplo.  Digunakan kurs porselen yang sebelumnya telah dipanaskan pada suhu 105 o C dan ditimbang setiap 30 menit
hingga  diperoleh  berat  konstan  setelah  dua  kali penimbangan.    Ekstrak  yang  digunakan  yaitu sebanyak    2,2570;  2,0400;  2,1514  g  dan dimasukkan  ke  dalam  kurs  porselen.  Kemudian ekstrak  yang  terdapat  pada  kurs  porselen dimasukkan  ke  dalam  oven.  Selama  dipanaskan penutup  kurs  porselen  dibuka.  Pemanasan dilakukan pada suhu 105 o C dan ditimbang setiap 30  menit  hingga  bobot  konstan setelah  dua  kali penimbangan.  Setiap  dilakukan  penimbangan ekstrak  terlebih  dahulu  dimasukkan  ke  dalam desikator selama 15 menit 13 .

## 4. Skrining Fitokimia Pemeriksaan Alkaloid
Larutan  ekstrak  ditambahkan  kloroform  dan amonia  kemudian  ditambahkan    1  mL  asam  sulfat  2 N dan dikocok sampai terbentuk dua lapisan. Lapisan asam  (atas)  dipipet  dan  dimasukkan  ke  dalam  tiga buah  tabung  reaksi.  Tabung  reaksi  pertama ditambahkan  dua  tetes  pereaksi Mayer.  Tabung reaksi  kedua  ditambahkan  dua  tetes  pereaksi Dragendorf.  Tabung  reaksi  ketiga  ditambahkan  dua tetes  pereaksi Wagner.  Adanya  senyawa  alkaloid ditandai  dengan  terbentuknya  endapan  putih  pada tabung  reaksi  pertama  dan  timbulnya  endapan berwarna coklat kemerahan pada tabung reaksi kedua dan ketiga 14 .

## Pemeriksaan Flavonoid
Larutan  ekstrak  sebanyak  2  ml  ditambah dengan 0,5 mL HCl pekat dan beberapa milig serbuk logam Mg. Adanya flavonoid ditandai dengan warna merah 14 .

## Pemeriksaan Saponin
Ekstrak sebanyak 50 mg dimasukkan  ke dalam tabung  reaksi,  lalu  ditambahkan  dengan  air  20  mL dan  dikocok  dengan  kuat  selama  15  menit.  Hasil positif ditunjukkan dengan terbentuknya busa dengan tinggi 2 cm 15 .

## Pemeriksaan Triterpenoid dan Steroid
Larutan  ekstrak  sebanyak  1  mL  dikeringkan  di atas  papan spot  test, ditambahkan  tiga  tetes CH3COOH anhidrat  dan  satu  tetes  larutan  H2SO4 pekat.  Warna  berubah  menjadi  merah  yang menunjukkan adanya senyawa triterpenoid dan warna berubah  menjadi  biru  yang  menunjukkan  adanya senyawa steroid 15 .

## Pemeriksaan Fenol
Larutan  ekstrak  diteteskan  di  atas  pelat  tetes dan  ditambah  larutan  FeCl3  5%.  Hasil  positif  yaitu timbul warna biru kehitaman 15 .

## Pemeriksaan Tanin
Larutan ekstrak ditambahkan larutan gelatin 1% dan larutan NaCl 10%. Hasil positif ditandai dengan terbentuknya endapan putih 15 .

## 5. Pengujian Aktivitas Antioksidan
Pemaparan  Asap  Rokok  dan  Pemberian  Ekstrak Etanol Daun E.americana
Rokok  yang  digunakan  adalah  rokok  kretek tanpa  filter.  Tikus  diberi  paparan  asap  rokok sebanyak  tiga  batang  rokok  dalam  satu  hari.  Proses pemaparan  dilakukan    pada  pagi  hari.  Pemaparan dilakukan  selama  14  hari.  Satu  jam  setelah  paparan tikus diberi ekstrak etanol daun E.americana peroral sesuai  kelompok  dosis  dan  berat  badan  tikus. Pemaparan  asap  rokok  menggunakan smoking chamber 16 .

## Perlakuan Hewan Percobaan
Penelitian  ini dibagi  menjadi  enam  kelompok sebagai berikut : a. Kelompok normal
b. Kelompok  kontrol  negatif  yang  diberi  paparan asap rokok.
c. Kelompok  kontrol  negatif  yang  diberi  paparan asap  rokok,  kemudian  diberi  vitamin  E  dosis 18 mg/kg BB.
d. Kelompok  perlakuan  yang  diberi  paparan  asap rokok,  kemudian  diberi  ekstrak  etanol  dosis 45 mg/kg BB.
e. Kelompok  perlakuan  yang  diberi  paparan  asap rokok,  kemudian  diberi  ekstrak  etanol  dosis 90 mg/kg BB.
f. Kelompok perlakuan yang  diberi  paparan  asap rokok,  kemudian  diberi  ekstrak  etanol  dosis 180 mg/kg BB.

## Pengambilan Sampel Darah
Tikus  dipuasakan  selama 24  jam.  Tikus dibunuh  dengan  cara  dislokasi  leher.  Darah  diambil melalui jantung. Darah disentrifugasi pada kecepatan 3000  rpm  selama  10  menit.  Plasma  darah  yang terletak  pada  bagian  atas  dipisahkan  dan  diambil untuk dianalisis konsentrasi MDA 17 .

## 6. Analisis Konsentrasi MDA Plasma
Pembuatan Kurva Standar Larutan stok pereaksi 1,1,3,3-
tetrametoksipropana (TMP) konsentrasi 6 M
diencerkan  menjadi  0,9;  0,8;  0,7;  0,5;  0,4;  0,3  ppm. Setiap  konsentrasi  TMP  direaksikan  dengan  1,0  mL TCA 20% dan 1,0 mL TBA 1% dalam pelarut asam asetat  glasial  50%.  Semua  larutan  kemudian diinkubasi  selama 45  menit pada suhu 95 o C. Setelah didinginkan,  larutan  disentrifugasi  pada  kecepatan 1000  rpm  selama  15  menit.  Supernatan  pada  lapisan atas  diukur  absorbansinya  dengan  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang 532,2 nm 17 .

## Pengukuran Sampel
Pengukuran  konsentrasi  dari  sampel  percobaan dilakukan  dengan  cara  yang  sama  seperti  larutan standar,  yaitu  1,0  mL  plasma  darah  direaksikan dengan  1,0  mL  TCA  20%  dan  1,0  mL  TBA  1% dalam asam asetat glasial 50%, kemudian diinkubasi selama  45  menit  pada  suhu  95 o C,  kemudian dibiarkan  dingin.  Larutan  disentrifugasi  selama  15 menit  pada  kecepatan  1000  rpm.  Supernatan dipisahkan kemudian diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang  gelombang  532,2  nm.  Konsentrasi  sampel diperoleh dengan memplot data absorbansi sampel ke dalam kurva standar 17 .

## 7. Analisis Data
Data  hasil  skrining  fitokimia  disajikan  secara kualitatif.  Kadar  MDA  dan  berat  badan  tikus  yang diperoleh  dinyatakan  sebagai  mean  dan  standar deviasi  dari  masing-masing  kelompok  (n  =  4). Analisis  statistik  dilakukan  dengan  menggunakan program  komputer Statistical  Program  Service Solution (SPSS)  versi 17 trial. Kadar  MDA  dengan ekstrak etanol daun E.americana dianalisis menggunakan  uji non  parametric yaitu  uji  Kruskal- Wallis  dan  dilanjutkan  dengan  analisa menggunakan uji  Mann-Whitney.  Uji  statistik  dilakukan  pada derajat kepercayaan 95%.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
1. Determinasi Tanaman Determinasi tanaman dilakukan di
Laboratorium Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Tanjungpura, Pontianak,  Kalimantan  Barat.  Hasil  determinasi tanaman  menunjukkan  bahwa  sampel  tanaman  yang diidentifikasi  adalah  benar  tanaman E.americana yang  memiliki  spesies Eleutherine  americana Merr. berasal dari suku Iridaceae.

## 2. Ekstraksi
Hasil ekstrak kental yang diperoleh adalah 35,7 g dengan nilai rendemen 17,85 %.

## 3. Penetapan Susut Pengeringan
Hasil  penetapan  diperoleh  persentase  susut pengeringan  ekstrak  sebesar  19,55%.  Ekstrak tersebut  termasuk dalam rentang ekstrak kental yaitu 5-30% 13,18 .

## 4. Skrining Fitokimia
Metode skrining fitokimia yang digunakan pada penelitian  ini  adalah  uji  tabung.  Senyawa  yang diidentifikasi  yaitu  alkaloid, flavonoid,  saponin, triterpenoid dan  steroid,  fenol  serta  tanin.  Hasil skrining dapat dilihat pada tabel 1.
Tebel  1.  Hasil  skrining  fitokimia  ekstrak  etanol daun E.americana
Metabolit Sekunder Keterangan Alkaloid + Flavonoid + Saponin + Triterpenoid dan Steroid + Fenol + Tanin -
Keterangan : (+) = terdeteksi, (-) = tidak terdeteksi

## 5. Pengujian Aktivitas Antioksidan Perlakuan Hewan Uji
Pengujian  antioksidan  yang  dilakukan  pada penelitian  ini  adalah  uji  secara in  vivo.  Hewan  uji dikondisikan  seperti  perokok  pasif  yang  terpapar asap  rokok  kretek  tanpa  filter.  Jumlah  rokok  yang digunakan  dalam  satu  hari  yaitu  tiga  batang  rokok. Penelitian  Dewi et  al. (2003)  menyatakan  bahwa kadar  nikotin  pada  rokok  memiliki  kandungan  yang lebih  besar  saat  dilepaskan  ke  udara  dibandingkan yang  dihirup  oleh  perokok 19 .  Pemaparan  dilakukan pada  pagi  hari  dijam  yang  sama.  Pemaparan  yang dilakukan  pada  pagi  hari  karena  hewan  tikus  akan semakin  agresif  apabila  semakin  siang  sehingga menyulitkan perlakuan  dan  dapat  meningkatkkan stres  pada  hewan  uji.  Rokok  dipaparkan  secara  akut selama  14  hari. Review jurnal  yang  dilakukan  oleh Van et  al. (2003)  menyatakan  bahwa  banyak penelitian  menggunakan paparan  akut  karena merupakan  metode  yang  relatif  mudah dan  sensitif untuk  mengetahui  efek  spesifik  dari  stres  oksidatif.
Selain  itu  paparan  akut  dapat  menyebabkan kerusakan  jaringan  akibat  peningkatan  peroksidasi lipid 20 .

## Pengambilan Sampel Darah
Pengukuran kadar MDA dilakukan pada sampel darah  hewan  uji. Bagian  darah  yang  diukur  adalah plasma  darah.  Pengukuran  pada  plasma  darah disebabkan  oleh  sebagian  besar  MDA  pada  darah terdapat  di  dalam  plasma.  Proses  pengambilan plasma  darah  dilakukan  dengan  menambahkan antikoagulan  yaitu  EDTA  sebelum  dilakukan sentrifugasi. Sentrifugasi dilakukan untuk memisahkan  supernatan  dan  platelet.  Plasma  darah terkandung pada supernatan yang dihasilkan 21 .

## Metode Pengukuran Kadar MDA
Metode yang digunakan untuk mengukur kadar MDA  adalah  metode  TBA.  TBA  mempunyai  nilai kepekaan  yang  tinggi  terhadap  radikal  bebas  dan mudah  diaplikasikan  untuk  sampel  dalam  berbagai tahap  oksidasi.  TBA  akan  bereaksi  dengan  gugus karboksilat dari MDA melalui penambahan nukleofilik  membentuk  kompleks  MDA-TBA  dalam suasana  asam  dan  membentuk  warna  merah  muda. Metode TBA menggunakan TCA 20%, TBA 1% dan asam  asetat  glasial  50%.  TCA  berfungsi  untuk mengendapkan  protein  yang  terdapat  di  dalam plasma,  sedangkan  TBA  berfungsi  sebagai  pengikat MDA pada plasma. TBA akan bereaksi dengan MDA dalam  konsidi  asam pada  suhu  95 o C  .  Oleh  karena itu,  dilakukan  penambahan  asam  asetat  glasial  dan inkubasi sampel 17,22 .

## Penentuan Kurva Baku
Pengukuran  kadar  MDA  dilakukan  dengan manggunakan  alat  spektrofotometer  UV-Vis.  Baku standar  yang  digunakan adalah  TMP.  TMP  jika direaksikan dengan TBA akan membentuk MDA dan metanol sebagai hasil sampingan. Panjang gelombang  maksimal  optimasi  yang  dihasilkan  dari penentuan  kurva  baku  yaitu  532,2  nm.  Hasil  nilai  r yang  diperoleh  yaitu  0,9930663438.  Persamaan kurva baku yang didapat yaitu y = 0,8264285714 x + 0,06580952381.
Gambar 1. Grafik Kadar MDA Plasma Tikus Wistar Jantan Pasca Paparan Asap Rokok
6. Analisis Kadar MDA
Kadar MDA yang diperoleh dianalisis menggunakan  uji  non parametrik.  Kadar  MDA  dari keenam  kelompok  dianalisis  menggunakan  uji Kruskal-Wallis.    Perbedaan  kadar  MDA  antar masing-masing  kelompok  menggunakan  uji  Mann- Whitney.  Hasil  analisis  kadar MDA  dapat  dilihat pada tabel 2.
Tabel  2.  Hasil  Analisis  Uji  Kruskal Wallis  Kadar MDA Plasma Tikus Wistar Jantan Pasca Paparan
Asap Rokok
Kelompok Perlakuan N = 4 mean±SD MDA (ppm) p-value Normal 0,11±0,09 0,003* Negatif 13,74±2,84 Vitamin E 0,06±0,03 Dosis 45mg/kg BB 10,88±2,19 Dosis 90mg/kg BB 0,13±0,03 Dosis 180mg/kg BB 0,03±0,02
Keterangan : p-value < 0,05 = perbedaan signifikan*
Pengukuran kadar MDA pada kelompok normal untuk  mengetahui  kadar  MDA  normal  sehingga  saat dibandingkan  dengan  kelompok  perlakuan  akan diketahui  telah  terjadi  stres  oksidatif  atau  tidak.  Saat keadaan  normal,  peroksida  lipid  di  dalam  tubuh
masih dapat diatasi oleh antioksidan alami (antioksidan  endogen)  yaitu  katalase, superokside dismutase (SOD) dan glutation peroksidase 23,24 . Jika dibandingkan  dengan  kelompok  negatif,  kelompok normal  memiliki  kadar  MDA  yang  berbeda signifikan.  Kelompok  negatif  memiliki  kadar  MDA yang  tinggi  dibandingkan  dengan  kelompok  normal. Kadar  MDA  yang  tinggi  disebabkan  oleh  kelompok negatif  merupakan  kelompok  yang  hanya  diberi paparan  asap  rokok  tanpa  adanya  pemberian antioksidan  eksogen.  Penelitian  yang  dilakukan Nabel et al. (2013) menunjukkan bahwa kadar MDA pada  tikus  wistar  yang  dipapar  asap  rokok  lebih tinggi dibandingkan yang tidak dipapar asap rokok 25 . Penelitian  yang  dilakukan  terhadap  manusia  juga menunjukkan  hal  yang  sama,    Sibel et  al. (2011) menyatakan  bahwa  manusia  yang terpapar  asap rokok memiliki kadar MDA yang tinggi pada plasma dibandingkan yang tidak terpapar 26 .
Kelompok  normal  jika  dibandingkan  dengan kelompok  kontrol  positif  memiliki  hasil  yang  tidak signifikan.  Kelompok  kontrol  positif  merupakan kelompok yang diberi paparan asap rokok dan diberi asupan  vitamin  E.  Vitamin  E  merupakan  vitamin yang  memiliki  nilai evidence  based paling  baik  jika dibandingkan  dengan  senyawa  lain  yang  berperan sebagai  antioksidan  untuk  menurunkan  kadar  MDA berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan  Maria et  al. (2003),  Ramesh et  al. (2007)  dan  Thirumalai et  al. (2010) 27,28,29 .    Vitamin  E mampu  meredam  radikal bebas yang dihasilkan asap rokok. Vitamin E sebagai
0.11 13.74 0.06 10.88 0.13 0.03 0 2 4 6 8 10 12 14 16 Normal Negatif Vitamin E
Dosis 45mg/kg BB Dosis 90mg/kg BB Dosis 180mg/kg BB M D A ( p p m )
antioksidan  mampu  memutus  rantai  peroksidasi lemak  dengan  menyumbangkan  ion  hidrogen  ke dalam reaksi sehingga menurunkan peroksidasi lipid. Mekanisme  penurunan  peroksidasi  lipid  diawali dengan  peran  α -tocoferol radikal  yang  kemudian berubah  menjadi  α -tocoferol peroksidase.  Dua  α - tocoferol radikal  akan  berubah  menjadi  α -tocoferol dimer yang pada akhirnya membentuk α -tocoquinone 30 .
Kelompok  perlakuan  merupakan  kelompok yang  diberi  paparan  asap  rokok  dan  asupan  ekstrak etanol  daun  bawang  mekah.  Terdapat  tiga  dosis berbeda  yang  digunakan.  Kelompok  normal  hanya memiliki  kadar  MDA  yang  signifikan  lebih  rendah dibandingkan  kelompok  dosis  45mg/kg  BB.  Dosis 45mg/kg BB memiliki kadar MDA yang lebih rendah dibandingkan kelompok kontrol negatif, namun tidak berbeda  signifikan,  sehingga  dapat  dikatakan  bahwa dosis 45mg/kg BB belum mampu menurunkan kadar MDA yang bermakna.
Kelompok  dosis  90mg/kg  BB  dan  dosis 180mg/kg  BB  memiliki  kadar  MDA  yang  tidak berbeda  signifikan  terhadap  kelompok  normal  dan kelompok  kontrol  positif,  namun  berbeda  signifikan lebih  rendah  terhadap  kelompok  kontrol  negatif  dan dosis 45mg/kg BB. Kadar MDA kelompok perlakuan yang  lebih  kecil  dibandingkan  kelompok  negatif didugakan oleh  peran  dari  senyawa  flavonoid  dan alkaloid dari ekstrak etanol daun bawang mekah yang diketahui  terkandung  di  dalam  ekstrak  setelah dilakukannya skrining fitokimia uji tabung. Widya et al. (2013)  dalam  penelitiannya  menyatakan  bahwa flavonoid  memiliki peran  sebagai  antioksidan 31 . Penelitian  Yanping et  al. (2005) dan  Rasyid et  al. (2012) mangatakan bahwa flavonoid mampu menurunkan  kadar  MDA  dengan  signifikan 32,33 . Flavonoid merupakan antioksidan eksogen yang telah terbukti  dapat  mencegah  stres  oksidatif.  Flavonoid dapat  bekerja  sebagai  antioksidan  secara  langsung maupun  tidak  langsung.  Sebagai  antioksidan  secara langsung  flavonoid  mendonorkan  ion  hidrogen sehingga  menetralisir  efek  toksik  dari  radikal  bebas. Sedangkan  sebagai  antioksidan  tidak  langsung dengan  meningkatkan  ekspresi  gen  antioksidan endogen.  Mekanisme  peningkatan  ekspresi  gen melalui  aktivasi nuclear  factor  erythroid  2  related factor 2 (Nrf2) sehingga terjadi peningkatan ekspresi gen  yang  berperan  dalam  sistesis  enzim  antioksidan endogen 34 .
Peran  alkaloid  sebagai  antioksidan  dibuktikan berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan  Nihal et  al. (2010)  yang  menyatakan  bahwa  alkaloid  memiliki efek  sebagai  antioksidan 35 .  Penelitian  lain  yang dilakukan  oleh  Fadila et  al. (2007)  menyatakan bahwa  alkaloid  mempunyai  aktivitas  antioksidan yang  kuat  sebagai  penangkap  radikal  bebas 36 .
Alkaloid  memiliki  dua  mekanisme  perlindungan sebagai  antioksidan  yaitu  melindungi  sel  dari toksisitas  dan  kerusakan  genetik  yang  disebabkan oleh oksidan H 2 O 2 yang kuat 37 .
Hasil  analisis  kadar  MDA  yang  diperoleh  dari tiga  dosis  ekstrak  etanol  daun  bawang  mekah  yang digunakan  menunjukkan  bahwa  dosis  yang  paling efektif adalah dosis 90mg/kg BB. Dosis 90mg/kg BB mampu  menurunkan  kadar  MDA  sehingga  tidak berbeda  signifikan  terhadap kelompok  normal  dan kelompok kontrol positif.

## IV. KESIMPULAN
Kesimpulan yang diperoleh dari hasil penelitian ini  yaitu  ekstrak  etanol  daun E.americana dosis 45mg/kg  BB,  90mg/kg  BB  dan  180mg/kg  BB  dapat mempengaruhi  kadar  MDA  tikus  wistar  jantan setelah terpapar asap rokok.

## DAFTAR PUSTAKA
1. World Health Organization. WHO Report on the global tobacco epidemic. World Health Organization; 2013.
2. Richard  R  Baker. Smoke  generation  inside  a burning  cigarette:    modifying  combustion  to develop cigarettes that may be less hazardous to health. Elsevier. 2006. 32(4): 373 – 385.
3. Leone  A,  L.  Landini  JR,  O  Biadi,  A  Balbarini. Smoking  and  cardiovascular  system:  cellular features of the damage. Curr Pharm Des . 2008. 14(18): 1771 – 1777.
4. Knight-Lozano, Cynthia  A, Christal  G  Young, David  L  Burow, Zhao  Yong  Hu, Dale
Uyeminami, Kent E Pinkerton, Harry
Ischiropoulos, Scott  W  Ballinger. Cigarette smoke exposure and hypercholesterolemia increase
mitochondrial damage in cardiovascular tissues. Circulation. 2002.
105(7):849 – 854.
5. Clarkson,  Priscilla  M,  Heather  S.  Thomson. Antioxidants: What role do they play in physical activity  and  health.  The  American  Journal  of Clinical Nutrition. 2000. 72(2): 637-646.
6. Souza TP,  Oliveira  PR,  Pereira  B. Physical exercise  and  oxidative  stress  effect  of  intense physical  exercise  on  urinary  chemiluminescence and  plasmatic  malondialdehyde.  Rev  Bras  Med Esporte . 2005.  11 (1):97-101.
7. Somwanshi,  Sachin  D,  Mahesh  B  Madole, Sandeep Ghuge,  Mahendra  Bikkad,  Sachin  B Ingle. Effect  of  cigarette  smoking  on  lipid peroxidation  in  semen. International  Journal  of Basic  and  Applied  Medical  Sciences. 2013. 3 (2): 289-294.
8. Mulyohadi  Ali,  Yuyun  Yueniwati. Pengaruh paparan asap rokok kretek terhadap peroksidasi lemak dan system proteksi  superoksid dismutase hepar  tikus  wistar.  Jurnal  Kedokteran  Yarsi. 2004. 12 (1) : 085-092.
9. Wulansari  D,  Chairul. Penapisan  aktivitas antioksidan  dan  beberapa  tumbuhan  obat indonesia  menggunakan  radikal  2,2-diphenyl-1 picrylhydrazyl (DPPH). Majalah Obat
Tradisional. 2011. 16 (1) 22-25.
10. Nurliani  Anni,  Santoso  Heri  Budi,  Rusmiati. Efek Antioksidan Ekstrak Bulbus Bawang Dayak (Eleutherine palmifolia) pada Gambaran Histopatologis  Paru-paru  Tikus  yang  Dipapar Asap Rokok. Bioscintiae. 2012. 9(1): 60-69.
11. Dina  Pratiwi,  Sri  Wahdaningsih,  Isnindar. Uji aktivitas antioksidan daun E.americana (Eleutherine  americana  Merr.)  dengan  metode DPPH  (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil).  Traditional Medicine Journal. 2013. 18(1): 9-16.
12. Indri SDBr Serimbing, Isnindar, Iswahyudi. Uji Aktivitas antioksidan fraksi etanol daun E.americana  (Eleutherine  Americana  Merr.) dengan metode DPPH (2,2-difenil-1-
pikrilhidrazil). Skripsi. 2013. Fakultas Kedokteran Universitas Tanjungpura Pontianak.
13. Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia. Parameter  standar  umum  ekstrak  tumbuhan obat.  Jakarta:  Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia; 2000. Hal 5, 9-12.
14. Alfinda NK, Nanik SA, Mulyadi T, Bambang K. Buku  Ajaran  Fitokimia.  Surabaya:  Airlangga University Press; 2008. Hal 19, 48-49.
15. Raaman  N. Phytochemical  Techniques.  New Delhi:  Jai  Bharat  Printing  Press;  2006.  Hal  21- 22.
16. Samuel Santos, Valenc A, Katia Da Hora, Paulo Castro,  Vera  Gonc,  Alves  Moraes,  La´Is Carvalho,  Lu´Is  Crist  ´Ov˜Ao  De  Moraes Sobrino  Porto. Emphysema  and  Metalloelastase
Expression in Mouse Lung Induced by Cigarette
Smoke. Toxicologic Pathology. 2004. Toxicologic Pathology. 32(3): 351-356.
17. Momuat,  Lydia  Irma,  Meiske  S  Sangi,  Ni  Putu Purwati. Pengaruh  VCO  mengandung  ekstrak wortel  terhadap  peroksida  lipid  plasma.  Jurnal Ilmiah Sains. 2011. 11(2): 296-301.
18. Voigt  R. Buku  Pelajaran  Teknologi  Farmasi. Yogyakarta  :  Gadjah  Mada  University  Press; 1995. Hal 564.
19. Dewi  Susanna,  Budi  H,  Hendra  F. Penentuan kadar  nikotin  dalam  asap  rokok.  Makara Kesehatan. 2003. 7(2): 38-41.
20. Van  Der  Vaart,  DS  Postma,  W  Timens,  NHT Ten  Hacken. Acute  effect  of  cigarette  smoke  on inflammation oxidative stress : a review. Thorax. 2004. 59: 713-721.
21. Hery  Winarsi. Antioksidan  Alami  dan  Radikal Bebas. Yogyakarta: Kanisius. 2007. Hal 53.
22. Yagi  K. Free  radical  in  diagnostic  medicine. New York: Plenum Pr. 1994.
23. Suryohudoyo  P. Oksidan  dan  Radikal  Bebas Jakarta : CV Sagung. 2000. Hal 31-47.
24. Sadikin  M. Biokimia  Enzim.  Jakarta:  Widya Medika. 2002. Hal 87-88.
25. Nabel AAM, Auliani’am, Joni K. Garciniamangostana Linn. pericarp  extract reduced  malondialdehyde  (MDA)  level  in cigarette smoke exposed rats. IRJES. 2013. 2(9): 1-5.
26. Sibel D, Huseyin O, Handan I, Unal E, Oguzhan S,  Zehra  S. Oxidative  stress  in  the  lungs associated  with  tobacco  smoke  exposure.  Clin Chem Lab Med. 2011. 49(12): 2007-2012.
27. Ramesh,  R.  Mahesh,  V  Hazeena  Begum. Effect of  Sesbania  grandiflora  on  lung  antioxidant defense  system  in  cigarette  smoke  exposed  rats. Internasional  Journal  of  Biological  Chemistry. 2007. 1(3): 141-148.
28. Maria  Francisca  Molina,  Isabel  Sanchez-Reus, Irene  I,  Juana  B. Quercetin,  a  flavonoid antioxidant, prevent and protect against ethanol- induced  oxidative  stress  in  mouse  liver.  Biol.
Pharm. Bull. 2003. 26(10): 1398-1402.
29. Thirumalai, SV Therasa, EK Elumalai, E David. Effect  in  vivo  of  cigarette  smoke  on  lipid peroxidation  and  antioxidant  status  in  male albino  mice.  J.  Pharm.  Sci  &  Res.  2010.  2(9):
579-582.
30. Frankel  EN. Lipid  Oxidation.  California:  The Oily Press Dundee. 1999.
31. Widya  S,  Max  RJR,  Gayatri  C. Kandungan Flavonoid  dan  Kapasitas  Antioksidan  total ekstrak  etanol  daun  binahong  (Anredera cordifolia)  Steenis.  Pharmacon.  2013.  2(1):  18-
22.
32. Yanping Z, Yanhua L, Dongzhi W.
Hypercholesterolemic  effects  of  a  flavonoid-rich extract  of  Hyper  perforatum  L.  in  rat  fed  a cholesterol-rich  diet.  J  Agric  Food  Chem.  2005.
53: 2462-2466.
33. HN  Rasyid,  YD  Ismiarto,  R  Prasetia. The efficacy  of  flavonoid  antioxidant  from  chocolate bean  extract:  prevention  of  myocyte  demage cause  by  reperfusion  injury  in  predominantly anaerobic sports. Malaysian Orthopedic Journal.
2012. 6(3): 3-6.
34. I Wayan S, I Made J. Ekstrak air daun ubi jalar ungu memperbaiki profil lipid dan meningkatkan kadar  SOD  darah  tikus  yang  diberi  makanan tinggi kolestrol. Jurnal Ilmiah Kedokteran. 2012.
43(2): 67-70.
35. Nihal  Turkmen  Erol,  Ferda  S,  Y  Sedat  V. Polyphenols,  alkaloids  and  antioxidant  activity of  different  grades  Turkish  black  tea.  GIDA. 2010. 35(3): 161-168.
36. Fadila Maiza-Benabdesselam, Sabiha K, Khalida B,  Mohamed  C,  Sandrine  A,  Yves  C,  Henry  M, Dominique  LM. Antioxidant  activities  of alkaloid  extracts  of  two  Algerian  species  of Fumaria :  Fumaria  capreolata  and  Fumaria bastardii. Rec. Nat. Prod. 2007. 1: 28-35.
37. Usama  Ramadan  Abdelmohsen,  Matthias  S, Eman  MO,  Tanja  S,  Stephanie  G,  Helga  S,  Ute H. Antioxidant  and  anti-protease  activities  of diazepinomicin  from  the  sponge-associated Micromonospora  Strain  RV115.  Mar.  Drugs. 2012. 10: 2208-2221.