Jurnal Hutan Tropika (ISSN: 1693-7643) Vol. X No.2, Desember 2016. Hal. 39-47
STRUKTUR DAN PENGEMBANGAN EMBRIO SOMATIK EKSPLAN DAUN Dyera lowii Hook.f. MELALUI TEKNIK IN-VITRO
Tri Suwarni Wahyudiningsih 1 *, Issirep Sumardi 2
1) Fakultas Pertanian, Jurusan Kehutanan, Universitas Palangka Raya, Indonesia Jl. Yos Sudarso, Kampus UPR, Palangka Raya, 73111
2) Faculty of Biology, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, Indonesia tri.s.w.basuki@gmail.com

## ABSTRACT
The  propagation  of  tree  plus Dyera  lowii can  be  anticipated  by  micropropagation  via  somatic embryogenesis. The study was aimed: 1). to determine the composition of growth regulators for induction of somatic embryos from leaf explant, 2). To study of the structure and development of somatic embryo D. lowii .  The  first  leaf  of  seedling  was  utilized  as  sources  of  explants.  The  base  leaf  explant  growth  roots directly on MS (Murashige & Skoog) medium with 2 mg/l Kinetin + 7.5 mg/l IBA, but indirectly via callus phase  at  IBA  5  mg/l.  The  middle  leaf  explant  produced  somatic  embryo  resulting  yellowish-white  and compact texture on MS  medium  with 0.2 mg/l Benzyl  Adenin + 0.5  mg/l IBA. Embryogenic callus cells have formed proembryonic stage: 2-cells, 4-cells, round, globular and heart phase.
Keywords: Micropropagation, explant, somatic embryo, pro-embryo, suspensor

## I. PENDAHULUAN
Pantung (Dyera  lowii) adalah  jenis pohon endemik hutan rawa gambut, rentan punah,  dan  Hasil  Hutan  Non  Kayu (HHBK)  unggulan  Kalimantan  Tengah. Pohon D.  lowii di  hutan  rawa  gambut berukuran  sangat  tinggi  dan  besar,  biji masak  sangat  mudah  terbang,  bersifat rekalsitran  dan  lokasi  sulit  dijangkau. Kendala tersebut dapat diantisipasi dengan teknik mikropropagasi melalui embriogenesis somatik. Menurut Costanza & McCard (2009), sel-sel yang menyusun tubuh  tumbuhan  selain  polen  dan  sel-sel telur  disebut  sel-sel  soma.  Tahapan embriogenesis  somatik  mirip  dengan proses  perkembangan  embrio  zigotik secara  alami.  Aplikasi  embriogenesis
somatik  pada  masa  yang  akan  datang untuk  multiplikasi  skala  besar  dalam waktu  singkat,  pembuatan  biji  sintetik, konservasi germplas dan  transformasi genetik. Studi mengenai embriogenesis somatik  secara in  vitro pada  tanaman bergetah  telah  sukses  dilakukan  pada tanaman Hevea  brasiliensis hingga  tahap kotiledon  (Cailloux et  al .,  1996).  Pada tumbuhan D.  lowii yang  juga  termasuk tumbuhan  bergetah  belum  dilakukan penelitian mengenai embriogenesis somatik,  sehingga  perlu  dikaji  bagaimana struktur dan perkembangan embrio somatik.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  1). Mengetahui komposisi zat pengatur tumbuh untuk induksi embrio somatik dari eksplan  daun D.  lowii ,  2).  Mengkaji
PENGEMBANGAN EMBRIO  (Tri Suwarni W. dan Issirep Sumardi )
struktur dan perkembangan embrio somatik D. lowii .

## II. METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  dilakukan  mulai  Desember 2012  sampai  November  2013.  Tempat penelitian  di  laboratorium  Bioteknologi Fakultas Biologi UGM.

## Bahan dan Alat
Bahan:  semai D.  lowii berumur  6 bulan  sebagai  sumber  eksplan  daun. Semai  tersebut  dikecambahkan  dari  biji yang  diambil  di  tegakan  hutan  tanaman jalan  Cilik  Riwut  Km  9  Palangka  Raya, Kalimantan Tengah. Daun urutan pertama dari  semai  sebagai  sumber  eksplan. Bahan-bahan  kimia  penyusun  medium Murashige  dan  Skoog/MS  (George  & Sherington,  1984), Indol  butirat  acid (IBA), Benzyl  adenin (BA),  dan  Kinetin. Peralatan  yang  digunakan  adalah laminar air  flow  cabinet untuk  menanam  eksplan, autoklaf  untuk  sterilisasi  alat,  timbangan analitik, hot-plate ,  seperangkat  alat  gelas dan logam.
Cara Kerja:
Induksi Embrio Somatik
Medium  I:  MS  +  6  kombinasi perlakuan  zat  pengatur  tumbuh  (K 0 IB 0 , K 2 IB 0.5 ;  K 4 IB 1, ;  K 6 IB 1,5 ;  K 8 IB 2 ;  K 10 IB 2,5 ).
Keterangan:  K  =  Kinetin,  IB  =  IBA,  dan angka  menandakan  konsentrasi  (mg/l). Ulangan  perlakuan  sebanyak  5.  Setiap cawan petri  terdapat  9 eksplan daun  yaitu bagian  ujung,  bagian  tengah,  dan  bagian
pangkal, masing-masing 3 eksplan. Keseluruhan sampel terdapat 270 eksplan.
Medium  II:  MS  +  3  kombinasi perlakuan (IB 0 B 0; IB 2,5 B 0,5; IB 5
B 1 ). Keterangan: IB = IBA, B = Benzyl adenin ,
dan angka menandakan konsentrasi (mg/l).  Ulangan  perlakuan  sebanyak  5. Setiap  cawan  petri  terdapat  9  eksplan yaitu  3  eksplan  bagian  ujung,  3  eksplan bagian  tengah,  dan  3  eksplan  bagian pangkal.    Seluruh  sampel  135  eksplan. Kultur  dipindah  pada  medium  yang  sama setiap  2  minggu  sekali.  Pengamatan perkembangan  embrio  somatik  dilakukan seminggu sekali menggunakan mikroskop stereo dan menggunakan mikroskop optik.
Pembuatan Preparat Anatomi
Sampel:  jaringan  kalus  embriogenik dimasukkan  ke  dalam  larutan  FAA (formalin  :  asam  asetat  :  etanol  absolut  = 5:  45:  45  v/v)  selama  24  jam  pada  suhu ruang. Sampel kemudian dicuci dengan air mengalir  selama  10  menit  dan  air  yang tersimpan  dalam  sampel  dihilangkan dengan  menggunakan  konsentrasi  etanol bertingkat. Infiltrasi xilol dilakukan selama  satu  malam  pada  suhu  37 0 C kemudian  diselubungi  dengan  parafin pada  suhu  56 0 C.  Sampel  yang  telah terselubungi  parafin  dipotong  menggu nakan  mikrotom  putar  dengan  ketebalan 5-8  µm.  Irisan  tersebut  diwarnai  dengan safranin.  Irisan  diletakkan  di  atas  gelas benda  dan  ditutup  gelas  penutup.  Bagian tepi  diberi  perekat.  Setelah  kering, preparat  diamati  dan  difoto  dengan menggunakan mikroskop optilab.

## Analisis Data
Pengamatan kualitatif berupa morfologi  dan  fisiologi  kalus,  embrio somatik (tahap pembelahan dua sel, empat
Jurnal Hutan Tropika (ISSN: 1693-7643) Vol. X No.2, Desember 2016. Hal. 39-47
sel,  fase  globuler,  fase  hati).  Respon jumlah eksplan yang mengalami pertumbuhan  dan  perkembangan  hanya sedikit,  sehingga  tidak  memenuhi  syarat untuk dilakukan uji statistik.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil Penelitian
Eksplan  adalah  bagian  kecil  jaringan atau  organ  yang  diambil  atau  dipisahkan dari tanaman induk kemudian dikulturkan. Pemilihan  eksplan  daun  dari  semai bertujuan  supaya  eksplan  mempunyai kemampuan  regenerasi  tinggi  dan  getah lebih  sedikit  dibanding  sumber  eksplan dari  pohon.  Pada  medium  I  respon  hanya satu  eksplan  pangkal  daun  tumbuh  akar secara  langsung  pada  perlakuan  K 2 IB 7,5 dan  eksplan  daun  bagian  tengah  tumbuh akar  secara  tidak  langsung  melalui  tahap kalus  pada  perlakuan  K 2 IB 5 . Pada medium  II,  perlakuan  I 0,25 B 0.1 eksplan mengalami  browning  90  %,  kontaminasi jamur  10  %.  Eksplan  daun  bagian  tengah yang  dikultur  pada  media  perlakuan I 0,5 B 0.2 tumbuh  kalus  80%,  eksplan pangkal  daun  dan  ujung  daun  hanya tumbuh kalus 10 %.
Morfologi  kalus  yang  mempunyai potensi membentuk embrio somatik
Berbagai  macam  respon  eksplan daun  bagian  tengah  yang  muncul  kalus dapat  dilihat  pada  Gambar  1.  Respon kalus  bertekstur  remah,  berwarna  putih, transparan  dan  kehijauan  tumbuh  pada bekas  irisan  tulang  daun  di  bagian  tengah (1a, 1b, dan  1c).  Pada Gambar 1d terlihat kalus  bertekstur  remah  dan  transparan tumbuh  di  daerah  tepi  tulang  daun  bekas
luka  irisan.  Kalus  bertekstur  kompak  dan berwarna kehijauan tumbuh di bagian tepi daun  bekas  irisan  membujur  (Gb.1e  dan 1g).  Pada  Gambar  1f  dan  1h  terlihat morfologi  kalus  bertekstur  kompak  dan berwarna  kekuningan  tumbuh  di  bagian tepi daun bekas irisan melintang.
Gambar 1. Berbagai macam respon eksplan  daun  bagian  tengah setelah dua bulan ditanam pada medium  MS  +  BA  0,2  mg/l  + IBA  0,5  mg/l.  Bar  =  5  mm. Tanda panah = kalus
Keterangan gambar:
a. Kalus tumbuh pada bekas irisan tulang daun di bagian tengah, terdapat embrio somatik fase globuler, kalus bertekstur remah  dan  kompak,  kalus  berwarna putih, transparan dan kehijauan.
b. Kalus tumbuh pada bekas irisan tulang daun di  bagian tengah, sebagian besar kalus  bertekstur  remah,  berwarna putih dan transparan.
c. Kalus  yang  tumbuh  pada  bekas  irisan tulang daun di bagian tengah bertekstur  remah  dan  berwarna  putih, sedang pada bekas irisan di bagian tepi

## PENGEMBANGAN EMBRIO  (Tri Suwarni W. dan Issirep Sumardi )
bertekstur kompak dan berwarna putih kekuningan.
d. Kalus hanya tumbuh pada bekas irisan tulang  daun  di  bagian  tepi  bertekstur sangat remah dan
berwarna
transparan.
e. Kalus  tumbuh  pada  bekas  irisan  di bagian  tepi  helaian,  kalus  bertekstur kompak dan berwarna kehijauan.
f. Kalus tumbuh pada bekas irisan tulang daun  bagian  tepi,  kalus  bertekstur kompak dan berwarna kekuningan.
g. Kalus  hanya  tumbuh  pada  salah  satu sisi  di  bekas  irisan  tulang  daun, terlihat eksplan mengalami browning .
h. Kalus  hanya  tumbuh  sedikit  pada salah  satu  sisi  di  bekas  irisan  tulang daun,  terlihat  eksplan  masih  berwarna hijau tua.
Kalus tumbuh dari eksplan pangkal daun terlihat pada Gambar 2a dan 2b.  Kalus  tumbuh  hampir  di  seluruh permukaan  bekas  luka.  Pada  bagian  tepi kalus  terlihat  beberapa  nodul  warna  putih dan  bertekstur  kompak  sebagai  calon embrio  somatik  stadium  globuler.  Pada bagian  lain  kalus  berwarna  kekuningan (Gb.  2a).  Pada  Gambar  2b,  kalus  hanya tumbuh dekat  tangkai daun. Kalus  berupa tonjolan-tonjolan berwarna kehijauan, cenderung  mengarah  membentuk  tunas. Pada  eksplan  ujung  daun  (Gb.2c)  kalus tumbuh  dari  bekas  irisan  ujung  tulang daun.  Pada  Gambar  2c  diperbesar  terlihat kalus  bertekstur  kompak  dan  berwarna kehijauan (Gb. 2d) cenderung membentuk primordia  tunas.  Pada  bagian  tepi  kalus bertekstur  kompak  dan  warna  putih kekuningan cenderung berpotensi
membentuk embrio  somatik pada stadium globuler (Gb. 3).
Gambar 2. Eksplan  pangkal  daun  (a  dan
b)  dan  eksplan  ujung  daun  (c) setelah dua bulan ditanam pada media  MS  +  BA  0,2  mg/l  + IBA  0,5  mg/l.  Bar  =  5  mm. Tanda panah = kalus
Keterangan gambar:
a. Kalus  tumbuh  menutupi  seluruh bekas  luka  pada  eksplan.  Embrio somatik stadium globuler berwarna  keputihan  terlihat  di bagian  salah  satu  ujung.  Kalus bertektur  kompak  dan  berwarna kekuningan.
b. Kalus bertektur kompak dan berwarna kehijauan cenderung membentuk  calon  tunas,  sedang sebagian  kalus  yang  lain  bertektur kompak dan berwarna kekuningan.
c. Eksplan ujung daun terlihat membentang,  kalus  tumbuh  pada bekas  irisan  tulang  daun  hanya pada salah satu sisi.
d. Kalus  yang  diperbesar  dari  Gb.  c, tekstur  kalus  kompak  berwarna kehijauan  cenderung  membentuk calon tunas.
Jurnal Hutan Tropika (ISSN: 1693-7643) Vol. X No.2, Desember 2016. Hal. 39-47
Gambar 3.  Embrio somatik bentuk
globuler  (tanda  panah)  pada eksplan daun bagiang pangkal setelah  dua  bulan  ditanam pada  media  MS  +  BA  0,2 mg/l + IBA 0,5 mg/l. Bar = 5 mm Anatomi sel-sel yang mempunyai potensi embriogenik
Sel-sel embriogenik diinduksi dari sel- sel  daun.  Daun  yang  telah  mengalami diferensiasi kemudian terjadi
dediferensiasi membentuk sel-sel embriogenik.
a                       b                     c
Kalus  kompak  yang  berwarna  putih kekuningan dibuat irisan melintang, kemudian preparat tersebut diamati menggunakan  mikroskop  optik  sehingga
terlihat  sel-sel  yang  mempunyai  potensi embrio  somatik.  Tahapan  perkembangan pro-embrio  (Gambar  4)  mulai  dari  pro- embrio  stadium  2  sel  (a),  empat  sel  (b), bulat  (c),  kemudian  membentuk  embrio somatik  stadium  globuler  yang  didukung dengan suspensor (d), dan stadium terpedo (e).

## Pembahasan
Komposisi  zat  pengatur  tumbuh  dan fakttor lain yang mempengaruhi induksi embrio somatik
Pada  tumbuhan D.  lowii, embrio somatik dapat diinduksi dari eksplan daun. Menurut Wang & Wei (2004 dalam Liu et al ,  2006),  eksplan  terbaik  untuk  induksi embrio  somatik  pada  tumbuhan Triticum aestivum adalah  eksplan  daun.  Eksplan daun D.  lowii membentang  setelah  tiga hari  dikulturkan.  Kalus  embriogenik berbentuk noduler.
d                              e
Pada penelitian ini digunakan medium  MS  (Murashige  dan  Skoog). Eksplan daun D. lowii yang dikultur pada medium  MS  +  0,2  mg/l  BA  +  0,5  mg/l
Gambar 4.    Irisan melintang (a,b,c) dan membujur (d) sel-sel kalus menunjukkan beberapa tahap perkembangan pro-embrio: stadium 2 sel (a), 4 sel (b), bulat (c), stadium globuler dengan suspensor (d), dan terpedo (e). Bar = 0,1 mm

## PENGEMBANGAN EMBRIO  (Tri Suwarni W. dan Issirep Sumardi )
IBA  membentuk  embrio  somatik  secara tidak langsung melalui tahap kalus.  Kalus yang berpotensi membentuk embrio somatik  berbentuk  noduler,  warna  putih kekuningan.  Namun  menurut  Anjaneyulu &  Giri  (2008),  konsentrasi  IBA  1  mg/l merupakan konsentrasi yang paling optimum  untuk  menghasilkan  embrio somatik  hingga  membentuk “seedling” dibanding  konsentrasi  lain  yaitu  0,1;  0,2; 0,5; 1,0; 2,0; 4,0 mg/l. Medium MS dan ½ MS  umum  digunakan  untuk  mendorong terbentuknya  hingga  pemasakan  embrio somatik pada spesies pohon.
Induksi  embrio  somatik  stadium globular  selain  dipengaruhi  oleh  zat pengatur  tumbuh  (ZPT)  juga  dipengaruhi oleh  faktor  dalam  (ekspresi  genetik  dan genotipe).  Genotipe  sumber  eksplan  yang berbeda  memiliki  kapasitas  embriogenik yang  tidak  sama  dan  menunjukkan perbedaan dalam hal
kemampuan mengaktifkan  elemen-elemen  kunci  pada jalur embriogenik.
Tiap genotipe
memerlukan  materi  yang  bersifat  spesifik untuk  mengoptimalkan  kapasitas  daya regenerasi  (Komatsuda,  1991 dalam Wahyudiningsih, 2000).
Menurut  Anjaneyulu  &  Giri  (2008), pada Terminalia chebula , media MS + 0,5 mg/l  BA  menghasilkan  jumlah  embrio somatik  paling  tinggi  (58±1,47).  Benzyl adenin  (BA)  berperan  pada  saat  induksi, pertumbuhan  dan  perkembangan  embrio somatik hingga terbentuk “ seedling ” pada Castanea  dentata , Pistacea  vera, dan Abies  alba >< Abies  cephalonica .  Benzyl adenin termasuk sitokinin. Sitokinin selain berperan pada proses pembelahan sel, juga berperan  mendorong  pemanjangan  sel (Salisbury & Ross, 1995b). Efek menghambat  maupun  efek  mendorong proses  pembelahan  sel  oleh  sitokinin tergantung dari adanya fitohormon lainnya,  terutama  auksin  (Wattimena,
1991). Auksin
mempengaruhi pemanjangan  suatu  sel  dengan  cara mengaktifkan  beberapa  enzim  yang  dapat menurunkan  pH  pada  dinding  sel.  Enzim tersebut bekerja memutuskan ikatan polisakarida  dinding  sel,  sehingga  terjadi pengenduran dinding sel dan pertumbuhan cepat (Salisbury & Ross, 1995b). Sitokinin pada siklus sel memiliki peranan penting yaitu memacu sitokinesis. Sitokinin  mendorong  pembelahan  sel dengan  cara  meningkatkan  peralihan  G 2 ke  mitosis  dan  meningkatkan  laju  sintesis protein  (Fosket,  1977  &  Fosket et  al ., 1981 dalam Salisbury  &  Ross,  1995b). Sitokinin  memperpendek  fase  S  dengan cara mengaktifkan DNA, sehingga ukuran salinan DNA menjadi dua kali lebih besar kemudian  laju  sintesis  DNA  digandakan (Houssa et  al., 1994 dalam Lyndon, 1998).
Morfologi  kalus yang  mempunyai potensi membentuk embrio somatik
Embrio  somatik  stadium  globular pada D. lowii berbentuk noduler, berwarna putih kekuningan (Gb 3). Hal ini seperti  bentuk  dan  warna  embrio  somatik stadium globular pada Allium cepa (Zheng et.al. ,  1998)  dan Eucalyptus  pellita (Wahyudiningsih,  2000).  Schumann et.al . dalam Bajaj  (1995)  juga  menyatakan bahwa ciri struktur embrio somatik adalah berbentuk noduler, berwarna putih transparan  dan  kekuningan.  Menurut Navarro et.al. (1997),  bentuk  kalus  yang kompak  dan  globular  merupakan  kalus yang  bersifat  embriogenik.  Karakteristik tekstur  kalus  non  embriogenik  pada D. lowii ada  yang  bertekstur  sangat  kompak dan  sangat  padat  serta  sangat  friabel  dan berair.
Pada  stadium  globular,  embrio somatik berwarna putih kekuningan
Jurnal Hutan Tropika (ISSN: 1693-7643) Vol. X No.2, Desember 2016. Hal. 39-47
setelah  dua  bulan  dikulturkan.  Namun setelah  disubkultur  pada  medium  yang sama  embrio  somatik  hanya  sampai stadium  hati  ( heart )  karena  mengalami browning .  Menurut  Carron et  al .  (1992) dalam Piyatrakul et  al .  (2012), browning berkontribusi
terhadap hilangnya
kapasitas  embriogenik  meskipun  kalus yang  mengalami browning terjadi  pada akhir  atau  selama  proses  perkembangan embrio.  Peristiwa browning pada  saat awal  proliferasi  kalus  berkontribusi  besar terhadap hilangnya kapasitas  embriogenik terutama  saat  diferensiasi  sel-sel  aktif pada  sel  meristematik  dan  embriogenik. Pada Hevea ,  peristiwa browning ini berkaitan erat dengan akumulasi polifenol yang  teroksidasi  dan  produksi  etilen  di dalam  sel.  Hal  ini  didukung  dengan aktivasi  biosintesis  etilen  dan  signal  gen pada  saat  proliferasi  pada  kalus  yang mempunyai  potensi  embriogenik  rendah dan  kalus  non-embriogenik  (Piyatrakul et a.l , 2012).
Anatomi sel-sel yang mempunyai potensi embriogenik
Induksi  embrio  somatik  pada D. lowii terjadi  melalui  tahap  kalus.    Pada Gambar  4  terlihat  hasil  irisan  melintang (a,b,c)  dan  membujur  (d)  sel-sel  kalus yang menunjukkan beberapa tahap perkembangan  pro-embrio:  stadium  2  sel (a),  4  sel  (b),  bulat  (c),  stadium  globuler (d) dan terpedo (e). Menurut Bajaj (1995), embriogenesis  secara  tidak  langsung melalui  tahap  kalus.  Embrio  somatik stadium globular berasal dari sel-sel kalus yang  bersifat  embriogenik  yang  akan membentuk  pro-embrio,  kemudian  akan tumbuh dan berkembang mengikuti stadium  globular,  jantung/hati,  terpedo dan kotiledon. Dixon (1985) menyebutkan bahwa,  pembentukan  pemula  pro-embrio
pada  umumnya  terjadi  pada  medium dengan konsentrasi auksin tinggi yaitu 1-5 ppm.  Selanjutnya  kelompok  sel  pemula pro-embrio  tersebut  dipindah  ke  dalam medium dengan konsentrasi auksin rendah/tanpa  auksin,  sehingga  terbentuk pro-embrio  baru,  sedang  pro-embrio  yang telah  ada  dirangsang  untuk  membentuk embrio bipolar.
Pada  Gambar  4d  terlihat  bahwa  sel bagian tepi mempunyai ukuran lebih kecil dibanding  sel-sel  di  bagian  tengah. Menurut  Lyndon  (1998),  sel  bagian  tepi dan  sel  bagian  tengah  pada  sel  apikal berbeda  dalam  hal  ukuran  dan  frekuensi pembelahan  sel.  Sel  pada  bagian  tengah memiliki  sel  yang  ukurannya  lebih  besar dari  sel  bagian  tepi  dan  frekuensi pembelahan  sel  lebih  rendah.  Sel  pada bagian  tepi  berukuran  lebih  kecil  dan mengalami  pembelahan  lebih  sering.  Sel bagian  tepi  tersebut  diduga  sebagai  calon meristem  ujung  batang.  Fungsi  utama meristem ujung batang sebagai sumber sel yang  mengandung  materi  seluler  yang berfungsi  untuk  pertumbuhan  lebih  lanjut membentuk primordium tunas.
Pada  penelitian  ini,  pembentukan akar terjadi pada minggu ke-3. Pembentukan akar berasal dari
diferensiasi  sel-sel  dalam  eksplan  daun yang masih bersifat meristematik. Pemberian  IBA  7,5  mg/l  menyebabkan sel-sel  yang  masih  bersifat  meristematik berdiferensiasi ke arah pembentukan akar. Sel-sel  pembentuk  akar  berturut-turut berkembang  dari  prokambium,  kambium, perisikel,  dan  akhirnya  membentuk  akar (Fahn,  1989).  Pemberian  kinetin  dan  IBA diarahkan  untuk  memacu  pembelahan, pembesaran, dan pemanjangan sel sehingga  dapat  mendorong  diferensiasi membentuk akar.

## IV. KESIMPULAN
1) Medium  MS  +  BA  0,2  mg/l  +  IBA
0,5  mg/l  dapat  menghasilkan  embrio somatik  stadium  globular  bertektur kompak serta berwarna putih kekuningan dan transparan.
2) Embrio  somatik  berasal  dari  sel-sel kalus  embriogenik  berukuran  kecil yang membentuk pro-embrio stadium: 2  sel,  4  sel,  bulat,  globular  dengan suspensor dan terpedo.

## DAFTAR PUSTAKA
Anjaneyulu,  C  dan  C.C.  Giri.  2008.
Factors  influencing  somatic  embryo maturation, high frequency germination  and  plantlet  formation in Terminalia  chebula Retz. Plant Biotechnol Rep (2008) 2:153–161.
Bajaj,  Y.P.S.  1995.  Biotechnologi  in Agriculture and Forestry 30 . Somatic Embryogenesis and Synthetic  seed  1.  Springer-Verlag. Berlin Heidelberg New York.
London.  Paris.  Tokyo.  Hongkong.
Barcelona. Budapest.
Cailloux,  F.,  J.  Julien-Guerrier,  L.
Linossier,  A.  Coudret.  1996.  Long- term  somatic  embryogenesis  and maturation  of  somatic  embryos  in Hevea  brasiliensis . Plant  Science , Volume 120: 185-196.
Costanza, A dan S. McCord. 2009. Forest biotechnology  and  its  responsible use. Institute of Forest Biotechnology. www.forestbiotech.org.
www.responsibleuse.org/resources/b iotechtrees.pdf diakses  tanggal  20 November 2013.
Dixon,  R.  A.  1985.  Plant  Cell  Culture.  A
Pratical  Approach.  IRL  PRESS. Oxford-Washington DC. Fahn, A. 1989. Plant anatomy . Diterjemahkan oleh A. Soediro & C. Kusmana. Anatomi
Tumbuhan.
Rineka Cipta George  E.F.  &  P.D.  Sherington,  1984. Plant  propagation  by  tissue  culture.
Handbook and directory of commercial  laboratories  eversley
Basingstoke. England. Liu,  C,  X.  Xia,  W.  Yin,  L.  Huang,  J.
Zhou.  2006.  Shoot  regeneration  and somatic embryogenesis from needles of  redwood  ( Sequoia  sempervirens (D.Don.)  Endl.). Plant  Cell  Rep 25:
621–628. Lyndon,  R.F.  1998. The  Shoot  Apical Meristem: Its Growth and Development. Cambridge University
Press. New York.
Navarro,  C.,  Ma  Rossa.,  Escobeda.,  and A.  Mayo.  1997.  In  vitro  plant regeneration from embriogenic culture  of  a  diploid  and  a  triploid, Cavendish  banana . Plant  Cell, Tissue and Organ Culture 51: 17-25. Kluwer Academic Publishers.
Netherlands.
Piyatrakul,  P.,  R.  A.  Putranto,  F.  Martin, M.  Rio,  F.  Dessailly,  J.  Leclercq, J.F.  Dufayard,  L.  Lardet  and  P. Montoro.  2012.  Some  ethylene biosynthesis  and  AP2/ERF  genes reveal a specific pattern of expression during somatic embryogenesis in Hevea brasiliensis. BMC Plant Biology 12:244. Salisbury,  F.B  &  C.W.  Ross.  1995a. Fisiologi Tumbuhan. Jilid 2. (Diterjemahkan  oleh  Diah  R.L  dan Sumaryono). Penerbit ITB. Bandung.
Jurnal Hutan Tropika (ISSN: 1693-7643) Vol. X No.2, Desember 2016. Hal. 39-47
Salisbury,  F.B  &  C.W.  Ross.  1995b.
Fisiologi Tumbuhan. Jilid 3. (Diterjemahkan  oleh  Diah  R.L  dan Sumaryono). Penerbit ITB. Bandung.
Wahyudiningsih,  T.S.  2000.  Struktur  dan perkembangan  embrio  somatik  dari kalus  kotiledon  dan  suspensi  pada Eucalyptus  pellita F.  Muell.  secara In  vitro. Tesis  Program  Parca Sarjana  Universitas  Gadjah  Mada. Yogyakarta. Wattimena,  L.W.  Gunawan,  N.A.  Mattik,
E.  Syamsudin,  N.M.A.  Wiendi  dan
A.  Ernawati.  1992.  Bioteknologi
Tanaman.  Institut  Pertanian  Bogor. Bogor. Zheng,  S.,  Henken,  B.,  Sofiari,  E.,
Jacobsen, E., A, Frans., Krens., Kik,
C. 1998. Factor Influencing Induction, Propagation and Regeneration  of    Mature  Zygote Embryo-Derived Callus from Allium
cepa . Plant  Cell,  Tissue  and  Organ Culture 53: 99-105. Kluwer Academic Publishers. Netherlands.