## PENGGUNAAN KITIN SEBAGAI ALTERNATIF FASE DIAM KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DALAM PRAKTIKUM KIMIA ORGANIK
Syahmani, Leny, Rilia Iriani, dan Noor Elfa Program Studi Pendidikan Kimia FKIP Universitas Lambung Mangkurat Jl. Brigjen H. Hasan Basry Banjarmasin, Indonesia e-mail :syahmani@unlam.ac.id
Abstract . Utilization of chitin as a stationary phase of TLC to separate the compound components  from  plants  had  been  carried  out.  The  objective  of  this  study  was  to investigate (1) the effectiveness of chitin as a stationary phase in TLC to separate the compound components of plants, and (2) composition of compounds in plant extracts that  can  be  separated  by  chitin.  Research  method  is  experiment  in  laboratory. Sampling  technique  of  plant  extract  (mahogany  seed,  turmeric  rhizome,  and pandanus  leaf)  using  random  sampling  technique,  while  shrimp  shrimp  skin  is shrimp  waste  from  Indu  Manis  Banjarmasin  factory.  Data  were  analyzed descriptively  qualitative.  The  results  showed  that  chitin  rendemen  successfully isolated from shrimp skin was 36,44%. Chitin is effectively used as an alternative to stationary  phase  in  TLC  to  separate  the  compound  components  from  plant  sample extracts (mahogany seeds, pandanus leaves, and turmeric rhizomes).
Keywords: chitin,  stationary  phase  of  TLC,  and  separation  of  plant  compound components.
Abstrak. Telah  dilakukan  penelitian  tentang  pemanfaatan  kitin  sebagai  fasa  diam KLT untuk memisahkan komponen senyawa dari tumbuhan. Penelitian ini bertujuan untuk  mengetahui  (1)  efektivitas  kitin  sebagai  fasa  diam  pada  KLT  untuk memisahkan  komponen  senyawa  dari  tumbuhan,  dan  (2)  komposisi  senyawa  dalam ekstrak  tumbuhan  yang  mampu  dipisahkan  oleh  kitin.  Metode  penelitian  adalah eksperimen  di  laboratorium.  Teknik  pengambilan  sampel  ekstrak  tumbuhan  (biji mahoni, rimpang kunyit, dan daun pandan) menggunakan teknik random sampling, sedangkan  kulit  udang  merupakan  limbah  kulit  udang  dari  pabrik  Indu  Manis Banjarmasin.  Data  dianalisis  secara  deskriptif  kualitatif.  Hasil  penelitian menunjukkan bahwa rendaman kitin yang berhasil diisolasi dari kulit udang sebesar 36,44%. Kitin cukup efektif digunakan sebagai alternatif fasa diam  pada KLT untuk memisahkan  komponen  senyawa  dari  ekstrak  sampel  tumbuhan  (biji  Mahoni,  daun Pandan, dan rimpang Kunyit).
Kata Kunci : kitin, fase diam KLT, dan pemisahan komponen senyawa tumbuhan.

## PENDAHULUAN
Pendekatan laboratorium dalam pembelajaran  kimia  organik  dapat  dilakukan dengan      menghubungkan  teori-teori  dan prinsip-prinsip yang diberikan dalam perkuliahan, serta verifikasinya di laboratorium  (Ricci  et  al,  1994) . Oleh  karena itu  diperlukan  adanya  relevansi  materi perkuliahan  dan  praktikum  agar  mahasiswa menemukan  prinsip  yang  sama  selama  di
laboratorium  dan  kemudian  menggunakan temuannya  sebagai  subyek  dari  bagian rangkaian  perkuliahan.  Pengalaman  konkrit yang  diperoleh  melalui  kegiatan  laboratorium sangat penting untuk  mahasiswa dalam proses belajar.  Pembelajaran  akan  lebih  efektif   jika mahasiswa  dapat  merefleksikan  pengalaman sendiri  dan  mencoba   menggunakan  apa  yang telah dipelajari.
Salah  satu  topik  percobaan  dalam Praktikum Kimia
Organik
adalah kromatografi.  Kromatografi  adalah  teknik pemisahan  campuran  berdasarkan  perbedaan kecepatan perambatan komponen dalam medium tertentu. Beberapa teknik kromatografi  yang  banyak  digunakan  antara lain  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT)  dan Kromatografi  Kolom  (KK).  Prinsip  dari  KLT di mana suatu analit bergerak melintasi lapisan fase diam di bawah pengaruh fase gerak, yang bergerak  melalui  fase  diam.  Semakin  polar suatu  senyawa  fase  gerak,  semakin  besar partisi  ke  dalam  fase  diam  gel  silika,  semakin sedikit  waktu  yang  dibutuhkan  fase  gerak untuk  bergerak  menyusuri  plat  sehingga semakin  pendek  jarak  tempuh  senyawa tersebut  menaiki  plat  dalam  waktu  tertentu (Watson, 2005).
Kromatografi  kolom  merupakan  teknik kromatografi yang menggunakan zat penyerap (fase  diam)  dalam  wadah  kaca  berbentuk buret,  fase  gerak  dituangkan  di  atas  dan menetes di bawah. Dalam kromatografi kolom, fase  diam  ditempatkan  dalam  kolom  yang dilewati  fasa  gerak  yang  dipengaruhi  oleh adanya tekanan gravitasi (Harvey, 2000).
Identifikasi  komponen  senyawa  yang terdapat dalam pigmen tumbuhan, atau bagian (daun,,  biji  atau  rimpang)  tumbuhan    dapat dilakukan menggunakan metode KLT. Metode KLT  umumnya  menggunakan  fasa  diam yaitu silika  gel,  alumina  dan  keiselguhr.  Silika  dan alumina merupakan adsorben (fasa diam) yang serba  guna,  sedangkan  keiselguhr  digunakan untuk adsorben senyawa–senyawa yang sangat
polar  (Johnson  &  Stevenson,  1991).  Silika biasanya  memberikan  hasil  yang  unggul, tersedia  dalam  berbagai  luas  permukaan  dari sebagian  besar  data  KLT,  namun  harganya relatif mahal.  Untuk itu perlu dicari alternatif penggantinya, semisal memanfaatkan kemampuan  kitin  sebagai  adsorben  logam menjadi media fasa diam pengganti silika gel.
Sumber  kitin  yang  potensial  adalah cangkang/kulit  krustasea,  yang  mengandung 30-50%  kalsium  karbonat,  dan  20-30%  kitin. Proporsi  tersebut  bervariasi  bergantung  pada jenis  krustasea  dan  musimnya  (Cho et  al. 1998). Beberapa  studi  menunjukkan  bahwa kitin  secara  ekonomis  dapat  diisolasi  dari limbah  kulit  udang  (Noerati  dan  Sanir,  2000; Riswiyanto  dkk.,  2001;  Widodo,  dkk,    2007). Kitin merupakan polimer (1-4)-2-asetamido-2- deoksi-B-D-glukosamin  (Krissetiana,  2004). Kitin  memiliki  gugus  amino  yang  bertindak sebagai donor pasangan elektron. Berdasarkan sifat inilah menjadikan kitin banyak dimanfaatkan sebagai adsorben.
Banyaknya  penelitian  yang  dilakukan mengenai pemanfaatan kitin sebagai adsorben, maka  peneliti  tertarik  untuk  melakukan pemanfaatan  kitin  dari  limbah  kulit  udang sebagai  media  fasa  diam  pada  KLT  untuk mengidentifikasi  komponen  senyawa  biji mahoni.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk:  (1) Mengetahui efektivitas kitin sebagai fasa diam pada  KLT  untuk  memisahkan  komponen senyawa  dalam  biji  mahoni,  rimpang  kunyit, dan  daun  pandan  (2)  Mengetahui  komposisi senyawa  dalam  ekstrak  biji  mahoni,  rimpang kunyit,  dan  daun  pandan  yang  mampu dipisahkan oleh kitin.

## METODE PENELITIAN
Penelitian menggunakan metode eksperimen,  yaitu  mengidentifikasi  komponen senyawa  dalam  tumbuhan  dan  menguji keefektivan  kitin  sebagai  media  fasa  diam pada  KLT  untuk  memisahkan  senyawa  dari tumbuhan. Penelitian ini dilakukan di
Laboratorium Kimia FKIP Unlam
Banjarmasin.  Penelitian  dilakukan  selama  5 bulan.
Pengambilan sampel menggunakan teknik  random  sampling.  Sampel  kulit  udang dari limbah pabrik pengolahan udang beku P.T Indu  Manis  Teluk  Tiram  Banjarmasin, sedangkan  sampel  tumbuhan  (biji  mahoni, daun pandan, dan rimpang kunyit) diperoleh di Banjarmasin.
Alat  penelitian  meliputi:  gelas  ukur  100 m,  pipet  tetes,  neraca  analitik  AND  tipe  GR- 200,  indikator  universal,  stirrer,  termometer 100 o C,  hot  plate  branstead  termolyne  tipe  Sp 47230,  kertas  saring,  corong  kaca,  cawan porselin,  blender,  oven,  plat  alumunium, bejana  pengembang,  lampu  Ultraviolet  (UV), octagon.  Bahan  penelitian  meliputi:  serbuk kulit  udang,  aquadest,  natrium  hidroksida (Merck,  p.a),  asam  klorida  (Merck,  p.a), natrium  hipoklorit,  aseton  (Merck,  p.a), kalsium sulfat, kloroform (Merck, p.a),  asetat anhidrat  (Merck,  p.a),  asam  sulfat  pekat (Merck,  p.a),  etil  asetat  (Merck,  p.a),  n- heksana  (Merck,  p.a),  biji  mahoni  ( Swietenia macrophylla (L.) King.),  daun  Pandan ( Pandanus  odoratissimus Linn) ,  dan  rimpang Kunyit ( Curcuma longa Linn ).
Prosedur  penelitian  terdiri  dari  beberapa tahap, yaitu:

## Isolasi kitin.
Isolasi kitin dari limbah kulit udang dilakukan dengan  tiga  tahap  (Kusumaningsih,  2004) yaitu:
a. Deproteinisasi. Dilakukan dengan menambahkan  250  mL  NaOH  3,5%  pada 50 g serbuk kulit limbah kulit udang dalam gelas kimia, di atas penangas air pada suhu 65 o C  selama  dua  jam  sampai  terbentuk gumpalan  putih  kemerahan.  Gumpalan  itu dipisahkan dengan cara dekantasi. Kemudian  larutan  tersebut  disaring  dan residunya  dicuci  dengan  akuades  sampai netral. Selanjutnya dikeringkan dalam oven pada suhu 60 o C selama  3 jam.
b. Dekalsifikasi.  Serbuk  kulit  udang  bebas protein  25  gram  dari  langkah  satu ditambahkan  HCl  2M  sebanyak  150  mL kemudian diaduk selama 30 menit. Dekalsifikasi ditunjukkan dengan terjadinya gelembung-gelembung  dan  dihentikan  jika tidak  muncul  gelembung  lagi.  Selanjutnya larutan  disaring  dan  residunya  dicuci dengan  akuades  sampai  netral,  kemudian dikeringkan  dalam  oven  pada  suhu  60 o C selama  3 jam.
c. Decolorisasi.  Serbuk  kulit  udang  yang sudah didekalsifikasi dimasukkan ke dalam gelas  kimia  kemudian  ditambahkan  aseton hingga terendam lalu diaduk dan didiamkan sampai kering. Sesudah kering ditambahkan NaOCl  2%  sampai  terendam,  diaduk  dan didiamkan selama 2 jam kemudian disaring, dicuci  dengan  akuades  hingga  netral. Selanjutnya  dikeringkan  dalam  oven  pada suhu 60 o C selama  3 jam. Hasilnya berupa kitin.

## Penyiapan kitin sebagai fasa diam KLT.
Menyediakan  plat  KLT  dari  aluminium berukuran  15  x  15  cm  dan  melapisi  plat dengan  bubur  kitin  sebagai  fasa  diam  yang telah  ditambahkan  kalsium  sulfat  sebanyak 13% dari massa kitin. Mengeringkan plat pada suhu kamar dan mengaktifkan dengan pemanasan  dalam  tanur  pada  suhu  105 0 C selama 30 menit. Memberi garis yang berjarak 1  cm  dari  ujung  bagian  bawahnya  dan  1  cm dari ujung bagian atas.

## Ekstraksi sampel.
Ekstraksi  sampel  dilakukan  dengan  pelarut organik yang sesuai.
(1) Biji Mahoni.  100 g biji mahoni yang telah dihaluskan  direndam  dengan  150  ml kloroform.  Bejana  dibiarkan  di  tempat yang  sejuk  dan  sesekali  diaduk.  kemudian kloroform  dievaporasi  untuk  mendapatkan ekstrak  pekatnya  (1/5  volume  semula) pada  suhu  rendah.  Menotolkan  ekstrak sampel tumbuhan masing-masing pada plat KLT  silika  gel  dan  kitin.  Memasukkan
masing-masing  plat  ke  dalam  bejana dengan fasa gerak n-heksana : etil asetat = 4:1.  Mengidentifikasi  pemisahan  noda pada  kromatogram  di  bawah  lampu Ultraviolet (UV).
(2) Rimpang  Kunyit.  100  g  rimpang  kunyit yang  telah  dihaluskan  direndam  dengan 150  ml  metanol.  Bejana  dibiarkan  di tempat  yang  sejuk  dan  sesekali  diaduk. kemudian  metanol  dievaporasi  untuk mendapatkan ekstrak pekatnya (1/5 volume  semula)  pada  suhu  yang  sesuai. Menotolkan ekstrak sampel kunyit masing-masing  pada  plat  KLT  silika  gel dan  kitin.  Campuran  eluen  kloroform  : benzene  :  metanol  (80:15:5)  sebanyak  40 mL dimasukkan ke dalam chamber diikuti dengan  plat  KLT.  Noda  pada  plat  dilihat pada  sinar  UV  254  nm  dan  noda  ditandai dengan pensil, lalu dihitung nilai Rf.
(3) Daun  Pandan.  100  g  daun  pandan  yang telah  dihaluskan  direndam  dengan  150  ml heksana/asetat  (7/3).  Bejana  dibiarkan  di tempat  yang  sejuk  dan  sesekali  diaduk. kemudian pelarut dievaporasi untuk mendapatkan ekstrak pekatnya (1/5 volume  semula)  pada  suhu  yang  sesuai. Menotolkan  ekstrak  sampel  tumbuhan masing-masing  pada  plat  KLT  silika  gel
dan kitin. Campuran eluen n- heksana/aseton  (7/3)  sebanyak  10  mL dimasukkan  ke  dalam  chamber  diikuti dengan  plat  KLT.  Kemudian  noda  pada plat  dilihat  pada  sinar  UV  254  nm  dan noda  ditandai  dengan  pensil,  lalu  dihitung nilai Rf.
Analisis data dilakukan secara deskriptif  kualitatif.  Harga  Rf  yang  diperoleh dari  KLT  dianalisis  berdasarkan  kepolaran baik  fasa  diam,  sifat  senyawa  yang  terelusi maupun  eluen  yang  digunakan  mengacu  pada pendapat  Johnson  &  Stevenson  (1991), kemudian  dibandingkan  dengan  referensi sebagai standar.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Isolasi kitin
Kulit  udang  terlebih  dahulu  dibersihkan dan  dikeringkan,  kemudian    sebanyak  200 gram  (=  4  x  50  gram)  sampel  serbuk  kulit udang  diproses  melalui  beberapa  tahap  yaitu penghilangan protein (deproteinisasi), penghilangan kalsium karbonat (dekalsifikasi), dan  penghilangan  warna  (decolorisasi)  untuk mendapatkan  kitin.  Kitin  yang  dihasilkan berupa  serbuk  halus  berwarna  putih  dengan rincian  massa  dan  rendemen  tiap  proses  pada Tabel 1.
Tabel 1. Rincian massa tiap proses pembuatan kitin
Proses Massa (g) Rendemen (%) Keterangan Deproteinisasi (penghilangan protein) 103,86 51,93 Serbuk putih kecoklatan Dekalsifikasi (penghilangan kalsium karbonat) 80,86 40,43 Serbuk putih kecoklatan Decolorisasi (penghilangan warna) 54,88 36,44 Serbuk putih Kitin yang diperoleh dari tahapan di atas, kemudian  dilakukan  penyaringan  dengan ukuran partikel 270 mesh. untuk menyeragamkan  ukuran  partikel  yang  akan dibuat  sebagai  adsorben  pada  KLT.  Serbuk kitin ini dibuat bubur untuk proses pembuatan plat  KLT.  Dalam  pembuatan  bubur  kitin  ini ditambahkan  kalsium  sulfat  sebanyak  13%
dari  massa  kitin  yang  digunakan.  Kalsium sulfat  ini  berfungsi  sebagai  pengikat/perekat serbuk kitin terhadap plat aluminium. Penambahan kalsium sulfat ini tidak memberikan  banyak  pengaruh  terhadap  plat KLT  yang  dihasilkan.  Hal  ini  dikarenakan silika gel yang digunakan sebagai pembanding kitin  pun  mengandung  13%  gips  (kalsium
sulfat)  sebagai  pengikat/perekat  (Anwar  dkk, 1993).  Plat  dapat  dibuat  dengan  cara penyebaran bubur di permukaan plat aluminium, sehingga, plat KLT yang dihasilkan  lebih  baik  dan  tidak  pecah.  Plat kemudian  dikeringkan  pada  suhu  kamar selama 15-18 jam (Anwar dkk, 1993) sebelum dilakukan  aktivasi  pada  suhu  yang  lebih tinggi.  Setelah  plat  kering  pada  suhu  kamar, barulah plat kitin diaktivasi dalam tanur (oven) pada suhu  105 0 C selama 30 menit.

## Kitin sebagai Fasa Diam KLT
Uji  KLT  ekstrak  biji  mahoni,  dilakukan dengan  dua  jenis  fasa  diam,  yaitu  silika  gel dan  kitin.  Eluen  yang  digunakan  adalah  n- heksana : etil asetat (4:1).  KLT menggunakan kedua fasa diam  kitin dan  silika gel. sehingga dapat  dilihat  pemisahan  senyawa  yang  terjadi dan  diukur  harga  Rf.  Hasil  KLT  ekstrak  biji mahoni  menggunakan  fasa  diam  kitin  dan silika  gel  dapat  dilihat  pada  Gambar  1  dan Tabel 2.
Gambar 1.  Hasil KLT ekstrak biji mahoni dengan fasa diam: (a) kitin dan (b) silika gel
Tabel 2. Harga Rf dengan senyawa yang dipisahkan oleh  fase diam kitin dan silika gel
Eluen Harga Rf (cm) Fase Kitin Harga Rf (cm) Fase Silika Nama Senyawa ( Ali et al . 2011; Lau, 2015) Warna Noda n-heksana : Etil asetat (4:1) 0,82 0,56 0,35 0,20 0,12 - 0,78 0,54 0,32 0,18 0,10 0,06 3,15-diasetil swietenolide 6-O-acetylswietenolide eikosil linolenat Asam linoleat Asam oleat Asam stearat Coklat Coklat Coklat Coklat Coklat Coklat
KLT  menggunakan  fasa  diam  kitin memberikan  lima  bercak  noda  sebagai komponen  senyawa  biji  mahoni.  Bercak  ini ditampakkan  (dideteksi)  menggunakan  lampu UV dengan panjang gelombang (λ) = 365 nm, Pada  silika  gel,  hasil  KLT  noda  dapat dideteksi  menggunakan  lampu  UV  dengan panjang  gelombang  (λ)  =  254  nm  ekstrak kloroform biji mahoni memberikan enam noda dengan harga Rf dan masing-masing senyawa. Jadi,  fasa  diam  silika  gel  mempunyai
kemampuan  yang  lebih  baik  dibandingkan dengan  fasa  diam  kitin  karena  silika  gel mampu  memisahkan  komponen  senyawa  dari biji  mahoni  dapat  dilihat  pada  Tabel  2  dan struktur senyawanya pada Gambar 2.
Identifikasi  komponen  ekstrak  rimpang kunyit  menggunakan  KLT  dengan  fase  diam kitin  dan  silika  gel  setelah  dielusi  dengan campuran eluen kloroform : benzena : metanol (80:15:5)  mampu  memisahkan  komponen senyawa dari rimpang kunyit pada Gambar 3.
Gambar 2.  Struktur komponen senyawa kimia dari biji mahoni
Gambar 3.  Hasil KLT ekstrak  rimpang kunyit dengan fasa diam: (a) kitin,  (b) silika gel disinari UV, (c) silika gel.
KLT menggunakan fasa diam kitin memberikan dua bercak noda sebagai komponen  senyawa  dari  rimpang  kunyit  yang dideteksi  menggunakan  lampu  UV  dengan panjang  gelombang  (λ)  =  365  nm,  sedangkan pada  fase  diam  silika  gel,  hasil  KLT memberikan  tiga  noda  dengan  harga  Rf  dan
masing-masing senyawa. Jadi, fasa diam silika gel  mempunyai  kemampuan  yang  lebih  baik dibandingkan  dengan  fasa  diam  kitin  karena silika  gel  mampu  memisahkan  komponen senyawa  dari  rimpang  kunyit  dapat  dilihat pada Tabel 3.

## Tabel 3. Hasil KLT ekstrak rimpang kunyit menggunakan fasa diam kitin dan silika gel
Rf (cm) Fase Kitin Rf (cm) Fase Silika Rf (cm) Referensi Nama Senyawa (Pothitirat & Gritsanapan, 2005) R1 R2 - 0,66 0.69 ± 0.02  Kurkumin  (jingga-kuning) OMe OMe 0,52 0,50 0.51 ± 0.02  Demetoksikurkumin (kuning) H  OMe 0,39 0,40 0.39 ± 0.02  Bisdemetoksikurkumin (kuning)  H H
Gambar 4  Hasil KLT ekstrak daun pandan dengan fasa diam: (a) kitin, dan  (b) silika gel disinari UV (c) silika gel.
Gambar  4.  menunjukkan  nilai  hasil percobaan  dan  Rf  teoritis  untuk  pigmen ekstrak daun pandan. Ekstrak lalu diuji dengan TLC  menggunakan  pelarut  n-heksana/aseton (7/3). KLT  menggunakan  fasa  diam  kitin memberikan  lima  bercak  noda  sebagai komponen  senyawa  dari ekstrak  daun  pandan, sedangkan  pada  fase  diam  silika  gel,  hasil
KLT memberikan enam noda dengan harga Rf dan  masing-masing  senyawa.  Jadi,  fasa  diam silika  gel  mempunyai  kemampuan  yang  lebih baik  dibandingkan  fasa  diam  kitin  karena silika  gel  mampu  memisahkan  komponen senyawa  dari  daun  pandan  dapat  dilihat  pada Tabel 4.
Tabel 4. Hasil KLT ekstrak daun pandan menggunakan fasa diam kitin dan silika gel Rf (cm) Fase Kitin Harga Rf Fase Silika Rf (cm) Referensi Pigmen (Briton et. al ., 1995; Griffin et. al ., 2004; Tomkins & Miller, 1994) 0,29 0,26 0,1-0,3 Ksantofil – Lutein (kuning) 0,35 0,33 0,32 Klorofil b (hijau muda) 0,44 0,43 0,44 Klorofil a (hijau tua) - 0,50 0,49 Feofitin b (coklat kekuningan) 0,67 0,64 0,60 Feofitin a (hijau kecoklatan) 0,84 0,85 0,88-0,95 β -karoten (kuning terang-jingga)
Fraksi yang berwarna hijau tua menunjukkan klorofil a banyak terisolasi pada ekstrak  ini.    Briton et.  al .  (1995)  juga memberikan hasil yang sama, dimana nilai Rf karoten  0,88  dan  ksantofil  0,10-0,30  dalam pelarut  aseton  :  heksana  dengan  perbandingan 5:95  (v/v).  Pigmen  daun  klorofil  yang berwarna  hijau  mempunyai  sifat  tidak  stabil. Selama  pemanasan,  akan  terjadi  pelepasan asam-asam  organik  dari  jaringan yang berdampak pada pembentukan feofitin. Pemanasan  juga  memberi  pengaruh  terhadap aktivitas enzim klorofilase dan enzim lipoksigenase.  Klorofilase  merupakan  satu- satunya  enzim  yang  dapat  mengkatalis degradasi  klorofil  (Manurung  dalam  Arfandi, 2013).  Klorofil  a  terdegradasi  membentuk sebuah  feofitin  a  yang  berwarna  hijau kecoklatan,  komponen  yang  sama  juga terbentuk  untuk  feofitin  b  dari  klorofil  b. Feofitin  memacu  perubahan  warna  pada  daun dari  kuning  menjadi  coklat.  Menurut  Gross (1991)  feofitin  adalah  derivat  klorofil  bebas magnesium.  Jadi  pigmen  pada  daun  pandan jika dianalisis nilai Rf dan warna pigmen yang dihasilkan  dengan  struktur  senyawa-senyawa kimia seperti pada Gambar 5.
Uji  ekstrak  metanol  dan  air  dari  daun  pandan menunjukkan  hasil  positif  adanya  alkaloid, karbohidrat,  protein,  steroid,  sterol,  senyawa fenol,  tanninsterpenes,  flavonoid,  gusi  dan lendir,  saponin,  dan  glikosida.  Senyawa fenolik  dalam  ekstrak  tumbuhan  ini  sebagian besar mempunyai aktivitas antioksidan (Mahalingam et al. , 2012).
Berdasarkan  percobaan yang  telah dilakukan dapat diketahui bahwa kitin sebagai fasa  diam  pengganti  silika  gel,  mampu memisahkan  senyawa  komponen  pada  sampel ekstrak  tumbuhan.  Kemampuan  kitin  untuk memisahkan  komponen  senyawa  tumbuhan cukup efektif, meskipun TLC silika gel masih lebih  baik  dalam  pemisahan  komponen senyawa  dari  tumbuhan.  Hal  ini  disebabkan oleh  banyak  pengaruh,  di  antaranya  adalah perbedaan  ketebalan  antara  plat  silika  gel dengan  plat  kitin  yang  digunakan.  Hal  ini terjadi  karena  plat  silika  gel  merupakan  plat yang dibuat oleh pabrik yang sudah distandarisasi,  sedangkan  plat  kitin  dibuat secara  manual.  Hal  inilah  yang  menyebabkan perbedaan tingkat  efektivitas pemisahan terhadap ekstrak tumbuhan. Perbedaan struktur  dan  gugus  aktif  antara  silika  gel  dan
kitin  juga  menyebabkan  adanya  perbedaan hasil KLT.
Silika  gel  adalah  bentuk  dari  silikon dioksida  (silika).  Atom  silikon  dihubungkan oleh  atom  oksigen  dalam  struktur  kovalen yang  besar.  Namun,  pada  permukaan  silika gel,  atom  silikon  berlekatan  pada  gugus  -OH. Permukaan  silika  gel  sangat  polar  dan karenanya gugus -OH dapat membentuk ikatan hidrogen  dengan  senyawa-senyawa  yang sesuai  di  sekitarnya,  seperti  halnya  gaya  van der  Waals  dan  interaksi  dipol-dipol.  Ketika pelarut mulai membasahi plat, pelarut pertama akan  melarutkan  senyawa-senyawa  dalam
bercak  yang  telah  ditempatkan  pada  garis dasar.  Senyawa-senyawa  akan  cenderung bergerak  pada  plat  kromatografi  sebagaimana halnya  pergerakan  pelarut  dengan  kecepatan tergantung pada:
1) Bagaimana  kelarutan  senyawa  dalam pelarut. hal ini bergantung pada bagaimana besar  interaksi  antara  molekul-molekul senyawa dengan pelarut.
2) Bagaimana  senyawa  melekat  pada  fasa diam, misalnya silika gel dan kitin. Hal ini tergantung pada bagaimana besar interaksi antara senyawa dengan silika gel dan kitin.
Gambar 5  Struktur komponen senyawa kimia dari daun Pandan
Senyawa  yang  dapat  membentuk  ikatan hidrogen  akan  melekat  pada  silika  gel  dan kitin  lebih  kuat  dibanding  senyawa  lainnya. Hal  ini  dapat  dikatakan  bahwa  senyawa  ini terelusi lebih  kuat  dari  senyawa  yang  lainnya.
Pengelusian  merupakan  pembentukan  suatu ikatan  dari  satu  senyawa  pada  permukaan. Terdapat  perbedaan  bahwa  ikatan  hidrogen pada  tingkatan  yang  sama  dan  dapat  larut dalam  pelarut  pada  tingkatan  yang  sama  pula.
Ini  tidak  hanya  merupakan  interaksi  antara senyawa  dengan  fasa  diam.  Interaksi  antara senyawa dan pelarut juga merupakan hal yang penting karena akan mempengaruhi bagaimana mudahnya senyawa ditarik pada larutan keluar dari permukaan fasa diam.
Pada  KLT  ada  dua  interaksi  yang mempengaruhi  harga  Rf  senyawa  yaitu interaksi  senyawa  dengan  fasa  diam  dan interaksi  dengan  eluen.  Menurut  Johnson  & Stevenson  (1991)  untuk  fasa  diam  silika  gel urutan  penambatan  senyawa  yang  lebih  kuat adalah  senyawa  yang  lebih  polar  (seperti golongan asam karboksilat). Hal ini dikarenakan  pada  silika  gel  terdapat  gugus  – OH  yang  berinteraksi  dengan  gugus  karboksil
(COO - )    pada  eluen  campuran  n-heksana  dan etil  asetat  (baik  dalam  bentuk  interaksi  dipol- dipol  maupun  ikatan  hidrogen).  Hal  ini mengakibatkan  senyawa  golongan  ini  mudah untuk  terelusi  oleh  campuran  eluen  yang bersifat  cenderung  lebih  polar  (Sherma  & Fried,  2003).  Sedangkan,  pengikatan  oleh gugus aktif pada kitin tidak hanya pada gugus hidroksil  saja,  tetapi  juga  pada  gugus asetamida.  Gugus  asetamida  inilah  yang mempengaruhi kemampuan eluen untuk memisahkan  senyawa,  sehingga  pada  kitin hanya mampu memisahkan 5 (lima) noda saja. Struktur  dari  masing-masing  fasa  diam  silika gel dan kitin disajikan pada Gambar 6.
Gambar 6. Gugus aktif silika gel dan kitin
Silika  gel  tersusun  atas  unsur  silikon, sedangkan  pada  kitin  monomernya  tersusun atas  atom  karbon.  Silikon  dan  karbon  terletak pada  satu  golongan,  tetapi  silikon  pada struktur  silika  gel  mempunyai  periode  lebih besar  dari  karbon  yang  terikat  pada  kitin. Sehingga, silikon pada silika gel memiliki jari- jari  atom  yang  lebih  besar  daripada  karbon pada kitin. Hal inilah yang menjadi salah satu penyebab  mengapa  silika  gel  lebih  banyak memisahkan senyawa dari tumbuhan dibandingkan dengan kitin pada KLT. Agar  dalam  melaksanakan  praktikum
dapat maksimal, mahasiswa perlu memperhatikan  apa  yang  akan  dikerjakan  dan bagaimana cara mengerjakannya dengan  teliti. Manfaat  bagi  mahasiswa,  akan  memperoleh keterampilan-keterampilan  melalui “learning by doing” yaitu:
a) keterampilan  dasar  laboratorium  seperti mengamati  dengan  teliti  dan  sistematik, melakukan  penyelidikan,  mengumpulkan data (tabulasi, atau rekaman), dan melakukan penelitian
b) keterampilan mengorganisasi seperti melakukan perekaman data, membandingkan, membedakan, mengklasifikasi, mengevaluasi, dan menganalisis.
c) keterampilan  kreatif  seperti  membuat perencanaan yang akan datang, merancang pembuatan  KLT,  menemukan  eluen  yang tepat,  mencipta  metode  pemisahan  dan melakukan sintesis senyawa organik.
d) keterampilan manipulatif seperti menggunakan  instrumen  (mengetahui  cara memakainya dan keterbatasannya), melakukan eksperimen, melakukan
perbaikan dan kalibrasi terhadap instrumen. e) Keterampilan komunikatif seperti mengajukan pertanyaan,
diskusi, mengkritik  yang  konstruktif,  mampu melakukan  interpretasi  data,  dan  membuat laporan  tertulis  tentang  eksperimen  yang dilakukan.Selain  itu  mahasiswa  dilatih menemukan kebenaran melalui kesimpulan-kesimpulan  yang  tepat  dari data  (fakta)  yang  dapat  diamati  atau diperoleh.

## PENUTUP Simpulan
Berdasarkan  uraian  di  atas  maka dapat  disimpulkan  bahw  limbah  udang memiliki  potensi  yang  besar  untuk  diolah menjadi  kitin  karena  ketersediaan  limbah udang  sebagai  bahan  baku  cukup  besar  dan mudah  diolah.  Kitin  cukup  efektif  digunakan sebagai  alternatif  fasa  diam    pada  KLT  untuk memisahkan  komponen  senyawa  dari  ekstrak sampel  tumbuhan  (biji  mahoni,  daun  pandan, dan rimpang kunyit),

## Saran
1) Variasi  campuran  dan  perbandingan  eluen untuk  optimalisasi  kitin  sebagai  fasa  diam pengganti silika gel.
2) Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai  penggunaan  kitin  sebagai  fasa diam  kolom  pengganti  silika  gel  untuk memisahkan senyawa organik.

## DAFTAR RUJUKAN
Adkar, P.P., & Bhaska, V.H. (2014). Pandanus odoratissimus  (Kewda):  A  Review  on Ethnopharmacology, Phytochemistry, and  Nutritional  Aspects. Advances  in Pharmacological Sciences . 2014: 1-19
Ali,  M.A.,  Sayeed,  M.A.,    Islam,  M.S., Yeasmin,  M.S.,  Khan,  G.R.M.A.M.  & Muhamad, I. I.  (2011). Physicochemical and
Antimicrobial Properties of Trichosanthes Anguina  and Switenia
Mahagoni Seeds. Bull. Chem. Soc. Ethiop , 25(3): 427-436.
Anwar,  C.,  B.  Purnowo,  H.  Dwi  Pranowo,  T. Dwi  Wahyuningsih.  (1993). Pengantar
Praktikum  Kimia  Organik .  Yogyakarta: Departemen Pendidikan dan Kebudayaan. Arfandi,  A.,  Ratnawulan,  &  Darvina,  Y. (2013).  Proses  Pembentukan  Feofitin Daun Suji sebagai Bahan Aktif Photosensitizer Akibat
pemberian Variasi Suhu. Pillar of Physics , 1: 68-76. Britton,  G.,  Liaen-Jensen,  S.,  &  Pfander,  H.
(1995) Carotenoids: Isolation and Analysis ,  Vol.  IA,  Birkhauser  Verlag,
Basel, p.240.
Cho, Y.I., No,  H.  K., & Meyers, S. P. (1998). Physicochemical characteristics and functional properties of various commercial chitin and chitosan products . J Agric Food Chem 46:3839-3843. Griffin,  G.W.,  Quach,  H.T.,  &  Steeper, R.  L., (2004).  Extraction  and  Thin  Layer Chromatography of Chlorofhyll A and B from  Spinach. Journal  Chem  Ed., 81: 385-387.
Gross,  J.  (1991). Pigments  in  Vegetables, Chlorophylls  and  Carotenoids .  New York: Van Nostrand Reinhold.
Harvey,  D.,  (2000), Modern  Analytical Chemistry. USA:  The  McGraw-Hill Companies Inc.
Inoue,  K.,  Kazuharu,  Y.,  &  Baba,  Y.  (1994). Adsorbtion  Of  Metal  Ion  On  Chitosan and  Chemically  Modified  Chitosan  and Their  Application  To  Hidrometalurgy. Biotechnology  and  Bioactive  Polymers., Gebelein, C., Carraher (Edd). New York: Plenum Publishing.
Johnson,  E.  L.  &  Stevenson,  R.  L.  (1991). Dasar  Kromatografi  Cair. Bandung: ITB.
Krissetiana, H. (2004). Kitin dan Kitosan dari
Limbah Udang . http://www.suara merdeka.com./kitin.htm/
Kusumaningsih, T.,  Suryanti, V, Permana, W. (2004).  Karakterisasi  Kitosan  Hasil Deasetilasi  Kitin  dari  Cangkang  Kerang Hijau  ( Mytilus  viridis linneaus ). Jurnal
Penelitian Alchemy , 3: 63-73
Lau, W. K., Goh, B. H., Kadir, H. A.,  Chien, A.  C.S.  &  Muhammad,  T.S.T.  (2015). Potent  PPAR  Ligands  from  Swietenia macrophylla Are Capable of Stimulating Glucose  Uptake  in  Muscle  Cells.
Molecules , 20: 22301–22314.
Mahalingam. R., Bharathidasan,
R.,
Ambikapathy,  V.  &  Panneerselvam.  A. (2012). Phytochemical compound analysis  of Pandanus  odoratissimum . Asian  Journal  of  Plant  Science  and Research , 2 (3):228-231.
Noerati  dan  Sanir,  I.  (2000).  Transformasi Kitin  Hasil  Isolasi  dari  Limbah  Udang Menjadi Kitosan Untuk Berbagai Keperluan  Industri. Warta  AKAB, 11: 98-107.
Pothitirat,  W.  &  Gritsanapan,  W.  (2005). Quantitative  Analysis  of  Curcumin, Demethoxycurcumin
and Bisdemethoxycurcumin  in  the  Crude Curcuminoid  Extract  from Curcuma longa in Thailand by TLC- Densitometry. Journal of Pharmaceutical  Sciences ,  32(1-2):  23- 30.
Ricci,  R.W.,  Ditzler,  M.A.,  Jarret,  R.,  Mc
Master,  P.,  &  Herrick,  R.  (1994).  The
Holy Cross Discovery Chemistry
Program. J. Chem. Education, 71(5).
Riswiyanto,  Franisal,  N.,  &  Sulistyani,  K.
(2001). Isolation  and  Characterization of  Chitosan  from  Shell  of  White  Shrimp (Penaeus  merquensis),  Crab  (Portunus pelagisus) and Cricket (Gryllus conspersus), International  Seminar  on Natural Products Chemistry and Utilization of Natural Resources, June 5- 7, 2001, Universitas Indonesia.
Sherma,  J.  &  Fried,  B.  (2003). Handbook  of Thin-Layer Chromatography . Third Edition,  Revised  and  Expanded.  New
York: Marcel Dekker Inc. Suhesti,T.  S.,  Kurniawan,  D.  W.,  &  Nuryanti. (2007). Penjaringan Senyawa Antikanker  pada  Kulit  Batang  Kayu Mahoni  (Swietenia  mahagoni  Jacg)  dan Uji  Aktivitasnya  terhadap  Larva  Udang Artemia  Salina  Leach. Jurnal  Ilmiah Keperawatan , 3: 156-159.
Tomkins,  S.  P.  and  Miller,  M.  B.  (1994).  A rapid  extraction  and  fast  separation  of leaf pigments using thin layer chromatography. School Science Review, 75 (273): 69 - 72.
Watson,  D.  (2005). Analisis  Farmasi. Edisi kedua. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC.