## Original Article
Total  Flavonoid  Content  and  Antioxidant  Activity  of  Temu  Mangga (Curcuma  mangga  Val.  &  Zijp)  and  its  Classification  with Chemometrics
Total  Kandungan  Flavonoid  dan  Aktivitas  Antioksidan  Temu  Mangga  (Curcuma mangga Val. & Zijp) dan Profil Pengelompokannya dengan Kemometrika
Yuniar Intan Hartono 1 , Indah Widyastuti 1 , Hanna Zaidah Luthfah 1 , Rosy Islamadina 1 , Adelin Theresia Can 1 , Abdul Rohman 2,3*)
1 Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, 55281, Indonesia
2 Departemen Kimia Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, 55281, Indonesia
3 Institute of Halal Industry and Systems, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, 55281, Indonesia *Corresponding author: Abdul Rohman | Email: abdulrohmanugm@gmail.com
Received: 4 November 2019; Revised: 27 December 2019; Accepted 31 December 2019; Published: 20 January 2020
Abstract:  Indonesia  is  a  rich  country  in  terms  of  its  biodiversity.  Herbs  that  are  widely  used  to maintain a healthy body comes from the Zingiberaceae family, including temu mangga. Temu mangga (Curcuma mangga Val. & Zijp) is effective for relieving gastric pain, diarrhea, menstrual pain, acne and ulcers, and increasing appetite. Besides, temu mangga is considered to have antioxidant activity due  to  the  presence  of  the  phenolic  and  flavonoid  compounds.  This  study  aims  to  determine  the correlation and classification of temu mangga from various places based on  total flavonoid content and  antioxidant  activities.  The  samples  were  extracted  with  methanol,  then  tested  for  total flavonoid content by AlCl 3 method and antioxidant activity by DPPH free radical capture method. Analysis  was  performed  using  correlation  coefficient  value  and  chemometrics  PCA  (Principal Component  Analysis)  and  CA  (Cluster  Analysis)  to  see  the  relationship  between  total  flavonoid content  with  their  antioxidant  activity  and  to  see  their  classification.  Total  flavonoid  content  of methanolic extract of temu mangga  gives a moderate correlation to its antioxidant  activity with r = -0.6085 and clustering samples successfully determined by PCA and CA which resulted in 4 groups. Keywords: curcuma mangga val. & zijp; methanolic extract; flavonoid; antioxidant; PCA; CA
Abstrak:  Indonesia  merupakan  negara  yang  kaya  akan  keanekaragaman  hayatinya.  Salah  satu tanaman  herbal  yang  banyak  dimanfaatkan  untuk  menjaga  kesehatan  tubuh  berasal  dari  famili Zingiberaceae,  di  antaranya  adalah  temu  mangga.  Temu  mangga  (Curcuma  mangga  Val.  &  Zijp) berkhasiat  sebagai  pereda  sakit  maag,  diare,  penghilang  nyeri  haid,  mengobati  jerawat  dan  bisul, serta  menambah  nafsu  makan.  Selain  itu,  temu  mangga  diduga  memiliki  aktivitas  antioksidan karena  adanya  senyawa  fenolik  dan  flavonoid  yang  terkandung  di  dalamnya.  Penelitian  ini bertujuan  untuk  melihat  korelasi  dan  pengelompokan  temu  mangga  dari  berbagai  tempat berdasarkan  kandungan  flavonoid  dan  aktivitas  antioksidannya.  Sampel  diekstraksi  dengan metanol  kemudian  diuji  kandungan  flavonoidnya  dengan  metode  AlCl 3 dan  aktivitas
antioksidannya  dengan  metode  penangkapan  radikal  bebas  DPPH.  Analisis  dilakukan menggunakan nilai koefisien korelasi dan kemometrika PCA (Principal Component Analysis) and CA (Cluster  Analysis)  untuk  melihat  hubungan  antara  kandungan  flavonoid  dengan  aktivitas antioksidannya serta untuk melihat profil pengelompokannya. Total kandungan flavonoid ekstrak metanolik  temu  mangga  memberikan  korelasi  yang  sedang  terhadap  aktivitas  antioksidannya dengan  nilai  r  =  -0,6085  dan  profil  pengelompokan  sampel  berhasil  ditentukan  dengan  PCA  dan CA yang menghasilkan 4 kelompok.
Kata kunci: curcuma mangga val. & zijp; ekstrak metanolik; flavonoid; antioksidan; PCA; CA

## 1. PENDAHULUAN
Indonesia merupakan negara kepulauan dengan tingkat keanekaragaman flora dan fauna tertinggi  kedua  setelah  Brazil.  Salah  satu  bukti  keanekaragaman  sumber  daya  hayati  tersebut adalah  banyaknya  spesies  tanaman  yang  ada  di  Indonesia,  yaitu  sekitar  30.000  jenis  spesies tanaman.  Dari  30.000  spesies  tanaman,  7.500  diantaranya  memiliki  khasiat  obat.  Namun,  baru sekitar 1.200 jenis spesies saja yang sudah dimanfaatkan sebagai bahan baku obat herbal maupun jamu [1].
Salah  satu  tanaman  obat  yang  banyak  dibudidayakan  berasal  dari  famili  Zingiberaceae, yang  dikenal  sebagai  temu-temuan.  Salah  satu  tanaman  dari  famili  Zingiberaceae  yang  banyak dimanfaatkan  dan  diketahui  memiliki  aktivitas  antioksidan  adalah  temu  mangga.  Temu  mangga merupakan  tanaman  semak  tahunan  yang  memiliki  ciri  khas  pada  rimpangnya  yang  berwarna kuning lemon hingga kuning sulfur dan berbau khas seperti mangga [2]. Temu mangga berkhasiat sebagai  antipiretik  (penurun  panas),  antitoksin  (penangkal  racun),  pencahar  (laksatif),  mencegah kanker, mengatasi sakit perut, mengecilkan rahim setelah melahirkan, mengurangi lemak di perut, menambah nafsu makan, mengatasi gatal-gatal (pruritis), luka, sesak napas (asma), radang saluran napas (bronkitis), demam, kembung, masuk angin, dan berkhasiat sebagai antioksidan [3]. Adanya aktivitas  antioksidan  pada  temu  mangga  ini  disebabkan  karena  temu  mangga  mengandung senyawa  kurkumin,  flavonoid,  polifenol,  dan  asam  p-hidroksisinamat  [4].  Adanya  senyawa flavonoid  dalam  temu  mangga  diduga  berkaitan  erat  dengan  aktivitas  antioksidannya  karena adanya  gugus  fenol  yang  dapat  menghambat  pembentukan  peroksidasi  lipid  pada  tahap  inisiasi dan  berperan  sebagai  peredam  radikal  bebas  oksigen  reaktif  maupun  radikal  hidroksil  dengan mendonorkan  atom  hidrogen  ke  radikal  peroksil  yang  membentuk  radikal  flavonoid  sehingga bereaksi dengan oksigen reaktif sehingga menjadi netral [5].
Beberapa  penelitian  menunjukkan  bahwa  temu  mangga  memiliki  aktivitas  antioksidan seperti  yang  dilakukan  oleh  Pujimulyani  et  al.  [6]  yang  meneliti  aktivitas  antioksidan  fraksi  etil asetat,  butanol,  dan  etanol  C.  mangga  berdasarkan  penangkapan  H 2 O 2 dengan  nilai  IC50 berturut-turut  sebesar  162,78  μg/mL,  566,06  μg/mL,  dan  1031,32  μg/mL.  Selain  itu,  Jalip  et  al.  [7] telah  meneliti  aktivitas  antioksidan  ekstrak  metanolik  C.  mangga  menggunakan  metode penangkapan  radikal  DPPH  dan  menunjukkan  nilai  IC50  sebesar  90,42  μg/mL.  Dari  studi  yang ditemukan,  ekstrak  metanolik  temu  mangga  memberikan  aktivitas  antioksidan  yang  lebih  tinggi sehingga  menjadi  objek  dalam  penelitian  ini.  Selain  itu,  metanol  juga  banyak  digunakan  sebagai pelarut pengesktraksi senyawa-senyawa polar seperti fenolik dan flavonoid karena adanya prinsip
like dissolve like  sehingga senyawa yang  bersifat polar akan lebih mudah larut dalam pelarut yang lebih bersifat polar pula [8].
Pada umumnya, kandungan metabolit sekunder pada suatu tanaman dapat dipengaruhi oleh  faktor  internal  (gen)  dan  faktor  eksternal  (cahaya,  suhu,  kelembaban,  pH,  kandungan  unsur hara  di  dalam  tanah,  dan  ketinggian  tempat).  Lokasi  penanaman/ketinggian  tempat  akan  sangat mempengaruhi pertumbuhan dan proses metabolisme dari tanaman sehingga akan menghasilkan kandungan senyawa yang  berbeda-beda [9]. Oleh karena itu, kandungan flavonoid temu mangga akan  berbeda-beda  di  berbagai  tempat.  Selain  itu,  masih  belum  diketahui  apakah  kandungan flavonoid temu mangga tersebut benar-benar berkorelasi terhadap aktivitas antioksidannya. Maka, penelitian  ini  dilakukan  untuk  menentukan  profil  korelasi  dan  profil  pengelompokan  ekstrak metanolik  temu  mangga  dari  berbagai  tempat  berdasarkan  kandungan  flavonoid  dan  aktivitas antioksidannya.

## 2. BAHAN DAN METODE

## 2.1. Bahan
Sampel  rimpang  temu  mangga  (Curcuma  mangga  Val.  &  Zijp)  yang  diperoleh  dari beberapa  pasar  di  Jawa  Tengah,  Jawa  Timur,  dan  D.I.  Yogyakarta  (Tabel  1);  metanol  p.a.;  DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil); akuades; 10% AlCl 3 (p.a.); 10% NaNO 2 (p.a.); 10% NaOH (p.a.); dan rutin (working standard HPLC grade, purity 95%).

## 2.2. Instrumentasi dan perangkat lunak
Instrumen yang digunakan dalam penelitian ini adalah Spektrofotometer UV-Vis Double Beam seri U-2900 (Hitachi, Tokyo, Japan). Data diolah dengan Microsoft Excel (Microsoft Inc., USA) untuk  kemudian  dianalisis  dengan  kemometrika  PCA  dan  CA  menggunakan  perangkat  lunak Minitab versi 19.1 (Minitab Inc., USA).

## 2.3. Metode ekstraksi rimpang temu mangga
Metode  ekstraksi  rimpang  temu  mangga  mengacu  pada  Mistriyani  et  al.  [10].  Rimpang temu  mangga  dicuci,  dikupas,  diiris  tipis-tipis,  kemudian  dilakukan  pengeringan  dengan  oven (40°C)  selama  1  hari,  dan  diserbukkan  secara  manual  (dengan  penumbukan)  hingga  diperoleh serbuk  halus.  Serbuk  temu  mangga  selanjutnya  dimaserasi  secara  bertingkat  sebanyak  2  kali dengan  metanol  p.a.  (1:10  b/v).  Pada  maserasi  1,  sampel  dicampur  dengan  60%  volume  metanol yang digunakan selama 3 hari  dan diaduk setiap  hari, lalu solut disaring dan dimaserasi  kembali menggunakan 40% volume metanol yang digunakan selama 3 hari dan diaduk setiap hari. Ekstrak dipekatkan  secara  konvensional  dengan  waterbath  evaporator  dan  diperoleh  ekstrak  kental  temu mangga untuk selanjutnya diuji kandungan flavonoid dan aktivitas antioksidannya.

## 2.4. Metode penentuan total kandungan flavonoid
Penentuan kandungan flavonoid total menggunakan metode AlCl 3 dengan mengacu pada Zou et al [11]. Sejumlah sampel dimasukkan ke dalam labu takar 10 mL, ditambahkan dengan 4 mL akuades  dan  0,3  mL  NaNO 2 10%.  Setelah  5  menit,  ditambahkan  0,3  mL  AlCl 3 10%  ke  dalam  labu takar  dan  didiamkan  selama  5  menit.  Selanjutnya  dilakukan  penambahan  4  mL  NaOH  10%  dan ditambahkan  akuades  hingga  tanda  tera  10  mL.  Larutan  digojog  hingga  homogen  kemudian didiamkan  di  tempat  gelap  selama  22  menit  (OT).  Selanjutnya,  absorbansi  dibaca  menggunakan
Spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang  maksimum  510  nm.  Digunakan  rutin  dengan seri konsentrasi 9,5 ; 19 ; 28,5 ; 38 ; 47,5 ; 57 ; dan 66,5 ppm sebagai standar kurva baku.

## 2.5. Metode penentuan aktivitas antioksidan dengan penangkapan radikal DPPH
Penentuan  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  penangkapan radikal DPPH yang mengacu pada Kikuzaki et al. [12]. Sejumlah sampel ditambahkan dengan 1 mL DPPH  0,4  mM  dalam  labu  takar  5  mL  dan  ditambahkan  dengan  metanol  hingga  tanda  tera. Campuran divortex dan didiamkan selama 30 menit (OT) pada suhu ruang di tempat gelap. Dibaca absorbansi dengan Spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimum 515 nm. Larutan DPPH tanpa sampel digunakan sebagai kontrol.

## 2.6. Metode analisis
Penentuan  total  kandungan  flavonoid  dan  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  3 replikasi.  Data  dinyatakan  dalam  rata-rata  ±  nilai  simpangan  baku  (SD)  menggunakan  Microsoft Excel.  Kemudian  dilakukan  analisis  kemometrika  PCA  dan  CA  menggunakan  software  Minitab versi 19.1 dengan variabel berupa aktivitas antioksidan (IC50) dan total kandungan flavonoid (TFC) yang  menghasilkan  score  plot  yang  digunakan  untuk  melihat  kemiripan  antar  sampel,  loading  plot untuk  mengevaluasi  korelasi  antarvariabel,  serta  dendogram  yang  digunakan  untuk mengelompokkan  sampel  menjadi  beberapa  kelompok  atau  cluster.  Selain  itu,  dilakukan  analisis untuk  mencari  nilai  koefisien  korelasi  (r)  yang  menyatakan  hubungan  antara  total  kandungan flavonoid dengan aktivitas antioksidannya dengan Microsoft Excel yang menghasilkan scatter plot.
Tabel 1. Data Asal Sampel dan Kode Sampel Temu Mangga (Curcuma mangga Val. & Zijp) yang Digunakan
dalam Penelitian Kode Sampel Asal (Pasar) TM01 Sentul, DIY TM02 Beringharjo, DIY TM03 Garum, Blitar TM04 Sambi, Kediri TM05 Kartasura, Sukoharjo TM06 Tugurante, Blitar TM07 Kranggan, DIY

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1. Preparasi sampel
Rimpang  temu  mangga  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  diperoleh  dari  berbagai tempat  seperti  yang  tercantum  dalam  Tabel  1.  Pengambilan  sampel  dilakukan  secara  acak  dari bulan Juni hingga November 2019 dan tidak memperhatikan berbagai faktor yang mempengaruhi aktivitasnya seperti umur tanaman, waktu panen, daerah asal yang tepat dikarenakan tujuan awal penelitian  ini  adalah  untuk  pemodelan  korelasi  antara  aktivitas  antioksidan  dengan  kandungan flavonoid,  sehingga  yang  diperlukan  adalah  adanya  variasi  yang  besar  antarsampel  sehingga dihasilkan pemodelan yang robust.
Rimpang  temu  mangga  yang  didapatkan  memiliki  ciri  berwarna  kuning  seperti  lemon dan  berbau  khas  segar  seperti  mangga.  Rimpang  dibersihkan,  diiris  tipis,  dan  dioven  pada  suhu 40-50°C  selama  1  hari  untuk  menghilangkan  kandungan  air  dan  mencegah  adanya  aktivitas mikroba  sehingga  sampel  bisa  disimpan  lebih  lama  dan  tidak  mengalami  kerusakan.  Suhu pemanasan oven tidak boleh terlalu tinggi untuk mencegah risiko kerusakan senyawa aktif akibat pemanasan.  Kemudian  rimpang  diserbukkan  untuk  mempermudah  proses  penarikan  senyawa dalam  tanaman  dan  dimaserasi  dengan  pelarut  metanol  sebanyak  2  kali  untuk  mencegah  risiko adanya senyawa yang belum terekstraksi akibat pelarut mencapai titik jenuh. Pengadukan selama maserasi  dilakukan  setiap  hari  untuk  mempermudah  proses  pemindahan  zat  aktif  dan mempercepat proses kesetimbangan konsentrasi bahan ekstraksi. Selanjutnya, filtrat hasil maserasi dipekatkan  untuk  menghilangkan  sisa  pelarut  dan  didapatkan  ekstrak  metanolik  kental.  Ekstrak metanolik  kental  yang  diperoleh  berwarna  coklat  tua  dan  berbau  khas.  Rendemen  ekstrak  kental temu  mangga  yang  didapatkan  berkisar  antara  3-7%  seperti  pada  Tabel  2  dan  dihitung  dengan rumus sebagai berikut:
% 𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 = 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖ℎ𝑎𝑠𝑖𝑙𝑘𝑎𝑛 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎 𝑠𝑒𝑟𝑏𝑢𝑘 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘𝑠𝑖 𝑥 100 %
Tabel 2. Persen (%) Rendemen Ekstrak Kental Temu Mangga yang Dihasilkan
Sebelum dilakukan uji kuantifikasi terhadap ekstrak kental temu mangga, terlebih dahulu dilakukan preparasi sampel untuk mendapatkan larutan stok sampel yang akan digunakan untuk uji  flavonoid  dan  uji  aktivitas  antioksidan.  Ditimbang  kurang  lebih  100  mg  ekstrak  kental  temu mangga dan dilarutkan dengan metanol p.a. dalam labu takar 100 mL hingga diperoleh konsentrasi larutan  stok  temu  mangga  sebesar  1000  μg/mL  (1  mg/mL).  Larutan  diultrasonikasi  selama  2-3 menit  hingga  larut  sempurna  lalu  disaring  untuk  selanjutnya  diuji  kandungan  flavonoid  dan aktivitas antioksidannya. Masing-masing sampel direplikasi sebanyak 3 kali.

## 3.2. Penentuan total kandungan flavonoid
Penetapan  total  kandungan  flavonoid  diukur  secara  spektrofotometer  UV-Vis menggunakan metode AlCl 3 . Prinsip metode ini adalah terjadinya  pembentukan kompleks  antara aluminium  klorida  (AlCl 3 )  dengan  senyawa  flavon  atau  flavonol  pada  gugus  keto  atom  C-4  dan gugus hidroksi pada atom C-3 atau C-5 yang bertetangga. AlCl 3 juga membentuk kompleks asam yang  stabil  dengan  gugus  ortho-dihydroxyl  pada  cincin  A  atau  B  flavonoid.  Senyawa  rutin digunakan sebagai standar pada penetapan kadar flavonoid ini karena rutin merupakan glikosida kuersetin  yang  tergolong  dalam  flavonol  yang  memiliki  struktur  cincin  dan  konfigurasi  aglikon
Kode Sampel Bobot Serbuk Maserasi Bobot Wadah + Ekstrak Bobot Wadah Bobot Ekstrak Kental % Rendeme n TM01 150 gram 99,7 gram 89,8 gram 9,9 gram 6,6 % TM02 150 gram 67,8 gram 61,6 gram 6,2 gram 4,13 % TM03 150 gram 96,0 gram 88,1 gram 7,9 gram 5,27 % TM04 150 gram 98,6 gram 88,3 gram 10,3 gram 6,87 % TM05 150 gram 129,1 gram 123, 5 gram 5,6 gram 3,73 % TM06 150 gram 99,8 gram 88,5 gram 11,3 gram 7,53 % TM07 150 gram 98,4 gram 89,9 gram 8,5 gram 5,67 %
dari  kelompok  hidroksil.  Hal  inilah  yang  membuat  senyawa  golongan  flavonol  memiliki kemampuan  antioksidan  yang  ampuh  [13].  Secara  umum,  reaksi  yang  terjadi  antara  senyawa flavonoid dengan pereaksi AlCl 3 sebagaimana dalam Gambar 1.
Gambar 1. Mekanisme Reaksi Senyawa Flavonoid dengan Pereaksi AlCl 3 [14]
Pada  penelitian  ini,  didapatkan  kurva  baku  hubungan  antara  konsentrasi  standar  rutin (sumbu x) dengan absorbansi rutin setelah direaksikan dengan AlCl 3 (sumbu y) dengan persamaan y = 0,013x - 0,0244 dan nilai koefisien determinasi (r 2 ) = 0,9945 seperti pada Gambar 2.
Gambar 2. Kurva Konsentrasi dan Absorbansi Larutan Baku Standar Rutin
Total kandungan flavonoid ekstrak metanolik temu mangga yang didapatkan seperti yang tercantum  pada  Tabel  3  cukup  bervariasi  yang  berkisar  antara  70,450  ±  2,036  hingga  224,798  ± 12,069 mg ekuivalen rutin/g sampel. Dari data tersebut, terlihat bahwa sampel temu mangga TM06 dari  Pasar  Tugurante  (Blitar)  memiliki  kandungan  flavonoid  tertinggi  dan  sampel  temu  mangga TM04  asal  Pasar  Sambi  (Kediri)  memiliki  kandungan  flavonoid  terendah.  Berdasarkan  penelitian yang  dilakukan  oleh  Sahu  dan  Saxena  [16],  kandungan  flavonoid  total  ekstrak  metanolik  temu mangga  adalah  sebesar  22,52  ±  0,015  mg/g.  Adanya  perbedaan  kandungan  flavonoid  ini  dapat disebabkan  oleh  berbagai  macam  faktor  dari  ekstrak  yang  didapatkan  seperti  umur tanaman/rimpang  yang  digunakan,  lokasi  penanaman,  waktu  panen,  penyimpanan  bahan tumbuhan,  kondisi  geografis  dan  tanah,  serta  iklim  dan  cuaca.  Selain  itu,  dapat  juga  disebabkan
karena perbedaan metode yang digunakan dalam mengekstraksi senyawa dan dalam menganalisis kandungan flavonoid dalam sampel.
Tabel 3. Total Kandungan Flavonoid (TFC) Temu Mangga dengan Metode AlCl 3 dari Berbagai Pasar Kode Sampel Asal (Pasar) TFC (mg RE/g) TFC mean ± SD (mg RE/g) TM01 Sentul, DIY 142,283 169,686 ± 25,443 192,559 174,218 TM02 Beringharjo, DIY 152,758 140,137 ± 13,862 142,352 125,300 TM03 Garum, Blitar 178,209 189,452 ± 27,545 169,306 220,840 TM04 Sambi, Kediri 70,494 70,450 ± 2,036 68,393 72,464 TM05 Kartasura, Sukoharjo 153,172 121,683 ± 37,269 80,536 131,341 TM06 Tugurante, Blitar 219,583 224,798 ± 12,069 216,214 238,597 TM07 Kranggan, DIY 159,076 180,312 ± 20,272 182,402 199,459

## 3.3. Penentuan aktivitas antioksidan
Penentuan  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  metode  penangkapan  radikal  DPPH secara spektrofotometri UV-Vis. Aktivitas antioksidan dari suatu senyawa ditentukan dengan nilai IC50  (Inhibition  Concentration  50%).  Nilai  IC50  menunjukkan  konsentrasi  senyawa  uji  yang dibutuhkan  untuk  mengurangi/meredam  radikal  DPPH  sebesar  50%.  Nilai  IC50  diperoleh  dari persamaan regresi linier yang menyatakan hubungan antara konsentrasi senyawa uji dengan nilai aktivitas  antioksidan.  Semakin  kecil  nilai  IC50  senyawa  uji,  maka  senyawa  uji  tersebut  akan semakin poten sebagai antioksidan [17].
Metode  uji  menggunakan  DPPH  didasarkan  pada  penurunan  absorbansi  akibat perubahan  warna  larutan  DPPH  dari  ungu  pekat  menjadi  lebih  tidak  berwarna/kuning.  Radikal DPPH  yang  memiliki  elektron  tidak  berpasangan  akan  bereaksi  dengan  atom  hidrogen  dari senyawa peredam/penangkap  radikal bebas membentuk DPPH-Hidrazin yang lebih stabil.  Ketika elektron  menjadi  berpasangan  oleh  keberadaan  senyawa  penangkap  radikal  bebas,  maka absorbansi akan menurun secara stokiometri sesuai dengan jumlah elektron yang diambil [18].
Gambar 3. Mekanisme Reaksi Senyawa Antioksidan dengan Radikal DPPH (1,1-Difenil-2-Pikrilhidrazil) [19]
Tabel  4.  Aktivitas  Antioksidan  Temu  Mangga  dengan  Metode  Penangkapan  Radikal  Bebas  DPPH dari berbagai Pasar Kode Sampel Asal (Pasar) IC50 (μg/mL) IC50 ± SD (μg/mL) TM01 Sentul, DIY 172,7833 167,696 ± 6,6202 160,2107 170,0927 TM02 Beringharjo, DIY 205,0964 222,263 ± 15,919 225,1549 236,539 TM03 Garum, Blitar 42,375 40,581 ± 3,030 42,287 37,083 TM04 Sambi, Kediri 130,963 134,999 ± 9,336 145,675 128,360 TM05 Kartasura, Sukoharjo 240,143 268,802 ± 43,573 318,945 247,318 TM06 Tugurante, Blitar 35,651 37,338 ± 1,851 39,318 37,046 TM07 Kranggan, DIY 42,168 41,284 ± 0,827 41,154 40,529
Menurut  Molyneux  [20],  suatu  ekstrak  memiliki  sifat  antioksidan  sangat  kuat  jika memiliki  IC50  <  50  μg/mL,  kuat  dengan  IC50  50-100  μg/mL,  sedang  dengan  IC50  100-150  μg/mL, lemah  dengan  IC50  150-200  μg/mL,  dan  sangat  lemah  dengan  IC50  >  200  μg/mL.  Dari  data  yang didapatkan seperti pada Tabel 4, sampel temu mangga memiliki aktivitas antioksidan yang sangat bervariasi, dari sangat kuat hingga lemah dengan IC50 berkisar antara 37,338 ± 1,851 hingga 268,802 ±  43,573  μg/mL  yang  menunjukkan  bahwa  dibutuhkan  ekstrak  metanolik  temu  mangga  dengan kisaran  konsentrasi  tersebut  untuk  menghasilkan  penurunan  50%  dari  aktivitas  DPPH.  Terlihat bahwa  sampel  temu  mangga  TM06  asal  Pasar  Tugurante  (Blitar)  memiliki  aktivitas  antioksidan tertinggi  yang  ditandai  dengan  nilai  IC50  terendah  dan  sampel  temu  mangga  TM05  asal  Pasar Kartasura  (Sukoharjo)  memiliki  aktivitas  antioksidan  terendah  yang  ditandai  dengan  nilai  IC50 tertinggi.
Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Jalip et al. [7], aktivitas penangkapan radikal dengan DPPH dari ekstrak metanolik C. mangga memiliki nilai IC50 sebesar 90,42  μg/mL. Adanya perbedaan nilai IC50 yang didapatkan dengan literatur disebabkan karena berbagai  macam faktor dari  ekstrak  yang  digunakan  seperti  metode  ekstraksi,  umur  tanaman/rimpang  yang  digunakan, waktu  panen,  penyimpanan  bahan  tumbuhan,  kondisi  geografis  dan  tanah  tempat  tumbuh tanaman,  serta  iklim  dan  cuaca  sehingga  mempengaruhi  aktivitas  antioksidannya.  Selain  itu, mungkin  dapat  disebabkan  karena  proses  pemekatan  ekstrak  dilakukan  dengan  metode konvensional yaitu pemanasan dengan waterbath sehingga senyawa fenolik dan flavonoid yang ada dalam  tanaman  temu  mangga  mengalami  degradasi  dan  teroksidasi,  akibatnya  aktivitas antioksidan yang dihasilkan ada yang lebih rendah jika dibandingkan dengan literatur [21].

## 3.4. Analisis kemometrika
Pengelompokan  ekstrak  metanolik  temu  mangga  dari  berbagai  tempat  berdasarkan kandungan flavonoid dan aktivitas antioksidannya dilakukan dengan menggunakan kemometrika PCA  dan  CA,  salah  satu  teknik  unsupervised  pattern  recognition.  Pada  penelitian  ini,  variabel  yang digunakan  adalah  aktivitas  antioksidan  (IC50) dan  TFC  (Total  Flavonoid  Content)  dari  setiap replikasi ekstrak metanolik temu mangga. PCA merupakan teknik reduksi data multivariat ketika antarvariabel  saling  berkorelasi.  Sampel  yang  memiliki  PC  (Principle  Component)  hampir  sama akan  memiliki  sifat  fisika  kimia  yang  hampir  sama  sehingga  PCA  dapat  digunakan  untuk pengelompokan [22]. Eigenvalue menunjukkan nilai kontribusi yang diberikan terhadap keragaman data. Eigenvalue yang diperoleh menunjukkan bahwa PC1 dan PC2 memberikan kontribusi sebesar 80,4%  dan  19,6%  terhadap  variansi  variabel.  Pada  penelitian  ini  digunakan  PC1  yang  sudah mewakili 80,4% variabel.
Score  plot  digunakan  untuk  mengelompokkan  dan  merepresentasikan  kedekatan antarsampel  yang  dinyatakan  oleh  First  Principle  Component  (PC1)  yang  menghitung  variasi terbesar  dari  seluruh  variabel  dan  Second  Principle  Component  (PC2)  yang  menghitung  variasi terbesar  kedua  dari  seluruh  variabel  [23].  Berdasarkan  score  plot  seperti  pada  Gambar  4,  ekstrak metanolik temu mangga dapat dikelompokkan menjadi 4 kelompok. Semakin dekat nilai score plot, maka  akan  semakin  mirip  kandungan  flavonoid  dan  aktivitas  antioksidannya.  Dari  score  plot terlihat bahwa ekstrak metanolik temu mangga 1a,b,c (TM01 : asal Pasar Sentul), 2a,b,c (TM02 : asal Pasar  Beringharjo),  dan  5a,c  (TM05  :  asal  Pasar  Kartasura)  berada  dalam  1  kelompok  sehingga memiliki  kandungan  flavonoid  dan  aktivitas  antioksidan  yang  mirip.  Begitu  pula  dengan  ekstrak metanolik  temu  mangga  4a,b,c  (TM04  :  asal  Pasar  Sambi)  yang  berada  dalam  1  kelompok,  serta ekstrak  metanolik  temu  mangga  3a,b,c  (TM03  :  asal  Pasar  Garum),  6a,b,c  (TM06  :  asal  Pasar Tugurante),  dan  7a,b,c  (TM07  :  asal  Pasar  Kranggan)  yang  berada  dalam  1  kelompok.  Ekstrak metanolik  temu  mangga  dari  replikasi  sampel  yang  sama  seharusnya  akan  berada  dalam  1 kelompok.  Namun,  ada  pencilan  pada  ekstrak  metanolik  temu  mangga  5b  (asal  Pasar  Kartasura, replikasi  kedua)  yang  menunjukkan  bahwa  sampel  5b  berada  cukup  jauh  dari  5a  dan  5c.  Hal  ini mungkin  dapat  disebabkan  karena  terdapat  kesalahan  dalam  proses  pembuatan  larutan  stok sampel 5b.
Gambar  4.  Score  Plot  PCA  oleh  First  Principle  Component  (PC1)  dan  Second  Principle  Component  (PC2)  dari Replikasi  Sampel  Ekstrak  Metanolik  Temu  Mangga.  1  (TM01)  :  Pasar  Sentul,  2  (TM02)  :  Pasar Beringharjo, 3 (TM03) : Pasar Garum, 4 (TM04) : Pasar Sambi, 5 (TM05) : Pasar Kartasura, 6 (TM06) : Pasar Tugurante, 7 (TM07) : Pasar Kranggan
Gambar 5. Dendogram CA berdasarkan Euclidean Distance dari Replikasi Ekstrak Metanolik Temu Mangga 1-3
(1a,b,c  asal  Pasar  Sentul),  4-6  (2a,b,c  asal  Pasar  Beringharjo),  7-9  (3a,b,c  asal  Pasar  Garum),  10-12
(4a,b,c  asal  Pasar  Sambi),  13-15  (5a,b,c  asal  Pasar  Kartasura),  16-18  (6a,b,c  asal  Pasar  Tugurante), dan 19-21 (7a,b,c asal Pasar Kranggan)
Cluster  Analysis  (CA)  merupakan  unsupervised  pattern  recognition  yang  digunakan  untuk mencari  sampel  yang  erat  satu  sama  lain  dalam  ruang  variabel  dan  membagi  sampel  ke  dalam kelompok  sehingga  sampel  yang  sejenis  akan  berada  dalam  kelompok  yang  sama  [22]. Dendrogram  hasil  cluster  analysis  menunjukkan  bahwa  semakin  dekat  jarak  Euclidean-nya,  maka
semakin  tinggi  tingkat  kesamaannya  dan  sebaliknya.  Berdasarkan  dendogram  CA  sebagaimana pada  Gambar  5,  didapatkan  4  kelompok  dari  21  sampel.  Kelompok  1  yaitu  1-3  (1a,b,c  asal  Pasar Sentul),  4-6  (2a,b,c  asal  Pasar  Beringharjo),  13  (5a  asal  Pasar  Kartasura),  dan  15  (5c  asal  Pasar Kartasura).  Kelompok  2  yaitu  10-12  (4a,b,c  asal  Pasar  Sambi).  Kelompok  3  yaitu  14  (5b  asal  Pasar Kartasura). Dan yang terakhir kelompok 4 yaitu 7-9 (3a,b,c asal Pasar Garum) dan 16-21 (6a,b,c asal Pasar Tugurante ; 7a,b,c asal Pasar Kranggan).

## Gambar 6. Loading Plot PCA dengan Variabel Kandungan Flavonoid (TFC) dan Nilai IC50 dari Penangkapan Radikal DPPH Ekstrak Metanolik Temu Mangga
Gambar 7. Scatter Plot antara Kandungan Flavonoid (TFC) dan Nilai IC50 dari Penangkapan Radikal DPPH

## Ekstrak Metanolik Temu Mangga
Loading  plot  digunakan  untuk  memberikan  evaluasi  terhadap  korelasi  antarvariabel berdasarkan  sudut  yang  dibentuk  antara  variabel-variabel  yang  digunakan.  Jika  dua  vektor membentuk  sudut  kecil,  kedua  variabel  berkorelasi  positif.  Jika  dua  vektor  membentuk  sudut sekitar  90°,  kedua  variabel  tidak  berkorelasi,  dan  jika  dua  vektor  membentuk  sudut  yang  lebar sekitar  180°,  kedua  variabel  berkorelasi  negatif  [23].  Berdasarkan  loading  plot  sebagaimana  pada Gambar  6,  kandungan  flavonoid  (TFC)  tidak  berkorelasi  secara  signifikan  (korelasi  sedang,  tidak
y = -1.0734x + 298.57 r² = 0.3703 0 50 100 150 200 250 300 350 0 50 100 150 200 250 300 IC 50 (μ g/ mL ) TFC (mgRE/g)
Scatter Plot Kandungan Flavonoid dengan Aktivitas Antioksidan
r = -0.6085
terlalu rendah ataupun tinggi) terhadap aktivitas antioksidan karena memiliki sudut mendekati 90° yang  didukung  dengan  nilai  koefisien  korelasi  (r)  pada  scatter  plot  sebagaimana  pada  Gambar  7 dengan  nilai  r  =  -0,6085  dan  r 2 =  0,3703,  di  mana  kandungan  flavonoid  memberikan  kontribusi sebesar 37,03% terhadap aktivitas antioksidan ekstrak metanolik temu mangga.
Profil pengelompokan temu mangga menggunakan PCA dan CA berhasil ditentukan. Hal ini dibuktikan dari hasil analisis CA yang ternyata mendukung  hasil analisis PCA dan sama-sama menghasilkan  4  kelompok.  Kelompok-kelompok  yang  terbentuk  ini  menunjukkan  bahwa perbedaan  tempat  memang  dapat  memberikan  pengaruh  terhadap  kandungan  flavonoid  dan aktivitas  antioksidan  dari  suatu  tanaman.  Ekstrak  metanolik  temu  mangga  dari  Pasar  Sentul, Beringharjo,  dan  Kartasura  memiliki  kandungan  flavonoid  dan  aktivitas  antioksidan  yang  mirip. Begitupula  dengan  ekstrak  metanolik  temu  mangga  dari  Pasar  Garum,  Tugurante,  dan  Kranggan yang memiliki kandungan flavonoid dan aktivitas antioksidan yang mirip.

## 4. KESIMPULAN
Aktivitas  antioksidan  dan  kandungan  flavonoid  temu  mangga  dari  berbagai  tempat  di Jawa Tengah, Jawa Timur, dan DIY berhasil ditentukan. Ekstrak metanolik temu mangga memiliki aktivitas antioksidan yang bervariasi dari lemah hingga sangat kuat dengan kandungan flavonoid yang berkisar antara 70,450 ± 2,036 hingga 224,798 ± 12,069 mgRE/g sampel. Kandungan flavonoid ekstrak  metanolik  temu  mangga  memberikan  korelasi  yang  sedang/tidak  signifikan  terhadap aktivitas antioksidannya dengan koefisien korelasi (r) = -0,6085 yang menunjukkan bahwa semakin tinggi  kandungan  flavonoidnya,  maka  semakin  tinggi  aktivitas  antioksidannya,  yang  ditandai dengan semakin menurunnya nilai IC50.    Profil pengelompokan ekstrak metanolik temu mangga berhasil ditentukan dengan PCA dan CA dan menghasilkan 4 kelompok berdasarkan  kandungan flavonoid dan aktivitas antioksidannya.

## Ucapan  terima  kasih  :  Penulis  mengucapkan  terima  kasih  yang  sebesar-besarnya  kepada
Kementerian  Riset  dan  Teknologi  serta  Kementerian  Pendidikan  dan  Kebudayaan  yang  telah membiayai penelitian ini melalui skema World Class Research 2020. Penulis juga mengucapkan terima kasih  yang  sebesar-besarnya  kepada  Fakultas  Farmasi  Universitas  Gadjah  Mada  atas  fasilitas laboratorium selama penelitian ini dilaksanakan.

## Referensi
1. PT Sido Muncul. Laporan Tahunan. PT Sido Muncul Tbk ; Semarang, 2015, 76.
2. Sudewo,  Bambang.  Tanaman Obat  Populer:  Penggempur  Aneka  Penyakit.  Agromedia  Pustaka  ;  Jakarta, 2006.
3. Hariana, Arief. Tumbuhan Obat dan Khasiatnya. Penebar Swadaya ; Jakarta, 2006.
4. Menkes RI. Formularium Obat Herbal Asli Indonesia. Menkes RI ; Jakarta, 2016, 110, 152.
5. Yuslianti, E. R. Pengantar Radikal Bebas dan Antioksidan. Penerbit Deepublish ; Yogyakarta, 2018, 76-85.
6. Pujimulyani,  D.;  Yulianto,  W.A.;  Setyowati,  A.;  Arumwardana,  S.;  Rizal,  R.  Antidiabetic  and Antioxidant Potential of Curcuma mangga Val. Extract and Fractions. Asian Journal of Agriculture and Biology. 2018, 6, 2, 162–168.
7. Jalip,  I.S.;  Suprihatin;  Wiryanti,  I.;  Sinaga,  E.  Antioxidant  Activity  and  Total  Flavonoids  Content  of Curcuma Rhizome Extract. The 4th Green Technology Faculty of Science and Technology, Islamic of University State Maulana Malik Ibrahim Malang. 2013, 93–99.
8. Kusmiyati, K.; Aznam, N.; Handayani, S. Isolasi dan Identifikasi Zat Aktif Ekstrak Metanol Rimpang Kunyit Putih (Curcuma mangga Val.) Fraksi Etil Asetat. Pharmaciana. 2011, 1, 2, 1-10.
9. Katuuk,  R.H.H.;  Wanget,  S.A.;  Tumewu,  P.  Pengaruh  Perbedaan  Ketinggian  Tempat  Terhadap Kandungan  Metabolit  Sekunder  Pada  Gulma  Babadotan  (Ageratum  Conyzoides  L.).  E-Journal Universitas Sam Ratulangi Manado. 2019, 1, 4.
10. Mistriyani; Riyanto, S.; Rohman, A. Antioxidant Activities of Rambutan (Nephelium lappaceum L.) Peel In Vitro. Food Research. 2018, 2, 1, 119–123.
11. Zou, Y.; Lu, Y.; Wei, D. Antioxidant activity of a flavonoid-rich extract of Hypericum perforatum L. in vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2004, 52, 16, 5032–5039.
12. Kikuzaki, H.; Hisamoto, M.; Hirose, K.; Akiyama, K.; Taniguchi, H. Antioxidant Properties of Ferulic Acid and Its Related Compounds. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2002, 50, 7, 2161–2168.
13. Arifin, B.; Ibrahim, S. Struktur, Bioaktivitas, dan Antioksidan Flavonoid. Jurnal Zarah. 2018, 6, 1, 21– 29.
14. Markham, K.R. Cara Mengidentifikasi Flavonoid. Penerbit ITB ; Bandung, 1988, 1-117, cit. Pine, A. T. D.; Alam,  G.;  Attamin,  F.  Standardisasi  Mutu  Ekstrak  Daun  Gedi  (Abelmoschus  manihot  (L.) Medik) dan Uji Efek Antioksidan dengan Metode DPPH. Jurnal Farmasi UIN Alauddin Makassar. 2017, 3, 3.
15. Pękal,  A.;  Pyrzynska,  K.  Evaluation  of  Aluminium  Complexation  Reaction  for  Flavonoid  Content Assay. Food Analytical Methods. 2014, 7, 9, 1776–1782.
16. Sahu,  R.;  Saxena,  J.  Screening  of  Total  Phenolic  and  Flavonoid  Content  in  Conventional  and  Non Conventional  Species  of  Curcuma.  International  Journal  of  Pharmaceutical  Sciences  Review  and Research. 2013, 21, 2, 24–26.
17. Othman,  A.;  Ismail,  A.;  Abdul  Ghani,  N.;  Adenan,  I.  Antioxidant  Capacity and  Phenolic  Content  of Cocoa Beans. Food Chemistry. 2007, 100, 4, 1523–1530.
18. Almoulah, N.; Voynikov, Y.; Gevrenova, R.; Schohn, H.; Tzanova, T.; Yagi, S.; Thomas, J.; Mignard, B.; Ahmed,  A.A.A.;  El  Siddig,  M.A.;  Spina,  R.;  Laurain-Mattar,  D.  Antibacterial,  antiproliferative  and antioxidant  activity  of  leaf  extracts  of  selected  Solanaceae  species.  South  African  Journal  of  Botany. 2017, 112, 368–374.
19. Shahidi, Fereidoon. Natural Antioxidants Chemistry, Health Effects, and Application. Memorial University of Newfoundland St.John’s ; Canada, 1997.
20. Molyneux,  P.  The  Use  Of  The  Stable  Free  Radical  Diphenylpicrylhydrazyl  (DPPH)  for  Estimating Antioxidant Activity. Journal of Science Technology. 2004, 26, 2, 211-219.
21. Pujihartati,  V.L.;  Raharjo,  S.;  Santosa,  U.  Stabilitas  Antioksidan  Ekstrak  Kunyit  (Curcuma  domestica) selama Penyimpanan Umbi dan Pemanasan. Prosiding Seminar Nasional PATPI, Yogyakarta. 1999.
22. Rohman, A.; Sujadi. Analisis Derivat Babi. Gadjah Mada University Press ; Yogyakarta, 2018, 28.
23. Widodo,  H.;  Sismindari,  S.;  Asmara,  W.;  Rohman,  A.  Antioxidant  activity,  total  phenolic  and flavonoid  contents  of  selected  medicinal  plants  used  for  liver  diseases  and  its  classification  with chemometrics. Journal of Applied Pharmaceutical Science. 2019, 9, 6, 99–105.
© 2020 by the authors. Submitted for possible open access publication under the terms and  conditions  of  the  Creative  Commons  Attribution  (CC  BY)  license (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).