## FLAVAN-3-OL IN  VITRO CULTURE  CAMELLIA SINENSIS CONTRIBUTIONS IN ORDER SUPPORT FUNCTIONAL FOOD
Sutini 1 ,  Susilowati 2 , Mochamad Rasjad Indra 3
1 Program Studi A grotechnology UPN ”Veteran” Jawa Timur.
2 Program Studi Teknik Kimia UPN ”Veteran” Jawa Timur.
3 Jurusan Medical school physiology, Brawijaya  University, Malang. Email: tien_basuki@yahoo.com

## Abstract
Flavan-3-ol act as bioactive compounds from in vitro culture of Camellia sinensis plant can support the functional food. These compounds are bioactive because of it has a chemical  structure  that  is  rich  in  hydroxide  groups  so  that  it  can  be  as  functional  food. However, flavan-3-ol which is extracted from the fields stunted harvest wait time of up to 3-5  years.  To  overcome  obstacles  waiting  time  of  harvesting  of  the  land  should  be developed mode of production flavan-3-ol via in vitro culture. The purpose of this paper is to obtain the production of flavan-3-ol becoming more efficient. The process of production to achieve  these objectives are: (1)  initiation of callus, (2) sub callus, (3) the  initiation of suspension  culture,  (4)  extraction  suspense  culture,  (3)  Analysis  of  qualitative  / quantitative compound of flavan-3-ol. Results of this study in the form of biomass culture can  play  a  role  in  supporting  both  as  a  functional  food  additives,  flavor  and  mix  of  food raw materials.
Keywords: flavan-3-ol, Camellia  sinensis, in vitro culture, functional food

## Abstrak
Flavan-3-ol  bertindak  sebagai  senyawa  bioaktif  dari  kultur  in  vitro  dari  tanaman Camellia  sinensis  dapat  berperan  sebagai  makanan  fungsional.  Senyawa  bioaktif  ini memiliki struktur kimia yang kaya kelompok hidroksida sehingga dapat menjadi makanan fungsional. Namun, flavan-3-ol yang dapat diekstrak terhambat panen menunggu hingga 3-5  tahun.  Untuk  mengatasi  kendala  waktu  panen  maka  dilakukan  produksi  flavan-3-ol yang  dikembangkan  melalui  kultur  in  vitro.  Tujuan  dari  makalah  ini  adalah  untuk mendapatkan produksi flavan-3-ol menjadi lebih efisien. Proses produksi untuk mencapai tujuan  tersebut  adalah:  (1)  inisiasi  kalus,  (2)  sub  kalus,  (3)  inisiasi  kultur  suspensi,  (4) budaya  ketegangan  ekstraksi,  (3)  Analisis  kualitatif  /  kuantitatif  senyawa  flavan  -3-ol. Hasil  penelitian  ini  dalam  bentuk  biomassa  dapat  berperan  sebagai  aditif  makanan fungsional, flavor dan campuran bahan baku makanan.
Kata kunci: flavan-3-ol, Camellia sinensis, kultur in vitro, makanan fungsional
PENDAHULUAN Flavan-3-ol  merupakan  senyawa senyawa
bioaktif pada tanaman Camellia  sinensis. Sebagai  senyawa bioaktif      berperan  dalam  industri makanan dan  industri kesehatan.    Pada industri makanan dapat sebagai strategi pengatur  program  diet  karena  sifat senyawa flavan-3-ol yang dapat mengikat  enzim  maupun  protein  (Mario et.al., 2012).  Menurut  Haslam  (  2007) flavan-3-ol  yang  memiliki  monomir  tanin akan  menyebabkan  adstringen  pada
rongga  mulut,  hal  ini  dikarenakan pembentukan agregat dan pengendapan air ludah yang menyebabkan hilangnya pelumasan pada langit-langit sehingga
menyebabkan sensasi adstringen.
Pada  industri  kesehatan  memiliki multi  fungsi  diantaranya  dapat  sebagai antioksidan  dan  anti  proliferasi  sel (Tores et.al., 2002). Sedangkan menurut    Khan  dan    Mukhtar  (  2007) fungsi    flavan  -3-ol  amat  beragam diantaranya  untuk:  anti  kanker,  anti
diabet,  anti  histamin,  anti  obesitas  dan kardiovaskuler.        Penelitian  Hernandes et.al., 2006  flavan-3-ol  pada  tanaman merupakan  bentukan  dari monomir: - Epicatechin (EC) dan -epigallocatechin  gallate (EGCG).    Senyawa  ini  dapat  diproduksi melalui kultur in vitro. Melihat pentingnya  dan  sifat  flavan-3-ol  yang telah  disebutkan  di  atas,  maka  tujuan dari  penulisan  makalah  ini  adalah memperoleh  cara  produksi  flavan-3-ol yang lebih efisien.
Kajian  empiris  yang  dilakukan oleh  ke-wang et.al., (2014)  bahwa green tea  yang mengandung flavan-3-ol dapat menghambat kanker mamae pada tikus  percobaan.  Sedangkan  penelitian Okello  ( et.al., 2011)  flavan  -3-ol    dapat mencegah  kanker  colon.  Flavan-3-ol yang  dipetik  di  ladang  waktu  panennya mencapai 3-5 tahun. Melihat pentingnya senyawa ini peneliti
melakukan  produksi  EGCG  melalui kultur  in  vitro  kalus  dapat  dipanen setelah  umur  yang  reatif  singkat  yaitu satu bulan (Sutini, 2010).

## 3.METODE PENELITIAN
Metode  penelitian    meliputi:  (1) inisiasi  kalus yang diperoleh dari eksplan  daun Camellia  sinensis  dengan
media    padat Murashige  and  Skoog (1962) (MS), (2) sub kultur kalus dengan cara  memindahkan  kalus  pada  media yang  sama/  berbeda  setelah  kalus berumur  2  minggu,  (3)  inisiasi  kultur suspense  dengan  cara  menimbang kalus yang dimasukkan pada media  MS cair yang diperkaya dengan zat pengatur  tumbuh  (ZPT)  konsentrasi tertentu  dengan  digojog  menggunakan penggojog  shaker    berkecepatan  100 rpm  ,  (4)  ekstraksi    kultur  suspense berpelarut  kloroform,  akuades  dan  etil asetat,  (5)  Analisis  senyawa  flavan-3-ol secara
kualitatif
/kuantitatif menggunakan  teknik  kromatografi  lapis tipis  /  kromatografi  densitometri.  Hasil studi  literatur  biomassa  flavan-3  ol berpeluang
menunjang
pangan
fungsional.

## 1.  HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil penulisan makalah ini diperoleh dari mereview penelitian terdahulu, dengan pembahasannya sebagai tersebut berikut.

## Inisiasi kalus
Hasil pada inisiasi kalus diperoleh  bobot basah  seperti tercantum pada Tabel 1.
Tabel 1. Bobot basah  Kultur kalus
Pada Tabel 1. Peningkatan bobot basah kultur  kalus  meningkat  seiring  dengan penambahan umur kalus. Hal ini relevan dengan  penelitian    Thayamini et.al., ( 1999  )  bahwa  bobot  kalus  yang  didapat dari  dari  jaringan  anther    camellia sinensis  meningkat  setelah  umur  kalus mencapai satu bulan.

## Sub kultur kalus
Sub kultur kalus dilakukan pada minggu  ke  dua  sampai  minggu  ke  tiga untuk  menggantikan  nutrisi  biomassa kalus  agar  dapat  bertumbuh  dengan normal.

## Inisiasi kultur suspense
Hasil  Inisiasi    kultur  suspense diperoleh bobot basah seperti tercantum pada Tabel 2.
Perlakuan  Media Bobot basah (mg)   Umur (bulan) Bulan 0 1 2 3 4 Ms 100 150 250 750 1200 Ms + ZPT 100 500 1000 1500 2000
Tabel 2. Bobot basah  Kultur  suspensi Perlakuan Bobot basah  Kultur  suspense (mg)   Umur (bulan) bulan 0 1 2 3 4 ZPT+ Fa 300 550 1980 2450 2100 Fa 300 500 980 980 750 Pada  Tabel  2  bobot  basah  kultur suspensi    peningkatan  hampir    6  kali pada  bulan  ke  dua  dengan  perlakuan ZPT  +  Fa,  namun  bila  perlakuan  tidak menggunakan ZPT peningkatan berkisar  3  kali  lipat.    Menurut  Hutami (2009) perbedaan hasil akhir pada kultur suspensi bukan
hanya
karena perbedaan perlakuan namun lebih
disebabkan oleh sel-sel secara morfologis  dan  fase  agregasi  yang berbeda.
Ekstraksi  kultur suspense &  analisis senyawa flavan-3-ol Ekstraksi kultur suspense dilanjutkan    dengan analisis    senyawa flavan-3-ol.  Hasil  ekstraksi    berupa biomasa  kultur  suspensi  yang  memadat
selanjutnya  diidentifikasi  menggunakan kromatografi  densitometri.  Gambar  1, menunjukkan standar flavan-3-ol- catechin      didapatkan  hasil  eluasi berupa   spot-spot  sampel yang berada satu  garis    dengan  standar  flavan-3-ol- catechin  (Sutini et.al., 2014).

## Flavan-3 ol  menunjang pangan fungsional
Flavan-3  ol  menunjang    pangan fungsional  seperti  yang  ditulis  oleh Winarno,  dan    Kartawidjajaputra  (2007) bahwa    konsumsi    tiga  cangkir  teh  per hari  (berisi  80%  total  polifenol  dan  50% EGCG)    atau    takaran    100-150  mg dalam  dosis  3  kali  sehari  dapat berfungsi sebagai anti oksidan.
Gambar 1. Dengan Densitometer Camag:kromatogram sampel (garis warna biru) dan standar (garis warna merah) terletak pada satu garis lurus (Sutini et.al., 2014).
Pada  Gambar  1  menunjukkan  letak kromatogram standar dan sampel   yang berada  pada  satu  garis  lurus  dengan pengamatan menggunakan densitometer camag, maka dapat disimpulkan  bahwa    sampel  kultur  in vitro  mengandung  senyawa  flavan-3  ol yang sama dengan standar.

## KESIMPULAN
Flavan-3  ol  dapat  diproduksi  secar kultur in vitro baik melalui kalus maupun kultur  suspensi    yang  diharapkan  dapat menunjang  bahan pangan  fungsional.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kepada  Dirjen  Dikti yang  telah  mendukung  dana  Hibah kompetitif  tingkat  nasional  sehingga penelitian berjalan dengan lancar.

## PUSTAKA
Haslam    E.  2007. Vegetable  tannins – Lessons  of  a  phytochemical lifetime . (Online ) www.elsevier.com/locate/p  hytoch em. J. Phytochemistry 68 :2713 –2721
Hernandes I., Alegre L., Sergi MB 2006. Enhanced  oxidation  of  ﬂavan-3-ols and proanthocyanidin accumulation   in water- stressed tea plants. (Online).www.elsevier.com/locate/p h  ytoch em . J. Phytochemistry
67:1120 –1126.
Hutami S.  2009.  Tinjauan Penggunaan Suspensi  Sel  Kultur  In  Vitro.  Jurnal AgroBiogen 5(2):84-92
Ke-Wang  L.,Chun-Hay  K.,  Grace  Gar- LY.  2014.  Green  tea  (Camellia sinensis)   extract  inhibits  both  the metastasis  and osteolytic components of mammary cancer 4T1 lesions in mice. O nline at www.sciencedirect.com.J. Nutritional  Biochemistry  25  :395 – 403
Mario  G. F., Bordenave N., Bruce R. H.
2012. Does
ﬂavor
impact function? Potential
consequences of  polyphenol – protein interactions delivery and  bioactivity of ﬂavan- 3-ols from foods. (Online). homepage:www.elsevier.com/loca te/phb. J. Physiology & Behavior: 591 –597. Murashige  T,  Skoog  F.  1962.  A  revised medium for rapidgrowth and bioassays  with  tobacco  tissue cultures. Physiol.Plant 15: 473-497 Naghma  Khan,  Hasan  Mukhtar.  2007. Tea polyphenols  for  health promotion. On line www.sciencedirect.com. J. Life Sciences 81 : 519 –533 Okello E.J., McDougall , G.J. , Kumar S. 2011.  In  vitro  protective  effects of colon-available extract of Camellia  sinensis  (tea)  against hydrogen peroxide and beta- amyloid (A_) induced cytotoxicity indifferentiated PC12 cells ( Online). www.elsevier.de/phymed. Phytomedicine 18: 691 –696 Sutini, 2010. Produksi Epigallocatechin Gallate MelaluiKalus  Camellia  Sinensis  L, Dengan Induksi Elisitor, Cu,Asam   Salisilat  Dan  Prekursor Fenilalanin. Disertasi. Program Pascasarjana  Fakultas  Pertanian Universitas Brawijaya Malang. Sutini, Susilowati ,  Mochamad  R  I., 2014.  Pengembangan    produksi flavan-3-ol melaluikultur  suspensi sel camellia  sinensis l  :  Untuk penghambatan    diferensiasi  sel adiposa.    Laporan  tahunan  Hibah penelitian    kompetensi.  Universitas Pembangunan  Na sional  “Veteran” Jatim.
Thayamini, Khanika  H  R,Hiriburegama WK.  1999.  Callus  formation  in anther    culture  of  te  clone camellia sinensis l.  J.  Natc  Sci.  Foundation Srilangka 27: 165-175.
Tores  J  L.,  Lozano  C.,  Julia  L.  2002.
Cysteinyl- ﬂavan-3-ol Conjugates from Grape Procyanidins. Antioxidant and Antiproliferative Properties . J. Bioorganic & Medicinal  Chemistry  10:  2497 – 2509 .
Winarno,  F.G  dan  F.  Kartawidjajaputra. 2007.  Pangan  Fungsional  dan Minuman  Energi.  M-BRIO  Press. Bogor.