BioEksakta: Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed Volume 6, Nomor 1 (2024): 37-43 E-ISSN: 2714-8564
Pengaruh Jenis Bahan Organik pada Pembuatan Eco-Enzyme terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphyloccocus aureus
Siti Nurhaliza, Inur Tivani *
Program Studi DIII Farmasi, Politeknik Harapan Bersama, Kota Tegal 52116, Indonesia * Corresponding author , Email: tiva.nie40@gmail.com
Rekam Jejak Artikel:
Diterima  : 06/02/2024 Disetujui  : 25/03/2024

## Abstract
Organic waste in Indonesia is increasing due to population growth. To deal with this problem, the utilization of organic waste in eco-enzymes is an easy solution. Eco-enzyme is the result of the fermentation of organic waste such as fruit and vegetable peels, sugar molasses, and water. This study aims to determine and compare the ability of eco-enzyme from a mixture of different types of organic materials to inhibit the growth of Staphylococcus aureus bacteria. The mixture of organic materials in the enzyme used was divided into 3 containers. Eco-enzyme 1 contains lemon peel, sugar, and water. Eco-enzyme 2 consists of lemon peel, pineapple peel, sugar, and water. Eco-enzyme 3 contains lemon peel, pineapple peel, kale vegetables, sugar, and water. The antibacterial activity was tested using the diffusion method. The data analysis method used was a statistical test with the one-way analysis of variance (one-way ANOVA) method and tested homogeneity and Bonferroni post-hoc tests. Based on the results of the eco-enzyme antibacterial activity  test  against S.  aureus ,  shows  that  certain  combinations  of  organic  materials  have different effectiveness. The most significant combination of organic components to kill S. aureus bacteria was eco-enzyme 3, with an inhibition zone diameter of 11.39 mm. Statistical analysys result  showed  that  there  was  a  significant  difference  in  the  inhibition  diameter  between  the organic materials and the enzyme mixture. The homogeneity test showed that the eco-enzyme groups were similar or homogeneous. Bonfenni's post-hoc test results obtained eco-enzyme three most influential in inhibiting S. aureus bacteria. It can be concluded that the more mixed types of organic materials used in eco-enzymes, the stronger their ability to inhibit S. aureus bacteria. Key Words : eco-enzyme, inhibition, organic matter, Staphylococcus aureus

## Abstrak
Sampah organik di Indonesia semakin meningkat akibat pertumbuhan jumlah penduduk. Dalam upaya  menangani  masalah  ini,  pemanfaatan  sampah  organik  menjadi eco-enzyme adalah  solusi yang mudah. Eco-enzyme merupakan hasil dari fermentasi sampah organik seperti kulit buah dan sayuran,  gula  molase  dan  air.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  dan  membandingkan kemampuan eco-enzyme dari  campuran  jenis  bahan  organik  yang  berbeda  dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus. Campuran  bahan  organik  pada eco-enzyme yang digunakan  dibagi  kedalam  3  wadah. Eco-enzyme 1  berisi  kulit  lemon,  gula,  air. Eco-enzyme 2 terdiri dari kulit lemon, kulit nanas, gula, air. Eco-enzyme 3 berisi kulit lemon, kulit nanas, sayur kangkung, gula, air. Serta dilakukan uji aktivitas antibakteri dengan metode difusi. Metode analisis data yang digunakan yaitu uji statistik dengan metode One Way Analysis of Varience (ANOVA satu arah), dan menguji homogenitas serta uji post-hoc bonferroni . Berdasarkan hasil penelitian uji aktivitas antibakteri eco-enzyme terhadap S. aureus menunjukkan bahwa kombinasi bahan organik tertentu memiliki efektivitas yang berbeda. Kombinasi komponen organik yang paling signifikan untuk membunuh bakteri S. aureus adalah eko-enzim 3, dengan diameter zona hambat 11,39 mm. Hasil  analisis  data  menunjukkan  perbedaan  signifikan  dalam  diameter  hambat  antara  bahan organik  dan  campuran  enzim.  Uji  homogenitas  menujukkan bahwa  antar kelompok eco-enzyme sama atau homogen dengan nilai signifikan 0.98. Hasil uji post-hoc bonfenni diperoleh eco-enzyme tiga  yang  paling  berpengaruh  dalam  menghambat  bakteri S.  aureus .  Kesimpulan  dari  penelitin yang dilakukan yaitu banyaknya campuran jenis bahan organik yang digunakan pada eco-enzyme , maka semakin kuat kemampuanya dalam menghambat bakteri S. aureus . Kata kunci: bahan organik, daya hambat, eco-enzyme, Staphyloccocus aureus

## PENDAHULUAN
Sampah menjadi masalah utama bagi masyarakat  Indonesia.  Pengolahannya  pun  menjadi permasalahan yang nyata akibat jumlah pertumbuhan penduduk  Indonesia  yang  semakin  meningkat terutama pada sampah organik. Dari data Kementrian Lingkungan Hidup dan Kehutanan Indonesia sampah organik termasuk yang paling banyak
peningkatannya  di  tahun  2020-2022  yang  mencapai 41,28% dibandingkan dengan sampah jenis lain yang relatif rendah (Anon., 2023)
Meskipun  terdapat  perbaikan  dalam  sistem pengolahan sampah di Indonesia, pengolahan sampah organik  masih  relatif  rendah.  Menurut  data  yang diperoleh dari Departemen Lingkungan  dan Sumber Daya  Hutan  tahun  2020,  hanya  sekitar  3%  sampah organik  yang  dapat  diolah  dalam  proses  kompos,
sedangkan  sisanya  masih  berakhir  di  tempat pembuangan  akhir  sampah  (TPAS). Pembuangan sampah organik yang tidak bisa terkelola dengan baik dapat berdampak negatif terhadap lingkungan. Proses penguraian  sampah  organik  di  TPA  menghasilkan gas  metana,  yang  merupakan  salah  satu  jenis  gas buangan  yang  berkontribusi  pada  perubahan  iklim. Selain  itu,  pembuangan  sampah  organik  yang  tidak terkendali  juga  dapat  menyebabkan  pencemaran tanah dan air (Siliana, 2023).
Menurut Imron (2020) salah satu pemaanfaatan limbah  organik  yaitu  dengan  mengolahnya  menjadi eco-enzyme .  Eko-enzime  adalah  hasil  dari  produk fermentasi  sampah  organik  seperti  ampas  atau  kulit buah dan sayuran, gula (gula aren, gula merah, atau gula  tebu),  dan  air.  Eko-enzime  memiliki  banyak manfaat  yaitu  dapat  digunakan  sebagai  pembersih serbaguna  seperti  pembersih  lantai,  pembersih  alat rumah  tangga  alami,  deterjen  dan  pelembut  alami, sabun  cair  alami,  membersihkan  peptisida,  kuman pada  sayuran  dan  buah.  Selain  itu  dapat  digunakan untuk  perawatan  diri  seperti  pengganti  odol/pasta gigi,  untuk  kumur,  sebagai  toner.  Jamur  putih  pada eco-enzyme atau  yang  sering  disebut mama  enzyme bisa  digunakan  untuk  masker  wajah  dan  sabagai campuran  sampo.  Selain  itu eco-enzyme dapat dimanfaatkan  dibidang  kesehatan  seperti  detoks, kebersihan  diri,  hand  sanitezer,  mengatasi  berbagai macam luka, mengatasi berbagai penyakit kulit yang diakibatkan  alergi,  infeksi  kulit  dan  lainnya, mengurangi tingkat radiasi elektromaknetik Ecoenzyme juga  dapat meningkatkan kulitas udara, air serta tanah, dan sangat membantu dalam pertanian (Poompanvong, R., Joean, O., dan Joni, 2020).
Penelitian  ini  akan  memfokuskan  pada  jenis bahan  organik  yang  digunakan,  seperti  kulit  lemon, kulit  nanas  dan  kangkung.  Berdasarkan  penelitian Tuberta  (2019)  menjelaskan  bahwa  limbah  kulit lemon dapat digunakan untuk pembuatan fermentasi eco-enzyme ,  selain  itu  kulit  lemon  memiliki kandungan  vitamin  C  dan  mengandung  berbagai senyawa  bioaktif  termasuk  flavonoid,  karotenoid, limonoid,  tanin,  dan  terpenoid.  Senyawa  bioaktif yang  terkandung  dalam  lemon  memiliki  sifat antibakteri.  Selain  limbah  kulit  lemon,  kulit  nanas bisa  digunakan  sebagai  bahan  fermentasi eco- enzyme . Sama halnya dengan kulit lemon kulit nanas juga banyak mengandung manfaat karena kulit nanas mengandung  sejumlah  senyawa  kimia  seperti flavonoid,  tannin  serta  saponin  berpotensi  sebagai agen antibakterial, kulit nanas di Indonesia sering kali hanya dijadikan limbah (Cayati, 2016).
Limbah  organik  yang  bisa  digunakan  lagi adalah  limbah  sayuran,  seperti  kangkung. Indonesia sebagai  negara  penghasil  sayuran  yang  melimpah, sering  mengimpor  sayuran  termasuk  kangkung. Selain itu, kangkung merupakan bahan pangan yang mudah diperoleh dan dapat ditemukan di pasar-pasar yang  tersebar  di  seluruh  Indonesia.  Kangkung termasuk  salah  satu  jenis  tanaman  yang  dapat
bertahan  hidup  di  dataran  rendah  maupun  tinggi. Kangkung  memiliki  daun  berwarna  hijau  yang berfungsi  sebagai  sumber  vitamin  A  (Sharfina  and Fevria, 2022).
Kandungan  yang  berbeda  dari  bahan  organik yang  telah  disebutkan  diatas  akan  memberikan pengaruh  yang  berbeda  dalam  menghambat  bakteri. Penggunaan bahan organik pada eco-enzyme sebagai alternatif  pengendalian  bakteri S.  aureus telah menarik  perhatian  peneliti. Eco-enzyme merupakan bahan  organik  yang  dihasilkan  dari  proses dekomposisi  bahan  organik  oleh  mikroorganisme. Menurut  (Welfalini,  Suartha  dan  Sudipa,  2022) fermentasi eco-enzyme memiliki  sifat  antimikroba yang  kuat  dan  mampu  menghambat  pertumbuhan mikroorganisme.  Ini  karena enzyme termasuk  asam asetat  (H 3 COOH),  yang  berfungsi  sebagai  agen antibakteri.
Namun,  meskipun  potensi  penggunaan  bahan organik eco-enzyme sebagai  agen  antimikroba  telah diketahui, masih terdapat kekurangan penelitian yang menyeluruh  mengenai  jenis  bahan  organik eco- enzyme yang  paling  efektif  dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri S.  aureus .  Oleh  karena  itu, penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengevaluasi pengaruh beberapa  jenis  bahan  organik  eco-enzyme terhadap daya hambat bakteri S. aureus . Diharapkan penelitian  ini  akan  memberikan  pemahaman  yang lebih  baik  terhadap  potensi  penggunaan  bahan organik eco-enzyme sebagai  agen  antimikroba alternatif  dala  m  pengendalian  infeksi  bakteri S. aureus ,  serta  memberikan  dasar  untuk  penelitian lebih  lanjut  dalam  pengembangan  antimikroba  baru yang berbasis eco-enzyme.

## MATERI DAN METODE
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini meliputi:  toples,  lakban,  plastik,  kresek,  gelas  ukur, batang pengaduk, beaker glass, tabung reaksi, cawan petri, kaki tiga penangas, kompor spirtus, asbes, pH meter,  incubator,  autoklaf,  timbangan,  neraca analitik,  mikro  pipet,  lidi,  kapas,  kasa  steril, alumunium foil, Laminar Air Flow (LAF), rak tabung reaksi, jarum ose, dan Bothdrop .
Bahan-bahan  yang  digunakan  pada  penelitian antara  lain  kulit  buah  lemon  diperoleh  dipenjual  es lemon  ditepi  jalan  di  daerah  Kota  Tegal,  kulit  buah nanas  dan  sayur  kangkung  diperoleh  di  pasar  pagi Kota  Tegal,  sedangkan  gula  pohot  atau  sisa  tetesan dari  gula  tebu  diperoleh  di  penjual  gula  pohot disekitar  pabrik  gula  tebu  Talang  Kota  Tegal. Kemudian  bahan  lainnya  air,  media Nutrient  Agar (NA) , media Brain  Heart  Infussion (BHI) , media Mueller Hinton Agar (MHA) , dan aquadest.
Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah fermentasi campuran bahan organik dari kulit dan  sayuran  pada eco-enzyme sebagai  uji  aktivitas antibakteri  dengan  metode  difusi. Eco-enzyme tersebut  dibuat  menjadi  3  wadah  dengan  perbedaan campuran  jenis  bahan  organik  yang  digunakan  dan
masing-masing  wadah  difermentasikan  selama  3 bulan.  Penelitian  ini  menggunakan  penelitian eksperimen  dengan  menguji  perbedaan  jenis  bahan organik  yang  digunakan  dan  mengukur  zona penghambatan  terhadap  pertumbuhan  bakteri S. aureus. Terdapat  4  perlakuan  yaitu  3  wadah eco- ezyme dan aquadest sebagai kontrol negatif dengan 3 kali pengulangan, jumlah seluruhnya terdapat 12 unit percobaan.

## Pembuatan Eco-enzyme
Perbandingan  pembuatan eco-enzyme yaitu air:bahan  organik:gula  (10:3:1)  (Dewi,  2021). Pembuatan eco-enzyme pada  penelitian  ini  dibuat menjadi  3  wadah  yang  dibedakan  dari  banyaknya jenis  bahan  organik  yang  digunakan  pada  setiap wadah.  Pembuatan eco-enzyme dilakukan  dengan pencucian  kulit  buah  lemon,  kulit  buah  nanas,  dan sayur  kangkung,  dikeringkan  dan  diiris  kecil-kecil. Masing-masing  bahan  organik  ditimbang,  untuk wadah  pertama  hanya  menggunakan  kulit  lemon sebanyak  1500  gram,  wadah  kedua  menggunakan kulit  lemon  750  gram  dan  kulit  nanas  750  gram, sedangkan  wadah  ketiga  menggunakan  kulit  lemon sebanyak 500 gram, kulit nanas 500 gram dan sayur kangkung sebanyak 500 gram. Semua bahan organik yang  sudah  ditimbang  dimasukkan  pada  masing- masing wadah yang sudah ditandai dengan tanda eco- enzyme 1 untuk wadah pertama, eco-enzyme 2 untuk wadah kedua, dan eco-enzyme 3 untuk wadah ketiga. Gula molase ditambahkan sebanyak 9.000 ml dan air sebanyak 9.000 ml pada setiap wadahnya, kemudian dihomogenkan. Selanjutnya wadah ditutup menggunakan  tutup  wadah  yang  sebelumnya  sudah di  lapisi  di  atasnya  dengan  kresek  dan  dilakban, pastikan  tertutup  dengan  rapat  jangan  sampai  ada rongga  udara  yang  masuk  kedalam  wadah  hal  ini dikarenakan  mempengaruhi  masa  fermentasi eco- enzyme .  Wadah  diletakkan  pada  tempat  yang  tidak terkena  langsung  paparan  cahaya  matahari,  tidak didekat  aliran  listrik  dan  jauhkan  dari  tempat  yang lembab karena dapat mempengaruhi hasil fermentasi. Fermentasi eco-enzyme tersebut  dilakukan  selama  3 bulan,  setelah  3  bulan  panen eco-enzyme tersebut dengan cara menyaring eco-enzyme untuk memisahkan  antara  jamur  dengan  larutannya menggunakan kain flannel (Poompanvong, R., Joean, O., dan Joni, 2020).

## Steriisasi alat
Sterilisasi pada penelitian ini, dilakukan dengan alat  autoklaf  yang  menggunakan  uap  dalam tekanannya.  Prosedurnya  menggunakan  suhu  121 0 C dengan  tekanan  2  atm  selama  15  menit.  Alat-alat yang  akan  disterilisasi  antara  lain:  cawan  petri, tabung  reaksi,  jarum  ose  bundar  dan  lurus, erlenmeyer, beaker glass, gelas ukur, penjepit kayu, kapas dan lidi. Selain itu, media NA,BHI, dan MHA disterilisasi sebelum dipakai untuk pengujian (Tivani and Sari, 2021).
Media Bakteri Dibuat Dengan Cara
Proses pembuatan media NA dilakukan dengan menimbang  serbuk  NA  instan  sebanyak  1,5  gram, mengambil  aquadest  sebanyak  75  ml.  Akuades dipanaskan  diatas  kompor  penangas,  setelah mendidih masukkan NA instan aduk sampai larut dan mendidih.  Kemudian  pH  media  diukur  (6,8-7,0). Media NA diangkat dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi,  kemudian  ditutup  menggunakan  kasa  dan kapas  serta  alumunium  foil.  Strerilisasi  media  NA dilakukan  menggunakan  autoklaf,  lalu  dimasukkan ke dalam pendingin udara dengan posisi dimiringkan.
Media  BHI  dibuat  dengan  cara  menimbang bahan  BHI  instan  sebanyak  2,78  gram  dan  75  ml aquadest.  Panaskan  aquadest  dan  masukan  BHI instan  aduk  sampai  larut  dan  mendidih.  Kemuadian cek  pH  (6,8-7,0),  angkat  dan  masukkan  ke  dalam tabung  reaksi  ditutup  menggunakan  kasa  dan  kapas dan  dilapisi  dengan  alumunium  foil.  Selanjutnya sterilisasikan media BHI kedalam autoklaf.
Pembuatan media MHA dilakukan dengan cara menimbang  bahan  MHA  instan  11,4  gram  dan dilarutkan  dengan  aquadest  sebanyak  300  ml  yang sebelumnya sudah dipanaskan hingga larut. Kemudian  cek  pH  (6,8-7,0),  masukkan  kedalam cawan petridish tutup cawan petridish dan dibungkus menggunakan alumunium foil dengan rapat kemudian sterilisasikan dengan autoklaf. Media BHI dan  MHA  selanjutnya    diinkubasi  selama  24  jam dengan suhu 37 o C (Tivani and Sari, 2021).

## Peremajaan Kultur Bakeri
Peremajaan  kultur  bakteri  dilakukan  dengan cara  mengambil  sejumlah  kecil  kultur  bakteri S. aureus yang  sudah  tumbuh  pada  satu  biakan  dan diambil  menggunakan  jarum  ose  steril  dari  kultur murninya  dan  dioleskan  secara  merata  pada permukaan  media  dengan  menggunakan  loop  steril. Loop steril digunakan untuk melakukan pengulangan pola garis-garis pada permukaan media. Hal tersebut dilakukan  untuk  memastikan  bahwa  setiap  koloni bakteri  yang  terbentuk  berasal  dari  satu  sel  bakteri (Hendri, Zakiah and Kurniatuhadi, 2023).

## Pengujian Daya Hambat Bakteri
Pengujian  daya  hambat  pertumbuhan  bakteri dilakukan  dengan  metode  difusi  agar  sumuran. Sumuran  dibuat  dengan  cara  membuat  lubang  pada media  menggunakan boor  drop sebanyak  4  lubang. Kemudian  kapas  lidi  steril  dicelupkan  pada  media BHI  yang  berisi  isolat  bakteri  dan  dioleskan  pada media MHA. Penelitian ini menggunakan tiga sampel yaitu Eco-enzyme satu  (hanya  menggunakan  kulit lemon  sebagai  campuran  bahan  organik  pada eco- enzyme ), Eco-enzyme dua  (kulit  lemon  dan  kulit nanas  sebagai  campuran  bahan  organik  pada Eco- enzyme ),  dan Eco-enzyme tiga  (kulit  lemon,  kulit nanas, dan sayur kangkung sebagai campuran bahan organik  pada eco-enzyme ).  Kontrol  negatif  pada penelitian ini menggunakan aquadest steril. Masing- masing sebanyak 50 mikro menggunakan mikropipet pada setiap lubang sumuran yang sudah diberi label
penanda  cawan  petri.  Rangkaian  cara  kerja  tadi dilakukan  sebanyak  tiga  kali replikasi  diruang  steril dengan  api  bunsen  menyala  serta  menggunakan sarung tangan dan masker sehingga tidak terkontaminasi  dengan  bakteri  lainnya.  Proses selanjutnya  menggunakan incubator dengan  suhu 37°C  selama  1-2  kali  24  jam.  Setelah  itu  diamati kemudian  menggukur  daerah  zona  bening  yang tampak  pada  media  dengan  diameter  statistik  dan diameter horizontal dengan satuan mm menggunkan jangka  sorong  (Oroh et  al. ,  2015).  Diameter  zona bening diukur menggunakan rumus (Welfalini Iet al., 2022).
Diameter zona bening: 𝑑1+𝑑2 2 − 𝑋
Keterangan: D 1 : Diameter vertical zona bening pada media D 2 : Diameter horizontal zona bening pada media
X: Diameter lubang sumuran
Semakin  lebar  diameter  zona  bakteri  maka semakin bagus bahan/sampel yang digunakan dalam menghambat  bakteri.  Adapun  kategori  zona  hambat terhadap bakteri tersaji pada Tabel 1.
Tabel 1. Kategori Zona Hambat Bakteri
Diameter Kekuatan hambat ≤5 mm Lemah 5-10 mm Sedang 11-20 mm Kuat ≥21 mm Sangat kuat (Davis & Stout, 1971) Analis Data
Hasil  dari  penelitian  eksperimen  ini  kemudian dianalisis menggunakan uji statistik dengan one way analysis  of  varian (ANOVA),  uji  homogenitas  dan dilanjutkan  uji post-hoc  bonfferoni pada  taraf  95% untuk perbandingan hasil uji diameter penghambatan pertumbuhan  bakteri.  Uji  statistik  ini  sangat  tepat digunakan dalam  penelitian  eksperimen karena  data yang diolah.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tujuan  dari  penelitian  ini  untuk  memahami bagaimana  jenis  bahan  organik  ( eco-enzym e) mempengaruhi  pertumbuhan  bakteri S.  aureus . Selama proses fermentasi, kandungan bahan limbah kulit dan sayuran dimetabolisme oleh mikroorganisme. Proses fermentasi dalam penelitian ini menggunakan gula molase atau gula pohot. Proses fermentasi  yang dimaksud  dengan  cepat dan  efisien menghasilkan  produk  fermentasi  dengan  kualitas mikrobiologis  dan  fisik  yang  dikontrol  oleh mikroorganisme  pembusuk.  Mikroorganisme  yang terdapat  pada  sisa    kulit  buah  dan  sayuran    akan mengeluarkan aroma khas karena mengandung asam yang nantinya berperan sebagai media pertumbuhan
bakteri, khamir, bahkan kapang (Suprayogi, Asra and Mahdalia, 2022).

## Pembuatan eco-enzyme
Bahan-bahan  untuk  membuat eco-enzyme memiliki peran dalam proses fermentasi. Gula molase merupakan  hasil  samping  dari  produks  gula  yang mengandung  mikroorganisme  aktif.  Gula  merah berfungsi  sebagai  substrat  untuk  fermentasi  dan bahan organik yang kaya karbon untuk bakteri yang terlibat  dalam  proses  fermentasi.  Penggunaan  gula merah  sangat  dianjurkan  karena  tidak  mengandung sisa  zat  pemutih.  Selain  itu,  gula  merah  memiliki energi  yang  lebih  tinggi  jika  dibandingkan  dengan gula  putih,  karena  gula  merah  memiliki  kandungan sukrosa  yang  lebih  tinggi  (84%)  jika  dibandingkan dengan  gula  pasir  sehingga  warna  yang  dihasilkan setelah fermentasi akan cenderung kecoklatan karena terjadinya reaksi yang diakibatkan oleh  gula, protein dan  asam  dari  bahan  organik  (Nururrahmani et  al ., 2021).  Hasil eco-enzyme setelah  melalui  proses fermentasi  selama  tiga  bulan  didapatkan  hasil  pada (Tabel 2).
Tabel 2. Hasil Pengamatan Organoleptis Pada Eco-
Enzyme Eco- enzyme Warna Bau Jamur pitera 1 Kuning kecoklatan Asam Tidak ada 2 Coklat pekat Asam segar Ada 3 Coklat pekat Asam segar Ada
Gambar 1. Eco-enzyme 1 Gambar 2. Eco-enzyme 2
Gambar 3. Eco-ezyme 3
Penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  setelah fermentasi  selama  3  bulan,  eco-enzyme  mengalami perubahan  warna  pada  setiap  wadahnya.  Wadah pertama menunjukkan warna agak kuning kecoklatan
Tabel 33. Hasil Diameter Zona Hambat Eco-enzyme pada Bakteri staphylococcus aureus
Pembagian kelompok Diameter Zona Hambat Bakteri (Mm) Rata-rata zona hambat Aktivitas antibakteri I II III K1 0 0 0 0 - K2 7,09 9,06 5,04 7,06 Sedang K3 8,05 10,07 16,01 11,38 Kuat K4 8,08 11,03 15,04 11,39 Kuat Catatan:
K1: Kelompok Aquadest K2: Kelompok Eco-enzyme dengan bahan organik kulit lemon K3: Kelompok Eco-enzyme dengan bahan organik kulit nanas dan kulit lemon K4: Kelompok Eco-enzyme dengan bahan organik kulit nanas, kulit lemon, dan kangkung
sementara  wadah  kedua  dan  ketiga  cenderung berwarna lebih kecoklatan dengan adanya pertumbuhan  jamur  pitera  serta mama  enzime . Perubahan warna ini karena dipengaruhi oleh proses fermentasi  gula  dan  variasi  jenis  campuran  bahan organik yang digunakan. Selain itu, eco-enzyme juga memiliki  bau  yang  berbeda  pada  setiap  wadahnya. Wadah pertama terdapat bau asam sementara wadah kedua  dan  ketiga  memiliki  aroma  khas  asam  segar. Eco-enzyme dikatakan  berhasil  jika eco-enzyme memiliki bau yang kuat, aroma asam segar yang khas, dan  kualitas  air  yang  banyak  (Nururrahmani  et  al., 2021).  Semakin  banyak  jenis  campuran  bahan organik yang digunakan maka semakin banyak hasil eco-enzyme nya (Poompanvong et al ., 2020).

## Uji aktvitas antibakteri eco-enzyme
Uji  aktivitas  antibakteri eco-enzyme terhadap bakteri S.  aureus ,  menggunakan  metode  difusi cakram  dengan  tiga  kali  pengulangan  pada  setiap kelompok  perlakuan.  Hasil  pengukuran  diameter daerah  hambat eco-enzyme menggunakan  jangka sorong dapat dilihat pada Tabel 3.
Gambar 4. Perlakuan 1 Gambar 5. Perlakuan 2
Gambar 6. Perlakuan 3
Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan  dalam penelitian  ini  untuk  melihat    zona  bening  yang terbentuk  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri dengan  3  kelompok  perlakuan  dari  larutan eco- enzyme .  Perbedaan  jenis  campuran  bahan  organik eco-enzyme yaitu, eco-enzyme satu, eco-enzyme dua, eco-enzyme tiga,  dan  aquadest  sebagai  kontrol negatif.  Hasil  yang  didapat  pada  uji  aktivitas antibakteri eco-enzyme terhadap S. aureus pada Tabel 3  diatas  menunjukan  bahwa  kelompok  satu  atau aquadest  tidak  ada  zona  hambat  yang  terbentuk. Sedangkan eco-enzyme dua hanya menggunakan satu campuran jenis bahan organik yaitu kulit lemon dapat menghambat  bakteri  namun  dalam  kategori  sedang. Kemudian eco-enzyme dua dan tiga dapat menghambat bakteri dan terbentuk zona bening pada media atau adanya zona hambat terhadap bakteri serta termasuk  dalam  kategori  kuat  namun,  lebih  besar zona bening yang terbentuk pada eco-enzyme ke tiga.

## Analisis bonferroni Eco-EnzymeTerhadap Bakteri
S. aureus
Dari  keempat  larutan  yang  digunakan,  dapat dikatakan eco -enzyme  ketiga  sangat  efektif  dalam menghambat  bakteri  karena  menggunakan  bahan organik lebih banyak. Hal tersebut karena banyaknya campuran  jenis  bahan  organik  pada eco-enzyme memberikan  pengaruh  terhadap  penghambatan bakteri S.  aureus .  Jenis  bahan  organik  memberikan sumbangan  terhadap  kandungan  zat-zat  terlarut dalam fermentasi. Menurut (Suprayogi et al. , 2022), juga menyebutkan bahwa pengaruh terpenting dalam eco-enzyme adalah  jenis  bahan  organik  yang digunakan. Selain itu pada masing-masing campuran jenis  bahan  organik eco-enzyme itu  sendiri mengandung  senyawa  antibakteri.  Pada eco-enzyme ketiga  menggunakan  campuran  bahan  organik  kulit lemon,  kulit  nanas  dan  sayur  kangkung  dari  ketiga bahan tersebut mengandung asam organik yang dapat menghambat bakteri dan termasuk kedalam golongan kuat.  Seperti  kulit  lemon  didalamnya  mengandung flavonoid  dan  alkaloid  berperan  sebagai  antibakteri (Lase,  2019).  Selain  itu  kulit  nanas  terdapat kandungan flavonoid dan bromin yang memiliki sifat antibakteri.  Kandungan  dari  masing-  masing  kulit lemon  dan  kulit  nanas  tersebut  dapat  menghentikan
metabolisme  pada  bakteri  akibat  dari  denaturasi protein dan menyebabkan kematian pada sel bakteri. Flavonoid  merupakan  komponen  antibakteri  yang potensial  sehingga dapat menghentikan sintesis pada dinding  sel  bakteri  (Husniah  and  Gunata,  2020). (Tivani  and  Sari,  2021)  juga  menyebutkan  bahwa kulit  nanas  mempunyai  sifat  antibakeri  yang  kuat terhadap  gram  positif.  Sedangkan  sayur  kangkung memiliki  kandungan  yang  sama  seperti  kulit  lemon dan kulit nanas, sayur kangkung  selain mengandung flavonoid  dan  alkaloid  terdapat  kandungan  saponin dan  triterpenoid  sebagai    antibakteri  (Baura et  al ., 2021).
Selain  itu  sifat  asam  asetat    dari  pembentukan alkohol  yang  dihasilkan  pada  proses  fermentasi menjadi alasan utama dalam menghambat bakteri S. aureus (Hendri,  Zakiah  and  Kurniatuhadi,  2023) . Dari penelitian (Sarabhai et al ., 2019), membuktikan gabungan bahan organik seperti kulit buah pada eco- enzyme mehasilkan  konsentrasi  asam  asetat  yang tinggi  untuk menghambat bakteri. Apabila campuran bahan organik alami yang digunakan kulit buah dan sayur, maka perbandingan penggunaan kulit buah dan sayur 80% kulit buah: 20% sayuran (Rosandi, 2022). Selain  itu,  tidak  ada  batasan  pada  campuran  bahan organik  yang  digunakan  dalam  pembuatan eco- enzyme ,  yang  paling  penting  dalam  pembuatannya adalah perbandingan bahan yang sesuai yakni 1:3:10. Selain  itu,  terdapat  empat  kriteria  penggunaan campuran  bahan  organik  pada eco-enzyme ,  yaitu tidak boleh dimasak, tidak boleh busuk, tidak boleh berlemak, dan tidak boleh berkulit keras (Poompanvong,  R.,  Joean,  O.,  dan  Joni,  2020).  Hal ini  dapat  mempengaruhi  hasil  dari eco-enzyme . Menurut (Welfalini et al. , 2022) semakin banyaknya jenis bahan organik dan konsentrasi yang digunakan memiliki  kemampuan  antibakteri,  oleh  karena  itu semakin  besar  zona  bening  terbentuk.  Faktor  ini menjadikan  zat  aktif  yang  dihasilkan  pada eco- enzyme akan meningkatan efektifitas dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Sehingga  dapat disimpulkan  bahwa  semakin  banyaknya  jenis campuran bahan  organik yang  digunakan  pada eco- enzyme ,  maka  akan  zona  hambat  yang  terbentuk semakin baik.

## SIMPULAN
Kesimpulan dari penelitian yang telah dilakukan  yaitu  campuran  jenis  bahan  organik pada eco-enzyme yang  dapat  secara  efektif  menghalangi pertumbuhan bakteri S. aureus adalah campuran kulit lemon,  kulit  nanas,  serta  kangkung  ( eco-enzyme 3) . Penelitian  ini  dapat  dikembangkan  lagi  menjadi produk sabun eco-enzyme .

## DAFTAR REFERENSI
Anon. 2023. SIPSN - Sistem Informasi Pengelolaan Sampah  Nasional .  [online]  Available  at: <https://sipsn.menlhk.go.id/sipsn/public/dat
a/komposisi>  [Accessed  19  November 2023].
Baura,  V.A.,  Pareta,  D.N.,  Tulandi,  S.S.  and  Untu, S.D.,  2021.  Uji  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Etanol  Daun  Kangkung  Air Ipomoea  aquatica  Forsk  Terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus. Biofarmasetikal Tropis , 4(1), pp.10–20. https://doi.org/10.55724/j.biofar.trop.v4i1.3 03.
Cayati,  M.B.,  2016.  Pemanfaatan  Sampah  Organik Kulit Buah Dan Sisa Sayuran Sebagai “Eco Enzim”  Untuk  Pengaplikasian  Pada  Air Limbah Tahu. 01, pp.1–23.
Dewi, D.M., 2021. Pelatihan Pembuatan Eco Enzyme Bersama Komunitas Eco Enzyme Lambung Mangkurat  Kalimantan  Selatan. Jurnal Pengabdian  ILUNG  (Inovasi  Lahan  Basah Unggul) , 1(1), pp.67–76.
Hendri,  H.,  Zakiah,  Z.  and  Kurniatuhadi,  R.,  2023. Antibacterial  Activity  of  Pineapple  Peel Eco-enzyme  (Ananas  comosus  L.)  on Growth  Pseudomonas  aeruginosa  and Staphylococcus epidermidis. Jurnal Biologi Tropis , 23(3), pp.464–474. https://doi.org/10.29303/jbt.v23i3.5272.
Husniah,  I.  and  Gunata,  A.F.,  2020.  Ekstrak  Kulit
Nanas sebagai Antibakteri. Jurnal
Penelitian  Perawat  Profesional ,  2(1), pp.85–90.
https://doi.org/10.37287/jppp.v2i1.51.
Junaidi,  I.L.,  Wijaya,  H.,  Shafira  Jarief,  R.  and Angkasa,  D.,  2021.  Pengaruh  Proses Fermentasi  dan  Non-Fermentasi  serta Pengeringan  dengan  Metode  Spray  Drying terhadap Mutu Serbuk Minuman Instan dari Buah Naga Merah (Hylocereus polyrhizus). Warta Industri Hasil Pertanian , 38(2), p.98. https://doi.org/10.32765/wartaihp.v38i2.69 86.
Karunia, A., 2016. ( ANOVA : Analysis of Variance) ( ANOVA : Analysis of Variance ). 2, pp.1– 20.
Lase,  N.T.,  2019.  Skrining  dan  Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Kulit  Buah  Jeruk Lemon  (Citrus  limon  (L.)  Burm.  fil.) Terhadap  Staphylococcus  aureus. Skripsi .
[online] Available at:
<http://repository.helvetia.ac.id/id/eprint/27
29>.
Nururrahmani,  A.,  Hibatulloh,  M.R.,  Nabila,  R.A. and  Djuarsa,  P.,  2021.  Ekoenzim  dari Berbagai  Jenis  Kulit  Jeruk. Jurnal  of Higiene , 9(1), pp.31–35.
Oroh,  E.S.,  Posangi,  J.  and  Wowor,  V.N.S.,  2015. Perbandingan Efektivitas Pasta Gigi Herbal Dengan  Pasta  Gigi  Non  Herbal  Terhadap Penurunan  Indeks  Plak  Gigi. e-GIGI ,  3(2). https://doi.org/10.35790/eg.3.2.2015.10020
Poompanvong,  R.,  Joean,  O.,  dan  Joni,  O.,  2020.
Pembuatan  Eco-Enzyme. Eco  enzyme nusantara , (November), pp.1–62.
Rosandi,  2024. Membuat  Eco-Enzyme  dan  Cara Pengolahannya  (2)  -  Indonesia .  [online]
Available
at:
<https://prcfindonesia.org/membuat-eco- enzyme-dan-cara-pengolahannya-2/> [Accessed 21 March 2024].
Sarabhai,  S.,  Arya,  A.  and  Arti  Arya,  C.,  2019. Garbage enzyme: A study on compositional analysis  of  kitchen  waste  ferments. The Pharma  Innovation  Journal ,  [online]  8(4), pp.1193–1197.
Sharfina,  A.F.  and  Fevria,  R.,  2022.  The  Effect  of Ecoenzymeon  Plant  Height  and  Leaf Number  of  Kangkung  (Ipomoea  reptans Poir)  Hydroponically  Cultivated. Serambi
Biologi , 7(3), pp.211–215.
Siliana,  O.,  2023. Bahaya  Sampah:  Mengancam Lingkungan  dan  Kesehatan  Manusia  - Kompasiana.com .  [online]  Available  at: <https://www.kompasiana.com/osy49452/6 4716f124addee26a55d7652/bahaya- sampah-mengancam-lingkungan-dan- kesehatan-manusia> [Accessed 19 November 2023].
Suprayogi,  D.,  Asra,  R.  and  Mahdalia,  R.,  2022. Analisis  Produk  Eco  Enzyme  Dari  Kulit Buah  NanaS  (Ananas  comosus  L.)  DAN JEruk  BerasTAGI  (Citrus  X  sinensis  L.).
Jurnal Redoks , 7(1), pp.19–27. https://doi.org/10.31851/redoks.v7i1.8414.
Tivani,  I.  and  Sari,  M.P.,  2021.  Uji  Efektivitas Antibakteri Ekstrak Kulit Buah Nanas Madu dan Kulit Buah Pepaya terhadap
Staphylococcus aureus. PHARMACY: Jurnal Farmasi Indonesia (Pharmaceutical
Journal of Indonesia) , 18(1), p.45. https://doi.org/10.30595/pharmacy.v18i1.8 030.
Welfalini, S.T., Suartha, I.N. and Sudipa, P.H., 2022. Uji  Daya  Hambat  Eko-enzim  terhadap Perumbuhan  Bakteri  Streptococcus  spp. yang  Diisolasi  dari  Jaringan  Ektodermal Kulit  Anjing. Buletin  Veteriner  Udayana , (158), p.169. https://doi.org/10.24843/bulvet.2023.v15.i0
2.p02.