## KANDUNGAN FLAVONOID DAN KAPASITAS ANTIOKSIDAN TOTAL EKSTRAK ETANOL DAUN BINAHONG [Anredera
cordifolia(Ten.)Steenis.]

## Widya Selawa, Max Revolta John Runtuwene, Gayatri Citraningtyas
Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT MANADO, 95115

## ABSTRACT
The objectives of this research were to determineflavonoid content and total antioxidant capacity  of    Ethanolic  extract  of  Binahong  Leaf[Anredera  cordifolia  (Ten.)  Steenis].  Total flavonoid were evaluated using Chang (2002) method, identification of flavonoid using thin layer  chromatography  and  color  reaction.  Evaluation  of  antioxidant  activity  using  ferric reducing  antioxidant  power  (FRAP)  method.  The  results  shows  that  ethanolic  extract  of Binahong  leaf  possess  total  flavonoids  11,266  mg/kg  (fresh)  and  7,687  mg/kg  (dry). Flavonoids  contain  in  both  extracts  were  flavonols  group.  Ethanolic  extract  of  Binahong possess total antioxidant 4,25 mmol/100g (fresh) and 3,68 mmol/100g (dry).
Keywords:  total  flavonoids,  total  antioxidant,  ferric  reducing  antioxidant  power,Anredera cordifolia Steenis.

## ABSTRAK
Tujuan  penelitian  ini  yaitu  untuk  menentukankandungan  flavonoiddan  kapasitas antioksidantotal  ekstrak  etanol  daun  Binahong  [Anredera  cordifolia(Ten.)  Steenis]. Kandungan flavonoid total diuji menggunakan metode Chang, (2002), identifikasi flavonoid menggunakan  kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  dan  reaksi  warna.  Pengujian  antioksidan  total menggunakan  metode  ferric  reducing  antioxidant  power  (FRAP).  Hasil  penelitian menunjukkan  ekstrak  etanol  daun  Binahong  mengandung  flavonoid  total  sebesar  11,263 mg/kg (segar) dan 7,81 mg/kg (kering). Flavonoid yang terkandung dalam ekstrak kering dan segar termasuk golongan flavonol. Ekstrak etanol daun Binahong memiliki antioksidan total sebesar 4,25 mmol/100g (segar) dan 3,68 mmol/100g (kering).
Kata  kunci:  flavonoid  total,  antioksidan  total,  ferric  reducing  antioxidant  power,  Anredera Cordifolia(Ten.) Steenis.

## PENDAHULUAN
Radikal  bebas  merupakan  suatu senyawa asing yang masuk ke dalam tubuh dan  merusak  sistem  imunitas  tubuh. Radikal bebas tersebut dapat timbul akibat berbagai  proses  kimia  yang  kompleks dalam  tubuh,  polutan  lingkungan,  radiasi zat-zat  kimia,  racun,  makanan  cepat  saji, dan  makanan  yang  digoreng  pada  suhu tinggi.    Jika  jumlahnya  berlebih,  radikal bebas akan memicu efek patologis.
Radikal  bebas yang  berlebih  dapat menyerang  apa  saja  terutama  yang  rentan seperti lipid, protein dan berimplikasi pada timbulnya  berbagai  penyakit  degeneratif. Oleh  karena  itu  pembentukan  radikal bebas  harus  dihalangi  atau  dihambat dengan antioksidan.
Senyawa-senyawa  yang  mampu menghilangkan,  membersihkan,  menahan efek radikal disebut antioksidan.Antioksidan menstabilkan
radikal bebas dengan melengkapi kekurangan  elektron  yang  dimiliki  radikal bebas,  dan  menghambat  terjadinya  reaksi berantai  dari  pembentukan  radikal  bebas. Selain itu, antioksidan juga berguna untuk mengatur agar tidak terjadi proses oksidasi berkelanjutan di dalam tubuh.
Keanekaragaman  hayati  Indonesia sangat berpotensi dalam penemuan senyawa baru sebagai antioksidan. Beberapa  penelitian  menunjukan  bahwa beberapa  tumbuhan  terbukti  bermanfaat melindungi  tubuh  manusia  dari  bahaya radikal  bebas,  karena  adanya  antioksidan yang  terdapat  dalam    tumbuhan  tersebut. Secara alami, tumbuhan yang mengandung antioksidan  tersebar  pada  berbagai  bagian tumbuhan  seperti  akar,  batang,  kulit, ranting,  daun,  buah,  bunga  dan  biji (Hutapea, 2005).
Tumbuhan yang berkhasiat sebagai obat  memiliki  zat-zat  penting  yang  sangat berperan dalam menentukan aktivitas kerja tumbuhan  obat  tersebut,  salah  satunya yaitu  flavonoid  yang  umumnya  terdapat pada tumbuhan sebagai glikosida.Flavonoid  termasuk  senyawa fenolik  alam  yang  potensial  sebagai
antioksidan.Salah  satu  tumbuhan  yang menarik  untuk  diteliti  sebagai  komponen aktif  antioksidan  adalah  binahong.Secara empiris  beragam  khasiat  binahong  telah diakui, untuk mengatasi beberapa penyakit seperti luka bakar, kanker, dan jantung.
Metode  FRAP  adalah  satu-satunya metode  yang  secara  langsung  mengukur antioksidan  dalam  bahan.    Vargia  (2002) mengamukakan  bahwa  metode  FRAP adalah  metode  yang  digunakan  untuk menguji  antioksidan  dalam  tumbuh  – tumbuhan.    Kelebihan  metode  FRAP  ini yaitu  metodenya  yang  murah,  cepat,  dan reagen  yang  digunakkan  cukup  sederhana serta tidak menggunakan alat khusus untuk menghitung total antioksidan.

## METODE PENELITIAN Alat
Alat  yang  digunakan  yaitu  pisau, tabung  reaksi,  gelas  kimia,  ayakan  ukuran 65 mesh, batang pengaduk, stirrer, corong, pipet  tetes,  pipet  ukur,  labu  Erlenmeyer, gelas  piala,  kertas  saring,  tissue,  lumpang, penjepit  tabung,  vortex,  pemanas  listrik, timbangan  analitik,  mikropipet,  rotary evaporator, spektrofotometer UV-Vis.

## Bahan
Daun  binahong,  aquades,  butanol, asam  asetat,  etanol  p.a,  asam  klorida, alumunium klorida, natrium asetat trihidrat, 2,4,6- tri-pridyal-s-triazine
(TPTZ) lempeng KLT 60 F 254, feri klorida heksahidrat, fero sulfat heptahidrat.

## Preparasi sampel
Sampel  daun  binahong  yang  akan digunakan  berupa  sampel  segar  yang dipetik  dari  tumbuhan  binahong  tersebut. Sampel  segar  ini  selanjutnya  dibagi menjadi  dua  bagian  yaitu  bagian  untuk serbuk  segar  dan  bagian  untuk  serbuk kering.    Serbuk  kering  diperoleh  dari sampel  segar  yang  dibersihkan  terlebih dahulu,  kemudian  dikeringkan  secara alami  di  udara  dengan  tidak  dikenai  sinar matahari  langsung  selama  ±  7  hari, kemudian  diblender  dan  diayak  dengan ayakan  65  mesh.    Serbuk  segar  diperoleh dari  sampel  segar  yang  dipotong-potong
hingga  menjadi  serbuk  tanpa  adanya pengeringan.
Penentuan kadar air(Sudarmadji, 2003).
Penentuan  kadar  air  ditentukan dengan  metode  pemanasan  menggunakan oven.  Sampel ditimbang sebanyak ± 3 g di dalam  cawan  porselin,  dimasukan  dalam oven  dengan  temperetur  pemanasan  105 ºC  selama  3  jam  kemudian  didinginkan, lalu  sampel  ditimbang.    Kemudian dipanaskan  kembali  dengan  oven  dan didinginkan    sampai  mencapai  berat konstan.
Rumus  perhitungan  kadar  air  sebagai berikut :
Kadar air × 100%
Keterangan : A = Berat sampel sebelum dipanaskan B = Berat sampel setelah dipanaskan (Sudarmadji, 2003).
Rendemen Pengujian daun binahong diperoleh dari berat ekstrak binahong yang dihasilkan  dibagi  dengan  berat  binahong yang digunakan.
Perhitungan :
Rendemen binahong  (%)
%

## Ekstraksi sampel
Sebanyak  50  g  sampel  masing- masing serbuk kering dan segar dimaserasi dengan  250  ml  etanol  p.a  dimasukan  ke dalam  Erlenmeyer  500  ml  selama  24  jam dengan  beberapa  kali  diaduk,  setelah  itu disaring  untuk  memisahkan  ampas  dan filtratnya.
Selanjutnya  filtratnya  dievaporasi sehingga didapatkan ekstrak kental.Ekstrak  kental  yang  diperoleh ditimbang dan disimpan di dalam desikator sebelum digunakan untuk uji selanjutnya. Penentuan kadar flavonoid
Penentuankadar
flavonoid dilakukan dengan spektrofotometri menggunakan  reagen  alumunim  klorida. Sebanyak  2  mL  larutan  ekstrak  dengan konsentrasi  50  µg/mL,  di  tambahkan dengan 2 mL alumunium klorida 2% yang telah  dilarutkan  dengan  etanol,  kemudian divorteks  selama  20  menit,  inkubasi
campuran  larutan  selama  24  menit.    Ukur absorban  pada  415  nm.    Buat  perhitungan rata-rata 3 kali pengukuran dan kandungan flavonoid  dinyatakan  dengan  kesetaraan pembanding baku (Chang dan Wen, 2002). Penentuan antioksidan total Pembuatan larutan :

## Larutan Buffer Asetat
Buffer  asetat  dengan  pH  3,6  dibuat dari  0,775  g  natrium  asetat  trihidrat (CH 3 COONa.3H 2 O)  yang  ditambahkan dengan  4  mL  asam  asetat  pekat  dan dilarutkan dengan aquade hingga tepat 250 mL dalam labu takar.
Larutan  10  mmol/mL  2,4,6-tripyridil-s- triazine (TPTZ)
Sebanyak  0,15  g  TPTZ  dilarutkan dalam  40  mmol/L  HCl  hingga  tepat  50 mL.  Larutan  40  mmol/L  HCl  dibuat dengan  melarutkan  0,828  mL  HCl  pekat dalam 250 mL aquades.
Larutan 20 mmol/L FeCl 3 .6H 2 O Sebanyak 0,54 g FeCl 3 .6H 2 O dilarutkan  dengan  aquades  dalam  labu takar hingga tepat 100 mL.

## Reagen FRAP
Reagen  FRAP  dibuat  dengan  cara mencampurkan  25  mL  buffer  asetat,  2,5 mL  larutan  TPTZ  dan  2,5  larutan FeCl 3 .6H 2 O,  lalu  ditambahkan  aquades hingga tepat 100 mL dalam labu takar.
Larutan Standar FeSO 4 .7H 2 O Larutan  stock  10.000  µmol/L FeSO 4 .7H 2 O  dibuat  dengan  melarutkan 2,78  g  FeSO 4 .7H 2 O  dalam  1000  mL aquades.  Selanjutnya  dari  larutan  stock 10.000  µmol/L  FeSO 4 .7H 2 O  diambil sebanyak  100  mL  dan  diencerkan  hingga 1000  mL  hingga  diperoleh  konsentrasi 1000  µmol/L  FeSO 4 .7H 2 O.    Larutan  1000 µmol/L  FeSO 4 .7H 2 O  diambil  masing  – masing sebanyak 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5 mL dan  ditempatkan  pada  labu  takar  berbeda dan  diencerkan  dengan  aquades  100  mL. Konsentrasi  larutan  standar  FeSO 4 .7H 2 O yang terbentuk berturut – turut 1, 2, 3, 4, 5 µmol/L
Penentuan Antioksidan Total Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Panjang gelombang maksimum diperoleh  melalui  pengukuran  absorbansi dari standar FeSO 4 ,7H 2 O dengan konsentrasi  yang  paling  tinggi  (1000 µmol/L).    Dari  larutan  tersebut  diambil sebanyak  1  mL  kemudian  ditambahkan reagen  FRAP  sebanyak  3  mL,  lalu  dibaca pada  setiap  panjang  gelombang  dalam kisaran 588-598 nm dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis.
Penentuan Absorbansi Sampel Larutan sampel daun binahong sebanyak  0,1  mL  ditambah  reagen  FRAP sebanyak  3  ml  dalam  tabung  reaksi. Selanjutnya  larutan  dibaca  absorbansinya dengan  menggunakan  spektrofotometer dengan  panjang  gelombang  maksimum (596 nm).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tabel  1.Hasi  preparasi  sampel  binahong  [Anredera  cordifolia (Ten.)  Steenis]  dilihat  secara  organoleptik,  hasil  perhitungan kadar air dan rendemen.
Karakteristik organoleptik serbuk Kadar air rendemen Bentuk Warna Bau Rasa Tekstur Serbuk Hijau tua Berbau khas Pahit dan sepat Halus dan lembab 81,99 % 3,29 %
Pada sampel
segar tidak mengalami  proses  pengolahan  lebih  lanjut sehingga  warna  masih  terlihat  cerah.  Hal tersebut  sejalan  dengan  pendapat  yang dikemukakan  oleh  Winarno  dkk  (1980), yaitu  proses  pengeringan  menyebabkan pigmen warna menjadi rusak dan berkurang, sampel segar memiliki kandungan  air  masih  tinggi  sehingga kandungan  cairan  masih  besar  yang membuat tekstur sampel halus dan lembab. Hal  ini  juga  didukung  oleh  penelitian  Nia (2009), yang menyatakan bahwa perbedaan tekstur pada sampel anggur laut diakibatkan karena
adanya proses pengeringan.

## Kandungan Flavonoid
Flavonoid  totalpada  sampel  segar daun  binahong  diperoleh  dengan  cara memasukan  nilai  absorbansi  pada  kurva standar kuersetin dengan persamaan kurva yaitu  y = 0,0278x – 0,0022 sehingga hasil dari  besar  flavonoid  pada  sampel  segar daun binahong  yaitu sebesar 11,23 mg/kg. kandungan  flavonoid  pada  sampel  segar lebih  besar,  karena  pada  proses  preparasi sampel segar tidak mengalami pemanasan. Hal tersebut dikarenakan proses pemanasan  dapat  membuat  kadar  dari senyawa  flavonoid  berkurang.    Lusivera (2002) mengatakan bahwa proses pemanasan ini dapat mengakibatkan penurunan kadar total flavonoid sebesar 15 – 78 %.

## Penentuan Konsentrasi Antioksidan
Total
Pada  penelitian  ini  penentuan kandungan  antioksidan  total  dilakukan dengan  menggunakan  metode  FRAP. Metode  ini  dapat  menentukan  kandungan antioksidan total dari suatu bahan berdasarkan kemampuan senyawa antioksidan  untuk  mereduksi  ion  Fe 3+ menjadi Fe 2+ sehingga kekuatan
antioksidan  suatu  senyawa  dianalogikan dengan kemampuan mereduksi dari senyawa tersebut (Halvorsen dkk, 2002). Data  yang  akan  diukur  dalam menentukan  total  antioksidan  berupa absorbansi.    Absorbansi  tersebut  didapat pada  saat  pengukuran  pada  panjang gelombang  maksimal  larutan  standar FeSO 4 .7H 2 O  1  mL  yang  ditambahkan dengan reagen FRAP 3 mL.  Dapat ditulis persamaan  regresinya  seperti  y  =  0,8731x –  0,0577,  dengan  y  adalah  absorbansi  dan x  adalah  konsentrasi.    Fungsi  persamaan regresi yaitu sebagai acuan untuk menentukan  konsentrasi  total  antioksidan pada daun binahong.
sampel Konsentrasi antioksidan mmol/100g Sampel segar Sampel kering 4,25 3,68
Hasil  penelitian  ini  menunjukan bahwa  total  antioksidan  pada  kedua sampel  ini  memiliki  perbedaan,  yang menunjukan  bahwa  proses  pengolahan sampel memberikan pengaruh yang berbeda  terhadap  uji  aktivitas  antioksidan.
Senyawa antioksidan sangat mudah
mengalami perubahan.Berbagai jenis pengolahan
dapat mengakibatkan hilangnya  senyawa  antioksidan  yang terdapat pada suatu sampel.

## KESIMPULAN
1. Flavonoid yang terkandung pada ekstrak  daun  binahong  dari  sampel segar dan kering adalah 7,81 mg/kg dan 11,23 mg/kg.
2. Jenis  flavonoid  yang  diperoleh  dari hasil  isolasi  dan  identifikasi  serbuk segar  dan  serbuk  kering  ekstrak  etanol daun binahong ialah flavonol.
3. Ekstrak etanol daun binahong (Anredera  cordifolia  (Ten.)  Steenis)
memiliki kapasitas sebagai antioksidan. Sampel kering memiliki total
antioksidan  sebesar  3,68  mmol/100  g dan  pada  sampel  segar  sebesar  4,25 mmol/100 g.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  mengenai  khasiat  antioksidan  dari daun  binahong  yang  bermanfaat  bagi manusia.

## DAFTAR PUSTAKA
Chang  C.  Yang  M,  Wen  Hand  Chern  J. 2002. Estimation of  Total Flavonoid Content in Propolis by Two Complementary Colorimetric Methods, J. Food Drug Anal.
Halvorsen  BL,  et  al.  2002.  A  Systematic
Screening  of  Total  Antioxidant  In Dietary Plants. J.  Nutrition.
Ho  HA.  1992.  Antioxydant  Activity  of Flavonoids Isolated from Scutellaria rehderiana. J.  Am.  Oil Chem.  Soc.
Kumalaningsih.  2007.  Antioksidan  dan
Penangkal  Radikal  Bebas.  Jakarta:
Penerbit Trubus Agrisarana. Marhkam, R.K. 1988. Cara Mengidentifikasi Flavonoid. Bandung: Penerbit ITB. Prior, R.L., X.Wu., dan K.  Schaich. 2005. Standardized Method for the
Determination of Antioxidant Capacity  and  Phenolic  in  Food  and Dietary  Supplements.  Journal  of agricultural and food chemistry.
Filename: 4 Directory: C:\Documents and Settings\User\My Documents Template: C:\Documents and Settings\User\Application Data\Microsoft\Templates\Normal.dotm Title:
Subject:
Author:
User Keywords: Comments: Creation Date: 1/18/2013 7:04:00 PM Change Number: 38 Last Saved On: 2/19/2013 2:32:00 PM Last Saved By: User Total Editing Time: 173 Minutes Last Printed On: 2/19/2013 2:32:00 PM As of Last Complete Printing Number of Pages:  5 Number of Words:  2,033 (approx.) Number of Characters:
11,593 (approx.)