Efektivitas Pemberian Ekstrak Ethanol Daun Polyscias obtusa dan Elephantopus scaber terhadap Modulasi Sel T CD4+ dan CD8+ pada Mencit Bunting BALB/c
Roffico 1) , Muhammad Sasmito Djati 2)
1),2) Laboratorium Fisiologi Hewan, Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Brawijaya, Malang
1) fallenroffico@yahoo.co.id dan 2) msdjati@ub.ac.id

## ABSTRAK
Tanaman  yang  memiliki  potensi  untuk  digunakan  sebagai  obat  dalam  pengobatan tradisional  adalah Kedondong  Laut  (Polyscias  obtusa)  dan  Tapak  Liman  (Elephantopus  scaber.  L).  Tanaman  ini  mengandung senyawa  aktif  yang  dapat  mempengaruhi  mekanisme  pertahanan  tubuh.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui bagaimana efek dari ekstrak ethanol daun Polyscias obtusa dan Elephantopus scaber. L terhadap ekspresi sel T CD4+ dan CD8+ pada mencit bunting BALB/c. Hasil menunjukkan bahwa jumlah relatif sel T CD4+ dan CD8+ tidak berbeda nyata (p> 0,05) dapat diketahui dari peningkatan dan penurunan yang terjadi pada  setiap  perlakuan  dibandingkan  dengan  kontrol.  Hal  ini  berarti,  rata-rata  jumlah  relatif  sel  T  tidak berbeda  secara  nyata  untuk  perlakuan  yang  diberikan  pada  mencit  bunting  BALB/c.  Berdasarkan  hasil output Tukey Test dan subset yang terbentuk terlihat bahwa jumlah relatif sel T tidak berbeda nyata untuk perlakuan  yang  diberikan  pada  mencit  bunting  BALB/c.  Hasil  juga  menunjukkan  jumlah  relatif  sel  T memang  berbeda  secara  nyata  (p<  0,05)  untuk  waktu  pembedahan.  Namun,  setelah  dilakukan  Tukey  Test subset  yang  terbentuk  menunjukkan  bahwa  jumlah  relatif  sel  T  tidak  berbeda  nyata  (p>  0,05)  terhadap waktu pembedahan. Kenaikan dan penurunan jumlah sel T CD4+ dan CD8+, kemungkinan karena aktivitas biologis  senyawa  yang  terkandung  dalam  P.  obtusa  yaitu  panaxidol  dan  stiqmasterol  dalam  E.  scaber  yang dapat bertindak sebagai imunosupresan dan imunomodulasi. Dosis optimum ekstrak ethanol daun P. obtusa dan E. scaber dalam peningkatan sel limfosit belum dapat ditentukan.

## Kata kunci: Elephantopus scaber, limfosit, Polyscias obtusa

## ABSTRACT
Plants  that  have  the  potential  to  be  used  as  a  drug  in  traditional  medicine  are  Kedondong  Laut (Polyscias obtusa) and Tapak Liman (Elephantopus scaber. L), these plants contain active compounds that can affect the body's defense mechanisms. This study aims to determine how the effects of the ethanol extract of the  Polyscias  obtusa    and  Elephantopus  scaber  L.  leaves  on  the  expression  of    CD4+  and  CD8+  T  cells  in pregnant mice  strain BALB/c. The results showed that the relative amount of CD4+ and  CD8+  T cells were not  significantly  different  (p>  0.05)  can  be  determined  from  the  increase  and  decrease  in  each  treatment compared with the control. This means  that, on average the relative number of  T cells was not significantly different for the treatment accorded to pregnant mice BALB/c. Based on the results of the Tukey test output and  the  subset  that  forms  seen  that  the  relative  number  of  T  cells  was  not  significantly  different  for  the treatment  to  be  given  to  pregnant  mice  BALB/c.  The  results  also  show  the  relative  number  of  T  cells  was significantly different (p <0.05) for the time of surgery. However, after the Tukey test showed that the subset that forms the relative number of T cells was not significantly different (p> 0.05) to the time of surgery. The increase and decrease in the number of CD4+ and CD8+ T cells, possibly due to the biological activity of the compounds  contained  in  the  P.  obtusa  is  panaxidol  and  E.  scaber  is  stiqmasterol  in  that  can  act  as  an immunosuppressant and immunomodulating. The optimum dose of ethanol extract of P. obtusa and E. scaber leaves can increase lymphocyte cells could not be determined.

## Key words: Elephantopus scaber, lymphocytes, Polyscias obtusa

## PENDAHULUAN
Kehamilan berhubungan erat dengan respon imun  maternal.  Terjadi  reaksi  penolakan  yang dilakukan oleh sel-sel fagosit ketika antigen berada di  saluran  reproduksi. Hal ini  disebabkan  dari  gen
paternal  yang  dianggap  sebagai  protein  asing  oleh tubuh  maternal.  Selama  hamil,  sistem  kekebalan tubuh berubah. Ibu hamil jadi lebih rentan terhadap penyakit dan infeksi oleh bakteri dan virus. Hal ini karena  janin  memiliki  separuh  DNA  dari  sang
ayah,  sehingga  sistem  kekebalan  tubuh  ibu mengenali  sebagai  antigen  asing.  Oleh  karena  itu, selama kehamilan sistem kekebalan tubuh berubah agar  tidak  membahayakan  janin  dalam  kandungan [1].
Perubahan  dalam  sistem  kekebalan  tubuh ibu yaitu dengan berkurangnya aktivitas sel T. Sel ini  yang  membantu  mengontrol  infeksi  virus, bakteri  dan  patogen  lain.  Akibat  menurunnya fungsi  sel  T,  ibu  hamil  jadi  lebih  rentan  terhadap infeksi,  seperti  infeksi  saluran  kemih,  infeksi  dari bakteri seperti Salmonella penyebab demam tifoid. Sebagai  contoh,  infeksi  dari  bakteri  seperti Salmonella  juga  tentu  dapat  membahayakan  ibu hamil  dan  janin.  Hal  ini  pasti  menimbulkan  dua kekhawatiran yaitu apa penyakitnya bisa membahayakan  janin  dan  apa  obat  yang  diminum berbahaya  bagi  janin.  Beberapa  penyakit  infeksi selama  kehamilan,  memang  lebih  berisiko  pada ibu, tapi juga bisa membahayakan janin, antara lain bisa  menyebabkan  keguguran,  kelahiran  prematur, bayi  lahir  dengan  menderita  kelainan  atau meninggal di dalam kandungan [1]. Sehingga  penggunaan  obat  sintetik  sebaiknya diminimalkan.  Terdapat  alternatif  lain  untuk menghindari  penggunaan  obat  sintetik  yang berdampak  destruktif,  yaitu  dengan  penggunaan obat herbal. Obat herbal ini berasal dari tumbuhan sehingga  memberi  efek  sistemik  pada  tubuh  tidak seperti obat aktif sintetik [2].
Salah satu contoh tumbuhan yang berpotensi sebagai  obat  herbal  yaitu  Polyscias  obtusa  dan Elephantopus  scaber.  Kedua  tumbuhan  ini  dapat dijadikan  alternatif  untuk  mengurangi  penggunaan obat  sintetik  yang  berdampak  negatif  bagi  janin dan  tubuh  maternal.  Tumbuhan  Kedondong  Laut (Polyscias obtusa) dan Tapak
Liman
(Elephantopus  scaber.  L)  mengandung  senyawa aktif  yang  mampu  mempengaruhi  mekanisme pertahanan tubuh [3,13,14,15]. Mekanisme pertahanan alamiah tubuh itu meliputi reaksi-reaksi spesifik maupun reaksi non-spesifik yang berperan dalam  proses  eliminasi  penyebab  penyakit  dan mikroba [4]. Tanaman Tapak Liman juga diketahui dapat  mengatasi  berbagai  penyakit  radang  seperti peradangan amandel, influenza, radang tenggorok, radang  mata,  radang  ginjal  akut  dan  kronis  serta radang  rahim  [5].  Tumbuhan  ini  dimungkinkan dapat membangun kembali kondisi pemulihan dari tubuh maternal.
Salah  satu  alternatif  untuk  memahami manfaat  suatu  tanaman  secara  farmakologis  dapat dilakukan  dengan  cara  mengamati  determinasi pertumbuhan  hematopoietic  stem  cells  (HSC), terutama  mobilisasi  HSC  yang  mengarah  dalam terbentuknya sistem imun. Sistem imun terdiri dari sistem  imun  alamiah  atau  non  spesifik  dan  sistem imun  spesifik.  Sistem  imun  spesifik  terdiri  dari sistem  imun  spesifik  humoral  dan  selular.  Bagian yang  berperan  dalam  sistem  imun  spesifik  selular adalah  limfosit  T.  Sel  T  berfungsi  sebagai regulator  dan  efektor,  salah  satu  organ  yang berperan  dalam  metabolisme  sistem  imun  adalah limpa [4].
Sel  limfosit  T  akan  berproliferasi  menjadi beberapa  subpopulasi  sel  T,  seperti  sel  T  helper (CD4 + ), sel T sitotoksik (CD8 + ), dan sel T memori. Sel  T  berkembang  menjadi  dua  subset:  CD4 + Th yang  berkembang  menjadi  Th1,  Th2  dan  CD8 + CTL/Tc.  Sel  T  juga    mengekspresikan  reseptor  T spesifik  yang  berperan  dalam  proteksi  terhadap infeksi virus dan infeksi intraseluler [6,13,14,15].
CD4 merupakan antigen yang mengekspresikan  sel    pada  subset  timosit  dan  sel inflamasi sel T (sekitar 2/3 sel T perifer),  monosit dan  makrofag.  CD4  berfungsi  sebagai  ko-reseptor MHC kelas-II (Mayor Histocompatibility Complex) dan mengikat Lck   pada membran  yang berhubungan  dengan  membran.  Sedangkan  CD8 adalah  antigen  yang  mengekspresikan  sel  subset timosit, sel T sitotoksik. CD8 ini berperan sebagai ko-reseptor  MHC  kelas  I  dan  mengikat  Lck  pada membran  yang  berhadapan dengan  sitoplasma [6]. Tujuan  penelitian  ini  yaitu  ingin  mengetahui bagaimana  efek  dari  kombinasi  ekstrak  ethanol daun  Polyscias  obtusa  dan  daun  Elephantopus scaber.  L  terhadap  ekspresi  sel  T  CD4 + ,  CD8 + pada mencit bunting strain BALB/c.

## METODE PENELITIAN
Percobaan  ini  dilaksanakan  pada  bulan November  2013  sampai  dengan  bulan  Juni  2014. Pelaksanaan penelitian bertempat di Animal Room Laboratorium  Biologi  Molekuler  dan  Seluler, Laboratorium  Fisiologi  Hewan,  Jurusan  Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Brawijaya, Malang.
Desain Eksperimen. Hewan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu mencit betina bunting  (Mus musculus)  galur BALB/c  berumur  6
minggu  dengan  kondisi  sehat,  bergerak  aktif, rambut tidak rontok, dan tidak memiliki kecacatan. Penelitian  ini  menggunakan  4  perlakuan  yaitu mencit  kontrol  non-bunting,  mencit  kontrol bunting  diinfeksi  Salmonella  typhimurium,  mencit bunting  diinfeksi  diberi  ekstrak  dosis  I  (ekstrak campuran  daun  E.  Scaber  50  mg/g  BB  dan  P. obtusa  0  mg/g  BB),  dan  mencit  bunting  diinfeksi diberi  ekstrak  dosis  II  (ekstrak  campuran  daun E.scaber 25 mg/g BB dan P. obtusa 25 mg/g BB). Awalnya  mencit  betina  estrus  dikawinkan  dengan mencit  jantan  dan  pada  pagi  hari  dilihat  adanya vaginal  plug.  Mencit  mulai  diberi  perlakuan  oral ekstrak  campuran  daun  E.  Scaber  dan  P.  obtusa pada  hari  kebuntingan  ke-0  hingga  hari  ke-7  dan dilakukan infeksi menggunakan Salmonella typhimurium. Sebelum dilakukan infeksi menggunakan  bakteri  Salmonella  typhimurium, terlebih  dahulu  dilakukan  uji  konfirmasi  dalam rangka  untuk  memastikan  isolat  yang  digunakan adalah  benar  bakteri  S.  Typhimurium.  Pemberian ekstrak  secara  oral  tetap  dilakukan  hingga pembedahan pertama yaitu hari kebuntingan ke-14 dan pembedahan kedua hari kebuntingan ke-18.
Pembuatan  Ekstrak  Ethanol  E.  Scaber dan  P.  obtusa.  Simplisia  daun  P.obtusa  sebanyak 500  g  direndam  dengan  2,5  liter  alkohol  96% selama 24 jam. Hasil rendaman diberi lagi dengan 2,5 liter alkohol 96% dan dibiarkan selama 24 jam. Hasil rendaman ditekan dengan press hidrolik dan diekstraksi  hingga  diperoleh  pasta.  Hasil  akhir diperoleh  pasta  daun  P.obtusa.  Proses  pembuatan pasta daun E.scaber juga sama  dengan  pembuatan pasta  daun  P.obtusa  seperti  penjelasan  di  atas. Kemudian  pasta  daun  P.obtusa  dan  pasta  daun E.scaber dilarutkan dengan akuades untuk membuat  larutan  stok.  Ditimbang  0,5  g  E.scaber, disiapkan 100 ml akuades hangat dicampur dengan pasta  E.scaber.  Diaduk    dengan  spatula  hingga tercampur,  dimasukkan  dalam  botol  dan  diberi label. Cara membuat larutan stok ekstrak P.obtusa juga sama seperti uraian di atas.
Preparasi
Infeksi
Salmonella typhimurium.  Setelah  dilakukan  uji  konfirmasi dan  menunjukkan  hasil  positif,  berarti  isolat  yang digunakan  adalah  benar  bakteri  S.  Typhimurium dan  bersifat  patogen.  Kemudian,  disiapkan  10  ml media  steril  Nutrient  Broth.  Diambil  1  ose  pada NA  slant  yang  berisi  S.  Typhimurium  dan
dimasukkan  dalam  10  ml  NB  diinkubasi  37ºC selama  24  jam  dalam  inkubator,  sehingga diperoleh  inokulum  aktif.  Diambil  0,5  ml inokulum aktif, dicampur dengan 4,5 ml NB steril. Injeksi dilakukan pada jam ke-0 sampling. Mencit diinjeksi secara intraperitoneal pada hari kebuntingan ke-7 sebanyak 0,5 ml per mencit.
Isolasi  Sel  Limfosit  dari  Organ  Spleen. Mencit  didislokasi  leher  terlebih  dahulu,  ditaruh pada  papan  sectio  yang  telah  disemprot  alkohol. Mencit  dibedah  pada  bagian  peritoneal,  diisolasi organ berupa spleen. Dicuci dengan PBS steril 2-3 kali,  organ  spleen  dimasukkan  dalam  cawan  Petri berbeda yang berisi PBS dan dipencet menggunakan  pangkal  spuit  searah  jarum  jam. Disaring  dengan  wire,  dimasukkan  dalam  tabung propilen  15  ml,  diberi  PBS  ±  5  ml  pada  saringan sel.  Kemudian,  suspensi  sel  disentrifugasi  pada 2500  rpm  suhu  4ºC  selama  5  menit.  Pelet diresuspensi  dengan  PBS  sebanyak  1  ml  dan dihomogenasi  dalam eppendorf. Diambil  70 µl sel dan  ditambah  500  µl  PBS  dimasukkan  dalam microtube,  dilakukan  sentrifugasi  pada  1500  rpm suhu 10ºC selama 5 menit. Pelet ditambah antibodi 50µl  dan  diinkubasi  selama  15  menit  dalam kondisi gelap di dalam ice box.
Analisis Kuantitatif Sel T CD4 + dan CD8 + Menggunakan  Flowcytometry.  Pelet  hasil  dari isolasi  spleen  dalam  eppendorf  ditambahkan antibodi monoklonal phycoerythrin (PE)- conjugated  anti-mouse  CD8  dan  fluorescein isothiocyanate (FITC)-conjugated anti-mouse CD4,  lalu  disimpan  dalam  ice  box  dan  diinkubasi dalam kondisi gelap. Kemudian dilakukan koneksi antara  komputer  dengan  flowcytometry  pada keadaan “acquiring” dan setting software BD Cell Quest  Pro TM sesuai  kebutuhan.  Pelet  dimasukkan dalam  tabung  kuvet  pada  flowcytometry  dengan mikropipet,  lalu  ditambahkan  500µl  PBS  dan dihomogenkan  dengan  pipeting.  Kuvet  dipasang pada  nozzle  BD  Biosciences  FACSCalibur TM flowcytometry.
Analisis  Data.  Penelitian  ini  menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) Faktorial dengan uji ANOVA selang kepercayaan 95%, data jumlah relatif  sel T  CD4 + ,  CD8 + , pada  organ  spleen  diuji statistik  dengan  uji  normalitas,  uji  homogenitas varian. Data yang telah terdistribusi normal dengan
variasi  homogen,  diuji  dengan  one-way  ANOVA dengan  nilai α =0.05.  apabila  diperoleh  p>0.05 maka  tidak  ada  beda  nyata  antar  perlakuan, sebaliknya  jika p<0.05 maka ada beda  nyata antar perlakuan.  Kemudian  dilakukan  post-hoc  test dengan  uji  Tukey  HSD  (High  Significant Difference).  Data  diuji  statistik  menggunakan program SPSS 16.0 for Windows.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Analisis  Jumlah  Relatif  Sel  T  CD4 + dan CD8 + . Analisis jumlah relatif sel T CD4 + dan CD8 + dalam  penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui pengaruh  aktifitas  biologis  dari  pemberian  ekstrak ethanol  daun  E.  Scaber  dan  P.  obtusa  terhadap peningkatan  kuantitas  sel  CD4 + dan  CD8 + . Peningkatan  kuantitas  sel  CD4 + dan  CD8 + dapat digunakan  untuk  melihat  karakter  sistem  imun yang  dianalisis  menggunakan  Flowcytometry.  Sel CD4 + dan CD8 + berhubungan dengan respon imun seluler, dimana sel CD4 + sebagai sel T helper dan sel  CD8 + sebagai  sel  T  sitotoksik.  Berikut  di bawah ini (Gambar 1) merupakan profil persentase jumlah  relatif  sel  T  CD4 + dan  CD8 + pada pembedahan hari ke-14 dan (Gambar 2) merupakan  profil  persentase  jumlah  relatif  sel  T CD4 + dan CD8 + pada pembedahan hari ke-18.
Gambar  1.  Profil  persentase  jumlah  relatif  sel  T  CD4 + dan CD8 + dari hasil analisis Flowcytometry pada organ spleen pembedahan hari ke-14
Gambar  2.  Profil  persentase  jumlah  relatif  sel  T  CD4 + dan CD8 + dari hasil analisis Flowcytometry pada organ spleen pembedahan hari ke-18
Hasil  (gambar  1)  di  atas  menunjukkan, jumlah relatif sel T CD4+ dan CD8+ pembedahan hari  ke-14  pada  perlakuan  kontrol    lebih  tinggi dibanding  dengan  perlakuan  dosis  I  dan  dosis  II. Sel  T  CD4+  dan  CD8+  pembedahan  hari  ke-14 mengalami  peningkatan  jumlah  relatif  sel  pada perlakuan  dosis  I  dibanding  dengan  perlakuan dosis II. Hal ini berbeda dengan hasil pada gambar 2. Jumlah relatif sel T CD4+ pembedahan hari ke- 18, pada perlakuan dosis II mengalami peningkatan  dibanding  dengan  dosis  I  dan perlakuan  kontrol  (Gambar  2).  Sedangkan  jumlah relatif  sel  T  CD8+  pembedahan  hari  ke-18,  pada perlakuan dosis I mengalami peningkatan dibanding  dengan  dosis  II  dan  perlakuan  kontrol. Data  hasil  Flowcytometry,  kemudian  dianalisis statistika  (Gambar  3)  menunjukkan  jumlah  relatif sel  T  CD4+  dan  CD8+  tidak  berbeda  nyata  (p> 0,05) dengan perlakuan yang digunakan.
Gambar  3.  Perubahan  jumlah  relatif  sel  T  CD4 + dan CD8 + terhadap  perlakuan  pada  organ spleen. Keterangan: Kontrol = non-bunting;
CD4 + Kontrol Non-Bunting Kontrol Bunting Infeksi Dosis I Dosis II 16,06% 10,26% 21,75% 9,47% 20,42% 7,69% 15,51 23,01%
CD4+ Kontrol Non-Bunting Kontrol Bunting Infeksi Dosis I Dosis II 11,74% 19,98% 6,17% 13,35% 12,20% 16,51% 10,89% 39,08%
Kontrol  =  bunting  infeksi;  Dosis  I  =  50 mg/g E. scaber dan 0 mg/g P. obtusa; Dosis II  =  25  mg/g  E.  scaber  dan  25  mg/g  P. obtusa
Hasil  uji  statistik  (gambar  4)  menunjukkan bahwa  jumlah  relatif  sel T  CD4+  dan  CD8+  tidak berbeda nyata  dengan  waktu pembedahan  hari ke- 14 dan hari ke-18.
Gambar  4.  Perubahan  jumlah  relatif  sel  T  CD4 + dan CD8 + terhadap  waktu  pembedahan  hari  ke- 14 dan hari ke-18 pada organ spleen
Berdasarkan hasil, terlihat bahwa percobaan ini  menunjukkan  tidak  ada  perbedaan  yang  nyata (p> 0,05) untuk perlakuan. Hal ini berarti rata-rata jumlah  relatif  sel  T  tidak  berbeda  secara  nyata untuk  perlakuan  yang  diberikan  pada  mencit bunting  BALB/c.  Berdasarkan  hasil  output  Tukey Test  dan  subset  yang  terbentuk  terlihat  bahwa jumlah  relatif  sel  T  tidak  berbeda  nyata  untuk perlakuan  yang  diberikan  pada  mencit  bunting BALB/c.  Kemudian,  terlihat  bahwa  terdapat perbedaan  secara  nyata  (p<  0,05)  untuk  waktu pembedahan. Hal ini berarti rata-rata jumlah relatif sel  T  memang  berbeda  secara  nyata  untuk  tiap waktu  pembedahan.  Berdasarkan  hasil  output Tukey  Test  dan  subset  yang  terbentuk  terlihat bahwa  jumlah  relatif  sel  T  tidak  berbeda  nyata terhadap waktu pembedahan.
Terdapat  kemungkinan,  senyawa yang terkandung  dalam  ekstrak  ethanol  daun  E.scaber dan P.obtusa mampu berperan sebagai imunostimulan,  sehingga  dapat  meningkatkan proliferasi  dan  deferensiasi  sel  T  naive  menjadi subset  sel  T CD4 + . Peningkatan  maupun penurunan  jumlah  sel  T  CD4 + dan  CD8 + kemungkinan akibat dari aktifitas biologis senyawa panaxidol  yang  terkandung  dalam  P.obtusa  dan
senyawa  stiqmasterol  yang  terkandung  dalam E.scaber.
Senyawa  tersebut  mampu  berperan  sebagai imunostimulan  dan  imunosupresan.  Senyawa tersebut  mampu  menjadi  imunosupresan  sel  T naive  CD4 + CD8 + yang  menghambat  proliferasi maupun diferensiasi sel T naive menjadi subset sel T  CD8 + yang  spesifik  sebagai  sel  Tc.  Sel  Tc  ini berperan  dalam  mengeliminasi  antigen  yang menginfeksi  tubuh.  Terjadi  stimulasi  proliferasi dan  deferensiasi  sel  T  naive  CD4 + CD8 + menjadi spesifik  sel  T  CD4 + sebagai  sel  T  efektor  Th1 maupun  Th2  [7,14].  Terjadinya  diferensiasi  sel  T CD4 + menjadi  Th1  dan  Th2  tergantung  sitokin yang diproduksi pada saat merespon mikroba yang memacu reaksi imunitas [8,13].
Mikroba yang dapat memacu produksi IL-12 secara  tidak  langsung,  misalnya  virus,  beberapa parasit  memacu  sel  NK  untuk  memproduksi  IFN- gamma  dan  memacu  makrofag  mengeluarkan  IL- 12.  IL-12  berikatan  dengan  sel  T  CD4 + sehingga memacu  untuk  menjadi  sel  Th1.  IL-12  juga meningkatkan  produksi  IFN-gamma  dan  aktifitas sitolitik  yang  dilakukan  oleh  sel  T  sitotoksik  dan sel  NK  sehingga  memacu  imunitas  seluler.  IFN- gamma  yang  diproduksi  Th1  akan  menghambat proliferasi  sel  Th2  sehingga  meningkatkan dominasi sel Th1 [9,13,14].
Kemungkinan  selanjutnya  senyawa  yang terkandung di dalam ekstrak ethanol daun E.scaber dan  P.obtusa  berperan  sebagai  imunostimulan yang  mampu  meningkatkan  proliferasi  dan deferensiasi  sel  T  naive  menjadi  subset  sel  T CD4 + . Pada permulaannya, progenitor sel T dalam timus  tidak  mengekspresikan  CD8  dan  CD4. Proses  perkembangannya  juga  melalui  beberapa tahapan. Timosit yang belum matang mengekspresikan  CD8  dan  CD4  dan  sel  ini  akan meningkatkan kematangan sel T yaitu CD4 + ,CD8- atau  CD4-,CD8 + .  Sel  T  yang  mampu  mengenal pasti  MHC  ini  akan  dipilih  untuk  proses pematangan  yang  dikenali  sebagai  seleksi  positif. MHC  kelas  I  ini  akan  mengeluarkan  sinyal instruksi  untuk  mengarahkan  diferensiasi  kepada jalur CD8 [10,15].
Sel  T  CD8 + naif  memerlukan  aktivasi  dan diferensiasi  lanjut  untuk  menjadi  sel  T  efektor yang  bisa  melisiskan  sel  target  yang  terinfeksi antigen  dan  sel-sel  tumor  [11,15].  Sel  T  CD8 + mengenali  antigen  yang  dipaparkan  oleh  molekul MHC  I.  Oleh  karena,  molekul  MHC  I  dapat
ditemukan  pada  sel-sel  tubuh  yang  memiliki nukleus,  maka  sel  T  CD8 + dengan  mudah memonitor  sel  jika  terjadi  tanda-tanda  infeksi [10,14].
Sel  T  CD8 + akan  diaktifasi  menjadi  sel  T efektor  setelah  bertemu  langsung  dengan  antigen pada  APC  profesional  atau  non-profesional  dan menerima “second signal”, sehingga sitokin seperti IL-2, IFN-gamma dan TNF-alpha yang dilepaskan oleh sel T helper CD4 + [12,13,14,15].
Pemberian perlakuan dosis untuk mengetahui  jumlah  sel  T  CD4 + dan  CD8 + masih belum  bisa  ditentukan,  berapa  dosis  optimum untuk  meningkatkan  ekspresi  sel  T  CD4 + dan CD8 + . Peranan sel T CD8 + sebagai sel T sitotoksik, seharusnya  mengalami  peningkatan  apabila  tubuh terpapar  antigen,  bisa  juga  akibat  adanya  sel  yang dimungkinkan sel kanker. Berdasar hasil, dimungkinkan  adanya  senyawa  aktif  panaxidol dalam  P.obtusa  mampu  menstimulasi  proliferasi sel  T  CD4 + dan  CD8 + ,  namun  ketika  ekstrak tersebut dicampur mampu menjadi imunosupresan, sehingga hasilnya tidak ada beda nyata resultantenya.

## KESIMPULAN
Pemberian  ekstrak    ethanol  daun  E.scaber dan P.obtusa secara  oral meningkatkan jumlah  sel T  CD4 + pada  Dosis  I  (50  mg/g  E.scaber  dan  0 mg/g  P.obtusa)  pembedahan  hari  ke-14  dan  Dosis II  (25  mg/g  E.scaber  dan 25  mg/g  P.obtusa)  pada pembedahan hari ke-18. Peningkatan  jumlah sel T CD8 + , pada Dosis 1 (50 mg/g E.scaber dan 0 mg/g P.obtusa).  Dosis  optimum  ekstrak  ethanol  daun E.scaber  dan  P.obtusa  dalam  peningkatan  sel limfosit belum dapat ditentukan.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Saito  S,  Nakashima  A,  Shima  T,  Ito  M. 2010. Th1/Th2/Th17 and regulatory T-cell paradigm  in  pregnancy.  Am  J  Reprod Immunol 73: 601-610.
[2] Spelman,  K.,  Burns  J.J.,  Nichols  D., Winters N., Ottersberg S., dan Tenborg M. 2006.  Modulation  of  cytokine  expression by  traditional  medicines:  A  review  of herbal immunomodulators. Alternative Med. Rev. 11: 128 – 146.
[3] Pinca  S,  Djati,  MS.,  Rifa’i  M.  2013. Analisis  Mobilisasi Sel T CD4 + dan CD8 +

## pada Timus Ayam Pedaging Pasca  Infeksi
Salmonella  typhimurium  dan  Pemberian Simplisia  Polyscias  obtusa.  Biotropika  1 (1) : 27-32.
[4] Abbas,  A.K.,  dan  Lichtman,  A.H.  2005. Cellular  and  Molecular  Immunology. Fifth  Edition.  W.B.  Saunders  Company. California.
[5] Mohan  V.R.,  Chenthurpandy  P.,  dan Kalidass  C.  2010.  Pharmacognostic  and phytochemical investigation
of Elephantopus  scaber  L.  Journal  of Pharmaceutical Science and Technology. 2 (3), 191-197.
[6] Baratawidjaya,  K.G.  2000.  Imunologi Dasar. Balai Penerbit. FK UI: Jakarta.
[7] Rifa’i M, Shi Z, Zhang SY, Lee YH, Shiku H,  Isobe  K,  Suzuki  H.  2008.  CD8 + CD12 + regulatory  T  cells  recognize  activated  T cells via conventional MHC class I- αβ TCR interaction  and  become  IL-10  producing active regulatory cells. International immunology 20 (7), 937-947 [8] Rifa’i M. 2010. Andrographolide ameliorate rheumatoid arthritis by promoting the development of regulatory T cells.  Journal  of  Tropical  Life  Science  1 (1), pp.5-8.
[9] Kung,  C.,  Pingel  J.,  Heikinheimo  M., Klemola  T.  2000.  Mutations  in  The
Tyrosine  phosphatase  CD45  Genes  in Child With Sever Combine Immunodeficiency Disease. Nature Medicine. 6(3): 343-5.
[10] Michael,  H.R.  2006.  Histology  A  Text and  Atlas  5  th  Edition.  Lippincott William & Wilkins. Maryland.
[11] Rifa’i M. 2013. CD4 + CD25 + Regulatory T Cells Preventing Detrimental Autoimmune Reactions. The Open Autoimmunity Journal 5: 1-5.
[12] Rifa’i  M,  Kawamoto  Y,  Nakashima  I, Suzuki  H.  2004.  Essential  roles  of CD8 + CD122 + regulatory  T  cells  in  the maintenance  of  T  cell  homeostasis.  The Journal  of  experimental  medicine  200  (9), 1123-1134.
[13] Farsely,  M.,  Djati,  MS.,  Rifa'i  M.  2013. Effectivity  of  Polyscias  obtusa  Simplicia as  Immunomodulator  on  CaecaTonsil  of Broiler  Post  Infection  of  Salmonella
typhimurium. The Journal of Experimental Life Science, 3(1): 20-24.
[14] Kurnianingtyas,  E.,  Djati,  MS.,  Rifa'i  M. 2013. Aktivitas Imunomodulator Polyscias obtusa  Terhadap  Sistem  Imunitas  Pada
Bone  Marrow  Broiler  Setelah  Pemberian
Salmonella  typhimurium.  The  Journal  of Experimental Life Science, 3(1): 25-30.
[15] Pradana,  A.  R.  A.,  Djati,  MS.,  Rifa'i  M. 2013.  Mobilization  of  CD4+,  CD8+,  and B220+  on  Broiler  Chicken  Spleen  with Feed  Contained  Polyscias  obtusa  Post
Infection  of  Salmonella  typhimurium.  The Journal of Experimental Life Science, 3(1):
7-12.