BioEksakta: Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed Volume 2, Nomor 2 (2020): 288 - 296 E-ISSN: 2714-8564
Pemanfaatan Ekstrak Kulit Buah Manggis (Garcinia mangostana L.) sebagai Pewarna Alami Jaringan Daun dan Batang Krokot (Portulaca oleracea L.)

## Gita Fitriyani, Muachiroh Abbas, Siti Samiyarsih
Faklutas Biologi Universitas Jenderal Soedirman Jalan dr. Soeparno 63 Purwokerto 53122 Email : gitafitriya97@gmail.com

## Rekam Jejak Artikel:
Received  : 29/08/2019 Accepted  : 07/04/2020

## Abstract
Natural  dyes  are  an  alternative  to  synthetic  dyes  because  they  are  safe,  inexpensive  and environmentally  friendly.  natural  dye  sources  obtained  from  plant  parts  such  as  fruit  peels. Efforts  to  use  mangosteen  rind  waste  as  an  herbal  remedy  can  also  be  used  as  a  natural  dye because  it  has  a  high  enough  anthocyanin  content.  Anthocyanins  in  mangosteen  peel  can  be obtained through extraction. Maceration is an easy extraction method where the results are only affected by the type of solvent and the extraction time. Purslane (Portulaca oleracea L.) is used as  research  material  because  currently  purslane  has  been  widely  used  because  of  its  nutritional content  including  high  metabolic  and  antioxidant  regualting  substances.  This  study  aims  to determine the ability of mangosteen rind extract in coloring the leaf and stem tissue of purslane, and  to  determine  the  type  of  solvent  and  optimal  immersion  time  to  produce  mangosteen  rind extract  so  that  it  can  color  the  leaf  tissue  and  stems  purslane  well.  The  study  was  conducted experimentally using a Completely Randomized Design (CRD) with 2 factors: factor 1 was the type  of  solvent  using  ethanol  96%  and  citric  acid 14%,  the  second  factor  was  immersion  time, namely  26,  27  and  28  hours.  The  data  obtained  were  analyzed  descriptively  qualitatively including the  contrast  and  clarity  of  the  preserved  tissue  preparation  of  leaf  and  stem  purslane. The results showed mangosteen rind extract has the ability to dye leaf tissue and stems. The type of 14% citric acid solvent with 28 hours soaking time was optimal in producing mangosteen rind extract so that it was able to dye the leaf and stem tissue of purslane.
Keywords: anthocyanin, maceration, mangosteen rind, natural coloring, purslane

## Abstrak
Pewarna  alami  menjadi  alternatif  pengganti  pewarna  sintetis  dikarenakan  bersifat  aman,  murah dan ramah lingkungan. Sumber pewarna alami diperoleh dari bagian-bagian tumbuhan misalnya kulit  buah.  Upaya  pemanfaatan  limbah  kulit  buah  manggis  selain  sebagai  obat  herbal  dapat dimanfaatkan  juga  sebagai  pewarna  alami  karena  memiliki  kandungan  antosianin  yang  cukup tinggi.  Antosianin  dalam  kulit  buah  manggis  dapat  diperoleh  melalui  ekstraksi.  Maserasi merupakan  metode  ekstraksi  yang  mudah  dilakukan  dimana  hasilnya  hanya  dipengaruhi  oleh jenis  pelarut  dan  lama  ekstraksi.  Krokot  ( Portulaca  oleracea L.)  digunakan  sebagai  bahan penelitian karena saat ini krokot telah banyak dimanfaatkan karena kandungan gizi diantaranya mengandung  zat  pengatur  metabolisme  dan  antioksidan  tinggi.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui kemampuan ekstrak  kulit buah manggis dalam  mewarnai jaringan daun dan batang krokot,  dan  untuk  mengetahui  jenis  pelarut  dan  waktu  perendaman  yang  optimal  untuk menghasilkan  ekstrak  kulit  buah  manggis  sehingga  dapat  mewarnai  jaringan  daun  dan  batang krokot  dengan  baik.  Penelitian  dilakukan  secara  eksperimen  menggunakan  Rancangan  Acak Lengkap (RAL) dengan 2 faktor yaitu faktor 1 adalah jenis pelarut menggunakan etanol 96% dan asam  sitrat  14%,  faktor  ke  2  lama  perendaman,  yaitu  26,  27  dan  28  jam.  Data  yang  diperoleh dianalisis secara deskriptif kualitatif meliputi kekontrasan dan kejelasan preparat awetan jaringan daun  dan  batang  krokot.  Hasil  penelitian  menunjukkan  ekstrak  kulit  buah  manggis  memiliki kemampuan  dalam  mewarnai  jaringan  daun  dan  batang  krokot.  Jenis  pelarut  asam  sitrat  14% dengan lama perendaman selama 28 jam merupakan  yang optimal dalam  menghasilkan ekstrak kulit buah manggis sehingga mampu mewarnai jaringan daun dan batang krokot.
Kata kunci : antosianin, krokot, kulit buah manggis, maserasi, pewarna alami .

## PENDAHULUAN
Pewarnaan berfungsi untuk mewarnai jaringan yang  dapat  memperjelas  bagian-bagian  jaringan tumbuhan  (Gresby,  2013).  Pewarna  yang  biasa digunakan  adalah  pewarna  sintetis  contohnya safranin yang bersifat karsinogenik, harganya mahal
dan  limbah  yang  dihasilkan  dapat  menyebabkan pencemaran  lingkungan.  Oleh  karena  itu,  harus  ada alternatif  pengganti  pewarna  sintetis,  yaitu  dengan menggunakan  pewarna  alami  yang  lebih  efisien, harganya  murah,  memiliki  daya  afinitas  tinggi  dan aman.  Pewarna  alami  merupakan  pewarna  yang
tidak  toksik  dan  ramah  lingkungan.  Pewarna  alami dapat diperoleh melalui proses ekstraksi dari bagian- bagian  tumbuhan  seperti  :  bunga,  buah,  daun,  biji, kulit,  batang/kayu  dan  akar  tumbuhan  (Pujilestari, 2015).
Peningkatan  produksi  buah  manggis  di Indonesia  menyebabkan  peningkatan  limbah  kulit buah  manggis  (Rubiyanti et  al .,  2014).  Salah  satu pemanfaatan  limbah  kulit  buah  manggis  yaitu sebagai  suplemen  herbal  untuk  mengobati  penyakit diantaranya diare, sariawan,  nyeri urat dan sembelit (Puspitasari et  al .,  2016).  Selain  dimanfaatkan sebagai obat herbal limbah kulit buah manggis dapat dimanfaatkan  sebagai  pewarna  alami  karena mengandung  kadar  antosianin  yang  cukup  tinggi yaitu  sebesar  593  ppm  (Farida  &  Nisa,  2015). Ekstrak  kulit  buah  manggis  selain  digunakan sebagai  pewarna  makanan,  minumam,  pewarna logam  dan  pewarna  kain,  juga  dapat  digunakan sebagai  pewarna  alami  jaringan  tumbuhan  karena mengandung  antosianin,  hal  ini  sesuai  dengan pernyataan  Sa’diyah  (2015),  bahwa  pewarna  alami berasal  dari  bagian  tumbuhan  tertentu  yang mengandung  antosianin.  Antosianin  yang  terdapat pada ekstrak kulit buah manggis dapat menghasilkan  warna  merah,  ungu  dan  biru, antosianin  yang  terkandung  dalam  kulit  buah manggis dapat diekstraksi dengan metode sederhana yaitu  maserasi  yang  merupakan  metode  ekstraksi tanpa  pemanasan  dimana  hasilnya  dipengaruhi  oleh jenis pelarut  serta  waktu  maserasi (Wijayanti et al., 2016). Jenis pelarut seperti etanol dan akuades biasa digunakan  untuk  maserasi  zat  warna,  karena memiliki  sifat  polar  yang  sesuai  dengan  antosianin (Nida, 2013).
Merujuk  hasil  penelitian  Saputri  (2018), bahwa  kulit  ubi  jalar  ungu  ( Ipomoea  batatas L.) yang  diekstrak  melalui  metode  maserasi  dengan jenis  pelarut  asam  sitrat  14%  dan  etanol  96% dengan lama perendaman masing-masing 24, 25 dan 26 jam mampu mewarnai jaringan batang tumbuhan krokot  dengan  baik,  jaringan  yang  terwarnai  yaitu epidermis, parenkin, xylem dan floem. Pelarut yang lebih  efektif  untuk  proses  ekstraksi  adalah  asam sitrat  14%  karena  warna  yang  dihasilkan  pada preparat section batang  krokot  lebih  cerah dibandingkan dengan pelarut etanol 96%, sedangkan lama  perendaman  ekstraksi  tidak  menunjukkan perbedaan  warna  pada  preparat.  Samiyarsih et  al . (2020)  menyatakan  bahwa  keberhasilan  proses pewarnaan  jaringan  tanaman  ditentukan  oleh karakteristik  jaringan  dan  lama  waktu  perendaman. Berbagai  modifikasi waktu  pewarnaan  telah dilakukan  pada  jaringan  anatomi  daun  mangrove akibat  pencemaran  air  (Samiyarsih et  al .,  2016), preparat  ubi  jalar  yang  diinokulasi  penyakit (Samiyarsih et  al .,  2018),  pada  jaringan  daun beberapa  varietas  tapak  dara  (Samiyarsih et  al ., 2019).
Krokot  (P ortulaca  oleracea L.)  oleh  sebagian masyarakat  Indonesia  dianggap  sebagai  gulma, setelah  mengetahui  kandungan  gizi  dan  manfaat untuk  kesehatan  tubuh,  kini  krokot  banyak dibudidayakan  (Imanuna et  al .,  2018).  Krokot mengandung  omega-3,  asam  lemak,  vitamin  A, vitamin  C  dan  vitamin  B  kompleks  (Simopoulos, 2004).  Menurut  Szalai et  al .  (2010)  krokot mengandung  banyak  gizi  sehingga  dimanfaatkan sebagai  sayuran  dan  obat  herbal.  Krokot  salah  satu sumber  obat  anti  radang  usus  buntu  karena mengandung  zat  yang  mengatur  metabolisme  dan memiliki  antioksidan  tinggi  (Anggarani et  al., 2013).  Peneliti  ingin  memanfaatkan  krokot  sebagai bahan  penelitian  sebagai  preparat  awetan  untuk analisis  pengamatan  jaringan.  Krokot  memiliki batang  berbentuk  bulat  berwarna  coklat  keunguan, daun tunggal, tebal berdaging, berbentuk bulat telur, permukaan  atas  berwarna  hijau  tua  dan  permukaan bawah  berwarna  merah  tua,  tangkai  pendek  dan bagian  ujung  bulat  melekuk  ke  dalam  (Hariana, 2015).
Berdasarkan  latar  belakang  tersebut,  maka dirumuskan  permasalahan,  yaitu  apakah  ekstrak kulit buah manggis mampu mewarnai jaringan daun dan  batang  krokot  dan  jenis  pelarut  apa  dan  berapa lama  waktu  perendaman  ekstraksi  yang  optimal untuk  menghasilkan  ekstrak  kulit  buah  manggis sehingga  dapat  mewarnai  jaringan  daun  dan  batang krokot dengan baik. Tujuan dari penelitian  meliputi mengetahui kemampuan ekstrak kulit buah manggis dalam  mewarnai  jaringan  daun  dan  batang  krokot dan  mengetahui  jenis  pelarut  dan  lama  waktu perendaman ekstraksi yang optimal untuk menghasilkan  ekstrak  kulit  buah  manggis  sehingga mampu  mewarnai  jaringan  daun  dan  batang  krokot dengan baik.

## METODE PENELITIAN
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah kulit buah manggis, daun dan batang krokot, etanol  96%,  asam  sitrat  14%,  larutan  fiksatif  FAA, alkohol 70%, alkohol 80% dan alkohol 96%, etanol PA, xylol, parafin murni, akuades, gliserin, albumin dan  entelan,  sedangkan  alat  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  blender,  alumunium  foil, batang pengaduk, saringan, silet, botol flakon, oven, cutter , holder, object glass, thermostat¸ staining jar , rotary  microtom , cover  glass, mikroskop,  gelas arloji, beaker  glass ,  gelas  ukur,  pipet  tetes,  pinset, kamera, alat tulis, kertas label, baki, bunsen dan tisu. Penelitian  dilaksanakan  di  Laboratorium  Struktur dan  Perkembangan  Tumbuhan  Fakultas  Biologi Unsoed Purwokerto pada bulan Juli-Agustus 2019.
Rancangan  penelitian  yang  digunakan  adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan menggunakan 2 faktor, faktor 1 adalah jenis pelarut (P) dengan dua perlakuan yaitu : pelarut etanol 96% (P1)  dan  pelarut  asam  sitrat  14%  (P2)  dan  faktor  2 adalah  lama  perendaman  (L)  dengan  tiga  perlakuan
yaitu  :  26  jam  (L1),  27  jam  (L2)  dan  28  jam  (L3). Sehingga perlakuan penelitian berjumlah 6 kombinasi  dan  masing-masing  perlakuan  dilakukan 3  kali  ulangan.  Variabel  bebas  yaitu  jenis  pelarut dan  lama  perendaman.  Variabel  terikat  yaitu jaringan daun dan batang krokot yang terwarnai oleh ekstrak kulit buah manggis. Parameter yang diamati yaitu  kekontrasan  warna  dan  kejelasan  preparat daun dan batang krokot.
Penelitian  dilakukan  dua  tahap,  tahap  pertama ekstraksi  kulit  buah  manggis  dengan  menggunakan metode  maserasi.  Tahap  kedua  pembuatan  preparat awetan  dengan  metode embedding untuk  bagian daun  dan  metode non-embedding untuk  bagian batang.
Ekstraksi dengan metode maserasi yang dimodifikasi (Basito, 2011)
Kulit  buah  manggis  dibersihkan,  dipotong kemudian  dihaluskan  menggunakan  blender.  100  g bubuk kulit buah manggis direndam dengan 100 ml etanol  96%  dan  100  g  bubuk  kulit  buah  manggis direndam  dengan  100  ml  t  asam  sitrat  14%  dengan lama  perendaman  sesuai  dengan  perlakuan  yaitu  26 jam, 27 jam dan 28 jam. Ditutup dengan aluminium foil,  disimpan  diruang  tertutup  dan  sesekali  diaduk dengan batang pengaduk kemudian disaring.

## Pengambilan sampel batang dan daun Krokot
Sampel  daun  dan  batang  krokot  diambil  dari lingkungan Fakultas Biologi Unsoed Purwokerto.

## Preparasi awetan
1) Preparasi awetan jaringan daun
Pembuatan  preparat  awetan  irisan  melintang daun  krokot  dilakukan  dengan  menggunakan metode embedding yang  dimodifikasi  (Sass,  1951). Preparat dibuat 3 macam : preparat dengan pewarna ekstrak  kulit  manggis,  preparat  dengan  pewarna safranin  sebagai  pembanding,  dan  preparat  tanpa pewarna sebagai kontrol.
2) Preparasi awetan jaringan batang Pembuatan  preparat  awetan  irisan  melintang batang  krokot  dilakukan  dengan  menggunakan metode non-embedding yang  dimodifikasi  (Preece, 1959).  Preparat  dibuat  3  macam  :  preparat  dengan pewarna  ekstrak  kulit  manggis,  preparat  dengan pewarna  safranin  sebagai  pembanding  dan  preparat tanpa diwarnai sebagai kontrol.

## Pengamatan Hasil Penelitian
Kekontrasan  dan  kejelasan  preparat  diamati menggunakan  mikroskop  perbesaran  40x  dan  100x, kemudian  dibandingkan  antara  preparat  yang diwarnai  dengan  pewarna  alami  ekstrak  kulit  buah manggis,  preparat  yang  diwarnai  dengan  safranin dan preparat tanpa pewarnaan sebagai kontrol.

## Kekontrasan Preparat
Kekontrasan  diukur  menggunakan color  chart red menurut  Martin  (2009)  pada  Gambar  1. Kemudian diamati menggunakan indikator
kekontrasan menurut Wahyuni (2015) yang dimodifikasi :
a. + :  Kurang kontras (10%-20%)
b. ++ :  Kontras (40% -60%) c. +++  : Sangat kontras (80%-100%)
Gambar 1. Color Chart Red. Sumber : www.stripgenerator.com .

## Kejelasan Preparat
Kejelasan preparat diukur berdasarkan bagian- bagian jaringan daun dan batang yang dapat teramati berdasarkan  indikator  kejelasan  preparat  menurut Wahyuni (2015) yang dimodifikasi :
+  :  Kurang  jelas,  apabila  bagian-bagian  struktur jaringan kurang dapat dibedakan dengan jelas ++ : Jelas, apabila dapat mewarnai struktur jaringan dengan  jelas  sehingga  bagian-bagian  jaringan  dapat dibedakan dengan jelas.
+++ : Sangat jelas, apabila dapat mewarnai struktur jaringan dengan sangat jelas sehingga bagian-bagian dapat dibedakan dengan sangat jelas.

## Analisis Data
Data  dianalisis  secara  deskriptif  kualitatif meliputi  kekontrasan  dan  kejelasan  preparat berdasarkan  indikator  kekontrasan  dan  kejelasan preparat.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  penelitan  kekontrasan  dan  kejelasan preparat  awetan  jaringan  daun  krokot  dengan menggunaan  ekstrak  kulit  buah  manggis  sebagai pewarna  alami  jaringan  daun  krokot  dengan  variasi perlakuan jenis pelarut yaitu pelarut etanol 96% dan pelarut asam sitrat 14% dan lama perendaman yaitu selama  26,  27  dan  28  jam  diperoleh  tingkat kekontrasan  dan  kejelasan  jaringan  yang  berbeda seperti pada Tabel 1.
Tabel 1. Kekontrasan dan kejelasan preparat awetan daun krokot
Perlakuan Kekontrasan Kejelasan P1L1 + (10%) + P1L2 + (20%) ++ P1L3 ++ (40%) ++ P2L1 ++ (60%) +++ P2L2 +++ (80%) +++ P2L3 +++ (100%) +++
Ket. : +  : Kurang Kontras / Kurang jelas ++  : Kontras / Jelas +++ : Sangat Kontras / Sangat Jelas
Jenis pelarut asam sitrat 14% (P2) menunjukkan  kekontrasan  dan  kejelasan  jaringan yang  lebih  baik  dibandingkan  pelarut  etanol  96% (P1)  (Tabel  1).  Pewarna  alami  ekstrak  kulit  buah manggis  dengan  perlakuan  asam  sitrat  14%  lebih mampu  mewarnai  jaringan  daun  krokot  karena jaringan daun krokot lebih mampu menyerap warna ekstrak  kulit  manggis  dengan  perlakuan  asam  sitrat 14% dengan baik. Hal ini sesuai dengan pernyataan (Hermawati,  2015)  bahwa  asam  sitrat  merupakan pelarut  yang  bersifat  polar  dalam  melarutkan antosianin  menghasilkan  konsentrasi  yang  tinggi dan  lebih  stabil.  Lama  perendaman  28  jam  (L3) menunjukkan  hasil  yang  paling  baik  dikarenakan lama  perendaman  berpengaruh  terhadap  hasil ekstraksi.  Lebih  lama  waktu  yang  digunakan  untuk maserasi  maka  akan  melarutkan  banyak  zat  warna, sehingga  pewarna  alami  ekstrak  kulit  manggis mampu  mewarnai  jaringan  daun  krokot.  Hal  ini sesuai  dengan  hasil  penelitian  Sartono  (2018),
bahwa semakin lama waktu maserasi maka semakin banyak  kontak  antara  bahan  dan  pelarut  sehingga antosianin semakin banyak yang terlarut.
Perlakuan dengan menggunakan pelarut etanol 96%  dengan  lama  perendaman  26  jam  (P1L1) menunjukkan  preparat  kurang  kontras  dikarenakan zat  warna  kurang  terserap  kedalam  jaringan sehingga  warna  yang  dihasilkan  kurang  terwarnai, dan  untuk  kejelasan  preparat  kurang  jelas  karena bagian-bagian jaringan tidak bisa dibedakan. Pelarut etanol 96% dengan lama perendaman 27 jam (P1L2) menunjukkan  preparat  kurang  kontras  karena  zat warna  kurang  mewarnai  jaringan  dan  kejelasan preparat  jelas  karena  jaringan  dapat  dibedakan. Pelarut etanol 96% dengan lama perendaman 28 jam (P1L3)  menunjukkan  preparat  yang  kontras  karena zat warna terserap dengan baik sehingga warna yang dihasilkan  kontras  dan  kejelasan  jaringan  jelas sehingga dapat dibedakan bagian-bagiannya (Gambar 1).
Gambar 1. Penampang melintang daun krokot perlakuan etanol 96% perbesaran  40x. Keterangan : Perlakuan (a) P1L1 (b) P1L2 (c) P1L3
Perlakuan  dengan  menggunakan  jenis  pelarut asam  sitrat  14%  dengan  lama  perendaman  26  jam (P2L1)  menunjukkan  preparat  yang  kontras  karena jaringan  terwarnai  dengan  baik  dan  bagian-bagian jaringan sangat jelas untuk dibedakan. Pelarut asam sitrat 14% dengan lama perendaman 27 jam (P2L2) menunjukkan  preparat  yang  sangat  kontras  karena jaringan mampu menyerap zat warna dengan sangat baik  sehingga  warna  yang  dihasilkan  berwarna merah,  sangat  kontras  dan  bagiab-bagian  jaringan
sangat  jelas  untuk  dibedakan  diantaranya  bagian epidermis, berkas pengangkut dan parenkim. Pelarut asam  sitrat  14%  dengan  lama  perendaman  28  jam (P2L3)  menunjukkan  preparat  paling  baik  yaitu sangat  kontras  dimana  warna  yang  dihasilkan berwarna  merah  cerah  dengan  tingkat  kekontrasan 100%  dan  kejelasan  yang  sangat  jelas  sehingga bagian-bagian  antara  jaringan  dapat  dibedakan diantaranya  bagian  epidermis,  berkas  pengangkut, bagian  mesofil/parenkim  dan  epidermis  bawah (Gambar 2).
Gambar 2. Penampang melintang daun krokot perlakuan asam sitrat 14% Perbesaran 40x.
Keterangan : Perlakuan (a) P2L1 (b) P2L2 (c) P2L3
Perbandingan  antara  jaringan  tanpa  diwarnai, jaringan  diwarnai  dengan  safranin  dan  jaringan diwarnai  dengan  pewarna  alami  ekstrak  kulit manggis dengan perlakuan etanol 96% dan pewarna alami  ekstrak  kulit  manggis  perlakuan  asam  sitrat 14%  menunjukkan  kekontrasn  dan  kejelasan  yang berbeda  (Gambar  3).  Jaringan  daun  krokot  tanpa pewarnaan  menunjukkan  jaringan  yang  tidak
kontras,  jaringan  tidak  terwarnai  dan  jaringan  tidak jelas.  Jaringan  kurang  dapat  dibedakan  bagian- bagiannya,  yang  dapat  diamati  adalah  bagian epidermis dan berkas pengangkut saja, dan jaringan yang  dihasilkan  tampak  transparan.  Menurut Elayanti et al . (2017), preparat yang tanpa diwarnai akan  menghasilkan  jaringan  yang  transparan  dan sulit  untuk  dibedakan  antar  jaringannya.  Jaringan
(a)
(b)
(c)
(a) (b) (c)
dengan  menggunakan  pewarna  alami  ekstrak  kulit buah manggis dan jaringan dengan pewarna safranin memperlihatkan  jaringan  terwarnai  merah  kontras dan  jelas  bagian-bagian  antar  jaringannya.  Hal  ini
sesuai  dengan  pernyataan  Wahyuni  (2008),  bahwa jaringan  yang  diwarnai  dapat  memperjelas  dan mempertajam berbagai elemen jaringan.
Gambar 3 . Perbandingan penampang melintang daun krokot. Perbesaran 40x. Keterangan  :  (a)Tanpa  pewarna  (b)Pewarna  Safranin  (c)Pewarna  ekstrak  kulit  manggis  perlakuan  etanol  96%
(d)Pewarna ekstrak kulit manggis perlakuan asam sitrat 14%
Pewarna alami dari ekstrak kulit buah manggis dapat  mewarnai  jaringan  daun  krokot,  dimana jaringan  daun  berwarna  merah  kontras  dan  bagian- bagian  jaringan  dapat  dibedakan.  Jaringan  yang teramati  yaitu  epidermis  atas,  mesofil/parenkim, berkas  pengangkut  dan  epidermis  bawah  (Gambar 4). Penyerapan  warna  pada  setiap  jaringan  berbeda, misalnya  berkas  pengangkut  yang  merupakan  sel yang  mengalami  penebalan  sekunder  (lignifikasi) nampak berwarna merah cerah dibandingkan bagian parenkim  yang  berwarna  merah  tipis  (Gambar  4). Hal  ini  sesuai  dengan  pernyataan  Sa’diyah  (2015) bahwa parenkim merupakan sel berdinding tipis dan tidak  mengalami  lignifikasi  (penebalan  sekunder) sehingga  mempengaruhi  kemampuan  penyerapan zat warna yang kurang optimal.
Gambar 4 .  Penampang  melintang  daun  krokot bagian-bagiannya. Perbesaran 40x. Keterangan : (a) Epidermis atas (b) Mesofil/parenkim  (c)  Berkas  pengangkut  (d) Epidermis bawah
Terwarnainya  jaringan  daun  krokot  oleh pewarna  alami  ekstrak  kulit  buah  manggis dikarenakan adanya reaksi karema muatan ion yang berbeda  antara  muatan  ion  zat  warna  ekstrak  kulit manggis  dan  muatan  ion  jaringan  daun  krokot. Reaksi  ikatan  elektrostatik  antara  muatan  ion  zat warna  dengan  bagian  sel  yang  berbeda  muatan menyebabkan  terwarnainya  jaringan  menjadi  merah (Nurwanti et al ., 2013). Antosianin yang terkandung dalam ekstrak kulit buah manggis memiliki pH asam yang  mampu  mewarnai  dinding  sel  yang  memiliki pH basa , ion positif pada zat warna antosianin akan terlepas  dan  berikatan  kovalen  dengan  ion  negatif
yang  terdapat  pada  dinding  sel  jaringan  (Hamid  & Muhlis, 2005).
Hasil  penelitan  kekontrasan  dan  kejelasan preparat  awetan  jaringan  batang  krokot  dengan menggunaan  ekstrak  kulit  buah  manggis  sebagai pewarna  alami  jaringan  batang  krokot  dengan variasi  perlakuan  jenis  pelarut  yaitu  pelarut  etanol 96%  dan  pelarut  asam  sitrat  14%  dan  lama perendaman  yaitu  selama  26,  27  dan  28  jam diperoleh tingkat kekontrasan dan kejelasan jaringan yang berbeda seperti pada Tabel 2.
Tabel 2. Kekontrasan dan kejelasan preparat awetan batang krokot
Perlakuan Kekontrasan Kejelasan P1L1 + (20%) ++ P1L2 ++ (40%) ++ P1L3 ++ (60%) ++ P2L1 ++ (60%) +++ P2L2 +++ (80%) +++ P2L3 +++ (100%) +++
Ket. : +  : Kurang Kontras / Kurang jelas ++ : Kontras / Jelas +++ : Sangat Kontras / Sangat Jelas
Pewarna  alami  ekstrak  kulit  buah  manggis dengan  perlakuan  pelarut  asam  sitrat  14%  lebih efektif  dalam  mewarnai  jaringan  batang  krokot dibandingkan  dengan  pewarna  alami  ekstrak  kulit buah  manggis  dengan  perlakuan  etanol  96%  (Tabel 2). Hal ini sesuai dengan penelitian Sartono (2018), bahwa  asam  sitrat  memiliki  keasaman  yang  sangat stabil sehingga keadaan asam ini akan memecahkan banyak  dinding  sel  vakuola  yang  menyebabkan warna  jaringan  yang  dihasilkan  menjadi  kontras terwarnai.  Perlakuan  dengan  lama  perendaman selama 28 jam menunjukkan hasil yang paling baik, semakin  lama  waktu  perendaman  pada  proses maserasi  maka  akan  semakin  banyak  antosianin yang  diperoleh  sehingga  jaringan  batang  krokot semakin  kontras  dan  jelas.  Hal  ini  sesuai  dengan hasil  penelitian  Armanzah  &  Hendrawati  (2016), bahwa semakin lama waktu maserasi maka semakin
a b c a b c d d
lama  interaksi  antara  bahan  dengan  pelarut, sehingga  tinggi  kadar  antosianin  yang  diperoleh. Kadar  antosianin  yang  tinggi  mnyebabkan  semakin efektif dalam mewarnai jaringan tumbuhan.
Pewarna  alami  ekstrak  kulit  buah  manggis dengan perlakuan  menggunakan pelarut  etanol 96% dengan lama perendaman 26 jam (P1L1) menunjukkan preparat batang krokot kurang kontras dengan  nilai  kekontrasan  20%,  namun  jaringan batang  krokot  jelas  sehingga  dapat  dibedakan bagian-bagian  jaringannya.  Pewarna  alami  ekstrak kulit buah manggis dengan perlakuan menggunakan
pelarut etanol 96% dengan lama perendaman 27 jam (P1L2) menunjukkan nilai kekontrasan sebesar 40% atau  jaringan  batang  krokot  kontras  terwarnai dengan  kejelasan  jaringan  batang  krokot  yang  jelas dimana  bagian-bagian  jaringan  batang  krokot  dapat dibedakan.  Pewarna  alami  dengan  perlakuan  jenis pelarut etanol 96% dengan lama perendaman 28 jam (P1L3)  menunjukkan  kekontrasan  jaringan  batang krokot  dengan  nilai  kekontrasan  sebesar  60% kontras, dan kejelasan jaringan jelas dimana bagian- bagian  jaringannya  dapat  dibedakan  diantaranya bagian epidermis. (Gambar 5).
Gambar 5. Penampang melintang batang krokot perlakuan etanol 96% perbesaran 40x. Keterangan : Perlakuan (a) P1L1 (b) P1L2 (c) P1L3
Pewarna  alami  ekstrak  kulit  buah  manggis dengan  perlakuan  pelarut  asam  sitrat  14%  dengan lama  perendaman  26  jam  (P2L1)  menunjukkan kekontrasan jaringan batang krokot sebesar 60% dan kejelasan  jaringan  batang  krokot  jelas  sehingga bagian-bagian jaringan batang krokot dapat dibedakan dengan jelas. Pewarna ekstrak kulit buah manggis  dengan  perlakuan  pelarut  asam  sitrat  14% dengan lama perendaman 27 jam (P2L2) menunjukkan  nilai  kekontrasan  jaringan  sebesar 80% atau jaringan batang krokot sangat kontras dan
jaringan  sangat  jelas  sehingga  jaringan  dapat dibedakan  bagian-bagiannya  dengan  sangat  jelas. Diantaranya  bagian  epidermis,  korteks  dan  berkas pengangkut.  Pewarna  alami  ekstrak  kulit  buah manggis  dengan  perlakuan  pelarut  asam  sitrat  14% dengan lama perendaman 28 jam (P2L3) menunjukkan  preparat  jaringan  batang  krokot  yang paling  baik  yaitu  dengan  nilai  kekontrasan  100% atau  jaringan  batang  krokot  sangat  kontras  dengan kejelasan  bagian-bagian  yang  dapat  dibedakan dengan sangat jelas  (Gambar 6).
Gambar 6. Penampang melintang batang krokot perlakuan asam sitrat 14% perbesaran 40x.
Keterangan : Perlakuan (a) P2L1 (b) P2L2 (c) P2L3.
Perbandingan  antara  jaringan  batang  tanpa diwarnai dan jaringan batang yang diwarnai dengan pewarna, baik itu pewarna safranin ataupun pewarna alami  ekstrak  kulit  buah  manggis dengan perlakuan etanol  96%  dan  asam  sitrat  14%,  menunjukkan jaringan batang yang diberikan pewarna
menghasilkan  kekontrasan  dan  kejelasan  pada jaringan tersebut (Gambar 7). Hal ini sesuai dengan pernyatan  Indasari et  al .  (2013),  bahwa  proses pemberian  warna  pada  jaringan  akan  membuat jaringan  itu  nampak  berwarna  kontras  sehingga mudah diamati.
(a) (a) (b) (a) ) (b) (c) (c) (a) )
Gambar 7. Perbandingan penampang melintang batang krokot perbesaran 40x. Keterangan : (a)Tanpa pewarna (b)Pewarna Safranin (c)Pewarna ekstrak kulit manggis perlakuan etanol 96% (d)Pewarna ekstrak kulit manggis perlakuan asam sitrat 14%
Pewarna alami dari ekstrak kulit buah manggis dapat  mewarnai  jaringan  batang  krokot,  dimana jaringan batang berwarna merah kontras dan bagian- bagian  jaringan  dapat  dibedakan.  Jaringan  yang teramati  yaitu  epidermis,  korteks  dan  berkas pengangkut (Gambar 8). Molekul antosianin ekstrak kulit  buah  manggis  berikatan  dengan  molekul  yang
ada  pada  jaringan  batang  krokot  sehingga  jaringan nampak  berwarna  merah.  Hal  ini  sesuai  dengan pernyataan Indasari et al . (2013) bahwa warna yang tampak  pada  jaringan  merupakan  hasil  ikatan molekul  antara  zat  warna  dengan  jaringan  yang diwarnai.
Gambar 8. Penampang Melintang Batang Krokot Bagian-bagiannya Perbesaran 40x. Keterangan : (a) Epidermis (b) Korteks (c) Berkas Pengangkut
Penggunaan  dua  jenis  pelarut  yang  berbeda dalam proses ekstraksi  yaitu untuk  membandingkan kemampuan  dalam  mengekstraksi  antosianin  dalam kulit  buah  manggis.  Pelarut  etanol  bersifat  polar sehingga  mudah  melarutkan  zat  warna  antosianin yang  bersifat  polar  juga.  Asam  sitrat  digunakan untuk  ekstraksi  antosianin  karena  antosianin  tidak stabil dalam larutan basa atau netral. Pada Gambar 9 menunjukkan perbedaaan warna ekstraksi kulit buah manggis dengan pelarut etanol 96% dan asam sitrat 14%, ekstraksi dengan pelarut asam sitrat 14% lebih
berwarna  merah  pekat  sedangkan  ekstraksi  dengan pelarut  etanol  96%  berwarna  merah  bening.  lama perendaman selama 26, 27 dan 28 jam menunjukkan perbedaan  warna  ekstraksi  kulit  buah  manggis, semakin  lama  perendaman  maserasi  maka  warna yang  dihasilkan  semakin  merah,  hal  ini  sesuai dengan  pernyataan  Wijayanti et  al . (2016)  bahwa penambahan  waktu  maserasi  akan  meningkatakan kadar  antosianin  yang  diperoleh  dari  kulit  buah manggis.
Gambar 9. Hasil maserasi ekstrak kulit buah manggis. Keterangan : (a) pelarut etanol 96% (b) pelarut asam sitrat 14%
a a b c b b c d a b
Kulit  buah  manggis  mengandung  banyak antosianin  sehingga  dapat  dimanfaatkan  sebagai pewarna  alami  jaringan  daun  dan  batang  krokot. Jenis  pelarut  dan  lama  perendaman  maserasi  yang berbeda  berpengaruh  terhadap  penyerapan  warna jaringan  daun  dan  batang  krokot.  Variasi  perlakuan jenis  pelarut  etanol  96%  dan  asam  sitrat  14%  dan lama  perendaman  yang  berbeda  menunjukkan  hasil yang  berbeda.  Perlakuan  dengan  menggunakan pelarut  asam  sitrat  menunjukkan  hasil  yang  lebih baik  dibandingkan  pelarut  etanol  96%.  Kualitas preparat  yang  dihasilkan  baik  sehingga  tidak  jauh berbeda  dengan  jaringan  yang  diwarnai  oleh pewarna  safranin.  Keduanya  memiliki  warna  yang kontras  dan  bagian-bagian  jaringan  yang  jelas. Ekstrak  kulit  buah  manggis  dengan  pelarut  asam sitrat  14%  dengan  lama  perendaman  28  jam memiliki  kekontrasan  dan  kejelasan  yang  paling optimal  sebagai  pewarna  alami  untuk  jaringan sebagai pengganti pewarna sintetis.

## SIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa  ekstrak  kulit  buah  manggis  memiliki kemampuan  dalam  mewarnai  jaringan  daun  dan batang krokot. Jenis pelarut asam sitrat 14% dengan lama  perendaman  selama  28  jam  merupakan  yang optimal  dalam  menghasilkan  ekstrak  kulit  buah manggis  sehingga  mampu  mewarnai  jaringan  daun dan batang krokot.

## DAFTAR REFERENSI
Aji,  A.,  Meriatna  &  Ferani,  A.S.  2013.  Pembuatan Pewarna  Makanan  dari  Kulit  Buah  Manggis dengan  Proses  Ektraksi. Jurnal  Teknologi Kimia Unimal , 2(2), pp.1-15.
Anam,  C.,  Mahmudati,  N.  &  Hudha,  A.M.  2016.
Ekstrak Kulit Buah Naga Merah ( Hylocereus polyrhizus )  sebagai  Pewarna  Alami  Preparat Section Tumbuhan Sirsak ( Annona muricata ). Prosiding  Seminar  Nasioanl  III . Malang  :  FKIP  dan  PSLK  Universitas Muhammadiyah Malang. pp. 812-818.
Anggarani,  D.N.,  Kartika,  D  &  Novitasari,  D.A. 2012.  “Table  Kroasia”  Tablet  krokot berkhasiat, inovasi effervescent dari tanaman krokot  ( Portulaca  oleracea L.)  sebagai alternatif minuman bersuplemen bagi penderita  radang  usus  buntu. Jurnal  Ilmiah Mahasiswa , 2(2), pp.91-96.
Astuti, R.E. 2016. Penggunaan Rimpang Temulawak  ( Curcuma  zanthorrhiza L.) sebagai  Pewarna  Preparat    Maserasi  Batang Iler  ( Coleus  scutellarioides L.)  sebagai Media Pembelajaran Biologi. Skripsi . Malang  :  Fakultas  Keguruan  dan  Ilmu
Pendidikan Universitas Muhammadiyah Malang. pp.1-20.
Basito.  2011.  Efektivitas  Penambahan  Etanol  95% dengan Variasi Asam dalam Proses Ekstraksi Pigmen  Antosianin  Kulit  Manggis  ( Garcinia mangostana L.). jurnal  Tekonlogi  Hasil Pertanian , 4(2), pp.84-93.
Dewi,  A.R.,  Purwanti,  E.  &  Nurwidodo.  2017. Kualitas  Preparat  Section  Organ  Tanaman Srikaya ( Annona squamosa ) dengan Pewarna Alami  Filtrat  Daun  Jati  Muda  ( Tectona grandis )  sebagai  Sumber  Belajar  Biologi SMA. Prosiding  Seminar  Nasional  Tahun 2017 .  Malang  :  FKIP  dan  PSLK  Universitas Muhammadiyah Malang. pp. 95-105.
Dewi,  R.K.  2010.  Pengamatan  Inti  Sel  Ujung  Akar Allium cepa menggunakan Pewarna Alternatif    Buah  Gendula-gendulu  ( Breynia sp)  dan  Perasan  Rimpang  Kunyit  ( Curcuma domestica ). Skripsi .  Surakarta  :  Fakultas Keguruan  dan  Ilmu  Pendidikan  Universitas Muhammadiyah Surakarta. pp.1-15.
Elayanti,  L.  2018.  Pemanfaatan  Ekstrak  Daun  Jati Muda  sebagai  Pewarna  Alami  dengan  Lama Perendaman  dan  Jenis  Pelarut  yang  Berbeda pada Preparat Batang Cabai. Skripsi . Surakarta  :  Fakultas  Keguruan  dan  Ilmu Pendidikan Universitas Muhammadiyah
Surakarta. pp.1-14.
Farida,  R  &  Nisa,  F.C.  2015.  Ekstraksi  Antosianin Limbah  Kulit  Manggis  Metode Microwave Assisted  Extraction (Lama  Ekstraksi  dan Rasio  Bahan  :  Pelarut). Jurnal  Pangan  dan Agroindustri , 3(2), pp.362-373.
Gresby,  A.  2013.  Pemanfaatan  Filtrat  Daun  Jati Muda  ( Tectona  grandis )  sebagai  Bahan Pewarna  Alternatif  Pembuatan  Preparat Maserasi  Batang  Cincau  Rambat  ( Cyclea barbata ). Skripsi . Malang : Fakultas Keguruan  dan  Ilmu  Pendidikan  Universitas Muhammadiyah Malang. pp.1-13.
Hariana, 2015. 262 .Tumbuhan Obat dan Khasiatnya . Jakarta : Penebar Swadaya
Imanuna,  M.,  Widodo,  M.W  &  Tako,  Y.E.  2018. Riko  Lara  sebagai  alternatif  pencegahan penyakit kardiovaskuler di Desa Karangwidoro  Kabupaten  Malang. Jurnal Karinov , 1(2), pp.1-6.
Martin & Manoli. 2009. Advanced Color Chart Red . Di akses pada 3 Oktober 2019
www.stripgenerator.com
Nida,  E.H.,  Melly,  N.,  &  Syarifah,  R.  2013.
Kandungan Antosianin dan Aktivitas
Antioksidan  Ubi  Jalar  Ungu  Segar  dan Produk  Olahannya. Jurnal  Agritech ,  33(3), pp.296-302.
Nurwanti,  M.,  Budiono,  J.D.  &  Pratiwi,  P.R.  2013. Pemanfaatan  Filtrat  Daun  Muda  Jati  sebagai Bahan  Pewarna  Alternatif  dalam  Pembuatan Preparat  Jaringan  Tumbuhan. BioEdu ,  2 Januari. pp.73-76.
Preece,  A.  1959. A  Manual  For  Histologic Technicians . Boston : Brown and Company.
Puspitasari,  M.L.,  Wulansari,  T.V.,  Widyaningsih, T.D., Maligan, J.Y & Nugrahini, N.I.P. 2016. Aktivitas  Antioksidn  dan  Suplemen  Herbal Daun Sirsak ( Annona muricata L. ) dan Kulit Manggis  ( Garcinia  mangostana  L. ). Jurnal Pangan dan Agroindustri, 4(1), pp.283-290.
Rubiyanti, R., Susilawati, Y & Muchtaridi, M. 2014. Potensi  Ekonomi  Dan  Manfaat  Kandungan Alfa-Mangostin  Serta  Gartanin  Dalam  Kulit Buah  Manggis  ( Garcinia  mangostana Linn). Farmaka, 15(1), pp.15-25.
Sa’diyah,  A.R.  2015.  Penggunaan  Filtrat  Kunyit ( Curcuma  domestica val.)  sebagai  Pewarna Alternatif Jaringan Tumbuhan pada Tanaman Melinjo  ( Gnetum  gnemon ). BioEdu ,  1 Januari. pp.365-369.
Samiyarsih,    S.,    Brata,    T.,  &  Juwarno.    2016. Karakter    anatomi    daun    tumbuhan mangrove  akibat    pencemaran    di  hutan mangrove    Kabupaten    Cilacap. Biosfera 33(1), pp. 31-36.
_______,    Fitrianto    N,    Azizah    E,    Herawati    W, Rochmatino.  2020.  Anatomical    profile    and genetic    variability    of    sweet  potato ( Ipomoea  batatas )  cultivars  in  Banyumas,
Central    Java,    based    on    RAPD    markers. Biodiversitas 21(4), pp. 1755-1766.
_______,    Juwarno,    Muljowati    JS.    2018.    The structural    resistance’s  anatomy    of    sweet potato    leaves    to    fungal    pathogen Sphaceloma  batatas . Biosaintifika 10(1), pp.131-137.
_______,  Naipospos,  N.,  &  Palupi,  D.  2019.
Variability  of Catharanthus  roseus based  on morphological  and  anatomical  characters, and  chlorophyll  contents. Biodiversitas , 20(10), pp. 2986-2993.
Saputri,  I.D.  2018.  Pemanfaatan  Ekstrak  Kulit  Ubi Jalar  Ungu  sebagai  Pewarna  Alami  Preparat
Section
Batang Tumbuhan Krokot ( Portulaca  oleracea ). Skripsi .  Surakarta  : Fakultas  Keguruan  dan  Ilmu  Pendidikan
Universitas  Muhammadiyah  Surakarta.  pp.1- 14.
Sartono, I.D. 2018. Pemanfaatan Ekstrak Kulit Buah Naga  Super  Merah  sebagai  Pewarna  Alami Preparat Section Jaringan Tumbuhan Rumput Teki ( Cyperus rotundus ). Skripsi . Surakarta : Fakultas  Keguruan  dan  Ilmu  Pendidikan Universitas  Muhammadiyah  Surakarta.  pp.1- 10.
Sass,  J.E.  1951. Botanical  Microtechnique  3 rd Edition. Lowa  :  The  Lowa  State  Collage Press.
Simopoulos,  A.,  2004.  Omega-3  fatty  acids  in inflammation  and  autoimmune  disease. Journal Am Clin Nutr , 21,pp. 495-505.
Szalai,  G.N.,  Dai  &  Avionam,  S.  2010.  Effect  of nitrogen  source  in  fertilizing  solution  on nutrional  quality  of  three  members  of  the Portulaca oleracea agregate. Journal science food agriculture , 90(12), pp.2039-2045.
Wahyuni,  S.  2015.  Identifikasi  Preparat  Gosok
Tulang ( Bone ) Berdasarkan
Teknik
Pewarnaan. Prosiding  Seminar  Nasioanal
Pendidikan  Biologi  2015 .  Malang  :  Prodi Pendidikan Biologi FKIP Universitas Muahammadiyah Malang. pp. 657-666.
Wijayanti,  N.P.A.D.,  Elayanti,  L.P.M.K.,  Astuti,
K.W  &  Fitri,  N.P.E.  2016.  Optimasi  Waktu Maserasi
untuk Manggis ( Garcinia mangostana L.)  Rind  Menggunakan  Pelarut Etil  Asetat. Jurnal  Farmasi  dan  Ilmu Kefarmasian Indonesia , 3(1), pp.12-16.