## PRODUKSI PROTEIN SEL TUNGGAL ISOLAT KHAMIR ASAL LIMBAH PABRIK KECAP DENGAN METODE CO-CULTURE
Chintya Corin 1) dan Tri Ardyati 2)
Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Brawijaya, Malang
1) triardy@ub.ac.id dan 2) tri_ardyati@yahoo.com

## ABSTRAK
Limbah  pabrik  kecap  terdiri  limbah  cair  dan  ampas  kecap.  Ampas  kecap  masih  mengandung nutrisi  yang  cukup  tinggi  sehingga  memungkinkan  khamir  dapat  hidup  pada  limbah  tersebut.  Isolat khamir  yang  berasal  dari  limbah  kecap  berpotensi  sebagai  sumber  protein  sel  tunggal.  Tujuan  dari penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  isolat-isolat  khamir  yang  dapat  digunakan  untuk  produksi protein sel tunggal secara co-culture dan mengetahui pengaruh metode co-culture terhadap kadar protein yang dihasilkan. Isolat yang digunakan yaitu I 2 YP 5 K 1 , I 2 YP 5 K 2 , KYP 6 K 1 , KYP 3 K 2 , AYP 6 K 1 , AYP 6 K 2 , dan AYP 5 K 4 .  Tahapan  penelitian  meliputi  perbanyakan  khamir  pada  media  Yeast  Malt  Broth,  uji  interaksi antar isolat yang didapatkan, produksi protein sel tunggal, dan identifikasi isolat dengan API 20C AUX. Parameter yang diamati meliputi biomassa, jumlah sel, dan kadar protein yang dihasilkan selama proses inkubasi.  Rancangan  penelitian  menggunakan  Rancangan  Acak  kelompok  (RAK)  dengan  tiga  kali ulangan. Isolat yang digunakan untuk metode co-culture dalam produksi protein sel tunggal adalah isolat yang  tidak  bersifat  antagonis  dengan  isolat  lainnya,  yaitu  isolat  KYP 3 K 2 (Saccharomyces  cereviseae), AYP 6 K 1 , AYP 6 K 2 , dan AYP 5 K 4 . Penggunaan metode co-culture tidak meningkatkan biomassa dan jumlah sel, namun dapat meningkatkan kadar protein. Produksi protein sel tunggal oleh co-culture isolat KYP 3 K 2 dan AYP 6 K 2 menghasilkan kadar protein tertinggi yaitu sebesar 1,31 mg/g.
Kata kunci : Ampas kecap, co-culture, khamir, protein sel tunggal

## ABSTRACT
Nutrient content in soy sauce waste able to allow growth of yeasts. Yeast isolates have potency to be used in the production of single cell protein. The research was carried out to study isolates for production of single cell protein using co-culture method and to determine the effect of co-culture method in protein content  obtained.  The  isolates  used  were  I 2 YP 5 K 1 ,  I 2 YP 5 K 2 ,  KYP 6 K 1 ,  KYP 3 K 2 ,  AYP 6 K 1 ,  AYP 6 K 2 ,  and AYP 5 K 4 . Steps used in this research were grown the yeast isolates in Yeast Malt Broth, assay of antagonist among  yeast  isolates,  single  cell  protein  production,  and  identification  using  API  20C  AUX.  Parameters measured were biomass, number of cells, and protein content. Design of research using two-way ANOVA with  three  replications.  Isolates  able  to  be  used  for  co-culture  method  in  the  production  of  single  cell protein  were  KYP 3 K 2 (Saccharomyces  cereviseae),  AYP 6 K 1 ,  AYP 6 K 2 ,  and  AYP 5 K 4 .  Co-culture  methods does  not  increase  biomass  and  number  of  cells,  however  able  to  increase  the  protein  content.  Protein production  by  co-culture  isolates  KYP 3 K 2 and  AYP 6 K 2 is  highest  than  other  co-culture  isolates  with protein content 1.31 mg / g.

## Key words : Co-culture, single cell protein, soy sauce waste, yeast

## PENDAHULUAN
Industri  kecap  di  Indonesia  saat  ini sangat  berkembang  pesat.  Hal  tersebut berbanding  lurus  dengan  limbah  yang dihasilkan dari produksi kecap. Limbah padat (ampas)  dari  industri  kecap  mengandung 27,26 % protein, 10,06 % lemak, dan 28,83 % karbohidrat  (Lubis,  2006).  Ampas  kecap mengandung protein sebesar 24,9 %, kalsium 0,39 %, dan 0,33 % fosfor (Widyati & Yanti,
1996).  Kandungan  nutrisi  yang  cukup  tinggi pada  limbah  kecap  memungkinkan  sebagai media  pertumbuhan  bagi  khamir.  Isolat khamir  dari  limbah  pabrik  kecap  juga berpotensi sebagai sumber protein sel tunggal. Isolat khamir yang telah  diisolasi dari limbah pabrik  kecap  sebanyak  tujuh  isolat,  yaitu I 2 YP 5 K 1 , I 2 YP 5 K 2 , KYP 6 K 1 , KYP 3 K 2 , AYP 6 K 1 ,  AYP 6 K 2 ,  dan  AYP 5 K 4 (Sidauruk dkk., 2013).
Sejak  perang  dunia  I  dan  II,  khamir telah  dikembangkan  sebagai  sumber  protein
sel tunggal (PST) untuk memenuhi kebutuhan protein dunia. Sumber PST dapat berasal dari spesies  khamir  Saccharomyces  cerevisiae, Candida  arborea,  dan  Candida  utilis.  Sel khamir  mengandung  protein  lebih  tinggi dibandingkan kapang, kandungan asam nukleat  lebih  rendah  daripada  bakteri,  dan ukuran  sel  lebih  besar  dibandingkan  bakteri sehingga lebih mudah dipanen untuk digunakan  sebagai  PST  (Waites  dkk.,  2001). Proses  produksi  protein  sel  tunggal  dapat dilakukan  secara  mono-culture  maupun  co- culture. Produksi PST secara co-culture lebih menguntungkan  karena  penggunaan  sumber karbon  lebih  efisien,  sehingga  meningkatkan biomassa  dan  mengurangi  waktu  fermentasi serta  mengurangi  biaya  produksi  (Tesfaw  & Assefa,  2014).  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui isolat khamir yang dapat digunakan  untuk  co-culture  dalam  produksi protein sel tunggal serta pengaruh metode co- culture  terhadap  biomassa,  jumlah  sel,  dan kadar protein yang dihasilkan.

## METODE PENELITIAN
Sumber  Isolat  Khamir.  Isolat  yang digunakan diperoleh dari penelitian sebelumnya, yaitu I 2 YP 5 K 1 , I 2 YP 5 K 2 , KYP 6 K 1 ,  KYP 3 K 2 ,  AYP 6 K 1 ,  AYP 6 K 2 ,  dan AYP 5 K 4 (Sidauruk  dkk.,  2013).  Setiap  isolat diremajakan  pada  media  Yeast  Malt  Agar (YMA) dengan komposisi ekstrak khamir 0,3 %, ekstrak malt 0,3 %, pepton 0,5 %, glukosa 3  %,  agar  1,5  %  dalam  100    ml  akuades, kemudian diinkubasi pada suhu 30° C selama 48 jam.

## Uji  Interaksi  Antar  Isolat.  Uji
interaksi menggunakan metode Disk Diffusion.  Isolat  dengan  densitas  sel  1-2x10 8
CFU/ml  dalam  media  YMB  (Yeast  Malt Broth) berumur 48 jam, diinokulasikan secara spread method pada permukaan media YMA, lalu ditunggu hingga mengering. Paper disk 6 mm direndam dalam media YMB yang berisi 1-2x10 8 CFU/ml  sel  isolat  khamir  lainnya, kemudian  diletakkan  pada  permukaan  YMA, diinkubasi  pada  suhu  30°  C  selama  48  jam. Setelah  itu  diamati  ada  tidaknya  zona  bening di sekitar paper disk (Jiang, 2009).
Produksi  Protein  Sel  Tunggal  dan Pengukuran Kadar Protein. Satu oose isolat yang  terpilih  diinokulasikan  dalam  60  ml
YMB,  diinkubasi  dalam  shaker  suhu  30°  C, kecepatan 120 rpm, selama 48 jam, kultur ini digunakan sebagai starter. Jumlah sel dihitung hingga  mencapai  1x10 8 CFU/ml.  Starter sebanyak  20  ml  dari  masing-masing  isolat (1:1)  diinokulasikan  dalam  360  ml  media YMB untuk produksi PST. Inokulum diinkubasi  dalam  shaker  suhu  30°  C, kecepatan 120 rpm, selama 10 jam.
Biakan  khamir  disentrifugasi  pada
5000  rpm,  4°  C  selama  5  menit.  Supernatan dibuang  dan  pelet  dicuci  dengan  PBS (Phosphat  Buffer  Saline)  sebanyak  tiga  kali. kemudian  ditimbang  untuk  menentukan  berat basah pelet. Biomassa dihitung dengan rumus
=
Keterangan: B : Biomassa ( µ g/sel) BP : Berat basah pelet ( µ g/ml)
JS : Jumlah sel (sel/ml)
Satu  gram  pelet  digerus  dengan ditambahkan  nitrogen  cair  dan  2  ml  buffer ekstrak protein (Bhima dkk., 2011). Supernatan  diambil  sebanyak  20 µ l  dan ditambahkan  780 µ l  akuabides  kemudian dihomogenasi.  Homogenat  ditambahkan  200 µ l  reagen  Bradford.  Suspensi  diinkubasi selama 10 menit pada suhu ruang dan diukur absorbansinya  pada  panjang  gelombang  595 nm  (Sidauruk  dkk.,  2013).  Data  absorbansi isolat  co-culture  dimasukkan  dalam  rumus kurva  standar  BSA  (Bovine  Serum  Albumin). Kadar protein dihitung dengan rumus
(2)
Keterangan: K : konsentrasi protein ( µ g/g)
BEP  : volume buffer ekstrak protein ( µ L) PS
: volume supernatan ( µ L) KP : konsentrasi protein BP : berat pelet (g)
Rancangan  Percobaan.  Rancangan percobaan  yang  dilakukan  adalah  rancangan acak  kelompok  (RAK)  dengan  tiga  kali ulangan.  Hasil  dianalisis  menggunakan  uji two-way ANOVA dan dilanjutkan dengan uji Tukey.

## Identifikasi Isolat Khamir dengan API
20C  AUX.  Isolat  khamir  dimurnikan  pada media  YMA  dengan  spread  method  dan diinkubasi  selama  48  jam.  Satu  koloni
(1)
diambil,  diinokulasikan  pada  2  ml NaCl  dan  disamakan  kekeruhannya  dengan McFarland.  Sebanyak  100 µ l  biakan  kultur diinokulasikan  ke  dalam  medium  API AUX,  diteteskan  pada  20  cupule diinkubasi  pada  suhu  ruang.  Perubahan terjadi  diamati  pada  48  dan  72  jam.  Hasil yang diperoleh dimasukkan ke dalam program  analisis  API  4.0  (Abulhamd  dkk 2007).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Khamir yang digunakan untuk produksi protein  sel  tunggal  adalah  khamir  yang  tidak bersifat  patogen  (tidak  menghasilkan  zona bening  pada  media  Blood  agar memiliki  pseudohifa,  dan  tidak  memiliki germ-tubes)  yaitu  isolat  I 2 YP 5 K KYP 6 K 1 ,  KYP 3 K 2 ,  AYP 6 K 1 ,  AYP AYP 5 K 4 (Sidauruk  dkk.,  2013) isolat  khamir  yang  dapat  digunakan  untuk produksi  protein  sel  tunggal  dengan  metode co-culture  adalah  isolat  khamir bersifat  antagonis,  yaitu  isolat  khamir  tidak membentuk  zona  bening  disekitar  koloni tumbuh.  Berdasarkan  hasil  uji diketahui  bahwa  isolat  I 2 YP 5 K terhadap  isolat  I 2 YP 5 K 2 dan  KYP sinergis  terhadap  isolat  KYP 3 K AYP 6 K 2 ,  dan  AYP 5 K 4 .  Isolat  KYP diketahui  antagonis  terhadap  isolat namun  sinergis  terhadap  isolat  yang  lainnya (Gambar  1).  Adanya  interaksi  negatif  dapat dilihat  dari  adanya  zona  bening paper  disk.  Zona  bening  dapat  terbentuk karena  adanya  metabolit  isolat  khamir  yang mampu  menghambat  pertumbuhan  isolat khamir  lainnya.  Beberapa  jenis  khamir mampu  mensintesis  protein  atau  glikoprotein dengan  efek  toksik  terhadap  jenis yang  sensitif  dan  kejadian  tersebut  sering disebut  dengan  killer  system 2008).
Pertimbangan  lain  yang  digunakan dalam  pemilihan  isolat  untuk  produksi  PST adalah  kadar  protein  masing-masing  isolat khamir.  Berdasarkan  Sidauruk  dkk.  (2013) terdapat empat isolat khamir yang menunjukkan kadar protein yang lain  isolat  KYP 3 K 2 ,  AYP 6 K 1 ,  AYP AYP 5 K 4 ,  sehingga  keempat  isolat  tersebut digunakan  dalam  produksi  PST  dengan metode co-culture.
diinokulasikan  pada  2  ml  0,85%
disamakan  kekeruhannya  dengan 2 biakan  kultur medium  API  20C
cupules  API  kit, Perubahan  yang 48  dan  72  jam.  Hasil masukkan ke dalam Abulhamd  dkk.,

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Khamir yang digunakan untuk produksi protein  sel  tunggal  adalah  khamir  yang  tidak (tidak  menghasilkan  zona
Blood  agar,  tidak
,  dan  tidak  memiliki
K 1 ,  I 2 YP 5 K 2 , ,  AYP 6 K 2 ,  dan (Sidauruk  dkk.,  2013) . Selain  itu isolat  khamir  yang  dapat  digunakan  untuk produksi  protein  sel  tunggal  dengan  metode
adalah  isolat  khamir  yang  tidak
,  yaitu  isolat  khamir  tidak ng  disekitar  koloni Berdasarkan  hasil  uji  interaksi,
K 1 antagonis KYP 6 K 1 ,  namun K 2 ,  AYP 6 K 1 , KYP 6 K 1 juga terhadap  isolat  KYP 3 K 2 , hadap  isolat  yang  lainnya ).  Adanya  interaksi  negatif  dapat dilihat  dari  adanya  zona  bening  di  sekitar
.  Zona  bening  dapat  terbentuk isolat  khamir  yang mampu  menghambat  pertumbuhan  isolat eberapa  jenis  khamir
mampu  mensintesis  protein  atau  glikoprotein dengan  efek  toksik  terhadap  jenis  khamir yang  sensitif  dan  kejadian  tersebut  sering (Baeza  dkk.,
Pertimbangan  lain  yang  digunakan dalam  pemilihan  isolat  untuk  produksi  PST masing  isolat
Sidauruk  dkk.  (2013) isolat khamir yang
menunjukkan kadar protein yang tinggi antara AYP 6 K 2 ,  dan isolat  tersebut digunakan  dalam  produksi  PST  dengan
Gambar  1.  Uji  antagonisme  A)  isolat terhadap isolat isolat  I 2 YP 5 K 2 dan  kontrol;  C)  isolat  KYP terhadap  isolat  lainnya  dan  kontrol; D)  isolat  KYP lainnya dan kontrol; E) isolat AYP terhadap isolat lainnya dan kontrol; F) isolat  AYP 6 K 2 dan kontrol
Pemanenan biomassa pada fase logaritmik akhir 10. Biomassa khamir memiliki yang  berbeda-beda  (Tabel  1 tabel tersebut dapat diketahui bahwa biomassa  sel  tertinggi  dihasilkan  oleh  isolat mono-culture  AYP 5 K 4 yaitu  seb 0,93  x  10 -6 µg/sel.  Biomassa  isolat
culture ternyata lebih tinggi bila dibandingkan  dengan  biomassa  isolat culture.  Hal  tersebut  disebabkan  waktu pengambilan  sampel  pada  media tidak  berada  pada  fase  logaritmik  sehingga dimungkinkan  telah  terjadi  pengurangan kadar  protein  dalam  sel.  Selain  itu  adanya kompetisi  nutrisi  antar  isolat  pada  media YMB  juga  dapat  mempengaruhi  biomassa yang dihasilkan.
A E F B C D
Gambar  1.  Uji  antagonisme  A)  isolat  I 2 YP 5 K 1 lainnya dan kontrol; B) 2 terhadap  isolat  lainnya dan  kontrol;  C)  isolat  KYP 6 K 1 terhadap  isolat  lainnya  dan  kontrol; D)  isolat  KYP 3 K 2 terhadap  isolat lainnya dan kontrol; E) isolat AYP 6 K 1 terhadap isolat lainnya dan kontrol; F) terhadap isolat lainnya
Pemanenan biomassa khamir dilakukan akhir yaitu pada jam ke- miliki berat biomassa
(Tabel  1).  Berdasarkan
tabel tersebut dapat diketahui bahwa tinggi  dihasilkan  oleh  isolat yaitu  sebesar  2,81  ± Biomassa  isolat  mono- ternyata lebih tinggi bila dibandingkan  dengan  biomassa  isolat  co-
.  Hal  tersebut  disebabkan  waktu pada  media  produksi tidak  berada  pada  fase  logaritmik  sehingga dimungkinkan  telah  terjadi  pengurangan kadar  protein  dalam  sel.  Selain  itu  adanya kompetisi  nutrisi  antar  isolat  pada  media YMB  juga  dapat  mempengaruhi  biomassa
F B D

## Tabel 1. Biomassa khamir isolat mono-culture dan
co-culture Metode Isolat Biomassa (x 10 -6 µg / sel) Mono- culture KYP 3 K 2 1,77 ± 0,12 bc AYP 6 K 1 2,21 ± 0,62 c AYP 6 K 2 0,68 ± 0,07 a AYP 5 K 4
2,81 ± 0,93 d Co- culture KYP 3 K 2 dan AYP 6 K 1 1,31 ± 0,05 b
KYP 3 K 2 dan AYP 6 K 2 1,04 ± 0,01 b
KYP 3 K 2 dan AYP 5 K 4 2,02 ± 0,49 c AYP 6 K 1 dan AYP 6 K 2 0,89 ± 0,16 ab
AYP 6 K 1 dan AYP 5 K 4 2,14 ± 0,45 c
AYP 6 K 2 dan AYP 5 K 4 1,14 ± 0,14 b
Kadar  protein  isolat  mono-culture digunakan  sebagai  kontrol  atau  pembanding terhadap  kadar  protein  isolat  co-culture. Perbedaan waktu pengukuran tidak mempengaruhi  kadar  protein  dengan  nilai signifikansi 0,67 > 0,05, sedangkan perbedaan isolat mempengaruhi kadar protein dengan nilai signifikansi 0,00 < 0,05.
Pada  Gambar  2  juga  dapat  dilihat bahwa kadar protein tertinggi dihasilkan oleh isolat  co-culture  KYP 3 K 2 dan  AYP 6 K 2 sebesar 1,31 mg/g dan kadar protein terendah dihasilkan oleh isolat co-culture AYP 6 K 2 dan AYP 5 K 4 sebesar  0,57  mg/g.  Isolat  co-culture KYP 3 K 2 dan  AYP 6 K 1 ,  KYP 3 K 2 dan  AYP 5 K 4 , serta  AYP 6 K 1 dan  AYP 6 K 2 menghasilkan kadar  protein  yang  tidak  berbeda  dengan kontrol,  sedangkan  isolat  AYP 6 K 1 dan AYP 5 K 4 serta AYP 6 K 2 dan AYP 5 K 4 menghasilkan kadar protein yang lebih rendah daripada  kontrol.  Penurunan  kadar  protein dapat dikarenakan waktu pengambilan sampel untuk  produksi  protein  sel  tunggal  tidak berada  pada  fase  logaritmik  isolat  khamir melainkan  saat  memasuki  fase  stasioner.  Hal tersebut  menyebabkan  jumlah  sel  kurang optimal  karena  saat  fase  stasioner  sel  khamir tidak  lagi  berkembang  biak  dan  mengalami autobiodegradasi  protein  dalam  sel  yang digunakan untuk memenuhi kebutuhan energi,  sehingga  kadar  protein  dalam  sel berkurang (Lay & Sugyo, 1992).
Berdasarkan  Gambar  3  dapat  dilihat bahwa  jumlah  sel  tertinggi  23,69  x  10 9 sel/g dihasilkan  oleh  isolat  mono-culture  AYP 6 K 2 dan  jumlah  sel  terendah  2,96  x  10 9 sel/g dihasilkan  oleh  isolat  mono-culture  AYP 5 K 4 .
Isolat  co-culture  KYP 3 K 2 dan  AYP 6 K 2 yang memiliki kadar protein tertinggi ternyata juga tidak  memiliki  jumlah  sel  yang  tinggi  pula, yaitu sebanyak 12,56 x 10 9 sel/g. Hal tersebut dapat terjadi karena substansi nutrisi pada co- culture  lebih  digunakan  untuk  menghasilkan metabolit  dibandingkan  untuk  pertumbuhan sel  (Lay  &  Sugyo,  1992).  Selain  itu,  pada proses  produksi  isolat  mono-culture  AYP 6 K 1 dan  AYP 5 K 4 terbentuk  banyak  buih  (foam) pada permukaan media produksi. Buih dalam kultur khamir merupakan hasil metabolit dari sel  yang  tumbuh.  Buih  dapat  terjadi  karena adanya kecepatan agitasi yang kurang optimal sehingga mempengaruhi ketersediaan oksigen yang  menyebabkan  pertumbuhan  khamir tidak optimum (Lee & Kyun, 2001).
Gambar  2.  Kadar  protein  pada  isolat  khamir mono-culture dan co-culture
Gambar  3.  Korelasi  antara  kadar  protein  dan jumlah  sel  pada  isolat  mono-culture dan co-culture
Co-culture  isolat  khamir  KYP 3 K 2 dan AYP 6 K 2 berpotensi  menjadi  sumber  protein sel  tunggal  karena  memiliki  kadar  asam
1,13 ± 0,34 0,99
± 0,25 1,17 0,22 1,10 ± 0,22 1,10 ± 0,22 1,31 ± 0,13 1,03 ± 0,11 1,03 ± 0,3 0,83 ± 0,26 0,57
± 0,13 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 K a d a r p ro te in ( m g /g ) Isolat bc ab bc bc bc bc bc bc c a 0 5 10 15 20 25 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 Ju m la h s e l (s e l x 1 0 9 / g ) K a d a r p ro te in ( m g /g ) Isolat Kadar protein
nukleat  yang  lebih  rendah  daripada  isolat lainnya  yaitu  sebesar  15,80  %  dan  memiliki kandungan asam amino yang seimbang. Isolat KYP 3 K 2 memiliki  nilai  kemiripan  dengan Saccharomyces  cereviseae  1  sebesar  99,6  % (Sidauruk dkk., 2013). Isolat khamir AYP 6 K 2 diketahui  memiliki  nilai  kemiripan  dengan Candida  glabrata  sebesar  99,3  %.  Produksi protein  sel  tunggal  menggunakan  co-culture antara Saccharomyces cerevisiae dan Candida  glabrata  tidak  dapat  diaplikasikan langsung  sebagai  pakan  ternak,  meskipun memiliki kadar protein yang tinggi dikarenakan  Candida  glabrata  merupakan salah satu jenis khamir patogen.

## KESIMPULAN
Isolat  yang  dapat  digunakan  secara  co- culture  dalam  produksi  PST  yaitu  isolat KYP 3 K 2 (Saccharomyces cereviseae), AYP 6 K 1 ,  AYP 6 K 2 ,  dan  AYP 5 K 4 .  Penggunaan metode co-culture tidak meningkatkan biomassa dan jumlah sel, namun meningkatkan  kadar  protein.  Produksi  PST co-culture  isolat  KYP 3 K 2 dan  AYP 6 K 2 menghasilkan  kadar  protein  tertinggi  sebesar 1,31 mg/g, namun kurang disarankan sebagai sumber PST.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Abulhamd, A. T., M. M. Mokhtar, & F. R.  Mohame.  2007.  Biochemical  and Molecular  Characterization  of  Some Yeast  Isolates.  J.  of  Agric.  Sci. 15(2):315-324.
[2] Baeza, M. E., M. A. Sanhueza, & V. H. Cifuentes.  2008.  Occurrence  of  Killer Yeast Strains in Industrial and Clinical Yeast  Isolates.  Biol.  Res.  41(1): 173-
182.
[3] Bhima,  B.,  T.  A.    Devi,  M.  S.  Reddy, Y.  R.  Reddy,  &  L.V.  Rao.  2011. Optimized  protein  extraction  from yeast  (Saccharomyces  cerevisiae)  for 2-D  gel  electrophoresis.  J.  of  Theo.  &
Exp. Biol. 8(1):77-84.
[4] Jiang,  L.  2009.  Comparison  of  Disk Diffusion,  Agar  Dilution,  and  Broth Microdilution for Antimicrobial Susceptibility
Testing of Five Chitosans.  Fujian  Agricultural  and
Forestry University. Fujian. Tesis.
[5] Lay,  B.W.  &  H.  Sugyo.  1992. Mikrobiologi. Rajawali Press. Jakarta.
[6] Lee,  B.K.  &  K.  J.  Kyun.  2001. Production  of  Candida  utilis  biomass on  molasses  in  different  culture  types. Aquacultural  Engineering,  25(1):111- 124.
[7] Lubis,  H.  2006.  Pengolahan  Limbah
Pabrik Kecap Menjadi Etanol. Pascasarjana Universitas Sumatera Utara. Medan. Tesis.
[8] Sidauruk, H., T. Ardyati, & O. Sjofjan. 2013. The Amino Acid Profile of Yeast from  Ketchup  Factory  Waste  as  a Candidate of Single Cell Protein (SCP).
Int. J. Biosci. 3(9): 36-43.
[9] Tesfaw,  A.  &  F.  Assefa.  2014.  Co- culture:  A  Great  Promising  Method  in Single Cell Protein Production. Biotech. & Mol. Biol. Review. 9(2): 12-
20.
[10]   Waites,  M.  J.,  N.  L.  Morgan,  J.  S. Rockey, & G. Higton. 2001. Industrial Microbiology: Introduction.
Blackwell Science. USA.
[11]   Widyati,  E.  &  W.,  Yanti.  1996.
Limbah untuk Pakan Ternak.
Agrisarana. Surabaya.