Potensi Hama Pomacea canaliculata Sebagai Antibakteri Terhadap Patogen Xanthomonas oryzae pv oryzae
Irwanto Sucipto 1 , Ahmad Ilham Tanzil 2 , Wildan Muhlison 3
1 Prodi Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Jember, Indonesia. Email: irwanto.sucipto@unej.ac.id
2 Prodi Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Jember, Indonesia. Email: aitanzil@unej.ac.id 3 Prodi Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Jember, Indonesia. Email: wildan.muhlison@unej.ac.id
Received: 05-09-2020 Accepted: 26-20-2020 Available online:01-11-2020

## ABSTRACT
Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo) is one of the important diseases in rice. The key to Xoo's primary control is using disease-free or treated seeds and crop rotation. However, the  relevance  of  using  certified  seeds  or  seedlings  will  be  reduced  if  there  is  a combination of main pest attacks that help the entry of these pathogens into the plant, one  example  is  the  golden  snail  from  the  mollusca  group.  Based  on  several  research sources, the mollusca group in marine areas is an untapped source and can be used to find new ingredients as antimicrobials. Starting from this, it can be seen that one of the important  pests  in  rice,  namely  golden  snails  ( Pomacea  canaliculata ),  is  part  of  the mollusca  phylum  which  can  actually  be  used  as  an  antimicrobial.  Given  that P. canaliculata is one of the important pests in rice which is very destructive, this can be one of  the  advantages,  namely  that  the  pest will  not return  to  the  pest  status  but  will  also hold the status as an antimicrobial raw material used in rice plants as well. This is an innovation in itself in the field of controlling bacterial leaf blight because in addition to controlling the disease, the important pests of golden snails can be controlled. Chitosan and  Antimicrobial Peptides (AMPs)  were  obtained  by  extracting  golden  snails  using different  techniques.  A  total  of  eight  treatments  were  used  in  this  study,  namely negative  control  (KON),  positive  control  (KKT),  Chitosan  (KT)  with  3  concentrations, namely 0.2%, 0.4%, 0.6 and Antimicrobial Peptides (AA) with 3 concentrations. 1%, 3%, 5%.  The  method  used  is  the  paper  disc  diffusion  method  to  determine  the  inhibitory power  of  Chitosan  and  Antimicrobial  Peptides  (AMPs)  against  pathogenic  bacteria. Treatments that have an effect will be further tested using the Duncan test at the level of α  = 0.05. Each  chitosan and  AMPs  treatment  at  each  concentration  showed  a  different level  of  inhibition.  The  highest  inhibition  was  seen  in  the  AMPs  treatment  with  a concentration of 1%. It was noted that the increase in concentration was inversely related to  the  inhibitory  power  in  each  treatment.  The  conclusion  from  this  study  is  that chitosan  and  AMPs  treatment  has  excellent  potential  as  environmentally  friendly antibacterials  with abundant  raw  materials  as  indicated  by  the  best  treatment,  namely AMPs 1%. The increasing number of new research related to environmentally friendly antibacterials will be a turning point in the world of antimicrobial development.
Keywords : antimicrobial, environmentally friendly, golden snail, mollusca, resistance

## TECHNO: JURNAL PENELITIAN
Journal homepage : http://ejournal.unkhair.ac.id/index.php/Techno Issue 09 Number 02 October 2020 DOI: http://dx.doi.org/10.33387/tjp.v9i2

## ABSTRAK
Xanthomonas oryzae pv. oryzae ( Xoo ) merupakan salah satu penyakit penting pada padi. Kunci pengendalian utama Xoo adalah menggunakan benih bebas penyakit atau benih yang diperlakukan dan rotasi tanaman. Namun relevansi penggunaan benih atau bibit bersertifikasi  akan  menjadi  berkurang  jika  terdapat  kombinasi  serangan  hama  utama yang membantu masuknya patogen ini ke dalam tanaman, salah satu contohnya adalah keong mas dari golongan mollusca . Berdasarkan beberapa sumber penelitian, golongan mollusca yang berada di daerah laut merupakan sumber yang tidak dimanfaatkan dan dapat digunakan untuk mencari kandungan baru sebagai antimikroba. Bertolak dari hal tersebut maka dapat dilihat bahwa  salah satu hama penting di padi yaitu  keong mas ( Pomacea  canaliculata )  merupakan  bagian  dari  filum mollusca yang  sebenarnya  dapat dimanfaatkan  sebagai  antimikroba.  Mengingat  bahwa P.  canaliculata merupakan  salah satu  hama  penting  pada  tanaman  padi yang  sangat merusak  maka  hal  tersebut  dapat menjadi  salah  satu  keuntungan  yaitu  hama  tersebut  tidak  akan  menyandang  status hama  kembali  melainkan  akan  menyandang  status  sebagai  bahan  baku  antimikroba yang digunakan pada tanaman padi juga. Hal tersebut menjadi suatu inovasi tersendiri di  bidang  pengendalian  penyakit  hawar  daun  bakteri  karena  selain  dapat mengendalikan  penyakit,  hama  penting  keong  mas  dapat  terkendalikan. Chitosan dan Antimicrobial Peptides (AMPs) didapatkan dengan cara melakukan ekstraksi dari keong mas  dengan  teknik  yang  berbeda.  Sebanyak  delapan  perlakuan  digunakan  dalam penelitian ini yaitu kontrol negative (KON), kontrol positif (KKT), Chitosan (KT) dengan 3 konsentrasi yaitu 0,2%, 0,4%, 0,6 dan Antimicrobial Peptides (AA) dengan 3 konsentrasi 1%,  3%,  5%.  Metode  yang  digunakan  adalah  Metode  Difusi  Cakram  kertas  untuk mengetahui  daya  hambat  dari Chitosan dan Antimicrobial  Peptides (AMPs)  terhadap bakteri  patogen.  Perlakuan  yang  berpengaruh  akan  diuji  lanjut  dengan  menggunakan uji  Duncan  pada pada  taraf  α  =  0,05. Tiap  perlakuan chitosan dan  AMPs  pada  tiap konsentrasi menunjukkan tingkat penghambatan yang berbeda. Penghambatan tertinggi terlihat  pada  perlakuan  AMPs  dengan  konsentrasi  1%.  Tercatat  bahwa  peningkatan konsentrasi berbanding terbalik terhadap daya hambat di setiap perlakuan. Kesimpulan yang didapat pada penelitian ini adalah perlakuan chitosan dan AMPs memiliki potensi yang sangat baik sebagai antibakteri ramah lingkungan dengan bahan baku melimpah yang  ditunjukkan  oleh  perlakuan  terbaik  yaitu  AMPs  1%.  Semakin  banyaknya penelitian  baru  terkait  antibakteri  ramah  lingkungan  akan  menjadi  titik  balik  dalam dunia pengembangan antimikroba.
Kata Kunci: antimikroba, keong mas, mollusca , ramah lingkungan, resistensi

## PENDAHULUAN
Selama dua dekade, industri farmasi telah cukup sukses dalam mengatasi permasalahan yang diakibatkan oleh faktor tunggal yang menyebabkan resistensi. Berbeda terhadap mekanisme resisten  yang  diakibatkan  oleh  faktor  yang  terdiri  dari  banyak  bagian,  kandungan antimikroba masih sangat terbatas. Oleh karena itu terdapat ketertarikan yang sangat penting dalam  mencari  kandungan  antimikroba  yang  baru  dengan  resiko  yang  rendah  terhadap lingkungan  dan  tingkat  toksikologinya  dimana  tidak  terdapat  pengembangan  tingkat resistensi oleh patogen (Chellaram, Gnanambal, & Edward, 2004). Perihal tersebut juga dapat diadopsi pada dunia pertanian dimana mulai dicari bahan aktif antimikroba yang lebih ramah
lingkungan  dan  tidak  berbahaya  bagi  manusia.  Pal  and  McSpadden  Gardener  (2006) menambahkan terdapat perubahan pola pikir manusia terhadap penggunaan pestisida dalam pertanian akibat residu pestisida yang menyebabkan polusi lingkungan.
Khususnya di wilayah Asia, tanaman padi merupakan tanaman pangan terpenting sehingga permintaan  akan  padi  selalu  meningkat  (Khush  &  Jena,  2009).  Hal  tersebut  meningkatkan perhatian  kesehatan  tanaman  terutama  untuk  tanaman  pangan  kaitannya  dengan penggunaan pestisida. Meskipun padi merupakan tanaman yang sudah lama dibudidayakan tetapi  banyak  permasalahan  OPT  (Organisme  Pengganggu  Tanaman)  yang  masih  belum terselesaikan sampai saat ini. Hawar Daun Bakteri (HBD) yang disebabkan oleh Xanthomonas oryzae pv. oryzae ( Xoo )  merupakan  salah satu  contoh  penting  penyakit  pada  padi  (Wahyudi, Meliah,  &  Nawangsih,  2011).  Banyak  bakterisida  yang  bermunculan  di  pasaran  tetapi  tidak satupun  dapat  menyelesaikan  secara  tuntas  keberadaan  patogen  tersebut.  Inovasi  pencarian bahan aktif antimikroba harusnya menjadi kunci untuk permasalahan tersebut.  Agrios (2005) menambahkan bahwa kunci pengendalian utama adalah menggunakan benih bebas penyakit atau benih yang diperlakukan dan rotasi tanaman. Namun relevansi penggunaan benih atau bibit  bersertifikasi  akan  menjadi  berkurang  jika  terdapat  kombinasi  serangan  hama  yang membantu masuknya patogen ini ke dalam tanaman, salah satu contohnya adalah keong mas dari golongan mollusca .
Mollusca sendiri  merupakan  salah  satu  filum  yang  diketahui  dengan  baik  dan  (setelah Arthropoda)  filum  terbesar  kedua  pada  kingdom  animalia,  memiliki  sekitar  100.000  spesies yang  masih  ada  dan  sekitar  70.000  spesies  yang  telah  dideskripsikan  sebagai  fosil. (Haszprunar, 2001). Selain image keong mas di pertanaman padi sebagai hama,  Chellaram et al.  (2004)  mengatakan mollusca yang  berada  di  daerah  laut  merupakan  sumber  yang  tidak dimanfaatkan  dan  dapat  digunakan  untuk  mencari  kandungan  baru  sebagai  antimikroba. Berdasarkan  laporan  dari  beberapa  penelitian  dilaporkan  bahwa  kandungan  ekstrak  dari mollusca seperti Parerythropodium  fulvum  fulvum (Kelman,  Kuhmaro,  Loya,  Kashman,  & Benayahu, 1998), Sepia sp., Loligo sp. dan Tibia insulaechorab-curta (Degiam & Abas, 2010), Thais tissoti , Babylonia  spirata (Kumaran,  Bragadeeswaran,  &  Thangaraj,  2011)  memiliki  aktivitas antimikroba.  Bertolak dari hal tersebut maka dapat dilihat bahwa  salah satu hama penting di padi  yaitu  keong  mas  ( Pomacea  canaliculata )  merupakan  bagian  dari  filum mollusca yang sebenarnya  dapat  dimanfaatkan  sebagai  antimikroba.  Mengingat  bahwa P.  canaliculata merupakan  salah  satu  hama  penting  pada  tanaman  padi  yang  sangat  merusak  maka  hal tersebut  dapat menjadi  salah  satu keuntungan yaitu  hama  tersebut  tidak akan menyandang status  hama  kembali  melainkan  akan  menyandang  status  sebagai  bahan  baku  antimikroba yang  digunakan  pada  tanaman  padi  juga.  Hal  tersebut  menjadi  suatu  inovasi  tersendiri  di bidang  pengendalian  penyakit  hawar  daun  bakteri  karena  selain  dapat  mengendalikan penyakit,  hama  penting  keong  mas  dapat  terkendalikan.  Untuk  dapat  mewujudkan  hal tersebut  maka  peneliti  melakukan  penelitian  yang  bertujuan  untuk  menemukannya  inovasi bahan  aktif  baru  yang  ekfektif  dan  efisien  sebagai  antibakteri  pada  tanaman  padi  sebagai pengganti pestisida kimia komersial.
Sucipto, I., Tanzil, A.I, Muhlison, W. 2020. antimicrobial, environmentally friendly, golden snail, mollusca, resistance

## METODE PENELITIAN
Penelitian  dilaksanakan  di  Laboratorium  Agroteknologi  Fakultas  Pertanian  Universitas Jember.  Isolat  bakteri yang digunakan Xanthomonas  oryzae pv. oryzae didapat  dari  koleksi Laboratorium Biologi Fakultas MIPA, Universitas Jember.
Prosedur Penelitian Persiapan  Larutan  AMPs  dari  Keong  Mas  ( P.  canaliculata ). Proses  pembuatan  larutan fermentasi keong mas menggunakan keong mas lengkap dengan cangkang dan buah pepaya matang.  Perbandingan  bahan  larutan  fermentasi  yang  digunakan  adalah  10:1.  Fermentasi diawali dengan merebus keong mas hingga masak kemudian setelah masak, kemudian keong mas  didinginkan  dan  ditiriskan.  Setelah  keong  mas  ditiriskan  maka  keong  mas  beserta cangkang ditumbuk hingga cangkang hancur dan diaduk rata dengan pepaya. Semua bahan yang  siap  dimasukkan  pada  wadah  yang  tertutup  rapat  dan  disimpan  selama  30-40  hari. Setelah fermentasi berakhir maka cairan fermentasi disaring sehingga terpisah dengan ampas nya.
Persiapan Chitosan yang  Berasal  dari  Cangkang  Keong  Mas  ( P.  canaliculata ). Proses pembuatan chitosan menggunakan  metode  yang  telah  dilakukan  oleh  Azam  Baihaqi  (2017) yaitu  mengekstraksi chitosan melalui  tahap  deproteinasi,  tahap  demineralisasi  dan  tahap deasetilasi.  Setiap  proses  diikuti  dengan  tahap  pencucian,  pembilasan,  penetralan  pH,  dan pengeringan.
Persiapan  Suspensi  Bakteri X. oryzae pv. oryzae . X.  oryzae pv. oryzae berumur  1  hari  pada media Nutrient Agar diinkubasi ke dalam media Nutrient broth 10 ml selama 12 jam. Setelah 12  jam,  100  µl  biakan X.  oryzae pv. oryzae diencerkan  ke  dalam  9,9  ml  media Nutrient  Broth (NB).  Sebanyak  100  µl diambil  dari  hasil  pengenceran  untuk  ditumbuhkan  pada media  NA dengan metode sebar menggunakan glass beed steril kemudian dikeringanginkan.
Pengujian  ekstrak  keong  mas  terhadap  penghambatan  pertumbuhan X.  oryzae pv. oryzae secara in vitro menggunakan delapan perlakuan yaitu kontrol negative (KON), kontrol positif (KKT), Chitosan (KT)  dengan  3  konsentrasi  yaitu  0,2%,  0,4%,  0,6  dan Antimicrobial Peptides (AA)  dengan  3  konsentrasi  1%,  3%,  5%.  Metode  yang  digunakan  dengan  Metode  Difusi Cakram kertas yang mengacu pada metode Ambarwati (2007); Khoirunnisya (2009). Cakram kertas  berbentuk  lingkaran  dengan diameter  10  mm disterilkan dalam  oven.  Sebanyak  lima kertas  cakram  steril  dengan  empat  ulangan  diletakkan  di  atas  media  berpatogen.  Di  atas kertas  cakram  pertama  diteteskan  20  µl  ekstrak  keong  mas,  di  atas  kertas  saring  kedua diteteskan 20 µl larutan fermentasi keong mas, di atas kertas saring berikutnya diteteskan 20 µl ekstrak chitosan yang berasal dari cangkang keong mas, kertas saring berikutnya diteteskan 20  µl  larutan  chlorampenicol  sebagai  perlakuan  kontrol  positif  dan  yang  terakhir  dibagian tengah  diteteskan  20  µl  media  NB  sebagai  perlakuan  kontrol  negatif.  Pengamatan penghambatan  pertumbuhan X.  oryzae pv. oryzae oleh  ekstrak  tumbuhan  dilakukan  24  jam setelah  perlakuan  dengan  mengukur  diameter  lebar  zona  bening  yang  terbentuk  di  sekitar kertas saring (Khoirunnisya, 2009).
Rancangan  percobaan  yang  dilakukan  adalah  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL).  Data perlakuan yang berpengaruh diuji lanjut dengan uji Duncan pada taraf α = 0,05 menggunakan program SPSS.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Aktivitas Antibakteri Chitosan dan Antimicrobial Peptides (AMPs) asal Keong Mas Pengujian aktivitas antibakteri dari Chitosan dan Antimicrobial Peptides (AMPs) asal keong mas dilakukan  dengan  mengevaluasi  berdasarkan zona  bening  yang  terbentuk  di  sekitar  daerah kertas  cakram  yang  telah  diberi  beberapa  perlakuan.  Hal  ini  bertujuan  untuk  mengetahui apakah antimicrobial peptides (AMPs)  (Gambar  1)  dan chitosan (Gambar  2)  asal  keong  mas memiliki  kandungan  antibakteri. Chitosan merupakan  biopolimer  polisakarida  yang menggabungkan satu set unik dari versatile physicochemical  dan karakteristik biologis yang memungkinkan  untuk  berbagai  aplikasi  (Raafat,  Von  Bargen,  Haas,  &  Sahl,  2008).  Sesuai dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Rabea,  Badawy,  Stevens,  Smagghe,  and  Steurbaut (2003) yang mengatakan chitosan yang biopolimer hidrofilik diperoleh secara industri melalui proses N -deacetylation dari  kitin, dapat digunakan sebagai agen antimikroba. Pada penelitian ini  proses N -deacetylation  merupakan  salah  satu  dari  proses  pembuatan chitosan .  Berbeda dengan chitosan ,  AMPs  merupakan  molekul  imun  bawaan  yang  menunjukkan  aktivitas penghambatan  terhadap  berbagai  mikroba,  termasuk  bakteri,  jamur,  virus,  dan  protozoa. (Gabere  &  Noble,  2017).  Zona  bening  yang  ditunjukkan  pada  Gambar  1  dan  Gambar  2 menunjukkan  adanya  bukti  terhadap  aktivitas  antibakteri,  meskipun  terdapat  tingkat perbedaan penghambatan di tiap perlakuan.
Gambar 1. Zona bening yang terlihat pada perlakuan AMPs: perlakuan 1 (K+) sebesar 2.5 cm dan pada perlakuan 2 (K-), 4 (3%) dan 5 (5%) tidak muncul zona bening, pada perlakuan 3
(1%) sebesar 1.9 cm (pengambilan foto menggunakan mode makro)
Sucipto, I., Tanzil, A.I, Muhlison, W. 2020. antimicrobial, environmentally friendly, golden snail, mollusca, resistance
Gambar 2. Zona bening yang terlihat pada perlakuan chitosan : perlakuan 1 (K+) sebesar 2.5 cm, pada perlakuan 2 (K-) tidak muncul zona bening, pada perlakuan 3 (0,2%) sebesar 0.7 cm, pada perlakuam 4 (0,4%) sebesar 0,6 cm dan perlakuan 5 (0,6%)sebesar 0.6 cm (pengambilan foto menggunakan mode makro).
Satu  cawan  petri  terdiri  dari  lima  kertas  cakram  yang  terdiri  dari  lima  perlakuan  yaitu perlakuan chitosan dengan  berbagai  konsentrasi,  perlakuan  asam  amino  dengan  berbagai konsentrasi,  kontrol  negatif  dan  kontrol  positif.  Konsentrasi  tinggi  yang  dianjurkan  adalah 5%-6%  karena  konsentrasi  tersebut  merupakan  ambang  batas  tingkat  efisien  untuk memproduksi  sebuah  pestisida  alami.  Berdasarkan  hasil  uji daya  hambat,  semua  larutan  uji baik chitosan atau  AMPs  memiliki  aktivitas  daya  hambat  dengan  persentase  daya  hambat yang  berbeda  (Tabel  2).  Menurut  hasil  analisis  ragam,  daya  hambat  tertinggi  yang  dari perlakuan  selain  kontrol  positif  ditunjukkan  oleh  perlakuan Chitosan 0,2%,  sedangkan perlakuan yang lain mulai dari asam amino berbagai konsentrasi sampai dengan chitosan 0,4% dan  0,6%  tidak  berbeda  nyata  meskipun  tiap  perlakuan  tersebut  menunjukkan  aktivitas antibakteri.  Hal  tersebut  menunjukkan  bahwa  tiap  perlakuan  memiliki  potensi  yang  besar sebagai  antibakteri  meskipun  kemampuan  antibakterinya  tidak  melampaui  aktivitas antibakteri  dari  antibiotik chloramfenicol .  Beberapa  laporan  penelitian  menunjukan  bahwa kandungan ekstrak dari mollusca seperti Parerythropodium fulvum fulvum (Kelman et al., 1998), Sepia sp., Loligo sp. dan Tibia insulaechorab-curta (Degiam & Abas, 2010), Thais tissoti , Babylonia spirata (Kumaran et al., 2011) memiliki aktivitas antimikroba.
Pengaruh  Chitosan  dan Antimicrobial Peptides (AMPs)  asal  Keong  Mas  terhadap pertumbuhan Xanthomonas oryzae pv. oryzae secara invitro
Hasil uji sidik ragam satu arah pada data penghambatan pertumbuhan bakteri dengan tingkat signifikansi 95%  menghasilkan  nilai F hitung sebesar  31,88  dan F tabel sebesar  2,42.  Nilai F hitung > F tabel memberikan  kesimpulan  bahwa  terdapat  perbedaan  yang  signifikan  antara  perlakuan yang diberikan terhadap hasil penghambatan pertumbuhan bakteri. Hasil uji Duncan Multiple Range  Test (DMRT)  pada  Tabel  2  juga  menunjukkan  perbedaan  yang  signifikan  di  tiap penghambatan pertumbuhan bakteri yang dicirikan notasi huruf yang berbeda (a, b, c dan d).

## Tabel 1. Hasil Uji ANOVA
Source of Variation SS df MS F P-value F crit Between Groups 22225.86 7  3175.123  31.88618 1.17E-10  2.422629 Within Groups 2389.843 24  99.57679 Total 24615.7 31
Pengujian  pengaruh chitosan dan antimicrobial  peptides (AMPs)  asal  keong  mas  terhadap pertumbuhan Xanthomonas  oryzae pv. oryzae secara invitro menunjukkan  terdapat  aktivitas penghambatan  pada  setiap  kosentrasi  di  tiap  perlakuan  (Tabel  2).  Delapan  perlakuan  yang digunakan adalah perlakuan kontrol negatif (K-), kontrol positif (K+) dengan menggunakan bakterisida, perlakuan AMPs dengan kode AA 1%, AA 3%, AA 5%, perlakuan chitosan dengan kode  KT  0,2%,  KT  0,4%,  KT  0,6%.  Beda  nyata  tertinggi  ditunjukkan  oleh  perlakuan  AA  1% dimana  menunjukkan  aktivitas  penghambatan  yang  tinggi  terhadap  pertumbuhan  bakteri Xanthomonas oryzae pv. oryzae . Aktivitas penghambatan pada tiap perlakuan ditunjukkan oleh munculnya zona bening pada perlakuan tersebut (Gambar 1 dan Gambar 2).
Tabel 2 . Hasil uji Duncan Multiple Range Test (DMRT) pada variasi Chitosan Perlakuan n a b c d Kontrol (-) 4 .0000 AA 5% 4 13.6667 AA 3% 4 14.6667 KT 0,6% 4 30.4206 KT 0,4% 4 31.3095 KT 0,2% 4 39.8810 AA 1% 4 73.5000 Kontrol (+) 4 78.8509 Subset for alpha = 0.05
* AA adalah perlakuan antimicrobial peptides (AMPs), KT adalah perlakuan chitosan, Kontrol (-) adalah perlakuan  kontrol  dengan  menggunakan  air  steril,  Kontrol  (+)  adalah  perlakuan  kontrol  dengan menggunakan antibiotik chloramphenicol . Angka-angka pada kolom yang sama yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf uji 5% (uji selang Duncan)
Perbedaan persentase penghambatan juga dapat dilihat pada Gambar 3 menunjukkan bahwa perlakuan AA 1%  mendekati perlakuan kontrol positif. Beda nyata terhadap kontrol negatif juga dapat dilihat pada perlakuan lain meskipun tidak  mendekati perlakuan kontrol positif. Hasil ini menunjukkan bahwa perlakuan AA 1% dapat menjadi tolak ukur sebagai perlakuan pestisida  ramah  lingkungan  pengganti  pestisida  kimia.  Selain  aktivitas  hambatan,  pada gambar 3 dapat terlihat bahwa terdapat fenomena unik yang ditangkap dari hasil penelitian ini  yaitu  semakin  menurunnya  tingkat  konsentrasi  berbanding  terbalik  dengan  area  zona hambatan. Zona hambatan KT 0,6% lebih kecil dari KT 0,4% dan KT 0,2%; begitu pula dengan AA 5% zona hambatan lebih kecil dari AA 3% dan AA 1%. Raafat et al. (2008) menyebutkan bahwa  aktivitas  antimikroba  dari chitosan dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor,  salah  satunya adalah dosis penggunaan dari chitosan .
Sucipto, I., Tanzil, A.I, Muhlison, W. 2020. antimicrobial, environmentally friendly, golden snail, mollusca, resistance
Gambar 3. Grafik persentase penghambatan pertumbuhan bakteri Xanthomonas oryzae pv. oryzae oleh perlakuan chitosan dan AMPs dengan berbagai konsentrasi.
Kemunculan  perkembangan  resistensi  terhadap  berbagai  obat  yang  cepat,  antibiotik konvensional  tidak  bisa  membunuh  bakteri  patogen  secara  efisien,  menyebabkan  perlakuan antibiotik  baru  seperti  AMPs  dapat  memberikan  solusi  untuk  krisis  resistensi  antibiotik (Chung et al., 2020). Gabere and Noble (2017) juga menambahkan bahwa peningkatan baru- baru  ini  pada  resistensi  mikroba  terhadap  obat  saat  ini  telah  menyebabkan  peningkatan kebutuhan  akan  agen  antimikroba  seperti  AMPs.  Huang  et  al.  (2017)  menyebutkan  bahwa AMPs  secara  alami  dikodekan  oleh  gen  dan  umumnya  mengandung  12 – 100  asam  amino, merupakan  komponen  penting  dari  sistem  kekebalan  bawaan  dan  dapat  melindungi  inang dari  berbagai  bakteri  dan  virus  patogen.  Dalam  beberapa  tahun  terakhir,  penggunaan antibiotik  secara  luas  telah  menyebabkan  pertumbuhan  yang  cepat  terhadap  resistensi mikroorganisme  terhadap  antibiotik  yang  sering  menyebabkan  infeksi  dan  tingkat patogenesis  yang  serius.    AMPs  mewakili  efektor  imun  yang  paling  universal. AMPs  dapat diambil dari berbagai organisme, salah satunya mollusca. Mollusca merupakan filum hewan terbesar kedua, setelah Arthropoda, dalam hal jumlah spesies. Sehingga pemanfaatan AMPs dari filum mollusca menjadi potensi tersendiri yang patut untuk dipertimbangkan.
Sama halnya dengan AMPs, chitosan merupakan merupakan sumber daya alam terbaharukan yang  memiliki  potensi  besar  di  dunia  pertanian. Chitosan dihasilkan  dari  produk  limbah udang dan kepiting di industri pengalengan serta juga bisa didapat  dari pengolahan limbah dari jamur, kerang, tiram, dan cumi-cumi (Tabel 2). Secara tradisional chitosan sangat penting karena  memiliki  sifat  relatif  persentase  nitrogen  besar  (6,89%)  dibandingkan  selulosa tersubstitusi sintesis (Mahmoud, El Kady, & Asker, 2019).  Ahmed, Ahmad, and Ikram (2014) menambahkan bahwa chitosan adalah polimer alami paling melimpah kedua setelah selulosa di  dunia;  kandungan  primernya  terdiri  dari  glukosamin  dan  residu  glukosamin  N-asetil dengan  ikatan  1,  4- β . Chitosan dianggap  merupakan  material  paling  menjanjikan  untuk
a b b c c c d d 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 KON AA 5% AA 3% KT 0,6%
KT 0,4% KT 0,2% AA 1% KKT P en gh am b at an Per tum b uh an B akt er i (% ) Perlakuan

## TECHNO: Vol. 09 (02) Oktober 2020
aplikasi  masa  depan  karena  kemampuannya  yang  baik  dalam  biodegradabilitas, biokompatibilitas, aktivitas antimikroba, non-toksisitas, dan keuntungan ekonominya.
Berdasarkan kajian chitosan dan AMPs sebagai antimikroba, potensi penggunaan chitosan dan AMPs  di  lapang  sangatlah  besar.  Hal  ini  dikarenakan  bakteri Xanthomonas  oryzae pv. oryzae sesuai  yang  dikatakan  oleh Agrios  (2005)  menyebutkan  bahwa  berdasarkan  kemampuan patogen  untuk  berkembang  menyebabkan  pengendalian  bakteri  ini  sangat  sulit  dilakukan. Satu-satunya  pengendalian  utama  yang  sangat  mungkin  dilakukan  adalah  menggunakan benih bebas penyakit atau benih yang diperlakukan dan rotasi tanaman. Namun penggunaan benih  atau  bibit  bersertifikasi  akan  menjadi  tidak  relevan jika  terdapat  serangan hama yang membantu masuknya patogen ini kedalam tanaman, salah satu contohnya adalah hama dari golongan mollusca yaitu Apple snails . Apple snails (Ampullariidae: Pomacea ) dikenal secara luas menjadi  hama  pertanian  pada  Asia  bagian  selatan  dan  timur  sejak  dikenalkan  pada  tahun 1980.  (Hayes,  Joshi,  Thiengo,  &  Cowie,  2008).  Salleh,  Arbain,  Daud,  Pilus,  and  Nawi  (2012) mengatakan Golden  apple  snail ( P.  canaliculata )  atau  yang  disebut  keong  mas  secara  luas dipandang  sebagai  spesies  hama  invasif  terburuk. P.  canaliculata secara  normal  dapat menghancurkan batang muda dan daun padi dan dapat menggkonsumsi 7-24 bibit padi per hari, oleh karena itu dapat menghasilkan kerusakan ekstrim terhadap area penanaman padi. Pomacea canaliculata merupakan spesies yang terbanyak ditemukan di area pertanaman padi di Jawa  Timur,  selain  merugikan  ternyata  spesies  ini  juga  memiliki  potensi  yang  terpendam. Mahmoud  et  al.  (2019)  mengatakan mollusca merupakan  salah  satu  golongan  yang  dapat menjadi sumber kitin dan chitosan terbesar.
Tabel 3. Sumber kitin dan chitosan (Mahmoud et al., 2019). Sea Animals Insects Micro-Organisms Crustaceans Scorpions Green algae Coelenterate Brachiopods Yeast (betta – Type) Annelida Cockroaches Fungi (cell walls) Mollusca Spiders Mycelia penicillium Lobster Beetles Brown Algae Shrimps Ants Chytridiaceae Prawn Ascomydes Krill Blastocladiaceae Crab Spores
Keseluruhan mekanisme kerja chitosan sebagai antimikroba dapat didefinisikan sesuai dengan komponen target dari sel bakteri yang memiliki aktivitas utamanya. Jadi, tiga tingkat interaksi dapat  dijelaskan  sebagai  berikut:  (i)  interaksi  dengan  komponen  seluler  luar,  (ii)  interaksi dengan membran sitoplasma dan (iii) interaksi dengan konstituen sitoplasma (Raafat & Sahl, 2009).  Raafat  et  al.  (2008)  menambahkan  aktivitas  antimikroba chitosan dipengaruhi  oleh beberapa  faktor,  menunjukkan  efek  penghambatan  pertumbuhan  tergantung  dosis.  Sampai pada  saat  ini image keong  mas  masih  terbatas  hanya  sebagai  hama  pada  tanaman  padi sehingga keong mas jarang diolah atau dimanfaatkan dalam bentuk lain. Namun jika dilihat dari  struktur  tubuh  keong  mas,  hewan  ini  memiliki  potensi  luar  biasa  yang  dapat dikembangkan seperti pada penelitian ini.
Sucipto, I., Tanzil, A.I, Muhlison, W. 2020. antimicrobial, environmentally friendly, golden snail, mollusca, resistance

## KESIMPULAN
Perlakuan chitosan dan  AMPs  memiliki  potensi  yang  sangat  baik  sebagai  antibakteri  ramah lingkungan  dengan  bahan  baku  melimpah  yang  ditunjukkan  oleh  perlakuan  terbaik  yaitu AMPs  1%.  Berdasarkan  pembahasan  menunjukkan  baik chitosan dan  AMPs  memiliki kandungan  antimikroba  sehingga  baik chitosan maupun  AMPs  memiliki  daya  hambat  yang baik  terhadap  bakteri.  Semakin  banyaknya  penelitian  baru  terkait  antibakteri  ramah lingkungan akan menjadi titik balik dalam dunia pengembangan antimikroba.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  menyampaikan  ucapan  terima  kasih  kepada  LP2M  Universitas  Jember  atas pendanaan penelitian sehingga penelitian ini dapat terlaksana dengan baik.

## DAFTAR PUSTAKA
Agrios, G. N. (2005). Plant Pathology. 5th ed . London: Elsevier Academic Press.
Ahmed, S., Ahmad, M., & Ikram, S. (2014). Chitosan: a natural antimicrobial agent-a review. J Journal of Applicable Chemistry, 3 (2), 493-503.
Ambarwati.  (2007).  Efektivitas  Zat  Antibakteri  Biji  Mimba  (Azadirachta  indica)  ntuk Menghambat  Pertumbuhan  Salmonella  thyposa  dan  Staphylococcus  aureus. Biodiversitas, 8 (3), 320-325. doi:10.13057/biodiv/d080415
Azam  Baihaqi,  M.  (2017). Pembuatan  dan  Uji  Potensi  Kitosan  Cangkang  Rajungan  Sebagai Bahan  Pelindung  Buah  Cabai  Merah  (Capsicum  annum  L.)  dari  Serangan  Penyakit Antraknosa. (Skripsi), Universitas Jember, Jember.
Chellaram, C., Gnanambal, K. M. E., & Edward, J. K. P. (2004). Antibacterial Activity of The Winged Oyter Pteria chinensis (Pterioida: Pteridae). Indian Journal of Marine Sciences, 33 (4), 369-372.
Chung,  C.-R.,  Jhong,  J.-H.,  Wang,  Z.,  Chen,  S.,  Wan,  Y.,  Horng,  J.-T., &  Lee,  T.-Y.  (2020). Characterization  and  Identification  of  Natural  Antimicrobial  Peptides  on  Different Organisms. J International Journal of Molecular Sciences, 21 (3), 986. Degiam,  Z.  D.,  &  Abas,  A.  T.  (2010).  Antimicrobial activity  of  some  crude marine  Mollusca extracts against some human pathogenic bacteria. Thi-Qar Medical Journal, 4 (3), 142- 147.
Gabere,  M.  N.,  &  Noble,  W.  S.  (2017).  Empirical  comparison  of  web-based  antimicrobial peptide prediction tools. J Bioinformatics, 33 (13), 1921-1929. Haszprunar,  G.  (2001).  Mollusca  (Molluscs).  In Encyclopedia  of  Life  Sciences .  Munich:  John Wiley & Sons, Ltd.
Hayes, K., Joshi, R., Thiengo, S., & Cowie, R. (2008). Out of South America: multiple origins of non‐native apple snails in Asia. Diversity and Distributions, 14 (4), 701-712. Huang, K.-Y., Chang, T.-H.,  Jhong, J.-H., Chi, Y.-H., Li, W.-C., Chan, C.-L., . . . Lee, T.-Y. (2017).  Identification  of  natural  antimicrobial  peptides  from  bacteria  through metagenomic and metatranscriptomic analysis of high-throughput transcriptome data of Taiwanese oolong teas. J BMC systems biology, 11 (7), 131.
Kelman,  D.,  Kuhmaro,  A.,  Loya,  Y.,  Kashman,  Y.,  &  Benayahu,  Y.  (1998).  Antimicrobial activity  of  a  Red  Sea  soft  coral,  Parerythropodium  fulvum  fulvum:  reproductive  and developmental considerations. Marine Ecology Progress Series, 169 , 87-95.
Khoirunnisya.  (2009). Potensi  Bakterisida  Senyawa  Metabolit  Penicillium  spp.  Terhadap Ralstonia  solanacearum  Penyebab  Penyakit  Layu  Bakteri  Pada  Cabai. (Skripsi), Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Khush,  G.  S.,  &  Jena,  K.  (2009).  Current  status  and  future  prospects  for  research  on  blast resistance  in  rice  ( Oryza  sativa L.).  In  G.-L.  Wang  &  B.  Valent  (Eds.), Advances  in genetics, genomics and control of rice blast disease (pp. 1-10): Springer. Kumaran,  N.  S.,  Bragadeeswaran,  S.,  &  Thangaraj,  S.  (2011).  Screening  for  antimicrobial activities of marine molluscs Thais tissoti (Petit, 1852) and Babylonia spirata (Linnaeus, 1758) against human, fish and biofilm pathogenic microorganisms. African Journal of Microbiology Research, 5 (24), 4155-4161.
Mahmoud,  M.  G.,  El  Kady,  E.  M.,  &  Asker,  M.  S.  (2019).  Chitin,  Chitosan  and  Glucan,
Properties and Applications. World Journal of Agriculture and Soil Science, 3 (1), 1-19.
Pal,  K.  K.,  &  McSpadden  Gardener,  B.  (2006).  Biological  Control  of  Plant  Pathogens. The Plant Health Instructor 2006: 1-25 . doi:10.1094/phi-a-2006-1117-02
Raafat,  D., &  Sahl,  H.  G.  (2009).  Chitosan  and  its antimicrobial  potential–a  critical  literature survey. J Microbial biotechnology, 2 (2), 186-201.
Raafat, D., Von Bargen, K., Haas, A., & Sahl, H.-G. (2008). Insights into the Mode of Action of Chitosan as an Antibacterial Compound. J Applied and Environmental Microbiology, 74 (12), 3764-3773.
Rabea, E. I., Badawy, M. E.-T., Stevens, C. V., Smagghe, G., & Steurbaut, W. (2003). Chitosan as Antimicrobial Agent: Applications and Mode of Action. J Biomacromolecules, 4 (6), 1457-1465.
Salleh, N. H. M., Arbain, D., Daud, M. Z. M., Pilus, N., & Nawi, R. (2012). Distribution and management  of  Pomacea  canaliculata  in  the  Northern  Region  of  Malaysia:  Mini Review. Apcbee Procedia, 2 , 129-134.
Wahyudi,  A.  T.,  Meliah,  S.,  &  Nawangsih,  A.  A.  (2011).  Xanthomonas  oryzae  pv.  oryzae bakteri  penyebab  hawar  daun  pada  padi:  isolasi,  karakterisasi,  dan  telaah  mutagenesis dengan transposon. Makara Journal of Science .
Sucipto, I., Tanzil, A.I, Muhlison, W. 2020. antimicrobial, environmentally friendly, golden snail, mollusca, resistance