## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAUN SELUTUI PUKA (Tabernaemontana macrocarpa Jack) TERHADAP BAKTERI

## Staphylococcus aureus
Yulistia Budianti Soemarie*, Fitri Handayani, Edna Nur Annisa Akademi Farmasi Samarinda
Email : yulistiabudianti@ymail.com

## ABSTRAK
Tumbuhan  selutui  puka  ( Tabernaemontana  macrocarpa Jack)  adalah  salah satu  tumbuhan  yang  digunakan  sebagai  obat  tradisional. Staphylococcus  aureus adalah  salah  satu  bakteri  gram  positif  yang  menyebabkan  infeksi  pada  manusia. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun  selutui  puka  terhadap Staphylococcus  aureus dan  mengetahui  konsentrasi efektif yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus. Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental.  Tahapan  penelitian diawali dengan pembuatan simplisia, pembuatan ekstrak etanol daun selutui puka, uji  skrining  fitokimia  ekstrak  etanol,  uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan  dengan metode difusi kertas cakram dengan konsentrasi 5%, 10%, dan 15% serta kontrol positif ampisilin 0,1% dan kontrol negatif DMSO 1%. Data yang didapat dianalisis secara deskriptif.
Hasil penelitian uji skrining fitokimia menunjukan ekstrak etanol daun selutui puka positif mengandung alkaloid, flavonoid, tanin, saponin, dan hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun selutui puka terhadap bakteri Staphylococcus aureus memiliki daya hambat pada konsentrasi 5%, 10% dan 15% secara berurutan 6,09 mm, 6,24 mm dan 6,25 mm, dengan kategori daya hambat sedang.
Kata kunci: antibakteri, daun selutui puka ( Tabernaemontana macrocarpa Jack), Staphylococcus aureus

## ABSTRACT
Selutui puka plant ( Tabernaemontana macrocarpa Jack) is one of the plants used as a traditional medicine. Staphylococcus aureus is one of the gram-positive bacteria that causes infection in humans. The purpose of this research is to know the  antibacterial  activity  on  ethanol  extract  of  leaf  of  selutui  puka  to Staphylococcus aureus and to know the effective concentration which can inhibit the growth of Staphylococcus aureus bacteria.
This  research  is  an  experimental  research.  Research  phase  begins  with making  of  simplicia,  making  of  ethanol  extract  of  leaf  of  selutui  puka, phytochemical screening test of ethanol extract, antibacterial activity test is done by  paper  disc  diffusion  method  with  concentration  5%,  10%  and  15%,  positive control  of  ampicillin  0,1%,  and  negative  control  DMSO  1%.  The  data  obtained were analyzed descriptively.
The results of the phytochemical screening test showed the extract of ethanol leaves  containing  alkaloids,  flavonoids,  tannins,  saponins,  and  antibacterial activity  test  of  ethanol  extract  of  selutui  puka  against Staphylococcus  aure us bacteria had inhibitory power at concentrations of 5%, 10% and 15% respectively 6.09 mm, 6.24 mm and 6.25 mm inadequate power category.
Keywords: antibacterial, leaves selutui puka ( Tabernaemontana macrocarpa Jack), Staphylococcus aureus

## PENDAHULUAN
Penyebab penyakit dan
kematian  di  negara  berkembang sebagian besar masih disebabkan oleh infeksi  bakteri.  Infeksi  disebabkan oleh  mikroba  patogen  yang  bersifat sangat  dinamis  dengan  menyerang antibodi sehingga tubuh mudah diserang penyakit (Darmadi, 2008).
Staphylococcus
aureus merupakan  bakteri  gram  positif  yang diperkirakan 20 - 75% ditemukan pada saluran  pernafasan  atas,  di  daerah muka,  tangan,  rambut  dan  vagina. Infeksi bakteri ini dapat menimbulkan penyakit  dengan  tanda-tanda  yang khas  yaitu  peradangan,  nekrosis, tampak sebagai jerawat, infeksi folikel rambut  dan  pembentukan  abses.  Di antara organ yang sering diserang oleh bakteri Staphylococcus  aureus adalah kulit yang mengalami luka terbuka dan dapat  menyebar  ke  orang  lain  yang juga mengalami luka terbuka (Usman, 1993).
Pengobatan akibat infeksi Staphylococcus  aureus dapat  diberi antibiotik  berupa  penisilin  G  atau derivat penisilin lainnya, namun pada infeksi  yang  berat  diduga  sudah  ada beberapa yang telah resistensi terhadap  penisilin.  Akibat  timbulnya resistensi dari antibiotik, maka dilakukan  pengujian  efek  tanaman obat yang berkhasiat sebagai antibakteri (Jawetz dkk., 2005). Tumbuhan selutui
puka ( Tabernaemontana  macrocarpa Jack) adalah  salah  satu  tumbuhan  yang tumbuh di hutan Kalimantan. Menurut empiris  masyarakat  Kutai  Barat, tumbuhan  selutui  puka  digunakan getahnya  untuk  mengobati  berbagai macam  penyakit  seperti  kanker, herpes,  kudis  dapat  juga  digunakan untuk  pengobatan  kulit  gatal  dan melepuh.    Buah  dan  daun  bisa digunakan  untuk  pengobatan  pada sakit gigi. Hasil penelitian sebelumnya menyatakan  bahwa  pada  batang
selutui  puka  terdapat  senyawa  yang memiliki  aktivitas  antioksidan  dan antikanker  yang  kuat  serta  terdapat senyawa  metabolit  sekunder,  salah satunya  yaitu  flavonoid  (Pratiwi, 2013). Penelitian mengenai antibakteri belum di laporkan.
Berdasarkan  uraian  di  atas, maka dilakukan penelitian uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun selutui puka  ( Tabernaemontana  macrocarpa Jack) terhadap bakteri Staphylococcus aureus .

## METODE PENELITIAN
A. Pengolahan Sampel Daun Selutui Puka (Tabernaemontana  macrocarpa Jack) Daun selutui puka
( Tabernaemontana  macrocarpa Jack) yang  telah  dikumpulkan  dari  Desa Karangan,  Kecamatan  Mook  Manar Bulant, Kabupaten Kutai Barat, kemudian dilakukan sortasi basah dan sortasi kering. Daun selutui puka yang telah  menjadi  simplisia,  kemudian dihaluskan atau dibuat serbuk dengan menggunakan  blender,  setelah  itu serbuk  simplisia  diayak  dan  hasil ayakan disimpan di wadah kaca  yang tertutup rapat.
B. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Selutui Paku (Tabernaemontana  macrocarpe Jack)
Serbuk  simplisia  daun  selutui puka  ( Tabernaemontana  macrocarpa
Jack)  ditimbang  sebanyak  100  g, dimasukkan  ke  dalam  wadah  kaca, kemudian ditambahkan  pelarut  etanol 70%  sebanyak  1  L  yang  berguna sebagai  cairan  penyari.  Selanjutnya setelah selesai diekstraksi, ekstrak cair yang  diperoleh  diuapkan  di  atas penangas air sampai kental.
C. Skrining  Fitokimia  Ekstrak Etanol  Daun  Selutui  Puka (Tabernaemontana  macrocarpa Jack)
Identifikasi  golongan  senyawa kimia  dilakukan  pada  ekstrak  etanol daun  selutui  puka  yang  meliputi  uji kandungan  alkaloid,  flavonoid,  tanin, saponin.
D. Persiapan  Sediaan  Uji  Ekstrak Etanol  Daun  Selutui  Puka (Tabernaemontana  macrocarpa Jack)
Konsentrasi ekstrak yang dibuat yaitu  5%,  10%,  dan  15%.  Untuk membuat konsentrasi 5%, ditimbang 50 mg ekstrak daun selutui puka kemudian dilarutkan ke dalam DMSO 1%  sebanyak  1  ml,  untuk  membuat konsentrasi 10%,  ditimbang  100  mg
ekstrak  daun  selutui  puka  kemudian dilarutkan  ke  dalam  DMSO  1% sebanyak  1  ml,  untuk  membuat konsentrasi 15%,  ditimbang  150  mg ekstrak  daun  selutui  puka  kemudian dilarutkan  ke  dalam  DMSO  1% sebanyak 1 ml.
E. Pengujian Aktivitas Antibakteri Selutui puka (Tabernaemontana  macrocarpa

## Jack)
Disiapkan  5  cawan  petri  dan dituang  medium  NA  yang  telah dicairkan pada suhu 45 o C sebanyak ± 15 ml ke dalam cawan petri, dibiarkan memadat. Dicelupkan cotton swap ke dalam suspensi bakteri Staphylococcus aureus , ditunggu sebentar supaya cairan dapat meresap ke  dalam  kapas  sambil  ditekan  pada dinding tabung, dioleskan pada permukaan media NA sampai seluruh permukaan  tertutup  rapat.  Dibiarkan selama  5  menit  supaya  suspensi bakteri meresap ke dalam media agar. Setelah  itu  diambil  kertas  cakram menggunakan pinset steril,
dimasukkan  kedalam  ekstrak  etanol daun selutui puka konsentrasi 5%,10%,  dan  15%  yang  sebelumnya telah dilarutkan dengan larutan DMSO 1%  kemudian  diletakan  dipermukaan
media dan pada masing-masing konsentrasi dibuat 3 kali pengulangan pada  setiap  cawan  petri.  Kemudian dilakukan  hal  yang  sama  pada perlakukan kontrol positif menggunakan  larutan  ampisilin  0,1% dan kontrol negatif DMSO 1% (Merta, 2003).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Ekstrasi dan Skrining Fitokimia  Daun  Selutui  Puka (Tabernaemontana  macrocarpa Jack) Daun selutui puka ( Tabernaemontana  macrocarpa Jack) segar  yang  diperoleh  dari  Desa Karangan,  Kecamatan  Mook  Manar Bulant, Kabupaten Kutai, barat diolah menjadi  simplisia  kering.  Tahap pertama  pembuatan  simplisia  adalah dilakukan sortasi basah untuk memisahkan  kotoran-kotoran  atau bahan-bahan asing lainnya dari bahan simplisia seperti tanah, rumput, batang,  daun  yang  telah  rusak  serta pengotor-pengotor  lainnya  (Agoes, 2007). Daun selutui puka ( Tabernaemontana  macrocarpa Jack) dicuci dengan air mengalir, kemudian dirajang,  setelah  itu  dikeringkan dengan  cara  diangin-anginkan  untuk
mengurangi  kadar  air  daun  agar didapatkan  simplisia  yang  tidak mudah rusak, sehingga dapat disimpan dalam  waktu  yang  lebih  lama. Mengurangi kadar air akan menghentikan reaksi enzimatik penurunan  mutu  atau  perusakan simplisia.  Setelah  proses  pengeringan daun  selutui  puka  ( Tabernaemontana macrocarpa Jack)
mengalami perubahan warna dan tekstur, menjadi hijau kecoklatan dan renyah.
Sortasi  kering  bertujuan  untuk memisahkan  benda-benda  asing  dan pengotor  –pengotor  lain  yang  masih ada  dan  tertinggal  pada  simplisia kering  (Prasetyo  &  Inoriah,  2013). Susut  pengeringan  yang  diperoleh yaitu  72,68  %.  Daun  selutui  puka ( Tabernaemontana  macrocarpa Jack)
yang telah kering kemudian dihaluskan dengan cara dibelender dan diayak menggunakan mesh 60. Penggunaan  mesh  60  karena  derajat kehalusan serbuk simplisia merupakan serbuk  simplisia  halus  seperti  tertera pada  pengayak.  Klasifikasi  serbuk berdasarkan  deerajat  halus  mesh  60 yaitu  “serbuk  halus”  (Depkes  RI, 2008).
Ekstraksi  daun  selutui  puka ( Tabernaemontana  macrocarpa Jack) dilakukan dengan menggunakan metode maserasi. Penggunaan metode maserasi  karena  merupakan  metode ekstrak  paling  sederhana.  Dasar  dari maserasi  adalah  melarutnya  bahan kandungan  simplisia  dari  sel  yang rusak.  Selama  maserasi  atau  proses perendaman  dilakukan  pengadukan yang  kontinyu.  Semakin  banyak pengadukan  maka  semakin  banyak desakan  antara  pelarut  dengan  sel sehingga  semakin  banyak  senyawa organik yang larut Upaya ini menjamin  keseimbangan  konsentrasi bahan  ekstraksi  yang  lebih  cepat  di dalam  cairan.  Keadaan  diam  selama maserasi menyebabkan turunnya perpindahan  bahan  aktif  (Agustina dkk.,  2006).  Ekstraksi  daun  selutui puka  ( Tabernaemontana  macrocarpa Jack)  menggunakan  pelarut  etanol 70%. Penggunaan etanol 70% dikarenakan  sangat  efektif  dalam menghasilkan jumlah bahan aktif yang optimal,  dimana  bahan  pengganggu hanya skala kecil yang turut ke dalam cairan pengekstraksi (Indraswari,
2008). Selain itu etanol 70%
merupakan  pelarut universal yang
melarutkan  senyawa  kimia  dalam tumbuhan dengan baik (senyawa polar maupun  nonpolar).  Berat  ekstrak kental  yang  diperoleh  dari  150  g serbuk  simplisia  yaitu  29,01  g sehingga  rendemen  yang  diperoleh sebesar 14,98 %.
Skrining  fitokimia  dilakukan untuk  mengetahui  adanya  kandungan senyawa  metabolit  sekunder  yang terkandung  dalam  daun  selutui  puka ( Tabernaemontana macrocarpa Jack).
Metabolit sekunder merupakan proses yang  tidak  esensial  bagi  organisme. Tidak  ada  atau  hilangnya  metabolit sekunder tidak menyebabkan kematian secara langsung bagi tumbuhan,  tapi  dapat  menyebabkan berkurangnya ketahanan hidup tumbuhan  secara  tidak  langsung (misalnya dari serangan herbivora dan hama),  ketahanan  terhadap  penyakit, dan estetika (Angarwulan & Solichatun, 2001).
Tabel 1 . Hasil skrining fitokimia ekstrak etanol daun selutui puka ( Tabernaemontana macrocarpa Jack). No. Uji Fitokimia Hasil Keterangan 1. Alkaloid: Meyer Bouchardat Dragendrof Endapan putih kuning Endapan coklat Endapan merah coklat + + + 2. Flavonoid Jingga pada lapisan amil alkohol + 3. Saponin Busa permanen + 4. Tanin Hijau kehitaman + Keterangan: (+)  : mengandung metabolit sekunder (-)  : tidak mengandung metabolit sekunder Alkaloid didapatkan hasil positif  karena  pada  pereaksi  Mayer terbentuk endapan putih kuning, pada pereaksi Bouchardat terbentuk endapan  coklat,  dan  pada  pereaksi Dragendorf  endapan  merah  coklat. Pengujian  alkaloid  dikatakan  positif jika terjadi paling sedikit dua dari tiga percobaan di atas (Budiyanti, 2016).
Hasil
skrining fitokimia flavonoid  dinyatakan  positif  karena terbentuk  warna  jingga  pada  lapisan amil  alkohol.  Penambahan  serbuk magnesium  dan  asam  klorida  pada pengujian  flavonoid  menyebabkan tereduksinya senyawa flavonoid yang ada  sehingga  menimbulkan  reaksi warna  yang  menunjukkan  adanya
flavonoid  (Tiwari,  2011).  Pengujian tanin  menunjukkan  hasil  positif karena  terbentuk  larutan  berwarna hijau  kehitaman.  Senyawa  golongan saponin  pada  pengujian  memperoleh hasil  positif  dengan  terbentuknya busa  yang  permanen  selama  tidak kurang dari 10 menit dan tidak hilang jika  diteteskan  asam  klorida  pekat (Widiastuti dkk., 2014).
B. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak  Etanol  Daun  Selutui Puka (Tabernaemontana macrocarpa Jack) Pengujian  aktivitas  antibakteri dilakukan dengan tiga variasi konsentrasi yaitu 5%, 10%, dan 15%, masing-masing  diuji  3  kali.  Metode yang  digunakan  yaitu disk  diffusion (metode  kertas  cakram).  Metode  ini dilakukan  dengan  meletakkan  kertas
cakram  yang  telah  direndam  larutan uji  di  atas  media  padat  yang  telah diinokulasi  dengan  bakteri  (Mulyadi dkk.,  2013).  Pemilihan  metode  ini dikarenakan  mudah  dilakukan,  tidak memerlukan  peralatan  khusus  dan relatif murah (Pelczar, 2005),
Parameter  yang  diukur  dalam pengujian  aktivitas  antibakteri  ini yaitu  terbentuknya  zona  bening  di sekitar  kertas  cakram  yang  telah berisi  konsentrasi  masing-masing ekstrak  etanol  daun  selutui  puka. Variasi  konsentrasi  ekstrak  etanol yang  digunakan  pada  penelitian  ini yaitu 5%, 10% dan 15%, menggunakan kontrol positif ampisilin dan kontrol negatif DMSO 1%.  Hasil  uji  aktivtas  antibakteri dapat dilihat di tabel 2.
Tabel 2 . Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun selutui puka
( Tabernaemontana macrocarpa Jack). Konsentrasi Rata-rata Diameter Zona Hambat (mm) Kriteria Zona Hambat Kontrol (-) 0 Tidak ada 5% 6,09 mm Sedang 10% 6,24 mm Sedang 15% 6,25 mm Sedang Kontrol (+) 14,55 mm Kuat Hasil  di  atas  menunjukkan bahwa  pada  konsentrasi  5%,  10%, dan 15% dapat menghambat pertumbuhan bakteri dengan kategori
sedang.  Menurut  Davis  dan  Stout (1971)  bila  zona  hambat  yang terbentuk kurang dari 5 mm dikatakan lemah,  5  mm  sampai  10  mm
dikatakan  sedang,  10  mm  sampai  20 mm dikatakan kuat dan lebih dari 20 mm dikatakan sangat kuat.
Dalam  penelitian  ini  semakin meningkat  konsentrasi  ekstrak  maka semakin  meningkat  daya  hambat yang diperoleh. Hal ini sesuai dengan pernyataan  Pelczar  dan  Chan  (2005) bahwa  semakin  besar  konsentrasi suatu  zat  antibakteri  maka  semakin tinggi  daya  antibakterinya.  Kontrol negatif  menggunakan  DMSO  1% tidak  menunjukan  terbentuk  zona hambat.  Pengujian  kontrol  negatif bertujuan untuk mengetahui ada atau tidaknya  pengaruh  pelarut  terhadap pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus .
Daya  hambat  terbesar  adalah pada  kontrol  positif  ampisilin  0,1%.
Ampisilin  dipilih  sebagai  kontrol positif dikarenakan memiliki
spektrum luas yang mampu
berpenetrasi  baik  terhadap  bakteri gram negatif maupun positif.

## KESIMPULAN
Ekstrak  etanol  daun  selutui puka ( Tabernaemontana macrocarpa Jack)  memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus
aureus yang  ditandai  dengan terbentuknya  zona  hambat.  Ekstrak etanol daun selutui puka ( Tabernaemontana macrocarpa Jack) dapat menghambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus secara berurutan pada konsentrasi  5%,  10%  dan  15% dengan  daya  hambatnya  berturut- turut sebesar 6,09 mm; 6,24 mm; dan 6,25 mm, dikategorikan sebagai zona hambat kategori sedang.

## REFERENSI
Agoes,  G.  2007. Teknologi  Bahan Alam .  ITB  Press.  Bandung.
Hal:14. Agustina,  D.,  Wasito,  H.S.,  dan Spatinah, A., 2006. Anticarcinogenesis  effect  of Gynura  Procumbens  (Lour)
Merr on tongue carcinogenesis in 4NQO- induced rat , Dent, J. Hal: 126-123.
Budiyanti,  N,  2016.  “Uji  Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol
Daun  Lakum  ( Cayratia trifolia Linn) Terhadap Staphylococcus aureus . Karya  Tulis  Ilmiah .
Samarinda: Akademi Farmasi.
Darmadi.  2008.  Infeksi Nosokomial: Problematika dan Pengendaliannya . Jakarta: Salemba Medika Davis,  W.W.  and  Stout.,  T.R.1971. Disc Plate Methods Of Microbiological Antibiotik
Assay . Mikrobiologi. Hal: 659- 665. Departemen Kesehatan Republik Indonesia.  2008. Farmakope Herbal  Indonesia .  Edisi  I. Jakarta:  DepKes  RI.  Hal:  171- 172.
Indraswari,  A.  2008.  “Optimasi Pembuatan Ekstrak Daun Dewan Daru ( Eugenia uniflora L.) Menggunakan Metode Maserasi  dengan  Parameter kadar total senyawa fenolik dan Flavonoid”. Skripsi .  Surakarta: Universitas Muhamadiyah Surakarta. Jawetz,  M.,dan  Adelberg.  2005. Mikrobiologi Kedokteran . Diterjemahkan  oleh  Huriawati Hartanto.  Edisi  23.  Jakarta: ECG. hal: 211-217. Merta,  IW.,  IN,  Nuidja.,  dan  NM, Marwati. 2003. “ Ekstrak Gambir Memiliki Daya Hambat Terhadap Pertumbuhan Staphylococcus  aureus  Secara In  Vitro ”. Jurnal Skala Husada Volume 10 nomor 1. Mulyadi, M., Wuryanti. Purbowantiningrum, R.S. 2013. Konsentrasi  Hambat  Minimum (KHM)  Kadar  Sampel  Alang- alang.
Pelczar,  M.J.,  E.S.  Chan.  2005.
Dasar-dasar Mikrobiologi Edisi  ke  2.  Jakarta  :  Penerbit Universitas Indonesia. Hal: 21. Prasetyo, Inoriah, E. 2013. Pengelolaan Budidaya Tanaman Obat (Bahan Simplisia). Bengkulu:  Badan Penerbitan  Fakultas  Pertanian UNIB. Hal: 17-19. Pratiwi, D.R. 2013. “Potensi Antioksidan  dan  Antikanker Ekstrak Batang Lelutung Tokak ( Tabernaemontana macrocarpa Jack.)”. Tesis . Bogor: Institut Pertanian Bogor. Tiwari, P. Kumar, B. Kaur, M. Kaur, G. Kaur, H. 2011. Phytochemical  screening  and Extraction : A Review.
Internationale  Pharmaceutical Sciencia . Vol (1).
Usman-Chatib  Warsa,  1993. Kokus Positif  Gram.  Dalam  (Staff Pengajar  FKUI)  Buku  Ajar Mikrobiologi Kedokteran, edisi revisi. Jakarta:  Bina  Rupa
Aksara.
Widiastuti,  A.E.S.,  Sri,  R.D.A., Ashadi.,  Bakti.M.,  Cici.P.R. 2014.  Skrining  Fitokimia  dan
Identifikasi  Komponen  Utama Ekstrak  Metanol  Kulit  Durian ( Durio zibethinus Murrr.) Varietas Petruk. Surakarta
: Makalah Pendamping Seminar
Nasional Kimia dan Pendidikan
Kimia VI.