## UJI EFEK HEPATOPROTEKTOR EKSTRAK ETANOL DAUN
BENALU LANGSAT (Dendrophthoe petandra (L.) Miq.) terhadap KADAR MALONDIALDEHID (MDA) pada HATI TIKUS PUTIH JANTAN GALUR WISTAR yang DIINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA (CCl 4 )

## Irma Tristanti, Fatimawali, Widdhi Bodhi
Program Studi Farmasi, FMIPA UNSRAT Manado

## ABSTRACT
Leaves  of  Langsat  parasite  (Dendrophthoe  petandra  (L.)  Miq.)  contains  flavonoids.  The objective of this research was to examine hepatoprotector effect of leave extract from langsat parasite on white male rats induced with CCl 4 . Treatment was conducted for 8 days to 13 rats, which  group  I  (P1)  were  administered  with  EDBL  35mg/KgBB,group  II  (P2)  were administered  with  EDBL  70mg/KgBB,group  III    (K+)  were  administered  withCurcuma 81mg/KgBB orally. Group  IV  (K-) and V (KP)  were administered with  aquadestad libitum. At  8 th day,  all  groups  except  (KP)  were  induced  with  CCl 4 1mL/KgBB  intraperitoneally. Eighteen  hours  after  inducing  time,  all  rats  in  every  group  were  sacrafied  to  take  its  liver. Rats liver were analyzed using TBARS (Thiobarbituric Acid Reactive  Subtance) method to calculate MDA  (Malondialdehid) level that were the end product of lipid peroxidation in rats liver.MDA content of P1 were 2,715 µ M, P2 were 2,080 µ M, K+ were 1,708 µ M, and K- were 3,413 µ M. Data analysis using SPSS ver.20 by One-Way ANOVA and Duncan Multiple Range Test.
Keywords : leave of Langsat parasite, hepatoprotector effect,CCl 4 , MDA

## ABSTRAK
Daun benalu Langsat (Dendrophthoe petandra (L.) Miq. )  mengandung senyawa flavonoid. Penelitian ini bertujuan untuk melihat efek hepatoprotektor ekstrak daun benalu Langsat pada hati tikus  jantan yang diinduksi CCl 4 . Perlakuan dilakukan selama 8 hari dengan jumlah 13 ekor tikus, dimana kelompok I (P1) diberi EDBL dosis 35mg/KgBB, kelompok II (P2) diberi EDBL  dosis  70mg/KgBB,  kelompok  III    (K+)  diberi  Curcuma  dosis  81mg/KgBB  masing- masing  diberikan  secara  peroral,  lalu  kelompok  IV  (K-)  dan  V  (KP)    hanya  diberi  aquades secara  ad  libitum.    Pada  hari  ke  8,  semua  kelompok  kecuali  (KP)  diinduksi  dengan  CCl 4 1mL/KgBB  secara  intraperitoneal.  18  jam  setelah  diinduksi,  semua  kelompok  tikus dianestesi kemudian dibunuh untuk diambil hatinya. Hati tikus lalu dianalisis dengan metode TBARS  (Thiobarbituric  Acid  Reactive    Subtance)    untuk    mengukur    kadar    MDA (Malondialdehid)  yang    merupakan  produk  akhir  dari  proses  peroksidasi  lipid  di  hati  tikus. Diperoleh  rerata  kadar  MDA  P1  2,715 µ M,  P2  2,080 µ M,  K+  1,708 µ M,  dan  K-  3,413 µ M. Analisis data dengan SPSS ver.20 dengan uji One-Way ANOVA dan uji Duncan.
Kata kunci : Daun benalu langsat, efek hepatoprotektor, CCl 4 , MDA

## PENDAHULUAN
Peradangan  yang  terjadi  di  hati  dapat menyebabkan sel terluka. Stimulasi pembentukan senyawa radikal bebas oleh sel yang terluka dapat menyebabkan peroksidasi lipid,  dan  menghasilkan  molekul  seperti malondialdehida  (MDA)  yang  kemudian akan terjadi kerusakan sel–sel hati (hepatosit) secara  berantai.  Pada  sel–sel  hati  dengan peradangan  yang  tidak  terkontrol  akan menyebabkan  timbulnya  nekrosis  dan  sirosis hati  (Arafah,  2005).  Reaksi    berantai    ini dapat    dihentikan    oleh    reaksi    dengan radikal  bebas  lain  atau  oleh  bahan
Benalu  Langsat  merupakan  suku tanaman  dengan  famili  Lorantaceae  yang termasuk  jenis  benalu  yang  terdapat  di tanaman  teh,  mangga,  nangka,  rambutan dan Langsat. Benalu (loranthus) merupakan jenis tumbuhan  yang hidupnya tidak  memerlukan  tanah.  Secara  empiris masyarakat  menggunakan  daun  benalu Langsat  ini  untuk  mengobati  penyakit kanker.  Kemampuan  daun  benalu  Langsat jika  diteliti  lebih  jauh  akan    menghasilkan manfaat    besar,    sehingga    mampu menambah pengetahuan masyarakat mengenai  tanaman  herbal  yang  memiliki potensi besar dalam menyembuhkan penyakit  peradangan  hati.  Namun  masih banyak  masyarakat  mengenal  tanaman  ini sebagai pengganggu dan merugikan inangnya. Sehubungan dengan penyebaran tanaman benalu Langsat yang melimpah di Indonesia,  namun  belum  dimanfaatkan penggunaannya  di  bidang  farmasi,  maka peneliti  memilih  tanaman  benalu  Langsat untuk diuji sebagai hepatoprotektor.

## METODOLOGI PENELITIAN
Penelitian  dilakukan  selama  4 bulan,  mulai  April  sampai  Agustus  2013, di Laboratorium
Farmakologi,
Laboratorium  Fitokimia dan  Laboratorium Advance  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi Manado. Penelitian ini
merupakan  jenis  penelitian  eksperimental laboratorium.
Alat yang digunakan yaitu kandang tikus  beserta  kelengkapannya,  aluminium foil,  sarung  tangan,  neraca  analitik, waterbath,  sentrifuge  (EBA    Hettich), seperangkat  alat  gelas,  seperangkat  alat soxhletasi,  mortir,  ayakan,  rotary  vacum evaporator,  blender,  minor  set,  vortex, spuit 1cc, NGT, spektrofotometer (Thermo Scientific GENESYS  20).
Sampel  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  daun  benalu  Langsat yang  akan  diperoleh  dari  Kecamatan Ratahan,  Kabupaten    Minahasa  Tenggara pada  bulan  April  2013.  Bahan  kimia  yang digunakan  adalah  etanol  95%,  aquadest, larutan  CCl 4 ,  larutan  dietil  eter,  larutan asam  trikloroasetat  (TCA)  Merck  10%, larutan  asam  tiobarbiturat  (TBA)  0,02M Merck,  larutan  baku  60 µ M  1,1,3,3- tetraetoksipropan
(TEP). Obat
pembanding  yang  digunakan  Curcuma (Soho ® ).  Hewan  uji  yang  akan  digunakan adalah  Tikus  (Rattus  novergicus  L.)  galur Wistar  serta  pakan  tikus  berupa  beras jagung.

## Preparasi Sampel
Tanaman diperoleh dari Kecamatan Ratahan  pada  bulan  April  2013.  Bagian tanaman  yang  digunakan  adalah  daun. Daun  benalu  Langsat  dipisahkan  dari ranting-rantingnya  kemudian  dicuci  di  air mengalir  hingga  bersih  dengan  tujuan untuk menghilangkan dan atau mengurangi kotoran  berupa  tanah  atau  debu  yang melekat  pada  daun.  Selanjutnya  disortasi untuk  memisahkan  dari  bagian  tanaman yang  rusak.  Daun  benalu  Langsat  yang masih  segar  ditimbang  sebanyak  2800 gram    (berat  basah)  lalu  dirajang. Perajangan  dilakukan  untuk  membantu mempercepat proses
pengeringan.
Rajangan dikeringkan dengan cara diangin-anginkan  selama  lebih  kurang  7 hari.  Setelah  itu  simplisia  diserbuk menggunakan  blender  untuk  memperkecil permukaan  partikel  agar  kontak  antara sampel  dan  pelarut  lebih  besar,  kemudian diayak dengan menggunakan ayakan mesh 60.
Simplisia akan
diekstraksi menggunakan  metode  soxhletasi.  Pelarut yang  digunakan  adalah  etanol  95%. Sebanyak  100  gram  serbuk  simplisia dimasukkan  ke  dalam  kertas  saring  yang telah dibentuk silindris kemudian diletakkan dalam thimble soxhlet. Digunakan  pelarut  etanol  95%  sebanyak 600 mL. Ekstraksi dilakukan sekitar 11-12 jam hingga cairan tidak  berwarna. Ekstrak cair  yang  diperoleh  kemudian  diuapkan pelarutnya  menggunakan  rotary  vacum evaporator  pada  suhu  60 0 C.  Setelah ekstrak  mulai  mengental  proses  evaporasi dihentikan  untuk  memindahkan  ekstrak dari  labu  alas  bulat  ke  wadah  porselen, kemudian penguapan dilanjutkan menggunakan  waterbath  pada  suhu  60 0 C untuk  menguapkan  pelarut  yang  tersisa juga  uap  air  yang  masih  terkandung  di dalam ekstrak kental.
Pembuatan  Suspensi  Ekstrak  Etanol Daun Benalu Langsat
Larutan  suspensi  dibuat  dengan mencampur  ekstrak  etanol  daun  benalu Langsat  sesuai  dosis  dengan  aquades sebanyak  0,1  mL.  Kemudian  dicampur hingga  homogen  lalu  diberi  pada  tikus secara peroral.
Pembuatan Suspensi Curcuma (Soho ® ) Untuk  membuat  larutan  suspensi  sama halnya  dengan  ekstrak  etanol  daun  benalu Langsat, ditimbang serbuk Curcuma sebanyak dosis yang dibutuhkan kemudian ditambahkan dengan aquades sebanyak 0,1 mL  dicampur  hingga  homogen  dan diberikan pada tikus secara peroral.
Pengujian Efek Hepatoprotektor Ekstrak  Etanol  Daun  Benalu  Langsat (Dendrophthoe petandra (L.) Miq.)
Untuk  pengujian  ini  diperlukan  13 ekor  tikus.  Tikus  yang  digunakan  adalah jenis  Rattus  novergicus  galur  wistar  jenis kelamin  jantan  dengan  usia  antara  2-3 bulan  diaklimatisasi  selama  7  minggu sebelum diberi perlakuan. Setelah diaklimatisasi  bobot  masing-masing  tikus ditimbang  beratnya  untuk  mengetahui keseragaman  bobot  subjek.  Bobot  tikus yang  digunakan  100-130  gram.  Kelompok
perlakuan  dibagi  secara  acak  menjadi  5 kelompok,  yaitu  dua  kelompok  perlakuan ekstrak  etanol  daun  benalu  Langsat (EDBL),  kelompok  kontrol  positif  (K+), kelompok  kontrol  negatif  (K-)  dan kelompok  kontrol  pembanding  (KP). Masing-masing kelompok kecuali kelompok  pembanding  terdiri  dari  3  ekor tikus.  Kelompok  kontrol    pembanding hanya  terdiri  dari  1  ekor  tikus  dan  tidak diberi  perlakuan  apapun  karena  hanya digunakan  sebagai  pembanding  terhadap semua kelompok perlakuan.
Sebelum dilakukan perlakuan semua  kelompok  dipuasakan  terlebih dahulu selama 8 jam. Pengujian dilakukan dari  hari  ke-1  sampai  hari  ke  9.  Hari  ke-1 sampai  ke-8  perlakuan,  kelompok  (P1) diberikan EDBL dengan dosis 35 mg/KgBB, kelompok (P2) diberikan EDBL  dengan  dosis  70  mg/KgBB, kelompok  (K+)  merupakan  kontrol  positif diberikan Curcuma (Soho®) 81 mg/KgBB, kelompok  (K-)  merupakan  kontrol  negatif diberikan  aquadest  dan  kelompok  (KP) yaitu  kontrol  pembanding  juga  diberikan aquadest.  Pada  hari  ke-8  setelah  4  jam pemberian  perlakuan,  semua  kelompok diinduksi dengan CCl 4 sebesar 1 mL/KgBB  secara  intraperitoneal  kecuali kelompok  kontrol  pembanding.  Kemudian 18 jam setelah diinduksi CCl 4 pada hari ke 9,  semua  kelompok  dianestesi  di  dalam toples jenuh dietil eter, kemudian dilanjutkan  dengan  dislokasi  tulang  leher dan  dilakukan  insisi  untuk  melihat homogenat  hati  dan  dilanjutkan  untuk analisis  kadar  Malondialdehid  (MDA) menggunakan  metode  Thiobarbituric  Acid Reactive Substance (TBARS).
Analisis  Thiobarbituric  Acid-Reactive Substance (TBARS)
Hati  yang  telah  diambil  dicincang hingga  halus  kemudian  ditimbang  0,5 gram,  setelah  itu  ditambahkan  asam triklorasetat  (TCA)  10%  sebanyak  4  mL kemudian  divortex  selama  1  menit.  Lalu disentrifugasi  (EBA    Hettich)  pada  4000 rpm  selama  10  menit.  Supernatannya dipisahkan, diambil larutannya dan
ditambah larutan asam tiobarbiturat (TBA) 0,02  M  sebanyak  2,5  mL  kemudian divortex  selama  1  menit  agar  homogen. Larutan  yang  telah  homogen  kemudian dipanaskan  di  dalam  waterbath  dengan suhu 100 0 C selama 10 menit. Larutan yang berwarna  merah  muda  didinginkan  di  air mengalir  lalu  diukur  serapannya  pada panjang gelombang 532nm dengan menggunakan  spektrofotometer  (Thermo Scientific  GENESYS    20).  Kadar  MDA dihitung  menggunakan  persamaan  garis regresi  dari  kurva  baku  standar  MDA 1,1,3,3  tetraethoxypropane  (TEP)  dengan dosis  0,  3 µ M,  6 µ M,  9 µ M  dn  12 µ M (Suryanto, 2006).

## PEMBAHASAN
Kadar  MDA  dari  masing-masing kelompok dengan tiap pengulangan dihitung  berdasarkan  persamaan  garis regresi  y=  0,0215x  +  0,0056.  Persamaan garis  diperoleh  setelah  membuat  kurva baku  kalibrasi  TEP  dengan  menggunakan larutan standar
yaitu
1,1,3,3- tetraetoksipropan  (TEP)  sebagai  sumber MDA  dan  absorbansi  konsentrasi  larutan baku  standar  TEP  dibaca  pada  panjang gelombang 532nm.
Gambar1. Kurva Standar 1,1,3,3- Tetraetoksipropan pada absorbansi 532nm
Diperoleh  rata-rata  kadar  MDA yang  terbentuk  untuk  masing-masing kelompok yaitu, kelompok I (K-) memiliki kadar MDA tertinggi dengan nilai rata-rata
3,413 µ M  dibandingkan  dengan  kelompok II  (K+)  sangat  beda  jauh  dengan  rata-rata 1,708 µ M,  kemudian  diikuti  dengan  nilai kadar  rata-rata  kelompok  III  (P2)  sebesar 2,080 µ M  dan  terakhir  kelompok  IV  (P1) sebesar 2,715 µ M.
Data  kadar  MDA  yang  diperoleh dapat  dilihat  ekstrak  etanol  daun  benalu
Langsat  memiliki  potensi  yang  sama dengan Curcuma (Soho ® ) yaitu memberikan efek hepatoprotektor terhadap jaringan  hati  tikus  yang  diinduksi  CCl 4 dengan  memperkecil  proses  peradangan, yaitu  menghambat  radikal  bebas  agar berikatan dengan antioksidan dalam hal ini flavonoid  agar  tidak  berikatan  dengan jaringan  lipid  pada  hati  tikus.  Hal  tersebut dibuktikan  dengan  jumlah  kadar  MDA yang jauh lebih kecil dibandingkan dengan kelompok (K-).

## KESIMPULAN
Pemberian  ekstrak  etanol  daun benalu  Langsat  terhadap  peroksidasi  lipid tikus  pada  dosis  35  mg/KgBB  dan  70 mg/KgBB  pada  tikus  putih  jantan  yang diinduksi  CCl 4 terbukti  memberikan  efek hepatoprotektor. Dilihat dari hasil perhitungan  diperoleh  rata-rata  kadar MDA  pada  dosis  35  mg/KgBB  sebesar 2,715 µ M  dan  dosis  70  mg/KgBB    sebesar
2,080 µ M.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdillah, A. 2006. Aktivitas Antiproliferasi  Ekstrak  Air  Daun Benalu Langsat (Pyrrosia numularifolia (Sw.) Ching)
Terhadap  Sel  Lestari  Tumor HeLa  secara  In  Vitro.  [Skripsi]. Institut Pertanian Bogor, Bogor. Arafah,  E.  2005.  Perlindungan  dan  Efek Penyembuhan  Sediaan  Bangle
(Zingiber cassumunar Roxb) Terhadap  Peradangan  Hati  Tikus serta  Mekanismenya  pada  Sel Makrofag dan Limfosit.
[Disertasi]. IPB, Bogor
Suryanto,  E.  2006.  Identifikasi  Komponen
Antioksidan dari Buah Andaliman (Zanthoxylum acanthopodium DC.). [Disertasi]. Universitas
Gajah Mada. Jogjakarta.
y = 0,0215x + 0,0056 R² = 0,9986 0 0,1 0,2 0,3 0 5 10 15