## SKRINING FITOKIMIA EKSTRAK JAMUR KANCING
( Agaricus bisporus )
Asriani Suhaenah, Siska Nuryanti 1
Fakultas Farmasi, Universitas Muslim Indonesia
1 siska.nuryanti@umi.ac.id

## ABSTRACT
The phytochemical screenings and analysis of chemical compounds in n-hexan extract, ethyl acetat extract and ethanol extract, of Agaricus bisporus with Thin Layer Chromatography (TLC) has been carried out. Extraction process  was  performed  with  terraced  maceration,  identification  of  bioactive  compound  with  thin  layer chromatography.  The  result  of  Thin  Layer  Chromatography  test  showed  that  n-hexane  extract  contains  flavonoid, coumarin, therpenoid and steroid. Ethyl acetate extract contains flavonoid, coumarine, therpenoid. Ethanol extract contains flavonoid, alkaloid, polyphenol, coumarin, terpenoid
Keywords: phytochemistry, TLC, Agaricus bisporus

## I. PENDAHULUAN
Indonesia adalah negara agraris yang terkenal akan  kekayaan  rempah  rempah  dan  berbagai  jenis tanaman,  dari  dulu  hingga  sekarang  tanaman  herbal ataupun tanaman obat dapat menyembuhkan berbagai macam penyakit.
Salah  satu  tanaman  yang  berfungsi  sebagai obat  adalah  jamur.  Istilah  jamur  berasal  dari  bahasa Yunani,  yaitu  fungus  ( mushroom )  yang  berarti tumbuh  dengan  subur.    Istilah  ini  selanjutnya ditujukan  kepada  jamur  yang  memiliki  tubuh  buah serta  tumbuh  atau  muncul  di  atas  tanah  atau pepohonan.  Organisme  yang  disebut  jamur  bersifat heterotrof, dinding sel spora mengandung kitin, tidak berplastid,  tidak  berfotosintesis,  tidak  bersifat fagotrof,  umumnya  memiliki  hifa  yang  berdinding yang dapat berinti banyak ( multinukleat ), atau berinti tunggal  ( mononukleat ),  dan  memperoleh  nutrien dengan  cara  absorpsi  (Gandjar et  al., 2006). Penggunaan  jamur  sebagai  obat  merupakan tradisi  yang  sudah  lama.  Jamur  kancing  putih ( Agaricus  bisporus )  adalah  salah  satu  jamur  yang paling  popular  yang  diambil  dari  alam  dan  dari budidaya  komersial. Agaricus  bisporus kaya  akan protein,  asam  amino  bebas,  polifenol,  polisakarida ergothionin,  vitamin.  Jamur  ini  juga  mengandung asam  linoleat  yang  tingi  dan  enzim  aromatase  yang berperan  mengkatalisis  hormone  seks  pada  manusia. Agaricus  bisporus memiliki  banyak  fungsi  seperti antioksidan,  anti  bakteri,  anti  inflamasi,  anti  tumor, dan sistem pertahanan tubuh  (Falguera et al ., 2011). Fenol  adalah  komponen  antioksidan  utama  yang ditemukan pada ekstrak Agaricus bisporus (Dhamodharan  &  Mirunalini,  2010).  Menurut  Jeong et  al (2010)  seluruh  bagian  dari  jamur  kancing ( Agaricus  bisporus )  kaya  akan  serat,  polisakarida, antioksidan,  vitamin  dan  polifenol,  dengan  adanya
kandungan tersebut, dapat memberikan efek terhadap sel dari sistem imun, sel tumor ( Adams et al ., 2008). Agaricus  bisporus adalah  sumber  elemen yang  bagus  seperti  natrium,  potassium,  dan  fosfor, dikonjugasikan dengan asam linoleic dan antioksidan (Shiuan et  al ,  2005).  Ini  dapat  menghambat aromatase,  sehingga  dapat  menurunkan  kadar estrogen  pada  tubuh  manusia,  dimana  dapat mengurangi resiko kanker payudara. Pada tahun 2009, penelitian  melalui  2000  wanita  menunjukkan penurunan  dalam  jumlah  besar  orang  yang mengkomsumsi jamur yang segar setiap hari, dimana 64%  cenderung  terkena  kanker  payudara.  Ketika dikombinasikan  antara  jamur  dengan  konsumsi  teh hijau  yang  teratur  dapat  mengurangi  resiko  kanker payudara  sampai  90%.  Hal  tersebut  kemungkinan disebabkan oleh adanya peningkatan sistem pertahanan  tubuh  (Dhamodharan  &  Mirunalini, 2010).
Melihat  banyaknya  khasiat  tanaman  dari jamur kancing tersebut diperkirakan tanaman tersebut mengandung bermacam-macam senyawa kimia yang berguna  bagi  kesehatan.  Oleh  karena  itu  pada penelitian  ini  dilakukan  analisis  komponen  kimia jamur  kancing  dalam  ekstrak  n-heksan,  ekstrak  etil asetat dan ekstrak etanol.

## II. METODE PENELITIAN A. Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  pisau  stainless, timbangan  kasar,  timbangan  analitik  (Denvert instrument), bejana maserasi, corong, cawan porselin, vial, sendok besi, labu takar, beker gelas, erlenmeyer, mortir  dan  stamper,  tabung  reaksi,  spektrofotometer UV-Vis  (Shimadzu),  Sonifikator,  lampu  UV,  pipet kapiler (Nesco), lempeng KLT F 254.
Bahan-bahan yang digunakan jamur kancing (Agaricus  bisporus),  aqudest,  etanol,  etil  asetat,  n- heksan, kertas saring, aluminium foil, kertas timbang, methanol  p.a,  toluene,  aseton,  asam  formiat,  AlCl 3, sitoborat, dragendorf, KOH, Liberman-Burchard.

## B. Pengambilan dan Pengolahan Sampel
Jamur  kancing  ( Agaricus  bisporus )  yang akan  digunakan  dikumpulkan  dan  selanjutnya dibersihkan  dari  pengotor  lalu  dicuci  dengan  air mengalir  hingga  bersih.  Jamur  tersebut  diiris  tipis- tipis,  kemudian  dikeringkan  di  udara  terbuka  dan terlindung  dari  sinar  matahari  langsung,  hingga didapatkan simplisia kering.

## C. Metode Ekstraksi
Ekstraksi sampel dilakukan secara bertingkat dengan ultrasonifikasi, simplisia ditimbang sebanyak 25  gram,  lalu  ditambahkan  pelarut  yang  non  polar yaitu  n-heksan,  sebanyak  125  mL,  kemudian ditempatkan di dalam ultrasonic bath selama 30 menit dengan  frekuensi  gelombang  38  kHz.  kemudian disaring, kemudian ditambahkan lagi dengan 125 ml n-heksan, dan disonifikasi selama 30 menit, kemudian disaring,  hasil  saringan  kemudian  diuapkan  untuk mendapatkan  ekstrak  n-heksan.  Kemudian  residu dikeringkan  dan  setelah  kering,  dimaserasi  lagi dengan  pelarut  semi  polar  yaitu  etil  asetat  sebanyak 125  ml  dengan  sonikator,  dan  dilakukan  sebanyak  2 kali,  kemudian  hasil  saringan  diuapkan  untuk mendapatkan  ekstrak  etil  asetat.  Selanjutnya  residu dikeringkan  dan  setelah  kering  ditambahkan  dengan 125  ml  peratut  polar  yaitu  etanol,  dan  dimaserasi kembali  dengan  sonifikator  sebanyak  2  kali, kemudian hasil saringan diuapkan untuk mendapatkan ekstrak etanol.

## D. Uji  Kandungan  senyawa  bioaktif  dengan Kromatografi lapis tipis
Ekstrak  kental  sampel  dan  asam  galat secukupnya masing-masing dilarutkan dengan metanol,  selanjutnya  ditotolkan  pada  lempeng  KLT. Kemudian lempeng dielusi dengan campuran pelarut butanol  ;  asam  galat  ;  air    (BAW)  dengan perbandingan (6:1:3). Spot noda yang diperoleh pada lempeng setelah kering, lalu disemprot dengan FeCl 3 . Jika spot noda hasil penyemprotan tersebut berwarna biru  kehitaman  maka  sampel  tersebut  positif mengandung  senyawa  fenolik.  Uji  kandungan senyawa  bioaktif  atau  metabolit  sekunder  dari tanaman  jamur  kancing  ( Agaricus  bisporus )  untuk masing-masing ekstrak dilakukan sebagai berikut:

## Senyawa flavonoid
Ekstrak  hexan,  etil  asetat  dan  etanol  masing-masing dilarutkan  kemudian  ditotolkan  pada  lempeng  silica gel G60 F 254 dan dielusi dengan menngunakan Toluen : Aseton :asam Formiat (6:6:1). Lempeng dikeringkan dan disemprot dengan pereaksi AlCl 3 dan sitroborat. Hasil  positif  adanya  senyawa  flavonoid  ditandai dengan  spot/bercak  berfluoresensi  kuning  kehijauan pada UV 366

## Senyawa Alkaloid
Ekstrak  hexan,  etil  asetat  dan  etanol  masing-masing dilarutkan  kemudian  ditotolkan  pada  lempeng  silica gel G60 F 254 dan dielusi dengan menngunakan Toluen : Aseton :asam Formiat (6:6:1). Lempeng dikeringkan dan  disemprot  pereaksi  dragendorf.    Hasil  positif adanya  alkaloid  ditandai  dengan  adanya  bercak/spot berwarna orange.

## Senyawa polifenol
Ekstrak  hexan,  etil  asetat  dan  etanol  masing-masing dilarutkan  kemudian  ditotolkan  pada  lempeng  silica gel G60 F 254 dan dielusi dengan menngunakan Toluen : Aseton :asam Formiat (6:6:1). Lempeng dikeringkan dan  disemprot  dengan  pereaksi  FeCl 3 .  Hasil  positif Hasil  positif  ditandai  dengan  adanya  spot/bercak berwarna gelap (hitam, ungu, biru tua atau coklat tua).

## Senyawa antrakuinon dan kumarin
Ekstrak  hexan,  etil  asetat  dan  etanol  masing-masing dilarutkan  kemudian  ditotolkan  pada  lempeng  silica gel G60 F 254 dan dielusi dengan menngunakan Toluen : Aseton :asam Formiat (6:6:1). Lempeng dikeringkan dan  disemprot  dengan  KOH  metanolik  dan  Hasil positif adanya senyawa kumarin ditandai dengan spot berfluoresensi  biru  terang  di  bawah  lampu  UV  366 dan spot berwarna merah untuk senyawa antakuinon

## Senyawa terfenoid dan steroid
Ekstrak hexan, etil asetat dan etanol masing- masing dilarutkan kemudian ditotolkan pada lempeng silica  gel G60 F 254 dan dielusi dengan  menngunakan Toluen  :  Aseton  :asam  Formiat  (6:6:1).  Lempeng dikeringkan dan disemprot dengan pereaksi Libermann-Burchard.  Hasil  positif  ditandai  dengan adanya  spot/bercak  berwarna  hijau-biru  untuk senyawa  steroid  dan  warna  merah  untuk  senyawa triterpenoid.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil Penelitian
Tabel  1 .  Kandungan  senyawa  bioaktif  ekstrak Agaricus  bisporus berdasarkan  kromatografi  lapis tipis Kandungan bioaktif Ekstrak n-hexan Ekstrak etil asetat Ekstrak etanol Flavonoid + + + Alkaloid - - + Polyfenol - - + Antrakuinon - - - Kumarin + + + Terpenoid + + + Steroid + - - Keterangan : +   : Positif - : negatif
Hasil  Uji  Senyawa  Bioaktif  Dengan  menggunakan Kromatografi Lapis Tipis
Senyawa Flavonoid

## A                         B
1     2     3                  1   2   3 C D

## 1   2    3          1   2    3
Gambar 1 . Hasil uji KLT (Kromatografi Lapis Tipis) untuk uji senyawa Flavonoid
Keterangan gambar Fase diam : Silika gel G60 F 254 Fase gerak : Toluen : Aseton :asam Formiat (6:6:1) 1. Ekstrak  n-heksan
2. Ekstrak Etil asetat
3. Ekstrak etanol
A. UV 254
B. UV 366 C. AlCl 3 D. Sitroborat
Hasil  positif  adanya  senyawa  flavonoid  ditandai dengan  spot/bercak  berfluoresensi  kuning  kehijauan pada UV 366 stelah disemprot dengan pereaksi AlCl 3 dan sitroborat
Hasil:  semua  ekstrak  mengandung  senyawa flavonoid

## Senyawa Alkaloid

## 1       2      3
Gambar 2 .  Hasil uji KLT (Kromatografi Lapis Tipis) untuk uji senyawa alkaloid
Keterangan Gambar Fase diam : Silika gel G60 F 254 Fase gerak : Toluen : Aseton :asam Formiat (6:6:1) 1. Ekstrak  n-heksan
2. Ekstrak Etil asetat
3. Ekstrak etanol
Hasil positif ditandai dengan adanya bercak/spot berwarna  orange  setelah  disemprot  dengan  pereaksi dragendorf.
Hasil:  ekstrak  etanol  mengandung  senyawa alkaloid,  ekstrak  n-heksan  dan  etil  asetat  tidak mengandung alkaloid
Senyawa polifenol

## 1        2        3
Gambar 3 . Hasil uji KLT (Kromatografi Lapis Tipis) untuk uji senyawa polifenol
Keterangan Gambar Fase diam : Silika gel G60 F 254 Fase gerak
: Toluen : Aseton :asam Formiat (6:6:1) 1. Ekstrak  n-heksan
2. Ekstrak Etil asetat
3. Ekstrak etanol
Hasil positif ditandai dengan adanya spot/bercak berwarna gelap (hitam, ungu, biru tua atau coklat tua) setelah disemprot dengan pereaksi FeCl 3 . Hasil: Ekstrak etanol positif mengandung polifenol
Senyawa Antrakuinon dan Kumarin

## 1      2      3
Gambar 4 . Hasil uji KLT (Kromatografi Lapis Tipis) untuk uji senyawa antrakuinon dan kumarin
Keterangan Gambar
Fase diam : Silika gel G60 F 254 Fase gerak : Toluen : Aseton :asam Formiat
(6:6:1)
1. Ekstrak  n-heksan
2. Ekstrak Etil asetat
3. Ekstrak etanol
Hasil  positif  adanya  senyawa  kumarin  ditandai dengan  spot  berfluoresensi  biru  terang  di  bawah lampu  UV  366  dan  spot  berwarna  merah  untuk senyawa  antakuinon  stelah  disemprot  dengan  KOH metanolik.
Hasil:  semua  ekstrak  positif  memgandung kumarin, sedangkan negative mengandung antrakuinon Senyawa Terpenoid dan steroid A B
1    2   3             1   2    3 Gambar 5. Hasil uji KLT (Kromatografi Lapis Tipis) untuk uji senyawa terpenoid dan steroid
Keterangan Gambar Fase diam : Silika gel G60 F 254 Fase gerak : Toluen : Aseton :asam Formiat (6:6:1) 1. Ekstrak  n-heksan 2. Ekstrak Etil asetat
3. Ekstrak etanol
4. Libermann-Burchard (di bawah UV 366)
5. Libermann-Burchard (Visibel)
Hasil  positif  ditandai  dengan  adanya spot/bercak  berwarna  hijau-biru  untuk  senyawa steroid dan warna merah untuk senyawa triterpenoid setelah  disemprot  dengan  pereaksi  Libermann- Burchard.
Hasil: Ekstrak n-heksan mengandung senyawa  steroid,  dan  Semua  ekstrak  mengandung triterpenoid.

## B. Pembahasan
Tanaman yang digunakan pada penelitian ini adalah jamur kancing ( Agaricus bisporus ). Ekstraksi dilakukan dengan maserasi bertingkat, dengan metode ultrasonikasi.
Ekstraksi  ultrasonic  merupakan  metode ekstraksi dengan menggunakan gelombang ultrasonik.  Metode  ini  tidak  membutuhkan  waktu yang  lama  dibandingkan  dengan  metode  maserasi ataupun soxhletasi. Prinsip ekstraksi ultrasonik adalah peningkatan  transfer  massa  yang  disebabkan  oleh meningkatnya  penetrasi  pelarut  ke  dalam  jaringan tumbuhan  lewat  efek  kapiler.  Gelembung  kavitasi akan  terbentuk  pada  dinding  sel  tanaman  akibat adanya  gelombang  ultrasonik.  Efek  dari  pecahnya gelembung kavitasi  ini dapat  mengakibatkan peningkatan pori-pori dinding sel. Pecahnya gelembung  kavitasi  disebabkan  oleh  tipisnya  bagian kelenjar  dalam  sel  tumbuhan  yang  mudah  dirusak dengan sonikasi. Hal tersebut memudahkan pelepasan komponen esensial ke dalam pelarut, dengan kata lain, gelombang  ultrasonic  dapat  memfasilitasi  terjadinya pembengkakan  sel  dan  pelarutan  komponen  dalam tanaman  yang  disebabkan  pembesaran  pori-pori dinding sel. Pembengkakan pori yang lebih besar akan meningkatkan  transfer massa  sehingga  dapat meningkatkan  efisiensi  dan  mengurangi  waktu ekstraksi (Melecchi et al ., 2006). Kelebihan lain dari ekstraksi  ultrasonic  adalah  keterulangan  ekstraksi baik,  waktu  ekstraksi  yang  jauh  lebih  singkat,  lebih efisien,  dan  dapat  digunakan  untuk  ukuran  sampel yang  beragam.  Ekstraksi  ultrasonic  sangat  baik digunakan  untuk  ekstraksi  komponen  organik  polar (Said, 2009).
Simplisia  diekstraksi  dengan  menggunakan pelarut  dengan  kepolaran  bertingkat  yaitu  pelarut  n- heksan, etil asetat, dan etanol.  Ekstraksi dengan cara bertingkat  dilakukan  supaya  senyawa  bioaktif  yang bersifat non-polar diharapkan tersari dalam pelarut n- heksan, semi polar tersari dalam etil asetat dan yang bersifat  polar  dapat  tersari  dalam  etanol.  Hasil masing-masing  ekstrak  yang  diperoleh  kemudian diidentifikasi secara kualitatif dengan menggunakana kromatografi lapis tipis (KLT).
Kromatograpi  lapis  tipis  adalah  metode pemisahan  senyawa  bioaktif  secara  kimia  fisika berdasarkan  perbedaan  kecepatan  migrasi  atau  ratio distribusi dari komponen campuran fase diam dan fase gerak  (Kusumaningtyas et  al .,  2008).  Identifikasi senyawa  bioaktif  dengan  kromatografi  lapis  tipis ditandai  dengan  menggunakan  pereaksi  semprot.
Hasil Penelitian (tabel 1) menunjukkan bahwa uji flavonoid pada berbagai ekstrak diperoleh bahwa pada  semua  ekstrak  positif  mengandung  flavonoid, namun  pada  ekstrak  n-heksan  intensitas  kandungan flavonoid  bersifat  lemah,  hal  ini  terjadi  karena senyawa golongan flavonoid bersifat polar. Kepolaran senyawa  tersebut  dikarenakan  flavonoid  merupakan senyawa polihidroksi (memiliki lebih dari satu gugus hidroksil) (Satrohamidjojo, 1996).
Pemeriksaan alkaloid pada ekstrak n-heksan, etil  asetat  dan  etanol  menunjukkan  bahwa  ekstrak etanol positif mengandung alkaloid. Adanya alkaloid dalam  ekstrak  tersebut  disebabkan  karena  alkaloid bersifat  polar  dan  non  polar  (harborne  1987).  Pada ekstrak  etil  asetat  dan  n-heksan  tidak  terdapat senyawa  alkaloid,  hal  ini  mungkin  disebabkan alkaloid  lebih  banyak  dalam  bentuk  garamnya sehingga umumnya larut dalam senyawa polar seperti air atau etanol (Bruneton, 1993).
Pemeriksaan senyawa polifenol/tannin menunjukkan hasil positif pada ekstrak etanol. Hal ini sesuai  dengan  penyataan  Sriwahyuni  (2010),  pada senyawa polifenol/tannin terdapat banyak  gugus OH sehingga menyebabkan sifatnya polar, sehingga larut dalam senyawa polar seperti etanol.
Pada  pemeriksaan  antrakuinon,  semua sampel negatif mengandung antrakuinon, Hal ini tidak sesuai dengan teori yang menyatakan bahwa senyawa antrakuinon dapat larut dalam lemak dan etanol encer (Harborne  1987),  sedangkan  pada  pemeriksaan kumarin, semua sampel positif mengandung kumarin. Hasil  tersebut  seuai  dengan  teori  yang  menyatakan bahwa  senyawa  kumarin  biasanya  terdapat  dalam senyawa  polar  maupun  yang  bersifat  non  polar. (harborne, 1987)
Pemeriksaan  terpenoid  dan  steroid  yang dilakukan pada masing-masing ekstrak menunjukkan bahwa  senyawa  terpenoid  terdapat  pada  semua ekstrak,  dan  senyawa  steroid  hanya  terdapat  pada ekstrak  n-heksan,  sedangkan  pada  etil  asetat  dan etanol  negatif  mengandung  steroid.  Hal  ini  sesuai dengan  teori  yang  menyatakan  bahwa  senyawa steroid  umumnya  larut  dalam  senyawa  non  polar (Harborne, 1987).

## IV. KESIMPULAN
Kandungan senyawa bioaktif dari ekstrak n- heksan  adalah  flavonoid,  kumarin,  terpenoid  dan steroid,  ekstrak  etil  asetat  mengandung  flavonoid, kumarin,  triterpenoid,  sedangkan  ekstrak  etanol mengandung flavonoid, alkaloid, polifenol, kumarin, terpenoid.

## DAFTAR PUSTAKA
Adams  L.S. et  al. (2008).    White  button  mushroom ( Agaricus bisporus) exhibits antiproliferative and  proapoptotic  properties  and  inhibits prostate  tumor  growth  in  athmic  mice. Nutr cancer Bruneton J. (1993). Pharmacognosy, Phytochemistry, Medicinal Plants. Lavoisier Publishing, Paris Dhamodharan  G,  &  Mirunalini  S.  (2010). A  Novel Medicinal  Characterization  of  Agaricus bisporus (white button mushroom). Pharmacology online 2:456-463
Falquera  V.,  Miarnau  O.,  Pangan  J&  Ibarz  A. (2011). Inhibitory  effect  of  melanins    from Agaricus  bisporus  polyphenol  oxidase  and two  different  substrats  on  carboxypeptidase A and B activity Gandjar  I.G.  &  Rohman.  (2007). Kimia  Analisis Farmasi. Yogyakarta: Pustaka Pelajar Harborne I.B. (1987). Metode Fitokimia . Penerbit ITB Bandung. ( Dictionanry Of Natural Product ) Jeong  SC.,  Jeong  Yt.,  Yang  BK.,  Islam  R., Koyyalamudia SR., Panga G, Choa K.Y., & Song  C.H.  (2010).  White  button  Mushroom (Agaricus bisporus) lower blood glucose and cholesterol level in diabetic and hypercholesterolemic  rats . Nutr  Res 30:  49- 56 Kusumaningtyas  E.,  Astuti  E.,&  Darmono.  (2008) . Sensitivitas Metode Bioautografi Kontak dan Agar  Overlay  Dalam  Penentuan  Senyawa Antikapang. Jurnal  Ilmu  Kefarmasian, September. Vo.6 No.2 Hal 75-79 Melechi et a l. (2006). Optimization of The Sonication Extraction  Method  of  Hibiscus  tiliaceus L.Fkowers. Ultrasonics Sonochemistry 13:242-250 Said  KABM.  (2009). Ultrasonic  Extraction  of Antioxidant  Compound  in  Guava (Tesis) Pahang.  Faculty  of  Chemical  &  Natural Resources Engineering, University Malaysia Pahang. Sastrohamidjojo.  (1996). Sintesis  Bahan  Alam. Cetakan Pertama. Yogyakarta, Gadjah Mada University Press
Shiuang  Chen.,  Sheryl  Phung.,  Gene  Hur.,  Sharon Kwok.,  Jingjing  Ye.,  &  Sei-Ryang  Oh. (2005).  Breast  cancer  prevention  with phytochemical  in  mushrooms. Proc  Amer Assoc Cancer Res , Volume 46,5186 Sriwahyuni I. (2010). Uji Fitokimia Ekstrak Tanaman Anting-anting (Acalypha indica Linn ) dengan  variasi  pelarut  dan  Uji  Toksisitas menggunakan Brine Shrimp (Artemia salina Laeach). Skripsi:  Universitas  Negri  Islam Maulana Malik Ibrahim, Malang