Studi Serologi Newcastle Disease pada Itik ( Anas javanicus ) yang Dipotong di Pasar Tradisional Surabaya Timur
Serological Study of Newcastle Disease in Ducks (Anas javanicus) Slaughtered in East Surabaya Traditional Market
Sellianova Ardhanella 1 , Ratna Damayanti 2 , Suwarno 3 , Fedik Abdul Rantam 3 , Kadek Rachmawati 2 , Aswin Rafif Khairullah 1 , Jola Rahmahani 3*
1 Pendidikan Dokter Hewan, 2 Departemen Ilmu Kedokteran Dasar, 3 Departemen Mikrobiologi Veteriner, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Airlangga.
* Corresponding author : jola_rahmahani@yahoo.co.id

## Abstrak
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui studi serologis Newcastle Disease yang menginfeksi itik  ( Anas  javanicus )  yang  dipotong  di  Pasar  Tradisional  Surabaya  Timur.  Penelitian  ini  dilakukan  dari Desember 2018 hingga Januari 2019. Sebanyak 122 sampel diambil dari empat pasar tradisional di Surabaya Timur. Uji Haemagglutination Inhibition (HI) digunakan untuk menentukan hasil positif dengan titer antibodi 4 atau lebih. Sampel untuk uji HI dikumpulkan dari serum itik telah diperlakukan dengan sel darah merah ayam. Hasil penelitian menunjukkan 13 (10,65%) dari 122 sampel positif ND.
Kata kunci: Haemagglutination Inhibition , itik, Newcastle Disease , studi serologis

## Abstract
The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  serological  study  of  Newcastle  Disease  that  infects slaughtered ducks (Anas javanicus) at the East Surabaya Traditional Market. This study was conducted from December 2018 to January 2019. A total of 122 samples were collected from four traditional markets in East Surabaya. The Haemagglutination Inhibition (HI) test was used to determine a positive result with an antibody titer of 4 or more. Samples for the HI test were collected from duck serum that had been treated with chicken red blood cells. The results showed 13 (10.65%) of the 122 samples were positive for ND.
Keywords: Haemagglutination Inhibition, duck, Newcastle Disease, serological studies
Received: 11 August 2022 Revised: 5 September 2022 Accepted: 8 October 2022

## PENDAHULUAN
Newcastle  Disease (ND)  adalah  salah  satu penyakit infeksius yang berpotensi penting dalam industri perunggasan (Karamendin dan Kydyrmanov, 2021). Newcastle Disease ditemukan  pertama  kali  pada  tahun  1926  oleh Kraneveld di Indonesia (Ganar et al ., 2014). Pada tahun  1927,  Doyle  menemukan  penyakit  yang sama  dengan  Newcastle  on  Tyne,  Inggris,  dan dinamakan Newcastle Disease (Getabalew et al ., 2019). Newcastle  Disease dilaporkan  sebagai penyakit endemis yang terjadi di beberapa negara di  dunia  (Ganar et  al .,  2014).  Penyakit  ini mengakibatkan  kerugian  yang  sangat  signifikan bagi industri perunggasan (Rehman et al. , 2020).
Kerugian  yang  ditimbulkan  karena  wabah virus  ND  berupa  kematian  sehingga  diperlukan biaya ekstra untuk biosekuriti, pemisahan ternak itik,  dan  vaksinasi  (Dimitrov et  al .,  2017).  Pada negara yang bebas dari ND harus mengeluarkan dana  untuk  melakukan  pengujian  berkala  dalam mempertahankan status bebas terhadap ND yang diperlukan  untuk  pendukung  izin  perdagangan sedangkan  pada  negara  berkembang  yang endemik  ND,  efek  yang  ditimbulkan  berupa kerugian  kesehatan,  sosial  ekonomi  masyarakat yang  tidak  mampu,  serta  kualitas  dan  kuantitas telur  serta  daging  yang  dikonsumsi  menurun akibat ND (Sahoo et al ., 2022).
Abraham-Oyiguh
(2014) menyatakan
kerugian  akibat  penyakit Newcastle  disease
disebabkan oleh angka kesakitan (morbiditas) dan angka  kematian  (mortalitas)  pada  unggas mencapai  50-100%  akibat  strain  virus  ND velogenik,  dan  30-50%  pada  strain  mesogenik. Pada  strain  virus  ND  lentogenik  hanya menimbulkan  gejala  klinis  ringan  (Dortmans et al. , 2011).
Pasar  unggas  tradisonal  memiliki  potensi besar dalam penularan penyakit ND (Haile et al ., 2020).  Penularan  penyakit  dari  unggas  yang terinfeksi ke unggas yang sehat disebabkan oleh berbagai spesies unggas yang dipasarkan bersama dalam satu lokasi (Jones et al ., 2015). Penularan penyakit  ND  dapat  disebabkan  juga  oleh  sistem pemeliharaan itik yang berbeda-beda yaitu mulai dari  sistem  pemeliharaan  secara  intensif  atau ekstensif (Brown dan Bevins, 2017).
Menurut  Panus et  al .  (2015)  itik  dapat bertindak  sebagai  pembawa  virus  (carrier)  atau sumber penyakit yang dapat ditularkan ke unggas lain yang peka untuk mengetahui adanya sirkulasi virus  ND  pada  itik  serta  sejauh  mana  itik  dapat terserang  dan  menyebarkan  penyakit  ND,  maka salah  satu  cara  untuk  mengetahuinya  adalah dengan  melakukan  deteksi  antibodi  terhadap virus ND pada itik yang diperdagangkan di Pasar Tradisional Surabaya Timur dengan jumlah yang besar, dan itik yang masuk dalam pasar tersebut berasal dari luar daerah, seperti Madura, Malang, Mojokerto, Sidoarjo, dan Tuban.

## METODE PENELITIAN

## Sampel Penelitian
Pada  penelitian  ini,  metode  sampling  yang digunakan  ialah Simple  random  sampling . Metode ini termasuk salah satu teknik probability sampling. Simple  random  sampling ialah  teknik pengambilan  sampel  yang  dipilih  berdasarkan target peneliti yaitu seroprevalensi terhadap virus ND (Elfil & Negida, 2017).

## Pembuatan Serum
Perlakuan khusus dilakukan terhadap sampel untuk  memisahkan  aglutinin  non  spesifik  dari serum.  Perlakuan  khusus  ini  dapat  dilakukan dengan  mencampurkan  eritrosit  ayam  murni (100%)  dan  serum  dengan  perbandingan  1:20.
Sebanyak  10  µl  eritrosit  ayam  murni  (100%) untuk tiap 200 µl serum dicampur lalu diinkubasi di  suhu  ruangan  selama  30  menit,  kemudian disentrifuge dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit. Supernatan hasil sentrifuge ini diambil untuk dilakukan uji HI (Kaufmann et al ., 2017). Perlakuan  khusus  ini  hanya  dilakukan  pada sampel  serum  yang  dapat  mengaglutinasi eritrosit.

## Uji HI
Uji HI memerlukan suspensi virus ND 4HA sebagai  antigen.  Titrasi  antigen  ND  dapat dilakukan  dengan  uji  HA  untuk  menentukan jumlah HA unit. Sebanyak 25 µl NaCl fisiologis diisikan  pada  semua  sumur  pada  baris  A  (A1- A12) microplate “V”. Kemudian pada sumur A1 ditambahkan virus ND sebanyak 25 µl dicampur menggunakan multichannel  micropippet dan dilakukan  titrasi  dengan  mengambil  25  µl  dari sumur pertama diisikan sumur kedua, dari sumur kedua ke sumur ketiga, begitu seterusnya hingga sumur  kedua  belas,  kemudian  sisa  25  µl  dari sumur  kedua  belas  dibuang,  kemudian  semua sumur diisi dengan eritrosit ayam 0,5% sebanyak 50  µl  kemudian  diinkubasi  pada  suhu  ruangan selama 30 menit kemudian baca titernya. Uji HA ini  dilakukan  secara  duplo  pada  baris  B sedangkan  baris  C  digunakan  sebagai  kontrol eritrosit yaitu hanya diisi larutan NaCl fisiologis dan  eritrosit  saja.  Hasil  HA  positif  dinyatakan dengan  terjadinya  aglutinasi  eritrosit  ( diffuse ).
Titer  HA  virus  adalah  kebalikan  angka  hasil pengenceran dimana pada sumur ke-berapa masih tampak adanya hemaglutinasi.
Suspensi virus ND 4 HA digunakan sebagai antigen  dalam  uji  HI.  Penghitungan  HA  unit dilakukan dengan cara menghitung sumur positif. Apabila  hemaglutinasi  terjadi  sampai  sumur  ke lima, maka HA dinyatakan dengan 25 atau 32 HA unit  dan  harus  diencerkan  menjadi  4  HA  unit, sehingga  antigen  harus  mengalami  pengenceran sebanyak  delapan  kali.  Pengenceran  sebanyak delapan kali tersebut dilakukan dengan mengambil  1  bagian  antigen  32  HA  tersebut kemudian  dicampur  dengan  larutan  NaCl fisiologis  sebanyak  7  ml.  Kemudian  dilakukan retitrasi  untuk  melihat  apakah  pengerjaan  kita
membuat  antigen  dengan  titer  4  HA  unit  sudah benar.
Pemeriksaan uji ini menggunakan
microplate “V”.  Seluruh  sumur  A1-H12  pada microplate “V”  diisi  dengan  25  µl  NaCl fisiologis,  kemudian  pada  sumur  kolom  1  (A1- H1) diisi dengan 25 µl serum sampel, campur lalu dilakukan  titrasi  dengan  mengambil  25  µl  dari setiap sumur pada kolom 1 dan dituang ke sumur pada kolom 2, dari kolom 2 ke kolom 3, demikian seterusnya  sampai  kolom  10,  dan  25  µl  dari kolom 10 dibuang, kemudian pada semua sumur pada kolom 1-10 (A1-H10) diisi dengan suspensi virus ND 4HA unit sebagai antigen sebanyak 25 µl. Kolom 11 sebagai kontrol eritrosit ditambahkan 25 µl NaCl fisiologis kemudian diisi dengan  50  µl  eritrosit  ayam  0,5%.  Kolom  12 sebagai kontrol serum, setelah diisi dengan 25 µl NaCl  fisiologis  kemudian  diisi  dengan  25  µl serum sampel, 50 µl eritrosit ayam 0,5%. Setelah penambahan  antigen  ND  dan  serum  tercampur, kemudian diinkubasi selama 30 menit. Selanjutnya  semua  sumur  pada microplate diisi dengan  eritrosit  ayam  0,5%  sebanyak  50  µl  dan diinkubasi pada suhu ruang selama 30 menit.
Pembacaan  hambatan  aglutinasi  sempurna adalah  terjadinya  pengendapan  eritrosit  seperti titik  merah  yang  terlohat  sama  dengan  kontrol pada  dasar  sumur  microplate.  Pembacaan  titer sebaiknya dibandingkan dengan kontrol eritrosit. Saat  pembacaan  hasil,  untuk  memudahkannya microplate dapat  di  miringkan  45º  sehingga apabila  hasil  positif  maka  pengendapan  eritrosit akan berbentuk tear-shape pada sumur microplate .  Titer  serum  adalah  kebalikan  dari pengenceran  tertinggi  antiserum  yang  masih mampu  menghambat  aglutinasi  eritrosit  dengan sempurna  (Ernawati et  al ,  2013).  Hasil  uji  HI dinyatakan  positif  apabila  titer  antibodi  terjadi hambatan aglutinasi pada pengenceran ≥ 4 (log 2 ) (Wibawa et al ., 2012).

## Analisis Data
Data sampel positif yang didapat dan jumlah keseluruhan  sampel  yang  diperoleh  disajikan dalam  bentuk  deskriptif.  Persentase  hasil  uji serologis positif dengan total keseluruhan sampel yang didapat dapat dirumuskan sebagai berikut:
ND = 𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑝𝑜𝑠𝑖𝑡𝑖𝑓 𝑁𝐷 𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑘𝑒𝑠𝑒𝑙𝑢𝑟𝑢ℎ𝑎𝑛 x100%
(Budiharta dan Suardana, 2016).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil pengujian serum itik dengan menggunakan uji HI terhadap ND yang diambil di Pasar  Tradisional  Surabaya  Timur  seperti  pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil pemeriksaan uji HI pada sampel serum itik di pasar tradisional Surabaya Timur
Lokasi Seropositif (%) Seronegatif (%) Pacarkeling 9,84 % 16,39 % Manyar Sabrangan 0,82 % 23,77 % Pucang Sewu 0 % 24,59 % Menur Pumpungan 0 % 24,59 %
Hasil pengujian HI pada 122 serum itik yang menunjukkan  titer  ≥  4  log 2 terdapat  13  sampel positif  dari 122 sampel yang mengandung titer antibodi yaitu 1 sampel dengan titer 5 Log 2 dan 12 sampel dengan titer 10 Log 2 artinya bahwa baik titer 5 Log 2 dan titer 10 Log 2 itik  memiliki abtibidi terhadap ND dan ini menunjukan bahwa itik  pernah  terpapar  karena  tidak  pernah dilakukan vaksinasi.
Berdasarkan  hasil  penelitian  pada  Tabel  2, itik  mempunyai  titer  antibodi  yang  tinggi menunjukkan  bahwa  itik  pernah  terpapar  oleh virus  ND.  Sebaran  titer  antibodi  positif  ND memiliki  titer  yang  berbeda,  ada  yang  memiliki titer  antibodi  tinggi  maupun  rendah  yang disebabkan  oleh  strain  virus  ND.  Itik  yang terdeteksi  memiliki  titer  antibodi  yang  sangat tinggi titer antibodi nya 210 dan 25 yaitu berasal dari Kecamatan Mojosari, Kabupaten Mojokerto dimungkinkan  paparan  virus Newcastle  Disease pada  itik  tersebut  telah  terjadi  di  peternakan wilayah Kabupaten tersebut.
Tabel 2. Sebaran titer antibodi positif ND pada itik di pasar tradisional Surabaya Timur
Titer antibodi (Log 2 ) ∑ sampel 5 1 10 12 Total 13
Tindakan vaksinasi masih dipandang sebagai cara  efektif  untuk  menanggulangi  penyakit  ND dan tindakan biosecurity juga penting diterapkan untuk upaya pencegahan penyakit ND. Biosecurity merupakan  hal  yang  penting  dalam kontrol  dan  pencegahan  penyakit Newcastle Disease , selain itu memberikan desinfektan pada kandang  dan  peralatan  secara  tepat  dan  cermat untuk  meminimalisir  penyebaran  penyakit  ND (Mccluskey et al ., 2006). Lingkungan memberikan  sumbangan  terhadap  imunitas unggas  sebesar  70%  dan  sisanya  sebesar  30% adalah  genetic,  dimana  lingkungan  tempat bertenak  harus  mempunyai biosecurity yang bagus  dan  memadai,  sedangkan  kondisi  genetik itik  yang  bagus  menghasilkan  sel  sel  yang memproduksi  antibodi  yang  bagus  pula  (Padhi, 2016).
Keberadaan  antibodi  pada  itik  yang  tidak divaksin  menunjukkan  adanya  respon  kekebalan terhadap infeksi virus ND, sedangkan terdeteksinya  antibodi  pada  itik  yang  tidak divaksin  dan  tidak  ditemukannya  virus  ND menunjukkan  infeksi  virus  ND  yang  sudah terlewati,  dan  unggas  tersebut  mampu  bertahan dan sembuh dari infeksi ND (Panus, 2015). Pada itik yang tidak divaksin, tidak ditemukan antibodi karena  proses  infeksi  belum  terjadi  sehingga antibodi belum dihasilkan (Miller et al ., 2013).
Gambar 1. Hasil  uji  HI  terhadap  sampel serum itik di Pasar Pacarkeling. (a). K1- K4 hasil uji HI negatif,
(b). K5- K16 hasil uji HI positif.
Pada  Gambar  1.  dapat  dibaca  hasilnya:  (a) Sampel  nomor  K1  sampai  K4  terlihat  tidak adanya pengendapan eritrosit atau dapat dikatakan titer pada sampel tersebut adalah 20 dan sumuran 11 (kontrol eritrosit) terlihat pengendapan eritrosit, (b) Sampel nomor K5-K16 terdapat  hambatan  hemaglutinasi  dengan  titer antibodi  210  dan  sumuran  11  (kontrol  eritrosit) terlihat pengendapan eritrosit.
Hasil  Uji  HI  dikatakan  negatif  bila  tidak terjadi  hambatan  hemaglutinasi,  reaksi  tersebut disebabkan tidak adanya antibodi pada serum itik seperti pada sampel nomor K1-K4. Hasil Uji HI dikatakan positif bila terjadi hambatan hemaglutinasi  yang  nampak  dengan  adanya pengendapan eritrosit pada sumuran plate seperti pada  kontrol  eritrosit  seperti  sampel  nomor  K5- K16 (Kaufmann et al. , 2017).
Prinsip  uji  HI  yaitu  terjadinya  hambatan aglutinasi  oleh  karena  adanya  antibodi  spesifik pada  serum  yang  mencegah  terbentuknya  ikatan antara hemaglutinin virus dengan eritrosit unggas (Kaufmann et al. , 2017). Hasil uji HI dinyatakan negatif  apabila  titernya  <  4  log 2 (Wibawa et  al ., 2012).  Jumlah  sampel  negatif  yang  didapatkan sebanyak 109 sampel. Sampel negatif menunjukkan  kemungkinan  bahwa  itik  tidak pernah  terpapar  virus  ND,  selain  itu  juga  ada kemungkinan  bahwa  itik  pernah  terpapar  virus ND  dalam  jangka  waktu  yang  sudah  lama sehingga  titer  antibodinya  turun  (Amanu  dan Rohi, 2005).
Uji HI dinyatakan positif apabila
menunjukkan titer ≥ 4 log 2 (Wibawa et al ., 2012).
Sampel  positif  menunjukkan  kemungkinan  itik pernah terpapar oleh virus ND baik dalam jangka waktu yang pendek maupun dalam jangka waktu yang  lama.  Pada  hasil  penelitian  diperoleh  13 sampel  positif  dari  122  sampel  yang  diperiksa dengan persentase 10,65%.
Itik  banyak  terinfeksi Newcastle  Disease pada  musim  pancaroba  (pergantian  musim  dari musim  kemarau  ke  musim  penghujan  atau sebaliknya). Pengambilan sampel pada waktu ini kemungkinan turut berpengaruh terhadap tingkat seropositif  pada  unggas.  Menurut  Adi et  al . (2009) tentang kejadian ND di Indonesia, puncak kejadian  ND  tercatat  pada  bulan  November-
Desember  (permulaan  musim  hujan)  dengan angka kejadian sebesar 24,2%, sedangkan tercatat paling rendah pada bulan Mei-Juni (pertengahan kemarau)  dengan  kejadian  10,6%.  Pada  musim hujan kondisi kesehatan unggas menurun drastis disebabkan  mengalami  stress  akibat  suhu lingkungan  kurang  stabil,  sehingga  itik  relatif kurang  tahan  terhadap  penyakit  (Wasti et  al ., 2020).
Pasar  Surabaya  Timur  kemungkinan  dapat terjadi penyebaran virus melalui kontak langsung antar unggas sakit ke unggas sehat melalui feses, sekresi  respirasi,  maupun  dengan  unggas  yang nampaknya sehat tetapi terinfeksi virus Newcastle Disease .  Penyebaran  virus  ND  dapat  melalui kontak langsung, feses, leleran yang mengandung virus, serta pakan, air dan peralatan kandang yang tercemar feses (Miller et al ., 2013).
Keberadaan  virus Newcastle  Disease di lingkungan  pasar  tradisional  dipengaruhi  oleh pasokan dari produsen baik dari peternakan besar, kecil,  pengepul  maupun  dari  individual  atau pekarangan belakang rumah ( Haile et al . , 2020).
Beragamnya aspek yang mempengaruhi mengakibatkan  perlu  adanya  pengawasan  dari pihak  yang  berwenang  mengenai  kondisi kesehatan itik pada waktu masuk ke dalam pasar dari  semua  sektor  (Babington  dan  Campbell, 2022).  Diperlukan  agar  dapat  meminimalisir masuknya  virus Newcastle  Disease dalam lingkungan pasar (Ganar et al ., 2014). Lingkungan asal itik, cuaca ataupun curah hujan juga  dapat  berpengaruh  terhadap  penyebaran virus (Curseu et al ., 2010).

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dan pembahasan  yang  telah  dilakukan,  maka  dapat ditarik  kesimpulan  sebagai  berikut,  telah ditemukan antibodi ND sebanyak 122 serum itik menunjukkan  13  sampel  dinyatakan  positif. Sebaran  antibodi  positif  ND  pada  itik  yang dipotong  di  Pasar  Tradisional  Surabaya  Timur adalah  titer  5  dan  10  (Log 2 )  yaitu  sebanyak 10,65% dari total sampel.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  pada peternakan  itik  di  Jawa  Timur  dan  Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga.

## DAFTAR PUSTAKA
Abraham-Oyiguh,  J.,  Sulaiman,  L.  K.,  Meseko,
C. A., Ismail, S., Suleiman, I., Ahmed, S. J.,
&  Onate,  E.  C.  (2014).  Prevalence  of Newcastle  Disease  Antibodies  in  Local Chicken in Federal Capital Territory, Abuja,
Nigeria. International  Scholarly  Research Notices , 2014: 796148.
Adi, A. A. A. M., Astawa, N. M., Putra, K. S. A., Hayashi,  Y.,  &  Matsumoto,  Y.  (2009). Isolation and Characterization of a Pathogenic Newcastle Disease Virus from a Natural  Case  in  Indonesia. Journal  of Veterinary Medical Science , 72(3), 313–319.
Amanu, S., & Rohi, O. K. (2005). Studi Serologis Dengan Uji Hambatan Hemaglutinasi
Terhadap  Angsa  Yang  Dapat  Bertindak Sebagai  Pembawa  Newcastle  Disease di  D. I. Yogyakarta. Jurnal Kedokteran Hewan , 1, 8–12.
Babington,  S.,  &  Campbell,  D.  L.  M.  (2022).
Water for Domestic Ducks: The Benefits and Challenges  in  Commercial  Production. Frontiers in Animal Science , 3, 782507.
Brown, V. R., & Bevins, S. N. (2017). A review of virulent Newcastle disease viruses in the United  States  and  the  role  of  wild  birds  in viral  persistence  and  spread. Veterinary Research , 48(1), 68.
Budiharta,  S.,  &  Suardana,  I.  W.  (2007).  Buku Ajar  Epidemiologi  dan  Ekonomi  Veteriner. Penerbit Universitas Udayana. Denpasar, pp: 54–55.
Curseu,  D.,  Popa,  M.,  Sirbu,  D.,  &  Stoian,  I.
(2010). Potential Impact of Climate Change
on  Pandemic  Influenza  Risk. Global
Warming , 30, 643–657.
Dimitrov, K. M., Afonso, C. L., Yu, Q., & Miller, P.  J.  (2017).  Newcastle  disease  vaccines-A solved  problem  or  a  continuous  challenge? Veterinary Microbiology , 206, 126–136.
Dortmans,  J.  C.,  Koch,  G.,  Rottier,  P.  J.,  &
Peeters,  B.  P.  (2011).  Virulence  of Newcastle  disease  virus:  what  is  known  so far? Veterinary Research , 42(1), 122.
Elfil,  M.,  &  Negida,  A.  (2017).  Sampling methods in Clinical Research; an Educational  Review. Emergency  (Tehran) , 5(1), e52.
Ganar,  K.,  Das,  M.,  Sinha,  S.,  &  Kumar,  S. (2014).  Newcastle  disease  virus:  current status and our understanding. Virus Research , 184, 71–81.
Getabalew,  M.,  Alemneh,  T.,  Akeberegn,  D., Getahun,  D.,  &  Zewdie,  D.  (2019). Epidemiology,  Diagnosis  &  Prevention  of
Newcastle  Disease  in  Poultry. American Journal of Biomedical Science and Research , 3(1), 50–59.
Haile, B., Fentie, T., & Kassa, T. (2020). The role of  live  chicken  markets  as  a  source  of replication  and  dissemination  of  Newcastle disease  virus  in  chickens,  northwest Ethiopia. Poultry  Science ,  99(11),  5415– 5421.
Jones,  J.  C.,  Sonnberg,  S.,  Webby,  R.  J.,  & Webster,  R.  G.  (2015).  Influenza  A(H7N9) virus  transmission  between  finches  and poultry. Emerging  Infectious  Diseases , 21(4), 619–628.
Karamendin,  K.,  &  Kydyrmanov,  A.  (2021). Cormorants  as  a  Potentially  Important Reservoir and Carrier of Newcastle Disease
Virus  on  the  Asian  Continent. Frontiers  in Veterinary Science , 8, 648091.
Kaufmann,  L.,  Syedbasha,  M.,  Vogt,  D., Hollenstein, Y., Hartmann, J., Linnik, J. E.,
& Egli, A. (2017). An Optimized Hemagglutination  Inhibition  (HI)  Assay  to Quantify Influenza-specific Antibody Titers. Journal  of  Visualized  Experiments ,  (130), 55833.
McCluskey, B. J., Burgess, B., Glover, J., Kinde, H.,  &  Hietala,  S.  (2006).  Use  of  sentinel chickens  to  evaluate  the  effectiveness  of cleaning  and  disinfection  procedures  in noncommercial  poultry  operations  infected with exotic Newcastle disease virus. Journal of  Veterinary  Diagnostic  Investigation , 18(3), 296–299.
Miller,  P.  J.,  Afonso,  C.  L.,  El  Attrache,  J., Dorsey, K. M., Courtney, S. C., Guo, Z., & Kapczynski,  D.  R.  (2013).  Effects  of Newcastle  disease  virus  vaccine  antibodies on  the  shedding  and  transmission  of challenge  viruses. Developmental  and Comparative Immunology , 41(4), 505–513.
Padhi,  M.  K.  (2016).  Importance  of  Indigenous Breeds  of  Chicken  for  Rural  Economy  and Their  Improvements  for  Higher  Production Performance. Scientifica  (Cairo) ,  2016, 2604685.
Panus, A., Setiyaningsih, S., & Mayasari, N. L. P. I. (2015). Newcastle Disease Virus Infection Study  on  Duck  and  Chicken  in  Subang District. Jurnal  Ilmu  Ternak  dan  Veteriner , 20(2), 134–147.
Rehman, Z. U., Ren, S., Yang, B., Yang, X., Butt, S. L., Afzal, A., Malik, M. I., Sun, Y., Yu, S., Meng,  C.,  &  Ding,  C.  (2020).  Newcastle disease virus induces testicular damage and disrupts steroidogenesis in specific pathogen free  roosters. Veterinary  Research ,  51(1),
84.
Sahoo, N., Bhuyan, K., Panda, B., Behura, N. C., Biswal,  S.,  Samal,  L.,  Chaudhary,  D.,
Bansal, N., Singh, R., Joshi, V. G., Jindal, N., Mahajan, N. K., Maan, S., Ravishankar, C., Rajasekhar, R., Radzio-Basu, J., Herzog, C. M., Kapur, V., Mor, S. K., & Goyal, S. M.
(2022). Prevalence of Newcastle disease and associated risk factors in domestic chickens in  the  Indian  state  of  Odisha. PLoS  One , 17(2), e0264028.
Wasti, S., Sah, N., & Mishra, B. (2020). Impact of  Heat  Stress  on  Poultry  Health  and
Performances,  and  Potential  Mitigation Strategies. Animals , 10, 1266.
Wibawa,  H.,  Henning,  J.,  Waluyati,  D.  E.,
Usman,  T.  B.,  Lowther,  S.,  Bingham,  J., Junaidi, A., & Meers, J. (2012). Comparison of serological assays for detecting antibodies in  ducks  exposed  to  H5  subtype  avian influenza  virus. BMC  Veterinary  Research , 8, 117 .
***