## Fermentasi Kelapa Parut Bebas Protein dengan Aspergillus niger untuk Menghasilkan Lipase
[Fermentation of Protein-Free Grated Coconut with Aspergillus niger to Produce of Lipase]
Rifka Aulia 1* , Syaiful Bahri 1 , Meryany Ananda 2
1) Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Tadulako, Jl. Soekarno Hatta Km.9, Kampus Bumi Tadulako Tondo Palu
2) Jurusan Biologi, Fakultas MIPA, Universitas Tadulako, Jl. Soekarno Hatta Km.9, Kampus Bumi Tadulako Tondo Palu
* ) Coresponding author: rifka_aulia@ymail.com
ABSTRACT. The  research  about  the  fermentation  of  protein-free  grated  coconut  with Aspergillus  niger to  produce  of  crude lipase enzyme has been carried out. This study aims to determine the effect of water content on fermentation medium and the incubation time which results lipase enzyme extract with the highest activity. This study used a Completely Randomized Design (CRD) consisting of 2 factors, i.e. variations of water content in medium of 40%, 50%, 60%, and 70% and incubation times of 48,  96,  144,  and  192  hours.  The  parameters  observed  were  lipase  enzyme  activity  produced  in  each  treatment.  The  results showed  that  the  highest  medium  water  content  was  70%  with  the  lipase  enzyme  activity  4.33  µmol/mL.minute  and  the  best incubation time was 96 hours with the lipase enzyme activity of 0.83 µmol/mL.minute.
Keywords : Lipase enzyme, protein-free grated coconut , Aspergillus niger
ABSTRAK. Telah  dilakukan  penelitian  tentang  fermentasi  kelapa  parut  bebas  protein  dengan Aspergillus  niger untuk menghasilkan  ekstrak  kasar  enzim  lipase.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  pengaruh  kadar  air  medium  fermentasi dan waktu inkubasi yang menghasilkan ekstrak enzim lipase dengan aktivitas tertinggi. Penelitian ini meggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) yang terdiri dari 2 faktor, yaitu variasi kadar air medium 40%, 50%, 60%, dan 70% dan waktu inkubasi 48, 96,  144  dan  192  jam.  Parameter  yang  diamati  adalah  aktivitas  enzim  lipase  yang  dihasilkan  pada  setiap  perlakuan.  Hasil penelitian menunjukkan  bahwa  kadar  air medium tertinggi  70%  dengan  aktivitas  enzim  lipase  4,33 µmol/mL.menit  dan  waktu inkubasi tertinggi 96 jam dengan aktivitas enzim lipase 0,83 µmol/mL.menit.
Kata Kunci : Enzim lipase, kelapa parut bebas protein , Aspergillus niger
Riwayat artikel: Diterima 2 Juli 2019, Disetujui 12 April 2020 Cara sitasi: Aulia,  R.,  Bahri,  S.,  Ananda,  M.  (2020).  Fermentasi  Kelapa  Parut  Bebas  Protein  dengan Aspergillus  niger untuk Menghasilkan Lipase. KOVALEN: Jurnal Riset Kimia , 6(1): 45-52. DOI: https://doi.org/10.22487/kovalen.2020.v6.i1.13052

## LATAR BELAKANG
Kelapa  merupakan  salah  satu  jenis tumbuhan  yang  cukup  tinggi  kadar  lipidnya, sehingga  banyak  dimanfaatkan  untuk  produksi minyak.  Menurut  Prihatini  (2008),  kandungan lemak kelapa tergantung pada umur kelapanya.  Semakin  tua  kelapa,  kandungan
lemaknya  semakin  tinggi.  Produk  dengan  nilai ekonomis  tinggi  yang  digunakan  diberbagai proses  industri  pangan  maupun  nonpangan dapat  dihasilkan  melalui  proses  reaksi  antara enzim dengan molekul substrat yang ditemukan  pada  hewan,  tumbuhan,  dan mikroorganisme.
Tingginya  kandungan  lipid  pada  buah kelapa,  sehingga  dapat  pula  dimanfaatkan untuk  menghasilkan  enzim  lipase.  Substrat yang  umum  digunakan  untuk  memproduksi enzim lipase adalah substrat yang mengandung  lemak,  seperti  santan  kelapa (Mappiratu,  1997),  bungkil  inti  sawit  (Pasaribu et  al. ,  1998),  dan  kelapa  parut  (Indah et  al. , 2017).  Enzim  lipase  dapat  diproduksi  melalui reaksi-reaksi  esterifikasi,  alkoholisis,  asidolisis dan  aminolisis  (Gandhi,  1997)  serta  hidrolisis triasilgliserol  (TAG)  menghasilkan  diasilgliserol (DAG) dan asam lemak bebas (Putranto et al. , 2006).  Enzim  lipase  dapat  dihasilkan  dengan cara fermentasi menggunakan kapang Aspergillus  niger (Prabaningtyas et  al .,  2018).
Jenis  kapang  ini  selain  dapat  menghasilkan enzim  lipase,  juga  dapat  menghasilkan  enzim lainnya,  seperti  selulase,  protease,  xilanase, dan mananase.
Produksi  enzim  lipase  menggunakan Aspergillus  niger penting  karena  kapang Aspergillus  niger merupakan  mikroorganisme yang  mampu  menghasilkan  enzim  lipase dengan  aktivitas  tinggi  dan mudah  didapatkan. Produksi enzim lipase sangat dipengaruhi oleh pH,  suhu,  kadar  air,  jenis  substrat  dan  waktu fermentasi.  Fermentasi  kelapa  parut  dari Aspergillus  niger untuk  menghasilkan  lipase dipengaruhi oleh komponen  kimia yang terdapat dalam substrat. Untuk mengefektifkan produksi  lipase,  komponen  yang  terdapat dalam  substrat  dapat  dikurangi  dengan  cara penambahan  larutan  NaOH  (deproteinasi) (Purkan et  al., 2016)  untuk  membebaskan protein  sehingga  jumlah  enzim  lipase  yang dihasilkan  meningkat  dan  diperoleh  enzim dengan aktivitas yang lebih tinggi.
Indah et  al. (2017)  telah  memproduksi enzim  lipase  menggunakan Aspergillus  niger
isolat  kapang  kopra  memanfaatkan  medium kelapa parut dan menghasilkan aktivitas enzim lipase  tertinggi  1,70  µmol/ml.menit  selama  48 jam  fermentasi  pada  pH  7.  August  (2000) dalam  produksi  lipase  menggunakan  substrat minyak  kelapa,  memperoleh  aktivitas  enzim lipase  5,042  µmol/ml.menit  selama  6  hari fermentasi  pada  pH  7.  Perbedaan    waktu fermentasi disebabkan oleh perbedaan kemampuan
mikroorganisme dalam mendegradasi komponen-komponen  nutrisi yang terdapat dalam substrat (August, 2000).
Dalam  proses  fermentasi  menggunakan fasa padat, kadar air pada medium berpengaruh  terhadap  jumlah  enzim  lipase yang dihasilkan. Air berfungsi dalam metabolisme  organisme,  yaitu  sebagai  sumber oksigen    dan  hidrogen  dalam  biosintesis komponen sel dan sebagai transportasi nutrisi. Jumlah  air  yang  dibutuhkan  dalam  fermentasi menggunakan fasa padat berbeda-beda tergantung  jenis  organisme  dan  substrat  yang digunakan.  Menurut  Zaks  &  Klibanov  (1984), jumlah  air  minimum  yang  dibutuhkan  oleh enzim  untuk  dapat  melakukan  aktivitasnya adalah  sekitar  50%  dari  jumlah  air  yang dibutuhkan untuk membentuk selapis (monolayer) molekul air yang menutup permukaan protein. Faktor kadar air dan waktu fermentasi  menjadi  variabel  utama  pada produksi  enzim  lipase  dari Aspergillus  niger menggunakan  kelapa  parut  bebas  protein dengan  tujuan  menghasilkan  aktivitas  lipase yang tinggi.

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan Peralatan
Bahan  utama  yang  digunakan,  yaitu kelapa parut, minyak kelapa merk Sunco , kultur murni Aspergillus  niger ,  kentang,  gula,  media
PDA,  PDB,  indikator  PP,  buffer  fosfat  (pH  6 dan 7), selenium, H 2 SO 4 (pa), urea, (NH 4 ) 2 SO 4 , KH 2 PO 4 ,  MgSO 4 .7H 2 O,  CaCl.H 2 O,  Na 2 CO 3 , CuSO 4 .5H 2 O,  aseton,  etanol,  CaCl 2 ,  NaOH  , dan akuades.
Peralatan  yang  digunakan,  yaitu  alat parut,  oven,  desikator,  neraca  analitik Ohaus Corp.  Pine  Brook ,  soxhlet,  Labu  kjehdahl, kompor destruksi Gerhardt , ayakan, mikropipet, botol  semprot, termoshaker Gerhardt ,  pipet tetes,  termometer,  autoklaf Hirayama ,  jarum ose, klem dan statif, buret, serta bunsen.

## Prosedur Penelitian

## Pembuatan kelapa parut bebas protein
Kelapa  parut  yang  telah  dikeringkan ditambahkan larutan NaOH 5% pada perbandingan  1:10  (b/v).  Kemudian  disaring dan  dicuci  menggunakan  akuades  sampai  pH netral.  Lalu  dikeringkan  dengan  oven  pada suhu  105°C  selama  10  jam  (Purkan et  al. , 2016).  Residu  kelapa  parut  yang  diperoleh diukur  kadar  protein  (metode  Kjehdahl)  dan kadar  lemak  (metode  sokletasi)  sebelum  dan sesudah dibebaskan protein.

## Perbanyakan Aspergillus murni pada media PDA
Alat-alat  yang  akan  digunakan  dalam perbanyakan  ini  disterilkan  terlebih  dulu, dengan cara membungkus cawan petri menggunakan  kertas  kemudian  disterilisasi selama  30  menit  dengan  suhu  121 o C.  Setelah disterilkan cawan petri diisi dengan media PDA ( Potato  Dextrose  Agar )  sebanyak  1,17  ml. Setelah  itu  cawan  petri  dibiarkan  agar medianya  menjadi  padat  selama  3-4  jam. Setelah media menjadi padat, dilakukan proses inokulasi dengan menggunakan metode gores. Teknik  dalam  inokulasi  yaitu  mengambil Aspergillus  niger murni  dengan  jarum  ose  dan dipindahkan  ke  dalam  media  padat  (PDA).
secara  zig-zag  dari  atas  ke  bawah.  Kemudian diinkubasi selama 3-7 hari.
Perbanyakan Aspergillus murni pada media produksi PDB
Kentang dikupas kemudian  dipotong dadu,  lalu  dimasukkan  di  dalam  air  dan dipanaskan  hingga  lunak.  Setelah itu disaring, kemudian diambil filtratnya 100 mL ditambahkan  gula  2  g  ke  dalam  erlenmeyer 250 mL. Kemudian suspensi jamur ditambahkan  secara  steril,  kemudian  dishaker selama 3-7 hari.
Penentuan  jumlah  sel  Aspergillus  niger menggunakan hemasitometer
Koloni Aspergillus  niger diencer  10x, kemudian dipipet menggunakan mikropipet 1µL pada  parit  kaca  pada  alat  hitung.  Diletakkan alat  hitung  pada  meja  benda  dan  kemudian diamati menggunakan mikroskop dengan perbesaran  lensa  objektif  lensa  40x.  Dihitung jumlah spora secara kasar dengan menghitung 5 kotak sedang dan dirata-ratakan.

## Produksi enzim lipase
Sejumlah  20  g  kelapa  parut  kering  bebas protein  dimasukkan  dalam  erlenmeyer  500  mL kemudian ditambahkan buffer posfat pH 7 yang berisi  larutan  nutrisi  (urea  0,75  g/L,  (NH 4 ) 2 SO 4 2,5  g/L,  KH 2 PO 4 (0,75  g/L),  MgSO 4 .7H 2 O
(0,125 g/L), dan CaCl.H 2 O (0,125 g/L)) dengan variasi  rasio  air  medium  40%,  50%,  60%,  dan 70% yang mengandung 1 mL kultur Aspergillus niger .  Campuran  diaduk  hingga  homogen  dan diinkubasi  pada  suhu  ruang  pada  waktu inkubasi  48, 96, 144 dan 192 jam. Lipase yang ada  dalam  medium  diekstrak  menggunakan 250  mL  larutan  CaCl 2 0,01  M.  Campuran dikocok selama 1 jam diatas shaker.
Selanjutnya  disaring  dan  filtratnya  ditampung sebagai  larutan  enzim  lipase  (Indah et  al. ,
2017) , kemudian  ditentukan  aktivitas  enzim lipasenya.

## Penentuan aktivitas enzim
Pada penentuan aktivitas enzim, digunakan  minyak  kelapa  sebanyak  2  g, dimasukkan  kedalam  erlenmeyer  bertutup  500 mL, kemudian ditambahkan 4 mL larutan buffer 0,01 M (pH 6,0), 1 mL larutan CaCl 1 M dan 1 mL filtrat (larutan enzim). Campuran selanjutnya diinkubasi pada inkubator bergoyang  agitasi  300  rpm  pada  suhu  ruang selama 1 jam. Setelah  waktu inkubasi tercapai segera  substrat  enzim  diinaktifkan  dengan penambahan campuran aseton-etanol (1:1 v/v) sebanyak  10  mL.  Lalu  campuran  dibuat homogen  dengan  pengocokan,  kemudian ditambahkan  3  tetes  indikator  pp  dan  dititrasi dengan  larutan  NaOH  0,05  M  sampai campuran  berwarna  merah  jambu.  Untuk blanko  dilakukan  dengan  cara  yang  sama tanpa  sampel.  Kemudian  aktivitas  lipase dihitung  menggunakan  Persamaan  1  (Indah et al ., 2017) :
Aktivitas Lipase = ( - ) t (1)
Keterangan : Aktivitas lipase  = µmol/mL.menit A = volume NaOH sampel (mL) B = volume  NaOH blanko (mL) N NaOH = 0,05 N 1000 = nilai konversi dari mmol ke µmol V = volume enzim (mL) t = waktu inkubasi (menit)

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Kelapa Parut Bebas Protein
Kelapa parut yang sudah kering kemudian di  bebaskan  protein  (deproteinasi)  dengan penambahan  NaOH  5%.  Deproteinasi  adalah proses memisahkan atau menghilangkan kandungan  protein  terlarut  yang  terdapat  pada
suatu  bahan.  Pada  prosesnya,  protein  akan bereaksi  dengan  ion  Na + dari  NaOH  menjadi Na proteinat yang larut (Ashari, 2018).
Hasil  analisis  kadar  protein  sebelum dilakukan  penambahan  NaOH  5%    adalah 6,94%  dan  setelah  dibebaskan  proteinnya 1,82%.  Hasil  yang  diperoleh  ini  sudah  dapat dikatakan  bebas  protein  karena  pada  bahan masih terdapat senyawa kimia yang mengandung  N  seperti  purina,  pirimidina, vitamin-vitamin,  asam  amino  besar,  dan kreatina  yang  ikut  teranalisis  dan  terukur sebagai  nitrogen  (Winarno,  2004).  Senyawa- senyawa  tersebut  tidak  dapat  larut  dalam NaOH  sehingga  ketika  dilakukan  uji  Kjeldahl tetap terbaca nitrogennya.
Hasil  analisis  kadar  lemak  kelapa  parut awal  menggunakan  metode  soklet  yang diperoleh  sebesar  19,96%,  setelah  dilakukan pembebasan  protein  kadar  lemaknya  naik menjadi  30,68%.  Peningkatan  kadar  lemak pada  kelapa  parut  diakibatkan  oleh  adanya sebagian komponen senyawa yang ikut terlarut di  dalam  NaOH  selain  senyawa  protein sehingga  komponen  senyawa  pada  kelapa parut  berkurang  dan  menyebabkan  kadar lemak  menjadi  naik.  Menurut  Prihatini  (2008), kandungan  lemak  pada  kelapa  berdasarkan perbedaan  umur  buah  kelapa  adalah  0,9% (muda),  15%  (setengah  tua)  dan  34,7%  (tua). Kadar  lemak  yang  diperoleh  lebih  kecil dibandingkan  dengan  literatur.  Kemungkinan kelapa  yang  digunakan  adalah  campuran antara kelapa setengah tua dan kelapa tua.

## Hasil Fermentasi
Pada  penelitian  ini,  produksi  enzim menggunakan  medium  kelapa  karena  kelapa memiliki  lemak  yang  tinggi. Aspergillus  niger digunakan karena mampu menghasilkan enzim lipase  dengan  baik.  Falony et  al .  (2006)
menyatakan  produksi  enzim  lipase  dengan menggunakan medium lemak sebagai substrat menghasilkan  enzim  lipase  yang  lebih  spesifik dibandingkan dengan produksi tanpa menggunakan medium lemak.
Jumlah enzim lipase yang dihasilkan pada setiap proses fermentasi akan berbeda hasilnya,  tergantung  pada  kandungan  lemak yang  terdapat  pada  media  yang  berfungsi sebagai substrat.
Jumlah Spora Aspergillus niger
Kultur Aspergillus  niger diremajakan  pada media  padat  PDA  (media  selektif  untuk kapang).  Hasil  inkubasi  selama  3-7  hari  pada suhu  37 o C,  terbentuk  miselium  berwarna  hijau kehitaman (Gambar 1). Pertumbahan miselium pada  hari  ke-3  belum  maksimal  dan  mencapai maksimal pada hari ke-7 yang ditandai dengan banyaknya  isolat Aspergillus  niger yang tumbuh memenuhi cawan petri.
Gambar 1 . Biakan Aspergillus niger pada media PDA hari ke-3 (a) dan ke-7 (b)
Miselium yang terbentuk kemudian
dipindahkan ke media PDB untuk menghasilkan  sel-sel Aspergillus  niger yang lebih aktif. Proses pengaktifan sel-sel dilakukan dengan  cara  aerasi  untuk  menyuplai  oksigen secara  terus  menerus.  Inkubasi  dilakukan
selama  3-7  hari.  Spora Aspergillus  niger yang terbentuk  sempurna  pada  hari  ke-7  dihitung menggunakan alat Hemasitometer (Gambar 2). Hasil  perhitungan  spora,  diperoleh  jumlah spora 9,25 x 10 9 sel /mL.
Gambar 2. Biakan Aspergillus niger pada media PDB hari ke-3 (a) dan ke-7 (b)
Aktivitas Lipase pada Variasi Waktu Inkubasi
Aktivitas enzim lipase dari kapang Aspergillus  niger pada  proses  fermentasi
mencapai  optimum  pada  waktu  inkubasi  96 jam, yaitu 0,83 µmol/mL.menit (Gambar 3).
a b a b
Gambar 3. Aktivitas enzim lipase pada variasi waktu inkubasi
Pada  waktu  inkubasi  48-96  jam,  jumlah nutrisi  yang  terdapat  pada  kelapa  parut  bebas protein mencukupi untuk pertumbuhan Aspergillus  niger sehingga  jumlah  ekstrak enzim yang dihasilkan meningkat dan mengakibatkan  aktivitas  enzim  lipase  semakin tinggi. Pada waktu inkubasi 96-192 jam, jumlah nutrisi sudah mulai berkurang dan kemungkinan  sebagian  dari  enzim  mengalami kerusakan  sehingga  jumlah  enzim yang terdapat dalam ekstrak semakin berkurang dan mengakibatkan  aktivitas  enzim  lipase  juga menurun.
Indah et  al. (2017)  memperoleh  waktu inkubasi  terbaik  48  jam  pada  produksi  enzim lipase  menggunakan  medium  kelapa  parut, sedangkan  Maryanty et  al .  (2010)  memperoleh waktu  inkubasi  72  jam  dengan  aktivitas  crude enzim  lipase  42,22  U/mL  pada  konsentrasi Aspergillus  niger 50%.  Utami et  al. ,  2017) memperoleh  waktu  terbaik  120  jam  dengan aktivitas  38,67  U/g  dalam  produksi  ekstrak kering ekstraseluler lipase dari Aspergillus niger dengan  fase  padat  substrat  dedak  padi. Perbedaan  hasil  aktivitas  enzim  lipase  yang dihasilkan  pada  variasi  waktu  inkubasi  dan kadar air medium dikarenakan adanya perbedaan  perlakuan  dan  lingkungan  yang
dapat mempengaruhi pertumbuhan
mikroorganisme. Hasil uji statistik (oneway ANOVA)
menghasilkan  nilai  signifikan  0,178  atau  lebih bes r  d ri  nil i  α  0,05.  Hasil  yang  diperoleh menunjukkan bahwa waktu inkubasi berpengaruh  tidak  nyata  terhadap  aktivitas enzim lipase.

## Aktivitas Lipase pada Variasi Kadar Air
Produksi enzim lipase dari kapang Aspergillus  niger menggunakan  fermentasi padat dipengaruhi oleh beberapa faktor, antara lain  seperti  kadar  air  medium,  pH  dan  waktu inkubasi.  Kadar  air  pada  medium  pada  saat inkubasi  dapat  diatur  dengan  menggunakan larutan  buffer.  Buffer  yang  digunakan  adalah buffer  fosfat.  Kapang  umumnya  lebih  toleran terhadap  suasana  asam  sampai  netral,  yaitu pada  pH    3-7. Aspergillus  niger mempunyai kisaran pH  untuk tumbuh cukup luas  yaitu  2,8- 8,8.  Menurut  Indah et  al. (2017),  pH  terbaik untuk produksi enzim lipase adalah pH 7. Pada penelitian ini digunakan buffer fosfat pH 7.
Hasil  analisis  yang  diperoleh  adalah aktivitas  enzim  lipase  tertinggi  diperoleh  pada kadar  air  70%  dengan  aktivitas  enzim  lipase 4,33 µmol/mL.menit (Gambar 4).
Gambar 4. Aktivitas enzim lipase pada variasi kadar air medium
Penggunaan kadar air lebih dari 70% tidak digunakan, karena dari beberapa hasil penelitian  untuk  beberapa  jenis  mikroba,
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 0 48 96 144 192 A k tiv ita s L ip a s e
(µmo l/ m L. m e ni t ) Waktu Inkubasi (jam) 0 1 2 3 4 5 30% 40% 50% 60%
70% 80% A k tiv ita s L ip a s e (µmo l/ m L. m e ni t )
Kadar Air
kondisi  optimum  hanya  terjadi  pada  kisaran kadar air 40%-70% (Idiawati et al ., 2014). Hasil yang  diperoleh  berbeda  dengan  hasil  yang diperoleh Indah et al. (2017), yaitu 45% dengan aktivitas  enzim  lipase  tertinggi  yaitu  1,70 µmol/mL.menit pada produksi enzim lipase dari Aspergillus niger menggunakan medium kelapa parut.  Falony et  al. (2006)  memperoleh  kadar air  optimum  65%  dengan  aktivitas  enzim  4,8 IU/mL  untuk  produksi  lipase  ekstraselular  dari Aspergillus  niger menggunakan  kultur  mineral dan dedak gandum.
Hasil analisis statistik dengan taraf kepercayaan 95% (sig = 0,05) didapatakan nilai signifikan 0,000. Hasil yang diperoleh menunjukkan  kadar  air  medium  memberi pengaruh nyata terhadap aktivitas enzim lipase. Dilanjutkan pada uji Duncan untuk menentukan kadar  air  medium  terbaik.  Kadar  air  medium 70%  memiliki  nilai  aktivitas  tertinggi  dan berbeda  nyata  dengan  perlakuan  kadar  air lainnya.

## KESIMPULAN
Waktu  inkubasi  96  jam  mengahasilkan aktivitas  enzim  lipase  tertinggi,  yaitu  0,83 µmol/mL.menit.  Kadar  air  medium  fermentasi terpilih,  yaitu  70%  dengan  aktivitas  enzim lipase  4,33  µmol/mL.menit.  Kadar  air  sangat berpengaruh  terhadap  aktivitas  enzim  lipase dari Aspergillus niger .

## DAFTAR PUSTAKA
Ashari,  N.  (2018).  Produksi  Mananase  Dari Substrat Ampas Kelapa Bebas Lemak dan Protein  Dari Aspergillus  niger .  [ Skripsi ]. Jurusan Kimia Universitas Tadulako, Palu.
August,  E.  (2000).  Kajian  Lipase  Amobil  dari Aspergillus  niger pada  Pembuatan    MAG Yang  Bersifat  Antibakteri  dari  Minyak
Kelapa . [ Skripsi ].  Institut  Pertanian  Bogor, Bogor.
Falony, G.,  Armas, J. C., Mendoza, J. C. D., & Hernández,  J.  L.  M.  (2006).  Production  of Extracellular  Lipase  from Aspergillus  niger
by Solid-State Fermentation. Food
Technol. Biotechnol. , 44 (2): 235--240.
Gandhi,  N.  N.  (1997).  Applications  of  Lipase.
Jour nal  of  the  American  Oil  Chemists’
Society , 74 (6): 621 –634.
https://doi.org/10.1007/s11746-997-0194-x
Indah, I., Mappiratu, M., & Musafira, M. (2017). Produksi  Enzim  Lipase  dari Aspergillus niger Isolat Kapang Kopra dengan Menggunakan  Medium  Kelapa  Parut. KOVALEN , 3 (3): 269 –276.
https://doi.org/10.22487/j24775398.2017.v 3.i3.9335
Mappiratu.  (1997).  Isolasi  Mikroba  Penghasil Enzim Protease, Amilase dan Lipase Serta Pengujian  Potensi  Produksinya . [ Tesis ]. Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Pasaribu,  S.,  Hamid,  H.,  &  Sinurat,  A.  (1998). Fermetasi  Bungkil  Inti  Sawit  Secara Substrat  Padat  dengan  Menggunakan Aspergillus  niger .  Balai  Penelitian  Ternak,
Bogor.
Prabaningtyas, R. K., Putri, D. N., Utami, T. S.,
&  Hermansyah,  H.  (2018).  Production  of Immobilized  Extracellular  Lipase  from
Aspergillus niger by Solid State
Fermentation  Method  Using  Palm  Kernel Cake, Soybean Meal, and Coir Pith as The Substrate. Energy  Procedia , 153 :  242 –
247. https://doi.org/10.1016/j.egypro.2018.10.010 Prihatini,  R.  (2008).  Analisa  Kecukupan  Panas Pada Proses Pasteurisasi Santan .
[ Skripsi ]. Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Purkan,  P.,  Purnama,  H.,  &  Sumarsih,  S. (2016).  Production  of  Cellulase  Enzyme from Aspergilus niger using Rice Husk and Bagasse as Inducer. Jurnal ILMU DASAR ,
16 (2): 95. https://doi.org/10.19184/jid.v16i2.2768
Putranto,  R.  A.,  Santoso,  D.,  Tri-Panji,
Suharyanto, & Budiani, A. (2006). Karakterisasi  Gen  Penyandi  Lipase  dari
Kapang Rhizopus  oryzae dan Absidia corymbifera. E-Journal Menara Perkebunan , 74 (1). https://doi.org/10.22302/iribb.jur.mp.v74i1. 118
Utami,  T.  S.,  Hariyani,  I.,  Alamsyah,  G.,  & Hermansyah, H. (2017). Production of  Dry
Extract Extracellular Lipase from Aspergillus niger by Solid State Fermentation Method
to
Catalyze
Biodiesel  Synthesis.
Energy  Procedia ,
136 :
41 –46.
https://doi.org/10.1016/j.egypro.2017.10.2 75
Winarno,  F.  (2004). Kimia  Pangan  dan  Gizi . Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.
Zaks,  A.,  &  Klibanov,  A.  (1984).  Enzymatic Catalysis in Organic Media at 100 Degrees
C. Science , 224 (4654): 1249 –1251.
https://doi.org/10.1126/science.6729453