## UJI AKTIVITAS FRAKSI SELEDRI (Apium graveolens L) TERHADAP JAMUR Candida albicans SECARA IN VITRO
Citra Purwanti Prodi DIII Kebidanan STIKes Muhammdiyah Palembang Email : citra.purwanti84@yahoo.com

## ABSTRAK
Candida  sp .  adalah  flora  normal  yang  terdapat  pada  membran  mukosa,  saluran pencernaan,  vagina,  uretra,  kulit,  dan  kuku.  Kandidiasis  merupakan  infeksi  yang disebabkan  oleh jamur Candida albicans . Salah satu bahan alam  yang  dapat digunakan untuk pengobatan tradisional adalah Seledri ( Apium graveolens L).
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  aktivitas  fraksi  seledri  ( Apium  graveolens L) terhadap jamur candida albicans.
Penelitian  ini  termasuk  penelitian  eksperimental  laboratoris in  vitro .  Sampel  penelitian adalah  Jamur Candida  albicans .  Sampel  fraksi  dibagi  menjdi  6  konsentrasi  yaitu  10%, 5%,  2,5%,  1,25%,  0,625%,  0,3125%  dengan  pembanding  ketokonazol.  Analisa  data menggunakan  uji  normalitas  dengan Kolmogorov  smirnov, Anova dan posthoc, semua analisa menggunakan program statistik SPSS versi 16.
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  fraksi  yang  aktif  adalah  n-heksan.  Fraksi  n- heksan  memiliki  nilai  KHM  1,25%  terhadap  jamur Candida  albicans. Golongan  senyawa aktif  yang  terkandung  adalah  terpenoid. . Berdasarkan  uji  statistik oneway  anova didapatkan  dari  masing-masing fraksi p  value = 0,000  dengan  nilai α = 0,05 (p<α) yang artinya  ada  perbedaan  yang  berpengaruh  terhadap  rerata  diameter  hambat  dari  tiap konsentrasi.  Berdasarkan  hasil  uji post  hoc ketokonazol  masih  lebih  efektif  bila dibandingkan dengan fraksi n-heksan terhadap Candida albicans dengan p value < 0,05. Dapat  disimpulkan  bahwa  Fraksi  n-heksan  lebih  rendah  aktivitas  antijamurnya  jika dibandingkan dengan ketokonazol.
Kata  Kunci:  Candida  Albicans,  Seledri  (Apium  graveolens  L),  Penelitian Eksperimen, in vitro

## ABSTRACT
Candida  sp.  is  normal  flora  contained  in  the  mucous  membranes,  gastrointestinal  tract, vagina,  urethra,  skin,  and  nails.  Candidiasis  is  an  infection  caused  by  Candida  albicans fungus. One  of the natural ingredients that can  be  used  as traditional  medicine is Celery (Apium graveolens L).
This Study aims  to determine the activity  of celery  fraction  (Apium graveolens L) against candida albicans.
This research  is a laboratory  experimental  research in vitro. The samples were Candida albicans  fungus.  Sample  fractions  were  divided  into  6  concentration  of  10%,  5%,  2.5%, 1.25%,  0.625%, 0.3125%  with comparison  of ketoconazole.  Data analysis  used Smirnov kolmogorof for normality test, ANOVA and posthoc, all analyzes used the SPSS statistical program version 16.
The results of this study showed that the active fraction  was n-hexane. n-hexane fraction has  MIC  value  of  1.25%  against  Candida  albicans  fungus.  Class  of  active  compounds contained  terpenoids.  Based  on  oneway  ANOVA  statistical  test,  it  showed  from  each fraction  where p  value  =  0.000  with  value  of  α  =  0.05  (p  <  α),  which  meant  there  was significant  differences  which  effect  the  mean  inhibitory  diameter  of  each  concentration. Based on the results of the post hoc test, ketoconazole was more effective than n-hexane fraction against Candida albicans with p value < 0.05.
It  can  be  concluded  that  n-hexane  fraction  has  lower  antifungal  activity  when  it  is compared with ketoconazole.
Keywords: Candida Albicans, Celery (Apium graveolens L),  experimental research, in vitro

## PENDAHULUAN
Kandidiasis  merupakan  infeksi yang  disebabkan  oleh  jamur Candida albicans yang  dapat  menginfeksi  mulut, vagina,  kulit,  perut,  dan  saluran  kemih. Sekitar  75%  wanita  akan  mengalami Candidiasis vaginal selama hidup mereka,  dan  90%  orang-orang  dengan
HIV/AIDS mengalami infeksi kandida.Terjadinya Infeksi
Candida albicans pada  vagina,  sekitar  5-10% terjadi pada wanita  yang tidak  hamil dan pada  kehamilan  akan  meningkat  sekitar 40% 1 .
Candida  sp .  adalah  flora  normal yang  terdapat  pada  membran  mukosa, saluran pencernaan, vagina, uretra, kulit, dan kuku. Kandidiasis vulvovaginal merupakan infeksi yang angka kejadiannya  tinggi  di  seluruh  dunia, terutama disebabkan oleh genus Candida terutama Candida albicans (80- 90%). Candida albicans sebagai penyebab kedua terbanyak setelah bacterial vaginosis merupakan organisme dimorfik, yaitu bisa ditemukan dalam  dua  fase  fenotip  yang  berbeda  di dalam tubuh manusia 5 .
Pemakaian  obat  antifungi  dapat menimbulkan  efek  yang  merugikan 16 .
Dalam dunia kesehatan dewasa ini mulai berlaku  slogan  “kembali  ke  alam”  ( back
to  nature )  sebagai  pengobatan  alternatif yang  lebih  aman.  Salah  satu  tanaman yang  dapat  digunakan  sebagai  obat herbal  adalah  seledri  ( Apium  graveolens L). Seledri merupakan tumbuhan serbaguna,  terutama  sebagai  sayuran dan obat-obatan herbal. Sebagai sayuran,  daun,  tangkai  daun  dan  umbi seledri bisa digunakan sebagai campuran  sup  dan  juga  sebagai  lalapan 8 .
Selain manfaat yang telah disebutkan  di  atas,  ada  salah  satu  nilai medis  seledri  yang  belum  diketahui  oleh masyarakat  secara  luas,  yaitu  sebagai antifungal 12 .
Berdasarkan  uraian  tersebut  di atas  maka  perlu  dilakukan  pemisahan bahan bioaktif antijamur Candida albicans dari  ekstrak  seledri serta  perlu diteliti lebih lanjut aktivitas bahan bioaktif dalam  berbagai  konsentrasi  terhadap pertumbuhan  jamur Candida  albicans . Bahan  bioaktif  ini  nantinya  diharapkan dapat  digunakan  sebagai  bahan  obat baru serta dapat dijadikan sebagai salah satu  obat  alternatif  untuk  mengobati berbagai macam penyakit yang berhubungan dengan infeksi jamur Candida albicans.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  adalah  penelitian eksperimental  secara in  vitro .  Subjek Penelitian ini menggunakan jamur
Candida  albicans diperoleh  dari  Balai Besar Laboratorium Kesehatan Palembang. Penelitian ini telah
dilaksanakan dari bulan Februari sampai dengan April 2014 bertempat di
Laboratorium Bersama Pascasarjana
Universitas Sriwijaya Palembang.
Proses Ekstraksi Simplisia yang
diperoleh sebanyak  150  gram  diekstraksi  dengan cara  direndam  dengan  menggunakan metanol  selama  2x24  jam.  Kemudian diuapkan dengan menggunakan penangas  air  atau  hair  dryer  sampai mengental seperti pasta sehingga diperoleh ekstrak metanol.
Proses Fraksinasi Proses fraksinasi dilakukan dengan  metode  FCC  (fraksi  cair-cair) yakni  ekstrak  aktif  dipartisi  dalam  labu pisah  dengan  menggunakan  pelarut- pelarut yang sesuai menjadi 3 fraksi yaitu n-heksan,  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi metanol.  Tahap  fraksinasi  dilakukan dengan  metode  FCC  (fraksi  cair-cair), dari ekstrak seledri yang diperoleh dalam tahap  ekstraksi  metanol  ditambahkan dengan  air  dengan  perbandingan  7:3 yaitu  sebanyak  200  ml  aquades  dan metanol  80  ml  metanol.  Selanjutnya
ditambahkan pelarut n-heksana sebanyak 1L secara bertahap, setiap kali dimasukan  sebanyak  250  ml  n-heksana (4x250 ml).
Fraksi  metanol  dan  n-heksan dipisahkan  dengan  corong  pemisah sehingga  diperoleh  fraksi  n-heksan  lalu diuapkan pada rotary evaporator sehingga  didapatkan  fraksi  berbentuk pasta.  Fraksi  metanol  air  dilanjutkan dengan  penambahan  pelarut  etil  asetat sebanyak 1L secara bertahap, setiap kali dimasukan  sebanyak  250  ml  etil  asetat (4x250 ml) kemudian dipisahkan  dengan corong  pemisah  sehingga  diperoleh fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  metanol setelah  diuapkan  pada  rotary  evapator dan  penangas  air.  Tahap  akhir  proses fraksinasi  diperoleh  tiga  fraksi  yaitu  n- heksan,  etil  asetat,  dan  metanol  dalam bentuk masing-masing pasta.
Ketiga macam fraksi yang diperoleh  diuji  dengan Candida  albicans untuk  menentukan  fraksi  yang  aktif. Pengujian dilakukan dengan menggunakan  metode  difusi  agar  untuk mengetahui ada tidaknya pengaruh fraksi seledri ( Apium graveolens L) menghambat pertumbuhan Candida albicans secara In  Vitro .  Kekuatan  fraksi aktif  seledri  ( Apium  graveolens L) menghambat pertumbuhan Candida albicans dapat  dilihat  dari  besarnya diameter zona  hambat yang terbentuk di sekitar  kertas  cakram  yang  telah  ditetesi
dengan  fraksi  seledri ( Apium  graveolens L).
Uji Aktivitas Antijamur Fraksi Uji  aktivitas  antijamur  dari  fraksi- fraksi  hasil  fraksinasi  dilakukan  untuk mengetahui  dalam  fraksi  mana  senyawa aktif  berada.  Konsentrasi  fraksi  yang diujikan ke Candida albicans adalah 10%
(100  mg/ml)  dengan  pelarut  DMSO ( dimetilsulfoksida ). Suspensi jamur dimasukkan  ke  dalam  cawan  petri sebanyak 0,1 ml, kemudian ditambahkan medium SDA ( Sabouraud Dextrose agar ) 10  ml  yang  belum  membeku,  dengan suhu sekitar 40 0 C. Selanjutnya dihomogenkan sampai membeku. Kertas cakram berukuran 6 mm diteteskan 20 µl dengan  menggunakan  mikropipet  dari masing –masing fraksi dan dibuat sebanyak  4  kali  ulangan,  kemudian diletakkan  di  atas  media  agar  dan  diberi label pada cawan petri, untuk menentukan jenisnya. Setelah itu diinkubasi selama 2 x 24 jam pada suhu 37 0 C. Pengujian aktivitas antijamur dinyatakan aktif apabila di sekitar cakram terdapat  zona  bening  yang  bebas pertumbuhan Candida  albicans. Fraksi aktif  dilanjutkan  untuk  dimurnikan  dan diuji konsentrasi hambat minimumnya.
Uji bioautografi dan penentuan golongan senyawa aktif antijamur
Uji  bioautografi  dilakukan  untuk mengetahui  aktivitas  antijamur  suatu
senyawa dengan menggunakan kromatografi    lapis  tipis.  Prosedur  uji bioautografi  adalah  sebagai  berikut: fraksi  aktif  dengan  konsentasi  1% ditotolkan  pada  plat  silica  gel  GF254, kemudian  dikembangkan  dengan  fase gerak untuk pemisahan senyawa- senyawa  yang  terdapat  dalam  fraksi, penotolan fraksi aktif dibuat rangkap dua pada kromatogram. Kromatogram pertama  diletakkan  dalam  cawan  yang berisi  biakan Candida  albicans ,  fraksi aktif pada kromatogram dibiarkan menempel  pada  medium  agar  selama  1 jam  supaya  bahan  bioaktif  menempel dan  berdifusi  ke  dalam  medium  agar, kemudian  diangkat  dengan  hati-hati. Cawan petri yang berisi biakan Candida tersebut  diinkubasi  selama  2  X  24  jam. Setelah medium diinkubasi diamati daerah bening yang menunjukkan hambatan  pertumbuhan Candida dan merupakan daerah senyawa aktif berada dan  dihitung  nilai  Rfnya 2 .  Kromatogram kedua  digunakan  untuk  mendeteksi senyawa kimianya dengan menyemprotkan penampak bercak larutan  H2SO4  pada  plat  silika  gel, kemudian  dipanaskan  sehingga  akan terlihat jelas senyawa kimia berdasarkan warna  yang  terbentuk  dengan  demikian dapat diketahui golongan senyawanya 7 .
Penentuan  nilai  konsentrasi  hambat minimum fraksi aktif
Penentuan nilai konsentrasi hambat  minimum  dilakukan  dengan metode difusi agar dengan menggunakan  kertas  cakram  ( paper disc )  berdiameter  6  mm.  Konsentrasi terkecil  yang  menghambat  pertumbuhan jamur merupakan nilai konsentrasi hambat  minimum  (KHM).  Prosedur  kerja penentuan KHM yaitu : Fraksi aktif dibuat dengan  konsentrasi  10%,  5%,  2,5%, 1,25%, 0,625%, 0,312%. Masing- masing dibuat  empat  kali  ulangan.  Pelarut  yang digunakan adalah dimetilsulfoksida (DMSO). Suspensi Candida dimasukkan ke  dalam  cawan  petri  sebanyak  0,1  ml, kemudian  ditambahkan  SDA  10  ml  yang belum membeku dan selanjutnya dihomogenkan untuk memastikan sel-sel terdistribusi merata dan dibiarkan membeku.  Di  atas  medium  yang  berisi jamur dimasukkan kertas cakram berdiameter  6  mm  dan  ditetesi  dengan larutan  isolat  masing-masing  dengan konsentrasi  tersebut    sebanyak  20  µl dengan menggunakan mikropipet.
Kemudian diinkubasi selama 2X24 jam di dalam inkubator  dengan suhu 37 0 C dan diukur  diameter  zona  hambat  yang terbentuk.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi Tanaman Seledri( Apium graveolens L)
Ekstraksi dilakukan secara maserasi  dengan  cara  tanaman  Seledri ( Apium  graveolens L)  seberat  3  kg
dikeringkan,  diperoleh  ekstrak  seledri kering  seberat  500  gram  kemudian diblender sampai halus sehingga didapat simplisia serbuk sebanyak 242 gram.
Salah  satu  metode  ekstraksi senyawa  organik  bahan  alam  yang umum digunakan adalah maserasi.
Maserasi merupakan proses perendaman  sampel  dengan  pelarut organik yang digunakan pada temperatur ruangan 6 . Proses ini sangat menguntungkan  dalam  isolasi  senyawa bahan alam karena dengan perendaman sampel tumbuhan akan terjadi pemecahan  dinding  dan  membran  sel akibat perbedaan tekanan antara didalam dan diluar sel sehingga metabolit  sekunder  yang  ada  dalam sitoplasma  akan  terlarut  dalam  pelarut organik  dan  ekstraksi  senyawa  akan sempurna  karena  dapat  diatur  lama perendaman  yang  dilakukan.  Pemilihan pelarut  untuk  proses  maserasi  akan memberikan efektivitas yang tinggi dengan memperhatikan kelarutan senyawa bahan alam pelarut tersebut.
Pembuatan  ekstrak  seledri  ini dengan  menggunakan  metanol  sebagai pelarutnya,  karena  metanol  relatif  tidak merusak  senyawa  kimia  aktif  yang terdapat  dalam  bahan  uji 12 .  Demikian juga yang diungkapkan Cowan, penapisan  awal  untuk  tanaman  yang mempunyai aktivitas antimikroba didahului dengan menggunakan aquades atau  alkohol  dan  dilanjutkan  dengan
ekstraksi  dengan  menggunakan  pelarut organik 3 .
Fraksinasi ekstrak Seledri ( Apium graveolens L) Fraksinasi bertujuan
untuk menarik  senyawa  aktif  yang  terkandung pada  ekstrak  sesuai  dengan  tingkat kepolarannya,  pelarut  yang  digunakan ádalah n-heksan, etilasetat dan metanol.
Dari  proses  fraksinasi  didapatkan hasil seperti pada tabel 1 berikut ini.
Tabel  1  Hasil  Fraksinasi  ekstrak  Seledri ( Apium graveolens L). No Pelarut Berat Fraksi (g) Persen Berat (%) 1 N heksan 2,5 3,9 2 E. asetat 50,9 79,5 3 Metanol 10,6 16,6 Tot 64,0 100,0
Dari  Tabel  1  diatas  didapatkan hasil  fraksinasi  ekstrak  Seledri  ( Apium graveolens L)  dengan  pelarut  etil  asetat memiliki  berat  50,9  gram  lebih  besar dibandingkan  dengan metanol air  dan n- heksan.  Pelarut  tersebut  mempunyai kemampuan memisahkan senyawa
dalam ekstrak berdasarkan kepolarannya.
Dalam  penelitian  ini  dapat  dilihat bahwa  senyawa  polar  lebih  banyak dibandingkan  senyawa  non  polar,  hal  ini sejalan  dengan  hasil  Purwantini , dkk senyawa polar yang terdapat dalam buah
seledri lebih banyak dibandingkan dengan  senyawa-senyawa  non  polar 7 .
Menurut Salni, Fraksinasi cair-cair merupakan  cara  fraksi  sederhana  dan umum dilakukan 11 .
Uji Sensitifitas Jamur Candida albicans
Jamur Candida
albicans diperoleh  dari  Balai  besar  Laboratorium Kesehatan  Palembang.  Uji  sensitifitas dilakukan  dengan  ketokonazol  melalui metode  difusi  agar.  Konsentrasi  yang digunakan  adalah  2%  dengan  pelarut Dimetilsulfoksida (DMSO). Hasil uji sensitifitas  didapatkan  diameter  hambat 14 mm.
Gambar 1 Hasil uji sensitifitas dengan ketokonazol pada konsentrasi 2% terhadap jamur Candida albicans
Dari  gambar  1  dapat  dilihat
bahwa Ketokonazol
menghasilkan diameter hambat terhadap jamur Candida albicans sebesar 14 mm. Hal ini ditunjukkan  dengan  terbentuknya  zona bening  pada  sekitar  kertas  cakram. Dilihat  dari  diameter  zona  hambat ketokonazole  terhadap  jamur Candida albicans termasuk  dalam  kategori
sedang  hal  ini  sesuai  dengan  teori  yang dikemukakan  oleh  Carrilo-Munoz,  C.Tur
&  Torres  bahwa  hasil  uji  sensitifitas ketokonazole dapat diklasifikasikan kedalam  3  kategori  yaitu  jika  diameter hambat  yang  terbentuk  >  20  mm  berarti sensitif,  jika  diameter  zona  hambat  yang terbentuk  12-19  mm  berarti  sedang  dan diameter  zona  hambat  yang  terbentuk <11 mm berarti resisten 4 .
Pada  penelitian  ini  menggunakan ketokonazol,  efek  antijamur  golongan azol  bekerja  pada  membran  sel  jamur yang  juga  sesuai  dengan  mekanisme kerja  dari  beberapa  golongan  senyawa yang ada pada seledri ( Apium graveolens L) 13 .
Hasil  uji  sensitifitas  menunjukkan bahwa  jamur Candida  albicans tersebut masih  sensitif  terhadap ketokonazol sehingga dapat digunakan sebagai sampel penelitian.
Uji  Aktivitas  Antijamur  fraksi  Seledri ( Apium graveolens L) Konsentrasi fraksi yang
digunakan  adalah  10%  dengan  pelarut dimetilsulfoksida. Hasil uji aktivitas antijamur  dari  masing-masing  fraksi dapat dilihat pada Tabel 2 dibawah ini.
No Jenis  Ekstrak dan Fraksi Diameter Hambat (mm) 1 Ekstrak 0,00 ± 0,00 2 N-heksana 11,00 ± 0,50 3 Etil asetat 7,00 ± 0,00 4 Metanol Air 7,00 ± 0,00
Gambar 2 Hasil uji ekstrak seledri, fraksi Metanol air, N-heksan, Etil asetat terhadap Candida albicans.
Berdasarkan Tabel 2 dan gambar 2  di  atas  fraksi  n-heksan  mempunyai diameter zona hambatan terbesar terhadap C andida albicans yaitu sebesar 11mm,  daerah  hambatan  ini  berarti  kuat karena  berada  pada  10-20  mm  sesuai dengan  pernyataan  Davis  dan  Stout yang  mengemukakan  bahwa  ketentuan kekuatan  daya  antimikroba  yaitu  bila daerah  hambatan  20  mm  atau  lebih berarti  sangat  kuat,  daerah  hambatan 10-20  mm  berarti  kuat,  5-10  mm  berarti sedang dan daerah hambatan 5 mm atau kurang berarti lemah.
Fraksi etilasetat dan fraksi metanol  mempunyai  diameter  zona hambatan  sebesar  7  mm  terhadap C andida  albicans ,  sedangkan  ekstrak seledri  tidak  mempunyai  daya  hambat. Ini  menunjukkan  bahwa  fraksi  n-heksan adalah  fraksi  yang  paling  aktif  jika dibandingkan  dengan  ekstrak,  fraksi etilasetat  dan  metanol.  Fraksi  n-heksan merupakan senyawa yang bersifat nonpolar  senyawa  aktif  antifungi  yang
N- heksan Etil asetat Metanol air Ekstrak
terdapat  dalam  buah  seledri  adalah senyawa  non  polar 9 .  Robinson  (1995) juga  mengungkapkan  fraksi  n-heksan mempunyai  aktivitas  antijamur,  dimana yang tersari dalam fraksi tersebut adalah triterpenoid.
Tidak  terbentuknya  zona  hambat pada  konsentrasi  tertentu  disebabkan oleh  kecilnya  konsentrasi  zat  aktif sehingga  belum  mampu  menghambat mikroba 11 .  seperti  halnya  pada  ekstrak seledri, penelitian
sebelumnya
mengungkapkan bahwa konsentrasi ekstrak  seledri  masih  memiliki  daya hambat pada konsentrasi 24% sedangkan pada penelitian ini digunakan ekstrak seledri dengan konsentrasi 10%.
Penentuan Konsentrasi hambat minimum (KHM)  fraksi  N-heksan  seledri  ( Apium graveolens L).
Hasil uji aktifitas antijamur menunjukkan bahwa fraksi n-heksan aktif terhadap jamur Candida albicans . Dalam penelitian  ini  penentuan  konsentrasi hambat
minimum
berdasarkan
penurunan konsentrasi  yang dimulai dari
10%, 5%, 2,5%, 1,25%, 0,625%, 0,3125%.  Dengan  4  kali  pengulangan.
Tujuannya  untuk  mengetahui  jumlah terkecil zat aktif antijamur yang diperlukan untuk menghambat pertumbuhan organisme yang diuji. KHM dinyatakan sebagai konsentrasi terendah dari  zat  antijamur  fraksi  n-heksan  dari tanaman  seledri  ( Apium  graveolens L)
yang masih mampu menghambat pertumbuhan jamur.
Tabel  3  Rerata  diameter  hambat (mm)  fraksi  n-heksan  terhadap  jamur Candida albicans pada berbagai konsentrasi. Kons. Fraksi (%) N x ± SD (mm) 10           4 11,33 ± 0,38 5          4 10,00 ± 0,00 2,5       4 8,75 ± 0,50 1,25     4 7,00 ± 0,00 0,625 4 0,00 ± 0,00 0,3125 4 0,00 ± 0,00
Gambar 3 Penentuan Kadar hambat Minimum terhadap jamur Candida albicans
Dari Tabel 3 dan gambar 3 dapat dilihat  bahwa  fraksi  n-heksan  dengan konsentrasi  10%  mempunyai  diameter hambat terbesar yaitu 11,33 mm terhadap  jamur candida  albican s.  Zona bening  menunjukkan  adanya  diameter hambat pada masing-masing konsentrasi
dimana  diameter  hambat  dari  masing- masing konsentrasi
mengalami penurunan  sesuai  dengan  penurunan nilai konsentrasi sehingga dapat diketahui  bahwa  besarnya  konsentrasi dan diameter hambat memiliki hubungan yang  berbanding  lurus  satu  sama  lain. Semakin  besar  diameter  hambat  maka semakin  aktif  zat  uji  tersebut  sebagai antijamur  yang  menunjukkan  bahwa semakin  banyak  jamur  yang  dapat dihambat pada pertumbuhannya oleh zat uji.  Sehingga  dapat  dikatakan  bahwa konsentrasi  fraksi  n-heksan  mempunyai diameter hambat, semakin besar konsentrasi  n-heksan  maka  semakin besar diameter hambat yang dihasilkan.
Konsentrasi  fraksi  n-heksan  yang masih  menghambat  pertumbuhan  jamur Candida albicans adalah  1,25%  dengan diameter  hambat  7,00  mm,  konsentrasi ini dinyatakan sebagai nilai KHM.
Pada  penelitian  ini  didapatkan diameter hambat minimum terdapat pada konsentrasi  1,25%,  bila  dibandingkan dengan  hasil  penelitian  Santoso  dkk didapatkan bahwa kadar hambat minimum  ekstrak  etanol  seledri  adalah pada  konsentrasi  24% 12 .  Semakin  besar konsentrasi  yang  diberikan  semakin besar  pula  konsentrasi  bahan  aktif  yang berpengaruh  terhadap Candida albicans sehingga pertumbuhan Candida albicans menjadi  semakin  sedikit  dan  sampai tidak  ada.  Jika  dilihat  dari  perbedaan konsentrasi  tersebut,  hal  ini  dapat
menunjukkan  bahwa  proses  fraksinasi lebih baik daya hambatnya dibandingkan dengan  proses  ekstraksi,  konsentrasi yang  dapat  menghambat  pertumbuhan jamur  pada  proses  fraksinasi  lebih  kecil dibandingkan konsentrasi yang digunakan pada proses ekstraksi.
Perbedaan besarnya daerah hambatan untuk masing-masing konsentrasi dapat diakibatkan antara lain perbedaan  besar  kecilnya  konsentrasi atau  sedikitnya  kandungan  zat  aktif antimikroba  yang  terkandung  di  dalam fraksi, kecepatan difusi bahan antimikroba ke dalam medium, kepekaan pertumbuhan jamur, reaksi antara bahan aktif  dengan  medium  dan  temperatur inkubasi,  pH  lingkungan,  komponen media,  waktu  inkubasi,  dan  aktivitas metabolik mikroorganisme 11 .
Uji
Bioautografi dan Penentuan
Golongan  Senyawa  Antijamur Candida albicans
Menurut  Stahl  diantara  berbagai teknik  kromatografi,  Kromatografi  Lapis tipis  adalah  yang  paling  cocok  untuk analisis  metode  ini  hanya  memerlukan waktu yang singkat untuk menyelesaikan analisis dan memerlukan cuplikan sedikit.  Selain  itu  kebutuhan  ruang minimum dan penanganannya sederhana 15 .
Uji  bioautografi  dilakukan  untuk mengetahui  golongan  senyawa  dan harga  Retordansi  factor  (Rf)  senyawa
aktif  antijamur  dengan  menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) plat silika gel GF 254 dengan menggunakan perbandingan eluen yang sesuai sebagai fase  gerak  dan  H 2 SO 4 10%  untuk penampak bercak yang memiliki aktivitas antijamur 9 .
Berdasarkan  hasil  uji  KLT,  pada
fraksi
aktif n-heksan dengan menggunakan eluen 9:1 terdapat golongan senyawa terpenoid yang ditandai  dengan  bercak  berwarna  ungu.
Dimana menurut Stahl, senyawa terpenoid
apabila
disemprot menggunakan pereaksi anisaldehid- asam  sulfat  akan  membentuk  warna yang  bervariasi  seperti  violet,  biru, merah,  abu-abu  atau  hijau 14 .  Hal  ini sesuai dengan penelitian Purwantini, dkk dimana  ekstrak  metanol  seledri (Apium graveolens L) menunjukkan bahwa terdapat golongan senyawa terpenoid 9 .
Hasil uji aktifitas antijamur menunjukkan bahwa fraksi yang aktif dari seledri (Apium  graveolens L)  adalah fraksi N-heksan, selanjutnya dilakukan uji bioautografi  untuk  mengetahui  nilai  Rf senyawa  aktif  antijamur  dengan  KLT. Pada  cawan  petri  yang  telah  berisi biakan  jamur,  bercak-bercak  bahan bioaktif  yang  terbentuk  setelah  ada pemisahan  diletakkan  ke  dalam  cawan petri,  dibiarkan  menempel  pada  medium agar selama 1 jam supaya bahan bioaktif dari  fraksi  berdifusi  ke  dalam  agar. Setelah  itu  kromatogram  diangkat  dari
cawan  petri  yang  berisi  biakan  jamur tersebut  diinkubasi  selama  24  jam. Setelah  24  jam  dapat  terlihat  zona bening  yang  merupakan  daerah  aktif berada.Didapatkan nilai Rf 0,60.
Gambar 4 Hasil Uji Bioautografi dan KLT
Hasil penelitian ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan Purwantini , dkk senyawa  yang  mempunyai  aktivitas sebagai  antifungi  dalam  buah  seledri, selain  komponen  minyak  atsiri  adalah senyawa  golongan  terpenoid 9 .  Menurut Sipailiene et  al Kandungan  utama dalam minyak esensial seledri adalah terpenes, sesquiterpenes dan phthalides 14 .
Terpenoid    merupakan  suatu golongan  hidrokarbon  yang  memiliki rumus  dasar  (C 5 H 8 ) n. Terpenoid  banyak dihasilkan oleh tumbuhan sebagai metabolit sekunder dan terutama terkandung  pada  getah  dan  vakuola selnya. Contoh senyawa terpenoid adalah  steroid,  karoten  dan  retinol  serta menyusun banyak minyak atsiri misalnya eugenol.  Senyawa  terpenoid  adalah senyawa  hidrokarbon  isometrik  yang juga terdapat pada lemak/minyak esensial  ( essential  oils ),  yaitu  sejenis
lemak  yang  sangat  penting  bagi  tubuh.
Zat-zat terpenoid membantu tubuh dalam proses  sintesa  organik  dan  pemulihan sel-sel  tubuh  serta  bersifat  sebagai antimikroba 17 .
Mekanisme kerja terpenoid sebagai  antimikroba  adalah  bereaksi dengan  porin  (protein  transmembran) pada membran luar dinding sel, membentuk  ikatan  polimer  yang  kuat sehingga merusak porin. Rusaknya porin yang  merupakan  pintu  keluar  masuknya senyawa akan mengurangi permeabilitas membran  sel  yang  akan  mengakibatkan sel  bakteri  akan  kekurangan  nutrisi, sehingga  pertumbuhan  mikroba  akan terhambat atau mati 3 .

## SIMPULAN
1.  Fraksi  aktif  dari  seledri  ( Apium graveolens L) yang memiliki aktivitas terhadap pertumbuhan jamur
candida  albicans adalah  fraksi  n- heksan.
2.  Nilai  konsentrasi  hambat  minimum (KHM) dari fraksi aktif  seledri ( Apium graveolens L) adalah pada
konsentrasi 1,25%.
3.  Golongan senyawa  yang mempunyai aktivitas  sebagai  antijamur Candida albicans adalah terpenoid.
4.  Ada perbedaan aktivitas antara fraksi n-heksan  seledri  ( Apium  graveolens
L)    dan  ketokonazol  terhadap  jamur candida
albicans.
Dimana
ketokonazol masih lebih baik
dibandingkan dengan fraksi n-heksan seledri

## SARAN
1.  Perlu  dilakukan  penelitian  mengenai isolasi  senyawa  antijamur  dari  fraksi seledri ( Apium graveolens L).
2.   Sebaiknya  dilakukan  pengujian  lebih lanjut  mengenai  kesetaraan  dosis antijamur  dengan  konsentrasi  dari fraksi seledri ( Apium graveolens L).
3.  Sebaiknya  dilakukan  pengujian  lebih lanjut toksisitas fraksi terhadap hewan percobaan secara in vivo dan dilanjutkan  dengan  pengujian  secara klinis.

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Arulkumaran S, Regan L,
Papageorghiou  A.  2011.Oxford  Desk
Reference Obstetrics and
Gynecology. Oxford University Press,
New York 2.  Betina  V.  1973.  Bioautography  in paper and Thin Layer
Chromatography and Its Scope in the Antibiotic  Field.  J.  Chromatography
(78): 41-51
3.  Cowan,  M.  1999.  Plant  Product  as antimicrobial agent,
clinical microbiology Reviews, hal 564-582.
4.  Carrilo-Munoz, C.Tur & Torres (1996). Invitro Antifungal of sertaconazole, bifonazole,
ketokonazole, and Miconazole
against  yeast  of  the  candida  genus.
Journal of antimikroba
chemotheraphy, 815-819
5.  Daili  SF.  2011.  Tinjauan  Infeksi Menular Seksual. Dalam: Djuanda A, Hamzah  Mochtar,  Aisah  Siti.  Ilmu Penyakit Kulit Kelamin. Edisi ketujuh. Jakarta:  Balai  Penerbit  FK  UI;  363-
365 6.  Darwis.  D.  2000 Teknik  Dasar Laboratorium Dalam Penelitian Senyawa Bahan Alami Hayati.
Workshop  Pengembangan  Sumber Daya  Manusia  Dalam  Bidang  Kimia Organik  Bahan  Alami  Hayati.  FMIPA Universitas Andalas Padang.
7. Farnsworth  N.R.,  1966.  Biological and  Phytochemical  Screening  of Plants. Journal  of  Pharmaceutical
Sciences vol 55 (3)
8.  Indah  & Darmawati. 2013. Keajaiban Daun Tumpas Tuntas Penyakit
Kanker,  Diabetes,  Ginjal,  Hepatitis, Kolesterol,  Jantung. Tribun  Media. Su rabaya. 36-38
9.  Purwantini  I,  Djoko  S,  Heru  AC.
2006.  Aktivitas  Antifungi  Ekstrak
Buah  Seledri.  Karya  Tulis  Ilmiah. Fakultas Farmasi UGM
10. Robinson.,  T.  1995. Kandungan Organik  Tumbuhan  Tinggi. Institut
Tehnologi Bandung (ITB). Bandung 11. Salni.    2003.  Karakteristik  dan  Uji Aktivitas Tropikal Senyawa
Antibakteri  dari  Daun  Karamuntung
( Rhodomyrtus tomentosa Ait Hassk).
Disertasi. ITB. Bandung 12. Santoso S, Soemardini, Nugroho PA. 2010.  Efektivitas  Ekstrak  Etanol Seledri  (Apium  Graveolens)  Sebagai
Antifungal Terhadap Candida
Albicans  Secara  In  Vitro .  Jurnal penelitian . FKUB Malang.
13. Sardi, L. Scorzoni, T. Bernardi, A. M.
Fusco-Almeida  and  M.  J.  S.  Mendes Giannini    2013.  Candida  species: current  epidemiology,  pathogenicity, biofilm  formation,  natural  antifungal products and new therapeutic options 14. Sipailine, et  a l,  2005.  Composition and  Antimicrobial  Activity  of  Celery (Apium  graveolens)  Leaf  and  Root Extracts Obtained with Liquid Carbon Dioxide ,  Department of  Food
Technology  Kaunas  University  of Technology Lithuania.
Proc.
WOCMAP III, Vol. 3 15. Stahl, E., 1985, Analisis Obat secara Kromatografi dan Mikroskopi,
Penerbit ITB, Bandung
16. Tjay  TH,  Rahardja  K,  2007. Obat-
Obat  Penting,  Khasiat  Penggunaan
Dan Efek Samping.
Gramedia.Jakarta.
17. Yuharmen,  dkk.  2002.  Uji  Aktivitas anti  mikroba  Minyak  Atsiri  dan Ekstrak  Metanol  Lengkuas (Lenguas galanga) Jurusan  Kimia,  FMIPA,
Universitas Riau.