Penggunaan serotonin dalam formulasi hormon pregnant mare serum gonadotropin dan antidopamin untuk menginduksi perkembangan gonad ikan ringau, Datnioides microlepis Bleeker, 1854
[Serotonin application in pregnant mare serum gonadotropin hormone and dopamin antagonist formulation to induce gonadal development of Indonesian tigerfish ( Datnioides microlepis Bleeker, 1854)]
Bastiar 1 , Agus Oman Sudrajat 2 , Melta Rini Fahmi 1
1 Balai Penelitian dan Pengembangan Budidaya Ikan Hias Jl. Perikanan No. 13 Pancoran Mas, Depok 16436
2 Departemen Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, IPB Jalan Agatis 1, kampus IPB Dramaga 16680
Diterima: 12 Mei 2017; Disetujui: 17 Januari 2017

## Abstrak
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menganalisis pengaruh  penggunaan  serotonin  ( 5-hydroxytryptamine atau  5-HT)  dalam formulasi hormon Pregnant Mare Serum Gonadotropin (PMSG) dan antidopamin (AD) terhadap perkembangan gonad ikan ringau. Penelitian ini menggunakan rancangan acak lengkap dengan lima perlakuan (dosis.kg -1 bobot tubuh ikan): (P1) 1 ml NaCl 0,9% (kontrol); (P2) 20 IU PMSG+10 mg AD; (P3) 20 IU PMSG+10 mg AD+0,2 mg 5-HT; (P4) 20 IU PMSG+10 mg AD+2 mg 5-HT; dan (P5) 20 IU PMSG+10 mg AD+4 mg 5-HT. Setiap perlakuan diujikan pada lima ekor ikan sebagai ulangan individu. Penyuntikan hormon dilakukan setiap 10 hari dengan lama penelitian 60 hari. Hor- mon  disuntikkan  secara  intramuskular  pada  bagian  bawah  sirip  punggung  ikan  uji. Ikan  yang  digunakan  merupakan hasil tangkapan alam dengan ukuran panjang total 17,5-33,0 cm dan bobot tubuh 118-926 g. Selama penelitian, ikan uji diberi pakan berupa udang dan ikan-ikan kecil (hidup) dua kali sehari secara satiasi. Parameter yang diamati adalah in- deks kematangan gonad, indeks hepatosomatik, konsentrasi estradiol- plasma dan tingkat kematangan gonad berda- sarkan morfologi dan histologi gonad. Hasil penelitian menunjukkan penggunaan 2 mg 5-HT dalam 20 IU PMSG dan 10 mg AD (perlakuan P4) menghasilkan perkembangan gonad yang lebih baik dibandingkan perlakuan lainnya. Nilai indeks  kematangan  gonad, indeks  hepatosomatik, dan  konsentrasi  E2  plasma  tertinggi  diperoleh  pada  perlakuan  P4 dengan  nilai  masing-masing  sebesar  2,38±0,06%; 3,09±0,12% dan  37,14±2,99 -1 .  Nilai  tersebut  berbeda  nyata p<0.05) dengan perlakuan lainnya. Perlakuan P4 meningkatkan konsentrasi E2 plasma dua kali lebih besar dibanding- kan sebelum penyuntikan serta menghasilkan perkembangan gonad yang mencapai tingkat kematangan gonad tahap III.
Kata penting: ikan ringau, perkembangan gonad, PMSG, serotonin

## Abstract
The objective of study  was to  analyze the effect  of serotonin (5-HT) in the formulation of hormones Pregnant Mare Serum Gonadotropin (PMSG) and dopamin antagonist (AD) hormones to gonad development of tigerfish. This study used completely randomized design (CRD) with five treatments of hormone namely: (P1) 1 ml of 0.9% NaCl (control); (P2) 20 IU PMSG+10 mg AD; (P3) 20 IU PMSG AD+10 mg+0.2 mg 5-HT; (P4) 20 IU PMSG+10 mg AD+2 mg 5- HT; and (P5) 20 IU PMSG+10 mg AD+4 mg 5-HT. Each treatment was tested on five fish as individual replications. Hormone injected intramuscularly at the lower part of the dorsal fin of fish every 10 days. The fish were reared for 60 days. Fish that were used at this study were originate from natural catches as much as 25 fishes with 17.5 33.0 cm of total length and 118 926 g of body weight. During the study, fish fed using shrimp and small fish (live) twice daily at -estradiol (E2) plasma concentration and gonad maturity level based on morphology and histology examination. The results showed that the use of 2 mg of 5-HT are added to 20 IU PMSG and 10 mg AD (treatment P4) has stimulated the fish to had the highest GSI  (2.38  ± 0.06%)  and  HSI  (3,09±0,12%)  which  was  significantly  different  to  other  treatment.  The  treatment  (P4) -1 )  two fold  compared  with  the  concentration  before injection and stimulated the gonadal development to stage III.
Keywords: Indonesian tigerfish, gonadal development, PMSG, serotonin
_____________________________ Penulis korespondensi Alamat surel: bastiarnurdin@gmail.com

## Pendahuluan
Ikan  ringau  atau  Indonesian  tiger  fish ( Datnioides  microlepis )  merupakan  salah  satu spesies ikan hias air tawar dari famili Datnioidi- dae  yang  hidup  di  perairan  sungai  dan  danau  di daerah Sumatera dan Kalimantan (Kottelat et al . 1993). Ikan ringau sangat potensial untuk dikem- bangkan karena termasuk salah satu ikan hias ko- moditas ekspor yang memiliki harga dan permin- taan  yang  relatif  cukup  tinggi  namun  pemenuh- annya masih mengandalkan hasil tangkapan dari alam. Tingginya permintaan pasar menyebabkan aktifitas  penangkapannya  semakin  tinggi  pada berbagai  ukuran  sehingga  mengancam  kelestari- annya.  Disamping  itu  kerusakan  habitat  akibat perubahan  fungsi  lahan  menjadi  area  pertam- bangan,  perkebunan,  dan  permukiman  menye- babkan terjadinya penurunan populasinya bahkan menjurus  kepada  kepunahan.  Oleh  karena  itu, kegiatan  budi  daya  menjadi  salah  satu  upaya konservasi ex  situ untuk  mencegah  kepunahan, mengurangi tekanan populasi di alam, dan untuk memenuhi kebutuhan pasar ikan hias.
Keberhasilan pemijahan ikan ringau dalam lingkungan  budi  daya  sangat  bergantung  pada ketersediaan induk matang gonad, namun pema- tangan gonad ikan ringau dalam wadah budi daya masih mengalami berbagai permasalahan. Upaya pematangan gonad ikan ringau dalam lingkungan terkontrol telah dilakukan baik melalui pendekat- an lingkungan dengan merekayasa  wadah peme- liharaan  (Sholichah et  al .  2010),  pemeliharaan berdasarkan  kelompok  ukuran  yang  sama  (Roh- my et  al .  2012),  pemeliharaan  dalam  media  air bersalinitas rendah (Rohmy et al . 2014), maupun melalui  pendekatan  pakan  dengan  pemberian kombinasi berbagai jenis pakan alami (Rohmy et al .  2011)  belum  mampu  merangsang  perkem- bangan  gonadnya  yang  dapat  dipijahkan  baik
secara  alami  maupun  buatan.  Permasalahan  lain yang  dihadapi  dalam  upaya  pemijahan  ikan  ri- ngau adalah keterbatasan ukuran induk serta ku- rangnya informasi tentang daur reproduksinya.
Kemampuan  ikan  ringau  untuk  memijah di  alam  dipengaruhi  oleh  berbagai  faktor  ling- kungan  diantaranya  suhu  perairan,  fotoperiode, curah  hujan,  substrat,  pH,  alkalinitas,  arus  su- ngai,  dan  kedalaman  perairan  (Mananos et  al. 2009,  Podhorec  &  Kouril  2009).  Dalam  wadah budi daya, beberapa faktor lingkungan yang me- mengaruhi  fungsi  reproduksi  tidak  tersedia  se- hingga ikan tidak dapat melangsungkan aktifitas reproduksinya  dengan  baik  (Keys  &  Crocos 2006, Mylonas et al . 2010, Lorenzen et al . 2012). Beberapa faktor lingkungan yang berperan dalam reproduksi  seperti  suhu,  fotoperiode,  salinitas, dan  substrat  pemijahan  dapat  dimanipulasi,  na- mun ada juga faktor lingkungan yang sulit dima- nipulasi seperti alur ruaya pemijahan, kedalaman, dan tekanan air sehingga memengaruhi stimulasi reproduksi ikan (Gallego et al . 2012). Oleh kare- na  itu,  penggunaan  hormon  eksogen  merupakan salah  satu  cara  yang  efektif  untuk  merangsang pematangan  gonad  pada  ikan  (Mylonas et  al . 2010). Salah satu hormon yang dapat diterapkan dalam  pematangan  gonad  ikan  adalah Pregnant Mare  Serum  Gonadotropin (PMSG)  (Nagahama et al . 1991, Gallego et al . 2012).
Hormon  PMSG  merupakan  glikoprotein kompleks yang diperoleh dari serum kuda hamil yang  memiliki  sifat  aktivitas  biologis  ganda  se- bagai hormon gonadotropin (GtH), yaitu berefek Follicle Stimulating Hormone (FSH) yang berpe- ran  pada  proses  perkembangan  gonad  (viteloge- nesis)  dan Luteinizing  Hormone (LH)  yang ber- peran pada proses pematangan akhir (Gallego et al . 2012). PMSG merangsang terjadinya lonjakan kadar GtH sehingga mempercepat terjadinya per-
kembangan  gonad  dan  ovulasi  (Bolamba et  al . 1992). Sintesis dan sekresi hormon gonadotropin (GtH)  dari  kelenjar  hipofisis  dipengaruhi  oleh neurotransmitter yang diproduksi di hipotalamus dan  daerah  preoptik  otak  ikan,  yaitu  dopamin. Dopamin  menghambat  sekresi Gonadotropin Releasing  Hormon (GnRH)  dari  hipotalamus (Kreke  &  Dietrich  2008).  Kerja  dopamin  dapat dihambat  dengan  pemberian  antidopamin  (AD) sehingga  sekresi  gonadotropin  akan  meningkat. Neurotransmitter  lain  yang  berperan  dalam  pro- ses  perkembangan  gonad  adalah  serotonin  atau 5-hydroxytryptamine  (5-HT)  (Iwamatsu et  al .
1992,  Khan  & Thomas  1992,  Iwamatsu et  al . 1993,  Cerda et  al .1998a).  Serotonin  berperan memodulasi  fungsi  reproduksi  ikan  melalui beberapa  jalur  termasuk  melalui  area  preoptic- hipotalamus,  hipofisis  maupun  langsung  bekerja pada  gonad,  serta  bertindak  dalam  memberi pengaruh  stimulasi  pada  sel  gonadotropin  dan menghambat  sekresi  dopamin  sehingga  mening- katkan  kadar  hormon  gonadotropin  (Somoza et al .  1988,  Prazad et  al .  2015).  Penyuntikan  hor- mon  PMSG  dan  AD  yang  dikombinasikan  de- ngan  5-HT  diharapkan  dapat  memicu  proses vitellogenesis  dan  maturasi  gonad  ikan  ringau. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menganalisis  pe- ngaruh penggunaan serotonin (5-HT) dalam  for- mulasi  hormon Pregnant  Mare  Serum  Gonado- tropin (PMSG)  dan  antidopamin  (AD)  terhadap perkembangan gonad ikan ringau.

## Bahan dan metode

## Waktu dan tempat penelitian
Penelitian  dilaksanakan  bulan  Mei-Agus- tus 2014 di Laboratorium  Reproduksi, Balai  Pe- nelitian  dan  Pengembangan  Budidaya  Ikan  Hias (BPPBIH)  Depok.  Analisis  konsentrasi  hormon estradiol-
BPPBIH  dan  analisis  histologi  gonad  dilakukan
di Laboratorium Biologi  Perkembangan dan Re- produksi, Fakultas MIPA Universitas Indonesia.

## Bahan penelitian
Bahan  penelitian  yang  digunakan  yaitu ikan  ringau  ( Datniodes  microlepis )  berukuran panjang total 17,5-33,0 cm dan bobot tubuh 118- 926 g yang diperoleh dari pengumpul dan meru- pakan hasil tangkapan alam di daerah Palembang (Sumatera  Selatan),  hormon Pregnant  Mare  Se- rum  Gonadotropin (PMSG)  dan  antidopamin (AD)  serta  serotonin  atau  5-hydroxytryptamine
(5-HT)  produksi  Sigma.  Sebelum  ditebar,  ma- sing-masing  ikan  uji  diberi  penanda  ( microchip implant ) yang dipasangkan di bawah permukaan kulit bagian punggung ikan menggunakan jarum tagging.

## Rancangan percobaan
Penelitian  ini  menggunakan  rancangan acak  lengkap  dengan  lima  perlakuan  dan  lima ulangan  individu  ikan.  Perlakuan  yang  diujikan adalah  penambahan  serotonin  (5-HT)  dengan dosis berbeda yaitu 0; 0,2; 2; dan 4 mg ke dalam formulasi hormon 20 IU  PMSG dan 10 mg AD (PMSG-AD).  Kombinasi  hormon  perlakuan  di- buat dalam bentuk larutan dan dosis penyuntikan sebesar 1 ml.kg -1 bobot tubuh ikan uji. Perlakuan uji  terdiri  atas:  (P1)  larutan  fisiologis  (NaCl 0,9%)  sebagai  kontrol,  (P2)  PMSG-AD,  (P3)
PMSG-AD+0,2 mg 5-HT, (P4) PMSG-AD+2 mg 5-HT, dan (P5) PMSG-AD+4 mg 5-HT.

## Pemeliharaan ikan uji dan penyuntikan hormon
Ikan dipelihara dalam bak semen berukur- an 200 x 150 x 100 cm 3 dengan ketinggian air 85 cm  dilengkapi  dengan  sistem  sirkulasi.  Selama pemeliharaan, ikan uji diberi pakan berupa udang dan  ikan  kecil  secara  satiasi.  Kondisi  air  media pemeliharaan  selama  penelitian  relatif  stabil  de-
ngan suhu berkisar 26,3-29,9 o C, pH air berkisar 5,4-6,5; dan oksigen terlarut 7,41-7,53 mg.L -1 .
Penyuntikan  dilakukan  setiap  10  hari  de- ngan  lama  pemeliharaan  60  hari.  Sebelum  pe- nyuntikan,  ikan  terlebih  dahulu  dibius  menggu- nakan ethylene  glycol monophenyl  ether dengan dosis  0,3  ml.L -1 air.  Kemudian  dilakukan  pe- nimbangan  untuk  menentukan  jumlah  hormon yang  diberikan.  Penyuntikan  hormon  dilakukan secara  intramuskular  pada  bagian  bawah  sirip punggung.

## Analisis estradiol dalam plasma darah
Pengambilan sampel darah  untuk  mengu- kur konsentrasi estradiol- dilaku- kan setiap 10 hari sebelum penyuntikan hormon. Darah  diambil  dari  dorsal  aorta  melalui  pangkal ekor  sebanyak  0,8-1  ml  menggunakan  syringe yang telah diberi heparin. Sampel darah yang di- peroleh  dimasukkan  kedalam  mikrotube  1,5  ml selanjutnya  disentrifus  dengan  kecepatan  10.000 rpm selama 10 menit pada suhu 5 o C. Plasma da- rah  dimasukkan  kedalam  mikrotube  baru  kemu- dian disimpan dalam freezer (-20 o C) untuk selan- jutnya  dilakukan  pengukuran  konsentrasi  E2 plasma.  Pengukuran  konsentrasi  E2  dalam  plas- ma  darah  dilakukan  menggunakan  metode ELISA  kit  komersial  (Catalog  No.  EIA  2693) yang diproduksi oleh Sigma.

## Preparasi dan pengamatan histologi gonad
Preparasi histologi gonad dilakukan seba- gai berikut: gonad dimasukkan dalam wadah ber- isi  larutan  bouin  (campuran  antara  asam  asetat glasial  5  ml  ditambah  dengan  formalin  40%  se- banyak  25  ml  dan  asam  pikrat  jenuh  75  ml). Selanjutnya  gonad  dicuci  dengan  air  bersih  dan dilakukan  proses  pembuatan  preparat  histologis mengacu  pada  metode  Gunarso  (1989).  Struktur
histologis  diamati  menggunakan  mikroskop  bi- nokuler dengan pembesaran 100 dan 400 kali.

## Penentuan  nilai  indeks  kematangan  gonad, indeks  hepatosomatik,  dan  tingkat  kematangan gonad
Pada  akhir  penelitian  dilakukan  pembe- dahan  ikan  uji  untuk  pengamatan  struktur  mor- fologis  gonad,  penghitungan  nilai  indeks  kema- tangan  gonad  (IKG)  dan  indeks  hepatosomatik (IHS)  serta  tingkat  kematangan  gonad  (TKG). Bobot gonad dan hati ikan ditimbang mengguna- kan  timbangan  digital  dengan  tingkat  ketelitian 0,01 g. Selanjutnya dilakukan analisis IKG, IHS, dan TKG.
IKG  dihitung  berdasarkan  perbandingan bobot gonad dengan bobot ikan uji dengan meng- acu kepada rumus Effendie (2002):
IHS  dihitung  berdasarkan  perbandingan  bobot hati  dan  bobot  tubuh  ikan  uji  dengan  mengacu kepada rumus Magalhaes et al . (2012):
TKG ikan ringau setelah perlakuan injeksi hormon dianalisis berdasarkan hasil pengamatan struktur  morfologis  dan  histologis  gonad  yang mengacu pada ikan Perca fluviatilis (Treasurer & Holliday 1981) seperti disajikan pada Tabel 3.

## Analisis data
Nilai  IKG,  IHS,  konsentrasi  E2  plasma,  dan pertumbuhan  bobot  dianalisis  secara  statistik menggunakan analisis ragam (ANOVA), dan jika terdapat  pengaruh  nyata  dilanjutkan  dengan  uji Duncan  dengan  selang  kepercayaan  95%  meng- gunakan  program  SPSS  versi  22.  Hasil  penga- matan  struktur  morfologis  dan  histologis  gonad dianalisis secara deskriptif.
Tabel 3. Ciri-ciri perkembangan gonad ikan Perca fluviatilis (Treasurer & Holliday 1981) TKG Nama periode Deskripsi I Oogonoia Dua ovarium primordial dipisahkan oleh lapisan epitel; ovarium mengandung sel primer (3,3-6,7 µm), oogonia (13,3-20,0 µm), dan oosit primer (13,3-60,0 µm) II Pre-vitellogenesis Ovarium lebih berkembang: ovarium diselimuti lamella ovigerous; diameter oosit primer telah meningkat menjadi 20,0-116,6 µm III Perkembangan awal (vitellogenesis awal) Oosit berkembang dan berukuran 162-346 µm; folikel terdiri atas lapisan teka dan granulosa; chorion yang terdiri tunica propria, zona radiata dan jaringan terlihat longgar; terjadi pembentukan vesikel kuning telur IV Perkembangan akhir (vitellogenesis) Struktur oosit (bagian-bagian oosit) lebih jelas, diameter oosit mencapai 773 µm; ooplasma hampir terisi penuh dengan granula kuning telur; chorion lebih luas.

## Hasil

## Indeks kematangan gonad
Nilai  indeks  kematangan  gonad  (IKG) ikan  uji  sebelum  dan  setelah  perlakuan  penyun- tikan  disajikan  pada  Gambar  1.  Nilai  IKG  pada awal  penelitian  adalah  0,12,  setelah  dilakukan penyuntikan  hormon  terjadi  peningkatan  IKG pada semua perlakuan. IKG tertinggi pada akhir penelitian yaitu 2,38±0,06 terdapat pada perlaku- an P4, diikuti oleh perlakuan P5 (1,70±0,09), P3 (1,59±0,02),  P2  (1,41±0,06),  dan  terendah  pada perlakuan  P1/kontrol  (0,77±0,09).  Hal  ini  didu- kung  oleh  hasil  analisis  statistik  yang  menun- jukkan  IKG  pada  perlakuan  P4  berbeda  nyata (p<0,05) dengan perlakuan lainnya.

## Indeks hepatosomatik
Nilai  indeks  hepatosomatik  (IHS)  selama penelitian  juga  mengalami  peningkatan  setelah penyuntikan  hormon  yang  disajikan  pada  Gam- bar  2.  Nilai  IHS  pada  awal  penelitian  adalah 1,16%  dan  meningkat  setelah  penyuntikan  hor- mon (Gambar 2). IHS tertinggi pada akhir pene- litian  sebesar  3,09±0,12%  diperoleh  pada  perla- kuan P4, diikuti  perlakuan P3 (2,15±0,08%), P2 (1,77±0,11%),  P5  (1,63±0,15  %)  dan  terendah pada perlakuan P1/kontrol (1,51±0,09 %). Hal ini didukung  oleh  hasil  analisis  statistik  yang  me-
nunjukkan IHS pada perlakuan P4 berbeda nyata (p<0,05) dengan perlakuan lainnya.

## Tingkat kematangan gonad
Tingkat  kematangan  gonad  (TKG)  ikan uji  dianalisis  berdasarkan  hasil  pengamatan struktur morfologis dan histologis gonad. Berda- sarkan  hasil  pengamatan  struktur  morfologis gonad (Gambar 3) dan  struktur histologis  gonad (Gambar  4  dan  5)  terlihat  bahwa  perkembangan gonad ikan uji paling baik diperoleh pada perla- kuan P4 (PMSG-AD + 2 mg 5-HT).
Hasil pengamatan struktur morfologis go- nad  menunjukkan  bahwa  perlakuan  P4  mengha- silkan  perkembangan  gonad  ikan  uji  yang  lebih baik dengan ukuran yang  lebih besar dibanding- kan  dengan  perlakuan  lainnya.  Gonad  ikan  uji pada  perlakuan  P4  mengandung  oosit  yang  ter- lihat  dari  permukaan  gonad.  Pada  perlakuan  P1 (kontrol), gonad ikan uji belum berkembang dan terlihat  masih  sangat  tipis.  Pada  perlakuan  P2, P3,  dan  P5  gonad  ikan  uji  terlihat  sudah  ber- kembang  dibandingkan  dengan  gonad  ikan  uji pada perlakuan P1 namun ukurannya lebih kecil dibandingkan  gonad  ikan  uji  pada  perlakuan  P4 (Gambar 3).
Struktur  histologis  gonad  juga  memperli- hatkan  bahwa  perlakuan  P4  memiliki  struktur dan ukuran oosit yang berbeda dengan perlakuan
lainnya.  Oosit  pada  perlakuan  P4  terlihat  paling berkembang, dalam hal ini inti telur (nukleus) su- dah  terlihat  dan  terdapat  nukleoli  di  sekitar  nu- kleus  oosit  (Gambar  4).  Selain  itu,  terlihat  ada- nya butiran lemak dan granula kuning telur pada lapisan  ooplasma  sebagai  hasil  dari  proses  vite-
llogenesis.  Ukuran  oosit  terbesar  yang  didapat- kan  pada perlakuan ini  mencapai ±  250 µm dan didominasi  oleh  ukuran  ±70-100  µm.  Berdasar- kan  ciri-ciri tersebut  maka perkembangan  gonad ikan uji pada perlakuan P4 termasuk dalam tahap TKG III.
Gambar 1.  Indeks kematangan gonad ikan ringau pada awal (n=1) dan akhir penelitian (n=3) dari semua perlakuan. P1: larutan NaCl 0,9% (kontrol); P2: PMSG-AD; P3: PMSG-AD+0.2 mg 5-HT; P4: PMSG-AD+2  mg  5-HT;  dan  P5:  PMSG-AD+4  mg  5-HT.  Notasi  huruf  yang  berbeda  pada masing-masing perlakuan menunjukkan nilai berbeda nyata (p<0,05).
Gambar 2.  Indeks hepatosomatik ikan ringau pada awal (n=1) dan akhir penelitian (n=3) semua perlakuan. P1: larutan  NaCl 0,9% (kontrol); P2:  PMSG-AD; P3: PMSG-AD+0.2  mg 5-HT; P4:  PMSG- AD+2  mg  5-HT;  dan  P5:  PMSG-AD+4  mg  5-HT.  Notasi  huruf  yang  berbeda  pada  masing- masing perlakuan menunjukkan nilai berbeda nyata (p<0.05).
d a b c c a b c d ab
Gambar 3. Struktur morfologis gonad ikan ringau sebelum perlakuan induksi hormon (A) dan se- mua  perlakuan  (P1,  P2,  P3,  P4  &  P5)  pada  akhir  penelitian  (hari  ke-60). P1:  larutan NaCl  0,9%;  P2:  PMSG-AD;  P3:  PMSG-AD+0,2  mg  5-HT;  P4:  PMSG-AD+2  mg  5-HT;  P5: PMSG-AD+4 mg 5-HT; G: gonad; dan L: lemak.
Gambar 4. Struktur histologis gonad ikan ringau perlakuan P4 dengan perbesaran 100X (P4-a) dan perbe- saran 400X (P4-b). Ni= nukleoli; N= Nukleus; Ld=butiran lemak Yg=granula kuning telur G A L G L P1 P2 G L P3 G L G P4 L G P5 L 400 µm P4-a P4-b N N Ni N Ld Yg Ld 100 µm
Gambar 5.   Struktur  histologis  gonad  ikan  ringau semua  perlakuan  pada  akhir  penelitian  (HE  perbesaran 400X (P1, P2, P3 dan P5), skala bar 50 µm dan perbesaran 100X (P4), skala bar 200 µm). P1: larutan NaCl 0,9%; P2: PMSG-AD; P3: PMSG-AD+0.2 mg 5-HT; P4: PMSG-AD+2 mg 5-HT; dan P5: PMSG-AD+4 mg 5-HT. Tanda panah: lamella ovigerous
Pada  perlakuan  P1  (kontrol),  gonad mengandung  oosit  (oogonia  dan  oosit  primer) dengan  ukuran  ±10-40  µm  dan  didominasi  oleh ukuran ± 25 µm. Pada perlakuan ini, tingkat ke- matangan gonad masih berada pada tahap TKG I. Pada perlakuan penyuntikan hormon lainnya baik dengan  PMSG-AD  (P2)  maupun  yang  dikombi- nasikan  dengan 5-HT  dengan  dosis  0,2  mg  (P3)
dan  4  mg  (P5),  tingkat  kematangan  gonad  ikan uji  yang  didapatkan  berada  pada  tahap  TKG  II. Pada tahap ini, ukuran oosit sudah lebih berkem- bang (diameter ±20-65µm) dibandingkan dengan perlakuan  P1.  Ukuran  terbesar  diameter  oosit yang teramati pada ketiga perlakuan tersebut (P2, P3 dan P5) sebesar ±65 µm, namun inti telur be- lum terlihat dengan jelas (Gambar 5).

## P1
P2 P3 P4 P5

## Konsentrasi estradiol-
Pada  awal  penelitian  (sebelum  perlakuan penyuntikan),  konsentrasi  E2  rata-rata  didapat-
-1 . Pada hari ke-10 hingga  ke-20,  secara  umum  terjadi  penurunan konsentrasi  E2  pada  semua  perlakuan.  Konsen- trasi  E2  tertinggi  pada  hari  ke-10  terjadi  pada perlakuan  P1  (1 -1 )  dan  terendah
-1 ). Pada hari ke-20, konsentrasi E2 tertinggi terjadi pada perla-
-1 ) dan terendah pada
-1 ).  Pada  hari  ke- 30, konsentrasi E2 sudah mulai meningkat diban- dingkan  hasil  pengamatan  sebelumnya.  Namun nilainya masih lebih kecil bila dibandingkan de- ngan  sebelum  perlakuan  penyuntikan  (awal)  ke- cuali pada perlakuan P4. Peningkatan konsentrasi E2  dengan  nilai  yang  relatif  lebih  tinggi  diban- dingkan sebelum penyuntikan mulai terjadi pada
hari  ke-40 kecuali pada perlakuan P1. Pada hari ke-50  dan  ke-60,  secara  umum  konsentrasi  E2 semakin  meningkat  pada  semua  perlakuan  mes- kipun terjadi fluktuasi  pada  hari ke-60. Konsen- trasi E2 tertinggi pada hari ke-60 diperoleh pada
-1 ), diikuti perla-
-1 ),  kemudian  perla-
-1 ),  P1  (28,48±2,74
-1 ), dan terendah perlakuan P3 (22,25±3,22
-1 ).  Berdasarkan  analisis  statistik,  konsen- trasi E2 perlakuan  P4 pada  akhir  penelitian  ber- beda nyata (p<0.05) dibandingkan dengan perla- kuan lainnya (Gambar 6).

## Pertumbuhan bobot
Hasil pengamatan pertumbuhan bobot pa- da  semua  perlakuan  selama  penelitian  disajikan pada  Gambar  7 . Pertumbuhan  bobot  ikan  uji yang  diberi  perlakuan  hormon  (P2,  P3,  P4  dan P5) lebih baik dibandingkan dengan tanpa perla-
Gambar 6.  Pola konsentrasi estradiol-
-0) dan sesudah
induksi  hormon (hari ke-10 sampai 60). P1: larutan NaCl  0,9%; P2:  PMSG-AD; P3: PMSG- AD+0.2 mg 5-HT; P4: PMSG-AD+2 mg 5-HT; dan P5: PMSG-AD+4 mg 5-HT. Notasi huruf yang berbeda pada setiap waktu pengamatan menunjukkan nilai berbeda nyata (p<0,05)
c bc abc ab a c
b b a a b ab a a a b b b b a ab b b b a c b b b a
Gambar 7.  Pertumbuhan  bobot  ikan  ringau  setiap  perlakuan  selama  penelitian  (n=3).  P1:  larutan  NaCl 0,9%;  P2:  PMSG-AD;  P3:  PMSG-AD+0.2  mg  5-HT;  P4:  PMSG-AD+2  mg  5-HT;  dan  P5: PMSG-AD+4  mg  5-HT.  Notasi  huruf  yang  berbeda  menunjukkan  nilai  pertumbuhan  bobot berbeda nyata (p<0.05) pada pengamatan hari ke-60.
kuan  hormon/kontrol  (P1).  Nilai  pertumbuhan bobot  tertinggi  pada  akhir  penelitian  diperoleh pada  perlakuan  P5  (61,87±10,30  g)  dan  diikuti oleh  perlakuan  P4  (59,67±1,48  g),  P3  (53,57± 13,61 g),  P2 (47,00±15,44 g) dan terendah pada perlakuan  P1  kontrol  (39,77±7,13  g).  Secara statistik,  pertumbuhan  bobot  pada  perlakuan  P5 berbeda  nyata  (p<0,05)  dengan  perlakuan  P1 (kontrol)  namun  tidak  berbeda  nyata  (p>0,05) dengan  perlakuan  induksi  hormon  lainnya  (P2, P3. dan P4).

## Pembahasan
Berdasarkan  hasil  pengamatan  parameter indeks kematangan gonad, indeks hepatosomatik, konsentrasi  estradiol- dan  histologis  gonad,  perlakuan  penyuntikan PMSG-AD  yang  dikombinasikan  dengan  2  mg serotonin (5-HT) (perlakuan P4) merupakan per- lakuan terbaik pada penelitian ini. Pada perlaku- an  P4,  nilai  masing-masing  parameter  perkem- bangan  gonad  yang  didapatkan  merupakan  nilai tertinggi  dibandingkan  perlakuan  lainnya.  Peng-
gunaan kombinasi hormon perlakuan P4 mening- katkan nilai IKG dari 0,76 (kontrol) menjadi 2,38 (Gambar  1)  dan  nilai  IHS  dari  1,51%  (kontrol) menjadi 3,09% (Gambar 2). Peningkatan konsen- trasi  E2  pada  perlakuan  P4  yaitu  sebesar  19,44
-1 (109,83%) lebih tinggi dibandingkan de- ngan perlakuan P1 (kontrol) yaitu  sebesar 10,78
-1 (60,90%) (Gambar 6) sehingga perlakuan P4  menghasilkan  perkembangan  gonad  paling baik hingga mencapai TKG III (Gambar 4).
Penggunaan hormon PMSG dan AD dapat meningkatkan kinerja reproduksi beberapa spesi- es ikan. FSH yang terdapat dalam hormon PMSG bekerja  pada  lapisan  teka  oosit  untuk  merang- sang terjadinya sintesis testosteron. Dalam lapis- an granulosa, testosteron diubah oleh enzim aro- matase menjadi E2 yang selanjutnya diangkut ke hati dan merangsang hati untuk mensintesis vite- llogenin  (Yaron  &  Levavi-Sivan  2011).  Antido- pamin  (AD)  merupakan  bahan  kimiawi  yang berfungsi  menghambat  kerja dopamin. Dopamin merupakan neurotransmitter yang bekerja  meng- hambat  sekresi  GnRH  (FSHRH)  dari  hipotala-
mus (Cerda-Reverter & Canosa 2009, Kah 2009, Van der Kraak 2009), menghambat  sekresi FSH dari  pituitari  dan  dari  sel  gonadotropin  melalui reseptor dopamin D2 (Vacher et al . 2000, Vacher et  al .  2002)  serta  menghambat  pematangan  go- nad  melalui  aksinya  sebagai  faktor  penghambat pelepasan  gonadotropin  ( Gonadotropin  release inhibiting  factor /GRIF)  (Dufour et  al .  2005).
Dengan  penambahan  antidopamin  maka  sekresi FSHRH  dapat  meningkat  dan  memengaruhi  ter- jadinya proses vitellogenesis.
Hormon  PMSG  dan  AD  telah  digunakan pada  beberapa  spesies  ikan  untuk  merangsang perkembangan  gonadnya.  Penggunaan  PMSG  5 IU.kg -1 bobot tubuh melalui penyuntikan mampu mempercepat proses pematangan gonad dan me- ningkatkan  indeks  kematangan  gonad  ikan  lele dumbo Clarias sp.  (Mayasari  2012);  memacu pembentukan  oosit  dan  pematangan  gonad  ikan Tor soro muda dengan dosis pemberian 4 IU.kg -1 bobot tubuh (Wahyuningsih 2012); dan  mening- katkan  kadar  E2,  IGS,  IHS,  diameter  telur  serta meningkatkan perkembangan gonad hingga TKG IV  belut  ( Monopterus  albus )  dengan  pemberian 20  IU  PMSG  dan  0,01  mg  antidopamin  per  kg bobot tubuhnya (Putra 2013). Pada penelitian ini, penggunaan 20 IU PMSG dan 10 mg AD (perla- kuan  P2) pada  ikan  ringau  ( Datnioides  microle- pis )  melalui  penyuntikan  secara  intramuskular dapat  meningkatkan  nilai  IKG  dan  IHS  diban- dingkan  tanpa  pemberian  hormon  (kontrol/P1). Namun demikian, penambahan serotonin (5-HT) ke  dalam  formulasi  hormon  tersebut  (perlakuan P3,  P4  dan  P5)  dapat  menghasilkan  nilai  IKG, IHS,  konsentrasi  E2,  dan  tingkat  kematangan gonad  yang  relatif  lebih  tinggi.  Hal  ini  menun- jukkan bahwa  serotonin (5-HT) memiliki peran- an  dalam  merangsang  proses  perkembangan  go- nad ikan ringau pada penelitian ini.
Serotonin  (5-HT)  telah  digunakan  pada beberapa  spesies  organisme  akuatik  untuk  me- rangsang perkembangan gonadnya. Serotonin (5- HT) dapat menginduksi pematangan oosit kerang zebra Dreissena polymorpha (Fong et al . 1994), meningkatkan  indeks  ovarium  dan  ukuran  oosit lobster merah Procambarus clarckii (Kulkarni et al .,  1992),  merangsang  perkembangan  ovarium dan testis kepiting rawa Uca pugilator (Richard- son et  al .,  1991),  merangsang  sekresi  GtH  pada ikan  Croaker  Atlantik Micropogonias  undulates
(Khan  &  Thomas  1992),  ikan  komet Carassius auratus (Somoza et al . 1988) dan ikan mas Pru- sia Carassius  gibelio Bloch  (Sokolowska-Miko- lajczyk et al . 2015), menginduksi sekresi GnRH pada  ikan  mas Ciprinus carpio (Yu et al . 1991) dan  ikan Pagrus  major (Senthilkumaran et  al . 2001),  serta  meningkatkan  produksi  estradiol- 17 pada ikan medaka Oryzias latipes (Iwamatsu et al . 1993).
Penambahan serotonin (5-HT) dengan do- sis  tertentu  dalam  kombinasi  hormon  perlakuan pada  penelitian  ini  tampaknya  memberikan  efek positif terhadap perkembangan gonad ikan ringau dengan  memengaruhi  kinerja  sel  gonadotropin dalam  melepaskan  GnRH.  Pada  penelitian  ini, penambahan 2 mg 5-HT per-kg bobot tubuh ikan ringau  merupakan dosis terbaik dalam kombina- sinya dengan 20 IU PMSG dan 10 mg AD (perla- kuan P4). Penambahan 0,2 mg 5-HT dalam kom- binasi  hormon perlakuan  P3  belum  memberikan hasil  yang  maksimal.  Hal  ini  dapat  dilihat  dari nilai IKG, IHS, konsentrasi E2, dan tingkat per- kembangan  gonadnya  yang  masih  rendah.  Nilai IKG  (1,59±0,02%),  IHS  (2,15±0,08%),  dan
.ml -1 )  pada  perla- kuan  P3  lebih  rendah  dibandingkan  IKG  (2,38 ±0,06%), IHS (3,09±0,12%), dan konsentrasi E2
.ml -1 )  pada  perlakuan  P4.  Demi- kian  pula  dengan  tingkat  perkembangan  gonad-
nya.  Pada  perlakuan  P3  perkembangan  gonad ikan  uji  masih  dalam  tahap  pre-vitellogenesis (TKG  II),  sedangkan  pada  perlakuan  P4  gonad ikan uji sudah memasuki TKG III yang ditandai dengan  terdapatnya  butiran  lemak  dan  granula kuning telur dalam ooplasma (Gambar 5). Hal ini menunjukkan  bahwa  proses  vitellogenesis  telah terjadi pada ikan uji perlakuan P4. Vitellogenesis merupakan proses pembentukan bakal kuning te- lur  (vitellogenin)  yang  terjadi  di  hati  kemudian dibawa  oleh  aliran  darah  menuju  gonad  dan secara  selektif  terjadi  penyerapan  oleh  lapisan folikel oosit (Lubzens et al . 2010).
Pada  penambahan  dosis  5-HT  yang  lebih besar  (4  mg.kg -1 bobot  tubuh)  dalam  kombinasi hormon  pada  perlakuan  P5  ternyata  tidak  mem- berikan hasil yang lebih baik dibandingkan pada perlakuan P4. Pada perlakuan ini, gonad ikan uji masih dalam periode pre-vitellogenesis (TKG II) dengan  nilai  IKG  sebesar  1,70±0,09;  nilai  IHS sebesar 1,63±0,15% serta konsentrasi E2 sebesar
.ml -1 pada  akhir  penelitian.  Nilai parameter  perkembangan  gonad  tersebut  lebih rendah  dibandingkan  dengan  hasil  yang  dipero- leh pada perlakuan P4. Hal ini kemungkinan di- sebabkan  oleh  jumlah  5-HT  dalam  kombinasi hormon  yang digunakan  pada  perlakuan  ini  me- lebihi kebutuhan ikan sehingga diduga memberi- kan  efek  negatif  terhadap  kinerja  sel  gonadotro- pin dalam tubuh ikan ringau. Kelebihan serotonin dalam  tubuh  ikan  dikurangin  melalui  oksidase monoamine (Kreke & Dietrich 2008) dan dikelu- arkan oleh tubuh melalui sistem ekskresi (Mylo- nas et  al .  2010).  Menurut  Cerda et  al .  (1998a), efek  negatif  5-HT  terhadap  pematangan  oosit terutama pada pembelahan miosis sangat bergan- tung  pada  masuknya  tahap  akhir  pertumbuhan oosit  menuju  pematangan  yang  diaktifkan  oleh steroid  yang  menginduksi  pematangan  ( Matura- tion-inducing  Steroid /MIS).  Pada  ikan Fundulus
heteroclitus 5-HT yang diberikan secara in vitro dengan  dosis  10 -4 M  (~0,213  mg)  dapat  meng- hambat  pematangan  oosit  (Cerda et  al .  1998b).
Pada  ikan  ringau  yang  diamati  pada  penelitian ini,  efek  negatif  5-HT  diduga  terjadi  pada  dosis yang lebih tinggi yaitu 4 mg (perlakuan P5). Na- mun  berbeda  halnya  pada  ikan  kakap  Atlantik ( Micropogonias  undulatus );  dosis  5-HT  yang lebih  besar  yaitu  20  µg.g -1 (~20  mg.kg -1 )  yang diberikan  bersamaan  dengan  LHRHa  20  ng.g -1
(~0,02 mg.kg -1 ) melalui penyuntikan intraperito- neal tidak memberikan reaksi negatif, pada dosis tersebut  5-HT  dapat  meningkatkan  kadar  gona- dotropinnya  (Khan  &  Thomas  1992).  Adanya perbedaan perkembangan gonad yang didapatkan dari penggunaan serotonin pada beberapa spesies ikan tampaknya berhubungan dengan tingkat ke- matangan individu ikan tersebut serta kebutuhan 5-HT pada masing-masing spesies ikan yang ber- beda-beda. Kreke & Dietrich (2008) menyatakan bahwa  5-HT  memberikan  pengaruh  pada  organ target  serta  jalur  yang  berbeda  dan  tampaknya spesifik  berdasarkan  spesies  dan  mungkin  juga bergantung  pada  jenis  kelamin  dan  atau  tingkat perkembangan dan reproduksi individu ikan.
Pada  pengamatan  pertumbuhan  bobot ikan  uji,  diperoleh  nilai  tertinggi  pada  akhir  pe- nelitian  pada  perlakuan  P5  (PMSG-AD  +  4  mg 5-HT) yaitu sebesar 61,87±10,30 g. Nilai ini  re- latif  lebih  tinggi  dibandingkan    pada  perlakuan P4  (PMSG-AD  +  2  mg  5-HT)  yaitu  sebesar 59,67±1,48 g, namun secara statistik kedua nilai tersebut  tidak  berbeda  nyata  (p>0,05).  Secara umum,  pertumbuhan  bobot  ikan  uji  pada  perla- kuan P5 tidak berbeda nyata (p>0,05) dengan se- mua  perlakuan  injeksi  menggunakan  hormon baik  PMSG  dan  AD  (P2)  maupun  yang  ditam- bahkan  dengan  serotonin  (5-HT)  sebesar  0,2g (P3) dan 2 g (P4), namun berbeda nyata (p<0,05) dengan  perlakuan  kontrol.  Hal  ini  berhubungan
dengan  perkembangan  gonad  ikan  ringau  yang diberi  perlakuan  penyuntikan  hormon  (P2,  P3, P4, dan  P5)  yang  lebih  baik  dibandingkan  de- ngan  perlakuan  kontrol  (P1).  Effendie (2002) menyatakan bahwa bobot tubuh induk ikan beti- na akan meningkat seiring dengan perkembangan gonadnya.  Perkembangan  gonad  pada  perlakuan penyuntikan  hormon  (P2,  P3  P4  dan  P5)  lebih baik  dengan  kematangan  gonad  berada  pada TKG II-III dibandingkan  perlakuan  kontrol  (P1) dengan gonadnya yang masih belum berkembang dan berada pada TKG I (Gambar 4).

## Simpulan
Penyuntikan ikan ringau dengan serotonin (5-HT) sebanyak 2  mg yang  dtambahkan  ke da- lam  hormon Pregnant  Mare  Serum Gonadotro- pin sebanyak 20 IU dan antidopamin 10  mg un- tuk  setiap  1  kg  bobot  tubuhnya  dapat  mening- katkan  nilai  indeks  kematangan  gonad,  indeks hepatosomatik,  konsentrasi  estradiol- dan  menghasilkan  perkembangan  gonad  paling baik hingga mencapai TKG III. Peningkatan do- sis  serotonin  menjadi  4  mg dalam  kombinasi hormon  tersebut dapat  memberikan  efek  negatif terhadap  kinerja  sel  gonadotropin  dalam  mele- paskan  GnRH  sehingga  perkembangan  gonad ikan tidak maksimal.

## Persantunan
Ucapan  terima  kasih  penulis sampaikan kepada  pimpinan  Balai  Penelitian  dan  Pengem- bangan  Budidaya  Ikan  Hias, Depok  yang  telah menyediakan sarana dan prasarana serta dukung- an  sehingga  penelitian  ini  dapat  dilaksanakan. Terima kasih juga penulis sampaikan kepada Ba- pak  Sawung  Cindelaras,  Bapak  Acep  Sutisna, Ibu  Dinar  Tri  Agustina  beserta  rekan  yang  lain yang telah membantu dalam pelaksanaan peneli- tian ini. Makalah ini merupakan bagian dari tesis
maturasi  ikan  ringau ( Datnioides microlepis ) secara hormonal .

## Daftar pustaka
Bolamba  D,  Mattont  P,  Estrada  R,  Dufour  JJ. 1992.  Effects  of  pregnant  mare's  serum gonadotropin  treatment  on  follicular  po- pulations and ovulation rates in prepuber- tal  gilts  with  two  morphologically  diffe- rent  ovarian  types. Journal  of  Animal Science, 70(6): 1916-1922.
Cerda  J,  Reich  G,  Wallace  RA,  Selman  K. 1998a.  Serotonin  inhibition  of  steroid- induced  meiotic  maturation  in  the  teleost Fundulus  heteroclitus :  Role  of  cyclic AMP  and  protein  kinases. Molecular  Re- production and Development , 49(3): 333 341.
Cerda J, Subhedar N, Reich G, Wallace RA, Sel- man K. 1998b. Oocyte sensitivity to sero- tonergic  regulation  during  the  follicular cycle of the teleost Fundulus heteroclitus . Biology of Reproduction , 59(1): 53 61.
Cerda-Reverter JM,  Canosa  LF. 2009. Neuroen- docrine  systems  of  the  fish  brain. In : Bernier NJ, Van der Kraak G, Farrell AP, Brauner  CJ (eds.). Fish  Physiology  vo- lume  28:  Fish  Neuroendocrinology. Academic Press. Burlington. p 3 74.
Dufour  S,  Weltzien  F-A,  Sebert  M-E,  Le  Belle N,  Vidal  B,  Vernier  P,  Pasqualini  C. 2005.  Dopaminergic  inhibition  of  repro- duction in teleost fishes, ecophysiological and  evolutionary  implications. Annals NewYork Academy Science , 1040: 9 21.
Effendie  MI.  2002. Biologi  perikanan .  Yayasan Pustaka Nusatama. Yogyakarta. 163 hlm.
Fong  PP,  Kyozuka  K,  Abdelghani  H,  Hardege JD,  Ram  JL.  1994. In  vivo and in  vitro induction  of  germinal  vesicle  breakdown in  a  freshwater  bivalve,  the  zebra  mussel Dreissena polymorpha (Pallas). The Jour- nal of Experimental Zoology , 269(5): 467- 474.
Gallego  V,  Mazzeo  I,  Vílchez  MC,  Peñaranda DS, Carneiro PCF, Pérez L, Asturiano JF. 2012.  Study  of  the  effects  of  thermal  re- gime and alternative hormonal treatments on  the  reproductive  performance  of European  eel  males  ( Anguilla anguilla ) during  induced  sexual  maturation. Aqua- culture , 354 355: 7 16.
Gunarso W. 1989. Mikroteknik . Pusat Antar Uni- versitas Ilmu Hayat. Institut Pertanian Bo- gor. Bogor. 117 hlm.
Iwamatsu  T,  Toya  Y,  Ouchi  H,  Aoyama  T, Yoneima J, Kondo T, Imai  K, Hattori H, Ikegami  S,  Onda  M.  1992.  Characteriza- tion  of  a  low  molecular  weight  factor  in chicken  serum  with  oocyte  maturation- inducing  activity. Biomedical  Research, 13(6): 429 437.
Iwamatsu T, Toya Y, Sakai N, Terada Y, Nagata R, Nagahama Y. 1993. Effect of 5-hydro- xytryptamine  on  steroidogenesis  and oocyte  maturation  in  preovulatory  folli- cles of the medaka, Oryzias latipes . Deve- lopment, Growth & Differentiation 35(6): 625 630.
Kah O. 2009. Endocrine targets of the hypothala- mus and pituitary. In : Bernier NJ, Van der Kraak  G,  Farrell  AP,  Brauner  CJ  (eds.). Fish  Physiology  volume  28:  Fish  Neuro- endocrinology. Academic  Press.  Burlin- gton. pp 75 112.
Keys  SJ,  Crocos  PJ.  2006.  Domestication, growth  and  reproductive  performance  of wild,  pond  and  tank-reared  brown  tiger shrimp Penaeus  esculentus . Aquaculture , 257(1-4): 232 240.
Khan IA, Thomas P. 1992. Stimulatory effects of serotonin  on  maturational  gonadotropin release  in  the  Atlantic  croaker, Micropo- gonias undulatus . General and Compara- tive Endocrinology, 88(3): 388 396.
Kottelat M, Whitten AJ, Kartikasari SN, Wirjoat- modjo  S.  1993. Freshwater  Fishes  of Western Indonesia and Sulawesi . Periplus Editions. Jakarta 158 p.
Kreke N, Dietrich DR. 2008. Physiological end- points  for  potential  SSRI  interactions  in fish. Critical  Reviews  in  Toxicology,
37(3): 215-247.
Kulkarni  GK,  Nagabhushanam  R,  Amaldoss  G, Jaiswal  RG,  Fingerman  M.  1992. In  vivo stimulation of ovarian development in the red swamp crayfish, Procambarus clarkii (Girard),  by  5-hydroxytryptamine. Inver- tebrate  Reproduction  and  Development, 21(3): 231-239.
Lorenzen K, Beveridge MCM, Mangel M. 2012.
Cultured  fish:  integrative  biology  and management  of  domestication  and  inter- actions  with  wild  fish.  Cambridge  Philo- sophical  Society. Biological  Reviews, 87(3): 639 660.
Lubzens  E,  Young  G,  Bobe  J,  Cerda  J.  2010. Oogenesis  in  teleost:  how  fish  eggs  are formed. General and Comparative Endo- crinology , 165(3): 367-389.
Magalhaes  T,  Mossolin  EC,  Mantelatto  FL. 2012.  Gonadosomatic  and  hepatosomatic indexes  of  the  freshwater  shrimp Macro- brachium  olfersii (Decapoda,  Palaemon- idae)  from  São  Sebastião  Island,  South- eastern  Brazil. Pan-American  Journal  of Aquatic Sciences , 7(1): 1-9.
Mananos E, Duncan N, Mylonas C. 2009. Repro- duction and control of ovulation, spermia- tion  and  spawning  in  cultured  fish. In : Cabrita  E,  Robles  V,  Herraez  P  (eds.). Methods  in  Reproductive  Aquaculture: Marine  and  Freshwater  Species .  CRC Press, Florida. p 3-80.
Mayasari N. 2012. Pemacuan kematangan gonad ikan  lele  dumbo  ( Clarias sp . )  betina  de- ngan kombinasi hormon pmsg dan Spiru- lina . Tesis .  Sekolah  Pascasarjana  Institut Pertanian Bogor. Bogor. 85 hlm.
Mylonas  CC, Fostier  A,  Zanuy  S.  2010. Brood- stock management and hormonal manipu- lations  of  fish  reproduction. General  and Comparative  Endocrinology, 165(3): 516 534.
Nagahama  Y,  Matsuhisa  A,  Iwamatsu  T,  Sakai N, Fukada S. 1991. A mechanism for the action of pregnant mare serum gonadotro- pin  on  aromatase  activity  in  the  ovarian follicle  of  the  medaka, Oryzias  latipes . The  Journal  of  Experimental  Zoology , 259(1): 53-58.
Podhorec  P,  Kouril  J.  2009.  Induction  of  final oocyte  maturation  in  cyprinidae  fish  by hypothalamic  factors:  A  review. Veteri- narni Medicina, 54(3): 97-110.
Prazad  P,  Ogawa  S,  Parhar  IS.  2015.  Review: Role  of  serotonin  in  fish  reproduction. Frontiers in Neuroscience 195(9): 1-9.
Putra WKA. 2013. Induksi maturasi belut sawah ( Monopterus albus ) secara hormonal. Te- sis . Sekolah Pascasarjana Institut Pertani- an Bogor. Bogor. 54 hlm.
Richardson  HG,  Deecaraman  M,  Fingerman  M. 1991.  The  effect  of  biogenic  amines  on ovarian  development  in  the  fiddler  crab, Uca pugilator . Comparative Biochemistry and Physiology, 99(1/2): 53-56.
Rohmy S, Solichah L, Satyani D. 2011. Perkem- bangan  reproduksi  dan  stimulasi  hormo- nal ikan hias tigerfish ( Datnioides micro- lepis ) di lingkungan budidaya. In : Naing- golan  C,  Sondita  FM,  Sudrajat  A,  Mase- ngi  S.  Sipahutar  YH.  Saifurridal  (ed.). Prosiding  Seminar  Nasional  Perikanan Indonesia  2011 .  Sekolah  Tinggi  Perikan- an. Jakarta. p. 316-322.
Rohmy S, Satyani D, Cindelaras S, Himawan Y. 2012.  Perkembangan  gonad  ikan  hias tigerfish ( Datnioides microlepis ) pada tiga kelompok  ukuran  berbeda. In :  Haryanti, Rachmansyah,  Sugama  K,  Parenrengi  A, Sudrajat  A,  Imron,  Sunarto  A,  Sumiarsa GS,  Azwar  ZI, Kristanto  AH  (ed.). Indo- aqua-Forum inovasi teknologi akuakultur 2012 . Pusat Penelitian dan Pengembangan Perikanan  Budidaya,  BRKP-KKP.  Jakar- ta. p. 369-379.
Rohmy S, Satyani D, Cindelaras S, Himawan Y. 2014.  Perkembangan  gonad  ikan  ringau ( Datnioides  microlepis )  pada  salinitas berbeda. In :  Sugama  K,  Kusnendar  E, Rachmansyah, Giri NA, Yuhana M, Kris- tanto  AH,  Imron,  Radiarta  IN,  Dewi RRSPS  (ed.). Forum  inovasi  teknologi akuakultur  2014 .  Pusat  Penelitian  dan
Pengembangan Perikanan Budidaya, BRKP-KKP. Jakarta. p. 253-259.
Senthilkumaran B, Okuzawa K, Gen K, Kagawa H. 2001. Effects of serotonin, GABA and neuropeptide  Y  on  seabream  gonadotro- pin  releasing  hormone  release  in  vitro from  preoptic-anterior  hypothalamus  and pituitary  of  red  seabream, Pagrus  major .
Journal  of  Neuroendocrinology 13(5): 395-400.
Sholichah L, Subandiyah S, Satyani D. 2010. Si- klus reproduksi tahunan ikan ringau, tiger fish  ( Datnioides  quadrifasciatus )  di  ling- kungan  budidaya  akuarium  dan  bak. In : Sudrajat A, Rachmansyah, Hanafi A, Az- war  ZI,  Imron,  Kristanto  AH,  Chumaidi, Insan  I  (ed.). Forum  Inovasi  Teknologi
Akuakultur  2010. Pusat  Penelitian  dan Pengembangan Perikanan Budidaya,
BRKP-KKP. Jakarta. p 417-424.
Sokolowska-Mikolajczyk  M,  Gajdzinski  D, Gosiewski  G,  Socha  M.  2015. Serotonin, GnRH-A,  and  dopamin  interaction  in  the kontrol  of  in  vivo  luteinizing  hormon re- lease  in  Prussian  carp  ( Carassius  gibelio Bloch)  at  the  time  of  gonad  recrudes- cence. Czech  Journal  of  Animal  Science , 60(2): 45 51.
Somoza GM, Yu KL, Peter RE. 1988. Serotonin stimulates gonadotropin release in female and  male  goldfish, Carassius  auratus L. General and Comparative Endocrinology, 72(3): 374-382.
Treasurer  JW,  Holliday  FGT.  1981.  Some  as- pects of the reproductive biology of perch Perca fluviatilis L. A histological descrip- tion of the reproductive cycle. Journal of Fish Biology , 18(3): 359-376.
Vacher C, Mananos E, Breton B, Marmignon M- H, Saligaut C. 2000. Modulation of pitui- tary  dopamine  D1  or  D2  receptors  and secretion of both FSH and LH during the annual reproductive cycle of  female rain- bow  trout. Journal  of  Neuroendocrino- logy , 12(12): 1219 1226.
Vacher C, Ferriere F, Marmignon M-H, Pellegri- ni  E,  Saligaut  C.  2002.  Dopamine  D2 receptors  and  secretion  of  FSH  and  LH: role of sexual steroids  on the pituitary of the  female  rainbow  trout. General  and Comparative  Endocrinology ,  127(2):
198 206.
Van der Kraak  G. 2009. The GnRH system and the  neuroendocrine  regulation  of  repro- duction. In : Bernier NJ, Van der Kraak G, Farrell AP, Brauner CJ (eds.). Fish Physi- ology  volume  28:  Fish  Neuroendocrino- logy. Academic  Press.  Burlington.  pp. 115 149.
Wahyuningsih H. 2012. Induksi buatan pada per- kembangan gonad ikan Tor soro . Diserta- si . Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian Bogor. Bogor. 94 hlm.
Yu KL, Rosenblum PM, Peter RE. 1991. In vitro release  of  gonadotropin-releasing  hor- mone from the brain p-anterior hypothala- mic  region  and  pituitary  of  female  gold- fish. General  and  Comparative  Endocri- nology , 81(2): 256-267.
Yaron Z, Levavi-Sivan B. 2011. Endocrine regu- lation of fish reproduction. In : Farrell AP (ed.). Encyclopedia  of  Fish  Physiology: from genome to  environment. San Diego, Academic Press 2: 1500-1508.