## Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Jambu Biji (Psidium guajava L.) Terhadap Bakteri Escherichia coli dan Vibrio cholerae
Antibacterial Activites of Extract Guava Leaf (Psidium guajava L.) on Escherichia coli and Vibrio cholerae
Noer Qonita 1) , Sri Sutji Susilowati* 1) , Dini Riyandini 2)
1) Jurusan Farmasi, Fakultas Ilmu-ilmu Kesehatan, Universitas Jenderal Soedirman
2) Fakultas Biologi Universitas Jenderal Soedirman
E-mail : srisutji.susilowati@yahoo.com 2018

## Abstrak
Diare merupakan salah satu masalah kesehatan yang masih menjadi penyebab utama tingginya  morbiditas  dan  mortalitas  pada  anak  di  negara  berkembang.  Penelitian  ini bertujuan  untuk  mengetahui  perbandingan  volume  ekstrak  daun  jambu  biji  muda  dan tua yang memiliki penghambatan paling tinggi terhadap bakteri E. coli dan V. cholerae. Ekstrak  daun  jambu  biji  muda  dan  tua  diekstraksi  dengan  metode  maserasi menggunakan etanol 96%.  Ekstrak kental  yang diperoleh kemudian dibuat konsentrasi 10%.  Rancangan  penelitian  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  yang dibagi  menjadi  5  perlakuan  dengan  perbedaan  perbandingan  daun  jambu  biji  muda  : daun jambu biji tua yaitu A 0 mL : 10 mL; B 2,5 mL : 7,5 mL; C 5 mL: 5 mL; D 7,5 mL : 2,5 mL; dan E 10 mL : 0 mL. Masing masing perlakuan dilakukan uji aktivitas antibakteri menggunakan  metode  Kirby-Bauer  dengan  kontrol  positif  kloramfenikol  dan  kontrol negatif  DMSO  5%.  Analisis  data  menggunakan  Anova  pada  tingkat  kepercayaan  95% dan  dilanjutkan  dengan  uji  LSD.  Uji  aktivitas  antibakteri  menunjukkan  konsentrasi ekstrak  daun  jambu  biji  muda  dan  daun  jambu  biji  tua  sebesar  10%  menghasilkan penghambatan  pertumbuhan bakteri. Zona  hambat  terbesar  pada  perlakuan  A  dengan zona hambat 8,16 mm pada E. coli dan 6,96 mm pada V. cholerae, dengan kadar tanin total sebesar 7,092 %GAE. Sedangkan zona hambat terkecil pada perlakuan E dengan zona  hambat  6,6  mm  pada  E.  coli  dan  6,43  mm  pada  V.  cholera,  dengan  kadar  tanin total sebesar 4,456 %GAE.
Kata  kunci:  Daun  Jambu  Biji,  E.  coli,  V  cholerae,  Kadar  Tanin  Total,  Diameter  Zona Hambat

## Abstract
Diarrhea is one of the  health problems that is still a  major cause of high morbidity and mortality in children in developing countries. This study aims to determine the effective comparison of young and old guava leaves against E. coli and V. cholerae. Extracts of young and old guava leaves were extracted by maceration method using ethanol 96%. The  thick  extract  obtained  was  then  made  up  to  a  concentration  of  10%.  The  study design used randomized completely design (RCD) which was divided into 5 group with

## Artikel Penelitian
Acta Pharm Indo (2019) Vol 7 No 2: hal 51-57
differences ratio of guava  young  leaves between guava old leaves.  They are  A  0 mL : 10 mL; B 2,5 mL : 7,5 mL; C 5 mL: 5 mL; D 7,5 mL : 2,5 mL; dan E 10 mL : 0 mL. Each treatment  was  tested  for  antibacterial  activity  using  the  Kirby-Bauer  method  with chloramphenicol  positive  control  and  DMSO  5%  negative  control.  Data  were  analyzed using  ANOVA  at  the  95%  confidence  level  followed  by  LSD  test.  Antibacterial  activity test showed that  10% guava leaves  extracts  have an antibacterial  activity.  The largest inhibition zone was showed in group A, with inhibition zone 8,16 mm on E. coli and 6,96 mm on V. cholerae, with total tannin content 7,092 %GAE. The smallest  inhibition zone was  showed  in  group  E  with  inhibition  zone  6,6  mm  on  E.  coli  and  6,43  mm  on  V. cholera, with total tannin content 4,456 %GAE.
Keywords:  Psidium  guajava,  E.  coli,  V.  cholerae,  Total  tannin  content,  inhibition  zone diameter

## PENDAHULUAN
Diare  merupakan  salah  satu  penyebab  utama  kematian  di  berbagai  negara  termasuk  di Indonesia  (Anas  et  al.,  2012).  Hingga  saat  ini  masih  banyak  masyarakat  yang menggunakan pengobatan  tradisional  seperti  penggunaan  daun  jambu  biji  sebagai  obat anti diare. Penggunaan daun jambu biji (Psidium guajava) secara luas ini harus disertai dengan  adanya  bukti  ilmiah  tentang  perbedaan  penggunaan  daun  jambu  biji  muda  dan daun jambu biji tua terhadap penghambatan pertumbuhan bakteri penyebab diare seperti E.  coli  dan  V.  cholerae.  Penelitian  lebih  lanjut  diperlukan  untuk  membuktikan perbedaan  kandungan  antara  daun  muda  dan  daun  tua  jambu  biji  beserta  uji  aktivitas anti bakterinya.
Tanaman  jambu  biji  merupakan  tumbuhan  tropis  yang  secara  empiris  digunakan  oleh masyarakat  sebagai  obat  antidiare  (Wibisono,  2011).  Daun  jambu  biji  mengandung tanin,  flovonoid,  minyak  atsiri,  dan  alkaloid.  Kandungan  tanin  pada  daun  jambu  biji mempunyai  sifat  sebagai  pengkelat  berefek  spasmolitik  yang  mengerutkan  usus sehingga  gerak  peristaltik  berkurang  dan  juga  efek  spasmolitik  ini  juga  dapat mengerutkan dinding sel bakteri atau membran sel sehingga mengganggu permeabilitas sel.  Tanin  juga  mempunyai  daya  antibakteri  dengan  cara  mempresipitasikan  protein, karena diduga tanin mempunyai efek sama dengan senyawa fenolat (Fratiwi, 2015).
Fadiah et al. (2014) melaporkan infusa daun jambu biji 10% memiliki aktivitas terhadap E. coli dan V. cholerae masing-masing dengan zona hambat 14,10 mm dan 14,03 mm. Pada umumnya masyarakat hanya mengetahui bahwa daun jambu biji dapat digunakan untuk  pengobatan  antidiare tanpa  mengetahui  jenis  daun  yang  memiliki  penghambatan paling  tinggi.  Kebanyakan  masyarakat  menganggap  bahwa  daun  muda  maupun  tua dengan proporsi yang sama dapat digunakan sebagai obat antidiare. Menurut Bahriul et al.  (2014),  semakin  tua  umur  tanaman  semakin  terakumulasi  senyawa  bioaktif  yang terkandung  didalamnya.  Peningkatan  senyawa  bioaktif  ini  disebabkan  oleh  proses sintesis  senyawa  bioaktif  yang  meningkat  bila  terkena  cahaya  langsung,  sehingga senyawa  yang  terkandung  pada  daun  muda  dan  daun  tua  berbeda.  Penelitian  ini bertujuan  untuk  mengetahui  variasi  perbandingan  volume  ekstrak  daun  jambu  biji  tua dan  muda  yang  memiliki  penghambatan  paling  tinggi  terhadap  bakteri  E.  coli  dan  V. cholerae penyebab diare.
Acta Pharm Indo (2019) Vol 7 No 2: hal 51-57

## BAHAN DAN METODE
Metode  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  eksperimental  Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan variasi perbandingan volume ekstrak daun jambu biji muda dan daun jambu biji tua konsentrasi 10% seperti tersaji pada Tabel 1.
Tabel.1. Variasi perbandingan volumr ekstrak daun jambu biji muda dan tua
Perlakuan Ekstrak daun jambu biji muda (mL) Ekstrak daun jambu biji tua (mL) A 0 10 B 2,5 7,5 C 5 5 D 7,5 2,5 E 10 0
Determinasi dan pembuatan ekstrak daun jambu biji
Daun jambu biji muda dan daun jambu biji tua dipilih terlebih dahulu. Daun jambu biji tua  memiliki  permukaan  licin,  berwarna  hijau  tua  dan  tekstur  keras  sedangkan  daun jambu  biji  muda  yang  memiliki  permukaan  atas  daun  berambut  halus,  berwarna  hijau muda  dan  tekstur  lunak.  Deteminasi  dilakukan  di  Laboratorium  Lingkungan  Fakultas Biologi  Universitas  Jenderal  Soedirman  Purwokerto.  Daun  jambu  biji  muda  dan    tua masing   masing   disiapkan    sebanyak  800  gram dicuci  dengan air mengalir  kemudian dikeringkan dibawah sinar matahari. Daun yang sudah kering dijadikan serbuk simplisia dengan blender dan diayak dengan ayakan 40 mesh. Sebanyak 200 gram masing-masing serbuk  dimaserasi  menggunakan  pelarut  etanol  96%  selama  3  hari,  dilakukukan remaserasi  selama  2  kali.  Kemudian  filtrat  dipekatk  menggunaka  rotary  evaporator. Kemudian disaring menggunakan kertas whatman no.1 Ekstrak dibuat konsentrasi 10%, 1 gram ekstrak dan dilarutkan ke dalam 10 mL DMSO 5% (Mailoa et al., 2014).
Pengujian aktivitas antibakteri dengan metode difusi cakram
Pengujian  dilakukan  menggunakan metode  difusi  cakram  pada  media  MHA steril. Medium  MHA  agar  cair  steril  disiapkan  dan didinginkan  kemudian  dimasukkan  1  mL inokolum  bakteri.  Setelah  penuangan,  cawan  petri  segera  digerakkan  melingkar  atau membentuk angka delapan agar sel- sel mikroba tersebar secara merata. Setelah cawan memadat,  kertas  cakram  diletakkan  di  atas  media,  kemudian  ditetesi  dengan  ekstrak sebanyak  20  µl  sesuai  dengan  kelompok  perlakuan  dan  diletakkan  diatas  media  MHA yang telah mengandung bakteri uji. Sebagai kontrol negatif digunakan DMSO 5% dan kontrol  positif  menggunakan  Kloramfenikol  50  µg.  Biakan  kemudian  diinkubasi  pada suhu 37 ˚C selama 24 jam dengan posisi terbalik. Diameter zona hambat yang terbentuk dinyatakan  dalam  mm  dengan  mengukur  diameter  zona  bening  menggunakan  jangka sorong (CLSI, 2017).

## Penentuan kadar tanin total
Penentuan kadar  tanin  total  menggunakan  metode  kalorimetri  dengan  spektrofotometri UV. Dilakukan pengukuran larutan standar yaitu asam tanat dengan 5 konsentrasi yaitu 20; 40; 60; 80; dan 100 ppm. Masing masing seri pengenceran diambil 1 mL ke dalam labu ukur 10 mL dan dilakukan pengujian dengan cara menambahkan reagen folin denin 0,5 mL diinkubasi selama 3 menit kemudian ditambahkan 1 mL Na2CO3 ditambahkan
Acta Pharm Indo (2019) Vol 7 No 2: hal 51-57
akuades sampai  tanda batas, diinkubasi  selama  64 menit. Serapan dibaca pada  panjang gelombang  maksimal  740  nm  dan  dihitung  persamaan  regresi  linier.  Penetapan  kadar tanin total pada sampel dilakukan dengan mengambil 1 mL sampel ke dalam labu ukur 10  mL,  masing-masing  perlakuan  kemudian  diambil  reagen  folin  denin  0,5  mL diinkubasi selama 3 menit kemudian ditambahkan 1 mL Na 2 CO 3 ditambahkan akuades sampai  tanda  batas,  diinkubasi  selama  64  menit.  Serapan  dibaca  pada  panjang gelombang maksimal 740 nm. Kadar dihitung menggunakan %GAE.
Analisis Data
Zona hambat yang diperoleh dianalisis statistika dengan dengan uji One Way Analysis of Variant (Anova) menggunakan program SPSS 22 for windows. Uji dilanjutkan dengan Post hoc test menggunakan uji Least Significant Difference (LSD).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  rendemen  ekstrak  daun  jambu  biji  muda  dan  tua  berturut-turut  sebesar  10%  dan 12,5%.  Rendemen  pada  daun  tua  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  daun  muda dikarenakan pada daun tua terdapat lebih banyak komponen bioaktif dibandingkan daun muda (Nurhayati et al., 2009).
Hasil  penelitian  menunjukkan  adanya  perbedaan  zona  hambat  antar  perlakuan  ekstrak konsentrasi 10% terhadap bakteri E .coli (Gambar 1) dan V.cholerae (Gambar 2).
Gambar  1.  Grafik perlakuan kombinasi ekstrak terhadap diameter zona hambat  pertumbuhan E. coli serta data kadar tanin total. Masing-masing perlakuan menunjukkan perbedaan perbandingan kombinasi ekstrak daun jambu biji. Perbandingan ekstrak daun jambu biji muda : daun jambu biji tua yaitu A 0 mL : 10 mL; B 2,5 mL : 7,5 mL; C 5 mL: 5 mL; D 7,5 mL : 2,5 mL; dan E 10 mL : 0 mL. Uji  anti bakteri  dilakukan dengan metode uji difusi cakram dengan mengukur diameter zona hambat setelah inkubasi 24 jam.
Gambar  2. Grafik perlakuan kombinasi ekstrak terhadap diameter zona hambat pertumbuhan V. cholerae  serta  data  kadar  tanin  total.  Masing-masing  perlakuan  menunjukkan  perbedaan perbandingan  kombinasi  ekstrak  daun  jambu  biji.  Perbandingan  ekstrak  daun  jambu  biji  muda  : daun jambu biji tua yaitu A 0 mL : 10 mL; B 2,5 mL : 7,5 mL; C 5 mL: 5 mL; D 7,5 mL : 2,5 mL; dan E 10 mL : 0 mL. Uji anti bakteri dilakukan dengan metode uji difusi cakram dengan mengukur diameter zona hambat setelah inkubasi 24 jam.
Hasil analisis keragaman data zona hambat dengan variasi perbandingan volume ekstrak daun jambu biji muda dan daun jambu biji tua terhadap penghambatan pertumbuhan E. coli  dan  V.  cholerae  dengan  tingkat  kepercayaan  95%  menunjukkan  signifikasi  data yang  tinggi  yaitu  berbeda  signifikan  dengan  p-value  <  0,005.  Hasil  analisis  lanjut dengan LSD untuk melihat pengaruh perbandingan ekstrak daun muda dan tua terhadap pertumbuhan E.coli dan V. cholerae menunjukkan tidak ada perbedaan signifikan antar perlakuan.
Hasil uji daya hambat ekstrak daun jambu biji pada penelitian ini lebih rendah dari hasil uji daya hambat infusa daun jambu biji oleh Fadiah et al. (2016). Diameter zona hambat yang  dihasilkan  ekstrak  infusa  daun  jambu  biji  10%  terhadap  bakteri  E.  coli  sebesar 14,10  mm  dan  V.  cholerae  14,03  mm.  Metode  infusa  menggunakan  pelarut  air sedangkan  maserasi  menggunakan  pelarut  96%  etanol.  Kepolaran  larutan  penyari mempengaruhi  senyawa  yang  terekstraksi  sehingga  semakin  polar  larutan  penyari semakin  banyak  kandungan  tanin  yang  dihasilkan  dan  mempengaruhi  uji  daya  hambat pada bakteri (Wardani, 2010).
Aktivitas antibakteri dari ekstrak daun jambu biji dipengaruhi oleh kadar senyawa tanin dalam  daun  jambu  biji.  Senyawa  tanin  mempunyai  aksi  antibakteri  yang  berhubungan dengan kemampuannya untuk menonaktifkan adhesin bakteri, menghambat kerja enzim dan menghambat trasnport protein pada selubung sel. Selain itu, perusakan membran sel bakteri dan pembentukan ikatan komplek ion logam dari tanin berperan dalam toksisitas tanin.  Bakteri  yang  tumbuh  dalam  kondisi  aerob  memerlukan  zat  besi  untuk  berbagai fungsi, termasuk reduksi dari prekursor ribonukleotida DNA. Adanya ikatan antara tanin dan besi akan menyebabkan terganggunya pertumbuhan bakteri ( Fratiwi, 2015).
Penentuan  kadar  tanin  dilakukan  berdasarkan  perhitungan  dari  persamaan  berdasarkan kurva baku kadar tanin, diperoleh persamaan regresi  y = 0,1032x + 0,211 dengan nilai koefisien determinasi sebesar 0,997. Nilai (r) yang mendekati satu menunjukkan bahwa persamaan regresi tersebut adalah linear (Mukhriani et al, 2017).
Gambar  3.  Grafik  perlakuan  kombinasi  ekstrak  terhadap  kadar  tanin  total.  Masing-masing perlakuan  menunjukkan  perbedaan  perbandingan  kombinasi  ekstrak  daun  jambu  biji. Perbandingan ekstrak daun jambu biji muda : daun jambu biji tua yaitu A 0 mL : 10 mL; B 2,5 mL : 7,5  mL;  C  5  mL:  5  mL;  D  7,5  mL  :  2,5  mL;  dan  E  10  mL  :  0  mL.  Penentuan  kadar  tanin  total menggunakan  metode  kalorimetri  yaitu  spektrofotometri  UV  pada  panjang  gelombang  maksimal 740 nm. Kadar dihitung menggunakan %GAE.
Hasil uji kadar tanin total pada perbandingan volume ekstrak daun jambu biji muda dan tua  menggunakan  prosentase  GAE  menunjukkan  daun  jambu  biji  tua  dan  muda mengandung  senyawa  tanin.  Gambar  3  menunjukkan  kadar  tanin  yang  paling  tinggi terdapat  pada  perlakuan  A  dengan  nilai  %GAE  sebesar  7,092%  dan  terrendah  pada perlakuan  E  dengan  %GAE  sebesar  4,456%.  Hal  ini  linier  dengan  histogram  pada Gambar 1 dan Gambar 2, diameter zona hambat paling luas terdapat pada perlakuan A dan diameter zona hambat terkecil pada perlakuan E. Penelitian ini membuktikan bahwa semakin  tinggi  kadar  tanin  maka  semakin  tinggi  pula  zona  hambat  yang  dihasilkan karena  pada  daun  tua  mengandung  tanin  yang  lebih  banyak  dibandingkan  daun  muda. Semakin  tua  umur  tanaman  maka  semakin  terakumulasi  senyawa  bioaktif  yang terkandung  didalamnya  karena  proses  sintesis  senyawa  bioaktif  yang  meningkat (Ghulamahdi et al, 2008).

## KESIMPULAN
Ekstrak  daun  jambu  biji  muda  dan  daun  jambu  biji  tua  dengan  konsentrasi  10% memiliki  kemampuan  menghambat  bakteri  E.  coli  dan  V.  cholerae  dengan  diameter zona hambat 6,43 mm – 8,17 mm. Perbandingan volume yang memiliki penghambatan paling  tinggi  terdapat  pada  perlakuan  A  yaitu  perbandingan  ekstrak  daun  jambu  biji muda  0  mL  :  ekstrak  daun  jambu  biji  10  mL  dengan  diameter  zona  hambat  8,17  mm pada  bakteri  E.  coli  dam  V.  cholerae  yaitu  6,96  mm.  Hal  ini  dikarenakan  kandungan tanin  pada  daun  jambu  biji  tua  lebih  besar  dengan  prosentase  GAE  sebesar  7,092% sedangkan  pada  daun  jambu  biji  muda  lebih  kecil  dengan  prosentase  GAE  sebesar 4,456%.

## REFERENSI
Anas,  Y.,  Fithria,  R.F.,  Purnamasari,  Y.A.,  Ningsih,  K.A.,  dan  Noviantoro,  S.G.,  S.  2012,  Aktivitas Antidiare Ekstrak Etanol Daun Randu (Ceiba Petandra L, Gaern) pada Mencit Jantan Galur BalbC, Jurnal Ilmu Farmasi dan Farmasi Klinik, 9 (2): 16–22.
Acta Pharm Indo (2019) Vol 7 No 2: hal 51-57
e-ISSN 2621-4520
Bahirul P., Nurdin R., dan Anang W.M.D., 2014, Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Salam (Syzygium polyanthum) dengan menggunakan 1,1-Difenil-2-pikrilhidrazil, J. Akad. Kim, ISSN 2302-6030, Universitas Tadulako, Palu.
Clinical  and  Laboratory  Standards  Institute,  2017,  Antimicrobial  Susceptibility  Testing  (AST),  US:  The Clinical and Laboratory Standards Institute.
Fadiah,  R.,  Izzah,  Z.  dan  Sugijanto,  N.E.N.,  2014,  Aktivitas  Antibakteri  Kombinasi  Probiotik (Bifidobacterium Bifidum dan Lactobacillus Acidophilus) dengan Infus Daun Jambu Biji (Psidium guajava), 7.
Fratiwi, Y., 2015, The Potential of Guava Leaf (Psidium guajava L.) for Diarrhe, Jurnal Majority, 4: 113– 118. doi: 10.1016/j.jcis.2013.04.044.
Ghulamahdi, M., Aziz, S, A., dan Nirwan, 2008, Peningkatan Laju Pertumbuhan dan Kandungan Flavonoid Klon Daun Dewa (Gynura pseudochina (L.) DC) melalui Periode Pencahayaan, Bul. Agronomi, 36 (1): 40- 48.
Mailoa,  M.  N.,  Mahendradatta,  M.,  Laga,  A.,  dan  Djide,  N.,  2014,  Antimicrobial  Activities  of  Tanins Extract  from  Guava  Leaves  (Psidium  guajava  L)  on  Pathogens  Microbial,  International  Journal  Of Scientific & Technology Research, 3 (1): 236-241.
Mukhriani,  M.,  Nonci,  F.  Y.,  dan  Mumang,  M.,  2017,  Penetapan  Kadar  Tanin  Total  Ekstrak  Biji  Jintan Hitam  (Nigella  sativa)  secara  Spektrofotometri  Uv-Vis,  Jurnal  Farmasi  UIN  Alauddin  Makassar,  2  (4): 154-158.
Nurhayati,T,D.,  Aryanti,  dan  Nurjannah,  2009,  Kajian  Awal  Potensi  Ekstrak  Spons  Sebagai  Antioksidan, Jurnal Kelautan Nasional, 2 (2): 43-51.
Wardani  A.  T.  F.  L.  2010,  Pengaruh  Cairan  Penyari  terhadap  Rendemen  dan  Kadar  Tanin  Ekstrak  Daun Jambu Biji ( Psidium guajava L.), Jurnal Farmasi Indonesia, 7 (2): 57–61.
Wibisono, W. G., 2011, Tanaman Obat Keluarga Berkhasiat, Jawa Tengah: Vivo Publisher.
© The Author(s) 2019