Majalah Farmaseutik Vol. 13 No. 1 : 28-37 ISSN-p : 1410-590x
ISSN-e : 2614-0063
Efek  Kombinasi  Ekstrak Tithonia  diversifolia (Hemsley) A.Gray  dan Curcuma  domestica Val  terhadap  Nodul  dan Berat Badan Tikus Model Kanker
Effect of Tithonia diversifolia (Hemsley) A.Gray and Curcuma domestica Val Extracts Combination Against Nodule and Body Weight in Cancer Rats Model
Wahyu Nur Halimah 1, Woro Rukmi Pratiwi 2, Mae Sri Hartati Wahyuningsih 2
1. Mahasiswa Program Studi Pendidikan Dokter FK-UGM
2. Departemen Farmakologi dan Terapi, Fakultas Kedokteran UGM Corresponding author: maeshw@ugm.ac.id

## ABSTRAK
Kembang  bulan  [ Tithonia  diversifolia (Hemsley)  A.  Gray]  merupakan  kandidat tanaman berpotensi antikanker yang telah dibuktikan sebelumnya memiliki efek sitotoksik terhadap  sel  kanker  WiDr,  IC 50 =61,55  ug/mL.  Kunyit  ( Curcuma  domestica Val.)  banyak digunakan  dalam  pengobatan  tradisional,  mengandung  kurkuminoid  yang  memiliki aktivitas antikanker dengan memodulasi fungsi imun yang dimediasi oleh limfosit. Dengan adanya efek imunostimulan dari kunyit apabila dicampur dengan kembang bulan sebagai kandidat antikanker diharapkan akan bersinergis lebih baik. Tujuan penelitian ini untuk mengkaji  potensi  kombinasi  ekstrak  etanol T.  diversifolia dan C.  domestica pada  hewan model kanker dengan cara menghitung berat badan, jumlah nodul dan volume nodul hewan coba. Penelitian ini adalah penelitian kuasi eksperimental. Kombinasi ekstrak etanol 70% daun kembang bulan dan rimpang kunyit dibuat suspensi dan dibagi menjadi 3 dosis yaitu dosis  40:150mg,  80:150mg,  dan  160:150mg.  Kemudian  diberikan  peroral  pada  masing- masing kelompok tikus yang telah mengalami kanker payudara setelah diinduksi dengan DMBA.  Kemudian  diamati  berat  badan,  jumlah  nodul,  dan  volume  nodul  tikus  yang dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol  negatif  dan  kelompok  kontrol  positif (doksorubisin).  Persentase  perubahan  pada  masing-masing  kelompok  perlakuan dibandingkan dan diuji secara statistik menggunakan analisis Anova. Hasil menunjukkan bahwa  perbandingan  berat  badan  tikus  antara  kelompok  kontrol  doksorubisin  dan kelompok  dosis  40:150mg,  80:150mg,  dan  160:150mg  menunjukkan  tidak  berbeda signifikan.  Perbandingan  volume  nodul  kanker  payudara  antara  kelompok  kontrol  dan kelompok uji menunjukkan hasil yang tidak berbeda signifikan. Kombinasi ekstrak etanol kembang bulan dan rimpang kunyit tidak mempunyai efek signifikan terhadap berat badan dan nodul kanker payudara.
Kata Kunci: Tithonia diversifolia , Curcuma domestica , DMBA, nodul kanker payudara, berat badan.

## ABSTRACT
Kembang bulan [ Tithonia diversifolia (Hemsley) A. Gray] is a potentially anticancer plants  that have been previously shown have cytotoxics effect on WiDr colon cancer cells, IC 50 =61.55µg/mL.  Turmeric  ( Curcuma  domestica Val.)  is  widely  used  in  traditional medicine. Curcuminoids compounds from turmeric have potential anticancer activity with possibly modulate immune function mediated by lymphocytes. With the immunostimulant effect of turmeric when mixed with kembang bulan as an anticancer candidate is expected to  synergize  better.  This  study  aims  to  determine  the  potential  of T.  diversifolia and C. domestica ethanolic  extracts combination in  cancer  rats  model  by  measuring  weight,
number of nodules, and nodule volume animals . The study was a quasi-experimental study. Mixed 70% ethanol extract of kembang bulan’s leaves and turmeric’s rhizome divided into 3 doses, 40:150mg, 80:150mg, and 160:150mg. Then it given to each group of rats by orally that had experienced breast cancer . After that, see potential on body weight, number of nodules, and nodule volume. Then compared with normal group, negative control group, and positive control group. Furthermore, the percentage change in each treatment group were compared and statistically tested using ANOVA analysis. Comparison of the results of rat’s  body  weight  between  the  control  group  (doxorubicin)  and  tes t  group  showed significantly no different results. Comparison of the results of rat’s breast cancer nodule volume  between  the  control  group  and  the  test  group  showed  significantly  no  different results. A combination of 70% ethanol extract of kembang bulan’s leaves and turmeric’s rhizome have no significant effect on body weight and breast cancer nodules. Key words: Tithonia diversifolia , Curcuma domestica, DMBA, body weight, cancer  nodules
PENDAHULUAN
Kanker  payudara  merupakan  jenis kanker yang paling umum pada wanita yang insidensinya  meningkat  setiap  tahunnya. Kanker payudara juga merupakan penyebab  utama  kematian  pada  penderita kanker. American Cancer Society melaporkan 182.460 kasus kanker payudara pada tahun 2008 (26% dari kasus kanker total) di Amerika Serikat. Di antara mereka, 40.480 meninggal karena penyakit ini  (Nugroho et  al .,  2012).  Di  Indonesia, sepuluh peringkat neoplasma ganas pasien rawat inap di rumah sakit sejak tahun 2004 hingga  tahun  2008  masih  sama  dan  tiga peringkat pertama adalah neoplasma ganas payudara,  serviks  uterus,  dan  hati  dan saluran empedu intrahepatik.
Penatalaksanaan  kanker  payudara
sampai saat ini belum memuaskan hasilnya karena  efek  samping  kemoterapi  yang merugikan.  Doksorubisin merupakan salah satu contoh agen kemoterapi yang banyak digunakan  untuk  pengobatan  kanker. Doksorubisin  memiliki  afinitas  tinggi sehingga  mampu  mengikat  DNA  secara interkalasi dengan menghambat topoisomerase  II  dan  mencegah  sintesis DNA  dan  RNA.  Dengan  cara  itu,
doksorubisin  mampu  menyebabkan  sel kanker  mati  sehingga  dapat  menekan progresi  tumor  (  Howland et  al .,  2006). Namun demikian penggunaan doksorubisin kini  semakin  terbatas  karena  efek
sampingnya  yang  telah  diketahui  berupa toksisitas pada jantung, ginjal, paru, testis, dan  hematologi  (Patil  and  Balaraman, 2009). Oleh karena itu pemanfaatan bahan alam  sebagai  salah  satu  alternatif pendampingan obat kanker perlu dieksplorasi. Salah  satunya  adalah  tanaman kembang  bulan  yang  telah  banyak digunakan  untuk  pengobatan  berbagai macam  penyakit  (Obafemi et  al .,  2006). Beberapa  penelitian  menunjukkan  bahwa ekstrak  etil  asetat  dan  ekstrak  etanol kembang  bulan  mampu  menghambat proliferasi sel kanker kolon (Col-2), dan anti leukemia  (Goffin et  al .,  2002;  Gu et  al ., 2002).  Tagitinin  C  isolasi  dari  kembang bulan  paling  aktif  dan  selektif  pada  sel kanker WiDr dengan IC 50 =0,585 ug/mL, IS. 69,  015  (Wahyuningsih et  al., 2015).
Rimpang  Kunyit  sudah  digunakan  sejak lama secara empiris oleh masyarakat untuk berbagai  macam  pengobatan,  termasuk penyakit kanker. Kunyit memiliki kandungan  senyawa  aktif  kurkuminoid yang  terdiri  dari  kurkumin,  desmetoksi kurkumin, trietil kurkumin, dan bisdesmetoksi kurkumin (Meiyanto, 1999). Beberapa  bukti  menunjukkan  bahwa kurkumin  berperan  secara  fungsional untuk  siklooksigenase-  dan  -lipoxygenase katalis arachidonic dan metabolisme asam linoleat  dalam  perkembangan  kanker  ( Furstenberger et    al .,    2007   ).    Kurkumin
memiliki  aktivitas  potensial  antikanker terhadap adenomous dengan kemungkinan memodulasi  fungsi  imun  yang  dimediasi oleh  limfosit  (Churchill,  2000).  Kurkumin dan  genistein  telah  dilaporkan  sebagai inhibitor  yang  paling  ampuh  terhadap pertumbuhan  sel-sel  tumor  payudara manusia (Verma et al ., 1998). Berdasarkan  fakta  tersebut  maka pencampuran  kedua  tanaman  tersebut diharapkan dapat meningkatkan potensinya sebagai antikanker dan menurunkan  toksisitasnya.  Keberhasilan pengobatan kanker payudara menggunakan  kedua  jenis  tanaman  ini, sangat  dipengaruhi  oleh  keadaan  nodul kanker  payudara  hewan  coba  itu  sendiri. Oleh karena itu, jumlah nodul dan volume nodul  sangat  penting  untuk  diperhatikan. Selain itu, pengukuran tingkat keberhasilannya  dengan  mengukur  berat badan tikus selama diberi perlakuan.

## METODOLOGI
Jenis penelitian adalah eksperimental dengan  rancangan post-test  control  group design. Penelitian  dilakukan  pada  tikus betina Sprague  Dawley yang  diinduksi dengan 7,12-dimethylbenz[a]antrasene (DMBA)  sehingga  tikus  mengalami  kanker payudara. Bahan Tanaman  Kembang  Bulan  dan
Kunyit    diambil  dari  Balai  Besar  Litbang Tanaman  Obat  dan  Obat  Tradisional (B2P2TO-OT)  Tawangmangu  pada  bulan Januari  2013  dan  keduanya  telah dideterminasi di Bagian Biologi Farmasi FF UGM  dengan  No  BF/28/Ident/Det/I/2013 dan  No.  BF/33/Ident/Det/II/2013,  Etanol (Merck),  suspensator  1  %  (PGA),  minyak jagung, air, 7,12-dimethylbenz[a]antrasene (DMBA)  Sigma  Chemical,  Co,  USA), formaldehide,  doksorubisin  1  vial,    pakan tikus Alat Vakum rotatory evaporator, corong Buchner,  cawan porselin, mortar, stamper, neraca  (alat  timbang  digital),  sentrifuge,
vortex, alumunium foil, tabung reaksi, spet, syringe  sonde,  kandang  tikus,  kertas, pulpen,  pinset,  jangka  sorong,  gloves, masker, tissue, kamera.

## CARA PENELITIAN
Pembuatan  Ekstrak  Kembang  Bulan  dan Rimpang Kunyit Serbuk  daun  kembang  bulan  (1  kg) diekstraksi  secara maserasi dengan  etanol 70% (2 liter). Kemudian didiamkan selama 24  jam  pada  suhu  kamar  sambil  sesekali diaduk. Maserat yang ada disaring dengan corong  Buchner  sehingga  diperoleh maserat  dan  ampas.  Ampas  dimaserasi kembali  menggunakan  cara  yang  sama seperti  di  atas  sampai  3x  maserasi. Maserat/Sari diuapkan menggunakan vakum rotatory evaporator sampai diperoleh  ekstrak  agak  kental  dan dituangkan pada cawan porselin. Kemudian diuapkan sampai ekstrak kental. Pembuatan ekstrak kunyit juga menggunakan prosedur yang sama dengan pembuatan ekstrak kembang bulan. Pembuatan Sediaan Suspensi
Ekstrak  etanol T.diversifolia dan C. domestica ,  setelah  ditimbang  masing- masing  dimasukkan  dalam  mortar  dan stamfer.  Ditambahkan  suspensator  1% (PGA)  dan  air  sedikit  demi  sedikit  sampai homogen  sehingga  diperoleh  volume suspensi yang akan dipakai.

## Uji Aktivitas Antikanker
1. Aklimatisasi  Tikus Sprague-Dawley (SD)
Tikus SD diaklimatisasi selama 7 hari dengan  diberi  makan  dan  minum  ad libitum. Sebelum diberikan sediaan uji tikus SD dipuasakan selama kurang lebih 12 jam, namun tetap diberi minum secukupnya.
2. Pengelompokan    dan  pembuatan model Tikus kanker payudara. Tiga  puluh  ekor  tikus  betina  galur Sprague  Dawley,  umur  4  minggu  dengan berat  70±20  g. Senyawa DBMA,  ditimbang dengan  dosis  20  mg/kgBB  dan  dilarutkan
dalam  minyak  jagung  ( corn  oil )  dengan bantuan  vortex  hingga  diperoleh  larutan jernih  dan  homogen.  Kadar  DMBA  dalam minyak  jagung  yang  disarankan  adalah  4 mg/mL. Volume DBMA yang diberikan pada hewan  coba  adalah  (BB  tikus/1000)  x (20/kadar DBMA). Larutan DBMA diberikan 2 kali seminggu selama 5 minggu.

## 3. Pengelompokan Hewan Coba
Sebanyak  30  ekor  tikus  SD  dibagi dalam  6  kelompok,  masing-masing  terdiri dari  3-5  ekor  tikus  dengan  pembagian kelompok sebagai berikut: Kelompok 1 :  Kelompok  tikus  sehat diberi  pakan  standar  dan  air  secara  ad libitum. Kelompok 2 :  Kelompok  tikus  sakit (induksi  DMBA)  diberi  pakan  standar  dan air secara ad libitum. Kelompok 3 :  Kelompok  tikus  sakit  dan diberi  obat  kanker  doksorubisin  1  kali perhari  0,032  mg/20  g  BB  secara  intra peritoneal selama 4 minggu Kelompok 4 :  Kelompok  tikus  sakit  +
Campuran  ekstrak T.  diversifolia dosis  (40 mg/kgBB)  dan C.  domestica dosis  (150 mg/kgBB) 2x sehari selama 4 minggu. Kelompok 5 :  Kelompok  tikus  sakit  + Campuran  ekstrak T.  diversifolia dosis  (80 mg/kgBB)  dan C.  domestica dosis  (150 mg/kgBB) 2x sehari selama 4 minggu. Kelompok  6  :  Kelompok  tikus  sakit  + Campuran ekstrak T. diversifolia dosis (160 mg/kgBB)  dan C.  domestica dosis  (150 mg/kgBB) 2x sehari selama 4 minggu.
4. Pengukuran berat badan tikus SD Penimbangan  berat  badan  tikus dilakukan  2  kali  seminggu  dari  awal  tikus diberi perlakuan sampai dengan tikus akan diterminasi. Penimbangan dilakukan menggunakan timbangan berat badan tikus manual. 5. Penghitungan  jumlah  nodul  dan diameter nodul tikus. Setiap tikus dipalpasi secara bergantian menggunakan jari pada
sepanjang  bagian  dada.  Hal  ini  digunakan untuk  mengetahui  keberadaan  benjolan yang  menjadi  indikasi  adanya  kanker payudara.  Identifikasi  dilakukan  dengan hati-hati  untuk  bisa  membedakan  kanker payudara  dengan  tonjolan  tertentu  yang memang merupakan bentuk alami morfologi  tubuh  tikus.  Pemeriksaan  nodul ini  dilakukan  2 minggu  setelah  pemberian DMBA  terakhir.  Kemudian  dilakukan  tiap seminggu  sekali.  Pengukuran  diameter nodul dengan menggunakan jangka sorong dengan  satuan  {panjang  xlebar  (mm2)} Pada tikus SD yang ditemukan nodul tumor segera  dicatat  nomornya,  jumlah,  dan diameter  nodul.  Selanjutnya  tikus  SD  ini yang akan dimasukkan kedalam kelompok perlakuan (kelompok 2-6). Apabila diameter nodul melebihi 1 cm, maka tikus segera diterminasi dan selanjutnya diperiksa  ke  Laboratorium  Patologi Anatomi dan Patologi Klinik. 6. Penentuan  dosis  dan  penyiapan doksorubisin
Dosis  doksorubisin  untuk  tikus  SD adalah  8  mg/kgBB  (=  0,16  mg/20  gBB) sekali pemberian. Dosis tersebut juga dapat diberikan 5 kali pemberian ( 5 hari dalam 1 minggu). Jadi setiap kali pemberian 0,16 : 5 = 0,032 mg/20 g BB.

## Analisis Hasil
Persentase  hasil  dari  kelompok perlakuan  (4,  5,  dan  6)  dibandingkan dengan  kelompok  kontrol  (1,  2,  dan  3).
Selanjutnya  persentase  perubahan  pada masing-masing kelompok perlakuan dibandingkan  dan  diuji  secara  statistik menggunakan analisis Anova.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Perkembangan berat badan hewan coba Berat  badan  hewan  coba  ditimbang selama  pemberian  campuran  kembang bulan dan rimpang kunyit yaitu selama 28 hari.  Data  perkembangan  berat  badan menunjukkan  bahwa  pertumbuhan  berat badan  kelompok  uji  lebih  rendah
dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol normal  (Gambar  1).  Nilai  rata-rata  selisih berat  badan  awal  dan  akhir  kelompok kontrol  normal  adalah  sebesar  56.33g, sedangkan  kelompok  uji  yaitu  kelompok kontrol  negatif,  kontrol  positif,  dosis  1, dosis 2, dosis 3, berturut-turut sebesar 35g, 23.5g, 36g, 33.67, dan 27g.
Pada  uji  statisktik  menggunakan Anova  didapatkan  nilai  signifikansi  antara semua  kelompok uji  dibandingkan  dengan kelompok  normal  menunjukkan  p<  0.05. Dengan demikian terdapat perbedaan berat badan secara bermakna pada kelompok uji dengan  kelompok  normal.  Sementara  itu, nilai signifikansi di antara kelompok uji saja (kontrol negatif, kontrol positif, dosis 40mg, dosis 80mg, dosis 160mg) menunjukkan p> 0.05,  sehingga  tidak  terdapat  perbedaan yang  berbeda  secara  bermakna  diantara kelompok uji.
Nodul tumor hasil induksi DMBA. Dari  25  ekor  tikus  galur  SD  yang diinduksi  DMBA  sebanyak  10  kali  pada dosis  20mg/kgBB,  hanya  14  ekor diantaranya yang muncul nodul. Kemudian dari 14 ekor tikus yang timbul nodul, 2 ekor
tikus dimasukkan dalam kelompok kontrol positif.  Sedangkan  kelompok  kontrol negatif,  kelompok  dosis  40  mg,  kelompok dosis  80mg,  dan  kelompok  dosis  160mg, masing-masing dimasukkan 3 ekor tikus ke dalamnya.
Respon  jumlah  nodul  untuk  setiap perlakuan  dapat  diamati  pada  Tabel  1. Tikus  kelompok  kontrol  negatif  memiliki jumlah nodul terendah. Namun hasil akhir dari  kelompok  kontrol  negatif  ini  adalah, dari 3 ekor tikus yang dimasukkan, 1 ekor tikus  mati  pada  hari  ke  19  pengamatan. Selanjutnya  kelompok  kontrol  positif menempati urutan ke 2 jumlah nodul yang terendah.  Disusul  oleh  kelompok  dosis 80mg, kelompok dosis 40mg, dan kelompok
160mg. Profil  perkembangan  volume  nodul tumor  dari  5  kelompok  perlakuan ditampilkan      pada     Gambar 2.      Dari gambar  tersebut        terlihat            bahwa pertumbuhan      volume       tumor    pada semua        kelompok        perlakuan menunjukkan              kenaikan.          Kelompok kontrol negatif (V2) menunjukkan pertumbuhan       volume      tumor       yang lebih         tinggi         dibandingkan       dengan
Gambar 1. Grafik pertumbuhan berat badan hewan coba selama percobaan. Kelompok 1: Kontrol normal; kelompok 2: Kontrol negatif; kelompok 3: Kontrol positif; Kelompok 4: dosis 40mg; Kelompok 5: dosis 80mg; Kelompok 6: dosis 160mg
100 120 140 160 180 200 220 240 1 4 7 10 13 16 19 22 25 28 Ber at ba d an Hari perlakuan kelompok1 kelompok2 kelompok3 kelompok4
kelompok5 krlompok6
kelompok perlakuan lainnya. Namun, pada uji  statistik  menggunakan  Kruskal-Wallis diperoleh  nilai  p=  0,061.  Oleh  karena p>0,05,  maka  dapat  diambil  kesimpulan bahwa  tidak  terdapat  perbedaan  yang signifikan di antara kelompok yang diuji.
Selanjutnya, untuk melihat perbedaan  pertumbuhan  volume  tumor pada semua kelompok perlakuan, dilakukan  pengamatan  nilai  volume  awal dan  volume  akhir  dari  nodul  tumor  serta nilai  delta  (selisih  antara  volume  awal dengan volume akhir) dari setiap kelompok perlakuan (Gambar 2 dan 3). Dari  gambar  4  terlihat  perbedaan nilai delta volume tumor diantara kelompok perlakuan.  Kelompok  kontrol    negatif menunjukkan  nilai  delta  volume  paling tinggi.  Jika  nilai  delta  pada  kelompok kontrol negatif digunakan sebagai pembanding  maka  dapat  diketahui  nilai presentase hambatan pertumbuhan volume Tabel I. Pengaruh perlakuan terhadap jumlah nodul kanker payudara Kelompok Jumlah Nodul 2 (kontrol negatif) 4 3 (kontrol positif) 3 4 (dosis 40mg) 9 5 (dosis 80mg) 7 6 (dosis 160mg) 10 *Data primer Nurhalimah, 2013
Gambar 2. Grafik Pertumbuhan volume tumor pada semua kelompok perlakuan. V2 : volume nodul tikus kelompok control negatif; V3 : volume nodul tikus kelompok kontrol positif; V4 : volume nodul tikus kelompok dosis 40mg 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 1 4 7 10 13 16 19 22 V olu me n odu l Hari ke V2 V3 V4 V5 V6
tumor  dari  kelompok  perlakuan  lainnya, seperti disajikan pada tabel 2 berikut.
Dari  keseluruhan  hasil  uji  terlihat bahwa  kelompok  kontrol  positif  memiliki nilai  hambatan  volume  tumor  yang  paling besar.  Kemudian  disusul  oleh  kelompok dosis 40mg, 80mg,  dan kemudian 160mg.

## PEMBAHASAN
Berat badan adalah salah satu respon yang menggambarkan perkembangan tikus. Pada  gambar  1  menunjukkan  adanya perbedaan peningkatan berat badan antara kelompok  uji  (  kelompok  kontrol  negatif, kelompok  kontrol  positif,  kelompok  dosis 40mg,  kelompok  dosis  80mg,  kelompok dosis  160mg)  terhadap  kelompok  normal. Hal tersebut kemungkinan disebabkan oleh adanya efek dari cachetin , yaitu suatu tumor necrosis factor (TNF) yang berfungsi untuk menguraikan  lemak  dan  mereduksi  enzim yang  berperan  dalam  produksi  dan penyimpanan lemak. Chacetin ini diketahui berperan dalam terjadinya kondisi chacexia kanker yaitu hilangnya berat badan akibat penyakit  kanker.  Kemungkinan  penyebab lain adalah adanya efek stress yang timbul pada  kelompok  uji.  Hal  ini  dikarenakan induksi  DMBA  dan  pemberian  ekstrak  uji yang  dilakukan  secara  per  oral  pada kelompok  uji  sehingga  kemungkinan tingkat stress yang dialami oleh kelompok uji  jauh  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan kelompok  normal  yang  tidak  mengalami perlakuan  apapun.  Tingkat  stress  yang tinggi  diketahui  dapat  menurunkan konsumsi  pakan  atau  mempengaruhi keseimbangan  metabolisme  pada  hewan coba, sehingga dapat berakibat lebih lanjut terhadap  ketidakstabilan  berat  badan hewan coba.
Hasil  penelitian  yang  dilakukan  oleh Meiyanto et  al., (2007)  juga  menunjukkan hasil  yang  sama.  Dimana  rata-rata  berat badan kelompok tikus kontrol normal lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok tikus yang  diinduksi  DMBA  dan  diberi  ekstrak.
Sementara itu jika dilihat dari berat badan masing-masing kelompok uji yang
dibuktikan  dengan  uji  statistik  Anova, menunjukkan  tidak  adanya  perbedaan berarti  pada  kecenderungan  peningkatan berat  badan  antara  kelompok  kontrol negatif,  kelompok  control  positif,  dan kelompok  yang  diberi  ekstrak.  Sehingga dapat  disimpulkan  bahwa  pemberian campuran  ekstrak  kembang  bulan  dan rimpang kunyit tidak berpengaruh terhadap  berat  badan  hewan  coba. Berdasarkan  hasil  penelitian,  dari  25  ekor tikus yang diinduksi DMBA hanya 14 ekor diantaranya  yang  muncul  nodul.  Hal  ini kemungkinan  dikarenakan  oleh  adanya beberapa faktor yang dapat mempengaruhi keberhasilan  induksi  DMBA,  diantaranya: (1)  faktor  individu  hewan  coba  yaitu kondisi dari kelangsungan sistem metabolism  pada  setiap  hewan  coba  yang belum tentu seragam, diantaranya mencakup kadar hormon (siklus hormonal), sistem kekebalan dan kerentanan  kelenjar  mamae  terhadap bahan  karsinogen;  (2)  umur  hewan  coba. Pada  umur  40-60  hari  setelah  lahir,  tikus betina  sangat  rentan  terhadap  induksi karsinogen.  Pada  umur  tersebut  tikus memasuki  masa  pubertas  awal  dengan tingkat proliferasi terminal end buds (TEBs) yang tinggi dalam kelenjar mamae; (3) dosis dan  frekuensi  induksi.  Induksi  bahan karsinogen  dosis  berulang  memberikan hasil yang lebih baik dibandingkan dengan dosis tunggal (Kubatka P et al., 2002). Jumlah  nodul  merupakan  variabel yang  dapat  dibandingkan  pada  tiap kelompok  perlakuan.  Rendahnya  laju pertumbuhan nodul tikus kelompok kontrol negatif dibandingkan dengan tikus kelompok  dosis  40,80,  dan  160mg  dapat diduga  akibat  rendahnya  stress  yang diterima.  Stress  oleh  Lyman  dan  Burstein (2007)  dinyatakan  sebagai  faktor  yang membuat pengobatan kanker tidak efektif. Hal  ini  dapat  dimengerti  bila  pada kelompok  tikus  dosis  40,  80,  dan  160  mg harus  diberi  ekstrak  campuran  kembang bulan dan rimpang kunyit sebanyak 2 kali sehari,  sedangkan  tikus  kelompok  kontrol
negative  tidak  dicekok  dengan  aquades.
Gambar 3 . Volume tumor total pada awal dan akhir pemberian sampel uji. V2 : Kelompok kontrol negatif; V3 : Kelompok control positif; V4 : Kelompok dosis 40mg; V5:
Kelompok dosis 80mg; V6: Kelompok dosis 160mg
Gambar  4.  Nilai  delta  volume  tumor  total  setiap  kelompok  perlakuan.  Kelompok  2: kelompok kontrol negatif; Kelompok 3: kelompok control positif; Kelompok 4: kelompok dosis 40mg; Kelompok 5: kelompok dosis 80mg; Kelompok 6: kelompok dosis 160mg
0 5 10 15 20 25 30 35 V2 V3 V4 V5 V6 Volume awal volume akhir
0 5 10 15 20 25 30 35 DELTA
negatif  tidak  dicekok  dengan  aquades. Diduga  bila  stress  (akibat  prosedur penelitian)  meneyebabkan  kanker  lebih ganas  dengan  memicu  metastasis,  yang dapat  dilihat  dari  peningkatan  jumlah nodul.  Dilihat  dari,  perkembangan  volume nodul kanker payudara, campuran ekstrak kembang bulan dan rimpang kunyit dengan dosis  40  mg  mempunyai  nilai  hambatan sebesar 74,6%. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak  campuran  kembang  bulan  dan rimpang  kunyit  memiliki  efektivitas  untuk menghambat pertumbuhan volume tumor, walaupun  kemampuannya  masih  dibawah doksorubisin  yang  mempunyai  nilai hambatan  sebesar  79,1%.  Hambatan pertumbuhan volume tumor dari campuran ekstrak kembang bulan dan rimpang kunyit diduga  melalui  mekanisme  hambatan proliferasi  sel  yaitu  menghambat  proses sintesis  DNA,  RNA  pada  tahap  mitosis. Baruah et  al. (1979)  melaporkan  bahwa daun  kembang  bulan (T.  diversifolia) mengandung metabolit sekunder golongan sesquiterpen lactone. Senyawa sesquiterpen  lactone  salah  satunya  yaitu tagitinin  A  dan  tagitinin  C  yang  telah terbukti  memiliki  aktivitas  antiinflamasi dan efek sitotoksik. Gu et al . (2002) meneliti tagitinin C menunjukkan aktivitas antiproliferasi  pada  sel  Col2  (sel  kanker kolon  manusia).  Kemungkinan  lain  adalah adanya  efek  proapoptosis  dari  senyawa kurkumin yang terkandung dalam rimpang kunyit.  Ibrahim et  al. (2011)  melaporkan bahwa  kurkumin  mampu  menginduksi apoptosis  melalui  peningkatan  ekspresi protein  procaspase-3  dan  menghambat protein  Bcl-2  sel  ENU1564  ( Metastatic  rat mammary gland ) .

## KESIMPULAN
Kombinasi Ekstrak etanol 70% daun kembang  bulan  dan  rimpang  kunyit  tidak berpengaruh terhadap berat badan, jumlah nodul,  dan  volume  kanker  payudara  pada tikus  model  kanker  payudara Sprague Dawley yang diinduksi dengan DMBA

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terimakasih kepada  Fakultas  Kedokteran  UGM  yang telah  memberikan  bantuan  dana  melalui Hibah Dana Masyarakat, Fakultas Kedokteran UGM Tahun 2012. DAFTAR PUSTAKA Baruah,  N.C.,  Sharma,  R.P.,  Madhusudana, K.P., Thygarajan, Gopalakrisna, Werner,    H., Murary,     Ramaswarny, Tabel II. Persentase hambatan volume tumor Kelompok Delta Volume Tumor Perbandingan terhadap control negatif (%) Hambatan volume tumor (%) Kelompok 2 30.75 100 0 Kelompok 3 6.43 20.9 79.1 Kelompok 4 7.81 25.4 74.6 Kelompok 5 10.35 33.7 66.3 Kelompok 6 10.91 35.5 64.5 *Data primer Nurhalimah, 2013
1979,  Sesquiterpen  Lactones  of
Tithonia diversifolia A. Gray. Chemical Abstract , 91 (20751): p.678, American Chemical Society, Ohio. Churchill,  M.  2000.  Inhibition  of  intestinal tumors  by  curcumin  is  associated with  changes  in  the  intestinal immune  cell  profile. J  Surg  Res , 89:169-75. Fürstenberger G, Krieg P, Müller-Decker K, Habenicht  AJ,  2007.  What  are cyclooxygenases  and  lipoxygenases doing  in  the  driver's  seat  of carcinogenesis? Int  J  Cancer ,  119:
2247-54.
Goffin,  E.,  Ziemons,  E.,  de  Mol,  P.,  de MadureiraMdo,  C.,  Martins,  A.P.,  da Cunha,  A.P.,  Phillippe,  G.,  Tits,  M., Angenot, L., and Frederich, M., 2002. In  vitro  antiplasmodium  activity  of Tithonia diversifolia and Identification  of  its  main  active constituent  :Taginin  C., Planta  Med .
68 (6): 543-5.
Gu, J. Q., Gills, JJ., Park, EJ., Mata-Greenwood, E.,  Hawthorne,  ME.,  Axelrod,  F., Chavez,  PI.,  Fong,  HH.,  Mehta,  RG., Pezzuto, JM. and Kinghorn, AD., 2002, Sesquiterpenoids from Tithonia diversifolia with  potencial  care chemopreventive activity, J Nat Prod , 65(4): 532-536. Howland, R.D., Mycek, M.J., editors Harvey, R.A., Champe, P. C., 2006. Pharmacology 3 rd ed ( Lippincot’s illustrated reviews ). Lippincott Williams & Wilkins, India. Ibrahim, A., El-Meligy, A., Lungu, G., Fetaih, H., Dessouki, A., Stoica, G., Barhoumi, R., 2011, Curcumin induces apoptosis in  a  murine  mammary  gland adenocarcinoma cell line through the mitochondrial  pathway. Eur  J Pharmacol . 668(1-2):127-32. Meiyanto, E., 1999, Kurkumin Sebagai Obat Kanker :Menelusuri Mekanisme Aksinya (Review), M. F. I ., 10 (4), 224- 236. Nugroho,  A.E.,  Hermawan,A.,  Putri,D.D.P., Meiyanto, E., Hakim,L. 2012, Synergistic  effects  of  ethyl  acetate fraction  of  Ficus  septic  Burm.f.  and doxorubicin  chemotherapy  on  T47D human breast cancer cell line..[Pubmed : 23073201]. Nurhalimah W, 2013, Pengaruh Pemberian Ekstrak  Etanol Tithonia  diversifolia (Hemsley)  A.Gray  dan Curcuma domestica Val  Terhadap  Nodul Kanker  Payudara  dan  Berat  Badan Tikus  Betina  yang  Diinduksi  dengan DMBA, [Skripsi], Fakultas Kedokteran, UGM, Yogyakarta. Obafemi, C. A., Sulaimon, T. o., Akinpelu, D. A.,  Olugbade.,  2006.  Antimicrobial activity of extracts and a germacranolide-type  sesquiterpene lactone from Tithonia diversifolia leaf extract. African Journal of Biotechnology 5(12):1254-8. Patil  LR  and  Balaraman  R,  2009.  Effect  of melatonin  on  Doxorubicin  Induced testicular damage in rat. Intl.J.PharmTech.Res .(IJPRIF).  1(3): 879-884. Verma  SP,  Goldin  BR,  Lin  PS,  1998.  The inhibition of the estrogenic effects of pesticides and environmental chemicals by curcumin and isoflavonoids. Environ Health Perspect ,106: 807-12. Wahyuningsih  MSH,  Pratiwi  WR,  2012, Aktivitas  Antikanker  ekstrak  etanol terstandar Tithonia diversifolia (Hemsley)  A.  Gray.    dan Curcuma domestica Val.    pada  Tikus  Model Kanker Payudara Serta Toksisitasnya, Laporan  Penelitian,  Damas  tahun 2012, FK-UGM. Wahyuningsih MSH, Wijayanti MA, Budiyanto  A,  Hanafi  M.  2015, Isolation  and  Identification  of Potential  Cytotoxic  Compound  from
Kembang bulan [ Tithonia diversifolia (Hemsley)  A.  Gray]  Leaves, Int  J Pharm Pharm Sci . 7 (6): 298-301.