## ISOPROTERENOL SEBAGAI MODEL INFARK MIOKARDIAL AKUT PADA TIKUS WISTAR
Wahyu Widyaningsih 1,2) , Sugiyanto 1) , Sitarina Widyarini 3) dan Suwidjiyo Pramono 1)
1) Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada
2) Fakultas Farmasi Universitas Ahmad Dahlan Yogyakarta,
3) Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Gadjah Mada
e-mail : widyaningsihwahyu@yahoo.com

## ABSTRACT
Decreased  oxygen  supply  and  necrosis  in  the  heart  muscle  cells  can  lead  to  acute myocardial infarction. Free radical compounds can lead to oxidative stress in the heart muscle and lead  to  myocardial  infarction.  Isoproterenol  is  a  non-selective  β-adrenergic  agonist  can  lead  to acute myocardial infarction in large doses. The purpose of this study was to validate the model of acute myocardial infarction. This study using male Wistar rats aged two months as the test animal. Male Wistar rats  divided into  two groups: control group and treatment group.  The  control  group treated with physiological saline and the treatment group treated with isoproterenol 85 mg/kg BW. Isoproterenol  administered  subcutaneously  for  two  doses  with  an  interval  of  24  hours.  After  48 hours of the isoproterenol first administration, rat heart rhythm's records with an electrocardiogram (ECG).  Furthermore,  the  rats  sacrificed  and  performed  a  necropsy.  The  left  ventricle  part  in  the cross  section  for  the  macroscopic  observation  (extensive  infarction)  with  triphenyl  tetrazolium chloride  (TTC)  staining,  microscopic  observation  of  infarction  with  hematoxylin-eosin  staining (HE)  and  immunohistochemical  (IHC)  to  observe  the  expression  of  caspase-3.  The  ECG  of isoproterenol group showed elevation in the ST segment. TTC staining shows the expansion of the infarct  area.  The  HE  staining  showed  the  typical  image  of  myocardial  infarction  and  the  IHC staining  results  showed  an  increase  in  the  expression  of  caspase-3.  The  results  showed  that isoproterenol can be use as a model myocardial infarction with parameters of infarction are ECG changes, TTC staining of infarct broad macroscopic image,  a histopathological image of heart and apoptosis with the expression of caspase-3.
Key words : Isoproterenol, acute myocardial infarction, cardiac histopathology

## PENDAHULUAN
Penyakit  kardiovaskuler  masih  merupakan  masalah  di  Indonesia,  salah  satunya  adalah Infark Miokardial Akut (IMA) (WHO, 2011). IMA dapat dipicu oleh stres oksidatif karena adanya radikal bebas dalam jumlah besar pada sel miokardium yang berasal dari reaksi oksidasi senyawa kimia tertentu (Li dkk . , 2012) peroksidasi lipid, hiperlipidemia, hiperglikemia (Kumar dan Menon, 1992). Salah satu penyebab stress oksidatif adakah senyawa kimia yang berupa obat. Isoproterenol merupakan obat golongan agonis  β-adrenergik non selektif yang digunakan sebagai model untuk penginduksi IMA pada tikus  (Grimm dkk ., 1997; Rathore 1998). Selain isoproterenol, model IMA yang  lain  reperfusi  injury  (Reiter  dan  Tan  2003).  Stimulasi  reseptor  β-adrenergik  cepat menghasilkan spesies oksigen reaktif (ROS) yang dapat memodulasi respon seluler dan fungsional dalam  jantung  (Zhang  dkk,  2005).  Mekanisme  induksi  isoproterenol  dalam  menyebabkan gangguan  keseimbangan  antara  pembentukan  radikal  bebas  dan  sistem  pertahanan  antioksidatif serta  nekrosis  (Rathore,  1998).    Produk  oksidasi  dapat  berinteraksi  dengan  gugus  sufhidril  dan bermacam-macam  protein  menghasilkan  anion  superoksida,  kemudian  hidrogen  peroksida.  Hal tersebut  menyebabkan  perubahan  permiabilitas  mitokondria, up-take kalsium  di  mitokondria, penurunan  ATP,  peningkatan  radikal  hidroksil  yang  tinggi  akan  menyebabkan  kerusakan  lipid, protein dan DNA (Dhalla dkk, 2010).
Pemberian  isoproterenol  pada  tikus  juga  akan  menstimulasi  iskemia  jantung  dan hyperplasia  fibroblastik  dengan  penurunan  kemampuan  jantung  dan  fungsi  diastolik  dan  sistolik
Prosiding Seminar Nasional Peluang Herbal Sebagai Alternatif Medicine Tahun 2015 ISBN: 978-602-19556-2-8 Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim
serta  menunjukkan  gambaran  infark  miokardial  seperti  infark  miokardial  di  manusia  (Devika, 2008).    Induksi infark  miokardial pada  hewan  uji tikus  yang diinduksi isoproterenol    merupakan standar  dalam  penelitian  praklinik  efek  kardioprotektif  yang  menunjukkan  pengaruh  pada perubahan metabolisme dan morfologi pada jaringan jantung seperti pada manusia. Isoproterenol menginduksi  nekrosis  pada  daerah  sub  endokardial  pada  ventrikel  kiri  dalam  septum interventrikuler  (Boluyt  dkk,  1995).  Mekanisme  yang  melibatkan    ROS  dan  perubahan  biokimia yang  mirip  pada  manusia  serta  gambaran  nekrosis  yang  sama  pada  daerah  subendokardial ventrikel  kiri  maka  dapat  dikatakan  model  infark  miokardial  akut  dengan  isoproterenol    dapat menggambarkan kejadian infark miokardial pada manusia. Injeksi  isoproterenol  juga dilaporkan dapat  meningkatkan  aktivitas  caspase-3  dan  kerusakan    DNA  yang  mengindikasikan  adanya proses  apoptosis  dan  nekrosis  pada  sel  otot  jantung  (Remondino  dkk,  2003).  Penelitian  ini bertujuan  melakukan  validasi  model  IMA  pada  tikus  jantan  galur  Wistar  yang  sudah  dilaporkan terdahulu dengan parameter gambaran fisiologis IMA melalui rekaman elektrokardiogram (EKG) dan gambaran patologis dengan mengamati kejadian IMA  secara makroskopik dan mikroskopik. Validasi diperlukan karena penelitian IMA dengan induksi isoproterenol banyak dilakukan di luar negeri  dengan  kondisi  fisiologis  hewan  uji  yang  berbeda.  Perbedaan  ini  dapat  mempengaruhi respon hewan uji terhadap isoproterenol.

## METODE PENELITIAN

## Bahan Penelitian
Isoproterenol-HCl  dan  Triphenil  Tetra  Klorida  (TTC  T  8877)  diperoleh  dari    Sigma Chemival.Co,  NaCl  fisiologis  (Abboth)  serta  natrium  thiopental  (Ketamin),  hematosiklin-eosin dan antibodi anti caspase-3.

## Alat Penelitian
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  seperangkat  alat  EKG  (Nihon  Kohden), waterbath , dan seperangkat alat pemrosesan jaringan.

## Hewan Uji
Hewan  uji  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  tikus  jantan  galur  Wistar  usia  tiga bulan  dengan  berat  badan  180-200  g  (Laboratorium  Penelitian  dan  Pengujian  Terpadu  LPPT- UGM). Hewan uji dipelihara dengan standar pengelolaan laboratorium pada suhu 25±2 º C, 12 jam gelap  dan  12  jam  terang.  Hewan  uji  diberi  pakan  standar  AD2  ( Comfeed )  dan  diberi  minum ad libitum .  Protokol  penelitian  telah  disetujui  oleh  komisi Ethical  Clearance untuk  penelitian praklinik LPPT UGM  No 205/KEC-LPPT/XII/2014.

## Pengelompokkan dan Perlakuan Isoproterenol pada Hewan Uji
Tikus  galur  Wistar  dibagi  menjadi  dua  kelompok,  yaitu  kelompok  kontrol  (normal)  dan kelompok  perlakuan  (isoproterenol).  Kelompok  kontrol  diberi  diberi  NaCl  fisiologis  dan kelompok perlakuan diberi Isoproterenol 85 mg/kg BB secara subkutan selama dua hari berturut- turut.

## Perekaman EKG
Tikus  dianastesi  dengan  Na-thiopental  (Ketamin)  50  mg/kg  BB  secara  intraperitoneal sebelum  direkam  dengan  EKG.  Perekaman  EKG  dilakukan  pada lead  II dengan  kecepatan  5 mm/detik.

## Pengukuran luas infark miokardial
Pengukuran  luas  infark  miokardial  sesuai  dengan  metode  Lie  dkk.,  (1975)  menggunakan pengecatan Triphenyl  Tetrazolium  Chloride (TTC).  Setelah  direkam  dengan  EKG,  tikus dikorbankan  dengan servical dislocation dan dilakukan nekropsiuntuk mengambil organ jantung. Jantung  segera  di  cuci  dengan  larutan garam fisiologis yang telah didinginkan.  Jantung dipotong pada  ventrikel  kiri  dengan  ketebalan  2-3  mm  dan  diinkubasi  pada  larutan  TTC  2  %  pada  suhu 37°C  selama  60  menit  dan  dibalik  setiap  30  menit.  Setelah  itu,  organ  jantung  difiksasi  dalam

## Wahyu Widyaningsih
formalin 10% selama 30 menit. Potongan jantung yang sudah di cat difoto dengan camera digital. Miokardium  normal  ditunjukkan  dengan  warna  merah  sedangkan  infark  miokardial  ditunjukan warna kuning atau putih pucat dengan pengecatan dengan TTC.

## Pemeriksaan mikroskopik infark miokardium
Jantung pada bagian ventrikel kiri yang telah difiksasi dalam formalin 10% dibuat paraffin blok setebal 5 mikro meter dengan Microtome dan dilakukan pengecatan dengan hematoksilin dan eosin (HE). Gambaran histologi jantung  dilihat dengan mikroskop (Olympus) dengan perbesaran 40x200. Skoring kejadian  infark dilakukan dengan memberikan skor (0) bila tidak ada kerusakan, skor (1) bila kerusakan kurang dari 25%,  skor (2) bila kerusakan  25-50 %, skor (3) bila kerusakan 50-75 % dan 4 bila kerusakan 75-100 % (Mehdizadeh dkk., 2013). Selain dengan pengecatan HE, dibuat  preparat  lain  untuk  analisis  IHC.  Metode  IHC  dilakukan  dengan  metode  tidak  langsung dengan penambahan antibodi primer caspase-3.

## Analisa Data
Hasil  EKG  dianalisis  dengan  menghitung  gelombang  P,  komplek  QRS,  interval  QT, interval RR dan segmen ST. Gambaran makroskopik luas  infark dihitung dengan program Image J .  Gambaran  mikroskopik  luas  infark  dianalisis  dengan  gambaran  histopatogi  kejadian  infark miokardial akut. Proses apoptosis pada miokardium diamati dengan ekspresi caspase-3. Data yang diperoleh dibandingkan antara kelompok kontrol dengan kelompok yang diberi isoproterenol.

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  pemberian  isoproterenol  dosis  85  mg/kg  BB  selama dua  hari  berturut-turut  menyebabkan  infark  miokardial  akut  yang  ditunjukkan  dengan  adanya perubahan  gambaran  EKG.  Berdasarkan  penelitian  terdahulu,  pemberian  isoproterenol  dapat meningkatkan segmen ST, interval QT dan menurunkan gelombang P, QRS komplek dan interval RR.    Perubahan  parameter  EKG  terjadi karena perubahan potensial membran  pada daerah infark (Upaganlawar dkk., 2012). Adanya elevasi atau depresi segmen ST merupakan parameter iskemi miokardial  dan  penelitian  eksperimental  induksi  isoproterenol  pada  tikus  (Peacock  dkk. , 2007; Upaganlawar dkk., 2012). Hasil penelitian ini menunjukkan adanya elevasi pada segmen ST pada gambaran EKG yang merupakan ciri khas gambaran infark miokardial akut pada kelompok yang tikus diberi isoproterenol (Gambar 1). Hasil pengukuran parameter EKG (Tabel I) secara statistik tidak menunjukkan adanya perbedaan pada gelombang P, interval RR, komplek QRS, interval QT maupun segmen ST (p>0,05). Hal itu kemungkinan terjadi karena besarnya variasi individu dalam kelompok  sehingga  secara  statistik  tidak  menunjukkan  perbedaan  yang  bermakna.  Untuk memperkecil  variasi  individu  disarankan  adanya  penambahan  jumlah  hewan  uji  dalam  setiap kelompok perlakuan.
Gambar 1.  Gambaran    EKG  tikus  pada  kelompok  normal  dan  kelompok  yang  diberi isoproterenol (elevasi segmen ST   )
Tabel I.  Perubahan  Parameter  EKG  Tikus  pada  Kelompok  Normal  dan  Kelompok  yang diberi Isoproterenol Parameter EKG Normal (X ± SE) Isoproterenol (X ±SE) 1. P (detik) 0,02± 0,063 0,02± 0,017 2. RR (detik) 0,13± 0,099 0,14± 0,245 3.QRSkompleks (detik) 0,03± 0,158 0,02± 0,135 4. QT interval (detik) 0,07± 0,080 0,08± 0,171 5. ST (detik) 0,02± 0,189 0,02± 0,124
Secara  morfologis,  pemberian  isoproterenol  menyebabkan  perubahan  makroskopis  pada jantung  tikus.  Pada  tikus  normal,  jantung  terlihat  berbentuk  kerucut  berwarna  merah,  sedangkan pada kelompok yang diberi isoproterenol, terlihat adanya warna putih pada daerah ventrikel yang menunjukkan  adanya  perubahan  morfologis  yang  menunjukkan  adanya  daerah  iskemia  pada jantung.  Gambaran  makroskopis    jantung    normal  dan  yang  diberi  isoproterenol  terlihat  pada gambar 2.

## Gambar 2. Gambar morfologis jantung kelompok normal dan kelompok Isoproterenol
Perubahan  makroskopis  jantung  di  daerah  ventrikel  kiri  dipertegaskan  dengan  pengecatan menggunakan  TTC  pada  daerah  ventrikel  kiri.  Pengecatan  dengan  TTC  akan  menunjukkan jaringan  infark  miokardial  akut  dengan  daerah  berwarna  putih  sedangkan  jaringan  normal berwarna merah. TTC adalah indikator reaksi redoks untuk membedakan proses metabolisme aktif dan  tidak  aktif  pada  sel  atau  jaringan.  Adanya  elektron  donor  dari  NADH  akan  mengoksidasi 2,3,5- triphenyl tetrazolium chloride (TCC) menjadi 1,3,5-triphenyl formazan (TPF). Pada sel yang mati,  NADH  akan  mencegah  oksidasi  TTC  menjadi  TPF.  Keberadaan  NADH  dan  enzim  laktat dehidrogenase  akan  mengoksidasi  TCC  menjadi  TPF  sehingga  menunjukkan  warna  merah  pada jaringan miokard yang hidup (Csonka dkk., 2010).
Studi  terdahulu  menunjukkan  adanya  peningkatan  daerah  infark  akibat  isoproterenol ditunjukkan  dengan  warna  kuning  atau  warna  putih  terang  yang  jelas.  Area  infark  menunjukkan kehilangan  integritas  membran  yang  terjadi  karena  pelepasan  enzim  laktat  dehidrogenase. Peningkatan  produksi  nitrit  oksida  meningkatkan  oksidatif  stress  dan  meningkatkan  area  infark (Hu  dkk.,  2006).  Penggunaan  NADH  untuk  menangkap  radikal  bebas  yang  dihasilkan  oleh isoproterenol menyebabkankan  sel miokardium kekurangan  enzim  laktat dehidrogenase sehingga perubahan  TCC  menjadi  TPF  dihambat  yang  ditunjukkan  dengan  daerah  berwarna  terang  yang jelas  seperti  yang  dilaporkan  Kumar  dan  Menon  (1992).  Hasil  pengecatan  TCC  pada  kelompok normal dan yang diberi isoproterenol terlihat pada gambar 3.

## Gambar 3.  Gambaran  makroskopik  jantung  pada  daerah  ventrikel  kiri  setelah  dilakukan pengecatan dengan TTC
Kejadian  infark  miokardial  akut  setelah  pemberian  isoproterenol  diperkuat  dari  hasil pemeriksaan  jaringan  mikroskopik dengan  pengecatan  HE  dan  imunohistokimia.  Pada  kelompok tikus yang diberi Isoproterenol terlihat adanya miopati yang ditandai dengan nekrosis miokardium ditandai inti sel otot jantung mengalami piknotik (kariopiknotik), serabut otot mengecil, jarak antar serabut  otot  menjadi  jarang  dan    infiltrasi  netrofil.  Serabut  otot  jantung  dengan  sitoplasma berwarna  pudar/pucat    (Gambar  4).  Hasil  ini  sesuai  dengan  penelitian  sebelumnya  bahwa isoproterenol dapat menyebabkan terjadinya infark miokardial akut ditunjukkan dengan lesi seperti degenerasi  miofibrilar,  hipertropi  miokardial  cardiomiopati  dan  kerusakan  miosit  (Farvin  dkk., 2006). Penelitian sebelumnya juga memperlihatkan bahwa pemberian isoproterenol menyebabkan terjadinya hemoragi pada miokardium dan epikardium dengan lesi terbatas yang tegas pada daerah apical jantung.  Peningkatan    lesi  infark  melalui  reseptor  β-adrenergik,  menstimulasi  influk kalsium  intrasel,  meningkatkan  kadar  c-AMP  dan  melepaskan  energi  fosfat  (Dhalla  dkk.,  1980). Pada  penelitian  ini  belum  menunjukkan  hemoragi  karena  penelitian  Dhalla  dkk.  (1980) menggunakan induksi yang berbeda. Pada penelitian tersebut, hipertropi pada kardium disebabkan karena endokarditis bakterial.

## Gambar 4.  Gambaran  histopatologi  miokardium  tikus  pada  kelompok  normal  dan kelompok yang diberi Isoproterenol dengan pengecatan HE
Pemberian  isoproterenol    juga  dilaporkan  dapat  meningkatkan  aktivitas  caspase-3  dan kerusakan    DNA  yang  mengindikasikan  adanya  proses  apoptosis  dan  nekrosis  pada  sel  otot jantung  (Remondino  dkk.,  2003).  Oksidatif  stress  dilaporkan  menyebabkan  kerusakan  DNA berupa  fragmentasi  dan  apoptosis  (Galang  dkk.,  2000).  Peningkatan  iNOS  di  miokardium  akan meningkatkan  jumlah  apotosis  di  miokardium.  Penelitian  ini  sesuai  dengan  penelitian  terdahulu
yang  menyatakan  bahwa  isoproterenol  dapat  meningkatkan  ekspresi  caspase-3  dibandingkan kelompok  kontrol  (Li  dkk.,  2012).  Peningkatan  ekpresi  caspase-3  pada  kelompok  yang  diberi isoproterenol  menunjukkan  bahwa  pemberian  isoproterenol  dapat  menyebabkan  terjadinya apoptosis  pada  sel  otot  jantung.  Ekspresi  protein  caspase-3  pada  kelompok  yang  diberi isoproterenol ditunjukkan dengan warna coklat pada inti sel  terlihat pada gambar 5.

## Gambar 5.  Ekpresi  caspase  3  pada  tikus  kelompok  normal  dan  kelompok  yang  diberi Isoproterenol
Metode  yang  digunakan  pada  pengecatan  imunohistokimia  dalam  penelitian  ini  adalah metode  tidak  langsung.  Pada  metode  ini,  antigen  diikatkan  pada  antibodi  primer  secara  tidak langsung.  Adapun  antibodi  primer  yang  digunakan  yaitu  anti  caspase-3.  Setelah  terjadi  ikatan antara  antigen  pada  sel  miokardium  kemudian  ditambahkan  antibodi  sekunder  berlabel  TUNEL ( Terminal  deoxynucleotidyl  transferase  Biotin-dUTP  Nick  End  Labelling )  yang  akan  berikatan dengan  antibodi  primer.  Selanjutnya,  ditambahkan  SA-HRP  ( Strep-Avidin  Horse  Radis Peroksidase ),  dimana  enzim  HRP  akan  mendeteksi  keberadaan  biotin  dan  membentuk  reaksi konjugasi  dengan  biotin,  serta  akan  menyebabkan  terjadinya  pembentukan  warna  (pigmen)  yang berasal  dari  penambahan  substrat  kromogen  DAB  (3, 3  diaminobenzidine  tetrahydrochloride ) yangdiubah  oleh  enzim  HRP.  Larutan  kromogen  DAB  telah  mengandung  peroksida  (H 2 O 2 ) sebagai substansi penanda yang membentuk kompleks dengan enzim peroksidase dalam kompleks SA-HRP. Kompleks yang terbentuk dalam kromogen DAB menghasilkan warna coklat gelap. Sel yang terekspresi positif akan berwarna coklat/coklat kemerahan oleh DAB, sedangkan  sel dengan ekspresi negatif akan berwarna biru oleh counterstain hematoksilin (Elmore, 2007).
Hasil  penelitian  sesuai  teori  bahwa  stimulasi  reseptor  β-adrenergik  (Isoproterenol)    dapat menghasilkan spesies oksigen reaktif (ROS) yang dapat memodulasi respon seluler dan fungsional dalam  jantung  (Zhang  dkk.,  2005).  Mekanisme  induksi  isoproterenol  menyebabkan  gangguan keseimbangan  antara  pembentukan  radikal  bebas  dan  sistem  pertahanan  antioksidatif  serta nekrosis  (Rathore,  1998).  Oksidasi  spontan  dari  cathecolamin  menghasilkan  chatecolamin-o- quinonones dengan menghasilkan aminochromes melalui siklisasi. Adrenochrome yang dihasilkan dari  siklisasi epinefrine-o-quinone dapat  dioksidasi  menjadi  komponen  lain  seperti  adrenolutin, 5,6- dihydroxy -1- methylindole atau  adrenochrome-adenolutin  dimmer.  Semua  reaksi  redoks tersebut menghasilkan radikal bebas. Oleh karena itu, chatecolamin -o- quinonones , aminochromes , dan  radikal  bebas  yang  dihasilkan  cathecolamin  terlibat  dalam  toksisitas  yang  berkaitan  dengan cathecolamin (Dhalla dkk., 1992). Produk oksidasi dapat berinteraksi dengan gugus sufhidril dan bermacam-macam  protein  menghasilkan  anion  superoksida    kemudian  hidrogen  peroksida.  Hal tersebut  menyebabkan  perubahan  permiabilitas  mitokondria, up-take kalsium  di  mitokondria, penurunan  ATP,  peningkatan  radikal  hidroksil  yang  tinggi  akan  menyebabkan  kerusakkan  lipid, protein  dan  DNA  (Dhalla  dkk.,  2010).  Stimulasi  ini  menyebabkan  perubahan  fisiologi  dan histopatologi.  Perubahan  fisiologi    yang  ditunjukkan  dengan  terjadinya  elevasi  pada  segmen  ST pada  gambaran  EKG-nya.  Perubahan  hsitopatologi  menyebabkan  nekrosis  otot  jantung  yang ditunjukkan  dengan  peningkatan  daerah  infark  miokardial  akut  pada  ventikel  kiri  dari  hasil

## Wahyu Widyaningsih
pengecatan dengan TCC dan perubahan histopatologi yang menunjukkan adanya infark miokardial akut  dengan pengecatan HE. Proses apoptosis akibat pemberian isoproterenol ditunjukkan dengan peningkatan ekspresi caspase-3 dari hasil imunohistokimia.

## KESIMPULAN
Isoproterenol  85  mg/kg  BB  dapat  digunakan  sebagai  model  infark  dengan  parameter perubahan  gambaran  EKG,  gambaran  makroskopik  luas  infark,  gambaran  histopatologisel  otot jantung serta apoptosis dengan adanya ekspresi caspase-3.

## DAFTAR PUSTAKA
Boluyt  M.O,,  Long  X.,  Eschenhagen  T.,  Mende  U.,  Schmitz  W.,  Crow  M.T.  and  Lakatta  E.G., 1995, Isoproterenol Infusion Alteration in Expression of Hypertropy-Associated Genes in Rat Heart. Am J.Physiol. , 269 , 638-647
Csonka C., Kupai K., Kocsis G.F., Novák G., Fekete V., Bencsik P, Csont T. and Ferdinandy P., 2010,  Measurement  of  Myocardial  Infarct  Size  in  Preclinical  Studies. J  Pharmacol Toxicol 61 (2), 163-70
Dhalla N.S., Ziegelhoffer A., Singal P.K., Panagia V. and Dhillon KS., 1980, Subseluler Changes During Cardiac Hypertrophy and Heard Failure due to Bacterial Endocarditis., Basic Res Cardiol. 75 , 81-91
Dhalla  N.S.,  Yates  J.C.,  Naimark  B.,  Dhalla  K.S.,  Beamish  R.E.  and  Ostadal,  B.,  1992, Cardiotoxicity  of  Catecholamines  and  Related  Agents.  In  Acosta  D  (Eds.), Cardiovascular Toxicolog , Raven Press, New York
Dhalla  N.S.,  Temsah  R.M.  and  Netticadan  T.,  2010,  Role  of  oxidative  Stress  in  Cardiovascular Disease., J.Hypertens., 18 , 655-673
Devika  P.T.  and  Prince  P.S.M.,  2008,  Epigallocatechingallate  (EGCC)  Prevents  Isoproterenol Induced Cardiac Toxicity by Stabilizing Cardiac Marker Enzymesand Membrane Bound ATPases, J. Pharm Pharmacogn, 60 , 125-133
Elmore, S., 2007. Apoptosis: a Review of Programmed Cell Death. Toxicol Pathol. 35 , 495-516
Farvin  K.H.,  Anandan  R.  and  Kumar  S.H,  2006,  Cardioprotective  Effect  of  Squalene  on  Lipid Profile in Isoprenalin-Induced Myocardial Infaction in Rat., J.Med Food , 9 , 531-536
Galang N., Sasaki H. and Maulik N., 2000, Apoptotic Cell Death during Ischemia Reperfusion and its Attenuation by Antioxidant Therapy. , Toxicol. 148, 111-118
Grimm D., Elsner D., Schunkert H., Pfeifer M., Griese D., Bruckschlegel G., Muders F., Riegger G.A.J.  and  Kromer  E.P.,  1997.  Development  of  Heart  Failure  Following  Isoproterenol Administration  in  the  Rat:  Role  of  the  Renin–Angiotensin  System. Cardiovascular Research. 37 , 91–100
Hu A., Jiao X., Gao E., KochW.K., Sharifi-Azad S., Grunwald Z., Ma X.L. and Sun J.Z., 2006, β- adrenergic Receptor Stimulation Induces Cardiac Apoptosis and Aggravates Myocardial Ischemia/Reperfusion  Injury  by  Provocating  Inducible  Nitric-Oxide  Synthase-Mediated Nitrative  Stress, J Pharmacol Exper Therap. 318 , 469-475
Kumar  J.S. and  Menon  V.P.,  1992,  Changes  in  Level of Lipid  Peroxides  Activity of Superoxide Dismutase and Catalase in Diabetes Associated with Myocardial Infarction, Indian J. Exp Biol. 30 , 122-127
Mehdizadeh  R.,  Parizadeh  M.R.,  Khooei  A.R.,  Mehri  S.  and  Hosseinzadeh  H.,  2013, Cardioprotective  Effect  of  Saffron  Extract  and  Safranal  in  Isoproterenol-induced Myocardial Infarction in Wistar Rats, Iran J. Basic Med Sci : 16 (1), 56-63
Li  H.,  Xie  Y.H.,  Yang  Q.,  Wang  S.W.,  Zhang  B.L.,  Wang  J.B.,  Cao  W.,  Bi  L.L.,  Sun  J.Y.  and Miao  S.,  2012,  Cardioprotective  Effect  of  Paeonol  and  Danshensu  Combination  on Isoproterenol-Induced Myocardial Injury in Rats. PloS One 7 , e48872
Lie  J.T.,  Pairolero  P.C.,  Holley  K.E.  and  Titus  J.L.,  1975,  Macroscopic  Enzyme  Mapping Verification  of  Large,  Homogenous,  Experimental  Myocardial  Infarcts  of  Predictable Size and Location in Dog. J Thor Cardiovasc Surg 69 , 599-605
Peacock  W.E.,  Hollander  J.E.,  Smalling  R.W.,  Bresler  M.J.,  2007,  Reperfusion  Strategies  in  the Emergency Treatment of ST-segment Elevation Myocardial Infarction, Am J Emerg Med, 25, 353-366
Rathore  N.,  John  S.,  Kale  M.  and  Bhatnagar  D.,  1998,  Lipid  Peroxidation  and  Antioxidant Anzymes in Isoproterenol Induced Oxidative Stress in Rat Tissues , Pharmacol Res,. 38 , 297-303
Remondino A., Kwon S.H., Communal C., Pimentel D.R., Sawyer D.B. and  Singh K., 2003, β- adrenergik Receptor-Stimulated Apoptosis in Cardiac Myocytes is Mediated by Reactive Oxygen Spesies/c-Jun NH2-Terminal Kinase-Dependent Activation of the Mitochondrial Pathway. Circ Res. 92, 136-138
Upaganlawar  A.,  Patel  V.  and  Balaraman,  2012,  Tomato  Lycopene  Attenuates  Myocardial Infarction Induced by Isoproterenol: Electrocardiograpic, Biochemical and Anti-apoptotic study, Asian Pac J. Trop Biomedic 2 (5), 345-351
WHO,  2011, Cardiovascular  Disease , http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs3.html , diakses pada tanggal 6 Mei 2014
Zhang  G.X.,  Kimura  S.,  Nishiyama  A.,  Shokoji  T.,  Rahman  M.  and  Yao  L.,  2005,  Cardiac Oxidative  Stress  in  Acute  and  Chronic  Isoproterenol-Infused  Rats. Cardiovasc  Res 65 , 230–8

## Wahyu Widyaningsih