## Respon Eksplan Buku Durian Lahung (Durio dulcis) terhadap Konsentrasi BAP (Benzil Amino Purin) pada Media WPM (Woody Plant Medium)

## Response of Durian Lahung (Durio dulcis) Nodus Explant to BAP (Benzyl Amino Purine) Concentration on WPM (Woody Plant Medium)

## Siti Nor Zahra, Nofia Hardarani, Raihani Wahdah dan Juharni
Fakultas Pertanian, Universitas Lambung Mangkurat, Kalimantan Selatan, Indonesia email : nofia.hardarani@ulm.ac.id

## Abstract
Lahung is a genus of endemic Durio in Kalimantan which currently has vulnerable status and is  rare.  Therefore,  ex-situ  conservation  of  this  plant  has  begun  using  tissue  culture techniques.  Several  things  that  need  to  be  considered  in  in  vitro  propagation  are  the  right type  of  explant,  planting  mediun  and  PGR.  Stem  nodes  are  generally  chosen  as  explant because  their  availability  does  not  depend  on  the  season  and  has  a  fast  response  in  bud induction. WPM medium is e medium intended for woody plants such as durian lahung. BAP is  a  PGR  from  the  cytokinin  group  which  is  quite  avtive  and  the  most  widely  used.  This research aimed to determine the best response of the durian lahung stem node culture to the BAP concentration on WPM medium. This research was designed using a rancomized block design  (RBD)  with  one  factor  in  the  form  of  BAP  concentration  consisting  of  six  levels,  i.e. 0.0,  0.5,  1.0,  1.5,  2.0  and  2.5  ppm.  Each  experimental  unit  was  repeated  four  times  and consisted  of  ten  planting  bottles  for  e  total  of  240  planting  bottles.  The  variables  observed were the percentage of live explant aged 1-8 WPP, callus growth time, percentage of explant forming  callus  aged  1-8  WAP,  callus  and  texture  callus,  shoot  growth  time  and  number  of shoots. The results showed that callus appeared in response of the durian lahung stem node to the BAP concentration treatments.

## Keywords : Durian, Explant, Medium, Plant growth regulator

## Abstrak
Tanaman lahung merupakan salah satu genus Durio endemik Kalimantan yang hingga saat ini berstatus rentan dan keberadaannya sudah langka. Oleh sebab itu, mulai dilakukan konservasi tanaman  ini  secara ex-situ melalui  teknik  kultur  jaringan.  Beberapa  hal  yang  perlu diperhatikan  dalam  perbanyakan  secara  in  vitro  adalah  jenis  eksplan,  media  tanam  dan  ZPT yang  tepat.  Buku  batang  umumnya  dipilih  sebagaai  eksplan  karena  ketersediaannya  tidak tergantung musim dan memiliki respon yang cepat dalam induksi tunas. Media WPM adalah media yang diperuntukkan bagi tanaman berkayu seperti durian lahung. BAP merupakan ZPT dari  golongan  sitokinin  yang  cukup  aktif  dan  paling  banyak  digunakan.  Penelitian  ini bertujuan  untuk  mengetahui  respon  kultur  buku  batang  durian  lahung  yang  terbaik  terhadap konsentrasi  BAP  pada  media  WPM.  Penelitian  ini  didesain  menggunakan  rancangan  acak kelompok (RAK) satu faktor berupa konsentrasi BAP yang terdiri dari enam taraf, yaitu 0,0; 0,5;  1,0;  1,5;  2,0  dan  2,5  ppm.  Tiap  satuan  percobaan  diulang  empat  kali  dan  terdiri  dari sepuluh  botol  tanam  sehingga  total  terdapat  240  botol  tanam.  Variabel  yang  diamati  adalah persentase  eksplan  hidup  umur  1-8  MST,  waktu  tumbuh  kalus,  persentase  eksplan
membentuk  kalus  umur 1-8 MST, warna dan tekstur kalus,  waktu  tumbuh tunas dan jumlah tunas. Hasil penelitian menunjukkan bahwa muncul kalus sebagai respon buku batang durian lahung terhadap konsentrasi BAP yang diberikan.
Kata kunci : Durian, Eksplan, Media, Zat pengatur tumbuh.

## PENDAHULUAN
Tanaman  lahung  ( Durio  dulcis ) merupakan  salah  satu  spesies  endemik Kalimantan  dari  keluarga  durian  yang statusnya  rentan  dari  kepunahan  sejak tahun  1998  hingga  sekarang.  Kondisi  ini dibuktikan  dengan  semakin  langkanya tanaman  ini  dan  hanya  tumbuh  secara  liar di  hutan-hutan  beberapa  Kabupaten  di Kalimantan.  Spesies  ini  dinilai  rentan secara  global  karena  deforestasi  yang parah  di  hutan  dataran  rendah  di Kalimantan. Hal ini menyebabkan penurunan  populasi  lebih  dari  30%  dalam 120  tahun  terakhir.  Beberapa  lokasi tercatat  sudah  tidak  layak  lagi  menjadi habitat alami bagi spesies ini, khususnya di Kalimantan  Selatan.  Investigasi  lebih lanjut  di  beberapa  kawasan  lindung  yang memiliki  catatan  tentang  eksistensi  dari spesies ini memerlukan adanya pemantauan  terhadap  kondisi  populasinya (Rahman, 2021).
Tanaman lahung memiliki karakter yang  unik  dibandingkan  dengan  jenis durian  lain,  yaitu  warna  buahnya  merah. Hal ini didukung pernyataan Maysyarah et al .  (2019)  bahwa  buah  tanaman  lahung warnanya menarik dan memiliki rasa yang sangat  manis.  Hasil  penelitian  Aprilianti dan  Sari  (2011)  menunjukkan  kadar kemanisan  buah  durian  lahung  mencapai 32 o Brix. Nilai padatan terlarut total antara 30-40 o Brix  termasuk  dalam  kategori  rasa durian  yang  sangat  manis  (Handayani  dan Ismadi, 2017).
Karakter  tersebut  yang  menjadikan tanaman  ini  sebagai  salah  satu  plasma nutfah  yang  perlu  dijaga  kelestariannya sehingga  dapat  dicegah  dari  kepunahan. Hal ini juga menjadi langkah penting yang dapat bermanfaat pada program pemuliaan tanaman  dalam  rangka  pengembangan buah durian unggul.
Upaya  konservasi  secara ex-situ dapat  dilakukan  dengan  cara  menanam komoditas  tersebut  pada  kebun  koleksi (Antarlina,  2009),  seperti  di  Kebun  Raya Bogor (Rahman, 2021). Konservasi secara ex-situ tanaman ini menggunakan teknik in vitro (kultur  jaringan)  juga  sudah  mulai dilaksanakan yang diawali dengan penelitian  tentang  prosedur  sterilisasi eksplan  daun,  buku,  dan  biji  yang  tepat (Hardarani  dan  Nisa,  2022;  Eprian,  2023; Agustiningrum et  al .,  2023).  Tahapan berikutnya  adalah  upaya  menginduksi pertumbuhan  tunas  dari  berbagai  eksplan (bahan tanam).
Salah  satu  faktor  yang  dapat mempengaruhi keberhasilan dalam induksi tunas adalah sumber eksplan.  Penggunaan nodus  atau  buku  batang  pada  kultur in vitro sangat baik karena pada buku batang akan  terbentuk  tunas  lateral  dan  cabang. Penggunaan  buku  batang  lebih  cepat daripada  bagian  tanaman  lainnya  kecuali biji.    Penggunaan  eksplan  buku  batang diharapkan  dapat  menginduksi  tunas  yang banyak (Yanti dan Isda, 2020).
Kelebihan  lain  penggunaan  buku batang  sebagai  eksplan  dibandingkan dengan eksplan biji adalah dapat
digunakan  tanpa  tergantung  pada  musim berbuah. Menurut Kosmiatin et al . (2005), waktu induksi tunas tercepat pada tanaman gaharu  diperoleh  dari  eksplan  buku  tanpa daun.    Eksplan  yang  relatif  lebih  mudah diinduksi  tunasnya  adalah  eksplan  yang memiliki  jaringan  meristem  atau  bakal tunas pada buku.
Aplikasi  teknik in  vitro pada dasarnya  bertujuan  untuk  perbanyakan tanaman  yang  dikenal  dengan  istilah mikropropagasi.    Tahapan  awal  dari mikropropagasi  adalah  induksi  tunas (Zulkarnain,  2009).    Keberhasilan  dalam induksi tunas ditandai dengan terbentuknya  tunas  dari  eksplan  yang ditanam pada media kultur dan berhubungan  dengan  jumlah  tunas  yang dihasilkan (Haryono et al. , 2016).
Dalam  tahapan  induksi  tunas, pemilihan  media  kultur  dan  zat  pengatur tumbuh  (ZPT)  yang  sesuai  merupakan syarat  yang  harus  terpenuhi.  Salah  satu media  yang  dapat  digunakan  untuk  kultur jaringan  tanaman  berkayu  adalah  media WPM ( Woody Plant Medium ) (Widyastuti, 2002).  Media  WPM  merupakan  media dasar  dengan  konsentrasi  sulfat  lebih tinggi daripada media MS (Murashige dan Skoog).  Media  ini  diperuntukkan  khusus untuk  tanaman  berkayu  berperawakan perdu  dan  pohon  (Haryono et  al .,  2016).
Media  WPM  ini  sangat  baik  untuk tanaman  berkayu  keras  seperti  durian  dan manggis  dalam  perbanyakan  secara in vitro (Hariono et al ., 2018).
Penambahan  ZPT  ke  dalam  media dapat  mendorong  regenerasi  dari  organ yang  kurang  responsif.  Salah  satu  ZPT yang sering digunakan dalam induksi tunas in vitro adalah  golongan  sitokinin. Sitokinin  berfungsi  untuk  meregulasi pembelahan sel dan memacu organogenesis baik secara langsung
maupun  tidak  langsung.    Benzil  amino purin  (BAP)  merupakan  sitokinin  sintetik yang  sering  digunakan  dan  sangat  efektif dalam  menginduksi  tunas,  pembentukan daun dan harganya relatif murah (Wattimena et al ., 1992).
Miah et  al. (2008)  menyatakan bahwa  pemberian  1,0  ppm  BAP  pada tanaman Citrus macroptera Mont. menunjukkan  hari  muncul  tunas  tercepat pada eksplan buku batang yaitu 6 HST dari pada  menggunakan  eksplan  tunas  apeks yaitu  7  HST.  Sementara  itu,  kombinasi konsentrasi  BAP  pada  media  WPM berpengaruh  nyata  terhadap  persentase eksplan  buku  batang  tanaman  karet membentuk  tunas.  Perlakuan  media  WPM +  BAP  0,5  mg  L -1 menghasilkan  respon terbaik terhadap persentase eksplan membentuk tunas dan umur muncul tunas. Perlakuan  ini  terbaik  untuk  memperoleh multiplikasi  tunas  aksilar  tanaman  karet (Sundari, 2014).
Hasil  penelitian  Handayani et  al .
(2018)  memperoleh  tunas  baru  tumbuh  di bagian  buku  batang  dari  eksplan  tunas durian yang dikulturkan dengan penambahan ZPT BAP sebanyak 2,0 ppm. Penelitian  Yanti  dan  Isda  (2020),  juga menunjukkan  adanya  pertumbuhan  tunas pada  eksplan  buku  batang  jeruk  kasturi dengan  penambahan  BAP  sebanyak  1  mg L -1 yang  menghasilkan  jumlah  tunas  yang paling  banyak  yaitu  2,5.    Keberhasilan eksplan tumbuh tunas menunjukkan bahwa eksplan yang dikulturkan mampu beregenerasi dengan baik.
Hingga saat ini belum ada penelitian  yang  mengkaji  bagaimana pengaruh  ZPT  BAP  terhadap  kultur  buku batang  durian  lahung.  Oleh  sebab  itu, penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui respon  kultur  buku  batang  durian  lahung
yang  terbaik  terhadap  konsentrasi  BAP pada media WPM.

## BAHAN DAN METODE

## Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilaksanakan  mulai
bulan Agustus–Oktober 2023
di Laboratorium  Kultur  Jaringan  Tanaman,
Fakultas  Pertanian,  Universitas  Lambung
Mangkurat, Banjarbaru.

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan pada penelitian ini berupa botol kultur, peralatan dalam  pembuatan  media  WPM  dan  alat tanam  secara in  vitro .  Bahan  yang digunakan  adalah  eksplan  buku  batang durian lahung, aquades, media WPM, ZPT BAP,  sterilan  berupa  larutan  fungisida, bakterisida,  alkohol  70%,  sublimat  0,1% dan Betadine.
Eksplan  buku  batang  yang  akan ditanam dicuci bersih kemudian disterilkan di luar laminar air flow (LAF) menggunakan  fungisida  dan  bakterisida. Setelah itu, sterilisasi eksplan dilakukan di dalam  LAF  menggunakan  alkohol  70% dan  sublimat  0,1%,  lalu  direndam  dalam larutan  Betadine.  Terakhir  eksplan  dibilas dengan aquades steril.
Penelitian ini merupakan percobaan di laboratorium yang didesain menggunakan Rancangan Acak Kelompok (RAK)  satu  faktor  yakni  konsentrasi  BAP dengan  6  taraf  perlakuan  (0,0;  0,5;  1,0; 1,5;  2,0  dan  2,5  ppm).  Setiap  perlakuan diulang  dalam  empat  kelompok.  Sebagai
dasar  pengelompokannya  adalah  posisi buku batang. Terdapat 24 satuan percobaan  dimana  setiap  unit  satuan percobaan  terdiri  dari  10  botol  sehingga total ada 240 botol tanam.
Variabel pengamatan meliputi persentase  eksplan  hidup  umur  1-8  MST (minggu  setelah  tanam),  waktu  tumbuh kalus,  persentase  eksplan  membentuk kalus  umur  1-8  MST,  warna  dan  tekstur kalus,  waktu  tumbuh  tunas  dan  jumlah tunas.
Data  yang  diperoleh  dari  hasil pengamatan diuji kehomogenannya
dengan  uji  Bartlett.  Jika  data  homogen maka dilanjutkan analisis ragam (ANOVA)  pada  taraf  nyata  5%.  Apabila analisis  ragam  menunjukkan  perlakuan berpengaruh  nyata,  maka  dilanjutkan dengan  uji  Beda  Nyata  Jujur  (BNJ)  pada taraf nyata 5%. Pengujian statistik menggunakan software  Minitab 17.  Data untuk  variabel  warna  dan  tekstur  kalus disajikan  berdasarkan  pengamatan  secara visual dan dideskripsikan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Persentase Eksplan Hidup
Hasil  analisis  ragam  menunjukkan bahwa  perlakuan  tidak  berpengaruh  nyata terhadap  variabel persentase  eksplan hidup.  Rata-rata  persentase  eksplan  hidup (%) pada kultur buku batang durian lahung umur  1-8  MST  pada  berbagai  konsentrasi BAP dapat dilihat pada Tabel 1.
1. Rata-rata persentase eksplan hidup  (%) kultur buku  batang durian lahung umur 1-8 MST pada berbagai konsentrasi BAP
Konsentrasi BAP (ppm) Persentase Eksplan Hidup (%) 1 2 3 4 5 6 7 8 ------------------------------------MST---------------------------------------- 0,0 100,0 95,0 87,5 80,0 75,0 75,0 75,0 72,5 0,5 92,5 85,0 70,0 65,0 65,0 65,0 65,0 65,0 1,0 100,0 80,0 80,0 75,0 72,5 72,5 72,5 72,5 1,5 97,5 72,5 72,5 70,0 70,0 70,0 70,0 70,0 2,0 100,0 85,0 77,5 77,5 75,0 75,0 75,0 75,0 2,5 97,5 90,0 72,5 72,5 70,0 70,0 62,5 62,5
Berdasarkan  Tabel  1,  terdapat beberapa  perlakuan  yang  memberikan persentase  eksplan  hidup  sebesar  100% pada  umur  1  MST,  yaitu  pada  konsentrasi BAP 0,0; 1,0 dan 2,0 ppm walaupun tidak berbeda nyata dengan perlakuan yang lain. Hingga  umur  8  MST,  persentase  eksplan hidup  terus  mengalami  penurunan  pada semua  perlakuan.  Pada  umur  8  MST kisaran  persentase  eksplan  hidup  adalah antara  62,5-75,0  %.  Nilai  ini  cukup  tinggi jika  dibandingkan  dengan  persentase eksplan  yang  hidup  pada  penelitian Zulkarnain et al . (2013) yang memperoleh kisaran  persentase  eksplan  hidup  antara 28-44 % pada kultur daun durian Selat.
Persentase  eksplan  hidup  hingga umur  8  MST  bertahan  di  atas  50% mengingat  tidak  dilakukannya  subkultur. Hal  ini  menunjukkan  penambahan  BAP pada media WPM memberikan daya hidup yang  cukup  tinggi.  Sitokinin  aktif  seperti BAP  dan  konsentrasi  sulfat  dalam  media WPM  berperan  aktif  dalam  pembelahan sel.  Didukung  oleh  pernyataan  Arisah et al .  (2021)  bahwa  kemampuan  hidup dipengaruhi  oleh  penambahan  hormon BAP  konsentrasi  rendah.  Diduga  BAP memiliki kontribusi agar sel-sel tetap aktif, mengingat  bahwa  BAP  sendiri  berperan penting  dalam  pembelahan  sel  dan jaringan. Sejalan dengan pernyataan Alqamari et  al .  (2020)  bahwa  konsentrasi sitokinin  yang  terdapat  dalam  jaringan eksplan,  mampu  mendorong  pertumbuhan
dan  perkembangan  eksplan  serta  eksplan mempunyai  kemampuan  untuk  dapat hidup sampai akhir percobaan. Di sisi lain, ketiadaan  suplai  sulfur  di  dalam  media menghambat  asimilasi  sistein  sintase  yang penting untuk proses embriogenesis somatik pada kalus kakao (Minyaka et al ., 2008).

## Waktu Muncul Kalus
Berdasarkan  hasil  analisis  ragam, perlakuan  juga  tidak  berpengaruh  nyata terhadap  variabel  waktu  muncul  kalus. Rata-rata  waktu  muncul  kalus  (HST) kultur  buku  batang  durian  lahung  pada berbagai  konsentrasi  BAP  disajikan  pada Gambar 1.
Gambar    1.  Rata-rata  waktu  muncul  kalus (HST)  kultur  buku  batang durian  lahung  pada  berbagai konsentrasi BAP
Gambar  1  menunjukkan  pada semua  konsentrasi  BAP  kalus  dapat tumbuh.  Waktu  muncul  kalus  pada  kultur buku  batang  durian  lahung berkisar antara
20,8 21,9 20,1 23,0 24,5 27,7 0 5 10 15 20 25 30 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 W ak tu M u n cu l Ka lu s (HST ) Konsentrasi BAP (ppm)
20,1-27,7  HST.  Walaupun  tidak  berbeda nyata,  namun  terdapat  kecenderungan bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  BAP maka semakin lama muncul kalus.
Penambahan BAP diharapkan dapat  menginisisai  pertumbuhan  tunas sebagaimana  fungsi  golongan  sitokinin pada umumnya. Namun respon setiap jenis eksplan  terhadap  pemberian  ZPT  dapat berbeda-beda.  Pertumbuhan  kalus  justru terjadi  yang  menunjukkan  konsentrasi BAP yang diberikan diduga belum mampu menginduksi pertunasan pada buku batang durian  lahung.  Hal  ini  juga  berarti,  selain melalui  organogenesis  langsung,  dalam kultur  buku  batang  durian  lahung  juga dapat mengalami organogenesis tak langsung,  dengan  adanya  kemunculan kalus.
Kalus  merupakan  sumber  bahan tanaman  yang  sangat  penting  dalam meregenerasi  tanaman  yang  baru  karena setiap    selnya  memiliki    kemampuan membentuk  organisme  baru.  Penelitian tentang  induksi  kalus  telah  banyak dilakukan namun keberhasilan kalus dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor  yaitu media,  ZPT  dan  eksplan.  Jenis  media berpengaruh  besar  terhadap  ketersediaan zat  makanan  bagi  eksplan  sehingga  dapat berpengaruh  terhadap  daya  tahan  eksplan untuk hidup pada media tersebut, sedangkan  ZPT  endogen  dan  eksogen berpengaruh  untuk  menginduksi  pola morfogenesis tertentu (Maharani, 2022).
Dalam  penelitian  ini,  rata-rata kalus  mulai  muncul  memasuki  minggu ketiga setelah tanam. Penambahan sitokinin  BAP  akan  dapat  memacu pertumbuhan  kalus  jika  konsentrasinya dalam  kondisi  seimbang  dengan  auksin.
Sejalan  dengan  pendapat  Wulandari et  al . (2022) bahwa diperlukan konsentrasi yang seimbang dan tepat  di  dalam media kultur
antara  hormon  dari  golongan  auksin  dan sitokinin  agar  kalus  dapat  tumbuh  dengan optimal.  Kombinasi  kedua  ZPT  tersebut adalah untuk melakukan proses pembelahan  secara  kontinyu  pada  kurun waktu yang tepat.
Walaupun  tidak  ada  penambahan ZPT  auksin,  namun  dalam  penelitian  ini, perlakuan  sitokinin  BAP  justru  memacu induksi  kalus.  Diduga  di  dalam  buku batang  durian  lahung  terkandung  auksin endogen  yang  cukup  dalam  mengimbangi konsentrasi BAP yang diberikan. Pertumbuhan kalus dapat terjadi dikarenakan  hormon  auksin    dan  sitokinin memiliki  efektivitas  yang  baik  dalam membantu  penginduksian  kalus  dengan cara pembelahan sel secara aktif (Wulandari et al ., 2022).
Penggunaan  BAP  antara  0,0-2,5 ppm  dalam  penelitian  ini  diduga  memang sesuai  dengan  kultur  buku  batang  durian lahung  dalam  menginduksi  pertumbuhan kalus.  Menurut  Arab et  al .  (2014),  salah satu  faktor  penting  dalam  kultur in  vitro khususnya pada tahap perbanyakan adalah ZPT  sitokinin. BAP  merupakan  salah  satu ZPT  dari kelompok sitokinin sintetis yang banyak  digunakan  dalam  perbanyakan beberapa    jenis    tanaman  berkayu. Sitokinin  berperan  dalam  perbanyakan pada tahap perkembangan tanaman seperti merangsang  pembelahan  sel  dan  ekspansi sel  dalam  sintesis  protein  tanaman  dan aktifitas beberapa enzim.
Semakin  tinggi  konsentrasi  BAP yang diberikan, cenderung semakin memperlambat pertumbuhan kalus. Hal ini mengindikasikan konsentrasi sitokinin eksogen  semakin  dalam  kondisi  yang kurang  seimbang  dengan  auksin  endogen yang  terkandung  di  dalam  eksplan. Didukung  oleh  pernyataan  Robles et  al . (2016) bahwa perbedaan laju pertumbuhan
kalus  dipengaruhi  karena  faktor  kecepatan pembelahan  sel  yang  dapat  disebabkan akibat  pemberian  kombinasi  konsentrasi hormon  auksin  dan  sitokinin.  Menurut
Indah dan Ermavitalini (2013),
terhambatnya pembentukan kalus
dikarenakan hormon endogen dan eksogen yang  terdapat  pada  eksplan  tidak  dapat merangsang  pertumbuhan  kalus  dengan cepat.
Selain kondisi keseimbangan auksin  dan  sitokinin,  induksi  kalus  juga disebabkan  oleh  kesesuaian  media  WPM. Menurut Prabakti et al . (2017), kalus yang terbentuk selain karena irisan dan pengaruh  media  WPM,  dipengaruhi  pula
oleh  ZPT.  Komposisi  media  dasar  sangat berpengaruh terhadap keberhasilan pembentukan kalus (Ajijah, 2016).

## Persentase Eksplan Membentuk Kalus
Sama halnya dengan kedua variabel  di  atas,  perlakuan  konsentrasi BAP  juga  tidak  berpengaruh  nyata terhadap  variabel persentase  eksplan membentuk  kalus.  Rata-rata  persentase eksplan membentuk kalus (%) kultur buku batang  durian  lahungumur  1-8  MST  pada berbagai  konsentrasi  BAP  tersaji  pada Tabel 2.
Tabel 2. Rata-rata persentase eksplan membentuk kalus (%) kultur buku durian lahung umur 1-8 MST pada berbagai konsentrasi BAP Konsentrasi BAP (ppm) Persentase Eksplan Membentuk Kalus (%) 1 2 3 4 5 6 7 8 ------------------------------------MST---------------------------------------- 0,0 5,0 10,0 25,0 30,0 32,5 37,5 37,5 37,5 0,5 0,0 10,0 20,0 22,5 25,0 27,5 27,5 27,5 1,0 7,5 12,5 19,8 30,0 32,5 32,5 32,5 32,5 1,5 2,5 2,5 10,0 15,0 17,5 20,0 20,0 20,0 2,0 0,0 5,0 17,5 20,0 25,0 27,5 27,5 27,5 2,5 0,0 0,0 0,0 7,5 7,5 17,5 17,5 17,5
Kalus sudah muncul pada beberapa perlakuan  pada  umur  1  MST,  yaitu  pada konsentrasi  BAP  0,0;  1,0  dan  1,5  ppm walaupun  tidak  berbeda  nyata  dengan perlakuan  lainnya  (Tabel  2).  Persentase eksplan  membentuk  kalus  terus  meningkat pada semua perlakuan hingga umur 6 MST dan  tidak  mengalami  perubahan  hingga umur  8  MST.  Pada  umur  8  MST persentase  eksplan  membentuk  kalus berkisar  antara  17,5-37,5  %.  Terdapat kecenderungan  semakin  tinggi  konsentrasi BAP,  persentase eksplan yang membentuk kalus semakin kecil. Namun jika dibandingkan  dengan  persentase  eksplan yang  membentuk  kalus  pada  penelitian
Zulkarnain et  al. (2013),  yaitu  antara  5-20
%, hasil penelitian ini lebih tinggi.
Pertumbuhan  kalus  pada  penelitian ini diinduksi oleh keseimbangan konsentrasi  antara  sitokinin  eksogen  dan auksin  endogen  dalam  jaringan  eksplan. Hal serupa juga diperoleh dalam penelitian Yelnititis  dan  Sunarti  (2020)  bahwa penambahan  ZPT  BAP  ke  dalam  media tumbuh  akan  mempengaruhi  kandungan hormon  endogen  dari  jaringan  tanaman yang  dikultur  sehingga  terjadi  diferensiasi sel.  Perubahan  kandungan  ZPT  tersebut dapat  mempengaruhi  keseimbangan in vitro kandungan  auksin  dan  sitokinin dalam  jaringan.  Diduga  akasia  hibrida
mempunyai  kandungan    hormon    auksin endogen  yang relatif lebih tinggi sehingga terbentuk kalus.
Selain  itu  kalus  tumbuh  juga disebabkan oleh adanya kesesuaian komposisi  media  WPM  untuk  induksi kalus tanaman durian lahung yang merupakan  tanaman  berkayu.  Menurut Mehaboob et  al .  (2019)  dan  Wada et  al .
(2015),    keberhasilan    perbanyakan dipengaruhi  oleh  komposisi  kimia  media kultur  dan  optimasi  mineral  nutrisi.
Ditambah dengan adanya jaringan kambium  pada  buku  tanaman  berkayu yang  mempermudah  pertumbuhan  kalus. Selain  media  dan  ZPT,  Rahayu  (2003) melaporkan  salah  satu  faktor  keberhasilan terbentuknya  kalus  adalah  keberadaan kambium  pada  eksplan.  Eksplan  dari tumbuhan yang memiliki kambium dilaporkan akan lebih mudah menginduksi kalus.
Semakin  tinggi  konsentrasi  BAP maka persentase eksplan yang membentuk kalus  cenderung  semakin  kecil.  Menurut Zulkarnain et al . (2013), kehadiran BAP di dalam medium kultur justru dapat menekan pembentukan  kalus,  di  mana  persentase eksplan  yang  membentuk  kalus  semakin sedikit seiring dengan meningkatnya konsentrasi  BAP.  Hal  serupa  diperoleh dalam penelitian Nurokhman et al . (2018), yaitu  induksi  kalus  eksplan  nodus  (buku batang) dan internodus (ruas) dari tanaman sambung nyawa yang memperoleh persentase 100% dengan kombinasi konsentrasi  yang  rendah  antara  2,4-D dengan BAP sebesar 0,1 ppm.

## Warna dan Tekstur Kalus
Induksi  kalus  memiliki    warna yang    bermacam-macam  yaitu  ada  yang memiliki    warna  kuning,  putih  bening,
putih    kecoklatan,  putih  kekuningan, kuning  kecoklatan,  coklat  kehitaman, coklat  dan  hitam  (Wulandari et  al .,  2022) dan hijau (Maharani, 2022).
Kalus pada penelitian ini berdasarkan  hasil  pengamatan  secara visual  dari  awal  mula  muncul  hingga pengamatan  minggu  kedelapan  setelah tanam  mengalami  perubahan  warna.  Pada awal pertumbuhannya (1 MST), kalus yang muncul berwarna putih. Memasuki minggu kelima setelah tanam, kalus mulai berwarna  coklat  muda  dan  menjadi  coklat saat  berumur  8  MST.  Perubahan  warna kalus  pada  eksplan  buku  durian  lahung dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar  2.  Perubahan  warna  kalus  dari putih  hingga  coklat  pada buku  durian  lahung  (tanda panah)
Warna  kalus  putih  muncul  pada awal  pertumbuhannya  (umur  1-4  MST). Seperti  halnya  kalus  pada  penelitian Maharani  (2022)  dimana  kalus  yang terbentuk berwarna putih. Hal ini disebabkan kalus terbentuk pada minggu 1- 3,  menandakan  bahwa  umur  kalus  masih muda  sehingga  kalus  berwarna  putih. Kemudian pada umur 5  MST, kalus  mulai berubah  warna  menjadi  coklat  dan  terus bertahan  hingga  umur  8  MST.  Hal  ini menandakan  kemunduran  kondisi  kalus yang mengindikasikan diperlukannya subkultur setelah umur 4 MST.
Perubahan  warna  kalus  menjadi coklat  menunjukkan  adanya  zat  fenolik 242
yang dapat menyebabkan pencoklatan pada kalus.  Hal  ini  terjadi  apabila  kalus dianggap  terlalu  lama  ditumbuhkan  dalam media  sehingga  perlu  dilakukan  subkultur ke  dalam  media  baru.  Menurut  Wulandari et al . (2017), senyawa fenolik menyebabkan perubahan warna kalus pada eksplan  yang  semakin  menghitam  ketika kultur semakin lama dalam media.
Pada  penelitian  Yelnititis  dan Sunarti  (2020)  juga  memperoleh  kalus kompak  berwarna  putih  dan  kecoklatan. Sejalan dengan penyataan Zulkarnain et al . (2013)  bahwa  massa  kalus  yang  berhasil diproliferasikan  perlu  disubkultur  pada media  baru  yang  masih  segar  karena pemeliharaan kultur yang terlalu lama pada media  yang  tetap  akan  menyebabkan terjadinya  kemunduran  kondisi  kalus. Dodds  dan  Robert  (1985)  menganjurkan untuk  melakukan  subkultur  kalus  28  hari sekali (4 minggu sekali).
Tekstur  kalus  ditunjukkan  oleh bagaimana  ciri  fisik  dari  kumpulan  sel kalus  yang  terbentuk.  Berdasarkan  ciri fisiknya,  kalus  dalam  penelitian  ini bertekstur kompak. Kalus remah mempunyai  ciri  fisik  kalus  dengan  tekstur lunak karena terdapat ruang antar sel. Pada kalus  kompak  mempunyai  ciri  fisik  kalus dengan  tekstur  yang  lebih  padat  dan  keras karena  sel-selnya  tersusun  dengan  rapat (Sugiyarto dan Kuswandi, 2014).

## Waktu Muncul dan Jumlah Tunas
Dalam penelitian ini hingga umur 8 MST,  tidak  ditemukan  tunas  yang  muncul pada  semua  konsentrasi  BAP.  Hal  ini diduga  karena  rendahnya  konsentrasi sitokinin  endogen  di  dalam  buku  durian lahung  sehingga  penambahan  BAP  dalam kisaran  0,0-2,5  ppm  belum  mampu
menginduksi  pertumbuhan  tunas.  Seperti halnya  dalam  penelitian  Wulandari et  al .
(2017)  yang  juga  tidak  memperoleh  tunas pada  kultur  tanaman  saninten.  Pada  media kontrol,  tidak  adanya  sitokinin  eksogen membuat eksplan tidak mampu memproduksi  tunas.  Kondisi  tersebut memperlihatkan  bahwa  secara  fisiologis kandungan sitokinin endogen dalam eksplan  sangat  rendah.  Tidak  adanya kemunculan  tunas  dapat  disebabkan  oleh dominasi  ZPT  auksin  eksogen  yang mengalahkan kerja sitokinin endogen pada eksplan.  Respon  yang  diperlihatkan  pada kultur  saninten  lainnya  ialah  kemunculan kalus  pada  eksplan.  Beberapa  kultur  pada semua  perlakuan  dapat  memunculkan kalus hingga umur 8 MST.
Konsentrasi  BAP  yang  diberikan dalam  penelitian  ini  diduga  masih  terlalu rendah. Dengan demikian, untuk menginduksi  pertumbuhan  tunas  pada kultur  buku  durian  lahung  diperlukan konsentrasi BAP yang lebih tinggi. Hal ini juga  sejalan  dengan  penelitian  Wulandari et al . (2017) pada kultur tanaman saninten menggunakan media WPM dimana hingga akhir  pengamatan,  umumnya  kalus  yang terbentuk  pada  seluruh  perlakuan  (kecuali kontrol)  belum  mampu  berdiferensiasi menjadi  tunas.  Kombinasi  konsentrasi BAP  dan  IAA  dalam  penelitian  tersebut belum optimal untuk merangsang pembentukan  tunas.  Hendaryono  dan Wijayani (2012) menyatakan bahwa pembentukan  tunas  akan  terjadi  ketika konsentrasi  sitokinin  lebih  tinggi  dari auksin.
Respon  eksplan  yang  dikulturkan dalam sistem in vitro tidak selalu sama dan sangat  ditentukan  oleh  tipe  eksplan, kondisi  lingkungan  kultur,  komposisi
243
media dan kehadiran ZPT, terutama auksin dan  sitokinin  di  dalam  media  kultur. Kombinasi  dari  dua  atau  lebih  faktor tersebut  seringkali  menjadi  faktor  kritis dan  sangat  dibutuhkan  untuk  menginduksi dan  meningkatkan  respon  jaringan  yang dikulturkan.  Oleh  karenanya  jenis  dan konsentrasi  ZPT  yang  diberikan  pada media  sangat  penting  untuk  diperhatikan guna  menginduksi  perkembangan  eksplan ke  arah  yang  dikehendaki  (Zulkarnain et al ., 2013).

## KESIMPULAN
Hasil penelitian menunjukkan konsentrasi  BAP  tidak  berpengaruh  nyata pada semua variabel pengamatan.
Pemberian  BAP  pada  kisaran  0,0-2,5  ppm tidak mampu memunculkan tunas. Sebagai responnya,  pada  buku  batang  durian lahung tumbuh kalus.

## SARAN
Berdasarkan hasil penelitian, disarankan  agar  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  dengan  penggunaan  BAP  dalam konsentrasi  yang  lebih  tinggi  agar  dapat terbentuk tunas. Selain itu, untuk mempertahankan kalus dalam kondisi yang baik,  perlu  dilakukan  subkultur  setelah memasuki umur 5 MST.

## DAFTAR PUSTAKA
Agustiningrum,  E.,  Hardarani,  N.  dan Susanti,  H.  2023.  Teknik  sterilisasi eksplan daun lahung ( Durio dulcis ) pada  media  MS  secara in  vitro . AGROSCRIPT  Journal  of  Applied Agricultural Sciences 5(2): 65-80.
Ajijah,  N.  2016.  Pengaruh  komposisi media  dasar  dan  jenis  eksplan terhadap pembentukan embrio
somatik  kakao. J.  TIDP 3(3):  127- 134.
Alqamari,  M.,  Thalib,  B.  dan  Fitra,  S. 2020.  Kajian  media  ms  dengan penambahan  auksin  dan  sitokinin terhadap pertumbuhan dan perkembangan  kultur  tunas  aren ( Arenga  pinnata (Wurmb.)  Merr.
Jurnal  Pertanian  Tropik  7(1) :  109- 115.
Antarlina, S.S. 2009. Identifikasi sifat fisik dan kimia buah-buahan lokal
Kalimantan. Buletin Plasma Nutfah 15(2): 80-90 Aprilianti, P. & Sari, R. (2011).
Keragaman  tumbuhan    buah    di Kabupaten  Malinau    –  Kalimantan Timur. Prosiding Seminar Nasional Biologi  Perspektif  Biologi  dalam Pengelolaan    Sumber    Daya Hayati.  Universitas  Gadjah  Mada Yogyakarta : 799-809.
Arab, M.M., Yadollahi, A., Shojaeiyan, A.,
Shokri,  S.,  dan  Ghojah  S.M.  2014. Effects  of  nutrient  media,  different cytokinin types and their concentrations on in vitro
multiplication  of  G  ×  N15  (hybrid of  almond  ×  peach)  vegetative rootstock. J. Genet. Eng. Biotechnol. 12 : 81-87. Arisah, H, Mariana, B.D., dan Selvawajayanti,  M.  2021.  Kajian konsentrasi  media  dan  hormon untuk  konservasi  apel in  vitro .
Proceedings
AGROPROSS,
National  Conference  Proceedings of  Agriculture  Politeknik  Negeri Jember : 198-185.
Dodds,  J.H.  dan  Roberts,  L.W.  1985.
Experiments in Plant Tissue
244
Culture .  Cambridge,  Cambridge University Press. Eprian,  R.L.  2023. Prosedur  Sterilisasi
Eksplan Biji Lahung (Durio dulcis)
pada Media MS . Universitas Lambung Mangkurat.
Handayani,  R.S.  dan  Ismadi.  2017.
Analisis  keragaman  kualitas  buah durian  unggulan  ( Durio  zibethinus ) Aceh  Utara. J.  Hort.  Indonesia 8(3): 147-154.
Handayani,  R.S.,  Ismadi,  M.S.  dan Hasyim,  C.R.  2018.  Pengaruh bahan  sterilan  etanol  dan  merkuri klorida terhadap pertumbuhan
eksplan tunas durian ( Durio zibethinus ) secara in vitro. Prosiding Forum Komunikasi Perguruan Tinggi Pertanian Indonesia  (FKPTPI)  Universitas Syiah Kuala Banda Aceh , 271-276.
Hardarani,  N.  dan  Nisa,  C.  2022.
Efektivitas formulasi sterilan terhadap  jenis  eksplan  pada  kultur durian lahung ( Durio dulcis ).
Jurnal Daun 9(2): 161-176.
Hariono,  E.,  Isda,  M.N.  dan  Fatonah,  S. 2018.  Pembentukan  nodul  dari  biji manggis  ( Garcinia  mangostana L.) asal  Bengkalis  pada  media  WPM dengan  penambahan  BAP  dan madu. Al-Kauniyah: Jurnal Biologi , 11(1) : 16-24.
Haryono,  E.,  Isda,  M.N.  dan  Fatonah,  S. 2016.  induksi  tunas  eksplan  biji tembesu ( Fragarea fragrans Roxb.) pada media WPM dengan penambahan  BAP  secara in  vitro .
Repository Universitas Riau.
Hendaryono,  D.P.S.  dan  Wijayani,  A.
2012. Teknik  Kultur  Jaringan: Pengenalan
dan Petunjuk
Perbanyakan Tanaman secara Vegetatif-Modern . Yogyakarta,
Kanisius.
Indah,  P.N.  dan  Ermavitalini,  D.  2013.
Induksi  kalus  daun  nyamplung ( Calophyllum  inophyllum Linn.) pada beberapa kombinasi konsentrasi 6-benzylaminopurine (BAP) dan 2,4-
dichlorophenoxyacetic  acid  (2,4- D). Jurnal  Sains  dan  Seni  Pomits
2(1): 1-6.
Kosmiatin,  M.  Husni,  A.  dan  Mariska,  I. 2005. Perkecambahan dan
perbanyakan gaharu secara in vitro . Jurnal AgroBiogen 1(2): 62-67.
Maharani,  L.  2022.  Perbedaan  waktu tumbuh  dan  ukuran  kalus  pada penambahan  ukuran  eksplan  tunas tanaman  karet  ( Hevea  Brasiliensis Muell.Arg.).  BIO-CONS,  Jurnal Biologi  &  Konservasi  4(1):  110- 117.
Maysyarah,  Rudiyansyah  dan  Alimuddin,
A.H. (2019). Karakteristik senyawa triterpenoid dari fraksi diklorometana  kulit  batang  durian merah  ( Durio  dulcis Becc.). Jurnal Kimia Khatulistiwa , 8(2): 22-27.
Mehaboob,  V.M.,  Faizal,  K.,  Raja,  P.,
Aslam,  A.  dan  Shajahan,  A.  2019. Effect  of  nitrogen  sources  and  2,4- D treatment on indirect regeneration  of  ginger  ( Zingiber officinale Rosc.)  using  leaf  base explants. J.  Plant  Biotechnol.  46 : 17–21.
Miah,  M.,  Nesawar,  Islam,  S.  dan
Hadiuzzaman, S. 2008. An
Improved  Protocol  for  Multiple shoot  regeneration  from  seedling
245
and  mature  explants  of Citrus macroptera (M.). Plant.  Tiss.  Cult.
& Biotech. 18(1): 17-24.
Minyaka,  E.,  Niemenak,  N.,  Koffi,  K.E.,
Issali,  E.A.,  Sangare,  A.  dan Omokolo,  D.N.,  2008.  Effect  of MgSO  and  K 2 SO 4 on  somatic embryo
differentiation in
Theobroma  cacao L. Plant  Cell, Tissue  and  Organ  Culture ,  94(2):
149-160.
Nurokhman,  A.,  Tahani,  N.A.,  Faizah,  H., Utami,  E.S.W.  dan  Manuhara, Y.S.W. 2018. Influence of combination of sucrose concentration and immersion frequency on biomass and flavonoid  production  of Gynura procumbens (Lour.)  Merr.  callus culture  in  temporary  immersion bioreactor. Journal  of  Bioscience 6(12 ) : 748-754.
Prabakti, H.D, Restanto, D.P. dan Avivi, S.
2017. Pengaruh macam eksplan dan konsentrasi  2,4D  terhadap  induksi kalus  kluwek  ( Pangium  edule Reinw.)  secara in  vitro . Gontor AGROTECH  Science  Journal 3(2): 39-58
Rahayu,  B.,  Solichatun  dan  Anggarwulan, E.  (2003).  Pengaruh  asam  2,4-D pembentukan terhadap dan
pertumbuhan    kalus    serta    pada kandungan  flavonoid  kultur  kalus ( Acalypha indica ). Biofarmasi 1(1): 45-51.
Rahman,  W.  2021.  Durio  dulcis.  The IUCN  (International  Union  for Conservation of Nature and Natural Resources)  Red  List  of  Threatened Species.
https://www.iucnredlist.org/species/ 34565/167012376.
Robles,  M.,  Rosa,  B.  dan  Gueroud,  F.
(2016).  Establishment      of      callus and  cell  wild  and  suspensions  of domesticated opuntia species: study on  their  potencial  as  a  source  of metabolite  production. Plant  Cell, Tissue  and  Organ  Culture 124  (1):
181-189.
Sundari, L. (2014). Respon Eksplan Nodus dalam Inisiasi Tunas Mikro
Tanaman  Karet  dalam  Medium WPM . Universitas Sumatera Utara. Sugiyarto,  L.  dan  Kuswandi,  P.C.  2014.
Pengaruh  2,4-diklorofenoksiasetat (2,4-D)  dan  benzil  amino  purin
(BAP) terhadap pertumbuhan kalus daun binahong ( Anredera cordifolia L.) serta analisis kandungan  flavonoid  total. Jurnal Saintek 19(1): 1-6.
Wada,  S.,  Niedz,  R.P.  dan  Reed,  B.M. 2015.  Determining  nitrate  and ammonium requirements for optimal in vitro response of diverse pear  species. In  Vitro  Cell  Dev.
Biol. Plant : 19-27.
Wattimena, G.A., Gunawan, L.W. Mattjik,
N.A.,  Syamsudin,  E.,  Wiendi,
N.M.A.  dan  Ernawati,  A.  1992. Bioteknologi Tanaman . Departemen Pendidikan dan
Kebudayaan  Direktorat  Jenderal Pendidikan  Tinggi.  Pusat  Antar Universtas  Bioteknologi  Institut Pertanian Bogor. Widyastuti, N. 2002. Inovasi
Memperbanyak  Bibit  Tanaman .
www.sinarharapan.co.id/berita/020 2/13/ipt02.html.
246
Wulandari,  A.S., Sulistiani,  E. dan Agustiani,  E.L.  2017.  Respon pertumbuhan
tunas saninten (C astanopsis argentea (Blume)
A.DC.)  terhadap  pemberian  zat pengatur  tumbuh  BAP  dan  IAA secara in  vitro . Jurnal  Silvikultur
Tropika 8(3) : 208-214.
Wulandari,  M.A.,  Silva,  S.,  Rizky,  Z.N.,
Sarianti, J., Zulaikha, S., Nurokhman, A., Yachya, A.,
Handayani, T., Syarifah, dan Afriansyah, D. 2022. Pengaruh 2,4-
dichlorophenoxyacetic  acid  (2,4-D)
dan  benzyl  amino  purine  (BAP) terhadap induksi kalus dari berbagai  jenis  eksplan  tanaman duku  ( Lansium  domesticum Corr.).
Stigma, 15 (1) , 38-45.
Yanti,  D.  dan  Isda,  M.N.  2020.  Induksi tunas  dari  eksplan  nodus  jeruk kasturi ( Citrus microcarpa Bunge. )
dengan penambahan 6-benzyl
amino  purine  (BAP)  secara in
vitro . Biospecies , 14(1): 53-58. Yelnititis dan Sunarti, S. 2020. Perbanyakan akasia hibrida ( Acacia mangium × Acacia  auriculiformis ) melalui  subkultur  berulang.  Jurnal
Bioteknologi  &  Biosains  Indonesia
7(1): 72-85. Zulkarnain. 2009. Kultur Jaringan
Tanaman, Solusi Perbanyakan Tanaman  Budidaya .  Jakarta,  Bumi
Aksara.
Zulkarnain,  Neliyati  dan  Lizawati.  2013.
Percepatan  pengembangan  durian unggul  (Durio  zibethinus  Murr. C.v.  Selat)  melalui  teknik  kultur jaringan:  pengaruh  zat  pengatur tumbuh  terhadap  proliferasi  kalus dari  eksplan  daun  muda. Prosiding
Seminar Nasional dan Rapat Tahunan  Dekan  Bidang  Ilmu-Ilmu Pertanian BKS-PTN Wilayah Barat Tahun 2013 Faperta Untan Pontianak 2: 441-456.