## INDEKS AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK RUMPUT LAUT COKLAT ( Sargassum aquifolium )

## Antioxidant Activity Index of Brown Seaweed (Sargassum aquifolium) Extract

## Muhamad Firdaus
Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Brawijaya, Malang, Indonesia *Korespondensi: Jln. Veteran Malang. Lab. Biokimia Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Brawijaya, 65145,
Hp. 081332774099. E-mail: muhamadfi r@yahoo.com
Diterima 1 April 2013/Disetujui 8 Mei 2013

## Abstract
Antioxidant activity index was improved for standardization of the antioxidant activity strength on extracts or pure compounds. Development of this method based on reduction of diphenylpicrylhydrazyl radical by antioxidant substances. Brown seaweed has been known containing antioxidant compounds that it capable to reduce reactivity of free radical. Th e purpose of this study was to determine antioxidant activity index of Sargassum aquifolium extracts. S. aquifolium was obtained from the shoreline of Talango Island, Sumenep district. Sample was cleaned, washed, dried, powdered and macerated by ethanol, acetone 70%,  methanol,  ethanol  80%,  methanol  80%  and  aquadest  (1:3  w/v),  respectively,  three  times  on  4oC  for 24 hours. Filtrate was combined, concentrated and dried to obtain extract. Aft er that it was reacted against diphenylpicrylhydrazyl radical. Decreasing of radical absorbance was observed with spectrophotometer at 517 nm. Th e result showed that the inhibition concentration 50% of S. aquifolium methanols extract was the lower than the others. Th e antioxidant activity index of S. aquifolium methanol extract was 0.54. According to the antioxidant activity index, methanol extract of S. aquifolium was included a medium antioxidant and potential improved as antioxidant nutraceutical .
Keywords: antioxidant activity index, diphenylpicrylhydrazyl, extracts , Sargassum aquifolium

## Abstrak
Indeks aktivitas antioksidan dikembangkan guna standarisasi kekuatan aktivitas antioksidan baik dari ekstrak maupun senyawa murni. Metode ini dikembangkan berdasar pereduksian radikal difenilpikrilhidrasil. Rumput laut cokelat diketahui mempunyai komponen aktif yang bersifat antioksidan. Tujuan penelitian ini adalah untuk menentukan indeks aktivitas antioksidan ekstrak Sargassum aquifolium . S. aquifolium didapatkan dari perairan pantai pulau Talango, Kabupaten Sumenep. S. aquifolium dibersihkan, dicuci, dikeringkan, ditepungkan dan dimaserasi etanol, aseton 70%, metanol, etanol 80%, metanol 80%, dan air (1:3 b/v) tiga kali pada suhu 4oC selama 24 jam. Fitrat digabungkan, dipekatkan, dan dikeringkan untuk mendapatkan ekstrak. Ekstrak selanjutnya diuji kemampuannya dalam mereduksiradikal difenilpikrilhidrasil. Penurunan serapan radikaldifenil pikrilhidrasil diamati dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 517 nm. Hasil menunjukkan bahwa konsentrasi hambatan 50% ekstrak metanol S. aquifolium lebih kecil dibanding ekstrak lainnya. Indeks aktivitas antioksidan ekstrak metanol S. aquifolium sebesar 0,54. Berdasar indeks aktivitas antioksidan maka ekstrak metanol S. aquifolium tergolong antioksidan sedang dan berpotensi dikembangkan sebagai nutraseutikal beraktivitas antioksidan.
Kata kunci: difenilpikrilhidrasil, ekstrak, indeks aktivitas antioksidan, Sargassum aquifolium
Indeks antivitas antioksidan ekstrak rumput laut, Firdaus M.

## PENDAHULUAN
Radikal bebas adalah senyawa aktif yang memiliki ion terluar tidak berpasangan. Senyawa ini diketahui sebagai penyebab kerusakan biomolekul dan penyebab penyakit degeneratif (Arouma 1998). Radikal bebas juga diketahui berperan terhadap peroksidasi lemak dalam pangan yang dapat menimbulkan bau tengik bahan pangan dan menurunkan mutunya. Penggunaan antioksidan diketahui dapat mencegah kerusakan sel tubuh dan komponen pangan (Choe dan Min 2005).
Penelitian tentang antioksidan bahan alam telah banyak dilakukan. Bioaktif yang banyak dipelajari sifat antioksidannya adalah polifenol (Rice-Evans et al. 1997;  Hagerman et al. 1998; Villano et al. 2007). Rumput laut merupakan salah satu bahan alam yang mengandung polifenol. Senyawa aktif ini utamanya dikandung oleh rumput laut cokelat
(Shibata et al. 2004; Firdaus et al. 2006; Nakai
et al. 2006; Nahas et al. 2007; Ganesan et al. 2008; Chandini et al. 2008; Chew et al. 2008; Wang et al. 2009).
Eiklonia stolonifera, Eisenia bicyclis, Sargassum kjelmanianum, S. siliquastrum, dan S. microcantum telah diuji aktivitas antioksidannya, seperti kemampuannya dalam menghambat peroksidasi lemak dan spesies oksigen reaktif ( Reactive Oxygen species = ROS) dengan mendonorkan protonnya sehingga mempercepat proses terminasi radikal bebas (Wei et al. 2003; Kang et al. 2004; Firdaus et al. 2010). Jimenez-Escrig et al. (2001), Raghavendran et al. (2005) dan Heo et al. (2005) menunjukkan bahwa ekstrak rumput laut cokelat dapat mencegah kerusakan LDL, DNA, dan peroksidasi lemak pada sel hati.
Metode penentuan kapasitas aktivitas antioksidan telah banyak dikembangkan, yaitu Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP), Oxygen Radical Absorbance Capacity (ORAC), Electron Spin Resonance (ESR), 2,2-azinobis 3 ethyl-benzothiazoline-6-sulphonate (ABTS) dan 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), namun metode yang paling banyak digunakan
dalam pengujian dan kemampuan aktivitas antioksidan suatu ekstrak atau senyawa adalah metode DPPH (Scherer dan Godoy 2009).
Hasil uji metode DPPH dapat ditampilkan dalam berbagai model, yaitu persentase hambatan, persentase DPPH tersisa, aktivitas antiradikal, dan aktivitas antioksidan setara dengan asam askorbat, namun di antara metode ini, penyajian hasil uji paling banyak berupa persentase hambatan 50%. Ketiadaan standarisasi hasil pengujian metode ini menyulitkan untuk membandingkan kemampuan dan kekuatan antioksidan dari ekstrak maupun senyawa murni. Indeks aktivitas antioksidan (IAA) merupakan salah satu metode untuk menstandarisasi hasil pengujian antioksidan berdasar metode DPPH. Penelitian ini dilakukan untuk menentukan kapasitas antioksidan ekstrak rumput laut cokelat ( S. aquifolium ) berdasar IAA.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Biokimia Hasil Perikanan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Brawijaya. Rumput laut cokelat ( S. aquifolium ) didapatkan dari perairan Pulau Talango, Kabupaten  Sumenep,  Jawa  Timur.  Aseton  p.a., etanol p.a., metanol p.a. dan DPPH dari Merck. Spektrofotometer merk Spectronic-20, Baush & Lomb digunakan untuk mengukur reduksi serapan radikal DPPH.
Ekstrak rumput laut cokelat ( S. aquifolium ) didapatkan berdasarkan metode Koivikko et al. (2005) yang dimodifi kasi yakni maserasi, sentrifugasi, dan pemekatan. Ekstrak yang didapat selanjutnya diuji aktivitas antioksidannya secara in vitro menggunakan radikal DPPH (Brand-Williams et al. 1995). Larutan 0,05 mM DPPH sebanyak 1,0 mL dicampur dengan 3,0 mL ekstrak terlarut metanol. Nilai serapan sesaat setelah pencampuran larutan DPPH dengan ekstrak dinyatakan sebagai absorbansi t= 0, sementara itu absorbansi t= 30 merupakan hasil pembacaan serapan pada menit ke-30. Nilai persentase aktivitas scavenging radikal (% RSA) didapatkan berdasar rumus:

## Konsentrasi hambatan 50% (IC
50 ) dihitung dengan perangkat lunak GraphPad Prism versi 5 berdasar hubungan konsentrasi ekstrak dengan persentase RSA. Konsentrasi akhir DPPH didapat dari konsentrasi DPPH tersisa pada menit ke-30. Indeks aktivitas antioksidan ditentukan dengan rumus:
Kapasitas aktivitas antioksidan suatu ekstrak atau senyawa berdasar IAA dapat terbagi menjadi 4, yaitu IAA < 0,5 artinya aktivitas antioksidan rendah, IAA 0,5-1 yang berarti aktivitas antioksidan sedang, IAA 1-2 yang bermakna aktivitas antioksidan kuat dan IAA > 2 artinya aktivitas antioksidan sangat kuat (Scherer dan Godoy 2009).
Data hasil penelitian dinyatakan sebagai rerata dan simpangan baku. Data persentase pemungutan radikal dianalisis keragamannya secara satu arah dan perbedaan antar perlakuan diuji dengan beda nyata terkecil. Tingkat kepercayaan yang digunakan adalah sebesar α= 1%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil analisis data menunjukkan bahwa ekstrak S. aquifolium dan konsentrasinya berpengaruh sangat nyata terhadap persentase pemungutan radikal (p< 0,01). Persentase pemungutan radikal dari berbagai ekstrak S. aquifolium dan konsentrasinya disajikan pada Gambar 1, sementara itu konsentrasi DPPH tersisa, IC 50 dan IAA berbagai ekstrak S. aquifolium disajikan pada Tabel 1.
Ekstrak metanol mempunyai persentase pemungutan radikal paling besar dibanding ekstrak lainnya (Gambar 1). Hal ini dimungkinkan karena metanol sebagai pelarut ekstrak mempunyai sifat lebih memudahkan pemindahan proton (atom hidrogen) ekstrak ke radikal bebas dari DPPH. Valgimigli et al. (1995), Brand-Williams et al. (1995), dan Prior
et al. (2005) menjelaskan bahwa metanol adalah senyawa polar yang mudah memposisikan atom hidrogen dari suatu senyawa atau gugus hidroksil untuk membentuk ikatan hidrogen karena adanya ikatan ini akan memudahkan perpindahan proton (atom hidrogen antioksidan) ke radikal bebas.
Makin besar konsentrasi ekstrak S. aquifolium , aktivitas pemungutan terhadap radikal bebas makin besar (Gambar 1). Hal ini kemungkinan terjadi karena keberadaan gugus hidroksil yang terlarut dalam metanol lebih banyak dibanding dalam ekstrak yang terlarut dalam berbagai pelarut.  Shahidi dan Wanasudara (1992) menjelaskan bahwa suatu aktivitas pemungutan radikal bebas oleh senyawa fenol mengikuti hukum atau aturan hubungan struktur-aktivitas, maka senyawa fenol yang mempunyai gugus hidroksil lebih banyak akan mudah melakukan ikatan hidrogen dengan radikal bebas.
Konsentrasi hambatan efektif 50% dari metanol  paling  kecil  dibanding  ekstrak S. aquifolium lainnya (Tabel 1), artinya dengan konsentrasi tersebut ekstrak sudah dapat menurunkan konsentrasi radikal bebas (DPPH) hingga tinggal 50%. Efektivitas ini kemungkinan terjadi karena polifenol S. aquifolium yang terlarut dalam metanol mempunyai struktur gugus hidroksil yang banyak dan paling efektif untuk memindahkan atom hidrogennya ke radikal bebas. Valgimigli et al. (1995)  menegaskan bahwa efektivitas penurunan radikal bebas oleh polifenol akan dipengaruhi banyaknya gugus hidroksil pada senyawa tersebut dan terjadinya pemindahan atom hidrogen polifenol pada radikal yang terlebih dahulu terbentuk ikatan hidrogen antara atom hidrogen dari gugus hidroksil polifenol dengan radikal bebas.
Indeks aktivitas antioksidan metanol paling besar  dibanding ekstrak S. aquifolium lainnya (Tabel 1). Hal serupa juga dilaporkan oleh Firdaus et al. (2006) bahwa efi siensi radikal bebas ekstrak rumput laut dalam metanol mempunyai nilai paling besar. Prior et al. (2005) menegaskan bahwa efektivitas
Indeks antivitas antioksidan ekstrak rumput laut, Firdaus M.
dan kekuatan aktivitas antioksidan ditentukan oleh kemampuan untuk memindahkan atom hidrogen maupun pemindahan elektron tunggal. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa ekstrak rumput laut jenis yang terlarut dalam metanol mempunyai kapasitas pemindahan atom hidrogen dan elektron tunggal ke radikal bebas lebih efektif. Berdasarkan indeks aktivitas antioksidan dapat dinyatakan bahwa ekstrak metanol
S. aquifolium dapat digolongkan sebagai antioksidan yang berkekuatan sedang dan ekstrak lainnya termasuk lemah, oleh karena itu walau masih berupa ekstrak, ekstrak ini dapat berpotensi dikembangkan sebagai komponen pangan fungsional atau nutraseutikal yang beraktivitas antioksidan.

## KESIMPULAN
Ekstrak metanol S. aquifolium mempunyai aktivitas penghambat radikal bebas paling besar dan berindeks aktivitas antioksidan
sebesar 0,54. Berdasar aturan indeks aktivitas antioksidan, maka ekstrak metanol S. aquifolium tergolong bahan beraktivitas antioksidan sedang.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian ini didukung oleh Direktorat Penelitian dan Pengabdian kepada Masyarakat (DP2M), Direktorat Perguruan Tinggi melalui program Hibah Bersaing tahun 2009.

## DAFTAR PUSTAKA
Arouma OI. 1998. Free radical, oxidative stress and antioxidants in human health and disease. Journal of the American Oil Chemists Society 75: 199-212.
Brand-Williams W, Cuvelier ME, Berset C. 1995.
Use of a free radical method to evaluate antioxidant activity. Lebbensmittel- Wissenschaft  und Technologie 28: 25-30. Chandini SK, Ganesan P, Bhaskar N. 2008.
In vitro antioxidant activities of three
Tabel 1 IC 50 dan IAA dari ekstrak S. aquifolium Ekstrak IC 50 IAA Etanol 2048,0810 0,0175 Aseton 70% 4065,6250 0,0088 Metanol 66,1554 0,5419 Etanol 80% 1260,9660 0,0284 Metanol 80% 851,4833 0,0421 Akuades 5381,2750 0,0067
Gambar 1 Persentase pemungutan radikal dari berbagai ekstrak dan konsentrasinya: ( ..... ) 100 ppm, ( ..... ) 200 ppm, ( ..... ) 500 ppm, ( ..... ) 1000 ppm.
selected brown seaweeds of India. Food Chemistry 107: 707-713.
Chew YL, Lim YY, Omar M, Khoo KS. 2008. Antioxidant activity of three edible seaweeds from two areas in South East Asia. Libbensmittel-Wissenschaft   und Technology 41: 1067-1072.
Choe E, Min DB. 2005. Chemistry and reactions of reactive oxygen species in foods. Journal of Food Science 70: 142-159.
Firdaus M, Astawan M, Muchtadi D,
Wresdiyati T, Waspadji S, Karyono SS.
2006. Efi siensi antiradikal fl orotanin Sargassum polycystum dan Sargassum echinocarpum yang terlarut dalam berbagai pelarut polar. Jurnal Penelitian Perikanan 9: 157-161.
Firdaus M, Astawan M, Muchtadi D, Wresdiyati T, Waspadji S, Karyono SS. 2010. Prevention of endothelial dysfunction in streptozotocin-induced diabetic rats by Sargassum echinocarpum extract . Med J Indonesia 19: 32-35.
Ganesan P, Kumar CS, Bhaskar N. 2008. Antioxidant properties of methanol extract and its solvent fractions obtained from selected Indian red seaweeds. Bioresource Technology 99: 2717-2723.
Hagerman AE, Riedl KM, Jones A, Sovik KN, Ritchard NT, Hartzfeld PW, Riechel TL. 1998. High molecular weight plant polyphenolics (Tannins) as biological antioxidants. Journal of Agricultural and Food Chemistry 46: 1887-1892.
Heo SJ, Park EJ, Lee KW, Jeon YJ. 2005.
Antioxidant activities of enzymatic extracts from brown seaweeds. Bioresource Technology 96: 1613–1623.
Jimenez-Escrig A, Jimenez-Jimenez I, Pulido
R, Saura-Calixto F. 2001. Antioxidant activity of fresh and processed edible seaweeds. Journal of the Science of Food and Agriculture 81: 530-534.
Kang HS, Chung HY, Kim JY, Son BW,
Jung HA,  Choi JS. 2004. Inhibitory phlorotannins from the edible brown alga Ecklonia stolonifera on total reactive
species (ROS) generation. Arc Pharmacol Res 27: 194-198.
Koivikko R, Poponen J, Honkanen T, Jormalainen V. 2005. Contents of soluble cell-wall-bound and exuded phlorotannins in the brown alga Fucus vesiculosus , with implications on their ecological functions. Journal of Chemical Ecology 31: 195-212. Nahas R,  Abatis D, Anagnostopoulou MA, Kefalas P, Vagias C, Ruossis V. 2007. Radical-scavenging activity of Aegean sea marine algae. Food Chemistry 102: 577-581. Nakai M, Kageyama N, Nakahara K, Miki W. 2006. Phlorotannins as radical scavengers from the extract of Sargassum ringgoldianum. Marine Biotechnology 8: 409-414.
Prior RL, Wu X, Schaich K. 2005. Standarized method for the determination of antioxidant capacity and phenolics in foods and dietary supplements. Journal of Agricultural and Food Chemistry 53:
4290-4302.
Raghavendran HRB, Sathivel A, Devaki T. 2005. Protective eff ect of Sargassum polycystum (brown alga) against acetaminophen- induced lipid peroxidation in rats.
Phytotherapy Research 19: 113-115. Rice-Evans CA, Miller NJ, Paganga G. 1997. Antioxidant properties of phenolic compounds. Trend in Plant Science 2:
152-159.
Scherer R, Godoy HT. 2009. Antioxidant activity index (AAI) by the 2,2-diphenyl- 1-picrylhydrazyl method. Food Chemistry
112: 654-658.
Shahidi F, Wanasudara PKJPD. 1992. Phenolic antioxidants. Crit rev. Food Science and Nutrition 32: 67-103.
Shibata T, Kawaguchi S, Hama Y, Inagaki
M, Yamaguchi K, Nakamura T. 2004. Local and chemical distribution of phlorotannins in brown algae. J Appl Phycol 16: 291-296.
Valgimigli L, Banks JT, Lusztyk J, Ingold
KU. 1995. Kinetic solvent eff ects  on
Indeks antivitas antioksidan ekstrak rumput laut, Firdaus M.
hydroxylic hydrogen atom abstractions are independent of the nature of the abstracting radical. Two extreme tets using vitamin E and phenol. Journal of American Chemical Society 117: 9966-9971.
Villano D, Fernandez-Pachon MS, Moya ML, Troncoso AM, Garcia-Parilla MC. 2007.
Radical scavenging ability of polyphenolic compounds towards DPPH free radical. Talanta 71: 230-235.
Wang T, Jonsdottir R, Olafsdottir G. 2009. Total phenolic compounds, radical scavenging and metal chelation of extracts from Icelandic seaweed. Food Chemistry 116: 240-248.
Wei Y, Li Z, Hu Y, Xu Z. 2003. Inhibition of mouse liver lipid peroxidation by high molecular weight phlorotannins from Sargassum kjelmanianum. Journal of Applied Phycology 15: 507-511.