Ekstrak Hibiscus  rosa-sinensis L.  Memperbaiki  Kadar  Glukosa  Darah Puasa  dan  Jumlah  Sel  Mast  pada  Model  Tikus  Diabetes  Terinfeksi Mycobacterium tuberculosis
( Hibiscus rosa-sinensis L. Extract Improves Fasting Blood Glucose Levels and Number of Mast Cells in Diabetic Rat Model that Infected with Mycobacterium tuberculosis )
David Pakaya 1* , Marzela Dewi 2 , Arlita Leniseptaria Antari 3 , Indah Saraswati 4
1* Departemen Histologi Fakultas Kedokteran Universitas Tadulako, Palu, Indonesia.
2 Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Pelita Mas, Palu, Indonesia.
3 Departemen Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro, Semarang, Indonesia.
4 Departemen Kimia Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro, Semarang, Indonesia. E-mail: davidpakaya@ymail.com
Article Info:
Received: 10 Oktober 2019
in revised form: 10 Oktober 2019 Accepted: 24 Oktober 2019 Available Online: 02 Maret 2020

## ABSTRACT
The  condition  of  hyperglycemia  in  Diabetes  mellitus  (DM)  causes  a disruption  of  the  function  of  phagocytes  that  can  facilitate M.  tuberculosis infection.  Immunostimulant  from  natural  ingredients  can  help  improve  the condition  of  hyperglycemia  an  immune  function.  To  analyze  the  effect  of Hibiscus  rosa-sinensis L.  extract  on  fasting  blood  glucose  level  and  the number of mast cell in TB-DM mouse model. This experimental study used 27  male  Wistar  rats,  8  weeks  of  age,  200-230  g  weight,  divided  into  3 groups,  K:  Normal  control  group,  P1: TB-positive  mouse  group  P2:  Group rat  TB-DM  +  Hibiscus  rosa-sinensis  L  extract  dose  250  mg/kgBW  and  3 time  measurement  of  H  +  7  DM,  H  +  14  DM  and  H  +  21  DM.  TB-DM model mice were prepared with the administration of nicotinamide (NA) 100 mg/kgBW  and  streptozotocin  (STZ)  65  mg/Kg  BW,  TB  agent  1.5  x  105 CFU. Fasting blood glucose levels were measured by GOD-PAP method and Pulmonary  tissue  is  excised,  made  in  paraffin  blocks  and  stained  with  blue Toluidine  to  count  the  mast  cells.  There  was  an  improvement  in  the  mean fasting  blood  glucose  levels  in  the  group  treated  with  the  Hibiscus  rosa- sinensis L. extract of 250 mg/kgBW compared to the TB-DM group without extract  therapy  followed  by  decreased  the  number  of  mast  cell.  Hibiscus rosa-sinensis L. extract. improves fasting blood glucose levels and decreases the number of mast cell of TB-DM rat model.
Keywords : Hibiscus rosa-sinensis L. TB-DM GDP Sel mast
Corresponding Author: David Pakaya Departemen Histologi Fakultas Kedokteran Universitas Tadulako
Palu 90245 Indonesia email: davidpakaya@ymail.com Copyright © 2019 JFG-UNTAD
This open access article is distributed under a Creative Commons Attribution (CC-BY-NC-SA) 4.0 International license.
How to cite (APA 6 th Style): Pakaya, D., Dewi, M., Antari, A. L., & Saraswati, I. (2020). Ekstrak Hibiscus rosa-sinensis L. Memperbaiki Kadar Glukosa Darah  Puasa  dan  Jumlah  Sel  Mast  pada  Model  Tikus  Diabetes  Terinfeksi Mycobacterium  tuberculosis . Jurnal  Farmasi Galenika :Galenika Journal of Pharmacy (e-Journal), 6 (1), 14-19. doi:10.22487/j24428744.2020.v6.i1.13930
Jurnal Farmasi Galenika ( Galenika Journal of Pharmacy ) (e-Journal) 2020; 6 (1): 14 – 19 ISSN : 2442-8744 (electronic); 2442-7284 (printed) Journal Homepage: https://bestjournal.untad.ac.id/index.php/Galenika DOI: 10.22487/j24428744.2020.v6.i1.13930

## ABSTRAK
Kondisi  hiperglikemia  pada  Diabetes  mellitus  (DM)  menyebabkan  terjadi  gangguan  fungsi  fagosit  yang  dapat memfasilitasi  infeksi M.  Tuberculosis. Imunostimulan  dari  bahan  alam  dapat  membantu  memperbaiki  kondisi hiperglikemia dan fungsi imunitas tersebut.  Menganalisis efek ekstrak bunga sepatu ( Hibiscus rosa-sinensis L. ) terhadap  kadar  glukosa  darah  puasa  (GDP)  dan  jumlah  sel  mast  pada  model  tikus  TB-DM.  Penelitian eksperimental ini menggunakan tikus Wistar jantan berjumlah 27 ekor, usia 8 minggu, berat badan 200-230 gr, yang dibagi menjadi 3 kelompok perlakuan, K: Kelompok tikus kontrol normal, P1: Kelompok tikus positif  TB- DM,  P2:  Kelompok  tikus  TB-DM  +  ekstrak  bunga  sepatu  dosis  250  mg/kg  BB  dan  3  waktu  pengukuran  H+7 DM, H+14 DM dan H+21 DM. Tikus model TB-DM dibuat dengan pemberian nicotinamide (NA) 100 mg/Kg BB dan streptozotocin (STZ) 65 mg/Kg BB, agen TB 1,5 x 10 5 CFU. Kadar GDP dikukur dengan metode GOD- PAP dan jaringan paru dinekropsi, dibuat dalam blok paraffin dan diwarnai dengan Toluidin biru untuk dihitung sel mast. Terdapat perbaikan rerata kadar GDP pada kelompok yang diterapi dengan ekstrak bunga sepatu dosis 250 mg/kg BB dibandingkan kelompok TB-DM tanpa terapi ekstrak yang diikuti dengan penurunan jumlah sel mast. Ekstrak Hibiscus rosa-sinensis L. memperbaiki kadar GDP dan menurunkan jumlah sel mast Tikus model TB-DM.
Kata kunci: Hibiscus rosa-sinensis L., TB-DM , GDP, sel mast.

## PENDAHULUAN
Diabetes  mellitus  (DM)  merupakan  kelainan  metabolik  akibat  defek  sekresi  maupun  kerja  insulin, merupakan salah satu faktor risiko terjadinya perburukan tuberkulosis (TB). Tuberkulosis disebabkan oleh  bakteri Mycobacterium  tuberculosis (M.  Tb) , sebagai  penyebab  kematian  utama  di  antara penyakit infeksi bakterial di dunia. Penderita DM mengalami gangguan respon imun, sehingga dapat memfasilitasi  infeksi  M.  Tb.  Penderita  DM  berisiko  2-3  kali  lebih  tinggi  untuk  mengidap  TB  (IDF, 2013;  WHO,  2010). Kondisi  DM  dapat  meningkatkan  frekuensi  maupun  tingkat  keparahan  infeksi, karena  adanya  abnormalitas  sistem  imun  yang  diperantarai  oleh  sel  dan  fungsi  fagosit  berkaitan dengan hiperglikemia, termasuk rusaknya vaskularisasi  (Jeon & Murray, 2008).
Bakteri  M.  Tb  merupakan  basil  intraseluler  yang  memiliki  mekanisme  berbeda  untuk  menghindari respon imun untuk bertahan hidup dalam inang. Saat masuk ke tubuh inang melalui saluran udara dan mencapai alveoli paru-paru, bakteri ini berinteraksi dengan sel-sel berbeda dari respon imun bawaan (Campillo-Navarro et  al .,  2015).  Sel-sel  ini  mengenali  M.  Tb  melalui  berbagai  reseptor  pengenalan pola  yang  mengarah  pada  aktivasi  mekanisme  antimikroba  yang  berbeda  (Mishra et  al .,  2017). Fagositosis  adalah  cara  yang  paling  sering  digunakan  inang.  Salah  satu  mekanisme  fagosit  yang digunakan  adalah  melalui  produksi ekstraseluler  traps (ET),  yang  terdiri  dari  kromatin  yang  berasal dari kompartemen intraseluler (Stoiber et al ., 2015). Sel yang melepaskan ET setelah infeksi meliputi neutrofil,  makrofag,  eosinofil,  basofil,  dan  sel  mast  (Mollerherm et  al .,  2016).  Sel  mast  ditemukan sangat banyak di paru-paru, dan mampu merespons berbagai patogen dengan cepat (Andersson et al ., 2009;  Campillo-Navarro et  al .,  2014).  Interaksi  antara  bakteri  dengan  sel  mast  menyebabkan pelepasan  berbagai  mediator  inflamasi  yang  merekrut  sel  efektor  untuk  mengendalikan  agen  infeksi termasuk  M. Tb  (St John  &  Abraham,  2013).  Bakteri  M. Tb  mampu  mengaktifkan  sel  mast  in  vitro mengaktifkan  degranulasi,  menginduksi  produksi  sitokin  inflamasi,  dan  menginternalisasi  bakteri melalui lipid rafts (Munoz et al ., 2003; Munoz et al ., 2009).
Pengobatan kasus TB-DM salah satunya menekankan pada pengembalian fungsi abnormalitas sistem imun, yang dapat dilakukan dengan imunostimulan, yaitu bahan yang dapat merangsang sistem imun. Imunostimulan  bekerja  dengan  cara  menstimulasi  sistem  imun,  antara  lain  melalui  fagositosis termasuk  memperbaiki  kemampuan  sel  mast  (Orsi,  2000;  Price et  al., 2005;  Petrunov et  al., 2007). Indonesia mempunyai keanekaragaman hayati yang sebagian diantaranya telah dibuktikan mempunyai khasiat  obat  dan  berpotensi  sebagai  imunostimulan.  Salah  satunya  adalah  bunga  sepatu  ( Hibiscus rosa-sinensis L. ). Tanaman ini merupakan semak suku Malvaceae yang berasal dari Asia Timur dan banyak  ditanam  sebagai  tanaman  hias  di  daerah  tropis  dan  subtropis.  Tujuan  penelitian  ini  untuk
menganalisis efek ekstrak bunga sepatu ( Hibiscus rosa-sinensis L. ) terhadap kadar glukosa darah dan aktivitas fagositosis yang diperankan oleh sel mast pada model tikus TB-DM.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini bersifat eksperimen laboratorik dengan rancangan acak lengkap sederhana. Hewan coba yang digunakan yaitu tikus Wistar jantan berjumlah 27 ekor, berusia 8 minggu, berat 200-230 gram, dalam  keadaan  sehat,  aktivitas,  dan  tingkah  laku  normal.  Hewan  coba  dikelompokan  menjadi  3 kelompok  perlakuan,  K:    Kelompok  tikus  kontrol  normal,  P1:  Kelompok  tikus  positif  TB-DM,  P2: Kelompok tikus TB-DM + ekstrak bunga sepatu dosis 250 mg/kg BB, dan 3 waktu terminasi pada hari ke-7, 14 dan 21. Hewan coba dibuat  model DM dengan pemberian nicotinamide (NA) dengan dosis 100mg/Kg BB dan streptozotocin (STZ) 65 mg/Kg BB, dan dinjeksikan agen TB sebanyak 1,5 x 10 5 CFU.  Pemeriksaan  kadar  glukosa  darah  puasa  (GDP)  dilakukan  dengan  metode  GOD-PAP  sebelum diterminasi.  Pada  hari  terminasi,  tikus  dinekropsi  jaringan  paru,  dibuat  blok  paraffin,  diiris menggunakan  mikrotom  dengan  ketebalan  5µm.  Jaringan  diwarnai  dengan  Toluidin  biru.  Sampel diamati  menggunakan  mikroskop Olympus  CX-23 dengan  perbesaran  400x  dengan Numerical Aperture 1,25.  Dilakukan  pengamatan  dan  penghitungan  sel  mast  pada  3  lapanan  pandang  dan direratakan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil pemeriksaan kadar GDP kelompok K menunjukkan nilai yang normal dan stabil hingga hari ke- 21. Pada kelompok P1 dan P2 pasca induksi STZ dan NA, terjadi peningkatan kadar GDP pada hari ke-7  dan  didiagnosis  sebagai  diabetes.  Kadar  GDP  kelompok  P1  terus  berada  pada  nilai  di  atas 200mg/dL. Pada kelompok P2 menunjukan penurunan kadar GDP di bawah 200mg/dL pada hari ke- 21, seperti tampak pada tabel 1.
Tabel 1. Rerata kadar glukosa darah puasa
Kelompok Rerata Kadar Glukosa darah puasa (GDP) (mg/dL) H+7 H+14 H+21 K 72.2 ± 2.6 71.25 ± 1.46 78.27 ± 1.24 P1 262.21 ± 3.89 261.4 ± 2.34 264.1 ± 6.92 P2 244.27 ± 1.82 205.33 ± 6.44 181.51 ± 5.47
Bunga  sedap  malam  memiliki  banyak  khasiat  sebagai  herbal  alternatif  penyakit,  salah  satunya memiliki  efek  antidiabetik  (Mozaffari et  al., 2009).  Penurunan  kadar  GDP  yang  signifikan  diamati pada subyek  diabetes,  setelah  pemberian ekstrak  bunga  sepatu  (Sachdewa et  al., 2003;  Venkatesh et al .,  2008).  Ekstrak  ini  berefek  pada  penurunan  glukosa  darah  dan  profil  lipid  pada  diabetes  yang diinduksi  streptozotocin  pada  tikus  (Subbarao  &  Basha,  2015;  Sharma et  al. ,  2016).  Ekstrak  etanol bunga  sepatu  ( Hibiscus  rosa-sinensis  L. )  mengandung  zat  anitioksidan  seperti  steroid,  alkaloid, fenolik,  saponin  dan  tannin.  Komponen  tersebut  bekerja  menyerupai  mekanisme  aksi  sulfonil  urea yang  mampu  mengendalikan kondisi hiperglikemia sehingga  memperbaiki abnormalitas sistem  imun yang  terjadi  (Al-Snafi,  2013).  Ekstrak  etanolik  bunga  sepatu  juga  dapat  menurunkan  kadar  glukosa darah sehingga kondisi hiperglikemia yang menimbulkan keadaan inflamasi dapat ditekan (Mamun et al., 2013; Sachdewa et al., 2001).
Sel mast pada alveoli paru-paru memperlihatkan sel berwarna ungu dan bergranula diantara alveolus yang  terpulas  biru.  Pada  kelompok  P2  menunjukkan  sel  mast  yang  berukuran  besar  dibandingkan dengan kelompok lain seperti yang tampak pada gambar 1.
Gambar  1. Sel  mast  pada  jaringan  paru-paru  tikus  dengan  pewarnaan  toluidine  biru  400x.  (A)  Sel  mast  tikus kelompok  K,  (B)  Sel  mast  tikus  kelompok  P1,  (C)  Sel  mast  tikus  kelompok  P2.  Panah  kuning menunjukkan adanya bakteri.
Keterangan:  Kelompok tikus kontrol normal, P1: Kelompok tikus positif TB-DM, P2: Kelompok tikus TB-DM + ekstrak bunga sepatu dosis 250 mg/kg BB
Hasil  pengamatan  dan  penghitungan  sel  mast  pada  jaringan  paru  menunjukkan  nilai  rerata  jumlah kelompok P1 (TB-DM tanpa terapi) menjadi yang paling tinggi dan kelompok K menjadi yang paling rendah  pada  setiap  waktu  pengukuran.  Jumlah  sel  mast  pada  kelompok  P2  tampak  lebih  rendah dengan P1, yang mengisyaratkan adanya perbaikan seperti tampak pada tabel 2.
Tabel 2. Rerata jumlah sel Mast jaringan paru
Kelompok Rerata jumlah sel mast jaringan paru H+7 H+14 H+21 K 0.7 ± 0.38 1 ± 0.33 1.4 ± 1.26 P1 3.67 ± 2.67 6.56 ± 1.02 6.33 ± 5.13 P2 2.67.27 ± 1.52 3.1 ± 0.38 1.78 ± 1.07
Peningkatan jumlah rerata sel mast P1 dibandingkan kelompok K dan P2 menandakan bahwa terjadi aktivasi sel-sel mast akibat adanya patogen M. Tb. Pada kondisi hiperglikemia akan mempermudah M. Tb  menginvasi,  sehingga  sel  mast  akan  secara  cepat  membantu  proses  perlawanan  terhadap  M.  Tb. Pada hari ke-21 menunjukan nilai rerata sel mast pada P1 lebih rendah dari 2 waktu pengukuran lain yang  mengindikasikan  sel  mast  yang  teraktivasi  di  fase  kronis  semakin  berkurang  (Petrunov et  al ., 2007).  Sel  mast  mengenali  Mtb  melalui  reseptor  TLR2  dan  CD48.  Proses uptake ini  ditunjukkan dengan  adaya  internalisasi  melalui  lipid  rafts.  Bakteri  M.  Tb  dan  antigen mycobacterial  antigenic early  secretory 6  (ESAT-6)  dan  MPT-63  menginduksi  degranulasi  sel  mast  dan  pelepasan  sitokin, yang kemudia  menginduksi sekresi peptida antimikroba dan pembentukan ekstraseluler trap oleh sel mast  sel.  Selain  itu  adanya  interaksi  sel-sel  imun  lain  seperti  neutrofil,  sel  dendritik  dan  makrofag berkontribusi  terhadap  penghancuran  Mtb.  Interaksi  ini  selanjutnya  menjadi  pemicu  terbentuknya granuloma Campillo-Navarro et al ., 2018; Caramori et al ., 2011).
Perbaikan jumlah rerata sel mast setelah pemberian ekstrak  bunga sepatu ( Hibiscus rosa-sinensis L. ) dipengaruhi  oleh  kemampuan  berbagai  zat  aktif  yang  terkandung  di  dalamnya.  Ekstrak  ini
B A C
mengandung steroid, alkaloid, fenolik, saponin dan tannin (Tukiran et al., 2014). Dengan pemberian ekstrak ini tampak adanya penurunan jumlah rerata sel mast pada kasus TB-DM. Ekstrak bunga sepatu terbukti  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri  dengan  konsentrasi  1000μg/mL,  dan  mampu menunjukkan eradikasi M. Tb  dan E. coli (Kairupan et al., 2014). Fungsi ini bisa didapatkan karena ekstrak ini mengandung saponin, tanin dan fenol yang bekerja sebagai antimikroba (Al-Snafi, 2013). Adanya eradikasi M. Tb pasca pemberian ekstrak bunga sepatu ini kemudian akan menurunkan rerata jumlah sel mast.

## KESIMPULAN
Ekstrak bunga sepatu ( Hibiscus rosa-sinensis L. ) memperbaiki kadar GDP dan menurunkan jumlah sel mast Tikus model TB-DM.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terima  kasih  kami  sampaikan  kepada  RPP  FK  Undip  2017  yang  telah  membantu  pendanaan  untuk penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Al-Snafi, A. E. (2013). Chemical constituents, pharmacological effects and therapeutic importance of Hibiscus rosa-sinensis A review. IOSR Journal of Pharmacy , 8 (7), 101-119.
Andersson, C. K., Mori, M., Bjermer, L., Lofdahl, C. G., & Erjefalt, J. S. (2009). Novel site-specific mast cell subpopulations in the human lung. Thorax. 64 (4), 297–305.
Campillo-Navarro, M., Chavez-Blanco, AD., Wong-Baeza, I., Serafin-Lopez, J., Flores-Mejia, R., & Estrada-Parra, S. (2014). Mast cells in lung homeostasis: beyond type I hypersensitivity. Curr Respir Med Rev, 10 (2), 115–23.
Campillo-Navarro,  M.,  Leyva-Paredes,  K.,  Donis-Maturano,  L.,  Rodriguez-Lpoez,  G.  M.,  Soria- Castro,  R.,  &  Garcia-Perez,  B.  E.  (2018). Mycobacterium  tuberculosis catalase  inhibits  the formation of mast cell extracellular traps. Front Immunol . 9:1161.
Campillo-Navarro, M., Wong-Baeza, I., Serafín-López, J., Hernández-Pando, R., Estrada-Parra, S., & Estrada-García,  I.  (2015). Regulation  of  the  immune  response  by Mycobacterium  tuberculosis Beijing genotype. In: Ribón W, editor. Tuberculosis – Expanding Knowledge , 65–88.
Caramori, G., Lasagna L., Casalini, A. G., Adcock, I. M., Casolari, P., & Contoli, M. (2011). Immune Response  to Mycobacterium  tuberculosis Infection  in  the  Parietal  Pleura  of  Patients  with Tuberculous Pleurisy. Plos One, 6 (7).
International Diabetes Federation. Diabetes and tuberculosis. 2013. Diakses dari: http://www.idf.org/diabetes/5e/diabetes-and-tuberculosis
Jeon,  C.  Y.,  Murray,  M.B.  (2018).  Diabetes  mellitus  increases  the  risk  of  active  tuberculosis:  a systematic review of 13 observational studies. PLoS Med, 15 (7), e152.
Kairupan,  C.  P.,  Fatimawali,  &  Lolo,  W.  A.  (2014).  Uji  Hambat  Ekstrak  Etanol  Daun  Kembang Sepatu ( Hibiscus rosa-sinesis L.) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli. Pharmacon, 3 (2), 93-8.
Mamun,  A.,  Islam,  S.,  Alam,  A.  H.  M.  K.,  Rahman,  M.  A.  A.,  &  Rashid,  M.  (2013).  Effects  of Ethanolic  Extract  of Hibiscus  rosa-sinensis Leaves  on  Alloxan-Induced  Diabetes  with Dyslipidemia in Rats. Bangladesh Pharm J, 16 (1), 27-31.
Mishra,  A.,  Akhtar,  S.,  Jagannath,  C.,  &  Khan,  A.  (2017).  Pattern  recognition  receptors  and coordinated  cellular  pathways  involved  in  tuberculosis  immunopathogenesis:  emerging concepts and perspectives. Mol Immunol. 87, 240–8.
Mollerherm,  H.,  von  Kockritz-Blickwede,  M.,  &  Branitzki-Heinemann,  K.  (2016).  Antimicrobial activity of mast cells: role and relevance of extracellular DNA traps. Front Immunol. 7,265.
Mozaffari-Khosravi, H., Jalali-Khanabadi, B. A., Afkhami-Ardekani, M., & Fatehi, F. (2009). Effects of  sour  tea  ( Hibiscus  sabdariffa )  on  lipid  profile  and  lipoproteins  in  patients  with  type  II diabetes. Journal of Alternative Complementary Medicine, 15 (8), 899-903.
Munoz,  S.,  Hernandez-Pando,  R.,  Abraham,  S.  N.,  Enciso,  J.  A.  (2003).  Mast  cell  activation  by Mycobacterium tuberculosis : mediator release and role of CD48. J Immunol , 170 (11), 5590–6.
Munoz, S., Rivas-Santiago, B., Enciso, J. A. (2009). Mycobacterium tuberculosis entry into mast cells through cholesterol-rich membrane microdomains. Scand J Immunol, 70 (3), 256–63.
Orsi, R. O. (2000). Immunomodulatory action on macrophage activation. J Venom Anim Toxin, 6 (2), 205-19.
Petrunov, B., Nenkov, P., & Shekerdjisky, R. (2007). The role of immunostimulants Inimmunotherapy and immunoprophylaxis. Bulgaria: BulBio-NCIPD Natsim Ltd.
Price,  S.  A.,  &  Wilson,  L.  M.  2005. Patofisiologi  konsep  klinis  proses-proses  penyakit.  Edisi  6 . Jakarta: EGC.
Sachdewa, A., Nigam, R., & Khemani, L. D. (2001). Hypoglycemic effect of Hibiscus rosa-sinesis L. leaf  extract  in  glucose  and  streptozotocin  induced  hyperglycemic  rats. Indian  J  Expt  Biol , 39 , 284-6.
Sharma,  K.,  Pareek,  A.,  &  Chaulan  E.  S.  (2016).  Evaluation  of  hyperglycemic  and  hyperlipidemic mitigating impact of Hibiscus rosa-sinensis (Gudhal) flower in type II diabetes mellitus subject. International Journal of Applied Biology and Pharmaceutical Technology, 7 (12), 223-228.
St John, A. L., & Abraham, S. N. (2013). Innate immunity and its regulation by mast cells. J Immunol. 190 (9), 4458–63.
Stoiber, W., Obermayer, A., Steinbacher, P., Krautgartner, W. D. (2015). The role of reactive oxygen species (ROS) in the formation of extracellular traps (ETs) in humans. Biomolecules , 5(2), 702– 23.
Subbarao, M., & Basha, D. P. (2015). Antidiabetic, Hypolipidemic and Histopathological Studies of Ethanolic  Leaves  Extract  of Hibiscus  rosa  sinensis in  Alloxan  Monohydrate  Induced  Diabetic Rats. World Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences. 43, 1064-74.
Tukiran,  Suyatno,  &  Hidayati,  N.  2014.  Skrining  Fitokimia  pada  Beberapa  Ekstrak  Dari  Tumbuhan Bugenvil  ( Bougainvillea  Glabra), Bunga  Sepatu  ( Hibiscus  rosa-sinesis L.)  dan  Daun  Ungu ( Graptophylum pictum Griff.). Semarang: Prosiding SemNas Kimia Unesa.
Venkatesha, S., Thilagavathib, J., & Shyam S. D. 2008. Anti-diabetic activity of flowers of Hibiscus rosasinensis . Fitoterapia, 79 (2), 79–81.
World Health Organization. (2010). Global tuberculosis control. Geneva: World Health Organization.