e- Jurnal Rekayasa dan Teknologi Budidaya Perairan
Volume II No 2 Februari 2014 ISSN: 2302-3600

## IMUNOGENISITAS KOMBINASI VAKSIN INAKTIF WHOLE CELL
Aeromonas salmonicida DAN JINTAN HITAM ( Nigella sativa)
PADA IKAN MAS ( Cyprinus carpio )
Nur` Ani Okta Trilia *† , Agus Setyawan ‡ , Y.T. Adiputra ‡ dan Wardiyanto ‡

## ABSTRAK
Furunculosis dan carp  erytrodermatitis merupakan  penyakit  pada  ikan  yang disebabkan  oleh  bakteri Aeromonas  salmonicida .    Vaksin  inaktif whole  cell A. salmonicida saat ini sedang dikembangkan untuk menanggulangi penyakit tersebut. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui imunogenisitas kombinasi vaksin inaktif whole cell A. salmonicida dengan imunostimulan dari jintan hitam ( Nigella sativa ) pada  ikan  mas  ( Cyprinus  carpio ).    Sebanyak  180  ekor  ikan  mas  dimasukkan kedalam  18  akuarium  dengan  6  perlakuan  yang  berbeda  dan  diulang  sebanyak  3 kali. Perlakuan yang dilakukan terdiri dari kontrol (tanpa vaksin dan jintan hitam), pemberian jintan hitam 5%, pemberian vaksin, vaksin yang ditambah jintan hitam 1%, vaksin yang ditambah jintan hitam 2.5%, vaksin yang ditambah jintam hitam 5%.      Vaksin  diberikan  dengan  cara  penyuntikan  secara  intraperitoneal  dengan kepadatan bakteri 10 7 sel/ikan dan jintan hitam diberikan melalui pakan sebanyak tiga  kali  dalam  sehari.  Pengambilan  contoh  darah  ikan  untuk  diuji  titer  antibodi, total leukosit, dan hematokrit ikan dilakukan saat sebelum vaksinasi, 7 hari setelah vaksinasi,  dan  7  hari  setelah booster .  Hasil  penelitian  menunjukkan  kombinasi vaksin inaktif whole cell A.  salmonicida yang ditambah jintan hitam 5% mampu meningkatkan  titer  antibodi  ikan  hingga  2 7 dibandingkan  kontrol  yang  hanya meningkat  hingga  2 5 dan  tanpa  jintan  hitam  yang  hanya  meningkat  hingga  2 4 , kombinasi  ini  juga  mampu  meningkatkan  jumlah  leukosit  pada  ikan  dengan rendahnya  nilai  hematokrit  dan  mampu  mengembalikan  kondisi  tubuh  dalam keadaan seimbang dalam waktu 7 hari.
Kata kunci : A. salmonicida, vaksin inaktif, jintan hitam, imunostimulan, ikan mas

## Pendahuluan
Ikan  air  tawar  yang  umum  dikonsumsi dan  dibudidayakan  di  Indonesia  yaitu
* Mahasiswa Jurusan Budidaya Perairan Fakultas Pertanian Universitas Lampung
† Email : Moeslimaniee@yahoo.com
‡ Dosen  Jurusan  Budidaya  Perairan  Fakultas  Pertanian  Universitas  Lampung  Jl.  Prof.  Soemantri Bojonegoro Gedong Meneng No.1 Bandar Lampung 35145
ikan  mas  ( Cyprinus  carpio ).  Ikan  mas dikenal sebagai komoditas yang berprospek  cerah,  karena  memiliki
harga  jual  yang  tinggi,  selain  itu  ikan mas  juga  memiliki    pertumbuhan  yang relatif  cepat,  fekunditas  dan  sintasan yang  tinggi,  dapat  diproduksi  secara massal serta memiliki peluang pengembangan skala industri (Cahyono,
2002).
A.  salmonicida merupakan  bakteri penyebab penyakit furunculosis . Akibat dari  serangan  bakteri Aeromonas sp. yang diantaranya adalah A. salmonicida di  Indonesia  pada  akhir  tahun  1980 terjadi kematian ikan mas sebanyak 125 ribu  ekor  di  daerah  budidaya  di  Jawa Barat.  Kejadian  tersebut  menyebabkan penurunan  produksi  dan  kerugian berkisar  4  milyar  rupiah  (Anonim, 2007).
Hingga  kini,  metode  yang  banyak digunakan untuk menanggulangi penyakit  pada  ikan  budidaya  adalah pengobatan  dengan  zat  kimia  atau antibiotik. Penggunaan antibiotik  yang berlebihan  dapat  menyebabkan  bakteri menjadi resisten.Untuk menghindari hal tersebut, resisten ketahanan tubuh perlu dilakukan dengan vaksinasi.
Vaksinasi merupakan suatu upaya untuk menimbulkan  ketahanan  tubuh  yang bersifat  spesifik  melalui  pemberian vaksin.    Pengembangan  vaksin  inaktif whole  cell Aeromonas  salmonicida pada  ikan  mas  telah  dilakukan    di Jurusan Budidaya Perairan Unila. Hasil penelitian menunjukkan vaksin tersebut memiliki  imunogenisitas  yang  cukup tinggi  pada ikan mas  yang ditunjukkan dengan titer antibodi yang mencapai 2 7 (Setyawan dkk., 2012). Namun, penggunaan vaksin saja dalam meningkatkan  kekebalan  tubuh  ikan dirasakan  kurang  maksimal,  karena vaksin  hanya  meningkatkan  ketahanan humoral  dan  hanya  efektif  pada  agen patogen  yang  spesifik.  Maka  dari  itu, selain penggunaan vaksin, untuk
menambah kekebalan tubuh ikan secara maksimal  dapat  dilakukan  dengan pemberian imunostimulan. Immunostimulan adalah suatu zat yang termasuk  dalam  adjuvant,  mempunyai kemampuan untuk meningkatkan ketahanan tubuh terhadap infeksi. Salah satu  sumber  imunostimulan  adalah jintan  hitam  ( Nigella  sativa ).  Biji  dari jintan hitam telah diuji pada hewan dan manusia  memiliki  kemampuan  anti bakteri, anti hipertensi,
dan antihelmintik.  El-Kadi  and  Kandil (1986) melaporkan bahwa ekstrak jinten hitam  berpengaruh  menguatkan  fungsi kekebalan,  dimana  kadar  sel-sel  T pembantu meningkat dibandingkan sel- sel  T  penekan  dengan  perbandingan rata-rata  72%  serta  terjadi  peningkatan aktivitas  sel-sel  pembunuh  alami  rata- rata  75%.  Aktivitas  immunostimulator ekstrak jinten hitam meliputi peningkatan  jumlah  sel  darah  putih (leukosit)  terutama  neutrofil,  limfosit dan  monosit  serta  ketahanan  terhadap infeksi bakteri Aeromonas . Kemampuan  anti  bakteri  ekstrak  jintan hitam  juga  dilaporkan  oleh  (Ali et  al ., 2007). Ekstrak jintan hitam  merupakan bahan  yang  potansial  untuk  digunakan sebagai  agen  imunostimulan  pada  ikan lele dumbo yang terinfeksi A. hydrophila karena terbukti meningkatkan  jumlah  sel  darah  putih dan  diferensial  leukosit  yang  berperan dalam respon immune nonspesifik .
Kombinasi  antara  vaksin  inaktif A. salmonicida dan jintan hitam diharapkan ikan akan memiliki imunitas atau  kekebalan  tubuh  secara  maksimal terhadap  berbagai macam infeksi patogen khususnya infeksi A.salmonicida.
Bahan dan Metode Penyediaan bahan Isolat bakteri A . salmonicida didapatkan dari  Stasiun  Karantina  Ikan  dan
Penjaminan  Mutu  Hasil  Perikanan
Kelas  I  Panjang,  Bandarlampung.
Sedangkan  ikan  mas  sebagai  ikan  uji diperoleh dari petani ikan di Kecamatan Pagelaran, Kabupaten Pringsewu. Pembuatan vaksin inaktif A. salmonicida Pembuatan vaksin inaktif A. salmonicida  dengan  cara  mengkultur
Isolat  bakteri A.  salmonicida pada media cair TSB, lalu diinkubasi selama 24  jam  pada  suhu  ruang.  Dilakukan pengkayaan dengan memindahkan inokulum A. salmonicida ke media TSA lalu diinkubasi  kembali selama 24 jam pada suhu ruang. Bakteri A. salmonicida dipanen  kemudian  diinaktifasi  dengan penambahan formalin 1% dan diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu ruang.  Untuk  menghilangkan  formalin dalam  inokulum  Dilakukan  pencucian menggunakan PBS kemudian disentrifuse dengan kecepatan 4000 rpm selama 1 jam, untuk memastikan bakteri sudan  inaktif,  dilakukan  uji  viabilitas pada  medium  spesifik  GSP  dan diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu ruang hingga bakteri tidak tumbuh lagi Kepadatan  vaksin  in-aktif  dihitung dengan
spektrofotometer.
UV- spektrofotometer  (l=625  nm)  dengan mengacu  larutan  standar  Mc  Farland. Vaksinasi  ikan  dilakukan  dengan  tiga metode suntik (10 7 cfu/ikan).
Pembuatan  pakan  yang  ditambah dengan jintan hitam
Pembuatan  pakan yang  ditambah dengan  jintan  hitam  dengan  cara menimbang  pakan  sesuai  bobot  ikan dengan FR 2% jintan hitam dicampurkan  merata  ke  dalam  pakan menggunakan  putih telur  sebagai
perekat dengan dosis jintan hitam yang digunakan pada penelitian ini yaitu: 1 % jintan  hitam  /kg  pakan,  2,5%  jintan hitam  /kg  pakan ,  dan  5 %  jintan  hitam /kg  pakan .  Pakan  bercampur jintan hitam diberikan  pada  ikan  mas  setiap hari  selama  pemeliharaan  dengan frekuensi  pemberian  pakan  sebanyak  3 kali  sehari yaitu  pada  pukul  08.00, 12.00, dan 16.00 .  Pakan yang diberikan sesuai  perlakuan  pada  masing-masing akuarium.

## Vaksinasi
Vaksinasi  dilakukan dalam 5 perlakuan yaitu,  kontrol,  pemberian  vaksin  + jintan  hitam  1%,  pemberian  vaksin  + jintan hitam 2,5%, pemberian vaksin + jintan  hitam  5%,  pemberian    jintan hitam  5%,  dan  pemberian  vaksin  saja. Pemberian  vaksin  dengan  metode suntik (10 7 cfu/ikan) secara
intrapetional  .  Tujuh  hari  setelah vaksinasi pertama, dilakukan penguatan (booster) vaksinasi  dengan metode dan dosis yang sama. Selama vaksinasi, ikan dipelihara  dalam  akuarium  dan  diberi makan menggunakan Feeding Rate 2% pemberian  pakan  tiga  kali  sehari. Kualitas air selama pemeliharaan dijaga agar masih dalam kisaran normal untuk budidaya  ikan  mas.  Pada  saat  sebelum vaksinasi, 7 hari sesudah vaksinasi, dan booster dilakukan  uji  titer  antibodi, hematokrit, dan total leukosit pada ikan untuk  mengetahui  imunogenisitas  pada ikan.

## Titer Antibodi
Pengukuran  titer  antibodi  bertujuan untuk menentukan jumlah antibodi yang dihasilkan  akibat  vaksinasi  Pengujian dengan  metode  aglutinasi  mengacu pada  prosedur  standar  mikroaglutinasi (Roberson, 1990) dengan sedikit modifikasi secara lengkap. Serum yang ada  diambil  dengan  mikropipet  secara hati-hati  sehingga  tidak  tercampur  lagi
dengan  sel  dara.  Serum  @  25  ml dimasukkan kedalam sumuran 1 dan 2. PBS  @  25  ml  dimasukkan  kedalam sumuran  2  –  12.  Sumuran  kedua direpipeting untuk mengencerkan serum, kemudian dilanjutkan ke sumuran  3  sampai  11.    Ag  @  25  ml dimasukkan  kedalam  sumuran  1  –  12.
mikrodiluton plate
digoyang –
goyangkan selama 3 menit dengan pola membentuk  angka  8.  Hasil  titer diinkubasi  dalam  refrigerator  selama  1 malam.  Dilakukan  pengamatan  reaksi aglutinasi pada masing – masing sumur. yang  di  tandai  dengan  adanya  kabut wara  keruh/putih  atau  dot  yang menyebar  ke  seluruh  sumuran  yang berarti antibodi telah terbentuk. Total Leukosit
Perhitungan  total  leukosit  dilakukan dengan cara bilik hitung haemocytometer dan  kaca  penutupnya dibersihkan  dengan  etanol,  kemudian dipasang kaca
penutup pada haemocytometer . Sampel darah dihisap dengan  pipet  berskala  sampai  0,5 dilanjutkan  dengan  menghisap  larutan turk  sampai  skala  11  (pengenceran 1:20), kemudian digoyangkan selama 3 menit agar bercampur homogen. Empat tetesan pertama dibuang, tetesan berikutnya dimasukan ke dalam haemocytometer dengan  meletakkan ujung pipet pada bilik hitung tepat batas kaca  penutup  dan  dibiarkan  selama  3 menit  agar  leukosit  mengendap  dalam bilik  hitung.  Bilik  hitung  diletakkan  di bawah mikroskop menggunakan pembesaran lemah. Penghitungan dilakukan pada 4 kotak besar
haemocytometer .

## Hematokrit
Sampel  darah    dimasukkan  kedalam tabung hematokrit sampai kira-kira 4/5 bagian  tabung,  ujungnya  (bertanda merah)  disumbat  dengan  kretoseal.
Sentrifusi dengan sentrufuse hematokrit selama  15  menit  dengan  kecepatan
3.500 rpm. Pengukuran kadar hematokrit dilakukan dengan membandingkan  volume  padatan  sel darah  dengan  volume  seluruh  darah pada skala hematokrit.

## Hasil dan Pembahasan
Pada dasarnya vaksinasi adalah memasukkan  antigen  kedalam  tubuh ikan yang sudah
dihilangkan patogenisitasnya untuk merangsang sel- sel  limfosit  sehingga  menimbulkan ketahanan  humoral  (spesifik).  Antigen yang digunakan adalah antigen H, yaitu melemahkan  bakteri A.    salmonicida menggunakan formalin untuk menghasilkan vaksin inaktif bakteri A . salmonicida .  Sebelum  dilakukannya penelitian ini, telah dilakukan penelitian oleh    Setyawan  dkk.  (2012)  mengenai vaksin  inaktif  bakteri A.    salmonicida yang  hasilnya  mampu  meningkatkan titer  antibodi  pada  ikan  mas.  Namun, dalam penelitian tersebut hanya mengamati  respon  imun  adaptif  saja yang  diindikatorkan  dengan  nilai  titer antibody  mencapai  2 7 .  Penambahan immunostimulan  jintan  hitam  dalam penelitian ini terbukti efektif meningkatkan  respon  imun  ikan  mas, baik  respon  imun  adaptif  dengan  titer antibody 2 7 maupun respon imun innate dengan  peningkatan  total  leukosit 5,7x10 3 sel/mm 3 dan  hematokrit  antara
21%-44%.
Titer Antibodi Hasil rata-rata titer mengalami peningkatan  setiap  minggunya,  dari sebelum  vaksinasi  hingga  sesudah vaksinasi  II  ( booster) .  Perhitungan ANOVA pada selang kepercayaan 95% didapatkan hasil titer sebelum vaksinasi , vaksinasi I dan vaksinasi II
menunjukkan  berbeda  nyata  ( P <0.05)
sehingga dilakukan uji lanjut BNT. Uji lanjut BNT pada saat sebelum vaksinasi menunjukkan  perlakuan  A,  C,  dan  D berbeda nyata terhadap perlakuan B, E, dan  F  dan  perlakuan  B,  E,  dan  F berbeda  nyata  dengan  perlakuan  A,  C dan D. Uji lanjut BNT pada vaksinasi I menunjukan  perlakuan  A,  E,  dan  F berbeda  nyata  dengan  perlakuan  B,  C, dan  D,  perlakuan  B  berbeda  nyata terhadap semua perlakuan, perlakuan C dan D berbeda nyata dengan perlakuan A,  B,  E,  dan  F.  Uji  lanjut  BNT  pada vaksinasi  II  menunjukan  perlakaun  A, E,  dan  F  berbeda  nyata  terhadap
perlakuan B, C, dan D, perlakuan B, C, dan D berbeda nyata terhadap perlakuan
A, E, dan F (Tabel 1). Nilai titer antibodi mengalami peningkatan  disetiap  minggunya,  yaitu 2 2 hingga  2 4 untuk  perlakuan  jintan hitam saja, 2 1 hingga 2 4 untuk perlakuan vaksin yang ditambah jintan hitam 1%, 2 0 hingga  2 5 untuk  perlakuan  vaksin saja,  dan  2 1 hingga  2 5 untuk  perlakuan kontrol,  2 2 hingga  2 6 untuk  perlakuan vaksin yang ditambah jintan hitam 2.5% dan  ,  2 2 hingga  2 7 untuk  perlakuan vaksin  yang  ditambah  jintan  hitam  5% (Gambar 1).
Tabel 1. Titer Antibodi pada Ikan Mas ( Cyprinus carpio ) ( 2 logY )
Perlakuan Rata-rata Titer Antibodi SV± SD SV I ± SD SV II ± SD A ( Kontrol) 1.00±0.00 a 4.67±1.15 a 5.67±1.55 a B ( JH 5%) 2.00±1.00 b 2.33±0.58 b 4.33±0.58 b C ( Vaksin) 0.00±0.00 a 3.67±0.58 c 4.67±1.15 b D ( V + JH 1%) 1.00±1.00 a 3.33±0.58 c 3.67±1.53 b E ( V + JH 2,5%) 2.00±1.00 b 4.67±0.58 a 6.33±0.58 a F ( V + JH 5%) 2.00±1.00 b 5.67±0.70 a 7.33±0.58 a
Gambar 1.  Titer Antibodi Ikan Mas ( Cyprinus carpio )

## Hematokrit
Hasil  analisa  ragam  (ANOVA)  dengan taraf kepercayaan 95%, perlakuan tidak menunjukkan  perbedaan  yang  nyata ( P  0,05)  pada  saat  sebelum  vaksinasi dan  sesudah  vaksinasi  II.  Perbedaan
nyata  terlihat  pada  saat  vaksinasi  I. Hasil uji BNT yang didapat menunjukkan  perlakaun  A  berbeda nyata terhadap semua perlakuan kecuali terhadap perlakuan D dan perlakuan B, C,  E,  dan  F  berbeda  nyata  dengan
0 1 2 3 4 5 6 7 8 A B C D E F R ata -r ata T iter An tib o d i Perlakuan Sebelum Vaksinasi Sesudah Vaksinasi I Sesudah Vaksinasi II
perlakuan  A  dan  D  (Tabel  2).  Nilai hematokrit  terendah  terdapat  pada perlakaun  A(kontrol)  yaitu  21±1  dan nilai  hematokrit tertinggi terdapat  pada perlakuan D ( vaksin + jintan hitam1%) yaitu 41.00±10.81 (Gambar 2). Hasil  pengamatan  menunjukan  nilai hematokrit  ikan  yang  bervariasi.  Nilai hematokrit
tertinggi didapatkan sebelum  perlakuan,  setelah  perlakuan mengalami penurunan, dan pada
booster meningkat  kembali.  Namun nilai  hematokrit  ikan  berada  dalam kisaran  nilai  normal.  Peningkatan  nilai hematokrit  menunjukkan  peningkatan sel-sel darah merah, peningkatan faktor- faktor selular darah ini selanjutnya akan menjadi  efektor  bagi  peningkatan respon  pertahanan  spesifik  (antibodi) yang  lebih  cepat  dalam  kuantitas  yang memadai  untuk  meredakan  infeksi A. salmonicida .
Tabel 2. Hematokrit Pada Ikan Mas ( Cyprinus carpio )
Perlakuan Rata-rata Hematokrit (%) SV± SD SV I ± SD SV II ± SD A ( Kontrol) 37.67±02.88 a 21.00±1.00 a 29.67±1.52 a B ( JH 5%) 35.67±03.05 a 26.00±4.00 b 27.33±3.78 a C ( Vaksin) 32.33±04.04 a 26.33±1.52 b 29.67±2.08 a D ( V + JH 1%) 41.00±10.81 a 23.33±2.51 a 30.00±1.73 a E ( V + JH 2,5%) 36.00±04.58 a 26.67±2.51 b 25.00±1.00 a F ( V + JH 5%) 33.00±09.00 a 30.33±3.78 b 30.67±3.51 a
Gambar 2. Hematokrit Ikan Mas ( Cyprinus carpio )

## Total Leukosit
Jumlah leukosit ikan sesudah vaksinasi I  mengalami  peningkatan  dan  sesudah vaksinasi  II    mengalami  penurunan mendekati  keadaan  normal.  Hasil analisa  ragam  (ANOVA)  dengan  taraf kepercayaan  95%,  perlakuan  tidak
menunjukkan  perbedaan  yang  nyata ( P  0.05)  telihat  pada  saat  sebelum vaksinasi  dan  sesudah  vaksinasi  II. Perbedaan yang nyata terlihat pada saat vaksinasi I. Perlakuan A berbeda nyata terhadap semua perlakuan, perlakuan B berbeda nyata terhadap semua 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 A B C D E F P er sen tas e R er ata Nilai Hem ato k rit Perlakuan Sebelum Vaksinasi Sesudah Vaksinasi I Sesudah Vaksinasi II
perlakuan kecuali terhadap perlakuan C, perlakuan  D  berbeda  nyata  terhadap semua perlakuan, dan perlakuan E dan F berbeda nyata terhadap perlakuan A, B, C,  dan  D  (Tabel  3).  Nilai  leukosit terendah pada akhir perlakuan didapatkan  pada  perlakuan  B(Jintan hitam  5%)  yaitu  39.  216  sel/mm 3 dan nilai  leukosit  tertinggi  didapatkan  oleh perlakuan F(vaksin  + jintan hitam  5%) yaitu 51.883 sel/mm 3 , diikuti perlakuan E(vaksin  +  jintan  hitam  2.5%)  yaitu 50.066  sel/mm 3 ,  perlakuan  C  (vaksin) yaitu  46.716  sel/mm 3 ,    perlakuan  D (vaksin + jintan hitam 1%) yaitu 41.833 sel/mm 3 ,  dan  perlakuan  A  (kontrol) yaitu 40.166 sel/mm 3 (Gambar 3) Total  sel  darah  putih  pada  ikan  yang diberi  vaksin  ditambah  jintan  hitam secara  umum  mengalami  peningkatan yang lebih tinggi  dibandingkan kontrol pada  saat  vaksinasi  I,  hal  ini  berkaitan dengan  fungsi  sel  darah  putih  dalam tubuh yaitu sebagai alat pertahanan dan sel  darah  putih  mengalami  penurunan pada saat vaksinasi II, hal ini karena sel- sel dalam tubuh mengalami homeostatis ,  yaitu  kembali  dalam kondisi  seimbang.  Leukosit  membantu membersihkan  tubuh  dari  benda  asing, termasuk invasi patogen melalui sistem imun  dan  respon  lainnya.  Ikan  yang kemasukan mikroorganisme akan menghasilkan  banyak  leukosit  untuk mensintesa  antibodi  dan  memfagosit bakteri (Moyle and Cech, 2004).

## Kualitas Air
Parameter  kualitas  air  yang  diukur dalam  penelitian  ini  adalah  :  suhu  air, oksigen  terlarut,  dan  pH  air.  Secara terperinci  terlihat  bahwa  kualitas  air disemua perlakuan tidak berbeda nyata, baik  suhu,  oksigen terlarut,  dan  pH berada  dalam  kisaran  normal  sehingga tidak  berpengaruh  nyata  terhadap perlakuan  artinya  perbedaan  hasil
(perubahan  parameter  imunitas  dan perubahan  gejala  lainnya)  disebabkan karena  perbedaan  perlakuan  bukan karena kualitas air yang berbeda (Tabel 4).
Nilai hematokrit, total leukosit, dan titer antibodi memiliki hubungan satu dengan lainnya. Pada awal pemeliharaan sebelum vaksinasi semua nilai  berada  pada  keadaan  standar, sesudah  vaksinasi  I  nilai  hematokrit menurun, nilai leukosit meningkat, dan nilai titer antibodi meningkat. Meningkatnya  jumlah  leukosit  karena adanya  benda  asing    yang  masuk kedalam  tubuh  ikan,  sehingga  bagian leukosit  bekerja  untuk  membersihkan benda  asing  dari  tubuh  dengan  cara fagositosis. Meningkatnya total leukosit memicu  meningkatnya  respon  innate sehingga  ikan  memiliki  kekebalan tubuh  yang  baik.  Menurunnya  nilai hematokrit  manandakan  jumlah  sel darah  merah  dalam  tubuh  menurun, menurunnya  jumlah  sel  darah  merah dikarenakan  jumlah  sel  darah  putih dalam darah sedang diproduksi banyak untuk  membersihkan  masuknya  benda asing  dalam  tubuh.  Dari  gambaran diatas  terdapat  korelasi  antara  jumlah leukosit  dan  jumlah  eritrosit  dalam tubuh  ikan.  Meningkatnya  nilai  titer antibodi  menunjukkan  bahwa  antibodi mampu  mengeliminasi  antigen  yang masuk ke dalam tubuh.
Setelah pemberian vaksinasi II ( booster) jumlah  leukosit  mengalami penurunan, nilai hematokrit mengalami peningkatan  dan  nilai  titer  antibodi meningkat.
Meningkatnya
nilai hematokrit  dan  menurunnya  jumlah leukosit  terjadi  dimungkinkan  karena sel-sel tubuh akan mengalami homeostatis.  Homeostatis  adalah  suatu keadaan komposisi kimia dan fisiokimia yang  konstan  pada  medium  internal
organisme.  Homeostatis  merupakan manifestasi keberadaan sejumlah factor biologis  yang  konstan  seperti  indikasi kuantitatif, karakteristik
suatu organisme pada kondisi normal. Termasuk temperature tubuh, konsentrasi  ion  dan  ratio  ion-ion  aktif yang berhubungan dengan biologis dan
sebaliknya ( Hernawati, 2012). Sedangkan  antibodi  pada  ikan  tetap mengalami  peningkatan,  hal  ini  terjadi karena antibodi bekerja kembali mengingat  antigen  yang  pernah  masuk kedalam tubuh dan mempersiapkan diri lebih baik dan efektif dengan masuknya antigen dalam tubuh.
Tabel 3. Total Leukosit Pada Ikan Mas ( Cyprinus carpio ) Perlakuan Rata-rata Total Leukosit ( X 10 3 sel/mm 3 ) SV± SD SV I ± SD SV II ± SD A ( Kontrol) 38±3.9 a 40±2.3 a 39±8.4 a B ( JH 5%) 37±2.8 a 39±2.4 b 46±3.1 a C ( Vaksin) 37±5.4 a 46±8.4 b 50±1.9 a D ( V + JH 1%) 35±7.2 a 41±6.3 c 44±1.7 a E ( V + JH 2,5%) 41±4.0 a 50±1.2 d 55±1.9 a F ( V + JH 5%) 40±2.8 a
51±3.2 d 57±2.8 a
Gambar 3.  Leukosit Ikan Mas ( Cyprinus carpio ) Tabel 4. Data Kisaran Kualitas Air Selama Penelitian
Perlakuan Pagi Sore pH Suhu ( o C) DO (mg/l) pH Suhu ( o C) DO (mg/l) A 7 26,0 4,90 7,1 27,25 4,25 B 7 25,8 5,15 7,1 26,20 5,00 C 7 25,5 5,20 7,2 26,10 4,65 D 7 25,2 4,58 7,1 26,25 4,85 E 7 25,6 4,90 7,2 26,10 5,05 F 7 26,2 5,25
7,1 26,30 4,20 0 10000 20000 30000 40000 50000 60000 70000 A B C D E F P er sent a se re ra ta nil a i leuk o sit Perlakuan Sebelum Vaksinasi Sesudah Vaksinasi I Sesudah Vaksinasi II
Kesimpulan Hasil yang diperoleh selama penelitian, pemberian kombinasi vaksin whole cell  A. salmonicida dan
immonostimulan jintan hitam dengan kadar  2.5%  -  5%  yang  dicampurkan dalam  pakan  mampu  meningkatkan imonogenisitas ikan mas.

## Daftar Pustaka
Ali, O., Basbulbul, G. and  Aydin T. 2007. Antimitotic and antibacterial effects  of  the Nigella  sativa L.
Seed. Caryologia. 60 : 270-272. Anonim, 2007.Metode Standar Pemeriksaan HPIK Golongan Bakteri.  Pusat  Karantina  Ikan.  66 hal.
Cahyono,  B.  2002.  Budidaya  Air Tawar.  Kanisius.  Yogyakarta.  10- 14 hal. El-Kadi A and  Kandil O. 1986. Effect of Nigella  sativa (the  black  seed) on  immunity.  Proceeding  of  the
4 th International  Conference  on Islamic Medicine,
Kuwait.
Bulletin  of  Islamic  Medicine.  4: 344-348
Hernawati. 2012. Mineral dan Homeostatis. FMIPA UPI.
Bandung. 1-17 hal.
Moyle  P.B  and  Cech  Jr  J.J.  2004. Fishes. An Introduction to
Ichthyology. 5 th Ed. Prentice Hall. USA. Roberson,  B.S.,  1990.  Bacterial Agglutination.  In:  Stolen,  J.S., Fletcher,  T.C.,  Anderson,  D.P., Roberson, B.S.,  &  Muiswinkel,  J.
(Eds.). Techniques in Fish
Immunology. SOS  Publications.
Fair Haven. New Jersey. pp.81-86. Setyawan, A., Hudaidah, S., Zulfikar Z.R., dan Sumino. 2012. Imunogenisitas Vaksin Inaktif
Whole cell Aeromonas salmonicida pada Ikan Mas
( Cyprinus carpio ). Aquasains 1:
17-21.