## JAGROS Journal of Agrotechnonogy and  Science
Jurnal Agroteknologi dan sains Fakultas Pertanian, Universitas Garut P ISSN : 2775-0485, E ISSN : 2548-7752
Isolasi Pseudomonas sp. untuk Pengendalian Biologi terhadap Layu

## Bakteri
The Isolation of Pseudomonas sp.  for Biological Control of Bacterial

## Wilt
Resti Fajarfika 1) *, Taufiq Hilmany 1) , Hanny Hidayati Nafi’ah 1) , Novriza Sativa 1) , Jajang Supriatna 2)
1) Program Studi Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Garut Jl. Raya Samarang No. 52A, Garut, Jawa Barat 44151
2) Program Studi Agroteknologi, Fakultas Sains dan Teknologi, UIN Sunan Gunung Djati Jl. A.H. Nasution No.105, Cipadung, Cibiru, Bandung, Jawa Barat 40614
*E-mail: fajarfikaresti@gmail.com

## Abstrak
Penyakit layu yang disebabkan oleh Ralstonia solanacearum merupakan patogen tular tanah yang banyak menyerang tanaman penting dan menyebabkan kehilangan hasil. Pengendalian secara biologi  yang ramah lingkungan masih terus dikembangkan baik secara in vitro , in vivo, maupun  di  lapangan.  Penelitian  dilaksanakan  di  Laboratorium  Terpadu  Fakultas Pertanian, Universitas Garut. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan Pseudomonas sp. dari  beberapa  rizosfer  tanaman  dan  potensinya  dalam  mengendalikan  bakteri  patogen. Kandidat bakteri antagonis diperoleh dari tanaman putri malu, ubi jalar, tomat, tembakau, dan sawi yang ditumbuhkan pada media selektif Pseudomonas Agar Base . Bakteri patogen diperoleh dari tanaman tomat yang terinfeksi layu bakteri. Bakteri Pseudomonas sp. yang diperoleh,  selanjutnya  di  uji  reaksi  gram,  hipersensitif,  dan  daya  hambat  secara in  vitro . Hasil  penelitian  diperoleh  delapan  isolat Pseudomonas sp.  yang  termasuk  reaksi  gram negatif, satu isolat menunjukkan reaksi hipersensitif, dan tidak terbentuk zona hambat pada medium Nutient Agar .
Kata Kunci : Layu bakteri, penyakit, patogen, Pseudomonas sp

## Abstract
Wilt disease caused by Ralstonia solanacearum is a soil-borne pathogen that attacks many important crops and causes yield loss. Environmentally friendly biological control is still being developed both in vitro, in vivo and in the field. The research was conducted at the Integrated Laboratory of the Faculty of Agriculture, University of Garut. This study aims to obtain  Pseudomonas  sp.  of  some  plant  rhizospheres  and  their  potential  in  controlling bacterial pathogens. Candidate antagonist bacteria were obtained from Mimosa sp., sweet potato, tomato, tobacco, and mustard plants grown on Pseudomonas Agar Base selective media. Pathogenic bacteria were obtained from tomato plants infected with bacterial wilt. Pseudomonas  sp.  was  obtained,  and  then  tested  for  gram  reaction,  hypersensitivity,  and inhibition in vitro. The results obtained eight isolates of Pseudomonas sp. which included a gram-negative reaction, one isolate showed a hypersensitivity reaction, and isolates could
inhibit R. solanacearum with different zones of inhibition,  no inhibition zone was formed on Nutrient Agar medium.
Keywords: Bacterial wilt, disease, pathogen, Pseudomonas sp

## 1. Pendahuluan
Ralstonia solanacearum penyebab layu bakteri, salah satu penyakit yang paling merusak di seluruh dunia (Gabriel et al. , 2006). Gejala awal yang ditimbulkan oleh serangan bakteri R. solanacearum pada tanaman tomat yaitu layu pada beberapa daun muda, daun-daun tua menguning,  dan  batang  tanaman  sakit  cenderung  lebih  banyak  membentuk  akar adventif sampai setinggi bunga (Semangun, 2007).
Bakteri  tular  tanah  ini  mempunyai  kisaran  inang  yang  luas  lebih  dari  50  famili  yang berbeda (Hayward, 1991), diantaranya tomat, tembakau, cabai, kacang tanah, jahe, pisang, eukaliptus, dan kentang (Prior et al. , 1998). Kejadian penyakit dapat mencapai 15-55% pada tanaman tomat di Taiwan yang menyebabkan kehilangan lebih dari 12 miliar US dolar per tahunnya  (Hartman et  al .,  1991).  Di  Hawai,  telah  dilaporkan  produksi  jahe  mengalami kerugian  lebih  dari  50%  selama  tahun  1998-1999  (Yu et  al. ,  2003).  Di  Indonesia,  layu bakteri  dikenal  sebagai  penyakit  yang  paling  merugikan  tanaman  cabai  dan  tomat  yang dilaporkan pada tahun 1921 dan 1922 di Madiun dan Kediri (Semangun, 2004). Kerugian mencapai 80% pada pertanaman jahe atau bahkan dapat menggagalkan panen (Aeny, 2006). Jenis kentang yang rentan terhadap penyakit layu dapat menyebabkan kerugian sampai 40% (Semangun,  2002).  Besarnya  nilai  kerugian  hasil  tersebut  dipengaruhi  beberapa  faktor meliputi  faktor  lingkungan  seperti  iklim  lokal,  tipe  tanah,  teknis  budidaya,  jenis  varietas yang ditanam, dan virulensi atau tingkat keganasan strain R. solanacearum (Elphinstones, 2005).
Layu bakteri sulit dikendalikan dengan bahan kimia dan kultur budidaya (Grimault et al. , 1993). Oleh karena itu, pengendalian biologi memiliki peranan penting dalam mengelola penyakit layu bakteri (Akiew et al. , 1993). Strategi pengendalian biologi atau hayati dapat membantu dalam tindakan pengembangan manajemen alternatif atau diintegrasikan dengan praktik  lain  untuk  manajemen  penyakit  yang  efektif  di  tingkat  lapangan.  Pengendalian biologi tidak hanya menekan penyakit dan meningkatkan hasil panen tetapi akan menjadi penting  dalam  mencegah  pencemaran  lingkungan  karena  pestisida  (Lwin  & Ranamukhaarachchi, 2006).
Beberapa  mikroba  antagonis  yang  telah  banyak  diteliti  adalah Bacillus  subtilis , Pseudomonas  fluorescens ,  dan Trichoderma  harzianum. Ketiga  isolat  mikroba  tersebut dapat  mengendalikan  penyakit R.  solanacearum dan  penyakit  lain  pada  tanaman  tomat, tembakau, kacang, nilam, jahe dan krisan. Bacillus subtilis, P. fluorescens dan T. harzianum mampu  menurunkan  intensitas  penyakit  yang  disebabkan R.  solanacearum pada  jahe sebesar 4% (Bustaman, 2006).
Pseudomonas yang  termasuk  dalam  kelompok fluorescens merupakan  bakteri pengkoloni  akar  yang  agresif,  bakteri  ini  mampu  memproduksi  hormon  pertumbuhan tanaman, dan berfungsi sebagai agens pengendali hayati melalui mekanisme kompetisi dan induksi  ketahanan  tanaman  (Haas  &  Defago,  2005).  Selain  itu, P.  fluorescens memiliki kemampuan  sebagai  PGPR  ( Plant  Growth  Promotting  Rhizobacteria )  yang  membantu pertumbuhan  tanaman  sehingga  tanaman  mampu  tumbuh  lebih  baik  dan  sehat. P.fluorescens juga mempunyai kemampuan sebagai antagonis terhadap patogen tular tanah karena  mampu  menghasilkan  siderofor  (Danya  &  Potty,  2007).  Upaya  pencarian agensia
hayati untuk mengendalikan patogen R. solanacearum telah dilaporkan dengan hasil yang masih bervariasi dalam hal efektifitasnya. Maka dari itu, perlu dilakukan eksplorasi dalam upaya menemukan bakteri P. fluorescens yang memiliki kemampuan sangat baik dan efektif dalam mengendalikan penyakit layu bakteri di lapangan.

## 2. Metodologi
Isolasi Pseudomonas sp.
Isolasi Pseudomonas sp. dilakukan menurut metode Naik et al. (2008). Sampel tanah diperoleh  dari  daerah  rizosfer  tanaman  putri  malu,  ubi  jalar,  tomat,  sawi  dan  tembakau. Selanjutnya  ditimbang  1  gram  tanah  dan  dibuat  seri  pengenceran  sampai  10 -5 .  Masing- masing  pengenceran  dituangkan  ke  dalam  cawan  petri  yang  berisi  medium  selektif Pseudomonas Agar Base (PAB) dan diinkubasi selama 24-48 jam.
Pembuatan medium Pseudomonas Agar Base (PAB)
Medium  ini  dibuat  dengan  cara  menyiapkan  air  500  ml,  kemudian  dipanaskan  dan ditambahkan  24,2  g  media  PAB  dan  5  ml  gliserol,  diaduk  supaya  homogen,  selanjutnya dimasukan ke dalam Erlenmeyer dan disterilisasi pada autoclave selama 15 menit dengan suhu  121 o C.  Selanjutnya  dibiarkan  sampai  suhunya  turun  mencapai  50 o C  kemudian ditambahkan 1 botol Pseudomonas C-N Supplement  dan diaduk sampai tercampur, media dituangkan ke dalam cawan Petri steril.

## Isolasi Bakteri Patogen
Isolat patogen layu bakteri diperoleh dari tanaman tomat yang sakit. Sampel akar sakit dicuci  dan  disinfektan  menggunakan  alkohol  70%.  Selanjutnya  dipotong-potong  hingga berukuran 5 mm×5 mm, dimasukan kedalam tabung reaksi dan ditambahkan 1 ml akuades steril.   Suspensi  bakteri  yang  ada  pada  tabung  reaksi  diambil  sebanyak  0.1  ml  kemudian dipindahkan  ke  dalam  cawan  Petri  yang  berisi  medium Nutrient  Agar (NA)  dan diinkubasikan selama 48 jam.

## Uji Reaksi Gram
Uji KOH 3% dilakukan dengan cara mencampur satu ose isolat bakteri dengan satu tetes KOH 3%, apabila terdapat lendir artinya bakteri tersebut bersifat gram negatif, dan apabila tidak berlendir bakteri tersebut bersifat gram positif.

## Uji Hipersensitif
Pengujian  hipersensitivitas  dilakukan  dengan  cara  menyuntikkan  suspensi  isolat  baik Pseudomonas sp.  maupun  bakteri  patogen  ke  dalam  daun  tembakau  (Arwiyanto et  al ., 2007). Reaksi yang muncul diamati setiap hari setelah perlakuan selama satu minggu.

## Uji Daya Hambat
Uji  daya  hambat Pseudomonas sp.  terhadap R.  Solanacearum (bakteri  patogen) dilakukan dengan cara mencampurkan 5 ml suspensi biakan murni bakteri patogen (dua ose dalam 5 ml air steril) ke dalam 100 ml medium NA, dihomogenkan, selanjutnya dimasukan ke  dalam  cawan  Petri  masing-masing  sebanyak  10  ml  dan  dibiarkan  padat.  Langkah selanjutnya potongan cakram kertas saring berdiameter 1 cm dicelupkan ke dalam suspensi Pseudomonas sp.,  dikeringanginkan,  dan  diletakkan  di  tengah  cawan  Petri  tersebut. Inkubasi  dilakukan  selama  72  jam  pada  suhu  37 o C,  kemudian  diamati  dan  diukur  zona
bening di sekeliling Pseudomonas sp. (Suryadi, 2009). Terdapat delapan Pseudomonas sp. yang diuji, setiap perlakuan diulang lima kali sehingga terdapat 40 satuan percobaan dengan menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL).

## 3. Hasil dan Pembahasan

## Isolasi bakteri Antagonis
Hasil  eksplorasi  bakteri  antagonis  dari  rizosfer  tanaman  tomat,  sawi  (912  m  dpl) tembakau, ubi jalar, dan putri malu (760 m dpl) di Kecamatan Samarang, Kabupaten Garut (Gambar  1)  diperoleh  delapan  isolat Pseudomonas sp.  pada  pengenceran  yang  berbeda (Tabel 1).
Tanaman tomat
Tanaman sawi Tanaman tembakau Tanaman ubi jalar Tanaman putri malu
Gambar 1. Tempat pengambilan sampel tanah rizosfer
Tabel 1. Koloni Pseudomonas sp. No Isolat Bakteri Morfologi Koloni Bentuk Tepi Warna Permukaan Jumlah Koloni 1 A: putri malu10 -2 Bulat Rata Putih susu Rata 6 2 B: putri malu10 -4 Bulat Rata Putih susu Cembung 17 3 C: putrimalu 10 -5 Bulat Rata Putih susu Cembung 3 4 D: ubi jalar10 -2 Bulat Rata Putih susu Rata kering 57 5 E: ubi jalar 10 -5 Bulat Rata Putih susu Cembung 317 6 F: tomat 10 -2 Bulat Rata Putih kekuningan Rata kering 44 7 G: sawi 10 -3 Bulat Rata Putih kekuningan Cembung 81 8 H: tembakau 10 -2 Bulat Rata Putih agak bening Rata kering 11
Keterangan: A, B, C, D, E, F, G, H adalah isolat Pseudomonas sp. dan I adalah Ralstonia solanacearum
Delapan isolat bakteri yang diperoleh memiliki ciri koloni bentuknya bulat, tepinya rata tetapi  warna,  permukaan,  dan  jumlahnya  berbeda.  Warnanya  kebanyakkan  putih  susu kecuali pada cawan petri dengan kode isolat F dan G warnanya putih kekuningan, sedangkan kode  isolat  H  warnanya  putih  agak  bening.  Permukaannya  ada  4  cawan  petri  yang permukaannya  rata  yaitu  kode  isolat  A,  D,  F,  H  dan  4  cawan  petri  lain  permukaannya cembung yaitu dengan kode isolat B,C,E,G. Jumlah koloni bakteri bervariasi, yang terendah pada isolat  C yaitu 3 dan tertinggi pada isolat E sebanyak 317. Hal ini sesuai dengan hasil penelitian  Suyono  &  Farid  (2011)  bahwa  bakteri Pseudomonas memiliki  karakteristik seperti, koloni berwarna putih, bersifat  gram negatif, berbentuk batang ( rods ) atau kokus ( coccus ), aerob obligat , motil mempunyai flagel polar. Bakteri ini, oksidase positif, katalase positif, nonfermenter dan tumbuh dengan baik pada suhu 4 o C atau dibawah 43 o C. Beberapa hasil pengamatan koloni bakteri dapat dilihat pada Gambar 2.
Bakteri R. solanacearum didapat dari daerah Rancabango pada ketinggian 760 m dpl. Bakteri tersebut diisolasi dari jaringan batang tanaman tomat yang memperlihatkan ciri-ciri gejala  layu,  akar  adventif  tumbuh  sampai  batang  bunga  paling  bawah,  apabila  dipotong terdapat lendir warna coklat dan potongan batang apabila dicelupkan pada air jernih akan turun bakterinya seperti asap putih (Gambar 3). Menurut Zuluag et al. (2013) bahwa lendir dalam jaringan pembuluh tanaman mengandung gula, asam amino, dan asam organik yang dapat mendukung pertumbuhan bakteri.
Kersten et.al. (2001) menyatakan bahwa Ralstonia solanacearum merupakan patogen tular  tanah  yang  menginfeksi  pada  bagian  akar,  bergerak  secara  sistemik  melalui xylem , bersifat  nonmotil  pada  tanaman,  namun  pada  media  pertumbuhan  bersifat  motil  dan menyebabkan  gejala  layu  yang  seringkali  berlanjut  pada  kematian  tanaman  (Denny  & Hayward, 2001). Stadium penyakit yang lanjut, bila batang dipotong, dari bekas pembuluh akan keluar masa bakteri seperti lendir berwarna putih susu. Lendir akan lebih banyak keluar bila  potongan  batang  disimpan  di  tempat  yang  lembab.  Jika  potongan  batang  sakit dimasukkan  ke  dalam  gelas  yang  berisi  air  jernih,  setelah  ditunggu  beberapa  menit  akan terlihat  benang-  benang  putih  halus,  yang  akan  putus  bila  gelas  digoyang.  Benang  putih tersebut adalah masa bakteri. Adanya massa bakteri ini dapat dipakai untuk membedakan penyakit layu bakteri dengan layu fusarium (Semangun, 2004).
Isolat ubi jalar 10 -2 Isolat ubi jalar 10 -5
Isolat putri malu 10 -5
Gambar 2. Koloni bakteri pada medium PAB
A B C
Gambar 3. Tanaman tomat yang terinfeksi layu bakteri. A: tanaman tomat sakit, B: batang tanaman tomat sakit, C: masa bakteri.

## Uji Reaksi Gram
Uji  KOH  3%  dilakukan  dengan  tujuan  untuk  mengetahui  sifat  gram  bakteri,  Gram negatif dicirikan dengan adanya lendir  dan Gram positif tidak berlendir setelah dicampur dengan KOH 3%. Gambar 4A menunjukkan hasil uji KOH 3% dengan hasil semua isolat bersifat  gram  negatif.  Menurut  Chandra  &  Mani  (2011)  bahwa  bakteri  Gram  negatif memiliki lemak tebal dan berdinding sel tipis yang berada di ruang periplasma, sedangkan bakteri Gram positif memiliki dinding sel yang tebal dan lemak yang tipis, kemudian KOH akan menyerang lemak ( bilayer lipid ) dan membuat sel bakteri Gram negatif pecah sehingga berlendir sedangkan Gram positif tidak terpengaruh.
Gambar 4. Hasil pengujian reaksi gram dan hipersensitif . A: Adanya lendir pada hasil uji reaksi  gram,  B:  gejala  nekrotik  isolat  ubi  jalar  10 -2 hari  pertama  pada  uji hipersensitif, C: gejala nekrotik pada hari ke-5.

## Uji Hipersensitif
Uji  hipersensitif  dilakukan  pada  tembakau,  hal  ini  dikarenakan  tembakau  merupakan tanaman yang sensitif terhadap hama dan penyakit (Yulianti, 2009). Menurut Danaatmadja et.al., (2009)  bahwa  hipersensitif  merupakan  mekanisme  pertahanan  yang  menghasilkan penghambatan  dari  serbuan  mikroorganisme.  Secara  karakteristik,  peningkatan permeabilitas, kekurangan, dan kematian sel inang terjadi pada sel  terinfeksi. Isolat  yang tidak  menimbulkan  gejala  nekrosis  menandakan  reaksi  negatif  atau  non  patogen  dan sebaliknya apabila isolat yang  menimbulkan gejala nekrosis menandakan reaksi positif atau patogen bagi tanaman.
Reaksi hipersensitif adalah proses kematian sel yang cepat dan terlokalisasi. Reaksi ini muncul pada tanaman yang terinfeksi saat pengenalan patogen yang merupakan usaha untuk menghambat pertumbuhan patogen (Zuraidah, 2013). Hasil penelitian menunjukkan bahwa terjadi  reaksi  positif  pada  bakteri  asal  isolat  ubi  jalar  10 -2 dan Ralstonia  solanacearum . Bagian  daun  tembakau  yang  disuntikkan  dengan  isolat  asal  ubi  jalar  10 -2 mengalami perubahan warna menjadi kuning, perubahan tersebut terjadi dari hari pertama (Gambar 4B dan 4C), sedangkan  yang disuntikkan dengan R. solanacearum perubahannya terjadi pada hari kedua. Hal ini mengindikasikan bahwa bakteri isolat asal tanaman ubi jalar 10 -2 adalah
A
B
C
bakteri  patogen  tanaman.  Berbeda  dengan  tujuh  isolat  bakteri  rizosfer  lainnya  tidak menimbulkan gejala apapun setelah diaplikasikan (Tabel 2).
Tabel 2. Hasil Uji Hipersensitif
No  Nama Isolat Pengamatan Hari ke- No Nama Isolat Pengamatan Hari ke- 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 aU 1 - - - - - 24 eU 4 - - - - - 2 aU 2 - - - - - 25 eU 5 - - - - - 3 aU 3 - - - - - 26 fU 1 - - - - - 4 aU 4 - - - - - 27 fU 2 - - - - - 5 aU 5 - - - - - 28 fU 3 - - - - - 6 bU 1 - - - - - 29 fU 4 - - - - - 7 bU 2 - - - - - 30 fU 5 - - - - - 8 bU 3 - - - - - 31 gU 1 - - - - - 9 bU 4 - - - - - 32 gU 2 - - - - - 10 bU 5 - - - - - 33 gU 3 - - - - - 11 cU 1 - - - - - 34 gU 4 - - - - - 12 cU 2 - - - - - 35 gU 5 - - - - - 13 cU 3 - - - - - 36 hU 1 - - - - - 14 cU 4 - - - - - 37 hU 2 - - - - - 15 cU 5 - - - - - 38 hU 3 - - - - - 16 dU 1 + + + + + 39 hU 4 - - - - - 17 dU 2 + + + + + 40 hU 5 - - - - - 18 dU 3 - + + + + 41 Rs U1 - + + + + 19 dU 4 + + + + + 42 Rs U2 - + + + + 20 dU 5 + + + + + 43 Rs U3 - + + + + 21 eU 1 - - - - - 44 Rs U4 - + + + + 22 eU 2 - - - - - 45 Rs U5 - + + + + 23 eU 3 - - - - -
Keterangan :   (+) : terjadi Nekrosis (-) : tidak terjadi nekrosis (a: putri malu 10 -2 , b: putri malu 10 -4 ,  c:  putri  malu  10 -5 ,  d:  ubi  jalar10 -2 ,  e:  ubi  jalar  10 -5 ,  f:  tomat  10 -2 ,  g:  sawi  10 -3 ,  h: tembakau 10 -2 , Rs: Ralstonia solanacearum , U: ulangan).

## Uji Daya Hambat
Uji daya hambat dapat diketahui dengan ada tidaknya zona hambat atau zona bening. Zona hambatan terbentuk karena adanya suatu ekskresi yang dihasilkan Pseudomonas sp. dan  diresapkan  ke  dalam  media  yang  efeknya  menghambat  patogen.  Hasil  pengujian menunjukkan tidak jelas ada tidaknya zona hambat, sehingga dianggap tidak terbentuk zona hambat pada medium NA. Hal ini sesuai dengan hasil penelitian Nurcahyanti et al. (2013) bahwa pengujian daya hambat Pseudomonas fluorescens terhadap Ralstonia solanacearum
tidak  menunjukkan  zona  hambat  pada  media  NA,  YPGA,  dan  CPG  tetapi  hanya  dapat menghambat pada media King’s B.
Gambar 5. Hasil pengujian daya hambat isolat B pada media NA

## 4. Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian,  dapat  disimpulkan  bahwa  diperoleh  tujuh  kandidat Pseudomonas sp.  dari  hasil  eksplorasi  yang  termasuk  bakteri  gram  negatif,  negatif hipersensitif,  dan  tidak  terbentuk  zona  hambat  pada  medium  NA  pada  pengujian  daya hambat, sehingga perlu dilakukan pengujian kembali pada medium King’s B.

## 5. Daftar Pustaka
Aeny, T. N. 2006. Pengaruh perlakuan bibit terhadap perkembangan penyakit layu bakteri ( Pseudomonas solanacearum ) pada jahe ( Zingiber officinale ). http://digilib.itb.ac.id/gdl. [diakses: 1 Mei 2022].
Akiew,  E.,  P.R.  Trevorrow  and  P.E.  Tonello,  1993.  Management  of  bacterial  wilt  of tobacco. In: Hartman, G.L. & A.C. Hayward (eds.), Bacterial Wilt. Pp: 270–5. ACIAR Proceedings,  No.  45:  Australian  Centre  for  International  Agricultural  Research, Camera.
Arwiyanto, T., Yuniarsih, F., Martoredjo, T. & Dalmadiyo, G. 2007. Seleksi Pseudomonad fluoresen secara  Langsung  di  Lapangan  untuk  Pengendalian  Penyakit  Lincat  pada Tembakau. Jurnal Hama Penyakit Tumbuhan Tropika, Vol. 8 (2): 62-68. Chandra, T. J & Mani, S. 2011. A study of 2 rapid tests to differentiate Gram positive and Gram negative aerobic bacteria. Journal Medicine Allied Science . Vol. 1 (2): 84-85. Danaatmadja, Y. Siti, S. Tri, J & Cavrina, U.S. 2009. Isolasi Dan Karakterisasi Ralstonia Syzygii Isolation  And  Characterization  Of Ralstonia  Syzygii.  Jurnal Perlindungan Tanaman Indonesia. Vol. 15 (1): 7–12.
Denny, T. P & Hayward, A. C. 2001. Gram negative bacteria . In : Schaad NW, Jones JB, Chun  W,  editor.  Laboratory  Guide  for  Identification  of  Plant  Pathogenic  Bacteria Third Edition. Minnesota : APS Press.
Elphinstone, J. G. 2005. The current bacterial wilt situation: a global overview. In: Allen C,  P.  Prior,  and  A.C.  Hayward.  (eds.).  Bacterial  wilt  disease  and  the  Ralstonia solanacearum species complex . St. Paul Minnesota. APS Press. 9pp.
Gabriel, D.W., Allen, I.C., Schell, M., Denny, T.P., Greenberg, J.T., Duan, Y.P., Cruz, Z. F., Huang, Q., Clifford, J. M., Presting, G., González, E.T., Reddy, J., Elphinstone, J., Swanson, J., Yao, J., Mulholland, V., Liu, L., Farmerie, W., Patnaikuni, M., Balogh, B.,  Norman,  I.D.,  Alvarez,  A.,  Castillo,  J.A.,  Jones,  J.,  Saddler,  G.,  Walunas,  T., Zhukov, A., Mikhailova, N. 2006. Identification of Open Reading Frames Unique  to a Select Agent: Ralstonia solanacearum Race 3 Biovar 2. Molecular Plant-Microbe Interactions , 19 (1): 69-79.
Hartman, G.I., Hong, W.F. & Wang, T.C. 1991. Survey of bacterial wilt on fresh market hybrid tomatoes in Taiwan. Plant Prot.Bull ., 33:197-203.
Hayward, A.  C.  1991.  Biology and epidemiology of bacterial wilt caused by Pseudomonas solanacearum. Annu. Rev. Phytopathol . 29:65-87. Kersten,  J.  T,  H.  Huang  &  C.  Allen.    2001. Ralstonia  solanacearum  Needs  Motility for Invasive  Virulence  on  Tomato .  Department  of  Plant  Pathology  University  of Wisconsin, Madison.
Lwin,  M.  &  Ranamukhaarachchi,  S.L.  2006.  Development  of  Biological  Control  of Ralstonia  solanacearum  Through  Antagonistic  Microbial  Populations.  International Journal of Agriculture & Biology, Vol.8 (5): 657-660.
Naik, P. R., Raman, G., Narayanan, K. B & Saknivel, N. 2008. Assessment of Genetic and Functional  Diversity  of  Phosphate  Solubilizing Fluorescent  Pseudomonads . Biomedical Central Microbiology. Vol. 8 (230): 1-14.
Nurcahyanti,  S.D.,  Arwiyanto,  T.,  Indradewa,  D.,  Widada,  J.  2013.  Isolasi  dan  Seleksi Pseudomonas  Fluorescens  pada  Risosfer  Penyambungan  Tomat. Berkala  Ilmiah Pertanian , Vol. 1(1): 15-18.
Prior,  P.,  Allen,  C.,  &  Elphinstone,  J.  1998. Bacterial  Wilt  Disease:  Molecular  and Ecological Aspects . Springer Verlag, Berlin. Semangun,  H. 2004. Penyakit-penyakit Tanaman Hortikultura di Indonesia . UGM Press, Yogyakarta.
Semangun, H. 2007. Penyakit-Penyakit Tanaman Hortikultura Di Indonesia . Gajah Mada University Press, Yogyakarta.
Suryadi,  Y.  2009.  Efektivitas Pseudomonas  fluorescens Terhadap  Penyakit  Layu  Bakteri ( Ralstonia  solanacearum )  Pada  Tanaman  Kacang  Tanah. Jurnal  Hama  Penyakit Tanaman Tropika . Vol. 9 (2): 174-180.
Suyono,  Y  &  Farid,  S.  2011.  Identifikasi  dan  Karakterisasi  Bakteri Pseudomonas pada Tanah  Yang  Terindikasi  Terkontaminasi Logam. Jurnal  Biopropal  Industri .  Vol.  2 (1): 8-13.
Yu,  Q.,  Alvarez,  A.M.,  Moore,  P.H.,  Zee,  F.  &  Kim  et  al.  2003.  Molecular  diversity  of Ralstonia  solanacearum isolated  from  ginger  in  Hawaii. Phytopathology ,  93:1124- 1130.
Yulianti,  T.  2009.  Pengelolaan  Patogen  Tular  Tanah  Untuk  Mengembalikan  Kejayaan Tembakau Temanggung di Kabupaten Temanggung. Jurnal Perspektif . Vol. 8 (1): I- 16.
Zuluaga  Cruz,  A.  P.,  Puigvert,  M.  &  Valls,  M.  2013.  Novel  plant  inputs  influencing Ralstonia solanacearum during infection. Frontiers in microbiology , 4, 349. Zuraidah.  2013.  Pengujian  Beberapa  Bakteri  Penghambat  Pertumbuhan Xanthomonas oryzae Pv. oryzae pada Tanaman Padi. Jurnal Ilmiah Pendidikan Biologi. Vol. 5 (1): 18-24.