## ANTIOXIDANT ACTIVITY TEST OF ETHANOL EXTRACTS OF SPONGE Ianthella basta FROM TUMBAK VILLAGE WATERS PUSOMAEN DISTRICT SOUTHEAST REGENCY

## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARI EKSTRAK ETANOL SPONS Ianthella basta DARI DESA TUMBAK KECAMATAN PUSOMAEN KABUPATEN MINAHASA TENGGARA
Nurhati Anton 1) , Adithya Yudistira 1) , Jainer Pasca Siampa 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT MANADO, 95115 *nurhatianton@gmail.com

## ABSTRACT
Sponges  are  a  component  of  coral  reef  biota  that  has  bioactive  compounds  with  a  greater  percentage  of activity compared to compounds produced by terrestrial plants. This study aims to determine the presence of antioxidant  activity  in  the  ethanol  extracts  of  sponge  Ianthella  basta  from  the  waters  of  Tumbak  Village. Ianthella  basta  sponge  was  extracted  using  maceration  method  with  96%  ethanol  solvent.  Antioxidant activity testing was carried out using the DPPH method with a concentration of 100 µg / mL, 75 μg / mL, 50 μg / mL, and 25 μg / mL and Vitamin C p.a as positive control. Each sample was made three repetitions of the  test.  Testing  using  a  UV-Vis  spectrophotometer.  The  results  showed  that  the  ethanol  extract  of  the Ianthella basta sponge had antioxidant activity with a percentage of 48.73%  at a concentration of 100 µg / mL.
Keywords : Ianthella basta sponge, Antioxidants, Extraction, DPPH

## ABSTRAK
Spons merupakan salah satu komponen biota penyusun terumbu karang yang mempunyai senyawa bioaktif dengan  persentase  keaktifan  lebih  besar  dibandingkan  dengan  senyawa-senyawa  yang  dihasilkan  oleh tumbuhan  darat.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  adanya  aktivitas  antioksidan  di  dalam  ekstrak etanol  Spons Ianthella  basta dari  perairan  Desa  Tumbak.  Spons Ianthella  basta diekstraksi  menggunakan metode  maserasi  dengan  pelarut  etanol  96%.  Pengujian  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan menggunakan  metode  DPPH  dengan  konsentrasi  100  µg/mL,  75  µg/mL,  50  µg/mL,  dan  25  µg/mL  dan Vitamin  C  p.a  sebagai  kontrol  positif.  Masing-masing  sampel  dibuat  tiga  kali  pengulangan  uji.  Pengujian menggunakan  alat  spektrofotometer  UV-Vis.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ektrak  etanol  Spons Ianthella  basta memiliki  aktivitas  antioksidan  dengan  persentase  sebesar  48,73%  pada  konsentrasi  100 µg/mL.
Kata Kunci: Spons Ianthella basta , Antioksidan, Ekstraksi, DPPH

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  negara  kepulauan yang besar di dunia dengan wilayah laut sangat luas yang  memiliki  sumber  daya  alam  hayati  laut  yang besar.  Seperti  halnya  daratan,  lautan  dihuni  juga oleh biota, seperti tumbuhan, hewan, dan mikroorganisme hidup. Biota laut menghuni hampir semua  bagian  laut,  mulai  dari  pantai,  permukaan laut,  sampai  dasar  laut  terjauh  (Romimohtarto  dan Juwana 2009). Indonesia telah dikenal sebagai pusat keberagaman hayati ( Center of Biodiversity ) karena memiliki perairan yang sangat kaya akan keanekaragaman biota laut diantaranya adalah spons (Wallace et al ., 2000). Menurut Collin dan Arneson (1995)  jumlah  dan  penyebaran  spons  pun  sangat beragam,  terdapat  lebih  dari  1000  spesies  spons hidup tersebar di wilayah perairan Indonesia.
Spons  merupakan  salah  satu  komponen biota  penyusun  terumbu  karang  yang  mempunyai senyawa bioaktif dengan presentase keaktifan lebih besar  dibandingkan  dengan  senyawa  –  senyawa yang  dihasilkan  oleh  tumbuhan  darat,  akan  tetapi belum  banyak  dimanfaatkan  (Muniarsih  dan Rachmaniar  1999).  Untuk  menjaga  kelangsungan hidup  dan  pertahanan  dirinya,  spons  menghasilkan metabolit  primer  dan  metabolit  sekunder.  Berbagai penelitian  yang  telah  dilakukan  terhadap  spons menghasilkan  senyawa  –  senyawa  baru  dengan struktur yang unik dan memiliki aktivitas farmakologis.  Senyawa  bioaktif    yang  dihasilkan dari  ekstrak  spons  bermanfaat  sebagai  antibakteri, antitumor,  antivirus,  antifouling,  antioksidan,  dan menghambat aktivitas enzim (Soediro, 1999).
Pergeseran  pola  hidup  masyarakat  dari  pola hidup  tradisional  menjadi  pola  hidup  yang  praktis dan  instan,  khususnya  pada  pemilihan  makanan memiliki  dampak  negatif  bagi  kesehatan.  Makanan cepat saji dengan pemanasan tinggi dan pembakaran merupakan  pilihan  dominan  yang  dapat  memicu terbentuknya  senyawa  radikal  bebas  (Poumorad et al. ,  2006).  Radikal  bebas  yang  berlebih  dapat menyerang  senyawa  –  senyawa  terutama  yang rentan  seperti  lipid  dan  protein  dan  berimplikasi pada  timbulnya  berbagai  penyakit  degeneratif (Amic et al ., 2003).
Radikal  bebas  merupakan  atom  atau molekul  yang  mengandung  satu  atau  lebih  elektron yang  tidak  berpasangan  pada  orbital  terluarnya. Senyawa  radikal  bebas  timbul  akibat  berbagai proses  kimia  kompleks  dalam  tubuh,  berupa  hasil
samping  dari  proses  oksidasi  atau  pembakaran  sel yang berlangsung pada waktu bernafas, metabolisme  sel,  olahraga  berlebihan,  peradangan atau ketika tubuh terpapar polusi lingkungan seperti asap  kendaraan  bermotor,  asap  rokok,  bahan pencemar,  dan  radiasi  matahari  atau  radiasi  kosmis (Fessenden dan Fessenden 1986).
Antioksidan atau senyawa penangkal radikal bebas  merupakan  zat  yang  dapat  menetralkan radikal  bebas,  atau  suatu  bahan  yang  berfungsi mencegah  sistem  biologi  tubuh  dari  efek  yang merugikan  yang  timbul  dari  proses  ataupun  reaksi yang  menyebabkan  oksidasi  yang  berlebihan. Berbagai bukti ilmiah menunjukkan bahwa senyawa antioksidan  mengurangi  resiko  terhadap  penyakit kronis  seperti  kanker  dan  penyakit  jantung  koroner (Prakash et  al .,  2001).  Sebagai  salah  satu  upaya untuk  mengoptimalkan  pemanfaatan  biota  laut Indonesia  untuk  pencarian  senyawa  bioaktif  baru, salah  satunya  adalah  spons.  Sehingga  mendorong peneliti untuk melakukan penelitian untuk membuktikan bahwa spons Ianthella basta memiliki kandungan  senyawa  bioaktif  yang  bermanfaat sebagai antioksidan.

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Pengambilan dan preparasi sampel dilakukan  di  Perairan  Desa  Tumbak,  Kecamatan Pusomaen, Kabupaten Minahasa Tenggara.
Sedangkan  untuk  pengamatan  dan  analisis  data penelitian  ini  dilakukan  di  Laboratorium  Farmasi Lanjut, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,  Universitas  Sam  Ratulangi  pada  bulan Oktober – Desember 2019.

## Bentuk Penelitian
Bentuk  penelitian  ini  yaitu  eksperimen laboratorium dengan rancangan penelitian dilakukan  melalui  tahap  persiapan  sampel  Spons Ianthella  basta dan  diekstraksi  dengan  metode maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  kemudian dilakukan  uji  aktivitas  antioksidan  terhadap  DPPH ( 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl ).

## Alat dan Bahan Alat
Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini yaitu scuba  diving ,  kamera,  gunting,  pisau,  wadah botol air kemasan 600 mL, cawan porselin, ziplock ,
sarung tangan, gelas ukur, erlenmeyer, beaker glass , vortex (Benchmark),  corong  kaca,  mikro  pipet, timbangan  digital  (AE  ADAM),  spatula,  oven, spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu UV-1800).
Bahan
Bahan-bahan yang digunakan pada penelitian  ini  yaitu  Spons Ianthella  basta ,  etanol 96%,  kertas  saring, tissue , aluminium  foil ,  kertas label,  Vitamin  C  p.a  dan  DPPH  ( 1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl ).

## Prosedur Penelitian Pengambilan Sampel dan Preparasi Sampel
Sampel  Spons Ianthella  basta diperoleh dari  perairan  Desa Tumbak,  Kecamatan  Pusomaen, Kabupaten  Minahasa  Tenggara.  Sampel  diambil dengan  menggunakan  alat  bantu  ( scuba  diving , ziplock dan  pisau),  kemudian  dimasukkan  dalam ziplock dan  diberikan  label.  Sampel  yang  telah didapat  langsung  dibersihkan  dari  pengotor  dengan menggunakan air laut, lalu dipotong kecil-kecil dan langsung dimasukkan ke dalam wadah sampel yang berisi pelarut etanol 96%. Wadah sampel dimasukkan ke dalam kotak dingin ( cool box ) yang berisi  es  batu  dan  tidak  terkena  matahari  secara langsung.  Di  Laboratorium  Farmasi  Lanjut  sampel tersebut diekstraksi menggunakan metode maserasi.

## Ekstraksi dengan Metode Maserasi
Sampel  direndam  dengan  menggunakan  pelarut etanol  96%.  Metode  ekstraksi  dilakukan  dengan cara  merendam  sampel  dengan  larutan  penyari selama  3  kali  24  jam  pada  temperatur  kamar  yang dilindungi  dari  cahaya  dan  sesekali  dikocok. Kemudian  hasil  ekstraksi  disaring  dan  diambil filtratnya  dan  residu  diremaserasi  sebanyak  2  kali. Setelah proses ekstraksi menghasilkan 3 filtrat yang kemudian  dicampur  menjadi  satu  dan  residu dibuang.  Filtrat  kemudian  dipekatkan  dengan menggunakan  oven  pada  suhu  40 o C  sampai  etanol menguap.

## Pembuatan Larutan Stok
Sebanyak  100  mg  ekstrak  etanol  Spons Ianthella  basta dilarutkan  di  dalam  etanol  96%  ad. 100  mL  (konsentrasi  1000  ppm).  Dengan  masing- masing  konsentrasi  100  µg/mL,  75  µg/mL,  50 µg/mL, dan 25 µg/mL dihitung dengan menggunakan rumus pengenceran, yaitu :
M 1 •V 1 = M 2 •V 2
Dari  masing-masing  hasil  yang  didapatkan dari  hasil  V 1 dipipet  dan  ditambahkan  etanol  96% hingga  mencapai  tanda  batas  (10  mL),  kemudian dipindahkan  ke  dalam  tabung  reaksi  dan  ditutup dengan menggunakan aluminium foil untuk digunakan pada perlakuan selanjutnya.

## Penentuan Panjang Gelombang (λ) Maksimum
Larutan  DPPH  sebanyak  1mL  dipipet kemudian  dicukupkan  volumenya  sampai  5  mL dengan  etanol  96%,  dihomogenkan  kemudian dibiarkan  selama  30  menit.  Selanjutnya,  diukur serapannya  pada  panjang  gelombang  400-800  nm menggunakan spektrofotometer UV-Vis dan diperoleh panjang gelombang  maksimum  yaitu 517 nm.

## Pembuatan Larutan DPPH
Penentuan aktivitas penangkal radikal bebas DPPH  (Burda  dan  Olezek  2001).  Sebanyak  4  mg DPPH  ditimbang  dan  dilarutkan  dalam  etanol  96% sebanyak  100  mL,  dan  buat  larutan  stok  DPPH. Selanjutnya larutan stok DPPH dilakukan pengujian kontrol, diuji pada spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang 517 nm.

## Pembuatan Larutan Vitamin C p.a
Vitamin  C  p.a  ditimbang  sebanyak  10  mg. Kemudian, vitamin C p.a dilarutkan ke dalam etanol 96%  sebanyak  10  mL,  buat  larutan  stok  dengan masing-masing  konsentrasi,  yaitu  konsentrasi  100 µg/mL,  75  µg/mL,  50  µg/mL,  dan  25  µg/mL dengan ditambahkan masing-masing larutan dengan etanol  96%  mencapai  tanda  batas  (10  mL),  dengan pengulangan  sebanyak  3  kali  pada  masing-masing konsentrasi.  Sampel  vitamin  C  p.a  diuji  pada spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang 517 nm.
Pengujian Larutan Kontrol DPPH dan Aktivitas Antioksidan dengan DPPH
Larutan kontrol DPPH diuji pada spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang  517  nm  sebagai  absorbansi  kontrol dalam  pengujian  ini.  Setelah  pengujian  kontrol DPPH,  dilanjutkan  pada  pengujian  aktivitas antioksidan.  Pada  pengujian  ini,  digunakan  larutan
stok  yang  telah  dibuat  pada  perlakuan  sebelumnya, yaitu  larutan  ekstrak  etanol  Spons Ianthella  basta . Diambil  sebanyak  2mL  larutan  sampel  dari  setiap konsentrasi 100 µg/mL, 75 µg/L, 50 µg/mL, dan 25 µg/mL  ditambahkan  masing-masing  2  mL  larutan DPPH  untuk  setiap  konsentrasinya  dan  divortex selama  2  menit.  Sampel  dibuat  sebanyak  3  kali pengulangan untuk setiap konsentrasinya.
Berubahnya  warna  ungu  menjadi  warna  kuning menunjukkan  efisiensi  penangkal  radikal  bebas. Diukur  absorbansi  pada  spektrofotometer  UV-Vis dengan  panjang  gelombang  517  nm  setelah diinkubasi  selama  30  menit.  Kemudian  diamati perbandingannya  dengan  vitamin  C  p.a  sebagai standar.  Setelah  absorbansi  didapat,  aktivitas penangkapan  radikal  bebas  (persen  inhibisi) dihitung  sebagai  persentase  berkurangnya  warna DPPH dengan menggunakan rumus :
% inhibisi = 1- 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 x 100%

## Analisis Data
Aktivitas  antioksidan  diukur  dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis kemudian  data  yang  diperoleh  dihitung  nilai persen inhibisi dan disajikan dalam bentuk tabel.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Penelitian
Dari hasil pengukuran dengan
menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada penelitian  ini  diperoleh  absorbansi  yang  kemudian digunakan  untuk  perhitungan  nilai  persen  inhibisi atau  persen  peredaman  senyawa  antioksidan terhadap DPPH. Data persen inhibisi ekstrak  etanol Spons Ianthella  basta dan  Vitamin  C  p.a  sebagai pembanding  disajikan  pada  tabel  1  dibawah  ini  :
Tabel 1. Hasil Pengujian Perbandingan antara Ekstrak Etanol Spons Ianthella basta dan Vitamin C p.a
Pengulangan Konsentrasi 25 µg/mL  50 µg/mL  75 µg/mL  100 µg/mL I Ekstrak 47,60% 47,60% 49,90% 50,20% Vit C 91,50% 91,70% 92,80% 92,50% II Ekstrak 40,70% 41,30% 44,30% 50,50% Vit C 87,30% 91,00% 91,50% 92,50% III Ekstrak 40,30% 42,50% 42,50% 45,50% Vit C 86,20% 88,20% 88,50% 91,60% Rata-rata Ekstrak 42,87% 43,80% 45,57% 48,73% Vit C 89,90% 90,30% 90,93% 92,20%

## Pembahasan
Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah  Spons Ianthella  basta yang  diperoleh  dari perairan  Desa  Tumbak,  Kecamatan  Pusomaen, Kabupaten  Minahasa  Tenggara.  Sampel  Spons Ianthella  basta dipotong  kecil-kecil  dengan  tujuan untuk  memperluas  ukuran  permukaan  sampel karena  semakin  luas  permukaan  sampel  maka interaksi  antara  sampel  dan  pelarut  semakin  besar sehingga proses ekstraksi berjalan optimal dan lebih banyak  senyawa  aktif  yang  tertarik  dari  sampel  ke dalam  pelarut  (Ncube, et  al., 2008).  Sampel
kemudian diekstraksi dengan menggunakan metode maserari. Metode maserasi dipilih karena cara
pengerjaan  dan  peralatannya  yang  sederhana,  tidak dilakukan  pemanasan  sehingga  dapat  mencegah penguraian zat aktif yang terkandung dalam sampel (Harbone, 1996).
Pada  penelitian  ini,  maserasi  dilakukan dengan  menggunakan  pelarut  etanol  96%.  Pelarut ini  dipilih  karena  selektif,  tidak  toksik,  ekonomis dan kemampuan penyariannya yang tinggi sehingga dapat  menyari  senyawa  baik  yang  bersifat  non- polar,  semi  polar  maupun  bersifat  polar.    Hasil
ekstrak Spons Ianthella basta selanjutnya diuapkan menggunakan  oven  dengan  suhu  40°C,  penguapan ekstrak  ini  dimaksudkan  agar  air  dan  pelarut  yang tersisa dalam ekstrak akan menguap.
Uji  aktivitas  antioksidan  suatu  tanaman maupun  biota  laut  sangat  penting  dilakukan  untuk mengetahui  adanya  aktivitas  pengikatan  terhadap radikal bebas. Pada beberapa penelitian sebelumnya,  diketahui  Spons Ianthella  basta mengandung  senyawa  bioaktif    sebagai  aktivitas antikanker  dan  antimikroba  (Katili et  al., 2020).
Sehingga  memungkinkan  untuk  Spons Ianthella basta juga  dapat  mengandung  senyawa  bioaktif sebagai aktivitas antioksidan yang diproduksi ketika mempertahankan  diri  dari  lingkungan  maupun  dari serangan organisme lain.
Metode  yang  digunakan  dalam  pengujian aktivitas antioksidan adalah metode serapan  radikal 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) karena merupakan  metode  yang  sederhana,  mudah,  cepat, dan  menggunakan  sampel  dalam  jumlah  yang sedikit  dengan  waktu  yang  singkat  (Hanani, et  al. , 2005). Mekanisme kerja metode DPPH yaitu gugus kromofor dan auksokrom pada radikal bebas DPPH memberikan  absorbansi  maksimum  pada  panjang gelombang  517  nm  sehingga  menimbulkan  warna ungu.  Warna  DPPH  akan  berubah  dari  ungu menjadi  kuning  seiring  dengan  penambahan antioksidan  yaitu  saat  elektron  tunggal  pada  DPPH berpasangan  dengan  hidrogen  dari  antioksidan. Hasil  dekolorisasi  oleh  antioksidan  setara  dengan jumlah  elektron  yang  tertangkap  (Dehpour, et  al .,
2009).
Sebelum  dilakukannya  pengujian  untuk tahap  selanjutnya,  terlebih  dahulu  menentukan panjang  gelombang  (λ)  maksimum.  Penentuan panjang  gelombang  (λ)  maksimum  larutan  DPPH dilakukan  dengan  mengukur  serapan  absorbansi larutan    pada  panjang  gelombang  400-800  nm dengan  mneggunakan  spektrofotometer  UV-Vis. Hasil yang diperoleh dalam penelitian ini yaitu 517 nm  untuk  panjang  gelombang  maksimum  dengan absorbansi  kontrol  yaitu  0,666.  Radikal  bebas DPPH  stabil  dengan  absorbansi  maksimum  pada panjang  gelombang  517  nm  dan  dapat  direduksi oleh senyawa antioksidan.
Pengujian aktivitas antioksidan dalam penelitian  ini  dilakukan  dengan  perbandingan  1:1 dimana 2 mL larutan DPPH dicampurkan dengan 2 mL  larutan  sampel  (ekstrak  etanol  Spons Ianthella
basta atau  vitamin  C  p.a)  pada  tiap  konsentrasi berbeda-beda.  Konsentrasi  ekstrak  etanol  Spons Ianthella  basta yang  digunakan  yaitu  100  µg/mL, 75  µg/mL,  50  µg/mL,  dan  25  µg/mL.  Campuran antara  larutan  sampel  dengan  larutan  DPPH dihomogenkan dengan cara divortex selama 2 menit dan  diinkubasi  selama  30  menit  pada  tempat  gelap dengan  suhu  37°C.  Setelah  sampel  diinkubasi, kemudian masing-masing ekstrak dilakukan pengukuran absorbansi dengan menggunakan spektrofotometer UV –  Vis  pada  panjang gelombang 517 nm. Pada tiap konsentrasi dilakukan sebanyak 3 kali pengulangan.
Pada  penelitian  ini,  pembanding  yang digunakan  sebagai  kontrol positif  adalah  vitamin  C p.a.  Vitamin  C  berperan  sebagai  antioksidan  dan penangkal  radikal  bebas.  Vitamin  C  memiliki aktivitas  antioksidan  yang  tinggi  karena  vitamin  C memiliki  2  gugus  hidroksil  yang  mengakibatkan lebih mudah dalam pendonoran hidrogen. Gugus ini terletak pada atom C 2 dan C 3 (Blois, 2005).
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  diperoleh pada  Tabel  1  menunjukkan  bahwa  nilai  persen inhibisi  pada  ekstrak  etanol  Spons Ianthella  basta memiliki  aktivitas  antioksidan  penangkal  radikal bebas  dan  mengalami  peningkatan  pada  tiap konsentrasinya  yaitu  konsentrasi  25  µg/mL,  50 µg/mL,  75  µg/mL,  dan  100  µg/mL.  Nilai  persen inhibisi  dari  ekstrak  etanol  Spons Ianthella  basta dapat  dilihat  pada  Tabel  1  dengan  hasil  rata-rata dari  konsentrasi  25  µg/mL  sampai  100  µg/mL secara berturut-turut yaitu 42,87 %, 43,80 %, 45,57 %,  dan  48,73  %.  Penigkatan  persen  inhibisi  pada ekstrak  menandakan  bahwa  konsentrasi  ekstrak yang  ditambahkan  mempengaruhi  kemampuan ekstrak dalam meredam radikal bebas.
Dalam  penelitian  ini,  uji  DPPH  dilakukan dengan  mengamati  penurunan  absorbansi  pada panjang gelombang 517 nm menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Hasil penelitian
menunjukkan bahwa dengan bertambahnya konsentrasi  ekstrak  maka  absorbansi  sampel  akan menurun  dan  tingkat  inhibisi  akan  naik.  Penurunan nilai absorbansi sampel karena elektron pada DPPH menjadi  berpasangan  dengan  elektron  sampel  yang mengakibatkan  intensitas  warna  dari  DPPH menurun yaitu dari warna ungu pekat menjadi kunig pucat.  Kondisi  ini  sesuai  dengan  pernyataan  Green (2004)  bahwa  nilai  tingkat  inhibisi  meningkat seiring meningkatnya konsentrasi sampel
dikarenakan  semakin  banyak  senyawa  antioksidan pada sampel yang dapat menangkal radikal bebas.
Hasil  pengujian  perbandingan  aktivitas antioksidan  ekstrak  etanol  Spons Ianthella  basta dan  vitamin  C  (Tabel  1)  menukjukkan  bahwa aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  spons Ianthella basta lebih rendah dibandingkan dengan vitamin C.
Rendahnya  aktivitas  antioksidan  ini  kemungkinan disebabkan oleh berbagai faktor, diantaranya karena metode  ekstraksi  yang  digunakan  kemungkinan tidak  cukup  menarik  senyawa  yang  bersifat antioksidan dalam Spons Ianthella basta . Selain itu, vitamin  C  merupakan  senyawa  murni  sedangkan ekstrak  etanol  Spons Ianthella  basta belum  murni karena merupakan senyawa campuran dan kandungan  senyawa  yang  memiliki  aktivitas antioksidan belum diketahui, sehingga memungkinkan  senyawa  lain  yang  tidak  bersifat antioksidan  mempengaruhi  aktivitas  antioksidan dari ekstrak etanol Spons Ianthella basta itu sendiri.

## KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan,  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol Spons Ianthella  basta dari  perairan  Desa  Tumbak Kecamatan Pusomaen, Kabupaten Minahasa
Tenggara,  memiliki  aktivitas  antioksidan  disetiap konsentrasinya  dan  aktivitas  antioksidan  tertinggi terdapat  pada  konsentrasi  100  µg/mL  dengan  nilai persen inhibisi rata-rata 48,73 %.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut untuk  mengetahui  senyawa  aktif  yang  terkandung dalam Spons Ianthella basta dan pengujian aktivitas antioksidan  dengan  menggunakan  metode  lain kemudian membandingkan hasilnya dengan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Amic, D., D.A. Dusanka., D. Beslo., & N.Trinasjtic. 2003. Structure-Related Scavenging Activity Relationship of Flavonoids.
Croatia Chemical Acta . 76: 55-61.
Blois, M.S. 2005. Antioxidant Determination By the
Use  of  Stable  Free  Radical. Nature . 181:
1191-1200.
Collin,  P.L  &  C.  Arneson.  1995. Tropical  Pacific Invertebrates .  Coral  Reef  Press.  Beverly Hills, California.
Dephour, A.A., M.A. Ebrahimzadeh., N.S. Fazel & N.S. Mohammad. 2009. Antioxidant Activity  of  Methanol  Extract  of  Ferula Assafoetida and Its Essential Oil
Composition. Grasas  Aceites . 60(4): 405- 412.
Fessenden,  R.J  &  J.  Fessenden.  1986. Kimia Organik.  Jilid  I.  Edisi  Ketiga .    Erlangga, Jakarta.
Green,  R.J.  2004. Antioxidant  Activity  of  Peanut Plant Tissues . North Caroline State University  Departement  of  Food  Science, Raleigh.
Hanani  E.,  B.  Mun’im  &  R.  Sekarini.  2005.
Identifikasi  Senyawa  Antioksidan  dalam spons Callispongia  sp. dari  Kepulauan Seribu. Jurnal  Ilmu  Kefarmasian . 2(3)  : 127-133.
Harbone,  B.J.  1996. Metode  Fitokimia:  Penuntun Cara  Modern  Menganalisis  Tumbuhan,
Teribtan Kedua . Institut Teknologi Bandung, Bandung.
Katili,  S.S.,  D.S.  Wewengkang  dan  H.  Rotinsulu. 2020.  Uji  Aktivitas  Antimikroba  Ekstrak Etanol  Organisme  Laut  Spons Ianthella basta terhadap  Beberapa  Mikroba  Patogen. Pharmacon  Jurnal  Ilmiah  Farmasi. 9(1) : 100-107.
Muniarsih,  T  &  R.  Rachmaniar.  1999.  Isolasi
Substansi  Bioaktif  Antimikroba  dari  Spons Asal Pulau Pari Kepulauan Seribu . Prosidings  Seminar  Bioteknologi  Kelautan Indonesia  I  1998.  Jakarta  14-15  Oktober 1998: 151-158. Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia, Jakarta.
Ncube,  N.S.,  A.J.  Afolayan  &  A.I.  Okoh.  2008. Assesement  Techniques  of  Antimicrobial Properties  of  Natural  Compounds  of  Plant Origin: Current Methods and Future Trends. Africa Journal of Biotechnology. 7(12) : 30- 32.
Poumorad, F., S.J. Hosseinimehr & N.
Shahabimajd.  2006.  Antioxidant  Activity Phenol  and  Flavonoid  Contents  of  Some Selected  Iranian  Medicinal  Plants. African Journal of Biotechnology . 11: 1142-1145
Prakash,  A.,  F.  Rigelhof  &  E.  Miller.  2001.
Antioxidant Activity: Medallion Laboratories. Analithycal  Progress . 19(2): 1-4.
Romimohtarto, K & S. Juwana. 2009. Biologi Laut: Ilmu  Pengetahuan  Tentang  Biota  Laut . Djambatan, Jakarta.
Soediro, I.S. 1999. Produk Alam Hayati Bahari dan
Prospek Pemanfaatannya di Bidang Kesehatan  dan  Kosmetik .  Lembaga  Ilmu Pengetahuan Indonesia, Jakarta.
Wallace,  J.M.,  N.C.  Grody  &  Coauthors.  2000.
Reconciling Observations of Global Temperature  Change.  National  Research Council . National
Academy Press, Washington DC.