Copyright © 2020 Jurnal Fitofarmaka Indonesia. This is an open-access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution-ShareAlike 4.0 International License
Potensi Ekstrak Buah Buni (Antidesma bunius (L) Spreng)

## Sebagai Inhibitor Enzim α-Glukosidase
La Hamidu 1* , Partomuan Simanjuntak 2 , Rizna Triana Dewi 3
1 Fakultas Farmasi, Universitas Pancasila, Jakarta Selatan
2 Puslit Bioteknologi, LIPI, Bogor
3 Puslit Kimia, LIPI, Tangerang Selatan
Article info Abstract History
Submission : 21-01-2020
Review : 15-02-2020 Accepted : 22-02-2020
* Email: hamidun30@gmail.com
DOI: 10.33096/jffi.v7i1.598
Keywords: buah buni; antidesma bunius; α-glukosidase; ELISA
Diabetes mellitus is still a global health problem that continues to increase rapidly  and  become  one  of  the  major  metabolic  diseases  throughout  the world.  This  study  aims  to  determine  the  potential  of  Buni  fruit  as  an  α- glucosidase inhibitor. α-glucosidase inhibition test is carried out on a blank solution  (test  solution  without  sample/standard),  acarbose  solution  as  a comparison standard and samples are carried out in accordance with the optimization conditions obtained. The rendemen percent of green and red buni fruit extract yields are 6.35% and 3.09%, respectively. The results of the  identification of secondary  metabolites using TLC  showed that green and  red  buni  fruit  extract  contains  flavonoid,  phenolic  and  alkaloid compounds. The results of the α-glucosidase enzyme inhibition test showed that the red buni fruit extract had the highest activity compared to green buni fruit extract with an IC 50 value of 85.27 ppm.

## I. Pendahuluan
Diabetes  melitus  (DM)  masih  menjadi masalah  kesehatan  global  yang  terus  meningkat pesat (Sunarwidhi, Sudarsono and Nugroho, 2014). Diabetes  melitus  adalah  salah  satu  penyakit metabolik utama diseluruh dunia  (Şendoǧdu et al. , 2006; Zatalia and Sanusi, 2013) dengan estimasi 143 juta  orang  menderita  penyakit  ini.  Jumlah  ini mungkin dua kali lipat pada tahun 2030 (Oyenihi et al. , 2014). Riset Kesehatan Dasar (Riskesdas) pada tahun  2013  (Badan  Penelitian  dan  Pengembangan Kesehatan,  2013)  mengungkapkan  lebih  dari sepertiga  penduduk  Indonesia  (36,6%)  mengalami glukosa darah puasa (GDP) terganggu dan toleransi glukosa terganggu (TGT) (29,9) pada umur ≥15.
Diabetes melitus adalah kelompok penyakit yang  menghasilkan  banyak  etiologi  ganda  dari kerusakan  sekresi  insulin,  kerja  insulin  atau keduanya  (Ayepola,  Brooks  and  Oguntibeju,  no date;  Goldenberg  and  Punthakee,  2013),  dan/atau resistensi  insulin  (Zatalia  and  Sanusi,  2013). Defisiensi pada akhirnya menyebabkan hiperglikemia  kronik  (kadar  glukosa  dalam  darah sangat tinggi) (Zatalia and Sanusi, 2013), gangguan karbohidrat, lemak (lipid), dan metabolism protein (Ayepola,  Brooks  and  Oguntibeju,  no  date; Nugroho,  2006;  Bisht,  Shradha;  Sisodia,  2010; Oyenihi et al. , 2014).
Hasil  penelitian  Samappito  dan  Butkhup (Samappito  and  Butkhup,  2008)  terhadap  varietas Mao  Luang  atau  buah  Buni  ( Antidesma  bunius L.
Spreng)  menunjukkan  bahwa  tanaman  ini  adalah jenis tanaman medis dimana banyak penduduk desa
di  Timur  Laut  Thailand  menggunakan  jus  buah- buahan  matang  untuk  menyembuhkan  masalah kesehatan mereka pada diabetes, disentri, gangguan pencernaan dan sembelit.  Butkhup dan Samappito (Butkhup  and  Samappito,  2011)  juga  melaporkan bahwa buah Buni ( A. bunius ) mengandung beberapa senyawa polifenol dengan sifat antioksidan kuat dan memiliki  kandungan  flavonoid  total  pada  masing- masing  ekstrak n -heksan,  etil  asetat  dan  metanol dengan ekstraksi bertingkat sebesar 10,72%, 7,9%, dan  3,56%  (Hamidu,  Ahmad  and  Najib,  2018). Jumlah senyawa polifenol secara signifikan berubah selama  proses  perkembangan  dan  pematangan. Procyanidin  B2,  procyanidin  B1,  (+)-katekin,  (-)- epikatekin,  rutin  dan tran -resveratrol  sebagai senyawa  polifenol  utama  meningkat,  tetapi  asam fenolik lainnya seperti asam galat, kafeat, dan asam alegat secara signifikan menurun selama perkembangan  dan  pematangan.  Ekstrak  metanol buah A. bunius yang tumbuh di Manipur, India, juga menunjukkan  aktivitas  antioksidan  yang  tinggi, dengan  nilai  rata-rata  IC 50 100,08  µg/mL,  bila dibandingkan  dengan  buah  lainnya  (Butkhup  and Samappito, 2011).
Indonesia sendiri memiliki banyak keanekaragaman  spesies  tumbuhan  yang  salah satunya  adalah  buah  Buni  ( A.  bunius ).  Buah  Buni mudah  ditemukan  di  daerah  Sulawesi  karena merupakan salah satu buah yang biasa dikonsumsi oleh  masyarakat,  sehingga  sangat  memungkinkan untuk diteliti dan dikembangkan sebagai bahan baku obat  antidiabetes  sehingga  perlu  dilakukan
penelitian  tentang  potensi  buah  Buni  sebagai penghambat enzim α-glukosidase.
II. Metode Penelitian

## II.1 Pengambilan dan Pengolahan sampel
Sampel  buah  Buni  ( A.  bunius )  yang digunakan  adalah  buah  buni  yang  berwarna  hijau (muda)  dan  yang  berwarna  merah  (matang)  yang diambil di Kabupaten Enrekang. Sampel kemudian dibersihkan  dari  kotoran  yang  melekat  dengan menggunakan air mengalir lalu dikeringkan dengan cara  diangin-anginkan.  Setelah  kering,  sampel diserbukkan,  kemudian  diekstraksi  dengan  metode maserasi.

## II.2 Ekstraksi Sampel
Serbuk  buah  Buni  hijau  dan  merah ditimbang  masing-masing  450  dan  1150  gram kemudian  dimasukkan  dalam  wadah  maserasi. Maserasi dengan menggunakan etanol 96% selama 24  jam.  Selanjutnya,  remaserasi  residu  dengan pelarut yang sama sebanyak 3 kali dan ekstrak cair yang  diperoleh  dicampur  dengan  ekstrak  cair sebelumnya.  Ekstrak  cair  dikumpulkan  kemudian dipekatkan  dengan rotary  vacuum  evaporator hingga diperoleh ekstrak etanol kental.

## II.3 Identifikasi Senyawa Kimia
Identifikasi  senyawa  kimia  pada  Ekstrak Buah Buni (EBB) menggunakan metode Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT).  Fase  diam  yang digunakan  adalah  silika  gel  60  F254  dan  fase geraknya adalah n -heksan:etil asetat (2:8). Senyawa kimia yang di identifikasi adalah senyawa golongan flavonoid  (AlCl 3 ),  fenolik  (FeCl 3 dan  Folin- Ciocalteu),  alkaloid  (Dragendorf),  dan  saponin (Vanilin asam sulfat).

## II.4 Uji Penghambatan α-glukosidase
Uji penghambatan α-glukosidase dilakukan terhadap  larutan  blanko  (larutan  uji  tanpa sampel/standar),  larutan  akarbose  (Glucobay ® ) sebagai  pembanding,  dan  sampel  yang  dilakukan sesuai  dengan  kondisi  optimasi  yang  diperoleh. Setiap larutan uji memiliki larutan kontrol masing- masing,  yaitu  larutan  uji  dengan  penambahan natrium karbonat terlebih dahulu.
Standar pembanding dan sampel ditimbang dan dilarutkan dengan dapar fosfat pH 6,8. Sampel
yang  tidak  larut  dengan  dapar  fosfat  dilarutkan terlebih  dahulu  dengan  DMSO  maksimal  10%. Kemudian larutan standar dan sampel diencerkan ke dalam beberapa konsentrasi.
Sebanyak  30  µL  larutan  standard  dan sampel masing-masing ditambahkan 17 µL substrat p NPG 5 mM. Kemudian larutan diinkubasi selama 5 menit  pada  suhu  37 o C  dan  ditambahkan  17  µL larutan  α-glukosidase  0,15  Unit/mL.  Larutan diinkubasi kembali pada suhu 37 o C selama 15 menit.
Setelah itu, ditambahkan 100 mL natrium karbonat 267  mM.  Larutan  diukur  absorbansinya  dengan microplate reader pada 𝜆 405 nm.
Prosedur  yang  sama  dilakukan  untuk  uji kontrol, tetapi terdapat perbedaan pada saat setelah inkubasi  pertama,  yaitu  100  µL  natrium  karbonat 267  mM  ditambahkan  terlebih  dahulu  dan  17  µL larutan  α-glukosidase  0,15  Unit/mL  ditambahkan setelah  inkubasi  kedua.  Kemudian  larutan  diukur absorbansinya dengan microplate reader pada 𝜆 405 nm.

## III. Hasil Dan Pembahasan
Pada penelitian ini menggunakan tumbuhan  buni  ( A.  bunius )  yang  diambil  di kabupaten  Enrekang,  Sulawesi  Selatan.  Simplisia yang  digunakan  berupa  buah  yang  berwarna  hijau dan  merah  dengan  berat  masing-masing  450  dan 1150 g.
Metode  ekstraksi  yang  digunakan  pada penelitian ini adalah maserasi dengan menggunakan pelarut  etanol  96%.  Maserasi  merupakan  metode ekstraksi  yang  tidak  menggunakan  pemanasan dalam  prosesnya,  sehingga  lebih  aman  dalam menarik  senyawa  yang  stabil  dan  tidak  stabil terhadap  pemanasan  pada  suhu  tinggi.  Senyawa yang ingin diisolasi dalam penelitian ini adalah yang dapat  menghambat  enzim α-glukosidase seperti terpenoid, fenolik (Van Quan et al. , 2019), alkaloid, quinin, flavonoid, fenol, dan fenilpropanoid (Yin et al. , 2014), sehingga penggunaan pelarut etanol 96% sangat  efektif  dalam  menarik  senyawa-senyawa tersebut.  Metode  penguapan  menggunakan  alat rotavapor  dengan  suhu  40 o C  dan  evaporasi sederhana.  Ekstrak  yang  diperoleh  dan  persen rendemen masing-masing ekstrak ditampilkan pada Tabel 1.
Tabel 1. Persen Rendamen Ekstrak Buah Buni (EBB)
No Buah Buni Berat Serbuk (g) Berat Ekstrak (g)  Rendemen Ekstrak (%) 1 Hijau 450 28,59 6,35 2 Merah 1150 35,48 3,09
Berdasarkan Tabel 1, EBB hijau memiliki persen rendemen ekstrak paling tinggi diikuti EBB merah. Hal ini menunjukkan bahwa buah buni yang berwarna  hijau  memiliki  kandungan  metabolit sekunder yang paling tinggi dibandingankan dengan buah buni yang masih berwarna merah.
EBB selanjutnya di identfikasi kandungan senyawa metabolit sekundernya secara kromatografi lapis tipis dengan menggunakan fase gerak n -heksan : etil asetat (2:8) dan fase diam silika gel F 254 . Hasil diperoleh  menunjukkan  bahwa  EBB  hijau  dan merah  memiliki  kandungan  kimia  yang  sama,
diantaranya  adalah  senyawa  golongan  flavonoid, fenolik  dan  alkaloid.  Hasil  ini  sesuai  dengan penelitian  sebelumnya  yang  menyebutkan  bahwa buah  buni  memiliki  kandungan  senyawa  polifenol
dan  antioksidan  kuat  seperti  senyawa  flavonoid (Butkhup  and  Samappito,  2011;  Hamidu,  Ahmad and  Najib,  2018).  Hasil  identifikasi  senyawa  yang terdapat pada EBB dapat dilihat pada Tabel 2.

## Tabel 2. Identifikasi senyawa EBB
No  Buah Buni Flavonoid Fenolik Alkaloid Saponin 1 Hijau + + + - 2 Merah + + + -
Keterangan: (+) = positif; (-) = negatif
Ekstrak  buah  buni  selanjutnya  di  uji aktivitas  penghambatannya  terhadap  enzim α- glukosidase . Pengujian dilakukan dengan mengukur absorbansi enzim α-glukosidase dengan menggunakan ELISA ,  kemudian  dihitung  IC 50 dari masing-masing  ekstrak.  Alat ELISA dipilih  karena volume  larutan  yang  digunakan  lebih  sedikit  dan efisien.  Selain  itu,  beberapa  sampel  dapat  diukur bersamaan  dalam  satu  kali  pengukuran,  sehingga waktu dan volume larutan lebih sedikit.
Dalam  pengujian,  pH  optimum  yang digunakan  untuk  analisis  enzim  adalah  pH  6,8, sedangkan suhu optimum untuk enzim adalah 37 o C (mauldina). Larutan uji terdiri dari beberapa reagen seperti DMSO, dapar fosfat, subsrat p-nitrofenil-α- D-Glukopiranosid  ( p NPG),  enzim α-glukosidase , Na 2 CO 3 . Substrat pNPG ketika direaksikan dengan enzim akan menghasilkan p -nitrofenol (Gambar 1) yang berwarna kuning dalam larutan alkali (Wilson and Walker, 2010).
Gambar 1. Reaksi enzimatis α-glukosidase dan p -nitrofenol-α-D-glukopiranosida (Qurrat-ul-Ain et al. , 2015)
Aktivitas  enzim  diukur  berdasarkan  hasil pengukuran  absorbansi  dari p -nitrofenol.  Na 2 CO 3 berperan  untuk  menghentikan  reaksi  enzim,  selain itu  Na 2 CO 3 mampu  meningkatkan  pH  larutan  uji hingga  pH  12,  sehingga  enzim  akan  terdenaturasi pada pH basa tersebut.
Tabel 3. Nilai IC 50 ekstrak buah buni
No Larutan Uji IC 50 (ppm) 1 EBB Hijau 91,59 2 EBB Merah 85,27
Hasil  pengujian  aktivitas  penghambatan enzim α-glukosidase dari  ekstrak  buah  buni  dapat dilihat pada Tabel 3. Hasil yang diperoleh, ekstrak yang  paling  aktif  adalah  EBB  merah  dengan  nilai IC 50 sebesar 85,27 ppm. Nilai IC 50 dari EBB hijau, tidak  memiliki  perbedaan  yang  signifikan.  Hasil pengujian  penghambatan  enzim α-glukosidase menunjukkan bahwa EBB memiliki potensi sebagai inhibitor α-glukosidase . Aktivitas tersebut kemungkinan  di  sebabkan  karena  kandungan senyawa  polifenol  dan  antioksidan  kuat  yang terdapat pada buah buni seperti senyawa flavonoid.
Reddy mengungkapkan bahwa, efek menguntungkan dari flavonoid telah dipelajai dalam kaitannya dengan DM, baik melalui penghambatan enzim α-glukosidase usus atau melalui kemampuannya  untuk  mencegah  penyerapan glukosa  dan/atau  memperbaiki  toleransi  glukosa (Reddy et al. , 2012)..

## IV. Kesimpulan
Ekstrak buah buni (EBB)  merah memiliki aktivitas  tertinggi  dalam  menghambat  enzim α- glukosidase dengan  nilai  IC 50 sebesar  85,27  ppm dibandingkan EBB hijau.
V. Conflict of Interest Penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan.

## Daftar Pustaka
Ayepola, O. R., Brooks, N. L. and Oguntibeju, O. O. (no  date)  ‘Oxidative  Stress  and  Diabetic Complications :  The  Role  of  Antioxidant
Vitamins and Flavonoids’.
doi:
10.5772/57282. Badan  Penelitian  dan  Pengembangan  Kesehatan (2013) ‘Riset Kesehatan Dasar
(RISKESDAS)  2013’, Laporan  Nasional 2013 , pp. 1–384. doi: 1 Desember 2013. Bisht,  Shradha;  Sisodia,  S.  (2010)  ‘Diabetes, Dyslipidemia,  Antioxidant  and  status  of oxidative  stress’, International  Journal  of Research  in  Ayurveda  &  Pharmacy ,  1(1), pp. 33–42. doi: 10.7897/2321.
Butkhup, L. and Samappito, S. (2011) ‘Changes in Physico-Chemical  Properties,  Polyphenol Compounds  and  Antiradical  Activity During  Development  and  Ripening  of Maoluang  (Antidesma  bunius  L.  Spreng) Fruits’, Journal  of  Fruit  and  Ornamental Plant Research , 19(1), pp. 85–99.
Goldenberg,  R.  and  Punthakee,  Z.  (2013) ‘Definition, Classification and Diagnosis of Diabetes,  Prediabetes  and  Metabolic Syndrome’, Canadian Journal of Diabetes ,
37(SUPPL.1), pp. 8–11. doi:
10.1016/j.jcjd.2013.01.011.
Hamidu,  L.,  Ahmad,  A.  R.  and  Najib,  A.  (2018) ‘Qualitative  and  quantitative  test  of  total flavonoid buni fruit (Antidesma bunius (L.) Spreng)  with  UV-Vis  spectrophotometry method’, Pharmacognosy  Journal ,  10(1). doi: 10.5530/pj.2018.1.12.
Nugroho, A. E. (2006) ‘Animal Models of Diabetes Mellitus :  Pathology  and  Mechanism  of Some Diabetogenics’, Biodiversitas,
Journal  of  Biological  Diversity ,  7(4),  pp.
378–382. doi: 10.13057/biodiv/d070415. Oyenihi,  A.  B. et  al. (2014)  ‘Antioxidant  -Rich Natural  Products  and  Diabetes  Mellitus’,
Antioxidant-Antidiabetic Agents and Human Health , pp. 1–29. doi: 10.5772/57192. Van Quan, N. et al. (2019) ‘Antioxidant, α-Amylase and  α-Glucosidase  Inhibitory  Activities and  Potential  Constituents  of  Canarium tramdenum  Bark’, Molecules ,  24(3).  doi: 10.3390/molecules24030605.
Qurrat-ul-Ain et al. (2015) ‘Alpha-glucosidase and carbonic  anhydrase  inhibition  studies  of Pd(II)-hydrazide  complexes’, Arabian Journal  of  Chemistry .  King  Saud
University.
doi:
10.1016/j.arabjc.2015.02.024. Reddy,  G.  A.  K. et  al. (2012)  ‘Pharmacology  & Toxicology’, 2(1), pp. 23–30. Samappito, S. and Butkhup, L. (2008) ‘An analysis on  organic  acids  contents  in ripe  fruits  of fifteen  Mao  Luang  (Antidesma  bunius) cultivars, harvested from dipterocarp forest of  Phupan  Valley  in  Northeast  Thailand’, Pakistan  Journal  of  Biological  Sciences ,
pp.
974–981.
doi: 10.3923/pjbs.2008.974.981. Şendoǧdu,  N. et  al. (2006)  ‘Antidiabetic  and antioxidant  effects  of  Vitis  vinifera  L. leaves  in  streptozotocin-diabetic  rats’,
Turkish  Journal  of  Pharmaceutical Sciences , 3(1), pp. 7–17.
Sunarwidhi, A. L., Sudarsono, S. and Nugroho, A. E.  (2014)  ‘Hypoglycemic  effect  of combination of Azadirachta indica A. Juss. and  Gynura  procumbens  (Lour.)  Merr. ethanolic extracts standardized by rutin and quercetin in alloxan-induced hyperglycemic rats’, Advanced Pharmaceutical  Bulletin ,  4(Suppl  2),  pp.
613–618. doi: 10.5681/apb.2014.090. Wilson,  K.  and  Walker,  J.  (2010) Principles  and techniques  of biochemistry  and  molecular biology . 7th edn. Edited by K. Wilson and J.  Walker.  Cambridge,  New  York: Cambridge University Press.
Yin,  Z. et  al. (2014)  ‘α-Glucosidase  inhibitors isolated  from  medicinal  plants’, Food Science and Human Wellness . Elsevier BV, 3(3–4), pp. 136–174. doi: 10.1016/j.fshw.2014.11.003.
Zatalia,  S.  R.  and  Sanusi,  H.  (2013)  ‘The  role  of antioxidants  in  the  pathophysiology, complications,  and  management  of diabetes mellitus.’, Acta medica Indonesiana ,  45(2),  pp.  141–7.  Available at: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/237 70795.