Efek Histopotogenik  dan Daya Tolak Ekstrak Biji Mengkudu ( Morinda Citrifolia ) Terhadap Vektor Demam Berdarah
Pathological effect and Repellent Of Noni ( Morinda citrifolia ) Seed Extract Toward Dengue Fever Vector
Adhi Kumoro Setya 1 , Tri Harningsih 2
Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Nasional 1,2
1 adhi_kumoro@stikesnas.ac.id, 2 tri_harningsih@stikesnas.ac.id
Abstract : Aedes aegypti mosquitoes are categorized as dangerous insects since they often transmit deadly  diseases  to  humans,  such  as  dengue  fever.  In  the  current  decades,  the  position  of  chemical insecticides  has  caused  resistance  of  vector  and  reduced  environmental  quality  due  to  the  residue produced.  This  research  aims  to  test  the  repellent  and  killing  power  on  larvae  (larvicide)  of  ethanol extract  of  noni  seeds  as  botanical  insecticide.  Repellent  power  of  the  extract  was  analyzed  using anova test. Larvicide power was tested using probit analysis and its pathological effect was examined histologically. This research used 7 (seven) variations of concentration with repetitive test for 3 (three) times.  Based  on  the  anova  test,  noni  seeds  were  not  effective  as  a  repellent  of  mosquitoes. Meanwhile,  based  on  probit  analysis,  it  was  shown  that  lethal  concentration  (LC50)  happened  in concentration  of  0.03%  for  instar  larvae  1;  0.04%  for  instar  larvae  2;  and  0.07%  for  instar  larvae  3. Significant result of one way anova > 0,05 while histopathology description shows that larval intestinal epithelium undergoes vacuolization, and the cuticle tissue did not show any significant damage. Based on  the  research  result,  it  can  be  reported  that  ethanol  extract  of  noni  seeds  is  not  effective  as  a repellent,  but  it  has  a  good  larvicidal  effect,  being  close  to  positive  control  which  gives  pathological effect on the intestinal tissue.
Key words : Aedes aegypti , Mengkudu ( Morinda citrifolia ), Extracts, larvicide, Repellent
Abstrak :  Nyamuk Aedes  aegypti masuk  dalam  kategori  serangga  berbahaya  karena  seringnya menularkan  penyakit  mematikan  kepada  manusia  contohnya  demam  berdarah.  Dalam  beberapa dekade,  posisi  insektisida  kimia  telah  menyebabkan  resistensi  dari  vektor  dan  menurunnya  kualitas lingkungan  akibat  residu  yang  dihasilkan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  kemampuan  daya tolak dan daya bunuh terhadap larva (larvasida) dari ekstrak etanol biji mengkudu sebagai insektisida botani.  Daya  tolak  ekstrak  dianalisa  menggunakan    uji  anova.  Kemampuan  larvasida  dilakukan menggunakan  analisis  probit  dan  efek  patologisnya  dibaca  secara  histologi.  Penelitian  ini menggunakan 7 (tujuh) variasi konsentrasi dengan penggulangan uji sebanyak 3 (tiga) kali. Dari hasil uji anova menunjukan biji mengkudu tidak efektif sebagai repellent (penolak) nyamuk sedangkan dari analisis  probit  menunjukan  lethal  concentration  (LC50)  terjadi  pada  konsentrasi  0,03%  untuk  larva instar 1; 0,04% untuk larva instar 2 dan 0,07% untuk larva instar 3. Nilai signifikasi uji one way anova >  0,05  sedangkan  gambaran  histopatologi    menunjukan  epitel  usus  larva  mengalami  vakuolisasi sedangkan  jaringan  kutikula  tidak  memperlihatkan  kerusakan  berarti.  Dari  hasil  penelitian  ini  dapat dilaporkan  bahwa  ekstrak  etanol  biji  mengkudu  tidak  efektif  sebagai  repellent  (penolak)  tetapi mempunyai daya larvasida yang bagus mendekati kontrol positif yang berefek patologis pada jaringan ususnya.
Kata kunci: Aedes aegypti , Morinda citrifolia , Ekstrak, Larvasida, Daya tolak

## I.  Pendahuluan
Berbagai  macam penyakit yang dapat disebarkan oleh Aedes aegypti , demam berdarah merupakan  penyakit  mematikan  dan  menjadi momok  bagi  dunia  kesehatan  (Imam,  2009). Terhitung  sejak  tahun  1968  hingga  tahun  2009, World Health  Organization  (WHO) mencatat negara  Indonesia  sebagai  negara  dengan  kasus DBD tertinggi di Asia Tenggara (Sukowati, 2010). Pemanasan  global  yang  berimplikasi  terhadap peningkatan  suhu  membuat metamorfose Aedes aegypti memendek  dan  curah  hujan  yang  tinggi membuat semakin banyaknya tempat berkembang  biak  stadium acuatic nyamuk (Felipe,  2013).  Hal  inilah  yang  membuat  kenapa
demam  berdarah  susah  untuk  dihilangkan terlebih di Indonesia.
Banyak  laporan  tentang  terjadinya  resistensi insektisida  pada Aedes  aegypti di  berbagai negara  endemik  demam  berdarah  (Labbé  P. et al ,  2017).  Unsur  kimia  dari  insektisida  yang susah  diurai  membuat  semakin  buruk  citra insektisida kimia dalam menekan penyakit vektor nyamuk. Insektisida kimia menyebabkan  kualitas lingkungan  menjadi  rendah  serta  mengancam kehidupan ekosistem. Dari alasan tersebut peran teknologi dan insektisida nabati yang lebih ramah lingkungan  sebagai  alternatif  untuk  mengantikan insektisida kimia yang berbahaya (Costa, 2012).
Telah  lama  buah  mengkudu  secara  empiris dan melalui penelitian bermanfaat bagi
kesehatan  manusia  (Wahyuni,  2008).  Dari penelitian  Setya  (2017),  hasil fitokimia  dalam  biji mengkudu positif terdapat alkaloid, saponin, tanin dan glikosida jantung. Senyawa fitokimia tersebut dapat dimanfaatkan sebagai insektisida nabati.
Penelitian  ini  dirancang  untuk  menguji kemampuan dari ekstrak biji mengkudu ( Morinda citrifolia )  sebagai  penolak  gigitan  nyamuk  dan larvasida.  Dalam  penelitian  ini  juga  mengevaluasi kemampuan  patologis  dari  ekstrak  terhadap  jaringan larva.  Perubahan  jaringan  kutikula  dan  usus  larva dibandingkan  dengan  kontrol  dan  dilaporkan  sebagai data histopatogenik.

## II.  Metode Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental  dengan  rancangan  studi Post-test With  Control. Subyek  dari  penelitian  ini  adalah larva  instar  III Aedes  aegypti hasil  koloni  dari Balai  Besar  Penelitian  dan  Pengembangan Vektor  dan  Reservoir  Penyakit  (B2P2VRP), Salatiga. Gambaran histopatologi larva dilakukan di laboratorium mikro anatomi Fakultas Kedokteran  Hewan  Universitas  Gadjah  Mada Yogyakarta.

## Bahan
Persiapan ekstrak tanaman Biji Morinda citrifolia diperoleh dari pekarangan  penduduk  kabupaten  Karanganyar, Sukoharjo  dan  Wonogiri  provinsi  Jawa  Tengah. Biji  dikeringkan  pada  suhu  kamar  dan  inkubator. Dihaluskan  menjadi  serbuk  dan  dipindahkan  ke dalam  wadah  kaca  untuk  ekstraksi.  sebanyak, 1,8 kg serbuk biji mengkudu dipindahkan ke botol kaca,  yang  berisi  masing-masing  1,5  L  etanol selama 3 hari. Suspensi disaring dan dievaporasi menggunakan vakum rotary dan disimpan dalam almari es sebelum digunakan.
Persiapan koloni larva dan nyamuk Larva  dan  nyamuk  dewasa  diperoleh  dari induk Aedes  aegypti noninfeksius.  Stadium  telur disimpan dalam kertas saring yang terhindar dari matahari dan air.

## Tahapan

## Persiapan Larva Instar dan nyamuk dewasa
Larva  instar  I,  II  dan  III  diperoleh  melalui penetasan stadium telur yang diperoleh dari Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Vektor dan
Reservoir Penyakit (B2P2VRP), Salatiga. Sebanyak  3000  butir  telur A.  aegypti dimasukan dalam  aquades  1  (satu)  liter  selama  5-7  hari dengan  pemberian  tetra  bit  sebagai  makanan larva.  Dipilih  dan  dipisahkan  larva  instar  dalam cup masing-masing 20 ekor tiap cup.
Diambil  nyamuk  betina  umur  3-5  hari  dan disimpan  dalam  7  cup  berpori  masing-masing berisi  15  nyamuk  betina.  Pemberian larutan  gula
digunakan  untuk  mencegah  nyamuk  mati  dalam cup .

## Persiapan konsentrasi ekstrak
Konsentrasi  untuk  daya  tolak  berurutan disiapkan  10%,  15%,  20%,  25%,  30%,  35%  dan 40%.  Konsentrasi  larvasida  yang  diuji  dalam penelitian  berurutan  dari  0,01%,  0,05%,  0,1%, 0,5%,  1%,  1,5%  dan  2%.  Semua  konsentrasi tersebut  dilakukan  pengulangan  sebanyak  3 (tiga)  kali.  Volume  aquades  sebagai  pelarut  dan pengujian  digunakan  100  ml  tiap cup .  Sebagai kontrol  hanya  berisi  etanol  96%  untuk  uji  daya tolak dan aquades untuk uji larvasida.
Pengujian daya tolak (repellent) Uji ini menggunakan lengan tangan probandus  sebagai  media  perlakuan.  Hindarkan lengan  tangan  dari  kontaminan  bau  yang  dapat merangsang  atau  menolak  nyamuk.  Terhadap lengan  probandus  sebelah  kiri  disemprotkan etanol  96%  dan  untuk  seri  konsentrasi  ekstrak disemprotkan lengan sebelah kanan. Pengamatan  terhadap  banyaknya  nyamuk  yang hinggap  pada  tangan  dilakukan  setiap  jam dimulai  dari  jam  ke-0  (segera  sesudah  tangan disemprotkan)  sampai  dengan  jam  ke-3.  Rerata hasil dianalisa menggunakan uji one way anova.

## Pengujian larvasida
Tiap  konsentrasi  berikut  pengulangannya, kepada  masing-masing  cup  dimasukan  masing- masing  20  ekor  larva  instar  I,II  dan  III.  Efek mortalitas  ekstrak  dibaca  setelah  24  jam paparan. Lethal  concentration (LC50)  dari konsentrasi ekstrak dihitung menggunakan analisis probit.

## Efek histopatologi
Terhadap  larva  yang  telah  mati  akibat  efek ekstrak  dipisahkan  dan  diberi  formalin  5-10%. Dilakukan  proses  pemotongan  menggunakan mikrotom dan secara bertahap dilakukan pengecatan HE dan PAS.

## III. Hasil
Terlihat  pada  tabel  1  bahwa  semakin  rendah umur  larva  dan  semakin  meningkat  konsentrasi dari  ekstrak  yang  diberikan  maka  jumlah  larva yang mengalami mortalitas juga semakin banyak. Hal  tersebut  terjadi  pada  semua  prosedur pengulanggan dari konsentrasi.

## Tabel 1. Hasil uji larvasida
Gambaran  histopatologi,  efek  ekstrak  biji mengkudu  diperiksa  pada  jaringan  usus  dan kutikula  pada  larva  dengan  pengecatan  HE  dan PAS (gambar 2).
Gambar 2. Pada larva kontrol (A dan B) epitel bertipe kuboid simplek (i) tidak mengalami perubahan dan kerusakan. Berbeda pada larva dengan perlakuan ekstrak (C dan D), jaringan epitel mengalami perengangan vakuolisasi (s). Adanya jejak isi perut terlihat jelas pada pengecatan PAS, dimana isi usus positif berwarna magenta (j). Jaringan kutikula (v) pada percobaan ini tidak memberikan perbedaan yang berarti antara larva kontrol (E) dan perlakuan (F).
Tabel 2. Hasil rata-rata daya proteksi ekstrak etanol biji buah mengkudu pada interval jam ke-0 sampai jam ke-3
Tabel 3. Hasil uji One Way Anova
Hasil  perhitungan  daya  proteksi  ekstrak etanol  biji  buah  mengkudu  menunjukan  bahwa daya  proteksi  tertinggi  adalah  87,13574  yaitu pada  konsentrasi  40  %  jam  ke  3,  dimana  daya proteksinya menurun sampai 61,44742 selama 3 jam.      Berdasarkan  tabel  3  didapatkan  nilai signifikansi  >  0,05  dengan  hasil  tersebut  maka menyatakan  bahwa  ekstrak  etanol  biji  buah mengkudu  tidak  efektif  sebagai Repellent terhadap Aedes aegypti.
IV. Pembahasan Metode maserasi pada penelitian ini menggunakan etanol 96 %, karena memiliki sifat toksik  yang  rendah  dan  semipolar  sehingga dapat  melarutkan  zat  kimia  yang  bersifat  polar maupun  non  polar  (Musdalifah,  2016).  WHO pada Global  Malaria  Progamme (2016),  usia ideal nyamuk untuk uji insektisida adalah 2-5 hari dan  berjenis  kelamin  betina.  Nyamuk  dengan usia 2-5 hari merupakan usia produktif dan pada usia  tersebut  nyamuk  memiliki  ketahanan  tubuh yang kuat.
Daya  proteksi  yang  didapatkan  dari  uji efektivitas  ekstrak  etanol  biji  buah  mengkudu  ini
Gambar 1. Grafik analisis probit dengan LC  50 berurutan ;  instar I 0,03%  (atas), instar II 0,04% (kiri) dan instar III 0,06% (kanan)
masih dibawah standar nasional yang diberlakukan  untuk  sediaan  anti  nyamuk.  Hasil perhitungan  daya  proteksi  ekstrak  etanol  biji buah  mengkudu  menunjukan  bahwa  daya proteksi  tertinggi  adalah  87,13574  yaitu  pada konsentrasi  40  %  jam  ke  3,  dimana  daya proteksinya menurun sampai 61,44742 selama 3 jam. Hal ini menunjukan bahwa ekstrak etanol biji buah  mengkudu  mempunyai  potensi  sebagai Repellent terhadap Aedes  aegypti meskipun daya  proteksinya  kurang  dari  90  %,  dimana peraturan  pemerintah  melalui  Komisi  Pestisida Departemen  Pertanian  (1995)  mensyaratkan bahwa  suatu  sediaan  anti  nyamuk  dapat dikatakan  efektif  apabila  daya  proteksinya  90  % selama 6 jam.
Daya  proteksi  eksrak  etanol  biji  buah mengkudu  setiap  konsentrasi  dan  interval waktunya  mengalami  kenaikan  dan  penurunan, hal  ini  disebabkan  oleh  beberapa  faktor diantaranya  ketahanan  ekstrak  tersebut  tidak cukup  lama  dan  berkurang  setiap  jamnya. Berkurangnya daya tahan aroma ekstrak tersebut disebabkan  besarnya  laju  penguapan  selama pengujian berlangsung pada setiap pengamatan.
Potensi  keefektivan  ekstrak  etanol  biji  buah mengkudu  sebagai repellent dipengaruhi  oleh tiga  hal,  yang  pertama  adalah  penguapan senyawa-senyawa  kimia  yang  terdapat  dalam ekstrak etanol biji buah mengkudu yang semakin meningkat  seiring  berjalannya  waktu,  sehingga bau dari ekstrak etanol biji buah mengkudu akan berkurang dan mengakibatkan penurunan potensi repellent. Kedua  adalah  keefektivan ekstrak  biji  buah  mengkudu  dapat  ditinjau  dari hasil  uji  fitokimia  dalam  biji  buah  mengkudu tersebut. Ketiga, aktivitas nyamuk Aedes aegypti yang  semakin  menurun  seiring  bertambahnya waktu  sehingga  seakan-akan  nyamuk  yang hinggap pada tangan semakin sedikit. Penurunan aktivitas  nyamuk  disebabkan  oleh  perbedaan umur dan keadaan oviparitas dari masing-masing nyamuk (Kardinan,2007).
Organ usus dan kutikula pada larva merupakan pintu awal perlindungan dari berbagai patogen. Kesehatan usus menjadi faktor penentu bahwa makanan yang masuk dapat dimanfaatkan sebagai sumber energi untuk terus berkembang.  Komponen  kitin  pada  kutikula menyebabkan  larva  terlindung  dari  patogen maupun  cemaran  yang  dapat  mempengaruhi perkembangan dan kemampuan hidup. Terjadinya vakuolisasi pada epitel usus membuktikan bahwa telah terjadi ketidak seimbangan  osmotik  pada  larva  sehingga memicu  terjadinya  kematian.  Jaringan  kutikula yang  masih  utuh  memperlihatkan  ekstrak  tidak mampu  menyebabkan  kelainan  berarti  pada jaringan tersebut.

## V.  SIMPULAN
Hasil  penelitian  ekstrak  Etanol  Biji  Mengkudu dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  tanaman tersebut  tidak  cukup  efektif  sebagai  penolak gigitan  nyamuk  ( repellent )  tetapi  berpotensi dimanfaatkan  sebagai  larvasida.  Ekstrak  biji mengkudu mampu menghasilkan lethal concentration (LC50) pada larva instar I, II dan III masing-masing  pada  konsentrasi  0,03%  0,04% dan 0,06%. Data histopatologi dari jaringan larva terlihat  epitel  usus  mengalami  vakuolisasi  akan tetapi  jaringan  kutikula  dari  penelitian  ini  tidak mengalami  kerusakan  berarti  jika  dibandingkan dengan kontrol.

## VI. UCAPAN TERIMA KASIH
Peneliti  mengucapkan  terima  kasih  kepada Direktorat Riset dan Pengabdian Kepada Masyarakat,          Direktorat  Jendral  Penguatan Riset  dan  Pengembangan  Kementerian  Riset, Teknologi  dan  Pendidikan  Tinggi  atas  bantuan dana sehingga dapat terselesaikannya penelitian ini

## DAFTAR PUSTAKA
Costa,  Pinheiro  do,  Serrão je  and  pereira  M.J.B. 2012.  Morphological  Changes  in  the Midgut  of Aedes  aegypti  L. (Diptera: Culicidae )  Larvae  Following  Exposure  to an Annona coriacea (Magnoliales: Annonaceae )  Extract.  Depto  de  Ciências Biológicas, UNEMAT. Brazil.
Felipe J.C, Carlo F., Iain R.L and Paul R.H. 2013. The  Effects  of  Weather  and  Climate Change  on  Dengue .  PLOS  Neglected
Tropical Diseases. Department of Economics, University of California, California.
Imam  D.M.,  Qathrunnada  D.,  Iwang  Y. ,  2009. Deteksi  Virus Dengue pada  Telur  Nyamuk Dewasa Aedes spesies di Daerah Endemis DBD. Fakultas Kedokteran Universitas Islam Sultan Agung.
Semarang.
Kardinan,  Agus.  (2007).  Potensi  Selasih  Sebagai R epellent Terhadap Nyamuk Aedes aegypti . Jurnal Litri 13 (2):38-42.
Labbé P, David J.P, Alout , Milesi P. , Djogbénou ,  Pasteur  N.,  Weill  M,.  2017. Evolution  of Resistance  to  Insecticide  in  Disease Vectors . Institut des Sciences de l’Evolution  de  Montpellier,  Université  de Montpellier. France.
Musdalifah,  2016.  Uji  Efektivitas  Ekstrak  Kulit
Buah  Jeruk  nipis  ( Citrus  aurantifolia ) Sebagai Insektisida
Hayati  Terhadap
Nyamuk Aedes aegypti . Skripsi . Makassar: Fakultas  Kedokteran  dan  Ilmu  Kesehatan UIN Alauddin.
Setya A.K. 2017. Potensi Biji Mengkudu ( morinda citrifolia l.)  Sebagai  Antelmintik  Terhadap
A scaris  suum.  Journal  Media  Farmasi
Indonesia, Sekolah  Tinggi  Ilmu  Farmasi .
Semarang.
Sukowati  S,  2010.  Masalah  Vektor  Demam
Berdarah Dengue (DBD) dan Pengendaliannya  di  Indonesia. Buletin Jendela  Epidemiologi .  Pusat  Data  dan Surveilans Epidemiologi Kementrian Kesehatan RI. Vol 2.
Wahyuni,  S.  2008.  Kajian  daya  insektisida  biji paria  ( Momordica  charantia  L .)  dan  biji mengkudu  ( Morinda  citrifolia  L )  terhadap perkembangan sitophilus zeamais Motsch. Skripsi.  Fakultas  Teknologi  Pertanian,IPB, Bogor. Pp. 42.
WHO  (2016).  Global  Malaria  Programme  :  Test
Procedure of Insectiside Resistence Monitoring  in  Malaria  Vector  Mosquito Second Edition. Switzerland : World Health Organization
.