## STANDARDISASI PARAMETER SPESIFIK DAN UJI AKTIVITAS ANTIKANKER TERHADAP SEL KANKER PAYUDARA T47D DARI
EKSTRAK ETANOL DAUN KEJI BELING ( Strobilanthes crispa (L.)

## Blume)
Natanael Roring 1) , Adithya Yudistira 1) , Widya Astuty Lolo 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
In  Indonesia,  keji  beling are  used  by  the  community as  a  traditional  medicine ingredient  to cure some diseases. Standardization is an important stage in conducting research and development of natural medicine in Indonesia to ensure the quality and safety of the drug. This study aimed to obtain the standardization of specific parameter data and determine the IC 50 value of the ethanol extract of the leaves  of  keji  beling  (Strobilanthes crispa  (L.)  Blume).  This  study  is  an  experimental laboratory and testing the anticancer activity against breast cancer cells in vitro is done using the MTT assay. The  results  obtained  by  the  standardization  of  data-specific  parameters  such  as  extract  identity, organoleptic  extract,  total  content  of  compounds  that  are  dissolved  in  water  and  ethanol,  data  of phytochemical screening of extract and total flavonoids of extract and IC 50 value of 968.041 μg / ml by  comparison  to  the  positive  control  Doxorubicin  is  8.923  μg  /  ml.  Therefore,  keji  beling  are included in inactive anticancer activity.
Keywords : Standardization of specific parameters, cavity, breast cancer cell T47D, MTT Assay, IC 50 .

## ABSTRAK
Di Indonesia, tumbuhan keji beling digunakan oleh masyarakat sebagai bahan obat tradisional untuk  menyembuhkan  beberapa  macam  penyakit.  Standardisasi  merupakan  tahapan  penting  dalam melakukan  penelitian  dan  pengembangan  obat  bahan  alam  di  Indonesia  untuk  menjamin  mutu  dan keamanan  dari  sediaan  obat  tersebut.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mendapatkan  data  parameter spesifik  standardisasi  dan  mengetahui  nilai  IC 50 dari  ekstrak  etanol  daun  keji  beling  ( Strobilanthes crispa (L.)  Blume).  Penelitian  ini  bersifat  eksperimental  laboratorium  dan  uji  aktivitas  antikanker terhadap  sel  kanker  payudara  dilakukan  secara in-vitro dengan  menggunakan  metode  MTT  assay. Hasil yang diperoleh yaitu data standardisasi parameter spesifik seperti idetintas ekstrak, organoleptik ekstrak, kandungan total senyawa yang terlarut dalam air dan etanol, data skrining fitokimia ekstrak, dan total flavonoid ekstrak dan nilai IC 50 sebesar dengan pembanding kontrol positif doxorubisin  adalah
.  Dengan  demikian,  keji  beling  termasuk  dalam  aktivitas  antikanker yang tidak aktif.
Kata  kunci :  Standardisasi  parameter  spesifik,  keji  beling,  sel  kanker  payudara  T47D,  MTT  Assay, IC 50 .

## PENDAHULUAN
Kanker  payudara  atau  karsinoma payudara  merupakan  jenis  kanker  yang paling banyak diderita wanita dan merupakan  penyebab  kematian  tertinggi pada wanita di seluruh dunia. Di Indonesia kanker  payudara  berada  diurutan  kedua yang paling sering ditemukan pada wanita setelah  kanker  mulut  rahim  (Burstein  and Winer,  2000).  Kanker  payudara  dapat terjadi  pada  pria  maupun  wanita,  hanya saja  prevalensi  pada  wanita  jauh  lebih tinggi.  Diperkirakan  pada  tahun  2006  di Amerika,  terdapat  212.920  kasus  baru kanker  payudara  pada  wanita  dan  1.720 kasus baru pada pria, dengan 40.970 kasus kematian  pada  wanita  dan  460  kasus kematian pada pria. Di  Indonesia,  jumlah penderita  kanker  pada  tahun  2013  sesuai dengan  data  dari  Kementerian  Kesehatan RI  yaitu 347.792 penderita dimana 61.682 adalah  penderita  kanker  Payudara  atau sekitar  17,73%.  Sementara  di  Sulawesi Utara,  penderita  kanker  payudara  pada tahun  2013  yaitu  sebanyak  346  penderita (Kementerian Kesehatan RI, 2015).
Indonesia  merupakan  salah  satu negara dengan kekayaan hayati terbesar di dunia.  Hingga  saat  ini  hanya  7.000 tanaman  yang  telah  diketahui  khasiatnya. WHO  pada  tahun  2008  mencatat  bahwa 68% penduduk dunia masih menggantungkan sistem pengobatan tradisional  yang  mayoritas  melibatkan tanaman  untuk  menyembuhkan  penyakit. Berbagai tanaman  obat dan ribuan tanaman  berpotensi  sebagai  bahan  baku obat  di    Indonesia  mengandung  beraneka ragam jenis senyawa kimia alami. Berdasarkan  penggunaan  tradisional  dan berbagai penelitian ilmiah, tanaman tersebut memiliki berbagai efek farmakologis  dan  bioaktivitas  (Saifudin et al., 2011).
Fakta  diatas  menunjukkan  bahwa obat  tradisional  cukup  banyak  digunakan oleh  masyarakat  dalam  usaha  pengobatan sendiri  ( self-medication ).  Obat  tradisional ialah  bahan  atau  ramuan  bahan  yang berasal  dari  tumbuhan,  hewan,  mineral, sediaan  sarian  (galenik)  atau  campuran dari  bahan  tersebut,  yang  secara  turun temurun telah digunakan untuk pengobatan berdasarkan  pengalaman  (Kementerian Kesehatan  RI,  2000).  Dalam  rangka pengembangan  obat  tradisional  menjadi Fitofarmaka  standarisasi  merupakan  salah satu hal yang perlu diperhatikan. Standarisasi  merupakan  tahapan  penting dalam melakukan penelitian dan pengembangan  obat  bahan  alam  di Indonesia  untuk  menjamin  mutu  dan keamanan  dari  sediaan  obat  tersebut. Standarisasi  dilakukan  sebagai  upaya peningkatan  mutu  dan  keamanan  produk yang diharapkan dapat lebih meningkatkan kepercayaan  terhadap  manfaat  obat  yang berasal dari bahan alam (Dewoto, 2007) . Penggunaan  bahan  obat  alam sebagai pengobatan alternatif dalam menangani  penyakit    kanker  dikarenakan bahan  obat  alam  mudah  didapatkan  serta memiliki harga yang terjangkau. Disamping  itu,  efek  samping yang ditimbulkan  relatif  kecil  (Thomas,  1989). Di  Indonesia,  tumbuhan  keji  beling digunakan  oleh  masyarakat  sebagai  bahan obat  tradisional  untuk  menyembuhkan beberapa  macam  penyakit.  Keji  Beling juga  telah  dilakukan  penelitian  untuk melihat kemampuannya sebagai tumbuhan yang memiliki aktivitas antikanker.
Dengan  menggunakan  metode Brine Shrimp  Lethality  Test, fraksi  n-heksana keji  beling  menunjukkan  nilai Lethality Concentration (LC 50 )  yang  potensial (Rahma et  al .,  2011).  Penelitian  ini dilakukan  untuk  mengetahui  tentang  Uji
aktivitas  antikanker  terhadap  sel  kanker payudara  T47D  dengan  memanfaatkan bahan  alam  yaitu  ekstrak  etanol  daun  keji beling  ( Strobilanthes  crispa (L.)  Blume) dan terlebih dahulu melakukan standardisasi  parameter  spesifik  terhadap ekstrak etanol daun keji beling ( Strobilanthes crispa (L.) Blume).
.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilakukan pada bulan Oktober 2016 – Juni 2017 di Laboratorium Farmakognosi  dan  Fitokimia  Program Studi  Farmasi,  Fakultas  Matematika  dan Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas  Sam Ratulangi  Manado,    dan  Laboratorium Parasitologi
Fakultas Kedokteran,
Universitas Gadjah Mada Yogyakarta.

## Alat dan Bahan

## Alat
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  tabung  reaksi,  rak tabung  reaksi,  batang  pengaduk,  kertas saring, gelas kimia, labu ukur, cawan petri, oven, hot  plate,  rotatory  evaporator , timbangan digital, vortex, pipet tetes, gelas ukur,  mikropipet,  spektrofotometri  UV- Vis,  tabung  evendorf,  mikro  plate  96, conical Tube, Cryotube, Mikroskop Inverted,  Hemositometer,  yellow  tip  dan blue tip, Inkubator CO 2 , Laminar air flow, Elisa Reader.
Bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  daun  Keji Beling  ( Strobilanthes  crispa (L.)  Blume) yang  diambil  di  desa  Leilem,  Kloroform P.A  ,  Etanol  70%,  Etanol  96%,    HCL, Serbuk  Magnesium,  Aquabides,  Asetat Anhidrida,  Asam  Sulfat,  Reagen  Meyer,
Reagen  Dragendorf,  Reagen  Wagner, FeCl 3 , Reagen Aluminium Klorida, Kuersetin,  Penisillin-Streptomisin, Fetal Bovine  Serum (FBS),  Tripsin  EDTA, NaHCO 3, Hepes,  Amphotericyn  B, Media RPMI,  MTT  5mg/ml  PBS  (50  mg  MTT dan  10  ml  PBS Phosphate  buffer  saline ), Dimethyl  Sulfoxide,  Sodium  Didusil Sulfat  10%,  Doxorubisin,  Sel  Kanker Payudara T47D

## Prosedur Penelitian Determinasi Tumbuhan
Sampel  keji  beling  ( Strobilanthes crispa (L.) Blume) dilakukan pemeriksaan atau  determinasi  tanaman  di  bagian Taksonomi  Tumbuhan  Jurusan    Biologi FMIPA UNSRAT.

## Penyiapan Simplisia dan Ekstrak
Daun  keji  beling  diambil  dan disortasi  dari  bahan-bahan  pengotor.  Lalu dilakukan  pencucian  dengan  air  mengalir hingga  bersih,  setelah  itu  dikeringkan dengan  cara  diangin-anginkan  hingga kering.  Kemudian  dihaluskan  dengan blender  hingga  menjadi  serbuk  dengan ukuran  derajat  kehalusan  serbuk  simplisia yang  sesuai.  Serbuk  simplisia  daun  keji beling  dimaserasi  dengan  menggunakan etanol 96% selama 24 jam dan pada 6 jam pertama sekali-kali dilakukan pengadukan. Hasil  maserasi  disaring  dengan  kertas saring.  Selanjutnya,  residu  dimaserasi kembali  hingga  warna  coklat  bening. Filtrat yang diperoleh disatukan dipekatkan  dengan  menggunakan  rotary evaporator pada suhu 40 o C – 50 o C sampai diperoleh  ekstrak  kental.  Rendemen  dari ekstrak kemudian dihitung.

## Pengujian Parameter Spesifik 1. Identitas
Pendiskripsian  tata  nama,  yaitu nama  ekstrak,  nama  latin  tumbuhan,
bagian  tumbuhan  yang  digunakan,  dan nama  Indonesia  tumbuhan  (Departemen Kesehatan RI, 2000).

## 2. Organoleptik
Penetapan organoleptik yaitu dengan  pengenalan  secara  fisik  dengan menggunakan panca indera dalam mendeskripsikan  bentuk,  warna,  bau  dan rasa. (Departemen Kesehatan RI, 2000).

## 3.  Senyawa  Terlarut  Dalam  Pelarut Tertentu
Pengujian  senyawa  terlarut  dalam pelarut  tertentu  dalam  ekstrak  terdiri  dari kadar senyawa yang terlarut dalam air dan kadar senyawa yang terlarut dalam etanol a) Kadar  Senyawa  yang  Larut  dalam

## Air
Sejumlah  1  g  ekstrak  (W1) dimaserasi  dengan  25  mL  kloroform selama  24  jam,  menggunakan  labu  ukur sambil berkali-kali dikocok selama 6 jam pertama. Kemudian didiamkan selama 18 jam  dan  disaring.  Filtrat  sebanyak  5  mL diuapkan  dalam  cawan  berdasar  rata yang  telah  ditara  (W0)  dengan  cara didiamkan  sampai  pelarutnya  menguap dan tersisa residunya, kemudian dipanaskan  residu  pada  suhu  105 o C hingga bobot tetap (W2) (Saifudin et al .,
2011).
b) Kadar  Senyawa  yang  Larut  dalam Etanol
Sejumlah  1  g  ekstrak  (W1) dimaserasi  dengan  25  mL  etanol  96%, selama  24  jam  dengan  menggunakan labu bersumbat sambil berkali-kali dikocok selama 6 jam pertama.
Kemudian didiamkan selama 18 jam dan disaring  cepat  untuk  menghindarkan penguapan etanol. Filtrat sebanyak 5 mL diuapkan  dalam  cawan  dangkal  berdasar rata  yang  telah  ditara  (W0)  dengan  cara didiamkan  sampai  pelarutnya  menguap dan  tersisa  residunya,  panaskan  residu
pada  suhu  105 o C  hingga  bobot  tetap (W2) (Saifudin et al ., 2011).
4 Uji Kandungan Kimia Ekstrak
a) Identifikasi Alkaloid
Ekstrak  0,5  g  dalam  tabung  reaksi ditambahkan 2 mL etanol 70% kemudian diaduk,  ditambahkan  5  mL  HCl  2  N, dipanaskan  pada  penangas  air.  Setelah dingin,  campuran  disaring  dan  filtrat ditambahkan beberapa tetes reagen Mayer. Sampel kemudian diamati hingga keruh  atau  ada  endapan  (Mojab et  al., 2003).
b) Identifikasi Flavonoid
Ekstrak  0,5  g  dalam  cawan ditambahkan 2 mL etanol 70% kemudian diaduk,  ditambahkan  serbuk  magnesium 0,5 g dan 3 tetes HCl pekat. Terbentuknya  warna  jingga  sampai merah  menunjukkan  adanya  flavon, merah sampai merah padam menunjukkan  adanya  flavanol,  merah padam sampai merah keunguan menunjukkan adanya flavanon (Mojab et al ., 2003).
c) Identifikasi Saponin
Ekstrak  0,5  g  dalam  tabung  reaksi ditambahkan 2 mL etanol 70% kemudian diaduk,  ditambahkan  dengan  20  mL aquabides dan dikocok kemudian didiamkan  selama  15-20  menit.  Jika  tida ada  busa  maka  negatif  saponin,  busa lebih  dari  1  cm  maka  positif  lemah, tinggi  1,2  cm  maka positif  saponin,  dan busa  lebih  dari  2  cm  maka  positif  kuat (Mojab et al ., 2003).
d) Identifikasi Triterpenoid
Ekstrak  0,5  g  dalam  tabung  reaksi ditambahkan 2 mL etanol 70% kemudian diaduk,  ditambahkan  1  mL  kloroform dan 1 mL asetat anhidrida lalu didinginkan. Setelah dingin, ditambahkan H 2 SO 4 .  Jika  terjadi  warna  kemerahan,
menunjukkan
adanya triterpenoid (Ghosal et al ., 2012).
e) Identifikasi steroid
Ekstrak  0,5  g  dalam  tabung  reaksi ditambahkan 2 mL etanol 70% kemudian diaduk,  ditambahkan  2  mL  H 2 SO 4 pekat dengan  cara  diteteskan  pelan-pelan  dari sisi  dinding  tabung  reaksi.  Pembentukan cincin warna merah menunjukkan adanya steroid (Ghosal et al ., 2012).
f) Identifikasi Tanin
Ekstrak  0,5  g  dalam  cawan ditambahkan 2 mL etanol 70% kemudian diaduk,  ditambahkan  FeCl 3 sebanyak  3 tetes, jika menghasilkan biru karakteristik,  biru-hitam,  hijau  atau  biru- hijau dan endapan (Mojab et al., 2003).

## 5. Penentuan Kadar Flavonoid
Penentuan kadar  flavonoid dengan spektrofotometri  UV-Vis  menggunakan reagen aluminium klorida. Sebanyak 2 mL larutan  ekstrak  dengan  konsentrasi  50 µg/mL,  ditambahkan  dengan  2  mL aluminium klorida 2% yang telah dilarutkan dengan etanol, kemudian divorteks  selama  20  menit,  inkubasi campuran  larutan  selama  24  menit.  Ukur absorban  pada  415  nm.  Buat  perhitungan rata-rata 3 kali pengukuran dan kandungan flavonoid  dinyatakan  dengan  kesetaraan pembanding  baku  kuersetin  (Chang et  al ., 2002).

## Uji Aktivitas pada Sel Kanker
Dalam  uji  aktivitas  antikanker terhadap  sel  kanker  payudara  T47D, digunakan  metode  MTT  Assay.  Prinsip dari  metode  MTT  Assay  yaitu  terjadinya
reduksi garam kuning tetrazolium MTT (3- (4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5- difeniltetrazolium  bromid)  oleh  sistem reduktase.  Suksinat  tetrazolium  yang termasuk  dalam  rantai  respirasi  dalam mitokondria sel-sel yang hidup membentuk  kristal  formazan  berwarna ungu dan tidak larut dalam air. Penambahan reagen  stopper (bersifat detergenik) akan melarutkan kristal berwarna  ini  yang  kemudian  diukur absorbansinya menggunakan Elisa Reader.
Intensitas  warna  ungu  yang  terbentuk proporsional  dengan  jumlah  sel  yang hidup. Sehingga jika intensitas warna ungu semakin  besar,  maka  jumlah  sel  yang hidup semakin banyak (Anonim, 2016).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil Determinasi Tumbuhan
Determinasi  tumbuhan  dilakukan di  Taksonomi  Tumbuhan  Jurusan  Biologi
Fakultas Matematika Dan Ilmu Pengetahuan  Alam.  Hasil  determinasi menunjukkan bahwa sampel yang digunakan  adalah  tumbuhan  Keji  Beling (Strobilanthes crispa (L.) Blume).

## Hasil Penyiapan Simplisia dan Ekstrak
Dari  hasil  ekstraksi  239,4  gram serbuk simplisia daun keji beling ( Strobilanthes crispa (L.) Blume) diperoleh  ekstrak  etanol  daun  keji  beling ( Strobilanthes  crispa (L.)  Blume)  sebesar 12,2  gram.  Dengan  demikian  rendemen ekstrak etanol daun keji beling ( Strobilanthes  crispa (L.)  Blume)  yaitu sebesar 5,096%.
Tabel 1. Hasil Pengujian Identitas Ekstrak Etanol Daun Keji Beling ( Strobilanthes crispa (L.) Blume)
Identitas Tumbuhan
Nama ekstrak                                                         Ekstrak etanol daun keji beling Nama latin tumbuhan Strobilanthes crispa (L.) Blume Bagian tumbuhan yang digunakan                        Daun Nama Indonesia tumbuhan                                   Keji Beling
Tabel 2. Hasil Uji Organoleptik Ekstrak Etanol  Daun Keji Beling ( Strobilanthes crispa (L.) Blume)
Uji Organoleptik Warna                                                                                 Hijau pekat Bau                                                                                     Khas keji beling
Rasa                                                                                    Sepat Bentuk                                                                                Ekstrak kental
Tabel  3.    Hasil  Uji  Senyawa  Terlarut  dalam  Pelarut  Tertentu  Ekstrak  Etanol  Daun  Keji Beling ( Strobilanthes crispa (L.) Blume)
Uji Senyawa Terlarut dalam Pelarut Tertentu Air                                                                                      50,577 % ± 4,083 % Etanol                                                                                 66,944 % ± 4,055%
Tabel 4. Hasil Uji Kandungan Kimia Ekstrak Etanol Daun Keji Beling ( Strobilanthes crispa (L.) Blume) Golongan Senyawa Hasil Alkaloid + Flavonoid + Saponin + Triterpenoid + Steroid + Tanin +

## Hasil Penentuan Kadar Flavonoid
Terlebih dahulu dibuat  kurva kalibrasi dari standard flavonoid (kuersetin). Setelah diperoleh kurva kalibrasi  dan  persamaan  regresi  liniernya, maka  dapat  ditentukan  kadar  flavonoid total yang terkandung dalam ekstrak etanol daun keji beling ( Strobilanthes crispa (L.)
Blume)  pada  konsentrasi  100  ppm  yaitu sebesar 5,449 ± 0,044 mg/kg.
Tabel  5.  Data  Hasil  Uji  MTT  Assay
Ekstrak Etanol Daun Keji Beling ( Strobilanthes crispa (L.) Blume) Terhadap Sel Kanker Payudara T47D Konsentrasi (µg/ml) Rata-rata absorbansi % Sel Hidup 1000 0,427 40,449 % 500 0,833 86,067 % 250 0,885 91,910 %
125 0,858 88,876 % 62,5 0,874 90,674 % 31,25 0,871 90,337 % 15,625 0,884 91,798 % Kontrol Sel 0,957 Kontrol Media 0,067 Tabel  5.  Data  Hasil  Uji  MTT  Assay Doxorubisin Terhadap Sel Kanker Payudara T47D Konsentrasi (µg/ml) Rata-rata absorbansi % Sel Hidup 100 0,350 33,061 % 50 0,465 46,441 % 25 0,470 46,986 % 12,5 0,461 45,935 % 6,25 0,498 50,331 % 3,125 0,518 52,625 % Kontrol Sel 0,957 Kontrol Media 0,067

## Analisis Data
Nilai  IC 50 ekstrak  etanol  daun  keji beling  ( Strobilanthes  crispa (L.)  Blume) dan kontrol positif doxorubisin didapatkan dengan regresi linear dengan menggunakan microsoft excel. Dari persamaan  linear  didapatkan  nilai  IC 50 yaitu . Sedangkan nilai IC 50 kontrol positif doxorubisin yaitu
.

## PEMBAHASAN
Determinasi  tumbuhan  merupakan proses  dalam  menentukan  nama/jenis tumbuhan  secara  spesifik.  Determinasi bertujuan  untuk  mendapatkan  spesies tumbuhan  yang spesifik dan tepat  sasaran. Hal tersebut dikarenakan dalam
pemanfaatan  tumbuhan  untuk  digunakan dalam berbagai hal (penelitian, bahan baku obat  dan  sebagainya)  perlu  menggunakan tumbuhan  yang  tepat  sehingga  hasil  yang didapatkan seobjektif mungkin.
Langkah pertama dalam pengerjaan yaitu  dengan  melakukan  ekstraksi  daun keji beling. Pelarut  yang digunakan dalam proses  ektraksi  ini  yaitu  etanol.  Tingkat polaritas dari suatu pelarut sangat menentukan  hasil  ekstraksi  dan  aktivitas yang  terkandung  dalam  ekstrak.  Beberapa kriteria  yang  diperkirakan  baik  sebagai pelarut  untuk  dipakai  dalam  ekstrak fenolik  tumbuhan  antara  lain yaitu konstanta  dielektrik  (30-80)  dan  memiliki titik  didih  (75-100 o C).  Etanol  adalah pelarut  yang memiliki konstanta dielektrik 24,30  dengan  titik  didih  78 o C  (Suryanto, 2012).
Standardisasi  dibutuhkan  untuk menjamin  aspek  keamanan  dan  stabilitas dari  ekstrak  yang  ada.  Hal  ini  juga dimaksudkan  agar  produk  ekstrak  yang ada  mempunyai  data  parameter  tertentu yang konstan. Pada pemeriksaan organoleptik  ekstrak  yang  meliputi  bau, warna, rasa dan bentuk ekstrak didapatkan hasil  yaitu  ekstrak  etanol  daun  keji  beling memiliki  bau  yang  khas,  berwarna  hijau pekat,  rasa  sepat  dan  bentuk  ekstrak  yang kental.  Data  organoleptik  dari  ekstrak tersebut  merupakan  salah  satu  parameter spesifik yang ditentukan dengan menggunakan  panca  indera.  Hal  ini bertujuan  sebagai  langkah  awal  untuk pengenalan secara sederhana dan subyektif dari ekstrak
yang akan distandardisasi.Pada  pengujian  senyawa yang  terlarut  dalam  pelarut  tertentu, digunakan  pelarut  yang  berbeda  tingkat polaritasnya  yaitu  air  dan  etanol.  Data
parameter  pada  pengujian  senyawa  yang terlarut  dalam  pelarut  tertentu  bukanlah data  yang    mendasar  atau  fundamental terkait  efek  farmakologis  dari  suatu ekstrak/tumbuhan. Namun data ini digunakan sebagai gambaran awal kandungan senyawa-senyawa aktif berdasarkan  sifat  polaritas  yaitu  yang bersifat  polar  (larut  dalam  air)  dan  yang bersifat  semi  polar  dan  non  polar  (larut dalam  etanol).  Senyawa-senyawa  aktif inilah  yang  secara  langsung  bertanggung jawab  terhadap  aktivitas  dari  tumbuhan yang ada.
Dalam pengujian identifikasi alkaloid,  digunakan  reagen Meyer sebagai larutan  uji.  Prinsip  dari  identifikasi alkaloid yaitu terbentuknya endapan alkaloid  dari  penambahan  reagen Meyer.
Dalam  uji  tersebut  menunjukkan  bahwa tumbuhan keji beling ( Strobilanthes crispa (L.) Blume) memiliki kandungan senyawa bioaktif alkaloid.
Dalam  uji  Flavonoid,    digunakan serbuk magnesium untuk mereduksi ikatan glikosida  flavonoid.  Di  dalam  tumbuhan, senyawa flavonoid berikatan dengan suatu gula  membentuk  senyawa  yang  disebut glikosida  flavonoid.  Glikosida  adalah senyawa  yang  terdiri  dari  senyawa  glikon (gula)  dan  senyawa  aglikon  (bukan  gula). Dalam  hal  ini,  senyawa  yang  bukan  gula adalah flavonoid. Ikatan glikosida flavonoid  inilah  yang  menghambat  proses penarikan  senyawa  oleh  pelarut.  Oleh karena  itu,  perlu  ditambahkannya  serbuk magnesium untuk mereduksi ikatan glikosida dengan flavonoid. Proses mereduksi ikatan dilakukan dalam suasana asam dengan menambahkan HCl pekat.
Pada uji kualitatif saponin dilakukan  dengan  menggunakan  metode
Forth.  Timbulnya  buih  pada  uji  Forth menunjukkan  adanya  glikosida yang mempunyai  kemampuan  membentuk  buih (busa) dalam air yang terhidrolisis menjadi glukosa  dan  senyawa  lainnya.  Hal  ini dikarenakan  sifat  khas  dari  saponin  yaitu pembentuk  buih,  sehingga  dalam  uji identifikasi  saponin  dapat  dilihat  melalui pembentukan buih.
Identifikasi Steroid dan Triterpenoid digunakan metode Lieberman-Burchard. Uji Lieberman-
Burchard  merupakan  uji  karakteristik  dari steroid  dan  triterpenoid.  Asam  yang digunakan (H 2 SO 4 atau bisa menggunakan CH 3 COOH)  akan  membentuk  cincin karakteristik  (steroid)  dan  perubahan warna  (triterpenoid).  Hal  ini  dikarenakan adanya  reaksi  antara  sterol  atau  triterpen dengan asam.
Uji fitokimia dengan menggunakan FeCl 3 digunakan untuk menentukan apakah  sampel  mengandung  gugus  fenol.
Adanya  gugus  fenol  ditunjukkan  dengan warna  hijau  kehitaman  atau  biru  tua setelah  penambahan  FeCl 3 ,  sehingga apabila  uji  fitokimia  dengan  FeCl 3 memberikan  hasil  positif  dimungkinkan dalam  sampel  tersebut  terdapat  senyawa fenol  dan  dimungkinkan  salah  satunya adalah  tanin  karena  tanin  adalah  senyawa polifenol. Terbentuknya warna hijau kehitaman  atau  biru  tua  pada  ekstrak setelah    ditambahkan  FeCl 3 karena  tanin akan  membentuk  senyawa  kompleks dengan ion Fe 3+ .
Penentuan  kadar  flavonoid  ini bertujuan  untuk  melihat  apakah  senyawa flavonoid  dalam  ekstrak  etanol  daun  keji beling  ( Strobilanthes  crispa (L.)  Blume) berperan  dalam  aktivitas  sitotoksik  dalam
penentuan  IC 50 terhadap  sel  kanker payudara T47D.
Dari hasil yang ada, nilai IC 50 yang didapatkan untuk  ekstrak etanol daun Keji Beling  ( Strobilanthes  crispa (L.)  Blume)
yaitu  sebesar dan  untuk kontrol positif doxorubisin sebesar 8,923 .  Menurut  NCI  ( National Cancer Institute ), suatu ekstrak dinyatakan memiliki aktivitas antikanker tinggi apabila  memiliki  nilai  IC 50 <  30  µg/ml, memiliki  aktivitas  antikanker  moderat apabila  memiliki  30  µg/ml  ≤  IC 50 <  100 µg/ml  dan  tidak  aktif  apabila  nilai  IC 50 > 100 µg/ml (Zheng et al ., 2000). Jika dilihat dari  nilai  IC 50 yang  didapatkan,  ekstrak etanol  daun  keji  beling  ( Strobilanthes crispa (L.)  Blume)  masuk  dalam  aktivitas antikanker  yang  tidak  aktif.  Dalam penelitian  sebelumnya,  bahwa  fraksi  n- heksana  daun  keji  beling  memiliki  nilai aktivitas antikanker yang baik karena hasil pengujian dengan metode BSLT menunjukkan bahwa nilai  LC 50 dari  fraksi n-heksana adalah 33,49 µg/ml.
Dalam penelitian ini terlihat bahwa kompleksitas  senyawa  ekstrak  sangat mempengaruhi  aktivitas  antikanker  yang diujikan  secara in-vitro .  Dengan  begitu, perlu dilakukan fraksinasi atau memperoleh  senyawa  isolat  yang  secara khusus berperan dalam aktivitas sitotoksik terhadap sel  kanker payudara T47D. Perlu juga  dilakukan  pengujian  terhadap  sel kanker yang lain, karena bisa saja senyawa antioksidan  dari  ekstrak  etanol  daun  keji beling  ( Strobilanthes  crispa (L.)  Blume) berperan  dalam  sitotoksisitas  pada  sel kanker  yang  lain.  Sedangkan  pada  nilai IC 50 doxorubisin  menunjukkan  bahwa doxorubisin masuk dalam kategori aktivitas antikanker yang tinggi.
Penggunaan  Doxorubisin  dalam  penelitian ini  dilakukan  untuk  membandingkan aktivitas  sitotoksik  senyawa  ekstrak  daun keji  beling  ( Strobilanthes  crispa (L.) Blume)  dengan  antibiotik  yang  biasa digunakan dalam pengobatan kanker.

## KESIMPULAN
Dari hasil penelitian yang didapatkan,  maka  dapat  disimpulkan bahwa:Ekstrak  etanol  daun  keji  beling ( Strobilanthes crispa (L.) telah terstandardisasi  parameter  spesifik  dengan data  yang  meliputi  idetintas  ekstrak, organoleptik  ekstrak,  kandungan  total senyawa  yang  terlarut  dalam  air  dan etanol, data skrining fitokimia ekstrak, dan total  flavonoid  ekstrak.  Nilai  IC 50 ekstrak etanol  daun  keji  beling  ( Strobilanthes crispa (L.)  terhadap  sel  kanker  payudara T47D  dengan  menggunakan  persamaan regresi linear adalah dengan  pembanding  kontrol  positif doxorubisin adalah

## SARAN
1. Perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  tentang  standardisasi  ekstrak etanol daun keji beling ( Strobilanthes  crispa (L.)  terutama data parameter spesifik (kandungan total alkaloid, saponin, triterpenoid, steroid, tannin) serta data parameter non spesifik.
2. Perlu  dilakukan  fraksinasi  atau partisi terhadap ekstrak etanol daun keji  beling  ( Strobilanthes  crispa (L.)  untuk  mendapatkan  fraksi yang memberikan aktivitas antikanker.
3. Perlu  diujikan  kepada  sel  kanker yang  lain  seperti  sel  kanker  HeLa, WiDr,  dan  sel  kanker  lainnya kemampuan  ekstrak  etanol  daun
keji  beling  ( Strobilanthes  crispa (L.)  dalam  menunjukkan  aktivitas antikanker.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim. 2016.
www.
ccrc.farmasi.ugm.ac.id.  [5  Oktober
2016].
Burstein,  HJ.,  Winer,  EP.  2000. Primary
Care  Of  Survivors  of  Breast  Cancer.
US  Departement  of  Health  and Human Services, Bethesda USA.
Chang, C. Y. M., dan Wen, H. C. J. 2002.
Estimation of Total Flavonoid Content in  Propolis  by  Two  Complementary Colorimetric  Methods. J.  Food  Drug Anal . 178-181
Departemen Kesehatan RI. 2000.
Parameter  Standar  Umum  Ekstrak Tumbuhan  Obat. Direktorat  Jendral
Pengawasan  Obat  dan  Makanan,
Jakarta.
Dewoto, H. R. 2007. Pengembangan  Obat
Tradisional Indonesia Menjadi Fitofarmaka. Majalah Kedokteran
Indonesia . 57 (7). Hal. 205-211.
Ghosal,  M.  And  Mandal,  P.  2012. Phytochemical Screening and Antioxidant Activities of Two Selected  ‘Bihi’  Fruits  Used  as Vegetables  In  Darjeeling  Himalaya .
International  Journal  of  Pharmacy and  Pharmaceutical  Sciences .  ISSN:
0974-1491
Kementerian Kesehatan RI. 2000.
Pedoman  Pelaksanaan  Uji  Klinik Obat  Tradisional .  Direktorat  Jenderal Pengawasan  Obat  dan  Makanan, Jakarta.
Kementerian  Kesehatan  RI.  2015. Stop Kanker .  Pusat  Data  dan  Informasi Kementerian Kesehatan RI, Jakarta.
Mojab,  F.,  Kamalinejad,  M.,  Ghaderi,  N.,
and Vahidipour, H. R. 2003.
Phytochemical  Screening  Of  Some Species  Of  Iranian  Plants .  Iranian Journal  Of  Pharmaceutical  Research .
Pp. 77-82
Rahma,  M.,  Hardianti,  S.,  dan  Susanti,  E.
2011.  Aktivitas  Sitotoksik  Ekstrak Heksana, Diklorometana, dan Metanol
Daun Keji Beling ( Sericocalyx crispus. L)  terhadap Artemia  salina Leach.  Di  dalam:  Peranan  dan Kontribusi Herbal dalam Terapi Penyakit degeneratif. Prosiding
Seminar  Nasional;  Semarang,  17
Desember  2011.  Fakultas  Farmasi UNWAHAS. Halaman 71-74.
Saifudin,  A.,  Rahayu,  V.,  dan  Teruna,  H.
2011. Standardisasi  Bahan  Obat Alam . Graha Ilmu,  Yogyakarta.
Suryanto, E. 2012. Fitokimia Antioksidan.
Putra Media Nusantara, Surabaya.
Thomas,  A.N.S.  1989.  Tanaman  Obat Tradisional 1. Kanisius, Yogyakarta.