Pengaruh  Lama  Penyimpanan  Semen  Cair  Ayam Buras pada  Suhu  5 0 C terhadap  Periode  Fertil dan Fertilitas Sperma
(The  Storage  Time  Effect  of    The  Local  Chicken Chilled Semen at 5 0 C on Fertility and Fertile Period of

## Sperm)
Nurcholidah Solihati, Ruhijat Idi, Rangga Setiawan, I.Y. Asmara, Bayu I. Sujana Fakultas Peternakan Universitas Padjadjaran Bandung E-mail : nurcholidah@yahoo.com

## Abstrak
Tujuan  penelitian  ini  untuk  mengetahui  sejauh  mana  pengaruh  lama  penyimpanan  semen cair ayam buras pada suhu 5 0 C terhadap periode fertil dan fertilitas sperma. Penelitian ini menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  dengan  3  perlakuan  dan  setiap  perlakuan diulang  6  kali. Lama  penyimpanan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah penyimpanan  1  jam  (0  hari),  24  jam  (1  hari)  dan  48  jam  (2  hari). Peubah  yang  diukur adalah  periode  fertil  dan  fertilitas  sperma.  Data yang  diperoleh  dianalisis  dengan  analisis sidik  ragam, dan untuk  mengetahui  perbedaan  antar  perlakuan  diuji  dengan menggunakan uji jarak berganda Duncan. Hasil penelitian  menunjukan bahwa lama penyimpanan semen cair  ayam  buras  berpengaruh  nyata  (P<0,05)  terhadap  periode  fertil  dan  fertilitas  sperma. Periode  fertil  dan  fertilitas  sperma  ayam  buras  yang  baik  diperoleh  dari  penyimpanan semen cair selama 1 jam (0 hari).
Kata Kunci : ayam buras, semen cair, periode fertil, fertilitas

## Abstract
The  aim  of  this research  was  to  identify  the  effect  storage  time  of  native  chicken  chilled semen  at  5 0 C  on  fertile  period  and  fertility of sperm. This  research  used  experimental method  by  using  Completely  Randomize  Design  (CRD)  with  3  treatments  and  each treatments  was replicated 6 times. Storage time used in this research  were 1 hour (0 day), 24  hour  (1  day)  and  48  hour  (2  day).  This  research  used  4  male  native  chickens  and  18 female  native  chickens.  The  variables  measured  were  fertile  period  and  fertility  of  sperm. Data obtained then analyzed by analysis of variant (Anova) while to identify the difference among tretments tested by usin g Duncan’s Multiple Range Test. Research result  indicated that  storage time of the native chicken chilled semen was significantly influence (P<0,05) on  fertile  period  and  sperm  fertility.  The  best  fertile  period  and  sperm  fertility  of  native chicken, was obtained from 1 hour (0 day) storage time of chilled semen should be used. Keywords : native chicken, chilled semen, fertile period and fertility

## Pendahuluan
Ayam  Buras  mempunyai  peran  yang  sangat besar  bagi  kehidupan  masyarakat  terutama  di pedesaan  dijadikan  sebagai  sumber  daging,  telur dan  sebagai  tambahan  pendapatan. Ayam  Buras mempunyai  beberapa  keuntungan  dibandingkan dengan  ayam  ras  yaitu  cenderung  lebih  kuat terhadap  penyakit  tertentu,  mempunyai  daya adaptasi  yang  tinggi  terhadap  lingkungan  dan pemeliharaan  yang  relatif  mudah.  Produk  ayam buras  seperti  telur  dan  daging  mempunyai keistimewaan  dan  sukar  digantikan  oleh  komoditi lain. Namun  demikian  ayam  buras  juga mempunyai beberapa kelemahan seperti
pertumbuhan yang lambat, produksi rendah, masih mempunyai  sifat  mengeram,  lambat  dewasa kelamin,  lamanya  selang  waktu  bertelur  akibat mengasuh  anak  dan  rendahnya  mutu  genetik. Harganya  relatif    lebih  mahal  dari  hasil  ternak unggas  lainnya,  karena  permintaan  yang  tinggi tidak diimbangi oleh peningkatan produksi.
Inseminasi  buatan  (IB)  dapat  dilakukan untuk  mengatasi  rendahnya  fertilitas  karena  sifat memilih  pasangan  yang  tinggi  pada  ayam  buras dan  adanya  perbedaan  tingkat  umur,  baik  pada jantan  maupun  betina.  Sejauh  ini  IB  pada  unggas hanya  menggunakan  semen  segar  dengan  atau tanpa  bahan  pengencer,  hal  ini  mempunyai
kendala,  karena  semen  sesudah  ditampung  pada suhu kamar harus dipakai dalam waktu tidak lebih dari 2 jam.  Penundaan dalam beberapa jam dapat menurunkan fertilitas telur (Toelihere, 1993a).
Usaha dalam mempertahankan daya fertilitas  yang  optimum    yaitu  dilakukan  dengan jalan penyimpanan semen pada suhu 4 sampai 5 0 C dengan  maksud  penghambatan  terhadap  aktivitas metabolisme baik secara fisik maupun kimia dalam kecepatan  yang  rendah. Kualitas  semen  selama penyimpanan sebelum dilakukan IB sangat penting diketahui  karena  dapat  memperkirakan  sejauh mana  daya  hidup  dan  fertilitas  spermatozoa  di dalam  saluran  reproduksi  betina.  Selain  itu  dapat digunakan  pula  sebagai  acuan  untuk  inseminator dalam  hal penyediaan  semen  yang  baik  untuk diinseminasikan. Dengan  mengetahui  lama penyimpanan  yang  terbaik  maka  kualitas  semen dapat  dipertahankan  dan  penggunaan  pejantan lebih efisien.

## Metode

## Alat dan Bahan
Penelitian  ini  menggunakan  18  ekor  ayam buras  (generasi  ke-4  antara  ayam  kedu  dan  ayam arab) betina dewasa produktif, dengan umur 50-54 minggu dan berat badan 1,6 – 2,0 kg. Pejantan yang digunakan  sebanyak  3  ekor  dengan  umur  rata-rata 65  minggu  dan  merupakan  hasil  dari  uji  Barlett (volume, konsentrasi total, motilitas).
Ayam  betina  penelitian  masing-masing ditempatkan  pada  kandang  individual  atau  cage yang terbuat dari ram kawat dengan ukuran 0,22 x 0,42  x  0,44  m.  Ayam  jantan  masing-masing ditempatkan pada kandang berukuran 0,60 x 0,30 x 0,48  m.  Tempat  makan  ditempatkan  di  luar kandang.
Alat  yang  digunakan  dalam  penampungan, evaluasi  semen  dan inseminasi  adalah  :  Gelas penampung  semen  yang  bersekala  0,1 – 15  ml, tissue  gulung,  objek  glass  datar  dan  cekung, haemocytometer,  spuit  1  ml,  2,5  ml  dan  5  ml, pipet,  pH paper,  mikroskop,  spuit  1  ml  yang dirangkai  dengan  gun. Alat  untuk  melihat  daya tunas digunakan peneropong telur.

## Penampungan dan Evaluasi Semen
Penampungan  semen  dilakukan  sore  hari. Selanjutnya dievaluasi dan ditambahkan pengencer kemudian disimpan  selama 1  jam, 24  jam dan 48 jam pada  suhu  5 0 C. Semen  yang  telah  disimpan masing-masing  dievaluasi konsentrasi  total  dan motilitasnya kemudian diinseminasikan.
Inseminasi
Dosis  inseminasi  yang  digunakan  adalah    ± 150 juta spermatozoa didalam 0,1 ml  pengencer.
Teknik Inseminasi; Ayam betina sebagai hewan  percobaan  diinseminasikan  dengan semen  yang  telah  diencerkan  dengan  lama penyimpanan yang berbeda-beda sesuai perlakuan. Inseminasi  dilakukan  sore  hari  hal ini dimaksudkan untuk menghindari kehadiran telur  dalam  uterus  yang  dapat  menghambat pergerakan progresif spermatozoa.

## Pengumpulan Telur Hasil Inseminasi
Pengambilan telur dimulai pada hari kedua setelah  inseminasi,  kemudian  dibersihkan  dari kotoran  lalu  telur  ditandai  sesuai  dengan  tanggal bertelur,  nomor  ayam  dan  kelompok  perlakuan. Telur  yang  telah  ditandai  dimasukan  kedalam mesin  tetas  dengan  suhu  38 0 C  (100 0 F).  Pada  hari ke  lima  inkubasi,  telur  diperiksa  fertilitasnya dengan metode candling.
Peubah yang Diamati.
1.  Periode fertil Periode  fertil  spermatozoa  adalah  lamanya spermatozoa  dalam  saluran  reproduksi  betina  dan masih  mampu  untuk  fertilisasi  pada  ovum. Parameter  ini  dihitung  mulai  hari  ke-2  setelah inseminasi sampai dengan telur tidak menghasilkan  tunas,  diamati  dalam  periode  14 hari.
2. Fertilitas sperma. Fertilitas  adalah banyaknya  telur fertil dari sejumlah telur yang diinkubasi.  Cara menentukan telur fertil yaitu dilakukan dengan metode candling dengan  melihat  perkembangan  embrio  di  dalam telur.  Fertilitas  dihitung  berdasarkan  jumlah  telur fertil pada periode 14 hari.

## Rancangan Percobaan dan Analisis Statistik
Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan Acak  Lengkap  (RAL)  dengan  3  Perlakuan  dan 6 ulangan. Perlakuan  yang  diberikan  adalah  sebagai berikut :
P 1 = Penyimpanan 0 hari (1 jam) P 2 = Penyimpanan 1 hari (24 jam) P 3 = Penyimpanan 2 hari (48 jam) Data  yang  diperoleh  dianalisis dengan menggunakan  sidik  ragam. Perbedaan  antara perlakuan dilakukan uji jarak berganda Duncan.

## Hasil dan Pembahasan
Pengaruh  Lama  Penyimpanan  Semen  Ayam Buras Terhadap Periode Fertil Spermatozoa.
Rataan  periode  fertil  spermatozoa  ayam buras  dari  ketiga  perlakuan  tercantum pada  Tabel 1.
Tabel 1. Rataan Periode Fertil Sperma Ayam Buras Tiap Perlakuan
Per lakuan Rataan Periode Fertil Sperma (hari) P1 9,50 P2 4,67 P3 3,83
Berdasarkan  Tabel 1 menunjukan  bahwa rataan  periode  fertil  tertinggi  diperoleh  dari perlakuan  penyimpanan  1  jam  (9,5  hari),  diikuti oleh  lama  penyimpanan  24  jam  (4,67  hari)  dan lama  penyimpanan  48  jam  (3,83  hari).  Hasil analisis sidik ragam  menunjukan bahwa  lama penyimpanan  semen  berpengaruh  nyata  (P<0,05) terhadap  periode  fertil  sperma. Hasil  uji  jarak berganda  Duncan  menunjukan  bahwa  rataan periode  fertil  perlakuan  P1  (3,1287)  dan  P2 (2,2596)  tidak  berbeda  nyata  (P>0,05),  demikian pula  P2  dan  P3  (1,6259)  tidak  berbeda  nyata (P>0,05), tetapi P1 berbeda nyata (P<0,05) dengan P3.
Periode  fertil  diartikan  sebagai  jarak  waktu kemampuan  spermatozoa  membuahi  sel  telur selama  dalam  saluran  reproduksi  betina  (Gilbert, 1990). Pada penelitian ini periode fertil diukur dari sejak inseminasi dilakukan sampai dihasilkan telur fertil terakhir dalam periode 14 hari.
Terjadinya  penurunan  periode  fertil  sejalan dengan  lama  penyimpanan  disebabkan  terjadinya penurunan  motilitas. Motilitas  pada  pada  suhu rendah  berkurang disebabkan pengaruh aktivitas spermatozoa.  Toelihere  (1993a),  menyatakan bahwa  tingkat  metabolisme  spermatozoa  berbeda- beda  menurut  suhu  dan  medianya.    Selama  proses penyimpanan  pada  suhu  5 0 C  spermatozoa secara cepat  kehilangan  daya  motilitasnya  dan  terjadi banyak  penghambatan  terhadap  aktivitas terhadap aktivitas  metabolisme  secara  fisik  dan  kimia dengan  ditandai  penurunan  metabolisme  adenosin trifosfat  dan  adenosin  3,5  monofosfat  (Apell  and Evans,  1997). Walaupun  demikian  metabolisme yang  rendah  masih  menghasilkan  hasil  sampingan berupa  asam  laktat  yang  dapat  mempengaruhi medium  sekitarnya  yang  dapat  mempengaruhi perubahan pH (Toelihere, 1993a). Angka keasaman  merupakan  salah  satu  faktor  yang mempengaruhi  daya  hidup  spermatozoa,  sehingga berpengaruh  terhadap  motilitas  dan  daya  fertilitas (Susilawati  dan  Hernawati,1992). Semakin  lama penyimpanan  menyebabkan  periode  fertil  semakin singkat.  Hal  ini  disebabkan  pada  penyimpanan yang  lebih  lama  akan  semakin  meningkatkan spermatozoa  yang  mati.  Jumlah  spermatozoa  mati yang  lebih  tinggi  akan  semakin  meningkatkan kematian  spermatozoa  hidup  selama  proses
penyimpanan, karena banyaknya sperma yang mati akan menjadi racun bagi sperma yang masih hidup. Lama  penyimpanan  juga  akan  menyebabkan kerusakan membran plasma spermatozoa sehingga akan  menurunkan  motilitas  dan  pada  akhirnya periode fertil juga lebih singkat.
Penyimpanan  semen  dalam  jangka  waktu lama akan menurunkan fertilitas dan plasma semen menjadi  tidak  isotonik.    Pada  penelitian  ini tingginya  motilitas  pada  perlakuan P1 karena tersedianya nutrien yang dibutuhkan, disamping itu spermatozoa  bisa  memanfaatkan  energi  nerupa ATP.    Pelepasan  energi  dari  penguraian  ATP digunakan untuk gerak (Salisbury dan VanDemark, 1985).    Semakin  lama  waktu  penyimpanan, motilitas  terus  mengalami  penurunan  karena persediaan  energi  semakin  terbatas.    Selama penyimpanan, spermatozoa terus melakukan aktifitas seperti pergerakan dan metabolisme.
Penurunan  motilitas  juga  disebabkan  oleh kejutan  dingin  dan  ketidakseimbangan  tekanan osmotik  akibat  dari  proses  metabolis  yang  terus berlangsung  selama  penyimpanan  pada  5 0 C. Semakin  lama  waktu  penyimpanan,  menyebabkan tingkat  penurunan  pH  juga  semakin  besar  yang terjadi  karena  selama  proses  penyimpanan  pada suhu  5 0 C  proses  metabolisme  terus  berlangsung baik  secara  aerob  maupun  anaerob.    Toelihere (1993a)  dan  Bearden  dan  Fuquay  (1997) menyatakan  bahwa  metabolisme  spermatozoa dalam  keadaan  anaerob  menghasilkan  asam  laktat yang  kian  tertimbun  dan  menurunkan  pH  semen yang  akhirnya  menurunkan  motilitas  dan  daya tahan hidup spermatozoa.
Menurut  Subowo  (1995)  pada  membran plasma  sel  terdapat  banyak  makromolekul  yang dibutuhkan dalam proses metabolisme dan sebagai pelindung  organel-organel  di  dalam  sel  dari kerusakan  mekanik.  Hasil  metabolisme  adalah energi berupa  ATP  yang  diperlukan  untuk  daya gerak  (motilitas)  spermatozoa.  Dengan  demikian kerusakan membran plasma sel akan mengakibatkan  terganggunya  suplai  energi  dan pada  akhirnya  menurunkan  motilitas  spermatozoa. Rendahnya motilitas pada akhirnya akan menyebabkan periode fertil dan fertilitas spermatozoa lebih singkat.
Pengaruh  Lama  Penyimpanan  Semen  Ayam Buras Terhadap Fertilitas Sperma.
Rataan  fertilitas  spermatozoa  ayam  buras dari ketiga perlakuan tercantum pada Tabel 2.
Tabel.  2. Rataan Fertilitas  Sperma Ayam  Buras Tiap Perlakuan Per lakuan Rataan Fertilitas Sperma (%) P1 43,24 P2 21,68 P3 10,32
Berdasarkan  Tabel  2,  lama  penyimpanan semen  yang  menghasilkan  rata-rata  fertilitas spermatozoa  tertinggi  diperoleh  dari  perlakuan penyimpanan 1 jam (43,24 %), diikuti penyimpanan  24  jam  (21,68  %)  dan  penyimpanan 48  jam  (10,32  %). Hasil  analisis  sidik  ragam menunjukan  bahwa  lama  penyimpanan  semen berpengaruh  nyata  (P<0,05)  terhadap  fertilitas sperma. Hasil  uji  jarak  berganda  Duncan menunjukan  bahwa  rataan  fertilitas  perlakuan  P1 (41,0946)  berbeda  nyata  (P<0,05)  dari  P2 (27,2145)  sedangkan  P2  dan  P3  (18,6632)  tidak berbeda nyata (P>0,05), P1 berbeda nyata (P<0,05) dengan P3.
Hasil  penelitian  ini  tidak  berbeda  jauh dengan  yang  dilaporkan  oleh  Bebas  (1998)  yang menyatakan  bahwa  pengaruh  lama  penyimpanan semen  cair  ayam  hutan  hijau  pada  suhu  4-5 0 C menghasilkan fertilitas berturut-turut untuk perlakuan  0  jam, 24  jam,  dan    48  jam  sebesar 61,51%,  34,95%  dan  9,10%, dimana  fertilitas diamati  dalam  periode  sembilan  hari .  Fertilisasi diartikan  sebagai  berhasilnya  satu  spermatozoa ayam jantan bertemu hidup-hidup dengan sel telur dari ayam betina yang kemudian kedua sel tersebut akan berkembang menjadi suatu janin atau embrio sebagai  bentuk  sosok  kehidupan  individu  baru anak  ayam. Fertilitas  dihitung  berdasarkan banyaknya  telur  fertil  dari  sejumlah  telur  yang diinkubasi Pada  penelitian  ini  fertilitas  diamati dalam periode 14 hari.
Sperma  dapat  kehilangan  fertilitas  sekalipun secara  visual  masih  motil,  ini  dapat  dilihat  dari hasil penelitian yang didapat angka motilitas tinggi namun  angka  fertilitasnya  kecil.  Lake  (1971) menyatakan  bahwa  semen  ayam  mengandung unsur-unsur  elektrolit  berupa  klorida,  kalsium, kalium,  natrium  dan  magnesium.  Peningkatan konsentrasi  elektrolit  yang  berlebihan  akan merusak  selubung  lipoprotein  dinding  sel  sperma, sehingga  pada  waktu  perubahan  suhu  ke  normal, permeabilitas membran sel akan berubah dan akan menyebabkan kematian sel (Toelihere, 1993b).
Bakst and Cecil (1992) menyatakan penyimpanan  semen  kalkun  selama  24-48  jam
dengan tanpa kehilangan fertilitas adalah merupakan  suatu  tantangan.  Nalbandov  (1990) menyatakan  penyimpanan  semen  ayam  pada  suhu 4 0 C  dapat  mempertahankan  daya  hidup  sperma dalam  beberapa  hari  tapi  mulai  kehilangan fertilitasnya dalam  48  jam.  Hal  ini  karena  sejalan dengan  lama  penyimpanan  terjadi  perubahan integrasi membran sel berupa pembengkakan pada daerah akrosom dari spermatozoa. Fungsi akrosom dalam  proses  fertilisasi  sangat  penting  karena menghasilkan  enzim  hyaluronidase  atau  zona lysine  yang  penting  untuk  penerobosan  ovum (Toelihere,1993b).

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  dan  pembahasan  dapat disimpulkan bahwa  lama  penyimpanan  semen ayam  buras  pada  suhu  5 0 C  berpengaruh  nyata terhadap  periode  fertil  dan  fertilitas  sperma  ayam buras. Semakin  lama  penyimpanan,  periode  fertil dan fertilitas semakin rendah.
Penggunaan  semen  cair  ayam  buras  agar dilakukan  secepat  mungkin  untuk  memperoleh periode fertil dan fertilitas yang optimum.

## Daftar Pustaka
Apell,  R.A.  and  P.R.,  Evans.  1997.  The  Effect  of
Temperature  on  Sperm  Motility  and  Viability. Fertil Steril 12 : 1329-1332.
Bakst,  M.R.  dan  H.  Cecil. 1992. Effect  Modification  of Semen  Diluent  with  Cells  Culture  Serum Replacement on Fresh and Stored Turkey Semen Quality and Hen Fertility. Poultry Sci. 71 : 754- 763
Bearden,  H.J.  and  J.W.    Fuquay.      2004. Applied Animal  Reproduction.  6 th Ed.  Prentice  Hall. Upper Saddle River.  New Jersey.
Bebas,  W.,G.,  J.P.  Wishart,  I.G.N.B.  Brillard, Trilaksana  dan  Sumandia.  1998. Pengaruh Konsentrasi dan Waktu Penyuntikan
Spermatozoa  Ayam  hutan  Hijau  (Gallus  varius) Terhadap  Fertilitas  Telur  Ayam Kampung (Gallus domesticus). Laporan Penelitian UNUD. Gilbert,  A.B.  1990.  Poultry. In :  E.S.E  Hafez (ed). Reproduction  in  Farm  Animal. Lea  and  Febiger. Philadelphia. 423-446.
Lake,  P.E.    1971.  The  Male  in  Reproduction.  In  :  D.J. Bell  and  B.M.  Freeman  (ed) Physiology  and Biochemistry of Domestic Fowl. Vol 3. Academic Press London.
Nalbandov,  A.V. 1990. Fisiologi  Reproduksi  Pada Mamalia  dan  Unggas.  Penerbit  Universitas Indonesia Press. Jakarta.
Salisbury,  G.W.  and  N.L.  Van  Denmark.  1985.
Fisiologi  Reproduksi  dan  Inseminasi  Buatan Pada  Sapi.  Diterjemahkan  oleh  R.  Djanuar. Gadjah Mada University Press. Yogyakarta.
Subowo. 1995. Biologi Sel. Angkasa. Bandung.
Susilawati,  S.  dan  T.  Hernawati,  1992. Penggunaan Pengencer  Larutan  Buah  Untuk  Menyimpan Semen  Domba. Media  Kedokteran  Hewan. Vol.3.No.3. Toelihere,  M.R.  1993a. Inseminasi  Buatan  Pada Ternak. Penerbit Angkasa Bandung. Toelihere,  M.R. 1993b. Fisiologi  Reproduksi  Pada Ternak. Penerbit Angkasa Bandung.