## PENGARUH MINYAK ATSIRI SERAI WANGI DAN NILAM PADA PERTUMBUHAN Botryodiplodia sp. SECARA IN VITRO

## The Effect of Essential Oils of Citronella and Patchouli Oil on Growth of Botryodiplodia sp. In Vitro
Muhammad Alam Firmansyah 1* , Anuraga Jayanegara 2 , Mafrika Ria Gita Solaya 1 , dan Ikhwan Shodiq Syifaudin 1

## (Diterima 7 Februari 2023 /Disetujui 10 April 2023)

## ABSTRACT
Pathogen Botryodiplodia sp. is a fungus that causes dieback and stems rot diseases that attack forestry plants. The  control  currently  being  used  in  the  field  is  using  chemical  pesticides,  which  are  harmful  to  the  surrounding environment  and the plant itself, so there is a need for another alternative, namely using  citronella and patchouli essential oils. Essential oils of citronella and patchouli have active compounds that act as antifungals to inhibit the growth of the pathogenic fungus Botryodiplodia sp. This study aimed to analyze the effect of citronella and patchouli essential oils on inhibiting the growth of the pathogen Botryodiplodia sp. in vitro. The results showed that the 10% patchouli treatment had the highest PDA and PDB media inhibition value. The lowest inhibition value was found in the 1% citronella treatment. The level of concentration, type of oil, and active ingredients contained in the oil affect the increase in effectiveness in controlling the pathogen Botryodiplodia sp.
Keywords: antifungal, Botryodiplodia sp., citronella, in vitro, patchouli

## ABSTRAK
Patogen Botryodiplodia sp.  merupakan  cendawan  penyebab  penyakit  mati  pucuk  dan  busuk  batang  yang menyerang  khususnya  tanaman  kehutanan.  Pengendalian  yang  saat  ini  masih  digunakan  di  lapangan  yaitu menggunakan  pestisida  kimia  yang  berbahaya  bagi  lingkungan  sekitar  maupun  bagi  tanaman  itu  sendiri,  sehingga perlu adanya alternatif lain yaitu menggunakan minyak atsiri serai wangi dan nilam. Minyak atsiri serai wangi dan nilam  memiliki  senyawa  aktif  di  dalamnya  yang  berperan  sebagai  anti  fungi  untuk  menghambat  pertumbuhan cendawan patogen Botryodiplodia sp. Tujuan penelitian ini adalah untuk menganalisis pengaruh minyak atsiri serai wangi  dan  nilam  dalam  menghambat  pertumbuhan  patogen Botryodiplodia sp.  secara in  vitro .  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  perlakuan  nilam  10%  memiliki  nilai  hambat  paling  tinggi  pada  media  PDA  dan  PDB.  Nilai hambat terendah terdapat pada perlakuan serai wangi 1%. Tingkat konsentrasi, jenis minyak, dan bahan aktif yang terkandung pada minyak merupakan faktor yang mempengaruhi peningkatan keefektifan dalam pengendalian patogen Botryodiplodia sp.
Kata kunci: antifungi, Botryodiplodia sp., in vitro , nilam, serai wangi
1 Departemen Silvikultur, Fakultas Kehutanan dan Lingkungan, IPB University Jl. Ulin Kampus IPB, Dramaga, Bogor, Jawa Barat, Indonesia 16680 * Penulis korespondensi: e-mail: alam@apps.ipb.ac.id
2 Departemen Ilmu Nutrisi dan Teknologi Pakan, Fakultas Peternakan, IPB University Jl. Agatis Kampus IPB, Dramaga, Bogor, Jawa Barat, Indonesia 16680

## PENDAHULUAN
Kesehatan tumbuhan memegang peran penting dalam pertumbuhan  maupun  produktivitas  suatu  tanaman. Menurut  Balijestro  (2014),  penyakit  yang  paling  utama menyerang  jeruk  di  Indonesia  dan  dapat  menyebabkan kematian pada tanaman yaitu penyakit busuk batang atau biasa  disebut  blendok. Penyakit  tersebut  disebabkan  oleh jamur Botryodiplodia theobrome yang dapat membahayakan tanaman hingga kematian.
Gejala  awal  yang  dialami  oleh  tanaman  yaitu munculnya  nekrotik  di  bagian  batang  tanaman  yang bergerak  secara  vertikal  menuju  bagian  daun  dan  pucuk. Gejala  lain  dari  tanaman  yang  terserang  di  antaranya membusuk, daun menguning dan pucuk akan mati (Aisah 2014). Salah satu contoh serangan Botryodiplodia sp. pada tanaman kehutanan yaitu penyakit mati pucuk pada jabon ( Anthocephalus cadamba (Roxb.) Miq.) akibatnya terjadi penurunan kualitas bibit  dan menyebabkan kerugian  bagi para  pembudidaya  jabon.  Penyebab  penyakit  mati  pucuk sampai  15%  pada  bibit  jabon  khususnya  di  Bogor disebabkan oleh Patogen Botryodiplodia theobromae Pat. (Falah et al . 2015).
Penyakit  tanaman  yang  diserang Botryodiplodia sp. dapat menurunkan produktivitas tanaman dan terganggunya  proses  fotosintesis,  maka  dalam  hal  ini dibutuhkan  langkah-langkah  pengendalian.  Pengendalian yang  biasa  dilakukan  di  lapangan  yaitu  menggunakan pestisida, namun penggunaan pestisida terus menurus akan berbahaya bagi lingkungan sekitar. Penggunaan fungisida alami  dapat  dijadikan  alternatif  pengendalian  karena sifatnya yang ramah lingkungan karena berasal dari ekstrak tumbuh-tumbuhan  yang  memiliki  racun  alami  bagi patogen perusak tanaman (Muhtar dan Mahjulan 2003).
Salah  satu  bahan  yang  dapat  digunakan  sebagai fungisida  nabati  adalah  minyak  atsiri.  Minyak  atsiri bersifat  aktif  biologis  sebagai  anti  jamur  dan  anti  bakteri (Purwata dan Dewi 2008). Minyak atsiri  yang digunakan pada  penelitian  ini  adalah  minyak  atsiri  serai  wangi  dan nilam.  Minyak  atsiri  nilam  dan  serai  wangi  merupakan tanaman  penghasil  minyak  atsiri  dan  sudah  banyak dibudayakan di Indonesia. Menurut Kalemba dan Kunicka (2003),  minyak  atsiri  serai  wangi  yang  dihasilkan mengandung  senyawa  anti  fungi.  Sama  halnya  dengan hasil penelitian Kiuchi et al . (2004) dan Zhao et al . (2005) menunjukkan  bahwa  minyak  nilam  mempunyai  anti bakterial dan anti fungi. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui  besar  pengaruh  dari  masing-masing  minyak atsiri  serai  wangi  dan  nilam  yang  dijadikan  sebagai pestisida nabati dalam menghambat pertumbuhan patogen Botryodiplodia sp.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian dilaksanakan pada bulan September sampai November  2022.  Lokasi  penelitian  bertempat  di Laboratorium  Patologi  Hutan  Departemen  Silvikultur Fakultas  Kehutanan  dan  Lingkungan  Institut  Pertanian Bogor.

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah cawan petri  ( ∅ 9  cm),  botol  jar,  botol filial,  sudip, coke  borer , syringe 1  ml, syringe 10  ml, erlenmeye r, Laminar  Air Flow , oven, Autoclave , gelas ukur, vortex , corong, neraca analitik,  bunsen,  mikroskop  optilab, software  Statiscal Analysis System (SAS), alat tulis, penggaris, kamera. Bahan yang digunakan adalah isolat Botryodiplodia sp.,  media  PDA  ( Potato  Dextrose  Agar ),  media  PDB ( Potato Dextrose Broth ), akuades, akuades steril, alkohol 70%, tween 20 , minyak atsiri sereh wangi, minyak atsiri nilam, spiritus, kapas, aluminium foil , plastic wrap , kertas saring, dan kertas label.

## Prosedur Penelitian
Pembuatan Media Potato Dextrose Agar (PDA) dan

## Potato Dextrose Broth (PDB).
Pembuatan  1  liter  PDA  memerlukan  200  gr kentang,  sebelum  digunakan  kulit  kentang  dikupas terlebih dahulu kemudian dicuci bersih dan dipotong dadu. Potongan  kentang  kemudian  direbus  dengan  akuades sebanyak  1  liter  sampai  kentang  melunak.  Air  ekstrak rebusan  kentang  dipisahkan  dari  kentangnya,  kemudian ditambahkan air hingga mencapai 1 liter. Ekstrak kentang yang  sudah  ditambahkan  dengan  akuades  tersebut kemudian  ditambahkan dextrose sebanyak  20  gram  dan agar  sebanyak  14  gram  dan  direbus  hingga  mendidih. Ekstrak  kentang  diangkat dan  didiamkan  sampai  sedikit dingin kemudian  diberikan  satu  kapsul chloramphenicol dan diaduk hingga tercampur rata. Larutan dimasukkan ke dalam labu enlemeyer . Media yang sudah dimasukkan ke dalam enlemeyer kemudian  di  sterilisasi  menggunakan autoclave pada  suhu  121℃  pada  tekanan  1  atm,  lama waktu sterilisasi menggunakan autoclave yaitu selama 15 menit.  Pembuatan  larutan  PDB  memiliki  Langkah pembuatan  yang  sama  dengan  pembuatan  PDA  namun tidak  menambahkan  agar.  Larutan  PDB  dimasukkan  ke dalam botol jar dengan masing- masing volume 29,7 ml.

## Penyediaan Isolat Patogen dan Minyak Atsiri
Isolat yang digunakan adalah Botryodiplodia sp. yang merupakan  koleksi  dari  Laboratorium  Patologi  Hutan Fakultas  Kehutanan  dan  Lingkungan.  Isolat  murni  yang didapat  kemudian  diremajakan  di  dalam  cawan  petri dengan media PDA. Peremajaan ini dilakukan secara steril di  dalam Laminar  Air  Flow .  Minyak  atsri  didapat  dari produsen yang telah mendapatkan Certificate of Analysis sehingga sudah berstandar SNI.

## Pembuatan Larutan Minyak Atsiri
Konsentrasi  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah konsentrasi 1%, 5%, 10%, dan  0%  sebagai  kontrol pada  kedua  minyak  dan  juga  pada  larutan  kombinasi dengan perbandingan 1:1 antara minyak atsiri dan Tween 20 yang kemudian ditambahkan air steril hingga mencapai 10 ml. Pembuatan larutan konsentrasi dilakukan kegiatan pencampuran  antara minyak atsiri serai  wangi  dan nilam dengan tween 20 dan air akuades steril. Konsentrasi yang sudah dibuat nantinya akan diujikan pada media PDA yang bertujuan  untuk  melihat  besar  penghambatan  isolat
Botryodiplodia sp. Kegiatan pembuatan larutan konsentrasi  ini  dilakukan  di Laminar  Air  Flow ,  yang kemudian dicampurkan menggunakan vortex agar larutan tercampur dengan homogen.

## Pembuatan Media Tumbuh Isolat
Masing-masing larutan konsentrasi yang sudah dibuat kemudian  ditambahkan  ke  larutan  PDA, volume  larutan PDA yang digunakan yaitu sebanyak 9,9 ml pada masing- masing  cawan  petri  sebanyak  3  ulangan.  Penambahan larutan konsentrasi yaitu sebanyak 0.1 ml sehingga besar volume  di  dalam  cawan  petri  yaitu  10  ml.  Penambahan larutan konsentrasi  pada  media  PDB  yaitu  sebanyak 0.3 ml kemudian ditambahkan larutan PDB sebanyak 29.7 ml sehingga larutan PDB mencapai 30 ml yang dihomogenkan di botol jar.

## Pengamatan  pada  media  Potato  Dextrose  Agar (PDA)
Pengamatan  yang  dilakukan  pada  media  PDA  yaitu setiap 12 jam sekali yaitu dengan mengukur pertumbuhan panjang  miselium  secara  vertikal  dan  horizontal  pada setiap cawan petri yang kemudian hasil dari pertumbuhan diameter miselium diukur berdasarkan rumus Mulyaningsih dan Achmad (2015) sebagai berikut :
Diameter arah radial = ∅ x+ ∅ y 2 ∅ x = diameter sumbu x ∅ y = diameter sumbu y
Pengamatan pada Media Potato Dextrose Broth (PDB) Isolat Botryodiplodia sp.  diinkubasi  selama  7  hari  di dalam  media  PDB.  Setelah  masa  inkubasi  selama  7  hari miselium  disaring  menggunakan  kertas  saring  yang sebelumnya sudah di oven selama 24 jam pada suhu 60 °C. untuk  mengetahui  berat  keringnya.  Miselia  pada  kertas saring kemudian di oven selama 24 jam dengan suhu 60 °C yang  kemudian  ditimbang  dengan  neraca  analitik. Biomassa  miselia  kemudian  dihitung  dengan  rumus (Mulyaningsih 2013):
Biomassa miselia = (BK kertas saring + BK miselia) –
BK kertas saring Perhitungan persentase penghambatan.
Nilai penghambatan isolat Botryodiplodia sp. dihitung menggunakan rumus (Abd-Alla et al . 2013):
Hambatan Relatif (%) dalam media PDA = Dc -Dt Dc 𝑥 100%
Hambatan Relatif (%) dalam media PDB = B1-B2 B1 𝑥 100%
Keterangan : Dc : diameter isolat kontrol (cm) Dt  : diameter isolat perlakuan (cm) B1 : biomassa miselia kontrol (gram) B2 : biomassa miselia perlauan (gram)

## Pengolahan Data
Data  hasil  pengukuran  dianalisis  menggunakan analisis sidik ragam. Rancangan  percobaan  menggunakan RAL  (Rancangan  Acak  Lengkap)  faktorial  dengan sebanyak 3 ulang. Analisis ini menggunakan software SAS 9.1.3 Portable . Hasil analisis yang menunjukkan pengaruh nyata  kemudian  dilanjutkan  dengan  uji  Duncan.  Model rancangan  yang  dibuat  sebagai  berikut  (Mattjik  dan Sumertajaya 2002):

## Yijk  =  µ  +  αi  +  βj  +  (αβ)ij  +  ɛijk
Keterangan: Yijk  = persentase  penghambatan Botryodiplodia sp. terhadap  control  pada  jenis  minyak  ke-I, konsentrasi minyak ke-j, dan ulangan ke-k μ = nilai rataan umum αi = pengaruh utama jenis minyak ke-i βj = pengaruh utama konsentrasi minyak ke-j
(αβ)ik = pengaruh  interaksi  antara  jenis  minyak  ke-i dan  konsentrasi  minyak ke-i  dan  konsentrasi minyak
εijk  = pengaruh  acak  pada  jenis  minyak  ke-  i, konsentrasi minyak ke-j, dan ulangan ke-k

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Morfologi Botryodiplodia sp.
Serangan patogen ini dapat mengakibatkan kematian pada  ranting,  cabang,  batang tanaman maupun menyebabkan kematian  tanaman.  Pada  kasus  tanaman kehutanan,  cendawan Botryodiplodia sp.  merupakan penyebab  terjadinya  penyakit  mati pucuk  pada  tanaman jabon.  Tanaman  yang  terserang  mati  pucuk  memiliki gejala  nekrosis di  bagian  tengah  maupun  atas  daun. Identifikasi  patogen Botryodiplodia sp.  dapat  dilakukan secara makroskopis dan mikroskopis.
Gambar 1  Morfologi Botryodiplodia sp. (A) Isolat Botryodiplodia sp. berumur 1 minggu, (B) Isolat Botryodiplodia sp.  berumur  1  bulan,  (C)  Konidia Botryodiplodia sp.,  (D)  Konidia Botryodiplodia sp.  menurut  hasil penelitian Aisah et al . (2015)
Journal of Tropical Silviculture Morfologi isolat Botryodiplodia sp. secara makroskopis yaitu pada saat awal pengamatan miselium berwarna putih, kemudian berubah menjadi abu- abu atau hijau  kehitaman  pada  permukaan  atas.  Sementara  pada permukaan  bawah  cawan  petri  kolini  mula-mula berwarna  abu-abu  kemudian  menjadi  warna  hitam. Morfologi  koloni  miselium Botryodiplodia sp  adalah fluffy dan rugose (Aisah  2015).  Hal  ini  sesuai  dengan gambar 1A, terlihat pada gambar bahwa miselium tumuh memenuhi cawan dan berwarna abu-abu kehitaman. Hasil pengamatan mikroskopis menunjukkan hifa Botryodiplodia sp.  bersekat.  Isolat Botryodiplodia sp. ketika  sudah  tua  dicirikan  adanya  konidia  yang  berisi cairan berwarna hitam pekat. Konidia pada Botryodiplodia sp.  ini  berbentuk  ellipsoid  atau  avoid. Ukuran konida  ketika  muda  berukuran  10.05  µm  x 22.36  µm  berwarna  coklat  tua,  sedangkan  konidia yang muda  berukuran  9.49  µm  x  22.33  µm  berwarna  coklat muda.  Aisah  (2014)  menjelaskan  bahwa Botryodiploda
sp.  memiliki  konidia  hialin  dan  nonseptate  yang selanjutnya menjadi coklat dan septate saat tua.

## Uji Penghambatan Botryodiplodia sp. pada Media PDA
Hasil  uji  kedua  minyak  atsiri  pada  media  PDA menunjukkan  bahwa  pertumbuhan diameter pada perlakuan kontrol memenuhi cawan dengan tercepat yaitu pada 60 jam. Hal ini sesuai dengan pendapat Aisah (2015), isolat Botryodiplodia sp.  Memiliki  pertumbuhan  radial yang tergolong cepat yaitu pada hari ke 2-4 dan memenuhi cawan.  Perlakuan  kontrol  dan  perlakuan  serai  wangi  1% memenuhi cawan petri pada waktu ke- 48 jam (hari ke- 2). Perlakuan  serai  wangi  1% mengalami pertumbuhan yang menyerupai kontrol, hal ini dikarenakan konsentrasi yang digunakan  memiliki  efek  penghambatan  pertumbuhan Botryodiplodia sp. rendah. Hal ini sesuai dengan pendapat Aisah  (2015)  bahwa  isolat Botryodiplodia  theobromae tumbuh memenuhi cawan petri setelah 2 sampai dengan 4 hari masa inkubasi. Rata- rata pertumbuhan diameter paling lambat  terdapat  pada  perlakuan  nilam  10%  kemudian disusul oleh perlakuan kombinasi 10% hal ini terlihat dari gambar 2, bahwa grafik  kedua perlakuan tersebut  hampir berimpitan.  Adanya  perbedaan  antara  pertumbuhan perlakuan  kontrol  dengan  perlakuan  minyak  atsiri,  maka dapat  disimpulkan  bawah  perlakuan  pemberian  minyak atsiri efektif untuk menghambat pertumbuhan Botryodiplodia sp.  dan  terdapat antifungal di  dalamnya. Hal  tersebut  sesuai  dengan  pendapat  Parwata  dan  Dewi (2008)  bahwa  minyak  atsiri  mempunyai  peran  anti  fungi dengan  cara  mengganggu  proses  terbentuknya  membran ataupun dinding sel sehingga tidak terbentuk ataupun tidak terbentuk dengan sempurna.
Laju  pertumbuhan  diameter  patogen  pada  setiap perlakuan  pemberian  jenis  minyak  ataupun  pemberian besar konsentrasi berbeda beda. Penghambatan pertumbuhan diameter patogen tersebut secara visual dapat
Gambar 2  Rata-rata pertumbuhan diameter PDA 0 5 10 0 12 24 48 60 72 84 96 108 120 132 144 156 168 180 Kontrol Serai wangi 1% Serai wangi 5%
Serai wangi 10%
dilihat  pada  Gambar  3.  Pertumbuhan  tercepat  setelah kontrol terdapat  pada  serai  wangi  1%  dan  pertumbuhan diameter  yang  relatif  lambat  terdapat  pada  nilam  10%, kombinasi  10%,  dan  serai  wangi  10%.  Hal  ini  sesuai dengan pendapat  Pelezar  (2005) yang menyatakan bahwa semakin  tinggi  konsentrasi  dari  perlakuan  pemberian bahan  bakteri,  maka  semakin  kuat  daya  antibakterinya sehingga zona hambatnya semakin luas.
Persentase  penghambatan  paling tinggi  dan  baik ditunjukkan  oleh  perlakuan  Nilam  10%  sebesar  59.07% sedangkan  penghambatan  terendah  ditemukan  pada perlakuan serai wangi sebesar 1% yaitu sebesar 4.67%, hal ini  disebabkan  oleh  konsentrasi  yang  relatif  rendah  yang diberikan  pada  isolat Botryodiplodia sp,  sehingga  tidak terlihat  nyata  menghambat  isolat Botryodiplodia sp.
besarnya  persentase  penghambatan  perlakuan  nilam terhadap  isolat Botryodiplodia sp. dikarenakan di dalam tanaman  nilam  mengandung seskuiterpen,  cytotoxic chalcones, dan  antimutagenik  (Miyazawa et  al . 2000). Kandungan  lainnya  yang  terdapat  pada tanaman  nilam adalah patchouli  alcohol ,  guaiene,  seychellene,  dan patchoulene. Kandungan  tertinggi  pada  tanaman  nilam yaitu patchouli  alkohol yang  memiliki  peran  sebagai antibakteri.  Senyawa  seskuiterpen  terutama  seskuiterpen alkohol  merupakah  merupakan  suatu  penentu  aktivitas microbial dan  aktivitas larvicidal (El-Shazly dan Hussein 2004),  sehingga  minyak  atsiri  nilam  efektif  menghambat pertumbuhan patogen secara in vitro.
Adanya  aktivitas  anti  fungi  juga  terlihat  pada perlakuan  minyak  atsiri  serai  wangi.  Perlakuan  minyak
Gambar 4  Persentase  penghambatan  minyak  atsiri
terhadap Botryodiplodia sp.  pada  media PDA Gambar 5  Persen  hambatan Botryodiplodia sp. pada media PDB
Gambar 6  Pertumbuhan  koloni Botryodiplodia sp.  berumur  7  hari  pada  berbagai  perlakuan.  Gambar  (a),  (e),  (i) kontrol, (b) serai wangi 1%, (c) serai wangi  5%, (d) serai  wangi  10%, (f)  nilam  1%, (g)  nilam  5%, (h), nilam 10%, (j) kombinasi 1%, (k) kombinasi 5%, (l) kombinasi 10%
atsiri serai wangi 10% menunjukkan persen penghambatan sebesar  41,56%.  Proses  penghambatan  perlakuan  serai wangi  disebabkan bahan aktif  yang terkandung di  dalam serai  wangi.  Hal  ini sesuai  dengan  pendapat  Burdock (2002), komponen senyawa utama pada serei wangi terdiri dari  sitronelal,  sitronellol,  dan  geraniol  yang  memiliki kandungan  anti  fungi  yang  efektif  menghambat pertumbuhan  patogen  penyebab  penyakit.  Hal  serupa terjadi pada perlakuan kombinasi yang memilki persentase penghambatan  sebesar  56.02%  dan  tergolong  efektif menghambat pertumbuhan Botryodiplodia sp.

## Pengujian Minyak Atsiri pada Media PDB
Uji  daya  hambat  pada  media  PDB  dilakukan  pada akhir pengamatan yaitu pada hari ke- 7. Uji daya hambat pada  media  PDB  dilakukan  dengan  membandingkan biomassa  antara  perlakuan  minyak  atsiri  dan  kontrol. Pertumbuhan  biomassa  dapat  dilihat  pada  Gambar  5. Gambar  5  menunjukkan  nilai  hambatan  biomassa Botryodiplodia sp.  pada  masing-masing  perlakuan terhadap  kontrol  dalam  media  PDB.  Nilai  hambatan biomassa tertinggi terdapat pada nilam 10% yaitu sebesar 87,59%  dan  pada  perlakuan  kombinasi  10%  sebesar 78.54%. Persentase terendah terdapat pada perlakuan serai wangi  1%  dan  nilam  1%  dengan  masing-masing  nilai hambatannya sebesar 20,04% dan 29,32%. Hal ini sesuai dengan  Rahmah  dan  Rahman  (2010)  yang  mengatakan bahwa semakin tinggi konsentrasi  maka  semakin  banyak kandungan  senyawa  aktif  yang  bersifat  anti  fungi  dalam penghambatan  pertumbuhan  jamur.  Semakin  kecil  berat miselium,  maka  senyawa  aktif  yang  terkandung  pada minyak atsiri akan menekan pertumbuhan cendawan.
Berdasarkan gambar 7, pertumbuhan  isolat Botyodiplodia sp dalam media PDB menunjukkan adanya penghambatan pada masing-masing perlakuan. Perlakuan konsentrasi 10% menunjukkan bahwa misselium tumbuh secara lambat, hal ini dikarenakan pada minyak atsiri serai wangi  dan  nilam  masing-masing  memiliki  senyawa terpenoid di dalamnya. Senyawa terpenoid ini mempengaruhi  pengambilan  nutrien  oleh  sel  dari lingkungannya,  sehingga  menghambat  kebutuhan  (ATP) yang  menyebabkan  berkurangnya  bertumbuhan  dan perkembangan  hifa  yang  pada  akhirnya  hifa  menjadi pendek.  Akibatnya  miselium  yang  terbentuk  menjadi berkurang dan pertumbuhan koloni  menjadi  tidak normal (Larbel  dan  Muller  1976).  Pemberian  minyak  atsiri  ini cukup efektif untuk menghambat pertumbuhan Botryodiplodia sp. karena senyawa-senyawa di  dalamnya yang mengandung anti fungi.

## Hasil Analisis Sidik Ragam
Hasil analisis sidik ragam dalam media PDA dan PDB menunjukkan  nilai  P- value <0.05  pada  jenis  minyak, konsentrasi  dan  interaksi  (jenis  minyak  dan  konsentrasi) yang  artinya  berpengaruh  nyata  terhadap  penghambatan pertumbuhan  diameter Botryodiplodia sp.  pada  tingkat kepercayaan 95%. Untuk mengetahui nilai perlakuan yang terbaik,  maka  dari  hasil  analisis  sidik  ragam  tersebut dilanjutkan dengan uji Duncan (Tabel 1).
Berdasarkan  Tabel  2  ketiga  jenis  minyak  memiliki nilai  penghambatan  diameter yang  berbeda  nyata.  Jenis minyak  nilam memiliki  nilai  persentase  penghambatan terbaik dalam media PDA dibandingkan dengan perlakuan kombinasi  dan  serai  wangi  dan  hal  serupa  terjadi  pada media  PDB.  Penggunaan  nilam  terbukti  efektif menghambat  pertumbuhan Botryodiplodia sp.  Nilai  rata- rata penghambatan pada nilam lebih besar dari serai wangi dikarenakan  dalam  minyak  nilam  terdapat  kandungan
Tabel 1  Hasil  analisis  sidik  ragam  penghambatan Botrydiplodia  sp.  dalam  media  PDA  dan PDB
Sumber Keragaman Parameter Diameter (PDA) Biomassa (PDB) Jenis minyak <0.0001 bn <0.0001 bn Konsentrasi <0.0001 bn <0.0001 bn interaksi 0.0007 bn 0.0233 bn
*bn = berpengaruh nyata pada taraf uji 5%
Tabel 2  Hasil  uji  Duncan  pengaruh  jenis  minyak atsiri terhadap penghambatan Botryodiplodia sp. Jenis minyak Rata-rata penghambatan (HR) (%) Diameter (PDA) Biomassa (PDB) Nilam 41.2a 63.78a Serai wangi 37.81b 63.76a Kombinasi 21.80c 47.46b
*huruf yang berbeda menunjukkan perlakuan berbeda nyata pada tingkat kepercayaan 95%
Table 3  Hasil  uji  Duncan  pengaruh  konsentrasi terhadap penghambatan Botryodipodia sp.
Konsentrasi Rata-rata penghambatan (HR) (%) Diameter (PDA) (PDB) 10% 52.22a 78.74a 5% 34.6b 71.97b 1% 14c 38.5c *huruf yang sama menunjukkan perlakuan tidak berbeda nyata pada tingkat kepercayaan 95%
Gambar 7   Mikroskopis hifa Botryodiplodia sp. perlakuan  (a)  kontrol  (b)  minyak  atsiri  serai  wangi  (c)  minyak atsiri nilam
patchouly  alcohol,  eugenol  dan  terpenoid .  Ketiga senyawa  tersebut  merupakan  bahan  aktif  minyak  atsiri yang berperan penting untuk menghambat patogen, hal ini sesuai dengan pendapat Abeymickrama dan Herath (2008) yang  mengatakan  bahwa  komponen  utama  minyak atsiri yang  berperan  penting  untuk  anti fungi  adalah  senyawa fenol, terpen alkohol, dan aldehid.
Perlakuan  pemberian  konsentrasi  berpengaruh  nyata terhadap  penghambatan  diameter  pada  media  PDA. Semakin  tinggi  konsentrasi  dari  setiap  perlakuan  maka semakin  besar  penghambatan  nya  terhadap  isolat Botryodiplodia sp.  Berdasarkan  hasil  yang  didapat,  dapat dikaitkan dengan hasil penelitian Sitepu et al . (2012) yang menyatakan  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak yang  diujikan  pada  media  maka  akan  semakin  banyak ekstrak  yang  berdifusi  ke  dalam  sel  jamur  yang mengakibatkan  adanya  peningkatan  persentase  daya hambat.  Tabel  4  merupakan  hasil  uji  Duncan  terhadap interaksi  antara  jenis  minyak  atsiri  dan  konsentrasi dilakukan  pada  media  PDA  dan  PDB.  Uji  lanjut Duncan pada  tabel  di  atas memiliki  perbedaan  persentase  hambat yang  berbeda  beda.  Nilai  hambat  tertinggi  pada  kedua media  terdapat  pada  nilam  10%  dengan  nilai  hambat sebesar 59.07% pada media PDA dan 87.59% pada media PDB.  Nilai  rata-rata  penghambatan  terendah  pada perlakuan  serai  wangi pada media PDA dan PDB terdapat pada perlakuan serai wangi 1% yaitu sebesar 4.67% pada media  PDA  dan  20.04%  pada  media  PDB,  hal  ini menunjukkan  bahwa  perlakuan  serai  wangi  1%  tidak efektif  menghambat  patogen Botryodiplodia sp.  pada media PDA maupun PDB.
Pengamatan  Mikroskopis  Hifa  Botryodiplodia  sp. setelah Perlakuan
Pemberian  minyak  atsiri  serai  wangi,  nilam  dan kombinasinya  telah  terbukti  menghambat  patogen Botryodiplodia sp.  pada  perlakuan  konsentrasi  yang berbeda-beda.  Adanya  peran  minyak  atsiri  yang menghambat pertumbuhan patogen menimbulkan perubahan  pada  bentuk  hifa  jika  diamati  secara mikroskopis. Pengamatan dilakukan dengan membandingkan  struktur  hifa  antara  perlakuan kontrol dengan perlakuan minyak atsiri.
Hifa  isolat  pada  perlakuan  kontrol  menunjukkan bahwa Botryodiplodia sp. memiliki sekat dan percabangannya  yang  teratur.  Berbeda  dengan  Gambar  7 (b  dan  c),  perubahan  yang  terjadi  pada  perlakuan pemberian minyak atsiri dan nilam menunjukkan hifa yang membengkak,  melingkar  tidak  beraturan  dan  terdapat bulatan seperti gelembung. Hal ini sesuai dengan pendapat Hu et  al .  (2003)  yang  menyatakan  bahwa  perubahan morfologi  suatu  patogen  yang abnormal yang disebabkan oleh  metabolit sekunder  (zat  ekstraktif)  akan  mengalami pembengkakan  ( swelling ),  pertumbuhan  yang  melingkar ( curling ),  berbentuk  manik-manik  ( bead  formation )  dan pertumbuhan yang berlebihan ( Hyperdivergence ).

## SIMPULAN DAN SARAN

## Simpulan
Pemberian minyak atsiri serai wangi dan nilam dengan berbagai  macam  konsentrasi  memiliki  pengaruh  efektif untuk  menghambat  pertumbuhan  patogen Botryodiplodia sp.  Perlakuan  minyak  atsiri  pada  media  PDA  dan  PDB menunjukkan  nilai  persen  hambat  tertinggi  pada  nilam 10%,  sedangkan  nilai  persen  hambat  terendah  terdapat pada serai wangi 1%. Hal ini disebabkan karena adanya zat anti fungi yang terdapat pada kedua jenis minyak dan juga besar  konsentrasi  yang  diberikan  sehingga  dapat disimpulkan  bahwa  minyak  atsiri  nilam  dan  serai  wangi efektif  dalam  menghambat  patogen Botryodiplodia sp. Pengamatan  mikroskopis setelah perlakuan  menunjukkan hifa  yang  mengalami  perubahan  pola  maupun  bentuk  di antaranya  membengkak,  pertumbuhan  yang  melingkar, berbentuk manik-manik dan pertumbuhan yang berlebihan.

## Saran
Perlu adanya penelitian lanjutan mengenai anti fungi minyak atsiri serai wangi dan nilam untuk pengaplikasian secara in  vivo .  Hal  bertujuan  untuk  menguji  keefektifan nya  dalam  kegiatan  pengendalian  penyakit  tanaman  dan juga  perlu  adanya  pengujian  formula  nya  terhadap beberapa  jenis  patogen  penyebab  penyakit  tanaman lainnya.

## DAFTAR PUSTAKA
Abd-Alla,  MA  Nadia,  G  El-Gamal,  ER  Hamed.  2013. Effect  of  some  natural  plant  extracts  and  plant essential  oils  on  suppressive of Penicillium digitattum (Pers.Fr)  Sacc.  and  its  enzyme  activity which  caused  Citrus  Green  Mold  for  Navel Oranges  in  Egypt .  Journal  of Applied  Sciences Research 9(6):4073- 4080.
Abeywickrama K and H Herath. 2008. In Vitro Application of  Selected  Essential  Oils  and  Their  Major Component  in  Controlling  Fungal  Patogens  of Crown Rot  in  Embul  Banana  ( Musa  acuminate – AAB). International  J.  Food  Sci.  and  Technol 43:440-447.
Tabel 4  Hasil  uji  Duncan  pengaruh  jenis  dan konsentrasi  minyak  atsiri  terhadap  persen penghambatan  koloni Botryodiplodia sp.
pada  media  PDA dan PDB Perlakuan Rata-rata penghambatan (HR) (%) PDA PDB Nilam 10% 59.07a 87.59a Kombinasi 10% 56.02b 78.54b Nilam 5% 46.67b 74.3b Serai wangi 10% 41.58c 70.1b Kombinasi 5% 37.92c 72.3b Kombinasi1% 19.48d 40.42d Serai wangi 5% 19.19d 52.24c Nilam 1% 17.85d 29.32e Serai wangi 1% 4.67e 20.04f
*huruf yang sama menunjukkan perlakuan tidak beda nyata pada tingkat kepercayaan 95%
Aisah AR. 2014. Identifikasi dan patogenisitas cendawan penyebab  primer  penyakit  mati  pucuk  pada  bibit jabon  ( Anthocephalus  cadamba (Roxb).  Miq)
[tesis]. Bogor (ID): Pascasarjana Institut Pertanian Bogor.
Aisah  AR,  Soekarno  BPW,  Achmad  2015.  Isolasi  dan identifikasi  cendawan  yang  berisolai  dengan penyakit mati pucuk pada bibit Jabon ( Anthocepalus cadamba (Roxb.)  Miq). Jurnal  Penelitian  Hutan Tanaman 12(3):153– 163.
Balijestro.2014.  Gejala  Serangan  Penyakit  Diplodia
( Botryodiplodia theobromae Pat.) dan Pengendaliannya. Tersedia pada: https://balijestro.litbang.pertanian. go.id
El-Shazaly, AM and Hussein KT 2004.Chemical Analysis and  Biological  Activities  of  the  Essential  Oil  of Teucrium  leucocladm  Boiss ( Lamiaceae ). J. Biochemical  Systematic  and  and  Ecology 32:665- 674.
Falah  S,  Achmad,  Winara  A.  2015.  Aktivitas  Antifungi Ekstrak Akar Mahoni terhadap Isolat Botryodiplodia theobromae Pat.  Penyebab  Mati  Pucuk  pada  Bibit Jabon. J. Ilmu Teknol Kayu Tropis 13(1):1-10. Hu  K,  Dong  A,  Kobayashi  H,  Iwasaki  S,  Yao  X.  2003.
Antifungal agent from tradisional Chinese medicines  against  rice  blast  fungus  Pyricularia oryzae  Cavara  Pp.  525-549.  On  Plant-Derived Antimycotics : Current Trend and Future Prosp.ects. Rai  M,  Mares  D  (Edt.).  New  York  (US)  :  Food Product Press. Jayanegara A, Makkar
Kalemba  A  dan  A  Kunicka.  2003.Antibacterial  and Antifungal Properties of Essential Oil. Current medical Chemistry 10(10):813-829.
Kiuchi F, Matsuo K Ito M, Qui TK, and Honda  G.  2004. New sesquiterpene hydroperoxides with trypanocidal  activity  from  Pogostemon  cablin .
J.Che Pharn Bull 52(12):1495-1496.
Lorber P dan WH Muller. 1976. Volatile growth  inhibitors produced  by Salvia leucophylla :effects on seedling root tip ultrastructure.  Amer J.  Bot 63(2):196- 200.
Miyazawa M, Okuno Y, Nakamura S, and Kosaka H. 2000.  Antimutagenic  activity  of  flavonoids  from Pogostemon  cablin . J.  Agric  Food  Che 48(3):642- 647.
Muhtar  dan  Muhjalan.  2003.  Skrining  sebagai  fungisida Botanis.  Prosiding  Lokakarya.  Nasional  Pertanian Organik;  Malang,  Indonesia.  Bogor:  Universitas Muhammadiyah.
Parwata  AOIM  dan  Dewi  SFP.  2008.  Isolasi  dan  uji aktivitas  antibakteri  minyak  atsiri  dari  rimpang lengkuas. Jurnal Kimia 2(2):100-104.
Pelezar  MJ  dan  Chan  ECS.  2005.  Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta (ID): Universitas Indonesia. Rahmah N. dan A Rahman. 2010. Uji fungistatic  ekstrak daun  sirih  ( Piper  betle L.)  terhadap  Candida albicans. Bioscientiae 07(2) Hal 17-24.
Sitepu  IR,  Sestric  R,  Ignatia  L,  Levin  D,  German  JB,
Gillies  LA,  Almada  LAG, Bound-Mills  KL.  2013. Manipulations  of  culture  conditions  alters  lipid content and  fatty  acid  profiles  of  a  wide  variety  of known and  new  oleaginous  yeast  species. Bioresources Technology 144C:360-369. Zhao  Z,  Lu  KLJ,  Chan  CH,  and  Jiang  ZH.  2005. Determination  of  Patchoulic  alcohol  in  herba pogostemonsis  by  GC- MS-MS. J.  Cheim  Pharn Bull 53(7):856-860.
Mattjik AA, Sumertjaya M.2002. Perancangan  Percobaan dengan  Aplikasi  SAS  dan  Minitab.  Bogor  (ID): Institut pertanian Bogor Press.
Mulyaningsih 1. 2003. Pengaruh pH, penggoyangan media dan  ekstrak  daun sirih  wangi  ( Piper  crocatum
Linn.) terhadap Rizoctonia sp. [skripsi]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor. Mulyaningsih I, Achmad. 2015. Pengaruh pH, penggoyangan media, dan ekstrak daun sirih  merah ( Piper  crocatum Linn.)  terhadap  pertumbuhan cendawan Rhizoctonia sp. Jurnal  Hortikultura 25(2):150-159.