## Efektivitas Pupuk Cair Pseudomonas fluorescens Agensia Pengendali Hayati Terhadap Penyakit Mosaik Tanaman Kakao
Wiwit Probowati 1)* , Ika Afifah Nugraheni 2) , Titin Aryani 3) 1,2 Program Studi Bioteknologi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas ‘Aisyiyah Yogyakarta 3 Program Studi Teknologi Laboratorium Medis, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas ‘Aisyiyah Yogyakarta
*) E-mail: wiwitprobo@unisayogya.ac.id Paper submit : 12 Februari 2020, Paper publish: Maret 2021
Abstract – Cocoa mosaic disease is one of disease which is cause cocoa trees suffering. Cocoa mosaic disease almost all caused by Cocoa swollen shoot virus (CSSV). In the framework of integrated pest and disease management (IPM) strategy, the use of biological agents and botanical extract pesticide have received attention and developed by experts or practitioner/farmers because it has a function as environment- friendly pesticide. Pseudomonas fluorescens are obligate aerobic bacteria that are very valuable for agricultural technology. The bacteria also protects plants from pathogens infection by producing secondary metabolites that kill bacteria and other virus so the bacteria can used as safe and environmentally friendly biological control agents. This study aims to determine the effectiveness of P. fluorescens liquid fertilizer formula to suppressing mosaic disease in cocoa plants. The research method was carried out by making a liquid formula from P. fluorescens with a concentration of 25%, 50% and 75% and then applying it to cocoa plants that were infected by mosaic disease. The liquid fertilizer formula is also compared to spraying using chemical insecticides. The results showed that at a liquid formula concentration of 75% it could have a positive effect on the growth and development of cocoa plants. Then from research results, the liquid formula P. fluorescens 75% was able to suppress the mosaic symptoms most effectively by disappearing the mosaic spots on the leaves, delaying leaf shedding and accelerating the growth of ner shoots of cocoa plants.
Keywords : Efectivity, Pseudomonas fluorescens, mosaic disease, cocoa
Abstrak – Penyakit kakao yang sampai saat ini merugikan adalah adanya penyakit mosaik kakao. Penyakit mosaic pada tanaman kakao disebabkan oleh Cocoa swollen shoot virus (CSSV). Dalam kerangka strategi pengendalian hama penyakit terpadu (PHPT), penggunaan agensia hayati dan pestisida nabati dewasa ini kembali diperhatikan dan dikembangkan oleh pakar ataupun praktisi/petani karena memiliki fungsi sebagai pestisida ramah lingkungan. Pseudomonas fluorescens adalah bakteri aerob obligat yang melindungi tanaman  dari  infeksi  oleh  patogen  dengan  memproduksi  metabolit  sekunder  yang  membunuh  bakteri  dan  virus  lain  sehingga  dapat dimanfaatkan sebagai agen pengendali hayati yang aman dan ramah lingkungan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efektivitas pupuk cair P.  fluorescens  dalam  menekan  penyakit  mosaik  pada  tanaman  kakao.  Metode  penelitian  ini  dilakukan  dengan  cara membuat formula cair dari P. fluorescens dengan konsentrasi 25%, 50% dan 75% kemudian mengaplikasikannya ke tanaman kakao yang terserang penyakit mosaik. Formula pupuk cair juga dibandingkan dengan penyemprotan menggunakan insektisida kimia. Hasil penelitian  menujukkan  bahwa  pada  konsentrasi  formula  cair  75%  dapat  memberikan  efek  positif  terhadap  pertumbuhan  dan perkembangan tanaman kakao. Kemudian dari hasil penelitian formula cair dari P. fluorescens mampu menekan gejala mosaik paling efektif dengan menghilangnya berkas mosaic pada daun, menghambat pengguguran daun dan mempercepat pertumbuhan tunas baru tanaman kakao.
Kata kunci : Efektivitas, Pseudomonas fluorescens, penyakit mosaik, kakao

## PENDAHULUAN
Kakao ( Theobroma cacao L.) merupakan salah  satu  komoditas  perkebunan  yang merupakan  komoditas  unggulan  nasional. Pada tahun 2015 sampai sekarang Indonesia menjadi  produsen  kakao  terbesar  ke-6  di dunia  (Tresliyana,  2015).  Kendala  yang dihadapi dalam budidaya kakao di Indonesia adalah  banyaknya  hama  dan  penyakit  yang antara  lain  disebabkan  oleh  virus.  Di Indonesia,  penyakit  mosaik  pada  tanaman kakao untuk pertama kalinya dilaporkan oleh
Parnata pada tahun 1976. Tentang penyebab penyakitnya,  Parnata,  1976  menduga  kuat bahwa  penyakit  tersebut  disebabkan  oleh virus.  Probowati et  al .  (2019)  membuktikan bahwa  penyebab  penyakit  mosaic  pada tanaman kakao adalah Cocoa swollen shoot virus (CSSV). Dalam kerangka strategi pengendalian hama penyakit terpadu (PHPT), penggunaan agensia hayati dan pestisida nabati dewasa ini kembali diperhatikan dan dikembangkan oleh pakar  ataupun  praktisi/petani  karena memiliki  fungsi  sebagai  pestisida  ramah
lingkungan.  Pengendalian  penyakit  karena bakteri  dan  virus  dapat  dilakukan  dengan menambahkan antagonis dan bahan organik ke  dalam  tanah (Ayed  dan  Tamimi,  2007). Pengendalian  menggunakan  agensia  hayati merupakan pilihan yang perlu dikembangkan, sebab  relatif  murah  dan  mudah  dilakukan,
serta bersifat ramah lingkungan. Pseudomonas kelompok fluorescens merupakan  bakteri  antagonis  yang  banyak dimanfaatkan  sebagai  agensia  hayati  baik untuk jamur, bakteri pathogen maupun virus (Arwiyanto dkk, 2007).
Usaha pengendalian virus pada saat ini masih ditekankan pada penggunaan pestisida sintetik  untuk  mengendalikan  vektor  virus. Penggunaan insektisida yang tidak bijaksana menimbulkan  banyak  masalah,  antara  lain kerusakan  rantai  makanan  dan  dampak kesehatan manusia sehingga perlu dilakukan pengendalian  alternatif  yang  efektif  dan ramah  lingkungan. Pseudomonas  fluorescens merupakan  salah  satu  bakteri  antagonis karena  memiliki  kemampuan  mengimbas ketahanan  sistemik. P.  fluorescens dilaporkan meningkatkan  kandungan  senyawa  fenol tanaman (Azizah, 2009 dan Chairul, 2003) . P.  fluorescens merupakan  salah  satu  strain bakteri  antagonis  yang  telah  menunjukkan kemampuannya  di  dalam  mengendalian beberapa  patogen  tanaman,  khususnya patogen tular tanah, baik in vitro, in planta, maupun  in  vivo .    P.  fluorescens mempunyai
sifat
“Plant Growth Promoting Rhizobacteria”  (PGPR) (Elad et.  al ,  2007), menghasilkan antibiotika 2,4- diasetilfloroglusinol (Phl atau DAPG) (Majid
& Ashna, 2013 dan Ollenu & Owusu, 2009) dan  siderofor  (Soesanto,  2017),  mampu mengoloni  akar  tanaman (Soesanto  2008, 2009) , serta mengimbas ketahanan tanaman (Raajimakers  &  Weller,  1998  dan  Soesanto,
2010).  Untuk  dapat  menggunakan  agensia pengendalian hayati secara efektif diperlukan formulasi yang tepat dalam membuat ekstrak P. fluorescens. Formulasi  pupuk  cair  P. fluorescens yang  telah  diketahui  efektif memberikan  perubahan  terhadap  tanaman kakao yang bergejala mosaic. Probowati dkk (2020)  membuktikan  bahwa  formula  pupuk cair  P. fluorescens 75%  adalah  yang  efektif
dalam  memberikan  pengaruh  baik  bagi pertumbuhan  dan  perkembangan  tanaman kakao. Namun perlu pengamatan lebih lanjut bagaimana  efeknya  terhadap  gejala  mosaic tanaman  kakao.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  menguji  efektifitan  formula  75%  P . fluorescens untuk  menekan  gejala  penyakit mosaik pada tanaman kakao.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilaksanakan di perkebunan  kakao  milik  rakyat  di  desa Banjaroya, Kalibawang, Kulonprogo.
Analisis  data  laboratorium  dilakukan  di Laboratorium Terpadu Universitas ‘Aisyiyah Yogyakarta.

## 1. Penyiapan Lahan Tanam Bibit Kakao
Bibit  tanaman  kakao  Klon  DR  (Djati Runggo) berukuran 10 cm dibibitkan dalam polibag ukuran 500 gram sampai berukuran Panjang  30  cm  dan  siap  digunakan.  Lahan dibersihkan  dari  gulma  dan  diolah    dengan dicampur pupuk kandang (1 kg m -2 ).
2. Pembuatan Formula Cair P. fluorescens Formula cair dibuat dengan merebus 400 g  daging  keong  dengan  1  L  air  dan ditambahkan  2  g  terasi  sampai  mendidih, kemudian disaring dan kaldunya dimasukkan ke  dalam  jerigen  steril,  ditutup  rapat,  dan disimpan  pada  suhu  kamar  sampai  dingin (Soesanto et.al .  2010).  Isolat  P. fluorescens (konsentrasi  10 9 upk  mL -1 )  dimasukkan  ke dalam  kaldu  keong  dan  dikocok  (Daiki Orbital  Shaker)  selama  3  hari  pada  suhu ruang  dengan  kecepatan  150  rpm.  Isolat bakteri  P. fluorescens yang  digunakan  dalam penelitian  ini  merupakan  koleksi  dari Laboratorium Ter padu Universitas ‘Aisyiyah Yogyakarta.
3. Pengaruh  Pemberian  P. Fluorescens terhadap  Pertumbuhan  Tanaman Kakao Penelitian dirancang menggunakan rancangan  acak  kelompok  nonfaktorial dengan 5 perlakuan dan 4 ulangan. Perlakuan yang  dicoba  meliputi  kontrol,  insektisida (bahan aktif Sipermetrin, konsentrasi 20 mL per  17  L  air),  serta  penyiraman  dan
penyemprotan P. fluorescens sebanyak 7 kali. Aplikasi P.  fluorescens dilakukan  dengan interval  1  minggu  dengan  dosis  20  mL tanaman-1  (untuk  aplikasi  1-3)  dan  40  mL tanaman-1  (untuk  aplikasi  ke  4 – 7)  (Rustati dkk,  2004).  Peubah  yang  diamati  meliputi masa  inkubasi,  intensitas  penyakit,  tinggi akhir  tanaman,  panjang  akar  terpanjang (akhir  penelitian),  jumlah  daun  dan  bobot kering  akar,  dan  bobot  akhir  tanaman. Perhitungan intensitas penyakit menggunakan rumus:
Dengan IP, intensitas penyakit (%); n, jumlah  tanaman  terserang  pada  tiap kategori;  N,  jumlah  tanaman  diamati;  Z, nilai  kategori  serangan  patogen;  v,  nilai setiap kategori serangan patogen. Penilaian gejala penyakit karena virus menggunakan skala (Dolores 1996).

## 4. Uji  efektifitas  formula  cair  P. Fluorescens  75%  terhadap  gejala mosaic tanaman kakao.
Penelitian  dirancang  dengan  Secara terpisah  setelah  dilakukan  uji  efektifitas formulasi  pupuk  cair  maka  dilakukan penyemprotan  tanaman  kakao  bergejala mosaic  dengan P.  Fluorescens 75%.
Selanjutnya  tanaman  hasil  perlakuan P. Fluorescens 75%  dilakukan  penanaman  di lahan perkebunan. Setelah beradaptasi selama 1  bulan  kemudian  dilakukan  penyemprotan kembali  dengan  formula  cair P.  Fluorescens 75%  sebanyak  7  kali  setiap  minggu. Kemudian  dilakukan  pengamatan  terhadap berkurangnya  gejala  penyakit  mosaic  pada tanaman kakao. Pengamatan meliputi:
a. Berkurang/hilangnya  berkas  mosaic pada daun.
b. Tumbuhnya tunas baru
c. Berkurangnya daun gugur.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pertama dilakukan survey di perkebunan  kakao  milik  rakyat  di  desa Banjaroya, Kalibawang Kulonprogo Yogyakarta.  Hasil  survey  lokasi  didapatkan kebun  kakao  klon  Djati  Runggo  1  (DR1) yang  sebagian  besar  terserang  penyakit
mosaik. Menurut Probowati et al ., (2019) klon DR1  yang  memiliki  gejala  mosaik  pada daunnya ini terbukti terserang Cacao swollen shoot  virus  (CSSV).  Gejala  secara  jelas tampak pada daun kakao. Umur tanaman ini sekitar  15  tahun.  Dari  pohon-pohon  inilah diandalkan  produksi  buah  kakao  yang dimanfaatkan  bijinya  untuk  membuat makanan coklat.
Gambar 1. Identifikasi gejala penyakit mosaik pada daun kakao di perkebunan kakao
Pada  gambar  tampak  gejala  mosaik pada  daun  kakao  yang  ditandai  dengan adanya  alur  berbentuk  lingkaran  dan selanjutnya membentuk alur mirip bulu ayam.
Penyebaran  penyakit  mosaik  ini  diketahui dapat  melalui  perbanyakan  teknik  sambung samping  maupun  biji  (Somowiyarjo  dkk,
2014).
Gambar 2. Buah kakao yang sehat dan terinfeksi penyakit mosaik. a dan b) buah kakao yang tidak terinfeksi virus dan biji kakao yang sehat berwarna putih c, d) buah kakao yang terinfeksi virus dan biji kakao terinfeksi virus berwarna hitam.
Gejala mosaik dari tanaman kakao juga ditemukan  pada  buah  dan  biji  kakao.  Pada tanaman yang sehat akan memiliki buah yang sehat pula, artinya tidak ada gejala terinfeksi virus. Penampakan buah kakao memiliki kulit halus  dan  biji  kakao  berdaging  buah  warna putih  dan  antar  biji  tidak  saling  melekat. Sementara itu pada tanaman yang terinfeksi virus, kulit buah kakao terlihat berkerut dan
mengalami  nekrosis.  Ketika  buah  kakao dibelah  akan  tampak  biji  kakao  yang berwarna hitam dan antar biji saling melekat. Tanaman  kakao  yang  terserang  virus  juga dapat dilihat dari adanya pembengkakan pada bagian  batang  kakao  (Gambar  3).  Batang tanaman kakao yang membengkak ini akibat terserang Cacao swollen shoot virus .
Gambar 3. Batang tanaman kakao yang mengalami pembengkakan (swollen) karena terinfeksi virus
Berdasarkan  pengamatan  kondisi lapangan  di  perkebunan  dimana  banyak tanaman  terserang  CSSV  dan  gejala  dapa diamati  mulai  dari  daun,  buah  dan  batang. Maka dari tanaman yang terinfeksi inilah yang akan  digunakan  untuk  menghasilkan  bibit
kakao pada penelitian ini. Pada penelitian ini diambil  biji  dari  buah  kakao  yang  terserang penyakit  mosaik  kemudian  ditumbuhkan dalam  polybag.  Pengamatan  gejala  mosaik dari  bibit  tanaman  terinfeksi  ini  dilakukan ketika  tanaman  sudah  memiliki  lebih  dari  3
helai daun bergejala. Sampai saat ini tanaman telah mencapai tinggi 30 cm setelah 3 bulan dilakukan penanaman.
Gambar 4. Bibit tanaman tanaman kakao bergejala mosaikyang akan diberikan perlakuan formula cair
Pseudomonas fluorescens .
Sementara itu penelitian
di laboratorium  dilakukan  isolasi  bakteri  dari tanah  perkebunan  untuk  mencari  kandidat bakteri Pseudomonas  fluorescens .  Dari  hasil isolasi dan identifikasi didapatkan bakteri P. fluorescens yang  diinkubasi  menggunakan medium Nutrient Broth (NB).
Kultur  bakteri  mulai  bekembang  ke tahap  pencarian  fase  logaritimik.  Kultur bakteri P.  fluorescens pada  medium  NB didapatkan  fase  logaritmik.  Fase  log  bakteri P.  fluorescens diperoleh  pada  lama  inokulasi selama  0,5  hari  didapatkan  kerapatan pertumbuhan 38,4x10 9
CFU/bidang pandang.
Hasil  optimasi  fase  logaritmik  bakteri dijadikan  dasar  untuk  inkubasi  bakteri  pada
medium  keong.  Inkubasi  medium  keong dilakukan pada beberapa variabel konsentrasi bakteri diantaranya formula cair baikteri 25% (P1), 50% (P2) dan 75% (P3) yang diinkubasi selama 3 hari. Setelah inkubasi baru dilakukan aplikasi  penyemprotan  pada  tanaman bergejala  mosaik  berumur  3  bulan.  Aplikasi diulang sebanyak 7 kali dengan rentang waktu penyemprotan 1 minggu. Penyemprotan juga dibandingkan dengan  insektisida kimia.
Setelah aplikasi selama 8 minggu maka dilakukan  pengamatan  akhir  pertumbuhan tanaman.  Pengamatan  yang  dilakukan meliputi  pengurkuran  tinggi  tanaman, panjang  akar,  diameter  daun  dan  bobot kering  tanaman.  Hasil  yang  didapatkan sebagai berikut:
Tabel 1. Hasil penyemprotan P. fluorescens terhadap pertumbuhan tanaman kakao Perlakuan Tinggi tanaman (cm) Panjang akar (cm) Jumlah daun (helai) Bobot  kering akar (g) Bobot kering tanaman, g/tanaman Kontrol 52.16 33.37 10 10.35 28.67 Insektisida 72.20 36.06 17 12.70 38.84 Semprot 1x 51.45 33.53 16 11.82 52.66 Semprot 2x 57.55 32.50 16 10.70 55.41 Semprot 3x 66.40 34.29 17 12.29 74.61 Semprot 4x 67.80 35.67 19 13.48 86.06 Semprot 5x 71.12 37.78 21 13.40 84.69 Semprot 6x 72.23 37.98 21 13.87 83.76 Semprot 7x 75.37 39.73 22 15.95 85.65
Parameter  pertumbuhan  tanaman kakao yang diukur antara lain tinggi tanaman, panjang akar, jumlah helai daun, bobot kering akar dan bobot kering tanaman. Pada tabel 1 pengamatan didapatkan hasil bahwa penyemprotan  formula  cair  sampai  7  kali didapatkan  tinggi  tanaman  yang  optimal, jumlah daun lebih banyak dan bobot kering lebih  besar.  Tanaman  kontrol  yang  hanya disemprot  dengan  air  hingga  8  minggu
aplikasi  dihasilkan  tanaman  yang  lebih pendek  dan  memiliki  bobot  lebih  rendah. Sementara  itu  aplikasi  menggunakan insektisida  sebanyak  7  kali  dalam  8  minggu menjadikan  tanaman  memiliki  tinggi  yang relatif  besar  namun  tidak  memberikan implikasi  yang  berarti  bagi  peningkatan kering  akar  dan  bobot  kering  tanaman dibandingkan  aplikasi  formula  cair P. fluorescens.
Gambar 5. Intensitas penyakit mosaik pada tanman kakao setelah aplikasi ke-1 sampai aplikasi ke-7
Pada Gambar 5 dapat terpantau adanya penurunan intensitas gejala penyakit mosaik pada  daun  kakao  yang  teramati  mulai  dari aplikasi  ertama  sampai  aplikasi  ke-7.  Grafik menunjukkan pada aplikasi ke-7 penyemprotan  insektisida  kimia  memiliki hasil  yang  paling  tinggi  sebesar  20% penurunan  intensitas  penyakit  mosaik. Sementara  itu  aplikasi  formula  cair konsentrasi 75% dapat menurunkan intensitas gejala penyakit sebesar 25%. Dapat dikatakan  aplikasi  paling  optimum  untuk pengendalian  penyakit  mosaik  adalah formula cair 75%. Sedangkan pada tanaman kontrol yang hanya disemprot air memperlihatkan  peningkatan  gejala  mosaik
seiring  waktu.    Ketiga  konsentrasi  formula cair pupuk P. fluorescens 25%, 50% dan 75% dapat  dikatakan  bahwa P.  fluorescens paling baik dapat mempengaruhi pertumbuhan dan perkembangan. Kemudian dari ui efektivitas formula  cair P.  fluorescens 75%  diketahui paling  efektif  menekan  gejala  mosaic  pada tanaman kakao. Hal tersebut ditandai dengan semakin  berkurangnya  berkas  mosaic, memperlambat  pengguguran  daun  dan mempercepat  tumbuhnya  tunas  baru tanaman  kakao.  Formula  Formulasi  paling optimum yang dapat menurunkan intensitas gejala mosaik tananam kakao didapatkan dari aplikasi formulai cair P. fluorescens 75%.
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Aplikasi ke-1 Aplikasi ke-2 Aplikasi ke-3 Aplikasi ke-4 Aplikasi ke-5 Aplikasi ke-6 Aplikasi ke-7 Intensitas Penyakit Mosaik pada Tanaman Kakao setelah Aplikasi Formula
Cair Pseudomonas fluorescens
Kontrol Insektisida
Ps 25% Ps 50% Ps 75%

## SIMPULAN
Aplikasi  formula  cair P.  fluorescens sebagai  agensia  hayati  penyakit  mosaik tanaman  kakao  didapatkan  formula  cair dengan konsentrasi 75% paling efektif dalam menekan  penyakit  mosaic  pada  tanaman
kakao dengan ditandai berkurangnya berkas mosaic pada daun, memperlambat pengguguran  daun  dan  mempercepat tumbuhnya tunas baru.

## DAFTAR PUSTAKA
Arwiyanto,  T.,  Maryudani,  YMS.,  Azizah,  NN.  2007.  Sifat-Sifat  Fenotipik Pseudomonas  fluoresen , Agensia  Pengendalian  Hayati  Penyakit  Lincat  pada  Tembakau  Temanggung. BIODIVERSITAS. Vol.8, No.2.Hal:147-151.
Ayed  Amr  and  E.  Al-Tamimi.  2007.  Stability  of  The  Crude  Extracts  of  Ranunculus  Asiaticus Anthocyanins  and  Their Use As  Food Colourants. International  Journal  of  Food  Science & Technology . 42 (8). 985 – 991.
Azizah  N.  2009.  Pengimbasan  Ketahanan  Bibit  Pisang  Raja  terhadap  Penyakit  Layu  Fusarium dengan  Ekstrak  Bakteri  Antagonis.  Skripsi.  Fakultas  Pertanian  Universitas  Jenderal Soedirman, Purwokerto (Tidak Dipublikasikan).
Chairul.  2003.  Identifikasi  secara  cepat  bahan  bioaktif  pada  tumbuhan  di  lapangan.  Berita Biol.6(4):621 – 630.
Dolores LM. 1996. Management of Pepper Viruses. Di dalam: Proceeding on the AVNET II.Final Workshop Philippines; 1995 Feb 21 – 25. Manila (PH) AVRDC. hlm 334 – 342.
Elad  Y,  Chet  I,  Baker  R.  2007.  Increased  growth  response  of  plants  induced  by  rhizobacteria antagonistic  to  soilborne  pathogenic  fungi.  Plant  Soil.  98(3):325330.  DOI: http://dx.doi.org/10.1007/ BF02378353.
Longworth, J.F. and J.M, Thresh. 2003. Field trials on the effect of a Nigerian swollen-shoot virus on the growth of different cacao types. Ann.appl.Biol. 52:217-224. Majid, A., dan Ashna, P. 2013. Keunggulan Kombinasi Agen Hayati Pseudomonas fluorescens dan Bacillus  subtillis untuk  Mengendalikan  Penyakit  Layu  Fusarium  pada  Tanaman Pisang.http://repository.unej.ac.id/handle/123456789/5080. Ollenu, L.A.A. and G.K. Owusu. 2009. Isolation and study of mild strains of cocoa swollen shoot virus for possible  cross  pretection .  Proceedings  of  the  4th  International  plant  virus epidemiology workshop. Montpellier. France. Pp. 119-122.
Parnata, Y. 1976. Beberapa Catatan Mengenai Penyakit Virus Tanaman Coklat di Sumatra Utara. Bull. BPP Medan 7 (1): 5-13. Probowati, W. Somowiyarjo, S. dan Hartono, S. 2019. Molecular characterization of Mosaic Virus from the cocoa trees showing mosaic symptoms in Yogyakarta. Biodiversitas Vol. 20 No.12: 3698-3704.
Probowati, W. Pilar Rosatria F, dan Wahyuni W. 2020. Formulasi Pupuk Cair Pseudomonas fluorescens sebagai Agensia Pengendali Hayati Penyakit Mosaik Tanaman Kakao. VIGOR: Jurnal Ilmu Pertanian Tropika dan Subtropika 5: 56-60. Raaijmakers  JM  &  Weller  DM.  1998.  Natural  plant  protection  by  2,4-  diacetyl phloroglucinolproducing Pseudomonas spp. in take-all decline soils. Molecular Plant Microbe Interactions 11: 144 – 152.
Rustati  R,  Soesanto  L  &  Wachjadi  M.  2004.  Pengendalian Fusarium  oxysporum Schlecht.  f.sp. zingiberi Trujillo pada Tanaman Jahe dengan Disinvestasi Tanah secara Hayati. Hal. 259 – 267.Dalam: Soesanto L, eds. Prosiding Symposium Nasional I tentang Fusarium . Purwokerto, 26-27 Agustus 2004. Soesanto  L.  2000.  Ecological  and  Biological  Control  of  Verticillium  dahliae.  Ph.D. Thesis.Wageningen University, Wageningen.
Soesanto  L.  2017.  Pengantar  Pestisida  Hayati,  Adendum  metabolit  sekunder  agenesia  hayati Tanaman. PT Raja Grafindo Persada, Jakarta.
Soesanto L & Rahayunati RF. 2009. Pengimbasan ketahanan bibit pisang Ambon Kuning terhadap penyakit  layu  Fusarium  dengan  beberapa  jamur  antagonis. Jurnal  Hama  dan  Penyakit Tumbuhan Tropika 9(2): 130 – 140.
Soesanto  L,  Mugiastuti  E,  Rahayuniati  RF.  2010.  Kajian  mekanisme  antagonis  Pseudomonas fluorescens P60 terhadap Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici pada tanaman tomat in vivo. Jurnal Hama Penyakit Tumbuhan Trop . 10(2):108 – 115.
Somowiyarjo,  S.,  Sulandari,  S.,  Hartono,  S.,  Paradisa,  Y.B.,  Aji,  T.M.  2014.  Etiologi  Penyebab Malformasi Tunas Ranting Kakao di Kulonprogo, DIY dan Segayung, Jawa Tengah. Jurnal Perlindungan Tanaman Indonesia , Vol. 18 No.2: 95-102. Tresliyana,    A.,  Anna  Fariyanti  dan    Amzul  Rifin.  2016.  Daya  saing  kakao  Indonesia  di  pasar Internasional. Jurnal  Manajemen & Agribisnis .Vol 12. No.2.