## ANALISIS METABOLIT SEKUNDER, AKTIVITAS ANTIBAKTERI DAN KOMPOSISI GOLONGAN SENYAWA DALAM EKSTRAK TERIPANG Bohadschia sp.

## ANALYSIS OF SECONDARY METABOLITES, ANTIBACTERIAL ACTIVITY AND COMPOUND COMPOSITION IN THE SEA CUCUMBER
Bohadschia sp. EXTRACT

## Abdullah Rasyid
Pusat Penelitian Oseanogafi LIPI E-mail: abdu005@lipi.go.id

## ABSTRACT
Bohadschia sp . is one of the sea cucumber species that has potential to be developed as a source of antibacterial from the sea. Samples of sea cucumber Bohadschia sp . used in this study collected from the  Ratai  bay  waters,  Lampung.  This  study  aims  to  determine  the  type  of  secondary  metabolites, antibacterial  activity  and  compound  composition  analysis  containing  in  the  sea  cucumber  extract. Identification of secondary metabolites by observation of color reactions, precipitation and foam. The method  used  to  antibacterial  activity  test  was  the  agar  diffusion  method,  while  identification  of  the composition of compounds performed with Gas Chromatogaphy-Mass Spectroscopy (GC-MS) method. The  results  showed  that  the  type  of  secondary  metabolites  contained  in  the  extract  of  sea  cucumber Bohadschia sp .  were  steroids  and  saponins.  The  extract  of  sea  cucumber  Bohadschia sp .  showed antibacterial activity against Bacillus subtilis and Vibrio eltor. Results of GC-MS were 12 compounds and have a similarity index same or more than 90%. All compounds consist of organosilicon cyclic, fatty acid, steroid, cyclo alkene and alkena. The compound with biggest abundance was cholest-5-en- 3-yl nonanoate (4.89%) and retention time was 37.370 minutes.
Keywords: antibacteria, Bohadschia sp ., GC-MS, Lampung, secondary metabolite

## ABSTRAK
Bohadschia sp.  merupakan  salah  satu  jenis  teripang  yang  memiliki  potensi  untuk  dikembangkan sebagai  sumber  bahan  antibakteri  dari  laut.  Sampel  teripang Bohadschia sp.  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  berasal  dari  perairan  Teluk  Ratai  Lampung.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui jenis metabolit sekunder, aktivitas antibakteri dan komposisi senyawa yang terkandung dalam ekstrak metanol  teripang Bohadschia sp. Metode  ekstraksi  yang  digunakan  adalah  metode  maserasi menggunakan  pelarut  metanol.  Identifikasi  metabolit  sekunder  dengan  pengamatan  reaksi  warna, pengendapan  dan  buih.  Metode  yang  digunakan  untuk  uji  aktivitas  antibakteri  adalah  metode  difusi agar,  sedangkan  analisa  komposisi  senyawa  menggunakan  Kromatogafi  Gas  –  Spektroskopi  Massa (KG-SM).  Hasil  identifikasi  golongan  metabolit  sekunder  menunjukkan  bahwa  ekstrak  metanol teripang Bohadschia sp. mengandung steroid dan saponin. Hasil uji aktivitas antibakteri menunjukkan bahwa ekstrak metanol teripang Bohadschia sp. hanya memiliki aktivitas antibakteri terhadap Bacillus subtilis dan Vibrio  eltor. Hasil  analisis  dengan  KG-SM  menunjukkan  bahwa  terdapat  12  senyawa dengan  indeks  kemiripan  sama  atau  lebih  besar  dari  90%.  Keduabelas  senyawa  tersebut  terdiri  dari senyawa  organosilikon siklik, asam lemak, steroid, senyawa siklo alkana dan alkena. Senyawa dengan kelimpahan terbesar adalah cholest-5-en-3-yl nonanoate (C 36 H 62 O 2) yaitu 4,89% dengan waktu retensi 37,370 menit.
Kata kunci: antibakteri, Bohadschia sp., KG-SM, Lampung, metabolit sekunder

## I. PENDAHULUAN
Perairan Indonesia merupakan habitat terbaik  untuk  teripang  karena  berada  di  an- tara Samudera Pasifik dan Samudera Hindia. Ada sekitar 1.135 spesies teripang yang telah dikenal di seluruh dunia. Di Indonesia, diper- kirakan mencapai 257 spesies tetapi yang di- ketahui baru sekitar 60 spesies dan sebanyak 23  spesies  telah  dieksploitasi  untuk  dikon- sumsi.  Spesies  yang  paling  banyak  dicari hanya  5  spesies  karena  nilai  ekonominya yang  tinggi,  yaitu  teripang  putih Holothuria scabra ,  teripang  hitam H.  nobilis ,  teripang getah  atau  keling H.  vacabunda ,  teripang merah H.  vatiensis dan  teripang  coklat H. marmorata (Kordi, 2010).
Selama  lebih  dari  empat  dekade  ter- akhir  telah  dilakukan  berbagai  upaya  untuk mengisolasi  senyawa-senyawa  metabolit  se- kunder  yang  memiliki  aktivitas  biologis  dari biota  laut.  Teripang  adalah  salah  satu  biota laut  target  yang  memiliki  potensi  metabolit sekunder, dan dapat digunakan sebagai bahan untuk  obat.  Menurut  Bordbar et  al. (2011), teripang  memiliki  potensi  untuk  dikembang- kan  sebagai  produk  obat  dan  makanan  ke- sehatan,  karena  memiliki  kandungan  protein dan  kolagen  yang  sangat  tinggi.  Selain  itu, teripang  juga  memiliki  kandungan  lainnya yaitu mineral, mukopolisakarida, glucasanin- oglycans,  omega-3,  6,  dan  9,  asam  amino, kondroitin dan vitamin.
Teripang  mengandung  banyak  meta- bolit  sekunder  yang  bersifat  polar  dan  non polar,  yang  dapat  digunakan  sebagai  bahan untuk berbagai macam obat-obatan  (Paul et al., 2008).  Beberapa  senyawa  yang  telah berhasil diisolasi dari teripang, misalnya anti- tumor (intercedenside D-I, hillaside A dan B, philnopside  A,  holothurinoside  A,  B,  C  dan D,  desholothurin  A,  nobiliside  A,  B  dan  C, impatienside  A),  antivirus  (liouvillosude  A dan  B),  antikoagulan,  antimikroba  (homoie- demoside  A  dan  B,  patagonicoside  A, maramoratoside  A,  17–hydroxyimpatienside A,  impatienside  A  dan  bivitroside  A),  anti- trombosit (glycosaminoglycan dan holothurin
glycosaminoglycan),  antikanker  (frondoside A, B1, B2 dan B3, intercedenside A-C, fron- danol  A  dan  holothurin  A),  antiangiogenik (philinopside A dan ) (Bordbar et al., 2011). Teripang Bohadschia sp.  termasuk kedalam  golongan  teripang  yang  bernilai ekonomi  rendah.  Hal  ini  disebabkan  oleh masih  terbatasnya  informasi  potensi  bioaktif teripang  tersebut.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengetahui  kandungan  golongan  me- tabolit  sekunder,  aktivitas  antibakteri  dan komposisi  senyawa  yang  terkandung  dalam ekstrak teripang Bohadschia sp. Hasil pene- litian ini diharapkan dapat memberikan infor- masi  tentang  potensi  pemanfaatan  teripang Bohadschia sp . perairan  Teluk  Ratai  Lam- pung  sebagai  bahan  baku  obat-obatan  alami dari laut.

## II. METODE PENELITIAN

## 2.1. Bahan Penelitian
Lokasi  pengambilan  sampel  teripang Bohadschia sp.  berada  di  Teluk  Ratai  Lam- pung  pada  posisi  geogafis  05 o 33.706’  Lin- tang  Selatan  dan  105 o 16,220’  Bujur  Timur. Sebanyak  6  individu  teripang  dengan  berat sekitar  1,8  kg  basah  digunakan  dalam  pene- litian ini (Gambar 1).  Sampel teripang diber- sihkan dengan air laut dari kotoran dan pasir yang  menempel,  kemudian  dibuang  isi  pe- rutnya.  Daging  teripang  yang  telah  bersih dimasukkan  ke  dalam  kantong  plastik  yang telah diberi label lalu disimpan di dalam cool box untuk  dibawa  ke  Laboratorium  Bahan Alam  Laut,  Pusat  Penelitian  Oseanogafi LIPI, Jakarta.
Bahan  kimia  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  terdiri  dari  metanol  (CH 4 O), ammonia  (NH 3 ),  kloroform  (CHCl 3 ),  asam sulfat  (H 2 SO 4 ),  pereaksi  Meyer,  pereaksi Lieberman-Burchard,  bubuk  logam magnesi- um (Mg), asam klorida (HCl), nutrient broth , yeast  extract  powder ,  peptone,  n-heksan (C 6 H 14 ),  etil  asetat  (C 4 H 8 O 2 ),  n-butanol (C 4 H 16 O),  amil  alcohol  (C 5 H 12 O),  besi  (III) klorida (FeCl 3 ) dan ampisilin (C 16 H 29 N 3 O 4 S).
Gambar 1. Teripang Bohadschia sp.
Bakteri  uji  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  terdiri  dari Staphylococcus aureus (ATCC  25923) ,  Bacillus  subtilis (ATCC  6633) ,  Vibrio  eltor dan Escherichia coli (ATCC 25922). Semua bakteri uji terse- but  dapat  diperoleh  dari  Departemen  Mikro- biologi  Fakultas  Kedokteran  Universitas Indonesia.

## 2.2. Ekstraksi Sampel
Sebanyak  500  g  sampel  teripang Bohadschia sp. dicacah halus (sekitar 0,5 cm x  0,5  cm),  kemudian  dimaserasi  dengan 1.000  mL  metanol  selama  3  -  5  hari,  lalu disaring  dengan  kertas  saring  lembaran. Proses  maserasi  dan  penyaringan  dilakukan dengan  beberapa  kali  pengulangan  sampai diperoleh  filtrat  yang  bening.  Semua  filtrat dikumpulkan,  lalu  diuapkan  dengan rotary evaporator pada suhu 40°C sampai diperoleh ekstrak yang kental.
Fraksinasi  dilakukan  dengan  pelarut yang  berbeda  tingkat  kepolarannya  meng- gunakan  corong  pisah.  Fraksinasi  diawali dengan  pelarut  non  polar  yaitu  n-heksan. Sebanyak  5  g  ekstrak  metanol  teripang  dila- rutkan dalam n-heksan sebanyak 3 x 300 mL, sehingga diperoleh fraksi n-heksan dan fraksi air.  Selanjutnya  fraksi  air  ditambahkan  de- ngan  pelarut  semi  polar  yaitu  etil  asetat  se- banyak 3 x 300 mL, sehingga diperoleh frak- si etil asetat dan fraksi air. Fraksi air kembali difraksinasi  dengan  menambahkan  pelarut polar  yaitu  n-butanol  sebanyak  3  x  300  mL, sehingga  diperoleh  fraksi  n-butanol  dan fraksi air. Hasil fraksinasi di atas yaitu fraksi
n-heksan,  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  n- butanol  masing-masing  diuapkan  dengan rotary  evaporatror pada  suhu  40°C  sampai diperoleh ekstrak yang kental.

## 2.3. Identifikasi  Komponen  Metabolit Sekunder
Sebanyak  1  g  ekstrak  metanol  teri-
pang Bohadschia sp.  ditambah  dengan  3 tetes amonia 10% dan 1,5 mL kloroform, lalu dikocok.  Lapisan  kloroform  diambil  kemu- dian dilarutkan dalam 1 mL asam sulfat 2 N, kemudian  dikocok.  Setelah  itu,  ekstrak  teri- pang  ditambahkan  pereaksi  Meyer.  Terben- tuknya  endapan  putih  menandakan  adanya senyawa alkaloid (Harborne, 2006).
Sebanyak  1  g  ekstrak  metanol  teri- pang Bohadschia sp. ditambah dengan 2 mL kloroform  dalam  tabung  reaksi,  kemudian diteteskan ke dalam plat  tetes, dan dibiarkan sampai  kering.  Setelah  itu,  ditambahkan  de- ngan  1  tetes  pereaksi  Liebermann  Burchard. Terbentuknya  warna  merah  menandakan adanya  senyawa  triterpenoid  dan  terben- tuknya  warna  biru  atau  ungu  menandakan adanya senyawa steroid (Harborne, 2006).
Sebanyak  1  g  ekstrak  metanol  teri- pang Bohadschia sp. ditambah dengan 20 mL akuades,  kemudian  dipanaskan  selama  5 menit. Larutan dituang ke dalam tabung reak- si  dalam keadaan panas.  Larutan diambil se- banyak 10 mL, kemudian dikocok kuat seca- ra  vertikal  selama  10  detik.  Adanya  saponin ditandai  dengan  terbentuknya  busa  yang stabil setinggi 1 - 10 cm selama 10 menit dan tidak  hilang  pada  saat  ditambahkan  dengan satu tetes HCl 2 N (Harborne, 2006).
Sebanyak  1  g  ekstrak  metanol  teri- pang Bohadschia sp.    dididihkan  dengan  25 mL  metanol  selama  10  menit,  kemudian disaring  dalam  keadaan  panas  dengan  kertas Whatman  no.  42.  Filtrat  yang  diperoleh  di- uapkan  sampai  kering  kemudian  ditambah- kan kloroform dan akuades (1:1) sebanyak 5 mL.  Campuran  dikocok  dan  dibiarkan  seje- nak sampai terbentuk dua lapisan kloroform- air.  Sebagian  dari  lapisan  air  diambil  dan dipindahkan  dengan  pipet  ke  dalam  tabung
reaksi,  kemudian  ditambahkan  0,1  g  bubuk magnesium  dan  beberapa  tetes  asam  klorida pekat  dan  amil  alkohol.  Adanya  senyawa flavonoid  ditandai  dengan  terbentuknya warna oranye merah (Harborne, 2006).
Sebagian  dari  lapisan  air  hasil identifikasi  flavonoid  dimasukkan  ke  dalam flat  tetes,  kemudian  ditambahkan  beberapa tetes  pereaksi  FeCl 3 1%.  Adanya  senyawa fenolik  ditandai  dengan  terbentuknya  warna biru atau ungu (Harborne, 2006).

## 2.4. Uji Aktivitas Antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  pada  peneli- tian  ini  menggunakan  metode  difusi  agar (Lay,  2006).  Untuk  mengetahui  efektivitas bakteri uji digunakan pembanding antibiotik, yaitu  ampisilin  karena  termasuk  salah  satu antibiotik  dengan  spektrum  pemakaian  yang luas, lebih murah dan mudah diperoleh.
Isolat  bakteri  uji  yang  telah  dikultur dalam  media nutrient  broth selama  24  jam dioleskan  pada  permukaan  media  inokulasi (nutrien  agar  yang  telah  dituang  pada Petri dish )  menggunakan  kapas  lidi  steril.  Seba- nyak  20  µL  ekstrak  diteteskan  pada paper disk menggunakan  pipet  mikro,  selanjutnya paper  disk yang  telah  mengandung  ekstrak diletakkan  pada  permukaan  media  inokulasi menggunakan  pinset.  Bakteri  diinkubasi  se- lama 24 jam pada suhu 30°C. Diameter zona hambat  yang  terbentuk  diukur  dengan  peng- garis (skala terkecil 1 mm). Semua proses di atas dilakukan secara  aseptis.

## 2.5. Analisis  Komposisi  Golongan  Se- nyawa
Analisis komposisi golongan senyawa yang  terkandung  dalam  ekstrak  metanol teripang Bohadschia sp.  menggunakan  GC- MS di Laboratorium Kesehatan Daerah Khu- sus Ibukota Jakarta. Spesifikasi GC-MS yang digunakan adalah Aglient Technologies 7890 Gas  Chromatogaph  with  Auto  Sampler  and 5975 Mass Selective Detector (GC-MS) and Chemstation  data  system .  Jenis  kolom  yang digunakan  adalah HP  Ultra  2  Capilary
Column  Length (m)  30  x  0,25  (mm)  LD  x 0,25 (µm).

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Terdapat 6 (enam) golongan senyawa metabolit sekunder yang diuji dalam peneliti- an  ini,  yaitu  alkaloid,  steroid,  triterpenoid, saponin,  flavonoid  dan  fenolik  (Tabel  1). Menurut  Harborne  (2006),  identifikasi  golo- ngan senyawa metabolit sekunder merupakan langkah  awal  yang  penting  dalam  penelitian pencarian  senyawa  bioaktif  baru,  dari  bahan alam yang dapat menjadi prekursor bagi sin- tesis  obat  baru  atau  prototipe  obat  berakti- vitas tertentu.
Tabel 1. Golongan  senyawa  metabolit  se- kunder  ekstrak  metanol  teripang Bohadschia sp.
No  Metabolit sekunder Hasil 1 Alkaloid - 2 Steroid + 3 Triterpenoid - 4 Saponin + 5 Flavonoid - 6 Fenolik -
Keterangan: - = tidak teridentifikasi; + = teridentifikasi.
Hasil  identifikasi  awal  golongan  me- tabolit sekunder (Tabel 1) menunjukkan bah- wa  ekstrak  metanol  teripang Bohadschia sp. tidak  mengandung  alkaloid,  karena  tidak terbentuk endapan putih setelah ditambahkan pereaksi  Meyer.  Senyawa  steroid  teridenti- fikasi  dalam  ekstrak  metanol  teripang Bohadschia sp. yang ditandai dengan terben- tuknya  warna  biru  setelah  ditambahkan  pe- reaksi  Lieberman-Burchard.  Demikian  hal- nya senyawa triterpenoid tidak teridentifikasi dalam  penelitian  ini,  karena  tidak  terbentuk warna  merah  setelah  ditambahkan  pereaksi Lieberman-Burchard.  Senyawa  saponin  teri- dentifikasi  dalam  ekstrak  metanol  teripang Bohadschia sp. yang ditandai dengan terben- tuknya busa yang stabil selama 10 menit dan
tidak  hilang  setelah  ditambahkan  HCl  2  N. Senyawa  flavonoid  tidak  teridentifikasi, karena  tidak  terbentuk  warna  oranye/merah setelah  ditambahkan  amil  alkohol.  Demikian halnya  senyawa  fenolik  tidak  teridentifikasi dalam  ekstrak  metanol  teripang Bohadschia sp.,  karena  tidak  terbentuk  warna  biru  atau ungu  setelah  ditambahkan  pereaksi  FeCl 3. (Harborne,  2006).  Kemungkinan  tidak  ter- identifikasinya  beberapa  golongan  senyawa metabolit  sekunder  dalam  penelitian  ini  di- karenakan  konsentrasi  senyawa  tersebut  ter- lalu  sedikit,  atau  memang  tidak  terdapat dalam  ekstrak  metanol  teripang  yang  diuji. Kemungkinan lainnya adalah perbedaan spe- sies misalnya golongan fenolik dan flavonoid yang tidak teridentifikasi dalam peneltian ini, tetapi teridentifikasi pada Holothuria scabra, H.  leucospilota,  Stichopus  chloronotus dan Cucumaria frondosa (Mamelona et al., 2007; Althumbat et al., 2009).
Beberapa hasil penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa pada golongan senyawa steroid  juga  teridentifikasi  pada  teripang Actinopyga echinites, A. miliaris, Holothuria atra dan H.  scabra (Jawahar et  al., 2002), Stichopus hermanii (Rasyid, 2012).
Senyawa  golongan  saponin  merupa- kan  senyawa  yang  paling  banyak  diisolasi dari  teripang  (Bhakuni  and  Rawat,  2005). Senyawa glikosida yang dapat larut dalam air ini  menunjukkan  aktivitas  hemolitik  dan sitotoksik  baik in  vivo maupun in  vitro (Kelly,  2005).  Beberapa  senyawa  saponin yang telah berhasil diisolasi dari  teripang an- tara lain 24-dehydroholothurin A (Kobayashi et al., 1991; Jawahar et al., 2002), holothu- rin  A  (Dang et  al., 2007;  Jawahar et  al.,
2002),  holothurin  B  (Elyakov et  al., 1973;
Jawahar et  al., 2002).  Holothurin  A  dan holothurin B juga telah berhasil diisolasi dari teripang A.  miliaris (Elyakov et  al., 1973; Jawahar et al., 2002).

## 3.1. Aktivitas Antibakteri
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  menun- jukkan  bahwa  ekstrak  metanol  dari  teripang Bohadschia sp.  tidak  memiliki  aktivitas
antibakteri terhadap bakteri uji S. aureus dan E.  coli (Tabel  2) . Hasil  yang  sama  ditunjuk- kan  oleh  fraksi  n-heksan,  fraksi  etil  asetat dan  fraksi  n-butanol.  Ekstrak  metanol  teri- pang Bohadschia sp. menunjukkan aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri  uji V.  eltor sebesar 10 mm atau sekitar 38,46 % terhadap ampisilin dan 11 mm terhadap bakteri uji B. subtilis atau sekitar 27,5% terhadap antibio- tik ampisilin.
Fraksi  n-heksan  teripang Bohadschia sp.  menunjukkan  aktivitas  antibakteri  terha- dap  bakteri  uji V.  eltor sebesar  13  mm  atau sekitar  50%  terhadap  ampisilin  dan  8  mm terhadap  bakteri  uji B.  subtilis atau  sekitar 20%  terhadap  ampisilin.  Berbeda  halnya dengan  ekstrak  metanol  dan  fraksi  n-heksan, fraksi etil asetat hanya menunjukkan aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri  uji B.  subtilis sebesar 8 mm atau sekitar 20% terhadap anti- biotik ampisilin. Fraksi n-butanol menunjuk- kan  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri  uji V.  eltor sebesar  8  mm  atau  sekitar  30,77% dan terhadap bakteri  uji B. subtilis sebesar 7 mm atau sekitar 17,5% terhadap ampisilin.
Beberapa hasil penelitian sebelumnya melaporkan bahwa teripang B. argus, dan B. marmorata menunjukkan  aktivitas  antibak- teri terhadap S. aureus, E. coli dan B. subtilis. Teripang Stichopus hermanni dan S. chloronatus menunjukkan  aktivitas  antibak- teri terhadap S. aureus dan E. coli, sedangkan S.  variegatus hanya  menunjukkan  aktivitas antibakteri  terhadap E.  coli (Pringgenies, 2013). Teripang B. similis dilaporkan menun- jukkan  aktivitas  antibakteri  terhadap S. aureus,  E.  coli,  V.  eltor dan B.  subtilis (Rasyid  dan  Bayu,  2014).  Teripang  jenis Holothuria  leucospilota dilaporkan  menun- jukkan  aktivitas  antibakteri  terhadap E.  coli dan S.  aureus (Shakouri et  al., 2014).  Te- ripang H.  scabra juga  dilaporkan  menun- jukkan  aktivitas  antibakteri  terhadap E.  coli (Arifin et al., 2013). Hal ini dapat menunjuk- kan  bahwa  perbedaan  jenis  teripang  menun- jukkan  pada  aktivitas  antibakteri  yang  ber- beda-beda.
Tabel 2. Hasil uji aktivitas antibakteri.
No Bakteri Uji Diameter zona hambat (mm) Ekstrak metanol Fraksi n-heksan Fraksi etil asetat Fraksi n-butanol Ampisilin 1 S. aureus - - - - 40 2 V. eltor 10 13 - 8 26 3 B. subtilis 11 8 8 7 40 4 E. coli - - - - 30
Hasil  identifikasi  awal  golongan senyawa  metabolit  sekunder  menunjukkan bahwa  hanya  ada  2  (dua)  golongan  senyawa yang  teridentifikasi  dalam  ekstrak  metanol teripang Bohadschia sp.  yakni  steroid  dan saponin.  Berdasarkan  hasil  tersebut,  maka kemungkinan  golongan  senyawa  metabolit sekunder  yang  terdapat  dalam  fraksi  n- heksan  adalah  steroid  yang  memiliki  sifat non  polar.  Kemungkinan  golongan  senyawa metabolit  sekunder  yang  terdapat  dalam fraksi n-butanol adalah saponin yang bersifat polar.  Hasil  penelitian  ini  juga  menunjukkan bahwa  semua  sampel  uji,  yaitu  ekstrak metanol,  fraksi  n-heksan,  fraksi  etil  asetat dan  fraksi  n-butanol  menunjukkan  aktivitas antibakteri terhadap B. subtilis.

## 3.2. Analisis Komposisi Senyawa
Karakterisasi  untuk  golongan  senya- wa  menggunakan  kromatogafi  gas  spektro- skopi  massa,  bertujuan  untuk  mengetahui senyawa  yang  terkandung  dalam  ekstrak metanol  teripang Bohadschia sp.  melalui perbandingan  spektrum  senyawa  yang  teri- dentifikasi dengan spektrum senyawa standar yang  tersimpan  dalam Library  Willey09 . Hasil  perbandingan  tersebut  dikenal  sebagai indeks  kemiripan,  yaitu  derajat  kemiripan senyawa dengan standar. Jika indeks kemiri- pan  semakin  mendekati  100%  menunjukkan bahwa  senyawa  yang  teridentifikasi  semakin mendekati senyawa standar.
Hasil  analisis  komposisi  pada  senya- wa  yang  terkandung  dalam  ekstrak  metanol teripang jenis Bohadschia sp. dengan meng- gunakan  alat  kromatogafi  gas  spektroskopi
massa,  menunjukkan  bahwa  terdapat  12 senyawa dengan indeks kemiripan ( similarity index )  sama  atau  lebih  besar  dari  90%  ter- lihat pada Tabel 3.
Senyawa  organosilikon  siklik  yang teridentifikasi  dalam  ekstrak  metanol  teri- pang Bohadschia sp.  yaitu  cyclotrisiloxane, hexamethyl  ( C 6 H 18 O 3 SI 3 )  dan  cyclotetra- siloxane,  octamethyl  ( C 8 H 24 O 4 SI 4 ).  Kedua senyawa  tersebut  memiliki  indeks  kemiripan yang  sama  yaitu  sebesar  91%.  Senyawa cyclotetrasiloxane,  octamethyl  memiliki  ke- limpahan sebesar 1,08% dengan waktu reten- si  4,818  menit,  sedangkan  cyclotrisiloxane, hexamethyl  memiliki  kelimpahan  sebesar 0,53% dengan waktu retensi 2,845 menit.
Asam  lemak  yang  teridentifikasi  ter- diri dari  cis-vaccenic acid (C 18 H 34 O 2) , hexa- decanoic acid ( C 16 H 32 O 2 ), stearic acid ( C 18 H 36 O 2 )  dan  1,2-benzenedicarboxylic  acid mono (2-ethylhexyl) ester (C 16 H 22 O 4 ). Senyawa  cis-vaccenic  acid  dan  1,2-benzene- dicarboxylic  acid  mono  (2-ethylhexyl)  ester memiliki  tingkat  kemiripan  yang  sama  yaitu sebesar  91%.  Namun  1,2-benzenedicar- boxylic  acid  mono  (2-ethylhexyl)  ester memiliki  kelimpahan  yang  lebih  besar  yaitu 4,19%  dengan  waktu  retensi  35,019  menit, sedangkan  cisvaccenic  acid  memiliki  kelim- pahan  sebesar  0,88%  dengan  waktu  retensi 31,909  menit.  Asam  lemak  lainnya  adalah hexadecanoic  acid  dengan  indeks  kemiripan 99%  memiliki  kelimpahan  sebesar  2,79% dengan  waktu  retensi  32,033  menit,  dan stearic  acid  dengan  indeks  kemiripan  95% memiliki  kelimpahan  sebesar  0,81%  dengan waktu retensi 33,232 menit.
Tabel 3. Komposisi senyawa dalam ekstrak metanol teripang Bohadschia sp.
No Waktu Retensi Area (%) Nama Senyawa Rumus Molekul Indeks Kemiripan (%) 1 2.845 0,53 Cyclotrisiloxane, hexamethyl- C 6 H 18 O 3 Si 3 91 2 4.818 1,08 Cyclotetrasiloxane, octamethyl C 8 H 24 O 4 Si 4 91 3 31.909 0,88 Cis-vaccenic acid C 18 H 34 O 2 91 4 32.033 2,79 Hexadecanoic acid C 16 H 32 O 2 99 5 32.302 1,01 Bicyclo  (10,8,0)  eicosane, cis- C 20 H 38 98 6 32.730 3,02 1-octadecene C 18 H 36 99 7 33.232 0,81 Stearic acid C 18 H 36 O 2 95 8 35.019 4,19 1,2-benzenedicarboxylic acid, mono (2-ethylhexyl) ester C 16 H 22 O 4 91 9 36.963 3,91 Cholest-2-ene C 27 H 46 93 10 37.370 4,89 Cholest-5-en-3-yl nonanoate C 36 H 62 O 2 93 11 39.253 3,29 Stigmastan-3,5-diene C 29 H 48 93 12 39.639 3,12 Cholest-5-ene, 3.beta.-chloro-  C 27 H 45 Cl 99
Steroid  yang  teridentifikasi  terdiri dari  cholest-2-ene  ( C 27 H 46 ),  cholest-5-en-3-yl nonanoate  (C 36 H 62 O 2 ),  stigmastan-3,5-diene ( C 29 H 48 )  dan  cholest-5-ene,  3.beta.-chloro- (C 27 H 45 Cl).  Senyawa  cholest-2-ene,  cholest- 5-en-3-yl  nonanoate  dan  stigmastan-3,5- diene  memiliki  indeks  kemiripan  yang  sama yaitu sebesar 93%.  Namun cholest-5-en-3-yl nonanoate  memiliki  kelimpahan  lebih  besar yaitu  sebesar  4,89%  dengan  waktu  retensi 37,370  menit,  sedangkan  cholest-2-ene memiliki  kelimpahan  3,91%  dengan  waktu retensi  36,963  menit  dan  stigmastan-3,5- diene  memiliki  kelimpahan  3,29%  dengan waktu retensi 39,253 menit.  Senyawa steroid lainnya  adalah  cholest-5-ene,  3.beta.-chloro- memiliki  indeks  kemiripan  sebesar  99% dengan kelimpahan 3,12% dan  waktu retensi 39,639 menit.
Senyawa  lainnya  yang  teridentifikasi adalah  golongan  alkena,  yaitu  1-octadecene ( C 18 H 36 )  dan  senyawa  siklo  alkana  yaitu bicyclo  (10,  8,  0)  eicosane,  cis  (C 20 H 38 ).  Se- nyawa  1-octadecene  memiliki  indeks  kemi- ripan sebesar 99% dengan kelimpahan 3,02% dan  waktu  retensi  32,730  menit,  sedangkan
siklo  alkana  yaitu  bicyclo  (10,8,0)  eicosane, cis-  memiliki  indeks  kemiripan  98%  kelim- pahan 1,01% dan waktu retensi 32,302 menit.

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  dan  pembahasan, dapat  disimpulkan  bahwa  golongan  senyawa metabolit  sekunder  yang  teridentifikasi  da- lam ekstrak metanol teripang Bohadschia sp. adalah steroid dan saponin. Ekstrak metanol, fraksi  n-heksan,  fraksi  n-buranol  teripang Bohadschia sp.  menunjukkan  aktivitas  anti- bakteri  terhadap Bacillus  subtilis dan Vibrio eltor. Fraksi etil asetat menunjukkan aktivitas antibakteri  hanya  terhadap B.  subtilis. Se- nyawa  dengan  kemiripan  terbesar  berdasar- kan  hasil  analisis  KG-SM  adalah  cholest-5- en-3-yl  nonanoate  (C 36 H 62 O 2) yaitu  sebesar 4,89% dengan waktu retensi  37,370 menit.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada Prof. Drs. Prapto Darsono, M.Sc. dari Pusat  Penelitian  Oseanogafi  LIPI  Jakarta
yang  telah  membantu  mengidentifikasi  teri- pang  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini. Tak  lupa  penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada  semua  pihak  yang  telah  membantu terlaksananya penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Althumbat,  O.Y.,  B.H.  Ridzwan,  M.  Taher, M.D.  Jamaluddin,  M.A.  Ikeda,  and B.I.  Zali.  2009.    In  vitro antioxidant and antiproliferative activities of three Malaysian  sea  cucumber  species.
Eur. J. Sci. Res., 37:376-387.
Bhakuni, D.S. and D.S. Rawat. 2005. Bioac- tive marine natural products. Springer Anamaya, India. 896p.
Bordbar,  S.,  F.  Anwar,  and  N.  Saari.  2011.
High  value  components  and  bioac- tivees  form  sea  cucumbers  for  func- tiona; foods – A review. Mar. Drugs,
9:1761-1805.
Dang,  N.H.,  N.V.  Thanh,  P.V.  Kien,  L.M. Huong,  C.V.  Ninh,  and  Y.  Hokim. 2007.  Two  new  triterpene  glycosidic from  sea  cucumber H.  scabra.  Arch. Pharm. Res., 30(11):1387-1391. Elyakov, G.B., V.A. Stonik, E.V. Levina, V.P.  Slanke,  T.A.  Kuznetsova,  and V.S.  Levina.  1973.  Glycosides  of marine  invertebrates  –I.  A  compara- tive  study  of  the  glycosides  fraction of  Pasific  sea  cucumbers. Compara- tive  Biochemistry  and  Physiology , 44:325-336.
Harborne,  J.B.  2006.  Metode  fitokimia:  Pe- nuntun  cara  modern  menganalisis tumbuhan.  Edisi  IV.  ITB  Bandung. 354hlm.
Jawahar,  A.T.,  J.  Nagarajan,  and  S.A. Shanmugan. 2002. Antimicrobial sub- stances  of  potential  biomedical  im- portance  from  holothurian  species.
Indian J. Mar. Sci. , 31:161-164.
Kelly, M.S. 2005. Echinoderms: their culture and  bioactive  compounds.  Progess  in Molecular  and  Subcellular  Biology , 39:139-165.
Kobayashi.  M.,  M.  Hori,  K.  Tan,  T. Yazusawa, M. Matsui, S. Suzuki, and I.  Kitagawa.  1991.  Marine  natural product  XXVII.  Distribution  of  Iano- stane  type  triterpene  oligogly  cosides in  ten  kind  of  Okinawan  sea  cucum- bers. Chemical  and  Pharmacological Bulletein, 39:2282-2287.
Kordi,  2010.  A  to  Z  budidaya  biota  akuatik untuk  pangan,  kosmetik  dan  obat- obatan. ANDI Yogyakarta. 226hlm.
Lay, B.W. 2006. Analisis mikroba di labora- torium.  PT.  Raja  Gafindo  Persada, Jakarta. 168hlm.
Mamelona,  J.,  E.M.  Pelletier,  K.G.  Lalan- cetie,  J.  Legault,  S.  Karboune  and  S. Kermasha.  2007.  Quantification  of phenolic  content  and  antioxidant  ca- pacity  of  Atlantic  sea  cucumber Cu- cumaria  frondosa.  Food  Chem., 104:
1040-1047.
Paul,  V.J.  and  R.  Ritson-Williams.  2008.
Marine  chemical  ecology. Natural Product Reports, 25:662-695.
Pringgenies,  D.  2013.  Antibacterial  activity of  sea  cucumber  harvested  from Karimunjawa. Squalen  Bulletin  of Marine  and  Fisheries  Postharvest and Biotechnology, 8(2):87-94. Rasyid,  A.  2012. Identifikasi  senyawa  meta- bolit  sekunder  serta  uji  aktivitas antibakteri  dan  antioksidan  ekstrak metanol  teripang  Stichopus  hermanii .
J.  Ilmu  dan  Teknologi  Kelautan Tropis, 4(2):360-368.
Rasyid,  A.  dan  A.  Bayu.  2014.  Identifikasi senyawa  metabolit  sekunder  serta  uji aktivitas  antibakteri  dan  antioksidan ekstrak  metanol  teripang Bohadschia similis. Prosiding  Seminar  Nasional Ke-III  Hasil-Hasil  penelitian  Perika- nan dan Kelauta. Hlm.:429-434.
Shakouri,  A.,  F.  Nematpour,  N.  Adibpour and  A.  Ameri.  2014.  The  investiga- tion  of  antibacterial  activity  of Holo- thuria  leucospilota sea  cucumber extracts  (body  wall,  guts  and  white strings) at Chbahar Bay in Oman sea.
Environmental  Studies  of  Persian
Gulf. , 1(2):135-140. Diterima : 1 Juni 2016 Direview : 14 Juni 2016 Disetujui : 22 Desember 2016