## Jurnal Biology Science & Education 2020  HENI MUTMAINNAH dkk
Analisis Kemampuan Akumulasi Polyfosfat pada Tiap Fase Pertumbuhan Isolat Bakteri Toleran Uranium
Heni Mutmainnah 1 , Muhammad Rijal 2
1,2 Program Studi Pendidikan Biologi, Fakultas Ilmu Tarbiyah dan Keguruan Institut Agama Islam Negeri Ambon
1 Email: henimutmainnah@gmail.com
Abstrak: Polyfosfat merupakan biopolimer rantai lurus yang terdiri dari puluhan hingga ratusan  residu  fosfat  yang  dihubungkan  oleh  ikatan phosphoanhydride energi  tinggi, polyfosfat berperan penting dalam proses bioremediasi limbah uranium terutama dalam proses presipitasi logam uranium pada sel bakteri. Beberapa bakteri diketahui memiliki potensi untuk berinteraksi dengan uranium melalui transformasi redoks dan biopresipitasi dengan melepaskan fosfat  anorganik  untuk  mengikat uranium dilingkungannya.  Fosfat anorganik dihasilkan dari degradasi polifosfat yang terakumulasi didalam sel. Penelitian ini  bertujuan  untuk  mengetahui  kemampuan  bakteri  toleran  uranium  dalam mengakumulasi  polifosfat  selama  fase  pertumbuhannya.  Pengukuran  dilakukan  pada  5 fase pertumbuhan yaitu fase lag, fase logaritmik, awal fase stasioner, fase stasioner, dan akhir  stasioner.  Analisis  akumulasi  polifosfat  secara  kuantitatif  dilakukan  dengan menggunakan  metode  Olsen  &  Dean.  Hasil  uji  diketahui  bahwa  isolat  bakteri  toleran uranium mampu mengakumulasi polyfosfat paling optimal pada fase stasioner terutama pada jam ke 48 dan akumulasi polyP terendah ditemukan pada fase awal stasioner pada jam ke 24.
Kata Kunci : Polyfosfat, Bakteri, Kurva Pertumbuhan
Abstract : Polyphosphate is a straight chain biopolymer consisting of tens to hundreds of phosphate  residues  that  are  linked  by  high  energy  phosphoanhydride  bonds, polyphosphate plays an important role in the bioremediation process of uranium waste, especially in the process of uranium metal precipitation in bacterial cells. Some bacteria are known to have the potential to interact with uranium through redox transformation and  bioprecipitation  by  releasing  inorganic  phosphate  to  bind  uranium  in  the environment.  Inorganic  phosphate  results  from  degradation  of  polyphosphates  that accumulate in cells. This study aims to determine the ability of uranium-tolerant bacteria to accumulate polyphosphates during their growth phase. Measurements were made in 5 growth  phases,  namely  the  lag  phase,  the  logarithmic  phase,  the  beginning  of  the stationary  phase,  the  stationary  phase,  and  the  stationary  end.  Quantitative  analysis  of polyphosphate accumulations was carried out using the Olsen & Dean method. The test results are known that the uranium-tolerant bacterial isolat is able to accumulate the most
Jurnal Biology Science & Education 2020  HENI MUTMAINNAH dkk
BIOLOGI SEL (vol 9 no 1 edisi jUN-JUL 2020 issn 2252-858x/e-ISSN 2541-1225)  Page 82
optimal polyphosphate in the stationary phase, especially at the 48th hour and the lowest polyP accumulation is found in the initial stationary phase at the 24th hour.

## Keywords: Polyphosphate, Bacteria, Growth Curve
Poly P merupakan salah satu biopolimer alami yang distribusinya paling luas. Polimer ini telah  terdeteksi  dibanyak  bakteri,  jamur,  ragi,  tumbuhan  dan  hewan.  PolyP  terdiri  dari rantai lurus yang terdiri dari puluhan hingga ratusan residu fosfat yang dihubungkan oleh ikatan phosphoanhydride energi tinggi (Kulaev et al ., 2004). Diketahui beberapa fungsi biologis  polyP  antara  lain  sebagai  reservoir  fosfat  dan  energi,  terlibat  dalam  regulasi aktifitas  gen,  sebagai  agen  yang  mentranspor  DNA  kedalam  sel  pada  fenomena transformasi  bakteri,  bahan  pembentuk  kapsul  pada  bakteri,  komponen  pembentuk biofilm, pengkelat kation divalent , buffer terhadap alkali, terlibat dalam motilitas bakteri patogen, penghambat degradasi RNA, dan temuan yang paling terbaru adalah promoter degradasi protein ribosomal bebas dalam hubungannya dengan protease Lon (Scroder & Muller, 1999; Hirota et al ., 2010; Tunpibonsak et al ., 2010). Selain itu, PolyP memegang peranan  penting  pada  adaptasi  fisiologis  sel  bakteri  terhadap  lingkungannya  selama pertumbuhan dan perkembangan, dan sebagai  respon terhadap stres lingkungan seperti syok osmotik dan kekurangan nutrisi (Mullan et al ., 2002).
Kadar  intraselular  Pi  pada  umumnya  tergantung  pada  tingkat  konsumsi  Pi  dari lingkungannya (Kulaev et al ., 2004). Pada Aerobacter aerogenes, akumulasi inorganik polifosfat  merupakan  fungsi  dari  medium  pertumbuhan.  Pada  medium  dengan konsentrasi fosfat yang rendah, polifosfat banyak diakumulasi. Sedangkan pada medium dengan  konsentrasi  fosfat  yang  tinggi,  akumulasi  polifosfat  diinduksi  oleh  kelaparan sulfur  (Harold  &  Sylvan,  1963).  Selain  itu,  akumulasi  polyP  juga  dipengaruhi  oleh keadaan energi dari sel sehubungan dengan aktivitas yang terkait pada ATPase membran dan  aktivitas  berbagai  enzim  penting  yang  terlibat  dalam  fosforilasi  dan  defosforilasi seperti kinase dan fosfatase (Kulaev et al ., 2004). Penyerapan Pi dari medium dipengaruhi oleh  pH  lingkungan,  pada Burkholderia  cepacia maksimal  menyerap  fosfat  dan mengakumulasi  fosfat  dalam bentuk  polyP pada  pH 5,5;  tingkatannya  mencapai  220% dan  330%,  lebih  tinggi  dari  pada  pertumbuhan  sel  di  pH  7,5.  Tingkat  maksimal intraselular polifosfat pada B. cepacia diperoleh pada awal fase stasioner (Mullan, 2002). Meningkatnya transportasi fosfat di nilai-nilai pH asam terjadi sebagai akibat dari serapan preferensial  H 2 PO 4 (spesies  fosfat  dominan  pada  nilai  PH  <  7,0)  diatas  HPO 4 atau terjadinya  reduksi  kekuatan  motif  proton  melintasi  membran  Plasma  pada  pH  5  -  6. Penyerapan fosfat pada Yarrowia lipolytica didorong oleh ion H + / fosfat co-transporter dengan  gradien H + melintasi  membran plasma diregulasi  oleh H + ATPase  yang terikat membran.  Selanjutnya  fosfat  bebas  yang  berlebihan  di  intraselular  disimpan  sebagai polyP (Van veen et al ., 1994; Zvyagilskaya et al ., 2000).
Sidat et al . (1999) menemukan bahwa bakteri pengakumulasi PO 4 tertinggi adalah bakteri  gram  negatif  yang  terdiri  dari Pseudomonas spp.  yang  merupakan  organisme utama sebanyak 58% dari total gram negatif yang diisolasi dari lumpur aktif, Moraxella spp 14%, Acinetobacter sp. 7%, Aeromonas spp., Alcaligenes spp. dan Enterobacter spp. masing-masing  sebanyak  7%  dari  total  populasi  gram  negatif.  Berdasarkan  hasil sekuensing gen 16S rRNA oleh Jeon et al (2003) diketahui bahwa Acinetobacter spp. , Aeromonas spp. , dan Pseudomonas spp. merupakan bakteri dominan penghilang fosfat, meskipun  termasuk  dalam  populasi  minor, Acinetobacter spp.  dapat  mengakumulasi lebih banyak fosfat daripada yang dibutuhkan untuk sintesis sel, sehingga bakteri ini biasa disebut luxury phosphate uptake (Sidat et al., 1999).
Beberapa  penelitian  sebelumnya  juga  telah  menunjukkan  bahwa  hilang  dan lepasnya fosfat dalam lumpur aktif merupakan hasil dari dominasi genus tunggal bakteri Acinetobacter spp.  dan  lebih  spesifik  yaitu  merupakan  spesies  tunggal, Acinetobacter calcoaceticus (Sidat et al ., 1999). Selain berpotensi mengakumulasi polifosfat, bakteri ini juga  mampu  hidup  pada  kondisi  ektrim  seperti  yang  dilaporkan  oleh  Nishimura et  al . (1981) yang berhasil mengisolasi Acinetobacter dari kapas tampon yang telah disterilisasi dengan sinar gamma. Hasil karakterisasi menunjukkan bahwa secara fenotipik, genotipik dan  enzimatik  terdapat  perbedaan  dengan  spesies Acinetobacter lainnya.  Kemampuan Acinetobacter hidup  pada  lingkungan  yang  terpapar  radiasi  dan  sifatnya  sebagai akumulator polyP, menjadikan genus ini sangat potensial sebagai agen presipitasi limbah radioaktif uranium.
Acinetobacter  calcoaceticus dan Aeromonas  hydrophila diketahui  sebagai akumulator PO 4 yang paling tinggi.  Kedua isolat  ini mampu mengakumulasi sebanyak 1.84  x  10 -10 dan  1.65x10 -10 mg  PO 4 .sel -1 secara  berurutan. Acinetobacter ecara  alami terdapat  pada  lumpur  aktif  yang  berperan  dalam  mengabsorbsi  orthofosfat  dan mengakumulasi  dalam  bentuk  polifosfat,  tetapi  merupakan  minoritas  karena  tingkat pertumbuhannya  yang rendah. Acinetobacter spp. jumlahnya sangat sedikit akan tetapi kapasitasnya dalam mengakumulasi polifosfat intraselular paling tinggi diantara mikrobia yang telah diisolasi (Sidat et al ., 1999).

## METODE PENELITIAN

## 1. Sampel Penelitian
Sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  isolat  bakteri  A671  toleran uranium  pada  konsentrasi  0,4  mM  yang  bersifat  fakultatif  anaerob.  Sampel  penelitian diisolasi  dari  limbah  yang  mengandung  uranium  dari  pusat  Sains  dan  Teknologi Akselerator (PSTA) BATAN Yogyakarta.
2. Uji Akumulasi Polifosfat
a. Pembuatan kurva standar PO 4
Larutan  standar  fosfat  dibuat  dengan  cara  0,4393  gram  KH 2 PO 4 dilarutkan kedalam air destilat sampai volume 1 L, larutan ini mengandung PO 4 dengan konsentrasi
BIOLOGI SEL (vol 9 no 1 edisi jUN-JUL 2020 issn 2252-858x/e-ISSN 2541-1225)  Page 84
100 μg/L. Kurva standar P dibuat dengan konsentrasi P- terlarut 0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40. 50, 55, 60, 70,  80 dan 90 μg/L. Sebanyak 1 ml larutan  yang mengandung PO 4 konsentrasi 100 μg/L diambil kemudian ditambahkan dengan ekstrak solution 4 mL lalu digojok  selama  1  menit,  dari  suspensi  tersebut  diambil  2  mL  kemudian  ditambahkan akuades  5  ml  dan  ammonium  molibdat  2  mL  lalu  dihomogenkan  selama  1  menit. Selanjutnya ditambahkan 1 mL SnCl kemudian dihomogenkan dan diinkubasi selama 10 menit. Optical  Density (OD)  larutan  ditera  dengan  spektrofotometer  pada  panjang gelombang 660 nm (Olsen & Dean,1965). Deret standar P dibuat dari hasil pengenceran PO4  konsentrasi  100  μg/L.  Nilai  yang  diperoleh  kemudian  dibuat  sebagai  dasar persamaan regresi linier kurva standar fosfat.

## b. Analisis Akumulasi Polifosfat
Analisis  akumulasi  polifosfat  diawali  dengan pre-culture isolat  A671  pada medium P- limit dengan sumber karbon hanya natrium asetat dan sumber fosfat terbatas. Isolat diinkubasi dengan cara digojog pada suhu 25 0 C selama overnight (Groenestijn et al .,  1988) . Dengan  kondisi  seperti  ini  maka  gen ppk yang  berperan  dalam  sintesis polyphosphate  akan  menjadi  aktif  (Gavigan et  al., 1999;  Kuroda  &  Ohtake,  2000). Selanjutnya, sel yang telah di pre-culture disentrifus dan dicuci dua kali menggunakan buffer  Tris  hydrochloride  dan  pellet  disuspensikan  ke  dalam  medium  P- uptake untuk pengambilan fosfat. Isolat ditumbuhkan dengan digojog 160 rpm pada suhu 25 0 C. Asetat pada  medium  ini  digunakan  sebagai  sumber  energi  untuk  proses  penyerapan  fosfat, sedangkan streptomisin ditambahkan untuk mencegah pertumbuhan sel (Groenestijn et al ., 1988). Pengukuran dilakukan pada 5 fase pertumbuhan yaitu fase lag, fase logaritmik, awal fase stasioner, fase stasioner, dan akhir stasioner.
Analisis akumulasi polifosfat secara kuantitatif menggunakan metode Olsen & Dean (1965). Supernatant diambil 1 mL kemudian ditambah 4 mL extract solution lalu digojog selama  1  menit.  Suspensi  supernatan  dan exstract  solution diambil  2  ml  kemudian ditambahkan  5  ml  akuades  dan  2  ml  ammonium  molibdat  lalu  digojog.  Terakhir ditambahkan 1 ml reagen SnCl 2 yang telah dilarutkan dalam 1N HCl. Sampel yang telah diberi  reagen  dihomogenkan  dan  diinkubasi  selama  1-10  menit  lalu  diukur  nilai absorbansinya pada panjang gelombang 660 nm menggunakan spektrofotometer visible. Kadar  fosfat  (PO 4 )  diketahui  dengan  menggunakan  persamaan  pada  kurva  standar PO4 . Analisis  secara  kualitatif  akumulasi  polifosfat  dilakukan  dengan  menggunakan pengecatan Neisser  yang dapat  mewarnai  granula-granula polyP didalam  sel  (Hoppert, 2003).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasi  analisis  mikroba  toleran  uranium  dalam  mengakumulasi  polifosfat  selama fase pertumbuhannya diukur dengan menganalisis sisa fosfat yang terlarut dalam medium cair yang telah diinokulasikan isolat A671 dan diinkubasi selama 48 jam. Sisa fosfat yang
BIOLOGI SEL (vol 9 no 1 edisi jUN-JUL 2020 issn 2252-858x/e-ISSN 2541-1225)  Page 85
terlarut dalam medium merupakan jumlah fosfat yang belumdiserap kedalam sel. Hasil analisis jumlah fosfat terlarut dalam medium terlihat pada gambar berikut.
Gambar 1. Hasil analisis akumulasi polifosfat berdasarkan kurva pertumbuhan isolat A671 pada medium P- uptake (a) dengan mengamati kadar fosfat yang terlarut dalam medium P- uptake (b) yang diukur dari beberapa titik pada fase pertumbuhan isolat A671. Kadar P diukur menggunakan spektrofotometer panjang gelombang 660 nm.
Berdasarkan hasil pengukuran kadar fosfat yang terlarut dalam medium diketahui bahwa  jumlah  fosfat  yang  tersisa  di  medium  paling  sedikit  pada  jam  ke-48.  Hal  ini menunjukkan bahwa penyerapan fosfat terbanyak terjadi pada fase stasioner dijam ke 48. Jumlah  fosfat  yang  diserap  oleh  sel  pada  fase  pertumbuhan  didapatkan  dengan  cara mengurangi kadar fosfat pada medium kontrol yang berjumlah 303,09 μg/L, dengan kadar fosfat  terlarut  setelah  dilakukan  inokulasi.  Data  hasil  analisis  penyerapan  fosfat ditunjukkan pada Tabel 4.1.
Tabel 4.1 Penyerapan fosfat oleh isolat A671 Jam Fase Pertumbuhan P-dalam medium (μg/L) P- uptake (μg/L) 0 Adaptasi 159,92 143,17 6 Eksponensial 168,24 134,85 12 Eksponensial 153,43 149,66 24 Awal stasioner 188,39 114,70 36 Stasioner 159,81 143,28 48 Stasioner 143,32 159,77
Berdasarkan  hasil  analisis  diketahui  bahwa  kadar  fosfat  yang  diserap  oleh  sel paling banyak pada fase stasioner yaitu pada jam ke-48 sebanyak 159,77 μg/L. Polifosfat disintesis optimal pada fase stasioner berhubungan dengan peran molekul ini dalam fase tersebut. PolyP berperan penting pada regulasi sel dalam merespon fase stasioner (Tzeng & Kornberg, 1998). Selain itu pada E. coli , polyp dibutuhkan untuk menginduksi rpoS, gen sigma faktor RNA polimerase yang meregulasi lebih dari 50 gen yang merespon stres (Shiba et al ., 1997; Sword, 1997). Rao et al. (1998) menambahkan bahwa pada E. coli
0 100 200 300 400 0 12 24 36 48 60 72 84 96 K le tt u n it waktu (jam) Klett Unit 120 130 140 150 160 170 180 190 200 0 20 40 60 kad ar PO 4 µ/L waktu (jam) Kadar PO4 (a) (b)
BIOLOGI SEL (vol 9 no 1 edisi jUN-JUL 2020 issn 2252-858x/e-ISSN 2541-1225)  Page 86
yang telah dimutasi gen ppk akan gagal beradaptasi pada fase stasioner terhadap tekanan dan stringencies sehingga tidak dapat bertahan hidup.
Pada  uji  akumulasi  polifosfat,  isolat  bakteri  sebelumnya  ditumbuhkan  pada medium TGY yang berisi nutrisi yang kompleks sehingga sel dapat tumbuh optimal. Hal ini  bertujuan  untuk  mendapatkan  biomassa  sel  yang  akan  digunakan  dalam  pengujian akumulasi polyP. Kultur isolat kemudian dipindahkan pada medium limit fosfat dengan tujuan  untuk  melepaskan  fosfat  keluar  sel  yang  telah  diakumulasi  sebelumnya. Groenestijn et  al. (1988)  menjelaskan  bahwa  tidak  ditemukan  adanya  granula-granula polifosfat setelah sel Acinetobacter ditumbuhkan dalam medium limit fosfat hingga fase stasioner.  Isolat  bakteri  yang  sudah  tidak  memiliki  granula  polifosfat  dalam  selnya kemudian  dipindahkan  dimedium  P- uptake untuk  melihat  kemampuannya  dalam menyerap  fosfat  dari  medium.  Terdapat  beberapa  sistem  tanspor  fosfat  inorganik  (Pi) yang  berperan  dalam  menyerap  Pi  dari  lingkungannya.  Ketika  Pi  tersedia  berlebih dilingkungannya,  Pi  akan  diserap  oleh  sistem  transpor  inorganik  Pi  ( Pit )  yang diekspresikan  secara  konstitutif.  Sedangkan  pada  kodisi  kelaparan  fosfat,  fosfat  akan diserap  oleh  sistem  transpor  spesifik  Pi  ( Pst ).  Fosfat  yang  telah  diserap  selanjutnya disimpan dalam bentuk polyP (Kulaev et al ., 2004; Hirota et al , 2010).
Polifosfat  didalam  sel  terdapat  dalam  3  fraksi  yaitu  polyP  rantai  pendek  yang terdapat pada permukaan sel (periplasmik), polifosfat rantai panjang yang terlarut dalam sitoplasma  dan  polyP  rantai  panjang  yang  terdapat  dalam  bentuk  granular-granular (volutin) (Clark et al., 1986).Berdasarkan hasil penelitian sebelumnya dijelaskan bahwa pada saat mikrobia tumbuh cepat, maka hanya sedikit cadangan polifosfat terakumulasi dalam sel, sedangkan apabila pertumbuhan terganggu (terhenti) karena nutrisinya tidak seimbang  (tidak  sesuai)  maka  sejumlah  besar  cadangan  polifosfat  tetap  terakumulasi (Wilkinson  &  Duguid,  1960;  Harold  &  Sylvan,  1963).  Hasil  yang  didapatkan  ini berkesesuaian dengan penelitian yang dilakukan sebelumnya bahwa terdapat hubungan antagonistik antara pertumbuhan sel dan akumulasi polifosfat. Menurut Harold & Sylvan (1963)  terdapat  hubungan reciprocal antara  metabolisme  polifosfat  dan  metabolisme asam  nukleat,  sehingga  saat  sel  tumbuh  dan  dimulai  sintesis  asam  nukleat,  maka polifosfat  dalam  sel  akan  didegradasi  dan  ditransfer  untuk  sintesis  asam  nukleat  dan ketika pertumbuhan terganggu atau terhenti sehingga sintesis asam nukleat juga terhenti maka  tidak  ada  degradasi  polifosfat  untuk  sintesis  asam  nukleat  sehingga  cadangan polifosfat tetap terakumulasi dalam jumlah besar. Identifikasi akumulasi polyP tertinggi berdasarkan fase pertumbuhan isolat berperan penting dalam tujuan aplikasi bakteri untuk meremediasi limbah logam yang memanfaatkan polifosfat pada proses penyerapan logam dari lingkungan. Berdasarkan hasil ini dapat diketahui bahwa isolat A671 paling optimal mengakumulasi polyP pada fase stasioner terutama pada jam ke 48.

## Jurnal Biology Science & Education 2020  HENI MUTMAINNAH dkk
BIOLOGI SEL (vol 9 no 1 edisi jUN-JUL 2020 issn 2252-858x/e-ISSN 2541-1225)  Page 87

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  ini  dapat  diketahui  bahwa  isolat  A671  paling  optimal mengakumulasi polyP pada fase stasioner terutama pada jam ke 48 dan akumulasi polyp terendah ditemukan pada fase awal stasioner pada jam ke 24.

## SARAN
Perlu dilakukan uji akumulasi polyp dengan menggunakan beberapa sel  bakteri toleran  uranium  lainnya  sebagai  pembanding  untuk  mengetahui  korelasi  anatara kemampuan mengakumulasi poliP terhadap kemampuan presipitasi uranium.

## DAFTAR PUSTAKA
Clark, J.E., Beegen, H. and Wood, H.J. (1986). Isolation of intact chains of polyphosphate from Propionibacterium shermanii grown on glucose or lactate. J. Bacteriol 168: 1212 - 1219.
Gavigan,  J.,  L.M.Marshall  dan  A.D.W.Dobson.  (1999).  Regulation  of  Polyphosphate Kinase  Gene  Expression  in Acinetobacter  baumanni 252. Microbiology 145: 2931-2937.
Groenestijn, J.V., Vlekke, G.J.F.M., Anink, D.M.E., Deinema, M.H. and Zehnder, A.J.B. (1988).  Role  of  Cations  in  Accumulation  and  Release  of  Phosphate  by Acinetobacter Strain 210A. App. and Env.Microbiol .54 (12): 2894-2901.
Harold,  F.M.  and  Sylvan,  S.  (1963).  Accumulation  of  Inorganic  Polyphosphate  in Aerobacter  aerogenes.II.  Environmental  Control  and  The  Role  of  Sulfur Compounds. J. Bacterial . 86: 222-231.
Hirota, R., Kuroda, A., Kato, J., and Ohtake, H. (2010). Bacterial Phosphate Metabolism and Its Application to Phosphorus Recovery and Industrial Bioprocesses. Journal of Bioscience and Bioengineering . 109: 423-432.
Hoppert,  M.  (2003). Microscopic  Techniques  in  Biotechnology .  Wiley-  VcH  Verlag, GmnH & Co, KGaA, Weinheim, Germany.
Jeon,  C.O.,  D.S.Lee,  J.M.  Park.  (2002).  Microbial  communities  in  activated  sludge performing  enhanced  biological  Phosphorus  removal  in  a  sequencing  batch reactor . Water Research . 37: 2195-2205.
Kulaev,  I.S.,  Vagabov,  V.M.  and  Kulakovskaya,  T.V.  (2004). The  Biochemistry  of Inorganic Polyphosphates; 2ed. John Wiley & Sons,Ltd. England.
Kuroda, A., and Ohtake, H. (2000). Molecular Analysis Of Polyphosphate Accumulation In Bacteria. Biochemistry (Moscow) 65 (3) : 304-308.
Mullan,  A.,  J.P.Quinn,  and  J.W.McGrath.  (2002).  Enhanced  Phosphate  Uptake  and Polyphosphate  accumulation  in  Burkholderia  cepacia  grown  under  Low-pH conditions. Microbial Ecology .44: 69-77.
Baku
Mutu
Baku
Mutu
Baku Mutu
Jurnal Biology Science & Education 2020  HENI MUTMAINNAH dkk
BIOLOGI SEL (vol 9 no 1 edisi jUN-JUL 2020 issn 2252-858x/e-ISSN 2541-1225)  Page 88
Muthmainna,  H.  (2018).  KARAKTERISASI  FENOTIPIK  ISOLAT  BAKTERI TOLERAN  URANIUM. Biosel  (Biology  Science  and  Education):  Jurnal Penelitian Sains dan Pendidikan , 7 (1), 23-28.
Nishimura, Y., Kairiyama, E., Shimadzu, M., and Iizuka, H. (1981). Characterization of  a  Radiation-Resistant  Acinetobacter .  Zeitschrift  fur  Allgemeine mikrobiologie . 21:125-130.
Olsen,  S.R.  and  Dean,  L.A.  (1965). Phosphorus  Methods  of  Soil  Analysis  Part  2 . American Society of Agronomy, Inc. USA.
Rao, N.N., Liu, S. and Kornberg, A. (1998) . Inorganic Polyphosphate in Escherichia coli: The phosphate Regulon and The Stringent Response . J. Bacteriol . 180(8): 2186 Shiba,  T.,  Tsutsumi,  K.,  Yano,  H.,  Ihara,  Y.,  Kameda,  A.,  Tanaka,  K.,  Takahashi,  H., Munekata, M., Rao, N.N., and Kornberg, A. (1997). Proc. Natl Acad . Sci. USA. 94: 11210-11215.
Sidat, M., F.Bux, and H.C.Kasan. (1999). Polyphosphate accumulation by bacteria isolatd from activated sludge. Water SA . 25 no. 2
Swords. W.E., Cannon, B.M. and Benjamin, W.H. (1997). Avirulence f LT2 Strains of Salmonella  typhimurium  Results  from  a  Defective  rpoS  Gene . Infection  and Immunity . 65(6): 2451-2453.
Tunpiboonsak, S., Mongkolrob, R., Kitudomsub, K., Thanwatanaying, P., Kiettipirodom, Tungboontina,  Y.,  and  Tungpradabkul,  S.  (2010).  Role  of  a  Bulkholderia pseudomallei Polyphosphate Kinase In an Oxidative Stress Response, Motilities, and Biofilm Formation. The Jornal of microbiology .48: pp.63-70 Tzeng,  C.M.  and  Kornberg,  A.  (1998) . Polyphosphate  Kinase  is  Highly  Conserved  In many Bacterial Pathogens. Mol.Microbiol . 29: 381-382.
Vanveen, H.W., Abee, T., Kortstee, G.J.J., Konings, W.N., and Zehnder, A.J.B. (1994). Substrate  Specificity  of  Two  Phosphate  Transport  System  of  Acinetobacter johnsonii 210A in Relation to Phosphate Speciation in Its Aquatic Environment . The Journal of Biological Chemistry . 269(23): pp 16212-16216.
Wilkinson,  J.F.,  and  Duguid,  J.P.  (1960).  The  Influences  Of  Cultural  Conditions  On Bacterial Cytology. Intern.Rev.Cytol . 9 : 1-76.
Zvyagilskaya, R., Allard, P. and Persson, B.L. (2000). Two systems for Phosphate Uptake in Yarrowia lipolytica Cells Grown at Acidic Conditions. IUBMB Life. 49: 143- 147