## PERANCANGAN AWAL PABRIK BIOHIDROGEN DARI LIMBAH CAIR PABRIK KELAPA SAWIT DENGAN FERMENTASI ANAEROBIK PADA KONDISI TERMOFILIK
Bambang Trisakti, Irvan, Hari Tiarasti, Irma Suraya Departemen Teknik Kimia, Fakultas Teknik, Universitas Sumatera Utara Jl. Almamater, Kampus USU Medan 20155, Indonesia
b_trisakti@yahoo.com

## Abstrak
Indonesia  memiliki  banyak  sumber  daya  alam  namun  tidak  mencukupi  lagi  untuk  memenuhi permintaan  energi  dari  konsumen,  khususnya  bahan  bakar.  Oleh  karena  itu,  pemerintah  terus menggalakkan  mencari  energi  alternatif  terbaru.  Salah  satunya  adalah  hidrogen.  Hidrogen merupakan  produk  ramah  lingkungan  yang  tidak  menghasilkan  emisi  gas  karbon.  Dalam pembentukan  hidrogen  dapat  menggunakan  limbah  yang  kaya  akan  karbohidrat  sebagai  bahan baku dan dilakukan proses fermentasi. Akan tetapi, hingga saat ini masih sebatas penelitian saja. Sehingga  hal  ini  mendorong  dibuatnya  suatu  perancangan  awal  pabrik  pembuatan  biohidrogen dari limbah cair pabrik kelapa sawit (LCPKS) dengan fermentasi anerobik pada kondisi termofilik dengan  tujuan  mencukupi  kebutuhan  konsumen  dan  turut  berperan  dalam  mengembangkan teknologi  bersih.  Untuk  kapasitas  produksi  sebesar  495,1694  ton/tahun,  total  investasi  yang dibutuhkan  untuk  membangun  sebuah  pabrik  biohidrogen  di  Indonesia  adalah  Rp. 507.190.573.523,-  dengan  total  biaya  produksi  sebesar  Rp.  354.636.600.139,-.  Parameter kelayakan  dengan  kapasitas  produksi  495,1694  ton/tahun  adalah  total  penjualan  produk  sebesar Rp  174.261.989,701,-  dan  laba  bersih  sebesar  180.030.185.327,-.  Profit  Margin  (PM)  41,9  %, Break Even Point (BEP) 45,24 %, Return on Investment (ROI) 35,5 %, Pay Out Time (POT) 2,82 tahun, Return on Network (RON) 59,16 %, Internal Rate of Return (IRR) 53,52  .
Kata kunci : biohidrogen, fermentasi anaerobik, IRR, LCPKS,termofilik.

## Abstract
Indonesia  has  a  lot  of  natural  resources  which  is  deficient  to  fulfill  the  energy  demand  of consumers,  particularly  fuel.  Therefore,  the  government  keeps  on  promoting  the  search  for alternative energy. One of these is hydrogen. Hydrogen is an  environmental friendly product that does  not  produce  carbon  emissions.  In  the  formation  of  hydrogen  we  can  use  carbohydrate-rich waste  as  a  raw  material  and  by  using  fermentation  process.  However,  it  is  still  limited  research only. So this encourage us to design biohydrogen plant from palm oil mill effluent (POME) with the conditions of thermophilic anaerobic fermentation in order  to accomplish the needs of consumers and  contribute  in  developing  clean  technologies.  For  the  production  capacity  of  495.1694  tons  / year,  the  total  investment  required  to  build  a  factory  of  biohydrogen  in  Indonesia  is  Rp. 507,190,573,523, - with a total production cost of Rp. 354,636,600,139, -. Parameter feasibility of the production capacity of 495.1694 tons / year is the total product sales of Rp 174,261,989.701, - and net  income 180,030,185,327,  -.  Profit  Margin  (PM)  41.9%  Break  Even  Point  (BEP)  45.24%, Return  on  Investment  (ROI)  35.5%,  Pay  Out  Time  (POT)  2.82  years,  Return  of  Network  (RON) 59.16%, Internal Rate of Return (IRR) 53.52  .
Keywords: anaerobic fermentation, biohydrogen, IRR, POME, thermophilic.

## Pendahuluan
Pada  saat  ini,  dunia  menghadapi  dua  krisis yaitu  kekurangan  bahan  bakar  fosil  perubahan iklim  secara  global.  Perubahan  iklim  secara  luas diyakini  terkait  dengan  peningkatan  pesat  dalam kerusakan  yang  disebabkan  oleh  bencana  alam selama  30  tahun  terakhir  dan  konsekuensi  global yang  disebabkan  oleh  konsentrasi  gas  efek  rumah kaca meningkat. Maka, sangat dibutuhkan alternatif  lain  untuk  menggantikan  bahan  bakar yang  bersumber  dari  fosil  [1].  Untuk    antisipasi dalam  memenuhi  pasokan  akan  kebutuhan  energi, energi  terbarukan  yang  ramah  lingkungan  antara lain  :  bioetanol,  bio-diesel,bio-hidrogen  (Bio-H 2 ),
bio-butandiol (Bio-BD) [2]. Dari berbagai pilihan, hidrogen  dan  metana  mempunyai  peran  yang penting  dalam  energi  masa  depan  karena  ramah lingkungan,  dapat  diperbaharui, sustainable dan energi yang digunakan rendah [1].
Lebih  dari  500  milyar  m 3 dari  hidrogen diproduksi  tiap  tahun  untuk  digunakan  dalam berbagai  macam  proses.  Jumlah  ini  dapat menghasilkan 6,5 EJ dari energi dan setara dengan konsumsi  1,5%  dari  energi  dunia.  Sembilan  puluh sembilan  persen  (99%)  dari  hidrogen  dihasilkan dari  bahan  bakar  fosil  terutama natural  gas , sedangkan  sumber  dari  yang  dapat  diperbaharui sisanya.  Saat  ini  penggunakan  katalitik steam
reforming dari  nafta  atau natural  gas ,  gasifikasi batu  bara  dan  elektrolisis  air  sangat  digemari sebagai  metode  klasik  untuk  pabrikasi  hidrogen. Tetapi,  semua  metode  tersebut  menggunakan energi  yang  tinggi,  biaya  yang  tinggi  dan  tidak ramah  lingkungan.  Oleh  karena  itu,  teknik  yang sesuai  untuk  memproduksi  energi  tersebut  adalah dengan biomassa atau limbah yang tersedia[3].
Gas  hidrogen  (H 2 )  mempunyai  gravimetrik densitas  energi  yang  paling  tertinggi  diantara beberapa  bahan  bakar  dan  cocok  terhadap elektrokimia  dan  proses  pembakaran  untuk konversi  energi  tanpa  menghasilkan  emisi  karbon yang  telah  memberikan  konstribusi  pada  polusi lingkungan  dan  perubahan  iklim.  Sekarang  ini, sebagian  besar  H 2 diproduksi  dengan  cara elektrolisa  air  atau  perubahan  dari  metan. Teknologi  produksi  H 2 secara  bio  (Bio-H 2 ) memberikan  pendekatan  yang  luas  terhadap produksi  H 2 termasuk  biofotolisis  langsung, biofotolisis  tidak  langsung,  foto  fermentasi  dan fermentasi  gelap.  Fermentasi  tanpa  menggunakan cahaya  ini  merupakan  salah  satu  energi  bersih masa  depan  untuk  menuju  sasaran  tanpa  limbah dikarenakan  dapat  dipakainya  limbah  pertanian dan limbah industri sebagai substrat mikroorganisma [4].
Biomassa dari limbah yang dapat dimanfaatkan  untuk  biohidrogen  ini  salah  satunya adalah limbah cair kelapa sawit. Pabrik pengolahan kelapa sawit menghasilkan limbah cair dalam  jumlah  yang  besar,  yaitu  satu  ton  tandan buah segar (TBS) dapat dikonversi menjadi 0,2 ton Crude  Palm  Oil (CPO),  sementara  0,66  ton  akan dikonversi menjadi limbah cair pabrik kelapa sawit (LCPKS)  [5].  LCPKS  mengandung  asam  amino, nutrisi  inorganik  seperti  Na,  K,  Ca,  Mg,  serat pendek  dan  campuran  dari  karbohidrat.  Oleh karena  itu  LCPKS  sangat  sesuai  sebagai  substrat untuk produksi hidrogen [6].
Adapun  potensi  LCPKS  atau palm  oil  mill effluent (POME)  untuk  menghasilkan  biohidrogen dapat  dijelaskan  pada  hasil  beberapa  penelitian pada gambar 1.
Gambar 1. Yield dari biohidrogen dengan menggunakan umpan yang berbeda [7]
Konsumsi  hidrogen  dunia  terus  meningkat pesat,  misalnya  untuk  industri  pupuk  dan  kilang minyak,  saat  ini  permintaannya  mencapai  50  juta ton per tahun, dengan laju sekitar 4-10% per tahun dan diperkirakan akan meningkat terus dengan laju yang  lebih  cepat.  Pada  kilang  minyak,  hidrogen dimanfaatkan  untuk  menghasilkan  bahan  bakar transportasi  dengan  kadar  hidrogen  sekitar  15% sehingga  diperoleh  bahan  bakar  transportasi (gasoline, jet  fuel )  yang  ramah  lingkungan. Hidrogen  juga  merupakan  kandidat  bahan  bakar transportasi yang paling menjanjikan di masa yang akan datang. Berbagai uji coba kendaraan fuel cell (yang  bersumber  dari  hidrogen)  oleh  industri- industri otomotif terkemuka dunia  sejak lebih dari 50  tahun  terakhir  mulai  menunjukkan  titik  terang dalam  pemanfaatan fuel  cell berbasis  hidrogen sebagai bahan bakar kendaraan. Jika hasil uji coba ini  memberikan  hasil  yang  positif  diperkirakan pada  akhir  dasawarsa  ini  akan  menjadi  awal  era mobil fuel  cell di  dunia.  Pada  saat  itulah  akan terjadi lonjakan permintaan hidrogen dalam jumlah sangat  besar.  Sebagai  contoh,  studi  di  Amerika menunjukkan  bahwa  jika  era  mobil fuel  cell dimulai, Amerika sendiri  membutuhkan sekitar 40 juta  ton  hidrogen  per  tahun  untuk  menggerakkan sekitar  100  juta  mesin-mesin  mobil fuel  cell [8]. Oleh  karena  itu,  makin  menjaminnya  potensi biohidrogen di masa depan menyebabkan perlunya perancangan  awal  pabrik  pembuatan  biohidrogen dari LCPKS.

## Teori
Produksi  hidrogen  dari  sumber  daya terbarukan dengan  fermentasi  adalah  metode  yang lebih  menjanjikan  di  antara  alternatif  proses produksi  hidrogen  yang  lain.  Sesuai  dengan pembangunan berkelanjutan dan masalah minimisasi  limbah,  produksi  hidrogen  biologis, yang  dikenal  sebagai  "teknologi  hijau"  telah menerima banyak perhatian dalam beberapa tahun terakhir disebabkan kebutuhan energi  yang sedikit dan dapat dikombinasikan dengan proses pengolahan  limbah  cair.  Hidrogen  tidak  berbau, tidak  berwarna,  tidak  berasa,  dan  tidak  beracun ketika digunakan sebagai bahan bakar karena tidak menghasilkan  polutan  tetapi  menghasilkan  air sebagai  produk  tunggal.  Dibandingkan  dengan bahan  bakar  fosil,  hidrogen  menghasilkan  energi sebesar  122  kJ/g,  2,75  kali  lebih  besar dibandingkan dengan bahan bakar hidrokarbon [9].
Adapun beberapa keuntungan dari
penggunaan  hidrogen  ialah    pembakaran  hidrogen pada automobile 50%  lebih  efisien  dari  pada bensin  [10].  Kemudian  hidrogen  mempunyai efisiensi konversi sebesar 55-60% (Nilai pembakaran  gas  H 2 )  dibandingkan  dengan  gas metana  yang  hanya  33%  [11].    Hidrogen  dapat
dijual  sebagai metal  hydride [12]  serta  transmisi hidrogen  melalui  perpipaan  gas  akan  lebih  efisien daripada transmisi electricity down power line [13]. Selain  itu  gas  H 2 mempunyai  aplikasi  industri yang lebih luas dibandingkan gas metana [14].
Di  antara  metode  produksi  hidrogen, metode  yang  paling  menjanjikan  dan  ramah lingkungan  adalah  fermentasi  gelap  dari  limbah organik  karena  menggabungkan  proses  produksi hidrogen dengan pengolahan limbah [15].

## Metodologi Pembuatan Biohidrogen
Bahan  baku  yang    digunakan  pada  proses ini  adalah  limbah  cair  pabrik  kelapa  sawit (LCPKS).
Tahap  pembentukan  biohidrogen  ada  3 yaitu pre-treatment , hidrolisis dan asidifikasi [16]. Proses pre-treatment
berfungsi
untuk menonaktifkan bakteri metanasi sehingga dihasilkan  produksi  hidrogen  yang  tinggi.  Metode yang  digunakan  adalah  penambahan 1  M  NaOH 10%  ke  dalam  LCPKS  dan  dipanaskan  pada  suhu 80 o C  selama  1  jam [6].  Pada  proses  hidrolisis terjadi  perombakan  rantai  panjang  karbohidrat menjadi bagian yang lebih pendek dan selanjutnya hasil  perombakan  itu  diubah  menjadi  hidrogen pada proses asidifikasi. Reaksi yang terjadi yaitu : (C 6 H 10 O 5 ) n H 2(g) +CO 2(g) +H 2 S (g) + C 2 H 4 O 2(i) +C 4 H 8 O 2(l) [17] Fermentasi yang
digunakan yaitu fermentasi  anerobik  pada  kondisi  termofilik dengan temperatur  60 o C,  pH  5,5  dan  HRT  2  hari. Biohidrogen  yang  dihasilkan  yaitu  61%  H 2 ,  85 ppm  H 2 S  dan  selebihnya  adalah  CO 2 . Selain  gas yang  dihasilkan,  akan  diperoleh  juga  beberapa asam  terutama  asam  asetat  dan  asam  butirat  pada effluent .  Nilai  COD  yang  dihasilkan  juga  masih tinggi  [18].  Oleh  karena  itu,  dapat  dilakukan proses anaerobik untuk  menghasilkan biogas  yang bisa  dimanfaatkan  untuk  energi  listrik  pembuatan biohidrogen.  Adapun  skema  proses  pembuatan biohidrogen  dan  biogas  dari  fermentasi  LCPKS ditunjukkan pada gambar 2.
Gambar  2.    Sistem  integrasi  dari  fermentasi  gelap dengan  anaerobik  untuk  produksi  biohidrogen  dan biogas [7]
Untuk  memurnikan  biohidrogen,  maka perlu  dilakukan  pemurnian.  Pertama,  dilakukan proses biodesulfurisasi. Biodesulfurisasi ini mempunyai  beberapa  keuntungan  diantaranya prosesnya  aman  karena  semua  H 2 S  terserap,  tidak menggunakan bahan kimia yang mahal, menggunakan  tekanan  atmosfer  dan  produk akhirnya  adalah  elemen  sulfur  yang  dapat dimanfaatkan  kembali.  Inokulum  yang  digunakan yaitu Thioalkalivibrio dan Thioalkalimicrobium
[19].  Kedua,  dilakukan  proses  penyerapan  CO 2 menggunakan larutan K2 2 CO 3 yang dapat diregenerasi.  Ketiga,  dilakukan  proses  pemurnian H 2 dengan  tingkat  kemurnian  99%  dengan menggunakan  prinsip Pressure  Swing  Adsorber (PSA).

## Hasil
a. Analisa Proses
Keunggulan produksi H 2 melalui fermentasi anaerobik adalah :
1. Tidak memerlukan energi matahari
2. Berbagai  limbah/tanaman  energi  dapat digunakan
3. Teknologi reaktor yang sederhana [20]
Selain  itu,  adapun  keistimewaan  dari perancangan  awal  pabrik  pembuatan  biohidrogen ini adalah terbentuknya H 2 dengan kemurnian 99% dan  produk  lain  seperti  CO 2 dan  sulfur  yang  juga bisa dijual serta pemanfaatan kembali effluent dari fermentasi  biohidrogen  menjadi  biogas  yang  akan digunakan  untuk  energi  listrik  dari  pabrik biohidrogen  itu  sendiri. Flowsheet lengkap  dari perancangan  awal  pabrik  ini  ditunjukkan  pada gambar 4.
 
   mikroba
Gambar 3. Flowsheet Pembuatan Biohidrogen dari Fermentasi LCPKS dengan Fermentasi Anaerobik pada kondisi Termofilik
b. Analisa Lokasi dan Tata Letak Pabrik
Pabrik pembuatan biohidrogen ini direncanakan berlokasi di daerah Tebing Tinggi, Provinsi  Sumatera  Utara  dengan  alasan  bahan baku  pabrik  merupakan  limbah  cair  proses pengolahan Crude  Palm  Oil (CPO)  yang diperoleh  dari  Pabrik  Minyak  Kelapa  Sawit (PMKS).  Pabrik  ini  direncanakan  terintegrasi dengan PMKS yang ada di sekitar lokasi pabrik. Adapun sumber utama bahan baku direncanakan berasal  dari  salah  satu  Pabrik  Kelapa  Sawit (PKS)  di  daerah  Tebing  Tinggi.  Kapasitas terpasang  di  pabrik  tersebut  adalah  60  ton tandan  buah  segar/jam  sehingga  menghasilkan limbah  cair  sekitar  36  ton/jam.  Jumlah  limbah cair  tersebut  telah  mencukupi  kebutuhan kapasitas pabrik yang akan dibangun.
Kawasan  industri  Tebing  Tinggi  ini, tidak  terlalu  jauh  dari  sarana  pelabuhan Belawan.  Selain  itu,  fasilitas  transportasi  darat dari  industri  ke  tempat  sekitar  juga  sangat  baik dan  dekat  dengan  jalan  utama.  Air  yang dibutuhkan  dalam  proses  diperoleh  dari  Daerah Aliran  Sungai  (DAS)  Padang  yang  mengalir  di sekitar  pabrik  untuk  proses,  sarana  utilitas  dan kebutuhan domestik.
Sebagai  kawasan  industri,  daerah  ini merupakan salah satu tujuan para pencari kerja. Di  daerah  ini  tersedia  tenaga  kerja  terdidik maupun  yang  tidak  terdidik  serta  tenaga  kerja yang  terlatih  maupun  tidak  terlatih.  Tata  Letak Pabrik ditunjukkan pada gambar 4 dengan skala 1: 63.7019 sehingga luas tanah yang dibutuhkan sebesar 13.250 m 2 . Keterangan gambar disajikan pada Tabel 1.
Tabel 1. Kode dan Penjelasan untuk Gambar 4
No. Jenis Area
1 Pos keamanan 2 Parkir
3 Taman
4 Perumahan Karyawan
5 Ruang kontrol
6 Area Proses
7 Area Utilitas
8 Perkantoran
9 Laboratorium
10 Poliklinik
11 Kantin
12 Tempat Ibadah
13 Gudang Peralatan/Suku Cadang
14 Bengkel
15 Perpustakaan
16 Unit Pemadam Kebakaran
17 Area Perluasan
18 Unit Pembangkit Listrik
19 Jalan
Gambar  4. Tata Letak Pabrik Biohidrogen
c. Analisa Ekonomi
Untuk kapasitas produksi sebesar 495,1694  ton/tahun,  total  investasi  yang dibutuhkan  untuk  membangun  sebuah  pabrik biohidrogen di Indonesia adalah Rp. 507.190.573.523,-  dengan  total  biaya  produksi sebesar  Rp.  354.636.600.139,-.  Parameter kelayakan  dengan  kapasitas  produksi  495,1694 ton/tahun adalah total penjualan produk sebesar Rp  174.261.989,701,-  dan  laba  bersih  sebesar 180.030.185.327,-. Profit Margin (PM) 41,9 %, Break  Even  Point (BEP)  45,24  %, Return  on Investment (ROI) 35,5 %, Pay Out Time (POT) 2,82 tahun, Return on Network (RON) 59,16 %, Internal Rate of Return (IRR) 53,52  .
Gambar  5. Grafik Break Even Point Pabrik Pembuatan Biohidrogen

## Kesimpulan
1. Prospek  biohidrogen  sangat  menjanjikan untuk  bahan  bakar  karena  melimpahnya bahan  baku  dan  menggunakan  teknologi ramah lingkungan.
2. Pabrik ini menghasilkan biohidrogen dengan  kemurnian  99%,  karbondioksida, sulfur  dan  biogas  yang  berfungsi  sebagai bahan bakar pada pabrik ini. Jadi, teknologi yang digunakan sangat terintegerasi.
3. Lokasi  pabrik  dipilih  di  Tebing  Tinggi, Provinsi  Sumatera  Utara,  disebabkan  dekat dengan  sumber  bahan  baku  yaitu  PKS Rambutan.
4. Untuk kapasitas produksi sebesar 495,1694 ton/tahun,  total  investasi  yang  dibutuhkan untuk membangun sebuah pabrik biohidrogen  di  Indonesia  adalah  Rp. 507.190.573.523,- dengan total biaya produksi sebesar Rp. 354.636.600.139,-. 5. Parameter  kelayakan  dengan  kapasitas produksi  495,1694  ton/tahun  adalah  total penjualan produk sebesar Rp 174.261.989,701,-  dan  laba  bersih  sebesar 180.030.185.327,-. Profit  Margin (PM) 41,9  %, Break  Even  Point (BEP)  45,24  %, Return  on  Investment (ROI)  35,5  %, Pay
Out  Time (POT)  2,82  tahun, Return  on Network (RON)  59,16  %, Internal  Rate  of Return (IRR) 53,52  .
Daftar Pustaka
[1] Antonopoulou G, Gavala H, Skiadas I,
Angelopoulos K, Lyberatos G,. Biofuels generation from sweet sorghum: Fermentative hydrogen production  and  anaerobic  digestion  of the  remaining  biomass .  Bioresource Technology, 99(1), 2008, p. 110-119.
[2] Chang J-S,Lee K-S, Lin P-J.
Biohydogen  production  with  fixed-bed bioreaktor ,  Int  J Hydrogen  Energy. 2002,  27 : p. 167-174.
[3] Nath,  Kaushik  dan  Debabrata  Das. Biohydrogen  production as  a  potential energy resource-Present of art . Journal of  Scientific  &  Industrial  Research. Vol. 63, 2004,  p.729-738.
[4] Mahyudin
dan Koesnandar. Biohydrogen  Production  :  Prospects and Limitations To Practical
Application . Akta Kimindo Vol.1 No.2 April 2006. p.73-78.
[5] Chisti  Y. Biodiesel  from  microalgae. Biotechnology  Advances  25,  2007, 294-306.
[6] Syafawati Ahmad Kamal, Jamaliah Md Jahim,  Nurina  Anuar,  Osman  Hassan, Wan  Ramli  Wan  Daud,  Mariatul
Fadzillah  Mansor  and  Shah  Samiur Rashid. Pre-Treatment  Effect  of  Palm Oil  Mill  Effluent  (POME)  during
Hydrogen  Production  by  a  Local Isolate Clostridium butyricum . Internasional  Journal  on  advanced
Science  Information  Technology.  Vol 2 No.4, 2012,  ISSN 2088-5534
[7] Kee  Lam  and  Keat  Teong  Lee. Renewable and sustainable bioenergies production  from  palm  oil  mill  effluent (POME)  :  Win-win  strategies  toward better environmental protection . Biotechnology  Advances  29,  2011,    p. 124-141.
[8] US-DOE. National  Hydrogen  Energy Roadmap .  National  Hydrogen  Energy. Roadmap  Workshop,  Washington  DC, 2002.
[9] Chong , Mei  Ling and  Sabaratnam,
Vikineswary and Shirai, Yoshihito dan Hassan, Mohd Ali. Biohydrogen
Production  by  Clostridium  butyricum from Palm Oil Mill Effluent . International  Journal  of  Hydrogen Energy 34: 2009,  p. 764-771.
[10] Reith  JH,  Wijffels  RH,  Barten  H, editors. Status  and  perspectives  of biological  methane  and  hydrogen production . Dutch Biological Hydrogen Foundation; 2003, p. 103–23. [11] Van Groenestijn JW, Hazewinkel JHO,
Nienoord  M,  Bussmann  PJT. Energy aspect of Biological Hydrogen Production  in  High  Rate  Bioreactors Operated in The Thermophilic Temperature Range. International
Journal  of  Hydrogen  Energy  27, 2002, p.1141-1147.
[12] Dong  GX,  Wu  BR,  Zhu  L,  Du  J. Microstructure  and  electrochemical properties of
low-temperature hydrogen  storage alloy  used  in  Ni/MH batteries .  Transactions  of  Nonferrous Metals Society of China, 2007.
[13] Kloeppel J, Rogerson S. The Hydrogen Economy . Electronics World & Wireless  World  97(1666):1991.p.668- 671.
[14] Li  C  and  Fang  HHP. Fermentative Hydrogen Production from Wastewater and  Solid  Wastes  by  Mixed  Cultures. Critical  Reviews  in  Enviromental Science  and  Technology  37:2007.p.  1- 39.
[15] Benemann J. Hydrogen Biotechnology:
Progress and Prospect . Nature Biotechnology 14:p.1996. 1101-1103.
[16] Kongjan, Prawit. Biohydrogen Process from  Sugar  rich  substrates  using  the dark fermentation process. Department of  Environmental  Engineering.  Phd Thesis, 2010.
[17] Dawei,Liu. Biohydrogen Production by Dark  Fermentation  from  Organic Wastes and Residues. Thesis Department of Enviromental Engineering.  Technical  University  of Denmark, 2008. [18] Sompong O-Thong, Poonsuk Prasertsan,  Nugul  Intrasungkha,  Sridu Dhamwichukorn and Nils-Kare Birkeland. Improvement of Biohydrogen production and treatment efficiency on palm oil mill effluent with nutrient supplementation at
thermophilic condition using anaerobic sequencing batch reactor. Enzyme and Microbial  Technology  41,  2007,  P. 583-590.
[19] Van  den  Bosch,  P.  L.  F,  Van Beusekom,  O.  C,  Buisman,  C.  J.  N.; Janssen,  A.  J.  H. Sulfide  oxidation  at haloalkaline  conditions  in  a  fed-batch
bioreactor . Biotechnology
and Bioengineering  97 ,  2007,  P.1053  - 1063. [20] Hallenbeck PC, Ghosh D. Advances in fermentative  biohydrogen  production: the  way  forward? .  Trends  Biotechnol, 2009.