e-issn: 2716-4608 p-issn: 2655-366X

## OPTIMIZATION OF Bacillus cereus GROWTH IN MEDIA WITH DIFFERENT CARBON SOURCES
Muhammad Hendra Putra 1 *, Feliatra 1 , Irwan Effendi 1
1 Faculty of Fisheries and Marine, University of Riau, Indonesia * muhammadhendraputra@gmail.com

## ABSTRACT
Bacillus cereus is a probiotic bacteria that requires media as a source of nutrients for its growth. This study aims to the media used were tofu liquid waste, sago liquid waste, and molasses.  The  method  used  is  an  experimental  method,  namely  testing  two  groups  of bacterial  isolates; B.  cereus SN7  and  the  consortium  (combination  of  five  isolates  from B.cereus with different strains). Each group of isolates was grown with three replications on each  waste  medium.  bacterial  growth  every  six  hours  for  twenty  four  hours  using  two methods;  Total  Plate  Count  (TPC)  and  bacterial  cell  biomass.  There  was  no  significant difference  in  growth  between  the  two  groups  of  bacterial  isolation.  The  optimal  growth  of each isolate was found in molasses waste. The growth between two bacterial isolates in the liquid waste media was B. cereus SN7 bacterial isolate.
Keywords: Bacillus cereus , carbon, molasses, optimal growth, incubation time

## I. PENDAHULUAN
Bakteri merupakan salah satu golongan organisme prokariotik yang tidak mempunyai  selubung  inti  [1].  Organisme ini paling banyak ditemukan jumlahnya dan tersebar  luas  dibandingkan  makhluk  hidup lainnya.  Hal  tersebut  dikarenakan  bakteri dapat  tumbuh  dan  berkembang  di  berbagai habitat  dengan  cara  memanfaatkan  zat-zat yang  ada  dilingkungannya  sebagai  sumber nutrisi.
Bakteri  memiliki  potensi  yang  tinggi sebagai  probiotik.  Probiotik  merupakan mikroba  hidup  yang  memiliki  pengaruh menguntungkan bagi inang melalui modifikasi  bentuk  keterikatan  (asosiasi) dengan  inang  atau  komunitas  mikroba lingkungan hidupnya sehingga dapat memiliki pengaruh memperbaiki kecernaan makanan, melindungi dari serangan
patogen dan memperbaiki kualitas
lingkungan [2]. Pemanfaatan bakteri probiotik  dapat  dijadikan  sebagai  protein sel  tunggal  (PST)  yang  telah  banyak
memberi  keuntungan  bagi  manusia.  Hal yang  menguntungkan  lainnya  dari  bakteri probiotik ini memiliki manfaat bagi bidang perikanan  karena  dapat  membunuh  bakteri patogen.
Salah  satu  bakteri  yang  potensial dikembangkan  sebagai  agen  PST  adalah B.cereus yang  tergolong  dalam  bakteri heterotrofik  [3]. B.  cereus sebagai  bakteri probiotik  telah  dibuktikan  dari  berbagai penelitian  yang  menyatakan  bahwa  bakteri ini  dapat  menghambat  beberapa  bakteri patogen  dan  juga  merupakan  bakteri heterotrofik  yang  dapat  mendegradasi bahan  organik  yang  bersifat  toksik  di lingkungan terutama perairan [4-5]. Kemampuan  bakteri  heterotrof  dalam menghambat pertumbuhan patogen menunjukkan  bahwa  bakteri  tersebut  dapat menghasilkan  metabolit  sekunder  atau senyawa bioaktif [6].
Bacillus cereus mempunyai kemampuan  mengontrol  bakteri  patogen dan  menekan  pertumbuhan  bakteri  lain
melalui  antibiotik  yang  dihasilkannya/ kompetisi  dalam  hal  perebutan  nutrisi  dan ruang.  Menurut  [7], B.  cereus merupakan bakteri probiotik yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri patogen seperti Vibrio sp., Pseudomonas sp.,  dan Aeromonas sp. Bakteri  ini  memiliki  potensi  sebagai tambahan  pakan    berupa  enzim    mananase [8].
Untuk  mengkultur  bakteri  diperlukan media  sebagai  wadah  pertumbuhannya. Bacillus mempunyai kemampuan mengontrol  bakteri  patogen  dan  menekan pertumbuhan bakteri lain melalui antibiotik yang  dihasilkannya/kompetisi  dalam  hal perebutan nutrisi dan ruang.
Media yang digunakan harus memenuhi persyaratan nutrisi yaitu karbon, nitrogen,  unsur  non  logam  (sulfur  dan fospor),  unsur  logam  (Ca,  Zn,  Na,  K,  Cu, Mn,  Mg,  dan  Fe),  vitamin,  air,  dan   energi [9].  Umumnya  untuk  pembuatan  media pertumbuhan  bakteri  menggunakan  media Nutrient  Agar (NA).  Akan  tetapi,  dengan harga  media  NA  yang  relatif  mahal, sehingga beberapa peneliti membuat media alternatif.  Salah  satu  media  yang  dapat diasumsikan  sebagai  media  pertumbuhan B. cereus yaitu limbah cair tahu, media cair sagu,  dan    molase.  Penelitian  ini  bertuan untuk  menguji  bakteri B.  cereus dapat tumbuh  pada  media  modifikasi  dan  waktu pertumbuhan  terbaik  dengan  menggunakan sumber karbon dari limbah cair tahu, sagu, dan molase.

## 2. METODE PENELITIAN Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  telah  dilaksanakan  dari bulan  Juni-Juli  2021  di  Laboratorium Mikrobiologi  Laut  Jurusan  Ilmu  Kelautan
Fakultas Perikanan
dan Kelautan
Universitas Riau.
Metode Penelitian Metode yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  metode  eksperimen yang  menggunakan  beberapa  isolat  dari galur  atau  strain  yang  berbeda.  Galur  atau
strain  adalah  koloni  mikrobia  (hasil biakannya) dengan sifat-sifat fisiologi yang sama  sebagai  hasil  proses  isolasi.  Strain yang  digunakan yaitu isolat  bakteri B.cereus strain  SN7  dan  konsorsium ( B.cereus strain  SP4, B.  cereus strain  S5, B.cereus strain  Xmb051, B.  cereus strain BF2 dan B. cereus strain SN7)  yang ada di
Laboratorium Mikrobiologi Laut. Rancangan percobaan yang
digunakan  pada  penelitian  ini  adalah rancangan  acak  lengkap  faktorial  yang memiliki dua faktor yaitu media dan isolat. Media memiliki lima taraf yang terdiri dari media  limbah  tahu,  limbah  sagu,  limbah molase, kontrol positif, dan kontrol negatif. Sedangkan  isolat  memiliki  dua  taraf  yaitu B. cereus  SN7  dan  konsorsium  yang diulang masing-masing sebanyak tiga kali..

## Prosedur Penelitian
Media  yang  digunakan  pada  kultur bakteri B.  cereus ini  adalah  media pertumbuhan  dengan  cara  memodifikasi limbah  cair  menjadi  media  pertumbuhan bagi B. cereus . Komposisi media modifikasi yang digunakan dalam penelitian ini memiliki yaitu: LCT = 5,8 ml limbah cair tahu + 15,8 gram  K 2 HPO 4 +  12,8  gram KH 2 PO 4 + 5 mg Vitamin B 12 + 17  ml  putih  telur  +  aquades sampai  larut  dengan  volume
1000 ml. LCS = 6,5  ml  limbah  sagu  +  15,8 gram  K 2 HPO 4 +  12,8  gram KH 2 PO 4 + 5 mg Vitamin B 12 + 17  ml  putih  telur  +  akuades sampai  larut  dengan  volume
1000 ml
LCM = 42,8  ml  molase  +  15,8  gram K 2 HPO 4 + 12,8 gram KH 2 PO 4 +  5  mg  Vitamin  B 12 +  17  ml putih  telur  +  aquades  sampai larut dengan volume 1000 ml.
Biakan  murni B.  cereus dibuat  sub kultur  pada  media  NA  miring  dan
diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  ±  24 jam. Untuk membuat 120 ml kultur bakteri, sebanyak  100  ml  media  modifikasi dimasukkan ke dalam botol kaca kemudian disterilkan  dengan  dipasteurisasi  di Water Bath Shaker pada suhu 63-66 0 C, selama 30 menit.
Isolat  bakteri B.cereus strain  SN7 disuspensikan  ke  dalam  20  mL  dan konsorsium 20 mL (masing-masing streinnya  4  mL)  larutan  fisiologis  0,9% NaCl  secara  aseptis  dan  dihomogenkan menggunakan vortex sampai  kekeruhan suspensi  bakteri  setarakan  dengan  larutan standar  0,5  McFarland.  Kedua  suspensi bakteri B.  cereus 20  mL  kemudian dimasukkan  ke  dalam  media  pertumbuhan limbah modifikasi. Media kultur yang telah berisi bakteri diinkubasi dalam Water Bath Shaker yang  diatur  dalam  suhu  37°C dengan kecepatan 90 rpm selama 24 jam.
Pengukuran pertumbuhan kultur bakteri  dilakukan  setiap  6  jam  selama  24 jam  dengan  menggunakan  dua  cara  yaitu metode  TPC  dan  pengukuran  biomassa  sel bakteri.  Teknik  yang  digunakan  pada metode  TPC  dalam  penelitian  ini  yaitu teknik  cawan  sebar  ( spread  plate ).  Sampel bakteri pada media pertumbuhan diencerkan terlebih dahulu sampai pengenceran  10- 5 ,  kemudian  0,1  mL diambil  menggunakan  mikropipet  dan dimasukkan  ke  dalam  cawan  petri  yang berisi  media  PCA.  Sampel  bakteri  pada media  kemudian  disebar  dan  diratakan menggunakan  batang  drigalski  secara aseptis  didekat  bunsen,  setelah  itu  sampel bakteri  diinkubasi  selama  24  jam  dalam inkubator  kemudian  koloni  bakteri  yang tumbuh pada media PCA dihitung menggunakan colony counter . Hasil jumlah koloni  yang  didapat  kemudian  dimasukkan kedalam rumus perhitungan bakteri sebagai berikut [11].
Pengukuran biomassa bakteri dilakukan  dengan  cara  menetukan  berat
kering  pada  sel  bakteri. Microtube yang menjadi  wadah  sel  bakteri  ditimbang terlebih  dahulu  dengan  timbangan  analitik, dicatat, dan dimasukkan 1 mL bakteri yang diambil pada media kultur. Microtube yang berisi  isolat  bakteri  disentrifugasi  dengan kecepatan  3000  rpm  selama  10  menit Supernatan  yang  telah  terbentuk  dibuang menggunakan  pipet  tetes  sampai  hanya endapan sel bakteri yang tersisa. Microtube yang  berisi  sel  bakteri  kemudian  di  oven dengan  suhu  100 0 C  selama  15  menit. Setelah  di  oven,  mikrotube  didinginkan kemudian ditimbang berat keringnya. Berat kering  yang  telah  didapatkan  dikurang dengan berat microtube sebelumnya sesampai  didapatkan  berat  kering  yang sebenarnya dari bakteri.

## Pengukuran Pertumnuhan Bakteri
Ada tiga metode pengukuran pertumbuhan bakteri yang digunakan, yaitu [11]:
Teknik  yang  digunakan  pada  metode TPC  dalam  penelitian  ini  yaitu  teknik cawan  sebar  ( spread  plate ).  Langkah pertama dalam metode ini yaitu menyiapkan  media  PCA  ( Plate  Count Agar )  yang  telah  dibuat,  disterilkan  dan ditempatkan  pada  cawan  petri  secara aseptis.  Sampel  bakteri  pada  media pertumbuhan  diencerkan  terlebih  dahulu sampai pengenceran 10 -5 , kemudian 0,1 ml diambil  menggunakan  mikropipet  dan dimasukkan  kedalam  cawan  petri  yang berisi  media  PCA.  Sampel  bakteri  pada media  kemudian  disebar  dan  diratakan menggunakan  batang  drigalski  secara aseptis  di  dekat  bunsen,  setelah  itu  sampel bakteri  diinkubasi  selama  24  jam  dalam inkubator  kemudian  koloni  bakteri  yang tumbuh pada Data  hasil  pengukuran  pertumbuhan sel  bakteri  dapat  disajikan  dalam  bentuk tabel  dan  grafik  serta  dibahas  secara deskriptif.  Untuk  uji  statistik  terhadap semua  perlakuan  yang  diberi  dilakukan dengan  uji  ANOVA,  jika  pada  hasil  pada
uji  ANOVA  berbeda  nyata  pada  tingkat kepercayaan 95%, maka akan dilakukan uji lanjut  menggunakan  uji  beda  nyata (Student  Newman  Keuls).  Kemudian  data pertumbuhan  bakteri B.  cereus pada  media berbeda  yang  telah  didapat  dibandingkan berdasarkan literatur yang berkaitan dengan pertumbuhan bakteri B. cereus.

## 3.  HASIL DAN PEMBAHASAN
Pertumbuhan Jumlah Koloni Bakteri

## B.cereus
Hasil  pengukuran  pertumbuhan  rata- rata  jumlah  koloni  bakteri B.  cereus strain SN7  dan  konsorsium  pada  media  limbah cair  tahu,  limbah  cair  sagu  dengan  metode TPC  ( Total  plate  count )  pada  penelitian yang  telah  dilakukan  dapat  dilihat  pada Tabel 1 dan Tabel 2.
Tabel  1 .  Metode  TPC  Bakteri B.  cereus strain SN7
Media Limbah
Jumlah Koloni Bakteri (x10 8 CFU/mL) pada Waktu Inkubasi (Jam ke-) 0 6 12 18 24 T 1,397  1,657   2,077 2,883   3,197 S 1,770   1,910 2,553 3,157   2,983 M 1,570 2,007   2,517   3,373   3,653 K (+) 1,697   2,093   2,530   3,117  2,977
K (-) 1,610   1,827   1,847   1,700   1,907
Tabel  2. Metode  TPC  Bakteri B.  cereus strain SN7
Media
Limbah Jumlah Koloni Bakteri (x10 8 CFU/mL) pada Waktu Inkubasi (Jam ke-) 0 6 12 18 24 T 1,400   1,683   1,913 2,520   2,586 S 1,707   1,767 2,047 2,523   2,343 M 1,277 1,537  2,390 3,000   2,983 K (+) 1,687   1,803   1,990   2,463   2,350 K (-) 1,520   1,693   1,560   2,000   1,850
Keterangan:  T  :  Media  Limbah  Cair  Tahu,  S  :
Media  Limbah  Cair  Sagu,  M  : Media  Limbah  Molases,  K  (+)  : Kontrol  Positif,  K(-)  :  Kontrol
Negatif
Berdasarkan Tabel 1, hasil
pengukuran  TPC  isolat B.  cereus strain SN7  dapat  dilihat  bahwa  pertumbuhan paling  baik  terjadi  pada  media  modifikasi limbah  molase  dengan  nilai  3,653  x10 8 CFU/mL pada jam ke-24. Hasil pengukuran TPC  isolat B.  cereus konsorsium  dapat dilihat  bahwa  pertumbuhan  paling  baik terjadi  pada  media  modifikasi  limbah molase  dengan  nilai  3,000  x10 8 CFU/mL pada jam ke-18.
Hasil ini menunjukkan bahwa molase memiliki nutrisi terutama karbon yang baik sehingga dapat memberi pertumbuhan yang optimal  pada  bakteri.  Hal  ini  sesuai  dari pernyataan  [12],  “bahwa  molase  memiliki kandungan  karbohidrat  berupa  gula  yang dapat  dijadikan  sumber  energi  serta  gula- gula yang terkandung dalam molase mudah dicerna  dan  diserap  oleh  sel  bakteri”  yang artinya molase memiliki kandungan karbon atau  karbohidrat  berupa  gula  yang  tepat bagi  pencernaan  dan  pertumbuhan  sel bakteri.
Pada  media  limbah  sagu  dan  limbah tahu  pertumbuhan B.  cereus lebih  sedikit dibandingkan dengan limbah molase karena B.  cereus merupakah  salah  satu  bakteri yang  memanfaatkan  karbon  yang  tinggi yang  terkandung  dalam  sukrosa.  Hal  ini didukung  oleh  pernyataan  [13],  “bahwa molase  mengandung  gula  sebanyak  50%, baik  dalam  bentuk  sukrosa  maupun  dalam bentuk  gula  pereduksi”  yang  artinya dengan  banyaknya  kandungan  gula  pada molase menjadikannya kaya akan kandungan unsur karbon.
Pengukuran  jumlah  koloni  pada penelitian ini menghasilkan satu pertumbuhan  optimal  pada  masing-masing isolat.  Pertumbuhan  optimal  tersebut  dapat dibandingkan  antar  media  modifikasi dengan kontrol. Perbandingan pertumbuhan ini  disajikan  dalam  bentuk  grafik  pada Gambar 1 dan Gambar 2.
Gambar  1. Pertumbuhan  Optimal  Sel
Bakteri B. cereus strain SN7 Gambar 2. Pertumbuhan Optimal Sel Bakteri B.cereus Konsorsium
Berdasarkan  Gambar  1  dan  Gambar
2,  pertumbuhan  optimal  isolat B.  cereus strain  SN7  terdapat  pada  media  modifikasi limbah  molase  yaitu  dengan  nilai  3,653 x10 8 CFU/mL pada jam ke-24. Dilihat dari grafik  menunjukkan  bahwa  pertumbuhan B.cereus strain SN7 masih naik, yang akan memungkinkan terjadi pertumbuhan di jam berikutnya.  Pertumbuhan  optimal  pada isolat B.  cereus konsorsium  juga  terdapat pada media modifikasi limbah molase yaitu dengan nilai 3,000 x10 8 CFU/mL.
Pada  pengukuran  ini,  isolat  yang memiliki  lebih  banyak  fase  pertumbuhan terdapat  pada  isolat B.  cereus konsorsium di  media  modifikasi  limbah  molase. Pertumbuhan  dengan  fase  eksponensial  ini terjadi  dari  jam  ke-0  sampai  dengan  jam ke-18.  Sedangkan  pada  jam  ke-18  sampai dengan jam ke-24 bakteri sudah mengalami fase  stasioner.  Sedangkan  pada  isolat B.cereus strain  SN7  hanya  mengalami  fase eksponensial  mulai  dari  jam  ke-0  s/d  jam ke-24.

## Pertumbuhan  Biomassa  Sel  Bakteri B.cereus
Hasil  pengukuran  biomassa  bakteri B.cereus strain  SN7  dan  konsorsium  yang telah  didapat  kemudian  dirata-ratakan  dan ditentukan  standar  deviasinya  berdasarkan 3 kali ulangan pada setiap perlakuan. Hasil yang  telah  didapatkan  dalam  pengukuran ini dapat dilihat pada Tabel 3 dan Tabel 4.
Tabel  3. Biomasaa  TPC  Bakteri B.  cereus strain SN7
Media Limbah Waktu Inkubasi (Jam ke-) (g/mL) 0 6 12 18 24 T 0,973  0,981   0,981 1,008   1,011 S 1,003  1,007 1,025 1,026   1,022 M 1,011 1,027   1,029 1,030   1,035 K (+) 1,018   1,032   1,044   1,050  1,040 K (-) 0,969   0,969   0,981   0,976   0,985
Tabel  4. Biomassa  bakteri B.  cereus
konsorsium Media Limbah Waktu Inkubasi (Jam ke-) (g/mL) 0 6 12 18 24 T 0,948  0,961   0,962 0,977   0,972 S 1,013  1,020 1,018 1,017   1,016 M 1,005 1,019   1,027 1,033   1,032 K (+) 0,974   0,992   1,006   1,009  1,005 K (-) 0,981   0,976   0,972   0,982   0,969
Keterangan:  T  :  Media  Limbah  Cair  Tahu,  S  : Media  Limbah  Cair  Sagu,  M  :  Media Limbah Molases, K (+) : Kontrol Positif, K(-) : Kontrol Negatif.
Berdasarkan hasil perhitungan (Tabel 3  dan  4),  dapat  dilihat  bahwa  biomassa tertinggi  terdapat  pada  media  modifikasi molase,  dimana  kedua  isolat  bakteri B.cereus strain  SN7  dengan  nilai  1,035 g/ml  pada  inkubasi  jam  ke-24  dan  isolat bakteri B.  cereus konsorsium  memiliki jumlah  nilai  biomassa  1,033  g/mL  pada inkubasi jam ke-18.
7.95 8.10 8.25 8.40 8.55 8.70 0 6 12 18 24 Lo g s el /m L Jam ke- Kontrol Positif Kontrol Negatif Molase 7.80 7.95 8.10 8.25 8.40 8.55 0 6 12 18 24 Lo g s el /m L Jam ke- Kontrol Positif Kontrol Negatif Molase
Pada  pengukuran  ini,  isolat  yang memiliki  lebih  banyak  fase  pertumbuhan terdapat  pada  isolat B.  cereus konsorsium di  media  modifikasi  limbah  molase. Pertumbuhan  dengan  fase  eksponensial  ini terjadi  dari  jam  ke-0  sampai  dengan  jam ke-18.  Sedangkan  pada  jam  ke-18  sampai dengan  1  jam  ke-24  bakteri  sudah mengalami  fase  stasioner.  Pada  isolat B.cereus strain  SN7  hanya  mengalami  fase eksponensial  mulai  dari  jam  ke-0  s/d  jam ke-24.
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan  oleh  [14],  media  limbah  cair dengan  nutrien  yang  cukup  dalam  kadar tertentu dapat menghasilkan kultur mikroalga  dan  bakteri  heterotrofik  yang mampu mengkonversi bahan organik menjadi sel-sel baru dari limbah itu sendiri sehingga meningkatkan pertumbuhan biomassa  dari  kultur  mikroba.  Sedangkan menurut [15], molase adalah hasil samping industri  gula  yang  mengandung  senyawa nitrogen, trace element dan kandungan gula yang  cukup  tinggi  terutama  kandungan sukrosa  sekitar  34%  dan  kandungan  total karbon  sekitar  37%.  Sedangkan  menurut [16]  kandungan  karbon    sebesar  21,4%, nitrogen  sebesar  2,14%,  dan  rasio  C:N pupuk  molase    adalah  10%.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  limbah  molase  dapat
menjadi  media  pertumbuhan    karena  dapat memenuhi  sumber  bahan  organik  terutama karbon  sebagai  sumber  nutrisi  bagi  isolat B.cereus yang dibuktikan dari pertumbuhan isolat B.  cereus strain  SN7  dan B.  cereus konsorsium  dapat  tumbuh  lebih  baik  dari media limbah tahu dan limbah sagu selama masa inkubasi selama 24 jam.

## 4. KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan
Media  pertumbuhan  yang  paling optimal untuk bakteri B. cereus strain SN7 dan  konsorsium  adalah  media  modifikasi limbah  molase  yang  diinkubasi  selama  24 jam, dibandingkan dengan media modifikasi  limbah  sagu  dan  limbah  tahu. Untuk  perbandingan  isolat B.  cereus strain SN7  masih  memiliki  potensi  pertumbuhan yang  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan isolat B.  cereus konsorsium  yang  telah diinkubasi selama 24 jam.

## Saran
Saran  untuk  penelitian  selanjutnya agar  memperpanjang  masa  inkubasi  isolat bakteri B.  cereus strain  SN7  untuk mendapatkan  pertumbuhan  yang  optimal pada  penggunaan  media  modifikasi limbah molase dan perlu dilakukan uji proksimat

## DAFTAR PUSTAKA
1. Holderman,  M.V.,  E.  de  Queljoe,  dan  S.B.  Rondonuwu.  (2017).  Identifikasi  bakteri pada pegangan eskalator di salah satu pusat perbelanjaan di kota Manado. Jurnal Ilmiah Sains , 17(1) : 13-18
2. Wardika,  A.S.,  Suminto,  dan  A.  Sudaryono.  (2014).  Pengaruh  Bakteri  Probiotik  pada Pakan dengan Dosis Berbeda terhadap Efisiensi Pemanfaatan  Pakan, Pertumbuhan dan Kelulushidupan  Lele  Dumbo  ( Clarias  gariepinus ). Journal  of  Aquaculture Management and Technology, 3(4): 9-17
3. Feliatra, F., N. Syirwani, A. Tanjung, D.S. Adithiya, M. Susanna, dan I. Lukistyowati. (2018).  The  Effectiveness  of  Heterotrophic  Bacteria  Isolated  from  Dumai  Marine Waters  of  Riau,  Used  as  Antibacterial  against  Pathogens  in  Fish  Culture. IOP Conference Series: Earth and Environmental Science, 116 (1) : 012034.
4. Nainggolan,  A.H.  (2019).  Uji  Metabolit  Bakteri  Heterotrofik  dari  Muara  Sungai  Siak terhadap  Bakteri  Patogen. Skripsi .  Pekanbaru.  Fakultas  Perikanan  dan  Kelatuan Universitas Riau. 61 hlm
5. Siregar,  I.A.  (2019).  Efektifitas  Penggunaan  Bakteri  Heterotrofik  terhadap Pertumbuhan  Ikan  Nila  Merah  ( Oreochromis  niloticus ). Skripsi .  Pekanbaru.  Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Riau. 80 hlm
6. Nursyirwani,  N.,  F.  Feliatra,  D.  Yoswaty,  dan  R.L.  Dinata.  (2018).  Activity  of heterotrophic  bacteria  from  marine  area  of  Siak  District  against  pathogenic  bacteria. In IOP Conference Series: Earth and Environmental Science , 216(1) : 012047.
7. Feliatra, F., I. Effendi, dan S.L. Yanti. (2018). Characteristic genetics of heterotrophic bacteria  in  Siak  River  Estuary,  Riau  Province,  Indonesia  as  Prospective  Anti- pathogenic Bacteria to Fish and Shrimps. J Pure Appl Microbiol., 12(4) : 1801-1808
8. El-Sharouny,  E.E.,  N.M.K.  El-Toukhyb,  N.A.  El-Sersyc  dan  A.A.  El-Aal  ElGayara. (2015).  Optimization  and  purification  of  mannanase  produced  by  an  alkaliphilic- thermotolerant Bacillus cereus N1 isolated from Bani Salama Lake in Wadi El-Natron. Biotechnol . Equip., 29 (3) : 15-323
9. Anisah  dan  R.  Triastuti.  (2015).  Media  Alternatif  untuk  Pertumbuhan  Bakteri Menggunakan  Sumber  Karbohidrat  yang  Berbeda. Seminar  Nasional  XII  Pendidikan Biologi FKIP UNS . 855 – 860.
10. Wulandari, Z., E. Taufik, M. Syarif.  (2017). Kajian Kualitas Produk Susu Pasteurisasi Hasil  Penerapan  Rantai  Pendingin. Jurnal  Ilmu  Produksi  dan  Teknologi  Hasil Peternakan , 5(3): 94- 100.
11. Effendi,  I.  (2020). Metode  Identifikasi  dan  Klasifikasi  Bakteri. Pekanbaru:  Oceanum Press. 142 hlm
12. Nengsih, I. A., F. Feliatra, dan I. Effendi. (2020). Growth of Bacteria Bacillus cereus in Liquid  Mediums with Different Carbohydrate Sources. Journal of Coastal and Ocean Sciences , 1(1) : 68-73
13. Endah,  W.,  I.  Tami,  dan  S.  Ernawati.  (2012).  Limbah  Molase:  Pemanfaatan  sebagai Sumber Karbohidrat untuk Perkembangbiakan Mikroorganisme. Valensi 2(5): 565-572 14. Septiani,  W.D.,  A.  Slamet,  dan  J.  Hermana.  (2014).  Pengaruh  Konsentrasi  Substrat terhadap Laju Pertumbuhan Alga dan  Bakteri Heterotropik. Jurnal Teknik POMITS, 3 (2) : D98 – D103.
15. Suastuti M. (1998). Pemanfaatan Hasil Samping Industri Pertanian Molase dan Limbah Cair  Tahu  sebagai  Sumber  Karbon  dan  Nitrogen  untuk  Produki  Biosurfaktan  oleh Bacillus sp  Galur  Komersil  dan  Lokal. Tesis .  Program  Pascasarjana  Institut  Pertanian Bogor. Bogor
16. Alviolita,  C.  (2017).  Pengaruh  Pemberian  Tetes  Gula  (Molase)  Sebagai  Pupuk  Alami Terhadap Kelimpahan Nannochloropsis Sp. Skripsi , Universitas Brawijaya.