## Jurnal Ilmu Farmasi dan Farmasi Klinik (JIFFK)
Vol.19, No.1, Juni 2022, Hal. 17-23 ISSN: 1693 7899, e-ISSN: 2716 3814

## ISOLASI DAN KARAKTERISASI EKSTRAK KULIT JENGKOL
( Pithecellobium jiringa ) SEBAGAI INHIBITOR ENZIM PENYAKIT
MALARIA Plasmodium falciparum MALATE QUINONE

## OXIDOREDUCTASE
Rhamal Amir 1) , Chaidir 1) , Aden Dhana Rizkita 2*) , Anis Herliyanti 1)
1 Fakultas Farmasi, Universitas Pancasila
2 Program Studi Sarjana Farmasi, Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Bogor Husada *E-mail: adendhanarizkita@gmail.com
Received:15-10-2021 Accepted:20-06-2022 Published:30-06-2022

## INTISARI
Dalam  rangka  penemuan  dan  identifikasi  senyawa  aktif  antimalaria,  dilakukan  isolasi  terhadap ekstrak  kulit  jengkol  dan  uji  aktivitas  antimalaria.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui senyawa aktif antimalaria dari ekstrak kulit jengkol yang berfungsi sebagai inhibitor enzim Malate Quinone  Oxidoreductase (MQO).  Pada  penelitian  ini  dilakukan  proses  ekstraksi  menggunakan pelarut  metanol  dengan  metode  maserasi.  Hasil  maserasi  kemudian  dipekatkan  menggunakan rotary  evaporator dengan  tekanan  rendah  pada  suhu  40-45°C  sehingga  diperoleh Crude  ekstract (ekstrak  kental)  sebanyak  203  gram.  Kemudian  dilakukan  fraksinasi  cair-cair  dengan  empat jenis pelarut yaitu n-heksan, etil asetat, metanol, dan air sesuai dengan tingkat kepolarannya. Fraksi yang diperoleh  masing  masing  sebanyak  400  ml  yang  kemudian  dilakukan  uji  inhibisi  enzim menggunakan  metode  penghambatan  pembentukan  enzim  MQO.  Fraksi  yang  memiliki  aktivitas penghambatan  tertinggi  adalah  fraksi  etil  asetat  sebesar  80%.  Dilakukan  konfirmasi  kembali dengan pemisahan yang sama menggunakan kromatografi kolom sehingga menghasilkan fraksi etil asetat yang terkonfirmasi untuk diidentifikasi menggunakan HPLC menghasilkan puncak senyawa yang  tidak  diketahui  di  waktu  retensi  22  dan  23  menit.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  di dalam ekstrak kulit jengkol terdapat senyawa aktif yang bersifat sebagai inhibitor enzim MQO.
Kata kunci : antimalaria, HPLC, jengkol, matale quinone oxidoreductase

## ABSTRACT
In order to discover and identify antimalarial active compounds, jengkol peel extract was isolated and tested for antimalarial activity. This study aims to determine the antimalarial active compound from  jengkol  peel  extract  which  functions  as  an  inhibitor  of  the  Malate  Quinone  Oxidoreductase (MQO) enzyme. In this study, the extraction process was carried out using methanol as a solvent with  the  maceration  method.  The  maceration  results  were  then  concentrated  using  a  rotary evaporator with low pressure at a temperature of 40-45°C to obtain a Crude extract of 203 grams. Then liquid-liquid fractionation was carried out with four types of solvents, namely n-hexane, ethyl acetate, methanol, and water according to the level of polarity. Each fraction obtained was 400 ml which was then tested for enzyme inhibition using the MQO  enzyme formation inhibition method. The  fraction  that  had  the  highest  inhibitory  activity  was  the  ethyl  acetate  fraction  of  80%. Confirmation  was  done  again  with  the  same  separation  using  column  chromatography  so  as  to produce  the  ethyl  acetate  fraction  which  was  confirmed  to  be  identified  using  HPLC  producing peaks at retention times of 22 and 23 minutes. The results showed that in jengkol peel extract there were active compounds that acted as inhibitors of the MQO enzyme but further tests were needed to confirm these peak compounds.
Keywords : antimalarial, HPLC,  jengkol, matale quinone oxidoreductase
*Rhamal Amir Fakultas Farmasi, Universitas Pancasila Jl. Raya Lenteng Agung No. 56-80 RT 01 RW 03 Srengseng Sawah, Jakarta Selatan 12640 rhamal.31@gmail.com

## PENDAHULUAN
Malaria  masih  merupakan  salah  satu  masalah  kesehatan  masyarakat  yang  dapat menyebabkan  kematian  terutama  pada  kelompok  resiko  tinggi,  yaitu  bayi,  anak  balita  dan  ibu hamil (Kementerian Kesehatan RI, 2011). Sejak tahun 1638 pengobatan malaria dilakukan secara tradisional oleh penduduk asli di Amerika Selatan dengan getah dari batang pohon cinchona yang lebih  dikenal  dengan  nama  kina.  Pada  tahun  1820  untuk  pertama  kali  berhasil  diisolasi  senyawa aktif antimalaria dari tanaman kina tersebut dengan nama quinine. Senyawa ini telah menginspirasi para  ahli  untuk  mensintesis  analog  antimalaria  baru  yang  efek  sampingnya  sangat  kecil  seperti klorokuin (Syamsurizal, 2007).
Di  Indonesia  tanaman  obat  yang  dapat  dimanfaatkan  dalam  pengobatan  tradisional antimalaria  banyak  tersebar  di  wilayah  Indonesia.  Tanaman  obat  yang  memiliki  efek  antimalaria mudah diperoleh oleh masyarakat dan beberapa tanaman telah teruji secara ilmiah melalui beberapa penelitian  dan  umumnya  dimanfaatkan  oleh  masyarakat  lokal  sebagai  pengobatan  tradisional antimalaria (Haryanto dkk., 2018). Seperti penelitian yang telah dilakukan oleh  Rehena diketahui bahwa  dari  hasil  pengujian in  vitro ekstrak  etanol  daun  pepaya  aktif  sebagai  antimalaria.  Dalam daun  pepaya  terkandung  senyawa  alkaloid,  papain,  saponin,  flavonoid,  polifenol,  dan  saponin (Rehena, 2010).
Salah  satu  tanaman  yang  banyak  dikenal  oleh  masyarakat  adalah  kulit  jengkol.  Selama  ini bagian  tanaman  tersebut  tergolong  limbah  organik  yang  berserakan  di  pasar  tradisional  dan  tidak memberikan nilai ekonomis. Penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Wartono tentang tanaman jengkol, peneliti mencoba menganalisis aktivitas antioksidan dalam kulit buah jengkol dan terbukti bahwa  kulit  tanaman  tersebut  memiliki  kandungan  fitokimia  yaitu  saponin,  flavonoid,  tanin, triterpenoid,  alkaloid  dan  memiliki  aktivitas  antioksidan  tergolong  kategori  kuat  (Wartono  dkk., 2021).  Hal  ini  mendasari  penelitian  ini  untuk  membuktikan  bahwa  kulit  jengkol  memiliki  sifat antimalaria karena kandungannya yang hampir sama dengan pepaya pada penelitian Rehana.
Penelitian lain yang belum dipublikasikan, uji dengan Lactate Dehydrogenase (LDH) assay dan  Malate  Quinone  Oxydoreductase  (MQO) assay pada  ekstrak  diklorometana  kulit  batang A. sericicarpus terhadap Plasmodium  falciparum diperoleh  hasil  bahwa  ekstrak  diklorometana  kulit batang A.  sericicarpus aktif  sebagai  antimalaria  dengan  nilai  IC50  2,11  μg/mL  serta  mampu menghambat aktivitas enzim MQO dengan nilai IC50 15,49 μg/mL. Malat kuinon oksidoreduktase Plasmodium  falciparum (PfMQO)  merupakan  enzim  yang  terletak  di  bagian  dalam  mitokondria. Mitokondria  merupakan  organel  yang  terlibat  dalam  beberapa  jalur  metabolisme  seluler  yang penting  untuk  kelangsungan  hidup  parasit.  PfMQO  adalah  target  pengobatan  antimalaria  yang bekerja  pada  organel  subseluler Plasmodium dengan  target  inhibisi  pada  siklus  eritrositer  (Isma, 2017).  PfMQO  merupakan  enzim  spesifik  sebagai  target  obat  di  mitokondria Plasmodium karena tidak dimiliki manusia, selain itu PfMQO dilaporkan terlibat dalam jalur transpor elektron, siklus asam trikarboksilat dan siklus fumarat (Wang dkk., 2019). Enzim MQO berfungsi mengubah malat menjadi  oksaloasetat.  Hasil  dari  oksidasi  malat  menjadi  oksaloasetat  dalam  siklus  krebs  adalah NADH dan H + . NADH dibutuhkan sel untuk menghasilkan ATP pada transpor elektron, sehingga jika  obat  antimalaria  dapat  menghambat  enzim  MQO  maka  hal  ini  akan  mengakibatkan  produksi energi untuk pertumbuhan parasit terganggu (Isma, 2017) (Lunev dkk., 2016).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  aktivitas  inhibisi  fraksi  aktif  ekstrak  kulit  jengkol terhadap  enzim  PfMQO.    Berdasarkan  uraian  di  atas  penelitian  tentang  bagian  tanaman  kulit jengkol yang ditujukan sebagai antimalaria perlu dilakukan dengan melakukan penelitian mengenai isolasi  dan  identifikasi  senyawa  bioaktif  dari  beberapa  ekstrak  kulit  jengkol  terhadap penghambatan pembentukan enzim MQO.

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah kulit daging buah jengkol (Pithecellobium jiringa) yang  diperoleh  dari  pusat  pengembangan  tanaman  obat  tradisional  Karya  Sari  Jakarta Timur.  Berbagai  bahan lain  yang  digunakan  adalah  aquadest, aluminium  foil (Klin  pak),  metanol analitycal  grade (Merck),  n-heksan analitycal  grade (Merck),  etil  asetat  (Merck),  KCN  (Merck), kloroform (Merck), silika gel (Merck), larutan penyemprot KLT (Merck), plat KLT (Merck), DCIP (Pudak), enzim PfMQO (abbexa), larutan buffer MQO (Merck), dimetil sulfoksida (DMSO) 100% (Merck) dan L-malate (Merck).
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  alat-alat  gelas,  timbangan  analitik (Shimadzu), Rotary evaporator (BUCHI Switzerland R-300), HPLC (BUCHI Switzerland R-300), Spectra Max ( form Japan ), 96 plate.

## Pembuatan Ekstrak
Sebanyak  5  kg  jengkol  disortasi  dengan  cara  memisahkan  buah  dan  kulit  jengkol.  Kulit jengkol dihaluskan lalu dikeringkan dan didapat serbuk sebesar 203 gram. Serbuk yang digunakan dalam  proses  ekstraksi  sebesar  100  gram.  Serbuk  dimaserasi  dengan  pelarut  metanol  teknis sebanyak 2000 ml. Hasilnya kemudian diuapkan selama 7 jam menggunakan evaporator temperatur rendah dan suhu 40-45°C sehingga diperoleh ekstrak kental metanol.

## Optimasi Pelarut
Optimasi  pelarut  dilakukan  untuk  mengetahui  pelarut  yang  cocok  dalam  memisahkan senyawa  yang  nantinya  akan  menjadi  acuan  untuk  tahapan  purifikasi.  KLT  digunakan  untuk melihat jumlah senyawa serta tingkat kepolarannya (Mursiti dkk., 2017).

## Fraksinasi
Fraksinasi dilakukan dengan menggunakan empat pelarut yang mewakili dari setiap tingkat kepolaran  mulai  dari  n-heksan,  etil  asetat,  metanol  dan  air.  Fraksinasi  dilakukan  menggunakan corong pisah. Ekstrak kental metanol dilarutkan dengan 400 ml metanol, kemudian dimasukkan ke dalam  corong  pisah  dan  ditambahkan  n-heksan  sebanyak  400  ml  dan  dikocok,  selanjutnya didiamkan  hingga  terdapat  dua  bagian  larutan  yang  terpisah  kemudian  diambil  dan  diletakkan dalam  wadah  yang  terpisah,  langkah  ini  dilakukan  sebanyak  tiga  kali  pengulangan.  Selanjutnya fraksi  metanol  dipekatkan  kembali  dan  dilarutkan  kembali  dengan  air  sebanyak  400  ml  dengan bantuan  sonikator,  kemudian  dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah  dan  ditambahkan  etil  asetat sebanyak 400 ml dan dikocok, didiamkan hingga terpisah dan setiap lapisan ditampung di wadah yang  berbeda.  Langkah  ini  diulangi  sebanyak  tiga  kali,  sehingga  didapat  4  fraksi  (n-heksan,  etil asetat, metanol, dan air) yang akan dianalisis pada uji aktivitas terhadap enzim PfMQO.

## Uji Aktivitas Antimalaria
Sampel hasil fraksinasi dimasukkan ke dalam 96 well plate , lalu ditambahkan pelarut dimetil sulfoksida  (DMSO)  100%  untuk  mendapatkan  larutan  induk  sebanyak  3  mg/ml,  larutan  induk  di vortex.  Larutan  induk  dimasukkan  0,4  µl  dan  2  µl  ke  dalam  96 well  plate (Rizal  dkk.,  2017) . Selanjutnya sampel ditambahkan larutan assay mix yang terdiri dari 50 mM HEPES pH 7.5, 1 M KCN, 17 mM DCIP, 60 mM decylubiquinone, 4,1 µl PfMQO enzim. Proses pengukuran dilakukan dengan bantuan alat uji SPECTRA MAX. HEPES berfungsi sebagai buffer pH sehingga pH tidak akan bergeser, KCN berfungsi sebagai penghambat reaksi yang terjadi di kompleks IV mitokondria Plasmodium falciparum , DCIP digunakan sebagai indikator berwarna biru, warna biru pada DCIP akan  hilang  apabila  ada  elektron  yang  masuk. Assay  mix selanjutnya  ditambahkan  campuran  uji sebanyak 194.6 µl (untuk volume 0,4 µl) dan 193 µl (untuk volume 2 µl) lalu dicampurkan dengan baik.  Campuran  dimasukKan  ke  dalam  instrumen SpectraMax® Multi-Mode  Microplate  Reader dengan suhu 37°C pada panjang gelombang 600 nm selama 5 menit. Kemudian  ditambahkan 5 µl Malate  dicampur  dengan  baik  dan  dimasukan  ke  dalam  instrumen  kemudian  aktivitas  dicatat selama 10 menit. Jika tidak ada elektron yang masuk maka DCIP tidak tereduksi, sehingga larutan akan  tetap  berwarna  biru.  Apabila  terdapat  aktivitas  inhibisi  enzim  PfMQO  maka  tidak  terjadi reduksi DCIP sehingga DCIP akan tetap berwarna biru.

## Purifikasi
Pemisahan  senyawa  yang  terkandung  di  dalam  fraksi-fraksi  ekstrak  kulit  jengkol menggunakan metode kromatografi silika gel. Silika dimasukkan ke dalam kolom sambil diketuk- ketuk agar silika dapat memadat di dalam kolom. Diameter kolom yang digunakan adalah 1,5 cm dengan  tinggi  silika  gel  15  cm  dengan  volume  eluen  25  ml.  Konsentrasi  eluen  atau  fase  gerak diatur  serapat  mungkin  dalam  perbandingannya  pada  awal  pengaliran  yakni  selisih  satu  antara kloroform dan metanol dengan pengulangan sebanyak tiga kali dan ditampung dalam wadah yang berbeda.  Seluruh  sampel  dari  ekstrak  kental  yang  didapatkan  pada  fraksi  etil  asetat  digunakan dalam proses ini dengan jumlah silika gel (fase diam) yang digunakan sebanyak 25 ml . Selanjutnya dari setiap fraksi kolom ini dilakukan uji aktivitas lagi dengan metode yang sama sesuai standar uji Bioassay Pf MQO.
Fraksi yang mempunyai daya inhibisi di atas 50% selanjutnya diproses dengan menggunakan KLT plat KLT GF254. Setelah semua fraksi dilakukan analisis dengan bantuan KLT untuk melihat tingkat  kepolaran  dan  jumlah  senyawa  yang  sama  dari  setiap  fraksi . Langkah  selanjutnya  yaitu dilakukan  optimasi  eluen  dengan  bantuan  KLT  untuk  mencari  pelarut  yang  mampu  melakukan pemisahan  yang  paling  baik . kemudian  dilakukan  lagi  uji  aktivitas  dari  fraksi  yang  sudah digabungkan  dari  subfraksi  sebelumnya.  Langkah  selanjutnya  dilakukan  analisis  menggunakan HPLC untuk melihat profil dari kromatogram senyawa (Rizkita dkk., 2021).
Pemisahan  senyawa  inhibitor  dengan  menggunakan  kromatografi  kolom  Sephadex  LH-20 untuk  mendapatkan  senyawa  yang  lebih  murni  dari  kromatografi  kolom  pertama,  perbedaannya terletak pada pemisahan yang lebih spesifik berdasarkan bobot molekul dari setiap senyawa yang ada di dalam fraksi. Sephadex LH-20 dilarutkan dengan metanol, kemudian dimasukkan ke dalam kolom  kecil  dan  didiamkan  selama  24  jam  agar  bisa  digunakan  dengan  baik.  Kemudian  sampel dimasukkan  ke  permukaan  kolom  dengan  hati-hati.  Setelahnya  kolom  disambungkan  dengan erlenmeyer  yang  berisi  metanol  menggunakan  selang  kecil,  dan  ujung  dari  kolom  disambungkan dengan  alat Fraction  Colector .  Alat  diatur  dengan  300  tetes  untuk  setiap  tabung,  proses  ini dilakukan secara terus menerus sampai semua sampel habis melewati kolom.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstrak  kental  metanol  yang  diperoleh  adalah  12,9379  gram.  Kemudian  dari  ekstrak  kenal ini  didapatkan  bobot  fraksi  n-heksan,  etil  asetat,  metanol  dan  air  masing  masing  2,7217  gram, 2,7117 gram, 4,9214 gram, dan 4,1571 gram. Dari hasil uji PfMQO semua fraksi, didapatkan fraksi yang  mempunyai  daya  inhibisi  paling  baik  adalah  fraksi  etil  asetat  karena  memiliki  daya hambat/kemampuan  inhibisi  diatas  50%.  Proses  inhibisi  terjadi  dengan  menghambat  kerja  enzim PfMQO, sehingga penelitian ini kembali difokuskan ke fraksi etil asetat. Hasil uji aktivitas inhibisi enzim PfMQO dapat dilihat pada Gambar 1.
Semua  fraksi  ekstrak  metanol  kulit  jengkol  menunjukkan  kemampuan  menginhibisi  enzim MQO. Hasil inhibisi yang melebihi 50% adalah fraksi ekstrak kental, fraksi etil asetat dan fraksi air terakhir. Kemudian fraksi yang memiliki hasil inhibisi diatas 50% dilakukan konfirmasi kemurnian menggunakan KLT. Pada hasil KLT belum terjadi pemisahan yang baik pada ketiga hasil tertinggi ini,  mungkin  karena  masih  terdapat  banyak  senyawa  pada  setiap fraksi.  Oleh  sebab  itu  dilakukan purifikasi lagi menggunakan kromatografi kolom pada fraksi etil asetat.

## Gambar 1. Hasil uji aktivitas inhibisi enzim PfMQO
Seluruh sampel dari ekstrak kental yang didapatkan pada fraksi etil asetat digunakan dalam proses  ini  dengan  jumlah  silika  gel  (fase  diam)  yang  digunakan  sebanyak  25  ml.  Perbandingan eluen kromatografi kolom silika gel dapat dilihat pada Tabel I.
Tabel I. Perbandingan eluen kromatografi kolom silika gel
Chloroform Metanol Kode Fraksi Chloroform Metanol Kode Fraksi 100 0 1a,1b,1c 90 10 7a,7b,7c 99 1 2a,2b,2c 80 20 8a,8b,8c 98 2 3a,3b,3c 70 30 9a,9b,9c 97 3 4a,4b,4c 60 40 10a,10b,10c 96 4 5a,5b,5c 50 50 11a,11b,11c 95 5 6a,6b,6c 0 100 12a,12b,12c
Selanjutnya dari setiap fraksi kolom ini dilakukan uji aktivitas kembali dengan metode yang sama di atas namun dibuat 3 variasi injeksi sampel, tiap sampel diinjeksi 3 variasi volume injeksi yaitu 2, 5, 10 µL sesuai standar uji bioassay Pf MQO yang sudah divalidasi oleh Balai Bioteknologi BPPT kawasan  PUSPIPTEK  Tangerang  Selatan.  Hampir  semua  fraksi  memiliki  aktivitas  inhibisi terhadap  enzim  MQO,  namun  lebih  diprioritaskan  adalah  fraksi  yang  memiliki  tingkat  kepolaran yang kurang atau nonpolar.
Gambar 2. Hasil uji bioassay PfMQO dari ekstrak hasil kolom silika gel
Hal  ini  disebabkan  senyawa  polar  dalam  proses  purifikasi  yang  lebih  rumit  dan  membutuhkan waktu yang lama selain itu pada pembuatan sediaan obat, senyawa polar kurang direkomendasikan karena membutuhkan penanganan khusus dalam pembuatannya dari pada pembuatan sediaan obat dari  senyawa  aktif  nonpolar. Hasil  uji bioassay PfMQO  dari  ekstrak  hasil  kolom  silika  gel  dapat dilihat pada Gambar 2.
Fraksi yang mempunyai daya inhibisi di atas 50% pada Gambar 2 adalah fraksi 3b, 4a, serta fraksi 9 sampai 12. Hasil ini sudah cukup menggambarkan bahwa hasil pemurnian fraksi etil asetat rata  rata  menunjukan  aktivitas  inhibisi  enzim  PfMQO  di  atas  50%  karena  semakin  tinggi  persen inhibisi oleh ekstrak yang digunakan maka semakin rendah aktivitas enzim, begitu pula sebaliknya, semakin  rendah  persen  inhibisi  oleh  ekstrak  yang  digunakan,  maka  semakin  tinggi  aktivitas enzimnya. Proses inhibisi terjadi dengan menghambat kerja enzim PfMQO. Hal ini sesuai dengan penelitian  Endah  dkk.,  2018  yang  menghasilkan  efek  antimalarial  dengan  menduga  senyawa ubiquinone  berikatan  dengan  Suksinat  Dehidrogenase  pada  mamalia  dengan  menginhibisi  enzim PfMQO dari fraksi ekstrak konsentrasi di atas 50%, sehingga cukup untuk mengkonfirmasi fraksi etil asetat ini untuk dikarakterisasi menggunakan HPLC untuk mendeteksi senyawa pada fraksi etil asetat. Selanjutnya dilakukan analisis menggunakan HPLC untuk melihat profil dari kromatogram senyawa  yang  ada  pada  fraksi  etil  asetat  dengan  gradien  5-10-100%  MeCN  +  0,1%  PA  dan menggunakan  eluen  air  +  0,1%  PA  dan  MeCN  +  0,1%  PA  dengan  kolom  HPLC  yaitu menggunakan kolom YMC ukuran 250 x 4,6 mml.D. S-10 µm, 30 nm. Kromatogram HPLC fraksi etil asetat Kolom Silika Gel dapat dilihat pada Gambar 3.

## Gambar 3. Kromatogram HPLC fraksi 3 kolom silika gel
Hasil  kromatogram  HPLC  menunjukkan  satu peak yang  dominan  dalam  fraksi  etil  asetat pada  panjang  gelombang  254  nm. Peak ini  berada  pada  waktu  retensi  22  dan  23  menit  sehingga dugaan  kuat  bahwa peak ini  yang  berperan  aktif  dalam  menginhibisi  enzim Pf MQO. Peak yang berdekatan  ini  belum  dapat  dikonfirmasi  sehingga  untuk  penelitian  selanjutnya  perlu  dilakukan spike sampel  untuk  mengkonfirmasi peak yang  menunjukkan  aktivitas  inhibitor  enzim  MQO. Selain spike sampel juga dapat dilakukan pemisahan lebih lanjut untuk lebih memurnikan senyawa yang  menjadi  target  dengan  menggunakan  kolom  Sephadex  LH-20  atau  dilakukan  elusidasi struktur.

## KESIMPULAN
Berdasarkan uji bioassay MQO terhadap sampel mulai dari ekstaksi awal, fraksinasi hingga purifikasi  terdapat  senyawa  aktif  pada  fraksi  etil  asetat  yang  memiliki  aktivitas  inhibitor  enzim Malate  Quinone  Oxireductase  (MQO)  namun  peak  pada  hasil  HPLC  tersebut  harus  diuji  lebih lanjut  untuk  mengkonfirmasi  struktur  maupun  golongan  senyawanya.  Hasil  HPLC  tersebut menunjukkan  terbentuknya  puncak  pada  waktu  retensi  22  dan  23  menit  dengan  senyawa  yang
terpisah pada fraksi etil asetat pada saat melalui proses  fraksinasi cair-cair. Hasil ini cukup untuk menunjukan  ekstrak  kulit  jengkol  dengan  pelarut  etil  asetat  mampu  menghambat  aktivitas  enzim MQO sebagai enzim penanda malaria.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada  Bapak  dan  Ibu  Dosen  Magister  Fakultas  Farmasi Universitas  Pancasila  atas  bimbingan  dan  ilmu  yang  diberikan  kepada  penulis.  Penulis  juga mengucapkan terima kasih kepada ketua Prodi Farmasi STIKES Bogor Husada dan ketua STIKES Bogor Husada atas supportnya dalam penulisan artikel ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Endah,  D.H.,  Daniel,  K.I.,  Keisuke,  K.,  Yukiko,  M.,  Russel,  J.M.,  Wang,  X.,  Mohamad,  S., Erwahyuni,  E.P.,  Danang,  W.,  Marie,  K.,  Eri,  A.,  Yuichi,  M.,  Nuki,  B.N.,  Hiroyuki,  S., Amila, P., Yohichi, W., Mihok, M., Kazuro, S., dan Kiyoshi, K., 2018, Biochemical Studies of  Membrane  bound  Plasmodium  falciparum  mitochondrial  L-Malate:  quinone oxidoreduktase, a potential drug target. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)- Bioenergetics,
1859(3), 191-200.
Haryanto,  D.,  Dalilah,  D.,  Anwar,  C.,  Prasasti,  G.D.,  Handayani,  D.  dan  Ghiffari,  A.,  2018, Investigasi  resistensi  Anopheles  sp.  terhadap  insektisida  piretroid  dan  kemungkinan terjadinya mutasi gen voltage gated sodium channel (VGSC), Jurnal Entomologi Indonesia , 15(3), 134–142.
Isma,  M.  L.,  2017,  Uji  Aktivitas  Fraksi  Aktif  Ekstrak  Kulit  Batang Garcinia  dioica Blume Terhadap  Enzim Malate : Quinone  Oxodoreductase  dari  Plasmodium  falciparum  (PfMQO) . Skripsi, Universitas Negeri Syarif Hidayatullah, Jakarta.
Kementerian  Kesehatan  RI,  2011, Epidemiologi  Malaria  di  Indonesia  eds.  Buletin  Jendela  Data Dan Informasi Kesehatan Epidemiologi Malaria Di Indonesia Dalam Kementrian Kesehatan RI Edisi 1 . Kementrian Kesehatan: Jakarta, 1–40.
Lunev,  S.,  Batista,  F.  A., Bosch,  S.  S., Wrenger,  C.,  dan  Groves,  M.  R.,  2016,  Identification  and Validation  of  Novel  Drug  Targets  for  the  Treatment  of Plasmodium  falciparum Malaria: New Insights, Current Topics in Malaria , 10–64.
Mursiti, S., Rizkita, A.D dan Dewi, S.A., 2017 , Uji Aktivitas Daun Wani, Iler, dan Mangga sebagai Antidiabetes menggunakan Metode Induksi Streptozotocin, Aloksan, dan TTGO, P roceeding Seminar Nasional Kimia dan Pendidikan Kimia, 3, 105-109
Rehena,  J.F.,  2010.  Uji  Aktivitas  Ekstrak  Daun  Pepaya  (Carica  papaya)  sebagai  Antimalaria  in vitro In Vitro, Jurnal Ilmu Dasar , 11(1) : 96–100.
Rizal,  M.,  Yusransyah  dan  Stiani,  S.N.,  2017,  Uji  Aktivitas  Antidiare  Ekstrak  Etanol  70%  Kulit Buah Jengkol ( Archidendron pauciflorum (Benth.) I.C.Nielsen) terhadap Mencit Jantan yang Diinduksi Oleum Ricini. Jurnal Ilmiah Manuntung , 2(2) : 131–136.
Rizkita, A.D., Dewi, S.A., Wibowo, E.A.P., Maulana, I. 2021. Isolasi dan Identifikasi Saponin dari Ekstrak  Leunca  ( Solanium  ningrum L)  secara  Spektrofotometri  Infra  Merah. Jurnal  Ilmiah Sains , 21 (2), 166-169.
Syamsurizal, 2007, Pendekatan Baru Untuk Malaria, Bio Trends Bulletin , 2(2), 25-29.
Wang,  X.,  Miyazaki,  Y.,  Inaoka,  D.  K.,  Hartuti,  E.  D.,  Watanabe,  Y.  I.,  Shiba,  T.,  dan  Kita,  K., 2019,  Identification  of  Plasmodium  falciparum  Mitochondial  Malate:  Quinone Oxidoreductase Inhibitors form the Pathogen Box, Genes, 10(6), 471.
Wartono, Mazmir dan Aryani, F., 2021, Analisis Fitokimia Dan Aktivitas Antioksidan Pada Kulit Buah Jengkol ( Pithecellobium jiringga ), Buletin Poltanesa , 22(1), 80–85.