## AKTIVITAS ANTIBAKTERI SALEP EKSTRAK DAUN
KEMBANG SEPATU ( Hibiscus rosa sinensis L.) TERHADAP

## LUKA YANG TERINFEKSI BAKTERI Staphylococcus aureus
PADA KELINCI ( Oryctolagus cuniculus )
Paulina V. Y. Yamlean 1) dan Widya Astuty Lolo 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT, 95115

## ABSTRACT
Healthy  living  is  the  primary  needs  of  every  individual  in  his  life.  Because  that  since  the society has used various plant as drug for cure disease . The one plants that are hereditary has been used  as  drug  traditional  for  treat  wounds  infection  is  Hibiscus  leaf  (  Hibiscus  rosa  sinensis  L.).  its have been done research about antibacterial activity by Moh . Andrianto (2007) and give results that Hibiscus  leaf  extract  have  antimicrobials  activity  to  Staphylococcus  aureus  and  Pseudomonas aeruginosa  bacteria  shown  with  concentration  minimum  inhibitory  for  Staphylococcus  aureus bacteria by 12.5% and for Pseudomonas aeruginosa bacteria by 25%. This is lead the researchers for do the more continue testing about antibacterial activity of Hibiscus leaf ( Hibiscus rosa sinensis L.) extract    ointment  has  antibacterial  activity  to  infected  wounds  Staphylococcus  aureus  bacteria  on rabbit  (  Oryctolagus  cuniculus  ).  The  method  used  is  experiments  laboratory  method.  Based  on results  research  obtained  that  Hibiscus  leaf  extract  ointment  with  concentrations  10%,  12.5%  and 15% were filled  requirement testing of ointment that includes Organolaptic test, pH test and power spread test. While for Homogeneity test has no find requirement . The results of antimicrobials test to infected wounds Staphylococcus aureus bacteria with concentrations 10%, 12.5% and 15% pointing that  Hibiscus  leaf  extract  ointment  have  healing  effect  to  infected  wounds  Staphylococcus  aureus bacteria this showed with shrink it wounds on rabbit from day 2 to day 4 and day 5 has closed.
Keywords : Hibiscus leaf extract ointment, wounds infection and antibacterial

## ABSTRAK
Hidup  sehat  merupakan  kebutuhan  utama  setiap  individu  dalam  hidupnya.  Oleh  karena  itu sejak  dahulu  masyarakat  telah  banyak  menggunakan  berbagai  tanaman  sebagai  obat  untuk menyebuhkan  penyakit.  Salah  satu  tanaman  yang  secara  turun-temurun  telah  digunakan  masyarakat sebagai  obat  tradisional  untuk  mengobati  luka  infeksi  adalah  daun  kembang  sepatu  ( Hibiscus  rosa sinensis L.).  Telah  dilakukan  penelitian  mengenai  aktivitas  antibakteri  daun  kembang  sepatu  oleh Moh. Andrianto (2007) dan memberikan hasil bahwa ekstrak daun kembang sepatu memiliki aktivitas antimikroba terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa yang ditunjukkan dengan konsentrasi hambat minimum untuk bakteri Staphylococcus aureus sebesar 12,5 % dan untuk bakteri Pseudomonas aeruginosa sebesar 25 %.Hal inilah yang mendorong peneliti untuk melakukan pengujian  lebih  lanjut  mengenai  aktivitas  antibakteri  sediaan  salep  ekstrak  daun  Kembang  sepatu ( Hibiscus  rosa  sinensis L.)  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap  luka  yang  terinfeksi  bakteri Staphylococcus  aureus pada  kelinci  ( Oryctolagus  cuniculus). Metode  yang  digunakan  ialah  metode eksperiman  laboratorium.  Berdasarkan  hasil  penelitian  didapatkan  bahwa  salep  ekstrak  daun Kembang  sepatu  dengan  konsentrasi  10%,  12,5%  dan  15  %  memenuhi  syarat  pengujian salep  yang meliputi  uji  Organolaptik,  Uji  pH  dan  Uji  daya  sebar.  Sedangkan  untuk  Uji  Homogenitas  tidak memenuhi syarat. Hasil uji antimikroba terhadap luka yang terinfeksi bakteri Staphylococcus aureus dengan konsentrasi 10%, 12,5% dan 15 % menunjukaan bahwa salep ekstrak etanol daun Kembang sepatu memiliki efek penyembuhan terhadap luka yang terinfeksi bakteri Staphylococcus aureus hal ini ditunjukan dengan mengecilnya luka sayat pada kelinci dari hari ke 2 sampai hari ke 4 dan hari ke 5 telah menutup..
Kata kunci : Salep ekstrak daun Kembang Sepatu, luka infeksi dan antibakteri.

## PENDAHULUAN
Hidup  sehat  merupakan  kebutuhan utama  setiap  individu  dalam  hidupnya. Oleh  karena  itu  sejak  dahulu  masyarakat telah  banyak  menggunakan  berbagai tanaman sebagai obat untuk menyebuhkan penyakit.  Salah  satu  tanaman  yang  secara turun-temurun telah digunakan masyarakat sebagai  obat  tradisional  untuk  mengobati luka  infeksi  adalah  daun  kembang  sepatu ( Hibiscus  rosa  sinensis L.).  Hal  ini disebabkan  karena  daun  tanaman  ini mengandung  senyawa  flavonoid,  saponin, dan  polifenol  yang  dapat  menghambat berkembangnya  bakteri  dalam  tubuh (Suriana, 2011). Telah dilakukan penelitian  mengenai  aktivitas  antibakteri daun kembang sepatu oleh Moh.
Andrianto  (2007)  dan  memberikan  hasil bahwa  ekstrak  daun  kembang  sepatu memiliki  aktivitas  antimikroba  terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan
Pseudomonas
aeruginosa yang ditunjukkan  dengan  konsentrasi  hambat minimum  untuk  bakteri Staphylococcus aureus sebesar  12,5  %  dan  untuk  bakteri Pseudomonas  aeruginosa sebesar  25  %. Penggunaan  bahan  obat alam  oleh masyarakat  masih  terbatas  baik  dalam  hal penentuan  dosis  maupun  cara  meramu. Oleh  karena  itu  penelitian  ini  akan memberikan informasi mengenai konsentrasi  yang  memberikan  efek  dan bentuk  sediaan  obat  yang  lebih  mudah digunakan  yaitu  dengan  memformulasi dalam  bentuk  sediaan  salep.  Hal  inilah yang mendorong peneliti untuk melakukan pengujian  lebih  lanjut  mengenai  aktivitas antibakteri  sediaan  salep  ekstrak  etanol daun  Kembang  sepatu  ( Hibiscus  rosa sinensis L.)  memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap  luka  yang  terinfeksi  bakteri
Staphylococcus aureus pada kelinci ( Oryctolagus cuniculus ).

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan pada penelitian ini yaitu gelas ukur, gelas kimia, tabung  reaksi,  pisau  bedah,  kaca  arloji, cawan  porselin,  pipet  mikro,  erlenmeyer, incubator, laminar  air  flow ,  autoklaf, jarum ose, lumpang dan alu, pot salep, plat kaca, timbangan  analitik,  cawan  petri,  pH mater,  mistar,  kamera,  blender,  ayakan, hot  plate stirrer , rotary  evaporator ,  dan waterbath .  Bahan  yang  digunakan  yaitu daun kembang sepatu, adeps lanae, vaselin flavum,  etanol  96  %,  aquades,  Nutrien Agar, NaCl 0,9 %, bakteri Staphylococcus aureus .

## Persiapan Sampel
Sampel yang telah diambil, pertama-tama  dicuci,  kemudian  dirajang dan  dikering-anginkan  selama  beberapa hari  dan  dilanjutkan  proses  pengeringan dengan  menggunakan  oven  pada  suhu  40 o C  sampai  kering.  Selanjutnya  daun kembang  sepatu yang  telah  kering diblender  dan  diayak  hingga  diperoleh serbuk daun kembang sepatu.

## Ekstraksi Sampel
Proses  ekstraksi  dilakukan  dengan metode  maserasi.  Serbuk  daun  kembang sepatu  direndam  dalam  pelarut  etanol  96 % dengan perbandingan 1 : 3 selama 5 hari sambil  sesekali  diaduk.  Setelah  5  hari, dilakukan  penyaringan  dan  diperoleh filtrat  1.  Residu  kemudian  di  maserasi
kembali dengan perbandingan 1 : 2 selama 2 hari, sesekali diaduk, kemudian disaring dan  diperoleh  filtrat  2.  Filtrat  yang diperoleh  digabungkan  dan  diuapkan dengan  menggunakan rotary  evaporator .
Hasil yang diperoleh selanjutnya
dipekatkan  diatas  waterbath  pada  suhu  40 o C  hingga  diperoleh  ekstrak  kental  yang selanjutnya akan digunakan dalam pembuatan sediaan salep.

## Pembuatan Salep
Pembuatan  salep  ekstrak  daun  kembang sepatu  dengan  konsentrasi  10  %,  12,5dan 15 %
Pembuatan salep ekstrak daun kembang sepatu konsentrasi 10 %
R/ Ekstrak daun kembang sepatu 0,6 g Basis salep 19,4 g m.f. salep  20 g
Pembuatan salep ekstrak daun kembang sepatu konsentrasi 12,5 %
R/ Ekstrak daun kembang sepatu 1 g Basis salep 19 g m.f. salep  20 g
Pembuatan salep ekstrak daun kembang sepatu konsentrasi 15 %
R/ Ekstrak daun kembang sepatu 2 g Basis salep 18 g m.f. salep  20 g

## Uji homogenitas
Sampel  diambil  dari  bagian  atas, tangah  dan  bawah,  kemudian  dioleskan pada plat kaca, lalu digosokkan dan diraba. Bila  homogen  maka  massa  salep  tidak
tersisa  bahan  padatnya  atau  strukturnya rata.

## Uji organoleptik
Pengujian dilakukan dengan mengamati salep dari segi bentuk, bau dan warna sediaan salep.

## Uji pH salep
Pengujian dilakukan dengan menggunakan  alat  pH-meter  yang  bagian sensornya  dikenakan  pada  sediaan  salep. Setelah  itu  baca  pH  yang  terlihat  pada monitor.

## Uji daya sebar
Sebanyak  0,5  g  salep  ditimbang, lalu  diletakkan  di  tengah  kaca  bulat berdiameter  15  cm.  Kaca  yang  satu diletakkan  di  atasnya,  dibiarkan  selama  1 ,enit.  Diameter  sebar  salep  diukur, kemudian  ditambahkan  50  g  beban tambahan,  didiamkan  selama  1  menit  lalu diukur  diameter  sebar  yang  konstan. Lakukan  replikasi  3  kali  (Astuti  et  al, 2010).

## Pembuatan Suspensi Bakteri
Suspensi bakteri dari biakan murni dibuat dengan menggunakan bakteri Staphylococcus  aureus yang  berumur  24 jam  pada nutrient  agar .  Bakteri  uji  yang telah diinokulasi diambil dengan jarum ose steril  lalu  dimasukkan  ke  dalam  tabung yang  berisi  2  ml  larutan  NaCl  0,9  %  dan terbentuk suspensi dengan kekeruhan yang sama  dengan  standar  kekeruhan  larutan Mc.Farland.

## Penyiapan  Hewan  Uji  dan  Pembuatan Infeksi
Hewan  uji  yang  digunakan  berumur  2  –  3 bulan dengan berat  badan antara 1,2 – 1,5 kg.  Sebelum  pembuatan  luka,  kelinci terlebih  dahulu  diaklimatisasi  selama  5
hari.  Sehari  sebelum  pembuatan  luka, hewan  uji  dicukur  bulunya  di  daerah punggung  sampai  licin  dan  dibersihkan dengan  alcohol  70  %,  selanjutnya  dibuat luka  sayat  dengan  ukuran  panjang  1,5  cm pada bagian punggung kelinci menggunakan  pisau  bedah  sampai  bagian subkutan.  Suspensi  bakteri  diberikan sebanyak  0,2  ml  pada  masing-masing lokasi.  Pengamatan  dilakukan  setelah  24 jam  untuk  melihat  adanya  infeksi  pada luka yang dibuat.

## Perlakuan dan Pengamatan
a. Masing-masing  kelinci  diberi perlakuan sebagai berikut : Perlakuan  A  :  diberi  kontrol  negative
(basis salep)
Perlakuan  B  :  diberi  kontrol  positif (salep kloramfenikol)
Perlakuan  C  :    diberi  salep  ekstrak daun  kembang  sepatu  konsentrasi  10 %
Perlakuan  D  :    diberi  salep  ekstrak daun kembang sepatu konsentrasi 12,5
%
Perlakuan  E  :    diberi  salep  ekstrak daun  kembang  sepatu  konsentrasi  15
%
b. Sediaan salep diberikan dengan  cara  dioleskan  secara  merata pada daerah luka 3 kali sehari.
c. Dilakukan  pengamatan  setiap hari  selama  9  hari,  kemudian  diukur panjang penutupan luka.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Evalausi Sediaan Salep
Uji Organoleptik
Uji  organoleptik    meliputi  pengamatan terhadap  bentuk,  bau  dan  warna  salep tersebut
Hasil  uji  Organoleptik  dapat  dilihat  pada Tabel 1 :

## Uji Homogenitas
Proses  pengujian  homogenitas  dilakukan dengan  cara  mengambil  salep  dari  bagian atas,tengah  dan  bawah  kemudian  salep dioleskan pada sekeping kaca objek. Hasil pengamatan  dapat  dilihat  pada  Tabel  2 dibawah ini :
Jenis salep Homogenitas Dasar salep Homogen Salep Ekstrak Etanol Daun Kembang Tidak Homogen sepatu 10% Salep Ekstrak Etanol Daun Kembang Tidak Homogen sepatu 12,5% Salep Ekstrak Etanol Daun Kemang Tidak Homogen Sepatu 15% Jenis Salep Bentuk Warna Bau Dasar salep Setengah padat Kuning muda Khas salep (vaselin) Salep Ekstrak Etanol Daun Kemang Sepatu 10% Setengah padat Hijau kehitaman Khas salep (vaselin) Salep Ekstrak Etanol Daun Kemang Sepatu 12,5% Setengah padat Hijau kehitaman Khas salep (vaselin) Salep Ekstrak Etanol Daun Kemang Sepatu 15% Setengah padat Hijau kehitaman Khas salep (vaselin)

## Hasil Uji pH Salep Ekstrak Etanol Daun Kembang Sepatu
Uji  pH  pada  salep  menggunakan
pengujian  untuk  mengetahui  asam  dan basa  dari  sediaan  salep.  Pengukur  pH dilakukan dengan menggunakan pH
universal.  Hasil  pengamatan  dapat  dilihat pada Tabel 3 dibawah ini :
Jenis Salep pH Dasar salep 5 Salep Ekstrak Etanol Daun Kemang Sepatu 10% 6 Salep Ekstrak Etanol Daun Kemang Sepatu 12,5% 6 Salep Ekstrak Etanol Daun Kemang Sepatu 15% 6

## Uji Daya Sebar
Pengujian daya sebar Salep Ekstrak
Etanol  Daun  Kembang  Sepatu  diakukan untuk  mengetahui  kemampuan  salep tersebut  menyebar.  Perlakuan  dilakukan dengan  cara  mengambil  0,5  g  salep diletakan pada cawan petri dalam keadaan terbalik  kemudian  ditutup  dan  diberikan penamabahan  beban  100  gram.  Hasil pengamatan dapat dilihat pada Tabel 4 :
Jenis Salep Daya Sebar Dasar salep 4,9 Salep Ekstrak Etanol Daun Kemang Sepatu 10% 5 Salep Ekstrak Etanol Daun Kemang Sepatu 12,5% 5,1 Salep Ekstrak Etanol Daun Kemang Sepatu 15%
5,1

## Uji Aktivitas Antibakteri
Hasil  pengujian  aktivitas  antibakteri  dapat dilihat pada Tabel 5 di bawah ini.
Kelompok pelakuan ulang an Panjang luka infeksi hari ke-0 sampai ke-5 (cm) 0 1 2 3 4 5 Kontrol negatif (Basis salep) 1 1 1 1 0, 8 0, 7 0 2 1 1 1 0, 9 0, 8 0, 5 Kontrol positif (Salep kloramfeni kol) 1 1 1 0, 7 0, 6 0, 3 0
2 1 1 0, 9 0, 9 0, 8 0, 3 SEEDKS 10 % 1 1 1 1 0, 6 0, 5 0
2 1 1 1 0,
4 0 0 SEEDKS 12,5 % 1 1 1 1 0, 3 0, 1 0
2 1 1 0, 9 0, 5 0, 5 0 SEEDKS 15 % 1 1 1 0, 9 0, 7 0, 5
0
2 1 1 0, 8 0, 4 0, 2 0
Keterangan  :SEEDKS  :  Salep  Ekstrak Etanol Daun Kembang Sepatu
Persentase  rata-rata  penyembuhan  luka infeksi  pada  masing-masing  perlakuan dapat dilihat pada Gambar  di bawah ini :
Proses  penyembuhan  luka  infeksi  terlihat dengan  terbentuknya  keropeng,  hingga hilangnya  nanah  dan  terjadi  proses penutuan luka pada masing-masing kelompok  perlakuan.  Berdasarkan  hasil pengukuran dan digambarkan dalam grafik,  dapat  terlihat  bahwa  terjadi penurunan  ukuran  panjang  luka  infeksi, yang  menunjukkan  bahwa  telah  terjadi proses penyembuhan. Bahkan pada peggunaan  ekstrak  terlihat  bahwa  telah terjadi  proses  penyembuhan  total  dengan hasil pengukuran panjang yaitu 0 cm pada hari  ke-5.Proses  penyembuhan  pada  luka disebabkan  karena  salep  ekstrak  etanol daun kembang sepatu mengandung berbagai komponen kimia yang berkhasiat sebagai  antibakteri,  diantaranya flavonoid, saponin,  dan  polifenol.  Flavonoid  bekerja dengan  mendenaturasi  protein  sel  bakteri dan merusak membran sitoplasma, demikian  pula  saponin  bekerja  dengan merusak  membran  sitoplasma  sedangkan polifenol bekerja dengan cara mendenaturasi  protein  dan  mengurangi tegangan permukaan sehingga meningkatkan  permeabilitas  dinding  sel bakteri.  Pada  hasil  pengukuran  panjang luka  infeksi  pada  setiap  perlakuan  dapat dilihat  bahwa  hasil  yang  diperoleh  tidak berbeda signifikan, kecuali pada perlakuan kontrol  negatif,  dimana  pada  hari  kelima luka  masih  belum  sembuh  total.  Hal  ini disebabkan  karena  tidak  adanya  bahan aktif  yang  terkandung  didalam  basis  salep yang  dapat  menghambat  pertumbuhan bahkan membunuh bakteri. Berbeda halnya  dengan  hasil  pengukuran  pada perlakuan kontrol positif, dimana pada hari kelima  panjang  luka  kelinci  walaupun belum  sembuh  total,  tetapi  ukurannya sudah  lebih  pendek  dibandingkan  dengan kontrol  negatif.  Hal  ini  disebabkan  karena
salep kloramfenikol yang digunakan sebagai  kontrol  positif  dapat  menghambat pertumbuhan  berbagai  bakteri  penyebab infeksi,  termsuk  di  dalamnya  bakteri Staphylococcus  aureus .  Hasil  penguuran pada  ke  tiga  seri  konsentrasi  ekstrak  yang digunakan,  dapat  dilihat  bahwa  pada  hari ke lima, semua luka sembuh total.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat disimpulkan  bahwa  Salep  ekstrak  daun Kembang sepatu dengan konsentrasi 10%, 12,5%  dan  15  %  memenuhi  syarat pengujian salep yang meliputi uji Organolaptik,  Uji  pH  dan  Uji  daya  sebar.
Sedangkan  untuk  Uji  Homogenitas  tidak memenuhi  syarat.  Hasil  uji  antimikroba terhadap  luka  yang  terinfeksi  bakteri Staphylococcus aureus dengan konsentrasi 10%,  12,5%  dan  15  %  menunjukaan bahwa salep ekstrak etanol daun Kembang sepatu memiliki efek penyembuhan terhadap  luka  yang  terinfeksi  bakteri Staphylococcus  aureus hal  ini  ditunjukan dengan  mengecilnya  luka  sayat  pada kelinci dari hari ke 2 sampai hari ke 4 dan hari ke 5 telah menutup

## SARAN
Bersasarkan hasil yang telah dilakuan  diharapkan  dapat  dikembangkan bentuk  sedian-sedian  farmasi  lainnya seperti  sediaan  krim  dan  gel  untuk penyembuahan luka yang terinfeksi

## DAFTAR PUSTAKA
Agoes,  Goeswin.  2008. Pengembangan Sediaan Farmasi .  ITB. Bandung.
Ansel  Howarrd,C.    2005. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi . Universitas Indonesia Press :Jakarta.
Astuti  Y.I,  Hartanti  D,  Aminiati  A,  2010. Peningkatan  Aktivitas  Antijamur Candida  albicans Salep  Minyak Atsiri  Daun  Sirih  ( Piper  bettle L.) Melalui  Pembentukan  Kompleks
Inklusi dengan ß-siklodekstrin [skripsi]. Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah. Purwokerto. Moh.  Andrianto,  2007.  Uji  Aktivitas Antimikroba Ekstrak Daun Kembang  Sepatu  ( Hibiscus rosa sinensis L.) terhadap Staphylococcus aureus dan
Pseudomonas  aeruginosa . [skripsi]. STIFA. Palu.
Suriana N, Sobarani I, 2011. Ensiklopedia Tanaman  Obat .  Malang,  Jawa Timur.
Suryanto,  E.  2012. Fitokimia  Antioksidan . Putra Media Nusantara. Surabaya.
Syamsuni.  2005. Farmasetika Dasar dan Hitungan Farmasi .Buku
Kedokteran EGC :   Jakarta. Tranggono, R.I.,  Latifah, F.  2007. Buku Pegangan Ilmu Pengetahuan Kosmetik . PT. Gramedia : Jakarta.
Setiabudy,  F.D,  Suyatna,  Rianto.  2007.
Farmakologi dan Terapi . Edisi IV.
Departemen Farmakologi dan
Terapeutik, FKUI, Jakarta