Komunikasi Singkat
EKSTRAKSI DAN KARAKTERISASI PARSIAL EKSTRAK KASAR ENZIM KATEPSIN DARI IKAN PATIN
[Extraction and Partial Characterization of Crude Enzymes Cathepsin from Catfish]

## Muhammad Zakiyul Fikri*, Tati Nurhayati dan Ella Salamah
Departemen Teknologi Hasil Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor, Bogor
Diterima 02 Juli 2013 / Disetujui 30 Mei 2014

## ABSTRACT
Decomposition of protein by enzymatic process will lead to changes in odor, texture, and appearance of fish. The enzymes that play a role in the enzymatic process is primarily proteolytic enzymes. Cathepsin is one of the proteolytic enzymes found in animal tissue that hydrolyzes peptide bonds of proteins. This study aims to extract the cathepsin, characterize the crude extract derived from catfish. The stages of this research consist of the extraction and characterization of the cathepsin from catfish. Result of the extraction was crude extract of cathepsin with activity of 0.278 U/mL. The enzyme had optimum temperature of 50°C, pH 6 and substrate concentration of 2%. The activity of the cathepsin was inhibited by metal ions of Fe 3+ , Cu 2+ , Ca 2+ , but increased by metal ions of Mg 2+ .
Keywords: catfish, cathepsin, enzyme

## ABSTRAK
Penguraian protein dalam proses enzimatis akan menyebabkan perubahan bau, tekstur, dan penampakan ikan. Enzim yang berperan dalam proses enzimatis terutama adalah enzim proteolitik. Enzim katepsin merupakan salah satu enzim proteolitik yang ditemukan pada jaringan hewan yang dapat menghidrolisis ikatan peptida pada protein. Penelitian ini bertujuan untuk mengekstraksi enzim katepsin dan mengkarakterisasi ekstrak kasar enzim katepsin yang berasal dari ikan patin. Tahapan penelitian terdiri dari proses ekstraksi dan karakterisasi. Hasil ekstraksi berupa ekstrak kasar enzim katepsin dengan aktivitas sebesar 0.278 U/mL. Enzim tersebut memiliki suhu optimum 50°C, pH optimum 6, dan substrat optimum 2%. Aktivitas ekstrak kasar enzim katepsin dihambat oleh ion logam Fe 3+ , Cu 2+ , Mn 2+ ,Ca 2 , namun ditingkatkan oleh ion logam Mg 2+ .
Kata kunci: enzim, katepsin, ikan patin

## PENDAHULUAN
1
Ikan  patin  merupakan  salah  jenis  ikan  budidaya  yang memegang  peranan  penting  dalam  produksi  perikanan budidaya  yang  mencapai  nilai  produksi  pada  tahun  2009 sebesar  109.606  ton  (KKP,  2011).  Selain  nilai  produksi  yang cukup  tinggi,  ikan  patin  juga  mempunyai  kandungan  gizi  yang cukup untuk memenuhi kebutuhan protein hewani. Kandungan protein pada filet patin cukup tinggi, yaitu berkisar antara 12.94– 17.52%  (bb),  sedangkan  kandungan  lemaknya  berkisar  antara 0.89–1.23% (bb). Kandungan lemak filet patin cukup rendah bila dibandingkan  produk  ikan  lainnya.  Pada  ikan  patin  kandungan lemak  yang  tinggi  terutama  berasal  dari  bagian  perut  ( belly ) yaitu 54.43% (bk) (Thammapat et al. 2010).
Kandungan  gizi  ikan  patin  menjadi  tidak  bernilai  tinggi apabila tidak ditangani dengan baik setelah penangkapan atau pemanenan.  Hal  ini  disebabkan  ikan  patin  sebagai  bahan pangan sangat rentan terhadap kerusakan. Kerusakan ini dapat terjadi secara fisik, biokimiawi, maupun mikrobiologi. Kerusakan daging ikan yang terjadi pada fase rigor mortis hingga fase post rigor, ditandai dengan melemasnya daging ikan ( softening ).
*Penulis Korespondensi: E-mail: zakifikrii@gmail.com
Proses penurunan mutu ikan segar terutama diawali dengan proses  perombakan  oleh  aktivitas  enzim  yang  secara  alami terdapat  di  dalam  ikan.  Salah  satu  jenis  enzim  yang  berperan penting  dalam  proses  kemunduran  mutu  ikan  adalah  enzim proteolitik  yang  menguraikan  protein  menjadi  pepton,  peptida dan  asam-asam  amino.  Hidrolisis  protein  oleh  suatu  protease seperti  katepsin,  calpain  dan  kolagenase  dapat  menyebabkan timbulnya  akumulasi  metabolit,  perubahan  citarasa  dan pelunakan  tekstur,  terbentuknya  komponen  volatil  serta peningkatan  jumlah  bakteri  yang  akhirnya  menimbulkan kebusukan.  Aktivitas  proteolitik  menyebabkan  perubahan fungsional  dan  sifat  organoleptik  dari  daging  ikan.  Katepsin merupakan kelompok dari sistein protease diantaranya katepsin B dan L yang dapat menyebabkan terjadinya pelunakan daging ( softening ) pada ikan (Ladrat et al . 2006).
Informasi  mengenai  enzim  katepsin  yang  berasal  dari  ikan patin  belum  diketahui,  sehingga  perlu  dilakukan  penelitian mengenai karakteristik dari enzim katepsin yang menjadi salah satu  faktor  utama  proses  pembusukan  ikan.  Penelitian  ini diharapkan dapat memberikan informasi mengenai karakteristik enzim katepsin yang berasal dari daging ikan patin. Informasi ini dapat  dikelola  agar  pada  saat  penanganan  kondisi-kondisi lingkungan  yang  dapat  meningkatkan  kerja  enzim  katepsin secara optimal khususnya pada ikan patin dapat dihindari.
Komunikasi Singkat

## BAHAN DAN METODE

## Bahan
Bahan yang digunakan terdiri dari bahan utama berupa ikan patin  dalam  keadaan post-rigor yang  diperoleh  dari  pasar tradisional Bogor.

## Ekstraksi enzim katepsin
Ekstraksi  dilakukan  dengan  preparasi  sampel  untuk  mem- peroleh  ekstrak  kasar  protease  katepsin.  Daging  ikan  diambil dan  disuspensikan  dalam  akuades  dengan  perbandingan daging ikan dan akuades sebesar 1:1, lalu dihomogenisasi pada suhu  0-4°C.  Proses  selanjutnya  adalah  pemisahan  dengan menggunakan sentrifugasi dingin (Beckmen) (Gambar 1).
Gambar 1.  Diagram  alir  proses  ekstraksi  enzim  katepsin  dengan teknik differensial sentrifugasi (Dinu et al. 2002)
Ekstrak daging hasil homogenisasi disentrifugasi pada 600 x g selama 10 menit dan supernatan yang diperoleh kemudian disentrifugasi lagi pada 10.000 x g selama 10 menit. Pelet yang dihasilkan dari hasil sentrifugasi kemudian dilarutkan dalam 0.1 M buffer tris-HCl (Aplichem) pH 7.4 dengan jumlah yang sama seperti  jumlah  akuades  dan  disentrifugasi  pada  4.000  x  g selama  10  menit.  Hasil  supernatan  (ekstrak  kasar  protease katepsin)  yang  diperoleh  merupakan  protein  utama  dari mitokondria  dan  lisosom  yang  siap  untuk  diteliti  aktivitasnya lebih lanjut.

## Aktivitas katepsin
Aktivitas  proteolitik  dari  katepsin  diuji  menggunakan hemoglobin  (SIGMA-ALDRICH)  sebagai  substratnya  dengan konsentrasi  2%  pH  2.  Sebanyak  0.5  mL  dari  larutan  substrat diinkubasi  dengan  inkubator  (Thermoline type 42000)  dengan 0.1  mL  larutan  enzim  pada  37°C  selama  10  menit.  Reaksi dihentikan  dengan  penambahan  2  mL  TCA  (EMSURE)  5% (w/v). Campuran disaring dengan kertas saring Whatman no.1, dan  hasil  reaksi  yang  dapat  larut  ditambah  dengan  1  mL pereaksi  folin  (Merck).  Campuran  kemudian  diukur  dengan spektrofotometer  (Spectrophotometer  UV-2500  LabomedInc) pada  panjang  gelombang  750  nm.  Selain  itu,  dilakukan  pula
pengukuran  untuk  larutan  blanko  dan  larutan  standar  dengan prosedur  yang  sama  seperti  larutan  sampel,  untuk  larutan standar  digunakan  tirosin  (Aplichem).  Aktivitas  katepsin  diukur berdasarkan metode Dinu et al . (2002).

## Penentuan suhu optimum
Karakterisasi ekstrak enzim katepsin dilakukan pada variasi suhu 40, 50, 60 dan 70°C. Pada waktu pengujian, hemoglobin sebagai  substratnya  dibuat  dengan  konsentrasi  2%  pH  2. Aktivitas enzim katepsin kasar diukur berdasarkan metode Dinu et al . (2002).

## Penentuan pH optimum
Karakterisasi  pH  dilakukan  menggunakan  substrat hemoglobin 2% yang diatur pada berbagai variasi pH yaitu 3, 4, 5, 6, dan 7 dengan pH meter (Orion 3STAR). Buffer Tris – HCl (Aplichem)  yang  digunakan  juga  diatur  pada  variasi  pH  yang sama  yaitu  3,  4,  5,  6,  dan  7.  Aktivitas  enzim  katepsin  diukur berdasarkan metode Dinu et al . (2002).

## Penentuan substrat optimum
Karakterisasi konsentrasi substrat dilakukan dengan meng- ubah konsentrasi substrat hemoglobin dengan berbagai variasi konsentrasi yaitu : 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5 dan 4% (b/v) pada pH 2. Aktivitas enzim katepsin kasar diukur berdasarkan metode Dinu et al . (2002).

## Penghambatan ion logam
Karakterisasi  pengaruh  ion  logam  dilakukan  dengan  me- nambahkan  ion  logam  monovalent,  bivalen  dan  trivalent  pada waktu  pengujian,  hemoglobin  sebagai  substratnya  dibuat dengan  konsentrasi  2%  pH  2.  Sebanyak  0.5  mL  larutan substrat, 0.1 mL larutan buffer Tris pH 7.4 dan 0.1 mL larutan logam  (NaCl,  CaCl 2 ,  ZnCl 2 ,  CuSO 4 ,  MgCl 2, MnCl 2 dan  FeCl 3 ) diinkubasi dengan 0.1 mL larutan enzim pada 37°C selama 10 menit.  Reaksi  dihentikan  dengan  penambahan  2  mL  TCA (EMSURE) 5% (w/v). Campuran disaring dan 1  mL filtrat hasil hasil penyaringan ditambah dengan 1 mL pereaksi folin (Merck). Selanjutnya  diinkubasi  kembali  pada  suhu  37°C  selama  10 menit.  Campuran  kemudian  diukur  dengan  spektrofotometer pada panjang gelombang 750 nm (Spectrophotometer UV-2500 LabomedInc).  Aktivitas  enzim  katepsin  kasar  diukur  berdasar- kan metode Dinu et al . (2002).

## Penentuan konsentrasi protein
Konsentrasi  protein  ditentukan  menggunakan  metode Bradford  (Bradford,  1976)  dengan bovine serum  albumin (Aplichem)  sebagai  standar.  Konsentrasi  protein  ditentukan dengan cara 0.1 mL enzim dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Kemudian  ditambahkan  sebanyak  5  mL  pereaksi  Bradford (Aplichem),  diinkubasi  selama  lima  menit  dan  diukur  abso- rbansinya  dengan  spektrofotometer  pada  panjang  gelombang 595  nm.  Demikian  pula  untuk  larutan  standar  dilakukan  sama seperti  larutan  sampel  dengan  konsentrasi  antara  0.1–1.0 mg/mL.
Buffer tris HCl 0.1 M pH 7.4 (100 mL)
10.000 x g, 10 mnt, 4°C Pelet 1 + Daging ikan post mortem + akuades(1:1)
Homogenisasi
600 x g, 10 mnt, 4°C Supernatan Pelet 1 Supernatan
4.000 x g, 10 mnt, 4°C
Ekstrak katepsin Pelet 1
Komunikasi Singkat
Terakreditasi Dikti: 80/DIKTI/Kep/2012
0.223 ± 0.191 0.250 ± 0.350
0.250 ± 0.180 0.271 ± 0.069 0.108 ± 0.167 0.000 0.050 0.100 0.150 0.200 0.250 0.300 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Ak tiv ita s En zim (U /m L) pH 0.081 ± 0.033 0.213 ± 0.098
0.100 ± 0.000
0.090 ± 0.096 0.000 0.050 0.100 0.150 0.200 0.250 30 40 50 60 70 80 A kt iv ita s En zim (U /m L) Suhu °C

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstrak kasar katepsin yang diperoleh dari daging ikan patin sudah  memasuki  tahap post-rigor memiliki  aktivitas  enzim sebesar 0.278 U/mL, aktivitas spesifik 0.9073 U/mg  dan kadar protein  sebesar  0.3064  mg/mL.  Berdasarkan  hasil  penelitian Nurhayati et al . (2012) diketahui bahwa ekstrak kasar katepsin yang  berasal  dari  ikan  bandeng  memiliki  aktivitas  spesifiknya sebesar  0.8598  U/mg  dengan  kadar  protein  sebesar  0.1163 mg/mL. Penelitian Toyohara et al . (2006) menyebutkan bahwa ekstrak  kasar  katepsin  A  yang  berasal  dari  daging  ikan  mas memiliki  aktivitas  spesifik  sebesar  0.279  U/mg  Pada  tahapan ekstraksi, pemilihan buffer Tris-HCl pH 7.4 dinilai sudah sesuai. Hal  ini  sesuai  dengan  pendapat  dari  Whitaker  (1994)  yang menyatakan  bahwa  ekstraksi  enzim  sebaiknya  menggunakan buffer untuk mengontrol pH dekat dengan 7.5 dan kekuatan ion 0.1-0.5.

## Suhu optimum
Suhu  merupakan  salah  satu  faktor  yang  dapat  mem- pengaruhi  aktivitas  enzim,  termasuk  didalamnya  adalah  enzim katepsin.  Hal  ini  disebabkan  karena  enzim  merupakan biokatalisator yang tersusun dari protein. Struktur protein dapat berubah  akibat  adanya  pengaruh  suhu.  Pengaruh  suhu terhadap aktivitas enzim dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2. Pengaruh suhu terhadap aktivitas enzim katepsin ikan patin
Ekstrak  kasar  enzim  katepsin  ikan  patin  memiliki  aktivitas spesifik optimum pada suhu 50°C dengan nilai aktivitas sebesar 0.213  U/mL.  Beberapa  hasil  penelitian  tentang  katepsin  yang berasal dari hasil perairan juga menyatakan suhu optimal enzim katepsin yang mendekati suhu optimal enzim katepsin dari ikan patin.  Hasil  penelitian  Balti et  al. (2010)  terhadap  katepsin  D yang  berasal  dari  hepatopankreas  sotong  memiliki  aktivitas optimum  pada  50°C.  Krause et  al. (2010)  menyatakan  bahwa enzim katepsin D yang berasal dari daging ikan ostrich memiliki aktivitas  optimal  pada  suhu  45°C.  Hasil  penelitian  yang dilakukan  oleh  Liu et  al. (2008)  menunjukkan  bahwa  suhu optimum  untuk  enzim  katepsin  B1  pada silver  carp 35°C sedangkan hasil penelitian yang dilakukan oleh Cunningham et al. (2010)  menunjukkan  bahwa  enzim  katepsin  B  pada  ikan salmon memiliki suhu optimum sebesar 45°C.
Suhu yang lebih tinggi akan membuat molekul lebih sering bertabrakan.  Konsep  ini  berlaku  juga  untuk  tumbukan  antar molekul substrat dengan enzim.  Hal ini disebabkan  suhu yang
tinggi  akan  mengkatalisis  reaksi  enzimatis.  Namun,  ketika kenaikan  suhu  melebihi  titik  tertentu  akan  menyebabkan gangguan  terhadap  struktur  tersier  enzim.  Perubahan  struktur tersier pada sisi aktif akan menghambat aktivitas katalitik enzim (Stoker, 2010).

## pH optimum
Enzim memiliki aktivitas optimum pada pH tertentu. Hal ini terkait  dengan  sifat  dasar  protein  yang  dapat  mengalami denaturasi akibat adanya pengaruh pH.
Gambar 3.   Pengaruh pH terhadap aktivitas enzim katepsin ikan patin
Gambar 3 menunjukkan bahwa pH optimum untuk aktivitas enzim katepsin, yaitu pada pH 6 dengan aktivitas 0.271 U/mL. Aktivitas enzim katepsin meningkat dari pH 3 sampai pH 5 dan tertinggi pada pH 6 kemudian menurun pada pH 7. Zhong et al . (2012) melaporkan bahwa enzim katepsin L yang diperoleh dari daging ikan blue scad mempunyai optimum pada pH 5.5, hasil serupa juga dilaporkan oleh  Chen dan Sun (2012) yang mem- peroleh katepsin B dari lidah ikan Cynoglossussemilaevis mem- punyai pH optimum pada nilai 5.5.
Hasil penelitian lainnya yang dilakukan oleh Cunningham et al. (2010)  pada  ikan  salmon  menghasilkan  bahwa  nilai  pH optimum katepsin B sekitar pH 4. Berdasarkan hasil penelitian tersebut dapat dilihat bahwa enzim katepsin yang diekstrak dari ikan  patin  memiliki  ciri-ciri  enzim  katepsin  yang  hampir  sama dengan  katepsin  B1  ataupun  katepsin  B2  yang  memiliki  pH optimum berkisar 5.5-6.0; sedangkan katepsin B1 sekitar 5.0.
Semua  reaksi  enzim  dipengaruhi  oleh  pH  medium  tempat reaksi  terjadi.  Setiap  enzim  memiliki  pH  optimum  yang  khas, yaitu pH yang menyebabkan aktivitas maksimal. Profil aktivitas pH enzim menggambarkan pH pada saat pemberi dan penerima proton  yang  penting  pada  sisi  katalitik  enzim  berada  pada tingkat  ionisasi  yang  diinginkan.  Namun  pada  pH  tertentu (ekstrim)  dapat  menyebabkan  enzim  terdenaturasi  yang  me- nyebabkan  enzim  kehilangan  aktivitas  biologisnya  (Lehninger, 1993).

## Konsentrasi substrat optimum
Konsentrasi  substrat  merupakan  salah  satu  faktor  yang berpengaruh terhadap jumlah produk yang dihasilkan. Substrat dibutuhkan oleh enzim untuk berikatan dengan sisi aktif enzim sehingga  akan  terbentuk  produk.  Pengaruh  susbtrat  terhadap aktvitas enzim dapat dilihat pada Gambar 4.
Komunikasi Singkat
Terakreditasi Dikti: 80/DIKTI/Kep/2012
0.079 ± 0.105 0.128 ± 0.035 0.144 ± 0.019
0.278 ± 0.135 0.275 ± 0.303 0.250 ± 0.002 0.167 ± 0.115
0.167 ± 0.058 0.000 0.050 0.100 0.150 0.200 0.250 0.300 0.350 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 Ak tif ita s En zim (U /m L) Konsentrasi Substrat % 0.275 ± 0.035  0.233 ± 0.058  0.169 ± 0.034 0.250 ± 0.071  0.217 ± 0.501
0.550 ± 0.300 0.075 ± 0.035 0.004
± 0.076
0.00 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 0.60 control Na Ca² ⁺ Zn² ⁺ Mn² ⁺ Mg² ⁺ Cu² ⁺ Fe³ ⁺
U nit A kt iv ita s (U /m L) Ion Logam Inhibitor
Gambar 4.  Pengaruh  konsentrasi  substrat  terhadap  aktivitas  enzim katepsin ikan patin
Gambar 4 menunjukkan bahwa aktivitas katepsin ikan patin optimum  pada  konsentrasi  substrat  2%  dengan  aktivitas sebesar  0.278  U/mL.  Semakin  banyak  molekul  substrat  yang tersedia,  semakin  sering  molekul-molekul  tersebut  memasuki sisi  aktif  molekul  enzim.  Akan  tetapi,  terdapat  keterbatasan dalam  memacu  kecepatan  reaksi  dengan  cara  menambahkan lebih  banyak  lagi  substrat  ke  suatu  konsentrasi  enzim  yang tetap.  Pada  suatu  titik  tertentu,  konsentrasi  substrat  itu  akan menjadi  cukup  tinggi  sehingga  semua  sisi  aktif  pada  semua molekul  enzim  sudah  ditempati  oleh  substrat.  Segera  setelah produk meninggkalkan sisi aktif, molekul substrat yang lain akan masuk.  Pada  konsentrasi  substrat  seperti  ini,  enzim  itu dikatakan mengalami kejenuhan, dan laju reaksi ditentukan oleh kecepatan sisi aktif mengubah substrat menjadi produk. Ketika suatu enzim telah jenuh, satu-satunya cara untuk meningkatkan produktivitas  ialah  menambahkan  lebih  banyak  lagi  enzim (Campbell, 2002).

## Pengaruh ion logam terhadap aktivitas enzim
Aktivator  dan  inhibitor  secara  kimiawi  tidak  dapat  dibeda- kan.  Namun  dapat  dibedakan  setelah  berinteraksi  dengan enzim.  Aktivator  berikatan  dengan  enzim  dan  menyebabkan kenaikan kecepatan reaksi enzim, sedangkan inhibitor berikatan dengan enzim dan menyebabkan penurunan kecepatan reaksi (Suhartono,  1989).  Pengaruh  ion  logam  terhadap  aktivitas enzim katepsin sebagaimana tertera pada Gambar 5.
Gambar 5. Pengaruh ion logam konsentrasi 5 mM terhadap aktivitas enzim katepsin
Berdasarkan Gambar 5 dapat dilihat bahwa ion logam Cu 2+ , Ca 2+ , Mn 2+ dan Fe 3+ dapat menjadi penghambat aktivitas enzim. Ion  logam  Fe 3+ memberikan  nilai  penghambatan  yang  paling besar.  Perbandingan  nilai  control  aktivitas  enzim  dengan  nilai aktivitas enzim yang telah ditambahkan ion logam dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1.  Efek  penambahan  ion  logam  terhadap  aktivitas  enzim katepsin Konsentrasi Logam (5 mM) Relatif Activity (%) Kontrol 100 Na 85 Ca 2+ 62 Zn 2+ 91
Mn 2+
79
Mg 2+
200 Cu 2+
27
Fe 3+
1
Balti et  al. (2010)  menyatakan  bahwa  keberadaan  ion logam  Mg 2+ ,  Ni 2+ ,  Zn 2+ ,  Cu 2+ ,  Cd 2+ ,  Sr 2+ ,  and  Co 2+ akan meningkatkan  aktivitas  enzim  katepsin  D  yang  berasal  dari hepatopankreas sotong. Sementara keberadaan ion logam Na + , K + , dan  Ca 2+ tidak akan berpengaruh terhadap aktivitas enzim katepsin D. Enzim katepsin D dari hepatopancreas sotong juga mengalami penurunan aktivitas dengan penambahan ion logam Ba 2+ , Mn 2+, Hg 2+ dan Fe 3+ . Sadana et al. (2003) menyebutkan bahwa logam Hg 2+ , Ca 2+ , Cu 2+ ,  Li 2+ ,  K + ,  Cd 2+ ,  Ni 2+ ,  Ba 2+ ,  Co 2+ dan  Sn 2+ dapat  meng- hambat aktivitas enzim katepsin L dari goat brain . Kerja enzim dapat  dihambat  oleh  zat  penghambat  atau  inhibitor.  Inhibitor non-kompetitif  tidak  bersaing  dengan  substrat  untuk  berikatan dengan enzim. Inhibitor jenis ini akan berikatan dengan enzim pada  sisi  yang  berbeda  (bukan  sisi  aktif).  Jika  telah  terjadi ikatan  enzim-inhibitor,  sisi  aktif  enzim  akan  berubah  sehingga substrat tidak dapat berikatan dengan enzim. Banyak ion logam bekerja  sebagai  inhibitor  non-kompetitif  (Firmansyah et  al . 2007).  Beberapa  enzim  dan  inhibitor  memerlukan  ion-ion  ter- tentu  untuk  menjaga  kestabilan  aktivitasnnya,  ion-ion  tersebut dapat bertindak sebagai inhibitor pada kosentrasi tertentu, tetapi dapat  juga  menjadi  aktivator  pada  kosentrasi  berbeda.  Ion logam dapat membentuk suatu komplek dengan subtrat dan sisi aktif  enzim  sehingga  mengabungkan  keduanya  dan  bentuk aktif.  Ion  logam  juga  berfungsi  sebagai  senyawa  penarik  kuat elektron  pada  tahap  tertentu  dalam  siklus  katalitik  (Lehninger, 1993).

## KESIMPULAN
Enzim  katepsin  berhasil  diekstraksi  dari  daging  ikan  patin. Ekstrak  kasar  enzim  tersebut  memiliki  aktivitas  sebesar  0.278 U/mL  dan  aktivitas  spesifik  0.907  U/mg.  Karakteristik  ekstrak kasar  enzim  katepsin  adalah  sebagai  berikut:  memiliki  suhu optimum  50°C,  pH  optimum  6,  dan  substrat  optimum  2%. Aktivitas enzim katepsin dipengaruhi oleh adanya ion logam. Ion logam  Fe 3+ ,  Cu 2+ ,  Mn 2+ ,  Ca 2+ menghambat  aktivitas  ekstrak
Komunikasi Singkat
kasar  enzim  katepsin,  sedangkan  ion  Mg 2+ meningkatkan aktivitas enzim tersebut.

## DAFTAR PUSTAKA
Balti F, Hmidet N, Jellouli K, Nnedjar-Arroume N, Guillochon D, Nasri  M.  2010.  Cathepsin  D  from  hepatopancreas  of  the cuttlefish (Sepia officinalis): purification and characterization. J Agr Food Chem 19: 10623–10630. DOI: 10.1021/jf102233d.
Campbell  N.  2002.  Biologi.  Rahayu,  penerjemah.  Jakarta: Erlangga. Terjemahan dari: Biology.
Cunningham E, McCarthy E, Copley L, Jackson D, Johnson D,
Dalton JP, Mulcahy G. 2010. Characterisation of cathepsin B-like  cysteine  protease  of Lepeophtheiruss  almonis.
Aquaculture 310:  38-42.  DOI:  10.1016/j.aquaculture.2010. 10.013.
Bradford  MM.  1976.  A  rapid  and  sensitive  method  for quantification of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein dye binding. Anal Biochem 72: 248-254. DOI: 10.1016/0003-2697(76) 90527-3.
Chen  L,  Sun  L.  2012.  Cathepsin  B  of  Cynoglossussemilaevis: Identification,  expression,  and  activity  analysis.  Comp Biochem  Phys  B  161:  54–59  DOI:  10.1016/j.cbpb.20 11.09.008
Dinu  D,  Dumitru  IF,  Nechifor  MT.  2002.  Isolation  and characterization  of  two  chatepsin  from  muscle  of Carassiusauratus gibelio . Rom Biotech Lett 7: 753-758.
Firmansyah R, Agus M, Umar R. 2007. Mudah dan Aktif Belajar Biologi. Bandung: Setia Purna Inves.
[KKP]  Kementrian  Kelautan  dan  Perikanan.  2011.  Statistik Kelautan dan Perikanan 2009. Jakarta.
Krause J, Tshidino  SC, Ogawa T, Watanabe Y, Oosthuizen V, Somai  B, Muramoto  K,  Naude  RJ.  2010. Purification  and partial characterization of ostrich skeletal muscle cathepsin D and its activity during meat maturation. Meat Sci 87: 196- 201. DOI: 10.1016/j.meatsci.2010.10.009.
Ladrat  DC,  Cheret  R,  Taylor  R,  Bagnis  VV.  2006.  Trends  in postmortem aging in fish: understanding of proteolysis and disorganization  of  the  myofibrillar  structure.  Crit  Rev  Food Sci Nutr 46: 409-421.
Lehninger  AL.  1993.  Dasar-Dasar  Biokimia  Jilid  1.  Jakarta: Erlangga. Terjemah dari : The Foundation of Biochemistry. Sadana  R,  Mittal  A,  Khurana  S,  Singh  H,  Kamboj  RC.  2003.
Purification  and  characterization  of  the  chatepsin  L-like Proteinase  from  goat  brain. Indian  J  Biochem  Biophy 40: 315-323.
Suhartono  MT.  1989.  Enzim  dan  Bioteknologi.  Bogor:  Pusat Antar Universitas
Stoker  HS.  2010.  General,  Organic,  and  Biological  Chemistry. USA: Cengage Learning.
Thammapat P, Raviyan P, Siriamorpon S. 2010. Proximate and fatty  acids  composition  of  muscles  and  viscera  of  asian catfish  ( Pangasiusbocourti ).  Food  Chem  122:  223–227. DOI: 10.1016/j.foodchem.2010.02.065.
Whitaker  JR.  1994.  Principles  of  Enzymology  for  The  Food Science. Second Edition. New York: Marcel Dekker, Inc.
Zhong  C,  Cai  QF,  Liu  GM,  Sun LC,  Hara  K,  Su  WJ,  Cao  MJ. 2012.  Purification  and  characterisation  of  cathepsin  L  from the skeletal muscle of blue scad ( Decapterus maruadsi ) and comparison of its role with myofibril-bound serine proteinase in the degradation of myofibrillar proteins. Food Chem 133: 1560–1568. DOI: 10.1016/j.foodchem.2012.02.050.