ejournal2.undip.ac.id/index.php/baf/index
Histopatologi Hepar Tikus Wistar (Rattus norvegicus) Jantan setelah Pemberian Teh Kombucha Konsentrasi 100% dengan Waktu Fermentasi yang Berbeda
Liver Histopathology of Male Wistar Rats ( Rattus norvegicus ) after 100% Concentration Kombucha’s Tea Treatment with different days fermentation
Agung Putra Nugraha 1 *, Sri Isdadiyanto 2 , Silvana Tana 2
1) Program Studi Biologi, Departemen Biologi, Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Diponegoro
2) Departemen Biologi, Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Diponegoro Jl. Prof. Soedarto, SH, Tembalang, Semarang *Email : nugraha_jackers@yahoo.com
Diterima 29 Desember 2017 / Disetujui 26 Januari 2018

## ABSTRAK
Hepar  berfungsi  sebagai  biotransformasi,  penyimpanan  nutrisi  dan  detoksifikasi  racun  yang  datang  melalui makanan  dan  minuman.  Minuman  fermentasi  dapat  mempengaruhi  kondisi  jaringan  hepar  dan  bobot  badan karena hasil dari metabolit sekunder adalah alkohol dan beberapa asam organik. Penelitian ini dilakukan untuk mengkaji  dan  menganalisis  pengaruh  perlakuan  teh  kombucha  fermentasi  6  (P1),  9  (P2)  dan  12  (P3)  hari fermentasi konsentrasi 100% terhadap jaringan hepar, diameter hepatosit, bobot badan, konsumsi pakan dan minum. Penelitian ini menggunakan 16 ekor tikus Wistar jantan terdiri atas 4 perlakuan dan 4 kali ulangan. Perlakuan penelitian ini terdiri dari P0 : perlakuan kontrol; P1, P2 dan P3 berturut-turut adalah perlakuan teh kombucha  fermentasi  6,  9  dan  12  hari  konsentrasi  100%.  Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan  Acak Lengkap (RAL). Variabel yang diukur  pada penelitian ini adalah diameter hepatosit, bobot badan, konsumsi pakan  dan  minum  pada  hewan  uji.  Data  yang  diperoleh  dianalisis  menggunakan Analysis  of  Variance (ANOVA) pada taraf kepercayaan 95% dan apabila terdapat perbedaan nyata, dilanjutkan uji Duncan. Hasil analisis data menunjukkan bahwa teh kombucha fermentasi 6, 9 dan 12 hari konsentrasi 100% tidak memiliki perbedaan  nyata  terhadap  seluruh  variabel.  Histologi  hepar  terlihat  normal  dan  tidak  menunjukkan  ciri-ciri kerusakan sel. Hal ini dapat disimpulkan bahwa teh kombucha dapat dikonsumsi aman oleh mammalia karena tidak menimbulkan kerusakan hepar pada hewan model penelitian.
Kata kunci : histopatolgi, hepar, teh kombucha, bobot badan, tikus wistar ( Rattus norvegicus)

## ABSTRACT
Liver  served  as  biotransformation  and  storage  of  nutrients  as  well  as  detoxification  of  toxins  that  came through food and drink. Fermented drinks could affect secondary metabolic conditions such as organic acid and  alcohol.  This  research  was  conducted  to  study  and  analyze  the  influence  of  kombucha  fermentation  6 (P1), 9 (P2) and 12 (P3) days fermentation with 100% concentration on hepatic tissue, hepatocyte diameter, body weight, feed and drink consumption. This study used 16 male Wistar rats consisted of 4 treatments and 4 repeat.  The  treatment  of  this  study  consisted  of  P0:  control  treatment;  P1,  P2  and  P3  were  treatment  of kombucha fermented tea 6, 9 and 12 days of 100% concentration respectively. This research used Completely Randomized  Design  (RAL).  The  variables  measured  in  this  study  were  hepatocyte  diameter,  body  weight, feed  and  drink  consumption  in  animal  test.  The  data  obtained  were  analyzed  using  Analysis  of  Variance (ANOVA) at 95% confidence level. The result of data analysis showed that kombucha fermentation 6, 9 and 12 days of 100% concentration had no significant difference to all variables. Histology of the liver were not indicate  the  presence  of  tissue-damaged  features  such  as  chronic  inflammation  (cirrhosis).  It  could  be concluded that tea kombucha was safe for consumption by mammalia because it was not affect liver damage of reserarch’s animal model.
Keywords : histopathology, hepar, kombucha tea, weight, wistar rat ( Rattus norvegicus)

## PENDAHULUAN
Hepar merupakan salah satu organ di dalam tubuh  yang  mempunyai  peran  penting  sebagai penetral  racun.  Hepar  bertanggung  jawab  atas biotransformasi  zat-zat  berbahaya  menjadi  zat-zat yang tidak berbahaya. Proses ini menyebabkan sel hepar  mudah  sekali  mengalami  kerusakan  baik berupa  kerusakan  struktur  sel  maupun  terjadi gangguan  fungsi  pada  hepar  (Aisyah,  2015).  Sel– sel yang terdapat di hepar antara lain hepatosit dan sel makrofag yang disebut sebagai sel Kupffer dan sel  Ito.  Sel  hepatosit  berderet  secara  radier  dalam lobulus  hepar  dan  membentuk  lapisan  1-2  sel serupa  dengan  susunan  bata.  Lempeng  sel  ini mengarah  dari  tepian  lobulus  ke  pusatnya  dan beranastomosis  secara  bebas  membentuk  struktur seperti  labirin  dan  busa.  Celah  diantara  lempeng- lempeng  ini  mengandung  kapiler  yang  disebut sinusoid  hepar.  Aliran  darah  menuju  ke  vena sentralis  dari  portal triad ,  sedangkan  aliran bile menuju  ke  portal triad dari  dalam  lobulus.  Sel ito ialah  sel  yang  berada  di  daerah disse berperan sebagai penimbun lipid (Junquiera et al, 2007).
Penelitian Afdina (2016) menjelaskan bahwa  beberapa  senyawa  herbal  yang  masuk  ke dalam  tubuh  akan  mengalami  proses  absorbsi, distribusi,  metabolisme  dan  ekskresi.  Hepar merupakan  organ  utama  metabolisme  yang  sering mengalami  kerusakan  karena  senyawa  itu  sendiri atau  penimbunan  metabolit.  Senyawa  akan mengalami  metabolisme  di  hepar  dan  akan  terjadi perubahan  struktur  kimia  yang  dikatalisis  oleh enzim yang dihasilkan oleh mikrosom sel hepatosit yang  disebut  biotransformasi.  Senyawa  obat  atau herbal  akan  diubah  menjadi  metabolit  yang biasanya  kurang  aktif  dari  obat  asalnya.  Proses metabolisme  obat  tidak  selalu  merupakan  proses detoksikasi  obat  atau  eliminasi  persenyawaan tersebut,  kadang-kadang  terjadi  transformasi  obat menjadi  senyawa  intermediet  yang  reaktif  dan toksik  terhadap  hepar.  Cedera  hepar  akut  akan menyebabkan perubahan metabolisme yang kemudian akan mengakibatkan perubahan struktur dan perubahan fungsi.
Teh kombucha merupakan minuman perpaduan rasa manis dan asam yang menyegarkan hasil  dari  fermentasi  beberapa  bakteri  dan  ragi
membentuk  ―jamur  teh‖  (Chen  dan  Liu,  2000). Teh  kombucha  disiapkan  dengan  menempatkan kultur  kombucha  (teh  jamur)  menjadi  kaldu  teh manis  untuk  proses  fermentasi.  Jika  kultur kombucha  dibudidayakan  sesuai  dengan  resep standar  dengan  ― black  tea ‖,  dipermanis  dengan sukrosa,  ternyata  substrat  ini  menjadi  minuman yang  disebut  minuman  teh  jamur  menyegarkan dengan  nilai  gizi  yang  tinggi  dan  berkhasiat (Loncar et  al ,  2000).  Teh  kombucha  adalah  nama umum yang diberikan untuk pertumbuhan simbiosis  bakteri  asam  asetat  dan  spesies  ragi osmofilik  di  membran  jamur  yang  dibudidayakan dalam  teh  manis  (Jarrell,  2000) . Teh  kombucha bukanlah  sebuah  ―jamur‖  melainkan  asosiasi  ragi dan bakteri (Jayabalan et al , 2014).
Jayabalan et al . (2014) menyebutkan bahwa beberapa  penelitian  mengaitkan  manfaat  dari  teh kombucha, salah satunya ialah sebagai hepatoprotector. Teh  kombucha  telah  dipelajari hepatoprotektifnya  terhadap  berbagai  polutan lingkungan  pada  model  hewan  dan  sel line . Penelitian  ini  telah  diuji  untuk  mengkaji hepatoprotektif  teh  kombucha  (disiapkan  dari  teh hitam) terhadap parasetamol (Pauline et al., 2001), karbon  tetra  klorida  (Murugesan et  al, 2009), aflatoksin  B1  (Jayabalan et  al, 2010).  Berbanding terbalik  dengan  Kusumah  (2008)  menjelaskan bahwa  pemberian  teh  kombucha  per  oral  terjadi perubahan struktur histologi sel hepar pada semua tingkat  dosis  yaitu  dosis  0,26  ml  2x/hari  0,52  ml 2x/hari  0,39  ml  2x/hari  menghasilkan  degenerasi parenkimatosa, degenerasi hidropik sampai dengan nekrosis. Berdasarkan latar belakang di atas, perlu dilakukan  penelitian  pemberian  teh  kombucha terhadap  hewan  uji  tikus  putih  sebagai  uji  pra- klinis  untuk  mengetahui  dampak  yang  sebenarnya terjadi pada hepar setelah perlakuan.

## METODE PENELITIAN
Penelitian dilakukan di Laboratorium Biologi  Struktur  dan  Fungsi  Hewan,  Departemen Biologi Fakultas Sains dan Matematika,
Universitas  Diponegoro  Semarang,  pada  bulan Mei sampai Juli 2016. Menggunakan Tikus Wistar (Rattus norvegicus) jantan sebanyak 16 ekor umur 2  bulan,  sedang  untuk  bahan  perlakuan  yaitu  Teh
Histopatologi Hepar Tikus Wistar (Rattus norvegicus) Jantan setelah Pemberian Teh Kombucha Konsentrasi 100% dengan Waktu Fermentasi yang Berbeda
kombucha  kadar  100%  yang  difermentasi  selama 6,  9  dan  12  hari  pada  suhu  25 o C  per  oral  dengan spuit injeksi ujung berkanul. Adapun alat-alat yang digunakan  yaitu  20  kandang  individu  yang dilengkapi dengan tempat minum dan pakan, gelas ukur, timbangan digital dan alat diseksi.
Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan Acak  Lengkap  dengan  4  perlakuan  dan  4  ulangan yaitu  :  P0  =  kontrol,  tanpa  tambahan  teh kombucha, P1 = air minum + 1,8 ml teh kombucha kadar 100% pagi dan sore fermentasi 6 hari, P2 = air  minum  +  1,8  ml  teh  kombucha  kadar  100% pagi dan sore fermentasi 9 hari, P3 = air minum + 1,8  ml  teh  kombucha  kadar  100%  pagi  dan  sore fermentasi  12  hari.  Pakan  dan  minum  diberikan secara ad  libitum .  Variabel  penelitian  terdiri  dari variabel bebas dan variabel terikat sebagai berikut :  Variabel  bebas  adalah  perlakuan  oral  teh kombucha fermentasi 6, 9 dan 12 hari konsentrasi 100%.  Variabel  terikat  meliputi  struktur  histologi hepar, bobot badan, konsumsi pakan dan konsumsi minum.  Gambaran  struktur  histologi  hepar dianalisa  secara  deskriptif.  Perhitungan  diameter hepatosit  dilakukan  dengan  cara  memilih  secara acak  5  hepatosit  terdekat  pada  vena  sentralis, kemudian dirata-rata. Setiap hepatosit dijumlahkan sisi terlebar + sisi tersempit, lalu dibagi 2. Analisis data  diameter  hepatosit,  bobot  badan,  konsumsi pakan  dan  minum  akan  dilakukan  uji  normalitas Shapiro-wilk  (Oktaviana,  2013),  pada  taraf kepercayaan 95% dilanjutkan uji ANOVA (Mattjik dan  Sumertajaya,  2006) dan  apabila terdapat  beda
nyata, dilanjutkan dengan uji Duncan. Seluruh data kuantitatif  akan  dianalisa  menggunakan  bantuan aplikasi SPSS 16 (Saputro, 2013).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  analisis  terhadap  diameter  hepatosit, bobot  badan,  konsumsi  pakan  dan  konsumsi minum  tikus  Wistar  jantan  pada  perlakuan  teh kombucha  konsentrasi  100%  dengan  waktu fermentasi  yang  berbeda  disajikan  pada  Tabel  1. Teh  kombucha  konsentrasi  100%  dengan  waktu fermentasi  6,  9  dan  12  hari  menunjukkan  hasil yang  tidak  berbeda  nyata.  Diameter  hepatosit menunjukkan  hasil  tidak  berbeda  nyata.  Teh kombucha  merupakan  fermentasi  yang  dilakukan secara  aerob,  sehingga  menghasilkan  metabolit sekunder  berupa  alkohol  (Loncar et  al ,  2000).
Gambar  1.  menunjukkan  kondisi  hepar  kontrol pada  perbesaran  100  kali  (A)  dan  200  kali  (B). Lumen  vena  sentralis  ( VS )  dan portal  triad ( PT ) terlihat jelas pada gambar mikroskopis perbesaran 100  kali.  Hepatosit  ( H )  dan  sinusoid  ( S )  yang merupakan  saluran  antara portal  triad dan  vena sentralis terlihat dengan jelas pada perbesaran 200 kali.  Pewarnaan  hematoksilin-eosin  mewarnai merah  muda  untuk  sitoplasma  dan  biru  tua  untuk inti.  Hepatosit  dapat  terlihat  pada  perbesaran  400 kali  seperti  pada  Gambar  C.  Hepatosit  pada  tanda panah  terlihat  jelas  inti  bewarna  biru  tua  dan berbentuk  bulat.  Struktur  inti  dapat  dilihat  untuk mengidentifikasi kerusakan sel.
Tabel  1. Hasil analisis rata-rata bobot badan,
diameter hepatosit, konsumsi pakan dan konsumsi minum
tikus Wistar setelah perlakuan teh
kombucha konsentrasi 100% dengan waktu fermentasi yang berbeda
Variabel Perlakuan P0 P1 P2 P3 Diameter Hepatosit (µm) 12,96 a ± 2,76 15,67 a ± 3,23 15,45 a ± 2,29 12,13 a ± 2,17 Bobot badan (g) 195,5 a ± 3,35 196 a ± 2,45 207,5 a ± 9,23 209,5 a ± 2,22 Konsumsi pakan(g) 14,92 a ± 1,15 14,22 a ± 1,59 14.31 a ± 2,57 13,85 a ± 0,92 Konsumsi minum(ml) 28,58 a ± 4,79 25,53 a ± 0,57 25,8 a ± 2,16 26,5 a ± 1,91
Keterangan  :  Angka  dengan  superskrip  yang  sama  pada  satu  baris  menunjukkan  tidak  berbeda  nyata  pada  taraf kepercayaan 95%.
Price  dan  Lorraine  (2006)  menjelaskan  bahwa metabolisme  hepar  dapat  terganggu  karena substansi  toksik  seperti  alkohol.  Hal  ini  akan berdampak  pada  mekanisme  kerusakan  sel  hingga nekrosis. Chen and Liu (2000) menjelaskan bahwa pembuatan  teh  kombucha  dilakukan  dengan  cara fermentasi aerob. Fermentasi ini dilakukan dengan melibatkan unsur O 2 dalam proses
metabolismenya. Ethanol ialah salah satu metabolit  sekunder  yang  dihasilkan  oleh  proses fermentasi.  Kandungan  ethanol  meningkat  seiring berjalannya  waktu  dan  menghasilkan  kandungan tertinggi  ethanol  5,5g/L  atau  0,5%  diikuti penurunan  lambat  kandungan  ethanol  di  waktu berikutnya.

## Gambar 1. Struktur mikroskopis hepar tikus Wistar pada kontrol, pewarnaan HE
Keterangan : A. Perbesaran 100x, B. Perbesaran 200x, C. Perbesaran 400x, VS : vena sentralis, H : hepatosit, PT : portal triad, S : sinusoid, SB : sel binukleat
Jayabalan et  al. (2014)  menjelaskan  bahwa kandungan  ethanol  pada  proses  fermentasi  6  hari menghasilkan kandungan ethanol maksimal. Kemenperin RI (2017) menjelaskan bahwa standar minuman  beralkohol  di  Indonesia  untuk  golongan A  adalah  sama  dengan  atau  kurang  dari  5% mendapatkan izin untuk  melakukan penjualan dan masih tergolong aman. Zakhari (2006) menjelaskan bahwa alkohol yang masuk ke dalam tubuh  akan  mengalami  serangkaian  proses biokimia.  Alkohol  yang  dikomsumsi  90%, diantaranya  akan  dimetabolisme  oleh  tubuh terutama  hati  oleh  enzim  alkohol  dehirogenase (ADH) dan koenzim nikotinamid-adenin- dinokleotida (NAD) menjadi asetaldehid,
kemudian  oleh  enzim  aldehida  dehidrogenase (ALDH) diubah menjadi asam asetat. Asam asetat dioksidasi menjadi CO 2 dan H 2 O. Piruvat, levulosa (fruktosa), gliseraldehida dan alanin akan mempercepat  metabolism  alkohol.  Alkohol  akan diubah menjadi asetaldehid, kemudian akan diubah menjadi  asetat  oleh  aldehid  dehidrogenase  di dalam mitokondria. Pemakaian alkohol yang lama akan  menimbulkan  perubahan  pada  mitokondria, yang  menyebabkan  berkurangnya  kapasitas  untuk oksidasi  lemak  hingga  menyebabkan  terjadinya nekrosis.
Strukur  histologi  pada  P1,  P2  dan  P3  tidak memiliki perbedaan nyata dengan kontrol. Preparat ketiga  perlakuan  dapat  dilihat  pada  Gambar  2,
Histopatologi Hepar Tikus Wistar (Rattus norvegicus) Jantan setelah Pemberian Teh Kombucha Konsentrasi 100% dengan Waktu Fermentasi yang Berbeda
Gambar  3  dan  Gambar  4.  Bobot  badan,  konsumsi pakan  dan  konsumsi  minum  juga  tidak  memiliki
perbedaan  yang  nyata.  Histogram  bobot  badan dapat dilihat pada Gambar 4.
Gambar  2.  Struktur  mikroskopis  hepar  tikus  Wistar  pada  perlakuan  teh  kombucha  fermentasi 6 hari konsentrasi 100% (P1) pewarnaan HE
Keterangan  :  A.  Perbesaran  100x,  B.  Perbesaran  200x,  C.  Perbesaran  400x,  VS  :  vena  sentralis,  S  :  sinusoid,  SB  :  sel binukleat
Gambar  3.  Struktur  mikroskopis  hepar  tikus  Wistar  pada  perlakuan  teh  kombucha  fermentasi  9  hari konsentrasi 100% (P2) pewarnaan HE
Keterangan  :  A.  Perbesaran  100x,  B.  Perbesaran  200x,  C.  Perbesaran  400x,  VS  :  vena  sentralis,  S  :  sinusoid,  SB  :  sel binukleat
Gambar 4. Struktur mikroskopis hepar tikus Wistar pada perlakuan teh kombucha fermentasi 12 hari konsentrasi 100% (P3) pewarnaan
HE (dokumentasi pribadi).
Keterangan : A. Perbesaran 100x, B. Perbesaran 200x, C. Perbesaran 400x, VS : vena sentralis, H : hepatosit, PT : portal triad, S : sinusoid, SB : sel binukleat
Preparat  P1,  P2  dan  P3  tidak  memiliki perbedaan  dengan  kontrol  (P0),  yaitu  seluruh preparat  tidak  menunjukkan  adanya  perbedaan yang nyata terhadap perlakuan. Hal ini menunjukkan bahwa variabel bebas tidak mempengaruhi  variabel  terikat,  artinya  perlakuan tidak  mempengaruhi  diameter  hepatosit,  bobot badan,  konsumsi  minum  dan  konsumi  pakan. Jayabalan et  al. (2014)  menjelaskan  bahwa  teh kombucha  tidak  dikategorikan  sebagai  substansi toksik.
Beberapa  preparat  menunjukkan  adanya proses  regenerasi  sel  dengan  adanya  sel  binukleat atau  sel  yang  memiliki  dua  inti  yang  saling berhimpitan.  Anindyaputri  (2017)  menjelaskan bahwa  proses  regenerasi  bisa  terjadi  pada hepatosit,  sel  parenkim  hepar  yang  mampu menggandakan  diri.  Hepatosit  bekerja  mirip  sel induk  (sel  punca)  artinya  hepatosit  dapat menggandakan diri. Setelah hepatosit menggandakan  diri,  sel  lainnya  juga  akan mengikuti  dan  memecah  jadi  beragam  sel  yang berbeda.  Sel-sel  baru  tersebut  lantas  membentuk
sebuah  struktur  baru,  menyerupai  lobulus  hepar baru.  Kemampuan  ini  hanya  bisa  dilakukan hepatosit  jika  kerusakan  yang  terjadi  pada  hepar ialah kerusakan ringan.  Penelitian sebelumnya terdapat  pendapat  yang  berbeda  antara  Jayabalan et al . (2014) dan Kusumah (2008). Jayabalan et al. (2014)  menjelaskan  bahwa  teh  kombucha  dengan substrat  teh  hitam  dapat  memperbaiki  kondisi hepar  yang  rusak  karena  kemampuan  teh kombucha  yang  merupakan  hepatoprotektif  atau substansi  yang  dapat  mendukung  kerja  hepar dengan  cara  mencegah  hepar  dari  kerusakan selular.  Kusumah  (2008)  menjelaskan  bahwa  teh kombucha pada dosis 0,26 ml, 0,39 ml dan 0,52 ml pada hewan uji mencit BALB/c dapat menyebabkan  terjadinya  perubahan  gambaran struktur  histologis  hepar  berupa  degenerasi parenkimatosa, degenerasi hidropik dan nekrosis.
Permana (2010) menyatakan bahwa rata-rata pemberian  pakan  harian  untuk  tikus  putih Rattus norvegicus selama  periode  pertumbuhan  dan reproduksi  mendekati  15-20g  untuk  jantan. Kebutuhan  pakan  bagi  seekor  tikus  setiap  harinya
Histopatologi Hepar Tikus Wistar (Rattus norvegicus) Jantan setelah Pemberian Teh Kombucha Konsentrasi 100% dengan Waktu Fermentasi yang Berbeda
kurang  lebih  sebanyak  10%  dari  bobot  tubuhnya jika pakan tersebut berupa pakan kering dan dapat ditingkatkan sampai 15% dari bobot tubuhnya jika pakan  yang  dikonsumsi  berupa  pakan  basah. Kondisi  dimana  pakan  diberikan  dalam  jumlah yang sangat terbatas maka tikus dapat mengurangi konsumsi  energinya,  tetapi  jika  nafsu  makan berlebih,  tikus  dapat  meningkatkan  penggantian energi.
Wolfenshon  and  Lloyd  (2013)  menyatakan bahwa  kebutuhan  minum  tikus  10ml/100g  berat badan. Hal ini membuktikan bahwa pemberian teh kombucha  tidak  memberikan  pengaruh  yang bermakna  terhadap  konsumsi  minum  tikus  putih sehingga  konsumsinya  tetap  normal.  Anugrah (2005)  menyatakan  bahwa  semakin  lama  waktu fermentasi  teh  kombucha  maka  semakin  banyak kandungan asam-asam organik sehingga menurunnya palatabilitas. Muliani (2015) menjelaskan  bahwa  kadar  teh  kombucha  yang semakin  tinggi  menyebabkan  konsumsi  minum berkurang,  karena  kadar  teh  kombucha  yang semakin  tinggi  menyebabkan  air  minum  terasa semakin asam sehingga akan mengurangi konsumsi minum.
Hasil  penelitian  dan  pembahasan  di  atas menyimpulkan  bahwa  konsumsi  pakan,  konsumsi minum,  bobot  badan  dan  diameter  sel  hepatosit pada jaringan hepar tidak berbeda nyata, sehingga keempat  variabel  tersebut  tidak  dipengaruhi  oleh ketiga perlakuan.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian,  maka  dapat disimpulkan  bahwa  pemberian  1,8  ml  teh kombucha fermentasi 6, 9, dan 12 hari konsentrasi 100%  selama  35  hari  tidak  mempengaruhi diameter  hepatosit  hepar,  bobot  badan,  konsumsi minum dan konsumsi pakan. Hal ini menunjukkan bahwa  kombucha  dapat  dikonsumsi  aman  oleh mammalia  karena  tidak  menimbulkan  kerusakan hepar pada hewan model penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
Afdina,  M.  2016.  Peran  dan  Fungsi  Sel  yang
terdapat
pada
Organ Hepar.
Skripsi .  Bandung.  Sekolah  Tinggi  Farmasi Indonesia.
Aisyah,  S.,  H.  Budiman.,  D.  Florenstina.,  dan  D. Aliza.  2015.  Efek  pemberian  Minyak Jelantah terhadap Gambaran Histopatologis Hati TikusPutih. Jurnal Media Veterinaria. 9(1) : 23.
Anindyaputri,  I.  2017.  Hepar  Manusia:Regenerasi Sel.Jakarta.Hello  Sehat  Media  Informasi Kesehatan.
Anugrah,  S.  T.  2005.  Pengembangan    Produk Kombucha  Prebiotik  Berbahan  Baku  Teh Hitam  ( Camelia  Sinensis ). Skripsi .  Fakultas Teknologi  Pertanian.  Institut  Pertanian Bogor.
Chen  and  Liu,  2000.  Changes  in  major components  of  tea  fungus  metabolites during  prolonged  fermentation. Journal Applied Microbiology 89:834–9.
Janquiera, L. C., and J. Carnaeiro. 2002. Histologi Dasar.  Alih  Bahasa  Adji  Dharma.  Penerbit Buku Kedokteran, Jakarta.
Jarrel, T., and J. W. Bennett. 2000. The Kombucha
Consortia of Yeast and Bacteria. Journal Mycologist. 14:166-70.
Jayabalan,  R.,  S.  Baskaran.,  S.  Marimuthu.,  K. Swaminathan., and S. E. Yun. 2010 . Effect of  Kombucha  on  Aflatoxin  B1  -Induced
Acute Hepatotoxicity in Albinorats—Prophylactic and Curative Studies. Journal Applied Biology Chemical 53:407–16. Jayabalan,  R., V.  Radomir.,  E.  Malbasa.,  E.  S. Loncar., S. Jasmina., S. Muthuswamy.2014.Comprehensiv  Reviews in Food Science and Food Safety. Volume 13. A review of Kombucha Tea-Microbiology,Composition, Fermentation,  Benefical  Effect,  Toxicity, and Tea Fungus. Journal Institute of Food Technologists . Doi : 10.1111/1541 4337.12073.
Kemenperin.go.id/artikel/8338/Standar  kandungan minuman  alkohol  berlabel  SNI.  Diakeses 25 Desember 2017
Kusumah,  A.  2008.  Pengaruh  Pemberian  Teh
Kombucha Per Oral Dengan Dosis BertingkatTerhadap  Gambaran  Histologi Hepar  Mencit  Balb/c. Skripsi .  Semarang  : Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro. Loncar, E. S., S. E. Petrovic., R. V. Malbasa., and R.  M.  Verac.  2000.  Biosynthesis  of Glucuronic  Acid  by  Means  of  Tea  Fungus. Comprehensive  Reviews  in  Food  Science and Food Safety . Nahrung 44:138–9.
Mattjik,  A.  A.,  dan  I.  M.  Sumertajaya.    2006. Perancangan  Percobaan  dengan  Aplikasi
SAS  dan  Minitab.  Ed.  Ke-3.  IPB-Press. Bogor. Muliani,  H.  2015.  Kadar  Kolesterol  Hepar  Ayam Broiler setelah Pemberian Teh Kombucha. Buletin  Anatomi  dan  Fisiologi
Volume XXIII, Nomor 2 .
Murugesan,  G.  S.,  M.  Sathishkumar.,  R.
Jayabalan., A. R. Binupriya., K.  Swaminathan.,  and  S.  E.  Yun.  2009. Hepatoprotectiveand  curative  properties    of
Kombucha  tea  against  carbon  tetrachloride -induced toxicity. Journal Microbiol
Biotechnology 19:397 –402.
Oktaviana,  2013.  Uji  Normalitas  Berdasarkan
MetodeAndersonDarling.  FMIPA  UNY.
Yogyakarta.
Pauline, T., P. Dipti., B. Anju., S. Kavimani., S. K.
Sharma.,  A.  K.  Kain.,  S.  K.  Sarada.,  M. Sairam., G. Ilavazhagan., K. Devendra., and W.  Selvamurthy.  2001.  Studies  on  toxicity, anti-stress and hepato-protectivepropertiesof Kombucha  tea .  Biomed  Environtment Science 14:207–13.
Permana,    Z.  2010.  Konsumsi,  Kecernaan  dan Konsumsi Tikus Putih ( Rattus norvegicus ) yang Disuplementasi Biomineral Cairan Rumen dalam Ransum.  Skripsi.  Fakultas  Peternakan. InstitutPertanianBogor.
Price,  S.  A.,  dan  M.  W.  Lorraine.,  2006. Patofisiologi  :  Konsep  Klinis  Proses-Proses Penyakit. Edisi 6. Volume 1. Jakarta : EGC.
Saputro,  R.  2013.  Statistik  Terapan  :  Ilmu Kesehatan Masyarakat . Padang Stikes PerintisSumatera Barat.
Wolfenshon.,  and  Lloyd.  2013.  Handbook  of
Laboratory Animal Management and Welfare,  4th  ed ., Wiley-Blackwell  :  West
Sussex, 234.
Zakhari,  S.  2006.  Overview:  how  is  alcohol metabolized  by  the  body  ?.  National Institute on
Alcohol  Abuse  and  Alcoholism  (NIAAA) 5635, Fisher Lane. MSC 9304 Bethesda.