## STABILITAS VITAMIN D3 PADA DADIH (SUSU KERBAU FERMENTASI)
Sari Bema Ramdika 1,2* , Diana Nur Afifah 3 , Anang Mohamad Legowo 4 , Muflihatul Muniroh 5 , Yora Nindita 6 , Endang Mahati 6
1 Program Studi Gizi, Fakultas Kesehatan Masyarakat, Universitas Sriwijaya, Palembang
2 Magister Ilmu Gizi, Fakultas Kedokteran, Universitas Diponegoro, Semarang 3 Departemen Ilmu Gizi, Fakultas Kedokteran, Universitas Diponegoro, Semarang 4 Program Studi Teknologi Pangan, Fakultas Peternakan dan Pertanian, Universitas Diponegoro, Semarang
5 Departemen Fisiologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Diponegoro, Semarang 6 Departemen Farmakologi dan Terapi, Fakultas Kedokteran, Universitas Diponegoro, Semarang
*Korespondensi dengan penulis (saribemaramdika@fkm.unsri.ac.id)

## Abstract
Vitamin D deficiency and inadequacy is a worldwide problem that can cause serious health problems.  Vitamin  D  reduce  the  risk  of  osteoporosis,  cancer,  diabetes  mellitus,  and cardiovascular  disease.  Vitamin  D  is  obtained  from  four  sources  such  as  sun  exposure, food, supplements and fortification food. The research was conducted in October 2019. The purpose of this study was to see the stability of vitamin D3 in dadih during storage. The High Performance Liquid Chromatogaphy (HPLC) method was used to calculate vitamin D3 levels in fortified dadih. Quantification of vitamin D3 was done on day 0, day 3, day 9, day 16, day 23  and  day  30.  Statistical  analysis  showed  that  there  was  no  significant  difference  in  the level of vitamin D3 in dadih for 30 days of storage although there was a decrease in the level of vitamin D3 in dadih on the fourth week but it was not significantly (p> 0.05). In conclusion, Vitamin D3 in the dadih was stable for 30 days of storage although there was a decrease in vitamin D3 levels on the 16th and 30th days of storage due to the undetectable vitamin D3 in some  samples.  The  addition  of  vitamin  D3  to  dadih  is  suggested  using  encapsulation techniques to increase solubility, longer shelf life, prevention of chemical degradation, better dispersibility, higher bioavailability and effectiveness.
Keywords: fortification; vitamin D3; dadih; HPLC; stability

## Abstrak
Kekurangan dan ketidakcukupan vitamin D merupakan masalah di seluruh dunia yang dapat menyebabkan  masalah  kesehatan  serius.  Vitamin  D  dapat  menurunkan  risiko  terkena osteoporosis, penyakit kanker, diabetes melitus, dan penyakit jantung. Vitamin D Vitamin D didapatkan  dari  empat  sumber  yaitu  paparan  sinar  matahari,  makanan,  suplemen  dan makanan fortifikasi. Tujuan dari penelitian ini adalah melihat kestabilan penambahan vitamin D3  pada  dadih  selama  penyimpanan.  Penelitian  dilakukan  pada  bulan  Oktober  2019. Metode  High  Performance  Liquid  Chromatogaphy  (HPLC)  digunakan  untuk  menghitung kadar vitamin D3 di dadih fortifikasi. Kuantifikasi vitamin D3 didadih dilakukan pada hari ke- 0,  hari  ke-3,  hari  ke-9,  hari  ke-16,  hari  ke-23  dan  hari  ke-30.  Hasil  analisis  statistik menunjukkan bahwa tidak ada perbedaan yang signifikan kadar vitamin D3 di dadih selama penyimpanan selama 30 hari walaupun ada penurunan kadar vitamin D3 di dadih di minggu keempat tetapi tidak signifikan (p > 0,05). Kesimpulannya, vitamin D3 di dalam dadih stabil selama 30 hari penyimpanan walaupun ada penurunan kadar vitamin D3 pada penyimpanan hari  ke-16  dan  ke-30  akibat  dari  tidak  terdeteksinya  vitamin  D3  pada  beberapa  sampel.
Penambahan  vitamin  D3  ke  dadih  disarankan  menggunakan  teknik  enkapsulasi  agar meningkatkan  kelarutan,  umur  simpan  yang  lama,  pencegahan  degradasi  kimia, dispersibilitas yang lebih baik, bioavailabilitas dan efektivitas yang lebih baik.
Kata kunci: fortifikasi; vitamin D3; dadih; HPLC; stabilitas

## PENDAHULUAN
Kekurangan dan ketidakcukupan vitamin D merupakan masalah di seluruh dunia  yang dapat  menyebabkan  masalah  kesehatan  serius. 1 Vitamin  D  memiliki  efek  terhadap  sistem muskuloskeletal, kekebalan tubuh, saraf, dan kardiovaskular serta sebagai anti inflamasi. 1,2
Banyak  penelitian  membuktikan  pengaruh  vitamin  D  pada  beberapa  penyakit  seperti penyakit  kardiovaskular,  obesitas,  diabetes  melitus,  sindrom  metabolik,  dan  penyakit autoimun. 3 – 7
Rekomendasi asupan vitamin D berbeda antara orang yang menderita penyakit tertentu dengan  orang  sehat. The  Central  Europe  Guidelines merekomendasikan  dosis  1600-4000 IU/hari pada orang dewasa dan lansia yang kelebihan berat badan, yaitu dua kali lipat dosis pada populasi umum. International Osteoporosis Foundation (IOF) merekomendasikan 2000 IU/hari  untuk  individu  yang  obesitas  dan  pasien  dengan  osteoporosis,  sedangkan  dosis pada  orang  dewasa  yang  sehat  adalah  800-1000  IU/hari. 8 Secara  klinis,  serum  25(OH)D3 digunakan  untuk  pengukuran  status  vitamin  D  karena  waktu  paruh  25(OH)D3  yang  lama dalam  sirkulasi  yaitu  antara  15  dan  50  hari.  Kekurangan  vitamin  D  terjadi  jika  kadar 25(OH)D3 disirkulasi sebanyak 20 ng/ml atau 50 nmol/l. 9
Vitamin  D  didapatkan  dari  empat  sumber  yaitu  paparan  sinar  matahari,  makanan, suplemen  dan  makanan  fortifikasi. 1 Makanan  yang  mengandung  vitamin  D  adalah  minyak ikan,  telur,  margarin,  hati,  ikan  salmon,  sarden  dan  tuna. 10 Namun,  makanan  yang  secara alami kaya akan vitamin D tidak banyak dikonsumsi. 11 Yogurt fortifikasi vitamin D merupakan salah  satu  minuman  yang  dapat  meningkatkan  kadar  25(OH)D3  pada  beberapa penelitian. 12 – 14 Yogurt fortifikasi vitamin D juga dapat  mencegah osteoporosis, menurunkan HOMA-IR,  rasio  lingkar  pinggang  panggul,  massa  lemak  tubuh  dan  persentase  lemak tubuh. 15 – 18
Dadih  adalah  fermentasi  susu  kerbau  yang  merupakan makanan  tradisional  Indonesia yang  berasal  dari  Sumatera  Barat. 19 Dadih  dibuat  secara  tradisional  dengan  menyimpan susu  kerbau  segar  dalam  tabung  bambu  betung (Dendrocalamus  asper )  yang  ditutup dengan  daun  pisang.  Susu  dibiarkan  berfermentasi  secara  spontan  pada  suhu  kamar selama  dua  hari  (48  jam). 20,21 Proses  fermentasi  dalam  pembuatan  dadih  terjadi  secara alami  dengan  melibatkan  berbagai  jenis  mikroba  yang  terdapat  pada  permukaan  tabung bambu  bagian  dalam,  permukaan  daun  penutup,  dan  dari  susu  kerbau  yang  digunakan. 22 Kandungan gizi dadih susu kerbau sangat bervariasi tergantung pada daerah produksi dan
jenis  kerbau. 23 Menurut  penelitian  Harahap et.  al, kadar  protein  pada  dadih  susu  kerbau adalah 5.7815%, lemak 8.1610% dan pH 5.6781. 23
Beberapa bakteri asam laktat ditemukan di dalam dadih seperti Lactobacillus plantarum, L.  casei  subsp.  Casei,  Leuconostoc  mesenteroides,  S.  lactis  supsp.  lactis,  S.  cremoris, Lactobacillus casei subsp. Rhamnosus, Streptococcus faecalis dan Lactococcus . 19,24 Bakteri asam laktat mempunyai manfaat seperti anti obesitas, anti diabetes, dan anti inflamasi. 25 – 28
Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui stabilitas vitamin D3 di dadih.

## METODE PENELITIAN
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  susu  kerbau  segar,  tabung bambu  betung (Dendrocalamus  asper ),  daun  pisang,  vitamin  D3,  metanol,  etanol  95%, asam  pirogalat,  asam  asetat,  aquabidest,  PTFE  0,45  µm  dan  HPLC.  Susu  kerbau didapatkan  dari  kelompok  pembuat  dadih  di  Gadut,  Kabupaten  Lima  Puluh  Kota.  Langkah pertama proses pembuatan dadih adalah memanaskan susu kerbau hingga mencapai suhu 72°C, kemudian tetap dipanaskan selama 15 detik. 29 Selanjutnya,  susu kerbau didinginkan hingga mencapai suhu 30°C. Langkah kedua proses pembuatan dadih yaitu menambahkan vitamin D 3 ke susu kerbau yang telah didinginkan sebanyak 900 IU. Proses selanjutnya yaitu memasukkan  susu  kerbau  yang  telah  ditambahkan  vitamin  D3  ke  dalam  bambu  betung kemudian  menutup  bambu  betung  dengan  daun  pisang.  Bambu  betung  yang  berisi  susu kerbau disimpan pada suhu ruang selama 2 hari untuk berfermentasi secara spontan . Dadih disimpan dalam botol amber pada suhu -18 o C (dibekukan) selama penyimpanan.
Pengujian  stabilitas  vitamin  D3  dilakukan  di  PT.  Saraswanti  Indo  Genetech  dengan menggunakan High  Performance  Liquid  Chromatogaphy (HPLC)  dengan  nomor  instruksi kerja  18-5-1/MU/SMM-SIG. 30 Cholecalcipherol dimasukan  ke  dalam  labu  ukur  25  mL sebanyak  25  mg,  kemudian  dilarutkan  dengan  metanol  hingga  mencapai  25  mL  lalu dihomogenkan untuk mendapatkan larutan standar  vitamin D3 1000 mg/L.  Larutan standar vitamin  D3  1000  mg/L  dipipet  ke  dalam  labu  ukur  10  mL  sebanyak  1  mL  kemudian diencerkan  dengan  pelarut  hingga  mencapai  tanda  10  mL  lalu  dihomogenkan  untuk mendapatkan  larutan  standar  100 mg/L.  Selanjutnya,  larutan standar  vitamin  D3  100 mg/L dipipet  ke  dalam  labu  ukur  10  mL  sebanyak  1  mL  kemudian  diencerkan  dengan  pelarut hingga  mencapai  tanda  10  mL  lalu  dihomogenkan  untuk  mendapatkan  larutan  standar  10 mg/L.
Sebanyak  10  g  dadih  ditimbang  dan  dimasukkan  ke  dalam  gelas  piala  100  mL, kemudian  ditambahkan  etanol  95%  sebanyak  40  mL  dan  asam  pirogalat  sebanyak  50  mg dan  dilewatkan  gas  nitrogen  sebelum  dipanaskan.  Larutan  dikocok  dan  dipanaskan  dalam waterbath  pada  suhu  ±  80 o C  selama  45  menit  dan  dikocok  setiap  10  menit  setelah menambahkan KOH 50  % sebanyak 10 mL kemudian larutan didinginkan.  Selanjutnya,  10
mL  asam  asetat  glasial  ditambahkan  kemudian  larutan  didinginkan  kembali  hingga  suhu ruang.  Larutan  dipindahkan  kedalam  labu  ukur  100  mL,  lalu  ditambahkan  dengan  THF- etanol 95% dengan perbandingan 1:1, lalu dihomogenkan. Larutan didiamkan selama 1 jam pada  suhu  ruang  atau  selama  24  jam  dalam  lemari  pendingin.  Larutan  sampel  disaring dengan PTFE 0,45 µm ke dalam vial dan diinjeksikan ke sistem HPLC.
Vitamin  D3  dikuantifikasi  dengan  menggunakan  HPLC  dengan  panjang  gelombang absorbansi  264  nm.  Pemisahan  kromatogafi  dilakukan  pada  kolom  analitik  C18  fase reverse.  Fase  gerak  HPLC  adalah  campuran  aquabidest  dan  metanol  pada  laju  aliran  1,5 ml/menit. Volume injeksi sampel atau larutan standar adalah 20 μ l. Kuantifikasi vitamin D3 pada  dadih  dianalisis  pada  waktu  penyimpanan  tertentu  selama  empat  minggu  setelah proses fermentasi. Kuantifikasi vitamin D3 pada hari ke 0 dilakukan pada saat penambahan vitamin D3 ke susu kerbau sedangkan kuantifikasi vitamin D3 selanjutnya dilakukan setelah proses fermentasi selesai yaitu pada hari ke-3 setelah pembuatan dadih. Kuantifikasi vitamin D3 pada penyimpanan satu minggu hingga empat minggu dilakukan pada hari ke-9, ke-16, ke-23  dan  ke-30  setelah  pembuatan  dadih.  Analisis  statistik  pada  penelitian  ini menggunakan uji Kruskal Wallis karena data tidak berdistribusi normal menggunakan SPSS 16.0 Statistic Software . Level signifikan yang ditetapkan sebesar α = 0,05.

## HASIL PENELITIAN
Tidak  adanya  perbedaan  yang  signifikan  pada  median  kadar  vitamin  D3  di  dadih selama  penyimpanan  (p>0,05;Tabel  1).  Pada  hari  ke-30  terjadi  penurunan  median  kadar vitamin  D3  dari  hari  ke-23,  namun  tidak  ada  perbedaan  yang  signifikan  antara  median kadar vitamin D3 pada penyimpanan hari ke-23 dan ke-30.

## Tabel 1. Hasil Analisa Vitamin D3 Selama Penyimpanan
Penyimpanan Kadar (Median (Min-Max)) mcg/100 gr p 1 0 hari  3 hari  9 hari 16 hari 23 hari 30 hari 0 hari 22,05 (19,16-22,19) - 0,513  0,513 0,513 0,513 0,507 3 hari 24,79 (14,97-46,12) - - 0,513 0,513 0,827 0,121 9 hari 12,59 (7,48-54,47) - - - 0,827 0,513 0,268 16 hari 22,59 (0,00-29,25) - - - - 0,275 0,487 23 hari 44,11 (12,09-58,83) - - - - - 0,121 30 hari 0,00 (0,00-24,63) - - - - - - p 0,603
p = uji Kruskal Wallis p 1 = uji Mann Whitney
Kadar vitamin D3 mengalami penurunan pada hari ke-9, namun mengalami kenaikan pada hari ke-16 dan ke-23. Penurunan yang terjadi pada hari ke-9 tidak signifikan secara statistik.  Pada  penyimpanan  hari  ke-16,  vitamin  D3  tidak  terdeteksi  pada  salah  satu
sampel.  Namun,  tidak  ada  perbedaan  median  kadar  vitamin  D3  yang  signifikan  dari penyimpanan hari ke-9 sampai penyimpanan hari ke-16. Kadar vitamin D3 juga mengalami kenaikan  di  penyimpanan  hari  ke-16.  Selain  itu,  ada  dua  sampel  yang  tidak  terdeteksi vitamin  D3-nya  pada  penyimpanan  hari  ke-30.  Kadar  vitamin  D3  pada  penyimpanan  hari ke-23 juga tidak berbeda secara signifikan dibandingkan dengan penyimpanan hari ke-30.

## PEMBAHASAN
Produk probiotik yang difortifikasi dengan vitamin D memberikan banyak manfaat bagi penderita obesitas, Non-Alcoholic Fatty Liver Disease (NAFLD), obesitas. 17,31,32 Serum 25- hidroksivitamin  D  yang  rendah  merupakan  faktor  risiko  osteoporosis,  penyakit kardiovaskular,  diabetes,  dan  kanker. 33 Pemberian  yogurt  fortifikasi  vitamin  D  dapat bermanfaat  dalam  meningkatkan  25OHD  serum,  profil  lipid,  metabolisme  glukosa,  dan parameter  antropometri  dan  menurunkan  kadar  hormon  paratiroid  pada  wanita  hamil, subjek  dewasa  dan  lanjut  usia  dengan  atau  tanpa  diabetes,  pradiabetes,  atau  sindrom metabolik. 16,34
Pada penelitian ini tidak ada perbedaan yang signifikan pada median kadar vitamin D3 di dadih selama penyimpanan (p>0,05;Tabel 1). Pada hari ke-30 terjadi penurunan median kadar  vitamin  D3  dari  hari  ke-23,  namun  tidak  ada  perbedaan  yang  signifikan  antara median kadar vitamin D3 pada penyimpanan hari ke-23 dan ke-30. Hasil ini sama dengan penelitian  tentang  stabilitas  vitamin  D3  pada  yogurt,  dimana  vitamin  D3  stabil  selama penyimpanan  sampai  3  minggu  dan  2  minggu. 1,35 Penambahan  vitamin  D3  pada  susu yang  di  pasteurisasi  juga  tidak  mempengaruhi  kadar  vitamin  D3.  Penelitian  tentang penambahan  D  ke  susu  UHT  menunjukkan  bahwa  vitamin  D  stabil  selama  60  hari penyimpanan. 36
Vitamin D rentan terhadap sinar UV, udara (oksigen), asam dan protein terhidrolisis. 37 –
39 Selain  itu,  pH,  kekuatan  ionik,  dan  perubahan  suhu  juga  merupakan  parameter  kritis kestabilan  vitamin  D  pada  minuman. 40 Penyimpanan  dadih  pada  penelitian  ini menggunakan botol amber untuk menghindari dadih fortifikasi vitamin D3 terkena cahaya. Vitamin  D3  pada  sampel  susu  dapat  berkurang  apabila  terpapar  cahaya. 1 Penelitian tentang  stabilitas  vitamin  D3  pada  yogurt  yang  disimpan  di  botol  gelap  dan  botol transparan menunjukkan hasil bahwa vitamin D3 stabil pada yogurt yang disimpan di botol gelap selama 3 minggu. 1
Keberhasilan  fortifikasi  vitamin  D  dalam  minuman  sangat  tergantung  pada homogenisasi,  stabilitas,  dan  bioavailabilitas  vitamin  D  dalam  matriks.  Ketiga  aspek  ini harus  diperhatikan  dalam  membuat  minuman  fortifikasi.  Kehilangan  vitamin  D  terutama disebabkan  oleh  oksidasi  dan  isomerisasi  selama  pemrosesan  dan  penyimpanan  telah diamati dalam berbagai sistem yang diperkaya dengan vitamin D. Selain itu, pengendapan
vitamin  D  di  dalam  bahan  pengemas  dan  degradasinya  dalam  matriks  makanan  berair merupakan  penyebab  utama  ketidakstabilan  vitamin  D  di  minuman.  Perubahan  ini mempengaruhi  penampilan  dan  rasa  dari  minuman  yang  diformulasikan,  sehingga mempengaruhi  penerimaan  pelanggan. 41 Beberapa  teknik  telah  diadopsi  untuk meningkatkan kestabilan penambahan vitamin D dalam minuman, termasuk penambahan langsung,  emulsifikasi,  dan  strategi  mikroenkapsulasi.  Teknik  enkapsulasi  untuk penambahan  vitamin  D  pada  produk  minuman  seperti spray  drying ,  koaservasi, emulsifikasi, nanostructured  lipid  carriers ,  liposom,  kompleksasi  untuk  polimer  dapat meningkatkan  kelarutan,  umur  simpan  yang  lama,  pencegahan  degradasi  kimia, dispersibilitas yang lebih baik, bioavailabilitas dan efektivitas yang lebih baik. 40 Penerapan teknik  enkapsulasi  dapat  lebih  efektif  dalam  meningkatkan  stabilitas  dan  bioavailabilitas vitamin D dalam  minuman fortifikasi. 40 Penggunaan teknik penambahan langsung vitamin D3  pada  dadih  fortifikasi  mengakibatkan  vitamin  D3  pada  beberapa  sampel  di penyimpanan  hari  ke-16  dan  ke-30  tidak  terdeteksi.  Hal  ini  mungkin  disebabkan  oleh kelarutan vitamin D3 yang tidak merata pada dadih.
Selain  teknik  penambahan  vitamin  D  dan  wadah  penyimpanan,  jenis  minuman  juga mempengaruhi  kestabilan  vitamin  D.  Ada  beberapa  produk  minuman  fermentasi  yang difortifikasi  vitamin  D3  diantaranya  adalah  yogurt  dan  kefir. 1,42 Vitamin  D3  pada  yogurt stabil selama penyimpanan sampai 3 minggu sedangkan vitamin D3 pada kefir mengalami penurunan  antara  hari  ke-9  dan  ke-15. 1,42 Perbedaan  antara  dadih,  yogurt  dan  kefir terdapat  pada  proses  fermentasinya.  Proses  fermentasi  dalam  pembuatan  dadih  terjadi secara  alami  dengan  melibatkan  berbagai  jenis  mikroba  yang  terdapat  pada  permukaan tabung  bambu  bagian  dalam,  permukaan  daun  penutup,  dan  dari  susu  kerbau  yang digunakan. 43 Kefir  dibuat  dengan  menambahkan  kefir  grain  ke  dalam  susu.  Kefir  grain mempunyai komposisi spesies mikroba yang kompleks seperti bakteri asam laktat, bakteri asetat, kamir, dan fungi. 44
Spesies  bakteri  yang  teridentifikasi  dalam  dadih  tergantung  pada  kondisi  daerah pembuatannya terutama suhu. Bakteri asam laktat  dikelompokkan menjadi BAL termofilik dan  mesofilik  berdasarkan  suhu  optimum  pertumbuhannya.  BAL  termofilik  dengan  suhu optimum  pertumbuhan  30-45°C  dan  BAL  mesofilik  dengan  suhu  optimum  pertumbuhan 20-30°C.  Hal  ini  menyebabkan  BAL  termofilik,  yaitu  genus Lactobacillus dan Streptococcus sebagian besar mendominasi mikroflora produk susu fermentasi tradisional yang  berasal  dari  daerah  tropis  dan  subtropis. 45 Bakteri  asam  laktat  yang  telah teridentifikasi di dadih daerah Gadut, Kabupaten Lima Puluh Kota adalah L. Plantarum dan Lactococcus  lactis . 46 Beberapa  bakteri  asam  laktat  telah  teridentifikasi  pada  dadih  dari berbagai  daerah. Lactobacillus  plantarum terdapat  pada  dadih  yang  berasal  dari  daerah Bukittinggi,  Sijunjung,  Kabupaten  Lima  Puluh  Kota,  Payakumbuh,  Padang  dan  Solok
sedangkan Lactobacillus  sp,  Lactococcus  sp,  dan  Leuconostoc  sp juga  terdapat  pada dadih  dari  daerah  Bukittinggi  dan  Padang  Panjang. 45,46 Komposisi  mikroba  di  kefir  juga dapat  bervariasi  sesuai  dengan  substrat  yang  digunakan  dalam  proses  fermentasi  dan metode pemeliharaan kultur. 44 Perbedaan dadih, yogurt, dan kefir terdapat pada Tabel 2.
Tabel 2. Perbedaan antara Dadih, Yogurt dan Kefir 1,36,42,44,46,47 Dadih Yogurt Kefir Ph 4,57 4-4,6 4,13-4,38 Strain Lactococcus  lactis  ssp. Lactis Lactobacillus plantarum ssp. Plantarum L. lactis ssp. Cremoris Lactobacillus Bulgaricus Streptococcus Biﬁdobacterium sp. Lactobacillus sp. 23 spesies Kamir Total BAL 8.56 cfu/g 8,8 cfu/g 8 cfu/g Prosedur Pembuatan Susu kerbau dipasteurisasi sampai suhu  72 o C,  kemudian
didinginkan  sampai  suhu 30 o C  dan  dimasukkan  ke dalam  tabung  bambu  dan ditutup dengan daun pisang.  Tabung  bambu yang berisi susu diletakkan  di  suhu  ruang selama 2 hari agar terfermentasi secara spontan Susu di pasteurisasi dan kemudian ditambahkan starter  pada  suhu 40-42 o C.  Susu yang  telah  diberi starter dibiarkan selama 7 jam Susu kambing sampai  suhu  72 o C,
kemudian didinginkan  sampai suhu  25 o C  dan tambahkan kefir grain  dan  dibiarkan selama 24 jam

## SIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan hasil penelitian yang diperoleh, hasil analisis statistik menunjukkan bahwa tidak ada perbedaan yang signifikan kadar vitamin D3 di dadih selama penyimpanan selama 30 hari walaupun ada penurunan kadar vitamin D3 di dadih di minggu keempat tetapi tidak signifikan  (p  >  0,05).  Kesimpulannya,  vitamin  D3  di  dalam  dadih  stabil  selama  30  hari penyimpanan walaupun ada penurunan kadar vitamin D3 pada penyimpanan hari ke-16 dan ke-30  akibat  dari  tidak  terdeteksinya  vitamin  D3  pada  beberapa  sampel.  Penambahan vitamin  D3  ke  dadih  disarankan  menggunakan  teknik  enkapsulasi  agar  meningkatkan kelarutan, umur simpan yang lama, pencegahan degradasi kimia, dispersibilitas yang lebih baik, bioavailabilitas dan efektivitas yang lebih baik.

## DAFTAR PUSTAKA
1.   Jafari, T., Askari, G., Mirlohi, M., Javanmard, S. H., Faghihimani, E., and Fallah, A. A., 2016.  Stability  of  Vitamin  D3  in  fortified  yoghurt  and  yoghurt  drink  (Doogh). Advanced biomedical research , 5 pp. 52.
2.   Zmijewski, M. A., 2019, January. Vitamin D  and Human Health. International journal of molecular sciences . Switzerland.
3.   Khosravi,  Z.  S.,  Kafeshani,  M.,  Tavasoli,  P.,  Zadeh,  A.  H.,  and  Entezari,  M.  H.,  2018. Effect  of  Vitamin  D  Supplementation  on  Weight  Loss,  Glycemic  Indices,  and  Lipid Profile in Obese and Overweight Women: A Clinical Trial Study. International journal of preventive medicine , 9 pp. 63.
4.   Kienreich, K., Tomaschitz, A., Verheyen, N., et al., 2013. Vitamin D and cardiovascular disease. Nutrients , 5 (8), pp. 3005 – 21.
5.   Hu,  Z.,  Chen,  J.,  Sun,  X.,  Wang,  L.,  and  Wang,  A.,  2019.  Efficacy  of  vitamin  D supplementation  on  glycemic  control  in  type  2  diabetes    patients:  A  meta-analysis  of interventional studies. Medicine , 98 (14), pp. e14970.
6.   Ferreira,  P.  P.,  Cangussu,  L.,  Bueloni-Dias,  F.  N.,  et  al.,  2020.  Vitamin  D supplementation  improves  the  metabolic  syndrome  risk  profile  in    postmenopausal women. Climacteric : the journal of the International Menopause Society , 23 (1), pp. 24 – 31.
7.   Konijeti,  G.  G.,  Arora,  P.,  Boylan,  M.  R.,  et  al.,  2016.  Vitamin  D  Supplementation Modulates T  Cell-Mediated  Immunity  in  Humans:  Results  from  a  Randomized  Control Trial. The Journal of clinical endocrinology and metabolism , 101 (2), pp. 533 – 8.
8.   Bassatne,  A.,  Chakhtoura,  M.,  Saad,  R.,  and  Fuleihan,  G.  E.-H.,  2019.  Vitamin  D supplementation in obesity and during weight  loss:  A review of  randomized controlled trials. Metabolism: clinical and experimental , 92 pp. 193 – 205.
9.   Ding, C., Gao, D., Wilding, J., Trayhurn, P., and Bing, C., 2012. Vitamin D  signalling in adipose tissue. The British journal of nutrition , 108 (11), pp. 1915 – 23.
10.  Yosephin,  B., Anwar, F., Riyadi, H., Khomsan, A., and Elly, N., 2016. Food sources of vitamin  d  and  its  deficiency  in  worker  women 4th  Asian  Academic  Society  International Conference ( AASIC ) 2016 , pp. 488 – 98.
11. O’Mahony,  L.,  Stepien,  M.,  Gibney,  M.  J.,  Nugent,  A.  P.,  and  Brennan,  L.,  2011.  The potential  role  of  vitamin  D  enhanced  foods  in  improving  vitamin  D  status. Nutrients , 3 (12), pp. 1023 – 41.
12.  Nikooyeh,  B.,  and  Neyestani, T.,  2018.  Efficacy  of  Food  Fortification  with  Vitamin  D  in Iranian  Adults:  A  Systematic  Review  and  Meta-Analysis. Nutrition  and  Food  Sciences Research , 5 (4),.
13.  Bonjour,  J.-P.,  Dontot-Payen,  F.,  Rouy,  E.,  Walrand,  S.,  and  Rousseau,  B.,  2018. Evolution  of  Serum  25OHD  in  Response  to  Vitamin  D(3)-Fortified  Yogurts  Consumed by Healthy Menopausal Women: A 6-Month Randomized Controlled Trial Assessing the Interactions between Doses, Baseline Vitamin D Status, and Seasonality. Journal of the American College of Nutrition , 37 (1), pp. 34 – 43.
14.  Shab-Bidar,  S.,  Neyestani,  T.  R.,  Djazayery,  A.,  et  al.,  2011.  Regular  consumption  of vitamin  D-fortified  yogurt  drink  (Doogh)  improved    endothelial  biomarkers  in  subjects
with type 2 diabetes: a randomized double-blind clinical trial. BMC medicine , 9 pp. 125. 15.  Bonjour, J.-P., Benoit, V., Atkin, S., and Walrand, S., 2015. Fortification of Yogurts with Vitamin  D  and  Calcium  Enhances  the  Inhibition  of    Serum  Parathyroid  Hormone  and Bone Resorption Markers: A Double Blind Randomized Controlled Trial in Women over 60  Living  in  a  Community  Dwelling  Home. The  journal  of  nutrition,  health  &  aging , 19 (5), pp. 563 – 9.
16.  Jafari,  T.,  Faghihimani,  E.,  Feizi,  A.,  et  al.,  2016.  Effects  of  vitamin  D-fortified  low  fat yogurt on glycemic status, anthropometric  indexes, inflammation, and bone turnover in diabetic postmenopausal women: A randomised controlled clinical trial. Clinical nutrition (Edinburgh, Scotland) , 35 (1), pp. 67 – 76.
17.  Morvaridzadeh,  M.,  Nachvak,  S.  M.,  Mohammadi,  R.,  et  al.,  2021.  Probiotic  Yogurt Fortified  with  Vitamin  D  Can  Improve  Glycemic  Status  in    Non-Alcoholic  Fatty  Liver Disease Patients: a Randomized Clinical Trial. Clinical nutrition research , 10 (1), pp. 36 – 47.
18.  Mohammadi-Sartang,  M.,  Bellissimo,  N.,  Totosy  de  Zepetnek,  J.  O.,  et  al.,  2018.  The effect  of  daily  fortified  yogurt  consumption  on  weight  loss  in  adults  with    metabolic syndrome:  A  10-week  randomized  controlled trial. Nutrition,  metabolism,  and cardiovascular diseases : NMCD , 28 (6), pp. 565 – 74.
19.  Venema,  K.,  and  Surono,  I.  S.,  2019.  Microbiota  composition  of  dadih  -  a  traditional fermented  buffalo  milk  of  West    Sumatra. Letters  in  applied  microbiology , 68 (3),  pp. 234 – 40.
20.  Pinem,  S.,  and  Damayanti,  E.,  2021.  Kualitas  Dadih  Susu  Sapi  Dan  Susu  Kambing Dengan Fermenter Tabung Bambu. Jurnal Jeumpa , 7 (1), pp. 371 – 8.
21.  Hasim,  Mustopa,  A.,  Andrianto,  N.,  and  Nur  Faridah,  D.,  2017.  Antioxidant  Production Of  Lactic  Acid  Bacteria  Isolated  From  Indonesian  Traditional  Fermented  Buffalo  Milk (Dadih). IOSR  Journal  of  Pharmacy  and  Biological  Sciences  (IOSR-JPBS , 12 (5),  pp. 76 – 82.
22.  Usmiati,  S.,  and  Risfaheri.,  2013.  Pengembangan  Dadih  Sebagai  Pangan  Fungsional Probiotik Asli Sumatera Barat. J. Litbang Pert. , 32 (1), pp. 20 – 9.
23.  Harahap,  F.  C.,  Ginting,  N.,  Hamdan,  H.,  DaulaY,  A.  H.,  and  Hasnudi,  H.,  2018.  Uji Nutrisi  Dadih  Susu  Kerbau  dan  Susu  Kambing  dengan  Menggunakan  Bambu  Ampel (Bambusa  vulgaris)  dan  Bambu  Gombong  (Gigantochloa  verticilata). Talenta Conference Series: Agricultural and Natural Resources (ANR) , 1 (2), pp. 186 – 91.
24.  Sunaryanto,  R.,  and  Marwoto,  B.,  2012.  Isolasi,  Identifikasi,  Dan  Karakterisasi  Bakteri Asam Laktat Dari Dadih Susu Kerbau. Jurnal Sains dan Teknologi Indonesia , 14 (3),.
25.  Cabello-Olmo,  M.,  Oneca,  M.,  Torre,  P.,  et  al.,  2019.  A  Fermented  Food  Product Containing  Lactic  Acid  Bacteria  Protects  ZDF  Rats  from    the  Development  of  Type  2
Diabetes. Nutrients , 11 (10),.
26.  Choi, W.  J.,  Dong,  H.  J.,  Jeong,  H.  U.,  Jung,  H.  H.,  Kim,  Y.-H.,  and  Kim, T.  H.,  2019. Antiobesity  Effects  of  Lactobacillus  plantarum  LMT1-48  Accompanied  by  Inhibition    of Enterobacter cloacae in the Intestine of Diet-Induced Obese Mice. Journal of medicinal food , 22 (6), pp. 560 – 6.
27.  Liao,  P.-H.,  Kuo, W.-W.,  Hsieh,  D.  J.-Y.,  et  al.,  2016.  Heat-killed  Lactobacillus  Reuteri GMNL-263  Prevents  Epididymal  Fat  Accumulation    and  Cardiac  Injury  in  High-Calorie Diet-Fed Rats. International journal of medical sciences , 13 (8), pp. 569 – 77.
28.  Park, J.-E., Oh, S.-H., and Cha, Y.-S., 2013. Lactobacillus plantarum LG42 isolated from gajami  sik-hae  inhibits  adipogenesis    in  3T3-L1  adipocyte. BioMed  research international , 2013 pp. 460927.
29.  Ranieri,  M.  L.,  Huck,  J.  R.,  Sonnen,  M.,  Barbano,  D.  M.,  and  Boor,  K.  J.,  2009.  High temperature, short time pasteurization temperatures inversely affect  bacterial numbers during  refrigerated  storage  of  pasteurized  fluid  milk. Journal  of  dairy  science , 92 (10), pp. 4823 – 32.
30.  Genetech,  P.  S.  I.,  2015. Diagram  Alir  Pengujian  Vitamin  Larut  Lemak  Secara  HPLC . Bogor.
31.  Nikooyeh,  B.,  Hollis,  B.  W.,  and  Neyestani,  T.  R.,  2021.  The  effect  of  daily  intake  of vitamin D-fortified yogurt drink, with and without  added calcium, on serum adiponectin and sirtuins 1 and 6 in adult subjects with type 2 diabetes. Nutrition & diabetes , 11 (1), pp. 26.
32.  Mostafai, R., Nachvakc, S. M., Mohammadi, R., et al., 2019. Effects of vitamin D-fortified yogurt  in  comparison  to  oral  vitamin  D  supplement  on  hyperlipidemia  in  pre-diabetic patients: A randomized clinical trial. Journal of Functional Foods , 52 pp. 116 – 20.
33.  Jones, M. L., Martoni, C. J., and Prakash, S., 2013. Oral supplementation with probiotic L.  reuteri  NCIMB  30242  increases  mean  circulating  25-hydroxyvitamin  D:  A  post  hoc analysis  of  a  randomized  controlled  trial. Journal  of  Clinical  Endocrinology  and Metabolism , 98 (7), pp. 2944 – 51.
34.  Gasparri, C., Perna, S., Spadaccini, D., et al., 2019. Is vitamin D-fortified yogurt a value- added strategy for improving human health?  A systematic review and meta-analysis of randomized trials. Journal of dairy science , 102 (10), pp. 8587 – 603.
35.  Leskauskaite,  D.,  Jasutiene,  I.,  Malinauskyte,  E.,  Kersiene,  M.,  and  Matusevicius,  P., 2016.  Fortification  of  dairy  products  with  vitamin  D3. International  Journal  of  Dairy Technology , 69 (2), pp. 177 – 83.
36.  Hanson, A. L., and Metzger, L. E., 2010. Evaluation of increased vitamin D fortification in  high-temperature,    short-time-processed  2%  milk,  UHT-processed  2%  fat  chocolate milk, and low-fat strawberry yogurt. Journal of dairy science , 93 (2), pp. 801 – 7.
37.  G, R., and Gupta, A., 2014. Fortification of foods with vitamin D in India. Nutrients , 6 (9), pp. 3601 – 23.
38.  Yeh,  E.  B.,  Barbano,  D.  M.,  and  Drake,  M.,  2017.  Vitamin  Fortification  of  Fluid  Milk. Journal of food science , 82 (4), pp. 856 – 64.
39. Lavelli,  V.,  D’Incecco,  P.,  and  Pellegrino,  L.,  2021.  Vitamin  D  Incorporation  in  Foods: Formulation  Strategies,  Stability,  and    Bioaccessibility  as  Affected  by  the  Food  Matrix. Foods (Basel, Switzerland) , 10 (9),.
40.  Vieira, E. F., and Souza, S., 2022. Formulation Strategies for Improving the Stability and Bioavailability of Vitamin  D-Fortified Beverages: A Review. Foods (Basel, Switzerland) , 11 (6),.
41.  Maurya,  V.  K.,  Bashir,  K.,  and  Aggarwal,  M.,  2020.  Vitamin  D  microencapsulation  and fortification: Trends and technologies. The Journal of steroid biochemistry and molecular biology , 196 pp. 105489.
42.  Dianti, E. P.,  Anjani, G., Afifah, D. N., Rustanti, N., and Panunggal, B., 2018. Nutrition Quality  and  Microbiology  of  Goat  Milk  Kefir  Fortified  with  Vitamin  B12  and  Vitamin  D3 during Storage. IOP Conference Series: Earth and Environmental Science , 116 (1), pp. 12032.
43.  Usmiati, S., and Risfaheri, R., 2013. Pengembangan Dadih sebagai Pangan Fungsional Probiotik Asli Sumatera Barat. Jurnal Penelitian dan Pengembangan Pertanian , 32 (1),.
44.  Prado,  M.  R.,  Blandón,  L.  M.,  Vandenberghe,  L.  P.  S.,  et  al.,  2015.  Milk  kefir: composition,  microbial  cultures,  biological  activities,  and  related  products. Frontiers  in Microbiology , 6 .
45.  Wirawati, C. U., Sudarwanto, M., Lukman, D., and Wientarsih, I., 2017. Karakteristik dan Pengembangan  Dadih  dari  Susu  Sapi  sebagai  Alternatif  Dadih  Susu  Kerbau (Characteristic and Development of Cow’s Milk Dadih as an Alternate of Buffalo’s Milk Dadih). Wartazoa , 27 (2), pp. 95 – 103.
46.  Wirawati, C. U., Sudarwanto, M. B., Lukman, D. W., Wientarsih, I., and Srihanto, E. A., 2019.  Diversity  of  lactic  acid  bacteria  in  dadih  produced  by  either  back-slopping  or spontaneous  fermentation  from  two  different  regions  of  West  Sumatra,  Indonesia. Veterinary world , 12 (6), pp. 823 – 9.
47.  Tirloni,  E.,  Bernardi,  C.,  Colombo,  F.,  and  Stella,  S.,  2015.  Microbiological  shelf  life  at different  temperatures  and  fate  of  Listeria  monocytogenes  and  Escherichia  coli inoculated  in  unflavored  and  strawberry  yogurts. Journal  of  Dairy  Science , 98 (7),  pp. 4318 – 27.