BioEksakta: Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed Volume 3, Nomor 3 (2021): 132-141 E-ISSN: 2714-8564
Potensi Ekstrak Etil Asetat Coprinus comatus terhadap Kadar Ureum dan Kreatinin pada Tikus Putih Model Diabetes
Anik Laeli Perdanawati, Nuniek Ina Ratnaningtyas, Hernayanti
Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman, Purwokerto 53122, Indonesia Email: anik.perdanawati@mhs.unsoed.ac.id
Rekam Jejak Artikel:
Diterima  : 23/05/2021
Disetujui  : 06/04/2022 Abstract Coprinus  comatus or  chicken  drumstick  mushrooms  has  potential  as  antioxidant  and antidiabetic.  Hyperglycemia  in  people  with  diabetes  mellitus  causes  an  increase  in  Reactive Oxygen Species (ROS). Pancreatic β cells have less antioxidants than other organs. This causes oxidative stress which triggers a chain reaction of lipid peroxidation which damages the kidneys and disturbs the glomerular filtration rate. Impaired glomerular filtration rate is characterized by increased levels of urea and creatinine. Flavonoids in C . comatus are able to donate H + and stop lipid peroxidation reactions in the kidneys, so that urea and creatinine levels decrease.This study aims  to  determine  the  effect  of C . comatus ethyl  acetate  extract  on blood urea  and  creatinine levels in diabetic rats and to determine the effective dose of C . comatus ethyl acetate extract on blood urea and creatinine levels in diabetic rats. This study used an experimental method based on a completely randomized design (CRD).  The data obtained from the  measurement of urea and  creatinine  levels  were  analyzed  using  the  one  way  Anova  statistical  test  at  the  95% confidence level and followed by Duncan's test at an error rate of 5%. The results of this study indicated that the ethyl acetate extract of C . comatus affected the blood urea and creatinine levels of diabetic rats. C . comatus extract at a dose of 500 mg/kgBW is an effective dose that has an effect on reducing levels of blood urea and creatinine in the amount of  16,66 ± 0,00 mg/dL dan 0,40 ± 0,12 mg/dL.
Key words: Coprinus comatus ; creatinne ; diabetes mellitus ; streptozotocin ; urea Abstrak Coprinus  comatus atau  jamur  paha  ayam  berpotensi  sebagai  antioksidan  dan  antidiabetes. Kondisi  hiperglikemia  pada  penderita  diabetes  mellitus  menyebabkan  peningkatan Reactive Oxygen Species (ROS). Sel β pankreas memiliki antioksidan hanya sedikit dibandingkan organ lain.  Hal  ini  menyebabkan  stress  oksidatif  yang  memicu  reaksi  berantai  peroksidasi  lipid sehingga merusak organ ginjal dan laju filtrasi glomerulus terganggu. Laju filtrasi glomerulus yang  terganggu  ditandai  dengan  peningkatan  kadar  ureum  dan  kreatinin.  Flavonoid  yang terkandung dalam C . comatus mampu  mendonorkan  H + dan  menghentikan  reaksi  peroksidasi lipid  pada  ginjal  sehingga  kadar  ureum  dan  kreatinin  menurun.  Tujuan  penelitian  ini  untuk mengetahui pengaruh ekstrak etil asetat C . comatus terhadap kadar ureum dan kreatinin darah tikus model diabetes dan untuk mengetahui dosis efektif ekstrak etil asetat C . comatus terhadap kadar  ureum  dan  kreatinin  darah  tikus  model  diabetes.  Penelitian  ini  menggunakan  metode eksperimental yang disusun berdasarkan Rancangan Acak Lengkap (RAL). Data yang diperoleh dari hasil pengukuran kadar ureum dan kreatinin dianalisis menggunakan uji  statistik one way Anova pada tingkat kepercayaan 95% dan dilanjutkan dengan uji Duncan pada tingkat kesalahan 5%. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa ekstrak etil asetat C. comatus berpengaruh terhadap kadar ureum dan kreatinin darah tikus model diabetes. Ekstrak C . comatus dosis 500 mg/kgBB merupakan dosis efektif yang berpengaruh terhadap penurunan kadar ureum dan kreatinin darah pada tikus model diabetes yaitu sebesar 16,66 ± 0,00 mg/dL dan 0,40 ± 0,12 mg/dL. Key words: Coprinus comatus ; diabetes mellitus ; kreatinin ; streptozotocin ; ureum

## PENDAHULUAN
Keragaman jamur di Indonesia tercatat sebanyak 2.273 jenis pada tahun 2017 (Retnowati et al .,  2019).  Jamur  obat  telah  dikenal  luas  oleh masyarakat  dunia  sebagai  obat  tradisional,  terutama di Negara Cina, Jepang, dan Korea. Jamur C . comatus mengandung  senyawa  bioaktif  yang  berpotensi sebagai  antioksidan,  antikanker,  dan  antidiabetes yang belum banyak diteliti (Tesanovic et al ., 2016).
Penderita diabetes mellitus di Indonesia tercatat 8,1% pada tahun 2018 dan akan meningkat 366 juta pada  tahun  2030  (Wild et  al .,  2004).  Penyakit diabetes  mellitus  terdapat  3  tipe.  Diabetes  mellitus merupakan  suatu  penyakit  yang  ditandai  dengan terjadinya  peningkatan  kadar  glukosa  darah  akibat defisiensi  relatif  atau  absolut  hormon  insulin (Simatupang, 2020).
Disfungsi hormon insulin menyebabkan hiperglikemia  pada  penderita  DM.  Hal  ini  dapat
memicu  terbentuknya Reactive  Oxygen  Species (ROS),  karena  sel  β  pankreas  memiliki  enzim antioksidan  yang  sedikit  dibandingkan  organ  lain sehingga  sangat  peka  terhadap  ROS  (Aldi et  al ., 2019).  Ketidak  seimbangan  antara  radikal  bebas dengan  antioksidan  endogen  (stress  oksidatif) memicu  terjadinya  peroksidasi  lipid  pada  membran sel  endotel  glomerulus,  sehingga  laju  filtrasi glomerulus terganggu. Laju filtrasi glomerulus yang terganggu  akan  meningkatkan  kadar  ureum  dan kreatinin  sehingga  kadar  ureum  dan  kreatinin  dapat menjadi parameter untuk menilai fungsi ginjal normal (Tandi et al ., 2017).
Ureum  adalah  salah  satu  produk  hasil pemecahan  protein  di  dalam  tubuh.  Kerusakan  atau gangguan fungsi ginjal ditandai dengan kadar ureum dan kreatinin dalam darah akan meningkat. Kreatinin merupakan hasil pemecahan keratin fosfat otot yang diproduksi  oleh  tubuh  secara  konstan  tergantung massa  otot  (Dai et  al .,  2020).  Kadar  ureum  normal pada tikus putih adalah 15,0 - 21,0 mg/dL sedangkan kreatinin 2,0 - 8,0 mg/dL  (Malole & Pramono, 1989).
Berdasarkan  hasil  penelitian  Tuldjannah et  al . (2018),  bahwa  ekstrak  n-heksana,  etanol,  dan  etil asetat daun gedi merah memiliki efek nefroprotektif pada tikus yang diinduksi dengan etilen glikol 0,75% dan  amonium  klorida  0,2%  kemudian  diberi perlakuan  ekstrak  selama  15  hari.  Presentase penurunan kadar ureum  pada ekstrak etanol sebesar 33,45%,  ekstrak  etil  asetat  17,02%  dan  ekstrak  n- heksana  5,2%  dari  kontrol  negatif  yang  hanya diberikan  Na-CMC.  persentase  penurunan  kadar kreatinin pada ekstrak etanol sebesar 35,79%, ekstrak etil asetat 23,16% dan ekstrak n-heksana 22,11% dari kontrol negatif.
Hewan  yang  sering  dijadikan  model  diabetes adalah tikus putih ( Rattus norvegicus ) jantan. Alasan tikus  putih  ( R . norvegicus )  jantan  karena  memiliki keidentikan  dengan  manusia  secara  fisiologi, anatomi, karakteristik biologi, perilaku dan genetiknya. Sistem hormonal yang dimiliki oleh tikus putih jantan lebih stabil dibandingkan betina (Sasmita et al ., 2017).
Berdasarkan uraian sebelumnya, dapat dirumuskan  permasalahan  sebagai  berikut:  Apakah ekstrak  etil  asetat  dari C.  comatus berpengaruh terhadap kadar ureum dan kreatinin darah tikus model diabetes  serta  berapakah  dosis  efektif  ekstrak  etil asetat C . comatus terhadap kadar ureum dan kreatinin darah tikus model diabetes.
Berdasarkan  rumusan  masalah  di  atas,  maka tujuan dari penelitian ini yaitu:
1. Mengetahui  pengaruh  ekstrak  etil  asetat C. comatus terhadap  kadar  ureum  dan  kreatinin darah tikus model diabetes.
2. Mengetahui  dosis  efektif  ekstrak  etil  asetat C . comatus terhadap  kadar  ureum  dan  kreatinin darah tikus model diabetes.
Manfaat  yang  diharapkan  dari  penelitian  ini yaitu dapat memberikan informasi ilmiah yang dapat digunakan sebagai bahan pertimbangan dalam upaya pembuatan  produk  pengobatan  alami  dari  jamur untuk penyakit diabetes mellitus..

## MATERI DAN METODE Materi Penelitian
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah tubuh buah jamur paha ayam ( C . comatus ) dari CV.  Asa  Agro  Corporation  Cianjur,  tikus  putih ( Rattus  norvegicus )  jantan  dari  CV.  Wistar Yogyakarta,  aquabides,  DMSO  5%,  metformin tablet, streptozotocin , buffer asam sitrat 0,1 M, strip glukometer,  etil  asetat  absolut,  kertas  saring Whattman  no.  41, alkohol  swab , yellow  pipette  tip , blue pipette tip , reagen kit ureum Glory Diagnostic , reagen kit kreatinin Glory Diagnostic , dan eter.
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah kandang  tikus,  neraca  analog,  timbangan  analitik, oven,  blender,  gelas  beaker  500  mL,  gelas  ukur, hotplate & stirer , milipore ,  termometer,  mortar  dan pestle,  lemari  pendingin,  spatula,  botol  vial,  tabung reaksi,  rak  tabung,    mikropipet, pipet  filler ,  alat penyekok oral (sonde), glucometer, spuit 1 cc, botol wadah,  pipet  kapiler  hematocrit,  sentrifugator, vacuum  tube  sterile EDTA,  microtube,  batang pengaduk, vortex ,  printer,  komputer,  kuvet,  dan spektrofotometer UV-Vis.
Penelitian  dilaksanakan  di  Fakultas  Biologi Universitas  Jenderal  Soedirman,  Laboratorium Mikologi  dan  Fitopatologi  untuk  membuat  larutan ekstrak,  metformin  serta streptozotocin ,  serta Laboratorium  Fisiologi  Tumbuhan  untuk  analisis kadar  ureum  dan  kreatinin.  Pemiliharaan  hewan percobaan  dilakukan  di  Laboratorium  Farmakologi Klinik,  Fakultas  Ilmu-Ilmu  Kesehatan,  Universitas Jenderal Soedirman.

## Metode Percobaan
Metode  penelitian  yang  digunakan  adalah metode eksperimental pada tikus putih jantan model diabetes.  Rancangan  penelitian  ini  menggunakan Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL).  Penelitian  ini menggunakan  hewan  percobaan  tikus  putih  ( Rattus novergicus )  jantan  yang  berumur  2  bulan  dengan bobot  badan  ±200  gram,  sehat,  dan  tidak  terdapat cacat.  Jumlah  keseluruhan  tikus  yang  dibutuhkan untuk  penelitian  sebanyak  30  tikus  putih  jantan sebagai  sampel  dengan  5  kali  ulangan  dan  6 perlakuan.  Perlakuan  yang  diberikan  adalah  sebagai berikut:
a. Kelompok sehat (K+) adalah kelompok kontrol positif.  Setiap  tikus  kelompok  ini  tidak diinduksi dengan streptozotocin , tidak diberikan metformin  maupun  ekstrak  etil  asetat C . comatus . Saat perawatan setiap tikus diberikan aquabides sesuai berat badan tikus dengan acuan 2 mL/hari untuk tikus 200 gBB.
b. Kelompok  sakit  (K-)  adalah  kelompok  kontrol negatif.  Setiap  tikus  kelompok  ini  diinduksi streptozotocin dengan  dosis  50  mg/kgBB  dan saat perawatan diberikan aquabides sesuai berat badan tikus dengan acuan 2 mL/hari untuk tikus 200 gBB.
c. Kelompok  diobati  (KP)  adalah  kelompok kontrol pembanding. Setiap tikus kelompok ini diinduksi streptozotocin dengan  dosis  50 mg/kgBB dan diberikan larutan metformin dosis 45  mg/kgBB  sesuai  berat  badan  tikus  dengan acuan 2 mL/hari untuk tikus 200 gBB.
d. Kelompok  P1  adalah  kelompok  perlakuan  1. Setiap tikus kelompok ini diinduksi streptozotocin dengan  dosis  50  mg/kgBB  dan diberikan  ekstrak  etil  asetat C . comatus dosis 250  mg/kgBB  sesuai  berat  badan  tikus  dengan acuan 2 mL/hari untuk tikus 200 gBB.
e. Kelompok  P2  adalah  kelompok  perlakuan  2. Setiap tikus kelompok ini diinduksi streptozotocin dengan  dosis  50  mg/kgBB  dan diberikan  ekstrak  etil  asetat C . comatus dosis 500  mg/kgBB  sesuai  berat  badan  tikus  dengan acuan 2 mL/hari untuk tikus 200 gBB.
f. Kelompok  P3  adalah  kelompok  perlakuan  3. Setiap tikus kelompok ini diinduksi streptozotocin dengan  dosis  50  mg/kgBB  dan diberikan  ekstrak  etil  asetat C . comatus dosis 750  mg/kgBB  sesuai  berat  badan  tikus  dengan acuan 2 mL/hari untuk tikus 200 gBB.
Pemberian ekstrak etil asetat jamur C . comatus , larutan  metformin  dan  aquabides  dilaksanakan selama  14  hari  secara  berturut-turut  dan  dilakukan pengukuran  kadar  glukosa  darah,  kadar  ureum  dan kreatinin tikus putih jantan pada hari ke 15.
Variabel  bebas  penelitian  adalah  variasi  dosis ekstrak  etil  asetat C . comatus .  Variabel  terikat penelitian  adalah  perubahan  kadar  ureum  dan kreatinin  darah  tikus.  Parameter  utama  yaitu  kadar ureum dan kreatinin darah tikus sedangkan parameter pendukung penelitian yaitu kadar glukosa darah tikus.

## Cara Kerja Penelitian

## a. Aklimasi dan Persiapan Hewan Percobaan
Hewan  percobaan  dipilih  berdasarkan kriteria.  Tikus  putih  jantan  akan  diaklimasi selama  2  minggu  sebelum  penelitian  dimulai dengan memberikan minuman aqudestilata dan pakan  standar  pellet  AD  II.  Tikus  putih  jantan dipelihara dalam kandang plastik yang diberikan  penutup  dari  anyaman  kawat. Kandang  tikus  diberi  sekam  dan  dijaga kebersihannya  dengan  mengganti  secara  rutin 2x  seminggu.  Selain  itu,  dilakukan  pengaturan suhu,  udara,  dan  pencahayaannya.  Tikus  putih jantan dibagi menjadi 6 kelompok yang berisi 5 tikus meliputi: 1 kelompok kontrol positif (K+), 1  kelompok  kontrol  negatif  (K-),  1  kelompok kontrol  pembanding  (KP),  dan  3  kelompok
perlakuan ekstrak C . comatus (P1, P2 dan P3).
Tikus  kemudian  ditimbang  dan  diukur  kadar glukosa darahnya sebelum diberikan perlakuan. Tikus  yang  telah  diaklimasi,  ditimbang  dan diukur  kadar  glukosa  darahnya  siap  digunakan sebagai hewan percobaan.
b. Persiapan  Simplisia  Jamur  (Widyastuti  et  al., 2011)
Tubuh  buah  jamur C . comatus dipotong- potong  dan  ditimbang.  Tubuh  buah  jamur C . comatus yang sudah dipotong-potong dikeringkan  menggunakan  oven  selama  2x24 jam  dalam  suhu  55 0 C.  Hasil  potongan  jamur kering  dihaluskan  menggunakan  blender. Simplisia (tepung) jamur siap digunakan untuk proses ekstraksi.
c. Ekstraksi  Senyawa  C.  comatus  (Radji  et  al., 2011)
Simplisia  jamur  disiapkan  dan  ditimbang sebanyak  200  g.  Simplisia  yang  sudah ditimbang dimasukkan ke dalam gelas beker dan direndam  dengan  pelarut  etil  asetat  absolut sebanyak 1000 mL (perbandingan b/v = 1 : 5), diaduk  selama  1  menit  dan  diinkubasi  24  jam. Setelah proses inkubasi 1 x 24 jam pelarut yang lama disaring dan dipindahkan ke dalam jerigen. Simplisia  jamur  kemudian  direndam  kembali (remaserasi) dengan pelarut etil asetat yang baru selama  1  x  24  jam.  Setelah  itu,  disaring menggunakan  kertas  whattman  no.  41  dan kemudian  digabungkan  dengan  hasil  maserasi pertama.  Selanjutnya,  ekstrak  dipisahkan  dari pelarut dengan hotplate sembari diukur suhunya agar stabil hingga didapatkan ekstrak kental dan berwarna kecoklatan.
d. Pembuatan dan Induksi Larutan Streptozotocin (Mustika et al., 2017)
Streptozotocin (STZ)  ditimbang  250  mg untuk  kebutuhan  25  tikus  (10  mg  per  tikus) dilarutkan ke dalam buffer sitrat konsentrasi 0,1 M pH 4,5 sebanyak 12,5 mL (0,5 mL per tikus), selanjutnya  dihomogenkan  hingga  dihasilkan larutan  STZ  stok.  Larutan  stok  disimpan  pada suhu 4 o C. Sebelumnya tikus dipuasakan terlebih dahulu  selama  6-8  jam.  Larutan  STZ diinduksikan  satu  kali  melalui  intraperitonial (i.p)  dengan  dosis  STZ  yaitu  50  mg/kgBB. Induksi STZ dilakukan setelah aklimasi selesai. Penginduksian  STZ  dilakukan  pada  kelompok negatif, pembanding, dan perlakuan. Pengukuran kadar glukosa darah tikus dilakukan setelah 3 hari induksi STZ.
e. Pembuatan  Larutan  Metformin  (Wati  et  al., 2014)
Obat metformin tablet ditimbang sebanyak 630 mg untuk 5 tikus dalam 14 hari perawatan (9  mg  per  tikus  setiap  hari).  Obat  metformin
yang  sudah  ditimbang,  digerus  menggunakan mortar  dan  pestle.  Serbuk  metformin  630  mg dimasukkan  ke  dalam  140  mL  aquabides kemudian dihomogenkan. Wadah ditutup rapat dan disimpan pada suhu 4 o C. Dosis  metformin yang  digunakan  pada  penelitian  ini  yaitu 45mg/kgBB  kemudian  diinduksi  pada  tikus secara oral  gavarage sesuai  berat  badan  tikus dengan acuan 2 mL/hari untuk tikus 200 gBB.
f. Pembuatan  Larutan  Ekstrak  Etil  Asetat  C. comatus (Nawfa & Purnomo, 2016)
Ekstrak  kental C . comatus ditimbang untuk  membuat  larutan  uji  dengan  masing- masing:  dosis  250  mg/kgBB  membutuhkan 3500 mg untuk 5 tikus dalam 14 hari perawatan (50  mg  per  tikus  setiap  hari),  dosis  500 mg/kgBB membutuhkan 7000 mg untuk 5 tikus dalam  14  hari  perawatan  (100  mg  per  tikus setiap hari), dan dosis 750 mg/kgBB membutuhkan 10500 mg untuk 5 tikus dalam 14 hari  perawatan  (150  mg  per  tikus  setiap  hari). Selanjutnya  masing-masing  ekstrak  kental  dari setiap dosis ditambahkan 133 mL aqubides dan 7  mL  DMSO  5%  untuk  kebutuhan  14  hari perawatan.  Ekstrak  kental,  aquabides,  dan DMSO  5%  dihomogenkan.  Dosis  larutan ekstrak C . comatus yang  digunakan  pada penelitian  ini  yaitu  250  mg/kgBB,  500 mg/kgBB,  dan  750  mg/kgBB  kemudian diinduksi pada tikus secara oral gavarage sesuai berat badan dengan patokan sebanyak 2 mL/hari untuk tikus 200 gBB.
g. Pemberian  Perlakuan  Hewan  Percobaan (Haliza, 2018)
Perlakuan  hewan  percobaan  dilakukan selama 14 hari berturut-turut setelah tikus putih jantan  dinyatakan  mengalami  hiperglikemia. Kadar  glukosa  darah  diukur  pada  hari  ke-0  (3 hari  setelah  diinduksi  STZ)  normalnya  ≤126 mg/dL.  Ekstrak  etil  asetat C . comatus yang dilarutkan  dalam  aquabides  dan  DMSO  5% diberikan sesuai berat badan tikus dengan acuan 2 mL/hari untuk tikus 200 gBB pada kelompok perlakuan (P1, P2, dan P3) yang sudah diinduksi streptozotocin . Tablet metformin yang dilarutkan ke dalam aquabides, diberikan sesuai berat badan tikus dengan acuan 2 mL/hari untuk tikus  200  gBB  pada  kelompok  kontrol pembanding  (KP)  yang  sudah  diinduksi streptozotocin .  Aquabides  diberikan  sesuai berat badan tikus dengan acuan 2 mL/hari untuk tikus  200  gBB  pada  kelompok  kontrol  negatif (K-)  yang  sudah  diinduksi streptozotocin dan kelompok  positif  (K+)  yang  tidak  diinduksi streptozotocin. Pemberian  perlakuan  dilakukan dengan  metode oral  gavarage atau  sonde lambung  selama  14  hari  berturut-turut.  Tikus ditimbang  2x  dalam  seminggu.  Kadar  glukosa
darah  diukur  dan  sampel  darah  diambil  untuk pemeriksaan  kadar  ureum  dan  kreatinin  pada hari ke-15.
h. Pengukuran  Kadar  Glukosa  Darah  (Mongi  et al., 2019)
Pertama,  bagian  ekor  tikus  dibersihkan terlebih  dahulu  menggunakan alkohol  swab sebelum  dilakukan  pengambilan  darah.  Darah diambil  pada  bagian  ekor  menggunakan  silet dan  diukur  kadar  glukosa  darah  dengan  alat glukometer. Darah tikus yang telah diambil dari bagian ekor tikus diteteskan pada strip glukosa yang  telah  dimasukkan  ke  dalam  glukometer, setelah  darah  diteteskan  pada  strip,  kemudian ditunggu  selama  10  detik  untuk  hasil  dari pembacaan kadar glukosa darah pada glukometer. Hasil yang tertera pada glukometer merupakan hasil dari nilai kadar glukosa darah dalam satuan mg/dL.
i. Pengambilan  Sampel  Darah  (Akmal  et  al., 2015)
Pengambilan sampel darah dilakukan hari ke-15  setelah  pemberian  perlakuan  selama  14 hari berturut-turut. Darah diambil melalui vena plexux  orbitalis menggunakan  hematocrit  dan ditampung  dalam  vacuum  tube  sterile  EDTA yang  telah  berisi  antikoagulan Ethylene Diamine  Tetra  Acetic  Acid (EDTA).  Darah kemudian  disentrifus  dengan  kecepatan  6000 rpm selama 10 menit. Cairan plasma dipisahkan dengan menggunakan micropipette dan dimasukkan  kedalam microtube . Microtube disimpan  ke  dalam  lemari  pendingin  dengan suhu  -20 o C,  kemudian  dilakukan  pengukuran kadar  ureum  dan  kreatinin  menggunakan spektrofotometri.
j. Pengukuran Kadar Ureum (Dai et al., 2020)
Alat  yang  digunakan  untuk  mengukur ureum  adalah  sprektrofotometri  UV-VIS. Komposisi reagen kit ureum terdiri dari reagen 1 (R1) berisi TRIS buffer 125 mmol/L pH 7,4, 2- oxoglutarate , urease >  140  U/mL, glutamate dehydrogenase > 120 U/mL, Biocides , reagen 2 (R2) berisi NADH 1,50 mmol/L, dan CAL Urea Standard berisi  Urea  50  mg/dL,  8,3  mmol/L. Reagen, sampel dan standar di preinkubasi pada suhu  ruang.  Reagen  1  dan  reagen  2 dihomogenkan  dengan  perbandingan  masing- masing 4:1. Reagen yang sudah dihomogenkan diambil dengan pipet kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi blanko, standar, dan sampel masing-masing  sebanyak  1  mLmenggunakan micropipette . Jumlah sampel atau standar yang dibutuhkan  10  µL.  Standar  atau  sampel dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang sudah berisikan reagen campuran. Sampel atau standar dan campuran reagen dihomogenkan
menggunakan  vortex.  Setelah  itu,  diukur menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis  pada panjang  gelombang  340  nm,  dengan  dua  kali pengukuran yaitu pengukuran pertama 30 detik dan  pengukuran  kedua  selama  90  detik, kemudian  hasil  absroban  ureum  dicatat  dan dihitung  menggunakan  rumus  perhitungan kadar ureum sebagai berikut:
Ureum (mg/dL) = (A1−A2)Sampel (A1 −A2)Standard x C standard
Keterangan: A1  =  Absorbansi  pada  pengukuran  pertama  (30 detik)
A2  = Absorbansi pada pengukuran kedua (90 detik)
C standart = Konsentrasi standar ureum (50 mg/dL)
k. Pengukuran Kadar Kreatinin (Dai et al., 2020)
Komposisi reagen kit kreatinin terdiri dari reagen  1  (R1)  berisi Picric  acid 25  mmol/L, reagen  2  (R2)  berisi Phosphate  buffer 300 mmol/L  pH  12,7  SDS  2,0  g/L,  dan Creatinen
Standard berisi Creatinine 2  mg/dL  (177 µmol/L).  Reagen,  sampel  dan  standar  di preinkubasi  pada  suhu  ruang.  Reagen  1  dan reagen  2  dihomogenkan  dengan  perbandingan masing-masing  1:1.  Reagen  yang  sudah dihomogenkan diambil dengan pipet kemudian dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  blanko, standar, dan sampel masing-masing sebanyak 1 mL menggunakan micropipette. Jumlah sampel atau  standar  yang  dibutuhkan  100  µL.  Standar atau sampel dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang sudah berisikan reagen campuran. Sampel atau standar dan campuran reagen dihomogenkan  menggunakan  vortex.  Setelah itu, diukur menggunakan spektrofotometri UV- Vis  pada  panjang  gelombang  510  nm,  dengan tiga kali pengukuran yaitu pengukuran pertama 0 detik, pengukuran kedua selama 1 menit detik dan  ketiga  2  menit  kemudian  hasil  absroban kreatinin  dicatat  dan  dihitung  menggunakan rumus  perhitungan  kadar  kreatinin  sebagai berikut:
Kreatinin (mg/dL) = △A((A1−A0)+(A2−A1))Sampel △A((A1−A0)+(A2−A1))Standard x C standard

## Keterangan:
△ A  = Selisih absorbansi
A0  = Absorbansi pada pengukuran pertama (0 detik) A1  = Absorbansi pada pengukuran kedua (1 menit) A2  = Absorbansi pada pengukuran ketiga (2 menit)
C standar = Konsentrasi standar kreatinin (2 mg/dL)
l. Terminasi  Hewan  Percobaan  (Tatukude  et  al.,
2014)
Hewan  percobaan  diterminasi  setelah penelitian  berakhir  dengan  pemberian  anastesi memakai  kapas  yang  ditetesi  eter.  Tikus  dan kapas  yang  telah  ditetesi  eter  dimasukkan kedalam  toples  kemudian  ditutup.  Tikus  yang telah mati dikuburkan dalam tanah.

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dianalisis  dengan  uji statistik one  way  Anova pada  tingkat  kepercayaan 95%  kemudian  dilanjutkan  dengan  uji  Duncan  pada tingkat  kesalahan 5%. Data dianalisis  menggunakan software SPSS 23.

## Ethical Clearance
Penelitian ini dilaksanakan setelah mendapatkan persetujuan dari komisi etik RSUD Dr. Moewardi,  Surakarta,  Jawa  Tengah  dengan  nomor 297 / II / HREC / 2020.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. Kadar Ureum
Kadar  ureum    pada  tikus  model  diabetes diukur pada hari ke-15 atau sehari setelah pemberian ekstrak C . comatus maupun metformin selama 14 hari berturut-turut.  Rerata kadar ureum dapat dilihat pada Tabel 1.
Pada  Tabel  1.  menunjukkan  bahwa  pemberian ekstrak C . comatus dosis  250  mg/kgBB,  500 mg/kgBB, 750 mg/kgBB maupun metformin (P1, P2, P3,  KP)  memberikan  pengaruh  yang  signifikan terhadap kadar ureum dibandingkan dengan kelompok  kontrol  negatif  (K-).  Nilai-nilai  kadar ureum  tersebut  sesuai  dengan  penelitian  Malole  & Pramono  (1989),  yang  menyatakan  bahwa  nilai normal  kadar  ureum  tikus  yaitu  15,0  –  21,0  mg/dL. Hasil  uji  lanjut  Duncan  pada  perlakuan  1,  2,  dan  3 memiliki  pengaruh  yang  tidak  signifikan  diantara ketiganya  untuk  menurunkan  kadar  ureum  darah tikus.  Hal  ini  ditunjukkan  dengan  notasi  huruf  yang sama  diantara  ketiga  perlakuan  tersebut  yaitu a . Berbeda  halnya  dengan  hasil  uji  laboratorium  yang dilihat dari rerata kadar ureum darah tikus, kelompok perlakuan  2  (P2)  memiliki  rerata  kadar  ureum  yang sama  dengan  kelompok  kontrol  positif  dan  kontrol pembanding  yaitu  16,00  ±  0,00  mg/dL  maka  dapat diartikan  pemberian  ekstrak C . comatus dosis  500 mg/kgBB merupakan dosis efektif untuk menurunkan kadar  ureum.  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian Ratnaningtyas et  al .  (2019),  bahwa  dosis  ekstrak C . comatus 500  mg/kgBB  mampu  menurunkan  kadar glukosa darah. Penurunan glukosa darah akan diikuti dengan  penurunan  kadar  ureum  karena  terhentinya proses  stress  oksidatif  dan  peroksidasi  lipid  yang merusak sel endotel glomerulus.
Tabel 1. Rerata Kadar Ureum Hewan Percobaan
No. Perlakuan Kadar Ureum  (mg/dL) 1 K+ 16,66 ± 0,00 a 2 K- 63,33 ± 13,94 b 3 KP 16,66 ± 0,00 a 4 P1 19,99 ± 7,46 a 5 P2 16,66 ± 0,00 a 6 P3 19,99 ± 7,46 a
Keterangan : Angka rerata yang diikuti huruf yang berbeda menunjukkan  perbedaan  yang  signifikan  antar  perlakuan pada taraf nyata p<0,05. (K+): kontrol positif (aquabides), (K-):  kontrol  negatif  ( streptozotocin dosis  50  mg/kgBB), (KP): kontrol pembanding (metformin dosis 45 mg/kgBB),
(P1)  :  perlakuan  1  (ekstrak C . comatus dosis  250 mg/kgBB), (P2): perlakuan 2 (ekstrak C . comatus dosis 500 mg/kgBB), dan (P3): perlakuan 3 (ekstrak C . comatus dosis 750 mg/kgBB).
Berdasarkan  Tabel  1.  kelompok  negatif  (K-) memiliki  kadar  ureum  yang  tinggi  dibandingkan kelompok  lainnya  dengan  rerata  63,33  ±  13,94 mg/dL.  Kadar  ureum  yang  tinggi  pada  kelompok kontrol  negatif  (K-)  terjadi  karena  tikus  hanya diinduksi streptozotocin dan  aquabides  selama perawatan. Menurut Defriana et al . (2015), tingginya kadar  ureum  dalam  darah  menandakan  adanya kerusakan  pada  ginjal.  Kerusakan  ginjal  pada kelompok  K-  tersebut  disebabkan  oleh  adanya streptozotocin . Zat toksik streptozotocin akan masuk ke dalam sel  β  pankreas  melalui Glucose  Transporter  Type  2 (GLTU2)  dan  menyebabkan  alkilasi  DNA  sehingga sel  β  pankreas  mengalami  nekrosis  (Szkudelski, 2001). Nekrosis yang terjadi pada sel β pankreas akan mengganggu sintesis dan sekresi insulin dalam tubuh. Akibat  dari  adanya  defisiensi  insulin,  maka  tubuh tidak  dapat  memproses  glukosa  darah  secara sempurna sehingga kadar glukosa darah meningkat.
Tabel 2. Persentase Penurunan Kadar Ureum Hewan Percobaan Dibandingkan Kontrol Negatif
No. Perlakuan Persentase Penurunan Kadar Ureum (%) 1 KP 73,69 2 P1 68,42 3 P2 73,69 4 P3 68,42
Keterangan : (KP): kontrol pembanding (metformin dosis 45 mg/kgBB), (P1): perlakuan 1 (ekstrak C . comatus dosis 250 mg/kgBB), (P2): perlakuan 2 (ekstrak C . comatus dosis 500 mg/kgBB), dan (P3): perlakuan 3 (ekstrak C . comatus dosis 750 mg/kgBB).
Berdasarkan  Tabel  2.  menunjukkan  bahwa pemberian  ekstrak  etil  asetat C . comatus dan metformin  selama  14  hari  terbukti mampu menurunkan kadar ureum dalam darah. Hal ini sesuai dengan  hasil  penelitian  Tuldjannah et  al .  (2018), bahwa  ekstrak  etil  asetat  daun  gedi  merah  yang mengandung  flavonoid  mampu  menurunkan  kadar ureum pada tikus yang diinduksi etilen glikol 0,75% dan  amonium  klorida  0,2%.  Kandungan  senyawa flavonoid dalam daun gedi merah berpotensi sebagai antioksidan dan diuretikum sehingga dapat meningkatkan laju filtrasi glomerulus dan menurunkan kadar ureum.
Senyawa  flavonoid  mampu  mendonorkan elektron  hidrogennya  pada  ROS  sehingga  ROS menjadi  molekul  yang  stabil  (Kumar  &  Pandey, 2013).  Senyawa  flavonoid  yang  terkandung  dalam ekstrak etil asetat C . comatus yaitu berupa rutin dan quersetin (Husen, 2019). Mekanisme efek hipoglikemik  dari  flavonoid  yaitu  mengurangi penyerapan  glukosa  dengan  menghambat  GLUT2 (Song et al ., 2002).
Menurut  hasil  penelitian  Husen  (2019),  bahwa ekstrak etil asetat C . comatus juga mengandung dua vitamin yaitu vitamin E dan C. Mekanisme vitamin E sebagai antioksidan eksogen yaitu dengan mendonorkan  H+  dan  mengikat  radikal  bebas  yang mengakibatkan  proses  peroksidasi  lipid  terhenti sehingga dapat melindungi ginjal dari kerusakan yang disebabkan  oleh  ROS.  Perbaikan  ginjal  yang  terjadi akan meningkatkan laju filtrasi glomerulus sehingga kadar  ureum  dalam  darah  menurun  (Efendi et  al ., 2016).  Vitamin  C  yang  bereaksi  dengan  ROS  akan mendonorkan  satu  elektron  hidrogennya  sehingga ROS  menjadi  stabil  dan  peroksidasi  lipid  terhenti (Lung & Destiani, 2018).

## B. Kreatinin
Kadar kreatinin lebih akurat dibandingkan kadar ureum  dalam  mengukur  fungsi  ginjal.  Hal  ini disebabkan oleh kreatinin diproduksi secara konstan oleh otot kemudian disaring hampir sepenuhnya oleh glomerulus  sehingga  lebih  akurat  untuk  mengukur fungsi  ginjal.  Selain  itu,  ureum  merupakan  hasil metabolisme  protein  yang  berasal  dari  makanan sedangkan  kreatinin  merupakan  hasil  pemecahan keratin  fosfat  yang  berhubungan  langsung  dengan massa  otot  tubuh  sehingga  lebih  akurat  untuk menggambarkan disfungsi ginjal (Khan et al ., 2012). Kadar  kreatinin  pada  tikus  model  diabetes diukur pada hari ke-15 atau sehari setelah pemberian ekstrak C . comatus maupun metformin secara 14 hari berturut-turut.  Rerata  kadar  kreatinin  dapat  dilihat pada Tabel 3
Tabel 3. Rerata Kadar Kreatinin Hewan Percobaan
No. Perlakuan Kadar Kreatinin (mg/dL) 1 K+ 0,25 ± 0,18 a 2 K- 1,71 ± 1,21 b 3 KP 0,40 ± 0,00 a 4 P1 0,64 ± 0,24 a 5 P2 0,40 ± 0,12 a 6 P3 0,44 ± 0,16 a
Keterangan : Angka rerata yang diikuti huruf yang berbeda menunjukkan  perbedaan  yang  signifikan  antar  perlakuan pada taraf nyata p<0,05. (K+): kontrol positif (aquabides), (K-):  kontrol  negatif  ( streptozotocin dosis  50  mg/kgBB), (KP): kontrol pembanding (metformin dosis 45 mg/kgBB), (P1): perlakuan 1 (ekstrak C . comatus dosis 250 mg/kgBB), (P2): perlakuan 2 (ekstrak C . comatus dosis 500 mg/kgBB), dan  (P3):  perlakuan  3  (ekstrak C . comatus dosis  750 mg/kgBB).
Pada  Tabel  3.  menunjukkan  bahwa  pemberian ekstrak C . comatus dosis  250  mg/kgBB,  500 mg/kgBB, 750 mg/kgBB maupun metformin (P1, P2, P3,  KP)  memberikan  pengaruh  yang  signifikan terhadap kadar ureum dibandingkan dengan kelompok  kontrol  negatif  (K-).  Kadar  kreatinin tersebut sesuai dengan penelitian Malole & Pramono (1989),  yang  menyatakan  bahwa  nilai  normal  kadar kreatinin tikus yaitu 0,2 – 0,8 mg/dL. Hasil uji lanjut Duncan pada perlakuan 1, 2, dan 3 memiliki pengaruh yang  tidak  signifikan  diantara  ketiganya  untuk menurunkan kadar kreatinin tikus. Hal ini ditunjukkan dengan notasi huruf yang sama diantara ketiga  perlakuan  tersebut  yaitu a .  Berbeda  halnya dengan hasil uji laboratorium yang dilihat dari rerata kadar  kreatinin  darah  tikus,  kelompok  perlakuan  2 (P2) memiliki rerata kadar kreatinin yang mendekati kelompok  kontrol  positif  yaitu  0,40  mg/dL  maka dapat  diartikan  pemberian  ekstrak C . comatus dosis 500  mg/kgBB  merupakan  dosis  efektif  untuk menurunkan  kadar  kreatinin.  Hal  ini  sesuai  dengan penelitian  Ratnaningtyas et  al .  (2019),  bahwa  dosis ekstrak C . comatus 500 mg/kgBB mampu menurunkan kadar glukosa darah. Penurunan glukosa darah akan diikuti dengan penurunan kadar kreatinin karena  terhentinya  proses  stress  oksidatif  dan peroksidasi  lipid  yang  merusak  sel  endotel glomerulus.
Berdasarkan  Tabel  3.  menunjukkan  bahwa kadar  kreatinin  tertinggi  terdapat  pada  kelompok negatif  (K-)  dengan  rerata  1,71  ±  1,21  mg/dL dibandingkan kelompok yang lainnya. Hal ini terjadi karena  tikus  kelompok  negatif  (K-)  yang  diinduksi streptozotocin tidak  diberikan  terapi  apapun  baik ekstrak C . comatus maupun metformin selama 14 hari perawatan. Kadar kreatinin yang tinggi menandakan adanya gangguan laju filtrasi glomerulus pada ginjal dan  kondisi  stress  oksidatif  yang  disebabkan  oleh induksi streptozotocin .  Hal  ini  sesuai  dengan  hasil
penelitian  Tandi et  al .  (2020),  bahwa  induksi streptozotocin mampu  meningkatkan  produksi  ROS yang  memicu  kondisi  stres  oksidatif  pada  tikus sehingga  terjadi  peroksidasi  lipid.  Peroksidasi  lipid yang  terhenti  akan  memperbaiki  sel  endotel glomerulus sehingga kreatinin menurun.
Tabel  4. Persentase  Penurunan  Kadar  Kreatinin Hewan Percobaan Dibandingkan Kontrol Negatif
No. Perlakuan Persentase Penurunan Kadar Kreatinin (%) 1 KP 76,64 2 P1 62,62 3 P2 76,64 4 P3 73,83
Keterangan : (KP): kontrol pembanding (metformin dosis 45 mg/kgBB), (P1): perlakuan 1 (ekstrak C . comatus dosis 250 mg/kgBB), (P2): perlakuan 2 (ekstrak C . comatus dosis 500 mg/kgBB), dan (P3): perlakuan 3 (ekstrak C . comatus dosis 750 mg/kgBB).
Berdasarkan Tabel 4. bahwa pemberian ekstrak etil asetat C . comatus dan metformin selama 14 hari terbukti  mampu  menurunkan  kadar  kreatinin  dalam darah  tikus.  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian Tuldjannah et  al .  (2018)  juga  menunjukkan  bahwa ekstrak etil asetat daun gedi merah yang mengandung flavonoid  mampu  menurunkan  kadar  kreatinin  pada tikus  yang  diinduksi  etilen  glikol  0,75%  dan amonium  klorida  0,2%.  Kandungan  senyawa flavonoid dalam daun gedi merah berpotensi sebagai antioksidan dan diuretikum sehingga dapat meningkatkan laju filtrasi glomerulus dan menurunkan kadar kreatinin.
Menurut  hasil  penelitian  Husen  (2019),  bahwa selain  flavonoid  ekstrak  etil  asetat C . comatus juga mengandung  senyawa  saponin.  Mekanisme  saponin untuk menurunkan kadar glukosa darah yaitu dengan meregenerasi  pankreas  sehingga  terjadi  peningkatan jumlah  sel  β  pankreas  dan  pulau-pulau  lagerhans akibatnya  sekresi  insulin  dalam  tubuh  juga  akan meningkat.  Sekresi  insulin  yang  meningkat  akan menurunkan  kadar  glukosa  darah  dalam  tubuh (Indrawati et  al .,  2015).  Penurunan  kadar  glukosa darah  diikuti  dengan  penurunan  kadar  kreatinin dalam darah tikus.
Senyawa  lain  yang  terkandung  dalam  ekstrak etil asetat C . comatus yaitu alkaloid yang berpotensi sebagai antioksidan serta antidiabetik (Husen, 2019). Mekanisme  alkaloid  sebagai  antidiabetik  yaitu dengan  cara  meningkatkan  ekspresi  GLUT  4  dan glukokinase. Ekspresi GLUT 4 yang meningkat akan mempercepat  proses  glikogenesis  sehingga  glukosa darah  yang  berlebih  pada  penderita  DM  dapat dikendalikan  (Sharma et  al .,  2009).  Kadar  glukosa darah  yang  terkendali  akan  menurunkan  kadar kreatinin dalam darah.
Tabel  5. Rerata  Kadar  Glukosa  Darah  Hewan
Percobaan No. Perlakuan Kadar Glukosa Darah  (mg/dL) Sebelum Perlakuan Sesudah Perlakuan 1 K+ 101,60 102,00 2 K- 138,40 141,80 3 KP 141,40 105,40 4 P1 133,80 119,80 5 P2 135,60 109,00 6 P3 137,20 114,00
Keterangan :  (K+):  kontrol  positif  (aquabides),  (K-): kontrol  negatif  ( streptozotocin dosis  50  mg/kgBB),  (KP): kontrol pembanding (metformin dosis 45 mg/kgBB), (P1): perlakuan 1 (ekstrak C . comatus dosis 250 mg/kgBB), (P2): perlakuan 2 (ekstrak C . comatus dosis 500 mg/kgBB), dan (P3): perlakuan 3 (ekstrak C . comatus dosis 750 mg/kgBB).
Kadar  kreatinin  darah  tikus  berhubungan dengan  kadar  glukosa  darah  tikus.  Penurunan kadar  kreatinin  darah  yang  terjadi  pada  tikus disebabkan oleh penurunan kadar glukosa darah tikus. Berdasarkan  Tabel  5.  menunjukkan  bahwa rerata  kadar  glukosa  darah  tikus    pada  kelompok pembanding  yaitu  105,40  mg/dL  mendekati  rerata kadar glukosa darah pada kontrol positif yaitu 102,00 mg/dL. Hasil ini sesuai dengan penelitian Arrosyid & Choiril  (2019),  bahwa  metformin  adalah  salah  satu obat  oral  antidiabetes  untuk  menurunkan  glukosa darah dari golongan biguanid yang banyak digunakan oleh  masyarakat. Mekanisme  spesifik  metformin untuk  menurunkan  kadar  glukosa  darah  antara lain memperlambat absorbsi glukosa dari darah, mengurangi glukoneogenesis di hati, mengurangi kadar glukagon dalam plasma, dan meningkatkan  pengikatan  insulin  pada  reseptor insulin (Prameswari & Widjanarko, 2014).

## Tabel 6. Persentase Penurunan Kadar Glukosa Darah Hewan Percobaan
No. Perlakuan Persentase Penurunan Kadar Glukosa Darah Tikus (%) 1 K+ -0,39 2 K- -2,46 3 KP 25,46 4 P1 10,46 5 P2 19,62 6 P3 16,91
Keterangan :  (K+):  kontrol  positif  (aquabides),  (K-): kontrol negatif ( streptozotocin dosis 50 mg/kgBB), (KP) : kontrol pembanding (metformin dosis 45 mg/kgBB), (P1): perlakuan 1 (ekstrak C . comatus dosis 250 mg/kgBB), (P2): perlakuan 2 (ekstrak C . comatus dosis 500 mg/kgBB), dan (P3): perlakuan 3 (ekstrak C . comatus dosis 750 mg/kgBB).
Berdasarkan  Tabel  6.  terjadi  penurunan  kadar glukosa darah tikus pada kelompok pembanding dan perlakuan  1,  2,  3.  Menurut  Tesanovic et  al .  (2016), menyatakan  bahwa  jamur C . comatus mengandung senyawa  comatin  yang  memiliki  efek  hipoglikemik. Sehingga  ekstrak C . comatus mampu  menurunkan kadar glukosa darah yang meningkat.

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dan  pembahasan dapat  disimpulkan  bahwa  Ekstrak  etil  asetat C. comatus berpengaruh  terhadap  kadar  ureum  dan kreatinin  darah  tikus  model  diabetes.  Dosis  efektif ekstrak  etil  asetat C . comatus yang  berpengaruh terhadap penurunan kadar ureum dan kreatinin darah tikus  model  diabetes  adalah  500  mg/kgBB.  Saran yang dapat disampaikan untuk penelitian selanjutnya adalah perlu dilakukan uji histologis ginjal agar dapat melihat  kondisi  histologis  ginjal  setelah  pemberian ekstrak C . comatus .

## DAFTAR REFERENSI
Akmal, M., Adam, M., Toras, M., Lubis, T.M., 2015. Pengaruh  pemberian  ekstrak  daun  pegagan ( Centella asiatica (L.)  Urban)  terhadap konsentrasi  testosteron  pada  tikus  putih jantan  ( Rattus norvegicus ). Jurnal  Medika Veterinaria 9(1), pp. 40-43.
Aldi, A.S.P., Kalsum, U.,  Fatmawati, 2019. Pengaruh suplementasi besi (fe) dosis tinggi terhadap kondisi  sel  beta  pankreas  pada  tikus  putih ( Rattus norvegicus )  strain  wistar  bunting. Journal of Issues In Midwifery 3(1), pp. 20– 25.
Arrosyid,  M.,  Choiril,  H.M.,  2019.  Pengaruh pemberian  campuran  bee  pollen,  serbuk rimpang kencur, serbuk rimpang kunyit, biji pinang dan daun sirih terhadap volume urin pada tikus wistar pasca paparan streptozotocin  (STZ).  MOTORIK Jurnal Ilmu Kesehatan 14(1), pp. 18-29.
Dai,  K.L.,  Hidayah,  F.  K.,  Triliana,  R.,  2020. Hubungan kadar glukosa terhadap perubahan  kadar  asam  urat,  ureum,  dan kreatinin  serum  penderita  diabetes  melitus tipe  2  di  malang  raya. Jurnal  Bio Komplementer Medicine 7(2), pp. 1-12.
Defriana,  D.,  Fridayanti,  A.,  Rijai,  L.,  2015.  Efek Ekstrak  tanduk  rusa  sambar  ( Cervusuni color )  terhadap  kadar  ureum  dan  kreatinin tikus putih ( Rattus novergicus ). Jurnal Sains dan Kesehatan 1(2), pp. 51–55.
Husen, F., 2019. Ekstrak etil asetat coprinus comatus sebagai  antidiabetik  dan  antioksidan  tikus wistar  ( Rattus norvegicus )  hiperglikemik. Tesis . Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman, Purwokerto.
Indrawati,  S.,  Yuliet,  Y.,    Ihwan,  I.,  2015.  Efek antidiabetes  ekstrak  air  kulit  buah  pisang ambon  ( Musa paradisiaca L.)  terhadap mencit ( Mus musculus ) model hiperglikemia. Galenika Journal of Pharmacy 1(2), pp. 133-140.
Khan.R., Ali, R., Khan, Z., Shah, S., Nawab, Z., 2012. Cinnamon  on  the  functions  of  liver  and kidney  in  type  2  diabetic  individuals. Pakistan Journal of Life and Social Sciences 8(2), pp. 145-149.
Kumar,  S.,  Pandey,  A.K.,  2013.  Chemistry  and biological  activities  of  flavonoids:  an overview. The scientific world journal 1(1), pp. 1-16.
Lung,  J.K.S.,  Destiani,  D.P.,  2018.  Uji  aktivitas antioksidan  vitamin  a,  c,  e  dengan  metode DPPH. Farmaka 15(1), pp. 53–62.
Malole,  M.B.M.  &  Pramono,  C.S.U.,  1989.
Pengantar  Hewan-hewan  Percobaan  di Laboratorium .  Pusat  Antar  Universitas Bioteknologi IPB, Bogor.
Mongi, R., Simbala, H.E., de Queljoe, E., 2019. Uji Aktivitas  penurunan  kadar  gula  darah ekstrak etanol daun pinang yaki
(arecavestiaria)  terhadap  tikus  putih  jantan Galur  Wistar  ( Rattus norvegicus )  yang diinduksi aloksan. Pharmacon 8(2), pp. 449- 456.
Mustika,  A.,  Indrawati,  R.,  Sari,  G.M.,  2017.  Efek ekstrak daun
singawalang
( petiveriaalliacea ) dalam menurunkan kadar glukosa darah melalui peningkatan ekspresi ampk-α1 pada tikus model diabetes mellitus. Jurnal  Farmasi  Klinik  Indonesia 6(1),  pp. 22-31.
Nawfa,  R.,  Purnomo,  A.S.,  2016.  Pengaruh  tongkol jagung sebagai media pertumbuhan
alternatif  jamur  tiram  putih  ( Pleurotus ostreatus ) terhadap aktivitas antimikroba. Jurnal Sains dan Seni ITS , 5(1), pp. 57-60.
Prameswari, O.M., Widjanarko, S.B., 2014. Uji efek ekstrak  air  daun  pandan  wangi  terhadap penurunan  kadar  glukosa  darah  dan histopatologi tikus diabetes mellitus. Jurnal Pangan dan agroindustri 2(2), pp. 16-27.
Radji,  M.,  Sumiati,  A.,  Rachmayani,  R.,    Elya,  B., 2011.  Isolation  of  fungal  endophytes  from garcinia  mangostana  and  their  antibacterial activity. African  Journal  of  Biotechnology 10(1), pp. 103 – 107.
Ratnaningtyas,  N.I.,  Ekowati,  N.,  Sukmawati,  D.,
Widianti,  H.,  2019.  Chicken  drumstick mushroom  ( Coprinus comatus )  ethanol extract exerts a hypoglycaemic effect in the rattus norvegicus model of
diabetes. Biocatalysis  and  Agricultural Biotechnology , 19(1), pp. 1-4.
Retnowati, A., Rugayah, J. S. R., Arifiani, D., 2019.
Status  Keanekaragaman  Hayati  Indonesia: Kekayaan  Jenis  Tumbuhan  dan  Jamur Indonesia . LIPI Press, Jakarta.
Sasmita,  F.W.,  Susetyarini,  E.,  Husamah,  H.  & Pantiwati,  Y.,  2017.  efek  ekstrak  daun kembang  bulan  ( Tithonia diversifolia ) terhadap  kadar  glukosa  darah  tikus  wistar ( Rattus novergicus ) yang diinduksi alloxan.
Majalah  Ilmiah  Biologi  BIOSFERA:  A Scientific Journal 34(1), pp. 22-31.
Sharma, B., Salunke, R., Balomajumder, C., Daniel, S., Roy, P., 2009. Anti-diabetic potential of alkaloid-rich fraction from capparis deciduas on diabetic mice. Journal Ethnopharmacol , 127, pp. 457-462.
Simatupang,  R.,  2020. Pedoman  Diet  Diabetes Mellitus.  Yayasan  Pendidikan  dan  Sosial Indonesia Maju , Serang.
Song, J., Kwon, O., Chen, S., Daruwala, R., Eck, P., Park,  J.  B.,  Levine,  M.,  2002.  Flavonoid inhibition  of  sodium-dependent  vitamin  c transporter 1 (SVCT1) and glucose transporter  isoform  2  (GLUT2),  intestinal transporters for vitamin c and glucose. Journal of Biological
Chemistry 277(18), pp. 15252-15260.
Szkudelski, T., 2001. The mechanism of alloxan and streptozotocin  action  in  b  cells  of  therat pancreas. Physio Res 50(6), pp. 537-546.
Tandi, J., Muttaqin, H.K., Handayani, K.R., Mulyani, S. & Patala, R., 2020. Uji potensi metabolit sekunder ekstrak kulit buah petai ( Parkiaspeciosa hassk )  terhadap  kadar kreatinin dan ureum tikus secara spektrofotometri uv-vis. KOVALEN: Jurnal Riset Kimia 6(2), pp. 143–151.
Tandi,  J.,  Wulandari,  A.,    Asrifa,  A.,  2017.  Efek ekstrak etanol daun gendola merah (Basella alba L.) terhadap kadar kreatinin, ureum dan deskripsi histologis tubulus ginjal tikus putih jantan  ( Rattus norvegicus )  diabetes  yang diinduksi  streptozotocin. Jurnal  Farmasi Galenika 3(2), pp. 93-102.
Tatukude,  R.L.,  Loho,  L.,  Lintong,  P.  M.,  2014.
Gambaran  histopatologi  hati  tikus  wistar yang diberikan boraks. eBiomedik , 2(3), pp. 1-7.
Tesanovic,  K.,  Pejin,  B.,  Sibul,  F.,  Matavulj,  M., Raseta,  M.,  Janjusevic,  L.,  Karaman,  M., 2016. A comparative overview of antioxidative properties and phenolic profiles  of  different  fungal  origins:  fruiting bodies and submerged cultures of  Coprinus comatus and Coprinellus truncorum.

## Journal  of  Food  Science  and  Technology
54(2), pp. 430-438.
Tuldjannah,  M., Tadjio,  Y.K.,  Tandi,  J.,  2018.  Efek nefroprotektif  ekstrak  daun  gedi  merah terhadap  kadar  kreatinin  atau  ureum  tikus putih jantan diinduksi etilenglikol. Farmakologika: Jurnal Farmasi , 15(2), pp. 160-167.
Wati,  A.,  Kosman,  R.,  Lizikri,  A.,  2014. perbandingan  efektivitas  hipoglikemik  obat metformin  paten  dan  generik  berlogo berdasarkan penurunan kadar glukosa darah mencit  (Mus  musculus)  jantan  yang diinduksi aloksan. As-Syifaa Jurnal Farmas i 6(1), pp. 91-97.
Widyastuti, N. Teguh, B., Reni, G., Henky, I., Priyo, W.,    Donowati.,  2011.  Analisa  kandungan beta-glukan  larut  air  dan  larut  alkali daritubuh buah jamur
tiram (Pleurotusostreatus)  dan  shiitake  ( Lentinus edodes ). Jurnal  Sains  dan  Teknologi Indonesia 13(3), pp. 182-191.
Wild, S., Roglic, G., Green, A., Sicree, R., King, H., 2004.  Global  prevalence  of  diabetes: estimates  for the  year 2000 and projections for  2030. Diabetes  Care 27(5),  pp.  1047- 1053.