## Pendahuluan
Produk  darah  merupakan  salah  satu  sediaan obat yang sangat dibutuhkan dewasa ini, terutama bagi  pasien  yang  menjalani  terapi  medis menggunakan  produk  darah  seperti  hemodialisis dan  anemia  kronik. 6 Darah  sebagai  sediaan  obat harus bebas dari kuman penyakit, karena baik virus maupun  bakteri  dapat  ditransmisikan  melalui transfusi  darah.  Hasil  penelitian  menunjukan bahwa kasus infeksi bakteri melalui transfusi darah lebih  banyak  dibandingkan  infeksi  virus  dengan
angka prevalensi infeksi bakteri mencapai 1: 1000 sedangkan  prevalensi  infeksi  virus  sebesar  1: 34.000. 7 Beberapa  upaya  yang  telah  dilakukan untuk  mengurangi  kontaminasi  bakteri  pada produk  darah  adalah  ketat  dalam  penggunaan desinfektan dalam serangkaian proses pengolahan darah, akan tetapi penggunaan alkohol dilaporkan memberi  resiko  lisis  darah,  sehingga  diperlukan senyawa  kimia  yang  efektif  sebagai  antibakteri namun  minim  resiko  melisiskan  darah.  Pada penelitian  ini  akan  dilakukan  uji  aktivitas antibakteri pada senyawa 2’-hidroksi-4’,6’- dimetoksikalkon  terhadap  bakteri  gram  positif: Staphylococcus  aureus dan  bakteri  gram  negatif: Escherichia  coli .  Senyawa  ini  diprediki  memiliki potensi sebagai antibakteri dikarenakan mengikat gugus-gugus aktif seperti hidroksi dan metoksi.

## Antibacterial Activity of 2 '-hydroxy-4', 6 'dimethoxychalcone

## Aktivitas Antibakteri Senyawa 2’-hidroksi-4’,6’ dimetoksikalkon
Wiwit Sepvianti*, Serafica Btari Christiyani Kusumaningrum

## Intisari
Kalkon  merupakan  senyawa  flavanoid  rantai  terbuka  yang  memiliki  beragam  aktivitas  farmakologis diantaranya  sebagai  antioksidan, 2 antibakteri, 3 antiinflamatori  dan  antikanker. 4 Senyawa  2’-hidroksi- 4’,6’-dimetoksikalkon  telah  dilaporkan  memiliki  aktivitas  antikanker  yang  sangat  baik  dan  bersifat selektif, yaitu hanya aktif mematikan sel kanker namun tidak mematikan sel normal. 5 Aktivitas senyawa 2’-hidroksi-4’,6’-dimetoksikalkon yang baik terhadap sel kanker diharapkan juga bekerja pada bakteri. Penggunaan  alkohol  sebagai  desinfektan  pada  proses  aftap  memberi  resiko  lisis  darah,  sehingga diperlukan  senyawa  kimia  yang  efektif  sebagai  antibakteri  namun  minim  resiko  melisiskan  darah. Aktivitas  antibakteri  senyawa  kalkon  diuji  menggunakan  metode  difusi  agar  dengan  sumuran,  zona bening yang terbentuk  disekitar sumuran  menunjukan  aktivitas  senyawa  kalkon  dalam  menghambat pertumbuhan bakteri. Pada penelitian ini seluruh larutan kalkon dalam variasi konsentrasi 2;  4; 8; 10; dan 20 % tidak menunjukkan aktivitas penghambatan pertumbuhan bakteri, sedangkan pada sumuran yang diisi padatan kristal kalkon menunjukkan zona bening sekitar 1 mm sehingga dapat disimpulkan bahwa senyawa 2’-hidroksi-4’,6’-dimetoksikalkon tidak memiliki aktivitas sebagai antibakteri.
Kata kunci : produk darah, antibakteri, kalkon

## Afiliasi Penulis
STIKes Guna Bangsa Yogyakarta

## Korespondensi kepada
W. Sepvianti wiwit.sepvianti01@gmail.com

## Metode
Uji  aktivitas  antibakteri  senyawa  2’-hidroksi- 4’,6’-dimetoksikalkon  dilakukan  dengan  metode difusi  agar  dengan  penentuan  daya  hambat dihitung dari zona bening yang terbentuk. Bakteri uji  yang  digunakan Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus .

## Alat
Alat  yang dibutuhkan  pada  penelitian  ini  yaitu seperangkat alat gelas steril, mikropipet, inkubator, hotplate dan autoklaf.

## Bahan
Bahan yang digunakan pada penelitian ini yaitu media  pertumbuhan  bakteri  nutrien  broth, akuades,  agar,  alkohol  70%, Brain-Heart  Infusion (BHI), antibiotik,  DMSO, kultur bakteri gram positif Staphylococcus  aureus, serta  kultur  bakteri  gram negatif Escherichia coli.

## Prosedur penelitian

## Pembuatan larutan uji kalkon
Larutan uji dibuat dengan melarutkan senyawa kalkon dalam DMSO, dengan variasi konsentrasi 2, 4, 8, 10 dan 20 %.

## Sterilisasi alat
Setiap alat harus disterilkan sebelum digunakan yaitu  dengan  cara  dibungkus  kertas  dan dimasukkan  dalam  autoklaf  pada  121°  C  dengan tekanan  15  psi  selama  15  menit.  Alat  yang  tidak tahan  dengan  panas  disterilkan  dengan  alkohol 70%.

## Pembuatan media alas
Sebanyak 20 g serbuk agar dilarutkan ke dalam 1000  mL  akuades.  Kemudian  larutan  dipanaskan hingga  serbuk  agar  larut  sempurna.  Selanjutnya disterilisasi menggunakan autoklaf pada suhu 121° C dan tekanan 15 psi selama 15 menit. Setelah itu larutan didinginkan dan didiamkan di dalam lemari pendingin.

## Peremajaan bakteri
Sebanyak 0,24 g NB dilarutkan ke dalam 30 mL akuades.  Kemudian  larutan  tersebut  dituang  ke dalam 5 buah tabung reaksi dengan masing-masing tabung  terdapat  6  mL  larutan  NB.  Selanjutnya disterilisasi  menggunakan  autoklaf  pada  suhu 121°C dan tekanan 15 psi selama 15 menit. Setiap tabung  diisi  dengan  3  mL  bakteri  patogen  yaitu
Staphylococcus  aureus dan Escherechia  coli . Setelah  itu  semua  tabung  dimasukkan  ke  dalam inkubator dan didiamkan selama 24 jam.

## Pembuatan media bakteri
Ke dalam 20 buah Erlenmeyer 100 mL masing- masing  dimasukkan  0,4  g  NB  dan  0,8  g  agar, kemudian  di  tuang  akuades  sebanyak  50  mL. Larutan  tersebut  dipanaskan  hingga  NB  dan  agar larut sempurna.
Selanjutnya disterilisasi
menggunakan  autoklaf  pada  suhu  121°  C  dan tekanan 15 psi selama 15 menit. Setelah itu larutan didinginkan  dan  didiamkan  di  dalam    lemari pendingin.  Larutan  dipanaskan  kembali  hingga encer dan didiamkan beberapa saat hingga larutan tidak terlalu panas. Selanjutnya setiap Erlenmeyer diisi  dengan  500  μL  bakteri  patogen  yaitu Staphylococcus  aureus dan Escherechia  coli hasil peremajaan. Larutan agar dituang ke dalam cawan petri  yang  telah  diisi  media  alas  serta  telah dipasang ring. Cawan petri kemudian ditutup dan didiamkan beberapa saat. Ring dicabut ketika agar sudah mengeras sehingga terbentuk sumuran agar.

## Injeksi sampel dan pengukuran zona hambat
Ke  dalam  sumuran  ditambahkan  serbuk  padat kalkon dan 150 μL sampel uji pada konsentrasi 2, 4, 8, 10, 20 % dengan kontrol positif chloramphenicol dan kontrol negatif DMSO. Masa inkubasi dilakukan selama 24 jam, selanjutnya dilakukan pengukuran zona  hambat.  Diameter  zona  hambat  yang terbentuk  diukur  menggunakan  jangka  sorong untuk menentukan efektifitas antibakteri.

## Hasil & Pembahasan
Senyawa  kalkon  yang  diujikan  berbentuk padatan kristal murni dan larutan dalam beberapa konsentrasi, untuk membuat larutannya digunakan pelarut  DMSO.  Pelarut  ini  digunakan  sebagai pelarut senyawa uji kalkon sekaligus kontrol negatif karena  terbukti  tidak  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri sehingga zona hambat yang terbentuk  merupakan  murni  zona  hambat  dari senyawa uji. Kontrol positif yang digunakan dalam uji  ini  yaitu  antibiotik chloramphenicol yang dilarutkan dengan akuades steril. Chloramphenicol merupakan antibakteri pertama yang berspektrum luas,  dengan  mekanisme  kerja  menghambat sintesis protein dan bersifat bakteriostatik.
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  senyawa  2’- hidroksi-4’,6’-dimetoksikalkon menggunakan metose  difusi  agar  yang  disajikan  pada  Tabel.1. menunjukkan bahwa senyawa senyawa 2’-hidroksi- 4’,6’-dimetoksikalkon  tidak  memiliki  aktifitas sebagai antibakteri baik pada bakteri gram positif: Staphylococcus  aureus maupun  bakteri  gram negatif: Escherichia  coli .  Padatan  kristal  kalkon murni menunjukan keberadaan zona bening pada pertumbuhan bakteri Escherichia coli namun hanya sekitar  1  mm  saja.  Suatu  senyawa  yang  zona penghambatan kurang dari 6 mm dinyatakan tidak aktif. 8
Senyawa 2’-hidroksi-4’,6’-dimetoksikalkon yang mengikat  gugus  hidroksi  dan  metoksi  pada  ring A semula  diprediksi  memiliki  aktivitas  yang  baik sebagai  antikanker.  Namun,  pada  penelitian  ini telah terbukti senyawa kalkon ini tidak berpotensi sebagai  antibakteri.  Gugus  hidroksi  memiliki kemampuan melarutkan lipid pada membran luar bakteri  gram  negatif,  sehingga  mampu  membuat kerusakan  membran  yang  menggangu  fungsi pertahanan terluar bakteri. Bakteri akan kehilangan  penyangga  dan  mengalami  lisis.  Akan tetapi  kemungkinan  posisi  gugus  hidroksi  pada senyawa  2’-hidroksi-4’,6’-dimetoksikalkon  berada pada  posisi  yang  cukup  sterik  atau  tidak  bebas menyebabkan  interaksinya  dengan  lipid  pada membran bakteri tidak optimal, sehingga senyawa ini tidak dapat berfungsi sebagai antibakteri. Hal ini bersesuaian  dengan  pernyataan  Nur et  al (2017) bahwa sifat antibakteri senyawa kalkon tergantung pada  jenis  substituen  dan  posisi  substituen  yang terikat pada kedua cincin aromatiknya.

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  peneltian  yang  telah dilakukan maka dapat disimpulkan bahwa senyawa 2’-hidroksi-4’,6’-dimetoksikalkon  tidak  memiliki aktivitas  antibakteri  pada  bakteri  gram  positif maupun bakteri gram negatif.

## Apresiasi
Ucapan  terimakasih  disampaikan  kepada  DIPA Kopertis Wilayah V yang telah mendukung dengan Dana  Bantuan  Penelitian  dengan  nomor  kontrak 017/LPPM-GB/PEN/VI/2018

## Bibliografi
1. Mai,  C.W.,  Yaeghoobi,  M.,  Ab-Rahman,  N.,  Kang, Y.B.,  and  Pichika,  M.R.,  2014,  Chalcones  with Electron-with  Drawing  and  Elektron-Donating Substituens:  Anticancer  Acitivity  Against  TRAIL Resistant Cancer Cells, Structure-Activity Relationship Analysis and Regulation of Apoptotic Protein, Eur. J. Med. Chem ., 77, 378-387.
2. Oldoni, T.L., Cabral, I.S., Regitano, M.A.B., Rosalen, P.L., and Ikegaki, M., 2011, Isolation and Analysis of Bioactive Isoflavanoids Chalcone from a New Type of Brazillian Propolis, Sep. Purif. Technol ., 77, 208-213.
3. Avila, H.P., Smania, E.F., Monache, F.D. and Junior, A.S.,  2008,  Structure-Activity  Relationship  of Antibacterial  Chalcones, Bioorg.  Med.  Chem ,  16, 9790-9794.
4. Li, Y.P., Yang, Y.C., Li, Y.K., Jiang, Z.Y., Hung, X.Z., Wang,  W.G.,  and  Gao,  X.M.,  2014,  Prenylated Chalcones  from Desmodium  renifolium , Phytochem. Lett , 9, 41-45.
5. Sepvianti,  W.,  2016,  Sintesis  dan  Uji  Sitotoksisitas Turunan Kalkon terhadap Sel Kanker T47D, Hela dan WiDr  secara  In  Vitro, Tesis ,  Pasca  Sarjasa, Universitas Gadjah Mada.
6. Darmawan,  A.,  Irawan,  R,  2015,  Mengenal  CPOB untuk Produk Darah, JMJ, 3:111-118
7. Delaney  M.,  Wendel  S.,  Bercivitz  R.,  Cid  J,  Cohn C.,Dunbar  N.M.,  2016,  Transfusion  Reactions: Prevention Diagnosis and Treatment, 388, 2824-2836.
8. Jasril., Teruna H.Y., Zamri A., Alfatos D., Yuslinda E., Nurulita  Y.,    2012,  Sintesis  dan  Uji  Antibakteri Senyawa  Bromo  Kalkon  Piridin, Natur  Indonesia , 14(3), 172-175.