## RESPON PERTUMBUHAN TUNAS DARI PROTOCORM-LIKE BODIES MENJADI PLANLET ANGGREK DENDROBIUM HIBRIDA IN VITRO TERHADAP DUA JENIS MEDIA DAN PEMBERIAN TRIPTON
Maera Zasari 1 , Sri Ramadiana 2 , Yusnita 2 , dan Dwi Hapsoro 2
1 Dosen Jurusan Budidaya Pertanian FPPB Bangka Belitung
2 Dosen Jurusan Budidaya Pertanian Fakultas Pertanian Universitas lampung

## ABSTRACT
RESPON  OF  SHOOT  GROWTH  PROTOCORM-LIKE  BODIES  INTO  DENDROBIUM  HYBRID ORCHID PLANTLETS IN VITRO AGAINTS TWO TYPES OF MEDIA AND TRIPTON . Dendrobium is great  interest  because  of  its  high  value  as  a  floricultural  commodity  and  a  kind  of  elite  herbage  plant  in Indonesia.  An  efficient  in  vitro  propagation  system  via  protocorm-like  body  (PLBs)  induction  has  been developed  using  one-year-old  axillary  node  explants.    The  potential  of  different  media  and  supplements triptone for reliable Dendrobium orchid plantlet regeneration from in vitro PLBs explants were studied. In all two  media  under  investigation,  shoot  regeneration  was  achieved  when  the  PLBs  were  transferred  onto solidified MS half strenght and Growmore medium with or without 2 g L-1 triptone supplemented with 15% (v/v)  coconut  water,  20  g  L-1  sucrose,  and  2  g  L-1    charcoal.    The  shoots  development  investigation  after three  month  of  culture.  1/2  MS  and  Growmore  media  significantly  influenced  the  plantlet  regeneration  of Dendrobium  orchid.  Among  the  media,  Growmore  showed  better  performance  on  shoots  and  leaves  per plantlet,  but  triptone  showed  no  significant  effect  on  number  shoots  and  leaves.    The  longest  shoots  were found in Growmore medium without triptone.
Key words: Dendrobium, in vitro, PLBs, planlet, triptone.

## PENDAHULUAN
Tanaman  anggrek  merupakan  salah  satu  jenis tanaman  hias  yang  penting  dan  populer  dalam industri florikultur di Indonesia karena keunggulannya,  yaitu  disamping  keindahan  dan karakter bunga yang unik (bentuk, ukuran, dan warna bunga bervariasi) juga memiliki nilai komersil tinggi, pasaran luas, sumber plasma nutfah untuk persilangan, dan mudah dibudidayakan (http://www.ristek.go.id, 2009). Dendrobium merupakan  jenis  anggrek  yang  paling  diminati  oleh konsumen  karena  bentuk  dan  warna  bunganya  lebih bervariasi  (bunganya  cukup  besar,  tegak,  kuat, jumlah kuntum banyak, berwarna cerah), waktu segar bunga setelah dipotong cukup panjang, dan harganya yang  terjangkau  (Direktorat  Jendral  Pengolahan  dan Pemasaran Hasil Pertanian, 2005).
Saat ini, kebanyakan produksi anggrek hibrida Dendrobium varietas  baru  yang  dihasilkan  para pemulia  tanaman  dipasarkan  secara  langsung  ke konsumen  berupa  bibit  botolan.    Seharusnya,  bibit- bibit hasil silangan ditumbuhkan dan diseleksi untuk mendapatkan  progeni  unggul  baru  yang  bernilai jual tinggi,  lalu  diperbanyak  secara  klonal  untuk mendapatkan bibit yang true-to-type (Ernst, 1994).
Salah satu tahapan penting dalam perbanyakan klonal in  vitro untuk  memperbanyak  tanaman anggrek  adalah  tahap  regenerasi  tunas  yaitu pemanjangan  dan  pengakaran  tunas  (George,  1996). Keberhasilan pada tahapan ini tergantung pada faktor
dari  dalam  maupun  faktor  dari  luar  diantaranya faktor  dari  luar  adalah  nutrisi  media  (dasar  atau tambahan)  (Wu, et  al .  (1987) yang  dikutip  dalam Puchooa, 2004).
Perbaikan  kualitas  tunas  hasil protocorm-like bodies (PLBs)  membentuk  planlet dilakukan  dengan cara memindahkan tunas-tunas mini ke dalam media pembesaran.    Untuk  tanaman  anggrek,  media  padat berformulasi  Murashige  dan  Skoog  (MS) full strength maupun half strength (1/2 MS) dengan atau tanpa  zat  pengatur  pertumbuhan  dapat  digunakan untuk  regenerasi  PLBs  menjadi  planlet  (George (1996); Puchooa (2004); Shiau et al . (2005); Aktar et al .  (2007);  Sheelavanthmath et  al .,  2008),  bahkan media  padat  mengandung  pupuk  daun  cukup  efektif digunakan sebagai media alternatif untuk mendukung pertumbuhan dan perkembangan kultur, seperti yang dilaporkan Damayanti, 2006; Indani, 2007; Ramadiana, et al ., 2008; Syaputri, 2009).
Pengayaan  nutrisi  dengan  menambahkan komponen  organik  mengandung  asam  amino misalnya  tripton  di  dalam  media  kultur  sering dilakukan  untuk  mengoptimalkan  pertumbuhan kultur  (Muralidhar  dan  Mehta,  1982;  Pierik et  al ., 1988a yang  dikutip  dalam George,  1996).    Tripton merupakan pancreatic digest amino acid ’asam amino yang  dicerna  enzim  pankreas  yang  mengandung sejumlah  asam  amino  seperti  alanin,  arginin,  asam aspartat,  sistein,  asam  glutamat,  glisin,  histidin, isoleusin,  leusin,  lisin,  metionin,  fenilalanin,  prolin, treonin,  triptofan,  dan  valin.    Kalsium,  fosfat,
beberapa mikroelemen, dan vitamin juga terkandung dalam  tripton  (Arditti  dan  Ernst,  1993).    Berkaitan dengan  hal  tersebut  perlu  diadakan  penelitian  yang mempelajari  pengaruh  pemberian  tripton  terhadap regenerasi protocorm-like  bodies menjadi  planlet in vitro anggrek Dendrobium hibrida.

## BAHAN DAN METODE
Percobaan  dilaksanakan  di  Laboratorium Kultur  Jaringan  Tanaman Fakultas Pertanian Universitas  Lampung,  mulai  bulan  Januari  sampai April  2010.    Eksplan  yang  digunakan  berupa clump tunas  yang  berasal  dari  pengulturan  PLBs  anggrek Dendrobium di dalam media cair 1/2 MS berNAA 2 mg/l.  Perlakuan percobaan adalah 2 formulasi media dasar  yaitu  1/2  MS  dan  2  g/l  Growmore  32-10-10 (sebagai faktor pertama) serta tanpa atau dengan 2 g/l tripton  (sebagai  faktor  kedua).    Tiap-tiap  media ditambahkan 150 ml/l air kelapa, 20 g/l sukrosa,  dan 2 g/l arang aktif serta diatur pHnya menjadi 5,6 lalu dipadatkan  dengan  7  g/l  agar Swallow  Globe .    1—2 clump tunas yang berasal dari PLBs berukuran 1—2 cm ditanam ke dalam botol yang berkapasitas 350 ml berisi  media  pembesaran  sesuai  dengan  perlakuan dan  diulang  sebanyak  5  kali.    Selanjutnya,  botol- botol  yang  telah  berisi  1—2 clump tunas  disusun dalam  rancangan  teracak  sempurna  faktorial  (2  x  2) di  dalam  ruang  inkubasi  bersuhu  26±2  °  C  dan  di bawah penyinaran lampu flourescent (TL) berintensitas 1000 lux selama 12 MST.  Data peubah berupa  tinggi  tunas  dan jumlah  daun  yang  diperoleh dihitung  nilai standar  error  of  the  mean (SE)  dan
ragamnya dianalisis menurut pola rancangan percobaan  yang  diterapkan.    Pemisahan  nilai  tengah dilakukan  dengan  uji Duncan's  multiple  range  test (DMRT) pada taraf 5 %.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Setelah  12  minggu  pengulturan  clump  tunas yang  berasal  dari  PLBs,  dilakukan  pengamatan terhadap tinggi tunas dan jumlah daun pada 2-5 tunas terbesar  dari  tiap-tiap  botol,  sebagaimana  disajikan pada  Gambar  1    Formulasi  media  (1/2  MS  atau Growmore) yang dicobakan berpengaruh pada tinggi tunas  tetapi  tidak  berpengaruh  pada  jumlah  daun, sedangkan  perlakuan  tripton  tidak  berpengaruh terhadap  kedua  peubah  yang  diamati.    Perlakuan formulasi media dan tripton berinteraksi nyata dalam mempengaruhi  pertumbuhan  tunas  yang  berasal  dari PLBs selama di dalam media pembesaran sebagaimana terlihat pada Tabel 1.
Formulasi media pembesaran hanya berpengaruh  terhadap  tinggi  tunas.    Tunas  yang didapatkan  pada  media  Growmore  berukuran  lebih tinggi  dibandingkan  dengan  yang  ditumbuhkan dalam media 1/2 MS yaitu berturut-turut 3,76 cm dan 3,13 cm, sebagaimana terlihat pada Tabel 2.
Formulasi media dan tripton saling berinteraksi  dalam  memengaruhi  regenerasi  tunas yang  berasal  dari  PLBs  menjadi  planlet.    Interaksi kedua perlakuan tersebut terhadap peningkatan tinggi tunas dan jumlah daun masing-masing disajikan pada Tabel 3.
Gambar  1 .    Penampilan  kultur  tunas  berasal  dari  PLBs  anggrek Dendrobium  sp . in  vitro saat  pengulturan awal  di  media  perbesaran  (a); plantlet berumur  4  minggu  (c);  8  minggu  (d);  dan  12  minggu setelah pengulturan awal (d).
a b d c
Tabel 1. Hasil sidik ragam respon pertumbuhan tunas yang berasal dari PLBs anggrek Dendrobium in vitro terhadap pemberian tripton.
Peubah F-hitung KK (%) Formulasi media Tripton g/l interaksi Tinggi tunas 4.75 * 0.05 tn 3.66 * 9.33 Jumlah daun 3.56 tn 0.68 tn 6.08 * 4.70
tn menunjukkan tidak berbeda nyata pada α 0.05
* menunjukkan berbeda nyata pada taraf α 0.05
Tabel 2. Rata-rata  tinggi tunas dan jumlah daun kultur tunas PLBs anggrek Dendrobium sp . secara in vitro terhadap pemberian tripton pada umur 12 minggu di dalam media perbesaran.
Peubah Perlakuan Formulasi media Tripton 1/2 MS Growmore 0 mg/l 2 g/l Tinggi tunas 3.13 b 3.76 a 3.41 a 3.48 a Jumlah daun 3.72 a 4.02 a 3.81 a 3.93 a
Angka yang diiukuti huruf yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata dengan uji DMRT pada α 5%.
Tabel  3. Pengaruh  media  dan  tripton  terhadap  rata-rata  tinggi  tunas  dan  jumlah  daun  yang  berasal  PLBs anggrek Dendrobium sp . secara in vitro pada umur 12 minggu. Peubah Media Pembesaran 1/2 MS tanpa Tripton Growmore  tanpa Tripton 1/2  MS  +  2  mg/l Tripton Growmore +  2  mg/l Tripton Tinggi tunas 2,86 b 3,98 a 3,42 AB 3,55 AB Jumlah daun 3,46 b 4,16 a 3,98 A 3,89 AB
Nilai rata-rata yang diiukuti huruf yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata dengan uji DMRT pada α 5%.
Tabel  3  memperlihatkan  interaksi  yang signifikan  antara  formulasi  media  dan  tripton  dalam pengaruhnya  terhadap  tinggi  tunas  dan  jumlah  daun anggrek  yang  dikulturkan.    Pada  media  1/2  MS, pemberian  tripton  cenderung  meningkatkan  tinggi tunas,  sebaliknya  pemberian  tripton  ke  dalam  media Growmore  justru  cenderung  menurunkan  tinggi tunas.    Tunas  tertinggi  didapatkan  pada  media Growmore tanpa tripton  yaitu 3,98 cm per botol dan tunas  terpendek  pada  media  1/2  MS  tanpa  tripton yaitu 2,86 cm per botol.
Pemberian  tripton  pada  media  1/2  MS  dapat meningkatkan  jumlah  daun,  sedangkan  pemberian tripton  pada  media  Growmore  tidak  berpengaruh terhadap  jumlah  daun.    Jumlah  daun  terbanyak didapatkan pada media Growmore tanpa tripton yaitu 4,16  helai  per  botol  dan  jumlah  daun  paling  sedikit pada media 1/2 MS tanpa tripton yaitu 3,46 helai per botol.
Gambar  2  menunjukkan  bahwa  tunas-tunas yang  dihasilkan  pada  media  Growmore  terutama Growmore tanpa tripton lebih vigorous dibandingkan dengan tunas-tunas yang berada pada media 1/2 MS tanpa  atau  dengan  tripton  2  g/l.    Tunas-tunas  pada
media  Growmore  tanpa  tripton  tampak  lebih  hijau dengan  tinggi,  jumlah  daun,  dan  jumlah  akar  yang lebih banyak.
Hasil percobaan menunjukkan bahwa perlakuan  formulasi  media  berpengaruh  terhadap tinggi tunas.  Tunas yang lebih tinggi dihasilkan pada perlakuan media mengandung pupuk daun Growmore  yaitu  3,76  cm  per  botol  dibandingkan dengan  yang  ditumbuhkan  di  media  1/2  MS,  yaitu 3,13 cm per botol.  Keberhasilan penggunaan media Growmore  sebagai  media pengganti  alternatif  dalam pengulturan in  vitro juga  telah  dilaporkan  oleh Damayanti  (2006);  Indani  (2007);  Ramadiana, et  al . (2008);  dan  Syaputri  (2009).    Diduga,  kandungan sejumlah  hara  penting  khususnya  nitrogen  (N)  yang terkandung  di  dalam  Growmore  32-10-10  lebih banyak sehingga cukup mendukung regenerasi tunas selama  periode  pembesaran.    Nitrogen  adalah  unsur yang  sangat  dibutuhkan  untuk  pertumbuhan  dan perkembangan  jaringan  selama  fase  vegetatif tanaman.
Penampilan  kultur  tunas  anggrek Dendrobium di  dalam  berbagai  media  perlakuan  setelah  umur  12 minggu disajikan pada Gambar 2.
Gambar 2 .    Penampilan kultur tunas PLBs anggrek Dendrobium di dalam berbagai media pembesaran (a) 1/2  MS  tanpa  tripton;  (b)  1/2  MS  +  2  mg/l  tripton;  c)  Growmore  tanpa  tripton;  dan  (d) Growmore + 2 mg/l tripton setelah 12 minggu.
Pemberian  tripton  2  g/l  ke  dalam  media pembesaran  tidak  berpengaruh  terhadap  tinggi  tunas dan  jumlah  daun  pada  kedua  jenis  media. Penambahan  sumber  nitrogen  organik  ke  dalam media  kultur  tidak  meningkatkan  regenerasi  tunas anggrek Dendrobium selama  pengulturan.    Hasil  ini berbeda  dengan  penelitian  Ramadiana et  al .  (2008) yang  mendapatkan  bahwa  penambahan  pepton sebagai sumber nitrogen ke dalam media kultur dapat meningkatkan  pertumbuhan protocorm anggrek Dendrobium .      Diduga,  bahwa  kebutuhan  sumber nitrogen  khususnya  an-organik  untuk  menunjang pertumbuhan  kultur  telah  tercukupi  sehingga penambahan  tripton  ke  dalam  media  pengulturan menjadi tidak efisien.  Menurut George (1996), tidak semua pengulturan in vitro memerlukan penambahan asam  amino  tetapi  tergantung  pada  ketersediaan sumber  nitrogen  yang  terkandung  di  dalam  media pengulturan.    Sebagian  besar  kebutuhan  unsur nitrogen  untuk  tujuan  pengulturan  tergantung  dari ketersediaan  sumber  nitrogen  anorganik  di  dalam media kultur dan selebihnya berasal dari asam amino sebagai  nitrogen  organik.    Suplemen  asam  amino yang  ditambahkan  ke  dalam  media  pengulturan diperlukan  untuk  menggantikan  kekurangan  sumber nitrogen  anorganik  seperti  yang  dilaporkan  Grimes dan Hodgess (1990); Chu et al . (1975) dalam George (1996).
Hasil  yang  signifikan  juga  terlihat  pada interaksi  antara  formulasi  media  dan  tripton  dalam pengaruhnya terhadap tinggi tunas dan jumlah daun. Hasilnya,  bahwa  perlakuan  media  Growmore  tanpa tripton  menghasilkan  tinggi  tunas  dan  jumlah  daun terbaik  yaitu  berturut-turut  3,98  cm  per  botol  dan 4,16  helai  per  botol.    Hasil  ini  mengindikasikan bahwa  pemberian  pupuk  daun  Growmore  2  g/l terbukti  efektif  sebagai  penyuplai  sumber  hara  yang diperlukan  untuk  pembesaran  tunas  PLBs  anggrek Dendrobium menjadi planlet. Sebelumnya, keberhasilan  penggunaan  pupuk  daun  Growmore  2 g/l  dalam  media  kultur  untuk  pengecambahan  dan pertumbuhan  PLBs  anggrek Dendrobium juga  telah dilaporkan  oleh  Ramadiana et  al .  (2008)  dan Soedjono (2005).

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil percobaan dapat disimpulkan
1. Untuk  regenerasi  PLBs  menjadi  planlet,  media dasar Growmore lebih baik daripada 1/2 MS,
2. sedangkan  pemberian  tripton  tidak  berpengaruh terhadap pertumbuhan planlet.
3. Pertumbuhan  planlet  tertinggi  didapatkan  pada media Growmore tanpa tripton.
b a

## c
d

## DAFTAR PUSTAKA
Aktar,  S.,  K.M.  Nasiruddin,  &  K.  Hossain.    2008. Effects  of  Different  Media  and  Organic
Additives Interaction on In Vitro Regeneration of Dendrobium Orchid.   Agric Rural Dev. 6(1:2): 69-74.
Damayanti, F. 2006.  Pembentukan Beberapa Hibrida Anggrek serta Pengaruh Beberapa  Media  Perkecambahan  dan  Media Perbanyakan  Cepat  secara  In  Vitro  pada Beberapa  Anggrek  Hibrida.    Laporan  Akhir Program  Hibah  Kompetisi.    Universitas Padjajaran.  Bandung.
Direktorat  Jendral  Pengolahan  dan  Pemasaran  Hasil Pertanian.  2005.  Road Map Pascapanen dan
Pemasaran Anggrek 2005-2010. http://agribisnis.deptan.go.id/.    Diakses  pada tanggal 24 Oktober 2009.
Ernst,  R.  1994.  Effects  of  Thidiazuron  on  In  Vitro
Propagation
of Phalaenopsis and Doritaenopsis (Orchidaceae).  Plant  Cell, Tissue and Organ Culture 39:273-275Sandra, E.    2004. Kultur  jaringan  Anggrek  Skala Rumah  Tangga .    AgroMedia  Pustaka. Jakarta.  80 hlm.
George,  E.F.    1996. Plant  Propagation  by  Tissue Culture Part  1  In  Practice .    2 nd Edition. Exegitics Limited.  England.  574 pp. _____.  1996. Plant Propagation by Tissue Culture Part  2  In  Practice .    2 nd Edition.    Exegitics Limited.  England.  1361 pp.
Indani.    2007.    Pengaruh  Pepton  dan  Media  Dasar Tehadap  Pertumbuhan  Protrokorm  Anggrek Dendrobium Hibrida In  Vitro .    Skripsi. Universitas  lampung.    Bandar  Lampung. Tidak dipublikasikan.
Juh  Shiau,  Y.  S.M.  Nalawade,  C.  Hsia,  V. Mulabagal,  and  H.  Tsay.    2005.    In  Vitro Propagation of The Chinese Medicinal Plant, Dendrobium Candidum Wall. Ex Lindl from Axenic  Nodal  Segment.    In  Vitro  Cellular and Developmental Biology –  Plant.
41(5):666-670.
Puchooa, D.  2004.  Comparison of Different Culture Media for the In Vitro Cultureof Dendrobium (Orchidaceae ). Agriculture  &  Biology. http://www.ijab.org.    Diakses  pada  tanggal 10 Nopember 2009.
Ramadiana,  S.  A.P.  Sari,  Yusnita,  dan  D.  Hapsoro. 2008.    Hibridisasi,  Pengaruh  Dua  Jenis Media dasar dan Pepton terhadap Perkecambahan Biji dan Pertumbuhan Protokorm  Anggrek  Dendrobium  Hibrida Secara  In  Vitro. Prosiding  Seminar Nasional Sains dan Teknologi-II Universitas Lampung . Bandar Lampung. 17-18
November 2008.
Sheelavanthmath,  B.P.  Hema,  E.J.  Hahn,  and  K.Y. Paek . 2005.    High  Frequency  of  Protocorm like  bodies  (PLBs)  Induction  and  Plant Regeneration  from  Protocorm  and  Leaf Sections  of Aerides  crispum .    Scientia
Horticulturae. 106(3): 395-401 http://www.sciencedirect.com/. Diakses pada tanggal 28 Oktober 2009.
Soedjono,  S.  2005.  Pengaruh  beberapa  pupuk  daun dalam media agar terhadap pertumbuhan  meriklon  anggrek Dendrobium Walter Oumae . Puslitbang Hortikultura.
Syaputri, G.  2009.  Pengaruh Arang Aktif dan Bubur
Pisang  Ambon  pada  Pembesaran Seedling Dendrobium  Hibrida In  Vitro .    Skripsi.
Universitas  Lampung.    Bandar  lampung. Tidak dipublikasikan.