## SKRINING FITOKIMIA DARI EKSTRAK DAUN BUNGA TELANG (Clitoria Ternatea L.) DAN UJI ANTIBAKTERI TERHADAP Escherichia coli
1 Nurgustiyanti, 2* Ermi Abriyani, 3 Iin Lidia Putama Mursal
1,2,3 Fakultas Farmasi Universitas Buana Perjuangan, Karawang, Indonesia *Corresponding author : ermi.abriyani@ubpkarawang.ac.id

## Abstrak
Indonesia  dikenal  sebagai  salah  satu  negara  yang  memiliki  keanekaragaman  hayati  terbesar  di  dunia.  Terdapat  90.000  jenis tumbuhan yang tumbuh di Indonesia. Salah satu tumbuhan yang dapat dibudidayakan sebagai tanaman hias dan tanaman obat yaitu Bunga Telang (Clitoria ternatea L .). Clitoria ternatea L memiliki potensi sebagai alternatif pengganti antibiotik karena aktivitas antibakteri  yang  dimilikinya.  Kandungan  kimia  yang  terdapat  pada  daun  bunga  telang  flavonoid,  senyawa  flavonoid  berpotensi sebagai  antibakteri.  Pada  uji  fitokimia  daun  bunga  telang  memiliki  senyawa  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  kuinon,  polifenolat, triterpenoid  dan  steroid.  Prinsip  metode  ini  adalah  membuat  lubang  pada  agar  yang  telah  diinokulasi  dengan  bakteri,  kemudian larutan  diteteskan  pada  lubang  sumuran  yang  telah  dibuat.  Penghambatan  pertumbuhan  mikroorganisme  terlihat  adanya  zona hambat  (wilayah  jernih)  disekitar  lubang  sumuran.  Konsentrasi  ekstrak  yang  digunakan  adalah  80%,  100%,  120%  dan  140%. Kontrol  positif  yang  digunakan  adalah  ciprofoxacin  sedangkan  kontrol  negatif  yang  digunakan  adalah  DMSO  5%.  Hasil  yang didapat pada zona hambat terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia colli pada ekstrak N-heksan, metanol, dan etil asetat . Pada sampel  metanol  dengan  konsentrasi  120%  dan  140%  memiliki  nilai  rata-rata  sebesar  (13,8  mm  dan  14,1  mm)  sedangkan  pada sampel  etil  asetat  dengan  konsentrasi  120%  dan  140%  memiliki  nilai  rata-rata  sebesar  (11,7  mm  dan  12,3  mm)  dimasukkan  ke dalam respon hambat sangat kuat.
Kata kunci: Daun bunga telang, Uji Fitokimia, metode sumuran

## Abstract
Indonesia is known as one of the countries with the largest biodiversity in the world. There are 90,000 types of plants that grow in Indonesia. One of the plants that can be cultivated as ornamental plants and medicinal plants  is  Telang  Flower  (Clitoria  ternatea  L.).  Clitoria  ternatea  L  has  potential  as  an  alternative  to antibiotics because of  its antibacterial  activity. The chemical  content contained in  the leaves of the telang flower is flavonoids, flavonoid compounds have the potential as antibacterial. In the phytochemical test, the leaves of telang flower have alkaloid compounds, flavonoids, saponins, quinones, polyphenols, triterpenoids and  steroids.  The  principle  of  this  method  is  to  make  holes  in  the  agar  that  has  been  inoculated  with bacteria,  then  the  solution  is  dripped  into  the  wells  that  have  been  made.  The  inhibition  of  the  growth  of microorganisms  was  seen  in  the  presence  of  an  inhibition  zone  (clear  region)  around  the  wellbore.  The concentration of extracts used were 80%, 100%, 120% and 140%. The positive control used was ciprofoxacin while  the  negative  control  used  was  DMSO  5%.  The  results  obtained  in  the  inhibition  zone  against  the growth of Escherichia colli bacteria in the extract of N- hexane, methanol, and ethyl acetate. The methanol sample with a concentration of 120% and 140% had an average value of (13.8 mm and 14.1 mm) while the ethyl acetate sample with a concentration of 120% and 140% had an average value of (11.7 mm). and 12.3 mm) was included in the very strong inhibitory response.
Keywords: Telang flower leaves, phytochemical test, well method

## PENDAHULUAN
Indonesia  dikenal  sebagai  salah  satu  negara yang  memiliki  keanekaragaman  hayati  terbesar  di dunia. Terdapat 90.000 jenis tumbuhan yang tumbuh di Indonesia. Salah satu tumbuhan yang dapat dibudidayakan sebagai tanaman hias dantanaman obat yaitu  Bunga  Telang (Clitoriaternatea  L .).  (Fitmawati et al. 2016).
Kekayaan tanaman obat di Indonesia meningkatkan  rasa  ingin  tahu  kita  dalam eksplorasi
tanaman  obat  sebagai  sumber  potensial  agen antimikroba baru. Kelimpahan tanaman di permukaan bumi  telah  menyebabkan  meningkatnya  minat  dalam penelitian  ekstrak  berbeda  yang  diperoleh  dari tanaman  obat  tradisional  sebagai  sumber  potensial agen  antimikroba  baru. Clitoria  ternatea  L memiliki potensi  sebagai  alternatif  pengganti  antibiotik  karena aktivitas  antibakteri  yang  dimilikinya.  (Rajesh,  et  al. 2017).
Bakteri  Gram  Positif  mampu  mempertahankan zat warna utama dalam  pewarnaan  Gram, yaitu
Gentian  Violet  (ungu  kristal  iodium),  sehingga nampak  berwarna  ungu  saat  pengamatan  dikarenakan dinding  sel  kelompok  bakteri  ini  tersusun  oleh sebagian  besar  Peptidoglikan,  yang  mampu  mengikat zat warna dan tidak rusak saat dicuci dengan alkohol. Sementara  itu , bakteri  Gram  negatif  memiliki komposisi  dinding  sel  yang  sebagian  besar  tersusun dari  lapisan  lipid,  sehingga  pada  saat  pewarnaan kurang  dapat  mempertahankan  zat  warna  utama terutama  saat  dicuci  dengan  alkohol  (lipid  rusak  saat dicuci  dengan  alkohol),  akibatnya  kelompok  bakteri ini memberikan kenampakan warna merah (warna dari zat  warna  ke  dua:  safranin  atau  air  fuchsin)  di  akhir kegiatan  pewarnaan  Gram.  Contoh  dari  bakteri  gram positif  ialah Clostridium  perfringens , Staphylococcus aureas , Neisseria gonnorrhoaeae, Treponema pallidum,  Vibrio  cholerae  dan  Bacillus  subtilis sedangkan  bakteri  gram  negatif  misalnya  adalah Streptococcus  mutans,  Staphylococcus  aureus dan Eschericia colli (Romauli, 2018).
Escherichia  coli atau  biasa  disingkat E.  coli adalah  salah  satu  jenis  spesies  utama  termasuk kedalam  gram  negarif.  Pada  umumnya  bakteri  ini diketahui  terdapat  secara  normal  dalam  alat pencernaan  manusia  dan  hewan.  Keberadaannya  di luar  tubuh  manusia  menjadi  indikator  sanitasi makanan  dan  minuman  apakah  pernah  tercemar  oleh kotoran  manusia  atau  tidak.  Keberadaan Eschericia coli dalam  air  atau  makanan  juga  dianggap  memiliki korelasi  tinggi  dengan  ditemukannya  bibit  penyakit (patogen)  pada  pangan  (Rahayu,  2003).  Dalam persyaratan  mikrobiologi E.  coli dipilih  sebagai indikator  tercemarnya  air  atau  makanan  karena keberadaan  bakteri E.  coli dalam  sumber  air  atau makanan  merupakan  indikasi  terjadinya  kontaminasi tinja manusia. E. coli yang terdapat pada makanan atau minuman  yang  masuk  kedalam  tubuh  manusia  dapat menyebabkan gejala seperti kholera, disentri, gastroenteritis,  diare  dan  berbagai  penyakit  saluran pencernaan lainnya (Nurwanto, 2007).
Berdasarkan  hal  tersebut  peneliti  tertarik  untuk melakukan  penelitian  mengenai  skrining  fitokimia dari  ekstrak  daun  bunga  telang (clitoria  ternatea  L.) dan uji antibakteri terhadap Escherichia coli.

## METODE PENELITIAN
Dalam  penelitian  ini  termasuk  jenis  penelitian kualitatif dengan metode eksperimental dilaboratorium.  Tujuannya  yaitu  untuk  mengetahui senyawa  metabolit  sekunder  yang  terkandung  pada ekstrak  daun  bunga  telang  dan  melakukan  pengujian antibakteri  pada  ekstrak  daun  bunga  telang  terhadap bakteri Escherichia coli.

## Persiapan Sampel
Penyiapan  bahan  dimulai  dengan  pengambilan bahan  yaitu  daun bunga telang  dan  sediaan  yang ada di masyarakat, determinasi sampel dengan pengolahan bahan.  Daun  bunga  telang  segar  yang  didapat  dari Lembaga  Ilmu  Pengetahuan  Indonesia  (LIPI)  dan
hasil  determinasi  dilakukan  di  Penelitian  Biologi Bogor.

## Peralatan yang digunakan dalam penelitian
Alat-alat  yang  akan  digunakan  pada  penelitian ini adalah blender, masker, sarung tangan, seperangkat  alat  maserasi,  rotary  evaporator,  neraca analitik,  spatula,  mortir  dan  stamper,  cawan  petri, batang  pengaduk,  erlenmayer,  gelas  ukur,  sangka sorong,  water  bath,  kompor  listrik,  beacker  glass, tabung  reaksi,  botol  coklat,  chamber,  lampu  UV, autoklaf,  inkubator,  cawan  porselen,  kaca  arloji, batang sumuran dan mikropipet.

## Bahan yang digunakan dalam penelitian
Bahan-bahan  yang  akan  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  daun  bunga  telang,  TSA  ( Tryptone Soya Agar) Aquadest, N-heksan, etil asetat, metanol,  perekasi  mayer,  pereksi  Liberman-Burchard, H 2 SO 4 2N,  FeCl 3 5%,  NaOH  1%,  HCL  2N, ciprofloxacin, kaps steril, DMSO (Dimetil Sulfoksida),  bakteri Escherichia  coli ,  plat  KLT,  pipa kapiler, aluminium foil, dan kertas saring .

## Ekstraksi
Banyak  metode  yang  dapat  digunakan  untuk mengekstraksi  senyawa  kimia  dari  sel  tumbuhan.  Pada penelitian ini dilakukan dengan metode maserasi bertingkat, Maserasi dilakukan selama 3-4 hari dengan masing-masing pada pelarut N-heksan, etil asetat dan methanol. Filtrat yang didapat kemudian diuapkan menggunakan rotary evaporator. Hasil dari maserasi tersebut yang nantinya akan dihitung rendemennya.
Skrining Fitokimia
1. Uji Alkaloid
Alkaloid  Larutan  uji  sebanyak  2  mL diuapkan  di  atas  cawan  porselin.  Residu  yang dihasilkan  kemudian  dilarutkan  dengan  5  mL HCl 2 N. Larutan yang diperoleh dibagi ke dalam 3  tabung  reaksi.  Tabung  pertama  ditambahkan dengan  3  tetes  HCl  2  N  yang  berfungsi  sebagai blanko.  Tabung  kedua  ditambahkan  3  tetes pereaksi Dragendorff dan tabung ketiga ditambahkan  3  tetes  pereaksi  Mayer.  Terbentuk endapan  jingga  pada  tabung  kedua  dan  endapan kuning  pada  tabung  ketiga  menunjukkan  adanya alkaloid (Farsnworth, 1966).
2. Uji Flavonoid
Flavonoid  Larutan  uji  ±  1  mL  diuapkan hingga kering, dibasahkan sisanya dengan aseton P, ditambahkan sedikit serbuk halus asam borat P dan serbuk  halus  asam  oksalat  P,  dipanaskan  di  atas tangas  air  dan  hindari  pemanasan  berlebihan.  Eter P  ditambahkan  10  mL.  Larutan  diamati  di  bawah sinar  UV  366  nm;  berfluoresensi  kuning  intensif, menunjukkan adanya flavonoid (Depkes RI, 1995).
3. Uji Saponin
Saponin Ekstrak kental daun bunga telang sebanyak  1  g  ditambahkan  dengan  air  hangat, dikocok  vertikal  selama  10  detik  kemudian dibiarkan  selama  10  detik.  Pembentukan  busa setinggi 1–10 cm yang stabil selama tidak kurang dari  10  menit,  menunjukkan  adanya  saponin. Pada  penambahan  1  tetes  HCl  2  N,  busa  tidak
hilang (Depkes RI, 1995).
4. Uji Tanin
Tanin  Larutan  uji  sebanyak  1  mL direaksikan dengan larutan besi (III) klorida 10%, jika  terjadi  warna  biru  tua  atau  hitam  kehijauan menunjukkan adanya tanin (Robinson, 1991
5. Uji Triterpenoid dan Steroid
Triterpenoid  dan  Steroid  Pemeriksaan triterpenoid  dan  steroid  dilakukan  dengan  reaksi Liebermann-Burchard.  Larutan  uji  sebanyak  2  mL diuapkan  dalam  cawan  porselin.  Residu  dilarutkan dengan  0,5  mL  kloroform,  kemudian  ditambahkan 0,5  mL  asam  asetat  anhidrat.  Asam  sulfat  pekat sebanyak  2  mL  selanjutnya  ditambahkan  melalui dinding  tabung.  Terbentuk  cincin  kecoklatan  atau violet pada perbatasan larutan menunjukkan adanya triterpenoid,  sedangkan  bila  muncul  cincin  biru kehijauan  menunjukkan  adanya  steroid  (Ciulei, 1984).

## Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Kromatografi  Lapis  Tipis  atau  KLT  adalah senyawa yang telah dihasilkan dilarutkan dengan pelarut yang  sesuai  dan  ditotolkan  pada  plat  KLT  dan  dielusi dengan beberapa perbandingan eluen. Hasil elusi dilihat dengan  menggunakan  pengungkap  noda  lampu  UV  λ 254 nm dan λ 365 nm.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Pengujian  antibakteri  ini  dilakukan  pembuatan media agar TSA (tryptone soya agar) sebanyak 12 gram dalam 300 ml aquadest, dimasukan kedalam Erlenmeyer kemudian dipanaskan menggunakan kompor listriksampai  media  homogen  dan  berwarna  jernih. Setelah  homogen  dan  jernih  disterilkan  menggunakan autoklaf  pada  shu  121˚C  dan  media  didiamkan  dingin untuk dimasukan kedalam cawan petri sebanyak 25 ml. Setelah pembuatan media agar kemudian ekstrak dibuat beberapa  konsentrasi  yaitu  80%,  100%,  120%,  dan 140%. Dilarutkan dengan DMSO. Kontrol positif menggunakan antibiotik yaitu ciprofloxacin yang dapat menghambat gram negatif dan gram positif dan kontrol negative DMSO 5%.
Sebelum  melakukan  penelitian  zona  hambat, ciprofloxacin dilarutkan terlebih dahulu dengan perhitungan  500  mg/tab  dibagi  100  ml  aquadest,  dan dibuat beberapa konsentrasi untuk mengetahui dikonsentrasi tersebut terdapat hambatan atau tidak. Pada  penelitian  zona  hambat  ini  menggunakan  metode difusi sumuran kelebihan metode ini yaitu lebih mudah mengukur  luas  zona  hambat  yang  terbentuk  karena isolat beraktivitas tidak hanya di permukaan agar tetapi juga  sampai  bawah,  sedangkan  kekurangannya  yaitu pada  metode  ini  media  sangat  rentan  terkontaminasi pada  saat  pembuatan  lubang  dan  memasukan  sampel karna  sering  membuka  cawan  dari  pada  metode  seperti difusi disk . Prinsip metode ini adalah membuat lubang pada agar yang telah diinokulasi dengan bakteri,
kemudian larutan diteteskan pada lubang sumuran yang telah dibuat. Penghambatan pertumbuhan mikroorganisme  terlihat  adanya  zona  hambat  (wilayah jernih) disekitar lubang sumuran.

## Analisis Data
SPSS  digunakan  sebagai  analisis  statistika  data yang  didapat  dari  hasil  penelitian.  Uji  normalitas  dan homogenitas diamati karena menjadi syarat uji One Way ANOVA dengan tingkat kepercayaan a=95% dengan tiga kali  pengulangan  uji  antibakteri  pada  masing-masing ekstrak.  Analisis  data  ini  bertujuan  untuk  melihat adanya  perbedaan  bermakna  pada  setiap  konsentrasi ekstrak.  H 0 diterima  ketika  nilai  sig  >  0.05,  artinya masing-masing  konsentrasi  ekstrak  tidak  mengalami perbedaan.  Sementara  itu,  H 0 ditolak  ketika  nilai  sig  < 0.05  dan  menerima  H 1 yang  berarti  adanya  perbedaan nyata. Dalam rangka mengamati perbedaan yang terjadi pada  setiap  konsentrasi  ekstrak,  dilakukan  uji post  hoc tukey HSD.

## Cara Penafsiran dan Penyimpulan Data
H0:  Diameter  zona  hambat  pada  ekstrak  daun  telang tidak mengalami perbedaan signifikan.
H1:  Diameter  zona  hambat  pada  ekstrak  daun  telang mengalami perbedaan signifikan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi
Daun  Bunga  Telang  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  dideterminasi  di  Laboratorium  Ilmu Pengetahuan  Indonesia.  Pusat  Penelitian  Biologi  Bogor dengan  No.  Surat  B-1674/III/KS.01.03/3/2021,  pada tanggal 8 Januari 2021. Hasil identifikasi berupa batang muda,  rachis,  daun  dan  bunga  yang  dibawa  ke  Pusat Penelitian  Konservasi  Tumbuhan  dari  Kebun  Raya- LIPI.  Tujuan  determinasi  ini  untuk  menidentifikasi kebenaran tanaman yang akan digunakan.

## Hasil Ekstrak
Pada  pelarut  n-heksan  ekstrak  kental  yang didapat  sebanyak  6,6  gram,  etil  asetat  sebanyak  65,4 gram,  dan  metanol  sebanyak  86,9  gram.  Sedangkan rendemen  N-  heksana  0,66%,  etil  aseta  6,54%  dan metanol  8,69%.  Hasil  rendemen  yang  paling  tinggi terdapat  pada  rendemen  ekstrak  pelarut  metanol dikarenakan  metanol  merupakan  pelarut  polar  sehingga dapat menarik  senyawa  polar  hingga  non  polar.  Tujuan dari  perhingan  rendemen  dilakukan  untuk  mengetahui perbandingan  antara  ekstrak  N-heksan,  etil  asetat  dan metanol  yang  diperoleh  dengan  bahan  yang  diekstrak (Dwicahyani,  Sumardianto,  &  Rianingsih,  2018). Uji Skrining Fitokimia
Kandungan  metabotit  sekunder  pada  sampel diketahui  melalui  skrining  fitokimia.  Hasil  skrining fitokimia  daun  telang  diketahui  memiliki  komponen bioaktif.  Komponen  bioaktif  diringkas  pada  tabel sebagai
berikut:

## Tabel 1. Hasil Skrining Fitokimia Simplisia Kering
Penapisan Fitokimia Simplisia Kering Senyawa Keterangan Hasil Alkaloid + Terbentuk endapan putih Flavonoid + Terbentuk lapisan warna kuning/merah Saponin + Terbentuk busa Tanin - Tidak terbentuk biru tua Kuinon + Terbentuk warna merah Polifenolat + Terbentuk hitam kehijauan Triterpenoid + Terbentuk warna ungu Steroid + Terbentuk warna biru Keterangan : (+) Ada, (-) Tidak ada.
Kemampuan  ekstrak  daun  bunga telang ( Clitoria  ternatea  L )  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri Escherichia  coli karena  adanya  kandungan senyawa metabolit sekunder berupa alkaloid, flavonoid, saponin,  kuinon,  polifenolat,  triterpenoid  dan  steroid. Senyawa-  senyawa  fitokimia  inilah  yang  berperan penting  dalam  kemampuan  antibakteri  suatu tumbuhan. Mekanisme  kerja  flavonoid  sebagai  antibakteri  adalah dengan  membentuk  senyawa  komplek  dengan  protein ekstraseluler  dan  terlarut  sehingga  dapat  merusak membrane  sel  bakteri  dan  diikuti  dengan  keluarnya senyawa  intraseluler  (Ngajow,  dkk,  2013).  Tanin merupakan  polimer  dari  senyawa  fenol  yang  memiliki kemampuan untuk menginaktifkan adhesion sel bakteri, menginaktifkan  enzim,  dan  mengganggu  transport protein  pada  lapisan  dalam  sel.  Selain  itu tanin  juga
menyerang polipeptida dinding sel sehingga pembentukan dinding sel menjadi kurang sempurna. Hal ini  menyebabkan  sel  bakteri  menjadi  lisis  karena tekanan  osmotik  dan  tekanan  fisik  sehingga  sel  bakteri akan  mati  (Hridhya  dan  Kulandhaivel,  2017). Mekanisme  kerja  saponin  sebagai  antibakteri  adalah dengan  menurunkan  tegangan  permukaan  sehingga mengakibatkan  naiknya  permeabilitas  atau  kebocoran sel dan menyebabkan senyawa intraseluler akan keluar. Senyawa  ini  berdifusi  melalui  membran  luar  dan dinding  sel  yang  rentan,  lalu  mengikat  membran sitoplasma  dan  mengganggu  kestabilan  sel.  Hal  ini menyebabkan  sitoplasma  bocor  keluar  dari  sel  dan mengakibatkan kematian sel (Ngajow, 2013). Senyawa- senyawa  fitokimia  ini  bekerja  secara  sinergis  sehingga dapat menghambat pertumbuhan bakteri.
Tabel 2. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak No Pemeriksaan Metanol Etil Asetat N-heksan 1 Alkaloid - - - 2 Flavonoid + + + 3 Saponin + - - 4 Tanin - - - 5 Kuinon + + - 6 Polifenolat + + - 7 Triterpenoid - + - 8 Steroid - - + Keterangan : (+) Ada, (-) Tidak ada. Hasil pada Tabel diatas menunjukkan kandungan  senyawa  penapisan  fitokimia  pada  ekstrak kental  Daun  Bunga  Telang  ( Clitoria  ternatea  L .). Kandungan  senyawa  pada  N-heksan  yaitu  flavonoid, dan  steroid.  Untuk  etil  asetat  kandungan  senyawanya terdapat  pada  flavonoid,  kuinon,  polifenolat  dan
triterpenoid Sedangkan metanol kandungan senyawanya terdapat  pada  senyawa  flavonoid,  saponin,  kuinon, polifenolat, dan steroid.
Pada  N-heksan  kandungan  senyawa  kimia terdapat  di  flavonoid  dan  steroid.  Dikarenakan,  pada flavonoid  terbentuk  dua  lapisan  warna  kuning  hingga
25 20 15 10 5 0 Konsentrasi Konsentrasi Konsentrasi Konsentrasi K+ K- Ekstrak Metanol Ekstrak Etil Asetat
Ekstrak N-heksan
kemerahan  sedangkan  pada  steroid  terbentuk  warna biru/hijau.
Kemudian  pada  ekstrak  etil  asetat  yang mengandung  senyawa  kimia  terdapat  di  flavonoid, kuinon,  polifenolat  dan  triterpenoid.  Dikarenakan,  pada flavonoid  terbentuknya  dua  lapisan  warna  kuning hingga  kemerahan,  kuinon  terbentuknya  warna  merah, polifenolat  terbentuknya  warna  hitam  kehijauan  dan triterpenoid terbentuknya warna ungu.
Dan  pada  ekstrak  methanol  yang  mengandung senyawa  kimia  terdapat  di  flavonoid  ,  saponin,  kuinon, polifenolat dan steroid. Dikarenakan, flavonoid terbentuk  dua  lapisanwarna  kuning  hingga  kemerahan,
saponin  terbentuknya  busa,  kuinon  terbentuknya  warna merah,  polifenolat  terbentuknya  warna  hitam  kehijauan dan steroid terbentuk warna biru/hijau.
Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Retardation  factor (Rf)  merupakan  parameter karakteristik  KLT.  Harga  Rf  didefinisikan  sebagai perbandingan antara jarak senyawa dari titik awal dan jarak tepi muka pelarut dari titik awal (Roth, 1994). Angka Rf berjangka  antara  0,00  sampai  1,00  dan  hanya  dapat ditemukan dua decimal (Stahl, 1985).
Rf : jarak yang ditempuh zat terlarut jarak yang ditempuh fase gerak
Tabel 3. Hasil Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Jenis Ekstrak Kandungan Kimia Pereaksi RF Hasil Flavonoid Sitoborat 0,08 + N-heksan Alkaloid Dragondrof 0,03 + Tanin Fecl3 5% 0,17 + Steroid Libermen Burchard 0,25 + Flavonoid Sitoborat 0,57 + Etil Asetat Alkaloid Dragondrof 0,25 + Tanin Fecl3 5% 0,03 + Steroid Libermen Burchard 0,17 + Flavonoid Sitoborat 0,55 + Metanol Alkaloid Dragondrof 0,15 + Tanin Fecl3 5% 0,07 + Steroid Libermen Burchard 0,20 + Pada tabel diatas menunjukan adanya kandungan kimia pada ketiga jenis ekstrak tersebut yaitu flavonoid, alkaloid, tanin dan steroid. Dan mendapatkan nilai Rf yang berbeda-beda, pada ekstrak N-heksan nilai Rfnya  adalah  (0,08.  0,03.  0,17.  0,25)  pada  ekstrak  etil asetat  nilai  Rfnya  adalah  (0,57.  0,25.  0,03.  0,17)  dan pada  ekstrak  metanol  nilai  Rfnya  adalah  (0,55.  0,15. 0,07.  0,20).  Hasil  tersebut  memenuhi  syarat  KLT  yang baik, yaitu dengan rentang nilai Rf 0,2- 0,8.

## Uji antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  dengan  menggunakan metode  sumuran  dilakukan  pengulangan  tiga  kali  pada masing-masing  konsentrasi  uji  dan  kontrol uji. Pengujian  antibakteri  menggunakan  media  agar  TSA ( Tryptone  Soya  Agar ).  Kontrol  positif  yang  digunakan yaitu  ciprofloxacin  dan  kontrol  negatif  yag  digunakan ialah  DMSO.  Dibuat  beberapa  konsentrasi  uji  terhadap bakteri Escherichia coli yaitu 140%, 120%, 100%, 80%.
80% 100% 120% 140% Ekstrak Metanol 11.2 11.5 11.7 12.3 19.5 0 Ekstrak Etil Asetat 11.2 13.3 13.8 14.1 20.4 0 Ekstrak N-heksan 0 0 0 0 19.13 0
Gambar 1. Diamater Zona Hambat Ekstrak Daun Telang Terhadap Bakteri Escherichia coli
Diameter  zona  hambat  yang  telah  terbentuk dapat  dihitung  menggunakan  jangka  sorong  dengan satuan  milimeter  (mm).  Pada  setiap  pengujian  terdapat perbedaan pada setiap ekstrak N-heksan, etil asetat dan
metanol terdapat pertumbuhan bakteri Escherichia coli. Pada  ekstrak  daun  bunga  telang  efektif  sebagai antibakteri Escherichia  coli dengan  konsentrasi  100%
dalam  uji  Kadar  Hambat  Minimun  (KHM)  (Ananggia dan Murnah, 2007).
Pada  penelitian  ini  diketahui  tinggi  rendahnya konsentrasi  ekstrak  N-heksan,  etil  asetat  dan  metanol memiliki diameter yang berbeda. Pada ekstrak N-heksan tidak menunjukkan adanya zona hambat dikarenakan N- heksan  mengandung  senyawa  non  polar.  Pada  ekstrak etil  asetat  yang  mengandung  senyawa  semi  polar  yang tertinggi  ditunjukan  pada  konsetrasi140%  (12,3  mm) dan  yang  terendah  pada  konsentrasi  80%  (11,2  mm). Sedangkan  pada  ekstrak  metanol  yang  mengandung senyawa  polar  yang  tertinggi  ditunjukan  pada konsentrasi  140%  (14,1  mm)  dan  yang  terendah  pada konsentrasi  80%  (11,2  mm).  Terlihat  pada  ektrak  etil asetat dan metanol dengan konsentrasi 140% (12,3 mm dan  14,1  mm)  memiliki  respon  hambat  pertumbuhan bakteri Escherichia  coli hal  ini  termasuk  kedalam respon  hambat  kuat.  Bahwa  zona  hambat  >20  mm dimasukkan  kedalam  respon  hambat  sangat  kuat,  zona hambat  11-20 mm  dimasukkan  kedalam respon  hambat kuat,  zona  hambat  5-10  mm  dimasukkan  ke  dalam respon  hambat  sedang,  dan  zona  hambat  <5  mm dimasukan  kedalam  respon  hambat  lemah.  (Rundengan et al, 2017).
Ekstrak  N-heksan,  metanol  dan  etil  asetat mempunyai  diameter  zona  hambat  yang  berbeda-beda. Ada  beberapa  kemungkinan  yang  dapat  menyebabkan
hal  ini  terjadi,  seperti  kurangnya  daya  difusi  ekstrak kedalam media. Proses difusi ekstrak dapat dipengaruhi oleh faktor pengenceran. Semakin tingginya konsentrasi ekstrak maka semakin rendah kelarutan, sehingga hal ini dapat memperlambat difusi bahan aktif ekstrak kedalam media  dan  akhirnya  dengan  konsentrasi  tinggi  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri  Escheriacia  colli. Temperatur  inkubasi  juga  dapat  menjadi  faktor  yang mempengaruhi  diameter  zona  hambat  pertumbuhan bakteri. Untuk memperoleh pertumbuhan yang optimal, inkubasi dilakukan pada suhu 35⁰ C. Suhu yang kurang dari  35⁰  C  dapat  menyebabkan  diameter  zona  hambat lebihbesar.
Kontrol  positif  yang  digunakan  golongan antibiotik  yaitu  ciprofloxacin  yang  memiliki  efek antibakteri  yang  besar.  Kontrol  positif  pada  zona hambat  ekstrak  metanol  20,4  mm  sedangkan  zona hambat ekstrak etil asett 19,46 mm. Pada kontrol negatif yang  digunakan  yaitu  DMSO  5%  tetapi  pada  kontrol negatif ini tidak menunjukkan adanya zona hambat.

## Uji Statistik
Hasil  pada  diameter  zona  hambat  kemudian dianalisis  dengan  menggunakan  uji  One  Way  ANOVA ada  beberapa  syarat  menggunakan  uji  One  Way ANOVA  yaitu  uji  normalitas  dan  uji  homogenitas. Apabila  nilai  sig.  (P<0,05)  maka  terdapat  perbadaan sedangkan sig. (P>0,05) tidak  terdapat perbedaan.
Tabel 4. Hasil Uji Normalitas Konsentrasi Sig Ekstrak Metanol Sig Ekstrak Etil Asetat 80% 0,363 0,363 100% 0,637 0,637 120% 0,843 0,363 140% 0,220 0,878 Kontrol Positif 0,843 0,917 Pada tabel diatas zona hambat ekstrak daun bunga telang terhadap bakteri Escheriacia colli. Hasil uji normalitas memiliki nilai normal dikarenakan nilai pada masing-masing konsentrasi sig. (P>0,05).
Tabel 5. Uji Homogenitas Ekstrak Levene Statistic Sig Metanol Asymp sig 0,128 Etil Asetat Asymp sig 0,145 Ekstrak Levene Statistic Sig Tabel  diatas  hasil  uji  homogenitas  menggunakan
levene statistic pada zona hambat ekstrak daun bunga telang
terhadap  bakteri Escheriacia  colli dan data  tersebut
termasuk  homogen    dikarenakan    nilai    sig.  (P>0,05).
Tabel 6. Uji One Way Anova Ekstrak Sum of Squares df Mean Square F Sig Metanol 143,689 4 35,922 123,870 .000 Etil asetat 146,689 4 36,672 78,177 .000
Pada  hasil  uji  one  way  anova  dinyatakan  tidak
signifikan  dikarenakan  nilai  sig.  (<0,05),  maka  akan
dilanjutkan  dengan  pengujian  tukey  untuk  bertujuan  melihat
perbedaan  daya hambat antara perlakuan  pada konsentrasi 80%, 100%, 120% dan 140%.
Tabel 7. Uji Tukey HSD Ekstrak Metanol Daun Telang
Konsentrasi 80% 100% 120% 140% 80% - 0,004 0,001 0,000 100% 0,004 - 0,784 0,492 120% 0,001 0,784 - 0,984 140% 0,000 0,492 0,982 - Konsentrasi 80% 100% 120% 140% 80% - 0,973 0,893 0,296 100% 0,973 - 0,998 0,590 120% 0,893 0,998 - 0,590 140% 0,296 0,590 0,756 -
Hasil  uji  Tukey  HSD  menunjukkan  terdapat perbedaan  yang  bermakna  dan  tidak  bermakna  antara perlakuan  pada  konsentrasi  yang  berbeda-beda.  Pada salah  satu  kelompok  konsentrasi  tidak  terdapat perbedaan  yang  bermakna antara  kelompok  konsentrasi yang  berbeda.  Hal  ini  disebabkan  oleh  zat  aktif antibakteri  pada  kelompok  konsentrasi  yang  berbeda tersebut  hampir  tidak  berbeda  pengaruhnya  dalam penghambat pertumbuhan bakteri Eschericia coli .

## PENUTUP
Berdasarkan  hasil  penelitian  ekstrak  daun  bunga  telang terhadap  bakteri  Escherichia  coli,  kesimpulan  yang dapat diambil dari penelitian ini adalah sebagai berikut:
1. Ekstrak  daun  bunga  telang  mengandung  senyawa alkaloid, flavonoid, saponin, kuinon, polifenolat dan triterpenoid.
2. Ekstrak  daun  bunga  telang  memiliki  aktivitas antibakteri terhadap bakteri E.coli dibuktikan dengan terbentuknya  zona  hambat  di  sekitar  area  sumuran. Rata-rata  besar  diameter  zona  hambat  ekstrak  daun bunga telang terhadap bakteri E.coli pada sampel N- heksan  tidak  terbentuk  zona  hambat.  Pada  sampel metanol  dengan  konsentrasi  120%  dan  140% memiliki  nilai  rata-rata  sebesar  (13,8  mm  dan  14,1 mm)  sedangkan  pada  sampel  etil  asetat  dengan konsentrasi 120% dan 140% memiliki nilai rata-rata sebesar  (11,7  mm  dan  12,3  mm)  dimasukkan  ke dalam respon hambat sangat kuat.

## Saran
Dapat  melakukan  penelitian  lebih  lanjut  terhadap senyawa  metabolit  sekunder  dari  setiap  ekstrak  N- heksan, metanol dan etil asetat.

## DAFTAR PUSTAKA
Adisakwattana,  S.,  Ruengsamran,  T.,  Kampa,  P.  & Sompong,  W.,  2012.  In  vitroinhibitory  effects  of plant-based  foods  and  their  combinations  on intestinal α-glucosidase and pancreatic αamylase. BMC  Complementary  and  Alternative  Medicine, 12(110), pp. 1-8.
Al-snafi  AE.  Pharmacological  importance  of  Clitoria ternatea  –  A  review  Pharmacological  importance of Clitoria ternatea – A review Prof Dr Ali Esmail Al-Snafi. 2017;6(April 2016):68-83.
Agoes,  G.  2007,  Teknologi  Bahan  Alam.  Bandung: Institut Teknologi Bandung Press, pp. 38-39. Budiasih,  K.  S.  (2017).  Kajian  Potensi  Farmakologis Bunga  Telang  (Clitoria  ternatea).  Jurdik  Kimia FMIPA UNY, (4), 201–206.
Chu,  B.-S.,  Divers,  R.,  Tziboula-Clarke,  A.  &  Lemos, M. A., 2017. Clitoria ternatea
L.  Flower  Extract  Inhibits  α-amylase  During  in Vitro  Starch  Digestion.  American  Research Journal of Food and Nutrition, 1(1), pp. 1-10.
Chusak,  C.  et  al.,  2018.  Influence  of  Clitoria  ternatea Flower  Extract  on  the  In  Vitro  Enzymatic Digestibility  of  Starch  and  Its  Application  in Bread. Foods, 7(7), pp. 102.
Chusak,  C.,  Thilavech,  T.,  Henry,  C.  J.  & Adisakwattana,  S.,  2018. Acute effect  of  Clitoria ternatea  flower  beverage  on  glycemic  response and  antioxidant  capacity  in  healthy  subjects:  a randomized crossover trial. BMC Complementary and Alternative Medicine, 18(6), pp. 1-18.
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia,  1991,
Petunjuk  Pemeriksaan  Mikrobiologi  Makanan Dan  Minuman,  20,  33,  Departemen  Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta.
Depkes, 1979. Farmakope Indonesia, Edisi III, XXX, 7, Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia, Jakarta.
Depkes,  1995.  Farmakope  Indonesia,  Edisi  IV,  7, Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia, Jakarta.
Djauhariya  E.,  Hernani.  2004.  Tanaman  Berkhasiat Obat. Jakarta: Penebar Swadaya.
Fadhly, E., Kusrini, D., & Fachriyah, E. (2015). Isolasi, Identifikasi  Senyawa  Alkaloid  dan  Daun  Rivina humilis  L.  serta  Uji  Sitotoksik  Menggunakan Metode  BSLT  (Brine  Shrimp  Lethality  Test). Kimia Sains dan Aplikasi, 67- 72.
Harborne, J.B. 1987, Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern  Menganalisis  Tumbuhan,  diterjemahkan dari  Bahasa  Inggris  oleh  Kosasih  Padmawinata dan  Iwang  Soediro,  Penerbit  Institut  Teknonlogi Bandung. pp. 147 Jafari,  A.,  Aslani,  M.M.  &  Bouzari,  S.  2012, ‘Escherichia coli: a brief review of diarrheagenic pathotypes  and  their  role  in  diarrheal  diseases  in Iran’,  Iranian  Journal  of  Microbiology,  vol.  4, no.3, pp. 02-117.
Jamil N, Pa F. Antimicrobial activity from leaf , flower , stem  ,  and  root  of  Clitoria  ternatea  –  A  review. 2018;020044(August):1-6 Jawetz,  E.,  Melnick,  L.J.,  dan  Adelberg,  A.E.,  1986,
Mikrobiologi
Untuk
Profesi
Kesehatan, diterjemahkan oleh Tonang, Edisi 16, Jilid 2, 288, EGC, Jakarta. Kazuma, K., Noda, K., Suzuki, M., 2013,  Flavonoid  composition  related  to  petal color  in  different  lines  of  Clitoria  ternatea, Phytochemistry, 64 (1133- 1139)
Kementerian Kesehatan RI. Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia Nomor 2406/Menkes/Per/XII/2011 tentang Pedoman Umum Penggunaan Antibiotik. Jakarta:Kemenkes; 2011
Markham  KR.  1988.  Cara Mengidentifikasi  Flavonoid. Terjemahan Kosasi Padmawinata. Bandung: ITB. Nurbaya. 2015. Kajian Ekstrak Etanol Bunga Kembang
Telang (Clitoria Ternate)Sebagai Bioindikator
Asam  Basa.  [Skripsi]  Palu:  MIPA  Universitas
Tadulako.
Pourbakhsh,  S.A.,  M.  Boulianne,  B.  Martineau-Doizé, C.  M.  Dozois,  C.  Desautels  and  J.  M. Fairbrother.1997.  Dynamics  of  Escherichia  coli infection  in  experimentally  inoculated  chickens. Avian Diseases, 41:221-233 Rao  AS,  Kl  S,  Almeida  P,  Rai  KS.  In  vitro antimicrobial  activity  of  root  extract  of  Clitoria ternatea. 2017;10(11):37-39
Reygaert  W,  Jusufi  I.  Green  tea  as  an  effective antimicrobial for urinary tract
infections  caused  by  Escherichia  coli.  Front Microbiol. 2013; 4
Robinson,  T.,  1995,  Kandungan  Organik  Tumbuhan
Tinggi,  diterjemahkan  oleh  Kosasih,  P.,  Edisi Keenam, 72, 157, 198, ITB, Bandung.
Sutarma.  2000.  Kultur  Media  Bakteri.  Temu  Teknis Fungsional non Peneliti.
Wikipedia.  2008a.  Ciprofloxacin.  Wikipedia,  the  free encyclopedia, Available from http://en.wikipedia.org/wiki/ciprofloxacin.  (15 April 2008) Zhu,  C.,  J.  Harel,  M.  Jacques,  C.  Desautels,  M.  S. Donnenberg, M. Beaudry, and J.
M.  Fairbrother.  1994.  Virulence  properties  and attachingeffacing  activity  of  E.  Coli  O45  associated from