Indonesian Journal of Pharmaceutical Science and Technology Journal Homepage : http://jurnal.unpad.ac.id/ijpst/ UNPAD
Isolation and Characterization of Chemical Compounds From n-Hexane Extract of Zodia ( Evodia suaveolens Scheff.) Leaves

## Mutakin*, Wina Yunita, Titi W. Nikodemus
Departemen Analisis Farmasi dan Kimia Medisinal, Fakultas Farmasi, Universitas Padjadjaran, Jawa Barat, Indonesia
Submitted 25 February 2021; Revised 03 March 2021; Accepted 4 March 2021 ; Published 21 June 2021 *Corresponding author: mutakin@unpad.ac.id
Abstract Zodia ( Evodia suaveolens Scheff.) (Rutaceae) is one of Indonesia's native plants, which comes from Papua which is widely used as traditional medicine. Empirically, zodia leaves are used as anti-mosquitoes, dysentery drugs, boiled bark is useful as a reliever for malaria fever, leaf decoction is used as a tonic, and increases stamina. Until now, no investigation has been carried out for the main compounds of the zodia leaf n-hexane extract which have proven activity. Therefore, it was done the isolation and characterization of the main compound in the zodia leaf n-hexane extract ( Evodia suaveolens Scheff.). Zodia leaves were extracted with n-hexane using the Soxhlet apparatus. The n-hexane extract was fractionated using column chromatography with a gradient of n-hexane-chloroform mixture. Isolates were isolated in the form of white needle crystals which were purified by washing with n-hexane. Isolates was characterized by analyzing various UV, IR 1D and 2D NMR spectrometry data which were confirmed by analyzing the mass spectrum. Based on the results of spectrometric analysis, it is known that the isolate is thought to be a triterpenoid compound, namely neohop-e13 (18) -ene-3α-ol.
Keywords: Evodia suaveolens , neohope-13(18)-ene-3α-ol, triterpenoid
Isolasi dan Karakterisasi Senyawa Kimia Ekstrak n-Heksan Daun Zodia ( Evodia suaveolens Scheff.)

## Abstrak
Zodia ( Evodia suaveolens Scheff.) (Rutaceae) merupakan salah satu tumbuhan asli Indonesia, yaitu berasal dari Papua yang banyak dimanfaatkan sebagai obat tradisional. Secara empirik daun zodia digunakan  sebagai  anti  nyamuk,  obat  disentri,  rebusan  kulit  batangnya  bermanfaat  sebagai  pereda demam malaria, rebusan daun dipakai sebagai tonik, dan penambah stamina tubuh. Sampai saat ini belum dilakukan penelusuran senyawa utama dari ekstrak n-heksan daun zodia yang terbukti memiliki aktivitas. Oleh karena itu  dilakukan isolasi dan karakterisasi senyawa utama dalam ekstrak n-heksan daun zodia ( Evodia suaveolens Scheff.).  Daun  zodia  diekstraksi  dengan  n-heksan  menggunakan alat  Soxhlet.  Ekstrak  n-heksan  difraksinasi  menggunakan  kromatografi  kolom  dengan  campuran n-heksan-kloroform secara gradien. Isolat telah diisolasi berbentuk kristal jarum berwarna putih yang dimurnikan melalui pencucian dengan n-heksan. Isolat dikarakterisasi dengan menganalisis berbagai data spektrometri UV, IM, RMI 1D dan 2D yang dikonfirmasi dengan menganalisis spektrum massa. Berdasarkan hasil analisis spektrometri diketahui bahwa isolat merupakan senyawa triterpenoid yaitu neohop-13(18)-ene-3α-ol.
Kata Kunci: Evodia suaveolens , neohop-13(18)-en-3α-ol, triterpenoid
1. Pendahuluan Zodia ( Evodia suaveolens Scheff.) (Rutaceae)  merupakan  salah  satu  tumbuhan asli Indonesia, yaitu berasal dari Papua yang  banyak  dimanfaatkan  sebagai  obat tradisional. Secara empirik daun zodia digunakan sebagai anti nyamuk, obat disentri, rebusan  kulit  batangnya  bermanfaat  sebagai pereda demam malaria, rebusan daun dipakai sebagai tonik, dan penambah stamina tubuh. Perkembangbiakannya sangat mudah yaitu dengan menggunakan biji atau stek batang . 1-6 Penelitian mengenai zodia masih sangat terbatas, terutama dilihat dari kandungan kimia maupun aktivitas biologisnya. Dalam Dictionary of Natural Products maupun pustaka lainnya belum dapat ditemukan hasil penelitian tumbuhan ini. Penelitian sejauh ini hanya sebagai anti nyamuk dan kandungan minyak atsirinya yang diketahui adalah linalool (46%) dan α-pinen. 7 Aktivitas farmakologis  dari  daun  zodia  diperkirakan dihasilkan dari minyak atsiri yang akan terdapat pelarut non polar 7 , oleh karena itu penelitian ini akan difokuskan pada senyawa kimia utama yang terdapat pada ekstrak n-heksan sebagai pelarut yang baik dalam melarutkan minyak atsiri.
Mengingat banyaknya khasiat serta penggunaan sebagai obat tradisional oleh masyarakat dan hal ini tentunya merupakan efek dari senyawa kimia yang terkandung di dalamnya, maka diperlukan penelitian yang dapat dipertanggungjawabkan secara ilmiah. Oleh karena itu dilakukan penelitian yang bertujuan mengetahui senyawa kimia utama ( major compound )  yang  terkandung  dalam ekstrak n-heksan daun zodia serta metode isolasi dan  karakterisasi dari senyawa tersebut.
2. Metode 2.1.  Alat Alat Soxhlet, rotary evaporator (Buchi), lampu  ultraviolet  (Camag  UV-Betrachter), kolom kromatografi, spektrofotometer ultraviolet  (Specord  200  Analytic  Jena), spektrofotometer  infra  merah  (FT-IR  8400 Shimadzu),  kromatografi  cair  kinerja tinggi  (Shimadzu  LC  10  VP),  spektrometer
massa  (Shimadzu  GC-17,  QP-5000  series), spektrofotometer  resonansi  magnet  inti (JOEL).
2.2.  Bahan Bahan penelitian yang digunakan adalah daun zodia, metanol (Merck), n-heksan (Merck), kloroform (Merck), toluen (Merck), aseton  (Merck),  eter  (Merck),  etil  asetat (Merck),  asetonitril  (Merck),  asam  klorida (Merck),  gelatin  (Merck),  pereaksi  Mayer, pereaksi Liebermann-Burchard, pereaksi Dragendorff,  pereaksi  vanilin-asam  sulfat, tetrametil silen, silika gel 60 F254 (Merck), silica gel pro column 60 mesh (Merck), semua bahan kecuali dinyatakan lain memiliki grade pro-analisis.
2.3.  Prosedur Rinci 2.3.1. Determinasi Tumbuhan dan Ekstraksi Tumbuhan  zodia  dideterminasi  di Laboratorium Taksonomi Tumbuhan, Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Padjadjaran. Serbuk simplisia daun zodia diekstraksi secara sinambung menggunakan alat ekstraksi Soxhlet dengan cairan penyari n-heksan. Simplisia yang telah ditimbang, dimasukkan ke dalam labu Soxhlet. Ekstraksi dilakukan sampai tetesan pelarut hampir tidak berwarna. Ekstrak yang diperoleh diuapkan pelarutnya menggunakan rotary evaporator (40 sampai 50 o C)  dengan  kecepatan  putar 40 rpm sehingga diperoleh ekstrak kental, penguapan dilanjutkan di atas penangas air pada suhu 40ºC sampai berat ekstrak konstan dan dihitung rendemennya.
2.3.2. Penapisan Fitokimia dan Kromatografi Lapis Tipis Ekstrak Penapisan fitokimia dilakukan terhadap simplisia dan ekstrak. Metode yang digunakan adalah metode Farnsworth. 8 Kromatografi lapis tipis ekstrak n-heksana dilakukan dengan menggunakan fase diam silika gel 60 F254, fase gerak : n-heksan:kloroform (2:8) dan dideteksi menggunakan sinar tampak, sinar UV 366 nm, penampak bercak vanillin- asam sulfat kemudian diikuti pemanasan pada 100 sampai 105ºC.

## 2.3.3. Isolasi dan Karakterisasi Isolat
Fraksinasi ekstrak dilakukan menggunakan  kromatografi  kolom  dengan kondisi :
Tinggi kolom : 40 cm Diameter kolom : 4 cm Fase diam : silika gel pro column 60 mesh Fase gerak : n-heksana : kloroform Sistem elusi : gradien Pengemasan kolom dilakukan dengan melarutkan 214,63 g silika gel dalam gelas  piala  dengan  fase  gerak.  Kemudian dituangkan secara perlahan-lahan ke dalam kolom sampai batas tertentu dan tidak terputus-putus. Silika dibiarkan turun sambil mengetuk-ngetuk dinding kolom, sehingga diperoleh kolom yang mampat dan kelebihan pelarut dikeluarkan melalui keran. Sebanyak 16.92 g ekstrak n-heksana digerus dengan silika gel sampai menjadi serbuk homogen. Kemudian diletakkan di atas kolom sedemikian rupa sehingga terbentuk pita yang siap untuk dielusi. Bagian atas sampel ditutup kembali dengan silika gel. Sampel dibiarkan meresap dulu ke dalam kolom, baru proses kromatografi dimulai yaitu mengelusi dengan campuran  pelarut  n-heksana  :  kloroform dalam 11 perbandingan (10:0, 9:1, 8:2, 7:3, 6:4, 5:5, 4:6, 3:7, 2:8, 1:9, 0:10). Fraksi yang keluar ditampung dan dilakukan pemantauan terhadap  fraksi  menggunakan  kromatografi lapis tipis.
Kromatografi lapis tipis fraksi dilakukan dengan menggunakan fase diam silika gel 60 F254, fase gerak : toluene:aseton (99:1) dan dideteksi menggunakan sianr tampak, sinar UV 366 nm, penampak bercak vanillin-asam sulfat  kemudian  diikuti  pemanasan  pada 100 sampai 105ºC. Fraksi dengan rendemen yang besar kemudian dilarutkan kembali dalam n-heksana pro analysis, dan diperoleh dua bagian. Bagian yang larut didekantasi, sedangkan endapan yang diperoleh dilarutkan kembali atau dilakukan pencucian dengan n-heksana. Pencucian ini dilakukan berulang kali sampai didapat endapan yang benar- benar terbebas dari bagain yang larut dalam n-heksana. Masing-masing bagian dipantau
kembali  menggunakan  kromatografi  lapis tipis dengan pengembang toluen : aseton (98:2).  Isolat yang diperoleh terlebih dahulu dilakukan uji golongan dengan pereaksi Liebermann-Burchard, kemudian dianalisis menggunakan  spektrofotometri  ultraviolet, spektrofotometri  inframerah,  spektrometri massa, dan spektrometri resonansi magnet inti ( 1 H-RMI, 13 C-RMI, COSY, HMQC, dan HMBC).

## 3. Hasil
3.1. Determinasi Tumbuhan dan Ekstraksi Hasil determinasi menunjukkan tumbuhan yang digunakan dalam penelitian termasuk  famili  Rutaceae,  genus  Evodia, spesies Evodia suaveolens Scheff. var. ridleyi (Hochr.)  Bakh.f.  Sebanyak  533  g  serbuk daun  zodia  diekstraksi  dengan  alat  Soxhlet sehingga diperoleh ekstrak berwarna hijau tua dengan rendemen 3,17 %.
3.2. Penapisan Fitokimia dan Kromatografi Lapis Tipis Ekstrak Penapisan fitokimia dilakukan terhadap simplisia dan ekstrak. Hasil penapisan fitokimia  dapat  dilihat  pada  Tabel  1.  Hasil kromatografi  lapis  tipis  ekstrak  dengan pengembang n-heksan : kloroform (2:8) dapat dilihat pada Tabel 2.
3.3.  Isolasi dan Karakterisasi Isolat Sebanyak 16 g ekstrak n-heksan difraksinasi  menggunakan  kromatografi kolom, dielusi secara gradien dengan n-heksan : kloroform dan diperoleh 75 fraksi. Fraksi yang diperoleh dianalisis kembali menggunakan  kromatografi  lapis  tipis dengan  pengembang  toluen  :  aseton  (99:1) dan  diperoleh  11  fraksi  gabungan  dengan pola  bercak  yang  sama.  Fraksi  I  (2,2017  g) dan fraksi J (0,6856 g) diisolasi lebih lanjut karena memiliki rendemen yang relatif lebih besar  dan  pola  bercak  yang  terlihat  relatif lebih mudah terpisah, yaitu melalui pencucian dengan n-heksan pro analysis . Hasil pencucian dianalisis kembali menggunakan kromatografi lapis tipis. Endapan yang diperoleh dari fraksi-fraksi  tersebut  larut  dalam  kloroform dan keduanya memberikan hasil satu bercak
(Rf  =  0,3)  dengan  pengembang  toluen  : aseton (99:1) yang dapat dilihat pada Tabel 3. Setelah pelarutnya menguap isolat diperoleh kembali dalam bentuk kristal jarum berwarna putih. Analisis  kualitatif  isolat  dilakukan dengan metode spektrofotometri UV dengan hasil isolat memiliki panjang gelombang maksimum pada 205 nm. Pengukuran isolat  dengan  spektrofotometri  infra  merah menunjukkan adanya serapan pada 3468cm- 1, 2946cm -1 , 2856cm -1 ,1632cm
-1 , 1464cm -1 ,
1378cm -1 dan 1068 cm -1 . Pengukuran dengan spektrometri masa menghasilkan adanya fragmen ion (M+1) 427 dan (M+2) 428 yang berasal dari isotop oksigen. Hasil pengukuran dengan spektrofotometri UV, IR dan MS dapat dilihat pada Gambar 1. Pengukuran 13 C-RMI,
1 H-RMI, 2D-COSY, 2D-HMQC, 2D-HMBC memberikan hasil yang dapat dilihat pada Tabel 4.

## 4. Pembahasan
4.1. Determinasi Tumbuhan dan Ekstraksi Hasil determinasi menunjukkan tumbuhan yang digunakan dalam penelitian termasuk  famili  Rutaceae,  genus  Evodia, spesies Evodia suaveolens Scheff. var. ridleyi (Hochr.)  Bakh.f.  Ekstraksi  yang  dilakukan pada serbuk daun zodiac memberikan nilai rendemen 3.17%.
4.2. Penapisan Fitokimia dan Kromatografi Lapis Tipis Ekstrak Berdasarkan  hasil  penapisan  fitokimia diketahui terdeteksi adanya golongan alkaloid,
Tabel 1. Hasil Penapisan Fitokimia Simplisia dan Ekstrak n-Heksan
Keterangan : (+) :  Terdeteksi; (-) : Tidak terdeteksi
Golongan Simplisia Ekstrak n-Heksan Alkaloid + - Flavonoid + - Polifenol + - Tanin - - Monoterpenoid dan Seskuiterpenoid + + Steroid - - Triterpenoid + + Kuinon - - Saponin - - Bercak Rf Warna Sinar tampak Sinar UV 366 nm Vanilin-asam sulfat 1 0,9 kuning coklat ungu 2 0,79 - merah ungu 3 0,68 hijau tua hitam kehijauan hijau 4 0,61 - - ungu 5 0,56 - ungu hijau muda 6 0,52 hijau tua merah tua hijau tua 7 0.45 hijau tua merah tua hijau tua 8 0,34 kuning merah abu-abu 9 0,22 - merah abu-abu
Tabel 2. Hasil Kromatografi Lapis Tipis Ekstrak n-Heksan Daun Zodia
flavonoid,  polifenol,  monoterpenoid  dan seskuiterpenoid serta triterpenoid. Hasil KLT yang dilakukan pada ekstrak memperlihatkan adanya 9 bercak yang memberikan warna berbeda pada sinar UV 366 nm sesuai pada Tabel 2 yang menunjukkan adanya senyawa golongan triterpenoid.
4.3.  Isolasi dan Karakterisasi Isolat
Isolat yang secara organoleptik
berbentuk kristal jarum berwarna putih diduga merupakan suatu senyawa triterpenoid. Selain uji golongan dengan pereaksi Liebermann- Burchard  yang  memberikan  hasil  positif (ungu) 8 , isolat memiliki panjang gelombang maksimum pada 205 nm (λ maks triterpenoid: 190-210 nm). 9 Isolat juga memiliki beberapa pita serapan pada spektrum IM yang umumnya dimiliki senyawa triterpenoid. Pita serapan pada 1378,63 cm -1 merupakan
Tabel 3. Hasil Kromatografi Lapis Tipis Fraksi I dan Fraksi J
Fraksi Rf Fraksi I Rf Fraksi J Warna Fraksi I Warna Fraksi J UV 366 nm Vanilin- Asam Sulfat UV 366 nm Vanilin- Asam Sulfat Awal 0,87 0,87 biru hijau-ungu biru hijau-ungu 0,8 0,8 biru - biru - 0,6 0,6 - ungu - ungu 0,4 - biru Bagian n-Heksan 0,87 0,87 biru hijau-ungu biru hijau-ungu 0,8 0,8 biru - biru - 0,4 - biru Bagian Klorofom 0,6 - ungu
Gambar 1. Spektrum dari Spektrofotometri UV-Visibel (a), Spektrofotometri Infra Merah (b) dan Spektrometri Masa (c) dari Isolat
(a) (b) (c)
No 1 H-RMI 13 C RMI/
HMQC
DEPT COSY
HMBC
2 J CH 3 J CH 1a 1,28 ddd 33,7 CH2 H2b C2, C10 - 1b 1,49 ddd - - H2a - - 2a 1,54 m 25,5 CH2 H1b, H3β C1, C3 C4, C10 2b 1,58 m - - H1a - - 3β 3,39 t 76,3 CH H2a, H2b - C1, C5, C23, C24 4 - 37,6 C - - - 5 1,21 dd 49,4 CH H6 C4, C6, C10 C3, C9, C24, C7 6a 1,43 m 18,5 CH2 H7b, H5 C7 C4 6b 1,47 m - - H7a - - 7a 1,59 ddd 34,4 CH2 H6b C6, C8 C5, C9 7b 1,62 ddd - - H6a - - 8 - 41,5 C - - - 9 1,45 dd 52,0 CH H11a, H11b C10, C8 C5, C11, C14, C26 10 - 42,7 C - - - 11a 1,92 m 26,7 CH2 H12b C9, C12 - 11b 2,19 m - - - - - 12a 1,84 m 27,6 CH2 H11b C13 C18 12b 1,88 m - - - - - 13 - 131,6 C - - - 14 - 37,6 C - - - 15 1,24 m 29,3 CH2 H16 C14, C16 - 16a 1,27 ddd 38,0 CH2 H15b C17 C18, C28 16b 1,78 ddd - - H15a - - 17 - 42,5 C - - - 18 - 141,2 C - - - 19a 2,29 m 26,5 CH2 H20b C18 C13, C21 19b 2,32 m - - H20a - - 20a 1,35 m 29,7 CH2 H19b C21, C19 - 20b 1,57 m - - H19a - 21 1,04 q 59,2 CH H22, H20a C17, C22 C29, C30, C28 22 1,56 oktet 29,9 CH H29, H30, H21 C21, C29, C30 - 23 0,94 s 28,3 CH3 - C4 C3, C5 24 0,82 s 22,2 CH3 - C4 C3, C5 25 0,83 s 16,6 CH3 - - C1, C9 26 0,85 s 18,7 CH3 - C8 C7 27 1,1 s 26,8 CH3 - C14 C13, C15,C21 28 0,79 s 17,9 CH3 - C17 C16, C21, C18 29 0,88 d ( J =6,7 Hz) 23,2 CH3 H22 C22 C21, C30 30 0,92 d ( J =6,7 Hz) 22,9 CH3 H22 C22 C21, C29

## Tabel 4. Hasil Pengukuran Spektrometri RMI 1D dan 2D
pita serapan khas untuk vibrasi regang gugus gem dimetil dari golongan triterpenoid 9 , pita serapan pada 1068,82 cm -1 merupakan pita serapan untuk CH 2 sistem lingkar triterpenoid 9 , dan daerah sidik jari 900 - 1400 cm -1 juga menunjukkan pola yang sama dengan senyawa triterpenoid. Selain itu isolat juga memiliki spektrum 1 H-RMI yang khas untuk golongan triterpenoid yaitu mempunyai geseran proton yang rapat di bawah 2,4 ppm. Spektrum 13 C-RMI dan DEPT menunjukkan isolat memiliki 30 atom karbon. Informasi ini juga menguatkan dugaan isolat, karena secara biosintesis triterpenoid dibentuk dari 6 unit isopren (C5). 10 Berdasarkan spektrum 13 C-RMI dan DEPT  diketahui  bahwa  isolat    memiliki 8 metil (CH 3)  yang  juga  ditunjukkan  oleh spektrum 1 H-RMI, 10 metilen (CH 2), 5 metin (CH), dan 7 karbon kuartener (C). Sedangkan spektrum massa menunjukkan bahwa isolat memiliki berat molekul (M + )  426. Analisis lebih lanjut pada spektrum 13 C-RMI menunjukkan adanya satu atom karbon yang teroksigenasi pada geseran 76,3 ppm yang juga ditunjukkan oleh spektrum 1 H-RMI dengan adanya sinyal proton pada geseran 3,3 ppm berasal dari proton yang dekat dengan atom  elektronegatif. 10 Keberadaan atom oksigen ini juga ditunjukkan oleh spektrum massa  dengan  adanya  fragmen  ion  (M+1) 427 dan (M+2) 428 yang berasal dari isotop oksigen.
Berdasarkan informasi di atas diketahui isolat memiliki struktur molekul C 30 H 50 O dengan nilai DBE ( double bond equivalent ) sebesar 6. Dengan demikian isolat memiliki kerangka dasar 5 cincin dengan satu ikatan rangkap. Ikatan rangkap ditunjukkan dengan adanya 2 sinyal karbon sp 2 pada geseran 131 dan 141 ppm yang berasal dari karbon kuartener (sinyal tidak muncul pada DEPT). Selain itu juga ditunjukkan oleh spektrum UV yaitu hanya memiliki satu λ maks pada 205 nm yang dihasilkan oleh transisi elektron dari ikatan rangkap yang terisolasi (ikatan rangkap terkonjugasi menyerap pada panjang gelombang lebih tinggi). 10 Spektrum IM juga menunjukkan keberadaan ikatan rangkap dengan adanya pita serapan pada bilangan
gelombang 1632,27 cm -1 yang berasal dari vibrasi regang C=C. 10 Spektrum IH-RMI menunjukkan 6 proton  metil  singlet  pada  δH  0,94  ppm  (H- 23), 0,82 ppm (H-24), 0,83 ppm (H-25), 0,85 ppm (H-26), 1,1 ppm (H-27), 0,79 ppm (H- 28).  Proton  metil  doublet  ditunjukkan  pada δH  0,88 ppm; J = 6,7 Hz (H-29), 0,92 ppm; J = 6,7 Hz (H-30). Proton metin triplet pada δH 3,39 ppm berasal dari proton karbinolik yang diduga berada pada posisi C-3. Proton metin dengan  multiplisitas  oktet  pada  δH    1,56 ppm diduga berada pada posisi C-22. Proton metin dan metilen lain sangat kompleks dan beresonansi pada δH 1,2-2,3 ppm.
Isolat diduga termasuk ke dalam triterpen hopanoid yang teroksigenasi. Hal ini disimpulkan dengan adanya rantai samping (R) isopropil pada posisi C21 yang ditentukan berdasarkan analisis data spektrum HMQC, COSY, dan HMBC. Atom oksigen pada isolat berasal dari gugus -OH yang ditunjukkan oleh spektrum IM dengan adanya pita serapan pada bilangan gelombang 3468,52 cm -1 yang berasal dari vibrasi regang O-H. 11
Penentuan urutan dari atom karbon dilakukan dengan bantuan spektrum COSY dan HMBC, yang sebelumnya masing- masing karbon telah ditentukan proton pasangannya dengan bantuan HMQC. Selain itu juga dilakukan dengan membandingkan harga  δC  karbon  isolat  dengan  atom-atom karbon dari senyawa hopanoid lainnya. Penentuan struktur isolat dimulai dari sinyal yang paling mudah yaitu dari sinyal proton triplet  pada  geseran  (δH)  3,3  ppm  dengan geseran karbon δC 76,3 ppm yang berasal dari proton karbinolik yang diduga terletak pada posisi 3. Tetapan penjodohan yang kecil dari proton karbinolik menunjukkan posisi proton karbinolik berada pada orientasi sedangkan gugus  hidroksil  terorientasi  pada  posisi  α (posisi α J di bawah 6 Hz, posisi β J di atas 10 Hz). 10,11 Selain itu, atom-atom karbon C1, C2, C3, dan C5 memiliki geseran sinyal yang lebih  kecil  (lebih  shielded)  dan  karbon  C24 memiliki geseran sinyal lebih besar (lebih deshielded)  dibandingkan  dengang  gugus hidroksil yang terorientasi pada posisi β. 11-13 Proton H3 memberikan korelasi
HMBC dengan karbon metilen δC 33,7 ppm (δH  1,28  &  1,49  ppm)  dan  korelasi  COSY dengan proton pada geseran δH (1,54 & 1,58 ppm)  (δC  25,5  ppm),  menunjukkan  secara berurutan kedua metilen tersebut berada pada posisi 1 dan 2, yang dipertegas dengan adanya korelasi COSY H2 dengan H3 dan sebaliknya. Adanya dua geseran proton yang dimiliki proton metilen sebagai akibat dari orientasi aksial dan ekuatorial dari masing- masing proton metilen tersebut. Dua proton metil  singlet  pada  geseran  δH  0,94  ppm (δC  28,3  ppm)  dan  δH  0,82  ppm  (δC  22,2 ppm)  keduanya  memiliki  korelasi  HMBC dengan karbon kuartener pada δC 37,6 ppm menunjukkan kedua metil tersebut terikat pada karbon kuarterner yang sama (gem dimetil). Spektrum HMBC juga menunjukkan adanya korelasi HMBC dari kedua proton metil tersebut dengan C3 dan sebaliknya sehingga diduga berada pada posisi 4 seperti yang umum terdapat pada senyawa triterpenoid. Masing-masing metil di atas secara berurutan berada pada posisi 23 dan 24. Proton metil singlet δH 0,85 ppm (δC 18,7 ppm) memiliki korelasi HMBC dengan karbon kuartener δC  41,5  dan  karbon  metilen  δC  34.4  ppm (δH  1,59  &  1,62  ppm).  Ketiganya  secara berurutan menunjukkan posisi 26, 8, dan 7. Adanya korelasi HMBC proton metilen H7 dengan C8 dan C6 dan korelasi COSY dengan proton H6 mempertegas kedudukan metilen ini pada posisi 7. Proton metil singlet δH 0,83 ppm (δC 16,6 ppm) memiliki korelasi HMBC dengan C9 dan C1 sehingga menunjukkan kedudukannya pada posisi 25. Korelasi HMBC yang ditunjukkan proton metil singlet δH 1,1 ppm (δC 26,8 ppm) terhadap karbon kuartener δC 37,6 ppm dan δC 131,6 dengan kontur HMBC yang lebih besar terhadap karbon  kuartener  δC  37,6,  memberikan gambaran keduanya secara berurutan berada pada posisi 14 dan 13. Sedangkan metilnya diduga pada posisi 27, karena adanya korelasi HMBC terhadap C8.
Proton  metilen  δH  (1,92  &  2,19 ppm)  (δC  26,7  ppm)  menunjukkan  korelasi HMBC dengan C10 dan dengan karbon metilen δC 27,6 ppm (δH 1,84 & 1,88 ppm) yang protonnya berkorelasi HMBC dengan
C13.  Informasi  ini  memberikan  gambaran keduanya  berada  pada  posisi  11  (δC  26,7 ppm) dan 12 (δC 27,6 ppm). Proton metilen H12 memberikan korelasi yang lebih lemah terhadap karbon kuartener 141 dibandingkan terhadap karbon kuartener pada posisi 13. Dengan demikian diduga karbon kuartener 141,2 berada 3 ikatan dari H12 yaitu pada posisi 18. Posisi ikatan rangkap ini diperkuat dengan tidak adanya sinyal dari proton oleofenik  yang  muncul  di  sekitar  geseran  5 ppm maupun pita serapan dari C-H oleofenik yang menyerap dengan intensitas lemah- sedang pada bilangan gelombang 3000-3100 cm-1 14. Pada spektrum HMBC proton metil  singlet    δH  0,79  ppm  (δC  17,9  ppm) memberikan korelasi selain terhadap karbon C18 juga terhadap karbon kuartener δC 42,5 ppm. Karbon kuartener ini diduga pada posisi 17 dan metilnya pada posisi 28. Proton metil ini juga memberikan korelasi HMBC dengan metilen δH (1,27 &1,78 ppm) (δC 38.0 ppm) dan metin δH 1,04 ppm (δC 59,2 ppm) dengan kontur yang sama besar dan diasumsikan keduanya berada pada jarak ikatan yang sama terhadap H28 yaitu secara berurutan pada posisi 16 dan 21. Posisi ini tidak mungkin berkebalikan karena sangat sulit dijelaskan secara biogenesis, meskipun diduga berasal dari senyawa  yang benar-benar baru. Isolat memiliki rantai samping isopropil yang terikat pada karbon C21. 1 H-RMI menunjukkan adanya dua sinyal metil yang memiliki multiplisitas doublet dengan tetapan penjodohan yang sama sebesar J=6,7 Hz. Ini menunjukkan kedua metil tersebut terikat pada karbon metin yang sama (gem dimetil). Kedudukan rantai samping ini, diperkuat dengan adanya korelasi HMBC dari kedua proton metil doublet δH 0,88 ppm (δC 23,2 ppm; J = 6,7 Hz) dan δH 0,94 ppm (δC 22,9 ppm J = 6,7 Hz) terhadap C21 dan sebaliknya. Proton-proton metil ini juga berkorelasi dengan karbon metin oktet δH 1,56 ppm (δC 29,9 ppm) yang diduga berada pada posisi 22. Korelasi COSY dari H29, H30, H22, dan H21 menguatkan dugaan adanya rantai samping isopropil pada posisi 21. Karbon C21 juga mendapat korelasi HMBC jarak jauh dari H27 dengan jarak lebih dari 3 ikatan. Pada
umumnya korelasi HMBC memberikan gambaran adanya interaksi antara proton dengan karbon yang berjarak 2-3 ikatan. Walaupun demikian interaksi HMBC lebih dari tiga ikatan mungkin terjadi karena adanya konformasi 3D (konformasi ruang). Dengan demikian diduga proton H27 dengan karbon C21 secara stereokimia memiliki konformasi yang berdekatan. 14,15
Proton metilen δH (2,29 & 2,32 ppm) (δC 26,5 ppm) memberikan korelasi HMBC dengan karbon C18, C13 (kontur yang lebih kecil  dibandingkan  kontur  terhadap  C18), serta C21. Hal ini menunjukkan kedudukannya pada posisi 19. Sedangkan proton metilen δH (1,35 & 1,57 ppm) (δC 29,7 ppm) memiliki korelasi HMBC dengan C19 dan C21, menunjukkan kedudukannya pada posisi 20 yang dikuatkan dengan korelasi COSY dari ketiganya.
Pemastian kedudukan dari masing- masing karbon dilakukan berdasarkan korelasi yang diberikan pada spektrum COSY. Hal ini dikarenakan kompleksnya bentuk kontur yang terjadi sebagai akibat interaksi yang kompleks dalam senyawa triterpenoid. Spektrum COSY menunjukkan adanya korelasi antara H3 dengan H2, H2 dengan H1, H21 dengan H20 dan H22, H22 dengan H29 dan H30 dengan H1, H21 dengan H20 dan H22, H22 dengan H29 dan H30. Berdasarkan hasil interpretasi berbagai data spektrum dan hasil reaksi kimia, isolat merupakan senyawa neohope-13(18)-ene-3α- ol dengan struktur kimia yang dapat dilihat pada Gambar 2. Hal ini diperkuat dengan adanya kemiripan geseran metil pada isolat (neohope-13(18)-ene-3α-ol)  dengan  geseran metil pada senyawa neohop-13(18)-ene.

## 5. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian diketahui
bahwa senyawa triterpenoid merupakan senyawa utama ( major compound )  dalam ekstrak n-heksan. Hasil karakterisasi isolat dengan menginterpretasi data  spektrum UV, IM, 1 H-RMI, 13 C-RMI, COSY, HMQC, dan HMBC serta dipastikan dengan menganalisis spektrum massa menunjukkan bahwa isolat termasuk dalam golongan triterpen hopanoid dan diduga terkarakterisasi sebagai Neohope- 13(18)-ene-3α-ol. Hasil perbandingan geseran proton, geseran karbon dan pola fragmentasi  dengan  senyawa  hopanoid  lain, isolat menunjukkan kemiripan paling besar dengan senyawa Neohope-13(18)-ene.
Daftar Pustaka 1.  R1. Guastaldi R, Reis A, Figueras A,  Secoli  S.  Prevalence  of  potential drug-drug interactions in bone marrow transplant  patients.  Int  J  Clin Pharm. 2011;33(6):1002-9.
2. 2.  L.  Susanti,  H.  Boesri.  Toksisitas Biolarvasida Ekstrak Tembakau dibandingkan dengan Ekstrak Zodia terhadap Jentik Vektor Demam Berdarah Dengeu (Aedes Aegypti). Bul. Pen. Kes. 2012;40:75-84,
3.  3. Evi Mintowati Kuntorini E.M, Nofaliana  D.,    and    Pujawati  E.D, Anatomical  Structure  and  Terpenoid Content  of  Zodia  (Evodia  suaveolens Scheff) Leaves, BIO Web of Conferences, 2020; 20:03001
4.  4. Mirawati P, Simareme E.V, Pratiwi R.D.  Uji  Efektivitas  Repellent  Sediaan Lotion Kombinasi Minyak Atsiri Daun Zodia  (Evodia  suaveolens  Scheff)  dan minyak atsiri batang serai (Cymbopogon citratrus)  terhadap  Nyamuk  Aedes aegypti L, Pharmacy: Jurnal Farmasi Indonesia,2018; 15(1):1-15
5.  5.  Lestari, F.D dan Simareme E,S, Uji
Gambar 2. Struktur kimia isolat (neohope-13(18)-ene-3α-ol)
Potensi Minyak Atsiri daun Zodia (Evodia suaveolens  Scheff)  sebagai  insektisida nyamuk Aedes Aegypti dengan metode elektrik, Pharmacy, 2017;14(1): 1-10
6.  6. Simareme E.S., Manurung, L., Gunawan E, dan Maryuni, A.E, Zodia (Evodia suaveolens Scheff) in liquid soap as repellent against Aedes aegypti  K. Advances Scienes Letters, 2018; 24:91- 94
7.  7. Kardinan, A. 2004. Zodia (Evodia suaveolens) : Tanaman Pengusir Nyamuk. www.litbang.deptan.go.id, diakses 11 Februari 2020
8.  8. Farnsworth, N.R. Biological and Phytochemical  Screening  of  Plant.  J. Pharm. Sci. 1966; 55(3): 243-269
9. 9.  Branco, Alexandro, A. Pinto, Ramundo B. F. Chemical Constituens from Vellozia graminifolia  (Velloziaceae).  An.  Acad. Braz. Cienc. 2004;76(3): 505-518
10. 10. Akihisa,  Toshihiro  &  L.  John  Goad. Analysis of Sterols. Blackie Academic & Professional.  Tokyo.  Japan.  1997;  2:23-
39
11. 11. Sanora, G., Mastura, E. Y., Handoyo, M. O. M., & Purnama, E. R. Identification
of  Anticancer  Active  Compound  from GC-MS  Test  Results  of  Zodia  Leaves (Evodia  suaveolens)  Ethanol  Extract. Jurnal Biota, 2019;5(2):89-95.
12. 12. Gunawidjaja  N.P.,  An  Overview  of Nuclear Magnetic Resonance, Integral, 2013; 11(1):27-39
13. 13. Liang Q., Wang Q.,Wang Y., Wang Y.N., Hao.J., Jiang M. Quantitative 1H-NMR  Spectroscopy  for  Profiling Primary Metabolites in Mulberry Leaves, Molecules, 2018; 23(3):554
14. 14. Hadi M., , Setiyadi D., Mawarni A., Martini M. , Sutiningsih D.,Suwondo A.,  Potential  of  Zodia  Leaf  Extracts of  Hexane  Solvent  in  Reducing  Aedes aegypti  Density:  Semi-Field  Trial Application in Endemic Areas of Dengue Hemorrhagic  Fever  (DHF),  Annals  of Tropical  Medicine  &  Public  Health,
2021;24(1):1-7
15. 15. Ngibad K., Lestari L.P.,. ISSN : 2085- 4714 161 Uji Fitokimia Dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Daun Zodia (Evodia  suaveolens),    As-Syifaa  Jurnal Farmasi, 2019; 11 (2):161-168