Jurnal Pharmascience, Vol. 8, No.2, Oktober 2021, hal: 69-78 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 https://ppjp.ulm.ac.id/journal/index.php/pharmascience Research Article
Aktivitas Sitotoksik dan Induksi Apoptosis dari Ekstrak Etanol Kulit Apel Hijau ( Pyrus malus L.) terhadap Sel MCF-7
Syahrul Iqbal Setiawan 1 , Erika Indah Safitri 1 , Laili Nailul Muna 2 , Devi Nisa Hidayati 1*
1 Fakultas Farmasi, Universitas Wahid Hasyim, Semarang, Jawa Tengah, Indonesia 2 Prodi Pendidikan Kimia, Fakultas Ilmu Tarbiyah dan Keguruan, Universitas Islam Negeri Sunan Kalijaga, Sleman, Yogyakarta, Indonesia
Email: devinisahidayati@yahoo.com

## ABSTRAK
Ekstrak kulit apel hijau ( Pyrus malus L.) mengandung senyawa Quercetin yang mampu  menurunkan  ekspresi  Bcl-2.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui aktivitas sitotoksik dan induksi apoptosis ekstrak etanol kulit apel hijau (EEKAH) pada model  sel  kanker  payudara  MCF-7.  Serbuk  kulit  apel  hijau diekstraksi  menggunakan pelarut  etanol  70%  dengan  metode  ultrasonik.  Uji  sitotoksik  terhadap  sel  kanker payudara  MCF-7  dengan  metode  MTT  Assay  pada  konsentrasi  EEKAH  yaitu  31,25; 62,5;  125;  250;  500  dan  1000  µg/mL.  Hasil  uji  sitotoksik  dihitung  nilai  IC 50 menggunakan regresi linier. Pengamatan induksi apoptosis dengan konsentrasi  ½ IC 50 (442,5 μg/ml) dan IC 50 (885 μg/ml) menggunakan flowcytometry . Analisis data dianalisis menggunakan  analisis  statistik One  Way  Anova .  Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa EEKAH  memiliki  aktivitas  sitotoksik  dengan  nilai  IC 50 sebesar  885  µg/ml.  Persentase rata-rata fase apoptosis total EEKAH pada konsentrasi  ½ IC 50 sebesar 30,2% (p>0,05) dan  IC 50 sebesar  47,9%  (p<0,05)  dibandingkan  kontrol  sel  sebesar  12,7%.  EEKAH mampu menginduksi apoptosis terhadap sel MCF-7.
Kata kunci: MCF-7, Pyrus malus L ., Sitotoksisitas, Apoptosis

## ABSTRACT
Green  apple  peel  extract ( Pyrus  malus L . ) contains  Quercetin  compound  which decrease Bcl-2 expression. The aims of this study was to determined the cytotoxic activity and  apoptosis  induction  of  green  apple  peel  ethanol  extract (GASEE) on  MCF-7  breast cancer  cells.  The  green  apple  peel  powder  was  extracted  using  70%  ethanol  solvent  by ultrasonic method. Cytotoxic test against MCF-7 breast cancer cells using the MTT Assay method at the GASEE concentration, namely 31.25; 62.5; 125; 250; 500 and 1000 µg/mL. The  results  of  the  cytotoxic  test  calculated  the  IC 50 value  using  linear  regression.
Determination  of  apoptosis  induction  with  a  concentration  of  ½  IC 50 (442.5  µg/mL)  and IC 50 (885 µg/mL) using flowcytometry. Data analysis was analyzed using statistical analysis One Way Anova. The results showed that GASEE has cytotoxic activity with an IC 50 value of  885  µg/ml.  Average  percentage  of  total  apoptosis  phase  are  ½  IC 50 concentration  of 30.2%  (p>0.05)  and  IC 50 of  47.9%  (p<0.05)  than  cell  control  of  12.6%. GASEE can apoptosis induced against MCF-7 cells.
Keywords : MCF-7, Pyrus malus L ., Cytotoxicity, Apoptosis

## I. PENDAHULUAN
Saat  ini  kejadian  kanker  payudara pada  wanita  tercatat  tinggi  dengan  jumlah kematian  sebesar  600  ribu  kasus  dari jumlah  penderita  2  juta  di  dunia.  Data kasus  kanker  payudara  di  Indonesia tercatat  kematian  sebesar  22  ribu  dari  58 ribu  kasus  (GLOBOCAN,  2018). Terapi pengobatan  antikanker  sekarang  masih mengakibatkan efek yang tidak diinginkan (Kementerian Kesehatan Republik Indonesia,  2018).  Efek  tersebut  dapat diakibatkan  karena  obat-obat  kemoterapi tidak hanya membunuk sel kanker, namun juga  sel  normal.  Sehingga,  perlunya pengembangan  terapi  menggunakan  obat alam  sebagai  bahan  alternatif  pengobatan (Sugiarto, 2006).
Masyarakat lebih memilih menggunakan  pengobatan  herbal  yang memiliki efek samping minimal (Bethesda, 2007).  Tanaman  apel  telah  dibuktikan memiliki  aktivitas  antikanker.  Tanaman tersebut  dapat  tumbuh  di  daerah  tropis seperti  Indonesia.  Buah  apel  merupakan buah yang sering dikonsumsi oleh masyarakat, namun bagian kulitnya
merupakan bahan buangan yang selama ini hanya  digunakan  sebagai  pakan  ternak atau pupuk (Subagyo & Achmad, 2010).
Senyawa flavonoid memiliki aktivitas  sitotoksik  serta  mempengaruhi pertumbuhan  sel  kanker  dengan  cara apoptosis  atau  mencegah  angiogenesis (Kozlowska  &  Szostak-Wegierek,  2014). Rastini et  al .  (2019) menyatakan  bahwa quercetin  menunjukkan  aktivitas  sebagai agen  antikanker  payudara. Ekstrak  etanol kulit  apel  manalagi  terbukti  memiliki metabolit  sekunder  yaitu  alkaloid,  steroid, triterpenoid,  flavonoid,  fenol,  dan  tannin (Novioella,  2019).  Penelitian  sebelumnya menyebutkan  quercetin  murni  mampu meningkatkan caspase-3 pada sel MDAMB  231  sehingga  menginduksi apoptosis (Chien et al ., 2009).
Senyawa  flavonoid  dapat  ditarik menggunakan  pelarut  etanol  70%  karena senyawa  flavonoid  bersifat  polar  dan pelarut  etanol  70%  juga  bersifat  polar sehingga  dapat  dengan  mudah  untuk menarik senyawa flavonoid (Pertiwi et al ., 2016).  Quercetin  memiliki  kemampuan memacu  proses  apoptosis  pada  sel  kanker
payudara  MCF-7  (Duo et  al .,  2012).
Mekanisme  lain  dari  kuersetin  juga dilaporkan mempu menstimulasi pelepasan sitokrom C sehingga meningkatkan apoptosis  (Taraphdar et  al .,  2001).
Pelepasan  sitokrom  C  oleh  mitokondria dikarenakan  terhambatnya  ekspresi  Bcl-2 yang kemudian menginduksi jalur caspase (Youle & Strasser, 2018).
Berdasarkan  telaah  literatur  yang telah  dilakukan,  belum  pernah  dilaporkan penelitian terkait ekstrak etanol kulit  buah apel  hijau  sebagai  agen  antikanker terhadap  sel  MCF-7.  Oleh  karena  itu, peneliti  tertarik  untuk  mengembangkan potensi  ekstrak  etanol  kulit  apel  hijau dalam  aktivitas  sitotoksik  dan  induksi apoptosis  terhadap  sel  kanker  payudara MCF-7.

## II. METODE

## A. Alat dan Bahan
Bahan  yang  digunakan  meliputi kulit  apel  hijau  yang  diperoleh  dari  buah apel  hijau  ( Pyrus  malus L.);  Sel  MCF-7 adalah biakan sel dari Laboratorium Kultur Sel Fakultas Kedokteran dan Ilmu
Kesehatan  Universitas  Muhammadiyah Yogyakarta, media RPMI (Gibco), penisilin-streptomisin  1%  v/v  (Gibco), fungizone 0,5% v/v (Gibco), FBS 10% v/v (Sigma),  DMSO  100%  (Merck),  Reagen MTT, pereaksi stopper (SDS 10% (Merck) dalam  0,01N  HCl),  tripsin-EDTA  0,25%
(Sigma),  PBS  (Biogear).  Alat-alat  yang digunakan  yaitu  ultrasonik  (BRANS), lemari  pengering,  mesin  penyerbuk,  alat- alat  gelas  (Iwaki  dan  Pyrex),  penguap vacum putar (Heidolph), timbangan analitik  (Excellent), moisture  balance
(Ohaus),  pengaduk, corong  buchner, inkubator  CO 2 (Thermoscience), biosafety cabinet (ESCO), tissue  cultur  dish , mikroskop inverted (Maqnus), conical tube (Falcon), mikropipet (Socorex), blue- tip , yellow-tip , haemocytometer (Assistant), hand  counter , 96-well  plate (Corning), mikrotube  (Eppendorf),  vortex  (Clever scientific),  ELISA reader (Tecan  Infinite F50), FITC  Annexin  V (BD Pharmingen), Flowcytometer (BD FACSCanto III).

## B. Pembuatan Serbuk Kulit Apel Hijau
Kulit  apel  hijau  didapatkan  dari buah  apel  hijau  dengan  usia  5  bulan  yang dipanen  Kota  Batu,  Kabupaten  Malang, Jawa  Timur.  Kulit  apel  yang  digunakan berasal  dari  buah  apel  hijau  yang  masih segar  dan  tidak  berpenyakit.  Apel  hijau sebanyak  5,160  kg  disortasi  basah  dan dicuci  dengan  air  mengalir.  Kulit  apel diambil dengan menggunakan pisau diperoleh  sebanyak  770  gram  selanjutnya dikeringkan dengan lemari pengering pada suhu  40 o C  sampai  kering.  Simplisia  kulit apel  hijau  kemudian  diserbuk  sehingga diperoleh serbuk kulit apel hijau sebanyak 185 gram.

## C. Pembuatan  Ekstrak  Etanol  Kulit Apel Hijau
Proses  ekstraksi  kulit  apel  hijau dengan  metode  ultrasonik  menggunakan pelarut  etanol 70%. Serbuk simplisia kulit apel hijau sebanyak 185 gram dimasukkan dalam beaker glass kemudian ditambahkan etanol 70% dengan perbandingan  1  :  10.  Jumlah  pelarut  yang digunakan  adalah  1850  mL.  Ekstraksi dilakukan pada suhu  40 o C  yang dilakukan seama  30  menit  menggunakan  frekuensi 40  kHz.  Filtrat  yang  dihasilkan  dilakukan proses  penguapan  menggunakan  penguap vacum  putar  suhu  40 o C  sampai  diperoleh ekstrak kental.

## D. Preparasi Sel MCF-7
Sel  MCF-7  dalam  ampul  yang berada  pada  tangki  nitrogen  cair  diambil, kemudian  dicairkan  pada  suhu  kamar. Conical  tube yang  berisi  media  kultur ditambahkan  dengan  sel  yang  telah  cair tadi sebanyak 1000 µL, dilanjutkan dengan proses  sentrifugasi  selama  5  menit. Supernantan dibuang kemudian endapan di resuspensi  ulang  dengan  media  kultur sebanyak  4  mL.  Suspensi  sel  dipindahkan dan  ditumbuhkan  dalam  2  buah tissue culture  dish kemudian  ditambahkan  5  mL media  kultur,  diinkubasi  dalam  inkubator CO 2 (CCRC, 2009).
E. Pembuatan sampel uji ekstrak etanol kulit apel hijau
Sepuluh  mg  ekstrak  etanol  kulit apel  hijau  dalam  mikrotube,  dilarutkan dalam  100  µL  DMSO  dan  dihomogenkan dengan vortex .  Sehingga  konsentrasi  stok sebesar  100.000  µg/mL.  Sampel  uji kemudian diencerkan hingga mendapatkan konsentrasi 1000; 500; 250; 125; 62,5 dan 31,25 µg/mL untuk pengujian sitotoksisitas  dan  seri  konsentrasi  IC 50
(885  µg/mL)    dan  ½  IC 50 (442,5  µg/mL) untuk  pengujian  apoptosis  sel  kanker payudara MCF-7.

## F. Pemanenan Sel
Sel  yang  sudah  konfluen  sekitar 80%  dipanen  dengan  cara  media  kultur  di buang  dan  se  Sel  yang  sudah  sekitar  80% konfluen  kemudian  media  kultur  di  buang dengan  menggunakan  pipet  pasteur  steril, sel  dicuci  dengan  menggunakan  PBS sebanyak  1  kali.  Larutan  PBS  dibuang sehingga sel yang mati akan ikut terbuang. Selanjutkan  ditambah  dengan  tripsin EDTA  0,25%  sebanyak  300  µL  dan diinkubasi  selama  3  menit.  Tambahkan  3 mL  media  kultur  untuk  menginaktifkan tripsin  kemudian  resuspensi  sel  dengan mikropipet  agar  tidak  ada  sel  yang menggerombol dan amati dibawah mikroskop inverted untuk  memastikan tidak  ada  sel yang  menggerombol.
Pindahkan  suspensi  sel  ke  dalam conical tube steril (CCRC, 2009).

## G. Uji Sitotoksisitas
Sel dipanen dan dihitung kemudian diisi 100 µL sel dengan jumlah sel 1 x 10 4 sel/sumuran  kedalam 96-well  plate ,  3 sumuran  tidak  diisi  digunakan  untuk kontrol  media.  Sel  diinkubasi  selama  24 jam  dalam  inkubator  CO 2 . Plate yang berisi  sel  diambil  dari  inkubator  CO 2 kemudian  media  sel  dibuang  dengan  cara membalik plate diatas  tempat  buangan.
Dicuci  dengan  PBS  sebanyak  100  µL  dan dibuang  kembali.  Dibuat  seri  konsentrasi ekstrak etanol kulit apel hijau 1000 µg/mL diambil  sebanyak  10  µL  dari  larutan  stok 100.000  µg/mL;  500;  250;  125;  62,5  dan 31,25  µg/mL  masing-masing  sebanyak 500  µL  kemudian  ditambahkan  media kultur sebanyak 500 µL. Sebanyak 100 µL tiap  konsentrasi  dimasukkan  kedalam sumuran.  Pengisian  dilakukan  dari  bawah keatas  mulai  dari  konsentrasi  rendah  ke konsentrasi  tinggi  dan  diinkubasi  selama 24  jam  dalam  inkubator  CO 2 .  Setelah inkubasi  amati  kondisi  sel  dibawah mikroskop,  media  sel  dibuang  dan  dicuci dengan PBS kemudian ditambahkan reagen MTT 5 mg/ml sebanyak 100 µL ke setiap  sumuran  dan  inkubasi  kembali  4 jam  dalam  inkubator  CO 2 .  Setelah inkubasi  amati  kondisi  sel  dibawah mikroskop,  jika  formazan  telah  terlihat
jelas  maka  tambahkan  reagen stopper 100 µL  SDS  dalam  HCl  0,01  N  dan plate dibungkus menggunakan kertas atau aluminium  foil  dan  diinkubasi  pada  suhu kamar  di  tempat  gelap  selama  semalam, serapan dibaca dengan ELISA reader pada panjang gelombang 600 nm (CCRC, 2009).

## H. Uji Apoptosis
Sel  MCF-7  dengan  kepadatan 5x10 5 sel/sumuran  ditanam  dalam  6 well plate masing-masing  sebanyak  1000  µl namun  3  sumuran  tidak  diisi  karena digunakan untuk kontrol sel dan dimasukkan  dalam  inkubator  CO 2 selama 24  jam.  Setelah  sel  normal  mengalami 80%  konfluen,  media  dibuang  kemudian tiap  sumuran  dicuci  dengan  PBS.  Sel diberi  perlakuan  ekstrak  kulit  apel  hijau dengan  seri  konsentrasi  IC 50 (885  µg/ml) dan  ½  IC 50 (442,5  µg/ml).  Pada  ekstrak etanol  kulit  apel  hijau  dimasukkan  ke dalam  sumuran  masing-masing  sebanyak 1000  µl  ke  dalam  sumuran.  Sebagai kontrol  sel  ditambahkan  1000  µl  medium kultur ke dalam sumuran. Plate diinkubasi kembali  selama  24  jam.  Kondisi  sel didokumentasikan  untuk  setiap  perlakuan menjelang akhir inkubasi (Vasicek, 2019).
Media  sel  ditransfer  ke conical tube ,  kemudian  masing-masing  sumuran dicuci  dengan  PBS.  PBS  diransfer  ke dalam conical tube yang sama.  Kemudian dilakukan pemanenan dengan
menambahkan  tripsin-EDTA  0,25%  ke dalam  sumuran  dan  diinkubasi  selama  3 menit. Media kultur ditambahkan ke dalam sumuran sebanyak 1000 µl/sumuran kemudian diresuspensi. Suspensi sel kemudian ditransfer ke dalam conical tube
dan  disentrifus  dengan  kecepatan  2000 rpm  selama  5  menit.  Superatan  dibuang sedangkan pellet (endapan) yang terbentuk ditempatkan  dalam conical  tube yang ditutup  dengan  alumunium  foil.  Pellet dilarutkan  dengan  100  µl  buffer  kit annexin V-FLOUS ditambah 2 µl PI dan 2 µl  annexin  V.  Suspensi  sel  kemudian dihomogenkan  dan  diinkubasi  selama  10 menit dalam suhu ruangan. Sel selanjutnya
ditransfer  ke  dalam  tabung flowcytometry dan  dilakukan  analisis  dengan  program flowing (FACS Calibur) untuk mengetahui profil  induksi  apoptosis  (Vasicek et  al ., 2019).

## I. Analisis Data

## Analisis uji sitotoksisitas
Analisis  data  uji  sitotoksisitas dilakukan  untuk  menghitung  persentase kehidupan  sel  dan  nilai  IC 50 .  Data absorbansi  dari  pembacaan  ELISA  reader tiap sumuran digunakan untuk menghitung persentase  kehidupan  sel  dengan  rumus sebagai berikut.
Persentase sel hidup = X 100 %
Nilai  persentase  kehidupan  sel digunakan  untuk  menghitung  nilai  IC 50 yang  merupakan  potensi  sitotoksisitas. Perhitungan  nilai  IC 50 didapat  dari perbandingan  konsentrasi  ekstrak  etanol kulit  apel  hijau  vs  persentase  kehidupan sel  menggunakan  regresi  linier  (CCRC, 2009).

## Analisis uji apoptosis
Data  flowcytometry    yang  akan dianalisis  untuk  mendapatkan  persentase sel  pada  4  kuadran  yaitu  LL  ( lower  left/ persen  sel  hidup),  LR  ( lower  right/ persen sel  yang  mengalami  early  apoptosis),  UL
( upper  left/ persen  sel  yang  mengalami nekrosis)  dan  UR  ( upper  right/ late apoptosis) Analisis yang digunakan adalah program flowing. Hasil percobaan dibandingkan dengan kontrol sel menggunakan  uji  statistik  IBM  SPSS statistik  20  dengan  menggunakan  uji normalitas  diperoleh  data  terdistribusi normal  karena  memiliki  nilai  sig  >0,05, dilanjut  uji  homogenitas  diperoleh  varian data yang homogen dengan nilai sig>0,05. Analisis  data  tersebut  menunjukan  data terdistribusi  normal  dan  homogen.  Untuk mengetahui  perbedaan  bermakna  pada semua kelompok perlakuan EEKAH maka
uji  analisis  statistik  selanjutnya one  way annova selanjutnya  untuk  mengetahui perbedaan  pada  masing-masing  kelompok perlakuan  maka  dilakukan  uji Post  Hoc (Susianti, 2016).

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil ekstrak kental kulit apel hijau (Gambar  1)  diperoleh  sebanyak  63,75 gram dengan rendemen 34,45%.
Karakteristik  ekstrak  yang  didapatkan kental, warna kecoklatan dan berbau khas.
Gambar 1. Ekstrak Etanol Kulit Apel Hijau (EEKAH)
Suatu  pengujian  untuk  mendeteksi adanya aktvitas antineoplastik dari senyawa dapat dilakukan dengan pengujian  sitotoksik.  Pengujian  tersebut untuk  menguji  toksisitas  menggunakan kultur  sel.  IC 50 merupakan  konsentrasi sampel yang menunjukan hambatan proliferasi  sel  sebanyak  50%,  sehingga nilai  IC 50 inilah  yang  biasanya  digunakan sebagai  parameter  uji  sitotoksik  (Haryoto dkk.,  2013).  Pengujian  sitotoksik  yang umum  dilakukan  adalah  menggunakan metode MTT assay. Metode ini mengukur adanya  kristal  formazan  yang  terbentuk.
Kristal formazan ini akan terbentuk karena adanya  reaksi  antara  garam  MTT  dengan enzim  suksinat  reduktase  yang  dimiliki oleh  sel  hidup  yang  terdapat  pada  organel mitokondria  sel,  sehingga  semakin  ungu warna  yang  dihasilkan  maka  menandakan semakin  banyak  sel  yang  hidup    (Haryoto et al ., 2013).
Tabel I. Hasil uji sitotoksisitas EEKAH
pada sel MCF-7 Konsentrasi EEKAH (µg/mL) % viabilitas sel 1000 44,05 500 72,87 250 93,78 125 98,89 62,5 107,76 31,25 111,89 Uji aktivitas sitotoksik
memperlihatkan  %  viabilitas  sel  yang makin  kecil  seiring  dengan  penambahan seri  konsentrasi  EEKAH    (Tabel  I). Penambahan  EEKAH  diketahui  dapat mempengaruhi  persentase  viabilitas  sel atau  kehidupan  sel  secara  spesifik. Morfologi sel MCF-7 (Gambar 2) memperlihatkan  perbedaan  bentuk  sel MCF-7 yang hidup dan mati.
Nilai  IC 50 ekstrak  etanol  kulit  apel hijau  diperoleh  dari  sebesar  885  µg/mL. Hasil  nilai  IC 50 yang  diperoleh  dapat dikategorikan  sebagai  moderat  sitotoksik (Prayong et al ., 2008).
Pengujian  apoptosis  sel  MCF-7 yang  diberi  perlakuan  EEKAH  dengan konsentrasi  IC 50 (885  µg/mL)  dan  ½  IC 50
(442,5  µg/mL).  Analisis  induksi  apoptosis menggunakan flowcytometry dilakukan untuk  mengetahui  terjadinya  kematian  sel baik apoptosis maupun nekrosis (Zhang et al .,  2015).  Persentase  rata-rata  distribusi
sel  kanker  payudara  MCF-7  setelah perlakuan  tunggal  dengan  ekstrak  etanol kulit  apel  hijau  (EEKAH)  dapat  dilihat pada Tabel II.
(A) (B)

## (C)
Gambar  2. Morfologi  sel  MCF-7  pengujian  sitotoksisitas  setelah  diberi  seri  konsentrasi EEKAH. Kontrol sel MCF-7 (A); EEKAH konsentrasi 62,5 µg/mL (B); EEKAH konsentrasi 1000 µg/mL (C). Sel hidup (       ) dan sel mati (         ).
Sel  MCF-7  dengan  perlakuan EEKAH konsentrasi ½ IC 50 (442,5 µg/mL)
memberikan  persentase  apoptosis  total sebesar  30,2%,  sel  dengan  perlakuan  IC 50
(885  µg/mL)  memberikan  persentase apoptosis  total  sebesar  47,9%.  Sedangkan pada kontrol  sel  persentase apoptosis  total
sebesar 12,7%.
Hasil tersebut memperlihatkan  bahwa  sel  MCF-7  yang diberi  perlakuan  EEKAH  konsentrasi  ½ IC 50 dan  IC 50 mampu  meningkatkan persentase  apoptosis  total,  dibandingkan dengan kontrol sel.
Tabel II. Persentase rata-rata distribusi sel kanker payudara MCF-7 setelah perlakuan tunggal dengan ekstrak etanol kulit apel hijau (EEKAH) Perlakuan Kontrol Sel ½ IC50 IC50 % sel hidup 85,9 65,4 47,5 % apoptosis awal 7,4 18,8 28,1 % apoptosis akhir 5,3 11,4 19,8 % apoptosis total 12,7a 30,2a 47,9a,b % nekrosis 1,5 4,4 4,6
Keterangan: (a) p<0,05 terhadap seluruh kelompok perlakuan, (b) p<0,05 terhadap kelompok kontrol sel, n=3

## IV. KESIMPULAN
Ekstrak  etanol  kulit  apel  hijau
(EEKAH) mempunyai aktivitas sitotoksisitas  terhadap  sel  MCF-7  (sel kanker payudara) dengan nilai IC 50 sebesar 885 µg/mL. Ekstrak etanol kulit apel hijau (EEKAH)  mampu  menginduksi  apoptosis sel  MCF-7  pada  konsentrasi  885  µg/mL (IC 50 ) sebesar 47,9% dibandingkan dengan kontrol sel yaitu sebesar 12,7%.

## DAFTAR PUSTAKA
Bethesda.  (2007). Fact  Sheet  Cervical Cancer .  National  Institutes  of Health.
CCRC. (2009). Standart Operating
Procedure .
Cancer
Chemoprevention Research Center.
Chien,  S.  Y.,  Wu,  Y.  C.,  Chung,  J.  G.,
Yang, J. S., Lu, H. F., Tsou, M. F., Wood, W. G., Kuo, S. J., & Chen, D.  R.  (2009).  Quercetin-induced Apoptosis Acts Through Mitochondrial-  and  Caspase  3- dependent  Pathways  in  Human
Breast  Cancer  MDA-MB-23  Cells.
HET , 28 , 493–503.
Duo,  J.,  Ying,  G.  G.,  Wang,  G.  W.,  & Zhang, L. (2012). Quercetin inhibits  human  breast  cancer  cell proliferation  and induces apoptosis via  Bcl-2  and  Bax  regulation. Molecular  Medicine  Reports , 5 , 1453–1456.
https://doi.org/10.3892/mmr.2012.
845 GLOBOCAN. (2018). International
Agency  or  Research  on  Cancer .
http://gco.iarc.fr/today/data/factshe ets/populations/360-indonesia-fact- sheets.pdf.  (Diakses  tanggal  14 Januari 2020).
Haryoto, Muhtadi, Indrayudha, P., Azizah, T., & Suhendi, A. (2013). Aktivitas
Sitotoksik Ekstrak Etanol Tumbuhan Sala (Cynometra
ramiflora Linn.) Terhadap Sel Hela T47D dan WiDr. Jurnal Penelitian Saintek . Kementerian Kesehatan Republik Indonesia. (2018). Panduan Penatalaksanaan Kanker Payudara . Komite Penanggulangan
Kanker Nasional.
Kozlowska,  A.,  &  Szostak-Wegierek,  D.
(2014).  Flavonoids-Food  Source and  Health  Benefits. Rocz  Panstw Zakl Hi , 65 , 79–85.
Novioella,  A.  M.  (2019).  Uji  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Etanol  dan Fraksi  Etil  Asetat  Kulit  Apel Manalagi  (Malus  sylvestris  Mill.).
Universitas  Islam  Negeri  Maulana Malik Ibrahim , 44–52.
Pertiwi, R. D., Cut, E. Y., & Nanda, F. P. (2016).  Uji  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak Etanol  Limbah  Kulit Buah Apel  (Malus  domestica  Borkh.)
Terhadap radikal bebas DPPH (2,2- Diphenyl-1-Picrylhydrazil). Jurnal Penelitian , 2 , 81–92. Prayong, P., Barusrux, S., &
Weerapreeyakul, N. (2008).
Cytotoxic  Activity  Screening  of Some  Indigenous  Thai  Plants. Fitoterapia , 79 , 598–601. Rastini,  M.  B.  O.,  Giantari,  N.  K.  M., Adnyani, K. D., & Laksmiani, N. P. L.  (2019).  Molecular  Docking
Aktivitas Antikanker Dari Kuersetin Terhadap Kanker Payudara  Secara  In  Silico. Journal of Chemistry , 13 , 180–184. Subagyo,  P.,  &  Achmad,  Z.  (2010). Pemungutan  Pektin  dari  Kulit  dan Ampas  Apel  Secara  Ekstraksi. Eksergi , 10 .
Sugiarto.  (2006).  Pendekatan  Baru  Terapi
Kanker. Medikora , 2 , 39–56. Susianti. (2016). Efek Timoquinon terhadap Apoptosis pada Sel Kanker Serviks. JK  Unila , 1 , 267– 271.
Taraphdar,  Amit,  K.,  Madhumita,  Roy,  &
Bhattacharya, R. K. (2001). Natural  products  as  inducers  of apoptosis:  Implication  for  cancer therapy  and  prevention. Current
Science , 80 , 1391. Vasicek,  J.,  Balazi,  A.,  &  Chrenek,  P. (2019). Staurosporine-Induced Apoptosis:  Analysis  By  Different Annexin V Assays. Slovak J. Anim.
Sci , 52 , 47–52.
Youle,  R.  J.,  &  Strasser,  A.  (2018).  The BCL-2  protein  family:  Opposing activities  that  mediate  cell  death, Nature Reviews. Nature Reviews , 9 , 47–59.
Zhang, X., Zhang, S., Yin, Q., & Zhang, J. (2015).  Quercetin  induces  human colon  cancer  cells  apoptosis  by inhibiting  the  nuclear  factor-kappa B Pathway. Pharmacognozy M , 11 , 404–409.