## Original Artikel
Received Agustus 2022 / Revised September 2022 / Accepted Oktober 2022

## Spizaetus: Jurnal Biologi dan Pendidikan Biologi
p-ISSN: 2716-151X
e-ISSN: 2722-869X
Skrining  Senyawa  Metabolit  Sekunder  pada  Ekstrak  Aseton  Biji Gayam ( Inocarpus fagifer )
Screening  of  Secondary  Metabolic  Compounds  Acetone  Extract  of Gayam Seeds ( Inocarpus fagifer )
Yuyun Widayati 1 dan Umarudin 2
1 Akademi Farmasi Surabaya, Surabaya, 60231, Indonesia
2 Akademi Farmasi Surabaya, Surabaya, 60231, Indonesia
Abstrak. Gayam  merupakan  tumbuhan  berkhasiat  obat,  salah  satu  bagian  yang  bisa dimanfaatkan  adalah  bijinya.  Biji  gayam  memiliki  manfaat  bagi  kesehatan  salah  satunya sebagai obat pencahar dan diabetes. Tujuan penelitian ini adalah mengetahui hasil identifikasi golongan  senyawa  metabolit  sekunder  dari  ekstrak  biji  gayam (Inocarpus  fagifer )  dengan pelarut  aseton.  Metode  penelitian  ini  yaitu  biji  gayam  dilakukan  determinasi,  biji  gayam dilakukan  proses  sortasi  basah,  pencucian,  perajangan,  pengeringan,  sortasi  kering,  dan penghalusan. Serbuk kering biji gayam dilakukan ekstraksi metode maserasi selama 3x24 jam. Hasil ekstraksi dilakukan perhitungan nilai rendemen dan skrining fitokimia untuk mengetahui golongan senyawa metabolit sekunder golongan alkaloid, flavonoid, terpenoid, steroid, tanin, dan  saponin  pada  ekstrak  biji  gayam  ditandai  positif  adanya  perubahan  warna,  endapan, cincin, atau busa. Hasil determinasi tanaman biji gayam memiliki nama ilmiah Inocarpus fagifer . Ekstrak biji gayam diperoleh nilai rendemen sebesar 22%. Hasil skrinning fitokimia senyawa metabolit sekunder positif mengandung senyawa golongan alkaloid, terpenoid, tanin, saponin, dan  negatif  senyawa  golongan  flavonoid  dan  steroid. Temuan  ini  dapat  mendukung  klaim secara  tradisional/etnomedisinal  yang  sebelumnya  biji  gayam  dimanfaatkan  untuk antidiabetes.
Kata Kunci: Biji Gayam, Determinasi, Ekstrak, Metabolit sekunder, Skrining Fitokimia.
DOI: http://dx.doi.org/10.55241/spibio.v3i3.78

## 1.  Pendahuluan
Keanekaragaman hayati  di  Indonesia yang  belum  banyak  diteliti  dan berpotensi  menghasilkan  senyawa metabolit  sekunder  adalah  pohon gayam (Inocarpus  fagifer). Gayam (Inocarpus  fagifer) merupakan  jenis tanaman asli dari Indonesia [1].
Pohon  gayam  yang  diteliti  sejauh  ini pada  bagian  daun,  biji  dan  batang namun  pada  bagian  biji  menjadi menarik  untuk  diteliti  lebih  lanjut.  Biji gayam  memiliki  bentuk  pipih  dengan diameter  antara  5-8  cm,  dalam  biji terdapat daging biji (endospermae) [2].
Kandungan biji gayam yaitu karbohidrat sekitar  75,79-77,70%.  Di  masyarakat biji  gayam  dimanfaatkan  sebagai sumber  bahan  pangan  seperti  di wilayah Yogyakarta, Cirebon, dan Tegal sebagai  makanan  selingan [2]. Nama lokal biji gayam di bali dikenal  dengan gatep [3] dan  di  filipina  Kayam [4] .  Berikut gambar biji gayam terlihat di bawah ini.
Gambar 1. Biji Gayam ( Inocarpus fagifer ) [5]
Biji  Gayam  pada  Gambar  1  terdapat lapisan  luar/eksokarp,  morfologi  bulat pipih,  tekstur biji yang keras berwarna hijau  jika  masih  muda  dan  menguning jika  biji  sudah  tua ) [6-7] .  Perbanyakan
gayam dilakukan dengan cara mengecambahkan bijinya.
Biji  gayam  dikenal  sebagai  bahan pangan  dan  juga  diketahui  dapat dimanfaatkan sebagai obat pencernaan yang telah digunakan  oleh masyarakat pedesaan [1]. Biji Gayam memiliki potensi sebagai antioksidan [8] , mengatasi aterosklerosis  akibat  tinggi  lemak [9] . Hasil  penelitian  daun  ekstrak  etanol 70%  daun  gayam  diperoleh  senyawa fenol  dengan  kadar  kandungan  fenol 313,560  mgGAE/g,  etanol  diketahui mampu  mengikat  atau  memisahkan senyawa fenol bersifat polar [1] . Sedangkan  pada  penelitian  ekstrak etanol  96%  kulit  batang  gayam  positif senyawa flavonoid [3] .
Berdasarkan  uraian  tersebut  sehingga sangat  menarik  untuk  diteliti  pada bagian  biji  gayam  dengan  pelarut aseton dengan metode maserasi untuk dilakukan pengujian senyawa yang ada di dalamnya.

## 2. Metode
Bahan  utama  yang  digunakan  adalah biji  gayam  ( Inocarpus  fagifer )  yang diambil  dari  Desa  Kalikangkung Kecamatan Pangkah Kabupaten Tegal, Jawa Tengah. Bahan untuk analisa yaitu aseton,  aquadest,  pereaksi  mayer, pereaksi dragendorff, pereaksi wagner, FeCl 3 1%,  HCL  2N  pekat,  CH 3 COOH, H2SO4  2N  pekat,  serbuk  Mg, kloroform, dan amoniak.
Alat  dibutuhkan  adalah  neraca  analitik Acis®  AD-300i,  blender  Miyako®, beaker  glass  Pyrex®,  ayakan  no  100 mesh,  erlemeyer  Pyrex®,  corong, rotary  evaporator  Heidolph,  tabung reaksi  Pyrex®,  pipet  tetes,  rak  tabung reaksi, kompor listrik, cawan penguap, toples  ukuran  1  liter,  pengaduk  kaca, kain  blacu,  gelas  ukur  Herma®  dan Pyrex®  5ml;10ml;20ml,  alumium  foil,
sarung tangan (sensi glove) dan masker (neo).
2.1 Ekstraksi Biji gayam Serbuk biji gayam ditimbang sebanyak 100  gram  dimaserasi  dalam  toples dengan  penambahan  pelarut  aseton sebanyak 1000 ml selama 24 jam pada hari pertama. Maserasi aseton dan biji gayam  disaring  menggunakan  kain blacu.  Maserat  yang  diperoleh  di  ukur menggunakan  gelas  ukur.  Dilakukan remaserasi  2X  dengan  penambahan aseton 500 ml pada hari kedua dan 250 ml  pada  hari  ketiga,  masing-masing dilakukan penyaringan hingga diperoleh  hasil  maserat  I,  II,  dan  III. Maserat  total  di  masukkan  dalam  satu wadah selanjutnya dilakukan
penguapan dengan alat rotary vaccum evaporator diperoleh ekstrak kental.
2.2 Perhitungan Rendeman Hasil akhir dari ekstrak kental biji gayam yang  diperoleh  dibandingkan  dengan berat serbuk sebelum dilakukan proses ekstraksi dikalikan 100%.2.3 Pengujian golongan senyawa [10-12].

## a. Uji Senyawa Flavovoid
Gambar 2. Uji Flavonoid
b. Uji Terpenoid Gambar 3. Uji Terpenoid c. Uji Steroid Gambar 4. Uji Steroid
d. Uji Tanin
Gambar 5. Uji Tanin
e. Uji Alkaloid Gambar 6. Uji Alkaloid f. Uji Saponin Gambar 7. Saponin

## 3.  Hasil dan Pembahasan
Biji  gayam  ( Inocarpus  fagifer )  yang telah dilakukan determinasi di
Laboratorium  Biosains  dan  Teknologi
Tumbuhan  Institut  Teknologi  Sepuluh Nopember  yang  telah  di  determinasi adalah benar-benar biji gayam
( Inocarpus  fagifer ),  data  lengkap  pada lampiran I. Determinasi bertujuan untuk mengetahui  kebenaran  jenis  bahan alam  yang  akan  diteliti  sehingga memudahkan dan memastikan tanaman yang digunakan. Biji gayam ( Inocarpus fagifer ) mengikuti prosedur  penyortiran  basah  untuk memisahkan dan menghilangkan kotoran  atau  zat  asing  yang  masih menempel  pada  biji.  Pengeringan dilakukan  setelahnya.  Pengeringan bertujuan untuk mengurangi kerusakan, tidak terdegradasi, dan tidak menumbuhkan  jamur.  Simplisia  biji gayam  dilakukan  untuk  mempercepat proses ekstraksi.
Proses  ekstraksi  dengan  metode maserasi,  selama  maserasi  terjadi interaksi  antara  pelarut  dan  simplisia terjadi    perbedaan  tekanan  antara  di dalam  dan  di  luar  sel,  menyebabkan kelompok senyawa metabolit sekunder yang  ada  di  sitoplasma  larut  dalam pelarut dan diekstraksi secara homogen  dari  biji  Gayam.  Metode ekstraksi  ini  menguntungkan  karena sederhana,  peralatannya  murah,  dan efektif dalam ekstraksi senyawa bahan alam.  digunakan  selama  tiga  hari maserasi.
Pelarut yang digunnakan pada penelitian  ini  dengan  metode  Aseton  , selanjutnya ekstrak biji gayam dilakukan Rotary  evaporator bertujuan penguapan untuk menghasilkan ekstrak  kental  lebih  cepat  karena
aseton  merupakan  pelarut  organik polar  dengan  indeks  polaritas  5,1  dan titik  didih  56 0 C.  Untuk  mengurangi risiko  kerusakan  kandungan  metabolit sekunder  dalam  ekstrak,  suhu  yang lebih  rendah  juga  memungkinkan penguapan  sampel  lebih  cepat  dan untuk  mengurangi  kerusakan senyawa yang ada didalamnya.
Proses maserasi menghasilkan ekstrak kental  biji  Gayam  dengan  aroma  khas dan berwarna coklat tua. Selain itu, nilai rendemen  sebesar  22%.  Berdasarkan hasil  penelitian,  suhu  ekstraksi,  jenis pelarut,  waktu  ekstraksi,  dan  rasio pelarut  terhadap  bahan  memiliki pengaruh yang signifikan terhadap nilai rendemen ekstrak biji gayam.
Tahap  selanjutnya  yaitu  skrining fitokimia.  Srining  fitokikia  bertujuan untuk  mengetahui  golongan  senyawa metabolit sekunder yang terkandung di dalamnya.  Hasil  uji  skrining  fitokimia secara kualitatif pada Tabel 1 dibawah ini
Tabel 1. Tabel pengamatan metabolit sekunder ekstrak biji gayam
Gol Senyawa Pereaksi Literatur Hasil Pengamatan Replikasi 1 2 3 Flavonoid 0,1 g serbuk Mg + 2 tetes HCL pekat Terbentuk warna merah pada lapisan aseton Terbentuk warna kuning - - - Terpenoid 2 ml kloroform + 3 ml H 2 SO 4 pekat Terbentuk warna merah kecoklatan pada antar permukaan Terbentuk cincin warna merah kecoklatan + + + Steroid 2 ml CH 3 COOH + 2 ml H 2 SO 4 pekat Terbentuk perubahan warna dari ungu sampai hijau/biru Terbentuk warna orange-hitam - - - Tanin 2-3 tetes FeCl 3 1% Terbentuk warna biru kehitaman / coklat kehijauan Terbentuk warna coklat kehijauan + + +
1 ml  kloroform + 1 ml amoniak + 3 tts H 2 SO 4 2N + 3 tts pereaksi Dragendorff Terbentuk endapan merah /jingga Terbentuk endapan jingga + + +
Alkaloid
1 ml kloroform + 1 ml amoniak
+ 3 tetes H 2 SO 4 2N + 3 tts pereaksi Wagner Terbentuk endapan coklat Terbentuk endapan coklat + + +
1 ml kloroform
+ 1 ml amoniak + 3 tetes H 2 SO 4 2N + pereaksi Mayer Terbentuk endapan putih Terbentuk endapan putih + + + Saponin 10 ml air panas Terbentuk busa selama 1-10 menit Terbentuk busa dengan tinggi 1 cm + + +
Keterangan : (+) terdapat senyawa metabolit sekunder (-) tidak mengandung senyawa metabolit sekunder
Pada  Tabel  1  menunjukkan  bahwa ekstrak  aseton  biji  gayam  ( Inocarpus fagifer ) mengandung senyawa metabolit sekunder golongan terpenoid, tanin, alkaloid, saponin, dan negatif  kandungan  flavonoid  dan steroid.
Hasil  uji  alkaloid  dengan  tiga  pereaksi yaitu Dragendorfft, Wagner, dan Mayer. Pereaksi Dragendorf pada penelitian ini positif  terbentuknya  endapan  jingga,
pereaksi  Wagner  positif  ditandai dengan  terbentuknya  endapan  coklat, dan  pereaksi  Mayer  positif  ditandai dengan  terbentuknya  endapan  putih. Simpulan,  uji  alkaloid  menunjukkan adanya  alkaloid.  Penciptaan  ikatan kovalen  koordinasi  dengan  ion  logam K + ,  yang  mengarah  pada  sintesis alkaloid  kalium,  adalah  mekanisme reaksi  Dragendorrft. Kalium  iodida  (KI) dan  yodium  (I 2 )  dibuat  dalam  reagen
Wagner,  dan  ketika  bereaksi,  mereka mengeluarkan  warna  coklat.  Kalium- alkaloid  dalam  endapan  ditunjukkan. Berbeda  dengan  reagen  Mayer,  yang menyebabkan kompleks kalium- alkaloid  yang  diendapkan  terbentuk ketika  ion  logam  K+  dari  kalium tetraidomerkurat (II) bergabung dengan nitrogen dalam alkaloid [13] . Hasil uji tiga perreaksi  yang  telah  dilakukan  positif adanya  alkaloid,  sehingga  dapat disimpulkan  bahwa  biji  gayam  positif mengandung alkaloid.
Uji flavonoid dengan hasil negative, ini karena  terciptanya  warna  kuning. Gugus  karbonil  flavonoid  diharapkan menempel  pada  Mg  melalui  proses yang berlangsung, khususnya penambahan serbuk Mg, dan penambahan  HCl  untuk  menghasilkan garam Flavilium pada ekstrak mencegah  terbentuknya  rona  merah- oranye [9] .  Negatif  dalam  pengujian  ini karena  serbuk  magnesium  tidak bereaksi dengan bahan kimia flavonoid untuk mereduksinya.
Uji  terpenoid  terbentuk  cincin  merah kecoklatan  diantara  permukaan  akibat hasil uji positif. Melalui proses kapasitas bahan kimia terpenoid untuk menghasilkan
warna
bila dikombinasikan  dengan  H 2 SO 4 pekat. Sedangkan  kelompok  steroid  memiliki hasil  negative,  ini  karena  satu-satunya warna yang berkisar dari oranye hingga hitam bukanlah ungu hingga hijau atau biru.  Karena  steroid  adalah  zat  non- polar, mereka tidak dapat sepenuhnya dihilangkan dari permukaan pelarut. Hasil  uji  tanin  menunjukkan  bahwa warna  coklat  kehijauan  dapat  muncul. Ini  menciptakan  kombinasi  dengan FeCl 3 dan  warna  coklat  kehijauan dengan  menggabungkannya  dengan salah  satu  gugus  hidroksil  yang ditemukan dalam molekul tanin [13] .
Uji  saponin  menunjukkan  adanya  buih atau  buih  dengan  ketebalan  rata-rata
0,9  cm  selama  5-10  menit.  Busa merupakan  tanda  adanya  glikosida, yang  dapat  membuat  busa  dalam  air dan  terhidrolisis  menjadi  molekul  lain seperti  glukosa.  Berdasarkan  tabel  1 hasil  uji  fitokimia  yang  telah  dilakukan dapat  diketahui  bahwa  ekstrak  aseton biji gayam ( Inocarpus fagifer )
menunjukkan  positif  adanya  senyawa metabolit sekunder golongan terpenoid, tanin, alkaloid, saponin, dan negatif golongan flavonoid dan steroid. Hasil  penelitian  biji  gayam  dengan pelarut  aseton  mengandung  senyawa metabolit  sekunder  golongan  alkaloid, tanin, saponin, terpenoid. Biji gayam di klaim bersifat sebagai antioksidan [14] . Flavonoid  dan  fenol  berperan  sebagai antioksidan. selain itu secara farmakologi biji gayam memiliki khasiat sebagai  antidiabetes [15] dan  bersifat sebagai  bakterisidal  terhadap  bakteri Gram positif [16] Tanin berpengaruh dalam penurunan kadar kolesterol total, LDL,  dan  trigliserida  pada  tikus [17] . Sapoin  secara  farmakologis  sebagai anti-inflamasi, imunostimulan, hipokolesterolemia, dan hipoglikemik [18] .,  dan  triterpenoid  juga berpotensi  sebagai  antikanker  dan antidiabetes [19] . Senyawa yang terkandung kadarnya perlu diteliti lebih karena  senyawa  metabolit  sekunder yang  terkandung  pada  ekstrak  biji gayam  sangat  berpotensi  untuk mengubati  berbagai  jenis  penyakit tergantung  senyawa  yang  tertinggi kadarnya  pada  ekstrak  tersebut, sehinga pemanfaatan bijigayam sekarang  sebagai  sumber  makanan prospektif  dari  beberapa  konstituen yang  bermanfaat  bagi  kesehatan [20] yang  mungkin  berkontribusi  pada kesejahteraan  penduduk  di  Indonesia serta  berpotensi  sebagai  pengobatan dibidang farmasi.

## 4. Simpulan
Simpulan  pada  penelitian  ini  ekstrak aseton  biji  gayam  ( Inocarpus  fagifer ) positif mengandung senyawa golongan alkaloid, terpenoid, tanin, saponin, dan negatif  senyawa  golongan  flavonoid dan  steroid.  Penelitian  ini  dapat
memberikan  informasi  ilmiah  tentang pemanfaatan  biji  gayam  sebagai sumber obat herbal.

## Acknowledgements
Autor  mengucapkan  banyak  terima  kasih  kepada  Akademi  Farmasi  Surabaya yang telah memfasilitasi penelitian ini.

## Daftar Pustaka
[1]  Lestari,  D.M.,  Mahmudati,  N.,  Sukarsono,  S,  Nurwidodo,  N.,  Husamah,  H.  Aktivitas Antioksidan Ekstrak Fenol Daun Gayam ( Inocarpus fagiferus Fosb). Biosfera. vol 35, no, 1, p 37-45, 2018.
[2]  Setyowati,  N.  Mengungkap  keberadaan  dan  potensi  gayam (Inocarpus  fagifer )  sebagai sumber pangan alternatif di Sukabumi, Jawa Barat. vol 1, p 71 – 7, 2018.
[3]  Ida Bagus Made Bramasta Wirabumi , I, B, M, B, Kriswiyanti, E., Darmadi, A, A, K. Analysis of Diversity, Importance Value Index and Cultural Significance of Ngaben Ceremonial Plant Based on Tri Mandala in Penglipuran Village, Bali. Journal of Biological Sciences , vol 9, no 1, p. 217-226. 2022.
[4] Roger, T., Sarmiento, Kevin, D. Balagon, Fritz Floyd, T.,   Merisco., Reonil D.J., Aniñon., Mhar Christian., V. Medrano , Kyle Kitche. Diversity and composition of riparian vegetation across forest and agro-ecosystem landscapes of Cabadbaran River, Agusan del Norte, Philippines. 2022. DOI:  https://doi.org/10.3897/arphapreprints.e82882.
[5] Pauku, R.L. Inocarpus fagifer. p. 1-18. 2006. www. traditionaltree.org.
[6] Wawo, A.H., Setyowati, N., Utami, P.L.N.K. Mengenal gayam (Tumbuhan Multi Manfaat). Jakarta:LIPI Press.2019.
[7]  Inayah,  I.  Uji  Total  Flavonoid  dan  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Daun  Biji  Gayam Menggunakan Pelarut Berbeda. Skripsi. Malang. Universitas Islam Negeri Malik Ibrahim. 2019.
[8]  Cai,  Y.,  Luo,  Q.,  Sun,  M.,  Corke,  H.  Atioxidant  Activity  and  Phenolic  Compound  of  112 Traditional Chinese Medicine Plants Associated with Anticancer. Life Sci , vol 74, no 1, p. 2157-84. 2004
[9] .. Upston, J.M., Niu, X., Brown, A.J., Mashima, R., Wang, H., Senthilmohan, R., Kettle, A.J., Dean, R.T., and Stocker, R. 2002. Disease Stage-dependent Accumulation of Lipid and Protein Oxidation Products in Human Atherosclerosis. Am J Pathol , vol 160, p. 701 – 10.
[10] Ahmed, N., Karobari, M.I., Yousaf, A., Mohamed, R. N., Arshad, S., Basheer, S.N., Peeran, S.W., Noorani, T.Y., Assiry, A.A., Alharbi, A.S., Yean, C.Y. Infection and Drug Resistance. 2773-2785. 2022.
[11]  Mahasuari,  N.P.S.,  Paramita,  NL.P.V.,  Putra,  A.  A.  G.  R.  Y.  2020.  Effect  Of  Methanol Concentration  As  A  Solvent  On  Total  Phenolic And  Flavonoid Contentof  Beluntas  Leaf Extract ( Pulchea indica L.). Journal of Pharmaceutical Science and Application. vol. 2, no 2), p 77-84.2020.
[12] Sharmistha, C., Chandra, K.J.  Preliminary phytochemical screening and acute oral toxicity study of the flower of Phlogacanthus Thyrsiflorus Nees in albino mice. I nt. Res. J. Pharm ., vol, 3, no  4, p. 293-295, 2012.
[13 Megaria, K.M., Martiningsih, N. W. Skrining Fitokimia Dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Aseton Daun Kelor ( Morinaga Oleifera ). vol, 10, no 1, p 1 – 11.2016.
[14]  Latayada,  F.S.,  Uy2,  M.M.  2016.  Screening  of  the  Antioxidant  Properties  of  the  Leaf Extracts of Philippine Medicinal Plants Ficus nota (Blanco) Merr., Metroxylon sagu Rottb., Mussaenda  philippica A.  Rich., Inocarpus  fagifer ,  and Cinnamomum  mercadoi Vidal. Bulletin of Environment, Pharmacology and Life Sciences , vol,  5, no 3, p18-24. 2015 .
[15] Hastuti, Alang, H., Hasyim, A. Inventory of plants by the community of Waur Village, Kei Besar District, Maluku Province. Pattimura Journal of Biology and Learning , vol, 2, no  1, p. 23-26, 2022.
[16] Umarudin, Sari, R. Y., Fal, F., Syukrianto. Efektivitas Daya Hambat Ekstrak Etanol 96% Bonggol  Nanas  ( Ananas  comosus L)  Terhadap  Pertumbuhan  Bakteri  S taphylococcu Aureus, Journal of Pharmacy and Science. vol 3, no 2, p. 32-36. 2018.
[17] Umarudin, Susanti, R, Yuniastuti, A. Efektivitas Ekstrak Tanin Seledri Terhadap Profil Lipid Tikus Putih Hiperkolesterolemi. Journal of Biologi Life Science . vol 1, no 2, p. 78-85. 2012.
[18] Marrelli, M., Conforti, F., Araniti, F.,  Statti, G. A. Effects of Saponins on Lipid Metabolism: A Review of Potential Health Benefits in the Treatment of Obesity . Molecule MDPI. vol 21, no 1404. p. 1-20. 2016. ; doi:10.3390/molecules21101404
[19]  Joshee,N.,  Dhekney,  S.A.,    Parajuli,  P.  Therapeutic  and  Medicinal  Uses  of  Terpenes. Medicinal Plants. vol 12. p 333-359. 2019. doi: 10.1007/978-3-030-31269-5_15
[20]  Huml,  K.,  Miksatkova,  P.,  Novy,  P.,  Drabek,  O.,  Sabolova,  M.,  Umar,  M.,  Tejnecky, V.,Pohorela, B., Kourimska, L., Maskova, E., Tulin, A., Lapcik, O., Kokoska, L. J ournal of Applied  Botany  and  Food  Quality. vol,  89,  p  264  -  269,  2016. doi:10.5073/jabfq.2016.089.034