Deteksi Ikan Tuna dan Produk Olahannya , Wulansari et al. Available online: journal.ipb.ac.id/index.php/jphpi
DOI: 10.17844/jphpi.2015.18.2.119

## DETEKSI IKAN TUNA DAN PRODUK OLAHANNYA BERBASIS PROTEIN DAN DNA BARCODING

## Detection Tuna and Processed Products Based Protein and DNA Barcoding
Nuring Wulansari 1 *, Mala Nurilmala 2 , Nurjanah 2 1 Direktorat Pengawasan Sumberdaya Perikanan Kementerian Kelautan dan Perikanan Republik Indonesia Gedung Mina Bahari Gambir Jakarta
2 Departemen Teknologi Hasil Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor Jalan Lingkar Akademik Kampus IPB Bogor 16680 Telepon (0251) 8622915 Faks.(0251) 8622916 *Korespodensi: nuringwulan@gmail.com Diterima 15 Juni 2015 / Disetujui 20 Agustus 2015

## Abstrak
Ikan tuna merupakan komoditi perikanan terbesar kedua di Indonesia setelah udang. Permintaan ikan tuna yang tinggi dan semakin terbatasnya stok ikan tuna terutama bluefin tuna mengakibatkan maraknya pemalsuan. Autentikasi diperlukan untuk meyakinkan konsumen tentang keakuratan pelabelan serta menjaga kualitas dan keamanan pangan. Pada penelitian ini, autentikasi dilakukan berdasarkan protein dan DNA barcoding . DNA barcoding menggunakan cytochrome b (cyt b) dari DNA mitokondria sebagai gen target. Primer gen cyt b  dirancang berdasarkan tuna spesies. Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi keaslian ikan tuna dan produk olahannya melalui protein metode SDS-PAGE dan teknik DNA barcoding . Tahapan penelitian ini yaitu elektroforesis protein melalui SDS-PAGE, ekstraksi DNA, PCR amplifikasi, elektroforesis, dan sekuensing. Sampel yang diuji berupa ikan segar (Tu1, Tu2, Tu3, Tu4, dan Tu5), dan olahan tuna (kaleng dan steak) berhasil diekstraksi. Hasil SDS-PAGE membuktikan kerusakan protein pada olahan ikan tuna, sehingga metode ini tidak tepat jika digunakan untuk mengidentifikasi keaslian ikan tuna. Hasil elektroforesis PCR menunjukkan bahwa sampel ikan tuna, tuna kaleng, dan steak tuna berhasil teramplifikasi pada rentang antara 500–750 bp, hal ini sesuai dengan DNA target yaitu sebesar 620 bp. Hasil sekuen diperoleh bahwa Tu2, Tu3, Tu4 dan Tu5 teridentifikasi sesuai hasil morfometrik yaitu T. albacares , sedangkan Tu1 teridentifikasi T. obesus dengan tingkat homologi sebesar 99%. Olahan steak tuna dan tuna kaleng teridentifikasi sebagai T. albacares , hal ini sesuai dengan yang tertera pada label yaitu tuna.
Kata kunci: autentikasi, cyt b, DNA barcoding , desain primer, SDS-PAGE.

## Abstract
Tuna is the second largest fishery commodity in Indonesia after the shrimp. Since the high demand and the limited stock of tuna resulted in fraudulent chance. Authentication is required to meassure consumers regarding the accuracy of its labeling and food safety. In this study, the authentication was based on protein and DNA barcoding using cytochrome-b gene (cyt-b) of the mitochondrial DNA as the target of gene. Primer of cyt b gene  was designed  based on the tuna species. This study aimed to identify the authenticity of tuna fresh and its processed products through protein using SDS-PAGE

## PENDAHULUAN
Ikan tuna di Indonesia merupakan komoditi perikanan terbesar kedua setelah udang. Tingginya permintaan akanikan tuna dan semakin terbatasnya stok ikan tuna, mengakibatkan adanya pemalsuan, dimana spesies yang mirip diganti dengan spesies yang memiliki harga yang rendah, seperti pada label ikan tuna dari genus Thunnus yang bernilai tinggi diganti dengan ikan dari genus Euthynnus yang  bernilai  rendah (Rasmussen dan Morrissey 2011). Kesalahan dalam identifikasi juga mengakibatkan kesalahan pelabelan seperti pada spesies tuna sirip kuning ( Thunnus albacares ) dan tuna mata besar
( Thunnus obesus ) mempunyai kemiripan morfologi pada ukuran kurang dari 40 cm (Gerasmio 2012). Pemalsuan spesies yang digunakan sebagai bahan baku produk merupakan suatu kegiatan penipuan dan merugikan konsumen serta menurunkan tingkat kenyamanan konsumen. Deteksi keaslian ikan diperlukan untuk meyakinkan konsumen tentang keakuratan pelabelan serta menjaga kualitas dan keamanan pangan (Klossa- Kilia et al . 2002). Deteksi keaslian ikan dapat dilkukan secara fisik (morfologi), protein seperti teknik
Sodium Dedocyl SulfatePolyacrylamide Gel
Electrophoresis (SDS-PAGE), Isoelectric Focusing (IEF), Isozyme Staining and Immunoreactivity (ELISA) (Martinez et al . 2003), dan molekuler (DNA)  (Lockley dan Bardsley 2000).
DNA barcoding merupakan suatu teknik molekuler untuk mengidentifikasi spesies menggunakan perbedaan urutan nukleotida  dari  daerah  gen  yang  terstandar (Stoeckle  dan Hebert 2008).  DNA barcoding didasarkan pada fragmen mtDNA gen cytochrome oxidase I (COI) atau cytochrome b (cyt b) yang berfungsi sebagai ‘ barcode ’  untuk  mengidentifikasi  spesies (Roe dan Sperling 2007; Ward et al . 2005). Penelitian ini menggunakan metode berbasis protein (SDS-PAGE) dan molekuler (DNA barcoding ). Gen cyt b dari DNA mitokondria digunakan sebagai gen target. Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi keaslian ikan tuna dan produk olahannya melalui metode berbasis protein dan DNA.

## BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat Bahan yang digunakan pada penelitian ini yaitu ikan tuna segar, tuna kaleng, steak tuna, DNeasy Blood and Tissue Kit (Qiagen), DNeasy Mericon
and DNA barcoding techniques. The phases of this research were protein electrophoresis by SDS-PAGE, DNA extraction, PCR amplification, electrophoresis and sequencing. Samples of  fresh fish (Tu1, Tu2, Tu3, Tu4, and Tu5) and processed tuna (canned and steak) were successfully extracted. Result showed that SDS-PAGE  proved the damage of proteins in the processed tuna, so this method was not appropriate if it is used to identify the authenticity of tuna. PCR electrophoresis results showed that the samples of tuna, tuna steak, sushi, meat ball, abon, and caned tuna were successfully amplified in the range of 500-750 bp except Ka3, which was in line with the target of DNA  (620 bp). Resulted sequences of Tu2, Tu3, Tu4 and Tu5 were identified according the results of morphometric namely T. albacares , while Tu1 was identified as T. obesus with homology level of 99%.
Processed tunas (steak and canned tuna) were identified as T. albacares , as stated on the labels.
Keywords: Authentication, cytb, DNA barcoding, design primer, SDS-PAGE
Deteksi Ikan Tuna dan Produk Olahannya , Wulansari et al.
Food Kit (Qiagen), proteinase K, etanol 96%,  kloroform, Kapa Taq Extra HotStart ReadyMix PCR Kit (Kapa Biosystems), primer foward dan reverse, agarose (Vivantis), Etium Bromida, gel loading buffer (Invitrogen), DNA ladder (Invitrogen). Alat yang digunakan antara lain pipet tips (Axygen Scientific, California-USA), mikro pipet (Thermo Scientific), tabung mikro, sentrifuse(PerfectSpin 24 plus, Peqlab Biotechnologie GmbH, Erlangen- Jerman), mesin PCR (Termocycler Biometra T1, Biometra GmbH, Gottingen- Jerman), inkubator (Digital Block Heater HX-1, Peqlab Biotechnologie GmbH, Erlangen-Jerman), elektroforesis (Merk Mupid-Exu, Tipe Electrophoresis System ), timbangan digital (Merk Adam Tipe PW254, England), spindown (PerfectSpin mini, Peqlab Biotechnologie GmbH, Erlangen-Jerman), vortex (peqTwist vortex mixer , Peqlab Biotechnologie GmbH, Erlangen-Jerman) microwave (Panasonic NN-SM320M), Freezer, dan alat sinar UV Extragene Ultraviolet Viewer (UV-1).

## METODE PENELITIAN
Koleksi Sampel Sampel terdiri dari ikan tuna segar dan produk olahan ikan tuna. Ikan tuna segar diperoleh dari Muara Baru, dan produk olahan tuna berupa tuna kaleng dan steak tuna diperoleh dari supermarket di daerah Bogor. Ikan tuna segar yang diperoleh,
Tabel 1 Koleksi sampel Kode sampel Label Lokasi Tanggal Sampling Tu1 Ikan segar Muara Baru 20 Nopember 2014 Tu2 Ikan segar Muara Baru 20 Nopember 2014 Tu3 Ikan segar Muara Baru 24 Februari 2015 Tu4 Ikan segar Muara Baru 24 Februari 2015 Tu5 Ikan segar Muara Baru 24 Februari 2015 Ka Tuna Kaleng ( Chunks Tuna ) Bogor 27 Nopember 2014 St Tuna Fillet Thunnus albacares Bogor 27 Nopember 2014
diambil bagian dagingnya dan dimasukan kedalam tabung mikro 1,5 mL dan diberi larutan etanol 96% pa sampai sampel terendam, kemudian disimpan ke dalam freezer suhu -70 o C. Produk steak tuna disimpan pada suhu -70 o C, sedangkan tuna kaleng disimpan pada suhu ruang. Koleksi sampel dapat dilihat pada Tabel 1.

## Analisis Berbasis Protein
SDS-PAGE merupakan teknik untuk memisahkan protein berdasarkan arus listrik, yang merupakan fungsi dari panjang rantai polipeptida atau berat molekulnya, hal ini dilakukan dengan cara menambahkan deterjen SDS dan pemanasan untuk merusak struktur tiga dimensi pada protein dengan terpecahnya ikatan disulfide yang selanjutnya direduksi menjadi gugus sulfidhihidril.
Sampel diekstrak proteinnya dengan cara 1 gr sampel ditambahkan 3 mL buffer phoshat dikocok-kocok kemudian di sentrifuse dengan kecepatan 5.000 rpm, suhu 4°C selama 30 menit dan diambil supernatannya. Hasil ekstraksi kemudian didenaturasi pada suhu 65°C  selama 3 menit. Sampel yang telah didenaturasi dan marker masing-masing dimasukan ke dalam sumur sebanyak 5 µL. Chamber elektroforesis dihubungkan dengan arus listrik dan running sampel p ada arus 20 A dan voltase 220 V selama 75 menit. Running buffer dipisahkan dan gel diambil
dari plate pembentuk gel. Gel yang telah diambil dari plate direndam dalam 25 mL larutan staining selama kurang lebih 2 jam, kemudian dibilas dengan air dan direndam dalam 50 mL larutan de staining over night atau sampai pita protein terlihat jelas, dalam tahap ini larutan staining digunakan untuk mewarnai protein dan larutan de staining untuk menghilangkan warna pada gel dan memperjelas pita protein yang terbentuk. Gel ( staining gel ) diwarnai dengan larutan staining yang mengandung Coomassive Briliant Blue R-25 0,01% yang dilarutkan dalam metanol asam asetat dan air dengan perbandingan tertentu. Gel direndam dalam pewarna, kemudian dibilas dengan asam asetat jenuh. Protein menjadi berwarna biru karena mengikat Coomassie Briliant Blue . Mobilitas relatif protein digunakan untuk menentukan berat molekulnya.
Analisis Berbasis Molekuler ( DNA Barcoding ) Analisis molekuler meliputi ekstraksi DNA, desain primer, PCR amplifikasi, sekuensing dan identifikasi spesies.
Ekstraksi DNA Proses ekstraksi DNA menggunakan standar protokol The Dneasy Blood and Tissue Kit (Qiagen) untuk ikan segar dan produk olahan menggunakan standar protokol Dneasy Mericon Food Kit (Qiagen). Proses ekstraksi DNA terdiri dari tiga tahap yaitu, perusakan dinding sel (lisis), pemisahan DNA dari bahan lain, dan permurnian DNA.
Desain Primer Data sekuens thunnus gen parsial cyt b mitrokondria diambil melalui National Center for Biotechnology Information (NCBI) situs web http://www.ncbi.nlm. nih.gov/nucleotide/. Pencarian homologi gen cyt b thunnus menggunakan program Basic Local Alignment Search
Tool (BLAST) dalam situs NCBI:http:// blast.ncbi.nlm.nih.gov/ Blast.cgi. Hasil primer yang diperoleh kemudian diuji pada web http://www.oligoevaluator.com/ OligoCalcServlet#.
Amplifikasi PCR Sampel yang telah diekstraksi dilakukan amplifikasi dengan PCR. Tahapan PCR meliputi: pradenaturasi (94°C  selama 5 menit),  denaturasi (94°C selama 5 menit), annealing (T = 50-60°C selama 1 menit), extension (T = 72°C selama 1 menit), post extention (T = 72°C selama 7 menit) dan preservation (T = 8°C selama 5 menit). Bahan yang digunakan untuk PCR terdiri dari campuran 21,5 μL ddH2O, primer foward dan reverse masing-masing 1,25 μL, DNA template sebanyak 1 μL, dan Kapa Taq Extra HotStart Ready Mix
PCR Kit (Kapa Biosystems) sebanyak 25 μL sehingga diperoleh bahan PCR mix sebanyak 50 μL. PCR mix terdiri dari dNTP yang berfungsi agar pada proses PCR dapat membuat untai baru serta taq polimerase, dd H 2 O berfungsi untuk melarutkan komponen PCR agar bercampur, dan primer baik forward maupun reverse berfungsi untuk proses penggandaan pada PCR. PCR mix kemudian dimasukkan ke thermocycler  yang sebelumnya diatur suhu dan siklus yang akan digunakan. Produk PCR kemudian dapat divisualisasikan pada 1% gel agarose yang telah diberi pewarna berupa larutan ethidium bromide untuk dielektroforesis, hasil elektroforesisi kemudian divisualisasikan di bawah gelombang pendek sinar UV.
Sekuensing DNA yang telah teramplifikasi kemudian disiapkan untuk proses penentuan urutan nukleotida menggunakan DNA sequencer . Data hasil sekuensing kemudian diolah
Deteksi Ikan Tuna dan Produk Olahannya , Wulansari et al.
menggunakan program MEGA 6 ( Molecular Evolutionary Genetic Analysis ) (Tamura et al. 2013). Hasil sekuensing yang telah dianalisis ditentukan indentifikasi spesiesnya menggunakan proses BLAST ( Basic Local Alignment Search Tool ) yaitu membandingkan dengan database sekuen DNA pada genbank (http://blast.ncbi.nlm. nih.-gov).
Pohon Filogenetik Hasil sekuensing kemudian di alignment (Clustal W) untuk menentukan apakah hasil sekuen homolog dengan lainnya. Pohon filogenetik dibuat menggunakan software MEGA 6, dengan metode Neighbour-Joining Tree model Kimura 2-Parameter (K2P) dan bootstrap 1.000 replikasi. Pohon filogentik digunakan untuk melihat kekerabatan dan jarak genetik suatu spesies. Jarak genetik merupakan ukuran perbedaaan genetik
antar populasi karena mutasi, seleksi, persilangan acak dan penghanyutan gen yang akan menyebabkan terjadinya evolusi. Data sekuen untuk spesies outgroup diperoleh dari Genbank  NCBI.
Hasil dan Pembahasan SDS-PAGE Pola protein yang terbentuk pada sampel ikan tuna segar, steak tuna, dan tuna kaleng dapat dilihat pada Gambar 1. Pada gambar terlihat bahwa pola protein pada ikan segar dan steak terlihat lebih tebal dan jelas dibandingkan pola protein pada tuna kaleng, hal ini dikarenakan pada tuna yang dikalengkan telah terjadi proses pemanasan sehingga protein menjadi terdenaturasi dan mengakibatkan pola proteinnya tidak terlihat. Identifikasi spesies berbasis protein tidak dapat digunakan untuk produk- produk yang telah mengalami pemanasan,

## M            1               2               3
192 112 85 60 47 28 21 8,8 BM (kDa)
Keterangan: M=Marker; 1=Ikan tuna segar; 2=Steak tuna; 3=Tuna kaleng.
Gambar 1 Fraksi-fraksi  protein ikan tuna dan olahan tuna
Tabel 2 Desain primer thunnus untuk gen cyt b Primer Sekuen Panjang (bp) Tm ( C) GC (%) Primer Dimer Struktur Sekunder Tuna1-F 5’CTYCTATCCGCAGTC CCATATGTYGG3’ 26 62,9 50,0 Tidak tidak Tuna1-R 5’GGAATAGGGAGAAGT AGAGGACG3’ 23 63,0 52,2 Tidak tidak sehingga perlu dilakukan identifikasi lanjut berbasis DNA. Rasmussen dan Morrissey (2008) menyatakan bahwa metode berbasis protein umumnya dapat digunakan untuk ikan segar, namun kurang efektif untuk produk yang mengalami pemanasan karena protein telah terdegradasi.

## Desain Primer
Desain primer mengambil sekuen Thunnus gen cyt b parsial mitokondria melalui NCBI. Sekuen Thunnus terdiri dari Thunnus obesus , T. orientalis , T. albacares , T. alalunga, T.  thynnus, T. maccoyii, T.
Tonggol, kemudian diolah dengan MEGA 6 dan diperoleh daerah conserve cyt b pada rentang daerah 445 bp untuk foward dan 1.064 pb untuk reverse sehingga diperoleh panjang fragmen sebesar 620 pb. Parameter yang digunakan dalam mendesain primer yaitu jumlah basa (18- 22 basa), suhu annealing antara 50-70°C, presentase G atau C antara 40-65%, basa pada ujung arah hilir yaitu G atau C, meminimalkan terjadinya loops dan self
anealing (Sambrook et al . 2001). Primer yang telah diperoleh diuji http://www.oligoevaluator.com/ OligoCalcServlet#. Primer yang telah didesain dapat dilihat pada Tabel 2. Primer cyt b ikan tuna diberi label Tuna1-F dan Tuna1-R.
Ekstraksi dan Amplifikasi DNA Ikan tuna segar dan olahannya telah berhasil diekstraksi. Hasil ekstrak DNA ikan tuna dan olahan tuna kemudian diamplifikasi dengan teknik PCR dengan primer Tuna1-F dan Tuna1-R cyt b, tahapan PCR terdiri dari predenaturasi 94°C selama 5 menit, denaturasi 94°C selama 30 detik, anealling 58°C selama 1 menit, ekstensi 72°C selama 1 menit dengan 40 siklus, post ektensi 72 °C selama 7 menit dan penyimpanan 8°C selama 5 menit. Elektroforegram PCR ikan tuna segar dan olahan tuna menunjukkan bahwa sampel teramplifikasi pada fragmen antara 500–750 bp, hal ini sesuai dengan DNA target yaitu sebesar 620 bp.
Keterangan: M=Marker;   1=Tuna1; 2=Tuna2; 3=Tuna3; 4=Tuna 4;
5=Tuna5; 6=Kaleng Tuna; 7=Fillet Tuna
Gambar 2 Hasil Elektroforegram PCR Gen target
620 bp
750 bp 500 bp
Deteksi Ikan Tuna dan Produk Olahannya , Wulansari et al.
Sekuensing DNA yang berhasil teramplifikasi kemudian dilakukan penentuan urutan nukleotidanya dengan cara mengirimkan hasil PCR produk. Hasil urutan nukleotida yang diterima kemudian diolah dengan software MEGA 6. Hasil identifikasi spesies (Tabel 3) dilakukan dengan analisis BLAST yaitu membandingkan dengan database yang ada pada Genbank.
Tabel 3 terlihat bahwa ikan tuna segar Tu1 terjadi perbedaan dalam identifikasi, dimana identifikasi berdasarkan morfologi Tu1 teridentifikasi sebagai T. albacares , sedangkan secara molekuler teridentifikasi sebagai T. obesus dengan tingkat homologi sebesar 99%.
Identifikasi secara morfologi sering terjadi kesalahan, dari 48 sampel dengan fork lenght 13-31 cm, hasil analisis morpho-meristik sebanyak 12 sampel (25%) terindentifikasi big eye , sedangkan 36 sampel (75%) merupakan yellow fin , namun dengan analisis genetik hati menunjukkan bahwa hanya 5 sampel (10%) merupakan big eye , sedangan 43 sampel (90%) merupakan yellow fin (Gerasmio 2012), sehingga metode berbasis DNA merupakan metode yang akurat untuk mengidentifikasi spesies, hal ini diperkuat oleh Nicole et al . (2012) bahwa metode berbasis DNA barcoding
merupakan teknik yang cepat dan akurat yang digunakan untuk mengidentifikasi genetik krustasea, moluska dan ikan, juga untuk konservasi terutama untuk memantau spesies yang dilindungi dan terancan punah, perdagangan ilegal, selain itu DNA barcoding dapat digunakan autentikasi untuk mendeteksi kesalahan pelabelan produk olahan. Galimberti et al . (2013) menyatakan bahwa DNA barcoding merupakan metode berbasis molekuler yang dapat mengidentifikasi spesies, bahan mentah dan makanan olahan, serta keamanan pangan.
Pohon Filogenetik Konstruksi pohon filogenetik menggunakan metode Neighbour Joining Tree dengan K2P model, dan nilai  bootstrap  1.000  replikasi.  Spesies Balaenoptera omurai dijadikan sebagai outgroup karena mempunyai perbedaan nukleotida yang signifikan dengan sampel. Pada gambar terlihat bahwa sampel Tu2, Tu3,Tu4, Tu5, K dan St membentuk clade dengan T. albacares, sedangkan Tu1 membentuk clade dengan T. obesus . Penelitian Maralit et al. (2013) dengan Neighbour Joining Tree dan K2P model menunjukkan bahwa semua sampel bluefin tuna membentuk clade dengan longtail tuna ( Thunnus tonggol ) yang mengindikasikan telah terjadi mislabelling .
Tabel 3 Identifikasi spesies dengan analisis BLAST Sampel Kode Spesies pada label Hasil analisis Homologi Kode Akses Tuna 1 Tu1 T. albacares T. obesus 99% KJ018961.1 Tuna 2 Tu2 T. albacares T. albacares 99% DQ080287.1 Tuna 3 Tu3 T. albacares T. albacares 99% DQ080285.1 Tuna 4 Tu4 T. albacares T. albacares 99% DQ080286.1 Tuna 5 Tu5 T. albacares T. albacares 99% DQ080281.1 Kaleng K Tuna T. albacares 99% DQ080281.1 Steak St T. albacares T. albacares 99% DQ080281.1

## KESIMPULAN
Pengujian keaslian berbasis protein (SDS-PAGE) tidak dapat digunakan terutama untuk produk-produk perikanan yang telah mengalami proses pemanasan. Hasil elektroforesis PCR menunjukkan bahwa sampel berhasil teramplifikasi sesuai dengan gen target 620 bp. Hasil analisis dengan BLAST menunjukkan bahwa sampel ikan segar teridentifikasi sebagai T. albacares dan T. obesus dengan tingkat homologi 99%, sedangkan produk olahan kaleng dan fillet teridentifikasi T. albacares dengan tingkat homologi 99%.

## DAFTAR PUSTAKA
Galimberti A, De Mattia F, Losa A, Bruni I, Federici S, Casiraghi M, Martellos S, Labra M. 2013. DNA Barcoding as a new tool for food traceability. Food Research International 50:55-63. Gerasmio IRP, Babaran RP, Santos MD.
2012. Discrimination of juvenile yellowfin ( Thunnus albacares ) and bigeye ( T. obesus ) tunas using mitochondrial DNA control region and liver morphology. PLoS ONE 7(4). Klossa-Kilia E, Papasotiropoulos V, Kilias G, Alahiotis S. 2002. Authentication of Messolongi (Greece) fish roe using PCR RFLP analysis of 16s rRNA mtDNA segment. Food Control 13:169-172. Lockley AK, Bardsley RG. 2000. DNA- based methods for food authentication. Trends in Food Science and Technology 11(2):67-77. Maralit BA, Aguila RD, Ventolero MFH, Perez SKL, Willette DA, Santos MD. 2013. Detection of mislabeled using DNA barcodes and its implications to food traceability and safety. Food Control 33:119-125. Martinez I, Aursand M, Erikson U,
Tu2 cytb* Tu5 cytb*
DQ080285.1| Thunnus albacares cytb DQ497903.1| Thunnus albacares cytb
DQ080287.1| Thunnus albacares cytb
K cytb* Tu4 cytb* St cytb*
DQ080281.1| Thunnus albacares cytb DQ497902.1| Thunnus albacares cytb
DQ080288.1| Thunnus albacares cytb
Tu3 cytb*
Tu1 cytb*
KJ018961.1| Thunnus obesus cytb KJ018960.1| Thunnus obesus cytb
KJ018956.1| Thunnus obesus cytb
KJ018928.1| Thunnus obesus cytb
KJ018926.1| Thunnus obesus cytb EF103940.1| Balaenoptera omurai cytb Gambar 4 Pohon filogenik sampel ikan tuna dan olahannya Keterangan: *sampel yang digunakan
Deteksi Ikan Tuna dan Produk Olahannya , Wulansari et al.
Singstad TE, Veliyulin E, van der Zwaag C. 2003. Destructive and non- destructive analytical techniques for authentication and composition analyses of foodstuffs. Trends in FoodScience and Technology 14(12):489-498.
Nicole S, Negrisol E, Eccher G, Mantovani R, Patarnello T, Erickson DL, Kress WJ, Barcaccia G. 2012. DNA Barcoding as a reliable method for authentication of commercial seafood products. Food Technol. Biotechnol 50(4):387-398. Rasmussen RS, Morrissey MT. 2008. DNA- based methods for the identification of commercial fish and seafood species.
Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety 7:280-295. Rasmussen RS, Morrissey MT. 2011.
DNA-based detection of commercial
fish species. Di dalam buku Handbook of Seafood Quality, Safety and HealthApplications ; Cesarettin Alasalvar, Fereidoon Shahidi, Kazuo Miyashita dan Udaya Wanasundara 2011 Blackwell Publishing Ltd. 576p. Roe AD, Sperling FAH. 2007. Patterns of evolution mitochondrial cytochrome c oxidase I and II and implications for DNA barcoding . Molecular Phylogenetics and Evolution 44:325- 345. Sambrook JR. 2001. Molecular cloning :A Laboratory Manual. 3rd ed. Cold Spring Harbor Lab. Press. New York.
Ward RD, Zemlak TS, Innes BH, Last PR, Herbert PDN. 2005. DNA barcoding Australia;s fish species. Philosophical Trans-actions of the Royal Society Part B 360:1847-1857.