DOI : http://doi.org/10.29244/jhi.14.1.1-8 Tersedia online di http://journal.ipb.ac.id/index.php/jhi p-ISSN 2087-4855 e-ISSN 2614-2872 Terakreditasi Sinta 2 No. 200/M/KPT/2020
1 Departemen Agronomi dan Hortikultura, Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor Jalan Meranti, Kampus IPB Dramaga, Bogor 16680, Indonesia.
2 Badan Riset dan Inovasi Nasional (BRIN). Jalan Raya Jakarta-Bogor, Cibinong, Kab. Bogor 16915, Indonesia. Email: mkosmiatin@yahoo.co.id (*penulis korespondensi)
J. Hort. Indonesia, April 2023, 14(1): 1-8
Perkecambahan dan Pertumbuhan in Vitro Jeruk Nipis (Citrus aurantiifolia)
In vitro Germination and Growth of Lime (Citrus aurantiifolia)
Komang Trisna Wirakusuma 1 , Agus  Purwito 1 , Ali Husni 2 , Mia Kosmiatin 2 *
Diterima 22 Maret 2021/Disetujui 25 Maret 2023

## ABSTRACT
In vitro selection to increase the citrus resistance to Huanglongbin-HLB diseases, requires the availability of lime in vitro shoots as a negative control, because it is one type of citrus that is very susceptible to HLB. In vitro shoots can be obtained from seed germination in vitro with a more controlled environment. Shoots derived from in vitro germination can be used as controls when in vitro artificial inoculation by pathogen suspension is performed to select in vitro breeding lines. This study aims to obtain the best concentration of gibberellins and scarification treatment for in vitro germination of lime. Germination was carried out on citrus seeds that had been sterilized on the surface of the fruit. Scarification is done by injuring the testa of the seed. Lime seeds with and without scarification treatment were germinated on Murashige & Skoog (MS) + Vitamin Morell & Wetmore (VMW) base media with the addition of GA 3 0 mg L -1 , 5 mg L -1 , 10 mg L -1 , and 15 mg L -1 . The results showed that the optimal concentration of GA 3 to induce lime seed germination was 5 mg L -1 . Scarification by wounding the seed testas significantly accelerated lime germination time.
Keywords: negative control, GA 3 , scarification

## ABSTRAK
Dalam seleksi in vitro untuk peningkatan ketahanan jeruk terhadap serangan patogen Huanglongbin-HLB, ketersediaan tunas in vitro jeruk nipis diperlukan sebagai kontrol negatif, karena jeruk nipis merupakan salah satu jenis jeruk yang sangat rentan terhadap HLB. Tunas in vitro dapat diperoleh dari perkecambahan biji secara in vitro dengan lingkungan yang lebih terkendali. Tunas yang dihasilkan dari proses perkecambahan dalam kondisi in vitro dapat digunakan sebagai kontrol negatif saat dilakukan inokulasi buatan secara in vitro dengan suspensi patogen untuk menseleksi galur-galur hasil pemuliaan in vitro . Penelitian ini bertujuan mendapatkan konsentrasi GA 3 dan perlakuan skarifikasi terbaik untuk perkecambahan in vitro jeruk nipis. Perkecambahan dilakukan pada biji jeruk yang sudah disetrilkan permukaaan buahnya. Skarifikasi dilakukan dengan melukai testa biji. Biji jeruk nipis dengan dan tanpa perlakuan skarifikasi dikecambahkan pada media dasar Murashige & Skoog (MS) + Vitamin Morell & Wetmore (VMW) dengan tambahan giberelin 0 mg L -1 , 5 mg L -1 , 10 mg L -1 , dan 15 mg L -1 . Hasil penelitian menunjukkan bahwa konsentrasi GA 3 optimal untuk menginduksi perkecambahan biji jeruk nipis adalah 5 mg L -1 . Perlakuan skarifikasi secara nyata mampu mempercepat waktu perkecambahan jeruk nipis.
Kata kunci: GA 3 , kontrol negatif, skarifikasi

## PENDAHULUAN
Jeruk adalah komoditas buah-buahan terpenting nomor tiga di Indonesia setelah pisang dan mangga. Produksi total jeruk pada tahun 2019 mencapai 2.56 juta ton dan diproduksi hampir di seluruh provinsi di Indonesia (BPS, 2020). Produksi jeruk  di  Indonesia  sering  mengalami  fluktuasi  karena
serangan penyakit terutama serangan penyakit HLB, yang berakibat fatal. Sampai saat ini belum ada yang melaporkan jenis jeruk yang tahan terhadap penyakit ini. Perakitan tanaman jeruk tahan HLB dapat dilakukan melalui seleksi in vitro pada populasi hasil pemuliaan secara dini dengan menggunakan patogen sebagai penseleksi. Penapisan ketahanan terhadap HLB secara in vitro sudah didaftarkan paten
teknologinya dengan nomor P00201909319 pada tahun 2019. Pada teknologi tersebut digunakan tunas in vitro jeruk nipis sebagai materi yang diinokulasi dengan suspensi patogen karena jeruk nipis merupakan salah satu jenis yang paling rentan dan bergejala saat diinokulasi. Ketersediaan tunas jeruk nipis in vitro sebagai kontrol negatif diperlukan untuk memastikan bahwa suspensi mengandung patogen yang mampu menimbulkan gejala HLB pada saat proses seleksi populasi jeruk hasil pemuliaan in vitro (Kosmiatin et al ., 2020). Perkecambahan biji jeruk dapat dilakukan secara in vitro pada medium optimum dan lingkungan yang lebih terkendali (Putra et al ., 2015). Tunas yang dihasilkan dari proses perkecambahan dalam kondisi in vitro dapat digunakan sebagai sumber eksplan steril untuk kegiatan pemuliaan dan konservasi in vitro , perbanyakan, dan penelitian penanggulangan penyakit (Isnaeni dan Habibah, 2014). Teknik in vitro mempunyai kondisi suhu, cahaya, dan kelembaban yang terjaga. Lingkungan, media tanam, dan eksplan biji yang dikecambahkan secara in vitro seluruhnya berada dalam kondisi yang aseptik (Isnaeni dan Habibah, 2014). Penelitian ini bertujuan mendapatkan konsentrasi of GA 3 dan perlakuan skarifikasi terbaik untuk perkecambahan in vitro jeruk nipis.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian dilakukan di Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik Pertanian, Bogor, Jawa Barat. Penelitian dilaksanakan pada bulan November 2019 hingga bulan Mei 2020. Percobaan disusun dengan menggunakan Rancangan Acak Lengkap (Faktorial RAL) dengan dua faktor, dengan tiga ulangan untuk masing-masing kombinasi perlakuan. Setiap ulangan terdiri dari empat eksplan biji. Faktor pertama adalah konsentrasi GA3 dengan empat taraf perlakuan (0 mg L -1 , 5 mg L -1 , 10 mg L -1 , dan 15 mg L -1 .).  Faktor  kedua  adalah  perlakuan  skarifikasi
pada biji jeruk dengan 2 taraf perlakuan (dilukai dan tidak dilukai).
Media dasar yang digunakan dalam penelitian ini adalah media MS yang ditambahkan dengan 30 g L -1 gula pasir dan dipadatkan dengan 2.5 g L -1 phytagel . Kemasaman media setelah ditambahkan dengan GA 3 sesuai perlakuan diatur 5.8 dan disesuaikan dengan penambahan NaOH atau HCl.
Bahan tanaman yang digunakan adalah benih jeruk nipis  masak  fisiologis  yang  diperoleh  Balai  Penelitian Tanaman Jeruk dan Buah Subtropika (Balitjestro). Permukaan buah disterilkan dengan cara dicelupkan dalam alkohol 96% kemudian dilewatkan pada api bunsen, proses ini diulang 3-4 kali. Buah jeruk kemudian dikupas dalam laminar air flow  cabinet untuk mengisolasi bijinya. Sebagian biji jeruk langsung ditanam pada media dasar MS dengan penambahan GA 3 sesuai perlakuan dan sebagian lagi diskarifikasi terlebih dahulu dengan cara melukai testa/kulit biji secara membujur.
Data percobaan pertama untuk setiap kombinasi perlakuan dan ulangan dianalisis Sidik Ragam. Jika pengaruh perlakuan nyata, dilakukan uji beda antar perlakuan dengan metode Beda Nyata Jujur (BNJ) pada taraf 5%. Pengaruh masing-masing faktor dan kombinasinya pada percobaan kedua dianalisis menggunakan analisis deskriptif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Secara umum, perlakuan GA 3 dan interaksi antara perlakuan GA 3 dengan  skarifikasi  tidak  berpengaruh  nyata terhadap keseluruhan variabel yang diamati (Tabel 1). Perlakuan  skarifikasi  berpengaruh  nyata  terhadap  variabel waktu berkecambah namun tidak berpengaruh nyata terhadap karakter pertumbuhan.

## Waktu berkecambah.
Waktu berkecambah adalah jumlah hari yang dibutuhkan biji jeruk untuk berkecambah membentuk kecambah normal
Tabel 1. Rekapitulasi sidik ragam pengaruh perlakuan GA 3 , skarifikasi dan interaksi keduanya terhadap keseluruhan variabel yang diamati pada 5 minggu setelah biji berkecambah dengan taraf nyata 5%
Variabel Pengamatan Perlakuan KK (%) 1 Konsentrasi GA 3 Skarifikasi Interaksi Kedua Perlakuan Waktu Berkecambah tn * tn 6.69 Tinggi Kecambah tn tn tn 8.73 Jumlah Buku tn tn tn 12.18 Jumlah Daun tn tn tn 11.74 Jumlah Akar tn tn tn 16.18 Jumlah Kecambah per Biji tn tn tn 16.19 Jumlah kecambah Normal per Biji tn tn tn 12.79
Keterangan:  *= nyata, tn = tidak nyata, KK = koefisien keragaman, 1 Data ditransformasikan dengan (x) 1/2
Tabel 2. Rata-rata waktu berkecambah jeruk nipis pada masing-masing perlakuan konsentrasi GA3 dan skarifikasi yang berbeda
Skarifikasi
Konsentrasi GA 3 (mg L -1 ) Rerata 0 5 10 15 hari setelah tanam (HST) Dengan Skarifikasi 41.33 31.67 34.58 40.00 36.90 a Tanpa Skarifikasi 68.78 67.30 69.45 61.86 66.85 a Rerata 55.06 49.48 52.02 50.93 -
Keterangan: Rata-rata yang diikuti huruf yang sama pada kolom yang sama, tidak berbeda pada taraf uji BNJ 5%.
A D C B
Gambar 1. Kecambah abnormal (A, B) dan kecambah normal (C,D)
dimana kecambah sudah memiliki daun sejati yang telah membuka sempurna dan akar yang tumbuh baik, sedangkan yang hanya tumbuh tunas/daun atau akar dikategorikan kecambah  tidak  normal  (Gambar  1).  Perlakuan  skarifikasi berpengaruh nyata terhadap waktu berkecambah jeruk nipis pada taraf nyata 5%, sedangkan perlakuan konsentrasi GA 3 dan interaksi kedua perlakuan tidak berpengaruh nyata (Tabel 1). Faktor  skarifikasi  yang  sebelumnya  dinyatakan berpengaruh nyata terhadap waktu berkecambah kemudian diuji lanjut dengan uji beda nyata jujur (BNJ) pada taraf nyata 5%. Hasil uji BNJ (Tabel 2) menunjukkan bahwa waktu berkecambah  jeruk  nipis  yang  diberi  perlakuan  skarifikasi berbeda nyata dengan yang tidak diberi perlakuan. Biji jeruk  nipis  yang  diberi  perlakuan  skarifikasi  lebih  cepat berkecambah (Tabel 2).
Perlakuan skarifikasi pada jeruk nipis berpengaruh nyata terhadap waktu berkecambah, hal ini serupa dengan laporan Juhanda et al . (2013) dan Elfianis et al. (2019) yang menyatakan bahwa  proses  skarifikasi  secara  nyata  mampu  mempercepat proses imbibisi dan meningkatkan daya serta kecepatan berkecambahnya benih dengan testa padat/keras seperti saga manis ( Abrus precatorius L.) dan palem putri ( Veitchia
merillii) . Menurut Juhanda et al . (2013), luka pada benih akibat skarifikasi menyebabkan benih menjadi lebih permeabel terhadap air dan gas, sehingga proses imbibisi terjadi lebih cepat.  Hal  tersebut  sejalan  dengan  Elfianis et al. (2019) yang  menyatakan  bahwa  skarifikasi  mampu  meningkatkan pertumbuhan karena nutrisi lebih mudah diserap.
Pada  perlakuan  skarifikasi,  biji  jeruk  nipis  memiliki kecenderungan berkecambah lebih cepat pada media dengan penambahan GA 3 dibandingkan dengan media tanpa GA 3 . Walaupun tidak berpengaruh nyata, namun terdapat indikasi bahwa penambahan GA 3 ke dalam media tumbuh dapat mempercepat terjadinya perkecambahan jeruk nipis. Hasil ini sejalan dengan perkecambahan in vitro biji jeruk JC (Putra et al., 2015). Pada grafik waktu berkecambah biji dengan perlakuan skarifikasi  (Gambar  2),  terdapat  kecenderungan  waktu  ber- kecambah biji yang semakin singkat seiring dengan menurun- nya konsentrasi GA 3 pada media tanam. Waktu berkecambah kembali meningkat pada perlakuan tanpa giberelin 0 mg L -1 . Hal tersebut dapat menjadi indikasi awal bahwa konsentrasi optimum GA 3 untuk menginduksi perkecambahan jeruk nipis berada di antara dosis 0 mg L -1 dan 5 mg L -1 .

## Tinggi kecambah
Tinggi kecambah diukur dari pangkal batang hingga ujung titik tumbuh kecambah jeruk nipis. Perlakuan konsentrasi GA 3 dan perlakuan skarifikasi serta interaksi keduanya tidak berpengaruh nyata terhadap variabel pengamatan tinggi kecambah jeruk nipis (Tabel 1), meskipun ada kecenderungan semakin tinggi konsentrasi GA 3 dalam medium semakin tinggi pula kecambahnya (Tabel 3). Hasil penelitian yang di- lakukan oleh Elfianis et al. (2019) dan Trisnawan et al. (2017) juga menunjukkan hal yang serupa, perlakuan GA 3 yang diberikan tidak berpengaruh nyata terhadap tinggi kecambah palem putri (Veitchia  merillii) dan kecambah jeruk keprok ( Citrus reticulata) . Tinggi  kecambah  pada  perlakuan  skarifikasi  (Tabel  3) memiliki kecenderungan lebih rendah dibandingkan dengan tanaman yang berasal dari biji tanpa skarifikasi. Hasil serupa juga didapatkan pada penelitian yang dilakukan oleh Hastuti et al. (2015) dan Pranata et al. (2018) dimana kecambah sawo dan sirsak yang berasal dari biji dengan skarifikasi memiliki tinggi yang jauh lebih rendah dibandingkan dengan tanaman kontrol tanpa skarifikasi. Hal ini terjadi karena pelukaan yang terlalu dalam dapat melukai embrio sehingga benih tidak dapat berkecambah optimal.
Tinggi kecambah pada perlakuan GA 3 memiliki kecenderungan meningkat seiring dengan peningkatan
konsentrasi GA 3 pada media kultur seperti yang terlihat pada Gambar  3.  Menurut  Agustin dan Aprilianti (2011), perlakuan GA 3 secara nyata menyebabkan kecambah tanaman Verschaffeltia splendida lebih tinggi dibandingkan kecambah tanaman yang tidak diberikan perlakuan GA 3 .

## Jumlah buku
Buku atau node merupakan jaringan meristematik tempat terjadinya aktivitas pembelahan sel yang menghasilkan tunas lateral, daun, cabang, atau bunga. Menurut Putra et al. (2015), multiplikasi tanaman jeruk secara in vitro dapat dilakukan dengan memperbanyak tunas samping, sehingga jumlah buku sangat mempengaruhi tingkat multiplikasinya. Perlakuan konsentrasi GA 3 , skarifikasi, dan interaksinya tidak berpengaruh nyata terhadap karakter jumlah buku (Tabel 1).
Rata-rata jumlah buku kecambah jeruk nipis (Tabel 4) menunjukkan bahwa karakter buku bersifat acak dan tidak dipengaruhi oleh perlakuan GA 3 maupun perlakuan skarifikasi. Perbedaan jumlah buku untuk masing-masing kecambah jeruk nipis diduga terjadi karena adanya keragaman sumber bahan tanam yang digunakan. Keragaman ini meliputi per- bedaan tingkat kemasakan buah jeruk nipis, perbedaan genetik antar kecambah yang berasal dari embrio zigotik dan nuselar karena sulit memisahkan embrio pada biji yang sudah masak fisiologis. Embrio zigotik jeruk yang dihasilkan
Gambar 2. Rata-rata waktu berkecambah jeruk nipis pada masing-masing perlakuan konsentrasi GA3 dan skarifikasi yang berbeda 41.33 68.78 31.67 67.3 34.58 69.45 40 61.86 0 10 20 30 40 50 60 70 80 Dengan Skarifikasi Tanpa Skarifikasi Wak tu B er ke cam bah (HS T ) 0 mg/l 5 mg/l 10 mg/l 15 mg/l
Gambar 3. Perbandingan rerata tinggi kecambah jeruk nipis pada masing-masing konsentrasi GA 3 6.49 6.18 6.72 7.86 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Konsentrasi GA3 T in ggi Ke cam bah (c m ) 0 mg/l 5 mg/l 10 mg/l 15 mg/l
Tabel 3.  Rata-rata tinggi kecambah jeruk nipis pada masing-masing perlakuan konsentrasi GA 3 dan skarifikasi yang berbeda pada
5 minggu setelah biji berkecambah
Skarifikasi Konsentrasi GA 3 (mg L -1 ) Rerata 0 5 10 15 Tinggi kecambah (cm) Dengan Skarifikasi (cm) 6.38 6.08 6.13 7.97 6.64 a Tanpa Skarifikasi (cm) 6.61 6.28 7.32 7.75 6.99 a Rerata 6.49 6.18 6.72 7.86 6.81
Tabel 4. Rata-rata jumlah buku kecambah jeruk nipis pada masing-masing perlakuan konsentrasi GA 3 dan  skarifikasi  yang berbeda pada 5 minggu setelah biji berkecambah
Skarifikasi
Konsentrasi GA 3 ( mg L -1 ) Rerata 0 5 10 15 Jumlah buku pada kecambah Dengan Skarifikasi 7.27 7.92 5.75 7.40 7.08 a Tanpa Skarifikasi 7.00 8.14 5.89 9.17 7.55 a Rerata 7.14 8.03 5.82 8.28 7.32

## Jumlah kecambah per biji
Jumlah kecambah per biji diamati untuk melihat sifat poliembrionik pada jeruk nipis. Poliembrionik adalah keadaan dimana tumbuh lebih dari satu kecambah dari satu biji jeruk yang dikecambahkan. Perbandingan antara kecambah poliembrionik dengan kecambah monoembrionik dapat dilihat pada Gambar  4. Perlakuan konsentrasi giberelin, skarifikasi, dan interaksi keduanya tidak berpengaruh nyata terhadap karakter jumlah kecambah per biji (Tabel 1). Pada Tabel 2 terlihat rata-rata jumlah kecambah per biji lebih dari 2, secara keseluruhan biji jeruk nipis 84.15% adalah biji poliembrionik (Tabel  7).  Pada  biji  yang  diperlakukan  dengan  skarifikasi, jumlah biji poliembrionik yang berhasil kecambah lebih tinggi dari pada yang tidak dilukai. Hal ini terjadi karena testa/kulit biji jeruk cukup keras sehingga menghambat perkecambahan sementara  perlakuan  skarifikasi  menyebabkan  peningkatan permeabilitas biji yang memudahkan imbibisi air dan gas.
Biji poliembrionik akan menghasilkan dua macam semaian, yaitu semaian generatif yang berasal dari fertilisasi sel gamet jantan dan betina atau disebut dengan zigot; dan semaian vegetatif atau semaian nuselar. Kecambah nuselar berasal dari embrio yang terbentuk dari sebuah atau sekelompok sel nuselar dari jaringan testa. Jumlah kecambah nuselar dapat lebih dari satu tiap bijinya  (Woo et al .,  2019). Dalam biji yang berkarakter poliembrionik tidak semua kecambah yang tumbuh berhasil menjadi kecambah normal hingga akhir masa pengamatan. Perbandingan antara kecambah normal dan abnormal dapat dilihat pada Gambar 1. Perlakuan konsentrasi GA 3 ,  skarifikasi,  dan  interaksi keduanya tidak berpengaruh nyata terhadap karakter jumlah kecambah normal per biji (Tabel 1). Tiap biji jeruk nipis
F
dari persilangan terbuka antara polen dan sel telur yang telah mengalami segregasi sehingga menghasilkan kombinasi yang beragam secara genetik (Andrini et al., 2013) sehingga akan memberikan respon in vitro yang berbeda.

## Jumlah Daun
Pengamatan jumlah daun dilakukan selama 5 minggu, dimulai sejak biji berhasil berkecambah membentuk kecambah normal. Daun yang dihitung tiap minggunya hanya daun yang telah membuka dengan sempurna. Perlakuan konsentrasi GA 3 ,  skarifikasi,  dan  interaksi  keduanya  tidak  berpengaruh nyata terhadap karakter jumlah daun (Tabel 1). Hal ini sesuai dengan laporan Trisnawan et al. (2017) dan Dharma et al. (2015), yang menyatakan GA 3 dan  skarifikasi  tidak  ber- pengaruh nyata terhadap jumlah daun jeruk keprok ( Citrus reticulata) dan tanaman pala ( Myristica fragrans ). Kecambah jeruk nipis pada seluruh kombinasi perlakuan rata-rata memiliki 6.08 daun per kecambah (Tabel 5).

## Jumlah Akar
Akar adalah organ tanaman yang berfungsi untuk menyerap air dan garam-garam mineral (zat-zat hara) dari media tanam. Akar berasal dari pemanjangan radikula embrio jeruk nipis. Perlakuan konsentrasi GA 3 ,  skarifikasi,  dan  interaksi keduanya tidak berpengaruh nyata terhadap karakter jumlah akar (Tabel 1). Hal yang berbeda ditemukan pada laporan Dharma et al. (2015),  yang  menyatakan  bahwa  skarifikasi mampu  meningkatkan  jumlah  akar  secara  signifikan  pada tanaman pala ( Myristica fragrans ). Tiap kecambah jeruk nipis pada seluruh kombinasi perlakuan rata-rata memiliki 2.61 akar per kecambah (Tabel 6).
Tabel 5. Rata-rata jumlah daun kecambah jeruk nipis pada masing-masing perlakuan konsentrasi GA 3 dan  skarifikasi  yang berbeda pada 5 minggu setelah biji berkecambah
Skarifikasi
Konsentrasi GA 3 ( mg L -1 ) Rerata 0 5 10 15 Jumlah daun kecambah Dengan Skarifikasi 5.91 6.50 4.92 6.40 5.93 a Tanpa Skarifikasi 7.17 6.29 5.00 6.50 6.24 a Rerata 6.54 6.39 4.96 6.45 6.08
Tabel 6. Rata-rata jumlah akar kecambah jeruk nipis pada masing-masing perlakuan konsentrasi GA 3 dan  skarifikasi  yang berbeda pada 5 minggu setelah biji berkecambah
Skarifikasi
Konsentrasi GA 3 ( mg L -1 ) Rerata 0 5 10 15 Jumlah akar kecambah Dengan Skarifikasi 2.90 3.08 2.25 2.20 2.61 a Tanpa Skarifikasi 2.33 2.86 2.44 2.83 2.62 a Rerata 2.62 2.97 2.35 2.52 2.61
Tabel 7. Rata-rata jumlah kecambah per biji jeruk nipis pada masing-masing perlakuan konsentrasi GA 3 dan skarifikasi yang
berbeda pada 5 minggu setelah biji berkecambah
Skarifikasi Konsentrasi GA3 (mg L -1 ) Rerata 0 5 10 15 Jumlah akar kecambah Dengan Skarifikasi 2.90 3.08 2.25 2.20 2.61 a Tanpa Skarifikasi 2.33 2.86 2.44 2.83 2.62 a Rerata 2.62 2.97 2.35 2.52 2.61
yang ditanam pada seluruh kombinasi perlakuan rata-rata berhasil menumbuhkan 1.99 kecambah normal per biji (Tabel
8). Hasil percobaan Putra (2015) menyatakan bahwa Jeruk
JC ( Japansche  citroen) setelah diberi perlakuan giberelin
10 mg L -1 pada 8 minggu setelah dikulturkan memiliki rata- rata kecambah normal sebesar 70%.
Buah jeruk nipis yang digunakan dalam percobaan ini adalah  buah  jeruk  nipis  yang  telah  masak  secara  fisiologis.
A B
C D
E F
Gambar 4. Kecambah poliembrionik (A, B, C) dan kecambah monoembrionik (D, E, F)
Tabel 8. Rata-rata jumlah kecambah normal per biji jeruk nipis pada masing-masing perlakuan konsentrasi GA 3 dan skarifikasi yang berbeda pada 5 minggu setelah biji berkecambah
Skarifikasi
Konsentrasi GA 3 (mg L -1 ) Rerata 0 5 10 15 Jumlah kecambah normal Dengan Skarifikasi 2.00 2.33 1.75 1.90 2.00 a Tanpa Skarifikasi 1.83 1.86 1.44 2.83 1.99 a Rerata 1.92 2.10 1.60 2.37 1.99
Agustin, E.K., P. Aprilianti. 2011. Pengaruh pemakaian hormon tumbuh GA3 ( giberelin acid ) terhadap perkecambahan dan  pertumbuhan  biji  Verschaffeltia  splendida  H.A. Wendl. Berk. Penel. Hayati Edisi Khusus. 7A:157-160.
Andrini, A., T.K. Suharsi, M. Surahman. 2013. Studi poliembrioni dan penentuan tingkat kemasakan fisiologis benih Japansche citroen berdasarkan warna kulit buah. J. Hort. 23(3):195-202. Doi: https://doi. org/10.21082/jhort.v23n3.2013.p195-202
Dharma, I.P.E.S., S. Samudin, Adrianton. 2015. Perkecambahan benih pala ( Myristica fragrans Houtt.) dengan metode skarifikasi dan perendaman ZPT alami. e-J. Agrotekbis. 3(2): 158 - 167
Elfianis,  R.,  S.  Hartina,  I.  Permanasari,  J.  Handoko.  2019. Pengaruh  skarifikasi  dan  hormon  giberelin  (GA3) terhadap daya kecambah dan pertumbuhan benih palem putri ( Veitchia merillii ). J. Agroteknologi. 10(1): 41-48. Doi: https://doi.org/10.24014/ja.v10i1.7306
Hastuti, E.Y., S. Purwanti, E. Ambarwati. 2015. Pengaruh skarifikasi  dan  lama  perendaman  air  terhadap perkecambahan benih dan pertumbuhan benih sawo ( Manilkara zapota (L.) van Royen). Vegetalika. 4(2): 30-38.
Isnaeni,  E.,  N.A.  Habibah.  2014.  Efektivitas  skarifikasi dan suhu perendaman terhadap perkecambahan biji kepel ( Stelechocarpus burahol (Blume) Hook. F & Thompson) secara in vitro dan ex vitro . J. MIPA. 37(2): 105-114.
Juhanda, Y. Nurmiaty, Ermawati. 2013. Pengaruh skarifikasi pada pola imbibisi dan perkecambahan benih saga manis ( Abruss precatorius L.). J. Agrotek Tropika. 1(1): 45 - 49. Doi: https://doi.org/10.23960/jat.v1i1.1888
Kosmiatin, M, C. Martasari, Yunimar, A. Akhdiya, A. Husni. 2020. increase Huanglongbing tolerance of citrus derived from in vitro breeding. IOP Conf. Series: Earth and Environmental Science 457. Doi: https://doi. org/10.1088/1755-1315/457/1/012080
Pranata, A.A., A. Barus, Meiriani. 2018. Pengaruh posisi skarifikasi benih dan perendaman air kelapa terhadap perkecambahan biji dan pertumbuhan benih sirsak ( Annona muricata L.). J. Pertanian Tropik. 5(1):104- 112. Doi: https://doi.org/10.32734/jpt.v5i1.3145
Putra, I.M.A., A. Purwito, M. Kosmiatin. 2015. Propagasi mikro dan sambung mikro jeruk keprok ( Citrus reticulata )
Menurut penelitian yang dilakukan Andrini et al. (2013), tingkat kemasakan buah tidak berpengaruh nyata terhadap persentase munculnya biji poliembrionik pada jeruk JC, tetapi lebih dipengaruhi oleh ada atau tidaknya sifat poliembrionik pada biji tersebut. Menurut Andrini et al. (2013), benih poliem- brionik dengan lebih dari dua embrio umumnya menunjukkan tingkat kemasakan yang beragam dengan bentuk embrio yang tidak beraturan. Embrio-embrio pada biji poliembrionik tidak selalu berkembang sempurna hingga fase cotiledonary . Beberapa embrio terhenti perkembangannya hingga fase globular dan heart . Biji dengan banyak embrio menyebabkan semakin banyak embrio yang belum masak sempurna. Terdapat kompetisi antar embrio dalam benih yang mana embrio berukuran lebih besar dan masak muncul terlebih dahulu dibandingkan embrio yang berukuran lebih kecil dan belum masak.
Giberelin eksogen yang diberikan untuk menginduksi perkecambahan biji jeruk mengalami kesulitan untuk menembus testa biji. Testa biji jeruk dapat diberikan perlakuan skarifikasi dengan cara disayat untuk memudahkan masuknya larutan ke dalam biji (Putra et al. , 2015). Biji jeruk memiliki permukaan yang sangat licin, hal tersebut menyebabkan pelukaan tipis pada permukaan biji menjadi sangat sulit untuk dilakukan. Pelukaan yang terlalu dalam dapat melukai embrio dalam benih sehingga benih tidak dapat berkecambah dengan normal.

## KESIMPULAN
Dari penelitian ini disimpulkan bahwa tidak ada interaksi yang nyata antara penambahan GA 3 dengan perlakuan skarifikasi  pada  perkecambaan  biji  jeruk  nipis  masak fisiologis. Penambahan GA 3 dalam medium perkecambahan in vitro bji jeruk nipis tidak mempengaruhi untuk seluruh karakter perkecambahan yang diamati, tetapi penambahan GA 3 5 mg L -1 dapat mempercepat waktu perkecambahan dan jumlah kecambah normal tertinggi untuk jeruk nipis. Perlakuan  skarifikasi  secara  nyata  mampu  mempersingkat waktu berkecambah jeruk nipis meskipun tidak memberikan pengaruh yang nyata untuk karakter perkecambahan lainnya.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penelitian ini merupakan bagian dari penelitian Peningkatan Ketahanan Tanaman Jeruk melalui pendekatan Bioteknologi yang didanai oleh DIPA BB BIOGEN TA 2019.

## DAFTAR PUSTAKA
[BPS] Badan Pusat Statistik. 2020. Produksi tanaman buah- buahan 2019. https://www.bps.go.id/indicator/55/62/1/ produksi-tanaman-buah-buahan.html. [10 Oktober 2020].
garut hasil mutagenesis in vitro dengan batang bawah Japansche citroen. J. Hort. Indonesia 6(2): 99-108. Doi: https://doi.org/10.29244/jhi.6.2.99-108
Trisnawan, A.S., A. Sugiyatno, S. Fajriani, L. Setyobudi. 2017. Pengaruh  pemberian  ZPT  pada  pematahan  dormansi mata tunas tanaman jeruk ( Citrus sp.) hasil okulasi. J.
Produksi Tanaman. 5(5): 742-747.
Woo, J.K., Y.C. Park, J.W. Lee, S.H. Yun, M. Kim, S. Park, Y. Lee, K.J. Song, H.B. Kim. 2019. Evaluation of polyembryony for genetic resources and efcacy of simple sequence repeat markers for the identifcation of nucellar and zygotic embryo-derived individuals in citrus. Appl. Biol. Chem. 62:30. Doi: https://doi. org/10.1186/s13765-019-0437-1