## Pengaruh Molibdenum terhadap Populasi Konsorsium Bacillus dan Indole 3-Acetic Acid
Aliya Zahrah Adawiah 1* , Sandra Amalia Riyadi 1 , Reginawanti Hindersah 2 , Pujawati Suryatmana 2
1 Program Studi Kimia, Sekolah Tinggi Analis Bakti Asih, Jawa Barat 2 Program studi Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Padjadjaran, Jawa Barat *email: aliyazahrah@yahoo.com

## ABSTRAK
Molibdenum (Mo) merupakan salah satu unsur hara yang berkontribusi dalam proses penambatan N 2 dan terkandung pada media pertumbuhan bakteri penambat N 2 . Bacillus merupakan bakteri yang banyak digunakan sebagai pupuk hayati karena mampu menambat N 2 pada atmosfer dan menghasilkan fitohormon berupa Indole 3- Acetic Acid (IAA) yang bermanfaat bagi pertumbuhan tanaman. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh penambahan Mo pada konsorsium Bacillus dalam media pertumbuhan 2% molase + 10 gram pepton + 3 gram beef extract terhadap populasi sel vegetatif, populasi spora, dan produksi hormon IAA setelah diinkubasi selama 3, 6 dan 9 hari. Penelitian dilakukan di Laboratorium Biologi Tanah Fakultas Pertanian Universitas Padjadjaran. Metode yang digunakan untuk menghitung total populasi sel vegetatif yaitu metode plat pengenceran berseri dengan pemanasan 80ºC selama 30 menit untuk total populasi spora, sedangkan produksi hormon IAA diukur menggunakan spektrofotometer UV-Vis dengan pereaksi Salkowski pada panjang gelombang 530 nm. Data diuji dengan t-student pada p ≤ 0.05. Hasil penelitian dengan menggunakan uji t-Student menunjukan Mo meningkatkan populasi sel vegetatif pada hari ke 3 tetapi tidak mempengaruhi populasi sel vegetatif pada hari ke 6 dan ke 9. Populasi spora konsorsium Bacillus tidak ditentukan oleh Mo. Produksi hormon IAA pada kultur dengan Mo tidak berbeda dengan pada kultur tanpa Mo.
Kata Kunci: molibdenum, konsorsium Bacillus, hormon IAA.

## Effect of Molybdenum on Population of Bacillus Consortium and Production of Indole 3-Acetic Acid

## ABSTRACT
Molybdenum (Mo) is one of nutrients that contributes on process of fixing N 2 and it’s contained in growth medium of N 2 -fixing bacteria. Bacillus is bacterium that widely used as biofertilizer because it can fix N 2 in the atmosphere and produce phytohormones in form of Indole 3-Acetic Acid (IAA) which are benefical for plant growth. The purpose of this research was to determine the effect of Mo addition on Bacillus consortium in a growth medium of 2%molasses + 10grams peptone + 3grams beef extract against vegetative cell population, spore population and IAA hormone production after incubated for 3, 6 and 9 days. This research was conducted at Soil Biology Laboratory, Faculty of Agriculture, Padjadjaran University. The method to calculate total population of vegetative cells is the serial dilution plate method with 80ºC heating for 30 minutes for total spore population, while the production of IAA hormone was measured using UV-Vis spectrophotometer with Salkowski reagent at a wavelength of 530 nm. All data subjected to Student-t test with p ≤ 0.05. The results of the study by using the Student-t test showed that Mo increased the vegetative cell population on day 3 but did not affect the vegetative cell population on day 6 and 9. The spore population of the Bacillus consortium was not determined by Mo. The production of IAA hormone in cultures with Mo was not different from that in cultures without Mo..
Keywords : molybdenum, consortium Bacillus, IAA Hormone

## PENDAHULUAN
Bacillus banyak dimanfaatkan dalam
bidang industri dan pertanian karena memiliki kemampuan tinggi dalam memproduksi dan mengeluarkan enzim ekstraseluler. Sifat
Adawiah et al , 2023. Pengaruh Molibdenum terhadap Populasi …
Bacillus yang tahan terhadap senyawa antiseptik, memiliki kisaran suhu pertumbuhan yang luas, pembentuk spora, beberapa diantaranya mampu melakukan biodegredasi terhadap banyak senyawa xenobiotik dan faktor tumbuhnya tidak mahal menjadikan Bacillus sangat berpotensi untuk dikembangkan dalam industri bioteknologi [1] . Seiring meningkatnya perkembangan teknologi khususnya di bidang pertanian, inokulan bakteri dapat diproduksi lebih dari satu kelompok mikroba fungsional atau konsorsium [2] . Konsorsium bakteri pada pupuk hayati dapat memberikan berbagai manfaat secara bersamaan sehingga akan lebih efektif dalam memberi keuntungan bagi tanah dan tanaman [3] . Konsorsium bakteri meningkatkan parameter pertumbuhan apabila dibandingkan dengan perlakuan tunggal [4] . Bacillus merupakan salah satu bakteri tanah yang dapat dibudayakan di sebagian besar tanah dan terkenal karena memiliki kemampuan untuk memberikan efek menguntungkan bagi tanaman seperti pengendali serangan hama dan patogen, menghasilkan beberapa metabolit sekonder seperti antibiotik, siderofor, dan bakteriosin [5] . Oleh karena itu Bacillus menjadi kandidat yang cocok untuk diaplikasikan sebagai pupuk hayati atau agen biokontrol [6] . Peran Bacillus dalam pertanian adalah meningkatkan ketersediaan unsur hara nitrogen dengan memfiksasi N 2 di atmosfer [7] . Selama proses fiksasi nitrogen bakteri melibatkan unsur hara Molibdenum (Mo) sebagai bagian komponen enzim nitrogenase yang mengkatalis proses fiksasi, penambahan Mo secara tidak langsung memberikan pengaruh terhadap pertumbuhan Bacillus [8] . Selain itu Bacillus mampu menghasilkan enzim ekstraseluller dan dapat mensintesis fitohormon auksin berupa Indole 3-Acetic Acid (IAA) yang berfungsi sebagai peningkat pertumbuhan akar dan tunas tanaman, oleh karena itu Bacillus sering kali dipilih dan dimanfaatkan sebagai pupuk hayati [9] .
Konsorsium 10 spesies Bacillus pada pupuk hayati yang diujinya dapat mensekresikan IAA sebanyak 3,0065 μgL -1 [10] . Hasil penelitian pada beberapa koleksi Bacillus sp. menunjuk k an konsentrasi IAA sebesar 8 – 79 μgL -1 [11] . Selanjutnya penelitian penggunaan inokulum yang dikombinasikan dengan pupuk Mo pada tanaman kacang tanah menunjukkan peningkatan nodulasi dan aktivitas enzim nitrogenase yang besar [12] . Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh penambahan Mo pada konsorsium Bacillus terhadap total populasi sel vegetatif dan spora, kemudian produksi hormon IAA.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian dilaksanakan di
Laboratorium Biologi Tanah Departemen Ilmu Tanah dan Sumberdaya Lahan Fakultas Pertanian Universitas Padjadjaran dimulai pada Maret 2022 hingga Juni 2022.
Konsorsium Bacillus yang digunakan yaitu Bacillus safensis, Bacillus altitudinis, Bacillus subtilis dan Bacillus sp. Keempat spesies Bacillus diisolasi berdasarkan Kerjasama antara PT. Pupuk Indonesia dan Laboratorium Biologi Tanah Fakultas Pertanian Unpad. Media pertumbuhan yang digunakan berupa media cair dengan kandungan molase 2%, pepton 10 g, beef extract 3 g, dengan dan tanpa penambahan Na 2 MoO 4 .2H 2 O 0,0025 g per liter. Media disterilkan menggunakan otoklaf pada temperatur 121 o C selama 20 menit, dan dibiarkan semalam sebelum digunakan. Kultur konsorsium Bacillus diproduksi pada fermentor ukuran 2 L berskala laboratorium dengan volume media sebanyak 1,5 L. Sebanyak 1% biakan murni campuran keempat spesies Bacillus diinokulasikan pada media, dan diaduk dengan kecepatan 130 RPM selama 9 hari pada suhu ruang.

## Penetapan Populasi Sel Vegetatif dan Spora Bacillus
Sampel inokulan diambil pada hari ke-3, hari ke-6 dan hari ke-9 untuk penghitungann populasi metode plat pengenceran berseri pada pengenceran 10 -7 . Untuk penetapan populasi spora dengan metode yang sama, kultur diencerkan hingga 10 -3 kemudian kultur dipanaskan pada suhu 80  C selama 30 menit sebelum dituangkan ke dalam media plat agar [9] . Media yang digunakan untuk menghitung total populasi sel vegetatif dan spora adalah Trypticase Soy Agar (TSA) dengan waktu inkubasi 24 jam pada suhu 35  C. Data total populasi sel vegetatif dan spora yang sudah didapat diubah menjadi bentuk log dan perbedaan nilai parameter ditetapkan oleh uji t dengan taraf kepercayaan 95% menggunakan aplikasi SPSS.
Penetapan Kadar IAA
Sabanyak 1 mL sampel pada hari ke-3, hari ke-6 dan hari ke-9 disentrifuge dengan kecepatan 8000 rpm selama 10 menit, kemudian supernatan dipindahkan ke tabung reaksi melalui syringe filter dan ditambahkan 2 mL pereaksi Salkowski (50mL HClO 4 + 1mL FeCl 3 0,5M) lalu diinkubasi di ruang gelap selama 30 menit. Pengukuran absorbansi dilakukan menggunakan spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang 530 nm.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Populasi Sel Vegetatif
Pengaruh penambahan Mo terhadap total populasi sel vegetatif konsorsium Bacillus hanya terlihat pada waktu inkubasi hari ke-3, sedangkan pada waktu inkubasi hari ke-6 dan hari ke-9 tidak menunjukkan adanya pengaruh. Data rata-rata total populasi sel vegetatif dapat dilihat pada Tabel 1.
.
Tabel 1. Rata-rata populasi sel vegetatif konsorsium Bacillus dengan dan tanpa penambahan Mo Inkubasi hari ke-
Total populasi sel vegetatif (Log 10 CFU mL -1 ) Tanpa Mo Dengan Mo 3 9,71 10,05 6 11,18 11,19 9 12,04 11,90 Keterangan: A= konsorsium Bacillus tanpa Mo; B= konsorsium Bacillus dengan Mo Penambahan Mo
meningkatkan populasi sel vegetatif konsorsium Bacillus pada hari ke-3 dibandingkan dengan tanpa Mo dengan nilai sig. 0,015 pada uji t. Peningkatan populasi Bacillus di media dengan Mo dengan nyata mencapai satu log. Hal ini membuktikan bahwa Mo dapat membantu pertumbuhan konsorsium Bacillus sebagai bakteri penambat N 2 karena Mo terlibat dalam proses penambatan N 2 sebagai komponen enzim nitrogenase [8] .Hasil penelitian lain membuktikan adanya peningkatan jumlah bakteri penambat N
2 pada
tanah setelah diaplikasikan Mo [13] . Pengaruh Mo pada pertumbuhan Bacillus telah diperlihatkan oleh peneliti lainnua yang berhasil mengisolasi bakteri penambat N 2 Bacillus aerius 24K menggunakan media selektif yang mengandung Mo [14] . Berdasarkan uji-t Student, populasi sel vegetatif di dalam kultur dengan dan tanpa Mo tidak berbeda pada hari ke-6 maupun ke-9 dengan nilai signifikansi berturut-turut 0,903 dan
0,340. Artinya, Bacillus tidak memberikan respons positif terhadap penambahan Mo sehingga tidak terdeteksi
Adawiah et al , 2023. Pengaruh Molibdenum terhadap Populasi …
peningkatan populasi di dalam kedua jenis media. Ketiadaan efek Mo dapat disebabkan karena bakteri telah melewati fase stasioner dimana konsentrasi nutrisi berkurang [15] . Pada penelitian ini, tidak ada perubahan bentuk koloni sel vegetatif konsorsium Bacillus umur 3 - 9 hari dengan dan tanpa penambahan Mo (Gambar 1, 2 dan 3).
Tanpa Mo Dengan Mo
Gambar 1. Koloni sel vegetatif konsorsium Bacillus pada hari ke-3 di dalam kultur cair
Tanpa Mo
Dengan Mo
Gambar 2. Koloni sel vegetatif konsorsium Bacillus pada hari ke-6 di dalam kultur cair

## Tanpa Mo
Dengan Mo
Gambar 3. Koloni sel vegetatif konsorsium Bacillus pada hari ke-9 di dalam kultur cair

## Populasi Spora
Berdasarkan Uji t-Student, penambahan Mo tidak mempengaruhi populasi spora konsorsium Bacillus baik pada waktu inkubasi hari ke-3, hari ke-6 dan hari ke-9.
Walaupun waktu inkubasi yang optimal untuk pertumbuhan Bacillus sudah tercapai, yaitu lebih dari 3 hari [16] namun Mo tidak mampu membantu proses pembentukan spora Bacillus.
Pada hari ke-3, peningkatan populasi sel vegetatif tidak diikuti dengan peningkatan spora yang menandakan bahwa komposisi media sesuai syarat nutrisi Bacillus. Secara
umum, proses sporulasi Bacillus terjadi pada cekaman abiotik seperti suhu tinggi yang tidak dilakukan pada penelitian ini.
Tabel 2. Rata-rata total populasi spora konsorsium Bacillus dengan dan tanpa penambahan Mo
Inkubasi hari ke-
Total populasi spora pengenceran (Log 10 CFU mL -1 ) A
B
3
3,95 3,70 6 4,67 4,70 9 4,84 4,86
(A= konsorsium Bacillus tanpa Mo; B= konsorsium Bacillus dengan Mo)

## Kadar IAA di dalam Media
Konsentrasi IAA di dalam kultur cair konsorsium Bacillus terdapat pada Gambar 4. Uji t-student pada penelitian ini menunjukkan tidak ada perbedaan konsentrasi IAA pada konsorsium Bacillus dengan dan tanpa penambahan Mo. Namun penambahan Mo
berpotensi menurunkan konsentrasi IAA di kultur bakteri paa hari ke 6 dan ke 9. Pembentukan IAA memerlukan precursor tritofan, suatu asam amino. Di hari ke 6 dan 9 Bacillus mencapai fase stasioner dimana kadar N dapat menurun dan menghambat pembentukan triptofan dan selanjutnya IAA.
Gambar 4. Grafik perbandingan kadar IAA dengan dan tanpa penambahan Mo Dalam tahap akhir lintasan sintesis IAA pada bakteri yang berasosiasi dengan tanaman, indol asetonitril dikonversi menjadi indol asetamina yang selanjutnya menjadi IAA tanpa melibatkan Mo [17] . Lintasan proses sintesis IAA memastikan bahwa Mo tidak berperan dalam produksi fitohormon IAA yang berperan penting sebagai biostimulant
pada penggunaan Bacillus sebagai rizobakteri pemicu pertumbuhan tanaman.

## KESIMPULAN
Penambahan Mo pada konsorsium Bacillus meningkatkan populasi sel vegetatif dengan nyata pada hari ke-3 inkubasi pada
Adawiah et al , 2023. Pengaruh Molibdenum terhadap Populasi …
suhu kamar. Populasi sel vegetatif di dalam kultur cair konsorsium Bacillus tanpa dan dengan penambahan Mo adalah masing- masing 9,71 dan 10,05 Log 10 CFU mL -1 . Penambahan Mo tidak mepengaruhi populasi Bacillus pada hari ke 6 dan 9. Penambahan Mo juga tidak berpengaruh terhadap populasi spora pada hari ke 3, 6 maupun 9 hari. Penambahan Mo pada kultur cair konsorsium Bacillus tidak berpengaruh terhadap produksi fitohormon IAA.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada PT Pupuk Indonesia yang yang telah memberi dukungan finansial terhadap penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] I. Melati and M. T. D. Sunarno, “Isolasi, Seleksi, dan Identifikasi Bakteri Selulolitik dari Rumput Laut Turbinaria sp. dan Sargassum sp. Sebagai Kandidat Pendegradasi Serat Kasar Pakan Ikan,” Jurnal Riset Akuakultur , vol. 10, no. 1, pp. 51–60, 2015, [Online]. Available: www.ncbi.nlm.nih.gov.
[2] D. Herdiyantoro and A. Setiawan,
“Upaya Peningkatan Kualitas Tanah Melalui Sosialisasi Pupuk Hayati, Pupuk Organik, dan Olah Tanah
Konservasi di Desa Sukamanah dan Desa Nanggerang
Kecamatan Cigalontang Kabupaten Tasikmalaya,” 2015. [3] Z. Resti, E. Sulyanti, and Reflin, “Konsorsium Bakteri Endofit Sebagai Pengendali Hayati
Ralstonia solanacearum dan Pemacu Pertumbuhan Tanaman Cabai,” Pros Sem Nas Masy Biodiv Indon , vol. 4, no. 2, pp. 208–214,
2018.
[4] O. S. Olanrewaju and O. O. Babalola, “Bacterial consortium for improved maize ( Zea mays l .) production,”
Microorganisms , vol. 7, no. 11, Nov.
2019,
doi: 10.3390/microorganisms7110519.
[5] E. Mugiastuti, A. Manan, R. F. Rahayuniati, and L. Soesanto, “Aplikasi Bacillus sp. untuk mengendalikan penyakit layu fusarium pada tanaman tomat,” Jurnal Agro , vol. 6, no. 2, pp. 144–152, Dec. 2019, doi: 10.15575/5397.
[6] A. K. Saxena, M. Kumar, H. Chakdar, N. Anuroopa, and D. J. Bagyaraj, “Bacillus species in soil as a natural resource for plant health and nutrition,”
Journal of Applied Microbiology , vol. 128, no. 6. Blackwell Publishing Ltd, pp. 1583–1594, Jun. 01, 2020. doi: 10.1111/jam.14506.
[7] F. Puspita, M. Ali, and R. Pratama, “Isolasi dan Karakterisasi Morfologi dan Fisiologi Bakteri Bacillus sp. Endofitik dari Tanaman Kelapa Sawit (Elaeis guineensis Jacq.) Isolation and Characterization of Morphology and Physiology of Endophytic Bacillus sp. from Oil Palm Plants (Elaeis guineensis Jacq.),” 2017.
[8] B. Tripama, D. Pebrian, and D. Pangesti, “Aplikasi Pemupukan Nitrogen dan Molybdenum Terhadap Pertumbuhan dan Produksi Tanaman Buncis Blue Lake ( Phaseulus Vulgaris ) di Tanah Entisol [Nitrogen And Molybdenum Application On The Growth And Production Blue Lake Beans ( Phaseulus Vulgaris ) In Entisol Soil],” Agritrop Jurnal - Jurnal Pertanian , pp. 12–17, 2016.
[9] R. Hindersah, M. R. Setiawati, B. N. Fitriatin, P. Suryatmana, and P. Asmiran, “Chemical characteristics of organic-based liquid inoculant of Bacillus spp,” in IOP Conference Series: Earth and Environmental Science ,
Institute of Physics Publishing, Dec. 2019.
doi:
10.1088/1755- 1315/393/1/012005.
[10] M. Husna, S. Sugiyanta, and E. Pratiwi, “Kemampuan Konsorsium Bacillus pada Pupuk Hayati dalam Memfiksasi N2, Melarutkan Fosfat dan Mensintesis Fitohormon Indole 3-Acetic-Acid,” Jurnal Tanah dan Iklim , vol. 43, no. 2,
p. 117, Jun. 2020, doi: 10.21082/jti.v43n2.2019.117-125.
[11] Y. Saputri, L. Advinda, M. Chatri, and D. Handayani, “Potential Bacillus sp. in Producing Indole Acetic Acid (IAA) and Its Effect on Sprouts Root Length of Red Chili Seeds (Capsicum annuum L.) Potensi Bacillus sp. dalam
Menghasilkan Indole Acetic Acid (IAA) serta Pengaruhnya terhadap Panjang Akar Kecambah Benih Cabai Merah (Capsicum annuum L.),” 2020.
[12] C. A. C. Crusciol et al. , “Rhizobial inoculation and molybdenum fertilization in peanut crops grown in a no tillage system after 20 years of pasture,” Rev Bras Cienc Solo , vol. 43, 2019, doi: 10.1590/18069657rbcs20170399.
[13] J. Ma et al. , “Impacts of Mo application on biological nitrogen fixation and diazotrophic communities in a flooded rice-soil system,” Science of the Total Environment , vol. 649, pp. 686–694, Feb.
2019, doi:
10.1016/j.scitotenv.2018.08.318.
[14] P. Biofertilizer, A. dan, I. Nyoman, P. Aryantha, P. Pertanian, and N. Kupang, “Asrul & I Nyoman Pugeg Aryantha, 2021. Isolasi Dan Identifikasi Bakteri Penambat Nitrogen Untuk Pembuatan Biofertilizer,” Journal Viabel Pertanian , vol. 15, no. 1, pp. 16–23, 2021, [Online]. Available:
http://ejournal.unisbablitar.ac.id/index.p hp/viabel
[15] M. Astriani and H. Murtiyaningsih, “Pengukuran Indole- 3-Acetic Acid (IAA) pada Bacillus sp dengan Penambahan L-Tryptopan,”
BIOEDUSCIENCE , vol. 2, no. 2, p. 116, Dec. 2018, doi: 10.29405/j.bes/22116- 1212233.
[16] Y. Jiwintarum, M. W. Diarti, and B. L.
Zaeniati, “Variasi Suhu Inkubasi Mempengaruhi Jumlah Sel Vegetatif dan Spora Bacillus Sphaericus Incubation Temperature Variation Affecting the Number of Vegetative Cells and Spora Bacillus Sphaericus ,” 2021, doi: 10.33860/jik.v15i1.415.
[17] D. R. Duca and B. R. Glick, “Indole-3- acetic acid biosynthesis and its regulation in plant-associated bacteria”, doi: 10.1007/s00253-020-10869-
5/Published.