Jurnal Pharmascience, Vol. 08, No.01, Februari 2021, hal: 88-93 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460 – 9560 https://ppjp.ulm.ac.id/journal/index.php/pharmascience Research Article

## Pengembangan Potensi Ekstrak Belut ( Monopterus albus ) dalam Menangkal Radikal Bebas
Havizur Rahman * , Putri Maya Sari, Fitrianingsih, Ai Kurniati, Fitri Kurniawati
Jurusan Farmasi, Universitas Jambi, Muaro Jambi, Indonesia Email: havizurrahman27@unja.ac.id

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktifitas  antioksidan  dari  ekstrak  belut ( Monopterus  albus )  yang  hidup  di  perairan  provinsi  jambi.  Radikal  bebas  cenderung menimbulkan  reaksi  berantai  yang  apabila  terjadi  di  dalam  tubuh  akan  dapat  menimbulkan kerusakan  sel  yang  berlanjut  dan  terus  menerus  terutama  pada  penyakit  kronis  seperti diabetes,  hipertensi  dan  hiperkolesterol.  Pencegahan  dapat  dilakukan  dengan  memberikan seyawa antioksidan, salah satunya asam amino. Di dalam al-Quran disebutkan bahwa bangkai yang  halal  untuk  dimakan  adalah  ikan  dan  belalang.  Belut  merupakan  salah  satu  jenis  ikan yang  memiliki  kandungan  albumin  yang  tinggi.  Sampel  daging belut  yang  telah  difillet  dan dipisahkan  dari  kepalanya,  dipotong  kecil-kecil  dengan  ukuran  1,5  cm 2 dan  dibalut  dengan kain tipis dalam sebuah mangkuk, lalu dikukus, dipress, dan disentrifus.  diambil fase air dan minyak dan dibuang pengotornya dengan cara disaring, lalu dikeringkan menggunakan freeze drying sehingga diperoleh ekstrak belut dalam bentuk serbuk.  Metode  yang digunakan pada penelitian  ini  adalah Radical  Scavenging  method menggunakan  senyawa  kimia  DPPH  (2,2- difenil-1-pikrilhidrazil).  Dari  hasil  penelitian  ditemukan  bahwa  nilai  IC50  ekstrak  belut sebesar  29,0816  ppm.  Ekstrak  belut  memiliki  potensi  menangkal  radikal  bebas  dengan aktifitas kuat.

## Kata Kunci: Ektstrak Belut, Monopterus albus, Penangkal Radikal Bebas

## ABSTRACT
This  study  aims  to  determine  the  antioxidant  activity  of  eel  (Monopterus  albus) extracts that live in the waters of the province of Jambi. Free radicals tend to cause chain reactions  that  occur  in  the  body  and  will  cause  ongoing  and  continuous  cell  damage, especially  in  chronic  diseases  such  as  diabetes,  hypertension  and  hypercholesterolemia. Prevention  can  be  done  by  providing  antioxidants,  one  of  which  is  amino  acids.  In  the Koran, it is stated that the carcasses that are lawful to eat are fish and grasshoppers. Eel is a type of fish that has a high albumin content. The eel meat sample that has been filled and given from its head, is cut into small pieces with a size of 1.5 cm2 and wrapped in a thin cloth  in  a  container,  then  steamed,  pressed,  and  centrifuged.  the  air  and  oil  phases  are taken and the impurities are removed by filtering, then they are dried using freeze drying in  order  to  obtain  the  eel  extract  in  powder  form.  The  method  used  in  this  study  is  the
Radical  Scavenging  Method  using  the  chemical  compound  DPPH  (2,2-  diphenyl-1- pikrilhidrazil).  From  the  research  results  it  was  found  that  the  IC50  value  of  eel  extract was  29.0816  ppm.  Eel  extract  has  the  potential  to  ward  off  free  radicals  with  strong activity.
Keywords: Extract, Monopterus albus, Free Radicals

## I. PENDAHULUAN
Didalam tubuh manuasia metabolisme  aerobik selalu  diikuti  dengan pembentukan radikal bebas. Radikal bebas merupakan  elektron  tidak  berpasangan dalam  orbital  terluar  yang  dapat  sangat reaktif.  Radikal  menyendiri  atau  elektron bebas  cenderung  menimbulkan  reaksi berantai  yang  apabila  terjadi  di  dalam tubuh  akan  dapat  menimbulkan  kerusakan sel  yang  berlanjut  dan  terus  menerus terutama  pada  penyakit-penyakit  kronis seperti diabetes, hipertensi dan hiperkolesterol. Pembentukan radikal bebas melibatkan enzim sitokrom P-450 di hati.  Pada  proses  metabolisme  di  hati terjadi  oksidasi  zat-zat  makanan  yang dirubah  menjadi  senyawa  pengikat  energi (adenosine  triphospat)  dengan  bantuan oksigen,  dan  diiringi  dengan  terbentuknya radikal bebas yaitu anion superoksida, dan hidroksil  radikal  (Dawn  et  al.,  2000). Untuk  menjaga  serangan  radikal  maka tubuh manusia memiliki sistem pertahanan melalui  metabolisme  sel  normal  dan peradangan.  Mekanisme  pertahanan  tubuh tersebut berupa antioksidan ((Isnidar et al., 2013).
Antioksidan  merupakan  senyawa donor elektron dan secara biologis mampu mengatasi  dampak  negatif  oksidan  dalam tubuh.  Keseimbangan  antara  oksidan  dan antioksidan  penting  karena  berkaitan dengan  kerja  fungsi  sistem  pertahanan tubuh,  terutama  untuk  menjaga  integritas fungsi  membran  lipid,  protein  sel,  dan asam  nukleat,  serta  mengontrol  tranduksi signal  dan  ekspresi  gen  dalam  sel  imun (Winarsi, 2007).
Asam  amino  terbukti  memiliki aktivitas  antioksidan  (Halim  and  sarbon, 2017).  Beberapa  asam  amino  dengan ikatan  peptida  dapat  membentuk  senyawa yang  lebih  besar,  diantaranya  albumin. Kandungan albumin yang tinggi pada belut, memungkinkan juga tingginya kadar asam amino pada belut, sehingga belut berpeluang  memiliki  potensi  sebagai antioksidan. Albumin  termasuk  kedalam jenis  protein  terbanyak  yang  ada  dalam plasma,  dan  bertugas  dalam  pembentukan sel atau jaringan baru. Telah ada penelitian tentang  pemanfaatan  albumin  didalam pengobatan,  diantaranya  luka  bakar  dan tukak  lambung  (Rahman  H,  et.  al,  2020; Manan  dan  Haruan,  2006).  Salah  satu
hewan  yang  mengandung  albumin  yang tinggi  adalah  belut.  Maka  perlu  penelitian terhadap  ekstrak  belut  dalam  pencegahan pembentukan radikal bebas.

## II. METODE

## A. Pembuatan Ekstrak
Belut  sebanyak  10  kg  (berukuran 30-50 cm), dicuci dan dibersihkan. Daging belut  dipisahkan  dari  bagian  tubuh  yang lain (kepala, tulang, dan kulit) dengan cara di fillet dan  bagian  daging  dipisahkan .
Sampel  daging  belut  yang  telah  diolah, dipotong  kecil-kecil  dengan  ukuran  1,5 cm 2 dan  dibalut  dengan  kain  tipis dimasukan  ke  dalam  dandang  atau kukusan berisi satu liter air dan didalamnya  sudah  disediakan  mangkuk tahan panas. Kemudian dikukus selama 30 menit dan diatur suhunya 40ºC.
Selanjutnya  hasil  kukusan  dimasukan  ke dalam  alat  press  hidrolik,  dan  dilakukan pengepresan.  Filtrat  belut  disentrifugasi 600  rpm  selama  60  menit,  saring, kemudian  ambil  fase  air  dan  minyak  dan dibuang  pengotornya,  lalu  dikeringkan menggunakan freeze  drying sehingga diperoleh  ekstrak  belut  dalam  bentuk serbuk

## B.  Penentuan  aktivitas  antioksidan
larutan  sampel  dengan  Metode DPPH
Pada  uji  aktivitas  antioksidan dilakukan  beberapa  tahapan,  tahapanya
meliputi pembuatan  pereaksi DPPH, penentuan  gelombang  serapan  maksimum DPPH,  penentuan  %lC  (persen  inhibisi) tiap  konsentrasi  larutan  sampel,  dan penentuan  lC50  sample  (ekstrak  belut  dan asam askorbat).
Tahapan  tersebut  menggunakan metode yang merujuk pada Blois (1958).

## 1. Pembuatan pereaksi DPPH (0.05 mM)
Ditimbang  sebanyak  1,97  mg DPPH  (BM  394,32)  kemudian  dilarutkan dalam 100 ml methanol p.a .
2. Penentuan panjang gelombang serapan maksimum DPPH
Dari  larutan  DPPH  0,05  mM  yang telah  dibuat  sebelumnya  dipipet  3,8  ml larutan  DPPH  dan  tambahkan  methanol p.a  sebanyak  0,2  ml.  Biarkan  selama  30 menit ditempat gelap. Ukur absorbansinya menggunakan  spektrofotometer  UV-VIS pada  panjang  gelombang  400-800  nm (Blois, 1958).

## C.  Penentuan  Konsentrasi  Indihibisi
(%IC) larutan sampel
Ditimbang  10  mg  sampel  (ektrak belut atau asam askorbat), dilarutkan 10 ml metanol p.a dalam labu ukur 10 ml sebagai larutan induk, sehingga didapat konsentrasi  1  mg/ml.  Kemudian  dipipet sebanyak  0,2;  0,3;  0,4;  0,5;  dan  0,7  mL, kemudian  dilakukan  pengenceran  dalam labu  ukur  ad  10  ml  dengan  menambah methanol p.a sehingga di peroleh
konsentrasi  20,  30,  40,  50  dan  70  ppm. Masing-masing konsentrasi di pipet sebanyak  0,2  ml  kemudian  dimasukan dalam  vial  gelap,  ditambahkan  3,8  ml larutan  standar  DPPH,  kocok  homogen. Biarkan  selama  30  menit  ditempat  gelap. Larutan tiap konsentrasi dimasukan kedalam  kuvet,  kemudian  diukur  serapan larutan  dengan  spektrofotometer  UV-VIS pada  panjang  gelombang  maksimum DPPH. Hitung % inhibisi masing- masingya.  Buat  grafik  antara  konsentrasi larutan  sampel  dan  %  inhibisi,  sehingga diperoleh  persamaan  regresi  liniernya. Selanjutnya  dihitung  IC50  ekstrak  belut dan  asam  askorbat  masing-masingnya (Blois, 1958).
% IC = (1 – (A hitung bahan uji/ A hitung DPPH)) ×100%

## D. Analisis Data
Data  IC50  ekstrak  belut  dan  asam askorbat dianalisis secara deskriptif. Untuk perbandingan  nilai  IC  (persen  konsentrasi inhibisi)  tiap  konsentrasi  antara  ektrstrak belut  dan  asam  askorbat  dilakukan pengolahan  data  menggunakan  uji  t- independent.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Penentuan besar aktifitas antioksidan  menggunakan  metode  DPPH (2,2-  difenil-1-pikrilhidrazil)  dikarenakan
metode tersebut  sederhana, mudah, cepat, peka  dan  hanya  membutuhkan  sedikit sample  dalam  pengujian  (Hanani,  2005). Pelarut  yang  digunakan  dalam  penelitian ini adalah metanol. Metanol dapat melarutkan  kristal  DPPH  dan  dapat menarik  senyawa  aktif  yang  bersifat sebagian besar polar dan sedikit non polar disebabkan  metanol  memiliki  gugus  metil (CH3-OH).  Senyawa  aktif  ini  nantinya bereaksi dengan DPPH untuk menghambat radikal  bebas  DPPH.  Aktifitas  senyawa aktif  yang  bekerja  menghambat  atau mereduksi  radikal  bebas  dari  DPPH  akan terlihat  dari  perubahan  warna  dari  ungu menjadi  kuning  pucat.    Perubahan  warna menjadi  kuning  pucat  menunjukan  bahwa elektron  radikal  DPPH  telah  berpasangan dengan atom hidrogen senyawa aktif yang mendonorkan  satu  electron  kepada  DPPH sehingga terbentuk senyawa DPPH tereduksi yang memiliki atom berpasangan (Yuhernita dan Juniarti, 2011).
Aktifitas antioksidan tiap konsentrasi ekstrak belut dinyatakan dalam persen konsentrasi inhibisi (%IC) zat aktif dalam  sample  terhadap  radikal  bebas (DPPH).  Pengukuran  %IC  dilakukan  pada konsentrasi  20,  30  40,  50,  dan  70  ppm. Kekuatan  aktifitas  antioksidan  dinyatakan dalam  %IC50  (Inhibitory  Concentration 50%)  yang  menunjukkan  kemampuan zat`aktif dalam sample untuk menghambat atau meredam radikal bebas DPPH sebesar
50%.  Semakin  kecil  nilai  IC50  maka semakin kuat aktifitas antioksidan. Sebelum diperoleh IC50, dilakukan pengukuran absorbansi menggunakan metode  spektrofotometri  pada  panjang gelombang  maksimum  DPPH  yaitu  517 nm  pada  konsentrasi  DPPH  0,05  mM. Grafik  konsentrasi  berbanding  nilai  IC
menunjukkan  suatu  persamaan  regresi linear  y= ax + b. Pada persamaan tersebut ditentukan  nilai  y=50  sehingga  akan diperoleh  nilai  x  yang  menunjukan konsentrasi  zat  aktif  dalam  sample  yang dapat  menangkal  terbetuknya  radikal bebas DPPH sebesar 50% (IC50) (Gambar 1).
Tabel I. Data absorbansi dan nilai IC50 ekstrak belut dan Vitamin C
Sample n Rerata %IC ± SD Konsentrasi (ppm) 20 30 40 50 70 Ekstrak Belut 3 a 48.376± 0.032008 a 50.15477015± 3.260414216 a 51.42527143± 0.152039572 a 54.00785401± 0.224058317 a 55.45853546± 0.076335004 Vit. C 3 a 53.70755371± 13.16920141 b 60.36036036± 1.231904978 b 63.82536383± 8.931916 b 68.81496881± 1.812431993 b 73.38877339± 5.041312122
Gambar  1. Perbandingan  nilai  %IC
Ekstrak  Belut  dan  Asam
Askorbat (vitamin C)
Berdasarkan persamaan regresi linear  dari  ektrak  belut  y  =  0,1459x  + 45,757  diperoleh  nilai  IC50  sebesar 29,0816.  Nilai  ini  menunjukan  bahwa aktifitas antioksidan ektrak belut tergolong kuat  meskipun  lebih  rendah  dari  pada asam  askorbat  sebagai  pembanding  yang memiliki  IC50  sebesar  5,71687,  diperoleh dari  persamaan  regresi  y  =  0.3864x  +
47,791.  Penggolongan  kekuatan  aktifitas antioksidan  dipaparkan  oleh  Phongpaichit et  al.,  (2007)  yaitu  sample  dinyatakan memiliki  aktifitas  antioksidan  sangat  kuat jika  memiliki  nilai  IC50<  10  ppm,  kuat jika memiliki nilai IC50 antara 10-50 ppm, sedang  apabila  nilai  IC50  antara  50-100 ppm, lemah apabila nilai IC50 antara 100- 250  ppm  dan  tidak  aktif  apabila  IC50 diatas 250 μg/mL.
Jika dilihat dari perbandingan %IC tiap  konsentrasi  ekstrak  belut  masih memilki nilai IC lebih rendah dibandingkan  asam  askorbat.  Hasil  ini sebanding  ketika  dilakukan  pengolahan data  dengan  uji  t-independent.  Asam (Tabel  II).  askorbat  dan  ekstrak  belut memilki  nilai  IC  yang  diasumsikan homogen,  ini  dapat  dilihat  dari  hasil
statistik  uji  t-independen  diperoleh  nilai sig.  levene  test  for  equality  of  variance 0,122>0,05,  sehingga  untuk  penafsirannya berpedoman pada nilai sig. equal variance
assumed menunjukkan  nilai  sig  0,01<0,05 yang  dapat  disimpulkan  bahwa  nilai  IC asam  askorbat  berbeda  nyata  dengan ekstrak  belut  pada  tiap  konsentrasi.
Tabel II. Hasil uji statistik perbandingan %IC sampel secara independent samples test
Levene's Test for Equality of Variances t-test for Equality of Means F Sig. t df Sig. (2-tailed) %IC Equal variances assumed 2.985 .122 -3.344 8 .010 Equal variances not assumed -3.344 5.115 .020

## IV. KESIMPULAN
Ektrak  belut  memiliki  kemampuan yang kuat dalam menangkal radikal bebas, dengan nilai IC50 sebesar 29,0816 ppm.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  diucapkan  kepada LPPM  Universitas  Jambi  yang  telah memberikan  dukungan  dana  serta  teman- teman  dosen  dan  mahasiswa  yang  telah membantu  sehingga  artikel  ini  dapat selesai.

## DAFTAR PUSTAKA
Blois, M. S. 1958. Antioxidant Determination  by  the  use  of  a stable  free  radical. Nature. 181: 1199-1200.
Dawn BM, Allan DM, Colleen MS. 2000.
Biokimia Kedokteran Dasar:
Sebuah  Pendekatan  Klinis.  EGC,
Jakarta. Hlm. 321-9.
Halim,  N.  R.  A.  and  Sarbon,  N.  M.  2017 .
A  response  surface  approach  on hydrolysis condition of eel ( Monopterus Sp.) protein hydrolysate with antioxidant activity. International
Food
Research  Journal .  24(3):  1081-
1093 Isnidar,  Erna  P.S.,  Subagus  W.  2011. Isolasi  dan  Identifikasi  Senyawa Antioksidan daun Kesemek (Diospyroskaki  Thunb)  Dengan Metode DPPH (2,2-Difenil- Pikrihidrazil. Majalah Obat
Manan  A,  dan  Haruan  A.  2006. “Fresh Water”  Wound  Healer .  University of Putra Malaysia, Malaysia.
Phongpaichit, et al. 2007.Biological Activities of Extracts From Endophytic  Fungi  Isolated  From Garcinia Plants. Chem Pharm Bull: Immunology & Medical Mycrobiology. Rahman,  H.,  Sari  ,  PM.,  Maharani,  I, Septiani, BA. 2020. Potensi Ekstrak  Belut  (Monopterus  albus) pada  Pengobatan  Tukak  Lambung.
Pharmacy. 17 (1).
Winarsi.  2007. Antioksidan  Alami  dan Radikal.  Potensi  dan  Aplikasinya dalam kesehatan. Kansas: Jakarta Yuhernita  dan  Juniarti.  2011.  Analisis Senyawa  Metabolit  Sekunder  dari Ekstrak Metanol Daun Surian yang Berpotensi  Sebagai  Antioksidan. Makara Sains 15(1) : 48 – 52.