## 1.Pendahuluan
Diare  adalah  gangguan  saluran pencernaan berupa terjadinya likuiditas dan frekuensi  buang  air  besar  yang  abnormal (lebih dari tiga kali dalam sehari) (Sukandar, dkk.,  2009).  Diare  merupakan  salah  satu penyakit  yang  paling  banyak  terjadi, khususnya  di  negara  berkembang  dengan insiden dan mortalitas yang tinggi. Menurut World  Health  Organization (WHO)  dan United  Nations  International  Children's Emergency  Fund (UNICEF),  sekitar  dua miliar  kasus  penyakit  diare  setiap  tahun. Sebanyak satu juta sembilan ratus anak-anak berusia kurang dari 5 tahun setiap tahunnya meninggal karena diare, terutama di negara- negara  berkembang.  Kematian  anak  akibat diare  ini  78%  terjadi  di  daerah  Afrika  dan Asia Tenggara. Diare dapat disebabkan oleh bakteri  ( Vibrio  cholerae , Escherichia  coli , Salmonella  spp. , Campylobacter  jejuni , Shigella  sp. ),  virus  (Rotavirus),  dan  parasit
(Farthing, et al ., 2012).
Penularan penyakit diare dapat terjadi melalui kontak langsung dan biasanya terjadi di  tempat  yang  memiliki  sanitasi  dan lingkungan  yang  kurang  bersih.  Infeksi Escherichia  coli sering  kali  berupa  diare yang  disertai  darah,  kejang  perut,  demam, dan terkadang dapat menyebabkan gangguan pada  ginjal.  Sebagian  besar  penyakit  yang disebabkan oleh Escherichia coli ditularkan melalui  makanan  yang  tidak  masak  dan daging  yang  terkontaminasi,  sedangkan Staphylococcus merupakan  penyebab penting dalam keracunan makanan sehingga dapat menyebabkan diare. Diare sering kali diobati  dengan  pemberian  antibiotika. Penggunaan  antibiotika  yang  tidak  rasional bisa  membuat  mikroba  menjadi    resisten. Untuk  mengatasi  hal  ini,  perlu  dilakukan pencarian  senyawa  antibakteri  baru  yang memungkinkan  untuk  penemuan  obat  baru yang  dapat  menggantikan  senyawa
JURNAL FARMASI SAINS DAN KOMUNITAS, Mei 2014, hlm. 23-31
ISSN : 1693-5683

## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOLIK
DAGING BUAH BUNI ( Antidesma bunius (L.) Spreng) TERHADAP Staphylococcus aureus ATCC 25922 dan Escherichia coli ATCC 25923

## BRIGITTA LYNDA RAKASIWI DAN C.J.SOEGIHARDJO
Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta Email korespondensi: constantinus_soegihardjo@yahoo.com
Abstract: The  aim  of  the  study  was  to  determine  the  antibacterial  activity  of  buni  skin-pulp ethanolic  extract  against  Staphylococcus  aureus  ATCC  25923  and  Escherichia  coli  ATCC 25922.  Profile  of  antibiotic  resistance  which  is  growing  among  Staphylococcus  aureus  and Escherichia  coli  need  some  exploration  of  antibacterial  activity  buni  skin-pulp  because  the contain of anthocyanin which has antibacterial activity. The research was purely experimental research with randomized complete direct sampling design. The extraction method was done by macerated in ethanol solvent. Tube tests and Thin Layer Chromatography (TLC) were used to determine the content of the secondary metabolites substance in buni skin-pulp ethanolic extract. Antibacterial  activity  test  was  done  by  diffusion  method,  then  followed  with  liquid  dilution method to determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC). The antibacterial activity was evaluated based on the result of inhibition zone  diameter  then  analyzed  with  Kruskal-Wallis  test  followed  with  Mann-Whitney  test. The results showed that the chemical substances of the buni skin-pulp ethanolic extract predicted with  TLC  assay  were  phenolic,  flavonoids,  and  anthocyanin  compounds.  The  antibacterial activity showed that the ethanolic extract only had antibacterial activity against Staphylococcus aureus ATCC 25923 with MIC and MBC values 30% and 33%, respectively.
Keywords: antibacterial potency, buni skin-pulp, Staphylococcus aureus, Escherichia coli
antibakteri yang sudah ada. Salah satu cara untuk menemukan senyawa antibakteri yang baru,  yaitu  dengan  melakukan  eksplorasi bahan  alam  hingga  memodifikasi  struktur antibiotik yang sudah ada.
Antosianin  merupakan  pigmen  yang bertanggung jawab memberikan warna pada buah,  sayur,  bunga,  dan  jaringan  tanaman lainnya.    Beberapa  penelitian  terakhir, antosianin  ternyata  memiliki  aktivitas biologi  yang  menguntungkan.  Salah  satu aktivitas  biologi  dari  antosianin  adalah antimikroba  (Mazza,  2007).  Jenis  bahan pangan  yang  mengandung  antosianin diantaranya adalah berbagai jenis buah berry . Salah satu jenis berry dan merupakan buah lokal  adalah  buni  ( Antidesma  bunius ). Berdasarkan  penelitian  Butkhup  dan Samappito  (2011)  menunjukkan  bahwa ekstrak  metanol  biji  dan  daging  buah  buni mengandung flavonoid (katekin, epikatekin, rutin,  mirisetin,  trans-resveratrol,  lutein, kuersetin,  naringenin,  dan  kaempferol), antosianin  (prosianidin  B1  dan  prosianidin B2),  dan  asam  fenolat  (asam  galat,  asam kafeat, asam elagat, dan asam ferulat). Oleh karena  itu,  sangat  dimungkinkan  dilakukan eksplorasi  senyawa  antibakteri  baru  dari buah  buni.  Eksplorasi  tanaman  ini diharapkan  dapat  dijadikan  bentuk  sediaan antimikrobia,  sehingga  perlu  diketahui Konsentrasi  Hambat  Minimal  (KHM)  dan Konsentrasi  Bunuh  Minimal  (KBM). Konsentrasi yang diperoleh dapat digunakan sebagai  konsentrasi  dasar  dalam  pengujian secara in vivo .
Sehubungan  dengan  potensi  yang dimiliki daging buah buni dan dalam usaha mendapatkan  bukti  secara  ilmiah  tentang khasiat  daging  buah  buni  terutama  sebagai obat  diare  yang  disebabkan  oleh  bakteri, maka  penelitian  ini  dilakukan  untuk mengetahui  senyawa-senyawa  yang terkandung di dalam ekstrak etanolik daging buah  buni  dan  membuktikan  aktivitas antibakteri ekstrak etanol daging buah buni terhadap Staphylococcus  aureus ATCC 25923 dan Escherichia coli ATCC 25922. Permasalahan  yang  bisa  diambil dari penelitian ini yaitu: Golongan senyawa
apa saja yang terdapat dalam ekstrak etanolik daging buah buni?, Apakah ekstrak etanolik daging  buah  buni  mempunyai  potensi antibakteri  terhadap Staphylococcus  aureus ATCC  25923  dan Escherichia  coli ATCC 25922 ?, Berapa KHM dan KBM dari ekstrak etanol  daging  buah  buni  terhadap Staphylococcus  aureus ATCC  25923  dan Escherichia coli ATCC 25922 ?

## 2. Bahan dan Metode Penelitian
Bahan Bakteri yang digunakan dalam penelitian  ini,  yaitu Staphylococcus  aureus ATCC  25923  yang  diperoleh  dari  Balai Laboratorium  Kesehatan  Yogyakarta, Escherichia  coli ATCC  25922  yang diperoleh dari Balai Besar Teknik Kesehatan Lingkungan  dan  Pengendalian  Penyakit Yogyakarta.  Sampel  berupa  daging  buah buni didapat di dari tanaman yang tumbuh di Taman Universitas Sanata Dharma, Kampus III,  Paingan,  Maguwoharjo,  Yogyakarta. Pelarut  yang  digunakan  yaitu:  Etanol  96% farmasetis  sebagai  pelarut  ekstrak  yang diperoleh  dari  PT  Brataco  Yogyakarta. Aquadest diperoleh  dari  Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia Universitas Sanata Dharma  Yogyakarta  dan aquabidestilata s t e r i l   y a n g   d i p e r o l e h   d a r i L u c a s Pharmaceutichal  Industry. Bahan  pelarut ekstrak  dan  kontrol  negatif  adalah  sebagai kontrol negatif adalah dimetilsulfoksida p.a ( Merck )  yang  diperoleh  dari  Laboratorium Farmakologi  Universitas  Gadjah  Mada. Bahan  uji  tabung  adalah  Bouchardat  LP, Dragendroff LP, Mayer LP, besi (III) klorida LP, serbuk zink P dan serbuk magnesium P, natrium  hidroksida  LP,  Liebermann- Burchard  LP,  asam  klorida  p.a,  asam  sulfat p.a,  etanol  p.a  ( Merck )  yang  diperoleh  dari Laboratorium  Farmakognosi-Fitokimia Universitas  Sanata  Dharma  Yogyakarta. Bahan uji antibakteri adalah timol p.a sebagai kontrol  positif  yang  diperoleh  dari Laboratorium  Biologi  Farmasi  Universitas Gadjah  Mada.  Fase  diam  yang  digunakan dalam  uji  KLT  adalah  silika  gel  GF dan 254 selulosa  ( Merck )  yang  diperoleh  dari Laboratorium  Farmakognosi-Fitokimia Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Fase
RAKASIWI, SOEGIHARDJO 24
gerak yang digunakan dalam uji KLT adalah etil asetat p.a, asam format p.a, asam asetat glasial  p.a,  toluena  p.a,  dan  n-butanol  p.a ( Merck )   yang diperoleh dari diperoleh dari Laboratorium  Farmakognosi-Fitokimia Universitas  Sanata  Dharma  Yogyakarta. Bahan  media  pertumbuhan  bakteri  adalah Muller Hinton Broth CM0405, Nutrien Broth No.  2  CM0067  ( Oxoid ),  dan Agar  ( Merck ) yang  diperoleh  dari  Balai  Besar  Teknik Kesehatan  Lingkungan  dan  Pengendalian Penyakit Yogyakarta.
Alat yang digunakan dalam penelitian berupa Alat-alat gelas, autoklaf (TOMY SX- 500),  inkubator  (Binder), oven (Memmert), rotary  evaporator (Buchi),  jarum  ose, timbangan analitik dengan kepekaan 0,1 mg (Mettler  Toledo),  timbangan  elektrik (Denver),  jangka  sorong  dengan  ketelitian 0,02  mm  (Oscano), ball pipet,  mikropipet ( Socorex Acura  825)  dan  mikropipet  P200 (Gilson  0503356), bunsen , show  case (Modena),  cawan  petri  ( Pyrex ),  Class  II Biological  Safety  Cabinet (ESCO), vortex (Maxi Mix II), PhoenixSpec Nephelometer, pompa  vakum  (EZ-STREAM™)  dan Millipore®, serta seperangkat alat-alat KLT.

## 3. Tata Cara Penelitian

## 3.1 Pengambilan bahan buah buni
Buah  buni  diperoleh  dari  Taman Universitas  Sanata  Dharma,  Yogyakarta. Cara pemanenan buah buni yang digunakan pada penelitian ini, yaitu diambil buah yang berwarna  hitam  berbentuk  bulat  telur  dan buah tidak jatuh ke tanah. Pemanenan buah buni dilakukan bulan Maret 2013 pada pagi hari sebelum pukul 10.00 WIB.
3.2. Determinasi tanaman buah buni D e t e r m i n a s i   d i l a k u k a n   d i Laboratorium  Kebun  Tanaman  Obat, Fakultas  Farmasi,  Universitas  Sanata Dharma,  Yogyakarta.  Proses  determinasi dilakukan  dengan  menggunakan  bagian tanaman buni seperti daun, buah, dan bunga . 3.3. Penyarian daging buah buni
Sebanyak  300  g  buah  buni  direndam dengan etanol 96% setinggi kurang lebih dua sentimeter  dari  tinggi  buah  buni  dan didiamkan dalam tempat gelap selama enam
hari  dan  setiap  enam  jam  sekali  diaduk, kemudian disaring. Hasil maserasi (maserat) disimpan  di  dalam  almari  es.  Remaserasi selama enam hari sambil setiap 6 jam sekali diaduk,  kemudian  disaring.  Setelah  itu, kedua  maserat  didiamkan  selama    24  jam, disaring, dan diuapkan menggunakan rotary evaporator . 3.4. Skrining fitokimia
Skrining fitokimia meliputi uji tabung dan uji Kromatografi Lapis Tipis (KLT).

## 3.4.1. Uji tabung
Uji tabung ekstrak etanol daging buah buni meliputi uji alkaloid, uji tanin, uji flavonoid, uji  antosianin,  uji  saponin,  dan  uji triterpenoid.
Uji  alkaloid.  Sebanyak  2  g  ekstrak  dan  2  g serbuk  daun  kecubung  masing-masing ditambahkan satu milliliter asam klorida 2N d a n   s e m b i l a n   m i l l i l i t e r a q u a d e s t . Dipanaskan di penangas air selama 2 menit, didinginkan  dan  disaring.  Dipindahkan  ke tiga tabung reaksi masing-masing sebanyak 3 mL    dan  masing-masing  ditetesi  pereaksi Dragendroff, Mayer, dan Bourchadat. Kedua hasil  yang  diperoleh  dibandingkan (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1995).
Uji tanin. Sebanyak 3 mL larutan sampel dan larutan tanin masing-masing dimasukkan ke dalam tabung reaksi ditambahkan lima tetes pereaksi besi (III) klorida. Kedua hasil yang diperoleh  dibandingkan  (Hayati  dan Halimah, 2010).
Uji flavonoid. Sebanyak 3 mL larutan sampel dan larutan rutin masing-masing dimasukkan ke  dalam  tabung  reaksi  dan  ditambahkan sedikit  logam  zink  atau  logam  magnesium, serta diberi lima tetes asam klorida 5N. Hasil yang  diperoleh  dibandingkan  (Krishnan, 2009).
Uji  antosianin.  Sebanyak  3  mL  larutan sampel  dan  sebagai  standar  digunakan larutan  ekstrak  metanolik  daging  buah anggur  merah  masing-masing  dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Tambahkan natrium hidroksida dan asam sulfat masing-masing 3 mL.  Hasil  yang  diperoleh  dibandingkan dengan standar (Krishnan, 2009).
Uji saponin. Sebanyak 5 mL larutan sampel
RAKASIWI, SOEGIHARDJO
dikocok  kuat  selama  10  detik.  Tabung dikondisikan berdiri tegak dan diamati yang terjadi  dan  dibandingkan  dengan  standar daging  buah  lerak  yang  diperlakukan  sama (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1995).
Uji  triterpenoid.  Sebanyak  3  mL  larutan sampel  dan  pembanding Succus  liquiritiae direaksikan  dengan  lima  tetes  Liebermann- Burchard  (LP).  Diamati  cincin  yang terbentuk  pada  perbatasan  kedua  larutan (Hayati dan Halimah, 2010).

## 3.4.2. Uji KLT
Uji  KLT  flavonoid.  Fase  diam  yang digunakan,  yaitu  silika  gel  GF   dan  fase 254 gerak  yang  digunakan  adalah  etil  asetat- asam format- asam asetat glacial- air dengan perbandingan  100:11:11:27  (v/v).  Standar pembanding  yang  digunakan  adalah  rutin. Hasil dideteksi dengan UV 254 nm, UV 365 nm, dan pereaksi semprot sitroborat (Wagner & Bladt, 2009).
Uji KLT tanin. Uji KLT tanin menggunakan fase  diam,  yaitu  silika  gel  GF   dan  fase 254 gerak  yang  digunakan  adalah  etil  asetat-
asam  format-  toluena-  air  dengan perbandingan  6:1,5:3:0,5  (v/v.).  Sebagai pembanding  digunakan  asam  galat.  Hasil dideteksi di bawah sinar UV 254 nm, UV 365 nm,  dan  pereaksi  semprot  besi  (III)  klorida (Wagner & Bladt, 2009).
Uji  KLT  antosianin.  Uji  KLT  antosianin menggunakan  fase  diam  selulosa  dan  fase gerak yang digunakan, yaitu n-butanol - asam asetat glacial - air dengan perbandingan 4:1:5 (v/v),  fase  atas.  Sebagai  pembanding digunakan  ekstrak  metanolik  daging  buah anggur  merah.  Hasil  dideteksi  pada  sinar tampak (Harborne, 1987).
3.5.  Uji  potensi  antibakteri  ekstrak  etanol daging buah buni terhadap Staphylococcus aureus  ATCC  25923  dan  Escherichia  coli ATCC 25922
Pembuatan orientasi konsentrasi larutan uji. Larutan  uji  yang  digunakan  untuk  orientasi uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanolik daging  buah  buni  dibuat  dalam  konsentrasi 40%, 60%, dan 80%.
Pembuatan  variasi  konsentrasi  larutan  uji. Larutan  uji  yang  digunakan  untuk  uji aktivitas  antibakteri  merupakan  ekstrak
RAKASIWI, SOEGIHARDJO 26
Jurnal Farmasi Sains dan Komunitas
Tabel I. Hasil Pengamatan Uji Tabung Terhadap Ekstrak Etanolik Daging Buah Buni
etanolik  yang  dibuat  dalam  berbagai konsentrasi, yaitu   40,5%; 27%; 18%; 12%; dan 8%.
Metode difusi. Pengujian potensi antibakteri ekstrak etanolik daging buah buni dilakukan dengan  metode  difusi  sumuran bi-layer . Lapisan  I  merupakan  media  agar  1,5%  dan lapisan II merupakan media Mueller Hinton Agar (MHA) yang sudah bercampur dengan suspensi bakteri uji. Media padat yang telah berisi bakteri dibuat sumuran berdiameter 5 mm  dan  ditetesi  dengan  seri  konsentrasi senyawa uji sebanyak 50 µl. Kontrol positif digunakan  timol  dan  kontrol  negatif digunakan DMSO 1,1%. Diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37ºC.
Metode  dilusi  cair.  Metode  dilusi  cair digunakan blanko berupa 4 mL MHB steril ditambah  1  mL  dari  masing-masing konsentrasi  ekstrak  etanolik  daging  buah buni  yang  digunakan.  Kelompok  perlakuan dilakukan  dengan  cara,  4  mL  media  MHB steril ditambahkan 1 mL suspensi bakteri uji yang  telah  disetarakan  dengan  standar  Mc Farland II dan 1 mL ekstrak etanolik daging buah  buni  dengan  kadar  tertentu,  sesuai dengan  hasil  pada  uji  difusi  padat. Pengamatan  dilakukan  pada  jam  ke-0,  24, dan  48  jam  dengan  suhu  inkubasi  37ºC (Mohamedkassm, et  al., 2013).  Uji penegasan dilakukan dengan cara melakukan streak  plate pada  media  agar  darah  domba dan diinkubasi selama 24 serta 48 jam.

## 4. Hasil dan Pembahasan
4.1. Hasil determinasi
Identifikasi  tanaman  ini  bertujuan untuk  memastikan  bahwa  tanaman  yang
digunakan  adalah  tanaman  buni.  Hasil determinasi menunjukkan bahwa buah buni yang  digunakan  memiliki  nama  ilmiah Antidesma bunius (L.) Spreng.

## 4.2. Pembuatan ekstrak etanolik daging buah buni
Prinsip  dari  maserasi,  yaitu  cairan penyari  akan  menembus  dinding  sel  dan masuk  ke  dalam  rongga  sel  yang mengandung  zat  aktif  sehingga  zat  aktif dapat  terlarut.    Setelah  maserasi  pertama selama enam hari maka dilakukan remaserasi agar didapatkan maserat yang lebih optimal. Remaserasi  dilakukan  juga  selama  enam hari. Hal ini dilandasi pada penelitian Drahici dan  Rapeanu  (2011)  yang  menunjukkan bahwa  semakin  lama  maserasi  anggur dilakukan,  maka  akan  meningkatkam kandungan  polifenolnya.  Hasil  rendemen yang diperoleh sebesar 11,3 % b/b.

## 4.3. Hasil Skrining Fitokimia
Tujuan utama skrining fitokimia adalah untuk  mengidentifikasi  kandungan  bioaktif atau  kandungan  yang  mempunyai  aktivitas dalam pengobatan  sebagai antibakteri.
4.3.1. Uji tabung
Hasil uji tabung ekstrak etanol daging buah  buni  yang  diperoleh  dibandingkan dengan  standar  yang  digunakan.  Hasil dikatakan  positif  jika  terdapat  persamaan atau kemiripan warna dengan standar.
Berdasarkan  hasil  penelitian  ini, diduga  bahwa  di  dalam  ekstrak  etanolik daging  buah  buni  mengandung  senyawa flavonoid, tanin, antosianin dan triterpenoid

## RAKASIWI, SOEGIHARDJO
Tabel II. Diameter Zona Hambat yang Dihasilkan Pada Orientasi Kontrol Positif Timol
sesuai  dengan Tabel  I.  Untuk  mempertegas hasil  uji  tabung  maka  dapat  dilanjutkan dengan analisis semi kuantitatif secara KLT.

## 4.3.2. Uji Kromatografi Lapis Tipis
Sistem  KLT  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  fase  normal  (uji  KLT flavonoid  dan  tanin)  dan  fase  terbalik  (uji KLT antosianin). Interaksi yang terjadi antara analit  dengan  fase  diam  adalah  adsorbsi. Analit  yang  berinteraksi  dengan  fase  diam akan  terpartisi  kemudian  terelusi  oleh  fase gerak. Nilai R  yang baik berkisar 0,09 – 0,9 f (Srivastava, 2011).
Berdasarkan  hasil  uji  kromatografi lapis  tipis  diketahui  bahwa  ekstrak  etanol daging  buah  buni  mengandung  senyawa flavonoid  dan  antosianin.  Hal  ini  karena adanya kemiripan warna dan nilai R  antara f standar dan sampel.
4.4.  Hasil  Orientasi  Kontrol  Positif  Timol dan Ekstrak Etanolik Daging Buah Buni terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923  dan  Escherichia  coli  ATCC 25922 dengan Metode Difusi Padat dan

## Dilusi Cair
Pada penelitian ini dilakukan orientasi untuk  menentukan  konsentrasi  awal  yang dapat memberikan zona penghambatan pada bakteri uji. Orientasi dilakukan pada kontrol positif  timol,  kontrol  negatif  DMSO  1,1  % dan ekstrak etanolik daging buah buni.

## 4.4.1. Penetapan konsentrasi kontrol positif
Kontrol  positif  timol  dipilih  karena timol  merupakan  senyawa  antibakteri  yang
berasal dari tanaman Thymus vulgaris yang memiliki  mekanisme  kerja  merusak membran  sel  bakteri,  sehingga  bakteri kehilangan  struktur  yang  kaku  dan  terjadi kebocoran  bahan-bahan  intrasel.  Kontrol positif  ini  memiliki  kemiripan  dengan antosianin  dalam  mekanisme  aksi  dalam membunuh  bakteri.  Antosianin  dapat memberikan  efek  antibakteri  dengan mekanisme  merusak  permeabilitas  dinding sel, sehingga terjadi kebocoran bahan-bahan intraseluler dan bakteri mati. Kontrol positif timol diuji dengan variasi konsentrasi, yaitu 0,2%; 0,4%; 0,8%, dan 1%.
Pada umumnya, diameter zona hambat cenderung  meningkat  sebanding  dengan meningkatnya  konsentrasi  ekstrak.  Hasil yang  diperoleh  menunjukkan  bahwa  hanya timol 0,2% memberikan zona hambat pada S. aureus dan E. coli. Tidak terbentuknya zona hambat  pada  konsentrasi  0,4%;  0,8%;  dan 1% diduga disebabkan perbedaan kecepatan difusi senyawa antibakteri pada media agar. Oleh karena itu, timol 0,2% akan dilanjutkan pengujiannya  dengan  metode  dilusi  cair. Menurut  Nurmahani, et  al. (2012),  KHM didefinisikan  sebagai  konsentrasi  terendah e k s t r a k   y a n g   d a p a t   m e n g h a m b a t pertumbuhan  bakteri  dalam  waktu  24  jam inkubasi. KBM merupakan konsentrasi dari s e b u a h   s e n y a w a   a n t i b a k t e r i   u n t u k membunuh  bakteri  dalam  waktu  48  jam inkubasi. Setelah dilakukan uji penengasan, pada timol 0,2% menunjukkan bahwa tidak ada  pertumbuhan  bakteri  didaerah  sekitar streak plate dengan lama inkubasi 24 jam dan
RAKASIWI, SOEGIHARDJO 28
Jurnal Farmasi Sains dan Komunitas
Tabel III. Diameter Zona Hambat yang Dihasilkan pada Orientasi Konsentrasi Ekstrak Etanol Daging Buah Buni
48  jam.  Oleh  karena  itu,  pada  konsentrasi timol  0,2%  dijadikan  konsentrasi  uji  pada pengujian  antibakteri  dengan  metode  difusi padat.

## 4.4.2. Penetapan variasi konsentrasi ekstrak etanolik daging buah buni
Pada  orientasi  konsentrasi  ekstrak etanolik daging buah buni, yaitu 40%, 60%, dan  80%.  Selain  variasi  ekstrak,  dilakukan juga  pengujian  terhadap  kontrol  negatif DMSO  1,1%.  Kontrol  negatif  berfungsi untuk  mengetahui  apakah  pelarut  yang d i g u n a k a n   m e m i l i k i   k e m a m p u a n menghambat pertumbuhan S. aureus dan E. coli atau  tidak.  Pelarut  yang  memiliki kemampuan  untuk  menghambat  bakteri  uji dapat membiaskan hasil penelitian.
Pada Tabel III diketahui bahwa ekstrak etanol daging buah buni 40%; 60%; dan 80% memberikan  zona  hambat  pada  bakteri S. aureus dengan  lama  inkubasi  24  jam, sedangkan  pada  bakteri E.  coli tidak menunjukkan  zona  hambat.  Setelah  diuji secara  statistik  ekstrak  etanol  daging  buah buni  pada  konsentrasi  40%,  60%,  dan  80% memiliki  daya  antibakteri  terhadap Staphylococcus  aureus .  Hal  ini  terbukti dengan  adanya  nilai  diameter  zona  hambat yang  lebih  besar  dengan  perbedaan bermakna  dari  kontrol  negatif.  Dari  data
tersebut, maka ekstrak etanolik daging buah buni 40% akan dijadikan sebagai konsentrasi dasar  pada  pengujian  antibakteri  dengan metode difusi sumuran.
4.5. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol D a g i n g   B u a h   B u n i   t e r h a d a p Staphylococcus  aureus  ATCC  25923 dan  Escherichia  coli  ATCC  25922 dengan Metode Difusi Padat
Variasi  konsentrasi  ekstrak  etanol daging  buah  buni  yang  digunakan,  yaitu 40,5%; 27%; 18%; 12%; dan 8%. Berikut ini merupakan hasil pengamatan diameter zona hambat yang diperoleh.
Berdasarkan  Tabel  IV,  zona  hambat yang  terbentuk  dari  ekstrak  etanol  daging buah  buni  hanya  mampu  menghambat pertumbuhan  bakteri  uji S.  aureus .Tidak adanya  zona  hambat  yang  diberikan  pada bakteri E.  coli dapat  disebabkan  karena senyawa  antibakteri  tidak  dapat  merusak membran sitoplasma E. coli. Hal ini karena outer  membran  E.  coli bersifat  lipofilik karena  mengandung  lipopolisakarida. Senyawa-senyawa  yang  dapat  ditarik  oleh etanol  merupakan  senyawa  yang  bersifat semipolar,  sehingga  sukar  berdifusi  pada membran  yang  lipofilik.  Berdasarkan perhitungan statistik, ekstrak etanolik daging
RAKASIWI, SOEGIHARDJO
Jurnal Farmasi Sains dan Komunitas 29
Tabel IV. Diameter Zona Hambat yang Dihasilkan pada Beberapa Konsentrasi Ekstrak Etanolik Daging Buah Buni
buah buni pada konsentrasi 40,5; 27%; dan 18%  memiliki  daya  antibakteri  terhadap S. aureus . Hal ini terbukti dengan adanya nilai diameter  zona  hambat  yang  lebih  besar dengan  perbedaan  bermakna  dari  kontrol negatif.  Jika  dibandingkan  dengan  kontrol positif  (timol  0,2%),  ekstrak  etanol  daging buah  buni  tidak  memiliki  daya  antibakteri sekuat timol 0,2%. Dari data tersebut, maka ekstrak etanol daging buah buni 40,5%; 27%, dan 18% akan digunakan dalam dilusi cair.
4.6.  Penentuan  Kadar  Hambat  Minimun (KHM)  dan  Kadar  Bunuh  Minimum (KBM)  Ekstrak  Etanol  Daging  Buah B u n i   t e rh a d a p   S t a p h y l o c o c c u s aureusATCC  25923  dengan  Metode Dilusi Cair
Prinsip metode dilusi adalah senyawa antimikroba  diencerkan  sehingga  diperoleh
beberapa  konsentrasi.  Oleh  karena  itu, ekstrak  etanolik  daging  buah  buni  18% dibuat seri konsentrasi. Seri konsentrasi yang digunakan,  yaitu  15%,  18%,  21%,  24%, 27%, 30%, dan 33%.
Pada  Tabel V  terlihat  bahwa  terdapat penurunan kekeruhan media pada kelompok ekstrak  etanolik  daging  buah  buni  dengan lama  inkubasi  48  jam  jika  dibandingkan dengan  inkubasi  24  jam.  Hasil  ini  dapat diartikan bahwa ekstrak etanol daging buah buni  dapat  membunuh  atau  menghambat pertumbuhan bakteri uji.
Uji penegasan dilakukan pada ekstrak etanolik daging buah buni 24%, 27%, 30%, dan 33% dengan lama inkubasi 24 jam dan 48 jam.  Berdasarkan  hasil  penelitian  diketahui bahwa nilai KHM pada konsentrasi 30% dan nilai KBM pada konsentrasi 33%.

## RAKASIWI, SOEGIHARDJO
30
Jurnal Farmasi Sains dan Komunitas
Tabel V. Hasil Uji Daya Antibakteri Ekstrak Etanol Daging Buni terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923 Menggunakan Metode Dilusi Cair

## 5. Kesimpulan dan Saran
B e r d a s a r k a n   u j i   t a b u n g   y a n g dilakukan, ekstrak etanolik daging buah buni diduga  mengandung  senyawa  flavonoid, polifenol,  antosianin,  dan  triterpenoid.  Uji KLT  menunjukkan  ada  profil  bercak  yang mirip  dengan  profil  bercak  flavonoid  dan antosianin. Ekstrak etanol daging buah buni hanya memiliki aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus  aureus ATCC  25923.  Nilai Kadar  Hambat  Minimum  (KHM)  dan Konsentrasi  Bunuh  Minimum  (KBM) ekstrak  etanolik  daging  buah  buni  terhadap bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923 berurutan, yaitu 30% dan 33%.
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai  kandungan  kimia  dari  buah  buni secara  kuantitatif  sehingga  dapat  diketahui berapa kadar senyawa flavonoid, antosianin, dan polifenol yang terkandung di dalam buah buni. Perlu diteliti pula potensi antimikroba dari  batang,  daun,  atau  bagian  lainnya  dari tanaman buni.

## Daftar Pustaka
Butkhup,  L.,  dan  Samappito,  S.,  2011,  Phenolic Constituents of Extract from Mao Luang Seeds and Skin-Pulp Residue ands Its Antiradical and Antimicrobial  Capacities, Journal  of  Food Biochemistry , 35 , 1671-1679.
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia,  1995, Materia  Medika  Indonesia ,  Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, Jilid V, 333-337.
Drahici,  L.,  dan  Rapeanu,  G.,  2011,  Evolution  of Polyphenols  During  The  Maceration  of  The Red  Grapes, Journal  of  Agroalimentary Processes and Technologies , 17 (2), 169 – 172. Farthing, M., Salam, M., Lindberg, G., Dite, P., Khalif, I., Lindo, E. S., Ramakrishna, B. S., Goh, K., Thomson, A., Khan, A. G., Krabshuis, J., dan
Lemair, A., 2012, Acute Diarrhea in Adults and Children:  A  Global  Perspective, World Gastroenterology  Organisation  Global Guidelines , 1-20.
Harborne,  J.  B.,  1987, Metode  Fitokimia:  Penuntun Cara Modern Menganilisis Tumbuhan , edisi II, Penerbit ITB, Bandung, 76-78.
Hayati, E. K., dan Halimah, N., 2010, Phytochemical Test  and  Brine  Shrimp  Lethality  Test Against Artemia  salina Leach  of  Anting- Anting ( Acalypha indica Linn.) Plant Extract, Alchemy , 1 (2), 75-82.
Krishnan, A., 2009, Phytopharmacological Study on Antidesma  acidium Retz.  –  A  Folk  Plant, Dissertation ,  Rajiv  Gandhi  University  of Health Sciences.
Mazza, G. J., 2007, Anthocyanins and Heart Health,
Pacific  Agri-Food  Research  Centre , 43 (4), 369-374.
Mohamedkassm,  N.,  Fessehaye,  N.,  Mebrahtu,  D., Teaghes,  K.,  Fessehaye, Y.,  Kaushik, A.,  dan Medhanie,  G.,  2013,  The  Etno-botanic Significance  and  Antimicrobial  Activities  of Two Plant Extracts used in Eritrea, American Journal  of  Phytomedicine  and  Clinical Therapeutics , 1 (7), 520-529.
Nurmahani, M. M., Osma, A., Hamid, A. A., Ghazali, F. M., dan Dek, P., 2012, Short Communication Antibacterial  Property  of Hylocereus and H y l o c e re u s   u n d a t u s P e e l   E x t r a c t s , International  Food  Research  Journal, 19 (1), 77-84.
Rota, M. C., Herrera, A., Martinez, R. M., Sotomayor, J. A.,  dan  Jordan,  M.  J.,  2008, Antimicrobial Activity and Chemical Composition of Thymus vulgaris, Thymus zygis and Thymus hyemalis Essential Oils, Food Control , 19 (2008), 681- 687. Srivastava, M., 2011, High Performance Thin Layer Chromatography  (HPTLC) ,  Springer Heidelberg Dordrecht, London, 290. Wagner, H., dan Bladt, S., 2009, Plant Drug Analysis: nd A Thin Layer Cromatography Atlas , 2  edition, Springer  Dordrecht  Heidelberg,  New  York, 330.
RAKASIWI, SOEGIHARDJO