## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN TOTAL FLAVONOID PADA EKTRAK ETANOL PINANG YAKI (Areca vestiaria)
Ary Pratama Samosir 1) , Max Revolta John Runtuwene 2) , Gayatri Citraningtyas 1)
1) Program studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115
2) Program studi Kimia FMIPA UNSRAT Manado, 95115
kontak : Djavu.p4@gmail.com

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  biji  Pinang  Yaki (Areca  vestiaria)  segar  dan  kandungan  total  senyawa  flavonoidnya.  Pengujiaan  aktivitas antioksidan  menggunakan  metode  Ferric  Reducing  Antioxidant  Power  (FRAP)  dan  metode Chang,  2002  untuk  perhitungan  total  flavonoid.  Hasil  dari  penelitian  menujukan  aktivitas antioksidan sampel segar 3,80375 mmol/100g sedangkan untuk perhitungan total flavonoid pada sampel segar adalah 7,2374 mg/kg.
Kata  kunci  :  sampel  segar  Pinang  Yaki  (Areca  vestiaria),  Antioksidan,  Total  flavonoid,  Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP)

## ABSTRACT
This study aims to determine the antioxidant activity of the ethanol extract in fresh Pinang Yaki (Areca vestiaria) seeds and the total content of flavonoid compounds. Total Antioxidant test used Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP) method and Chang method, 2002, for calculate the total  flavonoids  and  for  test  the  antioxidant  activity.  Result  from  this  study  showed  that  the antioxidant  activity  of  fresh  samples  is  3.80375  mmol/100g  and  the  total  flavonoids  in  fresh samples is 7.2374 mg / kg.
Keywords : fresh samples of Pinang Yaki (Areca vestiaria), Antioxidant, total flavonoids, Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP)

## PENDAHULAN
Beberapa penelitian menunjukkan bahwa  tumbuhan dan buah-buahan terbukti bermanfaat  melindungi  tubuh  manusia terhadap  bahaya  radikal  bebas.  Hal  ini disebabkan karena adanya aktivitas antioksidan  yang  terdapat  dalam  tanaman tersebut.  Secara  alami,  tumbuhan  yang mengandung  antioksidan  tersebar  pada berbagai  bagian  tumbuhan  seperti  akar, batang, kulit, ranting, daun, buah, bunga dan biji (Hutapea, 2005).
Menurut  Simbala  (2006),  Pinang  Yaki (Areca  vestiara)  yang  merupakan  sejenis palem  liar,  merupakan  tanaman  yang  multi fungsi.  Masyarakat  Sulawesi  Utara  secara empiris  menggunakan  tanaman  ini  untuk menyembuhkan  berbagai  macam  penyakit seperti  diabetes  dan  diare.  Biji  Pinang  Yaki (Areca vestiara) mengandung tanin, flavonoid,  hidrokuinon,  triterpenoid  dan saponin.  Sejauh  ini  informasi  yang  ada menggenai  total  flavonoid  dan  uji  akivitas antioksidan  dengan  mengunakan  metode Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP) dalam ekstrak pinang  yaki (Areca vestiaria) belum dilakukan.

## METODE PENELITIAN
Alat dan bahan
Alat  yang  digunakan  yaitu  peralatan  gelas laboratorium,  ayakan  ukuran  65  mesh, kertas  saring  tissue,  vortex , pemanas  listrik, timbangan  analitik, mikropipet,  rotary evaporator  dan  spektrofotometer  UV-Vis.
Sedangkan  bahan  yang  digunakan  yaitu  biji Pinang  Yaki  (Areca  vestiaria)  diambil  dari habitat  aslinya  di  gunung  Mahawu  yang berada  pada  kawasan  kota  Tomohon, aquadest,  butanol,  asam  asetat,  etanol  96%, asam  klorida,  alumunium  klorida,    natrium asetat  trihidrat,  2,4,6-  tri-pyridil-s-triazine
(TPTZ),  feri  klorida  heksahidrat,  fero  sulfat heptahidrat.

## Preparasi Sampel
Sampel  segar  biji  Pinang  Yaki  (Areca vestiara)  dibuat  serbuk  dengan  cara  sampel segar  biji  Pinang  Yaki  ditumbuk  tanpa adanya  pengeringan  kemudian  diblender. Sampel  hasil  blender    diayak  menggunakan ayakan ukuran 65 mesh, sehingga menghasilkan serbuk Pinang Yaki segar.

## Penentuan Kadar Air
Penentuan  kadar  air  dilakukan  dengan metode  pemanasan  menggunakan  oven. Sampel  ditimbang  sebanyak  ±  2  gram  di dalam  cawan  porselin,  dimasukkan  dalam oven  dengan  temperatur  pemanasan  105ºC selama  3  jam  kemudian  didinginkan  dalam desikator  selama  30  menit,  lalu  sampel ditimbang.  Kemudian  dipanaskan  kembali dengan oven dan didingikan sampai mencapai  berat  konstan.  Perhitungan  kadar air sebagai berikut :
Kadar air =
100%
Keterangan: A  = Berat sampel sebelum dipanaskan. B  = Berat sampel setelah dipanaskan.

## Ekstraksi sampel
Sebanyak  20  g  Pinang  Yaki  dimaserasi dengan  200  mL  etanol    96  %,  dimasukkan ke dalam erlenmeyer 250 mL selama 48 jam dengan  beberapa  kali  pengadukan,  setelah itu  disaring  dengan  menggunakan  kertas saring  untuk  memisahkan  ampas  dan filtratnya.  Selanjutnya  filtratnya  dievaporasi untuk  menguapkan  pelarutnya,  sehingga didapatkan  ekstrak  kental  dari  biji  Pinang Yaki (Areca vestiaria).
Penentuan Kadar Total Flavonoid (Chang dan Wen, 2002) Penetapan kadar total flavonoid
dilakukan dengan spektrofotometri
menggunakan  reagen  aluminium  klorida sesuai  prosedur  Chang.  Sebanyak  2  mL larutan ekstrak dengan konsentrasi 200 ppm ditambahkan  dengan  2  mL  alumunium klorida  2%  yang  telah  dilarutkan  degan etanol,  kemudian  divortex selama  20  menit, inkubasi campuran larutan selama 24 menit. Absorbansi  diukur  pada  415  nm.  Dibuat perhitungan  rata-rata  tiga  kali  pengukuran dan kandungan flavonoid dinyatakan dengan kesetaraan pembanding baku Quersetin.

## Penentuan  Aktivitas  total  Antioksidan
(Halvorsen dkk, 2002)

## 1. Pembuatan Larutan
a. Buffer Asetat.
Buffer  asetat  dengan  pH  3,6  dibuat
dari  0,775  g  natrium  asetat  trihidrat (CH 3 COONa.3H 2 O) yang
ditambahkan  dengan  4  mL  asam asetat  pekat  dan  dilarutkan  dengan aquases  hingga  tepat  250  mL  dalam labu takar.
b. Larutan  10  mmol/L  2,4,6-tripyridil-s- triazine (TPTZ).
Sebanyak  0,15  g  TPTZ  dilarutkan dalam  40  mmol/L  HCl  hingga  tepat 50  mL.  Larutan  40  mmol/L  HCl dibuat  dengan  melarutkan  0,828  mL HCl pekat dalam 250 mL aquades.
c. Larutan 20 mmol/L FeCl 3 .6H 2 O Sebanyak 0,54 g FeCl 3 .6H 2 O dilarutkan dengan aquades dalam labu takar hingga tepat 100 mL.
d. Reagen FRAP. Reagen  FRAP  dibuat  dengan  cara mencampurkan  25  mL  buffer  asetat, 2,5  mL  larutan  TPTZ  dan  2,5  larutan
FeCl 3 .6H 2 O, lalu ditambahkan
aquades  hingga  tepat  100  mL  dalam labu takar.
e. Pembuatan Larutan Standar FeSo 4 .7H 2 O Larutan stock 10.000 µmol/L FeSo 4 .7H 2 O dibuat dengan
melarutkan 2,78 g FeSo 4 .7H 2 O dalam
1000  mL  aquades.  Selanjutnya  dari larutan stock 10.000 µmol/L FeSo 4 .7H 2 O  diambil  sebanyak  100 mL  dan  diencerkan  hingga  1000  mL hingga  diperoleh  konsentrasi  1000 µmol/L  FeSo 4 .7H 2 O.Larutan  1000 µmol/L  FeSo 4 .7H 2 O  diambil  masing- masing  sebanyak  10,  20,  30,  40,  50, 60,  70,  80,  90,  100  mL  dan ditempatkan  pada  labu  takar  berbeda dan  diencerkan  dengan  aquades  100 mL.  Konsentrasi  larutan  standar FeSo 4 .7H 2 O  yang  terbentuk  berturut- turut  100,  200,  300,  400,  500,  600, 700, 800, 900, dan 1000 µmol/L.
2. Penentuan Penangkal Radikal Bebas
a. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum. Panjang gelombang maksimum diperoleh melalui pengukuran absorbansi  dari  standar  FeSo 4 .7H 2 O dengan konsentrasi yang paling tinggi
(1000 µmmol/L). Dari larutan tersebut  diambil  sebanyak  1  mL kemudian  ditambahkan  reagen  FRAP sebanyak  3  mL,  lalu  dibaca  pada setiap  panjang  gelombang  dalam kisaran 588-598 nm dengan menggunakan  spektrofotometer  UV- Vis.
b. Penentuan  Total  Antioksidan  Dalam Sampel.
Larutan  sampel  pinang  yaki  (Areca vestiaria) sebanyak 0,1 mL ditambah reagen  FRAP  sebanyak  3  mL  dalam tabung  reaksi.  Selanjutnya  larutan
dibaca absorbansinya dengan menggunakan spektrofotometer dengan panjang gelombang
maksimum (596 nm) .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tabel  1.  Hasil  Preparasi  sampel  segar  biji  Pinang  Yaki  (Areca  vestiaria)  dilihat  secara organoleptik dan hasil perhitungan kadar air.
Karateristik organoleptik Serbuk Kadar Air Bentuk Warna Bau Rasa Tekstur Serbuk Kuning cerah kecoklatan Berbau khas Pahit dan pedas Halus dan lembab 79,51%
Dari  gambaran  Tabel  1  hasil  orgnanoleptik proses  preparasi  sampel  biji  Pinang  Yaki  di atas  dapat  dilihat  dari  bentuk,  warna,  bau, rasa,  dan  tekstur  dari  sampel  segar  masih terjaga  dengan  baik,  hal  ini  dikarenakan proses  preparasi  sampel  tidak  mengalami penjemuran atau pemanasan. Menurut Fellows  (1992),  Selama  pengeringan,  bahan atau  sampel  akan  berubah  secara  sifat  fisik. Hal  lain  yang  dapat  dilihat  bahwa  adanya kandungan  air  yang  tinggi  pada  sampel segar  biji  Pinang  Yaki  (79,51%).  Menurut Dwihandita  (2009),  Anggur  laut  segar memiliki  rata-rata  kadar  air  tertinggi  dan lebih  dari  90%  karena  anggur  laut  segar tidak  mengalami  pengolahan  lebih  lanjut sehingga  kandungan  air  dalam  bahan  tidak mengalami banyak perubahan.

## Kandungan Total Flavonoid
Total  flavonoid  pada  sampel  segar  biji Pinang  Yaki  (Areca  vestiaria)  diperoleh dengan  cara  memasukan  nilai  absorbansi pada  kurva  standar  quersetin    dengan persamaan kurva yaitu y = 0,0278x – 0,0022 sehingga  hasil  dari  besar  total  flavonoid pada  sampel  segar  biji  Pinang  Yaki  yaitu
sebesar  7,737  mg/kg.  besarnya  kandungan total  flavonoid  pada  sampel  segar  biji Pinang  Yaki  dikarenakan  sampel  segar  biji Pinang  Yaki  tidak  mengalami  proses preparasi dan ekstraksi dengan
menggunakan pemanasan.
Hal ini dikarenakan proses pemanasan akan membuat  kadar  dari  flavonoid  berkurang. Pengurangan kadar flavonoid ini di karenakan adanya proses oksidasid. Lusivera  (2002),  mengatakan  bahwa  Proses pemanasan  dapat  mengakibatkan  penurunan kadar total flavonoid sebesar 15-78%.

## Penentuan konsentrasi Total Antioksidan
Penentuan  total  kandungan  antioksidan dilakukan  dengan  menggunakan  metode FRAP.  Metode  ini  dapat  menentukan kandungan  total  antioksidan  dari  suatu bahan  berdasarkan  kemampuan  senyawa antioksidan mereduksi ion Fe 3+ menjadi Fe 2+ sehingga kekuatan antioksidan suatu senyawa  dianalogikan  dengan  kemampuan mereduksi dari senyawa tersebut (Halvorsen dkk, 2002).
Penentuan kandungan total aktivitas antioksidan  sampel  segar  Pinang  yaki dilakukan pada panjang gelombang maksimum  596  nm  pada  spektro  Uv-vis sehingga didapatkan nilai berupa absorbansi. Pada  sampel  segar  pinang  yaki  didapatkan absorbansi 0,652 dan pengulangannya
0,561.  Setelah  didapatkan  nilai  absorbansi maksimum,  sampel  kemudian  dihitung  total antioksidan dengan cara di masukkan dalam persamaan regresi kurva
standar FeSO 4 .7H 2 O dengan persamaan y = 0,8731x –  0,0577.  Sehingga  hasil  dari  total  aktivitas antioksidan  dapat  dilihat  pada  Tabel  2  di bawah ini :
Tabel  2.  Aktivitas  antioksidan  biji  Pinang Yaki (Areca veasatiaria).
Sampel Konsentrasi antioksidan (mmol/L) Konsentrasi antioksidan (mmol/100g) Sampel segar biji Pinang  Yaki (Areca vestiaria) 0,76087 mmol/L 3,80375 mmol/100g Hasil penelitian aktivitas antioksidan menujukan  besar  konsentrasi  antioksidan yaitu  3,80375  mmol/100g.  Besarnya  angka antioksidan  tersebut  erat  hubungannya dengan  kandungan  flavonoid.  Semakin banyak  senyawa  flavonoid  yang  terkandung maka  semakin  besar  pula  total  aktivitas antioksidannya.  Besarnya  kandungan  total aktivitas  antioksidan  pada  sampel  segar Pinang  Yaki  menujukan  bahwa  proses preparasi  sampel  sangat  berkaitan  erat  pada proses  antioksidan.  Dwihandita  (2009), menyatakan  bahwa  senyawa  antioksidan sangat mudah mengalami perubahan,
sehingga  berbagai  jenis  pengolahan  dapat mengakibatkan
hilangnya senyawa
antioksidan  yang  terdapat  dalam  suatu bahan.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Dari penelitian ini menyimpulkan bahwa :
a. Ekstrak  etanol  biji  pinang  yaki  (Areca vestiaria)  memiliki  aktivitas  sebagai antioksidan.  Total  antioksidan  sebesar 3,80375 mmol/100g.
b. Total  flavonoid  yang  terkandung  pada ekstrak biji pinang yaki (Areca vestiaria) segar adalah 7,573 mg/kg

## Saran
Perlu  adanya  penelitian  lanjutan  khasiat pinang  yaki  (Areca  vestiaria)  sebagai tanaman  obat  dalam  mengobati  penyakit secara khusus.

## DAFTAR PUSTAKA
Chang  C.  Yang  M,  Wen  Hand  Chern  J. 2002. Estimation of Total
Flavonoid  Content  in  Propolis  by Two Complementary Colorimetric
Methods,  J.  Food  Drug  Anal.
178-181 Dwihandita, N. 2009. Perubahan
Kandungan  Antioksidan  Anggur Laut  (caulerpa  racemosa)  Akibat Pengolahan (skripsi). SPIK Istitut pertanian bogor.
Fellows PS. 1992. Food Processing Technology. England: Ellis Horwood Limited.
Halvorsen,  B.  L.,  K.  Holte.,  M.  C.  W.
Myhrstad., dkk. 2002. A
systematic  Screening  of  total antioxidant In Diethaey  Plants. J. Nutrition. 135 :461 – 471.

## Hutapea,  R.  2005.  Sehat  dan  Ceria  Diusia
Senja.  Penerbit  :  Rineka  Cipta. Jakarta
Lusivera, T.K. 2002. Mempelajari Pengaruh
Pemanasan Terahadap kadar Flavonoid. Skripsi, Fakultas Tegnologi Pertanian, Institut pertanian Bogor.
Simbala,  H.E.I.  2006.  Keanekaragaman Floristik  Dalam  Hubungan  Dengan Pemanfaatan sebagai Tumbuhan obat di  Taman  Nasional  Bogor  Nani Wartabone. (Jurnal)