Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com

## Abstrak
Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3

## Abstract
Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 5 No. 2 (September 2019)
I Gede Wempi Dody Surya Permadi,Yulian Taviv, Lasbudi Pertama Ambarita. (2019). Daya Tetas Telur Aedes Aegypty Strain Japan yang Disimpan Selama Seminggu pada Suhu Ekstrem. Journal Bioeksperimen. Vol. 5 (2) Pp. 131-135. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i2.2795

## DAYA TETAS TELUR AEDES AEGYPTY STRAIN JAPAN YANG DISIMPAN SELAMA SEMINGGU PADA SUHU EKSTREM
I Gede Wempi Dody Surya Permadi*,Yulian Taviv, Lasbudi Pertama Ambarita Loka Litbang P2B2 Departemen Kesehatan Baturaja Sumatera Selatan,
*Email: wempi_veteriner@yahoo.com, wempidvm@gmail.com Paper diterima : 3 September 2018, Paper publish : September 2019
Abstract- Dengue Hemorrhagic Fever (DHF) is one of the environmental health problems that several case increasing the number of patients and the wider area of   distribution. The spread of dengue is influenced by several factors such as the vector disease, the behavior of people and the environment. In some sub-tropical countries is like  in the winter season , a number of   Aedes albopictus is found the eggs can still hatch at temperatures 0,5 ◦ C. Eggs that will be tested for each treatment amounted to 100 eggs and had been through the process selected.  The research carried in Parasitology and Entomology Labolatories, South Sumatra. The research was conducted from March to December 2014. In a multivariate test showed that the interaction of temperature and storage time affect the hatchability of eggs of Aedes aegypti strain Japan. Humidity and temperature can influence one of the insects are mosquitoes. At a certain temperature and humidity mosquitoes can not do the lifecycle and inhibite the morfology. The conclusion of this research is the cold storage and extreme temperature influence to eggs hacthingof Strain Japan the Aedes aegypti. Suggestions in this research is the public should continue to implement programs 3M plus, due to the Aedes eggs can survive in cold weather.
Keywords: Aedes aegypt Strain Japan, Egg,  Hatching, Estreme Temperature, Storage Time

## Pendahuluan
Penyakit Demam Berdarah Dengue (DBD) merupakan salah satu masalah kesehatanyang cenderung meningkat jumlah penderita dan semakin luas daerah penyebarannya. Penyebaran DBD telah meluas bukan hanya di daerah perkotaan tetapi juga di pedesaan.Penyebaran DBD dipengaruhi oleh beberapa faktor seperti jumlah vektor, perilaku masyarakat dan lingkungan.Vektor DBDumumnya adalah nyamuk Ae. aegypti dan beberapa daerah juga terdapat Aedes albopictus serta Aedes scutellaris yang banyak menyebar di Indonesia.Dalam penyebarannya Ae. aegypti mempertahankan keturunannya melalui jentik-jentik yang berada di wadah atau kontainer  sebagaitempat perindukan. Di daerah perkotaan habitat Ae. aegypti dan Ae. albopictus sangat bervariasi, namun seringnya ditemukannya habitat Aedes sp sebagian besar adalah wadah-wadah (kontainer) buatan manusia (Lifdall & Edgerly, 2014). Kontainer di dalam maupun di luar
rumah sering didapatkan larva dan telur nyamuk Aedes sp (Lifdall & Edgerly, 2014).
Penyebaran Ae. aegypti juga dipengaruhi oleh perilaku masyarakat dalam mencegah penularan DBD.Pemerintah telah melaksanakan program pengendalian DBD melalui pelaksanaan kebersihan lingkungan berupa tahapan  Menguras, Menutup dan Mengubur (3M). Pelaksanaan 3M di dalam kesehatan masyarakat mempunyai dampak yang baik dalam pengendalian jumlah jentik di dalam dan luar rumah sehingga dapat mencegah penularan DBD.  Perilaku masyarakat yang tidak melaksanakan 3M memiliki hubungan dengan penularan DBD (Lahturohmi, Wahyuningsih, & Murwani, 2016). Selain penanggulangan melalui progam 3M juga perlu adanya pemberian insektisida yang disebut dengan 3M plus.  Pelaksanaan penyebaran abate dapat menurunkan jumlah jentik pada wadah penampungan air di masyarakat. Kematian 95% jentik Ae. aegypti dengan insektisida themephos pada dosis 0,028 mg/L (Arslan, et al., 2015).
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018). Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 5 No. 2 (September 2019)
Perkembangan peradaban dan kesadaran masyarakat akan pentingnya side effect yang ditimbulkan oleh adanya insektisida kimiawi, maka ditemukannya penelitian insektisida yang ramah lingkungan. Bioinsektisida juga efektif dalam membunuh jentik dengan keuntungan dapat menekan side effect tersebut. Pelaksanaan pengendalian jentik Ae. aegypti juga melalui bioinsektisida yang disebut bakteri Thurengiensis ( vectobac ) dapat menyebabkan kematian jentik hampir mencapai 100% (Wang, et al., 2013). Pada penelitian yang lain, penggunaan zat yang ramah lingkungan juga mampu menghambat pertumbuhan jentik Ae. aegypti . Pemanfaatan bakteri kitinolitik dari rendaman kulit udang dengan konsentrasi 4% dapat membunuh jentik Ae. aegypti sebesar 99% pada hari kedua (Widyastuti & Marbawati, 2016). Lingkungan merupakan faktor yang sangat penting dalam penyebaran DBD.  Suhu dan lingkungan yang baik dapat mengkondisikan telur dapat menetas menjadi larva dan menyelesaikan daur hidupnya.  Suhu yang baik telur Ae. aegypti menetas adalah kisaran pada suhu 23-36 ◦ C. Telur dapat menetas pada rentang suhu 15-28 ◦ C (Eisen, et al., 2014). Negara Tropis seperti Argentina ditemukan telur ades pada suhu dingin mengalami degenerasi struktur pada telur yang embrionik dibanding dengan telur yang non embrionik. Dalam berbagai penelitian telah diketahui bahwa kematian telur Ae. agypti terjadi pada suhu -10 ◦ C. Namun bagaimanakah daya tetas telur Ae. aegypti strain japan pada suhu ekstrem.

## Materi dan Metode
Penelitian di laksanakan Laboratorium Parasitologi dan Entomogi Loka Litbang P2B2 Baturaja, Sumatera Selatan. Penelitian dilaksanakan mulai bulan Maret sampai Desember 2014. Disain penelitian adalah eksperimental menggunakan uji multivariate annova .  Sampel telur Ae.aegypti diambil dari koleksi telur pada Laboratorium Parasitologi dan Entomologi Loka Litbang P2B2 Baturaja, Sumatera Selatan.

## 1.  Bahan Penelitian
Sampel telur Ae. aegypti strain japan yang akan ditetaskan untuk dijadikan indukan (yang akan menghasilkan telur untuk diujikan) lebih kurang 1000 butir telur. Telur yang akan diujikan untuk masing-masing perlakuan berjumlah 100 butir telur dan telah melalui proses seleksi.

## 2.  Prosedur Kerja a.  Pemilihan Sampel Telur Nyamuk
Periksa telur nyamuk yang berjumlah 100 telur menggunakan Mikroskop Disecting. Pelaksanaan Uji
a) Ambil 100 telur Ae. aegypti kering yang berwarna hitam yang masih menempel diatas kerta, sebanyak 3 buah. Kertas saring dimasukkan kedalam plastik ukuran 1 kg satu persatu kedalam freezer.
b) Atur suhu freezer pada range sebesar -10 o C sampai -15 o C , masukkan 3 kantung plastik yang berisikan kertas saring dan telur Ae. aegypti .
c) Pada 24 jam pertama ambil kertas saring kode pertama dari kantung Plastik, lalu langsung masukkan ke nampan yang berisi air hujan. Catat daya tetasnya.
d) Ambil juga kertas saring yang sebagai control , masukkan ke dalam nampan yang berisi air sumur
e) Catat suhu air, kelembaban dan salinitas air hujan yang digunakan sebagai media pada kedua nampan.
f) Lakukan hal sama pada kertas saring yang sudah disimpan selama 5 dan 7 hari
g) Lakukan hal sama pada suhu pada range suhu  -16 sampai-20 o C.

## Hasil dan Pembahasan
Suhu kamar secara normal telur Ae. aegypti dapat menetas. Sedangkan pada kisaran suhu -10 sampai -15°C telur yang disimpan di freezer storage selama 1, 5 dan 7 hari tidak dapat menetas (Tabel 1).
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)* 1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com

## Abstrak
Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3

## Abstract
Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 5 No. 2 (September 2019)
Nyamuk merupakan serangga yang menjadi perhatian dalam pengendalian penyakit tular vektor. Nyamuk Ae. aegypti merupakan nyamuk yang sering menjadi masalah kesehatan terutama menularkan penyakit DBD.  Masalah kesehatan yang utama adalah belum adanya insektisida yang efektif untuk menghambat penetasan telur menjadi larva. Pada penelitian ini menyatakan bahwa suhu dan lama penyimpanan berpengaruh pada daya tetas (p=0,001). Suhu -10°C terjadi kematian telur Ae. albopictus selama 2 hari (Garzon, Jensen, & Sweighmaan, 2013 ). Faktor yang mempengaruhi penetasan telur terutama yaitu suhu dan kelembaban air dan lingkungan.
Kelembapan dan suhu dapat memberi pengaruh terhadap serangga salah satunya nyamuk. Pada suhu dan kelembapan tertentu nyamuk tidak dapat melakukan siklus hidup. Begitu sebaliknya morfologi nyamuk yang sempurna (telur, larva, pupa, dan dewasa)  pada suhu tertentu  dapat melakukan  perkembangan yang optimal.  Pada fase telur untuk setiap nyamuk di pengaruhi oleh suhu dan daerah habitatnya dalam proses penetasan telur secara optimal. Suhu berpengaruh terhadap pertumbuhan fisiologis nyamuk Ae. aegypti (Makara, Ngumbi, & Lee, 2015).
Tabel 1. Daya Tetas Pada Suhu Ruangan dan Suhu Ekstrem
Suhu Lama Penyimpanan Ulangan Daya Tetas (%) Uji Annova (Celsius) (Hari) (N) Kontrol (28) 1 1 81 P=0,001 2 58
3 70 5 1 74 2 74 3 74 7 1 95 2 86 3 91 -10 sampai -15 1 1 0 2 0 3 0 5 1 0 2 0 3 0 7 1 0 2 0 3 0 -16 sampai -20 1 1 1 2 0 3 0 5 1 0 2 0 3 0 7 1 0 2 0 3 0
ISSN 2460-1365
tembaga tersebut melebihi tingkat kebutuhan harian. Akumulasi tembaga di dalam tubuh manusia dapat mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti gagal ginjal, kanker, kerusakan liver, kerusakan otak, gangguan saraf, bahkan kematian (Hocheng, Chakankar, & Jadhav, 2018). Pencemaran tembaga di pantai timur Surabaya merupakan salah satu kasus pencemaran logam berat yang terjadi di Indonesia yang belum dapat ditanggulangi. Pencemaran ini dapat terjadi karena adanya pembuangan limbah cair ke sungai oleh industri yang berada di sekitar pantai timur Surabaya. Akibat yang ditimbulkan dari pencemaran tembaga adalah akumulasi tembaga oleh hewan yang hidup di sungai dan laut di sekitarnya seperti ikan, kerang, dan udang. Hewan-hewan yang mengakumulasi logam berat bila terkonsumsi oleh manusia dalam jangka panjang dapat menimbulkan kerusakan pada beberapa organ tubuh (Irawati, Parhusip, Christian, & Yuwono, 2017).
Data pencemaran logam berat menunjukkan bahwa kadar Cu pada ikan dan kerang dari pantai sekitar muara yang berasal dari Rungkut, yaitu pantai di kelurahan Sukolilo mengandung 2.290,20 ppb dan 5.920,20 ppb. Pencemaran di Rungkut telah melebihi ambang batas yang ditentukan oleh World Health Organization (WHO) yaitu 1.200 ppb sehingga dapat membahayakan kesehatan penduduk yang tinggal di desa tersebut. Masalah kontaminasi tembaga di lingkungan telah dilakukan di beberapa daerah industri tetapi untuk mendegradasi dan menghilangkan logam berat tidak semudah mendegradasi limbah organik karena limbah logam berat bersifat nonbiodegradable. Degradasi dan reduksi logam berat dari lingkungan untuk skala kecil dapat dilakukan dengan cara fisik dan kimia melalui pertukaran ion (ion exchange), presipitasi, koagulasi, inverse osmosis, dan adsorpsi. Metode-metode tersebut cukup efisien dalam mengurangi kontaminasi logam berat tetapi akan sangat merugikan bila digunakan untuk mengolah limbah industri yang sangat banyak sehingga akan menimbulkan masalah baru, yaitu biaya  pengolahan limbah yang relatif mahal, membutuhkan energi dan bahan kimia cukup banyak (Jianlong, 2002). Pendekatan secara bioteknologi dengan menggunakan khamir merupakan alternatif yang
dapat dilakukan untuk masa yang akan datang dan merupakan langkah yang cukup berpotensi dalam meremediasi limbah cair yang mengandung logam berat. Mikroorganisme dapat mengurangi konsentrasi logam berat di lingkungannya melalui proses adsorpsi, produksi senyawa ekstraseluler, maupun sintesis enzimatis. Berbagai mikroorganisme memiliki toleransi terhadap logam pada konsentrasi yang lebih tinggi setelah ditumbuhkan pada medium yang mengandung logam berat (Irawati, Riak, Sopiah, & Sulistia, 2017). Hasil penelitian menunjukkan bahwa beberapa jenis khamir seperti Saccharomyces pombe strain 972, Saccharomyces cerevisiae, dan Candida tropicalis dapat mengabrsopsi tembaga di dalam medium masing-masing sebesar 70%, 86%, dan 82% (Stephen, 1992; Rahman, 2007). Mekanisme detoksifikasi tembaga pada khamir pada umumnya adalah dengan cara pengikatan ion tembaga pada membran, penyerapan ke dalam sel, dan dilanjutkan dengan pengikatan ion tembaga oleh protein metallothionein (MT) (Ashish, Neeti, & Himanshu, 2013). Eksplorasi khamir resisten tembaga yang dapat mengakumulasi tembaga perlu dilakukan untuk mendukung program bioremediasi limbah tembaga di Indonesia demi terciptanya lingkungan yang terbebas dari kontaminasi logam berat. Tingkat kontaminasi limbah tembaga di banyak daerah industri di Indonesia telah melebihi ambang batas dan perlu ditanggulangi untuk menghentikan pencemaran limbah tembaga ke lingkungan. Khamir resisten tembaga merupakan mikroorganisme yang sangat berpotensi dalam mengakumulasi tembaga dari limbah dalam proses bioremediasi tetapi penelitian mengenai isolasi dan karakterisasi khamir resisten tembaga belum banyak dilakukan di Indonesia (Qayyum, Khan, Maqbool, Zhao, & Peng, 2016) (Jianlong, 2002). Eksplorasi khamir resisten tembaga dari daerah industri Rungkut-Surabaya sangat penting untuk dilakukan sebagai langkah awal dalam rangka mendapatkan solusi dalam meremediasi lingkungan yang telah tercermar logam berat. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan menguji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri Rungkut Surabaya.
Bioeksperimen, Volume 5 No. 2 (September 2019) ISSN 2460-1365
Sedangkan pada suhu -16 sampai -20°C telur yang disimpan di freezer storage selama 1 hari masih ada yang menetas, sedangkan yang 5 dan 7 hari tidak dapat menetas.  Dari hasil uji Annova didapatkan hasil menunjukkan bahwa interaksi suhu dan lama penyimpanan berpengaruh pada daya tetas telur (p<0,05).
Tabel 2. Kadar pH dan Salinitas Pada Air Nampan Uji pH Salinitas Kontrol 6-7 0 -10 sampai -15°C 6-7 0 -16 sampai -20°C 6-7 0 Pada tabel 2 menunjukkan bahwa hasil pH dan salinitas tidak berubah akibat adanya perlakuan uji.
Hasil penelitian pada suhu rata-rata 28°C dan kelembaban 81% menyatakan hasil variasi range penetasan berkisar antar 53% sampai 95% dan penetasan tertinggi terletak pada 48 jam setelah telur ditetaskan.  Tingkat penetasan 62% setelah 48 jam pada suhu rata-rata 29,5 °C dengan kelembapan 92% (Chakraborty & Chatterjee, 2015). Secara normal  di daerah tropis telur aedes dapat menetas pada suhu diantara 26-31°C.  Setelah 48 jam penetasan berangsur-angsur terjadi penurunan penetasan. Terjadinya penurunan daya tetas di setelah 48 jam penetasan telur di air .  Faktor lain yang memperngaruhi adalah salah satunya adalah suhu. Penurunan tingkat penetasan terhadap telur Ae. aegypti pada suhu   29°C sampai 35°C.  Pada suhu perlakuan yaitu telur kering disimpan pada suhu -16 sampai -20 °C, masih ada satu telur yang menetas pada penyimpanan selama sehari.  Hal ini dimungkinkan karena telur  tersebut tidak terpapar sempurna oleh
perlakuan suhu.  Pada suhu -10 sampai -15°C dari penyimpanan telur di freezer selama 1,5 dan 7 hari tidak ada satu pun telur yang menetas.  Pada suhu -10 sampai -20°C, tidak terjadi penetasan telur Ae. Albopictus . Pengukuran salinitas air menggunakan air aquades rata-rata bernilai 0.  Salinitas juga berpengaruh pada daya tetas telur nyamuk. Larva Ae. aegypti dapat hidup dalam wadah yang mengandung air dengan mengandung kadar garam dengan konsentrasi 0-0,7 (Lucia, Erniwati, & Bintara, 2010 ).  Pada kadar salinitas yang tinggi larva  nyamuk tidak dapat bertahan untuk melakukan adaptasi dengan lingkungan, dan dapat menyebakan kematian pada larva. Kematian LC 50 terjadi pada kandungan salinitas 10 ppt, sedangkan salinitas 0-5 ppt, belum terjadi kematian pada larva Aedes (Ramasamy, Jude, Vellupilai, Eswaromohan, & Surendran, 2014). pH air pada penelitian ini dengan menggunakan uji kertas lakmus berkisar antara 6-7. pH ini sangat baik untuk kondisi penetasan telur Aedes. pH yang baik untuk penetasan telur nyamuk yaitu berkisar antara 4-9.  Kadar pH air mempengaruhi kadar Oksigen  dan Karbon monoksida yaitu di air kedua senyawa tersebut juga berpengaruh terhadap pembentukan enzim sinokrom oksidasi larva Ae. aegypti dan Ae. Albopictus (Ramasamy, Jude, Vellupilai, Eswaromohan, & Surendran, 2014) .

## Simpulan
Suhu dan lama waktu penyimpanan berpengaruh terhadap daya tetas  telur Aedes aegypti strain Japan.

## Daftar Pustaka
Arslan, A., Muchtar, M., Mushtag, S., Zakky, A., Hammad, M., & Bhatti, A. (2015). Arslan A, Muchtar MU, Mushtag S, Zakky AB, Hammad M dan Bhatti A. Comparison of Suscepbility Status of Labolatory and Field Populations of Aedes aegypti Against Temephos in Rawalpindi. Journal of Entomology and Zoology Studies , Vol 3(4): p 374-378.
Chakraborty, A., & Chatterjee, S. (2015). Studies on the Fitness Component and Comparative Ovipotition Preferences of Aedes albopictus in West Bengal. International Journal of Mosquitoes Research , Vol 2(3):156–160. .
Bioeksperimen, Volume 5 No.1, (Maret 2019)
Salomon Christian, Wahyu Irawati. (2019). Uji Resistensi Isolat Khamir yang Diisolasi dari Limbah Industri di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Jurnal Bioeksperimen . Vol. 5 (1) Pp. 1-10. Doi: 10.23917/bioeksperimen.v5i1.2795

## UJI RESISTENSI ISOLAT KHAMIR YANG DIISOLASI DARI LIMBAH INDUSTRI DI RUNGKUT, SURABAYA, INDONESIA
Salomo Christian 1) ; Wahyu Irawati 2)*
1 Fakultas Ilmu Pendidikan, Program Studi Pendidikan Biologi,
2 Fakultas sains dan Matematika, Program Studi Biologi, Universitas Pelita Harapan Jalan M.H. Thamrin Boulevard 1100, Lippo Karawaci, Tangerang 15811, Indonesia *Email : w.irawati3@gmail.com
Abstrak Pencemaran tembaga di daerah Rungkut-Surabaya telah melebihi ambang batas sehingga dapat mengancam kehidupan organisme di laut. Tembaga tidak dapat didegradasi dan beracun pada konsentrasi tinggi sehingga diperlukan pengolahan limbah yang dapat menurunkan konsentrasi tembaga di lingkungan. Khamir resisten tembaga dapat diisolasi dari daerah tercemar dan dapat dijadikan sebagai agen bioremediasi untuk mengatasi pencemaran tembaga. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan isolasi dan uji resistensi khamir resisten tembaga dari limbah industri. Sampel diambil dari lumpur aktif pusat pengolahan limbah PT. SIER Surabaya. Isolasi dilakukan dengan pengenceran sampel limbah kemudian diinokulasikan dengan metode sebar ke dalam medium Yeast Extract Peptone Dextrose Agar yang diperkaya dengan CuSO 4 . Uji resistensi dilakukan dengan menginokulasikan isolat murni dengan metode gores ke dalam medium Agar yang mengandung berbagai konsentrasi CuSO 4 untuk menentukan nilai Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Hasil isolasi diperoleh delapan isolat khamir dengan kode ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, dan ES10.4. Nilai MIC isolat khamir tersebut berkisar antara 16-20 Mm CuSO 4 . Isolat yang paling resisten adalah isolat dengan kode ES9.3 dengan nilai MIC= 20 mM CuSO 4 , sehingga isolate ini dipilih sebagai isolate yang paling resisten terhadap polutan di Wilayah Rungkut, Surabaya, Indonesia.
Kata kunci: Isolasi, karakterisasi, khamir, resistensi, tembaga, isolate ES9.3

## Abstract
Copper pollution in Rungkut-Surabaya area has exceeded the threshold so that it can be threaten the life of organisms in the sea. Copper cannot be degraded and its very toxic at high concentrations. So that, we need to treat the water waste to reduce copper concentrations. Copper yeast can be isolated from polluted areas and can be used as a bioremediation agent to overcome copper pollution. This study aims to conduct copper isolation and yeast resistance testing from industrial waste. Samples taken from the activated sludge of PT. SIER Surabaya. Isolation was carried out by dilution of the waste sample and then inoculated with the scatter method into Yeast Extract medium Peptone Dextrose Agar enriched with CuSO 4 . The resistance test was carried out by inoculating the pure isolate with the scratch method into Agar medium containing various concentrations of CuSO 4 to determine the value of Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The isolation results obtained eight yeast isolates with the code ES6.1, ES8.1, ES9.2, ES9.3, ES9.4, ES9.5, ES10.2, and ES10.4. The MIC value of yeast isolates ranged from 16-20 Mm CuSO4. The most resistant isolates were isolates with code ES9.3 with MIC = 20 mM CuSO 4 , so that this isolate was chosen as the most resistant isolate to pollutants in the Rungkut Region, Surabaya, Indonesia.
Keywords: Isolation, characterization, yeast, resistance, copper, isolate ES9.3

## Pendahuluan
Logam berat merupakan polutan yang tidak dapat didegradasi dan cenderung terakumulasi di dalam tubuh organisme. Logam berat dapat menjadi polutan karena merupakan senyawa sisa yang dihasilkan dari industri (Kobya, Demirbas, Senturk, & Ince, 2005). Tembaga adalah logam
berat yang banyak digunakan di dalam industri terutama industri elektronik dan bersifat toksik bagi organisme (Davis, Volesky, & Vieira, 2000). Tembaga merupakan salah satu logam berat esensial dan diperlukan oleh manusia dalam konsentrasi yang sangat kecil, yaitu tidak lebih dari 0,05 mg/kg berat badan yaitu untuk membentuk hemoglobin dan kolagen, tetapi akan menjadi racun jika konsentrasi
Bioeksperimen, Volume 5 No. 2 (September 2019)
Eisen, L., Monaghan, A., Fuentes, S., Steinhoff, D., Hayden, M., & Bieriner, P. (2014). The Impact of Temperature on The Bionomic of Aedes aegypti .Journal of Medical Entomology. 2014;51(3):496-516. Journal of Medical Entomology , Vol 51(3): p 496-516.
Garzon, M., Jensen, O., & Sweighmaan. (2013 ). Resistance to Freezing Temperatur in Aedes Eggs from Two Different Climate in Several Areas Argentine. Journal of Vector Ecology , Vol 38(2): p 339-344.
Lahturohmi, H., Wahyuningsih, N., & Murwani, R. (2016). Lahturohmi HPH, Wahyuningsih NE dan Murwani R. Hubungan Perilaku Penggunaan Insektisida, Perilaku 3M dan Keberadaan Breeding Place dengan Kejadian DBD di Kota Semarang. Jurnal Kesehatan Masyarakat , Vol 4(4): p 933-942.
Lifdall, T., & Edgerly, J. (2014). Lifdall TP dan Edgerly JS. Egg Hatching Inhibition: Field Evidence for Population Regulation in a Treehole Mosquito. Ecological Entomology Journal. 2014;12:395-399. Ecological Entomology Journal , Vol 12: p 395-399.
Lucia, Y., Erniwati, I., & Bintara, A. (2010 ). Hubungan Karakteristik Lingkungan Kimia dan Biologi dengan Keberadaan Larva Aedes aegypti di Wilayah Endemis DBD diKota Makasar tahun 2013. Majalah Parasitologi Indonesia , Vol 6(1): p 31-45.
Makara, M., Ngumbi, P., & Lee, D. (2015). Effects of Temperature on the Growth and Development Mosquitoes. Journal of Pharmacy and Biological Sciences , Vol 10(6): p 1-10.
Ramasamy, R., Jude, P., Vellupilai, L., Eswaromohan, E., & Surendran, S. (2014). Biological Differences between Brackish and Fresh Water Derived Aedes aegepty. Jurnal Plosone , Vol 9(8):p 1-10. .
Wang, C., Teng, H., Lee, S., Lin, C., Wu, J., & Wu, H. (2013). Efficasy of Various Larvacides AgainstAedes aegypti Immatures in Labolatory. Japan Journal Infectious Disease , Vol 66(4): p 341-344. .
Widyastuti, D., & Marbawati, D. (2016). Efek Larvasida Bakteri Kitininolitik Dari Limbah Kulit Uang Terhadap Larva Aedes aegypti. Jurnal Aspirator , Vol 8(1): p 47-54.