## Aktivitas Antioksidan dan Kandungan Total Fenolik pada Ekstrak Teripang di Perairan Karimunjawa, Jepara

## Yolanda Avigail*, Ervia Yudiati, Delianis Pringgenies
Departemen Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl. Prof.H.Soedarto S.H, Tembalang,Semarang, Jawa Tengah 50275 Indonesia *Corresponding author, e-mail :yolandavigail@gmail.com
ABSTRAK  : Teripang  merupakan  hewan  jenis  Echinodermata.  Beberapa  species  teripang, misalnya H.  scabra , H.  fuscogilva dan T.  ananas memiliki  nilai  jual  yang  tinggi.  Meskipun  tidak semua  spesies  memiliki  nilai  jual  yang  tinggi,  teripang  berpotensi  untuk  dikembangkan  dalam bidang kesehatan, terutama dalam kemampuannya untuk meredam radikal bebas dan mencegah berbagai penyakit degeneratif. Tujuan dari penelitian ini yaitu untuk mengidentifikasi, menentukan aktivitas  antioksidan,  kandungan  total  fenol,  serta  kadar  karotenoid  pada  ekstrak  beberapa teripang  yang berasal dari  Perairan Karimunjawa Jepara. Hasil identifikasi  dari ke empat spesies adalah Stichopus cf. quadrifasciatus , Pearsonothuria graeffei , Bohadschia vitiensis , dan Holothuria atra .  Ekstraksi  dilakukan  dengan  teknik  maserasi  dinding  tubuh  teripang  menggunakan  pelarut metanol.  Uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  DPPH  (1,1-difenil- pikrilhidrazil) sebagai agen radikal bebas. Penentuan total fenolik dilakukan menggunakan metode folin-ciocalteu, dan penentuan kadar karotenoid dilakukan dengan menggunakan spektrofotometer. Hasil menunjukkan bahwa aktivitas antioksidan Bohadschia vitiensis, Stichopus cf. quadrifasciatus,  Pearsonothuria  graeffei, dan Holothuria  atra tergolong  sangat  lemah  dengan nilai IC 50 secara berturut-turut adalah sebesar 454,28±14,4;  713,51±9,1; 801,57±8,4 dan 1535,47 ppm.  Kandungan  total  fenol  sebesar  21,08±0,49;  14,325±0,21;  14,033±0,33  dan  10,67±0,12  mg GAE/g  sampel,  dan  kadar  karotenoidnya  sebesar  23,28±0,07;  25,78±0,56;  11,85±0,04;  dan 41,44±0,008 µmol/g sampel.
Kata kunci: Teripang, Antioksidan, DPPH, Fenolik, Karotenoid
Antioxidant Activity and Total Phenolic Content From Extract Sea Cucumber in Karimunjawa Island, Jepara
ABSTRACT  : Sea  cucumbers  are  sea  benthos  from  phylum  Echinoderms  phylum.  Some  sea cucumbers  such  as  H.  scabra,  H.  fuscogilva,  T.  Ananas  have  a  high  economical  price. Eventhough,  some  sea  cucumbers  have  the  potency  of  being  a  healthy  food.  It  it  scientifically proven  that  some  sea  cucumbers  have  the  ability  to  reduce  free  radicals  and  prevent  various degenerative  diseases  caused  by  the  excessive  free  radicals.  The  aims  of  this  study  were  to identified,  determine  antioxidant  activity,  total  phenol  content,  and  carotenoid  levels  in  sea cucumber extracts originally from Karimunjawa waters. Some of the sea cucumbers obtained are Stichopus  cf.  quadrifasciatus,  Pearsonothuria  graeffei,  Bohadschia  vitiensis,  and  Holothuria  atra. The extraction was done by macerating the body walls with methanol. The antioxidant activity test were tested  using  the  DPPH  method  as  free  radicals,  the  total  phenolic  content tested  using  the folin-ciocalteu method, and determined the carotenoid levels spectrophotometrically. Based on the results,  antioxidant  activity  of    B.  vitiensis,  S.  cf.  quadrifasciatus,  P.  graeffei,  and  H.  atra  were classified  as  very  weak  with  IC 50 454.28±14.4;  713.51±9.1;  801.57±8.4  dan  1535.47  ppm.  Total phenolic content were 21.08±0.49; 14.325±0.21; 14.033±0.33 dan 10.67±0.12 mg GAE/g samples, while  carotenoid  levels  were  23.28±0.07;  25.78±0.56;  11.85±0.04;  dan  41.44±0.008  µmol/g sample.
Keyword : Sea cucumber, Antioxidant, DPPH, Phenolic, Carotenoid

## PENDAHULUAN
Radikal bebas adalah senyawa yang bersifat sangat reaktif karena mudah bereaksi dengan molekul lain dengan cara mengoksidasi sehingga dapat menimbulkan pengaruh negatif terhadap tubuh  antara  lain  mengakibatkan  kerusakan  lipida,  protein,  DNA  dan  membran  sel.  Kerusakan- kerusakan  tersebut  dapat  memicu  timbulnya  penyakit  degeneratif  yaitu  kanker,  aterosklerosis, diabetes,  dan  tekanan  darah  tinggi  (Inggrid    dan  Santoso , 2014).  Keberadaan  radikal  bebas mengakibatkan  tubuh  memerlukan  suatu  substansi  penting  yang  mampu  menangkap  radikal bebas,  yaitu  antioksidan.  Senyawa  antioksidan  bekerja  dengan  cara  mendonorkan  satu elektronnya  kepada  senyawa  radikal  bebas,  sehingga  aktivitas  senyawa  radikal  tersebut  dapat dihambat  (Saleh et  al .,  2005).  Berdasarkan  sumbernya,  antioksidan  dapat  dibagi  menjadi antioksidan  alami  dan  sintetik,  namun  penggunaan  beberapa  antioksidan  sintetik  bersifat karsinogenik, sehingga dapat menyebabkan kanker dan mutasi gen (Rita et al, 2009). Antioksidan alami dapat diperoleh dari organisme darat dan laut. Teripang merupakan salah satu produk laut yang memiliki aktivitas antioksidan. Beberapa teripang komersil yang sudah diketahui manfaatnya antara  lain Holothuria  scabra (teripang  putih  atau  pasir) ,  Holothuria  edulis (teripang  hitam) , Holothuria  vacabunda (teripang  getah  atau  keling) ,  Holothuria  vatiensis (teripang  merah)  dan Holothuria marmorata (teripang cokelat) , ( Stichopus horrens ) (Martoyo, 2000).
Senyawa  yang  terkandung  dalam  teripang  telah  terbukti  secara  ilmiah  dapat  meredam radikal  bebas  dan  mencegah  berbagai  penyakit  degeneratif  yang  disebabkan  oleh  radikal  bebas berlebih.  Beberapa  senyawa  diantaranya  adalah  triterpen  glikosida  (saponin),  kondroitin  sulfat, glycosaminoglycans  (GAGs),  fenolik,  dan  asam  lemak  esensial  (Soltani et  al .,  2014).  Rasyid (2012)  melaporkan  bahwa  teripang Stichopus  hermanii memiliki  potensi  sebagai  antioksidan dengan  nilai  IC 50 65,08  ppm.  Penelitian  lain  yang  dilakukan  oleh  Nobsathian  (2016),  aktivitas antioksidan pada Holothuria scabra memiliki nilai IC 50 sebesar 33.77 ± 0.24 mg/ml.
Penelitian  yang  telah  dilakukan  sebelumnya,  membuktikan  bahwa  teripang  berpotensi sebagai agen antioksidan. Selain itu, penelitian tentang aktivitas antioksidan pada spesies teripang non  komersial  yang  berasal  dari  Perairan  Karimunjawa  belum  banyak  dilakukan.  Di  Indonesia, Perairan dan Karimunjawa adalah salah satu lokasi di mana sumber teripang dipanen (Janakiram, Mohammed, & Rao, 2015; Ridhowati, Zakaria, Syah, & Chasanah, 2014). Salah satu upaya untuk mengoptimalkan  pemanfaatan  bahan  alam  laut  Indonesia  yaitu  melakukan  pengujian  aktivitas antioksidan  pada  beberapa  teripang  yang  ditemukan  di  Karimunjawa.Berdasarkan  pertimbangan tersebut maka penelitian ini perlu dilakukan. Tujuan dari penelitian ini yaitu untuk mengidentifikasi, menentukan  aktivitas  antioksidan,  kandungan  total  fenol,  serta  kadar  karotenoid  pada  ekstrak beberapa teripang yang berasal dari Perairan Karimunjawa Jepara.

## MATERI DAN METODE
Materi  penelitian  yang  digunakan  adalah  4  jenis  teripang  yaitu Bohadschia vitiensis , Stichopus cf. quadrifasciatus , Pearsonothuria graeffei ,  dan Holothuria atra yang  diambil  dari Pancuran  Belakang,  Karimunjawa.  Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  metode eksploratif  (Arikunto,  2006).  Pengambilan  sampel  dilakukan  dengan  metode purposive  sampling . Sampel yang didapat dibersihkan dan dibuang isi perutnya, Tahapan penelitian terdiri dari proses identifikasi, ekstraksi, uji aktivitas antioksidan, penentuan kadar total fenolik dan karotenoid.
Teknik  identifikasi  sampel  dilakukan  dengan  cara  mencocokkan  gambar  yang  sudah  ada beserta  keterangannya  (Siddiqi et  al., 2017).  Pengamatan  dilakukan  mulai  dari  bentuk  tubuh teripang,  warna  teripang,  dan  permukaan  tubuh  teripang.  Buku  identifikasi  yang  digunakan sebagai  acuan  untuk  mencocokkan  objek  yaitu  Commercially  Important  Sea  Cucumbers  of  The World  (Purcell et  al .,  2012),  Katalog  Timun  Laut  Anggota  Ordo  Aspidochirotida  Koleksi  Pusat Penelitian Oseanografi LIPI Jakarta (Purwati et al ., 2008), dan penelitian oleh Kim et al ., (2013). Ekstraksi dilakukan dengan teknik maserasi dengan perbandingan sampel dan pelarut yaitu 1:1 selama 3x24 jam (Roihanah et al., 2013). Metanol dipilih sebagai pelarut karena metanol dapat mengekstrak  senyawa –  senyawa  dengan  kepolaran  yang  tinggi  seperti  fenolik  (Firdiyani,  2015) dan  karotenoid  polar.  Tidak  hanya  mengekstrak  senyawa  yang  bersifat  polar,  tapi  juga  menyari hampir keseluruhan kandungan simplisia baik non polar, semi polar maupun polar (Iswanti, 2009). Berdasarkan  kepolarannya,  pelarut  metanol  juga  lebih  unggul  dibanding  dengan  etanol,  karena
metanol mempunyai titik didih yang relatif lebih rendah (65 0 C) sehingga lebih mudah dalam proses evaporasi dan mengurangi risiko kerusakan senyawa termolabil yang terkandung dalam sampel.
Sampel teripang dipotong kecil-kecil dan ditimbang. Kemudian dimaserasi dengan metanol. Setelah  itu  esktrak  dipekatkan  dengan rotary  evaporator pada  suhu  40 o C  sehingga  diperoleh ekstrak kasar.

## Uji Aktivitas Antioksidan
Uji  aktivitas  antioksidan  menggunakan  metode  DPPH  (Brand-Williams,  1995)  pada konsentrasi ekstrak 200, 400, 600, 800 ppm dan sebagai kontrol positif digunakan asam askorbat dengan  konsentrasi  2,4,6,8  ppm.  Hasil  ditunjukkan  pada  nilai  absorbansi  dengan  menggunakan spektrofotometer  dengan  panjang  gelombang  517  nm.  Perhitungan  yang  digunakan  adalah  nilai IC 50 ( Inhibition  Concentration )  yang  diperoleh  dari  hasil  persamaan  regresi  linier.  Semakin  kecil nilai IC 50 maka semakin tinggi aktivitas antioksidannya (Molyneux, 2004). Nilai absorbansi dihitung dengan menggunakan rumus berikut (Sánchez ‐ Moreno et al ., 1998):
% inhibisi = x 100%
Keterangan : A= Absorbansi larutan DPPH;  B= Absorbansi DPPH + Ekstrak

## Penetapan Kandungan Total Fenolik
Uji  kadar  total fenolik  mengacu  pada  Yangthong et  al .  (2009).  Asam galat  sebagai  standar dibuat  dengan konsentrasi  5,  10,  15,  20  dan  25  ppm.  Masing-masing konsentrasi  ditambah  5 ml aquades  dan  0,5  ml  reagen  folin  ciocalteouo  50%  (v/v).  Campuran  didiamkan  selama  5  menit kemudian ditambah Na 2 CO 3 5% p.a sebanyak 1 ml. Larutan dihomogenkan lalu diinkubasi dalam kondisi  gelap  selama  1  jam.  Absorbansi  sampel  diukur  dengan  spektrofotometer  UV-V  dengan panjang  gelombang  725  nm.  Selanjutnya,  masing-  masing  ekstrak  metanol  teripang  diambil sebanyak 5 mg, kemudian dilarutkan dalam 2 ml etanol p.a. Larutan ditambahkan 5 mL aquades dan  0,5  mL  reagen  folin  ciocalteouo  (v/v).  Campuran  didiamkan  selama  5  menit  kemudian ditambah Na 2 CO 3 5% p.a sebanyak 1 mL. Campuran larutan dihomogenkan lalu diinkubasi dalam kondisi  gelap  selama  1  jam.  Absorbansi  sampel  diukur  dengan  spektrofotometer  UV-V  dengan panjang gelombang yang sama.

## Penetapan Kadar Karotenoid
Uji  kadar  karotenoid  mengacu  pada  Gross  (1991).  Masing-masing  ekstrak  ditimbang sebanyak 10 mg dan dilarutkan dalam 5 mL aseton p.a sehingga diperoleh larutan ekstrak dengan konsentrasi  2000  ppm.  Setiap  konsentrasi  diukur  absorbansinya  pada  panjang  gelombang  645 nm, 663 nm, dan 480 nm. Kadar karotenooid dapat dihitung menggunakan rumus sebagai berikut (Gross, 1991)
Karetonoid µmol/g berat sampel:
Keterangan : A 663 = Absorbansi panjang gel. 663 nm; A 645 = Absorbansi panjang gel. 645 nm; A 480   = Absorbansi panjang gel. 480 nm; V = Volume ekstrak

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Teripang H. atra memiliki ciri-ciri seluruh tubuhnya berwarna hitam  dan biasa tertutup pasir dengan  lingkaran  kosong  di  dua  baris  di  sepanjang  permukaan  punggung,  serta  hidupnya  pada perairan  dangkal  dan  relatif  terbuka  (Rowe,  1969).  Teripang H.atra yang  ditemukan  di  Pulau Seribu  (Elfidasari,  2012)  memiliki  ciri  yang  sama,  Secara  morfologi  memiliki  penampang  tubuh bulat,  sisi  ventral  yang  cenderung  datar,  dan  lubang  anus  yang  bulat.  Warna  tubuh  hitam  kulit tubuhnya lembut dan tebal. Tipe spikula yang ditemukan di bagian dorsal adalah tipe meja, roset, dan  lempeng.  Ditemukan  di  daerah  bersubstrat  pasir  kasar  dan  tubuhnya  diselimuti  oleh  pasir halus. Pada P. graeffei warna dan corak tubuhnya unik sehingga mudah diidentifikasi. Tubuhnya
berwarna  krem  dengan  bintik-bintik  hitam  serta  permukaan  kasar  pada  permukaannya.  Bentuk tubuhnya  sub  silindris  panjang.  Terdapat  papilla  berbentuk  kerucut  berwarna  putih.  Sese  dan Wirawati (2018) menambahkan ciri Pearsonothuria yaitu bentuk tubuh sub silindris panjang, warna dasar putih dengan dengan bintik-bintik hitam serta permukaan kasar di bivium, papilla berwarna putih kerucut jarang tersebar di dorsal, podia terletak pada ventral, mulut hampir trivium dikelilingi oleh  24  tentakel  peltate  besar  dan  hitam,  anus  mendekati  dorsal  dan  terdapat  tubulus  cuvier. Spesies B. vitiensis memiliki warna krim kecoklatan, dengan dua garis lebar melintang membatasi dorsal. Podia cenderung terletak di titik yang lebih gelap. Secara karakteristik, spesies ini biasanya mengubur diri di dalam  sedimen, dan lebih memilih habitat yang tenang dan berpasir (Kim et al ., 2013). Karakter morfologi Bohadschia menurut Sesa dan Wirawati (2018) yaitu bentuk tubuh sub silindris, panjang tubuh 16 cm papilla hitam bulat tersebar di bivium, podia pada trivium tersebar, mulut ventral, anus hampir dorsal. Pengidentifikasian jenis stichopus cukup sulit dilakukan karena keterbatasan referensi. Namun secara morfologi, stichopus yang didapat mirip dengan Stichopus quadrifasciatus .  Menurut  Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Elfidasari et  al. (2012),  teripang  jenis Stichopus quadrifasciatus cenderung  mempunyai  penampang  tubuh  berbentuk  trapesium. Permukaan ventral tubuh datar dan dorsal tubuh melengkung. Permukaan tubuh memiliki tonjolan papila yang membesar. Tubuhnya memiliki warna dasar kuning dengan beberapa area berwarna abu-abu. Podia ditemukan tersebar di bagian dorsal tubuh dan berwarna putih.
Sampel  teripang  diekstrak  dalam  keadaan  basah.  Setelah  dilakukan  perendaman  dengan metanol  didapat  rendemen  sebesar  0,43%  pada B.  vitiensis , S. cf. quadrifasciatus 0,6%, P. graeffei dan H.  atra 0,4%.  Nilai  rendemen  menunjukkan  kadar  metabolit  sekunder  yang terkandung  pada  masing  masing  sampel.  Penelitian  lain  yang  dilakukan  oleh  Sari  (2015),  dalam pengekstraksian Holothuria leucospilota basah menggunakan metanol, didapat rendemen sebesar 5,66%.  Penelitian  lainnya  juga  dilakukan  oleh  Tursina  (2011)  yaitu  mengekstrak Holothuria  atra dan Bohadschia  marmorata dengan  rendemen  secara  berturut  turut  sebesar  0,9%  dan  0,6%. Perbedaan  hasil  rendemen  ekstrak  dari  suatu  bahan  dipengaruhi  oleh  metode  ekstraksi,  ukuran simplisia,  perbandingan  bahan  dan  pelarut,  jenis  pelarut,  waktu  ekstraksi,  suhu  ekstraksi  umur panen,  dan  perbedaan  habitat  (Kumar et  al., 2011).  Ditambahkan  oleh  Wahyuni  dan Widjanarko (2015), faktor-faktor yang mempengaruhi efisiensi ekstraksi senyawa bioaktif meliputi tipe pelarut, suhu, jumlah tahapan ekstraksi, volume pelarut dan ukuran partikel sampel.
Persentase  rendemen  yang  didapat  dalam  penelitian  ini  relatif  kecil.  Hal  ini  menunjukkan bahwa kandungan senyawa aktif / metabolit sekunder dalam sampel relatif sedikit. Diduga hal ini terjadi  karena  faktor  lingkungan  tempat  tinggal  sampel  tersebut  sangat  ideal  bagi  teripang, sehingga  teripang  tersebut  tidak  banyak  memproduksi  metabolit  sekunder  dalam  tubuhnya  guna mempertahankan hidupnya.
Berdasarkan  data  hasil  pengukuran  nilai  absorban  sampel,  dapat  dianalisis  pengaruh konsentrasi  sampel  terhadap  persentasi  aktivitas  peredaman  radikal  DPPH,  dimana  peningkatan konsentrasi sampel sebanding dengan meningkatnya aktivitas peredaman radikal bebas DPPH.
H. atra ; P. graeffei
B. vitiensis S. cf. quadrifasciatus
Gambar 1. Teripang yang ditemukan di Perairan Karimunjawa .
Tabel 2. Rerata nilai absorbansi, % inhibisi  dan IC 50 ekstrak teripang di Karimunjawa Sampel Konsentrasi (ppm) Abs. DPPH Abs. Sampel + DPPH % Inhibisi IC 50 (ppm) S. cf. quadrifasciatus 200 0,2167 0,1527 29,64 713,51 ± 9,1 400 0,1437 33,79 600 0,1220 43,79 800 0,0966 55,46 P.graeffei 200 0,2077 4,30 801,57 ± + 8,40 400 0,1963 9,52 600 0,1342 38,17 800 0,1100 49,30 B. vitiensis 200 0,1541 28,97 454,28 ± 14,4* 400 0,1251 42,35 600 0,0653 69,90 800 0,0577 73,42 H. atra 200 0,1730 20,04 1535,47 ± 5,93 400 0,1660 23,51 600 0,1555 28,34 800 0,1440 33,62 Asam askorbat 2 0,124 42,85 4,06 ± 0,19 4 0,1057 51,30 6 0,094 56,68 8 0,0881 59,41
Berdasarkan hasil perhitungan, masing - masing ekstrak metanol teripang didapatkan bahwa nilai  IC 50 pada  ekstrak B.  vitiensis , S. cf. quadrifasciatus , P.  graeffei dan H.  atra secara  berturut- turut adalah sebesar 446,09; 733,1767; 736,32; dan 1523,95 ppm. Berdasarkan nilai IC 50 yang ada maka  dapat  dikategorikan  semua  teripang  uji  dikategorikan  sebagai  antioksidan  sangat  lemah (Molyneux,  2004).  Hal  ini  kemungkinan  disebabkan  karena  kandungan  metabolit  sekunder  yang terkandung  pada  ekstrak  teripang  uji.  Teripang  uji  memiliki  metabolit  sekunder  dengan  kadar rendah sehingga menjadi faktor yang mempengaruhi rendahnya aktivitas antioksidan. Faktor yang berpengaruh terhadap kandungan metabolit sekunder pada organisme diantaranya adalah kondisi lingkungan asal sampel. Organisme yang hidup di habitat yang lebih mengancam seperti adanya gelombang  besar,  paparan  sinar  matahari,  pencemaran  dan  lain  lain  memungkinkan  suatu organisme  tersebut  menghasilkan  metabolit  sekunder  untuk  bertahan  hidup  sehingga  memiliki potensi antioksidan yang lebih besar. Faktor lain yang mempengaruhi aktivitas antioksidan sampel yaitu  ekstrak  yang  diujikan  masih  berupa  ekstrak  kasar  ( crude  extract )  yang  belum  dimurnikan, sehingga  senyawa –  senyawa  lain  seperti  garam,  mineral  dan  nutrien  lain  yang  tidak  memiliki sinergis terhadap kerja antioksidan dapat menghambat kerja senyawa antioksidan. Hal ini berbeda dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Nobsathian  (2016)  di  Thailand.  Setelah  dilakukan pemurnian senyawa penelitiannya menunjukkan bahwa teripang Holothuria sp. yang diuji memiliki EC 50 sebesar  14,62  µg/ml.  Penelitian  lain  tentang  aktivitas  antioksidan  pada  teripang  juga dilakukan  oleh  Murniasih et  al .,  (2015)  dengan kemampuan  meredam  radikal  sebesar  35,3487% pada  konsentrasi  1  mg/ml.  Peneliti  lain  melaporkan  bahwa  kedalaman,  suhu,  intensitas  cahaya matahari akan mempengaruhi komposisi pigmen dan senyawa aktif lainnya pada sampel (Jha dan Zhi-rong, 2004).
Journal of Marine Research Vol.8, No.4 November 2019, pp. 346-354
Bagian  tubuh  teripang  yang  diekstrak  juga  berpengaruhi  terhadap  potensi  antioksidan. Menurut  Mamelona et  al. (2007),  kemampuan  antioksidan  pada  jeroan  lebih  baik  dibandingkan pada  dinding  tubuhnya,  karena  berhubungan  dengan  makanan  yang  dimakan  oleh  teripang  itu sendiri, terutama fitoplankton yang banyak mengandung senyawa fenolik.

## Penetapan Kadar Total Fenolik
Penentuan kadar total fenol dilakukan untuk pengujian aktivitas antioksidan karena senyawa fenolik diketahui berperan dalam mencegah terjadinya peristiwa oksidasi (Fitriansyah et al., 2017). Pengukuran  ini  didasarkan  pada  pembentukan  kompleks  molibdenum-tungsten  yang  terbentuk akibat  reduksi  fosfomolibdat-fosfotungstat  yang  terkandung  dalam  reagen  Folin  ciocalteu  oleh senyawa fenolik yang terdapat dalam sampel. Larutan standar yang digunakan adalah asam galat karena  merupakan  salah  satu  senyawa  golongan  fenolik  yang  memiliki  struktur  yang  sederhana, substansi yang murni dan stabil.
Hasil uji penentuan kadar total fenol menunjukkan bahwa total fenol pada B. vitiensis , S. cf. quadrifasciatus , P.  graeffei dan H.  atra berturut  turut  sebesar  21,08;  14,31;  14,025  dan  10,6  mg GAE/g  sampel.  Hasil  ini  berbeda  dengan  hasil  penelitan  yang  dilakukan  oleh  Wafa et  al. (2014) dimana kandungan total fenolik pada ekstrak kasar fraksi metanol Holothuria scabra sebesar 69,09 GAE/g sampel dan fraksi n -heksana sebesar 58,01 GAE/g sampel. Penelitian lain yang dilakukan oleh Mamelona et al. (2007), ekstrak air pada otot Cucumaria frondosa memiliki kandungan fenol sebesar  29,9  GAE/g  sampel.  Sedangkan  pada  penelitian  Nobsathian  (2016),  didapati  bahwa ekstrak  kasar Holothuria  scabra yang  diuji  memiliki  kandungan  total  fenol  sebesar  30.52  ±  0.21 GAE/g.  Adanya  perbedaan  total  fenolik  pada  ekstrak  teripang  disebabkan  oleh  beberapa  faktor seperti jenis spesies, geografis, fisiologis dan keadaan lingkungan yang bervariasi (Machu et  al., 2015).  Faktor  lain  yang  mempengaruh  keberadaan  fenolik  dalam  teripang  adalah  makanan. Sumber utama makanan teripang yang merupakan bahan yang kaya fenolik yaitu fitoplankton dan partikel  yang  berasal  dari  makroalga  laut,  kemungkinan  besar  mempengaruhi  keberadaan senyawa fenolik aktif dalam dinding tubuh teripang (Mamelona et al ., 2007).
Rendahnya  kadar  fenolik  dalam  teripang  menjadi  salah  satu  faktor  rendahnya  kemampuan senyawa  tersebut  dalam  menghambat  radikal  bebas  DPPH. Terdapat  hubungan  yang  sinergis antara kandungan total fenol dan aktivitas antioksidan. Pada B. vitiensis yang memiliki total fenol paling tinggi, mampu merendam radikal bebas lebih besar dibandingkan dengan teripang jenis lain dibuktikan dengan nilai IC 50 yang paling rendah. Hal ini sesuai dengan pernyataan  Fitriansyah et al. (2017). Semakin tinggi kadar total fenol pada suatu bahan maka aktivitas antioksidannya akan tinggi, yang ditunjukkan oleh nilai IC 50 yang lebih rendah.

## Penetapan Kadar Karotenoid
Senyawa  karotenoid  juga  diduga  berpengaruh  terhadap  aktivitas  antioksidan  dalam senyawa. Karotenoid adalah pigmen berwarna jingga atau merah. Karotenoid terdiri atas senyawa poliena  isoprenoid.  Karoten  memiliki  peran  yang  menguntungkan  bagi  kesehatan  yakni mempunyai aktivitas sebagai antioksidan, meningkatkan hubungan interselular, immunomodulator dan antikarsinogenik (Supriyono, 2008).
Terdapat  perbedaan  warna  ekstrak  yang  berbeda  dari  keempat  teripang  yang  diuji. Stichopus sp.,  menunjukkan  warna  oranye, B.  vitiensis berwarna  kuning  terang, P.  graeffei . berwarna  hijau,  dan H.  atra berwarna  merah  terang.  Hal  ini  diduga  karena  adanya  perbedaan senyawa  dan  pigmen  yang  dikandung  pada  masing –  masing  teripang.  Berdasarkan  pengujian kadar karotenoid yang telah dilakukan, menunjukkan bahwa S. cf. quadrifasciatus . memiliki kadar karotenoid  sebesar  25,78  µmol/g  sampel, P.  graeffei 11,816  µmol/g  sampel, B.  vitiensis sebesar 23,33 µmol/g sampel, dan H.atra sebesar 42,84 µmol/g sampel.
Penelitian  oleh  Chasanah et  al. (2016),  yang  melakukan  perbandingan  kandungan karotenoid pada teripang di Perairan Karimunjawa jenis Stichopus dan Actinopyga dan teripang di Perairan  Lampung  jenis  Stichopus,  Actinopyga  dan  Holothuria  melaporkan  bahwa  kadar karotenoid  pada  teripang  di  Karimunjawa  lebih  rendah  dibanding  di  Lampung.  Ke  enam  6  jenis stichopus  yang  dihitung  karotenoidnya  bervariasi  dengan  nilai  berkisar  8,72 –  42,25  µmol/g

## Journal of Marine Research Vol.8, No.4 November 2019, pp. 346-354
sampel. Jika dibandingkan dengan nilai karotenoid yang dilakukan di penelitian ini, kadar karoten pada Stichopus sp. kurang lebuh sama yaitu sebesar 25,78 µmol/g sampel.
Philip  (1975)  menyatakan  bahwa  adanya  ikatan  rangkap  terkonjugasi  dalam  molekul karotenoid  menandakan  adanya  gugus  kromofor  yang  menyebabkan  terbentuknya  warna  pada karotenoid,  Semakin  banyak  ikatan  rangkap  terkonjugasi  maka  semakin  pekat  warna  karotenoid tersebut,  yaitu  semakin  mengarah  ke  warna  merah  atau  oranye.  Kandungan  karoten  yang terkandung dalam suatu bahan dipengaruhi oleh berbagai faktor, seperti lingkungan (makanan dan intensitas  cahaya),  jenis,  dan  lain-lain  (Howard et  al .,  1994).  Hasil  pengujian  total  fenolik  dan karotenoid yang telah dilakukan menunjukkan kemampuan aktivitas antioksidan yang terkandung dalam ekstrak teripang yang diuji tergolong lemah.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian,  dapat  disimpulkan  bahwa  aktivitas  antioksidan  pada  ekstrak kasar  teripang  yang  diuji  di  Perairan  Karimunjawa  tergolong  lemah,  sehingga  perlu  dilakukan  uji lebih  lanjut  mengenai  pemanfaatan  teripang  dalam  biofarmasi  selain  aktivitas  antioksidan  untuk mengoptimalkan potensi teripang tersebut.

## DAFTAR PUSTAKA
Arikunto, S. 2006. Metode Penelitian Kualitatif. Jakarta: Bumi Aksara Brand-Williams, W.,  Cuvelie,  M.E.,  Berset,  C.  1995.  Use  of  A  Free  Radical  Method  To  Evaluate Antioxidant Activity. Lebensmittel-Wissenschaft und Technologie , 28:25 –30.
Chasanah,  E.,  Fawzya,  Y.N.,  Tarman,  K.,  Januar,  H.I.  &  Nursid,  M.,  2016.  Fatty  Acid  Profile, Carotenoid Content, and In Vitro Anticancer Activity of Karimunjawa and Lampung Sea Cucumber. Squalen Bulletin of Marine and Fisheries Postharvest and Biotechnology , 11 (3):117-124.
Elfidasari,  D.,  Noriko,  N.,  Wulandari,  N.  &  Perdana,  A.T.,  2012.  Identifikasi  jenis  teripang  genus Holothuria  asal  perairan  sekitar  Kepulauan  Seribu  berdasarkan  perbedaan  morfologi. Jurnal Al-azhar Indonesia seri sains dan teknologi , 1(3):140-146.
Firdiyani, F., Agustini, T.W. & Ma’ruf, W.F. 2015. Ekstraksi Senyawa Bioaktif Sebagai Antioksidan Alami Spirulina  platensis Segar  Dengan  Pelarut  Yang Berbeda.  Jurnal  Pengolahan  Hasil Perikanan Indonesia, 18(1):28-37.
Fitriansyah,  S.N.,  Fidrianny,  I.  &  Ruslan,  K.  2017.  Correlation  of  total  phenolic,  flavonoid  and carotenoid  content  of Sesbania  sesban (L.Merr)  leaves  extract  with  DPPH  scavenging activities. International  Journal  of  Pharmacognosy  and  Phytochemical  Research .  9(1):89-94. DOI: 10.25258/ijpapr.v9i1.8047
Gross, J. 1991. Pigments in Vegetables.  Chlorophylls and Carotenoid. An avi Book. Van Nostrdan Reinhold. New York, p 351.
Howard,  L.R.,  Smith,  R.T.,  Wagner,  A.B.,  Villalon,  B.  &  Burns,  E.E.  1994.  Provitamin  A  and ascorbic acid content of fresh pepper cultivars ( Capsicum annuum ) and processed jalapenos. Journal Food science. 59, 362-364. DOI: 10.1111/j.1365-2621.1994.tb06967.x Iswanti, D.A. 2009. Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi N-Heksan, Fraksi Etil Asetat, Dan Fraksi Etanol 96% Daun Ekor Kucing ( Acalypha Hispida Burm. F ) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923 Secara Dilusi [skripsi]. Fakultas Farmasi Universitas Setia Budi, Surakata. Jha,  R.K.  &  Zi-Rong,  X.  2004.  Biomedical  Compounds  from  Marine  Organism, Marine  Drugs , 2:123-146. DOI: 10.3390/md203123
Kumar,  A.P.,  Graham,  H.,  Robson,  C.,  Garapati,  K.  and  Ghosh,  R.,  2011.  An  overview  of anticancer  herbal  medicines.  In Evidence-based  Anticancer  Materia  Medica (pp.  1-36).  Springer, Dordrecht. DOI: 10.1007/978-94-007-0526-5_1 Machu,  L.,  Misurcova,  L.,  Ambrozova,  J.  V.,  Orsavova,  J.,  Mlcek,  J.,  Sochor,  J.  &  Jurikova,  T.
2015.  Phenolic  Content  and  Antioxidant  Capacity  In  Algal  Food  Products. Molecules. (20):1118-1133.  DOI: 10.3390/molecules20011118
Mamelona, J., Pelletier, E., Girard-Lalancette, K., Legault, J., Karboune, S., & Kermasha, S., 2007,
Quantification  of  Phenol  Contents  and  Antioxidant  Capacity  of  Atlantic  Sea  cucumber,
Cucumaria  frondosa ,  Food  Chemistry, 104(3):1040-1047.  DOI:  10.1016/j.foodchem.2007. 01.016 Martoyo, J., Aji, N. & Winanto, Tj. 2000. Budidaya Teripang. Jakarta: Penebar Swadaya Molyneux,  P.  2004.  The  Use  Of  The  Stable  Free  Radical  Diphenylpicrylhydrazyl    (DPPH)  For Estimating  Antioxidant  Activity. Songklanakarin  Journal  of  Science  and  Technology. 26:211- 219.
Murniasih,  T.,  Putra,  M.Y.  &  Pangestuti,  R..  2015.  Antioxidant  Activities  of  Holothuria  Sea Cucumbers. Annales Bogorienses , 19(2):21-26
Nobsathian,  S.,  Tuchinda,P.,    Sobhon,  P.,  Tinikul,  Y.,  Poljaroen,  J.,  Tinikul,  R.,  Sroyraya,  M., Poomton,  T.,  &  Chaichotranunt,  S.  2016.  An  Antioxidant  Activity  of the Methanolic  Extract of Black Sea Cucumber. Journal of Traditional Medicine and Clinical Naturopathy, 5(3):1-4. DOI: 10.1186/s40538-017-0087-7 Philip, T. 1975. Carotenoid esters in plant product. Food Technol. 29 (5): 50-54. Purcell, S.W., Samyn, Y. & Conand, C. 2012. Comercially Important Sea Cucumber of The World.
FAO  Species  Catalogue  for  Fishery  Purposes.  No  6.  Rome,  Food  and  Agricukture Organization. 150 pp.
Purwati, Pradina & Wirawati, I. 2008. Synaptidae (Echinodermata: Apodidae) dari Daerah Lamun Elnusa Pulau Timor Nusa Tenggara Timur. Pusat Penelitian Oseanografi, LIPI Jakarta
Rasyid,  A.  2012.  Identifikasi  Senyawa  Metabolit  Sekunder  Serta  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Dan Antioksidan  Ekstrak  Metanol  Teripang  ( Stichopus  hermanii).  Jurnal  Ilmu  dan  Teknologi Kelautan Tropis. 4(2):360-368.
Rita,  A.,  Tania,  S.  U.,  Heri,  H,  Albana,  A.  M.  &  Rini,  R.  2009.  Produksi  antioksidan  dari  daun simpur  ( Dillenia  indica )  menggunakan  metode  ekstraksi  tekanan  tinggi  dengan  sirkulasi pelarut.  Prosiding  Seminar  Nasional  Teknik  Kimia  Indonesia;  Bandung:  Perhimpunan  Teknik Kimia Indonesia. 1-8 Hlm
Roihanah,  S.,  Sukoso  &  Andayani.  2012.  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Teripang Holothuria sp. Terhadap  Bakteri Vibrio  harveyi Secara In  vitro.  The  Journal  of.  Experimental  Life  Science , 2(1):1-5.
Rowe, F.W.E. 1969. A review of the family Holothuriidae (Holothurioidea : Aspidochirotida). Bulletin of the British Museum (Natural History), 18 (4):119-170 Ruswahyuni,  Fadli,  M.  &  Suryanti.  2013.    Kelimpahan  Jenis  Teripang  (Holothuroidea)  Di  Rataan Terumbu  Karang  Dan  Lereng  Terumbu  Karang  Pantai  Pancuran  Belakang,  Pulau Karimunjawa Jepara. Diponegoro Journal of  Maquares, 2(3):288-297 Saleh,  L.  P.,  Suryanto,  E.  &  Yudistira,  A.  2005.  Aktivitas  Antioksidan  Dari  Ekstrak    Jagung  ( Zea mays L. ). Jurnal Kimia. 2(4):20-28. Sánchez ‐ Moreno,  C.,  Larrauri,  J.A.,  &  Saura ‐ Calixto,  F.  1998.  A  Procedure  To  Measure  The Antiradical  Efficiency  Of Polyphenols. Journal  of  the  Science  of  Food  and  Agriculture ,  76(2),
270-276. DOI: 10.1002/(SICI)1097-0010(199802)76:2<270::AID-JSFA945>3.0.CO;2-9
Inggrid,  H.M.  &  Santoso,  H.  2014,  Ekstraksi  Antioksidan  dan  Senyawa  Aktif  dari  Buah  Kiwi (Actinidia deliciosa), Universitas Katolik Parahyangan.
Sari,  I.P.,  M.A.  Wibowo,  dan  S.  Arreneuz.  2015.  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Teripang  Butoh Keling  ( Holothuria  leucospilota )  Dari  Pulau  Lemukutan  Terhadap  Bakteri Propionibacterium acnes dan Staphylococcus epidermidis. Jurnal Kimia Khatulistiwa , 4(4):21-28. Sese,  M.R.  &  Wirawati,  I..  2018.  Identifikasi  Teripang  Jenis Pearsonothuria  graeffei (Semper, 1868)  dan Bohadschia  argus (Jaeger,  1833)  dari  Desa  Tandaigi,  Parigi  Moutong  Sulawesi Tengah. Natural Science: Journal of Science and Technology . 7(2):243-251. Siddiqi,  A.A.,  Sulardiono,  Bambang,  &  Suryanti.  2017. Struktur  Komunitas  Teripang (Holothuroidea)  di  Perairan  Pulau  Karimunjawa  Taman  Nasional  Karimunjawa,  Jepara. In: Prosiding  Seminar  Nasional  Hasil-Hasil  Penelitian  Perikanan  dan  Kelautan  ke-VI.  Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan UNDIP, pp. 173-182.
Soltani,  M.,  Parivar,  K., Baharara,  J.,  Kerachian,  A.  A.,  &  Asili,  J.  2014. Hemolytic  And  Cytotoxic Properties  Of  Saponin  Purified From  Holothuria  Leucospilota Sea  Cucumber.  Reports  of Biochemistry and Molecular Biology, 3(1):1-8.
Sumarno. 2009. Potensi Ekstrak Daun Sirih Merah ( Piper erocatum ) Sebagai Antioksidan
Supriyono. 2008. Kandungan Beta Karoten, Polifenol Total dan Aktivitas Merantas Radikal Bebas Kefir Susu Kacang Hijau (Vigna radiata) oleh Pengaruh Jumlah Starter (Lactobacillus bulgaris dan Candida kefir) dan Konsentrasi Glukosa [Tesis], Universitas Diponogoro, Semarang.
Tursina,  L.M.  2011.  Uji Antifeedant Ekstrak  Kasar  Teripang Holothuria  atra dan Bohadschia marmorata Terhadap  Ikan  Karang  Di  Perairan  Pulau  Pramuka,  Kepulauan  Seribu,  DKI Jakarta. Universitas Indonesia. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Depok. Wafa,  J.A.,  Adi,  T.K.,  Hanapi,  A.A.  &  Fasya,  A.G.  2014.  Penentuan  Kapasitas  Antioksidan  dan Kandungan  Fenolik  Total  Ekstrak  Kasar  Teripang  Pasir  ( Holothuria  scabra )  dari  Pantai Kenjeran Surabaya. Alchemy, 3(1):76-83.
Wahyuni,  D.T.  &  Widjanarko,  S.B.  2015.  Pengaruh  jenis  pelarut  dan  lama  ekstraksi  terhadap ekstrak  karotenoid  labu  kuning  dengan  metode  gelombang  ultrasonik. Jurnal  Pangan  dan Agroindustri . 3(2):390-401.
Yangthong,  M., Nongporn,  H.T. & Phromkunthong, W. 2009. Antioxidant  Activities of Four  Edible Seaweeds from The Southern Coast of Thailand. Plant Foods  Human Butrition, 64:218 –223. DOI: 10.1007/s11130-009-0127-y